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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-11-13
(54)【発明の名称】ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２受容体結合ドメイン抗体
(51)【国際特許分類】
C07K 16/10 20060101AFI20241106BHJP
C12N 15/13 20060101ALI20241106BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20241106BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20241106BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20241106BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20241106BHJP
C07K 16/28 20060101ALI20241106BHJP
G01N 33/569 20060101ALI20241106BHJP
G01N 33/531 20060101ALI20241106BHJP
C12P 21/08 20060101ALN20241106BHJP
【ＦＩ】
C07K16/10 ZNA
C12N15/13
C12N1/15
C12N1/19
C12N1/21
C12N5/10
C07K16/28
G01N33/569 L
G01N33/531 A
C12P21/08
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024525061
(86)(22)【出願日】2022-10-25
(85)【翻訳文提出日】2024-06-19
(86)【国際出願番号】 EP2022079718
(87)【国際公開番号】W WO2023072904
(87)【国際公開日】2023-05-04
(31)【優先権主張番号】21204850.8
(32)【優先日】2021-10-26
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】591003013
【氏名又は名称】エフ． ホフマン－ラ ロシュ アーゲー
【氏名又は名称原語表記】Ｆ． ＨＯＦＦＭＡＮＮ－ＬＡ ＲＯＣＨＥ ＡＫＴＩＥＮＧＥＳＥＬＬＳＣＨＡＦＴ
(74)【代理人】
【識別番号】100118902
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 修
(74)【代理人】
【識別番号】100106208
【弁理士】
【氏名又は名称】宮前 徹
(74)【代理人】
【識別番号】100196508
【弁理士】
【氏名又は名称】松尾 淳一
(72)【発明者】
【氏名】ゲルク，ミヒャエル
(72)【発明者】
【氏名】ヨッフム，ジーモン
(72)【発明者】
【氏名】ユックニシュケ，ウテ
(72)【発明者】
【氏名】クルトカヤ，ウルリケ
(72)【発明者】
【氏名】シュレームル，ミヒャエル
(72)【発明者】
【氏名】シュティーグラー，ザンドリーネ・カロリナ
【テーマコード（参考）】
4B064
4B065
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B064AG26
4B064AG27
4B064CA19
4B064CC24
4B064CE10
4B064DA13
4B065AA01X
4B065AA57X
4B065AA87X
4B065AA90X
4B065AA90Y
4B065AB01
4B065AC14
4B065BA02
4B065CA25
4B065CA46
4H045AA10
4H045AA11
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA10
4H045CA40
4H045DA75
4H045DA76
4H045EA50
4H045FA74
4H045GA21
(57)【要約】
本発明は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質の受容体結合ドメインに結合するモノクローナル抗体、前記抗体をコードする核酸、前記抗体を産生する宿主細胞、前記抗体を含む組成物及びキット、前記抗体を使用することを含む、試料中のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスを検出する方法、及びイムノアッセイにおいて前記抗体を使用する方法に関する。
【選択図】なし
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質の受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）に結合する（単離された）モノクローナル抗体又はその抗原結合断片であって、ａ）表面プラズモン共鳴によって決定される２．５Ｅ＋０６Ｍ－１ｓ－１を超える会合速度定数（ｋａ）を有する、
及び／又は
ｂ）表面プラズモン共鳴によって決定される５．０Ｅ－０３ｓ－１未満の解離速度定数（ｋｄ）を有する、
及び／又は
ｃ）表面プラズモン共鳴によって決定される４分以上のｔ／２ｄｉｓｓの半減期時間を有する、
及び／又は
ｄ）１：１若しくは１：２の化学量論を有する、
（単離された）モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項2】
抗体が中和性である、請求項１に記載の単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項3】
ａ）それぞれ配列番号１、２、３、４、５及び６によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含むか、ｂ）それぞれ配列番号１、２、３、４、５及び６によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）それぞれ配列番号１、２、３、４、５及び６によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する、
請求項１又は２に記載の単離されたモノクローナル抗体又は抗原結合断片。
【請求項4】
ａ）それぞれ配列番号７、８、９、１０、１１、１２、１３及び１４によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３及びＦＲ－Ｌ４を含むか、ｂ）それぞれ配列番号７、８、９、１０、１１、１２、１３及び１４によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３及びＦＲ－Ｌ４を含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）それぞれ配列番号７、８、９、１０、１１、１２、１３及び１４によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３、及びＦＲ－Ｌ４を含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する、
請求項３に記載の単離されたモノクローナル抗体又は抗原結合断片。
【請求項5】
ａ）それぞれ配列番号１７、１８、１９、２０、２１及び２２によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含むか、ｂ）それぞれ配列番号１７、１８、１９、２０、２１及び２２によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）それぞれ配列番号１７、１８、１９、２０、２１及び２２によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する、
請求項１又は２に記載の単離されたモノクローナル抗体又は抗原結合断片。
【請求項6】
ａ）それぞれ配列番号２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９及び３０によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３及びＦＲ－Ｌ４を含むか、ｂ）それぞれ配列番号２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９及び３０によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３及びＦＲ－Ｌ４を含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）それぞれ配列番号２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９及び３０によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３、及びＦＲ－Ｌ４を含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する、
請求項５に記載の単離されたモノクローナル抗体又は抗原結合断片。
【請求項7】
ａ）それぞれ配列番号３３、３４、３５、３６、３７及び３８によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含むか、ｂ）それぞれ配列番号３３、３４、３５、３６、３７及び３８によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）それぞれ配列番号３３、３４、３５、３６、３７及び３８によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する、
請求項１又は２に記載の単離されたモノクローナル抗体又は抗原結合断片。
【請求項8】
ａ）それぞれ配列番号３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５及び４６によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３及びＦＲ－Ｌ４を含むか、ｂ）それぞれ配列番号３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５及び４６によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３及びＦＲ－Ｌ４を含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）それぞれ配列番号３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５及び４６によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３、及びＦＲ－Ｌ４を含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する、
請求項７に記載の単離されたモノクローナル抗体又は抗原結合断片。
【請求項9】
ａ）それぞれ配列番号４９、５０、５１、５２、５３及び５４によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含むか、ｂ）それぞれ配列番号４９、５０、５１、５２、５３及び５４によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）それぞれ配列番号４９、５０、５１、５２、５３及び５４によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する、
請求項１又は２に記載の単離されたモノクローナル抗体又は抗原結合断片。
【請求項10】
ａ）それぞれ配列番号５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１及び６２によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３及びＦＲ－Ｌ４を含むか、ｂ）それぞれ配列番号５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１及び６２によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３及びＦＲ－Ｌ４を含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）それぞれ配列番号５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１及び６２によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３、及びＦＲ－Ｌ４を含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する、
請求項９に記載の単離されたモノクローナル抗体又は抗原結合断片。
【請求項11】
少なくとも１つの、請求項１～１０のいずれかに記載の抗体と、任意に、第２の異なる、請求項１～１０のいずれかに記載の抗体と、任意に、第３の異なる、請求項１～１０のいずれかに記載の抗体と、を含む、キット。
【請求項12】
請求項１～１０のいずれかに記載の抗体をコードする核酸。
【請求項13】
請求項１２に記載の核酸を含む、及び／又は請求項１～１０のいずれかに記載の抗体を産生する、宿主細胞。
【請求項14】
請求項１～１０のいずれかに記載の抗体を含む、組成物。
【請求項15】
ｉｎ ｖｉｔｒｏイムノアッセイのための、請求項１～１０のいずれか一項に記載の抗体、請求項１１に記載のキット、又は請求項１４に記載の組成物の使用。【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質の受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）に結合するモノクローナル抗体、前記抗体をコードする核酸、前記抗体を産生する宿主細胞、前記抗体を含む組成物及びキット、前記抗体を使用することを含む、試料中の前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスを検出する方法、及びイムノアッセイにおいて前記抗体を使用する方法に関する。
【背景技術】
【0002】
発明の背景
コロナウイルス（ＣｏＶ）は、大型でエンベロープ型のポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルスであり、それらの血清学的特性及び遺伝子型特性に基づいて、アルファウイルス、ベータウイルス、ガンマウイルス及びデルタコロノウイルスに更に細分することができる。２つのベータコロナウイルスＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１（重症急性呼吸器症候群コロナウイルス）及びＭＥＲＳ－ＣｏＶ（中東呼吸器症候群コロナウイルス）は、過去１０年間に２つの重症コロナウイルス流行を引き起こした（ＳＡＲＳ ２００２／２００３、ＭＥＲＳ ２０１２）。２０１９年１２月に、コロナウイルス病２０１９（ＣＯＶＩＤ－１９）と呼ばれる新規の感染性呼吸器疾患のアウトブレイクが中国で発生し、２０２０年３月までに世界的なパンデミックとなった。２０１９年１２月３１日以降、２０２１年７月５日の時点で、３，９９５，４２９名の死亡が確認された１８４，６７７，７６３名の症例が世界中で報告されており、２２１の国又は地域が影響を受けている（出典：Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ － ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｗｈｏ．ｉｎｔ／ｅｍｅｒｇｅｎｃｉｅｓ／ｄｉｓｅａｓｅｓ／ｎｏｖｅｌ－ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ－２０１９）。ＣＯＶＩＤ－１９は、新規のコロナウイルス、すなわち、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）によって引き起こされる。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、下気道にも広く存在する受容体である宿主の細胞受容体ＡＣＥ２（アンジオテンシン変換酵素２）の結合によって気道に感染する。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面スパイク（Ｓ）糖タンパク質は、ＡＣＥ２受容体とのこの相互作用を媒介し、膜融合を駆動し、したがって宿主細胞侵入を駆動する。スパイクタンパク質（Ｓ）は３量体タンパク質で、ワクチンやウイルス侵入阻害剤の主な標的である（Ｗａｌｌｓ ｅｔ ａｌ，２０２０）。
コロナウイルス（ＣｏＶ）は、大型でエンベロープ型のポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルスであり、それらの血清学的特性及び遺伝子型特性に基づいて、アルファウイルス、ベータウイルス、ガンマウイルス及びデルタコロノウイルスに更に細分することができる。２つのベータコロナウイルスＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１（重症急性呼吸器症候群コロナウイルス）及びＭＥＲＳ－ＣｏＶ（中東呼吸器症候群コロナウイルス）は、過去１０年間に２つの重症コロナウイルス流行を引き起こした（ＳＡＲＳ ２００２／２００３、ＭＥＲＳ ２０１２）。２０１９年１２月に、コロナウイルス病２０１９（ＣＯＶＩＤ－１９）と呼ばれる新規の感染性呼吸器疾患のアウトブレイクが中国で発生し、２０２０年３月までに世界的なパンデミックとなった。２０１９年１２月３１日以降、２０２１年７月５日の時点で、３，９９５，４２９名の死亡が確認された１８４，６７７，７６３名の症例が世界中で報告されており、２２１の国又は地域が影響を受けている（出典：Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ － ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｗｈｏ．ｉｎｔ／ｅｍｅｒｇｅｎｃｉｅｓ／ｄｉｓｅａｓｅｓ／ｎｏｖｅｌ－ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ－２０１９）。ＣＯＶＩＤ－１９は、新規のコロナウイルス、すなわち、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）によって引き起こされる。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、下気道にも広く存在する受容体である宿主の細胞受容体ＡＣＥ２（アンジオテンシン変換酵素２）の結合によって気道に感染する。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面スパイク（Ｓ）糖タンパク質は、ＡＣＥ２受容体とのこの相互作用を媒介し、膜融合を駆動し、したがって宿主細胞侵入を駆動する。スパイクタンパク質（Ｓ）は３量体タンパク質で、ワクチンやウイルス侵入阻害剤の主な標的である（Ｗａｌｌｓ ｅｔ ａｌ，２０２０）。
