特表 2024-540385 変異型ＫＲＡＳ、変異したがんドライバー遺伝子、または腫瘍関連抗原を発現する、がん免疫療法としての改変アレナウイルス粒子

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-10-31

(54)【発明の名称】変異型ＫＲＡＳ、変異したがんドライバー遺伝子、または腫瘍関連抗原を発現する、がん免疫療法としての改変アレナウイルス粒子

(51)【国際特許分類】

   C12N 7/01 20060101AFI20241024BHJP

   C12N 15/86 20060101ALI20241024BHJP

   C12N 7/02 20060101ALI20241024BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20241024BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20241024BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20241024BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20241024BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20241024BHJP

   A61K 35/76 20150101ALI20241024BHJP

   A61K 47/65 20170101ALI20241024BHJP

【ＦＩ】

C12N7/01 ZNA

C12N15/86 Z

C12N7/02

A61K48/00

A61P35/00

A61K47/68

A61K39/395 Y

A61K39/395 T

A61K39/395 C

A61K39/395 E

A61K39/395 L

A61P35/02

A61K35/76

A61K47/65

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024526921

(86)(22)【出願日】2022-11-07

(85)【翻訳文提出日】2024-06-11

(86)【国際出願番号】 EP2022081018

(87)【国際公開番号】W WO2023079153

(87)【国際公開日】2023-05-11

(31)【優先権主張番号】63/277,049

(32)【優先日】2021-11-08

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/277,052

(32)【優先日】2021-11-08

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/404,008

(32)【優先日】2022-09-06

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/404,068

(32)【優先日】2022-09-06

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】518408774

【氏名又は名称】ホオキパ バイオテック ジーエムビーエイチ

(74)【代理人】

【識別番号】100097456

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 徹

(72)【発明者】

【氏名】ヘニング ローターバッハ

(72)【発明者】

【氏名】ヨルグ クリストフ ランパート

(72)【発明者】

【氏名】モハメッド ハベディン

(72)【発明者】

【氏名】ジョシパ ラグズ

(72)【発明者】

【氏名】ティモ シッパーズ

(72)【発明者】

【氏名】サラ シュミット

(72)【発明者】

【氏名】サラ アフマディ‐エルバー

(72)【発明者】

【氏名】サンドラ ロスコップ

(72)【発明者】

【氏名】クロース オルリンガー

(72)【発明者】

【氏名】イゴール マトゥシャンスキー

【テーマコード（参考）】

4B065

4C076

4C084

4C085

4C087

【Ｆターム（参考）】

4B065AA95X

4B065AA95Y

4B065AB01

4B065BA02

4B065BD50

4B065CA44

4B065CA60

4C076AA95

4C076BB11

4C076CC27

4C076CC41

4C076EE41

4C076EE59

4C076FF31

4C084AA13

4C084MA05

4C084MA66

4C084NA05

4C084NA13

4C084NA14

4C084ZB261

4C084ZB262

4C084ZB271

4C084ZB272

4C085AA13

4C085AA14

4C085BB36

4C085CC22

4C085CC23

4C085DD62

4C085EE01

4C085EE05

4C085GG01

4C087AA01

4C087AA02

4C087BC83

4C087MA05

4C087NA05

4C087NA13

4C087NA14

4C087ZB26

4C087ZB27

(57)【要約】

本発明は、がんなどの腫瘍性疾患の処置に好適な遺伝子改変アレナウイルスに関する。本明細書に記載されるアレナウイルスは、腫瘍性疾患の処置及び／または免疫療法における使用に好適であり得る。特に、変異型ＫＲＡＳの１つもしくは複数の抗原性断片をコードするヌクレオチド配列のみを含むように、または変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）もしくは腫瘍関連抗原の１つもしくは複数の抗原性断片をコードするヌクレオチド配列をさらに含むように操作された遺伝子改変アレナウイルスを投与することによって腫瘍性疾患を処置するための方法及び組成物が本明細書で提供される。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

アレナウイルス粒子であって、
ａ．前記アレナウイルス粒子が、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードするヌクレオチド配列を含むアレナウイルスゲノムを含み、前記抗原性断片がＫＲＡＳの変異を含み、
ｂ．前記アレナウイルスゲノムの少なくとも１つのアレナウイルスオープンリーディングフレーム（「ＯＲＦ」）が、（ｉ）機能的に不活化しているかもしくは欠失しているか、または（ｉｉ）前記少なくとも１つのアレナウイルスＯＲＦの野生型の位置以外の位置に位置しているか、または（ｉｉｉ）２つ以上の機能的断片に分けられ、前記少なくとも１つのアレナウイルスＯＲＦの断片が前記少なくとも１つのアレナウイルスＯＲＦの野生型の位置以外の位置に位置しているかのいずれかである、
前記アレナウイルス粒子。

【請求項2】

前記ＫＲＡＳの変異が、ＫＲＡＳのアミノ酸位置Ｇ１２、Ｇ１３、Ａ１８、Ａ５９、Ｑ６１、Ｋ１１７、Ａ１４６、またはＤ１１９に存在する、請求項１に記載のアレナウイルス粒子。

【請求項3】

前記ＫＲＡＳの変異が、Ａ１８Ｄ、Ａ５９Ｅ、Ａ５９Ｇ、Ａ５９Ｐ、Ａ５９Ｔ、Ａ５９Ｓ、Ａ５９Ｖ、Ａ１４６Ｐ、Ａ１４６Ｓ、Ａ１４６Ｔ、Ａ１４６Ｖ、Ｄ１１９Ｎ、Ｇ１２Ａ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｆ、Ｇ１２Ｌ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１２Ｓ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１３Ａ、Ｇ１３Ｃ、Ｇ１３Ｄ、Ｇ１３Ｅ、Ｇ１３Ｒ、Ｇ１３Ｓ、Ｇ１３Ｖ、Ｋ１１７Ｎ、Ｑ６１Ｅ、Ｑ６１Ｈ、Ｑ６１Ｋ、Ｑ６１Ｌ、Ｑ６１Ｐ、Ｑ６１Ｒ、またはそれらの組合せである、先行請求項のいずれかに記載のアレナウイルス粒子。

【請求項4】

前記ＫＲＡＳの変異が、Ｇ１２Ａ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１２Ｓ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１３Ｄ、Ｑ６１Ｈ、Ｑ６１Ｒ、Ａ１４６Ｔ、またはそれらの組合せである、先行請求項のいずれかに記載のアレナウイルス粒子。

【請求項5】

前記ＫＲＡＳの変異が、Ｇ１３Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、及びＧ１２Ｒのうちの１つ、複数、または全てである、請求項１に記載のアレナウイルス粒子。

【請求項6】

前記ヌクレオチド配列がＮ末端からＣ末端に向かって、変異型ＫＲＡＳの複数の断片であって、それぞれ、前記変異Ｇ１３Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、及びＧ１２Ｒを含む、前記断片をコードする、請求項１から５のいずれか１項に記載のアレナウイルス粒子。

【請求項7】

前記ＫＲＡＳの変異が、任意の可能な順序の、Ｇ１３Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、及びＧ１２Ｒのうちの全てである、請求項５に記載のアレナウイルス粒子。

【請求項8】

前記アレナウイルスゲノムが、配列番号２０の配列に対して少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるヌクレオチド配列を含む、請求項１に記載のアレナウイルス粒子。

【請求項9】

前記アレナウイルスゲノムが、アミノ酸配列が配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である発現産物をコードするヌクレオチド配列を含む、請求項１に記載のアレナウイルス粒子。

【請求項10】

前記変異型ＫＲＡＳの断片が、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０アミノ酸長である、先行請求項のいずれかに記載のアレナウイルス粒子。

【請求項11】

前記変異型ＫＲＡＳの断片が、１８アミノ酸長である、先行請求項のいずれかに記載のアレナウイルス粒子。

【請求項12】

前記抗原性断片のＮ末端の前記変異に隣接する領域が、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０アミノ酸長である、先行請求項のいずれかに記載のアレナウイルス粒子。

【請求項13】

前記抗原性断片のＮ末端の前記変異に隣接する領域が、８または９アミノ酸長である、先行請求項のいずれかに記載のアレナウイルス粒子。

【請求項14】

前記抗原性断片のＣ末端の前記変異に隣接する領域が、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０アミノ酸長である、先行請求項のいずれかに記載のアレナウイルス粒子。

【請求項15】

前記抗原性断片のＣ末端の前記変異に隣接する領域が、８または９アミノ酸長である、先行請求項のいずれかに記載のアレナウイルス粒子。

【請求項16】

前記ヌクレオチド配列が、変異型ＫＲＡＳの２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０の抗原性断片をコードし、前記抗原性断片のそれぞれが、前記変異型ＫＲＡＳタンパク質のうちの１つの前記変異を含む、先行請求項のいずれかに記載のアレナウイルス粒子。

【請求項17】

前記ヌクレオチド配列が、変異型ＫＲＡＳの５つの抗原性断片をコードし、前記抗原性断片のそれぞれが、前記変異型ＫＲＡＳタンパク質のうちの１つの前記変異を含む、先行請求項のいずれかに記載のアレナウイルス粒子。

【請求項18】

前記変異型ＫＲＡＳの５つの抗原性断片が、前記変異Ｇ１３Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、及びＧ１２Ｒを含む、請求項１７に記載のアレナウイルス粒子。

【請求項19】

前記抗原性断片が、変異型ＫＲＡＳタンパク質の同じまたは異なる変異を含む、請求項１６または１７に記載のアレナウイルス粒子。

【請求項20】

前記抗原性断片が、同じまたは異なるリンカーを介して互いに融合している、請求項１６から１８のいずれかに記載のアレナウイルス粒子。

【請求項21】

前記抗原性断片が、介在配列を伴わずに互いに直接融合している、請求項１６から１８のいずれかに記載のアレナウイルス粒子。

【請求項22】

前記リンカーが、ＡＡＹリンカー（ＡＡＹ）、ＡＡＡリンカー（ＡＡＡ）、ＧＳリンカー（ＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧ）（配列番号４２）、またはｉｎ ｓｉｌｉｃｏ予測を介して最適化されたＡＡＹ、ＡＡＡ、及びＧＳリンカー配列のバリアントである、請求項２０に記載のアレナウイルス粒子。

【請求項23】

前記ヌクレオチド配列が、任意のＣｐＧ及びＴｐＡアイランドを減少または除去するように操作されている、先行請求項のいずれかに記載のアレナウイルス粒子。

【請求項24】

前記ＣｐＧ及びＴｐＡアイランドの前記除去が、３つのサイクル：
（ｉ）第１のサイクルにおいてＣｐＧを除去し、
（ｉｉ）第２のサイクルにおいてＴｐＡを除去し、
（ｉｉｉ）前記第２のサイクルで新たに導入されたＣｐＧを除去するために、第３のサイクルにおいてＣｐＧを除去する
を含む、請求項２３に記載のアレナウイルス粒子。

【請求項25】

前記アレナウイルスゲノムが、
（ｉ）アレナウイルスゲノム５’ＵＴＲの制御下にある前記抗原性断片（複数可）をコードする前記ヌクレオチド配列と、アレナウイルスゲノム３’ＵＴＲの制御下にあるアレナウイルス核タンパク質（「ＮＰ」）をコードするＯＲＦとを含む第１のＳセグメントと、
（ｉｉ）アレナウイルスゲノム５’ＵＴＲの制御下にある前記抗原性断片（複数可）をコードする前記ヌクレオチド配列と、アレナウイルスゲノム３’ＵＴＲの制御下にあるアレナウイルス糖タンパク質（「ＧＰ」）をコードするＯＲＦとを含む第２のＳセグメントと、
（ｉｉｉ）Ｌセグメントと
を含む、先行請求項のいずれかに記載のアレナウイルス粒子。

【請求項26】

前記アレナウイルスゲノムが、
（ｉ）アレナウイルスゲノム５’ＵＴＲの制御下にある配列番号２０のヌクレオチド配列と、アレナウイルスゲノム３’ＵＴＲの制御下にあるアレナウイルス核タンパク質（「ＮＰ」）をコードするＯＲＦとを含む第１のＳセグメントと、
（ｉｉ）アレナウイルスゲノム５’ＵＴＲの制御下にある配列番号２０のヌクレオチド配列と、アレナウイルスゲノム３’ＵＴＲの制御下にあるアレナウイルス糖タンパク質（「ＧＰ」）をコードするＯＲＦとを含む第２のＳセグメントと、
（ｉｉｉ）Ｌセグメントと
を含む、請求項１から１９、２１、及び２３から２５のいずれかに記載のアレナウイルス粒子。

【請求項27】

前記アレナウイルスゲノムが、
（ｉ）配列番号２１のヌクレオチド配列を含む第１のＳセグメントと、
（ｉｉ）配列番号２２のヌクレオチド配列を含む第２のＳセグメントと、
（ｉｉｉ）Ｌセグメントと
を含む、請求項１から１９、２１、及び２３から２６のいずれかに記載のアレナウイルス粒子。

【請求項28】

前記アレナウイルスゲノムが、
（ｉ）配列番号２３のヌクレオチド配列を含む第１のＳセグメントと、
（ｉｉ）配列番号２４のヌクレオチド配列を含む第２のＳセグメントと、
（ｉｉｉ）Ｌセグメントと
を含む、請求項１から１９、２１、及び２３から２６のいずれかに記載のアレナウイルス粒子。

【請求項29】

前記アレナウイルスゲノムが、
（ｉ）アレナウイルスゲノム５’ＵＴＲの制御下にある、異種シグナルペプチドと融合したアレナウイルスＧＰ１及びＧＰ２サブユニットをコードするＯＲＦと、アレナウイルスゲノム３’ＵＴＲの制御下にある、アレナウイルスＧＰシグナルペプチドと前記抗原性断片（複数可）をコードするヌクレオチド配列との融合体をコードするＯＲＦとを含む第１のＳセグメントと、
（ｉｉ）アレナウイルスゲノム５’ＵＴＲの制御下にある前記抗原性断片（複数可）をコードする前記ヌクレオチド配列と、アレナウイルスゲノム３’ＵＴＲの制御下にあるアレナウイルス核タンパク質（「ＮＰ」）をコードするＯＲＦとを含む第２のＳセグメントと、
（ｉｉｉ）Ｌセグメントと
を含む、請求項１から２４のいずれかに記載のアレナウイルス粒子。

【請求項30】

前記第１のＳセグメント上の前記抗原性断片（複数可）をコードする前記ヌクレオチド配列が、前記第２のＳセグメント上の前記抗原性断片（複数可）をコードする前記ヌクレオチド配列と異なる、請求項２５及び２９に記載のアレナウイルス粒子。

【請求項31】

前記第１のＳセグメント上の前記抗原性断片（複数可）をコードする前記ヌクレオチド配列が、前記第２のＳセグメント上の前記抗原性断片（複数可）をコードする前記ヌクレオチド配列と同じである、請求項２５及び２９に記載のアレナウイルス粒子。

【請求項32】

前記第１のＳセグメント上にコードされている前記抗原性断片（複数可）が、前記第２のＳセグメント上にコードされている前記抗原性断片（複数可）と異なる、請求項２５及び２９に記載のアレナウイルス粒子。

【請求項33】

前記第１のＳセグメント上にコードされている前記抗原性断片（複数可）が、前記第２のＳセグメント上にコードされている前記抗原性断片（複数可）と同じである、請求項２５及び２９に記載のアレナウイルス粒子。

【請求項34】

前記第１のＳセグメント上にコードされている前記抗原性断片が、前記第２のＳセグメント上にコードされている前記抗原性断片と同じであるが、前記第２のＳセグメント上にコードされている前記抗原性断片が互いに融合している順序とは異なる順序で互いに融合している、請求項３３に記載のアレナウイルス粒子。

【請求項35】

前記アレナウイルスゲノムが、変異型ＡＫＴ１、変異型ＢＲＡＦ、変異型ＨＥＲ２、変異型ＭＥＫ１、変異型ＭＥＴ、変異型ＮＲＡＳ、変異型ＰＩＫ３ＣＡ、変異型ＲＥＴ、変異型ＡＰＣ、変異型Ｕ２ＡＦ１、変異型ＥＧＦＲ、変異型ＦＢＸＷ７、変異型ＳＭＡＤ４、変異型ＧＮＡＳ、変異型ＥＲＢＢ２、変異型ＥＲＢＢ３、変異型ＣＤＫＮ２Ａ、変異型ＴＰ５３及び／または変異型ＣＴＮＮＢ１の抗原性断片をコードするヌクレオチド配列をさらに含み、前記抗原性断片がそれぞれの変異を含む、請求項１から２６及び２９から３４のいずれかに記載のアレナウイルス粒子。

【請求項36】

前記アレナウイルスゲノムが、変異型ＰＩ３ＫＣＡの抗原性断片をコードするヌクレオチド配列をさらに含み、前記抗原性断片が、Ｅ５４５Ｋ、Ｈ１０４７Ｒ及び／またはＥ５４２Ｋ変異を含む、請求項１から２６及び２９から３５のいずれかに記載のアレナウイルス粒子。

【請求項37】

前記アレナウイルスゲノムが、変異型ＢＲＡＦの抗原性断片をコードするヌクレオチド配列をさらに含み、前記抗原性断片がＶ６００Ｅ変異を含む、請求項１から２６及び２９から３６のいずれかに記載のアレナウイルス粒子。

【請求項38】

前記アレナウイルスゲノムが、変異型Ｕ２ＡＦ１の抗原性断片をコードするヌクレオチド配列をさらに含み、前記抗原性断片がＳ３４Ｆ変異を含む、請求項１から２６及び２９から３７のいずれかに記載のアレナウイルス粒子。

【請求項39】

前記アレナウイルスゲノムが、変異型ＴＰ５３の抗原性断片をコードするヌクレオチド配列をさらに含み、前記抗原性断片が、Ｇ２４５Ｓ、Ｙ２２０Ｃ、Ｒ２４８Ｑ、Ｒ２８２Ｗ、Ｈ１７９Ｒ、Ｖ１５７Ｆ、Ｒ２７３Ｃ、Ｒ２１３Ｌ、Ｒ２７３Ｈ、Ｒ２７３Ｌ、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ１５８Ｌ、Ｒ１９６Ｐ、Ｒ２４８Ｗ及び／またはＣ２７７Ｆ変異を含む、請求項１から２６及び２９から３８のいずれかに記載のアレナウイルス粒子。

【請求項40】

前記アレナウイルスゲノムが、ＢＩＲＣファミリー、ＣＥＡＣＡＭファミリー、ＣＴＡファミリー、ＥＰＨファミリー、ＥＲＢＢファミリー、ＦＯＬＲファミリー、ＧＡＳＴファミリー、ＧＵＣＹ２ファミリー、ＩＤＯファミリー、ＩＬ１３ＲＡファミリー、ＫＤＲファミリー、ＫＬＫファミリー、ＭＡＧＥファミリー、ＭＵＣファミリー、ＰＥＭＴファミリー、ＳＤＣファミリー、ＳＬＡＭＦファミリー、ＴＥＲＴファミリー、ＴＬＲファミリー、ＴＰＴＥファミリー、ＴＹＲファミリー、ＷＴファミリー及び／またはＸＢＰファミリーの抗原性断片をコードするヌクレオチド配列をさらに含む、請求項１から２６及び２９から３９のいずれかに記載のアレナウイルス粒子。

【請求項41】

リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）またはピチンデウイルスに由来する、先行請求項のいずれかに記載のアレナウイルス粒子。

【請求項42】

先行請求項のいずれかに記載のアレナウイルス粒子を含む医薬組成物。

【請求項43】

請求項１から４１のいずれかに記載のアレナウイルス粒子のゲノムをコードする１つまたは複数の核酸のセット。

【請求項44】

請求項４３に記載の１つまたは複数の核酸のセットを含む宿主細胞。

【請求項45】

請求項１から４１のいずれかに記載のアレナウイルス粒子を作製する方法であって、請求項４４に記載の宿主細胞を培養することと、前記アレナウイルス粒子を収集することとを含む、前記方法。

【請求項46】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、前記対象に、アレナウイルス粒子であって、
ａ．前記アレナウイルス粒子が、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードするヌクレオチド配列を含むアレナウイルスゲノムを含み、前記抗原性断片が変異を含み、
ｂ．前記アレナウイルスゲノムの少なくとも１つのアレナウイルスオープンリーディングフレーム（「ＯＲＦ」）が、（ｉ）機能的に不活化しているかもしくは欠失しているか、または（ｉｉ）前記少なくとも１つのアレナウイルスＯＲＦの野生型の位置以外の位置に位置しているか、または（ｉｉｉ）２つ以上の機能的断片に分けられ、前記少なくとも１つのアレナウイルスＯＲＦの断片が前記少なくとも１つのアレナウイルスＯＲＦの野生型の位置以外の位置に位置しているかのいずれかである、
前記アレナウイルス粒子を投与することを含む、前記方法。

【請求項47】

前記ＫＲＡＳの変異が、ＫＲＡＳのアミノ酸位置Ｇ１２、Ｇ１３、Ａ１８、Ａ５９、Ｑ６１、Ｋ１１７、Ａ１４６、またはＤ１１９に存在する、請求項４６に記載の方法。

【請求項48】

前記ＫＲＡＳの変異が、Ａ１８Ｄ、Ａ５９Ｅ、Ａ５９Ｇ、Ａ５９Ｐ、Ａ５９Ｔ、Ａ５９Ｓ、Ａ５９Ｖ、Ａ１４６Ｐ、Ａ１４６Ｓ、Ａ１４６Ｔ、Ａ１４６Ｖ、Ｄ１１９Ｎ、Ｇ１２Ａ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｆ、Ｇ１２Ｌ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１２Ｓ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１３Ａ、Ｇ１３Ｃ、Ｇ１３Ｄ、Ｇ１３Ｅ、Ｇ１３Ｒ、Ｇ１３Ｓ、Ｇ１３Ｖ、Ｋ１１７Ｎ、Ｑ６１Ｅ、Ｑ６１Ｈ、Ｑ６１Ｋ、Ｑ６１Ｌ、Ｑ６１Ｐ、Ｑ６１Ｒ、またはそれらの組合せである、請求項４６または４７に記載の方法。

【請求項49】

前記ＫＲＡＳの変異が、Ｇ１２Ａ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１２Ｓ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１３Ｄ、Ｑ６１Ｈ、Ｑ６１Ｒ、Ａ１４６Ｔ、またはそれらの組合せである、請求項４６から４８のいずれかに記載の方法。

【請求項50】

前記ＫＲＡＳの変異が、Ｇ１３Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、及びＧ１２Ｒのうちの１つ、複数、または全てである、請求項４６から４９のいずれかに記載の方法。

【請求項51】

前記ヌクレオチド配列がＮ末端からＣ末端に向かって、変異型ＫＲＡＳの複数の断片であって、それぞれ、前記変異Ｇ１３Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、及びＧ１２Ｒを含む、前記断片をコードする、請求項５０に記載の方法。

【請求項52】

前記ＫＲＡＳの変異が、任意の可能な順序の、Ｇ１３Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、及びＧ１２Ｒのうちの全てである、請求項５０に記載の方法。

【請求項53】

前記アレナウイルスゲノムが、配列番号２０の配列に対して少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるヌクレオチド配列を含む、請求項４６に記載の方法。

【請求項54】

前記アレナウイルスゲノムが、アミノ酸配列が配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である発現産物をコードするヌクレオチド配列を含む、請求項４６に記載の方法。

【請求項55】

前記変異型ＫＲＡＳの抗原性断片が、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０アミノ酸長である、請求項４６から５４のいずれかに記載の方法。

【請求項56】

前記変異型ＫＲＡＳの抗原性断片が、１８アミノ酸長である、請求項４６から５４のいずれかに記載の方法。

【請求項57】

前記抗原性断片のＮ末端の前記変異に隣接する領域が、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０アミノ酸長である、請求項４６から５２のいずれかに記載の方法。

【請求項58】

前記抗原性断片のＮ末端の前記変異に隣接する領域が、８または９アミノ酸長である、請求項４６から５２のいずれかに記載の方法。

【請求項59】

前記抗原性断片のＣ末端の前記変異に隣接する領域が、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０アミノ酸長である、請求項４６から５８のいずれかに記載の方法。

【請求項60】

前記抗原性断片のＣ末端の前記変異に隣接する領域が、８または９アミノ酸長である、請求項４６から５８のいずれかに記載の方法。

【請求項61】

前記ヌクレオチド配列が、変異型ＫＲＡＳの２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０の抗原性断片をコードし、前記抗原性断片のそれぞれが、前記変異型ＫＲＡＳタンパク質のうちの１つの前記変異を含む、請求項４６から６０のいずれかに記載の方法。

【請求項62】

前記ヌクレオチド配列が、変異型ＫＲＡＳの５つの抗原性断片をコードし、前記抗原性断片のそれぞれが、前記変異型ＫＲＡＳタンパク質のうちの１つの前記変異を含む、請求項４６から６０のいずれかに記載の方法。

【請求項63】

前記変異型ＫＲＡＳの５つの抗原性断片が、前記変異Ｇ１３Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、及びＧ１２Ｒを含む、請求項６２に記載の方法。

【請求項64】

前記抗原性断片が、変異型ＫＲＡＳタンパク質の同じまたは異なる変異を含む、請求項６１に記載の方法。

【請求項65】

前記抗原性断片が、同じまたは異なるリンカーを介して互いに融合している、請求項６１に記載の方法。

【請求項66】

前記抗原性断片が、介在配列を伴わずに互いに直接融合している、請求項６１から６３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項67】

前記リンカーが、ＡＡＹリンカー（ＡＡＹ）、ＡＡＡリンカー（ＡＡＡ）、ＧＳリンカー（ＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧ）（配列番号４２）、またはｉｎ ｓｉｌｉｃｏ予測を介して最適化されたＡＡＹ、ＡＡＡ、及びＧＳリンカー配列のバリアントである、請求項６５に記載の方法。

【請求項68】

前記ヌクレオチド配列が、任意のＣｐＧ及びＴｐＡアイランドを減少または除去するように操作されている、請求項４６から６７のいずれかに記載の方法。

【請求項69】

前記ＣｐＧ及びＴｐＡアイランドの前記除去が、３つのサイクル：
（ｉ）第１のサイクルにおいてＣｐＧを除去し、
（ｉｉ）第２のサイクルにおいてＴｐＡを除去し、
（ｉｉｉ）前記第２のサイクルで新たに導入されたＣｐＧを除去するために、第３のサイクルにおいてＣｐＧを除去する
を含む、請求項６８に記載の方法。

【請求項70】

前記アレナウイルスゲノムが、
（ｉ）アレナウイルスゲノム５’ＵＴＲの制御下にある前記抗原性断片（複数可）をコードする前記ヌクレオチド配列と、アレナウイルスゲノム３’ＵＴＲの制御下にあるアレナウイルス核タンパク質（「ＮＰ」）をコードするＯＲＦとを含む第１のＳセグメントと、
（ｉｉ）アレナウイルスゲノム５’ＵＴＲの制御下にある前記抗原性断片（複数可）をコードする前記ヌクレオチド配列と、アレナウイルスゲノム３’ＵＴＲの制御下にあるアレナウイルス糖タンパク質（「ＧＰ」）をコードするＯＲＦとを含む第２のＳセグメントと、
（ｉｉｉ）Ｌセグメントと
を含む、請求項４６から６９のいずれかに記載の方法。

【請求項71】

前記アレナウイルスゲノムが、
（ｉ）アレナウイルスゲノム５’ＵＴＲの制御下にある配列番号２０のヌクレオチド配列と、アレナウイルスゲノム３’ＵＴＲの制御下にあるアレナウイルス核タンパク質（「ＮＰ」）をコードするＯＲＦとを含む第１のＳセグメントと、
（ｉｉ）アレナウイルスゲノム５’ＵＴＲの制御下にある配列番号２０のヌクレオチド配列と、アレナウイルスゲノム３’ＵＴＲの制御下にあるアレナウイルス糖タンパク質（「ＧＰ」）をコードするＯＲＦとを含む第２のＳセグメントと、
（ｉｉｉ）Ｌセグメントと
を含む、請求項４６から６４、６６、及び６８から７０のいずれかに記載の方法。

【請求項72】

前記アレナウイルスゲノムが、
（ｉ）配列番号２１のヌクレオチド配列を含む第１のＳセグメントと、
（ｉｉ）配列番号２２のヌクレオチド配列を含む第２のＳセグメントと、
（ｉｉｉ）Ｌセグメントと
を含む、請求項４６から６４、６６、及び６８から７０のいずれかに記載の方法。

【請求項73】

前記アレナウイルスゲノムが、
（ｉ）配列番号２３のヌクレオチド配列を含む第１のＳセグメントと、
（ｉｉ）配列番号２４のヌクレオチド配列を含む第２のＳセグメントと、
（ｉｉｉ）Ｌセグメントと
を含む、請求項４６から６４、６６、及び６８から７０のいずれかに記載の方法。

【請求項74】

前記アレナウイルスゲノムが、
（ｉ）アレナウイルスゲノム５’ＵＴＲの制御下にある、異種シグナルペプチドと融合したアレナウイルスＧＰ１及びＧＰ２サブユニットをコードするＯＲＦと、アレナウイルスゲノム３’ＵＴＲの制御下にある、アレナウイルスＧＰシグナルペプチドと前記抗原性断片（複数可）をコードするヌクレオチド配列との融合体をコードするＯＲＦとを含む第１のＳセグメントと、
（ｉｉ）アレナウイルスゲノム５’ＵＴＲの制御下にある前記抗原性断片（複数可）をコードする前記ヌクレオチド配列と、アレナウイルスゲノム３’ＵＴＲの制御下にあるアレナウイルス核タンパク質（「ＮＰ」）をコードするＯＲＦとを含む第２のＳセグメントと、
（ｉｉｉ）Ｌセグメントと
を含む、請求項４６から６９のいずれかに記載の方法。

【請求項75】

前記第１のＳセグメント上の前記抗原性断片（複数可）をコードする前記ヌクレオチド配列が、前記第２のＳセグメント上の前記抗原性断片（複数可）をコードする前記ヌクレオチド配列と異なる、請求項７０及び７４に記載の方法。

【請求項76】

前記第１のＳセグメント上の前記抗原性断片（複数可）をコードする前記ヌクレオチド配列が、前記第２のＳセグメント上の前記抗原性断片（複数可）をコードする前記ヌクレオチド配列と同じである、請求項７０及び７４に記載の方法。

【請求項77】

前記第１のＳセグメント上にコードされている前記抗原性断片（複数可）が、前記第２のＳセグメント上にコードされている前記抗原性断片（複数可）と異なる、請求項７０及び７４に記載の方法。

【請求項78】

前記第１のＳセグメント上にコードされている前記抗原性断片（複数可）が、前記第２のＳセグメント上にコードされている前記抗原性断片（複数可）と同じである、請求項７０及び７４に記載の方法。

【請求項79】

前記第１のＳセグメント上にコードされている前記抗原性断片が、前記第２のＳセグメント上にコードされている前記抗原性断片と同じであるが、前記第２のＳセグメント上にコードされている前記抗原性断片が互いに融合している順序とは異なる順序で互いに融合している、請求項７８に記載の方法。

【請求項80】

前記腫瘍性疾患が、膵癌、結腸直腸癌、肺腺癌、肺扁平上皮癌、または非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）である、請求項４６から７９のいずれかに記載の方法。

【請求項81】

前記アレナウイルスゲノムが、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードするヌクレオチド配列を含み、前記抗原性断片が変異を含み、前記ＫＲＡＳの変異が、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｒ、Ｑ６１Ｈ、Ｑ６１Ｒ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｓ、及び／またはＧ１２Ａであり、前記腫瘍性疾患が膵癌である、請求項４６から７９のいずれかに記載の方法。

【請求項82】

前記アレナウイルスゲノムが、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードするヌクレオチド配列を含み、前記抗原性断片が変異を含み、前記ＫＲＡＳの変異が、Ｇ１３Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、及びＧ１２Ｒであり、前記腫瘍性疾患が膵癌、結腸直腸癌または肺腺癌である、請求項４６から７９のいずれかに記載の方法。

【請求項83】

前記アレナウイルスゲノムが、変異型ＴＰ５３の抗原性断片をコードするヌクレオチド配列をさらに含み、前記抗原性断片が変異を含み、前記ＫＲＡＳの変異が、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１２Ｖ、Ｑ６１Ｈ及び／またはＱ６１Ｒであり、前記ＴＰ５３の変異が、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ２４８Ｗ、Ｇ２４５Ｓ、Ｒ２８２Ｗ、Ｒ２４８Ｑ及び／またはＲ２７３Ｃであり、前記腫瘍性疾患が膵癌である、請求項４６から７１及び７４から７９のいずれかに記載の方法。

【請求項84】

前記アレナウイルスゲノムが、変異型ＴＰ５３及び／または変異型Ｕ２ＡＦ１の抗原性断片をコードするヌクレオチド配列をさらに含み、前記抗原性断片が変異を含み、前記ＫＲＡＳの変異が、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｒ、Ｑ６１Ｈ及び／またはＱ６１Ｒであり、前記ＴＰ５３の変異が、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ２４８Ｗ、Ｇ２４５Ｓ、Ｒ２８２Ｗ、Ｒ２４８Ｑ及び／またはＲ２７３Ｃであり、前記Ｕ２ＡＦ１の変異がＳ３４Ｆであり、前記腫瘍性疾患が膵癌である、請求項４６から７１及び７４から７９のいずれかに記載の方法。

【請求項85】

前記アレナウイルスゲノムが、変異型ＢＲＡＦ、変異型ＴＰ５３、変異型ＦＢＸＷ７及び／または変異型ＰＩＫ３ＣＡの抗原性断片をコードするヌクレオチド配列をさらに含み、前記抗原性断片が変異を含み、前記ＫＲＡＳの変異が、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１３Ｄ、Ａ１４６Ｔ及び／またはＧ１２Ｃであり、前記ＢＲＡＦの変異がＶ６００Ｅであり、前記ＴＰ５３の変異が、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ２７３Ｈ及び／またはＲ２４８Ｗであり、前記ＦＢＸＷ７の変異がＲ４６５Ｈであり、前記ＰＩＫ３ＣＡの変異が、Ｅ５４５Ｋ及び／またはＨ１０４７Ｒであり、前記腫瘍性疾患が結腸直腸癌である、請求項４６から７１及び７４から７９のいずれかに記載の方法。

【請求項86】

前記アレナウイルスゲノムが、変異型ＢＲＡＦ、変異型ＴＰ５３、変異型ＦＢＸＷ７、及び／または変異型ＰＩＫ３ＣＡの抗原性断片をコードするヌクレオチド配列をさらに含み、前記抗原性断片が変異を含み、前記ＫＲＡＳの変異が、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１３Ｄ、Ａ１４６Ｔ及び／またはＧ１２Ｃであり、前記ＢＲＡＦの変異がＶ６００Ｅであり、前記ＴＰ５３の変異が、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ２７３Ｈ及び／またはＲ２４８Ｗであり、前記ＦＢＸＷ７の変異がＲ４６５Ｈであり、前記ＰＩＫ３ＣＡの変異が、Ｅ５４５Ｋ及び／またはＨ１０４７Ｒであり、前記腫瘍性疾患が肺腺癌である、請求項４６から７１及び７４から７９のいずれかに記載の方法。

【請求項87】

前記アレナウイルスゲノムが、変異型ＢＲＡＦ、変異型ＰＩＫ３ＣＡ、変異型ＥＧＦＲ、変異型ＴＰ５３、及び／または変異型Ｕ２ＡＦ１の抗原性断片をコードするヌクレオチド配列をさらに含み、前記抗原性断片が変異を含み、前記ＫＲＡＳの変異が、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１３Ｄ及び／またはＧ１２Ｖであり、前記ＢＲＡＦの変異がＶ６００Ｅであり、前記ＰＩＫ３ＣＡの変異がＥ５４５Ｋであり、前記ＥＧＦＲの変異がＬ８５８Ｒであり、前記ＴＰ５３の変異が、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ２７３Ｈ及び／またはＲ２４８Ｗであり、前記Ｕ２ＡＦ１の変異がＳ３４Ｆであり、前記腫瘍性疾患が膵癌、結腸直腸癌または肺腺癌である、請求項４６から７１及び７４から７９のいずれかに記載の方法。

【請求項88】

前記アレナウイルスゲノムが、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードするヌクレオチド配列を含み、前記抗原性断片が変異を含み、前記ＫＲＡＳの変異が、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１３Ｄ、Ａ１４６Ｔ、Ｇ１２Ｓ、Ｑ６１Ｈ、Ｇ１２Ａ、及び／またはＱ６１Ｒであり、前記腫瘍性疾患が膵癌、結腸直腸癌または肺腺癌である、請求項４６から７９のいずれかに記載の方法。

【請求項89】

前記アレナウイルスゲノムが、変異型ＴＰ５３、変異型Ｕ２ＡＦ１、変異型ＰＩＫ３ＣＡ、変異型ＥＧＦＲ及び／または変異型ＢＲＡＦの抗原性断片をコードするヌクレオチド配列をさらに含み、前記抗原性断片が変異を含み、前記ＫＲＡＳの変異が、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｄ、及び／またはＧ１２Ｓであり、前記ＴＰ５３の変異がＲ１７５Ｈであり、前記Ｕ２ＡＦ１の変異がＳ３４Ｆであり、前記ＥＧＦＲの変異が、Ｌ８５８Ｒ、Ｌ８６１Ｑ及び／またはＥ７４６＿Ａ７５０ｄｅｌであり、前記ＰＩＫ３ＣＡの変異が、Ｅ５４５Ｋ及び／またはＥ５４２Ｋであり、前記ＢＲＡＦの変異がＶ６００Ｅであり、前記腫瘍性疾患が肺腺癌である、請求項４６から７１及び７４から７９のいずれかに記載の方法。

【請求項90】

前記アレナウイルスゲノムが、変異型ＡＫＴ１、変異型ＢＲＡＦ、変異型ＨＥＲ２、変異型ＭＥＫ１、変異型ＭＥＴ、変異型ＮＲＡＳ、変異型ＰＩＫ３ＣＡ及び／または変異型ＲＥＴの抗原性断片をコードするヌクレオチド配列をさらに含み、前記抗原性断片が変異を含み、前記腫瘍性疾患が非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）である、請求項４６から７１及び７４から７９のいずれかに記載の方法。

【請求項91】

前記アレナウイルスゲノムが、変異型ＡＫＴ１、変異型ＢＲＡＦ、変異型ＨＥＲ２、変異型ＭＥＫ１、変異型ＭＥＴ、変異型ＮＲＡＳ、変異型ＰＩＫ３ＣＡ、変異型ＲＥＴ、変異型ＡＰＣ、変異型Ｕ２ＡＦ１、変異型ＥＧＦＲ、変異型ＦＢＸＷ７、変異型ＳＭＡＤ４、変異型ＧＮＡＳ、変異型ＥＲＢＢ２、変異型ＥＲＢＢ３、変異型ＣＤＫＮ２Ａ、変異型ＴＰ５３及び／または変異型ＣＴＮＮＢ１の抗原性断片をコードするヌクレオチド配列をさらに含み、前記抗原性断片がそれぞれの変異を含む、請求項４６から７１及び７４から９０のいずれかに記載の方法。

【請求項92】

前記アレナウイルスゲノムが、変異型ＰＩ３ＫＣＡの抗原性断片をコードするヌクレオチド配列をさらに含み、前記抗原性断片が変異を含み、前記ＰＩ３ＫＣＡの変異が、Ｅ５４５Ｋ、Ｈ１０４７Ｒ及び／またはＥ５４２Ｋである、請求項４６から７１及び７４から９１のいずれかに記載の方法。

【請求項93】

前記アレナウイルスゲノムが、変異型ＢＲＡＦの抗原性断片をコードするヌクレオチド配列をさらに含み、前記抗原性断片が変異を含み、前記ＢＲＡＦの変異がＶ６００Ｅである、請求項４６から７１及び７４から９２のいずれかに記載の方法。

【請求項94】

前記アレナウイルスゲノムが、変異型Ｕ２ＡＦ１の抗原性断片をコードするヌクレオチド配列をさらに含み、前記抗原性断片が変異を含み、前記Ｕ２ＡＦ１の変異がＳ３４Ｆである、請求項４６から７１及び７４から９３のいずれかに記載の方法。

【請求項95】

前記アレナウイルスゲノムが、変異型ＴＰ５３の抗原性断片をコードするヌクレオチド配列をさらに含み、前記抗原性断片が変異を含み、前記ＴＰ５３の変異が、Ｇ２４５Ｓ、Ｙ２２０Ｃ、Ｒ２４８Ｑ、Ｒ２８２Ｗ、Ｈ１７９Ｒ、Ｖ１５７Ｆ、Ｒ２７３Ｃ、Ｒ２１３Ｌ、Ｒ２７３Ｈ、Ｒ２７３Ｌ、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ１５８Ｌ、Ｒ１９６Ｐ、Ｒ２４８Ｗ及び／またはＣ２７７Ｆである、請求項４６から７１及び７４から９４のいずれかに記載の方法。

【請求項96】

前記アレナウイルスゲノムが、ＢＩＲＣファミリー、ＣＥＡＣＡＭファミリー、ＣＴＡファミリー、ＥＰＨファミリー、ＥＲＢＢファミリー、ＦＯＬＲファミリー、ＧＡＳＴファミリー、ＧＵＣＹ２ファミリー、ＩＤＯファミリー、ＩＬ１３ＲＡファミリー、ＫＤＲファミリー、ＫＬＫファミリー、ＭＡＧＥファミリー、ＭＵＣファミリー、ＰＥＭＴファミリー、ＳＤＣファミリー、ＳＬＡＭＦファミリー、ＴＥＲＴファミリー、ＴＬＲファミリー、ＴＰＴＥファミリー、ＴＹＲファミリー、ＷＴファミリー及び／またはＸＢＰファミリーの抗原性断片をコードするヌクレオチド配列をさらに含む、請求項４６から７１及び７４から９５のいずれかに記載の方法。

【請求項97】

前記方法が、第２のアレナウイルス粒子を投与することをさらに含み、前記第２のアレナウイルス粒子が、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードし、前記抗原性断片が変異を含み、前記腫瘍性疾患が膵癌または結腸直腸癌である、請求項４６から８５、８７から８８、及び９１から９６のいずれかに記載の方法。

【請求項98】

前記方法が、第２のアレナウイルス粒子を投与することをさらに含み、前記第２のアレナウイルス粒子が、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードし、前記抗原性断片が変異を含み、前記ＫＲＡＳの変異が、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｒ、Ｑ６１Ｈ、Ｑ６１Ｒ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｓ及び／またはＧ１２Ａであり、前記腫瘍性疾患が膵癌である、請求項４６から８４、８７から８８、及び９１から９６のいずれかに記載の方法。

【請求項99】

前記方法が、第２のアレナウイルス粒子を投与することをさらに含み、前記第２のアレナウイルス粒子が、変異型ＫＲＡＳ及び／または変異型ＴＰ５３の抗原性断片をコードし、前記抗原性断片が変異を含み、前記ＫＲＡＳの変異が、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１２Ｖ、Ｑ６１Ｈ及び／またはＱ６１Ｒであり、前記ＴＰ５３の変異が、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ２４８Ｗ、Ｇ２４５Ｓ、Ｒ２８２Ｗ、Ｒ２４８Ｑ及び／またはＲ２７３Ｃであり、前記腫瘍性疾患が膵癌である、請求項４６から８４、８７から８８、及び９１から９６のいずれかに記載の方法。

