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特表2024-540288たばこ材料を処理するための方法および処理されたたばこ材料
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-10-31
(54)【発明の名称】たばこ材料を処理するための方法および処理されたたばこ材料
(51)【国際特許分類】
A24B 15/18 20060101AFI20241024BHJP
【ＦＩ】
A24B15/18
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024526548
(86)(22)【出願日】2022-11-04
(85)【翻訳文提出日】2024-05-02
(86)【国際出願番号】 EP2022080842
(87)【国際公開番号】W WO2023079089
(87)【国際公開日】2023-05-11
(31)【優先権主張番号】21206813.4
(32)【優先日】2021-11-05
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】596060424
【氏名又は名称】フィリップ・モーリス・プロダクツ・ソシエテ・アノニム
(74)【代理人】
【識別番号】100094569
【弁理士】
【氏名又は名称】田中 伸一郎
(74)【代理人】
【識別番号】100103610
【弁理士】
【氏名又は名称】▲吉▼田 和彦
(74)【代理人】
【識別番号】100109070
【弁理士】
【氏名又は名称】須田 洋之
(74)【代理人】
【識別番号】100119013
【弁理士】
【氏名又は名称】山崎 一夫
(74)【代理人】
【識別番号】100111796
【弁理士】
【氏名又は名称】服部 博信
(74)【代理人】
【識別番号】100123766
【弁理士】
【氏名又は名称】松田 七重
(74)【代理人】
【識別番号】100183379
【弁理士】
【氏名又は名称】藤代 昌彦
(72)【発明者】
【氏名】ボヴェ ルシアン
(72)【発明者】
【氏名】ヘニ シモン
【テーマコード（参考）】
4B043
【Ｆターム（参考）】
4B043BA60
4B043BB16
4B043BB25
4B043BC41
(57)【要約】
たばこ材料を処理するための方法であって、本方法は、たばこ材料を提供すること、たばこ材料を発酵させて発酵たばこ材料を得ることを含み、発酵工程は、＃嫌気性条件下でたばこ材料をインキュベートすること、＃以下の条件：＃乳酸の含有量が、たばこ材料中の乳酸の初期量の１０倍を超える、好ましくは２０倍を超える、より好ましくは５０倍を超える、より好ましくは７０倍を超える、好ましくは８０倍を超える、＃還元糖の含有量が、たばこ材料中の還元糖の初期量の０．５未満、好ましくは０．４未満、より好ましくは０．２未満、より好ましくは０．１未満である、＃インドール－３乳酸の含有量が、たばこ材料中のインドール－３乳酸の初期量の５倍を超える、好ましくは１０倍を超える、好ましくは２０倍を超える、＃カフェイン酸の含有量が、たばこ材料中のカフェイン酸の初期量の４倍を超える、好ましくは１０倍を超える、好ましくは２０倍を超える、＃キナ酸の含有量が、たばこ材料中のキナ酸の初期量の２倍を超える、好ましくは４倍を超える、＃アスパラギンの含有量が、たばこ材料中のアスパラギンの初期量の０．５未満、好ましくは０．４未満、好ましくは０．３未満である、＃グルタミンの含有量が、たばこ材料中のグルタミンの初期量の０．５未満、好ましくは０．４未満である、＃Ｌ－オルニチンの含有量が、たばこ材料中のＬ－オルニチンの初期量の１０倍を超える、好ましくは２０倍を超える、好ましくは５０倍を超える、好ましくは１００倍を超える、＃Ｌ－ロイシンの含有量が、たばこ材料中のＬ－ロイシンの初期量の２倍を超える、好ましくは４倍を超える、＃Ｌ－リジンの含有量が、たばこ材料中のＬ－リジンの初期量の２倍を超える、好ましくは６倍を超える、＃発酵指数が、５０を超え、好ましくは１００を超え、より好ましくは２５０を超え、より好ましくは４００を超え、ここで発酵指数は、処理されたたばこ材料中の乳酸の含有量と非発酵たばこ材料の乳酸の含有量との比を、処理されたたばこ材料中の還元糖の含有量と非発酵たばこ材料の還元糖の含有量との比で割って得られる、のうちの少なくとも一つが満たされたとき、発酵を停止すること、を含む。
【選択図】なし
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
たばこ材料を処理する方法であって、前記方法が、たばこ材料を提供することと、
発酵たばこ材料を得るために、前記たばこ材料を発酵させることであって、前記発酵工程が、
嫌気性条件下で前記たばこ材料をインキュベートすること、
以下の条件：
・ 乳酸の含有量が、前記たばこ材料中の乳酸の初期量の１０倍を超える、好ましくは２０倍を超える、より好ましくは５０倍を超える、より好ましくは７０倍を超える、好ましくは８０倍を超える、
・ 還元糖の含有量が、前記たばこ材料中の還元糖の初期量の０．５未満、好ましくは０．４未満、より好ましくは０．２未満、より好ましくは０．１未満である、
・ インドール－３乳酸の含有量が、前記たばこ材料中のインドール－３乳酸の初期量の５倍を超える、好ましくは１０倍を超える、好ましくは２０倍を超える、
・ カフェイン酸の含有量が、前記たばこ材料中のカフェイン酸の初期量の４倍を超える、好ましくは１０倍を超える、好ましくは２０倍を超える、
・ キナ酸の含有量が、前記たばこ材料中のキナ酸の初期量の２倍を超える、好ましくは４倍を超える、
・ アスパラギンの含有量が、前記たばこ材料中のアスパラギンの初期量の０．５未満、好ましくは０．４未満、好ましくは０．３未満である、
・ グルタミンの含有量が、前記たばこ材料中のグルタミンの初期量の０．５未満、好ましくは０．４未満である、
・ Ｌ－オルニチンの含有量が、前記たばこ材料中のＬ－オルニチンの初期量の１０倍を超える、好ましくは２０倍を超える、好ましくは５０倍を超える、好ましくは１００倍を超える、
・ Ｌ－ロイシンの含有量が、前記たばこ材料中のＬ－ロイシンの初期量の２倍を超える、好ましくは４倍を超える、
・ Ｌ－リジンの含有量が、前記たばこ材料中のＬ－リジンの初期量の２倍を超える、好ましくは６倍を超える、
・ 発酵指数が、５０を超え、好ましくは１００を超え、より好ましくは２５０を超え、より好ましくは４００を超え、前記発酵指数は、処理されたたばこ材料中の乳酸の含有量と非発酵たばこ材料中の乳酸の含有量との比を、前記処理されたたばこ材料中の還元糖の含有量と前記非発酵たばこ材料中の還元糖の含有量との比で割って得られる、のうちの少なくとも一つが満たされたとき、前記発酵を停止すること、を含む、発酵させることと、を含む、方法。
【請求項2】
前記たばこ材料中の、乳酸、または還元糖、またはインドール－３乳酸、またはキナ酸、またはカフェイン酸、またはＬ－オルニチン、またはアスパラギン、またはグルタミン、またはＬ－ロイシン、またはＬ－リジン、または発酵指数のうちの少なくとも一つの初期含有量を測定するための初期測定工程をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
前記発酵工程中の前記たばこ材料中の、乳酸、または還元糖、またはインドール－３乳酸、またはキナ酸、またはカフェイン酸、またはＬ－オルニチン、またはアスパラギン、またはグルタミン、またはＬ－ロイシン、またはＬ－リジン、または発酵指数のうちの少なくとも一つの含有量を測定するための測定工程をさらに含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項4】
前記たばこ材料がダークたばこを含有する場合、２，３ブタンジオールの含有量が、前記たばこ材料中の２，３ブタンジオールの初期量の５倍を超える、好ましくは１０倍を超える、またはジアセチルの含有量が、前記たばこ材料中のジアセチルの初期量の５倍を超える、好ましくは１０倍を超えるという条件のうちの少なくとも一つが満たされるときに、前記発酵を停止するために提供される、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項5】
前記たばこ材料中の２，３ブタンジオールまたはジアセチルのそれぞれの初期量を得るように、前記発酵前に前記たばこ材料中の２，３ブタンジオールまたはジアセチルの初期含有量を測定するための初期測定工程をさらに含む、請求項４に記載の方法。
【請求項6】
前記発酵工程中、１０００キログラム／平方メートル～１５０００キログラム／平方メートル、好ましくは３０００キログラム／平方メートル～１２０００キログラム／平方メートル、より好ましくは５０００キログラム／平方メートル～１００００キログラム／平方メートルから成る圧力を前記たばこ材料に印加するために提供される、請求項１に記載の方法。
【請求項7】
少なくとも１か月、好ましくは少なくとも２か月、より好ましくは少なくとも４か月、より好ましくは少なくとも６か月、さらにより好ましくは少なくとも８か月、好ましくは少なくとも１０か月、より好ましくは少なくとも１２か月の発酵時間の間、前記発酵工程を継続するために提供される、請求項１に記載の方法。
【請求項8】
前記発酵工程中、前記たばこ材料の温度を２１℃～３５℃、好ましくは２５℃～３１℃から成る温度に保つために提供される、請求項１に記載の方法。
【請求項9】
たばこ材料であって、ａ）以下の化合物、
－ 前記たばこ材料中の乳酸の初期量の１０倍を超える、好ましくは２０倍を超える、より好ましくは５０倍を超える、より好ましくは７０倍を超える、より好ましくは８０倍を超える量の乳酸、
－ 前記たばこ材料中の還元糖の初期量の０．５未満、好ましくは０．４未満、より好ましくは０．２未満、より好ましくは０．１未満である量の還元糖、
－ 前記たばこ材料中のインドール－３乳酸の初期量の５倍を超える、好ましくは１０倍を超える、好ましくは２０倍を超える量のインドール－３乳酸、
－ 前記たばこ材料中のカフェイン酸の初期量の４倍を超える、好ましくは１０倍を超える量のカフェイン酸、
－ 前記たばこ材料中のキナ酸の初期量の２倍を超える、好ましくは４倍を超える量のキナ酸、
－ 前記たばこ材料中のアスパラギンの初期量の０．５未満、好ましくは０．４未満、好ましくは０．３未満の量のアスパラギン、
－ 前記たばこ材料中のグルタミンの初期量の０．５未満、好ましくは０．４未満の量のグルタミン、
－ Ｌ－オルニチンは、前記たばこ材料中のＬ－オルニチンの初期量の１０倍を超える、好ましくは５０倍を超える、好ましくは１００倍を超える、
－ Ｌ－ロイシンの初期量の２倍を超える、好ましくは４倍を超えるの量のＬ－ロイシン、
－ Ｌ－リジンの初期量の２倍を超える、好ましくは６倍を超えるの量のＬ－リジン、
－ 発酵指数が、５０を超え、好ましくは１００を超え、より好ましくは２５０を超え、より好ましくは４００を超え、前記発酵指数は、前記たばこ材料中の乳酸の含有量と前記非発酵たばこ材料中の乳酸の含有量との比を、前記たばこ材料中の還元糖の含有量と前記非発酵たばこ材料中の還元糖の含有量との比で割って得られる、のうちの少なくとも一つ、または、
ｂ） 総乾燥重量基準で３００ミリグラム／キログラム未満のアスパラギン、または
ｃ） 総乾燥重量基準で７０ミリグラム／キログラム未満のグルタミン、または
ｄ） 総乾燥重量基準で１００００ミリグラム／キログラム超の総遊離アミノ酸、または
ｅ） 総乾燥重量基準で少なくとも１マイクログラム／グラム、好ましくは少なくとも２マイクログラム／グラム、より好ましくは少なくとも２．５マイクログラム／グラムのインドール－３乳酸、を含む、たばこ材料。
【請求項10】
前記たばこ材料が、前記たばこ材料を嫌気性条件下でインキュベートすることを含む、処理されたたばこ材料を得るために前記たばこ材料を発酵することを含むプロセスによって得られる、請求項１～９に記載のたばこ材料。
【請求項11】
前記たばこ材料が乾燥されている、請求項９または１０に記載のたばこ材料。
【請求項12】
前記たばこ材料が粉砕されている、請求項９～１１のいずれか一項に記載のたばこ材料。
【請求項13】
請求項９～１２のいずれか一項に記載のたばこ材料の総乾燥重量基準で約２．５重量パーセント～総乾燥重量基準で１００重量パーセント、好ましくは総乾燥重量基準で少なくとも約４重量パーセント、好ましくは総乾燥重量基準で少なくとも約１０重量パーセント、好ましくは総乾燥重量基準で少なくとも約２０重量パーセントを含有する、たばこ材料を含む、エアロゾル発生物品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、たばこを処理するための方法、および発酵によって処理されたたばこ材料に関する。本発明はまた、発酵によって処理されたたばこ材料を含有するエアロゾル発生物品に関する。特に、発酵は嫌気性発酵である。
【背景技術】
【0002】
たばこ製品に利用されるたばこ材料の全体的な特性または性質を変化させるために、様々な処理方法および添加剤が当技術分野で提案されてきた。例えば、たばこ材料は添加剤で処理されてきた。加えて、これらのたばこ材料の加工中に使用される処理条件は、こうしたたばこ材料から生産されるたばこ製品の化学特性または官能特性を変化させるために、およびこうしたたばこ材料を組み込んだ喫煙物品によって発生される主流煙またはエアロゾルの化学特性または官能特性を変化させるために、制御されてきた。
【0003】
たばこ加工の後の方の段階でたばこ材料の風味および香りを強化または添加するための処理は多くの場合、一つ以上の添加剤をたばこに添加することを伴い、追加の加工工程および装置を必要とする可能性があり、これは費用と時間がかかる可能性がある。さらに、たばこへの添加剤の添加は、一部の消費者に良く思われない場合がある。
【0004】
したがって、添加剤が全くなくて、良好かつ改善された感覚刺激特性を有するたばこ材料を提供するニーズがある。したがって、たばこ自体に外部風味剤を添加することを伴わない、たばこ材料の感覚刺激特性を改善する方法に対するニーズもまたある。さらに、複雑な加工を必要とせずに、こうした異なる感覚刺激材料を表すたばこ材料のニーズがある。
【0005】
また、高い感覚刺激特性と低減された濃度の有害化合物とを、同時に有するたばこ材料を提供するニーズもある。また、ユーザーによる使用時に産生される高い感覚刺激特性と、生成されたエアロゾル中の低減された濃度の有害化合物とを、同時に有するたばこ材料を提供するニーズもある。
【発明の概要】
【0006】
一態様によると、本発明は、たばこ材料を処理するための方法に関し、本方法は、たばこ材料を提供すること、およびたばこ材料を発酵させて発酵たばこ材料を得ることを含む。発酵工程は、嫌気性条件下でたばこ材料をインキュベートすることを含むことが好ましい。
【0007】
発酵に起因して、たばこ材料中に存在する特定の化合物は変化する場合があり、同様にたばこ材料の感覚刺激特性も変化しうる。さらに、発酵プロセス中、たばこ材料中の一部の化合物の含有量が減少し、一部のさらなる化合物の濃度が増加する。
【0008】
発酵たばこ材料は、感覚レベルで、対応する未発酵の乾燥処理済みたばこ材料と比較して、より高い滑らかさの特徴を一貫して送達する。さらに、発酵たばこ材料は、使用時に花のノートまたは香りの特徴を送達する。たばこ発酵材料は、粗削りな感覚を低減するより滑らかな特徴を有する。したがって、たばこ材料の感覚刺激特性が増加し、ユーザーにとっての体験が改善される。
【0009】
たばこ材料は発酵しうることが知られている。たばこ植物は微生物の宿主となる場合があり、この微生物は次に細菌、カビ、アクチノマイセスを含みうる。研究では、細菌がたばこ中の現存の微生物の大半を占める一方で、カビおよびアクチノマイセスは少数であることが示されている。酵母は低濃度であるか、または全く検出できない。発酵たばこは、当技術分野で周知の様々な適切な技法によって、例えばｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｓｃｉｒｐ．ｏｒｇ／ｊｏｕｒｎａｌ／ｊｂｍで入手可能なＹａｎｇ Ｙａｎｇらによって発表された「Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ Ｔｏｂａｃｃｏ Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ」（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ａｎｄ Ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ ２０１８，６，１０５－１１４）、または米国特許第５３７２１４９号、または米国特許第４５２８９９３号、およびその他に記載の通りの技法によって作られることができる。概して、たばこ発酵は、乾燥されて熟成されたたばこの水分含量を、約２０パーセント～約６０パーセントの水分含量に調整することと、湿らせたたばこを重ねて発酵させることとを含む。発酵は、例えば乾燥または低温貯蔵によって終了させることができる。上述の通り、微生物は概してたばこ植物に天然に存在するため、たばこ発酵は微生物の添加を必要としない。
【0010】
本発明において発酵は、嫌気性条件下で行われる。
【0011】
嫌気性発酵は、酸素の非存在下でのより小さい分子への複雑な有機化合物の変換として定義される。この用語はまた、化学平衡と生化学的活性の両方の結果として、酸化還元反応に酸素を利用できない条件として定義されることができる。代わりに、特定のタイプのエネルギー代謝のために微生物によって使用されることができる他の酸化化合物が存在してもよい。
【0012】
嫌気性条件は好気性条件と共存する場合があり、ガス形態の酸素は、微小環境（例えば、水中に懸濁された岩屑の凝集体など）中の微生物には利用できない場合があり、その一方でそれと同時にマクロ環境（水）中に存在しうる。
【0013】
たばこの嫌気性発酵において、理論に拘束されることなく、主要エネルギー抽出経路は解糖から来てもよく、一部のアミノ酸は炭素／窒素源としても使用される。好ましい窒素化合物には通常、グルタミン、アラニン、セリン、トレオニン、アスパラギン酸塩、アスパラギン、尿素、アルギニンが含まれる。
【0014】
以下において、「発酵条件」という定義では、たばこが嫌気性条件に供されることを意味する。発酵環境には特定の量の酸素が存在してもよいが、酸素は酸化還元反応には利用できない。
【0015】
嫌気性発酵条件は、アルカロイド、特にたばこ材料のニコチンの含有量に影響を与えない。同時に、たばこ材料の感覚刺激特性が増大する。
好ましくは、方法は、少なくとも一つの所望の条件が満たされたときに発酵工程を停止するために供する。
好ましくは、方法は、少なくとも一つの所望の条件が満たされたときに発酵工程を停止するために供する。
【0016】
このようにして、特定の望ましい特性を有する処理されたたばこ材料を得ることが可能である。また、長すぎる発酵プロセスを回避することも可能である。したがって、たばこ材料の品質は保たれる。
【0017】
方法は、乳酸の含有量がたばこ材料中の乳酸の初期量の１０倍を超える時に発酵工程を停止することを含むことが好ましく、好ましくは２０倍を超える時に、より好ましくは５０倍を超える時に発酵工程を停止することを含む。方法は、乳酸の含有量がたばこ材料中の乳酸の初期量の７０倍を超える時に発酵工程を停止することを含むことが好ましく、好ましくは８０倍を超える時に発酵工程を停止することを含む。
【0018】
乳酸の増加は、たばこ材料の発酵の信頼できる指標である。発酵後のたばこ材料中の乳酸の量は、たばこ材料のタイプ、またはたばこ材料中の乳酸の初期量にも依存しうる。さらに、発酵後のたばこ材料中の乳酸の量は、発酵前のたばこ材料中の他の化合物の含有量に依存しうる。反対に、たばこ材料中の乳酸の増加は、たばこ材料の発酵の程度の信頼できる指標である。このパラメータは、たばこ材料のタイプまたはたばこ材料の組成に依存せず、さらなる外部パラメータによる影響を受けない。
【0019】
乳酸は、二つのエナンチオマー、Ｌ－乳酸とＤ－乳酸とを有する。乳酸という用語を用いた本発明の目的において、二つのエナンチオマー、Ｌ－乳酸とＤ－乳酸との合計が意図されている。それにもかかわらず、発酵たばこでは、主にエナンチオマーＬ－乳酸が存在するが、一部のＤ－乳酸も生成される。Ｌ－乳酸と比較して、Ｄ－乳酸はヒトに対して有毒であり得、すなわち、経口的に毒されたラット当たりのＬＤ５０値レベルは、約４．５ｇ／キログラムである（Ｐｏｈａｎｋａ，２０２０）。しかしながら、Ｄ－乳酸およびＬ－乳酸は不揮発性であり、したがってたばこ材料で生成されるエアロゾルに伝達されない。
【0020】
たばこ材料中の乳酸の含有量は、ＭＰ ０３０９ ｒｅｖ ５ ２０１２，Ｃｈｅｌａｂ Ｓ．ｒ．ｌにより、分光光度法で判定される。
【0021】
方法は、還元糖の含有量が、たばこ材料中の還元糖の初期量の０．５未満である時に発酵工程を停止することを含むことが好ましく、好ましくは０．４未満、より好ましくは０．２未満、より好ましくは０．１未満である時に、発酵工程を停止することを含む。
【0022】
還元糖は嫌気性発酵によってピルビン酸塩に変換され、ピルビン酸は多くの他の風味化合物の前駆体であり、カラメル褐色の糖および酸の特徴を提供する。したがって、嫌気性発酵に供されるたばこ材料中の還元糖の含有量の減少は、たばこ材料の発酵の程度の良好な指標である。たばこ材料中の還元糖の量は、例えば、たばこのタイプ、収穫領域などの異なる要因に依存しうるが、還元糖の還元速度は発酵プロセスの程度を示す。たばこの葉に最も豊富に天然で存在する糖は、グルコース、フルクトース、スクロースである。糖含量の違いは、たばこの種類間で存在しうる。例えば、バージニアは糖度が高い（概して８パーセント～３０パーセントの範囲である）一方で、バーレーは糖度が低い（概して１パーセント～２パーセントの範囲である）特徴がある。しかしながら、たばこ材料に使用されるたばこタイプにかかわらず、本発明の発酵条件下での発酵中の還元糖の含有量の減少が見いだされた。還元糖の量の変化は、たばこ材料の感覚刺激特性、およびたばこ材料で生成される煙またはエアロゾルの感覚刺激特性を変化しうる。
【0023】
たばこ材料中の還元糖の含有量は、ＣＯＲＥＳＴＡ推奨の方法Ｎ°３８に従って、連続フローアナライザーによって判定されることが好ましい。
【0024】
方法は、インドール－３乳酸の含有量がたばこ材料中のインドール－３乳酸の初期量の５倍を超える時に発酵工程を停止することを含むことが好ましく、好ましくは１０倍を超える時に、好ましくは２０倍を超える時に発酵工程を停止することを含む。好ましくは、インドール－３乳酸の絶対含有量を、ＵＰＬＣ－ＭＳによって、抽出された標準曲線に基づいて計算して判定した。