【0003】
ＣＯＶＩＤ－１９の一般的な症候には、発熱、咳、疲労、息切れ又は呼吸困難が含まれる。これらの症候は比較的非特異的であり、様々な他の疾患で見られ得る。ほとんどのＣＯＶＩＤ－１９患者は軽度の症状を有するが、一部の患者は肺炎、急性呼吸窮迫症候群、敗血症性ショック及び腎不全を発症する。
【0004】
ＣＯＶＩＤ－１９の負荷は、伝染病の負荷をはるかに超えており、ヘルスケアシステムを圧倒する恐れがある。緊急医療及び公衆衛生資源の慎重且つ効果的な分配を保証するために、疾病負荷が高い場所を特定することが重要である。ＣＯＶＩＤ－１９に関連する重度の転帰のリスクは、年齢、虚弱及び血管併存症と共に増加するようである。このシナリオは、入院、集中治療室への入院、及び再入院を増加させると考えられる。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は新規なウイルスであるため、診断から治療及びワクチン接種までの患者管理における経験が不足している。
【0005】
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症を検査する標準的な方法は、患者からの鼻咽頭及び中咽頭スワブ試料のリアルタイム逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（リアルタイムＲＴ－ＰＣＲ）である。しかしながら、分子検査はかなり時間がかかり、高価であり、ＣＯＶＩＤ－１９のパンデミックに対応するために必要な規模の検査を提供することはできない。ＰＣＲベースのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２検査の需要は高く、パンデミックが続くため供給は依然として問題である。
【0006】
抗ヌクレオカプシド又は抗スパイク免疫アッセイのような抗体試験は、患者の免疫を評価するために実験室環境でのＰＣＲ試験に従った。抗原試験は、分子試験（ＰＣＲ）と免疫試験（抗体試験）との間のギャップを埋める。
【0007】
迅速な抗原検査は、検査の高い需要に対応し、できるだけ早くＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染を可能にすることを目的として、ポイントオブケア設定で開発された。しかしながら、市場には、ハイスループット検査を可能とし、世界中でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２検査能力が増加する、中央検査室設定のための抗原試験は存在しない。進行中のパンデミック及び感染患者の増加、したがって検査の需要を考慮すると、集中的な研究室セットアップでの費用効率が高く、且つハイスループットの抗原検査に対する高い需要がある。このような完全に自動化されたシステムは、分析器に応じて、単一の分析器から最大３００個の試験／時間のスループットで、単一の試験（試料採取、輸送、調製のための時間を除外する）に対して１８分で試験結果を提供することができる。実験室ベースの自動抗原アッセイは、手作業による操作を取り除き、並びに迅速なターンアラウンド時間及び高い試験スループットによるコスト及び誤差の低減を可能にする。
【発明の概要】
【0008】
発明の概要
第１の態様では、本発明は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質の受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）に結合する（単離された）モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関し、該モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、
ａ）表面プラズモン共鳴によって決定される２．５Ｅ＋０６Ｍ－１ｓ－１を超える会合速度定数（ｋａ）を有する、
及び／又は
ｂ）表面プラズモン共鳴によって決定される５．０Ｅ－０３ｓ－１未満の解離速度定数（ｋｄ）を有する、
及び／又は
ｃ）表面プラズモン共鳴によって決定される４分以上のｔ／２ｄｉｓｓの半減期時間を有する、
及び／又は
ｄ）１：１若しくは１：２の化学量論を有する。
第１の態様では、本発明は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質の受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）に結合する（単離された）モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関し、該モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、
ａ）表面プラズモン共鳴によって決定される２．５Ｅ＋０６Ｍ－１ｓ－１を超える会合速度定数（ｋａ）を有する、
及び／又は
ｂ）表面プラズモン共鳴によって決定される５．０Ｅ－０３ｓ－１未満の解離速度定数（ｋｄ）を有する、
及び／又は
ｃ）表面プラズモン共鳴によって決定される４分以上のｔ／２ｄｉｓｓの半減期時間を有する、
及び／又は
ｄ）１：１若しくは１：２の化学量論を有する。
【0009】
本発明の第１の態様の好ましい実施形態では、抗体は中和性である。
【0010】
本発明の第１の態様の好ましい実施形態では、抗体は阻害性である。
【0011】
第２の態様では、本発明は、単離された抗体又はその抗原結合断片に関し、該抗体又はその抗原結合断片は、
ａ）それぞれ配列番号１、２、３、４、５及び６によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含むか、
ｂ）それぞれ配列番号１、２、３、４、５及び６によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）それぞれ配列番号１、２、３、４、０ ５及び６によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する。
ａ）それぞれ配列番号１、２、３、４、５及び６によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含むか、
ｂ）それぞれ配列番号１、２、３、４、５及び６によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）それぞれ配列番号１、２、３、４、０ ５及び６によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する。
【0012】
第３の態様では、本発明は、単離された抗体又はその抗原結合断片に関し、該抗体又はその抗原結合断片は、
ａ）それぞれ配列番号１７、１８、１９、２０、２１及び２２によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含むか、
ｂ）それぞれ配列番号１７、１８、１９、２０、２１及び２２によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）それぞれ配列番号１７、１８、１９、２０、２１及び２２によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する。
ａ）それぞれ配列番号１７、１８、１９、２０、２１及び２２によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含むか、
ｂ）それぞれ配列番号１７、１８、１９、２０、２１及び２２によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）それぞれ配列番号１７、１８、１９、２０、２１及び２２によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する。
【0013】
第４の態様では、本発明は、単離された抗体又はその抗原結合断片に関し、該抗体又はその抗原結合断片は、
ａ）それぞれ配列番号３３、３４、３５、３６、３７及び３８によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含むか、
ｂ）それぞれ配列番号３３、３４、３５、３６、３７及び３８によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）それぞれ配列番号３３、３４、３５、３６、３７及び３８によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する。
ａ）それぞれ配列番号３３、３４、３５、３６、３７及び３８によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含むか、
ｂ）それぞれ配列番号３３、３４、３５、３６、３７及び３８によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）それぞれ配列番号３３、３４、３５、３６、３７及び３８によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する。
【0014】
第５の態様では、本発明は、単離された抗体又はその抗原結合断片に関し、該抗体又はその抗原結合断片は、
ａ）それぞれ配列番号４９、５０、５１、５２、５３及び５４によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含むか、
ｂ）それぞれ配列番号４９、５０、５１、５２、５３及び５４によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）それぞれ配列番号４９、５０、５１、５２、５３及び５４によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する。
ａ）それぞれ配列番号４９、５０、５１、５２、５３及び５４によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含むか、
ｂ）それぞれ配列番号４９、５０、５１、５２、５３及び５４によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）それぞれ配列番号４９、５０、５１、５２、５３及び５４によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する。
【0015】
好ましい実施形態では、本発明の第２、第３、第４及び第５の態様による抗体は中和抗体である。
【0016】
好ましい実施形態では、本発明の第２、第３、第４及び第５の態様による抗体は阻害性抗体である。
【0017】
第６の態様では、本発明は、本発明の第１の態様、第２の態様、第３の態様、第４の態様、又は第５の態様について上述した抗体の群から選択される少なくとも１つの抗体、及び任意で、本発明の第１の態様、第２の態様、第３の態様、第４の態様、又は第５の態様について上述した抗体の群から選択される第２の抗体、及び任意で、本発明の第１の態様、第２の態様、第３の態様、第４の態様、又は第５の態様について上述した抗体の群から選択される第３の抗体を含むキットに関する。
【0018】
第７の態様では、本発明は、本発明の第１の態様、第２の態様、第３の態様、第４の態様、又は第５の態様について上述した抗体の群から選択される抗体をコードする核酸に関する。
【0019】
第８の態様では、本発明は、本発明の第７の態様について上述した核酸を含む宿主細胞、及び／又は本発明の第１の態様、第２の態様、第３の態様、第４の態様、又は第５の態様について上述した抗体を産生する宿主細胞に関する。
【0020】
第９の態様では、本発明は、本発明の第１の態様、第２の態様、第３の態様、第４の態様、又は第５の態様について上述した抗体の群から選択される少なくとも１つの抗体を含む組成物に関する。
【0021】
第１０の態様では、本発明は、ｉｎ ｖｉｔｒｏイムノアッセイのための、本発明の第１の態様、第２の態様、第３の態様、第４の態様若しくは第５の態様の抗体、又は本発明の第６の態様のキット、又は本発明の第９の態様の組成物の使用に関する。
【0022】
第１１の態様では、本発明は、患者から得られた試料中のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスの存在を検出するための ｉｎ ｖｉｔｒｏ方法に関する。
【0023】
以下、本発明による実施形態をより詳細に説明する。
【図面の簡単な説明】
【0024】
【図1】抗体／ＲＢＤ（野生型）相互作用の例示的な速度論的シグネチャを用いた速度論的スクリーニング。（Ａ）スクリーニング後に選択解除。（Ｂ）スクリーニング後に更に推奨。
【図2】クローン１Ｆ１２、４Ｈ１０、７Ｇ５、及び１４Ｆ１０の速度定数。
【図3】ＢＳＡの存在下、ＲＢＤ濃度を０．２ｎＭから１３．３ｎＭまで増加させたときの抗体とＲＢＤ（野生型）との相互作用。濃度１３．３ｎＭ（黒）の複製をラングミュア１：１結合モデル、Ｒｍａｘ グローバル、ＲＩ＝０（灰色）によって重ね合わせた濃度系列を示す。
【図4-1】インハウス野生型ＲＢＤと抗体対の複合体形成に関するエピトープビニング実験のための例示的なセンサーグラムオーバーレイ。灰色の矢印は、注入の開始（上）及び停止（下）を示す。１）一次抗体、２）ブロッキング混合物、３）インハウスＲＢＤ、４）再び一次抗体、５）二次抗体、６）再生。Ａ）一次抗体としてクローン２Ｃ１１、及び二次抗体として７Ｇ５（上のセンサーグラム）は、ＲＢＤと免疫複合体を形成する。下のセンサーグラムは、一次抗体及び二次抗体として２Ｃ１１を用いた陰性対照を示す。陽性反応は、時間セクション５の陰性対照の実行において検出できない。Ｂ）ズーム－一次抗体としてクローン２Ｃ１１、二次抗体としてクローン７Ｇ５（上のセンサーグラム）対陰性対照（ｉ）２Ｃ１１をそれぞれ二次抗体として緩衝液（ｉｉ）二次抗体の代わりに緩衝液、及びＲＢＤの代わりに緩衝液、及び二次抗体として２Ｃ１１（下のセンサーグラム）。陽性反応は、時間セクション５の両方の陰性対照の実行において検出できない。Ｃ）ズーム－一次抗体として７Ｇ５及び二次抗体として２Ｃ１１（上のセンサーグラム）、ＲＢＤとサンドイッチ複合体を形成、一次抗体及び二次抗体としてそれぞれ陰性対照７Ｇ５、一次抗体及び二次抗体として７Ｇ５、及びＲＢＤの代わりに緩衝液（下のセンサーグラム）。様々な実験からの情報を組み合わせて、２１のエピトープ領域が同定された。
【図4-2】インハウス野生型ＲＢＤと抗体対の複合体形成に関するエピトープビニング実験のための例示的なセンサーグラムオーバーレイ。灰色の矢印は、注入の開始（上）及び停止（下）を示す。１）一次抗体、２）ブロッキング混合物、３）インハウスＲＢＤ、４）再び一次抗体、５）二次抗体、６）再生。Ａ）一次抗体としてクローン２Ｃ１１、及び二次抗体として７Ｇ５（上のセンサーグラム）は、ＲＢＤと免疫複合体を形成する。下のセンサーグラムは、一次抗体及び二次抗体として２Ｃ１１を用いた陰性対照を示す。陽性反応は、時間セクション５の陰性対照の実行において検出できない。Ｂ）ズーム－一次抗体としてクローン２Ｃ１１、二次抗体としてクローン７Ｇ５（上のセンサーグラム）対陰性対照（ｉ）２Ｃ１１をそれぞれ二次抗体として緩衝液（ｉｉ）二次抗体の代わりに緩衝液、及びＲＢＤの代わりに緩衝液、及び二次抗体として２Ｃ１１（下のセンサーグラム）。陽性反応は、時間セクション５の両方の陰性対照の実行において検出できない。Ｃ）ズーム－一次抗体として７Ｇ５及び二次抗体として２Ｃ１１（上のセンサーグラム）、ＲＢＤとサンドイッチ複合体を形成、一次抗体及び二次抗体としてそれぞれ陰性対照７Ｇ５、一次抗体及び二次抗体として７Ｇ５、及びＲＢＤの代わりに緩衝液（下のセンサーグラム）。様々な実験からの情報を組み合わせて、２１のエピトープ領域が同定された。
【図5】エピトープビニングの決定：９ｘ９抗体のモル比をマトリックスにまとめる。抗体４Ｈ１０は、９つの試験抗体からなるエピトープビニングマトリックス中の代表的な抗体として示されている。ここでは、８１の抗体対合の組み合わせを分析した。
【図6】ＡＣＥ－２ ＲＢＤ接触面バインダーの同定。 ２回の連続注入（１）１番目の野生型ＲＢＤ及び（２）２番目のＡＣＥ２が、表面に提示された抗ＲＢＤ ｍＡｂクローン４Ｈ１０、１Ｆ１２、１Ｈ９及び２Ｃ１１に提供される。（３）ＡＣＥ－２の注入停止及び解離相。Ａ）クローン４Ｈ１０及び１Ｆ１２で示された二元複合体解離相［２－３］では、ＡＣＥ－２応答シグナルの増加も減少もない。これらのクローンは、ＡＣＥ－２／ＲＢＤ接触面内又はその近くで野生型ＲＢＤに結合し、ＡＣＥ－２／ＲＢＤのドッキングを完全に回避する。Ｂ）ＡＣＥ－２増加応答シグナル及び三元ｍＡｂ／ＲＢＤ／ＡＣＥ－２複合体形成がクローン１Ｈ９及び２Ｃ１１で示されている。これらのクローンは、ＡＣＥ－２／ＲＢＤ接触面から離れて野生型ＲＢＤに結合する。
【図7】競合イムノアッセイによるＥｌｅｃｓｙｓ（登録商標）プラットフォーム上の抗体によるＡＣＥ２－ＲＢＤ結合の妨害の評価。このデータはＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）のデータを裏付けるものである。
【図8】ＳＰＲで得られた３７℃におけるｍＡｂ １Ｆ１２と選択したＲＢＤ変異体との結合の速度論的プロファイル。漸増濃度のＲＢＤ変異体と抗体との相互作用、ｃ＝１．２－３３．３ｎＭ、それぞれ３．７－３３．３ｎＭをラングミュア１：１結合モデルと重ね合わせたもの。
