特表 2024-540994 非ウイルス性ＤＮＡ送達のための方法および組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-11-06

(54)【発明の名称】非ウイルス性ＤＮＡ送達のための方法および組成物

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/88 20060101AFI20241029BHJP

   C12N 15/867 20060101ALI20241029BHJP

   C12N 15/869 20060101ALI20241029BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20241029BHJP

   A61K 31/711 20060101ALI20241029BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20241029BHJP

   A61K 47/46 20060101ALI20241029BHJP

   A61K 47/26 20060101ALI20241029BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20241029BHJP

   A61K 47/22 20060101ALI20241029BHJP

   A61K 9/14 20060101ALI20241029BHJP

   C12N 15/33 20060101ALN20241029BHJP

   C12N 15/31 20060101ALN20241029BHJP

   C12N 15/12 20060101ALN20241029BHJP

   C12N 15/11 20060101ALN20241029BHJP

   C12N 15/09 20060101ALN20241029BHJP

【ＦＩ】

C12N15/88 Z ZNA

C12N15/867

C12N15/869

C12N15/63 Z

A61K31/711

A61K48/00

A61K47/46

A61K47/26

A61P43/00 121

A61K47/22

A61K9/14

C12N15/33

C12N15/31

C12N15/12

C12N15/11 Z

C12N15/09 100

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024524371

(86)(22)【出願日】2022-07-22

(85)【翻訳文提出日】2024-04-23

(86)【国際出願番号】 US2022074084

(87)【国際公開番号】W WO2023004437

(87)【国際公開日】2023-01-26

(31)【優先権主張番号】63/203,451

(32)【優先日】2021-07-23

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】518138077

【氏名又は名称】スパーク セラピューティクス インコーポレイテッド

【氏名又は名称原語表記】ＳＰＡＲＫ ＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＳ， ＩＮＣ．

(74)【代理人】

【識別番号】110000109

【氏名又は名称】弁理士法人特許事務所サイクス

(72)【発明者】

【氏名】アンゲラ ザビエル

(72)【発明者】

【氏名】セハス ペドロ

(72)【発明者】

【氏名】ナヴィ アリ

(72)【発明者】

【氏名】ヤジシオグル ムスタファ

(72)【発明者】

【氏名】ツァン ルイ

【テーマコード（参考）】

4C076

4C084

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C076AA31

4C076AA95

4C076DD60

4C084AA13

4C084NA05

4C084NA13

4C086AA01

4C086AA02

4C086EA16

4C086MA03

4C086MA05

4C086NA05

4C086NA13

(57)【要約】

本発明は、対象へのＤＮＡの細胞内送達を促進するために使用できる方法および組成物を特徴とする。提供される方法と組成物は、細胞内ＤＮＡ送達用のナノ粒子と細胞質ＤＮＡ感知阻害剤を用いる。細胞質ＤＮＡ感知阻害剤は、ＤＮＡによって刺激される対象の免疫反応を低下させるために提供される。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

対象へのＤＮＡの細胞内送達方法であって、
ａ．環状ＧＭＰ－ＡＭＰ合成酵素－インターフェロン遺伝子刺激因子（ｃＧＡＳ－ＳＴＩＮＧ）経路阻害剤およびインフラマソーム経路阻害剤からなる群より選択される少なくとも１つの細胞質ＤＮＡ感知阻害剤；ならびに
ｂ．前記ＤＮＡを含む第１のナノ粒子
を投与することを含み、
工程（ｂ）は、工程（ａ）の前に、工程（ａ）と同時に、または工程（ａ）の後に実施される、方法。

【請求項2】

前記第１のナノ粒子が脂質ナノ粒子である場合、
（ｉ）前記細胞質ＤＮＡ感知阻害剤は、少なくともインフラマソーム経路阻害剤であるか；
（ｉｉ）脂質ナノ粒子は、エンドソーム溶解剤を含まないか；
（ｉｉｉ）ＤＮＡが環状であるか；
（ｉｖ）ＤＮＡが閉鎖型ＤＮＡでないか；または
（ｖ）細胞質ＤＮＡ感知阻害剤が第２のナノ粒子中に提供され、第２のナノ粒子は第１のナノ粒子と同じまたは異なる組成を有することができる、
の少なくとも１つである、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記ＤＮＡが、調節エレメントに作動可能に連結された導入遺伝子を含むＤＮＡベクターである、請求項１または２に記載の方法。

【請求項4】

前記導入遺伝子がプロモーターに作動可能に連結され；前記ＤＮＡベクターが、５´から３´に、前記プロモーター、前記導入遺伝子、およびポリアデニル化シグナルおよび終結シグナルを含む、請求項３に記載の方法。

【請求項5】

前記プロモーターがプロモーター／エンハンサーであり、前記ベクターが調節可能エレメントをさらに含む、請求項４に記載の方法。

【請求項6】

前記阻害剤がＳＴＩＮＧ阻害剤である、請求項４に記載の方法。

【請求項7】

前記細胞質ＤＮＡ感知阻害剤がｃＧＡＳ－ＳＴＩＮＧ経路阻害剤である、請求項１～５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項8】

前記ｃＧＡＳ－ＳＴＩＮＧ経路阻害剤がｃＧＡＳ阻害剤である、請求項７に記載の方法。

【請求項9】

前記ｃＧＡＳ－ＳＴＩＮＧ経路阻害剤がＳＴＩＮＧ阻害剤である、請求項７に記載の方法。

【請求項10】

前記ｃＧＡＳ－ＳＴＩＮＧ経路阻害剤がＴＢＫ１阻害剤である、請求項７に記載の方法。

【請求項11】

前記ｃＧＡＳ－ＳＴＩＮＧ経路阻害剤が、（ａ）Ｈ－１５１、ＧＳＫ－６９０６９３、ＲＵ－５２１、ＲＯ－３１５０、ＣＹＴ３８７およびＧＳＫ８６１２からなる群より選択されるか、もしくはそれらの薬学的に許容可能な塩であるか；または（ｂ）表１、表２、または表３の化合物、もしくはそれらの薬学的に許容可能な塩である、請求項７に記載の方法。

【請求項12】

前記細胞質ＤＮＡ感知阻害剤が、インフラマソーム経路阻害剤である、請求項１～５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項13】

前記インフラマソーム経路阻害剤がＡＩＭ２阻害剤である、請求項１２に記載の方法。

【請求項14】

前記インフラマソーム経路阻害剤が、配列番号１または配列番号２の配列を有するポリヌクレオチドである、請求項１３に記載の方法。

【請求項15】

前記導入遺伝子が、ウイルス抗原、細菌抗原、治療用タンパク質、ショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ＲＮＡｉ、リボザイム、アンチセンスＲＮＡ、ＣＲＩＳＰＲ（ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ ｒｅｇｕｌａｒｌｙ ｉｎｔｅｒｓｐａｃｅｄ ｓｈｏｒｔ ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ ｒｅｐｅａｔｓ）／Ｃａｓ９構築物、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、または転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）をコードする、請求項３～１４のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項16】

前記ＤＮＡが環状ＤＮＡである、請求項１～１５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項17】

前記細胞質ＤＮＡ感知阻害剤が第２のナノ粒子中に提供され、前記第２のナノ粒子が前記第１のナノ粒子と実質的に同じ組成を有する、請求項１～１６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項18】

前記ＤＮＡベクターおよび前記細胞質ＤＮＡ感知阻害剤が、前記第１のナノ粒子中に一緒に提供される、請求項１～１６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項19】

前記第１のナノ粒子が脂質ナノ粒子または脂質ポリマーナノ粒子である、請求項１～１８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項20】

前記第１のナノ粒子が、前記ＤＮＡまたは前記ＤＮＡベクターの放出の前に前記細胞質ＤＮＡ感知阻害剤を放出するように構成される、請求項１９に記載の方法。

【請求項21】

前記細胞質ＤＮＡ感知阻害剤が、前記ＤＮＡまたは前記ＤＮＡベクターの投与とほぼ同時から約４時間前までに投与される、請求項１～１９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項22】

インフラマソーム阻害剤およびｃＧＡＳ－ＳＴＩＮＧ阻害剤の両方が投与される、請求項１～２１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項23】

前記ＤＮＡが実質的に二本鎖ＤＮＡを含み、前記ＤＮＡベクターが実質的に二本鎖ＤＮＡを含む、請求項１～２２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項24】

前記対象がヒト患者であり、前記方法が治療的有効量の前記導入遺伝子を提供する、請求項３～２３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項25】

ａ． ＤＮＡ；および
ｂ． 環状ＧＭＰ－ＡＭＰ合成酵素（ｃＧＡＳ－ＳＴＩＮＧ）経路阻害剤およびインフラマソーム経路阻害剤からなる群より選択される少なくとも１つの細胞質ＤＮＡ感知阻害剤
を含むナノ粒子組成物。

【請求項26】

前記ＤＮＡが、調節エレメントに作動可能に連結された導入遺伝子を含むＤＮＡベクターである、請求項２５に記載の組成物。

【請求項27】

前記ＤＮＡベクターが、５´から３´に、プロモーター、前記導入遺伝子、およびポリアデニル化シグナルおよび終結シグナルを含む、請求項２６に記載の組成物。

【請求項28】

前記プロモーターがプロモーター／エンハンサーであり、前記ベクターが調節可能エレメントをさらに含む、請求項２７に記載の組成物。

【請求項29】

前記阻害剤がｃＧＡＳ－ＳＴＩＮＧ経路阻害剤である、請求項２５～２８のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項30】

前記ｃＧＡＳ－ＳＴＩＮＧ経路阻害剤がｃＧＡＳ阻害剤である、請求項２９に記載の組成物。

【請求項31】

前記ｃＧＡＳ－ＳＴＩＮＧ経路阻害剤がＳＴＩＮＧ阻害剤である、請求項２９に記載の組成物。

【請求項32】

前記ｃＧＡＳ－ＳＴＩＮＧ経路阻害剤がＴＢＫ１阻害剤である、請求項２９に記載の組成物。

【請求項33】

前記ｃＧＡＳ－ＳＴＩＮＧ経路阻害剤が、（ａ）Ｈ－１５１、ＧＳＫ－６９０６９３、ＲＵ－５２１、ＲＯ－３１５０、ＣＹＴ３８７およびＧＳＫ８６１２からなる群より選択されるか、もしくはそれらの薬学的に許容可能な塩であるか；または（ｂ）表１、表２、または表３の化合物、もしくはそれらの薬学的に許容可能な塩である、請求項２９に記載の組成物。

【請求項34】

前記細胞質ＤＮＡ感知阻害剤が、インフラマソーム経路阻害剤である、請求項２５～２８のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項35】

前記インフラマソーム経路阻害剤がＡＩＭ２阻害剤である、請求項３４に記載の組成物。

【請求項36】

前記インフラマソーム経路阻害剤が、配列番号１または配列番号２の配列を有するポリヌクレオチドである、請求項３５に記載の組成物。

【請求項37】

前記導入遺伝子が、ウイルス抗原、細菌抗原、治療用タンパク質、ショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ＲＮＡｉ、リボザイム、アンチセンスＲＮＡ、ＣＲＩＳＰＲ（ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ ｒｅｇｕｌａｒｌｙ ｉｎｔｅｒｓｐａｃｅｄ ｓｈｏｒｔ ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ ｒｅｐｅａｔｓ）／Ｃａｓ９構築物、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、または転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）をコードする、請求項２５～３６のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項38】

前記ＤＮＡベクターが環状ＤＮＡである、請求項２５～３７のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項39】

前記ナノ粒子が脂質ナノ粒子または脂質ポリマーナノ粒子である、請求項２５～３８のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項40】

前記ナノ粒子が、前記ＤＮＡベクターの前に前記細胞質ＤＮＡ感知阻害剤を放出するように構成された脂質ポリマーナノ粒子である、請求項３９に記載の組成物。

【請求項41】

前記ナノ粒子が、インフラマソーム阻害剤およびｃＧＡＳ－ＳＴＩＮＧ阻害剤の両方を含む、請求項２５～４０のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項42】

前記ＤＮＡが実質的に二本鎖ＤＮＡを含み、前記ＤＮＡベクターが実質的に二本鎖ＤＮＡを含む、請求項２５～４１のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項43】

請求項２５～４２のいずれか１項に記載のナノ粒子と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。

【請求項44】

前記組成物が、請求項１～２４のいずれか１項に記載の方法において使用するためのものである、請求項４３に記載の医薬組成物。

【請求項45】

請求項１～２４のいずれか１項に記載の方法において使用するための、請求項１～２４のいずれか１項に記載の第１のナノ粒子を含む、医薬において、好ましくは遺伝子治療において使用するための医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、対象への細胞内非ウイルス性ＤＮＡ送達の分野に関する。提供される方法および組成物は、遺伝子治療を含む様々な用途を有する。
電子的に提出された配列表への言及

【0002】

電子配列表の内容（ＳｅｑｕｅｎｃｅＬｉｓｔｉｎｇ＿９ＷＯ１．ｘｍｌ；Ｓｉｚｅ：３，８１０バイト、作成日：２０２２年７月１４日）は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【背景技術】

【0003】

遺伝子治療では、核酸を使って対象のＤＮＡを改変し、有益な効果を得る。遺伝子改変は、遺伝子増強、遺伝子抑制、ゲノム編集など、さまざまな戦略を用いて行うことができる。（Ａｎｇｕｅｌａ ａｎｄ Ｈｉｇｈ Ａｎｎｕ． Ｒｅｖ． Ｍｅｄ． ２０１９，７０，７３；ａｎｄ Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｓｉｇｎａｌ Ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔａｒｇｅｔｅｄ Ｔｈｅｒａｐｙ ２０２０，５，１．）

【0004】

遺伝子治療を成功させるためには、核酸の効果的な送達システムが重要である。核酸の送達に成功すると、許容できない副作用を生じることなく、有益な効果を得るのに十分な量が標的細胞に供給される。送達システムは、酵素的分解から遺伝物質を保護し、体内での寿命が十分に長く、体内で必要とされる部位に到達でき、許容できる毒性を持ち、細胞膜を通過できるものでなければならない。

【0005】

遺伝子治療ベクターは、ウイルス性と非ウイルス性に大別される。ベクターにはそれぞれ長所と短所がある。ウイルスベクターは一般に、遺伝物質を細胞に送達する効率は高いが、免疫原性、毒素産生、挿入突然変異誘発の可能性が高く、遺伝子導入の容量も限られている。非ウイルス性ベクターの利点には、導入遺伝子の容量が大きいこと、ベクターのカプシドに対する抗体がすでに存在する対象に投与できること、対象に再投与できることなどがある。非ウイルス性送達に関連する課題としては、ウイルス性アプローチに比べ、トランスフェクション効率の低下、核酸分解の可能性、自然免疫、体細胞標的への遺伝子送達効率の低さ、ｉｎ ｖｉｖｏでの遺伝子発現レベルの低さなどが挙げられる。（Ｈａｒｄｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅｓ ２０１７，８，６５ およびＮａｙｅｒｏｓｓａｄａｔ ｅｔ ａｌ．，Ａｄｖ．Ｂｉｏｍｅｄ Ｒｅｓ．２０１２，１，２７．）

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0006】

本発明は、対象へのＤＮＡの細胞内送達を促進するために使用できる方法および組成物を特徴とする。提供される方法と組成物は、細胞内ＤＮＡ送達のためのナノ粒子と、細胞質ＤＮＡ感知阻害剤を用いる。細胞質ＤＮＡ感知阻害剤は、ＤＮＡによって刺激される対象の免疫反応を低下させるために提供される。

【0007】

従って、本発明の第１の態様は、以下を対象に投与することを含むＤＮＡの細胞内送達方法を記載する：
ａ）環状ＧＭＰ－ＡＭＰ合成酵素－インターフェロン遺伝子刺激因子（ｃＧＡＳ－ＳＴＩＮＧ）経路阻害剤およびインフラマソーム経路阻害剤からなる群より選択される細胞質ＤＮＡ感知阻害剤；ならびに
ｂ）ＤＮＡを含むナノ粒子。

【0008】

本発明の別の態様は、（ａ）ＤＮＡと、（ｂ）ｃＧＡＳ－ＳＴＩＮＧ経路阻害剤およびインフラマソーム経路阻害剤からなる群から選択される細胞質ＤＮＡ感知阻害剤とを含むナノ粒子について記載する。

【0009】

本発明のさらなる態様には、本明細書に記載のナノ粒子を含む医薬組成物、本明細書に記載の用途のための医薬組成物、および本明細書に記載の用途のための医薬の調製が含まれる。本明細書に記載される用途のための医薬組成物は、細胞質ＤＮＡ感知阻害剤の前、同時に、または後に投与される、患者に使用するための導入遺伝子を含むＤＮＡベクターを提供することができる。同様に、本明細書に記載した用途の医薬品の調製には、細胞質ＤＮＡ感知阻害剤を投与する前、同時に、または投与した後に、患者に使用するための導入遺伝子を含むＤＮＡベクターを含む医薬組成物の調製を含むことができる。

【0010】

本発明の他の特徴および利点は、様々な実施例を含む、本明細書に提供される追加の説明から明らかである。提供された実施例は、本発明の実施に有用な様々な構成要素および方法論を示している。このような実施例は、特許請求される発明を限定するものではない。本開示に基づき、当業者は、本発明の実施に有用な他の構成要素および方法論を特定し、採用することができる。

【図面の簡単な説明】

【0011】

【図1】図１は、低分子ＳＴＩＮＧ阻害剤（Ｈ－１５１）のＤＮＡ－ＬＮＰ誘導性インターフェロン制御因子（ＩＲＦ）活性化阻害能に関する培養細胞を用いたｉｎ ｖｉｔｒｏ 試験の結果を示している。Ｈ－１５１は２種類の量（０．２ｎｇと２．１ｎｇ）使用した。左の白色棒グラフは、Ｈ－１５１阻害剤を使用せずにＤＮＡ－ＬＮＰで処理した細胞を示す（０）。Ｈ－１５１を添加した場合（０．２および２．１）、白色ボックスはＨ－１５１が可溶性であることを示し、灰色ボックスはＨ－１５１がＤＮＡ－ＬＮＰにカプセル化されていることを示す（ＬＮＰカプセル化）。

【0012】

【図2】図２Ａ、２Ｂ、２Ｃ、および２Ｄは、ＤＮＡ－ＬＮＰにカプセル化されたＨ－１５１が、ＤＮＡ－ＬＮＰ誘導性のＩＦＮ－β（図２Ａ）、ＩＦＮ－α（図２Ｂ）、ＩＦＮ－γ（図２Ｃ）、およびＩＬ－６（図２Ｄ）を阻害する能力に関するｉｎ ｖｉｖｏ 研究の結果を示している。

【0013】

【図3】図３Ａ、３Ｂ、３Ｃ、３Ｄ、３Ｅ、３Ｆ、３Ｇ、３Ｈは、ＲＯ３１５０、ＧＳＫ６９０６９３、およびデキサメタゾンがＤＮＡ－ＬＮＰによって誘導されるサイトカイン／ケモカインレベルを阻害する能力に関するｉｎ ｖｉｖｏ試験の結果を示している。

【0014】

【図4】図４Ａ、４Ｂ、４Ｃ、４Ｄ、および４Ｅは、ＤＮＡ－ＬＮＰ遺伝子治療を投与したマウスにおける、ＤＮＡ－ＬＮＰの忍容性および導入遺伝子の発現に対するＳＴＩＮＧシグナル遮断の影響を示している。ＤＮＡ－ＬＮＰに対する炎症反応は、機能的なＳＴＩＮＧを持つ野生型マウス（ＷＴ）と、細胞質二本鎖ＤＮＡ（ｄｓＤＮＡ）センサーのＧｏｌｄｅｎｔｉｃｋｅｔミスセンス変異を持つマウス（ＳＴＩＮＧ（Ｇｔ））で評価された。ベースラインのサイトカインレベルは、ＤＮＡ－ＬＮＰを投与していないＷＴマウス（ベースライン）のプールされた血漿サンプルから測定した。ＤＮＡ－ＬＮＰを投与したマウスでは、ＳＴＩＮＧ（Ｇｔ）マウスはＷＴマウスと比較して、血漿中ＩＬ－６レベルが低下し（図４Ａ）、血漿中ＩＦＮαが減少し（図４Ｂ）、血漿中ＩＦＮ－γが減少し（図４Ｃ）、生存期間が延長し（図４Ｄ）、導入遺伝子の発現が増加した（図４Ｅ）。ＵＬＯＱは定量上限を示す。ＬＬＯＱは定量下限を意味する。

【発明を実施するための形態】

【0015】

本発明は、ＤＮＡを含むナノ粒子と、ｃＧＡＳ－ＳＴＩＮＧ経路阻害剤およびインフラマソーム経路阻害剤からなる群から選択される細胞質ＤＮＡ感知阻害剤とを用いる、対象への細胞内ＤＮＡ送達のための方法および組成物を特徴とする。細胞内ＤＮＡ送達には、導入遺伝子を発現させるためのＤＮＡベクターの対象への送達など、さまざまな用途がある。ｃＧＡＳ－ＳＴＩＮＧ経路および／またはインフラマソーム経路を阻害することの利点としては、ＤＮＡペイロードによる炎症反応に対する感受性の低下が考えられる。

【0016】

「ナノ粒子」とは、ＤＮＡをカプセル化または結合させることができ、細胞へのＤＮＡ送達を容易にする小さな非ウイルス粒子を指す。ナノ粒子はまた、例えば、異なるＤＮＡベクター、異なる導入遺伝子、細胞質ＤＮＡ感知阻害剤、免疫細胞調節剤を送達するために使用することもできる。ナノ粒子の大きさは約１０ｎｍから約１０００ｎｍの範囲である。異なる実施形態では、ナノ粒子は約５０ｎｍから約５００ｎｍ、または約５０ｎｍから約２００ｎｍである。

【0017】

「対象」とは、ヒト、類人猿、テナガザル、ゴリラ、チンパンジー、オランウータン、マカクなどの非ヒト霊長類、イヌやネコなどの家畜、家禽やアヒル、ウマ、ウシ、ヤギ、ヒツジ、ブタなどの家畜、マウス、ラット、ウサギ、モルモットなどの実験動物を含む哺乳類を指す。好ましい対象は、治療を受けるヒト対象である。しかし、対象には、動物疾患モデル、例えば、ポンペ病（ＧＡＡ欠損）、グリコーゲン貯蔵病（ＧＳＤ）などのタンパク質／酵素欠損のマウスや他の動物モデルも含まれる。

【0018】

「ＤＮＡベクター」とは、導入遺伝子を含むＤＮＡ配列と、導入遺伝子からＲＮＡを発現させるための調節エレメントを連結したものである。生成されたＲＮＡは、それ自体が機能的であることもあれば、タンパク質をコードすることもある。調節エレメントの一種がプロモーターで、ＲＮＡポリメラーゼと必要な転写因子を結合させて転写を開始させる。タンパク質をコードする場合、産生されたＲＮＡ配列はコード配列の末端に終止配列もコードする。その他の調節エレメントには、ＲＮＡ発現、ＲＮＡ安定性、タンパク質生産に影響を与えるものが含まれる。ＤＮＡベクターは一本鎖、二本鎖、あるいは一本鎖と二本鎖の組み合わせのいずれでもよい。ＤＮＡベクターはまた、複数の導入遺伝子と、同じタイプまたは異なるタイプの複数の調節エレメントを含むことができる。

【0019】

「作動可能に連結された」という用語は、１つの核酸において２つ以上の核酸セグメントが結合し、一方の機能が他方の機能によって影響を受けることを指す。

【0020】

「導入遺伝子」とは、ポリヌクレオチド配列の起源に関係なく、ＲＮＡに発現可能なＤＮＡ領域を示す。導入遺伝子は一般に、より長い核酸の一部であり、その核酸は、導入遺伝子が天然には通常関連しない少なくとも一つの領域を含んでいる。