【0025】
インドール－３乳酸は、たばこの葉中に微量にのみ存在するが、嫌気性発酵中、乾燥処理済み葉材料中に生成され、たばこ材料が嫌気性発酵に供されたことを示す。
【0026】
方法は、カフェイン酸の含有量がたばこ材料中のカフェイン酸の初期量の４倍を超える時に発酵工程を停止することを含むことが好ましく、好ましくは１０倍を超える時に、より好ましくは２０倍を超える時に発酵工程を停止することを含む。
【0027】
カフェイン酸の存在は、たばこ材料の感覚刺激特性を増大させ、ユーザーの体験を改善する。たばこ材料中のカフェイン酸の含有量は、ＵＰＬＣ－ＭＳを使用したメタボローム解析、非発酵たばこ材料と、処理されたたばこ材料、すなわち発酵たばこ材料または部分的発酵たばこ材料とにおけるカフェイン酸の比較によって推定されることが好ましい。
【0028】
方法は、キナ酸の含有量がたばこ材料中のキナ酸の初期量の２倍を超える時に発酵工程を停止することを含むことが好ましく、好ましくは４倍を超える時に発酵工程を停止することを含む。
【0029】
たばこ材料中のキナ酸の含有量は、ＵＰＬＣ－ＭＳを使用したメタボローム解析、非発酵たばこ材料と、処理されたたばこ材料、すなわち発酵たばこ材料または部分的発酵たばこ材料とにおけるカフェイン酸の比較によって推定されることが好ましい。
【0030】
キナ酸およびカフェイン酸は、シンナモイルエステラーゼがクロロゲン酸を異化した結果として、発酵実施後に大幅に増加した。これらの化合物の増加は、発酵に使用されるたばこ基体に依存しない。強力な抗酸化活性、コラーゲン産生の増加、および早期老化の防止の他にも、カフェイン酸は抗菌活性を示し、皮膚疾患の治療に有望であり得る（Ｍａｇｎａｎｉ ｅｔ ａｌ．，２０１４）。さらに、キナ酸はまた、前立腺癌と闘う強力な薬剤候補でもある（Ｉｎｂａｔｈａｍｉｚｈ ｅｔ ａｌ．，２０１３）。
【0031】
方法は、アスパラギンの含有量が、たばこ材料中のアスパラギンの初期量の０．５未満である時に発酵工程を停止することを含むことが好ましく、好ましくは０．４未満、好ましくは０．３未満である時に、発酵工程を停止することを含む。アスパラギンの含有量は、ＭＰ ２４４２ ｒｅｖ ０ ２０２１，Ｃｈｅｌａｂ Ｓ．ｒ．ｌにより、イオン交換クロマトグラフィーで判定されることが好ましい。
【0032】
アスパラギンの減少は、アクリルアミドへの変換の減少を意味する。たばこ材料は、一定の量のアミノ酸を含有する。アミノ酸は、発酵たばこ材料が含有されている最終製品によって生成される煙またはエアロゾル中の特定の成分のレベルと、煙またはエアロゾルの官能特性とに実質的に寄与しうる。異なるタイプのたばこは、異なる量のアミノ酸を含有しうる。さらに、たばこの葉または先端または葉柄の間で、アミノ酸組成に（主に定量的な）差異がある可能性がある。また、たばこの生育地域により、様々なアミノ酸のレベルの比が変化しうるが、同じたばこアミノ酸でかなり類似した組成が概して維持される。たばこのタイプおよび原産地にかかわらず、本発明の発酵条件下での発酵中に、たばこ材料中のアスパラギン含有量が減少することが観察された。これは、本発明の発酵における発酵細菌が、アミノ酸資源からＣおよびＮを同化するための特定のアスパラギナーゼを産生することを示唆する。アスパラギンは、アクリルアミドに熱的に変換されうる。アクリルアミドは、潜在的に有害な物質であると考えられている。たばこ材料中のアスパラギンの含有量の減少させることは、アクリルアミド形成の減少を得ることを可能にする。
【0033】
方法は、グルタミンの含有量が、たばこ材料中のグルタミンの初期量の０．５未満である時に発酵工程を停止することを含むことが好ましく、好ましくは０．４未満である時に発酵工程を停止することを含む。グルタミンの含有量は、ＭＰ ２４４２ ｒｅｖ ０ ２０２１，Ｃｈｅｌａｂ Ｓ．ｒ．ｌにより、イオン交換クロマトグラフィーで判定されることが好ましい。
【0034】
グルタミンの減少は、使用時にたばこ材料から旨味（ｕｍａｍｉ）風味の特徴が放出されることを意味するため、グルタミンの減少がたばこ材料の風味を増加しうる。
【0035】
方法は、Ｌ－オルニチンの含有量がたばこ材料中のＬ－オルニチンの初期量の１０倍を超える時に発酵工程を停止することを含むことが好ましく、好ましくは２０倍を超える時に、好ましくは５０倍を超える時に、好ましくは１００倍を超える時に、発酵工程を停止することを含む。Ｌ－オルニチンの含有量は、ＭＰ ２４４２ ｒｅｖ ０ ２０２１，Ｃｈｅｌａｂ Ｓ．ｒ．ｌにより、イオン交換クロマトグラフィーで判定されることが好ましい。
【0036】
発酵たばこ材料中のＬ－オルニチンの増加は、発酵に供されるたばこ材料のタイプおよびその初期組成物とは無関係に、たばこ材料の発酵の程度の良好な指標である。たばこ材料のタイプとは無関係に、発酵はたばこ材料中のＬ－オルニチンの増加を引き起こすことが分かっている。
【0037】
方法は、Ｌ－ロイシンの含有量がたばこ材料中のＬ－ロイシンの初期量の２倍を超える時に、発酵工程を停止することを含むことが好ましく、好ましくは４倍を超える時に発酵工程を停止することを含む。Ｌ－ロイシンの含有量は、ＭＰ ２４４２ ｒｅｖ ０ ２０２１，Ｃｈｅｌａｂ Ｓ．ｒ．ｌにより、イオン交換クロマトグラフィーで判定されることが好ましい。
【0038】
方法は、Ｌ－リジンの含有量がたばこ材料中のＬ－リジンの初期量の２倍を超える時に、発酵工程を停止することを含むことが好ましく、好ましくは６倍を超える時に発酵工程を停止することを含む。Ｌ－リジンの含有量は、ＭＰ ２４４２ ｒｅｖ ０ ２０２１，Ｃｈｅｌａｂ Ｓ．ｒ．ｌにより、イオン交換クロマトグラフィーで判定されることが好ましい。
【0039】
Ｌ－ロイシンおよびＬ－リジンの増加は、発酵に供されるたばこ材料のタイプおよびその初期組成物とは無関係に、たばこ材料の発酵の程度の良好な指標である。
【0040】
方法は、３－ｓｅｃ－ブチルヘキサヒドロピロロ［１，２－ａ］ピラジン－１，４－ジオンの含有量が、たばこ材料中の３－ｓｅｃ－ブチルヘキサヒドロピロロ［１，２－ａ］ピラジン－１，４－ジオンの初期量の２０倍を超える時に、発酵工程を停止することを含むことが好ましく、好ましくは４０倍を超える時に、より好ましくは６０倍を超える時に、より好ましくは８０倍を超える時に、発酵工程を停止することを含む。
【0041】
３－ｓｅｃ－ブチルヘキサヒドロピロロ［１，２－ａ］ピラジン－１，４－ジオン（ＢＨＨＰＰＤ）は、乾燥処理済みたばこ材料において微量でのみ検出されるが、たばこ材料中のＢＨＨＰＰＤの含有量は、たばこ材料のタイプとは無関係に、発酵の程度と共に増加する。したがって、たばこ材料中のＢＨＨＰＰＤの増加は、たばこ材料の発酵の程度の良好な指標をイミリグラム（ｉｍｉｌｌｉｇｒａｍｓｓ）する。
【0042】
方法は、セコイソラリシレシノール（ＳＥＣＯ）の含有量がたばこ材料中のセコイソラリシレシノール（ＳＥＣＯ）の初期量の１０倍を超える時に、発酵工程を停止することを含むことが好ましく、好ましくは２０倍を超える時に、より好ましくは４０倍を超える時に、より好ましくは５０倍を超える時に、発酵工程を停止することを含む。
【0043】
セコイソラリシレシノールの微量のみが乾燥処理済みたばこ材料で検出されるが、たばこ材料中のＳＥＣＯの含有量は、たばこ材料のタイプとは無関係にたばこ材料の発酵と共に増加する。したがって、たばこ材料中のＳＥＣＯの増加は、たばこ材料の発酵の程度の信頼できる指標である。
【0044】
方法は、発酵指数が５０を超える時に発酵工程を停止することを含むことが好ましく、好ましくは１００を超える時に、より好ましくは２５０を超える時に、より好ましくは４００を超える時に、発酵工程を停止することを含む。発酵指数は、処理されたたばこ材料中の乳酸の含有量と非発酵たばこ材料中の乳酸の含有量との比を、処理されたたばこ材料中の還元糖の含有量と非発酵たばこ材料中の還元糖の含有量との比で割って得られる。発酵指数は、以下の式によって取得されうる：Ｆｒ＝（ＦLA／ＮＦLA）：（ＦRS／ＮＦRS）式中、ＦLA＝発酵たばこ材料中の乳酸の含有量、ＮＦLA＝非発酵たばこ材料中の乳酸の含有量、ＦRS＝発酵たばこ材料中の還元糖の含有量、ＮＦRS＝非発酵たばこ材料中の還元糖の初期含有量。また、この場合、乳酸は、上述のように、Ｌ－乳酸とＤ－乳酸との合計を示す。
【0045】
発酵指数（Ｆｒ）はまた、発酵中のたばこ材料の組成のわずかな変化を検出することも可能にする。さらに、このパラメータは発酵中に、発酵中のたばこ材料のタイプとは無関係に変化するため、パラメータは信頼性が高い。
【0046】
上記の条件のうちの少なくとも一つが満たされた時に発酵工程を停止することは、所望の感覚刺激特性を有する処理されたたばこ材料を得ることを可能にする。本発明の方法で処理されたたばこ材料は、完全に発酵または部分的に発酵されうる。たばこ材料の発酵の程度とは無関係に、上記の条件のうちの一つが満たされた時に発酵工程を停止することによって、特定の特徴を有するたばこ材料を得ることが可能である。
【0047】
本発明の目的において処理されたたばこ材料は、発酵たばこ材料または部分的発酵たばこ材料を示す。
【0048】
好ましくは、方法は、乳酸、または還元糖、またはインドール－３乳酸、またはキナ酸、またはカフェイン酸、またはＬ－オルニチン、またはアスパラギン、またはグルタミン、またはＬ－ロイシン、またはＬ－リジン、またはブチルヘキサヒドロピロロ［１，２－ａ］ピラジン－１，４－ジオン、またはセコイソラリシレシノール（ＳＥＣＯ）、または発酵指数のそれぞれ初期量の得るために、発酵工程前のたばこ材料中の、乳酸、または還元糖、またはインドール－３乳酸、またはキナ酸、またはカフェイン酸、またはアスパラギン、またはグルタミン、またはＬ－オルニチン、またはＬ－ロイシン、またはＬ－リジン、またはブチルヘキサヒドロピロロ１，２－ａ］ピラジン－１，４－ジオン、またはセコイソラリシレシノール、または発酵指数のうちの少なくとも一つの初期含有量を測定するための初期測定工程をさらに含む。
【0049】
この特徴により、たばこ材料中の少なくとも一つの化合物の初期含有量の正確な値を取得してから、発酵プロセスを受けることが可能となる。初期測定工程は、発酵前にたばこ材料の特徴を測定するために供し、言い換えれば、非発酵たばこ材料の特徴が、初期測定工程で測定される。測定された特徴の初期量は、非発酵たばこ材料の特徴の値に対応する。
【0050】
方法は、発酵中のたばこ材料中の、乳酸、または還元糖、またはインドール－３乳酸、またはキナ酸、またはカフェイン酸、またはアスパラギン、またはグルタミン、またはＬ－オルニチン、またはＬ－ロイシン、またはＬ－リジン、またはブチルヘキサヒドロピロロ［１，２－ａ］ピラジン－１，４－ジオン、またはセコイソラリシレシノール、または発酵指数のうちの少なくとも一つの含有量を測定するための測定工程をさらに含むことが好ましい。
【0051】
この特徴により、たばこ材料内の上述の特徴のうちの少なくとも一つの正確な値を得ることが可能である。発酵工程をより正確にモニターし、得られたたばこ材料の特性をより正確に調整することが可能である。このようにして、たばこ材料の発酵の程度の非常に信頼性の高い表示をリアルタイムで取得することが可能である。
【0052】
たばこ材料がダークたばこを含有する場合、方法は、２，３ブタンジオールの含有量がたばこ材料中の２，３ブタンジオールの初期量の５倍を超えるときに、発酵工程を停止するために供することが好ましく、好ましくは１０倍を超えるときに発酵工程を停止するために供する。２，３ブタンジオールの存在は、ココアバターの天然臭を与える。２，３ブタンジオールの存在は、嫌気性発酵たばこ材料中に存在する良好な風味のある揮発分に寄与する。
【0053】
たばこ材料がダークたばこを含有する場合、方法は、ジアセチルの含有量がたばこ材料中のジアセチルの初期量の５倍を超えるときに、発酵工程を停止するために供することが好ましく、好ましくは１０倍を超えるときに発酵工程を停止するために供する。ジアセチルの存在は、たばこ材料にいくらかの感覚刺激特性を与える。ジアセチルの存在は、嫌気性発酵たばこ材料中の良好な風味のある揮発分の存在に寄与する。
【0054】
方法は、たばこ材料中の２，３ブタンジオールまたはジアセチルのそれぞれの初期量を得るように、発酵前にたばこ材料中の２，３ブタンジオールまたはジアセチルの初期含有量を測定するための初期測定工程を含むことが好ましい。
【0055】
方法は、発酵中にたばこ材料中の２，３ブタンジオールまたはジアセチルの含有量を測定するための測定工程をさらに含むことが好ましい。
【0056】
方法は、非発酵たばこ材料中の、乳酸、または還元糖、またはインドール－３乳酸、またはキナ酸、またはカフェイン酸、またはＬ－オルニチン、またはアスパラギン、またはグルタミン、またはＬ－ロイシン、またはＬ－リジン、またはブチルヘキサヒドロピロロ［１，２－ａ］ピラジン－１，４－ジオン、またはセコイソラリシレシノール（ＳＥＣＯ）、または発酵指数、またはブタンジオール、またはジアセチルのうちの少なくとも一つの量を含むデータベースを提供することを含むことが好ましい。
【0057】
方法は、複数の異なるたばこ材料について、非発酵たばこ材料中の、乳酸、または還元糖、またはインドール－３乳酸、またはキナ酸、またはカフェイン酸、またはＬ－オルニチン、またはアスパラギン、またはグルタミン、またはＬ－ロイシン、またはＬ－リジン、またはブチルヘキサヒドロピロロ［１，２－ａ］ピラジン－１，４－ジオン、またはセコイソラリシレシノール（ＳＥＣＯ）、または発酵指数、またはブタンジオール、またはジアセチルのうちの少なくとも一つの量を含むデータベースを提供することを含むことが好ましい。
【0058】
したがって、少なくとも一つのタイプのたばこ材料のための少なくとも一つのデータベースを作成することが可能である。各データベースは、非発酵条件におけるたばこ材料の各タイプについて、乳酸、または還元糖、またはインドール－３乳酸、またはキナ酸、またはカフェイン酸、またはＬ－オルニチン、またはアスパラギン、またはグルタミン、またはＬ－ロイシン、またはＬ－リジン、またはブチルヘキサヒドロピロロ［１，２－ａ］ピラジン－１，４－ジオン、またはセコイソラリシレシノール（ＳＥＣＯ）、または発酵指数、またはブタンジオール、またはジアセチルの通常の量を含みうる。
【0059】
好ましくは、方法は、少なくとも一つのデータベースから、発酵前のたばこ材料中の、乳酸、または還元糖、またはインドール－３乳酸、またはキナ酸、またはカフェイン酸、またはＬ－オルニチン、またはアスパラギン、またはグルタミン、またはＬ－ロイシン、またはＬ－リジン、またはブチルヘキサヒドロピロロ［１，２－ａ］ピラジン－１，４－ジオン、またはセコイソラリシレシノール（ＳＥＣＯ）、またはブタンジオール、またはジアセチル、または発酵指数のうちの少なくとも一つの初期量を回収するために供する。
【0060】
好ましくは、方法は、発酵たばこ材料および／または部分的発酵たばこ材料中の、乳酸、または還元糖、またはインドール－３乳酸、またはキナ酸、またはカフェイン酸、またはＬ－オルニチン、またはアスパラギン、またはグルタミン、またはＬ－ロイシン、またはＬ－リジン、またはブチルヘキサヒドロピロロ［１，２－ａ］ピラジン－１，４－ジオン、またはセコイソラリシレシノール（ＳＥＣＯ）、または発酵指数、またはブタンジオール、またはジアセチルのうちの少なくとも一つの量を含むデータベースを提供することを含む。
【0061】
好ましくは、方法は、複数の異なるたばこ材料について、発酵たばこ材料および／または部 分的発酵たばこ材料中の、乳酸、または還元糖、またはインドール－３乳酸、またはキナ酸、またはカフェイン酸、またはＬ－オルニチン、またはアスパラギン、またはグルタミン、またはＬ－ロイシン、またはＬ－リジン、またはブチルヘキサヒドロピロロ［１，２－ａ］ピラジン－１，４－ジオン、またはセコイソラリシレシノール（ＳＥＣＯ）、または発酵指数、またはブタンジオール、またはジアセチルのうちの少なくとも一つの量を含むデータベースを提供することを含む。
【0062】
好ましくは、方法は、少なくとも一つのデータベースから、乳酸、または還元糖、またはインドール－３乳酸、またはキナ酸、またはカフェイン酸、またはＬ－オルニチン、またはアスパラギン、またはグルタミン、またはＬ－ロイシン、またはＬ－リジン、またはブチルヘキサヒドロピロロ［１，２－ａ］ピラジン－１，４－ジオン、またはセコイソラリシレシノール（ＳＥＣＯ）、または発酵指数、またはブタンジオール、またはジアセチルのうちの少なくとも一つの量を回収するため、および回収された値を、発酵中のたばこ材料における対応する測定された値と比較するために供する。
【0063】
好ましくは、方法は、比較工程の結果に基づいて、発酵工程を停止または継続するために供する。好ましくは、方法は、乳酸、またはインドール－３乳酸、またはキナ酸、またはカフェイン酸、またはＬ－オルニチン、またはＬ－ロイシン、またはＬ－リジン、またはブチルヘキサヒドロピロロ［１，２－ａ］ピラジン－１，４－ジオン、またはセコイソラリシレシノール（ＳＥＣＯ）、または発酵指数、またはブタンジオール、またはジアセチルの測定された値が、対応する回収された値よりも低い場合、および／または還元糖、またはアスパラギン、またはグルタミン、または発酵指数の値が、対応する回収された値よりも高い場合、発酵工程を継続するために供する。
【0064】
別の態様によると、本発明は、たばこ材料を処理するための方法に関し、本方法は、たばこ材料を提供すること、およびたばこ材料を発酵させて発酵たばこ材料を得ることを含む。好ましくは、発酵工程は、たばこ材料を嫌気性条件下でインキュベートすることと、以下の条件のうちの少なくとも一つが満たされた時に発酵工程を停止することとを含む：
－ たばこ材料が、総乾燥重量基準で、少なくとも２０ミリグラム／グラム、好ましくは少なくとも５０ミリグラム／グラムの乳酸を含有する、
－ たばこ材料が、総乾燥重量基準で３パーセント未満の総還元糖を含有する、
－ たばこ材料が、総乾燥重量基準で３００ミリグラム／キログラム未満のアスパラギンを含有する、
－ たばこ材料が、総乾燥重量基準で７０ミリグラム／キログラム未満のグルタミンを含有する、
－ たばこ材料が、総遊離アミノ酸の総乾燥重量で１００００ミリグラム／キログラム超のアスパラギンを含有する、
－ たばこ材料が、たばこ材料中に初期量の１０倍を超える、好ましくは２０倍を超えるＬ－オルニチンを含有する、
－ たばこ材料が、総乾燥重量基準で５０ミリグラム／キログラムを超える、好ましくは８０ミリグラム／キログラムを超えるＬ－オルニチンを含有する。
－ たばこ材料が、総乾燥重量基準で、少なくとも２０ミリグラム／グラム、好ましくは少なくとも５０ミリグラム／グラムの乳酸を含有する、
－ たばこ材料が、総乾燥重量基準で３パーセント未満の総還元糖を含有する、
－ たばこ材料が、総乾燥重量基準で３００ミリグラム／キログラム未満のアスパラギンを含有する、
－ たばこ材料が、総乾燥重量基準で７０ミリグラム／キログラム未満のグルタミンを含有する、
－ たばこ材料が、総遊離アミノ酸の総乾燥重量で１００００ミリグラム／キログラム超のアスパラギンを含有する、
－ たばこ材料が、たばこ材料中に初期量の１０倍を超える、好ましくは２０倍を超えるＬ－オルニチンを含有する、
－ たばこ材料が、総乾燥重量基準で５０ミリグラム／キログラムを超える、好ましくは８０ミリグラム／キログラムを超えるＬ－オルニチンを含有する。
【0065】
嫌気性条件は、たばこ材料を容器の中に入れることと、容器を閉じることとによって達成されることが好ましい。嫌気性条件は、たばこ材料を容器の中に入れ、容器から空気を除去し、容器を閉じて、達成されることが好ましい。好ましくは、容器は完全な気密の様式で閉じられず、そのため発酵中に生成されるＣＯ2またはその他のガスが容器から漏れ出ることが許容される。このようにして、容器内のこれらの物質の蓄積が回避される。容器は外部環境からしっかりと分離され、嫌気性条件が容器内部に維持されることが好ましい。容器は、容器内で実現される過圧を回避する閉鎖部で閉じられることが好ましい。
【0066】
たばこ材料から空気を除去するために、圧力がかけられることがより好ましい。かけられた圧力は、たばこ材料から空気を押し出し、それによって、容器が閉じられた後、容器中に酸素がもはや存在しないか、または最小限の量でのみ存在する。
【0067】
たばこ材料を容器の中に入れ、空気が密封容器から除去された後に容器を閉めることは、嫌気性条件に迅速に到達することを可能にする。嫌気性条件を達成するこの方法は、コスト効率が良く、実施が容易であるため好ましい。
【0068】
好ましくは、発酵工程は、１０００キログラム／平方メートル（キログラム／ｍ2）～１５０００キログラム／平方メートル（キログラム／ｍ2）、好ましくは３０００キログラム／平方メートル～１２０００キログラム／平方メートル、より好ましくは５０００キログラム／平方メートル～１００００キログラム／平方メートルから成る圧力を、たばこ材料にかけることを含む。
【0069】
たばこ材料にかけられる圧力は発酵工程中、上記の範囲に維持される。
【0070】
圧力は、任意の手段によってたばこ材料にかけられてもよい。圧力は、容器に不活性ガスをポンプ注入してかけられてもよい。たばこ材料上に重しを置いて、望ましい圧力範囲がたばこ材料にかけられるようにして圧力がかけられてもよい。例えば、湿ったたばこ材料で容器が充填されてもよく、また水が容器から滲出するまで、容器の「リッド」として重しが、たばこ材料と接触して置かれる。好ましくは、圧力は、容器内の所望の圧力を確立するように、容器の閉鎖部および／またはその中に含まれるたばこ材料に加圧する油圧アクチュエータによって印加される。
【0071】
油圧アクチュエータは、たばこ材料に所望の圧力を加えるために使用されることが好ましい。油圧アクチュエータは、容器内で実現される圧力のレベルに依存して選択されうる。油圧アクチュエータは、例えばワインプレスなど、容器に圧力をかけるための当技術分野で公知である。たばこ材料は容器に挿入され、重しはたばこ材料の上または上方に位置して、所望の圧力を及ぼすことが好ましい。その後、容器は閉じられ、容器内部に重しを残し、それによって重しがたばこ材料に圧力をかけ続けうることが好ましい。
【0072】