【請求項100】

前記方法が、第２のアレナウイルス粒子を投与することをさらに含み、前記第２のアレナウイルス粒子が、変異型ＫＲＡＳ、変異型ＴＰ５３、変異型Ｕ２ＡＦ１の抗原性断片をコードし、前記抗原性断片が変異を含み、前記ＫＲＡＳの変異が、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｒ、Ｑ６１Ｈ及び／またはＱ６１Ｒであり、前記ＴＰ５３の変異が、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ２４８Ｗ、Ｇ２４５Ｓ、Ｒ２８２Ｗ、Ｒ２４８Ｑ及び／またはＲ２７３Ｃであり、前記Ｕ２ＡＦ１の変異がＳ３４Ｆであり、前記腫瘍性疾患が膵癌である、請求項４６から８４、８７から８８、及び９１から９６のいずれかに記載の方法。

【請求項101】

前記方法が、第２のアレナウイルス粒子を投与することをさらに含み、前記第２のアレナウイルス粒子が、変異型ＫＲＡＳ、変異型ＢＲＡＦ、変異型ＴＰ５３、変異型ＦＢＸＷ７、変異型ＰＩＫ３ＣＡの抗原性断片をコードし、前記抗原性断片が変異を含み、前記ＫＲＡＳの変異が、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１３Ｄ、Ａ１４６Ｔ及び／またはＧ１２Ｃであり、前記ＢＲＡＦの変異がＶ６００Ｅであり、前記ＴＰ５３の変異が、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ２７３Ｈ及び／またはＲ２４８Ｗであり、前記ＦＢＸＷ７の変異が、Ｒ４６５Ｈ及び／またはＲ４６５Ｃであり、前記ＰＩＫ３ＣＡの変異が、Ｅ５４５Ｋ及び／またはＨ１０４７Ｒであり、前記腫瘍性疾患が結腸直腸癌である、請求項４６から８０、８２、８５、８７から８８及び９１から９６のいずれかに記載の方法。

【請求項102】

前記方法が、第２のアレナウイルス粒子を投与することをさらに含み、前記第２のアレナウイルス粒子が、変異型ＫＲＡＳ、変異型ＢＲＡＦ、変異型ＴＰ５３、変異型ＦＢＸＷ７及び／または変異型ＰＩＫ３ＣＡの抗原性断片をコードし、前記抗原性断片が変異を含み、前記ＫＲＡＳの変異が、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１３Ｄ、Ａ１４６Ｔ及び／またはＧ１２Ｃであり、前記ＢＲＡＦの変異がＶ６００Ｅであり、前記ＴＰ５３の変異が、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ２７３Ｈ及び／またはＲ２４８Ｗであり、前記ＦＢＸＷ７の変異がＲ４６５Ｈであり、前記ＰＩＫ３ＣＡの変異が、Ｅ５４５Ｋ及び／またはＨ１０４７Ｒであり、前記腫瘍性疾患が肺腺癌である、請求項４６から８０、８２、８６から８９、及び９１から９６のいずれかに記載の方法。

【請求項103】

前記方法が、第２のアレナウイルス粒子を投与することをさらに含み、前記第２のアレナウイルス粒子が、変異型ＫＲＡＳ、変異型ＢＲＡＦ、変異型ＰＩＫ３ＣＡ、変異型ＥＧＦＲ、変異型ＴＰ５３、及び／または変異型Ｕ２ＡＦ１の抗原性断片をコードし、前記抗原性断片が変異を含み、前記ＫＲＡＳの変異が、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１３Ｄ及び／またはＧ１２Ｖであり、前記ＢＲＡＦの変異がＶ６００Ｅであり、前記ＰＩＫ３ＣＡの変異がＥ５４５Ｋであり、前記ＥＧＦＲの変異がＬ８５８Ｒであり、前記ＴＰ５３の変異が、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ２７３Ｈ及び／またはＲ２４８Ｗであり、前記Ｕ２ＡＦ１の変異がＳ３４Ｆであり、前記腫瘍性疾患が膵癌、結腸直腸癌または肺腺癌である、請求項４６から８９、及び９１から９６のいずれかに記載の方法。

【請求項104】

前記方法が、第２のアレナウイルス粒子を投与することをさらに含み、前記第２のアレナウイルス粒子が、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードし、前記抗原性断片が変異を含み、前記ＫＲＡＳの変異が、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１３Ｄ、Ａ１４６Ｔ、Ｇ１２Ｓ、Ｑ６１Ｈ、Ｇ１２Ａ、及び／またはＱ６１Ｒであり、前記腫瘍性疾患が膵癌、結腸直腸癌または肺腺癌である、請求項４６から８９、及び９１から９６のいずれかに記載の方法。

【請求項105】

前記方法が、第２のアレナウイルス粒子を投与することをさらに含み、前記第２のアレナウイルス粒子が、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードし、前記抗原性断片が変異を含み、前記ＫＲＡＳの変異が、Ｇ１３Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、及びＧ１２Ｒであり、前記腫瘍性疾患が膵癌、結腸直腸癌または肺腺癌である、請求項４６から８９、及び９１から９６のいずれかに記載の方法。

【請求項106】

前記方法が、第２のアレナウイルス粒子を投与することをさらに含み、前記第２のアレナウイルス粒子が、変異型ＫＲＡＳ、変異型ＴＰ５３、変異型Ｕ２ＡＦ１、変異型ＰＩＫ３ＣＡ、変異型ＥＧＦＲ及び／または変異型ＢＲＡＦの抗原性断片をコードし、前記抗原性断片が変異を含み、前記ＫＲＡＳの変異が、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｄ、及び／またはＧ１２Ｓであり、前記ＴＰ５３の変異がＲ１７５Ｈであり、前記Ｕ２ＡＦ１の変異がＳ３４Ｆであり、前記ＥＧＦＲの変異が、Ｌ８５８Ｒ、Ｌ８６１Ｑ及び／またはＥ７４６＿Ａ７５０ｄｅｌであり、前記ＰＩＫ３ＣＡの変異が、Ｅ５４５Ｋ及び／またはＥ５４２Ｋであり、前記ＢＲＡＦの変異がＶ６００Ｅであり、前記腫瘍性疾患が肺腺癌である、請求項４６から８０、８２、８６から８９、及び９１から９６のいずれかに記載の方法。

【請求項107】

前記方法が、第２のアレナウイルス粒子を投与することをさらに含み、前記第２のアレナウイルス粒子が、変異型ＴＰ５３の抗原性断片をコードし、前記抗原性断片が変異を含む、請求項４６から１０６のいずれかに記載の方法。

【請求項108】

前記方法が、第２のアレナウイルス粒子を投与することをさらに含み、前記第２のアレナウイルス粒子が、変異型ＡＫＴ１、変異型ＢＲＡＦ、変異型ＨＥＲ２、変異型ＭＥＫ１、変異型ＭＥＴ、変異型ＮＲＡＳ、変異型ＰＩＫ３ＣＡ、変異型ＲＥＴ、変異型ＡＰＣ、変異型Ｕ２ＡＦ１、変異型ＥＧＦＲ、変異型ＦＢＸＷ７、変異型ＳＭＡＤ４、変異型ＧＮＡＳ、変異型ＥＲＢＢ２、変異型ＥＲＢＢ３、変異型ＣＤＫＮ２Ａ、変異型ＴＰ５３及び／または変異型ＣＴＮＮＢ１の抗原性断片をコードし、前記抗原性断片がそれぞれの変異を含む、請求項４６から１０６のいずれかに記載の方法。

【請求項109】

前記方法が、第２のアレナウイルス粒子を投与することをさらに含み、前記第２のアレナウイルス粒子が、変異型ＰＩ３ＫＣＡの抗原性断片をコードし、前記抗原性断片が変異を含み、前記ＰＩ３ＫＣＡの変異が、Ｅ５４５Ｋ、Ｈ１０４７Ｒ及び／またはＥ５４２Ｋである、請求項４６から９６のいずれかに記載の方法。

【請求項110】

前記方法が、第２のアレナウイルス粒子を投与することをさらに含み、前記第２のアレナウイルス粒子が、変異型ＢＲＡＦの抗原性断片をコードし、前記抗原性断片が変異を含み、前記ＢＲＡＦの変異がＶ６００Ｅである、請求項４６から９６のいずれかに記載の方法。

【請求項111】

前記方法が、第２のアレナウイルス粒子を投与することをさらに含み、前記第２のアレナウイルス粒子が、変異型Ｕ２ＡＦ１の抗原性断片をコードし、前記抗原性断片が変異を含み、前記Ｕ２ＡＦ１の変異がＳ３４Ｆである、請求項４６から９６のいずれかに記載の方法。

【請求項112】

前記方法が、第２のアレナウイルス粒子を投与することをさらに含み、前記第２のアレナウイルス粒子が、変異型ＴＰ５３の抗原性断片をコードし、前記抗原性断片が変異を含み、前記ＴＰ５３の変異が、Ｇ２４５Ｓ、Ｙ２２０Ｃ、Ｒ２４８Ｑ、Ｒ２８２Ｗ、Ｈ１７９Ｒ、Ｖ１５７Ｆ、Ｒ２７３Ｃ、Ｒ２１３Ｌ、Ｒ２７３Ｈ、Ｒ２７３Ｌ、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ１５８Ｌ、Ｒ１９６Ｐ、Ｒ２４８Ｗ及び／またはＣ２７７Ｆである、請求項４６から９６のいずれかに記載の方法。

【請求項113】

前記方法が、第２のアレナウイルス粒子を投与することをさらに含み、前記第２のアレナウイルス粒子が、ＢＩＲＣファミリー、ＣＥＡＣＡＭファミリー、ＣＴＡファミリー、ＥＰＨファミリー、ＥＲＢＢファミリー、ＦＯＬＲファミリー、ＧＡＳＴファミリー、ＧＵＣＹ２ファミリー、ＩＤＯファミリー、ＩＬ１３ＲＡファミリー、ＫＤＲファミリー、ＫＬＫファミリー、ＭＡＧＥファミリー、ＭＵＣファミリー、ＰＥＭＴファミリー、ＳＤＣファミリー、ＳＬＡＭＦファミリー、ＴＥＲＴファミリー、ＴＬＲファミリー、ＴＰＴＥファミリー、ＴＹＲファミリー、ＷＴファミリー及び／またはＸＢＰファミリーの抗原性断片をコードする、請求項４６から９６のいずれかに記載の方法。

【請求項114】

前記方法が、第２のアレナウイルス粒子を投与することをさらに含み、前記第２のアレナウイルス粒子が、配列番号２１及び２２のヌクレオチド配列を含むアレナウイルスゲノムを含む、請求項４６から９６のいずれかに記載の方法。

【請求項115】

前記方法が、第２のアレナウイルス粒子を投与することをさらに含み、前記第２のアレナウイルス粒子が、配列番号２３及び２４のヌクレオチド配列を含むアレナウイルスゲノムを含む、請求項４６から９６のいずれかに記載の方法。

【請求項116】

前記アレナウイルス粒子が、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）またはピチンデウイルスに由来する、請求項４６から１１５のいずれかに記載の方法。

【請求項117】

前記腫瘍性疾患が固形腫瘍であり、前記方法が、前記固形腫瘍内のＴ細胞の濃度の増加をもたらす、請求項４６から１１６のいずれかに記載の方法。

【請求項118】

前記腫瘍性疾患が、急性リンパ芽球性白血病；急性リンパ芽球性リンパ腫；急性リンパ性白血病；急性骨髄性白血病；急性骨髄白血病（成人／小児）；副腎皮質癌；ＡＩＤＳ関連癌；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；肛門癌；虫垂癌；星細胞腫；非定型奇形腫様／ラブドイド腫瘍；基底細胞癌；胆管癌、肝外（胆管細胞癌）；膀胱癌；骨の骨肉腫／悪性線維性組織球腫；脳癌（成人／小児）；脳腫瘍、小脳星細胞腫（成人／小児）；脳腫瘍、大脳星細胞腫／悪性神経膠腫脳腫瘍；脳腫瘍、上衣腫；脳腫瘍、髄芽腫；脳腫瘍、テント上原始神経外胚葉性腫瘍；脳腫瘍、視路及び視床下部神経膠腫；脳幹神経膠腫；乳癌；気管支腺腫／カルチノイド；気管支腫瘍；バーキットリンパ腫；小児のがん；カルチノイド消化管腫瘍；カルチノイド腫瘍；成人の癌腫、原発不明部位；原発不明の癌腫；中枢神経系胚芽腫；中枢神経系リンパ腫、原発性；子宮頸癌；小児副腎皮質癌；小児癌；小児大脳星細胞腫；脊索腫、小児；慢性リンパ性白血病；慢性骨髄性白血病；慢性骨髄白血病；慢性骨髄増殖性障害；結腸癌；結腸直腸癌；頭蓋咽頭腫；皮膚Ｔ細胞リンパ腫；線維形成性小円形細胞腫瘍；肺気腫；子宮内膜癌；上衣芽腫；上衣腫；食道癌；ユーイングファミリー腫瘍におけるユーイング肉腫；頭蓋外胚細胞腫瘍；性腺外胚細胞腫瘍；肝外胆管癌；胆嚢癌；胃（胃の）癌；胃カルチノイド；消化管カルチノイド腫瘍；消化管間質腫瘍；胚細胞腫瘍：頭蓋外、性腺外、または卵巣妊娠性絨毛性腫瘍；妊娠性絨毛性腫瘍、原発不明部位；神経膠腫；脳幹の神経膠腫；神経膠腫、小児視路及び視床下部；有毛細胞白血病；頭頸部癌；心臓癌；肝細胞（肝）癌；ホジキンリンパ腫；下咽頭癌；視床下部及び視路神経膠腫；眼内黒色腫；島細胞癌（膵島）；カポジ肉腫；腎癌（腎細胞癌）；ランゲルハンス細胞組織球症；喉頭癌；口唇及び口腔内癌；脂肪肉腫；肝癌（原発性）；肺癌、非小細胞；肺癌、小細胞；リンパ腫、原発性中枢神経系；マクログロブリン血症、ワルデンシュトレーム；男性乳癌；骨の悪性線維性組織球腫／骨肉腫；髄芽腫；髄上皮腫；黒色腫；黒色腫、眼内（眼）；メルケル細胞癌；メルケル細胞皮膚癌；中皮腫；中皮腫、成人悪性；原発不明転移性扁平上皮性頸部癌；口癌；多発性内分泌腫瘍症候群；多発性骨髄腫／形質細胞腫瘍；菌状息肉症、骨髄異形成症候群；骨髄異形成／骨髄増殖性疾患；骨髄性白血病、慢性；骨髄白血病、成人急性；骨髄白血病、小児急性；骨髄腫、多発性（骨髄のがん）；骨髄増殖性障害、慢性；鼻腔及び副鼻腔癌；上咽頭癌；神経芽腫、非小細胞肺癌；非ホジキンリンパ腫；オリゴデンドロ神経膠腫；口腔癌；口腔内癌；中咽頭癌；骨肉腫／骨の悪性線維性組織球腫；卵巣癌；卵巣上皮癌（表層上皮性・間質性腫瘍）；卵巣胚細胞腫瘍；卵巣低悪性度腫瘍；膵癌；膵癌、島細胞；乳頭腫；副鼻腔及び鼻腔癌；副甲状腺癌；陰茎癌；咽頭癌；褐色細胞腫；松果体星細胞腫；松果体胚細胞腫；中間分化型松果体実質腫瘍；松果体芽腫及びテント上原始神経外胚葉性腫瘍；下垂体腫瘍；下垂体腺腫；形質細胞新生物／多発性骨髄腫；胸膜肺芽腫；原発性中枢神経系リンパ腫；前立腺癌；直腸癌；腎細胞癌（腎癌）；腎盂及び尿管、移行細胞癌；１５番染色体上のＮＵＴ遺伝子が関与する気道癌；網膜芽細胞腫；横紋筋肉腫、小児；唾液腺癌；肉腫、ユーイングファミリー腫瘍；セザリー症候群；皮膚癌（黒色腫）；皮膚癌（非黒色腫）；小細胞肺癌；小腸癌 軟部組織肉腫；軟部組織肉腫；脊髄腫瘍；扁平上皮癌；原発不明扁平上皮性頸部癌、転移性；胃の（胃）癌；テント上原始神経外胚葉性腫瘍；Ｔ細胞リンパ腫、皮膚（菌状息肉症及びセザリー症候群）；精巣癌；喉癌；胸腺腫；胸腺腫及び胸腺癌；甲状腺癌；小児甲状腺癌；腎盂及び尿管の移行細胞癌；尿道癌；子宮癌、子宮内膜；子宮肉腫；膣癌；外陰癌；ならびにウィルムス腫瘍である、請求項４６から７９、９１から９６、及び１０７から１１７のいずれかに記載の方法。

【請求項119】

前記腫瘍性疾患が固形腫瘍であり、前記アレナウイルス粒子の投与経路が腫瘍内注射である、請求項４６から１１７のいずれかに記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、それぞれの内容の全体が参照によって本明細書に組み込まれ、その優先権が主張される、２０２２年９月６日に出願された米国仮出願第６３／４０４，００８号、２０２２年９月６日に出願された米国仮出願第６３／４０４，０６８号、２０２１年１１月８日に出願された米国仮出願第６３／２７７，０４９号、及び２０２１年１１月８日に出願された米国仮出願第６３／２７７，０５２号の優先権を主張する。

【0002】

配列表
本出願は、その内容全体が参照によって本明細書に組み込まれる、本出願と共にＸＭＬファイルフォーマットで提出されたコンピュータで読み取り可能な配列表を含有する。本出願と共に提出された配列表ＸＭＬファイルは、「１３１９４－０８２－２２８＿ＳｅｑｕｅｎｃｅＬｉｓｔｉｎｇ．ｘｍｌ」という名前で、２０２２年１１月４日に作成され、９３，５１５バイトのサイズである。

【0003】

１．序文
本発明は、がんなどの腫瘍性疾患の処置に好適な遺伝子改変アレナウイルスに関する。本明細書に記載されるアレナウイルスは、腫瘍性疾患の処置及び／または免疫療法における使用に好適であり得る。特に、変異型ＫＲＡＳの１つもしくはいくつかの抗原性断片をコードするヌクレオチド配列のみを含むように、または１つもしくはいくつかの異なる変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）もしくは腫瘍関連抗原の１つもしくはいくつかの抗原性断片をコードするヌクレオチド配列をさらに含むように操作された遺伝子改変アレナウイルスを投与することによって腫瘍性疾患を処置するための方法及び組成物が本明細書で提供される。

【背景技術】

【0004】

２．背景
がんなどの腫瘍性疾患の処置に関する満たされていない医学的必要性が存在する。新興分野である免疫療法は、これらの生命を脅かす疾患の処置に有望である。加えて、組合せ療法もまた探索されている。しかしながら、より多くの療法が利用可能になるにつれて、可能な組合せは複雑になっている。

【0005】

免疫療法のための戦略の１つは、変異型ＫＲＡＳ抗原、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）、腫瘍関連抗原のアレナウイルスベースの発現を伴う。例えば、ＷＯ２００９／０８３２１０、ＷＯ／２０１６／０７５２５０、ＷＯ２０１７／１９８７２６、及びＷＯ２０２１／０８９８５３を参照のこと。これらの免疫療法の腫瘍内投与は記載されている。例えば、ＷＯ２０１８／１８５３０７を参照のこと。

【発明の概要】

【0006】

３．発明の概要
本出願は、がんなどの腫瘍性疾患の処置に好適な遺伝子改変アレナウイルスに関する。特に、本出願は、アレナウイルス粒子であって、
ａ．アレナウイルス粒子が、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードするヌクレオチド配列を含むアレナウイルスゲノムを含み、抗原性断片が変異を含み、
ｂ．アレナウイルスゲノムの少なくとも１つのアレナウイルスオープンリーディングフレーム（「ＯＲＦ」）が、（ｉ）機能的に不活化しているかもしくは欠失しているか、または（ｉｉ）上記少なくとも１つのアレナウイルスＯＲＦの野生型の位置以外の位置に位置しているか、または（ｉｉｉ）２つ以上の機能的断片に分けられ、少なくとも１つのアレナウイルスＯＲＦの断片が上記少なくとも１つのアレナウイルスＯＲＦの野生型の位置以外の位置に位置しているかのいずれかである、
アレナウイルス粒子に関する。

【0007】

ＫＲＡＳの変異が、ＫＲＡＳのアミノ酸位置Ｇ１２、Ｇ１３、Ａ１８、Ａ５９、Ｑ６１、Ｋ１１７、Ａ１４６、またはＤ１１９に存在する、アレナウイルス粒子。

【0008】

ＫＲＡＳの変異が、Ａ１８Ｄ、Ａ５９Ｅ、Ａ５９Ｇ、Ａ５９Ｐ、Ａ５９Ｔ、Ａ５９Ｓ、Ａ５９Ｖ、Ａ１４６Ｐ、Ａ１４６Ｓ、Ａ１４６Ｔ、Ａ１４６Ｖ、Ｄ１１９Ｎ、Ｇ１２Ａ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｆ、Ｇ１２Ｌ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１２Ｓ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１３Ａ、Ｇ１３Ｃ、Ｇ１３Ｄ、Ｇ１３Ｅ、Ｇ１３Ｒ、Ｇ１３Ｓ、Ｇ１３Ｖ、Ｋ１１７Ｎ、Ｑ６１Ｅ、Ｑ６１Ｈ、Ｑ６１Ｋ、Ｑ６１Ｌ、Ｑ６１Ｐ、Ｑ６１Ｒ、またはそれらの組合せである、アレナウイルス粒子。

【0009】

ＫＲＡＳの変異が、Ｇ１２Ａ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１２Ｓ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１３Ｄ、Ｑ６１Ｈ、Ｑ６１Ｒ、Ａ１４６Ｔ、またはそれらの組合せである、アレナウイルス粒子。

【0010】

ＫＲＡＳの変異が、Ｇ１３Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｒ、またはそれらの組合せである、アレナウイルス粒子。より具体的な実施形態では、アレナウイルスゲノムは、変異型ＫＲＡＳの複数の断片であって、それぞれ、変異Ｇ１３Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、及びＧ１２Ｒを含む、断片をＮ末端からＣ末端に向かってコードするヌクレオチド配列を含む。他のより具体的な実施形態では、アレナウイルスゲノムは、変異Ｇ１３Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、及びＧ１２Ｒを含む変異型ＫＲＡＳの断片を任意の可能な順序でコードするヌクレオチド配列を含む。

【0011】

アレナウイルスゲノムが、配列番号２０の配列に対して少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるヌクレオチド配列を含む、アレナウイルス粒子。

【0012】

アレナウイルスゲノムが、アミノ酸配列が配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である発現産物をコードするヌクレオチド配列を含む、アレナウイルス粒子。

【0013】

変異型ＫＲＡＳの断片が、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０アミノ酸長である、アレナウイルス粒子。より具体的な実施形態では、変異型ＫＲＡＳの断片は、１８アミノ酸長である。

【0014】

抗原性断片のＮ末端の変異に隣接する領域が、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０アミノ酸長である、アレナウイルス粒子。より具体的な実施形態では、抗原性断片のＮ末端の変異に隣接する領域は、８または９アミノ酸長である。

【0015】

抗原性断片のＣ末端の変異に隣接する領域が、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０アミノ酸長である、アレナウイルス粒子。より具体的な実施形態では、抗原性断片のＣ末端の変異に隣接する領域は、８または９アミノ酸長である。

【0016】

ヌクレオチド配列が、変異型ＫＲＡＳの２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０の抗原性断片をコードし、抗原性断片のそれぞれが、変異型ＫＲＡＳタンパク質のうちの１つの変異を含む、アレナウイルス粒子。より具体的な実施形態では、ヌクレオチド配列は、変異型ＫＲＡＳの５つの抗原性断片をコードし、抗原性断片のそれぞれは、変異型ＫＲＡＳタンパク質のうちの１つの変異を含む。より具体的な実施形態では、変異型ＫＲＡＳの５つの抗原性断片は、変異Ｇ１３Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、及びＧ１２Ｒを含む。

【0017】

抗原性断片が、変異型ＫＲＡＳタンパク質の同じまたは異なる変異を含む、アレナウイルス粒子。

【0018】

抗原性断片が、同じまたは異なるリンカーを介して互いに融合している、アレナウイルス粒子。

【0019】

抗原性断片が、介在配列を伴わずに互いに直接融合している、アレナウイルス粒子。

【0020】

リンカーが、ＡＡＹリンカー（ＡＡＹ）、ＡＡＡリンカー（ＡＡＡ）、ＧＳリンカー（ＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧ）（配列番号４２）、またはｉｎ ｓｉｌｉｃｏ予測を介して最適化されたＡＡＹ、ＡＡＡ、及びＧＳリンカー配列のバリアントである、アレナウイルス粒子。

【0021】

ヌクレオチド配列が、任意のＣｐＧ及びＴｐＡアイランドを減少または除去するように操作されている、アレナウイルス粒子。

【0022】

ＣｐＧ及びＴｐＡアイランドの除去が、３つのサイクル：
（ｉ）第１のサイクルにおいてＣｐＧを除去し、
（ｉｉ）第２のサイクルにおいてＴｐＡを除去し、
（ｉｉｉ）第２のサイクルで新たに導入されたＣｐＧを除去するために、第３のサイクルにおいてＣｐＧを除去する
を含む、アレナウイルス粒子。

【0023】

アレナウイルスゲノムが、
（ｉ）アレナウイルスゲノム５’ＵＴＲの制御下にある抗原性断片（複数可）をコードするヌクレオチド配列と、アレナウイルスゲノム３’ＵＴＲの制御下にあるアレナウイルス核タンパク質（「ＮＰ」）をコードするＯＲＦとを含む第１のＳセグメントと、
（ｉｉ）アレナウイルスゲノム５’ＵＴＲの制御下にある抗原性断片（複数可）をコードするヌクレオチド配列と、アレナウイルスゲノム３’ＵＴＲの制御下にあるアレナウイルス糖タンパク質（「ＧＰ」）をコードするＯＲＦとを含む第２のＳセグメントと、
（ｉｉｉ）Ｌセグメントと
を含む、アレナウイルス粒子。

【0024】

アレナウイルスゲノムが、
（ｉ）アレナウイルスゲノム５’ＵＴＲの制御下にある配列番号２０のヌクレオチド配列と、アレナウイルスゲノム３’ＵＴＲの制御下にあるアレナウイルス核タンパク質（「ＮＰ」）をコードするＯＲＦとを含む第１のＳセグメントと、
（ｉｉ）アレナウイルスゲノム５’ＵＴＲの制御下にある配列番号２０のヌクレオチド配列と、アレナウイルスゲノム３’ＵＴＲの制御下にあるアレナウイルス糖タンパク質（「ＧＰ」）をコードするＯＲＦとを含む第２のＳセグメントと、
（ｉｉｉ）Ｌセグメントと
を含む、アレナウイルス粒子。

【0025】

アレナウイルスゲノムが、
（ｉ）配列番号２１のヌクレオチド配列を含む第１のＳセグメントと、
（ｉｉ）配列番号２２のヌクレオチド配列を含む第２のＳセグメントと、
（ｉｉｉ）Ｌセグメントと
を含む、アレナウイルス粒子。

【0026】

アレナウイルスゲノムが、
（ｉ）配列番号２３のヌクレオチド配列を含む第１のＳセグメントと、
（ｉｉ）配列番号２４のヌクレオチド配列を含む第２のＳセグメントと、
（ｉｉｉ）Ｌセグメントと
を含む、アレナウイルス粒子。

【0027】

アレナウイルスゲノムが、
（ｉ）アレナウイルスゲノム５’ＵＴＲの制御下にある、異種シグナルペプチドと融合したアレナウイルスＧＰ１及びＧＰ２サブユニットをコードするＯＲＦと、アレナウイルスゲノム３’ＵＴＲの制御下にある、アレナウイルスＧＰシグナルペプチドと抗原性断片（複数可）をコードするヌクレオチド配列との融合体をコードするＯＲＦとを含む第１のＳセグメントと、
（ｉｉ）アレナウイルスゲノム５’ＵＴＲの制御下にある抗原性断片（複数可）をコードするヌクレオチド配列と、アレナウイルスゲノム３’ＵＴＲの制御下にあるアレナウイルス核タンパク質（「ＮＰ」）をコードするＯＲＦとを含む第２のＳセグメントと、
（ｉｉｉ）Ｌセグメントと
を含む、アレナウイルス粒子。

【0028】

第１のＳセグメント上の抗原性断片（複数可）をコードするヌクレオチド配列が、第２のＳセグメント上の抗原性断片（複数可）をコードするヌクレオチド配列と異なる、アレナウイルス粒子。

【0029】

第１のＳセグメント上の抗原性断片（複数可）をコードするヌクレオチド配列が、第２のＳセグメント上の抗原性断片（複数可）をコードするヌクレオチド配列と同じである、アレナウイルス粒子。

【0030】

第１のＳセグメント上にコードされている抗原性断片（複数可）が、第２のＳセグメント上にコードされている抗原性断片（複数可）と異なる、アレナウイルス粒子。

【0031】

第１のＳセグメント上にコードされている抗原性断片（複数可）が、第２のＳセグメント上にコードされている抗原性断片（複数可）と同じである、アレナウイルス粒子。

【0032】

第１のＳセグメント上にコードされている抗原性断片が、第２のＳセグメント上にコードされている抗原性断片と同じであるが、第２のＳセグメント上にコードされている抗原性断片が互いに融合している順序とは異なる順序で互いに融合している、アレナウイルス粒子。

【0033】

アレナウイルスゲノムが、変異型ＡＫＴ１、変異型ＢＲＡＦ、変異型ＨＥＲ２、変異型ＭＥＫ１、変異型ＭＥＴ、変異型ＮＲＡＳ、変異型ＰＩＫ３ＣＡ、変異型ＲＥＴ、変異型ＡＰＣ、変異型Ｕ２ＡＦ１、変異型ＥＧＦＲ、変異型ＦＢＸＷ７、変異型ＳＭＡＤ４、変異型ＧＮＡＳ、変異型ＥＲＢＢ２、変異型ＥＲＢＢ３、変異型ＣＤＫＮ２Ａ、変異型ＴＰ５３及び／または変異型ＣＴＮＮＢ１の抗原性断片をコードするヌクレオチド配列をさらに含み、抗原性断片がそれぞれの変異を含む、アレナウイルス粒子。

【0034】

アレナウイルスゲノムが、変異型ＰＩ３ＫＣＡの抗原性断片をコードするヌクレオチド配列をさらに含み、抗原性断片が、Ｅ５４５Ｋ、Ｈ１０４７Ｒ及び／またはＥ５４２Ｋ変異を含む、アレナウイルス粒子。

【0035】

アレナウイルスゲノムが、変異型ＢＲＡＦの抗原性断片をコードするヌクレオチド配列をさらに含み、抗原性断片がＶ６００Ｅ変異を含む、アレナウイルス粒子。

【0036】

アレナウイルスゲノムが、変異型Ｕ２ＡＦ１の抗原性断片をコードするヌクレオチド配列をさらに含み、抗原性断片がＳ３４Ｆ変異を含む、アレナウイルス粒子。

【0037】

アレナウイルスゲノムが、変異型ＴＰ５３の抗原性断片をコードするヌクレオチド配列をさらに含み、抗原性断片が、Ｇ２４５Ｓ、Ｙ２２０Ｃ、Ｒ２４８Ｑ、Ｒ２８２Ｗ、Ｈ１７９Ｒ、Ｖ１５７Ｆ、Ｒ２７３Ｃ、Ｒ２１３Ｌ、Ｒ２７３Ｈ、Ｒ２７３Ｌ、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ１５８Ｌ、Ｒ１９６Ｐ、Ｒ２４８Ｗ及び／またはＣ２７７Ｆを含む、アレナウイルス粒子。

【0038】

アレナウイルスゲノムが、ＢＩＲＣファミリー、ＣＥＡＣＡＭファミリー、ＣＴＡファミリー、ＥＰＨファミリー、ＥＲＢＢファミリー、ＦＯＬＲファミリー、ＧＡＳＴファミリー、ＧＵＣＹ２ファミリー、ＩＤＯファミリー、ＩＬ１３ＲＡファミリー、ＫＤＲファミリー、ＫＬＫファミリー、ＭＡＧＥファミリー、ＭＵＣファミリー、ＰＥＭＴファミリー、ＳＤＣファミリー、ＳＬＡＭＦファミリー、ＴＥＲＴファミリー、ＴＬＲファミリー、ＴＰＴＥファミリー、ＴＹＲファミリー、ＷＴファミリー及び／またはＸＢＰファミリーの抗原性断片をコードするヌクレオチド配列をさらに含む、アレナウイルス粒子。

【0039】

リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）またはピチンデウイルスに由来する、アレナウイルス粒子。

【0040】

アレナウイルス粒子を含む医薬組成物。

【0041】

アレナウイルス粒子のゲノムをコードする１つまたは複数の核酸のセット。

【0042】

アレナウイルス粒子のゲノムをコードする１つまたは複数の核酸のセットを含む宿主細胞。

【0043】

アレナウイルス粒子を作製する方法であって、宿主細胞を培養することと、アレナウイルス粒子を収集することとを含む、方法。

【0044】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、対象に、アレナウイルス粒子であって、
ａ．アレナウイルス粒子が、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードするヌクレオチド配列を含むアレナウイルスゲノムを含み、抗原性断片が変異を含み、
ｂ．アレナウイルスゲノムの少なくとも１つのアレナウイルスオープンリーディングフレーム（「ＯＲＦ」）が、（ｉ）機能的に不活化しているかもしくは欠失しているか、または（ｉｉ）上記少なくとも１つのアレナウイルスＯＲＦの野生型の位置以外の位置に位置しているか、または（ｉｉｉ）２つ以上の機能的断片に分けられ、少なくとも１つのアレナウイルスＯＲＦの断片が上記少なくとも１つのアレナウイルスＯＲＦの野生型の位置以外の位置に位置しているかのいずれかである、
アレナウイルス粒子を投与することを含む、方法。

【0045】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、ＫＲＡＳの変異が、ＫＲＡＳのアミノ酸位置Ｇ１２、Ｇ１３、Ａ１８、Ａ５９、Ｑ６１、Ｋ１１７、Ａ１４６、またはＤ１１９に存在する、方法。

【0046】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、ＫＲＡＳの変異が、Ａ１８Ｄ、Ａ５９Ｅ、Ａ５９Ｇ、Ａ５９Ｐ、Ａ５９Ｔ、Ａ５９Ｓ、Ａ５９Ｖ、Ａ１４６Ｐ、Ａ１４６Ｓ、Ａ１４６Ｔ、Ａ１４６Ｖ、Ｄ１１９Ｎ、Ｇ１２Ａ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｆ、Ｇ１２Ｌ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１２Ｓ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１３Ａ、Ｇ１３Ｃ、Ｇ１３Ｄ、Ｇ１３Ｅ、Ｇ１３Ｒ、Ｇ１３Ｓ、Ｇ１３Ｖ、Ｋ１１７Ｎ、Ｑ６１Ｅ、Ｑ６１Ｈ、Ｑ６１Ｋ、Ｑ６１Ｌ、Ｑ６１Ｐ、Ｑ６１Ｒ、またはそれらの組合せである、方法。

【0047】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、ＫＲＡＳの変異が、Ｇ１２Ａ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１２Ｓ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１３Ｄ、Ｑ６１Ｈ、Ｑ６１Ｒ、Ａ１４６Ｔ、またはそれらの組合せである、方法。

【0048】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、ＫＲＡＳの変異が、Ｇ１３Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｒ、またはそれらの組合せである、方法。より具体的な実施形態では、アレナウイルスゲノムは、変異型ＫＲＡＳの複数の断片であって、それぞれ、変異Ｇ１３Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、及びＧ１２Ｒを含む、断片をＮ末端からＣ末端に向かってコードするヌクレオチド配列を含む。他のより具体的な実施形態では、アレナウイルスゲノムは、変異Ｇ１３Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、及びＧ１２Ｒを含む変異型ＫＲＡＳの断片を任意の可能な順序でコードするヌクレオチド配列を含む。

【0049】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、アレナウイルスゲノムが、配列番号２０の配列に対して少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるヌクレオチド配列を含む、方法。

【0050】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、アレナウイルスゲノムが、アミノ酸配列が配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である発現産物をコードするヌクレオチド配列を含む、方法。

【0051】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片が、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０アミノ酸長である、方法。より具体的な実施形態では、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片は、１８アミノ酸長である。

【0052】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、抗原性断片のＮ末端の変異に隣接する領域が、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０アミノ酸長である、方法。より具体的な実施形態では、抗原性断片のＮ末端の変異に隣接する領域は、８または９アミノ酸長である。

【0053】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、抗原性断片のＣ末端の変異に隣接する領域が、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０アミノ酸長である、方法。より具体的な実施形態では、抗原性断片のＣ末端の変異に隣接する領域は、８または９アミノ酸長である。

【0054】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、ヌクレオチド配列が、変異型ＫＲＡＳの２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０の抗原性断片をコードし、抗原性断片のそれぞれが、変異型ＫＲＡＳタンパク質のうちの１つの変異を含む、方法。処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、ヌクレオチド配列が、変異型ＫＲＡＳの５つの抗原性断片をコードし、抗原性断片のそれぞれが、変異型ＫＲＡＳタンパク質のうちの１つの変異を含む、方法。処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、変異型ＫＲＡＳの５つの抗原性断片が、変異Ｇ１３Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、及びＧ１２Ｒを含む、方法。

【0055】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、抗原性断片が、変異型ＫＲＡＳタンパク質の同じまたは異なる変異を含む、方法。

【0056】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、抗原性断片が、同じまたは異なるリンカーを介して互いに融合している、方法。

【0057】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、抗原性断片が、介在配列を伴わずに互いに直接融合している、方法。

【0058】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、リンカーが、ＡＡＹリンカー（ＡＡＹ）、ＡＡＡリンカー（ＡＡＡ）、ＧＳリンカー（ＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧ）（配列番号４２）、またはｉｎ ｓｉｌｉｃｏ予測を介して最適化されたＡＡＹ、ＡＡＡ、及びＧＳリンカー配列のバリアントである、方法。

【0059】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、ヌクレオチド配列が、任意のＣｐＧ及びＴｐＡアイランドを減少または除去するように操作されている、方法。

【0060】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、ＣｐＧ及びＴｐＡアイランドの除去が、３つのサイクル：
（ｉ）第１のサイクルにおいてＣｐＧを除去し、
（ｉｉ）第２のサイクルにおいてＴｐＡを除去し、
（ｉｉｉ）第２のサイクルで新たに導入されたＣｐＧを除去するために、第３のサイクルにおいてＣｐＧを除去する
を含む、方法。

【0061】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、アレナウイルスゲノムが、
（ｉ）アレナウイルスゲノム５’ＵＴＲの制御下にある抗原性断片（複数可）をコードするヌクレオチド配列と、アレナウイルスゲノム３’ＵＴＲの制御下にあるアレナウイルス核タンパク質（「ＮＰ」）をコードするＯＲＦとを含む第１のＳセグメントと、
（ｉｉ）アレナウイルスゲノム５’ＵＴＲの制御下にある抗原性断片（複数可）をコードするヌクレオチド配列と、アレナウイルスゲノム３’ＵＴＲの制御下にあるアレナウイルス糖タンパク質（「ＧＰ」）をコードするＯＲＦとを含む第２のＳセグメントと、
（ｉｉｉ）Ｌセグメントと
を含む、方法。

【0062】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、アレナウイルスゲノムが、
（ｉ）アレナウイルスゲノム５’ＵＴＲの制御下にある配列番号２０のヌクレオチド配列と、アレナウイルスゲノム３’ＵＴＲの制御下にあるアレナウイルス核タンパク質（「ＮＰ」）をコードするＯＲＦとを含む第１のＳセグメントと、
（ｉｉ）アレナウイルスゲノム５’ＵＴＲの制御下にある配列番号２０のヌクレオチド配列と、アレナウイルスゲノム３’ＵＴＲの制御下にあるアレナウイルス糖タンパク質（「ＧＰ」）をコードするＯＲＦとを含む第２のＳセグメントと、
（ｉｉｉ）Ｌセグメントと
を含む、方法。

【0063】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、アレナウイルスゲノムが、
（ｉ）配列番号２１のヌクレオチド配列を含む第１のＳセグメントと、
（ｉｉ）配列番号２２のヌクレオチド配列を含む第２のＳセグメントと、
（ｉｉｉ）Ｌセグメントと
を含む、方法。

【0064】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、アレナウイルスゲノムが、
（ｉ）配列番号２３のヌクレオチド配列を含む第１のＳセグメントと、
（ｉｉ）配列番号２４のヌクレオチド配列を含む第２のＳセグメントと、
（ｉｉｉ）Ｌセグメントと
を含む、方法。

【0065】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、アレナウイルスゲノムが、
（ｉ）アレナウイルスゲノム５’ＵＴＲの制御下にある、異種シグナルペプチドと融合したアレナウイルスＧＰ１及びＧＰ２サブユニットをコードするＯＲＦと、アレナウイルスゲノム３’ＵＴＲの制御下にある、アレナウイルスＧＰシグナルペプチドと抗原性断片（複数可）をコードするヌクレオチド配列との融合体をコードするＯＲＦとを含む第１のＳセグメントと、
（ｉｉ）アレナウイルスゲノム５’ＵＴＲの制御下にある抗原性断片（複数可）をコードするヌクレオチド配列と、アレナウイルスゲノム３’ＵＴＲの制御下にあるアレナウイルス核タンパク質（「ＮＰ」）をコードするＯＲＦとを含む第２のＳセグメントと、
（ｉｉｉ）Ｌセグメントと
を含む、方法。

【0066】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、第１のＳセグメント上の抗原性断片（複数可）をコードするヌクレオチド配列が、第２のＳセグメント上の抗原性断片（複数可）をコードするヌクレオチド配列と異なる、方法。

【0067】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、第１のＳセグメント上の抗原性断片（複数可）をコードするヌクレオチド配列が、第２のＳセグメント上の抗原性断片（複数可）をコードするヌクレオチド配列と同じである、方法。

【0068】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、第１のＳセグメント上にコードされている抗原性断片（複数可）が、第２のＳセグメント上にコードされている抗原性断片（複数可）と異なる、方法。

【0069】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、第１のＳセグメント上にコードされている抗原性断片（複数可）が、第２のＳセグメント上にコードされている抗原性断片（複数可）と同じである、方法。

【0070】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、第１のＳセグメント上にコードされている抗原性断片が、第２のＳセグメント上にコードされている抗原性断片と同じであるが、第２のＳセグメント上にコードされている抗原性断片が互いに融合している順序とは異なる順序で互いに融合している、方法。

【0071】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、腫瘍性疾患が、膵癌、結腸直腸癌、肺腺癌、肺扁平上皮癌、または非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）である、方法。

【0072】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、アレナウイルスゲノムが、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードするヌクレオチド配列を含み、抗原性断片が変異を含み、ＫＲＡＳの変異が、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｒ、Ｑ６１Ｈ、Ｑ６１Ｒ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｓ、及び／またはＧ１２Ａであり、腫瘍性疾患が膵癌である、方法。

【0073】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、アレナウイルスゲノムが、変異型ＴＰ５３及び／または変異型Ｕ２ＡＦ１の抗原性断片をコードするヌクレオチド配列をさらに含み、抗原性断片が変異を含み、ＫＲＡＳの変異が、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｒ、Ｑ６１Ｈ及び／またはＱ６１Ｒであり、ＴＰ５３の変異が、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ２４８Ｗ、Ｇ２４５Ｓ、Ｒ２８２Ｗ、Ｒ２４８Ｑ及び／またはＲ２７３Ｃであり、Ｕ２ＡＦ１の変異がＳ３４Ｆであり、腫瘍性疾患が膵癌である、方法。

【0074】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、アレナウイルスゲノムが、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードするヌクレオチド配列を含み、抗原性断片が変異を含み、ＫＲＡＳの変異が、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１３Ｄ、Ａ１４６Ｔ、Ｇ１２Ｓ、Ｑ６１Ｈ、Ｇ１２Ａ、及び／またはＱ６１Ｒであり、腫瘍性疾患が膵癌、結腸直腸癌または肺腺癌である、方法。