【0021】

「からなる群から」選択される細胞質ＤＮＡ感知阻害剤は、群の少なくとも１つのメンバーが存在することを提供し、例えば、群の両方のメンバーが存在すること、または１つ以上の追加の阻害剤の存在を排除するものではない。

【0022】

本発明の第１の態様は、以下を投与する工程を含む、対象へのＤＮＡの細胞内送達方法を記載する：
ａ）ｃＧＡＳ－ＳＴＩＮＧ経路阻害剤およびインフラマソーム経路阻害剤からなる群より選択される細胞質ＤＮＡ感知阻害剤；ならびに
ｂ）ＤＮＡを含む第１のナノ粒子；ここで、工程（ｂ）は、工程（ａ）の前に、工程（ａ）と同時に、または工程（ａ）の後に実施される。

【0023】

本発明の第二の態様は、以下を投与する工程を含む、対象へのＤＮＡの細胞内送達方法を記載する：
ａ）ｃＧＡＳ－ＳＴＩＮＧ経路阻害剤およびインフラマソーム経路阻害剤からなる群より選択される細胞質ＤＮＡ感知阻害剤；ならびに
ｂ）ＤＮＡを含む第１のナノ粒子；ただし、第１のナノ粒子が脂質ナノ粒子である場合、以下の少なくとも１つである：（ｉ）細胞質ＤＮＡ感知阻害剤は、少なくともインフラマソーム経路阻害剤である；（ｉｉ）脂質ナノ粒子はエンドソーム溶解剤（ｅｎｄｏｓｏｍｏｌｙｔｉｃ ａｇｅｎｔ）を含まない；（ｉｉｉ） ＤＮＡは環状である；（ｉｖ） ＤＮＡが閉鎖型（ｃｌｏｓｅｄ－ｅｎｄｅｄ）ＤＮＡでない、または（ｖ）細胞質ＤＮＡ感知阻害剤が第２のナノ粒子中に提供され、ここで第２のナノ粒子は第１のナノ粒子と同じまたは異なる組成を有することができる；ここで、工程（ｂ）は、工程（ａ）の前に、工程（ａ）と同時に、または工程（ａ）の後に実施される。

【0024】

ＳｔａｎｔｏｎとＭａｎｇａｎｉｅｌｌｏの国際特許公開第ＷＯ２０２０／１８１１６８号は、さまざまなエンドソーム溶解剤と、エンドソーム溶解剤と閉鎖型ＤＮＡを含むＬＮＰの使用について言及している。

【0025】

第１および第２の態様の第１の実施形態では、ＤＮＡは、調節エレメントに作動可能に連結された導入遺伝子を含むＤＮＡベクターである。さらなる実施形態において、導入遺伝子は、プロモーターに作動可能に連結され；プロモーター／エンハンサーに作動可能に連結され；プロモーター／エンハンサー、ポリアデニル化および終結シグナル、および／または調節可能エレメントに作動可能に連結され；そしてＤＮＡベクターは、５´から３´にプロモーター／エンハンサー、導入遺伝子、およびポリアデニル化および終結シグナルを含む。

【0026】

特定のエレメントに関する５´から３´への言及は、異なるエレメントの相対的な位置を示し、異なるエレメントが互いに隣接している必要はなく、付加的な配列の存在を許容する。付加的な活性をもたらす付加的な配列は、２つの同定されたエレメントの間、３´末端、５´末端など、異なる位置に配置することができる。

【0027】

第１および第２の態様の第２の実施形態では、ＤＮＡ感知阻害剤はｃＧＡＳ－ＳＴＩＮＧ経路阻害剤であり；そしてＤＮＡは、第１もしくは第２の態様、または第１の実施形態で提供される通りである。さらなる実施形態において、ｃＧＡＳ－ＳＴＩＮＧ経路阻害剤はｃＧＡＳ阻害剤であり；ｃＧＡＳ－ＳＴＩＮＧ経路阻害剤はＳＴＩＮＧ阻害剤であり；ｃＧＡＳ－ＳＴＩＮＧ経路阻害剤はＴＢＫ１阻害剤であり；ｃＧＡＳ－ＳＴＩＮＧ経路阻害剤は、後述のセクションＩＩ．Ａ．で提供されるｃＧＡＳ阻害剤であり、ｃＧＡＳ－ＳＴＩＮＧ経路阻害剤は、後述のセクションＩＩ．Ａ．で提供されるＳＴＩＮＧ阻害剤であり、および／またはｃＧＡＳ－ＳＴＩＮＧ経路阻害剤は、後述のセクションＩＩ．Ａ．で提供されるＴＢＫ１阻害剤である。さらなる実施形態において、阻害剤は、Ｈ－１５１、ＧＳＫ－６９０６９３、ＲＵ－５２１、ＲＯ－３１５０、ＩＳＤ ０１７、ＳＩ－００１、ＣＹＴ３８７もしくはＧＳＫ８６１２、またはそれらの薬学的に許容可能な塩であるか；または表１、表２もしくは表３の化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩である。

【0028】

特定の実施形態への言及は、そこに提供されるさらなる実施形態への言及を含む。例えば、第２の実施形態における第１の実施形態への言及は、そこに提供されるさらなる実施形態を含む、第１の実施形態に提供されるすべての実施形態への言及を提供する。

【0029】

第１および第２の態様の第３の実施形態において、細胞質ＤＮＡ感知阻害剤は、インフラマソーム経路阻害剤であり、ＤＮＡは、第１もしくは第２の態様、または第１の実施形態で提供される通りである。さらなる実施形態において、インフラマソーム経路阻害剤は、ＡＩＭ２阻害剤である；ＡＩＭ２阻害剤は、後述のセクションＩＩ．Ｂで提供されるものであり、ＡＩＭ２阻害剤はＡ１５１である。

【0030】

第１および第２の態様の第４の実施形態において、ＤＮＡは、ウイルス抗原、細菌抗原、治療タンパク質、ショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）をコードする導入遺伝子を含むＤＮＡベクターである、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ＲＮＡ_ｉ、リボザイム、アンチセンスＲＮＡ、ＣＲＩＳＰＲ（ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ ｒｅｇｕｌａｒｌｙ ｉｎｔｅｒｓｐａｃｅｄ ｓｈｏｒｔ ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ ｒｅｐｅａｔｓ）／Ｃａｓ９構築物、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、または転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）を含むＤＮＡベクターであり；ここで、ＤＮＡは第１の実施形態で提供される通りであり；細胞質ＤＮＡ感知阻害剤は第１または第２の態様、第２の実施形態または第３の実施形態で提供される通りである。さらなる実施形態において、治療用タンパク質は、後述のセクションＩＩＩ．Ｄ．で提供される通りである。

【0031】

第５の実施形態では、第１もしくは第２の態様または関連する実施形態のいずれかで提供されるＤＮＡは、環状ＤＮＡである。「関連する実施形態」への言及は、特定の態様に関して言及される提供される各実施形態（さらなる実施形態を含む）を示す。

【0032】

第１および第２の態様の第６の実施形態において、細胞質ＤＮＡ感知阻害剤は第２のナノ粒子中に提供され；ＤＮＡは第１もしくは第２の態様または第１、第４もしくは第５の実施形態において提供される通りであり；細胞質ＤＮＡ感知阻害剤は第１もしくは第２の態様、第２の実施形態または第３の実施形態において提供される通りである。さらなる実施形態では、第２のナノ粒子は第１のナノ粒子と実質的に同じ組成を有し；そして第１および第２のナノ粒子は脂質ナノ粒子または脂質ポリマーナノ粒子である。

【0033】

第１および第２の態様の第７の実施形態において、細胞質ＤＮＡ感知阻害剤は、第１のナノ粒子中のＤＮＡと共に提供され；ＤＮＡは、第１もしくは第２の態様、または第１、第４もしくは第５の実施形態において提供される通りであり；そして細胞質ＤＮＡ感知阻害剤は、第１もしくは第２の態様、第２の実施形態または第３の実施形態において提供される通りである。さらなる実施形態では、第１のナノ粒子は脂質ナノ粒子であり；第１のナノ粒子は脂質ポリマーナノ粒子であり；第１のナノ粒子はエクソソームであり；第１のナノ粒子はＤＮＡの放出に先立って阻害剤を放出するように構成され；第１のナノ粒子は、ＤＮＡの放出に先立って阻害剤を放出するように構成された脂質ナノ粒子であり；第１のナノ粒子は、ＤＮＡの放出に先立って阻害剤を放出するように構成された脂質ポリマーナノ粒子であり；そして第１のナノ粒子は、ＤＮＡの放出に先立って阻害剤を放出するように構成されたエクソソームである。

【0034】

第１および第２の態様の第８の実施形態、および関連する実施形態において、細胞質ＤＮＡ感知阻害剤は、ＤＮＡ投与とほぼ同時に、その前または後に、投与される。異なる実施形態では、細胞質ＤＮＡ感知阻害剤は、ＤＮＡの少なくとも３０分前、少なくとも６０分前、少なくとも９０分前、または少なくとも１２０分前に投与される；細胞質ＤＮＡ感知阻害剤は、ほぼ同時に、ＤＮＡ投与の約５分前まで、約１５分前まで、約３０分前まで、約４５分前まで、約６０分前まで、約９０分前まで、約２時間前まで、約３時間前まで、約４時間前まで、約５時間前まで、約６時間前まで、約７時間前まで、約８時間前まで、約９時間前まで、約１０時間前まで、約１２時間前まで、約１日前まで、約２日前まで、約３日前まで、約４日前まで、または約１週間前までに投与される。好ましくは、細胞質ＤＮＡ感知阻害剤は、ＤＮＡベクター投与とほぼ同時、ＤＮＡベクター投与の約５分前まで、約１５分前まで、約３０分前まで、約４５分前まで、約６０分前まで、約９０分前まで、約２時間前まで、約３時間前まで、または約４時間前までに投与される。異なる実施形態では、細胞質ＤＮＡ感知阻害剤は、ＤＮＡの少なくとも１５分後、少なくとも３０分後、少なくとも４５分後、少なくとも６０分後、少なくとも９０分後、少なくとも１２０分後、または少なくとも１日後に投与される。

【0035】

第１および第２の態様の第９の実施形態では、２つの異なる 細胞質ＤＮＡ感知阻害剤が使用される；ここで、他の成分および投与は、第１の態様、第２の態様、または関連する実施形態で提供される通りである。異なる阻害剤は、ナノ粒子なしで提供することも、異なるナノ粒子で提供することも、同じナノ粒子で提供することもできる。さらなる実施形態では、インフラマソーム経路阻害剤およびｃＧＡＳ － ＳＴＩＮＧ経路阻害剤が投与され；２つの異なるインフラマソーム経路阻害剤が投与され；そして２つの異なるｃＧＡＳ － ＳＴＩＮＧ経路阻害剤が投与される。

【0036】

第１および第２の態様または関連する実施形態の第１０の実施形態では、対象はヒト患者である。

【0037】

第１および第２の態様または関連する実施形態の第１１の実施形態では、ＤＮＡおよびＤＮＡベクターは実質的に二本鎖ＤＮＡを含むか、またはＤＮＡおよびＤＮＡベクターは実質的に一本鎖ＤＮＡを含む。ＤＮＡには、二本鎖ＤＮＡ、一本鎖ＤＮＡ、一本鎖領域と二本鎖領域を持つＤＮＡなどがある。ベクターを構成するＤＮＡを含むＤＮＡについて、「実質的に」二本鎖ＤＮＡ含む、または構成されるとは、ＤＮＡの半分以上、少なくとも７５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％が二本鎖ＤＮＡであるか、またはＤＮＡの１００％が二本鎖ＤＮＡであることを示す。ベクターを構成するＤＮＡを含むＤＮＡについて、「実質的に」一本鎖ＤＮＡを含む、または構成されるとは、ＤＮＡの半分以上、少なくとも７５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％が一本鎖ＤＮＡであるか、またはＤＮＡの１００％が一本鎖ＤＮＡであることを示す。

【0038】

第１および第２の態様または関連する実施形態の第１２の実施形態では、ナノ粒子はＬＮＰである。さらなる実施形態において、ＬＰＮ（ｍｏｌ％）は、以下の成分を含むか、それらから本質的になるか、またはそれらからなる：（１） 約２０％から約６５％の１種以上のカチオン性脂質、約１％から約５０％の１種以上のリン脂質、約０．１％から１０％の１種以上のＰＥＧ化脂質、および約０％～約７０％のコレステロール；並びに（２）約２０％～約５０％の１種以上のカチオン性脂質、約５％～約２０％の１種以上のリン脂質、約０．１％～約５％の１種以上のＰＥＧ化脂質、および約２０％～約６０％のコレステロール。さらなる実施形態において、リン脂質の脂質は中性脂質であり；そしてリン脂質の脂質はＤＯＰＥまたはＤＳＰＣである。

【0039】

第１および第２の態様の第１３の実施形態または関連する実施形態において、ＬＮＰ（モル％）は、以下の成分を含むか、それらから本質的になるか、またはそれらからなる：（１） ｃＫＫ－Ｅ１２（後述のＩ．Ａ．にさらに記載）、約３５％；Ｃ１４－ＰＥＧ２０００、約２．５％；コレステロール、約４６．５％；およびＤＯＰＥ、約１６％；（２） ｂＣＫＫ－Ｅ１２（後述のＩ．Ａにさらに記載）、約３５％；Ｃ１４－ＰＥＧ２０００、約２．５％；コレステロール、約４６．５％；およびＤＯＰＥ、約１６％；（３） Ｌｉｐｉｄ９（Ｓａｂｎｉｓら、および後述のＩ．Ａ．にさらに記載）、約５０％；Ｃ１４－ＰＥＧ２０００、約１．５％；コレステロール、約３８．５％；およびＤＳＰＣ、約１０％；または（４）Ｌｉｐｉｄ５（Ｓａｂｎｉｓらおよび後述のＩ．Ａ．さらに記載）約５０％；Ｃ１４－ＰＥＧ２０００約１．５％；コレステロール約３８．５％；およびＤＳＰＣ約１０％；ならびに（５）イオン化可能脂質、約５０％；ＤＳＰＣ、約１０％；コレステロール、約３７．５％；および安定剤（ＰＥＧ－脂質）、約２．５％；または（６）ＧｅｎＶｏｙ－ＩＬＭ^TM ＬＮＰ（Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ ＮａｎｏＳｙｓｔｅｍｓ）。

【0040】

本発明の第３の態様は、以下を含むナノ粒子組成物を特徴とする：
ａ）ＤＮＡ、および
ｂ）ＧＡＳ－ＳＴＩＮＧ経路阻害剤およびインフラマソーム経路阻害剤からなる群から選択される細胞質ＤＮＡ感知阻害剤。

【0041】

本発明の第４の態様は、以下を含むナノ粒子を特徴とする：
ａ）ＤＮＡ、および
ｂ）ｃＧＡＳ－ＳＴＩＮＧ経路阻害剤およびインフラマソーム経路阻害剤からなる群より選択される細胞質ＤＮＡ感知阻害剤；ただし、ナノ粒子が脂質ナノ粒子である場合、以下の少なくとも１つである：（ｉ）細胞質ＤＮＡ感知阻害剤は、少なくともインフラマソーム経路阻害剤である；（ｉｉ）脂質ナノ粒子は、エンドソーム溶解剤を含まない；（ｉｉｉ）ＤＮＡが環状である；（ｉｖ）ＤＮＡが閉鎖型ＤＮＡでない；または（ｖ）細胞質ＤＮＡ感知阻害剤が第２のナノ粒子中に提供され、第２のナノ粒子は第１のナノ粒子と同じまたは異なる組成を有することができる。

【0042】

第３および第４の態様の第１の実施形態において、ＤＮＡは導入遺伝子を含むＤＮＡベクターであり、導入遺伝子は調節エレメントに作動可能に連結されたプロモーターを含む。さらなる実施形態において、導入遺伝子は、プロモーターに作動可能に連結され；プロモーターエンハンサーに作動可能に連結され；プロモーター／エンハンサー、ポリアデニル化および終結シグナルおよび／または調節可能エレメントに作動可能に連結され；そしてＤＮＡベクターは、５´から３´にプロモーター／エンハンサー、導入遺伝子、およびポリアデニル化および終結シグナルを含む。

【0043】

第３および第４の態様の第１の実施形態では、ＤＮＡは、調節エレメントに作動可能に連結された導入遺伝子を含むＤＮＡベクターである。さらなる実施形態において、導入遺伝子は、プロモーターに作動可能に連結され；プロモーター／エンハンサーに作動可能に連結され；プロモーター／エンハンサー、ポリアデニル化および終結シグナル、および／または調節可能エレメントに作動可能に連結され；そしてＤＮＡベクターは、５´から３´にプロモーター／エンハンサー、導入遺伝子、およびポリアデニル化および終結シグナルを含む。

【0044】

第３および第４の態様の第２の実施形態では、細胞質ＤＮＡ感知阻害剤はｃＧＡＳ－ＳＴＩＮＧ経路阻害剤であり；そしてＤＮＡは第３もしくは第４の態様または第１の実施形態で提供される通りである。さらなる実施形態において、ｃＧＡＳ－ＳＴＩＮＧ経路阻害剤はｃＧＡＳ阻害剤であり；ｃＧＡＳ－ＳＴＩＮＧ経路阻害剤はＳＴＩＮＧ阻害剤であり；ｃＧＡＳ－ＳＴＩＮＧ経路阻害剤はＴＢＫ１阻害剤であり；ｃＧＡＳ－ＳＴＩＮＧ経路阻害剤は、後述の セクションＩＩ．Ａ．で提供されるｃＧＡＳ阻害剤であり、ｃＧＡＳ－ＳＴＩＮＧ経路阻害剤は、後述の セクションＩＩ．Ａ．で提供されるＳＴＩＮＧ阻害剤であり、および／またはｃＧＡＳ－ＳＴＩＮＧ経路阻害剤は、後述のセクションＩＩ．Ａ．で提供されるＴＢＫ１阻害剤である。さらなる実施形態において、阻害剤は、Ｈ－１５１、ＧＳＫ－６９０６９３、ＲＵ－５２１、ＲＯ－３１５０、ＩＳＤ ０１７、ＳＩ－００１、ＣＹＴ３８７もしくはＧＳＫ８６１２、またはそれらの薬学的に許容可能な塩であるか；または表１、表２もしくは表３の化合物、またはそれらの薬学的に許容可能な塩である。

【0045】

第３および第４の態様の第３の実施形態では、阻害剤は、インフラマソーム経路阻害剤であり；そしてＤＮＡは、第３もしくは第４の態様または第１の実施形態で提供される通りである。さらなる実施形態において、インフラマソーム経路阻害剤は、ＡＩＭ２阻害剤である；ＡＩＭ２阻害剤は、後述のセクションＩＩ．Ｂで提供されるものであり、ＡＩＭ２阻害剤はＡ１５１である。

【0046】

第３および第４の態様の第４の実施形態において、ＤＮＡは、ウイルス抗原、細菌抗原、治療タンパク質、ショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）をコードする導入遺伝子を含むＤＮＡベクターである、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ＲＮＡ_ｉ、リボザイム、アンチセンスＲＮＡ、ＣＲＩＳＰＲ（ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ ｒｅｇｕｌａｒｌｙ ｉｎｔｅｒｓｐａｃｅｄ ｓｈｏｒｔ ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ ｒｅｐｅａｔｓ）／Ｃａｓ９構築物、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、または転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）を含むＤＮＡベクターであり；ここで、ＤＮＡベクターは第１の実施形態で提供される通りであり；細胞質ＤＮＡ感知阻害剤は第３または第４の態様、第２の実施形態または第３の実施形態で提供される通りである。さらなる実施形態において、治療用タンパク質は、後述のセクションＩＩＩ．Ｄ．で提供される通りである。

【0047】

第５の実施形態では、ＤＮＡは第３もしくは第４の態様、または関連する実施形態のいずれかで提供されるような環状ＤＮＡである。

【0048】

第３および第４の態様の第６の実施形態では、ナノ粒子は脂質ナノ粒子、脂質ポリマーナノ粒子、またはエクソソームであり；ＤＮＡは第３もしくは第４の態様、または第１、第４もしくは第５の実施形態で提供される通りであり；細胞質ＤＮＡ感知阻害剤は第３もしくは第４の態様、または第２もしくは第３の実施形態で提供される通りである。さらなる実施形態では、ナノ粒子は脂質ナノ粒子であり；ナノ粒子は脂質ポリマーナノ粒子であり；ナノ粒子はエクソソームであり；ナノ粒子はＤＮＡの放出に先立って阻害剤を放出するように構成された脂質ナノ粒子であり；ナノ粒子はＤＮＡの放出に先立って阻害剤を放出するように構成された脂質ポリマーナノ粒子であり；ナノ粒子はＤＮＡの放出に先立って阻害剤を放出するように構成されたエクソソームである。

【0049】

さらなる実施形態では、ナノ粒子はＬＮＰである。さらなる実施形態において、ＬＰＮ（ｍｏｌ％）は、以下の成分を含むか、それらから本質的になるか、またはそれらからなる：（１） 約２０％から約６５％の１種以上のカチオン性脂質、約１％から約５０％の１種以上のリン脂質、約０．１％から１０％の１種以上のＰＥＧ化脂質、および約０％～約７０％のコレステロール；並びに（２）約２０％～約５０％の１種以上のカチオン性脂質、約５％～約２０％の１種以上のリン脂質、約０．１％～約５％の１種以上のＰＥＧ化脂質、および約２０％～約６０％のコレステロール。さらなる実施形態において、リン脂質の脂質は中性脂質であり；そしてリン脂質の脂質はＤＯＰＥまたはＤＳＰＣである。

【0050】

さらなる実施形態では、ＬＰＮ（ｍｏｌ％）は、以下の成分を含むか、それらから本質的になるか、またはそれらからなる：（１） ｃＫＫ－Ｅ１２（後述のＩ．Ａ．にさらに記載）、約３５％；Ｃ１４－ＰＥＧ２０００、約２．５％；コレステロール、約４６．５％；およびＤＯＰＥ、約１６％；（２） ｂＣＫＫ－Ｅ１２（後述のＩ．Ａにさらに記載）、約３５％；Ｃ１４－ＰＥＧ２０００、約２．５％；コレステロール、約４６．５％；およびＤＯＰＥ、約１６％；（３） Ｌｉｐｉｄ９（Ｓａｂｎｉｓら、および後述のＩ．Ａ．にさらに記載）、約５０％；Ｃ１４－ＰＥＧ２０００、約１．５％；コレステロール、約３８．５％；およびＤＳＰＣ、約１０％；または（４）Ｌｉｐｉｄ５（Ｓａｂｎｉｓらおよび後述のＩ．Ａ．さらに記載）約５０％；Ｃ１４－ＰＥＧ２０００約１．５％；コレステロール約３８．５％；およびＤＳＰＣ約１０％；ならびに（５）イオン化可能脂質、約５０％；ＤＳＰＣ、約１０％；コレステロール、約３７．５％；および安定剤（ＰＥＧ－脂質）、約２．５％；または（６）ＧｅｎＶｏｙ－ＩＬＭ^TM ＬＮＰ（Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ ＮａｎｏＳｙｓｔｅｍｓ）。

【0051】

第３および第４の態様の第７の実施形態では、２つの異なる 細胞質ＤＮＡ感知阻害剤がナノ粒子中に提供される；ここで、他の成分は第３または第４の態様または関連する実施形態で提供される通りである。さらなる実施形態において、インフラマソーム経路阻害剤およびｃＧＡＳ － ＳＴＩＮＧ経路阻害剤が提供され；２つの異なるインフラマソーム経路阻害剤が提供され；そして２つの異なるｃＧＡＳ － ＳＴＩＮＧ経路阻害剤が提供される。

