知財求人 - 知財ポータルサイト「IP Force」
▶ アメリカン ダイアグノスティックス アンド セラピー， エルエルシー （エーディーエックスアールエックス）の特許一覧
特表2024-540374がん胎児性抗原に対するモノクローナル抗体、及びそれらの使用
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-10-31
(54)【発明の名称】がん胎児性抗原に対するモノクローナル抗体、及びそれらの使用
(51)【国際特許分類】
C07K 16/28 20060101AFI20241024BHJP
C12N 15/13 20060101ALI20241024BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20241024BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20241024BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20241024BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20241024BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20241024BHJP
C12Q 1/02 20060101ALI20241024BHJP
C12Q 1/6886 20180101ALI20241024BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20241024BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20241024BHJP
A61K 47/68 20170101ALI20241024BHJP
A61K 31/711 20060101ALI20241024BHJP
A61K 48/00 20060101ALI20241024BHJP
A61K 35/76 20150101ALI20241024BHJP
G01N 33/574 20060101ALI20241024BHJP
G01N 33/531 20060101ALI20241024BHJP
【ＦＩ】
C07K16/28
C12N15/13 ZNA
C12N15/63 Z
C12N1/15
C12N1/19
C12N1/21
C12N5/10
C12Q1/02
C12Q1/6886 Z
A61K39/395 D
A61K39/395 N
A61P35/00
A61K47/68
A61K31/711
A61K48/00
A61K35/76
G01N33/574 E
G01N33/531 A
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024526885
(86)(22)【出願日】2022-11-04
(85)【翻訳文提出日】2024-05-24
(86)【国際出願番号】 US2022079296
(87)【国際公開番号】W WO2023081818
(87)【国際公開日】2023-05-11
(31)【優先権主張番号】63/275,998
(32)【優先日】2021-11-05
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/336,676
(32)【優先日】2022-04-29
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】524166835
【氏名又は名称】アメリカン ダイアグノスティックス アンド セラピー， エルエルシー （エーディーエックスアールエックス）
(74)【代理人】
【識別番号】100078282
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 秀策
(74)【代理人】
【識別番号】100113413
【弁理士】
【氏名又は名称】森下 夏樹
(74)【代理人】
【識別番号】100181674
【弁理士】
【氏名又は名称】飯田 貴敏
(74)【代理人】
【識別番号】100181641
【弁理士】
【氏名又は名称】石川 大輔
(74)【代理人】
【識別番号】230113332
【弁護士】
【氏名又は名称】山本 健策
(72)【発明者】
【氏名】アルパー， ウズゲ
【テーマコード（参考）】
4B063
4B065
4C076
4C084
4C085
4C086
4C087
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B063QA01
4B063QA19
4B063QQ36
4B063QR16
4B063QS33
4B065AA01X
4B065AA01Y
4B065AA57X
4B065AA57Y
4B065AA72X
4B065AA72Y
4B065AA83X
4B065AA83Y
4B065AA90X
4B065AA90Y
4B065AB01
4B065AC14
4B065BA02
4B065CA44
4B065CA46
4C076AA95
4C076CC27
4C076CC41
4C076EE59
4C084AA13
4C084NA05
4C084NA14
4C084ZB261
4C084ZB262
4C085AA13
4C085AA14
4C085AA26
4C085AA27
4C085BB01
4C085BB36
4C085DD62
4C085EE01
4C086AA01
4C086AA02
4C086AA03
4C086EA16
4C086MA01
4C086MA04
4C086NA05
4C086NA14
4C086ZB26
4C087AA01
4C087AA02
4C087AA03
4C087BC83
4C087CA12
4C087NA05
4C087NA13
4C087NA14
4C087ZB26
4H045AA10
4H045AA20
4H045AA30
4H045CA40
4H045DA76
4H045EA20
4H045EA50
4H045FA74
(57)【要約】
本発明は、ＣＥＡの検出、ＣＥＡ発現に関連する障害の治療、異常なＣＥＡ発現を特徴とするがんの診断、及びがん薬物療法の有効性の予測に使用するための抗がん胎児性抗原（ＣＥＡ）抗体を提供する。抗ＣＥＡ抗体、抗体断片、モノクローナル抗体、抗体コンジュゲート、記載される抗体を含む組成物、及びそれらの使用方法が提供される。
【選択図】図９Ａ
【選択図】図９Ａ
【特許請求の範囲】
【請求項1】
（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１と、（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２と、（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３と、（ｄ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１と、（ｅ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２と、（ｆ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３と、を含む、単離抗体又は抗体断片。
【請求項2】
単離抗体であって、前記抗体が、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、前記ＶＨが、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であり、かつ配列番号３を含むＨＣＤＲ３を含み、前記ＶＬが、配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であり、かつ配列番号６を含むＬＣＤＲ３を含む、単離抗体。
【請求項3】
前記抗体が、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、前記ＶＨが、配列番号７及び配列番号３のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号８及び配列番号６のアミノ酸配列を含む、請求項１又は２に記載の単離抗体。
【請求項4】
前記抗体が、モノクローナル抗体である、先行請求項のいずれか一項に記載の単離抗体又は抗体断片。
【請求項5】
前記抗体が、完全ヒト抗体である、先行請求項のいずれか一項に記載の単離抗体又は抗体断片。
【請求項6】
前記抗体が、抗体断片である、先行請求項のいずれか一項に記載の単離抗体又は抗体断片。
【請求項7】
前記断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、又は（Ｆａｂ’）２である、請求項６に記載の単離抗体又は抗体断片。
【請求項8】
前記抗体が、全長抗体である、請求項１～５のいずれか一項に記載の単離抗体又は抗体断片。
【請求項9】
前記抗体のＦｃ領域が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＧ４．１、又はＩｇＧ４．２を含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の単離抗体又は抗体断片。
【請求項10】
請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体又は抗体断片と、薬学的に許容される担体と、を含む、組成物。
【請求項11】
固相上に固定された、請求項１～９のいずれか一項に記載の単離抗体又は抗体断片。
【請求項12】
検出可能に標識された、請求項１～９のいずれか一項に記載の単離抗体又は抗体断片。
【請求項13】
細胞傷害性放射性核種にコンジュゲートされた、請求項１～９のいずれか一項に記載の単離抗体又は抗体断片。
【請求項14】
細胞傷害性薬物にコンジュゲートされた、請求項１～９のいずれか一項に記載の単離抗体又は抗体断片。
【請求項15】
細胞傷害性タンパク質にコンジュゲートされた、請求項１～９のいずれか一項に記載の単離抗体又は抗体断片。
【請求項16】
請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体又は抗体断片をコードする、単離ＤＮＡ配列。
【請求項17】
配列番号１１又はその断片を含む、請求項１６に記載のＤＮＡ。
【請求項18】
配列番号１２又はその断片を含む、請求項１６に記載のＤＮＡ。
【請求項19】
配列番号１１又はその断片と、配列番号１２又はその断片と、を含む、請求項１６に記載のＤＮＡ。
【請求項20】
請求項１６～１９のいずれか一項に記載のＤＮＡ配列を含む、ベクター。
【請求項21】
請求項２０に記載のベクターで形質転換された、宿主細胞。
【請求項22】
抗体の産生のためのプロセスであって、請求項２１に記載の宿主細胞を培養することと、抗体分子を単離することと、を含む、プロセス。
【請求項23】
配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であり、かつ配列番号３を含むＶＨと、配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であり、かつ配列番号６を含むＶＬと、を含む、単離抗体。
【請求項24】
がんを治療する方法であって、治療有効量の請求項１～９若しくは１３～１５のいずれか一項に記載の抗ＣＥＡ抗体、請求項１０に記載の組成物、又は請求項１６～２０のいずれか一項に記載のＤＮＡ若しくはベクターを、それを必要とする対象に投与することを含む、方法。
【請求項25】
ＣＥＡ抗原を検出するためのイムノアッセイであって、（ａ）試料を、有効結合量の請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体又は抗体断片と接触させることと、（ｂ）前記ＣＥＡ抗原への前記抗体の結合を検出することによって、前記抗原を検出することと、を含む、イムノアッセイ。
【請求項26】
前記アッセイが、ＣＥＡ抗原を発現するがん細胞を検出するために使用される、請求項２５に記載のイムノアッセイ。
【請求項27】
前記アッセイが、固形腫瘍を検出するために使用される、請求項２５に記載のイムノアッセイ。
【請求項28】
前記がんが、結腸直腸がん、肝臓がん、胃がん、卵巣がん、甲状腺がん、肺がん、乳がん、又は膵臓がんである、請求項２６又は２７に記載のイムノアッセイ。
【請求項29】
対象におけるがんを検出する方法であって、がんを有する対象又はがんを有する疑いのある対象から単離された試料に、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体を接触させることを含む、方法。
【請求項30】
前記がんが、固形腫瘍である、請求項２９に記載の方法。
【請求項31】
前記固形腫瘍が、結腸直腸がん、肝臓がん、胃がん、卵巣がん、甲状腺がん、肺がん、乳がん、又は膵臓がんである、請求項２９に記載の方法。
【請求項32】
ＣＥＡ抗原を発現する細胞を含む固形腫瘍がんの免疫組織化学的検出のためのキットであって、（ａ）請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体と、（ｂ）検出可能な標識にコンジュゲートされた二次抗体であって、ＣＥＡ抗原に結合したときに、前記（ａ）の抗体に結合し、かつそれを検出することができる、二次抗体と、を含む、キット。
【請求項33】
対象における固形腫瘍がんの状態を判定するための方法であって、（ａ）固形腫瘍がんを有する対象から試料を取り出すことと、（ｂ）前記試料を、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体又は抗体断片と接触させ、それによって、ＣＥＡ抗原と前記抗体又は抗体断片との複合体を形成することと、（ｃ）標本を、抗原－抗体複合体に特異的な標識で標識することと、（ｄ）前記標識を検出することによって、前記抗原－抗体複合体の存在を検出することと、を含む、方法。
【請求項34】
前記固形腫瘍がんが、結腸直腸がん、肝臓がん、胃がん、卵巣がん、甲状腺がん、肺がん、乳がん、又は膵臓がんである、請求項３３に記載の方法。
【請求項35】
前記固形腫瘍がんが、膵臓がんである、請求項３３に記載の方法。
【請求項36】
前記対象が、がんと診断されており、かつ療法を受けているか、又は受けようとしている、請求項３３～３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項37】
前記試料が、療法開始前に、前記対象から単離される、請求項３６に記載の方法。
【請求項38】
前記試料が、療法開始後に前記対象から単離される、請求項３６に記載の方法。
【請求項39】
後の時点で工程（ａ）～（ｄ）を繰り返すことを更に含む、請求項３３～３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項40】
前記後の時点が、前記対象が療法を開始した後である、請求項３９に記載の方法。
【請求項41】
前記後の時点が、前記対象が新しい又は第２の（共）療法を開始した後である、請求項３９に記載の方法。
【請求項42】
前記療法が、化学療法又は放射線である、請求項４０又は４１に記載の方法。
【請求項43】
前記化学療法が、エルロチニブ、フルオロウラシル、又はオキサリプラチンである、請求項４２に記載の方法。
【請求項44】
前記療法が、ホイップル処置、遠位膵摘出術、及び全膵摘出術を含む手術、放射線療法、陽子線療法、定位放射線（ＳＢＲＴ）若しくはサイバーナイフ、免疫療法、標的療法、又は化学療法である、請求項４０又は４１に記載の方法。
【請求項45】
ＣＥＡレベルが判定され、前記後の時点でより高いＣＥＡレベルが、前記療法が完全に有効ではないことを示し、前記後の時点で同じ又はより低いＣＥＡ抗原レベルが、前記療法が少なくとも部分的に有効であることを示す、請求項３３～４４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項46】
前記対象が、寛解状態にある、請求項３３～４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項47】
前記対象が寛解状態となった後の時点で工程（ａ）～（ｄ）を繰り返すことを更に含み、前記ＣＥＡレベルが判定され、前記後の時点でより高いＣＥＡレベルが、前記がんがもはや寛解状態ではないことを示し、前記後の時点で同じ又はより低いＣＥＡレベルが、前記療法が少なくとも部分的寛解状態であり続けていることを示す、請求項４６に記載の方法。
【請求項48】
前記試料が、全血、血清、若しくは血漿を含む血液、組織、又は細胞である、請求項３３～４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項49】
前記方法が、コンピュータ断層撮影の代替物である、請求項３３～４８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項50】
ＣＥＡの遺伝子産物及びその相同体の発現を特徴とするがんを検出するための方法であって、（ａ）対象から生体試料を単離することによって、がんを有するヒト患者においてＣＥＡによって発現される遺伝子産物及びその相同体を同定する工程であって、前記試料が、ＣＥＡ遺伝子が発現された場合に、ＣＥＡ遺伝子産物を含むものである、同定する工程と、（ｂ）前記生体試料を、請求項１～９若しくは１３～１５のいずれか一項に記載の抗ＣＥＡ抗体、又は請求項１０に記載の組成物と接触させて、試料－抗体複合体を作製することによって、バイオマーカーとして前記遺伝子産物を利用する工程と、（ｃ）任意の非結合抗体を除去し、次いで、前記試料－抗体複合体を、前記抗体又は試料－抗体複合体に特異的な標識と接触させる工程と、（ｄ）前記標識を検出することによって、前記抗原－抗体複合体の存在を検出する工程であって、前記標識の検出が、がんの検出を示す、検出する工程と、を含む、方法。
【請求項51】
がんを有する対象の状態を判定する方法であって、（ａ）対象から試料を得ることと、
（ｂ）前記試料を、請求項１～９若しくは１３～１５のいずれか一項に記載の抗体若しくは抗体断片、又は請求項１０に記載の組成物と接触させることと、
（ｃ）前記抗体又は抗体断片によって検出されるＣＥＡの量を判定することであって、陽性染色が悪性又は良性のがんを示し、陰性染色が前記細胞ががん性でないことを示す、判定することと、を含む、方法。
【請求項52】
患者における膵臓がんを検出するための方法であって、（ａ）膵臓がんの疑いがあるか、又は膵臓がんを有する患者から膵臓又は血液の標本を取り出すことと、（ｂ）前記標本を、請求項１～９若しくは１３～１５のいずれか一項に記載の抗体若しくは抗体断片、又は請求項１０に記載の組成物と接触させ、それによって、前記標本中に抗原－抗体複合体を形成することと、（ｃ）前記工程（ｂ）の抗体が標識されていない場合、前記標本を、前記抗体又は抗原－抗体複合体に特異的な標識で標識することと、（ｄ）前記標識を検出することによって、前記抗原－抗体複合体の存在を検出することと、（ｅ）陰性対照と比較して、ＣＥＡ抗原レベルを判定することであって、前記陰性対照よりも高いＣＥＡ抗原レベルが、膵臓がんを示す、判定することと、を含む、方法。
【請求項53】
前記試料が、膵臓であり、前記陰性対照が、がんを有しない対象由来の同様の膵臓試料である、請求項５２に記載の方法。
【請求項54】
前記試料が、血液であり、前記陰性対照が、分析されたときに０～２．５ｎｇ／ｍＬのＣＥＡを有する血液試料である、請求項５２に記載の方法。
【請求項55】
前記方法が、インビトロで実行される、請求項５２に記載の方法。
【請求項56】
前記膵臓がんが、初期ステージであり、前記方法が、この初期ステージでＣＥＡ抗原を検出することができる、請求項５２～５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項57】
前記膵臓がんが、ステージＩ、ＩＩ、ＩＩＩ、又はＩＶにあり、前記方法が、この初期ステージでＣＥＡ抗原を検出することができる、請求項５２～５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項58】
膵臓がんの免疫組織化学的検出のためのキットであって、（ａ）それぞれ配列番号１、２及び３を含む重鎖のＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列及びＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号４、５及び６を含む軽鎖のＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列及びＣＤＲ３配列を有するモノクローナル抗体と、（ｂ）検出可能な標識又は別個のコンジュゲートされていない検出可能な標識にコンジュゲートされた二次抗体であって、前記検出可能な標識又は別個のコンジュゲートされていない検出可能な標識が、前記二次抗体、前記抗体－抗原複合体、又は前記（ａ）のモノクローナル抗体に結合する、二次抗体と、を含む、キット。
【請求項59】
患者から採取された組織標本中の膵臓がんを検出する免疫組織化学的方法であって、ａ）組織標本を得る工程と、
ｂ）前記組織標本を、請求項１～９若しくは１３～１５のいずれか一項に記載の抗体断片の抗体、又は請求項１０に記載の組成物と接触させる工程と、
ｃ）工程ｂ）の後で、前記組織標本を、前記二次抗体、前記抗体－抗原複合体、又は前記抗体に結合する検出可能な標識と接触させる工程と、
ｄ）前記組織標本を、免疫組織化学染色で染色する工程と、を含み、
前記染色が、前記組織標本中の抗体結合及び膵臓がんの存在を示す、免疫組織化学的方法。
【請求項60】
組織標本と、請求項１～９若しくは１３～１５のいずれか一項に記載の抗体若しくは抗体断片、又は請求項１０に記載の組成物との抗体－抗原複合体と、を含む、組成物であって、前記組織標本が、がんに罹患している患者からのものである、組成物。
【請求項61】
前記がんが、結腸直腸がん、肝臓がん、胃がん、卵巣がん、甲状腺がん、肺がん、乳がん、又は膵臓がんである、請求項６０に記載の組成物。
【請求項62】