発酵工程は、発酵中、たばこ材料の水分含量を、たばこ材料の総重量の１０～５０重量パーセントから成る量に保つことを含むことが好ましい（重量百分率による重量）。発酵工程は、発酵中、たばこ材料の水分含量を、たばこ材料の総重量の３５重量パーセント～４５重量パーセントから成る量に保つことを含むことがより好ましい（重量百分率による重量）。発酵工程は、発酵中、たばこ材料の水分含量を、約４０重量パーセントに保つことを含むことがより好ましい（重量百分率による重量）。乾燥後、たばこ材料の水分は概して低い。したがって、所望の水分レベルに達するために、水がたばこ材料に添加されることが好ましい。少なくとも一か月間、より好ましくは少なくとも２か月間、好ましくは少なくとも６か月間、さらにより好ましくは少なくとも８か月間、好ましくは少なくとも１２か月間、好ましくは少なくとも２４か月間、たばこ材料の水分量を、たばこ材料の総重量の１０～５０重量パーセント、好ましくは３５重量パーセント～４５、より好ましくは約４０重量パーセントから成る量に保つために、発酵プロセス中にも水が添加されることがより好ましい。
【0073】
この水分含量に到達するために、たばこ材料は水で湿らせることが好ましい。水がたばこ材料に添加されている。嫌気性条件が創出され保たれる容器に導入される前に、たばこ材料を水で湿らせることが好ましい。
【0074】
さらに、発酵工程中、この水分含量が維持される。したがって、発酵工程中、たばこ材料の水分含量はモニターされることが好ましい。例えば、発酵が起こる容器の中にたばこ材料が導入される場合、容器は開けられてもよく、たばこ材料の水分は、容器が開けられた時に測定されてもよい。たばこの水分の測定を実施するために、容器は一定の間隔で開けられることが好ましい。
【0075】
水分は、容器内部に設けられた水分センサーによって測定されてもよい。このようにして、水分は、たばこ材料が密封容器中にある時も測定されてもよい。
【0076】
たばこ材料の水分は、一定の間隔で測定されることが好ましい。
【0077】
発酵工程は、少なくとも１か月、好ましくは少なくとも２か月、より好ましくは少なくとも４か月、より好ましくは少なくとも６か月、さらにより好ましくは少なくとも８か月、好ましくは少なくとも１０か月の発酵時間の間持続することが好ましい。発酵工程は、少なくとも１２か月持続することが好ましい。発酵工程は、少なくとも２４か月持続することが好ましい。たばこ材料は、３６か月未満の発酵時間の間、より好ましくは２４か月未満の発酵時間の間、発酵条件に供されることが好ましい。好ましくは、発酵工程は、複数の発酵段階を含み、各発酵段階は発酵期間にわたって持続する。全体的な発酵工程は、少なくとも１か月、好ましくは少なくとも２か月、より好ましくは少なくとも４か月、より好ましくは少なくとも６か月、さらにより好ましくは少なくとも８か月、好ましくは少なくとも１０か月、好ましくは少なくとも１２か月、好ましくは少なくとも２４か月の発酵時間の間持続する。
【0078】
発酵時間は、たばこ材料のタイプ、またはたばこ材料の特徴、または例えば、温度、圧力、相対湿度などの発酵工程のパラメータのうちの少なくとも一つに依存してもよい。
【0079】
発酵条件の適用は、すべての請求された時間（例えば、一か月超、または二か月超、または６か月超、または１２か月超、または２４か月超）にわたって継続しうる。別の方法として、発酵工程は、特定の発酵期間を持続させる複数の発酵段階を含む。この場合、発酵条件は、複数の時間間隔中に適用され、一連の時間間隔を形成してもよい。異なる発酵段階は、発酵条件が適用されない中断によって互いに分離される。中断は、以下の条件のうちの一つ以上が中断される期間であると考えられる：嫌気性条件の存在、たばこ材料の総重量の２５重量パーセント～４０重量パーセントから成る水分量、１０００キログラム／平方メートル～４０００キログラム／平方メートルから成る圧力の印加。中断は、たばこ材料を調べるために起こってもよい。例えば、たばこ材料の水分は、中断中に測定されてもよい。中断は、一様な処理されたたばこ材料が得られうるように、たばこ材料を回転させるまたは混合するために起こってよい。中断は最大６時間持続してもよい。
【0080】
それ故に発酵時間は、たばこが上記の発酵条件に供される合計期間であり、これは、発酵条件が実際に適用される各発酵段階のすべての発酵期間を足して計算される。別の方法として、発酵時間は、発酵条件が初めて適用される瞬間から開始して、発酵条件が最後に適用される時に終了し、その後中断の期間を差し引いて計算することができる。
【0081】
例えば、発酵時間Ｔ（ここで、たばこ材料が発酵条件に供される合計期間を「発酵時間」とする）が選択された場合、以下の場合が可能である。発酵条件は、Ｔに等しい総持続時間にわたって連続的に適用され、この場合、一つの発酵段階のみがある。複数の発酵段階が提供され、発酵条件は、Ｎ発酵期間：ｔ1、ｔ2、．．．、ｔNに適用され、式中、ｔ1＋ｔ2＋．．．＋ｔN＝Ｔである。発酵期間ｔjとその後の時間間隔ｔj+1との間の時間ギャップは中断である。この合計発酵時間Ｔは、少なくとも一か月、または少なくとも二か月、または少なくとも６か月、または少なくとも１２か月、または少なくとも２４か月である）。発酵条件が適用される二つの連続した時間間隔の間に、中断が存在することが好ましい。中断は６時間を超えて持続しない。各発酵段階は約１５日間持続することが好ましく、約３０日間持続することがより好ましい。各発酵段階は、約３０日～約６０日持続することが好ましい。
【0082】
好ましくは、方法は、たばこ材料を乾燥して、たばこ材料の総重量の５重量パーセント～１０重量パーセントから成る水分含量を有する乾燥たばこ材料を得るために供する。乾燥工程は、発酵条件下での発酵工程が終了した後に実施されることが好ましい。発酵工程が終了した後、処理されたたばこ材料は、それが入れられた容器から取り出されて、たばこにかけられる圧力が減少されることが好ましい。処理されたたばこ材料を次いで、たばこ材料の総重量の１重量パーセント～１５重量パーセント、より好ましくは５重量パーセント～１０重量パーセントの水分含量まで乾燥される。乾燥は、処理されたたばこ材料が後続の工程で容易に加工されうるように実施される。
【0083】
方法は、発酵工程前にたばこ材料を乾燥する工程を含むことが好ましい。本発明の方法によって加工されたたばこ材料は、乾燥後のたばこを含んでもよい。本明細書で使用される「乾燥後のたばこ」という用語は、乾燥されたたばこを指す。たばこの乾燥は、標準的な手順によって実現されることが好ましく、たばこ材料に含まれるたばこのタイプに依存しうる。たばこ材料は、異なるタイプのたばこ、および異なる乾燥を受けたたばこを含んでもよい。異なるタイプのたばこをブレンドし、その後本発明によって処理してもよい。
【0084】
別の方法として、たばこ材料を容器の中に入れ、空気を除去して水で置き換える。
【0085】
たばこ材料が入れられる容器は、例えばバレルである。バレルは木材、またはコンクリート、または金属、またはこれら三つの材料のいずれかの組み合わせで作製されることが好ましい。
【0086】
嫌気性条件は、所望の発酵工程の期間にわたり保たれる。
【0087】
好ましくは、方法は、たばこ材料の色を評価するために供する。たばこ材料の色の評価は、所望の化学物質の測定に加えて実施されてもよい。たばこ材料の色は発酵工程中に変化する。たばこ材料の色の評価は、発酵の程度に関する表示を簡単に取得することを可能にする。
【0088】
好ましくは、方法は、たばこ材料の色が所望の色に達したときに発酵工程を停止するために供する。例えば、発酵条件は、たばこ材料の所望の色が得られるまで適用されうる。このようにして、本発明の方法の有効性を改善することが可能である。
【0089】
好ましくは、方法は、発酵工程中にたばこ材料の温度を２１℃～３５℃、好ましくは２５℃～３１℃から成る温度に保つために供する。好ましくは、発酵工程中（発酵条件が適用される間）のたばこ材料の温度は、２１℃～３５℃、より好ましくは２５℃～３１℃の範囲内に含まれたままである。たばこ材料の温度は、発酵工程全体中、この範囲内に実質的に維持される。温度は発酵自体によって維持され、たばこ材料への熱を提供するまたは減じる必要はない。発酵中のたばこ材料のこの温度は、たばこ材料が位置する周囲の周囲温度が好ましくは１５℃～２５℃から成る時に得られる。
【0090】
方法は、発酵工程中にたばこ材料を回転させる工程を含むことが好ましい。たばこ材料の回転は、均質化の改善を提供しうる。たばこ材料を回転させることは、たばこ材料を上下逆にすることを意味してもよい。たばこ材料を回転させることは、たばこ材料をひっくり返すことを意味してもよい。回転によって引き起こされた、発酵条件の中断は、たばこ材料の特定のパラメータ、例えば水分含量を測定するためにも使用されてもよい。たばこ材料の回転中、発酵条件は、もはや適用されなくてもよい。たばこの回転中、たばこ材料が回転中に嫌気性条件に供されない場合があるという意味で、発酵プロセスは中断されてもよい。回転後、発酵条件をたばこ材料に再び適用することが好ましい。方法は、約３０日の時間間隔でたばこ材料を回転させる工程を含むことが好ましい。方法は、約１５日の時間間隔でたばこ材料を回転させる工程を含むことが好ましい。
【0091】
発酵工程の異なる発酵段階は、回転工程によって中断されることが好ましい。
【0092】
方法は、たばこ材料を水分保持材料内に確保することを含むことが好ましい。たばこ材料を確保するこの工程は、たばこ材料が発酵条件に供される前に起こることが好ましい。水分保持材料は、たばこ処理プロセス（発酵）中に、分解に耐えることが望ましい。水分保持材料は可撓性材料を含んでもよい。この可撓性材料は、たばこ材料の周りに巻かれてもよい。水分保持材料は、プラスチック材料を含むことが好ましい。別の方法として、または追加的に、水分保持材料は硬質材料を含んでもよい。たばこ材料が中に導入される容器は、水分保持材料として機能してもよい。この場合、容器の材料は、例えば金属、木材、プラスチック、またはコンクリートを含んでもよい。
【0093】
好ましくは、方法はさらに、一定の量の非発酵たばこ材料を望ましい量の発酵たばこ材料または部分的発酵たばこ材料と混合して、たばこ材料中の発酵たばこ材料の量がたばこ材料全体の５重量パーセント～１０重量パーセントから成るたばこ材料を得ることを含む。混合工程は、発酵工程の前に提供されることが好ましい。それは混合工程の後に、たばこ材料を発酵工程に供するために提供されることが好ましい。
【0094】
これは、発酵プロセスの効率を改善し、発酵工程に必要な時間を短縮し、発酵工程から得られた発酵たばこ材料の特性を改善する。
【0095】
方法は、たばこ材料が約０．３ミリメートル～約１．４ミリメートルから成る寸法を有する断片で切断される、切断工程を含むことが好ましい。切断工程は、発酵工程前に実施されることが好ましい。これは、発酵工程の効率を改善することになる。これはまた、発酵工程の持続時間、すなわち、たばこ材料の組成物の所望の変化を得るために必要とされる時間を低減する。
【0096】
好ましくは、発酵中、たばこ材料のｐＨを、４．５～５．５、好ましくは約４．８～５．４から成るｐＨに維持するための方法がさらに提供される。処理されたたばこ材料は、未処理のたばこ材料よりも少なくとも１００倍酸性であることが好ましい。処理されたたばこ材料のｐＨおよび未処理のたばこ材料のｐＨは、少なくとも２ｐＨ単位異なっていてもよい。異なるたばこ材料において、ｐＨは実質的に変化しないままでありうる。
【0097】
別の方法として、または追加的に、本発明の方法によって処理されたたばこ材料は、再び等級分けされたたばこ、未加工の葉がブレンドされたたばこ、コンディショニングされたたばこ、茎を取ったまたは茎を剥がされたたばこ（または全葉の場合ではない）、乾燥たばこ、または詰めたばこを含んでもよい。
【0098】
別の態様によれば、本発明は、処理されたたばこ材料を得るためにたばこ材料を発酵することを含むプロセスによって得られるたばこ材料に関し、方法はたばこ材料を嫌気性条件下でインキュベートすることを含む。
【0099】
処理されたたばこ材料は、乳酸を含むことが好ましい。処理されたたばこ材料は、たばこ材料中の乳酸の初期量の１０倍を超える、好ましくは２０倍を超える、より好ましくは５０倍を超える、より好ましくは７０倍を超える、より好ましくは８０倍を超える乳酸の含有量を有することが好ましい。嫌気性発酵において、乳酸は関連する異化産物であることが知られている。乳酸は、ニコチンのえぐさに関して「なめらかにする効果」を有しうる。乳酸は、処理されたたばこ材料のｐＨの低下の原因でありうる。
【0100】
処理されたたばこ材料は、たばこ材料中の還元糖の初期量の０．５未満、好ましくは０．４未満、より好ましくは０．２未満、より好ましくは０．１未満である還元糖の含有量を有することが好ましい。処理されたたばこ材料は、前の態様の方法による処理前の同じたばこ材料中に含有された総還元糖の量よりも少なくとも５０パーセント、より好ましくは６０パーセント、さらにより好ましくは８５パーセント低い総還元糖の量を含むことが好ましい。発酵工程の終了時に、還元糖の量は、処理前の同じたばこ材料中に含有された還元糖の量よりも少なくとも５０パーセント、より好ましくは６０パーセント、さらにより好ましくは８５パーセント低いことが好ましい。還元糖はグルコース、フルクトース、スクロース、マルトースの合計である。処理されたたばこ材料中の還元糖の大半は、変換されうる。出発たばこ材料中に存在するグルコースおよびフルクトースなどの還元糖資源は、嫌気性細菌によってエネルギー源として使用されうる。酸素が存在しない場合、解糖経路は、グルコース（またはフルクトース）をピルビン酸に変換する。これらの化合物のレベルの変化は、処理されたたばこ材料の望ましい味および香りに寄与しうる。
【0101】
処理されたたばこ材料は、たばこ材料中のインドール－３乳酸の初期量の５倍を超える、好ましくは１０倍を超える、好ましくは２０倍を超えるインドール－３乳酸の含有量を有することが好ましい。
【0102】
処理されたたばこ材料は、たばこ材料中のカフェイン酸の初期量の４倍を超える、好ましくは１０倍を超えるカフェイン酸の含有量を有することが好ましい。
【0103】
処理されたたばこ材料は、たばこ材料中のキナ酸の初期量の２倍を超える、好ましくは４倍を超えるキナ酸の含有量を有することが好ましい。
【0104】
処理されたたばこ材料は、たばこ材料中のアスパラギンの初期量の０．５未満、好ましくは０．４未満、好ましくは０．３未満のアスパラギンの含有量を有することが好ましい。
【0105】
処理されたたばこ材料は、たばこ材料中のグルタミンの初期量の０．５未満、好ましくは０．４未満のグルタミンの含有量を有することが好ましい。
【0106】
処理されたたばこ材料は、たばこ材料中のＬ－オルニチンの初期量の１０倍を超える、好ましくは５０倍を超える、好ましくは１００倍を超えるＬ－オルニチンの含有量を有することが好ましい。
【0107】
処理されたたばこ材料は、たばこ材料中のＬ－ロイシンの初期量の２倍を超える、好ましくは６倍を超えるＬ－ロイシンの含有量を有することが好ましい。
【0108】
処理されたたばこ材料は、たばこ材料中のＬ－リジンの初期量の２倍を超える、好ましくは６倍を超えるＬ－リジンの含有量を有することが好ましい。
【0109】
処理されたたばこ材料は、５０を超える、好ましくは１００を超える、より好ましくは２５０を超える、より好ましくは４００を超える発酵指数を有することが好ましい。発酵指数は、たばこ材料中の乳酸の含有量と乳酸の初期含有量との比を、たばこ材料中の還元糖の含有量と還元糖の初期含有量との比で割って得られる。
【0110】
さらなる態様によれば、本発明は、以下の特徴のうちの少なくとも一つを含有するたばこ処理材料に関する：
－ たばこ材料中の乳酸の初期量の１０倍を超える、好ましくは２０倍を超える、より好ましくは５０倍を超える、より好ましくは７０倍を超える、より好ましくは８０倍を超える量の乳酸、
－ たばこ材料中の還元糖の初期量の０．５未満、好ましくは０．４未満、より好ましくは０．２未満、より好ましくは０．１未満である量の還元糖、
－ たばこ材料中のインドール－３乳酸の初期量の５倍を超える、好ましくは１０倍を超える、好ましくは２０倍を超える量のインドール－３乳酸、
－ たばこ材料中のカフェイン酸の初期量の４倍を超える、好ましくは１０倍を超える量のカフェイン酸、
－ たばこ材料中のキナ酸の初期量の２倍を超える、好ましくは４倍を超える量のキナ酸、
－ たばこ材料中のアスパラギンの初期量の０．５未満、好ましくは０．４未満、好ましくは０．３未満の量のアスパラギン、
－ たばこ材料中のグルタミンの初期量の０．５未満、好ましくは０．４未満の量のグルタミン、
－ Ｌ－オルニチンは、たばこ材料中のＬ－オルニチンの初期量の１０倍を超える、好ましくは５０倍を超える、好ましくは１００倍を超える、
－ Ｌ－ロイシンの初期量の２倍を超える、好ましくは４倍を超えるの量のＬ－ロイシン、
－ Ｌ－リジンの初期量の２倍を超える、好ましくは６倍を超えるの量のＬ－リジン、
－ 発酵指数は、５０を超え、好ましくは１００を超え、より好ましくは２５０を超え、より好ましくは４００を超え、ここで発酵指数は、たばこ材料中の乳酸の含有量と非発酵たばこ材料中の乳酸の含有量との比を、たばこ材料中の還元糖の含有量と非発酵たばこ材料中の還元糖の含有量との比で割って得られる。
－ たばこ材料中の乳酸の初期量の１０倍を超える、好ましくは２０倍を超える、より好ましくは５０倍を超える、より好ましくは７０倍を超える、より好ましくは８０倍を超える量の乳酸、
－ たばこ材料中の還元糖の初期量の０．５未満、好ましくは０．４未満、より好ましくは０．２未満、より好ましくは０．１未満である量の還元糖、
－ たばこ材料中のインドール－３乳酸の初期量の５倍を超える、好ましくは１０倍を超える、好ましくは２０倍を超える量のインドール－３乳酸、
－ たばこ材料中のカフェイン酸の初期量の４倍を超える、好ましくは１０倍を超える量のカフェイン酸、
－ たばこ材料中のキナ酸の初期量の２倍を超える、好ましくは４倍を超える量のキナ酸、
－ たばこ材料中のアスパラギンの初期量の０．５未満、好ましくは０．４未満、好ましくは０．３未満の量のアスパラギン、
－ たばこ材料中のグルタミンの初期量の０．５未満、好ましくは０．４未満の量のグルタミン、
－ Ｌ－オルニチンは、たばこ材料中のＬ－オルニチンの初期量の１０倍を超える、好ましくは５０倍を超える、好ましくは１００倍を超える、
－ Ｌ－ロイシンの初期量の２倍を超える、好ましくは４倍を超えるの量のＬ－ロイシン、
－ Ｌ－リジンの初期量の２倍を超える、好ましくは６倍を超えるの量のＬ－リジン、
－ 発酵指数は、５０を超え、好ましくは１００を超え、より好ましくは２５０を超え、より好ましくは４００を超え、ここで発酵指数は、たばこ材料中の乳酸の含有量と非発酵たばこ材料中の乳酸の含有量との比を、たばこ材料中の還元糖の含有量と非発酵たばこ材料中の還元糖の含有量との比で割って得られる。
【0111】
前述のパラメータのうちの一つ以上を有する処理されたたばこ材料は、改善された感覚刺激特性を有する。上述のパラメータは、ユーザーからのたばこ材料の品質および考えられ得る評価を見きわめることを可能にする。さらに、上述のパラメータは感覚刺激特性、したがってたばこ材料の最終的な味に影響を与える。従って、上述のパラメータの値に基づいて、たばこ材料が方向付けられることが好ましいユーザー群を予測することが可能である。示されたパラメータのうちの一つ以上の値に基づいて、実際には、どのユーザーがたばこ材料をより高く評価するかを予測することが可能である。
【0112】
好ましくは、処理されたたばこ材料は、たばこ材料中の３－ｓｅｃ－ブチルヘキサヒドロピロロ［１，２－ａ］ピラジン－１，４－ジオンの初期量の２０倍を超える、好ましくは４０倍を超える、より好ましくは６０倍を超える、より好ましくは８０倍を超える、３－ｓｅｃ－ブチルヘキサヒドロピロロ［１，２－ａ］ピラジン－１，４－ジオンの含有量を有する。
【0113】
好ましくは、処理されたたばこ材料は、たばこ材料中のセコイソラリシレシノール（ＳＥＣＯ）の初期量の１０倍を超える、好ましくは２０倍を超える、より好ましくは４０倍を超える、より好ましくは５０倍を超える、セコイソラリシレシノール（ＳＥＣＯ）の含有量を有する。
【0114】
別の態様によると、本発明は、総乾燥重量基準で、少なくとも２０ミリグラム／グラム、好ましくは少なくとも５０ミリグラム／グラムの乳酸を含有するたばこ材料に関する。
【0115】
別の態様によると、本発明は、総乾燥重量基準で３パーセント未満の総還元糖を含むたばこ材料に関する。
【0116】
別の態様によると、本発明は、総乾燥重量基準で３００ミリグラム／キログラム未満のアスパラギンを含むたばこ材料に関する。
【0117】
別の態様によると、本発明は、総乾燥重量基準で７０ミリグラム／キログラム未満のグルタミンを含むたばこ材料に関する。
【0118】
別の態様によると、本発明は、総遊離アミノ酸の総乾燥重量で１００００ミリグラム／キログラム超のアスパラギンを含むたばこ材料に関する。
【0119】
別の態様によれば、本発明は、たばこ材料中のＬ－オルニチンの初期量の１０倍超、好ましくは２０倍超から成るたばこ材料に関する。
【0120】
別の態様によると、本発明は、総乾燥重量基準で５０ミリグラム／キログラムを超える、好ましくは８０ミリグラム／キログラムを超えるＬ－オルニチンを含有するたばこ材料に関する。
【0121】
前述の態様のいずれか一つのたばこ材料は、たばこ材料を発酵することを含むプロセスによって得られてもよく、方法はたばこ材料を嫌気性条件下でインキュベートすることを含む。
【0122】
たばこ材料は乾燥されることが好ましい。たばこ材料は、発酵工程に供される前に乾燥されることが好ましい。
【0123】
本発明の別の態様によれば、たばこ材料中の２，３ブタンジオールの初期量の５倍を超える、好ましくは１０倍を超える２，３ブタンジオールの含有量を有するダークたばこ材料が提供される。
【0124】
本発明の別の態様によれば、たばこ材料中のジアセチルの初期量の５倍を超える、好ましくは１０倍を超えるジアセチルの含有量を有するダークたばこ材料が提供される。
【0125】
本発明の別の態様によると、たばこ材料としてバージニアたばこ材料が提供される。
【0126】
本発明のさらなる態様によれば、総乾燥重量基準で約２．５重量パーセント～総乾燥重量基準で１００重量パーセント、好ましくは総乾燥重量基準で少なくとも約４重量パーセント、好ましくは総乾燥重量基準で少なくとも約１０重量パーセントを含有するたばこ材料を含むエアロゾル発生物品が提供される。割合は、前述の態様のいずれか一つによるたばこ発酵材料の総乾燥重量基準の重量で示されている。
【0127】
本発明のさらなる態様によると、総乾燥重量基準で少なくとも５ミリグラム／グラム、好ましくは１０ミリグラム／グラムの乳酸を含有するエアロゾル発生物品が提供される。
【0128】
本発明の別の態様によると、総乾燥重量基準で３００ミリグラム／キログラム未満のアスパラギンを含有するエアロゾル発生物品が提供される。
【0129】
