特表2024-541933抗ＧＤＦ１５抗体を使用してミトコンドリア筋症を処置する方法
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-11-13
(54)【発明の名称】抗ＧＤＦ１５抗体を使用してミトコンドリア筋症を処置する方法
(51)【国際特許分類】
A61K 39/395 20060101AFI20241106BHJP
A61P 21/00 20060101ALI20241106BHJP
C07K 16/24 20060101ALN20241106BHJP
C12N 15/13 20060101ALN20241106BHJP
【ＦＩ】
A61K39/395 N
A61P21/00
C07K16/24 ZNA
C12N15/13
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024524991
(86)(22)【出願日】2022-10-31
(85)【翻訳文提出日】2024-05-31
(86)【国際出願番号】 IB2022060469
(87)【国際公開番号】W WO2023079430
(87)【国際公開日】2023-05-11
(31)【優先権主張番号】63/274,721
(32)【優先日】2021-11-02
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/368,526
(32)【優先日】2022-07-15
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】593141953
【氏名又は名称】ファイザー・インク
(74)【代理人】
【識別番号】100133927
【弁理士】
【氏名又は名称】四本 能尚
(74)【代理人】
【識別番号】100174447
【弁理士】
【氏名又は名称】龍田 美幸
(74)【代理人】
【識別番号】100185960
【弁理士】
【氏名又は名称】池田 理愛
(72)【発明者】
【氏名】ビナ マリア アルバカーキ
(72)【発明者】
【氏名】ジダン ウ
【テーマコード（参考）】
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C085AA14
4C085AA16
4C085BB11
4C085DD62
4C085EE01
4C085GG02
4C085GG04
4H045AA11
4H045AA30
4H045BA10
4H045CA40
4H045DA76
4H045EA20
4H045FA74
(57)【要約】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
原発性ミトコンドリア筋症（ＰＭＭ）を処置する方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量の、ＧＤＦ－１５に結合する単離された抗体を投与するステップを含む、方法。
【請求項2】
前記原発性ミトコンドリア筋症が、リー症候群、カーンズ・セイヤー症候群、アルパーズ・フッテンロッヒャー症候群、乳酸アシドーシスおよび脳卒中様エピソードを伴うミトコンドリア脳筋症（ＭＥＬＡＳ）ならびに運動失調ニューロパチー症候群からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
前記抗ＧＤＦ１５抗体の前記投与が、投与前と比較して、ＰＭＭの１つ以上の徴候または症状における改善を生じる、請求項１から２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項4】
ＰＭＭの前記１つ以上の徴候または症状が、肉体的疲労、筋力低下および／または運動耐容能を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項5】
ＰＭＭの１つ以上の徴候または症状における前記改善が、増加した体重増加、増加した除脂肪筋肉量、増加した骨格筋量、回復した筋強度、および／または運動能力における改善を含む、請求項３から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項6】
前記対象が、悪液質、がんおよび／または心不全を有さない、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項7】
前記対象が、前記単離された抗体またはその抗原結合性断片の投与前に、上昇したＧＤＦ１５のレベルおよび／または活性を有する、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項8】
前記抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号９５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ－１、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ－２、配列番号９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ－３、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ－１、配列番号１６５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ－２および配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ－３を含む、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項9】
前記抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号１６６のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号１６３のＶＬアミノ酸配列を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項10】
前記抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号１６４のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号１６２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項９に記載の方法。
【請求項11】
前記抗体またはその抗原結合性断片が、皮下投与される、請求項１から１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項12】
前記抗体またはその抗原結合性断片が、静脈内投与される、請求項１から１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項13】
前記抗体またはその抗原結合性断片が、約１週間に２回、１週間に１回、２週間毎に１回、３週間毎に１回、４週間毎に１回、５週間毎に１回、６週間毎に１回、７週間毎に１回、８週間毎に１回、９週間毎に１回、１０週間毎に１回、１カ月に２回、１カ月に１回、２カ月毎に１回、３カ月毎に１回、または４カ月毎に１回、５カ月毎に１回、６カ月毎に１回、７カ月毎に１回、８カ月毎に１回、９カ月毎に１回、１０カ月毎に１回、１１カ月毎に１回または１２カ月毎に１回投与される、請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項14】
前記抗体またはその抗原結合性断片が、約０．１ｍｇと約１０００ｍｇとの間の用量で、１週間に１回投与される、請求項１から１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項15】
前記抗体またはその抗原結合性断片が、約１ｍｇと約５００ｍｇとの間の用量で、１週間に１回投与される、請求項１４に記載の方法。
【請求項16】
前記抗体またはその抗原結合性断片が、約０．１ｍｇと約５００ｍｇとの間の用量で、２週間毎に１回投与される、請求項１から１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項17】
前記抗体またはその抗原結合性断片が、約０．１ｍｇと約５００ｍｇとの間の用量で、４週間毎に１回投与される、請求項１から１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項18】
前記抗体またはその抗原結合性断片が、ＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ－１２５０３８を有するプラスミド中の挿入物によってコードされるアミノ酸配列、およびＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ－１２５０３９を有するプラスミド中の挿入物によってコードされるアミノ酸配列、を含む、請求項１から１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項19】
原発性ミトコンドリア筋症（ＰＭＭ）を処置する方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量の、ＧＤＦ－１５に結合する単離された抗体を投与するステップを含み、前記対象が、投与前に、上昇したＧＤＦ１５のレベルおよび／または活性を有し、前記抗ＧＤＦ１５抗体の前記投与が、投与前と比較して、前記対象において肉体的疲労、筋力低下および／または運動耐容能における改善を生じ、前記抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号９５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ－１、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ－２、配列番号９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ－３、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ－１、配列番号１６５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ－２および配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ－３を含む、方法。
【請求項20】
前記抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号１６６のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号１６３のＶＬアミノ酸配列を含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項21】
前記抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号１６４のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号１６２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項２０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明の分野
本発明は、抗ＧＤＦ１５抗体を使用してミトコンドリア筋症を予防、寛解および／または処置する方法に関する。
本発明は、抗ＧＤＦ１５抗体を使用してミトコンドリア筋症を予防、寛解および／または処置する方法に関する。
【背景技術】
【0002】
増殖分化因子１５（ＧＤＦ１５）は、マクロファージ阻害性サイトカイン１（ＭＩＣ－１）、前立腺由来因子（ＰＤＦ）、胎盤骨形成タンパク質（ＰＬＡＢ）、ＮＳＡＩＤ活性化遺伝子１（ＮＡＧ－１）および胎盤トランスフォーミング増殖因子β（ＰＴＧＦＢ）としても公知であり、トランスフォーミング増殖因子ベータ（ＴＧＦβ）スーパーファミリーのメンバーである２５ｋＤａのジスルフィド連結されたホモダイマーを形成する１２ｋＤａの分泌型タンパク質である。ＧＤＦ１５は、細胞ストレスおよび心不全の確立されたバイオマーカーである（Ａｎａｎｄら、２０１０）。ＧＤＦ１５は、後脳だけで発現される受容体複合体を介して作用し、それを介して、嫌悪として把握されるニューロン経路を活性化し、食物摂取を抑制する（Ｌｏｃｋｈａｒｔら、２０２０）。低減された食物摂取は、体重に対するＧＤＦ１５の効果のほとんどを媒介することが示されている（Ｅｍｍｅｒｓｏｎら、２０１７）（Ｍａｃｉａら、２０１２）（Ｍｕｌｌｉｃａｎら、２０１７）。最近、ＧＤＦ１５投与は、マウスにおいて条件付け味覚回避を誘発することが示され、ＧＤＦ１５発現は、栄養的ストレスに応答した統合的ストレス応答（ＩＳＲ）によって調節された（Ｂｏｒｎｅｒら、２０２０；Ｐａｔｅｌら、２０１９ａ）。
【0003】
ＷＯ２０２０／０３９３２１は、抗ＧＤＦ１５抗体およびその使用を開示しており、その全体が本明細書で参照によって組み込まれる。これらの抗ＧＤＦ１５抗体は、がんおよび心不全が含まれるいくつかの疾患に関連する悪液質の処置において有用であることが示されている。
【0004】
原発性ミトコンドリア筋症（ＰＭＭ）は、核ＤＮＡ（ｎＤＮＡ）および／またはミトコンドリアＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）内で見出される遺伝子における病原性変異によって引き起こされる一群の遺伝性障害である。これらの遺伝子は、ミトコンドリアタンパク質、またはミトコンドリア機能に関与するタンパク質をコードする（Ｇｏｒｍａｎら、２０１５）。ＰＭＭは、排他的にではないが優勢に骨格筋に影響を与え、最も一般的な症状は、承認された治療が存在しない、筋力低下、運動耐容能および進行性外眼筋麻痺である（Ｍａｎｃｕｓｏら、２０１６）。ＧＤＦ１５は、前臨床モデルにおいて食欲不振、嫌悪／嘔吐および体重減少を引き起こすことが報告されたサイトカインであり、患者におけるがん悪液質および低い生存に関連する（Ｂｒｅｉｔら、２０２１；Ｌｅｒｎｅｒら、２０１５）。ＧＤＦ１５の中和は、前臨床がん悪液質モデルにおいて食欲不振、体重減少を和らげ、筋機能および身体能力を改善することが報告された（Ｌｅｒｎｅｒら、２０１５；Ｂｒｅｅｎら、２０２０）。興味深いことに、上昇した循環ＧＤＦ１５が、ＰＭＭを有する患者において報告されたが（Ｍｏｎｔａｎｏら、Ｎｅｕｒｏｌ Ｇｅｎｅｔ．２０２０）、ＧＤＦ１５がこれらの患者における筋力低下、疲労および運動耐容能に寄与するかどうかは不明である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0005】
発明の概要
ＰＭＭを患っている患者のための疾患改変処置は存在しない；現在の治療は、特定の症状を改善また解消することを目的としている。ＰＭＭのための治療選択肢の満たされていない著しい必要性が存在したままである。
ＰＭＭを患っている患者のための疾患改変処置は存在しない；現在の治療は、特定の症状を改善また解消することを目的としている。ＰＭＭのための治療選択肢の満たされていない著しい必要性が存在したままである。
【課題を解決するための手段】
【0006】
本発明は、ＧＤＦ１５に結合する抗体およびその抗原結合性断片を使用してミトコンドリア筋症を予防、寛解および／または処置するための方法を提供する。
【0007】
一部の態様では、原発性ミトコンドリア筋症（ＰＭＭ）を処置する方法が提供される。この方法は、それを必要とする対象に、治療有効量の、ＧＤＦ－１５に結合する単離された抗体を投与するステップを含む。
【0008】
一部の実施形態では、原発性ミトコンドリア筋症は、リー症候群、カーンズ・セイヤー症候群、アルパーズ・フッテンロッヒャー症候群（Alpers-Huttenlocher syndrome）、乳酸アシドーシスおよび脳卒中様エピソードを伴うミトコンドリア脳筋症（mitochondrial encephalomyopathy with lactic acidosis and stroke-like
episodes）（ＭＥＬＡＳ）ならびに運動失調ニューロパチー症候群（ataxia neuropathy
syndrome）からなる群から選択される。一部の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体の投与は、投与前と比較して、ＰＭＭの１つ以上の徴候または症状における改善を生じる。一部の実施形態では、ＰＭＭの１つ以上の徴候または症状は、肉体的疲労、筋力低下および／または運動耐容能を含む。一部の実施形態では、ＰＭＭの１つ以上の徴候または症状における改善は、増加した体重増加、増加した除脂肪筋肉量、増加した骨格筋量、回復した筋強度、および／または運動能力における改善を含む。一部の実施形態では、対象は、悪液質、がんおよび／または心不全を有さない。一部の実施形態では、対象は、単離された抗体またはその抗原結合性断片の投与前に、上昇したＧＤＦ１５のレベルおよび／または活性を有する。
episodes）（ＭＥＬＡＳ）ならびに運動失調ニューロパチー症候群（ataxia neuropathy
syndrome）からなる群から選択される。一部の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体の投与は、投与前と比較して、ＰＭＭの１つ以上の徴候または症状における改善を生じる。一部の実施形態では、ＰＭＭの１つ以上の徴候または症状は、肉体的疲労、筋力低下および／または運動耐容能を含む。一部の実施形態では、ＰＭＭの１つ以上の徴候または症状における改善は、増加した体重増加、増加した除脂肪筋肉量、増加した骨格筋量、回復した筋強度、および／または運動能力における改善を含む。一部の実施形態では、対象は、悪液質、がんおよび／または心不全を有さない。一部の実施形態では、対象は、単離された抗体またはその抗原結合性断片の投与前に、上昇したＧＤＦ１５のレベルおよび／または活性を有する。
【0009】
一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ－１、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ－２、配列番号９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ－３、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ－１、配列番号１６５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ－２および配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ－３を含む。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１６６のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号１６３のＶＬアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１６４のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号１６２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【0010】
一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、皮下投与される。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、静脈内投与される。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、約１週間に２回、１週間に１回、２週間毎に１回、３週間毎に１回、４週間毎に１回、５週間毎に１回、６週間毎に１回、７週間毎に１回、８週間毎に１回、９週間毎に１回、１０週間毎に１回、１カ月に２回、１カ月に１回、２カ月毎に１回、３カ月毎に１回、または４カ月毎に１回、５カ月毎に１回、６カ月毎に１回、７カ月毎に１回、８カ月毎に１回、９カ月毎に１回、１０カ月毎に１回、１１カ月毎に１回または１２カ月毎に１回投与される。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、約０．１ｍｇと約１０００ｍｇとの間の用量で、１週間に１回投与される。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、約１ｍｇと約５００ｍｇとの間の用量で、１週間に１回投与される。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、約０．１ｍｇと約５００ｍｇとの間の用量で、２週間毎に１回投与される。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、約０．１ｍｇと約５００ｍｇとの間の用量で、４週間毎に１回投与される。
【0011】
一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ－１２５０３８を有するプラスミド中の挿入物によってコードされるアミノ酸配列、およびＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ－１２５０３９を有するプラスミド中の挿入物によってコードされるアミノ酸配列、を含む。
【0012】
一部の態様では、原発性ミトコンドリア筋症（ＰＭＭ）を処置する方法が提供される。この方法は、それを必要とする対象に、治療有効量の、ＧＤＦ－１５に結合する単離された抗体を投与するステップを含み、対象は、投与前に、上昇したＧＤＦ１５のレベルおよび／または活性を有し、抗ＧＤＦ１５抗体の投与は、投与前と比較して、対象において肉体的疲労、筋力低下および／または運動耐容能における改善を生じ、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ－１、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ－２、配列番号９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ－３、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ－１、配列番号１６５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ－２および配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ－３を含む。
【0013】
一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１６６のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号１６３のＶＬアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１６４のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号１６２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【図面の簡単な説明】
【0014】
【図5】図５は、ＰｏｌＧおよびＷＴマウスによる自発的ホイールランニングの間の運動能力を示すグラフであり、ＰｏＩＧマウスが、ＷＴと比較して、自発的ホイールランニングの間により低い運動能力を有したことを実証している。
【図6】図６は、ＰｏｌＧおよびＷＴマウスのｉｎ ｖｉｖｏ力測定の間の筋機能を示すグラフであり、ＰｏｌＧマウスが、ＷＴマウスと比較して、ｉｎ ｖｉｖｏ筋力測定の間により低い筋機能を有したことを実証している。
【図8】図８Ａおよび図８Ｂは、除脂肪量（図８Ａ）および体脂肪量（図８Ｂ）が、処置後２２日目および５７日目に、筋重量で、ＰｏｌＧマウスにおいてＧＤＦ１５ ｍＡｂ２処置によって有意に増加したことを実証している。
【発明を実施するための形態】
【0015】
発明の詳細な説明
上昇した循環レベルのＧＤＦ１５が、原発性ミトコンドリア筋症を有する患者において報告されているが（Ｍｏｎｔａｎｏら、Ｎｅｕｒｏｌ Ｇｅｎｅｔ．２０２０）、ＧＤＦ１５がこれらの筋症に関連する徴候および症状、例えば、筋力低下、肉体的疲労および運動耐容能に寄与するかどうかは不明である。本発明は、抗ＧＤＦ１５抗体を使用してＧＤＦ１５活性を遮断することが、ＰＭＭの患者と似た特色を示す前臨床マウスモデルにおいて運動能力および肉体的疲労を改善するという、思いがけない観察に関連する。特に、ＧＤＦ１５遮断が、ＰｏｌＧマウス（ミトコンドリアＤＮＡミューテーターマウス）において、有意に、体重増加を改善し、除脂肪筋肉量および骨格筋量を増加させたことが決定された。さらに、ＧＤＦ１５抗体による処置は、トレッドミルランニングおよび自発的ホイールランニング試験を使用して決定した場合、これらのマウスにおいて、筋強度を完全に回復させ、運動能力を改善した。したがって、本明細書で開示されるデータは、ＧＤＦ１５活性の遮断が、原発性ミトコンドリア筋症に関連する徴候および症状を寛解させるという、およびＧＤＦ１５阻害が、原発性ミトコンドリア筋症のための新たな治療アプローチを提供するという、最初の証拠を提供する。したがって、一部の態様では、本開示は、例えば、ＧＤＦ１５＿００１（本明細書でポンセグロマブ（ponsegromab）、ＰＦ－０６９４６８６０とも呼ばれる）およびＧＤＦ１５＿０３０１（本明細書でｍＡＢ２とも呼ばれる）であるがこれらに限定されない抗ＧＤＦ１５抗体を使用して、原発性ミトコンドリア筋症を予防、寛解および／または処置するための方法を提供する。
上昇した循環レベルのＧＤＦ１５が、原発性ミトコンドリア筋症を有する患者において報告されているが（Ｍｏｎｔａｎｏら、Ｎｅｕｒｏｌ Ｇｅｎｅｔ．２０２０）、ＧＤＦ１５がこれらの筋症に関連する徴候および症状、例えば、筋力低下、肉体的疲労および運動耐容能に寄与するかどうかは不明である。本発明は、抗ＧＤＦ１５抗体を使用してＧＤＦ１５活性を遮断することが、ＰＭＭの患者と似た特色を示す前臨床マウスモデルにおいて運動能力および肉体的疲労を改善するという、思いがけない観察に関連する。特に、ＧＤＦ１５遮断が、ＰｏｌＧマウス（ミトコンドリアＤＮＡミューテーターマウス）において、有意に、体重増加を改善し、除脂肪筋肉量および骨格筋量を増加させたことが決定された。さらに、ＧＤＦ１５抗体による処置は、トレッドミルランニングおよび自発的ホイールランニング試験を使用して決定した場合、これらのマウスにおいて、筋強度を完全に回復させ、運動能力を改善した。したがって、本明細書で開示されるデータは、ＧＤＦ１５活性の遮断が、原発性ミトコンドリア筋症に関連する徴候および症状を寛解させるという、およびＧＤＦ１５阻害が、原発性ミトコンドリア筋症のための新たな治療アプローチを提供するという、最初の証拠を提供する。したがって、一部の態様では、本開示は、例えば、ＧＤＦ１５＿００１（本明細書でポンセグロマブ（ponsegromab）、ＰＦ－０６９４６８６０とも呼ばれる）およびＧＤＦ１５＿０３０１（本明細書でｍＡＢ２とも呼ばれる）であるがこれらに限定されない抗ＧＤＦ１５抗体を使用して、原発性ミトコンドリア筋症を予防、寛解および／または処置するための方法を提供する。
【0016】
本明細書で使用されるセクション見出しは、構成のみを目的としており、記載される主題を限定すると解釈すべきではない。
【0017】
特許出願、特許公開およびＧｅｎｂａｎｋアクセッション番号を含む、本明細書で引用される全ての参考文献は、各個々の参考文献がその全体が参照によって組み込まれると具体的かつ個々に示されるかのように、本明細書で参照によって組み込まれる。
【0018】
本明細書に記載されるまたは本明細書で言及される技術および手順は、一般に、十分に理解され、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ 第３版（２００１）Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ． ＣＵＲＲＥＮＴ ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ ＩＮ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＢＩＯＬＯＧＹ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら編（２００３））；シリーズＭＥＴＨＯＤＳ ＩＮ ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）：ＰＣＲ ２：Ａ ＰＲＡＣＴＩＣＡＬ ＡＰＰＲＯＡＣＨ（Ｍ．Ｊ．ＭａｃＰｈｅｒｓｏｎ、Ｂ．Ｄ．ＨａｍｅｓおよびＧ．Ｒ．Ｔａｙｌｏｒ編（１９９５））、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ編（１９８８）ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ，Ａ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ，ａｎｄ ＡＮＩＭＡＬ ＣＥＬＬ ＣＵＬＴＵＲＥ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ編（１９８７））；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ編、１９８４）；Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｎｏｔｅｂｏｏｋ（Ｊ．Ｅ．Ｃｅｌｌｉｓ編、１９９８）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ）編、１９８７）；Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｊ．Ｐ．ＭａｔｈｅｒおよびＰ．Ｅ．Ｒｏｂｅｒｔｓ、１９９８）Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ（Ａ．Ｄｏｙｌｅ、Ｊ．Ｂ．ＧｒｉｆｆｉｔｈｓおよびＤ．Ｇ．Ｎｅｗｅｌｌ編、１９９３－８）Ｊ．Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ；Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｄ．Ｍ．ＷｅｉｒおよびＣ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ編）；Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｍ．ＭｉｌｌｅｒおよびＭ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ編、１９８７）；ＰＣＲ：Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ（Ｍｕｌｌｉｓら編、１９９４）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎら編、１９９１）；Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、１９９９）；Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｃ．Ａ．ＪａｎｅｗａｙおよびＰ．Ｔｒａｖｅｒｓ、１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｐ．Ｆｉｎｃｈ、１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｄ．Ｃａｔｔｙ編、ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ、１９８８～１９８９）；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐ．ＳｈｅｐｈｅｒｄおよびＣ．Ｄｅａｎ編、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、２０００）；Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｅ．ＨａｒｌｏｗおよびＤ．Ｌａｎｅ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、１９９９））；Ｔｈｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｍ．ＺａｎｅｔｔｉおよびＪ．Ｄ．Ｃａｐｒａ編、Ｈａｒｗｏｏｄ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、１９９５）；およびＣａｎｃｅｒ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（Ｖ．Ｔ．ＤｅＶｉｔａら編、Ｊ．Ｂ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｃｏｍｐａｎｙ、１９９３）；ならびにそれらの最新版に記載される広く利用される方法論などの、当業者による従来の方法論を使用して、一般に使用される。
【0019】
抗体
「抗体」または「Ａｂ」は、免疫グロブリン分子の可変領域中に位置する少なくとも１つの抗原認識部位を介して、特異的標的または抗原（Ａｇ）、例えば、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、ポリペプチドなどを認識しそれに結合することが可能な免疫グロブリン分子である。本明細書で使用する場合、用語「抗体」は、所与の抗原（例えば、ＧＤＦ１５）に特異的に結合する能力を保持する、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、インタクトな抗体の抗原結合性断片（または部分）が含まれるがこれらに限定されない、任意の型の抗体を包含し得る。
「抗体」または「Ａｂ」は、免疫グロブリン分子の可変領域中に位置する少なくとも１つの抗原認識部位を介して、特異的標的または抗原（Ａｇ）、例えば、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、ポリペプチドなどを認識しそれに結合することが可能な免疫グロブリン分子である。本明細書で使用する場合、用語「抗体」は、所与の抗原（例えば、ＧＤＦ１５）に特異的に結合する能力を保持する、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、インタクトな抗体の抗原結合性断片（または部分）が含まれるがこれらに限定されない、任意の型の抗体を包含し得る。
【0020】
用語「抗原」は、Ａｇを認識する抗体を産生するため、または発現ライブラリー（例えば、とりわけ、ファージ、酵母またはリボソームディスプレイライブラリー）をスクリーニングするために、免疫適格性脊椎動物の免疫化のために使用される分子実体を指す。本明細書で、Ａｇは、より広い用語であり、Ａｂによって特異的に認識される標的分子を含むこと、したがって、Ａｂを生じさせるための免疫化プロセスにおいて、またはＡｂを選択するためのライブラリースクリーニングにおいて使用される分子の断片または模倣物を含むことを一般に意図する。したがって、ＧＤＦ１５に結合する本発明の抗体について、そのモノマーおよびマルチマー、例えば、ダイマー、トリマーなどを含む、哺乳動物種由来の全長ＧＤＦ１５（例えば、ヒト、サル、マウスおよびラットＧＤＦ１５）、ならびにＧＤＦ１５の短縮型および他のバリアントが、抗原と呼ばれる。
【0021】
抗体の「抗原結合性断片」は、抗原に（好ましくは、実質的に同じ結合親和性で）特異的に結合する能力を保持する、全長抗体の断片を指す。抗原結合性断片の例には、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価断片であるＦａｂ断片；（ｉｉ）ヒンジ領域においてジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片であるＦ（ａｂ’）２断片；（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の単一のアームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）１つのＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄら、１９８９ Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４～５４６）；ならびに（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）、ジスルフィド連結されたＦｖ（ｄｓＦｖ）、ならびに抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体および細胞内抗体、が含まれる。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメインＶＬおよびＶＨは、別々の遺伝子によってコードされるが、これらは、組換え方法を使用して、ＶＬおよびＶＨ領域が対になって一価分子（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）としても公知）を形成している単一のタンパク質鎖としてそれらが作製されるのを可能にする合成リンカーによって、接合され得る；例えば、Ｂｉｒｄら Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３～４２６（１９８８）およびＨｕｓｔｏｎら、１９８８、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９～５８８３を参照のこと。他の形態の単鎖抗体、例えば、ダイアボディ（diabody）もまた包含される。ダイアボディは、ＶＨおよびＶＬドメインが単一のポリペプチド鎖上で発現されるが、同じ鎖上の２つのドメイン間での対形成を可能にするには短すぎるリンカーを使用し、それによって、これらのドメインをもう一方の鎖の相補的ドメインと対形成させ、２つの抗原結合部位を創出する、二価の二重特異性抗体である（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒら、１９９３、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４～６４４８；Ｐｏｌｊａｋら、１９９４、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ２：１１２１～１１２３を参照のこと）。
【0022】
抗体「可変ドメイン」は、単独のまたは組み合わせた、抗体軽鎖の可変領域（ＶＬ）または抗体重鎖の可変領域（ＶＨ）を指す。当該分野で公知のように、重鎖および軽鎖の可変領域は各々、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）によって接続された４つのフレームワーク領域（ＦＲ）からなり、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。
【0023】
「相補性決定領域」（ＣＤＲ）は、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａの両方の集積、ＡｂＭ、接触、Ｎｏｒｔｈおよび／もしくはコンフォメーション定義または当該分野で周知のＣＤＲ決定の任意の方法の定義に従って同定され得る。例えば、Ｋａｂａｔら、１９９１、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版（超可変領域）；Ｃｈｏｔｈｉａら、１９８９、Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７７～８８３（構造的ループ構造）を参照のこと。特定の抗体中のＣＤＲを構成するアミノ酸残基の同一性は、当該分野で周知の方法を使用して決定され得る。ＣＤＲのＡｂＭ定義は、ＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａとの間の妥協であり、Ｏｘｆｏｒｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェア（Ａｃｃｅｌｒｙｓ（登録商標））を使用する。ＣＤＲの「接触」定義は、ＭａｃＣａｌｌｕｍら、１９９６、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２６２：７３２～７４５に示される、観察された抗原接触に基づく。ＣＤＲの「コンフォメーション」定義は、抗原結合にエンタルピー的に寄与する残基に基づく（例えば、Ｍａｋａｂｅら、２００８、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２８３：１１５６～１１６６を参照のこと）。Ｎｏｒｔｈは、異なる好ましいセットのＣＤＲ定義を使用して、カノニカルなＣＤＲコンフォメーションを同定している（Ｎｏｒｔｈら、２０１１、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４０６：２２８～２５６）。ＣＤＲの「コンフォメーション定義」と本明細書で呼ばれる別のアプローチでは、ＣＤＲの位置は、抗原結合にエンタルピー的に寄与する残基として同定され得る（Ｍａｋａｂｅら、２００８、Ｊ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８３：１１５６～１１６６）。なお他のＣＤＲ境界定義は、上記アプローチのうちの１つに厳密に従わなくてもよいが、それにもかかわらず、Ｋａｂａｔ ＣＤＲの少なくとも一部分と重複するが、これらは、特定の残基もしくは残基の群またはさらにはＣＤＲ全体であっても抗原結合に顕著には影響しないという予測または実験的知見に照らして、短縮または延長され得る。本明細書で使用する場合、ＣＤＲは、アプローチの組み合わせを含む、当該分野で公知の任意のアプローチによって定義されるＣＤＲを指し得る。本明細書で使用される方法は、これらのアプローチのいずれかに従って定義されるＣＤＲを利用し得る。１つよりも多くのＣＤＲを含む任意の所与の実施形態について、ＣＤＲ（または抗体の他の残基）は、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｎｏｒｔｈ、拡張型（extended）、ＡｂＭ、接触および／またはコンフォメーション定義のいずれかに従って定義され得る。
【0024】
「フレームワーク」（ＦＲ）残基は、ＣＤＲ残基以外の抗体可変ドメイン残基である。ＶＨまたはＶＬドメインフレームワークは、以下の構造：ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４でＣＤＲが散在する４つのフレームワークサブ領域ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４を含む。
【0025】
当該分野で公知のように、抗体の「定常領域」は、単独のまたは組み合わせた、抗体軽鎖の定常領域または抗体重鎖の定常領域を指す。
【0026】
