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特表2024-541121イソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体、製造方法及びその用途
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-11-06
(54)【発明の名称】イソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体、製造方法及びその用途
(51)【国際特許分類】
C07H 15/18 20060101AFI20241029BHJP
A61K 31/7028 20060101ALI20241029BHJP
A61P 25/02 20060101ALI20241029BHJP
A61P 25/04 20060101ALI20241029BHJP
A61P 27/02 20060101ALI20241029BHJP
【ＦＩ】
C07H15/18 CSP
A61K31/7028
A61P25/02
A61P25/04
A61P27/02
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024547816
(86)(22)【出願日】2022-10-25
(85)【翻訳文提出日】2024-04-24
(86)【国際出願番号】 CN2022127414
(87)【国際公開番号】W WO2023072085
(87)【国際公開日】2023-05-04
(31)【優先権主張番号】63/271,411
(32)【優先日】2021-10-25
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】524158209
【氏名又は名称】陳令儀
(74)【代理人】
【識別番号】100091683
【弁理士】
【氏名又は名称】▲吉▼川 俊雄
(74)【代理人】
【識別番号】100179316
【弁理士】
【氏名又は名称】市川 寛奈
(72)【発明者】
【氏名】陳令儀
(72)【発明者】
【氏名】王翊
(72)【発明者】
【氏名】廖▲ぶん▼玲
(72)【発明者】
【氏名】李育棠
(72)【発明者】
【氏名】呂亭萱
(72)【発明者】
【氏名】黄郁文
(72)【発明者】
【氏名】李家維
(72)【発明者】
【氏名】王貞
(72)【発明者】
【氏名】陳方儀
(72)【発明者】
【氏名】焦伝金
【テーマコード（参考）】
4C057
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C057AA17
4C057BB02
4C057DD01
4C057JJ19
4C086AA01
4C086AA02
4C086AA03
4C086AA04
4C086EA07
4C086GA16
4C086MA59
4C086ZA02
4C086ZA20
4C086ZA33
(57)【要約】
イソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体及びその合成方法に関する。且つ、当該誘導体は、脳神経及び網膜神経の再生と、脳神経及び網膜神経の損傷修復を有効に促進可能とする。
【選択図】図４Ａ
【選択図】図４Ａ
【特許請求の範囲】
【請求項1】
化学構造式が化学式（１）の通りであり、【化1】
【化2】
【化3】
Ｒ５は、水素、デューテリウム、トリチウム、ヒドロキシ基、カルボニル基又はハロゲンであり、
Ｒ６は、水素、デューテリウム、トリチウム、ヒドロキシ基、カルボニル基又はハロゲンであり、
Ｒ７は、水素、デューテリウム、トリチウム、ヒドロキシ基、カルボニル基又はハロゲンであり、
Ｒ１”は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム、トリチウム又はヒドロキシ基であり、
Ｒ２”は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム、トリチウム又はヒドロキシ基であり、
Ｒ３”は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム又はトリチウムであり、
Ｒ４”は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム又はトリチウムであることを特徴とするイソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体。
【請求項2】
前記Ｒ１が化学式（２）の場合、【化4】
【化5】
前記Ｒ５は、水素、デューテリウム、トリチウム、ヒドロキシ基、カルボニル基又はハロゲンであり、
前記Ｒ６は、水素、デューテリウム、トリチウム、ヒドロキシ基、カルボニル基又はハロゲンであり、
前記Ｒ７は、水素、デューテリウム、トリチウム、ヒドロキシ基又はハロゲンであり、
前記Ｒ１”は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム、トリチウム又はヒドロキシ基であり、
前記Ｒ２”は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム、トリチウム又はヒドロキシ基であり、
前記Ｒ３”は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム又はトリチウムであり、
前記Ｒ４”は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム又はトリチウムであることを特徴とする請求項１に記載のイソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体。
【請求項3】
前記Ｒ１が化学式（３）の場合、【化6】
【化7】
前記Ｒ５は、水素、デューテリウム、トリチウム、ヒドロキシ基、カルボニル基又はハロゲンであり、
前記Ｒ６は、水素、デューテリウム、トリチウム、ヒドロキシ基、カルボニル基又はハロゲンであり、
前記Ｒ７は、水素、デューテリウム、トリチウム、ヒドロキシ基又はハロゲンであり、
前記Ｒ１”は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム、トリチウム又はヒドロキシ基であり、
前記Ｒ２”は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム、トリチウム又はヒドロキシ基であり、
前記Ｒ３”は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム又はトリチウムであり、
前記Ｒ４”は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム又はトリチウムであることを特徴とする請求項１に記載のイソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体。
【請求項4】
前記誘導体は、下記化学式の化合物を含み、【化8】
【化9】
前記Ｒ２は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム、トリチウム又はヒドロキシ基であり、
前記Ｒ３は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム又はトリチウムであり、
前記Ｒ４は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム又はトリチウムであり、
前記Ｒ５は、水素、デューテリウム、トリチウム、ヒドロキシ基、カルボニル基又はハロゲンであり、
前記Ｒ６は、水素、デューテリウム、トリチウム、ヒドロキシ基又はハロゲンであることを特徴とする請求項１に記載のイソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体。
【請求項5】
化学式（６）で表されるイソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体の製造方法であって、【化10】
【化11】
（Ｂ）オレフィン化反応、還元反応及び脱保護反応によって、化学式（８）で表される化合物を化学式（９）で表される化合物に変換し、
【化12】
（Ｃ）糖結合反応によって、化学式（９）で表される化合物を化学式（１０）で表される化合物に結合することで、化学式（１１）で表される化合物を形成し、
【化13】
（Ｄ）脱ケタール化、異性化、脱ベンゾイル及び１，４－還元反応によって、前記化学式（１１）で表される化合物を化学式（６）で表される化合物に変換し、
化学式（１１）で表される化合物は、まず、脱ケタール化及び異性化反応を行い、前記脱ケタール化及び異性化反応は試薬１により行い、前記試薬１は、酢酸水溶液、塩酸水溶液、トリフルオロ酢酸水溶液、ＴｓＯＨとＨ２Ｏ、ＨＣｌを１，４－ｄｉｏｘａｎｅに溶解した混合溶液（ＨＣＬ ｉｎ １，４－ｄｉｏｘａｎｅ）又は硫酸水溶液であり、続いて、脱ベンゾイルを行い、前記脱ベンゾイルは脱ベンゾイル試薬を用いて行い、前記脱ベンゾイル試薬は、水酸化ナトリウム、ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、水酸化カリウム、カリウムメトキシド、カリウムエトキシド、塩化水素－メタノール溶液、塩酸水溶液、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）とＨ２Ｏ、又は硫酸水溶液であり、続いて、１，４－還元反応を行って、目標とする化学式（６）の化合物を取得し、前記１，４－還元反応は１，４－還元反応試薬により行い、前記１，４－還元反応試薬は、水素化ホウ素ナトリウム、水素化リチウムアルミニウム、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢ（ＯＡｃ）３Ｈ）、ＮａＢＣＮＨ３、Ｌ－ｓｅｌｅｃｔｒｉｄｅ（リチウムトリ－ｓｅｃ－ブチルボロヒドリド）、［ＣｕＨ（ＰＰｈ３）］６、ｄｉｉｓｏｂｕｔｙｌ ａｌｕｍｉｎｕｍ ｈｙｄｒｉｄｅ（ＤＩＢＡＬ，ジイソブチルアルミニウムヒドリド）又はＨ２／Ｐｄ／Ｃであり、前記１，４－還元反応の反応温度は－７８～２５℃であり、