本発明の別の態様によると、総乾燥重量基準で７０ミリグラム／キログラム未満のグルタミンを含有するエアロゾル発生物品が提供される。
【0130】
本発明の別の態様によると、総遊離アミノ酸の総乾燥重量で１００００ミリグラム／キログラム未満のアスパラギンを含有するエアロゾル発生物品が提供される。
【0131】
本発明のたばこ材料の利点は、前の態様を参照しながら既に概説されていて、ここでは繰り返さない。
【0132】
たばこ材料は、葉脈が取り除かれた、手で剥がされた葉を含むことが好ましい。
【0133】
たばこ材料はカストリたばこを含むことが好ましい。
【0134】
たばこ材料はバージニアたばこを含むことが好ましい。
【0135】
たばこ材料はダークたばこを含むことが好ましい。
【0136】
本発明の方法によって処理されたたばこは、未処理のたばこに関して、その化学的組成を変化しうる。本文脈における「処理されたたばこ材料」とは、前のプロセスにおいて記述の通りの処理を受けたたばこ材料、すなわち少なくとも一か月間、発酵条件に供されたたばこ材料を意味する。本文脈における「未処理のたばこ材料」とは、前の方法において記述の通りの処理を受けなかったたばこ材料、すなわち発酵工程に供されていないたばこ材料を意味する。未処理のたばこ材料は、例えば本発明の処理が始まる前に容器に挿入されているたばこ材料である。処理されたたばこ材料は、本発明による処理を受けなかった同じたばこ材料（未処理のたばこ材料）と比較される。アスパラギンの減少は、アスパラギン酸塩の増加と関連付けられうる。これは、発酵細菌が、アミノ酸資源からＣおよびＮを同化するための特定のアスパラギナーゼを産生することを示唆する。この反応はアンモニアを産生しうる。
【0137】
本文脈における非発酵たばこ材料とは、前の方法において記述の通りの処理を受けなかったたばこ材料、すなわち発酵工程に供されていないたばこ材料を意味する。本文脈における発酵たばこ材料または部分的発酵たばこ材料とは、前の方法において記述の通りの処理を受けたたばこ材料、すなわち特定の期間の間発酵工程に供されたたばこ材料を意味する。
【0138】
本明細書で使用される「変化」または「変化した」という用語は、風味または感覚刺激特性の文脈において使用され、熟練した喫煙者によって特定される通りの、一つの全体的な味または官能特性から別の味または官能特性への修正があることを意味する。これには改善が含まれうる。
【0139】
本開示の目的において、「初期」という用語で、たばこ材料を発酵工程に供する前の、化学物質の量、または一般的にたばこ材料のパラメータの値とみなされる。この意味で、初期という語は、非発酵と同義とみなされ得る。
【0140】
その中で使用される場合、「発酵工程」、または「発酵」または「発酵条件」の定義はすべて、材料が、材料の発酵を引き起こすのに好適な条件に望ましい時間にわたって供されることを示す。
【0141】
「たばこ材料」という用語は、たばこ植物の任意の部分、または異なるたばこ植物の混合物を意味し、これには、たばこ葉くず、未加工のたばこ葉くず、たばこの茎、たばこ加工中に発生されたたばこダスト、たばこ葉プライムラミナ細片、およびその組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。たばこ材料は、加工済みたばこの部分または断片の形態、本質的に天然のラミナまたは茎の形態の乾燥・熟成されたたばこ、たばこ抽出物、または上記の混合物を有することができ、これには例えば、抽出されたたばこパルプを、粒状化されて乾燥・熟成された天然たばこラミナと組み合わせた混合物がある。たばこ材料は、固体の形態、液体の形態、半固体の形態、またはこれに類するものとしうる。「たばこ材料」という用語は、任意の部分、および例えばＮｉｃｏｔｉａｎａ属の任意のメンバーの葉または茎など、関連する任意の副産物を含むことが好ましい。本発明で使用するためのたばこ材料は、Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔａｂａｃｕｍ種由来であることが好ましい。任意のタイプ、スタイル、または様々なたばこを処理しうる。使用されうるたばこの例には、バージニア、バーレー、オリエント葉たばこ、およびこれらのタイプの任意のブレンドが含まれうるが、これらに限定されない。たばこ材料はカストリたばこを含むことが好ましい。処理されるたばこ材料は、乾燥後のたばこを含んでもよいか、またはそれから成ってもよい。
【0142】
本明細書で使用される「乾燥後のたばこ」という用語は、乾燥されたが、たばこ材料の味または香りを変えるためのさらなる処理プロセスを受けていないたばこを指す。乾燥後のたばこは、他のスタイル、種類、またはタイプのたばことブレンドされていてもよい。別の方法として、または追加的に、処理されるたばこ材料は、再び等級分けされたたばこ、未処理の葉がブレンドされたたばこ、コンディショニングされたたばこ、茎を取ったまたは茎をはがされたたばこ（または全葉の場合ではない）、乾燥されたたばこ、または詰められたたばこを含むかまたはそれらから成ってもよい。
【0143】
たばこ材料はラミナたばこ材料を含むことが好ましい。たばこは約７０パーセント～１００パーセントのラミナ材料を含んでもよい。
【0144】
たばこ材料がラミナたばこ材料を含む時、ラミナは全葉の形態でありうる。一部の実施形態において、たばこ材料は、乾燥された全葉たばこを含む。一部の実施形態において、たばこ材料は、乾燥された全葉たばこを実質的に含む。一部の実施形態において、たばこ材料は本質的に、乾燥された全葉のたばこから成る。
【0145】
一部の実施形態において、たばこ材料は茎たばこ材料を含む。たばこは、最大３０パーセントの茎材料を含んでもよい。
【0146】
未乾燥たばこを「乾燥する」プロセスは、収穫したたばこのタイプに依存する。例えば、バージニアフルー（ブライト）たばこは典型的に、熱風乾燥され、その一方でバーレーおよびある種のダークストレインは通常、空気乾燥される。たばこの熱風乾燥は典型的に、五日～七日の期間にわたって行われ、これと比較して空気乾燥は一か月～二か月にわたって行われる。数多くの主要な化学変化および生化学変化は、乾燥プロセス中に始まり、葉の乾燥の初期段階を通して継続される。黄色から褐色へのたばこの転換は概して、ニトロソアミンの形成および著しい蓄積をもたらし、微生物の含量が増加する。
【0147】
異なるタイプのたばこには、異なるタイプの乾燥が使用される。
【0148】
バージニアたばこは概して、「熱風乾燥」されている。たばこの葉は乾燥する納屋に吊り下げられ、そこで加熱された空気が発生されて葉を乾燥する。葉が水分を失うと、独特の香り、質感、色を発現する。農夫は、このプロセスを慎重に進めなければならず、このプロセスには最大一週間かかるが、その間、加熱された空気の温度を絶えず監視し、徐々に上昇させなければならない。プロセスのどの段階においても、熱が高すぎたり低すぎたりすると、たばこの品質にマイナスの影響を及ぼすことになる。
【0149】
バーレーおよびオリエント葉たばこは、異なる方法で乾燥される。バーレーは、熱と湿度が自然換気に由来する納屋内で「空気乾燥」される。乾燥プロセスは最大二か月かかる。オリエント葉たばこは、日の当たる屋外で葉を約二週間吊り下げることによって、「日光乾燥」される。
【0150】
本テキストにおいて、動詞の「ｃｏｍｐｒｉｓｅ（含む）」および「ｉｎｃｌｕｄｅ（含む）」は同義語であり、両方とも特徴の非網羅的リストを示す。動詞「ｃｏｎｓｉｓｔ（から成る）」は、網羅的なリストを示す。
【0151】
本発明は特許請求の範囲に定義されている。しかしながら、以下に非限定的な実施例の非網羅的なリストを提供している。これらの実施例の特徴のうちのいずれか一つ以上は、本明細書に記載の別の実施例、実施形態、または態様のうちのいずれか一つ以上の特徴と組み合わされてもよい。
【0152】
本発明は、とりわけ以下の実施例によって定義されうる。
【0153】
実施例１．
たばこ材料を処理する方法であって、方法が、
－ たばこ材料を提供することと、
－ 発酵たばこ材料を得るためにたばこ材料を発酵させることであって、
－ 嫌気性条件下でたばこ材料をインキュベートすること、
－ および、以下の条件：
－ 乳酸の含有量が、たばこ材料中の乳酸の初期量の１０倍を超える、好ましくは２０倍を超える、より好ましくは５０倍を超える、より好ましくは７０倍を超える、好ましくは８０倍を超える、
－ 還元糖の含有量が、たばこ材料中の還元糖の初期量の０．５未満、好ましくは０．４未満、より好ましくは０．２未満、より好ましくは０．１未満である、
－ インドール－３乳酸の含有量が、たばこ材料中のインドール－３乳酸の初期量の５倍を超える、好ましくは１０倍を超える、好ましくは２０倍を超える、
－ カフェイン酸の含有量が、たばこ材料中のカフェイン酸の初期量の４倍を超える、好ましくは１０倍を超える、
－ キナ酸の含有量が、たばこ材料中のキナ酸の初期量の２倍を超える、好ましくは４倍を超える、
－ アスパラギンの含有量が、たばこ材料中のアスパラギンの初期量の０．５未満、好ましくは０．４未満、好ましくは０．３未満である、
－ グルタミンの含有量が、たばこ材料中のグルタミンの初期量の０．５未満、好ましくは０．４未満である、
－ Ｌ－オルニチンの含有量が、たばこ材料中のＬ－オルニチンの初期量の１０倍を超える、好ましくは５０倍を超える、好ましくは１００倍を超える、
－ Ｌ－ロイシンの含有量が、たばこ材料中のＬ－ロイシンの初期量の２倍を超える、好ましくは４倍を超える、
－ Ｌ－リジンの含有量が、たばこ材料中のＬ－リジンの初期量の２倍を超える、好ましくは６倍を超える、
－ 発酵指数が、５０を超え、好ましくは１００を超え、より好ましくは２５０を超え、より好ましくは４００を超え、ここで発酵指数は、たばこ材料中の乳酸の含有量と乳酸の初期含有量との比を、たばこ材料中の還元糖の含有量と還元糖の初期含有量との比で割って得られる、のうちの少なくとも一つが満たされたとき、発酵工程を停止すること、を含む、たばこ材料を発酵させることと、を含む、方法。
実施例２．
たばこ材料中の、乳酸、または還元糖、またはインドール－３乳酸、またはキナ酸、またはカフェイン酸、またはＬ－オルニチン、またはアスパラギン、またはグルタミン、またはＬ－ロイシン、またはＬ－リジン、または発酵指数のうちの少なくとも一つの初期含有量を測定するための初期測定工程をさらに含む、実施例１に記載の方法。
実施例３．
発酵工程中のたばこ材料中の、乳酸、または還元糖、またはインドール－３乳酸、またはキナ酸、またはカフェイン酸、またはＬ－オルニチン、またはアスパラギン、またはグルタミン、またはＬ－ロイシン、またはＬ－リジン、または発酵指数のうちの少なくとも一つの含有量を測定するための測定工程をさらに含む、実施例１または２に記載の方法。
実施例４．
たばこ材料がダークたばこを含有する場合、２，３ブタンジオールの含有量が、たばこ材料中の２，３ブタンジオールの初期量の５倍を超える、好ましくは１０倍を超える、またはジアセチルの含有量が、たばこ材料中のジアセチルの初期量の５倍を超える、好ましくは１０倍を超えるという条件のうちの少なくとも一つが満たされる時に、発酵を停止するために提供される、実施例１～３のいずれか一つに記載の方法。
実施例５．
たばこ材料中の２，３ブタンジオールまたはジアセチルのそれぞれの初期量を得るように、発酵前にたばこ材料中の２，３ブタンジオールまたはジアセチルの初期含有量を測定するための初期測定工程をさらに含む、実施例４に記載の方法。
実施例６．
発酵工程中にたばこ材料中の２，３ブタンジオールまたはジアセチルの含有量を測定するための測定工程をさらに含む、実施例４～５のいずれかに記載の方法。
実施例７．
発酵工程中に、１０００キログラム／平方メートル～１５０００キログラム／平方メートル、好ましくは３０００キログラム／平方メートル～１２０００キログラム／平方メートル、より好ましくは５０００キログラム／平方メートル～１００００キログラム／平方メートルから成る圧力をたばこ材料に印加することを含む、実施例１～６のいずれか一つに記載の方法。
実施例８．
発酵工程中に、発酵中にたばこ材料の水分含量を、たばこ材料の総重量の１０重量パーセント～５０重量パーセント、好ましくは３５重量パーセント～４５重量パーセント、より好ましくは約４０重量パーセントから成る量に保つことを含む、実施例１～７のいずれか一つに記載の方法。
実施例９．
少なくとも１か月、好ましくは少なくとも２か月、より好ましくは少なくとも４か月、より好ましくは少なくとも６か月、さらにより好ましくは少なくとも８か月、好ましくは少なくとも１０か月、より好ましくは少なくとも１２か月の発酵時間の間発酵工程を継続するために提供される、実施例１～８に記載の方法。
実施例１０．
少なくとも２４か月の発酵時間の間、発酵工程を継続するために提供される、実施例１～９のいずれか一つに記載の方法。
実施例１１．
たばこ材料を乾燥して、たばこ材料の総重量の５重量パーセント～１０重量パーセントから成る水分含量を有する乾燥たばこ材料を得ることをさらに含む、実施例１～１０のいずれか一つに記載の方法。
実施例１２．
発酵工程の前にたばこ材料を乾燥するための乾燥工程を含む、実施例１～１１のいずれか一つに記載の方法。
実施例１３．
たばこ材料の温度を２１℃～３５℃、好ましくは２５℃～３１℃から成る温度に保つことを含む、実施例１～１２のいずれか一つに記載の方法。
実施例１４．
好ましくは約１５日の時間間隔で、より好ましくは約３０日の時間間隔で、好ましくは約３０日～約６０日の時間間隔でたばこ材料を回転させる工程を含む、実施例１～１３の一つ以上に記載の方法。
実施例１５．
たばこ材料を水分保持材料内に確保することを含む、実施例１～１４の一つ以上に記載の方法。
実施例１６．
たばこ材料の総重量の約１０重量パーセント～約５０重量パーセント、好ましくは総重量の約３５重量パーセント～約４５重量パーセント、好ましくは総重量の約４０重量パーセントから成るたばこ材料の水分含量を達成するように、発酵前に水中でたばこ材料を湿らせることを含む、実施例１～１５の一つ以上に記載の方法。
実施例１７．
一定の量の非発酵たばこ材料を望ましい量の発酵たばこ材料と混合してたばこ材料を得て、次にたばこ材料を発酵工程に供し、ここでたばこ材料中の発酵たばこ材料の量が、たばこ材料の５重量パーセント～１０重量パーセントから成る、実施例１～１６のいずれか一つに記載の方法。
実施例１８．
発酵工程後のたばこ材料中の、乳酸、または還元糖、またはインドール－３乳酸、またはキナ酸、またはカフェイン酸、またはＬ－オルニチン、またはアスパラギン、またはグルタミン、またはＬ－ロイシン、またはＬ－リジン、または発酵指数のうちの少なくとも一つの含有量を測定するための最終測定工程をさらに含む、実施例１～１７のいずれかに記載の方法。
実施例１９．
発酵中、たばこ材料のｐＨを、４．５～５．５、好ましくは約４．８～５．４から成るｐＨに維持するためにさらに供する、実施例１～１８のいずれか一つに記載の方法。
実施例２０．
たばこ材料を処理する方法であって、方法が、
－ たばこ材料を提供することと、
－ 発酵たばこ材料を得るためにたばこ材料を発酵させることであって、発酵工程が、
－ 嫌気性条件下でたばこ材料をインキュベートすることであって、ここで発酵工程中、１０００キログラム／平方メートル～１５０００キログラム／平方メートル、好ましくは３０００キログラム／平方メートル～１２０００キログラム／平方メートル、より好ましくは５０００キログラム／平方メートル～１００００キログラム／平方メートルから成る圧力をたばこ材料に印加するために提供される、インキュベートすること、を含む、発酵させることと、を含む方法。
実施例２１．
たばこ材料を処理する方法であって、方法が、
－ たばこ材料を提供することと、
－ 発酵たばこ材料を得るためにたばこ材料を発酵させることであって、発酵工程が、
－ 嫌気性条件下でたばこ材料をインキュベートすることであって、ここで少なくとも１か月、好ましくは少なくとも２か月、より好ましくは少なくとも４か月、より好ましくは少なくとも６か月、さらにより好ましくは少なくとも８か月、好ましくは少なくとも１０か月、より好ましくは少なくとも１２か月の発酵時間の間発酵工程を継続するために提供される、インキュベートすること、を含む、発酵させることと、を含む方法。
実施例２２．
たばこ材料を処理する方法であって、方法が、
－ たばこ材料を提供することと、
－ 発酵たばこ材料を得るためにたばこ材料を発酵させることであって、発酵工程が、
－ 嫌気性条件下でたばこ材料をインキュベートすることであって、ここで発酵工程中、たばこ材料の温度を２１℃～３５℃、好ましくは２５℃～３１℃から成る温度に保つために提供される、インキュベートすること、を含む発酵させることと、を含む方法。
実施例２３．
発酵たばこ材料および／または部分的発酵たばこ材料中の、乳酸、または還元糖、またはインドール－３乳酸、またはキナ酸、またはカフェイン酸、またはＬ－オルニチン、またはアスパラギン、またはグルタミン、またはＬ－ロイシン、またはＬ－リジン、またはブチルヘキサヒドロピロロ［１，２－ａ］ピラジン－１，４－ジオン、またはセコイソラリシレシノール（ＳＥＣＯ）、または発酵指数、またはブタンジオール、またはジアセチルのうちの少なくとも一つの量を含むデータベースを提供することをさらに含む、実施例１～２２のいずれか一つに記載の方法。
実施例２４．
複数の異なるたばこ材料について、発酵たばこ材料および／または部分的発酵たばこ材料中の、乳酸、または還元糖、またはインドール－３乳酸、またはキナ酸、またはカフェイン酸、またはＬ－オルニチン、またはアスパラギン、またはグルタミン、またはＬ－ロイシン、またはＬ－リジン、またはブチルヘキサヒドロピロロ［１，２－ａ］ピラジン－１，４－ジオン、またはセコイソラリシレシノール（ＳＥＣＯ）、または発酵指数、またはブタンジオール、またはジアセチルのうちの少なくとも一つの量を含むデータベースを提供することを含む、実施例１～２３のいずれか一つに記載の方法。
実施例２５．
少なくとも一つのデータベースから、乳酸、または還元糖、またはインドール－３乳酸、またはキナ酸、またはカフェイン酸、またはＬ－オルニチン、またはアスパラギン、またはグルタミン、またはＬ－ロイシン、またはＬ－リジン、またはブチルヘキサヒドロピロロ［１，２－ａ］ピラジン－１，４－ジオン、またはセコイソラリシレシノール（ＳＥＣＯ）、または発酵指数、またはブタンジオール、またはジアセチルのうちの少なくとも一つの量を回収すること、および回収された値を、発酵中のたばこ材料における対応する測定された値と比較すること、を含む、実施例２６または２７に記載の方法。
実施例２６．
乳酸、またはインドール－３乳酸、またはキナ酸、またはカフェイン酸、またはＬ－オルニチン、またはＬ－ロイシン、またはＬ－リジン、またはブチルヘキサヒドロピロロ［１，２－ａ］ピラジン－１，４－ジオン、またはセコイソラリシレシノール（ＳＥＣＯ）、または発酵指数、またはブタンジオール、またはジアセチルの測定された値が、対応する回収された値よりも低い場合、および／または還元糖、またはアスパラギン、またはグルタミン、または発酵指数の値が、対応する回収された値よりも高い場合、発酵工程を継続すること、をさらに含む、実施例２８に記載の方法
実施例２７．
実施例１～２６のいずれか一つに記載の方法に従って得られるたばこ材料。
実施例２８．
たばこ材料を発酵することを含む方法によって得られるたばこ材料であって、方法が、嫌気性条件下でたばこ材料をインキュベートすることを含み、ここで以下の条件のうちの少なくとも一つがたばこ材料において満たされる：
－ 乳酸の含有量が、たばこ中の乳酸の初期量の１０倍を超える、好ましくは２０倍を超える、より好ましくは５０倍を超える、より好ましくは７０倍を超える、より好ましくは８０倍を超える、
－ 還元糖の含有量が、たばこ材料中の還元糖の初期量の０．５未満、好ましくは０．４未満、より好ましくは０．２未満、より好ましくは０．１未満である、
－ インドール－３乳酸の含有量が、たばこ材料中のインドール－３乳酸の初期量の５倍を超える、好ましくは１０倍を超える、好ましくは２０倍を超える、
－ カフェイン酸の含有量が、たばこ材料中のカフェイン酸の初期量の４倍を超える、好ましくは１０倍を超える、
－ キナ酸の含有量が、たばこ材料中のキナ酸の初期量の２倍を超える、好ましくは４倍を超える、
－ アスパラギンの含有量が、たばこ材料中のアスパラギンの初期量の０．５未満、好ましくは０．４未満、好ましくは０．３未満である、
－ グルタミンの含有量が、たばこ材料中のグルタミンの初期量の０．５未満、好ましくは０．４未満である、
－ Ｌ－オルニチンの含有量が、たばこ材料中のＬ－オルニチンの初期量の１０倍を超える、好ましくは５０倍を超える、好ましくは１００倍を超える、
－ Ｌ－ロイシンの含有量が、たばこ材料中のＬ－ロイシンの初期量の２倍を超える、好ましくは４倍を超える、
－ Ｌ－リジンの含有量が、たばこ材料中のＬ－リジンの初期量の２倍を超える、好ましくは６倍を超える、
－ 発酵指数が、５０を超え、好ましくは１００を超え、より好ましくは２５０を超え、より好ましくは４００を超え、ここで発酵指数は、たばこ材料中の乳酸の含有量と非発酵たばこ材料中の乳酸の含有量との比を、たばこ材料中の還元糖の含有量と非発酵たばこ材料中の還元糖の含有量との比で割って得られる。
実施例２９．
以下の特徴のうちの少なくとも一つを含有するたばこ材料：
－ たばこ材料中の乳酸の初期量の１０倍を超える、好ましくは２０倍を超える、より好ましくは５０倍を超える、より好ましくは７０倍を超える、より好ましくは８０倍を超える量の乳酸、
－ たばこ材料中の還元糖の初期量の０．５未満、好ましくは０．４未満、より好ましくは０．２未満、より好ましくは０．１未満である量の還元糖、
－ たばこ材料中のインドール－３乳酸の初期量の５倍を超える、好ましくは１０倍を超える、好ましくは２０倍を超える量のインドール－３乳酸、
－ たばこ材料中のカフェイン酸の初期量の４倍を超える、好ましくは１０倍を超える量のカフェイン酸、
－ たばこ材料中のキナ酸の初期量の２倍を超える、好ましくは４倍を超える量のキナ酸、
－ たばこ材料中のアスパラギンの初期量の０．５未満、好ましくは０．４未満、好ましくは０．３未満の量のアスパラギン、
－ たばこ材料中のグルタミンの初期量の０．５未満、好ましくは０．４未満の量のグルタミン、
－ Ｌ－オルニチンは、たばこ材料中のＬ－オルニチンの初期量の１０倍を超える、好ましくは５０倍を超える、好ましくは１００倍を超える、
－ Ｌ－ロイシンの初期量の２倍を超える、好ましくは４倍を超えるの量のＬ－ロイシン、
－ Ｌ－リジンの初期量の２倍を超える、好ましくは６倍を超えるの量のＬ－リジン、
－ 発酵指数は、５０を超え、好ましくは１００を超え、より好ましくは２５０を超え、より好ましくは４００を超え、ここで発酵指数は、たばこ材料中の乳酸の含有量と非発酵たばこ材料中の乳酸の含有量との比を、たばこ材料中の還元糖の含有量と非発酵たばこ材料中の還元糖の含有量との比で割って得られる。