【図9】親和性、会合速度定数ｋａ、及び複合体安定性（ｔ／２ ｄｉｓｓ）（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の異なる変異体（バリアント）に対するクローン１Ｆ１２の結合）に関するＲＢＤ野生型と変異体の比較。
【図10】相対的親和性、ＲＢＤ野生型対変異体（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の異なる変異体（バリアント）に対するクローン１Ｆ１２の結合）。
【図11】相対的会合速度定数ｋａ ＲＢＤ、及び複合体安定性（ｔ／２ ｄｉｓｓ）、野生型対変異体（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の異なる変異体（バリアント）に対するクローン１Ｆ１２の結合）。
【図12】クローン１Ｆ１２の、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の野生型及び変異体（バリアント）に対する結合の速度定数。１行目は野生型の結果を示している。２行目は変異体ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２－ＲＢＤ－Ｎ５０１Ｙ；３行目は変異体ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＢＤ－Ｅ４８４Ｋ；４行目は変異体ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＢＤ－Ｅ４８４Ｋ Ｎ５０１Ｙ；５行目は変異体ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＢＤ－Ｑ－Ｈｉｓ８＿Ｌ４５２Ｒ，Ｅ４８４Ｑ；６行目は変異体ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＢＤ－Ｑ－Ｈｉｓ８ Ｌ４５２Ｒ，Ｎ５０１Ｙ；７行目は変異体ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＢＤ－Ｑ－Ｈｉｓ８ Ｅ４０６Ｗ；８行目は変異体ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＢＤ－Ｑ－Ｈｉｓ８ Ｋ４１７Ｔ，Ｅ４８４Ｋ，Ｎ５０１Ｙ；９行目は変異体ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＢＤ－Ｑ－Ｈｉｓ８ Ｋ４１７Ｎ，Ｅ４８４Ｋ，Ｎ５０１Ｙ；１０行目は変異体ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ オミクロン；１１行目は変異体ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＢＡ２；１２行目は変異体ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＢＡ２．１２．１；１３行目は変異体ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＢＡ２．１１；１４行目は変異体ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＢＤ Ｑ Ｌ４５２Ｒ，Ｔ４７８Ｋ；１５行目は変異体ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＢＤ Ｑ Ｌ４５２Ｑ Ｆ４９０Ｓ；１６行目は変異体ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＢＤ Ｑ Ｒ３４６Ｋ Ｅ４８４Ｋ Ｎ５０１Ｙ；１７行目は変異体ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＢＤ Ｑ＿ＢＡ５。
【発明を実施するための形態】
【0025】
配列表
配列番号１ 抗体１Ｆ１２：ＣＤＲ－Ｈ１：ＮＮＹＶＭＣ
配列番号２ 抗体１Ｆ１２：ＣＤＲ－Ｈ２：ＣＩＮＴＧＳＧＳＴＹＹＡＴＷＡＫＧ
配列番号３ 抗体１Ｆ１２：ＣＤＲ－Ｈ３：ＳＴＴＹＹＮＹＩＧＧＮＷＩＹＶＭＤＧＦＮＬ
配列番号４ 抗体１Ｆ１２：ＣＤＲ－Ｌ１：ＱＡＳＥＮＩＹＳＳＬＡ
配列番号５ 抗体１Ｆ１２：ＣＤＲ－Ｌ２：ＤＡＳＤＬＡＳ
配列番号６ 抗体１Ｆ１２：ＣＤＲ－Ｌ３：ＱＱＧＹＴＶＤＮＩＤＮＴ
配列番号７ 抗体１Ｆ１２：ＦＲ－Ｈ１：ＱＳＬＥＥＳＧＧＤＬＶＫＰＧＡＳＬＴＬＴＣＴＡＳＧＦＳＦＳ
配列番号８ 抗体１Ｆ１２：ＦＲ－Ｈ２：ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧ
配列番号９ 抗体１Ｆ１２：ＦＲ－Ｈ３：ＲＦＴＩＳＫＩＳＳＴＴＶＴＬＱＭＴＳＬＴＡＡＤＴＡＴＹＦＣＡＲ
配列番号１０ 抗体１Ｆ１２：ＦＲ－Ｈ４：ＷＧＰＧＴＬＶＰＶＳＳ
配列番号１１ 抗体１Ｆ１２：ＦＲ－Ｌ１：ＡＱＶＬＴＱＴＰＳＳＶＳＥＰＶＧＧＴＶＴＩＮＣ
配列番号１２ 抗体１Ｆ１２：ＦＲ－Ｌ２：ＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹ
配列番号１３ 抗体１Ｆ１２：ＦＲ－Ｌ３：ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＹＴＬＴＩＳＧＶＥＣＤＤＡＡＴＹＹＣ
配列番号１４ 抗体１Ｆ１２：ＦＲ－Ｌ４：ＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫ
配列番号１５ 抗体１Ｆ１２：重鎖可変ドメイン：ＱＳＬＥＥＳＧＧＤＬＶＫＰＧＡＳＬＴＬＴＣＴＡＳＧＦＳＦＳＮＮＹＶＭＣＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＣＩＮＴＧＳＧＳＴＹＹＡＴＷＡＫＧＲＦＴＩＳＫＩＳＳＴＴＶＴＬＱＭＴＳＬＴＡＡＤＴＡＴＹＦＣＡＲＳＴＴＹＹＮＹＩＧＧＮＷＩＹＶＭＤＧＦＮＬＷＧＰＧＴＬＶＰＶＳＳ
配列番号１６ 抗体１Ｆ１２：重鎖可変ドメイン：ＡＱＶＬＴＱＴＰＳＳＶＳＥＰＶＧＧＴＶＴＩＮＣＱＡＳＥＮＩＹＳＳＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＤＡＳＤＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＹＴＬＴＩＳＧＶＥＣＤＤＡＡＴＹＹＣＱＱＧＹＴＶＤＮＩＤＮＴＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫ
配列番号１７ 抗体４Ｈ１０：ＣＤＲ－Ｈ１：ＴＹＹＦＭＣ
配列番号１８ 抗体４Ｈ１０：ＣＤＲ－Ｈ２：ＣＩＡＴＳＳＧＳＴＷＹＡＮＷＶＮＧ
配列番号１９ 抗体４Ｈ１０：ＣＤＲ－Ｈ３：ＷＤＶＳＹＡＧＤＧＹＧＦＮＬ
配列番号２０ 抗体４Ｈ１０：ＣＤＲ－Ｌ１：ＱＡＳＱＳＩＳＮＤＬＮ
配列番号２１ 抗体４Ｈ１０：ＣＤＲ－Ｌ２：ＫＡＳＴＬＡＳ
配列番号２２ 抗体４Ｈ１０：ＣＤＲ－Ｌ３：ＱＱＧＹＳＳＳＮＶＤＮＶ
配列番号２３ 抗体４Ｈ１０：ＦＲ－Ｈ１：ＱＥＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＥＧＳＬＴＬＴＣＫＧＳＧＦＤＬＳ
配列番号２４ 抗体４Ｈ１０：ＦＲ－Ｈ２：ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧ
配列番号２５ 抗体４Ｈ１０：ＦＲ－Ｈ３：ＲＦＳＩＳＫＴＳＳＴＴＶＴＬＱＭＴＳＬＴＡＡＤＴＡＴＹＦＣＡＲ
配列番号２６ 抗体４Ｈ１０：ＦＲ－Ｈ４：ＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号２７ 抗体４Ｈ１０：ＦＲ－Ｌ１：ＹＤＭＴＱＴＰＳＳＶＳＡＡＶＧＧＴＶＴＩＮＣ
配列番号２８ 抗体４Ｈ１０：ＦＲ－Ｌ２：ＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＴＹ
配列番号２９ 抗体４Ｈ１０：ＦＲ－Ｌ３：ＧＶＰＳＲＦＫＧＳＧＳＧＴＱＦＴＬＴＩＳＧＩＥＣＡＤＡＡＴＹＹＣ
配列番号３０ 抗体４Ｈ１０：ＦＲ－Ｌ４：ＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫ
配列番号３１ 抗体４Ｈ１０：重鎖可変ドメイン：ＱＥＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＥＧＳＬＴＬＴＣＫＧＳＧＦＤＬＳＴＹＹＦＭＣＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＣＩＡＴＳＳＧＳＴＷＹＡＮＷＶＮＧＲＦＳＩＳＫＴＳＳＴＴＶＴＬＱＭＴＳＬＴＡＡＤＴＡＴＹＦＣＡＲＷＤＶＳＹＡＧＤＧＹＧＦＮＬＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３２ 抗体４Ｈ１０：重鎖可変ドメイン：ＹＤＭＴＱＴＰＳＳＶＳＡＡＶＧＧＴＶＴＩＮＣＱＡＳＱＳＩＳＮＤＬＮＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＴＹＫＡＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＫＧＳＧＳＧＴＱＦＴＬＴＩＳＧＩＥＣＡＤＡＡＴＹＹＣＱＱＧＹＳＳＳＮＶＤＮＶＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫ
配列番号３３ 抗体７Ｇ５：ＣＤＲ－Ｈ１：ＴＹＳＭＧ
配列番号３４ 抗体７Ｇ５：ＣＤＲ－Ｈ２：ＩＩＮＴＧＧＧＡＹＹＡＳＷＡＫＧ
配列番号３５ 抗体７Ｇ５：ＣＤＲ－Ｈ３：ＥＳＬＩＹＧＧＦＨＩ
配列番号３６ 抗体７Ｇ５：ＣＤＲ－Ｌ１：ＱＡＳＱＳＩＳＮＡＬＡ
配列番号３７ 抗体７Ｇ５：ＣＤＲ－Ｌ２：ＧＡＳＮＬＡＳ
配列番号３８ 抗体７Ｇ５：ＣＤＲ－Ｌ３：ＱＳＴＹＹＧＳＳＹＶＧＧＡ
配列番号３９ 抗体７Ｇ５：ＦＲ－Ｈ１：ＱＳＶＥＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＴＶＳＧＩＤＬＳ
配列番号４０ 抗体７Ｇ５：ＦＲ－Ｈ２：ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＹＩＧ
配列番号４１ 抗体７Ｇ５：ＦＲ－Ｈ３：ＲＦＴＩＳＲＴＳＴＴＶＤＬＫＩＴＳＰＴＴＥＤＴＡＴＹＦＣＡＲ
配列番号４２ 抗体７Ｇ５：ＦＲ－Ｈ４：ＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＬ
配列番号４３ 抗体７Ｇ５：ＦＲ－Ｌ１：ＤＶＶＭＴＱＴＰＡＳＶＳＥＰＶＧＧＴＶＴＩＫＣ
配列番号４４ 抗体７Ｇ５：ＦＲ－Ｌ２：ＷＹＱＱＫＰＧＱＲＰＮＬＬＩＹ
配列番号４５ 抗体７Ｇ５：ＦＲ－Ｌ３：ＧＶＰＳＲＦＴＧＳＲＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＤＬＥＣＡＤＡＡＴＹＹＣ
配列番号４６ 抗体７Ｇ５：ＦＲ－Ｌ４：ＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫ
配列番号４７ 抗体７Ｇ５：重鎖可変ドメイン：ＱＳＶＥＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＴＶＳＧＩＤＬＳＴＹＳＭＧＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＹＩＧＩＩＮＴＧＧＧＡＹＹＡＳＷＡＫＧＲＦＴＩＳＲＴＳＴＴＶＤＬＫＩＴＳＰＴＴＥＤＴＡＴＹＦＣＡＲＥＳＬＩＹＧＧＦＨＩＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＬ
配列番号４８ 抗体７Ｇ５：重鎖可変ドメイン：ＤＶＶＭＴＱＴＰＡＳＶＳＥＰＶＧＧＴＶＴＩＫＣＱＡＳＱＳＩＳＮＡＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＲＰＮＬＬＩＹＧＡＳＮＬＡＳＧＶＰＳＲＦＴＧＳＲＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＤＬＥＣＡＤＡＡＴＹＹＣＱＳＴＹＹＧＳＳＹＶＧＧＡＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫ
配列番号４９ 抗体１４Ｆ１０：ＣＤＲ－Ｈ１：ＳＹＹＭＩ
配列番号５０ 抗体１４Ｆ１０：ＣＤＲ－Ｈ２：ＦＩＮＴＧＧＧＡＹＹＡＳＷＡＫＧ
配列番号５１ 抗体１４Ｆ１０：ＣＤＲ－Ｈ３：ＧＧＡＰＤＶＮＤＹＧＹＤＩ
配列番号５２ 抗体１４Ｆ１０：ＣＤＲ－Ｌ１：ＱＡＳＱＮＩＶＧＲＬＡ
配列番号５３ 抗体１４Ｆ１０：ＣＤＲ－Ｌ２：ＧＡＳＴＬＡＳ
配列番号５４ 抗体１４Ｆ１０：ＣＤＲ－Ｌ３：ＱＳＮＹＧＡＤＳＴＴＹＧＶＶ
配列番号５５ 抗体１４Ｆ１０：ＦＲ－Ｈ１：ＱＳＶＥＥＳＧＧＲＬＶＫＰＤＥＳＬＴＬＴＣＴＡＳＧＦＳＬＳ
配列番号５６ 抗体１４Ｆ１０：ＦＲ－Ｈ２：ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＣＩＧ
配列番号５７ 抗体１４Ｆ１０：ＦＲ－Ｈ３：ＲＦＴＩＳＲＴＳＴＴＶＤＬＫＭＴＳＬＴＴＥＤＴＡＴＹＦＣＡＲ
配列番号５８ 抗体１４Ｆ１０：ＦＲ－Ｈ４：ＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＬ
配列番号５９ 抗体１４Ｆ１０：ＦＲ－Ｌ１：ＤＩＶＭＴＱＴＰＡＳＶＳＥＰＶＧＧＴＶＴＩＫＣ
配列番号６０ 抗体１４Ｆ１０：ＦＲ－Ｌ２：ＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹ
配列番号６１ 抗体１４Ｆ１０：ＦＲ－Ｌ３：ＧＶＰＳＲＦＫＧＳＧＳＧＴＱＦＴＬＴＩＳＤＬＥＣＤＤＡＡＴＹＹＣ
配列番号６２ 抗体１４Ｆ１０：ＦＲ－Ｌ４：ＦＧＧＧＴＥＶＶＶＲ
配列番号６３ 抗体１４Ｆ１０：重鎖可変ドメイン：ＱＳＶＥＥＳＧＧＲＬＶＫＰＤＥＳＬＴＬＴＣＴＡＳＧＦＳＬＳＳＹＹＭＩＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＣＩＧＦＩＮＴＧＧＧＡＹＹＡＳＷＡＫＧＲＦＴＩＳＲＴＳＴＴＶＤＬＫＭＴＳＬＴＴＥＤＴＡＴＹＦＣＡＲＧＧＡＰＤＶＮＤＹＧＹＤＩＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＬ
配列番号６４ 抗体１４Ｆ１０：重鎖可変ドメイン：ＤＩＶＭＴＱＴＰＡＳＶＳＥＰＶＧＧＴＶＴＩＫＣＱＡＳＱＮＩＶＧＲＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＧＡＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＫＧＳＧＳＧＴＱＦＴＬＴＩＳＤＬＥＣＤＤＡＡＴＹＹＣＱＳＮＹＧＡＤＳＴＴＹＧＶＶＦＧＧＧＴＥＶＶＶＲ
配列番号１ 抗体１Ｆ１２：ＣＤＲ－Ｈ１：ＮＮＹＶＭＣ
配列番号２ 抗体１Ｆ１２：ＣＤＲ－Ｈ２：ＣＩＮＴＧＳＧＳＴＹＹＡＴＷＡＫＧ
配列番号３ 抗体１Ｆ１２：ＣＤＲ－Ｈ３：ＳＴＴＹＹＮＹＩＧＧＮＷＩＹＶＭＤＧＦＮＬ
配列番号４ 抗体１Ｆ１２：ＣＤＲ－Ｌ１：ＱＡＳＥＮＩＹＳＳＬＡ
配列番号５ 抗体１Ｆ１２：ＣＤＲ－Ｌ２：ＤＡＳＤＬＡＳ
配列番号６ 抗体１Ｆ１２：ＣＤＲ－Ｌ３：ＱＱＧＹＴＶＤＮＩＤＮＴ
配列番号７ 抗体１Ｆ１２：ＦＲ－Ｈ１：ＱＳＬＥＥＳＧＧＤＬＶＫＰＧＡＳＬＴＬＴＣＴＡＳＧＦＳＦＳ
配列番号８ 抗体１Ｆ１２：ＦＲ－Ｈ２：ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧ
配列番号９ 抗体１Ｆ１２：ＦＲ－Ｈ３：ＲＦＴＩＳＫＩＳＳＴＴＶＴＬＱＭＴＳＬＴＡＡＤＴＡＴＹＦＣＡＲ
配列番号１０ 抗体１Ｆ１２：ＦＲ－Ｈ４：ＷＧＰＧＴＬＶＰＶＳＳ
配列番号１１ 抗体１Ｆ１２：ＦＲ－Ｌ１：ＡＱＶＬＴＱＴＰＳＳＶＳＥＰＶＧＧＴＶＴＩＮＣ
配列番号１２ 抗体１Ｆ１２：ＦＲ－Ｌ２：ＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹ
配列番号１３ 抗体１Ｆ１２：ＦＲ－Ｌ３：ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＹＴＬＴＩＳＧＶＥＣＤＤＡＡＴＹＹＣ
配列番号１４ 抗体１Ｆ１２：ＦＲ－Ｌ４：ＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫ
配列番号１５ 抗体１Ｆ１２：重鎖可変ドメイン：ＱＳＬＥＥＳＧＧＤＬＶＫＰＧＡＳＬＴＬＴＣＴＡＳＧＦＳＦＳＮＮＹＶＭＣＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＣＩＮＴＧＳＧＳＴＹＹＡＴＷＡＫＧＲＦＴＩＳＫＩＳＳＴＴＶＴＬＱＭＴＳＬＴＡＡＤＴＡＴＹＦＣＡＲＳＴＴＹＹＮＹＩＧＧＮＷＩＹＶＭＤＧＦＮＬＷＧＰＧＴＬＶＰＶＳＳ
配列番号１６ 抗体１Ｆ１２：重鎖可変ドメイン：ＡＱＶＬＴＱＴＰＳＳＶＳＥＰＶＧＧＴＶＴＩＮＣＱＡＳＥＮＩＹＳＳＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＤＡＳＤＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＹＴＬＴＩＳＧＶＥＣＤＤＡＡＴＹＹＣＱＱＧＹＴＶＤＮＩＤＮＴＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫ
配列番号１７ 抗体４Ｈ１０：ＣＤＲ－Ｈ１：ＴＹＹＦＭＣ
配列番号１８ 抗体４Ｈ１０：ＣＤＲ－Ｈ２：ＣＩＡＴＳＳＧＳＴＷＹＡＮＷＶＮＧ
配列番号１９ 抗体４Ｈ１０：ＣＤＲ－Ｈ３：ＷＤＶＳＹＡＧＤＧＹＧＦＮＬ
配列番号２０ 抗体４Ｈ１０：ＣＤＲ－Ｌ１：ＱＡＳＱＳＩＳＮＤＬＮ
配列番号２１ 抗体４Ｈ１０：ＣＤＲ－Ｌ２：ＫＡＳＴＬＡＳ
配列番号２２ 抗体４Ｈ１０：ＣＤＲ－Ｌ３：ＱＱＧＹＳＳＳＮＶＤＮＶ
配列番号２３ 抗体４Ｈ１０：ＦＲ－Ｈ１：ＱＥＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＥＧＳＬＴＬＴＣＫＧＳＧＦＤＬＳ
配列番号２４ 抗体４Ｈ１０：ＦＲ－Ｈ２：ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧ
配列番号２５ 抗体４Ｈ１０：ＦＲ－Ｈ３：ＲＦＳＩＳＫＴＳＳＴＴＶＴＬＱＭＴＳＬＴＡＡＤＴＡＴＹＦＣＡＲ
配列番号２６ 抗体４Ｈ１０：ＦＲ－Ｈ４：ＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号２７ 抗体４Ｈ１０：ＦＲ－Ｌ１：ＹＤＭＴＱＴＰＳＳＶＳＡＡＶＧＧＴＶＴＩＮＣ
配列番号２８ 抗体４Ｈ１０：ＦＲ－Ｌ２：ＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＴＹ
