特表 2024-540359 ＴＥＡＭを分泌する抗メソテリンＣＡＲＴ細胞とその使用方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-10-31

(54)【発明の名称】ＴＥＡＭを分泌する抗メソテリンＣＡＲＴ細胞とその使用方法

(51)【国際特許分類】

   C12N 5/10 20060101AFI20241024BHJP

   C12N 5/0783 20100101ALI20241024BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20241024BHJP

   C12N 15/62 20060101ALI20241024BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20241024BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20241024BHJP

   C12N 15/864 20060101ALI20241024BHJP

   C12N 15/867 20060101ALI20241024BHJP

   A61K 35/17 20150101ALI20241024BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20241024BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20241024BHJP

   A61K 38/19 20060101ALI20241024BHJP

   A61K 38/17 20060101ALI20241024BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20241024BHJP

   A61K 35/76 20150101ALI20241024BHJP

   C07K 14/705 20060101ALN20241024BHJP

   C07K 14/52 20060101ALN20241024BHJP

【ＦＩ】

C12N5/10 ZNA

C12N5/0783

C12N15/13

C12N15/62 Z

C07K16/28

C07K19/00

C12N15/864 100Z

C12N15/867 Z

A61K35/17

A61P35/00

A61K39/395 T

A61K39/395 E

A61K39/395 N

A61K39/395 D

A61K38/19

A61K38/17

A61K48/00

A61K35/76

C07K14/705

C07K14/52

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024526840

(86)(22)【出願日】2022-11-04

(85)【翻訳文提出日】2024-06-28

(86)【国際出願番号】 US2022079284

(87)【国際公開番号】W WO2023081808

(87)【国際公開日】2023-05-11

(31)【優先権主張番号】63/275,911

(32)【優先日】2021-11-04

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/278,825

(32)【優先日】2021-11-12

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】592017633

【氏名又は名称】ザ ジェネラル ホスピタル コーポレイション

(74)【代理人】

【識別番号】110002077

【氏名又は名称】園田・小林弁理士法人

(72)【発明者】

【氏名】マウス， マルセラ ヴィー．

(72)【発明者】

【氏名】ウェールリ， マーク

【テーマコード（参考）】

4B065

4C084

4C085

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA90X

4B065AA90Y

4B065AA94X

4B065AA94Y

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA24

4B065CA25

4B065CA44

4C084AA02

4C084AA13

4C084BA01

4C084BA08

4C084BA22

4C084BA23

4C084BA44

4C084CA53

4C084DA01

4C084DC50

4C084MA66

4C084NA07

4C084NA13

4C084NA14

4C084ZB26

4C085AA13

4C085AA14

4C085BB31

4C085CC22

4C085CC23

4C085DD62

4C085EE01

4C085GG01

4C085GG02

4C087AA01

4C087AA02

4C087BB37

4C087BB65

4C087BC83

4C087CA12

4C087MA66

4C087NA07

4C087NA13

4C087NA14

4C087ZB26

4H045AA10

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA41

4H045BA72

4H045CA40

4H045DA01

4H045DA50

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA72

4H045FA74

(57)【要約】

本開示は、メソテリンキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、Ｔ細胞エンゲージ分子（ＴＥＡＭ）、任意選択的にＴＥＡＭを含む抗メソテリン－ＣＡＲ Ｔ細胞、及びそれらの使用方法に関する。
図１２Ａ

【特許請求の範囲】

【請求項1】

異種核酸分子を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞であって、異種核酸分子が、
（ａ）メソテリン又はその一部を含む腫瘍抗原に結合する細胞外抗原結合ドメイン；膜貫通ドメイン；及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲをコードする第一のポリヌクレオチド
を含む、ＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項2】

（ｂ）治療薬をコードする第二のポリヌクレオチド
を更に含む、請求項１に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項3】

第二のポリヌクレオチドが異種核酸分子の一部である、請求項２に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項4】

第二のポリヌクレオチドを含む第二の異種核酸分子を更に含む、請求項２に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項5】

治療薬が抗体試薬を含む、請求項１から４の何れか一項に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項6】

抗体試薬が単鎖抗体又は単一ドメイン抗体を含む、請求項５に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項7】

抗体試薬が二重特異性抗体試薬を含む、請求項５に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項8】

二重特異性抗体試薬がＴ細胞エンゲージ抗体分子（ＴＥＡＭ）を含む、請求項７に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項9】

単一ドメイン抗体がラクダ科動物抗体を含む、請求項６に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項10】

治療薬がサイトカインを含む、請求項２から９の何れか一項に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項11】

ＣＡＲと治療薬が単一ポリペプチドの形態で生成され、それが切断されて別個のＣＡＲ及び治療薬分子が生成される、請求項２から１０の何れか一項に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項12】

単一ポリペプチドがＣＡＲと治療薬の間に切断可能な部分を含む、請求項１１に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項13】

切断可能な部分が、２Ａペプチド、２Ａリボソームスキップ配列、又はＩＲＥＳを含む、請求項１２に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項14】

２ＡペプチドがＰ２Ａ又はＴ２Ａを含む、請求項１３に記載のＣＡＲ Ｔ細胞

【請求項15】

ＣＡＲと治療薬がそれぞれ構成的に発現される、請求項２から１４の何れか一項に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項16】

ＣＡＲと治療薬の発現が伸長因子１アルファ（ＥＦ１α）プロモーターによって駆動される、請求項２から１５の何れか一項に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項17】

治療薬が、任意選択的にＴ細胞受容体又はＣＡＲシグナル伝達によって誘導可能である、誘導性プロモーターの制御下で発現される、請求項２から１４の何れか一項に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項18】

誘導性プロモーターがＮＦＡＴプロモーターを含む、請求項１７に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項19】

ＣＡＲが構成的プロモーターの制御下で発現され、治療薬が、任意選択的にＴ細胞受容体又はＣＡＲシグナル伝達によって誘導可能である、誘導性プロモーターの制御下で発現される、請求項２から１８の何れか一項に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項20】

ＣＡＲが第一のベクターから発現され、治療薬が第二のベクターから発現される、請求項２から１９の何れか一項に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項21】

ＣＡＲが一又は複数の共刺激ドメインを更に含む、請求項１から２０の何れか一項に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項22】

ＣＡＲの抗原結合ドメインが、抗体、単鎖抗体、単一ドメイン抗体、又はリガンドを含む、請求項１から２１の何れか一項に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項23】

ＣＡＲの膜貫通ドメインが、任意選択的に配列番号：２４の配列又はそのバリアントを含む、ＣＤ８ヒンジ／膜貫通ドメインを含む、請求項１から２２の何れか一項に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項24】

細胞内シグナル伝達ドメインが、任意選択的に配列番号：２６～２７の何れか一つの配列又はそのバリアントを含む、ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達ドメインを含む、請求項１から２３の何れか一項に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項25】

共刺激ドメインが、任意選択的に配列番号：２５の配列又はそのバリアントを含む、４－１ＢＢ共刺激ドメインを含む、請求項１から２４の何れか一項に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項26】

治療薬が腫瘍抗原に結合する、請求項２から２５の何れか一項に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項27】

治療薬が結合する腫瘍抗原が固形腫瘍抗原である、請求項２６に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項28】

治療薬が結合する腫瘍抗原が活性化線維芽細胞マーカーである、請求項２６に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項29】

活性化線維芽細胞マーカーが、αＳＭＡ（ＡＣＴＡ２）、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、血小板由来増殖因子受容体α及びβ（ＰＤＧＦＲＡ、ＰＤＧＦＲＢ）、線維芽細胞特異的タンパク質１（ＦＳＰ１／Ｓ１００Ａ４）、エンドグリン（ＥＮＧ）、トランスジェリン（ＴＡＧＬＮ）、テネイシンＣ（ＴＮＣ）、ペリオスチン（ＰＯＳＴＮ）、コンドロイチン硫酸プロテオグリカン４又はニューロングリア抗原２（ＣＳＰＧ４／ＮＧ２）、ポドプラニン（ＰＤＰＮ）、又はオステオポンチン（ＳＰＰ１）を含む、請求項２８に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項30】

活性化線維芽細胞マーカーがＦＡＰを含む、請求項２９に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項31】

抗体試薬の腫瘍抗原結合ドメインのＶＨが、配列番号：６のアミノ酸配列、又は配列番号：６のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２６から３０の何れか一項に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項32】

抗体試薬の腫瘍抗原結合ドメインのＶＬが、配列番号：７のアミノ酸配列、又は配列番号：７のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２６から３１の何れか一項に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項33】

抗体試薬の腫瘍抗原結合ドメインが、配列番号：８のアミノ酸配列、又は配列番号：８のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２６から３２の何れか一項に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項34】

抗体試薬の腫瘍抗原結合ドメインのＶＨが、抗体試薬の腫瘍抗原結合ドメインのＶＬのＮ末端にある、請求項２６から３２の何れか一項に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項35】

抗体試薬の腫瘍抗原結合ドメインのＶＬが、抗体試薬の腫瘍抗原結合ドメインのＶＨのＮ末端にある、請求項２６から３２の何れか一項に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項36】

抗体試薬の腫瘍抗原結合ドメインが、任意選択的に配列番号：８の配列又はそのバリアントを含む、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）又は単一ドメイン抗体を含む、請求項３１から３５の何れか一項に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項37】

抗体試薬がＴ細胞表面抗原に結合する、請求項５から３６の何れか一項に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項38】

Ｔ細胞表面抗原が、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、ＴＣＲ複合体成分、又はそれらの何れかの一部を含む、請求項３７に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項39】

ＴＣＲ複合体成分が、ＣＤ３（例えば、ＣＤ３εサブユニット、ＣＤ３ζサブユニット、又はＣＤ３γサブユニット）、ＣＤ４共受容体、及びＣＤ８共受容体から選択される、請求項３８に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項40】

ＴＣＲ複合体成分がＣＤ３である、請求項３９に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項41】

抗体試薬のＴ細胞表面抗原結合ドメインのＶＨが、配列番号：９のアミノ酸配列、又は配列番号：９のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項３７から４０の何れか一項に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項42】

抗体試薬のＴ細胞表面抗原結合ドメインのＶＬが、配列番号：１０のアミノ酸配列、又は配列番号：１０のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項３７から４１の何れか一項に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項43】

抗体試薬のＴ細胞表面抗原結合ドメインのＶＨが、抗体試薬のＴ細胞表面抗原結合ドメインのＶＬのＮ末端にある、請求項３７から４２の何れか一項に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項44】

抗体試薬のＴ細胞表面抗原結合ドメインのＶＬが、抗体試薬のＴ細胞表面抗原結合ドメインのＶＨのＮ末端にある、請求項３７から４２の何れか一項に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項45】

抗体試薬のＴ細胞表面抗原結合ドメインが、任意選択的に配列番号：１１～１２の何れか一の配列又はそのバリアントを含む、ｓｃＦｖ又は単一ドメイン抗体を含む、請求項３７から４２の何れか一項に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項46】

ＣＡＲの抗原結合ドメインが、
（ａ）三つの相補性決定領域ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）であって、ＣＤＲ－Ｈ１が、配列番号：１３のアミノ酸配列、又は配列番号：１３の１、２、若しくは３以下のアミノ酸置換を持つアミノ酸配列を含み；ＣＤＲ－Ｈ２が、配列番号：１４のアミノ酸配列、又は配列番号：１４の１、２、若しくは３以下のアミノ酸置換を持つアミノ酸配列を含み；かつＣＤＲ－Ｈ３が、配列番号：１５のアミノ酸配列、又は配列番号：１５の１、２、若しくは３以下のアミノ酸置換を持つアミノ酸配列を含む、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、
（ｂ）三つの相補性決定領域ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）であって、ＣＤＲ－Ｌ１が、配列番号：１６のアミノ酸配列、又は配列番号：１６の１、２、若しくは３以下のアミノ酸置換を持つアミノ酸配列を含み；ＣＤＲ－Ｌ２が、配列番号：１７のアミノ酸配列、又は配列番号：１７の１、２、若しくは３以下のアミノ酸置換を持つアミノ酸配列を含み；かつＣＤＲ－Ｌ３が、配列番号：１８のアミノ酸配列、又は配列番号：１８の１、２、若しくは３以下のアミノ酸置換を持つアミノ酸配列を含む、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）
を含む、請求項１から４５の何れか一項に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項47】

ＣＡＲの抗原結合ドメインのＶＨが、配列番号：１９のアミノ酸配列、又は配列番号：１９のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項４６に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項48】

ＣＡＲの抗原結合ドメインのＶＬが、配列番号：２０のアミノ酸配列、又は配列番号：２０のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項４６又は請求項４７に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項49】

ＣＡＲの抗原結合ドメインのＶＨが、ＣＡＲの抗原結合ドメインのＶＬのＮ末端にある、請求項４６から４８の何れか一項に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項50】

ＣＡＲの抗原結合ドメインのＶＬが、ＣＡＲの抗原結合ドメインのＶＨのＮ末端にある、請求項４６から４８の何れか一項に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項51】

ＣＡＲの抗原結合ドメインが、任意選択的に配列番号：２１又は２２、及びそのバリアントからなる群から選択される配列を含む、ｓｃＦｖ又は単一ドメイン抗体を含む、請求項４６から４８の何れか一項に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項52】

ＣＡＲの抗原結合ドメインが、
（ａ）相補性決定領域ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）であって、ＣＤＲ－Ｈ１が、配列番号：４２のアミノ酸配列、又はそれに対して１、２、若しくは３以下のアミノ酸置換を持つアミノ酸配列を含み；ＣＤＲ－Ｈ２が、配列番号：４３のアミノ酸配列、又はそれに対して１、２、若しくは３以下のアミノ酸置換を持つアミノ酸配列を含み；かつＣＤＲ－Ｈ３が、配列番号：４４のアミノ酸配列、又はそれに対して１、２、若しくは３以下のアミノ酸置換を持つアミノ酸配列を含む、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、
（ｂ）相補性決定領域ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）であって、ＣＤＲ－Ｌ１が、配列番号：４５のアミノ酸配列、又はそれに対して１、２、若しくは３以下のアミノ酸置換を持つアミノ酸配列を含み；ＣＤＲ－Ｌ２が、配列番号：４６のアミノ酸配列、又はそれに対して１、２、若しくは３以下のアミノ酸置換を持つアミノ酸配列を含み；かつＣＤＲ－Ｌ３が、配列番号：４７のアミノ酸配列、又はそれに対して１、２、若しくは３以下のアミノ酸置換を持つアミノ酸配列を含む、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）
を含む、請求項１から４５の何れか一項に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項53】

ＣＡＲの抗原結合ドメインのＶＨが、配列番号：４０のＳＳ１重鎖配列、又は配列番号：４０のＳＳ１重鎖配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項５２に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項54】

ＣＡＲの抗原結合ドメインのＶＬが、配列番号：４１のＳＳ１軽鎖配列、又は配列番号：４１のＳＳ１軽鎖配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項５２又は請求項５３に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項55】

ＣＡＲの抗原結合ドメインのＶＨが、ＣＡＲの抗原結合ドメインのＶＬのＮ末端にある、請求項５２から５４の何れか一項に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項56】

ＣＡＲの抗原結合ドメインのＶＬが、ＣＡＲの抗原結合ドメインのＶＨのＮ末端にある、請求項５２から５４の何れか一項に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項57】

ＣＡＲの抗原結合ドメインが、任意選択的に配列番号：４０のＳＳ１ ＶＨアミノ酸配列及び配列番号：４１のＳＳ１ ＶＬアミノ酸配列、並びにそれらのバリアントを含む、ｓｃＦｖ又は単一ドメイン抗体を含む、請求項５２から５４の何れか一項に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項58】

異種核酸分子が自殺遺伝子を更に含む、請求項１から５７の何れか一項に記載のＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項59】

（ａ）メソテリン又はその一部を含む腫瘍抗原に結合する細胞外抗原結合ドメイン、
（ｂ）膜貫通ドメイン、及び
（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメイン
を含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。

【請求項60】

ポリヌクレオチド又はポリペプチド治療薬を更に含む、請求項５９に記載のＣＡＲ。

【請求項61】

治療薬が抗体試薬を含む、請求項５９又は６０の何れかに記載のＣＡＲ。

【請求項62】

抗体試薬が単鎖抗体又は単一ドメイン抗体を含む、請求項６１に記載のＣＡＲ。

【請求項63】

抗体試薬が二重特異性抗体試薬を含む、請求項６２に記載のＣＡＲ。

【請求項64】

二重特異性抗体試薬がＴ細胞エンゲージ分子（ＴＥＡＭ）を含む、請求項６３に記載のＣＡＲ。

【請求項65】

単一ドメイン抗体がラクダ科動物抗体を含む、請求項６２に記載のＣＡＲ。

【請求項66】

治療薬がサイトカインを含む、請求項６０から６５の何れか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項67】

ＣＡＲと治療薬が単一ポリペプチドの形態で生成され、それが切断されて別個のＣＡＲ及び治療薬分子が生成される、請求項６０から６６の何れか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項68】

単一ポリペプチドがＣＡＲと治療薬の間に切断可能な部分を含む、請求項６７に記載のＣＡＲ。

【請求項69】

切断可能な部分が、２Ａペプチドを含む、請求項６８に記載のＣＡＲ。

【請求項70】

２ＡペプチドがＰ２Ａ又はＴ２Ａを含む、請求項６９に記載のＣＡＲ。

【請求項71】

ＣＡＲと治療薬が構成的に発現される、請求項６０から７０の何れか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項72】

ＣＡＲと治療薬の発現が伸長因子１アルファ（ＥＦ１α）プロモーターによって駆動される、請求項６０から７１の何れか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項73】

ＣＡＲと治療薬の発現が、任意選択的にＴ細胞受容体又はＣＡＲシグナル伝達によって誘導可能である、誘導性プロモーターによって駆動される、請求項６０から７０の何れか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項74】

誘導性プロモーターがＮＦＡＴプロモーターを含む、請求項７３に記載のＣＡＲ。

【請求項75】

ＣＡＲが構成的プロモーターの制御下で発現され、治療薬が、任意選択的にＴ細胞受容体又はＣＡＲシグナル伝達によって誘導可能である、誘導性プロモーターの制御下で発現される、請求項６０から７０の何れか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項76】

ＣＡＲが一又は複数の共刺激ドメインを更に含む、請求項５９から７５の何れか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項77】

ＣＡＲの抗原結合ドメインが、抗体、単鎖抗体、単一ドメイン抗体、又はリガンドを含む、請求項５９から７６の何れか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項78】

ＣＡＲの膜貫通ドメインが、任意選択的に配列番号：２４の配列、又はそのバリアントを含む、ＣＤ８ヒンジ／膜貫通ドメインを含む、請求項５９から７７の何れか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項79】

細胞内シグナル伝達ドメインが、任意選択的に配列番号：２６～２７の配列、又はそのバリアントを含む、ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達ドメインを含む、請求項５９から７８の何れか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項80】

共刺激ドメインが、任意選択的に配列番号：２５の配列、又はそのバリアントを含む、４－１ＢＢ共刺激ドメインを含む、請求項５９から７９の何れか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項81】

治療薬が腫瘍抗原に結合する、請求項６０から８０の何れか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項82】

治療薬が結合する腫瘍抗原が固形腫瘍抗原である、請求項８１に記載のＣＡＲ。

【請求項83】

治療薬が結合する腫瘍抗原が活性化線維芽細胞マーカーである、請求項８１に記載のＣＡＲ。

【請求項84】

活性化線維芽細胞マーカーが、αＳＭＡ（ＡＣＴＡ２）、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、血小板由来増殖因子受容体α及びβ（ＰＤＧＦＲＡ、ＰＤＧＦＲＢ）、線維芽細胞特異的タンパク質１（ＦＳＰ１／Ｓ１００Ａ４）、エンドグリン（ＥＮＧ）、トランスジェリン（ＴＡＧＬＮ）、テネイシンＣ（ＴＮＣ）、ペリオスチン（ＰＯＳＴＮ）、コンドロイチン硫酸プロテオグリカン４又はニューロングリア抗原２（ＣＳＰＧ４／ＮＧ２）、ポドプラニン（ＰＤＰＮ）、又はオステオポンチン（ＳＰＰ１）を含む、請求項８３に記載のＣＡＲ。

【請求項85】

活性化線維芽細胞マーカーがＦＡＰを含む、請求項８４に記載のＣＡＲ。

【請求項86】

抗体試薬の腫瘍抗原結合ドメインのＶＨが、配列番号：６のアミノ酸配列、又は配列番号：６のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項８１から８５の何れか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項87】

抗体試薬の腫瘍抗原結合ドメインのＶＬが、配列番号：７のアミノ酸配列、又は配列番号：７のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項８１から８６の何れか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項88】

抗体試薬の腫瘍抗原結合ドメインのＶＨが、抗体試薬の腫瘍抗原結合ドメインのＶＬのＮ末端にある、請求項８６又は８７の何れかに記載のＣＡＲ。

【請求項89】

抗体試薬の腫瘍抗原結合ドメインのＶＬが、抗体試薬の腫瘍抗原結合ドメインのＶＨのＮ末端にある、請求項８６又は８７の何れかに記載のＣＡＲ。

【請求項90】

抗体試薬の腫瘍抗原結合ドメインが、任意選択的に配列番号：２１若しくは２２の配列、又はそのバリアントを含む、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）又は単一ドメイン抗体を含む、請求項８１から８９の何れか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項91】

抗体試薬がＴ細胞表面抗原に結合する、請求項６１から９０の何れか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項92】

Ｔ細胞表面抗原が、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、ＴＣＲ複合体成分、又はそれらの何れかの一部を含む、請求項９１に記載のＣＡＲ。

【請求項93】

ＴＣＲ複合体成分が、ＣＤ３（例えば、ＣＤ３εサブユニット、ＣＤ３ζサブユニット、又はＣＤ３γサブユニット）、ＣＤ４共受容体、及びＣＤ８共受容体から選択される、請求項９２に記載のＣＡＲ。

【請求項94】

ＴＣＲ複合体成分がＣＤ３である、請求項９３に記載のＣＡＲ。

【請求項95】

抗体試薬のＴ細胞表面抗原結合ドメインのＶＨが、配列番号：９のアミノ酸配列、又は配列番号：９のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項９１から９４の何れか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項96】

抗体試薬のＴ細胞表面抗原結合ドメインのＶＬが、配列番号：１０のアミノ酸配列、又は配列番号：１０のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項９１から９５の何れか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項97】

抗体試薬のＴ細胞表面抗原結合ドメインのＶＨが、抗体試薬のＴ細胞表面抗原結合ドメインのＶＬのＮ末端にある、請求項９１から９６の何れか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項98】

抗体試薬のＴ細胞表面抗原結合ドメインのＶＬが、抗体試薬のＴ細胞表面抗原結合ドメインのＶＨのＮ末端にある、請求項９１から９６の何れか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項99】

抗体試薬のＴ細胞表面抗原結合ドメインが、任意選択的に配列番号：１１～１２の配列又はそのバリアントを含む、ｓｃＦｖ又は単一ドメイン抗体を含む、請求項９１から９６の何れか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項100】

ＣＡＲの抗原結合ドメインが、
（ａ）三つの相補性決定領域ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）であって、ＣＤＲ－Ｈ１が、配列番号：１３のアミノ酸配列、又は配列番号：１３の１、２、若しくは３以下のアミノ酸置換を持つアミノ酸配列を含み；ＣＤＲ－Ｈ２が、配列番号：１４のアミノ酸配列、又は配列番号：１４の１、２、若しくは３以下のアミノ酸置換を持つアミノ酸配列を含み；かつＣＤＲ－Ｈ３が、配列番号：１５のアミノ酸配列、又は配列番号：１５の１、２、若しくは３以下のアミノ酸置換を持つアミノ酸配列を含む、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、
（ｂ）三つの相補性決定領域ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）であって、ＣＤＲ－Ｌ１が、配列番号：１６のアミノ酸配列、又は配列番号：１６の１、２、若しくは３以下のアミノ酸置換を持つアミノ酸配列を含み；ＣＤＲ－Ｌ２が、配列番号：１７のアミノ酸配列、又は配列番号：１７の１、２、若しくは３以下のアミノ酸置換を持つアミノ酸配列を含み；かつＣＤＲ－Ｌ３が、配列番号：１８のアミノ酸配列、又は配列番号：１８の１、２、若しくは３以下のアミノ酸置換を持つアミノ酸配列を含む、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）
を含む、請求項５９から９９の何れか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項101】

ＣＡＲの抗原結合ドメインのＶＨが、配列番号：１９のアミノ酸配列、又は配列番号：１９のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１００に記載のＣＡＲ。

【請求項102】

ＣＡＲの抗原結合ドメインのＶＬが、配列番号：２０のアミノ酸配列、又は配列番号：２０のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１００又は１０１の何れかに記載のＣＡＲ。

【請求項103】

ＣＡＲの抗原結合ドメインのＶＨが、ＣＡＲの抗原結合ドメインのＶＬのＮ末端にある、請求項１００から１０２の何れか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項104】

ＣＡＲの抗原結合ドメインのＶＬが、ＣＡＲの抗原結合ドメインのＶＨのＮ末端にある、請求項１００から１０２の何れか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項105】

ＣＡＲの抗原結合ドメインが、任意選択的に配列番号：２１又は２２、及びそのバリアントからなる群から選択される配列を含む、ｓｃＦｖ又は単一ドメイン抗体を含む、請求項１００から１０２の何れか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項106】

配列番号：２１又は２２のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１００から１０２の何れか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項107】

配列番号：２１又は２２のアミノ酸配列を含む、請求項１０６に記載のＣＡＲ。

【請求項108】

ＣＡＲの抗原結合ドメインが、
（ａ）相補性決定領域ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）であって、ＣＤＲ－Ｈ１が、配列番号：４２のアミノ酸配列、又はそれに対して１、２、若しくは３以下のアミノ酸置換を持つアミノ酸配列を含み；ＣＤＲ－Ｈ２が、配列番号：４３のアミノ酸配列、又はそれに対して１、２、若しくは３以下のアミノ酸置換を持つアミノ酸配列を含み；かつＣＤＲ－Ｈ３が、配列番号：４４のアミノ酸配列、又はそれに対して１、２、若しくは３以下のアミノ酸置換を持つアミノ酸配列を含む、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、
（ｂ）相補性決定領域ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）であって、ＣＤＲ－Ｌ１が、配列番号：４５のアミノ酸配列、又はそれに対して１、２、若しくは３以下のアミノ酸置換を持つアミノ酸配列を含み；ＣＤＲ－Ｌ２が、配列番号：４６のアミノ酸配列、又はそれに対して１、２、若しくは３以下のアミノ酸置換を持つアミノ酸配列を含み；かつＣＤＲ－Ｌ３が、配列番号：４７のアミノ酸配列、又はそれに対して１、２、若しくは３以下のアミノ酸置換を持つアミノ酸配列を含む、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）
を含む、請求項５９から９９の何れか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項109】

ＣＡＲの抗原結合ドメインのＶＨが、配列番号：４０のＳＳ１重鎖配列、又は配列番号：４０のＳＳ１重鎖配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１０８に記載のＣＡＲ。

【請求項110】

ＣＡＲの抗原結合ドメインのＶＬが、配列番号：４１のＳＳ１軽鎖配列、又は配列番号：４１のＳＳ１軽鎖配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１０８又は請求項１０９に記載のＣＡＲ。

【請求項111】

ＣＡＲの抗原結合ドメインのＶＨが、ＣＡＲの抗原結合ドメインのＶＬのＮ末端にある、請求項１０８から１１０の何れか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項112】

ＣＡＲの抗原結合ドメインのＶＬが、ＣＡＲの抗原結合ドメインのＶＨのＮ末端にある、請求項１０８から１１０の何れか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項113】

ＣＡＲの抗原結合ドメインが、任意選択的に配列番号：４０のＳＳ１ ＶＨアミノ酸配列及び配列番号：４１のＳＳ１ ＶＬアミノ酸配列、並びにそれらのバリアントを含む、ｓｃＦｖ又は単一ドメイン抗体を含む、請求項１０８から１１０の何れか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項114】

配列番号：１～５の何れか一つのアミノ酸配列を含む、請求項５９から１１３の何れか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項115】

配列番号：１～５の何れか一つのアミノ酸配列からなる、請求項１１４に記載のＣＡＲ。

【請求項116】

自殺遺伝子を更に含む、請求項５９から１１４の何れか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項117】

請求項５９から１１６の何れか一項に記載のＣＡＲポリペプチドをコードする核酸分子。

【請求項118】

プラスミド又はベクターである、請求項１１７に記載の核酸分子。

【請求項119】

請求項１１７又は１１８に記載の核酸分子を含むウイルスベクター。

【請求項120】

レンチウイルス又はアデノ随伴ウイルスベクターである、請求項１１９に記載のウイルスベクター。

【請求項121】

請求項１から１１６の何れか一項に記載のＣＡＲポリペプチドと治療薬を含む、ＣＡＲポリペプチド、又は単一ポリペプチド。

【請求項122】

請求項５９から１１６の何れか一項に記載のＣＡＲ又は請求項１１７から１２０の何れか一項に記載の核酸分子若しくはウイルスベクターを含むＣＡＲ Ｔ細胞。

【請求項123】

請求項１から５８若しくは１２２の何れか一項に記載のＣＡＲ Ｔ細胞、請求項５９から１１６若しくは１２１の何れか一項に記載のＣＡＲポリペプチド、又は請求項１１７から１２０の何れか一項に記載の核酸分子若しくはウイルスベクターを含む薬学的組成物。