【0075】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、アレナウイルスゲノムが、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードするヌクレオチド配列を含み、抗原性断片が変異を含み、ＫＲＡＳの変異が、Ｇ１３Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、及びＧ１２Ｒであり、腫瘍性疾患が膵癌、結腸直腸癌または肺腺癌である、方法。

【0076】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、アレナウイルスゲノムが、変異型ＴＰ５３の抗原性断片をコードするヌクレオチド配列をさらに含み、抗原性断片が変異を含み、ＫＲＡＳの変異が、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１２Ｖ、Ｑ６１Ｈ及び／またはＱ６１Ｒであり、ＴＰ５３の変異が、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ２４８Ｗ、Ｇ２４５Ｓ、Ｒ２８２Ｗ、Ｒ２４８Ｑ及び／またはＲ２７３Ｃであり、腫瘍性疾患が膵癌である、方法。

【0077】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、アレナウイルスゲノムが、変異型ＢＲＡＦ、変異型ＴＰ５３、変異型ＦＢＸＷ７、及び／または変異型ＰＩＫ３ＣＡの抗原性断片をコードするヌクレオチド配列をさらに含み、抗原性断片が変異を含み、ＫＲＡＳの変異が、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１３Ｄ、Ａ１４６Ｔ及び／またはＧ１２Ｃであり、ＢＲＡＦの変異がＶ６００Ｅであり、ＴＰ５３の変異が、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ２７３Ｈ及び／またはＲ２４８Ｗであり、ＦＢＸＷ７の変異がＲ４６５Ｈであり、ＰＩＫ３ＣＡの変異が、Ｅ５４５Ｋ及び／またはＨ１０４７Ｒであり、腫瘍性疾患が結腸直腸癌または肺腺癌である、方法。

【0078】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、アレナウイルスゲノムが、変異型ＢＲＡＦ、変異型ＰＩＫ３ＣＡ、変異型ＥＧＦＲ、変異型ＴＰ５３、及び／または変異型Ｕ２ＡＦ１の抗原性断片をコードするヌクレオチド配列をさらに含み、抗原性断片が変異を含み、ＫＲＡＳの変異が、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１３Ｄ及び／またはＧ１２Ｖであり、ＢＲＡＦの変異がＶ６００Ｅであり、ＰＩＫ３ＣＡの変異がＥ５４５Ｋであり、ＥＧＦＲの変異がＬ８５８Ｒであり、ＴＰ５３の変異が、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ２７３Ｈ及び／またはＲ２４８Ｗであり、Ｕ２ＡＦ１の変異がＳ３４Ｆであり、腫瘍性疾患が膵癌、結腸直腸癌または肺腺癌である、方法。

【0079】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、アレナウイルスゲノムが、変異型ＴＰ５３、変異型Ｕ２ＡＦ１、変異型ＰＩＫ３ＣＡ、変異型ＥＧＦＲ及び／または変異型ＢＲＡＦの抗原性断片をコードするヌクレオチド配列をさらに含み、抗原性断片が変異を含み、ＫＲＡＳの変異が、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｄ、及び／またはＧ１２Ｓであり、ＴＰ５３の変異がＲ１７５Ｈであり、Ｕ２ＡＦ１の変異がＳ３４Ｆであり、ＥＧＦＲの変異が、Ｌ８５８Ｒ、Ｌ８６１Ｑ及び／またはＥ７４６＿Ａ７５０ｄｅｌであり、ＰＩＫ３ＣＡの変異が、Ｅ５４５Ｋ及び／またはＥ５４２Ｋであり、ＢＲＡＦの変異がＶ６００Ｅであり、腫瘍性疾患が肺腺癌である、方法。

【0080】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、アレナウイルスゲノムが、変異型ＡＫＴ１、変異型ＢＲＡＦ、変異型ＨＥＲ２、変異型ＭＥＫ１、変異型ＭＥＴ、変異型ＮＲＡＳ、変異型ＰＩＫ３ＣＡ及び／または変異型ＲＥＴの抗原性断片をコードするヌクレオチド配列をさらに含み、抗原性断片が変異を含み、腫瘍性疾患が非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）である、方法。

【0081】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、アレナウイルスゲノムが、変異型ＡＫＴ１、変異型ＢＲＡＦ、変異型ＨＥＲ２、変異型ＭＥＫ１、変異型ＭＥＴ、変異型ＮＲＡＳ、変異型ＰＩＫ３ＣＡ、変異型ＲＥＴ、変異型ＡＰＣ、変異型Ｕ２ＡＦ１、変異型ＥＧＦＲ、変異型ＦＢＸＷ７、変異型ＳＭＡＤ４、変異型ＧＮＡＳ、変異型ＥＲＢＢ２、変異型ＥＲＢＢ３、変異型ＣＤＫＮ２Ａ、変異型ＴＰ５３及び／または変異型ＣＴＮＮＢ１の抗原性断片をコードするヌクレオチド配列をさらに含み、抗原性断片がそれぞれの変異を含む、方法。

【0082】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、アレナウイルスゲノムが、変異型ＰＩ３ＫＣＡの抗原性断片をコードするヌクレオチド配列をさらに含み、抗原性断片が変異を含み、ＰＩ３ＫＣＡの変異が、Ｅ５４５Ｋ、Ｈ１０４７Ｒ及び／またはＥ５４２Ｋである、方法。

【0083】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、アレナウイルスゲノムが、変異型ＢＲＡＦの抗原性断片をコードするヌクレオチド配列をさらに含み、抗原性断片が変異を含み、ＢＲＡＦの変異がＶ６００Ｅである、方法。

【0084】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、アレナウイルスゲノムが、変異型Ｕ２ＡＦ１の抗原性断片をコードするヌクレオチド配列をさらに含み、抗原性断片が変異を含み、Ｕ２ＡＦ１の変異がＳ３４Ｆである、方法。

【0085】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、アレナウイルスゲノムが、変異型ＴＰ５３の抗原性断片をコードするヌクレオチド配列をさらに含み、抗原性断片が変異を含み、ＴＰ５３の変異が、Ｇ２４５Ｓ、Ｙ２２０Ｃ、Ｒ２４８Ｑ、Ｒ２８２Ｗ、Ｈ１７９Ｒ、Ｖ１５７Ｆ、Ｒ２７３Ｃ、Ｒ２１３Ｌ、Ｒ２７３Ｈ、Ｒ２７３Ｌ、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ１５８Ｌ、Ｒ１９６Ｐ、Ｒ２４８Ｗ及び／またはＣ２７７Ｆである、方法。

【0086】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、アレナウイルスゲノムが、ＢＩＲＣファミリー、ＣＥＡＣＡＭファミリー、ＣＴＡファミリー、ＥＰＨファミリー、ＥＲＢＢファミリー、ＦＯＬＲファミリー、ＧＡＳＴファミリー、ＧＵＣＹ２ファミリー、ＩＤＯファミリー、ＩＬ１３ＲＡファミリー、ＫＤＲファミリー、ＫＬＫファミリー、ＭＡＧＥファミリー、ＭＵＣファミリー、ＰＥＭＴファミリー、ＳＤＣファミリー、ＳＬＡＭＦファミリー、ＴＥＲＴファミリー、ＴＬＲファミリー、ＴＰＴＥファミリー、ＴＹＲファミリー、ＷＴファミリー及び／またはＸＢＰファミリーの抗原性断片をコードするヌクレオチド配列をさらに含む、方法。

【0087】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、方法が、第２のアレナウイルス粒子を投与することをさらに含み、第２のアレナウイルス粒子が、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードし、抗原性断片が変異を含み、ＫＲＡＳの変異が、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｒ、Ｑ６１Ｈ、Ｑ６１Ｒ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｓ、及び／またはＧ１２Ａであり、腫瘍性疾患が膵癌である、方法。

【0088】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、方法が、第２のアレナウイルス粒子を投与することをさらに含み、第２のアレナウイルス粒子が、変異型ＫＲＡＳ、変異型ＴＰ５３、及び／または変異型Ｕ２ＡＦ１の抗原性断片をコードし、抗原性断片が変異を含み、ＫＲＡＳの変異が、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｒ、Ｑ６１Ｈ及び／またはＱ６１Ｒであり、ＴＰ５３の変異が、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ２４８Ｗ、Ｇ２４５Ｓ、Ｒ２８２Ｗ、Ｒ２４８Ｑ及び／またはＲ２７３Ｃであり、Ｕ２ＡＦ１の変異がＳ３４Ｆであり、腫瘍性疾患が膵癌である、方法。

【0089】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、方法が、第２のアレナウイルス粒子を投与することをさらに含み、第２のアレナウイルス粒子が、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードし、抗原性断片が変異を含み、腫瘍性疾患が膵癌である、方法。

【0090】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、方法が、第２のアレナウイルス粒子を投与することをさらに含み、第２のアレナウイルス粒子が、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードし、抗原性断片が変異を含み、腫瘍性疾患が結腸直腸癌である、方法。

【0091】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、方法が、第２のアレナウイルス粒子を投与することをさらに含み、第２のアレナウイルス粒子が、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードし、抗原性断片が変異を含み、ＫＲＡＳの変異が、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１３Ｄ、Ａ１４６Ｔ、Ｇ１２Ｓ、Ｑ６１Ｈ、Ｇ１２Ａ、及び／またはＱ６１Ｒであり、腫瘍性疾患が膵癌、結腸直腸癌または肺腺癌である、方法。

【0092】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、方法が、第２のアレナウイルス粒子を投与することをさらに含み、第２のアレナウイルス粒子が、変異型ＫＲＡＳ及び／または変異型ＴＰ５３の抗原性断片をコードし、抗原性断片が変異を含み、ＫＲＡＳの変異が、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１２Ｖ、Ｑ６１Ｈ及び／またはＱ６１Ｒであり、ＴＰ５３の変異が、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ２４８Ｗ、Ｇ２４５Ｓ、Ｒ２８２Ｗ、Ｒ２４８Ｑ及び／またはＲ２７３Ｃであり、腫瘍性疾患が膵癌である、方法。

【0093】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、方法が、第２のアレナウイルス粒子を投与することをさらに含み、第２のアレナウイルス粒子が、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードし、抗原性断片が変異を含み、ＫＲＡＳの変異が、Ｇ１３Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、及びＧ１２Ｒであり、腫瘍性疾患が膵癌、結腸直腸癌または肺腺癌である、方法。

【0094】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、方法が、第２のアレナウイルス粒子を投与することをさらに含み、第２のアレナウイルス粒子が、変異型ＫＲＡＳ、変異型ＢＲＡＦ、変異型ＴＰ５３、変異型ＦＢＸＷ７、及び／または変異型ＰＩＫ３ＣＡの抗原性断片をコードし、抗原性断片が変異を含み、ＫＲＡＳの変異が、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１３Ｄ、Ａ１４６Ｔ及び／またはＧ１２Ｃであり、ＢＲＡＦの変異がＶ６００Ｅであり、ＴＰ５３の変異が、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ２７３Ｈ及び／またはＲ２４８Ｗであり、ＦＢＸＷ７の変異がＲ４６５Ｈであり、ＰＩＫ３ＣＡの変異が、Ｅ５４５Ｋ及び／またはＨ１０４７Ｒであり、腫瘍性疾患が結腸直腸癌または肺腺癌である、方法。

【0095】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、方法が、第２のアレナウイルス粒子を投与することをさらに含み、第２のアレナウイルス粒子が、変異型ＫＲＡＳ、変異型ＢＲＡＦ、変異型ＰＩＫ３ＣＡ、変異型ＥＧＦＲ、変異型ＴＰ５３、及び／または変異型Ｕ２ＡＦ１の抗原性断片をコードし、抗原性断片が変異を含み、ＫＲＡＳの変異が、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１３Ｄ及び／またはＧ１２Ｖであり、ＢＲＡＦの変異がＶ６００Ｅであり、ＰＩＫ３ＣＡの変異がＥ５４５Ｋであり、ＥＧＦＲの変異がＬ８５８Ｒであり、ＴＰ５３の変異が、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ２７３Ｈ及び／またはＲ２４８Ｗであり、Ｕ２ＡＦ１の変異がＳ３４Ｆであり、腫瘍性疾患が膵癌、結腸直腸癌または肺腺癌である、方法。

【0096】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、方法が、第２のアレナウイルス粒子を投与することをさらに含み、第２のアレナウイルス粒子が、変異型ＫＲＡＳ、変異型ＴＰ５３、変異型Ｕ２ＡＦ１、変異型ＰＩＫ３ＣＡ、変異型ＥＧＦＲ及び／または変異型ＢＲＡＦの抗原性断片をコードし、抗原性断片が変異を含み、ＫＲＡＳの変異が、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｄ、及び／またはＧ１２Ｓであり、ＴＰ５３の変異がＲ１７５Ｈであり、Ｕ２ＡＦ１の変異がＳ３４Ｆであり、ＥＧＦＲの変異が、Ｌ８５８Ｒ、Ｌ８６１Ｑ及び／またはＥ７４６＿Ａ７５０ｄｅｌであり、ＰＩＫ３ＣＡの変異が、Ｅ５４５Ｋ及び／またはＥ５４２Ｋであり、ＢＲＡＦの変異がＶ６００Ｅであり、腫瘍性疾患が肺腺癌である、方法。

【0097】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、方法が、第２のアレナウイルス粒子を投与することをさらに含み、第２のアレナウイルス粒子が、変異型ＴＰ５３の抗原性断片をコードし、抗原性断片が変異を含む、方法。

【0098】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、方法が、第２のアレナウイルス粒子を投与することをさらに含み、第２のアレナウイルス粒子が、変異型ＫＲＡＳ、変異型ＡＫＴ１、変異型ＢＲＡＦ、変異型ＨＥＲ２、変異型ＭＥＫ１、変異型ＭＥＴ、変異型ＮＲＡＳ、変異型ＰＩＫ３ＣＡ及び／または変異型ＲＥＴの抗原性断片をコードし、抗原性断片が変異を含み、腫瘍性疾患が非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）である、方法。

【0099】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、方法が、第２のアレナウイルス粒子を投与することをさらに含み、第２のアレナウイルス粒子が、変異型ＡＫＴ１、変異型ＢＲＡＦ、変異型ＨＥＲ２、変異型ＭＥＫ１、変異型ＭＥＴ、変異型ＮＲＡＳ、変異型ＰＩＫ３ＣＡ、変異型ＲＥＴ、変異型ＡＰＣ、変異型Ｕ２ＡＦ１、変異型ＥＧＦＲ、変異型ＦＢＸＷ７、変異型ＳＭＡＤ４、変異型ＧＮＡＳ、変異型ＥＲＢＢ２、変異型ＥＲＢＢ３、変異型ＣＤＫＮ２Ａ、変異型ＴＰ５３及び／または変異型ＣＴＮＮＢ１の抗原性断片をコードし、抗原性断片がそれぞれの変異を含む、方法。

【0100】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、方法が、第２のアレナウイルス粒子を投与することをさらに含み、第２のアレナウイルス粒子が、変異型ＰＩ３ＫＣＡの抗原性断片をコードし、抗原性断片が変異を含み、ＰＩ３ＫＣＡの変異が、Ｅ５４５Ｋ、Ｈ１０４７Ｒ及び／またはＥ５４２Ｋである、方法。

【0101】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、方法が、第２のアレナウイルス粒子を投与することをさらに含み、第２のアレナウイルス粒子が、変異型ＢＲＡＦの抗原性断片をコードし、抗原性断片が変異を含み、ＢＲＡＦの変異がＶ６００Ｅである、方法。

【0102】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、方法が、第２のアレナウイルス粒子を投与することをさらに含み、第２のアレナウイルス粒子が、変異型Ｕ２ＡＦ１の抗原性断片をコードし、抗原性断片が変異を含み、Ｕ２ＡＦ１の変異がＳ３４Ｆである、方法。

【0103】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、方法が、第２のアレナウイルス粒子を投与することをさらに含み、第２のアレナウイルス粒子が、変異型ＴＰ５３の抗原性断片をコードし、抗原性断片が変異を含み、ＴＰ５３の変異が、Ｇ２４５Ｓ、Ｙ２２０Ｃ、Ｒ２４８Ｑ、Ｒ２８２Ｗ、Ｈ１７９Ｒ、Ｖ１５７Ｆ、Ｒ２７３Ｃ、Ｒ２１３Ｌ、Ｒ２７３Ｈ、Ｒ２７３Ｌ、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ１５８Ｌ、Ｒ１９６Ｐ、Ｒ２４８Ｗ及び／またはＣ２７７Ｆである、方法。

【0104】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、方法が、第２のアレナウイルス粒子を投与することをさらに含み、第２のアレナウイルス粒子が、ＢＩＲＣファミリー、ＣＥＡＣＡＭファミリー、ＣＴＡファミリー、ＥＰＨファミリー、ＥＲＢＢファミリー、ＦＯＬＲファミリー、ＧＡＳＴファミリー、ＧＵＣＹ２ファミリー、ＩＤＯファミリー、ＩＬ１３ＲＡファミリー、ＫＤＲファミリー、ＫＬＫファミリー、ＭＡＧＥファミリー、ＭＵＣファミリー、ＰＥＭＴファミリー、ＳＤＣファミリー、ＳＬＡＭＦファミリー、ＴＥＲＴファミリー、ＴＬＲファミリー、ＴＰＴＥファミリー、ＴＹＲファミリー、ＷＴファミリー及び／またはＸＢＰファミリーの抗原性断片をコードする、方法。

【0105】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、方法が、第２のアレナウイルス粒子を投与することをさらに含み、第２のアレナウイルス粒子が、配列番号２１及び２２のヌクレオチド配列を含むアレナウイルスゲノムを含む、方法。処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、方法が、第２のアレナウイルス粒子を投与することをさらに含み、第２のアレナウイルス粒子が、配列番号２３及び２４のヌクレオチド配列を含むアレナウイルスゲノムを含む、方法。

【0106】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、アレナウイルス粒子が、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）またはピチンデウイルスに由来する、方法。

【0107】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、腫瘍性疾患が固形腫瘍であり、方法が、固形腫瘍内のＴ細胞の濃度の増加をもたらす、方法。

【0108】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、腫瘍性疾患が、急性リンパ芽球性白血病；急性リンパ芽球性リンパ腫；急性リンパ性白血病；急性骨髄性白血病（ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ ｌｅｕｋｅｍｉａ）；急性骨髄白血病（ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ）（成人／小児）；副腎皮質癌；ＡＩＤＳ関連癌；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；肛門癌；虫垂癌；星細胞腫；非定型奇形腫様／ラブドイド腫瘍；基底細胞癌；胆管癌、肝外（胆管細胞癌（ｃｈｏｌａｎｇｉｏｃａｒｃｉｎｏｍａ））；膀胱癌；骨の骨肉腫／悪性線維性組織球腫；脳癌（成人／小児）；脳腫瘍、小脳星細胞腫（成人／小児）；脳腫瘍、大脳星細胞腫／悪性神経膠腫脳腫瘍；脳腫瘍、上衣腫；脳腫瘍、髄芽腫；脳腫瘍、テント上原始神経外胚葉性腫瘍；脳腫瘍、視路及び視床下部神経膠腫；脳幹神経膠腫；乳癌；気管支腺腫／カルチノイド；気管支腫瘍；バーキットリンパ腫；小児のがん；カルチノイド消化管腫瘍；カルチノイド腫瘍；成人の癌腫、原発不明部位；原発不明の癌腫；中枢神経系胚芽腫；中枢神経系リンパ腫、原発性；子宮頸癌；小児副腎皮質癌；小児癌；小児大脳星細胞腫；脊索腫、小児；慢性リンパ性白血病；慢性骨髄性白血病；慢性骨髄白血病；慢性骨髄増殖性障害；結腸癌；結腸直腸癌；頭蓋咽頭腫；皮膚Ｔ細胞リンパ腫；線維形成性小円形細胞腫瘍；肺気腫；子宮内膜癌；上衣芽腫；上衣腫；食道癌；ユーイングファミリー腫瘍におけるユーイング肉腫；頭蓋外胚細胞腫瘍；性腺外胚細胞腫瘍；肝外胆管癌；胆嚢癌；胃（ｇａｓｔｒｉｃ）（胃の（ｓｔｏｍａｃｈ））癌；胃カルチノイド；消化管カルチノイド腫瘍；消化管間質腫瘍；胚細胞腫瘍：頭蓋外、性腺外、または卵巣妊娠性絨毛性腫瘍；妊娠性絨毛性腫瘍、原発不明部位；神経膠腫；脳幹の神経膠腫；神経膠腫、小児視路及び視床下部；有毛細胞白血病；頭頸部癌；心臓癌；肝細胞（肝）癌；ホジキンリンパ腫；下咽頭癌；視床下部及び視路神経膠腫；眼内黒色腫；島細胞癌（膵島）；カポジ肉腫；腎癌（腎細胞癌）；ランゲルハンス細胞組織球症；喉頭癌；口唇及び口腔内癌；脂肪肉腫；肝癌（原発性）；肺癌、非小細胞；肺癌、小細胞；リンパ腫、原発性中枢神経系；マクログロブリン血症、ワルデンシュトレーム；男性乳癌；骨の悪性線維性組織球腫／骨肉腫；髄芽腫；髄上皮腫；黒色腫；黒色腫、眼内（眼）；メルケル細胞癌；メルケル細胞皮膚癌；中皮腫；中皮腫、成人悪性；原発不明転移性扁平上皮性頸部癌；口癌；多発性内分泌腫瘍症候群；多発性骨髄腫／形質細胞腫瘍（ｐｌａｓｍａ ｃｅｌｌ ｎｅｏｐｌａｓｍ）；菌状息肉症、骨髄異形成症候群；骨髄異形成／骨髄増殖性疾患；骨髄性白血病、慢性；骨髄白血病、成人急性；骨髄白血病、小児急性；骨髄腫、多発性（骨髄のがん）；骨髄増殖性障害、慢性；鼻腔及び副鼻腔癌；上咽頭癌；神経芽腫、非小細胞肺癌；非ホジキンリンパ腫；オリゴデンドロ神経膠腫；口腔癌（ｏｒａｌ ｃａｎｃｅｒ）；口腔内癌（ｏｒａｌ ｃａｖｉｔｙ ｃａｎｃｅｒ）；中咽頭癌；骨肉腫／骨の悪性線維性組織球腫；卵巣癌；卵巣上皮癌（表層上皮性・間質性腫瘍）；卵巣胚細胞腫瘍；卵巣低悪性度腫瘍；膵癌；膵癌、島細胞；乳頭腫；副鼻腔及び鼻腔癌；副甲状腺癌；陰茎癌；咽頭癌；褐色細胞腫；松果体星細胞腫；松果体胚細胞腫；中間分化型松果体実質腫瘍；松果体芽腫及びテント上原始神経外胚葉性腫瘍；下垂体腫瘍；下垂体腺腫；形質細胞新生物（ｐｌａｓｍａ ｃｅｌｌ ｎｅｏｐｌａｓｉａ）／多発性骨髄腫；胸膜肺芽腫；原発性中枢神経系リンパ腫；前立腺癌；直腸癌；腎細胞癌（腎癌）；腎盂及び尿管、移行細胞癌；１５番染色体上のＮＵＴ遺伝子が関与する気道癌；網膜芽細胞腫；横紋筋肉腫、小児；唾液腺癌；肉腫、ユーイングファミリー腫瘍；セザリー症候群；皮膚癌（黒色腫）；皮膚癌（非黒色腫）；小細胞肺癌；小腸癌 軟部組織肉腫；軟部組織肉腫；脊髄腫瘍；扁平上皮癌；原発不明扁平上皮性頸部癌、転移性；胃の（胃）癌；テント上原始神経外胚葉性腫瘍；Ｔ細胞リンパ腫、皮膚（菌状息肉症及びセザリー症候群）；精巣癌；喉癌；胸腺腫；胸腺腫及び胸腺癌；甲状腺癌；小児甲状腺癌；腎盂及び尿管の移行細胞癌；尿道癌；子宮癌、子宮内膜；子宮肉腫；膣癌；外陰癌；ならびにウィルムス腫瘍である、方法。

【0109】

処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、腫瘍性疾患が固形腫瘍であり、アレナウイルス粒子の投与経路が腫瘍内注射である、方法。

【表1】

【図面の簡単な説明】

【0110】

４．図面の簡単な説明

【図1】ａｒｔＬＣＭＶ－４ｘＫＲＡＳｍｕｔベクター及びａｒｔＰＩＣＶ－４ｘＫＲＡＳｍｕｔベクターの概略図。

【0111】

【図2】ａｒｔＬＣＭＶ－４ｘＫＲＡＳｍｕｔ＿Ｅ７ベクター及びａｒｔＰＩＣＶ－４ｘＫＲＡＳｍｕｔ＿Ｅ７ベクターの概略図。

【0112】

【図3】ａｒｔＬＣＭＶ－４ｘＫＲＡＳｍｕｔ＿ＥＢＶベクター及びａｒｔＰＩＣＶ－４ｘＫＲＡＳｍｕｔ＿ＥＢＶベクターの概略図。

【0113】

【図4】ａｒｔＬＣＭＶ－ＫＲＡＳｍｕｔベクター及びａｒｔＰＩＣＶ－ＫＲＡＳｍｕｔベクターの概略図。

【0114】

【図5A】ａｒｔＬＣＭＶ－１４ｘｐ５３ｍｕｔベクターの概略図。

【図5B】ａｒｔＰＩＣＶ－１４ｘｐ５３ｍｕｔベクターの概略図。

【0115】

【図6A】ａｒｔＬＣＭＶ－１４ｘｐ５３ｍｕｔ＿Ｅ７ベクターの概略図。

【図6B】ａｒｔＰＩＣＶ－１４ｘｐ５３ｍｕｔ＿Ｅ７ベクターの概略図。

【0116】

【図7A】ａｒｔＬＣＭＶ－１４ｘｐ５３ｍｕｔ＿ＥＢＶベクターの概略図。

【図7B】ａｒｔＰＩＣＶ－１４ｘｐ５３ｍｕｔ＿ＥＢＶベクターの概略図。

【0117】

【図8】ａｒｔＬＣＭＶ－ｐ５３ｍｕｔベクター及びａｒｔＰＩＣＶ－ｐ５３ｍｕｔベクターの概略図。

【0118】

【図9A】ａｒｔＬＣＭＶ－ｐ５３ｍｕｔ／ＫＲＡＳｍｕｔベクター及びａｒｔＰＩＣＶ－ｐ５３ｍｕｔ／ＫＲＡＳｍｕｔベクターの概略図。

【0119】

【図9B】ａｒｔＬＣＭＶ－ＫＲＡＳｍｕｔ／ｐ５３ｍｕｔベクター及びａｒｔＰＩＣＶ－ＫＲＡＳｍｕｔ／ｐ５３ｍｕｔベクターの概略図。

【0120】

【図9C】変異型ＫＲＡＳ及び／またはＴＰ５３の抗原性断片をコードするａｒｔＬＣＭＶベクター及びａｒｔＰＩＣＶベクターにおける抗原性挿入断片の概略図。

【0121】

【図10】ａｒｔＬＣＭＶ－５ｘＫＲＡＳｍｕｔ－Ｈ２ベクター及びａｒｔＰＩＣＶ－５ｘＫＲＡＳｍｕｔ－Ｈ２ベクターの概略図。

【0122】

【図11】変異したＫＲＡＳエピトープの種々の組合せをコードするアレナウイルス粒子の投与後のＨＬＡ－Ａ＊１１のトランスジェニックマウス（すなわち、ＣＢ６Ｆ１－Ｔｇ（ＨＬＡ－Ａ＊１１０１／Ｈ２－Ｋｂ）Ａ１１．０１マウス）におけるＣＤ８＋Ｔ細胞応答の誘導。個々の変異したＫＲＡＳエピトープに対するＣＤ８＋Ｔ細胞（すなわち、ＩＦＮ－γ＋）応答を、示されたベクターのプライム－ブースト投与後のＨＬＡ－Ａ＊１１トランスジェニックマウスにおいて、ＥＬＩＳＰＯＴによって解析した。ペプチド刺激を、野生型及び変異特異的ＫＲＡＳベースペプチドを用いて実施した。ＬＣＭＶ及びＰＩＣＶに由来するＮＰベースペプチドの混合物を対照として使用した。ＩＦＮ－γ＋ＳＦＵ（１０^５個の細胞当たり）を、個々のマウスについて、算術平均±標準偏差として示す。

【0123】

【図12】ａｒｔＬＣＭＶ－５ｘＫＲＡＳｍｕｔ－Ｈ２の導入遺伝子安定性（図１２Ａ）及びａｒｔＰＩＣＶ－５ｘＫＲＡＳｍｕｔ－Ｈ２の導入遺伝子安定性（図１２Ｂ）。５ｘＫＲＡＳｍｕｔ導入遺伝子安定性は、ＰＣＲによって、示された継代レベル（ｐ１～ｐ６）において解析した。

【0124】

【図13】ａｒｔＬＣＭＶ－５ｘＫＲＡＳｍｕｔ－Ｈ２－ＮＰ－Ｓセグメント（図１０のＳセグメント＃１）のヌクレオチド配列（配列番号２１）。以下のエレメントが、開示される配列の５’から３’に向かって示される。ＬＣＭＶ ｃｌ１３ Ｓセグメントに基づく５’非翻訳領域（ＵＴＲ）は小文字で示され、ＫＲＡＳｍｕｔ－Ｈ２導入遺伝子は太字で示され、ＬＣＭＶ ｃｌ１３ Ｓセグメントに基づく遺伝子間領域（ＩＧＲ）は四角で囲まれ、ＬＣＭＶ ｃｌ１３に基づく核タンパク質（ＮＰ）は下線付きの文字で示され、ＬＣＭＶ ｃｌ１３ Ｓセグメントに基づく３’非翻訳領域（ＵＴＲ）は小文字で示される。ゲノムセグメントはＲＮＡであり、配列番号２１の配列はＤＮＡとして示されるが、配列番号２１の全てのチミジン（「Ｔ」）をウリジン（「Ｕ」）に交換することでＲＮＡ配列（配列番号３４）が得られる。

【0125】

【図14】ａｒｔＬＣＭＶ－５ｘＫＲＡＳｍｕｔ－Ｈ２－ＧＰ－Ｓセグメント（図１０のＳセグメント＃２）のヌクレオチド配列（配列番号２２）。以下のエレメントが、開示される配列の５’から３’に向かって示される。ＬＣＭＶ ｃｌ１３ Ｓセグメントに基づく５’非翻訳領域（ＵＴＲ）は小文字で示され、ＫＲＡＳｍｕｔ－Ｈ２導入遺伝子は太字で示され、ＬＣＭＶ ｃｌ１３ Ｓセグメントに基づく遺伝子間領域（ＩＧＲ）は四角で囲んで示され、ＬＣＭＶ ＷＥに基づく糖タンパク質（ＧＰ）は下線で示され、ＬＣＭＶ ｃｌ１３ Ｓセグメントに基づく３’非翻訳領域（ＵＴＲ）は小文字で示される。ゲノムセグメントはＲＮＡであり、配列番号２２の配列はＤＮＡで示されるが、配列番号２２の全てのチミジン（「Ｔ」）をウリジン（「Ｕ」）に交換することでＲＮＡ配列（配列番号３５）が得られる。

【0126】

【図15】ａｒｔＰＩＣＶ－５ｘＫＲＡＳｍｕｔ－Ｈ２－ＮＰ－Ｓセグメント（図１０のＳセグメント＃１）のヌクレオチド配列（配列番号２３）。以下のエレメントが、開示される配列の５’から３’に向かって示される。ＰＩＣＶ ｐ１８ Ｓセグメントに基づく５’非翻訳領域（ＵＴＲ）は小文字で示され、ＫＲＡＳｍｕｔ－Ｈ２導入遺伝子は太字で示され、ＰＩＣＶ ｐ１８ Ｓセグメントに基づく遺伝子間領域（ＩＧＲ）は四角で囲んで示され、ＰＩＣＶ ｐ１８に基づく核タンパク質（ＮＰ）は下線で示され、ＰＩＣＶ ｐ１８ Ｓセグメントに基づく３’非翻訳領域（ＵＴＲ）は小文字で示される。ゲノムセグメントはＲＮＡであり、配列番号２３の配列はＤＮＡで示されるが、配列番号２３の全てのチミジン（「Ｔ」）をウリジン（「Ｕ」）に交換することでＲＮＡ配列（配列番号３６）が得られる。

【0127】

【図16】ａｒｔＰＣＩＶ－５ｘＫＲＡＳｍｕｔ－Ｈ２－ＧＰ－Ｓセグメント（図１０のＳセグメント＃２）のヌクレオチド配列（配列番号２４）。以下のエレメントが、開示される配列の５’から３’に向かって示される。ＰＩＣＶ ｐ１８ Ｓセグメントに基づく５’非翻訳領域（ＵＴＲ）は小文字で示され、ＫＲＡＳｍｕｔ－Ｈ２導入遺伝子は太字で示され、ＰＩＣＶ ｐ１８ Ｓセグメントに基づく遺伝子間領域（ＩＧＲ）は四角で囲んで示され、ＰＩＣＶ ｐ１８に基づく糖タンパク質（ＧＰ）は下線で示され、ＰＩＣＶ ｐ１８ Ｓセグメントに基づく３’非翻訳領域（ＵＴＲ）は小文字で示される。ゲノムセグメントはＲＮＡであり、配列番号２４の配列はＤＮＡで示されるが、配列番号２４の全てのチミジン（「Ｔ」）をウリジン（「Ｕ」）に交換することでＲＮＡ配列（配列番号３７）が得られる。

【0128】

【図17】ａｒｔＬＣＭＶ－５ｘＫＲＡＳｍｕｔ－Ｈ１－ＮＰ－Ｓセグメント（図１０のＳセグメント＃１）のヌクレオチド配列（配列番号２７）。以下のエレメントが、開示される配列の５’から３’に向かって示される。ＬＣＭＶ ｃｌ１３ Ｓセグメントに基づく５’非翻訳領域（ＵＴＲ）は小文字で示され、ＫＲＡＳｍｕｔ－Ｈ１導入遺伝子は太字で示され、ＬＣＭＶ ｃｌ１３ Ｓセグメントに基づく遺伝子間領域（ＩＧＲ）は四角で囲んで示され、ＬＣＭＶ ｃｌ１３に基づく核タンパク質（ＮＰ）は下線で示され、ＬＣＭＶ ｃｌ１３ Ｓセグメントに基づく３’非翻訳領域（ＵＴＲ）は小文字で示される。ゲノムセグメントはＲＮＡであり、配列番号２７の配列はＤＮＡで示されるが、配列番号２７の全てのチミジン（「Ｔ」）をウリジン（「Ｕ」）に交換することでＲＮＡ配列（配列番号３８）が得られる。

【0129】

【図18】ａｒｔＬＣＭＶ－５ｘＫＲＡＳｍｕｔ－Ｈ１－ＧＰ－Ｓセグメント（図１０のＳセグメント＃２）のヌクレオチド配列（配列番号２８）。以下のエレメントが、開示される配列の５’から３’に向かって示される。ＬＣＭＶ ｃｌ１３ Ｓセグメントに基づく５’非翻訳領域（ＵＴＲ）は小文字で示され、ＫＲＡＳｍｕｔ－Ｈ１導入遺伝子は太字で示され、ＬＣＭＶ ｃｌ１３ Ｓセグメントに基づく遺伝子間領域（ＩＧＲ）は四角で囲んで示され、ＬＣＭＶ ＷＥに基づく糖タンパク質（ＧＰ）は下線で示され、ＬＣＭＶ ｃｌ１３ Ｓセグメントに基づく３’非翻訳領域（ＵＴＲ）は小文字で示される。ゲノムセグメントはＲＮＡであり、配列番号２８の配列はＤＮＡで示されるが、配列番号２８の全てのチミジン（「Ｔ」）をウリジン（「Ｕ」）に交換することでＲＮＡ配列（配列番号３９）が得られる。

【0130】

【図19】ａｒｔＰＩＣＶ－５ｘＫＲＡＳｍｕｔ－Ｈ１－ＮＰ－Ｓセグメント（図１０のＳセグメント＃１）のヌクレオチド配列（配列番号２９）。以下のエレメントが、開示される配列の５’から３’に向かって示される。ＰＩＣＶ ｐ１８ Ｓセグメントに基づく５’非翻訳領域（ＵＴＲ）は小文字で示され、ＫＲＡＳｍｕｔ－Ｈ１導入遺伝子は太字で示され、ＰＩＣＶ ｐ１８ Ｓセグメントに基づく遺伝子間領域（ＩＧＲ）は四角で囲んで示され、ＰＩＣＶ ｐ１８に基づく核タンパク質（ＮＰ）は下線で示され、ＰＩＣＶ ｐ１８ Ｓセグメントに基づく３’非翻訳領域（ＵＴＲ）は小文字で示される。ゲノムセグメントはＲＮＡであり、配列番号２９の配列はＤＮＡで示されるが、配列番号２９の全てのチミジン（「Ｔ」）をウリジン（「Ｕ」）に交換することでＲＮＡ配列（配列番号４０）が得られる。

【0131】

【図20】ａｒｔＰＣＩＶ－５ｘＫＲＡＳｍｕｔ－Ｈ１－ＧＰ－Ｓセグメント（図１０のＳセグメント＃２）のヌクレオチド配列（配列番号３０）。以下のエレメントが、開示される配列の５’から３’に向かって示される。ＰＩＣＶ ｐ１８ Ｓセグメントに基づく５’非翻訳領域（ＵＴＲ）は小文字で示され、ＫＲＡＳｍｕｔ－Ｈ１導入遺伝子は太字で示され、ＰＩＣＶ ｐ１８ Ｓセグメントに基づく遺伝子間領域（ＩＧＲ）は四角で囲んで示され、ＰＩＣＶ ｐ１８に基づく糖タンパク質（ＧＰ）は下線で示され、ＰＩＣＶ ｐ１８ Ｓセグメントに基づく３’非翻訳領域（ＵＴＲ）は小文字で示される。ゲノムセグメントはＲＮＡであり、配列番号３０の配列はＤＮＡで示されるが、配列番号３０の全てのチミジン（「Ｔ」）をウリジン（「Ｕ」）に交換することでＲＮＡ配列（配列番号４１）が得られる。

【0132】

【図21】変異したＫＲＡＳエピトープの種々の組合せをコードするアレナウイルス粒子の投与後のＨＬＡ－Ｂ＊０７のトランスジェニックマウス（すなわち、ＣＢ６Ｆ１－Ｔｇ（ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２／Ｈ２－Ｋｂ）Ｂ７．ｘｘマウス）におけるＣＤ８ Ｔ細胞応答の誘導。個々の変異したＫＲＡＳエピトープに対するＣＤ８ Ｔ細胞（すなわち、ＩＦＮ－γ＋）応答を、示されたベクターのプライム－ブースト投与後のＨＬＡ－Ｂ＊０７トランスジェニックマウスにおいて、ＥＬＩＳｐｏｔによって解析した。ペプチド刺激を、野生型及び変異特異的ＫＲＡＳベースペプチドを用いて実施した。ＬＣＭＶ及びＰＩＣＶに由来するＮＰベースペプチドの混合物を対照として使用した。ＩＦＮ－γ＋ＳＦＵ（１０^５個の細胞当たり）を、個々のマウスについて、算術平均±標準偏差として示す。

【0133】

【図22】本開示の８．５節に開示される実施例の研究設計。

【0134】

【図23】本開示の８．６節に開示される実施例の研究設計。

【0135】

【図24】変異したＫＲＡＳエピトープの組合せをコードするアレナウイルス粒子の投与後のＨＬＡ－Ａ＊１１のトランスジェニックマウス（すなわち、ＣＢ６Ｆ１－Ｔｇ（ＨＬＡ－Ａ＊１１０１／Ｈ２－Ｋｂ）Ａ１１．０１マウス）におけるＣＤ８ Ｔ細胞応答の誘導。個々の変異したＫＲＡＳエピトープに対するＣＤ８ Ｔ細胞（すなわち、ＩＦＮ－γ＋）応答を、示されたベクターのプライム投与後のＨＬＡ－Ａ＊１１トランスジェニックマウスにおいて、ＥＬＩＳｐｏｔによって解析した。ペプチド刺激を、野生型及び変異特異的ＫＲＡＳベースペプチドを用いて実施した。ＬＣＭＶに由来するＮＰベースペプチドの混合物を対照として使用した。ＰＩＣＶに由来するＮＰベースペプチドは、技術的エラーのために検出されなかった。ＩＦＮ－γ＋ＳＦＵ（１０^５個の細胞当たり）を、個々のマウスについて、算術平均±標準偏差として示す。

【発明を実施するための形態】

【0136】

５．発明を実施するための形態
処置を必要とする対象における腫瘍性疾患（５．１節を参照）を処置するための方法であって、対象に、アレナウイルス粒子（５．３～５．６節に規定されるアレナウイルス粒子を参照）であって、変異型ＫＲＡＳ（５．７節を参照）の抗原性断片をコードするヌクレオチド配列のみを含むか、または変異したがんドライバー遺伝子（５．８節を参照、例えば変異型ＴＰ５３）もしくは腫瘍関連抗原（５．９節を参照）の抗原性断片をコードするヌクレオチド配列をさらに含むアレナウイルスゲノムを含有するように操作されている、アレナウイルス粒子を送達することを含む、方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、腫瘍性疾患を処置するための方法は、第１のアレナウイルス粒子及び第２のアレナウイルス粒子を投与することを含み、ここで、第１のアレナウイルス粒子及び第２のアレナウイルス粒子は、同じまたは異なる抗原性断片をコードする（５．１０節を参照）。

【0137】

ある特定の実施形態では、様々な抗原性断片（変異型ＫＲＡＳ、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）、及び／または腫瘍関連抗原に由来）は、同じ転写物上に存在する、アレナウイルスゲノムの同じ位置に存在する、同じゲノムセグメント上にある、及び／または同じアレナウイルスゲノムに存在する。ある特定の実施形態では、様々な抗原性断片（変異型ＫＲＡＳ、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）、及び／または腫瘍関連抗原に由来）は、別個の転写物上に存在する、アレナウイルスゲノムの別個の位置に存在する、別個のゲノムセグメント上に存在する、及び／または別個のアレナウイルスゲノムに存在する。