【0052】

第３および第４の態様または関連する実施形態の第８の実施形態では、ＤＮＡおよびＤＮＡベクターはそれぞれ実質的に二本鎖ＤＮＡを含み；そしてＤＮＡおよびＤＮＡベクターはそれぞれ実質的に一本鎖ＤＮＡを含む。

【0053】

第５の態様は、第３もしくは第４の態様または関連する実施形態のナノ粒子組成物および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物に向けられている。

【0054】

第６の態様は、導入遺伝子を含むＤＮＡベクターを含む遺伝子治療に使用するための医薬組成物であって、該組成物が、細胞質ＤＮＡ感知阻害剤の投与前、同時に、または投与後に使用するためのものであり、ＤＮＡベクターがナノ粒子内に提供される、医薬組成物に向けられている。追加の実施形態は、第１および第２の態様および関連する実施形態に記載される方法；ならびに第３および第４の態様および関連する実施形態に記載される組成物に提供される。

【0055】

本発明の第７の態様は、第１および第２の態様ならびに関連する実施形態で使用する医薬品の製造方法に向けられている。医薬品は、ナノ粒子を医薬的に許容される担体と組み合せることにより製造され、ここでナノ粒子は第１、第２、第３、第４の態様または関連する実施形態に記載されている通りである。

【0056】

単数形の「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈上明らかにそうでない場合を除き、複数形の参照語を含む。

【0057】

本明細書で使用される場合、複数の言及された要素間の接続語「および／または」は、個々の選択肢と組み合わされた選択肢の両方を包含すると理解される。例えば、２つの要素が「および／または」で結ばれている場合、第一の選択肢は第二の選択肢を含まない第一の選択肢の適用可能性を指し、第二の選択肢は第一の選択肢を含まない第二の選択肢の適用可能性を指し、第三の選択肢は第一と第二の選択肢を合わせた適用可能性を指す。選択肢のいずれかは、その意味の範囲内にあり、したがって「および／または」という用語の要件を満たすと理解される。１つ以上の選択肢の同時適用も、「および／または」という用語の意味に含まれると理解される。

【0058】

また、文脈上別段の定めがない限り、「または」および「および」という用語は、「および／または」と同じ意味を持つ。

【0059】

「を含む」、「例えば」、「例」、「のような」といった用語の後に異なるメンバーや例が続くのは、列挙されたメンバーや例が例示であり、他のメンバーや例を提供または使用することができるオープンエンドの説明である。

【0060】

「ポリペプチド」、「タンパク質」、「ペプチド」という用語は、機能に関係なくアミノ酸配列を指すために互換的に使用することができる。ポリペプチドとペプチドは少なくとも２個のアミノ酸を含み、タンパク質は少なくとも約１０個のアミノ酸を含む。提供されるアミノ酸には、天然に存在するアミノ酸と細胞修飾によって提供されるアミノ酸が含まれる。

【0061】

要素または要素群に関して使用される「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの変化形への言及は、オープンエンドであり、追加の未述要素または方法工程を除外するものではない。「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、「～を特徴とする」などの用語は、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」と同義である。本明細書に記載の異なる態様および実施形態において、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などのオープンエンドの用語への言及は、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」または「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」という用語に置き換えることができる。

【0062】

「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」という言及は、列挙された請求項の要素に明記されていない要素、ステップ、または成分を除外するものであり、そのような要素、ステップ、または成分が請求項に記載された発明に関連する場合は、この限りでない。

【0063】

「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」という言及は、請求項の範囲を、特定された材料またはステップ、と請求項に記載された発明の基本的かつ新規な特性に重大な影響を与えないものに限定する。

【0064】

「約」という用語は、基礎となるパラメータの１０％以内の値（すなわち、プラスマイナス１０％）を指す。例えば、「約１：１０」には１．１：１０．１または０．９：９．９が含まれ、「約５時間」には４．５時間または５．５時間が含まれる。値の文字列の先頭に「約」を付けると、各値が１０％ずつ変更される。

【0065】

すべての数値または数値範囲は、文脈上明らかにそうでない場合を除き、その範囲内の整数、および数値または数値範囲内の整数の端数を含む。このように、９５％以上の低減という表現には、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、１００％のほか、９５．１％、９５．２％、９５．３％、９５．４％、９５．５％などが含まれる、９６．１％、９６．２％、９６．３％、９６．４％、９６．５％など；「１～４」のような数値範囲への言及は、２、３のほか、１．１、１．２、１．３、１．４などを含み、「１～４」は７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８日を含み、「０．０１～１０」などの数値範囲は０．０１１、０．０１２、０．０１３などのほか、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９、１０などを含む。例えば、対象の体重「０．０１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇ」の用量には、０．０１１ｍｇ／ｋｇ、０．０１２ｍｇ／ｋｇ、０．０１３ｍｇ／ｋｇ、０．０１４ｍｇ／ｋｇ、０．０１５ｍｇ／ｋｇなどのほか、９．５ｍｇ／ｋｇ、９．６ｍｇ／ｋｇ、９．７ｍｇ／ｋｇ、９．８ｍｇ／ｋｇ、９．９ｍｇ／ｋｇなどが含まれる。

【0066】

より多い（大きい）またはより少ない整数への参照は、それぞれ参照番号より大きいまたは小さい数を含む。したがって、例えば、２回以上という表現には、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、１１回、１２回、１３回、１４回、１５回が含まれ、「２回以上」という表現には、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、１１回、１２回、１３回、１４回、１５回、またはそれ以上の回数が含まれる。

【0067】

本明細書の背景および全体にわたって、論文や特許文献を含む様々な参考文献が引用または記載されている。これらの文献はそれぞれ、参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる。いずれの文献も、開示またはクレームされた発明に関して先行技術であることを認めていない。場合によっては、特定の参考文献を参照により本明細書に組み入れることを示し、組み入れを強調している。

【0068】

本項および本願の他の項を含め、本明細書で規定される定義は、本願全体に適用される。

【0069】

別に定義しない限り、本明細書で使用される全ての技術および科学用語は、本発明が関連する技術分野の通常の技術者により一般に理解されているものと同じ意味を有する。

【0070】

本明細書は、様々な節や段落に分けられ、様々な実施形態を提供している。これらの分離は、ある段落や節や実施形態の実質を、別の段落や節や実施形態の実質から切り離すものと考えるべきではない。提供された記述は広範に適用され、想定されるさまざまな節、段落、文のすべての組み合わせを包含する。任意の実施形態の議論は、例示的なものであることのみを意図しており、特許請求の範囲を含む本開示の範囲が（特許請求の範囲に別段の定めがない限り）これらの例に限定されることを示唆することを意図していない。

【0071】

本明細書では、特定の特徴の組み合わせが強調されているが、本明細書に開示されているすべての特徴は、任意の組み合わせで組み合わせることができる。本明細書に開示されている各特徴は、同一、同等、または類似の目的を果たす代替的な特徴で置き換えることができる。
Ｉ． ナノ粒子

【0072】

脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）、ポリマーナノ粒子、脂質ポリマーナノ粒子（ＬＰＮＰ）、タンパク質およびペプチドベースのナノ粒子、ＤＮＡデンドリマーおよびＤＮＡベースのナノキャリア、カーボンナノチューブ、マイクロ粒子、マイクロカプセル、無機ナノ粒子、ペプチドケージナノ粒子、エクソソームなど、さまざまな異なるナノ粒子を採用することができる。（例えば、Ｒｉｌｅｙ ａｎｄ Ｖｅｒｍｅｒｒｉｓ Ｎａｎｏｍａｔｅｒｉａｌｓ ２０１７，７，９４；Ｔｈｏｍａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２０１９，２４，３７４４；Ｂｏｃｈｉｃｃｈｉｏ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ ２０２１，１３，１９８；Ｍｕｎａｇａｌａ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｌｅｔｔｅｒｓ ２０２１，５０５，５８；Ｆｕ ｅｔ ａｌ．，２０２０ ＮａｎｏＩｍｐａｃｔ ２０，１００２６１；ａｎｄ Ｎｅｓｈａｔ ｅｔ ａｌ． ２０２０ Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．６６：１－１０）。

【0073】

必要であれば、例えば標的細胞レセプターを認識するターゲティングリガンドを用いて、ナノ粒子を細胞種にターゲティングすることができる。ターゲティングリガンドの例としては、炭水化物（例えば、ガラクトース、マンノース、グルコース、ガラクトマンナン）、内因性リガンド（例えば、葉酸、トランスフェリン）、抗体（例えば、抗ＨＥＲ２抗体、ｈＤ１）、タンパク質／ペプチド（例えば、ＲＧＤ、上皮増殖因子、低密度リポタンパク質）およびペプチドが挙げられる。（Ｆｏｒ ｅｘａｍｐｌｅ，Ｔｅｏ ｅｔ ａｌ．，Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ ２０１６，９８，４１．）

【0074】

本出願の特徴は、ＤＮＡを送達するためにナノ粒子を使用することである。異なる実施形態では、ナノ粒子は、細胞質ＤＮＡ感知阻害剤、免疫抑制剤、貪食細胞減少化合物、追加的治療化合物などの追加的化合物を送達することができ、１つ以上の追加的化合物が異なるナノ粒子で提供され；および１つ以上の付加的な化合物は、ＤＮＡベクターと同じナノ粒子内に提供され、例えば、ＤＮＡベクターと細胞質ＤＮＡ感知阻害剤、あるいはＤＮＡベクターと細胞質ＤＮＡ感知阻害剤と免疫細胞調節剤などである。「化合物」には、低分子、高分子（例えば、治療用タンパク質や抗体）、核酸が含まれる。

【0075】

さまざまなナノ粒子の製造と核酸やその他の化合物の組み込みは、当技術分野でよく知られており、セクションＩの議論を通じてさまざまな刊行物に例示されている。一般に、ナノ粒子カーゴ（例えば、ＤＮＡおよび／または阻害剤）の曝露動態は、ＤＮＡと異なる化合物に異なる環境を与えたり、異なる構造と会合させたりすることによって影響を受ける可能性がある。

【0076】

ＬＰＮＰおよびＬＮＰなどの特定のナノ粒子における核酸の組み込みを例示する刊行物の例には、Ｔｅｏら、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ ２０１６、９８、４１；Ｂｏｃｈｉｃｃｈｉｏら、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ ２０２１、１３、１９８；ＭａｈｚａｂｉｎおよびＤａｓ、ＩＪＰＳＲ ２０２１、１２（１）、６５；およびＴｅｉｘｅｉｒａら、Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２０１７、１が含まれる（これらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。このような文献はまた、核酸や低分子と相互作用する様々な構造を提供することで、望ましい放出動態に影響を与えることができるというＬＰＮＰの利点を指摘している。低分子のナノ粒子への取り込みに影響を与える要因としては、疎水性とイオン化可能な部分の存在が挙げられる。（例えば、Ｎｉｉ ａｎｄ Ｉｓｈｉｉ，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ ２００５，２９８，１９８；ａｎｄ Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ ２０１８，２８６，４６を参照）。

【0077】

一実施形態では、化合物（例えば、細胞質ＤＮＡ感知阻害剤および／または免疫細胞調節剤）は、疎水性を高めるために脂肪酸と連結される。低分子と結合できる脂肪酸の例としては、Ｃｈｅｎら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ ２０１８，２８６，４６－５４によるものがある。
Ｉ．Ａ．脂質ベースの送達系

【0078】

脂質ベースの送達系には、成分として脂質の使用が含まれる。脂質ベースの送達系の例としては、リポソーム、ＬＮＰ、ミセル、細胞外小胞などがある。

【0079】

「脂質ナノ粒子」または「ＬＮＰ」は、核酸分子の送達に有用で、ナノスケールの寸法を持つ脂質ベースの小胞を指す。異なる実施形態では、ナノ粒子は約１０ｎｍ～約１０００ｎｍ、約５０ｎｍ～約５００ｎｍ、または約５０ｎｍ～約２００ｎｍである。

【0080】

ＤＮＡはマイナスに帯電している。したがって、ＬＮＰが例えばアミノ脂質のようなカチオン性脂質を含むことは有益である。例示的なアミノ脂質は、米国特許第９，３５２，０４２号、同第９，２２０，６８３号、同第９，１８６，３２５号、同第９，１３９，５５４号、同第９，１２６，９６６号、同第９，０１８，１８７号、同第８，９９９，３５１号、同第８，７２２，０８２号、同第８，６４２，０７６号、同第８，５６９，２５６号、同第８，４６６，１２２号、および同第７，７４５，６５１号ならびに米国特許公開第２０１６／０２１３７８５号、同第２０１６／０１９９４８５号、同第２０１５／０２６５７０８号、同第２０１４／０２８８１４６号、同第２０１３／０１２３３３８号、同第２０１３／０１１６３０７号、同第２０１３／００６４８９４号、同第２０１２／０１７２４１１号、および同第２０１０／０１１７１２５号に記載されており、これらの特許はすべて、その全体が本明細書に組み込まれる。特定の実施形態において、ＬＮＰは、米国特許第９，５１２，０７３号（その全体が本明細書に組み込まれる）に記載されているアミノ脂質を含む。

【0081】

「カチオン性脂質」および「アミノ脂質」という用語は、本明細書において互換的に使用され、１、２、３、またはそれ以上の脂肪酸または脂肪アルキル鎖およびｐＨ調整可能なアミノ基（例えば、アルキルアミノ基またはジアルキルアミノ基）を有する脂質およびその塩を含む。カチオン性脂質は通常、カチオン性脂質のｐＫａ以下のｐＨではプロトン化（すなわち正に帯電）しており、ｐＫａ以上のｐＨでは実質的に中性である。カチオン性脂質は、滴定可能なカチオン性脂質であることもできる。特定の実施形態において、カチオン性脂質は、プロトン化可能な第三級アミン（例えば、ｐＨ滴定可能）基；Ｃ１８アルキル鎖（ここで、各アルキル鎖は独立して、１つ以上の二重結合、１つ以上の三重結合を有することができる）；および頭部基とアルキル鎖との間のエーテル、エステル、またはケタール結合を含む。

【0082】

カチオン性脂質は、１，２－ジリノオレイルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎＤＭＡ）、１，２－ジリノレニルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｅｎＤＭＡ）、１，２－ジ－γ－リノレニルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノプロパン（γ－ＤＬｅｎＤＭＡ）、２，２－ジリノレイル－４－（２－ジメチルアミノエチル）－［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－Ｋ－Ｃ２－ＤＭＡ、ＤＬｉｎ－Ｃ２Ｋ－ＤＭＡ、ＸＴＣ２、Ｃ２Ｋとしても知られる）、２，２－ジリノレイル－４－ジメチルアミノメチル－［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－Ｋ－ＤＭＡ）、ジリノレイルメチル－３－ジメチルアミノプロピオネート（ＤＬｉｎ－Ｍ－Ｃ２－ＤＭＡ、別名ＭＣ２）、（６Ｚ，９Ｚ，２８Ｚ，３１Ｚ）－ヘプタトリアコンタ－６，９，２８，３１－テトラエン－１９－イル ４－（ジメチルアミノ）ブタノエート（ＤＬｉｎ－Ｍ－Ｃ３－ＤＭＡ、別名ＭＣ３）、その塩、およびそれらの混合物を含む。その他のカチオン性脂質は、１，２－ジステアリルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－アミノプロパン（ＤＳＤＭＡ）、１，２－ジオレイルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－アミノプロパン（ＤＯＤＭＡ）、２，２－ジリノレイル－４－（３－ジメチルアミノプロピル）－［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－Ｋ－Ｃ３－ＤＭＡ）、２，２－ジリノレイル－４－（３－ジメチルアミノブチル）－［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－Ｋ－Ｃ４－ＤＭＡ）、ＤＬｅｎ－Ｃ２Ｋ－ＤＭＡ、γ－ＤＬｅｎ－Ｃ２Ｋ－ＤＭＡ、および（ＤＬｉｎ－ＭＰ－ＤＭＡ）（１－Ｂ１１としても知られる）を含む。

【0083】

さらに別のカチオン性脂質は、２，２－ジリノレイル－５－ジメチルアミノメチル－［１，３］－ジオキサン（ＤＬｉｎ－Ｋ６－ＤＭＡ）、２，２－ジリノレイル－４－Ｎ－メチルペピアジノ－［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－Ｋ－ＭＰＺ）、１，２－ジリノレイルカルバモイルオキシ－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ－Ｃ－ＤＡＰ）、１，２－ジリノレオキシ－３－（ジメチルアミノ）アセトキシプロパン（ＤＬｉｎ－ＤＡＣ）、１，２－ジリノレオキシ－３－モルフォリノプロパン（ＤＬｉｎ－ＭＡ）、１，２－ジリノレオイル－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎＤＡＰ）、１，２－ジリノレイルチオ－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ－Ｓ－ＤＭＡ）、１－リノレオイル－２－リノレイルオキシ－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ－２－ＤＭＡＰ）、１，２－ジリノオレイルオキシ－３－トリメチルアミノプロパンクロリド塩（ＤＬｉｎ－ＴＭＡ．Ｃｌ）、１，２－ジリノレオイル－３－トリメチルアミノプロパンクロライド塩（ＤＬｉｎ－ＴＡＰ．Ｃｌ）、１，２－ジリノールオキシ－３－（Ｎ－メチルピペラジノ）プロパン（ＤＬｉｎ－ＭＰＺ）、３－（Ｎ，Ｎ－ジリノオレイルアミノ）－１，２－プロパンジオール（ＤＬｉｎＡＰ）、３－（Ｎ，Ｎ－ジオレイルアミノ）－１，２－プロパンジオ（ＤＯＡＰ）、１，２－ジリノオレイルオキソ－３－（２－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノ）エトキシプロパン（ＤＬｉｎ－ＥＧ－ＤＭＡ）、Ｎ，Ｎ－ジオレイル－Ｎ，Ｎ－ジメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＤＡＣ）、Ｎ－（１－（２，３－ジオレイルオキシ）プロピル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ－トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）、Ｎ，Ｎ－ジステアリル－Ｎ，Ｎ－ジメチルアンモニウムブロミド（ＤＤＡＢ）、Ｎ－（１－（２，３－ジオレオイルオキシ）プロピル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ－トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＡＰ）、３－（Ｎ－（Ｎ′，Ｎ′－ジメチルアミノエタン）－カルバモイル）コレステロール（ＤＣ－Ｃｈｏｌ）、Ｎ－（１，２－ジミリスチルオキシプロプ－３－イル）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－Ｎ－ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＭＲＩＥ）、２，３－ジオレイルオキシ－Ｎ－［２（スペルミンカルボキサミド）エチル］－Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－プロパナミニウムトリフルオロアセテート（ＤＯＳＰＡ）、ジオクタデシルアミドグリシルスペルミン（ＤＯＧＳ）、３－ジメチルアミノ－２－（コレスト－５－エン－３－β－オキシブタン－４－オキシ）－１－（シス，シス－９，１２－オクタデカジエノキシ）プロパン（ＣＬｉｎＤＭＡ）、２－［５′－（コレスト－５－エン－３－β－オキシ）－３′－オキサペントキシ）－３－ジメチル－１－（シス，シス－９′，１－２′－オクタデカジエノキシ）プロパン（ＣｐＬｉｎＤＭＡ）、Ｎ，Ｎ－ジメチル－３，４－ジオレイルオキシベンジルアミン（ＤＭＯＢＡ）、１，２－Ｎ，Ｎ′－ジオレイルカルバミル－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＯｃａｒｂＤＡＰ）、１，２－Ｎ，Ｎ′－ジリノレイルカルバミル－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎｃａｒｂＤＡＰ）、デキサメタゾン－スペリミン（ＤＳ）および二置換スペルミン（Ｄ２Ｓ）、またはそれらの混合物を含む。

【0084】

カチオン性脂質の多くの市販製剤、例えば、ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（登録商標）（ＤＯＴＭＡおよびＤＯＰＥを含み、ＧＩＢＣＯ／ＢＲＬから入手可能）、およびＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ（登録商標）（ＤＯＳＰＡおよびＤＯＰＥを含み、ＧＩＢＣＯ／ＢＲＬから入手可能）を使用することができる。

【0085】

使用可能な追加のイオン化可能脂質としては、Ｃ１２－２００、３０６Ｏｉ１０、ＭＣ３、ｃＫＫ－Ｅ１２、ｂＣＫＫ－Ｅ１２、Ｌｉｐｉｄ ５、Ｌｉｐｉｄ ９、ＡＴＸ－００２、ＡＴＸ－００３、およびＭｅｒｃｋ－３２が挙げられる。米国特許出願公開第２０１７／０３６７９８８号には、Ｍｅｒｃｋ－３２が記載されている。

【0086】

さらなる実施形態では、カチオン性脂質は、ＬＮＰのモル比で約１０％～ＬＮＰのモル比で約８５％、またはＬＮＰのモル比で約５０％～ＬＮＰのモル比で約７５％の量で存在することができる。

【0087】

ＬＮＰは中性脂質を含むことができる。中性脂質は、生理学的ｐＨにおいて非荷電または中性の双性イオン形態で存在する脂質種を含む。このような脂質には、ジアシルホスファチジルコリン、ジアシルホスファチジルエタノールアミン、セラミド、スフィンゴミエリン、ジヒドロスフィンゴミエリン、セファリン、およびセレブロシドが含まれる。中性脂質の選択は、一般的に粒子径や安定性などを考慮して行われる。特定の実施形態において、中性脂質成分は、２つのアシル基（例えば、ジアシルホスファチジルコリンおよびジアシルホスファチジルエタノールアミン）を有する脂質であり得る。

【0088】

鎖長や飽和度の異なる様々なアシル鎖基を持つ脂質が入手可能であり、また単離や合成も可能である。特定の実施形態では、Ｃ１４からＣ２２の範囲の炭素鎖長を有する飽和脂肪酸を含む脂質を使用することができる。特定の実施形態では、Ｃ１４からＣ２２の範囲の炭素鎖長を有する一価または二価不飽和脂肪酸を有する脂質が使用される。さらに、飽和脂肪酸鎖と不飽和脂肪酸鎖の混合物を有する脂質を使用することもできる。例示的な中性脂質には、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスファチジル－エタノールアミン（ＤＯＰＥ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、またはホスファチジルコリンが含まれる。さらに中性脂質はスフィンゴミエリン、ジヒドロスフィンゴミエリン、またはセリンやイノシトールのような他の頭部基を持つリン脂質で構成され得る。

【0089】

中性脂質を提供するさらなる実施形態では、中性脂質は、ＬＮＰの約０．１重量％～ＬＮＰの約９９重量％、またはＬＮＰの約５重量％～ＬＮＰの約１５重量％の量で存在することができ、例えば、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または約９９％である。

【0090】

ＬＮＰは、ステロールやポリエチレングリコールなどの追加成分を含むことができる。ステロールはＬＮＰに流動性を与えることができる。本明細書で使用する「ステロール」とは、植物（フィトステロール）または動物（ズーステロール）由来の天然に存在するステロール、および天然に存在しない合成ステロールを指し、これらはすべて、ステロイドＡ環の３位にヒドロキシル基が存在することを特徴とする。好適なステロールには、リポソーム、脂質ベシクルまたは脂質粒子調製の分野で従来から使用されているもの、最も一般的にはコレステロールが含まれる。フィトステロールには、カンペステロール、シトステロール、スチグマステロールなどがある。ステロールには、米国特許出願公開２０１１／０１７７１５６号に記載されているような、ステロール修飾脂質も含まれる。ステロールを提供する異なる実施形態では、ステロールは、ＬＮＰの約１重量％～ＬＮＰの約８０重量％、またはＬＮＰの約１０重量％～ＬＮＰの約２５重量％の量で存在する。