がんを検出するための、請求項１０に記載の組成物、又は請求項１～９若しくは１０～１３のいずれか一項に記載の抗体若しくは抗体断片の、使用。
【請求項63】
前記がんが、結腸直腸がん、肝臓がん、胃がん、卵巣がん、甲状腺がん、肺がん、乳がん、又は膵臓がんである、請求項６２に記載の組成物。
【請求項64】
がんの進行及び／又はがん治療薬の治療有効性を監視するための方法であって、（ａ）第１の時点でがんを有するヒト患者から初期試料を得ることと、
（ｂ）前記試料を、請求項１～９若しくは１３～１５のいずれか一項に記載の抗体若しくは抗体断片、又は請求項１０に記載の組成物と接触させて、抗原－抗体複合体を形成することと、
（ｃ）前記標本を、前記抗原－抗体複合体に特異的な標識で標識することと、
（ｄ）前記標識を検出することによって、前記抗原－抗体複合体の存在を検出することと、
（ｅ）前記抗体又は抗体断片によって検出されたＣＥＡ抗原レベルを判定して、前記患者のがんと関連するＣＥＡ抗原のベースラインレベルを決定することと、
（ｆ）第２の（後の）時点で第２の試料を得ることであって、任意選択的に、前記第２の時点が、前記対象が療法を受けている期間の後である、得ることと、
（ｇ）工程（ｂ）～（ｅ）を繰り返して、前記患者のがんに関連する第２のＣＥＡ抗原レベルを判定することと、
（ｈ）前記第２の時点での前記ＣＥＡ抗原レベルがベースライン時のレベルよりも高い場合に、前記患者のがんが進行したと判定し、前記第２の時点での前記ＣＥＡ抗原レベルがベースライン時の前記レベルよりも低い場合に、前記患者のがんが退縮したと判定することと、を含む、方法。
【請求項65】
前記がんが、結腸直腸がん、肝臓がん、胃がん、卵巣がん、甲状腺がん、肺がん、乳がん、又は膵臓がんである、請求項６４に記載の方法。
【請求項66】
前記固形腫瘍がんが、膵臓がんである、請求項６４に記載の方法。
【請求項67】
前記第２の時点での前記ＣＥＡの増加が、前記がんの進行を示す、請求項６４に記載の方法。
【請求項68】
前記第２の時点での前記ＣＥＡの減少が、前記がんの退縮を示す、請求項６４に記載の方法。
【請求項69】
前記第１の時点が、療法前又は初期診断時である、請求項６４に記載の方法。
【請求項70】
前記第１の時点が、療法後又は初期診断時である、請求項６４に記載の方法。
【請求項71】
前記第２の時点が、療法を受けた後である、請求項６４に記載の方法。
【請求項72】
前記方法が、インビトロで実行される、請求項６４に記載の方法。
【請求項73】
前記療法が、ホイップル処理、遠位膵摘出術、及び全膵摘出術を含む手術、放射線療法、陽子線療法、定位放射線（ＳＢＲＴ）又はサイバーナイフ、免疫療法、標的療法、並びに化学療法である、請求項７０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、２０２２年４月２９日に出願された米国出願第６３／３３６，６７６号及び２０２１年１１月５日に出願された米国出願第６３／２７５，９９８号に対する優先権を主張し、その内容全体は、あらゆる目的のために参照により本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０２２年４月２９日に出願された米国出願第６３／３３６，６７６号及び２０２１年１１月５日に出願された米国出願第６３／２７５，９９８号に対する優先権を主張し、その内容全体は、あらゆる目的のために参照により本明細書に組み込まれる。
【0002】
本発明は、がん胎児性抗原（本明細書において「ＣＥＡ」とも称される）を結合するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）及びその抗原結合断片に関する。したがって、本発明は、これらのｍＡｂ抗体、特に、ＣＥＡを検出するための、並びにがんなどの異常なＣＥＡ発現に関連するか、又はそれに関連することが知られる疾患及び状態を診断及び治療するためのそれらの使用を包含する。
【背景技術】
【0003】
がん胎児性抗原（ＣＥＡ）は、約１８０，５００ダルトン（１８０ｋＤａ）の分子量を有する免疫グロブリンのファミリーに属する。ＣＥＡは、発達中の赤ん坊（胎児）のある特定の組織に存在するタンパク質であるが、赤ん坊が生まれるまでにその発現は非常に低いレベルに低下する。成人では、ＣＥＡは通常、血中に非常に低いレベルで存在するが、ある特定のタイプのがんでは上昇し得る。ＣＥＡＣＡＭ５又はＣＤ６６ｅとしても知られるＣＥＡは、胃腸管及び膵臓の内胚葉由来上皮の悪性腫瘍において発見された（Ｇｏｌｄ ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １２２：４６７－４８１（１９６５））。ほぼ５０年前にＣＥＡが発見されて以来、ヒトがん腫の大部分において過剰発現されることが明らかになっている（Ｇｏｌｄ ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １２２：４６７－４８１（１９６５）、Ｂｌｕｍｅｎｔｈａｌ ｅｔ ａｌ．ＢＭＣ Ｃａｎｃｅｒ ７：１－１５（２００７））。ＣＥＡの機能は、腸、網状内皮系、及び肝実質細胞から体内の全ての増殖細胞に鉄を輸送することである。ＣＥＡはまた、血清からのある特定の有機物及びアレルゲンの除去に関与する顆粒球／花粉結合タンパク質（ＧＰＢＰ）としての生理学的役割を有し得、細胞増殖を刺激する更なる役割を有し得る。ヒトＣＥＡは、データベースＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ：Ｐ０６７３１に記載されている。ＣＥＡは、免疫グロブリン様構造特性を有し、多くのグリコシル化修飾部位を有する（Ｂｅａｕｃｈｅｍｉｎ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ ａｎｄ Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ Ｒｅｖｉｅｗｓ ３２：６４３－６７１（２０１３））。
ＣＥＡはまた、炎症、肝硬変、消化性潰瘍、潰瘍性大腸炎、直腸ポリープ、肺気腫、及び良性乳房疾患などのいくつかの非がん関連状態において、並びに喫煙者において過剰に発現され得る。このため、ＣＥＡの検出は、一般的ながんスクリーニングツールとしては有用ではなく、むしろがん治療に対する応答を評価するのに有用であると一般的に考えられている。Ｔｈｅ Ｄｙｎａｍｉｃ Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ ｏｆ ＣＥＡ ｉｎ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ Ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ＭＣＲＣ Ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｙｕ，ｅｔ ａｌ．ＢＭＣ Ｃａｎｃｅｒ．（２０１８）１８：１０７６、及びＡＳＣＯ ２００６ Ｕｐｄａｔｅ ｏｆ Ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｕｓｅ ｏｆ Ｔｕｍｏｒ Ｍａｒｋｅｒｓ ｉｎ Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ．Ｇｅｒｓｈｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（２００６）２４：５３１３を参照されたい。例えば、個体ががんと診断された場合、ＣＥＡに関する初期ベースライン試験が実行され得る。ＣＥＡの後続の連続試験は、個体が治療を受けるとき及び／又は個体が寛解状態になるときに、がん進行を監視するために実行され得る。Ｒｏｂｅｒｔｏ ｅｔ ａｌ．Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ（２０２１）１２４：８３９を参照されたい。
ＣＥＡはまた、炎症、肝硬変、消化性潰瘍、潰瘍性大腸炎、直腸ポリープ、肺気腫、及び良性乳房疾患などのいくつかの非がん関連状態において、並びに喫煙者において過剰に発現され得る。このため、ＣＥＡの検出は、一般的ながんスクリーニングツールとしては有用ではなく、むしろがん治療に対する応答を評価するのに有用であると一般的に考えられている。Ｔｈｅ Ｄｙｎａｍｉｃ Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ ｏｆ ＣＥＡ ｉｎ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ Ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ＭＣＲＣ Ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｙｕ，ｅｔ ａｌ．ＢＭＣ Ｃａｎｃｅｒ．（２０１８）１８：１０７６、及びＡＳＣＯ ２００６ Ｕｐｄａｔｅ ｏｆ Ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｕｓｅ ｏｆ Ｔｕｍｏｒ Ｍａｒｋｅｒｓ ｉｎ Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ．Ｇｅｒｓｈｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（２００６）２４：５３１３を参照されたい。例えば、個体ががんと診断された場合、ＣＥＡに関する初期ベースライン試験が実行され得る。ＣＥＡの後続の連続試験は、個体が治療を受けるとき及び／又は個体が寛解状態になるときに、がん進行を監視するために実行され得る。Ｒｏｂｅｒｔｏ ｅｔ ａｌ．Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ（２０２１）１２４：８３９を参照されたい。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0004】
【非特許文献1】Ｇｏｌｄ ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １２２：４６７－４８１（１９６５）
【非特許文献2】Ｂｌｕｍｅｎｔｈａｌ ｅｔ ａｌ．ＢＭＣ Ｃａｎｃｅｒ ７：１－１５（２００７）
【非特許文献3】Ｂｅａｕｃｈｅｍｉｎ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ ａｎｄ Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ Ｒｅｖｉｅｗｓ ３２：６４３－６７１（２０１３）
【非特許文献4】Ｔｈｅ Ｄｙｎａｍｉｃ Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ ｏｆ ＣＥＡ ｉｎ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ Ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ＭＣＲＣ Ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｙｕ，ｅｔ ａｌ．ＢＭＣ Ｃａｎｃｅｒ．（２０１８）１８：１０７６
【非特許文献5】ＡＳＣＯ ２００６ Ｕｐｄａｔｅ ｏｆ Ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｕｓｅ ｏｆ Ｔｕｍｏｒ Ｍａｒｋｅｒｓ ｉｎ Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ．Ｇｅｒｓｈｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（２００６）２４：５３１３
【非特許文献6】Ｒｏｂｅｒｔｏ ｅｔ ａｌ．Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ（２０２１）１２４：８３９
【図面の簡単な説明】
【0005】
【図1】ＡＤｘ－ＣＥＡの重鎖のアンプリコンを示す。
【図2】ＡＤｘ－ＣＥＡの重鎖のＮＣＢＩ＿Ｉｇ Ｂｌａｓｔ Ｔｏｏｌ＿ＩＭＧＴビューを表示する。一文字でコードされたアミノ酸位置、ＣＤＲ位置、及びヒトＩｇＨＶＤＪ内の相同性を最大化するためのギャップ（＊）の組み込みは、ＩＭＧＴデータベースによるものである。ヌクレオチド及び予測されるタンパク質配列は、Ｖ－Ｄ－Ｊ領域の重鎖について以下に示される。
【図3】ＡＤｘ－ＣＥＡの軽鎖のＮＣＢＩ＿Ｉｇ Ｔｏｏｌ＿ＩＭＧＴ ｂｌａｓｔ試料を表示する。一文字でコードされたアミノ酸位置、ＣＤＲ位置、及びヒトＩｇＫＶＪ内の相同性を最大化するためのギャップ（＊）の組み込みは、ＩＭＧＴデータベースによるものである。ヌクレオチド及び予測されるタンパク質配列は、Ｖ－Ｊ領域のＫ鎖について以下に示される。
【図4】単離されたＡＤｘ－ＣＥＡの重鎖及び軽鎖のＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析を示す。
【図5】単離されたＡＤｘ－ＣＥＡによって検出されたＣＥＡのウェスタンブロット分析を示す。
【図7】対照と比較して、患者が膵臓がんを有する、患者試料中の単離されたＡＤｘ－ＣＥＡのウェスタンブロット分析を示す。
【図8】様々なステージの膵臓がん組織におけるＡＤｘ－ＣＥＡによるＩＨＣ染色分析を示す。
【図12B】軟質寒天冠動脈形成及び関連データを示す。図１２Ｂは、ＡＤｘ－ＣＥＡ処理及び未処理のＢｘＰＣ－３細胞におけるコロニー形成の代表的な高倍率画像を示す。ウェルの画像は、３つの独立した実験の代表である。
【図13A】ＩＨＣ染色を介した、様々なホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）ヒト組織におけるＣＥＡ発現を示す。ＣＥＡタンパク質の発現は、ＡＤｘ－ＣＥＡを使用して、健康な個体及びがん患者からの健康な組織及びがん性組織において検証した。膵臓、結腸及び肝臓のがん組織は、ＣＥＡ発現について陽性の膜及び細胞質染色を示した。図１３Ａは、膵臓組織の結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【0006】
Ｉ．定義
本出願では、「又は」の使用は、別段明記されない限り、「及び／又は」を意味する。複数の従属請求項の文脈において、「又は」の使用は、代替のみにおいて、２つ以上の先行する独立又は従属請求項に戻ることを指す。「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、及び「有する（ｈａｖｉｎｇ）」という用語は、本明細書中で互換的に使用され得る。本発明によれば、「単離された」分子は、その天然環境から除去された分子である。したがって、「単離された」という用語は、必ずしも分子が精製された程度を反映しているわけではない。
本出願では、「又は」の使用は、別段明記されない限り、「及び／又は」を意味する。複数の従属請求項の文脈において、「又は」の使用は、代替のみにおいて、２つ以上の先行する独立又は従属請求項に戻ることを指す。「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、及び「有する（ｈａｖｉｎｇ）」という用語は、本明細書中で互換的に使用され得る。本発明によれば、「単離された」分子は、その天然環境から除去された分子である。したがって、「単離された」という用語は、必ずしも分子が精製された程度を反映しているわけではない。
【0007】
本明細書で使用される場合、ＣＥＡは、がん胎児性抗原関連細胞接着分子５、ＣＥＣＡＭ５、細胞接着分子５、及びＣＤ６６ｅとしても知られている。例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ：Ｐ０６７３１．
【0008】
本明細書における「抗体」という用語は、最も広義に使用され、それらが所望の抗原結合活性を呈する限り、これらに限定されないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び抗体断片を含む様々な抗体構造を包含する。組換え抗体、キメラ抗体、及びヒト化抗体が包含される。
【0009】
「抗体断片」は、インタクト抗体が結合する抗原に結合するインタクト抗体の一部を含む、インタクト抗体以外の分子を指す。抗体断片の例には、これらに限定されないが、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、ダイアボディ、線形抗体、一本鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）、及び抗体断片から形成される多重特異性抗体が挙げられる。
【0010】
「抗原」という用語は、抗体によって結合されることが可能であり、更にその抗原のエピトープに結合することができる抗体を産生するように動物を誘導することができる、１つ以上の分子又は分子の１つ以上の部分を指す。抗原は、１つ以上のエピトープを有してもよい。上記に言及される特異的反応は、抗原が、その対応する抗体とは非常に優先的に反応し、他の抗原によって誘発され得る多数の他の抗体とは反応しないことを示すことを意味する。抗体への抗原の結合は、バックグラウンドレベルを超えていなければならない。
【0011】
「がん」という用語は、異常に高いレベルの増殖及び成長を示す細胞群を指すために本明細書で使用される。がんは、良性（良性腫瘍とも称される）、前悪性、又は悪性であり得る。がん細胞は、固形がん細胞又は白血病性がん細胞であり得る。
【0012】
「相補性決定領域、又はＣＤＲ」という用語は、天然免疫グロブリン結合部位の天然Ｆｖ領域の結合親和性及び特異性を一緒に規定するアミノ酸配列を指す。免疫グロブリンの軽鎖及び重鎖は、各々、３つのＣＤＲを有する。
【0013】
抗体の「クラス」とは、その重鎖によって保有される定常ドメイン又は定常領域のタイプを指す。抗体には、５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭが存在し、これらのうちのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２に更に分けられ得る。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ、α、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。
【0014】
「全長抗体」、「インタクトな抗体」、及び「全抗体」という用語は、本明細書において互換的に使用されて、天然抗体構造と実質的に同様の構造を有するか、又は本明細書で定義されるＦｃ領域を含有する重鎖を有する抗体を指す。
【0015】
「ヒト抗体」は、ヒト若しくはヒト細胞によって産生されるか、又はヒト抗体レパートリー若しくは他のヒト抗体をコードする配列を利用する非ヒト供給源に由来する抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を保有するものである。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を特に除外する。
【0016】
「可変領域」又は「可変ドメイン」という用語は、抗体の抗原への結合に関与する抗体重鎖又は軽鎖のドメインを指す。天然抗体の重鎖及び軽鎖の可変ドメイン（それぞれＶＨ及びＶＬ）は、一般に、類似の構造を有し、各ドメインは、４つの保存フレームワーク領域（ＦＲ）及び３つの超可変領域（ＨＶＲ）を含む。（例えば、Ｋｉｎｄｔ ｅｔ ａｌ．Ｋｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６ｔｈ ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．，ｐａｇｅ ９１（２００７）を参照されたい。）単一のＶＨドメイン又はＶＬドメインは、抗原結合特異性を付与するのに十分であり得る。更に、特定の抗原を結合する抗体は、それぞれ、相補的なＶＬドメイン又はＶＨドメインのライブラリをスクリーニングするために、抗原を結合する抗体からのＶＨドメイン又はＶＬドメインを使用して単離されてもよい。例えば、Ｐｏｒｔｏｌａｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：８８０－８８７（１９９３）；Ｃｌａｒｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－６２８（１９９１）を参照されたい。
【0017】
「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨフレームワーク配列の選択における最も一般的に存在するアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般に、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループからのものである。一般に、配列のサブグループは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ９１－３２４２，Ｂｅｔｈｅｓｄａ ＭＤ（１９９１），ｖｏｌｓ．１－３におけるようなサブグループである。いくつかの実施形態では、ＶＬについて、サブグループは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（上記参照）におけるようなサブグループカッパＩである。いくつかの実施形態では、ＶＨについて、サブグループは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（上記参照）におけるようなサブグループＩＩＩである。
【0018】
本明細書で使用される場合、「超可変領域」又は「ＨＶＲ」という用語は、配列が超可変であり（「相補性決定領域」若しくは「ＣＤＲ」）、かつ／又は構造的に規定されたループ（「超可変ループ」）を形成し、かつ／又は抗原接触残基（「抗原接触」）を含む、抗体可変ドメインの領域の各々を指す。一般に、抗体は、６つのＨＶＲを含み、３つがＶＨにあり（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）、３つがＶＬにある（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）。