Ｒ１は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム、トリチウム又はヒドロキシ基であり、
Ｒ２は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム、トリチウム又はヒドロキシ基であり、
Ｒ３は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム又はトリチウムであり、
Ｒ４は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム又はトリチウムである、
との合成ステップを含むことを特徴とする製造方法。
【請求項6】
前記ステップ（Ｂ）のあと、更に、【化14】
【化15】
Ｒ１は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム、トリチウム又はヒドロキシ基であり、
Ｒ２は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム、トリチウム又はヒドロキシ基であり、
Ｒ３は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム又はトリチウムであり、
Ｒ４は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム又はトリチウムである、
との合成ステップを含んでもよいことを特徴とする請求項５に記載の化学式（６）で表されるイソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体の製造方法。
【請求項7】
前記製造方法のあと、更に、【化16】
【化17】
Ｒ１は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム、トリチウム又はヒドロキシ基であり、
Ｒ２は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム、トリチウム又はヒドロキシ基であり、
Ｒ３は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム又はトリチウムであり、
Ｒ４は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム又はトリチウムである、
との合成ステップを含むことを特徴とする請求項６に記載の化学式（６）で表される化合物であるイソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体の製造方法。
【請求項8】
化学式（１２）で表される化合物であるイソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体の製造方法であって、【化18】
【化19】
Ｒ１は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム、トリチウム又はヒドロキシ基であり、
Ｒ２は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム、トリチウム又はヒドロキシ基であり、
Ｒ３は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム又はトリチウムであり、
Ｒ４は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム又はトリチウムである、
との合成ステップを含むことを特徴とする製造方法。
【請求項9】
更に、【化20】
【化21】
Ｒ１は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム、トリチウム又はヒドロキシ基であり、
Ｒ２は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム、トリチウム又はヒドロキシ基であり、
Ｒ３は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム又はトリチウムであり、
Ｒ４は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム又はトリチウムである、
との合成ステップを含むことを特徴とする請求項８に記載の化学式（１２）で表されるイソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体の製造方法。
【請求項10】
更に、【化22】
【化23】
Ｒ１は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム、トリチウム又はヒドロキシ基であり、
Ｒ２は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム、トリチウム又はヒドロキシ基であり、
Ｒ３は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム又はトリチウムであり、
Ｒ４は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム又はトリチウムである、
との合成ステップを含むことを特徴とする請求項８に記載の化学式（１２）で表される化合物であるイソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体の製造方法。
【請求項11】
神経損傷を治療する医薬品を製造するための請求項１に記載のイソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体の用途。
【請求項12】
前記神経損傷は中枢神経又は末梢神経の損傷であることを特徴とする請求項１１に記載の神経損傷を治療する医薬品を製造するためのイソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体の用途。
【請求項13】
前記神経損傷はニューロンの損傷であることを特徴とする請求項１１に記載の神経損傷を治療する医薬品を製造するためのイソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体の用途。
【請求項14】
前記神経損傷は、皮質ニューロン（ｃｏｒｔｉｃａｌ ｎｅｕｒｏｎｓ）又は海馬ニューロン（ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ ｎｅｕｒｏｎｓ）の損傷であることを特徴とする請求項１１に記載の神経損傷を治療する医薬品を製造するためのイソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体の用途。
【請求項15】
前記治療とは、神経の再生、神経数の増加又は神経の修復であることを特徴とする請求項１１に記載の神経損傷を治療する医薬品を製造するためのイソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体の用途。
【請求項16】
前記イソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体は、血液脳関門（ｂｌｏｏｄ－ｂｒａｉｎ ｂａｒｒｉｅｒ）を通過して大脳に進入することを特徴とする請求項１１に記載の神経損傷を治療する医薬品を製造するためのイソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体の用途。
【請求項17】
前記イソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体の有効用量は、９．６７４ｎＭ～１３４２μＭであることを特徴とする請求項１１に記載の神経損傷を治療する医薬品を製造するためのイソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体の用途。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、イソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド（Ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ－Ｄ－ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ）誘導体及びその合成方法と、神経修復を促進するためのイソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体の用途を提供する。
【背景技術】
【0002】
現在、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）のような神経損傷については、世界中で毎年約７千万人がその病症に悩まされている。一般的な治療法は、物理療法、高気圧酸素治療、経頭蓋磁気刺激及び経頭蓋直流電気刺激といった非侵襲的な治療法であり、ＴＢＩ後の抑うつや認知機能を改善可能である。しかし、現在のところ、脳損傷後の神経再生を促進可能とする有効な薬物は存在しない。
【0003】
外傷性脳損傷は、外力が脳部に衝撃を与えることで生じる損傷であり、世界中で毎年約７０００万近くの診断事例がある。外傷性脳損傷は、脳神経を損傷させることで、患者の行動又は認知機能の欠損を招来する。中枢神経系は損傷すると再生や回復が難しいため、現在の医学では、外傷性脳損傷について神経再生を有効に促進する治療法が存在しない。また、脳外傷患者は、一定期間後に脳部に病変が生じたり、将来的に脳神経変性疾患が生じたりすることが多い。そのため、脳損傷後にいち早く脳神経の再生を促進する薬物を使用することが、治療における解決手法となる。