用語「Ｆｃ領域」、「Ｆｃドメイン」および「Ｆｃ」は、本明細書で相互交換可能に使用される場合、免疫グロブリン（Ｉｇ）分子のパパイン消化によって得られる結晶化可能な断片と相関する、Ｉｇ分子の部分を指す。本明細書で使用する場合、これらの用語は、第１の定常領域免疫グロブリンドメインを除外する抗体の定常領域に関し、その領域の部分にさらに関する。したがって、Ｆｃは、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＧの最後の２つの定常領域免疫グロブリンドメイン、ならびにＩｇＥおよびＩｇＭの最後の３つの定常領域免疫グロブリンドメイン、ならびにこれらのドメインに対してＮ末端側の可動性ヒンジ、またはそれらの部分を指す。ＩｇＡおよびＩｇＭについて、Ｆｃは、Ｊ鎖を含み得る。
【0027】
ＩｇＧについて、Ｆｃは、免疫グロブリンドメインＣγ２およびＣγ３（Ｃガンマ２およびＣガンマ３）ならびにＣγ１（Ｃガンマ１）とＣγ２（Ｃガンマ２）との間のヒンジを含む。Ｆｃ領域の境界は変動し得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、通常、残基Ｃ２２６またはＰ２３０からそのカルボキシル末端までを含むと定義され、この番号付けは、Ｋａｂａｔら、１９９１に記載されるように、Ｅｄｅｌｍａｎら、１９６９、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ６３（１）：７８～８５のＥＵインデックスに従う。典型的には、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１定常ドメインのアミノ酸残基約２３６～約４４７を含む。例示的なヒト野生型ＩｇＧ１ Ｆｃドメインアミノ酸配列は、配列番号３１に示される。Ｆｃポリペプチドは、単離状態にあるこの領域、または抗体もしくはその抗原結合性部分、またはＦｃ融合タンパク質と関連したこの領域を指し得る。
【0028】
重鎖定常ドメインは、Ｆｃ領域を含み、ＩｇＧ重鎖のＣＨ１ドメインおよびヒンジならびにＣＨ２およびＣＨ３（ならびに、任意選択により、ＩｇＡおよびＩｇＥのＣＨ４）ドメインをさらに含む。
【0029】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合性断片は、Ｆｃドメインを含む。Ｆｃドメインは、ＩｇＡ（例えば、ＩｇＡ１またはＩｇＡ２）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭまたはＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４）に由来し得る。
【0030】
「Ｆｃ融合」タンパク質は、１つ以上のポリペプチドがＦｃポリペプチドに作動可能に連結されたタンパク質である。Ｆｃ融合は、免疫グロブリンのＦｃ領域を融合パートナーと組み合わせる。
【0031】
「エピトープ」は、抗体が特異的に結合する抗原のエリアまたは領域、例えば、抗体と相互作用する残基を含むエリアまたは領域を指す。エピトープは、線状またはコンフォメーションであり得る。
【0032】
その最も詳細なレベルでは、ＡｇとＡｂとの間の相互作用のためのエピトープは、Ａｇ－Ａｂ相互作用中に存在する原子接触を定義する空間座標、ならびに結合熱力学へのそれらの相対的寄与についての情報によって、定義され得る。あまり詳細でないレベルでは、エピトープは、ＡｇとＡｂとの間の原子接触を定義する空間座標によって特徴付けられ得る。さらにあまり詳細でないレベルでは、エピトープは、具体的な基準によって、例えば、ＡｂおよびＡｇ中の原子（例えば、重原子、即ち、非水素原子）間の距離によって定義される、それが含むアミノ酸残基によって特徴付けられ得る。さらにあまり詳細でないレベルでは、エピトープは、機能を介して、例えば、他のＡｂとの競合結合によって、特徴付けられ得る。エピトープはまた、別のアミノ酸による置換（例えば、アラニンスキャニングを使用する）がＡｂとＡｇとの間の相互作用の特徴を変更するアミノ酸残基を含むものとして、より一般に定義され得る。
【0033】
使用されるエピトープマッピング法に依存するエピトープの説明および定義が、異なるレベルの詳細さで得られるという事実から、同じＡｇ上の、異なるＡｂに対するエピトープの比較は、異なるレベルの詳細さで同様に実施することができるということになる。
【0034】
例えばＸ線構造から決定される、アミノ酸レベルで記載されるエピトープは、それらが同じセットのアミノ酸残基を含む場合、同一であると言われる。エピトープは、少なくとも１つのアミノ酸がそれらのエピトープによって共有される場合、重複すると言われる。エピトープは、アミノ酸残基がそれらのエピトープによって共有されない場合、別々（独自）であると言われる。
【0035】
競合結合によって特徴付けられるエピトープは、対応する抗体の結合が相互に排他的である場合、即ち、１つの抗体の結合が、他の抗体の同時のまたは連続的な結合を排除する場合、重複していると言われる。エピトープは、抗原が、両方の対応する抗体の結合を同時に受け入れることが可能である場合、別々（独自）であると言われる。
【0036】
エピトープに「優先的に結合する」または「特異的に結合する」（本明細書で相互交換可能に使用される）抗体は、当該分野で十分に理解された用語であり、かかる特異的または優先的結合を決定するための方法もまた、当該分野で周知である。分子は、それが代替的な細胞または物質と反応または会合する場合よりも、特定の細胞または物質と、より頻繁に、より迅速に、より長い持続時間で、および／またはより高い親和性で反応または会合する場合、「特異的結合」または「優先的結合」を示すと言われる。抗体が他の物質に結合する場合よりも、より高い親和性、結合力で、より容易に、および／またはより長い持続時間で結合する場合、抗体は、標的に「特異的に結合する」または「優先的に結合する」。例えば、ＧＤＦ１５エピトープに特異的にまたは優先的に結合する抗体は、それが他のＧＤＦ１５エピトープまたは非ＧＤＦ１５エピトープに結合する場合よりも、より高い親和性、結合力で、より容易に、および／またはより長い持続時間でこのエピトープに結合する抗体である。一般に、必ずではないが、結合に対する言及は、優先的結合を意味する。「特異的結合」または「優先的結合」は、サンプル中の特定の分子を認識しそれに結合するが、サンプル中の他の分子は実質的に認識も結合もしない、化合物、例えば、タンパク質、核酸、抗体などを含む。例えば、サンプル中の同族リガンドまたは結合パートナーを認識しそれに結合するが、サンプル中の他の分子は実質的に認識も結合もしない抗体またはペプチド受容体は、その同族リガンドまたは結合パートナーに特異的に結合する。したがって、指定されたアッセイ条件下で、特定された結合部分（例えば、抗体もしくはその抗原結合性部分または受容体もしくはそのリガンド結合性部分）は、特定の標的分子に優先的に結合し、試験サンプル中に存在する他の構成要素には、顕著な量では結合しない。
【0037】
種々のアッセイフォーマットが、目的の分子に特異的に結合する抗体またはペプチドを選択するために使用され得る。抗原と特異的に反応する抗体、または同族リガンドもしくは結合パートナーに特異的に結合する受容体もしくはそのリガンド結合性部分を同定するために使用され得る多くのアッセイの中では、例えば、固相ＥＬＩＳＡイムノアッセイ、免疫沈降、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）、Ｏｃｔｅｔ（商標）（ＦｏｒｔｅＢｉｏ，Ｉｎｃ．、Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ、ＣＡ）およびウエスタンブロット分析である。典型的には、特異的または選択的反応は、背景シグナルまたはノイズの少なくとも２倍であり、より典型的には、背景の１０倍を超え、さらにより具体的には、抗体は、平衡解離定数（ＫＤ）が、≦１μＭ、好ましくは≦１００ｎＭ、より好ましくは≦１０ｎＭ、さらにより好ましくは≦１００ｐＭ、なおより好ましくは≦１０ｐＭ、さらにより好ましくは≦１ｐＭである場合、抗原に「特異的に結合する」と言われる。
【0038】
用語「競合する」は、抗体に関して本明細書で使用する場合、抗原への第１の抗体またはその抗原結合性部分の結合が、第２の抗体またはその抗原結合性部分による同じ抗原の引き続く結合を低減させることを意味する。一般に、第１の抗体の結合は、同じ抗原への第２の抗体の結合が低減されるような、立体障害、コンフォメーション変化、または共通のエピトープ（もしくはその部分）への結合を創出する。標準的な競合アッセイが、２つの抗体が互いに競合するかどうかを決定するために使用され得る。抗体競合についての１つの適切なアッセイには、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）テクノロジーを使用して、典型的には、バイオセンサーシステム（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥシステム）を使用して相互作用の程度を測定することができる、Ｂｉａｃｏｒｅテクノロジーの使用が関与する。例えば、ＳＰＲは、第２の抗体の結合を阻害する１つの抗体の能力を決定するために、ｉｎ ｖｉｔｒｏ競合的結合阻害アッセイにおいて使用され得る。抗体競合を測定するための別のアッセイは、ＥＬＩＳＡベースのアプローチを使用する。
【0039】
さらに、それらの競合に基づいて抗体を「ビニング」するためのハイスループットプロセスが、国際特許出願公開ＷＯ２００３／４８７３１に記載されている。競合は、１つの抗体（または断片）がＧＤＦ１５への別の抗体（または断片）の結合を低減させる場合に存在する。例えば、逐次的な結合競合アッセイが使用され得、異なる抗体は逐次的に添加される。第１の抗体は、飽和に近い結合に到達するまで添加され得る。次いで、第２の抗体が添加される。ＧＤＦ１５への第２の抗体の結合が検出されない場合、または第１の抗体の非存在下での並行アッセイ（その値が１００％と設定され得る）と比較して、顕著に低減される（例えば、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％または少なくとも約９０％の低減）場合、これら２つの抗体は、互いに競合するとみなされる。
【0040】
バリアント抗体は、上で議論した特定の配列および断片からの、１、２、３、４、５、最大で１０、最大で２０、最大で３０、またはそれよりも多くのアミノ酸置換および／または欠失および／または挿入を含み得る。「欠失」バリアントは、個々のアミノ酸の欠失、アミノ酸の小さい群、例えば、２、３、４もしくは５アミノ酸の欠失、またはより大きいアミノ酸領域の欠失、例えば、特定のアミノ酸ドメインもしくは他の特色の欠失を含み得る。「挿入」バリアントは、個々のアミノ酸の挿入、アミノ酸の小さい群、例えば、２、３、４もしくは５アミノ酸の挿入、またはより大きいアミノ酸領域の挿入、例えば、特定のアミノ酸ドメインもしくは他の特色の挿入を含み得る。「置換」バリアントには、好ましくは、１つ以上のアミノ酸の、同じ数のアミノ酸による置き換え、および保存的アミノ酸置換を行うことが関与する。例えば、アミノ酸は、類似の特性を有する代替的アミノ酸、例えば、別の塩基性アミノ酸、別の酸性アミノ酸、別の中性アミノ酸、別の荷電アミノ酸、別の親水性アミノ酸、別の疎水性アミノ酸、別の極性アミノ酸、別の芳香族アミノ酸または別の脂肪族アミノ酸で置換され得る。適切な置換基を選択するために使用され得る２０種の主要アミノ酸の一部の特性は、以下の通りである：
【0041】
置換バリアントは、抗体分子中の少なくとも１つのアミノ酸残基が除去され、その場所に異なる残基が挿入されている。置換変異誘発のために最も目的とされる部位には、超可変領域が含まれるが、フレームワーク変更もまた企図される。保存的置換は、「保存的置換」の見出しの下で、表１中に示される。かかる置換が生物学的活性における変化を生じる場合、以下に示される「例示的な置換」と称される、またはアミノ酸クラスを参照して以下にさらに記載される、より実質的な変化が導入され得、産物がスクリーニングされ得る。
【0042】
【表1】
【0043】
抗体の生物学的特性における実質的な改変は、（ａ）例えば、ベータ－シートもしくはらせんコンフォメーションとしての、置換のエリアにおけるポリペプチド骨格の構造、（ｂ）標的部位における分子の電荷もしくは疎水性、または（ｃ）側鎖の嵩、を維持することに対するそれらの効果が顕著に異なる置換を選択することによって達成される。天然に存在する残基は、共通の側鎖特性に基づいて、以下の群へと分けられる：
ｉ．非極性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
ｉｉ．電荷なし極性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
ｉｉｉ．酸性（負に荷電）：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
ｉｖ．塩基性（正に荷電）：Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
ｖ．鎖の配向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；および
ｖｉ．芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｈｉｓ。
ｉ．非極性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
ｉｉ．電荷なし極性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
ｉｉｉ．酸性（負に荷電）：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
ｉｖ．塩基性（正に荷電）：Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
ｖ．鎖の配向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；および
ｖｉ．芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｈｉｓ。
【0044】
非保存的置換は、これらのクラスのうち１つのメンバーを、別のクラスと交換することによって行われる。
【0045】
例えば、行われ得る１つの型の置換は、抗体中の化学的に反応性であり得る１つ以上のシステインを、別の残基、例えば、限定なしに、アラニンまたはセリンに変化させることである。例えば、非カノニカルなシステインの置換が存在し得る。置換は、抗体の可変ドメインのＣＤＲもしくはフレームワーク領域中、または定常領域中で行われ得る。一部の実施形態では、システインは、カノニカルである。抗体の適切なコンフォメーションを維持することに関与しない任意のシステイン残基もまた、分子の酸化安定性を改善するためおよび異常な架橋結合を防止するために、一般にはセリンで置換され得る。逆に、システイン結合は、特に、抗体がＦｖ断片などの抗体断片である場合、その安定性を改善するために抗体に付加され得る。
【0046】
「生殖系列化（germlining）」として公知のプロセスでは、ＶＨおよびＶＬ配列中の特定のアミノ酸が、生殖系列ＶＨおよびＶＬ配列中に天然に見出されるアミノ酸と一致するように変異され得る。特に、ＶＨおよびＶＬ配列中のフレームワーク領域のアミノ酸配列は、抗体が投与された場合の免疫原性のリスクを低減させるために、生殖系列配列と一致するように変異され得る。本明細書で使用する場合、用語「生殖系列」は、それらが生殖細胞を介して親から子孫に受け継がれるときの、抗体遺伝子および遺伝子セグメントのヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を指す。この生殖系列配列は、Ｂ細胞成熟化の過程の間の組換えおよび超変異事象によって変更された、成熟Ｂ細胞中の抗体をコードするヌクレオチド配列から識別される。特定の生殖系列を「利用する」抗体は、その生殖系列ヌクレオチド配列またはそれが特定するアミノ酸配列と最も密接にアラインするヌクレオチドまたはアミノ酸配列を有する。かかる抗体は、生殖系列配列と比較して、頻繁に変異される。ヒトＶＨおよびＶＬ遺伝子についての生殖系列ＤＮＡ配列は、当該分野で公知である（例えば、「Ｖｂａｓｅ」ヒト生殖系列配列データベースを参照のこと；Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ら、１９９１、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２；Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：７７６～７９８、１９９２；およびＣｏｘら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：８２７～８３６、１９９４もまた参照のこと）。
【0047】
結合親和性
抗体の結合親和性は、特定の抗原－抗体相互作用の解離速度を指すＫＤ値として表され得る。ＫＤは、「オフレート（off-rate）（ｋｏｆｆ）」とも呼ばれる解離の速度の、会合速度、即ち「オンレート（on-rate）（ｋｏｎ）」に対する比である。したがって、ＫＤは、ｋｏｆｆ／ｋｏｎと等しく、モル濃度（Ｍ）として表され、ＫＤが小さいほど、結合の親和性はより強い。抗体についてのＫＤ値は、当該分野で十分に確立された方法を使用して決定され得る。Ｋｄを測定するための１つの例示的な方法は、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）システムなどのバイオセンサーシステムを典型的には使用する、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）である。ＢＩＡｃｏｒｅ動態分析は、それらの表面上に固定化された分子（例えば、エピトープ結合ドメインを含む分子）を有するチップからの、抗原の結合および解離を分析することを含む。抗体のＫｄを決定するための別の方法は、Ｂｉｏ－Ｌａｙｅｒ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｍｅｔｒｙを使用すること、典型的には、ＯＣＴＥＴテクノロジー（Ｏｃｔｅｔ ＱＫｅ ｓｙｓｔｅｍ、ＦｏｒｔｅＢｉｏ）を使用することによる。あるいは、またはさらに、Ｓａｐｉｄｙｎｅ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（Ｂｏｉｓｅ、Ｉｄ．）から入手可能なＫｉｎＥｘＡ（Ｋｉｎｅｔｉｃ Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ Ａｓｓａｙ）アッセイもまた使用され得る。
抗体の結合親和性は、特定の抗原－抗体相互作用の解離速度を指すＫＤ値として表され得る。ＫＤは、「オフレート（off-rate）（ｋｏｆｆ）」とも呼ばれる解離の速度の、会合速度、即ち「オンレート（on-rate）（ｋｏｎ）」に対する比である。したがって、ＫＤは、ｋｏｆｆ／ｋｏｎと等しく、モル濃度（Ｍ）として表され、ＫＤが小さいほど、結合の親和性はより強い。抗体についてのＫＤ値は、当該分野で十分に確立された方法を使用して決定され得る。Ｋｄを測定するための１つの例示的な方法は、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）システムなどのバイオセンサーシステムを典型的には使用する、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）である。ＢＩＡｃｏｒｅ動態分析は、それらの表面上に固定化された分子（例えば、エピトープ結合ドメインを含む分子）を有するチップからの、抗原の結合および解離を分析することを含む。抗体のＫｄを決定するための別の方法は、Ｂｉｏ－Ｌａｙｅｒ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｍｅｔｒｙを使用すること、典型的には、ＯＣＴＥＴテクノロジー（Ｏｃｔｅｔ ＱＫｅ ｓｙｓｔｅｍ、ＦｏｒｔｅＢｉｏ）を使用することによる。あるいは、またはさらに、Ｓａｐｉｄｙｎｅ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（Ｂｏｉｓｅ、Ｉｄ．）から入手可能なＫｉｎＥｘＡ（Ｋｉｎｅｔｉｃ Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ Ａｓｓａｙ）アッセイもまた使用され得る。
【0048】
ＧＤＦ１５に対する抗体
本発明は、抗ＧＤＦ１５抗体を提供する。抗ＧＤＦ１５抗体、好ましくは、高親和性抗体は、ＧＤＦ１５がその標的細胞に対して作用すると考えられる血漿および複数の組織区画において有効であり得る。本発明の抗体は、とりわけ、がん、心不全またはＣＯＰＤと関連する悪液質の発達および進行を駆動する経路を改変する潜在力を有する。
本発明は、抗ＧＤＦ１５抗体を提供する。抗ＧＤＦ１５抗体、好ましくは、高親和性抗体は、ＧＤＦ１５がその標的細胞に対して作用すると考えられる血漿および複数の組織区画において有効であり得る。本発明の抗体は、とりわけ、がん、心不全またはＣＯＰＤと関連する悪液質の発達および進行を駆動する経路を改変する潜在力を有する。
【0049】
中和または「遮断」抗体は、ＧＤＦ１５へのその結合が、ＧＤＦ１５もしくはＧＤＦ１５断片とＧＤＦ１５受容体、例えば、ＧＦＲＡＬもしくはＧＤＦ１５受容体構成要素との間の相互作用を妨害、制限もしくは阻害する；および／または（ｉｉ）ＧＤＦ１５の少なくとも１つの生物学的機能の阻害を生じる、抗体を指す。本発明の抗体による中和を決定するためのアッセイは、本明細書の他の場所に記載されており、当該分野で周知である。
【0050】
本明細書で使用する場合、用語「ＧＤＦ１５」には、ヒトＧＤＦ１５のバリアント、アイソフォーム、ホモログ、オルソログおよびパラログが含まれる。本発明の一部の態様では、抗体は、ヒト以外の種からのＧＤＦ１５、例えば、マウス、ラットまたは非ヒト霊長類のＧＤＦ１５、ならびに異なる形態のＧＤＦ１５と交差反応する。他の態様では、抗体は、ヒトＧＤＦ１５に対して完全に特異的であり得、種または他の型の交差反応性を示さなくてもよい。本明細書で使用する場合、ＧＤＦ１５という用語は、文脈上他のように定められない限り、天然に存在するヒトＧＤＦ１５を指す。したがって、「ＧＤＦ１５抗体」、「抗ＧＤＦ１５抗体」または他の類似の指定は、ＧＤＦ１５型のリガンドもしくはアイソフォームと特異的に会合、結合もしくは反応する任意の抗体（本明細書で定義される）、またはその断片もしくは誘導体を意味する。ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔアクセッション番号Ｑ９９９８８．１によって示される全長成熟形態のヒトＧＤＦ１５は、本明細書で配列番号１として提供される。
【0051】
いずれの特定の理論に束縛されることも望まないが、ＧＤＦ１５との相互作用の際に、ＧＦＲＡＬは、原癌遺伝子チロシンタンパク質キナーゼ受容体Ｒｅｔ（ＲＥＴ）と相互作用し、ＭＡＰＫシグナル伝達経路およびＡＫＴシグナル伝達経路の活性化を介して細胞シグナル伝達を誘導する。次いで、ＲＥＴシグナル伝達は、例えば、とりわけ、ＥＲＫ、Ｓ６のリン酸化を誘導または媒介する。本明細書で使用する場合、用語「ＧＦＲＡＬ」には、ヒトＧＦＲＡＬのバリアント、アイソフォーム、ホモログ、オルソログおよびパラログが含まれる。全長成熟形態のヒトＧＦＲＡＬは、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔアクセッション番号Ｑ６ＵＸＶ０によって示される。本明細書で使用する場合、用語「ＲＥＴ」には、ヒトＲＥＴのバリアント、アイソフォーム、ホモログ、オルソログおよびパラログが含まれる。全長成熟形態のヒトＲＥＴは、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔアクセッション番号Ｐ０７９４９によって示される。
【0052】
ＧＤＦ１５の「生物学的機能」または「生物学的活性」は、組織における炎症およびアポトーシス経路、ならびに細胞傷害後の細胞のストレス応答プログラムを調節することを含む意味である。ＧＤＦ１５の「生物学的機能」または「生物学的活性」には、とりわけ、当該分野で現在公知のまたは後に同定される、悪液質を増加させること、減少した食物摂取、減少した食欲、減少した体重、体重減少、減少した体脂肪量、減少した除脂肪量、ＧＦＲＡＬの結合、ＲＥＴの活性化、ＥＲＫのリン酸化、およびＳ６のリン酸化を媒介することが含まれる。ＧＤＦ１５の生物学的機能または生物学的活性は、ＧＤＦ１５とその同族受容体ＧＦＲＡＬとの間の相互作用によって媒介され得るが、その必要はない。
【0053】
本発明は、ＧＤＦ１５の生物学的活性をモジュレートし得る抗体またはその抗原結合性部分を含む。即ち、本発明は、その抗体が、（ａ）食物摂取を増加させる；（ｂ）食欲を増加させる；（ｃ）体重を増加させる；（ｄ）体重減少を減少させる；（ｅ）体脂肪量を増加させる；（ｆ）除脂肪量を増加させる；（ｇ）体脂肪量の喪失を減少させる、（ｈ）除脂肪筋肉量の喪失を減少させる、（ｉ）ＧＦＲＡＬへのＧＤＦ１５結合を減少させる；（ｊ）ＲＥＴによって媒介される下流シグナル伝達を減少させる；（ｋ）ＥＲＫのリン酸化を減少させるもしくは阻害する；（ｌ）Ｓ６のリン酸化を減少させるもしくは阻害する；（ｍ）ＭＡＰＫシグナル伝達経路のＲＥＴ活性化を減少させる；（ｎ）ＡＫＴシグナル伝達経路のＲＥＴ活性化を減少させる；および／または（ｏ）ＰＬＣ－γ１シグナル伝達経路の活性化を減少させるような、ＧＤＦ１５に特異的に結合し、少なくとも１つの検出可能なＧＤＦ１５活性をモジュレートする、単離された抗体またはその抗原結合性部分を含む。
【0054】
ＧＤＦ１５の生物学的活性およびＧＤＦ１５依存的シグナル伝達活性は、多くの当該分野で認識されたアッセイの中でも、ＧＦＲＡＬおよびＲＥＴを共発現するＨＥＫ２９３またはＣＨＯ細胞を使用して、ｉｎ ｖｉｔｒｏで評価され得る。ＧＤＦ１５による刺激後のＭＡＰＫ経路の活性化は、とりわけ、ルシフェラーゼベースの遺伝子レポーターシステム（例えば、ＰａｔｈＤｅｔｅｃｔ、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して測定され得る。均一時間分解蛍光テクノロジー（Ｃｉｓｂｉｏ Ｉｎｃ．）に基づくリン酸化タンパク質アッセイもまた、その受容体に結合するＧＤＦ１５に応答したＭＡＰＫおよびＡＫＴ経路の活性化（例えば、リン酸化ＥＲＫ１／２）を測定するための直交アプローチとして使用され得る。ＧＤＦ１５依存的シグナル伝達を防止する中和抗体の能力は、漸増濃度の抗ＧＤＦ１５抗体の非存在下または存在下で、細胞を固定濃度のＧＤＦ１５と共にインキュベートすることによっても評価され得る。
【0055】
本発明の一態様では、本発明のＧＤＦ１５抗体は、配列番号１６６として示される重鎖可変領域のアミノ酸配列および配列番号１６３として示される軽鎖可変領域のアミノ酸配列を有する抗体またはその抗原結合性断片と、ヒトＧＤＦ１５への結合について競合する、および／またはそれと同じエピトープに結合する、抗体を包含する。
【0056】
本発明の一態様では、本発明のＧＤＦ１５抗体は、ＧＦＲＡＬとのＧＤＦ１５の結合を阻害するまたは低減させる抗体を包含する。
【0057】
一態様では、本発明は、ＧＦＲＡＬとのＧＤＦ１５の結合を阻害するにあたり、配列番号１６６として示される重鎖可変領域のアミノ酸配列および配列番号１６３として示される軽鎖可変領域のアミノ酸配列を有する抗体またはその抗原結合性断片と競合する抗体を包含する。
【0058】
本発明の一部の態様では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＩｇＧ１重鎖定常領域、例えば、配列番号１６４として示されるＧＤＦ１５重鎖を含む。他の態様では、抗体またはその抗原結合性断片は、カッパ軽鎖定常領域、例えば、配列番号１６２として示されるＧＤＦ１５軽鎖を含む。
【0059】
表２は、本発明の抗ＧＤＦ１５抗体のアミノ酸（タンパク質）配列および関連の核酸（ＤＮＡ）配列を提供する。Ｋａｂａｔによって、およびＣｈｏｔｈｉａによって定義される抗ＧＤＦ１５ ＶＨおよび抗ＧＤＦ１５ ＶＬのＣＤＲは、別々の配列として示される。
【0060】
一部の態様では、ＣＤＲは、配列番号１７１、１７２、１７３、１７４、１７５および１７６を含む。これらのＣＤＲ配列は、以下の実施例１～１０に示される好ましい配列分析および生物物理学的プロファイルデータに基づくコンセンサスを取り込む。これらのＣＤＲ配列は、それらの配列、結合、熱安定性、低いｐＨにおける安定性、および粘度プロファイルに基づく利点を保有する。
【0061】
【表2-1】
【0062】
【表2-2】
【0063】
【表2-3】
【0064】
【表2-4】
【0065】
【表2-5】
【0066】
【表2-6】
【0067】
【表2-7】
【0068】
【表2-8】
【0069】
【表2-9】
【0070】
【表2-10】
【0071】
【表2-11】
【0072】
【表2-12】
【0073】
【表2-13】
【0074】
【表2-14】
【0075】
【表2-15】
【0076】
【表2-16】
【0077】
【表2-17】
【0078】
【表2-18】
【0079】
【表2-19】
【0080】
【表2-20】
【0081】
【表2-21】
【0082】
ある特定の実施形態では、置換は、（ドナー）ＣＤＲ残基が、例えば、米国特許出願公開第２０１７／００７３３９５号およびＴｏｗｎｓｅｎｄら、２０１５、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １１２（５０）：１５３５４～１５３５９に記載されるように、ヒトアミノ酸含量を増加させ、抗体の免疫原性を潜在的に低減させるように、対応するヒト生殖系列（アクセプター）残基で置き換えられる、ヒト生殖系列置換である。例えば、ヒト生殖系列ＩＧＨＶ１－６９＊０１フレームワークが使用され、例示的な抗体、ＧＤＦ１５＿００１ＶＨ（配列番号１６６）が比較される場合、ＧＤＦ１５＿００１抗体（配列番号３２）およびヒト生殖系列ＩＧＨＶ１－６９＊０１のＨＣＤＲ－１のアラインメントは、以下の通りである：
【0083】
【表3】
【0084】
アミノ酸位置番号２６、２８、２９、３０、３１、３２および３４（イタリック）について、ヒト生殖系列残基（アクセプター）と対応するＧＤＦ１５＿００１残基（ドナー）とは同じであり、生殖系列置換は不可能である。位置２７、３３および３５（太字かつ下線付き）について、ヒト生殖系列（アクセプター）残基と対応するＧＤＦ１５＿００１（ドナー）残基とは異なる。これらの位置におけるＧＤＦ１５＿００１の残基は、ヒト残基含量をさらに増加させるために、対応するヒト生殖系列ＩＧＨＶ１－６９＊０１残基で置き換えられ得る。ヒトアミノ酸残基の含量を増加させる一方で、マウス残基の含量を最小化し、それによって、ヒトにおける抗体に対する任意の潜在的な免疫原性、例えば、ヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）免疫応答を減少させつつ、結合特徴、例えば、エピトープ結合、親和性などを保存するために、同じプロセスが、各重鎖および軽鎖ＣＤＲについて踏襲され得る。
【0085】
抗体ＣＤＲ中にヒト生殖系列残基を導入するための方法およびライブラリーは、米国特許出願公開第２０１７／００７３３９５号およびＴｏｗｎｓｅｎｄら、２０１５、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．１１２（５０）：１５３５４～１５３５９に詳細に記載されており、これらは共に、それらの全体が本明細書で参照によって組み込まれる。
【0086】
抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性断片は、ヒト生殖系列ＶＨフレームワーク配列を含むＶＨフレームワークを含み得る。一部の態様では、以下の生殖系列からのＶＨフレームワークが使用され得る：ＩＧＨＶ１－２＊０２、ＩＧＨＶ１－３＊０１、ＩＧＨＶ１－４６＊０１、ＩＧＨＶ１－６９＊０１、ＩＧＨＶ１－６９＊０２、ＩＧＨＶ１－８＊０１、ＩＧＨＶ３－１３＊０１、ＩＧＨＶ３－２３＊０１、ＩＧＨＶ３－２３＊０４、ＩＧＨＶ３－３０＊０１、ＩＧＨＶ３－３０＊１８、ＩＧＨＶ５－１０－１＊０１、ＩＧＨＶ５－１０－１＊０４またはＩＧＨＶ５－５１＊０１（生殖系列の名称は、ＩＭＧＴ生殖系列定義に基づく）。一部の態様では、以下の生殖系列からのＶＬフレームワークが使用され得る：ＩＧＫＶ１－１２＊０１、ＩＧＫＶ１－１３＊０２、ＩＧＫＶ１－３３＊０１、ＩＧＫＶ１－３９＊０１、ＩＧＫＶ１－５＊０１、ＩＧＫＶ３－１１＊０１、ＩＧＫＶ３－１５＊０１、ＩＧＫＶ３－２０＊０１、ＩＧＫＶ３Ｄ－２０＊０２およびＩＧＫＶ４－１＊０１（生殖系列の名称は、ＩＭＧＴ生殖系列定義に基づく）。ヒト生殖系列フレームワークの配列は、種々の公的データベース、例えば、Ｖ－ｂａｓｅ、ＩＭＧＴ、ＮＣＢＩまたはＡｂｙｓｉｓから入手可能である。
【0087】
抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性断片は、ヒト生殖系列ＶＬフレームワーク配列を含むＶＬフレームワークを含み得る。ＶＬフレームワークは、それが由来した生殖系列との機能的および構造的類似性をなおも保持しつつ、１つ以上のアミノ酸置換、付加または欠失を含み得る。一部の態様では、ＶＬフレームワークは、それが由来したヒト生殖系列配列に対して少なくとも５３％、５８％、６０％、６３％、７１％、７２％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一である。一部の態様では、抗体またはその抗原結合性断片は、ヒト生殖系列ＶＬフレームワーク配列と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個のアミノ酸置換、付加または欠失を含むＶＬフレームワークを含む。一部の態様では、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加または欠失は、フレームワーク領域中のみにある。一部の態様では、パーセント（％）同一性は、本明細書でＣＤＲと定義される部分を除いたＶＬとの類似性に基づく。
【0088】
抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性断片は、ヒト生殖系列ＶＨフレームワーク配列を含むＶＨフレームワークを含み得る。ＶＨフレームワークは、それが由来した生殖系列との機能的および構造的類似性をなおも保持しつつ、１つ以上のアミノ酸置換、付加または欠失を含み得る。一部の態様では、ＶＨフレームワークは、それが由来したヒト生殖系列配列に対して少なくとも７２％、７４％、７５％、７７％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一である。一部の態様では、抗体またはその抗原結合性断片は、ヒト生殖系列ＶＨフレームワーク配列と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個のアミノ酸置換、付加または欠失を含むＶＨフレームワークを含む。一部の態様では、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加または欠失は、フレームワーク領域中のみにある。一部の態様では、％同一性は、本明細書でＣＤＲと定義される部分を除いたＶＨとの類似性に基づく。
【0089】
抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含むＶＨを含み得る。ＶＨは、配列番号２１、３４、４４、５３、６０、６８、７３、８０、８６、９３、９９、１０６、１１２、１２０、１２７、１３６、１４２、１４８、１５５、１６１および１６６のアミノ酸配列に対して少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一なアミノ酸配列を含み得る。ＶＨは、配列番号２１、３４、４４、５３、６０、６８、７３、８０、８６、９３、９９、１０６、１１２、１２０、１２７、１３６、１４２、１４８、１５５、１６１および１６６のアミノ酸配列を含み得る。
【0090】
抗体または抗原結合性断片は、配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含むＶＬを含み得る。ＶＬは、配列番号１１、３０、３９、４９、５６、６４、７１、７７、８３、９０、９６、１０３、１０９、１１５、１２３、１３１、１３９、１４４、１５１、１５８および１６３のアミノ酸配列に対して少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一なアミノ酸配列を含み得る。ＶＬは、配列番号１１、３０、３９、４９、５６、６４、７１、７７、８３、９０、９６、１０３、１０９、１１５、１２３、１３１、１３９、１４４、１５１、１５８および１６３のアミノ酸配列を含み得る。
【0091】
一部の態様では、抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号１１、３０、３９、４９、５６、６４、７１、７７、８３、９０、９６、１０３、１０９、１１５、１２３、１３１、１３９、１４４、１５１、１５８および１６３のうち少なくとも１つのアミノ酸配列に示されるＬＣＤＲ－１、ＬＣＤＲ－２およびＬＣＤＲ－３を含む。
【0092】
一部の態様では、抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号２１、３４、４４、５３、６０、６８、７３、８０、８６、９３、９９、１０６、１１２、１２０、１２７、１３６、１４２、１４８、１５５、１６１および１６６のうち少なくとも１つのアミノ酸配列に示されるＨＣＤＲ－１、ＨＣＤＲ－２およびＨＣＤＲ－３をさらに含む。
【0093】
一部の態様では、抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号１６３のアミノ酸配列に示されるＬＣＤＲ－１、ＬＣＤＲ－２、ＬＣＤＲ－３、ならびに配列番号１６６のアミノ酸配列に示されるＨＣＤＲ－１、ＨＣＤＲ－２およびＨＣＤＲ－３を含む。
【0094】
抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号１６３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含むＶＬを含み得る。ＶＬは、配列番号１６３のアミノ酸配列に対して少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一なアミノ酸配列を含み得る。ＶＬは、配列番号１６３のアミノ酸配列を含み得る。
【0095】
抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号１６６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含むＶＨを含み得る。ＶＨは、配列番号１６６のアミノ酸配列に対して少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一なアミノ酸配列を含み得る。ＶＨは、配列番号１６６のアミノ酸配列を含み得る。
【0096】
抗体または抗原結合性断片は、配列番号１６４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一なアミノ酸配列を含むＨＣを含み得る。ＨＣは、配列番号１６４のアミノ酸配列を含み得る。
【0097】
抗体または抗原結合性断片は、配列番号１６２に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一なアミノ酸配列を含むＬＣを含み得る。ＬＣは、配列番号１６２のアミノ酸配列を含み得る。
【0098】
ＰＤ－１軸結合性アンタゴニスト
用語「ＰＤ－１軸結合性アンタゴニスト」は、本明細書で使用する場合、ＰＤ－１シグナル伝達軸（「ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ経路」または「ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌシグナル伝達経路」とも呼ばれる）上でのシグナル伝達から生じるＴ細胞機能障害を除去して、結果が、Ｔ細胞機能の回復または増強であるような、その結合パートナーのいずれか１つ以上との、ＰＤ－１軸結合性パートナーの相互作用を阻害する分子を指す。本明細書で使用する場合、ＰＤ－１軸結合性アンタゴニストには、ＰＤ－１結合性アンタゴニスト、ＰＤ－Ｌ１結合性アンタゴニストおよびＰＤ－Ｌ２結合性アンタゴニストが含まれる。一部の実施形態では、ＰＤ－１軸結合性アンタゴニストは、抗ＰＤ－１抗体である。一部の実施形態では、ＰＤ－１軸結合性アンタゴニストは、抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。一部の実施形態では、ＰＤ－１軸結合性アンタゴニストは、抗ＰＤ－Ｌ２抗体である。
用語「ＰＤ－１軸結合性アンタゴニスト」は、本明細書で使用する場合、ＰＤ－１シグナル伝達軸（「ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ経路」または「ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌシグナル伝達経路」とも呼ばれる）上でのシグナル伝達から生じるＴ細胞機能障害を除去して、結果が、Ｔ細胞機能の回復または増強であるような、その結合パートナーのいずれか１つ以上との、ＰＤ－１軸結合性パートナーの相互作用を阻害する分子を指す。本明細書で使用する場合、ＰＤ－１軸結合性アンタゴニストには、ＰＤ－１結合性アンタゴニスト、ＰＤ－Ｌ１結合性アンタゴニストおよびＰＤ－Ｌ２結合性アンタゴニストが含まれる。一部の実施形態では、ＰＤ－１軸結合性アンタゴニストは、抗ＰＤ－１抗体である。一部の実施形態では、ＰＤ－１軸結合性アンタゴニストは、抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。一部の実施形態では、ＰＤ－１軸結合性アンタゴニストは、抗ＰＤ－Ｌ２抗体である。
【0099】
一部の態様では、ＰＤ－１軸アンタゴニスト、ＰＤ－１軸結合性アンタゴニスト、ＰＤ－１結合性アンタゴニストおよび抗ＰＤ－Ｌ１抗体には、アベルマブが含まれない。即ち、任意選択により、アベルマブは、ＰＤ－１軸シグナル伝達軸を阻害する薬剤から排除される。
【0100】
本発明の処置方法、医薬および使用における使用のための例示的なＰＤ－１軸結合性アンタゴニストには、限定なしに、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、国際特許出願公開第ＷＯ２０１０／０２７８２７およびＷＯ２０１１／０６６３４２に記載される、シグナル配列ありまたはなしのＡＭＰ－２２４、国際特許出願公開第ＷＯ２０１６／０９２４１９に開示されるｍＡｂ７およびｍＡｂ１５、ならびにＷＯ２０１３／０７９１７４に記載されるアベルマブが含まれる。ＷＯ２０１０／０２７８２７、ＷＯ２０１１／０６６３４２、ＷＯ２０１６／０９２４１９およびＷＯ２０１３／０７９１７４の開示は、それらの全体が本明細書で参照によって組み込まれる。表３は、例示されたＰＤ－１軸結合性アンタゴニストの一部の種々の配列を列挙する。
【0101】
【表4-1】
【0102】
【表4-2】
【0103】