【請求項124】

請求項１から５８若しくは１２２の何れか一項に記載のＣＡＲ Ｔ細胞、請求項５９から１１６若しくは１２１の何れか一項に記載のＣＡＲポリペプチド、又は請求項１１７から１２０の何れか一項に記載の核酸分子若しくはウイルスベクターの治療有効量を含む薬学的組成物。

【請求項125】

薬学的に許容される添加物を更に含む、請求項１２３又は１２４の何れか一項に記載の薬学的組成物。

【請求項126】

がんを有する患者を治療する方法であって、請求項１から５８若しくは１２２の何れか一項に記載のＣＡＲ Ｔ細胞、請求項５９から１１６若しくは１２１の何れか一項に記載のＣＡＲポリペプチド、又は請求項１１７から１２０の何れか一項に記載の核酸分子若しくはウイルスベクターを含む薬学的組成物、又は請求項１２３から１２５の何れか一項に記載の薬学的組成物を患者に投与することを含む、方法。

【請求項127】

腫瘍微小環境を標的とすることにより、全身毒性が低減される、請求項１２６に記載の方法。

【請求項128】

がんが、一又は複数の固形腫瘍の存在を特徴とする、請求項１２６又は１２７の何れか一項に記載の方法。

【請求項129】

がんが、メソテリンの発現を特徴とする、請求項１２６から１２８の何れか一項に記載の方法。

【請求項130】

腫瘍微小環境が、活性化線維芽細胞の存在を特徴とする、請求項１２６から１２９の何れか一項に記載の方法。

【請求項131】

腫瘍微小環境が、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）の存在を特徴とする、請求項１２６から１３０の何れか一項に記載の方法。

【請求項132】

がんが、膵臓がん、肺がん、卵巣がん、子宮内膜がん、胆道がん、胃がん、又は中皮腫である、請求項１２６から１３１の何れか一項に記載の方法。

【請求項133】

がんを有する患者を治療する方法であって、腫瘍毒性抗体又はサイトカインを分泌するように遺伝子改変されたＣＡＲ Ｔ細胞産物を患者に投与することを含み、がん毒性を腫瘍微小環境に局所的に向けることによって全身毒性が低減される、方法。

【請求項134】

ＣＡＲ Ｔ細胞が、活性化線維芽細胞マーカーに対する抗体又は二重特異性抗体を腫瘍微小環境に送達するように遺伝子改変されている、請求項１３３に記載の方法。

【請求項135】

ＣＡＲ Ｔ細胞が、メソテリン又はその一部を含む腫瘍抗原に結合する細胞外抗原結合ドメインを含むＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む、請求項１３３又は１３４の何れかに記載の方法。

【請求項136】

二重特異性抗体が、活性化線維芽細胞マーカーとＣＤ３に対するものである、請求項１３４又は１３５の何れか一項に記載の方法。

【請求項137】

疾患又は病状を治療するために患者の組織又は臓器に治療薬を送達する方法であって、治療用抗体、毒素、又は薬剤を分泌するように遺伝子改変されたＣＡＲ Ｔ細胞を前記患者に投与することを含み、治療用抗体、毒素、又は薬剤が、それ自体では組織又は臓器に進入又は浸透することができない、方法。

【請求項138】

組織又は臓器が、消化器系又は内分泌系にある、請求項１３７に記載の方法。

【請求項139】

組織が膵臓内にあるか、又は臓器が膵臓である、請求項１３８に記載の方法。

【請求項140】

組織又は臓器が、生殖器系内にある、請求項１３７に記載の方法。

【請求項141】

組織が卵巣内にあるか、又は臓器が卵巣である、請求項１４０に記載の方法。

【請求項142】

組織又は臓器が、呼吸器系又は肺器系内にある、請求項１３７に記載の方法。

【請求項143】

組織が肺内にあるか、又は臓器が肺である、請求項１４２に記載の方法。

【請求項144】

治療用抗体が活性化線維芽細胞マーカーに対するものである、請求項１３７から１４３の何れか一項に記載の方法。

【請求項145】

ＣＡＲ Ｔ細胞が、請求項１から５８若しくは１２２の何れか一項に記載のＣＡＲ Ｔ細胞であるか、又はＣＡＲ Ｔ細胞が、請求項１２３から１２５の何れか一項に記載の薬学的組成物内に含まれる、請求項１３３から１４４の何れか一項に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

［関連出願］
この出願は、それぞれの内容全体が出典明示によりここに援用される、２０２１年１１月４日出願の「ＴＥＡＭを分泌する抗メソテリンＣＡＲ Ｔ細胞とその使用方法」と題された米国仮出願第６３／２７５９１１号、及び２０２１年１１月１２日出願の「ＴＥＡＭを分泌する抗メソテリンＣＡＲ Ｔ細胞とその使用方法」と題された米国仮出願第６３／２７８８２５号に対して米国特許法第１１９条（ｅ）項に基づく利益を主張する。

【0002】

［連邦支援研究］
この発明は、国立がん研究所が授与したＲ０１ＣＡ２３８２６８及び国立衛生研究所が授与したＴ３２ＣＡ００９２１６に基づく政府支援を受けてなされた。政府は、本発明において所定の権利を有する。

【0003】

［電子配列表への参照］
電子配列表（Ｍ１０５３７００２６ＷＯ００－ＳＥＱ－ＡＲＭ．ｘｍｌ；サイズ：５０２３８バイト；作成日：２０２２年１１月３日）の内容は、その全体が出典明示によりここに援用される。

【背景技術】

【0004】

がん及び自己免疫疾患を含む多くの疾患がメソテリンの過剰発現に関連している。キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞が、これまで、罹患細胞に特異的に結合して、罹患細胞の死滅をもたらすために使用されてきた。

【発明の概要】

【0005】

ここに記載されるのは、メソテリンを標的とするＣＡＲ及びＣＡＲ Ｔ細胞であり、これらは、例えばがん、形質細胞疾患若しくは障害、又は自己免疫疾患若しくは障害などの疾患若しくは障害を有する対象を治療するのに有用でありうる。またここに提供されるのは、前記ＣＡＲをコードする核酸及びベクター、並びにここに記載されるＣＡＲ、核酸、又はベクターを含む細胞である。またここに提供されるのは、ＣＡＲ、ＣＡＲ Ｔ細胞、及びここに記載される他の組成物を含む薬学的組成物である。更に提供されるのは、ここに記載される組成物を投与することにより、対象におけるがん又は自己免疫疾患を治療する方法である。

【0006】

従って、一態様では、本開示は、異種核酸分子を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞であって、異種核酸分子が、メソテリン又はその一部を含む腫瘍抗原に結合する細胞外抗原結合ドメイン；膜貫通ドメイン；及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲをコードする第一のポリヌクレオチドを含む、ＣＡＲ Ｔ細胞に関する。

【0007】

幾つかの実施態様では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、治療薬をコードする第二のポリヌクレオチドを更に含む。幾つかの実施態様では、第二のポリヌクレオチドは異種核酸分子の一部である。幾つかの実施態様では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、第二のポリヌクレオチドを含む第二の異種核酸分子を更に含む。

【0008】

別の態様では、本開示は、メソテリン又はその一部を含む腫瘍抗原に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）に関する。幾つかの実施態様では、ＣＡＲはポリヌクレオチド又はポリペプチド治療薬を含む。

【0009】

幾つかの実施態様では、治療薬は抗体試薬を含む。幾つかの実施態様では、抗体試薬は単鎖抗体又は単一ドメイン抗体を含む。幾つかの実施態様では、抗体試薬は二重特異性抗体試薬を含む。幾つかの実施態様では、二重特異性抗体試薬はＴ細胞エンゲージ抗体分子（ＴＥＡＭ）を含む。幾つかの実施態様では、単一ドメイン抗体はラクダ科動物抗体を含む。幾つかの実施態様では、治療薬はサイトカインを含む。

【0010】

幾つかの実施態様では、ＣＡＲと治療薬は、単一ポリペプチドの形態で生成され、それが切断されて別個のＣＡＲ及び治療薬分子が生成される。幾つかの実施態様では、単一ポリペプチドは、ＣＡＲと治療薬の間に切断可能な部分を含む。幾つかの実施態様では、切断可能な部分は、２Ａペプチド、２Ａリボソームスキップ配列、又はＩＲＥＳを含む。幾つかの実施態様では、２ＡペプチドはＰ２Ａ又はＴ２Ａを含む。

【0011】

幾つかの実施態様では、ＣＡＲと治療薬は、それぞれ構成的に発現される。幾つかの実施態様では、ＣＡＲと治療薬の発現は伸長因子１アルファ（ＥＦ１α）プロモーターによって駆動される。幾つかの実施態様では、治療薬は、任意選択的にＴ細胞受容体又はＣＡＲシグナル伝達によって誘導可能である、誘導性プロモーターの制御下で発現される。幾つかの実施態様では、誘導性プロモーターはＮＦＡＴプロモーターを含む。幾つかの実施態様では、ＣＡＲは、構成的プロモーターの制御下で発現され、治療薬は、任意選択的にＴ細胞受容体又はＣＡＲシグナル伝達によって誘導可能である、誘導性プロモーターの制御下で発現される。幾つかの実施態様では、ＣＡＲは第一のベクターから発現され、治療薬は第二のベクターから発現される。

【0012】

幾つかの実施態様では、ＣＡＲは一又は複数の共刺激ドメインを含む。幾つかの実施態様では、共刺激ドメインは、任意選択的に配列番号：２５の配列又はそのバリアントを含む、４－１ＢＢ共刺激ドメインを含む。

【0013】

幾つかの実施態様では、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、抗体、単鎖抗体、単一ドメイン抗体、又はリガンドを含む。

【0014】

幾つかの実施態様では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、任意選択的に配列番号：２４の配列又はそのバリアントを含む、ＣＤ８ヒンジ／膜貫通ドメインを含む。幾つかの実施態様では、細胞内シグナル伝達ドメインは、任意選択的に配列番号：２６～２７の何れか一つの配列又はそのバリアントを含む、ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達ドメインを含む。

【0015】

幾つかの実施態様では、治療薬は腫瘍抗原に結合する。幾つかの実施態様では、治療薬が結合する腫瘍抗原は固形腫瘍抗原である。幾つかの実施態様では、治療薬が結合する腫瘍抗原は活性化線維芽細胞マーカーである。幾つかの実施態様では、活性化線維芽細胞マーカーは、αＳＭＡ（ＡＣＴＡ２）、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、血小板由来増殖因子受容体α及びβ（ＰＤＧＦＲＡ、ＰＤＧＦＲＢ）、線維芽細胞特異的タンパク質１（ＦＳＰ１／Ｓ１００Ａ４）、エンドグリン（ＥＮＧ）、トランスジェリン（ＴＡＧＬＮ）、テネイシンＣ（ＴＮＣ）、ペリオスチン（ＰＯＳＴＮ）、コンドロイチン硫酸プロテオグリカン４又はニューロングリア抗原２（ＣＳＰＧ４／ＮＧ２）、ポドプラニン（ＰＤＰＮ）、又はオステオポンチン（ＳＰＰ１）を含む。幾つかの実施態様では、活性化線維芽細胞マーカーはＦＡＰを含む。

【0016】

幾つかの実施態様では、抗体試薬の腫瘍抗原結合ドメインのＶＨは、配列番号：６のアミノ酸配列、又は配列番号：６のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施態様では、抗体試薬の腫瘍抗原結合ドメインのＶＬは、配列番号：７のアミノ酸配列、又は配列番号：７のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施態様では、抗体試薬の腫瘍抗原結合ドメインは、配列番号：８のアミノ酸配列、又は配列番号：８のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施態様では、抗体試薬の腫瘍抗原結合ドメインのＶＨは、抗体試薬の腫瘍抗原結合ドメインのＶＬのＮ末端にある。幾つかの実施態様では、抗体試薬の腫瘍抗原結合ドメインのＶＬは、抗体試薬の腫瘍抗原結合ドメインのＶＨのＮ末端にある。幾つかの実施態様では、抗体試薬の腫瘍抗原結合ドメインは、任意選択的に配列番号：８の配列又はそのバリアントを含む、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）又は単一ドメイン抗体を含む。

【0017】

幾つかの実施態様では、抗体試薬はＴ細胞表面抗原に結合する。幾つかの実施態様では、Ｔ細胞表面抗原は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、ＴＣＲ複合体成分、又はそれらの何れかの一部を含む。幾つかの実施態様では、ＴＣＲ複合体成分は、ＣＤ３（例えば、ＣＤ３εサブユニット、ＣＤ３ζサブユニット、又はＣＤ３γサブユニット）、ＣＤ４共受容体、及びＣＤ８共受容体から選択される。幾つかの実施態様では、ＴＣＲ複合体成分はＣＤ３である。

【0018】

幾つかの実施態様では、抗体試薬のＴ細胞表面抗原結合ドメインのＶＨは、配列番号：９のアミノ酸配列、又は配列番号：９のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施態様では、抗体試薬のＴ細胞表面抗原結合ドメインのＶＬは、配列番号：１０のアミノ酸配列、又は配列番号：１０のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施態様では、抗体試薬のＴ細胞表面抗原結合ドメインのＶＨは、抗体試薬のＴ細胞表面抗原結合ドメインのＶＬのＮ末端にある。幾つかの実施態様では、抗体試薬のＴ細胞表面抗原結合ドメインのＶＬは、抗体試薬のＴ細胞表面抗原結合ドメインのＶＨのＮ末端にある。幾つかの実施態様では、抗体試薬のＴ細胞表面抗原結合ドメインは、任意選択的に配列番号：１１～１２の何れか一の配列又はそのバリアントを含む、ｓｃＦＶ又は単一ドメイン抗体を含む。

【0019】

幾つかの実施態様では、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、（ａ）三つの相補性決定領域ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）であって、ＣＤＲ－Ｈ１が、配列番号：１３のアミノ酸配列、又は配列番号：１３の１、２、若しくは３以下のアミノ酸置換を持つアミノ酸配列を含み；ＣＤＲ－Ｈ２が、配列番号：１４のアミノ酸配列、又は配列番号：１４の１、２、若しくは３以下のアミノ酸置換を持つアミノ酸配列を含み；かつＣＤＲ－Ｈ３が、配列番号：１５のアミノ酸配列、又は配列番号：１５の１、２、若しくは３以下のアミノ酸置換を持つアミノ酸配列を含む、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｂ）三つの相補性決定領域ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）であって、ＣＤＲ－Ｌ１が、配列番号：１６のアミノ酸配列、又は配列番号：１６の１、２、若しくは３以下のアミノ酸置換を持つアミノ酸配列を含み；ＣＤＲ－Ｌ２が、配列番号：１７のアミノ酸配列、又は配列番号：１７の１、２、若しくは３以下のアミノ酸置換を持つアミノ酸配列を含み；かつＣＤＲ－Ｌ３が、配列番号：１８のアミノ酸配列、又は配列番号：１８の１、２、若しくは３以下のアミノ酸置換を持つアミノ酸配列を含む、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。幾つかの実施態様では、ＣＡＲの抗原結合ドメインのＶＨは、配列番号：１９のアミノ酸配列、又は配列番号：１９のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施態様では、ＣＡＲの抗原結合ドメインのＶＬは、配列番号：２０のアミノ酸配列、又は配列番号：２０のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施態様では、ＣＡＲの抗原結合ドメインのＶＨは、ＣＡＲの抗原結合ドメインのＶＬのＮ末端にある。幾つかの実施態様では、ＣＡＲの抗原結合ドメインのＶＬは、ＣＡＲの抗原結合ドメインのＶＨのＮ末端にある。幾つかの実施態様では、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、任意選択的に配列番号：２１又は２２、及びそのバリアントからなる群から選択される配列を含む、ｓｃＦｖ又は単一ドメイン抗体を含む。

【0020】

幾つかの実施態様では、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、（ａ）相補性決定領域ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）であって、ＣＤＲ－Ｈ１が、配列番号：４２のアミノ酸配列、又はそれに対して１、２、若しくは３以下のアミノ酸置換を持つアミノ酸配列を含み；ＣＤＲ－Ｈ２が、配列番号：４３のアミノ酸配列、又はそれに対して１、２、若しくは３以下のアミノ酸置換を持つアミノ酸配列を含み；かつＣＤＲ－Ｈ３が、配列番号：４４のアミノ酸配列、又はそれに対して１、２、若しくは３以下のアミノ酸置換を持つアミノ酸配列を含む、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｂ）相補性決定領域ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）であって、ＣＤＲ－Ｌ１が、配列番号：４５のアミノ酸配列、又はそれに対して１、２、若しくは３以下のアミノ酸置換を持つアミノ酸配列を含み；ＣＤＲ－Ｌ２が、配列番号：４６のアミノ酸配列、又はそれに対して１、２、若しくは３以下のアミノ酸置換を持つアミノ酸配列を含み；かつＣＤＲ－Ｌ３が、配列番号：４７のアミノ酸配列、又はそれに対して１、２、若しくは３以下のアミノ酸置換を持つアミノ酸配列を含む、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。幾つかの実施態様では、ＣＡＲの抗原結合ドメインのＶＨは、配列番号：４０のＳＳ１重鎖配列、又は配列番号：４０のＳＳ１重鎖配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施態様では、ＣＡＲの抗原結合ドメインのＶＬは、配列番号：４１のＳＳ１軽鎖配列、又は配列番号：４１のＳＳ１軽鎖配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施態様では、ＣＡＲの抗原結合ドメインのＶＨは、ＣＡＲの抗原結合ドメインのＶＬのＮ末端にある。幾つかの実施態様では、ＣＡＲの抗原結合ドメインのＶＬは、ＣＡＲの抗原結合ドメインのＶＨのＮ末端にある。幾つかの実施態様では、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、任意選択的に配列番号：４０のＳＳ１ ＶＨアミノ酸配列及び配列番号：４１のＳＳ１ ＶＬアミノ酸配列、並びにそれらのバリアントを含む、ｓｃＦｖ又は単一ドメイン抗体を含む。

【0021】

幾つかの実施態様では、異種核酸分子は自殺遺伝子を更に含む。

【0022】

別の態様では、本開示は、ここに記載のＣＡＲポリペプチドをコードする配列を含む核酸分子に関する。幾つかの実施態様では、核酸分子はここに記載の治療薬をコードする配列を更に含む。幾つかの実施態様では、核酸分子はプラスミド又はベクターである。

【0023】

別の態様では、本開示は、ここに記載の核酸分子を含むウイルスベクターに関する。幾つかの実施態様では、ウイルスベクターはレンチウイルス又はアデノ随伴ウイルスベクターである。

【0024】

別の態様では、本開示は、ここに記載のＣＡＲ Ｔ細胞、ＣＡＲポリペプチド、又は核酸分子若しくはウイルスベクターを含む薬学的組成物に関する。幾つかの実施態様では、薬学的組成物は、ここに記載のＣＡＲ Ｔ細胞、ＣＡＲポリペプチド、又は核酸分子若しくはウイルスベクターの治療有効量を含む。幾つかの実施態様では、薬学的組成物は薬学的に許容される添加物を含む。

【0025】

別の態様では、本開示は、がんを有する患者を治療する方法であって、ここに記載の薬学的組成物を患者に投与することを含む方法に関する。幾つかの実施態様では、腫瘍微小環境を標的とすることにより、全身毒性が低減される。幾つかの実施態様では、がんは一又は複数の固形腫瘍の存在を特徴とする。幾つかの実施態様では、がんは、メソテリンの発現を特徴とする。幾つかの実施態様では、腫瘍微小環境は、活性化線維芽細胞の存在を特徴とする。幾つかの実施態様では、腫瘍微小環境は、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）の存在を特徴とする。幾つかの実施態様では、がんは、膵臓がん、肺がん、卵巣がん、子宮内膜がん、胆道がん、胃がん、又は中皮腫である。

【0026】

別の態様では、本開示は、がんを有する患者を治療する方法であって、腫瘍毒性抗体又はサイトカインを分泌するように遺伝子改変されたＣＡＲ Ｔ細胞産物を患者に投与することを含み、がん毒性を腫瘍微小環境に局所的に向けることによって全身毒性が低減される、方法に関する。幾つかの実施態様では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、活性化線維芽細胞マーカーに対する抗体又は二重特異性抗体を腫瘍微小環境に送達するように遺伝子改変されている。幾つかの実施態様では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、メソテリン又はその一部を含む腫瘍抗原に結合する細胞外抗原結合ドメインを含むＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む。幾つかの実施態様では、二重特異性抗体は、活性化線維芽細胞マーカーとＣＤ３に対するものである。

【0027】

別の態様では、本開示は、疾患又は病状を治療するために患者の組織又は臓器に治療薬を送達する方法であって、治療用抗体、毒素、又は薬剤を分泌するように遺伝子改変されたＣＡＲ Ｔ細胞を前記患者に投与することを含み、治療用抗体、毒素、又は薬剤が、それ自体では組織又は臓器に進入又は浸透することができない、方法に関する。幾つかの実施態様では、組織又は臓器は、消化器系又は内分泌系にある。幾つかの実施態様では、組織は膵臓内にあるか、又は臓器は膵臓である。幾つかの実施態様では、組織又は臓器は、生殖器系内にある。幾つかの実施態様では、組織は卵巣内にあるか、又は臓器は卵巣である。幾つかの実施態様では、組織又は臓器は、呼吸器系又は肺器系内にある。幾つかの実施態様では、組織は肺内にあるか、又は臓器は肺である。幾つかの実施態様では、治療用抗体は活性化線維芽細胞マーカーに対するものである。

【0028】

ここに記載の方法の幾つかの実施態様では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、ここに記載のＣＡＲ Ｔ細胞であるか、又はＣＡＲ Ｔ細胞は、ここに記載の薬学的組成物内に含まれる。

【0029】

便宜上、本明細書、実施例、及び添付の特許請求の範囲において使用される幾つかの用語及び語句の意味を以下に示す。特に明記されていない限り、又は文脈から暗示されていない限り、次の用語及び語句には、以下に示す意味が含まれる。意味は特定の実施態様を説明するのを助けるために提供しており、技術的範囲は特許請求の範囲によってのみ限定されるため、請求項記載の技術を限定することは意図していない。特に定義されていない限り、ここで使用される全ての技術的及び科学的用語は、この技術が属する分野の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有している。当該分野における用語の使用法とここに提供したその意味との間に明らかな矛盾がある場合、明細書において提供される意味が優先するものとする。

【0030】

ここで使用される場合、「対象」はヒト又は動物を意味する。通常、動物は、霊長類、齧歯類、家畜、又は狩猟動物などの脊椎動物である。霊長類には、例えば、チンパンジー、カニクイザル、クモザル、及びマカク、例えば、アカゲザルが含まれる。齧歯類には、例えば、マウス、ラット、マーモット、フェレット、ウサギ及びハムスターが含まれる。家畜及び狩猟動物には、例えば、ウシ、ウマ、ブタ、シカ、バイソン、バッファロー、ネコ種、例えば、飼い猫、イヌ種、例えば、イヌ、キツネ、オオカミ、鳥種、例えば、ニワトリ、エミュー、ダチョウ、及び魚、例えば、マス、ナマズ及びサケが含まれる。幾つかの実施態様では、対象は哺乳動物、例えば霊長類、例えばヒトである。「個体」、「患者」、及び「対象」という用語は、ここでは互換的に使用される。対象は、治療を必要とする状態（例えば、なかでも中皮腫、又は他のタイプのがん）又はそのような状態に関連した一又は複数の合併症と以前に診断されたか、又はそれに罹患しもしくはそれを有していると判定され、場合によっては、その状態又はその状態に関連する一又は複数の合併症に対して治療を既に受けているものでありうる。或いは、対象はまたそのような状態又は関連する合併症を有していると過去には診断されたことがないものでありうる。例えば、対象は、その状態又はその状態に関連する一又は複数の合併症に対する一又は複数の危険因子を示すもの或いは危険因子を示さない対象でありうる。

【0031】

特定の状態の治療を「必要とする対象」は、その状態を有し、その状態を有していると診断され、又はその状態を発症するリスクがある対象でありうる。

【0032】

ここで使用される場合、「腫瘍抗原」及び「がん抗原」という用語は、がん細胞によって差次的に発現され、それによってがん細胞（例えばメソテリン）を標的とするために利用できる抗原を意味するために互換的に使用される。がん抗原は、明らかに腫瘍特異的な免疫反応を潜在的に刺激することができる抗原である。これらの抗原の幾つかは、必ずしも発現されているわけではないが、正常細胞によってコードされている。これらの抗原は、正常細胞では通常サイレントである（すなわち発現されない）もの、分化の所定の段階でのみ発現されるもの、及び胚性及び胎児性抗原などの一過性に発現されるものとして特徴付けることができる。他のがん抗原は、がん遺伝子（例えば、活性化Ｒａｓがん遺伝子）、サプレッサー遺伝子（例えば、変異体ｐ５３）、及び内部欠失又は染色体転座から生じる融合タンパク質など、変異細胞遺伝子によってコードされている。更に他のがん抗原は、ＲＮＡ及びＤＮＡ腫瘍ウイルスで運ばれるものなど、ウイルス遺伝子によってコードされうる。多くの腫瘍抗原が、複数の固形腫瘍の点から定義されている：免疫によって定義されたＭＡＧＥ１、２、及び３；ＭＡＲＴ－１／Ｍｅｌａｎ－Ａ、ｇｐ１００、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、ヒト上皮増殖因子受容体（ＨＥＲ２）、ムチン（すなわち、ＭＵＣ－１）、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、及び前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）。加えて、Ｂ型肝炎（ＨＢＶ）、エプスタインバー（ＥＢＶ）、及びヒトパピローマ（ＨＰＶ）によってコードされる幾つかなどのウイルスタンパク質は、それぞれ肝細胞癌、リンパ腫、及び子宮頸がんの発症において重要であることが示されている。幾つかの実施態様では、腫瘍抗原はメソテリンである。腫瘍抗原の例は以下に提供され、例えば、メソテリン、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＣＤ１９、ＰＳＭＡ、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、インターロイキン１３受容体サブユニットα－２（ＩＬ１３Ｒａ２）などを含む。幾つかの実施態様では、腫瘍抗原は腫瘍関連抗原である。腫瘍関連抗原は、がん細胞又は腫瘍の近くに存在しうるが、必ずしもがん細胞又は腫瘍に付着している必要はない。例えば、腫瘍関連抗原は、腫瘍を取り囲むか又は腫瘍に隣接する細胞外マトリックスに（例えば、正常組織と比較して増加したレベルで）存在するマーカーでありうる。

【0033】

ここで使用される場合、「キメラ」という用語は、少なくとも二種以上の異なるポリヌクレオチド分子の部分の融合産物を意味する。幾つかの実施態様では、「キメラ」という用語は、既知のエレメント又は他のポリヌクレオチド分子の操作を通して産生される遺伝子発現エレメントを意味する。

【0034】

ここで使用される場合、「Ｔ細胞エンゲージ抗体分子」又は「ＴＥＡＭ」という用語は、それぞれがタンデムに連結された単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含むポリペプチドを意味する。任意選択的には、ｓｃＦｖはリンカー（例えば、グリシンリッチリンカー）によって連結される。ＴＥＡＭの一方のｓｃＦｖがＴ細胞表面抗原（例えば、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）又はその一部（例えば、ＣＤ３εサブユニット））に結合し、他方が標的抗原（例えば、腫瘍抗原）に結合する。幾つかの実施態様では、Ｔ細胞表面抗原はＴｒｅｇ抗原である。

【0035】

ここで使用される場合、「Ｔｒｅｇ抗原」又は「Ｔｒｅｇ関連抗原」は、制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞によって発現される抗原を意味するために互換的に使用される。これらの抗原は、場合によっては、本開示の抗体試薬、抗体コンジュゲート、及び方法によって標的とされうる。Ｔｒｅｇ抗原の例は以下に提供され、例えば、ＧＡＲＰ、ＬＡＰ、ＣＤ２５、及びＣＴＬＡ－４を含む。

【0036】

幾つかの実施態様では、「活性化」は、検出可能な細胞増殖を誘導するように十分に刺激されているＴ細胞の状態を意味しうる。幾つかの実施態様では、活性化は誘導されたサイトカイン産生を意味しうる。他の実施態様では、活性化は、検出可能なエフェクター機能を意味しうる。

【0037】

少なくとも、ここで使用される「活性化されたＴ細胞」は、増殖性Ｔ細胞である。

【0038】

ここで使用される場合、「治療有効量」という用語は、所望の生物学的効果を実現するために必要な又は十分な量を指す。例えば、本開示のＣＡＲ、ＣＡＲ Ｔ細胞、又は抗体試薬の治療有効量は、がんの一つ又は複数の症状を改善するのに十分な量でありうる。ここで提供される教示と組み合わせて、様々な活性化合物の中から選択し、効力、相対的バイオアベイラビリティ、患者の体重、有害な副作用の重症度及び好ましい投与方法などの要因を比較検討することにより、実質的な毒性を引き起こさず、特定の対象を治療するのに完全に有効な、効果的な予防又は治療処置レジメンを計画することができる。任意の特定の用途に対する有効量は、治療される疾患若しくは状態、投与される特定の治療化合物、対象のサイズ、又は疾患若しくは状態の重症度などの要因に応じて変化しうる。当業者であれば、過度の実験を必要とせずに、本開示に関連する特定の治療化合物の有効量を経験的に決定することができる。

