特表 2024-540448 標的細胞への医薬品有効成分の赤血球媒介送達のための治療化合物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-10-31

(54)【発明の名称】標的細胞への医薬品有効成分の赤血球媒介送達のための治療化合物

(51)【国際特許分類】

   A61K 47/68 20170101AFI20241024BHJP

   A61K 47/64 20170101ALI20241024BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20241024BHJP

   A61P 31/14 20060101ALI20241024BHJP

   A61P 31/12 20060101ALI20241024BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20241024BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20241024BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20241024BHJP

   C12N 15/12 20060101ALN20241024BHJP

   C07K 14/47 20060101ALN20241024BHJP

   C07K 16/28 20060101ALN20241024BHJP

   C12N 15/13 20060101ALN20241024BHJP

   C12N 15/113 20100101ALN20241024BHJP

【ＦＩ】

A61K47/68

A61K47/64

A61K48/00

A61P31/14

A61P31/12

A61P35/00

A61P43/00 105

A61K39/395 D

A61K39/395 N

C12N15/12 ZNA

C07K14/47

C07K16/28

C12N15/13

C12N15/113 Z

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024528584

(86)(22)【出願日】2022-11-18

(85)【翻訳文提出日】2024-07-04

(86)【国際出願番号】 US2022080167

(87)【国際公開番号】W WO2023092089

(87)【国際公開日】2023-05-25

(31)【優先権主張番号】63/281,370

(32)【優先日】2021-11-19

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/392,323

(32)【優先日】2022-07-26

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】524034051

【氏名又は名称】ケーアイエスティー（コリア インスティテュート オブ サイエンス アンド テクノロジー）

(71)【出願人】

【識別番号】524179167

【氏名又は名称】ケー２ビー セラピューティクス， インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】キム， ホウォン ジェイ．

(72)【発明者】

【氏名】キム， イン－サン

(72)【発明者】

【氏名】キム， ジェイ エス．

(72)【発明者】

【氏名】キム， スン ファ

(72)【発明者】

【氏名】クウォン， イク チャン

(72)【発明者】

【氏名】リ， ジョン ウォン

(72)【発明者】

【氏名】ヤン， ユ ス

(72)【発明者】

【氏名】ユン， ホン ヨル

【テーマコード（参考）】

4C076

4C084

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C076AA95

4C076CC26

4C076CC27

4C076CC35

4C076CC41

4C076EE59

4C084AA13

4C084NA13

4C084ZB211

4C084ZB212

4C084ZB261

4C084ZB262

4C084ZB331

4C084ZB332

4C085AA13

4C085AA14

4C085AA25

4C085BB11

4C085DD59

4C085EE01

4H045AA10

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA54

4H045CA40

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

標的細胞への医薬品有効成分の赤血球媒介送達のための治療化合物が記載される。治療化合物は、赤血球の表面のＣＤ４７に結合するように、およびその後、標的細胞の表面のＣＤ４７へ移行されるように構成されており、したがって、治療用化合物は、最終的に、エンドサイトーシスによって標的細胞に内在化される。標的細胞は、がん細胞、ウイルス感染細胞、または線維化細胞であり得る。ＣＤ４７結合タンパク質は、共有結合、水素結合、イオン結合、ファンデルワールス相互作用、およびこれらの組合せからなる群から選択される結合により、ＡＰＩにコンジュゲートされ得る。ＣＤ４７結合タンパク質は、リンカーによりＡＰＩにコンジュゲートされ得、リンカーは、切断可能であり得る。リンカーは、リソソーム分解酵素により切断されるように構成され得る。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ＣＤ４７を発現する標的細胞への哺乳動物対象におけるＲＢＣ媒介送達のための治療化合物であって、
コンジュゲートを形成するようにＡＰＩにコンジュゲートされているＣＤ４７結合タンパク質
を含み；
前記ＣＤ４７結合タンパク質が、野生型トロンボスポンジン－１（ＴＳＰ－１）（配列番号７）、野生型ＳＩＲＰγ（配列番号４）、ｖＳＩＲＰγ－１（配列番号５）、ｖＳＩＲＰγ－２（配列番号６）、ＡＬＸ１４８（配列番号９６２）、ＴＴＩ－６６１（配列番号９６３）、ＴＴＩ－６６２（配列番号９６４）、前述のもののいずれかのホモログ、およびこれらの組合せからなる群から選択され、前記対象の循環系による前記標的細胞への前記コンジュゲートの輸送を可能にするために前記コンジュゲートを前記対象の赤血球のＣＤ４７に結合させるように構成されており、したがって、（ｉ）前記コンジュゲートを前記赤血球の前記ＣＤ４７に結合させるように構成されている前記ＣＤ４７結合タンパク質が、前記標的細胞の前記ＣＤ４７に結合し、ひいては、前記コンジュゲートを前記赤血球から前記標的細胞へ移行させて、前記標的細胞上にコンジュゲート－ＣＤ４７複合体を形成するようにし、それによって、ＣＤ４７を遮断し、前記標的細胞の免疫逃避機構としてのＣＤ４７活性を阻害し、かつ（ｉｉ）前記コンジュゲートが、前記コンジュゲート－ＣＤ４７複合体のエンドサイトーシスによって前記標的細胞に取り込まれ、それによって、前記標的細胞の前記免疫逃避機構をさらに阻害し、前記ＡＰＩを前記標的細胞に送達する、
治療化合物。

【請求項2】

ＣＤ４７を発現する標的細胞への哺乳動物対象におけるＲＢＣ媒介送達のための治療化合物であって、
コンジュゲートを形成するようにＡＰＩにコンジュゲートされているＣＤ４７結合タンパク質
を含み；
前記ＣＤ４７結合タンパク質が、野生型ＳＩＲＰα（配列番号１）、ｖＳＩＲＰα（配列番号３）、野生型トロンボスポンジン－１（ＴＳＰ－１）（配列番号７）、野生型ＳＩＲＰγ（配列番号４）、ｖＳＩＲＰγ－１（配列番号５）、ｖＳＩＲＰγ－２（配列番号６）、ＡＬＸ１４８（配列番号９６２）、ＴＴＩ－６６１（配列番号９６３）、ＴＴＩ－６６２（配列番号９６４）、前述のもののいずれかのホモログ、およびこれらの組合せからなる群から選択され、前記対象の循環系による前記標的細胞への前記コンジュゲートの輸送を可能にするために前記コンジュゲートを前記対象の赤血球のＣＤ４７に結合させるように構成されており、したがって、（ｉ）前記コンジュゲートを前記赤血球の前記ＣＤ４７に結合させるように構成されている前記ＣＤ４７結合タンパク質が、前記標的細胞の前記ＣＤ４７に結合し、ひいては、前記コンジュゲートを前記赤血球から前記標的細胞へ移行させて、前記標的細胞上にコンジュゲート－ＣＤ４７複合体を形成するようにし、それによって、ＣＤ４７を遮断し、前記標的細胞の免疫逃避機構としてのＣＤ４７活性を阻害し、かつ（ｉｉ）前記コンジュゲートが、前記コンジュゲート－ＣＤ４７複合体のエンドサイトーシスによって前記標的細胞に取り込まれ、それによって、前記標的細胞の前記免疫逃避機構をさらに阻害し、前記ＡＰＩを前記標的細胞に送達する、
治療化合物。

【請求項3】

ＣＤ４７を発現する標的細胞への哺乳動物対象におけるＲＢＣ媒介送達のための治療化合物であって、
コンジュゲートを形成するようにＡＰＩにコンジュゲートされているＣＤ４７結合タンパク質を含み；
前記ＣＤ４７結合タンパク質が、抗ＣＤ４７抗体であり、前記抗ＣＤ４７抗体が、
（ａ）配列番号９３２、配列番号９３３および配列番号９３４をそれぞれ含む相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号９３５、配列番号９３６および配列番号９３７をそれぞれ含む相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含むか；
（ｂ）配列番号９４０、配列番号９４１および配列番号９４２をそれぞれ含む相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号９４３、配列番号９４４および配列番号９４５をそれぞれ含む相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含むか；
（ｃ）配列番号９４８、配列番号９４９および配列番号９５０をそれぞれ含む相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号９５１、配列番号９５２および配列番号９５３をそれぞれ含む相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含むか；または
（ｄ）配列番号９５６、配列番号９５７および配列番号９５８をそれぞれ含む相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号９５９、配列番号９６０および配列番号９６１をそれぞれ含む相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含み；
前記対象の循環系による前記標的細胞への前記コンジュゲートの輸送を可能にするために前記コンジュゲートを前記対象の赤血球のＣＤ４７に結合させるように構成されており、したがって、（ｉ）前記コンジュゲートを前記赤血球の前記ＣＤ４７に結合させるように構成されている前記ＣＤ４７結合タンパク質が、前記標的細胞の前記ＣＤ４７に結合し、ひいては、前記コンジュゲートを前記赤血球から前記標的細胞へ移行させて、前記標的細胞上にコンジュゲート－ＣＤ４７複合体を形成するようにし、それによって、ＣＤ４７を遮断し、前記標的細胞の免疫逃避機構としてのＣＤ４７活性を阻害し、かつ（ｉｉ）前記コンジュゲートが、前記コンジュゲート－ＣＤ４７複合体のエンドサイトーシスによって前記標的細胞に取り込まれ、それによって、前記標的細胞の前記免疫逃避機構をさらに阻害し、前記ＡＰＩを前記標的細胞に送達する、
治療化合物。

【請求項4】

前記ＣＤ４７結合タンパク質が、共有結合、水素結合、イオン結合、ファンデルワールス相互作用、およびこれらの組合せからなる群から選択される結合により、前記ＡＰＩにコンジュゲートされている、前記請求項のいずれか一項に記載の治療化合物。

【請求項5】

前記ＣＤ４７結合タンパク質が、リンカーにより前記ＡＰＩにコンジュゲートされている、前記請求項のいずれか一項に記載の治療化合物。

【請求項6】

前記リンカーが、切断可能である、請求項５に記載の治療化合物。

【請求項7】

前記リンカーが、リソソーム分解酵素により切断されるように構成されている、請求項５および６のいずれか一項に記載の治療化合物。

【請求項8】

前記ＡＰＩが、ＲＮＡ、ＤＮＡ、ＲＮＡ誘導体、ＤＮＡ誘導体、タンパク質、および小分子からなる群から選択される、前記請求項のいずれか一項に記載の治療化合物。

【請求項9】

前記ＡＰＩが、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ａｎｔｉｍｉＲ、およびｍＲＮＡからなる群から選択される、請求項１から７のいずれか一項に記載の治療化合物。

【請求項10】

前記標的細胞が、がん細胞、ウイルス感染細胞、線維化細胞、およびこれらの組合せからなる群から選択される細胞である、前記請求項のいずれか一項に記載の治療化合物。

【請求項11】

前記標的細胞が、がん細胞である、請求項１から８のいずれか一項に記載の治療化合物。

【請求項12】

前記標的細胞が、ウイルス感染細胞である、請求項１から８のいずれか一項に記載の治療化合物。

【請求項13】

前記標的細胞が、線維化細胞である、請求項１から８のいずれか一項に記載の治療化合物。

【請求項14】

前記がん細胞が、脳腫瘍、脊髄腫瘍、網膜芽細胞腫、口腔がん、鼻腔がん、副鼻腔がん、咽頭がん、喉頭がん、頸部がん、頭頸部がん、黒色腫、皮膚がん、乳がん、甲状腺がん、悪性副腎腫瘍、内分泌がん、肺がん、胸膜腫瘍、気道がん、食道がん、胃がん、小腸がん、結腸がん、肛門がん、肝臓がん、胆道がん、膵臓がん、腎臓がん、膀胱がん、前立腺がん、精巣がん、陰茎がん、子宮頸がん、子宮内膜がん、絨毛癌、卵巣がん；急性／慢性白血病、悪性リンパ腫および多発性骨髄腫を含む血液がん；骨腫瘍、軟部組織腫瘍、小児白血病、ならびに小児がんからなる群から選択されるがんに起因する腫瘍におけるものである、請求項１１に記載の治療化合物。

【請求項15】

前記がん細胞が、卵巣漿液性嚢胞腺癌、肺腺癌、子宮頸および子宮頸管がん、頭頸部扁平上皮癌、甲状腺癌、子宮体類内膜癌、前立腺癌、中皮腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、急性白血病、肺扁平上皮癌、急性リンパ性白血病、食道癌、粘液線維肉腫、膵臓腺癌、直腸腺癌、結腸腺癌、急性巨核芽球性白血病、浸潤性乳癌、胃腺癌、膀胱尿路上皮癌、胆管癌、白血病、胸腺癌、平滑筋肉腫、胸腺腫、未分化多形性肉腫、子宮癌肉腫、急性骨髄性白血病、多形性神経膠芽種、肉腫、皮膚黒色腫、腎臓明細胞癌、脱分化型脂肪肉腫、リンパ腫、網膜芽細胞腫、神経芽細胞腫、骨肉腫、若年性骨髄単球性白血病、消化管間質腫瘍、胚芽異形成性神経上皮腫瘍、副腎皮質がん、分化系統不明瞭な急性白血病、褐色細胞腫および傍神経節腫、神経膠腫、精巣胚細胞腫瘍、テント上胎児性腫瘍ＮＯＳ、神経芽細胞腫、腎臓乳頭細胞癌、肝細胞癌、嫌色素性腎細胞癌、悪性末梢神経鞘腫瘍、上衣腫、副腎皮質癌、上咽頭癌、紡錘細胞／硬化性横紋筋肉腫、黒色腫、脈絡叢癌、未分化紡錘細胞癌、筋上皮癌、肺胞横紋筋肉腫、横紋筋肉腫、非定型奇形腫／ラブドイド腫瘍、線維形成性小円形細胞腫瘍、線維腫症、滑膜肉腫、ウィルムス腫瘍、筋線維腫症、線維層板型肝細胞癌、未分化肉腫ＮＯＳ、胎児性横紋筋肉腫、ブドウ膜黒色腫、ユーイング肉腫、肝芽腫、乳児型線維肉腫、ＩＮＩ依存性軟部組織肉腫ＮＯＡ、未分化肝肉腫、ならびに髄芽腫からなる群から選択されるがんに起因する、請求項１１に記載の治療化合物。

【請求項16】

前記ウイルス感染細胞が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスに感染している、請求項１２に記載の治療化合物。

【請求項17】

前記線維化細胞が、嚢胞性線維症に関連する、請求項１３に記載の治療化合物。

【請求項18】

前記ＡＰＩが、ｓｉＲＮＡであり、前記ｓｉＲＮＡが、アンチセンスＲＮＡ鎖とセンスＲＮＡ鎖とを含む二本鎖ＲＮＡ分子であり、
（ａ）前記アンチセンスＲＮＡ鎖が、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、前記ｍＲＮＡ配列が、配列番号８～７４７および７７１～８２４からなる群から選択され、
（ｂ）前記センスＲＮＡ鎖が、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、前記アンチセンスＲＮＡ鎖からの１４～２９ヌクレオチドに相補的であり、
（ｃ）前記二本鎖ＲＮＡ分子が、長さ１４～２９ヌクレオチドの二本鎖領域と長さ０～５ヌクレオチドの３’オーバーハング領域とを有する、
請求項１１、１４および１５のいずれか一項に記載の治療化合物。

【請求項19】

前記ＡＰＩが、ｓｉＲＮＡであり、前記ｓｉＲＮＡが、アンチセンスＲＮＡ鎖とセンスＲＮＡ鎖とを含む二本鎖ＲＮＡ分子であり、
（ａ）前記アンチセンスＲＮＡ鎖が、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、前記ｍＲＮＡ配列が、配列番号２２～７４７および７７１～８２４からなる群から選択され、
（ｂ）前記センスＲＮＡ鎖が、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、前記アンチセンスＲＮＡ鎖からの１４～２９ヌクレオチドに相補的であり、
（ｃ）前記二本鎖ＲＮＡ分子が、長さ１４～２９ヌクレオチドの二本鎖領域と長さ０～５ヌクレオチドの３’オーバーハング領域とを有する、
請求項１１、１４および１５のいずれか一項に記載の治療化合物。

【請求項20】

前記ＡＰＩが、ｓｉＲＮＡであり、前記ｓｉＲＮＡが、アンチセンスＲＮＡ鎖とセンスＲＮＡ鎖とを含む二本鎖ＲＮＡ分子であり、
（ａ）前記アンチセンスＲＮＡ鎖が、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、前記ｍＲＮＡ配列が、配列番号２２～３７からなる群から選択され、
（ｂ）前記センスＲＮＡ鎖が、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、前記アンチセンスＲＮＡ鎖からの１４～２９ヌクレオチドに相補的であり、
（ｃ）前記二本鎖ＲＮＡ分子が、長さ１４～２９ヌクレオチドの二本鎖領域と長さ０～５ヌクレオチドの３’オーバーハング領域とを有する、
請求項１１、１４および１５のいずれか一項に記載の治療化合物。

【請求項21】

前記ＡＰＩが、ｓｉＲＮＡであり、前記ｓｉＲＮＡが、アンチセンスＲＮＡ鎖とセンスＲＮＡ鎖とを含む二本鎖ＲＮＡ分子であり、
（ａ）前記アンチセンスＲＮＡ鎖が、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、前記ｍＲＮＡ配列が、配列番号３８～３９からなる群から選択され、
（ｂ）前記センスＲＮＡ鎖が、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、前記アンチセンスＲＮＡ鎖からの１４～２９ヌクレオチドに相補的であり、
（ｃ）前記二本鎖ＲＮＡ分子が、長さ１４～２９ヌクレオチドの二本鎖領域と長さ０～５ヌクレオチドの３’オーバーハング領域とを有する、
請求項１１、１４および１５のいずれか一項に記載の治療化合物。

【請求項22】

前記ＡＰＩが、ｓｉＲＮＡであり、前記ｓｉＲＮＡが、アンチセンスＲＮＡ鎖とセンスＲＮＡ鎖とを含む二本鎖ＲＮＡ分子であり、
（ａ）前記アンチセンスＲＮＡ鎖が、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、前記ｍＲＮＡ配列が、配列番号４０～４３からなる群から選択され、
（ｂ）前記センスＲＮＡ鎖が、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、前記アンチセンスＲＮＡ鎖からの１４～２９ヌクレオチドに相補的であり、
（ｃ）前記二本鎖ＲＮＡ分子が、長さ１４～２９ヌクレオチドの二本鎖領域と長さ０～５ヌクレオチドの３’オーバーハング領域とを有する、
請求項１１、１４および１５のいずれか一項に記載の治療化合物。

【請求項23】

前記ＡＰＩが、ｓｉＲＮＡであり、前記ｓｉＲＮＡが、アンチセンスＲＮＡ鎖とセンスＲＮＡ鎖とを含む二本鎖ＲＮＡ分子であり、
（ａ）前記アンチセンスＲＮＡ鎖が、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、前記ｍＲＮＡ配列が、配列番号４４～５１からなる群から選択され、
（ｂ）前記センスＲＮＡ鎖が、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、前記アンチセンスＲＮＡ鎖からの１４～２９ヌクレオチドに相補的であり、
（ｃ）前記二本鎖ＲＮＡ分子が、長さ１４～２９ヌクレオチドの二本鎖領域と長さ０～５ヌクレオチドの３’オーバーハング領域とを有する、
請求項１１、１４および１５のいずれか一項に記載の治療化合物。

【請求項24】

前記ＡＰＩが、ｓｉＲＮＡであり、前記ｓｉＲＮＡが、アンチセンスＲＮＡ鎖とセンスＲＮＡ鎖とを含む二本鎖ＲＮＡ分子であり、
（ａ）前記アンチセンスＲＮＡ鎖が、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、前記ｍＲＮＡ配列が、配列番号８～２１、４８２～４８６、および７４８～７６５からなる群から選択され、
（ｂ）前記センスＲＮＡ鎖が、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、前記アンチセンスＲＮＡ鎖からの１４～２９ヌクレオチドに相補的であり、
（ｃ）前記二本鎖ＲＮＡ分子が、長さ１４～２９ヌクレオチドの二本鎖領域と長さ０～５ヌクレオチドの３’オーバーハング領域とを有する、
請求項１２および１６のいずれか一項に記載の治療化合物。

【請求項25】

前記ＡＰＩが、ｓｉＲＮＡであり、前記ｓｉＲＮＡが、アンチセンスＲＮＡ鎖とセンスＲＮＡ鎖とを含む二本鎖ＲＮＡ分子であり、
（ａ）前記アンチセンスＲＮＡ鎖が、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、前記ｍＲＮＡ配列が、配列番号４８２～４８６および７４８～７６５からなる群から選択され、
（ｂ）前記センスＲＮＡ鎖が、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、前記アンチセンスＲＮＡ鎖からの１４～２９ヌクレオチドに相補的であり、
（ｃ）前記二本鎖ＲＮＡ分子が、長さ１４～２９ヌクレオチドの二本鎖領域と長さ０～５ヌクレオチドの３’オーバーハング領域とを有する、
請求項１２および１６のいずれか一項に記載の治療化合物。

【請求項26】

前記ＡＰＩが、ｓｉＲＮＡであり、前記ｓｉＲＮＡが、アンチセンスＲＮＡ鎖とセンスＲＮＡ鎖とを含む二本鎖ＲＮＡ分子であり、
（ａ）前記アンチセンスＲＮＡ鎖が、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、前記ｍＲＮＡ配列が、配列番号８～２１、４０～４３、および７６６～７７０からなる群から選択され、
（ｂ）前記センスＲＮＡ鎖が、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、前記アンチセンスＲＮＡ鎖からの１４～２９ヌクレオチドに相補的であり、
（ｃ）前記二本鎖ＲＮＡ分子が、長さ１４～２９ヌクレオチドの二本鎖領域と長さ０～５ヌクレオチドの３’オーバーハング領域とを有する、
請求項１３および１７のいずれか一項に記載の治療化合物。

【請求項27】

前記ＡＰＩが、ｓｉＲＮＡであり、前記ｓｉＲＮＡが、アンチセンスＲＮＡ鎖とセンスＲＮＡ鎖とを含む二本鎖ＲＮＡ分子であり、
（ａ）前記アンチセンスＲＮＡ鎖が、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、前記ｍＲＮＡ配列が、配列番号４０～４３および７６６～７７０からなる群から選択され、
（ｂ）前記センスＲＮＡ鎖が、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、前記アンチセンスＲＮＡ鎖からの１４～２９ヌクレオチドに相補的であり、
（ｃ）前記二本鎖ＲＮＡ分子が、長さ１４～２９ヌクレオチドの二本鎖領域と長さ０～５ヌクレオチドの３’オーバーハング領域とを有する、
請求項１３および１７のいずれか一項に記載の治療化合物。

【請求項28】

前記ＡＰＩが、ｓｈＲＮＡであり、前記ｓｈＲＮＡが、長さ４４～７１ヌクレオチドの一本鎖ＲＮＡ分子であり、５’から３’方向に：
前記一本鎖ＲＮＡ分子の５’末端における１９～２９ヌクレオチドの第１の領域であって、第１の配列を有する第１の領域；
前記第１の領域に直接隣接する４～１１ヌクレオチドの第２の領域であって、第２の配列を有する第２の領域；
前記第２の領域に直接隣接する１９～２９ヌクレオチドの第３の領域であって、第３の配列を有する第３の領域；および
前記第３の領域に直接隣接する、前記一本鎖ＲＮＡ分子３’末端における２ヌクレオチドの第４の領域であって、第４の配列を有する第４の領域
を有し、
（ａ）前記第１の領域が、前記第３の領域と同数のヌクレオチドを有し、
（ｂ）前記第３の配列が、前記第１の配列の逆相補配列であり、
（ｃ）前記第３の領域が、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、前記ｍＲＮＡ配列が、配列番号８～７４７および７７１～８２４からなる群から選択され、
（ｄ）前記一本鎖ＲＮＡ分子が、前記第１の領域が前記第３の領域と塩基対合してステムを形成し、前記第２の領域がループを形成し、前記第４の領域が３’オーバーハングを形成する、ステムループ構造を形成するように構成されている、
請求項１１、１４および１５のいずれか一項に記載の治療化合物。