配列番号２９ 抗体４Ｈ１０：ＦＲ－Ｌ３：ＧＶＰＳＲＦＫＧＳＧＳＧＴＱＦＴＬＴＩＳＧＩＥＣＡＤＡＡＴＹＹＣ
配列番号３０ 抗体４Ｈ１０：ＦＲ－Ｌ４：ＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫ
配列番号３１ 抗体４Ｈ１０：重鎖可変ドメイン：ＱＥＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＥＧＳＬＴＬＴＣＫＧＳＧＦＤＬＳＴＹＹＦＭＣＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＣＩＡＴＳＳＧＳＴＷＹＡＮＷＶＮＧＲＦＳＩＳＫＴＳＳＴＴＶＴＬＱＭＴＳＬＴＡＡＤＴＡＴＹＦＣＡＲＷＤＶＳＹＡＧＤＧＹＧＦＮＬＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３２ 抗体４Ｈ１０：重鎖可変ドメイン：ＹＤＭＴＱＴＰＳＳＶＳＡＡＶＧＧＴＶＴＩＮＣＱＡＳＱＳＩＳＮＤＬＮＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＴＹＫＡＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＫＧＳＧＳＧＴＱＦＴＬＴＩＳＧＩＥＣＡＤＡＡＴＹＹＣＱＱＧＹＳＳＳＮＶＤＮＶＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫ
配列番号３３ 抗体７Ｇ５：ＣＤＲ－Ｈ１：ＴＹＳＭＧ
配列番号３４ 抗体７Ｇ５：ＣＤＲ－Ｈ２：ＩＩＮＴＧＧＧＡＹＹＡＳＷＡＫＧ
配列番号３５ 抗体７Ｇ５：ＣＤＲ－Ｈ３：ＥＳＬＩＹＧＧＦＨＩ
配列番号３６ 抗体７Ｇ５：ＣＤＲ－Ｌ１：ＱＡＳＱＳＩＳＮＡＬＡ
配列番号３７ 抗体７Ｇ５：ＣＤＲ－Ｌ２：ＧＡＳＮＬＡＳ
配列番号３８ 抗体７Ｇ５：ＣＤＲ－Ｌ３：ＱＳＴＹＹＧＳＳＹＶＧＧＡ
配列番号３９ 抗体７Ｇ５：ＦＲ－Ｈ１：ＱＳＶＥＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＴＶＳＧＩＤＬＳ
配列番号４０ 抗体７Ｇ５：ＦＲ－Ｈ２：ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＹＩＧ
配列番号４１ 抗体７Ｇ５：ＦＲ－Ｈ３：ＲＦＴＩＳＲＴＳＴＴＶＤＬＫＩＴＳＰＴＴＥＤＴＡＴＹＦＣＡＲ
配列番号４２ 抗体７Ｇ５：ＦＲ－Ｈ４：ＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＬ
配列番号４３ 抗体７Ｇ５：ＦＲ－Ｌ１：ＤＶＶＭＴＱＴＰＡＳＶＳＥＰＶＧＧＴＶＴＩＫＣ
配列番号４４ 抗体７Ｇ５：ＦＲ－Ｌ２：ＷＹＱＱＫＰＧＱＲＰＮＬＬＩＹ
配列番号４５ 抗体７Ｇ５：ＦＲ－Ｌ３：ＧＶＰＳＲＦＴＧＳＲＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＤＬＥＣＡＤＡＡＴＹＹＣ
配列番号４６ 抗体７Ｇ５：ＦＲ－Ｌ４：ＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫ
配列番号４７ 抗体７Ｇ５：重鎖可変ドメイン：ＱＳＶＥＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＴＶＳＧＩＤＬＳＴＹＳＭＧＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＹＩＧＩＩＮＴＧＧＧＡＹＹＡＳＷＡＫＧＲＦＴＩＳＲＴＳＴＴＶＤＬＫＩＴＳＰＴＴＥＤＴＡＴＹＦＣＡＲＥＳＬＩＹＧＧＦＨＩＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＬ
配列番号４８ 抗体７Ｇ５：重鎖可変ドメイン：ＤＶＶＭＴＱＴＰＡＳＶＳＥＰＶＧＧＴＶＴＩＫＣＱＡＳＱＳＩＳＮＡＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＲＰＮＬＬＩＹＧＡＳＮＬＡＳＧＶＰＳＲＦＴＧＳＲＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＤＬＥＣＡＤＡＡＴＹＹＣＱＳＴＹＹＧＳＳＹＶＧＧＡＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫ
配列番号４９ 抗体１４Ｆ１０：ＣＤＲ－Ｈ１：ＳＹＹＭＩ
配列番号５０ 抗体１４Ｆ１０：ＣＤＲ－Ｈ２：ＦＩＮＴＧＧＧＡＹＹＡＳＷＡＫＧ
配列番号５１ 抗体１４Ｆ１０：ＣＤＲ－Ｈ３：ＧＧＡＰＤＶＮＤＹＧＹＤＩ
配列番号５２ 抗体１４Ｆ１０：ＣＤＲ－Ｌ１：ＱＡＳＱＮＩＶＧＲＬＡ
配列番号５３ 抗体１４Ｆ１０：ＣＤＲ－Ｌ２：ＧＡＳＴＬＡＳ
配列番号５４ 抗体１４Ｆ１０：ＣＤＲ－Ｌ３：ＱＳＮＹＧＡＤＳＴＴＹＧＶＶ
配列番号５５ 抗体１４Ｆ１０：ＦＲ－Ｈ１：ＱＳＶＥＥＳＧＧＲＬＶＫＰＤＥＳＬＴＬＴＣＴＡＳＧＦＳＬＳ
配列番号５６ 抗体１４Ｆ１０：ＦＲ－Ｈ２：ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＣＩＧ
配列番号５７ 抗体１４Ｆ１０：ＦＲ－Ｈ３：ＲＦＴＩＳＲＴＳＴＴＶＤＬＫＭＴＳＬＴＴＥＤＴＡＴＹＦＣＡＲ
配列番号５８ 抗体１４Ｆ１０：ＦＲ－Ｈ４：ＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＬ
配列番号５９ 抗体１４Ｆ１０：ＦＲ－Ｌ１：ＤＩＶＭＴＱＴＰＡＳＶＳＥＰＶＧＧＴＶＴＩＫＣ
配列番号６０ 抗体１４Ｆ１０：ＦＲ－Ｌ２：ＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹ
配列番号６１ 抗体１４Ｆ１０：ＦＲ－Ｌ３：ＧＶＰＳＲＦＫＧＳＧＳＧＴＱＦＴＬＴＩＳＤＬＥＣＤＤＡＡＴＹＹＣ
配列番号６２ 抗体１４Ｆ１０：ＦＲ－Ｌ４：ＦＧＧＧＴＥＶＶＶＲ
配列番号６３ 抗体１４Ｆ１０：重鎖可変ドメイン：ＱＳＶＥＥＳＧＧＲＬＶＫＰＤＥＳＬＴＬＴＣＴＡＳＧＦＳＬＳＳＹＹＭＩＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＣＩＧＦＩＮＴＧＧＧＡＹＹＡＳＷＡＫＧＲＦＴＩＳＲＴＳＴＴＶＤＬＫＭＴＳＬＴＴＥＤＴＡＴＹＦＣＡＲＧＧＡＰＤＶＮＤＹＧＹＤＩＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＬ
配列番号６４ 抗体１４Ｆ１０：重鎖可変ドメイン：ＤＩＶＭＴＱＴＰＡＳＶＳＥＰＶＧＧＴＶＴＩＫＣＱＡＳＱＮＩＶＧＲＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＧＡＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＫＧＳＧＳＧＴＱＦＴＬＴＩＳＤＬＥＣＤＤＡＡＴＹＹＣＱＳＮＹＧＡＤＳＴＴＹＧＶＶＦＧＧＧＴＥＶＶＶＲ
【0026】
発明の詳細な説明
本発明を以下に詳細に説明する前に、本発明は、本明細書に記載される特定の方法、プロトコル、及び試薬に限定されず、これらは変化し得ることを理解されたい。本明細書で使用される用語は、特定の実施形態を説明することのみを目的とし、添付の特許請求の範囲によってのみ限定される本発明の範囲を限定することを意図しないことも理解されるべきである。別段の定義がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、当技術分野の当業者によって一般的に理解されている意味と同じ意味を有する。
本発明を以下に詳細に説明する前に、本発明は、本明細書に記載される特定の方法、プロトコル、及び試薬に限定されず、これらは変化し得ることを理解されたい。本明細書で使用される用語は、特定の実施形態を説明することのみを目的とし、添付の特許請求の範囲によってのみ限定される本発明の範囲を限定することを意図しないことも理解されるべきである。別段の定義がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、当技術分野の当業者によって一般的に理解されている意味と同じ意味を有する。
【0027】
いくつかの文献が本明細書中で引用されている。本明細書に引用されている各文献（全ての特許、特許出願、科学出版物、製造業者の仕様書、説明書等を含む）は、上記であろうと以下であろうと、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。このように組み込まれた参照の定義又は教示と、本明細書に引用された定義又は教示との間に矛盾がある場合には、本明細書の本文が優先する。
【0028】
以下、本発明の各要素について説明する。これらの要素は特定の実施形態とともに列挙されているが、これらは任意の方法及び任意の数で組み合わせて追加の実施形態を作成することができることを理解されたい。様々な実施例及び好ましい実施形態は、本発明を明示的に説明した実施形態のみに限定するものと解釈されるべきではない。この記載は、明示的に記載された実施形態を任意の数の開示された要素及び／又は好ましい要素と組み合わせる実施形態を支持し、且つ包含するものと理解されるべきである。更に、本出願に記載されている全ての要素の任意の順列及び組み合わせは、文脈が別段の意味を示さない限り、本出願の説明によって開示されていると考えるべきである。
【0029】
定義
「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という単語、並びに「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」及び「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」のような変形は、記載された整数若しくは工程又は整数若しくは工程のグループの包含を意味するが、いかなる他の整数若しくは工程又は整数若しくは工程のグループの除外を意味しないことが理解されよう。
「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という単語、並びに「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」及び「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」のような変形は、記載された整数若しくは工程又は整数若しくは工程のグループの包含を意味するが、いかなる他の整数若しくは工程又は整数若しくは工程のグループの除外を意味しないことが理解されよう。
【0030】
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、及び「その（ｔｈｅ）」は、別途内容が明確に指示しない限り、複数の指示対象を含む。
【0031】
濃度、量、及び他の数値データは、本明細書では「範囲」の形式で表現又は提示され得る。このような範囲の形式は、便宜上及び簡潔にするために単に使用されているに過ぎないことが理解され、したがって、その範囲の境界として明示的に列挙されている数値を含むだけではなく、各数値及び部分範囲があたかも明示的に列挙されているかのごとく、その範囲内に包含される個々の数値又は部分範囲の全てを含むことを柔軟に解釈するべきである。例示として、「１５０ｍｇ～６００ｍｇ」の数値範囲は、１５０ｍｇ～６００ｍｇの明示的に列挙された値を含むだけでなく、示された範囲内の個々の値及び部分範囲も含むと解釈されるべきである。したがって、この数値範囲には、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、・・・５８０、５９０、６００ｍｇなどの個々の値、及び１５０～２００、１５０～２５０、２５０～３００、３５０～６００などの部分範囲が含まれる。これと同じ原則が、１つの数値のみを表す範囲にも適用される。更に、このような解釈は、その範囲の幅又は記載されている特性にかかわらず、適用すべきである。
【0032】
「約」という用語は、数値に関連して使用される場合、示された数値よりも５％小さい下限値を有し、且つ示された数値よりも５％大きい上限値を有する範囲内の数値を包含することを意味する。
【0033】
疾患の「症候」は、そのような疾患を有する組織、器官又は生物によって顕著な疾患の暗示であり、以下に限定されないが、組織、器官又は個体の疼痛、脱力感、圧痛、緊張、硬直及び痙攣を含む。疾患の「兆候」又は「シグナル」には、以下に限定されないが、バイオマーカー若しくは分子マーカー等の特定のインジケータの有無、増加若しくは上昇、減少若しくは低下等の変化（ｃｈａｎｇｅ）若しくは変化（ａｌｔｅｒａｔｉｏｎ）、又は症候の発症、存在若しくは悪化が含まれる。疼痛の症候には、以下に限定されないが、持続性又は様々な灼熱痛、拍動痛、かゆみ又は刺痛として感じられ得る不快な感覚が含まれる。
【0034】
「疾患」及び「障害」という用語は、本明細書では互換的に使用され、異常な症状、特に組織、器官又は個体がもはやその機能を効率的に果たすことができない病気又は損傷等の異常な医学的症状を指す。必ずしもそうとは限らないが、典型的には、疾患は、そのような疾患の存在を示す特定の症候又は兆候に関連する。したがって、そのような症候又は兆候の存在は、疾患に罹患している組織、器官又は個体を示し得る。これらの症候又は兆候の変化は、そのような疾患の進行を示し得る。疾患の進行は、典型的には、疾患の「悪化」又は「好転」を示し得る、そのような症候又は兆候の増加又は減少を特徴とする。疾患の「悪化」は、組織、器官又は生物がその機能を効率的に果たす能力の減少を特徴とするのに対して、疾患の「好転」は、典型的には、組織、器官又は個体がその機能を効率的に果たす能力の増加を特徴とする。疾患を「発症するリスク」にある組織、器官又は個体は、健康な状態にあるが、疾患が顕在化する可能性を示す。典型的には、疾患を発症するリスクは、そのような疾患の早期又は弱い兆候又は症候に関連する。そのような場合、疾患の発症は依然として処置によって予防され得る。疾患の例には、感染性疾患、外傷性疾患、炎症性疾患、皮膚症状、内分泌疾患、腸疾患、神経障害、関節疾患、遺伝性障害、自己免疫疾患、及び様々な種類の癌が含まれるが、これらに限定されない。
【0035】
「コロナウイルス」という用語は、哺乳動物及び鳥類において疾患を引き起こす関連ウイルスの群を指す。ヒトでは、コロナウイルスは、軽度から致死的までの範囲であり得る気道感染症を引き起こす。軽度の病気には、風邪の一部の症例が含まれるが、より致死的な種類は、「ＳＡＲＳ」、「ＭＥＲＳ」、及び「ＣＯＶＩＤ－１９」を引き起こす可能性がある。コロナウイルスは、プラスセンスの一本鎖ＲＮＡゲノムを含有する。
【0036】
ウイルスエンベロープは、膜（Ｍ）、エンベロープ（Ｅ）及びスパイク（Ｓ）構造タンパク質が固定されている脂質二重層によって形成される。エンベロープの内部で、ヌクレオカプシド（Ｎ）タンパク質の複数のコピーがヌクレオカプシドを形成し、これは連続的なビーズ－オン－ストリング型の立体配座でプラスセンス一本鎖ＲＮＡゲノムに結合している。そのゲノムは、レプリカーゼ／転写酵素ポリタンパク質をコードするＯｒｆｓ １ａ及び１ｂと、その後に、スパイク（Ｓ）－エンベロープタンパク質、エンベロープ（Ｅ）－タンパク質、膜（Ｍ）－タンパク質及びヌクレオカプシド（Ｎ）－タンパク質をコードする配列とを含む。これらのリーディングフレームの間には、異なるウイルス株の間で異なるアクセサリータンパク質のリーディングフレームが散在している。
【0037】
いくつかのヒトコロナウイルスが知られており、そのうちの４つは患者においてかなり軽度の症候をもたらす：
ヒトコロナウイルスＮＬ６３（ＨＣｏＶ－ＮＬ６３）、α－ＣｏＶ
ヒトコロナウイルス２２９Ｅ（ＨＣｏＶ－２２９Ｅ）、α－ＣｏＶ
ヒトコロナウイルスＨＫＵ１（ＨＣｏＶ－ＨＫＵ１）、β－ＣｏＶ
ヒトコロナウイルスＯＣ４３（ＨＣｏＶ－ＯＣ４３）、β－ＣｏＶ
ＨＣｏＶ－ＮＬ６３、ＨＣｏＶ－２２９Ｅ、ＨＣｏＶ－ＨＫＵ１、及びＨＣｏＶ－ＯＣ４３は、「風邪コロナウイルス」と呼ばれることが多い。
ヒトコロナウイルスＮＬ６３（ＨＣｏＶ－ＮＬ６３）、α－ＣｏＶ
ヒトコロナウイルス２２９Ｅ（ＨＣｏＶ－２２９Ｅ）、α－ＣｏＶ
ヒトコロナウイルスＨＫＵ１（ＨＣｏＶ－ＨＫＵ１）、β－ＣｏＶ
ヒトコロナウイルスＯＣ４３（ＨＣｏＶ－ＯＣ４３）、β－ＣｏＶ
ＨＣｏＶ－ＮＬ６３、ＨＣｏＶ－２２９Ｅ、ＨＣｏＶ－ＨＫＵ１、及びＨＣｏＶ－ＯＣ４３は、「風邪コロナウイルス」と呼ばれることが多い。
【0038】
３つのヒトコロナウイルスは、潜在的に重度の症候を生じる：
中東呼吸器症候群関連コロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）、β－ＣｏＶ
重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ）、β－ＣｏＶ
重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）、β－ＣｏＶ
ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２は、コロナウイルス疾患２０１９（ＣＯＶＩＤ－１９）を引き起こす。この株は中国の武漢で最初に発見されたので、武漢ウイルスと呼ばれることもある。本出願の文脈において、この株は野生型株と呼ばれる。ウイルスの最初の発見以来、野生型株のいくつかの変異体が出現している。これらの変異株は当業者によく知られており、先行技術によく記載されている（例えば、ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｃｄｃ．ｇｏｖ／ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ／２０１９－ｎｃｏｖ／ｖａｒｉａｎｔｓ／ｖａｒｉａｎｔ－ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ．ｈｔｍｌを参照）。本出願の文脈において、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２という用語は、野生型株並びに変異株（バリアントとしても知られる）を指す。ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２は、ヒトに対して非常に伝染性があり、世界保健機関（ＷＨＯ）は、まだ進行中のＣＯＶＩＤ－１９のパンデミックを、国際的懸念の公衆衛生に関する緊急事態に指定している。現在知られている最も早い感染症例は、２０１９年１１月１７日に発見されたと考えられている。ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２配列は、２０２０年１月１０日に最初に公表された（Ｗｕｈａｎ－Ｈｕ－１、ＧｅｎＢａｎｋアクセション番号ＭＮ９０８９４７）。最初の武漢でのアウトブレイク後、このウイルスは中国の全ての省、並びにアジア、欧州、北米、南米、アフリカ及び太平洋の１５０を超える他の国に拡散した。症候としては、高熱、喉の痛み、乾性咳、及び消耗が挙げられる。重篤な場合、肺炎が発症することがある。