【0039】

ここで使用される場合、「特異的結合」及び「特異的に結合する」という用語は、第一のエンティティが第二の標的エンティティに、それが非標的である第三のエンティティに結合するよりも大きい特異性及び親和性で結合する、二つの分子、化合物、細胞及び／又は粒子間の物理的相互作用を意味する。幾つかの実施態様では、特異的結合は、同じ条件下で第三の非標的エンティティに対する親和性よりも少なくとも１０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも５００倍、少なくとも１０００倍又はそれ以上大きい、第二の標的エンティティに対する第一のエンティティの親和性を意味しうる。所与の標的に特異的な試薬は、利用されているアッセイの条件下でその標的に対して特異的な結合を示すものである。非限定的な例には、同族結合パートナー（例えば、Ｔ細胞上に存在する刺激及び／又は共刺激分子）タンパク質を認識して結合する抗体又はリガンドが含まれる。

【0040】

ここで使用される「刺激リガンド」は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）（例えば、マクロファージ、樹状細胞、Ｂ細胞、人工ＡＰＣなど）上に存在する場合、Ｔ細胞上の同族結合パートナー（ここでは「刺激分子」又は「共刺激分子」と呼ばれる）と特異的に結合することができ、それにより、限定されないが増殖、活性化、免疫応答の開始などを含むＴ細胞による一次応答を媒介するリガンドを意味する。刺激リガンドは当該技術分野でよく知られており、とりわけ、ペプチドが充填されたＭＨＣクラスＩ分子、抗ＣＤ３抗体、スーパーアゴニスト抗ＣＤ２８抗体、及びスーパーアゴニスト抗ＣＤ２抗体を包含する。

【0041】

「刺激分子」は、該用語がここで使用される場合、抗原提示細胞上に存在する同族刺激リガンドと特異的に結合するＴ細胞上の分子を意味する。「共刺激リガンド」は、該用語がここで使用される場合、Ｔ細胞上の同族共刺激分子に特異的に結合し、それにより、例えば、ペプチドが充填されたＭＨＣ分子とのＴＣＲ／ＣＤ３複合体の結合によって提供される一次シグナルに加えて、限定されないが増殖、活性化、分化などを含むＴ細胞応答を媒介するシグナルを提供するＡＰＣ上の分子を含む。共刺激リガンドには、限定されないが、４－１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７、Ｂ７－１（ＣＤ８０）、Ｂ７－２（ＣＤ８６）、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、誘導性共刺激リガンド（ＩＣＯＳ－Ｌ）、細胞間接着分子（ＩＣＡＭ）、ＣＤ３０Ｌ、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ８３、ＨＬＡ－Ｇ、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＨＶＥＭ、リンホトキシンベータ受容体、３／ＴＲ６、ＩＬ Ｔ３、ＩＬ Ｔ４、ＨＶＥＭ、Ｔｏｌｌ様受容体に結合するアゴニスト又は抗体及びＢ７－Ｈ３と特異的に結合するリガンドが含まれうる。共刺激リガンドにはまた、限定されないが、Ｔ細胞上に存在する共刺激分子と特異的に結合する抗体、例えば、限定されないが、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、及びＣＤ８３と特異的に結合するリガンドが含まれうる。

【0042】

「共刺激分子」とは、共刺激リガンドと特異的に結合し、それにより、限定されないが増殖などのＴ細胞による共刺激応答を媒介する、Ｔ細胞上の同族結合パートナーを意味する。共刺激分子には、限定されないが、ＭＨＣクラスＩ分子、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌ様受容体、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、及びＣＤ８３が含まれる。

【0043】

幾つかの実施態様では、ここで使用される「改変された」という用語及びその文法的等価語は、核酸、例えば、生物のゲノム内の核酸の一又は複数のヒトデザインの改変を意味しうる。別の実施態様では、改変されたとは、遺伝子の変化、付加、及び／又は欠失を意味しうる。「改変された細胞」は、遺伝子を付加、欠失及び／又は変化させた細胞を意味しうる。

【0044】

ここで使用される「細胞」又は「改変された細胞」という用語及びそれらの文法的等価語は、ヒト又は非ヒト動物由来の細胞を意味しうる。

【0045】

ここで使用される場合、「作用可能に連結された」という用語は、プロモーターなどの第一ポリヌクレオチド分子が、目的の遺伝子などの第二の転写可能なポリヌクレオチド分子に連結され、そこで、ポリヌクレオチド分子が、第一ポリヌクレオチド分子が第二ポリヌクレオチド分子の機能に影響を与えるように配されていることを指す。二つのポリヌクレオチド分子は、単一の近接ポリヌクレオチド分子の一部であってもなくてもよく、隣接してもしていなくてもよい。例えば、プロモーターは、そのプロモーターが細胞内の目的の遺伝子の転写を調節し又は媒介するならば、目的の遺伝子に作用可能に連結されている。

【0046】

ここに記載される様々な実施態様では、記載された特定のポリペプチドの何れかのバリアント（天然に存在するか又は別のバリアント）、対立遺伝子、ホモログ、保存的に修飾されたバリアント、及び／又は保存的置換バリアントが包含されることが更に考えられる。アミノ酸配列に関し、当業者であれば、コードされた配列中の単一のアミノ酸又は僅かな割合のアミノ酸を変化させる、核酸、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質配列における個々の置換、欠失、又は付加は、その変化が化学的に類似したアミノ酸によるアミノ酸の置換をもたらし、ポリペプチドの所望の活性を保持する「保存的修飾バリアント」であることを認識する。そのような保存的修飾バリアントは、開示と一致する多形バリアント、種間ホモログ、及び対立遺伝子に加えられ、それらを排除しない。

【0047】

所与のアミノ酸は、類似の生理化学的特性を持つ残基で置き換えることができ、例えば、ある脂肪族残基を別の脂肪族残基で（例えばＩｌｅ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、又はＡｌａを互いに）置換し、又はある極性残基を別の極性残基で（例えばＬｙｓとＡｒｇ；ＧｌｕとＡｓｐ；又はＧｌｎとＡｓｎの間で）置換することができる。他のそのような保存的置換、例えば類似の疎水性特性を有する領域全体の置換はよく知られている。保存的アミノ酸置換を含むポリペプチドは、ここに記載されるアッセイの何れか一で試験して、天然又は参照ポリペプチドの所望の活性、例えば、リガンド媒介性受容体活性及び特異性が保持されることを確認できる。アミノ酸は、その側鎖の性質の類似性に従ってグループ化できる（Ａ．Ｌ．Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ，ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２版，ｐｐ．７３－７５，Ｗｏｒｔｈ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９７５））：（１）非極性：Ａｌａ（Ａ）、Ｖａｌ（Ｖ）、Ｌｅｕ（Ｌ）、Ｉｌｅ（Ｉ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｐｈｅ（Ｆ）、Ｔｒｐ（Ｗ）、Ｍｅｔ（Ｍ）；（２）無電荷極性：Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、Ｔｈｒ（Ｔ）、Ｃｙｓ（Ｃ）、Ｔｙｒ（Ｙ）、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｇｌｎ（Ｑ）；（３）酸性：Ａｓｐ（Ｄ）、Ｇｌｕ（Ｅ）；（４）塩基性：Ｌｙｓ（Ｋ）、Ａｒｇ（Ｒ）、Ｈｉｓ（Ｈ）。或いは、天然に存在する残基は、共通の側鎖の性質に基づいてグループに分類できる：（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；（５）鎖配向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。非保存的置換は、これらのクラスの一つのメンバーを別のクラスと交換することを伴う。特定の保存的置換には、例えば、ＡｌａをＧｌｙ又はＳｅｒへ；ＡｒｇをＬｙｓへ；ＡｓｎをＧｌｎ又はＨｉｓへ；ＡｓｐをＧｌｕへ；ＣｙｓをＳｅｒへ；ＧｌｎをＡｓｎへ；ＧｌｕをＡｓｐへ；ＧｌｙをＡｌａ又はＰｒｏへ；ＨｉｓをＡｓｎ又はＧｌｎへ；ＩｌｅをＬｅｕ又はＶａｌへ；ＬｅｕをＩｌｅ又はＶａｌへ；ＬｙｓをＡｒｇ、Ｇｌｎ、又はＧｌｕへ；ＭｅｔをＬｅｕ、Ｔｙｒ又はＩｌｅへ；ＰｈｅをＭｅｔ、Ｌｅｕ又はＴｙｒへ；ＳｅｒをＴｈｒへ；ＴｙｒをＳｅｒへ；ＴｒｐをＴｙｒへ；ＴｙｒをＴｒｐへ；及び／又はＰｈｅをＶａｌ、Ｉｌｅ又はＬｅｕへの置換が含まれる。

【0048】

幾つかの実施態様では、ここに記載されるポリペプチド（又はそのようなポリペプチドをコードする核酸）は、ここに記載されるアミノ酸配列の一つの機能的断片でありうる。ここで使用される場合、「機能的断片」とは、当該技術分野において知られ又はここに後述されるアッセイに従って野生型参照ポリペプチドの活性の少なくとも５０％を保持するペプチドの断片又はセグメントである。機能的断片は、ここに開示される配列の保存的置換を含みうる。

【0049】

幾つかの実施態様では、ここに記載されるポリペプチドは、ここに記載されるポリペプチド又は分子のバリアントでありうる。幾つかの実施態様では、バリアントは保存的修飾バリアントである。保存的置換バリアントは、例えば、天然ヌクレオチド配列の変異によって得ることができる。ここで言及される「バリアント」は、天然又は参照ポリペプチドと実質的に相同であるが、一又は複数の欠失、挿入、又は置換のために天然又は参照ポリペプチドのものとは異なるアミノ酸配列を有するポリペプチドである。バリアントポリペプチドをコードするＤＮＡ配列は、天然又は参照ＤＮＡ配列と比較した場合、ヌクレオチドの一又は複数の付加、欠失、又は置換を含むが、非バリアントポリペプチドの活性を保持するバリアントタンパク質又はその断片をコードする配列を包含する。多種多様なＰＣＲに基づく部位特異的変異誘発アプローチが当該技術分野において知られており、当業者によって適用されうる。

【0050】

バリアントアミノ酸又はＤＮＡ配列は、天然又は参照配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又はそれ以上、同一でありうる。天然配列と変異配列の間の相同性の度合い（同一性パーセント）は、例えば、ワールドワイドウェブでこの目的に一般的に用いられている無料公開のコンピュータープログラムを（例えば、ＢＬＡＳＴｐ又はＢＬＡＳＴｎをデフォルト設定で）使用して二つの配列を比較することによって決定できる。

【0051】

天然アミノ酸配列の改変は、当業者に知られている多くの技術の何れかによって達成することができる。変異は、例えば、天然配列の断片へのライゲーションを可能にする制限部位が隣接している変異配列を含むオリゴヌクレオチドを合成することによって、特定の遺伝子座に導入することができる。ライゲーション後、得られた再構築配列は、所望のアミノ酸の挿入、置換、又は欠失を有するアナログをコードする。或いは、オリゴヌクレオチド指定部位特異的変異誘発手順を用いて、必要とされる置換、欠失、又は挿入に従って改変された特定のコドンを有する改変されたヌクレオチド配列を得ることができる。このような改変を行うための技法は十分に確立されており、例えば、出典明示によりその全体がここに援用される、Ｗａｌｄｅｒ等（Ｇｅｎｅ ４２：１３３，１９８６）；Ｂａｕｅｒ等（Ｇｅｎｅ ３７：７３，１９８５）；Ｃｒａｉｋ（ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ｊａｎｕａｒｙ １９８５，１２－１９）；Ｓｍｉｔｈ等（Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ，Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，１９８１）；及び米国特許第４５１８５８４号及び第４７３７４６２号に開示されたものが含まれる。ポリペプチドの適切な立体構造の維持に関与しない任意のシステイン残基はまた、分子の酸化安定性を改善し、異常な架橋を防ぐため、一般にセリンで、置換されうる。逆に、システイン結合をポリペプチドに加えて、その安定性を改善し又はオリゴマー化を促進することもできる。

【0052】

「ポリヌクレオチド」という用語は、ヌクレオシドのポリマーを示すために、「核酸分子」と互換的にここでは使用される。典型的には、ポリヌクレオチドは、ホスホジエステル結合によって結合された、ＤＮＡ又はＲＮＡに天然に見出されるヌクレオシド（例えば、アデノシン、チミジン、グアノシン、シチジン、ウリジン、デオキシアデノシン、デオキシチミジン、デオキシグアノシン、及びデオキシシチジン）で構成される。しかしながら、この用語は、天然に存在する核酸に見出されるか否かにかかわらず、化学的又は生物学的に修飾された塩基、修飾された骨格などを含むヌクレオシド又はヌクレオシドアナログを含む分子を包含し、そのような分子が所定の用途に好ましい場合がある。この出願がポリヌクレオチドに言及する場合、ＤＮＡ、ＲＮＡの両方と、何れの場合にも一本鎖及び二本鎖形態（及び各一本鎖分子の相補鎖）が提供されることが理解される。ここで使用される「ポリヌクレオチド配列」は、ポリヌクレオチド物質自体及び／又は特定の核酸を生化学的に特徴付ける配列情報（すなわち、塩基の略語として使用される一連の文字）を指しうる。幾つかの実施態様では、核酸分子は異種核酸分子である。ここで使用される場合、「異種核酸分子」という用語は、所与の細胞内には天然には存在しない核酸分子を指す。

【0053】

ここに提示されるポリヌクレオチド配列は、他に示されない限り、５’から３’の方向で提示される。

【0054】

ここで使用される「ポリペプチド」という用語は、アミノ酸のポリマーを意味する。「タンパク質」及び「ポリペプチド」という用語は、ここでは互換的に使用される。ペプチドは、比較的短いポリペプチドであり、典型的には約２から６０アミノ酸長である。ここで使用されるポリペプチドは、典型的には、タンパク質に最も一般的に見出される２０のＬ－アミノ酸などのアミノ酸を含む。しかしながら、当該技術分野において知られている他のアミノ酸及び／又はアミノ酸アナログを使用することができる。ポリペプチド内のアミノ酸の一又は複数が、例えば、炭水化物基、リン酸基、脂肪酸基、コンジュゲーションのためのリンカー、官能基などの化学エンティティを加えることによって修飾されうる。非ポリペプチド部分が共有的又は非共有的に結合したポリペプチドは、依然として「ポリペプチド」と考えられる。例示的な修飾には、グリコシル化及びパルミトイル化が含まれる。ポリペプチドは、天然源から精製され、組換えＤＮＡ技術を使用して産生され、又は一般的な固相ペプチド合成などの化学的手段によって合成されうる。ここで使用される「ポリペプチド配列」又は「アミノ酸配列」という用語は、ポリペプチド物質自体及び／又はポリペプチドを生化学的に特徴付ける配列情報（すなわち、アミノ酸名の略語として使用される一連の文字又は３文字コード）を指す場合がある。ここに提示されるポリペプチド配列は、他に示されない限り、Ｎ末端からＣ末端の方向で提示される。

【0055】

幾つかの実施態様では、ここに記載されるポリペプチド（例えば、ＣＡＲポリペプチド）をコードする核酸は、ベクターによって含められる。ここに記載される態様の幾つかでは、ここに記載される所与のポリペプチドをコードする核酸配列又はその任意のモジュールが、ベクターに作用可能に連結される。ここで使用される「ベクター」という用語は、宿主細胞への送達又は異なる宿主細胞間の移動のためにデザインされた核酸コンストラクトを意味する。ここで使用される場合、ベクターは、ウイルス性又は非ウイルス性でありうる。「ベクター」という用語は、適切な調節エレメントと会合されると複製することができ、遺伝子配列を細胞に移すことができる任意の遺伝要素を包含する。ベクターには、限定されないが、クローニングベクター、発現ベクター、プラスミド、ファージ、トランスポゾン、コスミド、人工染色体、ウイルス、ビリオンなどが含まれうる。

【0056】

ここで使用される場合、「発現ベクター」という用語は、ベクター上の転写調節配列に連結された配列からのＲＮＡ又はポリペプチドの発現を指示するベクターを意味する。発現される配列は、必ずしもではないが、細胞にとって異種性であることが多い。発現ベクターは追加のエレメントを含み得、例えば、発現ベクターは二種の複製系を有し得、それにより、二種の生物において、例えばヒト細胞において発現のため、また原核生物宿主においてクローニング及び増幅のために、維持されることが可能になる。「発現」という用語は、適用可能であれば、限定されないが、例えば、転写、転写物プロセシング、翻訳及びタンパク質フォールディング、修飾及びプロセシングを含む、ＲＮＡ及びタンパク質の産生と、適切にはタンパク質の分泌に関与する細胞内プロセスを意味する。「発現産物」には、遺伝子から転写されたＲＮＡ、及び遺伝子から転写されたｍＲＮＡの翻訳によって得られたポリペプチドが含まれる。

【0057】

「遺伝子」という用語は、適切な調節配列に作用可能に連結された場合にインビトロ又はインビボでＲＮＡに転写（ＤＮＡ）される核酸配列を意味する。遺伝子は、コード領域の前後の領域、例えば５’非翻訳（５’ＵＴＲ）又は「リーダー」配列及び３’ＵＴＲ又は「トレーラー」配列、並びに個々のコード化セグメント（エクソン）間の介在配列（イントロン）を含んでも含まなくてもよい。

【0058】

ここで使用される場合、「ウイルスベクター」という用語は、ウイルス起源の少なくとも一のエレメントを含み、ウイルスベクター粒子にパッケージ化される能力を有する核酸ベクターコンストラクトを意味する。ウイルスベクターは、非必須のウイルス遺伝子の代わりに、ここに記載のポリペプチドをコードする核酸を含みうる。ベクター及び／又は粒子は、インビトロ又はインビボの何れかで核酸を細胞に移入する目的のために利用されうる。ウイルスベクターの多くの形態が当該分野において知られている。

【0059】

「組換えベクター」とは、インビボで発現することができる異種核酸配列又は「導入遺伝子」を含むベクターを意味する。ここに記載のベクターは、幾つかの実施態様では、他の適切な組成物及び治療法と組み合わせることができることを理解されたい。幾つかの実施態様では、ベクターはエピソームである。適切なエピソームベクターの使用は、対象において目的のヌクレオチドを高コピー数の染色体外ＤＮＡに維持する手段を提供し、それによって染色体への組み込みの潜在的な影響を排除する。

【0060】

ここで使用される場合、「シグナルペプチド」又は「シグナル配列」は、新生タンパク質を小胞体に方向付けるのに役立つ、新規合成タンパク質のＮ末端のペプチドを意味する。幾つかの実施態様では、シグナルペプチドはＣＤ８又はＩｇＫシグナルペプチドである。

【0061】

ここで使用される場合、「治療する（treat）」、「治療」、「治療する（treating）」、又は「改善」という用語は、目的が、疾患又は障害、例えばがん又は自己免疫疾患に関連する状態の進行又は重症度を逆転させ、緩和し、改善し、阻害し、減速させ、又は停止させることである治療的処置を意味する。「治療する（treating）」という用語は、病気、疾患又は障害の少なくとも一つの副作用又は症状を低減させ又は緩和させることを含む。一又は複数の症状又は臨床マーカーが減少した場合、治療は一般に「効果的」である。或いは、疾患の進行が減少し又は停止した場合、治療は「効果的」である。すなわち、「治療」には、症状又はマーカーの改善だけでなく、治療を行わない場合に予想されうる症状と比較して、症状の進行又は悪化の停止又は少なくとも緩徐化も含まれる。有益な又は望ましい臨床結果には、限定されないが、一又は複数の症状の緩和、疾患の範囲の縮小、疾患の安定した状態（すなわち悪化しないこと）、疾患進行の遅延又は緩徐化、疾患状態の改善又は緩和、寛解（部分又は完全）、及び／又は死亡率の低下が、検出可能であろうと検出不可能であろうと、含まれる。疾患の「治療」という用語はまた疾患の症状又は副作用からの緩和をもたらすこと（対症的治療を含む）を含む。

【0062】

ここで使用される場合、量に関連して使用される「約」又は「およそ」という用語は、前記量の±１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０％、例えば、±１％又は±１０％の周辺の値の範囲を指す。

【0063】

ここで使用される場合、「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」という単数形の用語は、文脈が明らかに他の意味を示さない限り、複数の指示対象を含む。同様に、「又は」という語は、文脈が明確に別のことを示していない限り、「及び」を含むことが意図される。他の用語は、以下に示すように、技術の様々な態様及び実施態様の説明の中で定義される。

【図面の簡単な説明】

【0064】

添付の図面は、正確な比率で描かれることを意図したものではない。特許又は出願ファイルは、カラーで完成させた少なくとも一つの図面を含む。カラー図面を含むこの特許又は特許出願刊行物のコピーは、請求と必要な料金の支払いに応じて庁から提供される。

【図1A-1C】図１Ａ～１Ｅは、本開示のＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ抗メソテリンＣＡＲを発現する本開示の例示的なＣＡＲ Ｔ細胞（白色は未形質導入対照）と比較して、以前から知られている抗メソテリンＳＳ１ ＣＡＲを発現するＳＳ１抗メソテリンＣＡＲ Ｔ細胞におけるサイトカイン産生を示すグラフである。

【図1D-1E】（上記）

【図1F】図１Ｆは、メソテリン陽性膵臓がん（Ｃａｐａｎ－２）（上部）又はメソテリン陰性リンパ腫細胞（ＪｅＫｏ－１）細胞株（下部）を用いた一晩のルシフェラーゼベースの殺傷アッセイで評価した細胞溶解のグラフを示す。

【図2A】図２Ａ～２Ｂは、抗メソテリンＳＳ１ ＣＡＲ又は抗メソテリンＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ ＣＡＲの有効性を評価するために使用された実験マウスプロトコルの概要を示す。図２Ａは、マウスへの膵臓がん細胞（ＡｓＰＣ－１細胞）の投与とそれに続くＣＡＲ Ｔ細胞の投与のスケジュールを示す。

【図2B】図２Ｂは、ＣＡＲ Ｔ投与量、治療日数、及び治療当たりのマウスの数を示す。

【図3A-3B】図３Ａ～３Ｄは、ＡＳＰＣ１膵臓がん細胞を注射したマウス（灰色はＣＡＲ Ｔ細胞注射なし）における以前から知られている抗メソテリンＳＳ１ ＣＡＲ（Ｃ）又は本開示の抗メソテリンＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ ＣＡＲ（Ｂ）を含む抗メソテリンＣＡＲ Ｔ細胞を比較している。各実験では、１×１０^６（１ｅ６）個のＣＡＲ Ｔ細胞を投与した。図３Ａ～３Ｄのそれぞれには、図のヘッダーにＣＡＲ－Ｔ用量の投与に関連するフラックス及び生存曲線を示すパネルがある。図３Ａは、がん細胞を注射してから７日後に静脈内（ＩＶ）投与されたＳＳ１ ＣＡＲ Ｔ細胞とＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ ＣＡＲ Ｔ細胞を比較している。図３Ｂは、がん細胞を注射してから１４日後にＩＶ投与されたＳＳ１ ＣＡＲ Ｔ細胞とＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ ＣＡＲ Ｔ細胞を比較している。

【図3C-3D】図３Ｃは、がん細胞を注射してから７日後に腹腔内（ＩＰ）注射により投与されたＳＳ１ ＣＡＲ Ｔ細胞とＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ ＣＡＲ Ｔ細胞を比較している。図３Ｄは、がん細胞を注射してから１４日後に腹腔内（ＩＰ）注射により投与されたＳＳ１ ＣＡＲ Ｔ細胞とＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ ＣＡＲ Ｔ細胞を比較している。

【図4A-4B】図４Ａ～４Ｄは、ＡＳＰＣ１膵臓がん細胞を注射したマウス（灰色はＣＡＲ Ｔ細胞注射なし）における以前から知られている抗メソテリンＳＳ１ ＣＡＲ（Ｃ）又は本開示の抗メソテリンＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ ＣＡＲ（Ｂ）を含む抗メソテリンＣＡＲ Ｔ細胞を比較している。各実験では、２×１０^６（２ｅ６）個のＣＡＲ Ｔ細胞を投与した。図４Ａ～４Ｄのそれぞれには、図のヘッダーにＣＡＲ－Ｔ用量の投与に関連するフラックス及び生存曲線を示すパネルがある。図４Ａは、がん細胞を注射してから７日後に静脈内（ＩＶ）投与されたＳＳ１ ＣＡＲ Ｔ細胞とＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ ＣＡＲ Ｔ細胞を比較している。図４Ｂは、がん細胞を注射してから１４日後にＩＶ投与されたＳＳ１ ＣＡＲ Ｔ細胞とＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ ＣＡＲ Ｔ細胞を比較している。

【図4C-4D】図４Ｃは、がん細胞を注射してから７日後に腹腔内（ＩＰ）注射により投与されたＳＳ１ ＣＡＲ Ｔ細胞とＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ ＣＡＲ Ｔ細胞を比較している。図４Ｄは、がん細胞を注射してから１４日後に腹腔内（ＩＰ）注射により投与されたＳＳ１ ＣＡＲ Ｔ細胞とＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ ＣＡＲ Ｔ細胞を比較している。

【図5A-5B】図５Ａ～５Ｄは、ＢＸＰＣ３膵臓がん細胞を注射したマウス（灰色はＣＡＲ Ｔ細胞注射なし）における以前から知られている抗メソテリンＳＳ１ ＣＡＲ（Ｃ）又は本開示の抗メソテリンＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ ＣＡＲ（Ｂ）を含む抗メソテリンＣＡＲ Ｔ細胞を比較している。各実験では、１×１０^６（１ｅ６）個のＣＡＲ Ｔ細胞を投与した。図５Ａ～５Ｄのそれぞれには、図のヘッダーにＣＡＲ－Ｔ用量の投与に関連するフラックス及び生存曲線を示すパネルがある。図５Ａは、がん細胞を注射してから７日後に静脈内（ＩＶ）投与されたＳＳ１ ＣＡＲ Ｔ細胞とＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ ＣＡＲ Ｔ細胞を比較している。図５Ｂは、がん細胞を注射してから１４日後にＩＶ投与されたＳＳ１ ＣＡＲ Ｔ細胞とＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ ＣＡＲ Ｔ細胞を比較している。

【図5C-5D】図５Ｃは、がん細胞を注射してから７日後に腹腔内（ＩＰ）注射により投与されたＳＳ１ ＣＡＲ Ｔ細胞とＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ ＣＡＲ Ｔ細胞を比較している。図５Ｄは、がん細胞を注射してから１４日後に腹腔内（ＩＰ）注射により投与されたＳＳ１ ＣＡＲ Ｔ細胞とＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ ＣＡＲ Ｔ細胞を比較している。

【図6A-6B】図６Ａ～６Ｄは、ＢＸＰＣ３膵臓がん細胞を注射したマウス（灰色はＣＡＲ Ｔ細胞注射なし）における以前から知られている抗メソテリンＳＳ１ ＣＡＲ（Ｃ）又は本開示の抗メソテリンＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ ＣＡＲ（Ｂ）を含む抗メソテリンＣＡＲ Ｔ細胞を比較している。各実験では、２×１０^６（２ｅ６）個のＣＡＲ Ｔ細胞を投与した。図６Ａ～６Ｄのそれぞれには、図のヘッダーにＣＡＲ－Ｔ用量の投与に関連するフラックス及び生存曲線を示すパネルがある。図６Ａは、がん細胞を注射してから７日後に静脈内（ＩＶ）投与されたＳＳ１ ＣＡＲ Ｔ細胞とＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ ＣＡＲ Ｔ細胞を比較している。図６Ｂは、がん細胞を注射してから１４日後にＩＶ投与されたＳＳ１ ＣＡＲ Ｔ細胞とＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ ＣＡＲ Ｔ細胞を比較している。

【図6C-6D】図６Ｃは、がん細胞を注射してから７日後に腹腔内（ＩＰ）注射により投与されたＳＳ１ ＣＡＲ Ｔ細胞とＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ ＣＡＲ Ｔ細胞を比較している。図６Ｄは、がん細胞を注射してから１４日後に腹腔内（ＩＰ）注射により投与されたＳＳ１ ＣＡＲ Ｔ細胞とＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ ＣＡＲ Ｔ細胞を比較している。

【図7A-7B】図７Ａ～７Ｄは、ＰＡＮＣ１膵臓がん細胞を注射したマウス（灰色はＣＡＲ Ｔ細胞注射なし）における以前から知られている抗メソテリンＳＳ１ ＣＡＲ（Ｃ）又は本開示の抗メソテリンＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ ＣＡＲ（Ｂ）を含む抗メソテリンＣＡＲ Ｔ細胞を比較している。各実験では、１×１０^６（１ｅ６）個のＣＡＲ Ｔ細胞を投与した。図７Ａ～７Ｄのそれぞれには、図のヘッダーにＣＡＲ－Ｔ用量の投与に関連するフラックス及び生存曲線を示すパネルがある。図７Ａは、がん細胞を注射してから７日後に静脈内（ＩＶ）投与されたＳＳ１ ＣＡＲ Ｔ細胞とＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ ＣＡＲ Ｔ細胞を比較している。図７Ｂは、がん細胞を注射してから１４日後にＩＶ投与されたＳＳ１ ＣＡＲ Ｔ細胞とＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ ＣＡＲ Ｔ細胞を比較している。