【0138】

５．１腫瘍性疾患
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される方法及び組成物で処置することができる腫瘍性疾患としては、以下に列挙される腫瘍性疾患が挙げられる。したがって、本明細書に記載されるアレナウイルス粒子のゲノムによってコードされる変異型ＫＲＡＳ（５．７節を参照）、変異したがんドライバー遺伝子（５．８節を参照、例えば変異型ＴＰ５３）、または腫瘍関連抗原（５．９節を参照）は、列挙される腫瘍性疾患のうちの１つに関連し得るかまたはそれに特異的であり得る。腫瘍性疾患としては、急性リンパ芽球性白血病；急性リンパ芽球性リンパ腫；急性リンパ性白血病；急性骨髄性白血病；急性骨髄白血病（成人／小児）；副腎皮質癌；ＡＩＤＳ関連癌；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；肛門癌；虫垂癌；星細胞腫；非定型奇形腫様／ラブドイド腫瘍；基底細胞癌；胆管癌、肝外（胆管細胞癌）；膀胱癌；骨の骨肉腫／悪性線維性組織球腫；脳癌（成人／小児）；脳腫瘍、小脳星細胞腫（成人／小児）；脳腫瘍、大脳星細胞腫／悪性神経膠腫脳腫瘍；脳腫瘍、上衣腫；脳腫瘍、髄芽腫；脳腫瘍、テント上原始神経外胚葉性腫瘍；脳腫瘍、視路及び視床下部神経膠腫；脳幹神経膠腫；乳癌；気管支腺腫／カルチノイド；気管支腫瘍；バーキットリンパ腫；小児のがん；カルチノイド消化管腫瘍；カルチノイド腫瘍；成人の癌腫、原発不明部位；原発不明の癌腫；中枢神経系胚芽腫；中枢神経系リンパ腫、原発性；子宮頸癌；小児副腎皮質癌；小児癌；小児大脳星細胞腫；脊索腫、小児；慢性リンパ性白血病；慢性骨髄性白血病；慢性骨髄白血病；慢性骨髄増殖性障害；結腸癌；結腸直腸癌；頭蓋咽頭腫；皮膚Ｔ細胞リンパ腫；線維形成性小円形細胞腫瘍；肺気腫；子宮内膜癌；上衣芽腫；上衣腫；食道癌；ユーイングファミリー腫瘍におけるユーイング肉腫；頭蓋外胚細胞腫瘍；性腺外胚細胞腫瘍；肝外胆管癌；胆嚢癌；胃（胃の）癌；胃カルチノイド；消化管カルチノイド腫瘍；消化管間質腫瘍；胚細胞腫瘍：頭蓋外、性腺外、または卵巣妊娠性絨毛性腫瘍；妊娠性絨毛性腫瘍、原発不明部位；神経膠腫；脳幹の神経膠腫；神経膠腫、小児視路及び視床下部；有毛細胞白血病；頭頸部癌；心臓癌；肝細胞（肝）癌；ホジキンリンパ腫；下咽頭癌；視床下部及び視路神経膠腫；眼内黒色腫；島細胞癌（膵島）；カポジ肉腫；腎癌（腎細胞癌）；ランゲルハンス細胞組織球症；喉頭癌；口唇及び口腔内癌；脂肪肉腫；肝癌（原発性）；肺癌、非小細胞；肺癌、小細胞；リンパ腫、原発性中枢神経系；マクログロブリン血症、ワルデンシュトレーム；男性乳癌；骨の悪性線維性組織球腫／骨肉腫；髄芽腫；髄上皮腫；黒色腫；黒色腫、眼内（眼）；メルケル細胞癌；メルケル細胞皮膚癌；中皮腫；中皮腫、成人悪性；原発不明転移性扁平上皮性頸部癌；口癌；多発性内分泌腫瘍症候群；多発性骨髄腫／形質細胞腫瘍；菌状息肉症、骨髄異形成症候群；骨髄異形成／骨髄増殖性疾患；骨髄性白血病、慢性；骨髄白血病、成人急性；骨髄白血病、小児急性；骨髄腫、多発性（骨髄のがん）；骨髄増殖性障害、慢性；鼻腔及び副鼻腔癌；上咽頭癌；神経芽腫、非小細胞肺癌；非ホジキンリンパ腫；オリゴデンドロ神経膠腫；口腔癌；口腔内癌；中咽頭癌；骨肉腫／骨の悪性線維性組織球腫；卵巣癌；卵巣上皮癌（表層上皮性・間質性腫瘍）；卵巣胚細胞腫瘍；卵巣低悪性度腫瘍；膵癌；膵癌、島細胞；乳頭腫；副鼻腔及び鼻腔癌；副甲状腺癌；陰茎癌；咽頭癌；褐色細胞腫；松果体星細胞腫；松果体胚細胞腫；中間分化型松果体実質腫瘍；松果体芽腫及びテント上原始神経外胚葉性腫瘍；下垂体腫瘍；下垂体腺腫；形質細胞新生物／多発性骨髄腫；胸膜肺芽腫；原発性中枢神経系リンパ腫；前立腺癌；直腸癌；腎細胞癌（腎癌）；腎盂及び尿管、移行細胞癌；１５番染色体上のＮＵＴ遺伝子が関与する気道癌；網膜芽細胞腫；横紋筋肉腫、小児；唾液腺癌；肉腫、ユーイングファミリー腫瘍；セザリー症候群；皮膚癌（黒色腫）；皮膚癌（非黒色腫）；小細胞肺癌；小腸癌 軟部組織肉腫；軟部組織肉腫；脊髄腫瘍；扁平上皮癌；原発不明扁平上皮性頸部癌、転移性；胃の（胃）癌；テント上原始神経外胚葉性腫瘍；Ｔ細胞リンパ腫、皮膚（菌状息肉症及びセザリー症候群）；精巣癌；喉癌；胸腺腫；胸腺腫及び胸腺癌；甲状腺癌；小児甲状腺癌；腎盂及び尿管の移行細胞癌；尿道癌；子宮癌、子宮内膜；子宮肉腫；膣癌；外陰癌；ならびにウィルムス腫瘍が挙げられる。

【0139】

ある特定の実施形態では、処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法は、アレナウイルス粒子を対象に投与することを含み、ここで、アレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳ（５．７節を参照）及び／または変異型ＴＰ５３（５．８節を参照）の抗原性断片をコードする。ある特定の実施形態では、アレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードし、ここで、ＫＲＡＳの変異は、膵癌、結腸直腸癌、肺腺癌、肺扁平上皮癌、または非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）に関連し得るかまたはそれに特異的であり得る。ある特定の実施形態では、処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法は、アレナウイルス粒子を対象に投与することを含み、ここで、アレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードし、ＫＲＡＳの変異は、膵癌、結腸直腸癌、肺腺癌に関連し得るかまたはそれに特異的であり得、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１３Ｄ、Ａ１４６Ｔ、Ｇ１２Ｓ、Ｑ６１Ｈ、Ｇ１２Ａ、及び／またはＱ６１Ｒである。ある特定の実施形態では、処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法は、アレナウイルス粒子を対象に投与することを含み、ここで、アレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードし、ＫＲＡＳの変異は、膵癌、結腸直腸癌、肺腺癌に関連し得るかまたはそれに特異的であり得、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１３Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、及びＧ１２Ｒである。ある特定の実施形態では、処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法は、アレナウイルス粒子を対象に投与することを含み、ここで、アレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードし、ＫＲＡＳの変異は、膵癌に関連し得るかまたはそれに特異的であり得、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｒ、Ｑ６１Ｈ、Ｑ６１Ｒ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｓ、及び／またはＧ１２Ａである。ある特定の実施形態では、処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法は、アレナウイルス粒子を対象に投与することを含み、ここで、アレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳ及び／または変異型ＴＰ５３の抗原性断片をコードし、ＫＲＡＳ及びＴＰ５３の変異は、膵癌に関連し得るかまたはそれに特異的であり得、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｒ及び／またはＧ１２Ｖであり、ＴＰ５３の変異は、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ２４８Ｗ及び／またはＲ２７３Ｃである。ある特定の実施形態では、処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法は、アレナウイルス粒子を対象に投与することを含み、ここで、アレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳ及び／または変異型ＴＰ５３の抗原性断片をコードし、抗原性断片は変異を含み、ＫＲＡＳ及びＴＰ５３の変異は、結腸直腸癌または肺腺癌に関連し得るかまたはそれに特異的であり得、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１３Ｄ、Ａ１４６Ｔ及び／またはＧ１２Ｃであり、ＴＰ５３の変異は、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ２７３Ｈ及び／またはＲ２４８Ｗである。ある特定の実施形態では、アレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳ及び／または変異型ＴＰ５３の抗原性断片をコードし、ここで、抗原性断片は変異を含み、ＫＲＡＳ及びＴＰ５３の変異は、肺腺癌に関連し得るかまたはそれに特異的であり得、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｄ、及び／またはＧ１２Ｓであり、ＴＰ５３の変異はＲ１７５Ｈである。ある特定の実施形態では、アレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳ及び／または変異型ＴＰ５３の抗原性断片をコードし、ここで、抗原性断片は変異を含み、ＫＲＡＳ及びＴＰ５３の変異は、膵癌、結腸直腸癌または肺腺癌に関連し得るかまたはそれに特異的であり得、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１３Ｄ及び／またはＧ１２Ｖであり、ＴＰ５３の変異は、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ２７３Ｈ及び／またはＲ２４８Ｗである。

【0140】

ある特定の実施形態では、処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法は、第２のアレナウイルス粒子を対象に投与することをさらに含み、ここで、第２のアレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳ（５．７節を参照）及び／または変異型ＴＰ５３（５．８節を参照）の抗原性断片をコードする。ある特定の実施形態では、第２のアレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードし、ここで、ＫＲＡＳの変異は、膵癌に関連し得るかまたはそれに特異的であり得る。ある特定の実施形態では、第２のアレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードし、ここで、ＫＲＡＳの変異は、膵癌に関連し得るかまたはそれに特異的であり得、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｒ、Ｑ６１Ｈ、Ｑ６１Ｒ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｓ、及び／またはＧ１２Ａである。ある特定の実施形態では、第２のアレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードし、ここで、ＫＲＡＳの変異は、膵癌、結腸直腸癌、肺腺癌に関連し得るかまたはそれに特異的であり得、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１３Ｄ、Ａ１４６Ｔ、Ｇ１２Ｓ、Ｑ６１Ｈ、Ｇ１２Ａ、及び／またはＱ６１Ｒである。ある特定の実施形態では、第２のアレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳ及び／または変異型ＴＰ５３の抗原性断片をコードし、ここで、ＫＲＡＳ及びＴＰ５３の変異は、膵癌に関連し得るかまたはそれに特異的であり得、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｒ及び／またはＧ１２Ｖであり、ＴＰ５３の変異は、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ２４８Ｗ及び／またはＲ２７３Ｃである。ある特定の実施形態では、第２のアレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳ及び／または変異型ＴＰ５３の抗原性断片をコードし、ここで、ＫＲＡＳ及びＴＰ５３の変異は、結腸直腸癌または肺腺癌に関連し得るかまたはそれに特異的であり得、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１３Ｄ、Ａ１４６Ｔ及び／またはＧ１２Ｃであり、ＴＰ５３の変異は、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ２７３Ｈ及び／またはＲ２４８Ｗである。ある特定の実施形態では、第２のアレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳ及び／または変異型ＴＰ５３の抗原性断片をコードし、ここで、ＫＲＡＳ及びＴＰ５３の変異は、膵癌、結腸直腸癌、または肺腺癌に関連し得るかまたはそれに特異的であり得、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１３Ｄ及び／またはＧ１２Ｖであり、ＴＰ５３の変異は、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ２７３Ｈ及び／またはＲ２４８Ｗである。ある特定の実施形態では、第２のアレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳ及び／または変異型ＴＰ５３の抗原性断片をコードし、ここで、ＫＲＡＳ及びＴＰ５３の変異は、肺腺癌に関連し得るかまたはそれに特異的であり得、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｄ、及び／またはＧ１２Ｓであり、ＴＰ５３の変異はＲ１７５Ｈである。

【0141】

ある特定の実施形態では、処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法は、アレナウイルス粒子を対象に投与することを含み、ここで、アレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳ（５．７節を参照）、変異したがんドライバー遺伝子（５．８節を参照）、または腫瘍関連抗原（５．９節を参照）の抗原性断片をコードする。ある特定の実施形態では、アレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードし、ここで、ＫＲＡＳの変異は、膵癌、結腸直腸癌、肺腺癌、肺扁平上皮癌、または非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）に関連し得るかまたはそれに特異的であり得る。ある特定の実施形態では、処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法は、アレナウイルス粒子を対象に投与することを含み、ここで、アレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードし、ＫＲＡＳの変異は、膵癌に関連し得るかまたはそれに特異的であり得、ＫＲＡＳの変異は、ＫＲＡＳは、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｒ、Ｑ６１Ｈ、Ｑ６１Ｒ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｓ、及び／またはＧ１２Ａである。ある特定の実施形態では、処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法は、アレナウイルス粒子を対象に投与することを含み、ここで、アレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳ、変異型ＴＰ５３、及び／または変異型Ｕ２ＡＦ１の抗原性断片をコードし、ＫＲＡＳ、ＴＰ５３及び／またはＵ２ＡＦ１の変異は、膵癌に関連し得るかまたはそれに特異的であり得、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｒ、Ｑ６１Ｈ及び／またはＱ６１Ｒであり、ＴＰ５３の変異は、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ２４８Ｗ、Ｇ２４５Ｓ、Ｒ２８２Ｗ、Ｒ２４８Ｑ及び／またはＲ２７３Ｃであり、Ｕ２ＡＦ１の変異はＳ３４Ｆである。ある特定の実施形態では、処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法は、アレナウイルス粒子を対象に投与することを含み、ここで、アレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードし、ＫＲＡＳの変異は、膵癌、結腸直腸癌または肺腺癌に関連し得るかまたはそれに特異的であり得、ＫＲＡＳの変異は、ＫＲＡＳは、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１３Ｄ、Ａ１４６Ｔ、Ｇ１２Ｓ、Ｑ６１Ｈ、Ｇ１２Ａ、及び／またはＱ６１Ｒである。ある特定の実施形態では、処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法は、アレナウイルス粒子を対象に投与することを含み、ここで、アレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳ、変異型ＢＲＡＦ、変異型ＴＰ５３、変異型ＦＢＸＷ７及び／または変異型ＰＩＫ３ＣＡの抗原性断片をコードし、ＫＲＡＳ、ＢＲＡＦ、ＴＰ５３、ＦＢＸＷ７及び／またはＰＩＫ３ＣＡの変異は、結腸直腸癌または肺腺癌に関連し得るかまたはそれに特異的であり得、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１３Ｄ、Ａ１４６Ｔ及び／またはＧ１２Ｃであり、ＢＲＡＦの変異はＶ６００Ｅであり、ＴＰ５３の変異は、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ２７３Ｈ及び／またはＲ２４８Ｗであり、ＦＢＸＷ７の変異はＲ４６５Ｈであり、ＰＩＫ３ＣＡの変異は、Ｅ５４５Ｋ及び／またはＨ１０４７Ｒである。ある特定の実施形態では、処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法は、アレナウイルス粒子を対象に投与することを含み、ここで、アレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳ、変異型ＢＲＡＦ、変異型ＰＩＫ３ＣＡ、変異型ＥＧＦＲ、変異型ＴＰ５３及び／または変異型Ｕ２ＡＦ１の抗原性断片をコードし、ＫＲＡＳ、ＢＲＡＦ、ＰＩＫ３ＣＡ、ＥＧＦＲ、ＴＰ５３及び／またはＵ２ＡＦ１の変異は、膵癌、結腸直腸癌または肺腺癌に関連し得るかまたはそれに特異的であり得、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１３Ｄ及び／またはＧ１２Ｖであり、ＢＲＡＦの変異はＶ６００Ｅであり、ＰＩＫ３ＣＡの変異はＥ５４５Ｋであり、ＥＧＦＲの変異はＬ８５８Ｒであり、ＴＰ５３の変異は、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ２７３Ｈ及び／またはＲ２４８Ｗであり、Ｕ２ＡＦ１の変異はＳ３４Ｆである。ある特定の実施形態では、処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法は、アレナウイルス粒子を対象に投与することを含み、ここで、アレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳ、変異型ＴＰ５３、変異型Ｕ２ＡＦ１、変異型ＰＩＫ３ＣＡ、変異型ＥＧＦＲ及び／または変異型ＢＲＡＦの抗原性断片をコードし、ＫＲＡＳ、ＴＰ５３、Ｕ２ＡＦ１、ＰＩＫ３ＣＡ、ＥＧＦＲ及び／またはＢＲＡＦの変異は、肺腺癌に関連し得るかまたはそれに特異的であり得、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｄ、及び／またはＧ１２Ｓであり、ＴＰ５３の変異はＲ１７５Ｈであり、Ｕ２ＡＦ１の変異はＳ３４Ｆであり、ＥＧＦＲの変異は、Ｌ８５８Ｒ、Ｌ８６１Ｑ及び／またはＥ７４６＿Ａ７５０ｄｅｌであり、ＰＩＫ３ＣＡの変異は、Ｅ５４５Ｋ及び／またはＥ５４２Ｋであり、ＢＲＡＦの変異はＶ６００Ｅである。ある特定の実施形態では、処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法は、アレナウイルス粒子を対象に投与することを含み、ここで、アレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳ、変異型ＡＫＴ１、変異型ＢＲＡＦ、変異型ＨＥＲ２、変異型ＭＥＫ１、変異型ＭＥＴ、変異型ＮＲＡＳ、変異型ＰＩＫ３ＣＡ及び／または変異型ＲＥＴの抗原性断片をコードし、ＫＲＡＳ、ＡＫＴ１、ＢＲＡＦ、ＨＥＲ２、ＭＥＫ１、ＭＥＴ、ＮＲＡＳ、ＰＩＫ３ＣＡ及び／またはＲＥＴの変異は、ＮＳＣＬＣに関連し得るかまたはそれに特異的であり得る。

【0142】

ある特定の実施形態では、処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法は、第２のアレナウイルス粒子を対象に投与することをさらに含み、ここで、第２のアレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳ、変異したがんドライバー遺伝子、または腫瘍関連抗原の抗原性断片をコードする。ある特定の実施形態では、第２のアレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードし、ここで、ＫＲＡＳの変異は、膵癌に関連し得るかまたはそれに特異的であり得、ＫＲＡＳの変異は、ＫＲＡＳは、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｒ、Ｑ６１Ｈ、Ｑ６１Ｒ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｓ、及び／またはＧ１２Ａである。ある特定の実施形態では、処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法は、第２のアレナウイルス粒子を対象に投与することをさらに含み、ここで、第２のアレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳ、変異型ＴＰ５３、及び／または変異型Ｕ２ＡＦ１の抗原性断片をコードし、ＫＲＡＳ、ＴＰ５３及び／またはＵ２ＡＦ１の変異は、膵癌に関連し得るかまたはそれに特異的であり得、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｒ、Ｑ６１Ｈ及び／またはＱ６１Ｒであり、ＴＰ５３の変異は、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ２４８Ｗ、Ｇ２４５Ｓ、Ｒ２８２Ｗ、Ｒ２４８Ｑ及び／またはＲ２７３Ｃであり、Ｕ２ＡＦ１の変異はＳ３４Ｆである。ある特定の実施形態では、処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法は、第２のアレナウイルス粒子を対象に投与することをさらに含み、ここで、第２のアレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードし、ＫＲＡＳの変異は、膵癌、結腸直腸癌または肺腺癌に関連し得るかまたはそれに特異的であり得、ＫＲＡＳの変異は、ＫＲＡＳは、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１３Ｄ、Ａ１４６Ｔ、Ｇ１２Ｓ、Ｑ６１Ｈ、Ｇ１２Ａ、及び／またはＱ６１Ｒである。ある特定の実施形態では、処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法は、第２のアレナウイルス粒子を対象に投与することをさらに含み、ここで、第２のアレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳ、変異型ＢＲＡＦ、変異型ＴＰ５３、変異型ＦＢＸＷ７及び／または変異型ＰＩＫ３ＣＡの抗原性断片をコードし、ＫＲＡＳ、ＢＲＡＦ、ＴＰ５３、ＦＢＸＷ７及び／またはＰＩＫ３ＣＡの変異は、結腸直腸癌または肺腺癌に関連し得るかまたはそれに特異的であり得、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１３Ｄ、Ａ１４６Ｔ及び／またはＧ１２Ｃであり、ＢＲＡＦの変異はＶ６００Ｅであり、ＴＰ５３の変異は、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ２７３Ｈ及び／またはＲ２４８Ｗであり、ＦＢＸＷ７の変異はＲ４６５Ｈであり、ＰＩＫ３ＣＡの変異は、Ｅ５４５Ｋ及び／またはＨ１０４７Ｒである。ある特定の実施形態では、処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法は、第２のアレナウイルス粒子を対象に投与することをさらに含み、ここで、第２のアレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳ、変異型ＢＲＡＦ、変異型ＰＩＫ３ＣＡ、変異型ＥＧＦＲ、変異型ＴＰ５３及び／または変異型Ｕ２ＡＦ１の抗原性断片をコードし、ＫＲＡＳ、ＢＲＡＦ、ＰＩＫ３ＣＡ、ＥＧＦＲ、ＴＰ５３及び／またはＵ２ＡＦ１の変異は、膵癌、結腸直腸癌または肺腺癌に関連し得るかまたはそれに特異的であり得、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１３Ｄ及び／またはＧ１２Ｖであり、ＢＲＡＦの変異はＶ６００Ｅであり、ＰＩＫ３ＣＡの変異はＥ５４５Ｋであり、ＥＧＦＲの変異はＬ８５８Ｒであり、ＴＰ５３の変異は、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ２７３Ｈ及び／またはＲ２４８Ｗであり、Ｕ２ＡＦ１の変異はＳ３４Ｆである。ある特定の実施形態では、処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法は、第２のアレナウイルス粒子を対象に投与することをさらに含み、ここで、第２のアレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳ、変異型ＴＰ５３、変異型Ｕ２ＡＦ１、変異型ＰＩＫ３ＣＡ、変異型ＥＧＦＲ及び／または変異型ＢＲＡＦの抗原性断片をコードし、ＫＲＡＳ、ＴＰ５３、Ｕ２ＡＦ１、ＰＩＫ３ＣＡ、ＥＧＦＲ及び／またはＢＲＡＦの変異は、肺腺癌に関連し得るかまたはそれに特異的であり得、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｄ、及び／またはＧ１２Ｓであり、ＴＰ５３の変異はＲ１７５Ｈであり、Ｕ２ＡＦ１の変異はＳ３４Ｆであり、ＥＧＦＲの変異は、Ｌ８５８Ｒ、Ｌ８６１Ｑ及び／またはＥ７４６＿Ａ７５０ｄｅｌであり、ＰＩＫ３ＣＡの変異は、Ｅ５４５Ｋ及び／またはＥ５４２Ｋであり、ＢＲＡＦの変異はＶ６００Ｅである。ある特定の実施形態では、処置を必要とする対象における腫瘍性疾患を処置するための方法は、第２のアレナウイルス粒子を対象に投与することをさらに含み、ここで、第２のアレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳ、変異型ＡＫＴ１、変異型ＢＲＡＦ、変異型ＨＥＲ２、変異型ＭＥＫ１、変異型ＭＥＴ、変異型ＮＲＡＳ、変異型ＰＩＫ３ＣＡ及び／または変異型ＲＥＴの抗原性断片をコードし、ＡＫＴ１、ＢＲＡＦ、ＨＥＲ２、ＭＥＫ１、ＭＥＴ、ＮＲＡＳ、ＰＩＫ３ＣＡ及び／またはＲＥＴの変異は、ＮＳＣＬＣに関連し得るかまたはそれに特異的であり得る。

【0143】

５．２アレナウイルス構築物
ある特定の実施形態では、本明細書における方法及び組成物のために操作され得るアレナウイルス粒子としては、以下に列挙される構築物が挙げられる。ある特定の実施形態では、アレナウイルス構築物は、国際特許出願公開第ＷＯ２００９／０８３２１０号（その全体が本明細書に組み込まれる）に記載されているような非複製アレナウイルス構築物である。５．３節を参照されたい。ある特定の実施形態では、アレナウイルス構築物は、国際特許出願公開第ＷＯ２０１６／０７５２５０号及び同第ＷＯ２０２１／０８９８５３号（どちらもその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されているような複製または非複製３セグメント型アレナウイルス構築物である。５．４及び５．５節を参照されたい。

【0144】

本明細書で提供される方法及び組成物において使用されるアレナウイルスは、例えばラッサウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）、モバラウイルス、モペイアウイルス、もしくはイッピイウイルスなどの旧世界ウイルス、または例えばアマパリウイルス、フレキサルウイルス、グアナリトウイルス、フニンウイルス、ラチノウイルス、マチュポウイルス、オリベロスウイルス、パラナウイルス、ピチンデウイルス、ピリタルウイルス、サビアウイルス、タカリベウイルス、タミアミウイルス、ベアキャニオンウイルス、アルパフアヨウイルス（ＡＬＬＶ）、もしくはホワイトウォーターアロヨウイルスなどの新世界ウイルスであり得る。本明細書で提供される方法及び組成物において使用されるアレナウイルスは、例えば、アレナウイルス、マーマアレナウイルス（ｍａｍｍａｒｅｎａｖｉｒｕｓ）、旧世界マーマアレナウイルス、新世界マーマアレナウイルス、クレードＡの新世界マーマアレナウイルス、クレードＢの新世界マーマアレナウイルス、クレードＣの新世界マーマアレナウイルス、またはクレードＤの新世界マーマアレナウイルスであり得る。本明細書で提供される方法及び組成物において使用されるアレナウイルスは、アルパフアヨウイルス、アルシャウイルス、フニンウイルス、ベアキャニオンウイルス、サビアウイルス、ピチンデウイルス、チャパレウイルス、リジャンウイルス、クピシウイルス、フレキサルウイルス、ガイロウイルス、グアナリトウイルス、イッピイウイルス、ラッサウイルス、ラチノウイルス、ルーイリバーウイルス、ルジョウイルス、ルナウイルス、ルリウイルス、ルンクウイルス（Ｌｕｎｋ ｖｉｒｕｓ）、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、マチュポウイルス、マリエンタルウイルス、メリノウォークウイルス、モバラウイルス、モペイアウイルス、モロゴロウイルス、オカハンジャウイルス、オリベロスウイルス、パラナウイルス、ピリタルウイルス、アポレーウイルス、リュウキュウウイルス、アマパリウイルス、ソルウェジウイルス、スーリウイルス、タカリベウイルス、タミアミウイルス、温州ウイルス、ホワイトウォーターアロヨウイルス、ビッグブラッシータンクウイルス、カタリナウイルス、スキナータンクウイルス、トントクリークウイルス、またはシャプーリウイルスを含むがこれらに限定されないマーマアレナウイルスであり得る。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される方法及び組成物において使用されるアレナウイルスは、クレードＡのアレナウイルスである。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される方法及び組成物において使用されるアレナウイルスは、ピチンデウイルスである。

【0145】

５．３複製欠陥アレナウイルス粒子
例示的な複製欠陥アレナウイルス粒子は、例えば、国際特許出願公開第ＷＯ２００９／０８３２１０号（その全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される変異型ＫＲＡＳ（５．７節を参照）、変異したがんドライバー遺伝子（５．８節を参照、例えば変異型ＴＰ５３）、または腫瘍関連抗原（５．９節を参照）をコードするヌクレオチド配列を有する複製欠陥（例えば、複製欠損）アレナウイルス粒子は、本明細書で提供される方法及び組成物において使用することができる。具体的な実施形態では、本明細書に記載される複製欠陥アレナウイルス粒子は、本明細書に記載される複製可能なアレナウイルス粒子と組み合わせて、本明細書で提供される方法及び組成物において使用される。より具体的な実施形態では、本明細書に記載される複製欠陥アレナウイルス粒子は、本明細書に記載される複製可能なアレナウイルス粒子と組み合わせて、本明細書で提供される方法及び組成物において使用され、ここで、上記複製可能なアレナウイルス粒子は、対象の腫瘍に直接注射される。

【0146】

ある特定の実施形態では、結果として得られるウイルスがさらなる感染性子孫ウイルス粒子を産生することができないように、ＧＰ、ＮＰ、Ｚタンパク質、またはＬタンパク質をコードするＯＲＦが除去されているかまたは機能的に不活化しているアレナウイルス粒子が本明細書で提供される。１つまたは複数のＯＲＦが欠失しているかまたは機能的に不活化している遺伝子改変ゲノムを含むアレナウイルス粒子は、補完細胞（すなわち、欠失しているかまたは機能的に不活化しているアレナウイルスＯＲＦを発現する細胞）において産生され得る。結果として得られるアレナウイルス粒子の遺伝物質は、宿主細胞への感染時に宿主細胞に転移することができ、上記宿主細胞において、遺伝物質は発現及び増幅され得る。

【0147】

ある特定の実施形態では、そのような異種ヌクレオチド配列はポリシストロン性であり得、そのため、最終的に、単一の異種ヌクレオチド配列／転写物から複数のポリペプチドが産生される。これは、例えば、内部リボソーム進入部位を使用して実現することができる。ある特定の実施形態では、そのようなポリペプチドの１つは、変異型ＫＲＡＳであり得る。ある特定の実施形態では、そのような異種ヌクレオチド配列は、変異型ＫＲＡＳ、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）、または腫瘍関連抗原の抗原性断片をコードし得る。

【0148】

ある特定の実施形態では、アレナウイルスのＯＲＦは、欠失しているかまたは機能的に不活化しており、本明細書に記載される変異型ＫＲＡＳ、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）、または腫瘍関連抗原の抗原性断片をコードするヌクレオチド配列で置き換えられている。具体的な実施形態では、アレナウイルスの糖タンパク質ＧＰをコードするＯＲＦは、欠失しているかまたは機能的に不活化している。ある特定の実施形態では、遺伝子の機能不活化は、任意の翻訳産物を取り除く。ある特定の実施形態では、機能不活化とは、ある程度の翻訳を可能にするが、その翻訳産物がもはや機能性ではなく、野生型タンパク質の代わりとなることができない、遺伝子変更を指す。

【0149】

ある特定の実施形態では、ＧＰ、ＮＰ、Ｚタンパク質、及びＬタンパク質をコードする４つのアレナウイルスＯＲＦのうちの少なくとも１つが、除去され、本明細書で提供される変異型ＫＲＡＳ、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）、または腫瘍関連抗原の抗原性断片をコードするヌクレオチド配列で置き換えられている。別の実施形態では、ＧＰ、ＮＰ、Ｚタンパク質及びＬタンパク質をコードする少なくとも１つのＯＲＦ、少なくとも２つのＯＲＦ、少なくとも３つのＯＲＦ、または少なくとも４つのＯＲＦが、除去され、本明細書で提供される変異型ＫＲＡＳ、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）、または腫瘍関連抗原の抗原性断片をコードするヌクレオチド配列で置き換えられている可能性がある。具体的な実施形態では、ＧＰ、ＮＰ、Ｚタンパク質、及びＬタンパク質をコードする４つのＯＲＦのうちの１つのみが、除去され、本明細書で提供される変異型ＫＲＡＳ、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）、または腫瘍関連抗原の抗原性断片をコードするヌクレオチド配列で置き換えられている。より具体的な実施形態では、アレナウイルスゲノムセグメントのＧＰをコードするＯＲＦが除去されている。別の具体的な実施形態では、アレナウイルスゲノムセグメントのＮＰをコードするＯＲＦが除去されている。より具体的な実施形態では、アレナウイルスゲノムセグメントのＺタンパク質をコードするＯＲＦが除去されている。さらに別の具体的な実施形態では、アレナウイルスゲノムセグメントのＬタンパク質をコードするＯＲＦが除去されている。

【0150】

したがって、ある特定の実施形態では、本明細書で提供されるアレナウイルス粒子は、（ｉ）ＧＰ、ＮＰ、Ｚタンパク質、またはＬタンパク質をコードするＯＲＦが除去されており、（ｉｉ）除去されているＯＲＦが、本明細書で提供される変異型ＫＲＡＳ（５．７節を参照）、変異したがんドライバー遺伝子（５．８節を参照、例えば変異型ＴＰ５３）、または腫瘍関連抗原（５．９節を参照）をコードするヌクレオチド配列で置き換えられている、ゲノムセグメントを含む。

【0151】

ある特定の実施形態では、アレナウイルス粒子の補完細胞における成長及び感染力は、本明細書で提供される変異型ＫＲＡＳ（５．７節を参照）、変異したがんドライバー遺伝子（５．８節を参照、例えば変異型ＴＰ５３）、または腫瘍関連抗原（５．９節を参照）の抗原性断片をコードするヌクレオチド配列による影響を受けない。

【0152】

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される変異型ＫＲＡＳ（５．７節を参照）の抗原性断片をコードするヌクレオチド配列を含む本明細書で提供されるアレナウイルス粒子またはアレナウイルスゲノムセグメントは、変異したがんドライバー遺伝子または腫瘍関連抗原の少なくとも１つの抗原性断片をコードする少なくとも１つのヌクレオチド配列をさらに含み得る。ある特定の実施形態では、変異したがんドライバー遺伝子は、変異型ＡＫＴ１、変異型ＢＲＡＦ、変異型ＨＥＲ２、変異型ＭＥＫ１、変異型ＭＥＴ、変異型ＮＲＡＳ、変異型ＰＩＫ３ＣＡ、変異型ＲＥＴ、変異型ＡＰＣ、変異型ＴＰ５３、変異型ＥＧＦＲ、変異型ＦＢＸＷ７、変異型ＳＭＡＤ４、変異型ＧＮＡＳ、変異型ＥＲＢＢ２、変異型ＥＲＢＢ３、変異型ＣＤＫＮ２Ａ、変異型ＣＴＮＮＢ１、及び／または変異型Ｕ２ＡＦ１である（５．８節を参照）。ある特定の実施形態では、腫瘍関連抗原は、ＢＩＲＣファミリー、ＣＥＡＣＡＭファミリー、ＣＴＡファミリー、ＥＰＨファミリー、ＥＲＢＢファミリー、ＦＯＬＲファミリー、ＧＡＳＴファミリー、ＧＵＣＹ２ファミリー、ＩＤＯファミリー、ＩＬ１３ＲＡファミリー、ＫＤＲファミリー、ＫＬＫファミリー、ＭＡＧＥファミリー、ＭＵＣファミリー、ＰＥＭＴファミリー、ＳＤＣファミリー、ＳＬＡＭＦファミリー、ＴＥＲＴファミリー、ＴＬＲファミリー、ＴＰＴＥファミリー、ＴＹＲファミリー、ＷＴファミリー及び／またはＸＢＰファミリーに由来する（５．９節を参照）。

【0153】

ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるアレナウイルス粒子は、ワクチン、免疫療法、または医薬組成物としての使用に好適であり、そのようなアレナウイルス粒子を腫瘍性疾患、例えばがんの処置に使用する方法が提供される。本明細書に記載されるアレナウイルス粒子を使用する方法のより詳細な説明は、節（５．１０節を参照）に提供される。

【0154】

５．４ ＯＲＦの再構成を伴う３セグメント型アレナウイルス粒子
例示的な３セグメント型アレナウイルス粒子は、例えば、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる国際特許出願公開第ＷＯ２０１６／０７５２５０号及び同第ＷＯ２０１７／１９８７２６号に記載されている。

【0155】

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される変異型ＫＲＡＳ（５．７節を参照）、変異したがんドライバー遺伝子（５．８節を参照、例えば変異型ＴＰ５３）、または腫瘍関連抗原（５．９節を参照）の抗原性断片をコードするヌクレオチド配列を含むＯＲＦの再構成を伴う３セグメント型アレナウイルス粒子が、本明細書で提供される方法及び組成物において使用され得る。一態様では、１つのＬセグメントと２つのＳセグメント、または２つのＬセグメントと１つのＳセグメントを含む３セグメント型アレナウイルス粒子が本明細書で提供される。製造方法については５．６（ｂ）節を参照されたい。ある特定の実施形態では、３セグメント型アレナウイルス粒子の増殖は、複製可能な２セグメント型アレナウイルス粒子をもたらさない。換言すれば、本明細書で提供される３セグメント型ウイルスは遺伝子的に安定である。より具体的には、ある特定の実施形態では、ゲノムセグメントのうちの２つ（例えば、それぞれ２つのＳセグメントまたは２つのＬセグメント）は、２つの親セグメントの代わりとなり得る単一のウイルスセグメントを得るように組み換えることができない。ある特定の実施形態では、２つのアレナウイルスＯＲＦを２つの別個のセグメントではなく１つのみのセグメント上に統合する、ゲノムセグメントのうちの２つ（例えば、それぞれ２つのＳセグメントまたは２つのＬセグメント）のセグメント間組換えは、ウイルスプロモーター活性を消失させる。具体的な実施形態では、３セグメント型アレナウイルス粒子のゲノムは、その野生型の位置以外の位置にあるアレナウイルスＯＲＦと、本明細書で提供される変異型ＫＲＡＳ（５．７節を参照）、変異したがんドライバー遺伝子（５．８節を参照、例えば変異型ＴＰ５３）、または腫瘍関連抗原（５．９節を参照）の抗原性断片をコードするヌクレオチド配列とを含む。さらに別の具体的な実施形態では、３セグメント型アレナウイルス粒子のゲノムは、４つのアレナウイルスＯＲＦのうちの全てを含む。したがって、ある特定の実施形態では、３セグメント型アレナウイルス粒子は、複製可能かつ感染性である。

【0156】

ある特定の実施形態では、複製可能かつ感染性であるそのような３セグメント型アレナウイルス粒子（５．６（ｂ）節を参照）のゲノムは、異種ヌクレオチド配列を含めるために利用可能な２つの位置を有する。これらの位置は、例えば以下の表１に記載されるように異種ヌクレオチド配列を組み入れるために使用することができる。ある特定の実施形態では、そのような異種ヌクレオチド配列のそれぞれは、単一の転写物に転写され得る。ある特定の実施形態では、そのような異種ヌクレオチド配列のそれぞれは、ポリペプチドをコードする。ある特定の実施形態では、そのような異種ヌクレオチド配列はポリシストロン性であり得、そのため、最終的に、単一の異種ヌクレオチド配列／転写物から複数のポリペプチドが産生される。これは、例えば、内部リボソーム進入部位を使用することによって実現することができる。ある特定の実施形態では、そのようなポリペプチドの１つは、変異型ＫＲＡＳ（５．７節を参照）、変異したがんドライバー遺伝子（５．８節を参照、例えば変異型ＴＰ５３）、または腫瘍関連抗原（５．９節を参照）であり得る。ある特定の実施形態では、２つの利用可能な位置における異種ヌクレオチド配列は、共に変異型ＫＲＡＳをコードする。他の実施形態では、２つの利用可能な位置のうちの一方における異種ヌクレオチド配列は、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードし、２つの利用可能な位置のうちの他方における異種ヌクレオチド配列は、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）または腫瘍関連抗原の抗原性断片をコードする。

【0157】

ある特定の実施形態では、外来抗原をコードしないヌクレオチド配列を含むＯＲＦの再構成を伴う３セグメント型アレナウイルス粒子（５．６（ｂ）節を参照）が、本明細書で提供される方法及び組成物において使用され得る。具体的な実施形態では、３セグメント型アレナウイルス粒子はＯＲＦを、そのＯＲＦの野生型の位置以外の位置に含む。さらに別の具体的な実施形態では、３セグメント型アレナウイルス粒子は、４つのアレナウイルスＯＲＦのうちの全てを含む。したがって、ある特定の実施形態では、３セグメント型アレナウイルス粒子は、複製可能かつ感染性である。

【0158】

ある特定の実施形態では、本明細書に記載される３セグメント型アレナウイルス粒子（５．６（ｂ）節を参照）のＧＰ、ＮＰ、Ｚタンパク質、またはＬタンパク質をコードするＯＲＦは、アレナウイルスゲノム３’ＵＴＲまたはアレナウイルスゲノム５’ＵＴＲの制御下にあり得る。より具体的な実施形態では、アレナウイルスゲノム３’ＵＴＲは、アレナウイルスＳセグメントの３’ＵＴＲである。別の具体的な実施形態では、アレナウイルスゲノム３’ＵＴＲは、アレナウイルスＬセグメントの３’ＵＴＲである。より具体的な実施形態では、アレナウイルスゲノム５’ＵＴＲは、アレナウイルスＳセグメントの５’ＵＴＲである。他の具体的な実施形態では、アレナウイルスゲノム５’ＵＴＲは、アレナウイルスＬセグメントの５’ＵＴＲである。

【0159】

他の実施形態では、本明細書に記載される３セグメント型アレナウイルス粒子（製造方法については５．６（ｂ）節を参照）のＧＰ、ＮＰ、Ｚタンパク質、またはＬタンパク質をコードするＯＲＦは、アレナウイルス保存末端配列エレメント（５’及び３’末端の１９～２０ｎｔの領域）の制御下にあり得る（例えば、Ｐｅｒｅｚ＆ｄｅ ｌａ Ｔｏｒｒｅ，２００３，Ｊ Ｖｉｒｏｌ．７７（２）：１１８４－１１９４を参照）。

【0160】

ある特定の実施形態では、３セグメント型アレナウイルス粒子（製造方法については５．６（ｂ）節を参照）のＧＰ、ＮＰ、Ｚタンパク質またはＬタンパク質をコードするＯＲＦは、５’ＵＴＲのプロモーターエレメントの制御下にあり得る（例えば、Ａｌｂａｒｉｎｏ ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ｊ Ｖｉｒｏｌ．，８５（８）：４０２０－４を参照）。別の実施形態では、３セグメント型アレナウイルス粒子のＧＰ、ＮＰ、Ｚタンパク質、Ｌタンパク質をコードするＯＲＦは、３’ＵＴＲのプロモーターエレメントの制御下にあり得る（例えば、Ａｌｂａｒｉｎｏ ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ｊ Ｖｉｒｏｌ．，８５（８）：４０２０－４を参照）。より具体的な実施形態では、５’ＵＴＲのプロモーターエレメントは、Ｓセグメント（複数可）またはＬセグメント（複数可）の５’ＵＴＲプロモーターエレメントである。別の具体的な実施形態では、３’ＵＴＲのプロモーターエレメントは、Ｓセグメント（複数可）またはＬセグメント（複数可）の３’ＵＴＲプロモーターエレメントである。

【0161】

ある特定の実施形態では、３セグメント型アレナウイルス粒子のＧＰ、ＮＰ、Ｚタンパク質またはＬタンパク質をコードするＯＲＦは、短縮したアレナウイルス３’ＵＴＲまたは短縮したアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下にあり得る（例えば、Ｐｅｒｅｚ＆ｄｅ ｌａ Ｔｏｒｒｅ，２００３，Ｊ Ｖｉｒｏｌ．７７（２）：１１８４－１１９４、Ａｌｂａｒｉｎｏ ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ｊ Ｖｉｒｏｌ．，８５（８）：４０２０－４を参照）。より具体的な実施形態では、短縮した３’ＵＴＲは、アレナウイルスＳセグメントまたはＬセグメントの３’ＵＴＲに由来する。より具体的な実施形態では、短縮した５’ＵＴＲは、アレナウイルスＳセグメント（複数可）またはＬセグメント（複数可）の５’ＵＴＲに由来する。

【0162】

本明細書で提供される変異型ＫＲＡＳ（５．７節を参照）、変異したがんドライバー遺伝子（５．８節を参照、例えば変異型ＴＰ５３）、または腫瘍関連抗原（５．９節を参照）の抗原性断片をコードするヌクレオチド配列を含む３セグメント型アレナウイルス粒子のゲノムのｃＤＮＡもまた本明細書で提供される。より具体的な実施形態では、表１に記載される３セグメント型アレナウイルス粒子のゲノムをコードするＤＮＡ核酸またはＤＮＡ核酸のセットが本明細書で提供される。

【0163】

ある特定の実施形態では、３セグメント型アレナウイルスゲノム（５．６（ｂ）節を参照）のゲノムをコードする核酸は、１つまたは複数のＤＮＡ発現ベクターの一部であるかまたはそれに組み込まれる。具体的な実施形態では、３セグメント型アレナウイルス粒子のゲノムをコードする核酸は、本明細書に記載される３セグメント型アレナウイルス粒子の産生を容易にする１つまたは複数のＤＮＡ発現ベクターの一部であるかまたはそれに組み込まれる。別の実施形態では、本明細書に記載されるｃＤＮＡがプラスミドに組み込まれ得る。ｃＤＮＡの作製のための技法、ならびに当業者に公知の任意のクローニング技法を含む、分子生物学、及びＤＮＡの操作及び作製の慣例的な従来の技法を使用することができる。そのような技法は、当業者に周知であり、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ａｎｄ Ｒｕｓｓｅｌｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，３^ｒｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｎ．Ｙ．（２００１）などの実験マニュアルにおいて利用可能である。