【請求項29】

前記ＡＰＩが、ｓｈＲＮＡであり、前記ｓｈＲＮＡが、長さ４４～７１ヌクレオチドの一本鎖ＲＮＡ分子であり、５’から３’方向に：
前記一本鎖ＲＮＡ分子の５’末端における１９～２９ヌクレオチドの第１の領域であって、第１の配列を有する第１の領域；
前記第１の領域に直接隣接する４～１１ヌクレオチドの第２の領域であって、第２の配列を有する第２の領域；
前記第２の領域に直接隣接する１９～２９ヌクレオチドの第３の領域であって、第３の配列を有する第３の領域；および
前記第３の領域に直接隣接する、前記一本鎖ＲＮＡ分子３’末端における２ヌクレオチドの第４の領域であって、第４の配列を有する第４の領域
を有し、
（ａ）前記第１の領域が、前記第３の領域と同数のヌクレオチドを有し、
（ｂ）前記第３の配列が、前記第１の配列の逆相補配列であり、
（ｃ）前記第３の領域が、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、前記ｍＲＮＡ配列が、配列番号２２～７４７および７７１～８２４からなる群から選択され、
（ｄ）前記一本鎖ＲＮＡ分子が、前記第１の領域が前記第３の領域と塩基対合してステムを形成し、前記第２の領域がループを形成し、前記第４の領域が３’オーバーハングを形成する、ステムループ構造を形成するように構成されている、
請求項１１、１４および１５のいずれか一項に記載の治療化合物。

【請求項30】

前記ＡＰＩが、ｓｈＲＮＡであり、前記ｓｈＲＮＡが、長さ４４～７１ヌクレオチドの一本鎖ＲＮＡ分子であり、５’から３’方向に：
前記一本鎖ＲＮＡ分子の５’末端における１９～２９ヌクレオチドの第１の領域であって、第１の配列を有する第１の領域；
前記第１の領域に直接隣接する４～１１ヌクレオチドの第２の領域であって、第２の配列を有する第２の領域；
前記第２の領域に直接隣接する１９～２９ヌクレオチドの第３の領域であって、第３の配列を有する第３の領域；および
前記第３の領域に直接隣接する、前記一本鎖ＲＮＡ分子３’末端における２ヌクレオチドの第４の領域であって、第４の配列を有する第４の領域
を有し、
（ａ）前記第１の領域が、前記第３の領域と同数のヌクレオチドを有し、
（ｂ）前記第３の配列が、前記第１の配列の逆相補配列であり、
（ｃ）前記第３の領域が、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、前記ｍＲＮＡ配列が、配列番号２２～３７からなる群から選択され、
（ｄ）前記一本鎖ＲＮＡ分子が、前記第１の領域が前記第３の領域と塩基対合してステムを形成し、前記第２の領域がループを形成し、前記第４の領域が３’オーバーハングを形成する、ステムループ構造を形成するように構成されている、
請求項１１、１４および１５のいずれか一項に記載の治療化合物。

【請求項31】

前記ＡＰＩが、ｓｈＲＮＡであり、前記ｓｈＲＮＡが、長さ４４～７１ヌクレオチドの一本鎖ＲＮＡ分子であり、５’から３’方向に：
前記一本鎖ＲＮＡ分子の５’末端における１９～２９ヌクレオチドの第１の領域であって、第１の配列を有する第１の領域；
前記第１の領域に直接隣接する４～１１ヌクレオチドの第２の領域であって、第２の配列を有する第２の領域；
前記第２の領域に直接隣接する１９～２９ヌクレオチドの第３の領域であって、第３の配列を有する第３の領域；および
前記第３の領域に直接隣接する、前記一本鎖ＲＮＡ分子３’末端における２ヌクレオチドの第４の領域であって、第４の配列を有する第４の領域
を有し、
（ａ）前記第１の領域が、前記第３の領域と同数のヌクレオチドを有し、
（ｂ）前記第３の配列が、前記第１の配列の逆相補配列であり、
（ｃ）前記第３の領域が、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、前記ｍＲＮＡ配列が、配列番号３８～３９からなる群から選択され、
（ｄ）前記一本鎖ＲＮＡ分子が、前記第１の領域が前記第３の領域と塩基対合してステムを形成し、前記第２の領域がループを形成し、前記第４の領域が３’オーバーハングを形成する、ステムループ構造を形成するように構成されている、
請求項１１、１４および１５のいずれか一項に記載の治療化合物。

【請求項32】

前記ＡＰＩが、ｓｈＲＮＡであり、前記ｓｈＲＮＡが、長さ４４～７１ヌクレオチドの一本鎖ＲＮＡ分子であり、５’から３’方向に：
前記一本鎖ＲＮＡ分子の５’末端における１９～２９ヌクレオチドの第１の領域であって、第１の配列を有する第１の領域；
前記第１の領域に直接隣接する４～１１ヌクレオチドの第２の領域であって、第２の配列を有する第２の領域；
前記第２の領域に直接隣接する１９～２９ヌクレオチドの第３の領域であって、第３の配列を有する第３の領域；および
前記第３の領域に直接隣接する、前記一本鎖ＲＮＡ分子３’末端における２ヌクレオチドの第４の領域であって、第４の配列を有する第４の領域
を有し、
（ａ）前記第１の領域が、前記第３の領域と同数のヌクレオチドを有し、
（ｂ）前記第３の配列が、前記第１の配列の逆相補配列であり、
（ｃ）前記第３の領域が、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、前記ｍＲＮＡ配列が、配列番号４０～４３からなる群から選択され、
（ｄ）前記一本鎖ＲＮＡ分子が、前記第１の領域が前記第３の領域と塩基対合してステムを形成し、前記第２の領域がループを形成し、前記第４の領域が３’オーバーハングを形成する、ステムループ構造を形成するように構成されている、
請求項１１、１４および１５のいずれか一項に記載の治療化合物。

【請求項33】

前記ＡＰＩが、ｓｈＲＮＡであり、前記ｓｈＲＮＡが、長さ４４～７１ヌクレオチドの一本鎖ＲＮＡ分子であり、５’から３’方向に：
前記一本鎖ＲＮＡ分子の５’末端における１９～２９ヌクレオチドの第１の領域であって、第１の配列を有する第１の領域；
前記第１の領域に直接隣接する４～１１ヌクレオチドの第２の領域であって、第２の配列を有する第２の領域；
前記第２の領域に直接隣接する１９～２９ヌクレオチドの第３の領域であって、第３の配列を有する第３の領域；および
前記第３の領域に直接隣接する、前記一本鎖ＲＮＡ分子３’末端における２ヌクレオチドの第４の領域であって、第４の配列を有する第４の領域
を有し、
（ａ）前記第１の領域が、前記第３の領域と同数のヌクレオチドを有し、
（ｂ）前記第３の配列が、前記第１の配列の逆相補配列であり、
（ｃ）前記第３の領域が、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、前記ｍＲＮＡ配列が、配列番号４４～５１からなる群から選択され、
（ｄ）前記一本鎖ＲＮＡ分子が、前記第１の領域が前記第３の領域と塩基対合してステムを形成し、前記第２の領域がループを形成し、前記第４の領域が３’オーバーハングを形成する、ステムループ構造を形成するように構成されている、
請求項１１、１４および１５のいずれか一項に記載の治療化合物。

【請求項34】

前記ＡＰＩが、ｓｈＲＮＡであり、前記ｓｈＲＮＡが、長さ４４～７１ヌクレオチドの一本鎖ＲＮＡ分子であり、５’から３’方向に：
前記一本鎖ＲＮＡ分子の５’末端における１９～２９ヌクレオチドの第１の領域であって、第１の配列を有する第１の領域；
前記第１の領域に直接隣接する４～１１ヌクレオチドの第２の領域であって、第２の配列を有する第２の領域；
前記第２の領域に直接隣接する１９～２９ヌクレオチドの第３の領域であって、第３の配列を有する第３の領域；および
前記第３の領域に直接隣接する、前記一本鎖ＲＮＡ分子３’末端における２ヌクレオチドの第４の領域であって、第４の配列を有する第４の領域
を有し、
（ａ）前記第１の領域が、前記第３の領域と同数のヌクレオチドを有し、
（ｂ）前記第３の配列が、前記第１の配列の逆相補配列であり、
（ｃ）前記第３の領域が、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、前記ｍＲＮＡ配列が、配列番号８～２１、４８２～４８６、および７４８～７６５からなる群から選択され、
（ｄ）前記一本鎖ＲＮＡ分子が、前記第１の領域が前記第３の領域と塩基対合してステムを形成し、前記第２の領域がループを形成し、前記第４の領域が３’オーバーハングを形成する、ステムループ構造を形成するように構成されている、
請求項１２および１６のいずれか一項に記載の治療化合物。

【請求項35】

前記ＡＰＩが、ｓｈＲＮＡであり、前記ｓｈＲＮＡが、長さ４４～７１ヌクレオチドの一本鎖ＲＮＡ分子であり、５’から３’方向に：
前記一本鎖ＲＮＡ分子の５’末端における１９～２９ヌクレオチドの第１の領域であって、第１の配列を有する第１の領域；
前記第１の領域に直接隣接する４～１１ヌクレオチドの第２の領域であって、第２の配列を有する第２の領域；
前記第２の領域に直接隣接する１９～２９ヌクレオチドの第３の領域であって、第３の配列を有する第３の領域；および
前記第３の領域に直接隣接する、前記一本鎖ＲＮＡ分子３’末端における２ヌクレオチドの第４の領域であって、第４の配列を有する第４の領域
を有し、
（ａ）前記第１の領域が、前記第３の領域と同数のヌクレオチドを有し、
（ｂ）前記第３の配列が、前記第１の配列の逆相補配列であり、
（ｃ）前記第３の領域が、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、前記ｍＲＮＡ配列が、配列番号４８２～４８６および７４８～７６５からなる群から選択され、
（ｄ）前記一本鎖ＲＮＡ分子が、前記第１の領域が前記第３の領域と塩基対合してステムを形成し、前記第２の領域がループを形成し、前記第４の領域が３’オーバーハングを形成する、ステムループ構造を形成するように構成されている、
請求項１２および１６のいずれか一項に記載の治療化合物。

【請求項36】

前記ＡＰＩが、ｓｈＲＮＡであり、前記ｓｈＲＮＡが、長さ４４～７１ヌクレオチドの一本鎖ＲＮＡ分子であり、５’から３’方向に：
前記一本鎖ＲＮＡ分子の５’末端における１９～２９ヌクレオチドの第１の領域であって、第１の配列を有する第１の領域；
前記第１の領域に直接隣接する４～１１ヌクレオチドの第２の領域であって、第２の配列を有する第２の領域；
前記第２の領域に直接隣接する１９～２９ヌクレオチドの第３の領域であって、第３の配列を有する第３の領域；および
前記第３の領域に直接隣接する、前記一本鎖ＲＮＡ分子３’末端における２ヌクレオチドの第４の領域であって、第４の配列を有する第４の領域
を有し、
（ａ）前記第１の領域が、前記第３の領域と同数のヌクレオチドを有し、
（ｂ）前記第３の配列が、前記第１の配列の逆相補配列であり、
（ｃ）前記第３の領域が、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、前記ｍＲＮＡ配列が、配列番号８～２１、４０～４３、および７６６～７７０からなる群から選択され、
（ｄ）前記一本鎖ＲＮＡ分子が、前記第１の領域が前記第３の領域と塩基対合してステムを形成し、前記第２の領域がループを形成し、前記第４の領域が３’オーバーハングを形成する、ステムループ構造を形成するように構成されている、
請求項１３および１７のいずれか一項に記載の治療化合物。

【請求項37】

前記ＡＰＩが、ｓｈＲＮＡであり、前記ｓｈＲＮＡが、長さ４４～７１ヌクレオチドの一本鎖ＲＮＡ分子であり、５’から３’方向に：
前記一本鎖ＲＮＡ分子の５’末端における１９～２９ヌクレオチドの第１の領域であって、第１の配列を有する第１の領域；
前記第１の領域に直接隣接する４～１１ヌクレオチドの第２の領域であって、第２の配列を有する第２の領域；
前記第２の領域に直接隣接する１９～２９ヌクレオチドの第３の領域であって、第３の配列を有する第３の領域；および
前記第３の領域に直接隣接する、前記一本鎖ＲＮＡ分子３’末端における２ヌクレオチドの第４の領域であって、第４の配列を有する第４の領域
を有し、
（ａ）前記第１の領域が、前記第３の領域と同数のヌクレオチドを有し、
（ｂ）前記第３の配列が、前記第１の配列の逆相補配列であり、
（ｃ）前記第３の領域が、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、前記ｍＲＮＡ配列が、配列番号４０～４３および７６６～７７０からなる群から選択され、
（ｄ）前記一本鎖ＲＮＡ分子が、前記第１の領域が前記第３の領域と塩基対合してステムを形成し、前記第２の領域がループを形成し、前記第４の領域が３’オーバーハングを形成する、ステムループ構造を形成するように構成されている、
請求項１３および１７のいずれか一項に記載の治療化合物。

【請求項38】

前記ＡＰＩが、配列番号８２５～８４４、８４９～８５１、８５３、８５５、８５７、８６４、８６５、および８６７～８８３からなる群から選択されるｍｉＲＮＡである、請求項１１、１４および１５のいずれか一項に記載の治療化合物。

【請求項39】

前記ＡＰＩが、ａｎｔｉｍｉＲであり、前記ａｎｔｉｍｉＲが、長さ１２～２５ヌクレオチドの一本鎖核酸分子であり、前記ａｎｔｉｍｉＲが、標的成熟ｍｉＲＮＡ産物配列における連続するヌクレオチドに相補的である連続する１２～２５ヌクレオチドの配列を有し、前記成熟ｍｉＲＮＡ産物配列が、配列番号８８４～９０８からなる群から選択され、前記成熟ｍｉＲＮＡ産物配列における前記連続するヌクレオチドが、５’から３’方向に、前記成熟ｍｉＲＮＡ産物配列のヌクレオチド２～８を含む、請求項１１、１４および１５のいずれか一項に記載の治療化合物。

【請求項40】

前記ＡＰＩが、メトトレキサート；ドキソルビシン；ビンカアルカロイド；カンプトテシン類似体；微小管破壊剤；およびＤＮＡ損傷剤からなる群から選択される、小分子である、請求項１１、１４および１５のいずれか一項に記載の治療化合物。

【請求項41】

前記ＡＰＩが、タンパク質であり、前記タンパク質が、配列番号９０９～９２９およびこれらのホモログからなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項１１、１４および１５のいずれか一項に記載の治療化合物。

【請求項42】

前記ＡＰＩが、タンパク質であり、前記タンパク質が、配列番号９０９～９２９およびこれらのホモログからなる群から選択されるアミノ酸配列からなる、請求項１１、１４および１５のいずれか一項に記載の治療化合物。

【請求項43】

前記ＡＰＩが、配列番号９０９～９２９およびこれらのホモログからなる群から選択されるアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡであり、前記ｍＲＮＡが、前記アミノ酸配列を含むタンパク質を産生するように前記標的細胞において翻訳されるように構成されている、請求項１１、１４および１５のいずれか一項に記載の治療化合物。

【請求項44】

前記ＡＰＩが、配列番号９０９～９２９およびこれらのホモログからなる群から選択されるアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡであり、前記ｍＲＮＡが、前記アミノ酸配列からなるタンパク質を産生するように前記標的細胞において翻訳されるように構成されている、請求項１１、１４および１５のいずれか一項に記載の治療化合物。

【請求項45】

前記ｍＲＮＡが、コドン最適化されている、請求項４３および４４のいずれか一項に記載の治療化合物。

【請求項46】

それを必要とする哺乳動物対象におけるがんを処置する方法であって、請求項１から１１、１４、１５、１８から２３、２８から３３、および３８から４５のいずれか一項に記載の治療化合物の治療有効量を投与するステップを含む、方法。

【請求項47】

それを必要とする哺乳動物対象におけるウイルス感染症を処置する方法であって、請求項１から１０、１２、１６、２４、２５、３４、および３５のいずれか一項に記載の治療化合物の治療有効量を投与するステップを含む、方法。

【請求項48】

それを必要とする哺乳動物対象における線維性疾患を処置する方法であって、請求項１から１０、１３、１７、２６、２７、３６、および３７のいずれか一項に記載の治療化合物の治療有効量を投与するステップを含む、方法。

【請求項49】

前記哺乳動物対象が、ヒトである、請求項１から４５のいずれか一項に記載の治療化合物。

【請求項50】

前記哺乳動物対象が、ヒトである、請求項４６から４８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項51】

請求項１から４５および４９のいずれか一項に記載の治療化合物と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願への相互参照
本願は、２０２１年１１月１９日に出願した米国仮特許出願第６３／２８１，３７０号および２０２２年７月２６日に出願した米国仮特許出願第６３／３９２，３２３号に基づく優先権を主張するものであり、前記仮出願の各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

技術分野
本発明は、一般に、ＣＤ４７に結合するように構成されている治療化合物に関し、より詳細には、赤血球の表面のＣＤ４７に結合するように、およびその後、標的細胞の表面のＣＤ４７へ移行されるように構成されているそのような化合物、したがって、最終的に、エンドサイトーシスによって標的細胞に内在化される治療用化合物に関する。

【背景技術】

【0003】

背景技術
インテグリン関連タンパク質である分化抗原群４７（「ＣＤ４７」）は、ファゴサイトーシスによるクリアランスまたは好中球遊走を阻害するプロセスに関与するマルチスパン形質膜タンパク質である。マクロファージおよび樹状細胞などの自然免疫細胞により発現される膜貫通タンパク質であるシグナル調節タンパク質アルファ（「ＳＩＲＰα」）が、ＣＤ４７の主受容体である。ＣＤ４７へのＳＩＲＰαの結合は、ＳＩＲＰα阻害シグナルを誘発し、このシグナルは、レシピエントマクロファージへの「ｄｏｎ’ｔ ｅａｔ ｍｅ」シグナルとして作用し、その結果、それらのファゴサイトーシス活性化が防止される。したがって、ＳＩＲＰα－ＣＤ４７相互作用は、自然およびその後の適応免疫の負のチェックポイントとして機能する。他のタンパク質、例えば、シグナル調節タンパク質ガンマ（「ＳＩＲＰγ」）およびトロンボスポンジン－１（「ＴＳＰ－１」）も、ＣＤ４７に結合し、それによって免疫応答の態様を阻害し得る。

【0004】

哺乳動物細胞は、典型的には、低レベルのＣＤ４７を発現して、それらをファゴサイトーシスから防御する。しかし、がん細胞は、回避機構としてＣＤ４７を過剰発現して、免疫監視および食細胞による攻撃から逃避する。いくつかのヒト固形腫瘍は、ＣＤ４７を過剰発現する。すなわち、これらの固形腫瘍の細胞は、概して正常な細胞より多くのＣＤ４７を発現する（Willingham et al. PNAS 109(17):6662-6667 (2012)、この参考文献は、これによりその全体が参照により本明細書に組み込まれる）。それ故、ＣＤ４７は、がん免疫療法の有望な新たな治療標的として浮上した（Willingham et al. PNAS 109(17):6662-6667 (2012)；Weiskopf, Eur. J. Cancer 76:100-109 (2017)；Weiskopf et al. J Clin Invest 126(7):2610-2620 (2016)、これらの参考文献の各々は、これによりその全体が参照により本明細書に組み込まれる）。

【0005】

加えて、ウイルス感染細胞も、高レベルのＣＤ４７を発現する。これらのウイルス感染細胞は、ＣＯＶＩＤ－１９を引き起こすウイルスであるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に感染した細胞を含む（Cham et al. Cell Rep 14;31(2):107494 (2020) doi:10.1016/j.celrep.2020.03.058およびMcLaughlin et al. bioRxiv 2021.03.01.433404 (2021) doi:10.1101/2021.03.01.433404、これらの参考文献の各々は、これによりその全体が参照により本明細書に組み込まれる）。ＣＤ４７阻害シグナル伝達の遮断は、ウイルス感染症に対する自然および適応免疫応答を増強することが実証されている。

【0006】

さらに、ＣＤ４７発現の増加は、線維化線維芽細胞において観察されており、ＣＤ４７を遮断することは、線維化促進性線維芽細胞のファゴサイトーシスを増加させることにより、および適応免疫に対する抑制効果を消失させることにより、線維症を好転させる（Cui et al. Nat Commun 11:2795 (2020)；Wernig et al. PNAS 2017;114(18):4757-62；Boyd J Cyst Fibros Suppl 1:S54-S59 (2020)；Lerbs et al. JCI Insight 2020;5(16):e140458 (2020)、これらの参考文献の各々は、これによりその全体が参照により本明細書に組み込まれる）。
それ故、ＣＤ４７は、がん、ウイルス感染症、ならびに線維性疾患、例えば嚢胞性線維症の処置の有望な標的になる。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0007】

【非特許文献1】Willingham et al. PNAS 109(17):6662-6667 (2012)

【非特許文献2】Weiskopf, Eur. J. Cancer 76:100-109 (2017)

【非特許文献3】Weiskopf et al. J Clin Invest 126(7):2610-2620 (2016)

【非特許文献4】Cham et al. Cell Rep 14;31(2):107494 (2020) doi:10.1016/j.celrep.2020.03.058

【非特許文献5】McLaughlin et al. bioRxiv 2021.03.01.433404 (2021) doi:10.1101/2021.03.01.433404

【非特許文献6】Cui et al. Nat Commun 11:2795 (2020)

【非特許文献7】Wernig et al. PNAS 2017;114(18):4757-62

【非特許文献8】Boyd J Cyst Fibros Suppl 1:S54-S59 (2020)

【非特許文献9】Lerbs et al. JCI Insight 2020;5(16):e140458 (2020)

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0008】

実施形態の概要
本発明の一実施形態によれば、ＣＤ４７を発現する標的細胞への哺乳動物対象におけるＲＢＣ媒介送達のための治療化合物であって、コンジュゲートを形成するように医薬品有効成分（「ＡＰＩ」）にコンジュゲートされているＣＤ４７結合タンパク質を含み；ＣＤ４７結合タンパク質が、野生型ＳＩＲＰα（配列番号１）、ｖＳＩＲＰα（配列番号３）、野生型トロンボスポンジン－１（ＴＳＰ－１）（配列番号７）、野生型ＳＩＲＰγ（配列番号４）、ｖＳＩＲＰγ－１（配列番号５）、ｖＳＩＲＰγ－２（配列番号６）、ＡＬＸ１４８（配列番号９６２）、ＴＴＩ－６６１（配列番号９６３）、ＴＴＩ－６６２（配列番号９６４）、前述のもののいずれかのホモログ、およびこれらの組合せからなる群から選択され、対象の循環系による標的細胞へのコンジュゲートの輸送を可能にするためにコンジュゲートを対象の赤血球のＣＤ４７に結合させるように構成されており、したがって、（ｉ）コンジュゲートを赤血球のＣＤ４７に結合させるように構成されているＣＤ４７結合タンパク質が、標的細胞のＣＤ４７に結合し、ひいては、コンジュゲートを赤血球から標的細胞へ移行させて、標的細胞上にコンジュゲート－ＣＤ４７複合体を形成するようにし、それによって、ＣＤ４７を遮断し、標的細胞の免疫逃避機構としてのＣＤ４７活性を阻害し、かつ（ｉｉ）コンジュゲートが、コンジュゲート－ＣＤ４７複合体のエンドサイトーシスによって標的細胞に取り込まれ、それによって、標的細胞の免疫逃避機構をさらに阻害し、ＡＰＩを標的細胞に送達する、治療化合物。哺乳動物対象は、ヒトであり得る。