【図7C-7D】図７Ｃは、がん細胞を注射してから７日後に腹腔内（ＩＰ）注射により投与されたＳＳ１ ＣＡＲ Ｔ細胞とＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ ＣＡＲ Ｔ細胞を比較している。図７Ｄは、がん細胞を注射してから１４日後に腹腔内（ＩＰ）注射により投与されたＳＳ１ ＣＡＲ Ｔ細胞とＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ ＣＡＲ Ｔ細胞を比較している。

【図8A-8B】図８Ａ～８Ｄは、ＰＡＮＣ１膵臓がん細胞を注射したマウス（灰色はＣＡＲ Ｔ細胞注射なし）における以前から知られている抗メソテリンＳＳ１ ＣＡＲ（Ｃ）又は本開示の抗メソテリンＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ ＣＡＲ（Ｂ）を含む抗メソテリンＣＡＲ Ｔ細胞を比較している。各実験では、２×１０^６（２ｅ６）個のＣＡＲ Ｔ細胞を投与した。図８Ａ～８Ｄのそれぞれには、図のヘッダーにＣＡＲ－Ｔ用量の投与に関連するフラックス及び生存曲線を示すパネルがある。図８Ａは、がん細胞を注射してから７日後に静脈内（ＩＶ）投与されたＳＳ１ ＣＡＲ Ｔ細胞とＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ ＣＡＲ Ｔ細胞を比較している。図８Ｂは、がん細胞を注射してから１４日後にＩＶ投与されたＳＳ１ ＣＡＲ Ｔ細胞とＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ ＣＡＲ Ｔ細胞を比較している。

【図8C-8D】図８Ｃは、がん細胞を注射してから７日後に腹腔内（ＩＰ）注射により投与されたＳＳ１ ＣＡＲ Ｔ細胞とＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ ＣＡＲ Ｔ細胞を比較している。図８Ｄは、がん細胞を注射してから１４日後に腹腔内（ＩＰ）注射により投与されたＳＳ１ ＣＡＲ Ｔ細胞とＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ ＣＡＲ Ｔ細胞を比較している。

【図9A-9B】図９Ａ～９Ｄは、ＣＡＰＡＮ２膵臓がん細胞を注射したマウス（灰色はＣＡＲ Ｔ細胞注射なし）における以前から知られている抗メソテリンＳＳ１ ＣＡＲ（Ｃ）又は本開示の抗メソテリンＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ ＣＡＲ（Ｂ）を含む抗メソテリンＣＡＲ Ｔ細胞を比較している。各実験では、２．５×１０^５（２．５ｅ５）個のＣＡＲ Ｔ細胞を投与した。図９Ａ～９Ｄのそれぞれには、図のヘッダーにＣＡＲ－Ｔ用量の投与に関連するフラックス及び生存曲線を示すパネルがある。図９Ａは、がん細胞を注射してから７日後に静脈内（ＩＶ）投与されたＳＳ１ ＣＡＲ Ｔ細胞とＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ ＣＡＲ Ｔ細胞を比較している。図９Ｂは、がん細胞を注射してから１４日後にＩＶ投与されたＳＳ１ ＣＡＲ Ｔ細胞とＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ ＣＡＲ Ｔ細胞を比較している。

【図9C-9D】図９Ｃは、がん細胞を注射してから７日後に腹腔内（ＩＰ）注射により投与されたＳＳ１ ＣＡＲ Ｔ細胞とＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ ＣＡＲ Ｔ細胞を比較している。図９Ｄは、がん細胞を注射してから１４日後に腹腔内（ＩＰ）注射により投与されたＳＳ１ ＣＡＲ Ｔ細胞とＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ ＣＡＲ Ｔ細胞を比較している。

【図10A-10B】図１０Ａ～１０Ｄは、ＣＡＰＡＮ２膵臓がん細胞を注射したマウス（灰色はＣＡＲ Ｔ細胞注射なし）における以前から知られている抗メソテリンＳＳ１ ＣＡＲ（Ｃ）又は本開示の抗メソテリンＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ ＣＡＲ（Ｂ）を含む抗メソテリンＣＡＲ Ｔ細胞を比較している。各実験では、５×１０^５（５ｅ５）個のＣＡＲ Ｔ細胞を投与した。図１０Ａ～１０Ｄのそれぞれには、図のヘッダーにＣＡＲ－Ｔ用量の投与に関連するフラックス及び生存曲線を示すパネルがある。図１０Ａは、がん細胞を注射してから７日後に静脈内（ＩＶ）投与されたＳＳ１ ＣＡＲ Ｔ細胞とＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ ＣＡＲ Ｔ細胞を比較している。図１０Ｂは、がん細胞を注射してから１４日後にＩＶ投与されたＳＳ１ ＣＡＲ Ｔ細胞とＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ ＣＡＲ Ｔ細胞を比較している。

【図10C-10D】図１０Ｃは、がん細胞を注射してから７日後に腹腔内（ＩＰ）注射により投与されたＳＳ１ ＣＡＲ Ｔ細胞とＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ ＣＡＲ Ｔ細胞を比較している。図１０Ｄは、がん細胞を注射してから１４日後に腹腔内（ＩＰ）注射により投与されたＳＳ１ ＣＡＲ Ｔ細胞とＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ ＣＡＲ Ｔ細胞を比較している。

【図11A-11B】図１１Ａ～１１Ｃは、異なるがん細胞株の、４１ＢＢｚ細胞内シグナル伝達ドメイン及び以前から知られているＳＳ１抗メソテリン抗体（Ｃ）、本開示のＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ抗体（Ｂ－１）又は本開示のＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｈ／Ｌ抗体（Ｂ－２）を含むＣＡＲを有する抗メソテリンＣＡＲＴ細胞に特異的な溶解を比較している（ＵＴＤ対照は白）。図１１Ａは、ＢｘＰＣ－３膵臓がん細胞のＳＳ１、ＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ－ＢＢｚ、及びＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｈ／Ｌ－ＢＢｚ特異的溶解を比較している。図１１Ｂは、Ｃａｐａｎ－２がん細胞のＳＳ１、ＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ－ＢＢｚ、及びＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｈ／Ｌ－ＢＢｚ ＣＡＲＴ細胞特異的溶解を比較している。

【図11C】図１１Ｃは、ＮＣＩ－Ｈ２２６肺がん細胞のＳＳ１、ＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ－ＢＢｚ、及びＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｈ／Ｌ－ＢＢｚ特異的溶解を比較している。

【図12A】図１２Ａ～１２Ｂは、抗メソテリンＣＡＲ ＴＥＡＭコンストラクト及び対照コンストラクトの概略図及び形質導入を示す。図１２Ａは、ＳＳ１抗メソテリンＣＡＲ ＴＥＡＭ ＦＡＰコンストラクト及び５種の追加の対照コンストラクトの概略図を示す。

【図12B】図１２Ｂは、抗メソテリンＳＳ１ ＣＡＲ ＴＥＡＭコンストラクト及び対照コンストラクトの形質導入効率を示す。

【図13】図１３は、メソテリンを含む（濃い灰色）又は含まない（薄い灰色）プレートでのＣＡＲＴ細胞活性化アッセイの結果を示す。メソテリン刺激の６時間後の分類されたＣＡＲＴ細胞のＣＤ６９発現（１４日目）。

【図14A-14B】図１４Ａ～１４Ｃは、標的細胞に二次Ｈｉｓタグ標識を施したＴＥＡＭ分泌ＣＡＲＴ細胞の上清のフローサイトメトリー解析（ヒストグラム）を示す。図１４ＡはＦＡＰ陽性ＨＦＦ細胞を示し、図１４ＢはＣＤ１９陽性Ｋ５６２細胞（３人の個々のドナーの代表例、２０日目）を示す。

【図14C】図１４Ｃは３人の個々の健康なドナーの平均蛍光強度（ＭＦＩ）比を示す。統計的有意性は、両側対応ｔ検定によって計算した。

【図15A-15B】図１５Ａ～１５Ｅは、分泌されたＴＥＡＭの細胞傷害性効果を定量するためのアッセイを示す。図１５Ａは、共培養アッセイのスキームを示す。図１５Ｂ、１５Ｃ、１５Ｅは、ＴＥＡＭを、ヒト包皮線維芽細胞（図１５Ｂ～１５ＣのＨＦＦ）に対して１：１の比で、並びにがん関連線維芽細胞（図１５ＥのＣＡＦ－１）に対して１：１の比で、分泌するＣＡＲＴのインピーダンスベースの細胞傷害性アッセイを示す。図１５Ｄは、トランスウェルアッセイのスキームを表す。図１５Ａのキー：ＳＳ１抗メソテリンＣＡＲ ＦＡＰ ＴＥＡＭ（１）、ＳＳ１抗メソテリンＣＡＲ ＦＡＰ ＴＥＡＭの上清（２）、ＳＳ１抗メソテリンＣＡＲ（３）、及びＣＤ１９ ＣＡＲ（４）。図１５Ｃのキー：ＳＳ１抗メソテリンＣＡＲ ＣＤ１９ ＴＥＡＭ（１）、ＳＳ１抗メソテリンＣＡＲ（２）、及びＣＤ１９ ＣＡＲ（３）。図１５Ｅのキー：ＳＳ１抗メソテリンＣＡＲ ＦＡＰ ＴＥＡＭ（１）、ヘッドレスＣＡＲ ＦＡＰ ＴＥＡＭ（２）、抗メソテリンＣＡＲ（３）ＣＤ１９ ＣＡＲ（４）、ＣＤ１９ ＣＡＲ ＦＡＰ ＴＥＡＭ（５）、抗メソテリンＣＡＲ ＣＤ１９ ＴＥＡＭ（６）、及びＵＴＤ対照（７）。

【図15C-15D】（上記）

【図15E】（上記）

【図16】図１６は、マウスの膵臓腫瘍増殖に対する抗メソテリンＣＡＲ ＦＡＰ ＴＥＡＭの効果を評価する実験のスケジュール（上）とグラフ（下）を示している。上のパネルは、膵臓モデルがん細胞が治療の３日前にマウスに注入されたことを示している。下のパネルは、抗メソテリンＣＡＲ ＦＡＰ ＴＥＡＭ（水平線を伴う円）、抗メソテリンＣＡＲ ＣＤ１９ ＴＥＡＭ（ジグザグ線を伴う円）、抗ＣＤ１９ ＣＡＲ ＦＡＰ ＴＥＡＭ（垂直線を伴う円）、又はＵＴＤ（白抜きの円）による治療後の腫瘍の経時的な増殖を示している。腫瘍サイズは平均値として示され、エラーバーは標準偏差である。統計は、独立ｔ検定で計算され、^＊Ｐ＝０．０１９２であった。

【図17】図１７は、ＦＡＰ ＴＥＡＭ分子の結合活性がＴ細胞とＦＡＰ発現線維芽細胞との間の結合活性を増加させることを示すグラフである。ＵＴＤ（４、灰色）及びＵＴＤ ＣＡＲ ＦＡＰ ＴＥＡＭ（１）又は抗メソテリンＣＡＲ ＦＡＰ ＴＥＡＭ（２）と相互作用するＨＦＦ発現ＦＡＰ細胞を、音響力顕微鏡法を使用して分析した。抗ＣＤ１９ ＣＡＲ ＦＡＰ ＴＥＡＭ（３）は対照であった。結合細胞の％は、音響力（ｐＮ）の関数として測定した（左パネル）。ＵＴＤと比較した結合細胞の増加倍数は、右パネルに示されている（対応ｔ検定、^＊Ｐ＜０．０５）。

【発明を実施する形態】

【0065】

ここに提供されるのは、メソテリンを標的とするキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）及びＣＡＲ Ｔ細胞である。理論に縛られることは望まないが、ＭＳＬＮ（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ／ｕｎｉｐｒｏｔ／Ｑ１３４２１）は、一部の組織（胸膜、心膜、腹膜など）の正常中皮細胞に発現され、一部の上皮細胞（卵巣、精巣鞘膜、精巣網、卵管など）に微量に発現されるが、様々ながん細胞には豊富に発現される。例えば、それぞれが出典明示によりここに援用される、Ｌｖ，Ｊｉａｎｇ、及びＬｉ，Ｐｅｎｇ“Ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｎ ａｓ ａ ｂｉｏｍａｒｋｅｒ ｆｏｒ ｔａｒｇｅｔｅｄ ｔｈｅｒａｐｙ”．Ｂｉｏｍａｒｋ Ｒｅｓ．２０１９；７：１８；及びＨａｓｓａｎ等“Ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ：Ｒｅａｄｙ ｆｏｒ Ｐｒｉｍｅ Ｔｉｍｅ？”Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ．２０１６ Ｄｅｃ １；３４（３４）：４１７１－４１７９を参照のこと。メソテリンは、様々ながんに関連する（例えば、様々ながんで過剰発現される）細胞に対するマーカーとして使用することができ、メソテリン又はその一部に結合するＣＡＲ及びＣＡＲ Ｔ細胞は、例えばメソテリン発現に関連するがんを有する対象を治療するために使用することができる。

【0066】

［キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）］
ここに記載の技術は、免疫療法で使用するための改善されたキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供する。次では、ＣＡＲと様々な改善を検討する。

【0067】

ここで使用される「キメラ抗原受容体」又は「ＣＡＲ」又は「ＣＡＲｓ」という用語は、リガンド又は抗原特異性をＴ細胞（例えば、ナイーブＴ細胞、セントラルメモリーＴ細胞、エフェクターメモリーＴ細胞又はその組み合わせ）に移植する改変されたＴ細胞受容体を意味する。ＣＡＲは、人工Ｔ細胞受容体、キメラＴ細胞受容体、又はキメラ免疫受容体としてもまた知られている。

【0068】

ＣＡＲは、Ｔ細胞受容体分子の膜貫通ドメインと細胞内ドメインを含むコンストラクトに、Ｔ細胞応答の標的となる細胞の表面に発現される標的、例えばポリペプチドに特異的に結合するキメラ細胞外抗原結合ドメインを配する。幾つかの実施態様では、キメラ細胞外抗原結合ドメインは、Ｔ細胞応答の標的となる細胞上に発現される抗原に特異的に結合する抗体試薬の抗原結合ドメインを含む。幾つかの実施態様では、キメラ細胞外抗原結合ドメインは、Ｔ細胞応答の標的となる細胞上に発現される抗原に特異的に結合するリガンドを含む。

【0069】

ここで使用される場合、「ＣＡＲ Ｔ細胞」又は「ＣＡＲ－Ｔ」は、ＣＡＲを発現するＴ細胞を意味する。Ｔ細胞で発現されると、ＣＡＲは、Ｔ細胞の特異性と反応性を、ＭＨＣ非拘束の形で選択された標的に向けてリダイレクトし、モノクローナル抗体の抗原結合特性を利用する能力を有する。ＭＨＣ非拘束の抗原認識は、ＣＡＲを発現するＴ細胞に、抗原プロセシングとは独立して抗原を認識する能力を与え、腫瘍エスケープの主要機序を迂回する。

【0070】

幾つかの実施態様では、ＣＡＲポリペプチドは、配列番号：２～５の何れか一つから選択される配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又はそれ以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施態様では、ＣＡＲポリペプチドは、配列番号：２～５の何れか一つのアミノ酸配列を含む。幾つかの実施態様では、ＣＡＲポリペプチドは、配列番号：２～５の何れか一つのアミノ酸配列からなる。幾つかの実施態様では、ＣＡＲは、ここに記載のＣＤ８シグナルペプチドを含まない。当業者によって決定されうるように、これらのＣＡＲの様々な機能的に類似又は同等の構成要素を相互に交換又は置換することができ、また、当該技術分野で知られているか又はここに列挙されている他の類似又は機能的に同等の構成要素と交換又は置換することができる。

【0071】

［細胞外抗原結合ドメイン］
ここで使用される場合、「細胞外抗原結合ドメイン」という用語は、標的への結合を促進するのに十分な、細胞の外側に見出されるポリペプチドを意味する。細胞外標的結合ドメインは、その結合パートナー、すなわち標的に特異的に結合する。非限定的な例として、細胞外抗原結合ドメインは、抗体又は抗体試薬の抗原結合ドメイン、又は同族結合パートナータンパク質を認識して結合するリガンドを含みうる。この文脈において、リガンドは、タンパク質及び／又は受容体の一部に特異的に結合する分子である。ここに記載される方法及び組成物において有用なリガンドの同族結合パートナーは、一般に、細胞の表面に見出されうる。リガンド：同族パートナー結合は、リガンドを持つ受容体の変化をもたらし、又は例えばシグナル伝達経路の活性化など、生理学的応答を活性化しうる。幾つかの実施態様では、リガンドはゲノムに対して非天然でありうる。場合によっては、リガンドは、少なくとも二種にわたって保存された機能を有する。

【0072】

任意の細胞表面部分がＣＡＲによって標的とされうる。多くの場合、標的は、Ｔ細胞応答の標的としたい細胞上で差次的又は優先的に発現されうる細胞表面ポリペプチドである。Ｔｒｅｇを標的とするには、抗体試薬を、例えば、糖タンパク質Ａ反復優位（ＧＡＲＰ）、潜伏関連ペプチド（ＬＡＰ）、ＣＤ２５、ＣＴＬＡ－４、ＩＣＯＳ、ＴＮＦＲ２、ＧＩＴＲ、ＯＸ４０、４－１ＢＢ、及びＬＡＧ－３に対して標的とすることができる。腫瘍又はがん細胞を標的とするには、抗体ドメインを、ここに記載されるように、例えば、メソテリンに対して標的とすることができる。腫瘍に特異的な腫瘍抗原、例えば、メソテリンを標的とすることは、非腫瘍細胞又は組織への付随的な損傷を回避又は少なくとも制限しながら、腫瘍細胞を標的とする手段を提供することができる。

【0073】

幾つかの実施態様では、ＣＡＲの標的／抗原はメソテリンである。

【0074】

［ヒンジ及び膜貫通ドメイン］
ここに記載される各ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメインを細胞内シグナル伝達ドメインに結合する膜貫通ドメイン、例えば、ヒンジ／膜貫通ドメインを含む。ＣＡＲの結合ドメインの後には場合によっては一又は複数の「ヒンジドメイン」が続き、これが、抗原結合ドメインをエフェクター細胞表面から離れて位置させて、適切な細胞／細胞接触、抗原結合及び活性化を可能にする役割を果たす。ＣＡＲは、場合によっては結合ドメインと膜貫通ドメイン（ＴＭ）との間に一又は複数のヒンジドメインを含む。ヒンジドメインは、天然、合成、半合成、又は組換え源の何れかに由来しうる。ヒンジドメインは、天然に存在する免疫グロブリンヒンジ領域又は改変された免疫グロブリンヒンジ領域のアミノ酸配列を含みうる。ここに記載のＣＡＲでの使用に適した例示的なヒンジドメインは、ＣＤ８（例えば、ＣＤ８α）、ＣＤ４、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、及びＣＤ７などの１型膜タンパク質の細胞外領域に由来するヒンジ領域を含み、これらはこれら分子からの野生型ヒンジ領域でありうるか又は改変されうる。

【0075】

幾つかの実施態様では、ヒンジ領域は、免疫グロブリン様タンパク質（例えば、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、又はＩｇＭ）、ＣＤ２８、又はＣＤ８のヒンジ領域に由来する。幾つかの実施態様では、ヒンジドメインは、ＣＤ８ａヒンジ領域を含む。

【0076】

ここで使用される場合、「膜貫通ドメイン」（ＴＭドメイン）とは、細胞外結合部分を、場合によってはヒンジドメインを介して、細胞内部分（例えば、共刺激ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメイン）に融合させ、ＣＡＲを免疫エフェクター細胞の細胞膜に固定させるＣＡＲの部分を指す。膜貫通ドメインは、細胞の細胞膜を通過するＣＡＲの一般的に疎水性の領域である。ＴＭドメインは、膜貫通タンパク質（例えば、Ｉ型膜貫通タンパク質又は他の膜貫通タンパク質）、人工疎水性配列、又はそれらの組み合わせの膜貫通領域又はその断片でありうる。特定の例がここに提供され、実施例において使用されるが、他の膜貫通ドメインは当業者には明らかであり、技術の代替の実施態様に関連して使用されうる。選択された膜貫通領域又はその断片は、ＣＡＲの意図された機能を妨害しないことが好ましい。

【0077】

タンパク質又はポリペプチドの膜貫通ドメインに関連して使用される場合、「その断片」は、タンパク質を細胞表面に固定し又は付着させるのに十分な膜貫通ドメインの一部を意味する。

【0078】

幾つかの実施態様では、ここに記載のＣＡＲの膜貫通ドメイン又はその断片は、Ｔ細胞受容体のアルファ、ベータ又はゼータ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＫＩＲＤＳ２、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ、ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、４－１ＢＢＬ、ＧＩＴＲ、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＩＬ２Ｒベータ、ＩＬ２Ｒガンマ、ＩＬ７Ｒａ、ＩＴＧＡ１、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＢ７、ＴＮＦＲ２、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ ＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙｌ０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＮＫＧ２Ｄ、及び／又はＮＫＧ２Ｃの膜貫通ドメインから選択される膜貫通ドメインを含む。

【0079】

ここで使用される場合、「ヒンジ／膜貫通ドメイン」とは、ヒンジドメインと膜貫通ドメインの両方を含むドメインを意味する。例えば、ヒンジ／膜貫通ドメインは、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ７、又は４－１ＢＢのヒンジ／膜貫通ドメインに由来しうる。幾つかの実施態様では、ＣＡＲ又はその断片のヒンジ／膜貫通ドメインは、ＣＤ８のヒンジ／膜貫通ドメイン（例えば、配列番号：２４、又はそれらのバリアントの何れか一）に由来するか、又はそれを含む。ＣＤ８は、細胞傷害性Ｔリンパ球の細胞表面に優先的に見出される抗原である。ＣＤ８は免疫系内の細胞間相互作用を媒介し、Ｔ細胞の共受容体として作用する。ＣＤ８は、アルファ（ＣＤ８α又はＣＤ８ａ）及びベータ（ＣＤ８１３又はＣＤ８ｂ）鎖からなる。ＣＤ８ａ配列は、多くの種、例えば、ヒトＣＤ８ａ（ＮＣＢＩ遺伝子番号：９２５）ポリペプチド（例えば、ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ＿００１１３９３４５．１）及びｍＲＮＡ（例えば、ＮＣＢＩ参照配列ＮＭ＿０００００２．１２）に対して知られている。ＣＤ８は、天然に存在するバリアント、分子、及びその対立遺伝子を含む、ヒトＣＤ８を意味しうる。態様の何れかの幾つかの実施態様において、例えば、獣医学的用途では、ＣＤ８は、例えば、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ブタなどのＣＤ８を意味しうる。幾つかの実施態様では、ＣＡＲ又はその断片のヒンジ／膜貫通ドメインは、ＣＤ２８のヒンジ／膜貫通ドメインに由来するか、又はＣＤ２８のヒンジ／膜貫通ドメインを含む（例えば、配列番号：３８のアミノ酸配列又はそのバリアントを含むか、或いは配列番号：３９の核酸配列によってコードされる）。

【0080】

ヒトＣＤ８のホモログ及び／又はオルソログは、例えばＮＣＢＩオルソログ検索機能を使用して、又は参照ＣＤ８配列に類似する配列について所与の種の利用可能な配列データを検索することにより、当業者によってそのような種について容易に同定される。

【0081】

幾つかの実施態様では、ＣＤ８ヒンジ及び膜貫通配列は、配列番号：２４のアミノ酸配列に対応し；或いは配列番号：２４の配列を含み；或いは配列番号：２４の配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は少なくとも１００％の配列同一性を持つ配列を含む。

【0082】

［共刺激ドメイン］
ここに記載の各ＣＡＲは、場合によっては、一又は複数の共刺激分子の細胞内ドメイン又は共刺激ドメインを含む。ここで使用される場合、「共刺激ドメイン」という用語は、共刺激分子の細胞内シグナル伝達ドメインを意味する。共刺激分子は、抗原に結合するとＴリンパ球の効率的な活性化と機能に必要とされる第二のシグナルを提供する抗原受容体又はＦｃ受容体以外の細胞表面分子である。共刺激ドメインは、例えば、４－１ＢＢ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、又はＯＸ４０の共刺激ドメインでありうる。一例では、４－１ＢＢ細胞内ドメイン（ＩＣＤ）を使用することができる（例えば、以下及び配列番号：２５、又はそれらのバリアントを参照）。そのような共刺激分子の追加の例示的な例には、ＣＡＲＤ１１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ４）、ＣＤ２２３（ＬＡＧ３）、ＣＤ２７０（ＨＶＥＭ）、ＣＤ２７３（ＰＤ－Ｌ２）、ＣＤ２７４（ＰＤ－Ｌ１）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＡＰ１０、ＬＡＴ、ＮＫＤ２Ｃ ＳＬＰ７６、ＴＲＩＭ、及びＺＡＰ７０が含まれる。幾つかの実施態様では、細胞内ドメインは、４－１ＢＢの細胞内ドメインである。４－１ＢＢ（ＣＤ１３７；ＴＮＦＲＳ９）は、活性化によって誘導される共刺激分子であり、免疫応答の重要な調節因子である。

【0083】

４－１ＢＢは、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体スーパーファミリーのメンバーである、ＣＤ１３７としても知られる膜受容体タンパク質である。４－１ＢＢは活性化Ｔリンパ球に発現される。４－１ＢＢ配列は、多くの種に対して知られており、例えば、ＴＮＦＲＳＦ９（ＮＣＢＩ遺伝子２５番号：３６０４）及びｍＲＮＡ（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００１５６１．５）としても知られているヒト４－１ＢＢである。４－１ＢＢは、天然に存在するバリアント、分子、及びそれらの対立遺伝子を含む、ヒト４－１ＢＢを指しうる。態様の何れかの幾つかの実施態様において、例えば、獣医学的用途では、４－１ＢＢは、例えば、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ブタ等の４－１ＢＢを指しうる。ヒト４－１ＢＢのホモログ及び／又はオルソログは、例えばＮＣＢＩオルソログ検索機能を使用して、又は参照４－１ＢＢ配列に類似する配列について所与の種の利用可能な配列データを検索することにより、当業者によってそのような種について容易に同定される。

【0084】

幾つかの実施態様では、細胞内ドメインは４－１ＢＢの細胞内ドメインである。幾つかの実施態様では、４－１ＢＢ細胞内ドメインは、配列番号：２５から選択されるアミノ酸配列に対応し；或いは配列番号：２５から選択される配列を含み；或いは配列番号：２５から選択される配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は少なくとも１００％の配列同一性を含む。

【0085】

［細胞内シグナル伝達ドメイン］
ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインの特性は、当該技術分野で知られているように、またここに開示されているように、様々でありうるが、キメラ標的／抗原結合ドメインは、標的細胞の表面上の標的／抗原にキメラ標的／抗原結合ドメインが結合すると、受容体をシグナル伝達活性化に対して感受性にする。

【0086】

細胞内シグナル伝達ドメインに関し、いわゆる「第一世代」ＣＡＲには、抗原結合時にＣＤ３ゼータシグナルのみを提供するものが含まれる。いわゆる「第二世代」ＣＡＲには、共刺激（例えば、ＣＤ２８又はＣＤ１３７）と活性化（ＣＤ３ゼータ）ドメインの両方を提供するものが含まれ、いわゆる「第三世代」ＣＡＲには、複数の共刺激（例えば、ＣＤ２８及びＣＤ１３７）ドメインと活性化ドメイン（例えば、ＣＤ３ゼータ）を提供するものが含まれる。様々な実施態様では、ＣＡＲは、標的／抗原に対して高い親和性又は結合活性を有するように選択され－例えば、抗体由来の標的又は抗原結合ドメインは、天然に存在するＴ細胞受容体よりも一般に標的抗原に対して高い親和性及び／又は結合活性を有する。この特性は、抗体に対して選択できる高い特異性と相まって、ＣＡＲ Ｔ細胞による高度に特異的なＴ細胞ターゲティングをもたらす。

【0087】

ここに記載されるＣＡＲは、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。「細胞内シグナル伝達ドメイン」は、標的抗原への効果的なＣＡＲ結合のメッセージを免疫エフェクター細胞の内部に伝達して、エフェクター細胞機能、例えば活性化、サイトカイン産生、増殖及び細胞傷害性活性、例えばＣＡＲに結合した標的細胞への細胞傷害性因子の放出、又は細胞外ＣＡＲドメインへの抗原結合後に誘発される他の細胞応答を誘発することに関与するＣＡＲポリペプチドの部分を意味する。様々な例では、細胞内シグナル伝達ドメインはＣＤ３ゼータに由来する（例えば、以下を参照）。当該技術において特に有用である免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）を含む細胞内シグナル伝達ドメインの更なる非限定的な例には、ＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３θ、ＣＤ３σ、ＣＤ３η、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ；ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、及びＣＤ６６ｄに由来するものが含まれる。