用語「ＰＤ－１結合性アンタゴニスト」は、本明細書で使用する場合、ＰＤ－１に特異的に結合し、ＰＤ－１と、その結合パートナー、例えば、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２のうち１つ以上との相互作用から生じるシグナル伝達を減少、遮断、阻害、無効化または妨害する分子を指す。一部の実施形態では、ＰＤ－１結合性アンタゴニストは、その結合パートナーへのＰＤ－１の結合を阻害する分子である。具体的な態様では、ＰＤ－１結合性アンタゴニストは、ＰＤ－１に特異的に結合し、それによって、ＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２へのＰＤ－１の結合を阻害する。例えば、ＰＤ－１結合性アンタゴニストには、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２との相互作用から生じるシグナル伝達を減少、遮断、阻害、無効化または妨害する、抗ＰＤ－１抗体、その抗原結合性断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチドおよび他の分子が含まれる。一実施形態では、ＰＤ－１結合性アンタゴニストは、ＰＤ－１に特異的に結合し、それによって、機能障害性Ｔ細胞をあまり非機能障害性でなくするように、ＰＤ－１を介したシグナル伝達を介して媒介される、Ｔリンパ球上に発現される細胞表面タンパク質によってまたはそれを介して媒介される負の共刺激シグナルを低減させる。一部の実施形態では、ＰＤ－１結合性アンタゴニストは、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、スパルタリズマブ、チスレチズマブ、ピディリズマブ、ＡＭＰ－２２４、ＡＭＰ－５５４、セミプリマブおよびＰＦ－０６８０１５９１が含まれるがこれらに限定されない抗ＰＤ－１抗体である。
【0104】
ＰＦ－０６８０１９５１は、ササンリマブ（ＣＡＳ登録番号２２０６７９２－５０－７）、ＲＮ８８８とも呼ばれ、それらの全体が本明細書に示されるかのように参照によって組み込まれる国際特許出願公開第ＷＯ２０１６／０９２４１９に開示されている。ササンリマブは、ヒト化されたヒンジ領域安定化ＩｇＧ４－カッパ（κ）モノクローナル抗体である。ササンリマブ（ＰＦ－０６８０１９５１；ＲＮ８８８）のアミノ酸配列は、以下の表４に示される。
【0105】
具体的な態様では、ＰＤ－１結合性アンタゴニストは、ニボルマブである。別の具体的な態様では、ＰＤ－１結合性アンタゴニストは、ペムブロリズマブである。別の具体的な態様では、ＰＤ－１結合性アンタゴニストは、ピディリズマブである。
【0106】
用語「ＰＤ－Ｌ１結合性アンタゴニスト」は、本明細書で使用する場合、ＰＤ－Ｌ１に特異的に結合し、ＰＤ－Ｌ１と、その結合パートナー、例えば、ＰＤ－１、Ｂ７－１のいずれか１つ以上との相互作用から生じるシグナル伝達を減少、遮断、阻害、無効化または妨害する分子を指す。一部の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合性アンタゴニストは、その結合パートナーへのＰＤ－Ｌ１の結合を阻害する分子である。一部の態様では、ＰＤ－Ｌ１結合性アンタゴニストには、アベルマブは含まれない。具体的な態様では、ＰＤ－Ｌ１結合性アンタゴニストは、ＰＤ－１および／またはＢ７－１へのＰＤ－Ｌ１の結合を阻害する。一部の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合性アンタゴニストには、ＰＤ－Ｌ１と、その結合パートナー、例えば、ＰＤ－１、Ｂ７－１のうち１つ以上との相互作用から生じるシグナル伝達を減少、遮断、阻害、無効化または妨害する、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、その抗原結合性断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチドおよび他の分子が含まれる。一実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合性アンタゴニストは、機能障害性Ｔ細胞をあまり非機能障害性でなくするように、ＰＤ－Ｌ１を介したシグナル伝達によって媒介される、Ｔリンパ球上に発現される細胞表面タンパク質によってまたはそれを介して媒介される負の共刺激シグナルを低減させる。一部の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合性アンタゴニストは、抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。具体的な態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、アベルマブ（国際特許出願公開第ＷＯ２０１３／０７９１７４において、Ａ０９－２４６－２として開示される）である。一部の態様では、アベルマブは、ＰＤ－１軸アンタゴニストとしては含まれない。
【0107】
別の具体的な態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、アテゾリズマブである。別の具体的な態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、デュルバルマブである。別の具体的な態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＢＭＳ－９３６５５９（ＭＤＸ－１１０５）である。
【0108】
本明細書で使用する場合、抗ヒトＰＤ－Ｌ１抗体は、成熟ヒトＰＤ－Ｌ１に特異的に結合する抗体またはその部分を指し、成熟ヒトＰＤ－Ｌ１分子は、以下の配列のアミノ酸１９～２９０からなる：
ＭＲＩＦＡＶＦＩＦＭＴＹＷＨＬＬＮＡＦＴＶＴＶＰＫＤＬＹＶＶＥＹＧＳＮＭＴＩＥＣＫＦＰＶＥＫＱＬＤＬＡＡＬＩＶＹＷＥＭＥＤＫＮＩＩＱＦＶＨＧＥＥＤＬＫＶＱＨＳＳＹＲＱＲＡＲＬＬＫＤＱＬＳＬＧＮＡＡＬＱＩＴＤＶＫＬＱＤＡＧＶＹＲＣＭＩＳＹＧＧＡＤＹＫＲＩＴＶＫＶＮＡＰＹＮＫＩＮＱＲＩＬＶＶＤＰＶＴＳＥＨＥＬＴＣＱＡＥＧＹＰＫＡＥＶＩＷＴＳＳＤＨＱＶＬＳＧＫＴＴＴＴＮＳＫＲＥＥＫＬＦＮＶＴＳＴＬＲＩＮＴＴＴＮＥＩＦＹＣＴＦＲＲＬＤＰＥＥＮＨＴＡＥＬＶＩＰＥＬＰＬＡＨＰＰＮＥＲＴＨＬＶＩＬＧＡＩＬＬＣＬＧＶＡＬＴＦＩＦＲＬＲＫＧＲＭＭＤＶＫＫＣＧＩＱＤＴＮＳＫＫＱＳＤＴＨＬＥＥＴ（配列番号２２１）
ＭＲＩＦＡＶＦＩＦＭＴＹＷＨＬＬＮＡＦＴＶＴＶＰＫＤＬＹＶＶＥＹＧＳＮＭＴＩＥＣＫＦＰＶＥＫＱＬＤＬＡＡＬＩＶＹＷＥＭＥＤＫＮＩＩＱＦＶＨＧＥＥＤＬＫＶＱＨＳＳＹＲＱＲＡＲＬＬＫＤＱＬＳＬＧＮＡＡＬＱＩＴＤＶＫＬＱＤＡＧＶＹＲＣＭＩＳＹＧＧＡＤＹＫＲＩＴＶＫＶＮＡＰＹＮＫＩＮＱＲＩＬＶＶＤＰＶＴＳＥＨＥＬＴＣＱＡＥＧＹＰＫＡＥＶＩＷＴＳＳＤＨＱＶＬＳＧＫＴＴＴＴＮＳＫＲＥＥＫＬＦＮＶＴＳＴＬＲＩＮＴＴＴＮＥＩＦＹＣＴＦＲＲＬＤＰＥＥＮＨＴＡＥＬＶＩＰＥＬＰＬＡＨＰＰＮＥＲＴＨＬＶＩＬＧＡＩＬＬＣＬＧＶＡＬＴＦＩＦＲＬＲＫＧＲＭＭＤＶＫＫＣＧＩＱＤＴＮＳＫＫＱＳＤＴＨＬＥＥＴ（配列番号２２１）
【0109】
【表5-1】
【0110】
【表5-2】
【0111】
用語「ＰＤ－Ｌ２結合性アンタゴニスト」は、本明細書で使用する場合、ＰＤ－Ｌ２に特異的に結合し、ＰＤ－Ｌ２と、その結合パートナー、例えば、ＰＤ－１のいずれか１つ以上との相互作用から生じるシグナル伝達を減少、遮断、阻害、無効化または妨害する分子を指す。一部の実施形態では、ＰＤ－Ｌ２結合性アンタゴニストは、その結合パートナーへのＰＤ－Ｌ２の結合を阻害する分子である。具体的な態様では、ＰＤ－Ｌ２結合性アンタゴニストは、ＰＤ－１へのＰＤ－Ｌ２の結合を阻害する。一部の実施形態では、ＰＤ－Ｌ２アンタゴニストには、ＰＤ－Ｌ２に特異的に結合し、ＰＤ－Ｌ２と、その結合パートナー、例えば、ＰＤ－１のいずれか１つ以上との相互作用から生じるシグナル伝達を減少、遮断、阻害、無効化または妨害する、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、その抗原結合性断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチドおよび他の分子が含まれる。一実施形態では、ＰＤ－Ｌ２結合性アンタゴニストは、機能障害性Ｔ細胞をあまり非機能障害性でなくするように、ＰＤ－Ｌ２を介したシグナル伝達を介して媒介される、Ｔリンパ球上に発現される細胞表面タンパク質によってまたはそれを介して媒介される負の共刺激シグナルを低減させる。一部の実施形態では、ＰＤ－Ｌ２結合性アンタゴニストは、ＰＤ－Ｌ２イムノアドヘシンである。
【0112】
核酸
本発明は、本明細書に記載される抗体部分および改変抗体を含む本発明の抗体のいずれかをコードするポリヌクレオチドもまた提供する。本発明は、本明細書に記載されるポリヌクレオチドのいずれかを作製する方法もまた提供する。ポリヌクレオチドは、当該分野で公知の手順によって作製および発現され得る。
本発明は、本明細書に記載される抗体部分および改変抗体を含む本発明の抗体のいずれかをコードするポリヌクレオチドもまた提供する。本発明は、本明細書に記載されるポリヌクレオチドのいずれかを作製する方法もまた提供する。ポリヌクレオチドは、当該分野で公知の手順によって作製および発現され得る。
【0113】
所望の抗体またはその抗原結合性断片およびかかる抗体またはその抗原結合性断片をコードする核酸の配列は、標準的な配列決定技術を使用して決定され得る。所望の抗体またはその抗原結合性断片をコードする核酸配列は、組換え産生および特徴付けのために、種々のベクター（例えば、クローニングおよび発現ベクター）中に挿入され得る。重鎖または重鎖の抗原結合性断片をコードする核酸、および軽鎖または軽鎖の抗原結合性断片をコードする核酸は、同じベクターまたは異なるベクター中にクローニングされ得る。
【0114】
一態様では、本発明は、以下のＧＤＦ１５抗体およびその抗原結合性部分のいずれかのアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを提供する：
ＧＤＦ１５＿００１、ＧＤＦ１５＿００２、ＧＤＦ１５＿００３、ＧＤＦ１５＿００４、ＧＤＦ１５＿００５、ＧＤＦ１５＿００６、ＧＤＦ１５＿００７、ＧＤＦ１５＿００８、ＧＤＦ１５＿００９、ＧＤＦ１５＿０１０、ＧＤＦ１５＿０１１、ＧＤＦ１５＿０１２、ＧＤＦ１５＿０１３、ＧＤＦ１５＿０１４、ＧＤＦ１５＿０１５、ＧＤＦ１５＿０１７、ＧＤＦ１５＿０１８、ＧＤＦ１５＿０２０、ＧＤＦ１５＿０２１、ＧＤＦ１５＿０２２、ＧＤＦ１５＿１００、ＧＤＦ１５＿２００、ＧＤＦ１５＿２９７、ＧＤＦ１５＿３０１、ＧＤＦ１５－４７０
ＧＤＦ１５＿００１、ＧＤＦ１５＿００２、ＧＤＦ１５＿００３、ＧＤＦ１５＿００４、ＧＤＦ１５＿００５、ＧＤＦ１５＿００６、ＧＤＦ１５＿００７、ＧＤＦ１５＿００８、ＧＤＦ１５＿００９、ＧＤＦ１５＿０１０、ＧＤＦ１５＿０１１、ＧＤＦ１５＿０１２、ＧＤＦ１５＿０１３、ＧＤＦ１５＿０１４、ＧＤＦ１５＿０１５、ＧＤＦ１５＿０１７、ＧＤＦ１５＿０１８、ＧＤＦ１５＿０２０、ＧＤＦ１５＿０２１、ＧＤＦ１５＿０２２、ＧＤＦ１５＿１００、ＧＤＦ１５＿２００、ＧＤＦ１５＿２９７、ＧＤＦ１５＿３０１、ＧＤＦ１５－４７０
【0115】
本発明は、（ｉ）配列番号２１、３４、４４、５３、６０、６８、７３、８０、８６、９３、９９、１０６、１１２、１２０、１２７、１３６、１４２、１４８、１５５、１６１、１６６、１１、３０、３９、４９、５６、６４、７１、７７、８３、９０、９６、１０３、１０９、１１５、１２３、１３１、１３９、１４４、１５１、１５８、１６３、１６６、１８３、１８７、１８９、１９１、１９３および１９５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む１つ以上のタンパク質をコードするポリヌクレオチドを提供する。
【0116】
本発明は、配列番号１６７、１６８、１６９および１７０のうち１つ以上として示される核酸配列を含むポリヌクレオチドを提供する。本発明は、配列番号１６７として示される核酸配列を含むポリヌクレオチドを提供する。本発明は、配列番号１６８として示される核酸配列を含むポリヌクレオチドを提供する。本発明は、配列番号１６９として示される核酸配列を含むポリヌクレオチドを提供する。本発明は、配列番号１７０として示される核酸配列を含むポリヌクレオチドを提供する。遺伝コードの縮重に起因して、本発明は、配列番号１７０の位置番号１３４４におけるヌクレオチドがＡ、Ｃ、Ｇ、Ｔであり得、および／または位置番号１３４７におけるヌクレオチドがＡ、Ｃ、Ｇ、Ｔであり得る、核酸配列をさらに提供する。配列番号１７０中に提供される最後の２つのコドンは、それぞれ、プロリンおよびグリシンをなおもコードする。
【0117】
本発明は、ＧＤＦ１５＿００１のＶＨドメインをコードする、ＡＴＣＣに寄託され、アクセッション番号ＰＴＡ－１２５０３８を有するプラスミドの挿入物の核酸配列を含むポリヌクレオチドを提供する。本発明は、ＧＤＦ１５＿００１のＶＬドメインをコードする、ＡＴＣＣに寄託され、アクセッション番号ＰＴＡ－１２５０３９を有するプラスミドの挿入物の核酸配列を含むポリヌクレオチドもまた提供する。さらに、本発明は、ＧＤＦ１５＿００１のＶＨドメインをコードする、ＡＴＣＣに寄託され、アクセッション番号ＰＴＡ－１２５０３８を有するプラスミドのＤＮＡ挿入物によってコードされるアミノ酸配列を含むポリペプチドを提供する。本発明は、ＧＤＦ１５＿００１のＶＬドメインをコードする、ＡＴＣＣに寄託され、アクセッション番号ＰＴＡ－１２５０３９を有するプラスミドの挿入物によってコードされるアミノ酸配列を含むポリペプチドをさらに提供する。
【0118】
本発明は、ＧＤＦ１５＿００１のＶＨドメインをコードする、ＡＴＣＣに寄託され、アクセッション番号ＰＴＡ－１２５０３８を有するプラスミドの挿入物の核酸配列、およびＧＤＦ１５＿００１のＶＬドメインをコードする、ＡＴＣＣに寄託され、アクセッション番号ＰＴＡ－１２５０３９を有するプラスミドの挿入物の核酸配列、を含むポリヌクレオチドもまた提供する。
【0119】
別の態様では、本発明は、抗ＧＤＦ１５抗体をコードするポリヌクレオチドおよびそのバリアントを提供し、かかるバリアントポリヌクレオチドは、本明細書で開示または言及される核酸配列のいずれかに対して、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８７％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の核酸配列同一性を共有する。これらの量は限定を意味せず、列挙されたパーセンテージ間の増分は、本開示の一部として具体的に想定される。
【0120】
本発明は、本明細書に記載される核酸分子によってコードされるポリペプチドを提供する。
【0121】
一実施形態では、ＶＨおよびＶＬドメインもしくはその抗原結合性部分、または全長ＨＣもしくはＬＣは、別々のポリヌクレオチドによってコードされる。あるいは、ＶＨおよびＶＬもしくはその抗原結合性部分、またはＨＣおよびＬＣは共に、単一のポリヌクレオチドによってコードされる。
【0122】
任意のかかる配列に対して相補的なポリヌクレオチドもまた、本開示によって包含される。ポリヌクレオチドは、一本鎖（コーディングまたはアンチセンス）または二本鎖であり得、ＤＮＡ（ゲノム、ｃＤＮＡまたは合成）またはＲＮＡ分子であり得る。ＲＮＡ分子には、イントロンを含み、一対一の様式でＤＮＡ分子に対応するＨｎＲＮＡ分子、およびイントロンを含まないｍＲＮＡ分子が含まれる。さらなるコードまたは非コード配列が、本開示のポリヌクレオチド内に存在してもよいがその必要はなく、ポリヌクレオチドは、他の分子および／または支持体材料に連結されてもよいがその必要はない。
【0123】
ポリヌクレオチドは、抗体もしくはその一部分をコードする核酸配列を含み得、またはかかる配列のバリアントを含み得る。ポリヌクレオチドバリアントは、コードされたポリペプチドの結合特徴がネイティブ抗体分子と比較して減弱されるような、１つ以上の置換、付加、欠失および／または挿入を含む。バリアント核酸配列によってコードされるポリペプチドの結合特徴に対する影響は、一般に、本明細書に記載されるように評価され得る。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドバリアントは、いずれの置換、付加、欠失および／もしくは挿入も含まない元の（親）抗体またはその一部分をコードするポリヌクレオチド配列に対して、少なくとも約７０％の同一性、一部の実施形態では、少なくとも約８０％の同一性、一部の実施形態では、少なくとも約９０％の同一性、一部の実施形態では、少なくとも約９５％の同一性を示す。これらのパーセント同一性は限定を意味せず、列挙されたパーセンテージ間の増分は、本開示の一部として具体的に想定される。
【0124】
２つのポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列は、２つの配列中のヌクレオチドまたはアミノ酸の配列が、以下に記載されるように、最大の対応を求めてアラインした場合に同じである場合、「同一」であると言われる。２つの配列間の比較は、典型的には、配列類似性の局所的領域を同定および比較するために、比較ウインドウにわたって配列を比較することによって実施される。「比較ウインドウ」は、本明細書で使用する場合、少なくとも約２０、通常は３０～約７５または４０～約５０連続する位置のセグメントを指し、ここで、配列は、２つの配列を最適にアラインした後に、同じ数の連続する位置の参照配列と比較され得る。
【0125】
比較のための配列の最適なアラインメントは、デフォルトパラメーターを使用して、Ｌａｓｅｒｇｅｎｅ（登録商標）スイートのバイオインフォマティクスソフトウェア（ＤＮＡＳＴＡＲ（登録商標），Ｉｎｃ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）中のＭｅｇＡｌｉｇｎ（登録商標）プログラムを使用して実施され得る。このプログラムは、以下の参考文献に記載されるいくつかのアラインメントスキームを具体化する：Ｄａｙｈｏｆｆ，Ｍ．Ｏ．、１９７８、Ａ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ ｃｈａｎｇｅ ｉｎ ｐｒｏｔｅｉｎｓ－Ｍａｔｒｉｃｅｓ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ｄｉｓｔａｎｔ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ．、Ｄａｙｈｏｆｆ，Ｍ．Ｏ．（編）Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ ＤＣ、第５巻、補遺３、３４５～３５８頁；Ｈｅｉｎ Ｊ．、１９９０、Ｕｎｉｆｉｅｄ Ａｐｐｒｏａｃｈ ｔｏ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ａｎｄ Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｓ、６２６～６４５頁、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、第１８３巻、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ；Ｈｉｇｇｉｎｓ，Ｄ．Ｇ．およびＳｈａｒｐ，Ｐ．Ｍ．、１９８９、ＣＡＢＩＯＳ ５：１５１～１５３；Ｍｙｅｒｓ，Ｅ．Ｗ．およびＭｕｌｌｅｒ Ｗ．、１９８８、ＣＡＢＩＯＳ ４：１１～１７；Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，Ｅ．Ｄ．、１９７１、Ｃｏｍｂ．Ｔｈｅｏｒ．１１：１０５；Ｓａｎｔｏｕ，Ｎ．、Ｎｅｓ，Ｍ．、１９８７、Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｅｖｏｌ．４：４０６～４２５；Ｓｎｅａｔｈ，Ｐ．Ｈ．Ａ．およびＳｏｋａｌ，Ｒ．Ｒ．、１９７３、Ｎｕｍｅｒｉｃａｌ Ｔａｘｏｎｏｍｙ ｔｈｅ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｎｕｍｅｒｉｃａｌ Ｔａｘｏｎｏｍｙ、Ｆｒｅｅｍａｎ Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、ＣＡ；Ｗｉｌｂｕｒ，Ｗ．Ｊ．およびＬｉｐｍａｎ，Ｄ．Ｊ．、１９８３、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８０：７２６～７３０。
【0126】
一部の実施形態では、「配列同一性のパーセンテージ」は、少なくとも２０個の位置の比較のウインドウにわたって、２つの最適にアラインされた配列を比較することによって決定され、ここで、比較ウインドウ中のポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列の部分は、２つの配列の最適なアラインメントのために、参照配列（付加も欠失も含まない）と比較して、２０パーセント以下、通常は５～１５パーセントまたは１０～１２パーセントの付加または欠失（即ち、ギャップ）を含み得る。パーセンテージは、同一な核酸塩基またはアミノ酸残基が両方の配列中に存在する位置の数を決定して、一致した位置の数を得、一致した位置の数を参照配列中の位置の総数（即ち、ウインドウサイズ）によって除算し、結果に１００を乗算して配列同一性のパーセンテージを得ることによって、計算される。
【0127】
ポリヌクレオチドバリアントはまた、またはあるいは、遺伝子、またはその一部分もしくは相補体に対して実質的に相同であり得る。かかるポリヌクレオチドバリアントは、抗体をコードする天然に存在するＤＮＡ配列（または相補的配列）に、中程度にストリンジェントな条件下でハイブリダイズすることが可能である。
【0128】
適切な「中程度にストリンジェントな条件」は、５×ＳＳＣ、０．５％ＳＤＳ、１．０ｍＭ ＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）の溶液中で事前洗浄すること；約５０℃～６５℃、５×ＳＳＣ（０．７５Ｍ ＮａＣｌ、０．０７５Ｍクエン酸ナトリウム）で一晩ハイブリダイズさせること；その後、０．１％ＳＤＳを含む２×、０．５×および０．２×ＳＳＣの各々で、６５℃で２０分間２回洗浄すること、を含む。
【0129】
本明細書で使用する場合、「高度にストリンジェントな条件」または「高ストリンジェンシー条件」は、以下の条件である：（１）洗浄のために、低いイオン強度および高い温度、例えば、５０℃で、０．０１５Ｍ塩化ナトリウム／０．００１５Ｍクエン酸ナトリウム／０．１％ドデシル硫酸ナトリウムを使用する；（２）ハイブリダイゼーションの間に、変性剤、例えば、ホルムアミド、例えば、５０％（ｖ／ｖ）ホルムアミドを、７５０ｍＭ塩化ナトリウム、７５ｍＭクエン酸ナトリウムを含む０．１％ウシ血清アルブミン／０．１％Ｆｉｃｏｌｌ／０．１％ポリビニルピロリドン／５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液ｐＨ６．５と共に、４２℃で使用する；または（３）５０％ホルムアミド、５×ＳＳＣ、５０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ６．８）、０．１％ピロリン酸ナトリウム、５×デンハルト溶液、超音波処理したサケ精子ＤＮＡ（５０μｇ／ｍＬ）、０．１％ＳＤＳおよび１０％硫酸デキストランを４２℃で使用し、０．２×ＳＳＣ（塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム）中で４２℃および５０％ホルムアミド中で５５℃での洗浄、その後の、ＥＤＴＡを含む０．１×ＳＳＣからなる５５℃での高ストリンジェンシー洗浄を使用する。当業者は、例えば、プローブ長さなどの因子に適応するために、必要に応じて、温度、イオン強度などを調整する方法を認識する。
【0130】
遺伝コードの縮重の結果として、本明細書に記載されるポリペプチドをコードする多くのヌクレオチド配列が存在することが、当業者によって理解される。これらのポリヌクレオチドの一部は、任意のネイティブ遺伝子のヌクレオチド配列に対する最小限の相同性を保有する。それにもかかわらず、コドン使用における差異に起因して変動するポリヌクレオチドは、本開示によって具体的に企図される。さらに、本明細書で提供されるポリヌクレオチド配列を含む遺伝子の対立遺伝子は、本開示の範囲内である。対立遺伝子は、ヌクレオチドの１つ以上の変異、例えば、欠失、付加および／または置換の結果として変更された内因性遺伝子である。得られたｍＲＮＡおよびタンパク質は、変更された構造または機能を有し得るが、その必要はない。対立遺伝子は、標準的な技術（例えば、ハイブリダイゼーション、増幅および／またはデータベース配列比較）を使用して同定され得る。
【0131】
本開示のポリヌクレオチドは、化学的合成、組換え法またはＰＣＲを使用して得ることができる。化学的ポリヌクレオチド合成の方法は、当該分野で周知であり、本明細書で詳細に記載する必要はない。当業者は、所望のＤＮＡ配列を産生するために、本明細書で提供される配列および市販のＤＮＡ合成機を使用することができる。
【0132】
組換え法を使用してポリヌクレオチドを調製するために、所望の配列を含むポリヌクレオチドが、適切なベクター中に挿入され得、このベクターは、次に、本明細書でさらに議論されるように、複製および増幅に適切な宿主細胞中に導入され得る。ポリヌクレオチドは、当該分野で公知の任意の手段によって、宿主細胞中に挿入され得る。細胞は、直接的取り込み、エンドサイトーシス、トランスフェクション、Ｆ交配（F-mating）またはエレクトロポレーションによって外因性ポリヌクレオチドを導入することによって形質転換される。いったん導入されると、外因性ポリヌクレオチドは、非組み込みベクター（例えば、プラスミド）として細胞内で維持され得、または宿主細胞ゲノム中に組み込まれ得る。そうして増幅されたポリヌクレオチドは、当該分野で周知の方法によって、宿主細胞から単離され得る。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９を参照のこと。
【0133】
あるいは、ＰＣＲは、ＤＮＡ配列の再生産を可能にする。ＰＣＲテクノロジーは、当該分野で周知であり、米国特許第４，６８３，１９５号、同第４，８００，１５９号、同第４，７５４，０６５号および同第４，６８３，２０２号、ならびにＰＣＲ：Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ、Ｍｕｌｌｉｓら編、Ｂｉｒｋａｕｓｗｅｒ Ｐｒｅｓｓ、Ｂｏｓｔｏｎ、１９９４に記載されている。
【0134】
ＲＮＡは、適切なベクター中の単離されたＤＮＡを使用し、それを適切な宿主細胞中に挿入することによって得ることができる。細胞が複製し、ＤＮＡがＲＮＡへと転写される場合、ＲＮＡは、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９に示される、当業者に周知の方法を使用して単離され得る。
【0135】
本明細書で使用する場合、「ベクター」は、目的の１つ以上の遺伝子または配列を宿主細胞中に送達すること、好ましくは、それを宿主細胞において発現させることが可能な、構築物を意味する。ベクターの例には、ウイルスベクター、ネイキッドＤＮＡもしくはＲＮＡ発現ベクター、プラスミド、コスミドもしくはファージベクター、カチオン性縮合剤と関連したＤＮＡもしくはＲＮＡ発現ベクター、リポソーム中に封入されたＤＮＡもしくはＲＮＡ発現ベクター、および特定の真核生物細胞、例えば、産生細胞が含まれるがこれらに限定されない。
【0136】
適切なクローニングおよび発現ベクターは、種々の構成要素、例えば、プロモーター、エンハンサーおよび他の転写調節配列を含み得る。ベクターはまた、異なるベクター中への抗体可変ドメインの引き続くクローニングを可能にするように構築され得る。適切なクローニングベクターは、標準的な技術に従って構築され得、または当該分野で入手可能な多数のクローニングベクターから選択され得る。選択されるクローニングベクターは、使用が意図される宿主細胞に従って変動し得るが、有用なクローニングベクターは、一般に、自己複製する能力を有し、特定の制限エンドヌクレアーゼに対する単一の標的を保有し得、および／またはベクターを含むクローンを選択する際に使用され得るマーカーの遺伝子を保有し得る。適切な例には、プラスミドおよび細菌ウイルス、例えば、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（例えば、ｐＢＳ ＳＫ＋）およびその誘導体、ｍｐ１８、ｍｐ１９、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９、ＣｏｌＥ１、ｐＣＲ１、ＲＰ４、ファージＤＮＡ、ならびにシャトルベクター、例えば、ｐＳＡ３およびｐＡＴ２８が含まれる。これらおよび多くの他のクローニングベクターが、供給業者、例えば、ＢｉｏＲａｄ、ＳｔｒａｔｅｇｅｎｅおよびＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎから入手可能である。発現ベクターがさらに提供される。発現ベクターは、一般に、本開示に従うポリヌクレオチドを含む複製可能なポリヌクレオチド構築物である。発現ベクターは、エピソームとして、または染色体ＤＮＡの不可欠な一部として、宿主細胞中で複製可能でなければならないことが暗示される。適切な発現ベクターには、プラスミド、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルスが含まれるウイルスベクター、コスミド、およびＰＣＴ公開番号ＷＯ８７／０４４６２に開示される発現ベクターが含まれるがこれらに限定されない。ベクター構成要素には、一般に、以下のうち１つ以上が含まれ得るがこれらに限定されない：シグナル配列；複製起点；１つ以上のマーカー遺伝子；適切な転写制御エレメント（例えば、プロモーター、エンハンサーおよびターミネーター）。発現（即ち、翻訳）のために、リボソーム結合部位、翻訳開始部位および停止コドンなどの、１つ以上の翻訳制御エレメントもまた通常は必要とされる。
【0137】
目的のポリヌクレオチドを含むベクターおよび／またはポリヌクレオチド自体は、エレクトロポレーション、塩化カルシウム、塩化ルビジウム、リン酸カルシウム、ＤＥＡＥ－デキストラン、または他の物質を使用するトランスフェクション；微粒子銃；リポフェクション；および感染（例えば、ベクターが、ワクシニアウイルスなどの感染性因子である場合）が含まれるいくつかの適切な手段のいずれかによって、宿主細胞中に導入され得る。ベクターまたはポリヌクレオチドを導入する選択は、宿主細胞の特色に依存する場合が多い。
【0138】
したがって、「宿主細胞」には、ポリヌクレオチドおよび／またはベクターの取り込みのための、ポリヌクレオチドおよび／またはポリヌクレオチドを含むベクターのレシピエントであり得るまたはレシピエントであった個々の細胞または細胞培養物が含まれる。宿主細胞には、単一の宿主細胞の子孫が含まれ、この子孫は、天然の、偶然のまたは意図的な変異に起因して、（形態学的に、またはゲノムＤＮＡ相補性において）元の親細胞とは必ずしも完全に同一でなくてもよい。宿主細胞には、本発明のポリヌクレオチドでｉｎ ｖｉｖｏでトランスフェクトおよび／または形質転換された細胞が含まれる。
【0139】
抗体またはその抗原結合性断片は、適切な宿主細胞を使用して、組換え作製され得る。抗体またはその抗原結合性断片をコードする核酸は、発現ベクター中にクローニングされ得、これは次いで、組換え宿主細胞における抗体の合成を得るために、さもなければ免疫グロブリンタンパク質を産生しない宿主細胞、例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞、酵母細胞、昆虫細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞または骨髄腫細胞中に導入され得る。好ましい宿主細胞には、当該分野で周知の多くの細胞の中で、ＣＨＯ細胞、ヒト胎児由来腎臓（ＨＥＫ）２９３細胞、ＮＳ０細胞またはＳｐ２．０細胞が含まれる。抗体断片は、全長抗体のタンパク質分解性もしくは他の分解によって、組換え法によって、または化学的合成によって産生され得る。抗体のポリペプチド断片、特に、最大で約５０アミノ酸のより短いポリペプチドは、化学的合成によって簡便に作製され得る。タンパク質およびペプチドのための化学的合成の方法は、当該分野で公知であり、市販されている。
【0140】
本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、親和性成熟され得る。例えば、親和性成熟された抗体は、当該分野で公知の手順によって産生され得る（Ｍａｒｋｓら、１９９２、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０：７７９～７８３；Ｂａｒｂａｓら、１９９４、Ｐｒｏｃ Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ、ＵＳＡ ９１：３８０９～３８１３；Ｓｃｈｉｅｒら、１９９５、Ｇｅｎｅ、１６９：１４７～１５５；Ｙｅｌｔｏｎら、１９９５、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５５：１９９４～２００４；Ｊａｃｋｓｏｎら、１９９５、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５４（７）：３３１０～９；Ｈａｗｋｉｎｓら、１９９２、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２６：８８９～８９６；およびＷＯ２００４／０５８１８４）。
【0141】
免疫原性
免疫原性は、抗体およびＦｃ融合タンパク質が含まれるタンパク質治療薬の開発および利用に対する主な障壁である。タンパク質配列、投与の経路および頻度、ならびに患者集団が含まれるがこれらに限定されないいくつかの因子が、タンパク質免疫原性に寄与し得る。免疫応答は、典型的には、マウス抗体などの非ヒトタンパク質に対して最も激しいが、主にまたは完全にヒト配列内容を有する治療薬であっても、免疫原性であり得る。免疫原性は、外来として把握される物質に対する複雑な一連の応答であり、これには、中和および非中和抗体の産生、免疫複合体の形成、補体活性化、肥満細胞活性化、炎症ならびにアナフィラキシーが含まれ得る。望まれない免疫応答は、抗原認識を直接妨害すること、エフェクター分子との相互作用を変更すること、または治療薬の血清半減期もしくは組織分布を乱すことによって、抗体およびＦｃ融合タンパク質治療薬の効力を低減させ得る。
免疫原性は、抗体およびＦｃ融合タンパク質が含まれるタンパク質治療薬の開発および利用に対する主な障壁である。タンパク質配列、投与の経路および頻度、ならびに患者集団が含まれるがこれらに限定されないいくつかの因子が、タンパク質免疫原性に寄与し得る。免疫応答は、典型的には、マウス抗体などの非ヒトタンパク質に対して最も激しいが、主にまたは完全にヒト配列内容を有する治療薬であっても、免疫原性であり得る。免疫原性は、外来として把握される物質に対する複雑な一連の応答であり、これには、中和および非中和抗体の産生、免疫複合体の形成、補体活性化、肥満細胞活性化、炎症ならびにアナフィラキシーが含まれ得る。望まれない免疫応答は、抗原認識を直接妨害すること、エフェクター分子との相互作用を変更すること、または治療薬の血清半減期もしくは組織分布を乱すことによって、抗体およびＦｃ融合タンパク質治療薬の効力を低減させ得る。
【0142】
タンパク質治療薬は、Ｐｒｏｖｉｄｅｎｃｅ、Ｒ．Ｉ．のＥｐｉｖａｘ，Ｉｎｃ．によって提供されるような市販のサービスを使用して、潜在的な免疫原性エピトープの存在を予測するために分析され得る。一部の実施形態では、ｉｎ ｓｉｌｉｃｏアルゴリズムが、クラスＩＩ ＭＨＣ分子に結合するエピトープを予測できる。かかるアルゴリズムを用いたポリペプチドのデータセットの分析は、予測されたエピトープを提供する。予測されたエピトープは、自動ペプチド合成または組換えＤＮＡ技術の標準的な方法によって調製されるペプチドを作製するために使用される。Ｅｐｉｖａｘから提供されたスコアリング情報は、集団中に認識された予測されたエピトープがどのように広がっているかの指標を提供し得る。
【0143】
以下の実施例１０に記載されるように、本発明の抗体を、ＥｐｉＶａｘによって開発されたＥｐｉＭａｔｒｉｘアルゴリズムを使用して、本明細書でＴ細胞エピトープ、「Ｔ－レジトープ」または「ｔＲｅｇ」とも呼ばれる、Ｔ細胞によって認識されるエピトープの存在についてスクリーニングした。抗体配列は、重複する９マーフレームへと分類解析され、各フレームは、最後が８アミノ酸重複する。次いで、得られたフレームの各々は、８つの一般的なＭＨＣクラスＩＩ ＨＬＡ対立遺伝子（ＤＲＢ１＊０１０１、ＤＲＢ１＊０３０１、ＤＲＢ１＊０４０１、ＤＲＢ１＊０７０１、ＤＲＢ１＊０８０１、ＤＲＢ１＊１１０１、ＤＲＢ１＊１３０１およびＤＲＢ１＊１５０１）のパネルに関して、予測される結合親和性についてスコアリングされる。生スコアは、無作為に生成されたペプチドの大きいサンプルのスコアに対して標準化され、得られた「Ｚ」スコアが報告される。
【0144】
全体的配列スコアであるｔＲｅｇ調整済スコアは、抗体の免疫原性を予測するために、ＥｐｉＭａｔｒｉｘ Ｚスコアを使用して計算され得る。実施例１０に記載されるように、ｔＲｅｇ調整済スコアは、９マーフレームのＥｐｉＭａｔｒｉｘ Ｚスコアを合計し（中間合計）、ＨＬＡ型観測の数を指摘することによって計算される。９マーおよびＨＬＡ型の全ての個々の組み合わせ（「観測」）が、その９マーがエピトープであるかどうかにかかわらず、試験される。特定の観測が、そのペプチドが所与のＨＬＡ型に対する結合子の上位５％にあることを示す場合、この観測についてのＥｐｉＭａｔｒｉｘ Ｚスコアが、タンパク質配列全体と関連する中間合計に加算される。試験した観測の総数もまた記録される。唯一の例外は、ＥｐｉＶａｘによって開発されたＩＳＰＲＩソフトウェアパッケージによって「Ｔ－レジトープ」として同定された９マーについての全ての観測が、ゼロのＥｐｉＭａｔｒｉｘスコアを有すると仮定されることである。本明細書で使用する場合、「Ｔ－レジトープ」は、天然の調節性Ｔ細胞を活性化し、望まれない免疫応答を低減させることが潜在的にできる、モノクローナル抗体フレームワーク領域内のアミノ酸配列である。ｔＲｅｇ調整済スコアは以下のように計算される：ｔＲｅｇ調整済スコア＝（中間合計）＊１０００／（観測の数）。中間合計では、０．０５＊２．２２４８のベースラインスコアが、各観測（Ｔ－レジトープを含む）から減算される。より低いｔＲｅｇ調整済スコアは、免疫原性リスクのより低い潜在力を予測する。
【0145】
使用
原発性ミトコンドリア筋症を処置するための方法
一部の態様では、本開示は、それを必要とする対象において原発性ミトコンドリア筋症を予防、寛解および／または処置するための方法であって、対象に、治療有効量のＧＤＦ１５抗体（例えば、本明細書に記載されるＧＤＦ１５抗体）を投与するステップを含む、方法に関する。
原発性ミトコンドリア筋症を処置するための方法
一部の態様では、本開示は、それを必要とする対象において原発性ミトコンドリア筋症を予防、寛解および／または処置するための方法であって、対象に、治療有効量のＧＤＦ１５抗体（例えば、本明細書に記載されるＧＤＦ１５抗体）を投与するステップを含む、方法に関する。
【0146】
原発性ミトコンドリア筋症（ＰＭＭ）は、骨格筋に優勢に影響を与える、ミトコンドリアのＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）内またはミトコンドリアの外側の遺伝子（核ＤＮＡ）内で見出される変化（例えば、枯渇、欠失または変異であるがこれらに限定されない）に関連する一群の遺伝性障害である。ミトコンドリアは、身体の全ての細胞内で見出される。ミトコンドリアは、細胞エネルギーの産生の調節を担い、それら自身の独自のＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）内に、このプロセスのための遺伝的設計図を保有している。ＰＭＭは、影響された細胞が、食物および酸素を分解し、エネルギーを産生する能力を妨げる場合が多い。ミトコンドリアは、身体の組織によって使用されるエネルギーの９０％よりも多くを提供する；ミトコンドリア障害は、身体の細胞が適切に機能するために十分なエネルギーの欠如によって特徴付けられる。したがって、高いエネルギーを要求する組織、例えば、筋肉、脳または心臓組織が、ミトコンドリア障害によって影響される可能性が最も高い。ミトコンドリア疾患は、身体の１つよりも多くの臓器系に影響を与え得る。しかし、多くのミトコンドリア疾患が、筋肉に主に影響を与え（筋症）、筋肉疾患が、ミトコンドリア障害の唯一のまたは優勢な徴候であり、したがって、ＰＭＭと定義される。ＰＭＭのための疾患改変処置は存在しない；処置は、特定の症状を改善また解消することを目的としている（Ｐｒｉｍａｒｙ Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ Ｍｙｏｐａｔｈｉｅｓ － ＮＯＲＤ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｒａｒｅ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ）（ｒａｒｅｄｉｓｅａｓｅｓ．ｏｒｇ））。
【0147】
本明細書で使用する場合、原発性ミトコンドリア筋症という用語には、リー症候群、カーンズ・セイヤー症候群、アルパーズ・フッテンロッヒャー症候群、乳酸アシドーシスおよび脳卒中様エピソードを伴うミトコンドリア脳筋症（ＭＥＬＡＳ）ならびに運動失調ニューロパチー症候群が含まれるがこれらに限定されない。
【0148】
一部の態様では、本開示は、それを必要とする対象において原発性ミトコンドリア筋症（ＰＭＭ）を処置するための方法を提供する。これらの方法は、抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性断片を投与するステップを含み、抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性断片の投与は、ＰＭＭの１つ以上の徴候または症状の改善を生じる。ＰＭＭの主な徴候または症状には、肉体的疲労、筋力低下および運動耐容能が含まれるがこれらに限定されない。筋力低下は、眼および眼瞼の動きを制御する筋肉において生じ得、進行性外眼筋麻痺（opthalmoplegia）（ＰＥＯ）と呼ばれる眼の動きの漸進的な麻痺、および下垂と呼ばれる上眼瞼の垂下を生じる。筋力低下および消耗は、顔、首および腕の他の筋肉においても生じ得る。労作性疲労とも呼ばれる運動耐容能は、肉体労作、例えば、運動、例えばジョギング、またはさらには日常的な活動、例えば、歩行もしくは牛乳パックの持ち上げによってもたらされる、普通でない感覚の疲弊を指す。
【0149】
一部の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性断片の投与は、投与前と比較して、増加した体重増加、増加した除脂肪筋肉量、増加した骨格筋量、回復した筋強度、および／または運動能力における改善を生じる（がこれらに限定されない）。改善は、少なくとも０．５％、少なくとも１％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％または少なくとも１００％であり得る。
【0150】