【0004】
上記だけでなく、治療薬の選択においては、大脳は血液脳関門を有しているため、一般的な薬物は自在に血液脳関門を通過して有効用量に達することができない。よって、脳部の疾患を治療する際には、有効薬物の投与が重要な課題となる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0005】
以上に鑑みて、現在、神経損傷を治療可能な薬物の開発が極めて必要とされているほか、血液脳関門を通過可能な投薬方式も極めて必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【0006】
発明の概要は、閲覧者が本開示の内容について基本的な理解を持ち得るよう、本開示の内容のあらましを提供することを主旨としている。この発明の概要は、本開示の内容を完全にとりまとめるものではなく、本発明の実施例の重要／主要アセンブリを指摘したり、本発明の範囲を規定したりすることを意図していない。
【0007】
人体の神経系統は中枢神経と末梢神経に分けられるが、これらはいずれもニューロンで構成される。三叉神経は、末梢神経のうちの脳神経であって、橋（中枢神経）につながっている。よって、本発明の化合物は、鼻腔粘膜を通じて嗅上皮細胞を通過し、嗅覚及び三叉神経周辺の経路に入って大脳に進入するのと同時に、末梢神経を通じて全身の神経を修復するとの効果を達成可能である。
【0008】
以上に鑑みて、本発明では、修復が容易でない脳神経を実験対象とする。こうすることで、神経系統内の中枢神経及び末梢神経をいずれも修復可能にするとの効果が達成される。
【0009】
「中枢神経」は脳と脊髄からなる。本発明で言うところの「中枢神経」は、嗅脳、扁桃体、海馬、新皮質、側脳室、視床上部、視床、視床下部、視床腹部、脳下垂体、松果体、第三脳室、中脳蓋、大脳脚、視蓋前野、中脳水道、橋、小脳延髄、脊髄を含むが、これらに限らない。
【0010】
「末梢神経」は、体性神経系及び自律神経系からなる。本発明で言うところの「末梢神経」は、知覚神経、運動神経、脳神経、脊髄神経、交感神経、副交感神経、腸管神経系を含むが、これらに限らない。
【0011】
本発明は、化学式（１）で表される化学構造を有するイソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド（Ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ－Ｄ－ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ）誘導体を提供する。
【0012】
【化1】
【0013】
Ｒ１は、置換又は非置換の化学式（２）又は化学式（３）で表される化学構造である。
【0014】
【化2】
【0015】
Ｒ２及びＲ３は、置換又は非置換の化学式（４）又は化学式（５）で表される化学構造である。
【0016】
【化3】
【0017】
Ｒ４は、水素、デューテリウム、トリチウム、ヒドロキシ基又はハロゲンである。
【0018】
Ｒ５は、水素、デューテリウム、トリチウム、ヒドロキシ基、カルボニル基又はハロゲンである。
【0019】
Ｒ６は、水素、デューテリウム、トリチウム、ヒドロキシ基、カルボニル基又はハロゲンである。
【0020】
Ｒ７は、水素、デューテリウム、トリチウム、ヒドロキシ基又はハロゲンである。
【0021】
Ｒ１”は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム、トリチウム又はヒドロキシ基である。
【0022】
Ｒ２”は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム、トリチウム又はヒドロキシ基である。
【0023】
Ｒ３”は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム又はトリチウムである。
【0024】
Ｒ４”は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム又はトリチウムである。
【0025】
いくつかの実施例において、本発明のイソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体は、下記化学式の化合物を含む。
【0026】
【化4】
【0027】
【化5】
【0028】
前記Ｒ１は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム、トリチウム又はヒドロキシ基である。
【0029】
前記Ｒ２は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム、トリチウム又はヒドロキシ基である。
【0030】
前記Ｒ３は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム又はトリチウムである。
【0031】
前記Ｒ４は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム又はトリチウムである。
【0032】
前記Ｒ５は、水素、デューテリウム、トリチウム、ヒドロキシ基、カルボニル基又はハロゲンである。
【0033】
前記Ｒ６は、水素、デューテリウム、トリチウム、ヒドロキシ基又はハロゲンである。
【0034】
本発明で使用する「イソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体」は、「神経損傷の治療」に用いられる。出願する本件特許の発明の内容を当業者が理解できるよう、本発明では、「イソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体」における「アンペロプシシオノシド（Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓｉｏｎｏｓｉｄｅ）」、「ビザンチオノシドＢ（Ｂｙｚａｎｔｉｏｎｏｓｉｄｅ Ｂ）」及び「ロセオシド（Ｒｏｓｅｏｓｉｄｅ）」を実施例として使用する。
【0035】
いくつかの実施例において、本発明のイソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体における下記化学式（６）の化合物は、以下の化学合成ステップで得られる
【0036】
【化6】
【0037】
（Ａ）下記のフロー１に示すように、ビスアルキル化反応、アシル化反応及びアルキン求核付加反応によって、化学式（７）の化合物を化学式（８）の化合物に変換する。
【0038】
【化7】
【0039】
化学式（８）で表される化合物の置換基については、それぞれ、Ｒ１は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム、トリチウム又はヒドロキシ基であり、Ｒ２は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム、トリチウム又はヒドロキシ基であり、Ｒ３は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム又はトリチウムであり、Ｒ４は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム又はトリチウムである可能性がある。
【0040】
前記ビスアルキル化反応は求電子剤１により行う。前記求電子剤１は、ヨウ化メチル、ヨウ化エチル、ヨウ化プロピル、ＭｅＯＴｆ、ＥｔＯＴｆ、ＰｒＯＴｆ、臭化プロピル／ヨウ化ナトリウム又は硫酸ジメチルである。前記アシル化反応の試薬は、ホルムアルデヒド、アセトアルデヒド又はプロピオンアルデヒドである。この中間体について、更に、アルキン求核付加反応を行うことで化合物（８）を取得する。当該アルキン求核付加の試薬は、Ｒ４の官能基を有するアルキン及び塩基を含む。この塩基は、ｎブチルリチウム（ｎＢｕＬｉ）、リチウムジイソプロピルアミド（ＬＤＡ）、リチウムビス（トリメチルシリル）アミド（ＬＨＭＤＳ）を含む。また、当該Ｒ４の官能基は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム又はトリチウムである。
【0041】
（Ｂ）下記のフロー２に示すように、オレフィン化反応、還元反応及び脱保護反応によって、化学式（８）で表される化合物を化学式（９）で表される化合物に変換する。
【0042】
【化8】
【0043】