【0019】
「単離された」抗体は、その天然環境の構成要素から分離されたものである。いくつかの実施形態では、抗体は、例えば、電気泳動（例えば、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）又はクロマトグラフィー（例えば、イオン交換若しくは逆相ＨＰＬＣ）によって判定されるような９５％又は９９％を超える純度まで精製される。抗体純度の評価のための方法の概説については、例えば、Ｆｌａｔｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ ８４８：７９－８７（２００７）を参照されたい。
【0020】
本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均一な抗体の集団から得られた抗体を指す。すなわち、集団を構成する個々の抗体は、例えば、天然に存在する変異を含むか、又はモノクローナル抗体調製物の産生中に生じる可能性のあるバリアント抗体を除いて、同一であり、かつ／又は同じエピトープを結合し、そのようなバリアントは、一般に、わずかな量で存在する。異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を典型的に含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対するものである。したがって、「モノクローナル」という修飾語は、実質的に均一な抗体集団から得られる抗体の特性を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするものとして解釈されるべきではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座の全部又は一部を含むトランスジェニック動物を利用する方法を含むがこれらに限定されない、様々な技術によって作製されてもよく、そのような方法及びモノクローナル抗体を作製するための他の例示的な方法が本明細書に記載されている。
【0021】
「天然抗体」は、様々な構造を有する天然に存在する免疫グロブリン分子を指す。例えば、天然ＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合した２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖から構成される、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端まで、各重鎖は、可変重鎖ドメイン又は重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）、続いて３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）を有する。同様に、Ｎ末端からＣ末端まで、各軽鎖は、可変軽鎖ドメイン又は軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）、続いて定常軽（ＣＬ）ドメインを有する。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる２つのタイプのうちの１つに割り当てられ得る。
【0022】
膵臓がんの「ステージ」とは、米国がん合同委員会（ＡＪＣＣ）の臨床ステージを指す：米国がん合同委員会で定義されているような、０、ＩＡ、ＩＢ、ＩＩＡ、ＩＩＢ、ＩＩＩ、及びＩＶ。Ｅｘｏｃｒｉｎｅ Ｐａｎｃｒｅａｓ．Ｉｎ： ＡＪＣＣ Ｃａｎｃｅｒ Ｓｔａｇｉｎｇ Ｍａｎｕａｌ．８ｔｈ ｅｄ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ： Ｓｐｒｉｎｇｅｒ；２０１７：３３７。本明細書で使用される場合、「初期ステージ」膵臓がんは、ステージＩ及びＩＩを指し、「後期ステージ」膵臓がんは、ステージＩＩＩ及びＩＶを指す。
【0023】
本明細書で使用される場合、本明細書で言及されるアッセイ及び検出に関する「陰性対照」は、検出又はアッセイされるアッセイのタイプ及びがんのタイプに関して専門家によって本分野で通常使用される対照を指す。ヒト血液中のＣＥＡレベルの検出の一例では、正常な血液（血漿又は血清）のＣＥＡレベルは、約０～２．５ｎｇ／ｍＬであり得る。検出されたＣＥＡレベルがこのレベルよりも高い場合、そのレベルは陰性対照よりも高いと言われ得る。
【0024】
ＩＩ．組成物及び方法
抗ＣＥＡ抗体、抗体断片、モノクローナル抗体、抗体コンジュゲート、記載される抗体を含む組成物、及びそれらの使用方法が提供される。
抗ＣＥＡ抗体、抗体断片、モノクローナル抗体、抗体コンジュゲート、記載される抗体を含む組成物、及びそれらの使用方法が提供される。
【0025】
Ａ．例示的な抗ＣＥＡ抗体
以下の配列表は、本明細書に開示され、特許請求される抗体（ＡＤｘ－ＣＥＡ）の配列を提供する。配列番号１～１２を参照されたい。
以下の配列表は、本明細書に開示され、特許請求される抗体（ＡＤｘ－ＣＥＡ）の配列を提供する。配列番号１～１２を参照されたい。
【0026】
本明細書において、ＡＤｘ－ＣＥＡ並びにその断片及びバリアントを含む、ヒトＣＥＡに特異的に結合する抗体及び抗体断片が提供される。
【0027】
ある特定の実施形態では、配列番号１、２、及び３をそれぞれ含むＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（「ＶＨ」）と、配列番号４、５、及び６のうちのいずれか１つのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／又はＣＤＲ３をそれぞれ含む軽鎖可変領域（「ＶＬ」）と、を含む、抗ＣＥＡ抗体及び抗体断片が提供される。
【0028】
いくつかの実施形態では、以下を含む抗体が提供される：
（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１（含む、又は含まない）、（ｅ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、又は
（ｂ）重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、ＶＨが、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％同一であり、ＶＬが、配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％同一である、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）、又は
（ｃ）重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、ＶＨが、配列番号７のアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号８のアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）、又は
（ｄ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１（含む、又は含まない）、（ｅ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、並びに重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、ＶＨが、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％同一であり、ＶＬが、配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％同一である、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）。
（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１（含む、又は含まない）、（ｅ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、又は
（ｂ）重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、ＶＨが、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％同一であり、ＶＬが、配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％同一である、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）、又は
（ｃ）重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、ＶＨが、配列番号７のアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号８のアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）、又は
（ｄ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１（含む、又は含まない）、（ｅ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、並びに重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、ＶＨが、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％同一であり、ＶＬが、配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％同一である、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）。
【0029】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単離抗体又は抗体断片は、モノクローナル抗体である。更なる実施形態では、単離抗体又は抗体断片は、完全ヒト抗体である。いくつかの実施形態では、単離抗体又は抗体断片は、抗体断片である。更なる実施形態では、抗体断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、又は（Ｆａｂ’）２である。いくつかの実施形態では、単離抗体又は抗体断片は、全長抗体である。いくつかの実施形態では、単離抗体又は抗体断片は、Ｆｃ領域を含み、抗体のＦｃ領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＧ４．１、又はＩｇＧ４．２を含む。
【0030】
いくつかの実施形態では、抗体又は抗体断片と、薬学的に許容される担体と、を含む、組成物が提供される。
【0031】
いくつかの実施形態では、単離抗体又は抗体断片は、固相上に固定化されている。いくつかの実施形態では、単離抗体又は抗体断片は、検出可能に標識されている。いくつかの実施形態では、単離抗体又は抗体断片は、細胞傷害性放射性核種にコンジュゲートされている。いくつかの実施形態では、単離抗体又は抗体断片は、細胞傷害性薬物にコンジュゲートされている。いくつかの実施形態では、単離抗体又は抗体断片は、細胞傷害性タンパク質にコンジュゲートされている。
【0032】
いくつかの実施形態では、抗体又は抗体断片をコードする、単離ＤＮＡ配列が提供される。いくつかの実施形態では、ＤＮＡは、配列番号１１又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、ＤＮＡは、配列番号１２又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、ＤＮＡは、配列番号１１又はその断片と、配列番号１２又はその断片と、を含む。いくつかの実施形態では、ＤＮＡは、配列番号１１と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％同一である配列、又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、ＤＮＡは、配列番号１２と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％同一である配列、又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、ＤＮＡは、配列番号１１又はその断片と、配列番号１２又はその断片と、を含む。いくつかの実施形態では、ＤＮＡは、配列番号１１と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％同一である配列又はその断片と、配列番号１２と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％同一である配列又はその断片と、を含む。
【0033】
いくつかの実施形態では、抗体又は抗体断片をコードするＤＮＡ配列を含む、ベクターが提供される。
【0034】
いくつかの実施形態では、抗体又は抗体断片をコードするＤＮＡ配列を含むベクターで形質転換された、宿主細胞が提供される。
【0035】
いくつかの実施形態では、抗体の産生のためのプロセスであって、抗体又は抗体断片をコードするＤＮＡ配列を含むベクターで形質転換された宿主細胞を培養することと、抗体分子を単離することと、を含む、プロセスを提供する。
【0036】
ある特定の実施形態では、抗ＣＥＡ抗体又は抗体断片は、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＶＨと、配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＶＬと、を含む単離抗体を含む。いくつかの実施形態では、この抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、並びに（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３（含む、又は含まない）を含む。
【0037】
いくつかの実施形態では、本発明は、がんを治療する方法であって、治療有効量の本明細書に記載の抗ＣＥＡ抗体若しくは抗体断片、又はその組成物、又はそのＤＮＡ若しくはベクターを、それを必要とする対象に投与することを含む、方法を含む。いくつかの実施形態では、がんは固形腫瘍である。いくつかの実施形態では、がんは、白血病である。いくつかの実施形態では、がんは、結腸直腸がん、肝臓がん、胃がん、卵巣がん、甲状腺がん、肺がん、乳がん、又は膵臓がんである。
【0038】
ある特定の実施形態では、ＣＥＡ抗原を検出するためのイムノアッセイであって、（ａ）試料を、有効結合量のＡＤｘ－ＣＥＡなどの本明細書に記載の抗体又は抗体断片と接触させることと、（ｂ）ＣＥＡ抗原への抗体の結合を検出することによって、抗原を検出することと、を含む、イムノアッセイが提供される。いくつかの実施形態では、アッセイは、ＣＥＡ抗原を発現するがん細胞を検出するために使用される。いくつかの実施形態では、アッセイは、固形腫瘍を検出するために使用される。更なる実施形態では、がんは、結腸直腸がん、肝臓がん、胃がん、卵巣がん、甲状腺がん、肺がん、乳がん、又は膵臓がんである。
【0039】
いくつかの実施形態では、本発明は、対象におけるがんを検出する方法であって、がんを有する対象又はがんの疑いのある対象から単離された試料に、本明細書に記載の抗体又は抗体断片を接触させることを含む、方法を含む。いくつかの実施形態では、がんは、固形腫瘍である。更なる実施形態では、固形腫瘍は、結腸直腸がん、肝臓がん、胃がん、卵巣がん、甲状腺がん、肺がん、乳がん、又は膵臓がんである。
【0040】
ある特定の実施形態では、本発明は、ＣＥＡ抗原を発現する細胞を含む固形腫瘍がんの免疫組織化学的検出のためのキットであって、（ａ）ＡＤｘ－ＣＥＡなどの本明細書に記載の抗体又は抗体断片と、（ｂ）検出可能な標識にコンジュゲートされた二次抗体であって、ＣＥＡ抗原に結合したときに、（ａ）の抗体に結合し、かつそれを検出することができる、二次抗体と、を含む、キットを提供する。代替的に、二次抗体は、検出可能な標識にコンジュゲートされておらず、代わりに、二次抗体に結合するか、又は二次抗体と相互作用する標識を検出のために使用する。当該キットを使用してＣＥＡを検出する方法が包含される。
【0041】
いくつかの実施形態では、本発明は、対象における固形腫瘍がんの状態を判定するための方法であって、（ａ）固形腫瘍がんを有する対象から試料を取り出すことと、（ｂ）試料を、ＡＤｘ－ＣＥＡなどの本明細書に記載の抗体又は抗体断片と接触させ、それによって、ＣＥＡ抗原と抗体又は抗体断片との複合体を形成することと、（ｃ）標本を、抗原－抗体複合体に特異的な標識で標識することと、（ｄ）標識を検出することによって、抗原－抗体複合体の存在を検出することと、を含む、方法である。いくつかの実施形態では、試料は、全血、血清、若しくは血漿を含む血液、又は組織若しくは細胞である。
【0042】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の工程（ａ）～（ｄ）は、後の時点で繰り返される。いくつかの実施形態では、この時点は、対象が療法を開始した後である。いくつかの実施形態では、この時点は、対象が新しい又は第２の（共）療法を開始した後である。いくつかの実施形態では、固形腫瘍がんは、結腸直腸がん、肝臓がん、胃がん、卵巣がん、甲状腺がん、肺がん、乳がん、又は膵臓がんである。いくつかの実施形態では、固形腫瘍がんは、膵臓がんである。いくつかの実施形態では、対象は、がんと診断されており、かつ療法を受けているか、又は受けようとしている。いくつかの実施形態では、試料は、療法開始前に、対象から単離される。いくつかの実施形態では、試料は、療法開始後に対象から単離される。いくつかの実施形態では、療法は、化学療法又は放射線である。いくつかの実施形態では、化学療法は、エルロチニブ、フルオロウラシル、又はオキサリプラチンである。いくつかの実施形態では、療法は、ホイップル処理、遠位膵摘出術、及び全膵摘出術を含む手術、放射線療法、陽子線療法、定位放射線（ＳＢＲＴ）若しくはサイバーナイフ、免疫療法、標的療法、又は化学療法である。
【0043】
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載の対象における固形腫瘍がんの状態を判定するための方法であって、ＣＥＡレベルが判定され、後の時点でより高いＣＥＡレベルが、療法が完全に有効ではないことを示し、後の時点で同じ又はより低いＣＥＡ抗原レベルが、療法が少なくとも部分的に有効であることを示す、方法を含む。いくつかの実施形態では、対象は、寛解状態にある。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、対象が寛解状態となった後の時点で繰り返され、ＣＥＡレベルが判定され、後の時点でより高いＣＥＡレベルは、がんがもはや寛解状態ではないことを示し、後の時点で同じ又はより低いＣＥＡレベルは、がんが寛解状態であり続けていることを示す。いくつかの実施形態では、方法は、コンピュータ断層撮影の代替物である。
【0044】
ある特定の実施形態では、本発明は、ＣＥＡの遺伝子産物及びその相同体の発現を特徴とするがんを検出する方法であって、（ａ）対象から生体試料を単離することによって、がんを有するヒト患者においてＣＥＡによって発現される遺伝子産物及びその相同体を同定する工程であって、試料が、ＣＥＡ遺伝子が発現された場合に、ＣＥＡ遺伝子産物を含むものである、同定する工程と、（ｂ）生体試料を、ＡＤｘ－ＣＥＡなどの本明細書に記載の抗ＣＥＡ抗体若しくは抗体断片、又はその組成物と接触させて、試料－抗体複合体を作製することによって、バイオマーカーとして遺伝子産物を利用する工程と、（ｃ）任意の非結合抗体を除去し、次いで、試料－抗体複合体を、抗体又は試料－抗体複合体に特異的な標識と接触させる工程と、（ｄ）標識を検出することによって、抗原－抗体複合体の存在を検出する工程であって、標識の検出が、がんの検出を示す、検出する工程と、を含む、方法を含む。
【0045】
いくつかの実施形態では、本発明は、試料中の細胞の状態を判定する方法であって、（ａ）対象から当該試料を得ることと、当該試料を、ＡＤｘ－ＣＥＡなどの本明細書に記載の抗体若しくは抗体断片、又はその組成物と接触させることと、（ｃ）抗体又は抗体断片によって検出されるＣＥＡの量を判定することと、を含む、方法を提供する。
【0046】
いくつかの実施形態では、本発明は、患者における膵臓がんを検出するための方法であって、（ａ）膵臓がんの疑いがあるか、又は膵臓がんを有する患者から膵臓又は血液の標本を取り出すことと、（ｂ）標本を、本明細書に記載の抗体若しくは抗体断片、又はその組成物と接触させ、それによって、標本中に抗原－抗体複合体を形成することと、（ｃ）標本を、抗体又は抗原－抗体複合体に特異的な標識で標識することと、（ｄ）標識を検出することによって、抗原－抗体複合体の存在を検出することと、（ｅ）陰性対照と比較して、ＣＥＡ抗原レベルを判定することであって、陰性対照よりも高いＣＥＡ抗原レベルが、膵臓がんを示す、判定することと、を含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、方法は、インビトロで実行される。更なる実施形態では、膵臓がんは、初期ステージであり、方法は、この初期ステージでＣＥＡ抗原を検出することができる。更なる実施形態では、膵臓がんは、ステージＩ、ＩＩ、ＩＩＡ、又はＩＩＢにあり、方法は、この初期ステージでＣＥＡ抗原を検出することができる。いくつかの実施形態では、膵臓がんは、ステージＩＩ、ＩＩＡ、又はＩＩＢにある。
【0047】