【0091】

ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）は、２つの末端水酸基を持つエチレンＰＥＧ繰り返し単位の直鎖状水溶性ポリマーである。ＰＥＧは分子量によって分類され、例えばＰＥＧ ２０００は平均分子量約２０００ダルトン、ＰＥＧ ５０００は平均分子量約５０００ダルトンである。シグマ・ケミカル社などから市販されているＰＥＧには、モノメトキシポリエチレングリコール（ＭｅＰＥＧ－ＯＨ）、モノメトキシポリエチレングリコール－スクシナート（ＭｅＰＥＧ－Ｓ）、モノメトキシポリエチレングリコール－スクシンイミジルスクシナート（ＭｅＰＥＧ－Ｓ－ＮＨＳ）、モノメトキシポリエチレングリコール－アミン（ＭｅＰＥＧ－ＮＨ２）、モノメトキシポリエチレングリコール－トレシレート（ＭｅＰＥＧ－ＴＲＥＳ）、およびモノメトキシポリエチレングリコール－イミダゾリル－カルボニル（ＭｅＰＥＧ－ＩＭ）が含まれる。

【0092】

ＰＥＧに関する特定の実施形態では、ＰＥＧは約５５０～約１０，０００ダルトンの平均分子量を有し、アルキル、アルコキシ、アシルまたはアリールで任意選択的に置換されている。さらなる実施形態において、ＰＥＧは末端ヒドロキシル位でメチルで置換されている。さらなる実施形態において、ＰＥＧは、約７５０～約５，０００ダルトン、または約１，０００～約５，０００ダルトン、または約１，５００～約３，０００ダルトン、または約２，０００ダルトン～、または約７５０ダルトン～の平均分子量を有する。

【0093】

ＰＥＧ修飾脂質には、米国特許第８，９３６，９４２号および同第７，８０３，３９７号に記載されているＰＥＧ－ジアルキルオキシプロピルコンジュゲート（ＰＥＧ－ＤＡＡ）がある。ＰＥＧ修飾脂質（または脂質－ポリオキシエチレンコンジュゲート）は、ＰＥＧ部分を脂質ベシクルの表面に固定するために、様々な「アンカー」脂質部分を持つことができる。適切なＰＥＧ修飾脂質の例としては、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミンおよびホスファチジン酸、米国特許第５，８２０，８７３号に記載されているＰＥＧ－セラミドコンジュゲート（例えば、ＰＥＧ－ＣｅｒＣ１４またはＰＥＧ－ＣｅｒＣ２０）、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミンおよびＰＥＧ修飾１，２－ジアシルオキシプロパン－３－アミンが挙げられる。特定の実施形態において、ＰＥＧ修飾脂質は、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロールおよびジアルキルグリセロールであり得る。特定の実施形態では、ＰＥＧは、ＬＮＰの約０．１重量％～ＬＮＰの約５０重量％、またはＬＮＰの約５重量％～ＬＮＰの約１５重量％の量であり得る。

【0094】

ＬＮＰサイズに関するさらなる実施形態では、核酸を封入する前のＬＮＰは、約１０ｎｍ～約５００ｎｍ、または約５０ｎｍ～約２００ｎｍ、または７５ｎｍ～約１２５ｎｍの範囲のサイズを有する。

【0095】

ＬＮＰに関する特定の実施形態では、ＬＮＰは、Ｂｉｌｌｉｎｇｓｌｅｙら、Ｎａｎｏ Ｌｅｔｔ． ２０２０，２０，１５７８またはＢｉｌｌｉｎｇｓｌｅｙら、国際特許公開第ＷＯ ２０２１／０７７０６６号（いずれも参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。Ｂｉｌｌｉｎｇｓｌｅｙらや ＷＯ２０２１／０７７０６６は、脂質固定化ＰＥＧ、コレステロール、リン脂質、イオン化可能脂質を含むＬＮＰを記載している。特定の実施形態において、ＬＮＰは、Ｃ１４－４ポリアミンコアを含み、および／または約７０ｎｍの粒径を有する。Ｃ１４－４は次の構造をしている。

【化1】

【0096】

特定の実施形態において、ＬＮＰは、米国特許第１０，４９３，０３１号、米国特許第１０，６８２，３７４号またはＷＯ２０２１／０７７０６６（これらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）によって記載されるカチオン性脂質またはリポペプチドで構成される。特定の実施形態において、ＬＮＰは、カチオン性脂質、コレステロールベースの脂質、および／または１つ以上のＰＥＧ修飾脂質を含む。特定の実施形態において、ＬＮＰはｃＫＫ－Ｅ１２を含む（Ｄｏｎｇら、ＰＮＡＳ（２０１４）１１１（１１）、３９５５）：

【化2】

【0097】

特定の実施形態において、ＬＮＰは、本明細書において「ｂＣＫＫ－Ｅ１２」と呼ばれる、以下の構造を有するｃＫＫ－Ｅ１２の修飾形態を含む：

【化3】

【0098】

特定の実施形態において、ＬＮＰは、Ｓａｂｎｉｓら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ ２０１８、２６：６、１５０９～１５１９（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）によって記載される脂質１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０を含む。特定の実施形態において、ＬＮＰは、Ｓａｂｎｉｓらに記載されたＬｉｐｉｄ５、８、９、１０、または１１を含む。

【0099】

ＳａｂｎｉｓらのＬｉｐｉｄ５の構造は以下の通りである：

【化4】

【0100】

ＳａｂｎｉｓらのＬｉｐｉｄ９の構造は以下の通りである：

【化5】

【0101】

利用され得る追加の脂質としては、Ｒｏｃｅｓら、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ、２０２０、１２，１０９５；Ｊａｙａｒａｍａｎら、Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．，２０１２，５１，８５２９－８５３３；Ｍａｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，ｗｗｗ．ｍｏｌｅｃｕｌａｒｔｈｅｒａｐｙ．ｏｒｇ，２０１３，Ｖｏｌ．２１，Ｎｏ．８，１５７０－１５７８；Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，Ａｄｖ．Ｍａｔｅｒ．２０１９，３１，１９０２５７５，例えば、ＢＡＭＥＡ－Ｏ１６Ｂ；Ｃｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ａｄｖ．Ｍａｔｅｒ．、２０１８、３０、１８０５３０８、例えば、５Ａ２－ＳＣ８；Ｈａｊｊ ａｎｄ Ｂａｌｌ、Ｓｍａｌｌ、２０１９ １５、１８０５０９７、例えば、３０６Ｏｉ１０；Ｄｕら、米国特許出願公開第２０１６０３７６２２４号；およびＴａｎａｋａら、Ａｄｖ．Ｆｕｎｃｔ．Ｍａｔｅｒ．，２０２０，３０，１９１０５７５を含む；これら文献の各々は、参照によりその全体が本明細書に援用される。

【0102】

さらなる実施形態では、ナノ粒子はＬＮＰである。さらなる実施形態において、ＬＰＮ（ｍｏｌ％）は、以下の成分を含むか、それらから本質的になるか、またはそれらからなる：（１） 約２０％から約６５％の１種以上のカチオン性脂質、約１％から約５０％の１種以上のリン脂質、約０．１％から１０％の１種以上のＰＥＧ化脂質、および約０％～約７０％のコレステロール；並びに（２）約２０％～約５０％の１種以上のカチオン性脂質、約５％～約２０％の１種以上のリン脂質、約０．１％～約５％の１種以上のＰＥＧ化脂質、および約２０％～約６０％のコレステロール。さらなる実施形態において、リン脂質の脂質は中性脂質であり；そしてリン脂質の脂質はＤＯＰＥまたはＤＳＰＣである。

【0103】

さらなる実施形態では、ＬＰＮ（ｍｏｌ％）は、以下の成分を含むか、それらから本質的になるか、またはそれらからなる：（１） ｃＫＫ－Ｅ１２（後述のＩ．Ａ．にさらに記載）、約３５％；Ｃ１４－ＰＥＧ２０００、約２．５％；コレステロール、約４６．５％；およびＤＯＰＥ、約１６％；（２） ｂＣＫＫ－Ｅ１２（後述のＩ．Ａにさらに記載）、約３５％；Ｃ１４－ＰＥＧ２０００、約２．５％；コレステロール、約４６．５％；およびＤＯＰＥ、約１６％；（３） Ｌｉｐｉｄ９（Ｓａｂｎｉｓら、および後述のＩ．Ａ．にさらに記載）、約５０％；Ｃ１４－ＰＥＧ２０００、約１．５％；コレステロール、約３８．５％；およびＤＳＰＣ、約１０％；または（４）Ｌｉｐｉｄ５（Ｓａｂｎｉｓらおよび後述のＩ．Ａ．さらに記載）約５０％；Ｃ１４－ＰＥＧ２０００約１．５％；コレステロール約３８．５％；およびＤＳＰＣ約１０％；ならびに（５）イオン化可能脂質、約５０％；ＤＳＰＣ、約１０％；コレステロール、約３７．５％；および安定剤（ＰＥＧ－脂質）、約２．５％；または（６）ＧｅｎＶｏｙ－ＩＬＭ^TM ＬＮＰ（Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ ＮａｎｏＳｙｓｔｅｍｓ）。
Ｉ．Ｂ．ポリマー・ベース・ナノ粒子

【0104】

ポリマーベースの送達系は、さまざまな天然素材や合成素材から作ることができる。ＤＮＡや他の化合物は、ポリマーナノ粒子のポリマーマトリックスに封入することも、ナノ粒子の表面に吸着または結合させることもできる。核酸デリバリーによく使われるポリマーの例としては、ポリ（乳酸－コ－グリコール酸）（ＰＬＧＡ）、ポリ乳酸（ＰＬＡ）、ポリ（エチレンイミン）（ＰＥＩ）およびＰＥＩ誘導体、キトサン、デンドリマー、ポリ無水物、ポリカプロラクトン ポリメタクリレート、ポリ－Ｌ－リジン、プルラン、デキストラン、およびヒアルロン酸、ポリ－β－アミノエステルを含む。（Ｔｈｏｍａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２０１９，２４，３７４４．）

【0105】

特定の実施形態において、ポリマー系ナノ粒子は、約１ｎｍ～約１０００ｎｍ、約１０ｎｍ～約５００ｎｍ、約５０ｎｍ～約２００ｎｍ、約１００ｎｍ～約１５０ｎｍ、および約１５０ｎｍ以下の範囲の異なるサイズを有する。
Ｉ．Ｃ．ー脂質ポリマーナノ粒子

【0106】

脂質ポリマーナノ粒子は、脂質成分とポリマー成分の両方を提供するハイブリッドナノ粒子であり、そのようなものとしてＬＮＰまたはＬＰＮＰと考えることができる。ＬＰＮＰ構成は、外側ポリマーと内側脂質、または外側脂質と内側ポリマーを提供することができる。２つの異なるタイプの材料が存在することで、成分の遅延放出を実現するナノ粒子の設計が容易になる。異なる脂質およびポリマー成分は、Ｉ．Ａ． 上掲およびＩ．Ｂ． 上掲で提供さ れ、当技術分野で提供されている ガイダンスとともに、送達される物質（例えば、細胞質ＤＮＡ感知阻害剤およびＤＮＡベクター ）を考慮して選択することができる。（例えば Ｔｅｏ ｅｔ ａｌ．，Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ ２０１６，９８，４１；Ｂｏｃｈｉｃｃｈｉｏ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，２０２１ １３，１９８；Ｍａｈｚａｂｉｎ ａｎｄ Ｄａｓ，ＩＪＰＳＲ ２０２１，１２（１），６５；Ｔｅｉｘｅｉｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０１８，１．）
Ｉ．Ｄ． タンパク質およびペプチドベースのナノ粒子

【0107】

タンパク質やペプチドをベースにしたシステムは、さまざまな種類のタンパク質やペプチドを用いることができる。タンパク質の例としては、ゼラチンやエラスチンを含む。ペプチドベースのシステムは、例えばＣＰＰを用いることができる、

【0108】

ＣＰＰは短いペプチド（６－３０アミノ酸残基）で、治療分子を細胞内に浸透させることができる可能性がある。ＣＰＰの大部分は主にアルギニン残基とリジン残基からなり、陽イオン性で親水性であるが、ＣＰＰは両親媒性、陰イオン性、疎水性であることもある。ＣＰＰは、天然の生物分子（例えば、ＨＩＶ－１タンパク質のＴａｔ）から誘導することも できるし、合成法によって得ることもできる（例えば、ポリ－Ｌ－リジン、ポリアルギニン）（Ｓｉｎｇｈら、Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．２０１８；２５（１）：１９９６－２００６）． ＣＰＰの例としては、Ｔａｔペプチド、ペネトラチン、プロタミン、ポリ－Ｌ－リジン、ポリアルギニンなどのカチオン性ＣＰＰ（高正電荷）；トランスポルタン、ＶＴ５、バクテネシン－７（Ｂａｃ７）、プロリンリッチペプチド（ＰＰＲ）、ＳＡＰ（ＶＲＬＰＰＰ）_３、ＴＰ１０、ｐｅｐ－１、ＭＰＧなどの両親媒性ＣＰＰ（異なる供給源から構築され、正と負の両方の荷電アミノ酸配列を含むキメラペプチドまたは融合ペプチド）；Ｈ６２５、ＳＰＩＯＮｓ－ＰＥＧ－ＣＰＰ、ＮＰのような膜向性ＣＰＰ（疎水性と両親媒性の性質を同時に示し、大きな芳香族残基と小さな残基の両方を含む）、ＳＧ３、ＰＦＶＹＬＩ、ｐｅｐ－７、線維芽細胞増殖因子のような疎水性ＣＰＰ（非極性のモチーフや残基のみを含む）を含む。

【0109】

タンパク質およびペプチドナノ粒子は、例えば、約１ｎｍから約１０００ｎｍ、約１０ｎｍから約５００ｎｍ、約５０ｎｍから約２００ｎｍ、約１００ｎｍから約１５０ｎｍ、または約１５０ｎｍ以下の範囲の異なるサイズで提供することができる。
Ｉ．Ｅ．ペプチドケージ・ナノ粒子

【0110】

ペプチドケージベースの送達系は、制約された内部環境を形成するケージ状の構造に組み立てることができるタンパク質質材料から製造することができる。ペプチドケージは、自己組織化してタンパク質ケージを形成するタンパク質性シェル（例えば、溶媒に自然にアクセスできるか、溶媒濃度、ｐＨ、平衡比を変化させることによってそうすることができる内部空洞を有する構造）を含むことができる。タンパク質ケージのモノマーは、天然に存在するものでも、アミノ酸置換、挿入、欠失（断片など）を含む変異体でもよい。

【0111】

さまざまな種類のタンパク質の「殻（ｓｈｅｌｌｓ）」を組み立て、さまざまな種類の材料を装填することができる。タンパク質ケージは、ウイルス性コートタンパク質（例えば、ササゲ葉緑素斑点病ウイルスタンパク質コートから）、ならびに非ウイルス性タンパク質（例えば、米国特許第６，１８０，３８９号および同第６，９８４，３８６号、米国特許出願公開第２００４００２８６９４号、および米国特許出願公開第２００９００３５３８９号、これらの各明細書中の記載は参照により本明細書に組み込まれる）を用いて作製され得る。

【0112】

非ウイルス性タンパク質由来のタンパク質ケージの例としては、真核生物または原核生物由来のフェリチンやアポフェリチン、例えば１２および２４サブユニットフェリチン；および熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）、例えば内部コア空間を形成する２４サブユニット熱ショックタンパク質のクラス、Ｍｅｔｈａｎｏｃｏｃｃｕｓ ｊａｎｎａｓｃｈｉｉの小型ＨＳＰ、大腸菌の１２量体Ｄｓｐ ＨＳＰ：およびＭｒｇＡタンパク質が挙げられる。

【0113】

特定の実施形態では、タンパク質ケージは、約１ｎｍから約１０００ｎｍ、約１０ｎｍから約５００ｎｍ、約５０ｎｍから約２００ｎｍ、約１００ｎｍから約１５０ｎｍ、または約１５０ｎｍ以下の範囲など、異なるコアサイズを有する。
Ｉ．Ｆ．エクソソーム

【0114】

エクソソームとは小さな生体膜小胞のことで、低分子、ペプチド、タンパク質、核酸など、さまざまなカーゴを運搬するために利用されている。エクソソームの大きさは一般に約３０ｎｍから１００ｎｍで、細胞に取り込まれ、カーゴを運搬することができる。カーゴはエクソソーム表面構造と結合していることもあれば、エクソソーム二重膜内に封入されていることもある。

【0115】

エクソソームには様々な修飾を加えることができ、カーゴ送達や細胞標的化を容易にする。カーゴの運搬を容易にするための修飾には、タンパク質の足場やポリマーのようなカーゴと会合するための構造が含まれる。細胞標的化のための修飾には、標的化リガンドと表面電荷の修飾が含まれる。異なるカーゴの送達のためのエクソソームの産生、修飾、および使用について記述した刊行物には、Ｍｕｎａｇａｌａら、Ｃａｎｃｅｒ Ｌｅｔｔｅｒｓ ２０２１、５０５、５８；Ｆｕら、２０２０ ＮａｎｏＩｍｐａｃｔ ２０、１００２６１；およびＤｏｏｌｅｙら、２０２１ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ ２９（５）、１７２９（これらの各々は、参照により本明細書に援用される）が含まれる。
ＩＩ．細胞質ＤＮＡ感知経路阻害剤

【0116】

細胞質ＤＮＡ感知経路は、外来ＤＮＡを感知し、炎症性サイトカイン、炎症性ケモカイン、Ｉ型インターフェロンの産生をもたらす免疫反応を引き起こす。（例えば、ｈｙｐｅｒｔｅｘｔ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｐｒｏｔｏｃｏｌ：／／ｗｗｗ．ｇｅｎｏｍｅ．ｊｐ／ｄｂｇｅｔ－ｂｉｎ／ｗｗｗ＿ｂｇｅｔ？ｐａｔｈｗａｙ＋ｈｓａ０４６２３、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。ＤＮＡによって引き起こされる免疫反応を軽減するために、細胞質ＤＮＡ感知経路阻害剤を提供することができる。異なる実施形態では、ｃＧＡＳ－ＳＴＩＮＧおよび／またはインフラマソーム経路阻害剤が採用される。１つ以上の標的を阻害する特定の阻害剤は、各標的またはいずれかの標的の阻害剤として提供することができる。

【0117】

様々な種類の化合物が、細胞質ＤＮＡ感知経路に関与するタンパク質の生産や活性を阻害することができ、阻害剤として使用することができる。特定の実施形態において、細胞質ＤＮＡ感知経路阻害剤は、低分子、抗体、ペプチド、核酸、または分解剤（プロタックまたは分解剤など）の標的タンパク質である。
ＩＩ．Ａ． ｃＧＡＳ－ＳＴＩＮＧ経路阻害剤

【0118】

ｃＧＡＳ－ＳＴＩＮＧ経路阻害剤は、ｃＧＡＳ、ＳＴＩＮＧ、ＴＢＫ１などのｃＧＡＳ－ＳＴＩＮＧ経路タンパク質に直接作用するか、あるいはｃＧＡＳ－ＳＴＩＮＧ経路に影響を与える薬剤に作用しうる。ｃＧＡＳ － ＳＴＩＮＧ経路阻害剤設計を記載する参考文献、および阻害剤の例には、Ｄｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ａｃｔａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ Ｓｉｎｉｃａ Ｂ ２０２０，１０（１２），２２７２（“Ｄｉｎｇ”），Ｆｕ ｅｔ ａｌ．，ｉＳｃｉｅｎｃｅ ２０２０，２３，１０１０２６，Ｋｏｎｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｒｅｐ． ２０１８，２３（２４），１１１２，Ｕ．Ｓ． Ｐａｔｅｎｔ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ． ２０２００２９１００１，およびＨａａｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２０１８，５５９，２６９－２７３（これらの各々は、参照により本明細書に組み込まれる）が含まれる。

【0119】

ｃＧＡＳ－ＳＴＩＮＧ経路阻害剤を含む本明細書に記載の様々な化合物は、薬学的に許容可能な塩として提供することができる。「薬学的に許容可能な塩」とは、投与に適した塩を指す。化合物にもよるが、薬学的に許容可能な塩には酸付加塩と塩基性塩がある。薬学的に許容可能な酸付加塩には以下のものが含まれる：塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硝酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、イソニコチン酸塩、炭酸塩、重炭酸塩、酢酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、プロピオン酸塩、酪酸塩、ピルビン酸塩、シュウ酸塩、マロン酸塩、パントテン酸塩、重酒石酸塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩 ゲンチシン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルカロン酸塩、サッカラート塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩および パモ酸塩（すなわち、１，１′－メチレン－ビス－（２－ヒドロキシ－３－ナフトエート））。適切な塩基塩としては、アルミニウム塩、カルシウム塩、リチウム塩、マグネシウム塩、カリウム塩、ナトリウム塩、亜鉛塩、ビスマス塩、ジエタノールアミン塩などが挙げられる。さらに、様々なアミノ酸を薬学的に許容可能な塩として採用することができる。

【0120】

特定の実施形態において、ＳＴＩＮＧ阻害剤は、１－オキソ－１，２，３，４－テトラヒドロイソキノリン－４－イルカルボン酸（４４）、９－アミノ－６－クロロ－２－メトキシアクリジン（５９）、ヒドロクロロキン（６０）から選択される：

【化6】

【化7】

【化8】

【0121】

ＧＳＫ６９０６９３は、ＡＭＰ活性化プロテインキナーゼ（ＡＭＰＫ）／ＡＫＴ阻害剤であり、ｃＧＡＳ－ＳＴＩＮＧ経路に影響を与える阻害剤の一例である。ＡＭＰＫ／ＡＫＴ活性は、ＵＬＫ１のリン酸化を低下させることにより、環状ｃＧＡＳ－ＳＴＩＮＧ経路に影響を与え、これによりＵＬＫ１はＳＴＩＮＧをリン酸化し、ＳＴＩＮＧ活性を阻害する。ＧＳＫ６９０６９３を含むＡＭＰＫ阻害剤の例は、Ｋｏｎｎｏら，Ｃｅｌｌ Ｒｅｐ． ２０１８，２３（４），１１１２に提供されている。

【0122】

追加のＳＴＩＮＧ阻害剤、ＳＴＩＮＧ阻害剤の足場およびモチーフ、ならびに設計に関する考察を提供する追加の参考文献には、Ｄｅｃｏｕｔら、Ｎａｔ．Ｒｅｖ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０２１，Ｓｅｐ；２１（９）：５４８－５６９；Ｄｕｂｅｎｓｋｙら、米国特許第１０，１８９，８７３号；Ｋａｔｉｂａｈら、米国特許出願公開第２０１８０３６９２６８号；Ｓｅｉｄｅｌら、国際特許公開第ＷＯ２０２０／１５０４３９号；Ｒｏｕｓｈら、米国特許出願公開第２０２００１７２５３４号；Ｒｏｕｓｈら、米国特許出願公開第２０２１２３６４６６号；Ｇｌｉｃｋら、国際特許公開第ＷＯ２０２２／１４０４１０号；Ｈｏｎｇら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．、２０２１、Ｊｕｎ １５；１１８（２４）；およびＨｏｎｇら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ、２０２２、１４（２）、ｎｊａｃ００５がある；これらの各出版物は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0123】