一部の実施形態では、対象は、上昇したレベルのＧＤＦ１５を有する。一部の実施形態では、ＧＤＦ１５のレベルは、≧２０００ｎｇ／Ｌである。一部の実施形態では、対象は、対照対象と比較して、異常なレベルの１つ以上のエネルギーバイオマーカーを有する。エネルギーバイオマーカーには、乳酸（乳酸塩）レベル；ピルビン酸（ピルビン酸塩）レベル；乳酸塩／ピルビン酸塩比；クレアチンリン酸レベル；ＮＡＤＨ（ＮＡＤＨ＋Ｈ＋）またはＮＡＤＰＨ（ＮＡＤＰＨ＋Ｈ＋）レベル；ＮＡＤまたはＮＡＤＰレベル；ＡＴＰレベル；還元型補酵素Ｑ（ＣｏＱｒｅｄ）レベル；酸化型補酵素Ｑ（ＣｏＱｏｘ）レベル；総補酵素Ｑ（ＣｏＱｔｏｔ）レベル；酸化型チトクロムＣレベル；還元型チトクロムＣレベル；酸化型チトクロムＣ／還元型チトクロムＣ比；アセト酢酸塩レベル；ベータ－ヒドロキシ酪酸塩レベル；アセト酢酸塩／ベータ－ヒドロキシ酪酸塩比；８－ヒドロキシ－２’－デオキシグアノシン（８－ＯＨｄＧ）レベル；反応性酸素種のレベル；酸素消費量（ＶＯ２）、二酸化炭素放出量（ＶＣＯ２）および呼吸商（ＶＣＯ２／ＶＯ２）が含まれるがこれらに限定されない。
【0151】
一部の実施形態では、対象は、悪液質を有さない。一部の実施形態では、対象は、がんを有さない。一部の実施形態では、対象は、心不全を有さない。一部の実施形態では、対象は、悪液質を有するが、抗ＧＤＦ１５治療を受けていない。一部の実施形態では、対象は、がんを有するが、抗ＧＤＦ１５治療を受けていない。一部の実施形態では、対象は、心不全を有するが、抗ＧＤＦ１５治療を受けていない。
【0152】
用語「処置」または「処置された」には、予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）（即ち、予防的（ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ））および／または治療的処置が含まれる。状態の臨床所見の前に投与される場合、処置は、予防的とみなされる。治療的処置には、例えば、疾患の重症度を寛解もしくは低減させる、または疾患の長さを短縮することが含まれる。
【0153】
本明細書で開示される方法は、任意の抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性断片を投与するステップを含む。抗ＧＤＦ１５抗体の例は、当該分野で公知である（例えば、ＷＯ１４１００６８９、ＷＯ２０１５／１９６１４２およびＷＯ２０２０／０３９３２１を参照のこと）。一部の実施形態では、本明細書で開示される方法は、ＧＤＦ１５＿００１（ＨＣＤＲ－１：配列番号３２、ＨＣＤＲ－２：配列番号１６５、ＨＣＤＲ－３：配列番号５２、ＬＣＤＲ－１：配列番号９５、ＬＣＤＲ－２：配列番号２８、ＬＣＤＲ－３：配列番号９を含む）またはＧＤＦ１５＿０３０１（ＨＣＤＲ－１：配列番号１７９、ＨＣＤＲ－２：配列番号１８０、ＨＣＤＲ－３：配列番号１８１、ＬＣＤＲ－１：配列番号１８４、ＬＣＤＲ－２：配列番号１８５、ＬＣＤＲ－３：配列番号１８６を含む）を投与するステップを含む。
【0154】
心不全を処置するための方法
一部の態様では、本開示は、それを必要とする対象において心障害または機能障害を処置する方法を提供する。一部の態様では、本開示は、それを必要とする対象において心不全（例えば、低減された駆出率（ＨＦｒＥＦ）を伴う心不全）を処置するための方法を提供する。これらの方法は、治療有効量の抗ＧＤＦ１５抗体（例えば、本明細書で開示される抗体であるがこれらに限定されない）またはその抗原結合性断片を投与して、ＨＦｒＥＦの１つ以上の徴候または症状を寛解させるステップを含む。
一部の態様では、本開示は、それを必要とする対象において心障害または機能障害を処置する方法を提供する。一部の態様では、本開示は、それを必要とする対象において心不全（例えば、低減された駆出率（ＨＦｒＥＦ）を伴う心不全）を処置するための方法を提供する。これらの方法は、治療有効量の抗ＧＤＦ１５抗体（例えば、本明細書で開示される抗体であるがこれらに限定されない）またはその抗原結合性断片を投与して、ＨＦｒＥＦの１つ以上の徴候または症状を寛解させるステップを含む。
【0155】
ＨＦｒＥＦは、損なわれた収縮機能を有する罹患した心筋が、呼吸困難または労作性（extertional）制約をもたらし、それによって、日常生活の活動を患者が実行する能力が制限される、臨床症候群である。２０１３年～２０１６年にＮａｔｉｏｎａｌ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ Ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ Ｓｕｒｖｅｙから収集されたデータに基づくと、推定６２０万人のアメリカの成人が心不全を有し、その有病率は、２０３０年までに８００万人よりも多くの成人にまで増加すると予期される；心不全を有する成人の５０％は、ＨＦｒＥＦを有する。これは一般に、薬物療法および／もしくは治療的デバイスで安定化され得る、または適切な候補では心臓移植によって処置され得る、慢性の進行性の状態である。心不全ケアの一次目的は、疾患進行の予防、症状の寛解、および心血管死亡率の予防である。
【0156】
循環ＧＤＦ－１５濃度は、特に、ＨＦｒＥＦを有する集団における心血管罹患率および死亡率の予後バイオマーカーとして同定されている。ＨＦｒＥＦを有する患者では、循環ＧＤＦ－１５レベルはまた、ボディマス指数と逆相関し、ＨＦ症状重症度、機能的状態および運動能力に高度に関連する。さらに、上昇したＧＤＦ－１５レベルは、ＨＦｒＥＦを有する患者における死亡および有害な心不全事象の増加したリスクを予測する。
【0157】
対象は、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ Ｈｅａｒｔ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ（ＮＹＨＡ）機能分類に基づいてＩＩ～ＩＶと分類される心不全を有する。一部の実施形態では、対象は、体液（例えば、血清）中の上昇したＧＤＦ１５レベルを有する。一部の実施形態では、対象の血清ＧＤＦ１５レベルは、≧２０００ｐｇ／ｍＬである。一部の実施形態では、対象は、４０％未満の／４０％と等しい左心室駆出率（ＬＶＥＦ）を示す。一部の実施形態では、対象は、最も最近の測定時（例えば、直近の１２カ月以内）に、５０％未満のＬＶＥＦを示す。一部の実施形態では、対象は、１４ｍＬ／ｋｇ／分未満のピークＶＯ２を示す。一部の実施形態では、対象は、４００ｐｇ／ｍＬと等しいまたはそれを超えるＮ末端プロｂ型ナトリウム利尿ペプチド（ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ）レベルを示す。一部の実施形態では、対象は、ｌ００ｇ／ｍｌを超えるＢＮＰレベルを示す。一部の実施形態では、対象は、１．５ｎｇ／ｍＬを超える血清心筋トロポニンＩ（ｃＴｎｌ）レベルを示す。
【0158】
一部の実施形態では、対象は、以下のうち少なくとも１つによって実証される、悪液質または疲労または機能的障害の証拠を示す：
ａ．主観的疲労もしくは食欲不振に関連する、直近の６カ月における非浮腫性の意図しない体重減少≧５％、もしくは現在のＢＭＩ＜２０ｋｇ／ｍ２；または
ｂ．１週間当たり少なくとも３回の疲労および過去２週間における少なくとも中程度に厄介な疲労；または
ｃ．スクリーニング時に施行したＫＣＣＱ ２３のＰｈｙｓｉｃａｌ Ｌｉｍｉｔａｔｉｏｎｓ Ｄｏｍａｉｎで＜６０のスコア。
ａ．主観的疲労もしくは食欲不振に関連する、直近の６カ月における非浮腫性の意図しない体重減少≧５％、もしくは現在のＢＭＩ＜２０ｋｇ／ｍ２；または
ｂ．１週間当たり少なくとも３回の疲労および過去２週間における少なくとも中程度に厄介な疲労；または
ｃ．スクリーニング時に施行したＫＣＣＱ ２３のＰｈｙｓｉｃａｌ Ｌｉｍｉｔａｔｉｏｎｓ Ｄｏｍａｉｎで＜６０のスコア。
【0159】
一部の実施形態では、対象は、７５未満のＫａｎｓａｓ Ｃｉｔｙ Ｃａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙ Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅ（ＫＣＣＱ）－Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｓｕｍｍａｒｙ Ｓｃｏｒｅ（ＣＳＳ）を有する。ＫＣＣＱは、うっ血性心不全を有する参加者について肉体的制約、症状、自己効力感、社会的干渉および生活の質を定量化する、自己施行型アンケートである（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｗｏｒｄ － Ｑ１６００１１ Ｑｕａｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｓｕｍｍａｒｙ＿ＦＩＮＡＬ．ｄｏｃｘ（ｆｄａ．ｇｏｖ））。ＫＣＣＱは、臨床的変化に対して感受性であり、参加者にとって完了するのが明快な手段であり、他の患者報告アウトカム（ＰＲＯ）と比較して負担を低減させる。機能的状態およびＰＲＯデータの利益および重要性は、ＣＨＦ研究における重要な臨床的エンドポイントと認識される。
【0160】
一部の実施形態では、対象は、以下のうち少なくとも１つによって実証される、悪液質、疲労または機能的障害の証拠を示す：（ｉ）主観的疲労もしくは食欲不振に関連する、１２カ月における非浮腫性の意図しない体重減少≧５％、もしくはＢＭＩ＜２０ｋｇ／ｍ２；（ｉｉ）１週間当たり少なくとも３回の疲労および過去２週間における少なくとも中程度に厄介な疲労、および（ｉｉｉ）スクリーニング来院時に施行したＫＣＣＱ－２３のＰｈｙｓｉｃａｌ Ｌｉｍｉｔａｔｉｏｎｓ Ｄｏｍａｉｎで＜６０のスコア。
【0161】
抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性断片の投与は、ＨＦｒＥＦの１つ以上の徴候または症状を寛解させる。これらには、肉体的疲労／疲れ、息切れ、発作性夜間呼吸困難、浮腫／腫脹、体重の喪失、および肉体活動制約（例えば、例えば、６分間歩行距離試験によって測定される歩行困難、低減した体力であるがこれらに限定されない）が含まれるがこれらに限定されない。一部の実施形態では、ＨＦｒＥＦの１つ以上の徴候または症状の寛解は、１つ以上のＰＲＯの、ベースライン（即ち、投与前）からの変化として測定される。ＰＲＯの例には、ＫＣＣＱ－２３、Ｐａｔｉｅｎｔ Ｇｌｏｂａｌ Ｉｍｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｓｅｖｅｒｉｔｙ（ＰＧＩ－Ｓ）、Ｆａｔｉｇｕｅ Ｓｅｖｅｒｉｔｙ Ｄａｉｌｙ Ｄｉａｒｙ、ＰＲＯＭＩＳ－Ｆａｔｉｇｕｅ ７ａ（「ｐａｓｔ ７ ｄａｙｓ」改修版）、Ｐａｔｉｅｎｔ Ｇｌｏｂａｌ Ｉｍｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｃｈａｎｇｅ（ＰＧＩ－Ｃ）および／またはＡｐｐｅｔｉｔｅ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔが含まれるがこれらに限定されない。
【0162】
Ｋａｎｓａｓ Ｃｉｔｙ Ｃａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙ Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅ：ＫＣＣＱは、心不全を有する参加者においてＨＲＱＬを評価する、自己申告型２３項目アンケートである。項目は、肉体的制約、症状（頻度、重症度、および最近の経時変化）、ＱｏＬ、社会的干渉および自己効力感を評価する。応答選択肢は、質問によって変動する。ＫＣＣＱ内には、以下の１０個のサマリースコアが存在する：肉体的制約、症状安定性、症状頻度、症状負荷、総症状スコア、自己効力感、生活の質、社会的制限、全体的サマリースコアおよび臨床的サマリースコア。生サマリースコアは、０～１００のスケールに変換され、より高いスコアは、より良い健康状態を示す。
【0163】
Ｆａｔｉｇｕｅ Ｓｅｖｅｒｉｔｙ Ｄａｉｌｙ Ｄｉａｒｙ：Ｆａｔｉｇｕｅ Ｓｅｖｅｒｉｔｙ Ｄａｉｌｙ Ｄｉａｒｙは、疲労の重症度を測定する、毎日の自己申告型アンケートである。これは、患者を用いた定性的研究ならびに文献および他の既存の関連する尺度の再検討に基づいて開発された。この尺度は、研究参加者に、過去２４時間にわたる自身の疲労の重症度を、０ － 「疲労なし」から１０ － 「最悪の疲労」までの範囲の１１ポイントのＮＲＳで評価してもらう１つの質問からなる。
【0164】
Ａｐｐｅｔｉｔｅ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ：Ａｐｐｅｔｉｔｅ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔは、食欲不振の重症度を測定する自己申告型アンケートである。これは、患者を用いた定性的研究ならびに文献および他の既存の関連する尺度の再検討に基づいて開発された。この尺度は、研究参加者に、過去７日間にわたる自身の食欲を、０ － 「食欲なし」から１０ － 「非常に良好な食欲」までの範囲の１１ポイントのＮＲＳで評価してもらう１つの質問からなる。
【0165】
ＰＲＯＭＩＳ Ｆａｔｉｇｕｅ（Ｖｅｒｓｉｏｎ ７ａ）：ＰＲＯＭＩＳ Ｆａｔｉｇｕｅ ７ａは、過去７日間における、疲れの軽度の主観的感覚から、人が日常活動を実行し、家族または社会的役割において正常に役割を果たす能力を減少させる可能性が高い圧倒的で衰弱性かつ持続的な意味での疲弊までの範囲の症状を評価する、自己申告型尺度である。
【0166】
短文形式の７Ａは、研究参加者が１：「決してない」から５：「常に」までを評価する７つの項目からなる。７から３５までの範囲の全体的生スコアが計算され、ＰＲＯＭＩＳユーザーズマニュアルに提供された適用可能なスコア変換表を使用して、Ｔ－スコア（平均＝５０、ＳＤ＝１０）に変換され得る。
【0167】
Ｐａｔｉｅｎｔ’ｓ Ｇｌｏｂａｌ Ｉｍｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｓｅｖｅｒｉｔｙ（ＰＧＩ－Ｓ）：ＰＧＩ－Ｓは、研究参加者に、過去１４日間にわたる自身の疲労、心不全に起因する症状、および日常活動制約の重症度を、「なし」から「非常に重症」までの範囲の５ポイントの言葉による応答スケールで評価してもらう３つの質問からなる尺度である。ＰＧＩ－Ｓは、標的患者集団における意味のある個体内変化を示す適切な閾値を生成するためのアンカー尺度としての使用のために、ＦＤＡによって推奨されている。
【0168】
Ｐａｔｉｅｎｔ’ｓ Ｇｌｏｂａｌ Ｉｍｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｃｈａｎｇｅ（ＰＧＩ－Ｃ）：ＰＧＩ－Ｃは、研究参加者に、自身の疲労、心不全に起因する症状、および日常活動を行う能力における全体的変化を、「かなり良い」から「かなり悪い」までの範囲の、５ポイントの言葉による評価スケールで評価してもらう３つの質問からなる尺度である。ＰＧＩ－Ｃは、標的患者集団における意味のある個体内変化を示す適切な閾値を生成するためのアンカー尺度としての使用のために、ＦＤＡによって推奨されている。
【0169】
６－Ｍｉｎｕｔｅ Ｗａｌｋ Ｔｅｓｔ（６ＭＷＴ）
６ＭＷＴは、６分間の長さにわたって歩行した距離の測定を伴う最大下運動試験である。６ＭＷＤ（メートルでの移動距離）は、運動に関与する複数の心肺および骨格筋系の統合的な全体的応答についての尺度を提供する。息切れおよび疲労重症度を評価するＢｏｒｇ疲労スケールは、６ＭＷＴの一部として、歩行距離評価の前および後に施行され得る。
６ＭＷＴは、６分間の長さにわたって歩行した距離の測定を伴う最大下運動試験である。６ＭＷＤ（メートルでの移動距離）は、運動に関与する複数の心肺および骨格筋系の統合的な全体的応答についての尺度を提供する。息切れおよび疲労重症度を評価するＢｏｒｇ疲労スケールは、６ＭＷＴの一部として、歩行距離評価の前および後に施行され得る。
【0170】
一部の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体の投与は、（例えば、投与の１日、２、日、４日、１週間、５週間、７週間、１０週間、１５週間、２０週間、２１週間、２２週間または２５週間後）に、ＫＣＣＱ－ＣＳＳにおけるベースラインからの変化を生じる。一部の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体の投与は、ＫＣＣＱ－ＣＳＳ、全体的サマリースコア（ＯＳＳ）、総症状スコア（ＴＳＳ）および／または肉体的制約における、ベースラインからの変化を生じる。一部の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体の投与は、１つ以上のＰＲＯの、ベースライン（即ち、投与前）からの少なくとも５ポイントの増加を生じる。一部の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体の投与は、ＫＣＣＱ－ＣＳＳの、ベースライン（即ち、投与前）からの少なくとも５ポイントの増加を生じる。一部の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体の投与は、ＫＣＣＱ－ＣＳＳ、ＯＳＳ、ＴＳＳおよび／または肉体的制約の、ベースライン（即ち、投与前）からの少なくとも５ポイントの増加を生じる。一部の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体の投与は、６ＭＷＤにおけるベースラインからの変化を生じる。
【0171】
本明細書で開示される方法は、任意の抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性断片を投与するステップを含む。抗ＧＤＦ１５抗体の例は、当該分野で公知である（例えば、ＷＯ１４１００６８９、ＷＯ２０１５／１９６１４２およびＷＯ２０２０／０３９３２１を参照のこと）。一部の実施形態では、本明細書で開示される方法は、ＧＤＦ１５＿００１（ＨＣＤＲ－１：配列番号３２、ＨＣＤＲ－２：配列番号１６５、ＨＣＤＲ－３：配列番号５２、ＬＣＤＲ－１：配列番号９５、ＬＣＤＲ－２：配列番号２８、ＬＣＤＲ－３：配列番号９を含む）またはＧＤＦ１５＿０３０１（ＨＣＤＲ－１：配列番号１７９、ＨＣＤＲ－２：配列番号１８０、ＨＣＤＲ－３：配列番号１８１、ＬＣＤＲ－１：配列番号１８４、ＬＣＤＲ－２：配列番号１８５、ＬＣＤＲ－３：配列番号１８６を含む）を投与するステップを含む。
【0172】
本開示は、それを必要とする対象において、低減された駆出率を伴う心不全を処置するための方法を提供する。この方法は、治療有効量の抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性断片を投与するステップを含み、対象は、４０％未満の／４０％と等しいＬＶＥＦ、２０００ｎｇ／Ｌよりも高い／２０００ｎｇ／Ｌと等しい血清ＧＤＦ１５レベル、７５未満のＫＣＣＱ－ＣＳＳを有し、悪液質、疲労または機能的障害の証拠を示し；抗ＧＤＦ１５抗体の投与は、投与後と比較して、ＫＣＣＱ－ＣＳＳにおけるベースライン（即ち、投与前）からの変化（例えば、少なくとも５ポイントの増加）を生じ、抗ＧＤＦ１５抗体は、
（ａ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ－１；
（ｂ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ－２；
（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ－３；
（ｄ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ－１；
（ｅ）配列番号１６５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ－２；および
（ｆ）配列番号５２のａａ配列を含むＨＣＤＲ－３
を含む。
（ａ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ－１；
（ｂ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ－２；
（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ－３；
（ｄ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ－１；
（ｅ）配列番号１６５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ－２；および
（ｆ）配列番号５２のａａ配列を含むＨＣＤＲ－３
を含む。
【0173】
一部の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体は、配列番号１６６のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号１６４のアミノ酸配列を含むＨＣおよび配列番号１６２のアミノ酸配列を含むＬＣを含む。一部の実施形態では、５０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇまたは５００ｍｇの抗ＧＤＦ１５抗体（例えば、ＧＤＦ１５＿００１）が、４週間毎に皮下投与される。一部の実施形態では、１００ｍｇ、２００ｍｇまたは３００ｍｇの抗ＧＤＦ１５抗体（例えば、ＧＤＦ１５＿００１）が、４週間毎に皮下投与される。一部の実施形態では、３００ｍｇの抗ＧＤＦ１５抗体が、４週間毎に投与される。
【0174】
診断方法
本開示の抗ＧＤＦ１５抗体、抗体組成物および方法は、原発性ミトコンドリア筋症の診断およびその処置の評価のためのイムノアッセイおよび使用が含まれる、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏの有用性を有する。これらの方法には、サンプル中のＧＤＦ１５の存在を検出するための方法であって、ＧＤＦ１５を含むと疑われるサンプルを、ＧＤＦ１５に対して特異的な抗体と接触させるステップ、および抗体と結合したＧＤＦ１５の存在を検出するステップを含み、それによって、サンプル中のＧＤＦ１５を検出する、方法が含まれる。ＧＤＦ１５が固体支持体に結合され、サンプルがそれに添加されて、サンプル中のＧＤＦ１５に抗体を結合させるアッセイが含まれるがこれに限定されない、抗体と結合したＧＤＦ１５を検出するための方法が、当該分野で周知である。固体支持体に結合した抗体と同じまたはそれとは異なる第２のＧＤＦ１５抗体が添加され、直接的標識化（即ち、第２の抗体は、検出可能な標識にコンジュゲートされる）によって、または例えば、第２の抗体の定常ドメインと反応し、検出可能な標識を含む、別の種由来の第３の抗体を添加することによって、検出され得る。したがって、アッセイは、ＰＭＭを有する対象からのサンプル中のＧＤＦ１５の存在または非存在を検出するために使用され得る。
本開示の抗ＧＤＦ１５抗体、抗体組成物および方法は、原発性ミトコンドリア筋症の診断およびその処置の評価のためのイムノアッセイおよび使用が含まれる、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏの有用性を有する。これらの方法には、サンプル中のＧＤＦ１５の存在を検出するための方法であって、ＧＤＦ１５を含むと疑われるサンプルを、ＧＤＦ１５に対して特異的な抗体と接触させるステップ、および抗体と結合したＧＤＦ１５の存在を検出するステップを含み、それによって、サンプル中のＧＤＦ１５を検出する、方法が含まれる。ＧＤＦ１５が固体支持体に結合され、サンプルがそれに添加されて、サンプル中のＧＤＦ１５に抗体を結合させるアッセイが含まれるがこれに限定されない、抗体と結合したＧＤＦ１５を検出するための方法が、当該分野で周知である。固体支持体に結合した抗体と同じまたはそれとは異なる第２のＧＤＦ１５抗体が添加され、直接的標識化（即ち、第２の抗体は、検出可能な標識にコンジュゲートされる）によって、または例えば、第２の抗体の定常ドメインと反応し、検出可能な標識を含む、別の種由来の第３の抗体を添加することによって、検出され得る。したがって、アッセイは、ＰＭＭを有する対象からのサンプル中のＧＤＦ１５の存在または非存在を検出するために使用され得る。
【0175】
別の実施形態では、本発明は、ＰＭＭを有する対象からのサンプル中のＧＤＦ１５の存在を検出するためのキットであって、ＧＤＦ１５に対して特異的な抗体、アプリケーター、およびそれらの使用のための指導用材料を含む、キットを含む。
【0176】
本発明は、ＰＭＭを有する対象からのサンプル中のＧＤＦ１５の濃度を決定するための方法であって、検出可能な標識にカップリングされたＧＤＦ１５を含む標識された競合相手を提供するステップ；ＧＤＦ１５に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片を提供するステップ；サンプル、抗体および標識された競合相手を組み合わせるステップであって、サンプル中のＧＤＦ１５が、抗体への結合について、標識された競合相手と競合する、ステップ；ならびに標識の検出によって、抗体に結合していない標識された競合相手の量を測定することによって、このサンプル中のＧＤＦ１５の濃度を決定するステップ、を含む方法もまた提供する。サンプルの非存在下で抗体に結合した標識された競合相手の量が、サンプルが添加された場合の抗体に結合した標識された競合相手の量と比較される。サンプルの存在下での結合した標識された競合相手の減少の量は、サンプル中に存在する標識されていないＧＤＦ１５の量の指標であり、その結果、このアッセイは、ＰＭＭを有する対象からのサンプル中のＧＤＦ１５の存在およびレベルを評価するために使用され得る。
【0177】
一実施形態では、本発明は、ＰＭＭを有する対象において、増加したレベルのＧＤＦ１５と関連する疾患または障害に対する処置の有効性を評価するための方法であって、対象に処置を投与するステップ、および処置の前に対象から得られたサンプル中のＧＤＦ１５のレベルを、処置の後に対象から得られた他の点では同一のサンプル中のＧＤＦ１５のレベルと比較するステップ、を含み、サンプル中のＧＤＦ１５のレベルが、ＧＤＦ１５特異的抗体を使用して評価され、さらに、処置の前に対象から収集されたサンプル中のＧＤＦ１５のレベルと比較した、処置の後に対象から収集されたサンプル中のＧＤＦ１５のより低いレベルが、処置の過程の有効性の指標である、方法を提供する。
【0178】
ＧＤＦ１５特異的抗体または標識された競合相手に関して、「標識された」という用語は、検出可能な物質を抗体または標識された競合相手にカップリングする（即ち、物理的に連結する）ことによる直接的標識化、ならびにそれを直接標識される別の試薬にカップリングすることによる、抗体または標識された競合相手の間接的標識化を含む。間接的標識化の一例には、蛍光標識した二次抗体を使用した一次抗体の検出が含まれる。本発明のポリペプチドの検出のためのｉｎ ｖｉｔｒｏ技術には、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ウエスタンブロット、免疫沈降および免疫蛍光が含まれる。
【0179】
用語「生物学的サンプル」は、対象から単離された組織、細胞および生物学的流体、ならびにＰＭＭを有する対象内に存在する組織、細胞および流体を含む意図である。
【0180】
本明細書に記載される抗体、標識された競合相手、および潜在的な治療的化合物は、様々な検出システムを用いたいくつかの他の均一および不均一イムノアッセイのいずれかとの使用のためにも適切である。
【0181】
組成物
本発明のＧＤＦ１５抗体は、医薬組成物として製剤化され得る。医薬組成物は、凍結乾燥された製剤または水溶液の形態の、薬学的に許容できる担体、賦形剤および／または安定剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２１版、２００５、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｋ．Ｅ．Ｈｏｏｖｅｒ編）をさらに含み得る。許容できる担体、賦形剤または安定剤は、投薬量および濃度においてレシピエントにとって非毒性であり、緩衝液、例えば、リン酸、クエン酸および他の有機酸；アスコルビン酸およびメチオニンが含まれる抗酸化剤；防腐剤（例えば、塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム（octadecyldimethylbenzyl ammonium chloride）；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルもしくはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えば、メチルもしくはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；およびｍ－クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチンもしくは免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニンもしくはリジン；グルコース、マンノースもしくはデキストランが含まれる、単糖、二糖および他の炭水化物；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロースもしくはソルビトール；塩形成性対イオン、例えば、ナトリウム；金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）；および／または非イオン性界面活性剤、例えば、ＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含み得る。薬学的に許容できる賦形剤は、本明細書にさらに記載される。
本発明のＧＤＦ１５抗体は、医薬組成物として製剤化され得る。医薬組成物は、凍結乾燥された製剤または水溶液の形態の、薬学的に許容できる担体、賦形剤および／または安定剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２１版、２００５、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｋ．Ｅ．Ｈｏｏｖｅｒ編）をさらに含み得る。許容できる担体、賦形剤または安定剤は、投薬量および濃度においてレシピエントにとって非毒性であり、緩衝液、例えば、リン酸、クエン酸および他の有機酸；アスコルビン酸およびメチオニンが含まれる抗酸化剤；防腐剤（例えば、塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム（octadecyldimethylbenzyl ammonium chloride）；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルもしくはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えば、メチルもしくはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；およびｍ－クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチンもしくは免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニンもしくはリジン；グルコース、マンノースもしくはデキストランが含まれる、単糖、二糖および他の炭水化物；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロースもしくはソルビトール；塩形成性対イオン、例えば、ナトリウム；金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）；および／または非イオン性界面活性剤、例えば、ＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含み得る。薬学的に許容できる賦形剤は、本明細書にさらに記載される。
【0182】
本開示の医薬組成物は、本明細書に記載されるＰＤ－１軸アンタゴニストおよび本明細書に記載されるＧＤＦ１５阻害剤をさらに含み得る。一実施形態では、ＧＤＦ１５阻害剤は、抗ＧＤＦ１５抗体ＧＤＦ１５＿００１またはＧＤＦ１５＿２９７であり、ＰＤ－１軸アンタゴニストは、任意選択により、アベルマブ、ＰＦ－０６８０１５９１（「ササンリマブ」および「ＲＮ－８８８」およびｍＡｂ７とも呼ばれ、全てＷＯ２０１６／０９２４１９に開示されている）、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、アテゾリズマブおよびデュルバルマブからなる群から選択される。一実施形態では、ＰＤ－１軸アンタゴニストには、アベルマブは含まれない。
【0183】
本開示の医薬化合物には、１つ以上の薬学的に許容できる塩が含まれ得る。かかる塩の例には、酸付加塩および塩基付加塩が含まれる。酸付加塩には、非毒性無機酸、例えば、塩酸、硝酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、亜リン酸などに由来するもの、ならびに非毒性有機酸、例えば、脂肪族モノおよびジカルボン酸、フェニル置換されたアルカン酸、ヒドロキシアルカン酸、芳香族酸、脂肪族ならびに芳香族スルホン酸などに由来するものが含まれる。塩基付加塩には、アルカリ土類金属、例えば、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウムなどに由来するもの、ならびに非毒性有機アミン、例えば、Ｎ，Ｎ’－ジベンジルエチレンジアミン、Ｎ－メチルグルカミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、プロカインなどに由来するものが含まれる。
【0184】
本開示の医薬組成物は、薬学的に許容できる抗酸化剤もまた含み得る。薬学的に許容できる抗酸化剤の例には、以下が含まれる：（１）水溶性抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸、塩酸システイン、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなど；（２）油溶性抗酸化剤、例えば、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、アルファ－トコフェロールなど；および（３）金属キレート剤、例えば、クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸など。
【0185】
本開示の医薬組成物において使用され得る適切な水性および非水性担体の例には、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）およびそれらの適切な混合物、植物油、例えば、オリーブ油、ならびに注射可能な有機エステル、例えば、オレイン酸エチルが含まれる。適切な流動性は、例えば、コーティング材料、例えば、レシチンの使用によって、分散物の場合には要求される粒子サイズの維持によって、および界面活性剤の使用によって、維持され得る。
【0186】
これらの組成物は、アジュバント、例えば、防腐剤、湿潤剤、乳化剤および分散剤もまた含み得る。微生物の存在の防止は、無菌化手順、ならびに種々の抗細菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸などを含めること、の両方によって確実にされ得る。等張剤、例えば、糖、塩化ナトリウムなどを組成物中に含めることが望ましい場合もある。さらに、注射可能な医薬形態の延長された吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを含めることによってもたらされ得る。
【0187】
医薬組成物は、典型的には、製造および貯蔵の条件下で無菌かつ安定でなければならない。組成物は、高い薬物濃度に適切な、溶液、マイクロエマルジョン、リポソームまたは他の秩序立った構造として製剤化され得る。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコールなど）およびそれらの適切な混合物を含む溶媒または分散媒であり得る。適切な流動性は、例えば、コーティング、例えば、レシチンの使用によって、分散物の場合には要求される粒子サイズの維持によって、および界面活性剤の使用によって、維持され得る。多くの場合、組成物中に等張剤、例えば、糖、ポリアルコール、例えば、マンニトール、ソルビトール、または塩化ナトリウムを含めることが適切である。注射可能な組成物の延長された吸収は、組成物中に、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸塩およびゼラチンを含めることによってもたらされ得る。
【0188】
無菌の注射可能な溶液は、上に列挙した成分のうち１つまたはその組み合わせと共に、適切な溶媒中に活性化合物を要求される量で取り込み、その後、必要に応じて、無菌化精密濾過することによって、調製され得る。
【0189】
一般に、分散物は、基本分散媒および上に列挙したものからの要求される他の成分を含む無菌のビヒクル中に活性化合物を取り込むことによって調製される。無菌の注射可能な溶液の調製のための無菌の粉末の場合、調製の好ましい方法は、その以前に無菌濾過された溶液から、活性成分プラス任意のさらなる所望の成分の粉末を得る、真空乾燥およびフリーズドライ（凍結乾燥）である。
【0190】
本開示の医薬組成物は、点眼投与に適切な製剤で、調製、包装または販売され得る。かかる製剤は、例えば、水性または油性液体担体中の活性成分の０．１％～１．０％（ｗ／ｗ）溶液または懸濁物を例えば含む点眼薬の形態であり得る。かかる点眼薬は、緩衝剤、塩、または本明細書に記載されるさらなる成分のうち１つ以上の他のものをさらに含み得る。有用な他の点眼投与可能な製剤には、微結晶形態で、またはリポソーム調製物中に、活性成分を含むものが含まれる。
【0191】
本明細書で使用する場合、「さらなる成分」には、以下のうち１つ以上が含まれるがこれらに限定されない：賦形剤；表面活性剤；分散剤；不活性希釈剤；造粒および崩壊剤；結合剤；滑沢剤；甘味剤；香味剤；着色剤；防腐剤；生理学的に分解可能な組成物、例えば、ゼラチン；水性ビヒクルおよび溶媒；油性ビヒクルおよび溶媒；懸濁化剤；分散剤または湿潤剤；乳化剤、乳化破壊剤（demulcent）；緩衝液；塩；増粘剤；フィラー；乳化剤；抗酸化剤；抗生物質；抗真菌剤；安定化剤；および薬学的に許容できるポリマー性または疎水性材料。本開示の医薬組成物中に含められ得る他の「さらなる成分」は、当該分野で公知であり、例えば、本明細書で参照によって組み込まれるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｇｅｎａｒｏ編、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ（１９８５）に記載されている。
【0192】
一実施形態では、ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性部分は、約５～６の範囲のｐＨで、酢酸ナトリウム、ポリソルベート８０および塩化ナトリウムと共に、５ｍｇ／ｍＬ、または一部の実施形態では、約１０ｍｇ／ｍＬ、または一部の実施形態では、約１５ｍｇ／ｍＬ、または一部の実施形態では、約２０ｍｇ／ｍＬの抗体、または一部の実施形態では、約２５ｍｇ／ｍＬ、または一部の実施形態では、約５０ｍｇ／ｍＬを含む無菌の水溶液として、静脈内製剤で投与される。一部の実施形態では、静脈内製剤は、ｐＨ５．５で、２０ｍＭ酢酸ナトリウム、０．２ｍｇ／ｍＬポリソルベート８０および１４０ｍＭ塩化ナトリウムと共に、５または１０ｍｇ／ｍＬの抗体を含む、無菌の水溶液である。さらに、抗体またはその抗原結合性部分を含む溶液は、多くの他の化合物の中でも、ヒスチジン、マンニトール、スクロース、トレハロース、グリシン、ポリ（エチレン）グリコール、ＥＤＴＡ、メチオニンおよびそれらの任意の組み合わせ、ならびに当該分野で公知の多くの他の化合物を含み得る。
【0193】
一実施形態では、本開示の医薬組成物は、以下の構成要素を含む：ｐＨ５．８で、５０ｍｇ／ｍＬの本開示のＧＤＦ１５抗体または抗原結合性部分、２０ｍＭヒスチジン、８．５％スクロースおよび０．０２％ポリソルベート８０、０．００５％ＥＤＴＡ；別の実施形態では、本発明の医薬組成物は、以下の構成要素を含む：ｐＨ５．８で、１００ｍｇ／ｍＬの本開示のＧＤＦ１５抗体または抗原結合性部分、１０ｍＭヒスチジン、５％スクロースおよび０．０１％ポリソルベート８０。この組成物は、液体製剤として、または凍結乾燥された粉末として、提供され得る。粉末が最大体積で再構成される場合、組成物は、同じ製剤を保持する。あるいは、粉末は、半分体積で再構成され得、その場合、組成物は、ｐＨ５．８で、１００ｍｇの本開示のＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性部分、２０ｍＭヒスチジン、１０％スクロースおよび０．０２％ポリソルベート８０を含む。
【0194】
一実施形態では、用量の一部は、静脈内ボーラスによって投与され、残りは、抗体製剤の注入によって投与される。例えば、ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性部分の０．０１ｍｇ／ｋｇ静脈内注射は、ボーラスとして与えられ得、抗体用量の残りは、静脈内注射によって投与され得る。所定の用量のＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性部分は、例えば、１時間半～２時間～５時間の期間にわたって、投与され得る。
【0195】
治療剤に関して、この薬剤が例えば小分子である場合、これは、当該分野で周知のように、例えば、生理学的に許容できるカチオンまたはアニオンと組み合わせた、生理学的に許容できるエステルまたは塩の形態で、医薬組成物中に存在し得る。
【0196】
本明細書に記載される医薬組成物の製剤は、薬理学の分野で公知のまたは今後開発される任意の方法によって調製され得る。一般に、かかる調製方法は、活性成分を、担体または１つ以上の他の補助成分と関連させるステップ、および次いで、必要な場合または望ましい場合、産物を所望の単回用量単位または複数用量単位へと成形または包装するステップを含む。
【0197】
一実施形態では、本開示の組成物は、エンドトキシンおよび／または関連の発熱性物質を実質的に含まない、発熱物質を含まない製剤である。エンドトキシンには、微生物の内側に制限される毒素が含まれ、これは、微生物が破壊または死亡した場合に放出される。発熱性物質には、細菌および他の微生物の外膜からの、発熱誘導性の熱安定性物質（糖タンパク質）もまた含まれる。これらの物質は共に、ヒトに投与されると、発熱、低血圧およびショックを引き起こし得る。潜在的な有害作用に起因して、静脈内投与される医薬薬物溶液から、低い量のエンドトキシンでさえも除去することが有利である。食品医薬品局（「ＦＤＡ」）は、静脈内薬物適用のための、単一の１時間の期間における、体重１キログラム当たり１用量当たり、５エンドトキシン単位（ＥＵ）の上限を設定している（Ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａｌ Ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎ、Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａｌ Ｆｏｒｕｍ ２６（１）：２２３（２０００））。治療的タンパク質が、体重１キログラム当たり数百または数千ミリグラムの量で投与される場合、微量のエンドトキシンでさえも除去することが有利である。一実施形態では、組成物中のエンドトキシンおよび発熱物質のレベルは、１０ＥＵ／ｍｇ未満、または５ＥＵ／ｍｇ未満、または１ＥＵ／ｍｇ未満、または０．１ＥＵ／ｍｇ未満、または０．０１ＥＵ／ｍｇ未満、または０．００１ＥＵ／ｍｇ未満である。別の実施形態では、組成物中のエンドトキシンおよび発熱物質のレベルは、約１０ＥＵ／ｍｇ未満、または約５ＥＵ／ｍｇ未満、または約１ＥＵ／ｍｇ未満、または約０．１ＥＵ／ｍｇ未満、または約０．０１ＥＵ／ｍｇ未満、または約０．００１ＥＵ／ｍｇ未満である。