化学式（８）で表される化合物は、オレフィン化反応において、まず、求電子剤２及びアミン系試薬を利用して低温条件で反応することで、化学式（９）で表される化合物を生成する。前記求電子剤２は、メシルクロリド（ｍｅｓｙｌ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、トシルクロリド（ｔｏｓｙｌ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、無水酢酸、無水安息香酸、ヨウ化メチル又は硫酸ジメチルである。前記アミン系試薬は、トリエチルアミン、ジエチルアミン、ピリジン、ピロリジン（ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎｅ）、ジイソプロピルエチルアミン（ｅｔｈｙｌｄｉｓｉｏｐｒｏｐｙｌ ａｍｉｎｅ）、２，６－ルチジン（２，６－ｌｕｔｉｄｉｎｅ）、又は、１，４－ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン（１，４－ｄｉａｚａｂｉｃｙｃｌｏ［２，２，２］ｏｃｔａｎｅ）である。また、前記低温条件の温度は－３０～２５℃である。続いて、完了後に、第２の塩基を加えてオレフィン化を完了させる。前記第２の塩基は、カリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｔｅｒｔ－ｂｕｔｏｘｉｄｅ）、水酸化ナトリウム、ナトリウムメトキシド、又は、１，８－ジアザビシクロ［５，４，０］ウンデク－７－エン（１，８－ｄｉａｚａｂｉｃｙｃｌｏ［５，４，０］ｕｎｄｅｃ－７－ｅｎｅ）である。続いて、完了後に、還元反応を行う。前記還元反応では、還元剤として還元剤１を用いる。前記還元剤１は、水素化リチウムアルミニウム、ジイソブチルアルミニウムヒドリド（ｄｉｉｓｏｂｕｔｙｌ ａｌｕｍｉｎｕｍ ｈｙｄｒｉｄｅ（ＤＩＢＡＬ））、水素化ホウ素ナトリウム、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢ（ＯＡｃ）３Ｈ）、水素化トリエチルホウ素リチウム（Ｌｉｔｈｉｕｍ ｔｒｉｅｔｈｙｌｂｏｒｏｈｙｄｒｉｄｅ）、又は、水素化ビス（２－メトキシエトキシ）アルミニウムナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ ｂｉｓ（２－ｍｅｔｈｏｘｙｅｔｈｏｘｙ）ａｌｕｍｉｎｉｕｍｈｙｄｒｉｄｅ）である。前記還元反応の反応温度は－５０～２５℃である。続いて、完了後に、脱保護ステップを行う。前記脱保護ステップでは、脱保護試薬１を用いて脱保護反応を行うことで、化学式（９）で表される化合物を取得する。前記脱保護試薬１は、テトラブチルアンモニウムフルオリド（ｔｅｔｒａｂｕｔｙｌ ａｍｍｏｎｉｕｍ ｆｌｕｏｒｉｄｅ（ＴＢＡＦ））、無水フッ化水素酸－ピリジン（ＨＦ－ｐｙ）、塩酸又はカリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｔｅｒｔ－ｂｕｔｏｘｉｄｅ）である。前記脱保護反応の反応温度は－３５～２５℃である。
【0044】
（Ｃ）下記のフロー３に示すように、糖結合反応によって、化学式（９）で表される化合物を化学式（１０）で表される化合物に結合することで、化学式（１１）で表される化合物を形成する。
【0045】
【化9】
【0046】
化学式（９）で表される化合物が、前記糖結合反応により、糖結合試薬１を利用して反応することで、化学式（１０）で表される化合物が得られる。前記糖結合試薬１は、硫化ニッケル／トリフルオロメタンスルホン酸銀（ＮＩＳ／ＡｇＯＴｆ）、ブロモスルホフタレイン／トリ－ｔｅｒｔ－ブチルフェノール／トリフルオロメタンスルホン酸無水物（ＢＳＰ／ＴＴＢＰ／Ｔｆ２Ｏ）、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル／硫化ニッケル（ＴＭＳＯＴｆ／ＮＩＳ）、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシ（ＴＭＳＯＴｆ）、トリフルオロメタンスルホン酸銀（ＡｇＯＴｆ）又はＣｕＯＴｆである。また、前記糖結合反応の反応温度は－７８～０℃である。
【0047】
（Ｄ）脱ケタール化、異性化、脱ベンゾイル及び１，４－還元によって、化学式（１１）で表される化合物を化学式（６）で表される化合物に変換する。
【0048】
化学式（１１）で表される化合物は、まず、脱ケタール化及び異性化反応を行う。前記脱ケタール化及び異性化反応は試薬１により行う。前記試薬１は、酢酸水溶液、塩酸水溶液、トリフルオロ酢酸水溶液、ＴｓＯＨとＨ２Ｏ、ＨＣｌを１，４－ｄｉｏｘａｎｅに溶解した混合溶液（ＨＣＬ ｉｎ １，４－ｄｉｏｘａｎｅ）又は硫酸水溶液である。続いて、前記脱ベンゾイル反応を行う。前記脱ベンゾイル反応は脱ベンゾイル試薬を用いて行う。前記脱ベンゾイル試薬は、水酸化ナトリウム、ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、水酸化カリウム、カリウムメトキシド、カリウムエトキシド、塩化水素－メタノール溶液、塩酸水溶液、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）とＨ２Ｏ、又は硫酸水溶液である。続いて、前記１，４－還元反応を行って、化学式（６）で表される化合物を取得する。前記１，４－還元反応は１，４－還元反応試薬により行う。前記１，４－還元反応試薬は、水素化ホウ素ナトリウム、水素化リチウムアルミニウム、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢ（ＯＡｃ）３Ｈ）、ＮａＢＣＮＨ３、リチウムトリ－ｓｅｃ－ブチルボロヒドリド（Ｌ－ｓｅｌｅｃｔｒｉｄｅ）、［ＣｕＨ（ＰＰｈ３）］６、ジイソブチルアルミニウムヒドリド（ｄｉｉｓｏｂｕｔｙｌ ａｌｕｍｉｎｕｍ ｈｙｄｒｉｄｅ（ＤＩＢＡＬ））又はＨ２／Ｐｄ／Ｃである。前記１，４－還元反応の反応温度は－７８～２５℃である。
【0049】
Ｒ１は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム、トリチウム又はヒドロキシ基である。
【0050】
Ｒ２は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム、トリチウム又はヒドロキシ基である。
【0051】
Ｒ３は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム又はトリチウムである。
【0052】
Ｒ４は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム又はトリチウムである。
【0053】
いくつかの実施例において、本発明のイソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体における下記化学式（１２）で表される化合物は、以下の化学合成ステップで得られる。
【0054】
【化10】
【0055】
（Ａ）下記のフロー４に示すように、化学式（１１）で表される化合物を化学式（１２）で表される化合物に変換する。
【0056】
【化11】
【0057】
前記変換は、アセタールの脱保護、異性化、立体選択的脱酸化及びベンゾイル基の脱保護反応を含む。前記アセタールの脱保護及び前記異性化は酸性試薬により行う。前記酸性試薬は、酢酸水溶液、塩酸水溶液、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）とＨ２Ｏ、ＴｓＯＨとＨ２Ｏ、ＨＣｌを１，４－ジオキサン（１，４－ｄｉｏｘａｎｅ）に溶解した混合溶液（ＨＣＬ ｉｎ １，４－ｄｉｏｘａｎｅ）又は硫酸水溶液である。その後、第１低温条件で、還元剤２を用いて立体選択的脱酸化を行う。前記還元剤２は、ＮａＢＨ４、ＬｉＡｌＨ４、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢ（ＯＡｃ）３Ｈ）、ＮａＢＣＮＨ３、Ｅｔ３ＳｉＨ／ＢＦ３－Ｅｔ２Ｏ、リチウムトリ－ｓｅｃ－ブチルボロヒドリド（Ｌ－ｓｅｌｅｃｔｒｉｄｅ）、［ＣｕＨ（ＰＰｈ３）］６又は水素化ジイソブチルアルミニウム（ＤＩＢＡＬ）である。前記還元剤２の量は、０．５、１．０、２．０、３．０、４．０又は５．０当量である。また、前記立体選択的脱酸化ステップにおける前記第１低温条件の温度は－７８～２５℃である。続いて、脱保護試薬２で中間体のベンゾイル基を除去して、化学式（１１）で表される化合物を生成する。前記脱保護試薬２は、ＮａＯＨ、ＮａＯＭｅ、ＮａＯＥｔ、ＫＯＨ、ＫＯＭｅ、ＫＯＥｔ、塩化水素－メタノール溶液、ＨＣｌ水溶液、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）とＨ２Ｏ、又はＨ２ＳＯ４水溶液である。
【0058】
Ｒ１は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム、トリチウム又はヒドロキシ基である。
【0059】
Ｒ２は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム、トリチウム又はヒドロキシ基である。
【0060】
Ｒ３は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム又はトリチウムである。
【0061】
Ｒ４は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム又はトリチウムである。
【0062】
いくつかの実施例において、本発明のイソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体における下記化学式（１３）で表される化合物は、以下の化学合成ステップで得られる。
【0063】
【化12】
【0064】
（Ａ）下記のフロー５に示すように、変換反応によって、化学式（１２）で表される化合物を化学式（１３）で表される化合物に変換する。
【0065】
【化13】
【0066】
前記変換は、位置選択的及び立体選択的な１，４－還元／カルボニル還元を含む。前記位置選択的及び立体選択的な１，４－還元は、還元剤３により第２低温条件で行う。前記還元剤３は、ＮａＢＨ４、ＬｉＡｌＨ４、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢ（ＯＡｃ）３Ｈ）、ＮａＢＣＮＨ３、リチウムトリ－ｓｅｃ－ブチルボロヒドリド（Ｌ－ｓｅｌｅｃｔｒｉｄｅ）、［ＣｕＨ（ＰＰｈ３）］６、ＤＩＢＡＬ又はＨ２，Ｐｄ／Ｃである。前記還元剤３の当量は、０．５、１．０、２．０、３．０、４．０又は５．０当量である。前記位置選択的及び前記立体選択的な１，４－還元ステップにおける前記第２低温条件の温度は－７８～２５℃である。
【0067】
Ｒ１は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム、トリチウム又はヒドロキシ基である。
【0068】
Ｒ２は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム、トリチウム又はヒドロキシ基である。
【0069】
Ｒ３は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム又はトリチウムである。