いくつかの実施形態では、本発明は、がんの検出のためのキットであって、（ａ）それぞれ配列番号１、２及び３を含む重鎖のＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列及びＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号４、５及び６を含む軽鎖のＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列及びＣＤＲ３配列を有する抗体又は抗体断片と、（ｂ）検出可能な標識又は別個のコンジュゲートされていない検出可能な標識にコンジュゲートされた二次抗体であって、検出可能な標識又は別個のコンジュゲートされていない検出可能な標識が、二次抗体、抗体－抗原複合体、又は（ａ）のモノクローナル抗体に結合する、二次抗体と、を含む、キットを提供する。いくつかの実施形態では、キットは、膵臓がんの免疫組織化学的検出のためのものである。
【0048】
いくつかの実施形態では、本発明は、患者から採取された組織標本中のがんを検出する免疫組織化学的方法であって、（ａ）組織標本を得る工程と、（ｂ）当該組織標本を、本明細書に記載の抗体断片の抗体、又はその組成物と接触させる工程と、（ｃ）工程（ｂ）の後で、組織標本を、二次抗体、抗体－抗原複合体、又は抗体に結合する検出可能な標識と接触させる工程と、（ｄ）当該組織標本を、免疫組織化学染色で染色する工程と、を含み、当該染色が、当該組織標本中の抗体結合及びがんの存在を示す、免疫組織化学的方法を含む。いくつかの実施形態では、がんは、膵臓がんである。
【0049】
いくつかの実施形態では、組織、細胞、又は血液標本と、明細書に記載の抗体若しくは抗体断片、又はその組成物と、組織、細胞、又は血液試料中のＣＥＡ抗原との抗体－抗原複合体と、を含む、組成物であって、当該試料が、がんに罹患している患者からのものである、組成物が提供される。ある特定の実施形態では、がんは、結腸直腸がん、肝臓がん、胃がん、卵巣がん、甲状腺がん、肺がん、乳がん、又は膵臓がんである。
【0050】
いくつかの実施形態では、がんを検出するための、本明細書に記載の抗体若しくは抗体断片、又はその組成物の使用が提供される。更なる実施形態では、がんは、結腸直腸がん、肝臓がん、胃がん、卵巣がん、甲状腺がん、肺がん、乳がん、又は膵臓がんである。
【0051】
いくつかの実施形態では、がんの進行及び／又はがん治療薬の治療有効性を監視するための方法であって、（ａ）第１の時点でがんを有するヒト患者から初期試料を得ることと、（ｂ）試料を、本明細書に記載の抗体若しくは抗体断片、又はその組成物と接触させて、抗原－抗体複合体を形成することと、（ｃ）標本を、抗原－抗体複合体に特異的な標識で標識することと、（ｄ）標識を検出することによって、抗原－抗体複合体の存在を検出することと、（ｅ）抗体又は抗体断片によって検出されたＣＥＡ抗原レベルを判定して、患者のがんと関連するＣＥＡ抗原のベースラインレベルを決定することと、（ｆ）第２の（後の）時点で第２の試料を得ることであって、任意選択的に、第２の時点が、対象が療法を受けている期間の後である、得ることと、（ｇ）工程（ｂ）～（ｅ）を繰り返して、患者のがんに関連する第２のＣＥＡ抗原レベルを判定することと、（ｈ）第２の時点でのＣＥＡ抗原レベルがベースライン時のレベルよりも高い場合に、患者のがんが進行したと判定し、第２の時点でのＣＥＡ抗原レベルがベースライン時のレベルよりも低い場合に、患者のがんが退縮したと判定することと、を含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、がんは、結腸直腸がん、肝臓がん、胃がん、卵巣がん、甲状腺がん、肺がん、乳がん、又は膵臓がんである。いくつかの実施形態では、固形腫瘍がんは、膵臓がんである。いくつかの実施形態では、第２の時点でのＣＥＡの増加は、がんの進行を示す。いくつかの実施形態では、第２の時点でのＣＥＡの減少は、がんの退縮を示す。いくつかの実施形態では、第１の時点は、療法前又は初期診断時である。いくつかの実施形態では、第１の時点は、療法後又は初期診断時である。いくつかの実施形態では、第２の時点は、療法を受けた後である。いくつかの実施形態では、方法は、インビトロで実行される。いくつかの実施形態では、療法は、ホイップル処理、遠位膵摘出術、及び全膵摘出術を含む手術、放射線療法、陽子線療法、定位放射線（ＳＢＲＴ）又はサイバーナイフ、免疫療法、標的療法、並びに化学療法である。
【0052】
Ｂ．グリコシル化バリアント
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、抗体がグリコシル化される程度を増加又は減少させるように改変される。抗体へのグリコシル化部位の付加又は欠失は、１つ以上のグリコシル化部位が作製又は除去されるようにアミノ酸配列を改変することによって好都合に達成され得る。
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、抗体がグリコシル化される程度を増加又は減少させるように改変される。抗体へのグリコシル化部位の付加又は欠失は、１つ以上のグリコシル化部位が作製又は除去されるようにアミノ酸配列を改変することによって好都合に達成され得る。
【0053】
抗体がＦｃ領域を含む場合、それに結合した炭水化物を改変してもよい。哺乳動物細胞によって産生される天然抗体は、典型的には、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７へのＮ連結によって一般的に結合される分岐した二分岐オリゴ糖を含む。例えば、Ｗｒｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ．ＴＩＢＴＥＣＨ １５：２６－３２（１９９７）を参照されたい。オリゴ糖は、様々な炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、及びシアル酸、並びに二分岐オリゴ糖構造の「幹」中のＧｌｃＮＡｃに結合したフコースを含み得る。いくつかの実施形態では、本発明の抗体中のオリゴ糖の修飾は、ある特定の改善された特性を有する抗体バリアントを作製するために行われ得る。
【0054】
いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域に（直接的又は間接的に）結合したフコースを欠く炭水化物構造を有する抗体バリアントが提供される。例えば、そのような抗体におけるフコースの量は、１％～８０％、１％～６５％、５％～６５％、又は２０％～４０％であってもよい。フコースの量は、例えば、ＷＯ２００８／０７７５４６に記載されるように、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ質量分析によって測定されるように、Ａｓｎ２９７に結合する全ての糖構造（例えば、複合体、ハイブリッド及び高マンノース構造）の合計と比較して、Ａｓｎ２９７における糖鎖内のフコースの平均量を計算することによって決定される。「Ａｓｎ２９７」は、Ｆｃ領域内の約２９７位（Ｆｃ領域残基のＥｕ番号付け）に位置するアスパラギン残基を指す。しかしながら、Ａｓｎ２９７はまた、抗体中のマイナーな配列変異に起因して、２９７位の約±３アミノ酸上流又は下流、すなわち、２９４位と３００位との間に位置し得る。そのようなフコシル化バリアントは、改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。例えば、米国特許公開第２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）、ＵＳ２００４／００９３６２１（Ｋｙｏｗａ Ｈａｋｋｏ Ｋｏｇｙｏ Ｃｏ．， Ｌｔｄ）を参照されたい。「脱フコシル化」又は「フコース欠損」抗体バリアントに関連する刊行物の例としては、ＵＳ２００３／０１５７１０８、ＷＯ２０００／６１７３９、ＷＯ２００１／２９２４６、ＵＳ２００３／０１１５６１４、ＵＳ２００２／０１６４３２８、ＵＳ２００４／００９３６２１、ＵＳ２００４／０１３２１４０、ＵＳ２００４／０１１０７０４、ＵＳ２００４／０１１０２８２、ＵＳ２００４／０１０９８６５、ＷＯ２００３／０８５１１９、ＷＯ２００３／０８４５７０、ＷＯ２００５／０３５５８６、ＷＯ２００５／０３５７７８、ＷＯ２００５／０５３７４２、ＷＯ２００２／０３１１４０、Ｏｋａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９－１２４９（２００４）、Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）が挙げられる。脱フコシル化抗体を産生することができる細胞株の例としては、タンパク質フコシル化が欠損したＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ ｅｔ ａｌ．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３－５４５（１９８６）、米国特許出願第２００３／０１５７１０８ Ａ１号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ）、及びＷＯ２００４／０５６３１２ Ａ１（Ａｄａｍｓ ｅｔ ａｌ．、特に実施例１１において）、並びにアルファ－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞などのノックアウト細胞株（例えば、Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）、Ｋａｎｄａ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，９４（４）：６８０－６８８（２００６）、及びＷＯ２００３／０８５１０７）を参照されたい）が挙げられる。
【0055】
抗体バリアントは、二分されたオリゴ糖とともに更に提供され、例えば、抗体のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖が、ＧｌｃＮＡｃによって二分される。かかる抗体バリアントは、低減されたフコシル化機能及び／又は改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。かかる抗体バリアントの例としては、例えば、ＷＯ２００３／０１１８７８（Ｊｅａｎ－Ｍａｉｒｅｔ ｅｔ ａｌ．）、米国特許第６，６０２，６８４号（Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．）、及びＵＳ２００５／０１２３５４６（Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．）が挙げられる。Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖内に少なくとも１つのガラクトース残基を有する抗体バリアントも提供される。そのような抗体バリアントは、改善されたＣＤＣ機能を有し得る。かかる抗体バリアントは、例えば、ＷＯ１９９７／３００８７（Ｐａｔｅｌ ｅｔ ａｌ．）、ＷＯ１９９８／５８９６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）、及びＷＯ１９９９／２２７６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）を参照されたい。
【0056】
Ｃ．Ｆｃ領域バリアント
ある特定の実施形態では、１つ以上のアミノ酸修飾が、本明細書で提供される抗体のＦｃ領域に導入され、それによって、Ｆｃ領域バリアントを生成し得る。Ｆｃ領域バリアントは、１つ以上のアミノ酸位置にアミノ酸修飾（例えば、置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４ Ｆｃ領域）を含み得る。
ある特定の実施形態では、１つ以上のアミノ酸修飾が、本明細書で提供される抗体のＦｃ領域に導入され、それによって、Ｆｃ領域バリアントを生成し得る。Ｆｃ領域バリアントは、１つ以上のアミノ酸位置にアミノ酸修飾（例えば、置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４ Ｆｃ領域）を含み得る。
【0057】
ある特定の実施形態では、本発明は、全てではないがいくつかのエフェクター機能を有する抗体バリアントであって、インビボでの抗体の半減期が重要であるが、ある特定のエフェクター機能（補体及びＡＤＣＣなど）が不要であるか、又は有害である用途に望ましい候補となる、抗体バリアントを企図する。インビトロ及び／又はインビボの細胞傷害性アッセイを実施して、ＣＤＣ及び／又はＡＤＣＣの活性の低下／枯渇を確認することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを実施して、抗体がＦｃｇＲ結合を欠いている（したがって、ＡＤＣＣ活性を欠いている可能性が高い）が、ＦｃＲｎ結合能力を保持していることを確実にすることができる。ＡＤＣＣを媒介するための一次細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃｇＲＩＩＩのみを発現するが、単球は、ＦｃｇＲＩ、ＦｃｇＲＩＩ、及びＦｃｇＲＩＩＩを発現する。造血細胞上でのＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７－４９２（１９９１）の４６４ページの表３に要約される。目的とする分子のＡＤＣＣ活性を評価するインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５，５００，３６２号（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ． ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８３：７０５９－７０６３（１９８６））及びＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：１４９９－１５０２（１９８５）、５，８２１，３３７（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：１３５１－１３６１（１９８７）を参照されたい）に記載される。代替的に、非放射性アッセイ方法が用いられてもよい（例えば、フローサイトメトリーについては、ＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ及びＣｙｔｏＴｏｘ ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を参照されたい）。そのようなアッセイに有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。代替的又は追加的に、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、インビボで、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９５：６５２－６５６（１９９８）に開示されるものなどの動物モデルにおいて評価され得る。Ｃ１ｑ結合アッセイを実施して、抗体がＣ１ｑを結合することができず、したがってＣＤＣ活性を欠いていることを確認することもできる。例えば、ＷＯ２００６／０２９８７９及びＷＯ２００５／１００４０２におけるＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照されたい。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを実行してもよい（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ－Ｓａｎｔｏｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２：１６３（１９９６）、Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ １０１：１０４５－１０５２（２００３）、及びＣｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ａｎｄ Ｍ．Ｊ．Ｇｌｅｎｎｉｅ，Ｂｌｏｏｄ １０３：２７３８－２７４３（２００４）を参照されたい）。ＦｃＲｎ結合及びインビボクリアランス／半減期決定もまた、当該技術分野で公知の方法を使用して実行することができる（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ，Ｓ．Ｂ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ’ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（１２）：１７５９－１７６９（２００６）を参照されたい）．
【0058】
エフェクター機能が低下した抗体としては、Ｆｃ領域残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７、及び３２９のうちの１つ以上の置換を有するものが挙げられる（米国特許第６，７３７，０５６号）。そのようなＦｃ変異体には、アラニンへの残基２６５及び２９７の置換を伴ういわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ変異体を含む、アミノ酸２６５、２６９、２７０、２９７、及び３２７位のうちの２つ以上の置換を伴うＦｃ変異体が含まれる（米国特許第７，３３２，５８１号）。
【0059】
ＦｃＲへの結合が改善又は減少したある特定の抗体バリアントが記載されている。（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号、ＷＯ２００４／０５６３１２、及びＳｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１－６６０４（２００１）を参照されたい。）
【0060】
ある特定の実施形態では、抗体バリアントは、ＡＤＣＣを改善する１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の２９８、３３３、及び／又は３３４位における置換（残基のＥＵ番号付け）を有するＦｃ領域を含む。
【0061】
いくつかの実施形態では、例えば、米国特許第６，１９４，５５１号、ＷＯ９９／５１６４２、及びＩｄｕｓｏｇｉｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８－４１８４（２０００）に記載されているように、Ｃ１ｑ結合及び／又は補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）の改変（すなわち、改善又は減少のいずれか）をもたらす改変がＦｃ領域で行われる。
【0062】
半減期の増加及び母体ＩｇＧの胎児への移行を担う新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合の改善を伴う抗体（Ｇｕｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）及びＫｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））は、ＵＳ２００５／００１４９３４Ａ１（Ｈｉｎｔｏｎ ｅｔ ａｌ．）に記載されている。これらの抗体は、Ｆｃ領域のＦｃＲｎへの結合を改善する１つ以上の置換を有するＦｃ領域を含む。かかるＦｃバリアントとしては、Ｆｃ領域残基：２３８、２５２、２５４、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４又は４３４のうちの１つ以上での置換、例えば、Ｆｃ領域残基４３４の置換を有するものが挙げられる（例えば、米国特許第７，３７１，８２６号）。
【0063】
また、Ｆｃ領域バリアントの他の例に関する、Ｄｕｎｃａｎ＆Ｗｉｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ ３２２：７３８－４０（１９８８）、米国特許第５，６４８，２６０号、米国特許第５，６２４，８２１号、及びＷＯ９４／２９３５１号も参照されたい。
【0064】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列表に従って提供され、アイソタイプは、ヒトＩｇＧ１である。いくつかの実施形態では、抗体は、配列表に従って提供され、アイソタイプは、ヒトＩｇＧ２である。いくつかの実施形態では、抗体は、配列表に従って提供され、アイソタイプは、ヒトＩｇＧ３である。いくつかの実施形態では、抗体は、配列表に従って提供され、アイソタイプは、ヒトＩｇＧ４である。
【表1-1】
【表1-2】
【0065】
Ｄ．システイン操作抗体バリアント
ある特定の実施形態では、抗体の１つ以上の残基がシステイン残基で置換されている、システイン操作抗体、例えば、「チオＭ抗体（ｔｈｉｏＭａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）」を作製することが望ましい場合がある。特定の実施形態では、置換された残基は、抗体のアクセス可能な部位に生じる。これらの残基をシステインで置換することによって、反応性チオール基は、それによって抗体のアクセス可能な部位に配置され、本明細書に更に記載されるように、抗体を薬物部分又はリンカー－薬物部分などの他の部分にコンジュゲートして、免疫コンジュゲートを作製するために使用され得る。ある特定の実施形態では、以下の残基のうちのいずれか１つ以上が、システインで置換されてもよい：軽鎖のＶ２０５（Ｋａｂａｔ番号付け）、重鎖のＡ１１８（ＥＵ番号付け）、及び重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵ番号付け）。システイン操作抗体は、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号に記載されるように生成され得る。