【0198】
一実施形態では、本開示は、組成物を投与することを含み、この投与は、経口、非経口、筋肉内、鼻腔内、腟、直腸、舌、舌下、頬、頬内、静脈内、皮膚、皮下または経皮である。
【0199】
別の実施形態では、本開示は、他の治療、例えば、手術、化学療法、ホルモン療法、生物学的治療、免疫療法または放射線治療と組み合わせて、組成物を投与することをさらに含む。
【0200】
投薬量
本開示のＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性部分を含む医薬組成物または無菌の組成物を調製するために、抗体は、薬学的に許容できる担体または賦形剤と混合される。治療剤および診断剤の製剤は、例えば、凍結乾燥された粉末、スラリー、水溶液、ローションまたは懸濁物の形態の、生理学的に許容できる担体、賦形剤または安定剤と混合することによって調製され得る（例えば、Ｈａｒｄｍａｎら（２００１）Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．；Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．；Ａｖｉｓら（編）（１９９３）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ、ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら（編）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ、ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら（編）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｄｉｓｐｅｒｓｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ、ＮＹ；ＷｅｉｎｅｒおよびＫｏｔｋｏｓｋｉｅ（２０００）Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ Ｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｎｄ Ｓａｆｅｔｙ、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．を参照のこと）。
本開示のＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性部分を含む医薬組成物または無菌の組成物を調製するために、抗体は、薬学的に許容できる担体または賦形剤と混合される。治療剤および診断剤の製剤は、例えば、凍結乾燥された粉末、スラリー、水溶液、ローションまたは懸濁物の形態の、生理学的に許容できる担体、賦形剤または安定剤と混合することによって調製され得る（例えば、Ｈａｒｄｍａｎら（２００１）Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．；Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．；Ａｖｉｓら（編）（１９９３）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ、ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら（編）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ、ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら（編）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｄｉｓｐｅｒｓｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ、ＮＹ；ＷｅｉｎｅｒおよびＫｏｔｋｏｓｋｉｅ（２０００）Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ Ｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｎｄ Ｓａｆｅｔｙ、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．を参照のこと）。
【0201】
治療薬のために投与レジメンを選択することは、実体の血清または組織ターンオーバー速度、症状のレベル、実体の免疫原性、および生物学的マトリックス中の標的細胞のアクセス可能性が含まれるいくつかの因子に依存する。ある特定の実施形態では、投与レジメンは、許容できるレベルの副作用と合致した、患者に送達される治療薬の量を最大化する。したがって、送達される生物製剤の量は、特定の実体、および処置されている状態の重症度に一部依存する。抗体、サイトカインおよび小分子の適切な用量を選択する際のガイダンスは、入手可能である（例えば、Ｗａｗｒｚｙｎｃｚａｋ、１９９６、Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｂｉｏｓ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂ．Ｌｔｄ、Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ、ＵＫ；Ｋｒｅｓｉｎａ（編）、１９９１、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．；Ｂａｃｈ（編）、１９９３、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ Ｄｉｓｅａｓｅｓ、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．；Ｂａｅｒｔら、２００３、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：６０１～６０８；Ｍｉｌｇｒｏｍら、１９９９、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４１：１９６６～１９７３；Ｓｌａｍｏｎら、２００１、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４４：７８３～７９２；Ｂｅｎｉａｍｉｎｏｖｉｔｚら、２０００、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４２：６１３～６１９；Ｇｈｏｓｈら、２００３、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：２４～３２；Ｌｉｐｓｋｙら、２０００、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４３：１５９４～１６０２を参照のこと）。
【0202】
適切な用量の決定は、例えば、当該分野で公知の、または処置に影響を与えると疑われるもしくは処置に影響を与えると予測される、パラメーターまたは因子を使用して、臨床医によってなされる。一般に、用量は、最適な用量よりもいくらか少ない量で開始し、任意の負の副作用と比較して所望のまたは最適な効果が達成されるまで、その後小さい増分ずつ増加される。
【0203】
「ＧＤＦ１５のレベルを低減させる」または「ＧＤＦ１５のレベルを低下させる」は、これらの用語が本明細書で使用される場合、任意の治療的介入の前の遊離ＧＤＦ１５のレベルと比較して、遊離ＧＤＦ１５のレベルを低下させることを意味する。本明細書で使用する場合、「遊離ＧＤＦ１５」は、結合していない、またはさもなくば別の分子（例えば、血漿中などに存在する抗体または結合分子）との複合体中に存在しないＧＤＦ１５を意味する。
【0204】
ＧＤＦ１５のレベルには、対象における遊離ＧＤＦ１５のレベルが含まれ、このレベルは、本明細書で開示される方法または当該分野で公知の遊離ＧＤＦ１５のレベルを評価するための任意の他の方法を使用して、評価される。
【0205】
一実施形態では、遊離ＧＤＦ１５のレベルは、本発明の抗体の投与前の対象におけるＧＤＦ１５のレベルと比較して低減される。一実施形態では、遊離ＧＤＦ１５のレベルは、増加したレベルの遊離ＧＤＦ１５と関連するまたはそれによって媒介される疾患、障害または状態に対象が罹患していないことと関連するまたはそれを示す標準的なレベルの遊離ＧＤＦ１５と比較して低減される。一実施形態では、遊離ＧＤＦ１５の標準的なまたは参照のレベルは、血漿中で約０．０５ｎｇ／ｍＬ～約３ｎｇ／ｍＬである。別の実施形態では、遊離ＧＤＦ１５の標準的なまたは参照のレベルは、その下限値が、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９ｎｇ／ｍＬからなる群から選択され、その上限値が、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９および３．０ｎｇ／ｍＬからなる群から選択される範囲内である。さらなる実施形態では、遊離ＧＤＦ１５の標準的なまたは参照のレベルは、１ｎｇ／ｍＬ未満、好ましくは０．９ｎｇ／ｍＬ未満、さらにより好ましくは０．８ｎｇ／ｍＬ未満、なおより好ましくは０．７ｎｇ／ｍＬ未満、さらにより好ましくは０．６ｎｇ／ｍＬ未満、なおより好ましくは０．５ｎｇ／ｍＬ未満、さらにより好ましくは０．４ｎｇ／ｍｌ未満である。一実施形態では、遊離ＧＤＦ１５のレベルは、血漿中のレベルである。
【0206】
本発明は、０．５ｎｇ／ｍＬ未満の遊離ＧＤＦ１５レベルに限定されない；そのかわり、治療レベルは、特定の対象について、０．５ｎｇ／ｍＬよりも低くても高くてもよいことが、当業者によって理解される。したがって、本発明は、増加したレベルの遊離ＧＤＦ１５によって媒介されるまたはそれと関連する検出可能な有害作用の減少またはその完全な欠如が存在するレベルまで、遊離ＧＤＦ１５のレベルを低減させることを包含する。かかる効果には、悪液質、減少した食物摂取、減少した食欲、減少した体重、体重減少、減少した体脂肪量、減少した除脂肪量などが含まれるがこれらに限定されない。
【0207】
本明細書で使用する場合、薬物、化合物または医薬組成物の「有効投薬量」、「有効用量」、「有効量」または「治療有効量」は、任意の１つ以上の有益なまたは所望の結果をもたらすのに十分な量である。予防的使用について、有益なまたは所望の結果には、リスクを排除もしくは低減させること、重症度を低下させること、または疾患、その合併症、および疾患の発達の間に存在する中間の病理学的表現型の生化学的、組織学的および／もしくは行動学的症状を含む、疾患の開始を遅延させること、が含まれる。治療的使用について、有益なまたは所望の結果には、検出可能な臨床結果、例えば、体重減少の速度を低減もしくは減少させること、または活性ＧＤＦ１５の高い発現から生じる１つ以上の症状（例えば、減少した食物摂取、減少した食欲、減少した体重、体重減少、減少した体脂肪量および減少した除脂肪量）を低減させること、疾患を処置するために要求される他の薬物療法の用量を減少させること、別の薬物療法の効果を増強すること、および／もしくは患者の疾患の進行を遅延させること、が含まれる。有効投薬量は、１つ以上の投与で投与され得る。本発明の目的のために、薬物、化合物または医薬組成物の有効投薬量は、予防的処置または治療的処置を直接的または間接的に達成するのに十分な量である。臨床状況において理解されるように、薬物、化合物または医薬組成物の有効投薬量は、別の薬物、化合物または医薬組成物と併せて達成されてもされなくてもよい。したがって、「有効投薬量」は、１つ以上の治療剤を投与する観点から検討され得、単一の薬剤は、１つ以上の他の薬剤と併せて、望ましい結果が達成され得るまたは達成される場合に、有効量で与えられたとみなされ得る。
【0208】
一部の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片の有効投薬量は、健康なヒトボランティアおよび罹患患者における遊離ＧＤＦ－１５の血漿濃度に基づく。全体の有効な用量は、罹患患者における遊離ＧＤＦ－１５の初期血漿濃度に基づく。一実施形態では、有効投薬量は、投薬間隔全体にわたって、定常状態で、対象における遊離ＧＤＦ１５レベルを、健康なヒトボランティアにおいて測定された同じまたはより低い平均レベルまで低下または低減させる能力を有する投薬量であり得る。別の実施形態では、有効投薬量は、投薬間隔全体にわたって、定常状態で、患者における遊離ＧＤＦ１５レベルを、０．５ｎｇ／ｍＬ未満まで低下または低減させる能力を有する投薬量であり得る。なお別の実施形態では、有効投薬量は、投薬間隔を通じて、定常状態で、対象における遊離ＧＤＦ１５レベルを、０．５ｎｇ／ｍＬ未満まで低下または低減させることができる、７０ｋｇの対象に与えられる投薬量であり得る。
【0209】
「個体」、「患者」または「対象」は、哺乳動物、より好ましくは、ヒトである。哺乳動物には、家畜、スポーツ動物（sport animal）、ペット、霊長類、ウマ、イヌ、ネコ、マウスおよびラットもまた含まれるがこれらに限定されない。一部の実施形態では、個体は、その受容体へのＧＤＦ１５結合およびそれによって媒介されるシグナル伝達によって媒介されるまたはそれと関連する疾患、障害または状態のリスクがあるとみなされる。ある特定の実施形態では、対象は、がん、化学療法、がん免疫学治療と組み合わせた化学療法、慢性心不全、うっ血性心不全、サルコペニア、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、サルコペニアおよび慢性腎臓疾患（ＣＫＤ）と関連する悪液質を有する。
【0210】
一部の実施形態では、方法または使用は、本発明の抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物の約０．０２５ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇの初期用量を投与することを含む。初期用量には、１つ以上の引き続く用量が後に続き得る。一部の実施形態では、１つ以上の引き続く用量は、毎週、１週間おき、３週間毎、４週間毎、５週間毎、６週間毎、７週間毎、８週間毎、９週間毎、１０週間毎、１１週間毎または１２週間毎の少なくともいずれかで投与され得る。
【0211】
一部の実施形態では、方法または使用は、本発明の抗体またはその抗原結合性断片の約０．２５ｍｇ～約２０００ｍｇの固定用量を投与することを含む。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、毎週、１週間おき、３週間毎、４週間毎、５週間毎、６週間毎、７週間毎、８週間毎、９週間毎、１０週間毎、１１週間毎または１２週間毎に投与される。
【0212】
他の実施形態では、方法または使用は、本発明の抗体またはその抗原結合性断片の約０．１～約６０ｍｇの固定用量を毎週投与することを含む。一部の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片の固定用量は、毎週投与される約２ｍｇ、約５ｍｇ、約７ｍｇ、約１０ｍｇ、約１２ｍｇ、約１５ｍｇ、約２５ｍｇ、約４０ｍｇおよび約５０ｍｇである。
【0213】
一部の実施形態では、方法または使用は、本発明の抗体またはその抗原結合性断片の約０．１～約１３０ｍｇの固定用量を１週間おきに投与することを含む。一部の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片の固定用量は、隔週で投与される約５ｍｇ、約１２ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約４０ｍｇ、約６０ｍｇ、約９０ｍｇおよび約１２５ｍｇである。
【0214】
一部の実施形態では、方法または使用は、本発明の抗体またはその抗原結合性断片の約０．１～約４００ｍｇの固定用量を４週間毎に投与することを含む。一部の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片の固定用量は、４週間毎に投与される約１５ｍｇ、約４０ｍｇ、約６０ｍｇ、約７５ｍｇ、約１００ｍｇ、約１１５ｍｇ、約２００ｍｇ、約３００ｍｇおよび約３８５ｍｇである。
【0215】
一部の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体は、静脈内（ＩＶ）または皮下（ＳＣ）投与される。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、約１週間に２回、１週間に１回、２週間毎に１回、３週間毎に１回、４週間毎に１回、５週間毎に１回、６週間毎に１回、７週間毎に１回、８週間毎に１回、９週間毎に１回、１０週間毎に１回、１カ月に２回、１カ月に１回、２カ月毎に１回、３カ月毎に１回、または４カ月毎に１回、５カ月毎に１回、６カ月毎に１回、７カ月毎に１回、８カ月毎に１回、９カ月毎に１回、１０カ月毎に１回、１１カ月毎に１回または１２カ月毎に１回投与される。
【0216】
一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、約０．１ｍｇと約１０００ｍｇとの間の用量で、１週間に１回投与される。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、約１ｍｇと約５００ｍｇとの間の用量で、１週間に１回投与される。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、約１０ｍｇ、約２０ｍｇ、約３０ｍｇ、約４０ｍｇ、約５０ｍｇ、約６０ｍｇ、約７０ｍｇ、約８０ｍｇ、約９０ｍｇ、約１００ｍｇ、約１２５ｍｇ、約１５０ｍｇ、約１７５ｍｇ、約２００ｍｇ、約２５０ｍｇ、約３００ｍｇ、約３５０ｍｇ、約４００ｍｇおよび約５００ｍｇからなる群から選択される用量で、１週間に１回投与される。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、約０．１ｍｇと約５００ｍｇとの間の用量で、２週間毎に１回投与される。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、約１０ｍｇと約２５０ｍｇとの間の用量で、２週間毎に１回投与される。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、約５ｍｇ、約１２ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約４０ｍｇ、約６０ｍｇ、約９０ｍｇ、約１２５ｍｇ、約１５０ｍｇ、約１７５ｍｇ、約２００ｍｇ、約２５０ｍｇ、約３００ｍｇ、約３５０ｍｇ、約４００ｍｇ、約４５０ｍｇおよび約５００ｍｇからなる群から選択される用量で、２週間毎に１回投与される。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、約０．１ｍｇと約５００ｍｇとの間の用量で、４週間毎に１回投与される。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、約１０ｍｇと約５００ｍｇとの間の用量で、４週間毎に１回投与される。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、約１５ｍｇ、約４０ｍｇ、約６０ｍｇ、約７５ｍｇ、約１００ｍｇ、約１１５ｍｇ、約２００ｍｇ、約３００ｍｇ、約３５０ｍｇ、約４００ｍｇ、約４５０ｍｇおよび約５００ｍｇからなる群から選択される用量で、４週間毎に１回投与される。
【0217】
キット
本発明は、本発明の抗体またはその抗原結合性断片を含むキットまたは製造品、および使用のための指示もまた提供する。したがって、一部の実施形態では、コンテナ、コンテナ内の抗ＧＤＦ１５抗体を含む組成物、およびＰＭＭを有する対象の処置のために治療有効量の抗ＧＤＦ１５抗体を投与するための指示を含む添付文書、を含むキットまたは製造品が提供される。
本発明は、本発明の抗体またはその抗原結合性断片を含むキットまたは製造品、および使用のための指示もまた提供する。したがって、一部の実施形態では、コンテナ、コンテナ内の抗ＧＤＦ１５抗体を含む組成物、およびＰＭＭを有する対象の処置のために治療有効量の抗ＧＤＦ１５抗体を投与するための指示を含む添付文書、を含むキットまたは製造品が提供される。
【0218】
ある特定の実施形態では、キットは、乾燥タンパク質を有する第１のコンテナおよび水性製剤を有する第２のコンテナの両方を含み得る。ある特定の実施形態では、単一および複数チャンバーの事前充填シリンジ（例えば、液体シリンジおよびリオシリンジ（lyosyringe））を含むキットが含まれる。
【0219】
一実施形態では、本発明は、サンプル中のＧＤＦ１５の濃度を決定するためのキットであって、検出可能な標識にカップリングされたＧＤＦ１５を含む標識された競合相手；ＧＤＦ１５に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片；アプリケーター；およびそれらの使用のための指導用材料、を含むキットを提供する。
【0220】
本発明は、試験サンプル中のＧＤＦ１５の量を決定するための競合的イムノアッセイキットであって、ＧＤＦ１５に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片；検出可能な標識にコンジュゲートされたＧＤＦ１５を含む標識された競合相手を含み；標識された競合相手が、抗体との結合について、試験サンプル中のＧＤＦ１５と競合し、さらに、標識が、試験サンプル中のＧＤＦ１５の量を示すシグナルを提供する、競合的イムノアッセイキットをさらに提供する。例示的な実施形態では、ＧＤＦ１５を含まない他の点では同一のサンプル中の抗体によって結合された標識と比較した、試験サンプル中の抗体によって結合された標識における減少は、試験サンプル中のＧＤＦ１５の量の指標である。
【0221】
一実施形態では、本発明は、サンプル中のＧＤＦ１５の濃度を決定するためのキットであって、検出可能な標識にカップリングされたＧＤＦ１５を含む標識された競合相手；ＧＤＦ１５に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片；アプリケーター；およびそれらの使用のための指導用材料、を含むキットを提供する。
【0222】
代替的な実施形態では、本発明は、悪液質のリスクがあるヒト患者を同定するためのキットであって、ＧＤＦ１５特異的抗体またはその抗原結合性断片、アプリケーター、およびそれらの使用のための指導用材料、を含むキットを提供する。
【0223】
一部の実施形態では、第１のコンテナ、このコンテナ内の抗ＧＤＦ１５抗体を含む組成物、第２のコンテナ、第２のコンテナ内のＰＤ－１軸結合性アンタゴニストを含む組成物、ならびにそれを必要とする患者の処置のために治療有効量の抗ＧＤＦ１５抗体およびＰＤ－１軸結合性アンタゴニストを投与するための指示を含む添付文書、を含むキットまたは製造品が提供される。
【0224】
本発明は、第１のコンテナ、このコンテナ内の相乗的治療有効量の抗ＧＤＦ１５抗体を含む組成物、第２のコンテナ、第２のコンテナ内の治療有効量のＰＤ－１軸結合性アンタゴニストを含む組成物、ならびにそれを必要とする患者の組み合わせ処置のために相乗的治療有効量の抗ＧＤＦ１５抗体およびＰＤ－１軸結合性アンタゴニストを投与するための指示を含む添付文書、を含むキットまたは製造品を包含する。
【0225】
一部の態様では、ＰＤ－１軸結合性アンタゴニストは、ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片、ＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合性断片、およびＰＤ－Ｌ２抗体またはその抗原結合性断片からなる群から選択される。一部の態様では、ＰＤ－１抗体は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、スパルタリズマブ、チスレリズマブ、ピディリズマブ、ＡＭＰ－２２４、ＡＭＰ－５１４、セミプリマブおよびＰＦ－０６８０１５９１（ササンリマブ、ＲＮ８８８）からなる群から選択される。他の態様では、ＰＤ－Ｌ１抗体は、任意選択により、アベルマブ、アテゾリズマブ、デュルバルマブからなる群から選択される。他の態様では、ＰＤ－Ｌ１抗体は、アベルマブではない。
【0226】
他の実施形態では、第１のコンテナ、このコンテナ内の抗ＧＤＦ１５抗体を含む組成物、第２のコンテナ、第２のコンテナ内の抗がん治療剤を含む組成物、ならびにそれを必要とする患者の処置のために治療有効量の抗ＧＤＦ１５抗体および抗がん治療剤を投与するための指示を含む添付文書、を含むキットまたは製造品が提供される。一部の態様では、抗がん治療剤は、抗ＣＤ４０抗体である。
【0227】
本発明は、第１のコンテナ、このコンテナ内の相乗的治療有効量の抗ＧＤＦ１５抗体を含む組成物、第２のコンテナ、第２のコンテナ内の治療有効量の抗がん治療剤を含む組成物、ならびにそれを必要とする患者の組み合わせ処置のために相乗的治療有効量の抗ＧＤＦ１５抗体および抗がん治療剤を投与するための指示を含む添付文書、を含むキットまたは製造品を包含する。一部の実施形態では、抗がん治療剤は、抗ＣＤ４０抗体である。
【0228】
本発明の抗体またはその抗原結合性断片の使用に関する指示は、一般に、意図した処置のための投薬量、投薬スケジュール、および投与の経路に関する情報を含む。コンテナは、単位用量、バルク包装（例えば、多用量包装）またはサブ単位用量であり得る。本発明のキット中に供給される指示は、典型的には、ラベルまたは添付文書（例えば、キット中に含まれる紙シート）上の書面による指示であるが、機械可読指示（例えば、磁気または光学保存ディスク上で運搬される指示）もまた許容できる。
【0229】
本発明のキットは、適切な包装中にある。適切な包装には、バイアル、ボトル、ジャー、可撓性包装（例えば、密封Ｍｙｌａｒまたはプラスチックバッグ）などが含まれるがこれらに限定されない。特定のデバイス、例えば、インヘラー、経鼻投与デバイス（例えば、アトマイザー）または注入デバイス、例えば、ミニポンプと組み合わせた使用のための包装もまた企図される。キットは、無菌のアクセスポートを有し得る（例えば、コンテナは、皮下注射針によって貫通可能なストッパーを有する静脈内溶液バッグまたはバイアルであり得る）。コンテナもまた、無菌のアクセスポートを有し得る（例えば、コンテナは、皮下注射針によって貫通可能なストッパーを有する静脈内溶液バッグまたはバイアルであり得る）。コンテナは、第２の薬学的に活性な薬剤をさらに含み得る。
【0230】
キットは、任意選択により、さらなる構成要素、例えば、緩衝液および説明情報を提供し得る。通常、キットは、コンテナ、およびコンテナ上にあるまたはそれと関連したラベルまたは添付文書を含む。
【0231】
定義
「約」または「およそ」は、本明細書で他に定義されない限り、測定可能な数値変数と併せて使用される場合、変数の示された値、および示された値の実験誤差（例えば、平均についての９５％信頼区間）または示された値の１０パーセントのいずれか大きい方以内の、変数の全ての値を指す。数値範囲は、範囲を規定する数字を含む。
「約」または「およそ」は、本明細書で他に定義されない限り、測定可能な数値変数と併せて使用される場合、変数の示された値、および示された値の実験誤差（例えば、平均についての９５％信頼区間）または示された値の１０パーセントのいずれか大きい方以内の、変数の全ての値を指す。数値範囲は、範囲を規定する数字を含む。
【0232】
用語「同一性」は、当該分野で公知のように、配列を比較することによって決定される、２つ以上のポリペプチド分子または２つ以上の核酸分子の配列間の関連性を指す。当該分野では、「同一性」は、場合によっては、ヌクレオチドまたはアミノ酸配列のストリング間の一致によって決定され得る、ポリペプチドまたは核酸分子配列間の配列関連の程度もまた意味する。「同一性」は、特定の数理モデルのコンピュータープログラム（即ち、「アルゴリズム」）によって扱われるギャップアラインメントを用いて、２つ以上の配列間の同一の一致のパーセントを測定する。
【0233】
用語「類似性」は、関連する概念であるが、「同一性」とは対照的に、同一の一致および保存的置換一致の両方を含む類似性の尺度を指す。保存的置換は、ポリペプチドには当てはまり、核酸分子には当てはまらないので、類似性は、ポリペプチド配列比較のみを扱う。２つのポリペプチド配列が、例えば、２０個のうち１０個の同一なアミノ酸を有し、残りが全て非保存的置換である場合、パーセント同一性および類似性は、共に５０％である。同じ例において、保存的置換が存在する５つのさらなる位置が存在する場合、パーセント同一性は、５０％のままであるが、パーセント類似性は、７５％（２０個のうち１５個）である。したがって、保存的置換が存在する場合、２つのポリペプチド配列間の類似性の程度は、その２つの配列間のパーセント同一性よりも高い。
【0234】
特許請求の範囲における用語「または」の使用は、選択肢のみを指すこと、または選択肢が相互に排他的であることを指すことが明確に示されない限り、「および／または」を意味するために使用されるが、本開示は、選択肢および「および／または」のみを指す定義を支持する。本明細書で使用する場合、「１つの（a）」または「１つの（an）」は、明確に他が示されない限り、１つ以上を意味し得る。特許請求の範囲において本明細書で使用する場合、単語「含む（comprising）」と併せて使用される場合、単語「１つの（a）」または「１つの（an）」は、１つまたは１つよりも多くを意味し得る。本明細書で使用する場合、「別の」は、少なくとも第２のものまたはそれ以上を意味し得る。本明細書で他に定義されない限り、本発明と併せて使用される科学用語および技術用語は、当業者が一般に理解する意味を有するものとする。さらに、文脈が他を要求しない限り、単数形の用語は、複数を含むものとし、複数形の用語は、単数形を含むものとする。単語「含む（comprises／comprising）」および単語「有する（having）／含む（including）」は、本発明に関して本明細書で使用される場合、述べられた特色、整数、ステップまたは構成要素の存在を特定するために使用されるが、１つ以上の他の特色、整数、ステップ、構成要素またはそれらの群の存在または追加を除外しない。
【0235】
用語「がん」、「がん性」または「悪性」は、調節されない細胞成長によって典型的には特徴付けられる、哺乳動物における生理学的状態を指すまたは記述する。がんの例には、癌腫、リンパ腫、白血病、芽腫および肉腫が含まれるがこれらに限定されない。かかるがんのより特定の例には、扁平上皮癌、骨髄腫、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、神経膠腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、多発性骨髄腫、胃腸（管）がん、腎がん、卵巣がん、肝臓がん、リンパ芽球性白血病、リンパ球性白血病、結腸直腸がん、子宮内膜がん、腎臓がん、前立腺がん、甲状腺がん、黒色腫、軟骨肉腫、神経芽腫、膵がん、多形神経膠芽腫、子宮頸がん、脳腫瘍、胃がん（stomach cancer）、膀胱がん、ヘパトーマ、乳がん、結腸癌および頭頸部がんが含まれる。がんの別の特定の例には、腎細胞癌が含まれる。
【0236】
用語「処置する」は、本明細書で使用する場合、他に示されない限り、かかる用語が適用される障害もしくは状態、またはかかる障害もしくは状態の１つ以上の症状を逆転させること、軽減すること、その進行を阻害すること、またはそれを予防することを意味する。
【0237】
本発明に従って処置される「患者」には、例えば、ヒト、サルまたは他の下位霊長類、ウマ、イヌ、ウサギ、モルモットまたはマウスであるがこれらに限定されない、任意の温血動物が含まれる。例えば、患者は、ヒトである。医学分野の当業者は、非小細胞肺がんに罹患しており処置を必要としている個々の患者を容易に同定することができる。
【0238】
用語「処置レジメン」、「投薬プロトコール」および投薬レジメンは、本発明の組み合わせ中の各治療剤の用量および投与のタイミングを指すために、相互交換可能に使用される。
【0239】
「寛解させる」は、処置を投与しない場合と比較した、１つ以上の症状の低下または改善を意味する。「寛解させる」は、症状の持続時間における短縮または低減もまた含む。
【0240】
医薬による処置に対する患者の「有効な応答」または患者の「応答性」および類似の言い回しは、疾患または障害、例えばＰＭＭのリスクがある、またはそれを患っている患者に付与される、臨床的または治療的利益を指す。一実施形態では、かかる利益には、以下のうちいずれか１つ以上が含まれる：客観的応答（完全を含む）を生じさせること。
【0241】
本明細書で使用する場合、「～と組み合わせた」または「～と併せた」は、別の処置モダリティに加えた、１つの処置モダリティの投与を指す。このように、「～と組み合わせた」または「～と併せた」は、個体への他の処置モダリティの投与の前、その間またはその後の、１つの処置モダリティの投与を指す。
【0242】
「低用量」は、本明細書で使用する場合、臨床設定において典型的に使用される量または用量よりも低い、物質、薬剤、化合物または組成物の量または用量を指す。
【0243】
用語「相加的」は、２つの化合物、構成要素または標的化された薬剤の組み合わせの結果が、各個々の化合物、構成要素または標的化された薬剤の合計以下であることを意味するために使用される。用語「相加的」は、各個々の化合物、構成要素または標的化された薬剤の使用を超える、処置されている疾患状態または障害における改善が存在しないことを意味する。
【0244】
用語「シナジー」または「相乗的」は、２つの化合物、構成要素または標的化された薬剤の組み合わせの効果が、各薬剤が単独で提供する効果の合計よりも大きいことを意味するために使用される。用語「シナジー」または「相乗的」は、各個々の化合物、構成要素または標的化された薬剤の別々の使用を超える、処置されている疾患状態または障害における改善が存在することを意味する。処置されている疾患状態または障害におけるこの改善は、「相乗的効果」または「相乗的治療効果」である。「相乗的量」、「相乗的有効量」または「相乗的治療有効量」は、組み合わせて投与された場合に相乗的効果を生じる化合物、構成要素または標的化された薬剤の量であり、「相乗的」は、本明細書で定義される。２つ以上の構成要素間の相乗的相互作用を決定すると、効果のための最適な範囲および効果のための各構成要素の絶対的用量範囲が、処置を必要とする患者への、異なるｗ／ｗ（重量／重量）比範囲および用量にわたる構成要素の投与によって断定的に測定され得る。しかし、ｉｎ ｖｉｔｒｏモデルまたはｉｎ ｖｉｖｏモデルにおけるシナジーの観察は、ヒトおよび他の種における効果を予測し得、ｉｎ ｖｉｔｒｏモデルまたはｉｎ ｖｉｖｏモデルは、本明細書に記載されるように、相乗的効果を測定するために存在し、かかる研究の結果は、ヒトおよび他の種において要求される有効用量および血漿濃度比範囲ならびに絶対的用量および血漿濃度を、薬物動態学的／薬力学的方法の適用によって予測するためにも使用され得る。
【0245】
非限定的な実施形態
本発明は、ＧＤＦ１５に特異的に結合する抗体およびその抗原結合性断片を使用してミトコンドリア筋症を予防、寛解および／または処置するための方法を提供する。当業者は、慣用的にすぎない実験を使用して、本明細書に記載される発明の具体的な実施形態に対する多くの等価物を認識する、またはそれを確認することができる。かかる等価物は、以下の実施形態（Ｅ）によって包含される意図である。
本発明は、ＧＤＦ１５に特異的に結合する抗体およびその抗原結合性断片を使用してミトコンドリア筋症を予防、寛解および／または処置するための方法を提供する。当業者は、慣用的にすぎない実験を使用して、本明細書に記載される発明の具体的な実施形態に対する多くの等価物を認識する、またはそれを確認することができる。かかる等価物は、以下の実施形態（Ｅ）によって包含される意図である。
【0246】
Ｅ１．原発性ミトコンドリア筋症（ＰＭＭ）を予防、寛解および／または処置する方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量の、ＧＤＦ－１５に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片を投与するステップを含む、方法。
【0247】
Ｅ２．原発性ミトコンドリア筋症（ＰＭＭ）を処置する方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量の、ＧＤＦ－１５に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片を投与するステップを含む、方法。
【0248】
Ｅ３．原発性ミトコンドリア筋症が、リー症候群、カーンズ・セイヤー症候群、アルパーズ・フッテンロッヒャー症候群、乳酸アシドーシスおよび脳卒中様エピソードを伴うミトコンドリア脳筋症（ＭＥＬＡＳ）ならびに運動失調ニューロパチー症候群からなる群から選択される、Ｅ１に記載の方法。
【0249】
Ｅ４．投与が、投与前と比較して、ＰＭＭの１つ以上の徴候または症状における改善を生じる、Ｅ１からＥ３のいずれか１つに記載の方法。
【0250】
Ｅ５．ＰＭＭの１つ以上の徴候または症状が、肉体的疲労、筋力低下および／または運動耐容能を含む、Ｅ４に記載の方法。
【0251】
Ｅ６．ＰＭＭの１つ以上の徴候または症状における改善が、増加した体重増加、増加した除脂肪筋肉量、増加した骨格筋量、回復した筋強度、および／または運動能力における改善を含む、Ｅ４に記載の方法。
【0252】
Ｅ７．対象が、悪液質、心不全および／またはがんを有さない、Ｅ１からＥ９のいずれか１つに記載の方法。
【0253】
Ｅ８．対象が、悪液質、心不全および／またはがんを有する、Ｅ１からＥ９のいずれか１つに記載の方法。
【0254】
Ｅ９．対象が、対照対象と比較して、異常なレベルの１つ以上のエネルギーバイオマーカーを示す、Ｅ８に記載の方法。
【0255】
Ｅ１０．エネルギーバイオマーカーが、乳酸（乳酸塩）レベル；ピルビン酸（ピルビン酸塩）レベル；乳酸塩／ピルビン酸塩比；クレアチンリン酸レベル；ＮＡＤＨ（ＮＡＤＨ＋Ｈ＋）またはＮＡＤＰＨ（ＮＡＤＰＨ＋Ｈ＋）レベル；ＮＡＤまたはＮＡＤＰレベル；ＡＴＰレベル；還元型補酵素Ｑ（ＣｏＱｒｅｄ）レベル；酸化型補酵素Ｑ（ＣｏＱｏｘ）レベル；総補酵素Ｑ（ＣｏＱｔｏｔ）レベル；酸化型チトクロムＣレベル；還元型チトクロムＣレベル；酸化型チトクロムＣ／還元型チトクロムＣ比；アセト酢酸塩レベル；ベータ－ヒドロキシ酪酸塩レベル；アセト酢酸塩／ベータ－ヒドロキシ酪酸塩比；８－ヒドロキシ－２’－デオキシグアノシン（８－ＯＨｄＧ）レベル；反応性酸素種のレベル；酸素消費量（ＶＯ２）、二酸化炭素放出量（ＶＣＯ２）および呼吸商（ＶＣＯ２／ＶＯ２）からなる群から選択される、Ｅ９に記載の方法。
【0256】
Ｅ１１．対象が、単離された抗体またはその抗原結合性断片の投与前に、上昇したＧＤＦ１５のレベルおよび／または活性を有する、Ｅ１からＥ１０のいずれか１つに記載の方法。
【0257】
Ｅ１２．対象が、投与前と比較して、単離された抗体またはその抗原結合性断片の投与後に、低減されたＧＤＦ１５のレベルおよび／または活性を有する、Ｅ１からＥ１１のいずれか１つに記載の方法。
【0258】
Ｅ１３．ＧＤＦ１５の活性が、
（ａ）ＧＦＲＡＬの結合を増加させること；
（ｂ）食物摂取を減少させること；
（ｃ）ボディマスを減少させること；
（ｄ）筋肉量を減少させること；
（ｅ）体脂肪量を減少させること；
（ｆ）ＲＥＴを活性化すること；
（ｇ）ＥＲＫのリン酸化（ｐＥＲＫ）を増加させること；および
（ｈ）リボソームタンパク質Ｓ６（Ｓ６）のリン酸化を増加させること
（ｉ）ＡＫＴのリン酸化を増加させること；
（ｊ）ＭＡＰＫのリン酸化を増加させること；
（ｋ）ＰＬＣ－γ１のリン酸化を増加させること；
（ｌ）疲労を増加させること；および
（ｍ）身体能力／肉体活動を減少させること
からなる群から選択される、Ｅ１１またはＥ１２に記載の方法。
（ａ）ＧＦＲＡＬの結合を増加させること；
（ｂ）食物摂取を減少させること；
（ｃ）ボディマスを減少させること；
（ｄ）筋肉量を減少させること；
（ｅ）体脂肪量を減少させること；
（ｆ）ＲＥＴを活性化すること；
（ｇ）ＥＲＫのリン酸化（ｐＥＲＫ）を増加させること；および
（ｈ）リボソームタンパク質Ｓ６（Ｓ６）のリン酸化を増加させること
（ｉ）ＡＫＴのリン酸化を増加させること；
（ｊ）ＭＡＰＫのリン酸化を増加させること；
（ｋ）ＰＬＣ－γ１のリン酸化を増加させること；
（ｌ）疲労を増加させること；および
（ｍ）身体能力／肉体活動を減少させること
からなる群から選択される、Ｅ１１またはＥ１２に記載の方法。
【0259】
Ｅ１４．抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号２１、３４、４４、５３、６０、６８、７３、８０、８６、９３、９９、１０６、１１２、１２０、１２７、１３６、１４２、１４８、１５５、１６１および１６６からなる群のうち１つのＨＣＤＲ－１、ＨＣＤＲ－２およびＨＣＤＲ－３配列を含む、Ｅ１からＥ１３のいずれか１つに記載の方法。
【0260】
Ｅ１５．抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号１１、３０、３９、４９、５６、６４、７１、７７、８３、９０、９６、１０３、１０９、１１５、１２３、１３１、１３９、１４４、１５１、１５８および１６３からなる群のうち１つのＬＣＤＲ－１、ＬＣＤＲ－２およびＬＣＤＲ－３配列を含む、Ｅ１からＥ１４のいずれか１つに記載の方法。
【0261】
Ｅ１６．抗体またはその抗原結合性断片が、（ａ）～（ｆ）：
（ａ）配列番号７、２７、３６、４６、５５、６２、８２、８８、９５、１０１、１２９、１３８、１５０および１５７からなる群から選択されるＬＣＤＲ－１、
（ｂ）配列番号８、２８、３７、４７、７０、１０８、１１４、１２２および１３０からなる群から選択されるＬＣＤＲ－２、
（ｃ）配列番号９、２９、３８、４８、６３、７６、８９および１０２からなる群から選択されるＬＣＤＲ－３、
（ｄ）配列番号１７、３２、４１、５８、６６、１１７、１２５、１３３および１５３からなる群から選択されるＨＣＤＲ－１、
（ｅ）配列番号１８、３３、４２、５１、５９、６７、８５、９２、９８、１０５、１１８、１２６、１３４、１４１、１４６および１６５からなる群から選択されるＨＣＤＲ－２、
（ｆ）配列番号１、１９、４３、５２、７９、１１１、１１９、１３５、１４７、１５４および１６０からなる群から選択されるＨＣＤＲ－３
のうち１つ以上を含む、Ｅ１からＥ１５のいずれか１つに記載の方法。
（ａ）配列番号７、２７、３６、４６、５５、６２、８２、８８、９５、１０１、１２９、１３８、１５０および１５７からなる群から選択されるＬＣＤＲ－１、
（ｂ）配列番号８、２８、３７、４７、７０、１０８、１１４、１２２および１３０からなる群から選択されるＬＣＤＲ－２、