異なる実施形態において、阻害剤は、表１に提供されている通りであるか、またはその薬学的に許容可能な塩である。

【0124】

【表1】

【0125】

異なる実施形態において、ｃＧＡＳ阻害剤は、以下のいずれかである：塩酸キナクリン（５５）、臭化エチジウム（５６）、アクチノマイシン（５７）、キナクリン（５８）、９－アミノ－６－クロロ－２－メトキシアクリジン（５９）、ヒドロキシクロロキン（６０）、

【化9】

【化10】

【0126】

Ｄｉｎｇは、化合物５５、５６および５７を、ＤＮＡをインターカレートする間接的なｃＧＡＳ阻害剤として記載し、化合物５８から６４を、２´，３´－ｃＧＡＭＰ合成を阻害する間接的なｃＧＡＳ阻害剤として記載している。

【0127】

ｃＧＡＳ阻害剤、ｃＧＡＳ阻害剤の足場とモチーフ、および設計に関する考察を提供するその他の文献は以下を含む：Ｄｅｃｏｕｔ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ． Ｒｅｖ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０２１ Ｓｅｐ；２１（９）：５４８－５６９：Ｖｉｎｃｅｎｔ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ． Ｃｏｍｍｕｎ．，２０１７，８：７５０；Ｌａｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ． Ｃｏｍｍｕｎ．，２０１９，Ｍａｙ ２１；１０（１）：２２６１；Ｏｂｉｏｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｕ．Ｓ． Ｐａｔｅｎｔ Ｎｏ． １０，７３８，０５６；Ｈｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２０２２，１４（２），ｎｊａｃ００５；Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ． Ｃｈｅｍ． Ｉｎｆ．Ｍｏｄｅｌ，２０２０，６０，３２６５－３２７６；ａｎｄ Ｐａｄｉｌｌａ－Ｓａｌｉｎａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ． Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２０２０，８５，１５７９－１６００；これらの各出版物は、参照によりその全体が本明細書に援用される。

【0128】

異なる実施形態において、阻害剤は、表２に提供される通りであるか、またはその薬学的塩である。

【0129】

【表2】

【0130】

異なる実施形態では、ＴＢＫ１阻害剤はドビチニブのいずれかである、

【化11】

【0131】

その他のＴＢＫ１阻害剤、ＴＢＫ１阻害剤の足場とモチーフ、および設計に関する考察を提供する参考文献は以下の通りである： Ｔｈｏｍｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｏｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｐａｔｅｎｔｓ，２０２１，３１：９ ７８５－７９４；Ｃｈｅｋｌｅｒら、米国出願特許公開第２０２１０２１４３３９号；ＮｅｗｔｏｎおよびＳｔｅｗａｒｔ、米国特許第１１，０５８，６８６号；Ｋａｒｒａら、国際特許公開第ＷＯ２０１９／０７９３７３Ａ１号；Ｂｉｇｉら、米国特許第９，９９４，５４７号；Ｓｃｈｕｌｚｅら、米国特許第１０，８９４，７８４号；Ｈａｓｓａｎ ａｎｄ Ｙａｎ，Ｐａｒｍａｃｏｌ．Ｒｅｓ．，２０１６，１１１：３３６－３４２；Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ． Ｃａｎｃｅｒ ２０１４，１３４：１９７２－１９８０；Ａｌａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，２０２２，２０２７：１０２２－１０３７；Ｐｅｒｒｉｏｒら、米国特許第８，９６２，６０９号；およびＤｕら、米国特許第１０，３１６，０４９号；なお、これらの文献はすべて記載が、本明細書において参照により援用される。

【0132】

特定の実施形態において、阻害剤は、表３に提供されている通りであるか、またはその薬学的塩である。

【0133】

【表3】

【0134】

ＩＩ．Ｂ．インフラマソーム経路阻害剤

【0135】

インフラマソーム経路阻害剤は、Ａｂｓｅｎｔ ｉｎ Ｍｅｌａｎｏｍａ－２（ＡＩＭ２）タンパク質のようなインフラマソーム経路タンパク質に直接作用するか、インフラマソーム経路に影響を与える薬剤に作用することができる。哺乳類のテロメアＤＮＡによく見られるＴＴＡＧＧＧリピートのような特定のＤＮＡ配列は、ＡＩＭ２と結合して自然免疫の活性化を抑制する。（Ｋａｍｉｎｓｋｉ ｅｔ ａｌ，Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２０１３，１９１，３８７６）。このような配列は、ｃＧＡＳやＳＴＩＮＧのような他の生来の反応も阻害することができる。ＡＩＭ２阻害剤の例としては、ＴＴＡＧＧＧモチーフの４つの反復を含む合成オリゴヌクレオチドであるＡ１５１があり、以下のヌクレオチド配列を有し、塩基はホスホロチオエート結合で結合している：５′－ＴＴＡＧＧＧＴＴＡＧＧＧＴＴＡＧＧＧＴＴＡＧＧＧ－３´（配列番号１）；および５′－ＴＴＡＧＧＧＴＴＡＧＧＧＴＴＡＧＧＧＴＴＡＧＧＧ－３´（配列番号２）、ホスホジエステル結合を含む。追加のオリゴヌクレオチド配列には、他のタイプの修飾配列番号２、例えば、同じヌクレオチド配列を有するが、異なる修飾されたバックボーンを有するものなどである。このようなヌクレオチド配列は、ｃＧＡＳおよびＳＴＩＮＧ阻害剤としても使用できる。ｃＧＡＳおよびＳＴＩＮＧ阻害剤として、ＤＮＡまたはＤＮＡベクターに組み込むことができる。
ＩＩＩ．ＤＮＡベクター

【0136】

ＤＮＡベクターは、導入遺伝子と、導入遺伝子からのＲＮＡ発現またはプロセッシングに影響を及ぼす１つ以上の調節エレメントを含む。生成されたＲＮＡは、例えば、機能的であったり、特定のタンパク質をコードしていたりする。調節エレメントには、例えば、機能性ＲＮＡの転写、導入遺伝子がコードするタンパク質の産生、タンパク質のプロセシングを調節する様々なエレメントが含まれる。存在しうる調節エレメントには、エンハンサー配列、イントロン、転写後調節エレメント、ポリアデニル化および終結シグナル配列、オンオフスイッチ、細胞特異的調節因子、および内部リボソーム進入部位が含まれる。ＤＮＡベクターによっては、調節エレメントに加えて、末端反転反復、プラスミドの複製や選択を促進するエレメント、タンパク質の分泌を促進する配列などのエレメントを含み得る。同じタイプであっても異なっていてもよい複数の導入遺伝子；および／または同じタイプであっても異なっていてもよい複数のエレメントが存在してもよい。

【0137】

ＤＮＡベクターはさらに、１つ以上の調節可能エレメントを含んでいてもよい。このようなエレメントは、遺伝子発現のオン／オフスイッチとなる。制御可能エレメントには、組織特異的エレメントや薬物応答性転写（プロモーター／エンハンサー）エレメントが含まれる。制御可能エレメントの例としては、テトラサイクリン誘導性エレメント、薬剤投与可能なリボザイム、薬剤投与可能なトーホールド（ｔｏｅ－ｈｏｌｄ）スイッチ、マイクロＲＮＡ応答性遺伝子（例えば、ｍＲＮＡ安定性またはタンパク質翻訳）、モルホリノ応答性ｍＲＮＡ（例えば、スプライシングまたはｍＲＮＡ安定性）、サプレッサーｔＲＮＡ制御遺伝子、代替スプライシングにより制御される遺伝子、およびｄｒｕｇｇａｂｌｅ ｄｅｇｒｏｎｓが挙げられる。

【0138】

一実施形態では、ＤＮＡベクターは遺伝子治療に用いられる。遺伝子治療には、機能喪失型遺伝子欠損と機能獲得型遺伝子欠損の両方が含まれる。遺伝子異常に関する「機能喪失型」という用語は、その遺伝子によってコードされるタンパク質が、通常野生型タンパク質に付随する機能の一部または全部を喪失する遺伝子変異を指す。遺伝的欠陥に関する「機能獲得型」という用語は、遺伝子に変異が生じ、その遺伝子によってコードされるタンパク質が、野生型タンパク質とは通常関連しない機能を獲得し、疾患または障害を引き起こす、あるいはその一因となることを指す。機能獲得型変異は、遺伝子中のヌクレオチドまたはヌクレオチドの欠失、付加、置換であり、コードされるタンパク質の機能に変化をもたらす。特定の実施形態では、機能獲得型変異は変異型タンパク質の機能を変化させるか、他のタンパク質との相互作用を引き起こす。特定の実施形態では、機能獲得型変異は、例えば、変化した変異型タンパク質と正常な野生型タンパク質との相互作用によって、正常な野生型タンパク質の減少または除去を引き起こす。

【0139】

ミニサークル、ナノプラスミド、オープン型直鎖二重鎖ＤＮＡ、閉鎖型直鎖二重鎖ＤＮＡ（ＣＥＬｉＤ／ｃｅＤＮＡ／ドギーボーンＤＮＡ）、一本鎖環状ＤＮＡ、一本鎖直鎖ＤＮＡなど、さまざまなタイプのＤＮＡベクターを採用することができる。

【0140】

一実施形態では、ＤＮＡベクターは、対象として選択された特定の哺乳動物、遺伝子発現を増強するモチーフ、および哺乳動物に免疫刺激を誘導する配列とモチーフをバランスよく含んでいる。特定の哺乳類における遺伝子発現は、例えばコドンの最適化、ＣｐＧの減少、ＲＮＡの二次構造や不安定モチーフの 減少によって高めることができる。減少させる免疫刺激モチーフの例としては、ＣｐＧ、ピリミジンに富んだ配列、回文配列などがある。

【0141】

異なる実施形態において、導入遺伝子は、ウイルス抗原、細菌抗原、治療用タンパク質、ショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ＲＮＡ_ｉ、リボザイム、アンチセンスＲＮＡ、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９コンストラクト、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、または転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）をコードする。
ＩＩＩ．Ａ．プロモーター

【0142】

プロモーターは一般に、発現されるポリヌクレオチド配列の５´に位置し、ポリヌクレオチド配列と作動可能に連結している。例えば、プロモーターがポリヌクレオチド配列と作動可能に連結しているのは、それが配列の発現に影響を与えることができる場合である（例えば、その配列はプロモーターの転写制御下にある）。プロモーターはＲＮＡポリメラーゼと必要な転写因子を結合し、ポリヌクレオチド配列から転写を開始 する。プロモーター配列は、転写の方向とどのＤＮＡ鎖が転写されるかを規定する。

【0143】

コーディング配列は、センスまたはアンチセンスの方向で制御配列と作動可能に連結されていてもよい。特定の実施形態において、プロモーターは異種プロモーターである。「異種プロモーター」という用語は、自然界で所定のコード配列と作動的に連結していることが見出されていないプロモーターを指す。

【0144】

プロモーター配列は、近位およびより遠位の上流エレメントを提供することができる。一実施形態では、プロモーターはエンハンサーエレメントを含む。「エンハンサー」とは、プロモーター活性を刺激することができるヌクレオチド配列であり、プロモーターの生来のエレメントであってもよく、プロモーターのレベルや組織特異性を高めるために挿入される異種エレメントであってもよい。

【0145】

プロモーターは、異なる供給源に由来することも、異なるエレメントから生成されることもある。例えば、プロモーターは、ネイティブ遺伝子に由来するもの、天然に存在する異なるプロモーターに由来する異なるエレメントから構成されるもの、または合成ヌクレオチド配列から構成されるものがある。

【0146】

異なるプロモーターは、異なる組織や細胞型、あるいは発生の異なる段階、あるいは異なる環境条件、あるいは薬物や転写補因子の有無に応答して、ヌクレオチド配列の発現を指示するように選択され得る。ユビキタス、細胞型特異的、組織特異的、発生段階特異的、条件付きプロモーターは当技術分野でよく知られている。プロモーターの例は、ホスホグリセリン酸キナーゼ（ＰＫＧ）プロモーター、ＣＡＧ（ＣＭＶエンハンサー、ニワトリβアクチンプロモーター（ＣＢＡ）、ウサギβグロビンイントロンの複合体）、ＮＳＥ（神経特異的エノラーゼ）、ＮｅｕＮプロモーター ＳＶ４０初期プロモーター、マウス乳腺腫瘍ウイルスＬＴＲプロモーター、アデノウイルス主要後期プロモーター（Ａｄ ＭＬＰ）、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）プロモーター、ＣＭＶ即時型初期プロモーター領域（ＣＭＶＩＥ）のようなサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ＳＦＦＶプロモーター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）プロモーター、合成プロモーターおよびハイブリッドプロモーター その他のプロモーターは、ヒト由来のものでも、マウスを含む他の種由来のものでもよい。一般的なプロモーターは以下の通りである：ヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）即時型初期遺伝子プロモーター、ラウス肉腫ウイルスのロングターミナルリピート、［β］－アクチン、ラットインスリンプロモーター、ヒトα１アンチトリプシン（ｈＡＡＴ）プロモーター、トランスサイレチンプロモーター、ＴＢＧプロモーターと他の肝臓特異的プロモーター、デスミンプロモーターと同様の筋肉特異的プロモーター、ＥＦ１αプロモーター、ＣＡＧプロモーターおよび他の構成的プロモーター、複数組織特異性を持つハイブリッドプロモーター、シナプシンのようなニューロンに特異的なプロモーター、およびグリセルアルデヒド－３－リン酸デヒドロゲナーゼプロモーター。さらに、マウスメタロチオネイン遺伝子のような非ウイルス遺伝子由来の配列も採用できる。様々なプロモーター配列が市販されている、例えば、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ（カリフォルニア州サンディエゴ）を参照のこと。
ＩＩＩ．Ｂ．追加要素

【0147】

存在し得る付加的なエレメントとしては、イントロン、エンハンサー、ポリアデニル化および終結シグナル、翻訳後調節エレメント、５´および３´インバーテッドリピート（ＩＴＲ）、オンオフスイッチ（例えば、レオスタット）、細胞特異的調節因子（例えば、ｍｉｃｏＲＮＡ結合エレメント）、内部リボソーム進入部位、またはコードされた配列の発現もしくは安定性に影響を及ぼす他のエレメント；またはタンパク質プロセッシング（例えば、分泌シグナル配列）が挙げられる。異なるエレメントの配置の例としては、５´から３´のプロモーター／エンハンサー、導入遺伝子、転写後調節エレメント、ポリアデニル化および終結シグナルがある。

【0148】

ポリアデニル化配列はｍＲＮＡの核内輸送、翻訳、安定性に重要である。ポリアデニル化配列の例としては、ＨＧＨ、ＳＶ４０ ｌａｔｅ、ｂＧＨｐＡ、合成ポリＡ（ＳＰＡ）、ｂＧＨ、変異ＢＧＨ、ＨＳＶ ＴＫなどがある。（Ｗａｎｇ ａｎｄ Ｇｕｏ ２０２０，１０４，５６７３；および Ｐｏｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２０１５，１９（１０２），４９．）．

【0149】

ウイルス転写後調節エレメントは、イントロンレスウイルスＲＮＡの核外輸送に関与する シス作用エレメントである。例えば、Ｂ型肝炎ウイルスＰＲＥやウッドチャック・レスポンス・エレメント（ＷＲＥ）などである。（Ｐｏｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２０１５，１９（１０２），４９）。

【0150】

プロモーターと導入遺伝子の間にイントロンがあると、遺伝子発現とＲＮＡプロセシングが促進される。（Ｐｏｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２０１５，１９（１０２），４９）。イントロンの例としては、ＭＶＭ、ｈＣＭＶイントロン、ｈＥＦ１プロモーターイントロン、キメライントロン、修飾ＳＶ４０イントロン、βグロビンイントロンなどがある。

【0151】

所望により、コードされたポリペプチドは、ポリペプチドの細胞外分泌を促進する分泌シグナル配列とともに発現させることができる。「分泌シグナル配列」という用語は、分泌シグナル配列を欠くポリペプチドで見られる分泌レベルと比較して、作動的に連結したポリペプチドの細胞からの分泌を増強するように機能するアミノ酸配列を指す。ネイティブポリペプチドと比較して分泌レベルが向上していれば、ポリペプチドの本質的にすべて、あるいは大部分が分泌される必要はない。異なる実施形態では、ポリペプチドの少なくとも９５％、９７％、９８％、または９９％が分泌される。一般に、分泌シグナル配列は小胞体内で切断され、分泌前に切断されることもある。細胞からのポリペプチドの分泌が促進され、ポリペプチドが機能する限り、分泌シグナル配列が切断される必要はない。

【0152】

分泌シグナル配列は、分泌ポリペプチドの分泌シグナルから（すなわち、前駆体から）全体的または部分的に誘導することができ、および／または全体的または部分的に合成することができる。分泌シグナル配列の長さは重要ではなく、例えば約１０－１５から５０－６０アミノ酸の長さにすることができる。分泌ポリペプチドからの既知の分泌シグナルは、結果として生じる分泌シグナル配列が、作動的に連結したポリペプチドの分泌を増強するように機能する限り、（例えば、アミノ酸の置換、欠失、切断、または挿入によって）変更または修飾することができる。分泌シグナル配列は、天然に存在する分泌シグナル配列またはその改変体を含むか、本質的にそれらからなるか、またはそれらからなることができる。合成または人工の分泌シグナルペプチドの例は、Ｂａｒａｓｈら，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．２９４，８３５（２００２）に記載されている。
ＩＩＩ．Ｄ．治療用タンパク質

【0153】

ＤＮＡベクターは、所望の活性を有するタンパク質を提供するために発現させることができる様々な異なる導入遺伝子を送達することができる。導入遺伝子の例としては、遺伝子に欠陥のある対象に健康な遺伝子のコピーを提供するもの、あるいは疾患または障害の治療に役立つ新しい遺伝子、有益な効果をもたらすタンパク質をコードする新しい遺伝子などがある。

【0154】

異なる実施形態では、導入遺伝子は、以下のものをコードする：ポンペ病の治療のためのＧＡＡ（酸性α－グルコシダーゼ）；後期小児神経性セロイドリポフスチン症２型（ＣＬＮ２）の治療のためのＴＰＰ１（トリペプチジルペプチダーゼ－１）；ウィルソン病の治療のためのＡＴＰ７Ｂ（銅輸送性ＡＴＰａｓｅ２）；ファブリー病の治療のためのαガラクトシダーゼ；シトルリン血症１型の治療のためのＡＳＳ１（アルギノコハク酸合成酵素）；１型ゴーシェ病の治療のためのβ－グルコセレブロシダーゼ；テイ・サックス病の治療のためのβ－ヘキソサミニダーゼＡ；遺伝性血管性浮腫（ＨＡＥ）（Ｃ１阻害剤欠乏症Ｉ型およびＩＩ型としても知られている）の治療のためのＳＥＲＰＩＮＧ１（Ｃ１プロテアーゼ阻害剤またはＣ１エステラーゼ阻害剤）；またはグリコーゲン貯蔵病Ｉ型（ＧＳＤＩ）の治療のためのグルコース－６－ホスファターゼ。

【0155】

異なる実施形態では、導入遺伝子は以下のものをコードする：インスリン、グルカゴン、成長ホルモン（ＧＨ）、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、成長ホルモン放出因子（ＧＲＦ）、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、黄体形成ホルモン（ＬＨ）、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、アンジオポエチン、アンジオスタチン、顆粒球コロニー刺激因子（ＧＣＳＦ）、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、結合組織増殖因子（ＣＴＧＦ）、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）、酸性線維芽細胞増殖因子（ａＦＧＦ）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、トランスフォーミング増殖因子α（ＴＧＦα）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、インスリン増殖因子ＩまたはＩＩ（ＩＧＦ－ＩまたはＩＧＦ－ＩＩ）、ＴＧＦβ、アクチビン、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、神経成長因子（ＮＧＦ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、ニューロトロフィンＮＴ－３またはＮＴ４／５、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）、グリア細胞由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）、ノイルトリン、アグリン ネトリン－１またはネトリン－２、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、エフリン、ノギン、ソニックヘッジホッグ、チロシン水酸化酵素などである。

【0156】

異なる実施形態では、導入遺伝子は以下をコードする：トロンボポエチン（ＴＰＯ）、インターロイキン（ＩＬ－１～ＩＬ－３６）、単球走化性タンパク質、白血病抑制因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、Ｆａｓリガンド、腫瘍壊死因子αまたはβ、インターフェロンα、β、γ、幹細胞因子、ｆｌｋ－２／ｆｌｔ３リガンド、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤまたはＩｇＥ、キメラ免疫グロブリン、抗体、ヒト化抗体、単鎖抗体、Ｔ細胞受容体、キメラＴ細胞受容体、単鎖Ｔ細胞受容体、クラスＩまたはクラスＩＩのＭＨＣ分子。抗体や免疫グロブリンは、例えば、癌細胞やその他の疾患または障害の原因となる細胞を標的として提供することができる。

【0157】

異なる実施形態では、導入遺伝子は以下のものをコードする：ＣＦＴＲ（嚢胞性線維症膜貫通調節因子タンパク質）、血液凝固（凝血）因子（第ＸＩＩＩ因子、第ＩＸ因子（ＦＩＸ）、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）、第Ｘ因子、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩａ因子、またはプロテインＣ）、血液凝固因子の機能獲得、エリスロポエチン、ＬＤＬ受容体、リポタンパク質リパーゼ、オルニチン・トランスカルバミラーゼ、β－グロビン、α－グロビン、スペクトリン、α－アンチトリプシン、アデノシンデアミナーゼ（ＡＤＡ）、金属トランスポーター（ＡＴＰ７ＡまたはＡＴＰ７）、スルファミダーゼ、ライソゾーム貯蔵病（ＡＲＳＡ）に関与する酵素、ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ、β－２５グルコセレブロシダーゼ、スフィンゴミエリナーゼ、リソソーム・ヘキソサミニダーゼ、分岐鎖ケト酸デヒドロゲナーゼ、ホルモン、増殖因子、インスリン様増殖因子１または２、血小板由来増殖因子、上皮増殖因子、神経成長因子、神経栄養因子－３および－４、脳由来神経栄養因子、グリア由来増殖因子、トランスフォーミング増殖因子αとβ、サイトカイン、α－インターフェロン、β－インターフェロン、インターフェロン－γ、インターロイキン－２、インターロイキン－４、インターロイキン１２、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、リンパ毒素、自殺遺伝子産物、単純ヘルペスウイルスのチミジンキナーゼ、シトシンデアミナーゼ、ジフテリア毒素、チトクロームＰ４５０、デオキシシチジンキナーゼ、腫瘍壊死因子、薬剤耐性タンパク質、腫瘍抑制タンパク質（例えば、ｐ５３、Ｒｂ、Ｗｔ－１、ＮＦ１、Ｖｏｎ Ｈｉｐｐｅｌ－Ｌｉｎｄａｕ（ＶＨＬ））、腺腫性大腸ポリポーシス（ＡＰＣ））、免疫調節作用を持つペプチド、寛容原性または免疫原性のペプチドまたはタンパク質ＴｒｅｇｉｔｏｐｅまたはｈＣＤＲ１、インスリン、グルコキナーゼ、グアニル酸シクラーゼ２Ｄ（ＬＣＡ－ＧＵＣＹ２Ｄ）、網膜色素上皮特異的６５ｋＤａタンパク質（ＲＰＥ６５）、Ｒａｂエスコートタンパク質１（コロイデレミア）、ＬＣＡ５（ＬＣＡ－レバシリン）、オルニチンケト酸アミノトランスフェラーゼ（回旋筋萎縮症）、レチノシシン１（Ｘ連鎖性網膜弛緩症）、Ｘ連鎖性網膜色素変性症ＧＴＰａｓｅ（ＸＬＲＰ）、ＭＥＲ癌原遺伝子チロシンキナーゼ（ＭＥＲＴＫ）（常染色体劣性遺伝（ＡＲ）型網膜色素変性症（ＲＰ））、ＡＢＣＡ４（スターガルト）、ＡＣＨＭ ２、３、４（色覚異常）、抗血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）剤ポリペプチド（ベバシズマブ、ブロルシズマブ、ラニビズマブ、アフリベルセプトなど）、ＤＦＮＢ１（コネキシン２６難聴）、ＵＳＨ１Ｃ（アッシャー症候群１Ｃ）、ＰＫＤ－１またはＰＫＤ－２（多発性嚢胞腎）、ＴＰＰ１（トリペプチジルペプチダーゼ－１）、スルファターゼ、Ｎ－アセチルグルコサミン－１－リン酸転移酵素、カテプシンＡ、ＧＭ２－ＡＰ、ＮＰＣ１、ＶＰＣ２、スフィンゴ脂質活性化タンパク質、またはゲノム編集の修復テンプレートとして使用される１つ以上のドナー配列。