ある特定の実施形態では、抗体の１つ以上の残基がシステイン残基で置換されている、システイン操作抗体、例えば、「チオＭ抗体（ｔｈｉｏＭａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）」を作製することが望ましい場合がある。特定の実施形態では、置換された残基は、抗体のアクセス可能な部位に生じる。これらの残基をシステインで置換することによって、反応性チオール基は、それによって抗体のアクセス可能な部位に配置され、本明細書に更に記載されるように、抗体を薬物部分又はリンカー－薬物部分などの他の部分にコンジュゲートして、免疫コンジュゲートを作製するために使用され得る。ある特定の実施形態では、以下の残基のうちのいずれか１つ以上が、システインで置換されてもよい：軽鎖のＶ２０５（Ｋａｂａｔ番号付け）、重鎖のＡ１１８（ＥＵ番号付け）、及び重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵ番号付け）。システイン操作抗体は、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号に記載されるように生成され得る。
【0066】
Ｅ．抗体誘導体
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、当該技術分野で既知であり、かつ容易に利用可能な追加の非タンパク質性部分を含有するように更に修飾されてもよい。抗体の誘導体化に適した部分には、水溶性ポリマーが含まれるが、これらに限定されない。水溶性ポリマーの非限定的な例としては、限定されないが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ－１，３－ジオキソラン、ポリ－１，３，６－トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマー又はランダムコポリマーのいずれか）、及びデキストラン又はポリ（ｎ－ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロプロピレングリコールホモポリマー、プロリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、並びにそれらの混合物が挙げられる。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性のために、製造において利点を有し得る。ポリマーは、任意の分子量であってもよく、分岐鎖又は非分岐鎖であってもよい。抗体に結合したポリマーの数は様々であってもよく、２つ以上のポリマーが結合している場合、それらは、同じ分子であっても異なった分子であってもよい。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数及び／又はタイプは、限定されないが、改善される抗体の特定の特性又は機能、抗体誘導体が規定された条件下で治療に使用されるかどうかなどの考慮に基づいて決定され得る。
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、当該技術分野で既知であり、かつ容易に利用可能な追加の非タンパク質性部分を含有するように更に修飾されてもよい。抗体の誘導体化に適した部分には、水溶性ポリマーが含まれるが、これらに限定されない。水溶性ポリマーの非限定的な例としては、限定されないが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ－１，３－ジオキソラン、ポリ－１，３，６－トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマー又はランダムコポリマーのいずれか）、及びデキストラン又はポリ（ｎ－ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロプロピレングリコールホモポリマー、プロリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、並びにそれらの混合物が挙げられる。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性のために、製造において利点を有し得る。ポリマーは、任意の分子量であってもよく、分岐鎖又は非分岐鎖であってもよい。抗体に結合したポリマーの数は様々であってもよく、２つ以上のポリマーが結合している場合、それらは、同じ分子であっても異なった分子であってもよい。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数及び／又はタイプは、限定されないが、改善される抗体の特定の特性又は機能、抗体誘導体が規定された条件下で治療に使用されるかどうかなどの考慮に基づいて決定され得る。
【0067】
他の実施形態では、放射線への曝露によって選択的に加熱され得る抗体及び非タンパク質性部分のコンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、非タンパク質性部分は、カーボンナノチューブである（Ｋａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０２：１１６００－１１６０５（２００５））。放射線は、任意の波長であってもよく、通常の細胞に害を及ぼさないが、非タンパク質性部分を、抗体－非タンパク質性部分に近接する細胞が殺傷される温度まで加熱する波長が含まれるが、これらに限定されない。
【0068】
Ｆ．組換え方法
抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に記載されるような組換え方法及び組成物を使用して産生されてもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＥＡ抗体をコードする単離核酸が提供される。かかる核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列、及び／又は抗体のＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖及び／若しくは重鎖）をコードしてもよい。更なる実施形態では、このような核酸を含む１つ以上のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。更なる実施形態では、そのような核酸を含む宿主細胞が提供される。そのような一実施形態では、宿主細胞は、（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、又は（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクター及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２のベクター、を含む（例えば、それで形質転換されている）。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、真核生物、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞又はリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。いくつかの実施形態では、抗ＣＥＡ抗体を作製する方法であって、上記で提供されるように、抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を、抗体の発現に好適な条件下で培養することと、任意選択的に、宿主細胞（又は宿主細胞培養培地）から抗体を回収することと、を含む、方法が提供される。
抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に記載されるような組換え方法及び組成物を使用して産生されてもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＥＡ抗体をコードする単離核酸が提供される。かかる核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列、及び／又は抗体のＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖及び／若しくは重鎖）をコードしてもよい。更なる実施形態では、このような核酸を含む１つ以上のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。更なる実施形態では、そのような核酸を含む宿主細胞が提供される。そのような一実施形態では、宿主細胞は、（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、又は（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクター及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２のベクター、を含む（例えば、それで形質転換されている）。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、真核生物、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞又はリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。いくつかの実施形態では、抗ＣＥＡ抗体を作製する方法であって、上記で提供されるように、抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を、抗体の発現に好適な条件下で培養することと、任意選択的に、宿主細胞（又は宿主細胞培養培地）から抗体を回収することと、を含む、方法が提供される。
【0069】
抗ＣＥＡ抗体の組み換え産生のために、例えば、上述のような抗体をコードする核酸を単離し、宿主細胞内での更なるクローニング及び／又は発現のために１つ以上のベクターに挿入する。そのような核酸は、従来の手順を使用して（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）容易に単離され、配列決定され得る。
【0070】
抗体コードベクターのクローニング又は発現に好適な宿主細胞としては、本明細書に記載される原核細胞又は真核細胞が挙げられる。例えば、抗体は、特にグリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要とされない場合に、細菌において産生され得る。細菌における抗体断片及びポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号、同第５，７８９，１９９号、及び同第５，８４０，５２３号を参照されたい。（また、Ｅ．ｃｏｌｉ中での抗体断片の発現を記載しているＣｈａｒｌｔｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３），ｐｐ．２４５－２５４も参照されたい。）発現後、抗体は、可溶性画分内で細菌細胞ペーストから単離され得、更に精製されることができる。
【0071】
原核生物に加えて、糸状菌又は酵母などの真核生物は、グリコシル化経路が「ヒト化」されており、部分的又は完全にヒトグリコシル化パターンを有する抗体の産生をもたらす真菌及び酵母株を含む、抗体コードベクターに適したクローニング又は発現宿主である。Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９－１４１４（２００４）、及びＬｉ ｅｔ ａｌ．、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０－２１５（２００６）を参照されたい。
【0072】
グリコシル化抗体の発現に好適な宿主細胞はまた、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）に由来する。無脊椎動物細胞の例には、植物細胞及び昆虫細胞が含まれる。特にＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞のトランスフェクションのために、昆虫細胞と併せて使用することができる多数のバキュロウイルス株が同定されている。
【0073】
植物細胞培養物を宿主として利用することもできる。例えば、米国特許第５，９５９，１７７号、同第６，０４０，４９８号、同第６，４２０，５４８号、同第７，１２５，９７８号、及び同第６，４１７，４２９号（トランスジェニック植物において抗体を産生するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）技術を記載している）を参照されたい。
【0074】
脊椎動物細胞を、宿主として使用してもよい。例えば、懸濁液中で増殖するように適合された哺乳動物細胞株が有用であり得る。有用な哺乳動物宿主細胞株の他の例は、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ－７）、ヒト胚性腎臓株（例えば、Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ ３６：５９（１９７７）に記載される２９３又は２９３細胞）、ベビーハムスター腎細胞（ＢＨＫ）、マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３－２５１（１９８０）に記載されるＴＭ４細胞）、サル腎細胞（ＣＶ１）、アフリカグリーンサル腎細胞（ＶＥＲＯ－７６）、ヒト子宮頸がん細胞（ＨＥＬＡ）、イヌ腎細胞（ＭＤＣＫ、バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ ３Ａ）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８）、ヒト肝細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）、マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２）、例えば、Ｍａｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４－６８（１９８２）に記載のＴＲＩ細胞、ＭＲＣ ５細胞、及びＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳動物宿主細胞株としては、ＤＨＦＲ－ＣＨＯ細胞を含むチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（Ｕｒｌａｕｂ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６（１９８０））、並びにＹ０、ＮＳ０、及びＳｐ２／０などの骨髄腫細胞株が挙げられる。抗体産生に適した特定の哺乳動物宿主細胞株の概説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ ａｎｄ Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ），ｐｐ．２５５－２６８（２００３）を参照されたい。
【0075】
Ｇ．免疫コンジュゲート
本発明はまた、１つ以上の他の治療剤又は放射性同位体にコンジュゲートされた本明細書の抗ＣＥＡ抗体を含む免疫コンジュゲートを提供する。
本発明はまた、１つ以上の他の治療剤又は放射性同位体にコンジュゲートされた本明細書の抗ＣＥＡ抗体を含む免疫コンジュゲートを提供する。
【0076】
別の実施形態では、免疫コンジュゲートは、放射性原子にコンジュゲートされて放射性コンジュゲートを形成する、本明細書に記載の抗体を含む。放射性コンジュゲートの産生には、様々な放射性同位体が利用可能である。例としては、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位体が挙げられる。放射性コンジュゲートを検出に使用する場合、放射性コンジュゲートは、例えば、ｔｃ９９ｍ又はＩ１２３のシンチグラフィック研究のための放射性原子、又は再びヨウ素－１２３、ヨウ素－１３１、インジウム－１１１、フッ素－１９、炭素－１３、窒素－１５、酸素－１７、ガドリニウム、マンガン又は鉄などの核磁気共鳴（ＮＭＲ）画像法（磁気共鳴画像法、ＭＲＩとも呼ばれる）のためのスピンラベルを含み得る。
【0077】
抗体のコンジュゲートは、Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル－４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（アジプイミド酸ジメチルＨＣｌなど）、活性エステル（スベリン酸ジスクシンイミジル等）、アルデヒド（グルタルアルデヒド等）、ビス－アジド化合物（ビス（ｐ－アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン等）、ビス－ジアゾニウム誘導体（ビス－（ｐ－ジアゾニウムベンゾイル）－エチレンジアミン等）、ジイソシアネート（トルエン２，６ジイソシアネート等）、及びビス－活性フッ素化合物（１，５－ジフルオロ－２，４－ジニトロベンゼンなど）など様々な二官能性タンパク質カップリング剤を使用して作製され得る。例えば、リシン免疫毒素は、Ｖｉｔｅｔｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３８：１０９８（１９８７）に記載のように調製することができる。例えば、炭素－１４－標識１－イソチオシアナトベンジル－３－メチルジエチレントリアミン五酢酸（ＭＸ－ＤＴＰＡ）は、放射性ヌクレオチドの抗体へのコンジュゲーションのための例示のキレート剤である。ＷＯ９４／１１０２６を参照されたい。リンカーは、細胞における細胞傷害性薬物の放出を促進する「切断可能なリンカー」であり得る。例えば、酸不安定性リンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー、感光性リンカー、ジメチルリンカー、又はジスルフィド含有リンカー（Ｃｈａｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５２：１２７－１３１（１９９２）、米国特許第５，２０８，０２０号を参照されたい）を使用してもよい。
【0078】
本明細書における免疫コンジュゲート又はＡＤＣは、限定されないが、ＢＭＰＳ、ＥＭＣＳ、ＧＭＢＳ、ＨＢＶＳ、ＬＣ－ＳＭＣＣ、ＭＢＳ、ＭＰＢＨ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、ＳＭＣＣ、ＳＭＰＢ、ＳＭＰＨ、スルホ－ＥＭＣＳ、スルホ－ＧＭＢＳ、スルホ－ＫＭＵＳ、スルホ－ＭＢＳ、スルホ－ＳＩＡＢ、スルホ－ＳＭＣＣ、及びスルホ－ＳＭＰＢ、並びに市販（例えば、Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ，Ｕ．Ｓ．Ａ．から）のＳＶＳＢ（スクシンイミジル－（４－ビニルスルホン）ベンゾエート）を含む架橋試薬で調製されたかかるコンジュゲートを明示的に企図する。
【0079】
Ｈ．薬学的製剤及び組成物
本明細書に記載の抗ＣＥＡ抗体の薬学的製剤又は組成物は、凍結乾燥製剤又は水溶液の形態で、所望の純度を有する抗体を、１つ以上の任意選択的な薬学的に許容される担体、希釈剤、及び／又は賦形剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０））と混合することによって調製される。薬学的に許容される担体、希釈剤、及び賦形剤は、一般に、用いられる投薬量及び濃度でレシピエントに対して非毒性であり、滅菌水、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸などの緩衝剤；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；保存剤（例えば、塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル若しくはベンジルアルコール；メチル若しくはプロピルパラベンなどのパラベンアルキル；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；及びｍ－クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、若しくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギン若しくはリシンなどのアミノ酸；単糖類、二糖類、及び他の炭水化物、例えば、グルコース、マンノース若しくはデキストリン；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース若しくはソルビトールなどの糖類；ナトリウムなどの塩を形成する対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）；並びに／又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤を含むが、これらに限定されない。本明細書における例示的な薬学的に許容される担体としては、可溶性中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えば、ｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｂａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）などのヒト可溶性ＰＨ－２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質などの間質薬物分散剤が更に挙げられる。ｒＨｕＰＨ２０を含むある特定の例示的なｓＨＡＳＥＧＰ及び使用方法は、米国特許公開第２００５／０２６０１８６号及び同第２００６／０１０４９６８号に記載されている。一態様では、ｓＨＡＳＥＧＰは、コンドロイチナーゼなどの１つ以上の追加のグリコサミノグリカナーゼと組み合わせられる。