【0009】

本発明の別の実施形態によれば、ＣＤ４７を発現する標的細胞への哺乳動物対象におけるＲＢＣ媒介送達のための治療化合物であって、コンジュゲートを形成するようにＡＰＩにコンジュゲートされているＣＤ４７結合タンパク質を含み；ＣＤ４７結合タンパク質が、野生型トロンボスポンジン－１（ＴＳＰ－１）（配列番号７）、野生型ＳＩＲＰγ（配列番号４）、ｖＳＩＲＰγ－１（配列番号５）、ｖＳＩＲＰγ－２（配列番号６）、ＡＬＸ１４８（配列番号９６２）、ＴＴＩ－６６１（配列番号９６３）、ＴＴＩ－６６２（配列番号９６４）、前述のもののいずれかのホモログ、およびこれらの組合せからなる群から選択され、対象の循環系による標的細胞へのコンジュゲートの輸送を可能にするためにコンジュゲートを対象の赤血球のＣＤ４７に結合させるように構成されており、したがって、（ｉ）コンジュゲートを赤血球のＣＤ４７に結合させるように構成されているＣＤ４７結合タンパク質が、標的細胞のＣＤ４７に結合し、ひいては、コンジュゲートを赤血球から標的細胞へ移行させて、標的細胞上にコンジュゲート－ＣＤ４７複合体を形成するようにし、それによって、ＣＤ４７を遮断し、標的細胞の免疫逃避機構としてのＣＤ４７活性を阻害し、かつ（ｉｉ）コンジュゲートが、コンジュゲート－ＣＤ４７複合体のエンドサイトーシスによって標的細胞に取り込まれ、それによって、標的細胞の免疫逃避機構をさらに阻害し、ＡＰＩを標的細胞に送達する、治療化合物。哺乳動物対象は、ヒトであり得る。

【0010】

本発明の実施形態によれば、ＣＤ４７を発現する標的細胞への哺乳動物対象におけるＲＢＣ媒介送達のための治療化合物であって、コンジュゲートを形成するようにＡＰＩにコンジュゲートされているＣＤ４７結合タンパク質を含み；ＣＤ４７結合タンパク質が、抗ＣＤ４７抗体であり、抗ＣＤ４７抗体が、（ａ）配列番号９３２、配列番号９３３および配列番号９３４をそれぞれ含む相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号９３５、配列番号９３６および配列番号９３７をそれぞれ含む相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含むか；（ｂ）配列番号９４０、配列番号９４１および配列番号９４２をそれぞれ含む相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号９４３、配列番号９４４および配列番号９４５をそれぞれ含む相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含むか；（ｃ）配列番号９４８、配列番号９４９および配列番号９５０をそれぞれ含む相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号９５１、配列番号９５２および配列番号９５３をそれぞれ含む相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含むか；または（ｄ）配列番号９５６、配列番号９５７および配列番号９５８をそれぞれ含む相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号９５９、配列番号９６０および配列番号９６１をそれぞれ含む相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含み；対象の循環系による標的細胞へのコンジュゲートの輸送を可能にするためにコンジュゲートを対象の赤血球のＣＤ４７に結合させるように構成されており、したがって、（ｉ）コンジュゲートを赤血球のＣＤ４７に結合させるように構成されているＣＤ４７結合タンパク質が、標的細胞のＣＤ４７に結合し、ひいては、コンジュゲートを赤血球から標的細胞へ移行させて、標的細胞上にコンジュゲート－ＣＤ４７複合体を形成するようにし、それによって、ＣＤ４７を遮断し、標的細胞の免疫逃避機構としてのＣＤ４７活性を阻害し、かつ（ｉｉ）コンジュゲートが、コンジュゲート－ＣＤ４７複合体のエンドサイトーシスによって標的細胞に取り込まれ、それによって、標的細胞の免疫逃避機構をさらに阻害し、ＡＰＩを標的細胞に送達する、治療化合物。哺乳動物対象は、ヒトであり得る。

【0011】

ＣＤ４７結合タンパク質は、共有結合、水素結合、イオン結合、ファンデルワールス相互作用、およびこれらの組合せからなる群から選択される結合により、ＡＰＩにコンジュゲートされ得る。ＣＤ４７結合タンパク質は、リンカーによりＡＰＩにコンジュゲートされ得、リンカーは、切断可能であり得る。リンカーは、リソソーム分解酵素により切断されるように構成され得る。

【0012】

一部の実施形態では、ＡＰＩは、ＲＮＡ、ＤＮＡ、ＲＮＡ誘導体、ＤＮＡ誘導体、タンパク質、および小分子からなる群から選択される。ＲＮＡは、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ａｎｔｉｍｉＲ、およびｍＲＮＡからなる群から選択され得る。

【0013】

標的細胞は、がん細胞、ウイルス感染細胞、線維化細胞、およびこれらの組合せからなる群から選択される細胞であり得る。一部の実施形態では、標的細胞は、がん細胞である。一部の実施形態では、標的細胞は、ウイルス感染細胞である。一部の実施形態では、標的細胞は、線維化細胞である。

【0014】

一部の実施形態では、がん細胞は、脳腫瘍、脊髄腫瘍、網膜芽細胞腫、口腔がん、鼻腔がん、副鼻腔がん、咽頭がん、喉頭がん、頸部がん、頭頸部がん、黒色腫、皮膚がん、乳がん、甲状腺がん、悪性副腎腫瘍、内分泌がん、肺がん、胸膜腫瘍、気道がん、食道がん、胃がん、小腸がん、結腸がん、肛門がん、肝臓がん、胆道がん、膵臓がん、腎臓がん、膀胱がん、前立腺がん、精巣がん、陰茎がん、子宮頸がん、子宮内膜がん、絨毛癌、卵巣がん；急性／慢性白血病、悪性リンパ腫および多発性骨髄腫を含む血液がん；骨腫瘍、軟部組織腫瘍、小児白血病、ならびに小児がんからなる群から選択されるがんに起因する腫瘍におけるものである。

【0015】

一部の実施形態では、がん細胞は、卵巣漿液性嚢胞腺癌、肺腺癌、子宮頸および子宮頸管がん、頭頸部扁平上皮癌、甲状腺癌、子宮体類内膜癌、前立腺癌、中皮腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、急性白血病、肺扁平上皮癌、急性リンパ性白血病、食道癌、粘液線維肉腫、膵臓腺癌、直腸腺癌、結腸腺癌、急性巨核芽球性白血病、浸潤性乳癌、胃腺癌、膀胱尿路上皮癌、胆管癌、白血病、胸腺癌、平滑筋肉腫、胸腺腫、未分化多形性肉腫、子宮癌肉腫、急性骨髄性白血病、多形性神経膠芽種、肉腫、皮膚黒色腫、腎臓明細胞癌、脱分化型脂肪肉腫、リンパ腫、網膜芽細胞腫、神経芽細胞腫、骨肉腫、若年性骨髄単球性白血病、消化管間質腫瘍、胚芽異形成性神経上皮腫瘍、副腎皮質がん、分化系統不明瞭な急性白血病、褐色細胞腫および傍神経節腫、神経膠腫、精巣胚細胞腫瘍、テント上胎児性腫瘍ＮＯＳ、神経芽細胞腫、腎臓乳頭細胞癌、肝細胞癌、嫌色素性腎細胞癌、悪性末梢神経鞘腫瘍、上衣腫、副腎皮質癌、上咽頭癌、紡錘細胞／硬化性横紋筋肉腫、黒色腫、脈絡叢癌、未分化紡錘細胞癌、筋上皮癌、肺胞横紋筋肉腫、横紋筋肉腫、非定型奇形腫／ラブドイド腫瘍、線維形成性小円形細胞腫瘍、線維腫症、滑膜肉腫、ウィルムス腫瘍、筋線維腫症（myofibromytosis）、線維層板型肝細胞癌、未分化肉腫ＮＯＳ、胎児性横紋筋肉腫、ブドウ膜黒色腫、ユーイング肉腫、肝芽腫、乳児型線維肉腫、ＩＮＩ依存性軟部組織肉腫ＮＯＡ、未分化肝肉腫、ならびに髄芽腫からなる群から選択されるがんに起因する。

【0016】

一部の実施形態では、ウイルス感染細胞は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスに感染している。一部の実施形態では、線維化細胞は、嚢胞性線維症に関連する。

【0017】

一部の実施形態では、ＡＰＩは、ｓｉＲＮＡであり、ｓｉＲＮＡは、アンチセンスＲＮＡ鎖とセンスＲＮＡ鎖とを含む二本鎖ＲＮＡ分子であり、（ａ）アンチセンスＲＮＡ鎖は、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、ｍＲＮＡ配列は、配列番号８～７４７および７７１～８２４からなる群から選択され、（ｂ）センスＲＮＡ鎖は、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、アンチセンスＲＮＡ鎖からの１４～２９ヌクレオチドに相補的であり、（ｃ）二本鎖ＲＮＡ分子は、長さ１４～２９ヌクレオチドの二本鎖領域と長さ０～５ヌクレオチドの３’オーバーハング領域とを有する。他の実施形態では、ｍＲＮＡ配列は、配列番号２２～７４７および７７１～８２４からなる群から選択される。一部の実施形態では、ｍＲＮＡ配列は、配列番号２２～３７からなる群から選択される。他の実施形態では、ｍＲＮＡ配列は、配列番号３８～３９からなる群から選択される。一部の実施形態では、ｍＲＮＡ配列は、配列番号４０～４３からなる群から選択される。他の実施形態では、ｍＲＮＡ配列は、配列番号４４～５１からなる群から選択される。

【0018】

一部の実施形態では、ＡＰＩは、ｓｉＲＮＡであり、ｓｉＲＮＡは、アンチセンスＲＮＡ鎖とセンスＲＮＡ鎖とを含む二本鎖ＲＮＡ分子であり、（ａ）アンチセンスＲＮＡ鎖は、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、ｍＲＮＡ配列は、配列番号８～２１、４８２～４８６、および７４８～７６５からなる群から選択され、（ｂ）センスＲＮＡ鎖は、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、アンチセンスＲＮＡ鎖からの１４～２９ヌクレオチドに相補的であり、（ｃ）二本鎖ＲＮＡ分子は、長さ１４～２９ヌクレオチドの二本鎖領域と長さ０～５ヌクレオチドの３’オーバーハング領域とを有する。他の実施形態では、ｍＲＮＡ配列は、配列番号４８２～４８６および７４８～７６５からなる群から選択される。

【0019】

一部の実施形態では、ＡＰＩは、ｓｉＲＮＡであり、ｓｉＲＮＡは、アンチセンスＲＮＡ鎖とセンスＲＮＡ鎖とを含む二本鎖ＲＮＡ分子であり、（ａ）アンチセンスＲＮＡ鎖は、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、ｍＲＮＡ配列は、配列番号８～２１、４０～４３、および７６６～７７０からなる群から選択され、（ｂ）センスＲＮＡ鎖は、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、アンチセンスＲＮＡ鎖からの１４～２９ヌクレオチドに相補的であり、（ｃ）二本鎖ＲＮＡ分子は、長さ１４～２９ヌクレオチドの二本鎖領域と長さ０～５ヌクレオチドの３’オーバーハング領域とを有する。他の実施形態では、ｍＲＮＡ配列は、配列番号４０～４３および７６６～７７０からなる群から選択される。

【0020】

ＡＰＩは、ｓｈＲＮＡであり、ｓｈＲＮＡは、長さ４４～７１ヌクレオチドの一本鎖ＲＮＡ分子であり、５’から３’方向に：一本鎖ＲＮＡ分子の５’末端における１９～２９ヌクレオチドの第１の領域であって、第１の配列を有する第１の領域；第１の領域に直接隣接する４～１１ヌクレオチドの第２の領域であって、第２の配列を有する第２の領域；第２の領域に直接隣接する１９～２９ヌクレオチドの第３の領域であって、第３の配列を有する第３の領域；および第３の領域に直接隣接する、一本鎖ＲＮＡ分子３’末端における２ヌクレオチドの第４の領域であって、第４の配列を有する第４の領域を有し、（ａ）第１の領域は、第３の領域と同数のヌクレオチドを有し、（ｂ）第３の配列は、第１の配列の逆相補配列であり、（ｃ）第３の領域は、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、ｍＲＮＡ配列は、配列番号８～７４７および７７１～８２４からなる群から選択され、（ｄ）一本鎖ＲＮＡ分子は、第１の領域が第３の領域と塩基対合してステムを形成し、第２の領域がループを形成し、第４の領域が３’オーバーハングを形成する、ステムループ構造を形成するように構成されている。他の実施形態では、ｍＲＮＡ配列は、配列番号２２～７４７および７７１～８２４からなる群から選択される。一部の実施形態では、ｍＲＮＡ配列は、配列番号２２～３７からなる群から選択される。他の実施形態では、ｍＲＮＡ配列は、配列番号３８～３９からなる群から選択される。一部の実施形態では、ｍＲＮＡ配列は、配列番号４０～４３からなる群から選択される。他の実施形態では、ｍＲＮＡ配列は、配列番号４４～５１からなる群から選択される。

【0021】

一部の実施形態では、ＡＰＩは、ｓｈＲＮＡであり、ｓｈＲＮＡは、長さ４４～７１ヌクレオチドの一本鎖ＲＮＡ分子であり、５’から３’方向に：一本鎖ＲＮＡ分子の５’末端における１９～２９ヌクレオチドの第１の領域であって、第１の配列を有する第１の領域；第１の領域に直接隣接する４～１１ヌクレオチドの第２の領域であって、第２の配列を有する第２の領域；第２の領域に直接隣接する１９～２９ヌクレオチドの第３の領域であって、第３の配列を有する第３の領域；および第３の領域に直接隣接する、一本鎖ＲＮＡ分子３’末端における２ヌクレオチドの第４の領域であって、第４の配列を有する第４の領域を有し、（ａ）第１の領域は、第３の領域と同数のヌクレオチドを有し、（ｂ）第３の配列は、第１の配列の逆相補配列であり、（ｃ）第３の領域は、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、ｍＲＮＡ配列は、配列番号８～２１、４８２～４８６、および７４８～７６５からなる群から選択され、（ｄ）一本鎖ＲＮＡ分子は、第１の領域が第３の領域と塩基対合してステムを形成し、第２の領域がループを形成し、第４の領域が３’オーバーハングを形成する、ステムループ構造を形成するように構成されている。他の実施形態では、ｍＲＮＡ配列は、配列番号４８２～４８６および７４８～７６５からなる群から選択される。

【0022】

一部の実施形態では、ＡＰＩは、ｓｈＲＮＡであり、ｓｈＲＮＡは、長さ４４～７１ヌクレオチドの一本鎖ＲＮＡ分子であり、５’から３’方向に：一本鎖ＲＮＡ分子の５’末端における１９～２９ヌクレオチドの第１の領域であって、第１の配列を有する第１の領域；第１の領域に直接隣接する４～１１ヌクレオチドの第２の領域であって、第２の配列を有する第２の領域；第２の領域に直接隣接する１９～２９ヌクレオチドの第３の領域であって、第３の配列を有する第３の領域；および第３の領域に直接隣接する、一本鎖ＲＮＡ分子３’末端における２ヌクレオチドの第４の領域であって、第４の配列を有する第４の領域を有し、（ａ）第１の領域は、第３の領域と同数のヌクレオチドを有し、（ｂ）第３の配列は、第１の配列の逆相補配列であり、（ｃ）第３の領域は、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、ｍＲＮＡ配列は、配列番号８～２１、４０～４３、および７６６～７７０からなる群から選択され、（ｄ）一本鎖ＲＮＡ分子は、第１の領域が第３の領域と塩基対合してステムを形成し、第２の領域がループを形成し、第４の領域が３’オーバーハングを形成する、ステムループ構造を形成するように構成されている。他の実施形態では、ｍＲＮＡ配列は、配列番号４０～４３および７６６～７７０からなる群から選択される。

【0023】

一部の実施形態では、ＡＰＩは、配列番号８２５～８４４、８４９～８５１、８５３、８５５、８５７、８６４、８６５、および８６７～８８３からなる群から選択されるｍｉＲＮＡである。

【0024】

一部の実施形態では、ＡＰＩは、ａｎｔｉｍｉＲであり、ａｎｔｉｍｉＲは、長さ１２～２５ヌクレオチドの一本鎖核酸分子であり、ａｎｔｉｍｉＲは、標的成熟ｍｉＲＮＡ産物配列における連続するヌクレオチドに相補的である連続する１２～２５ヌクレオチドの配列を有し、成熟ｍｉＲＮＡ産物配列は、配列番号８８４～９０８からなる群から選択され、成熟ｍｉＲＮＡ産物配列における連続するヌクレオチドは、５’から３’方向に、成熟ｍｉＲＮＡ産物配列のヌクレオチド２～８を含む。

【0025】

一部の実施形態では、ＡＰＩは、メトトレキサート；ドキソルビシン；ビンカアルカロイド；カンプトテシン類似体；微小管破壊剤、例えば、アウリスタチン（例えば、ＭＭＡＥおよびＭＭＡＦ）およびメイタンシノイド（例えば、ＤＭ１およびＤＭ４）；ならびにＤＮＡ損傷剤、例えば、ＤＮＡトポイソメラーゼＩ阻害剤（例えば、ＳＮ－３８およびエキサテカン）、二本鎖切断剤（例えば、カリケアマイシン）、架橋剤（例えば、ピロロベンゾジアゼピン二量体－ＰＢＤ）、およびアルキル化剤（例えば、デュオカルマイシンおよびインドリノベンゾジアゼピン二量体－ＩＧＮ）からなる群から選択される、小分子である。

【0026】

一部の実施形態では、ＡＰＩは、タンパク質であり、タンパク質は、配列番号９０９～９２９およびこれらのホモログからなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。他の実施形態では、タンパク質は、配列番号９０９～９２９およびこれらのホモログからなる群から選択されるアミノ酸配列からなる。

【0027】

一部の実施形態では、ＡＰＩは、配列番号９０９～９２９およびこれらのホモログからなる群から選択されるアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡであり、ｍＲＮＡは、アミノ酸配列を含むタンパク質を産生するように標的細胞において翻訳されるように構成されている。他の実施形態では、ｍＲＮＡは、アミノ酸配列からなるタンパク質を産生するように標的細胞において翻訳されるように構成されている。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、コドン最適化されている。

【0028】

本発明の一実施形態によれば、それを必要とする哺乳動物対象におけるがんを処置する方法であって、本明細書に記載される治療化合物の治療有効量を投与するステップを含む方法。哺乳動物対象は、ヒトであり得る。

【0029】

本発明の別の実施形態によれば、それを必要とする哺乳動物対象におけるウイルス感染症を処置する方法であって、本明細書に記載される治療化合物の治療有効量を投与するステップを含む、方法。哺乳動物対象は、ヒトであり得る。

【0030】

本発明の実施形態によれば、それを必要とする哺乳動物対象における線維性疾患を処置する方法であって、本明細書に記載される治療化合物の治療有効量を投与するステップを含む、方法。哺乳動物対象は、ヒトであり得る。

【0031】

本発明の別の実施形態によれば、本明細書に記載される治療化合物を含む医薬組成物。

【0032】

実施形態の上述の特徴は、添付の図面を参照して解釈される、後続の詳細な説明を参照することによって、より容易に理解されるであろう。

【図面の簡単な説明】

【0033】

【図1】図１Ａは、本発明の実施形態によるＦＡＭタグ付きｖＳＩＲＰα－ｓｉＲＮＡコンジュゲートを示す。図１Ｂは、図１ＡのＦＡＭタグ付きｖＳＩＲＰα－ｓｉＲＮＡコンジュゲートとの赤血球のインキュベーションの説明図である。図１Ｃは、図１Ａに示されているＦＡＭタグ付きｖＳＩＲＰα－ｓｉＲＮＡコンジュゲートとともにインキュベートしなかった赤血球（左側）、および図１Ａに示されているＦＡＭタグ付きｖＳＩＲＰα－ｓｉＲＮＡコンジュゲートとともにインキュベートした赤血球（右側）の蛍光顕微鏡画像を示す。

【0034】

【図2】図２Ａは、本発明の実施形態による、ＦＡＭタグ付きｖＳＩＲＰα－ｓｉＲＮＡと結合した赤血球とともにインキュベートする前およびした後のＣａＣＯ２細胞のフローサイトメトリー結果を示す。図２Ｂは、ＦＡＭタグ付きｖＳＩＲＰα－ｓｉＲＮＡと結合した赤血球とともにインキュベートする前およびした後のＣＴ２６．ＣＬ２５細胞のフローサイトメトリー結果を示す。

【0035】

【図3】図３Ａは、本発明の実施形態による、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７抗マウスＣＤ４７モノクローナル抗体と結合した赤血球とともにインキュベートする前およびした後のＣａＣＯ２細胞のフローサイトメトリー結果を示す。図３Ｂは、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７抗マウスＣＤ４７モノクローナル抗体と結合した赤血球とともにインキュベートする前およびした後のＣＴ２６．ＣＬ２５細胞のフローサイトメトリー結果を示す。

【0036】

【図4】図４は、本発明の実施形態による、ＦＡＭタグ付きｖＳＩＲＰα－ｓｉＲＮＡと結合した赤血球とともにインキュベートする前（「未染色」）およびした後のＣａＣＯ２細胞およびＣＴ２６．ＣＬ２５細胞のフローサイトメトリー結果を示す。

【0037】

【図5】図５は、本発明の実施形態による、Ｃｙ５．５標識ｖＳＩＲＰαと結合した赤血球とともにインキュベートする前（「未染色」）およびした後のＣａＣＯ２細胞およびＣＴ２６．ＣＬ２５細胞のフローサイトメトリー結果を示す。

【0038】

【図6】図６は、本発明の実施形態による、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７抗マウスＣＤ４７モノクローナル抗体と結合した赤血球とともにインキュベートする前（「未染色」）およびした後のＣＴ２６．ＣＬ２５細胞のフローサイトメトリー結果を示す。

【0039】

【図7】図７は、本発明の実施形態による、ＣＤ４７ｍＡｂ－ｍｉＲ２１－Ｃｙ５コンジュゲートと結合した赤血球とともにインキュベートする前（「未染色」）およびした後のＣＴ２６．ＣＬ２５細胞のフローサイトメトリー結果を示す。

【0040】

【図8】図８は、本発明の実施形態による、Ｃｙ５．５標識マウストロンボスポンジン－１と結合した赤血球とともにインキュベートする前（「未染色」）およびした後のＣａＣＯ２細胞およびＣＴ２６．ＣＬ２５細胞のフローサイトメトリー結果を示す。

【0041】

【図9】図９は、本発明の実施形態による、未処置マウス、蛍光標識ｓｉＲＮＡコンジュゲートを注射したマウス、および蛍光標識ｖＳＩＲＰα－ｓｉＲＮＡコンジュゲートを注射したマウスから単離した赤血球を示す。

【発明を実施するための形態】

【0042】

特定の実施形態の詳細な説明
本明細書および添付の特許請求の範囲において使用される場合、以下の用語は、文脈上他の意味に解すべき場合を除き、示される意味を有するものとする。

【0043】

本発明を説明する文脈において（特に、特許請求の範囲の文脈において）使用される用語「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、「その（ｔｈｅ）」および類似の言及は、本明細書中で別段の指示がない限り、または文脈上明らかな矛盾がある場合を除き、単数形と複数形の両方に及ぶと解釈されたい。本明細書における値の範囲の記述は、範囲内に入る別々の値各々に個々に言及する省略表現法として役立つことを目的としたものに過ぎない。本明細書中で別段の指示がない限り、個々の値各々は、それが本明細書で個々に述べられているかのごとく本明細書に組み込まれる。本発明の実施に不可欠な何らかの請求項不記載要素を示すと解釈すべき言葉は、本明細書には存在しない。