中東呼吸器症候群関連コロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）、β－ＣｏＶ
重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ）、β－ＣｏＶ
重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）、β－ＣｏＶ
ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２は、コロナウイルス疾患２０１９（ＣＯＶＩＤ－１９）を引き起こす。この株は中国の武漢で最初に発見されたので、武漢ウイルスと呼ばれることもある。本出願の文脈において、この株は野生型株と呼ばれる。ウイルスの最初の発見以来、野生型株のいくつかの変異体が出現している。これらの変異株は当業者によく知られており、先行技術によく記載されている（例えば、ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｃｄｃ．ｇｏｖ／ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ／２０１９－ｎｃｏｖ／ｖａｒｉａｎｔｓ／ｖａｒｉａｎｔ－ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ．ｈｔｍｌを参照）。本出願の文脈において、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２という用語は、野生型株並びに変異株（バリアントとしても知られる）を指す。ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２は、ヒトに対して非常に伝染性があり、世界保健機関（ＷＨＯ）は、まだ進行中のＣＯＶＩＤ－１９のパンデミックを、国際的懸念の公衆衛生に関する緊急事態に指定している。現在知られている最も早い感染症例は、２０１９年１１月１７日に発見されたと考えられている。ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２配列は、２０２０年１月１０日に最初に公表された（Ｗｕｈａｎ－Ｈｕ－１、ＧｅｎＢａｎｋアクセション番号ＭＮ９０８９４７）。最初の武漢でのアウトブレイク後、このウイルスは中国の全ての省、並びにアジア、欧州、北米、南米、アフリカ及び太平洋の１５０を超える他の国に拡散した。症候としては、高熱、喉の痛み、乾性咳、及び消耗が挙げられる。重篤な場合、肺炎が発症することがある。
【0039】
「天然コロナウイルス」という用語は、自然界に存在するコロナウイルス、すなわち、野生型株と変異株（バリアント）の両方を含む、上記で開示した任意のコロナウイルスを指す。天然コロナウイルスは、天然に存在するウイルスに存在する全てのタンパク質及び核酸分子を含むことが理解される。天然コロナウイルスとは異なり、「ウイルス断片」、「ウイルス様粒子」、又はコロナ特異的抗原は、天然に存在するウイルスに存在する全てではないが一部のタンパク質及び核酸分子のみを含む。したがって、そのような「ウイルス断片」、「ウイルス様粒子」、又はコロナウイルス特異的抗原は、感染性ではないが、依然として患者において免疫応答を引き起こすことができる。したがって、コロナウイルス特異的ウイルス断片、コロナウイルス特異的ウイルス様粒子、又はコロナウイルス特異的抗原によるワクチン接種は、患者においてそれらのウイルス断片、ウイルス様粒子、又は抗原に対する抗体の産生を与える。
【0040】
「測定」、「測定する」、「検出する」又は「検出」、「決定／判定すること」又は「決定／判定」という用語は、定性的、半定量的又は定量的測定を含む。「存在を検出する」という用語は、定性的測定を指し、量についての記述なしに存在又は非存在を示す（例えば、イエス又はノーの記述）。「量を検出する」という用語は、絶対数が検出される定量的測定（ｎｇ）を指す。「濃度を検出する」という用語は、量が所与の体積に関して決定される定量的測定（例えばｎｇ／ｍｌ）を指す。
【0041】
本明細書で使用される場合、「患者」は、本明細書に記載の判定又は診断から利益を得ることができる任意の哺乳動物、魚類、爬虫類又は鳥類を意味する。特に、「患者」は、実験動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ又はゼブラフィッシュ）、家畜（例えば、モルモット、ウサギ、ウマ、ロバ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、ニワトリ、ラクダ、ネコ、イヌ、タートル、カメ、ヘビ、トカゲ又は金魚を含む）、又はチンパンジー、ボノボ、ゴリラ及びヒトを含む霊長類からなる群から選択される。「患者」はヒトであることが特に好ましい。
【0042】
「試料」又は「目的の試料」という用語は、本明細書において互換的に使用され、組織、器官若しくは個体の部分又は片を指し、通常、組織、器官又は個体の全体を表すことが意図されているこのような組織、器官又は個体よりも小さい。分析に際して、試料は、組織の状態、又は器官若しくは個体の健康若しくは疾患状態に関する情報をもたらす。サンプルの例は、限定されるものではないが、鼻咽頭スワブ、中咽頭スワブ、血液、血清、血漿、滑液、尿、唾液、及びリンパ液等の流体試料、又は組織抽出物、軟骨、骨、滑膜、及び結合組織等の固形試料を含む。試料の分析は、視覚的又は化学的に達成され得る。視覚的分析には、試料の形態学的評価を可能にする組織、器官又は個体の顕微鏡イメージング又は放射線スキャニングが含まれるが、これらに限定されない。化学的分析には、特定のインジケータの有無、又はそれらの量若しくはレベルの変化の検出が含まれるが、これらに限定されない。
【0043】
「宿主細胞」という用語は、ベクター（例えば、プラスミド又はウイルス）を保有する細胞を指す。そのような宿主細胞は、原核細胞（例えば、細菌細胞）又は真核細胞（例えば真菌、植物又は動物細胞）のいずれかであり得る。宿主細胞には、単一細胞原核生物及び真核生物（例えば、細菌、酵母、及び放線菌）の両方、並びに細胞培養で増殖させた場合の高次植物又は動物由来の単一細胞が含まれる。
【0044】
「アミノ酸」という用語は、一般に、置換又は非置換アミノ基、置換又は非置換カルボキシ基、及びこれらの基のいずれかの１つ又は複数の側鎖又は基、又は類似体を含む任意のモノマー単位を指す。例示的な側鎖は、例えば、チオール、セレノ、スルホニル、アルキル、アリール、アシル、ケト、アジド、ヒドロキシル、ヒドラジン、シアノ、ハロ、ヒドラジド、アルケニル、アルキニル、エーテル、ボレート、ボロネート、ホスホ、ホスホノ、ホスフィン、ヘテロ環式、エノン、イミン、アルデヒド、エステル、チオ酸、ヒドロキシルアミン、又はこれらの基の任意の組み合わせを含む。その他の代表的なアミノ酸は、光活性化可能な架橋剤を含むアミノ酸、金属結合アミノ酸、スピン標識アミノ酸、蛍光性アミノ酸、金属含有アミノ酸、新規官能基を有するアミノ酸、その他の分子と共有結合的に又は非共有結合的に相互作用するアミノ酸、フォトケージド及び／又は光異性化可能なアミノ酸、放射性アミノ酸、ビオチン又はビオチン類似体を含むアミノ酸、グリコシル化アミノ酸、その他の炭水化物修飾アミノ酸、ポリエチレングリコール又はポリエーテルを含むアミノ酸、重原子置換アミノ酸、化学的に切断可能な及び／又は光切断可能なアミノ酸、炭素結合糖含有アミノ酸、レドックス活性アミノ酸、アミノチオ酸含有アミノ酸、並びに１つ又は複数の毒性部分を含むアミノ酸を含むがこれらに限定されない。本明細書で使用される場合、「アミノ酸」という用語は、下記の２０種の天然又は遺伝的にコードされたアルファ－アミノ酸：アラニン（Ａｌａ又はＡ）、アルギニン（Ａｒｇ又はＲ）、アスパラギン（Ａｓｎ又はＮ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ又はＤ）、システイン（Ｃｙｓ又はＣ）、グルタミン（Ｇｌｎ又はＱ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ又はＥ）、グリシン（Ｇｌｙ又はＧ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ又はＨ）、イソロイシン（Ｉｌｅ又はＩ）、ロイシン（Ｌｅｕ又はＬ）、リジン（Ｌｙｓ又はＫ）、メチオニン（Ｍｅｔ又はＭ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ又はＦ）、プロリン（Ｐｒｏ又はＰ）、セリン（Ｓｅｒ又はＳ）、トレオニン（Ｔｈｒ又はＴ）、トリプトファン（Ｔｒｐ又はＷ）、チロシン（Ｔｙｒ又はＹ）及びバリン（Ｖａｌ又はＶ）を含む。「Ｘ」残基が未定義である場合には、これらは「任意のアミノ酸」として定義されるべきである。これらの２０個の天然アミノ酸の構造は、例えば、Ｓｔｒｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，５ｔｈ ｅｄ．，Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ（２００２）に示されている。セレノシステイン及びピロリシン等の更なるアミノ酸は遺伝的にコードされていてもよい（Ｓｔａｄｔｍａｎ（１９９６）“Ｓｅｌｅｎｏｃｙｓｔｅｉｎｅ，”Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｂｉｏｃｈｅｍ．６５：８３－１００及びＩｂｂａ ｅｔ ａｌ．（２００２）“Ｇｅｎｅｔｉｃ ｃｏｄｅ：ｉｎｔｒｏｄｕｃｉｎｇ ｐｙｒｒｏｌｙｓｉｎｅ，”Ｃｕｒｒ Ｂｉｏｌ．１２（１３）：Ｒ４６４－Ｒ４６６）。「アミノ酸］という用語は、非天然アミノ酸、修飾アミノ酸（例えば、修飾された側鎖及び／又は骨格を有する）、及びアミノ酸類似体も含む。例えば、Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．（２００４）“Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ ｏｆ ５－ｈｙｄｒｏｘｙｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ ｉｎｔｏ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌｌｓ，”Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１０１（２４）：８８８２－８８８７，Ａｎｄｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（２００４）“Ａｎ ｅｘｐａｎｄｅｄ ｇｅｎｅｔｉｃ ｃｏｄｅ ｗｉｔｈ ａ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｑｕａｄｒｕｐｌｅｔ ｃｏｄｏｎ” Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１０１（２０）：７５６６－７５７１，Ｉｋｅｄａ ｅｔ ａｌ．（２００３）“Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ａ ｎｏｖｅｌ ｈｉｓｔｉｄｉｎｅ ａｎａｌｏｇｕｅ ａｎｄ ｉｔｓ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ ｉｎｔｏ ａ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ ｖｉｖｏ，” Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌ．１６（９）：６９９－７０６，Ｃｈｉｎ ｅｔ ａｌ．（２００３）“Ａｎ Ｅｘｐａｎｄｅｄ Ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｃｏｄｅ，” Ｓｃｉｅｎｃｅ ３０１（５６３５）：９６４－９６７，Ｊａｍｅｓ ｅｔ ａｌ．（２００１）“Ｋｉｎｅｔｉｃ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｉｂｏｎｕｃｌｅａｓｅ Ｓ ｍｕｔａｎｔｓ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｐｈｏｔｏｉｓｏｍｅｒｉｚａｂｌｅ ｐｈｅｎｙｌａｚｏｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ ｒｅｓｉｄｕｅｓ，” Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌ．１４（１２）：９８３－９９１，Ｋｏｈｒｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００１）“Ｉｍｐｏｒｔ ｏｆ ａｍｂｅｒ ａｎｄ ｏｃｈｒｅ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｔＲＮＡｓ ｉｎｔｏ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌｌｓ：Ａ ｇｅｎｅｒａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ ｔｏ ｓｉｔｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｉｎｓｅｒｔｉｏｎ ｏｆ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ａｎａｌｏｇｕｅｓ ｉｎｔｏ ｐｒｏｔｅｉｎｓ，” Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９８（２５）：１４３１０－１４３１５，Ｂａｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００１）“Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ Ｖａｒｉａｎｔｓ Ｃａｐａｂｌｅ ｏｆ Ｇｒｏｗｔｈ ｏｎ ａｎ Ｏｔｈｅｒｗｉｓｅ Ｔｏｘｉｃ Ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ Ａｎａｌｏｇｕｅ，” Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１８３（１８）：５４１４－５４２５，Ｈａｍａｎｏ－Ｔａｋａｋｕ ｅｔ ａｌ．（２０００）“Ａ Ｍｕｔａｎｔ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ Ｔｙｒｏｓｙｌ－ｔＲＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ Ｕｔｉｌｉｚｅｓ ｔｈｅ Ｕｎｎａｔｕｒａｌ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ａｚａｔｙｒｏｓｉｎｅ Ｍｏｒｅ Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔｌｙ ｔｈａｎ Ｔｙｒｏｓｉｎｅ，” Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７５（５１）：４０３２４－４０３２８、及びＢｕｄｉｓａ ｅｔ ａｌ．（２００１）“Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｗｉｔｈ ｛ｂｅｔａ｝－（ｔｈｉｅｎｏｐｙｒｒｏｌｙｌ）ａｌａｎｉｎｅｓ ａｓ ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ ｃｈｒｏｍｏｐｈｏｒｅｓ ａｎｄ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｌｙ ａｃｔｉｖｅ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ，” Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．１０（７）：１２８１－１２９２を参照。アミノ酸は、ペプチド、ポリペプチド又はタンパク質に併合され得る。
【0045】
本発明との関連では、「ペプチド」という用語は、ペプチド結合によって連結されたアミノ酸の短いポリマーを指す。これは、タンパク質と同じ化学（ペプチド）結合を有するが、一般に長さが短い。最短のペプチドは、単一のペプチド結合によって連結された２つのアミノ酸からなるジペプチドである。トリペプチド、テトラペプチド、ペンタペプチドなどもあり得る。典型的には、ペプチドは、最大４、６、８、１０、１２、１５、１８又は２０アミノ酸の長さを有する。ペプチドは、環状ペプチドでない限り、アミノ末端及びカルボキシル末端を有する。
【0046】
本発明との関連では、「ポリペプチド」という用語は、ペプチド結合によって共に結合したアミノ酸の一本鎖を指し、典型的には少なくとも約２１個のアミノ酸、すなわち少なくとも２１、２２、２３、２４、２５個等のアミノ酸を含む。ポリペプチドは、２本以上の鎖から構成されるタンパク質の１本の鎖であり得るか、又はタンパク質が１本の鎖から構成される場合はタンパク質自体であり得る。
【0047】
本発明の様々な態様に関連して、「タンパク質」という用語は、二次及び三次構造を再開する１つ又は複数のポリペプチドを含む分子を指し、更に四次構造を形成するいくつかのポリペプチド、すなわちいくつかのサブユニットで構成されるタンパク質を指す。タンパク質には、時折、非ペプチド基が結合しており、これは、補欠分子族又は補因子と呼ばれ得る。
【0048】