実施例３０．
前述のたばこ材料が、たばこ材料を嫌気性条件下でインキュベートすることを含む、処理されたたばこ材料を得るためにたばこ材料を発酵することを含むプロセスによって得られる、実施例１～２９に記載のたばこ材料。
実施例３１．
総乾燥重量基準で、少なくとも２０ミリグラム／グラム、好ましくは少なくとも５０ｍｇ／グラム、より好ましくは少なくとも６０ミリグラム／グラムの乳酸を含有する、たばこ材料。
実施例３２．
総乾燥重量基準で３パーセント未満の総還元糖を含む、たばこ材料。
実施例３３．
総乾燥重量基準で３００ミリグラム／キログラム未満のアスパラギンを含む、たばこ材料。
実施例３４．
総乾燥重量基準で７０ミリグラム／キログラム未満のグルタミンを含む、たばこ材料。
実施例３５．
総乾燥重量基準で１００００ミリグラム／キログラム超の総遊離アミノ酸を含む、たばこ材料。
実施例３６．
少なくとも１マイクログラム／グラム、好ましくは少なくとも２マイクログラム／グラム、より好ましくは少なくとも２．５マイクログラム／グラムのインドール－３乳酸を含む、たばこ材料。
実施例３７．
たばこ材料が乾燥される、実施例２７～３６の一つ以上に記載のたばこ材料。
実施例３８．
たばこ材料が粉砕される、実施例２７～３７の一つ以上に記載のたばこ材料。
実施例３９．
総乾燥重量基準で約２．５重量パーセント～総乾燥重量基準で１００重量パーセント、好ましくは総乾燥重量基準で少なくとも約４重量パーセント、好ましくは総乾燥重量基準で少なくとも約１０重量パーセント、好ましくは総乾燥重量基準で少なくとも約２０重量パーセントの実施例２７～３８のいずれか一つに記載のたばこ材料を含有する、たばこ材料を含む、エアロゾル発生物品。
実施例４０．
少なくとも５ミリグラム／グラム、好ましくは１０ミリグラム／グラムの乳酸を含有する、たばこ材料を含む、エアロゾル発生物品。
実施例４１．
総乾燥重量基準で３００ミリグラム／キログラム未満のアスパラギンを含有する、たばこ材料を含む、エアロゾル発生物品。
実施例４２．
総乾燥重量基準で７０ミリグラム／キログラム未満のグルタミンを含有する、たばこ材料を含む、エアロゾル発生物品。
実施例４３．
総遊離アミノ酸の総乾燥重量で１００００ミリグラム／キログラムを超えるアスパラギンを含有する、たばこ材料を含む、エアロゾル発生物品。
たばこ材料を処理する方法であって、方法が、
－ たばこ材料を提供することと、
－ 発酵たばこ材料を得るためにたばこ材料を発酵させることであって、
－ 嫌気性条件下でたばこ材料をインキュベートすること、
－ および、以下の条件：
－ 乳酸の含有量が、たばこ材料中の乳酸の初期量の１０倍を超える、好ましくは２０倍を超える、より好ましくは５０倍を超える、より好ましくは７０倍を超える、好ましくは８０倍を超える、
－ 還元糖の含有量が、たばこ材料中の還元糖の初期量の０．５未満、好ましくは０．４未満、より好ましくは０．２未満、より好ましくは０．１未満である、
－ インドール－３乳酸の含有量が、たばこ材料中のインドール－３乳酸の初期量の５倍を超える、好ましくは１０倍を超える、好ましくは２０倍を超える、
－ カフェイン酸の含有量が、たばこ材料中のカフェイン酸の初期量の４倍を超える、好ましくは１０倍を超える、
－ キナ酸の含有量が、たばこ材料中のキナ酸の初期量の２倍を超える、好ましくは４倍を超える、
－ アスパラギンの含有量が、たばこ材料中のアスパラギンの初期量の０．５未満、好ましくは０．４未満、好ましくは０．３未満である、
－ グルタミンの含有量が、たばこ材料中のグルタミンの初期量の０．５未満、好ましくは０．４未満である、
－ Ｌ－オルニチンの含有量が、たばこ材料中のＬ－オルニチンの初期量の１０倍を超える、好ましくは５０倍を超える、好ましくは１００倍を超える、
－ Ｌ－ロイシンの含有量が、たばこ材料中のＬ－ロイシンの初期量の２倍を超える、好ましくは４倍を超える、
－ Ｌ－リジンの含有量が、たばこ材料中のＬ－リジンの初期量の２倍を超える、好ましくは６倍を超える、
－ 発酵指数が、５０を超え、好ましくは１００を超え、より好ましくは２５０を超え、より好ましくは４００を超え、ここで発酵指数は、たばこ材料中の乳酸の含有量と乳酸の初期含有量との比を、たばこ材料中の還元糖の含有量と還元糖の初期含有量との比で割って得られる、のうちの少なくとも一つが満たされたとき、発酵工程を停止すること、を含む、たばこ材料を発酵させることと、を含む、方法。
実施例２．
たばこ材料中の、乳酸、または還元糖、またはインドール－３乳酸、またはキナ酸、またはカフェイン酸、またはＬ－オルニチン、またはアスパラギン、またはグルタミン、またはＬ－ロイシン、またはＬ－リジン、または発酵指数のうちの少なくとも一つの初期含有量を測定するための初期測定工程をさらに含む、実施例１に記載の方法。
実施例３．
発酵工程中のたばこ材料中の、乳酸、または還元糖、またはインドール－３乳酸、またはキナ酸、またはカフェイン酸、またはＬ－オルニチン、またはアスパラギン、またはグルタミン、またはＬ－ロイシン、またはＬ－リジン、または発酵指数のうちの少なくとも一つの含有量を測定するための測定工程をさらに含む、実施例１または２に記載の方法。
実施例４．
たばこ材料がダークたばこを含有する場合、２，３ブタンジオールの含有量が、たばこ材料中の２，３ブタンジオールの初期量の５倍を超える、好ましくは１０倍を超える、またはジアセチルの含有量が、たばこ材料中のジアセチルの初期量の５倍を超える、好ましくは１０倍を超えるという条件のうちの少なくとも一つが満たされる時に、発酵を停止するために提供される、実施例１～３のいずれか一つに記載の方法。
実施例５．
たばこ材料中の２，３ブタンジオールまたはジアセチルのそれぞれの初期量を得るように、発酵前にたばこ材料中の２，３ブタンジオールまたはジアセチルの初期含有量を測定するための初期測定工程をさらに含む、実施例４に記載の方法。
実施例６．
発酵工程中にたばこ材料中の２，３ブタンジオールまたはジアセチルの含有量を測定するための測定工程をさらに含む、実施例４～５のいずれかに記載の方法。
実施例７．
発酵工程中に、１０００キログラム／平方メートル～１５０００キログラム／平方メートル、好ましくは３０００キログラム／平方メートル～１２０００キログラム／平方メートル、より好ましくは５０００キログラム／平方メートル～１００００キログラム／平方メートルから成る圧力をたばこ材料に印加することを含む、実施例１～６のいずれか一つに記載の方法。
実施例８．
発酵工程中に、発酵中にたばこ材料の水分含量を、たばこ材料の総重量の１０重量パーセント～５０重量パーセント、好ましくは３５重量パーセント～４５重量パーセント、より好ましくは約４０重量パーセントから成る量に保つことを含む、実施例１～７のいずれか一つに記載の方法。
実施例９．
少なくとも１か月、好ましくは少なくとも２か月、より好ましくは少なくとも４か月、より好ましくは少なくとも６か月、さらにより好ましくは少なくとも８か月、好ましくは少なくとも１０か月、より好ましくは少なくとも１２か月の発酵時間の間発酵工程を継続するために提供される、実施例１～８に記載の方法。
実施例１０．
少なくとも２４か月の発酵時間の間、発酵工程を継続するために提供される、実施例１～９のいずれか一つに記載の方法。
実施例１１．
たばこ材料を乾燥して、たばこ材料の総重量の５重量パーセント～１０重量パーセントから成る水分含量を有する乾燥たばこ材料を得ることをさらに含む、実施例１～１０のいずれか一つに記載の方法。
実施例１２．
発酵工程の前にたばこ材料を乾燥するための乾燥工程を含む、実施例１～１１のいずれか一つに記載の方法。
実施例１３．
たばこ材料の温度を２１℃～３５℃、好ましくは２５℃～３１℃から成る温度に保つことを含む、実施例１～１２のいずれか一つに記載の方法。
実施例１４．
好ましくは約１５日の時間間隔で、より好ましくは約３０日の時間間隔で、好ましくは約３０日～約６０日の時間間隔でたばこ材料を回転させる工程を含む、実施例１～１３の一つ以上に記載の方法。
実施例１５．
たばこ材料を水分保持材料内に確保することを含む、実施例１～１４の一つ以上に記載の方法。
実施例１６．
たばこ材料の総重量の約１０重量パーセント～約５０重量パーセント、好ましくは総重量の約３５重量パーセント～約４５重量パーセント、好ましくは総重量の約４０重量パーセントから成るたばこ材料の水分含量を達成するように、発酵前に水中でたばこ材料を湿らせることを含む、実施例１～１５の一つ以上に記載の方法。
実施例１７．
一定の量の非発酵たばこ材料を望ましい量の発酵たばこ材料と混合してたばこ材料を得て、次にたばこ材料を発酵工程に供し、ここでたばこ材料中の発酵たばこ材料の量が、たばこ材料の５重量パーセント～１０重量パーセントから成る、実施例１～１６のいずれか一つに記載の方法。
実施例１８．
発酵工程後のたばこ材料中の、乳酸、または還元糖、またはインドール－３乳酸、またはキナ酸、またはカフェイン酸、またはＬ－オルニチン、またはアスパラギン、またはグルタミン、またはＬ－ロイシン、またはＬ－リジン、または発酵指数のうちの少なくとも一つの含有量を測定するための最終測定工程をさらに含む、実施例１～１７のいずれかに記載の方法。
実施例１９．
発酵中、たばこ材料のｐＨを、４．５～５．５、好ましくは約４．８～５．４から成るｐＨに維持するためにさらに供する、実施例１～１８のいずれか一つに記載の方法。
実施例２０．
たばこ材料を処理する方法であって、方法が、
－ たばこ材料を提供することと、
－ 発酵たばこ材料を得るためにたばこ材料を発酵させることであって、発酵工程が、
－ 嫌気性条件下でたばこ材料をインキュベートすることであって、ここで発酵工程中、１０００キログラム／平方メートル～１５０００キログラム／平方メートル、好ましくは３０００キログラム／平方メートル～１２０００キログラム／平方メートル、より好ましくは５０００キログラム／平方メートル～１００００キログラム／平方メートルから成る圧力をたばこ材料に印加するために提供される、インキュベートすること、を含む、発酵させることと、を含む方法。
実施例２１．
たばこ材料を処理する方法であって、方法が、
－ たばこ材料を提供することと、
－ 発酵たばこ材料を得るためにたばこ材料を発酵させることであって、発酵工程が、
－ 嫌気性条件下でたばこ材料をインキュベートすることであって、ここで少なくとも１か月、好ましくは少なくとも２か月、より好ましくは少なくとも４か月、より好ましくは少なくとも６か月、さらにより好ましくは少なくとも８か月、好ましくは少なくとも１０か月、より好ましくは少なくとも１２か月の発酵時間の間発酵工程を継続するために提供される、インキュベートすること、を含む、発酵させることと、を含む方法。
実施例２２．
たばこ材料を処理する方法であって、方法が、
－ たばこ材料を提供することと、
－ 発酵たばこ材料を得るためにたばこ材料を発酵させることであって、発酵工程が、
－ 嫌気性条件下でたばこ材料をインキュベートすることであって、ここで発酵工程中、たばこ材料の温度を２１℃～３５℃、好ましくは２５℃～３１℃から成る温度に保つために提供される、インキュベートすること、を含む発酵させることと、を含む方法。
実施例２３．
発酵たばこ材料および／または部分的発酵たばこ材料中の、乳酸、または還元糖、またはインドール－３乳酸、またはキナ酸、またはカフェイン酸、またはＬ－オルニチン、またはアスパラギン、またはグルタミン、またはＬ－ロイシン、またはＬ－リジン、またはブチルヘキサヒドロピロロ［１，２－ａ］ピラジン－１，４－ジオン、またはセコイソラリシレシノール（ＳＥＣＯ）、または発酵指数、またはブタンジオール、またはジアセチルのうちの少なくとも一つの量を含むデータベースを提供することをさらに含む、実施例１～２２のいずれか一つに記載の方法。
実施例２４．
複数の異なるたばこ材料について、発酵たばこ材料および／または部分的発酵たばこ材料中の、乳酸、または還元糖、またはインドール－３乳酸、またはキナ酸、またはカフェイン酸、またはＬ－オルニチン、またはアスパラギン、またはグルタミン、またはＬ－ロイシン、またはＬ－リジン、またはブチルヘキサヒドロピロロ［１，２－ａ］ピラジン－１，４－ジオン、またはセコイソラリシレシノール（ＳＥＣＯ）、または発酵指数、またはブタンジオール、またはジアセチルのうちの少なくとも一つの量を含むデータベースを提供することを含む、実施例１～２３のいずれか一つに記載の方法。
実施例２５．
少なくとも一つのデータベースから、乳酸、または還元糖、またはインドール－３乳酸、またはキナ酸、またはカフェイン酸、またはＬ－オルニチン、またはアスパラギン、またはグルタミン、またはＬ－ロイシン、またはＬ－リジン、またはブチルヘキサヒドロピロロ［１，２－ａ］ピラジン－１，４－ジオン、またはセコイソラリシレシノール（ＳＥＣＯ）、または発酵指数、またはブタンジオール、またはジアセチルのうちの少なくとも一つの量を回収すること、および回収された値を、発酵中のたばこ材料における対応する測定された値と比較すること、を含む、実施例２６または２７に記載の方法。
実施例２６．
乳酸、またはインドール－３乳酸、またはキナ酸、またはカフェイン酸、またはＬ－オルニチン、またはＬ－ロイシン、またはＬ－リジン、またはブチルヘキサヒドロピロロ［１，２－ａ］ピラジン－１，４－ジオン、またはセコイソラリシレシノール（ＳＥＣＯ）、または発酵指数、またはブタンジオール、またはジアセチルの測定された値が、対応する回収された値よりも低い場合、および／または還元糖、またはアスパラギン、またはグルタミン、または発酵指数の値が、対応する回収された値よりも高い場合、発酵工程を継続すること、をさらに含む、実施例２８に記載の方法
実施例２７．
実施例１～２６のいずれか一つに記載の方法に従って得られるたばこ材料。
実施例２８．
たばこ材料を発酵することを含む方法によって得られるたばこ材料であって、方法が、嫌気性条件下でたばこ材料をインキュベートすることを含み、ここで以下の条件のうちの少なくとも一つがたばこ材料において満たされる：
－ 乳酸の含有量が、たばこ中の乳酸の初期量の１０倍を超える、好ましくは２０倍を超える、より好ましくは５０倍を超える、より好ましくは７０倍を超える、より好ましくは８０倍を超える、
－ 還元糖の含有量が、たばこ材料中の還元糖の初期量の０．５未満、好ましくは０．４未満、より好ましくは０．２未満、より好ましくは０．１未満である、
－ インドール－３乳酸の含有量が、たばこ材料中のインドール－３乳酸の初期量の５倍を超える、好ましくは１０倍を超える、好ましくは２０倍を超える、
－ カフェイン酸の含有量が、たばこ材料中のカフェイン酸の初期量の４倍を超える、好ましくは１０倍を超える、
－ キナ酸の含有量が、たばこ材料中のキナ酸の初期量の２倍を超える、好ましくは４倍を超える、
－ アスパラギンの含有量が、たばこ材料中のアスパラギンの初期量の０．５未満、好ましくは０．４未満、好ましくは０．３未満である、
－ グルタミンの含有量が、たばこ材料中のグルタミンの初期量の０．５未満、好ましくは０．４未満である、
－ Ｌ－オルニチンの含有量が、たばこ材料中のＬ－オルニチンの初期量の１０倍を超える、好ましくは５０倍を超える、好ましくは１００倍を超える、
－ Ｌ－ロイシンの含有量が、たばこ材料中のＬ－ロイシンの初期量の２倍を超える、好ましくは４倍を超える、
－ Ｌ－リジンの含有量が、たばこ材料中のＬ－リジンの初期量の２倍を超える、好ましくは６倍を超える、
－ 発酵指数が、５０を超え、好ましくは１００を超え、より好ましくは２５０を超え、より好ましくは４００を超え、ここで発酵指数は、たばこ材料中の乳酸の含有量と非発酵たばこ材料中の乳酸の含有量との比を、たばこ材料中の還元糖の含有量と非発酵たばこ材料中の還元糖の含有量との比で割って得られる。
実施例２９．
以下の特徴のうちの少なくとも一つを含有するたばこ材料：
－ たばこ材料中の乳酸の初期量の１０倍を超える、好ましくは２０倍を超える、より好ましくは５０倍を超える、より好ましくは７０倍を超える、より好ましくは８０倍を超える量の乳酸、
－ たばこ材料中の還元糖の初期量の０．５未満、好ましくは０．４未満、より好ましくは０．２未満、より好ましくは０．１未満である量の還元糖、
－ たばこ材料中のインドール－３乳酸の初期量の５倍を超える、好ましくは１０倍を超える、好ましくは２０倍を超える量のインドール－３乳酸、
－ たばこ材料中のカフェイン酸の初期量の４倍を超える、好ましくは１０倍を超える量のカフェイン酸、
－ たばこ材料中のキナ酸の初期量の２倍を超える、好ましくは４倍を超える量のキナ酸、
－ たばこ材料中のアスパラギンの初期量の０．５未満、好ましくは０．４未満、好ましくは０．３未満の量のアスパラギン、
－ たばこ材料中のグルタミンの初期量の０．５未満、好ましくは０．４未満の量のグルタミン、
－ Ｌ－オルニチンは、たばこ材料中のＬ－オルニチンの初期量の１０倍を超える、好ましくは５０倍を超える、好ましくは１００倍を超える、
－ Ｌ－ロイシンの初期量の２倍を超える、好ましくは４倍を超えるの量のＬ－ロイシン、
－ Ｌ－リジンの初期量の２倍を超える、好ましくは６倍を超えるの量のＬ－リジン、
－ 発酵指数は、５０を超え、好ましくは１００を超え、より好ましくは２５０を超え、より好ましくは４００を超え、ここで発酵指数は、たばこ材料中の乳酸の含有量と非発酵たばこ材料中の乳酸の含有量との比を、たばこ材料中の還元糖の含有量と非発酵たばこ材料中の還元糖の含有量との比で割って得られる。
実施例３０．
前述のたばこ材料が、たばこ材料を嫌気性条件下でインキュベートすることを含む、処理されたたばこ材料を得るためにたばこ材料を発酵することを含むプロセスによって得られる、実施例１～２９に記載のたばこ材料。
実施例３１．
総乾燥重量基準で、少なくとも２０ミリグラム／グラム、好ましくは少なくとも５０ｍｇ／グラム、より好ましくは少なくとも６０ミリグラム／グラムの乳酸を含有する、たばこ材料。
実施例３２．
総乾燥重量基準で３パーセント未満の総還元糖を含む、たばこ材料。
実施例３３．
総乾燥重量基準で３００ミリグラム／キログラム未満のアスパラギンを含む、たばこ材料。
実施例３４．
総乾燥重量基準で７０ミリグラム／キログラム未満のグルタミンを含む、たばこ材料。
実施例３５．
総乾燥重量基準で１００００ミリグラム／キログラム超の総遊離アミノ酸を含む、たばこ材料。
実施例３６．
少なくとも１マイクログラム／グラム、好ましくは少なくとも２マイクログラム／グラム、より好ましくは少なくとも２．５マイクログラム／グラムのインドール－３乳酸を含む、たばこ材料。
実施例３７．
たばこ材料が乾燥される、実施例２７～３６の一つ以上に記載のたばこ材料。
実施例３８．
たばこ材料が粉砕される、実施例２７～３７の一つ以上に記載のたばこ材料。
実施例３９．
総乾燥重量基準で約２．５重量パーセント～総乾燥重量基準で１００重量パーセント、好ましくは総乾燥重量基準で少なくとも約４重量パーセント、好ましくは総乾燥重量基準で少なくとも約１０重量パーセント、好ましくは総乾燥重量基準で少なくとも約２０重量パーセントの実施例２７～３８のいずれか一つに記載のたばこ材料を含有する、たばこ材料を含む、エアロゾル発生物品。
実施例４０．
少なくとも５ミリグラム／グラム、好ましくは１０ミリグラム／グラムの乳酸を含有する、たばこ材料を含む、エアロゾル発生物品。
実施例４１．
総乾燥重量基準で３００ミリグラム／キログラム未満のアスパラギンを含有する、たばこ材料を含む、エアロゾル発生物品。
実施例４２．
総乾燥重量基準で７０ミリグラム／キログラム未満のグルタミンを含有する、たばこ材料を含む、エアロゾル発生物品。
実施例４３．
総遊離アミノ酸の総乾燥重量で１００００ミリグラム／キログラムを超えるアスパラギンを含有する、たばこ材料を含む、エアロゾル発生物品。
【0154】
ここで、以下の図を参照しながら実施例をさらに説明する。
【図面の簡単な説明】
【0155】
【図2】同上。
【図3】図３および図４は、本発明による発酵前（０Ｔ）および発酵中にそれぞれ測定された、実施例１および実施例２のたばこ材料中の総アルカロイド（ＴＡ）レベルの量（総乾燥重量基準ＤＷのパーセント）を表すヒストグラムである。
【図4】同上。
【図5】図５および図６は、本発明による発酵前（０Ｔ）および発酵中に測定された、実施例１および実施例２のたばこ材料（総乾燥重量基準、ＤＷ）中のそれぞれグルタミンおよびグルタミン酸の量を表すヒストグラムである。
【図6】同上。
【図7】図７および図８は、本発明による発酵前（０Ｔ）および発酵中に測定された、実施例１および実施例２のたばこ材料（総乾燥重量基準、ＤＷ）中のそれぞれアスパラギンおよびアスパラギン酸の量を表すヒストグラムである。
【図8】同上。
【図9】図９および図１０は、本発明による発酵前（ＶＧ－ＢＦ）、発酵中、および発酵後（ＶＧ－ＡＦ）にそれぞれ測定された、実施例３のたばこ材料（総乾燥重量基準、ＤＷ）中の総アルカロイド（図９）および還元糖（図１０）の量をそれぞれ表すヒストグラムである。
【図10】同上。
【図11】図１１は、発酵プロセス（Ｔ１～Ｔ７）中および発酵後（ＡＦ）の非発酵バージニア（ＶＧ）材料（ＳＭ）中のＴＡ（総アルカロイド）、ＲＳ（還元糖）、およびアンモニア（ＮＨ３）を、総乾燥重量基準、ＤＷの割合で示す。
【図13】図１３Ａおよび１３Ｂは、バージニアたばこの発酵前後の消費された（図１３Ａ）および生成された（図１３Ｂ）遊離アミノ酸を示す。メタボローム解析から表される比データ（ｎ＝３）、統計は、対応ｔ検定である（＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊ｐ＜０．００１）；
【図14】図１４は、バージニアたばこの発酵におけるキナ酸およびカフェイン酸の生成を示す。メタボローム解析から表される比データ（ｎ＝３）、統計は、対応ｔ検定である（＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊ｐ＜０．００１）；
【0156】
同じたばこタイプであるが、発酵前に異なる加工を受けた第一および第二のたばこ材料が準備された。たばこ材料はカストリたばこである。
【発明を実施するための形態】
【0157】
実施例１
ダークたばこの葉材料を約１０日間完全に日光で乾燥した。日光で乾燥された葉は、ラミナ（手で剥がされた葉）のみを取っておくために剥がされた。このたばこ材料は「ＨＳ」と呼ばれる。
ダークたばこの葉材料を約１０日間完全に日光で乾燥した。日光で乾燥された葉は、ラミナ（手で剥がされた葉）のみを取っておくために剥がされた。このたばこ材料は「ＨＳ」と呼ばれる。
【0158】
たばこ材料をコンディショニングして、およそ３０パーセントの水分を得た。コンディショニングされているが、まだ発酵されていないこのたばこ材料の試料は０Ｔ（「出発材料」）と呼ばれる。