【0044】

「セット」は、少なくとも１つのメンバーを含む。

【0045】

用語「哺乳動物」などは、哺乳綱の任意の動物種を指す。哺乳動物の例としては、ヒト；実験動物、例えば、ラット、マウス、サルおよびモルモット；飼育動物、例えば、ウサギ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ネコ、イヌ、ウマ、ブタなどが挙げられる。

【0046】

「医薬品有効成分」、「ＡＰＩ」などは、生物活性である、本発明の実施形態による、治療用化合物の非ＣＤ４７結合タンパク質部分および非リンカー部分を意味する。好適な医薬品有効成分（「ＡＰＩ」）としては、ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、およびｍＲＮＡ）、ＤＮＡ、ａｎｔｉｍｉＲオリゴヌクレオチド（ＲＮＡ、ＤＮＡ、およびその誘導体）、ＲＮＡおよびＤＮＡ誘導体（改変された骨格、糖および／または塩基を含む、改変ＲＮＡおよびＤＮＡを含むが、これらに限定されない）、タンパク質、ならびに小分子が挙げられる。

【0047】

本明細書で使用される場合、所与のタンパク質などの「ホモログ」は、所与のタンパク質と少なくとも９５％の配列同一性を有するタンパク質を意味するものとする。

【0048】

「相補性」は、核酸配列に関して本明細書で使用される場合、ワトソン－クリック塩基対合またはゆらぎ塩基対合により別の核酸配列と水素結合を形成する核酸の能力を指す。パーセント相補性は、第２の核酸配列のヌクレオチドと水素結合（例えば、ワトソン－クリック塩基対合）を形成することができる、核酸分子におけるヌクレオチドのパーセンテージ（例えば、１０のうちの５、６、７、８、９、１０は、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％および１００％相補性である）を示す。「完全に相補的」などは、核酸配列の連続するヌクレオチドの全てが、第２の核酸配列における同数の連続するヌクレオチドと水素結合することになる（すなわち、核酸配列が１００％相補性を有する）ことを意味する。「相補的」は、さらなるただし書きなしに本明細書で使用される場合、核酸配列の連続するヌクレオチドが、核酸配列の１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、またはそれより多くのヌクレオチド数の領域にわたって、第２の核酸配列の連続するヌクレオチドと、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％および１００％相補性からなる群から選択されるパーセント相補性を有することを意味する。例えば、長さ１９ヌクレオチドであり、第２の核酸配列の１４ヌクレオチドに相補的である、核酸配列は、核酸配列の連続する１４ヌクレオチドが、第２の核酸配列の連続するヌクレオチドと、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％および１００％相補性からなる群から選択されるパーセント相補性を有することを意味する。長さ１９ヌクレオチドであり、第２の核酸配列における連続するヌクレオチドに相補的である、核酸配列は、核酸配列の連続する１９ヌクレオチドが、第２の核酸配列の連続するヌクレオチドと、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％および１００％相補性からなる群から選択されるパーセント相補性を有することを意味する。

【0049】

「コドン最適化された」は、ｍＲＮＡ転写物のコード配列が、コード配列のコドンの少なくとも６０％について、所与の標的細胞／宿主細胞の種にとって最も好ましいまたは２番目に好ましいコドンを含有することを意味し、したがって、コドン最適化された配列は、標的細胞／宿主細胞において、最適化されていない配列と比べて効率的に翻訳される。

【0050】

用語「抗体」は、１本の「重」（Ｈ）鎖および１本の「軽」（Ｌ）鎖を各対が有する、同一の２対のポリペプチド鎖で典型的に構成される、免疫グロブリン分子を指す。ヒト軽鎖は、カッパ（κ）およびラムダ（λ）として分類される。重鎖は、ミュー、デルタ、ガンマ、アルファまたはイプシロンとして分類され、抗体のアイソタイプをそれぞれＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＥとして規定する。各重鎖は、重鎖可変領域（ＶＨ）および重鎖定常領域から構成される。ＩｇＤ、ＩｇＧおよびＩｇＡの重鎖定常領域は、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３という３つのドメインから構成され、ＩｇＭおよびＩｇＥの重鎖定常領域は、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３およびＣＨ４という４つのドメインから構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（ＶＬ）および軽鎖定常領域から構成される。軽鎖定常領域は、ＣＬという１つのドメインから構成される。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）を含む、宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合を媒介し得る。ＶＨおよびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより高度に保存される領域が散在している、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域に、さらに細分され得る。ＶＨおよびＶＬ各々は、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲで構成され、これらは、アミノ末端からカルボキシ末端へ次の順序で配列されている：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。重鎖／軽鎖対（ＶＨ／ＶＬ）各々の可変領域は、典型的に、抗体の抗原結合部位を形成する。用語「抗体」は、抗体を産生するいずれかの特定の方法により限定されない。例えば、それは、モノクローナル抗体、組換え抗体、およびポリクローナル抗体を含む。

【0051】

用語「ヒト抗体」は、ヒト免疫グロブリン配列のみのアミノ酸配列からなる抗体を指す。ヒト抗体は、マウスにおいて、マウス細胞において、またはマウス細胞に由来するハイブリドーマにおいて産生された場合、マウス糖鎖を含有し得る。ヒト抗体は、当技術分野において公知の様々な方法で調製され得る。

【0052】

用語「ヒト化抗体」は、抗体のフレームワークおよび定常領域が、ヒト抗体配列に由来するアミノ酸残基を含有する一方で、非ヒト動物抗体からのＣＤＲの一部または全てを含有する、抗体を指す。ヒト化抗体は、マウス抗体からのＣＤＲをヒトフレームワーク配列にグラフトし、続いて、ある特定のヒトフレームワーク残基での、起源抗体からの対応するマウス残基の復帰置換を行うことにより、典型的に産生される。用語「ヒト化抗体」は、典型的には１つまたは複数の可変領域における、ヒトＴ細胞および／またはＢ細胞エピトープを構成する傾向が強い１つまたは複数のエピトープが、免疫原性を低下させる目的で除去された、非ヒト起源の抗体も指す。エピトープのアミノ酸配列を完全にまたは部分的に除去することができる。しかし、典型的には、アミノ酸配列は、エピトープを構成するアミノ酸のうちの１つまたは複数で、１つまたは複数の他のアミノ酸を置換し、それによって、アミノ酸配列を、ヒトＴ細胞および／またはＢ細胞エピトープを構成しない配列に変化させることにより、変更される。アミノ酸は、場合によっては、対応するヒト可変重鎖または可変軽鎖における対応する位置に存在するアミノ酸により置換される。

【0053】

用語「薬学的に許容される担体」は、医薬化合物の投与に通常使用される、溶媒、担体剤、希釈剤などを意味する。

【0054】

ＣＤ４７は、様々ながん細胞に、ウイルス感染細胞に、および線維化細胞に過剰発現され、したがって、様々ながん、ウイルス感染症、および線維性疾患の処置の有望な標的になる。これらの細胞におけるＣＤ４７シグナル伝達およびさらにはＣＤ４７自体の発現を遮断することにより、これらの細胞の免疫系回避を抑制することができ、それらの消失、および患者の疾患からのその後の回復が可能になる。

【0055】

例えば、ＣＤ４７に対する高い親和性を有し、プローブにコンジュゲートされた、バリアントＳＩＲＰα（「ｖＳＩＲＰα」）の静脈内注射が、マウスの腫瘍形成性細胞に取り込まれることが判明している。加えて、ＣＤ４７を標的とするｓｉＲＮＡにコンジュゲートされたｖＳＩＲＰαが、培養下でＣＴ２６．ＣＬ２５がん細胞のファゴサイトーシスを増強することが示されている（Ko et al. Control Release 323:376-386 (2020)および米国特許出願公開第２０２１／００１５９３１号、これらの参考文献の各々は、これによりその全体が参照により本明細書に組み込まれる）。

【0056】

本発明者らは、赤血球（「ＲＢＣ」）の細胞表面にならびにがん細胞、ウイルス感染細胞および線維化細胞などの標的細胞の細胞表面に存在するＣＤ４７を利用して、様々なＡＰＩを前記標的細胞に新規機構によって送達することができることを、意外にも見出した。

【0057】

ここで、本発明者らは、哺乳動物対象におけるＣＤ４７を発現する標的細胞へのＡＰＩのＲＢＣ媒介送達のための新規治療化合物を説明する。治療化合物は、ＡＰＩにコンジュゲートされているＣＤ４７結合タンパク質を含むコンジュゲートである。コンジュゲートのＣＤ４７結合タンパク質は、コンジュゲートを対象の赤血球の表面に存在するＣＤ４７に結合させ、それによって、対象の循環系による標的細胞へのコンジュゲートの輸送を可能にする。コンジュゲートは、ＲＢＣから標的細胞の表面に存在するＣＤ４７へ移行される。コンジュゲートが標的細胞のＣＤ４７に結合すると、対象の免疫系による攻撃を回避する標的細胞の能力は、低下する。さらに、コンジュゲートが標的細胞のＣＤ４７に結合すると、コンジュゲート－ＣＤ４７複合体は、エンドサイトーシスによって内在化され、その結果、対象の免疫系による攻撃を回避する標的細胞の能力がさらに低下し、ＡＰＩが標的細胞に送達される。驚くべきことに、コンジュゲートがＲＢＣの表面のＣＤ４７に結合しても、コンジュゲート－ＣＤ４７は、ＲＢＣに内在化されない。一部の実施形態では、哺乳動物対象は、ヒトである。

【0058】

ＣＤ４７結合タンパク質は、リンカーによりＡＰＩにコンジュゲートされ得る。リンカーは、ＣＤ４７結合タンパク質をＡＰＩに接続する。リンカーは、標的細胞によりコンジュゲートが内在化されると切断され、それによってＡＰＩをＣＤ４７結合タンパク質から放出する、切断可能なリンカーであり得る。

【0059】

一部の実施形態では、標的細胞は、がん細胞であり、治療化合物は、哺乳動物対象におけるがんを処置するために使用され得る。

【0060】

がん細胞は、脳腫瘍、脊髄腫瘍、網膜芽細胞腫、口腔がん、鼻腔がん、副鼻腔がん、咽頭がん、喉頭がん、頸部がん、頭頸部がん、黒色腫、皮膚がん、乳がん、甲状腺がん、悪性副腎腫瘍、内分泌がん、肺がん、胸膜腫瘍、気道がん、食道がん、胃がん、小腸がん、結腸がん、肛門がん、肝臓がん、胆道がん、膵臓がん、腎臓がん、膀胱がん、前立腺がん、精巣がん、陰茎がん、子宮頸がん、子宮内膜がん、絨毛癌、卵巣がん；急性／慢性白血病、悪性リンパ腫および多発性骨髄腫を含む血液がん；骨腫瘍、軟部組織腫瘍、小児白血病、ならびに小児がんからなる群から選択されるがんに起因する腫瘍におけるものであり得る。

【0061】

がん細胞は、卵巣漿液性嚢胞腺癌、肺腺癌、子宮頸および子宮頸管がん、頭頸部扁平上皮癌、甲状腺癌、子宮体類内膜癌、前立腺癌、中皮腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、急性白血病、肺扁平上皮癌、急性リンパ性白血病、食道癌、粘液線維肉腫、膵臓腺癌、直腸腺癌、結腸腺癌、急性巨核芽球性白血病、浸潤性乳癌、胃腺癌、膀胱尿路上皮癌、胆管癌、白血病、胸腺癌、平滑筋肉腫、胸腺腫、未分化多形性肉腫、子宮癌肉腫、急性骨髄性白血病、多形性神経膠芽種、肉腫、皮膚黒色腫、腎臓明細胞癌、脱分化型脂肪肉腫、リンパ腫、網膜芽細胞腫、神経芽細胞腫、骨肉腫、若年性骨髄単球性白血病、消化管間質腫瘍、胚芽異形成性神経上皮腫瘍、副腎皮質がん、分化系統不明瞭な急性白血病、褐色細胞腫および傍神経節腫、神経膠腫、精巣胚細胞腫瘍、テント上胎児性腫瘍ＮＯＳ、神経芽細胞腫、腎臓乳頭細胞癌、肝細胞癌、嫌色素性腎細胞癌、悪性末梢神経鞘腫瘍、上衣腫、副腎皮質癌、上咽頭癌、紡錘細胞／硬化性横紋筋肉腫、黒色腫、脈絡叢癌、未分化紡錘細胞癌、筋上皮癌、肺胞横紋筋肉腫、横紋筋肉腫、非定型奇形腫／ラブドイド腫瘍、線維形成性小円形細胞腫瘍、線維腫症、滑膜肉腫、ウィルムス腫瘍、筋線維腫症、線維層板型肝細胞癌、未分化肉腫ＮＯＳ、胎児性横紋筋肉腫、ブドウ膜黒色腫、ユーイング肉腫、肝芽腫、乳児型線維肉腫、ＩＮＩ依存性軟部組織肉腫ＮＯＡ、未分化肝肉腫、ならびに髄芽腫からなる群から選択されるがんに起因し得る。Gupta et al. Cancer Drug Resist 3:550-62 (2020)を参照されたく、この参考文献は、これによりその全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0062】

他の実施形態では、標的細胞は、ウイルス感染細胞であり、治療化合物は、哺乳動物対象におけるウイルス感染症を処置するために使用され得る。ウイルス感染細胞は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスに感染していることがある。

【0063】

一部の実施形態では、標的細胞は、線維化細胞であり、治療化合物は、哺乳動物対象における線維性疾患を処置するために使用され得る。線維化細胞は、線維化線維芽細胞であり得る。一部の実施形態では、線維性疾患は、嚢胞性線維症である。

【0064】

ＣＤ４７結合タンパク質

【0065】

本明細書に記載されるコンジュゲートに好適なＣＤ４７結合タンパク質は、野生型（「ｗｔ」）ＳＩＲＰα（配列番号１）、バリアントＳＩＲＰα（「ｖＳＩＲＰα」）（配列番号３）、ｗｔ ＴＳＰ－１（配列番号７）、ｗｔ ＳＩＲＰγ（配列番号４）、バリアントＳＩＲＰγ－１（「ｖＳＩＲＰγ－１」）（配列番号５）、バリアントＳＩＲＰγ－２（「ｖＳＩＲＰγ－２」）（配列番号６）、および前述のもののいずれかのホモログを含む。ＡＬＸ１４８（配列番号９６２）、ＴＴＩ－６６１（配列番号９６３）、ＴＴＩ－６６２（配列番号９６４）、およびこれらのホモログも、本明細書に記載されるコンジュゲートに好適なＣＤ４７結合タンパク質である。ＡＬＸ１４８は、Ｆｃドメイン単量体に融合されたＳＩＲＰα Ｄ１バリアントである。例えば、米国特許第１０，６９６，７３０号を参照されたく、この参考文献は、これによりその全体が参照により本明細書に組み込まれる。ＴＴＩ－６６１は、ヒトＩｇＧ１抗体の定常領域に融合されたヒトＳＩＲＰαバリアント２のＩｇＶドメインであり、ＴＴＩ－６６２は、ヒトＩｇＧ４抗体の定常領域に融合されたヒトＳＩＲＰαバリアント２のＩｇＶドメインである。例えば、米国特許第９，９６９，７８９号を参照されたく、この参考文献は、これによりその全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0066】

他の好適なＣＤ４７結合タンパク質としては、抗ＣＤ４７抗体が挙げられる。

【0067】

一部の実施形態では、抗ＣＤ４７結合タンパク質は、抗ＣＤ４７抗体、例えば、米国特許第９，０１７，６７５号および同第９，６２３，０７９号に記載されているＢ６Ｈ１２、５Ｆ９、８Ｂ６、Ｃ３、およびＨｕ５Ｆ９－Ｇ４であり、前記参考文献の各々は、これによりその全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0068】

一部の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体は、配列番号９３０を含む重鎖可変領域、および配列番号９３１を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体は、配列番号９３８を含む重鎖可変領域、および配列番号９３９を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体は、配列番号９４６を含む重鎖可変領域、および配列番号９４７を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体は、配列番号９５４を含む重鎖可変領域、および配列番号９５５を含む軽鎖可変領域を含む。

【0069】

一部の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体は、配列番号９３２、配列番号９３３および配列番号９３４をそれぞれ含む相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号９３５、配列番号９３６および配列番号９３７をそれぞれ含む相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む。

【0070】

一部の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体は、配列番号９４０、配列番号９４１および配列番号９４２をそれぞれ含む相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号９４３、配列番号９４４および配列番号９４５をそれぞれ含む相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む。

【0071】

一部の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体は、配列番号９４８、配列番号９４９および配列番号９５０をそれぞれ含む相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号９５１、配列番号９５２および配列番号９５３をそれぞれ含む相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む。

【0072】

一部の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体は、配列番号９５６、配列番号９５７および配列番号９５８をそれぞれ含む相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号９５９、配列番号９６０および配列番号９６１をそれぞれ含む相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む。

【0073】

一部の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体は、ヒト抗体である。一部の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体は、ヒト化抗体である。

【0074】

これらの抗ＣＤ４７結合タンパク質の各々は、標的細胞の表面に存在するＣＤ４７に結合する。

【0075】

一部の実施形態では、ＣＤ４７結合タンパク質は、共有結合、水素結合、イオン結合、ファンデルワールス相互作用、およびこれらの組合せからなる群から選択される結合により、ＡＰＩにコンジュゲートされている。ＣＤ４７結合タンパク質をＡＰＩに共有結合させるリンカーの例は、下に記載される。

【0076】

リンカー

【0077】

好適なリンカーとしては、切断可能なリンカー、例えば、ヒドラゾンリンカー、イミンリンカー、オキシムリンカー、カーボネートリンカー、アセタールリンカー、オルトエステルリンカー、シリルエーテルリンカー、ジスルフィドリンカー、トリオキソランリンカー、ベータ－グルクロニドリンカー、ベータ－ガラクトシドリンカー、ピロホスフェートリンカー、ホスホロアミデートリンカー、アリールスルフェートリンカー、ヘプタメチンシアニンリンカー、ニトロベンジルリンカー、アリールボロン酸リンカー、ボロネートリンカー、チオエーテルリンカー、マレイミドカプロイル含有リンカー、酵素により切断可能なペプチドリンカー、およびパラ－アミノベンジルカルバメート含有リンカー、ならびに切断可能ではないリンカー、例えば、ポリエチレングリコールが挙げられるが、これらに限定されない。

【0078】

本明細書に記載されるＣＤ４７結合タンパク質－ＡＰＩコンジュゲートは、カップリング反応、例えば、ビス（ビニルスルホニル）ピペラジン－ジスルフィドカップリング、Ｎ－メチル－Ｎ－フェニルビニルスルホンアミド－システインカップリング、白金（ＩＩ）化合物－ヒスチジンカップリング、およびテトラジン－ｔｒａｎｓ－シクロオクテンカップリングを使用して、ＣＤ４７結合タンパク質をＡＰＩにリンカーを介して連結させることにより、作製することができる。好適なリンカーおよびカップリング反応は、当業者に公知である。例えば、Su et al. Acta Pharmaceutica Sinica B (2021), ISSN 2211-3835；Pan et al. Med Res Rev. 40:2682- 2713 (2020)；Khongorzulet al. Mol Cancer Res 18:3-19 (2020)；Bargh et al. Chem Soc Rev 48:4361-4374 (2019)；およびSmith et al. Pharm Res 32:3526-3540 (2015)を参照されたく、これらの参考文献の各々は、これによりその全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0079】

本発明の実施形態に従って、下で説明されるものなどの様々な、酵素により切断可能なペプチドリンカーを使用してＣＤ４７結合タンパク質をＡＰＩとカップリングさせてＣＤ４７結合タンパク質－ＡＰＩコンジュゲートを形成することができる。これらのリンカーは、アミノ酸残基を含み、細胞内の特定の酵素、例えばリソソーム分解酵素、により切断される。例えば、Kong et al. J Biol Chem 290:7160-7168 (2015)；Poreba FEBS J 287:1936-1969 (2020)；およびSingh et al., Current Medicinal Chemistry 15(18) (2008)を参照されたく、これらの参考文献の各々は、これによりその全体が参照により本明細書に組み込まれる。本発明の実施形態による使用に好適な例示的なペプチドリンカーは、下で説明される。

【0080】

例えば、ジペプチドリンカーは、２つのアミノ酸残基から構成され、これらの残基は、２番目のアミノ酸残基の後ろでカルボニルとアミンとのアミド結合を切断する酵素カテプシンＢによる切断のための認識モチーフとして役立つ。カテプシンＢにより切断されるジペプチドリンカーとしては、Ｐｈｅ－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｃｉｔ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ａｌａ－Ａｒｇ、Ａｌａ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、およびＡｒｇ－Ａｒｇが挙げられる。カテプシンＢは、同様に、テトラペプチドリンカーＧｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－ＧｌｙおよびＡｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕを４番目のアミノ酸残基の後ろで認識し、切断する。

【0081】

加えて、トリペプチドリンカーＡｌａ－Ａｌａ－Ａｓｎは、最後のアミノ酸残基の後ろで酵素レグマインにより切断される。テトラペプチドリンカーＬｙｓ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、およびＡｒｇ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｒｇは、パパイン様プロテアーゼ酵素により切断される。

【0082】

ペプチドリンカーＡｒｇ－Ａｒｇ－Ｘ、Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ｘ、Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｘ、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ－Ｘ、およびＡｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ｘ（これらの式中、Ｘは、任意のアミノ酸である）は、酵素カテプシンＢ、ＨおよびＬにより切断される。カテプシンＢ、ＨおよびＬは、タンパク質のリソソーム分解に関与する。

【0083】

ペプチドリンカーＰｈｅ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ｐｈｅ（ＮＯ_２）－Ｐｈｅ－Ｖａｌ－Ｌｅｕ－ＯＭ４Ｐ－ＸおよびＢｚ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｐｒｏ－４ｍβＮＡ（これらの式中、Ｘは、任意のアミノ酸である）は、酵素カテプシンＤにより切断される。

【0084】

血清プラスミノーゲン活性化因子は、多くの腫瘍細胞において産生される。プラスミノーゲンは、プラスミンに変換され、その結果として、腫瘍細胞において高レベルのプラスミンを生じさせる。このプラスミンは、血漿中で迅速に分解されるため、腫瘍から遠い組織は、プラスミンに曝露されない。プラスミンは、線維素溶解および血漿タンパク質の分解に関与し、ペプチドリンカーＤ－Ｖａｌ－Ｌｅｕ－Ｌｙｓ－Ｘ、Ｄ－Ａｌａ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ－Ｘ、およびＤ－Ａｌａ－Ｔｒｐ－Ｌｙｓ－Ｘ（これらの式中、Ｘは、任意のアミノ酸である）を切断する。

【0085】

組織プラスミノーゲン活性化因子（ｔＰＡ）およびウロキナーゼ（ｕＰＡ）は、プラスミン形成の活性化に関与し、各々が、ペプチドリンカーＧｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｘ（式中、Ｘは、任意のアミノ酸である）を切断することができる。

【0086】

前立腺特異抗原は、精液の液化に関与し、ペプチドリンカーモルホリノカルボニル－Ｈｉｓ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｌｅｕ－Ｘ（式中、Ｘは、任意のアミノ酸である）を切断する。

【0087】

マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ－２およびＭＭ－９）は、細胞外基質およびコラーゲンの分解に関与し、ペプチドリンカーＡｃ－Ｐｒｏ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｌｅｕ－ＸおよびＧｌｙ－Ｐｒｏ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ－Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｇｌｎ－Ｘ（これらの式中、Ｘは、任意のアミノ酸である）を切断する。