【0164】

細胞株、培養物、ならびに本明細書で提供される核酸、ベクター、及び組成物をトランスフェクトした細胞を培養する方法が本明細書で提供される。

【0165】

具体的な実施形態では、本明細書に記載されるアレナウイルス粒子は弱毒化されている。特定の実施形態では、３セグメント型アレナウイルス粒子は、ウイルスが少なくとも部分的に複製可能なままであり、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて複製可能であるが、低いウイルス量を生成できるに過ぎず、結果として非病原性の亜臨床レベルの感染をもたらすように弱毒化されている。そのような弱毒化ウイルスは、免疫原性組成物として使用することができる。

【0166】

ある特定の実施形態では、３セグメント型アレナウイルス粒子は、３セグメント型ウイルスの由来となった２セグメント型アレナウイルス粒子と同じ指向性を有する。

【0167】

本明細書に記載される３セグメント型アレナウイルス粒子を含む医薬組成物もまた本明細書で提供される。

【0168】

（ａ）１つのＬセグメントと２つのＳセグメントとを含む３セグメント型アレナウイルス粒子
一態様では、１つのＬセグメントと２つのＳセグメントとを含む３セグメント型アレナウイルス粒子が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、１つのＬセグメントと２つのＳセグメントとを含む３セグメント型アレナウイルス粒子の増殖は、複製可能な２セグメント型ウイルス粒子をもたらさない。具体的な実施形態では、１つのＬセグメントと２つのＳセグメントとを含む３セグメント型アレナウイルス粒子の増殖は、Ｉ型インターフェロン受容体、ＩＩ型インターフェロン受容体及び組換え活性化遺伝子（ＲＡＧ１）を欠く、１０^４ＰＦＵの３セグメント型アレナウイルス粒子を感染させたマウス（５．１２（ｍ）節を参照）において、少なくとも１０日、少なくとも２０日、少なくとも３０日、少なくとも４０日、少なくとも５０日、少なくとも６０日、少なくとも７０日、少なくとも８０日、少なくとも９０日、または少なくとも１００日の持続感染後に、複製可能な２セグメント型ウイルス粒子をもたらさない。他の実施形態では、１つのＬセグメントと２つのＳセグメントとを含む３セグメント型アレナウイルス粒子の増殖は、少なくとも１０回の継代、少なくとも２０回の継代、少なくとも３０回の継代、少なくとも４０回の継代、または少なくとも５０回の継代後に、複製可能な２セグメント型ウイルス粒子をもたらさない。

【0169】

特に、３セグメント型アレナウイルス粒子のゲノムは、１つのＬセグメントと２つのＳセグメントとを含み、ここで、本明細書で提供される変異型ＫＲＡＳ（５．７節を参照）、変異したがんドライバー遺伝子（５．８節を参照、例えば変異型ＴＰ５３）、または腫瘍関連抗原（５．９節を参照）をコードするヌクレオチド配列は、各Ｓセグメント上の１つの位置に挿入されている。より具体的には、一方のＳセグメントは、アレナウイルスＧＰと、変異型ＫＲＡＳ、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）、またはそれらの腫瘍関連抗原とをそれぞれコードする。他方のＳセグメントは、アレナウイルスＮＰと、変異型ＫＲＡＳ、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）、または腫瘍関連抗原とをコードする。Ｌセグメントは、アレナウイルスＬタンパク質及びＺタンパク質をコードする。全てのセグメントは、それぞれの５’及び３’ＵＴＲに隣接している。

【0170】

より具体的には、
（ｉ）アレナウイルスゲノム５’ＵＴＲの制御下にある抗原性断片（複数可）（例えば、変異型ＫＲＡＳ（５．７節を参照）、変異したがんドライバー遺伝子（５．８節を参照、例えば変異型ＴＰ５３）、または腫瘍関連抗原（５．９節を参照））をコードするヌクレオチド配列と、アレナウイルスゲノム３’ＵＴＲの制御下にあるアレナウイルス核タンパク質（「ＮＰ」）をコードするＯＲＦとを含む第１のＳセグメントと、
（ｉｉ）アレナウイルスゲノム５’ＵＴＲの制御下にある抗原性断片（複数可）（例えば、変異型ＫＲＡＳ（５．７節を参照）、変異したがんドライバー遺伝子（５．８節を参照、例えば変異型ＴＰ５３）、または腫瘍関連抗原（５．９節を参照））をコードするヌクレオチド配列と、アレナウイルスゲノム３’ＵＴＲの制御下にあるアレナウイルス糖タンパク質（「ＧＰ」）をコードするＯＲＦとを含む第２のＳセグメントと、
（ｉｉｉ）Ｌセグメントと
を含むアレナウイルスが本明細書で提供される。

【0171】

ある特定の実施形態では、２つのアレナウイルスＯＲＦを２つの別個のセグメントではなく１つのセグメント上に統合する、本明細書で提供される３セグメント型アレナウイルス粒子の２つのＳセグメントのセグメント間組換えは、ゲノムの一端を形成する各ＵＴＲが同じゲノムの他端の逆向き反復配列となる非機能性プロモーター（すなわち、５’ＵＴＲ－－－－－－－－－－－５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲ－－－－－－－－－－－－３’ＵＴＲの構造のゲノムセグメント）をもたらす。

【0172】

ある特定の実施形態では、１つのＬセグメントと２つのＳセグメントとを含む３セグメント型アレナウイルス粒子は、その野生型の位置以外の位置にあるアレナウイルスＯＲＦと、本明細書で提供される変異型ＫＲＡＳ（５．７節を参照）、変異したがんドライバー遺伝子（５．８節を参照、例えば変異型ＴＰ５３）、または腫瘍関連抗原（５．９節を参照）をコードするヌクレオチド配列とを保有するように操作されている。他の実施形態では、１つのＬセグメントと２つのＳセグメントとを含む３セグメント型アレナウイルス粒子は、２つのアレナウイルスＯＲＦ、または３つのアレナウイルスＯＲＦ、または４つのアレナウイルスＯＲＦ、または５つのアレナウイルスＯＲＦ、または６つのアレナウイルスＯＲＦを、それぞれの野生型の位置以外の位置に保有するように操作されている。具体的な実施形態では、１つのＬセグメントと２つのＳセグメントとを含む３セグメント型アレナウイルス粒子は、４つのアレナウイルスＯＲＦのうちの全ての完全な補完部分を含む。したがって、一部の実施形態では、３セグメント型アレナウイルス粒子は、感染性かつ複製可能な３セグメント型アレナウイルス粒子である。具体的な実施形態では、３セグメント型アレナウイルス粒子の２つのＳセグメントは、それらのＯＲＦのうちの１つを野生型の位置以外の位置に保有するように操作されている。より具体的な実施形態では、２つのＳセグメントはＳセグメントＯＲＦの完全な補完部分を含む。ある特定の具体的な実施形態では、ＬセグメントはＯＲＦを野生型の位置以外の位置に保有するように操作されているか、またはＬセグメントは野生型ゲノムセグメントであってもよい。

【0173】

ある特定の実施形態では、２つのＳセグメントのうちの一方は、
（ｉ）Ｚタンパク質をコードするＯＲＦがアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下にあるアレナウイルスＳセグメント、
（ｉｉ）Ｌタンパク質をコードするＯＲＦがアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下にあるアレナウイルスＳセグメント、
（ｉｉｉ）ＮＰをコードするＯＲＦがアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下にあるアレナウイルスＳセグメント、
（ｉｖ）ＧＰをコードするＯＲＦがアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下にあるアレナウイルスＳセグメント、
（ｖ）Ｌタンパク質をコードするＯＲＦがアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下にあるアレナウイルスＳセグメント、及び
（ｖｉ）Ｚタンパク質をコードするＯＲＦがアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下にあるアレナウイルスＳセグメント
であり得る。

【0174】

ある特定の実施形態では、１つのＬセグメントと２つのＳセグメントとを含む３セグメント型アレナウイルス粒子は、重複するアレナウイルスＯＲＦ（すなわち、例えばＧＰまたはＮＰをコードする２つの野生型ＯＲＦ）を含み得る。具体的な実施形態では、１つのＬセグメントと２つのＳセグメントとを含む３セグメント型アレナウイルス粒子は、１つの重複するＯＲＦ（例えば、（ＧＰ、ＧＰ））または２つの重複するＯＲＦ（例えば、（ＧＰ、ＧＰ）及び（ＮＰ、ＮＰ））を含み得る。

【0175】

以下の表１は、１つのＬセグメントと２つのＳセグメントとを含む３セグメント型アレナウイルス粒子であって、３セグメント型アレナウイルスゲノムにおける２つのＳセグメントのセグメント間組換えが、複製可能な２セグメント型ウイルス粒子をもたらさず、アレナウイルスプロモーター活性を消失させる（すなわち、結果として得られる組み換えられたＳセグメントが、３’ＵＴＲと５’ＵＴＲではなく、２つの３’ＵＴＲから構成される）、３セグメント型アレナウイルス粒子のゲノム構成の例示である。

【表2】

【0176】

ある特定の実施形態では、位置１と位置２との間のＩＧＲは、アレナウイルスＳセグメントまたはＬセグメントＩＧＲであり得、位置３と位置４との間のＩＧＲは、アレナウイルスＳセグメントまたはＬセグメントＩＧＲであり得、位置５と位置６との間のＩＧＲは、アレナウイルスＬセグメントＩＧＲであり得る。具体的な実施形態では、位置１と位置２との間のＩＧＲは、アレナウイルスＳセグメントＩＧＲであり得、位置３と位置４との間のＩＧＲは、アレナウイルスＳセグメントＩＧＲであり得、位置５と位置６との間のＩＧＲは、アレナウイルスＬセグメントＩＧＲであり得る。ある特定の実施形態では、他の組合せもまた可能である。例えば、１つのＬセグメントと２つのＳセグメントとを含む３セグメント型アレナウイルス粒子であって、３セグメント型アレナウイルスゲノムにおける２つのＳセグメントのセグメント間組換えが、複製可能な２セグメント型ウイルス粒子をもたらさず、アレナウイルスプロモーター活性を消失させる（すなわち、結果として得られる組み換えられたＳセグメントが、３’ＵＴＲと５’ＵＴＲではなく、２つの５’ＵＴＲから構成される）、３セグメント型アレナウイルス粒子。

【0177】

ある特定の実施形態では、１つのＬセグメントと２つのＳセグメントとを含む３セグメント型アレナウイルス粒子におけるＳセグメントとＬセグメントとのセグメント間組換えは、２つの別個のセグメントではなく１つのみのセグメント上に２つのウイルス遺伝子を有する機能性セグメントを再建する。他の実施形態では、１つのＬセグメントと２つのＳセグメントとを含む３セグメント型アレナウイルス粒子におけるＳセグメントとＬセグメントとのセグメント間組換えは、複製可能な２セグメント型ウイルス粒子をもたらさない。

【0178】

ある特定の実施形態では、当業者であれば、表１に例示され、本明細書に記載される構成を有するアレナウイルスゲノムを構築し、次いで、５．１２節に記載されるアッセイを使用して、３セグメント型アレナウイルス粒子が遺伝子的に安定か否か、すなわち、本明細書において論じられる複製可能な２セグメント型ウイルス粒子をもたらさないか否かを決定することができるだろう。

【0179】

５．５分割アレナウイルスベクター粒子
アレナウイルスはまた、国際特許出願公開第ＷＯ２０２１／０８９８５３号及び２０２１年５月１３日に出願された米国仮出願第６３／１８８，３１７号（これらはその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている手段で操作することもできる。この技術は「分割」ベクター技術とも呼ばれる。上に記載した３セグメント型ウイルスと同様に、ＷＯ２０２１／０８９８５３に記載されている技術を使用して、異種ヌクレオチド配列のための２つの空いている位置を有する３セグメント型ウイルスを生成することができる。そのような異種ヌクレオチド配列は、ポリペプチドをコードし得る。ある特定の実施形態では、そのようなポリペプチドの１つは、変異型ＫＲＡＳ（５．７節を参照）、変異したがんドライバー遺伝子（５．８節を参照、例えば変異型ＴＰ５３）、または腫瘍関連抗原（５．９節を参照）であり得る。

【0180】

簡潔に述べると、そのような「分割」アレナウイルス粒子は、アレナウイルスＯＲＦが２つ以上のｍＲＮＡ転写物上に分離されるように操作されている。ある特定の実施形態では、転写の結果、アレナウイルスＧＰ、ＮＰ、Ｌタンパク質またはＺタンパク質の機能的断片をコードするヌクレオチド配列を含む１つまたは複数のｍＲＮＡ転写物が生じるように操作されているアレナウイルスゲノムまたはアンチゲノムセグメントが本明細書で提供される。

【0181】

ある特定の実施形態では、アレナウイルスＧＰをコードするＯＲＦは、２つのｍＲＮＡ転写物上に、それぞれアレナウイルスゲノムの２つの位置に分離（または分割）されている。例えば、アレナウイルスＧＰシグナルペプチドまたはその機能的断片は、第１のｍＲＮＡ転写物（例えば、ウイルスｍＲＮＡ転写物）から発現することができ、アレナウイルスＧＰ１及びＧＰ２サブユニットは第２のｍＲＮＡ転写物（例えば、ウイルスｍＲＮＡ転写物）から発現する。ある特定の実施形態では、第１のｍＲＮＡ転写物は、アレナウイルス３’ゲノムＵＴＲの制御下にある。ある特定の実施形態では、第２のｍＲＮＡ転写物は、異種非アレナウイルスシグナルペプチド（例えば水疱性口内炎ウイルスインディアナ血清型糖タンパク質のシグナルペプチド）をさらにコードする。ある特定の実施形態では、第１のｍＲＮＡ転写物は、異種非アレナウイルスポリペプチド、すなわち変異型ＫＲＡＳ（５．７節を参照）、変異したがんドライバー遺伝子（５．８節を参照、例えば変異型ＴＰ５３）、または腫瘍関連抗原（５．９節を参照）をコードするヌクレオチド配列をさらに含む。

【0182】

ある特定の実施形態では、そのような「分割」アレナウイルスベクターのゲノムの構成は以下の通りである：
第１のＳセグメント：アレナウイルスゲノム５’ＵＴＲの制御下にある、異種シグナルペプチドと融合したアレナウイルスＧＰ１及びＧＰ２サブユニット；アレナウイルスゲノム３’ＵＴＲの制御下にある、アレナウイルスＧＰシグナルペプチドと抗原性断片（複数可）をコードするヌクレオチド配列との融合体。
第２のＳセグメント：アレナウイルスゲノム５’ＵＴＲの制御下にある抗原性断片（複数可）をコードするヌクレオチド配列と、アレナウイルスゲノム３’ＵＴＲの制御下にある核タンパク質（「ＮＰ」）をコードするＯＲＦ。
Ｌセグメント：アレナウイルスゲノム５’ＵＴＲの制御下にあるアレナウイルスＺタンパク質；アレナウイルスゲノム３’ＵＴＲの制御下にあるアレナウイルスＬタンパク質。

【0183】

ある特定の実施形態では、第１のＳセグメント上の抗原性断片（複数可）をコードするヌクレオチド配列は、第２のＳセグメント上の抗原性断片（複数可）をコードするヌクレオチド配列と異なる。ある特定の実施形態では、第１のＳセグメント上の抗原性断片（複数可）をコードするヌクレオチド配列は、第２のＳセグメント上の抗原性断片（複数可）をコードするヌクレオチド配列と同じである。

【0184】

ある特定の実施形態では、第１のＳセグメント上にコードされている抗原性断片（複数可）は、第２のＳセグメント上にコードされている抗原性断片（複数可）と異なる。ある特定の実施形態では、第１のＳセグメント上にコードされている抗原性断片（複数可）は、第２のＳセグメント上にコードされている抗原性断片（複数可）と同じである。ある特定の実施形態では、第１のＳセグメント上にコードされている抗原性断片は、第２のＳセグメント上にコードされている抗原性断片と同じであるが、第２のＳセグメント上にコードされている抗原性断片が互いに融合している順序とは異なる順序で互いに融合している。

【0185】

５．６アレナウイルス粒子の生成
概して、本明細書で提供される方法及び組成物における使用のためのアレナウイルス粒子は、ＬＣＭＶに関して記載されている標準的な逆遺伝学的技法によって組換え作製することができる（参照によって本明細書に組み込まれる、Ｆｌａｔｚ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １０３：４６６３－４６６８、Ｓａｎｃｈｅｚ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ３５０：３７０、Ｏｒｔｉｚ－Ｒｉａｎｏ ｅｔ ａｌ．，２０１３，Ｊ Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．９４：１１７５－８８を参照）。本明細書で提供されるアレナウイルス粒子を生成するために、これらの技法は、以下に記載されるように適用することができる。ウイルスのゲノムは、本明細書に記載されるように改変することができる。

【0186】

（ａ）複製欠損アレナウイルス粒子の生成
感染細胞では遺伝子情報を増幅及び発現することができるが、正常な非補完細胞ではさらなる感染性子孫粒子を産生することができないゲノムを含むように操作されたアレナウイルス粒子であって、１つのアレナウイルスオープンリーディングフレームが、除去され、変異型ＫＲＡＳ（５．７節を参照）、変異したがんドライバー遺伝子（５．８節を参照、例えば変異型ＴＰ５３）、または腫瘍関連抗原（５．９節を参照）をコードするヌクレオチド配列と置き換えられている、アレナウイルス粒子が、当業者に公知の任意の逆遺伝学的技法によって組換え作製され得る。

【0187】

ある特定の実施形態では、感染性複製欠損アレナウイルス粒子を生成する方法は、（ｉ）補完宿主細胞（ゲノムセグメントの、欠失しているかまたは機能的に不活化しているオープンリーディングフレームを発現する）に、第１のアレナウイルスゲノムセグメントのｃＤＮＡをトランスフェクトすることと、（ｉｉ）宿主細胞に、第２のアレナウイルスゲノムセグメントのｃＤＮＡをトランスフェクトすることと、（ｉｉｉ）宿主細胞に、アレナウイルスの最小トランス作用因子ＮＰ及びＬを発現するプラスミドをトランスフェクトすることと、（ｉｖ）宿主細胞をウイルス形成に好適な条件下で維持することと、（ｖ）アレナウイルス粒子を収集することとを含む。ある特定のより具体的な実施形態では、ｃＤＮＡはプラスミドに含まれる。

【0188】

ｃＤＮＡから生成されたら、感染性複製欠損アレナウイルスは補完細胞において増殖することができる。補完細胞とは、ゲノムの改変によって複製欠損アレナウイルスから取り除かれた機能性を提供する細胞である（例えば、ＧＰタンパク質をコードするＯＲＦが欠失しているかまたは機能的に不活化している場合、補完細胞はそのＧＰタンパク質を提供する）。

【0189】

アレナウイルスベクターにおけるＯＲＦのうちの１つまたは複数の除去または機能不活化（ここでは、糖タンパク質、すなわちＧＰの欠失を一例として取り上げる）のために、アレナウイルスベクターは、欠失したウイルス遺伝子（複数可）、例えば、本例ではＧＰをトランスで提供する細胞において生成及び増加することができる。以降Ｃ細胞と称すそのような補完細胞株は、細胞株、例えばＢＨＫ－２１、ＨＥＫ ２９３、ＶＥＲＯなどに、目的のウイルス遺伝子（複数可）の発現のための１つまたは複数のプラスミド（補完プラスミド（Ｃプラスミドと称す））をトランスフェクトすることによって生成される。Ｃプラスミド（複数可）は、哺乳動物細胞での発現に好適な１つまたは複数の発現カセット、例えば、ポリアデニル化シグナルを有するＥＦ１アルファプロモーターなどの哺乳動物ポリメラーゼＩＩプロモーターの制御下で生成される、アレナウイルスベクターにおいて欠失しているウイルス遺伝子（複数可）を発現する。加えて、補完プラスミドは、哺乳動物細胞での遺伝子発現に好適な発現カセット、例えば、上記のポリメラーゼＩＩ発現カセットの制御下にある哺乳動物選択マーカー、例えばピューロマイシン耐性を備えるか、またはウイルス遺伝子転写物（複数可）の後に内部リボソーム進入部位、例えば脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位が続き、その後に哺乳動物耐性マーカーが続く。Ｅ．ｃｏｌｉでの作製の場合、プラスミドは、細菌選択マーカー、例えばアンピシリン耐性カセットをさらに備える。

【0190】

使用され得る細胞、例えば、ＢＨＫ－２１、ＨＥＫ ２９３、ＭＣ５７Ｇなどは、培養され続け、リン酸カルシウム、リポソームベースのプロトコルまたは電気穿孔などの一般的に使用される戦略のいずれかを使用して補完プラスミド（複数可）をトランスフェクトされる。数日後、好適な選択剤、例えばピューロマイシンを滴定濃度で添加する。生存クローンを標準的な手順に従って単離及びサブクローニングし、高発現Ｃ細胞クローンを、目的のウイルスタンパク質（複数可）に対する抗体を用いるウェスタンブロットまたはフローサイトメトリー手順を使用して同定する。安定にトランスフェクトされるＣ細胞を使用する代わりに、正常細胞の一過性トランスフェクションによって、以下のＣ細胞を使用するステップのそれぞれにおいて欠落しているウイルス遺伝子（複数可）を補完してもよい。加えて、ヘルパーウイルスを使用して、欠落している機能性をトランスで提供してもよい。

【0191】

ある特定の実施形態では、補完宿主細胞は、培養され続け、１つまたは複数のプラスミドをトランスフェクトされる。プラスミド（複数可）は、ポリメラーゼＩプロモーター及びターミネーターの制御下で生成されるアレナウイルス粒子のアレナウイルスゲノムセグメント（複数可）をコードする。

【0192】

アレナウイルス粒子の生成のために使用することができるプラスミドは、ｉ）Ｓゲノムセグメント、例えばｐｏｌ－Ｉ Ｓをコードするプラスミド、ｉｉ）Ｌゲノムセグメント、例えばｐｏｌ－Ｉ Ｌをコードするプラスミドを含み得る。ある特定の実施形態では、ウイルスのＬ及びＳセグメントの細胞内合成を導くアレナウイルスポリメラーゼをコードするプラスミドは、トランスフェクション混合物に組み込まれ得る。例えば、Ｌタンパク質をコードするプラスミド及び／またはＮＰをコードするプラスミド（それぞれｐＣ－Ｌ及びｐＣ－ＮＰ）が存在し得る。Ｌタンパク質及びＮＰは、ウイルスＲＮＡの転写及び複製に必要な最小トランス作用因子である。あるいは、ＮＰ及びＬタンパク質と一緒になったウイルスのＬ及びＳセグメントの細胞内合成は、それぞれ２つの別個のプラスミドのＬ及びＳセグメントｃＤＮＡを反対側から読み取るｐｏｌ－Ｉ及びｐｏｌ－ＩＩプロモーターを有する発現カセットを使用して実施してもよい。

【0193】

典型的には、ＲＮＡポリメラーゼＩ駆動発現カセット、ＲＮＡポリメラーゼＩＩ駆動カセットまたはＴ７バクテリオファージＲＮＡポリメラーゼ駆動カセットを使用することができ、後者を、正確な末端を得るために、一次転写物のプロセシングのための３’末端リボザイムと共に優先的に使用することができる。ある特定の実施形態では、アレナウイルスゲノムセグメントをコードするプラスミドは同じであり得る、すなわち、ゲノム配列及びトランス作用因子は、Ｔ７、ｐｏｌＩ、及びｐｏｌＩＩプロモーターによって１つのプラスミドから転写され得る。

【0194】

他の実施形態では、アレナウイルスゲノムセグメントの転写は、双方向発現カセットを使用して実施される（例えば、Ｏｒｔｉｚ－Ｒｉａｎｏ ｅｔ ａｌ．，２０１３，Ｊ Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．，９４（Ｐｔ ６）：１１７５－１１８８を参照）。より具体的な実施形態では、双方向発現カセットは、それぞれ挿入されたアレナウイルスゲノムセグメントの２つの末端を反対側から読み取るポリメラーゼＩプロモーターとポリメラーゼＩＩプロモーターの両方を含む。

【0195】

他の実施形態では、本明細書に記載されるアレナウイルスゲノムセグメントのｃＤＮＡの転写はプロモーターを含む。プロモーターの具体例としては、ＲＮＡポリメラーゼＩプロモーター、ＲＮＡポリメラーゼＩＩプロモーター、ＲＮＡポリメラーゼＩＩＩプロモーター、Ｔ７プロモーター、ＳＰ６プロモーターまたはＴ３プロモーターが挙げられる。

【0196】

本明細書に記載されるアレナウイルス粒子の回収については、以下の手順が想定される。第１日：補完細胞にプラスミドの混合物を上に記載したようにトランスフェクトする。このために、リン酸カルシウム、リポソームベースのプロトコルまたは電気穿孔などの任意の一般的に使用される戦略を利用することができる。

【0197】

３～５日後：細胞懸濁液（すなわち、細胞及び培地）を収集する。培地に存在するアレナウイルス粒子を遠心分離によって細胞及び細片から取り除き、上清（すなわち、アレナウイルスベクター調製物）をアリコートし、４℃、－２０℃、または－８０℃で保存する。アレナウイルスベクター調製物の感染性力価を免疫フォーカスアッセイによって評価する。あるいは、トランスフェクトされた細胞及び上清は、トランスフェクション後３～５日目により大きな容器に継代してもよく、ベクターは、上述のように、継代の最大５日後に収集する。

【0198】

（ｂ）３セグメント型複製可能アレナウイルス粒子の生成
ウイルスＯＲＦを、そのＯＲＦの野生型の位置以外の位置に保有するように操作されているゲノムセグメントを含み、変異型ＫＲＡＳ（５．７節を参照）、変異したがんドライバー遺伝子（５．８節を参照、例えば変異型ＴＰ５３）、または腫瘍関連抗原（５．９節を参照）をコードするヌクレオチド配列をさらに含む３セグメント型アレナウイルス粒子は、例えば参照によって本明細書に組み込まれるＥｍｏｎｅｔ ｅｔ ａｌ．，２００８，ＰＮＡＳ，１０６（９）：３４７３－３４７８、Ｐｏｐｋｉｎ ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，８５（１５）：７９２８－７９３２によって記載されているような当技術分野で公知の逆遺伝学的技法によって組換え作製することができる。５．４及び５．５節に記載されたどちらのベクター系も、この節に記載される方法を使用して生成することができる。

【0199】

ある特定の実施形態では、３セグメント型アレナウイルス粒子を生成する方法は、（ｉ）宿主細胞に、１つのアレナウイルスＬセグメント及び２つのアレナウイルスＳセグメントのｃＤＮＡ、または２つのアレナウイルスＬセグメント及び１つのアレナウイルスＳセグメントのｃＤＮＡをトランスフェクトすることと、（ｉｉ）宿主細胞に、アレナウイルスの最小トランス作用因子ＮＰ及びＬタンパク質を発現するプラスミドをトランスフェクトすることと、（ｉｉｉ）宿主細胞をウイルス形成に好適な条件下で維持することと、（ｉｖ）アレナウイルス粒子を収集することとを含む。ある特定のより具体的な実施形態では、アレナウイルスのＳ及びＬセグメントのｃＤＮＡはプラスミドに含まれる。

【0200】

ｃＤＮＡから生成されたら、３セグメント型アレナウイルス粒子（すなわち、感染性かつ複製可能）は、増殖することができる。ある特定の実施形態では、３セグメント型アレナウイルス粒子は、本明細書に記載されるウイルスの使用を可能にする力価までウイルスが成長することを可能にする任意の宿主細胞において増殖することができる。一実施形態では、宿主細胞は、対応する野生型について決定された力価に匹敵する力価まで３セグメント型アレナウイルス粒子が成長することを可能にする。

【0201】

ある特定の実施形態では、３セグメント型アレナウイルス粒子は、宿主細胞において増殖し得る。使用され得る宿主細胞の具体例としては、ＢＨＫ－２１、ＨＥＫ ２９３、ＶＥＲＯなどが挙げられる。具体的な実施形態では、３セグメント型アレナウイルス粒子は細胞株において増殖し得る。

【0202】

ある特定の実施形態では、宿主細胞は、培養され続け、１つまたは複数のプラスミドをトランスフェクトされる。プラスミド（複数可）は、ポリメラーゼＩプロモーター及びターミネーターの制御下で生成されるアレナウイルス粒子のアレナウイルスゲノムセグメント（複数可）をコードする。

【0203】

具体的な実施形態では、宿主細胞は、培養され続け、１つまたは複数のプラスミドをトランスフェクトされる。プラスミド（複数可）は、例えばポリメラーゼＩＩプロモーター及びターミネーターからなる、哺乳動物細胞での発現に好適な１つまたは複数の発現カセットの制御下で生成されるウイルスタンパク質（複数可）をコードする。

【0204】

１つのＬセグメントと２つのＳセグメントとを含む３セグメント型アレナウイルスを生成するために使用することができるプラスミドは、ｉ）それぞれゲノムのＳセグメント、例えばｐｏｌ－Ｉ Ｓをコードする２つのプラスミド、ｉｉ）ゲノムのＬセグメント、例えばｐｏｌ－Ｉ Ｌをコードするプラスミドを含み得る。２つのＬセグメントと１つのＳセグメントとを含む３セグメント型アレナウイルスのために必要なプラスミドは、ｉ）それぞれゲノムのＬセグメント、例えばｐｏｌ－Ｌをコードする２つのプラスミド、ｉｉ）ゲノムのＳセグメント、例えばｐｏｌ－Ｉ Ｓをコードするプラスミドである。

【0205】

ある特定の実施形態では、ウイルスのＬ及びＳセグメントの細胞内合成を導くアレナウイルスポリメラーゼをコードするプラスミドは、トランスフェクション混合物に組み込まれ得る。例えば、Ｌタンパク質をコードするプラスミド及びＮＰをコードするプラスミド（それぞれｐＣ－Ｌ及びｐＣ－ＮＰ）が使用され得る。Ｌタンパク質及びＮＰは、ウイルスＲＮＡの転写及び複製に必要な最小トランス作用因子である。あるいは、ＮＰ及びＬタンパク質と一緒になったウイルスのＬ及びＳセグメントの細胞内合成は、それぞれ２つの別個のプラスミドのＬ及びＳセグメントｃＤＮＡを反対側から読み取るｐｏｌ－Ｉ及びｐｏｌ－ＩＩプロモーターを有する発現カセットを使用して実施してもよい。

【0206】

加えて、プラスミド（複数可）は、哺乳動物細胞での遺伝子発現に好適な発現カセット、例えば、上記のポリメラーゼＩＩ発現カセットの制御下にある哺乳動物選択マーカー、例えばピューロマイシン耐性を備えるか、またはウイルス遺伝子転写物（複数可）の後に内部リボソーム進入部位、例えば脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位が続き、その後に哺乳動物耐性マーカーが続く。Ｅ．ｃｏｌｉでの作製の場合、プラスミドは、細菌選択マーカー、例えばアンピシリン耐性カセットをさらに備える。

【0207】

宿主細胞へのプラスミド（複数可）のトランスフェクションは、リン酸カルシウム、リポソームベースのプロトコルまたは電気穿孔などの一般的に使用される戦略のいずれかを使用して実施することができる。

【0208】

典型的には、ＲＮＡポリメラーゼＩ駆動発現カセット、ＲＮＡポリメラーゼＩＩ駆動カセットまたはＴ７バクテリオファージＲＮＡポリメラーゼ駆動カセットを使用することができ、後者を、正確な末端を得るために、一次転写物のプロセシングのための３’末端リボザイムと共に優先的に使用することができる。ある特定の実施形態では、アレナウイルスゲノムセグメントをコードするプラスミドは同じであり得る、すなわち、ゲノム配列及びトランス作用因子は、Ｔ７、ｐｏｌＩ、及びｐｏｌＩＩプロモーターによって１つのプラスミドから転写され得る。

【0209】

他の実施形態では、アレナウイルスゲノムセグメントの転写は、双方向発現カセットを使用して実施される（例えば、Ｏｒｔｉｚ－Ｒｉａｎｏ ｅｔ ａｌ．，２０１３，Ｊ Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．，９４（Ｐｔ ６）：１１７５－１１８８を参照）。より具体的な実施形態では、双方向発現カセットは、それぞれ挿入されたアレナウイルスゲノムセグメントの２つの末端を反対側から読み取るポリメラーゼＩプロモーターとポリメラーゼＩＩプロモーターの両方を含む。

【0210】

他の実施形態では、本明細書に記載されるアレナウイルスゲノムセグメントのｃＤＮＡの転写はプロモーターを含む。プロモーターの具体例としては、ＲＮＡポリメラーゼＩプロモーター、ＲＮＡポリメラーゼＩＩプロモーター、ＲＮＡポリメラーゼＩＩＩプロモーター、Ｔ７プロモーター、ＳＰ６プロモーターまたはＴ３プロモーターが挙げられる。

【0211】

３セグメント型アレナウイルスベクターの回収については、以下の手順が想定される。第１日：細胞にプラスミドの混合物を上に記載したようにトランスフェクトする。このために、リン酸カルシウム、リポソームベースのプロトコルまたは電気穿孔などの任意の一般的に使用される戦略を利用することができる。

【0212】

３～５日後：細胞懸濁液（すなわち、細胞及び培地）を収集する。培地に存在するアレナウイルス粒子を遠心分離によって細胞及び細片から取り除き、上清（すなわち、アレナウイルスベクター調製物）をアリコートし、４℃、－２０℃、または－８０℃で保存する。アレナウイルスベクター調製物の感染性力価を免疫フォーカスアッセイによって評価する。あるいは、トランスフェクトされた細胞及び上清は、トランスフェクション後３～５日目により大きな容器に継代してもよく、ベクターは、上述のように、継代の最大５日後に収集する。

【0213】

ある特定の実施形態では、変異型ＫＲＡＳ（５．７節を参照）、変異したがんドライバー遺伝子（５．８節を参照、例えば変異型ＴＰ５３）、または腫瘍関連抗原（５．９節を参照）をコードするヌクレオチド配列の発現であって、ゲノムセグメントをコードするプラスミドが、変異型ＫＲＡＳ、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）、または腫瘍関連抗原をコードするヌクレオチド配列を組み込むように改変されている、ヌクレオチド配列の発現が提供される。変異型ＫＲＡＳ、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）、または腫瘍関連抗原をコードするヌクレオチド配列は、制限酵素を使用してプラスミドに組み込むことができる。

【0214】

５．７変異型ＫＲＡＳ
本出願の文脈では、「変異型ＫＲＡＳ」とは、変異したＫＲＡＳ遺伝子によってコードされるポリペプチドを意味する。

【0215】

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードするヌクレオチド配列を有するアレナウイルス粒子は、本明細書で提供される方法及び組成物において使用することができる。ある特定の実施形態では、変異したがんドライバー遺伝子（複数可）（例えば、変異型ＴＰ５３）または腫瘍関連抗原（複数可）の１つまたは複数の抗原性断片をコードするヌクレオチド配列をさらに含む、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードするヌクレオチド配列を有するアレナウイルス粒子（すなわち、異なるヌクレオチド配列を含む同じアレナウイルス粒子）が、本明細書で提供され、本明細書で提供される方法及び組成物において使用することができる。ある特定の実施形態では、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片と、変異したがんドライバー遺伝子（複数可）（例えば、変異型ＴＰ５３）または腫瘍関連抗原（複数可）の１つまたは複数の抗原性断片とをコードするヌクレオチド配列（すなわち、異なる抗原性断片をコードする同じヌクレオチド配列）を有するアレナウイルス粒子が、本明細書で提供され、本明細書で提供される方法及び組成物において使用することができる。ある特定の実施形態では、ＫＲＡＳの変異は、ＫＲＡＳのアミノ酸位置Ｇ１２、Ｇ１３、Ａ１８、Ａ５９、Ｑ６１、Ｋ１１７、Ａ１４６、またはＤ１１９に存在する。ある特定の実施形態では、ＫＲＡＳの変異は、Ａ１８Ｄ、Ａ５９Ｅ、Ａ５９Ｇ、Ａ５９Ｐ、Ａ５９Ｔ、Ａ５９Ｓ、Ａ５９Ｖ、Ａ１４６Ｐ、Ａ１４６Ｓ、Ａ１４６Ｔ、Ａ１４６Ｖ、Ｄ１１９Ｎ、Ｇ１２Ａ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｆ、Ｇ１２Ｌ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１２Ｓ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１３Ａ、Ｇ１３Ｃ、Ｇ１３Ｄ、Ｇ１３Ｅ、Ｇ１３Ｒ、Ｇ１３Ｓ、Ｇ１３Ｖ、Ｋ１１７Ｎ、Ｑ６１Ｅ、Ｑ６１Ｈ、Ｑ６１Ｋ、Ｑ６１Ｌ、Ｑ６１Ｐ、Ｑ６１Ｒ、またはそれらの組合せである。ある特定の実施形態では、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１２Ａ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１２Ｓ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１３Ｄ、Ｑ６１Ｈ、Ｑ６１Ｒ、Ａ１４６Ｔ、またはそれらの組合せである。ある特定の実施形態では、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１３Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｒ、またはそれらの組合せである。より具体的な実施形態では、アレナウイルスゲノムは、変異型ＫＲＡＳの複数の断片であって、それぞれ、変異Ｇ１３Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、及びＧ１２Ｒを含む、断片をＮ末端からＣ末端に向かってコードするヌクレオチド配列を含む。他のより具体的な実施形態では、アレナウイルスゲノムは、変異Ｇ１３Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、及びＧ１２Ｒを含む変異型ＫＲＡＳの断片を任意の可能な順序でコードするヌクレオチド配列を含む。

【0216】

ある特定の実施形態では、ヌクレオチド配列は、配列番号２０の配列に対して少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である。

【0217】

ある特定の実施形態では、ヌクレオチド配列は、アミノ酸配列が配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である発現産物をコードする。

【0218】

ある特定の実施形態では、ヌクレオチド配列は、変異型ＫＲＡＳの断片をコードし、ここで、断片は、８アミノ酸長、９アミノ酸長、１０アミノ酸長、１１アミノ酸長、１２アミノ酸長、１３アミノ酸長、１４アミノ酸長、１５アミノ酸長、１６アミノ酸長、１７アミノ酸長、１８アミノ酸長、１９アミノ酸長、２０アミノ酸長、２１アミノ酸長、２２アミノ酸長、２３アミノ酸長、２４アミノ酸長、２５アミノ酸長、２６アミノ酸長、２７アミノ酸長、２８アミノ酸長、２９アミノ酸長、または３０アミノ酸長であり、断片は、変異型ＫＲＡＳの変異を含む。より具体的な実施形態では、ヌクレオチド配列は、変異型ＫＲＡＳの断片をコードし、ここで、断片は、１８アミノ酸長である。

【0219】

ある特定の実施形態では、抗原性断片のＮ末端の変異に隣接する領域は、０アミノ酸長、１アミノ酸長、２アミノ酸長、３アミノ酸長、４アミノ酸長、５アミノ酸長、６アミノ酸長、７アミノ酸長、８アミノ酸長、９アミノ酸長、１０アミノ酸長、１１アミノ酸長、１２アミノ酸長、１３アミノ酸長、１４アミノ酸長、１５アミノ酸長、１６アミノ酸長、１７アミノ酸長、１８アミノ酸長、１９アミノ酸長、または２０アミノ酸長である。より具体的な実施形態では、抗原性断片のＮ末端の変異に隣接する領域は、８アミノ酸長である。別のより具体的な実施形態では、抗原性断片のＮ末端の変異に隣接する領域は、９アミノ酸長である。ある特定の実施形態では、抗原性断片のＣ末端の変異に隣接する領域は、０アミノ酸長、１アミノ酸長、２アミノ酸長、３アミノ酸長、４アミノ酸長、５アミノ酸長、６アミノ酸長、７アミノ酸長、８アミノ酸長、９アミノ酸長、１０アミノ酸長、１１アミノ酸長、１２アミノ酸長、１３アミノ酸長、１４アミノ酸長、１５アミノ酸長、１６アミノ酸長、１７アミノ酸長、１８アミノ酸長、１９アミノ酸長、または２０アミノ酸長である。より具体的な実施形態では、抗原性断片のＣ末端の変異に隣接する領域は、８アミノ酸長である。別のより具体的な実施形態では、抗原性断片のＣ末端の変異に隣接する領域は、９アミノ酸長である。

【0220】

ある特定の実施形態では、アレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳの２つの抗原性断片、変異型ＫＲＡＳの３つの抗原性断片、変異型ＫＲＡＳの４つの抗原性断片、変異型ＫＲＡＳの５つの抗原性断片、変異型ＫＲＡＳの６つの抗原性断片、変異型ＫＲＡＳの７つの抗原性断片、変異型ＫＲＡＳの８つの抗原性断片、変異型ＫＲＡＳの９つの抗原性断片、変異型ＫＲＡＳの１０の抗原性断片、変異型ＫＲＡＳの１１の抗原性断片、変異型ＫＲＡＳの１２の抗原性断片、変異型ＫＲＡＳの１３の抗原性断片、変異型ＫＲＡＳの１４の抗原性断片、変異型ＫＲＡＳの１５の抗原性断片、変異型ＫＲＡＳの１６の抗原性断片、変異型ＫＲＡＳの１７の抗原性断片、変異型ＫＲＡＳの１８の抗原性断片、変異型ＫＲＡＳの１９の抗原性断片、または変異型ＫＲＡＳの２０の抗原性断片をコードするヌクレオチド配列を含むアレナウイルスゲノムを含み、ここで、抗原性断片のそれぞれは、変異型ＫＲＡＳタンパク質のうちの１つの変異を含む。ある特定の実施形態では、抗原性断片のそれぞれは、変異型ＫＲＡＳタンパク質の同じ変異または異なる変異を含む。具体的な実施形態では、各断片は、ＫＲＡＳの異なる変異を含む。より具体的な実施形態では、アレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳの５つの抗原性断片をコードするヌクレオチド配列を含むアレナウイルスゲノムを含み、ここで、抗原性断片のそれぞれは、変異型ＫＲＡＳの異なる変異を含み、異なる変異は、Ｇ１３Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、及びＧ１２Ｒであり、抗原性断片のそれぞれは、１８アミノ酸長である。

【0221】

ある特定の実施形態では、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片は、一緒に直接融合している。ある特定の実施形態では、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片は、同じまたは異なるペプチドリンカーを介して一緒に融合している。具体的な実施形態では、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片は、ＡＡＹリンカー（ＡＡＹ）、ＡＡＡリンカー（ＡＡＡ）、ＧＳリンカー（ＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧ）（配列番号４２）、またはｉｎ ｓｉｌｉｃｏ予測を介して最適化されたＡＡＹ、ＡＡＡ、及びＧＳリンカー配列のバリアントを介して一緒に融合している。

【0222】

ある特定の実施形態では、アレナウイルス粒子のヌクレオチド配列は、任意のＣｐＧ及びＴｐＡアイランドを減少または除去するように操作されている。具体的な実施形態では、ＣｐＧ及びＴｐＡアイランドの除去は、３つのサイクル：（ｉ）第１のサイクルにおいてＣｐＧを除去し、（ｉｉ）第２のサイクルにおいてＴｐＡを除去し、（ｉｉｉ）第２のサイクルで新たに導入されたＣｐＧを除去するために、第３のサイクルにおいてＣｐＧを除去する、を含む。

【0223】

５．８変異したがんドライバー遺伝子
本出願の文脈では、「変異したがんドライバー遺伝子」とは、変異したがんドライバー遺伝子によってコードされるポリペプチドを意味する。

【0224】

ある特定の実施形態では、本明細書に開示される方法及び組成物において使用される変異したがんドライバー遺伝子は、変異型ＡＫＴ１、変異型ＢＲＡＦ、変異型ＨＥＲ２、変異型ＭＥＫ１、変異型ＭＥＴ、変異型ＮＲＡＳ、変異型ＰＩＫ３ＣＡ、変異型ＲＥＴ、変異型ＡＰＣ、変異型Ｕ２ＡＦ１、変異型ＥＧＦＲ、変異型ＦＢＸＷ７、変異型ＳＭＡＤ４、変異型ＧＮＡＳ、変異型ＥＲＢＢ２、変異型ＥＲＢＢ３、変異型ＣＤＫＮ２Ａ、変異型ＴＰ５３、及び変異型ＣＴＮＮＢ１を含む。