【0159】
次いで、コンディショニングされたたばこ材料を三つのバレルに導入し、各バレルにおよそ１００キログラムのたばこ材料が存在する。導入前に、たばこ材料は、得られた水分を維持する材料で包まれる。
【0160】
圧力が各バレルにかけられる。圧力は、１０００キログラム／平方メートル～４０００キログラム／平方メートルから成る。
【0161】
１か月後（１Ｔと呼ばれる試料）、２．５か月後（２Ｔと呼ばれる試料）、６か月後（３Ｔと呼ばれる試料）、および８．５か月後（４Ｔと呼ばれる試料）に、バレルを開けて、たばこの回転前に、および水分含量をおよそ３０パーセント±５パーセントに再調整する前に、試料を各バレルで少なくとも三つ採取した。
【0162】
完全嫌気性条件下での重発酵プロセス中に、バレル内部の温度は特に上昇しなかった（温度は２７℃～３１℃の範囲内に留まった）。発酵は８．５か月後に停止された。
【0163】
実施例２
ダークたばこの葉材料を二日間黄ばませ、カットフィラーで急速に刻んだ。このたばこ材料は、ラミナと葉脈の両方を含有する。ラミナと中央脈の両方を含有する刻まれた葉を二日間日干しした。このたばこ材料の試料は、以下で「ＣＣ」と命名されている。
ダークたばこの葉材料を二日間黄ばませ、カットフィラーで急速に刻んだ。このたばこ材料は、ラミナと葉脈の両方を含有する。ラミナと中央脈の両方を含有する刻まれた葉を二日間日干しした。このたばこ材料の試料は、以下で「ＣＣ」と命名されている。
【0164】
たばこ材料をコンディショニングして、およそ３０パーセントの水分含量を得た。コンディショニングされているが、まだ発酵されていないこのたばこ材料の試料は０Ｔ（「出発材料」）と呼ばれる。
【0165】
次いで、コンディショニングされたたばこ材料を三つのバレルに導入し、各バレルにおよそ１００キログラムのたばこ材料が存在する。導入前に、たばこ材料は、得られた水分を維持する材料で包まれる。
【0166】
圧力が各バレルにかけられる。圧力は、１０００キログラム／平方メートル～４０００キログラム／平方メートルから成る。
【0167】
１か月後（１Ｔと呼ばれる試料）、２．５か月後（２Ｔと呼ばれる試料）、６か月後（３Ｔと呼ばれる試料）、および８．５か月後（４Ｔと呼ばれる試料）に、バレルを開けて、たばこの回転前に、および水分含量をおよそ３０パーセント±５パーセントに再調整する前に、試料を各バレルで少なくとも三つ採取した。
【0168】
完全嫌気性条件下での重発酵プロセス中に、バレル内部の温度は特に上昇しなかった（温度は２７℃～３１℃の範囲内に留まった）。発酵は８．５か月後に停止された。
【0169】
目視観察
最初のたばこ材料は発酵の２．５か月後（試料２Ｔ）、既に変化していて、ＨＳ葉とＣＣ葉の両方の色はより暗くなり、たばこの臭いは良いカラメルバターと発酵した複雑な特徴とを発現していた。暗色はプロセス終了時（８．５か月、４Ｔ）のＣＣ葉と比較して、発酵ＨＳ葉でより顕著であったが、これはおそらくＣＣ葉の葉の中央脈の存在に起因する。
最初のたばこ材料は発酵の２．５か月後（試料２Ｔ）、既に変化していて、ＨＳ葉とＣＣ葉の両方の色はより暗くなり、たばこの臭いは良いカラメルバターと発酵した複雑な特徴とを発現していた。暗色はプロセス終了時（８．５か月、４Ｔ）のＣＣ葉と比較して、発酵ＨＳ葉でより顕著であったが、これはおそらくＣＣ葉の葉の中央脈の存在に起因する。
【0170】
化学分析
以下において、試料に関する値が言及される場合、所与の値は、同じタイプの各試料について得られた幾つかの値の平均を表す。
以下において、試料に関する値が言及される場合、所与の値は、同じタイプの各試料について得られた幾つかの値の平均を表す。
【0171】
発酵条件が２．５か月間適用された後（試料２Ｔで見いだされた通り）、たばこ材料の試料（ＣＣとＨＳの両方）のｐＨは酸性になり、３．２に達した。これは、（酢酸および／または）乳酸などの有機酸を通常産生する、糖分解を伴う嫌気性発酵のプロセスを反映する。たばこ材料の出発ｐＨは概して、５ｐＨ～６ｐＨから成る。
【0172】
図１および図２は、たばこ材料中の乳酸の存在を示す。図によって示される通り（図１はＨＳ葉の乳酸含量を表し、図２はＣＣ葉の乳酸含量を表す）、発酵前に、全試料には乳酸が存在しない（たばこ材料（ＣＣまたはＨＳ）当たり三つの試料０Ｔが示されている）。発酵後（この場合、６か月後に、３Ｔと呼ばれるたばこ材料についての三つの試料が、両方のたばこ材料（ＣＣまたはＨＳ）について示されている）、すべての試料（ＣＣとＨＳの両方の葉）は、可変量であるが乳酸の存在を示す。
【0173】
発酵中にアルカロイドは分解しなかったか、またはわずかだけ分解した。総乾燥重量基準のパーセントでの総アルカロイド（ＴＡ）含量（図においてパーセントＤＷとして示される）が、図３（ＨＳ葉）および図４（刻まれた葉、ＣＣ葉）に示されている。総アルカロイド含量は、発酵中にかなり安定を保っていた。８．５か月後（４Ｔ）、ＨＳ葉では４パーセントだけ分解し、ＣＣ葉では９パーセント分解した。統計的に関連があるものの、こうした小さい変動はサンプリングからのみ生じうる。一部の限定的なアルカロイドヒドロラーゼ活性を除外できない可能性がある。総アルカロイドは、重発酵プロセス中に開始時（０Ｔ、ｎ＝６試料が分析されている）、１か月後（１Ｔ、ｎ＝９）、２．５か月後（２Ｔ、ｎ＝９）、６か月後（３Ｔ、ｎ＝９）、８．５か月後（４Ｔ、ｎ＝１２）後に収集された試料で分析された。Ｔ検定（検定統計量）を対照の未発酵の乾燥されたたばこ（０Ｔ）との比較のために行った。結果は、ｐ値を示す図３および４に示されていて、ｐ値は以下のように示されている：
＊、ｐ＜０．０５；
＊＊、ｐ＜０．０１および
＊＊＊、ｐ＜０．００１。
＊、ｐ＜０．０５；
＊＊、ｐ＜０．０１および
＊＊＊、ｐ＜０．００１。
【0174】
ＨＳ葉の試料４ＴおよびＣＣ葉の試料３Ｔは、ｐ値＜０．０１を有し、ＣＣ葉の試料１Ｔおよび４Ｔは、ｐ値＜０．００１を有する。これは、発酵たばこ材料と非発酵たばこ材料の間の統計的有意差を示す。
【0175】
硝酸塩含量は重発酵プロセスの影響を受けなかった。しかし、たばこ特異的ニトロソアミン（ＴＳＮＡ）に幾らかの影響が観察された：ＮＮＮ（Ｎ’－ニトロソノルニコチン）、ＮＮＫ（ニコチン由来ニトロソアミンケトン）、およびＮＡＴ（Ｎ’－ニトロソアナタビン）。８．５か月の発酵後、ＮＮＫおよびＮＡＴについて変化は測定されなかった。しかし、ＨＳ（３倍の増加）とＣＣ（５～６倍の増加）の両方において、ＮＮＮの増加が観察された。ノルニコチンとして、ニトロ化前のＮＮＮの前駆体は、それに応じて増加しなかった。従って、ＮＡＴおよびＮＮＫは、発酵を実施中に細菌によって部分的に分解されうるが、ＮＮＮは部分的に分解されない場合がある。その理由はＮＮＫおよびＮＡＴが最初に２．５か月の発酵まで２倍上昇し、その後、低下して非発酵たばこの初期値に達したからである。この観察は、アルカロイドのニトロ化が重発酵中に起こることを意味しうる。
【0176】
本発明による重発酵中の糖類および遊離アミノ酸の進展が分析されている。たばこ材料の試料で実施された測定の値は表１に収集されている。表１は、実施例１および実施例２にある通り、手で剥がされた（ＨＳ）または刻まれた（ＣＣ）葉のいずれかを含有するバレル中の発酵条件下での、未処理のたばこ材料試料（試料０Ｔ）から発酵プロセスの８．５か月（試料４Ｔ）に至る重発酵プロセス中の糖およびアミノ酸の進展を示す。表のすべての値は、総乾燥重量基準である。還元糖の単位は総乾燥重量基準のパーセントである一方で、遊離アミノ酸は、全乾燥たばこ材料の１キログラム当たりのミリグラムである。還元糖の低下は、色の変化およびスラリー酸性化と同調して、２．５か月後（２Ｔ、表１を参照）に現れた。グルコースおよびフルクトースは、発酵バレル中で嫌気性細菌が代謝しうる二つのたばこ葉基体である。逆に、大半のアミノ酸はプロセス中に増加した。アスパラギンとグルタミンの両方が大きく減少した。全体として、これらの観察は、主要な発酵活性が一か月目と三か月目の間に生じたことを示しうる。プロリンは嫌気性発酵下で分解されなかった（表１を参照）。オルニチンは、ＨＳとＣＣの両方で発酵中に大きく（＞１００倍）増加し、シトルリン（０Ｔと３Ｔの間のメタボローム解析から得られたデータ）は、ＨＳにおいて１６倍、ＣＣにおいて２倍増加した。これは、（植物由来の）乳酸細菌が、たばこ発酵バレル中で活性であることを示し場合があり、その理由は、こうした細菌が、高レベルでオルニチンおよびシトルリンを産生すると説明されているからである（Ｒａｋｈｉｍｕｚｚａｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｌ Ｐｈａｒｍ Ｂｕｌｌ．２０１９；４２（９）：１５８１－１５８９）。
【表1】
【0177】
図５～８において、たばこ材料中のグルタミンおよびアスパラギンの量を示す。図５～８によって示す通り、および表１に提示したデータに基づき、ＨＳ葉とＣＣ葉の両方の重発酵プロセス中に起こるグルタミンおよびアスパラギンの脱アミノ化は、グルタミン酸塩およびアスパラギン酸塩の同時増加とそれぞれ相関しうる。これは、発酵細菌が、アミノ酸資源からＣおよびＮを同化するための特定のグルタミナーゼおよびアスパラギナーゼを産生することを示唆する。どちらの反応もアンモニアを産生し、アンモニアはＨＳ葉とＣＣ葉の両方の嫌気性発酵プロセス中に二倍増加した。図５および図６は、ＨＳ葉およびＣＣ葉中のグルタミン（白色のヒストグラム）およびグルタミン酸（黒色のヒストグラム）のレベルをそれぞれ示す。発酵中にグルタミンが減少し、グルタミン酸が増加することが、図から明らかである。図７および図８は、ＨＳ葉およびＣＣ葉中のアスパラギン（縞模様のヒストグラム）およびアスパラギン酸（黒色のヒストグラム）のレベルをそれぞれ示す。発酵中にアスパラギンが減少し、アスパラギン酸が増加することが、図から明らかである。
【0178】
たばこ葉嫌気性発酵プロセスに関連するマーカー分子または経路を特定するために、メタボローム研究を実施した。ＨＳ葉とＣＣ葉の両方の出発材料（対照）中に存在するグルコースおよびフルクトースなどの糖資源は、嫌気性細菌によってエネルギー源として使用されうる（表１を参照）。酸素が存在しない場合、解糖経路は、グルコース（またはフルクトース）をピルビン酸に変換し、２つのＡＴＰおよび２つのＮＡＤＨ＋Ｈ＋を産生する。嫌気性細菌によって急速に使用されうる他の有機化合物および豊富な炭素化合物は、クエン酸塩およびリンゴ酸塩であり（Ｂｉｎｔｓｉｓ，Ｔ，２０１８，ＡＩＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，４（４）：６６５－６８４）、どちらも植物において最も豊富な有機酸である。クエン酸塩およびリンゴ酸塩も還元糖と同様に、たばこの重発酵中に代謝される。試料の化学分析から、出発たばこ材料（試料０Ｔ）、手で剥がされて刻まれた葉の中に存在するグルコースおよびフルクトース、クエン酸塩およびリンゴ酸塩の６０パーセント超が、６か月間の重発酵後（試料３Ｔ）に異化されることが示されている。こうした有機分子の消費に関連付けられることができる別の観察は、ＨＳとＣＣの両方の発酵たばこ材料におけるピルビン酸の増加（１３～１４倍）である。ピルビン酸は、嫌気性条件下で起こりうる幾つかの反応の基質である：（１）主に解糖反応のためのＮＡＤ＋を再発生するためのＤ－乳酸の産生、（２）重発酵たばこ中の芳香族化合物および風味の送達に寄与しうる酢酸、ジアセチル、２，３ブタンジオールの産生。ピルビン酸は、乳酸細菌の産物として、２，３－ブタンジオールまたは乳酸などの芳香族化合物の発生をもたらしうる。
【0179】
重発酵たばこのメタボローム解析から、（１）トリプトファンの分解、および（２）クロロゲン酸の異化という二つの他の経路が出現した。
【0180】
トリプトファン分解に関して、経路は、チーズ細菌についてＵｍｍａｄｉおよびＷｅｉｍｅｒによって説明されていて（２００１、Ｊ．Ｄａｉｒｙ Ｓｃｉ．８４：１７７３－１７８２）、それに応じて適合されている。この場合、出発たばこ材料（試料０Ｔ）中に存在するトリプトファンの７８パーセント超は、ＨＳ葉とＣＣ葉の両方において６か月の発酵後（試料３Ｔ）に異化される。経路は、こうした異化反応から生じる産物が主にインドール－３－乳酸であることを示した。これは、ＨＳ葉とＣＣ葉におけるそれぞれ１４倍および２８倍の増加によって示されている。この経路に属する他の化合物は、こうした増加を示さなかった。この化合物について、特定の芳香族特性は報告されていなかった。
【0181】
重要な生物学的に活性な食物ポリフェノールであるクロロゲン酸（ＣＧＡ）は、たばこなどの特定の植物種によって産生され、コーヒーの主要成分である。重発酵たばこ葉において、ＣＧＡは嫌気性発酵プロセス後に完全に分解される。その一方で、ＣＧＡの異化から生じる産物、すなわちキナ酸およびカフェイン酸は、ＨＳ葉とＣＣ葉の両方において６か月の発酵後に増加した。これはおそらく、Ｇｕｇｌｉｅｌｍｅｔｔｉら（２００８，Ａｐｐｌｉｅｄ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，７４，４：１２８４－１２８８）によって記録された通り、細菌のシンナモイルエステラーゼ活性に起因する。したがって、キナ酸プールおよびカフェイン酸プールの一部はおそらく、ＣＧＡの加水分解に起因し、それらのいずれも風味特性を有すると報告されなかった。
【0182】
乾燥されたたばこと比較して、重発酵たばこ中のピルビン酸、インドール－３－乳酸の上昇の存在、およびクロロゲン酸の欠如は、それらを化学マーカーとして有用なものにしうる。
【0183】
本明細書および添付の特許請求の範囲の目的において、別途示されていない限り、量（ａｍｏｕｎｔｓ）、量（ｑｕａｎｔｉｔｉｅｓ）、割合などを表すすべての数字は、すべての場合において用語「約」によって修飾されるものとして理解されるべきである。また、すべての範囲は、開示された最大点および最小点を含み、かつその中の任意の中間範囲を含み、これらは本明細書に具体的に列挙されてもよく、列挙されていなくてもよい。したがって、この文脈において、数字ＡはＡ±１０パーセントとして理解される。この文脈内で、数字Ａは、数字Ａが表す特性の測定値に対する一般的な標準誤差内にある数値を含むと考えられてもよい。数字Ａは、添付の特許請求の範囲で使用される通りの一部の場合において、Ａが逸脱する量が特許請求する本発明の基本的かつ新規の特性に実質的に影響を及ぼさないという条件で、上記に列挙された割合だけ逸脱してもよい。また、すべての範囲は、開示された最大点および最小点を含み、かつその中の任意の中間範囲を含み、これらは本明細書に具体的に列挙されてもよく、列挙されていなくてもよい。
【0184】
実施例１および２のたばこ材料はまた、発酵と接続されうる一部の追加的な化学的化合物について試験されている。
【0185】
図１７は、実施例１（ＲＡＪ）および実施例２（ＨＳ）のたばこ材料における、非発酵材料（対照）と発酵材料（ＨＦ）との間のインドール－３－乳酸の変化を示す。これらのデータは、発酵材料中のインドール－３－乳酸の含有量の増加を示す。
【0186】
図１８は、実施例１（ＲＡＪ）および実施例２（ＨＳ）のたばこ材料における、非発酵材料（対照）と発酵材料（ＨＦ）との間のＬ－オルニチンの変化を示し、Ｌ－オルニチンの量およびまた、絶対的な変化で示されている。これらのデータは、発酵材料中のＬ－オルニチンの含有量の増加を示す。
【0187】
図１９は、実施例１（ＲＡＪ）および実施例２（ＨＳ）のたばこ材料における、非発酵材料（対照）と発酵材料（ＨＦ）との間のＢＨＨＰＰＤの変化を示す。これらのデータは、発酵材料中のＢＨＨＰＰＤの含有量の増加を示す。
【0188】
図２０は、実施例１（ＲＡＪ）および実施例２（ＨＳ）のたばこ材料における、非発酵材料（対照）と発酵材料（ＨＦ）との間のセコイソラリシレシノールの変化を示す。これらのデータは、発酵材料中のセコイソラリシレシノールの含有量の増加を示す。
【0189】
実施例３
バージニアたばこの試料について、アジアでさらなる試験が実施された。たばこ葉材料は、標準手順として熱風乾燥されている。
バージニアたばこの試料について、アジアでさらなる試験が実施された。たばこ葉材料は、標準手順として熱風乾燥されている。
【0190】
細片の形態のたばこ乾燥処理済み材料を、次にコンディショニングして、およそ３０パーセントの水分を得た。コンディショニングされているが、まだ発酵されていないこのたばこ材料の試料は、ＳＭ（発酵前の出発材料）と呼ばれる。
【0191】
次いで、コンディショニングされたたばこ材料を二つのバレルに導入し、各バレルにおよそ１００キログラムのたばこ材料が存在する。導入前に、たばこ材料は、得られた水分を維持する材料で包まれる。バージニアたばこ材料を含む二つのバレルを、実施例１に記載されるように嫌気性発酵に供した。発酵バレル内部の温度および発酵中のたばこ材料のｐＨを、実験全体中にモニターした。
【0192】
１か月後（１Ｔと呼ばれる試料）、２か月後（２Ｔと呼ばれる試料）、３か月後（３Ｔと呼ばれる試料）、４か月後（４Ｔと呼ばれる試料）、５か月後（５Ｔと呼ばれる試料）、６か月後（６Ｔと呼ばれる試料）、７か月後（７Ｔと呼ばれる試料）、および８か月後（ＡＦと呼ばれる試料、発酵後）に、バレルを開けた。
【0193】
二つのバレルのたばこ材料は、実験の７か月の間に毎月回転されている。
【0194】
試料は、以下に報告される表２に示すように、発酵前（ＶＧ－ＳＭ：出発材料、６回の反復）、発酵プロセス中（ＶＧ－Ｔ１からＶＧ－Ｔ７までのすべての月、１バレル当たり３回の反復）、および発酵後（ＶＧ－ＡＦ：発酵後、６回の反復）に採取された。試料の特徴を分析した。
【表2】
【0195】
完全嫌気性条件下での重発酵プロセス中に、発酵開始時（ＶＧ－Ｔ１）の３０℃から発酵終了時（ＶＧ－ＡＦ）の２６℃に直線的に変動した発酵プロセス中に、大きな温度変化は観察されなかった。温度は、キャプターを使用してバレル内部で測定された。
【0196】
たばこ材料のｐＨは、発酵実施（Ｔ１～ＡＦ）中に著しく変化せず、５．１±０．３に留まった。
【0197】
目視観察
カストリたばこ材料の場合で見られる通り、発酵プロセス終了時（ＶＧ－ＡＦ）のたばこ材料の色は、出発材料（ＶＧ－ＳＭ）と比較して著しくより暗くなった。しかしながら、４か月の嫌気性発酵後（ＶＧ－Ｔ４）、したがって４回の回転後、バージニアたばこ材料はきわめて暗い着色を示さず、これは、実験条件で、４か月ではバージニアたばこ材料の完全な発酵を得るために十分ではない可能性を示唆していた。嫌気性発酵（ＶＧ－ＡＦ）の８か月後、したがって８回転後、バージニアたばこ材料は４か月後よりも暗い色を有し、それ故にバージニアたばこ材料の完全な発酵が行われたことを示唆していた。さらに、８か月後に、よい香りがして、および花の香りが知覚された。
カストリたばこ材料の場合で見られる通り、発酵プロセス終了時（ＶＧ－ＡＦ）のたばこ材料の色は、出発材料（ＶＧ－ＳＭ）と比較して著しくより暗くなった。しかしながら、４か月の嫌気性発酵後（ＶＧ－Ｔ４）、したがって４回の回転後、バージニアたばこ材料はきわめて暗い着色を示さず、これは、実験条件で、４か月ではバージニアたばこ材料の完全な発酵を得るために十分ではない可能性を示唆していた。嫌気性発酵（ＶＧ－ＡＦ）の８か月後、したがって８回転後、バージニアたばこ材料は４か月後よりも暗い色を有し、それ故にバージニアたばこ材料の完全な発酵が行われたことを示唆していた。さらに、８か月後に、よい香りがして、および花の香りが知覚された。
【0198】
化学分析
以下において、試料に関する値が言及される場合、所与の値は、同じタイプの各試料、反復について得られた幾つかの値の平均を表す。
以下において、試料に関する値が言及される場合、所与の値は、同じタイプの各試料、反復について得られた幾つかの値の平均を表す。
【0199】
図１１は、発酵プロセス中の総アルカロイド（ＴＡ）、発酵プロセス中の還元糖（ＲＳ）およびアンモニア（ＮＨ３）の進展を示す。これらのデータは、アルカロイド、特にニコチン（図示せず）が嫌気性発酵の影響を受けないことを裏付ける。細菌は、発酵基質として主要なアルカロイドを消費しなかった。バージニアを発酵材料として使用した場合、アンモニアの増加は観察されず、このバージニア材料には存在しなかった硝酸塩は、発酵プロセス中および発酵プロセス後にいかなる増加も示さなかった。図１１は、発酵プロセス（Ｔ１～Ｔ７）中および発酵後（ＡＦ）の非発酵バージニア（ＶＧ）材料（ＳＭ）中のＴＡ（総アルカロイド）、ＲＳ（還元糖）、およびアンモニア（ＮＨ３）を示す。データは、ＤＷパーセントで表される。発酵（ＡＦ）後の非発酵バージニア（ＶＧ）材料（ＳＭ）中のＴＡ（総アルカロイド）、ＲＳ（還元糖）、およびアンモニア（ＮＨ３）のデータはまた、非発酵材料と発酵材料との間の値の差が直ちに明らかである図１１のヒストグラムに報告される。
【0200】
その一方で、実施例１および実施例２で既に観察された通り、還元糖は発酵細菌によって基質として使用された。したがって、還元糖（ＲＳ）の約６０パーセントは、８か月の発酵中に酸化され、乾燥重量（ＤＷ）で１８．３パーセント（ＶＧ－ＳＭ）から７．４パーセント（ＶＧ－ＡＦ）に変わった。より長い発酵期間は、還元糖のより高い分解率につながった可能性がある。
【0201】
出発材料（ＶＧ－ＳＭ）および発酵材料（ＶＧ－ＡＦ）中の化合物を比較するために、さらなる化学分析を実施した。
【0202】
分析は、非発酵材料（ＶＧ－ＳＭ）と比較して、発酵材料（ＶＧ－ＡＦ）中の乳酸塩（表３のＨＳ ＩＤ ＶＧ－１９－２０－ＮＦ、ＨＳ ＩＤ ＶＧ－１９－２０－Ｆ）の強力な有意な増加（約１０倍）を示す。さらに、発酵材料（ＶＧ－ＡＦ）中のグルコースおよびフルクトースの量は、出発材料（ＶＧ－ＢＦ）中のグルコースおよびフルクトースの含有量よりもかなり低い。発酵材料（ＶＧ－ＡＦ）中のグルコースは、非発酵材料（ＶＧ－ＳＭ）中のグルコースの０．６未満であり、発酵材料（ＶＧ－ＡＦ）中のフルクトースは、非発酵材料（ＶＧ－ＳＭ）中のフルクトースの０．４未満である。したがって、還元糖の発酵後に約６０パーセントの減少が観察されうる。さらに、有機酸、クエン酸塩およびリンゴ酸塩も、ダークたばこについて図１にも示すように、発酵によって影響を受ける。図１２は、バージニアたばこの嫌気性発酵中の、たばこ還元糖、クエン酸塩、およびリンゴ酸塩の異化、続いてピルビン酸および乳酸（乳酸発酵）の蓄積を示す。メタボローム解析から表される比データ（ｎ＝３）、統計は、対応ｔ検定である（＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊ｐ＜０．００１）
【0203】