本明細書に記載の抗ＣＥＡ抗体の薬学的製剤又は組成物は、凍結乾燥製剤又は水溶液の形態で、所望の純度を有する抗体を、１つ以上の任意選択的な薬学的に許容される担体、希釈剤、及び／又は賦形剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０））と混合することによって調製される。薬学的に許容される担体、希釈剤、及び賦形剤は、一般に、用いられる投薬量及び濃度でレシピエントに対して非毒性であり、滅菌水、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸などの緩衝剤；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；保存剤（例えば、塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル若しくはベンジルアルコール；メチル若しくはプロピルパラベンなどのパラベンアルキル；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；及びｍ－クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、若しくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギン若しくはリシンなどのアミノ酸；単糖類、二糖類、及び他の炭水化物、例えば、グルコース、マンノース若しくはデキストリン；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース若しくはソルビトールなどの糖類；ナトリウムなどの塩を形成する対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）；並びに／又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤を含むが、これらに限定されない。本明細書における例示的な薬学的に許容される担体としては、可溶性中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えば、ｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｂａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）などのヒト可溶性ＰＨ－２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質などの間質薬物分散剤が更に挙げられる。ｒＨｕＰＨ２０を含むある特定の例示的なｓＨＡＳＥＧＰ及び使用方法は、米国特許公開第２００５／０２６０１８６号及び同第２００６／０１０４９６８号に記載されている。一態様では、ｓＨＡＳＥＧＰは、コンドロイチナーゼなどの１つ以上の追加のグリコサミノグリカナーゼと組み合わせられる。
【0080】
例示的な凍結乾燥抗体製剤は、米国特許第６，２６７，９５８号に記載されている。水性抗体製剤としては、米国特許第６，１７１，５８６号及びＷＯ２００６／０４４９０８に記載されているものが挙げられ、後者の製剤としては、ヒスチジン－酢酸塩緩衝液が挙げられる。
【0081】
本明細書の製剤又は組成物はまた、治療されている特定の適応症に必要な２つ以上の活性成分、好ましくは互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を有するものを含有し得る。このような活性成分は、好適には、意図する目的に効果的である量で組み合わせて存在する。
【0082】
活性成分は、例えば、液滴形成技術又は界面重合によって調製されたマイクロカプセルに、例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロース又はゼラチンマイクロカプセル及びポリ－（メチルメタクリレート）マイクロカプセルに、コロイド薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子、及びナノカプセル）に、又はマクロエマルションに封入される場合がある。かかる技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）に開示されている。
【0083】
持続放出調製物を調製してもよい。徐放性調製物の好適な例としては、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透明性マトリックスが挙げられ、マトリックスは、成形物品、例えば、フィルム、又はマイクロカプセルの形態である。
【0084】
インビボ投与に使用される製剤又は組成物は、一般に、滅菌である。滅菌性は、例えば、滅菌濾過膜を通しての濾過によって容易に達成され得る。
【0085】
Ｉ．実施形態
以下の実施形態が提供される。
実施形態１．（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１と、（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２と、（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３と、（ｄ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１と、（ｅ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２と、（ｆ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３と、を含む、単離抗体又は抗体断片。
実施形態２．抗体が、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＨが、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であり、ＶＬが、配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である、実施形態１の単離抗体。
実施形態３．抗体が、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＨが、配列番号７のアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号８のアミノ酸配列を含む、実施形態１又は２の単離抗体。
実施形態４．単離抗体又は抗体断片であって、（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、並びに重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＨが、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％同一であり、ＶＬが、配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％同一である、単離抗体又は抗体断片。
実施形態５．抗体が、モノクローナル抗体である、先行実施形態のうちのいずれか１つの単離抗体又は抗体断片。
実施形態６．抗体が、完全ヒト抗体である、先行実施形態のうちのいずれか１つの単離抗体又は抗体断片。
実施形態７．抗体が、抗体断片である、先行実施形態のうちのいずれか１つの単離抗体又は抗体断片。
実施形態８．断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、又は（Ｆａｂ’）２である、実施形態７の単離抗体又は抗体断片。
実施形態９．抗体が、全長抗体である、実施形態１～５のうちのいずれか１つの単離抗体又は抗体断片。
実施形態１０．抗体のＦｃ領域が、存在する場合、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＧ４．１、又はＩｇＧ４．２を含む、実施形態１～９のうちのいずれか１つの単離抗体又は抗体断片。
実施形態１１．実施形態１～１０のうちのいずれか１つの抗体又は抗体断片と、薬学的に許容される担体と、を含む、組成物。
実施形態１２．固相上に固定された、実施形態１～１０のうちのいずれか１つの単離抗体又は抗体断片。
実施形態１３．検出可能に標識された、実施形態１～１０のうちのいずれか１つの単離抗体又は抗体断片。
実施形態１４．細胞傷害性放射性核種にコンジュゲートされた、実施形態１～１０のうちのいずれか１つの単離抗体又は抗体断片。
実施形態１５．細胞傷害性薬物にコンジュゲートされた、実施形態１～１０のうちのいずれか１つの単離抗体又は抗体断片。
実施形態１６．細胞傷害性タンパク質にコンジュゲートされた、実施形態１～１０のうちのいずれか１つの単離抗体又は抗体断片。
実施形態１７．実施形態１～１０のうちのいずれか１つの抗体又は抗体断片をコードする、単離ＤＮＡ配列。
実施形態１８．配列番号１１若しくはその断片、又は配列番号１１と少なくとも８０、９０、若しくは９５％同一である配列を含む、実施形態１７のＤＮＡ。
実施形態１９．配列番号１２若しくはその断片、又は配列番号１２と少なくとも８０、９０、若しくは９５％同一である配列を含む、実施形態１７のＤＮＡ。
実施形態２０．配列番号１１若しくはその断片及び配列番号１２若しくはその断片を含むか、又は配列番号１１と少なくとも８０、９０、若しくは９５％同一である配列及び配列番号１２と少なくとも８０、９０、若しくは９５％同一である配列を含む、実施形態１７のＤＮＡ。
実施形態２１．実施形態１７～２０のうちのいずれか１つのＤＮＡ配列を含む、ベクター。
実施形態２２．実施形態２１のベクターで形質転換された、宿主細胞。
実施形態２３．抗体の産生のためのプロセスであって、実施形態２２の宿主細胞を培養することと、抗体分子を単離することと、を含む、プロセス。
実施形態２４．配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＶＨと、配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＶＬと、を含む、単離抗体。
実施形態２５．がんを治療する方法であって、治療有効量の請求項１～１０若しくは１４～１６のいずれか一項に記載の抗ＣＥＡ抗体、請求項１１に記載の組成物、又は請求項１７～２１のいずれか一項に記載のＤＮＡ若しくはベクターを、それを必要とする対象に投与することを含む、方法。
実施形態２６．ＣＥＡ抗原を検出するためのイムノアッセイであって、（ａ）当該試料を、有効結合量の実施形態１～１０のうちのいずれか１つの抗体又は抗体断片と接触させることと、（ｂ）ＣＥＡ抗原への抗体の結合を検出することによって、当該抗原を検出することと、を含む、イムノアッセイ。
実施形態２７．アッセイが、ＣＥＡ抗原を発現するがん細胞を検出するために使用される、実施形態２６のイムノアッセイ。
実施形態２８．アッセイが、固形腫瘍を検出するために使用される、実施形態２６のイムノアッセイ。
実施形態２９．がんが、結腸直腸がん、肝臓がん、胃がん、卵巣がん、甲状腺がん、肺がん、乳がん、又は膵臓がんである、実施形態２７又は２８のイムノアッセイ。
実施形態３０．対象におけるがんを検出する方法であって、がんを有する対象又はがんを有する疑いのある対象から単離された試料に、実施形態１～１０のうちのいずれか１つの抗体を接触させることを含む、方法。
実施形態３１．がんが、固形腫瘍である、実施形態３０の方法。
実施形態３２．固形腫瘍が、結腸直腸がん、肝臓がん、胃がん、卵巣がん、甲状腺がん、肺がん、乳がん、又は膵臓がんである、実施形態３０の方法。
実施形態３３．ＣＥＡ抗原を発現する細胞を含む固形腫瘍がんの免疫組織化学的検出のためのキットであって、（ａ）実施形態１～１０のうちのいずれか１つに記載の抗体と、（ｂ）検出可能な標識にコンジュゲートされた二次抗体であって、ＣＥＡ抗原に結合したときに、（ａ）の抗体に結合し、かつそれを検出することができる、二次抗体と、を含む、キット。
実施形態３４．対象における固形腫瘍がんの状態を判定するための方法であって、（ａ）固形腫瘍がんを有する対象から試料を取り出すことと、（ｂ）試料を、実施形態１～１０のうちのいずれか１つの抗体又は抗体断片と接触させ、それによって、ＣＥＡ抗原と抗体又は抗体断片との複合体を形成することと、（ｃ）標本を、抗原－抗体複合体に特異的な標識で標識することと、（ｄ）標識を検出することによって、抗原－抗体複合体の存在を検出することと、を含む、方法。
実施形態３５．固形腫瘍がんが、結腸直腸がん、肝臓がん、胃がん、卵巣がん、甲状腺がん、肺がん、乳がん、又は膵臓がんである、実施形態３４の方法。
実施形態３６．固形腫瘍がんが、膵臓がんである、実施形態３４の方法。
実施形態３７．対象が、がんと診断されており、かつ療法を受けているか、又は受けようとしている、実施形態３４～３６のうちのいずれか１つの方法。
実施形態３８．試料が、療法開始前に、対象から単離される、実施形態３７の方法。
実施形態３９．試料が、療法開始後に対象から単離される、実施形態３７の方法。
実施形態４０．後の時点で工程（ａ）～（ｄ）を繰り返すことを更に含む、実施形態３４～３９のうちのいずれか１つの方法。
実施形態４１．後の時点が、対象が療法を開始した後である、実施形態４０の方法。
実施形態４２．後の時点が、対象が新しい又は第２の（共）療法を開始した後である、実施形態４０の方法。
実施形態４３．療法が、化学療法又は放射線である、実施形態４１又は４２の方法。
実施形態４４．化学療法が、エルロチニブ、フルオロウラシル、又はオキサリプラチンである、請求項４３に記載の方法。
実施形態４５．療法が、ホイップル処置、遠位膵摘出術、及び全膵摘出術を含む手術、放射線療法、陽子線療法、定位放射線（ＳＢＲＴ）若しくはサイバーナイフ、免疫療法、標的療法、又は化学療法である、請求項４１又は４２に記載の方法。
実施形態４６．検出されたＣＥＡ抗原レベルが判定され、後の時点でより高いＣＥＡレベルが、療法が完全に有効であることを示し、後の時点で同じ又はより低いＣＥＡ抗原レベルが、療法が少なくとも部分的に有効であることを示す、実施形態３４～４５のうちのいずれか１つの方法。
実施形態４７．対象が、寛解状態にある、実施形態３４～４６のうちのいずれか１つの方法。
実施形態４８．対象が寛解状態となった後の時点で工程（ａ）～（ｄ）を繰り返すことを更に含み、ＣＥＡレベルが判定され、後の時点でより高いＣＥＡレベルが、がんがもはや寛解状態ではないことを示し、後の時点で同じ又はより低いＣＥＡレベルが、療法が寛解状態であり続けていることを示す、実施形態４７に記載の方法。
実施形態４９．試料が、全血、血清、若しくは血漿を含む血液、組織、又は細胞である、実施形態３４～４８のうちのいずれか１つの方法。
実施形態５０．方法が、コンピュータ断層撮影の代替物である、実施形態３４～４９のうちのいずれか１つの方法。
実施形態５１．ＣＥＡの遺伝子産物及びその相同体の発現を特徴とするがんを検出するための方法であって、（ａ）対象から生体試料を単離することによって、がんを有するヒト患者においてＣＥＡによって発現される遺伝子産物及びその相同体を同定する工程であって、試料が、ＣＥＡ遺伝子が発現された場合に、ＣＥＡ遺伝子産物を含むものである、同定する工程と、（ｂ）生体試料を、請求項１～１０若しくは１４～１６のいずれか一項に記載の抗ＣＥＡ抗体、又は請求項１１に記載の組成物と接触させて、試料－抗体複合体を作製することによって、バイオマーカーとして遺伝子産物を利用する工程と、（ｃ）任意の非結合抗体を除去し、次いで、試料－抗体複合体を、抗体又は試料－抗体複合体に特異的な標識と接触させる工程と、（ｄ）標識を検出することによって、抗原－抗体複合体の存在を検出する工程であって、標識の検出が、がんの検出を示す、検出する工程と、を含む、方法。
実施形態５２．試料中の細胞の状態を判定する方法であって、
ａ．対象から当該試料を得ることと、
ｂ．当該試料を、実施形態１～１０若しくは１４～１６のうちのいずれか１つの抗体若しくは抗体断片、又は実施形態１１の組成物と接触させることと、
ｃ．抗体又は抗体断片によって検出されるＣＥＡの量を判定することと、を含む、方法。
実施形態５３．患者における膵臓がんを検出するための方法であって、（ａ）膵臓がんの疑いがあるか、又は膵臓がんを有する患者から膵臓又は血液の標本を取り出すことと、（ｂ）標本を、実施形態１～１０若しくは１４～１６のうちのいずれか１つの抗体若しくは抗体断片、又は請求項１１に記載の組成物と接触させ、それによって、標本中に抗原－抗体複合体を形成することと、（ｃ）標本を、抗体又は抗原－抗体複合体に特異的な標識で標識することと、（ｄ）標識を検出することによって、抗原－抗体複合体の存在を検出することと、（ｅ）陰性対照と比較して、ＣＥＡ抗原レベルを判定することであって、陰性対照よりも高いＣＥＡ抗原レベルが、膵臓がんを示す、判定することと、を含む、方法。
実施形態５４．方法が、インビトロで実行される、実施形態５３の方法。
実施形態５５．膵臓がんが、初期ステージであり、方法が、この初期ステージでＣＥＡ抗原を検出することができる、実施形態５３又は５４の方法。
実施形態５６．膵臓がんが、ステージＩ、ＩＩ、ＩＩＩ、又はＩＶであり、方法が、この初期ステージでＣＥＡ抗原を検出することができる、実施形態５３～５５のうちのいずれかに記載の方法。
実施形態５７．膵臓がんの免疫組織化学的検出のためのキットであって、（ａ）それぞれ配列番号１、２及び３を含む重鎖のＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列及びＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号４、５及び６を含む軽鎖のＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列及びＣＤＲ３配列を有するモノクローナル抗体と、（ｂ）検出可能な標識又は別個のコンジュゲートされていない検出可能な標識にコンジュゲートされた二次抗体であって、検出可能な標識又は別個のコンジュゲートされていない検出可能な標識が、二次抗体、抗体－抗原複合体、又は（ａ）のモノクローナル抗体に結合する、二次抗体と、を含む、キット。
実施形態５８．患者から採取された組織標本中の膵臓がんを検出する免疫組織化学的方法であって、（ａ）組織標本を得る工程と、（ｂ）組織標本を、実施形態～１０若しくは１４～１６のうちのいずれか１つの抗体断片の抗体、又は請求項１１に記載の組成物と接触させる工程と、（ｃ）工程ｂ）の後で、組織標本を、二次抗体、抗体－抗原複合体、又は抗体に結合する検出可能な標識と接触させる工程と、（ｄ）組織標本を、免疫組織化学染色で染色する工程と、を含み、当該染色が、当該組織標本における抗体結合及び膵臓がんの存在を示す、免疫組織化学的方法。
実施形態５９．組織標本と、実施形態～１０若しくは１４～１６のうちのいずれか１つの抗体若しくは抗体断片、又は請求項１１に記載の組成物との抗体－抗原複合体と、を含む、組成物であって、組織標本が、がんに罹患している患者からのものである、組成物。
実施形態６０．がんが、結腸直腸がん、肝臓がん、胃がん、卵巣がん、甲状腺がん、肺がん、乳がん、又は膵臓がんである、実施形態５９の組成物。
実施形態６１．がんを検出するための、実施形態１１の組成物、又は実施形態１～１０若しくは１１～１４のうちのいずれか１つの抗体若しくは抗体断片の、使用。
実施形態６２．がんが、結腸直腸がん、肝臓がん、胃がん、卵巣がん、甲状腺がん、肺がん、乳がん、又は膵臓がんである、実施形態６１の組成物。
実施形態６３．がんの進行及び／又はがん治療薬の治療有効性を監視するための方法であって、第１の時点でがんを有するヒト患者から初期試料を得ることと、試料を、実施形態～１０若しくは１４～１６のうちのいずれか１つの抗体若しくは抗体断片、又は請求項１１に記載の組成物と接触させて、抗原－抗体複合体を形成することと、標本を、抗原－抗体複合体に特異的な標識で標識することと、標識を検出することによって、抗原－抗体複合体の存在を検出することと、抗体又は抗体断片によって検出されたＣＥＡ抗原レベルを判定して、患者のがんと関連するＣＥＡ抗原のベースラインレベルを判定することと、第２の（後の）時点で第２の試料を得ることであって、任意選択的に、第２の時点が、対象が療法を受けている期間の後である、得ることと、工程（ｂ）～（ｅ）を繰り返して、患者のがんに関連する第２のＣＥＡ抗原レベルを判定することと、第２の時点でのＣＥＡ抗原レベルがベースライン時のレベルよりも高い場合に、患者のがんが進行したと判定し、第２の時点でのＣＥＡ抗原レベルがベースライン時のレベルよりも低い場合に、患者のがんが退縮したと判定することと、を含む、方法。
実施形態６４．がんが、結腸直腸がん、肝臓がん、胃がん、卵巣がん、甲状腺がん、肺がん、乳がん、又は膵臓がんである、実施形態６３の方法。
実施形態６５．固形腫瘍がんが、膵臓がんである、実施形態６３の方法。
実施形態６６．第２の時点でのＣＥＡの増加が、がんの進行を示す、実施形態６３の方法。
実施形態６７．第２の時点でのＣＥＡの減少が、がんの退縮を示す、実施形態６３の方法。
実施形態６８．第１の時点が、療法前又は初期診断時である、実施形態６３の方法。
実施形態６９．第１の時点が、療法後又は初期診断時である、実施形態６３に記載の方法。
実施形態７０．第２の時点が、療法を受けた後である、実施形態６３の方法。
実施形態７１．方法が、インビトロで実行される、実施形態６３の方法。
実施形態７２．療法が、ホイップル処理、遠位膵摘出術、及び全膵摘出術を含む手術、放射線療法、陽子線療法、定位放射線（ＳＢＲＴ）又はサイバーナイフ、免疫療法、標的療法、並びに化学療法である、実施形態６９の方法。
以下の実施形態が提供される。
実施形態１．（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１と、（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２と、（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３と、（ｄ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１と、（ｅ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２と、（ｆ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３と、を含む、単離抗体又は抗体断片。