（ｃ）配列番号９、２９、３８、４８、６３、７６、８９および１０２からなる群から選択されるＬＣＤＲ－３、
（ｄ）配列番号１７、３２、４１、５８、６６、１１７、１２５、１３３および１５３からなる群から選択されるＨＣＤＲ－１、
（ｅ）配列番号１８、３３、４２、５１、５９、６７、８５、９２、９８、１０５、１１８、１２６、１３４、１４１、１４６および１６５からなる群から選択されるＨＣＤＲ－２、
（ｆ）配列番号１、１９、４３、５２、７９、１１１、１１９、１３５、１４７、１５４および１６０からなる群から選択されるＨＣＤＲ－３
のうち１つ以上を含む、Ｅ１からＥ１５のいずれか１つに記載の方法。
【0262】
Ｅ１７．抗体またはその抗原結合性断片が、ｉ）アミノ酸配列ＧＹＴＦＸ１Ｘ２ＹＮＩＤを含むＨＣＤＲ－１であって、式中、Ｘ１がＳまたはＴであり、Ｘ２がＳまたはＤである、ＨＣＤＲ－１；ｉｉ）アミノ酸配列Ｘ３ＩＮＰＸ４Ｘ５ＧＸ６ＡＸ７Ｘ８Ｘ９ＱＫＦＱＧを含むＨＣＤＲ－２であって、式中、Ｘ３がＧまたはＱであり；Ｘ４がＩまたはＮであり；Ｘ５がＦまたはＮであり；Ｘ６がＴまたはＬであり；Ｘ７がＦまたはＮであり；Ｘ８がＹまたはＦであり、Ｘ９がＮまたはＡである、ＨＣＤＲ－２；およびｉｉｉ）アミノ酸配列ＥＸ１０ＩＴＴＸ１１ＧＡＭＤＸ１２を含むＨＣＤＲ－３であって、式中、Ｘ１０がＡまたはＱであり；Ｘ１１がＶまたはＩであり；Ｘ１２がＨまたはＹである、ＨＣＤＲ－３、を含む、Ｅ１からＥ１６のいずれか１つに記載の方法。
【0263】
Ｅ１８．抗体またはその抗原結合性断片が、ｉ）アミノ酸配列ＲＸ１ＳＱＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５ＹＬＡを含むＬＣＤＲ－１であって、式中、Ｘ１がＴまたはＡであり、Ｘ２がＳまたはＮであり、Ｘ３がＶまたはＬであり、Ｘ４がＨまたはＳであり、Ｘ５がＮまたはＳである、ＬＣＤＲ－１；ｉｉ）アミノ酸配列ＤＡＸ６Ｘ７ＲＡＸ８を含むＬＣＤＲ－２であって、式中、Ｘ６がＳまたはＫであり；Ｘ７がＴまたはＮであり；Ｘ８がＤまたはＴである、ＬＣＤＲ－２；およびｉｉｉ）アミノ酸配列ＱＱＦＸ９Ｘ１０Ｘ１１ＰＸ１２Ｔを含むＬＣＤＲ－３であって、式中、Ｘ９がＷまたはＳであり；Ｘ１０がＳまたはＮであり；Ｘ１１がＷまたはＤであり；Ｘ１２がＷまたはＹである、ＬＣＤＲ－３、を含む、Ｅ１からＥ１７のいずれか１つに記載の方法。
【0264】
Ｅ１９．抗体またはその抗原結合性断片が、以下：
（ａ）配列番号１７４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ－１、
（ｂ）配列番号１７５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ－２、
（ｃ）配列番号１７６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ－３、
（ｄ）配列番号１７１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ－１、
（ｅ）配列番号１７２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ－２、
（ｆ）配列番号１７３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ－３
のうち１つ以上を含む、Ｅ１からＥ１８のいずれか１つに記載の方法。
（ａ）配列番号１７４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ－１、
（ｂ）配列番号１７５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ－２、
（ｃ）配列番号１７６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ－３、
（ｄ）配列番号１７１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ－１、
（ｅ）配列番号１７２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ－２、
（ｆ）配列番号１７３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ－３
のうち１つ以上を含む、Ｅ１からＥ１８のいずれか１つに記載の方法。
【0265】
Ｅ２０．抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号３４、１０６、１４８、１５５および１６６からなる群から選択される少なくとも１つの配列のＨＣＤＲ－１、ＨＣＤＲ－２およびＨＣＤＲ－３配列を含む、Ｅ１からＥ１９のいずれか１つに記載の方法。
【0266】
Ｅ２１．抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号３０、１０３、１４４、１５１および１６３からなる群から選択される少なくとも１つの配列のＬＣＤＲ－１、ＬＣＤＲ－２およびＬＣＤＲ－３配列を含む、Ｅ１からＥ２０のいずれか１つに記載の方法。
【0267】
Ｅ２２．抗体またはその抗原結合性断片が、（ａ）～（ｆ）
（ａ）配列番号２７、８８、９５、１０１および１５０からなる群から選択されるＬＣＤＲ－１
（ｂ）配列番号８、２８および１０８からなる群から選択されるＬＣＤＲ－２
（ｃ）配列番号９、２９、３８、４８および１０２からなる群から選択されるＬＣＤＲ－３
（ｄ）配列番号３２、４１および１５３からなる群から選択されるＨＣＤＲ－１
（ｅ）配列番号３３、１０５、１４６および１６５からなる群から選択されるＨＣＤＲ－２
（ｆ）配列番号１９、５２、１４７および１５４からなる群から選択されるＨＣＤＲ－３
のうち１つ以上を含む、Ｅ１からＥ２１のいずれか１つに記載の方法。
（ａ）配列番号２７、８８、９５、１０１および１５０からなる群から選択されるＬＣＤＲ－１
（ｂ）配列番号８、２８および１０８からなる群から選択されるＬＣＤＲ－２
（ｃ）配列番号９、２９、３８、４８および１０２からなる群から選択されるＬＣＤＲ－３
（ｄ）配列番号３２、４１および１５３からなる群から選択されるＨＣＤＲ－１
（ｅ）配列番号３３、１０５、１４６および１６５からなる群から選択されるＨＣＤＲ－２
（ｆ）配列番号１９、５２、１４７および１５４からなる群から選択されるＨＣＤＲ－３
のうち１つ以上を含む、Ｅ１からＥ２１のいずれか１つに記載の方法。
【0268】
Ｅ２３．抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号１６６のＨＣＤＲ－１、ＨＣＤＲ－２およびＨＣＤＲ－３配列を含む、Ｅ１からＥ２２のいずれか１つに記載の方法。
【0269】
Ｅ２４．抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号１６３のＬＣＤＲ－１、ＬＣＤＲ－２およびＬＣＤＲ－３配列を含む、Ｅ１からＥ２３のいずれか１つに記載の方法。
【0270】
Ｅ２５．抗体またはその抗原結合性断片が、以下：
（ａ）配列番号９５の配列を含むＬＣＤＲ－１、
（ｂ）配列番号２８の配列を含むＬＣＤＲ－２、
（ｃ）配列番号９の配列を含むＬＣＤＲ－３、
（ｄ）配列番号３２の配列を含むＨＣＤＲ－１、
（ｅ）配列番号１６５の配列を含むＨＣＤＲ－２、および
（ｆ）配列番号５２の配列を含むＨＣＤＲ－３
のうち１つ以上を含む、Ｅ１からＥ２４のいずれか１つに記載の方法。
（ａ）配列番号９５の配列を含むＬＣＤＲ－１、
（ｂ）配列番号２８の配列を含むＬＣＤＲ－２、
（ｃ）配列番号９の配列を含むＬＣＤＲ－３、
（ｄ）配列番号３２の配列を含むＨＣＤＲ－１、
（ｅ）配列番号１６５の配列を含むＨＣＤＲ－２、および
（ｆ）配列番号５２の配列を含むＨＣＤＲ－３
のうち１つ以上を含む、Ｅ１からＥ２４のいずれか１つに記載の方法。
【0271】
Ｅ２６．抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号９５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ－１、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ－２、配列番号９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ－３、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ－１、配列番号１６５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ－２および配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ－３を含む、Ｅ１からＥ２５のいずれか１つに記載の方法。
【0272】
Ｅ２７．抗体またはその抗原結合性断片が、以下の置換：
（ａ）ヒト生殖系列ＶＬ配列の対応する残基への、ＬＣＤＲ－１中の１、２、３、４、５または６個の置換、
（ｂ）ヒトＶＬ生殖系列配列の対応する残基への、ＬＣＤＲ－２中の１、２、３、４または５個の置換、
（ｃ）ヒト生殖系列ＶＬ配列の対応する残基への、ＬＣＤＲ－３中の１、２、３、４、５または６個の置換、
（ｄ）ヒト生殖系列ＶＨ配列の対応する残基への、ＨＣＤＲ－１中の１個の置換、
（ｅ）ヒト生殖系列ＶＨ配列の対応する残基への、ＨＣＤＲ－２中の１、２、３、４、５、６、７または８個の置換
のうち１つ以上を含む、Ｅ１からＥ２６のいずれか１つに記載の方法であって、ヒト生殖系列ＶＬ配列が、ＩＧＫＶ１－１２＊０１、ＩＧＫＶ１－１３＊０２、ＩＧＫＶ１－３３＊０１、ＩＧＫＶ１－３９＊０１、ＩＧＫＶ１－５＊０１、ＩＧＫＶ３－１１＊０１、ＩＧＫＶ３－１５＊０１、ＩＧＫＶ３－２０＊０１、ＩＧＫＶ３Ｄ－２０＊０２およびＩＧＫＶ４－１＊０１からなる群から選択され、ヒト生殖系列ＶＨが、ＩＧＨＶ１－２＊０２、ＩＧＨＶ１－３＊０１、ＩＧＨＶ１－４６＊０１、ＩＧＨＶ１－６９＊０１、ＩＧＨＶ１－６９＊０２、ＩＧＨＶ１－８＊０１、ＩＧＨＶ３－１３＊０１、ＩＧＨＶ３－２３＊０１、ＩＧＨＶ３－２３＊０４、ＩＧＨＶ３－３０＊０１、ＩＧＨＶ３－３０＊１８、ＩＧＨＶ５－１０－１＊０１、ＩＧＨＶ５－１０－１＊０４およびＩＧＨＶ５－５１＊０１からなる群から選択される、方法。
（ａ）ヒト生殖系列ＶＬ配列の対応する残基への、ＬＣＤＲ－１中の１、２、３、４、５または６個の置換、
（ｂ）ヒトＶＬ生殖系列配列の対応する残基への、ＬＣＤＲ－２中の１、２、３、４または５個の置換、
（ｃ）ヒト生殖系列ＶＬ配列の対応する残基への、ＬＣＤＲ－３中の１、２、３、４、５または６個の置換、
（ｄ）ヒト生殖系列ＶＨ配列の対応する残基への、ＨＣＤＲ－１中の１個の置換、
（ｅ）ヒト生殖系列ＶＨ配列の対応する残基への、ＨＣＤＲ－２中の１、２、３、４、５、６、７または８個の置換
のうち１つ以上を含む、Ｅ１からＥ２６のいずれか１つに記載の方法であって、ヒト生殖系列ＶＬ配列が、ＩＧＫＶ１－１２＊０１、ＩＧＫＶ１－１３＊０２、ＩＧＫＶ１－３３＊０１、ＩＧＫＶ１－３９＊０１、ＩＧＫＶ１－５＊０１、ＩＧＫＶ３－１１＊０１、ＩＧＫＶ３－１５＊０１、ＩＧＫＶ３－２０＊０１、ＩＧＫＶ３Ｄ－２０＊０２およびＩＧＫＶ４－１＊０１からなる群から選択され、ヒト生殖系列ＶＨが、ＩＧＨＶ１－２＊０２、ＩＧＨＶ１－３＊０１、ＩＧＨＶ１－４６＊０１、ＩＧＨＶ１－６９＊０１、ＩＧＨＶ１－６９＊０２、ＩＧＨＶ１－８＊０１、ＩＧＨＶ３－１３＊０１、ＩＧＨＶ３－２３＊０１、ＩＧＨＶ３－２３＊０４、ＩＧＨＶ３－３０＊０１、ＩＧＨＶ３－３０＊１８、ＩＧＨＶ５－１０－１＊０１、ＩＧＨＶ５－１０－１＊０４およびＩＧＨＶ５－５１＊０１からなる群から選択される、方法。
【0273】
Ｅ２８．抗体またはその抗原結合性断片が、ＩＧＨＶ１－２＊０２、ＩＧＨＶ１－３＊０１、ＩＧＨＶ１－４６＊０１、ＩＧＨＶ１－６９＊０１、ＩＧＨＶ１－６９＊０２、ＩＧＨＶ１－８＊０１、ＩＧＨＶ３－１３＊０１、ＩＧＨＶ３－２３＊０１、ＩＧＨＶ３－２３＊０４、ＩＧＨＶ３－３０＊０１、ＩＧＨＶ３－３０＊１８、ＩＧＨＶ５－１０－１＊０１、ＩＧＨＶ５－１０－１＊０４およびＩＧＨＶ５－５１＊０１からなる群から選択されるヒト生殖系列ＶＨ配列に由来するＶＨフレームワーク配列を含む、Ｅ１からＥ２７のいずれか１つに記載の方法。
【0274】
Ｅ２９．抗体またはその抗原結合性断片が、ＩＧＨＶ１－６９＊０１ ＶＨフレームワーク配列を含む、Ｅ１からＥ２８のいずれか１つに記載の方法。
【0275】
Ｅ３０．抗体またはその抗原結合性断片が、ＩＧＫＶ１－１２＊０１、ＩＧＫＶ１－１３＊０２、ＩＧＫＶ１－３３＊０１、ＩＧＫＶ１－３９＊０１、ＩＧＫＶ１－５＊０１、ＩＧＫＶ３－１１＊０１、ＩＧＫＶ３－１５＊０１、ＩＧＫＶ３－２０＊０１、ＩＧＫＶ３Ｄ－２０＊０２およびＩＧＫＶ４－１＊０１からなる群から選択されるヒト生殖系列ＶＬ配列に由来するＶＬフレームワーク配列を含む、Ｅ１からＥ２９のいずれか１つに記載の方法。
【0276】
Ｅ３１．抗体またはその抗原結合性断片が、ＩＧＫＶ３－１１＊０１ ＶＬフレームワーク配列を含む、Ｅ１からＥ３０のいずれか１つに記載の方法。
【0277】
Ｅ３２．抗体またはその抗原結合性断片が、ＶＬフレームワーク配列およびＶＨフレームワーク配列を含み、ＶＬフレームワーク配列が、それが由来したヒト生殖系列配列に対して少なくとも７２％同一である、Ｅ１からＥ３１のいずれか１つに記載の方法。
【0278】
Ｅ３３．抗体またはその抗原結合性断片が、ＶＬフレームワーク配列およびＶＨフレームワーク配列を含み、ＶＬフレームワーク配列が、それが由来したヒト生殖系列配列に対して少なくとも７２％、７４％、７５％、７７％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一である、Ｅ１からＥ３２のいずれか１つに記載の方法。
【0279】
Ｅ３４．抗体またはその抗原結合性断片が、ＶＬフレームワーク配列およびＶＨフレームワーク配列を含み、ＶＨフレームワーク配列が、それが由来したヒト生殖系列配列に対して少なくとも５３％同一である、Ｅ１からＥ３３のいずれか１つに記載の方法。
【0280】
Ｅ３５．抗体またはその抗原結合性断片が、ＶＬフレームワーク配列およびＶＨフレームワーク配列を含み、ＶＨフレームワーク配列が、それが由来したヒト生殖系列配列に対して少なくとも５３％、５８％、６０％、６３％、７１％、７２％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一である、Ｅ１からＥ３４のいずれか１つに記載の方法。
【0281】
Ｅ３６．抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号１６６に対して少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含むＶＨを含む、Ｅ１からＥ３５のいずれか１つに記載の方法。
【0282】
Ｅ３７．抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号１６６に対して少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一なアミノ酸配列を含むＶＨを含む、Ｅ１からＥ３６のいずれか１つに記載の方法。
【0283】
Ｅ３８．抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号１６６のアミノ酸配列を含むＶＨを含む、Ｅ１からＥ３７のいずれか１つに記載の方法。
【0284】
Ｅ３９．抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号１６３に対して少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含むＶＬを含む、Ｅ１からＥ３８のいずれか１つに記載の方法。
【0285】
Ｅ４０．抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号１６３に対して少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一なアミノ酸配列を含むＶＬを含む、Ｅ１からＥ３９のいずれか１つに記載の方法。
【0286】
Ｅ４１．抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、Ｅ１からＥ４０のいずれか１つに記載の方法。
【0287】
Ｅ４２．抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号１６６のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号１６３のＶＬアミノ酸配列を含む、Ｅ１からＥ４１のいずれか１つに記載の方法。
【0288】
Ｅ４３．抗体またはその抗原結合性断片が、Ｆｃドメインを含む、Ｅ１からＥ４２のいずれか１つに記載の方法。
【0289】
Ｅ４４．Ｆｃドメインが、ＩｇＡ（例えば、ＩｇＡ１またはＩｇＡ２）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭまたはＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４）のＦｃドメインである、Ｅ１からＥ４３のいずれか１つに記載の方法。
【0290】
Ｅ４５．Ｆｃドメインが、ＩｇＧのＦｃドメインである、Ｅ４３またはＥ４４に記載の方法。
【0291】
Ｅ４６．ＩｇＧが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４からなる群から選択される、Ｅ４５に記載の方法。
【0292】
Ｅ４７．ＩｇＧがＩｇＧ１である、Ｅ４６に記載の方法。
【0293】
Ｅ４８．抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号１６４に対して少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）を含む、Ｅ１からＥ４７のいずれか１つに記載の方法。
【0294】
Ｅ４９．抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号１６４に対して少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一なアミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）を含む、Ｅ１からＥ４８のいずれか１つに記載の方法。
【0295】
Ｅ５０．抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号１６４のアミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）を含む、Ｅ１からＥ４９のいずれか１つに記載の方法。
【0296】
Ｅ５１．抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号１６２に対して少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含む軽鎖（ＬＣ）を含む、Ｅ１からＥ５０のいずれか１つに記載の方法。
【0297】
Ｅ５２．抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号１６２に対して少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一なアミノ酸配列を含むＬＣを含む、Ｅ１からＥ５１のいずれか１つに記載の方法。
【0298】
Ｅ５３．抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号１６２のアミノ酸配列を含むＬＣを含む、Ｅ１からＥ５２のいずれか１つに記載の方法。
【0299】
Ｅ５４．抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号１６４のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号１６２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、Ｅ１からＥ５３のいずれか１つに記載の方法。
【0300】
Ｅ５５．抗体またはその抗原結合性断片が、ＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ－１２５０３８を有するプラスミドの挿入物によってコードされるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む、Ｅ１からＥ５０のいずれか１つに記載の方法。
【0301】
Ｅ５６．抗体またはその抗原結合性断片が、ＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ－１２５０３９を有するプラスミドの挿入物によってコードされるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む、Ｅ１からＥ５５のいずれか１つに記載の方法。
【0302】
Ｅ５７．抗体またはその抗原結合性断片が、ＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ－１２５０３８を有するプラスミド中の挿入物によってコードされる、Ｅ１からＥ５６のいずれか１つに記載の方法。
【0303】
Ｅ５８．抗体またはその抗原結合性断片が、ＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ－１２５０３９を有するプラスミド中の挿入物によってコードされる、Ｅ１からＥ５７のいずれか１つに記載の方法。
【0304】
Ｅ５９．抗体またはその抗原結合性断片が、ＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ－１２５０３８を有するプラスミド中の挿入物によってコードされるアミノ酸配列、およびＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ－１２５０３９を有するプラスミド中の挿入物によってコードされるアミノ酸配列、を含む、Ｅ１からＥ５８のいずれか１つに記載の方法。
【0305】
Ｅ６０．抗体または抗原結合性断片が、Ｆｃ融合タンパク質、モノボディ（monobody）、マキシボディ（maxibody）、二機能性抗体、ｓｃＦａｂ、ｓｃＦｖ、ペプチボディである、Ｅ１からＥ５９のいずれか１つに記載の方法。
【0306】
Ｅ６１．抗体またはその抗原結合性断片が、約１０ｎＭ、５ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、９００ｐＭ、８００ｐＭ、７００ｐＭ、６００ｐＭ、５００ｐＭ、４００ｐＭ、３００ｐＭ、２５０ｐＭ、２００ｐＭ、１５０ｐＭ、１００ｐＭ、５０ｐＭ、４０ｐＭ、３０ｐＭ、２５ｐＭ、２０ｐＭ、１５ｐＭおよび１０ｐＭからなる群から選択されるおよその値のＫＤまたはその値未満のＫＤで、ヒトＧＤＦ１５に結合する、Ｅ１からＥ６０のいずれか１つに記載の方法。
【0307】
Ｅ６２．抗体またはその抗原結合性断片が、約１０ｎＭ、５ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、９００ｐＭ、８００ｐＭ、７００ｐＭ、６００ｐＭ、５００ｐＭ、４００ｐＭ、３００ｐＭ、２５０ｐＭ、２００ｐＭ、１５０ｐＭ、１００ｐＭ、５０ｐＭ、４０ｐＭ、３０ｐＭ、２５ｐＭ、２０ｐＭ、１５ｐＭ、１３ｐＭ、１０ｐＭおよび９ｐＭからなる群から選択されるおよその値のＫＤまたはその値未満のＫＤで、カニクイザルＧＤＦ１５に結合する、Ｅ１からＥ６１のいずれか１つに記載の方法。
【0308】
Ｅ６３．抗体またはその抗原結合性断片が、約８ｐＭまたは９ｐＭのＫＤでカニクイザルＧＤＦ１５に結合する、Ｅ１からＥ６２のいずれか１つに記載の方法。
【0309】
Ｅ６４．抗体またはその抗原結合性断片が、約８．２８ｐＭのＫＤでカニクイザルＧＤＦ１５に結合する、Ｅ１からＥ６３のいずれか１つに記載の方法。
【0310】
Ｅ６５．抗体またはその抗原結合性断片が、少なくとも約１６日間である、ヒトにおける終末相半減期を有する、Ｅ１からＥ６４のいずれか１つに記載の方法。
【0311】
Ｅ６６．抗体またはその抗原結合性断片が、少なくとも１７日間である、ヒトにおける終末相半減期を有する、Ｅ１からＥ６５のいずれか１つに記載の方法。
【0312】
Ｅ６７．抗体またはその抗原結合性断片が、約－２４未満のｔ－レジトープ（t-regitope）（ｔＲｅｇ）調整済スコアによって示される、予測される免疫原性潜在力を有する、Ｅ１からＥ６６のいずれか１つに記載の方法。
【0313】
Ｅ６８．ｔＲｅｇ調整済スコアによって示される、抗体の予測される免疫原性潜在力が、約－２４、－２６、－２７、－３０、－３２、－３３、－３４、－３５、－３６、－３７、－３８、－３９、－４０、－４１、－４２、－４３、－５０および－５１からなる群から選択されるｔＲｅｇ調整済スコア未満である、Ｅ１からＥ６７のいずれか１つに記載の方法。
【0314】
Ｅ６９．ｔＲｅｇ調整済スコアによって示される、抗体の予測される免疫原性潜在力が、約－２６、－３４、－３６、－４１および－４２からなる群から選択される、Ｅ１からＥ６８のいずれか１つに記載の方法。
【0315】
Ｅ７０．ｔＲｅｇ調整済スコアによって示される、抗体の予測される免疫原性潜在力が、約－４１または－４２である、Ｅ１からＥ６９のいずれか１つに記載の方法。
【0316】
Ｅ７１．抗体またはその抗原結合性断片が、２５℃で測定した場合に、少なくとも約１０センチポアズ（ｃＰ）、少なくとも約１５ｃＰ、少なくとも約２０ｃＰ、少なくとも約４０ｃＰおよび少なくとも約７０ｃＰからなる群から選択される粘度を有する、Ｅ１からＥ７０のいずれか１つに記載の方法。
【0317】
Ｅ７２．抗体または抗原結合性断片が、２５℃で測定した場合に、約２０ｃＰの粘度を有する、Ｅ１からＥ７１のいずれか１つに記載の方法。
【0318】
Ｅ７３．抗体またはその抗原結合性断片が、２５℃で測定した場合に、２０ｃＰの粘度を有する、Ｅ１からＥ７２のいずれか１つに記載の方法。
【0319】
Ｅ７４．マウスＧＤＦ１５への結合と比較した、ヒトＧＤＦ１５への抗体またはその抗原結合性断片のＫＤの比が、約０．０５と約０．１０との間である、Ｅ１からＥ７３のいずれか１つに記載の方法。
【0320】
Ｅ７５．マウスＧＤＦ１５への結合と比較した、ヒトＧＤＦ１５への抗体またはその抗原結合性断片のＫＤの比が、約０．０７である、Ｅ１からＥ７４のいずれか１つに記載の方法。
【0321】
Ｅ７６．マウスＧＤＦ１５への結合と比較した、ヒトＧＤＦ１５への抗体またはその抗原結合性断片のＫＤの比が、０．０７である、Ｅ１からＥ７５のいずれか１つに記載の方法。
【0322】
Ｅ７７．カニクイザルＧＤＦ１５への結合と比較した、ヒトＧＤＦ１５への抗体またはその抗原結合性断片のＫＤの比が、約１．０と約１．５との間である、Ｅ１からＥ７６のいずれか１つに記載の方法。
【0323】
Ｅ７８．カニクイザルＧＤＦ１５への結合と比較した、ヒトＧＤＦ１５への抗体またはその抗原結合性断片のＫＤの比が、約１．２である、Ｅ１からＥ７７のいずれか１つに記載の方法。
【0324】
Ｅ７９．カニクイザルＧＤＦ１５への結合と比較した、ヒトＧＤＦ１５への抗体またはその抗原結合性断片のＫＤの比が、１．２１である、Ｅ１からＥ７８のいずれか１つに記載の方法。
【0325】
Ｅ８０．マウスＧＤＦ１５への結合と比較した、カニクイザルＧＤＦ１５への抗体またはその抗原結合性断片のＫＤの比が、約０．０３と約０．０９との間である、Ｅ１からＥ７９のいずれか１つに記載の方法。
【0326】
Ｅ８１．マウスＧＤＦ１５への結合と比較した、カニクイザルＧＤＦ１５への抗体またはその抗原結合性断片のＫＤの比が、約０．０４と０．０８との間である、Ｅ１からＥ８０のいずれか１つに記載の方法。
【0327】
Ｅ８２．マウスＧＤＦ１５への結合と比較した、カニクイザルＧＤＦ１５への抗体またはその抗原結合性断片のＫＤの比が、０．０５と０．０６との間である、Ｅ１からＥ８１のいずれか１つに記載の方法。
【0328】
Ｅ８３．マウスＧＤＦ１５への結合と比較した、カニクイザルＧＤＦ１５への抗体またはその抗原結合性断片のＫＤの比が、０．０５である、Ｅ１からＥ８２のいずれか１つに記載の方法。
【0329】
Ｅ８４．抗体またはその抗原結合性断片が、示差走査熱量測定によって測定した場合に、約７１℃以上の、融解温度（Ｔｍ１）または抗体のＣＨ２が５０％折り畳まれていない温度で、熱安定性を有する、Ｅ１からＥ８３のいずれか１つに記載の方法。
【0330】
Ｅ８５．抗体が、示差走査熱量測定によって測定した場合に、７１℃と７２℃との間の、融解温度（Ｔｍ１）または抗体のＣＨ２が５０％折り畳まれていない温度で、熱安定性を有する、Ｅ１からＥ８４のいずれか１つに記載の方法。
【0331】
Ｅ８６．抗体またはその抗原結合性断片が、示差走査熱量測定によって測定した場合に、７１℃と７２℃との間の、融解温度（Ｔｍ１）または抗体のＣＨ２が５０％折り畳まれていない温度で、熱安定性を有する、Ｅ１からＥ８５のいずれか１つに記載の方法。
【0332】
Ｅ８７．抗体が、示差走査熱量測定によって測定した場合に、約８０℃以上の、融解温度（Ｔｍ２）または抗体のＦａｂが５０％折り畳まれていない温度で、熱安定性を有する、Ｅ１からＥ８６のいずれか１つに記載の方法。
【0333】
Ｅ８８．抗体が、示差走査熱量測定によって測定した場合に、８０℃と８６℃との間の、融解温度（Ｔｍ２）または抗体のＦａｂが５０％折り畳まれていない温度で、熱安定性を有する、Ｅ１からＥ８７のいずれか１つに記載の方法。
【0334】
Ｅ８９．抗体が、示差走査熱量測定によって測定した場合に、８４℃と８５℃との間の、融解温度（Ｔｍ２）または抗体のＦａｂが５０％折り畳まれていない温度で、熱安定性を有する、Ｅ１からＥ８８のいずれか１つに記載の方法。
【0335】
Ｅ９０．抗体が、示差走査熱量測定によって測定した場合に、約８２℃以上の、融解温度（Ｔｍ３）または抗体のＣＨ３が５０％折り畳まれていない温度で、熱安定性を有する、Ｅ１からＥ８９のいずれか１つに記載の方法。
【0336】
Ｅ９１．抗体が、示差走査熱量測定によって測定した場合に、８３℃と９１℃との間の、融解温度（Ｔｍ３）または抗体のＣＨ３が５０％折り畳まれていない温度で、熱安定性を有する、Ｅ１からＥ９０のいずれか１つに記載の方法。
【0337】
Ｅ９２．抗体が、示差走査熱量測定によって測定した場合に、８７℃と８９℃との間の、融解温度（Ｔｍ３）または抗体のＣＨ３が５０％折り畳まれていない温度で、熱安定性を有する、Ｅ１からＥ９１のいずれか１つに記載の方法。
【0338】
Ｅ９３．抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号１６７の核酸配列、配列番号１６８の核酸配列、またはそれら両方を含む核酸分子によってコードされる、Ｅ１からＥ９２のいずれか１つに記載の方法。
【0339】
Ｅ９４．抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号１６９の核酸配列、配列番号１７０の核酸配列、またはそれら両方を含む核酸分子によってコードされる、Ｅ１からＥ９３のいずれか１つに記載の方法。
【0340】
Ｅ９５．抗体またはその抗原結合性断片が、ＡＴＣＣに寄託され、アクセッション番号ＰＴＡ－１２５０３８を有するプラスミドの挿入物の核酸配列を含む核酸分子によってコードされる、Ｅ１からＥ９４のいずれか１つに記載の方法。
【0341】
Ｅ９６．抗体またはその抗原結合性断片が、ＡＴＣＣに寄託され、アクセッション番号ＰＴＡ－１２５０３９を有するプラスミドの挿入物の核酸配列を含む核酸分子によってコードされる、Ｅ１からＥ９５のいずれか１つに記載の方法。
【0342】
Ｅ９７．抗体またはその抗原結合性断片が、ＡＴＣＣに寄託され、アクセッション番号ＰＴＡ－１２５０３８を有するプラスミドの挿入物の核酸配列、およびＡＴＣＣに寄託され、アクセッション番号ＰＴＡ－１２５０３９を有するプラスミドの挿入物の核酸配列、を含む核酸分子によってコードされる、Ｅ１からＥ９６のいずれか１つに記載の方法。
【0343】
Ｅ９８．対象がヒトである、Ｅ１からＥ９７のいずれか１つに記載の方法。
【0344】
Ｅ９９．抗体またはその抗原結合性断片が、皮下投与される、Ｅ１からＥ９８のいずれか１つに記載の方法。
【0345】
Ｅ１００．抗体またはその抗原結合性断片が、静脈内投与される、Ｅ１からＥ９９のいずれか１つに記載の方法。
【0346】
Ｅ１０１．抗体またはその抗原結合性断片が、約１週間に２回、１週間に１回、２週間毎に１回、３週間毎に１回、４週間毎に１回、５週間毎に１回、６週間毎に１回、７週間毎に１回、８週間毎に１回、９週間毎に１回、１０週間毎に１回、１カ月に２回、１カ月に１回、２カ月毎に１回、３カ月毎に１回、または４カ月毎に１回、５カ月毎に１回、６カ月毎に１回、７カ月毎に１回、８カ月毎に１回、９カ月毎に１回、１０カ月毎に１回、１１カ月毎に１回または１２カ月毎に１回投与される、Ｅ１からＥ１００のいずれか１つに記載の方法。
【0347】
Ｅ１０２．抗体またはその抗原結合性断片が、約０．１ｍｇと約１０００ｍｇとの間の用量で、１週間に１回投与される、Ｅ１からＥ１０１のいずれか１つに記載の方法。
【0348】
Ｅ１０３．抗体またはその抗原結合性断片が、約１ｍｇと約５００ｍｇとの間の用量で、１週間に１回投与される、Ｅ１からＥ１０２のいずれか１つに記載の方法。
【0349】
Ｅ１０４．抗体またはその抗原結合性断片が、約１０ｍｇ、約２０ｍｇ、約３０ｍｇ、約４０ｍｇ、約５０ｍｇ、約６０ｍｇ、約７０ｍｇ、約８０ｍｇ、約９０ｍｇ、約１００ｍｇ、約１２５ｍｇ、約１５０ｍｇ、約１７５ｍｇ、約２００ｍｇ、約２５０ｍｇ、約３００ｍｇ、約３５０ｍｇ、約４００ｍｇおよび約５００ｍｇからなる群から選択される用量で、１週間に１回投与される、Ｅ１からＥ１０３のいずれか１つに記載の方法。
【0350】
Ｅ１０５．抗体またはその抗原結合性断片が、約０．１ｍｇと約５００ｍｇとの間の用量で、２週間毎に１回投与される、Ｅ１からＥ１０４のいずれか１つに記載の方法。
【0351】
Ｅ１０６．抗体またはその抗原結合性断片が、約１０ｍｇと約２５０ｍｇとの間の用量で、２週間毎に１回投与される、Ｅ１からＥ１０５のいずれか１つに記載の方法。
【0352】
Ｅ１０７．抗体またはその抗原結合性断片が、約５ｍｇ、約１２ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約４０ｍｇ、約６０ｍｇ、約９０ｍｇ、約１２５ｍｇ、約１５０ｍｇ、約１７５ｍｇ、約２００ｍｇ、約２５０ｍｇ、約３００ｍｇ、約３５０ｍｇ、約４００ｍｇ、約４５０ｍｇおよび約５００ｍｇからなる群から選択される用量で、２週間毎に１回投与される、Ｅ１からＥ１０６のいずれか１つに記載の方法。
【0353】
Ｅ１０８．抗体またはその抗原結合性断片が、約０．１ｍｇと約５００ｍｇとの間の用量で、４週間毎に１回投与される、Ｅ１からＥ１２３のいずれか１つに記載の方法。
【0354】
Ｅ１０９．抗体またはその抗原結合性断片が、約１０ｍｇと約５００ｍｇとの間の用量で、４週間毎に１回投与される、Ｅ１からＥ１０８のいずれか１つに記載の方法。
【0355】
Ｅ１１０．抗体またはその抗原結合性断片が、約１５ｍｇ、約４０ｍｇ、約６０ｍｇ、約７５ｍｇ、約１００ｍｇ、約１１５ｍｇ、約２００ｍｇ、約３００ｍｇ、約３５０ｍｇ、約４００ｍｇ、約４５０ｍｇおよび約５００ｍｇからなる群から選択される用量で、４週間毎に１回投与される、Ｅ１からＥ１０９のいずれか１つに記載の方法。
【0356】
Ｅ１１１．原発性ミトコンドリア筋症を予防、寛解および／または処置する方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量の、
（ａ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ－１；
（ｂ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ－２；
（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ－３；
（ｄ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ－１；
（ｅ）配列番号１６５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ－２；および
（ｆ）配列番号５２のａａ配列を含むＨＣＤＲ－３
を含む抗体またはその抗原結合性断片を投与するステップを含む、方法。
（ａ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ－１；
（ｂ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ－２；
（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ－３；
（ｄ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ－１；
（ｅ）配列番号１６５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ－２；および
（ｆ）配列番号５２のａａ配列を含むＨＣＤＲ－３
を含む抗体またはその抗原結合性断片を投与するステップを含む、方法。
【0357】
Ｅ１１２．原発性ミトコンドリア筋症を処置する方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量の、
（ａ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ－１；
（ｂ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ－２；
（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ－３；
（ｄ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ－１；
（ｅ）配列番号１６５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ－２；および
（ｆ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ－３
を含む抗体またはその抗原結合性断片を投与するステップを含む、方法。
（ａ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ－１；
（ｂ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ－２；
（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ－３；
（ｄ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ－１；
（ｅ）配列番号１６５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ－２；および
（ｆ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ－３
を含む抗体またはその抗原結合性断片を投与するステップを含む、方法。
【0358】
Ｅ１１３．原発性ミトコンドリア筋症を処置する方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量の、
（ａ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ－１；
（ｂ）配列番号２８のａａ配列を含むＬＣＤＲ－２；
（ｃ）配列番号９のａａ配列を含むＬＣＤＲ－３；
（ｄ）配列番号３２のａａ配列を含むＨＣＤＲ－１；
（ｅ）配列番号１６５のａａ配列を含むＨＣＤＲ－２；および
（ｆ）配列番号５２のａａ配列を含むＨＣＤＲ－３
を含む抗体またはその抗原結合性断片を投与するステップを含み、抗体の投与が、投与前と比較して、対象において肉体的疲労、筋力低下および／または運動耐容能における改善を生じる、方法。
（ａ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ－１；
（ｂ）配列番号２８のａａ配列を含むＬＣＤＲ－２；
（ｃ）配列番号９のａａ配列を含むＬＣＤＲ－３；
（ｄ）配列番号３２のａａ配列を含むＨＣＤＲ－１；
（ｅ）配列番号１６５のａａ配列を含むＨＣＤＲ－２；および
（ｆ）配列番号５２のａａ配列を含むＨＣＤＲ－３
を含む抗体またはその抗原結合性断片を投与するステップを含み、抗体の投与が、投与前と比較して、対象において肉体的疲労、筋力低下および／または運動耐容能における改善を生じる、方法。
【0359】
Ｅ１１４．抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号１６６のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、Ｅ１１１からＥ１１３のいずれか１つに記載の方法。
【0360】
Ｅ１１５．抗体が、配列番号１６４のアミノ酸配列を含むＨＣおよび配列番号１６２のアミノ酸配列を含むＬＣを含む、Ｅ１１１からＥ１１４のいずれか１つに記載の方法。
【0361】
Ｅ１１６．先行する実施形態のいずれか１つに記載の本発明の方法における、ＧＤＦ１５に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片の使用。
【0362】
Ｅ１１７．先行する実施形態のいずれか１つに記載の使用のための、ＧＤＦ１５に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片。
【0363】
Ｅ１１８．先行する実施形態のいずれか１つに記載の方法における使用のための医薬の製造における、ＧＤＦ１５に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片。
【0364】
Ｅ１１９．原発性ミトコンドリア筋症の予防、寛解および／または処置における使用のための、ＧＤＦ１５に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片であって、
（ａ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ－１；
（ｂ）配列番号２８のａａ配列を含むＬＣＤＲ－２；
（ｃ）配列番号９のａａ配列を含むＬＣＤＲ－３；
（ｄ）配列番号３２のａａ配列を含むＨＣＤＲ－１；
（ｅ）配列番号１６５のａａ配列を含むＨＣＤＲ－２；および
（ｆ）配列番号５２のａａ配列を含むＨＣＤＲ－３
を含む、抗体またはその抗原結合性断片。
（ａ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ－１；
（ｂ）配列番号２８のａａ配列を含むＬＣＤＲ－２；
（ｃ）配列番号９のａａ配列を含むＬＣＤＲ－３；
（ｄ）配列番号３２のａａ配列を含むＨＣＤＲ－１；
（ｅ）配列番号１６５のａａ配列を含むＨＣＤＲ－２；および
（ｆ）配列番号５２のａａ配列を含むＨＣＤＲ－３
を含む、抗体またはその抗原結合性断片。
【0365】
Ｅ１２０．配列番号１６６のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、Ｅ１１９に記載の、使用のための抗体またはその抗原結合性断片。
【0366】
Ｅ１２１．配列番号１６４のアミノ酸配列を含むＨＣおよび配列番号１６２のアミノ酸配列を含むＬＣを含む、Ｅ１１９からＥ１２０に記載の、使用のための抗体またはその抗原結合性断片。
【0367】