化学分析はまた、アスパラギンおよびグルタミンが、嫌気性細菌によっても消費される還元糖の側にあり、グルタミン酸塩、ヒスチジン、プロリン、およびトリプトファンなどの他の遊離アミノ酸もバージニアたばこの発酵後に著しく分解され、それに対して他のアミノ酸、特にＬ－ロイシンおよびＬ－リジンは、バージニアたばこの発酵後に増加することを確認した（図１３Ａおよび１３Ｂを参照）。図１３Ａおよび１３Ｂはそれぞれ、バージニアたばこの発酵前後の、消費されたおよび生成された遊離アミノ酸を示す。メタボローム解析から表される比データ（ｎ＝３）、統計は、対応ｔ検定である（＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊ｐ＜０．００１）
図１４は、キナ酸およびカフェイン酸の含有量の変化を示す。実施例１および実施例２で既に観察された通り、発酵たばこ材料中のキナ酸およびカフェイン酸の含有量が非発酵たばこ材料中の含有量と比較されたとき、これらの化合物は発酵後に大幅に増加した。これはおそらく、クロロゲン酸を異化させるシンナモイルエステラーゼの結果である。強力な抗酸化活性、コラーゲン産生の増加、および早期老化の防止の他にも、カフェイン酸は抗菌活性を示し、皮膚疾患の治療に有望であり得る。一方、キナ酸はまた、前立腺癌と戦う強力な薬物候補である。
図１４は、キナ酸およびカフェイン酸の含有量の変化を示す。実施例１および実施例２で既に観察された通り、発酵たばこ材料中のキナ酸およびカフェイン酸の含有量が非発酵たばこ材料中の含有量と比較されたとき、これらの化合物は発酵後に大幅に増加した。これはおそらく、クロロゲン酸を異化させるシンナモイルエステラーゼの結果である。強力な抗酸化活性、コラーゲン産生の増加、および早期老化の防止の他にも、カフェイン酸は抗菌活性を示し、皮膚疾患の治療に有望であり得る。一方、キナ酸はまた、前立腺癌と戦う強力な薬物候補である。
【0204】
インドール－３－乳酸（図１５）は、たばこ発酵プロセス中に大幅に増加し（＞１０倍）、トリプトファンの異化に由来する。したがって、乳酸として、有機酸インドール－３－乳酸はまた、乳酸発酵の良好なマーカーである。
【0205】
実施例４
この実験は、実施例３で使用されるのと同じ実験条件で、スイスで実施された。
この実験は、実施例３で使用されるのと同じ実験条件で、スイスで実施された。
【0206】
この実験では、湿式たばこ基体を二か月～十か月間加圧することができる金属ワインバレルが使用されている。ブドウに使用され、プロジェクトのニーズに合わせてカスタマイズされた加圧設備が使用されている。バレルは、平坦な底部、慣習的なディスク直径、および慣習的な圧力ゲージを有する。０～８キログラム／平方センチメートルで押圧することができる。押圧は、手動または電動機によってトリガーされ得る。随意の部品として、ステンレス鋼押圧ディスクに木製ディスクが取り付けられる。発酵タンクは、７０センチメートルの高さ、５７センチメートルの直径、１００キログラムの容量で、発酵実施の中間または終了時に材料を回転させるときに基体を開梱するのに役立つ金属タンク（バレル）の後方の開口部を有し、試験目的のために修正されている。
【0207】
ブラジルからのＦＣたばこ細片（ＣＸ Ｂ）を、約３０重量パーセント～約５０重量パーセントの水の最終湿度に達するように水で予め調整した発酵基質として使用した。約１００キログラムのたばこ材料が、発酵タンクに装填され、押圧される。圧力は、約０．５キログラム／平方センチメートル～約１キログラム／平方センチメートルに保たれる。たばこ材料は、発酵プロセス全体（６か月）の間、約５０重量パーセントの相対湿度および約２２°Ｃの温度に維持される。三か月後、たばこ材料はバレルから取り出され、分離され、混合され、回転される。次いで、たばこ材料に約３０重量パーセントの水～約５０重量パーセントの水を添加し、次いでバレルに再装填する。
【0208】
圧力および水レベルを定期的にモニターし、標的からの逸脱および任意の好気性発酵を防止するために補正した。タンク内部の温度は、以前に観察されたように、全実施中変化しなかった。
【0209】
６か月後、たばこ材料を、異なる温度範囲で約８分間の総乾燥時間、ベルトオーブン上で予備乾燥した。たばこ材料は、まず約４０°Ｃの温度に供され、次に約（７０°Ｃ）の温度に供され、次に約６０°Ｃの温度に供される。予備乾燥プロセスにより、約２５重量パーセントの相対湿度ＯＶ［パーセント］を有するたばこ材料を得ることができ、細片をより細かい粒子に切断することを可能にする。次に、たばこ材料は、約１ミリメートルの切断幅の粒子に切断される。次いで、たばこ材料は、１０重量パーセント～約１５重量パーセントＯＶ［パーセント］の最終水分含量まで乾燥される。乾燥工程は、約１０分間、約９０°Ｃ～約１００°Ｃから成る温度および約０．６バールの圧力で回転式乾燥機内で行われた。次いで、たばこ材料は最終的に、短い貯蔵のために７０マイクロメートルの仕様で粉砕される。
【0210】
二つのバレルのたばこ材料は、実験の６か月の間、二か月に一度回転されている。
【0211】
試料は、発酵前（ＶＧ－ＳＭ：出発材料、６回の反復）、発酵プロセスの開始から３か月後の発酵プロセス中、および発酵後（ＶＧ－ＡＦ：発酵後、６回の反復）に採取された。
【0212】
目視観察
発酵プロセス終了時（ＶＧ－ＡＦ）のたばこ材料の色は、出発材料（ＶＧ－ＳＭ）と比較して著しくより暗くなった。６か月の嫌気性発酵後、バージニアたばこ材料は、バージニアたばこ材料の完全な発酵が起こったことを示す暗色を呈する。
発酵プロセス終了時（ＶＧ－ＡＦ）のたばこ材料の色は、出発材料（ＶＧ－ＳＭ）と比較して著しくより暗くなった。６か月の嫌気性発酵後、バージニアたばこ材料は、バージニアたばこ材料の完全な発酵が起こったことを示す暗色を呈する。
【0213】
化学分析
以下において、試料に関する値が言及される場合、所与の値は、同じタイプの各試料、反復について得られた幾つかの値の平均を表す。
以下において、試料に関する値が言及される場合、所与の値は、同じタイプの各試料、反復について得られた幾つかの値の平均を表す。
【0214】
図１６は、発酵プロセス中の総アルカロイド（ＴＡ）、発酵前、および発酵の三か月後、および発酵プロセスの終了時における還元糖（ＲＳ）、硝酸塩（ＮＯ3）、およびアンモニア（ＮＨ3）の含有量の差を示す。総アルカロイド（ＴＡ）は嫌気性発酵プロセスによる影響を受けない。還元糖は嫌気性細菌によって消費され、たばこ材料中のそれらの含有量は発酵と共に減少する。発酵の終了時に、たばこ材料中の還元糖のレベルは非常に低い。この場合、還元糖は、６か月の発酵および一回のみの回転後にほぼ完全に消費された。これらのデータは、実施例１、２、および３で得られたデータに相当する。
【0215】
化学分析は、乳酸が重発酵中に生成されることを示す。乳酸細菌中に存在する代謝経路によると、乳酸は、実施例３について既に考察した通り、還元糖（グルコースおよびフルクトース）、ピルビン酸、リンゴ酸およびクエン酸の異化に由来する。
【0216】
図１７Ａは、実施例４のたばこ材料中のインドール－３－乳酸の変化を示す（ＶＧ－ＣＨ）。インドール－３－Ｌａｃｔｉｃの含有量は、マイクログラム／グラムで示されている。グラフは、発酵たばこ材料中のインドール－３－乳酸の含有量の著しい増加を示す。インドール－３－乳酸についての上記に示したデータは、超高速液体クロマトグラフィー極性および脂質陽性ならびにＧＣ－ＭＳ、極性負イオン化モードでの測定に供された非発酵たばこ材料（ＶＧ－ＮＦＨＳ ＣＨ ＶＧ－１９－２０－ＮＦ）および発酵たばこ材料（ＨＳ ＣＨ ＶＧ－１９－２０－Ｆ）の試料を使用して得られている。試料を、エレクトロスプレーイオン化源（ＥＳＩ）およびオービトラップ質量分析器から成るＴｈｅｒｍｏ－Ｆｉｓｈｅｒ Ｅｘａｃｔｉｖｅ質量分析計に結合されたＷａｔｅｒｓ ＡＣＱＵＩＴＹ逆相超高性能液体クロマトグラフィー（ＲＰ－ＵＰＬＣ）、ならびに電子衝撃イオン化源（ＥＩ）および飛行時間（ＴＯＦ）質量分析器から成るＡｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ質量分析計で測定した。水相のＵＰＬＣ－ＭＳ測定により、極性および半極性の一次代謝物および二次代謝産物の検出が可能となり、有機相では脂質および親油性含有量の検出が可能となった。ＧＣ－ＭＳ測定により、一次代謝物の分析が可能になる。
【0217】
試料調製
試料調製は、ｍｅｔａＳｙｓＸ標準手順、Ｓａｌｅｍらの修正されたプロトコールにより実施された（Ｓａｌｅｍ ｅｔ ａｌ．，Ｐｌａｎｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ．２０１６ ４５（１２））。２０（±２）ミリグラムの粉砕材料を代謝物抽出に使用した。試料をＭＴＢＥ：ＭｅｔＯＨ：Ｈ２Ｏ二相抽出法で抽出する。総（６５０μｌ）有機相を収集し、ＬＣ－ＭＳ脂質測定のために乾燥させる。４５０μｌの極性相を収集し、ＬＣ－ＭＳ極性代謝物測定のために乾燥させ、１５０μｌの極性相を乾燥させ、ＧＣ－ＭＳ測定のために誘導体化する。
試料調製は、ｍｅｔａＳｙｓＸ標準手順、Ｓａｌｅｍらの修正されたプロトコールにより実施された（Ｓａｌｅｍ ｅｔ ａｌ．，Ｐｌａｎｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ．２０１６ ４５（１２））。２０（±２）ミリグラムの粉砕材料を代謝物抽出に使用した。試料をＭＴＢＥ：ＭｅｔＯＨ：Ｈ２Ｏ二相抽出法で抽出する。総（６５０μｌ）有機相を収集し、ＬＣ－ＭＳ脂質測定のために乾燥させる。４５０μｌの極性相を収集し、ＬＣ－ＭＳ極性代謝物測定のために乾燥させ、１５０μｌの極性相を乾燥させ、ＧＣ－ＭＳ測定のために誘導体化する。
【0218】
標準曲線調製液
２ミリグラム／ｍｌのインドール－３－ｌａｃｔｉｃのストックを水中で溶解した。標準混合物を、１０、５、２、１、０．５、０．２５、０．１２５、０．０６２μｇ／ｍｌの濃度で調製した。さらに、２００μｌの標準混合物を乾燥させ、試料（「例」）と同じ抽出手順（例）に供するか、またはＬＣ－ＭＳ分析に直接供するか、または乾燥させ、誘導体化し、ＧＣ－ＭＳ（例なし）によって分析した。標準の抽出手順および試料は、すべての同一の体積と同一であった。
２ミリグラム／ｍｌのインドール－３－ｌａｃｔｉｃのストックを水中で溶解した。標準混合物を、１０、５、２、１、０．５、０．２５、０．１２５、０．０６２μｇ／ｍｌの濃度で調製した。さらに、２００μｌの標準混合物を乾燥させ、試料（「例」）と同じ抽出手順（例）に供するか、またはＬＣ－ＭＳ分析に直接供するか、または乾燥させ、誘導体化し、ＧＣ－ＭＳ（例なし）によって分析した。標準の抽出手順および試料は、すべての同一の体積と同一であった。
【0219】
絶対含有量の計算
化合物濃度は、抽出された標準曲線に基づいて計算され、計算のためにすべての点（技術的反復の平均）が取られ、試料重量のミリグラム当たりのマイクログラムとして表される。
化合物濃度は、抽出された標準曲線に基づいて計算され、計算のためにすべての点（技術的反復の平均）が取られ、試料重量のミリグラム当たりのマイクログラムとして表される。
【0220】
これらのデータは、以下の表３に報告される。この表は、実施例４の処理されたたばこ材料の試料（ＶＧ＿ＩＤＣ＿ＡＦ）の、実施例４の非発酵たばこ材料（ＶＧ＿ＩＤＣ＿ＢＦ）の、および発酵プロセスに供されない異なるたばこ材料（Ｋ３２６＿７５、ＴＮ９０＿１１０、Ｋ３２６＿Ｇ、Ｋ３２６＿１１０、ＴＮ９０＿Ｇ、Ｋ３２６＿乾燥処理済み、ＴＮ９０＿７５）からの、希釈試料（標準）のインドール－３－乳酸の含有量を示す。
【表3】
【0221】
Ｃ－ＭＳ測定（親水性および親油性分析物）
試料を、Ｔｈｅｒｍｏ－Ｆｉｓｈｅｒ Ｅｘａｃｔｉｖｅ質量分析計に結合されたＷａｔｅｒｓ ＡＣＱＵＩＴＹ逆相超高性能液体クロマトグラフィー（ＲＰ－ＵＰＬＣ）で測定した。Ｃ８カラムおよびＣ１８カラムをそれぞれ親油性および親水性測定に使用した。クロマトグラムをフルスキャンＭＳモード（質量範囲［１００～１５００］）で記録した。すべての質量スペクトルを、正イオン化モードおよび負イオン化モードで取得した。
試料を、Ｔｈｅｒｍｏ－Ｆｉｓｈｅｒ Ｅｘａｃｔｉｖｅ質量分析計に結合されたＷａｔｅｒｓ ＡＣＱＵＩＴＹ逆相超高性能液体クロマトグラフィー（ＲＰ－ＵＰＬＣ）で測定した。Ｃ８カラムおよびＣ１８カラムをそれぞれ親油性および親水性測定に使用した。クロマトグラムをフルスキャンＭＳモード（質量範囲［１００～１５００］）で記録した。すべての質量スペクトルを、正イオン化モードおよび負イオン化モードで取得した。
【0222】
ＬＣ－ＭＳデータ処理（親水性および親油性分析物）
ＬＣ－ＭＳデータの抽出を、ソフトウェアＰｅａｋＳｈａｐｅｒ（ｍｅｔａＳｙｓＸ ＧｍｂＨ）を用いて達成した。ＬＣ－ＭＳデータのアライメントおよびフィルタリングは、社内ソフトウェアを使用して完了した。クロマトグラムから抽出した後、データは処理され、整列され、冗長ピークに対してフィルタリングされる。各クロマトグラムから抽出されたデータのアライメントは、群のうちの少なくとも一つのすべての反復において特徴が存在する必要があるという基準に従って実施された。この段階では、平均ＲＴ値およびｍ／ｚ値が特徴に与えられる。アライメントは、各タイプの測定値に対して独立して実施された。
ＬＣ－ＭＳデータの抽出を、ソフトウェアＰｅａｋＳｈａｐｅｒ（ｍｅｔａＳｙｓＸ ＧｍｂＨ）を用いて達成した。ＬＣ－ＭＳデータのアライメントおよびフィルタリングは、社内ソフトウェアを使用して完了した。クロマトグラムから抽出した後、データは処理され、整列され、冗長ピークに対してフィルタリングされる。各クロマトグラムから抽出されたデータのアライメントは、群のうちの少なくとも一つのすべての反復において特徴が存在する必要があるという基準に従って実施された。この段階では、平均ＲＴ値およびｍ／ｚ値が特徴に与えられる。アライメントは、各タイプの測定値に対して独立して実施された。
【0223】
ＬＣ－ＭＳデータ注釈付け（親水性親水性および分析物）
化学化合物の社内ｍｅｔａＳｙｓＸデータベースを使用して、ＬＣ－ＭＳ親油性プラットフォームで検出された特徴を一致させた。対象の化合物の注釈付けは、ＭＳＸデータベースと照合することによって実施され、測定された標準によって確認された。
化学化合物の社内ｍｅｔａＳｙｓＸデータベースを使用して、ＬＣ－ＭＳ親油性プラットフォームで検出された特徴を一致させた。対象の化合物の注釈付けは、ＭＳＸデータベースと照合することによって実施され、測定された標準によって確認された。
【0224】
ｍｅｔａＳｙｓＸ（ＭＳＸ）データベース
ｍｅｔａＳｙｓＸ社内データベースは、純粋な化合物として利用可能な７５００の参照化合物の質量対電荷比および保持時間情報を含み、測定された試料と同じクロマトグラフィーおよび分光測定条件で測定される。さらに、前駆体 ｍ／ｚ、断片化スペクトル、および溶出パターンに基づいて推定的に注釈付けされた１５００の脂質および糖エステル。ＤＧＤＧ注釈付けの合致基準は、それぞれ参照化合物質量対電荷比および保持時間から、５パーツ・パー・ミリオンおよび０．０８５分の偏差であった。
ｍｅｔａＳｙｓＸ社内データベースは、純粋な化合物として利用可能な７５００の参照化合物の質量対電荷比および保持時間情報を含み、測定された試料と同じクロマトグラフィーおよび分光測定条件で測定される。さらに、前駆体 ｍ／ｚ、断片化スペクトル、および溶出パターンに基づいて推定的に注釈付けされた１５００の脂質および糖エステル。ＤＧＤＧ注釈付けの合致基準は、それぞれ参照化合物質量対電荷比および保持時間から、５パーツ・パー・ミリオンおよび０．０８５分の偏差であった。
【0225】
ＧＣ－ＭＳ測定
試料を、ＥＩイオン化源およびＴＯＦ質量分析器から成るＬｅｃｏ Ｐｅｇａｓｕｓ ＨＴ質量分析計に結合されたＡｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ＧＣ上で測定した。
試料を、ＥＩイオン化源およびＴＯＦ質量分析器から成るＬｅｃｏ Ｐｅｇａｓｕｓ ＨＴ質量分析計に結合されたＡｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ＧＣ上で測定した。
【0226】
カラム：３０メートルＤＢ３５、開始温度：８５°Ｃで２分間、勾配：１分当たり１５℃～最高３６０℃。
【0227】
ＧＣ－ＭＳデータ処理および注釈付け
Ｌｅｃｏ ＰｅｇａｓｕｓソフトウェアからエクスポートされたＮｅｔＣＤＦファイルを「Ｒ」にインポートした。バイオコンダクタパッケージＴａｒｇｅｔＳｅａｒｃｈ［３］を使用して、保持時間を保持指標（ＲＩ）に変換し、クロマトグラムを整列させ、ピークを抽出し、それらを注釈付けした。
Ｌｅｃｏ ＰｅｇａｓｕｓソフトウェアからエクスポートされたＮｅｔＣＤＦファイルを「Ｒ」にインポートした。バイオコンダクタパッケージＴａｒｇｅｔＳｅａｒｃｈ［３］を使用して、保持時間を保持指標（ＲＩ）に変換し、クロマトグラムを整列させ、ピークを抽出し、それらを注釈付けした。
【0228】
試料に対して実施された分析は、発酵たばこ材料（ＶＧ＿ＩＤＣ＿ＡＦ）中のインドール－３－ｌａｃｔｉｃの含有量が０．００２５２０００６ マイクログラム／ミリグラムであり、発酵たばこ材料（ＶＧ＿ＩＤＣ＿ＢＦ）中のインドール－３－ｌａｃｔｉｃの含有量が０．０００１１３９８８ マイクログラム／ミリグラムであることを示す。これらのデータは、図１７Ａで報告される。
上述の実験で得られた結果を比較すると、化学分析により、実施されたすべての実験において嫌気性発酵後に乳酸が著しく増加したことが確認されることが明らかである。完全発酵たばこ材料が約５０ミリグラム／グラム～約１００ミリグラム／グラムの乳酸を含有するが、一方で非発酵たばこにおいて４ミリグラム／グラム未満が見出されうる。異なるタイプのたばこについての乳酸のデータを、表２に報告し、この表では、Ｒａｊａｎｇａｎ（ＲＡＪ）たばこＲＡＪ ＩＤ ＫＳ－１８－１９、ハンドストリッピングされた（ＨＳ）ダークたばこＨＳ ＩＤ ＫＳ－１８－１９、ハンドストリッピングされたバージニアたばこＨＳ ＩＤ ＶＧ－１９－２０、およびハンドストリッピングされたバージニアたばこＨＳ ＣＨ ＶＧ－１９－２０が報告されている。
上述の実験で得られた結果を比較すると、化学分析により、実施されたすべての実験において嫌気性発酵後に乳酸が著しく増加したことが確認されることが明らかである。完全発酵たばこ材料が約５０ミリグラム／グラム～約１００ミリグラム／グラムの乳酸を含有するが、一方で非発酵たばこにおいて４ミリグラム／グラム未満が見出されうる。異なるタイプのたばこについての乳酸のデータを、表２に報告し、この表では、Ｒａｊａｎｇａｎ（ＲＡＪ）たばこＲＡＪ ＩＤ ＫＳ－１８－１９、ハンドストリッピングされた（ＨＳ）ダークたばこＨＳ ＩＤ ＫＳ－１８－１９、ハンドストリッピングされたバージニアたばこＨＳ ＩＤ ＶＧ－１９－２０、およびハンドストリッピングされたバージニアたばこＨＳ ＣＨ ＶＧ－１９－２０が報告されている。
【0229】
Ｒａｊａｎｇａｎ（ＲＡＪ）たばこＩＤ ＫＳ－１８－１９は、実施例２のたばこ材料を示し、ＨＳ ＩＤ ＫＳ－１８－１９は、実施例１のたばこ材料を示し、ＨＳ ＩＤ ＶＧ－１９－２０は、実施例３のたばこ材料を示し、ＨＳ ＣＨ ＶＧ－１９－２０は、実施例４のたばこ材料を示す。
【表4】
【0230】
表４には、発酵たばこ材料（Ｆ）および非発酵たばこ材料（ＮＦ）中の乳酸の量が示されている。乳酸の量は、たばこ材料の乾燥重量を参照して、ミリグラム／キログラムで示されている。データは、すべてのたばこ材料が発酵後に乳酸の含有量の増加を有することを示す。すべてのたばこ試料は、類似した量の乳酸を有し、それによって、中肋を有する高速乾燥済みカットフィラーたばこおよび対応する手で剥がされた乾燥処理済み材料の両方が、類似したレベルの乳酸に達することを示す。バージニアたばこは、ダークたばこと比較して類似のレベルの乳酸に達した（ＨＳ ＣＨ ＶＧ－１９－２０－Ｆ［６８．７ミリグラム／グラム］をＨＳ ＩＤ ＫＳ－１８－１９－Ｆ［７９．２ミリグラム／グラム］と比較する）。
【0231】
これは、たばこ発酵は、異なるたばこタイプ、すなわち、ダークたばこおよびバージニアたばこで実施することができ、糖およびアミノ酸が乳酸細菌ための炭素および窒素の供給源となりうることを確認する。バーレー種およびオリエント葉たばこで試験が実施されていない場合でも、オリエント葉たばこは、嫌気性発酵プロセスによる影響を受けないにもかかわらず、通常はアルカロイドが少ないダークたばこに近いことが多い組成物を有する。
【0232】
発酵たばこで測定される乳酸の大部分は、嫌気性細菌の生化学的経路と一致するエナンチオマーＬ－乳酸である。しかしながら、一部のＤ－乳酸も生成される。Ｌ－乳酸と比較して、Ｄ－乳酸はヒトに対して有毒であり得、すなわち、経口的に毒されたラット当たりのＬＤ５０値レベルは、約４．５ｇ／キログラムである（Ｐｏｈａｎｋａ，２０２０）。しかしながら、Ｄ－乳酸およびＬ－乳酸は不揮発性であり、したがってエアロゾル中に移動しない。
【0233】
さらに、実施例１～２および４～５のたばこ材料の発酵比を測定し、データを以下の表４および５に収集する。
【0234】
たばこ発酵比は、以下の式によって与えられる：Ｆｒ＝（ＦLA／ＮＦLA）：（ＦRS／ＮＦRS）式中、
Ｆｒ＝発酵定量（Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ Ｒａｔｉｏｎ）、ＦLA＝発酵たばこ材料中の乳酸の含有量、ＮＦLA＝たばこ材料中の乳酸の初期含有量、ＦRS＝発酵たばこ材料中の還元糖の含有量、ＮＦRS＝たばこ材料中の還元糖の初期含有量。
Ｆｒ＝発酵定量（Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ Ｒａｔｉｏｎ）、ＦLA＝発酵たばこ材料中の乳酸の含有量、ＮＦLA＝たばこ材料中の乳酸の初期含有量、ＦRS＝発酵たばこ材料中の還元糖の含有量、ＮＦRS＝たばこ材料中の還元糖の初期含有量。
【表5】
【表6】
【0235】
たばこ発酵指数は、たばこ材料の発酵についてさらなる表示を与える。たばこ発酵定量（ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｒａｔｉｏｎ）は、たばこ試料中の発酵のレベルをモニターすることを可能にする。表５に示すように、発酵定量（ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｒａｔｉｏｎ）は、発酵中に大幅に増加する。したがって、発酵定量（ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｒａｔｉｏｎ）は、たばこ材料の発酵の非常に効率的な指標である。
【0236】