【0225】

ある特定の実施形態では、変異したがんドライバー遺伝子（複数可）（例えば、変異型ＴＰ５３（複数可））の１つまたは複数の抗原性断片をコードするヌクレオチド配列をさらに含む、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードするヌクレオチド配列を有するアレナウイルス粒子（すなわち、異なるヌクレオチド配列を含む同じアレナウイルス粒子）が、本明細書で提供され、本明細書で提供される方法及び組成物において使用することができる。ある特定の実施形態では、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片と、変異したがんドライバー遺伝子（複数可）（例えば、変異型ＴＰ５３（複数可））の１つまたは複数の抗原性断片とをコードするヌクレオチド配列（すなわち、異なる抗原性断片をコードする同じヌクレオチド配列）を有するアレナウイルス粒子が、本明細書で提供され、本明細書で提供される方法及び組成物において使用することができる。ある特定の実施形態では、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードするヌクレオチド配列を有するアレナウイルス粒子は、変異型ＡＫＴ１、変異型ＢＲＡＦ、変異型ＨＥＲ２、変異型ＭＥＫ１、変異型ＭＥＴ、変異型ＮＲＡＳ、変異型ＰＩＫ３ＣＡ、変異型ＲＥＴ、変異型ＡＰＣ、変異型Ｕ２ＡＦ１、変異型ＥＧＦＲ、変異型ＦＢＸＷ７、変異型ＳＭＡＤ４、変異型ＧＮＡＳ、変異型ＥＲＢＢ２、変異型ＥＲＢＢ３、変異型ＣＤＫＮ２Ａ、変異型ＴＰ５３及び／または変異型ＣＴＮＮＢ１の抗原性断片をさらにコードし得、ここで、抗原性断片はそれぞれの変異を含む。ある特定の実施形態では、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードするヌクレオチド配列を有するアレナウイルス粒子は、変異型ＰＩ３ＫＣＡの抗原性断片をさらにコードし得る。特に、ＰＩ３ＫＣＡの変異は、Ｅ５４５Ｋ、Ｈ１０４７Ｒ、及び／またはＥ５４２Ｋである。ある特定の実施形態では、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードするヌクレオチド配列を有するアレナウイルス粒子は、変異型ＢＲＡＦの抗原性断片をさらにコードし得る。特に、ＢＲＡＦの変異はＶ６００Ｅである。ある特定の実施形態では、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードするヌクレオチド配列を有するアレナウイルス粒子は、変異型Ｕ２ＡＦ１の抗原性断片をさらにコードし得る。特に、Ｕ２ＡＦ１の変異はＳ３４Ｆである。ある特定の実施形態では、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードするヌクレオチド配列を有するアレナウイルス粒子は、変異型ＴＰ５３の抗原性断片をさらにコードし得る。特に、ＴＰ５３の変異は、Ｇ２４５Ｓ、Ｙ２２０Ｃ、Ｒ２４８Ｑ、Ｒ２８２Ｗ、Ｈ１７９Ｒ、Ｖ１５７Ｆ、Ｒ２７３Ｃ、Ｒ２１３Ｌ、Ｒ２７３Ｈ、Ｒ２７３Ｌ、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ１５８Ｌ、Ｒ１９６Ｐ、Ｒ２４８Ｗ、及び／またはＣ２７７Ｆ変異である。ある特定の実施形態では、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードするヌクレオチド配列を有するアレナウイルス粒子は、Ｅ５４５Ｋ変異、Ｈ１０４７Ｒ変異、もしくはＥ５４２Ｋ変異を有する変異型ＰＩ３ＫＣＡ、Ｖ６００Ｅ変異を有する変異型ＢＲＡＦ、またはＲ１７５Ｈ変異を有する変異型ＴＰ５３の抗原性断片をさらにコードし得る。

【0226】

ある特定の実施形態では、腫瘍性疾患を処置するための方法は、第２のアレナウイルス粒子を投与することをさらに含み、ここで、第２のアレナウイルス粒子は、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）の抗原性断片をコードする。ある特定の実施形態では、アレナウイルス粒子のゲノムによってコードされる、変異型ＫＲＡＳ、Ｖ６００Ｅの変異を有する変異型ＢＲＡＦ、または変異型ＰＩＫ３ＣＡの抗原性断片は、結腸直腸癌に関連し得るかまたはそれに特異的であり得る。ある特定の実施形態では、アレナウイルス粒子のゲノムによってコードされる、変異型ＫＲＡＳ、変異型ＢＲＡＦ、または変異型ＰＩＫ３ＣＡの抗原性断片は、肺腺癌に関連し得るかまたはそれに特異的であり得る。ある特定の実施形態では、アレナウイルス粒子のゲノムによってコードされる、変異型ＫＲＡＳ及び変異型ＰＩＫ３ＣＡの抗原性断片は、肺扁平上皮癌に関連し得るかまたはそれに特異的であり得る。ある特定の実施形態では、アレナウイルス粒子のゲノムによってコードされる、変異型ＡＫＴ１、変異型ＢＲＡＦ、変異型ＨＥＲ２、変異型ＭＥＫ１、変異型ＭＥＴ、変異型ＮＲＡＳ、変異型ＰＩＫ３ＣＡ、または変異型ＲＥＴの抗原性断片は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）に関連し得るかまたはそれに特異的であり得る。

【0227】

ある特定の実施形態では、ヌクレオチド配列は、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）の断片をコードし、ここで、断片は、８アミノ酸長、９アミノ酸長、１０アミノ酸長、１１アミノ酸長、１２アミノ酸長、１３アミノ酸長、１４アミノ酸長、１５アミノ酸長、１６アミノ酸長、１７アミノ酸長、１８アミノ酸長、１９アミノ酸長、２０アミノ酸長、２１アミノ酸長、２２アミノ酸長、２３アミノ酸長、２４アミノ酸長、２５アミノ酸長、２６アミノ酸長、２７アミノ酸長、２８アミノ酸長、２９アミノ酸長、または３０アミノ酸長であり、断片は、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）の変異を含む。

【0228】

ある特定の実施形態では、ヌクレオチド配列は、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）の断片をコードし、ここで、断片は、８アミノ酸長、９アミノ酸長、１０アミノ酸長、１１アミノ酸長、１２アミノ酸長、１３アミノ酸長、１４アミノ酸長、１５アミノ酸長、１６アミノ酸長、１７アミノ酸長、１８アミノ酸長、１９アミノ酸長、２０アミノ酸長、２１アミノ酸長、２２アミノ酸長、２３アミノ酸長、２４アミノ酸長、２５アミノ酸長、２６アミノ酸長、２７アミノ酸長、２８アミノ酸長、２９アミノ酸長、または３０アミノ酸長であり、断片は、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）の変異を含む。

【0229】

ある特定の実施形態では、抗原性断片のＮ末端の変異に隣接する領域は、０アミノ酸長、１アミノ酸長、２アミノ酸長、３アミノ酸長、４アミノ酸長、５アミノ酸長、６アミノ酸長、７アミノ酸長、８アミノ酸長、９アミノ酸長、１０アミノ酸長、１１アミノ酸長、１２アミノ酸長、１３アミノ酸長、１４アミノ酸長、１５アミノ酸長、１６アミノ酸長、１７アミノ酸長、１８アミノ酸長、１９アミノ酸長、または２０アミノ酸長である。ある特定の実施形態では、抗原性断片のＣ末端の変異に隣接する領域は、０アミノ酸長、１アミノ酸長、２アミノ酸長、３アミノ酸長、４アミノ酸長、５アミノ酸長、６アミノ酸長、７アミノ酸長、８アミノ酸長、９アミノ酸長、１０アミノ酸長、１１アミノ酸長、１２アミノ酸長、１３アミノ酸長、１４アミノ酸長、１５アミノ酸長、１６アミノ酸長、１７アミノ酸長、１８アミノ酸長、１９アミノ酸長、または２０アミノ酸長である。

【0230】

ある特定の実施形態では、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）の２つの抗原性断片、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）の３つの抗原性断片、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）の４つの抗原性断片、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）の５つの抗原性断片、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）の６つの抗原性断片、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）の７つの抗原性断片、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）の８つの抗原性断片、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）の９つの抗原性断片、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）の１０の抗原性断片、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）の１１の抗原性断片、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）の１２の抗原性断片、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）の１３の抗原性断片、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）の１４の抗原性断片、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）の１５の抗原性断片、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）の１６の抗原性断片、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）の１７の抗原性断片、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）の１８の抗原性断片、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）の１９の抗原性断片、または変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）の２０の抗原性断片をコードするヌクレオチド配列を有するアレナウイルス粒子であって、抗原性断片のそれぞれが、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）タンパク質のうちの１つの変異を含む、アレナウイルス粒子。ある特定の実施形態では、抗原性断片のそれぞれは、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）タンパク質の同じ変異または異なる変異を含む。具体的な実施形態では、各断片は、がんドライバー遺伝子の異なる変異を含む。

【0231】

ある特定の実施形態では、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）の抗原性断片は、一緒に直接融合している。ある特定の実施形態では、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）の抗原性断片は、同じまたは異なるペプチドリンカーを介して一緒に融合している。具体的な実施形態では、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）の抗原性断片は、ＡＡＹリンカー（ＡＡＹ）、ＡＡＡリンカー（ＡＡＡ）、ＧＳリンカー（ＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧ）（配列番号４２）、またはｉｎ ｓｉｌｉｃｏ予測を介して最適化されたＡＡＹ、ＡＡＡ、及びＧＳリンカー配列のバリアントを介して一緒に融合している。

【0232】

本出願の文脈では、「変異型ＴＰ５３」とは、変異したＴＰ５３遺伝子によってコードされるポリペプチドを意味する。ある特定の実施形態では、１つまたは複数の変異型ＴＰ５３の１つまたは複数の抗原性断片をコードするヌクレオチド配列をさらに含む、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードするヌクレオチド配列を有するアレナウイルス粒子（すなわち、異なるヌクレオチド配列を含む同じアレナウイルス粒子）が、本明細書で提供され、本明細書で提供される方法及び組成物において使用することができる。ある特定の実施形態では、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片と、１つまたは複数の変異型ＴＰ５３の１つまたは複数の抗原性断片とをコードするヌクレオチド配列（すなわち、異なる抗原性断片をコードする同じヌクレオチド配列）を有するアレナウイルス粒子が、本明細書で提供され、本明細書で提供される方法及び組成物において使用することができる。ある特定の実施形態では、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードするヌクレオチド配列を有するアレナウイルス粒子は、変異型ＴＰ５３の抗原性断片をさらにコードし得、ここで、抗原性断片はそれぞれの変異を含む。ある特定の実施形態では、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードするヌクレオチド配列を有するアレナウイルス粒子は、変異型ＴＰ５３の抗原性断片をさらにコードし得る。特に、ＴＰ５３の変異は、Ｇ２４５Ｓ、Ｙ２２０Ｃ、Ｒ２４８Ｑ、Ｒ２８２Ｗ、Ｈ１７９Ｒ、Ｖ１５７Ｆ、Ｒ２７３Ｃ、Ｒ２１３Ｌ、Ｒ２７３Ｈ、Ｒ２７３Ｌ、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ１５８Ｌ、Ｒ１９６Ｐ、Ｒ２４８Ｗ、またはＣ２７７Ｆ変異である。

【0233】

ある特定の実施形態では、腫瘍性疾患を処置するための方法は、アレナウイルス粒子を投与することを含み、ここで、アレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳ及び変異型ＴＰ５３の抗原性断片をコードし、抗原性断片は変異を含み、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１２Ｖ、Ｑ６１Ｈ及び／またはＱ６１Ｒであり、ＴＰ５３の変異は、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ２４８Ｗ、Ｇ２４５Ｓ、Ｒ２８２Ｗ、Ｒ２４８Ｑ及び／またはＲ２７３Ｃであり、腫瘍性疾患は膵癌である。ある特定の実施形態では、腫瘍性疾患を処置するための方法は、アレナウイルス粒子を投与することを含み、ここで、アレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳ及び変異型ＴＰ５３の抗原性断片をコードし、抗原性断片は変異を含み、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１３Ｄ、Ａ１４６Ｔ及び／またはＧ１２Ｃであり、ＴＰ５３の変異は、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ２７３Ｈ及び／またはＲ２４８Ｗであり、腫瘍性疾患は結腸直腸癌または肺腺癌である。ある特定の実施形態では、腫瘍性疾患を処置するための方法は、アレナウイルス粒子を投与することを含み、ここで、アレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳ及び変異型ＴＰ５３の抗原性断片をコードし、抗原性断片は変異を含み、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１３Ｄ及び／またはＧ１２Ｖであり、ＴＰ５３の変異は、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ２７３Ｈ及び／またはＲ２４８Ｗであり、腫瘍性疾患は膵癌、結腸直腸癌または肺腺癌である。ある特定の実施形態では、腫瘍性疾患を処置するための方法は、アレナウイルス粒子を投与することを含み、ここで、アレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳ及び変異型ＴＰ５３の抗原性断片をコードし、抗原性断片は変異を含み、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｄ、及び／またはＧ１２Ｓであり、ＴＰ５３の変異はＲ１７５Ｈであり、腫瘍性疾患は肺腺癌である。ある特定の実施形態では、腫瘍性疾患を処置するための方法は、第２のアレナウイルス粒子を投与することをさらに含み、ここで、第２のアレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳ及び変異型ＴＰ５３の抗原性断片をコードし、抗原性断片は変異を含み、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１２Ｖ、Ｑ６１Ｈ及び／またはＱ６１Ｒであり、ＴＰ５３の変異は、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ２４８Ｗ、Ｇ２４５Ｓ、Ｒ２８２Ｗ、Ｒ２４８Ｑ及び／またはＲ２７３Ｃであり、腫瘍性疾患は膵癌である。ある特定の実施形態では、腫瘍性疾患を処置するための方法は、第２のアレナウイルス粒子を投与することをさらに含み、ここで、第２のアレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳ及び変異型ＴＰ５３の抗原性断片をコードし、抗原性断片は変異を含み、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１２Ｖ、Ｑ６１Ｈ及び／またはＱ６１Ｒであり、ＴＰ５３の変異は、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ２４８Ｗ、Ｇ２４５Ｓ、Ｒ２８２Ｗ、Ｒ２４８Ｑ及び／またはＲ２７３Ｃであり、腫瘍性疾患は膵癌である。ある特定の実施形態では、腫瘍性疾患を処置するための方法は、第２のアレナウイルス粒子を投与することをさらに含み、ここで、第２のアレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳ及び変異型ＴＰ５３の抗原性断片をコードし、抗原性断片は変異を含み、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１３Ｄ、Ａ１４６Ｔ及び／またはＧ１２Ｃであり、ＴＰ５３の変異は、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ２７３Ｈ及び／またはＲ２４８Ｗであり、腫瘍性疾患は結腸直腸癌または肺腺癌である。ある特定の実施形態では、腫瘍性疾患を処置するための方法は、第２のアレナウイルス粒子を投与することをさらに含み、ここで、第２のアレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳ及び変異型ＴＰ５３の抗原性断片をコードし、抗原性断片は変異を含み、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１３Ｄ及び／またはＧ１２Ｖであり、ＴＰ５３の変異は、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ２７３Ｈ及び／またはＲ２４８Ｗであり、腫瘍性疾患は膵癌、結腸直腸癌または肺腺癌である。ある特定の実施形態では、腫瘍性疾患を処置するための方法は、第２のアレナウイルス粒子を投与することをさらに含み、ここで、第２のアレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳ及び変異型ＴＰ５３の抗原性断片をコードし、抗原性断片は変異を含み、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｄ、及び／またはＧ１２Ｓであり、ＴＰ５３の変異はＲ１７５Ｈであり、腫瘍性疾患は肺腺癌である。

【0234】

５．９腫瘍関連抗原
ある特定の実施形態では、本明細書に開示される方法及び組成物において使用される腫瘍関連抗原は、ＢＩＲＣファミリー、ＣＥＡＣＡＭファミリー、ＣＴＡファミリー、ＥＰＨファミリー、ＥＲＢＢファミリー、ＦＯＬＲファミリー、ＧＡＳＴファミリー、ＧＵＣＹ２ファミリー、ＩＤＯファミリー、ＩＬ１３ＲＡファミリー、ＫＤＲファミリー、ＫＬＫファミリー、ＭＡＧＥファミリー、ＭＵＣファミリー、ＰＥＭＴファミリー、ＳＤＣファミリー、ＳＬＡＭＦファミリー、ＴＥＲＴファミリー、ＴＬＲファミリー、ＴＰＴＥファミリー、ＴＹＲファミリー、ＷＴファミリー、及びＸＢＰファミリーに由来する抗原を含む。

【0235】

ある特定の実施形態では、腫瘍関連抗原（複数可）の１つまたは複数の抗原性断片をコードするヌクレオチド配列をさらに含む、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードするヌクレオチド配列を有するアレナウイルス粒子（すなわち、異なるヌクレオチド配列を含む同じアレナウイルス粒子）が、本明細書で提供され、本明細書で提供される方法及び組成物において使用することができる。ある特定の実施形態では、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片と、腫瘍関連抗原（複数可）の１つまたは複数の抗原性断片とをコードするヌクレオチド配列（すなわち、異なる抗原性断片をコードする同じヌクレオチド配列）を有するアレナウイルス粒子が、本明細書で提供され、本明細書で提供される方法及び組成物において使用することができる。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される方法及び組成物において使用される腫瘍関連抗原は、新生細胞または腫瘍、例えばがん細胞または悪性腫瘍の内部または表面上に発現する免疫原性タンパク質である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される方法及び組成物において使用される腫瘍関連抗原は、新生細胞または腫瘍と正常細胞または組織の両方の表面上に存在し得る、非特異的、変異型、過剰発現、または異常発現タンパク質である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される方法及び組成物において使用される腫瘍関連抗原は、腫瘍細胞に限定される腫瘍特異的抗原である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される方法及び組成物において使用される腫瘍関連抗原は、がん細胞に限定されるがん特異的抗原である。ある特定の実施形態では、腫瘍性疾患を処置するための方法は、第２のアレナウイルス粒子を投与することをさらに含み、ここで、第２のアレナウイルス粒子は、腫瘍関連抗原の抗原性断片をコードする。

【0236】

ある特定の実施形態では、腫瘍関連抗原は、以下の特徴：過剰発現／蓄積（すなわち、正常組織と新生組織の両方によって発現されるが、新生物において高度に発現する）、がん胎児性（すなわち、通例、胎児組織及びがん性体細胞においてのみ発現する）、腫瘍ウイルス性もしくは発がんウイルス性（すなわち、腫瘍形成性形質転換ウイルスによってコードされる）、がん－精巣性（すなわち、がん細胞及び成人生殖組織、例えば精巣によってのみ発現される）、系統限定性（すなわち、主に単一のがん組織型によって発現される）、変異している（すなわち、遺伝子変異または転写の変化の結果として新生組織においてのみ発現する）、翻訳後変化している（例えば、グリコシル化における腫瘍関連変化）、またはイディオタイプ（すなわち、ＢまたはＴリンパ球の悪性クローナル増加から発生する）のうちの１、２、または３つ以上、例えば全てを示し得る。

【0237】

ある特定の実施形態では、本明細書に記載される方法及び組成物において使用される腫瘍関連抗原としては、急性リンパ芽球性白血病；急性リンパ芽球性リンパ腫；急性リンパ性白血病；急性骨髄性白血病；急性骨髄白血病（成人／小児）；副腎皮質癌；ＡＩＤＳ関連癌；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；肛門癌；虫垂癌；星細胞腫；非定型奇形腫様／ラブドイド腫瘍；基底細胞癌；胆管癌、肝外（胆管細胞癌）；膀胱癌；骨の骨肉腫／悪性線維性組織球腫；脳癌（成人／小児）；脳腫瘍、小脳星細胞腫（成人／小児）；脳腫瘍、大脳星細胞腫／悪性神経膠腫脳腫瘍；脳腫瘍、上衣腫；脳腫瘍、髄芽腫；脳腫瘍、テント上原始神経外胚葉性腫瘍；脳腫瘍、視路及び視床下部神経膠腫；脳幹神経膠腫；乳癌；気管支腺腫／カルチノイド；気管支腫瘍；バーキットリンパ腫；小児のがん；カルチノイド消化管腫瘍；カルチノイド腫瘍；成人の癌腫、原発不明部位；原発不明の癌腫；中枢神経系胚芽腫；中枢神経系リンパ腫、原発性；子宮頸癌；小児副腎皮質癌；小児癌；小児大脳星細胞腫；脊索腫、小児；慢性リンパ性白血病；慢性骨髄性白血病；慢性骨髄白血病；慢性骨髄増殖性障害；結腸癌；結腸直腸癌；頭蓋咽頭腫；皮膚Ｔ細胞リンパ腫；線維形成性小円形細胞腫瘍；肺気腫；子宮内膜癌；上衣芽腫；上衣腫；食道癌；ユーイングファミリー腫瘍におけるユーイング肉腫；頭蓋外胚細胞腫瘍；性腺外胚細胞腫瘍；肝外胆管癌；胆嚢癌；胃（胃の）癌；胃カルチノイド；消化管カルチノイド腫瘍；消化管間質腫瘍；胚細胞腫瘍：頭蓋外、性腺外、または卵巣妊娠性絨毛性腫瘍；妊娠性絨毛性腫瘍、原発不明部位；神経膠腫；脳幹の神経膠腫；神経膠腫、小児視路及び視床下部；有毛細胞白血病；頭頸部癌；心臓癌；肝細胞（肝）癌；ホジキンリンパ腫；下咽頭癌；視床下部及び視路神経膠腫；眼内黒色腫；島細胞癌（膵島）；カポジ肉腫；腎癌（腎細胞癌）；ランゲルハンス細胞組織球症；喉頭癌；口唇及び口腔内癌；脂肪肉腫；肝癌（原発性）；肺癌、非小細胞；肺癌、小細胞；リンパ腫、原発性中枢神経系；マクログロブリン血症、ワルデンシュトレーム；男性乳癌；骨の悪性線維性組織球腫／骨肉腫；髄芽腫；髄上皮腫；黒色腫；黒色腫、眼内（眼）；メルケル細胞癌；メルケル細胞皮膚癌；中皮腫；中皮腫、成人悪性；原発不明転移性扁平上皮性頸部癌；口癌；多発性内分泌腫瘍症候群；多発性骨髄腫／形質細胞腫瘍；菌状息肉症、骨髄異形成症候群；骨髄異形成／骨髄増殖性疾患；骨髄性白血病、慢性；骨髄白血病、成人急性；骨髄白血病、小児急性；骨髄腫、多発性（骨髄のがん）；骨髄増殖性障害、慢性；鼻腔及び副鼻腔癌；上咽頭癌；神経芽腫、非小細胞肺癌；非ホジキンリンパ腫；オリゴデンドロ神経膠腫；口腔癌；口腔内癌；中咽頭癌；骨肉腫／骨の悪性線維性組織球腫；卵巣癌；卵巣上皮癌（表層上皮性・間質性腫瘍）；卵巣胚細胞腫瘍；卵巣低悪性度腫瘍；膵癌；膵癌、島細胞；乳頭腫；副鼻腔及び鼻腔癌；副甲状腺癌；陰茎癌；咽頭癌；褐色細胞腫；松果体星細胞腫；松果体胚細胞腫；中間分化型松果体実質腫瘍；松果体芽腫及びテント上原始神経外胚葉性腫瘍；下垂体腫瘍；下垂体腺腫；形質細胞新生物／多発性骨髄腫；胸膜肺芽腫；原発性中枢神経系リンパ腫；前立腺癌；直腸癌；腎細胞癌（腎癌）；腎盂及び尿管、移行細胞癌；１５番染色体上のＮＵＴ遺伝子が関与する気道癌；網膜芽細胞腫；横紋筋肉腫、小児；唾液腺癌；肉腫、ユーイングファミリー腫瘍；セザリー症候群；皮膚癌（黒色腫）；皮膚癌（非黒色腫）；小細胞肺癌；小腸癌 軟部組織肉腫；軟部組織肉腫；脊髄腫瘍；扁平上皮癌；原発不明扁平上皮性頸部癌、転移性；胃の（胃）癌；テント上原始神経外胚葉性腫瘍；Ｔ細胞リンパ腫、皮膚（菌状息肉症及びセザリー症候群）；精巣癌；喉癌；胸腺腫；胸腺腫及び胸腺癌；甲状腺癌；甲状腺癌、小児；腎盂及び尿管の移行細胞癌；尿道癌；子宮癌、子宮内膜；子宮肉腫；膣癌；外陰癌；ならびにウィルムス腫瘍を含む腫瘍性疾患からの抗原が挙げられる。

【0238】

ある特定の実施形態では、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードするヌクレオチド配列を有するアレナウイルス粒子は、ＢＩＲＣファミリー、ＣＥＡＣＡＭファミリー、ＣＴＡファミリー、ＥＰＨファミリー、ＥＲＢＢファミリー、ＦＯＬＲファミリー、ＧＡＳＴファミリー、ＧＵＣＹ２ファミリー、ＩＤＯファミリー、ＩＬ１３ＲＡファミリー、ＫＤＲファミリー、ＫＬＫファミリー、ＭＡＧＥファミリー、ＭＵＣファミリー、ＰＥＭＴファミリー、ＳＤＣファミリー、ＳＬＡＭＦファミリー、ＴＥＲＴファミリー、ＴＬＲファミリー、ＴＰＴＥファミリー、ＴＹＲファミリー、ＷＴファミリー、及びＸＢＰファミリーの抗原性断片をさらにコードし得る。

【0239】

ある特定の実施形態では、腫瘍関連抗原の断片は、（ｉ）抗体免疫応答を宿主（例えば、マウス、ウサギ、ヤギ、ロバまたはヒト）において誘発すること（ここで、結果として生じる抗体は、新生細胞（例えば、がん細胞）の内部または表面上に発現する免疫原性タンパク質に特異的に結合する）、及び／または（ｉｉ）特異的Ｔ細胞免疫応答を誘発することができる場合、抗原性である。

【0240】

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される腫瘍関連抗原の抗原性断片をコードするヌクレオチド配列は、８～１００ヌクレオチド長、１５～１００ヌクレオチド長、２５～１００ヌクレオチド長、５０～２００ヌクレオチド長、５０～４００ヌクレオチド長、２００～５００ヌクレオチド長、または４００～６００ヌクレオチド長、５００～８００ヌクレオチド長である。他の実施形態では、本明細書で提供される抗原性断片をコードするヌクレオチド配列は、７５０～９００ヌクレオチド長、８００～１００ヌクレオチド長、８５０～１０００ヌクレオチド長、９００～１２００ヌクレオチド長、１０００～１２００ヌクレオチド長、１０００～１５００ヌクレオチドもしくは１０～１５００ヌクレオチド長、１５００～２０００ヌクレオチド長、１７００～２０００ヌクレオチド長、２０００～２３００ヌクレオチド長、２２００～２５００ヌクレオチド長、２５００～３０００ヌクレオチド長、３０００～３２００ヌクレオチド長、３０００～３５００ヌクレオチド長、３２００～３６００ヌクレオチド長、３３００～３８００ヌクレオチド長、４０００ヌクレオチド～４４００ヌクレオチド長、４２００～４７００ヌクレオチド長、４８００～５０００ヌクレオチド長、５０００～５２００ヌクレオチド長、５２００～５５００ヌクレオチド長、５５００～５８００ヌクレオチド長、５８００～６０００ヌクレオチド長、６０００～６４００ヌクレオチド長、６２００～６８００ヌクレオチド長、６６００～７０００ヌクレオチド長、７０００～７２００ヌクレオチド長、７２００～７５００ヌクレオチド長、または７５００ヌクレオチド長である。一部の実施形態では、ヌクレオチド配列は、５～１０アミノ酸長、１０～２５アミノ酸長、２５～５０アミノ酸長、５０～１００アミノ酸長、１００～１５０アミノ酸長、１５０～２００アミノ酸長、２００～２５０アミノ酸長、２５０～３００アミノ酸長、３００～４００アミノ酸長、４００～５００アミノ酸長、５００～７５０アミノ酸長、７５０～１０００アミノ酸長、１０００～１２５０アミノ酸長、１２５０～１５００アミノ酸長、１５００～１７５０アミノ酸長、１７５０～２０００アミノ酸長、２０００～２５００アミノ酸長、または２５００を超えるかもしくは２５００以上のアミノ酸長のペプチドまたはポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、ヌクレオチド配列は２５００アミノ酸長を超えないポリペプチドをコードする。具体的な実施形態では、ヌクレオチド配列は終止コドンを含有しない。ある特定の実施形態では、ヌクレオチド配列はコドン最適化される。ある特定の実施形態では、ヌクレオチド組成物、ヌクレオチド対組成物、またはその両方が最適化され得る。そのような最適化のための技法は、当技術分野で公知であり、腫瘍関連抗原またはその抗原性断片をコードするヌクレオチド配列を最適化するために適用され得る。

【0241】

ある特定の実施形態では、アレナウイルスゲノムセグメント、アレナウイルス粒子、または３セグメント型アレナウイルス粒子は、腫瘍関連抗原またはその抗原性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列を含み得る。他の実施形態では、アレナウイルスゲノムセグメント、アレナウイルス粒子、または３セグメント型アレナウイルス粒子は、腫瘍関連抗原もしくはその抗原性断片をコードする少なくとも１つのヌクレオチド配列、腫瘍関連抗原もしくはその抗原性断片をコードする少なくとも２つのヌクレオチド配列、腫瘍関連抗原もしくはその抗原性断片をコードする少なくとも３つのヌクレオチド配列、または腫瘍関連抗原もしくはその抗原性断片をコードする４つ以上のヌクレオチド配列を含み得る。

【0242】

ある特定の実施形態では、本明細書で提供されるアレナウイルス粒子は、ａ）ゲノムセグメントの野生型形態に存在するＯＲＦの除去または機能不活化を有し、ｂ）（ｉ）本明細書で提供される１つまたは複数の変異型ＫＲＡＳ、変異したがんドライバー遺伝子、または腫瘍関連抗原を（センスまたはアンチセンスのいずれかに）コードするゲノムセグメントを含む。他の実施形態では、本明細書で提供されるアレナウイルス粒子は、ａ）アレナウイルスＯＲＦを、そのＯＲＦの野生型の位置以外の位置に含み、ｂ）（ｉ）本明細書で提供される１つまたは複数の変異型ＫＲＡＳ、変異したがんドライバー遺伝子、または腫瘍関連抗原を（センスまたはアンチセンスのいずれかに）コードするゲノムセグメントを含む。

【0243】

ある特定の実施形態では、１つまたは複数の変異型ＫＲＡＳ、変異したがんドライバー遺伝子、または腫瘍関連抗原をコードするように生成されたアレナウイルス粒子は、本明細書で提供される変異型ＫＲＡＳ、変異したがんドライバー遺伝子、または腫瘍関連抗原をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列を含む。具体的な実施形態では、本明細書で提供される変異型ＫＲＡＳ、変異したがんドライバー遺伝子、または腫瘍関連抗原は、本明細書に記載される様々な１つまたは複数のリンカー、スペーサー、または切断部位によって分離される。

【0244】

５．１０使用方法
対象における腫瘍性疾患を予防及び／または処置するための方法であって、アレナウイルス粒子を対象に投与することを含み、アレナウイルス粒子が、本明細書で提供される変異型ＫＲＡＳ（５．７節を参照）をコードする、方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、アレナウイルス粒子は、本明細書で提供される変異型ＫＲＡＳ、変異したがんドライバー遺伝子（５．８節を参照、例えば変異型ＴＰ５３）、または腫瘍関連抗原（５．９節を参照）をコードする。ある特定の実施形態では、これらの方法は、腫瘍成長の抑制をもたらす。ある特定の実施形態では、これらの方法は、より低い再発率をもたらす。

【0245】

ある特定の実施形態では、対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、（ａ）対象に、第１のアレナウイルス粒子であって、変異型ＫＲＡＳ（５．７節を参照）、変異したがんドライバー遺伝子（５．８節を参照、例えば変異型ＴＰ５３）及び／または腫瘍関連抗原（５．９節を参照）をコードする、第１のアレナウイルス粒子を投与することと、（ｂ）対象に、第２のアレナウイルス粒子であって、変異型ＫＲＡＳ、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）及び／または腫瘍関連抗原を発現する、第２のアレナウイルス粒子を投与することとを含む、方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、（ａ）及び（ｂ）は、１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、または１０回繰り返される。一部の実施形態では、第１及び第２のアレナウイルス粒子は同時に投与される。他の実施形態では、（ａ）と（ｂ）の間隔は、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、または１２週間である。他の実施形態では、（ａ）と（ｂ）の間隔は、１３週間、１４週間、１５週間、１６週間、１７週間、１８週間、１９週間、２０週間、２２週間、２３週間、または２４週間である。他の実施形態では、（ａ）と（ｂ）の間隔は、２５週間、２６週間、２７週間、２８週間、２９週間、３０週間、３１週間、３２週間、３３週間、３４週間、３５週間、または３６週間である。さらに、（ａ）と（ｂ）とを繰り返している間、間隔は、（ａ）及び（ｂ）の元のサイクルと同じであっても、（ａ）及び（ｂ）の元のサイクルと異なっていてもよい。したがって、繰り返している時の（ａ）と（ｂ）の間隔は、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間であってもよい。ある特定の実施形態では、第１のアレナウイルス粒子及び第２のアレナウイルス粒子は、同じ抗原（複数可）をコードする、例えば、２つのアレナウイルス粒子は、同じ変異型ＫＲＡＳ（複数可）、変異したがんドライバー遺伝子（複数可）（例えば、変異型ＴＰ５３（複数可））及び／または腫瘍関連抗原（複数可）をコードする。ある特定の実施形態では、第１のアレナウイルス粒子及び第２のアレナウイルス粒子は、異なる抗原をコードする、例えば、第１のアレナウイルス粒子は変異型ＫＲＡＳのみをコードし、第２のアレナウイルス粒子は、本明細書で提供される変異型ＫＲＡＳ、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）及び／または腫瘍関連抗原をコードする。ある特定の実施形態では、第１のアレナウイルス粒子は変異型ＫＲＡＳのみをコードし、第２のアレナウイルス粒子は、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）及び／または腫瘍関連抗原をコードする。ある特定の実施形態では、第１のアレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳ、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）及び／または腫瘍関連抗原をコードし、第２のアレナウイルス粒子は変異型ＫＲＡＳのみをコードする。ある特定の実施形態では、第１のアレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳ、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）及び／または腫瘍関連抗原をコードし、第２のアレナウイルス粒子は、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）及び／または腫瘍関連抗原をコードする。

【0246】

ある特定の実施形態では、第１のアレナウイルス粒子及び第２のアレナウイルス粒子は同じである。ある特定の実施形態では、第１のアレナウイルス粒子及び第２のアレナウイルス粒子は、同じ（すなわち、同じ骨格を有する）アレナウイルスに由来するが、異なる変異型ＫＲＡＳ（５．７節を参照）、変異したがんドライバー遺伝子（５．８節を参照、例えば変異型ＴＰ５３）、または腫瘍関連抗原（５．９節を参照）を発現する。ある特定の実施形態では、第１のアレナウイルス粒子及び第２のアレナウイルス粒子は、異なる（すなわち、異なる骨格を有する）アレナウイルスに由来するが、同じ変異型ＫＲＡＳ（複数可）、変異型ＴＰ５３（複数可）、変異したがんドライバー遺伝子（複数可）、または腫瘍関連抗原（複数可）を発現する。ある特定の実施形態では、第１のアレナウイルス粒子及び第２のアレナウイルス粒子は、異なる（すなわち、異なる骨格を有する）アレナウイルスに由来し、異なる変異型ＫＲＡＳ、変異型ＴＰ５３（複数可）、変異したがんドライバー遺伝子、または腫瘍関連抗原を発現する。

【0247】

ある特定の実施形態では、対象における腫瘍性疾患を処置するための方法であって、（ａ）対象に、第１のアレナウイルス粒子であって、複製可能であり、本明細書で提供される変異型ＫＲＡＳ（５．７節を参照）、変異したがんドライバー遺伝子（５．８節を参照、例えば変異型ＴＰ５３）、または腫瘍関連抗原（５．９節を参照）を発現する、第１のアレナウイルス粒子を投与することと、（ｂ）対象に、第２のアレナウイルス粒子であって、変異型ＫＲＡＳ、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）、または腫瘍関連抗原を発現する、第２のアレナウイルス粒子を投与することとを含む、方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、第１のアレナウイルス粒子は３セグメント型（５．６（ｂ）節を参照）である。具体的な実施形態では、第１のアレナウイルス粒子は複製可能である。具体的な実施形態では、第２のアレナウイルス粒子は複製欠陥である。具体的な実施形態では、第２のアレナウイルス粒子は複製可能である。ある特定の実施形態では、第２のアレナウイルス粒子は３セグメント型である。具体的な実施形態では、第２のアレナウイルス粒子は３セグメント型かつ複製可能である。

【0248】

ある特定の実施形態では、対象における腫瘍性疾患を処置する方法であって、変異型ＫＲＡＳ（５．７節を参照）の抗原性断片をコードするヌクレオチド配列を含むアレナウイルス粒子を投与することを含み、腫瘍性疾患が膵癌、結腸直腸癌、肺腺癌、肺扁平上皮癌、または非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）である、方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、アレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳ（５．８節を参照）の抗原性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列を含み、ここで、抗原性断片は変異を含み、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｒ、Ｑ６１Ｈ、Ｑ６１Ｒ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｓ、及び／またはＧ１２Ａであり、腫瘍性疾患は膵癌である。ある特定の実施形態では、アレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳ、変異型ＴＰ５３及び／または変異型Ｕ２ＡＦ１（５．８節を参照）の抗原性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列を含み、ここで、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｒ、Ｑ６１Ｈ及び／またはＱ６１Ｒであり、ＴＰ５３の変異は、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ２４８Ｗ、Ｇ２４５Ｓ、Ｒ２８２Ｗ、Ｒ２４８Ｑ及び／またはＲ２７３Ｃであり、Ｕ２ＡＦ１の変異はＳ３４Ｆであり、腫瘍性疾患は膵癌である。ある特定の実施形態では、アレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列を含み、ここで、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１３Ｄ、Ａ１４６Ｔ、Ｇ１２Ｓ、Ｑ６１Ｈ、Ｇ１２Ａ、及び／またはＱ６１Ｒであり、腫瘍性疾患は膵癌、結腸直腸癌または肺腺癌である。ある特定の実施形態では、アレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列を含み、ここで、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１３Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、及びＧ１２Ｒであり、腫瘍性疾患は膵癌、結腸直腸癌または肺腺癌である。ある特定の実施形態では、アレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳ、変異型ＢＲＡＦ、変異型ＴＰ５３、変異型ＦＢＸＷ７、及び／または変異型ＰＩＫ３ＣＡの抗原性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列を含み、ここで、抗原性断片は変異を含み、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１３Ｄ、Ａ１４６Ｔ及び／またはＧ１２Ｃであり、ＢＲＡＦの変異はＶ６００Ｅであり、ＴＰ５３の変異は、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ２７３Ｈ及び／またはＲ２４８Ｗであり、ＦＢＸＷ７の変異はＲ４６５Ｈであり、ＰＩＫ３ＣＡの変異は、Ｅ５４５Ｋ及び／またはＨ１０４７Ｒであり、腫瘍性疾患は結腸直腸癌または肺腺癌である。ある特定の実施形態では、アレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳ、変異型ＢＲＡＦ、変異型ＰＩＫ３ＣＡ、変異型ＥＧＦＲ、変異型ＴＰ５３、及び／または変異型Ｕ２ＡＦ１の抗原性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列を含み、ここで、抗原性断片は変異を含み、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１３Ｄ及び／またはＧ１２Ｖであり、ＢＲＡＦの変異はＶ６００Ｅであり、ＰＩＫ３ＣＡの変異はＥ５４５Ｋであり、ＥＧＦＲの変異はＬ８５８Ｒであり、ＴＰ５３の変異は、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ２７３Ｈ及び／またはＲ２４８Ｗであり、Ｕ２ＡＦ１の変異はＳ３４Ｆであり、腫瘍性疾患は膵癌、結腸直腸癌または肺腺癌である。ある特定の実施形態では、アレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳ、変異型ＴＰ５３、変異型Ｕ２ＡＦ１、変異型ＰＩＫ３ＣＡ、変異型ＥＧＦＲ及び／または変異型ＢＲＡＦの抗原性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列を含み、ここで、抗原性断片は変異を含み、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｄ、及び／またはＧ１２Ｓであり、ＴＰ５３の変異はＲ１７５Ｈであり、Ｕ２ＡＦ１の変異はＳ３４Ｆであり、ＥＧＦＲの変異は、Ｌ８５８Ｒ、Ｌ８６１Ｑ及び／またはＥ７４６＿Ａ７５０ｄｅｌであり、ＰＩＫ３ＣＡの変異はＥ５４５Ｋ及び／またはＥ５４２Ｋであり、ＢＲＡＦの変異はＶ６００Ｅであり、腫瘍性疾患は肺腺癌である。ある特定の実施形態では、アレナウイルス粒子は、変異型ＡＫＴ１、変異型ＢＲＡＦ、変異型ＨＥＲ２、変異型ＭＥＫ１、変異型ＭＥＴ、変異型ＮＲＡＳ、変異型ＰＩＫ３ＣＡ及び／または変異型ＲＥＴの抗原性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列を含み、ここで、抗原性断片は変異を含み、腫瘍性疾患は非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）である。ある特定の実施形態では、アレナウイルス粒子は、変異型ＡＫＴ１、変異型ＢＲＡＦ、変異型ＨＥＲ２、変異型ＭＥＫ１、変異型ＭＥＴ、変異型ＮＲＡＳ、変異型ＰＩＫ３ＣＡ、変異型ＲＥＴ、変異型ＡＰＣ、変異型Ｕ２ＡＦ１、変異型ＥＧＦＲ、変異型ＦＢＸＷ７、変異型ＳＭＡＤ４、変異型ＧＮＡＳ、変異型ＥＲＢＢ２、変異型ＥＲＢＢ３、変異型ＣＤＫＮ２Ａ、変異型ＴＰ５３及び／または変異型ＣＴＮＮＢ１の抗原性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列を含み、ここで、抗原性断片はそれぞれの変異を含む。ある特定の実施形態では、アレナウイルス粒子は、変異型Ｕ２ＡＦ１の抗原性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列を含み、ここで、抗原性断片は変異を含み、Ｕ２ＡＦ１の変異はＳ３４Ｆである。ある特定の実施形態では、アレナウイルス粒子は、変異型ＴＰ５３の抗原性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列を含み、ここで、抗原性断片は変異を含み、ＴＰ５３の変異は、Ｇ２４５Ｓ、Ｙ２２０Ｃ、Ｒ２４８Ｑ、Ｒ２８２Ｗ、Ｈ１７９Ｒ、Ｖ１５７Ｆ、Ｒ２７３Ｃ、Ｒ２１３Ｌ、Ｒ２７３Ｈ、Ｒ２７３Ｌ、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ１５８Ｌ、Ｒ１９６Ｐ、Ｒ２４８ＷまたはＣ２７７Ｆである。ある特定の実施形態では、アレナウイルス粒子は、ＢＩＲＣファミリー、ＣＥＡＣＡＭファミリー、ＣＴＡファミリー、ＥＰＨファミリー、ＥＲＢＢファミリー、ＦＯＬＲファミリー、ＧＡＳＴファミリー、ＧＵＣＹ２ファミリー、ＩＤＯファミリー、ＩＬ１３ＲＡファミリー、ＫＤＲファミリー、ＫＬＫファミリー、ＭＡＧＥファミリー、ＭＵＣファミリー、ＰＥＭＴファミリー、ＳＤＣファミリー、ＳＬＡＭＦファミリー、ＴＥＲＴファミリー、ＴＬＲファミリー、ＴＰＴＥファミリー、ＴＹＲファミリー、ＷＴファミリー及び／またはＸＢＰファミリー（５．９節を参照）の抗原性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列を含み、ここで、抗原性断片は変異を含む。