特に、「ペプチドバリアント」、「ポリペプチドバリアント」、「タンパク質バリアント」という用語は、例えば変異株（バリアント）の場合のように、アミノ酸配列の１つ又は複数の変化によってそれが由来するペプチド、ポリペプチド又はタンパク質と比較して異なるペプチド、ポリペプチド又はタンパク質として理解される。ペプチド、ポリペプチド又はタンパク質バリアントが由来するペプチド、ポリペプチド又はタンパク質は、親ペプチド、ポリペプチド又はタンパク質としても公知である。更に、本発明で使用可能なバリアントはまた、バリアントが親ペプチド、ポリペプチド又はタンパク質の少なくとも１つの生物学的活性を示す限り、親ペプチド、ポリペプチド又はタンパク質のホモログ、オルソログ若しくはパラログに由来してもよく、又は人工的に構築されたバリアントに由来してもよい。アミノ酸配列の変化は、１つ又はいくつかの部位で起こり得るアミノ酸交換、挿入、欠失、Ｎ末端切断若しくはＣ末端切断、又はこれらの変化の任意の組み合わせであり得る。ペプチド、ポリペプチド又はタンパク質バリアントは、アミノ酸配列（すなわち、交換、挿入、欠失、Ｎ末端切断及び／又はＣ末端切断）において合計２００個まで（最大１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、又は２００）の変化を示し得る。アミノ酸交換は、保存的及び／又は非保存的であり得る。或いは又は更に、本明細書で使用される場合、「バリアント」は、それが由来する親ペプチド、ポリペプチド又はタンパク質とのある程度の配列同一性を特徴とし得る。より正確には、本発明との関連でペプチド、ポリペプチド又はタンパク質バリアントは、その親ペプチド、ポリペプチド又はタンパク質に対して少なくとも８０％の配列同一性を示す。ペプチド、ポリペプチド又はタンパク質バリアントの配列同一性は、２０、３０、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００又はそれ以上のアミノ酸の連続ストレッチにわたる。
【0049】
本発明による「置換」という用語は、アミノ酸を他のアミノ酸と置き換えることを指す。したがって、アミノ酸の総数は同じままである。特定の位置でのアミノ酸の欠失又は異なる位置での１つ（又は複数）のアミノ酸（複数可）の導入は、それぞれ、「置換」という用語に明示的に包含されるものではない。
【0050】
「保存的アミノ酸置換」という用語は、あるアミノ酸残基が、類似の化学的特性（例えば、電荷又は疎水性）を有する側鎖（Ｒ基）を有する別のアミノ酸残基によって置換される置換を指す。一般に、保存的アミノ酸置換は、タンパク質の機能特性を実質的に変化させない。このような類似性には、例えば、関与する残基の極性、電荷、溶解度、疎水性、親水性、及び／又は両親媒性の性質における類似性を含む。一実施形態では、保存的アミノ酸置換は、（ｉ）アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン及びメチオニンを含む非極性（疎水性）アミノ酸；（ｉｉ）グリシン、セリン、トレオニン、システイン、アスパラギン及びグルタミンを含む極性中性アミノ酸；（ｉｉｉ）アルギニン、リジン及びヒスチジンを含む正に帯電した（塩基性）アミノ酸；並びに（ｉｖ）アスパラギン酸及びグルタミン酸を含む負に帯電した（酸性）アミノ酸の群のうちの１つに含まれるような別のアミノ酸に対する１つのアミノ酸の置換である。
【0051】
「特異的結合剤」という用語は、標的に特異的に結合する天然又は非天然分子を指す。特異的結合剤の例としては、タンパク質、ペプチド及び核酸が挙げられるが、これらに限定されない。
【0052】
「抗原（Ａｇ）」という用語は、抗原特異的抗体（Ａｂ）又はＢ細胞抗原受容体（ＢＣＲ）によって結合される分子又は分子構造である。体内の抗原の存在は、通常、免疫応答を誘発する。体内では、各抗体は、免疫系の細胞がそれと接触した後に抗原に適合するように特異的に産生され、これにより、抗原の正確な同定又はマッチング及び個別化された応答の開始が可能になる。ほとんどの場合、抗体は１つの特異的抗原にのみ反応して結合することができる。しかしながら、いくつかの例では、抗体は交差反応し、１つを超える抗原に結合し得る。抗原は、通常、タンパク質、ペプチド（アミノ酸鎖）及び多糖（単糖／単一の糖の鎖）又はそれらの組み合わせである。
【0053】
「結合優先性」又は「結合優先性」という用語は、そうでなければ同等の条件下で、２つの代替的な抗原又は標的のうちの１つが他のものよりも良好に結合することを示す。
【0054】
典型的には、「抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、膜貫通領域を欠き、したがって血流及び体腔に放出され得る分泌型免疫グロブリンを指す。存在する重鎖の種類は、抗体のクラス（すなわち、これらの鎖は、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ抗体にそれぞれ見られる）を定義し、それぞれ異なる役割を果たし、異なる種類の抗原に対する適切な免疫応答を指示する。異なる重鎖は、サイズ及び組成が異なり、約４５０個のアミノ酸を含み得る（Ｊａｎｅｗａｙ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇａｒｌａｎｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ）。ＩｇＡは、消化管、気道及び尿生殖路等の粘膜領域、並びに唾液、涙及び母乳中に見出され、病原体によるコロニー形成を妨げる（Ｕｎｄｅｒｄｏｗｎ＆Ｓｃｈｉｆｆ（１９８６）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４：３８９～４１７）。ＩｇＤは主に、抗原に曝露されていないＢ細胞の抗原受容体として機能し、好塩基球及び肥満細胞を活性化して抗微生物因子を産生することに関与している（Ｇｅｉｓｂｅｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １１８：４２９－４３７；Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０：８８９－８９８）。ＩｇＥは、肥満細胞及び好塩基球からのヒスタミン放出を引き起こすアレルゲンへの結合を介してアレルギー反応に関与する。ＩｇＥは、寄生虫からの保護にも関与する（Ｐｉｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，ＡＳＭ Ｐｒｅｓｓ）。ＩｇＧは、侵入病原体に対する抗体ベースの免疫の大部分を提供し、胎盤を通過して胎児に受動免疫を与え得る唯一の抗体アイソタイプである（Ｐｉｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，ＡＳＭ Ｐｒｅｓｓ）。ヒトでは４つの異なるＩｇＧサブクラス（ＩｇＧｌ、２、３、及び４）があり、血清中の存在量の順に命名され、ＩｇＧｌが最も多く（約６６％）、ＩｇＧ２（約２３％）、ＩｇＧ３（約７％）、及びＩｇＧ（約４％）がこれに続く。異なるＩｇＧクラスの生物学的プロファイルは、それぞれのヒンジ領域の構造によって決定される。ＩｇＭは、単量体形態、及び非常に高いアビディティーを有する分泌型五量体形態でＢ細胞の表面に発現される。ＩｇＭは、十分なＩｇＧが産生される前のＢ細胞媒介（体液性）免疫の初期段階で病原体を排除することに関与する（Ｇｅｉｓｂｅｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １１８：４２９－４３７）。抗体は、単量体として見出されるだけでなく、２つのＩｇユニットの二量体（例えばＩｇＡ）、４つのＩｇユニットの四量体（例えば、硬骨魚のＩｇＭ）、又は５つのＩｇユニットの五量体（例えば哺乳動物ＩｇＭ）を形成することもよく知られている。抗体は、典型的には、ジスルフィド結合を介して連結される、２つの同一の重鎖及び２つの同一の軽鎖を含む４つのポリペプチド鎖から作製され、「Ｙ」形状の巨大分子に類似する。鎖の各々は、いくつかの免疫グロブリンドメインを含み、そのうちのいくつかは定常ドメインであり、他のものは可変ドメインである。免疫グロブリンドメインは、２つの～シート状に配置された７から９本の逆平行～鎖の２層サンドイッチからなる。典型的には、抗体の重鎖は４つのＩｇドメインからなり、そのうちの３つは定数ドメイン（ＣＨドメイン：ＣＨＩ．ＣＨ２．ＣＨ３）、そのうちの１つは可変ドメイン（ＶＨ）である。軽鎖は、典型的には、１つの定常Ｉｇドメイン（ＣＬ）及び１つの可変Ｉｇドメイン（ＶＬ）を含む。例示すると、ヒトＩｇＧ重鎖は、Ｎ末端からＣ末端にＶｗＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３の順序（ＶｗＣｙｌ－Ｃｙ２－Ｃｙ３とも称される）で連結された４つのＩｇドメインで構成されており、一方、ヒトＩｇＧ軽鎖は、Ｎ末端からＣ末端にＶＬ－ＣＬの順序で連結された２つの免疫グロブリンドメインで構成されており、カッパ型又はラムダ型のいずれか（ＶＫ－ＣＫ又はＶＡ－ＣＡ）である。例示すると、ヒトＩｇＧの定常鎖は４４７個のアミノ酸を含む。本明細書及び特許請求の範囲を通して、免疫グロブリンのアミノ酸位置のナンバリングは、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，Ｗｕ，Ｔ．Ｔ．，Ｐｅｒｒｙ，Ｈ．Ｍ．，Ｇｏｔｔｅｓｍａｎ，Ｋ．Ｓ．，ａｎｄ Ｆｏｅｌｌｅｒ，Ｃ．，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ ｅｄ．Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤにおけるような「ＥＵインデックス」のものである。「ＫａｂａｔにおけるようなＥＵインデックス」とは、ヒトＩｇＧ ｌＥＵ抗体の残基ナンバリングを指す。したがって、ＩｇＧの文脈におけるＣＨドメインは以下の通りである：「ＣＨ１」は、ＫａｂａｔにおけるようなＥＵインデックスによるアミノ酸位置１１８～２２０位を指し；「ＣＨ２」は、ＫａｂａｔにおけるようなＥＵインデックスによるアミノ酸位置２３７～３４０位を指し；「ＣＨ３」は、ＫａｂａｔにおけるようなＥＵインデックスによるアミノ酸位置３４１～４４７位を指す。
【0055】
「全長抗体」、「インタクトな抗体」、及び「全抗体」という用語は、以下に記載の抗体断片ではない、その実質的にインタクトな形態の抗体を指すために本明細書で同義に使用される。これらの用語は、具体的には、Ｆｃ領域を含む重鎖を有する抗体を指す。
【0056】
抗体のパパイン消化により、各々単一の抗原結合部位を有する「Ｆａｂ断片」（「Ｆａｂ部分」又は「Ｆａｂ領域」とも称される）と、容易に結晶化するその能力を反映して命名された残りの「Ｆｃ断片」（「Ｆｃ部分」又は「Ｆｃ領域」とも称される）と呼ばれる、２つの同一の抗原結合断片が産生される。ヒトＩｇＧ Ｆｅ領域の結晶構造は決定されている（Ｄｅｉｓｅｎｈｏｆｅｒ（１９８１）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２０：２３６１－２３７０）。ＩｇＧ、ＩｇＡ及びＩｇＤアイソタイプでは、Ｆｅ領域は、抗体の２つの重鎖のＣＨ２及びＣＨ３ドメインに由来する２つの同一のタンパク質断片から構成され、ＩｇＭ及びＩｇＥアイソタイプでは、Ｆｅ領域は、各ポリペプチド鎖に３つの重鎖定常ドメイン（ＣＨ２～４）を含む。更に、より小さい免疫グロブリン分子が天然に存在するか、又は人工的に構築されている。「Ｆａｂ’断片」という用語は、Ｉｇ分子のヒンジ領域を追加で含むＦａｂ断片を指し、一方で「Ｆ（ａｂ’）２断片」は、化学的に連結されているか又はジスルフィド結合を介して結合されている２つのＦａｂ’断片を含むと理解される。「単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）」、（Ｄｅｓｍｙｔｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ｎａｔ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ｂｉｏｌ．３：８０３－８１１））及び「ナノボディ」は単一のＶＨドメインのみを含むが、「一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）」断片は、短いリンカーペプチドを介して軽鎖可変ドメインに連結された重鎖可変ドメインを含む（Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５，５８７９－５８８３）。二価の一本鎖可変断片（ｄｉ－ｓｃＦｖ）は、２つのｓｃＦｖ（ｓｃＦｖＡ－ｓｃＦｖＢ）を連結することによって操作することができる。これは、２つのＶＨ領域及び２つのＶＬ領域を有する単一のペプチド鎖を生成することによって行われ得、「タンデムｓｃＦｖ」（ＶＨＡ－ＶＬＡ－ＶＨＢ－ＶＬＢ）を得る。別の可能性は、２つの可変領域が一緒に折り畳まれるには短すぎるリンカーを有するｓｃＦｖの作製であり、ｓｃＦｖを強制的に二量体化させる。通常、５残基の長さを有するリンカーが、これらの二量体を生成するために使用される。このタイプは、「ダイアボディ」として知られている。ＶＨドメインとＶＬドメインとの間の更に短いリンカー（１個又は２個のアミノ酸）は、単一特異性三量体、いわゆる「トリアボディ」又は「トリボディ」の形成をもたらす。二重特異性ダイアボディは、それぞれ配列ＶＨＡ－ＶＬＢ及びＶＨＢ－ＶＬＡ又はＶＬＡ－ＶＨＢ及びＶＬＢ－ＶＨＡを有する鎖に発現させることによって形成される。一本鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）は、１２～２０個のアミノ酸、好ましくは１４個のアミノ酸のリンカーペプチド（Ｐ）によって連結されたＶＨＡ－ＶＬＢ及びＶＨＢ－ＶＬＡ断片（ＶＨＡ－ＶＬＢ－Ｐ－ＶＨＢ－ＶＬＡ）を含む。「二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）」は、異なる抗体の２つのｓｃＦｖからなる融合タンパク質であり、ｓｃＦｖの一方はＣＤ３受容体を介してＴ細胞に結合し、他方は腫瘍特異的分子を介して腫瘍細胞に結合する（Ｋｕｆｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２２：２３８－２４４）。二重親和性再標的化分子（「ＤＡＲＴ」分子）は、Ｃ末端ジスルフィド架橋によって更に安定化されたダイアボディである。
【0057】
したがって、「抗体断片」という用語は、インタクトな抗体の、好ましくはその抗原結合領域を含む部分を指す。抗体断片には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片；ダイアボディ；ｓｄＡｂ、ナノボディ、ｓｃＦｖ、ｄｉ－ｓｃＦｖ、タンデムｓｃＦｖ、トリアボディ、ダイアボディ、ｓｃＤｂ、ＢｉＴＥ、及びＤＡＲＴが含まれるが、これらに限定されない。
【0058】
抗体の「可変領域」又は「可変ドメイン」とは、抗体の重鎖又は軽鎖のアミノ末端ドメインを指す。重鎖の可変ドメインは、「ＶＨ」と称され得る。軽鎖の可変ドメインは、「ＶＬ」と称され得る。これらのドメインは、一般に、抗体の最も可変性の高い部分であり、抗原結合部位を含有する。
【0059】
「可変」という用語は、可変ドメインの特定の部分の配列が抗体間で広く異なり、且つ各特定の抗体の特定の抗原に対する結合及び特異性において使用されるという事実を指す。しかしながら、可変性は、抗体の可変ドメイン全体にわたって均等に分布していない。これは、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインの両方の超可変領域（ＨＶＲ）と呼ばれる３つのセグメントに集中している。可変ドメインのより高度に保存された部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。天然の重鎖及び軽鎖の可変ドメインは各々、ベータ－シート構造を接続し、且ついくつかの場合では、ベータ－シート構造の一部を形成するループを形成する３つのＨＶＲによって接続されたベータシート立体配置を大部分が採用する４つのＦＲ領域を含む。各鎖内のＨＶＲは、ＦＲ領域によって近接して互いに保持され、他方の鎖からのＨＶＲと共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）を参照）。定常ドメインは、抗体の抗原への結合に直接関与していないが、抗体の抗体依存性細胞毒性への関与等の様々なエフェクター機能を呈する。
【0060】
任意の脊椎動物種由来の抗体（免疫グロブリン）の「軽鎖」は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる２つの明らかに異なる型のうちの１つに割り当て得る。
【0061】
本明細書の目的で、「ネイキッド抗体」は、任意の付加部分、例えば細胞傷害性部分又は標識（例えば、放射性標識）にコンジュゲートしていない抗体である。
【0062】
本明細書で使用されるとき、「超可変領域」、「ＨＶＲ」、又は「ＨＶ」という用語は、配列が超可変性であり、及び／又は構造的に定義されたループを形成する抗体可変ドメインの領域を指す。一般に、抗体は、ＶＨに３つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）及びＶＬに３つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）、計６つのＨＶＲを含む。天然抗体では、Ｈ３及びＬ３が、６つのＨＶＲのうちで最も高い多様性を示し、特にＨ３が抗体に優れた特異性を与える上で特有の役割を果たすと考えられている。例えば、Ｘｕ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １３：３７－４５（２０００）；Ｊｏｈｎｓｏｎ ａｎｄ Ｗｕ，ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２４８：１－２５（Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎ．Ｊ．，２００３）を参照されたい。実際に、重鎖のみからなる、天然に存在するラクダ抗体は、軽鎖の非存在下で機能的であり、安定している。例えば、Ｈａｍｅｒｓ－Ｃａｓｔｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３６３：４４６－４４８（１９９３）及びＳｈｅｒｉｆｆ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．３：７３３－７３６（１９９６）を参照されたい。いくつかのＨＶＲ描写が本明細書で使用され、本明細書に包含されている。Ｋａｂａｔ相補性決定領域（ＣＤＲ）であるＨＶＲは、配列可変性に基づいており、最も一般的に使用される（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１））。Ｃｈｏｔｈｉａは、代わりに、構造ループの位置を指す（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７））。ＡｂＭ ＨＶＲは、ＫａｂａｔのＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａの構造的ループとの間の折衷物を表し、Ｏｘｆｏｒｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアによって使用されている。「接触」ＨＶＲは、利用可能な複合体結晶構造の分析に基づく。これらＨＶＲの各々に由来する残基が、以下に示される。