【0088】

ＡＰＩ

【0089】

一部の実施形態によれば、ＡＰＩは、小分子であり得る。例えば、がんの処置において有用な小分子ＡＰＩとしては、メトトレキサート；ドキソルビシン；ビンカアルカロイド；カンプトテシン類似体；微小管破壊剤、例えば、アウリスタチン（例えば、ＭＭＡＥおよびＭＭＡＦ）およびメイタンシノイド（例えば、ＤＭ１およびＤＭ４）；ならびにＤＮＡ損傷剤、例えば、ＤＮＡトポイソメラーゼＩ阻害剤（例えば、ＳＮ－３８およびエキサテカン）、二本鎖切断剤（例えば、カリケアマイシン）、架橋剤（例えば、ピロロベンゾジアゼピン二量体－ＰＢＤ）、およびアルキル化剤（例えば、デュオカルマイシンおよびインドリノベンゾジアゼピン二量体－ＩＧＮ）が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、Khongorzulet al. Mol Cancer Res 18:3-19 (2020)；Salomon et al. Mol Pharm 16(12):4817-4825 (2019)；およびDrago et al. Nat Rev Clin Oncol 18, 327-344 (2021)を参照されたく、これらの参考文献の各々は、これによりその全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0090】

他の部の実施形態によれば、ＡＰＩは、低分子干渉ＲＮＡ（「ｓｉＲＮＡ」）であり得る。ｓｉＲＮＡは、特定の遺伝子の発現を、二本鎖ｓｉＲＮＡ分子の鎖と部分的相補性を共有するその遺伝子のｍＲＮＡ転写物の分解を引き起こすことにより低下させることができる、二本鎖ＲＮＡ分子である。ｓｉＲＮＡを使用して遺伝子の発現を低下させるプロセスは、ＲＮＡ干渉（「ＲＮＡｉ」）と呼ばれる。例えば、米国特許第７，０５６，７０４号、同第７，０７８，１９６号、同第８，３７２，９６８号を参照されたく、これらの参考文献の各々は、これによりその全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0091】

いくつかの遺伝子は、様々な機構によってがんの進行およびがん細胞の増殖を促進することに関係している。これらの遺伝子、およびそれらのｍＲＮＡ転写物は、表１に収載されている。表１からの１つまたは複数の遺伝子の発現を低下させることにより、がんの進行およびがん細胞の増殖を阻害することができる。したがって、表１に収載されている遺伝子の転写物は、ｓｉＲＮＡ媒介ＲＮＡｉを使用するがんの処置の肝要な標的に相当する。

【0092】

一部の実施形態では、哺乳動物におけるがんの処置に有用なＡＰＩは、ｓｉＲＮＡであり、ｓｉＲＮＡは、アンチセンスＲＮＡ鎖とセンスＲＮＡ鎖とを含む二本鎖ＲＮＡ分子であり、（ａ）アンチセンスＲＮＡ鎖は、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、ｍＲＮＡ配列は、配列番号８～７４７および７７１～８２４からなる群から選択され、（ｂ）センスＲＮＡ鎖は、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、アンチセンスＲＮＡ鎖からの１４～２９ヌクレオチドに相補的であり、（ｃ）二本鎖ＲＮＡ分子は、長さ１４～２９ヌクレオチドの二本鎖領域と長さ０～５ヌクレオチドの３’オーバーハング領域とを有する。

【0093】

一部の実施形態では、哺乳動物におけるがんの処置に有用なＡＰＩは、ｓｉＲＮＡであり、ｓｉＲＮＡは、アンチセンスＲＮＡ鎖とセンスＲＮＡ鎖とを含む二本鎖ＲＮＡ分子であり、（ａ）アンチセンスＲＮＡ鎖は、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、ｍＲＮＡ配列は、配列番号２２～７４７および７７１～８２４からなる群から選択され、（ｂ）センスＲＮＡ鎖は、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、アンチセンスＲＮＡ鎖からの１４～２９ヌクレオチドに相補的であり、（ｃ）二本鎖ＲＮＡ分子は、長さ１４～２９ヌクレオチドの二本鎖領域と長さ０～５ヌクレオチドの３’オーバーハング領域とを有する。

【0094】

一部の実施形態では、哺乳動物におけるがんの処置に有用なＡＰＩは、ｓｉＲＮＡであり、ｓｉＲＮＡは、アンチセンスＲＮＡ鎖とセンスＲＮＡ鎖とを含む二本鎖ＲＮＡ分子であり、（ａ）アンチセンスＲＮＡ鎖は、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、ｍＲＮＡ配列は、配列番号２２～３７からなる群から選択され、（ｂ）センスＲＮＡ鎖は、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、アンチセンスＲＮＡ鎖からの１４～２９ヌクレオチドに相補的であり、（ｃ）二本鎖ＲＮＡ分子は、長さ１４～２９ヌクレオチドの二本鎖領域と長さ０～５ヌクレオチドの３’オーバーハング領域とを有する。

【0095】

一部の実施形態では、哺乳動物におけるがんの処置に有用なＡＰＩは、ｓｉＲＮＡであり、ｓｉＲＮＡは、アンチセンスＲＮＡ鎖とセンスＲＮＡ鎖とを含む二本鎖ＲＮＡ分子であり、（ａ）アンチセンスＲＮＡ鎖は、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、ｍＲＮＡ配列は、配列番号３８～３９からなる群から選択され、（ｂ）センスＲＮＡ鎖は、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、アンチセンスＲＮＡ鎖からの１４～２９ヌクレオチドに相補的であり、（ｃ）二本鎖ＲＮＡ分子は、長さ１４～２９ヌクレオチドの二本鎖領域と長さ０～５ヌクレオチドの３’オーバーハング領域とを有する。

【0096】

一部の実施形態では、哺乳動物におけるがんの処置に有用なＡＰＩは、ｓｉＲＮＡであり、ｓｉＲＮＡは、アンチセンスＲＮＡ鎖とセンスＲＮＡ鎖とを含む二本鎖ＲＮＡ分子であり、（ａ）アンチセンスＲＮＡ鎖は、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、ｍＲＮＡ配列は、配列番号４０～４３からなる群から選択され、（ｂ）センスＲＮＡ鎖は、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、アンチセンスＲＮＡ鎖からの１４～２９ヌクレオチドに相補的であり、（ｃ）二本鎖ＲＮＡ分子は、長さ１４～２９ヌクレオチドの二本鎖領域と長さ０～５ヌクレオチドの３’オーバーハング領域とを有する。

【0097】

一部の実施形態では、哺乳動物におけるがんの処置に有用なＡＰＩは、ｓｉＲＮＡであり、ｓｉＲＮＡは、アンチセンスＲＮＡ鎖とセンスＲＮＡ鎖とを含む二本鎖ＲＮＡ分子であり、（ａ）アンチセンスＲＮＡ鎖は、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、ｍＲＮＡ配列は、配列番号４４～５１からなる群から選択され、（ｂ）センスＲＮＡ鎖は、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、アンチセンスＲＮＡ鎖からの１４～２９ヌクレオチドに相補的であり、（ｃ）二本鎖ＲＮＡ分子は、長さ１４～２９ヌクレオチドの二本鎖領域と長さ０～５ヌクレオチドの３’オーバーハング領域とを有する。

【0098】

【表1-1】

【表1-2】

【表1-3】

【表1-4】

【表1-5】

【表1-6】

【表1-7】

【表1-8】

【表1-9】

【表1-10】

【表1-11】

【表1-12】

【表1-13】

【表1-14】

【表1-15】

【表1-16】

【表1-17】

【表1-18】

【表1-19】

【表1-20】

【0099】

ｓｉＲＮＡ媒介ＲＮＡｉを使用して遺伝子の発現を低下させることは、ウイルス感染症の処置においても有用である。例えば、感染細胞が宿主の免疫系を回避することを可能にする遺伝子セット、またはウイルス複製に必要な遺伝子セットの発現を低下させることは、宿主におけるウイルスの増殖を妨げる。そのような遺伝子、およびそれらのｍＲＮＡ転写物は、表２に収載されている。したがって、表２に収載されている遺伝子の転写物は、ｓｉＲＮＡ媒介ＲＮＡｉを使用するウイルス感染症の処置の肝要な標的である。

【0100】

したがって、一部の実施形態では、哺乳動物におけるウイルス感染症の処置に有用なＡＰＩは、ｓｉＲＮＡであり、ｓｉＲＮＡは、アンチセンスＲＮＡ鎖とセンスＲＮＡ鎖とを含む二本鎖ＲＮＡ分子であり、（ａ）アンチセンスＲＮＡ鎖は、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、ｍＲＮＡ配列は、配列番号８～２１、４８２～４８６、および７４８～７６５からなる群から選択され、（ｂ）センスＲＮＡ鎖は、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、アンチセンスＲＮＡ鎖からの１４～２９ヌクレオチドに相補的であり、（ｃ）二本鎖ＲＮＡ分子は、長さ１４～２９ヌクレオチドの二本鎖領域と長さ０～５ヌクレオチドの３’オーバーハング領域とを有する。

【0101】

一部の実施形態では、哺乳動物におけるウイルス感染症の処置に有用なＡＰＩは、ｓｉＲＮＡであり、ｓｉＲＮＡは、アンチセンスＲＮＡ鎖とセンスＲＮＡ鎖とを含む二本鎖ＲＮＡ分子であり、（ａ）アンチセンスＲＮＡ鎖は、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、ｃＤＮＡ配列は、配列番号４８２～４８６および７４８～７６５からなる群から選択され、（ｂ）センスＲＮＡ鎖は、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、アンチセンスＲＮＡ鎖からの１４～２９ヌクレオチドに相補的であり、（ｃ）二本鎖ＲＮＡ分子は、長さ１４～２９ヌクレオチドの二本鎖領域と長さ０～５ヌクレオチドの３’オーバーハング領域とを有する。

【0102】

【表2】

【0103】

ＣＤ４７発現の増加は、線維化線維芽細胞において観察されており、ＣＤ４７を遮断することは、線維化促進性線維芽細胞のファゴサイトーシスを増加させることにより、および適応免疫に対する抑制効果を消失させることにより、線維症を好転させる。ＣＤ４７に加えて、表３に収載さている他の遺伝子の発現は、線維症の促進に関連付けられている。ｓｉＲＮＡ媒介ＲＮＡｉを使用してこれらの遺伝子の発現を低下させることは、線維性疾患の処置においても有用である。そのような遺伝子、およびそれらのｍＲＮＡ転写物は、表３に収載されている。したがって、表３に収載されている遺伝子の転写物は、ｓｉＲＮＡ媒介ＲＮＡｉを使用する線維性疾患の処置の肝要な標的に相当する。

【0104】

一部の実施形態では、哺乳動物における線維性疾患の処置に有用なＡＰＩは、ｓｉＲＮＡであり、ｓｉＲＮＡは、アンチセンスＲＮＡ鎖とセンスＲＮＡ鎖とを含む二本鎖ＲＮＡ分子であり、（ａ）アンチセンスＲＮＡ鎖は、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、ｍＲＮＡ配列は、配列番号８～２１、４０～４３、および７６６～７７０からなる群から選択され、（ｂ）センスＲＮＡ鎖は、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、アンチセンスＲＮＡ鎖からの１４～２９ヌクレオチドに相補的であり、（ｃ）二本鎖ＲＮＡ分子は、長さ１４～２９ヌクレオチドの二本鎖領域と長さ０～５ヌクレオチドの３’オーバーハング領域とを有する。

【0105】

一部の実施形態では、哺乳動物における線維性疾患の処置に有用なＡＰＩは、ｓｉＲＮＡであり、ｓｉＲＮＡは、アンチセンスＲＮＡ鎖とセンスＲＮＡ鎖とを含む二本鎖ＲＮＡ分子であり、（ａ）アンチセンスＲＮＡ鎖は、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、ｍＲＮＡ配列は、配列番号４０～４３および７６６～７７０からなる群から選択され、（ｂ）センスＲＮＡ鎖は、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、アンチセンスＲＮＡ鎖からの１４～２９ヌクレオチドに相補的であり、（ｃ）二本鎖ＲＮＡ分子は、長さ１４～２９ヌクレオチドの二本鎖領域と長さ０～５ヌクレオチドの３’オーバーハング領域とを有する。

【0106】

【表3】

【0107】

一部の実施形態によれば、ＡＰＩは、短鎖ヘアピンＲＮＡ（「ｓｈＲＮＡ」）であり得る。短鎖ヘアピンＲＮＡは、ステムループ構造を形成する一本鎖ＲＮＡ分子であって、特定の遺伝子の発現を、ｓｈＲＮＡ分子の領域と部分的相補性を共有するその遺伝子のｍＲＮＡ転写物の分解を引き起こすことにより低下させることができる、一本鎖ＲＮＡ分子である。ｓｉＲＮＡと同様に、ｓｈＲＮＡを使用して遺伝子の発現を低下させるプロセスは、ＲＮＡｉと呼ばれる。一般に、Rao et al. Adv Drug Deliv Rev 61(9):746-59 (2009)を参照されたく、この参考文献は、これによりその全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0108】

いくつかの遺伝子は、様々な機構によってがんの進行およびがん細胞の増殖を促進することに関係している。これらの遺伝子、およびそれらのｍＲＮＡ転写物は、表１に収載されている。表１からの１つまたは複数の遺伝子の発現を低下させることにより、がんの進行およびがん細胞の増殖を阻害することができる。したがって、表１に収載されている遺伝子の転写物は、ｓｈＲＮＡ媒介ＲＮＡｉを使用するがんの処置の肝要な標的に相当する。

【0109】

したがって、一部の実施形態では、哺乳動物におけるがんの処置に有用なＡＰＩは、ｓｈＲＮＡであり、ｓｈＲＮＡは、長さ４４～７１ヌクレオチドの一本鎖ＲＮＡ分子であり、５’から３’方向に：一本鎖ＲＮＡ分子の５’末端における１９～２９ヌクレオチドの第１の領域であって、第１の配列を有する第１の領域；第１の領域に直接隣接する４～１１ヌクレオチドの第２の領域であって、第２の配列を有する第２の領域；第２の領域に直接隣接する１９～２９ヌクレオチドの第３の領域であって、第３の配列を有する第３の領域；および第３の領域に直接隣接する、一本鎖ＲＮＡ分子３’末端における２ヌクレオチドの第４の領域であって、第４の配列を有する第４の領域を有し、（ａ）第１の領域は、第３の領域と同数のヌクレオチドを有し、（ｂ）第３の配列は、第１の配列の逆相補配列であり、（ｃ）第３の領域は、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、ｍＲＮＡ配列は、配列番号８～７４７および７７１～８２４からなる群から選択され、（ｄ）一本鎖ＲＮＡ分子は、第１の領域が第３の領域と塩基対合してステムを形成し、第２の領域がループを形成し、第４の領域が３’オーバーハングを形成する、ステムループ構造を形成するように構成されている。

【0110】

一部の実施形態では、哺乳動物におけるがんの処置に有用なＡＰＩは、ｓｈＲＮＡであり、ｓｈＲＮＡは、長さ４４～７１ヌクレオチドの一本鎖ＲＮＡ分子であり、５’から３’方向に：一本鎖ＲＮＡ分子の５’末端における１９～２９ヌクレオチドの第１の領域であって、第１の配列を有する第１の領域；第１の領域に直接隣接する４～１１ヌクレオチドの第２の領域であって、第２の配列を有する第２の領域；第２の領域に直接隣接する１９～２９ヌクレオチドの第３の領域であって、第３の配列を有する第３の領域；および第３の領域に直接隣接する、一本鎖ＲＮＡ分子３’末端における２ヌクレオチドの第４の領域であって、第４の配列を有する第４の領域を有し、（ａ）第１の領域は、第３の領域と同数のヌクレオチドを有し、（ｂ）第３の配列は、第１の配列の逆相補配列であり、（ｃ）第３の領域は、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、ｍＲＮＡ配列は、配列番号２２～７４７および７７１～８２４からなる群から選択され、（ｄ）一本鎖ＲＮＡ分子は、第１の領域が第３の領域と塩基対合してステムを形成し、第２の領域がループを形成し、第４の領域が３’オーバーハングを形成する、ステムループ構造を形成するように構成されている。

【0111】

一部の実施形態では、哺乳動物におけるがんの処置に有用なＡＰＩは、ｓｈＲＮＡであり、ｓｈＲＮＡは、長さ４４～７１ヌクレオチドの一本鎖ＲＮＡ分子であり、５’から３’方向に：一本鎖ＲＮＡ分子の５’末端における１９～２９ヌクレオチドの第１の領域であって、第１の配列を有する第１の領域；第１の領域に直接隣接する４～１１ヌクレオチドの第２の領域であって、第２の配列を有する第２の領域；第２の領域に直接隣接する１９～２９ヌクレオチドの第３の領域であって、第３の配列を有する第３の領域；および第３の領域に直接隣接する、一本鎖ＲＮＡ分子３’末端における２ヌクレオチドの第４の領域であって、第４の配列を有する第４の領域を有し、（ａ）第１の領域は、第３の領域と同数のヌクレオチドを有し、（ｂ）第３の配列は、第１の配列の逆相補配列であり、（ｃ）第３の領域は、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、ｍＲＮＡ配列は、配列番号２２～３７からなる群から選択され、（ｄ）一本鎖ＲＮＡ分子は、第１の領域が第３の領域と塩基対合してステムを形成し、第２の領域がループを形成し、第４の領域が３’オーバーハングを形成する、ステムループ構造を形成するように構成されている。

【0112】

一部の実施形態では、哺乳動物におけるがんの処置に有用なＡＰＩは、ｓｈＲＮＡであり、ｓｈＲＮＡは、長さ４４～７１ヌクレオチドの一本鎖ＲＮＡ分子であり、５’から３’方向に：一本鎖ＲＮＡ分子の５’末端における１９～２９ヌクレオチドの第１の領域であって、第１の配列を有する第１の領域；第１の領域に直接隣接する４～１１ヌクレオチドの第２の領域であって、第２の配列を有する第２の領域；第２の領域に直接隣接する１９～２９ヌクレオチドの第３の領域であって、第３の配列を有する第３の領域；および第３の領域に直接隣接する、一本鎖ＲＮＡ分子３’末端における２ヌクレオチドの第４の領域であって、第４の配列を有する第４の領域を有し、（ａ）第１の領域は、第３の領域と同数のヌクレオチドを有し、（ｂ）第３の配列は、第１の配列の逆相補配列であり、（ｃ）第３の領域は、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、ｍＲＮＡ配列は、配列番号３８～３９からなる群から選択され、（ｄ）一本鎖ＲＮＡ分子は、第１の領域が第３の領域と塩基対合してステムを形成し、第２の領域がループを形成し、第４の領域が３’オーバーハングを形成する、ステムループ構造を形成するように構成されている。

【0113】

一部の実施形態では、哺乳動物におけるがんの処置に有用なＡＰＩは、ｓｈＲＮＡであり、ｓｈＲＮＡは、長さ４４～７１ヌクレオチドの一本鎖ＲＮＡ分子であり、５’から３’方向に：一本鎖ＲＮＡ分子の５’末端における１９～２９ヌクレオチドの第１の領域であって、第１の配列を有する第１の領域；第１の領域に直接隣接する４～１１ヌクレオチドの第２の領域であって、第２の配列を有する第２の領域；第２の領域に直接隣接する１９～２９ヌクレオチドの第３の領域であって、第３の配列を有する第３の領域；および第３の領域に直接隣接する、一本鎖ＲＮＡ分子３’末端における２ヌクレオチドの第４の領域であって、第４の配列を有する第４の領域を有し、（ａ）第１の領域は、第３の領域と同数のヌクレオチドを有し、（ｂ）第３の配列は、第１の配列の逆相補配列であり、（ｃ）第３の領域は、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、ｍＲＮＡ配列は、配列番号４０～４３からなる群から選択され、（ｄ）一本鎖ＲＮＡ分子は、第１の領域が第３の領域と塩基対合してステムを形成し、第２の領域がループを形成し、第４の領域が３’オーバーハングを形成する、ステムループ構造を形成するように構成されている。

【0114】

一部の実施形態では、哺乳動物におけるがんの処置に有用なＡＰＩは、ｓｈＲＮＡであり、ｓｈＲＮＡは、長さ４４～７１ヌクレオチドの一本鎖ＲＮＡ分子であり、５’から３’方向に：一本鎖ＲＮＡ分子の５’末端における１９～２９ヌクレオチドの第１の領域であって、第１の配列を有する第１の領域；第１の領域に直接隣接する４～１１ヌクレオチドの第２の領域であって、第２の配列を有する第２の領域；第２の領域に直接隣接する１９～２９ヌクレオチドの第３の領域であって、第３の配列を有する第３の領域；および第３の領域に直接隣接する、一本鎖ＲＮＡ分子３’末端における２ヌクレオチドの第４の領域であって、第４の配列を有する第４の領域を有し、（ａ）第１の領域は、第３の領域と同数のヌクレオチドを有し、（ｂ）第３の配列は、第１の配列の逆相補配列であり、（ｃ）第３の領域は、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、ｍＲＮＡ配列は、配列番号４４～５１からなる群から選択され、（ｄ）一本鎖ＲＮＡ分子は、第１の領域が第３の領域と塩基対合してステムを形成し、第２の領域がループを形成し、第４の領域が３’オーバーハングを形成する、ステムループ構造を形成するように構成されている。

【0115】

ｓｈＲＮＡ媒介ＲＮＡｉを使用して遺伝子の発現を低下させることは、ウイルス感染症の処置においても有用である。例えば、感染細胞が宿主の免疫系を回避することを可能にする遺伝子セット、またはウイルス複製に必要な遺伝子セットの発現を低下させることは、宿主におけるウイルスの増殖を妨げる。そのような遺伝子、およびそれらのｍＲＮＡ転写物は、表２に収載されている。したがって、表２に収載されている遺伝子の転写物はまた、ｓｈＲＮＡ媒介ＲＮＡｉを使用するウイルス感染症の処置の肝要な標的である。

【0116】

したがって、一部の実施形態では、哺乳動物におけるウイルス感染症の処置に有用なＡＰＩは、ｓｈＲＮＡであり、ｓｈＲＮＡは、長さ４４～７１ヌクレオチドの一本鎖ＲＮＡ分子であり、５’から３’方向に：一本鎖ＲＮＡ分子の５’末端における１９～２９ヌクレオチドの第１の領域であって、第１の配列を有する第１の領域；第１の領域に直接隣接する４～１１ヌクレオチドの第２の領域であって、第２の配列を有する第２の領域；第２の領域に直接隣接する１９～２９ヌクレオチドの第３の領域であって、第３の配列を有する第３の領域；および第３の領域に直接隣接する、一本鎖ＲＮＡ分子３’末端における２ヌクレオチドの第４の領域であって、第４の配列を有する第４の領域を有し、（ａ）第１の領域は、第３の領域と同数のヌクレオチドを有し、（ｂ）第３の配列は、第１の配列の逆相補配列であり、（ｃ）第３の領域は、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、ｍＲＮＡ配列は、配列番号８～２１、４８２～４８６、および７４８～７６５からなる群から選択され、（ｄ）一本鎖ＲＮＡ分子は、第１の領域が第３の領域と塩基対合してステムを形成し、第２の領域がループを形成し、第４の領域が３’オーバーハングを形成する、ステムループ構造を形成するように構成されている。

【0117】

一部の実施形態では、哺乳動物におけるウイルス感染症の処置に有用なＡＰＩは、ｓｈＲＮＡであり、ｓｈＲＮＡは、長さ４４～７１ヌクレオチドの一本鎖ＲＮＡ分子であり、５’から３’方向に：一本鎖ＲＮＡ分子の５’末端における１９～２９ヌクレオチドの第１の領域であって、第１の配列を有する第１の領域；第１の領域に直接隣接する４～１１ヌクレオチドの第２の領域であって、第２の配列を有する第２の領域；第２の領域に直接隣接する１９～２９ヌクレオチドの第３の領域であって、第３の配列を有する第３の領域；および第３の領域に直接隣接する、一本鎖ＲＮＡ分子３’末端における２ヌクレオチドの第４の領域であって、第４の配列を有する第４の領域を有し、（ａ）第１の領域は、第３の領域と同数のヌクレオチドを有し、（ｂ）第３の配列は、第１の配列の逆相補配列であり、（ｃ）第３の領域は、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、ｍＲＮＡ配列は、配列番号４８２～４８６および７４８～７６５からなる群から選択され、（ｄ）一本鎖ＲＮＡ分子は、第１の領域が第３の領域と塩基対合してステムを形成し、第２の領域がループを形成し、第４の領域が３’オーバーハングを形成する、ステムループ構造を形成するように構成されている。