等価物
上述の説明および以下の実施例は、本開示のある特定の具体的な実施形態を詳述し、本発明者らによって企図される最良の形態を記載する。しかし、上述がテキスト中に出現し得ることがどんなに詳述されても、本開示が多くの方法で実施され得、本開示が添付の特許請求の範囲およびその任意の等価物に従って実施されるべきであることが、理解される。
上述の説明および以下の実施例は、本開示のある特定の具体的な実施形態を詳述し、本発明者らによって企図される最良の形態を記載する。しかし、上述がテキスト中に出現し得ることがどんなに詳述されても、本開示が多くの方法で実施され得、本開示が添付の特許請求の範囲およびその任意の等価物に従って実施されるべきであることが、理解される。
【0368】
開示された教示は、種々の適用、方法、キットおよび組成物に関して記載されてきたが、種々の変化および改変が、本明細書の教示および以下の特許請求される開示から逸脱することなしになされ得ることが理解される。以下の実施例は、開示された教示をよりよく説明するために提供されるのであって、本明細書に提示された教示の範囲を限定することを意図しない。本明細書の教示は、これらの例示的な実施形態に関して記載されてきたが、当業者は、これらの例示的な実施形態の多数のバリエーションおよび改変が過度の実験なしに可能であることを容易に理解する。全てのかかるバリエーションおよび改変は、本明細書の教示の範囲内である。
【0369】
特許、特許出願、論文、教科書などを含む、本明細書で引用される全ての参考文献、ならびにまだ引用されていない範囲までその中で引用される参考文献は、それらの全体が本明細書で参照によって組み込まれる。組み込まれた文献および類似の資料のうち１つ以上が、定義された用語、用語の用法、記載された技術などが含まれるがこれらに限定されない本出願とは異なるまたはそれと矛盾する場合、本出願が支配する。
【0370】
一般技術
本発明は、当然変動し得る、それを作製する特定の合成方法に限定されないことを理解すべきである。本明細書で他に定義されない限り、本発明と併せて使用される科学用語および技術用語は、当業者が一般に理解する意味を有するものとする。さらに、文脈が他を要求しない限り、単数形の用語は、複数を含むものとし、複数形の用語は、単数形を含むものとする。一般に、本明細書に記載される細胞および組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学ならびにタンパク質および核酸化学、ならびにハイブリダイゼーションと併せて使用される術語体系、ならびにそれらの技術は、当該分野で周知かつ一般に使用されるものである。
本発明は、当然変動し得る、それを作製する特定の合成方法に限定されないことを理解すべきである。本明細書で他に定義されない限り、本発明と併せて使用される科学用語および技術用語は、当業者が一般に理解する意味を有するものとする。さらに、文脈が他を要求しない限り、単数形の用語は、複数を含むものとし、複数形の用語は、単数形を含むものとする。一般に、本明細書に記載される細胞および組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学ならびにタンパク質および核酸化学、ならびにハイブリダイゼーションと併せて使用される術語体系、ならびにそれらの技術は、当該分野で周知かつ一般に使用されるものである。
【0371】
本発明の実施は、他に示されない限り、当業者の技術範囲内にある分子生物学（組換え技術を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学および免疫学の従来技術を使用する。かかる技術は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第２版（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９）Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ編、１９８４）；Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｎｏｔｅｂｏｏｋ（Ｊ．Ｅ．Ｃｅｌｌｉｓ編、１９９８）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ編、１９８７）；Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｊ．Ｐ．ＭａｔｈｅｒおよびＰ．Ｅ．Ｒｏｂｅｒｔｓ、１９９８）Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ（Ａ．Ｄｏｙｌｅ、Ｊ．Ｂ．ＧｒｉｆｆｉｔｈｓおよびＤ．Ｇ．Ｎｅｗｅｌｌ編、１９９３～１９９８）Ｊ．Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ；Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）；Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｄ．Ｍ．ＷｅｉｒおよびＣ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ編）；Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｍ．ＭｉｌｌｅｒおよびＭ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ編、１９８７）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら編、１９８７）；ＰＣＲ：Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ（Ｍｕｌｌｉｓら編、１９９４）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎら編、１９９１）；ＳａｍｂｒｏｏｋおよびＲｕｓｓｅｌｌ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第３版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ（２００１）；Ａｕｓｕｂｅｌら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、ＮＹ（２００２）；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ（１９９８）；Ｃｏｌｉｇａｎら、Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、ＮＹ（２００３）；Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、１９９９）；Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｃ．Ａ．ＪａｎｅｗａｙおよびＰ．Ｔｒａｖｅｒｓ、１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｐ．Ｆｉｎｃｈ、１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｄ．Ｃａｔｔｙ．編、ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ、１９８８～１９８９）；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐ．ＳｈｅｐｈｅｒｄおよびＣ．Ｄｅａｎ編、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、２０００）；Ｕｓｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ（Ｅ．ＨａｒｌｏｗおよびＤ．Ｌａｎｅ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、１９９９）；Ｔｈｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｍ．ＺａｎｅｔｔｉおよびＪ．Ｄ．Ｃａｐｒａ編、Ｈａｒｗｏｏｄ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、１９９５）などの文献中で完全に説明されている。
【0372】
酵素反応および精製技術は、当該分野で一般に達成されるように、または本明細書に記載されるように、製造業者の仕様書に従って実施される。本明細書に記載される分析化学、生化学、免疫学、分子生物学、合成有機化学ならびに医薬品化学および薬化学と併せて使用される術語体系、ならびにそれらの実験室手順ならびに技術は、当該分野で周知かつ一般に使用されるものである。標準的な技術が、化学的合成、化学的分析、医薬の調製、製剤および送達、ならびに患者の処置のために使用される。
【0373】
生物学的寄託
本発明の代表的な材料は、２０１８年４月４日に、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、１０８０１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ、Ｍａｎａｓｓａｓ、Ｖａ．２０１１０－２２０９、ＵＳＡに寄託された。ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ－１２５０３８を有するベクターＧＤＦ１５＿００１－ＶＨは、抗体ＧＤＦ１５＿００１の重鎖可変領域をコードするＤＮＡ挿入物を含むプラスミドを含み、ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ－１２５０３９を有するベクターＧＤＦ１５＿００１－ＶＬは、抗体ＧＤＦ１５＿００１の軽鎖可変領域をコードするＤＮＡ挿入物を含むプラスミドを含む。これらの寄託は、特許手続き上の微生物の寄託の国際承認に関するブダペスト条約の条項およびその規則（ブダペスト条約）の規定の下で行われた。これは、寄託の日から３０年間にわたって寄託物の生存可能な培養物の維持を保証する。寄託物は、Ｐｆｉｚｅｒ Ｉｎｃ．とＡＴＣＣとの間での同意を条件として、ブダペスト条約の条項の下でＡＴＣＣによって入手可能にされ、これは、関連する米国特許の発行の際、または任意の米国もしくは外国の特許出願の公衆への公開の際のいずれか早い方の時点における、公衆への寄託物の培養物の子孫の恒久的かつ無制限の入手可能性を保証し、米国特許商標庁長官が米国特許法１２２条およびそれに従う長官規則（特に８８６ ＯＧ ６３８に関連した米国特許規則１．１４を含む）に従って資格ありと決定した者への子孫の入手可能性を保証する。
本発明の代表的な材料は、２０１８年４月４日に、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、１０８０１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ、Ｍａｎａｓｓａｓ、Ｖａ．２０１１０－２２０９、ＵＳＡに寄託された。ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ－１２５０３８を有するベクターＧＤＦ１５＿００１－ＶＨは、抗体ＧＤＦ１５＿００１の重鎖可変領域をコードするＤＮＡ挿入物を含むプラスミドを含み、ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ－１２５０３９を有するベクターＧＤＦ１５＿００１－ＶＬは、抗体ＧＤＦ１５＿００１の軽鎖可変領域をコードするＤＮＡ挿入物を含むプラスミドを含む。これらの寄託は、特許手続き上の微生物の寄託の国際承認に関するブダペスト条約の条項およびその規則（ブダペスト条約）の規定の下で行われた。これは、寄託の日から３０年間にわたって寄託物の生存可能な培養物の維持を保証する。寄託物は、Ｐｆｉｚｅｒ Ｉｎｃ．とＡＴＣＣとの間での同意を条件として、ブダペスト条約の条項の下でＡＴＣＣによって入手可能にされ、これは、関連する米国特許の発行の際、または任意の米国もしくは外国の特許出願の公衆への公開の際のいずれか早い方の時点における、公衆への寄託物の培養物の子孫の恒久的かつ無制限の入手可能性を保証し、米国特許商標庁長官が米国特許法１２２条およびそれに従う長官規則（特に８８６ ＯＧ ６３８に関連した米国特許規則１．１４を含む）に従って資格ありと決定した者への子孫の入手可能性を保証する。
【0374】
本出願の譲受人は、寄託にかかる材料の培養物が、適切な条件下で培養した場合に万一死んだり失われたり破壊されたりしたときには、通知があり次第それらの材料が同一物の別のもので速やかに置き換えられることに同意している。寄託された材料の入手可能性は、その特許法に従って任意の政府の権限の下で与えられた権利に違反して本発明を実施することの許諾として解釈すべきではない。
【実施例】
【0375】
【0376】
本発明の抗ＧＤＦ１５抗体を、それらのアミノ酸配列、およびＣＤＲ領域中の「ホットスポット」（例えば、潜在的なグリコシル化、酸化および化学的分解の部位）の存在に基づいて分析した。抗ＧＤＦ１５抗体のホットスポット配列分析は、以下の表５に示される。ＧＤＦ１５＿００５、ＧＤＦ１５＿００６、ＧＤＦ１５＿００７、ＧＤＦ１５＿００８、ＧＤＦ１５＿００９およびＧＤＦ１５＿２００は、ＣＤＲ領域中のＮ結合型グリコシル化部位の存在を実証し、さらなる研究のためには選択しなかった。
【0377】
【表6-1】
【0378】
【表6-2】
【0379】
（実施例２）
抗ＧＤＦ１５抗体の結合特性：ＳＰＲによる、ヒト、カニクイザルおよびマウスＧＤＦ１５への結合活性
ヒト、カニクイザルおよびマウスＧＤＦ１５に対する抗体ＧＤＦ１５＿００１（配列番号１６６のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＶＬを含む）の結合親和性を、１０Ｈｚの収集速度で３７℃でＢＩＡｃｏｒｅ Ｔ２００機器（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して決定した。マウスＦｃ－ヒトＧＤＦ１５（Ｍｕ ＩｇＧ１Ｆｃ＿Ｆｘａ＿Ｈｕ ＧＤＦ１５；配列番号２）、マウスＦｃ－マウスＧＤＦ１５（Ｍｕ ＩｇＧ１Ｆｃ＿Ｆｘａ＿Ｍｕ ＧＤＦ１５；配列番号５）およびマウスＦｃ－カニクイザルＧＤＦ１５（Ｍｕ ＩｇＧ１Ｆｃ＿Ｆｘａ＿Ｃｙｎｏ ＧＤＦ１５；配列番号４）を、製造業者のプロトコールに従ってＭｏｕｓｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃａｐｔｕｒｅ Ｋｉｔ（ＢＲ１００８３８、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、ＣＭ４センサーチップ（カタログ番号ＢＲ１００５３４、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）表面の３つの異なるフローセル上に捕捉した。ランニングおよびサンプル緩衝液は、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．４、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、０．０５％Ｐ－２０（ＨＢＳ－ＥＰ＋）であった。Ｍｕ ＩｇＧ１Ｆｃ＿Ｆｘａ＿Ｈｕ ＧＤＦ１５、Ｍｕ ＩｇＧ１Ｆｃ＿Ｆｘａ＿Ｍｕ ＧＤＦ１５およびＭｕ ＩｇＧ１Ｆｃ＿Ｆｘａ＿Ｃｙｎｏ ＧＤＦ１５の最終捕捉レベルは、それぞれ、４０レゾナンスユニット（ＲＵ）、３２ＲＵおよび２５ＲＵであった。フローセル１を、参照フローセルとして使用した。１０ｎＭから０．６２５ｎＭまでの範囲の濃度を有するＧＤＦ１５＿００１の２倍希釈シリーズを、１２０秒間にわたってセンサー表面上に注入した。解離を２．８時間にわたってモニタリングし、表面を、１０ｍＭグリシンｐＨ１．７で再生させた。結合親和性および速度定数を、得られたセンサーグラムデータを、ＢＩＡｃｏｒｅ Ｔ２００ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアバージョン２．０（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で１：１ Ｌａｎｇｍｕｉｒモデルにフィットさせることによって、マウスおよびカニクイザルＧＤＦ１５について決定した。親和性値を、以下の表６に示すように決定した。
抗ＧＤＦ１５抗体の結合特性：ＳＰＲによる、ヒト、カニクイザルおよびマウスＧＤＦ１５への結合活性
ヒト、カニクイザルおよびマウスＧＤＦ１５に対する抗体ＧＤＦ１５＿００１（配列番号１６６のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＶＬを含む）の結合親和性を、１０Ｈｚの収集速度で３７℃でＢＩＡｃｏｒｅ Ｔ２００機器（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して決定した。マウスＦｃ－ヒトＧＤＦ１５（Ｍｕ ＩｇＧ１Ｆｃ＿Ｆｘａ＿Ｈｕ ＧＤＦ１５；配列番号２）、マウスＦｃ－マウスＧＤＦ１５（Ｍｕ ＩｇＧ１Ｆｃ＿Ｆｘａ＿Ｍｕ ＧＤＦ１５；配列番号５）およびマウスＦｃ－カニクイザルＧＤＦ１５（Ｍｕ ＩｇＧ１Ｆｃ＿Ｆｘａ＿Ｃｙｎｏ ＧＤＦ１５；配列番号４）を、製造業者のプロトコールに従ってＭｏｕｓｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃａｐｔｕｒｅ Ｋｉｔ（ＢＲ１００８３８、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、ＣＭ４センサーチップ（カタログ番号ＢＲ１００５３４、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）表面の３つの異なるフローセル上に捕捉した。ランニングおよびサンプル緩衝液は、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．４、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、０．０５％Ｐ－２０（ＨＢＳ－ＥＰ＋）であった。Ｍｕ ＩｇＧ１Ｆｃ＿Ｆｘａ＿Ｈｕ ＧＤＦ１５、Ｍｕ ＩｇＧ１Ｆｃ＿Ｆｘａ＿Ｍｕ ＧＤＦ１５およびＭｕ ＩｇＧ１Ｆｃ＿Ｆｘａ＿Ｃｙｎｏ ＧＤＦ１５の最終捕捉レベルは、それぞれ、４０レゾナンスユニット（ＲＵ）、３２ＲＵおよび２５ＲＵであった。フローセル１を、参照フローセルとして使用した。１０ｎＭから０．６２５ｎＭまでの範囲の濃度を有するＧＤＦ１５＿００１の２倍希釈シリーズを、１２０秒間にわたってセンサー表面上に注入した。解離を２．８時間にわたってモニタリングし、表面を、１０ｍＭグリシンｐＨ１．７で再生させた。結合親和性および速度定数を、得られたセンサーグラムデータを、ＢＩＡｃｏｒｅ Ｔ２００ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアバージョン２．０（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で１：１ Ｌａｎｇｍｕｉｒモデルにフィットさせることによって、マウスおよびカニクイザルＧＤＦ１５について決定した。親和性値を、以下の表６に示すように決定した。
【0380】
マウスＦｃ－ヒトＧＤＦ１５に対するＧＤＦ１５結合性抗体のいくつかのクローンの結合親和性もまた、実施例２で本明細書に記載される方法論を使用して決定し、以下の表６に示す。二価フォーマットで試験した全てのクローンは、１５０ｐＭを下回る見かけのＫＤ値を実証し、これは、これらが、ヒトＧＤＦ１５に対する強い結合子であることを示唆している。さらに、カニクイザルおよびマウスＧＤＦ１５へのクローンＧＤＦ１５＿００１の結合を、上で言及したＢＩＡｃｏｒｅアッセイを使用して測定した（表７）。クローンＧＤＦ１５＿００１は、カニクイザルＧＤＦ－１５への強い結合を示し（見かけのＫＤ ８．２８ｐＭ）、マウスＧＤＦ１５への結合を維持し（見かけのＫＤ １４２．３ｐＭ）、このことが、クローンＧＤＦ１５＿００１を、両方の種における前臨床研究にとって適切なものにしている。
【0381】
【表7-1】
【0382】
【表7-2】
【0383】
【表8】
【0384】
（実施例３）
抗ＧＤＦ１５抗体の結合特性：ＳＰＲによる、ヒト、カニクイザルおよびマウスＧＤＦ１５へのモノマー性抗ＧＤＦ１５抗体の結合活性
ＧＤＦ１５へのＧＤＦ１５＿００１結合の、結合力効果（avidity effect）なしのＫＤ値を理解するために、モノマー性Ｆｃ－Ｆａｂを産生し、実施例２で使用したのと同じアッセイにおいて試験した。ヒト、カニクイザルおよびマウスＧＤＦ１５に対するモノマー性ＧＤＦ１５＿００１の結合親和性を、１０Ｈｚの収集速度で３７℃でＢＩＡｃｏｒｅ Ｔ２００機器（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して決定した。Ｍｕ ＩｇＧ１Ｆｃ＿Ｆｘａ＿Ｈｕ ＧＤＦ１５、Ｍｕ ＩｇＧ１Ｆｃ＿Ｆｘａ＿Ｍｕ ＧＤＦ１５およびＭｕ ＩｇＧ１Ｆｃ＿Ｆｘａ＿Ｃｙｎｏ ＧＤＦ１５を、製造業者のプロトコールに従ってＭｏｕｓｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃａｐｔｕｒｅ Ｋｉｔ（ＢＲ１００８３８、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、ＣＭ４センサーチップ（カタログ番号ＢＲ１００５３４、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）表面の３つの異なるフローセル上に捕捉した。ランニングおよびサンプル緩衝液は、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．４、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、０．０５％Ｐ－２０（ＨＢＳ－ＥＰ＋）であった。Ｍｕ ＩｇＧ１Ｆｃ＿Ｆｘａ＿Ｈｕ ＧＤＦ１５、Ｍｕ ＩｇＧ１Ｆｃ＿Ｆｘａ＿Ｍｕ ＧＤＦ１５およびＭｕ ＩｇＧ１Ｆｃ＿Ｆｘａ＿Ｃｙｎｏ ＧＤＦ１５の最終捕捉レベルは、それぞれ、１９レゾナンスユニット（ＲＵ）、２２ＲＵおよび１９ＲＵであった。フローセル１を、参照フローセルとして使用した。１０ｎＭから１．２５ｎＭまでの範囲の濃度を有するモノマー性ＧＤＦ１５＿００の２倍希釈シリーズを、１２０秒間にわたってセンサー表面上に注入した。解離を１２００秒間にわたってモニタリングし、表面を、１０ｍＭグリシンｐＨ１．７で再生させた。結合親和性および速度定数を、得られたセンサーグラムデータを、ＢＩＡｃｏｒｅ Ｔ２００ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアバージョン２．０（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で１：１ Ｌａｎｇｍｕｉｒモデルにフィットさせることによって決定した。モノマー性クローンＧＤＦ１５＿００１は、以下の表８に示すように、マウスＧＤＦ１５へのより弱い結合（ＫＤ １９６５．０ｐＭ）と共に、ヒト（ＫＤ ２１．３ｐＭ）およびカニクイザルＧＤＦ１５（ＫＤ ６２．０ｐＭ）への強い結合を実証した。
抗ＧＤＦ１５抗体の結合特性：ＳＰＲによる、ヒト、カニクイザルおよびマウスＧＤＦ１５へのモノマー性抗ＧＤＦ１５抗体の結合活性
ＧＤＦ１５へのＧＤＦ１５＿００１結合の、結合力効果（avidity effect）なしのＫＤ値を理解するために、モノマー性Ｆｃ－Ｆａｂを産生し、実施例２で使用したのと同じアッセイにおいて試験した。ヒト、カニクイザルおよびマウスＧＤＦ１５に対するモノマー性ＧＤＦ１５＿００１の結合親和性を、１０Ｈｚの収集速度で３７℃でＢＩＡｃｏｒｅ Ｔ２００機器（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して決定した。Ｍｕ ＩｇＧ１Ｆｃ＿Ｆｘａ＿Ｈｕ ＧＤＦ１５、Ｍｕ ＩｇＧ１Ｆｃ＿Ｆｘａ＿Ｍｕ ＧＤＦ１５およびＭｕ ＩｇＧ１Ｆｃ＿Ｆｘａ＿Ｃｙｎｏ ＧＤＦ１５を、製造業者のプロトコールに従ってＭｏｕｓｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃａｐｔｕｒｅ Ｋｉｔ（ＢＲ１００８３８、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、ＣＭ４センサーチップ（カタログ番号ＢＲ１００５３４、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）表面の３つの異なるフローセル上に捕捉した。ランニングおよびサンプル緩衝液は、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．４、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、０．０５％Ｐ－２０（ＨＢＳ－ＥＰ＋）であった。Ｍｕ ＩｇＧ１Ｆｃ＿Ｆｘａ＿Ｈｕ ＧＤＦ１５、Ｍｕ ＩｇＧ１Ｆｃ＿Ｆｘａ＿Ｍｕ ＧＤＦ１５およびＭｕ ＩｇＧ１Ｆｃ＿Ｆｘａ＿Ｃｙｎｏ ＧＤＦ１５の最終捕捉レベルは、それぞれ、１９レゾナンスユニット（ＲＵ）、２２ＲＵおよび１９ＲＵであった。フローセル１を、参照フローセルとして使用した。１０ｎＭから１．２５ｎＭまでの範囲の濃度を有するモノマー性ＧＤＦ１５＿００の２倍希釈シリーズを、１２０秒間にわたってセンサー表面上に注入した。解離を１２００秒間にわたってモニタリングし、表面を、１０ｍＭグリシンｐＨ１．７で再生させた。結合親和性および速度定数を、得られたセンサーグラムデータを、ＢＩＡｃｏｒｅ Ｔ２００ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアバージョン２．０（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で１：１ Ｌａｎｇｍｕｉｒモデルにフィットさせることによって決定した。モノマー性クローンＧＤＦ１５＿００１は、以下の表８に示すように、マウスＧＤＦ１５へのより弱い結合（ＫＤ １９６５．０ｐＭ）と共に、ヒト（ＫＤ ２１．３ｐＭ）およびカニクイザルＧＤＦ１５（ＫＤ ６２．０ｐＭ）への強い結合を実証した。
【0385】
【表9】
【0386】
（実施例４）
抗ＧＤＦ１５抗体の結合特性：ヒトＧＤＦ１５へのＧＤＦ１５＿００１の結合特異性
ヒトＧＤＦ１５へのＧＤＦ１５＿００１の結合特異性を評価するために、さらなるＴＧＦβファミリーメンバーへのＧＤＦ１５＿００１結合を試験した。分析を、Ｏｃｔｅｔ Ｒｅｄ機器で実施した。
抗ＧＤＦ１５抗体の結合特性：ヒトＧＤＦ１５へのＧＤＦ１５＿００１の結合特異性
ヒトＧＤＦ１５へのＧＤＦ１５＿００１の結合特異性を評価するために、さらなるＴＧＦβファミリーメンバーへのＧＤＦ１５＿００１結合を試験した。分析を、Ｏｃｔｅｔ Ｒｅｄ機器で実施した。
【0387】
ＯｃｔｅｔＲＥＤ ３８４（ＦｏｒｔｅＢｉｏ、Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ、ＣＡ）を使用して、ヒトＧＤＮＦ（Ｒ＆Ｄ、２１２－ＧＤ／ＣＦ）、ヒトインヒビンＡ（Ｒ＆Ｄ、８５０６－ＡＢ／ＣＦ）、ヒトアクチビンＢ（Ｒ＆Ｄ、６５９－ＡＢ／ＣＦ）、ヒトＴＧＦβ－１（Ｒ＆Ｄ、２４０－Ｂ／ＣＦ）、ヒトＢＭＰ２（Ｒ＆Ｄ、３５５－ＢＭ／ＣＦ）、ヒトＢＭＰ３ｂ（Ｒ＆Ｄ、１５４３－ＢＰ／ＣＦ）、ヒトＢＭＰ６（Ｒ＆Ｄ、５０７－ＢＰ／ＣＦ）、ヒトＢＭＰ９（Ｒ＆Ｄ、３２０９－ＢＰ／ＣＦ）、ヒトＢＭＰ１１（Ｒ＆Ｄ、１９５８－ＣＤ／ＣＦ）、ヒトＧＤＦ８（Ｐｆｉｚｅｒ、４１０７５－２０１）および対照ヒトＧＤＦ１５（Ｍｕ ＩｇＧ１Ｆｃ＿Ｆｘａ＿Ｈｕ ＧＤＦ１５）を含む１０種のＴＧＦβファミリーメンバーへの、モノマー性ＧＤＦ１５＿００１（ＣＨ２３ＬＳ－ＧＢＴ－ＧＤＦ１５＿００１）のオフターゲット結合を評価した。ＴＧＦβファミリーメンバーを、１０ｍＭ酢酸ナトリウムｐＨ４．５中で１０ｕｇ／ｍｌになるように希釈し、製造業者の指示に従って、ＡＲ２Ｇバイオセンサー（カタログ番号１８－５０９２、ＦｏｒｔｅＢｉｏ）上にアミンカップリングした。モノマー性ＧＤＦ１５＿００１を、キネティクス（kinetics）緩衝液（カタログ番号１８－５０３２ ＦｏｒｔｅＢｉｏ）中で２００ｎＭになるように希釈した。Ｏｃｔｅｔアッセイを、３００秒の会合時間および１８０秒の解離時間で室温で実施した。データを二重参照し（Ｍｙｓｚｋａ，Ｄ．、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔ １９９９；２７９～２８４）、Ｏｃｔｅｔ Ｄａｔａ Ａｎａｌｙｓｉｓソフトウェアバージョン８．１（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）で分析した。
【0388】
ＧＤＦ１５＿００１は、期待通り、ヒトＧＤＦ１５に結合した。他のＴＧＦβファミリーメンバー（ＧＤＦ－１１、ＢＭＰ－９、ＧＤＦ－８、ＢＭＰ－２、ＢＭＰ－６、ＴＧＦβ－１、アクチビン－Ｂ、インヒビン－Ａ）への結合は、２００ｎＭのモノマー性クローンＧＤＦ１５＿００１では検出されず、これは、これらの他の関連のファミリーメンバーには結合しない、ＧＤＦ１５＿００１の高い特異性を実証している。ＧＤＦ１５＿００１の高い特異性は、オフターゲット結合のリスクを最小化し、ＧＤＦ１５＿００１が、潜在的な新規の有用なヒト治療薬であることを示している。
【0389】
（実施例５）
抗ＧＤＦ１５抗体は、ＧＦＲＡＬへのＧＤＦ１５結合を防止する
ＧＦＲＡＬの細胞外ドメインへのヒトＧＤＦ１５結合を防止するＧＤＦ１５＿００１の能力を、競合アッセイによって評価した。分析を、ＢＩＡｃｏｒｅ Ｔ２００機器（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｃｈｉｃａｇｏ、ＩＬ）を使用して実施した。
抗ＧＤＦ１５抗体は、ＧＦＲＡＬへのＧＤＦ１５結合を防止する
ＧＦＲＡＬの細胞外ドメインへのヒトＧＤＦ１５結合を防止するＧＤＦ１５＿００１の能力を、競合アッセイによって評価した。分析を、ＢＩＡｃｏｒｅ Ｔ２００機器（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｃｈｉｃａｇｏ、ＩＬ）を使用して実施した。
【0390】
ＧＤＦ１５＿００１を、１０ｎＭから２．５ｎＭまでの範囲の濃度で、１０ｎＭヒトＧＤＦ－１５中に滴定した。混合物ＧＤＦ－１５、ＧＤＦ１５＿００１および対照を、ＣＭ４センサーチップ上に直接固定化したヒトＧＦＲＡＬの細胞外ドメイン上に注入した。ＧＦＲＡＬへのヒトＧＤＦ１５結合の濃度依存的阻害が観察された。ヒトＧＦＲＡＬ ＥＣＤへのヒトＧＤＦ１５の結合は、７．５ｎＭ ＧＤＦ１５＿００１によって完全に遮断された。
【0391】
これらのデータは、ＧＤＦ１５＿００１が、ヒトＧＤＦ１５とその同族受容体ＧＦＲＡＬとの間の相互作用を遮断し、それによって、ＧＦＲＡＬシグナル伝達を妨害できることを実証している。これは、ＧＤＦ１５＿００１が、ＧＦＲＡＬへのＧＤＦ１５結合によって媒介される活性を減少させるための新規の潜在的に有用な治療薬であり得ることをさらに実証している。
【0392】
（実施例６）
抗ＧＤＦ１５抗体の生物物理学的特性：熱安定性
抗ＧＤＦ１５抗体の熱安定性を、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）によって評価した。タンパク質を、リン酸緩衝溶液（ＰＢＳ）中に、４００μｌの体積中０．３ｍｇ／ｍｌになるように希釈した。ＰＢＳを、参照セルにおいて緩衝液ブランクとして使用した。ＰＢＳは、１３７ｍＭ ＮａＣｌ、２．７ｍＭ ＫＣｌ、８．１ｍＭ Ｎａ２ＨＰＯ４および１．４７ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４、ｐＨ７．２を含んだ。サンプルを、Ａｕｔｏｓａｍｐｌｅｒ（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｌｔｄ、Ｍａｌｖｅｒｎ、ＵＫ）を用いて、ＭｉｃｒｏＣａｌ ＶＰ－Ｃａｐｉｌｌａｒｙ ＤＳＣのサンプルトレイ中に分配した。サンプルを、１０℃で５分間平衡化し、次いで、１時間当たり１００℃の速度で、１１０℃までスキャンした。１６秒間のフィルタリング期間を選択した。生データをベースライン補正し、タンパク質濃度を標準化した。Ｏｒｉｇｉｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅ ７．０（ＯｒｉｇｉｎＬａｂ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｎｏｒｔｈａｍｐｔｏｎ、ＭＡ）を使用して、データを、適切な数の遷移を有するＭＮ２－Ｓｔａｔｅ Ｍｏｄｅｌにフィットさせた。
抗ＧＤＦ１５抗体の生物物理学的特性：熱安定性
抗ＧＤＦ１５抗体の熱安定性を、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）によって評価した。タンパク質を、リン酸緩衝溶液（ＰＢＳ）中に、４００μｌの体積中０．３ｍｇ／ｍｌになるように希釈した。ＰＢＳを、参照セルにおいて緩衝液ブランクとして使用した。ＰＢＳは、１３７ｍＭ ＮａＣｌ、２．７ｍＭ ＫＣｌ、８．１ｍＭ Ｎａ２ＨＰＯ４および１．４７ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４、ｐＨ７．２を含んだ。サンプルを、Ａｕｔｏｓａｍｐｌｅｒ（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｌｔｄ、Ｍａｌｖｅｒｎ、ＵＫ）を用いて、ＭｉｃｒｏＣａｌ ＶＰ－Ｃａｐｉｌｌａｒｙ ＤＳＣのサンプルトレイ中に分配した。サンプルを、１０℃で５分間平衡化し、次いで、１時間当たり１００℃の速度で、１１０℃までスキャンした。１６秒間のフィルタリング期間を選択した。生データをベースライン補正し、タンパク質濃度を標準化した。Ｏｒｉｇｉｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅ ７．０（ＯｒｉｇｉｎＬａｂ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｎｏｒｔｈａｍｐｔｏｎ、ＭＡ）を使用して、データを、適切な数の遷移を有するＭＮ２－Ｓｔａｔｅ Ｍｏｄｅｌにフィットさせた。
【0393】
遷移温度は、図１Ａ、１Ｂおよび１Ｃに示され、表９に列挙される。Ｔｍ１は、抗体のＣＨ２が５０％折り畳まれていない温度を示す。Ｔｍ２は、抗体のＦａｂが５０％折り畳まれていない温度を示す。Ｔｍ３は、抗体のＣＨ３が５０％折り畳まれていない温度を示す。６５℃を超える融解温度（Ｔｍ１）を有する全てのクローンは、安定なクローンとして設計され、これは、製造および貯蔵の間、安定である。
【0394】
【表10】
【0395】
（実施例７）
抗ＧＤＦ１５抗体の生物物理学的特性：サイズ排除クロマトグラフィー
抗体クローンを、分析的サイズ排除クロマトグラフィー（ａＳＥＣ）によって分析した。タンパク質を、リン酸緩衝溶液（ＰＢＳ）中に１．０ｍｇ／ｍｌになるように希釈し、２０ｍＭリン酸ナトリウムｐＨ７．２、４００ｍＭ ＮａＣｌを含むアイソクラチックランニング緩衝液を用いたＹＭＣ－Ｐａｃｋ Ｄｉｏｌ－２００、３００×８ｍｍカラム上でのａＳＥＣによって分析した。ネイティブＳＥＣを使用して、高分子量（凝集体）およびモノマー性のインタクトな抗体の相対的な量を決定した。パーセント凝集体を、総（凝集体およびモノマー）ピーク面積によって除算し、１００を乗算した、高分子量のピーク面積として計算した。分での保持時間を記録し、アッセイ対照と比較した。ａＳＥＣ分析からの、標準の保持時間およびピーク形状を有する抗体クローンは、固定相樹脂との最小の相互作用および最適な疎水性を示唆し得、これらは、有用な特徴であり、抗体が、潜在的な有用な治療薬であり得ることを示している。
抗ＧＤＦ１５抗体の生物物理学的特性：サイズ排除クロマトグラフィー
抗体クローンを、分析的サイズ排除クロマトグラフィー（ａＳＥＣ）によって分析した。タンパク質を、リン酸緩衝溶液（ＰＢＳ）中に１．０ｍｇ／ｍｌになるように希釈し、２０ｍＭリン酸ナトリウムｐＨ７．２、４００ｍＭ ＮａＣｌを含むアイソクラチックランニング緩衝液を用いたＹＭＣ－Ｐａｃｋ Ｄｉｏｌ－２００、３００×８ｍｍカラム上でのａＳＥＣによって分析した。ネイティブＳＥＣを使用して、高分子量（凝集体）およびモノマー性のインタクトな抗体の相対的な量を決定した。パーセント凝集体を、総（凝集体およびモノマー）ピーク面積によって除算し、１００を乗算した、高分子量のピーク面積として計算した。分での保持時間を記録し、アッセイ対照と比較した。ａＳＥＣ分析からの、標準の保持時間およびピーク形状を有する抗体クローンは、固定相樹脂との最小の相互作用および最適な疎水性を示唆し得、これらは、有用な特徴であり、抗体が、潜在的な有用な治療薬であり得ることを示している。
【0396】
試験した各抗体クローンについての保持時間を、表１０に示す。ＧＤＦ１５＿００２は、遅延された保持時間および広いピーク形状を示し、したがって、さらには研究しなかった。
【0397】
【表11】
【0398】
（実施例８）
抗ＧＤＦ１５抗体の生物物理学的特性：低ｐＨにおける安定性
抗体はプロテインＡ捕捉によって精製され、溶出は低ｐＨ条件であるので、抗ＧＤＦ１５抗体クローンを、低ｐＨ維持安定性について試験した。ＰＢＳ、ｐＨ７．２中１．０ｍｇ／ｍｌの抗体を、グリシンｐＨ３．４で酸性化し、２５℃で５時間インキュベートし、次いで、Ｔｒｉｓ塩基で中和し、ａＳＥＣ上に流して、高分子量種（ＨＭＭＳ）および低分子量種（ＬＭＭＳ）の量を決定した、表１１。試験した全てのクローンは、低ｐＨチャレンジ後に、ＨＭＭＳの許容できる量の増加（＜５％）を示す。これは、抗ＧＤＦ１５抗体が、精製プロセスの間安定のままであり、潜在的に有用な治療薬であり得ることを示している。
抗ＧＤＦ１５抗体の生物物理学的特性：低ｐＨにおける安定性
抗体はプロテインＡ捕捉によって精製され、溶出は低ｐＨ条件であるので、抗ＧＤＦ１５抗体クローンを、低ｐＨ維持安定性について試験した。ＰＢＳ、ｐＨ７．２中１．０ｍｇ／ｍｌの抗体を、グリシンｐＨ３．４で酸性化し、２５℃で５時間インキュベートし、次いで、Ｔｒｉｓ塩基で中和し、ａＳＥＣ上に流して、高分子量種（ＨＭＭＳ）および低分子量種（ＬＭＭＳ）の量を決定した、表１１。試験した全てのクローンは、低ｐＨチャレンジ後に、ＨＭＭＳの許容できる量の増加（＜５％）を示す。これは、抗ＧＤＦ１５抗体が、精製プロセスの間安定のままであり、潜在的に有用な治療薬であり得ることを示している。
【0399】
【表12】
【0400】
（実施例９）
抗ＧＤＦ１５抗体の生物物理学的特性：粘度
ＧＤＦ１５＿００１の粘度を、Ａｎｔｏｎ Ｐａａｒ機器によって分析した。ＧＤＦ１５＿００１を、３０ｋＤａ分子量カットオフＡｍｉｃｏｎ遠心濾過ユニット（ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ、ＭＡ）を使用して、２１５ｍｇ／ｍＬに濃縮した。４６～１７８ｍｇ／ｍＬの範囲の一連の希釈を、２０ｍＭヒスチジン、８５ｇ／Ｌスクロース、０．０５ｍｇ／ｍｌ ＥＤＴＡ ｐＨ５．８緩衝液を希釈剤として用いて調製した。タンパク質濃度を、ＳｏｌｏＶＰＥ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｐａｔｈｌｅｎｇｔｈ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｃ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ、Ｂｒｉｄｇｅｗａｔｅｒ、ＮＪ）での２８０ｎｍ分析によって決定した。粘度測定を、２５℃で１５０ｒｐｍの一定の回転速度で、ＭＣＲ－３０２血流計（Ａｎｔｏｎ Ｐａａｒ ＵＳＡ Ｉｎｃ．、Ａｓｈｌａｎｄ、ＶＡ）上でＣＰ２５－１円錐およびプレートを使用して実施した。各々１０秒間の合計１０個の測定値を、サンプル１つ当たり収集し、データを、Ｒｈｅｏｐｌｕｓ（Ａｎｔｏｎ Ｐａａｒ ＵＳＡ Ｉｎｃ．）Ｖ ３．６２ソフトウェアを使用して分析した。粘度は、センチポアズ（ｃＰ）単位で報告する。
抗ＧＤＦ１５抗体の生物物理学的特性：粘度
ＧＤＦ１５＿００１の粘度を、Ａｎｔｏｎ Ｐａａｒ機器によって分析した。ＧＤＦ１５＿００１を、３０ｋＤａ分子量カットオフＡｍｉｃｏｎ遠心濾過ユニット（ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ、ＭＡ）を使用して、２１５ｍｇ／ｍＬに濃縮した。４６～１７８ｍｇ／ｍＬの範囲の一連の希釈を、２０ｍＭヒスチジン、８５ｇ／Ｌスクロース、０．０５ｍｇ／ｍｌ ＥＤＴＡ ｐＨ５．８緩衝液を希釈剤として用いて調製した。タンパク質濃度を、ＳｏｌｏＶＰＥ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｐａｔｈｌｅｎｇｔｈ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｃ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ、Ｂｒｉｄｇｅｗａｔｅｒ、ＮＪ）での２８０ｎｍ分析によって決定した。粘度測定を、２５℃で１５０ｒｐｍの一定の回転速度で、ＭＣＲ－３０２血流計（Ａｎｔｏｎ Ｐａａｒ ＵＳＡ Ｉｎｃ．、Ａｓｈｌａｎｄ、ＶＡ）上でＣＰ２５－１円錐およびプレートを使用して実施した。各々１０秒間の合計１０個の測定値を、サンプル１つ当たり収集し、データを、Ｒｈｅｏｐｌｕｓ（Ａｎｔｏｎ Ｐａａｒ ＵＳＡ Ｉｎｃ．）Ｖ ３．６２ソフトウェアを使用して分析した。粘度は、センチポアズ（ｃＰ）単位で報告する。
【0401】
ＧＤＦ１５＿００１の粘度を、図２に示す。このデータは、許容できる粘度限界（２０ｃＰ）には、約１４０ｍｇ／ｍｌにおいて到達することを示しており、これが、ＧＤＦ１５＿００１の皮下注射を実現可能なものにしており、この抗体が有用な潜在的な治療薬であることをさらに示している。
【0402】
（実施例１０）
抗ＧＤＦ１５抗体の免疫原性
非生殖系列Ｔ細胞エピトープの検出、および計算されたｔＲｅｇ調整済スコアに基づいて、本発明の抗ＧＤＦ１５抗体および当該分野で公知の別の抗ＧＤＦ１５抗体、例えば、ｈｕ０１Ｇ０６（ｈｕ０１Ｇ０６のＶＨおよびＶＬ配列は、それぞれ配列番号１７７および配列番号１７８として本明細書で提供される（ＶＨ、ＷＯ２０１４／１００６８９の配列番号２４８、およびＶＬ、ＷＯ２０１４／１００６８９の配列番号２５４））の免疫原性を予測した。より低いｔＲｅｇ調整済スコアは、免疫原性リスクのより低い潜在力を予測する。
抗ＧＤＦ１５抗体の免疫原性
非生殖系列Ｔ細胞エピトープの検出、および計算されたｔＲｅｇ調整済スコアに基づいて、本発明の抗ＧＤＦ１５抗体および当該分野で公知の別の抗ＧＤＦ１５抗体、例えば、ｈｕ０１Ｇ０６（ｈｕ０１Ｇ０６のＶＨおよびＶＬ配列は、それぞれ配列番号１７７および配列番号１７８として本明細書で提供される（ＶＨ、ＷＯ２０１４／１００６８９の配列番号２４８、およびＶＬ、ＷＯ２０１４／１００６８９の配列番号２５４））の免疫原性を予測した。より低いｔＲｅｇ調整済スコアは、免疫原性リスクのより低い潜在力を予測する。
【0403】
配列を、２つのプロトコール（以下のプロトコール１および２）を使用して分析して、エピトープを同定した。いずれかのプロトコールについて本明細書に記載される規則によって同定された任意の配列を、エピトープとみなした。配列を、アミノ酸９マーのレベルで試験した。
【0404】