実施形態２．抗体が、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＨが、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であり、ＶＬが、配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である、実施形態１の単離抗体。
実施形態３．抗体が、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＨが、配列番号７のアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号８のアミノ酸配列を含む、実施形態１又は２の単離抗体。
実施形態４．単離抗体又は抗体断片であって、（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、並びに重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＨが、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％同一であり、ＶＬが、配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％同一である、単離抗体又は抗体断片。
実施形態５．抗体が、モノクローナル抗体である、先行実施形態のうちのいずれか１つの単離抗体又は抗体断片。
実施形態６．抗体が、完全ヒト抗体である、先行実施形態のうちのいずれか１つの単離抗体又は抗体断片。
実施形態７．抗体が、抗体断片である、先行実施形態のうちのいずれか１つの単離抗体又は抗体断片。
実施形態８．断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、又は（Ｆａｂ’）２である、実施形態７の単離抗体又は抗体断片。
実施形態９．抗体が、全長抗体である、実施形態１～５のうちのいずれか１つの単離抗体又は抗体断片。
実施形態１０．抗体のＦｃ領域が、存在する場合、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＧ４．１、又はＩｇＧ４．２を含む、実施形態１～９のうちのいずれか１つの単離抗体又は抗体断片。
実施形態１１．実施形態１～１０のうちのいずれか１つの抗体又は抗体断片と、薬学的に許容される担体と、を含む、組成物。
実施形態１２．固相上に固定された、実施形態１～１０のうちのいずれか１つの単離抗体又は抗体断片。
実施形態１３．検出可能に標識された、実施形態１～１０のうちのいずれか１つの単離抗体又は抗体断片。
実施形態１４．細胞傷害性放射性核種にコンジュゲートされた、実施形態１～１０のうちのいずれか１つの単離抗体又は抗体断片。
実施形態１５．細胞傷害性薬物にコンジュゲートされた、実施形態１～１０のうちのいずれか１つの単離抗体又は抗体断片。
実施形態１６．細胞傷害性タンパク質にコンジュゲートされた、実施形態１～１０のうちのいずれか１つの単離抗体又は抗体断片。
実施形態１７．実施形態１～１０のうちのいずれか１つの抗体又は抗体断片をコードする、単離ＤＮＡ配列。
実施形態１８．配列番号１１若しくはその断片、又は配列番号１１と少なくとも８０、９０、若しくは９５％同一である配列を含む、実施形態１７のＤＮＡ。
実施形態１９．配列番号１２若しくはその断片、又は配列番号１２と少なくとも８０、９０、若しくは９５％同一である配列を含む、実施形態１７のＤＮＡ。
実施形態２０．配列番号１１若しくはその断片及び配列番号１２若しくはその断片を含むか、又は配列番号１１と少なくとも８０、９０、若しくは９５％同一である配列及び配列番号１２と少なくとも８０、９０、若しくは９５％同一である配列を含む、実施形態１７のＤＮＡ。
実施形態２１．実施形態１７～２０のうちのいずれか１つのＤＮＡ配列を含む、ベクター。
実施形態２２．実施形態２１のベクターで形質転換された、宿主細胞。
実施形態２３．抗体の産生のためのプロセスであって、実施形態２２の宿主細胞を培養することと、抗体分子を単離することと、を含む、プロセス。
実施形態２４．配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＶＨと、配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＶＬと、を含む、単離抗体。
実施形態２５．がんを治療する方法であって、治療有効量の請求項１～１０若しくは１４～１６のいずれか一項に記載の抗ＣＥＡ抗体、請求項１１に記載の組成物、又は請求項１７～２１のいずれか一項に記載のＤＮＡ若しくはベクターを、それを必要とする対象に投与することを含む、方法。
実施形態２６．ＣＥＡ抗原を検出するためのイムノアッセイであって、（ａ）当該試料を、有効結合量の実施形態１～１０のうちのいずれか１つの抗体又は抗体断片と接触させることと、（ｂ）ＣＥＡ抗原への抗体の結合を検出することによって、当該抗原を検出することと、を含む、イムノアッセイ。
実施形態２７．アッセイが、ＣＥＡ抗原を発現するがん細胞を検出するために使用される、実施形態２６のイムノアッセイ。
実施形態２８．アッセイが、固形腫瘍を検出するために使用される、実施形態２６のイムノアッセイ。
実施形態２９．がんが、結腸直腸がん、肝臓がん、胃がん、卵巣がん、甲状腺がん、肺がん、乳がん、又は膵臓がんである、実施形態２７又は２８のイムノアッセイ。
実施形態３０．対象におけるがんを検出する方法であって、がんを有する対象又はがんを有する疑いのある対象から単離された試料に、実施形態１～１０のうちのいずれか１つの抗体を接触させることを含む、方法。
実施形態３１．がんが、固形腫瘍である、実施形態３０の方法。
実施形態３２．固形腫瘍が、結腸直腸がん、肝臓がん、胃がん、卵巣がん、甲状腺がん、肺がん、乳がん、又は膵臓がんである、実施形態３０の方法。
実施形態３３．ＣＥＡ抗原を発現する細胞を含む固形腫瘍がんの免疫組織化学的検出のためのキットであって、（ａ）実施形態１～１０のうちのいずれか１つに記載の抗体と、（ｂ）検出可能な標識にコンジュゲートされた二次抗体であって、ＣＥＡ抗原に結合したときに、（ａ）の抗体に結合し、かつそれを検出することができる、二次抗体と、を含む、キット。
実施形態３４．対象における固形腫瘍がんの状態を判定するための方法であって、（ａ）固形腫瘍がんを有する対象から試料を取り出すことと、（ｂ）試料を、実施形態１～１０のうちのいずれか１つの抗体又は抗体断片と接触させ、それによって、ＣＥＡ抗原と抗体又は抗体断片との複合体を形成することと、（ｃ）標本を、抗原－抗体複合体に特異的な標識で標識することと、（ｄ）標識を検出することによって、抗原－抗体複合体の存在を検出することと、を含む、方法。
実施形態３５．固形腫瘍がんが、結腸直腸がん、肝臓がん、胃がん、卵巣がん、甲状腺がん、肺がん、乳がん、又は膵臓がんである、実施形態３４の方法。
実施形態３６．固形腫瘍がんが、膵臓がんである、実施形態３４の方法。
実施形態３７．対象が、がんと診断されており、かつ療法を受けているか、又は受けようとしている、実施形態３４～３６のうちのいずれか１つの方法。
実施形態３８．試料が、療法開始前に、対象から単離される、実施形態３７の方法。
実施形態３９．試料が、療法開始後に対象から単離される、実施形態３７の方法。
実施形態４０．後の時点で工程（ａ）～（ｄ）を繰り返すことを更に含む、実施形態３４～３９のうちのいずれか１つの方法。
実施形態４１．後の時点が、対象が療法を開始した後である、実施形態４０の方法。
実施形態４２．後の時点が、対象が新しい又は第２の（共）療法を開始した後である、実施形態４０の方法。
実施形態４３．療法が、化学療法又は放射線である、実施形態４１又は４２の方法。
実施形態４４．化学療法が、エルロチニブ、フルオロウラシル、又はオキサリプラチンである、請求項４３に記載の方法。
実施形態４５．療法が、ホイップル処置、遠位膵摘出術、及び全膵摘出術を含む手術、放射線療法、陽子線療法、定位放射線（ＳＢＲＴ）若しくはサイバーナイフ、免疫療法、標的療法、又は化学療法である、請求項４１又は４２に記載の方法。
実施形態４６．検出されたＣＥＡ抗原レベルが判定され、後の時点でより高いＣＥＡレベルが、療法が完全に有効であることを示し、後の時点で同じ又はより低いＣＥＡ抗原レベルが、療法が少なくとも部分的に有効であることを示す、実施形態３４～４５のうちのいずれか１つの方法。
実施形態４７．対象が、寛解状態にある、実施形態３４～４６のうちのいずれか１つの方法。
実施形態４８．対象が寛解状態となった後の時点で工程（ａ）～（ｄ）を繰り返すことを更に含み、ＣＥＡレベルが判定され、後の時点でより高いＣＥＡレベルが、がんがもはや寛解状態ではないことを示し、後の時点で同じ又はより低いＣＥＡレベルが、療法が寛解状態であり続けていることを示す、実施形態４７に記載の方法。
実施形態４９．試料が、全血、血清、若しくは血漿を含む血液、組織、又は細胞である、実施形態３４～４８のうちのいずれか１つの方法。
実施形態５０．方法が、コンピュータ断層撮影の代替物である、実施形態３４～４９のうちのいずれか１つの方法。
実施形態５１．ＣＥＡの遺伝子産物及びその相同体の発現を特徴とするがんを検出するための方法であって、（ａ）対象から生体試料を単離することによって、がんを有するヒト患者においてＣＥＡによって発現される遺伝子産物及びその相同体を同定する工程であって、試料が、ＣＥＡ遺伝子が発現された場合に、ＣＥＡ遺伝子産物を含むものである、同定する工程と、（ｂ）生体試料を、請求項１～１０若しくは１４～１６のいずれか一項に記載の抗ＣＥＡ抗体、又は請求項１１に記載の組成物と接触させて、試料－抗体複合体を作製することによって、バイオマーカーとして遺伝子産物を利用する工程と、（ｃ）任意の非結合抗体を除去し、次いで、試料－抗体複合体を、抗体又は試料－抗体複合体に特異的な標識と接触させる工程と、（ｄ）標識を検出することによって、抗原－抗体複合体の存在を検出する工程であって、標識の検出が、がんの検出を示す、検出する工程と、を含む、方法。
実施形態５２．試料中の細胞の状態を判定する方法であって、
ａ．対象から当該試料を得ることと、
ｂ．当該試料を、実施形態１～１０若しくは１４～１６のうちのいずれか１つの抗体若しくは抗体断片、又は実施形態１１の組成物と接触させることと、
ｃ．抗体又は抗体断片によって検出されるＣＥＡの量を判定することと、を含む、方法。
実施形態５３．患者における膵臓がんを検出するための方法であって、（ａ）膵臓がんの疑いがあるか、又は膵臓がんを有する患者から膵臓又は血液の標本を取り出すことと、（ｂ）標本を、実施形態１～１０若しくは１４～１６のうちのいずれか１つの抗体若しくは抗体断片、又は請求項１１に記載の組成物と接触させ、それによって、標本中に抗原－抗体複合体を形成することと、（ｃ）標本を、抗体又は抗原－抗体複合体に特異的な標識で標識することと、（ｄ）標識を検出することによって、抗原－抗体複合体の存在を検出することと、（ｅ）陰性対照と比較して、ＣＥＡ抗原レベルを判定することであって、陰性対照よりも高いＣＥＡ抗原レベルが、膵臓がんを示す、判定することと、を含む、方法。
実施形態５４．方法が、インビトロで実行される、実施形態５３の方法。
実施形態５５．膵臓がんが、初期ステージであり、方法が、この初期ステージでＣＥＡ抗原を検出することができる、実施形態５３又は５４の方法。
実施形態５６．膵臓がんが、ステージＩ、ＩＩ、ＩＩＩ、又はＩＶであり、方法が、この初期ステージでＣＥＡ抗原を検出することができる、実施形態５３～５５のうちのいずれかに記載の方法。
実施形態５７．膵臓がんの免疫組織化学的検出のためのキットであって、（ａ）それぞれ配列番号１、２及び３を含む重鎖のＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列及びＣＤＲ３配列、並びにそれぞれ配列番号４、５及び６を含む軽鎖のＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列及びＣＤＲ３配列を有するモノクローナル抗体と、（ｂ）検出可能な標識又は別個のコンジュゲートされていない検出可能な標識にコンジュゲートされた二次抗体であって、検出可能な標識又は別個のコンジュゲートされていない検出可能な標識が、二次抗体、抗体－抗原複合体、又は（ａ）のモノクローナル抗体に結合する、二次抗体と、を含む、キット。
実施形態５８．患者から採取された組織標本中の膵臓がんを検出する免疫組織化学的方法であって、（ａ）組織標本を得る工程と、（ｂ）組織標本を、実施形態～１０若しくは１４～１６のうちのいずれか１つの抗体断片の抗体、又は請求項１１に記載の組成物と接触させる工程と、（ｃ）工程ｂ）の後で、組織標本を、二次抗体、抗体－抗原複合体、又は抗体に結合する検出可能な標識と接触させる工程と、（ｄ）組織標本を、免疫組織化学染色で染色する工程と、を含み、当該染色が、当該組織標本における抗体結合及び膵臓がんの存在を示す、免疫組織化学的方法。
実施形態５９．組織標本と、実施形態～１０若しくは１４～１６のうちのいずれか１つの抗体若しくは抗体断片、又は請求項１１に記載の組成物との抗体－抗原複合体と、を含む、組成物であって、組織標本が、がんに罹患している患者からのものである、組成物。
実施形態６０．がんが、結腸直腸がん、肝臓がん、胃がん、卵巣がん、甲状腺がん、肺がん、乳がん、又は膵臓がんである、実施形態５９の組成物。
実施形態６１．がんを検出するための、実施形態１１の組成物、又は実施形態１～１０若しくは１１～１４のうちのいずれか１つの抗体若しくは抗体断片の、使用。
実施形態６２．がんが、結腸直腸がん、肝臓がん、胃がん、卵巣がん、甲状腺がん、肺がん、乳がん、又は膵臓がんである、実施形態６１の組成物。
実施形態６３．がんの進行及び／又はがん治療薬の治療有効性を監視するための方法であって、第１の時点でがんを有するヒト患者から初期試料を得ることと、試料を、実施形態～１０若しくは１４～１６のうちのいずれか１つの抗体若しくは抗体断片、又は請求項１１に記載の組成物と接触させて、抗原－抗体複合体を形成することと、標本を、抗原－抗体複合体に特異的な標識で標識することと、標識を検出することによって、抗原－抗体複合体の存在を検出することと、抗体又は抗体断片によって検出されたＣＥＡ抗原レベルを判定して、患者のがんと関連するＣＥＡ抗原のベースラインレベルを判定することと、第２の（後の）時点で第２の試料を得ることであって、任意選択的に、第２の時点が、対象が療法を受けている期間の後である、得ることと、工程（ｂ）～（ｅ）を繰り返して、患者のがんに関連する第２のＣＥＡ抗原レベルを判定することと、第２の時点でのＣＥＡ抗原レベルがベースライン時のレベルよりも高い場合に、患者のがんが進行したと判定し、第２の時点でのＣＥＡ抗原レベルがベースライン時のレベルよりも低い場合に、患者のがんが退縮したと判定することと、を含む、方法。
実施形態６４．がんが、結腸直腸がん、肝臓がん、胃がん、卵巣がん、甲状腺がん、肺がん、乳がん、又は膵臓がんである、実施形態６３の方法。
実施形態６５．固形腫瘍がんが、膵臓がんである、実施形態６３の方法。
実施形態６６．第２の時点でのＣＥＡの増加が、がんの進行を示す、実施形態６３の方法。
実施形態６７．第２の時点でのＣＥＡの減少が、がんの退縮を示す、実施形態６３の方法。
実施形態６８．第１の時点が、療法前又は初期診断時である、実施形態６３の方法。
実施形態６９．第１の時点が、療法後又は初期診断時である、実施形態６３に記載の方法。
実施形態７０．第２の時点が、療法を受けた後である、実施形態６３の方法。
実施形態７１．方法が、インビトロで実行される、実施形態６３の方法。
実施形態７２．療法が、ホイップル処理、遠位膵摘出術、及び全膵摘出術を含む手術、放射線療法、陽子線療法、定位放射線（ＳＢＲＴ）又はサイバーナイフ、免疫療法、標的療法、並びに化学療法である、実施形態６９の方法。
【実施例】
【0086】
実施例１．
免疫原として天然（ｗｔ）ＣＥＡ抗原を使用して抗体を調製し、約１９，２００のハイブリドーマを産生し、スクリーニングした。約２０の有望な候補を更に評価し、最終的に以下のように５つのクローンをフォローアップのために選択した。ハイブリドーマクローンのＩｇＧアイソタイプ（ＩｇＧ１、Ｇ２、Ｇ２ａ、Ｇ２ｂ）の判定後、キットの指示に従ってＲＮＡ抽出キット（例えば、Ｑｉａｇｅｎ Ｍｉｎｉ ＲＮｅａｓｙキット）を使用することによって、ハイブリドーマ細胞株培養物（２×１０６）から全ＲＮＡを抽出した。ＲＮＡを、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ（登録商標）ＩＩＩ第一ストランド合成システム（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ，ＵＳＡ）を使用して、相補ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）に逆転写した。各試料由来の１μｇのｃＤＮＡをポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）に供した。マウスユニバーサルＩｇ重鎖又は軽鎖プライマーを使用して、ハイブリドーマクローン（ＡＤｘ－ＣＥＡ）のｃＤＮＡ試料のＶ領域を増幅した。ユニバーサルプライマーは、Ｄａｔｔａｍａｊｕｍｄａｒ，Ａｎｕｐａｍ Ｋ．，ｅｔ ａｌ．“Ｒａｐｉｄ ｃｌｏｎｉｎｇ ｏｆ ａｎｙ ｒｅａｒｒａｎｇｅｄ ｍｏｕｓｅ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ｖａｒｉａｂｌｅ ｇｅｎｅｓ．”Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ ４３．３（１９９６）：１４１－１５１に記載の高度に保存された領域から設計した。プライマー対Ｈ－Ｆ及びＨ－Ｒを使用して遺伝子Ｈを増幅し、対Ｋ－Ｆ及びＫ－Ｒを使用して遺伝子Ｋを増幅した。表２を参照されたい。重鎖のプライマー配列は、以下のとおりであった：ＶＨ ５’－ｔｇａｇｇｔｇｃａｇｃｔｇｇａｇｇａｇｔｃ－３’（配列番号１３）及びＪＨ ５’－ｇｔｇａｃｃｇｔｇｇｔｃｃｃｔｔｇｇｃｃｃｃａｇ－３’（配列番号１４）。軽鎖のプライマー配列は、以下のとおりであった：ＶＫ ５’－ｇａｃａｔｔｃｔｇａｔｇａｃｃｃａｇｔｃｔ－３’（配列番号１５）及びＪＫ ５’－ｔｔｔｔａｔｔｔｃｃａｇｃｔｔｇｇｔｃｃｃ－３’（配列番号１６）。対を以下の表２に記載する。ＰＣＲサイクルは、９４℃で１５秒、６２℃（－１．２℃／サイクル）で３０秒、及び７２℃で３０秒の最初の６サイクルで行い、その後、９４℃で１５秒、５６℃で３０秒、及び７２℃で３０秒の３０サイクルを行った。１つのハイブリドーマを後続試験のためのリードとして選択し、このハイブリドーマは、本明細書に記載されるような、配列番号１～６のＣＤＲ、配列番号７のＶＨ、配列番号８のＶＬ、配列番号９の完全重、及び配列番号１０の完全軽を有する抗体ＡＤｘ－ＣＥＡを産生した。全体を通して、このリード抗体は、ＡＤｘ－ＣＥＡと称される。ＡＤｘ－ＣＥＡのアンプリコンを図１に示し、重鎖及び軽鎖は１％アガロース上で約３８０～５００ｂｐで実行される。
免疫原として天然（ｗｔ）ＣＥＡ抗原を使用して抗体を調製し、約１９，２００のハイブリドーマを産生し、スクリーニングした。約２０の有望な候補を更に評価し、最終的に以下のように５つのクローンをフォローアップのために選択した。ハイブリドーマクローンのＩｇＧアイソタイプ（ＩｇＧ１、Ｇ２、Ｇ２ａ、Ｇ２ｂ）の判定後、キットの指示に従ってＲＮＡ抽出キット（例えば、Ｑｉａｇｅｎ Ｍｉｎｉ ＲＮｅａｓｙキット）を使用することによって、ハイブリドーマ細胞株培養物（２×１０６）から全ＲＮＡを抽出した。ＲＮＡを、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ（登録商標）ＩＩＩ第一ストランド合成システム（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ，ＵＳＡ）を使用して、相補ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）に逆転写した。各試料由来の１μｇのｃＤＮＡをポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）に供した。マウスユニバーサルＩｇ重鎖又は軽鎖プライマーを使用して、ハイブリドーマクローン（ＡＤｘ－ＣＥＡ）のｃＤＮＡ試料のＶ領域を増幅した。ユニバーサルプライマーは、Ｄａｔｔａｍａｊｕｍｄａｒ，Ａｎｕｐａｍ Ｋ．，ｅｔ ａｌ．“Ｒａｐｉｄ ｃｌｏｎｉｎｇ ｏｆ ａｎｙ ｒｅａｒｒａｎｇｅｄ ｍｏｕｓｅ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ｖａｒｉａｂｌｅ ｇｅｎｅｓ．”Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ ４３．３（１９９６）：１４１－１５１に記載の高度に保存された領域から設計した。プライマー対Ｈ－Ｆ及びＨ－Ｒを使用して遺伝子Ｈを増幅し、対Ｋ－Ｆ及びＫ－Ｒを使用して遺伝子Ｋを増幅した。表２を参照されたい。重鎖のプライマー配列は、以下のとおりであった：ＶＨ ５’－ｔｇａｇｇｔｇｃａｇｃｔｇｇａｇｇａｇｔｃ－３’（配列番号１３）及びＪＨ ５’－ｇｔｇａｃｃｇｔｇｇｔｃｃｃｔｔｇｇｃｃｃｃａｇ－３’（配列番号１４）。軽鎖のプライマー配列は、以下のとおりであった：ＶＫ ５’－ｇａｃａｔｔｃｔｇａｔｇａｃｃｃａｇｔｃｔ－３’（配列番号１５）及びＪＫ ５’－ｔｔｔｔａｔｔｔｃｃａｇｃｔｔｇｇｔｃｃｃ－３’（配列番号１６）。対を以下の表２に記載する。ＰＣＲサイクルは、９４℃で１５秒、６２℃（－１．２℃／サイクル）で３０秒、及び７２℃で３０秒の最初の６サイクルで行い、その後、９４℃で１５秒、５６℃で３０秒、及び７２℃で３０秒の３０サイクルを行った。１つのハイブリドーマを後続試験のためのリードとして選択し、このハイブリドーマは、本明細書に記載されるような、配列番号１～６のＣＤＲ、配列番号７のＶＨ、配列番号８のＶＬ、配列番号９の完全重、及び配列番号１０の完全軽を有する抗体ＡＤｘ－ＣＥＡを産生した。全体を通して、このリード抗体は、ＡＤｘ－ＣＥＡと称される。ＡＤｘ－ＣＥＡのアンプリコンを図１に示し、重鎖及び軽鎖は１％アガロース上で約３８０～５００ｂｐで実行される。
【表2-1】
【表2-2】
【0087】
実施例２．