【0158】

異なる実施形態では、導入遺伝子は以下のものをコードする：貧血治療のためのエリスロポエチン（ＥＰＯ）；さまざまな免疫疾患、ウイルス感染症、癌の治療のためのインターフェロン－α、インターフェロン－β、インターフェロン－γ；様々な炎症性疾患または免疫不全の治療のための、ＩＬ－１からＩＬ－３６のいずれか１つを含むインターロイキン（ＩＬ）、および対応するレセプター；免疫疾患の治療のためのケモカイン（Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフ）リガンド５（ＣＸＣＬ５）を含むケモカイン；クローン病などの免疫疾患の治療に用いられる顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）；様々な炎症性疾患の治療のための顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）；様々な炎症性疾患の治療のためのマクロファージコロニー刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ）；上皮組織損傷の治療のためのケラチノサイト成長因子（ＫＧＦ）；再発性流産、ＨＩＶ関連合併症、インスリン抵抗性の治療のための単球走化性タンパク質－１（ＭＣＰ－１）などのケモカイン；様々な免疫疾患の治療のための腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）および受容体；肺気腫または慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の治療のためのα１－アンチトリプシン；ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）の治療のためのα－Ｌ－イドロニダーゼ；オルニチントランスカルバモイル酵素（ＯＴＣ）欠乏症の治療のためのＯＴＣ；フェニルケトン尿症（ＰＫＵ）の治療のためのフェニルアラニン水酸化酵素（ＰＡＨ）またはフェニルアラニンアンモニア分解酵素（ＰＡＬ）；リポタンパク質リパーゼ欠乏症の治療のためのリポタンパク質リパーゼ；アポリポタンパク質（Ａｐｏ）Ａ－Ｉ欠乏症治療のためのアポリポタンパク質；家族性高コレステロール血症（ＦＨ）治療のための低比重リポタンパク質受容体（ＬＤＬ－Ｒ）；低アルブミン血症治療のためのアルブミン；レシチンコレステロールアシルトランスフェラーゼ（ＬＣＡＴ）；カルバモイル合成酵素Ｉ；アルギニノコハク酸合成酵素；アルギニノコハク酸リアーゼ；アルギナーゼ；フマリルアセト酢酸ヒドロラーゼ；ポルホビリノーゲン・デアミナーゼ；ホモシスチン尿症の治療のためのシスタチオニンβ－シンターゼ；分岐鎖ケト酸脱炭酸酵素；イソバレリル－ＣｏＡデヒドロゲナーゼ；プロピオニルＣｏＡカルボキシラーゼ；メチルマロニル－ＣｏＡミューターゼ；グルタリルＣｏＡデヒドロゲナーゼ；インスリン；ピルビン酸カルボキシラーゼ；肝ホスホリラーゼ；ホスホリラーゼ・キナーゼ グリシン脱炭酸酵素；Ｈタンパク質；Ｔタンパク質；嚢胞性線維症膜貫通調節因子（ＣＦＴＲ）；スターガルト病治療のためのＡＴＰ結合カセット、サブファミリーＡ（ＡＢＣ１）、メンバー４（ＡＢＣＡ４）；あるいはジストロフィン。

【0159】

さらなる実施形態において、導入遺伝子は、遺伝性血管性浮腫、ポンペ病、血友病Ａ、血友病Ｂ、ファブリー病、湿性黄斑変性症、レーベル遺伝性視神経症、およびシュタルガルト病からなる群より選択される疾患または障害を治療するためのタンパク質をコードする。
ＩＩＩ．Ｅ．阻害性核酸

【0160】

ＤＮＡベクターは、ショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ＲＮＡ_ｉ、リボザイム、およびアンチセンスＲＮＡなどの様々な異なる阻害性核酸をコードする様々な異なる導入遺伝子を提供することができる。異なる実施形態において、阻害性核酸は、以下からなる群より選択される遺伝子、遺伝子の転写産物、またはポリヌクレオチド反復疾患に関連する遺伝子の転写産物に結合する：ハンチンチン（ＨＴＴ）遺伝子、歯槽膿漏性萎縮症に関連する遺伝子（アトロフィン１、ＡＴＮ１）、棘突起筋萎縮症におけるＸ染色体上のアンドロゲン受容体、ヒトＡｔａｘｉｎ－１、－２、－３、－７、Ｃａｖ２．１ Ｐ／Ｑ電位依存性カルシウムチャネル（ＣＡＣＮＡ１Ａ）、ＴＡＴＡ結合タンパク質、アタキシン８反対鎖（ＡＴＸＮ８ＯＳ）、脊髄小脳性運動失調症（１型、２型、３型、６型、７型、８型、１２型１７）におけるセリン／スレオニン・タンパク質ホスファターゼ２Ａ ５５ｋＤａ調節サブユニットＢβアイソフォーム、脆弱Ｘ症候群におけるＦＭＲ１（脆弱Ｘ精神遅滞１）、脆弱Ｘ関連振戦／運動失調症候群におけるＦＭＲ１（脆弱Ｘ精神遅滞１）、脆弱ＸＥ精神遅滞におけるＦＭＲ２（脆弱Ｘ精神遅滞２）またはＡＦ４／ＦＭＲ２ファミリーメンバー２；筋強直性ジストロフィーにおけるミオトニン・プロテイン・キナーゼ（ＭＴ－ＰＫ）；フリードライヒ運動失調症におけるフラタキシン；筋萎縮性側索硬化症におけるスーパーオキシドジスムターゼ１（ＳＯＤ１）遺伝子の変異体；パーキンソン病やアルツハイマー病の発症に関与する遺伝子；アポリポタンパク質Ｂ（ＡＰＯＢ）とプロタンパク質転換酵素サブチリシン／ケキシン９型（ＰＣＳＫ９）、高コレステロール血症；ＨＩＶ感染症におけるＨＩＶ Ｔａｔ、ヒト免疫不全ウイルス転写活性化遺伝子；ＨＩＶ感染におけるＨＩＶ ＴＡＲ、ＨＩＶ ＴＡＲ、ヒト免疫不全ウイルスのトランスアクチベーター応答エレメント遺伝子；ＨＩＶ感染におけるＣ－Ｃケモカイン受容体（ＣＣＲ５）；ＲＳＶ感染におけるラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）ヌクレオカプシドタンパク質、Ｃ型肝炎ウイルス感染における肝臓特異的マイクロＲＮＡ（ｍｉＲ－１２２）；ｐ５３、急性腎障害または移植片機能遅延腎移植または腎障害急性腎不全；再発性または転移性の固形悪性腫瘍の進行に関与するプロテインキナーゼＮ３（ＰＫＮ３）；ＬＭＰ２、プロテアソームサブユニットβ型９（ＰＳＭＢ ９）としても知られるＬＭＰ２、転移性メラノーマ；プロテアソームサブユニットβ型８（ＰＳＭＢ ８）としても知られるＬＭＰ７、転移性メラノーマ；プロテアソームサブユニットβ型１０（ＰＳＭＢ １０）としても知られる ＭＥＣＬ１、転移性メラノーマ；固形腫瘍における血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）；固形腫瘍におけるキネシンスピンドルタンパク質、慢性骨髄性白血病におけるアポトーシス抑制因子Ｂ細胞ＣＬＬ／リンパ腫（ＢＣＬ－２）；固形腫瘍におけるリボヌクレオチド還元酵素Ｍ２（ＲＲＭ２）；固形腫瘍におけるフーリン；肝腫瘍におけるポロ様キナーゼ１（ＰＬＫ１）、Ｃ型肝炎感染におけるジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ１（ＤＧＡＴ１）、家族性腺腫性ポリポーシスにおけるβカテニン；β２アドレナリン受容体、緑内障；糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）または加齢性黄斑変性症におけるＤＮＡ損傷誘導性転写物４タンパク質としても知られるＲＴＰ８０１／Ｒｅｄｄ１；加齢性黄斑変性症または脈絡膜新生血管における血管内皮増殖因子受容体Ｉ（ＶＥＧＦＲ１）；非動脈炎性虚血性視神経症におけるカスパーゼ２；先天性爪肥厚症におけるケラチン６Ａ Ｎ１７Ｋ変異型タンパク質；インフルエンザ感染におけるＡ型インフルエンザウイルスゲノム／遺伝子配列；重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）感染におけるＳＡＲＳコロナウイルスゲノム／遺伝子配列；呼吸器合胞体ウイルス感染症における呼吸器合胞体ウイルスゲノム／遺伝子配列；エボラ出血熱感染におけるエボラフィロウイルスのゲノム／遺伝子配列；Ｂ型肝炎およびＣ型肝炎感染におけるＢ型肝炎ウイルスゲノム／遺伝子配列；ＨＳＶ感染における単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ゲノム／遺伝子配列；コクサッキーウイルスＢ３感染におけるコクサッキーウイルスＢ３ゲノム／遺伝子配列；原発性ジストニアにおけるトルシンＡ（ＴＯＲ１Ａ）様遺伝子の病因対立遺伝子のサイレンシング（対立遺伝子特異的サイレンシング）、移植における汎クラスＩおよびＨＬＡアレル特異性；および常染色体優性遺伝性網膜色素変性症（ａｄＲＰ）における変異体ロドプシン遺伝子（ＲＨＯ）。
ＩＩＩ．Ｆ 遺伝子編集

【0161】

ＤＮＡベクターは、ＺＦＮ、ＴＡＬＥＮ、ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９などの様々な異なる遺伝子編集核酸をコードする様々な異なる導入遺伝子を提供することができる。異なる実施形態において、遺伝子編集核酸は、対象のＤＮＡを編集して、セクションＩＩＩ．Ｄ．（上掲）で提供されるような治療用タンパク質を提供するか、またはセクションＩＩＩ．Ｅ．（上掲）で提供されるような遺伝子を破壊する。
ＩＶ．免疫細胞調節剤

【0162】

場合によっては、ＤＮＡベクターの投与は、例えばＤＮＡベクター成分、導入遺伝子産物が異物として認識されること、あるいはタンパク質を産生する編集遺伝子が異物とみなされることなどにより、望ましくない免疫反応を引き起こす可能性がある。このような場合、所望であれば、例えば免疫細胞調節剤や免疫抑制剤を用いて、宿主の免疫反応を低下させることができる。癌治療、ウイルス治療、細菌治療など、場合によっては特定の反応が有利に働くこともある。
ＩＶ．Ａ．貪食細胞減少剤

【0163】

「貪食細胞減少剤」とは、対象内の貪食細胞を減少もしくは破壊する薬剤、および／または１つ以上の貪食細胞の機能を阻害する薬剤を指す。貪食細胞は、本明細書では食細胞、貪食性免疫細胞、ファゴサイト細胞、またはファゴサイト免疫細胞とも呼ばれ、マクロファージ、単球、好中球、樹状細胞を含む。ランゲルハンス細胞は皮膚に存在する樹状細胞である。肥満細胞（マスト細胞）は肺や皮膚など多くの組織に存在し、貪食細胞としても働く。

【0164】

「単球および／またはマクロファージ減少剤」とは、対象中の単球および／またはマクロファージを枯渇または破壊し、および／または１つ以上の単球および／またはマクロファージの機能を阻害する薬剤を指す。単球および／またはマクロファージ減少剤は、単球および／またはマクロファージを標的とすることができる。マクロファージは分化した単球である単核貪食細胞である。異なる組織では、マクロファージは異なる名前で呼ばれる。組織特異的、または常在マクロファージの例としては、肝臓のクッパー細胞、腸の腸管マクロファージ、脳のミクログリア細胞、肺の肺胞マクロファージ、腎臓の常在マクロファージ、皮膚のマクロファージ、脾臓の赤肉マクロファージ、骨の破骨細胞などがある。単球および／またはマクロファージ減少剤の例としては、貪食性免疫細胞マーカーを標的とする薬剤、例えば、抗ＣＤ１１５抗体やＣＤ１１５低分子阻害剤などのＣＤ１１５阻害剤；抗Ｆ４／８０抗体やＦ４／８０低分子阻害剤などのＦ４／８０阻害剤；抗ＣＤ６８抗体やＣＤ６８低分子阻害剤などのＣＤ６８阻害剤；抗ＣＤ１１ｂ抗体やＣＤ１１ｂ低分子阻害剤などのＣＤ１１ｂ阻害剤；化学療法剤トラベクテジン；イントラリピッド（ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄｓ）；空のリポソーム；およびクロドロン酸を含むビスフォスフォネート系薬剤を含む。特定の実施形態では、単球および／またはマクロファージ減少剤はクロドロン酸（Ｃｌｏｄｒｏｎａｔｅ）ではない。特定の実施形態では、クロドロン酸と少なくとも１つの追加の単球および／またはマクロファージ減少剤が併用される。

【0165】

「好中球減少剤」とは、対象内の好中球を減少または破壊する薬剤、および／または１つ以上の好中球機能を阻害する薬剤を指す。好中球除去剤は好中球を標的とする。好中球除去剤の例としては、以下のような貪食性免疫細胞マーカーを標的とする薬剤がある：抗Ｌｙ６Ｇ抗体またはＬｙ６Ｇ低分子阻害剤を含むＬｙ６Ｇ阻害剤；抗ＣＤ１７７抗体またはＣＤ１７７低分子阻害剤を含むＣＤ１７７阻害剤；抗ＣＤ１４抗体またはＣＤ１４低分子阻害剤を含むＣＤ１４阻害剤；抗ＣＤ１５抗体またはＣＤ１５低分子阻害剤を含むＣＤ１５阻害剤；抗ＣＤ１１ｂ抗体またはＣＤ１１ｂ低分子阻害剤を含むＣＤ１１ｂ阻害剤；抗ＣＤ１６抗体またはＣＤ１６低分子阻害剤を含むＣＤ１６阻害剤；抗ＣＤ３２抗体またはＣＤ３２低分子阻害剤を含むＣＤ３２阻害剤；抗ＣＤ３３抗体またはＣＤ３３低分子阻害剤を含むＣＤ３３阻害剤；抗ＣＤ４４抗体またはＣＤ４４低分子阻害剤を含むＣＤ４４阻害剤；抗ＣＤ４５抗体またはＣＤ４５低分子阻害剤を含むＣＤ４５阻害剤；抗ＣＤ６６ｂ抗体またはＣＤ６６ｂ低分子阻害剤を含むＣＤ６６ｂ阻害剤；または抗ＣＤ１８抗体やＣＤ１８低分子阻害剤を含むＣＤ１８阻害剤；抗ＣＤ６２Ｌ抗体またはＣＤ６２Ｌ低分子阻害剤を含むＣＤ６２Ｌ阻害剤；およびＧｒ－１阻害剤である抗Ｇｒ－１抗体またはＧｒ－１低分子阻害剤。

【0166】

「樹状細胞減少剤」とは、対象内の樹状細胞を枯渇または破壊する、および／または１つ以上の樹状細胞の機能を阻害する薬剤を指す。樹状細胞減少剤はあらゆる樹状細胞を標的とすることができる。樹状細胞減少剤の例としては、抗ＰＤＣＡ１抗体またはＰＤＣＡ１低分子阻害剤を含むＰＤＣＡ１阻害剤；および抗ＣＤ１１ｃ抗体またはＣＤ１１ｃ低分子阻害剤を含むＣＤ１１ｃ阻害剤のような、貪食性免疫細胞マーカーを標的とする薬剤が挙げられる。

【0167】

「阻害剤」とは、標的タンパク質の量および／または活性をダウンレギュレーション、減少、低減、抑制、または不活性化することができる任意の化合物を指す。阻害剤は、タンパク質、オリゴペプチド、ポリペプチド、核酸、遺伝子、または化学分子であり得る。適切なタンパク質阻害剤としては、例えば、標的タンパク質に結合するモノクローナル抗体やポリクローナル抗体、および低分子が挙げられる。

【0168】

ＣＤ１１５阻害剤の例としては、以下が挙げられる：ＣＤ１１５低分子阻害剤ｐｅｘｉｄａｒｔｉｎｉｂ（ＰＬＸ－３３９７）、ＢＬＺ－９４５、リニファニブ（ＡＢＴ－８６９）、ＪＮＪ－２８３１２１４１（ジョンソン・エンド・ジョンソン）、ＪＮＪ－４０３４６５２７（ジョンソン・エンド・ジョンソン）、ＰＬＸ７４８６（プレキシコン）、ＡＲＲＹ－３８２（アレイ・バイオファーマ）、以下のなどの抗ＣＤ１１５抗体、ＡＦＳ９８（ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎまたはＢｉｏＣｅｌｌ）、１２－３Ａ３－１Ｂ１０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、６Ｃ７（バイオス）、Ｃａｂｉｒａｌｉｚｕｍａｂ（ＦＰＡ００８）、２５９４９－１－ＡＰ（プロテインテック）、１Ｇ４（アブノバ）、３Ｇ１２（アブノバ）、６０４Ｂ５ ２Ｅ１１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、Ｅｍａｃｔｕｚｕｍａｂ（ＲＧ－７１５５；ロシュ）、ＡＭＧ ８２０（アムジェン）、ＩＭＣ－ＣＳ４、および ＲＯＳ８Ｇ１１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）。特定の実施形態において、抗体またはその抗原結合性断片は、ＡＦＳ９８（例えば、ＢｉｏＣｅｌｌ ＢＥ０２１３およびＯｎｃｏｇｅｎｅ １９９５；１１（１２）：２４６９－２４７６）である。

【0169】

本開示の観点から、当業者に公知のものを含む適切なＬｙ６Ｇ阻害剤を使用することができる。抗Ｌｙ６Ｇ抗体の例としては、Ａ８（ＢｉｏＣｅｌｌ ＢＰ００７５－１）およびＲＢ６－８Ｃ５（ａｂ２５３７７）がある。

【0170】

イントラリピッドや空のリポソームは、単球やマクロファージの１つ以上の機能を阻害することが示されている。例えば、Ｌｉｕら、Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ．２０１３ Ｊｕｎ；１８３０（６）：３４４７－５３およびＳａｕｎｄｅｒｓら、Ｎａｎｏ Ｌｅｔｔ．２０２０ Ｊｕｎ １０；２０（６）：４２６４－４２６９を参照。イントラリピッドまたは空のリポソームによる前処理は、単球／マクロファージ細胞を効果的に飽和させ、非ウイルス性治療薬の貪食を防ぐことができる。イントラ脂質および空のリポソームの例としては、Ｉ１４１－１００ＭＬ（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）、２Ｂ６０６３（Ｂａｘｔｅｒ）、およびＬｉｕら、Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ．２０１３ Ｊｕｎ；１８３０（６）：３４４７－５３およびＳａｕｎｄｅｒｓら、Ｎａｎｏ Ｌｅｔｔ．２０２０ Ｊｕｎ １０；２０（６）：４２６４－４２６９に記載されているものが挙げられる。

【0171】

ビスホスホネートの例としては、クロドロン酸、パミドロネート、イバンドロネート、アレンドロネート、ゾレドロネートなどがある。

【0172】

「貪食細胞減少剤」の他の例としては、パルボシクリブ（Ｉｂｒａｎｃｅ（登録商標）；ファイザー）、クロモリンナトリウム（Ｎａｓａｌｃｒｏｍ（登録商標）；ボシュロム）などがある。
ＩＶ．Ｂ．免疫抑制剤

【0173】

免疫抑制剤とは、対象の免疫系の活性を低下させたり、停止させたりすることができる化合物である。自然免疫応答や体液性免疫応答など、さまざまな免疫応答が産生される。例えば、免疫応答には、Ｔｏｌｌ受容体の活性化、リンホカイン（例えば、サイトカインまたはケモカイン）の発現および／または分泌、マクロファージの活性化、樹状細胞の活性化、Ｔ細胞の活性化（例えば、ＣＤ４＋またはＣＤ８＋Ｔ細胞）、ＮＫ細胞の活性化、および／またはＢ細胞の活性化（例えば、抗体の生成および／または分泌）における検出可能な変化が含まれる。その他の免疫反応の例としては、以下が挙げられる：免疫原（抗原など）がＭＨＣ分子に結合し、細胞傷害性Ｔリンパ球（「ＣＴＬ」）反応を誘導すること、Ｂ細胞応答（例えば、抗体産生）、および／またはＴヘルパーリンパ球応答、および／または免疫原性ポリペプチドが由来する抗原に対する遅延型過敏症（ＤＴＨ）反応、免疫系の細胞が増殖、および抗原提示細胞による抗原の処理と提示の増加を誘導すること。

【0174】

免疫抑制剤の例としては、以下が挙げられる：シクロスポリン、ＩＳＡ（ＴＸ）２４７、タクロリムスまたはカルシニューリンなどのカルシニューリン阻害剤；シロリムス、エベロリムス、ＦＫ７７８、ＴＡＦＡ－９３などのラパマイシン標的薬；バシリキシマブやダクリズマブなどのインターロイキン－２α鎖遮断薬；ミコフェノール酸モフェチルなどのイノシン一リン酸脱水素酵素阻害剤；メトトレキサートなどのジヒドロ葉酸還元酵素阻害剤；アザチオプリンなどの免疫抑制性代謝拮抗薬；ルキソリチニブなどのＪＡＫ阻害剤；抗サイトカイン抗体、例えば Ｓｉｌｔｕｘｉｍａｂなどのサイトカイン阻害剤；あるいはステロイド。

【0175】

特定の実施形態において、免疫抑制剤は抗炎症剤である。特定の実施形態において、免疫抑制剤は、ステロイド、例えば、コルチコステロイド、プレドニゾン、プレドニゾロン、シクロスポリン（例えば、シクロスポリンＡ）、ミコフェノラート；Ｂ細胞標的抗体、例えばリツキシマブ；プロテアソーム阻害剤、例えばボルテゾミブ；哺乳類ラパマイシン標的（ｍＴＯＲ）阻害剤、例えばラパマイシン；チロシンキナーゼ阻害剤、例えばイブルチニブ；Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）の阻害剤；または増殖誘導リガンド（ＡＰＲＩＬ）の阻害剤またはその誘導体である。特定の実施形態において、免疫抑制剤は、抗ＩＬ－１β剤（例えば、抗ＩＬ－１βモノクローナル抗体カナキヌマブ（Ｉｌａｒｉｓ（登録商標）））または抗ＩＬ－６剤（例えば、抗ＩＬ－６抗体ｓｉｒｕｋｕｍａｂまたは抗ＩＬ－６受容体抗体ｔｏｃｉｌｉｚｕｍａｂ（Ａｃｔｅｍｒａ（登録商標）））、またはそれらの組み合わせである。

【0176】

「ステロイド」とは、３つのシクロヘキサン環と１つのシクロペンタン環を含む化学物質を指す。環は四環式シクロペンタフェナントレン、すなわちゴナンを形成するように配置されている。ステロイドにはコルチコステロイドやグルココルチコステロイドなどの様々な種類がある。