【0249】

ある特定の実施形態では、対象における腫瘍性疾患を処置する方法であって、第２のアレナウイルス粒子を投与することをさらに含み、第２のアレナウイルス粒子が、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードするヌクレオチド配列を含み、抗原性断片が変異を含み、ＫＲＡＳの変異が、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｒ、Ｑ６１Ｈ、Ｑ６１Ｒ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｓ、及び／またはＧ１２Ａであり、腫瘍性疾患が膵癌である、方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、第２のアレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳ、変異型ＴＰ５３、及び／または変異型Ｕ２ＡＦ１の抗原性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列を含み、ここで、抗原性断片は変異を含み、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｒ、Ｑ６１Ｈ及び／またはＱ６１Ｒであり、ＴＰ５３の変異は、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ２４８Ｗ、Ｇ２４５Ｓ、Ｒ２８２Ｗ、Ｒ２４８Ｑ及び／またはＲ２７３Ｃであり、Ｕ２ＡＦ１の変異はＳ３４Ｆであり、腫瘍性疾患は膵癌である。ある特定の実施形態では、第２のアレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列を含み、ここで、抗原性断片は変異を含み、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１３Ｄ、Ａ１４６Ｔ、Ｇ１２Ｓ、Ｑ６１Ｈ、Ｇ１２Ａ、及び／またはＱ６１Ｒであり、腫瘍性疾患は膵癌、結腸直腸癌または肺腺癌である。ある特定の実施形態では、第２のアレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列を含み、ここで、抗原性断片は変異を含み、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１３Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、及びＧ１２Ｒであり、腫瘍性疾患は膵癌、結腸直腸癌または肺腺癌である。ある特定の実施形態では、第２のアレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳ、変異型ＢＲＡＦ、変異型ＴＰ５３、変異型ＦＢＸＷ７及び／または変異型ＰＩＫ３ＣＡの抗原性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列を含み、ここで、抗原性断片は変異を含み、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１３Ｄ、Ａ１４６Ｔ及び／またはＧ１２Ｃであり、ＢＲＡＦの変異はＶ６００Ｅであり、ＴＰ５３の変異は、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ２７３Ｈ及び／またはＲ２４８Ｗであり、ＦＢＸＷ７の変異はＲ４６５Ｈであり、ＰＩＫ３ＣＡの変異は、Ｅ５４５Ｋ及び／またはＨ１０４７Ｒであり、腫瘍性疾患は結腸直腸癌または肺腺癌である。ある特定の実施形態では、第２のアレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳ、変異型ＢＲＡＦ、変異型ＰＩＫ３ＣＡ、変異型ＥＧＦＲ、変異型ＴＰ５３、及び／または変異型Ｕ２ＡＦ１の抗原性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列を含み、ここで、抗原性断片は変異を含み、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１３Ｄ及び／またはＧ１２Ｖであり、ＢＲＡＦの変異はＶ６００Ｅであり、ＰＩＫ３ＣＡの変異はＥ５４５Ｋであり、ＥＧＦＲの変異はＬ８５８Ｒであり、ＴＰ５３の変異は、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ２７３Ｈ及び／またはＲ２４８Ｗであり、Ｕ２ＡＦ１の変異はＳ３４Ｆであり、腫瘍性疾患は膵癌、結腸直腸癌または肺腺癌である。ある特定の実施形態では、第２のアレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳ、変異型ＴＰ５３、変異型Ｕ２ＡＦ１、変異型ＰＩＫ３ＣＡ、変異型ＥＧＦＲ及び／または変異型ＢＲＡＦの抗原性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列を含み、ここで、抗原性断片は変異を含み、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｄ、及び／またはＧ１２Ｓであり、ＴＰ５３の変異はＲ１７５Ｈであり、Ｕ２ＡＦ１の変異はＳ３４Ｆであり、ＥＧＦＲの変異は、Ｌ８５８Ｒ、Ｌ８６１Ｑ及び／またはＥ７４６＿Ａ７５０ｄｅｌであり、ＰＩＫ３ＣＡの変異は、Ｅ５４５Ｋ及び／またはＥ５４２Ｋであり、ＢＲＡＦの変異はＶ６００Ｅであり、腫瘍性疾患は肺腺癌である。ある特定の実施形態では、第２のアレナウイルス粒子は、変異型ＡＫＴ１、変異型ＢＲＡＦ、変異型ＨＥＲ２、変異型ＭＥＫ１、変異型ＭＥＴ、変異型ＮＲＡＳ、変異型ＰＩＫ３ＣＡ及び／または変異型ＲＥＴの抗原性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列を含み、ここで、抗原性断片は変異を含み、腫瘍性疾患は非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）である。ある特定の実施形態では、第２のアレナウイルス粒子は、変異型ＡＫＴ１、変異型ＢＲＡＦ、変異型ＨＥＲ２、変異型ＭＥＫ１、変異型ＭＥＴ、変異型ＮＲＡＳ、変異型ＰＩＫ３ＣＡ、変異型ＲＥＴ、変異型ＡＰＣ、変異型Ｕ２ＡＦ１、変異型ＥＧＦＲ、変異型ＦＢＸＷ７、変異型ＳＭＡＤ４、変異型ＧＮＡＳ、変異型ＥＲＢＢ２、変異型ＥＲＢＢ３、変異型ＣＤＫＮ２Ａ、変異型ＦＢＸＷ７、変異型ＴＰ５３及び／または変異型ＣＴＮＮＢ１（５．８節を参照）の抗原性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列を含み、ここで、抗原性断片は変異を含む。ある特定の実施形態では、第２のアレナウイルス粒子は、変異型Ｕ２ＡＦ１の抗原性断片をコードするヌクレオチド配列を含み、ここで、抗原性断片は変異を含み、Ｕ２ＡＦ１の変異はＳ３４Ｆである。ある特定の実施形態では、第２のアレナウイルス粒子は、変異型ＴＰ５３の抗原性断片をコードするヌクレオチド配列を含み、ここで、抗原性断片は変異を含み、ＴＰ５３の変異は、Ｇ２４５Ｓ、Ｙ２２０Ｃ、Ｒ２４８Ｑ、Ｒ２８２Ｗ、Ｈ１７９Ｒ、Ｖ１５７Ｆ、Ｒ２７３Ｃ、Ｒ２１３Ｌ、Ｒ２７３Ｈ、Ｒ２７３Ｌ、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ１５８Ｌ、Ｒ１９６Ｐ、Ｒ２４８Ｗ及び／またはＣ２７７Ｆ（５．８節を参照）である。ある特定の実施形態では、第２のアレナウイルス粒子は、ＢＩＲＣファミリー、ＣＥＡＣＡＭファミリー、ＣＴＡファミリー、ＥＰＨファミリー、ＥＲＢＢファミリー、ＦＯＬＲファミリー、ＧＡＳＴファミリー、ＧＵＣＹ２ファミリー、ＩＤＯファミリー、ＩＬ１３ＲＡファミリー、ＫＤＲファミリー、ＫＬＫファミリー、ＭＡＧＥファミリー、ＭＵＣファミリー、ＰＥＭＴファミリー、ＳＤＣファミリー、ＳＬＡＭＦファミリー、ＴＥＲＴファミリー、ＴＬＲファミリー、ＴＰＴＥファミリー、ＴＹＲファミリー、ＷＴファミリー及び／またはＸＢＰファミリー（５．９節を参照）の抗原性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列を含む。

【0250】

ある特定の実施形態では、対象における腫瘍性疾患を処置する方法であって、変異型ＫＲＡＳ（５．７節を参照）の抗原性断片をコードするヌクレオチド配列を含むアレナウイルス粒子を投与することを含み、腫瘍性疾患が、膵癌、結腸直腸癌、肺腺癌、肺扁平上皮癌、または非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）である、方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、アレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列を含み、ここで、抗原性断片は変異を含み、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１３Ｄ、Ａ１４６Ｔ、Ｇ１２Ｓ、Ｑ６１Ｈ、Ｇ１２Ａ、及び／またはＱ６１Ｒであり、腫瘍性疾患は膵癌、結腸直腸癌または肺腺癌である。ある特定の実施形態では、アレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列を含み、ここで、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１３Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、及びＧ１２Ｒであり、腫瘍性疾患は膵癌、結腸直腸癌または肺腺癌である。ある特定の実施形態では、アレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列を含み、ここで、抗原性断片は変異を含み、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｒ、Ｑ６１Ｈ、Ｑ６１Ｒ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｓ、及び／またはＧ１２Ａであり、腫瘍性疾患は膵癌である。ある特定の実施形態では、アレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳ及び／または変異型ＴＰ５３の抗原性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列を含み、ここで、抗原性断片は変異を含み、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｒ。Ｇ１２Ｖ、Ｑ６１Ｈ及び／またはＱ６１Ｒであり、ＴＰ５３の変異は、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ２４８Ｗ、Ｇ２４５Ｓ、Ｒ２８２Ｗ、Ｒ２４８Ｑ及び／またはＲ２７３Ｃであり、腫瘍性疾患は膵癌である。ある特定の実施形態では、アレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳ及び／または変異型ＴＰ５３の抗原性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列を含み、ここで、抗原性断片は変異を含み、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１３Ｄ、Ａ１４６Ｔ及び／またはＧ１２Ｃであり、ＴＰ５３の変異は、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ２７３Ｈ及び／またはＲ２４８Ｗであり、腫瘍性疾患は結腸直腸癌または肺腺癌である。ある特定の実施形態では、アレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳ及び／または変異型ＴＰ５３の抗原性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列を含み、ここで、抗原性断片は変異を含み、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１３Ｄ及び／またはＧ１２Ｖであり、ＴＰ５３の変異は、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ２７３Ｈ及び／またはＲ２４８Ｗであり、腫瘍性疾患は膵癌、結腸直腸癌または肺腺癌である。ある特定の実施形態では、アレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳ及び／または変異型ＴＰ５３の抗原性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列を含み、ここで、抗原性断片は変異を含み、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｄ、及び／またはＧ１２Ｓであり、ＴＰ５３の変異はＲ１７５Ｈであり、腫瘍性疾患は肺腺癌である。

【0251】

ある特定の実施形態では、アレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳ及び／または変異型ＴＰ５３の抗原性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列を含み、ここで、抗原性断片はそれぞれの変異を含む。ある特定の実施形態では、アレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳ及び／または変異型ＴＰ５３の抗原性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列を含み、ここで、抗原性断片は変異を含み、ＴＰ５３の変異は、Ｇ２４５Ｓ、Ｙ２２０Ｃ、Ｒ２４８Ｑ、Ｒ２８２Ｗ、Ｈ１７９Ｒ、Ｖ１５７Ｆ、Ｒ２７３Ｃ、Ｒ２１３Ｌ、Ｒ２７３Ｈ、Ｒ２７３Ｌ、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ１５８Ｌ、Ｒ１９６Ｐ、Ｒ２４８ＷまたはＣ２７７Ｆである。

【0252】

ある特定の実施形態では、対象における腫瘍性疾患を処置する方法であって、第２のアレナウイルス粒子を投与することをさらに含み、第２のアレナウイルス粒子が、変異型ＫＲＡＳ（５．７節を参照）の抗原性断片をコードするヌクレオチド配列を含み、抗原性断片が変異を含み、腫瘍性疾患が膵癌である、方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、第２のアレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列を含み、ここで、抗原性断片は変異を含み、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１３Ｄ、Ａ１４６Ｔ、Ｇ１２Ｓ、Ｑ６１Ｈ、Ｇ１２Ａ、及び／またはＱ６１Ｒであり、腫瘍性疾患は膵癌、結腸直腸癌または肺腺癌である。

【0253】

ある特定の実施形態では、第２のアレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列を含み、ここで、抗原性断片は変異を含み、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｒ、Ｑ６１Ｈ、Ｑ６１Ｒ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｓ、及び／またはＧ１２Ａであり、腫瘍性疾患は膵癌である。

【0254】

ある特定の実施形態では、第２のアレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳ及び／または変異型ＴＰ５３の抗原性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列を含み、ここで、抗原性断片は変異を含み、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１２Ｖ、Ｑ６１Ｈ及び／またはＱ６１Ｒであり、ＴＰ５３の変異は、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ２４８Ｗ、Ｇ２４５Ｓ、Ｒ２８２Ｗ、Ｒ２４８Ｑ及び／またはＲ２７３Ｃであり、腫瘍性疾患は膵癌である。ある特定の実施形態では、第２のアレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳ及び／または変異型ＴＰ５３の抗原性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列を含み、ここで、抗原性断片は変異を含み、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１３Ｄ、Ａ１４６Ｔ及び／またはＧ１２Ｃであり、ＴＰ５３の変異は、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ２７３Ｈ及び／またはＲ２４８Ｗであり、腫瘍性疾患は結腸直腸癌または肺腺癌である。ある特定の実施形態では、第２のアレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳ及び／または変異型ＴＰ５３の抗原性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列を含み、ここで、抗原性断片は変異を含み、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１３Ｄ及び／またはＧ１２Ｖであり、ＴＰ５３の変異は、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ２７３Ｈ及び／またはＲ２４８Ｗであり、腫瘍性疾患は膵癌、結腸直腸癌または肺腺癌である。ある特定の実施形態では、第２のアレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳ及び／または変異型ＴＰ５３の抗原性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列を含み、ここで、抗原性断片は変異を含み、ＫＲＡＳの変異は、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｄ、及び／またはＧ１２Ｓであり、ＴＰ５３の変異はＲ１７５Ｈであり、腫瘍性疾患は肺腺癌である。ある特定の実施形態では、第２のアレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳ及び／または変異型ＴＰ５３の抗原性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列を含み、ここで、抗原性断片は変異を含む。ある特定の実施形態では、第２のアレナウイルス粒子は、変異型ＫＲＡＳ及び／または変異型ＴＰ５３の抗原性断片をコードするヌクレオチド配列を含み、ここで、抗原性断片は変異を含み、ＴＰ５３の変異は、Ｇ２４５Ｓ、Ｙ２２０Ｃ、Ｒ２４８Ｑ、Ｒ２８２Ｗ、Ｈ１７９Ｒ、Ｖ１５７Ｆ、Ｒ２７３Ｃ、Ｒ２１３Ｌ、Ｒ２７３Ｈ、Ｒ２７３Ｌ、Ｒ１７５Ｈ、Ｒ１５８Ｌ、Ｒ１９６Ｐ、Ｒ２４８Ｗ及び／またはＣ２７７Ｆ（５．８節を参照）である。

【0255】

がん患者の処置の成功は、予想生存期間の延長、抗腫瘍免疫応答の誘導、またはがんの特定の特徴の改善として評価することができる。改善し得るがんの特徴の例としては、腫瘍サイズ（例えば、Ｔ０、Ｔは、またはＴ１～４）、転移の状態（例えば、Ｍ０、Ｍ１）、観察可能な腫瘍の数、リンパ節転移（例えば、Ｎ０、Ｎ１～４、Ｎｘ）、グレード（すなわち、グレード１、２、３、または４）、ステージ（例えば、０、Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶ）、細胞上もしくは体液中のある特定のマーカーの存在もしくは濃度（例えば、ＡＦＰ、Ｂ２Ｍ、ベータ－ＨＣＧ、ＢＴＡ、ＣＡ１５－３、ＣＡ２７．２９、ＣＡ１２５、ＣＡ７２．４、ＣＡ１９－９、カルシトニン、ＣＥＡ、クロモグラニンＡ、ＥＧＦＲ、ホルモン受容体、ＨＥＲ２、ＨＣＧ、免疫グロブリン、ＮＳＥ、ＮＭＰ２２、ＰＳＡ、ＰＡＰ、ＰＳＭＡ、Ｓ－１００、ＴＡ－９０、及びサイログロブリン）、及び／または関連する病態（例えば、腹水または浮腫）もしくは症状（例えば、悪液質、発熱、食欲不振、または疼痛）が挙げられる。パーセントによって測定可能な場合、改善は、少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、または９０％の改善であり得る（例えば、生存期間、または腫瘍の体積もしくは直線寸法）。

【0256】

別の実施形態では、本明細書で提供される変異型ＫＲＡＳ（５．７節を参照）、変異したがんドライバー遺伝子（５．８節を参照、例えば変異型ＴＰ５３）、または腫瘍関連抗原（５．９節を参照）を発現するアレナウイルス粒子は、腫瘍内注射によって対象に投与される。別の実施形態では、本明細書で提供される変異型ＫＲＡＳ、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）、または腫瘍関連抗原を発現するアレナウイルス粒子は、静脈内注射によって対象に投与される。

【0257】

別の実施形態では、本明細書で提供される変異型ＫＲＡＳ（５．７節を参照）、変異したがんドライバー遺伝子（５．８節を参照、例えば変異型ＴＰ５３）、もしくは腫瘍関連抗原（５．９節を参照）を発現するアレナウイルス粒子またはその組成物は、危険因子を有する対象に投与される。例示的な危険因子としては、加齢、タバコ、日光曝露、放射線曝露、化学物質曝露、家族歴、アルコール、不健康な食事、身体活動の不足、または過体重が挙げられる。

【0258】

別の実施形態では、本明細書で提供される変異型ＫＲＡＳ（５．７節を参照）、変異したがんドライバー遺伝子（５．８節を参照、例えば変異型ＴＰ５３）、もしくは腫瘍関連抗原（５．９節を参照）を発現するアレナウイルス粒子またはその組成物は、１つまたは複数の種類のがんに罹患している対象に投与される。他の実施形態では、本明細書に記載される組成物を用いる処置に感受性の、がんなどの任意の種類の腫瘍性疾患が標的とされ得る。

【0259】

別の実施形態では、本明細書で提供される変異型ＫＲＡＳ（５．７節を参照）、変異したがんドライバー遺伝子（５．８節を参照、例えば変異型ＴＰ５３）、もしくは腫瘍関連抗原（５．９節を参照）を発現するアレナウイルス粒子またはその組成物を対象に投与することは、新生細胞または腫瘍、例えばがん細胞または腫瘍に対する細胞媒介免疫（ＣＭＩ）を付与する。理論に拘束されるものではないが、別の実施形態では、本明細書で提供される変異型ＫＲＡＳ、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）、もしくは腫瘍関連抗原を発現するアレナウイルス粒子またはその組成物は、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）クラスＩ及びＩＩにおける抗原の直接提示のために宿主の抗原提示細胞（ＡＰＣ）（例えば、マクロファージ）に感染し、そこにおいて目的の抗原を発現させる。別の実施形態では、本明細書で提供される変異型ＫＲＡＳ、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）、もしくは腫瘍関連抗原を発現するアレナウイルス粒子またはその組成物を対象に投与することは、大規模の多機能性ＩＦＮ－γ及びＴＮＦ－α同時産生がん特異的ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞応答（ＩＦＮ－γはＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞によって産生され、ＴＮＦ－αはＣＤ４＋Ｔ細胞によって産生される）を誘導して、腫瘍性疾患を処置する。

【0260】

別の実施形態では、本明細書で提供される変異型ＫＲＡＳ（５．７節を参照）、変異したがんドライバー遺伝子（５．８節を参照、例えば変異型ＴＰ５３）、もしくは腫瘍関連抗原（５．９節を参照）を発現するアレナウイルス粒子またはその組成物を投与することは、がん処置に関する１つまたは複数の臨床転帰を向上または改善する。そのような転帰の非限定的な例は、全生存期間、無憎悪生存期間、無憎悪期間、治療成功期間、無イベント生存期間、次治療開始までの期間、全奏効率及び奏効期間である。臨床転帰のうちの１つまたは複数の向上または改善は、そのような処置の非存在下における同じ腫瘍性疾患を有する患者または患者群と比較して少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、または少なくとも約９０％以上の向上または改善であり得る。

【0261】

対象における、本明細書で提供される変異型ＫＲＡＳ（５．７節を参照）、変異したがんドライバー遺伝子（５．８節を参照、例えば変異型ＴＰ５３）、もしくは腫瘍関連抗原（５．９節を参照）を発現するアレナウイルス粒子またはその組成物を投与することによって誘導される、がん細胞または腫瘍を含む新生細胞または腫瘍に対する細胞媒介免疫（ＣＭＩ）応答機能の変化は、当業者に公知の任意のアッセイ、例えば、これらに限定されないが、フローサイトメトリー（例えば、Ｐｅｒｆｅｔｔｏ Ｓ．Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎ．２００４；４（８）：６４８－５５を参照）、リンパ球増殖アッセイ（例えば、Ｂｏｎｉｌｌａ Ｆ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ Ａｌｌｅｒｇｙ Ａｓｔｈｍａ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００８；１０１：１０１－４、及びＨｉｃｋｓ Ｍ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ａｍ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐａｔｈｏｌ．１９８３；８０：１５９－６３を参照）、Ｔリンパ球のサイトカインの測定の実施後の表面マーカー発現の変化を決定することを含むリンパ球活性化を測定するアッセイ（例えば、Ｃａｒｕｓｏ Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ．１９９７；２７：７１－６を参照）、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイ（例えば、Ｃｚｅｒｋｉｎｓｋｙ Ｃ．Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．１９８３；６５：１０９－１２１、及びＨｕｔｃｈｉｎｇｓ Ｐ．Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．１９８９；１２０：１－８を参照）、またはナチュラルキラー細胞の細胞傷害性アッセイ（例えば、Ｂｏｎｉｌｌａ Ｆ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ Ａｌｌｅｒｇｙ Ａｓｔｈｍａ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００５ Ｍａｙ；９４（５ Ｓｕｐｐｌ １）：Ｓ１－６３を参照）によって測定することができる。

【0262】

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される処置は、化学療法剤とさらに組み合わせることができる。化学療法剤としては、アルキル化剤（例えば、シクロホスファミド）、プラチナ系治療剤、代謝拮抗剤、トポイソメラーゼ阻害剤、細胞毒性抗生物質、インターカレート剤、有糸分裂阻害剤、タキサン、またはそれらのうちの２つ以上の組合せが挙げられる。ある特定の実施形態では、アルキル化剤は、ナイトロジェンマスタード、ニトロソウレア、アルキルスルホネート、非古典的アルキル化剤、またはトリアゼンである。ある特定の実施形態では、化学療法剤は、シクロホスファミド、チオテパ、メクロレタミン（クロルメチン／ムスチン）、ウラムスチン、メルファラン、クロラムブシル、イホスファミド、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、ノベムビシン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード、ベンダムスチン、ブスルファン、インプロスルファン、ピポスルファン、カルムスチン、ロムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ニムスチン、ラニムスチン、ストレプトゾシン、シスプラチン、カルボプラチン、ネダプラチン、オキサリプラチン、サトラプラチン、四硝酸トリプラチン、プロカルバジン、アルトレタミン、ダカルバジン、ミトゾロミド、テモゾロミド、パクリタキセル、ドセタキセル、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、カバジタキセル、ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）、カリケアミシン、ジネミシン、アムサクリン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、ミトキサントロン、イダルビシン、ピラルビシン、ベンゾドパ、カルボコン、メツレドパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）、ウレドパ（ｕｒｅｄｏｐａ）、アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド、トリメチロールメラミン、ブラタシン、ブラタシノン、カンプトテシン、トポテカン、ブリオスタチン、カリスタチン、ＣＣ－１０６５、アドゼレシン、カルゼレシン、ビゼレシン、クリプトフィシン、ドラスタチン、デュオカルマイシン、ＫＷ－２１８９、ＣＢ１－ＴＭ１、エレウテロビン、パンクラチスタチン、サルコディクチン、スポンジスタチン、クロドロネート、エスペラミシン、ネオカルジノスタチン発色団、アクラシノマイシン、アントラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、デトルビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、クエラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン、メトトレキセート、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）、デノプテリン、プテロプテリン、トリメトレキセート、フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン、アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン、カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン、ミトタン、トリロスタン、フロリン酸、アセグラトン、アルドホスファミドグリコシド、アミノレブリン酸、エニルウラシル、ベストラブシル、ビサントレン、エダトラキセート、デフォファミン、デメコルシン、ジアジコン、エフロルニチン、酢酸エリプチニウム、エトグルシド、硝酸ガリウム、ヒドロキシ尿素、レンチナン、ロニダミン、メイタンシン、アンサミトシン、ミトグアゾン、モピダンモール、ニトラエリン、ペントスタチン、フェナメット、ピラルビシン、ロソキサントロン、ポドフィリン酸、２－エチルヒドラジド、ＰＳＫ多糖複合体、ラゾキサン、リゾキシン、シゾフィラン、スピロゲルマニウム、テヌアゾン酸、トリアジコン、２，２’，２”－トリクロロトリエチルアミン；Ｔ－２毒素、ベラキュリンＡ、ロリジンＡ及びアングイジン、ウレタン（ｕｒｅｔｈａｎ）、ビンデシン、マンノムスチン、ミトブロニトール、ミトラクトール、ピポブロマン、ガシトシン、アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）、エトポシド（ＶＰ－１６）、ビノレルビン、ノバントロン、テニポシド、エダトレキセート、アミノプテリン、ゼローダ、イバンドロネート、イリノテカン（例えば、ＣＰＴ－１１）、トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００、ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）、レチノイン酸、カペシタビン、プリコマイシン、ゲムシタビン、ナベルビン、トランスプラチナ（ｔｒａｎｓｐｌａｔｉｎｕｍ）、ならびに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸、または誘導体のうちの１つまたは複数を含む。

【0263】

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される変異型ＫＲＡＳ（５．７節を参照）、変異したがんドライバー遺伝子（５．８節を参照、例えば変異型ＴＰ５３）、もしくは腫瘍関連抗原（５．９節を参照）を発現する１つもしくは複数のアレナウイルス粒子またはその組成物は、１時間の期間、２時間の期間、３時間の期間、６時間の期間、１２時間の期間、２４時間の期間、または４８時間の期間にわたる２回以上の別個の注射において投与される。

【0264】

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される変異型ＫＲＡＳ（５．７節を参照）、変異したがんドライバー遺伝子（５．８節を参照、例えば変異型ＴＰ５３）、もしくは腫瘍関連抗原（５．９節を参照）を発現する１つもしくは複数のアレナウイルス粒子またはその組成物は、３日の期間、５日の期間、１週間の期間、２週間の期間、３週間の期間、４週間の期間、または１２週間の期間にわたる２回以上の別個の注射において投与される。

【0265】

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される変異型ＫＲＡＳ（５．７節を参照）、変異したがんドライバー遺伝子（５．８節を参照、例えば変異型ＴＰ５３）、もしくは腫瘍関連抗原（５．９節を参照）を発現する１つもしくは複数のアレナウイルス粒子またはその組成物は、６か月の期間、１２か月の期間、２４か月の期間、または４８か月の期間にわたる２回以上の別個の注射において投与される。

【0266】

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される２つのアレナウイルス粒子は、処置計画において投与され、投与は、約１：１～１：１０００の範囲のモル比、特に、例えば１：１の比、１：２の比、１：５の比、１：１０の比、１：２０の比、１：５０の比、１：１００の比、１：２００の比、１：３００の比、１：４００の比、１：５００の比、１：６００の比、１：７００の比、１：８００の比、１：９００の比、１：１０００の比であり得る。

【0267】

ある特定の実施形態では、腫瘍性疾患を処置する方法であって、第１のアレナウイルス粒子が最初に「プライム」として投与され、第２のアレナウイルス粒子が「ブースト」として投与される、方法が本明細書で提供される。第１及び第２のアレナウイルス粒子は、同じまたは異なる変異型ＫＲＡＳ、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）、または腫瘍関連抗原を発現することができる。代替的にまたは付加的に、一部のある特定の実施形態では、「プライム」及び「ブースト」投与は、異なるアレナウイルス種に由来するアレナウイルス粒子を用いて実施される。ある特定の具体的な実施形態では、「プライム」投与は、ＬＣＭＶに由来するアレナウイルス粒子を用いて実施され、「ブースト」は、ピチンデウイルスに由来するアレナウイルス粒子を用いて実施される。ある特定の具体的な実施形態では、「プライム」投与は、ピチンデウイルスに由来するアレナウイルス粒子を用いて実施され、「ブースト」は、ＬＣＭＶに由来するアレナウイルス粒子を用いて実施される。

【0268】

ある特定の実施形態では、変異型ＫＲＡＳ（５．７節を参照）、変異したがんドライバー遺伝子（５．８節を参照、例えば変異型ＴＰ５３）及び／または腫瘍関連抗原（５．９節を参照）を発現する第１のアレナウイルス粒子を投与し、続いて変異型ＫＲＡＳ、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）及び／または腫瘍関連抗原を発現する第２のアレナウイルス粒子を投与することは、変異型ＫＲＡＳ、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）及び／または腫瘍関連抗原を発現する単一のアレナウイルス粒子を投与することよりも大きな抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞応答をもたらす。ある特定の実施形態では、抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞数は、第２の投与後に、第１の投与と比較して５０％、１００％、１５０％または２００％増加する。

【0269】

ある特定の実施形態では、変異型ＫＲＡＳ（５．７節を参照）、変異したがんドライバー遺伝子（５．８節を参照、例えば変異型ＴＰ５３）及び／または腫瘍関連抗原（５．９節を参照）を発現する第１のアレナウイルス粒子と、変異型ＫＲＡＳ、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）及び／または腫瘍関連抗原を発現する第２の異種アレナウイルス粒子とを投与することは、変異型ＫＲＡＳ、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）及び／または腫瘍関連抗原を発現する第１のアレナウイルス粒子と、変異型ＫＲＡＳ、変異したがんドライバー遺伝子（例えば、変異型ＴＰ５３）及び／または腫瘍関連抗原を発現する第２の同種アレナウイルス粒子とを投与することよりも大きなＣＤ８＋Ｔ細胞応答を誘発する。

【0270】

５．１１組成物、投与、及び投薬量
本明細書で提供されるアレナウイルス粒子を含むワクチン、免疫原性組成物（例えば、ワクチン製剤）、及び医薬組成物もまた本明細書で提供される。そのようなワクチン、免疫原性組成物、及び医薬組成物は、当技術分野における標準的手順に従って製剤化することができる。

【0271】

ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるアレナウイルス粒子（または種々のアレナウイルス粒子の組合せ）を含む免疫原性組成物が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、そのような免疫原性組成物は、薬学的に許容される賦形剤をさらに含む。ある特定の実施形態では、そのような免疫原性組成物はアジュバントをさらに含む。本明細書に記載される組成物と組み合わせて投与されるアジュバントは、上記組成物の投与の前、それと同時、またはその後に投与することができる。一部の実施形態では、「アジュバント」という用語は、本明細書に記載される組成物と共にまたはその一部として投与される場合には、感染性複製欠損アレナウイルス粒子に対する免疫応答を増幅、増強、及び／またはブーストするが、単独で投与される場合には感染性複製欠損アレナウイルス粒子に対する免疫応答を生じない化合物を指す。一部の実施形態では、アジュバントは、感染性複製欠損アレナウイルス粒子に対する免疫応答を生じ、アレルギーも他の有害反応も引き起こさない。アジュバントは、例えばリンパ球動員、Ｂ及び／またはＴ細胞の刺激、ならびにマクロファージの刺激を含むいくつかの機構によって免疫応答を増強することができる。本発明のワクチンまたは免疫原性組成物がアジュバントを含むかまたは１種もしくは複数種のアジュバントと一緒に投与される場合、使用することができるアジュバントとしては、これらに限定されないが、無機塩アジュバントまたは無機塩ゲルアジュバント、粒子アジュバント、微粒子アジュバント、粘膜アジュバント、及び免疫刺激アジュバントが挙げられる。アジュバントの例としては、これらに限定されないが、アルミニウム塩（アラム）（例えば、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、及び硫酸アルミニウム）、３デ－Ｏ－アシル化モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）（ＧＢ２２２０２１１を参照）、ＭＦ５９（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＡＳ０３（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、ＡＳ０４（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ８０、ＩＣＬ Ａｍｅｒｉｃａｓ，Ｉｎｃ．）、イミダゾピリジン化合物（国際公開第ＷＯ２００７／１０９８１２号として公開されている国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０６４８５７号を参照）、イミダゾキノキサリン化合物（国際公開第ＷＯ２００７／１０９８１３号として公開されている国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０６４８５８号を参照）、及びサポニン、例えばＱＳ２１（Ｋｅｎｓｉｌ ｅｔ ａｌ．，ｉｎ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｓｉｇｎ：Ｔｈｅ Ｓｕｂｕｎｉｔ ａｎｄ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ａｐｐｒｏａｃｈ（ｅｄｓ．Ｐｏｗｅｌｌ＆Ｎｅｗｍａｎ，Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ，１９９５）、米国特許第５，０５７，５４０号を参照）が挙げられる。一部の実施形態では、アジュバントはフロイントアジュバント（完全または不完全）である。他のアジュバントは、任意選択でモノホスホリルリピドＡなどの免疫刺激剤と組み合わされた水中油型エマルション（例えばスクアレンまたはピーナッツ油）である（Ｓｔｏｕｔｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３６，８６－９１（１９９７）を参照）。

【0272】

ある特定の実施形態では、本明細書に記載される組成物は、保存剤、例えば水銀誘導体のチメロサールをさらに含む。具体的な実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は、０．００１％～０．０１％のチメロサールを含む。他の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は保存剤を含まない。

【0273】

医薬組成物は、約１０^３～約１０^１１フォーカス形成単位の遺伝子操作アレナウイルス粒子を含む。非経口投与のための単位剤形は、例えばアンプルまたはバイアル、例えば、約１０^３～１０^１０フォーカス形成単位または１０^５～１０^１５個の物理粒子の遺伝子操作アレナウイルス粒子を含有するバイアルである。

【0274】

別の実施形態では、本明細書で提供されるワクチンまたは免疫原性組成物は、腫瘍内注射によって対象に投与される。別の実施形態では、本明細書で提供されるワクチンまたは免疫原性組成物は、静脈内注射によって対象に投与される。

【0275】

有効成分の投薬量は、ワクチン接種の種類、ならびに対象、及びその年齢、体重、個々の状態、個々の薬物動態データ、ならびに投与様式に依存する。

【0276】

ある特定の実施形態では、組成物は、単回用量として患者に投与され、続いて３～６週間後に第２の用量が投与される。これらの実施形態においては、２回目の接種から６～１２か月の間隔でブースター接種が対象に投与されてもよい。ある特定の実施形態では、ブースター接種には、異なるアレナウイルス粒子またはその組成物を利用してもよい。一部の実施形態では、本明細書に記載される同じ組成物の投与は、繰り返され、少なくとも１日、２日、３日、４日、５日、１０日、１５日、３０日、４５日、２か月、７５日、３か月、または少なくとも６か月の間隔を空けてもよい。

【0277】

ある特定の実施形態では、アレナウイルス粒子または３セグメント型アレナウイルス粒子の好適な投薬量は、１０^２、５×１０^２、１０^３、５×１０^３、１０^４、５×１０^４、１０^５、５×１０^５、１０^６、５×１０^６、１０^７、５×１０^７、１０^８、５×１０^８、１×１０^９、５×１０^９、１×１０^１０、５×１０^１０、１×１０^１１、５×１０^１１または１０^１２ｐｆｕであり、必要に応じて、間隔を空けて１回、２回、または３回以上対象に投与することができる。

【0278】

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される方法及び組成物は、個別化医療と組み合わせて使用される。個別化医療は、患者の固有の遺伝子プロファイル及び／またはエピジェネティックプロファイルからの情報を使用して、種々の療法に対する患者の応答を予測し、どの療法が効果的となる可能性がより高いかを特定することによって、患者に利益をもたらすことを目指す。患者の固有の遺伝子プロファイル及び／またはエピジェネティックプロファイルを得るために本明細書で提供される方法及び組成物と組み合わせて使用することができる技法としては、これらに限定されないが、ゲノム配列決定、ＲＮＡ配列決定、遺伝子発現解析、及び腫瘍抗原（例えば、新抗原）、腫瘍関連抗原またはその抗原性断片の同定が挙げられる。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される方法及び組成物における使用のためのアレナウイルス腫瘍抗原または腫瘍関連抗原の選択は、患者の遺伝子プロファイルに基づいて実施される。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される方法及び組成物における使用のためのアレナウイルス腫瘍抗原または腫瘍関連抗原の選択は、腫瘍または腫瘍細胞の遺伝子プロファイルに基づいて実施される。

【0279】

本明細書に記載される方法を実施するために使用することができるキットもまた本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、本明細書で提供されるキットは、１つまたは複数の容器を含み得る。これらの容器は、本明細書で提供される組成物（例えば、医薬組成物、免疫原性組成物、またはワクチン組成物）を保存のために保持することができる。キットには、使用説明書も含まれる。これらの説明書には、そこに含有されている組成物を使用するための治療プロトコルが十分詳細に記載されている。例えば、説明書には、本明細書で提供される、腫瘍性疾患を処置する方法のための投薬及び投与の説明書が含まれ得る。

【0280】

５．１２活性を実証するアッセイ
（ａ）アレナウイルス検出アッセイ
当業者であれば、当技術分野で公知の技法を使用して、本明細書に記載されるように、アレナウイルスゲノムセグメントまたはアレナウイルス粒子を検出することができるだろう。例えば、ＲＴ－ＰＣＲを、アレナウイルスに特異的なプライマーを用いて使用して、アレナウイルスゲノムセグメントまたは３セグメント型アレナウイルス粒子を検出及び定量することができる。ウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡ、放射免疫アッセイ、免疫沈降、免疫細胞化学、またはＦＡＣＳと組み合わせた免疫細胞化学を使用して、アレナウイルスゲノムセグメントまたはアレナウイルス粒子の遺伝子産物を定量することができる。

【0281】

（ｂ）感染力を測定するアッセイ
アレナウイルスベクター調製物の感染力を測定するために、当業者に公知の任意のアッセイを使用することができる。例えば、ウイルス／ベクター力価の決定は、「フォーカス形成単位アッセイ」（ＦＦＵアッセイ）によって行うことができる。簡潔に述べると、補完細胞、例えばＨＥＫ２９３－ＴＶＬ細胞をプレーティングし、それらに種々の希釈率のウイルス／ベクター試料を接種する。インキュベーション期間後、細胞が単層を形成し、ウイルスが細胞に付着することを可能にするために、単層をメチルセルロースで覆う。プレートをさらにインキュベートする場合、元の感染細胞はウイルス子孫を放出する。メチルセルロースオーバーレイのために、新たなウイルスの拡散は付近の細胞に制限される。その結果、各感染性粒子は、フォーカスと呼ばれる感染細胞の円形のゾーンを生成する。そのようなフォーカスは、ＬＣＭＶ－ＮＰまたはアレナウイルス粒子もしくは３セグメント型アレナウイルス粒子によって発現される別のタンパク質に対する抗体及びＨＲＰベースの呈色反応を使用して可視化し、したがって計数可能とすることができる。ウイルス／ベクターの力価は、フォーカス形成単位／ミリリットル（ＦＦＵ／ｍＬ）として算出することができる。同様に、３セグメント型複製可能ウイルス粒子の割合を決定することができる。補完細胞の代わりに、非補完細胞株、例えばＨＥＫ２９３が使用される。これは、３セグメント型ウイルス粒子のみが付近の細胞に感染することを可能にする。複製可能なウイルス／ベクター（ＲＣＶ）の力価は、フォーカス形成単位／ミリリットル（ＲＣＶ ＦＦＵ／ｍＬ）として算出することができる。

【0282】

（ｃ）アレナウイルス粒子の成長
本明細書に記載されるアレナウイルス粒子の成長は、当技術分野で公知の、または本明細書に記載される任意の方法（例えば、細胞培養）によって評価することができる。ウイルス成長は、規定量／濃度の本明細書に記載されるアレナウイルス粒子を細胞培養物（例えば、Ｖｅｒｏ細胞またはＢＨＫ－２１細胞）に接種することによって決定することができる。ウイルスを指定された時間インキュベーションした後、標準的な方法を使用してウイルス含有上清を採取し、本明細書に記載のアッセイを使用して感染力を測定することができる。

【0283】

（ｄ）血清ＥＬＩＳＡ
動物（例えば、マウス、モルモット）へのワクチン接種時の液性免疫応答の決定は、抗原特異的血清ＥＬＩＳＡ（酵素連結免疫吸着アッセイ）によって行うことができる。簡潔に述べると、プレートを抗原（例えば、組換えタンパク質）でコーティングし、抗体の非特異的結合を回避するためにブロッキングし、血清の段階希釈液と共にインキュベートする。インキュベーション後、結合した血清－抗体は、例えば、酵素結合抗種（例えば、マウス、モルモット）特異的抗体（総ＩｇＧまたはＩｇＧサブクラスを検出する）及びその後の呈色反応を使用して検出することができる。抗体価は、例えば、エンドポイント幾何平均価として決定することができる。

【0284】

（ｅ）誘導された抗体の中和活性を測定するアッセイ
血清中の中和抗体の決定は、ＡＴＣＣ製のＡＲＰＥ－１９細胞及びＧＦＰタグ付きウイルスを使用する以下の細胞アッセイを用いて実施される。加えて、外因性補体源としての補足的なモルモット血清を使用する。アッセイは、中和のための使用の１または２日前の、３８４ウェルプレートへの６．５×１０^３細胞／ウェル（５０μｌ／ウェル）の播種から開始する。中和は、細胞を有しない９６ウェル滅菌組織培養プレートにおいて、３７℃で１時間行う。中和インキュベーションステップ後、混合物を細胞に添加し、プレートリーダーでのＧＦＰ検出のためにさらに４日間インキュベートする。全ての結果の信頼性を確認するために、陽性中和ヒト血清を各プレートにおいてアッセイ陽性対照として使用する。力価（ＥＣ５０）は、４パラメータロジスティック曲線フィッティングを使用して決定する。追加の試験として、蛍光顕微鏡を用いてウェルを確認する。

【0285】

（ｆ）プラーク減少アッセイ
簡潔に述べると、ＬＣＭＶに関するプラーク減少（中和）アッセイは、レポーター遺伝子（例えば、緑色蛍光タンパク質）をコードする複製可能または複製欠損ＬＣＭＶの使用によって実施することができ、５％ウサギ血清を外因性補体源として使用してもよく、プラークは蛍光顕微鏡検査によって計数することができる。中和価は、対照（免疫前）血清試料と比較して５０％、７５％、９０％または９５％のプラークの減少をもたらす血清の最大希釈率として定義することができる。ｑＰＣＲ ＬＣＭＶ ＲＮＡゲノムを、製造業者によって提供されたプロトコルに従ってＱＩＡａｍｐ Ｖｉｒａｌ ＲＮＡ ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ）を使用して単離する。ＬＣＭＶ ＲＮＡゲノム等価物を、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ（登録商標）ＩＩＩ Ｐｌａｔｉｎｕｍ（登録商標）Ｏｎｅ－Ｓｔｅｐ ｑＲＴ－ＰＣＲ Ｋｉｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ならびにＬＣＭＶ ＮＰコード領域の一部またはアレナウイルス粒子もしくは３セグメント型アレナウイルス粒子の別のゲノムストレッチに特異的なプライマー及びプローブ（ＦＡＭレポーター及びＮＦＱ－ＭＧＢクエンチャー）を備えるＳｔｅｐＯｎｅＰｌｕｓ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）において実行する定量ＰＣＲによって検出する。反応の温度プロファイルは、６０℃で３０分、９５℃で２分、それに続く９５℃で１５秒、５６℃で３０秒の４５サイクルであり得る。ＲＮＡは、プライマー及びプローブ結合部位を含有するＬＣＭＶ ＮＰコード配列の断片またはアレナウイルス粒子もしくは３セグメント型アレナウイルス粒子の別のゲノムストレッチに対応する、分光光度的に定量されたｉｎ ｖｉｔｒｏ転写ＲＮＡ断片のｌｏｇ１０希釈系列から作成された標準曲線と試料結果を比較することによって定量することができる。