【0070】
Ｒ４は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム又はトリチウムである。
【0071】
いくつかの実施例において、本発明のイソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体における下記化学式（１４）で記載される化合物は、以下の化学合成ステップで得られる。
【0072】
【化14】
【0073】
（Ａ）下記のフロー６に示すように、選択的アルケン還元によって、化学式（１２）で表される化合物を化学式（１４）で表される化合物に変換する。
【0074】
【化15】
【0075】
前記選択的アルケン還元は還元剤４を用いて行う。前記還元剤４は、水素化ホウ素ナトリウム、水素化リチウムアルミニウム、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢ（ＯＡｃ）３Ｈ）、ＮａＢＣＮＨ３、リチウムトリ－ｓｅｃ－ブチルボロヒドリド（Ｌ－ｓｅｌｅｃｔｒｉｄｅ）、［ＣｕＨ（ＰＰｈ３）］６、ジイソブチルアルミニウムヒドリド（ｄｉｉｓｏｂｕｔｙｌ ａｌｕｍｉｎｕｍ ｈｙｄｒｉｄｅ（ＤＩＢＡＬ））、Ｈ２／Ｐｄ／Ｃ又はＲｈＣｌ（ＰＰＨ３）３／Ｈ２である。前記選択的アルケン還元反応の反応温度は－７８～２５℃である。
【0076】
Ｒ１は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム、トリチウム又はヒドロキシ基である。
【0077】
Ｒ２は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム、トリチウム又はヒドロキシ基である。
【0078】
Ｒ３は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム又はトリチウムである。
【0079】
Ｒ４は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム又はトリチウムである。
【0080】
いくつかの実施例において、本発明のイソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体における下記化学式（１５）で表される化合物は、以下の化学合成ステップで得られる。
【0081】
【化16】
【0082】
（Ａ）下記のフロー７に示すように、脱ケタール化、異性化、脱ベンゾイル保護により、化学式（９）で表される化合物を化学式（１５）で表される化合物に変換する。
【0083】
【化17】
【0084】
前記化学式（９）で表される化合物は、まず、前記脱ケタール化及び前記異性化反応を行う。前記脱ケタール化及び前記異性化反応は、脱ケタール化及び異性化反応試薬を用いて行う。前記脱ケタール化及び異性化反応試薬は、酢酸水溶液、塩酸水溶液、トリフルオロ酢酸水溶液、ＴｓＯＨとＨ２Ｏ、ＨＣｌを１，４－ｄｉｏｘａｎｅに溶解した混合溶液（ＨＣＬ ｉｎ １，４－ｄｉｏｘａｎｅ）又は硫酸水溶液である。また、続く前記脱ベンゾイル保護反応は脱ベンゾイル保護試薬を用いて行う。前記脱ベンゾイル保護試薬は、水酸化ナトリウム、ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、水酸化カリウム、カリウムメトキシド、カリウムエトキシド、塩化水素－メタノール溶液、塩酸水溶液、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）とＨ２Ｏ、又は硫酸水溶液である。
【0085】
Ｒ１は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム、トリチウム又はヒドロキシ基である。
【0086】
Ｒ２は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム、トリチウム又はヒドロキシ基である。
【0087】
Ｒ３は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム又はトリチウムである。
【0088】
Ｒ４は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム又はトリチウムである。
【0089】
いくつかの実施例において、本発明のイソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体における下記化学式（１６）で表される化合物及び化学式（１７）で表される化合物は、以下の化学合成ステップで得られる。
【0090】
下記のフロー８に示すように、選択的還元反応により、化学式（１５）で表される化合物を化学式（１６）で表される化合物及び化学式（１７）で表される化合物に変換する。
【0091】
【化18】
【0092】
化学式（１５）で表される化合物が、前記選択的還元反応を行うことで、選択的還元反応試薬により、化学式（１６）で表される化合物及び化学式（１７）で表される化合物が得られる。前記選択的還元反応試薬は、水素化ホウ素ナトリウム、水素化リチウムアルミニウム、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢ（ＯＡｃ）３Ｈ）、ＮａＢＣＮＨ３、リチウムトリ－ｓｅｃ－ブチルボロヒドリド（Ｌ－ｓｅｌｅｃｔｒｉｄｅ）、［ＣｕＨ（ＰＰｈ３）］６、ジイソブチルアルミニウムヒドリド（ｄｉｉｓｏｂｕｔｙｌ ａｌｕｍｉｎｕｍ ｈｙｄｒｉｄｅ（ＤＩＢＡＬ））又はＨ２／Ｐｄ／Ｃである。また、前記選択的還元反応の反応温度は－７８～２５℃である。
【0093】
Ｒ１は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム、トリチウム又はヒドロキシ基である。
【0094】
Ｒ２は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム、トリチウム又はヒドロキシ基である。
【0095】
Ｒ３は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム又はトリチウムである。
【0096】
Ｒ４は、メチル基、エチル基、プロピル基、水素、デューテリウム又はトリチウムである。
【0097】
いくつかの実施例において、本発明のイソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体は、Ｎｅｕｒｏ２ａ細胞に対する毒性が非常に低い。
【発明の効果】
【0098】
本発明は、更に、神経修復を促進するためのイソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体の用途を提供する。
【0099】
いくつかの実施例において、イソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体を単独で使用した場合、損傷した海馬ニューロン（ｉｎｊｕｒｅｄ ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ ｎｅｕｒｏｎｓ）の再生促進及び３次元の脳組織切片の神経再生促進が可能となる。このことは、当該化合物がニューロンの再生を有効に促進可能とし、且つ、神経損傷の修復に使用可能であることを証明している。
【0100】
いくつかの実施例において、本発明のイソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体は、網膜神経の修復を促進可能とする。
【0101】
いくつかの実施例において、本発明のイソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体は、鼻腔から投与すると、使用者の血液脳関門（ｂｌｏｏｄ－ｂｒａｉｎ ｂａｒｒｉｅｒ）を通過して大脳に進入することで、当該損傷ニューロンの修復を促進可能とする。
【0102】
いくつかの実施例において、本発明のイソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体は、血液脳関門（ｂｌｏｏｄ－ｂｒａｉｎ ｂａｒｒｉｅｒ）を通過して大脳に進入することで、脳神経の修復、再生又は神経数の増加を促進可能とする。
【0103】
いくつかの実施例において、本発明のイソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体は、脳外傷後の皮質ニューロン（ｃｏｒｔｉｃａｌ ｎｅｕｒｏｎｓ）の再生を促進可能とする。
【0104】
いくつかの実施例において、本発明で使用するイソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体の有効用量・濃度は、９．６７４ｎＭ～１３４２μＭである。
【0105】
いくつかの実施例において、本発明のイソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体は、神経修復について顕著な効果を有する。鼻腔から投与された化合物は、血液脳関門（ｂｌｏｏｄ－ｂｒａｉｎ ｂａｒｒｉｅｒ）を通過して大脳に進入すると、損傷したニューロンの修復促進、脳神経の修復、再生又は神経数の増加促進、及び、脳外傷後の皮質ニューロン（ｃｏｒｔｉｃａｌ ｎｅｕｒｏｎｓ）及び海馬ニューロン（ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ ｎｅｕｒｏｎｓ）の軸索の再生促進を可能とする。
【0106】
以下の実施形態を参照することで、当業者は、本発明の基本的精神及びその他の発明の目的と、本発明で用いる技術手段及び実施形態を容易に理解可能となる。
【図面の簡単な説明】
【0107】
【図14】図１４は、本発明における制御的皮質衝撃脳外傷モデル実験のフローチャートと、イソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体であるアンペロプシシオノシドによる脳外傷後のラットの運動能力回復促進実験の結果である。