【0063】
ループ Kabat AbM Chothia 接触
L1 L24-L34 L24-L34 L26-L32 L30-L36
L2 L50-L56 L50-L56 L50-L52 L46-L55
L3 L89-L97 L89-L97 L91-L96 L89-L96
H1 H31-H35B H26-H35B H26-H32 H30-H35B （Kabatナンバリング）
H1 H31-H35 H26-H35 H26-H32 H30-H35 （Chothiaナンバリング）
H2 H50-H65 H50-H58 H53-H55 H47-H58
H3 H95-H102 H95-H102 H96-H101 H93-H101
ＨＶＲは、以下の「伸長ＨＶＲ」を含み得る：ＶＬにおいて、２４～３６又は２４～３４（Ｌ１）、４６～５６又は５０～５６（Ｌ２）、及び８９～９７又は８９～９６（Ｌ３）、並びにＶＨにおいて、２６～３５（Ｈ１）、５０～６５又は４９～６５（Ｈ２）、及び９３～１０２、９４～１０２、又は９５～１０２（Ｈ３）。可変ドメイン残基は、これらの拡張ＨＶＲの定義の各々について、上記のＫａｂａｔらに従ってナンバリングされる。
L1 L24-L34 L24-L34 L26-L32 L30-L36
L2 L50-L56 L50-L56 L50-L52 L46-L55
L3 L89-L97 L89-L97 L91-L96 L89-L96
H1 H31-H35B H26-H35B H26-H32 H30-H35B （Kabatナンバリング）
H1 H31-H35 H26-H35 H26-H32 H30-H35 （Chothiaナンバリング）
H2 H50-H65 H50-H58 H53-H55 H47-H58
H3 H95-H102 H95-H102 H96-H101 H93-H101
ＨＶＲは、以下の「伸長ＨＶＲ」を含み得る：ＶＬにおいて、２４～３６又は２４～３４（Ｌ１）、４６～５６又は５０～５６（Ｌ２）、及び８９～９７又は８９～９６（Ｌ３）、並びにＶＨにおいて、２６～３５（Ｈ１）、５０～６５又は４９～６５（Ｈ２）、及び９３～１０２、９４～１０２、又は９５～１０２（Ｈ３）。可変ドメイン残基は、これらの拡張ＨＶＲの定義の各々について、上記のＫａｂａｔらに従ってナンバリングされる。
【0064】
「フレームワーク」又は「ＦＲ」残基は、本明細書で定義されるＨＶＲ残基以外の可変ドメイン残基である。
【0065】
軽鎖可変ドメイン／配列は、式Ｉに表されるフレームワーク領域（ＦＲ）及び相補性決定領域（ＣＤＲ）からなる：
ＦＲ－Ｌ１ － ＣＤＲ－Ｌ１ － ＦＲ－Ｌ２ － ＣＤＲ－Ｌ２ － ＦＲ－Ｌ３ － ＣＤＲ－Ｌ３ － ＦＲ－Ｌ４
重鎖可変ドメイン／配列は、式ＩＩに表されるＦＲ及びＣＤＲからなる：
ＦＲ－Ｈ１ － ＣＤＲ－Ｈ１ － ＦＲ－Ｈ２ － ＣＤＲ－Ｈ２ － ＦＲ－Ｈ３ － ＣＤＲ－Ｈ３ － ＦＲ－Ｈ４
ＦＲ－Ｌ１ － ＣＤＲ－Ｌ１ － ＦＲ－Ｌ２ － ＣＤＲ－Ｌ２ － ＦＲ－Ｌ３ － ＣＤＲ－Ｌ３ － ＦＲ－Ｌ４
重鎖可変ドメイン／配列は、式ＩＩに表されるＦＲ及びＣＤＲからなる：
ＦＲ－Ｈ１ － ＣＤＲ－Ｈ１ － ＦＲ－Ｈ２ － ＣＤＲ－Ｈ２ － ＦＲ－Ｈ３ － ＣＤＲ－Ｈ３ － ＦＲ－Ｈ４
【0066】
「Ｋａｂａｔにおけるような可変ドメイン残基ナンバリング」又は「Ｋａｂａｔにおけるようなアミノ酸位置ナンバリング」という表現及びその変形は、上記のＫａｂａｔらの抗体の編集の重鎖可変ドメイン又は軽鎖可変ドメインに使用されるナンバリングシステムを指す。このナンバリングシステムを使用すると、実際の線形アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲ又はＣＤＲの短縮又はそれへの挿入に対応するより少ない又は追加のアミノ酸を含み得る。例えば、重鎖可変ドメインは、Ｈ２の残基５２後に単一のアミノ酸挿入（Ｋａｂａｔに従って残基５２ａ）を、そして重鎖ＦＲ残基８２後に挿入された残基（例えば、Ｋａｂａｔに従って残基８２ａ、８２ｂ、及び８２ｃ等）を含んでもよい。「ＫａｂａｔにおけるようなＥＵインデックス」とは、ヒトＩｇＧ ｌＥＵ抗体の残基ナンバリングを指す。したがって、ＩｇＧの文脈におけるＣＨドメインは以下の通りである：「ＣＨ１」は、ＫａｂａｔにおけるようなＥＵインデックスによるアミノ酸位置１１８～２２０位を指し；「ＣＨ２」は、ＫａｂａｔにおけるようなＥＵインデックスによるアミノ酸位置２３７～３４０位を指し；「ＣＨ３」は、ＫａｂａｔにおけるようなＥＵインデックスによるアミノ酸位置３４１～４４７位を指す。
【0067】
「結合親和性」という用語は、一般に、分子（例えば抗体）の単一の結合部位と、その結合パートナー（例えば抗原）との間の非共有相互作用の合計の強度を指す。別途示されない限り、本明細書で使用される場合、「結合親和性」は、結合対のメンバー（例えば、抗体及び抗原）間の１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子Ｘの、そのパートナーＹに対する親和性は一般に、平衡解離定数（ＫＤ）により表すことができる。この定数は、「オン速度」又は「会合速度定数」（ｋａ）と「オフ速度」又は「解離速度定数」（ｋｄ）との比でもある。２つの抗体は同じ親和性を有し得るが、一方は高いオン速度定数及びオフ速度定数の両方を有し得、他方は低いオン速度定数及びオフ速度定数の両方を有し得る。会合速度定数ｋａ［Ｍ－１ ｓ－１］は抗体／抗原複合体の複合体形成速度を定義するが、解離速度定数［ｓ－１］は抗体／抗原複合体安定性を１秒あたりの減衰として定義する。式ｔ／２ ｄｉｓｓ＝ｌｎ（２）／（ｋｄ＊６０）に従って再計算すると、分単位の抗体／抗原複合体半減期は記述パラメータを表す。
【0068】
親和性は、限定されないが、表面プラズモン共鳴に基づくアッセイ（例えば、ＰＣＴ出願公開ＷＯ２００５／０１２３５９号に記載されているようなＢＩＡｃｏｒｅアッセイ）；酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）；及び競合アッセイ（例えば、ＲＩＡ）を含む、当技術分野で公知の一般的な方法によって測定し得る。低親和性抗体は、一般に、抗原とゆっくり結合し、容易に解離する傾向にあるが、高親和性抗体は、一般に、抗原と迅速に結合し、より長く結合したままの傾向にある。結合親和性の種々の測定方法が当技術分野で公知であり、これらのいずれも、本発明の目的に対して使用することができる。結合親和性を測定するための特定の例証的及び例示的な実施形態を以下に記載する。
【0069】
ｋａ値及びｋｄ値は、当技術分野で周知の方法を使用して、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）－２０００又はＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）－３０００機器（ＢＩＡｃｏｒｅ， Ｉｎｃ．、ニュージャージー州ピスカタウェイ）を使用する表面プラズモン共鳴アッセイを２５℃で、約１０応答単位（ＲＵ）の固定化抗原ＣＭ５チップを用いて測定することができる。簡潔に述べると、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサチップ（ＣＭ５、ＢＩＡｃｏｒｅ Ｉｎｃ．）を、供給業者の指示に従って、Ｎ－エチル－Ｎ’－（３－ジメチルアミノプロピル）－カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及びＮ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）を用いて活性化させる。抗原を、１０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ４．８で５μｇ／ｍｌ（～０．２μＭ）に希釈してから、５μｌ／分の流速で注入し、結合タンパク質の十分な高密度を達成する。抗原の注入後、未反応群を遮断するために、１Ｍのエタノールアミンを注入する。速度論的測定については、Ｆａｂの２倍段階希釈液（０．７８ｎＭ～５００ｎＭ）を、０．０５％ＴＷＥＥＮ２０（登録商標）界面活性剤を含むＰＢＳ（ＰＢＳＴ）に、２５℃で、およそ２５μＬ／分の流速で注入する。会合速度（ｋａ）及び解離速度（ｋｄ）は、単純１対１ラングミュア結合モデル（ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅバージョン３．２）を使用して、会合及び解離センサーグラムを同時にフィッティングすることによって計算される。平衡解離定数（ＫＤ）は、ｋｄ／ｋａ比として計算される。例えば、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５－８８１（１９９９）を参照されたい。上記表面プラズモン共鳴アッセイによるオン速度が１０６Ｍ－１ｓ－１を超える場合、オン速度は、ストップトフローを備えた分光光度計（Ａｖｉｖ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）、又は撹拌キュベットを備えた８０００シリーズＳＬＭ－ＡＭＩＮＣＯ（商標）分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）等の分光計で測定される場合に、増加する抗原濃度の存在下で、２５℃で、ＰＢＳ中２０ｎＭの抗抗原抗体（Ｆａｂ型）（ｐＨ７．２）の蛍光発光強度（励起＝２９５ｎｍ、発光＝３４０ｎｍ、１６ｎｍ帯域通過）の増加又は減少を測定する蛍光消光技法を使用して決定し得る。
【0070】
本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」（ｍＡｂ）という用語は、固有の親細胞のクローンである同一の免疫細胞によって作製され、したがって全て所与の標的分子の同一のエピトープに対して反応性である単一特異性抗体を指す。対照的に、「ポリクローナル抗体」は、いくつかの異なる免疫細胞から作製され、したがって所与の標的分子の異なるエピトープを標的とする。したがって、モノクローナル抗体は一価親和性を有し、すなわち、それらは同じエピトープに結合するが、ポリクローナル抗体は同じ標的のいくつかの異なるエピトープに結合する。典型的には異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対するものである。それらの特異性に加えて、モノクローナル抗体調製物は、それらが典型的には他の免疫グロブリンで汚染されていないという点で有利である。
【0071】
「モノクローナル」という修飾語は、実質的に均一な抗体集団から得られているという抗体の特徴を示し、抗体を何か特定の方法で作製しなければならないと解釈されるものではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、例えば、限定されないが、ハイブリドーマ法（例えば、Ｋｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ．，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５－９７（１９７５）；Ｈｏｎｇｏ ｅｔ ａｌ．，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ，１４（３）：２５３－２６０（１９９５），Ｈａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ ｅｄ．１９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔ－Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ５６３－６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１））、組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照されたい）、ファージディスプレイ技術（例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４－６２８（１９９１）、Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１－５９７（１９９２）、Ｓｉｄｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９－３１０（２００４）、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３－１０９３（２００４）、Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，ＰＮＡＳ ＵＳＡ １０１（３４）：１２４６７－１２４７２（２００４）、及びＬｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ２８４（１－２）：１１９－１３２（２００４）を参照されたい）、及びヒト免疫グロブリン配列をコードするヒト免疫グロブリン遺伝子座又は遺伝子の一部又は全てを有するヒト又はヒト様抗体を動物で産生するための技術（例えば、国際公開第１９９８／２４８９３号、国際公開第１９９６／３４０９６号、国際公開第１９９６／３３７３５号、国際公開第１９９１／１０７４１号、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ＵＳＡ ９０：２５５１（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３６２：２５５－２５８（１９９３）、Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｙｅａｒ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：３３（１９９３）、米国特許第５，５４５，８０７号、同第５，５４５，８０６号、同第５，５６９，８２５号、同第５，６２５，１２６号、同第５，６３３，４２５号、及び同第５，６６１，０１６号、Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：７７９－７８３（１９９２）、Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６－８５９（１９９４）、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８１２－８１３（１９９４）、Ｆｉｓｈｗｉｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：８４５－８５１（１９９６）、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：８２６（１９９６）、並びにＬｏｎｂｅｒｇ ａｎｄ Ｈｕｓｚａｒ，Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５－９３（１９９５））を含む様々な技法によって作製され得る。
【0072】
抗体は、例えば「タグ」又は「標識」等の「エフェクター基」を更に含み得る。「タグ」という用語は、抗体が他の分子に結合する能力又は他の分子に結合される能力を提供するエフェクター基を指す。タグの例としては、限定されないが、例えば精製を可能にするために抗原配列に結合したＨｉｓタグが挙げられる。タグはまた、抗原が結合対の第２のパートナーによって結合されることを可能にするバイオアフィン結合対のパートナーを含み得る。「バイオアフィン結合対」という用語は、互いに結合する強い親和性を有する２つのパートナー分子（すなわち、１対中の２つのパートナー）を指す。バイオアフィン結合対のパートナーの例は、ａ）ビオチン又はビオチン類似体／アビジン又はストレプトアビジン；ｂ）ハプテン／抗ハプテン抗体又は抗体断片（例えばジゴキシン／抗ジゴキシン抗体）；ｃ）糖類／レクチン；ｄ）相補的オリゴヌクレオチド配列（例えば相補的ＬＮＡ配列）、及び一般にｅ）リガンド／受容体である。
【0073】
「標識」という用語は、抗原の検出を可能にするエフェクター基を指す。標識には、分光学的、光化学的、生化学的、免疫化学的又は化学的標識が含まれるが、これらに限定されない。例示される適切な標識には、蛍光色素、発光又は電気化学発光錯体（例えば、ルテニウム又はイリジウム錯体）、高電子密度試薬、及び酵素標識が含まれる。
【0074】
「サンドイッチイムノアッセイ」は、目的の分析物の検出に広く使用されている。そのようなアッセイでは、分析物は、第１の抗体と第２の抗体との間に「サンドイッチされる」。典型的には、サンドイッチアッセイは、捕捉及び検出抗体が目的の分析物上の重複しない異なるエピトープに結合することを必要とする。適切な手段によって、そのようなサンドイッチ複合体が測定され、それにより分析物が定量される。典型的なサンドイッチ型アッセイでは、固相に結合した、又は固相に結合することができる第１の抗体、及び検出可能に標識された第２の抗体は各々、重複しない異なるエピトープで分析物に結合する。第１の分析物に特異的な結合剤（例えば、抗体）は、固体表面に共有結合しているか又は受動結合している（ｐａｓｓｉｖｅｌｙ ｂｏｕｎｄ）かのいずれかである。固体表面は、典型的にはガラス又はポリマーであり、最も一般的に使用されるポリマーは、セルロース、ポリアクリルアミド、ナイロン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、又はポリプロピレンである。固体支持体は、粒子、チューブ、ビーズ、マイクロプレートのディスク、又はイムノアッセイの実施に好適な任意の他の表面であっても良い。結合プロセスは、当技術分野でよく知られており、一般に、架橋共有結合、又は物理的吸着からなり、ポリマー－抗体複合体は、試験試料の調製において洗浄される。次いで、試験される試料のアリコートを固相複合体に添加し、第１の抗体又は捕捉抗体と対応する抗原との間の結合を可能にするのに十分な期間（例えば、２～４０分又はより好都合であれば一晩）及び適切な条件下（例えば、室温～４０℃、例えば２５℃～３７℃（両端を含む））でインキュベートする。インキュベーション期間に続いて、第１の抗体又は捕捉抗体、及び抗体に結合した抗原を含む固相を洗浄し、抗原上の別のエピトープに結合する二次抗体又は標識抗体と共にインキュベートすることができる。第２の抗体を、第１の抗体と目的の抗原との複合体に対する第２の抗体の結合を示すために使用するレポーター分子に結合させる。