ＰＣＲ産物を精製し、ＴＡクローニング戦略（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ，ＵＳＡ））を使用して、製造業者の指示に従って、ｐＣＲ４－ＴＯＰＯベクターにクローニングした。３～５個の単一コロニーを選択し、ベクターＤＮＡ配列に特異的なプライマーを用いてプラスミドＤＮＡを増幅した。必要に応じてサブクローニングを行った。各コロニー由来のプラスミドを、Ｍｉｎｉｐｒｅｐ Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ Ｉｎｃ）を使用して単離した。ＰＣＲインサートを、ＥｃｏＲ１消化を使用した制限分析によって検証し、蛍光色素ターミネータを用いたサイクル配列決定反応及びキャピラリーベースの電気泳動を使用して、Ｍ１３ユニバーサルプライマーを使用して両鎖について配列決定した。全ての構築物からのＤＮＡ配列データを分析し、重鎖及び軽鎖のコンセンサス配列を決定した。コンセンサス配列を、全ての既知の可変領域配列と比較して、人工物及び／又はプロセス汚染を排除した。次に、コンセンサス配列をオンラインツールを使用して分析して、その配列が生産性のある免疫グロブリンをコード可能であることを検証した。マウス及びヒトデータベース（ＧｅｎＢａｎｋ）との配列比較は、Ｋａｂａｔデータベース（ＣＤＲ１及びＣＤＲ２を同定するため）及びＩＭＧＴ／Ｖ Ｑｕｅｓｔ（ＣＤＲ３を検出するため）プログラムに対するＮＣＢＩ（ＮＩＨ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ）のＢＬＡＳＴ（Ｂａｓｉｃ Ｌｏｃａｌ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ Ｓｅａｒｃｈ Ｔｏｏｌ）を使用して実行し、クエリは、ＡＤｘ－ＣＥＡクローンのＤＮＡ配列であった。ＡＤｘ－ＣＥＡの重鎖及び軽鎖についての代表的なＢＬＡＳＴ結果を図２及び図３に示す。検証目的のために、及び図２及び３に示されるように、ＩＧＨＶ４－４＊０２；ＩＧＨＶ３－３３＊０８及びＩＧＨＶ４－３０－４＊０１の参照ゲノム配列は、Ｈｏｍｏ Ｓａｐｉｅｎｓ Ｉｇ生殖系列配列に対してブラストした場合、Ｖ領域における相同性を検出するための最も信頼性の高い６６～６７％）配列であることが判明した。最も信頼性の高い可変（Ｖ）遺伝子の一致は、ＩＧＨＶ４－４＊０２であることが判明し、最も信頼性の高い多様性（Ｄ）遺伝子の一致は、ＩＧＨＤ２－８＊０１であることが判明した。最も信頼性の高い接合（Ｊ）遺伝子セグメントの一致は、ＩＧＨＪ６＊０２であることが判明した。
ＰＣＲ産物を精製し、ＴＡクローニング戦略（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ，ＵＳＡ））を使用して、製造業者の指示に従って、ｐＣＲ４－ＴＯＰＯベクターにクローニングした。３～５個の単一コロニーを選択し、ベクターＤＮＡ配列に特異的なプライマーを用いてプラスミドＤＮＡを増幅した。必要に応じてサブクローニングを行った。各コロニー由来のプラスミドを、Ｍｉｎｉｐｒｅｐ Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ Ｉｎｃ）を使用して単離した。ＰＣＲインサートを、ＥｃｏＲ１消化を使用した制限分析によって検証し、蛍光色素ターミネータを用いたサイクル配列決定反応及びキャピラリーベースの電気泳動を使用して、Ｍ１３ユニバーサルプライマーを使用して両鎖について配列決定した。全ての構築物からのＤＮＡ配列データを分析し、重鎖及び軽鎖のコンセンサス配列を決定した。コンセンサス配列を、全ての既知の可変領域配列と比較して、人工物及び／又はプロセス汚染を排除した。次に、コンセンサス配列をオンラインツールを使用して分析して、その配列が生産性のある免疫グロブリンをコード可能であることを検証した。マウス及びヒトデータベース（ＧｅｎＢａｎｋ）との配列比較は、Ｋａｂａｔデータベース（ＣＤＲ１及びＣＤＲ２を同定するため）及びＩＭＧＴ／Ｖ Ｑｕｅｓｔ（ＣＤＲ３を検出するため）プログラムに対するＮＣＢＩ（ＮＩＨ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ）のＢＬＡＳＴ（Ｂａｓｉｃ Ｌｏｃａｌ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ Ｓｅａｒｃｈ Ｔｏｏｌ）を使用して実行し、クエリは、ＡＤｘ－ＣＥＡクローンのＤＮＡ配列であった。ＡＤｘ－ＣＥＡの重鎖及び軽鎖についての代表的なＢＬＡＳＴ結果を図２及び図３に示す。検証目的のために、及び図２及び３に示されるように、ＩＧＨＶ４－４＊０２；ＩＧＨＶ３－３３＊０８及びＩＧＨＶ４－３０－４＊０１の参照ゲノム配列は、Ｈｏｍｏ Ｓａｐｉｅｎｓ Ｉｇ生殖系列配列に対してブラストした場合、Ｖ領域における相同性を検出するための最も信頼性の高い６６～６７％）配列であることが判明した。最も信頼性の高い可変（Ｖ）遺伝子の一致は、ＩＧＨＶ４－４＊０２であることが判明し、最も信頼性の高い多様性（Ｄ）遺伝子の一致は、ＩＧＨＤ２－８＊０１であることが判明した。最も信頼性の高い接合（Ｊ）遺伝子セグメントの一致は、ＩＧＨＪ６＊０２であることが判明した。
【0088】
実施例３．
本明細書で「ＡＤｘ－ＣＥＡ」と称される、リード候補モノクローナル抗体を選択した。約１μｇ及び５μｇの精製ＡＤｘ－ＣＥＡをＰＢＳ中に懸濁し、還元条件（ベータ－メルカプトエタノール及び１０％ＳＤＳを含む試料緩衝液中で３分間沸騰させた）下でＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルに、及び非還元条件下で１０％Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓゲル（それぞれ、レーン３、５及び７、９）に適用した。ゲルを１２９ボルトで実行し、次いで、Ｃｏｏｍａｓｓｉｅ Ｂｌｕｅ Ｒ３５０（０．１ｗ／ｖ）、２０％ｖ／ｖメタノール、及び１０％ｖ／ｖ酢酸で染色し、１０％ｖ／ｖ酢酸を用いて水中５０％ｖ／ｖメタノールで脱染色した。
本明細書で「ＡＤｘ－ＣＥＡ」と称される、リード候補モノクローナル抗体を選択した。約１μｇ及び５μｇの精製ＡＤｘ－ＣＥＡをＰＢＳ中に懸濁し、還元条件（ベータ－メルカプトエタノール及び１０％ＳＤＳを含む試料緩衝液中で３分間沸騰させた）下でＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルに、及び非還元条件下で１０％Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓゲル（それぞれ、レーン３、５及び７、９）に適用した。ゲルを１２９ボルトで実行し、次いで、Ｃｏｏｍａｓｓｉｅ Ｂｌｕｅ Ｒ３５０（０．１ｗ／ｖ）、２０％ｖ／ｖメタノール、及び１０％ｖ／ｖ酢酸で染色し、１０％ｖ／ｖ酢酸を用いて水中５０％ｖ／ｖメタノールで脱染色した。
【0089】
図４に示すように、レーン３は、１μｇのＡＤｘ－ＣＥＡ ｍＡｂ（還元）を含有した。レーン５は、５μｇのＡＤｘ－ＣＥＡ ｍＡｂ（還元）を含有した。レーン７は、１μｇのＡＤｘ－ＣＥＡ ｍＡｂ（非還元）を含有した。レーン９は、５μｇのＡＤｘ－ＣＥＡ ｍＡｂ（非還元）を含有した。変性条件下で、ＡＤｘ－ＣＥＡの重鎖（ＩｇＧ１カッパ）を約５０ｋＤａで検出した。ＡＤｘ－ＣＥＡの軽鎖を約２５ｋＤａで検出した（図４）。
【0090】
実施例４．
５０μｇの組換えＣＥＡ（Ｍｙｂｉｏｓｏｕｒｃｅ Ｃａｒｃｉｎｏｅｍｂｒｙｏｎｉｃ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｐｒｏｔｅｉｎ、カタログ番号ＭＢＳ１４２８４３）を含有する２５μｌの試料緩衝液を３分間沸騰させ、５μｌの分子マーカーとともに、４～１２％のＴｒｉｓ－Ｇｌｙｃｉｎｅゲルにロードした。ゲルを１２５Ｖで１．５時間実行した。次いで、ゲルをＰＶＤＦ膜に移した。膜をＡＤｘ－ＣＥＡ ｍＡｂとともに４℃で一晩インキュベートした。膜をＰＢＳＴですすいだ後、それを二次抗体（ヒツジ抗マウスＩｇＧ－ＨＲＰ、ＰＢＳＴで１：１０００希釈）とともに１時間インキュベートし、ＰＢＳＴですすいだ。１－Ｓｔｅｐ ＮＢＴ／ＢＣＩＰ溶液で可視化されたバンド。
５０μｇの組換えＣＥＡ（Ｍｙｂｉｏｓｏｕｒｃｅ Ｃａｒｃｉｎｏｅｍｂｒｙｏｎｉｃ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｐｒｏｔｅｉｎ、カタログ番号ＭＢＳ１４２８４３）を含有する２５μｌの試料緩衝液を３分間沸騰させ、５μｌの分子マーカーとともに、４～１２％のＴｒｉｓ－Ｇｌｙｃｉｎｅゲルにロードした。ゲルを１２５Ｖで１．５時間実行した。次いで、ゲルをＰＶＤＦ膜に移した。膜をＡＤｘ－ＣＥＡ ｍＡｂとともに４℃で一晩インキュベートした。膜をＰＢＳＴですすいだ後、それを二次抗体（ヒツジ抗マウスＩｇＧ－ＨＲＰ、ＰＢＳＴで１：１０００希釈）とともに１時間インキュベートし、ＰＢＳＴですすいだ。１－Ｓｔｅｐ ＮＢＴ／ＢＣＩＰ溶液で可視化されたバンド。
【0091】
【0092】
実施例５．
ＰＡＮＣ－１細胞（導管細胞由来の膵臓がんから単離されたヒト膵臓がん細胞株；ＡＴＣＣから購入）を、ガラス底のウェル上で１８時間培養した。細胞を１０％パラホルムアルデヒドで固定し、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標） Ｘ－１００で透過処理した。細胞をＰＢＳで洗浄し、ＡＤｘ－ＣＥＡ（５μｇ／ｍｌ）とともに１５分間インキュベートした。細胞をＰＢＳで洗浄し、続いてＦＩＴＣコンジュゲートマウスＩｇＧ（４μｇ／ｍｌ）とともに１５分間インキュベートした。細胞を洗浄し、免疫蛍光顕微鏡下で染色を可視化した。
ＰＡＮＣ－１細胞（導管細胞由来の膵臓がんから単離されたヒト膵臓がん細胞株；ＡＴＣＣから購入）を、ガラス底のウェル上で１８時間培養した。細胞を１０％パラホルムアルデヒドで固定し、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標） Ｘ－１００で透過処理した。細胞をＰＢＳで洗浄し、ＡＤｘ－ＣＥＡ（５μｇ／ｍｌ）とともに１５分間インキュベートした。細胞をＰＢＳで洗浄し、続いてＦＩＴＣコンジュゲートマウスＩｇＧ（４μｇ／ｍｌ）とともに１５分間インキュベートした。細胞を洗浄し、免疫蛍光顕微鏡下で染色を可視化した。
【0093】
【0094】
実施例６．
健康なドナー（ｎ＝９）、及び未治療であり、かつ様々なステージ（ＩＡ、ＩＢ、ＩＩＡ、ＩＩＢ、ＩＩＩ、ＩＩＩＡ、ＩＶ）の膵臓がんと診断された患者（ｎ＝１７）からの血漿試料を、ＰＢＳで希釈した。試料緩衝液を最終体積２５μｌで添加し、３分間沸騰させた。試料を、５μｌの分子マーカーとともに、４～１２％のＴｒｉｓ－Ｇｌｙｃｉｎｅゲルにロードした。ゲルを１２５Ｖで１．５時間実行した。次いで、ゲルをＰＶＤＦメンブレンに移した。膜をＡＤｘ－ＣＥＡとともに４℃で一晩インキュベートした。膜をＰＢＳＴですすいだ後、それを二次抗体（ヒツジ抗マウスＩｇＧ－ＨＲＰ、ＰＢＳＴで１：１０００希釈）とともに１時間インキュベートし、ＰＢＳＴですすいだ。１－Ｓｔｅｐ ＮＢＴ／ＢＣＩＰ溶液で可視化されたバンド。
健康なドナー（ｎ＝９）、及び未治療であり、かつ様々なステージ（ＩＡ、ＩＢ、ＩＩＡ、ＩＩＢ、ＩＩＩ、ＩＩＩＡ、ＩＶ）の膵臓がんと診断された患者（ｎ＝１７）からの血漿試料を、ＰＢＳで希釈した。試料緩衝液を最終体積２５μｌで添加し、３分間沸騰させた。試料を、５μｌの分子マーカーとともに、４～１２％のＴｒｉｓ－Ｇｌｙｃｉｎｅゲルにロードした。ゲルを１２５Ｖで１．５時間実行した。次いで、ゲルをＰＶＤＦメンブレンに移した。膜をＡＤｘ－ＣＥＡとともに４℃で一晩インキュベートした。膜をＰＢＳＴですすいだ後、それを二次抗体（ヒツジ抗マウスＩｇＧ－ＨＲＰ、ＰＢＳＴで１：１０００希釈）とともに１時間インキュベートし、ＰＢＳＴですすいだ。１－Ｓｔｅｐ ＮＢＴ／ＢＣＩＰ溶液で可視化されたバンド。
【0095】
ＡＤｘ－ＣＥＡは、健康なドナー及び膵臓がんと診断された患者からの血漿血液試料中のＣＥＡタンパク質を検出した。図７。ＣＥＡタンパク質発現は様々なレベルを示し、健康な血液試料（ｎ＝９）では低レベルでＣＥＡが検出された。様々なステージで診断された膵臓がん患者の血液分析により、ステージとともにＣＥＡタンパク質のレベルが増加することが示された（ｎ＝１７）。
【0096】
実施例７．
ホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）組織切片を有する組織アレイスライド（ＢｉｏｃｏｒｅＵＳＡ製、カタログ番号ＢＣ００１１５７）を使用した。スライドをキシレンで脱パラフィン化し、一連のアルコールにより水和した。抗原回収を、スチーマ内でクエン酸塩－ＥＤＴＡ緩衝液（ｐＨ６．０）中２０分間実行した。スライドをＨ２０２で１０分間処理し、次いで、Ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ Ｓｎｉｐｅｒ（Ｂｉｏｃａｒｅ Ｍｅｄｉｃａｌ、カタログ番号ＢＳ９６６）で１０分間処理した。一次抗体を、ＮＤＢのＡｎｔｉｂｏｄｙ Ｄｉｌｕｅｎｔ Ｂｕｆｆｅｒ中で６０分間１：５０希釈する。抗体染色の検出は、Ｂｉｏｃａｒｅ Ｍａｃｈ ３試薬を使用し、各成分について１０分間インキュベーションして達成された。Ｇｉｌｌ’ｓ ＩＩ Ｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎを使用して対抗染色を実行した。次いで、スライドをアルコールで脱水し、キシレンで透明処理し、Ｐｅｒｍｏｕｎｔでマウントした。染色の存在を、Ｌａｂ Ｖｉｓｉｏｎ ＩＨＣ ３６０ Ａｕｔｏｓｔａｉｎｅｒ及びＤａｋｏ Ｌｉｎｋ ｐｌｕｓ ＩＨＣ Ｓｙｓｔｅｍを使用して判定した。
ホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）組織切片を有する組織アレイスライド（ＢｉｏｃｏｒｅＵＳＡ製、カタログ番号ＢＣ００１１５７）を使用した。スライドをキシレンで脱パラフィン化し、一連のアルコールにより水和した。抗原回収を、スチーマ内でクエン酸塩－ＥＤＴＡ緩衝液（ｐＨ６．０）中２０分間実行した。スライドをＨ２０２で１０分間処理し、次いで、Ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ Ｓｎｉｐｅｒ（Ｂｉｏｃａｒｅ Ｍｅｄｉｃａｌ、カタログ番号ＢＳ９６６）で１０分間処理した。一次抗体を、ＮＤＢのＡｎｔｉｂｏｄｙ Ｄｉｌｕｅｎｔ Ｂｕｆｆｅｒ中で６０分間１：５０希釈する。抗体染色の検出は、Ｂｉｏｃａｒｅ Ｍａｃｈ ３試薬を使用し、各成分について１０分間インキュベーションして達成された。Ｇｉｌｌ’ｓ ＩＩ Ｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎを使用して対抗染色を実行した。次いで、スライドをアルコールで脱水し、キシレンで透明処理し、Ｐｅｒｍｏｕｎｔでマウントした。染色の存在を、Ｌａｂ Ｖｉｓｉｏｎ ＩＨＣ ３６０ Ａｕｔｏｓｔａｉｎｅｒ及びＤａｋｏ Ｌｉｎｋ ｐｌｕｓ ＩＨＣ Ｓｙｓｔｅｍを使用して判定した。
【0097】
ＡＤｘ－ＣＥＡは、初期ステージの膵臓がんを検出した。図８。図８に示すように、ＤＡＫＯ抗ヒト市販ＣＥＡ ｍＡｂは、部分的に陽性を示した様々なステージの膵臓がん組織で偽陰性染色を示し、ステージＩ、ＩＩＩ及びＩＶではなく、ステージＩＩ組織のみを染色した。一方、ＡＤｘ－ＣＥＡは、ステージＩ～ＩＶ組織を含む同じ組織で陽性染色を示した。染色は、膜、細胞質、及びパターンを示し、ステージが増加するにつれて検出されたＣＥＡの発現が増加することを示した。病理学者は、染色された組織が膵臓がんと診断されることを確認した。
【0098】
実施例８．
合計２１５の健康な組織及び膵臓がん組織における病理検査室（Ｊｏｈｎ’ｓ Ｈｏｐｋｉｎｓ及びＣＬＩＡ病理）での免疫組織化学（ＩＨＣ）染色を使用して、健康な正常なヒト組織（ｎ＝１９）、及び様々なステージの膵臓がんと診断された患者組織（ｎ＝１９６）を含む、合計２１５の組織試料において、ＡＤｘ－ＣＥＡを使用して免疫組織化学（ＩＨＣ）染色を実行し、ＤＡＫＯからの市販のＦＤＡ承認マウス抗ヒトＣＥＡ抗体を使用して並行して比較した。
合計２１５の健康な組織及び膵臓がん組織における病理検査室（Ｊｏｈｎ’ｓ Ｈｏｐｋｉｎｓ及びＣＬＩＡ病理）での免疫組織化学（ＩＨＣ）染色を使用して、健康な正常なヒト組織（ｎ＝１９）、及び様々なステージの膵臓がんと診断された患者組織（ｎ＝１９６）を含む、合計２１５の組織試料において、ＡＤｘ－ＣＥＡを使用して免疫組織化学（ＩＨＣ）染色を実行し、ＤＡＫＯからの市販のＦＤＡ承認マウス抗ヒトＣＥＡ抗体を使用して並行して比較した。
【0099】
ＡＤｘ－ＣＥＡの感受性の計算値は９９．５％であったが、市販のｍＡｂは、表３～５及び図９Ａ～Ｂに示されるように３４％であった。初期ステージ（Ｉ、ＩＩ）の感受性及び特異性を図１０Ａ～Ｂに示す。後期ステージ（ＩＩＩ、ＩＶ）の感受性及び特異性を図１１Ａ～Ｂに示す。
【表3】
【0100】
表４～５は、頻度分布並びに対応する感受性及び特異性を表示する。
【表4】
【0101】
ＡＤｘ－ＣＥＡの感受性（表４のデータを使用して推定）：１９５／１９６＝０．９９４８×１００＝９９．５％
【0102】
ＡＤｘ－ＣＥＡの特異性（表４のデータを使用して推定）：１９／１９＝１．００×１００＝１００％
【表5】
【0103】
ＤＡＫＯ－ＣＥＡの感受性（表５のデータを使用して推定）：６６／１９６＝０．３３６７×１００＝３４％
【0104】
ＤＡＫＯ－ＣＥＡの特異性（表５のデータを使用して推定）：１９／１９＝１．００×１００＝１００％
【0105】
実施例９．
ヒトＢｘＰＣ－３膵臓腺がん細胞株は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ，ＵＳＡ）から購入した。細胞を、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ；Ｔｈｅｒｍｏｓｔａｔ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ．）を補充したＲＰＭＩ－１６４０；Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ，ＵＳＡ）中で培養し、５％ＣＯ２雰囲気中で３７℃で維持した。
ヒトＢｘＰＣ－３膵臓腺がん細胞株は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ，ＵＳＡ）から購入した。細胞を、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ；Ｔｈｅｒｍｏｓｔａｔ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ．）を補充したＲＰＭＩ－１６４０；Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ，ＵＳＡ）中で培養し、５％ＣＯ２雰囲気中で３７℃で維持した。
【0106】
軟質寒天コロニー形成アッセイ：ＢｘＰＣ－３細胞（２，０００細胞）を、１０％ＦＢＳを補充したＲＰＭＩ－１６４０中の０．３％Ｎｏｂｌｅ寒天（Ｄｉｆｃｏ；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ，ＵＳＡ）中のＡＤｘ－ＣＥＡと、又はＰＢＳのみに懸濁し、１２ウェル組織培養プレート中の０．８％ Ｎｏｂｌｅ寒天に重ねた。コロニーを成長培地で２．５週間成長させ、コロニー形成を観察し、データ分析のためにカウントした。
【0107】
ＢｘＰＣ－３細胞を、ＡＤｘ－ＣＥＡの非存在下（ＰＢＳのみ）及び異なる濃度のＡＤｘ－ＣＥＡの存在下で、軟質寒天中で培養した。２．５週間後、倒立顕微鏡を使用してコロニーを画像化した（図１２Ａ～Ｂ）。ウェルの画像は、３つの独立した実験の代表である。
【0108】
ＢｘＰＣ－３細胞を、ＰＢＳ、又は１０、２５、及び５０μｇ／ｍＬのＡＤｘ－ＣＥＡ中の軟質寒天中で成長させた。２．５週間後、７０μｍを超える個々のコロニーをカウントした。実験を３回繰り返した。対照試料と処理試料との間の総コロニー数差の統計的有意性を、スチューデントｔ検定によって判定した（＊ｐ＜０．００５）（図１２Ｃ）。ＢｘＰＣ－３細胞は、１０μｇ／ｍＬ、２５μｇ／ｍＬ及び５０μｇ／ｍＬのＡＤｘ－ＣＥＡの存在下でのコロニー形成において、用量依存的に顕著な減少を示した。
【0109】
実施例１０．
ＣＥＡタンパク質の発現は、ＩＨＣ染色を使用して、本明細書に記載のＡＤｘ－ＣＥＡを使用して、健康な個体及びがん患者からの健康な組織及びがん性組織において検証した。抗体を、乳房、リンパ、子宮頸部、前立腺、膵臓、卵巣、膀胱、腎臓、子宮、結腸、肝臓、脳、直腸、食道、胃、肺、及び子宮からの組織に対して試験した。膵臓（図１３Ａ）、結腸（図１３Ｂ）及び肝臓（図１３Ｃ）のがん組織は、ＣＥＡ発現について陽性の膜性細胞質染色を示した。乳がん及び腎臓がんは弱い染色を示した（データは示さず）。リンパ、子宮頸部、前立腺、卵巣、食道、膀胱、子宮、脳、胃、子宮、肺、及び直腸からの組織は、ＣＥＡ発現について陰性染色を示した（データは示さず）。
ＣＥＡタンパク質の発現は、ＩＨＣ染色を使用して、本明細書に記載のＡＤｘ－ＣＥＡを使用して、健康な個体及びがん患者からの健康な組織及びがん性組織において検証した。抗体を、乳房、リンパ、子宮頸部、前立腺、膵臓、卵巣、膀胱、腎臓、子宮、結腸、肝臓、脳、直腸、食道、胃、肺、及び子宮からの組織に対して試験した。膵臓（図１３Ａ）、結腸（図１３Ｂ）及び肝臓（図１３Ｃ）のがん組織は、ＣＥＡ発現について陽性の膜性細胞質染色を示した。乳がん及び腎臓がんは弱い染色を示した（データは示さず）。リンパ、子宮頸部、前立腺、卵巣、食道、膀胱、子宮、脳、胃、子宮、肺、及び直腸からの組織は、ＣＥＡ発現について陰性染色を示した（データは示さず）。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6A】
【図6B】
【図7】
【図8】
【図9A】
【図9B】
【図10A】
【図10B】
【図11A】
【図11B】
【図12A】
【図12B】
【図12C】
【図13A】
【図13B】
【図13C】
【配列表】
【手続補正書】
【提出日】2024-07-22
【手続補正1】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
【国際調査報告】