【0177】

用語「コルチコステロイド」とは、副腎皮質で産生される、あるいは合成的に産生されるステロイドホルモンの一群を指す。特定の実施形態において、ステロイドはコルチコステロイドであり得る。コルチコステロイドは、ストレス反応、免疫反応、炎症の制御、糖質代謝、タンパク質異化作用、血中電解質レベル、行動など、幅広い生理学的システムに関与している。コルチコステロイドは一般に、化学構造に基づいて４つのクラスに分類される。Ａ群コルチコステロイド（短～中作用性グルココルチコイド）には、ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、酢酸コルチゾン、ピバル酸チキソコルトール、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾンが含まれる。Ｂ群コルチコステロイドには、トリアムシノロンアセトニド、トリアムシノロンアルコール、モメタゾン、アムシノニド、ブデソニド、デソニド、フルオシノニド、フルオロシノロンアセトニド、ハルシノニドなどがある。Ｃ群コルチコステロイドには、ベタメタゾン、リン酸ベタメタゾンナトリウム、デキサメタゾン、リン酸デキサメタゾンナトリウム、フルオコルトロンが含まれる。Ｄ群コルチコステロイドには、１７－酪酸ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾン－１７－バレレート、ジプロピオン酸アクロメタゾン、ベタメタゾンジバレレート、ジプロピオン酸ベタメタゾン、プレドニカルビン酸、１７－酪酸クロベタゾン、１７－プロピオン酸クロベタゾール、カプロン酸フルオコルトロン、ピバリン酸フルオコルトロン、酢酸フルプレドニデンなどがある。コルチコステロイドの非限定的な例としては、以下が挙げられる：アルドステルノン、ベクロメタゾン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、ベタメタハゾン、ベタメタハゾン－２１－リン酸二ナトリウム、ベタメタハゾン・バレレート、ブデソニド、クロベタゾール、プロピオン酸クロベタゾール、酪酸クロベタゾン、ピバリン酸クロコルトロン、コルチゾール、コルチステロン、コルチゾン、デフラザコート、デキサメタゾン、酢酸デキサメタゾン、リン酸デキサメタゾンナトリウム、ジフロラゾンジアセテート、ジヒドロキシコルチゾン、フルシノニド、酢酸フルドロコルチゾン、フルメタゾン、フルニソリド、フルシオノロンアセトニド、フルチカゾンフレート、プロピオン酸フルチカゾンエ、ハルシノニド、ハルプタゾン、ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、コハク酸ヒドロコルチゾン、１６α－ヒドロキシプレドニゾロン、酢酸イソフルプレドン、メディソン（ｍｅｄｒｙｓｏｎｅ）、メチルプレドニゾロン、プレドナシノロン、プレドリカルベート、プレドニゾロン、酢酸プレドニゾロン、コハク酸プレドニゾロンナトリウム、プレドニン、トリアムシノロン、トリアムシノロン、トリアムシノロンジアセテート。

【0178】

コルチコステロイドは、ジェネリックもブランド名もさまざまな種類がある： コルチゾン（ＣＯＲＴＯＮＥ^TM ＡＣＥＴＡＴＥ^TM，ＡＤＲＥＳＯＮ^TM，ＡＬＴＥＳＯＮＡ^TM，ＣＯＲＴＥＬＡＮＴ^TM，ＣＯＲＴＩＳＴＡＢ^TM，ＣＯＲＴＩＳＹＬ^TM，ＣＯＲＴＯＧＥＮ^TM，ＣＯＲＴＯＮＥ^TM，ＳＣＨＥＲＯＳＯＮ^TM）；デキサメタゾン経口剤（ＤＥＣＡＤＲＯＮ ＯＲＡＬ^TM、ＤＥＸＡＭＥＴＨ^TM、ＤＥＸＯＮＥ^TM、ＨＥＸＡＤＲＯＬ－ＯＲＡＬ^TM、ＤＥＸＡＭＥＴＨＡＳＯＮＥ^TM ＩＮＴＥＮＳＯＬ^TM、ＤＥＸＯＮＥ ０．５^TM、ＤＥＸＯＮＥ ０．７５^TM、ＤＥＸＯＮＥ １．５^TM、ＤＥＸＯＮＥ ４^TM）；ヒドロコルチゾン経口剤（ＣＯＲＴＥＦ^TM，ＨＹＤＲＯＣＯＲＴＯＮＥ^TM）；シピオン酸ヒドロコルチゾン（ＣＯＲＴＥＦ ＯＲＡＬ ＳＵＳＰＥＮＳＩＯＮ^TM）；メチルプレドニゾロン経口剤（ＭＥＤＲＯＬ－ＯＲＡＬ^TM）；プレドニゾロン経口剤（ＰＲＥＬＯＮＥ^TM，ＤＥＬＴＡ－ＣＯＲＴＥＦ^TM，ＰＥＤＩＡＰＲＥＤ^TM，ＡＤＮＩＳＯＬＯＮＥ^TM，ＣＯＲＴＡＬＯＮＥ^TM，ＤＥＬＴＡＣＯＲＴＲＩＬ^TM，ＤＥＬＴＡＳＯＬＯＮＥ^TM，ＤＥＬＴＡＳＴＡＢ^TM，ＤＩ－ＡＤＲＥＳＯＮ Ｆ^TM，ＥＮＣＯＲＴＯＬＯＮＥ^TM，ＨＹＤＲＯＣＯＲＴＡＮＣＹＬ^TM，ＭＥＤＩＳＯＬＯＮＥ^TM，ＭＥＴＩＣＯＲＴＥＬＯＮＥ^TM，ＯＰＲＥＤＳＯＮＥ^TM，ＰＡＮＡＡＦＣＯＲＴＥＬＯＮＥ^TM，ＰＲＥＣＯＲＴＩＳＹＬ^TM，ＰＲＥＮＩＳＯＬＯＮＡ^TM，ＳＣＨＥＲＩＳＯＬＯＮＡ^TM，ＳＣＨＥＲＩＳＯＬＯＮＥ^TM）；プレドニゾン（ＤＥＬＴＡＳＯＮＥ^TM，ＬＩＱＵＩＤ ＰＲＥＤ^TM，ＭＥＴＩＣＯＲＴＥＮＴ^TM，ＯＲＡＳＯＮＥ １^TM，ＯＲＡＳＯＮＥ ５^TM，ＯＲＡＳＯＮＥ １０^TM，ＯＲＡＳＯＮＥ ２０^TM，ＯＲＡＳＯＮＥ ５０^TM，ＰＲＥＤＮＩＣＥＮ－Ｍ^TM，ＰＲＥＤＮＩＳＯＮＥ ＩＮＴＥＮＳＯＬ^TM，ＳＴＥＲＡＰＲＥＤ^TM，ＳＴＥＲＡＰＲＥＤ ＤＳ^TM，ＡＤＡＳＯＮＥ^TM，ＣＡＲＴＡＮＣＹＬ^TM，ＣＯＬＩＳＯＮＥ^TM，ＣＯＲＤＲＯＬ^TM，ＣＯＲＴＡＮ^TM，ＤＡＣＯＲＴＩＮ^TM，ＤＥＣＯＲＴＩＮ^TM，ＤＥＣＯＲＴＩＳＹＬ^TM，ＤＥＬＣＯＲＴＩＮ^TM，ＤＥＬＬＡＣＯＲＴ^TM，ＤＥＬＴＡＤＯＭＥ^TM，ＤＥＬＴＡＣＯＲＴＥＮＥ^TM，ＤＥＬＴＩＳＯＮＡ^TM，ＤＩＡＤＲＥＳＯＮ^TM，ＥＣＯＮＯＳＯＮＥ^TM，ＥＮＣＯＲＴＯＮ^TM，ＦＥＲＮＩＳＯＮＥ^TM，ＮＩＳＯＮＡ^TM，ＮＯＶＯＰＲＥＤＮＩＳＯＮＥ^TM，ＰＡＮＡＦＣＯＲＴ^TM，ＰＡＮＡＳＯＬ^TM，ＰＡＲＡＣＯＲＴ^TM，ＰＡＲＭＥＮＩＳＯＮ^TM，ＰＥＨＡＣＯＲＴ^TM，ＰＲＥＤＥＬＴＩＮ^TM，ＰＲＥＤＮＩＣＯＲＴ^TM，ＰＲＥＤＮＩＣＯＴ^TM，ＰＲＥＤＮＩＤＩＢ^TM，ＰＲＥＤＮＩＭＥＮＴ^TM，ＲＥＣＴＯＤＥＬＴ^TM，ＵＬＴＲＡＣＯＲＴＥＮ^TM，ＷＩＮＰＲＥＤ^TM）；トリアムシノロン経口剤（ＫＥＮＡＣＯＲＴ^TM，ＡＲＩＳＴＯＣＯＲＴ^TM，ＡＴＯＬＯＮＥ^TM，ＳＨＯＬＯＧ Ａ^TM，ＴＲＡＭＡＣＯＲＴ－Ｄ^TM，ＴＲＩ－ＭＥＤ^TM，ＴＲＩＡＭＣＯＴ^TM，ＴＲＩＳＴＯＰＬＥＸ^TM，ＴＲＹＬＯＮＥ Ｄ^TM，Ｕ－ＴＲＩ－ＬＯＮＥ^TM）。特定の実施形態において、コルチコステロイドは、以下である：デキサメタゾン、プレドニゾン、プレドニゾロン、トリアムシノロン、プロピオン酸クロベタゾール、ベタメタゾン・バレレート、ジプロピオン酸ベタメタゾン、またはモメタゾンフロエート。ステロイドとコルチコステロイドの合成法は当技術分野でよく知られており、その多くは市販もされている。

【0179】

コルチコステロイド、例えばデキサメタゾンは、遊離のデキサメタゾンとして、別のＬＮＰ組成物として、またはＤＮＡと同じＬＮＰ組成物の一部として送達することができる。Ｃｈｅｎら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ ２０１８、２８６、４６－５４には、脂肪酸に連結した核酸とデキサメタゾンを提供するＬＮＰに関する記述がある。
Ｖ．医薬組成物

【0180】

医薬組成物は、医薬的に許容される担体とともに、１つ以上の活性成分を含む。「薬学的に」または「薬学的に許容される」とは、投与および／または保存に適した非毒性の分子実体を指す。
医薬組成物は、複数の治療活性薬剤を含むことができる。薬学的に許容される担体の例としては、（使用量において）非毒性の固体、半固体または液体の充填剤、希釈剤、カプセル化材料または製剤が挙げられる。

【0181】

医薬組成物の形態、投与経路、投与量、およびレジメンは、治療される症状、病気の重症度、患者の年齢、体重、および性別などに当然依存する。本明細書に記載の薬剤のための医薬組成物は、局所投与、経口投与、経鼻投与、非経口投与、眼内投与、静脈内投与、筋肉内投与、または皮下投与のために処方することができる。

【0182】

一実施形態において、医薬組成物は、対象への注射が可能な製剤を含む。注射用製剤成分の例としては、等張化剤、無菌、生理食塩水（例えば、リン酸一ナトリウムまたは二ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウムまたは塩化マグネシウム、およびこれらの塩の混合物）、緩衝生理食塩水、糖類（例えば、ブドウ糖）、および注射用水が挙げられる。医薬組成物には、乾燥物、例えば凍結乾燥した組成物が含まれ、場合によっては滅菌水または生理的食塩水を加えることにより、注射用溶液を構成することができる。投与に使用される用量は、様々なパラメータ、例えば、投与様式、関連する病理、および／または所望の治療期間の関数として適合され得る。

【0183】

その他の薬学的に許容される形態としては、経口投与用の錠剤またはその他の固形剤（タイムリリースカプセルを含む）が挙げられる。

【0184】

治療用導入遺伝子を含むＤＮＡベクターを含む医薬組成物は、特定の疾患または障害の治療に適した用量で対象に投与することができる。異なる実施形態において、好適な投薬量は、対象の体重１ｋｇあたり約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇのベクター、対象の体重１ｋｇあたり約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約０．１ｍｇ／ｋｇのベクター、対象の体重１ｋｇあたり約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１．０ｍｇ／ｋｇのベクター、および対象の体重１ｋｇあたり約１．０ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇのベクターであり得る。

【0185】

低分子細胞質ＤＮＡ感知阻害剤または免疫細胞調節剤阻害剤、特定の疾患または障害に適した用量で対象に投与することができる。異なる実施形態において、好適な投与量は、対象の体重約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１ｍｇ／ｋｇ、約１．０ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、および約１０．０ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇであり得る。

【0186】

貪食性免疫細胞マーカーを標的とする抗体は、任意の適切な用量で対象に投与することができる。例えば、好適な投与量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇ体重の対象とすることができ、投与量は合計１～１０回の注射で投与される。

【0187】

ペキシダルチニブのようなＣＤ１１５阻害剤を適切な用量で対象に投与することができる。例えば、好適な投与量は、対象の体重あたり、約０．１ｍｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇから約１ｍｇ／ｋｇ、約１．０ｍｇ／ｋｇから約１０ｍｇ／ｋｇ、および約１０．０ｍｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇであり得る。

【0188】

ビスフォスフォネート、例えばクロドロン酸は、任意の適切な用量で対象に投与することができる。例えば、好適な投与量は、対象の体重あたり、約０．１ｍｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇから約１ｍｇ／ｋｇ、約１．０ｍｇ／ｋｇから約１０ｍｇ／ｋｇ、および約１０．０ｍｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇであり得る。

【0189】

コルチコステロイド、例えばデキサメタゾンは、任意の適切な用量で対象に投与することができる。例えば、好適な投与量は、対象の体重あたり、約０．１ｍｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇから約１ｍｇ／ｋｇ、約１．０ｍｇ／ｋｇから約１０ｍｇ／ｋｇ、および約１０．０ｍｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇであり得る。

【0190】

ＶＩ．投与と治療

【0191】

本明細書に記載の異なる化合物および組成物は、研究目的や哺乳動物の疾患または障害の治療を含む異なる目的で対象に投与することができる。好ましい用途は、ヒトの疾患の治療である。

【0192】

「治療」または「処置」とは、疾患または障害を持つ患者の予防的治療と治療的治療の両方を指す。「予防的」治療とは、疾患または障害にかかる可能性を減少させたり、病気や障害の重篤度を減少させたりすることである。「治療的」とは、疾患または障害に関連する少なくとも一つの症状または原因において、臨床的に意味のある改善を意味する。したがって、治療には、疾患または障害に罹患する危険性のある対象、疾患または障害に罹患した疑いのある対象、ならびに疾患または障害に罹患している、または罹患していると診断された対象への投与が含まれ、臨床的再発の抑制も含まれる。

【0193】

「改善する（ａｍｅｌｉｏｒａｔｅ）」および「改善（ａｍｅｌｉｏｒａｔｉｏｎ）」という用語は、疾患または障害の症状、または基礎となる細胞反応の、検出可能または測定可能な改善を指す。検出可能または測定可能な改善には、疾患もしくは障害、または疾患もしくは障害に起因もしくは関連する合併症の発生、頻度、重篤度、進行もしくは期間における主観的もしくは客観的な減少、軽減、抑制、制限もしくは制御、または症状もしくは疾患もしくは障害の根本原因もしくは結果の改善、または疾患もしくは障害の回復が含まれる。ポンペの場合、有効量には、グリコーゲンの産生または蓄積を阻害または減少させ、グリコーゲンの分解または除去を促進または増加させ、筋緊張および／または筋力および／または呼吸機能を改善する量が含まれる。ＨｅｍＡまたはＨｅｍＢの場合、有効量には、対象における急性出血エピソードの頻度または重症度を減少させる量、および凝固アッセイによって測定される凝固時間を減少させる量が含まれる。

【0194】

「有効量」や「十分量」という用語は、所望の効果を得るために必要な量である。治療は、治療的有効量のＤＮＡベクターを対象に投与することによって実施することができる。治療的または予防的効果を得るために、治療的有効量を単回または複数回に分けて投与することができる。

【0195】

他の薬剤は、所望の効果を得るために「有効量」または「十分量」投与することができる。一例として、ＤＮＡ感知阻害剤の有効量は、ｃＧＡＳ－ＳＴＩＮＧ経路またはインフラマソーム経路の活性を阻害し、自然免疫応答の１つ以上の活性の低下をもたらす、単回または複数回投与で提供される量である。同様に、免疫細胞調節剤の有効量とは、例えば、セクションＩＶ．Ａ．で提供されるような、貪食細胞および／または貪食細胞の機能において検出可能な減少を提供する阻害を、単回または複数回の用量で提供される量である；有効量の免疫抑制剤とは、単回または複数回の投与で免疫系活性を阻害する量をいい、例えば、セクションＩＶ．Ｂ．に規定されている。

【0196】

有効量は単独で投与することもできるし、別の組成物、治療法、プロトコル、または治療レジメンと組み合わせて投与することもできる。その量は、例えば、対象の必要性、治療される疾患または障害の種類、状態および重症度、または副作用に基づいて、比例的に増加させることができる。

【0197】

有効量または十分量は、処置された各対象において有効である必要はなく、所与の群または集団における処置された対象の大多数において有効である必要もない。有効量または十分量とは、特定の対象における有効性または十分性を意味し、集団や一般集団における有効性または十分性を意味しない。このような方法の典型的な例として、対象によっては、ある治療方法や使用法に対して、より大きな反応を示したり、あるいは反応が少なかったり、あるいは全く示さなかったりする。

【0198】

ＤＮＡベクターと細胞質ＤＮＡ感知阻害剤を別々に投与する場合、どのような順序でも、あるいはほぼ同時に投与することができる。特定の実施形態では、阻害剤はＤＮＡベクターの少なくとも６０分前、少なくとも９０分前、または少なくとも１２０分前に投与される。

【0199】

特定の実施形態では、細胞質ＤＮＡ感知阻害剤は、ほぼ同時に、ＤＮＡベクター投与の約５分前まで、約１５分前まで、約３０分前まで、約４５分前まで、約６０分前まで、約９０分前まで、約２時間前まで、約３時間前まで、約４時間前まで、約５時間前まで、約６時間前まで、約７時間前まで、約８時間前まで、約９時間前まで、約１０時間前まで、約１２時間前まで、約１日前まで、約２日前まで、約３日前まで、約４日前まで、または約１週間前までに投与される。好ましくは、細胞質ＤＮＡ感知阻害剤は、ＤＮＡベクター投与とほぼ同時、ＤＮＡベクター投与の約５分前まで、約１５分前まで、約３０分前まで、約４５分前まで、約６０分前まで、約９０分前まで、約２時間前まで、約３時間前まで、または約４時間前までに投与される。特定の実施形態では、細胞質ＤＮＡ感知阻害剤は、ＤＮＡの約１５分後、約３０分後、約４５分後、約６０分後、約９０分後、約１２０分後、または約１日後に投与される。

【0200】

特定の実施形態において、細胞質ＤＮＡ感知阻害剤は、ＤＮＡベクター投与とほぼ同時、約５分、約１０分、約１５分、約３０分、約４５分、約６０分、約９０分、２時間、約２．５時間、約３時間、約３．５時間、または約４時間前に投与される。

【0201】

ＤＮＡベクターと細胞質ＤＮＡ感知阻害剤は、ほぼ同時に放出されるように同じナノ粒子内に提供することもできるし、ナノ粒子は成分の一方の放出を遅らせるように設計することもできる。一実施形態では、ナノ粒子はＤＮＡの放出に先立って阻害剤を放出するように設計されている。

【0202】

ＤＮＡベクターの治療用量は様々であり得、治療が指向される疾患または障害の種類、発症、進行、重症度、頻度、期間、または確率、所望される臨床評価項目、以前のまたは同時の治療、対象の一般的な健康状態、年齢、性別、人種、または免疫学的能力、および当業者に理解されるであろう他の要因に依存する。投与量、投与回数、投与頻度または投与期間は、治療または療法の副作用、合併症またはその他の危険因子および対象の状態に応じて、比例的に増減することができる。

【0203】

治療効果を達成するための投与量、例えば、体重１ｋｇあたりｍｇ（ｍｇ／ｋｇ）単位のＤＮＡベクター投与量も、投与経路、治療効果を達成するために必要な導入遺伝子発現のレベル、治療される特定の疾患または障害、ＤＮＡに対する宿主免疫応答、宿主免疫応答導入遺伝子発現産物、発現されるタンパク質、ペプチドまたは核酸の安定性など、いくつかの要因に基づいて変化する。本明細書で提供されるガイダンスに基づいて、当業者は、特定の疾患または障害を有する患者を治療するのに適したＤＮＡベクターの用量範囲を決定することができる。

【0204】

導入遺伝子の全体的な発現レベルは、ＤＮＡベクターの使用によって変わりうる。治療用タンパク質を提供する遺伝子治療の異なる実施形態において、提供される発現または活性は、対応する対象タンパク質の正常発現の少なくとも１％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％である。

【0205】

特定の実施形態において、本発明による方法は、治療用核酸によって標的化されるタンパク質の発現または活性の低下をもたらし得る。異なる実施形態において、治療用核酸が標的とするタンパク質の発現または活性の低下は、標的タンパク質の正常発現の少なくとも１％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％である。

【0206】

本発明の方法および使用には、例えば注射または注入による、全身的、局所的または局所的な送達および投与が含まれる。ｉｎ ｖｉｖｏにおける医薬組成物の直接送達は、一般に、従来の注射器を用いた注射によって達成することができるが、対流促進送達などの他の送達方法も想定される（例えば、米国特許第５，７２０，７２０号を参照）。例えば、組成物は、皮下、表皮内、皮内、髄腔内、眼窩内、粘膜内、腹腔内（ＩＰ）、静脈内（ＩＶ）、胸膜内、動脈内、経口、肝内、門脈経由、または筋肉内に送達され得る。その他の投与方法としては、経口投与、肺投与、坐剤、経皮吸収製剤などがあります。
ＶＩ．Ａ．例示の疾病と障害

【0207】

治療可能な疾患や障害は以下の通りである：肺疾患（嚢胞性線維症など）、血液疾患（貧血など）、ＣＮＳ（中枢神経系）の病気と障害、てんかん、ライソゾーム貯蔵病（例：アスパルチルグルコサミン尿症）、バッテン病、乳児期後期神経細胞性セロイドリポフスチン症２型（ＣＬＮ２）、シスチン症、ファブリー病、ゴーシェ病Ｉ型、ＩＩ型、ＩＩＩ型、グリコーゲン貯蔵病ＩＩ型（ポンペ病）、ＧＭ２－ガングリオシドーシスＩ型（テイ・サックス病）、ＧＭ２－ガングリオシドーシスＩＩ型（サンドホフ病）、ムコリピドーシスＩ型（シアリドーシスＩ型およびＩＩ型）、ＩＩ型（Ｉ細胞病）、ＩＩＩ型（偽ハーラー病）、ＩＶ型、ムコ多糖貯蔵病（ハーラー病とその変種、ハンター病、サンフィリポＡ，Ｂ，Ｃ，Ｄ型、モルキオＡ，Ｂ型、マロトー－ラミー病、スライ病）、ニーマン・ピック病Ａ／Ｂ型、Ｃ１型、Ｃ２型、シンドラー病Ｉ型、ＩＩ型、遺伝性血管性浮腫（ＨＡＥ）、銅または鉄の蓄積障害（ウィルソン病やメンケス病など）、リソソーム酸性リパーゼ欠損症、神経学的または神経変性疾患、癌１型または２型糖尿病、アデノシンデアミナーゼ欠損症、代謝異常症（例えば、グリコーゲン貯蔵病）、および固形臓器（脳、肝臓、腎臓、心臓など）の疾患。