【発明を実施するための形態】
【0108】
本開示の内容の記載をより詳細且つ十分とするために、以下では、本発明の実施形態及び具体的実施例について説明的に述べる。ただし、これは本発明の具体的実施例を実施又は運用するための唯一の形式ではない。実施形態では複数の具体的実施例の特徴と、それらの具体的実施例を操作するための方法及び用途を網羅しているが、その他の具体的実施例によっても同じ又は均等な効果を達成可能である。理解すべき点として、これらの実施例は本発明を説明するためのものであって、本発明の範囲を制限するものではない。
【実施例1】
【0109】
イソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド（Ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ－Ｄ－ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ）誘導体の細胞毒性実験
【0110】
ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ ｃｅｌｌ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ ａｓｓａｙを用いて、本発明のイソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体であるアンペロプシシオノシド（Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓｉｏｎｏｓｉｄｅ）、ビザンチオノシドＢ（Ｂｙｚａｎｔｉｏｎｏｓｉｄｅ Ｂ）及びロセオシド（Ｒｏｓｅｏｓｉｄｅ）のＮｅｕｒｏ２ａ細胞に対する毒性を検査した。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ ｃｅｌｌ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ ａｓｓａｙにより細胞中のＡＴＰ含有量を測定することで、化合物添加後の細胞の生存率を定量化可能であった。
【0111】
図１Ａ～図１Ｃに示すように、実験結果から明らかなように、Ｎｅｕｒｏ２ａ細胞に対するアンペロプシシオノシド、ビザンチオノシドＢ及びロセオシドのＩＣ５０は、約４．１７５ｍＭ～３２．６５８ｍＭの範囲であった。これより、イソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体は、細胞に対する毒性が非常に低いことが分かった。
【実施例2】
【0112】
イソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体であるアンペロプシシオノシドによるインビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）での海馬神経細胞の神経修復試験
【0113】
図２に示すように、本実験のフローでは、妊娠１８日目のラットの胎児を取り出して、胎児の大脳を大脳皮質（ｃｏｒｔｅｘ）と海馬（ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ）に分けた。次に、大脳皮質と海馬を皮質神経細胞（ｃｏｒｔｉｃａｌ ｎｅｕｒｏｎｓ）と海馬神経細胞（ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ ｎｅｕｒｏｎｓ）に分離し、海馬神経細胞を４８ウェルプレートに移した。この日をＤａｙ Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ ０（ＤＩＶ０）とし、ＤＩＶ２時点でシトシンアラビノシド（Ｃｙｔｏｓｉｎｅ ｂｅｔａ－Ｄ－ａｒａｂｉｎｏｓｉｄｅ，ＡｒａＣ）を添加してグリア細胞（ｇｌｉａｌ ｃｅｌｌ）の増殖を阻害した。そして、ＤＩＶ８時点で、マイクロピペットチップを用いて神経細胞を傷付け、アンペロプシシオノシド（濃度９．６７４ｎＭ～９６７．４μＭ）を添加した。また、０．１％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）をアンペロプシシオノシドの溶媒とした。アンペロプシシオノシドを添加してから７２時間後に、免疫蛍光染色法を用い、ＴＵＪ１抗体で神経細胞を標識して神経再生の状況を観察した。この実験は、Ｚｅｉｓｓ Ｏｂｓｅｒｖｅｒ Ｚ１ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅで撮影した。
【0114】
図３に示すように、隙間閉塞率（ｇａｐ ｃｌｏｓｕｒｅ ｒａｔｅ）から軸索の再生度合いを定量化した。白色の点線は、マイクロピペットチップで擦って神経細胞を傷付けた際に生じた境界であり、中央の黒色部分はマイクロピペットチップで擦られた領域である。再生した神経突起は、点線の両側から中央に向かって成長した。計算方法としては、損傷領域の５０μｍごとに、隙間に線を１本引いて隙間の幅を計算し、合計１０本の線を引いたあとに、平均値である損傷境界間の隙間長（Ｌｅｎｇｔｈ ｏｆ ｇａｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ｉｎｊｕｒｅｄ ｂｏｒｄｅｒｓ，Ｌｇ）を求めた。また、一定時間後に、同様の損傷領域の５０μｍごとに線を１本引き、再生により延伸した軸索を結んでから長さを計算した。そして、１０本の線を引いたあとに、平均値である再生神経間の隙間長（Ｌｅｎｇｔｈ ｏｆ ｇａｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄ ｎｅｕｒｏｎｓ，Ｌｎ）を求め、（Ｌｇ－Ｌｎ）／Ｌｇから隙間閉塞率を計算した。なお、縮尺は１００μｍとした。この実験は、Ｚｅｉｓｓ Ｏｂｓｅｒｖｅｒ Ｚ１ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅで撮影した。
【0115】
図４Ａ～図４Ｂに示すように、隙間閉塞率（ｇａｐ ｃｌｏｓｕｒｅ ｒａｔｅ）から軸索の再生度合いを定量化した。この実験結果は、アンペロプシシオノシドが海馬の神経突起の増殖を有効に促進可能とすることを示していた。
【実施例3】
【0116】
イソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体であるアンペロプシシオノシドによるインビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）での損傷皮質神経細胞の神経再生促進実験
【0117】
本実験では、妊娠１８日目のラットの胎児を取り出して、胎児の大脳を大脳皮質と海馬に分けてから、皮質神経細胞及び海馬神経細胞に分離し、皮質神経細胞を４８ウェルプレートに移した。この日をＤａｙ Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ ０（ＤＩＶ０）とし、ＤＩＶ２時点でシトシンアラビノシド（ＡｒａＣ）を添加してグリア細胞の増殖を阻害した。そして、ＤＩＶ８時点で、マイクロピペットチップを用いて神経細胞を傷付け、アンペロプシシオノシド（９．６７４ｎＭ～９６．７４μＭ）をそれぞれ添加した。また、０．１％ＤＭＳＯを溶媒コントロール群とした。図中の結果は、いずれもＤＭＳＯ群に対し標準化したものである。アンペロプシシオノシドを添加してから７２時間後に、免疫蛍光染色法を用い、ＴＵＪ１抗体で神経細胞を標識して神経再生の状況を観察した。この実験は、Ｚｅｉｓｓ Ｏｂｓｅｒｖｅｒ Ｚ１ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅで撮影した。なお、縮尺は１００μｍとした。
【0118】
図５に示すように、０．１％ＤＭＳＯに対する隙間閉塞率（ｇａｐ ｃｌｏｓｕｒｅ ｒａｔｅ）を計算して、軸索の再生度合いを定量化した。なお、免疫蛍光画像の２本の点線間は損傷領域を表している。この実験結果は、アンペロプシシオノシドが皮質の神経突起の増殖を有効に促進可能とすることを示していた。
【実施例4】
【0119】
イソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体であるビザンチオノシドＢによるインビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）での海馬神経細胞の神経修復試験
【0120】
本実験では、妊娠１８日目のラットの胎児を取り出して、胎児の大脳を大脳皮質と海馬に分けてから、皮質神経細胞及び海馬神経細胞に分離し、海馬神経細胞を４８ウェルプレートに移した。この日をＤａｙ Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ ０（ＤＩＶ０）とし、ＤＩＶ２時点でシトシンアラビノシド（ＡｒａＣ）を添加してグリア細胞の増殖を阻害した。そして、ＤＩＶ８時点で、マイクロピペットチップを用いて神経細胞を傷付け、ビザンチオノシドＢ（０．１３μＭ～１３４２μＭ）をそれぞれ添加した。なお、ｄｄＨ２Ｏを溶媒コントロール群とした。図中の結果は、いずれもｄｄＨ２Ｏ群に対し標準化したものである。ビザンチオノシドＢを添加してから７２時間後に、免疫蛍光染色法を用い、ＴＵＪ１抗体で神経細胞を標識して神経再生の状況を観察した。この実験は、Ｚｅｉｓｓ Ｏｂｓｅｒｖｅｒ Ｚ１ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅで撮影した。なお、縮尺は１００μｍとした。
【0121】
図６に示すように、ｄｄＨ２Ｏに対する隙間閉塞率（ｇａｐ ｃｌｏｓｕｒｅ ｒａｔｅ）を計算して、軸索の再生度合いを定量化した。なお、免疫蛍光画像の２本の点線間は損傷領域を表している。また、下側の図の点線はｄｄＨ２Ｏ群を表している。この実験結果は、ビザンチオノシドＢが海馬の神経突起の増殖を有効に促進可能とすることを示していた。