【0088】

ＣＤ３は、適切な共刺激（例えば、共刺激分子の結合）と同時にエンゲージされると、Ｔリンパ球活性化を促進するＴ細胞共受容体である。ＣＤ３複合体は４つの異なる鎖からなり；哺乳動物ＣＤ３は、ＣＤ３γ鎖、ＣＤ３δ鎖、及び２つのＣＤ３ε鎖からなる。

【0089】

これらの鎖は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）として知られている分子及びＣＤ３ζと会合して、Ｔリンパ球において活性化シグナルを生成する。完全ＴＣＲ複合体は、ＴＣＲ、ＣＤ３ζ、及び完全ＣＤ３複合体を含む。

【0090】

何れかの態様の幾つかの実施態様では、ここに記載のＣＡＲポリペプチドは、例えばＩＴＡＭ変異ＣＤ３ζ、ＣＤ３η、又はＣＤ３θなどのＣＤ３ζのバリアントを含む、ＣＤ３ζ由来の免疫受容活性化チロシンモチーフ又はＩＴＡＭを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む。何れかの態様の幾つかの実施態様では、ＩＴＡＭは、ＣＤ３ζのＩＴＡＭ（ＩＴＡＭ３）の３つのモチーフを含む。何れかの態様の幾つかの実施態様では、ＣＤ３ζのＩＴＡＭの３つのモチーフは変異しておらず、従って、天然又は野生型の配列を含む。幾つかの実施態様では、ＣＤ３ζ配列は、ここに提供された配列に記載されているＣＤ３ζの配列、例えば、配列番号：２６～２７、又はそれらのバリアントの一つのＣＤ３ζ配列を含む。

【0091】

例えば、ここに記載されるＣＡＲポリペプチドは、ＣＤ３ζの細胞内シグナル伝達ドメインを含む。幾つかの実施態様では、ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号：２６～２７の何れか一つから選択されるアミノ酸配列に対応し；或いは配列番号：２６～２７の何れか一つから選択される配列を含み；或いは配列番号：２６～２７の何れか一つから選択される配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は少なくとも１００％の配列同一性を持つ配列を含む。

【0092】

ここに記載される個々のＣＡＲ及び他のコンストラクト成分は、当業者によって決定されうるように、互いに一緒に使用され得、ここに記載される様々なコンストラクトに入れ替えられうる。これらの成分のそれぞれは、ここに記載された対応する配列の何れか、又はそれらのバリアントを含みうるか、又はそれらからなりうる。

【0093】

ＣＡＲ及びＣＡＲ Ｔ細胞のより詳細な説明は、Ｍａｕｓ等，Ｂｌｏｏｄ １２３：２６２４－２６３５，２０１４；Ｒｅａｒｄｏｎ等，Ｎｅｕｒｏ－Ｏｎｃｏｌｏｇｙ １６：１４４１－１４５８，２０１４；Ｈｏｙｏｓ等，Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ ９７：１６２２，２０１２；Ｂｙｒｄ等，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．３２：３０３９－３０４７，２０１４；Ｍａｈｅｒ等，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ６９：４５５９－４５６２，２００９；及びＴａｍａｄａ等，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１８：６４３６－６４４５，２０１２に見出すことができ；これらの各々はその全体が出典明示によりここに援用される。

【0094】

［シグナルペプチド］
幾つかの実施態様では、ここに記載されるＣＡＲポリペプチドは、シグナルペプチドを含む。シグナルペプチドは、細胞外ドメインを有するか、又は分泌される任意のタンパク質に由来しうる。ここに記載されるＣＡＲポリペプチドは、当該技術分野で知られている任意のシグナルペプチドを含みうる。幾つかの実施態様では、ＣＡＲポリペプチドは、ＣＤ８シグナルペプチド、例えば、配列番号：２９のアミノ酸配列に対応し、或いは配列番号：２９のアミノ酸配列を含み、或いは配列番号：２９の配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は少なくとも１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＣＤ８シグナルペプチドを含む。

【0095】

更なる実施態様では、ここに記載のＣＡＲポリペプチドは、ここに記載のシグナルペプチドの一つ、例えば配列番号：２９のＣＤ８シグナルペプチド又は配列番号：３０のＩｇＫシグナルペプチドを場合によっては除外しうる。

【0096】

［リンカードメイン］
幾つかの実施態様では、ＣＡＲは、リンカードメインを更に含む。ここで使用される場合、「リンカードメイン」とは、ここに記載のＣＡＲのドメイン／領域の何れかを一緒に連結する、約２から１００アミノ酸長のオリゴ又はポリペプチド領域を意味する。幾つかの実施態様では、リンカーは、隣接するタンパク質ドメインが互いに対して自由に移動できるように、グリシン及びセリンなどの可動性残基を含むか、又はそれらから構成されうる。本開示のＣＡＲに有用なリンカー配列は、２から１００アミノ酸長、５から５０アミノ酸長、１０から１５アミノ酸長、１５から２０アミノ酸長、又は１８から２０アミノ酸長であり得、当該分野で知られている任意の適切なリンカーを含む。例えば、本開示のＣＡＲに有用なリンカー配列は、限定されないが、グリシン／セリンリンカー、例えば、ＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳ（配列番号：３１）及びＧｌｙ４Ｓｅｒ（Ｇ４Ｓ）（配列番号：４８）リンカー、例えば（Ｇ４Ｓ）３（ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号：３２））及び（Ｇ４Ｓ）４（ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号：３３２））；その内容がその全体において出典明示によりここに援用されるＷｈｉｔｌｏｗ等，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．６（８）：９８９－９５，１９９３によって記載されているＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号：３４）のリンカー配列；その内容がその全体において出典明示によりここに援用されるＡｎｄｒｉｓ－Ｗｉｄｈｏｐｆ等，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ．Ｐｒｏｔｏｃ．２０１１（９），２０１１によって記載されているＧＧＳＳＲＳＳＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号：３５）のリンカー配列；並びにその内容がその全体において出典明示によりここに援用されるＳｂｌａｔｔｅｒｏ等，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１８（１）：７５－８０，２０００によって記載されている、例えば、Ｃｒｅ－Ｌｏｘ組換え部位を含むコード化配列又はエピトープタグのような、機能性が追加されたリンカー配列を含む。二つの隣接ドメインが互いに立体的に干渉しないようにすることが望ましい場合は、より長いリンカーが使用されうる。

【0097】

更に、リンカーは、切断可能又は切断不可能でありうる。切断可能なリンカーの例には、２Ａリンカー（例えば、Ｐ２Ａ及びＴ２Ａ（配列番号：３７））、２Ａ様リンカー又はそれらの機能的等価物及びそれらの組み合わせが含まれる。

【0098】

例えば、Ｐ２Ａリンカー配列は、配列番号：３８のアミノ酸配列に対応することができる。様々な例では、ここに記載されている配列を有するリンカー又はそのバリアントが使用される。特定の位置のコンストラクトにおける特定のリンカーの表示は、そのリンカーのみがそこで使用できることを意味しないことを理解されたい。むしろ、当業者により決定されうるように、異なるリンカー配列（例えば、Ｐ２Ａ及びＴ２Ａ）は、（例えば、本発明のコンストラクトの文脈において）互いに交換されうる。幾つかの実施態様では、リンカー領域は、Ｔｈｏｓｅａ ａｓｉｇｎａウイルスに由来するＴ２Ａである。この技術において使用されうるリンカーの非限定的な例には、Ｔ２Ａ、Ｐ２Ａ、Ｅ２Ａ、ＢｍＣＰＶ２Ａ、及びＢｍＩＦＶ２Ａが含まれる。これらのようなリンカーは、以下に記載するもののようなポリタンパク質の状況において使用できる。例えば、それらは、ポリタンパク質のＣＡＲ成分を、ポリタンパク質の治療薬（例えば、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体（例えば、ラクダ科動物抗体）、又は二重特異性抗体（例えば、ＴＥＡＭ）などの抗体）成分から分離するために使用されうる（以下を参照）。

【0099】

［レポーター分子］
幾つかの実施態様では、ここに記載されるＣＡＲは、場合によっては、例えば、非侵襲的画像化（例えば、陽電子放射断層撮影ＰＥＴスキャン）を可能にするために、レポーター分子を更に含む。レポーター分子を含む二重特異性ＣＡＲでは、第一細胞外結合ドメインと第二細胞外結合ドメインは、異なる又は同じレポーター分子を含みうる。二重特異性ＣＡＲＴ細胞では、第一ＣＡＲと第二ＣＡＲは異なる又は同じレポーター分子を発現しうる。別の実施態様では、ここに記載されるＣＡＲは、単独で又は基質もしくは化学物質（例えば、９－［４－［１８Ｆ］フルオロ－３］－（ヒドロキシメチル）ブチル］グアニン（［１８Ｆ］ＦＨＢＧ））と組み合わせて画像化されうるレポーター分子（例えば、ハイグロマイシンホスホトランスフェラーゼ（ｈｐｈ））を更に含む。別の実施態様では、ここに記載されるＣＡＲは、非侵襲的技術（例えば、６４Ｃｕ２＋で機能化された金ナノ粒子（ＧＮＰ））を使用して容易に画像化できるナノ粒子を更に含む。非侵襲的イメージングのためのＣＡＲ Ｔ細胞の標識化は、例えば、出典明示によりその全体がここに援用されるＢｈａｔｎａｇａｒ等，Ｉｎｔｅｇｒ．Ｂｉｏｌ．（Ｃａｍｂ）．５（１）：２３１－２３８，２０１３、及びＫｅｕ等，Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．１８；９（３７３），２０１７に概説されている。

【0100】

幾つかの実施態様では、ＧＦＰ及びｍＣｈｅｒｒｙを、Ｔ細胞（例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞）上で発現されたＣＡＲを画像化するために蛍光タグとして使用することができる。当該技術分野で知られている本質的に如何なる蛍光タンパク質も、この目的のための蛍光タグとして使用することができることが期待される。臨床応用では、ＣＡＲに蛍光タグ又は蛍光タンパク質を含める必要はない。従って、ここに提供される特定のコンストラクトのそれぞれの例では、コンストラクト中に存在する任意のマーカーを除去することができる。本開示は、マーカーを伴うか又は伴わないコンストラクトを含む。従って、特定のコンストラクトがここで参照される場合、（例えば、ＨＨＨＨＨＨ（配列番号：３９）のヒスチジンタグなどのヒスチジンタグを含む）マーカー又はタグの有無にかかわらず、本開示に含まれていると考えることができる。

【0101】

［抗体試薬］
様々な実施態様では、ここに記載のＣＡＲは、細胞外標的結合ドメインとして抗体試薬又はその抗原結合ドメインを含む。

【0102】

ここで使用される場合、「抗体試薬」という用語は、少なくとも一の免疫グロブリン可変ドメイン又は免疫グロブリン可変ドメイン配列を含み、所与の抗原に特異的に結合するポリペプチドを意味する。幾つかの実施態様では、抗体試薬は、抗体又は抗体の抗原結合ドメインを含むポリペプチドを含みうる。態様の何れかの幾つかの実施態様では、抗体試薬は、モノクローナル抗体又はモノクローナル抗体の抗原結合ドメインを含むポリペプチドを含みうる。例えば、抗体は、重（Ｈ）鎖可変領域（ここではＶＨと略される）と、軽（Ｌ）鎖可変領域（ここではＶＬと略される）を含みうる。幾つかの実施態様では、抗体は、二つの重（Ｈ）鎖可変領域と二つの軽（Ｌ）鎖可変領域を含む。幾つかの実施態様では、抗体試薬は二重特異性抗体試薬である。

【0103】

「抗体試薬」という用語は、抗体の抗原結合断片（例えば、単鎖抗体、Ｆａｂ及びｓＦａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ、ＣＤＲ、及びドメイン抗体（ｄＡｂ）断片（例えば、ｄｅ Ｗｉｌｄｔ等，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２６（３）：６２９－６３９，１９９６を参照のこと；これは出典明示によりその全体がここに援用される））並びに完全抗体を包含する。抗体は、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、又はＩｇＭ（並びにそれらのサブタイプと組み合わせ）の構造的特徴を有しうる。抗体は、マウス、ウサギ、ブタ、ラット、及び霊長類（ヒト及び非ヒト霊長類）及び霊長類化抗体を含む、任意の供給源由来でありうる。抗体には、ミディボディ、ヒト化抗体、キメラ抗体などもまた含まれる。幾つかの実施態様では、ＣＡＲは抗体試薬を含む。幾つかの実施態様では、治療薬は抗体試薬を含む。

【0104】

完全ヒト抗体結合ドメインは、例えば、当業者に知られた方法を使用して、ファージディスプレイライブラリーから選択することができる。更に、抗体試薬には、ラクダ科動物抗体などの単一ドメイン抗体が含まれる。

【0105】

ＶＨ及びＶＬ領域は、「フレームワーク領域」（「ＦＲ」）と呼ばれるより保存された領域が散在する、「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）と呼ばれる超可変性領域に更に分割されうる。フレームワーク領域とＣＤＲの範囲は正確に定義されている（Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．等（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５版，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２，及びＣｈｏｔｈｉａ等，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７，１９８７を参照のこと；これらのそれぞれは、出典明示によりその全体がここに援用される）。各ＶＨ及びＶＬは、典型的には、３つのＣＤＲと４つのＦＲで構成され、アミノ末端からカルボキシ末端に向けて次の順で配置される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。

【0106】

幾つかの実施態様では、抗体又は抗体試薬はヒト抗体又は抗体試薬ではない（すなわち、抗体又は抗体試薬はマウスである）が、ヒト化されている。「ヒト化抗体又は抗体試薬」とは、タンパク質配列レベルで修飾されて、ヒトにおいて天然に産生される抗体又は抗体試薬バリアントとのその類似性を高める非ヒト抗体又は抗体試薬を意味する。抗体をヒト化する一つのアプローチは、マウス又は他の非ヒトＣＤＲをヒト抗体フレームワークに移植することを採用している。

【0107】

幾つかの実施態様では、ＣＡＲの細胞外標的結合ドメインは、可動性リンカーペプチドを介して、抗体、一般的にはモノクローナル抗体のＶＨ及びＶＬドメインを融合することにより作製される単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片を含むか、又は本質的にそれからなる。様々な実施態様では、ｓｃＦｖは、膜貫通ドメイン及びＴ細胞受容体細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば、ここに記載されるような改変された細胞内シグナル伝達ドメインに融合される。別の実施態様では、ＣＡＲの細胞外標的結合ドメインはラクダ科動物抗体を含む。

【0108】

幾つかの実施態様では、ＣＡＲ、抗体、又は抗原結合ドメインはメソテリンに結合する。メソテリン配列は、多くの種、例えばヒトメソテリン（ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１０２３２）及びポリペプチド（例えば、プレタンパク質ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００５８１４．２）について知られている。メソテリンは、その天然に存在するバリアント、分子、及び対立遺伝子を含むヒトメソテリンを意味しうる。ヒトメソテリンのホモログ及び／又はオルソログは、当業者によって、例えばメソテリンオルソログ検索機能を使用するか、又は参照メソテリン配列に類似する配列について所与の種について利用可能な配列データを検索することにより、そのような種について容易に同定される。幾つかの実施態様では、メソテリンに特異的に結合するＣＡＲ、抗体、又は抗原結合ドメインは、例えばヒトメソテリンに加えて、ヒトメソテリンのホモログ及び／又はオルソログに特異的に結合する。

【0109】

「抗メソテリン抗体」、「メソテリンに結合する抗体」、及び「メソテリンに特異的に結合する抗体」という用語は、抗体が、メソテリンを標的とすることで予防、診断及び／又は治療薬として有用であるように十分な親和性でメソテリンに結合することができる抗体試薬を指す。一実施態様では、無関係の非メソテリンタンパク質への抗メソテリン抗体の結合の度合いは、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定して、メソテリンへの抗体の結合の約１０％未満である。所定の実施態様では、メソテリンに結合する抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、又は≦０．１ｎＭ（例えば１０^－６Ｍ以下、１０^－７Ｍ、又は１０^－８Ｍ以下、例えば１０^－６Ｍから１０^－９Ｍ）の解離定数（Ｋ_Ｄ）を有する。所定の実施態様では、メソテリンに結合する抗体は、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭ（例えば１０^－９、１０^－１０、１０^－１１、又は１０^－１２Ｍ以下、例えば１０^－９Ｍから１０^－１２Ｍ）の解離定数（Ｋ_Ｄ）を有する。

【0110】

幾つかの実施態様では、抗メソテリン抗体試薬は、ＭＧＨｍｅｓｏ１である。幾つかの実施態様では、抗メソテリン抗体試薬は、配列番号：１３～１８の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むか、又は配列番号：１３～１８の所与のＣＤＲに対して１、２、若しくは３以下のアミノ酸置換を有するＣＤＲ配列を含む。幾つかの実施態様では、抗メソテリン抗体試薬は、配列番号：１９～２０の可変重鎖（ＶＨ）及び／又は可変軽鎖（ＶＬ）を含むか、或いは配列番号：１９～２０の配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又はそれ以上の配列同一性を有するＶＨ及び／又はＶＬ配列を含む。ＶＨはＶＬのＮ末端に配置されうるか、又はＶＬがＶＨのＮ末端に配置されうる。

【0111】

幾つかの実施態様では、抗体試薬は、ダクリズマブ又はその抗原結合断片を含む。抗体試薬は、ここに記載の又は当該技術分野で知られている任意の他の抗原を標的とすることもできる。ここに記載のように、任意選択的に抗体試薬を送達することに加えて、本開示のＣＡＲＴ細胞は、限定されないが、サイトカイン及び毒素を含む他の治療薬を送達するために使用することができる。幾つかの実施態様では、治療試薬は、上皮増殖因子受容体バリアントＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、ＣＤ１９、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、又はＩＬ－１３受容体アルファ２（ＩＬ－１３Ｒα２）の何れか一つに結合する抗体試薬を含む。幾つかの実施態様では、治療試薬は、上皮増殖因子受容体バリアントＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、ＣＤ１９、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、又はＩＬ－１３受容体アルファ２（ＩＬ－１３Ｒα２）のうちの二つ以上に結合する抗体試薬を含む。

【0112】

幾つかの実施態様では、抗体試薬は腫瘍関連抗原に結合する。追加の腫瘍抗原又は目的の他の抗原の非限定的な例には、活性化線維芽細胞マーカー、ＣＤ１９、ＣＤ３７、ＢＣＭＡ（腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１７（ＴＮＦＲＳＦ１７）；ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：６０８；ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ００１１８３．２及びｍＲＮＡ（例えば、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００１１９２．２））、ＣＥＡ、未熟ラミニン受容体、ＴＡＧ－７２、ＨＰＶ Ｅ６及びＥ７、ＢＩＮＧ－４、カルシウム活性化塩素イオンチャネル２、サイクリンＢ１、９Ｄ７、Ｅｐ－ＣＡＭ、ＥｐｈＡ３、１５ｈｅｒ２／ｎｅｕ、テロメラーゼ、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖｉｉｉ ＳＡＰ－１、サバイビン、ＢＡＧＥファミリー、ＣＡＧＥファミリー、ＧＡＧＥファミリー、ＭＡＧＥファミリー、ＳＡＧＥファミリー、ＸＡＧＥファミリー、ＮＹ－ＥＳＯ－１／ＬＡＧＥ－１、ＰＲＡＭＥ、ＳＳＸ－２、Ｍｅｌａｎ－ＮＭＡＲＴ－１、ｇｐ１００／ｐｍｅｌ１７、チロシナーゼ、ＴＲＰ－１／－２、ＭＣ１Ｒ、ＢＲＣＡ１／２、ＣＤＫ４、ＭＡＲＴ－２、ｐ５３、Ｒａｓ、ＭＵＣ１、ＴＧＦ－ＢｅｔａＲＩＩ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１３Ｒａ２、及びＣＳＦ１Ｒが含まれる。幾つかの実施態様では、活性化線維芽細胞マーカーは、αＳＭＡ（ＡＣＴＡ２）、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、血小板由来増殖因子受容体α及びβ（ＰＤＧＦＲＡ、ＰＤＧＦＲＢ）、線維芽細胞特異的タンパク質１（ＦＳＰ１／Ｓ１００Ａ４）、エンドグリン（ＥＮＧ）、トランスジェリン（ＴＡＧＬＮ）、テネイシンＣ（ＴＮＣ）、ペリオスチン（ＰＯＳＴＮ）、コンドロイチン硫酸プロテオグリカン４又はニューロングリア抗原２（ＣＳＰＧ４／ＮＧ２）、ポドプラニン（ＰＤＰＮ）、又はオステオポンチン（ＳＰＰ１）の何れか一つを含む。

【0113】

［多重特異性抗体試薬］
幾つかの実施態様では、抗体試薬は多重特異性であり、二つ以上の標的抗原に特異的に結合することができる。幾つかの実施態様では、抗体試薬は二重特異性である（すなわち、二重特異性抗体試薬）。幾つかの実施態様では、二重特異性抗体試薬は、第一の抗原（例えば、メソテリン）と第二の抗原に特異的に結合する。幾つかの実施態様では、第二の抗原は腫瘍抗原である。幾つかの実施態様では、第二の抗原は、メソテリン発現がん細胞によって（例えば、その表面上に）発現される。幾つかの実施態様では、第二の抗原は、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ３７、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、上皮細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ）、ＥｐｈＡ３、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＭＵＣ１、ＴＧＦ－βＲＩＩ、コロニー刺激因子１受容体（ＣＳＦ１Ｒ）、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、又はここに記載の任意の他の腫瘍抗原である。幾つかの実施態様では、多重特異性抗体試薬は、ここに記載されたような、ＴＥＡＭである。

【0114】

多重特異性抗体試薬は、第一の抗原（例えば、メソテリン）に結合する全長抗体又はその抗体断片を含む第一の結合ドメインと、第二の抗原（例えば、腫瘍抗原）に結合する異なる全長抗体又はその抗体断片を含む第二の結合ドメインとを含みうる。第一及び第二の結合ドメインは、リンカー配列、例えばここに記載のリンカー配列によって連結されうる。

【0115】

［ＣＡＲ Ｔ細胞によって送達される治療薬］
上記のように、本開示のＣＡＲ Ｔ細胞は、場合によっては、治療薬、例えば、抗体試薬又は他の治療分子、例えばサイトカインを腫瘍（すなわち、腫瘍微小環境）に送達するために使用されうる。幾つかの実施態様では、サイトカインはインターフェロン、インターロイキン、又は成長因子である。幾つかの実施態様では、治療薬は、ＣＡＲと同じ核酸分子によってコードされ、従って、ＣＡＲと治療薬、例えば、抗体試薬又はサイトカインの両方を発現するように、細胞（例えば、Ｔ細胞）の形質導入を促進する。そのような例では、治療薬（例えば、抗体試薬又はサイトカイン）は、例えば、切断可能なリンカー配列（例えば、２Ａリボソームスキップ配列及び配列内リボソーム進入部位（ＩＲＳ）、又は２Ａリンカー（２Ａペプチド）、例えば、Ｐ２Ａ又はＴ２Ａ；上記を参照）によってＣＡＲ（及び任意選択的に他のタンパク質、例えばマーカー）から分離されるように発現されうる。幾つかの実施態様では、治療薬は、ＣＡＲとは異なる核酸分子上にコードされる。

【0116】

幾つかの実施態様では、治療薬（例えば、抗体試薬又はサイトカイン）は、ＣＡＲと同じプロモーターの制御下で（例えば、ＥＦ１αプロモーターにより）発現させることができ、構成的に発現させることができる。幾つかの実施態様では、治療薬（例えば、抗体試薬又はサイトカイン）は、誘導性プロモーター、例えば、Ｔ細胞活性化時に発現されるプロモーター（例えば、ＮＦＡＴプロモーター）の制御下で発現される。そのような誘導性プロモーターは、例えば、Ｔ細胞活性化時にのみ、よって、例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞が、そこでの抗体産生の限定が有利でありうる腫瘍微小環境内にある場合にのみ、抗体が発現されることを確実にするために使用されうる。当該技術分野において理解されているように、ＣＡＲコード配列は、本開示内の様々なベクターデザインにおいて治療薬（例えば、抗体試薬又はサイトカイン）コード配列に対して５’又は３’でありうる。

【0117】

幾つかの実施態様では、治療薬はＩｇＫシグナルペプチド、例えば、配列番号：３０のアミノ酸配列に対応するか、又は配列番号：３０のアミノ酸配列を含むか、又は配列番号：３０の配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は少なくとも１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＩｇＫシグナルペプチドを含む。

【0118】

様々な例では、治療薬は抗体試薬である。（例えば、ＣＡＲと同じ核酸分子から）ＣＡＲ Ｔ細胞内で発現される抗体試薬は、ここに記載される、単鎖抗体（例えば、ｓｃＦｖ）又は単一ドメイン抗体（例えば、ラクダ科動物抗体）でありうる。単鎖抗体の場合、軽鎖（Ｌ）と重鎖（Ｈ）はＬ－Ｈ又はＨ－Ｌの順（Ｎ末端からＣ末端）であり得、場合によってはリンカー（例えば、グリシン系リンカー）によって互いに分離されうる。更なる例では、抗体試薬は、例えば、以下に記載されるＴ細胞エンゲージ分子（ＴＥＡＭ）を含む二重特異性抗体である。

【0119】

［Ｔ細胞エンゲージ抗体分子（ＴＥＡＭ）］
幾つかの実施態様では、ここに記載のＣＡＲＴ細胞によって送達される治療薬は、Ｔ細胞エンゲージ分子（ＴＥＡＭ）（文献では二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー又はＢｉＴＥ^ＴＭとも呼ばれる）である。「Ｔ細胞エンゲージ分子」、「ＴＥＡＭ抗体コンストラクト」、又は「ＴＥＡＭ」とは、それぞれがタンデムに連結された単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含むポリペプチドを意味する。任意選択的に、ｓｃＦｖはリンカー（例えば、グリシンリッチリンカー）によって連結される。ＴＥＡＭの一方のｓｃＦｖがＴ細胞受容体（ＴＣＲ）（例えば、ＣＤ３￡サブユニット）に結合し、他方が標的抗原（例えば、腫瘍抗原）に結合する。そのような分子は、Ｔ細胞抗原に結合することによって（例えば、ＣＤ３に結合することによって）、並びに標的抗原、例えば腫瘍抗原に結合することによって、Ｔ細胞を標的とすることができる。例示的な腫瘍抗原にはメソテリン（以下をまた参照）が含まれる。ＴＥＡＭは、例えば腫瘍微小環境におけるＴ細胞応答を増強するために使用できる。ＴＥＡＭの二つの成分は、ここに記載のリンカー（例えば、グリシン系リンカー）によって場合によっては互いに分離され得、また、例えば、抗標的抗原成分のＮ末端に抗ＣＤ３成分を、又はその逆の何れかの配向で連結されうる。ＴＥＡＭの抗ＣＤ３成分又は抗標的抗原成分には、ここに記載の抗体試薬の何れかを含めることができる。

【0120】

ＣＡＲＴ細胞が分泌したＴＥＡＭは、例えば、ＣＡＲＴ細胞自体を刺激し、又は非特異的バイスタンダーＴ細胞を腫瘍に対してリダイレクトすることによってパラ分泌的に作用し、よってＣＡＲＴ細胞免疫療法の抗腫瘍効果を増強しうる。ＣＡＲＴ細胞媒介性ＴＥＡＭ分泌は、腫瘍微小環境にＴＥＡＭ分泌を方向づけることによって、全身組織における望ましくないＴＥＡＭ活性のリスクの低減を可能にしうる。例示的なＴＥＡＭコンストラクトを以下に提供するが、ここに記載のもの以外のＴＥＡＭもまた本開示のＣＡＲ Ｔ細胞及び方法に有用でありうる。

【0121】

例示的なＴＥＡＭは、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ及び抗ＣＤ３ ｓｃＦｖを含む抗ＣＤ１９ ＴＥＡＭである（ここではＴＥＡＭ－ＣＤ１９とも呼ばれる）。抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖは、ＶＨ－ＶＬ配向、又はＶＬ－ＶＨ配向に配置することができる。所定の実施態様では、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖは、配列番号：３７のアミノ酸配列に対応するか、又は配列番号：３７のアミノ酸配列を含むか、又は配列番号：３７のアミノ酸配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又はそれ以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0122】

幾つかの実施態様では、ここに記載のＴＥＡＭの何れかの抗ＣＤ３ ｓｃＦｖは、ＶＨ－ＶＬ配向、又はＶＬ－ＶＨ配向に配置することができる。幾つかの実施態様では、抗ＣＤ３ ＶＨは、配列番号：９のアミノ酸配列、又は配列番号：９のアミノ酸配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又はそれ以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施態様では、抗ＣＤ３ ＶＬは、配列番号：１０のアミノ酸配列、又は配列番号：１０のアミノ酸配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又はそれ以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0123】

幾つかの実施態様では、ＴＥＡＭは、反復優位糖タンパク質Ａ（ＧＡＲＰ）、潜在関連ペプチド（ＬＡＰ）、ＣＤ２５、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ－４）に結合する抗体を含む。幾つかの実施態様では、ＴＥＡＭは、配列番号：１１～１２の何れか一つのアミノ酸配列、又は配列番号：１１～１２の何れか一つのアミノ酸配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又はそれ以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0124】

幾つかの実施態様では、ＴＥＡＭは、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）に結合する抗体試薬を含む。