【0208】

グリコーゲン貯蔵病ＩＩ型（ポンペ病とも呼ばれる）は、本発明による方法で治療することができる。ポンペ病は、グリコーゲンの分解を触媒するリソソーム酵素酸性α－グルコシダーゼ（ＧＡＡ）をコードする遺伝子の変異によって引き起こされる常染色体劣性疾患である。その結果、酵素欠乏はグリコーゲンの病的蓄積とリソソームの変化をもたらし、心臓、呼吸器、骨格筋の機能障害を引き起こす。

【0209】

治療可能な血液凝固障害には、血友病Ａ、阻害性抗体を伴う血友病Ａ、血友病Ｂ、阻害性抗体を伴う血友病Ｂ、凝固因子ＶＩＩ、ＶＩＩＩ、ＩＸ、Ｘ、ＸＩ、Ｖ、ＸＩＩ、ＩＩの何れかの欠損症、フォン・ヴィレブランド因子の欠損症、または複合型ＦＶ／ＦＶＩＩＩ欠損症、サラセミア、ビタミンＫエポキシド還元酵素Ｃ１欠損症、またはガンマ－カルボキシラーゼ欠損症が含まれる。

【0210】

その他の治療可能な疾患および障害は、外傷、損傷、血栓症、血小板減少症、脳卒中、凝固障害、播種性血管内凝固（ＤＩＣ）に伴う出血、ヘパリン、低分子ヘパリン、五炭糖、ワルファリン、低分子抗血栓薬（ＦＸａ阻害薬など）に伴う過剰抗凝固がある、ＦＸａ阻害剤）、またはＢｅｒｎａｒｄ Ｓｏｕｌｉｅｒ症候群、Ｇｌａｎｚｍａｎｎ血小板無力症、貯蔵プール欠損症などの血小板障害を含む。

【0211】

治療可能な他の疾患や障害には、増殖性疾患（癌、腫瘍、異形成など）、クリグラー・ナジャールや肝臓の代謝性疾患などの代謝性疾患；フリードライヒ運動失調症；感染症；例えば、Ｂ型またはＣ型肝炎ウイルス、ＨＩＶ、ヘルペス、レトロウイルスなどによって誘発されるウイルス性疾患；以下のような遺伝性疾患、嚢胞性線維症、ジストログリカノパチー、デュシェンヌ型筋ミオパチーやジストロフィーなどのミオパチー、筋管ミオパチー、鎌状赤血球貧血、鎌状赤血球症、ファンコニー貧血、糖尿病 筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ミオチュブラリンミオパチー、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）、脊髄球筋萎縮症、またはシャルコー・マリー・トゥース病などの運動ニューロン疾患；関節炎；ＲＳ－ＳＣＩＤ、ＡＤＡ－ＳＣＩＤ、Ｘ－ＳＣＩＤなどの重症複合免疫不全症；ウィスコット・アルドリッチ症候群；Ｘ連鎖性血小板減少症；Ｘ連鎖性先天性好中球減少症；慢性肉芽腫性疾患；凝固因子欠乏症；再狭窄、虚血、脂質異常症、ホモ接合性家族性高コレステロール血症などの心血管疾患；以下のような眼疾患、網膜色素変性症、Ｘ連鎖性網膜色素変性症、常染色体優性網膜色素変性症、劣性網膜色素変性症、コロイデレミア、脈絡膜新生血管、回旋筋萎縮、網膜弛緩症、Ｘ連鎖性網膜弛緩症、黄斑変性症、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）、ＤＭＥを伴う糖尿病性網膜症、湿性加齢性黄斑変性症（ｗｅｔ ＡＭＤまたはｗＡＭＤ）、網膜静脈閉塞症後の黄斑浮腫、非動脈炎性虚血性視神経症、レーベル先天性黒内障、レーベル遺伝性視神経症、色覚異常、およびスターガルト病；サンフィリッポ症候群のようなライソゾーム貯蔵病；ＣＮ Ｉ型やＩＩ型、ジルベール症候群などの高ビリルビン血症；ＧＳＤＩ、ＧＳＤＩＩ（ポンペ病）、ＧＳＤＩＩＩ、ＧＳＤＩＶ、ＧＳＤＶ、ＧＳＤＶＩ、ＧＳＤＶＩＩ、ＧＳＤＶＩＩＩなどのグリコーゲン貯蔵症、または致死性の先天性心臓グリコーゲン貯蔵症を含む。

【0212】

特定の実施形態において、対象は、中枢神経系（ＣＮＳ）に影響を及ぼすか、または中枢神経系に由来する疾患または障害を有する。特定の実施形態では、疾患は神経変性疾患である。ＣＮＳまたは神経変性疾患の非限定的な例としては、アルツハイマー病、ハンチントン病、ＡＬＳ、遺伝性痙性片麻痺、原発性側索硬化症、脊髄性筋萎縮症、ケネディ病、ポリグルタミン反復病、またはパーキンソン病が挙げられる。特定の実施形態において、疾患は、精神疾患、中毒（例えば、タバコ、アルコール、または薬物）、てんかん、カナヴァン病、またはアドレノロイコジストロフィーである。特定の実施形態において、ＣＮＳまたは神経変性疾患は、脊髄小脳性運動失調症（ＳＣＡ１、ＳＣＡ２、ＳＣＡ３、ＳＣＡ６、ＳＣＡ７、またはＳＣＡ１７）などのポリグルタミン反復疾患である。
ＶＩ．Ｂ．さまざまな疾患と症状の投与例

【0213】

本出願に基づいて、多種多様な疾患や障害を治療することができる。本項では、特定の疾患または障害に対する投与を取り上げる。提供された実施例は、本願の他の実施例と同様に、異なる実施形態および説明の目的を提供するためのものである。

【0214】

ポンペ病の場合、有効量とは、グリコーゲンの産生もしくは蓄積を阻害もしくは減少させ、グリコーゲンの分解もしくは除去を促進もしくは増加させ、対象の組織におけるリソソームの変化を減少させ、または対象の筋緊張および／もしくは筋力および／もしくは呼吸機能を改善するＧＡＡの量である。有効量は、例えば、血漿からの筋芽細胞によるＧＡＡ取り込みの動態を確認することによって決定することができる。筋芽細胞のＧＡＡ取り込み速度（Ｋ取り込み）は、約１４１～１４７ｎＭが有効のようである（例えば、Ｍａｇａら、Ｊ． Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２０１２，８；２８８（３），１４２８）。動物モデルでは、血漿中のＧＡＡ活性レベルが約１，０００ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍＬ以上、例えば約１，０００～約２，０００ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍＬで治療効果が認められている。

【0215】

ＨｅｍＡとＨｅｍＢについては、一般に、重症の疾患表現型を中等症に変化させるためには、血液凝固因子濃度が正常人に見られる因子濃度の１％を超えることが必要であると予想されている。重度の表現型は、関節の損傷と生命を脅かす出血を特徴とする。中等症の表現型を軽症の表現型に変えるには、血液凝固因子濃度が正常値の５％を超える必要があると予想される。

【0216】

ＦＶＩＩＩ正常値は約１００－２００ｎｇ／ｍｌで、正常ヒトのＦＩＸレベルは５０００ｎｇ／ｍｌであるが、活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）一段階凝固アッセイなどで決定される機能的凝固により、レベルはこれより多くても少なくても正常とみなされる。したがって、対象／ヒトにおけるＦＶＩＩＩまたはＦＩＸの総量が、正常な対象／ヒトに存在するＦＶＩＩＩまたはＦＩＸの１％より多くなるような（例えば、１００～３００ｎｇ／ｍＬの１％）治療効果を達成することができる。
ＶＩ．Ｃ．免疫反応に関する考察

【0217】

免疫細胞調節剤および細胞質ＤＮＡ感知阻害剤は、ｃＧＡＳ－ＳＴＩＮＧ経路およびインフラマソーム経路、ならびに導入遺伝子発現産物によって媒介される自然免疫応答を低下させるために用いることができる。例えば、ｃＧＡＳ－ＳＴＩＮＧ経路の活性化は、インターフェロン、炎症誘導性サイトカイン、ＩＬ－６、ＩＦＮ－γ、ＩＦＮ－β、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＸＣＬ１０などの炎症誘導性ケモカインの産生を誘導し、炎症や細胞死などの有害な影響を引き起こす。インフラマソーム経路の活性化は、ＩＬ－１β、ＩＬ－１８、ＩＬ－３３のような炎症誘導性サイトカインを産生し、炎症やピロトーシス（ｐｙｒｏｐｔｏｓｉｓ）のような有害な作用を引き起こす。

【0218】

ＤＮＡベクターの投与は、「望ましくない免疫反応」を最小にするか、あるいは全く起こさないようにしなければならない。ＤＮＡによって誘導される望ましくない免疫応答は、ベクターによってコードされる場合、抗原（例えば、細菌またはウイルス）によって誘導される対象における望ましい免疫応答とは異なる。

【0219】

異なる実施形態において、安全または治療上許容される免疫応答は、ＤＮＡの投与に伴う対象における免疫応答のレベルに関し、炎症、サイトカイン放出、インフラマソーム活性化、およびピロトーシス阻害によって決定される。

【0220】

特定の実施形態において、本明細書に記載の方法は、対象において生じ得る、毒性サイトカイン放出または「サイトカイン放出症候群」（ＣＲＳ）または「重症サイトカイン放出症候群」（ｓＣＲＳ）または「サイトカインストーム」；またはピロトーシスの発生率を減少させる。

【0221】

毒性サイトカイン放出または毒性サイトカインレベルを減少させることは、対象における毒性サイトカインレベルの産生を減少もしくは阻害すること、または対象におけるサイトカイン放出症候群もしくはサイトカインストームの発生を阻害もしくは減少させることを含む。特定の実施形態において、毒性サイトカインは炎症誘導性サイトカインを含む。特定の実施形態において、炎症誘導性サイトカインは、ＩＬ－６、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１β、またはＴＮＦ－α、またはそれらの任意の組み合わせを含む。

【0222】

特定の実施形態において、サイトカイン放出症候群は、いくつかの炎症性サイトカインのレベルの上昇、および低血圧、高熱、震えなどの対象における有害な身体反応によって特徴づけられる。特定の実施形態において、ＣＲＳは、ＩＬ－６、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１β、もしくはＴＮＦ－α、またはそれらの組み合わせのレベルの上昇によって特徴づけられる。

【0223】

特定の実施形態において、サイトカインストームまたはピロトーシスの指標としてのサイトカインレベルまたは濃度の測定は、サイトカインレベルまたは濃度の倍数増加、パーセント（％）増加、純増加、または変化率として表すことができる。特定の実施形態において、あるレベル以上の絶対的サイトカインレベルまたは濃度は、サイトカインストームを経験している、または経験しようとしている対象の指標となり得る。特定の実施形態において、あるレベルまたは濃度における絶対的サイトカインレベルまたは濃度、例えば、非ウイルス性遺伝子治療を受けていないコントロール対象において通常見出されるレベルまたは濃度は、遺伝子治療を受けている対象においてサイトカインストームの発生を阻害または低減する方法の指標となり得る。

【0224】

「サイトカインレベル」という用語は、濃度の尺度、倍数変化の尺度、パーセント（％）変化の尺度、または速度変化の尺度を包含し得る。さらに、血液、唾液、血清、尿、血漿中のサイトカインを測定する方法は、当技術分野でよく知られている。

【0225】

特定の実施形態において、ＩＦＮ－γレベルは、サイトカインストームの指標として、および／またはサイトカインストームに対する治療の有効性の共通の指標として用いることができる。特定の実施形態において、ＩＬ－６レベルはサイトカインストームの共通の尺度として、および／またはサイトカインストームに対する治療の有効性の共通の尺度として用いることができる。他のサイトカインもサイトカインストームのマーカーとして用いることができ、例えばＴＮＦ－α、ＩＢ－１α、ＩＬ－８、ＩＬ－１３などがある。

【0226】

特定の実施形態において、ＩＬ－１８は、ピロトーシスの指標として、および／またはピロトーシスに対する治療の有効性の指標として使用される。

【0227】

対象におけるサイトカインのレベルは、ＤＮＡの投与前および／または投与後に分析、測定または決定することができる。対象のサイトカインレベルは、ＤＮＡの投与前および／または投与後に、複数回分析または測定することができる。生物学的試料中のサイトカインレベルを分析・測定するための例示的な方法には、メソスケールデリバリープラットフォーム（ＭＳＤ）が含まれる。

【0228】

セクションＩＶで述べた免疫細胞調節剤は、ＤＮＡベクターまたは細胞質ＤＮＡ感知阻害剤の投与前、投与中、投与後に投与することができる。異なる実施形態では、導入遺伝子を含むＤＮＡベクターおよび薬学的に許容される担体が投与される約１分～約１時間、約２時間、約３時間、または約４時間前に免疫細胞調節剤が投与される。異なる実施形態では、ＤＮＡベクターは免疫細胞調節剤の約１分～約１時間、２時間、３時間、４時間前に投与される。異なる実施形態では、免疫細胞調節剤は、ＤＮＡの少なくとも１日前に、任意選択でＤＮＡベクターの１年前までに投与され、例えば５２週、５１週、５０週、４９週、４８週、４７週、４６週、４５週、４４週、４３週、４２週、４１週、４０週、３９週、３８週、３７週、３６週、３５週、３４週、３３週、３２週以下に投与される、３１週、３０週、２９週、２８週、２７週、２６週、２５週、２４週、２３週、２２週、２１週、２０週、１９週、１８週、１７週、１６週、１５週、１４週、１３週、１２週、１１週、１０週、９週、８週、７週、６週、５週、４週、３週、２週、１週、６日、５日、４日、３日、または２日前までにＤＮＡベクターは投与され、任意選択でＤＮＡベクターの、例えば１週間、２週間、３週間、４週間前に投与される。

【0229】

特定の実施形態では、ビスホスホネートおよび／または免疫細胞調節剤は、ＤＮＡを含むナノ粒子内に含まれる。例えば、ＬＮＰ、ＬＰＮＰ、ポリマーナノ粒子、タンパク質ベースのナノ粒子、またはペプチドケージ内にカプセル化される。
ＶＩ．Ｄ．併用療法

【0230】

本明細書に記載のＤＮＡベクターは、特定の疾患または障害に対する他の治療法と組み合わせて使用することができる。
ＶＩ．Ｅ．キット

【0231】

さらに本明細書では、少なくとも（ａ）ＤＮＡを含むナノ粒子を含む医薬組成物；（ｂ）ｃＧＡＳ－ＳＴＩＮＧ経路阻害剤およびインフラマソーム経路阻害剤からなる群から選択される細胞質ＤＮＡ感知阻害剤；および（ｃ）任意選択で免疫細胞調節剤を別々の容器で提供するキットを提供する。異なる態様および実施形態において、ＤＮＡおよび細胞質ＤＮＡ感知阻害剤は、第１、第２、第３、第４の態様および関連する実施形態のいずれかに記載されている通りであり；そして免疫細胞調節剤は、セクションＩＶ（上掲）を通して記載されている通りである。異なる成分の量は、上掲のセクションＶ．およびＶＩ．全体を含め、本明細書で提供されるガイダンスに基づいて容易に求めることができる。キットはまた、本明細書に記載される方法に従って投与するための指示を記載したラベルを提供することができる。

【0232】

本出願を通じて、本発明の多くの異なる態様と実施形態が説明されてきた。それにもかかわらず、当業者は、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、本発明を様々な用途および条件に適合させるために様々な変更および修正を加えることができる。

【実施例】

【0233】

以下に、本発明の異なる特徴および本発明を実施するための方法論をさらに例示する。提供された実施例は、特許請求された発明を限定するものではない。
実施例１：Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｈ－１５１によるＤＮＡ－ＬＮＰ誘導ＩＲＦ活性化の抑制

【0234】

ＴＨＰ１－Ｄｕａｌ^ＴＭ細胞（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ社製）を９６ウェルプレートに４５，０００細胞／ウェルの密度で播種した。一晩培養した後、細胞を２５ｎｇのＤＮＡ－ＬＮＰ／ウェルで、０、０．２または２．１ｎｇの低分子ＳＴＩＮＧ阻害剤Ｈ－１５１（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ社製）の存在下で処理した。Ｈ－１５１は、ａ）ＬＮＰ中のＤＮＡと共封入されるか、ｂ）可溶性の形態で提供される。２４時間培養後、細胞培養上清中の 発光シグナル（ルシアルシフェラーゼ）を測定することにより、インターフェロン調節因子（ＩＲＦ）経路の活性化（「ｆｏｌｄ ＩＲＦ活性」）を決定した。ＤＮＡ－ＬＮＰは、（１）ＤＮＡプラスミド（ヒト凝固第ＩＸ因子（ｈＦＩＸ）をコードするナノプラスミド発現カセット）と、（２）Ｌｉｐｉｄ５（Ｓａｂｎｉｓら、Ｉ．Ａ．後述にさらに記載）、５０％；Ｃ１４－ＰＥＧ２０００、１．５％；コレステロール、３８．５％；およびＤＳＰＣ、１０％から構成された。

【0235】

可溶性Ｈ－１５１は、ＬＮＰ－ＤＮＡによって誘導されたＩＲＦ活性化（サイトカイン誘導によって示される）に対して阻害効果を示し、この効果は、Ｈ－１５１をＤＮＡ－ＬＮＰでカプセル化した場合に顕著であった（図１）。
実施例２：Ｉｎ Ｖｉｖｏ ＬＮＰカプセル化Ｈ－１５１のＤＮＡ－ＬＮＰ誘導サイトカイン放出抑制作用

【0236】

ＢＡＬＢ／ｃマウスに１０μｇのＤＮＡ－ＬＮＰまたはＨ－１５１をカプセル化した１０μｇのＤＮＡ－ＬＮＰを注射した。Ｈ－１５１は約１－２μｇ／マウス（約０．０４－０．０８ｍｇ／ｋｇマウス）の用量で投与された。血漿中のサイトカインレベルは注射後４時間で測定された。図２Ａ、２Ｂ、２Ｃおよび２Ｄは、ＤＮＡ－ＬＮＰでカプセル化したＨ－１５１が、ＤＮＡ誘導ＩＦＮ－β（図２Ａ）、ＩＦＮ－α（図２Ｂ）、ＩＦＮ－γ（図２Ｃ）およびＩＬ－６（図２Ｄ）を阻害する能力を示している。ＤＮＡ－ＬＮＰは上記の実施例１に記載された通りであった。
実施例３：Ｉｎ Ｖｉｖｏ ＲＯ３１５０とＧＳＫ６９０６９３によるＤＮＡ－ＬＮＰ誘発サイトカイン放出抑制作用

【0237】

ＤＮＡ－ＬＮＰ投与前にＢＡＬＢ／ｃマウスをデキサメタゾン、ＧＳＫ６９０６９３、またはＲＯ３１５０で前処理し、ＤＮＡ－ＬＮＰ投与４時間後に血漿中サイトカイン濃度を測定した。ＤＮＡ－ＬＮＰは、（１）ＤＮＡプラスミド（ｈＦＩＸをコードするナノプラスミド発現カセット）；および（２）ＧｅｎＶｏｙ－ＩＬＭ^TM ＬＮＰから構成された。ＧｅｎＶｏｙ－ＩＬＭ^TM ＬＮＰは、イオン化可能な脂質を５０％、ＤＳＰＣを１０％、コレステロールを３７．５％、安定剤（ＰＥＧ－Ｌｉｐｉｄ）を２．５％含む（Ｒｏｃｅｓら，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，２０２０ １２，１０９５を参照）。前処置は、デキサメタゾン２００μｇをＤＮＡ－ＬＮＰ投与の約１時間前に腹腔内投与、ＧＳＫ６９０６３ ３１２．５μｇをＤＮＡ－ＬＮＰ投与の約１時間前に腹腔内投与、またはＲＯ３０１５ ６０μｇをＤＮＡ－ＬＮＰ投与の直前に静脈内投与した。

【0238】

図３Ａ、３Ｂ、３Ｃ、３Ｄ、３Ｅ、３Ｆ、３Ｇ、３Ｈは、ＲＯ３１５０、ＧＳＫ６９０６９３、およびデキサメタゾンの、ＤＮＡ－ＬＮＰによって誘導されるサイトカイン／ケモカインレベルを阻害する能力を示している。採用した用量では、デキサメタゾンとＲＯ３１５０は広く活性を示し、ＧＳＫ６９０６９３はＩＬ－６とＫＣ／ＧＲＯを除くほとんどのサイトカイン／ケモカインレベルを低下させた。
実施例４：ＳＴＩＮＧシグナル伝達の遮断

【0239】

野生型（ＷＴ）マウスおよび細胞質二本鎖ＤＮＡ（ｄｓＤＮＡ）センサーであるＳＴＩＮＧのミスセンス変異であるＧｏｌｄｅｎｔｉｃｋｅｔ（ＳＴＩＮＧ（Ｇｔ））を持つマウス（各群ｎ＝５）に、ＤＮＡ－ＬＮＰ（それぞれ０．６２５ｍｐｋ（２５μｇ／マウス）および１．２５ｍｐｋ（５０μｇ／マウス））を２つの時点（ｔ＝０日およびｔ＝４１日）で全身投与（尾静脈からボーラス投与）した。ＤＮＡ－ＬＮＰは、３５％のｂＣＫＫ－Ｅ１２脂質（後述のＩ．Ａ．にさらに記載）；２．４％のＣ１４－ＰＥＧ２０００；０．１％のＧａｌＮＡｃ ＰＥＧ Ｃ１８；４６．５％のコレステロール；および１６％のＤＯＰＥを含むＬＮＰにカプセル化されたヒト凝固因子ＩＸ（ｈＦＩＸ）をコードするナノプラスミドＤＮＡから構成されていた。図４Ａ、４Ｂ、および４Ｃは、４１日目の投与４時間後に測定した血漿中サイトカインレベル（それぞれＩＬ－６、ＩＦＮα、およびＩＦＮγ）を示し、ＷＴマウスのプールした投与前の血漿中レベル（「ベースライン」）と比較した（すなわち、ＤＮＡ－ＬＮＰを投与していないＷＴマウスで測定した）。図４Ｄは、各群のマウスの生存期間を７０日まで追跡したものである。図４Ｅは、７０日目までの各群の生存マウスにおいて、投与後の様々な時点でＥＬＩＳＡにより測定した血漿中のトランスジェニックｈＦＩＸタンパク質レベルを示す。ＳＴＩＮＧシグナル伝達の遮断はＤＮＡ－ＬＮＰの忍容性、生存率、導入遺伝子発現を改善する。

【0240】

ＳＴＩＮＧの遺伝子遮断マウス（Ｇｏｌｄｅｎｔｉｃｋｅｔマウス）は、ＷＴマウスと比較して、ＤＮＡ－ＬＮＰ遺伝子治療を投与したマウスのＩＬ－６の減少（図４Ａ）、ＩＦＮαの減少（図４Ｂ）、ＩＦＮ－γの減少（図４Ｃ）、および生存率の改善（図４Ｄ）をもたらした。ＳＴＩＮＧ遮断により、ＤＮＡ－ＬＮＰ遺伝子治療導入遺伝子の発現もＷＴマウスに比べて増加した（図４Ｅ）。

【0241】

このデータは、ＤＮＡ－ＬＮＰ遺伝子治療の忍容性と有効性を改善するアプローチとして、ＳＴＩＮＧシグナルを標的とした治療を支持するものである。遺伝子治療のｄｓＤＮＡペイロードにより、免疫細胞（そしておそらく標的細胞も）の炎症反応に対する感受性が低下するなどの利点が期待される。

【0242】

本発明を、その特定の実施形態を参照して説明および図示したが、当業者は、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、手順およびプロトコルの様々な適合、変更、修正、置換、削除、または追加がなされ得ることを理解するであろう。

【図1】

【図2】

【図3-1】

【図3-2】

【図4-1】

【図4-2】

【図4-3】

【配列表】

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【国際調査報告】