【実施例5】
【0122】
イソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体であるビザンチオノシドＢによるインビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）での皮質神経細胞の神経修復試験
【0123】
本実験では、妊娠１８日目のラットの胎児を取り出して、胎児の大脳を大脳皮質（ｃｏｒｔｅｘ）と海馬（ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ）に分けた。次に、大脳皮質と海馬を皮質神経細胞（ｃｏｒｔｉｃａｌ ｎｅｕｒｏｎｓ）と海馬神経細胞（ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ ｎｅｕｒｏｎｓ）に分離し、皮質神経細胞を４８ウェルプレートに移した。この日をＤａｙ Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ ０（ＤＩＶ０）とし、ＤＩＶ２時点でシトシンアラビノシド（ＡｒａＣ）を添加してグリア細胞（ｇｌｉａｌ ｃｅｌｌ）の増殖を阻害した。そして、ＤＩＶ８時点で、マイクロピペットチップを用いて神経細胞を傷付け、ビザンチオノシドＢ（１．３４μＭ～２６．８４μＭ）をそれぞれ添加した。なお、二次蒸留水（ｄｄＨ２Ｏ）をビザンチオノシドＢの溶媒とした。ビザンチオノシドＢを添加してから７２時間後に、免疫蛍光染色法を用い、ＴＵＪ１抗体で神経細胞を標識して神経再生の状況を観察した。この実験は、Ｚｅｉｓｓ Ｏｂｓｅｒｖｅｒ Ｚ１ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅで撮影した。なお、２本の点線間は損傷領域を表している。
【0124】
図７に示すように、隙間閉塞率（ｇａｐ ｃｌｏｓｕｒｅ ｒａｔｅ）から軸索の再生度合いを定量化した。この実験結果は、ビザンチオノシドＢが皮質の神経突起の増殖を有効に促進可能とすることを示していた。
【実施例6】
【0125】
イソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体であるロセオシドによるインビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）での海馬神経細胞の神経修復試験
【0126】
本実験では、妊娠１８日目のラットの胎児を取り出して、胎児の大脳を大脳皮質と海馬に分けてから、皮質神経細胞及び海馬神経細胞に分離し、海馬神経細胞を４８ウェルプレートに移した。この日をＤａｙ Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ ０（ＤＩＶ０）とし、ＤＩＶ２時点でシトシンアラビノシド（ＡｒａＣ）を添加してグリア細胞の増殖を阻害した。そして、ＤＩＶ８時点で、マイクロピペットチップを用いて神経細胞を傷付け、ロセオシド（０．０１３μＭ～１２９４μＭ）をそれぞれ添加した。なお、ｄｄＨ２Ｏを溶媒コントロール群とした。図中の結果は、いずれもｄｄＨ２Ｏ群に対し標準化したものである。ロセオシドを添加してから７２時間後に、免疫蛍光染色法を用い、ＴＵＪ１抗体で神経細胞を標識して神経再生の状況を観察した。この実験は、Ｚｅｉｓｓ Ｏｂｓｅｒｖｅｒ Ｚ１ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅで撮影した。なお、縮尺は１００μｍとした。
【0127】
図８に示すように、ｄｄＨ２Ｏに対する隙間閉塞率（ｇａｐ ｃｌｏｓｕｒｅ ｒａｔｅ）を計算して、軸索の再生度合いを定量化した。なお、免疫蛍光画像の２本の点線間は損傷領域を表している。また、下側の図の点線はｄｄＨ２Ｏ群を表している。この実験結果は、ロセオシドが海馬の神経突起の増殖を有効に促進可能とすることを示していた。
【実施例7】
【0128】
イソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体であるロセオシドによるインビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）での皮質神経細胞の神経修復試験
【0129】
本実験では、妊娠１８日目のラットの胎児を取り出して、胎児の大脳を大脳皮質と海馬に分けてから、皮質神経細胞及び海馬神経細胞に分離し、皮質神経細胞を４８ウェルプレートに移した。この日をＤａｙ Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ ０（ＤＩＶ０）とし、ＤＩＶ２時点でシトシンアラビノシド（ＡｒａＣ）を添加してグリア細胞の増殖を阻害した。そして、ＤＩＶ８時点で、マイクロピペットチップを用いて神経細胞を傷付け、ロセオシド（１．２９μＭ～２５．８８μＭ）をそれぞれ添加した。なお、ｄｄＨ２Ｏをロセオシドの溶媒とした。ロセオシドを添加してから７２時間後に、免疫蛍光染色法を用い、ＴＵＪ１抗体で神経細胞を標識して神経再生の状況を観察した。この実験は、Ｚｅｉｓｓ Ｏｂｓｅｒｖｅｒ Ｚ１ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅで撮影した。
【0130】
図９に示すように、隙間閉塞率（ｇａｐ ｃｌｏｓｕｒｅ ｒａｔｅ）から軸索の再生度合いを定量化した。この実験結果は、ロセオシドが皮質の軸索の再生を有効に促進可能とすることを示していた。
【実施例8】
【0131】
イソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体であるアンペロプシシオノシドによるエクスビボ（ｅｘ ｖｉｖｏ）での３次元脳組織切片実験
【0132】
図１０に示すように、本実験のフローでは、まず、ラットの胎児の脳を取り出して、脳を低融点アガロースゲル内に包埋してから、ライカミクロトーム（Ｌｅｉｃａ ｍｉｃｒｏｔｏｍｅ）ＶＴ１００で脳を厚さ３５０μｍの切片組織にスライスした。次に、メスで脳切片を傷付けたあと培養するとともに、ｄｄＨ２Ｏ又はアンペロプシシオノシドを毎日添加した。そして、９６時間培養したあと、蛍光免疫染色法により、ＴＵＪ１抗体で神経細胞を標識し、ＧＦＡＰ抗体でグリア細胞を標識し、ＤＡＰＩ試薬で細胞核を標識した。なお、この実験の縮尺は１００μｍとした。また、この実験では、Ｚｅｉｓｓ ＬＳＭ８００ ｃｏｎｆｏｃａｌ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅを用いて撮影した。
【0133】
図１１に示すように、白色の点線はメスで傷付けた切り口であり、点線の右側は新生された軸索である。この実験より、アンペロプシシオノシドが神経再生を促進する効果を有することが明らかとなった。
【実施例9】
【0134】
イソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体であるビザンチオノシドＢによるエクスビボ（ｅｘ ｖｉｖｏ）での脳組織切片実験
【0135】
図１０に示すように、本実験のフローでは、まず、ラットの胎児の脳を取り出して、脳を低融点アガロースゲル内に包埋してから、ライカミクロトームＶＴ１００で脳を厚さ３５０μｍの切片組織にスライスした。次に、メスで脳切片を傷付けたあと培養するとともに、ｄｄＨ２Ｏ又はビザンチオノシドＢを毎日添加した。そして、９６時間培養したあと、蛍光免疫染色法により、ＴＵＪ１抗体で神経細胞を標識し、ＧＦＡＰ抗体でグリア細胞を標識し、ＤＡＰＩ試薬で細胞核を標識した。なお、この実験の縮尺は１００μｍとした。また、この実験では、Ｚｅｉｓｓ ＬＳＭ８００ ｃｏｎｆｏｃａｌ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅを用いて撮影した。
【0136】
図１２に示すように、白色の点線はメスで傷付けた切り口であり、点線の右側は新生された神経突起である。この実験より、ビザンチオノシドＢが神経再生を促進する効果を有することが明らかとなった。
【実施例10】
【0137】
イソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体であるロセオシドによるエクスビボ（ｅｘ ｖｉｖｏ）での脳組織切片実験
【0138】
図１０に示すように、本実験のフローでは、まず、ラットの胎児の脳を取り出して、脳を低融点アガロースゲル内に包埋してから、ライカミクロトームＶＴ１００で脳を厚さ３５０μｍの切片組織にスライスした。次に、メスで脳切片を傷付けたあと培養するとともに、ｄｄＨ２Ｏ又はロセオシドを毎日添加した。そして、９６時間培養したあと、蛍光免疫染色法により、ＴＵＪ１抗体で神経細胞を標識し、ＧＦＡＰ抗体でグリア細胞を標識し、ＤＡＰＩ試薬で細胞核を標識した。なお、この実験の縮尺は１００μｍとした。また、この実験では、Ｚｅｉｓｓ ＬＳＭ８００ ｃｏｎｆｏｃａｌ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅを用いて撮影した。
【0139】
図１３に示すように、白色の点線はメスで傷付けた切り口であり、点線の右側は新生された神経突起である。この実験より、ロセオシドが神経再生を促進する効果を有することが明らかとなった。
【実施例11】
【0140】
イソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体であるアンペロプシシオノシドによる脳外傷後のラットの運動能力回復促進試験
【0141】