【0125】

幾つかの実施態様では、抗ＦＡＰ抗体試薬はシブロツズマブである。幾つかの実施態様では、抗ＦＡＰ抗体試薬は、配列番号：６の可変重鎖（ＶＨ）を含むか、又は配列番号：６に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、若しくはそれ以上の配列同一性を有するＶＨ配列を含む。幾つかの実施態様では、抗ＦＡＰ抗体試薬は、配列番号：７の可変軽鎖（ＶＬ）を含むか、又は配列番号：７の配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、若しくはそれ以上の配列同一性を有するＶＬ配列を含む。ＶＨはＶＬのＮ末端に配置されてもよく、又はＶＬはＶＨのＮ末端に配置されてもよい。幾つかの実施態様では、抗ＦＡＰ抗体試薬は、配列番号：８を含むか、又は配列番号：８と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、若しくはそれ以上の配列同一性を有する配列を含む。

【0126】

幾つかの実施態様では、ＴＥＡＭは、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）に結合する抗体試薬と、ＣＤ３に結合する抗体試薬とを含む。幾つかの実施態様では、ＦＡＰ抗体試薬は、ＣＤ３ ｓｃＦｖの上流にコードされる。

【0127】

幾つかの実施態様では、ＣＡＲ及びＴＥＡＭは、同じポリペプチド上にコードされる。幾つかの実施態様では、ＣＡＲ及びＴＥＡＭは、同じポリペプチド上にコードされ、上記のようにリンカードメインによって分離される。幾つかの実施態様では、リンカードメインは切断可能である。幾つかの実施態様では、ＣＡＲは抗メソテリンＣＡＲであり、ＴＥＡＭは線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）及びＣＤ３ ＴＥＡＭである。幾つかの実施態様では、ＣＡＲは抗メソテリンＣＡＲであり、ＴＥＡＭは抗ＦＡＰ ｓｃＦｖ及び抗ＣＤ３ ｓｃＦｖを含む。幾つかの実施態様では、ＣＡＲ及びＴＥＡＭポリペプチドは、配列番号：１の少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又はそれ以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施態様では、ＣＡＲ及びＴＥＡＭポリペプチドは、アミノ酸配列配列番号：１を含む。幾つかの実施態様では、ＣＡＲ及びＴＥＡＭポリペプチドは、アミノ酸配列配列番号：１からなる。

【0128】

幾つかの実施態様では、ＴＥＡＭは、ＴＥＡＭが存在しない場合における免疫細胞のがんへの結合と比較して、免疫細胞のがんへの結合を増強する。幾つかの実施態様では、ＴＥＡＭは、ＴＥＡＭがなく、免疫細胞上の抗原に結合するＣＡＲがない場合における免疫細胞のがんへの結合と比較して、免疫細胞のがんへの結合を増強する。幾つかの実施態様では、ＴＥＡＭは、免疫細胞のがんへの結合を少なくとも１０％（例えば、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも１２５％、少なくとも１５０％、少なくとも１７５％、少なくとも２００％、又は少なくとも２５０％）増加させる。幾つかの実施態様では、ＴＥＡＭは、免疫細胞のがんへの結合を、１０％～２０％、１０％～３０％、１０％～５０％、１０％～１００％、１０％～１５０％、１０％～２００％、１０％～２５０％、５０％～１００％、５０％～１５０％、５０％～２００％、５０％～２５０％、１００％～１５０％、１００％～２００％、１００％～２５０％、２０％～３０％、２０％～４０％、２０％～５０％、２０％～６０％、２０％～７０％、３０％～４０％、３０％～５０％、３０％～６０％、又は３０％～７０％増加させる。幾つかの実施態様では、ＴＥＡＭは、免疫細胞のがんへの結合を２０％～４０％増加させる。幾つかの実施態様では、ＴＥＡＭは、免疫細胞のがんへの結合を１００％～２５０％増加させる。幾つかの実施態様では、免疫細胞はＴ細胞である。幾つかの実施態様では、免疫細胞はＣＡＲ Ｔ細胞である。幾つかの実施態様では、ＴＥＡＭはＦＡＰ ＴＥＡＭである。

【0129】

［ＣＡＲ Ｔ細胞］
ここに記載の技術の一態様は、（任意選択的に別の治療薬（例えば、抗体試薬（例えば、ｓｃＦｖ、ラクダ科動物抗体、又はＴＥＡＭ）又はサイトカイン）と一緒に）ここに記載されるＣＡＲポリペプチドの何れかを含む哺乳動物細胞；又は（任意選択的に別の治療薬（例えば、抗体試薬（例えば、ｓｃＦｖ、ラクダ科動物抗体、又はＴＥＡＭ）又はサイトカイン）と一緒に）ここに記載のＣＡＲポリペプチドの何れかをコードする核酸に関する。幾つかの実施態様では、哺乳動物細胞は、抗体、抗体試薬、その抗原結合部分、ここに記載のＣＡＲの何れか、又はサイトカイン、或いはそのような抗体、抗体試薬、その抗原結合部分、ここに記載のＣＡＲの何れか、又はサイトカインをコードする核酸を含む。哺乳動物細胞又は組織は、ヒト、霊長類、ハムスター、ウサギ、齧歯類、ウシ、ブタ、ヒツジ、ウマ、ヤギ、イヌ又はネコ由来でありうるが、任意の他の哺乳動物細胞を使用してもよい。何れかの態様の好ましい実施態様では、哺乳動物細胞はヒトである。

【0130】

何れかの態様の幾つかの実施態様では、哺乳動物細胞は免疫細胞である。ここで使用される場合、「免疫細胞」は、免疫応答においてある役割を果たす細胞を意味する。免疫細胞は造血起源であり、リンパ球、例えばＢ細胞及びＴ細胞；ナチュラルキラー細胞；骨髄系細胞、例えば単球、マクロファージ、好酸球、マスト細胞、好塩基球、及び顆粒球を含む。幾つかの実施態様では、免疫細胞は、Ｔ細胞；ＮＫ細胞；ＮＫＴ細胞；リンパ球、例えばＢ細胞及びＴ細胞；及び骨髄系細胞、例えば単球、マクロファージ、好酸球、マスト細胞、好塩基球、及び顆粒球である。幾つかの実施態様では、免疫細胞はＴ細胞である。

【0131】

幾つかの実施態様では、免疫細胞は、がん、形質細胞障害、又は自己免疫疾患を有するか、又は有すると診断された個体から得られる。

【0132】

幾つかの実施態様では、哺乳動物細胞、例えばＴ細胞は、ここに記載のＣＡＲポリペプチドの何れかとここに記載の治療薬；又はここに記載のＣＡＲポリペプチドの何れかと治療薬をコードする核酸を含むように改変されうる。Ｔ細胞は、当該分野で知られている標準的技術を使用して対象から得ることができる。例えば、Ｔ細胞は、ドナー又は患者から採取した末梢血から単離することができる。Ｔ細胞は哺乳動物から単離することができる。好ましくは、Ｔ細胞はヒトから単離される。

【0133】

幾つかの実施態様では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、ここに記載の抗メソテリンＣＡＲを含む。幾つかの実施態様では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、配列番号：２～５の何れか一つのＣＡＲ又は配列番号：１のＣＡＲ－ＴＥＡＭポリペプチドをコードする核酸配列を含む。

【0134】

［ＣＡＲ Ｔ及び治療薬核酸配列］
また提供されるのは、ＣＡＲＴ細胞の産生に使用されるここに記載の（ｉ）ＣＡＲポリペプチド（例えば、配列番号：２～５の何れか一つ）、又は（ｉｉ）ＣＡＲポリペプチド及び治療薬（例えば、配列番号：１）を含むポリタンパク質をコードする核酸コンストラクト及びベクターである。

【0135】

幾つかの実施態様では、本開示は、それぞれが本開示のＣＡＲＴ細胞で発現される複数のタンパク質の別個のコード配列を含むコンストラクトを提供する。これらの別個のコード配列は、ここに記載のように、切断可能なリンカー配列によって互いに分離することができる。例えば、ウイルス２Ａタンパク質（例えば、Ｔ２Ａ及びＰ２Ａ）をコードする配列は、別個の遺伝子の間に配置することができ、転写されると、生成されたポリタンパク質の切断を方向付けることができる。上記のように、本開示のコンストラクト及びベクターは、多くの配列の様々な組み合わせの何れかを含みうる。例えば、本開示のコンストラクト又はベクターは、ここに記載されるような一つのＣＡＲをコードする配列を、任意選択的にここに記載されるような治療薬（例えば、抗体試薬（例えば、単鎖抗体、単一ドメイン抗体（例えば、ラクダ科動物抗体）、又は二重特異性抗体（例えば、ＴＥＡＭ））又はサイトカイン）と組み合わせて、含みうる。

【0136】

ここに記載のＣＡＲＴ細胞内でのタンパク質の効率的な発現は、タンパク質をコードする核酸のｍＲＮＡ、ＤＮＡ、又は遺伝子産物を検出する標準的なアッセイを使用して評価することができる。例えば、ＲＴ－ＰＣＲ、ＦＡＧＳ、ノーザンブロッティング、ウエスタンブロッティング、ＥＬＩＳＡ、又は免疫組織化学を使用することができる。ここに記載のタンパク質は、構成的に発現され、又は誘導的に発現されうる。幾つかの実施態様では、タンパク質は、組換え核酸配列によってコードされる。例えば、本開示は、ＣＡＲをコードする第一のポリヌクレオチド配列を含むベクターを提供し、ＣＡＲは、例えば腫瘍抗原又はＴｒｅｇ関連抗原に結合する抗原結合配列を含む細胞外ドメイン、及び任意選択的に、治療薬（例えば、抗体試薬（例えば、単鎖抗体、単一ドメイン抗体（例えば、ラクダ科動物抗体）、又は二重特異性抗体（例えば、ＴＥＡＭ））又はサイトカイン）をコードする第二のポリヌクレオチド配列を含む。

【0137】

幾つかの実施態様では、第一のポリヌクレオチド配列と第二のポリヌクレオチド配列は、それぞれプロモーターに作用可能に連結される。幾つかの実施態様では、第一のポリヌクレオチド配列は第一のプロモーターに作用可能に連結され、第二のポリヌクレオチド配列は第二のプロモーターに作用可能に連結される。プロモーターは、構成的に発現されるプロモーター（例えば、ＥＦ１αプロモーター）又は誘導的に発現されるプロモーター（例えば、ＮＦＡＴプロモーター）でありうる。

【0138】

幾つかの実施態様では、ＣＡＲと治療薬の発現は、同じプロモーター、例えば構成的に発現されるプロモーター（例えば、ＥＦ１αプロモーター）によって駆動される。他の実施態様では、ＣＡＲと治療薬の発現は、異なるプロモーターによって駆動される。例えば、ＣＡＲの発現は構成的に発現されるプロモーター（例えば、ＥＦ１αプロモーター）によって駆動されうるが、治療薬の発現は誘導的に発現されるプロモーター（例えば、ＮＦＡＴプロモーター）によって駆動されうる。ＣＡＲをコードするポリヌクレオチド配列は、治療薬をコードするポリヌクレオチド配列の上流に位置することができ、又は治療薬をコードするポリヌクレオチド配列は、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチド配列の上流に位置することができる。

【0139】

幾つかの実施態様では、ポリヌクレオチドは、自殺遺伝子の発現を含みうる。これは、投与された細胞の外部の薬物媒介制御を促進するためになされうる。例えば、自殺遺伝子を使用することにより、例えば、有害事象の場合に、改変された細胞を患者から枯渇させることができる。幾つかの実施態様では、ＦＫ５０６結合ドメインが、カスパーゼ９プロアポトーシス分子に融合される。このように改変されたＴ細胞は、免疫抑制薬タクロリムスに対して感受性になる。自殺遺伝子の他の例は、チミジンキナーゼ（ＴＫ）、ＣＤ２０、チミジル酸キナーゼ、切断型前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、切断型低親和性神経成長因子受容体（ＬＮＧＦＲ）、切断型ｃｏ・１９、及び改変Ｆａｓであり、これらは特定の分子（例えば、ＴＫ＋細胞に対するガンシクロビル）又は抗体又は抗体－薬物コンジュゲートの投与による条件付きアブレーションでトリガーされうる。

【0140】

ＣＡＲ Ｔ細胞で発現されるタンパク質をコードする配列を含むコンストラクトをベクター内に含めることができる。様々な例では、ベクターはレトロウイルスベクターである。レンチウイルスなどのレトロウイルスは、目的の遺伝子又はキメラ遺伝子をコードする核酸配列を送達するための簡便なプラットフォームを提供する。選択された核酸配列は、当該技術分野において知られている技術を使用して、ベクターに挿入され、レトロウイルス粒子にパッケージ化されうる。ついで、組換えウイルスは単離され、例えば、インビトロ又はエクスビボで細胞に送達されうる。レトロウイルス系は当該技術分野においてよく知られており、その全体が出典明示によりここに援用される、例えば、米国特許第５２１９７４０号；Ｋｕｒｔｈ及びＢａｎｎｅｒｔ（２０１０）“Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ：Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ａｎｄ Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ”Ｃａｌｓｔｅｒ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ（ＩＳＢＮ：９７８－１－９０４５５－５５－４）；及びＨｕ等，Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ５２：４９３－５１２，２０００に記載されている。効率的なＤＮＡ送達のためのレンチウイルス系は、ＯｒｉＧｅｎｅ（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）から購入できる。様々な実施態様では、タンパク質は、当該技術分野で知られているベクター及び方法を使用して、タンパク質をコードする核酸を含む発現ベクターのトランスフェクション又はエレクトロポレーションによってＴ細胞で発現される。幾つかの実施態様では、ベクターはウイルスベクター又は非ウイルスベクターである。

【0141】

幾つかの実施態様では、ウイルスベクターは、レトロウイルスベクター（例えば、レンチウイルスベクター）、アデノウイルスベクター、又はアデノ随伴ウイルスベクターである。

【0142】

幾つかの実施態様では、ベクターを含む組成物は、ＣＡＲをコードする第一のポリヌクレオチド配列を含み、ＣＡＲは、腫瘍抗原又はＴｒｅｇ関連抗原に特異的に結合する配列を含む細胞外ドメイン、及び任意選択的に、治療薬をコードする第二のポリヌクレオチド配列を含む。所定の実施態様では、治療薬が抗体試薬（例えば、単鎖抗体、単一ドメイン抗体（例えば、ラクダ科動物抗体）、又は二重特異性抗体（例えば、ＴＥＡＭ））である場合、抗体試薬は、腫瘍抗原又はＴｒｅｇ関連抗原に特異的に結合する。

【0143】

［ＣＡＲ及び治療薬の発現］
何れかの態様の幾つかの実施態様では、ここに記載のＣＡＲポリペプチドの何れかは（任意選択的に、ここに記載の抗体試薬又はサイトカインと一緒に）、レンチウイルスベクターから発現される。レンチウイルスベクターは、感染標準技術を使用して、細胞内でＣＡＲポリペプチド（及び任意選択的に抗体試薬又はサイトカイン）を発現させるために使用される。

【0144】

レンチウイルスなどのレトロウイルスは、目的の遺伝子又はキメラ遺伝子をコードする核酸配列を送達するための簡便なプラットフォームを提供する。選択された核酸配列は、当該技術分野において知られている技術を使用して、ベクターに挿入され、レトロウイルス粒子にパッケージ化されうる。ついで、組換えウイルスは単離され、例えば、インビトロ又はエクスビボで細胞に送達されうる。レトロウイルス系は当該技術分野においてよく知られており、その全体が出典明示によりここに援用される、例えば、米国特許第５２１９７４０号；Ｋｕｒｔｈ及びＢａｎｎｅｒｔ（２０１０）“Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ：Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ａｎｄ Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ”Ｃａｌｓｔｅｒ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ（ＩＳＢＮ：９７８－１－９０４５５－５５－４）；及びＨｕ等，Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ５２：４９３－５１２，２０００に記載されている。効率的なＤＮＡ送達のためのレンチウイルス系は、ＯｒｉＧｅｎｅ（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）から購入できる。幾つかの実施態様では、ここに記載のＣＡＲの何れかのＣＡＲポリペプチド（及び任意選択的に抗体試薬又はサイトカイン）は、ＣＡＲをコードする核酸を含む発現ベクターのトランスフェクション又はエレクトロポレーションを介して哺乳動物細胞内で発現される。

【0145】

トランスフェクション又はエレクトロポレーション法は当該技術分野において知られている。

【0146】

ここに記載のポリペプチドの何れかのＣＡＲポリペプチド（及び任意選択的に抗体試薬又はサイトカイン）の効率的な発現は、ｍＲＮＡ、ＤＮＡ、又はＣＡＲ（及び任意選択的に抗体試薬又はサイトカイン）をコードする核酸の遺伝子産物を検出する標準アッセイ、例えばＲＴ－ＰＣＲ、ＦＡＣＳ、ノーザンブロッティング、ウエスタンブロッティング、ＥＬＩＳＡ、又は免疫組織化学的検査を使用してアッセイされうる。

【0147】

幾つかの実施態様では、ここに記載されるＣＡＲポリペプチド（及び任意選択的に抗体試薬又はサイトカイン）は構成的に発現される。他の実施態様では、ＣＡＲポリペプチドは構成的に発現され、任意選択的な抗体試薬又はサイトカインは誘導的に発現される。幾つかの実施態様では、ここに記載のＣＡＲポリペプチド（及び任意選択的な抗体試薬又はサイトカイン）は組換え核酸配列によってコードされる。

【0148】

［配列］

【0149】

［投与及び治療］
［対象］
ここで使用される場合、「対象」はヒト又は動物を意味する。通常、動物は、霊長類、齧歯類、家畜、又は狩猟動物などの脊椎動物である。霊長類には、例えば、チンパンジー、カニクイザル、クモザル、及びマカク、例えば、アカゲザルが含まれる。齧歯類には、例えば、マウス、ラット、マーモット、フェレット、ウサギ及びハムスターが含まれる。家畜及び狩猟動物には、例えば、ウシ、ウマ、ブタ、シカ、バイソン、バッファロー、ネコ種、例えば、飼い猫、イヌ種、例えば、イヌ、キツネ、オオカミ、鳥種、例えば、ニワトリ、エミュー、ダチョウ、及び魚、例えば、マス、ナマズ及びサケが含まれる。幾つかの実施態様では、対象は哺乳動物、例えば霊長類、例えばヒトである。「個体」、「患者」、及び「対象」という用語は、ここでは互換的に使用される。好ましくは、対象は哺乳動物である。哺乳動物は、ヒト、非ヒト霊長類、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ウマ、又はウシでありうるが、これらの例には限定されない。ヒト以外の哺乳動物は、がんなどの疾患の動物モデルを表す対象として有利に使用することができる。対象は、雄又は雌でありうる。

【0150】

対象者は、治療を必要とする状態（例えば、なかでも膵臓がん、肺がん、卵巣がん、子宮内膜がん、胆道がん、胃がん、若しくは中皮腫、又はメソテリンを発現する別の種類のがん）又はそのような状態に関連した一又は複数の合併症と以前に診断されたか、又はそれに罹患しもしくはそれを有していると判定され、場合によっては、その状態又はその状態に関連する一又は複数の合併症に対して治療を既に受けているものでありうる。

【0151】

或いは、対象はまたそのような状態又は関連する合併症を有していると過去には診断されたことがないものでありうる。例えば、対象は、その状態又はその状態に関連する一又は複数の合併症に対する一又は複数の危険因子を示すもの或いは危険因子を示さない対象でありうる。

【0152】

特定の状態の治療を「必要とする対象」は、その状態を有し、その状態を有していると診断され、又はその状態を発症するリスクがある対象でありうる。

【0153】

［薬学的組成物］
ここで使用される場合、「薬学的組成物」という用語は、薬学的に許容される担体、例えば、製薬業界で一般的に使用される担体と組み合わせた活性剤を意味する。

【0154】

「薬学的に許容される」という語句は、ここでは、健全な医学的判断の範囲内で、過度な毒性、刺激、アレルギー反応、又は他の問題や合併症を伴わないで、妥当な効果／リスク比に見合って、人間や動物の組織と接触して使用されるのに適した化合物、物質、組成物、及び／又は剤形を指すために用いられる。態様の何れかの幾つかの実施態様では、薬学的に許容される担体は、水以外の担体でありうる。態様の何れかの幾つかの実施態様では、薬学的に許容される担体は、クリーム、エマルジョン、ゲル、リポソーム、ナノ粒子、及び／又は軟膏でありうる。態様の何れかの幾つかの実施態様では、薬学的に許容される担体は、人工又は改変された担体、例えば、活性成分がその中では天然に生じることが見出されない担体でありうる。

【0155】

本技術の一態様では、ここに記載の技術は、ここに記載の活性化ＣＡＲ Ｔ細胞と、場合によっては薬学的に許容される担体とを含む薬学的組成物に関する。最小限の薬学的組成物の活性成分は、ここに記載される活性化ＣＡＲ Ｔ細胞を含む。幾つかの実施態様では、薬学的組成物の有効成分は、ここに記載される活性化ＣＡＲ Ｔ細胞から本質的になる。幾つかの実施態様では、薬学的組成物の有効成分は、ここに記載される活性化ＣＡＲ Ｔ細胞からなる。細胞ベースの治療製剤のための薬学的に許容される担体には、生理食塩水及び水性緩衝液、リンゲル液、並びに血清成分、例えば血清アルブミン、ＨＤＬ及びＬＤＬが含まれる。「添加物」、「担体」、「薬学的に許容される担体」、「薬学的に許容される添加物」等のような用語は、ここでは互換的に使用される。

【0156】

幾つかの実施態様では、ここに記載される活性化ＣＡＲ Ｔ細胞を含む薬学的組成物は、非経口剤形でありうる。非経口剤形の投与は、典型的には、汚染物質に対する患者の自然防御を回避するので、ＣＡＲ Ｔ細胞自体以外の成分は、好ましくは、無菌であるか、又は患者への投与前に無菌化できる。非経口剤形の例には、限定されないが、注射用の溶液、注射用の薬学的に許容されるビヒクルに溶解又は懸濁される乾燥生成物、注射用の懸濁液、及び乳濁液が含まれる。これらの何れも、投与前に活性化ＣＡＲ Ｔ細胞調製物に加えることができる。開示されている活性化ＣＡＲ Ｔ細胞の非経口剤形を提供するために使用されうる適切なビヒクルは当業者によく知られている。例には、非限定的に、生理食塩水；グルコース溶液；限定されないが、塩化ナトリウム注射液、リンガー注射液、ブドウ糖注射液、ブドウ糖及び塩化ナトリウム注射液、乳酸リンゲル注射液を含む水性ビヒクル；限定されないが、エチルアルコール、ポリエチレングリコール、及びプロピレングリコールなどの水混和性ビヒクル；並びに限定されないが、コーン油、綿実油、落花生油、ゴマ油、オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル、及び安息香酸ベンジルなどの非水性ビヒクルが含まれる。

【0157】

［投薬量］
ここで使用される「単位剤形」という用語は、適切な一回の投与のための投薬量を意味する。例として、単位剤形は、例えばシリンジ又は静脈内点滴バッグなどの送達デバイスに配されたある量の治療薬でありうる。幾つかの実施態様では、単位剤形は単回投与で投与される。別の実施態様では、一を超える単位剤形が同時に投与されうる。

【0158】

幾つかの実施態様では、ここに記載される活性化ＣＡＲ Ｔ細胞は単剤療法として投与され、すなわち、状態に対する他の治療は対象に同時的には施されない。ここに記載のＴ細胞を含む薬学的組成物は、一般に、１０^４から１０^９細胞／ｋｇ体重、場合によっては１０^５から１０^６細胞／ｋｇ体重の投薬量で投与でき、それらの範囲内の全ての整数値を含む。必要に応じて、Ｔ細胞組成物はこれらの投薬量で複数回投与することもできる。細胞は、免疫療法において一般的に知られている注入技術を使用することによって投与することができる（例えば、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ等，Ｎｅｗ Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅｄ．３１９：１６７６，１９８８を参照）。

【0159】

所定の態様では、活性化ＣＡＲ Ｔ細胞を対象に投与し、その後血液を再採取（又はアフェレーシスを実施）し、ここに記載のようにそこからＴ細胞を活性化し、患者にこれらの活性化及び増殖Ｔ細胞を再注入することが望ましい場合がある。この方法は、数週間ごとに複数回実行されうる。所定の態様では、Ｔ細胞は、３５ １０ｃｃから４００ｃｃの採血から活性化されうる。所定の態様では、Ｔ細胞は、２０ｃｃ、３０ｃｃ、４０ｃｃ、５０ｃｃ、６０ｃｃ、７０ｃｃ、８０ｃｃ、９０ｃｃ、又は１００ｃｃの採血から活性化される。

【0160】

［投与］
幾つかの実施態様では、ここに記載の方法は、がん、形質細胞疾患又は障害、又は自己免疫疾患又は障害を有しているか又は有していると診断された対象を、ここに記載のＣＡＲポリペプチド（及び任意選択的な抗体試薬又はサイトカイン）の何れか、或いはここに記載のＣＡＲポリペプチド（及び任意選択的な抗体試薬又はサイトカイン）の何れかをコードする核酸を含む哺乳動物細胞で治療することに関する。ここに記載のＣＡＲ Ｔ細胞は、ここに記載のＣＡＲポリペプチド（及び任意選択的な抗体試薬又はサイトカイン）の何れか、又はここに記載のＣＡＲポリペプチド（及び任意選択的な抗体試薬又はサイトカイン）の何れかをコードする核酸を含む哺乳動物細胞を含む。状態を有する対象は、状態を診断する本方法を使用して医師によって特定されうる。これらの状態を特徴付け、診断を助ける、状態の症状及び／又は合併症は、当該技術分野においてよく知られており、限定されないが、疲労、持続性感染、及び持続性出血が含まれる。例えば、状態の診断に役立ちうる試験には、限定されないが、血液検査及び骨髄検査があり、所与の状態に対して当該分野で知られている。状態の家族歴、又は状態の危険因子への曝露は、対象がその状態を有している可能性が高いかどうかを判断したり、状態の診断を下したりするのにも役立ちうる。

【0161】

ここに記載の組成物は、状態を有するか、又は状態を有すると診断された対象に投与されうる。幾つかの実施態様では、ここに記載される方法は、状態の症状を緩和するために、ここに記載される活性化ＣＡＲ Ｔ細胞の有効量を対象に投与することを含む。ここで使用される場合、「状態の症状を緩和する」とは、任意の状態又は状態に関連する症状を寛解させることである。同等の未処置対照と比較して、そのような減少は、任意の標準技法で測定して、少なくとも５％、１０％、２０％、４０％、５０％、６０％、８０％、９０％、９５％、９９％又はそれ以上である。ここに記載の組成物を対象に投与するための様々な手段は、当業者に知られている。幾つかの実施態様では、ここに記載の組成物は、全身的又は局所的に投与される。好ましい実施態様では、ここに記載の組成物は静脈内投与される。別の実施態様では、ここに記載の組成物は、腫瘍の部位に投与される。

【0162】

ここで使用される「有効量」という用語は、疾患又は障害の少なくとも一又は複数の症状を緩和するのに必要な活性化ＣＡＲ Ｔ細胞の量を意味し、所望の効果をもたらすのに十分な量の細胞調製物又は組成物に関する。従って、「治療的有効量」という用語は、典型的な対象に投与されると、特定の状態に抗する効果をもたらすのに十分な活性化ＣＡＲ Ｔ細胞の量を意味する。ここで使用される有効量は、様々な状況では、疾患の症状の進行を遅らせ、疾患の症状の経過を変え（例えば、限定されないが、状態の進行を遅らせ）、又は状態の症状を逆転させるのに十分な量をまた含みうる。従って、正確な「有効量」を指定することは一般に現実的ではない。しかしながら、如何なる場合においても、適切な「有効量」は、日常的な実験のみを使用して当業者によって決定されうる。

【0163】

有効量、毒性、及び治療効果は、細胞培養又は実験動物における標準的な製薬手順によって評価されうる。投薬量は、用いられる剤形及び利用される投与経路に応じて変動しうる。毒性と治療効果の間の用量比は治療指数であり、比ＬＤ５０／ＥＤ５０として表すことができる。大きな治療指数を示す組成物及び方法が好ましい。治療上有効な用量は、最初に細胞培養アッセイから推定できる。また、用量は、細胞培養又は適切な動物モデルにおいて決定されたＩＣ５０（すなわち、症状の最大半量阻害を達成する活性化ＣＡＲ Ｔ細胞の濃度）を含む循環血漿中濃度範囲を達成するために、動物モデルで定式化されうる。血漿中レベルは、例えば、高速液体クロマトグラフィーによって測定することができる。任意の特定の投薬量の効果は、適切なバイオアッセイ、例えば、とりわけ骨髄検査のためのアッセイによって、モニターされうる。投薬量は医師によって決定され、観察された治療効果に合わせて必要に応じて調整されうる。

【0164】

［投与方法］
投与方法は、例えば、静脈内（ｉ．ｖ．）注射又は注入を含みうる。ここに記載の組成物は、患者に経動脈的に、腫瘍内に、節内に、腹腔内に又は髄内に投与されうる。幾つかの実施態様では、Ｔ細胞の組成物は、腫瘍、リンパ節、又は感染部位に直接注射されうる。幾つかの実施態様では、ここに記載の組成物は、体腔又は体液（例えば、腹水、胸膜液、腹腔液、又は脳脊髄液）中に投与される。