【0118】

上述のとおり、ＣＤ４７発現の増加は、線維化線維芽細胞において観察されており、ＣＤ４７を遮断することは、線維化促進性線維芽細胞のファゴサイトーシスを増加させることにより、および適応免疫に対する抑制効果を消失させることにより、線維症を好転させる。ＣＤ４７に加えて、表３に収載さている他の遺伝子の発現は、線維症の促進に関連付けられている。ｓｈＲＮＡ媒介ＲＮＡｉを使用してこれらの遺伝子の発現を低下させることは、線維性疾患の処置においても有用である。そのような遺伝子、およびそれらのｍＲＮＡ転写物は、表３に収載されている。したがって、表３に収載されている遺伝子の転写物はまた、ｓｈＲＮＡ媒介ＲＮＡｉを使用する線維性疾患の処置の肝要な標的に相当する。

【0119】

したがって、一部の実施形態では、哺乳動物における線維性疾患の処置に有用なＡＰＩは、ｓｈＲＮＡであり、ｓｈＲＮＡは、長さ４４～７１ヌクレオチドの一本鎖ＲＮＡ分子であり、５’から３’方向に：一本鎖ＲＮＡ分子の５’末端における１９～２９ヌクレオチドの第１の領域であって、第１の配列を有する第１の領域；第１の領域に直接隣接する４～１１ヌクレオチドの第２の領域であって、第２の配列を有する第２の領域；第２の領域に直接隣接する１９～２９ヌクレオチドの第３の領域であって、第３の配列を有する第３の領域；および第３の領域に直接隣接する、一本鎖ＲＮＡ分子３’末端における２ヌクレオチドの第４の領域であって、第４の配列を有する第４の領域を有し、（ａ）第１の領域は、第３の領域と同数のヌクレオチドを有し、（ｂ）第３の配列は、第１の配列の逆相補配列であり、（ｃ）第３の領域は、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、ｍＲＮＡ配列は、配列番号８～２１、４０～４３、および７６６～７７０からなる群から選択され、（ｄ）一本鎖ＲＮＡ分子は、第１の領域が第３の領域と塩基対合してステムを形成し、第２の領域がループを形成し、第４の領域が３’オーバーハングを形成する、ステムループ構造を形成するように構成されている。

【0120】

一部の実施形態では、哺乳動物における線維性疾患の処置に有用なＡＰＩは、ｓｈＲＮＡであり、ｓｈＲＮＡは、長さ４４～７１ヌクレオチドの一本鎖ＲＮＡ分子であり、５’から３’方向に：一本鎖ＲＮＡ分子の５’末端における１９～２９ヌクレオチドの第１の領域であって、第１の配列を有する第１の領域；第１の領域に直接隣接する４～１１ヌクレオチドの第２の領域であって、第２の配列を有する第２の領域；第２の領域に直接隣接する１９～２９ヌクレオチドの第３の領域であって、第３の配列を有する第３の領域；および第３の領域に直接隣接する、一本鎖ＲＮＡ分子３’末端における２ヌクレオチドの第４の領域であって、第４の配列を有する第４の領域を有し、（ａ）第１の領域は、第３の領域と同数のヌクレオチドを有し、（ｂ）第３の配列は、第１の配列の逆相補配列であり、（ｃ）第３の領域は、哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、ｍＲＮＡ配列は、配列番号４０～４３および７６６～７７０からなる群から選択され、（ｄ）一本鎖ＲＮＡ分子は、第１の領域が第３の領域と塩基対合してステムを形成し、第２の領域がループを形成し、第４の領域が３’オーバーハングを形成する、ステムループ構造を形成するように構成されている。

【0121】

マイクロＲＮＡ（「ｍｉＲＮＡ」）ベースの治療薬は、ｍｉＲＮＡ（およびｍｉＲＮＡ模倣物）、およびｍｉＲＮＡの阻害剤（「ａｎｔｉｍｉＲ」）を含む。

【0122】

ｍｉＲＮＡは、ステム－ループ構造を有する一本鎖ＲＮＡ前駆体として転写され、その後、サイトゾル中でダイサー酵素によりプロセシングされ、その結果、成熟二本鎖産物（「成熟ｍｉＲＮＡ産物」）が産生される。これらの成熟ｍｉＲＮＡ産物は、ｍＲＮＡとのそれらの相補性によって、ＲＮＡサイレンシングおよび遺伝子発現の転写後調節を含む、調節的な役割を有すると考えられる。

【0123】

表４に示されているｍｉＲＮＡの発現は、様々ながんにおいて下方制御されることが公知であり、下方制御されたｍｉＲＮＡの補充は、がんの処置のための有望な治療法になる。

【0124】

したがって、一部の実施形態では、哺乳動物におけるがんの処置に有用なＡＰＩは、配列番号８２５～８４４、８４９～８５１、８５３、８５５、８５７、８６４、８６５、および８６７～８８３からなる群から選択されるｍｉＲＮＡである。

【0125】

【表4-1】

【表4-2】

【0126】

ｍｉＲＮＡとは対照的に、ａｎｔｉｍｉＲ（「ａｎｔａｇｏｍｉｒ」としても公知）は、標的成熟ｍｉＲＮＡ産物の領域の配列に相補的である配列を有する一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチド（「ＡＳＯ」）である。成熟ｍｉＲＮＡ産物は、ｍｉＲＮＡ分子がサイトゾル中でプロセシングされた後に産生される、短い一本鎖ＲＮＡ分子である。典型的には、５ｐ ＲＮＡ分子（これは、ｍｉＲＮＡのステムとして形成された二重鎖の５’アームからプロセシングされるため、そう名付けられた）および３ｐ ＲＮＡ分子（これは、ｍｉＲＮＡのステムとして形成された二重鎖の３’アームからプロセシングされるため、そう名付けられた）という２つの成熟ｍｉＲＮＡ産物が、ｍｉＲＮＡ分子から産生される。５Ｐおよび３ｐ分子は、互いに塩基対合して二重鎖を形成し得、各々の分子は、ｍＲＮＡとのそれらの相補性によって細胞内で、機能性であり得る－実際には、別々の機能を果たし得る。一部の事例では、ｍｉＲＮＡ分子がプロセシングされ、その結果、単一の機能性成熟ｍｉＲＮＡ産物のみが産生される。

【0127】

それらの標的成熟ｍｉＲＮＡ産物に相補的塩基対合によって結合することにより、ａｎｔｉｍｉＲは、成熟ｍｉＲＮＡ産物によるその標的への結合を遮断することができ、それによって、成熟ｍｉＲＮＡ産物が機能することを阻害することができる。成熟ｍｉＲＮＡ産物を阻害するためにａｎｔｉｍｉＲを使用することは、ｍｉＲＮＡノックダウンと呼ばれる。一般に、Quemener et al. Wiley Interdiscip Rev RNA (5):e1594 (2020)を参照されたく、この参考文献は、これによりその全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0128】

ａｎｔｉｍｉＲは、長さ１２～２５ヌクレオチドであり、標的成熟ｍｉＲＮＡ産物の連続ヌクレオチドに相補的である。異なるタイプの核酸を使用して、ａｎｔｉｍｉＲを生成することができる。好ましくは、ａｎｔｉｍｉＲは、ＲＮＡ／ＲＮＡハイブリッドが非常に安定しているので、ＲＮＡを含む。加えて、ａｎｔｉｍｉＲは、ＤＮＡを含むことがあり、またはＲＮＡヌクレオチドとＤＮＡヌクレオチドの両方（本明細書では「キメラ」と呼ばれる）を含むことがある。ａｎｔｉｍｉＲは、成熟ｍｉＲＮＡ産物の５’末端からヌクレオチド２～８にわたる、成熟ｍｉＲＮＡ産物の「シード領域」に、相補的塩基対合によって、高い親和性で結合するはずである（Lennox et al. Gene Therapy 18: 1111-20 (2011)、この参考文献は、これによりその全体が参照により本明細書に組み込まれる）。

【0129】

長年にわたって、ａｎｔｉｍｉＲの結合親和性、安定性および標的モジュレーション効果の有意な改善が、オリゴヌクレオチド骨格への化学的改変によって達成されてきた。それ故、ａｎｔｉｍｉＲは、ＲＮＡ誘導体またはＤＮＡ誘導体であり得る。一部の実施形態では、ａｎｔｉｍｉＲは、追加の特性、例えば、エンドヌクレアーゼおよびＲＮａｓｅＨに対する耐性、安定性（例えば、体液中での）、ならびに毒性低下、をａｎｔｉｍｉＲに備えさせる改変を含む。一部の実施形態では、改変は、２’－Ｏ－メチル－ホスホロチオエートオリゴヌクレオチド改変、２’－Ｏ－メトキシエチルオリゴヌクレオチド改変、およびこれらの組合せである。一部の実施形態では、ａｎｔｉｍｉＲは、ペプチド核酸、ロックド核酸、またはモルホリノホスホロジアミデートを含む。一般に、Wahlestedt et al. PNAS 97, 5633-5638 (2000)；Elayadi et al. Curr Opin Investig Drugs 2, 558-61 (2001)；Larsen et al. Biochim Biophys Acta 1489, 159-166 (1999)；Braasch et al. Biochemistry 41, 4503-4510 (2002)；Summerton et al. Antisense Nucleic Acid Drug Dev 7, 187-195 (1997)を参照されたく、これらの参考文献の各々は、これによりその全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0130】

表５に示されているｍｉＲＮＡの発現は、様々ながんにおいて上方制御されることが公知であり、表６に示されているようなそれらの成熟ｍｉＲＮＡ産物は、がんの処置のためのｍｉＲＮＡノックダウンの好ましい標的である。

【0131】

したがって、一部の実施形態では、哺乳動物におけるがんの処置に有用なＡＰＩは、ａｎｔｉｍｉＲであり、ａｎｔｉｍｉＲは、長さ１２～２５ヌクレオチドの一本鎖核酸分子であり、ａｎｔｉｍｉＲは、標的成熟ｍｉＲＮＡ産物配列における連続するヌクレオチドに相補的である連続する１２～２５ヌクレオチドの配列を有し、成熟ｍｉＲＮＡ産物配列は、配列番号８８４～９０８からなる群から選択され、成熟ｍｉＲＮＡ産物配列における連続するヌクレオチドは、５’から３’方向に、成熟ｍｉＲＮＡ産物配列のヌクレオチド２～８を含む。

【0132】

【表5】

【0133】

【表6】

【0134】

他の実施形態では、哺乳動物におけるがんの処置に有用なＡＰＩは、抗がん特性を有するタンパク質である。抗がん特性としては、がん細胞の増殖を阻害すること、腫瘍の増殖を阻害すること、がん細胞の死を引き起こすこと、腫瘍のサイズを低下させること、または腫瘍の消失を引き起こすことが挙げられる。表７に収載されているタンパク質は、抗がん特性を有する。したがって、配列番号９０９～９２９およびそのホモログからなる群から選択されるアミノ酸配列を有するタンパク質は、本発明の実施形態による使用に好適なＡＰＩである。他の実施形態では、配列番号９０９～９２９およびこれらのホモログからなる群から選択されるアミノ酸配列からなるタンパク質は、本発明の実施形態による使用に好適なＡＰＩである。

【0135】

一部の実施形態では、哺乳動物におけるがんの処置に好適なＡＰＩは、配列番号９０９～９２９およびこれらのホモログからなる群から選択されるアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡであり、ｍＲＮＡは、アミノ酸配列を含むタンパク質を産生するように哺乳動物の標的細胞において翻訳されるように構成されている。他の実施形態では、哺乳動物におけるがんの処置に好適なＡＰＩは、配列番号９０９～９２９およびこれらのホモログからなる群から選択されるアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡであり、ｍＲＮＡは、アミノ酸配列からなるタンパク質を産生するように哺乳動物の標的細胞において翻訳されるように構成されている。ｍＲＮＡは、哺乳動物の標的細胞における翻訳のためにコドン最適化され得る。

【0136】

【表7】

【実施例】

【0137】

（実施例１）
ｖＳＩＲＰα－ｓｉＲＮＡコンジュゲートは赤血球に結合する

【0138】

ＦＡＭタグ付きｓｉＲＮＡ（図１Ａ）（配列番号９６５（センス鎖）および配列番号９６６（アンチセンス鎖））をｖＳＩＲＰαと１：１のモル比（５０ｐｍｏｌのｖＳＩＲＰαと５０ｐｍｏｌのｓｉＲＮＡ）で混合した。ｓｉＲＮＡをその３’末端においてマレイミドによって改変した。ｖＳＩＲＰαをそのＣ末端の付近にシステインを有するように設計した。システインからのチオールとマレイミドとを中性ｐＨでクリックケミストリーによって反応させた。反応物を、一晩、４℃のシェーカーの中で保持し、その結果、図１Ａに示すｖＳＩＲＰα－ｓｉＲＮＡコンジュゲートを得た。

【0139】

製造業者のプロトコールを使用してＮＡＰ－５カラムを使用して、ｖＳＩＲＰα－ｓｉＲＮＡコンジュゲートを単離した。

【0140】

赤血球（「ＲＢＣ」）に結合するｖＳＩＲＰα－ｓｉＲＮＡコンジュゲートの能力を評価するために、ｖＳＩＲＰα－ｓｉＲＮＡコンジュゲートを、図１Ｂに描示するようにマウスＲＢＣと混合した。この実験については、２μｌの体積のリン酸緩衝食塩水（「ＰＢＳ」）中の６×１０^６の赤血球を、ｖＳＩＲＰα－ｓｉＲＮＡコンジュゲートを含有する２．５μｌのＰＢＳ（合計５０ｐｍｏｌのｖＳＩＲＰα－ｓｉＲＮＡコンジュゲート）、および５．５μｌのＰＢＳと混合した。陰性対照を、２μｌの体積のＰＢＳ中の６×１０^６の赤血球を８μｌのＰＢＳと混合することにより作製した。次いで、各混合物を室温（２０～２５℃）で２時間、インキュベートした（図１Ｂ）。

【0141】

インキュベーション後、５μｌの各混合物をＰＢＳで２０倍希釈して混合物ごとに１００μｌの総体積にし、各希釈物をガラス底の皿に入れ、顕微鏡（４８８ｎｍの励起波長）を用いて４９４～５６７ｎｍで蛍光イメージングした。

【0142】

図１Ｃから明らかなように、陰性対照は、蛍光を示さないが、その一方でｖＳＩＲＰα－ｓｉＲＮＡコンジュゲートを含有する混合物は、赤血球に関連する強い蛍光シグナルを示し、これは、ｖＳＩＲＰα－ｓｉＲＮＡコンジュゲートがＲＢＣに結合することを示す。

【0143】

（実施例２）
ｖＳＩＲＰα－ｓｉＲＮＡコンジュゲートはフローサイトメトリーにより実証されるようにＲＢＣからがん細胞へ移行される

【0144】

実施例１からの５００ｐｍｏｌのｖＳＩＲＰα－ｓｉＲＮＡコンジュゲートを、ダルベッコリン酸緩衝食塩水（「ＤＰＢＳ」）中の５×１０^３のマウスＲＢＣとともに、２０μｌの総体積で、３０分間、室温（２０～２５℃）でインキュベートした。

【0145】

３０分後、混合物を５００×ｇの遠心分離により１０分間、ＤＰＢＳで洗浄し、上清を除去した。次いで、ｖＳＩＲＰα－ｓｉＲＮＡコンジュゲートと結合したＲＢＣを２０μｌのＰＢＳに再懸濁させた。

【0146】

ＣＴ２６．ＣＬ２５（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－２６３９）およびＣａＣＯ２（ＡＴＣＣ ＨＴＢ－３７）という２つの細胞系を使用した。ＣＴ２６．ＣＬ２５は、マウス結腸癌細胞系である。ＣａＣＯ２は、ＣＤ４７の発現が欠損しているヒト大腸腺癌細胞系であり、したがって、これを陰性対照として使用した（Liu et al. J Biol Chem 276(43):40156-66 (2001)、この参考文献は、これによりその全体が参照により本明細書に組み込まれる）。

【0147】

細胞培養皿で独立して成長させた各細胞系を、トリプシン－ＥＤＴＡによって皿から剥離させた。次いで、各皿からの細胞をＤＰＢＳで洗浄し、計数し、１０^５細胞／１００μｌ ＰＢＳに希釈した。４μｌのＦＡＭ－ｖＳＩＲＰα－ｓｉＲＮＡ／ＲＢＣ再懸濁液（合計１０^３のＲＢＣおよび１００ｐｍｏｌのｖＳＩＲＰα－ｓｉＲＮＡ）を、独立して、ＣＴ２６．ＣＬ２５細胞およびＣａＣＯ２細胞の各々１００μｌの希釈物と混合した。各混合物を３０分間、室温（２０～２５℃）でインキュベートした。

【0148】

３０分後、各混合物を遠心分離し、上清を除去した。細胞ペレットを、フローサイトメーター解析用の２００μｌのフローサイトメトリー緩衝液を用いて再懸濁させた。

【0149】

図２Ａおよび２Ｂは、それぞれ、ＣａＣＯ２細胞およびＣＴ２６．ＣＬ２５細胞についてのフローサイトメトリー結果を示す。フローサイトメトリーは、ＦＡＭタグの励起のために４８８ｎｍのレーザーを使用して行い、５２５～５６５ｎｍの波長で検出した。ＦＡＭタグ付きｖＳＩＲＰα－ｓｉＲＮＡと結合したＲＢＣとのインキュベーション後、各がん細胞系は、異なるレベルの蛍光シフトを示した。これらの結果は、ＣＴ２６．ＣＬ２５についてはＲＢＣとのインキュベーション後に有意な蛍光シフトを示し、ＣａＣＯ２についてはＲＢＣとのインキュベーション後にほとんどシフトを示さず、したがって、蛍光シフトの程度が、がん細胞上のＣＤ４７のレベルに依存していることを示す。これらの結果は、ＦＡＭタグ付きｖＳＩＲＰα－ｓｉＲＮＡがＲＢＣからＣＴ２６．ＣＬ２５細胞の表面に存在するＣＤ４７へ移行されたことを強く示唆している。

【0150】

（実施例３）
抗ＣＤ４７抗体はフローサイトメトリーにより実証されるようにＲＢＣからがん細胞へ移行される

【0151】

先ず、０．１μｇのＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７抗マウスＣＤ４７モノクローナル抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、＃１２７５１０）を１００μｌの総体積のＤＰＢＳ中で４×１０^３のマウスＲＢＣとともに３０分間、室温でインキュベートした。インキュベーション後、ＲＢＣ－抗体混合物を５００ｇで５分間、遠心分離した。次いで、上清をデカントし、細胞を２０μｌのＤＰＢＳに再懸濁させた。

【0152】

次いで、本発明者らは、２×１０^５のＣＴ２６．ＣＬ２５細胞（１００μｌのＤＰＢＳ中）を１０μｌの再懸濁ＲＢＣ－抗体混合物と混合して１１０μｌの総体積にした（混合物＃１）。同様に、２×１０^５のＣａＣＯ２細胞（１００μｌのＤＰＢＳ中）を１０μｌの再懸濁ＲＢＣ－抗体混合物と混合して１１０μｌの総体積にした（混合物＃２）。

【0153】

混合物＃１および混合物＃２を３０分間、室温でインキュベートした。インキュベーション後、１ｍｌのＤＰＢＳを各混合物に添加し、続いて、５００ｇで５分間の遠心分離を行った。混合物ごとに、遠心分離後、上清をデカントし、残存細胞を１００μｌのＤＰＢＳに再懸濁させ、フローサイトメトリー（Ｂｅｃｋｍａｎ、レーザー４８８ｎｍ、検出６５０～６７０ｎｍ）に供した。

【0154】

図３Ａおよび３Ｂは、それぞれ、ＣａＣＯ２細胞およびＣＴ２６．ＣＬ２５細胞についてのこれらのフローサイトメトリー結果を示す。実施例２で観察された蛍光シフトほどは顕著でなかったが、ＲＢＣとのインキュベーション後のＣＴ２６．ＣＬ２５細胞について、ＲＢＣとのインキュベーション後のＣａＣＯ２細胞についての蛍光シフトと比較して大きい蛍光シフトが観察された。これは、この場合もやはり、蛍光シフトの程度が、がん細胞上のＣＤ４７のレベルに依存していることを示す。これらの結果は、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７抗マウスＣＤ４７モノクローナル抗体がＲＢＣからＣＴ２６．ＣＬ２５細胞の表面に存在するＣＤ４７へ移行されたことを示唆している。

【0155】

（実施例４）
ｖＳＩＲＰα－ｓｉＲＮＡコンジュゲートはフローサイトメトリーにより実証されるようにＲＢＣからがん細胞へ移行される

【0156】

実施例１のｖＳＩＲＰα－ｓｉＲＮＡ－ＦＡＭコンジュゲートを、ＲＢＣからＣＴ２６．ＣＬ２５細胞の表面に存在するＣＤ４７へ移行されるその能力について、さらに試験した。実験は、５００ｐｍｏｌではなく１００ｐｍｏｌのコンジュゲートをＲＢＣとともにインキュベートしたことを除き、実施例２の場合と同様に行った。

【0157】

図４のフローサイトメトリー結果で示されるように、ＣａＣＯ２細胞と比較してＣＴ２６．ＣＬ２５細胞の有意に大きいパーセンテージがＦＡＭ蛍光を示しており、これは、この場合もやはり、ＦＡＭタグ付きｖＳＩＲＰα－ｓｉＲＮＡが、ＲＢＣからＣＴ２６．ＣＬ２５細胞の表面に存在するＣＤ４７へ移行されたことを強く示唆している。

【0158】

（実施例５）
Ｃｙ５．５標識ｖＳＩＲＰαはフローサイトメトリーにより実証されるようにＲＢＣからがん細胞へ移行される

【0159】

Ｃｙ５．５で標識したｖＳＩＲＰαを、ＲＢＣからＣＴ２６．ＣＬ２５細胞の表面に存在するＣＤ４７へ移行されるその能力について試験した。実験は、５００ｐｍｏｌのコンジュゲートではなく２００ｐｍｏｌの標識ｖＳＩＲＰαをＲＢＣとともにインキュベートしたことを除き、実施例２の場合と同様に行った。

【0160】

図５のフローサイトメトリー結果で示されるように、ＣａＣＯ２細胞と比較してＣＴ２６．ＣＬ２５細胞の有意に大きいパーセンテージがＣｙ５．５蛍光を示しており、これは、Ｃｙ５．５で標識したｖＳＩＲＰαが、ＲＢＣからＣＴ２６．ＣＬ２５細胞の表面に存在するＣＤ４７へ移行されたことを強く示唆している。

【0161】

（実施例６）
抗ＣＤ４７抗体はフローサイトメトリーにより実証されるようにＲＢＣからがん細胞へ移行される

【0162】

Ａｌｅｘａ Ｆｌｏｕｒ（登録商標）６４７で標識した抗マウスＣＤ４７モノクローナル抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、＃１２７５１０）を、ＲＢＣからＣＴ２６．ＣＬ２５細胞の表面に存在するＣＤ４７へ移行されるその能力について試験した。実験は、０．１μｇではなく１μｇの標識抗体をＲＢＣとともにインキュベートしたことを除き、実施例３の場合と同様に行った。