本実験では、マウスを開頭したが脳損傷させなかった場合と、脳損傷させた場合、及び、脳損傷後に１４μｇ／ｋｇのアンペロプシシオノシドを毎日投与した場合についてオープンフィールド試験を用いて測定し、１日後又は５日後（１ｄａｙ ｐｏｓｔ ｉｎｊｕｒｙ：１ｄｐｉ、５ｄａｙ ｐｏｓｔ ｉｎｊｕｒｙ：５ｄｐｉ）の運動能力を比較した。本実験の実験モデルは図１４に示す通りであった。０ｄｐｉ時点で、制御的皮質衝撃脳外傷モデル（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｃｏｒｔｉｃａｌ ｉｍｐａｃｔ ｍｏｄｅｌ）を用いてマウスを脳損傷させ、０、２、４、６、８、１０、１２ｄｐｉ（ｄａｙ ｐｏｓｔ ｉｎｊｕｒｙ）時点で、鼻腔から投与する方式で１４μｇ／ｋｇのアンペロプシシオノシドを投与した。
【0142】
図１４に示すように、Ａ部分は、本テストにおいて、４等分した白色の大きなアクリルボックスにマウスを入れて５分間自由に行動させたものである。また、５分間、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ ＬｉｆｅＣａｍ Ｃｉｎｅｍａカメラでマウスの運動状況を記録するともに、Ａｎｕｂｉｓ ｔｒａｃｋ追跡ソフトで分析した。
【0143】
図１４に示すように、Ｂ部分は、この実験により、アンペロプシシオノシド群と未損傷群の動作経路長はほぼ同じであったが、未投与の脳損傷群は半分の経路長しか有さなかったことを示すものである。これにより、本発明のイソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体であるアンペロプシシオノシドが脳外傷後のラットの運動能力回復を促進する効果を有することが明らかとなった。
【実施例12】
【0144】
イソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体であるアンペロプシシオノシドによる脳外傷後のラットの探索能力回復促進
【0145】
本実験では、マウスを開頭したが脳損傷させなかった場合と、脳損傷させた場合、及び、脳損傷後に１４μｇ／ｋｇのアンペロプシシオノシドを投与した場合について、５日後（５ｄａｙ ｐｏｓｔ ｉｎｊｕｒｙ：５ｄｐｉ）の領域に対する探索能力と、中央開放領域での滞在時間をオープンフィールド試験により測定した。本実験の実験モデルは図１７に示す通りであった。０ｄｐｉ時点で、制御的皮質衝撃脳外傷モデル（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｃｏｒｔｉｃａｌ ｉｍｐａｃｔ ｍｏｄｅｌ）を用いてマウスを脳損傷させ、０、２、４、６、８、１０、１２ｄｐｉ（ｄａｙ ｐｏｓｔ ｉｎｊｕｒｙ）時点で、鼻腔から投与する方式で１４μｇ／ｋｇのアンペロプシシオノシドを投与した。
【0146】
図１５に示すように、Ａ部分は、本テストにおいて、４等分した白色の大きなアクリルボックスにマウスを入れて５分間自由に行動させたものである。また、５分間、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ ＬｉｆｅＣａｍ Ｃｉｎｅｍａカメラでマウスの運動状況を記録するともに、Ａｎｕｂｉｓ ｔｒａｃｋ追跡ソフトで分析した。
【0147】
図１５に示すように、Ｂ部分は、この実験により、アンペロプシシオノシド群と未損傷群は中央領域にいる時間が長かったが、未投与の脳損傷群はほとんど中央で行動しなかったことを示すものである。図１５を組み合わせることで、本発明のイソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体であるアンペロプシシオノシドが脳外傷後のラットの探索能力回復を促進する効果を有することが明らかとなった。
【実施例13】
【0148】
イソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体であるアンペロプシシオノシドによる脳外傷後のラットの運動協調性回復促進
【0149】
水平棒実験によって、地上から４９ｃｍに位置する長さ３８ｃｍ、直径２ｍｍ、４ｍｍ、６ｍｍの黄銅棒上にマウスを置いて、前足で黄銅棒を掴ませた。そして、黄銅棒上でのマウスの滞在時間を計算するとともに、黄銅棒末端の台上に到達したか否かより、マウスの運動協調性能力を評価した。評価基準は、１～５秒を１点、５～１０秒を２点、１０～２０秒を３点、２０～３０秒を４点、３０秒以上又は台上への到達を５点とした。
【0150】
図１６に示すように、本実験の実験モデルについては、それぞれ、－５、－３、－１ｄｐｉ（ｄａｙ ｐｏｓｔ ｉｎｊｕｒｙ）（脳損傷の５日前、３日前、１日前）に予備訓練（ｐｒｅ－ｔｒａｉｎｉｎｇ）を行った。且つ、０ｄｐｉ時点で、制御的皮質衝撃脳外傷モデル（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｃｏｒｔｉｃａｌ ｉｍｐａｃｔ ｍｏｄｅｌ）を用いてマウスを脳損傷させ、０、２、４、６、８、１０、１２ｄｐｉ時点で、鼻腔から投与する方式で１４μｇ／ｋｇ又は１４０μｇ／ｋｇのアンペロプシシオノシドを投与した。また、１、３、６、１０、１３ｄｐｉ時点で水平棒実験を行った。
【0151】
図１７に示すように、脳損傷後に水（ｄｄＨ２Ｏ）のみを投与した群では運動協調性の喪失が見られたが、アンペロプシシオノシドを投与した群では、運動協調性がＳｈａｍ群と類似しており、運動協調性の回復が明らかに促進されることが分かった。
【実施例14】
【0152】
イソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体であるビザンチオノシドＢによるエクスビボ（ｅｘ ｖｉｖｏ）での網膜神経修復促進
【0153】
実験のデザイン及びフローは図１８に示す通りであった。網膜組織（ｒｅｔｉｎａｌ ｅｘｐｌａｎｔｓ）は生後８日目のＣ５７ＢＬ／６系統マウスから取り出した。殺処理後に目を取り出して、ピンセット及びマイクロ剪刀で眼球と網膜を分離するとともに、硝子体を除去した。最後に、分離した網膜を４片に分け、マイクロ剪刀で組織の辺縁を整えて傷付けた。各片は、１８ｍｍの円形ガラス上で培養してから１２ウェルプレートに投入し、インキュベーターに入れて、５％ＣＯ２及び３５℃条件で５日間培養した。各網膜組織については、新鮮な培養液に毎日交換するとともに、１３．５μＭ又は１３５μＭのビザンチオノシドＢを添加するものとした。そして、網膜組織を５日目まで培養した時点で、０．１％グルタルアルデヒド溶液（Ｇｌｕｔａｒａｌｄｅｈｙｄｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ）及び４％パラホルムアルデヒド（ｐａｒａｆｏｒｍａｌｄｅｈｙｄｅ）混合溶液を用い、室温で１時間固定（Ｆｉｘ）した。且つ、一次抗体であるａｘｏｎａｌ ｍａｒｋｅｒ ｂｅｔａ－ＩＩＩ－ｔｕｂｕｌｉｎ（ＴＵＪ１）及びＤＡＰＩを用いて染色し、神経細胞と細胞核を標識してから、超解像正立型共焦点顕微鏡（ＬＳＭ－８００，カール・ツァイス）で撮影した。そして、画像解析プログラムＩｍａｇｅＪを用い、組織境界を選択して周長及び組織外の神経繊維面積を計算した。これにより、神経繊維面積を組織境界の周長で割って、周長あたりの神経繊維長を求めた。
【0154】
図１９に示すように、網膜組織の損傷後に、ビザンチオノシドＢを投与した群は、水（ｄｄＨ２Ｏ）のみを投与した群に比べて明らかな損傷後回復効果を有していた。
【実施例15】
【0155】
イソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体であるロセオシドによるエクスビボ（ｅｘ ｖｉｖｏ）での網膜神経修復促進
【0156】
実験のデザイン及びフローは図２０に示す通りであった。網膜組織（ｒｅｔｉｎａｌ ｅｘｐｌａｎｔｓ）は生後８日目のＣ５７ＢＬ／６系統マウスから取り出した。殺処理後に目を取り出して、ピンセット及びマイクロ剪刀で眼球と網膜を分離するとともに、硝子体を除去した。最後に、分離した網膜を４片に分け、マイクロ剪刀で組織の辺縁を整えて傷付けた。各片は、１８ｍｍの円形ガラス上で培養してから１２ウェルプレートに投入し、インキュベーターに入れて、５％ＣＯ２及び３５℃条件で５日間培養した。各網膜組織については、新鮮な培養液に毎日交換するとともに、１３μＭ又は１３０μＭのロセオシドを添加するものとした。そして、網膜組織を５日目まで培養した時点で、０．１％グルタルアルデヒド溶液及び４％パラホルムアルデヒド混合溶液を用い、室温で１時間固定した。且つ、一次抗体であるａｘｏｎａｌ ｍａｒｋｅｒ ｂｅｔａ－ＩＩＩ－ｔｕｂｕｌｉｎ（ＴＵＪ１）及びＤＡＰＩを用いて染色し、神経細胞と細胞核を標識してから、超解像正立型共焦点顕微鏡（ＬＳＭ－８００，カール・ツァイス）で撮影した。そして、画像解析プログラムＩｍａｇｅＪを用い、組織境界を選択して周長及び組織外の神経繊維面積を計算した。これにより、神経繊維面積を組織境界の周長で割って、周長あたりの神経繊維長を求めた。
【0157】
図２１に示すように、網膜組織の損傷後に、ロセオシドを投与した群は、水（ｄｄＨ２Ｏ）のみを投与した群に比べて明らかな損傷後回復効果を有していた。
【実施例16】
【0158】
イソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体の連続合成ステップ
【0159】
本発明におけるイソプロピル－Ｄ－グルコピラノシド誘導体の連続合成ステップは、以下の通りであった。
【0160】
【化19】
【0161】
上記の実験データは、特定条件で取得した初歩的な実験結果であって、本発明の技術内容の理解又は参照を容易とするためのものにすぎず、更にその他の関連実験を行う必要がある。当該実験データ及び結果は本発明の権利範囲を制限するためのものではない。
【0162】
上記の好ましい実施例は、本発明とその技術的特徴を例示的に説明したものにすぎず、当該実施例の技術は、各種の実質的な等価の改変及び／又は置き換えを適切に行って実施してもよい。従って、本発明の権利範囲は、請求項で規定される範囲に準じる。
【図1A】
【図1B】
【図1C】
【図2】
【図3】
【図4A】
【図4B】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【図19】
【図20】
【図21】
【図22】
【国際調査報告】