【0165】

特定の例示的な態様では、対象は白血球除去輸血を受けてもよく、白血球がエクスビボで収集され、濃縮され、又は除去されて、目的の細胞、例えばＴ細胞を選択及び／又は単離する。これらのＴ細胞分離株は、人工ＡＰＣ、例えば、抗ＣＤ２８及び抗ＣＤ３ ＣＤＲを発現するａＡＰＣとの接触によって増殖され、本技術の一又は複数のＣＡＲコンストラクトが導入されうるように処理され、それによってＣＡＲ Ｔ細胞が作製される。それを必要とする対象は、その後、高用量化学療法による標準治療を受け、その後、末梢血幹細胞移植を受けることができる。移植後又は移植と同時に、対象は増殖ＣＡＲ Ｔ細胞の注入を受けることができる。幾つかの実施態様では、増殖細胞は、手術の前又は後に投与される。幾つかの実施態様では、リンパ球枯渇は、ここに記載される一又は複数のＣＡＲ Ｔ細胞を投与する前に対象に実施される。そのような実施態様では、リンパ球枯渇は、メルファラン、サイトキサン、シクロホスファミド、及びフルダラビンの一又は複数を投与することを含みうる。患者に投与される上記の治療薬の投薬量は、治療される状態の正確な性質及び治療のレシピエントによって変化するであろう。ヒトへの投与のための投薬量のスケーリングは、当該技術分野で認められている実務に従って実施されうる。

【0166】

幾つかの実施態様では、単一の治療レジメンが必要とされる。他の場合には、一又は複数回のその後の用量又は治療レジメンの投与が実施されうる。例えば、隔週で３か月間治療した後、治療を月に１回、６か月間又は１年以上繰り返すことができる。幾つかの実施態様では、初回治療後に追加の治療は施されない。

【0167】

ここに記載される組成物の投薬量は、医師によって決定され、必要に応じて、観察された治療の効果に適合するように調整されうる。治療の期間と頻度に関して、熟練した臨床医は、治療がいつ治療効果をもたらすかを判断し、更に細胞を投与するか、治療を中止するか、治療を再開するか、又は治療レジメンに対してその他の変更を行うかを決定するために、対象を監視するのが一般的である。投薬量は、サイトカイン放出症候群などの有害な副作用を引き起こすほど多くすべきではない。一般に、投薬量は、患者の年齢、状態、及び性別によって異なり、当業者が決定することができる。投薬量はまた何らかの合併症が発生した場合には、個々の医師によって調整されうる。

【0168】

［併用療法］
ここに記載の活性化ＣＡＲ Ｔ細胞は、場合によっては、当業者により適切であると決定されうるように、互いに、また他の既知の薬剤及び療法と組み合わせて、使用されうる。一例では、異なるＴｒｅｇマーカー（例えば、ＧＡＲＰ、ＬＡＰ、ＣＤ２５、及び細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原－４（ＣＴＬＡ－４）など）を標的とする二種以上のＣＡＲ Ｔ細胞を組み合わせて投与することができる。別の例では、異なるがん抗原を標的とする二種以上のＣＡＲ Ｔ細胞が組み合わせて投与される。更なる例では、Ｔｒｅｇマーカー（例えば、ＧＡＲＰ、ＬＡＰなど）を標的とする一又は複数のＣＡＲ Ｔ細胞と、一又は複数の腫瘍抗原を標的とする一又は複数のＣＡＲ Ｔ細胞とが組み合わせて投与される。

【0169】

ここで使用される「組み合わせて」投与されるとは、対象の疾患の苦痛の過程中に二種（又はそれ以上）の異なる治療剤が対象に送達されることを意味し、例えば、二種以上の治療剤は対象が障害を持つと診断された後で、障害が治癒され又は排除される前、又は治療が他の理由で中止される前に送達される。幾つかの実施態様では、一回の治療の送達は二回目の送達が開始された時点でまだなされており、投与に関して重複がある。これは、ここではしばしば「同時」又は「同時的送達」と呼ばれる。他の実施態様では、一種の治療剤の送達が、他の種の治療剤の送達が始まる前に終了する。何れかの場合の幾つかの実施態様では、治療は、併用投与のため、より効果的である。例えば、第二の治療剤は、第一の治療剤がない場合に投与された場合に見られるよりも、より効果的で、例えば、第二の治療剤を少なくしても同等の効果が見られ、又は第二の治療剤が症状を大きく低減し、或いは第一の治療剤と類似の状況が見られる。幾つかの実施態様では、送達は、症状又は障害に関連する他のパラメーターの減少が、他の治療剤がない場合に送達された一種の治療剤で観察されるであろうものよりも大きいようなものである。二種の治療剤の効果は、部分的に相加的、完全に相加的、又は相加的よりも大きい場合がある。送達は、送達された第一の治療剤の効果が、第二の治療剤が送達されたときに依然として検出可能であるようなものでありうる。ここに記載の活性化ＣＡＲ Ｔ細胞と少なくとも一種の追加の治療剤は、同時に、同じ又は別々の組成物で、又は逐次的に投与されうる。逐次投与の場合、ここに記載のＣＡＲ発現細胞を最初に投与することができ、追加の薬剤を二回目に投与することができ、又は投与の順序を逆にすることができる。ＣＡＲ Ｔ療法及び／又は他の治療剤、手順又はモダリティは、活動性障害の期間中、又は寛解期間もしくは活動性の低い疾患の期間中に施されうる。ＣＡＲ Ｔ療法は、別の治療の前に、治療と同時に、治療後に、又は障害の寛解中に施されうる。

【0170】

組み合わせて投与される場合、活性化ＣＡＲ Ｔ細胞と追加の薬剤（例えば、第二又は第三の薬剤）、又は全てが、例えば単剤療法として、個々に使用される各薬剤の量又は投薬量より多いか、少ないか又は同じである量又は用量で投与されうる。所定の実施態様では、活性化ＣＡＲ Ｔ細胞、追加の薬剤（例えば、第二又は第三の薬剤）、又は全ての投与される量又は投薬量は、個々に使用される各薬剤の量又は投薬量より少ない（例えば、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、又は少なくとも５０％である）。他の実施態様では、所望の効果（例えば、がんの治療）をもたらす、活性化ＣＡＲ Ｔ細胞、追加の薬剤（例えば、第二又は第三の薬剤）、又は全ての量又は投薬量は、同じ治療効果を達成するために個々に必要とされる各薬剤の量又は投薬量よりも少ない（例えば、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、又は少なくとも５０％少ない）。更なる実施態様では、ここに記載の活性化ＣＡＲ Ｔ細胞は、外科手術、化学療法、放射線、ｍＴＯＲ経路阻害剤、免疫抑制剤、例えばシクロスポリン、アザチオプリン、メトトレキセート、ミコフェノレート、及びＦＫ５０６、抗体、又は他の免疫除去剤、例えばＣＡＭＰＡＴＨ、抗ＣＤ３抗体又は他の抗体療法、サイトキシン、フルダラビン、ラパマイシン、ミコフェノール酸、ステロイド、ＦＲ９０１２２８、サイトカイン、又はペプチドワクチン、例えばＩｚｕｍｏｔｏ等，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．１０８：９６３－９７１，２００８に記載されたものと組み合わせた治療レジメンにおいて使用されうる。

【0171】

幾つかの実施態様では、ここに記載の活性化ＣＡＲ Ｔ細胞は、チェックポイント阻害剤と組み合わせて使用されうる。例示的なチェックポイント阻害剤には、抗ＰＤ－１阻害剤（ニボルマブ、ＭＫ－３４７５、ペムブロリズマブ、ピジリズマブ、ＡＭＰ－２２４、ＡＭＰ－５１４）、抗ＣＴＬＡ４阻害剤（イピリムマブ及びトレメリムマブ）、抗ＰＯＬ１阻害剤（アテゾリズマブ、アベロマブ、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ、ＭＥＤＩ４７３６、及びＭＰＤＬ３２８０Ａ）、及び抗ＴＩＭ３阻害剤が含まれる。

【0172】

幾つかの実施態様では、ここに記載の活性化ＣＡＲ Ｔ細胞は、化学療法剤と組み合わせて使用されうる。例示的な化学療法剤には、アントラサイクリン（例えば、ドキソルビシン（例えば、リポソームドキソルビシン））、ビンカアルカロイド（例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン）、アルキル化剤（例えば、シクロホスファミド、デカルバジン、メルファラン、イホスファミド、テモゾロミド）、免疫細胞抗体（例えば、アレムツザマブ、ゲムツズマブ、リツキシマブ、トシツモマブ）、代謝拮抗剤（例えば、葉酸拮抗薬、ピリミジン類似体、プリン類似体及びアデノシンデアミナーゼ阻害剤（例えば、フルダラビン）を含む）、ｍＴＯＲ阻害剤、ＴＮＦＲグルココルチコイド誘導ＴＮＦＲ関連タンパク質（ＧＩＴＲ）アゴニスト、プロテアソーム阻害剤（例えば、アクラシノマイシンＡ、グリオトキシン又はボルテゾミブ）、免疫調節剤、例えばサリドマイド又はサリドマイド誘導体（例えば、レナリドマイド）が含まれる。併用療法における使用が考えられる一般的な化学療法剤には、アナストロゾール（アリミデックス（登録商標））、ビカルタミド（カソデックス（登録商標））、硫酸ブレオマイシン（ブレノキサン（Blenoxane）（登録商標））、ブスルファン（ミレラン（登録商標））、ブスルファン注射剤（ブスルフェクス（登録商標））、カペシタビン（ゼローダ（登録商標））、Ｎ４－ペントキシカルボニル－５－デオキシ－５－フルオロシチジン、カルボプラチン（パラプラチン（登録商標））、カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））、クロラムブシル（ロイケラン（登録商標））、シスプラチン（プラチノール（登録商標））、クラドリビン（ロイスタチン（登録商標））、シクロホスファミド（シトキサン（登録商標）又はネオサール（登録商標））、シタラビン、シトシンアラビノシド（サイトサール－Ｕ（登録商標））、シタラビンリポソーム注射剤（ＤｅｐｏＣｙｔ（登録商標））、ダカルバジン（ＤＴＩＣ－Ｄｏｍｅ（登録商標））、ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ、コスメガン）、ダウノルビシン塩酸塩（セルビジン（登録商標））、クエン酸ダウノルビシンリポソーム注射剤（ＤａｕｎｏＸｏｍｅ（登録商標））、デキサメタゾン、ドセタキセル（タキソテール（登録商標））、ドキソルビシン塩酸塩（アドリアマイシン（登録商標）、ルベックス（登録商標））、エトポシド（ベペシド（登録商標））、リン酸フルダラビン（フルダラ（登録商標））、５－フルオロウラシル（アドルシル（登録商標）、エフデックス（登録商標））、フルタミド（ユーレキシン（Eulexin）（登録商標））、テザシチビン、ゲムシタビン（ジフルオロデオキシシチジン）、ヒドロキシ尿素（ハイドレア（登録商標））、イダルビシン（イダマイシン）、イフォスファミド（ＩＦＥＸ（登録商標））、イリノテカン（カンプトサール（登録商標））、Ｌ－アスパラギナーゼ（ＥＬＳＰＡＲ（登録商標））、ロイコボリンカルシウム、メルファラン（アルケラン（登録商標））、６－メルカプトプリン（プリネトール（Purinethol）（登録商標））、メトトレキサート（フォーレックス（Folex）（登録商標））、ミトキサントロン（ノバントロン（登録商標））、マイロターグ、パクリタキセル（タキソール（登録商標））、フェニックス（イットリウム９０／ＭＸ－ＤＴＰＡ）、ペントスタチン、カルムスチンインプラントを含むポリフェプロサン２０（ギリアデル（登録商標））、クエン酸タモキシフェン（ノルバデックス（登録商標））、テニポシド（ブモン（Vumon）（登録商標））、６－チオグアニン、チオテパ、チラパザミン（チラゾン（Tirazone）（登録商標））、注射用トポテカン塩酸塩（ハイカムチン（登録商標））、ビンブラスチン（ベルバン（Velban）（登録商標））、ビンクリスチン（オンコビン（登録商標））、及びビノレルビン（ナベルビン（登録商標））が含まれる。例示的なアルキル化剤には、限定されないが、ナイトロジェンマスタード、エチレンイミン誘導体、アルキルスルホネート、ニトロソウレア及びトリアゼン）；ウラシルマスタード（アミノウラシルマスタード（登録商標）、クロレタミナシル（登録商標）、デメチルドパン（登録商標）、デスメチルドパン（登録商標）、ヘマンタミン（登録商標）、ノルドパン（登録商標）、ウラシルナイトロジェンマスタード（登録商標）、ウラシルロスト（Uracillost）（登録商標）、ウラシルモスターザ（Uracilmostaza）（登録商標）、ウラムスチン（Uramustin）（登録商標）、ウラムスチン（Uramustine）（登録商標））、クロルメチン（マスタージェン（Mustargen）（登録商標））、シクロホスファミド（シトキサン（登録商標）、ネオサール（登録商標）、クラフェン（Clafen）（登録商標）、エンドキサン（登録商標）、プロシトックス（Procytox）（登録商標）、Revimmune^TM）、イホスファミド（ミトキサーナ（Mitoxana）（登録商標）、メルファラン（アルケラン（登録商標））、クロラムブシル（リューケラン（登録商標））、ピポブロマン（アメデル（Amedel）（登録商標）、ベルサイト（Vercyte）（登録商標））、トリエチレンメラミン（へメル（Hemel）（登録商標）、ヘキサレン（登録商標）、ヘキサスタット（Hexastat）（登録商標））、トリエチレンチオホスホラミン、テモゾロミド（テモダール（登録商標））、チオテパ（チオプレックス（Thioplex）（登録商標））、ブスルファン（ブシルベックス（Busilvex）（登録商標）、ミレラン（登録商標））、カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））、ロムスチン（ＣｅｅＮＵ（登録商標））、ストレプトゾシン（ザノサー（登録商標））、及びダカルバジン（ＤＴＩＣ－Ｄｏｍｅ（登録商標））が含まれる。追加の例示的なアルキル化剤には、限定されないが、オキサリプラチン（エロキサチン（Eloxatin）（登録商標）；テモゾロミド（テモダール（Temodar）（登録商標）及びテモダール（Temodal）（登録商標））；ダクチノマイシン（アクチノマイシン－Ｄ、コスメゲン（登録商標）としても知られている）；メルファラン（Ｌ－ＰＡＭ、Ｌ－サルコリシン、及びフェニルアラニンマスタード、アルケラン（登録商標）としても知られている）；アルトレタミン（ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ）、ヘキサレン（登録商標）としても知られている）；カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））；ベンダムスチン（トレアンダ（登録商標））；ブスルファン（ブスルフェックス（登録商標）及びミレラン（登録商標））；カルボプラチン（パラプラチン（登録商標））；ロムスチン（ＣＣＮＵ、ＣｅｅＮＵ（登録商標）としても知られている）；シスプラチン（ＣＤＤＰ、プラチノール（登録商標）及びプラチノール（登録商標）－ＡＯとしても知られている）；クロラムブシル（リューケラン（登録商標））；シクロホスファミド（シトキサン（登録商標）及びネオサール（登録商標））；ダカルバジン（ＤＴＩＣ、ＤＩＣ及びイミダゾールカルボキサミド、ＤＴＩＣ－Ｄｏｍｅ（登録商標）としても知られている）；アルトレタミン（ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ）、ヘキサレン（登録商標）としても知られている）；イフォスファミド（Ｉｆｅｘ（登録商標））；プレドヌムスチン；プロカルバジン（マチュレーン（登録商標））；メクロレタミン（ナイトロジェンマスタード、ムスチン及び塩酸メクロレタミン、マスタージェン（登録商標）としても知られている）；ストレプトゾシン（ザノサー（登録商標））；チオテパ（チオホスホアミド、ＴＥＳＰＡ及びＴＳＰＡ、チオプレックス（登録商標）としても知られている）；シクロホスファミド（エンドキサン（登録商標）、シトキサン（登録商標）、ネオサール（登録商標）、プロシトックス（登録商標）、Ｒｅｖｉｍｍｕｎｅ（登録商標））；及びベンダムスチンＨＣ１（トレアンダ（登録商標））が含まれる。例示的なｍＴＯＲ阻害剤には、例えば、テムシロリムス；リダフォロリムス（正式には、ＡＰ２３５７３及びＭＫ８６６９としても知られ、ＰＣＴ公開番号ＷＯ０３／０６４３８３に記載されている、デフェロリムス（deferolimus）、（ｌＲ，２Ｒ，４５）－４－［（２Ｒ）－２［（１Ｒ，９５，１２５，１５Ｒ，１６Ｅ，１８Ｒ，１９Ｒ，２１Ｒ，２３５，２４Ｅ，２６Ｅ，２８Ｚ，３０５，３２５，３５Ｒ）－ｌ，１８－ジヒドロキシ－１９，３０－ジメトキシ－１５，１７，２１，２３，２９，３５－ヘキサメチル－２，３，１０，１４，２０－ペンタオキソ－ｌｌ，３６－ジオキサ－４－アザトリシクロ［３０．３．１．０４’９］ヘキサトリアコンタ－１６，２４，２６，２８－テトラエン－１２－イル］プロピル］－２－メトキシシクロヘキシルジメチルホスフィネート）；エベロリムス（アフィニトール（登録商標）又はＲＡＤＯＯＩ）；ラパマイシン（ＡＹ２２９８９、シロリムス（登録商標））；シマピモド（simapimod（ＣＡＳ１６４３０１－５１－３）；エムシロリムス、（５－｛２，４－ビス［（３５，）－３－メチルモルホリン－４－イル］ピリド［２，３－（ｉ］ピリミジン－７－イル｝－２－メトキシフェニル）メタノール（ＡＺＤ８０５５）；２－アミノ－８－［ｉｒａｗ５，－４－（２－ヒドロキシエトキシ）シクロヘキシル］－６－（６－メトキシ－３－ピリジニル）－４－メチル－ピリド［２，３－ＪＪピリミジン－７（８Ｈ）－オン（ＰＦ０４６９１５０２、ＣＡＳ１０１３１０１－３６－４）；及びＮ２－［１，４－ジオキソ－４－［［４－（４－オキソ－８－フェニル－４Ｈ－１－ベンゾピラン－２－イル）モルホリニウム－４－イル］メトキシ］ブチル］－Ｌ－アルギニルグリシル－Ｌ－ａ－アスパルチルＬ－セリン－，内塩（ＳＦ１１２６、ＣＡＳ９３６４８７－６７－１）、及びＸＬ７６５が含まれる。例示的な免疫調節剤には、例えば、アフツズマブ（Ｒｏｃｈｅ（登録商標）から入手可能）、ペグフィルグラスチム（ニューラスタ（Neulasta）（登録商標））；レナリドミド（ＣＣ－５０１３、レブラミド（登録商標））；サリドマイド（サロミド（Thalomid）（登録商標））、アクチミド（ＣＣ４０４７）；及びＩＲＸ－２（インターロイキン１、インターロイキン２、及びインターフェロンｙを含むヒトサイトカイン混合物、ＣＡＳ９５１２０９－７１－５、 IRX Therapeuticsから入手可能）が含まれる。例示的なアントラサイクリンには、例えば、ドキソルビシン（アドリアマイシン（登録商標）及びルベックス（登録商標））；ブレオマイシン（レノキサン（登録商標））；ダウノルビシン（ダウノルビシン塩酸塩、ダウノマイシン、及びルビドマイシン塩酸塩、セルビジン（登録商標））；ダウノルビシンリポソーム（クエン酸ダウノルビシンリポソーム、ＤａｕｎｏＸｏｍｅ（登録商標））；ミトキサントロン（ＤＨＡＤ、ノバントロン（Novantrone）（登録商標））；エピルビシン（エレンス^TM）；イダルビシン（イダマイシン（登録商標）、イダマイシンＰＦＳ（登録商標））；マイトマイシンＣ（ムタマイシン（登録商標））；ゲルダナマイシン；ハービマイシン；ラビドマイシン；及びデスアセチルラビドマイシンが含まれる。例示的なビンカアルカロイドには、例えば、酒石酸ビノレルビン（ナベルビン（登録商標））、ビンクリスチン（オンコビン（登録商標））、及びビンデシン（エルディシン（登録商標））；ビンブラスチン（硫酸ビンブラスチン、ビンカロイコブラスチン及びＶＬＢ、アルカバンＡＱ（登録商標）及びベルバン（登録商標）としても知られている）；及びビノレルビン（ナベルビン（登録商標））が含まれる。例示的なプロテオソーム阻害剤には、ボルテゾミブ（ベルケイド（登録商標））；カルフィルゾミブ（ＰＸ－１７１－００７、（５）－４－メチル－Ｎ－（（５）－ｌ－（（（５）－４－メチル－１－（（Ｒ）－２－メチルオキシラン－２－イル）－１－オキソペンタン－２－イル）アミノ）－１－オキソ－３－フェニルプロパン－２－イル）－２－（（５，）－２－（２－モルホリノアセトアミド）－４－フェニルブタンアミド）－ペンタンアミド）；マリゾミブ（ＮＰＴ００５２）；クエン酸イキサゾミブ（ＭＬＮ－９７０８）；デランゾミブ（ＣＥＰ－１８７７０）；及びＯ－メチル－Ｎ－
［（２－メチル－５－チアゾリル）カルボニル］－Ｌ－セリル－Ｏ－メチル－Ｎ－［（ＩＩＳ’）－２－［（２Ｒ）－２－メチル－２－オキシラニル］－２－オキソ－１－（フェニルメチル）エチル］－Ｌ－セリンアミド（ＯＮＸ－０９１２）が含まれる。

【0173】

当業者であれば、使用する化学療法剤を容易に特定することができる（例えば、Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ Ｄｒｕｇ Ｍａｎｕａｌ ２０１４，Ｅｄｗａｒｄ Ｃｈｕ，Ｖｉｎｃｅｎｔ Ｔ．ＤｅＶｉｔａ Ｊｒ．，Ｊｏｎｅｓ ＆Ｂａｒｔｌｅｔｔ Ｌｅａｒｎｉｎｇ；Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｃｈａｐｔｅｒ ８５ ｉｎ Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１８版；Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌｓ：Ｅｒａ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｌｙ Ｔａｒｇｅｔｅｄ Ａｇｅｎｔｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，Ｃｈａｐｔｅｒｓ ２８－２９ ｉｎ Ａｂｅｌｏｆｆ’ｓ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，２０１３ Ｅｌｓｅｖｉｅｒ；及びＦｉｓｃｈｅｒ Ｄ．Ｓ．（編）：Ｔｈｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ，４版 Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏｓｂｙ－Ｙｅａｒ Ｂｏｏｋ，２００３を参照のこと）。

【0174】

一実施態様では、ここに記載の活性化ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＧＩＴＲを標的とし、及び／又はＧＩＴＲ機能を調節する分子のレベル及び／又は活性を低下させる分子、Ｔｒｅｇ細胞集団を減少させる分子、ｍＴＯＲ阻害剤、ＧＩＴＲアゴニスト、キナーゼ阻害剤、非受容体チロシンキナーゼ阻害剤、ＣＤＫ４阻害剤、及び／又はＢＴＫ阻害剤と組み合わせて対象に投与される。

【0175】

［有効性］
例えば、ここに記載される状態の治療における、又はここに記載される応答（例えば、がん細胞の減少）を誘導する、活性化ＣＡＲ Ｔ細胞の有効性は、熟練した臨床医により決定されうる。しかし、治療は、ここに記載の方法による治療後に、ここに記載の状態の徴候又は症状の一又は複数が有益な形で変更され、他の臨床的に受け入れられる症状が改善され、寛解さえされ、又は所望の応答が、例えば少なくとも１０％まで誘導されるならば、その用語がここで使用されているような「有効な治療」と考えられる。有効性は、例えば、ここに記載の方法によって治療される状態のマーカー、指標、症状、及び／又は発生率或いは任意の他の適切な測定可能なパラメーターを測定することによって、評価することができる。

【0176】

ここに記載の方法による治療は、状態のマーカー又は症状のレベルを、例えば、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％又は少なくとも９０％以上低下させることができる。

【0177】

有効性は、入院によって評価される個体の悪化がないこと、又は医療介入の必要性（すなわち、疾患の進行の停止）によって測定することもできる。これらの指標を測定する方法は、当業者に知られており、及び／又はここに記載されている。治療は、個体又は動物（幾つかの非限定的な例はヒト又は動物を含む）における疾患の任意の治療を含み、（１）疾患の阻害、例えば症状（例えば、痛み又は炎症）の悪化の防止；又は（２）症状の重症度の緩和、例えば症状の後退を生じさせることを含む。疾患の治療のための有効量とは、それを必要とする対象に投与された場合、その疾患に対して、その用語についてここで定義されるような、有効な治療をもたらすのに十分な量を意味する。薬剤の有効性は、状態又は望ましい応答の物理的指標を評価することによって決定されうる。そのようなパラメーターの何れか一、又はパラメーターの任意の組み合わせを測定することにより、投与及び／又は治療の有効性をモニターすることは、十分に当業者の能力の範囲内である。所与のアプローチの有効性は、ここに記載されている状態の動物モデルにおいて評価することができる。実験動物モデルを使用する場合、マーカーの統計的に有意な変化が観察されると、治療の有効性が証明される。

【0178】

この出願を通して引用される、参照文献、発行済み特許、公開特許出願、及び同時係属中の特許出願を含む、全ての特許及びその他の刊行物は、例えば、ここに記載される技術に関連して使用されるかもしれないそのような刊行物に記載された方法論を説明し開示する目的で、出典明示によりここに明示的に援用される。これらの刊行物は、本出願の出願日より前のそれらの開示についてのみ提供される。この点に関し如何なるものも、発明者等が先の技術の理由で又は任意の他の理由のためにそのような開示に先行する権利がないことの自認と解釈されるべきではない。日付に関する全ての記述又はこれらの文書の内容に関する提示は、出願人が入手できる情報に基づいており、これらの文書の日付又は内容の正確さに関して何ら自認を構成するものではない。

【0179】

本開示の実施態様の説明は、網羅的であること又は本開示を開示された正確な形態に限定することを意図したものではない。本開示の特定の実施態様及び実施例を例示目的でここで説明するが、関連分野の当業者が認識するように、本開示の範囲内で様々な均等の変形が可能である。例えば、方法の工程又は機能が所与の順序で提示されているが、代替の実施態様では、異なる順序で機能を実行してもよく、又は機能は実質的に同時に実施されてもよい。ここで提供される開示の教示は、必要に応じて他の手順又は方法に適用することができる。ここで説明される様々な実施態様は、更なる実施態様を提供するために組み合わせることができる。本開示の態様は、必要に応じて、上記の参考文献及び出願の組成物、機能、及び概念を用いて本開示のまた更なる実施態様を提供するように変更することができる。更に、生物学的機能の均等性の考慮により、種類又は量において生物学的又は化学的作用に影響を与えることなく、タンパク質構造に幾らかの変更を加えることができる。詳細な説明に照らして、これらの変更及び他の変更を本開示に加えることができる。そのような変更は全て、添付の特許請求の範囲内に含まれることが意図される。

【0180】

前述の実施態様の何れかの特定の要素は、他の実施態様の要素と組み合わせるか、又は置き換えることができる。更に、本開示の所定の実施態様に関連する利点をこれら実施態様の文脈において説明したが、他の実施態様もまたそのような利点を示し得、全ての実施態様が本開示の範囲内に入るために必ずしもそのような利点を示す必要はない。

【0181】

ここに記載される技術は、決して更なる限定であると解釈されるべきではない、次の実施例によって更に例証される。

【0182】

［がん］
幾つかの実施態様では、ここに記載のＣＡＲＴ ＴＥＡＭなどのＣＡＲを含む免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）はまた異種抗原発現（例えば、メソテリン発現）を有するがんを治療するために使用することができる。例えば、ＣＡＲＴ ＴＥＡＭコンストラクトのＣＡＲ成分は、がんによって発現される一つの抗原に結合する細胞外抗原結合ドメインを含み得、ＣＡＲＴ ＴＥＡＭコンストラクトのＴＥＡＭ成分は、Ｔ細胞抗原（例えば、ＣＤ３）に加えてがんによって発現される第二抗原に結合しうる。ここで使用される「がん」は、その独特の形質、正常な細胞制御の喪失が未制御の成長、分化の欠如、局所組織浸潤、及び転移をもたらす細胞の過剰増殖を意味しうる。例示的ながんには、限定されないが、神経膠芽腫、前立腺がん、神経膠腫、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫、又は固形腫瘍、例えば肺がん及び膵臓がんが含まれる。白血病の非限定的な例には、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、及び慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）が含まれる。幾つかの実施態様では、がんはＡＬＬ又はＣＬＬである。リンパ腫の非限定的な例には、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯リンパ腫、バーキットリンパ腫、有毛細胞白血病（ＨＣＬ）、及びＴ細胞リンパ腫（例えば、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）及び未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）を含む末梢性Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ））が含まれる。幾つかの実施態様では、がんはＤＬＢＣＬ又は濾胞性リンパ腫である。固形腫瘍の非限定的な例には、副腎皮質腫瘍、胞状軟部肉腫、癌腫、軟骨肉腫、結腸直腸癌、類腱腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、内分泌腫瘍、内胚葉洞腫瘍、類上皮血管内皮腫、ユーイング肉腫、生殖細胞腫瘍（固形腫瘍）、骨及び軟部組織の巨細胞腫瘍、肝芽腫、肝細胞癌、メラノーマ、腎腫、神経芽細胞腫、非横紋筋肉腫軟部肉腫（ＮＲＳＴＳ）、骨肉腫、傍脊柱肉腫、腎細胞癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、滑膜肉腫、及びウィルムス腫瘍が含まれる。