【0163】

図６のフローサイトメトリー結果で示されるように、未染色細胞と比較してＣＴ２６．ＣＬ２５細胞の有意に大きいパーセンテージがＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７蛍光を示しており、これは、Ａｌｅｘａ Ｆｌｏｕｒ（登録商標）６４７にコンジュゲートした抗ＣＤ４７抗体が、ＲＢＣからＣＴ２６．ＣＬ２５細胞の表面に存在するＣＤ４７へ移行されたことを強く示唆している。この実験は、ＣＤ４７に対するモノクローナル抗体がＲＢＣからがん細胞の表面に存在するＣＤ４７へ移行され得ることも実証する。

【0164】

（実施例７）
抗体－ｍｉＲ２１コンジュゲートはフローサイトメトリーにより実証されるようにＲＢＣからがん細胞へ移行される

【0165】

Ｃｙ５標識ｍｉＲ２１（配列番号８７８）にコンジュゲートした抗ＣＤ４７モノクローナル抗体（Ｂｉｏｘｃｅｌｌ、＃ＢＥ０２７０）を、ＲＢＣからＣＴ２６．ＣＬ２５細胞の表面に存在するＣＤ４７へ移行されるその能力について試験した。実験は、０．１μｇではなく１５．８μｇの抗体コンジュゲートをＲＢＣとともにインキュベートしたことを除き、実施例３の場合と同様に行った。

【0166】

図７のフローサイトメトリー結果で示されるように、未染色細胞と比較してＣＴ２６．ＣＬ２５細胞のより大きいパーセンテージがＣｙ５蛍光を示しており、これは、ＣＤ４７ｍＡｂ－ｍｉＲ２１－Ｃｙ５コンジュゲートが、ＲＢＣからＣＴ２６．ＣＬ２５細胞の表面に存在するＣＤ４７へ移行されたことを強く示唆している。

【0167】

（実施例８）
トロンボスポンジン－１はフローサイトメトリーにより実証されるようにＲＢＣからがん細胞へ移行される

【0168】

トロンボスポンジン－１（ＴＳＰ－１）は、血管新生および内皮細胞増殖を阻害するマトリックス細胞タンパク質である。ＴＳＰ－１は、ＣＤ４７に結合する。ＴＳＰ－１シグナル伝達経路は、腎疾患、心血管疾患、炎症およびがんなどの様々な状態に関与することが判明している。ＴＳＰ－１の基礎をなす機構および経路は、まだ十分に解明されていない。しかし、いくつかの肝要な受容体ＣＤ３６／ＶＥＧＦおよびＣＤ４７に対するＴＳＰ－１の機能は、実証されている。特にがんにおいて、活性化されたＴＳＰ－１およびＣＤ４７経路は、腫瘍成長および転移を低減させることが判明している。Kale et al. Int J Mol Sci, 22(8) (2021)およびKaur et al. J Biol Chem, 285(50), 38923-38932 (2010)を参照されたい。ここで、本発明者らは、標識マウスＴＳＰ－１がＲＢＣからＣＴ２６．ＣＬ２５がん細胞へ移行されることを示す。

【0169】

Ｃｙ５．５で標識したマウスＴＳＰ－１（７８５９－ＴＨ、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を、ＲＢＣからＣＴ２６．ＣＬ２５細胞の表面に存在するＣＤ４７へ移行されるその能力について試験した。実験は、５００ｐｍｏｌのコンジュゲートではなく５μｇのＣｙ５．５標識ＴＳＰ－１をＲＢＣとともにインキュベートしたことを除き、実施例２の場合と同様に行った。

【0170】

図８のフローサイトメトリー結果で示されるように、ＣａＣＯ２細胞と比較してＣＴ２６．ＣＬ２５細胞の有意に大きいパーセンテージがＣｙ５．５蛍光を示しており、これは、Ｃｙ５．５標識ＴＳＰ－１が、ＲＢＣからＣＴ２６．ＣＬ２５細胞の表面に存在するＣＤ４７へ移行されたことを強く示唆している。

【0171】

（実施例９）
ｖＳＩＲＰα－ｓｉＲＮＡコンジュゲートはｉｎ ｖｉｖｏでＲＢＣに結合する

【0172】

実施例１からの５ｎｍｏｌのｖＳＩＲＰα－ｓｉＲＮＡコンジュゲート、および実施例１からの５ｎｍｏｌのコンジュゲートしていないｓｉＲＮＡを、各々、１２０μｌの総体積のＲＮＡｓｅフリー水中、１：１のモル比でインターカレーティング色素ＹＯＹＯ（商標）－１ヨウ化物によって染色した。３０分間、室温でのインキュベーション後、染色されたコンジュゲートおよびｓｉＲＮＡを、下で詳述するようにマウスに注射した。

【0173】

３匹のＢａｌｂ／ｃマウスを実験に使用した：１匹の未処置マウスを陰性対照として使用し；１匹のマウスには５ｎｍｏｌのコンジュゲートしていない染色されたｓｉＲＮＡを尾静脈に静脈内注射し；１匹のマウスには５ｎｍｏｌの染色されたｖＳＩＲＰα－ｓｉＲＮＡコンジュゲートを尾静脈に静脈内注射した。

【0174】

注射の４５分後、血液をマウスから採取した。各試料からの５０μｌの全血を５００×ｇでの遠心分離により１０分間、１ｍｌのＤＰＢＳで２回洗浄し、ＤＰＢＳに再懸濁させた。再懸濁血液を、共焦点皿（ＳＰＬ １００３５０）を使用して共焦点顕微鏡法によってイメージングし、ＲＢＣ会合ＹＯＹＯ（商標）－１ヨウ化物蛍光シグナルを異なる群（対照、ｓｉＲＮＡ、およびコンジュゲート）間で比較した。４８８ｎｍのレーザーを使用した（ＹＯＹＯ（商標）－１ヨウ化物は、４９１ｎｍの励起波長を有する）。

【0175】

図９に示すように、ｖＳＩＲＰα－ｓｉＲＮＡコンジュゲートを注射したマウスからのＲＢＣは、蛍光輝点を示し（図９の矢印）、これは、ｖＳＩＲＰα－ｓｉＲＮＡコンジュゲートとＲＢＣとの結合がｉｎ ｖｉｖｏで起こることを示す。

【0176】

可能性のある特許請求の範囲

【0177】

本発明の様々な実施形態は、この段落の後に続く（および本願の最後に提供する実際の特許請求の範囲の前の）段落に列挙する、可能性のある特許請求の範囲を特徴とする可能性がある。これらの可能性のある特許請求の範囲は、本願の書面による明細の一部をなす。したがって、以下の可能性のある特許請求の範囲の主題は、本願に関わる、または本願に基づいて優先権を主張する任意の出願に関わる、後の手続きにおいて、実際の特許請求の範囲として提示される可能性がある。そのような可能性のある特許請求の範囲を含めることを、実際の特許請求の範囲が可能性のある特許請求の範囲の主題をカバーしないという意味に解釈すべきではない。したがって、後の手続きにおいてこれらの可能性のある特許請求の範囲を提示しないという決定を、主題を公衆に提供することと解釈すべきでない。