【0286】

（ｇ）ウェスタンブロッティング
組織培養フラスコまたは懸濁液において成長させた感染細胞を、感染後の示された時点においてＲＩＰＡ緩衝液（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して溶解するか、または細胞溶解せずに直接使用する。試料を、還元剤及びＮｕＰａｇｅ ＬＤＳ Ｓａｍｐｌｅ ｂｕｆｆｅｒ（ＮＯＶＥＸ）と共に１０分かけて９９℃まで加熱し、室温まで冷却した後、電気泳動のために４～１２％ＳＤＳゲルに充填する。タンパク質を、ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎのｉＢｌｏｔ Ｇｅｌ ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｄｅｖｉｃｅを使用して膜にブロッティングし、ポンソー染色によって可視化する。最後に、調製物を、目的のタンパク質に対する一次抗体及びアルカリホスファターゼ結合二次抗体を用いてプローブし、続いて１－Ｓｔｅｐ ＮＢＴ／ＢＣＩＰ溶液（ＩＮＶＩＴＲＯＧＥＮ）を用いて染色する。

【0287】

（ｈ）抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の検出のためのＭＨＣ－ペプチド多量体染色アッセイ
抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞応答を試験するために、当業者に公知の任意のアッセイを使用することができる。例えば、ＭＨＣ－ペプチド四量体染色アッセイを使用することができる（例えば、Ａｌｔｍａｎ Ｊ．Ｄ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ．１９９６；２７４：９４－９６、及びＭｕｒａｌｉ－Ｋｒｉｓｈｎａ Ｋ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．１９９８；８：１７７－１８７を参照）。簡潔に述べると、アッセイは以下のステップを含み、四量体アッセイを使用して、抗原特異的Ｔ細胞の存在を検出する。抗原特異的Ｔ細胞を検出するためには、これは、ペプチドと、Ｔ細胞の定義された抗原特異性及びＭＨＣハプロタイプについて特注されたＭＨＣ分子の四量体（典型的には蛍光標識されている）との両方に結合する必要がある。次いで、四量体を、蛍光標識を介したフローサイトメトリーによって検出する。

【0288】

（ｉ）抗原特異的Ｔ細胞の検出のためのＥＬＩＳＰＯＴアッセイ
抗原特異的Ｔ細胞応答を試験するために、当業者に公知の任意のアッセイを使用することができる。例えば、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイを使用することができる（例えば、Ｃｚｅｒｋｉｎｓｋｙ Ｃ．Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．１９８３；６５：１０９－１２１、及びＨｕｔｃｈｉｎｇｓ Ｐ．Ｒ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．１９８９；１２０：１－８を参照）。例えば、これに限定されないが、ＩＦＮ－γなどのサイトカインは、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイによって測定することができる。簡潔に述べると、アッセイは以下のステップを含む：免疫スポットプレートを抗サイトカイン抗体でコーティングする。細胞を、免疫スポットプレートにおいて、目的の抗原に由来するペプチドと共にインキュベートする。抗原特異的細胞は、コーティングした抗体に結合するサイトカインを分泌する。次いで、細胞を洗浄除去し、第２のビオチン化抗サイトカイン抗体をプレートに添加し、アビジン－ＨＲＰ系または他の適切な方法を用いて可視化する。

【0289】

（ｊ）ＣＤ８＋及びＣＤ４＋Ｔ細胞の機能性の検出のための細胞内サイトカインアッセイ
ＣＤ８＋及びＣＤ４＋Ｔ細胞応答の機能性を試験するために、当業者に公知の任意のアッセイを使用することができる。例えば、フローサイトメトリーと組み合わせた細胞内サイトカインアッセイを使用することができる（例えば、Ｓｕｎｉ Ｍ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．１９９８；２１２：８９－９８、Ｎｏｍｕｒａ Ｌ．Ｅ．ｅｔ ａｌ．，Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ．２０００；４０：６０－６８、及びＧｈａｎｅｋａｒ Ｓ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２００１；８：６２８－６３を参照）。簡潔に述べると、アッセイは以下のステップを含む：特定のペプチドまたはタンパク質による細胞の活性化の直後に、タンパク質輸送阻害剤（例えば、ブレフェルジンＡ）を添加して、サイトカインを細胞内に留める。規定のインキュベーション期間の後に、典型的には５時間後に、洗浄ステップが続き、他の細胞のマーカーに対する抗体を細胞に添加することができる。次いで、細胞を固定し、透過処理する。蛍光色素結合抗サイトカイン抗体を添加し、細胞をフローサイトメトリーによって解析することができる。

【0290】

（ｋ）ウイルスベクターの複製欠損を確認するためのアッセイ
感染性かつ複製可能なウイルス粒子の濃度を決定する当業者に公知の任意のアッセイはまた、試料中の複製欠損ウイルス粒子を測定するためにも使用することができる。例えば、この目的のために、非補完細胞を用いるＦＦＵアッセイを使用することができる。

【0291】

さらに、プラークベースのアッセイは、ウイルス濃度をウイルス試料中のプラーク形成単位（ＰＦＵ）に換算して決定するために使用される標準的な方法である。具体的には、コンフルエント単層の非補完宿主細胞に様々な希釈率のウイルスを感染させ、ウイルス感染が無差別に拡散するのを防止するために、細胞を寒天などの半固形培地で覆う。ウイルスプラークは、ウイルスが成功裏に感染し、固定細胞単層内の細胞において自己複製する場合に形成され、周囲細胞に拡散する（例えば、Ｋａｕｆｍａｎｎ，Ｓ．Ｈ．；Ｋａｂｅｌｉｔｚ，Ｄ．（２００２）．Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ．３２：Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ．ＩＳＢＮ ０－１２－５２１５３２－０を参照）。プラーク形成には、解析されるウイルスに応じて２～１４日間かかる可能性がある。プラークは、概して、手動で計数され、その結果を、プレートを調製するために使用された希釈倍率と組み合わせて使用して、試料単位容量当たりのプラーク形成単位の数（ＰＦＵ／ｍＬ）を算出する。ＰＦＵ／ｍＬでの結果は、試料内の感染力のある複製可能な粒子の数を表す。Ｃ細胞を使用する場合、同じアッセイを使用して、複製欠損アレナウイルス粒子または３セグメント型アレナウイルス粒子を滴定することができる。

【0292】

（ｌ）ウイルス抗原の発現のためのアッセイ
ウイルス抗原の発現を測定するために、当業者に公知の任意のアッセイを使用することができる。例えば、ＦＦＵアッセイを実施することができる。検出のために、それぞれのウイルス抗原に対するモノクローナルまたはポリクローナル抗体調製物（複数可）を使用する（導入遺伝子特異的ＦＦＵ）。

【0293】

（ｍ）動物モデル
本明細書に記載されるアレナウイルス粒子のｉｎ ｖｉｖｏにおける組換え及び感染力を検討するために、動物モデルを使用することができる。ある特定の実施形態では、３セグメント型アレナウイルス粒子の組換え及び感染力を検討するために使用することができる動物モデルとしては、マウス、モルモット、ウサギ、及びサルが挙げられる。好ましい実施形態では、アレナウイルスの組換え及び感染力を検討するために使用することができる動物モデルとしては、マウスが挙げられる。より具体的な実施形態では、アレナウイルス粒子の組換え及び感染力を検討するために使用することができるマウスは、Ｉ型インターフェロン受容体、ＩＩ型インターフェロン受容体及び組換え活性化遺伝子１（ＲＡＧ１）の三重欠損マウスである。

【0294】

ある特定の実施形態では、動物モデルは、アレナウイルス感染力及び導入遺伝子安定性を決定するために使用することができる。一部の実施形態では、ウイルスＲＮＡは、動物モデルの血清から単離することができる。技法は、当業者によって容易に知られている。ウイルスＲＮＡは逆転写することができ、アレナウイルスＯＲＦを保有するｃＤＮＡは、遺伝子特異的プライマーを用いてＰＣＲ増幅することができる。フローサイトメトリーもまた、アレナウイルス感染力及び導入遺伝子安定性を検討するために使用することができる。

【0295】

６．均等物
本明細書において言及される全ての特許及び刊行物は、それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる。前述の記載から、本明細書に記載される発明の変形及び修正を行って、それを様々な使用及び条件に適応させることができることは明らかだろう。そのような実施形態もまた以下の特許請求の範囲内である。

【表3】

【実施例】

【0296】

８．実施例
８．１アレナウイルスベクターの設計
（ａ）ａｒｔＬＣＭＶ－４ｘＫＲＡＳｍｕｔ
ａｒｔＬＣＭＶ－４ｘＫＲＡＳｍｕｔは、ＬＣＭＶクローン１３（ＬＣＭＶ ｃｌ１３）をベースとする、弱毒化された複製可能な３セグメント型ベクターであり、その内因性糖タンパク質の代わりにＬＣＭＶ株ＷＥのＧＰを発現する（ＬＣＭＶ ｃｌ１３／ＷＥ）（図１）。ＮＰ－Ｓセグメントは、それぞれＧ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、及びＧ１３Ｄ変異を有する、ＫＲＡＳアミノ酸１～２９の４つのコピーをコードするヌクレオチド配列（配列番号１）を含み、ＧＰ－Ｓセグメントは、それぞれＧ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、及びＧ１３Ｄ変異を有する、ＫＲＡＳアミノ酸１～２９の４つのコピーをコードするヌクレオチド配列（配列番号１）を含む。ＫＲＡＳエピトープのヌクレオチド配列は、ＣｐＧジヌクレオチドモチーフを欠くように改変されている。ベクターは、Ｋａｌｌｅｒｔ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ ２０１７；８：１５３２７によって先に記載されているように、５プラスミド同時トランスフェクション系を使用する産生細胞の電気穿孔によってｄｅ ｎｏｖｏに生成する。

【0297】

（ｂ）ａｒｔＬＣＭＶ－４ｘＫＲＡＳｍｕｔ＿Ｅ７
ａｒｔＬＣＭＶ－４ｘＫＲＡＳｍｕｔ＿Ｅ７は、ＬＣＭＶクローン１３（ＬＣＭＶ ｃｌ１３）をベースとする、弱毒化された複製可能な３セグメント型ベクターであり、その内因性糖タンパク質の代わりにＬＣＭＶ株ＷＥのＧＰを発現する（ＬＣＭＶ ｃｌ１３／ＷＥ）（図２）。ＮＰ－Ｓセグメントは、それぞれＧ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、及びＧ１３Ｄ変異を有する、ＫＲＡＳアミノ酸１～２９の４つのコピーと、ＨＰＶ Ｅ７エピトープとをコードするヌクレオチド配列（配列番号２）を含み、ＧＰ－Ｓセグメントは、それぞれＧ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、及びＧ１３Ｄ変異を有する、ＫＲＡＳアミノ酸１～２９の４つのコピーと、ＨＰＶ Ｅ７エピトープとをコードするヌクレオチド配列（配列番号２）を含む。ＫＲＡＳエピトープ及びＨＰＶ Ｅ７エピトープのヌクレオチド配列は、ＣｐＧジヌクレオチドモチーフを欠くように改変されている。ベクターは、Ｋａｌｌｅｒｔ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ ２０１７；８：１５３２７によって先に記載されているように、５プラスミド同時トランスフェクション系を使用する産生細胞の電気穿孔によってｄｅ ｎｏｖｏに生成する。

【0298】

（ｃ）ａｒｔＬＣＭＶ－４ｘＫＲＡＳｍｕｔ＿ＥＢＶ
ａｒｔＬＣＭＶ－４ｘＫＲＡＳｍｕｔ＿ＥＢＶは、ＬＣＭＶクローン１３（ＬＣＭＶ ｃｌ１３）をベースとする、弱毒化された複製可能な３セグメント型ベクターであり、その内因性糖タンパク質の代わりにＬＣＭＶ株ＷＥのＧＰを発現する（ＬＣＭＶ ｃｌ１３／ＷＥ）（図３）。ＮＰ－Ｓセグメントは、それぞれＧ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、及びＧ１３Ｄ変異を有する、ＫＲＡＳアミノ酸１～２９の４つのコピーと、ＥＢＶエピトープとをコードするヌクレオチド配列（配列番号３）を含み、ＧＰ－Ｓセグメントは、それぞれＧ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、及びＧ１３Ｄ変異を有する、ＫＲＡＳアミノ酸１～２９の４つのコピーと、ＥＢＶエピトープとをコードするヌクレオチド配列（配列番号３）を含む。ＫＲＡＳエピトープ及びＨＰＶ Ｅ７エピトープのヌクレオチド配列は、ＣｐＧジヌクレオチドモチーフを欠くように改変されている。ベクターは、Ｋａｌｌｅｒｔ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ ２０１７；８：１５３２７によって先に記載されているように、５プラスミド同時トランスフェクション系を使用する産生細胞の電気穿孔によってｄｅ ｎｏｖｏに生成する。

【0299】

（ｄ）ａｒｔＰＩＣＶ－４ｘＫＲＡＳｍｕｔ
ａｒｔＰＩＣＶ－４ｘＫＲＡＳｍｕｔは、ピチンデウイルスの毒性株第１８継代（ＰＩＣ、あるいはＰＩＣＶ ｐ１８と命名）をベースとする、弱毒化された複製可能な３セグメント型ベクターである（図１）。ＮＰ－Ｓセグメントは、それぞれＧ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、及びＧ１３Ｄ変異を有する、ＫＲＡＳアミノ酸１～２９の４つのコピーをコードするヌクレオチド配列（配列番号１）を含み、ＧＰ－Ｓセグメントは、それぞれＧ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、及びＧ１３Ｄ変異を有する、ＫＲＡＳアミノ酸１～２９の４つのコピーをコードするヌクレオチド配列（配列番号１）を含む。ＫＲＡＳエピトープのヌクレオチド配列は、ＣｐＧジヌクレオチドモチーフを欠くように改変されている。ベクターは、Ｋａｌｌｅｒｔ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ ２０１７；８：１５３２７によって先に記載されているように、５プラスミド同時トランスフェクション系を使用する産生細胞の電気穿孔によってｄｅ ｎｏｖｏに生成する。

【0300】

（ｅ）ａｒｔＰＩＣＶ－４ｘＫＲＡＳｍｕｔ＿Ｅ７
ａｒｔＰＩＣＶ－４ｘＫＲＡＳｍｕｔ＿Ｅ７は、ピチンデウイルスの毒性株第１８継代（ＰＩＣ、あるいはＰＩＣＶ ｐ１８と命名）をベースとする、弱毒化された複製可能な３セグメント型ベクターである（図２）。ＮＰ－Ｓセグメントは、それぞれＧ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、及びＧ１３Ｄ変異を有する、ＫＲＡＳアミノ酸１～２９の４つのコピーと、ＨＰＶ Ｅ７エピトープとをコードするヌクレオチド配列（配列番号２）を含み、ＧＰ－Ｓセグメントは、それぞれＧ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、及びＧ１３Ｄ変異を有する、ＫＲＡＳアミノ酸１～２９の４つのコピーと、ＨＰＶ Ｅ７エピトープとをコードするヌクレオチド配列（配列番号２）を含む。ＫＲＡＳエピトープ及びＨＰＶ Ｅ７エピトープのヌクレオチド配列は、ＣｐＧジヌクレオチドモチーフを欠くように改変されている。ベクターは、Ｋａｌｌｅｒｔ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ ２０１７；８：１５３２７によって先に記載されているように、５プラスミド同時トランスフェクション系を使用する産生細胞の電気穿孔によってｄｅ ｎｏｖｏに生成する。

【0301】

（ｆ）ａｒｔＰＩＣＶ－４ｘＫＲＡＳｍｕｔ＿ＥＢＶ
ａｒｔＰＩＣＶ－４ｘＫＲＡＳｍｕｔ＿ＥＢＶは、ピチンデウイルスの毒性株第１８継代（ＰＩＣ、あるいはＰＩＣＶ ｐ１８と命名）をベースとする、弱毒化された複製可能な３セグメント型ベクターである（図３）。ＮＰ－Ｓセグメントは、それぞれＧ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、及びＧ１３Ｄ変異を有する、ＫＲＡＳアミノ酸１～２９の４つのコピーと、ＥＢＶエピトープとをコードするヌクレオチド配列（配列番号３）を含み、ＧＰ－Ｓセグメントは、それぞれＧ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、及びＧ１３Ｄ変異を有する、ＫＲＡＳアミノ酸１～２９の４つのコピーと、ＥＢＶエピトープとをコードするヌクレオチド配列（配列番号３）を含む。ＫＲＡＳエピトープ及びＨＰＶ Ｅ７エピトープのヌクレオチド配列は、ＣｐＧジヌクレオチドモチーフを欠くように改変されている。ベクターは、Ｋａｌｌｅｒｔ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ ２０１７；８：１５３２７によって先に記載されているように、５プラスミド同時トランスフェクション系を使用する産生細胞の電気穿孔によってｄｅ ｎｏｖｏに生成する。

【0302】

（ｇ）ａｒｔＬＣＭＶ－１４ｘｐ５３ｍｕｔ
ａｒｔＬＣＭＶ－１４ｘｐ５３ｍｕｔは、ＬＣＭＶクローン１３（ＬＣＭＶ ｃｌ１３）をベースとする、弱毒化された複製可能な３セグメント型ベクターであり、その内因性糖タンパク質の代わりにＬＣＭＶ株ＷＥのＧＰを発現する（ＬＣＭＶ ｃｌ１３／ＷＥ）（図５Ａ）。ＮＰ－Ｓセグメントは、それぞれ２９アミノ酸からなる１４個のｐ５３ネオエピトープをコードするヌクレオチド配列（配列番号７）を含み、ＧＰ－Ｓセグメントは、それぞれ２９アミノ酸からなる１４個のｐ５３ネオエピトープをコードするヌクレオチド配列（配列番号７）を含む。ｐ５３ネオエピトープをコードするヌクレオチド配列は、ＣｐＧジヌクレオチドモチーフを欠くように改変されている。ベクターは、Ｋａｌｌｅｒｔ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ ２０１７；８：１５３２７によって先に記載されているように、５プラスミド同時トランスフェクション系を使用する産生細胞の電気穿孔によってｄｅ ｎｏｖｏに生成する。

【0303】

（ｈ）ａｒｔＬＣＭＶ－１４ｘｐ５３ｍｕｔ＿Ｅ７
ａｒｔＬＣＭＶ－１４ｘｐ５３ｍｕｔ＿Ｅ７は、ＬＣＭＶクローン１３（ＬＣＭＶ ｃｌ１３）をベースとする、弱毒化された複製可能な３セグメント型ベクターであり、その内因性糖タンパク質の代わりにＬＣＭＶ株ＷＥのＧＰを発現する（ＬＣＭＶ ｃｌ１３／ＷＥ）（図６Ａ）。ＮＰ－Ｓセグメントは、それぞれ２９アミノ酸からなる１４個のｐ５３ネオエピトープとＨＰＶ Ｅ７エピトープとをコードするヌクレオチド配列（配列番号８）を含み、ＧＰ－Ｓセグメントは、それぞれ２９アミノ酸からなる１４個のｐ５３ネオエピトープとＨＰＶ Ｅ７エピトープとをコードするヌクレオチド配列（配列番号８）を含む。ｐ５３ネオエピトープ及びＨＰＶ Ｅ７エピトープをコードするヌクレオチド配列は、ＣｐＧジヌクレオチドモチーフを欠くように改変されている。ベクターは、Ｋａｌｌｅｒｔ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ ２０１７；８：１５３２７によって先に記載されているように、５プラスミド同時トランスフェクション系を使用する産生細胞の電気穿孔によってｄｅ ｎｏｖｏに生成する。

【0304】

（ｉ）ａｒｔＬＣＭＶ－１４ｘｐ５３ｍｕｔ＿ＥＢＶ
ａｒｔＬＣＭＶ－１４ｘｐ５３ｍｕｔ＿ＥＢＶは、ＬＣＭＶクローン１３（ＬＣＭＶ ｃｌ１３）をベースとする、弱毒化された複製可能な３セグメント型ベクターであり、その内因性糖タンパク質の代わりにＬＣＭＶ株ＷＥのＧＰを発現する（ＬＣＭＶ ｃｌ１３／ＷＥ）（図７Ａ）。ＮＰ－Ｓセグメントは、それぞれ２９アミノ酸からなる１４個のｐ５３ネオエピトープとＥＢＶエピトープとをコードするヌクレオチド配列（配列番号９）を含み、ＧＰ－Ｓセグメントは、それぞれ２９アミノ酸からなる１４個のｐ５３ネオエピトープとＥＢＶエピトープとをコードするヌクレオチド配列（配列番号９）を含む。ｐ５３ネオエピトープをコードするヌクレオチド配列は、ＣｐＧジヌクレオチドモチーフを欠くように改変されている。ベクターは、Ｋａｌｌｅｒｔ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ ２０１７；８：１５３２７によって先に記載されているように、５プラスミド同時トランスフェクション系を使用する産生細胞の電気穿孔によってｄｅ ｎｏｖｏに生成する。

【0305】

（ｊ）ａｒｔＰＩＣＶ－１４ｘｐ５３ｍｕｔ
ａｒｔＰＩＣＶ－１４ｘｐ５３ｍｕｔは、ピチンデウイルスの毒性株第１８継代（ＰＩＣ、あるいはＰＩＣＶ ｐ１８と命名）をベースとする、弱毒化された複製可能な３セグメント型ベクターである（図５Ｂ）。ＮＰ－Ｓセグメントは、それぞれ２９アミノ酸からなる１４個のｐ５３ネオエピトープをコードするヌクレオチド配列（配列番号１０）を含み、ＧＰ－Ｓセグメントは、それぞれ２９アミノ酸からなる１４個のｐ５３ネオエピトープをコードするヌクレオチド配列（配列番号１０）を含む。ｐ５３ネオエピトープをコードするヌクレオチド配列は、ＣｐＧジヌクレオチドモチーフを欠くように改変されている。ベクターは、Ｋａｌｌｅｒｔ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ ２０１７；８：１５３２７によって先に記載されているように、５プラスミド同時トランスフェクション系を使用する産生細胞の電気穿孔によってｄｅ ｎｏｖｏに生成する。

【0306】

（ｋ）ａｒｔＰＩＣＶ－１４ｘｐ５３ｍｕｔ＿Ｅ７
ａｒｔＰＩＣＶ－１４ｘｐ５３ｍｕｔ＿Ｅ７は、ピチンデウイルスの毒性株第１８継代（ＰＩＣ、あるいはＰＩＣＶ ｐ１８と命名）をベースとする、弱毒化された複製可能な３セグメント型ベクターである（図６Ｂ）。ＮＰ－Ｓセグメントは、それぞれ２９アミノ酸からなる１４個のｐ５３ネオエピトープとＨＰＶ Ｅ７エピトープとをコードするヌクレオチド配列（配列番号１１）を含み、ＧＰ－Ｓセグメントは、それぞれ２９アミノ酸からなる１４個のｐ５３ネオエピトープとＨＰＶ Ｅ７エピトープとをコードするヌクレオチド配列（配列番号１１）を含む。ｐ５３ネオエピトープ及びＨＰＶ Ｅ７エピトープをコードするヌクレオチド配列は、ＣｐＧジヌクレオチドモチーフを欠くように改変されている。ベクターは、Ｋａｌｌｅｒｔ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ ２０１７；８：１５３２７によって先に記載されているように、５プラスミド同時トランスフェクション系を使用する産生細胞の電気穿孔によってｄｅ ｎｏｖｏに生成する。

【0307】

（ｌ）ａｒｔＰＩＣＶ－１４ｘｐ５３ｍｕｔ＿ＥＢＶ
ａｒｔＰＩＣＶ－１４ｘｐ５３ｍｕｔ＿ＥＢＶは、ピチンデウイルスの毒性株第１８継代（ＰＩＣ、あるいはＰＩＣＶ ｐ１８と命名）をベースとする、弱毒化された複製可能な３セグメント型ベクターである（図７Ｂ）。ＮＰ－Ｓセグメントは、それぞれ２９アミノ酸からなる１４個のｐ５３ネオエピトープとＥＢＶエピトープとをコードするヌクレオチド配列（配列番号１２）を含み、ＧＰ－Ｓセグメントは、それぞれ２９アミノ酸からなる１４個のｐ５３ネオエピトープとＥＢＶエピトープとをコードするヌクレオチド配列（配列番号１２）を含む。ｐ５３ネオエピトープをコードするヌクレオチド配列は、ＣｐＧジヌクレオチドモチーフを欠くように改変されている。ベクターは、Ｋａｌｌｅｒｔ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ ２０１７；８：１５３２７によって先に記載されているように、５プラスミド同時トランスフェクション系を使用する産生細胞の電気穿孔によってｄｅ ｎｏｖｏに生成する。

【0308】

（ｍ）ａｒｔＬＣＭＶ－５ｘＫＲＡＳｍｕｔ－Ｈ２
ａｒｔＬＣＭＶ－５ｘＫＲＡＳｍｕｔ－Ｈ２は、ＬＣＭＶクローン１３（ＬＣＭＶ ｃｌ１３）をベースとする、弱毒化された複製可能な３セグメント型ベクターであり、その内因性糖タンパク質の代わりにＬＣＭＶ株ＷＥのＧＰを発現する（ＬＣＭＶ ｃｌ１３／ＷＥ）。ＮＰ－Ｓセグメント及びＧＰ－Ｓセグメントは、それぞれ１８アミノ酸からなるＫＲＡＳの５つの変異型エピトープで構成される抗原性挿入断片（配列番号１９）をコードする。抗原性挿入断片のヌクレオチド配列は、ＣｐＧジヌクレオチドモチーフを欠くように改変された。ベクターは、Ｋａｌｌｅｒｔ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ ２０１７；８：１５３２７によって先に記載されているように、５プラスミド同時トランスフェクション系を使用する産生細胞の電気穿孔によってｄｅ ｎｏｖｏに生成した。図１０は、ａｒｔＬＣＭＶ－５ｘＫＲＡＳｍｕｔ－Ｈ２の概略図を示す。

【0309】

（ｎ）ａｒｔＰＩＣＶ－５ｘＫＲＡＳｍｕｔ－Ｈ２
ａｒｔＰＩＣＶ－５ｘＫＲＡＳｍｕｔ－Ｈ２は、ピチンデウイルスの毒性株第１８継代（ＰＩＣ、あるいはＰＩＣＶ ｐ１８と命名）をベースとする、弱毒化された複製可能な３セグメント型ベクターである。ＮＰ－Ｓセグメント及びＧＰ－Ｓセグメントは、それぞれ１８アミノ酸からなるＫＲＡＳの５つの変異型エピトープで構成される抗原性挿入断片（配列番号１９）をコードする。抗原性挿入断片のヌクレオチド配列は、ＣｐＧジヌクレオチドモチーフを欠くように改変された。ベクターは、Ｋａｌｌｅｒｔ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ ２０１７；８：１５３２７によって先に記載されているように、５プラスミド同時トランスフェクション系を使用する産生細胞の電気穿孔によってｄｅ ｎｏｖｏに生成した。図１０は、ａｒｔＰＩＣＶ－５ｘＫＲＡＳｍｕｔ－Ｈ２の概略図を示す。

【0310】

８．２ ｉｎ ｖｉｔｒｏ Ｔ細胞活性化及び機能
（ａ）ヒトＰＢＭＣ活性化アッセイ
ヒトＰＢＭＣを健康なＨＬＡ－Ａ２＋ドナーから単離し、ＨＬＡ－Ａ２制限ＫＲＡＳｍｕｔ及び対照ペプチドをパルスする。Ｔ細胞活性化を、ＥＬＩＳＰＯＴ、増殖（ＦＡＣＳ ＣＦＳＥ）及びサイトカイン発現プロファイル（上清、細胞内ＦＡＣＳ染色）によって測定する。

【0311】

（ｂ）ｉｎ ｖｉｔｒｏ Ｔ細胞活性化系
単球由来樹状細胞（ｍｏＤＣ）または人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）に、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片（複数可）をコードするアレナウイルス粒子（ＫＲＡＳｍｕｔベクター）及び対照ベクター（すなわち、変異型ＫＲＡＳの抗原性断片をコードしないアレナウイルス粒子）を感染させ、単離したヒトＴ細胞と共にインキュベートする。Ｔ細胞活性化を、ＥＬＩＳＰＯＴ、増殖（ＦＡＣＳ ＣＦＳＥ）及びサイトカイン発現プロファイル（上清、細胞内ＦＡＣＳ染色）によって測定する。

【0312】

（ｃ）細胞傷害性
ＫＲＡＳｍｕｔベクターをプライムしたヒトＴ細胞による、ＫＲＡＳｍｕｔヒトがん細胞株（すなわち、変異型ＫＲＡＳを発現するヒトがん細胞株）のｉｎ ｖｉｔｒｏにおける殺傷を、ＬＤＨ放出、^５１Ｃｒ放出、フローサイトメトリーまたは生細胞イメージングアッセイによって評価する。

【0313】

（ｄ）ＫＲＡＳ－レポーター細胞アッセイ
ＫＲＡＳ－ｍｕｔ特異的Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の活性化を、ＫＲＡＳ－ｍｕｔ特異的ＴＣＲを発現し、ＴＣＲシグナル伝達によって誘導される生物発光または蛍光シグナルを産生するように遺伝子操作されたレポーター細胞株を用いて測定する。これらの細胞を、ＨＬＡ適合ＫＲＡＳｍｕｔベクタートランスフェクト細胞株と共にインキュベートする。

【0314】

８．３ ｉｎ ｖｉｖｏ免疫原性及び有効性
（ａ）免疫原性
ヒトＨＬＡトランスジェニックマウスをＫＲＡＳｍｕｔベクター及び対照ベクターで免疫化する。免疫化した動物のＰＢＭＣ及び／または脾臓細胞を単離し、ＫＲＡＳｍｕｔ特異的Ｔ細胞応答を、ＥＬＩＳＰＯＴ、細胞内サイトカイン染色、ＭＨＣ多量体染色によって、及びマルチプレックスサイトカイン解析によって測定する。

【0315】

ヒト化マウスをＫＲＡＳｍｕｔベクター及び対照ベクターで免疫化する。免疫化した動物のＰＢＭＣ及び／または脾臓細胞を単離し、ＫＲＡＳｍｕｔ特異的Ｔ細胞応答を、ＥＬＩＳＰＯＴ、細胞内サイトカイン染色、ＭＨＣ多量体染色によって、及びマルチプレックスサイトカイン解析によって測定する。

【0316】

変異したＫＲＡＳエピトープ（すなわち、変異型ＫＲＡＳの断片）の種々の組合せをコードするベクター構築物の、ＨＬＡ－Ａ＊１１のトランスジェニックマウス（すなわち、ＣＢ６Ｆ１－Ｔｇ（ＨＬＡ－Ａ＊１１０１／Ｈ２－Ｋｂ）Ａ１１．０１マウス）における抗原特異的免疫応答を誘導する能力を解析するために、静脈内（ｉ．ｖ．）免疫化を、１×１０^５ＲＣＶ ＦＦＵ／用量の示されたベクター構築物を用いて実施した。

【0317】

以下の表２は、本出願に記載されるベクターのｉｎ ｖｉｖｏ免疫原性を試験する実験の例示である。

【表4】

【0318】

０日目に、ＨＬＡ－Ａ＊１１のトランスジェニックマウス（すなわち、ＣＢ６Ｆ１－Ｔｇ（ＨＬＡ－Ａ＊１１０１／Ｈ２－Ｋｂ）Ａ１１．０１マウス）を、１×１０^５ＲＣＶ ＦＦＵ／用量のａｒｔＰＩＣＶ－５ｘＫＲＡＳｍｕｔ－Ｈ２（群２）、ａｒｔＰＩＣＶ－５ｘＫＲＡＳｍｕｔ－Ｈ１（群３）、ａｒｔＰＩＣＶ－４ｘＫＲＡＳｍｕｔ（１８マー）（群４）、またはＫＲＡＳの対応する１８マー野生型エピトープをコードする、ａｒｔＰＩＣＶをベースとするベクター（すなわち、ａｒｔＰＩＣＶ－ＫＲＡＳｗｔ）（群５）で静脈内免疫化した。対照マウスは、製剤緩衝液のみ（群１）で処置した。２１日目に、マウスを、１×１０^５ＲＣＶ ＦＦＵ／用量のａｒｔＬＣＭＶ－５ｘＫＲＡＳｍｕｔ－Ｈ２（群２）、ａｒｔＬＣＭＶ－５ｘＫＲＡＳｍｕｔ－Ｈ１（群３）、ａｒｔＬＣＭＶ－４ｘＫＲＡＳｍｕｔ（１８マー）（群４）、ａｒｔＬＣＭＶ－ＫＲＡＳｗｔ（群５）で静脈内免疫化したか、または製剤緩衝液（群１）で処置した。２６日目に、ＫＲＡＳエピトープ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞応答を、野生型及び変異特異的ＫＲＡＳベースペプチドを刺激として使用したＥＬＩＳＰＯＴ解析によって解析した。ＬＣＭＶ及びＰＩＣＶに由来するＮＰベースペプチドの混合物を対照として使用した。

【0319】

図１１に示すように、コードされた、変異したＫＲＡＳエピトープのうちの２つ（すなわち、ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ及びＫＲＡＳ Ｇ１２Ｖ）に対するＣＤ８＋Ｔ細胞応答が、群２の動物（５ｘＫＲＡＳｍｕｔ－Ｈ２エピトープカセットをコードする、ａｒｔＰＩＣＶ及びａｒｔＬＣＭＶをベースとするベクターの組合せで処置）及び群４のマウス（４ｘＫＲＡＳｍｕｔ（１８マー）エピトープカセットをコードする、ａｒｔＰＩＣＶ及びａｒｔＬＣＭＶをベースとするベクターの組合せで処置）において検出できた。驚くべきことに、対照的に、群３の動物（５ｘＫＲＡＳｍｕｔ－Ｈ１エピトープカセットをコードする、ａｒｔＰＩＣＶ及びａｒｔＬＣＭＶをベースとするベクターの組合せで処置）では、ＣＤ８＋Ｔ細胞応答は、コードされた、変異したＫＲＡＳエピトープのうちの１つ（すなわち、ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ）に対してのみ観察することができ、このベクターの組合せは、ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｖエピトープに対する検出可能な免疫応答を誘導しなかった。重要なことに、ＫＲＡＳの変異したエピトープをコードする試験されたベクター構築物のいずれも、野生型ＫＲＡＳタンパク質に対する検出可能なＣＤ８＋Ｔ細胞応答を誘導しなかった。

【0320】

（ｂ）有効性
（ｉ）ＣＴ２６モデル
皮下に移植したＣＴ２６（ＫＲＡＳ－ｍｕｔ）腫瘍を有するＢａｌｂ／ｃマウスに、ＫＲＡＳｍｕｔベクター、対照ベクター、または緩衝液を注射する。腫瘍制御を、ベクター処置後の腫瘍成長をモニタリングすること（ノギス測定）によって評価する。ＫＲＡＳｍｕｔ特異的Ｔ細胞応答を、ＭＨＣ多量体染色及びフローサイトメトリーによって解析する。

【0321】

（ｉｉ）ＫＰＣ ＰＤＡＣモデル
ＫＲＡＳの変異（例えば、Ｇ１２Ｄ）及びＴｐ５３の変異（例えば、Ｒ１７２Ｈ）を有するＫＰＣマウスは、腫瘍を自然に発症し、肺及び肝臓に転移を起こす。ＫＰＣマウスまたはＫＰＣ腫瘍を移植したマウスに、ＫＲＡＳｍｕｔベクター、対照ベクター、または緩衝液を注射する。原発性腫瘍及び転移制御を、ベクター処置後の膵臓、肝臓、及びリンパ節の組織学的解析によって評価する。ＫＲＡＳｍｕｔ特異的Ｔ細胞応答を、ＭＨＣ多量体染色及びフローサイトメトリーによって解析する。

【0322】

（ｉｉｉ）ヒト化ＰＤＸ及びＫＲＡＳ－ｍｕｔ腫瘍細胞株
ヒト化マウスに、患者由来ＨＬＡ適合ヒトＫＲＡＳｍｕｔ異種移植片またはヒトＫＲＡＳｍｕｔ腫瘍細胞株を移植し、ＫＲＡＳｍｕｔベクター、対照ベクター、または緩衝液を注射する。腫瘍制御を、ベクター処置後の腫瘍成長をモニタリングすること（ノギス測定）によって評価する。ＫＲＡＳｍｕｔ特異的Ｔ細胞応答を、ＭＨＣ多量体染色及びフローサイトメトリーによって解析する。

【0323】

８．４導入遺伝子安定性
（ｉ）ａｒｔＬＣＭＶ－５ｘＫＲＡＳｍｕｔ－Ｈ２
ａｒｔＬＣＭＶ－５ｘＫＲＡＳｍｕｔ－Ｈ２ベクターの生成後のコードされた導入遺伝子の遺伝子安定性を、ＰＣＲによって、継代レベルを増加させて解析した（図１２Ａ）。５ｘＫＲＡＳｍｕｔ導入遺伝子は、試験された全ての継代レベルにわたって安定であった。

【0324】

（ｉｉ）ａｒｔＰＩＣＶ－５ｘＫＲＡＳｍｕｔ－Ｈ２
ａｒｔＰＩＣＶ－５ｘＫＲＡＳｍｕｔ－Ｈ２ベクターの生成後のコードされた導入遺伝子の遺伝子安定性を、ＰＣＲによって、継代レベルを増加させて解析した（図１２Ｂ）。５ｘＫＲＡＳｍｕｔ導入遺伝子は、試験された全ての継代レベルにわたって安定であった。

【0325】

８．５ベクター免疫原性
変異したＫＲＡＳエピトープの種々の組合せをコードするベクター構築物の抗原特異的免疫応答を誘導する能力を解析するために、静脈内免疫化を、マウスにおいて、１×１０^５ＲＣＶ ＦＦＵ／用量の示されたベクター構築物を用いて実施した（研究設計については図２２を参照）。

【0326】

０日目に、ＨＬＡ－Ｂ＊０７のトランスジェニックマウス（すなわち、ＣＢ６Ｆ１－Ｔｇ（ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２／Ｈ２－Ｋｂ）Ｂ７．ｘｘマウス）を、１×１０^５ＲＣＶ ＦＦＵ／用量のａｒｔＰＩＣＶ－５ｘＫＲＡＳｍｕｔ－Ｈ２（群２）、ａｒｔＰＩＣＶ－５ｘＫＲＡＳｍｕｔ－Ｈ１（群３）、ａｒｔＰＩＣＶ－４ｘＫＲＡＳｍｕｔ（群４）、またはＫＲＡＳの対応する１８マー野生型エピトープをコードする、ａｒｔＰＩＣＶをベースとするベクター（すなわち、ａｒｔＰＩＣＶ－ＫＲＡＳｗｔ）（群５）で静脈内免疫化した。対照マウスは、製剤緩衝液のみ（群１）で処置した。２１日後、マウスを、１×１０^５ＲＣＶ ＦＦＵ／用量のａｒｔＬＣＭＶ－５ｘＫＲＡＳｍｕｔ－Ｈ２（群２）、ａｒｔＬＣＭＶ－５ｘＫＲＡＳｍｕｔ－Ｈ１（群３）、ａｒｔＬＣＭＶ－４ｘＫＲＡＳｍｕｔ（群４）、ａｒｔＬＣＭＶ－ＫＲＡＳｗｔ（群５）で静脈内免疫化したか、または製剤緩衝液（群１）で処置した。２６日目に、ＫＲＡＳエピトープ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞応答を、野生型及び変異特異的ＫＲＡＳベースペプチドを刺激として使用したＥＬＩＳｐｏｔ解析によって解析した。ＬＣＭＶ及びＰＩＣＶに由来するＮＰベースペプチドの混合物を対照として使用した。

【0327】

図２１に示すように、コードされた、変異したＫＲＡＳエピトープのうちの２つ（すなわち、ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｃ及びＫＲＡＳ Ｇ１２Ｒ）に対するＣＤ８ Ｔ細胞応答が、群２の（５匹中２匹の）動物（５ｘＫＲＡＳｍｕｔ－Ｈ２エピトープカセットをコードする、ａｒｔＰＩＣＶ及びａｒｔＬＣＭＶをベースとするベクターの組合せで処置）及び群３の（５匹中２匹の）マウス（５ｘＫＲＡＳｍｕｔ－Ｈ１エピトープカセットをコードする、ａｒｔＰＩＣＶ及びａｒｔＬＣＭＶをベースとするベクターの組合せで処置）において検出できた。対照的に、群４の動物（４ｘＫＲＡＳｍｕｔエピトープカセットをコードする、ａｒｔＰＩＣＶ及びａｒｔＬＣＭＶをベースとするベクターの組合せで処置）では、ＣＤ８ Ｔ細胞応答は観察することができなかった。さらに、ＫＲＡＳの変異したエピトープをコードする試験されたベクター構築物のいずれも、野生型ＫＲＡＳタンパク質に対する検出可能なＣＤ８ Ｔ細胞応答を誘導しなかった。

【0328】

８．６ベクター免疫原性
変異したＫＲＡＳエピトープをコードするベクター構築物の抗原特異的免疫応答を誘導する能力を解析するために、静脈内免疫化を、マウスにおいて、１×１０^５ＲＣＶ ＦＦＵ／用量の示されたベクター構築物を用いて実施した（研究設計については図２３を参照）。

【0329】

０日目に、ＨＬＡ－Ａ＊１１のトランスジェニックマウス（すなわち、ＣＢ６Ｆ１－Ｔｇ（ＨＬＡ－Ａ＊１１０１／Ｈ２－Ｋｂ）Ａ１１．０１マウス）を、１×１０^５ＲＣＶ ＦＦＵ／用量のａｒｔＬＣＭＶ－５ｘＫＲＡＳｍｕｔ－Ｈ２（群２）、ａｒｔＰＩＣＶ－５ｘＫＲＡＳｍｕｔ－Ｈ２（群４）、またはＫＲＡＳの対応する１８マー野生型エピトープをコードする、ａｒｔＬＣＭＶ及びａｒｔＰＩＣＶをベースとするベクター（すなわち、ａｒｔＬＣＭＶ－ＫＲＡＳｗｔ及びａｒｔＰＩＣＶ－ＫＲＡＳｗｔ）（群３及び５）で静脈内免疫化した。対照マウスは、製剤緩衝液のみ（群１）で処置した。免疫化後７日目に、ＫＲＡＳエピトープ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞応答を、野生型及び変異特異的ＫＲＡＳベースペプチドを刺激として使用したＥＬＩＳｐｏｔ解析によって解析した。ＬＣＭＶに由来するＮＰベースペプチドの混合物を対照として使用した。ＰＩＣＶに由来するＮＰベースペプチドは、技術的エラーのために検出されなかった。

【0330】

図２４に示すように、ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｖに対するＣＤ８ Ｔ細胞応答が、群２の動物（ａｒｔＬＣＭＶ－５ｘＫＲＡＳｍｕｔ－Ｈ２で処置）及び群４のマウス（ａｒｔＬＣＭＶ－５ｘＫＲＡＳｍｕｔ－Ｈ２で処置）において検出できた。さらに、ＫＲＡＳの変異したエピトープをコードする試験されたベクター構築物のいずれも、野生型ＫＲＡＳタンパク質に対する検出可能なＣＤ８ Ｔ細胞応答を誘導しなかった。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5A】

【図5B】

【図6A】

【図6B】

【図7A】

【図7B】

【図8】

【図9A】

【図9B】

【図9C】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23】

【図24】

【配列表】

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【国際調査報告】