プロトコール１ － ＩＳＰＲＩ／ＥｐｉＭａｔｒｉｘ：配列を、ＩＳＰＲＩソフトウェアパッケージ（ＩＳＰＲＩ ｖ １．８．０、ＥｐｉＶａｘ Ｉｎｃ．、Ｐｒｏｖｉｄｅｎｃｅ、ＲＩ（２０１７）；Ｓｃｈａｆｅｒら Ｖａｃｃｉｎｅ １６（１９）、１８８０～８４（１９９８））でのＥｐｉＭａｔｒｉｘ分析に供した。生結果は、８つの異なるＨＬＡ型に対する各９マーアミノ酸断片の結合の可能性のランキングを提供する。したがって、各９マーについて、８つの予測（「観測」）が存在する。これらの９マーを、配列の各個々の直線的な番号付け位置で開始して生成する。同じ９マーが同じ配列中に１回よりも多く存在することが可能である。任意の４つの観測が、９マーが結合子の上位５％にあることを示す場合、これは、少なくとも４つのＨＬＡ型について、それが結合子の上位５％にあることを意味し、９マーは、予測されたエピトープとみなされる。あるいは、８つの予測のうちいずれか１つが、９マーが結合子の上位１％にあることを示す場合、この９マーも、予測されたエピトープとみなされる。
【0405】
プロトコール２ －ＩＥＤＢコンセンサス法：配列を、免疫エピトープデータベース（ＩＥＤＢ）（ＩＥＤＢ ＭＨＣ－ＩＩ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎｓ、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｅｄｂ．ｏｒｇ；Ｖｉｔａら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．Ｊａｎ ２８（４３）、Ｄ４０５～１２（２０１５））においてＭＨＣ－ＩＩ ｂｉｎｄｉｎｇ Ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ Ｍｅｔｈｏｄ（Ｗａｎｇら、ＢＭＣ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ １１、５６８（２０１０）；Ｗａｎｇら、ＰＬｏＳ Ｃｏｍｐｕｔ Ｂｉｏｌ．４（４）、ｅ１００００４８（２００８））を使用する分析に供した。ソフトウェアのアウトプットは、結果を１５マーずつ配置する。コンセンサススコアおよびパーセンタイルランキングが、１５マーおよびＨＬＡ型の各組み合わせについて提供される。しかし、各１５マーのコンセンサスが由来する個々のスコアは、１５マー中に見出される特定の９マーのランキングである：コンセンサスのために使用される各方法は、１５マー内の９マーについてのパーセンタイルランクを報告し、１５マー全体についての値として取られたコンセンサスは、中央値スコアを有する９マーについての予測である。９マーは、（ａ）それが１５マーを代表するコンセンサスとして選択される場合、および（ｂ）検討されているＨＬＡ型に対する結合子の上位１０％中にパーセンタイルランキングを有する場合、ならびに基準（ａ）および（ｂ）が、同じ９マーについて３つ以上の別個のＨＬＡ型（即ち、３つの観測）について生じる場合、エピトープとして分類される。検討したＨＬＡ型は、ＤＲＢ１＊０１、１＊０３、１＊０４、１＊０７、１＊０８、１＊１１、１＊１３および１＊１５であり、これらは、標準的なＩＳＰＲＩ／ＥｐｉＭａｔｒｉｘ報告では、同じＨＬＡ型である。プロトコール１との比較の容易さのために、データは、予測された９マーエピトープのリストを得るために再解釈されるが、コンセンサス法の一次アウトプットは、１５マーのランキングである。
【0406】
各エピトープは、生殖系列または非生殖系列エピトープとして分類される。抗体について、各エピトープは、抗体内でのその位置（例えば、ＣＤＲまたは非ＣＤＲ）に基づいて、さらに分類される。ＩＭＧＴ（ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ）から得られたヒトＶドメインの配列をフィルタリングして、偽遺伝子またはオープンリーディングフレームとしてアノテーションされる生殖系列を除去する。残りの配列中に見出される任意の予測された９マーエピトープは、生殖系列エピトープとみなされる。ＪもしくはＣ領域（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４を含む）またはこれらの領域間の接合部中に見出されるエピトープもまた、生殖系列エピトープとして分類した。さもなければ、エピトープは、非生殖系列エピトープとして分類した。
【0407】
ＣＤＲ定義は、Ｋａｂａｔの方法に基づき、ここで、ＣＤＲは、以下の残基を含むと定義される：ＨＣＤＲ－１（例えばＨ３５Ａであるが、Ｈ３６未満の挿入を含むＨ２６～Ｈ３５）、ＨＣＤＲ－２（Ｈ５０～Ｈ６５包含的）、ＨＣＤＲ－３（Ｈ９５～Ｈ１０２包含的）、ＬＣＤＲ－１（Ｌ２４～Ｌ３４包含的）、ＬＣＤＲ－２（Ｌ５４～Ｌ５６包含的）、ＬＣＤＲ－３（Ｌ８９～Ｌ９７、包含的）。予測された９マーエピトープは、そのアミノ酸のうちいずれか１つがＣＤＲ領域の一部である場合、ＣＤＲエピトープとして定義される。
【0408】
全体的配列スコア（ｔＲｅｇ調整済スコア）：個々の鎖について、または抗体ＶＨおよびＶＬドメインの対形成について、全体的スコアは、以下に記載されるように、構成成分９マーの各々を合計することによって計算され得る。
【0409】
９マーおよびＨＬＡ型の全ての個々の組み合わせ（「観測」）を、９マーがエピトープであるかどうかにかかわりなく試験した。特定の観測が、そのペプチドが所与のＨＬＡ型に対する結合子の上位５％にあることを示す場合、この観測についてのＥｐｉＭａｔｒｉｘ Ｚスコアが、タンパク質配列全体と関連する中間合計に加算される。試験した観測の総数もまた記録される。唯一の例外は、ＩＳＰＲＩによって「Ｔ－レジトープ」（天然の調節性Ｔ細胞を活性化し、望まれない免疫応答を低減させることが潜在的にできる、モノクローナル抗体フレームワーク領域内のアミノ酸配列）として同定された９マーについての全ての観測が、ゼロのＥｐｉＭａｔｒｉｘスコアを有すると仮定されることである。
【0410】
中間合計では、０．０５＊２．２２４８のベースラインスコアが、各観測（Ｔ－レジトープを含む）から減算される。最終スコアは、以下のように計算される：ｔＲｅｇ調整済スコア＝（中間合計）＊１０００／（観測の数）。
【0411】
計算されたスコアを、表１２に列挙する。上述のように、より低いスコアは、より低い予測される免疫原性潜在力を示す。本発明の抗ＧＤＦ１５抗体は、ｈｕ０１Ｇ０６よりも低いスコアを有した。クローンＧＤＦ１５＿００１、ＧＤＦ１５＿００４、ＧＤＦ１５＿００５およびＧＤＦ１５＿０１３は、最も低いスコアを有し、したがって、免疫原性応答を惹起する、最も低い潜在的な予測されたリスクを有した。これは、本発明の抗体が潜在的な有用な治療薬であることをさらに示している。
【0412】
【表13】
【0413】
ＧＤＦ１５＿００１およびｈｕ０１Ｇ０６の予測されたＴ細胞エピトープもまた、上記ｉｎ ｓｉｌｉｃｏ方法に基づいて比較した。以下の表１３に示すように、ｈｕ０１Ｇ０６は、重鎖中に２つの予測されたＴ細胞エピトープを有し、軽鎖中に１つの予測されたＴ細胞エピトープを有するが、ＧＤＦ１５＿００１は、いずれの予測されたＴ細胞エピトープも有さない。これは、ＧＤＦ１５＿００１がまた、ｈｕ０１Ｇ０６と比較した場合に、免疫原性応答を惹起するより低い潜在的なリスクを有することを示している。これは、ＧＤＦ１５＿００１が、改善された特徴を有する潜在的な有用な新規の治療薬であることをさらに示している。
【0414】
【表14】
【0415】
（実施例１１）
健康なマウスにおけるヒトおよびマウスＧＤＦ１５の阻害
ヒトＧＤＦ１５活性を阻害するＧＤＦ１５＿００１の能力を、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）－ヒトＧＤＦ１５で処置した健康なＣ５７Ｂｌ６Ｎマウスにおいて評価した。ＡＡＶ－ヒトＧＤＦ１５処置の２週間後、循環ヒトＧＤＦ１５レベルは、およそ１７ｎｇ／ｍＬまで増加し（図３）、体重は１５％減少した（図４）。ＧＤＦ１５＿００１の投与は、ＩｇＧ対照と比較して、ＡＡＶ－ヒトＧＤＦ１５処置マウスにおいて、体重（図４）、脂肪（図５）および除脂肪量喪失（図６）を迅速に逆転させた。ＧＤＦ１５＿００１は、ＡＡＶ対照ベクター処置マウスでは効果を有さなかった。
健康なマウスにおけるヒトおよびマウスＧＤＦ１５の阻害
ヒトＧＤＦ１５活性を阻害するＧＤＦ１５＿００１の能力を、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）－ヒトＧＤＦ１５で処置した健康なＣ５７Ｂｌ６Ｎマウスにおいて評価した。ＡＡＶ－ヒトＧＤＦ１５処置の２週間後、循環ヒトＧＤＦ１５レベルは、およそ１７ｎｇ／ｍＬまで増加し（図３）、体重は１５％減少した（図４）。ＧＤＦ１５＿００１の投与は、ＩｇＧ対照と比較して、ＡＡＶ－ヒトＧＤＦ１５処置マウスにおいて、体重（図４）、脂肪（図５）および除脂肪量喪失（図６）を迅速に逆転させた。ＧＤＦ１５＿００１は、ＡＡＶ対照ベクター処置マウスでは効果を有さなかった。
【0416】
マウスＧＤＦ１５活性を阻害するＧＤＦ１５＿００１の能力もまた、ＡＡＶ－マウスＧＤＦ１５で処置した健康なＣ５７Ｂｌ６Ｎマウスにおいて評価した。ＡＡＶ－マウスＧＤＦ１５投与の１１日後、循環マウスＧＤＦ１５レベルは、およそ３ｎｇ／ｍＬまで増加し（図７）、体重は、およそ１０％減少した（図８）。ＧＤＦ１５＿００１の投与は、ＩｇＧ対照と比較して、ＡＡＶ－ヒトＧＤＦ１５処置マウスにおいて、体重減少を迅速に逆転させ（図８）、食物摂取を増加させた（図９）。ＧＤＦ１５＿００１は、ＡＡＶ対照ベクター処置マウスでは効果を有さなかった。
【0417】
これらのデータは、ＧＤＦ１５＿００１が、増加したレベルのＧＤＦ１５の存在下であってさえも、健康なマウスにおいて、除脂肪量および体脂肪量喪失の両方に起因する体重減少を逆転させ、食物摂取を増加させることを実証している。
【0418】
（実施例１２）
抗ＧＤＦ－１５抗体によるミトコンドリアミューテーターマウス（ＰｏｌｇＡＤ２５７Ａ）の処置
材料および方法
動物
雄性野生型（ＷＴ）およびホモ接合体（ＰｏｌｇＤ２５７Ａ／Ｄ２５７Ａ）ミトコンドリアＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）ミューテーター（本明細書でＰｏｌｇＡＤ２５７Ａ、ＰｏｌＧと相互交換可能に言及される）マウスを、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから得た（ストック番号０１７３４１）。これらのマウスにおけるＰｏｌｇＤ２５７Ａ変異体対立遺伝子は、ＤＮＡポリメラーゼγ遺伝子（Ｐｏｌｇ）のＮ末端「プルーフリーディング」エキソヌクレアーゼドメイン中にＤ２５７Ａ変異を有し、発現された変異体タンパク質を、ミトコンドリアにおいてポリメラーゼプルーフリーディング機能を欠くものにする。全てのマウスを、中立温度（thermoneutral）条件（２７±１℃）で個々に収容し、標準的な明－暗サイクル（６ａ．ｍ．～６ｐ．ｍ．）で維持した。マウスに、食物摂取測定のために特定された場合を除き、水および食物（Ｐｕｒｉｎａげっ歯類食５０６１；Ｐｕｒｉｎａ Ｍｉｌｌｓ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ、ＵＳＡ）に自由意志でアクセスさせた。全ての手順は、１９６４年のヘルシンキ宣言およびその後の修正において制定された倫理規範に従って、Ｐｆｉｚｅｒ Ｇｒｏｔｏｎ ａｎｄ Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅｓによって承認された。
抗ＧＤＦ－１５抗体によるミトコンドリアミューテーターマウス（ＰｏｌｇＡＤ２５７Ａ）の処置
材料および方法
動物
雄性野生型（ＷＴ）およびホモ接合体（ＰｏｌｇＤ２５７Ａ／Ｄ２５７Ａ）ミトコンドリアＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）ミューテーター（本明細書でＰｏｌｇＡＤ２５７Ａ、ＰｏｌＧと相互交換可能に言及される）マウスを、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから得た（ストック番号０１７３４１）。これらのマウスにおけるＰｏｌｇＤ２５７Ａ変異体対立遺伝子は、ＤＮＡポリメラーゼγ遺伝子（Ｐｏｌｇ）のＮ末端「プルーフリーディング」エキソヌクレアーゼドメイン中にＤ２５７Ａ変異を有し、発現された変異体タンパク質を、ミトコンドリアにおいてポリメラーゼプルーフリーディング機能を欠くものにする。全てのマウスを、中立温度（thermoneutral）条件（２７±１℃）で個々に収容し、標準的な明－暗サイクル（６ａ．ｍ．～６ｐ．ｍ．）で維持した。マウスに、食物摂取測定のために特定された場合を除き、水および食物（Ｐｕｒｉｎａげっ歯類食５０６１；Ｐｕｒｉｎａ Ｍｉｌｌｓ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ、ＵＳＡ）に自由意志でアクセスさせた。全ての手順は、１９６４年のヘルシンキ宣言およびその後の修正において制定された倫理規範に従って、Ｐｆｉｚｅｒ Ｇｒｏｔｏｎ ａｎｄ Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅｓによって承認された。
【0419】
血漿ＧＤＦ１５およびＦＧＦ２１測定
尾部血液サンプルを、３、６および１０月齢のＷＴおよびＰｏｌＧマウスから収集した。血漿ＧＤＦ－１５およびＦＧＦ２１レベルを、Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍのＥＬＩＳＡキット（ＧＤＦ－１５についてはカタログ番号ＭＧＤ１５０、ＦＧＦ－２１についてはＭＦ２１００、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ、ＵＳＡ）を使用して測定した。アッセイを、製造業者の指示に従い、ＭＳＤによって提供されたキャリブレーターを使用して、実施した。６および１０月齢についてのＰｏｌＧサンプルのみを、アッセイ緩衝液中に１：４希釈した。
尾部血液サンプルを、３、６および１０月齢のＷＴおよびＰｏｌＧマウスから収集した。血漿ＧＤＦ－１５およびＦＧＦ２１レベルを、Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍのＥＬＩＳＡキット（ＧＤＦ－１５についてはカタログ番号ＭＧＤ１５０、ＦＧＦ－２１についてはＭＦ２１００、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ、ＵＳＡ）を使用して測定した。アッセイを、製造業者の指示に従い、ＭＳＤによって提供されたキャリブレーターを使用して、実施した。６および１０月齢についてのＰｏｌＧサンプルのみを、アッセイ緩衝液中に１：４希釈した。
【0420】
自発的ホイールランニング測定
自発的ホイールランニング活動を測定するために、マウスを、標準的な明－暗サイクル（６ａ．ｍ．～６ｐ．ｍ．）で、ホイール（Ｃｏｌｕｍｂｕｓ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｃｈｉｃａｇｏ、ＩＬ、ＵＳＡ）、食物および水への自由意志での自由なアクセスと共に、中立温度条件で収容した。ランニング距離を示すホイール計数を、自発的ホイールランニングへのアクセスを伴う３日間の順化期間後に、５日間にわたって毎日測定した。
自発的ホイールランニング活動を測定するために、マウスを、標準的な明－暗サイクル（６ａ．ｍ．～６ｐ．ｍ．）で、ホイール（Ｃｏｌｕｍｂｕｓ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｃｈｉｃａｇｏ、ＩＬ、ＵＳＡ）、食物および水への自由意志での自由なアクセスと共に、中立温度条件で収容した。ランニング距離を示すホイール計数を、自発的ホイールランニングへのアクセスを伴う３日間の順化期間後に、５日間にわたって毎日測定した。
【0421】
ｉｎ ｖｉｖｏ筋力生成測定
マウスを、２％イソフルランで麻酔し、循環水浴を介して３７℃に加熱したプラットフォーム上にあおむけに配置した。右脚を、膝蓋骨に向かって剃り上げ、右膝を膝クランプを介して安定化した。安定化したら、右足を、Ｄｕａｌ Ｍｏｄｅ Ｆｏｏｔ Ｐｌａｔｅ（３００－Ｃ ＦＰ、Ａｕｒｏｒａ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．、Ａｕｒｏｒａ、Ｃａｎａｄａ）に貼り付け、２つの電極を、腓腹筋の腹中央（mid-belly）近傍で皮下に配置して、底屈を達成した。１Ｈｚの電気刺激（０．２秒の持続時間、刺激間１秒）を、アンペアを増加させつつ、５０Ｈｚ、１００Ｈｚおよび１５０Ｈｚまで、刺激器（７０１Ｃ、Ａｕｒｏｒａ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．）を介して与えて、最大単収縮測定を生成した。全てのデータを、製造業者が供給したソフトウェア（ＤＭＣおよびＤＭＡ、Ａｕｒｏｒａ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．）を使用して、収集および分析した。マウスを、分析の前に、中立温度で収容した。
マウスを、２％イソフルランで麻酔し、循環水浴を介して３７℃に加熱したプラットフォーム上にあおむけに配置した。右脚を、膝蓋骨に向かって剃り上げ、右膝を膝クランプを介して安定化した。安定化したら、右足を、Ｄｕａｌ Ｍｏｄｅ Ｆｏｏｔ Ｐｌａｔｅ（３００－Ｃ ＦＰ、Ａｕｒｏｒａ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．、Ａｕｒｏｒａ、Ｃａｎａｄａ）に貼り付け、２つの電極を、腓腹筋の腹中央（mid-belly）近傍で皮下に配置して、底屈を達成した。１Ｈｚの電気刺激（０．２秒の持続時間、刺激間１秒）を、アンペアを増加させつつ、５０Ｈｚ、１００Ｈｚおよび１５０Ｈｚまで、刺激器（７０１Ｃ、Ａｕｒｏｒａ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．）を介して与えて、最大単収縮測定を生成した。全てのデータを、製造業者が供給したソフトウェア（ＤＭＣおよびＤＭＡ、Ａｕｒｏｒａ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．）を使用して、収集および分析した。マウスを、分析の前に、中立温度で収容した。
【0422】
トレッドミルランニング評価
全てのマウスを、試験日前に２日間順化させた。最初の順化日は、マウスを動いていないベルト上に２５分間配置し、その後、マウスを３ｍ／分で５分間走らせることからなった。翌日、全てのマウスを、動いていないベルトに２０分間順化させ、その後、マウスを３ｍ／分で５分間走らせた。試験日に、マウスを、動いていないトレッドミル上に２０分間配置し、その後、マウスを８ｍ／分で２分間走らせた。スピードを、もう２分間かけて１２ｍ／分まで増加させ、その後、３回の引き続く場合にわたり、連続する３秒間にわたってショックグリッド上にマウスが滞在する疲弊まで、２分毎に３ｍ／分増加させた。全ての試験を、１０度の傾斜を有する、２Ｈｚに設定したショックグリッドを有する、Ｃｏｌｕｍｂｕｓ ＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓのＭｏｄｕｌａｒ Ｅｎｃｌｏｓｅｄ Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ Ｔｒｅａｄｍｉｌｌ ｆｏｒ Ｍｉｃｅ（合計４レーン）上で実施した。
全てのマウスを、試験日前に２日間順化させた。最初の順化日は、マウスを動いていないベルト上に２５分間配置し、その後、マウスを３ｍ／分で５分間走らせることからなった。翌日、全てのマウスを、動いていないベルトに２０分間順化させ、その後、マウスを３ｍ／分で５分間走らせた。試験日に、マウスを、動いていないトレッドミル上に２０分間配置し、その後、マウスを８ｍ／分で２分間走らせた。スピードを、もう２分間かけて１２ｍ／分まで増加させ、その後、３回の引き続く場合にわたり、連続する３秒間にわたってショックグリッド上にマウスが滞在する疲弊まで、２分毎に３ｍ／分増加させた。全ての試験を、１０度の傾斜を有する、２Ｈｚに設定したショックグリッドを有する、Ｃｏｌｕｍｂｕｓ ＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓのＭｏｄｕｌａｒ Ｅｎｃｌｏｓｅｄ Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ Ｔｒｅａｄｍｉｌｌ ｆｏｒ Ｍｉｃｅ（合計４レーン）上で実施した。
【0423】
抗ＧＤＦ１５介入
抗ＧＤＦ－１５抗体：本明細書でｍＡＢ２とも呼ばれるＧＤＦ１５－０３０１を、この研究で使用した。ＰｏｌＧマウス（９月齢）を、２つの群：ＰｏｌＧ－ビヒクルおよびＰｏｌＧ－ｍＡＢ２に無作為化した。ＷＴ同腹仔も研究のために含めた。マウスに、研究の持続時間を通じて毎週１回、１０ｍｇ／ｋｇのＧＤＦ１５抗体、ｍＡｂ２（ＰｏｌＧ－ｍＡＢ２）または対照ＩｇＧ（ＰｏｌＧ－ビヒクル）のいずれかを、皮下注射した。体重を毎週測定した。除脂肪量および体脂肪量を、ＥｃｈｏＭＲＩ（商標）４１００システムを使用して評価した。
抗ＧＤＦ－１５抗体：本明細書でｍＡＢ２とも呼ばれるＧＤＦ１５－０３０１を、この研究で使用した。ＰｏｌＧマウス（９月齢）を、２つの群：ＰｏｌＧ－ビヒクルおよびＰｏｌＧ－ｍＡＢ２に無作為化した。ＷＴ同腹仔も研究のために含めた。マウスに、研究の持続時間を通じて毎週１回、１０ｍｇ／ｋｇのＧＤＦ１５抗体、ｍＡｂ２（ＰｏｌＧ－ｍＡＢ２）または対照ＩｇＧ（ＰｏｌＧ－ビヒクル）のいずれかを、皮下注射した。体重を毎週測定した。除脂肪量および体脂肪量を、ＥｃｈｏＭＲＩ（商標）４１００システムを使用して評価した。
【0424】
組織収集
マウスを、ＣＯ２下で安楽死させ、心スティック（cardiac
stick）を実施して、マウスを失血させた。腓腹筋および前脛骨筋（ＴＡ）を収集し、計量し、液体窒素下で即座に凍結させた。
マウスを、ＣＯ２下で安楽死させ、心スティック（cardiac
stick）を実施して、マウスを失血させた。腓腹筋および前脛骨筋（ＴＡ）を収集し、計量し、液体窒素下で即座に凍結させた。
【0425】
統計分析
データは、平均±ＳＥとして表される。統計分析を、Ｔ検定、一元配置および二元配置ＡＮＯＶＡ、ならびに多変量分析のためのＴｕｋｅｙ ＨＳＤ検定のいずれかによって実施した。統計的有意性は、以下の記号を使用して図中に示される：＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１。
データは、平均±ＳＥとして表される。統計分析を、Ｔ検定、一元配置および二元配置ＡＮＯＶＡ、ならびに多変量分析のためのＴｕｋｅｙ ＨＳＤ検定のいずれかによって実施した。統計的有意性は、以下の記号を使用して図中に示される：＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１。
【0426】
結果
血漿ＧＤＦ１５レベルを、３、６および１０月齢の時点で、ＷＴおよびＰｏｌＧミューテーターマウスにおいて測定した。循環ＧＤＦ１５レベルは、３月齢の時点で、ＷＴマウスとＰｏｌＧマウスとの間で匹敵していた（図１Ａ）。ＧＤＦ１５レベルは、３～１０月齢のＷＴマウスでは、２００ｎｇ／ｍｌよりも低かった。対照的に、ＧＤＦ１５は、ＰｏｌＧマウスにおいて３月齢から１０月齢まで著しく増加し、１０月齢の時点で１．３ｎｇ／ｍｌよりも上に達した（図１Ａ）。循環ＦＧＦ２１もまた、１０月齢の時点で、それらのＷＴ同腹仔と比較して、ＰｏｌＧマウスにおいてかなり高かった（図１Ｂ）。
血漿ＧＤＦ１５レベルを、３、６および１０月齢の時点で、ＷＴおよびＰｏｌＧミューテーターマウスにおいて測定した。循環ＧＤＦ１５レベルは、３月齢の時点で、ＷＴマウスとＰｏｌＧマウスとの間で匹敵していた（図１Ａ）。ＧＤＦ１５レベルは、３～１０月齢のＷＴマウスでは、２００ｎｇ／ｍｌよりも低かった。対照的に、ＧＤＦ１５は、ＰｏｌＧマウスにおいて３月齢から１０月齢まで著しく増加し、１０月齢の時点で１．３ｎｇ／ｍｌよりも上に達した（図１Ａ）。循環ＦＧＦ２１もまた、１０月齢の時点で、それらのＷＴ同腹仔と比較して、ＰｏｌＧマウスにおいてかなり高かった（図１Ｂ）。
【0427】
身体能力および筋機能を、自発的ホイールランニング活動およびｉｎ ｖｉｖｏ筋力生成を測定することによって、ＷＴおよびＰｏｌＧマウスにおいて評価した。ホイールランニング距離および筋力生成は、ＷＴ同腹仔と比較して、ＰｏｌＧマウスにおいてそれぞれ３３％および１３．５％低減し（図２および３）、これは、運動耐容能および筋力低下を示している。
【0428】
ＧＤＦ１５中和が、ＰｏＧミューテーターマウスにおいて罹患した状態を改善することができるかどうかを評価するために、体重減少、筋機能障害および運動耐容能を示していた９月齢のＰｏｌＧミューテーターマウスを、選択的かつ強力なＧＤＦ１５抗体（ｍＡＢ２）またはＩｇＧ対照（ビヒクル）で処置した。ＷＴ同腹仔も研究に含めた。ＰｏｌＧマウスは、それらのＷＴ同腹仔と比較して、より低い体重を有した（図４）。ＧＤＦ１５ ｍＡＢ２で処置したＰｏｌＧマウスは、ビヒクルで処置したＰｏｌＧマウスと比較して、有意に多くの体重が増加した（図４）。ＥｃｏＭＲＩによって評価した体組成は、ＧＤＦ１５ ｍＡＢ２で処置したＰｏｌＧマウスが、処置後２２日目および５７日目の時点で、ビヒクル処置マウスと比較して、有意に多くの除脂肪量が増加した（図５Ａ）。ＧＤＦ１５ ｍＡＢ２処置群は、処置後２２日目の時点で、ビヒクル処置群と比較して、有意に高い体脂肪量を有した（図５Ｂ）。後肢筋肉を、研究の終了時（処置後８７日目）に摘出し、計量した。ＧＤＦ１５ ｍＡＢ２で処置したＰｏｌＧマウス由来の腓腹筋および前脛骨筋（tibias）は、ビヒクルで処置したＰｏｌＧマウス由来のものよりも有意に重かった（図６ＡおよびＢ）。
【0429】
ＧＤＦ１５ ｍＡＢ２によって増加した筋肉量が、改善された筋機能を生じたかどうかを評価するために、筋力生成を、電気刺激の間にｉｎ ｖｉｖｏで評価した。ＰｏｌＧ－ＧＤＦ１５ ｍＡＢ２処置群における筋力生成は、ＰｏｌＧマウスにおけるビヒクル処置群と比較して、有意に高かった。意外なことに、ＧＤＦ１５ ｍＡＢ２で処置したＰｏｌＧマウスの最大の力は、ＷＴマウスと類似のレベルまで回復した（図７）。さらに、ＧＤＦ１５ ｍＡＢ２で処置したＰｏｌＧマウスは、ＰｏｌＧビヒクル処置群と比較して、トレッドミル上で有意に長く走行し、これは、運動能力の改善を示している（図８Ａ）。自発的ホイールランニング距離もまた、ビヒクル処置ＰｏｌＧマウスと比較して、ＧＤＦ１５ ｍＡＢ２処置によって増加した（図８Ｂ）。
【0430】
結論
この研究からのデータは、ＧＤＦ１５ ｍＡＢ２処置が、体重増加を改善し、除脂肪筋肉量および骨格筋量を増加させたことを実証した。ＧＤＦ１５ ｍＡＢ２は、ｉｎ ｖｉｖｏで筋力生成によって評価される筋強度を、完全に回復させた。さらに、ＧＤＦ１５ ｍＡＢ２処置は、トレッドミルランニングおよび自発的ホイールランニング距離を改善し、これは、ＰｏｌＧマウスにおける運動能力の改善を示している。これらの結果は、ＧＤＦ１５阻害が、原発性ミトコンドリア筋症のための新たな治療アプローチを提供することを実証している。
この研究からのデータは、ＧＤＦ１５ ｍＡＢ２処置が、体重増加を改善し、除脂肪筋肉量および骨格筋量を増加させたことを実証した。ＧＤＦ１５ ｍＡＢ２は、ｉｎ ｖｉｖｏで筋力生成によって評価される筋強度を、完全に回復させた。さらに、ＧＤＦ１５ ｍＡＢ２処置は、トレッドミルランニングおよび自発的ホイールランニング距離を改善し、これは、ＰｏｌＧマウスにおける運動能力の改善を示している。これらの結果は、ＧＤＦ１５阻害が、原発性ミトコンドリア筋症のための新たな治療アプローチを提供することを実証している。
【0431】
（実施例１３）
心不全を有する患者における健康関連の生活の質に対するポンセグロマブの効果および安全性の研究（ＧＡＲＤＥＮ ＴＩＭＩ７４）
この研究の一次目的は、心不全を有する参加者における症状の頻度、重症度および負荷ならびに肉体的制約、ならびに上昇した循環ＧＤＦ－１５濃度に対する、ポンセグロマブ（ＰＦ－０６９４６８６０；本明細書でＧＤＦ１５＿００１とも呼ばれる）の反復皮下投与の効果を評価することである。この研究は、ポンセグロマブの安全性、忍容性、ＰＫ、ＰＤおよび免疫原性もまた評価する。
心不全を有する患者における健康関連の生活の質に対するポンセグロマブの効果および安全性の研究（ＧＡＲＤＥＮ ＴＩＭＩ７４）
この研究の一次目的は、心不全を有する参加者における症状の頻度、重症度および負荷ならびに肉体的制約、ならびに上昇した循環ＧＤＦ－１５濃度に対する、ポンセグロマブ（ＰＦ－０６９４６８６０；本明細書でＧＤＦ１５＿００１とも呼ばれる）の反復皮下投与の効果を評価することである。この研究は、ポンセグロマブの安全性、忍容性、ＰＫ、ＰＤおよび免疫原性もまた評価する。
【0432】
状態：心不全
介入：
薬物：ポンセグロマブ１００ｍｇ
薬物：ポンセグロマブ２００ｍｇ
薬物：ポンセグロマブ３００ｍｇ
その他：釣り合う用量のプラセボ
介入：
薬物：ポンセグロマブ１００ｍｇ
薬物：ポンセグロマブ２００ｍｇ
薬物：ポンセグロマブ３００ｍｇ
その他：釣り合う用量のプラセボ
【0433】
第２相
割り付け：無作為化
割り付け：無作為化
【0434】
【表15】
【0435】
この研究では、ポンセグロマブを、合計６用量になるように、皮下注射によって４週間毎に１００、２００または３００ｍｇの用量で投与する。参加者を、ポンセグロマブの３つの用量のうち１つまたはプラセボに無作為化する。
【0436】
主要評価項目：
・ Ｋａｎｓａｓ Ｃｉｔｙ Ｃａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙ Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅ ２３ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｓｕｍｍａｒｙ Ｓｃｏｒｅ［時間枠：２２週間］におけるベースラインからの変化
心不全を有する参加者における心不全疾患特異的健康状態に対するポンセグロマブの効果をプラセボに対して比較する
・ Ｋａｎｓａｓ Ｃｉｔｙ Ｃａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙ Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅ ２３ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｓｕｍｍａｒｙ Ｓｃｏｒｅ［時間枠：２２週間］におけるベースラインからの変化
心不全を有する参加者における心不全疾患特異的健康状態に対するポンセグロマブの効果をプラセボに対して比較する
【0437】
二次評価項目：
・ Ｋａｎｓａｓ Ｃｉｔｙ Ｃａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙ Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅ ２３ Ｏｖｅｒａｌｌ Ｓｕｍｍａｒｙ Ｓｃｏｒｅ、Ｔｏｔａｌ Ｓｙｍｐｔｏｍ Ｓｃｏｒｅおよび肉体的制約におけるベースラインからの変化［時間枠：２２週間］
ＨＦを有する参加者におけるＨＦ疾患特異的健康状態全般に対するポンセグロマブの効果をプラセボに対して比較する
・ Ｋａｎｓａｓ Ｃｉｔｙ Ｃａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙ Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅ ２３ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｓｕｍｍａｒｙ Ｓｃｏｒｅ（ＣＳＳ）、Ｏｖｅｒａｌｌ Ｓｕｍｍａｒｙ Ｓｃｏｒｅ（ＯＳＳ）、Ｔｏｔａｌ Ｓｙｍｐｔｏｍ Ｓｃｏｒｅ（ＴＳＳ）および肉体的制約（ＰＬ）におけるベースラインからの≧５ポイントの増加によって定義される応答［時間枠：２２週間］
ＨＦを有する参加者におけるＨＦ疾患特異的健康状態に対するポンセグロマブの効果をプラセボに対して比較する
・ ６－Ｍｉｎｕｔｅ Ｗａｌｋ Ｄｉｓｔａｎｃｅにおけるベースラインからの変化［時間枠：２２週間］
ＨＦを有する参加者の身体機能に対するポンセグロマブの効果をプラセボに対して比較する
・ 心不全Ｄａｉｌｙ Ｄｉａｒｙ疲労スコアにおけるベースラインからの変化［時間枠：２２週間］
ＨＦを有する参加者によって報告される疲労に対するポンセグロマブの効果をプラセボに対して比較する
・ Ｐａｔｉｅｎｔ－Ｒｅｐｏｒｔｅｄ Ｏｕｔｃｏｍｅｓ Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ Ｆａｔｉｇｕｅ ７ａにおけるベースラインからの変化［時間枠：２２週間］
ＨＦを有する参加者によって報告される疲労に対するポンセグロマブの効果をプラセボに対して比較する
・ 処置により発生した有害事象の発生率［時間枠：２２週間］
ＨＦを有する参加者におけるポンセグロマブの安全性および忍容性を記述する
・ 処置により発生した重篤有害事象の発生率［時間枠：２２週間］
ＨＦを有する参加者におけるポンセグロマブの安全性および忍容性を記述する
・ 異常実験室結果の発生率［時間枠：２２週間］
ＨＦを有する参加者におけるポンセグロマブの安全性および忍容性を記述する
・ 異常なバイタルサインの発生率［時間枠：２２週間］
ＨＦを有する参加者におけるポンセグロマブの安全性および忍容性を記述する
・ Ｋａｎｓａｓ Ｃｉｔｙ Ｃａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙ Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅ ２３ Ｏｖｅｒａｌｌ Ｓｕｍｍａｒｙ Ｓｃｏｒｅ、Ｔｏｔａｌ Ｓｙｍｐｔｏｍ Ｓｃｏｒｅおよび肉体的制約におけるベースラインからの変化［時間枠：２２週間］
ＨＦを有する参加者におけるＨＦ疾患特異的健康状態全般に対するポンセグロマブの効果をプラセボに対して比較する
・ Ｋａｎｓａｓ Ｃｉｔｙ Ｃａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙ Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅ ２３ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｓｕｍｍａｒｙ Ｓｃｏｒｅ（ＣＳＳ）、Ｏｖｅｒａｌｌ Ｓｕｍｍａｒｙ Ｓｃｏｒｅ（ＯＳＳ）、Ｔｏｔａｌ Ｓｙｍｐｔｏｍ Ｓｃｏｒｅ（ＴＳＳ）および肉体的制約（ＰＬ）におけるベースラインからの≧５ポイントの増加によって定義される応答［時間枠：２２週間］
ＨＦを有する参加者におけるＨＦ疾患特異的健康状態に対するポンセグロマブの効果をプラセボに対して比較する
・ ６－Ｍｉｎｕｔｅ Ｗａｌｋ Ｄｉｓｔａｎｃｅにおけるベースラインからの変化［時間枠：２２週間］
ＨＦを有する参加者の身体機能に対するポンセグロマブの効果をプラセボに対して比較する
・ 心不全Ｄａｉｌｙ Ｄｉａｒｙ疲労スコアにおけるベースラインからの変化［時間枠：２２週間］
ＨＦを有する参加者によって報告される疲労に対するポンセグロマブの効果をプラセボに対して比較する
・ Ｐａｔｉｅｎｔ－Ｒｅｐｏｒｔｅｄ Ｏｕｔｃｏｍｅｓ Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ Ｆａｔｉｇｕｅ ７ａにおけるベースラインからの変化［時間枠：２２週間］
ＨＦを有する参加者によって報告される疲労に対するポンセグロマブの効果をプラセボに対して比較する
・ 処置により発生した有害事象の発生率［時間枠：２２週間］
ＨＦを有する参加者におけるポンセグロマブの安全性および忍容性を記述する
・ 処置により発生した重篤有害事象の発生率［時間枠：２２週間］
ＨＦを有する参加者におけるポンセグロマブの安全性および忍容性を記述する
・ 異常実験室結果の発生率［時間枠：２２週間］
ＨＦを有する参加者におけるポンセグロマブの安全性および忍容性を記述する
・ 異常なバイタルサインの発生率［時間枠：２２週間］
ＨＦを有する参加者におけるポンセグロマブの安全性および忍容性を記述する
【0438】
【表16】
【0439】
適格性
【0440】
【表17】
【0441】
基準
組み入れ基準：
－ １８歳以上の雄性および雌性参加者
－．以下の基準の各々による、ＨＦの臨床的証拠：
ａ．最も最近の測定時（直近の１２カ月以内）にＬＶＥＦ＜５０％
ｂ．スクリーニング時にＮＹＨＡクラスＩＩ～ＩＶ
ｃ．スクリーニング時にＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ≧４００ｐｇ／ｍＬ
－ スクリーニング時に血清ＧＤＦ－１５濃度≧２０００ｐｇ／ｍＬ
－ スクリーニング時にＫＣＣＱ－２３ ＣＳＳ＜７５
－ 以下のうち少なくとも１つによって実証される、悪液質または疲労または機能的障害の証拠：
ａ．主観的疲労もしくは食欲不振に関連する、直近の６カ月における非浮腫性の意図しない体重減少≧５％、もしくは現在のＢＭＩ＜２０ｋｇ／ｍ２；または
ｂ．１週間当たり少なくとも３回の疲労および過去２週間における少なくとも中程度に厄介な疲労；または
ｃ．スクリーニング時に施行したＫＣＣＱ ２３のＰｈｙｓｉｃａｌ Ｌｉｍｉｔａｔｉｏｎｓ Ｄｏｍａｉｎで＜６０のスコア。
組み入れ基準：
－ １８歳以上の雄性および雌性参加者
－．以下の基準の各々による、ＨＦの臨床的証拠：
ａ．最も最近の測定時（直近の１２カ月以内）にＬＶＥＦ＜５０％
ｂ．スクリーニング時にＮＹＨＡクラスＩＩ～ＩＶ
ｃ．スクリーニング時にＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ≧４００ｐｇ／ｍＬ
－ スクリーニング時に血清ＧＤＦ－１５濃度≧２０００ｐｇ／ｍＬ
－ スクリーニング時にＫＣＣＱ－２３ ＣＳＳ＜７５
－ 以下のうち少なくとも１つによって実証される、悪液質または疲労または機能的障害の証拠：
ａ．主観的疲労もしくは食欲不振に関連する、直近の６カ月における非浮腫性の意図しない体重減少≧５％、もしくは現在のＢＭＩ＜２０ｋｇ／ｍ２；または
ｂ．１週間当たり少なくとも３回の疲労および過去２週間における少なくとも中程度に厄介な疲労；または
ｃ．スクリーニング時に施行したＫＣＣＱ ２３のＰｈｙｓｉｃａｌ Ｌｉｍｉｔａｔｉｏｎｓ Ｄｏｍａｉｎで＜６０のスコア。
【0442】
除外基準：
－ 無作為化前の１カ月以内の急性非代償性ＨＦ
－ 無作為化前の３カ月以内の心臓再同期治療デバイスの埋め込みまたは弁修復もしくは置換、または試験中にそれを行う意思があること
－ 心臓移植の履歴、現在心臓移植のリストに入っている、または予定された機械的循環補助
－ 無作為化前の１カ月以内の急性冠動脈症候群
－ 無作為化前の３カ月以内の冠血行再建（経皮的冠動脈介入または冠動脈バイパス移植）、または試験の間に冠血行再建を受ける意思があること
－ 心リズム異常（即ち、頻脈性不整脈または徐脈性不整脈）を処置するための埋め込み可能な心除細動器またはペースメーカーに関して未処置の適応症
－ この研究で使用される研究介入の最初の用量に先行する３０日（または現地の要求によって決定される）または５半減期（いずれか長い方）以内の、治験産物（薬物またはワクチン）の以前の投与。１日目の６カ月または５半減期（いずれか長い方）以内の、治験生物剤による処置
－ 透析を必要とする腎疾患
－ ＨＦに起因しない門脈圧亢進の証拠を伴う硬変
－ 無作為化前の１カ月以内の急性非代償性ＨＦ
－ 無作為化前の３カ月以内の心臓再同期治療デバイスの埋め込みまたは弁修復もしくは置換、または試験中にそれを行う意思があること
－ 心臓移植の履歴、現在心臓移植のリストに入っている、または予定された機械的循環補助
－ 無作為化前の１カ月以内の急性冠動脈症候群
－ 無作為化前の３カ月以内の冠血行再建（経皮的冠動脈介入または冠動脈バイパス移植）、または試験の間に冠血行再建を受ける意思があること
－ 心リズム異常（即ち、頻脈性不整脈または徐脈性不整脈）を処置するための埋め込み可能な心除細動器またはペースメーカーに関して未処置の適応症
－ この研究で使用される研究介入の最初の用量に先行する３０日（または現地の要求によって決定される）または５半減期（いずれか長い方）以内の、治験産物（薬物またはワクチン）の以前の投与。１日目の６カ月または５半減期（いずれか長い方）以内の、治験生物剤による処置
－ 透析を必要とする腎疾患
－ ＨＦに起因しない門脈圧亢進の証拠を伴う硬変
【0443】
参考文献
Breenら, Cell Metab.
2020 Dec1; 32(6):938-950
Breitら, Annu Rev
Physiol. 2021 Feb 10;83:127-151
Grormanら, Ann
Neurol. 2015 Nov 78(5):814-23
Mancusoら,
Neuromuscul Disord. 2017 Dec; 27(12):1126-1137
Montanoら, Neurol
Genet. 2020 Oct 20; 6(6):e519
Lernerら, 2015, J.
Cachexia Sarcopenia Muscle, 6: 317-324
Breenら, Cell Metab.
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Breitら, Annu Rev
Physiol. 2021 Feb 10;83:127-151
Grormanら, Ann
Neurol. 2015 Nov 78(5):814-23
Mancusoら,
Neuromuscul Disord. 2017 Dec; 27(12):1126-1137
Montanoら, Neurol
Genet. 2020 Oct 20; 6(6):e519
Lernerら, 2015, J.
Cachexia Sarcopenia Muscle, 6: 317-324
【0444】
開示された教示は、種々の適用、方法、キットおよび組成物に関して記載されてきたが、種々の変化および改変が、本明細書の教示および以下の特許請求される発明から逸脱することなしになされ得ることが理解される。上述の実施例は、開示された教示をよりよく説明するために提供されるのであって、本明細書に提示された教示の範囲を限定することを意図しない。本明細書の教示は、これらの例示的な実施形態に関して記載されてきたが、当業者は、これらの例示的な実施形態の多数のバリエーションおよび改変が過度の実験なしに可能であることを容易に理解する。全てのかかるバリエーションおよび改変は、本明細書の教示の範囲内である。
【0445】
特許、特許出願、論文、教科書などを含む、本明細書で引用される全ての参考文献、ならびにまだ引用されていない範囲までその中で引用される参考文献は、全ての目的のために、それらの全体が本明細書で参照によって組み込まれる。組み込まれた文献および類似の資料のうち１つ以上が、定義された用語、用語の用法、記載された技術などが含まれるがこれらに限定されない本出願とは異なるまたはそれと矛盾する場合、本出願が支配する。
【0446】
種々の改変およびバリエーションが、本発明の範囲または精神から逸脱することなしに本発明においてなされ得ることが、当業者に明らかである。本発明の他の実施形態は、本明細書で開示される発明の仕様および実施を考慮して、当業者に明らかである。仕様および例は、例示にすぎないとみなされる意図であり、本発明の真の範囲および精神は、以下の特許請求の範囲によって示される。
【図1-1】
【図1-2】
【図1-3】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【配列表】
【国際調査報告】