【0178】

これらに限定されるものではないが、請求する可能性がある、可能性のある主題（下に提示する実際の特許請求の範囲との混同を避けるために文字「Ｐ」で始める）は、以下を含む：
（Ｐ１）
ＣＤ４７を発現する標的細胞への哺乳動物対象におけるＲＢＣ媒介送達のための治療化合物であって、
コンジュゲートを形成するようにＡＰＩにコンジュゲートされているＣＤ４７結合タンパク質を含み；
前記ＣＤ４７結合タンパク質が、野生型ＳＩＲＰα（配列番号１）、ｖＳＩＲＰα（配列番号３）、野生型トロンボスポンジン－１（ＴＳＰ－１）（配列番号７）、野生型ＳＩＲＰγ（配列番号４）、ｖＳＩＲＰγ－１（配列番号５）、ｖＳＩＲＰγ－２（配列番号６）、ＡＬＸ１４８（配列番号９６２）、ＴＴＩ－６６１（配列番号９６３）、ＴＴＩ－６６２（配列番号９６４）、前述のもののいずれかのホモログ、およびこれらの組合せからなる群から選択され、前記対象の循環系による前記標的細胞への前記コンジュゲートの輸送を可能にするために前記コンジュゲートを前記対象の赤血球のＣＤ４７に結合させるように構成されており、したがって、（ｉ）前記コンジュゲートを前記赤血球の前記ＣＤ４７に結合させるように構成されている前記ＣＤ４７結合タンパク質が、前記標的細胞の前記ＣＤ４７に結合し、ひいては、前記コンジュゲートを前記赤血球から前記標的細胞へ移行させて、前記標的細胞上にコンジュゲート－ＣＤ４７複合体を形成するようにし、それによって、ＣＤ４７を遮断し、前記標的細胞の免疫逃避機構としてのＣＤ４７活性を阻害し、かつ（ｉｉ）前記コンジュゲートが、前記コンジュゲート－ＣＤ４７複合体のエンドサイトーシスによって前記標的細胞に取り込まれ、それによって、前記標的細胞の前記免疫逃避機構をさらに阻害し、前記ＡＰＩを前記標的細胞に送達する、
治療化合物。
（Ｐ２）
ＣＤ４７を発現する標的細胞への哺乳動物対象におけるＲＢＣ媒介送達のための治療化合物であって、
コンジュゲートを形成するようにＡＰＩにコンジュゲートされているＣＤ４７結合タンパク質を含み；
前記ＣＤ４７結合タンパク質が、野生型トロンボスポンジン－１（ＴＳＰ－１）（配列番号７）、野生型ＳＩＲＰγ（配列番号４）、ｖＳＩＲＰγ－１（配列番号５）、ｖＳＩＲＰγ－２（配列番号６）、ＡＬＸ１４８（配列番号９６２）、ＴＴＩ－６６１（配列番号９６３）、ＴＴＩ－６６２（配列番号９６４）、前述のもののいずれかのホモログ、およびこれらの組合せからなる群から選択され、前記対象の循環系による前記標的細胞への前記コンジュゲートの輸送を可能にするために前記コンジュゲートを前記対象の赤血球のＣＤ４７に結合させるように構成されており、したがって、（ｉ）前記コンジュゲートを前記赤血球の前記ＣＤ４７に結合させるように構成されている前記ＣＤ４７結合タンパク質が、前記標的細胞の前記ＣＤ４７に結合し、ひいては、前記コンジュゲートを前記赤血球から前記標的細胞へ移行させて、前記標的細胞上にコンジュゲート－ＣＤ４７複合体を形成するようにし、それによって、ＣＤ４７を遮断し、前記標的細胞の免疫逃避機構としてのＣＤ４７活性を阻害し、かつ（ｉｉ）前記コンジュゲートが、前記コンジュゲート－ＣＤ４７複合体のエンドサイトーシスによって前記標的細胞に取り込まれ、それによって、前記標的細胞の前記免疫逃避機構をさらに阻害し、前記ＡＰＩを前記標的細胞に送達する、
治療化合物。
（Ｐ３）
ＣＤ４７を発現する標的細胞への哺乳動物対象におけるＲＢＣ媒介送達のための治療化合物であって、
コンジュゲートを形成するようにＡＰＩにコンジュゲートされているＣＤ４７結合タンパク質を含み；
前記ＣＤ４７結合タンパク質が、抗ＣＤ４７抗体であり、前記抗ＣＤ４７抗体が、
（ａ）配列番号９３２、配列番号９３３および配列番号９３４をそれぞれ含む相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号９３５、配列番号９３６および配列番号９３７をそれぞれ含む相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含むか；
（ｂ）配列番号９４０、配列番号９４１および配列番号９４２をそれぞれ含む相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号９４３、配列番号９４４および配列番号９４５をそれぞれ含む相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含むか；
（ｃ）配列番号９４８、配列番号９４９および配列番号９５０をそれぞれ含む相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号９５１、配列番号９５２および配列番号９５３をそれぞれ含む相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含むか；または
（ｄ）配列番号９５６、配列番号９５７および配列番号９５８をそれぞれ含む相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号９５９、配列番号９６０および配列番号９６１をそれぞれ含む相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含み；
前記対象の循環系による前記標的細胞への前記コンジュゲートの輸送を可能にするために前記コンジュゲートを前記対象の赤血球のＣＤ４７に結合させるように構成されており、したがって、（ｉ）前記コンジュゲートを前記赤血球の前記ＣＤ４７に結合させるように構成されている前記ＣＤ４７結合タンパク質が、前記標的細胞の前記ＣＤ４７に結合し、ひいては、前記コンジュゲートを前記赤血球から前記標的細胞へ移行させて、前記標的細胞上にコンジュゲート－ＣＤ４７複合体を形成するようにし、それによって、ＣＤ４７を遮断し、前記標的細胞の免疫逃避機構としてのＣＤ４７活性を阻害し、かつ（ｉｉ）前記コンジュゲートが、前記コンジュゲート－ＣＤ４７複合体のエンドサイトーシスによって前記標的細胞に取り込まれ、それによって、前記標的細胞の前記免疫逃避機構をさらに阻害し、前記ＡＰＩを前記標的細胞に送達する、
治療化合物。
（Ｐ３．５）
前記抗ＣＤ４７抗体が、ヒト化抗体である、請求項Ｐ３に記載の治療化合物。
（Ｐ４）
前記ＣＤ４７結合タンパク質が、共有結合、水素結合、イオン結合、ファンデルワールス相互作用、およびこれらの組合せからなる群から選択される結合により、前記ＡＰＩにコンジュゲートされている、前記請求項のいずれか一項に記載の治療化合物。
（Ｐ５）
前記ＣＤ４７結合タンパク質が、リンカーにより前記ＡＰＩにコンジュゲートされている、前記可能性のある請求項のいずれか一項に記載の治療化合物。
（Ｐ６）
前記リンカーが、切断可能である、請求項Ｐ５に記載の治療化合物。
（Ｐ７）
前記リンカーが、リソソーム分解酵素により切断されるように構成されている、請求項Ｐ５およびＰ６のいずれか一項に記載の治療化合物。
（Ｐ８）
前記ＡＰＩが、ＲＮＡ、ＤＮＡ、ＲＮＡ誘導体、ＤＮＡ誘導体、タンパク質、および小分子からなる群から選択される、前記可能性のある請求項のいずれか一項に記載の治療化合物。
（Ｐ９）
前記ＡＰＩが、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ａｎｔｉｍｉＲ、およびｍＲＮＡからなる群から選択される、請求項Ｐ１からＰ７のいずれか一項に記載の治療化合物。
（Ｐ１０）
前記標的細胞が、がん細胞、ウイルス感染細胞、線維化細胞、およびこれらの組合せからなる群から選択される細胞である、前記可能性のある請求項のいずれか一項に記載の治療化合物。
（Ｐ１１）
前記標的細胞が、がん細胞である、請求項Ｐ１からＰ９のいずれか一項に記載の治療化合物。
（Ｐ１２）
前記標的細胞が、ウイルス感染細胞である、請求項Ｐ１からＰ９のいずれか一項に記載の治療化合物。
（Ｐ１３）
前記標的細胞が、線維化細胞である、請求項Ｐ１からＰ９のいずれか一項に記載の治療化合物。
（Ｐ１４）
前記がん細胞が、脳腫瘍、脊髄腫瘍、網膜芽細胞腫、口腔がん、鼻腔がん、副鼻腔がん、咽頭がん、喉頭がん、頸部がん、頭頸部がん、黒色腫、皮膚がん、乳がん、甲状腺がん、悪性副腎腫瘍、内分泌がん、肺がん、胸膜腫瘍、気道がん、食道がん、胃がん、小腸がん、結腸がん、肛門がん、肝臓がん、胆道がん、膵臓がん、腎臓がん、膀胱がん、前立腺がん、精巣がん、陰茎がん、子宮頸がん、子宮内膜がん、絨毛癌、卵巣がん；急性／慢性白血病、悪性リンパ腫および多発性骨髄腫を含む血液がん；骨腫瘍、軟部組織腫瘍、小児白血病、ならびに小児がんからなる群から選択されるがんに起因する腫瘍におけるものである、請求項Ｐ１１に記載の治療化合物。
（Ｐ１５）
前記がん細胞が、卵巣漿液性嚢胞腺癌、肺腺癌、子宮頸および子宮頸管がん、頭頸部扁平上皮癌、甲状腺癌、子宮体類内膜癌、前立腺癌、中皮腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、急性白血病、肺扁平上皮癌、急性リンパ性白血病、食道癌、粘液線維肉腫、膵臓腺癌、直腸腺癌、結腸腺癌、急性巨核芽球性白血病、浸潤性乳癌、胃腺癌、膀胱尿路上皮癌、胆管癌、白血病、胸腺癌、平滑筋肉腫、胸腺腫、未分化多形性肉腫、子宮癌肉腫、急性骨髄性白血病、多形性神経膠芽種、肉腫、皮膚黒色腫、腎臓明細胞癌、脱分化型脂肪肉腫、リンパ腫、網膜芽細胞腫、神経芽細胞腫、骨肉腫、若年性骨髄単球性白血病、消化管間質腫瘍、胚芽異形成性神経上皮腫瘍、副腎皮質がん、分化系統不明瞭な急性白血病、褐色細胞腫および傍神経節腫、神経膠腫、精巣胚細胞腫瘍、テント上胎児性腫瘍ＮＯＳ、神経芽細胞腫、腎臓乳頭細胞癌、肝細胞癌、嫌色素性腎細胞癌、悪性末梢神経鞘腫瘍、上衣腫、副腎皮質癌、上咽頭癌、紡錘細胞／硬化性横紋筋肉腫、黒色腫、脈絡叢癌、未分化紡錘細胞癌、筋上皮癌、肺胞横紋筋肉腫、横紋筋肉腫、非定型奇形腫／ラブドイド腫瘍、線維形成性小円形細胞腫瘍、線維腫症、滑膜肉腫、ウィルムス腫瘍、筋線維腫症、線維層板型肝細胞癌、未分化肉腫ＮＯＳ、胎児性横紋筋肉腫、ブドウ膜黒色腫、ユーイング肉腫、肝芽腫、乳児型線維肉腫、ＩＮＩ依存性軟部組織肉腫ＮＯＡ、未分化肝肉腫、ならびに髄芽腫からなる群から選択されるがんに起因する、請求項Ｐ１１に記載の治療化合物。
（Ｐ１６）
前記ウイルス感染細胞が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスに感染している、請求項Ｐ１２に記載の治療化合物。
（Ｐ１７）
前記線維化細胞が、嚢胞性線維症に関連する、請求項Ｐ１３に記載の治療化合物。
（Ｐ１８）
前記ＡＰＩが、ｓｉＲＮＡであり、前記ｓｉＲＮＡが、アンチセンスＲＮＡ鎖とセンスＲＮＡ鎖とを含む二本鎖ＲＮＡ分子であり、
（ａ）前記アンチセンスＲＮＡ鎖が、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、前記ｍＲＮＡ配列が、配列番号８～７４７および７７１～８２４からなる群から選択され、
（ｂ）前記センスＲＮＡ鎖が、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、前記アンチセンスＲＮＡ鎖からの１４～２９ヌクレオチドに相補的であり、
（ｃ）前記二本鎖ＲＮＡ分子が、長さ１４～２９ヌクレオチドの二本鎖領域と長さ０～５ヌクレオチドの３’オーバーハング領域とを有する、
請求項Ｐ１からＰ７、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１４、およびＰ１５のいずれか一項に記載の治療化合物。
（Ｐ１９）
前記ＡＰＩが、ｓｉＲＮＡであり、前記ｓｉＲＮＡが、アンチセンスＲＮＡ鎖とセンスＲＮＡ鎖とを含む二本鎖ＲＮＡ分子であり、
（ａ）前記アンチセンスＲＮＡ鎖が、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、前記ｍＲＮＡ配列が、配列番号２２～７４７および７７１～８２４からなる群から選択され、
（ｂ）前記センスＲＮＡ鎖が、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、前記アンチセンスＲＮＡ鎖からの１４～２９ヌクレオチドに相補的であり、
（ｃ）前記二本鎖ＲＮＡ分子が、長さ１４～２９ヌクレオチドの二本鎖領域と長さ０～５ヌクレオチドの３’オーバーハング領域とを有する、
請求項Ｐ１からＰ７、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１４、およびＰ１５のいずれか一項に記載の治療化合物。
（Ｐ２０）
前記ＡＰＩが、ｓｉＲＮＡであり、前記ｓｉＲＮＡが、アンチセンスＲＮＡ鎖とセンスＲＮＡ鎖とを含む二本鎖ＲＮＡ分子であり、
（ａ）前記アンチセンスＲＮＡ鎖が、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、前記ｍＲＮＡ配列が、配列番号２２～３７からなる群から選択され、
（ｂ）前記センスＲＮＡ鎖が、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、前記アンチセンスＲＮＡ鎖からの１４～２９ヌクレオチドに相補的であり、
（ｃ）前記二本鎖ＲＮＡ分子が、長さ１４～２９ヌクレオチドの二本鎖領域と長さ０～５ヌクレオチドの３’オーバーハング領域とを有する、
請求項Ｐ１からＰ７、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１４、およびＰ１５のいずれか一項に記載の治療化合物。
（Ｐ２１）
前記ＡＰＩが、ｓｉＲＮＡであり、前記ｓｉＲＮＡが、アンチセンスＲＮＡ鎖とセンスＲＮＡ鎖とを含む二本鎖ＲＮＡ分子であり、
（ａ）前記アンチセンスＲＮＡ鎖が、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、前記ｍＲＮＡ配列が、配列番号３８～３９からなる群から選択され、
（ｂ）前記センスＲＮＡ鎖が、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、前記アンチセンスＲＮＡ鎖からの１４～２９ヌクレオチドに相補的であり、
（ｃ）前記二本鎖ＲＮＡ分子が、長さ１４～２９ヌクレオチドの二本鎖領域と長さ０～５ヌクレオチドの３’オーバーハング領域とを有する、
請求項Ｐ１からＰ７、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１４、およびＰ１５のいずれか一項に記載の治療化合物。
（Ｐ２２）
前記ＡＰＩが、ｓｉＲＮＡであり、前記ｓｉＲＮＡが、アンチセンスＲＮＡ鎖とセンスＲＮＡ鎖とを含む二本鎖ＲＮＡ分子であり、
（ａ）前記アンチセンスＲＮＡ鎖が、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、前記ｍＲＮＡ配列が、配列番号４０～４３からなる群から選択され、
（ｂ）前記センスＲＮＡ鎖が、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、前記アンチセンスＲＮＡ鎖からの１４～２９ヌクレオチドに相補的であり、
（ｃ）前記二本鎖ＲＮＡ分子が、長さ１４～２９ヌクレオチドの二本鎖領域と長さ０～５ヌクレオチドの３’オーバーハング領域とを有する、
請求項Ｐ１からＰ７、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１４、およびＰ１５のいずれか一項に記載の治療化合物。
（Ｐ２３）
前記ＡＰＩが、ｓｉＲＮＡであり、前記ｓｉＲＮＡが、アンチセンスＲＮＡ鎖とセンスＲＮＡ鎖とを含む二本鎖ＲＮＡ分子であり、
（ａ）前記アンチセンスＲＮＡ鎖が、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、前記ｍＲＮＡ配列が、配列番号４４～５１からなる群から選択され、
（ｂ）前記センスＲＮＡ鎖が、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、前記アンチセンスＲＮＡ鎖からの１４～２９ヌクレオチドに相補的であり、
（ｃ）前記二本鎖ＲＮＡ分子が、長さ１４～２９ヌクレオチドの二本鎖領域と長さ０～５ヌクレオチドの３’オーバーハング領域とを有する、
請求項Ｐ１からＰ７、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１４、およびＰ１５のいずれか一項に記載の治療化合物。
（Ｐ２４）
前記ＡＰＩが、ｓｉＲＮＡであり、前記ｓｉＲＮＡが、アンチセンスＲＮＡ鎖とセンスＲＮＡ鎖とを含む二本鎖ＲＮＡ分子であり、
（ａ）前記アンチセンスＲＮＡ鎖が、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、前記ｍＲＮＡ配列が、配列番号８～２１、４８２～４８６、および７４８～７６５からなる群から選択され、
（ｂ）前記センスＲＮＡ鎖が、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、前記アンチセンスＲＮＡ鎖からの１４～２９ヌクレオチドに相補的であり、
（ｃ）前記二本鎖ＲＮＡ分子が、長さ１４～２９ヌクレオチドの二本鎖領域と長さ０～５ヌクレオチドの３’オーバーハング領域とを有する、
請求項Ｐ１からＰ７、Ｐ１０、Ｐ１２、およびＰ１６のいずれか一項に記載の治療化合物。
（Ｐ２５）
前記ＡＰＩが、ｓｉＲＮＡであり、前記ｓｉＲＮＡが、アンチセンスＲＮＡ鎖とセンスＲＮＡ鎖とを含む二本鎖ＲＮＡ分子であり、
（ａ）前記アンチセンスＲＮＡ鎖が、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、前記ｍＲＮＡ配列が、配列番号４８２～４８６および７４８～７６５からなる群から選択され、
（ｂ）前記センスＲＮＡ鎖が、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、前記アンチセンスＲＮＡ鎖からの１４～２９ヌクレオチドに相補的であり、
（ｃ）前記二本鎖ＲＮＡ分子が、長さ１４～２９ヌクレオチドの二本鎖領域と長さ０～５ヌクレオチドの３’オーバーハング領域とを有する、
請求項Ｐ１からＰ７、Ｐ１０、Ｐ１２、およびＰ１６のいずれか一項に記載の治療化合物。
（Ｐ２６）
前記ＡＰＩが、ｓｉＲＮＡであり、前記ｓｉＲＮＡが、アンチセンスＲＮＡ鎖とセンスＲＮＡ鎖とを含む二本鎖ＲＮＡ分子であり、
（ａ）前記アンチセンスＲＮＡ鎖が、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、前記ｍＲＮＡ配列が、配列番号８～２１、４０～４３、および７６６～７７０からなる群から選択され、
（ｂ）前記センスＲＮＡ鎖が、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、前記アンチセンスＲＮＡ鎖からの１４～２９ヌクレオチドに相補的であり、
（ｃ）前記二本鎖ＲＮＡ分子が、長さ１４～２９ヌクレオチドの二本鎖領域と長さ０～５ヌクレオチドの３’オーバーハング領域とを有する、
請求項Ｐ１からＰ７、Ｐ１０、Ｐ１３、およびＰ１７のいずれか一項に記載の治療化合物。
（Ｐ２７）
前記ＡＰＩが、ｓｉＲＮＡであり、前記ｓｉＲＮＡが、アンチセンスＲＮＡ鎖とセンスＲＮＡ鎖とを含む二本鎖ＲＮＡ分子であり、
（ａ）前記アンチセンスＲＮＡ鎖が、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、前記ｍＲＮＡ配列が、配列番号４０～４３および７６６～７７０からなる群から選択され、
（ｂ）前記センスＲＮＡ鎖が、長さ１９～２９ヌクレオチドであり、前記アンチセンスＲＮＡ鎖からの１４～２９ヌクレオチドに相補的であり、
（ｃ）前記二本鎖ＲＮＡ分子が、長さ１４～２９ヌクレオチドの二本鎖領域と長さ０～５ヌクレオチドの３’オーバーハング領域とを有する、
請求項Ｐ１からＰ７、Ｐ１０、Ｐ１３、およびＰ１７のいずれか一項に記載の治療化合物。
（Ｐ２８）
前記ＡＰＩが、ｓｈＲＮＡであり、前記ｓｈＲＮＡが、長さ４４～７１ヌクレオチドの一本鎖ＲＮＡ分子であり、５’から３’方向に：
前記一本鎖ＲＮＡ分子の５’末端における１９～２９ヌクレオチドの第１の領域であって、第１の配列を有する第１の領域；
前記第１の領域に直接隣接する４～１１ヌクレオチドの第２の領域であって、第２の配列を有する第２の領域；
前記第２の領域に直接隣接する１９～２９ヌクレオチドの第３の領域であって、第３の配列を有する第３の領域；および
前記第３の領域に直接隣接する、前記一本鎖ＲＮＡ分子３’末端における２ヌクレオチドの第４の領域であって、第４の配列を有する第４の領域
を有し、
（ａ）前記第１の領域が、前記第３の領域と同数のヌクレオチドを有し、
（ｂ）前記第３の配列が、前記第１の配列の逆相補配列であり、
（ｃ）前記第３の領域が、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、前記ｍＲＮＡ配列が、配列番号８～７４７および７７１～８２４からなる群から選択され、
（ｄ）前記一本鎖ＲＮＡ分子が、前記第１の領域が前記第３の領域と塩基対合してステムを形成し、前記第２の領域がループを形成し、前記第４の領域が３’オーバーハングを形成する、ステムループ構造を形成するように構成されている、
請求項Ｐ１からＰ７、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１４、およびＰ１５のいずれか一項に記載の治療化合物。
（Ｐ２９）
前記ＡＰＩが、ｓｈＲＮＡであり、前記ｓｈＲＮＡが、長さ４４～７１ヌクレオチドの一本鎖ＲＮＡ分子であり、５’から３’方向に：
前記一本鎖ＲＮＡ分子の５’末端における１９～２９ヌクレオチドの第１の領域であって、第１の配列を有する第１の領域；
前記第１の領域に直接隣接する４～１１ヌクレオチドの第２の領域であって、第２の配列を有する第２の領域；
前記第２の領域に直接隣接する１９～２９ヌクレオチドの第３の領域であって、第３の配列を有する第３の領域；および
前記第３の領域に直接隣接する、前記一本鎖ＲＮＡ分子３’末端における２ヌクレオチドの第４の領域であって、第４の配列を有する第４の領域
を有し、
（ａ）前記第１の領域が、前記第３の領域と同数のヌクレオチドを有し、
（ｂ）前記第３の配列が、前記第１の配列の逆相補配列であり、
（ｃ）前記第３の領域が、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、前記ｍＲＮＡ配列が、配列番号２２～７４７および７７１～８２４からなる群から選択され、
（ｄ）前記一本鎖ＲＮＡ分子が、前記第１の領域が前記第３の領域と塩基対合してステムを形成し、前記第２の領域がループを形成し、前記第４の領域が３’オーバーハングを形成する、ステムループ構造を形成するように構成されている、
請求項Ｐ１からＰ７、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１４、およびＰ１５のいずれか一項に記載の治療化合物。
（Ｐ３０）
前記ＡＰＩが、ｓｈＲＮＡであり、前記ｓｈＲＮＡが、長さ４４～７１ヌクレオチドの一本鎖ＲＮＡ分子であり、５’から３’方向に：
前記一本鎖ＲＮＡ分子の５’末端における１９～２９ヌクレオチドの第１の領域であって、第１の配列を有する第１の領域；
前記第１の領域に直接隣接する４～１１ヌクレオチドの第２の領域であって、第２の配列を有する第２の領域；
前記第２の領域に直接隣接する１９～２９ヌクレオチドの第３の領域であって、第３の配列を有する第３の領域；および
前記第３の領域に直接隣接する、前記一本鎖ＲＮＡ分子３’末端における２ヌクレオチドの第４の領域であって、第４の配列を有する第４の領域
を有し、
（ａ）前記第１の領域が、前記第３の領域と同数のヌクレオチドを有し、
（ｂ）前記第３の配列が、前記第１の配列の逆相補配列であり、
（ｃ）前記第３の領域が、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、前記ｍＲＮＡ配列が、配列番号２２～３７からなる群から選択され、
（ｄ）前記一本鎖ＲＮＡ分子が、前記第１の領域が前記第３の領域と塩基対合してステムを形成し、前記第２の領域がループを形成し、前記第４の領域が３’オーバーハングを形成する、ステムループ構造を形成するように構成されている、
請求項Ｐ１からＰ７、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１４、およびＰ１５のいずれか一項に記載の治療化合物。
（Ｐ３１）
前記ＡＰＩが、ｓｈＲＮＡであり、前記ｓｈＲＮＡが、長さ４４～７１ヌクレオチドの一本鎖ＲＮＡ分子であり、５’から３’方向に：
前記一本鎖ＲＮＡ分子の５’末端における１９～２９ヌクレオチドの第１の領域であって、第１の配列を有する第１の領域；
前記第１の領域に直接隣接する４～１１ヌクレオチドの第２の領域であって、第２の配列を有する第２の領域；
前記第２の領域に直接隣接する１９～２９ヌクレオチドの第３の領域であって、第３の配列を有する第３の領域；および
前記第３の領域に直接隣接する、前記一本鎖ＲＮＡ分子３’末端における２ヌクレオチドの第４の領域であって、第４の配列を有する第４の領域
を有し、
（ａ）前記第１の領域が、前記第３の領域と同数のヌクレオチドを有し、
（ｂ）前記第３の配列が、前記第１の配列の逆相補配列であり、
（ｃ）前記第３の領域が、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、前記ｍＲＮＡ配列が、配列番号３８～３９からなる群から選択され、
（ｄ）前記一本鎖ＲＮＡ分子が、前記第１の領域が前記第３の領域と塩基対合してステムを形成し、前記第２の領域がループを形成し、前記第４の領域が３’オーバーハングを形成する、ステムループ構造を形成するように構成されている、
請求項Ｐ１からＰ７、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１４、およびＰ１５のいずれか一項に記載の治療化合物。
（Ｐ３２）
前記ＡＰＩが、ｓｈＲＮＡであり、前記ｓｈＲＮＡが、長さ４４～７１ヌクレオチドの一本鎖ＲＮＡ分子であり、５’から３’方向に：
前記一本鎖ＲＮＡ分子の５’末端における１９～２９ヌクレオチドの第１の領域であって、第１の配列を有する第１の領域；
前記第１の領域に直接隣接する４～１１ヌクレオチドの第２の領域であって、第２の配列を有する第２の領域；
前記第２の領域に直接隣接する１９～２９ヌクレオチドの第３の領域であって、第３の配列を有する第３の領域；および
前記第３の領域に直接隣接する、前記一本鎖ＲＮＡ分子３’末端における２ヌクレオチドの第４の領域であって、第４の配列を有する第４の領域
を有し、
（ａ）前記第１の領域が、前記第３の領域と同数のヌクレオチドを有し、
（ｂ）前記第３の配列が、前記第１の配列の逆相補配列であり、
（ｃ）前記第３の領域が、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、前記ｍＲＮＡ配列が、配列番号４０～４３からなる群から選択され、
（ｄ）前記一本鎖ＲＮＡ分子が、前記第１の領域が前記第３の領域と塩基対合してステムを形成し、前記第２の領域がループを形成し、前記第４の領域が３’オーバーハングを形成する、ステムループ構造を形成するように構成されている、
請求項Ｐ１からＰ７、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１４、およびＰ１５のいずれか一項に記載の治療化合物。
（Ｐ３３）
前記ＡＰＩが、ｓｈＲＮＡであり、前記ｓｈＲＮＡが、長さ４４～７１ヌクレオチドの一本鎖ＲＮＡ分子であり、５’から３’方向に：
前記一本鎖ＲＮＡ分子の５’末端における１９～２９ヌクレオチドの第１の領域であって、第１の配列を有する第１の領域；
前記第１の領域に直接隣接する４～１１ヌクレオチドの第２の領域であって、第２の配列を有する第２の領域；
前記第２の領域に直接隣接する１９～２９ヌクレオチドの第３の領域であって、第３の配列を有する第３の領域；および
前記第３の領域に直接隣接する、前記一本鎖ＲＮＡ分子３’末端における２ヌクレオチドの第４の領域であって、第４の配列を有する第４の領域
を有し、
（ａ）前記第１の領域が、前記第３の領域と同数のヌクレオチドを有し、
（ｂ）前記第３の配列が、前記第１の配列の逆相補配列であり、
（ｃ）前記第３の領域が、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、前記ｍＲＮＡ配列が、配列番号４４～５１からなる群から選択され、
（ｄ）前記一本鎖ＲＮＡ分子が、前記第１の領域が前記第３の領域と塩基対合してステムを形成し、前記第２の領域がループを形成し、前記第４の領域が３’オーバーハングを形成する、ステムループ構造を形成するように構成されている、
請求項Ｐ１からＰ７、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１４、およびＰ１５のいずれか一項に記載の治療化合物。
（Ｐ３４）
前記ＡＰＩが、ｓｈＲＮＡであり、前記ｓｈＲＮＡが、長さ４４～７１ヌクレオチドの一本鎖ＲＮＡ分子であり、５’から３’方向に：
前記一本鎖ＲＮＡ分子の５’末端における１９～２９ヌクレオチドの第１の領域であって、第１の配列を有する第１の領域；
前記第１の領域に直接隣接する４～１１ヌクレオチドの第２の領域であって、第２の配列を有する第２の領域；
前記第２の領域に直接隣接する１９～２９ヌクレオチドの第３の領域であって、第３の配列を有する第３の領域；および
前記第３の領域に直接隣接する、前記一本鎖ＲＮＡ分子３’末端における２ヌクレオチドの第４の領域であって、第４の配列を有する第４の領域
を有し、
（ａ）前記第１の領域が、前記第３の領域と同数のヌクレオチドを有し、
（ｂ）前記第３の配列が、前記第１の配列の逆相補配列であり、
（ｃ）前記第３の領域が、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、前記ｍＲＮＡ配列が、配列番号８～２１、４８２～４８６、および７４８～７６５からなる群から選択され、
（ｄ）前記一本鎖ＲＮＡ分子が、前記第１の領域が前記第３の領域と塩基対合してステムを形成し、前記第２の領域がループを形成し、前記第４の領域が３’オーバーハングを形成する、ステムループ構造を形成するように構成されている、
請求項Ｐ１からＰ７、Ｐ１０、Ｐ１２、およびＰ１６のいずれか一項に記載の治療化合物。
（Ｐ３５）
前記ＡＰＩが、ｓｈＲＮＡであり、前記ｓｈＲＮＡが、長さ４４～７１ヌクレオチドの一本鎖ＲＮＡ分子であり、５’から３’方向に：
前記一本鎖ＲＮＡ分子の５’末端における１９～２９ヌクレオチドの第１の領域であって、第１の配列を有する第１の領域；
前記第１の領域に直接隣接する４～１１ヌクレオチドの第２の領域であって、第２の配列を有する第２の領域；
前記第２の領域に直接隣接する１９～２９ヌクレオチドの第３の領域であって、第３の配列を有する第３の領域；および
前記第３の領域に直接隣接する、前記一本鎖ＲＮＡ分子３’末端における２ヌクレオチドの第４の領域であって、第４の配列を有する第４の領域
を有し、
（ａ）前記第１の領域が、前記第３の領域と同数のヌクレオチドを有し、
（ｂ）前記第３の配列が、前記第１の配列の逆相補配列であり、
（ｃ）前記第３の領域が、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、前記ｍＲＮＡ配列が、配列番号４８２～４８６および７４８～７６５からなる群から選択され、
（ｄ）前記一本鎖ＲＮＡ分子が、前記第１の領域が前記第３の領域と塩基対合してステムを形成し、前記第２の領域がループを形成し、前記第４の領域が３’オーバーハングを形成する、ステムループ構造を形成するように構成されている、
請求項Ｐ１からＰ７、Ｐ１０、Ｐ１２、およびＰ１６のいずれか一項に記載の治療化合物。
（Ｐ３６）
前記ＡＰＩが、ｓｈＲＮＡであり、前記ｓｈＲＮＡが、長さ４４～７１ヌクレオチドの一本鎖ＲＮＡ分子であり、５’から３’方向に：
前記一本鎖ＲＮＡ分子の５’末端における１９～２９ヌクレオチドの第１の領域であって、第１の配列を有する第１の領域；
前記第１の領域に直接隣接する４～１１ヌクレオチドの第２の領域であって、第２の配列を有する第２の領域；
前記第２の領域に直接隣接する１９～２９ヌクレオチドの第３の領域であって、第３の配列を有する第３の領域；および
前記第３の領域に直接隣接する、前記一本鎖ＲＮＡ分子３’末端における２ヌクレオチドの第４の領域であって、第４の配列を有する第４の領域
を有し、
（ａ）前記第１の領域が、前記第３の領域と同数のヌクレオチドを有し、
（ｂ）前記第３の配列が、前記第１の配列の逆相補配列であり、
（ｃ）前記第３の領域が、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、前記ｍＲＮＡ配列が、配列番号８～２１、４０～４３、および７６６～７７０からなる群から選択され、
（ｄ）前記一本鎖ＲＮＡ分子が、前記第１の領域が前記第３の領域と塩基対合してステムを形成し、前記第２の領域がループを形成し、前記第４の領域が３’オーバーハングを形成する、ステムループ構造を形成するように構成されている、
請求項Ｐ１からＰ７、Ｐ１０、Ｐ１３、およびＰ１７のいずれか一項に記載の治療化合物。
（Ｐ３７）
前記ＡＰＩが、ｓｈＲＮＡであり、前記ｓｈＲＮＡが、長さ４４～７１ヌクレオチドの一本鎖ＲＮＡ分子であり、５’から３’方向に：
前記一本鎖ＲＮＡ分子の５’末端における１９～２９ヌクレオチドの第１の領域であって、第１の配列を有する第１の領域；
前記第１の領域に直接隣接する４～１１ヌクレオチドの第２の領域であって、第２の配列を有する第２の領域；
前記第２の領域に直接隣接する１９～２９ヌクレオチドの第３の領域であって、第３の配列を有する第３の領域；および
前記第３の領域に直接隣接する、前記一本鎖ＲＮＡ分子３’末端における２ヌクレオチドの第４の領域であって、第４の配列を有する第４の領域
を有し、
（ａ）前記第１の領域が、前記第３の領域と同数のヌクレオチドを有し、
（ｂ）前記第３の配列が、前記第１の配列の逆相補配列であり、
（ｃ）前記第３の領域が、標的哺乳動物ｍＲＮＡ配列における連続するヌクレオチドに相補的であり、前記ｍＲＮＡ配列が、配列番号４０～４３および７６６～７７０からなる群から選択され、
（ｄ）前記一本鎖ＲＮＡ分子が、前記第１の領域が前記第３の領域と塩基対合してステムを形成し、前記第２の領域がループを形成し、前記第４の領域が３’オーバーハングを形成する、ステムループ構造を形成するように構成されている、
請求項Ｐ１からＰ７、Ｐ１０、Ｐ１３、およびＰ１７のいずれか一項に記載の治療化合物。
（Ｐ３８）
前記ＡＰＩが、配列番号８２５～８４４、８４９～８５１、８５３、８５５、８５７、８６４、８６５、および８６７～８８３からなる群から選択されるｍｉＲＮＡである、請求項Ｐ１からＰ７、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１４、およびＰ１５のいずれか一項に記載の治療化合物。
（Ｐ３９）
前記ＡＰＩが、ａｎｔｉｍｉＲであり、前記ａｎｔｉｍｉＲが、長さ１２～２５ヌクレオチドの一本鎖核酸分子であり、前記ａｎｔｉｍｉＲが、標的成熟ｍｉＲＮＡ産物配列における連続するヌクレオチドに相補的である連続する１２～２５ヌクレオチドの配列を有し、前記成熟ｍｉＲＮＡ産物配列が、配列番号８８４～９０８からなる群から選択され、前記成熟ｍｉＲＮＡ産物配列における前記連続するヌクレオチドが、５’から３’方向に、前記成熟ｍｉＲＮＡ産物配列のヌクレオチド２～８を含む、請求項Ｐ１からＰ７、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１４、およびＰ１５のいずれか一項に記載の治療化合物。
（Ｐ４０）
前記ＡＰＩが、メトトレキサート；ドキソルビシン；ビンカアルカロイド；カンプトテシン類似体；微小管破壊剤、例えば、アウリスタチン（例えば、ＭＭＡＥおよびＭＭＡＦ）およびメイタンシノイド（例えば、ＤＭ１およびＤＭ４）；ならびにＤＮＡ損傷剤、例えば、ＤＮＡトポイソメラーゼＩ阻害剤（例えば、ＳＮ－３８およびエキサテカン）、二本鎖切断剤（例えば、カリケアマイシン）、架橋剤（例えば、ピロロベンゾジアゼピン二量体－ＰＢＤ）、およびアルキル化剤（例えば、デュオカルマイシンおよびインドリノベンゾジアゼピン二量体－ＩＧＮ）からなる群から選択される、小分子である、請求項Ｐ１からＰ７、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１４、およびＰ１５のいずれか一項に記載の治療化合物。
（Ｐ４１）
前記ＡＰＩが、タンパク質であり、前記タンパク質が、配列番号９０９～９２９およびこれらのホモログからなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項Ｐ１からＰ７、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１４、およびＰ１５のいずれか一項に記載の治療化合物。
（Ｐ４２）
前記ＡＰＩが、タンパク質であり、前記タンパク質が、配列番号９０９～９２９およびこれらのホモログからなる群から選択されるアミノ酸配列からなる、請求項Ｐ１からＰ７、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１４、およびＰ１５のいずれか一項に記載の治療化合物。
（Ｐ４３）
前記ＡＰＩが、配列番号９０９～９２９およびこれらのホモログからなる群から選択されるアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡであり、前記ｍＲＮＡが、前記アミノ酸配列を含むタンパク質を産生するように前記標的細胞において翻訳されるように構成されている、請求項Ｐ１からＰ７、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１４、およびＰ１５のいずれか一項に記載の治療化合物。
（Ｐ４４）
前記ＡＰＩが、配列番号９０９～９２９およびこれらのホモログからなる群から選択されるアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡであり、前記ｍＲＮＡが、前記アミノ酸配列からなるタンパク質を産生するように前記標的細胞において翻訳されるように構成されている、請求項Ｐ１からＰ７、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１４、およびＰ１５のいずれか一項に記載の治療化合物。
（Ｐ４５）
前記ｍＲＮＡが、コドン最適化されている、請求項Ｐ４３およびＰ４４のいずれか一項に記載の治療化合物。
（Ｐ４６）
それを必要とする哺乳動物対象におけるがんを処置する方法であって、請求項Ｐ１からＰ１１、Ｐ１４、Ｐ１５、Ｐ１８からＰ２３、Ｐ２８からＰ３３、およびＰ３８からＰ４５のいずれか一項に記載の治療化合物の治療有効量を投与するステップを含む、方法。
（Ｐ４７）
それを必要とする哺乳動物対象におけるウイルス感染症を処置する方法であって、請求項Ｐ１からＰ１０、Ｐ１２、Ｐ１６、Ｐ２４、Ｐ２５、Ｐ３４、およびＰ３５のいずれか一項に記載の治療化合物の治療有効量を投与するステップを含む、方法。
（Ｐ４８）
それを必要とする哺乳動物対象における線維性疾患を処置する方法であって、請求項Ｐ１からＰ１０、Ｐ１３、Ｐ１７、Ｐ２６、Ｐ２７、Ｐ３６、およびＰ３７のいずれか一項に記載の治療化合物の治療有効量を投与するステップを含む、方法。
（Ｐ４９）
前記哺乳動物対象が、ヒトである、請求項Ｐ１からＰ４５のいずれか一項に記載の治療化合物。
（Ｐ５０）
前記哺乳動物対象が、ヒトである、請求項Ｐ４６からＰ４８のいずれか一項に記載の方法。
（Ｐ５１）
請求項Ｐ１からＰ４５およびＰ４９のいずれか一項に記載の治療化合物と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。

【0179】

上で説明した本発明の実施形態は単に例となることを意図したものであり、非常に多くの変形形態および改変形態が当業者には明らかであろう。全てのそのような変形形態および改変形態を、いずれかの添付の請求項において定義される本発明の範囲内であると考えている。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【配列表】

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【国際調査報告】