【0183】

固形腫瘍は、骨、筋肉、又は臓器に見出され得、肉腫又は癌腫でありうる。ここに記載の技術の何れかの態様を使用して、本出願に列挙されていないがんを含む全てのタイプのがんを治療することができると考えられる。ここで使用される場合、「腫瘍」という用語は、例えば、悪性タイプ又は良性タイプの細胞又は組織の異常増殖を意味する。

【0184】

表面抗原分類（ＣＤ）分子は、白血球上に存在する細胞表面マーカーである。白血球が分化し、成熟すると、そのＣＤプロファイルが変化する。白血球ががん細胞（すなわち、リンパ腫）になる場合、そのＣＤプロファイルは疾患の診断に重要である。所定のタイプのがんの治療と予後は、がん細胞のＣＤプロファイルの決定に依存している。「Ｘ」がＣＤマーカーである「ＣＤＸ＋」は、ＣＤマーカーががん細胞中に存在していることを示し、「ＣＤＸ－」は、マーカーが存在していないことを示す。当業者は、標準的な技術を使用して、例えば、免疫蛍光を使用して、ＣＤ分子に結合した市販の抗体を検出することにより、がん細胞上に存在するＣＤ分子を評価することができる。

【0185】

［自己免疫疾患］
ここで使用される場合、「自己免疫疾患又は障害」は、その免疫系が異質細胞と正常細胞とを区別できないことによって特徴付けられる。これにより、プログラム細胞死のために正常細胞を標的とするその免疫系が生まれる。自己免疫疾患又は障害の非限定的な例には、炎症性関節炎、１型糖尿病、多発性硬化症、乾癬、炎症性腸疾患、ＳＬＥ、及び血管炎、アレルギー性炎症、例えばアレルギー性喘息、アトピー性皮膚炎、及び接触過敏症が含まれる。限定されると解釈されるべきではないが、自己免疫関連疾患又は障害の他の例には、関節リウマチ、多発性硬化症（ＭＳ）、全身性エリテマトーデス、グレーブス病（甲状腺機能亢進症）、橋本甲状腺炎（甲状腺機能低下症）、セリアック病、クローン病及び潰瘍性大腸炎、ギラン・バレー症候群、原発性胆管硬化症／肝硬変、硬化性胆管炎、自己免疫性肝炎、レイノー現象、強皮症、シェーグレン症候群、グッドパスチャー症候群、ウェゲナー肉芽腫症、リウマチ性多発性筋痛、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、慢性疲労症候群（ＣＦＳ）、乾癬、自己免疫性アジソン病、強直性脊椎炎、急性播種性脳脊髄炎、抗リン脂質抗体症候群、再生不良性貧血、特発性血小板減少性紫斑病、重症筋無力症、オプソクローヌス・ミオクローヌス症候群、視神経炎、オード甲状腺炎、天疱瘡、悪性貧血、イヌにおける多発性関節炎、ライター症候群、高安動脈炎、温式自己免疫性溶血性貧血、ウェゲナー肉芽腫症及び線維筋痛症（ＦＭ）が含まれる。幾つかの実施態様では、哺乳動物細胞は、免疫系の異常に低い活性をもたらす免疫系障害、又は外来物質（例えば、ウイルス又は細菌細胞）と戦う能力を妨げる免疫不全障害を有する患者から得られる。形質細胞は、感染との闘いに必要とされる抗体を産生し放出するように機能するＢリンパ球から生成される白血球である。ここで使用される場合、「形質細胞障害又は疾患」は、形質細胞の異常な増殖によって特徴付けられる。異常な形質細胞は、健康な形質細胞を「締め出す」ことができ、ウイルス又は細菌細胞などの異物と戦う能力が低下する。形質細胞障害の非限定的な例には、アミロイドーシス、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、骨硬化性骨髄腫（ＰＯＥＭＳ症候群）、意義不明の単クローン性ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、及び形質細胞骨髄腫が含まれる。

【0186】

［ＣＡＲ Ｔ細胞療法］
ここに記載の技術の一態様は、それを必要とする対象におけるがん、形質細胞障害、又は自己免疫疾患の治療方法であって、Ｔ細胞表面上にここに記載のＣＡＲポリペプチド（及び任意選択的な抗体試薬又はサイトカイン）を含めるようにＴ細胞を改変することと、ここに記載のＣＡＲ Ｔ細胞を対象に投与することとを含む、方法に関する。がんの場合、その方法は、診断されたがんの治療、がんの再発の予防、又はアジュバント若しくはネオアジュバント設定での使用のためのものでありうる。幾つかの実施態様では、対象はメソテリンを発現するがんを有する。

【0187】

ここに記載の技術の一態様は、それを必要とする対象におけるがん、形質細胞障害、又は自己免疫疾患の治療方法であって、ここに記載のＣＡＲポリペプチドの何れか（及び任意選択的な抗体試薬又はサイトカイン）を含む哺乳動物細胞の何れかの細胞を投与することを含む、方法に関する。態様の何れかの幾つかの実施態様では、改変されたＣＡＲ－Ｔ細胞が、対象への投与前に刺激され、及び／又は活性化される。

【0188】

幾つかの実施態様では、ここに記載のＣＡＲＴ ＴＥＡＭなどのＣＡＲを含む免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）は、メソテリンを発現するがん、例えば膵臓がん、肺がん、卵巣がん、子宮内膜がん、胆道がん、胃がん、又は中皮腫を治療するために使用することができる。幾つかの実施態様では、がんはメソテリンを発現する。幾つかの実施態様では、ＣＡＲ Ｔ細胞又はその薬学的組成物は、上記のようにがんを有する対象に投与される。幾つかの実施態様では、がんを有する対象に投与されるＣＡＲ Ｔ細胞は、抗メソテリンＣＡＲを含む。幾つかの実施態様では、がんを有する対象に投与されるＣＡＲ Ｔ細胞は、抗メソテリンＣＡＲ及びＦＡＰ ＴＥＡＭを含む。幾つかの実施態様では、がんを有する対象に投与されるＣＡＲ Ｔ細胞は、配列番号：１～５の何れか一つのアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む。

【0189】

幾つかの実施態様では、ここに記載のＣＡＲＴ ＴＥＡＭなどのＣＡＲを含む免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）は、腫瘍微小環境における、例えばＴｒｅｇによる免疫抑制を防止又は低下させるために使用することができる。更に、このようなＣＡＲＴ ＴＥＡＭは、腫瘍微小環境におけるＴ細胞の消耗を防止又は低下させるのに有用である。幾つかの実施態様では、ＣＡＲ Ｔ細胞又はその薬学的組成物は、上記の自己免疫疾患を有する対象に投与される。幾つかの実施態様では、がんを有する対象に投与されるＣＡＲ Ｔ細胞は、配列番号：１～５の何れか一つのアミノ酸配列を含む。幾つかの実施態様では、自己免疫疾患を有する対象に投与されるＣＡＲ Ｔ細胞は、抗メソテリンＣＡＲを含む。幾つかの実施態様では、自己免疫疾患を有する対象に投与されるＣＡＲ Ｔ細胞は、抗メソテリンＣＡＲ及びＦＡＰ ＴＥＡＭを含む。幾つかの実施態様では、自己免疫疾患を有する対象に投与されるＣＡＲ Ｔ細胞は、配列番号：１～５の何れか一つのアミノ酸配列を含む。

【実施例】

【0190】

実施例１：がんの治療のための抗メソテリンＣＡＲ－Ｔ細胞
メソテリンは、膵臓がんを含む多くのがんに対する有望な治療標的である。メソテリンを発現するがんを標的とするために、三種の異なるタイプのメソテリンキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を開発した：タイプ１はＳＳ１－ＢＢｚ ＣＡＲを発現し、タイプ２はＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ－ＢＢｚ ＣＡＲを発現し、タイプ３はＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｈ／Ｌ－ＢＢｚ ＣＡＲを発現する。開発した各抗メソテリンＣＡＲは、ＣＤ８リーダー、ｓｃＦｖメソテリン抗体のＶＨ及びＶＬドメイン、ＣＤ８ヒンジ／膜貫通、４－１ＢＢｚ細胞内ドメイン（ＩＣＤ）、ＣＤ３ ＩＣＤ、及びＴ２Ａを含む。ＳＳ１－ＢＢｚは、ＳＳ１ ｓｃＦｖ抗体のＶＨ及びＶＬを含む。ＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈは、ＭＧＨｍｅｓｏ１ ｓｃＦｖ抗体のＶＨ及びＶＬを含み、ＶＬドメインはＶＨドメインのＮ末端に位置する。ＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｈ／Ｌは、ＭＧＨｍｅｓｏ１ ｓｃＦｖ抗体のＶＨ及びＶＬを含み、ＶＨドメインはＶＬドメインのＮ末端に位置する。

【0191】

開発した抗メソテリンＣＡＲ Ｔ細胞のがん殺傷効力を、三種の異なるがん細胞株：ＢｘＰＣ－３（膵臓がん）、Ｃａｐａｎ－２（膵臓がん）、及びＮＣＩ－Ｈ２２６（肺がん）で試験した（図１１Ａ～１１Ｃ）。結果は、三種の抗メソテリンＣＡＲ Ｔ細胞全てが各タイプのがん細胞の特異的溶解を誘導したことを示した。（Ｌ／Ｈ配向抗メソテリンＣＡＲを含む）ＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ－４１ＢＢｚは、一貫して（Ｈ／Ｌ配向抗メソテリンＣＡＲを含む）ＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｈ／Ｌ－４１ＢＢｚと同等かそれ以上の特異的溶解を示したため、ＭＧＨｍｅｓｏ１Ｌ／Ｈ－４１ＢＢｚ ＣＡＲ Ｔ細胞を更なる研究のために選択した。

【0192】

ＳＳ１－ＢＢｚ及びＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ－４１ＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔ細胞のサイトカイン発現プロファイルを更に解析した（図１Ａ～１Ｅ、ｎ＝３複製）。結果は、抗メソテリンＣＡＲ（ＳＳ１－４１ＢＢｚ及びＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ－４１ＢＢｚ）の発現により、ＣＡＲ Ｔ細胞におけるＩＮＦ－γ、ＩＬ－２、ＧＭ－ＣＳＦ、ＴＮＦ－α、及びグランザイムＢの発現が大幅に増加したことを示した。加えて、結果は、ＳＳ１－ＢＢｚ及びＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ－４１ＢＢｚがメソテリン陽性Ｃａｐａｎ－２細胞を特異的に溶解したが、メソテリン陰性ＪｅＫｏ－１細胞（マントル細胞リンパ腫）は溶解しなかったことを示した（図１Ｅ～１Ｆ）。図１の結果は、ＳＳ１－４１ＢＢｚ細胞とＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ－４１ＢＢｚ細胞が類似の細胞機能及び細胞傷害性を示すことを証明している。

【0193】

ＳＳ１－４１ＢＢｚ及びＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ－４１ＢＢｚ ＣＡＲ Ｔ細胞の有効性を、マウスでインビボで更に試験した。図２Ａ～２Ｂは、ＣＡＲ Ｔをマウスに投与する一連の実験の詳細を示しており、一連の実験の結果は図３Ａ～１０Ｄに示される。マウスにＡｓＰＣ－１（膵臓がん）細胞を注射した後、ＣＡＲ Ｔ細胞を、異なる用量、異なる期間（７日又は１４日）、異なる方法（静脈内（ＩＶ）及び腹腔内注射（ＩＰ））で投与した。

【0194】

図３Ａ～３Ｄは、ＡｓＰＣ－１を注射したマウスへの１ｅ６のＳＳ１－ＢＢｚ及びＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ－ＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔ細胞の投与を比較している。図３Ａは、治療後７日目におけるＩＶ投与後のフラックス及び生存率を比較している。フラックスは１秒当たりの光子として定義され、腫瘍負荷の尺度である。試験したがん細胞株はルシフェラーゼで形質導入されており、Ｄ－ルシフェリン基質を注射すると光を発する。図３Ｂは、治療後１４日目にＩＶ投与した後のフラックス及び生存率を比較している。図３Ｃは、治療後７日目にＩＰ投与した後のフラックス及び生存率を比較している。図３Ｄは、治療後１４日目にＩＰ投与した後のフラックス及び生存率を比較している。総合すると、図３Ａ～３Ｄの結果は、ＩＰ注射で投与した場合、ＭＧＨｍｅｓｏ１ ＣＡＲ Ｔ細胞がＳＳ１ ＣＡＲ Ｔよりも効果的であることを示している。これらの結果は、メソテリン発現がんの治療におけるＭＧＨｍｅｓｏ１ ＣＡＲ Ｔ細胞の潜在的な有用性と利点、並びに前記ＣＡＲ Ｔ細胞の投与方法が治療の相対的な有効性の要因となりうることを実証している。

【0195】

図４Ａ～４Ｄは、ＡｓＰＣ－１を注射され、より高用量（２ｅ６細胞）のＳＳ１－ＢＢｚ又はＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ－ＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔ細胞を投与されたマウスのフラックス及び生存率をまた比較している。図４Ａ～４Ｄの結果は、ＭＧＨｍｅｓｏ１ ＣＡＲ Ｔ細胞のＩＰ投与がＩＶ投与よりも効果的であり、ＭＧＨｍｅｓｏ１ ＣＡＲ Ｔ細胞が７日目に投与された場合、ＳＳ１ ＣＡＲ Ｔ細胞よりも有効性が高いことを示している。これらの結果は更に、メソテリン発現がんの治療におけるＭＧＨｍｅｓｏ１ ＣＡＲ Ｔ細胞の潜在的な有用性と利点、並びに前記ＣＡＲ Ｔ細胞の投与のタイミングと投与方法の両方が治療の相対的な有効性の要因でありうることを実証している。

【0196】

図５Ａ～５Ｄは、異なる膵臓がん細胞株（ＢＸＰＣ３）を注射され、１ｅ６のＣＡＲ Ｔ細胞の用量でＳＳ１－ＢＢｚ又はＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ－ＢＢｚ ＣＡＲ Ｔ細胞を投与されたマウスのフラックス及び生存率を比較している。図５Ａ～５Ｄの結果は、マウスにおけるマウスＢＸＰＣ３がんを治療する場合、１ｅ６のＭＧＨｍｅｓｏ１ ＣＡＲ Ｔ細胞のＩＰ投与がＩＶ投与と同等かそれ以上に効果的であることを示している。図５Ａ～５Ｄの結果はまた、マウスのＢＸＰＣ３がんを治療する場合、ＳＳ１ ＣＡＲ Ｔ細胞とＭＧＨｍｅｓｏ１ ＣＡＲ Ｔ細胞は１４日目には類似の有効性を有するが、ＳＳ１ ＣＡＲ Ｔ細胞が７日目に僅かに増加した有効性を有していることを示している。

【0197】

図６Ａ～６Ｄは、ＢＸＰＣ３膵臓がん細胞を注射し、ＳＳ１－ＢＢｚ又はＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ－ＢＢｚ ＣＡＲ Ｔ細胞を２ｅ６のＣＡＲ Ｔ細胞の用量で投与したマウスのフラックス及び生存率を比較している。図６Ａ～６Ｄの結果は、ＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ ＣＡＲ Ｔ細胞を、図５Ａ～５Ｄと比較してこのより高用量でＢＸＰＣ３がんを有するマウスにＩＰ注射により投与した場合、ＳＳ１ Ｃａｒ Ｔ細胞と比較して有効性が向上したことを示している。これらの結果は、メソテリン発現がんをＭＧＨｍｅｓｏ１ ＣＡＲ Ｔ細胞で治療することの利点を証明しており、以前から知られているＣＡＲ（ＳＳ１）を発現するＣＡＲ Ｔ細胞に対する用量依存的な改善を示唆している。

【0198】

図７Ａ～７Ｄは、異なる膵臓がん細胞株（ＰＡＮＣ１）を注射され、１ｅ６のＣＡＲ Ｔ細胞の用量でＳＳ１－ＢＢｚ又はＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ－ＢＢｚ ＣＡＲ Ｔ細胞を投与されたマウスのフラックス及び生存率を比較している。図７Ａ～７Ｄの結果は、ＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＰＡＮＣ１がんのマウスにＩＰ注射で投与された場合、ＳＳ１ Ｃａｒ Ｔ細胞と比較して増加した有効性を有することを示している。これらの結果は、ＭＧＨｍｅｓｏ１ ＣＡＲ Ｔ細胞が別のメソテリン発現がんの治療に潜在的有用性と利点があること、並びに前記ＣＡＲ Ｔ細胞の投与方法が治療の相対的有効性の要因となりうることを証明している。

【0199】

図８Ａ～８Ｄは、ＰＡＮＣ１膵臓がん細胞を注射し、ＳＳ１－ＢＢｚ又はＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ－ＢＢｚ ＣＡＲ Ｔ細胞を２ｅ６のＣＡＲ Ｔ細胞の用量で投与したマウスのフラックス及び生存率を比較している。図８Ａ～８Ｄの結果は、ＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＰＡＮＣ１がんのマウスにＩＰ注射で投与した場合のＳＳ１ ＣＡＲ Ｔ細胞と比較して、がん細胞注射後１４日目に投与した場合の有効性が向上したことを示している。これらの結果は更に、メソテリン発現がんの治療におけるＭＧＨｍｅｓｏ１ ＣＡＲ Ｔ細胞の潜在的な有用性と利点、並びに前記ＣＡＲ Ｔ細胞の投与のタイミングと投与方法の両方が治療の相対的な有効性の要因でありうることを実証している。ＣＡＲ Ｔ細胞の最適な投与量、タイミング、及び投与経路をアッセイするために、一連の実験を実施した（図９Ａ～１０Ｄ）。図９Ａ～９Ｄは、異なる膵臓がん細胞株（ＣＡＰＡＮ２）を注射し、ＳＳ１－ＢＢｚ又はＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ－ＢＢｚ ＣＡＲ Ｔ細胞を２．５ｅ５のＣＡＲ Ｔ細胞の用量で投与したマウスのフラックス及び生存率を比較している。図９Ａ～９Ｄの結果は、ＳＳ１ ＣＡＲ Ｔ細胞とＭＧＨｍｅｓｏ１ ＣＡＲ Ｔ細胞がマウスのＣＡＰＡＮ２がんの治療に類似の有効性を有することを示している。図１０Ａ～１０Ｄは、ＣＡＰＡＮ２細胞を注射し、ＳＳ１－ＢＢｚ又はＭＧＨｍｅｓｏ１ Ｌ／Ｈ－ＢＢｚ ＣＡＲ Ｔ細胞を５ｅ５のＣＡＲ Ｔ細胞の用量で投与したマウスのフラックス及び生存率を比較している。図１０Ａ～１０Ｄの結果は、ＳＳ１ ＣＡＲ Ｔ細胞とＭＧＨｍｅｓｏ１ ＣＡＲ Ｔ細胞がマウスのＣＡＰＡＮ２がんの治療に類似の有効性を有することを示している。

【0200】

総合すると、これらの結果は、メソテリン発現がん、特に膵臓がんの治療におけるＭＧＨｍｅｓｏ１ ＣＡＲ Ｔ細胞の有用性を実証し、ＩＰによるＭＧＨｍｅｓｏ１ ＣＡＲ－Ｔ投与がＩＶより効果的であることを示唆し、投与のタイミングと方法によってはＭＧＨｍｅｓｏ１ ＣＡＲ Ｔ細胞がＳＳ１より強力でありうることを示唆している。加えて、結果は、ＭＧＨｍｅｓｏ１ ＣＡＲ Ｔ療法はＳＳ１ ＣＡＲ Ｔに必要な量よりも低い用量でより効果的でありうることを示唆している。結果はまた、２．５ｅ５の腫瘍細胞をマウスに移植でき、数百万個は必要ないことを示唆している。

【0201】

実施例２：ＴＥＡＭ ＦＡＰを含む抗メソテリンＣＡＲ－Ｔ細胞
ＣＡＲ Ｔ細胞は、血液悪性腫瘍の治療に革命をもたらした。しかし、固形がんタイプを標的とすることは、その異質な標的抗原の発現、単一の標的抗原の抗原エスケープ、及び腫瘍微小環境のために、より困難であることが判明している。これらの課題に対処するために、ＣＡＲ Ｔ細胞をリダイレクトし、バイスタンダーＴ細胞をＦＡＰにリクルートできる線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）に対するＴ細胞エンゲージ分子（ＴＥＡＭ）を分泌するメソテリンに向けられたキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞をデザインした。これにより、腫瘍細胞自体よりもむしろ間質及び腫瘍微小環境を標的とすることが可能になる。

【0202】

メソテリンは腫瘍浸潤に関連しており、中皮腫、膵臓がん、胸膜がん、乳がん、卵巣がん、並びに他のタイプのがんなど、様々ながんのタイプで高度に発現される。線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）は、がん関連線維芽細胞（ＣＡＦ）によって発現され、沈着して細胞外マトリックス（ＥＣＭ）に分布している。ＣＡＦは異なる腫瘍促進機能に関与している。ＦＡＰを標的とするＴＥＡＭを使用すると、ＣＡＦとＥＣＭ自体を標的とすることが可能になる。

【0203】

抗メソテリンＣＡＲ Ｔコンストラクトを、実施例１のＳＳ１抗メソテリンＣＡＲ、ＦＡＰ ｓｃＦｖ抗体試薬シブロツズマブを含むＴＥＡＭ、及びＣＤ３ ｓｃＦｖ抗体試薬（ここでは抗メソテリンＣＡＲ ＦＡＰ ＴＥＡＭと呼ぶ）を含むようにデザインした（図１２Ａ）。ＳＳ１抗メソテリンＣＡＲ ＦＡＰ ＴＥＡＭは、ドナーＴ細胞への効率的な形質導入を示した（図１２Ｂ）；抗メソテリンＣＡＲ ＦＡＰ ＴＥＡＭでは、１９．６％の平均形質導入効率が達成された。潜在的な有効性を決定するために、ＣＤ６９活性化アッセイを使用してＳＳ１抗メソテリンＣＡＲ ＦＡＰ ＴＥＡＭ Ｔ細胞活性化を定量した。結果は、ＳＳ１抗メソテリンＣＡＲ ＦＡＰ Ｔｅａｍ ＣＡＲ Ｔ細胞がメソテリンと接触すると活性化されたことを示し（図１３）、ＣＡＲが正しく機能していることを示している（ｎ＝３の個々のドナー）。

【0204】

ＳＳ１抗メソテリンＣＡＲ ＦＡＰ ＴＥＡＭ Ｔ細胞もまた、ＦＡＰを効率的に分泌することが示された。ＦＡＰ（ヒト包皮線維芽細胞（ＨＦＦ）細胞）又はＣＤ１９（Ｋ５６２細胞、陰性対照）を発現する細胞を、ＣＡＲ ＦＡＰ ＴＥＡＭ Ｔ細胞培養物の上清で処理した（図１４Ａ～１４Ｃ）。結果は、ＨＦＦ細胞にＦＡＰ ＴＥＡＭが有意に結合したのに対し（図１４Ａ、１４Ｃ）、Ｋ５６２細胞には結合しなかったことを示している。ＦＡＰ結合は、ＴＥＡＭに結合する抗Ｈｉｓ抗体を使用して検出した。これらの結果は、１）ＦＡＰ ＴＥＡＭが適切に産生され分泌されていること、及び２）ＦＡＰ ＴＥＡＭがＦＡＰ発現細胞に特異的であることを示唆している。

【0205】

ＳＳ１抗メソテリンＣＡＲ ＦＡＰ ＴＥＡＭ Ｔ細胞は、細胞培養においてＨＦＦ細胞に対して細胞傷害性を示した（図１５Ａ～１５Ｂ、ｎ＝３の個々のＴ細胞ドナー、各ドナーは二重）。対照的に、ＳＳ１抗メソテリンＣＡＲ ＣＤ１９ ＴＥＡＭ Ｔ細胞はＨＦＦ細胞に対して毒性を示さず、ＦＡＰ ＴＥＡＭが細胞傷害性に大きく寄与していることを示唆している。インピーダンスベースの細胞傷害性アッセイを使用した共培養系では、バイスタンダーＴ細胞による腫瘍溶解とＣＡＲＴ細胞のリダイレクトを観察することができた。分割細胞培養を使用したインピーダンスアッセイは、ＳＳ１抗メソテリンＣＡＲ ＦＡＰ ＴＥＡＭ Ｔ細胞との物理的相互作用がない場合でも、ＦＡＰ ＴＥＡＭの分泌は活性化バイスタンダーＴ細胞を産生し、がん関連線維芽細胞（ＣＡＦ）に対する細胞傷害性を生じるのに十分であることを示唆している（図１５Ｅ、ｎ＝３の個々のＴ細胞ドナー、各ドナーは二重）。しかし、ＣＡＲ ＦＡＰ ＴＥＡＭ Ｔ細胞とがんとの物理的相互作用により、がん細胞が殺される割合が増加する場合がある（図１５Ａ、１５Ｅ）。

【0206】

ＳＳ１抗メソテリンＣＡＲ ＦＡＰ ＴＥＡＭは、インビボでの膵臓がん増殖をまた減少させた。実験は、その混合物が膵臓がんと腫瘍微小環境（ＴＭＥ）を模倣する、がん関連線維芽細胞（ＣＡＦ）と混合した皮下移植膵臓がん細胞株のマウスモデルで実施した。抗メソテリンＣＡＲ ＦＡＰ ＴＥＡＭ細胞の注射は、対照コンストラクト及び非形質導入Ｔ細胞（ＵＴＤ）と比較して、優れた腫瘍制御をもたらした（図１６）。これらの結果は、ＴＭＥと組み合わせてメソテリン発現がんを治療する際の抗メソテリンＣＡＲ ＦＡＰ ＴＥＡＭの有効性を実証しており、抗メソテリンＣＡＲ ＦＡＰ ＴＥＡＭのその有効性はインビボでの使用にまで及ぶ。

【0207】

次に、ＦＡＰ発現線維芽細胞とＣＡＲ Ｔ細胞間のＦＡＰ ＴＥＡＭ媒介物理的相互作用の強さ（例えば、結合活性）を音響顕微鏡法を使用して定量した。ＨＦＦ（ヒト包皮線維芽細胞）を、ｚ－Ｍｏｖｉ Ｃｅｌｌ Ａｖｉｄｉｔｙ Ａｎａｌｙｚｅｒ（Ｌｕｍｉｃｋｓ）で試験する前に、少なくとも３時間、ポリＬリジンをコーティングしたマイクロ流体チップに付着させた。単離したＴＥＡＭ分子と共に共インキュベートした、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ遠赤色標識（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）フローサイトメトリーで選別したＣＡＲ Ｔ細胞又は非形質導入Ｔ細胞（ＵＴＤ）を、音響力を増加させる前に５分間結合させた。実験は、３人の正常ドナーから産生されたＴＥＡＭ分子と共に共インキュベートしたＵＴＤを含む、二種の異なるＣＡＲ Ｔ細胞コンストラクトを用いて実施した。結果は、ＦＡＰ特異的ＴＥＡＭ分子が、ＵＴＤと比較して抗メソテリンＣＡＲ ＦＡＰ ＴＥＡＭ細胞の結合活性を高めるだけでなく、ＦＡＰ特異的分子と共培養されたＵＴＤの結合活性も高めることを示した（図１７）。これらの結果は、ＦＡＰ ＴＥＡＭがＣＡＲの存在とは無関係にＴ細胞を補充することができ、免疫系の活性をＴＭＥに標的化するのに広く有用でありうることを示唆している。

【0208】

総合すると、これらの結果は、分泌ＴＥＡＭＳをＣＡＲ Ｔ細胞に添加することで、更に二つの治療方法が開かれることを示している。第一は、細胞外マトリックスだけでなく、細胞外マトリックス生成がん関連線維芽細胞もまた標的とすること。第二は、ＣＡＲＴ細胞とバイスタンダーＴ細胞を補充してリダイレクトすること。これらの結果に基づくと、細胞外マトリックスを標的とするＴＥＡＭを分泌するＣＡＲＴ細胞は、一般的に固形腫瘍におけるＣＡＲＴ細胞の有効性を増加させる可能性がある。

【図1A-1C】

【図1D-1E】

【図1F】

【図2A】

【図2B】

【図3A-3B】

【図3C-3D】

【図4A-4B】

【図4C-4D】

【図5A-5B】

【図5C-5D】

【図6A-6B】

【図6C-6D】

【図7A-7B】

【図7C-7D】

【図8A-8B】

【図8C-8D】

【図9A-9B】

【図9C-9D】

【図10A-10B】

【図10C-10D】

【図11A-11B】

【図11C】

【図12A】

【図12B】

【図13】

【図14A-14B】

【図14C】

【図15A-15B】

【図15C-15D】

【図15E】

【図16】

【図17】

【配列表】

2024540359000001.xml

【国際調査報告】