結論として、メタボロームデータは、たばこ発酵中に生成される化合物、すなわち乳酸、インドール乳酸、カフェイン酸、およびキナ酸は、ダークまたは火力乾燥たばこマトリクスの両方を用いて生成されるため、たばこタイプに直接連結していないことを示唆している。しかしながら、それらは、開始たばこ葉材料中に見られる基質化合物の以前の存在量に関して確かに定量的に変化し得る。したがって、嫌気性発酵は、異なるたばこタイプおよび材料に適用可能なプロセスであり、たばこ材料のタイプとは無関係に、たばこ材料中の一部の物質の含有量の変化を引き起こす。
【0237】
一部の物質は、たばこ材料の発酵の程度の指標として使用されてもよく、これらの物質は、発酵の程度の信頼できる表示として使用されてもよい。
【0238】
多くの指標の使用、ならびに例えば色変化、ＲＳ消費、および嫌気性細菌による乳酸生成の間の相関は、たばこ材料の発酵の程度を証明し、発酵の程度の非常に信頼性の高い表示を与える。
【0239】
さらに、嫌気性プロセスは、たばこ材料のアルカロイドの含有量に悪影響を及ぼさない。
【0240】
実施された実験は、以下の条件が発酵にプラスの影響を与え、プロセスの効率を高める可能性があるという定義に導く：
－ 相対湿度として示される約４０重量パーセント～６０重量パーセントから成る最終湿度に達するように、手で剥がされた葉材料を水で前処理する、
－ 閉じたバレル、タンク、または容器（バレル）を予め調整された細片で充填して、約１００キログラムの容量に到達させる、
－ 発酵プロセス中の密封容器において、水で約３０重量パーセント～５０重量パーセントから成る相対湿度を維持する、
－ 約２２℃の温度で発酵を実施する、
－ 発酵プロセス中に温度をほぼ安定に維持する、
－ 容器内の嫌気性発酵プロセスを均質化するために、発酵プロセス中に、少なくとも一回転させ、たばこ材料を取り出し、たばこ材料を混合し、および発酵装置内にたばこ材料の再装填することを実施する、
－ 発酵プロセス中に、たばこを回転させるときを除いて、約０．５キログラム／平方センチメートル～１キログラム／平方センチメートルから成る圧力を加える
－ 二つの工程の乾燥プロセスで発酵たばこ材料を乾燥する
－ たばこ材料を、たばこ材料が約６０℃の温度に約８分間供されて約２５パーセントＯＶに達する第一の乾燥工程に供すること
－ たばこ材料を、約９０℃～１００℃から成る温度で、約０．６バールの圧力で、約１０分間にわたり、１０～１５パーセントＯＶに達するように第二の乾燥工程に供すること。
－ 相対湿度として示される約４０重量パーセント～６０重量パーセントから成る最終湿度に達するように、手で剥がされた葉材料を水で前処理する、
－ 閉じたバレル、タンク、または容器（バレル）を予め調整された細片で充填して、約１００キログラムの容量に到達させる、
－ 発酵プロセス中の密封容器において、水で約３０重量パーセント～５０重量パーセントから成る相対湿度を維持する、
－ 約２２℃の温度で発酵を実施する、
－ 発酵プロセス中に温度をほぼ安定に維持する、
－ 容器内の嫌気性発酵プロセスを均質化するために、発酵プロセス中に、少なくとも一回転させ、たばこ材料を取り出し、たばこ材料を混合し、および発酵装置内にたばこ材料の再装填することを実施する、
－ 発酵プロセス中に、たばこを回転させるときを除いて、約０．５キログラム／平方センチメートル～１キログラム／平方センチメートルから成る圧力を加える
－ 二つの工程の乾燥プロセスで発酵たばこ材料を乾燥する
－ たばこ材料を、たばこ材料が約６０℃の温度に約８分間供されて約２５パーセントＯＶに達する第一の乾燥工程に供すること
－ たばこ材料を、約９０℃～１００℃から成る温度で、約０．６バールの圧力で、約１０分間にわたり、１０～１５パーセントＯＶに達するように第二の乾燥工程に供すること。
【0241】
その一方で、図１０に描写の通り、かつ実施例１および実施例２で既に観察された通り、還元糖は発酵細菌によって基質として使用された。したがって、還元糖（ＲＳ）の約６０パーセントは、８か月の発酵中に酸化され、乾燥重量（ＤＷ）で１８．３パーセント（ＶＧ－ＢＦ）から７．４パーセント（ＶＧ－ＡＦ）に変わった。より長い発酵期間は、より高いＲＳ分解率につながった可能性がある。
【0242】
本発明はまた、以下の実施形態を対象とする。
【0243】
実施形態１．
たばこ材料を処理する方法であって、方法が、
－ たばこ材料を提供することと、
－ 発酵たばこ材料を得るためにたばこ材料を発酵させることであって、発酵工程が、
・ 嫌気性条件下でたばこ材料をインキュベートすること、
・ 以下の条件：
・ 乳酸の含有量が、たばこ材料中の乳酸の初期量の１０倍を超える、好ましくは２０倍を超える、より好ましくは５０倍を超える、より好ましくは７０倍を超える、好ましくは８０倍を超える、
・ 還元糖の含有量が、たばこ材料中の還元糖の初期量の０．５未満、好ましくは０．４未満、より好ましくは０．２未満、より好ましくは０．１未満である、
・ インドール－３乳酸の含有量が、たばこ材料中のインドール－３乳酸の初期量の５倍を超える、好ましくは１０倍を超える、好ましくは２０倍を超える、
・ カフェイン酸の含有量が、たばこ材料中のカフェイン酸の初期量の４倍を超える、好ましくは１０倍を超える、好ましくは２０倍を超える、
・ キナ酸の含有量が、たばこ材料中のキナ酸の初期量の２倍を超える、好ましくは４倍を超える、
・ アスパラギンの含有量が、たばこ材料中のアスパラギンの初期量の０．５未満、好ましくは０．４未満、好ましくは０．３未満である、
・ グルタミンの含有量が、たばこ材料中のグルタミンの初期量の０．５未満、好ましくは０．４未満である、
・ Ｌ－オルニチンの含有量が、たばこ材料中のＬ－オルニチンの初期量の１０倍を超える、好ましくは２０倍を超える、好ましくは５０倍を超える、好ましくは１００倍を超える、
・ Ｌ－ロイシンの含有量が、たばこ材料中のＬ－ロイシンの初期量の２倍を超える、好ましくは４倍を超える、
・ Ｌ－リジンの含有量が、たばこ材料中のＬ－リジンの初期量の２倍を超える、好ましくは６倍を超える、
・ 発酵指数が、５０を超え、好ましくは１００を超え、より好ましくは２５０を超え、より好ましくは４００を超え、ここで発酵指数は、処理されたたばこ材料中の乳酸の含有量と非発酵たばこ材料中の乳酸の含有量との比を、処理されたたばこ材料中の還元糖の含有量と非発酵たばこ材料中の還元糖の含有量との比で割って得られる、のうちの少なくとも一つを満たすとき、発酵を停止すること、を含む、発酵させることと、を含む。
実施形態２．
たばこ材料中の、乳酸、または還元糖、またはインドール－３乳酸、またはキナ酸、またはカフェイン酸、またはＬ－オルニチン、またはアスパラギン、またはグルタミン、またはＬ－ロイシン、またはＬ－リジン、または発酵指数のうちの少なくとも一つの初期含有量を測定するための初期測定工程をさらに含む、実施形態１に記載の方法。
実施形態３．
発酵工程中のたばこ材料中の、乳酸、または還元糖、またはインドール－３乳酸、またはキナ酸、またはカフェイン酸、またはＬ－オルニチン、またはアスパラギン、またはグルタミン、またはＬ－ロイシン、またはＬ－リジン、または発酵指数のうちの少なくとも一つの含有量を測定するための測定工程をさらに含む、実施形態１または２に記載の方法。
実施形態４．
たばこ材料がダークたばこを含有する場合、２，３ブタンジオールの含有量が、たばこ材料中の２，３ブタンジオールの初期量の５倍を超える、好ましくは１０倍を超える、またはジアセチルの含有量が、たばこ材料中のジアセチルの初期量の５倍を超える、好ましくは１０倍を超えるという条件のうちの少なくとも一つが満たされる時に、発酵を停止するために提供される、実施形態１～３のいずれか一つに記載の方法。
実施形態５．
たばこ材料中の２，３ブタンジオールまたはジアセチルのそれぞれの初期量を得るように、発酵前にたばこ材料中の２，３ブタンジオールまたはジアセチルの初期含有量を測定するための初期測定工程をさらに含む、実施形態４に記載の方法。
実施形態６．
たばこ材料を処理する方法であって、方法が、
－ たばこ材料を提供することと、
－ 発酵たばこ材料を得るためにたばこ材料を発酵させることであって、発酵工程が、
－ 嫌気性条件下でたばこ材料をインキュベートすることであって、ここで発酵工程中、１０００キログラム／平方メートル～１５０００キログラム／平方メートル、好ましくは３０００キログラム／平方メートル～１２０００キログラム／平方メートル、より好ましくは５０００キログラム／平方メートル～１００００キログラム／平方メートルから成る圧力をたばこ材料に印加するために提供される、インキュベートすること、を含む、発酵させることと、を含む方法。
実施形態７．
たばこ材料を処理する方法であって、方法が、
－ たばこ材料を提供することと、
－ 発酵たばこ材料を得るためにたばこ材料を発酵させることであって、発酵工程が、
－ 嫌気性条件下でたばこ材料をインキュベートすることであって、ここで少なくとも１か月、好ましくは少なくとも２か月、より好ましくは少なくとも４か月、より好ましくは少なくとも６か月、さらにより好ましくは少なくとも８か月、好ましくは少なくとも１０か月、より好ましくは少なくとも１２か月の発酵時間の間発酵工程を継続するために提供される、インキュベートすること、を含む、発酵させることと、を含む方法。
実施形態８．
たばこ材料を処理する方法であって、方法が、
－ たばこ材料を提供することと、
－ 発酵たばこ材料を得るためにたばこ材料を発酵させることであって、発酵工程が、
－ 嫌気性条件下でたばこ材料をインキュベートすることであって、ここで発酵工程中、たばこ材料の温度を２１℃～３５℃、好ましくは２５℃～３１℃から成る温度に保つために提供される、インキュベートすること、を含む発酵させることと、を含む方法。
実施形態９．
実施形態１～８のいずれか一つに記載の方法に従って得られるたばこ材料。
実施形態１０．
以下の化合物のうちの少なくとも一つを含むたばこ材料：
－ たばこ材料中の乳酸の初期量の１０倍を超える、好ましくは２０倍を超える、より好ましくは５０倍を超える、より好ましくは７０倍を超える、より好ましくは８０倍を超える量の乳酸、
－ たばこ材料中の還元糖の初期量の０．５未満、好ましくは０．４未満、より好ましくは０．２未満、より好ましくは０．１未満である量の還元糖、
－ たばこ材料中のインドール－３乳酸の初期量の５倍を超える、好ましくは１０倍を超える、好ましくは２０倍を超える量のインドール－３乳酸、
－ たばこ材料中のカフェイン酸の初期量の４倍を超える、好ましくは１０倍を超える量のカフェイン酸、
－ たばこ材料中のキナ酸の初期量の２倍を超える、好ましくは４倍を超える量のキナ酸、
－ たばこ材料中のアスパラギンの初期量の０．５未満、好ましくは０．４未満、好ましくは０．３未満の量のアスパラギン、
－ たばこ材料中のグルタミンの初期量の０．５未満、好ましくは０．４未満の量のグルタミン、
－ Ｌ－オルニチンは、たばこ材料中のＬ－オルニチンの初期量の１０倍を超える、好ましくは５０倍を超える、好ましくは１００倍を超える、
－ Ｌ－ロイシンの初期量の２倍を超える、好ましくは４倍を超えるの量のＬ－ロイシン、
－ Ｌ－リジンの初期量の２倍を超える、好ましくは６倍を超えるの量のＬ－リジン、
－ 発酵指数は、５０を超え、好ましくは１００を超え、より好ましくは２５０を超え、より好ましくは４００を超え、ここで発酵指数は、たばこ材料中の乳酸の含有量と非発酵たばこ材料中の乳酸の含有量との比を、たばこ材料中の還元糖の含有量と非発酵たばこ材料中の還元糖の含有量との比で割って得られる。
実施形態１１．
前述のたばこ材料が、たばこ材料を嫌気性条件下でインキュベートすることを含む、処理されたたばこ材料を得るためにたばこ材料を発酵することを含むプロセスによって得られる、実施形態１～１０に記載のたばこ材料。
実施形態１２．
総乾燥重量基準で、少なくとも２０ミリグラム／グラム、好ましくは少なくとも５０ミリグラム／グラム、より好ましくは少なくとも６０ミリグラム／グラムの乳酸を含む、たばこ材料。
実施形態１３．
たばこ材料であって、
ｏ 総乾燥重量基準で３パーセント未満の総還元糖、および／または
ｏ 総乾燥重量基準で３００ミリグラム／キログラム未満のアスパラギン、を含むたばこ材料。
実施形態１４．
総乾燥重量基準で７０ミリグラム／キログラム未満のグルタミンを含む、たばこ材料。
実施形態１５．
総乾燥重量基準で１００００ミリグラム／キログラム超の総遊離アミノ酸を含む、たばこ材料。
実施形態１６．
総乾燥重量基準で少なくとも１マイクログラム／グラム、好ましくは少なくとも２マイクログラム／グラム、より好ましくは少なくとも２．５マイクログラム／グラムのインドール－３乳酸を含む、たばこ材料。
実施形態１７．
たばこ材料が乾燥されている、実施形態１９～２７のいずれか一つに記載のたばこ材料。
実施形態１８．
たばこ材料が粉砕されている、実施形態１９～２８のいずれか一つに記載のたばこ材料。
実施形態１９．
総乾燥重量基準で約２．５重量パーセント～総乾燥重量基準で１００重量パーセント、好ましくは総乾燥重量基準で少なくとも約４重量パーセント、好ましくは総乾燥重量基準で少なくとも約１０重量パーセント、好ましくは総乾燥重量基準で少なくとも約２０重量パーセントの実施形態９～１８のいずれか一つに記載のたばこ材料を含有する、たばこ材料を含む、エアロゾル発生物品。
実施形態２０．
総乾燥重量基準で少なくとも５ミリグラム／グラム、好ましくは１０ミリグラム／グラムの乳酸を含有する、たばこ材料を含む、エアロゾル発生物品。
たばこ材料を処理する方法であって、方法が、
－ たばこ材料を提供することと、
－ 発酵たばこ材料を得るためにたばこ材料を発酵させることであって、発酵工程が、
・ 嫌気性条件下でたばこ材料をインキュベートすること、
・ 以下の条件：
・ 乳酸の含有量が、たばこ材料中の乳酸の初期量の１０倍を超える、好ましくは２０倍を超える、より好ましくは５０倍を超える、より好ましくは７０倍を超える、好ましくは８０倍を超える、
・ 還元糖の含有量が、たばこ材料中の還元糖の初期量の０．５未満、好ましくは０．４未満、より好ましくは０．２未満、より好ましくは０．１未満である、
・ インドール－３乳酸の含有量が、たばこ材料中のインドール－３乳酸の初期量の５倍を超える、好ましくは１０倍を超える、好ましくは２０倍を超える、
・ カフェイン酸の含有量が、たばこ材料中のカフェイン酸の初期量の４倍を超える、好ましくは１０倍を超える、好ましくは２０倍を超える、
・ キナ酸の含有量が、たばこ材料中のキナ酸の初期量の２倍を超える、好ましくは４倍を超える、
・ アスパラギンの含有量が、たばこ材料中のアスパラギンの初期量の０．５未満、好ましくは０．４未満、好ましくは０．３未満である、
・ グルタミンの含有量が、たばこ材料中のグルタミンの初期量の０．５未満、好ましくは０．４未満である、
・ Ｌ－オルニチンの含有量が、たばこ材料中のＬ－オルニチンの初期量の１０倍を超える、好ましくは２０倍を超える、好ましくは５０倍を超える、好ましくは１００倍を超える、
・ Ｌ－ロイシンの含有量が、たばこ材料中のＬ－ロイシンの初期量の２倍を超える、好ましくは４倍を超える、
・ Ｌ－リジンの含有量が、たばこ材料中のＬ－リジンの初期量の２倍を超える、好ましくは６倍を超える、
・ 発酵指数が、５０を超え、好ましくは１００を超え、より好ましくは２５０を超え、より好ましくは４００を超え、ここで発酵指数は、処理されたたばこ材料中の乳酸の含有量と非発酵たばこ材料中の乳酸の含有量との比を、処理されたたばこ材料中の還元糖の含有量と非発酵たばこ材料中の還元糖の含有量との比で割って得られる、のうちの少なくとも一つを満たすとき、発酵を停止すること、を含む、発酵させることと、を含む。
実施形態２．
たばこ材料中の、乳酸、または還元糖、またはインドール－３乳酸、またはキナ酸、またはカフェイン酸、またはＬ－オルニチン、またはアスパラギン、またはグルタミン、またはＬ－ロイシン、またはＬ－リジン、または発酵指数のうちの少なくとも一つの初期含有量を測定するための初期測定工程をさらに含む、実施形態１に記載の方法。
実施形態３．
発酵工程中のたばこ材料中の、乳酸、または還元糖、またはインドール－３乳酸、またはキナ酸、またはカフェイン酸、またはＬ－オルニチン、またはアスパラギン、またはグルタミン、またはＬ－ロイシン、またはＬ－リジン、または発酵指数のうちの少なくとも一つの含有量を測定するための測定工程をさらに含む、実施形態１または２に記載の方法。
実施形態４．
たばこ材料がダークたばこを含有する場合、２，３ブタンジオールの含有量が、たばこ材料中の２，３ブタンジオールの初期量の５倍を超える、好ましくは１０倍を超える、またはジアセチルの含有量が、たばこ材料中のジアセチルの初期量の５倍を超える、好ましくは１０倍を超えるという条件のうちの少なくとも一つが満たされる時に、発酵を停止するために提供される、実施形態１～３のいずれか一つに記載の方法。
実施形態５．
たばこ材料中の２，３ブタンジオールまたはジアセチルのそれぞれの初期量を得るように、発酵前にたばこ材料中の２，３ブタンジオールまたはジアセチルの初期含有量を測定するための初期測定工程をさらに含む、実施形態４に記載の方法。
実施形態６．
たばこ材料を処理する方法であって、方法が、
－ たばこ材料を提供することと、
－ 発酵たばこ材料を得るためにたばこ材料を発酵させることであって、発酵工程が、
－ 嫌気性条件下でたばこ材料をインキュベートすることであって、ここで発酵工程中、１０００キログラム／平方メートル～１５０００キログラム／平方メートル、好ましくは３０００キログラム／平方メートル～１２０００キログラム／平方メートル、より好ましくは５０００キログラム／平方メートル～１００００キログラム／平方メートルから成る圧力をたばこ材料に印加するために提供される、インキュベートすること、を含む、発酵させることと、を含む方法。
実施形態７．
たばこ材料を処理する方法であって、方法が、
－ たばこ材料を提供することと、
－ 発酵たばこ材料を得るためにたばこ材料を発酵させることであって、発酵工程が、
－ 嫌気性条件下でたばこ材料をインキュベートすることであって、ここで少なくとも１か月、好ましくは少なくとも２か月、より好ましくは少なくとも４か月、より好ましくは少なくとも６か月、さらにより好ましくは少なくとも８か月、好ましくは少なくとも１０か月、より好ましくは少なくとも１２か月の発酵時間の間発酵工程を継続するために提供される、インキュベートすること、を含む、発酵させることと、を含む方法。
実施形態８．
たばこ材料を処理する方法であって、方法が、
－ たばこ材料を提供することと、
－ 発酵たばこ材料を得るためにたばこ材料を発酵させることであって、発酵工程が、
－ 嫌気性条件下でたばこ材料をインキュベートすることであって、ここで発酵工程中、たばこ材料の温度を２１℃～３５℃、好ましくは２５℃～３１℃から成る温度に保つために提供される、インキュベートすること、を含む発酵させることと、を含む方法。
実施形態９．
実施形態１～８のいずれか一つに記載の方法に従って得られるたばこ材料。
実施形態１０．
以下の化合物のうちの少なくとも一つを含むたばこ材料：
－ たばこ材料中の乳酸の初期量の１０倍を超える、好ましくは２０倍を超える、より好ましくは５０倍を超える、より好ましくは７０倍を超える、より好ましくは８０倍を超える量の乳酸、
－ たばこ材料中の還元糖の初期量の０．５未満、好ましくは０．４未満、より好ましくは０．２未満、より好ましくは０．１未満である量の還元糖、
－ たばこ材料中のインドール－３乳酸の初期量の５倍を超える、好ましくは１０倍を超える、好ましくは２０倍を超える量のインドール－３乳酸、
－ たばこ材料中のカフェイン酸の初期量の４倍を超える、好ましくは１０倍を超える量のカフェイン酸、
－ たばこ材料中のキナ酸の初期量の２倍を超える、好ましくは４倍を超える量のキナ酸、
－ たばこ材料中のアスパラギンの初期量の０．５未満、好ましくは０．４未満、好ましくは０．３未満の量のアスパラギン、
－ たばこ材料中のグルタミンの初期量の０．５未満、好ましくは０．４未満の量のグルタミン、
－ Ｌ－オルニチンは、たばこ材料中のＬ－オルニチンの初期量の１０倍を超える、好ましくは５０倍を超える、好ましくは１００倍を超える、
－ Ｌ－ロイシンの初期量の２倍を超える、好ましくは４倍を超えるの量のＬ－ロイシン、
－ Ｌ－リジンの初期量の２倍を超える、好ましくは６倍を超えるの量のＬ－リジン、
－ 発酵指数は、５０を超え、好ましくは１００を超え、より好ましくは２５０を超え、より好ましくは４００を超え、ここで発酵指数は、たばこ材料中の乳酸の含有量と非発酵たばこ材料中の乳酸の含有量との比を、たばこ材料中の還元糖の含有量と非発酵たばこ材料中の還元糖の含有量との比で割って得られる。
実施形態１１．
前述のたばこ材料が、たばこ材料を嫌気性条件下でインキュベートすることを含む、処理されたたばこ材料を得るためにたばこ材料を発酵することを含むプロセスによって得られる、実施形態１～１０に記載のたばこ材料。
実施形態１２．
総乾燥重量基準で、少なくとも２０ミリグラム／グラム、好ましくは少なくとも５０ミリグラム／グラム、より好ましくは少なくとも６０ミリグラム／グラムの乳酸を含む、たばこ材料。
実施形態１３．
たばこ材料であって、
ｏ 総乾燥重量基準で３パーセント未満の総還元糖、および／または
ｏ 総乾燥重量基準で３００ミリグラム／キログラム未満のアスパラギン、を含むたばこ材料。
実施形態１４．
総乾燥重量基準で７０ミリグラム／キログラム未満のグルタミンを含む、たばこ材料。
実施形態１５．
総乾燥重量基準で１００００ミリグラム／キログラム超の総遊離アミノ酸を含む、たばこ材料。
実施形態１６．
総乾燥重量基準で少なくとも１マイクログラム／グラム、好ましくは少なくとも２マイクログラム／グラム、より好ましくは少なくとも２．５マイクログラム／グラムのインドール－３乳酸を含む、たばこ材料。
実施形態１７．
たばこ材料が乾燥されている、実施形態１９～２７のいずれか一つに記載のたばこ材料。
実施形態１８．
たばこ材料が粉砕されている、実施形態１９～２８のいずれか一つに記載のたばこ材料。
実施形態１９．
総乾燥重量基準で約２．５重量パーセント～総乾燥重量基準で１００重量パーセント、好ましくは総乾燥重量基準で少なくとも約４重量パーセント、好ましくは総乾燥重量基準で少なくとも約１０重量パーセント、好ましくは総乾燥重量基準で少なくとも約２０重量パーセントの実施形態９～１８のいずれか一つに記載のたばこ材料を含有する、たばこ材料を含む、エアロゾル発生物品。
実施形態２０．
総乾燥重量基準で少なくとも５ミリグラム／グラム、好ましくは１０ミリグラム／グラムの乳酸を含有する、たばこ材料を含む、エアロゾル発生物品。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図17A】
【図18】
【図19】
【図20】
【国際調査報告】