【0075】
非常に用途の広い代替サンドイッチアッセイ形式には、結合対の第１のパートナーでコーティングされた固相、例えば、常磁性ストレプトアビジンでコーティングした微粒子の使用が含まれる。このような微粒子を、結合対の第２のパートナー（例えば、ビオチン化抗体）に結合した分析物に特異的な結合剤、結合対の当該第２のパートナーが当該分析物に特異的な結合剤に結合している分析物を含むと疑われる又は含んでいる試料、及び検出可能に標識された第２の分析物に特異的な結合剤と混合及びインキュベートする。当業者には明らかなように、これらの成分は、適切な条件下で、分析物、結合対の第２のパートナー（に結合した）分析物に特異的な結合剤、及び結合対の第１のパートナーを介して標識抗体を固相微粒子に結合させるのに十分な期間インキュベートされる。適宜、このようなアッセイは、１つ又は複数の洗浄工程を含んでもよい。
【0076】
「検出可能に標識した」という用語は、直接的又は間接的に検出することができる標識を包含する。直接的に検出可能な標識が、検出可能なシグナルを提供するか、又は標識が、第２の標識と相互作用するかのいずれかをして、第１又は第２の標識によってもたらされる検出可能なシグナルを改変して、例えば、ＦＲＥＴ（蛍光共鳴エネルギー移動）を与える。蛍光色素及び発光色素（化学発光及び電気化学発光を含む）などの標識（Ｂｒｉｇｇｓ ｅｔ ａｌ “Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｓｅｄ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ Ｄｙｅｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｃｏｕｐｌｉｎｇ ｔｏ Ａｍｉｎｅｓ ａｎｄ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄｓ，”Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，Ｐｅｒｋｉｎ－Ｔｒａｎｓ．１（１９９７）１０５１－１０５８）は、検出可能なシグナルを提供し、一般に標識に適用できる。一実施形態では、検出可能に標識されたとは、検出可能なシグナル、すなわち蛍光標識、発光標識（例えば、化学発光標識又は電気化学発光標識）、放射性標識又は金属キレート系標識をそれぞれ提供するか又は提供するように誘導可能な標識を指す。
【0077】
多数の標識（色素とも称する）が利用可能であり、これらは概して、以下の区分に分類することができ、区分は全てまとまっており、及びその各々が本開示による実施形態を表している。
（ａ）蛍光色素
蛍光色素は、例えば、Ｂｒｉｇｇｓら「Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚｅｄ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ Ｄｙｅｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｃｏｕｐｌｉｎｇ ｔｏ Ａｍｉｎｅｓ ａｎｄ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄｓ」、Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、Ｐｅｒｋｉｎ－Ｔｒａｎｓ．１（１９９７）１０５１－１０５８）によって記載されている。
（ａ）蛍光色素
蛍光色素は、例えば、Ｂｒｉｇｇｓら「Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚｅｄ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ Ｄｙｅｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｃｏｕｐｌｉｎｇ ｔｏ Ａｍｉｎｅｓ ａｎｄ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄｓ」、Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、Ｐｅｒｋｉｎ－Ｔｒａｎｓ．１（１９９７）１０５１－１０５８）によって記載されている。
【0078】
蛍光標識又は蛍光体には、希土類キレート（ユーロピウムキレート）、フルオレセイン型標識（ＦＩＴＣ、５－カルボキシフルオロセイン、６－カルボキシフルオロセインを含む）、ローダミン型標識（ＴＡＭＲＡを含む）、ダンシル、リサミン、シアニン、フィコエリトリン、テキサスレッド、及びこれらの類似体が含まれる。蛍光標識は、本明細書に開示される技術を使用して、標的分子内に含まれるアルデヒド基に結合させることができる。蛍光色素及び蛍光標識試薬には、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ／Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ（Ｅｕｇｅｎｅ，Ｏｒｅｇｏｎ，ＵＳＡ）及びＰｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌ．）から市販されるものが含まれる。
【0079】
（ｂ）発光色素
発光色素又は標識は、化学発光色素及び電気化学発光色素に更に下位分類することができる。
発光色素又は標識は、化学発光色素及び電気化学発光色素に更に下位分類することができる。
【0080】
化学発光標識の異なるクラスには、ルミノール、アクリジニウム化合物、セレンテラジン及び類似体、ジオキセタン、ペルオキシシュウ酸及びペルオキシシュウ酸誘導体に基づく系が含まれる。免疫診断手順のためには、主にアクリジニウム系標識が使用される（詳細な概要は、Ｄｏｄｅｉｇｎｅ Ｃ．ら，Ｔａｌａｎｔａ ５１（２０００）４１５－４３９において示されている）。
【0081】
電気化学発光標識として使用される主な関連性のある標識は、それぞれルテニウム及びイリジウム系の電気化学発光錯体である。電気化学発光（ＥＣＬ）は、高感度で選択的な方法として分析用途に非常に有用であることが証明された。ＥＣＬは、化学発光分析の分析上の利点（背景光シグナルの非存在）を、電極電位を適用することによる反応制御の容易さと組み合わせている。概して、ルテニウム錯体、特に液相又は液固界面においてＴＰＡ（トリプロピルアミン）を用いて再生する［Ｒｕ（Ｂｐｙ）３］２＋（約６２０ｎｍで光子を放出）がＥＣＬ標識として使用される。
【0082】
電気化学発光（ＥＣＬ）アッセイは、目的の分析物の存在及び濃度の高感度且つ正確な測定を提供する。このような技法は、適切な化学的環境において電気化学的に酸化又は還元したときに発光するように誘導することができる標識又は他の反応物を使用する。このような電気化学発光は、特定の時間に特定の様式で作用電極に印加される電圧によって引き起こされる。標識によって生成された光は、測定され、分析物の存在又は量を示す。このようなＥＣＬ技法のより完全な説明については、米国特許第５，２２１，６０５号、米国特許第５，５９１，５８１号、米国特許第５，５９７，９１０号、ＰＣＴ出願公開ＷＯ９０／０５２９６、ＰＣＴ出願公開ＷＯ９２／１４１３９、ＰＣＴ出願公開ＷＯ９０／０５３０１、ＰＣＴ出願公開ＷＯ９６／２４６９０、ＰＣＴ出願公開ＵＳ９５／０３１９０、ＰＣＴ出願ＵＳ９７／１６９４２、ＰＣＴ出願公開ＵＳ９６／０６７６３、ＰＣＴ出願公開ＷＯ９５／０８６４４、ＰＣＴ出願公開ＷＯ９６／０６９４６、ＰＣＴ出願公開ＷＯ９６／３３４１１、ＰＣＴ出願公開ＷＯ８７／０６７０６、ＰＣＴ出願公開ＷＯ９６／３９５３４、ＰＣＴ出願公開ＷＯ９６／４１１７５、ＰＣＴ出願公開ＷＯ９６／４０９７８、ＰＣＴ／ＵＳ９７／０３６５３及び米国特許出願０８／４３７，３４８（米国特許第５，６７９，５１９号）が参照される。また、Ｋｎｉｇｈｔら（Ａｎａｌｙｓｔ、１９９４、１１９：８７９－８９０）によるＥＣＬの分析用途に関する１９９４年の総説及び総説に引用されている参考文献も参照される。一実施形態では、本明細書による方法は、電気化学発光標識を使用して実施される。
【0083】
近年、イリジウム系ＥＣＬ標識も記載されている（国際公開第２０１２１０７４１９号）。
【0084】
（ｃ）放射性標識は、放射性同位体（放射性核種）、例えば、３Ｈ、１１Ｃ、１４Ｃ、１８Ｆ、３２Ｐ、３５Ｓ、６４Ｃｕ、６８Ｇｎ、８６Ｙ、８９Ｚｒ、９９ＴＣ、１１１Ｉｎ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１３３Ｘｅ、１７７Ｌｕ、２１１Ａｔ、又は１３１Ｂｉを採用する。
【0085】
（ｄ）イメージング及び治療目的のための標識として適切な金属キレート錯体は当技術分野でよく知られている（米国特許出願公開第２０１０／０１１１８６１、米国特許第５，３４２，６０６号、米国特許第５，４２８，１５５号、米国特許第５，３１６，７５７号、米国特許第５，４８０，９９０号、米国特許第５，４６２，７２５号、米国特許第５，４２８，１３９号、米国特許第５，３８５，８９３号、米国特許第５，７３９，２９４号、米国特許第５，７５０，６６０号、米国特許第５，８３４，４６１号、Ｈｎａｔｏｗｉｃｈ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ６５（１９８３）１４７－１５７、Ｍｅａｒｅｓ ｅｔ ａｌ，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１４２（１９８４）６８－７８、Ｍｉｒｚａｄｅｈ ｅｔ ａｌ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．１（１９９０）５９－６５、Ｍｅａｒｅｓ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ（１９９０），Ｓｕｐｐｌ．１０：２１－２６、Ｉｚａｒｄ ｅｔ ａｌ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．３（１９９２）３４６－３５０、Ｎｉｋｕｌａ ｅｔ ａｌ，Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２２（１９９５）３８７－９０、Ｃａｍｅｒａ ｅｔ ａｌ，Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２０（１９９３）９５５－６２、Ｋｕｋｉｓ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．３９（１９９８）２１０５－２１１０、Ｖｅｒｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．４４（２００３）１６６３－１６７０、Ｃａｍｅｒａ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．２１（１９９４）６４０－６４６、Ｒｕｅｇｇ ｅｔ ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５０（１９９０）４２２１－４２２６、Ｖｅｒｅｌ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．４４（２００３）１６６３－１６７０、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６１（２００１）４４７４－４４８２、Ｍｉｔｃｈｅｌｌ，ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．４４（２００３）１１０５－１１１２、Ｋｏｂａｙａｓｈｉ ｅｔ ａｌ Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．１０（１９９９）１０３－１１１、Ｍｉｅｄｅｒｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．４５（２００４）１２９－１３７、ＤｅＮａｒｄｏ ｅｔ ａｌ，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ４（１９９８）２４８３－９０、Ｂｌｅｎｄ ｅｔ ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ ＆ Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ １８（２００３）３５５－３６３、Ｎｉｋｕｌａ ｅｔ ａｌ Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．４０（１９９９）１６６－７６、Ｋｏｂａｙａｓｈｉ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．３９（１９９８）８２９－３６、Ｍａｒｄｉｒｏｓｓｉａｎ ｅｔ ａｌ，Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２０（１９９３）６５－７４、Ｒｏｓｅｌｌｉ ｅｔ ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ ＆ Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，１４（１９９９）２０９－２０）。
【0086】
本明細書で使用される場合、「粒子」は、体積、質量又は平均サイズ等の物理的特性を帰することができる小さな局在化した物体を意味する。したがって、粒子は、対称、球状、本質的に球状又は球形の形状であってもよく、又は不規則、非対称の形状又は形態であってもよい。粒子のサイズは変化し得る。「微粒子」という用語は、ナノメートル及びマイクロメートル範囲の直径を有する粒子を指す。
【0087】
上記の本明細書で定義される微粒子は、当業者に公知の任意の適切な材料を含んでもよく、又はそれからなってもよく、例えば、無機又は有機材料を含んでもよく、又はそれからなってもよく、又は本質的にそれからなってもよい。典型的には、それらは、金属若しくは金属の合金、又は有機材料を含むか、それらからなるか、又はそれらから本質的になり得るか、又は炭水化物要素を含むか、それらからなるか、又はそれらから本質的になり得る。微粒子のために想定される材料の例としては、アガロース、ポリスチレン、ラテックス、ポリビニルアルコール、シリカ及び強磁性金属、合金又は混成材料が挙げられる。一実施形態では、微粒子は、磁性又は強磁性金属、合金又は混成である。更なる実施形態では、材料は特定の特性を有してもよく、例えば疎水性又は親水性であってもよい。そのような微粒子は、典型的には水溶液中に分散され、微粒子を分離したままにし、非特異的なクラスター形成を回避しながら、小さな負の表面電荷を保持する。
【0088】
本発明の一実施形態では、微小粒子は常磁性微小粒子であり、本開示に係る測定方法における該粒子の分離は磁力によって促進される。溶液／懸濁液から常磁性又は磁性粒子を引き抜き、それらを必要に応じて保持するために磁力が印加され、溶液／懸濁液の液体を除去することができ、粒子を例えば洗浄することができる。
【0089】
「キット」は、少なくとも１つの試薬、例えば障害の処置のための薬品、又は本発明のバイオマーカー遺伝子若しくはタンパク質を特異的に検出するためのプローブを含む、任意の製品（例えば、パッケージ又は容器）である。キットは、好ましくは、本発明の方法を実行するためのユニットとして、促進、流通、又は販売される。典型的には、キットは、厳重な管理下で、バイアル及びチューブ等の１つ又は複数の容器手段を受容するように区分化された担体手段を更に含み得る。特に、容器手段のそれぞれは、第１の態様の方法において使用される別個の要素のうちの１つを含む。キットは、緩衝液、希釈剤、フィルタ、ニードル、注射器、及び使用説明を伴う添付文書を含むがこれらに限定されない、更なる材料を含む１つ又は複数の他の容器を更に備えてもよい。標識は、組成物が特定の用途に使用されることを示すために容器上に提示され得、ｉｎ ｖｉｖｏ使用又はｉｎ ｖｉｔｒｏ使用のいずれかに関する指示も示し得る。コンピュータプログラムコードは、光記憶媒体（例えば、コンパクトディスク）などのデータ記憶媒体もしくは装置上に、又はコンピュータ若しくはデータ処理装置に直接提供されてもよい。更に、キットは、較正目的のために、本明細書の別の箇所に記載されるようなバイオマーカーの標準量を含み得る。
【0090】
「添付文書」は、かかる治療薬若しくは薬品の適応症、使用法、投薬量、投与、禁忌症についての情報、パッケージ製品と組み合わされる他の治療薬、及び／又はその使用に関する警告等を含有する、治療薬又は薬品の商用のパッケージに通例含まれる指示書を指すように使用される。
【0091】
実施形態
患者試料中のＳＡＲＳ ＣｏＶ－２ウイルスを検出するための現在利用可能なＰＣＲフォーマット診断アッセイは、結果が利用可能になるのに数時間を必要とする。したがって、それらは、現在進行中のパンデミックにおいてコロナウイルス検査に対する高い需要を満たすのに十分ではない。迅速なポイントオブケア抗原検査は、はるかに速い結果を提供するが、信頼できる診断に必要となる感度及び／又は特異性を示さないことが多い。パンデミックにおける信頼できる診断結果の高い要求を提供するために、本発明者らは、高特異性抗体を使用するハイスループット抗原アッセイを開発した。
患者試料中のＳＡＲＳ ＣｏＶ－２ウイルスを検出するための現在利用可能なＰＣＲフォーマット診断アッセイは、結果が利用可能になるのに数時間を必要とする。したがって、それらは、現在進行中のパンデミックにおいてコロナウイルス検査に対する高い需要を満たすのに十分ではない。迅速なポイントオブケア抗原検査は、はるかに速い結果を提供するが、信頼できる診断に必要となる感度及び／又は特異性を示さないことが多い。パンデミックにおける信頼できる診断結果の高い要求を提供するために、本発明者らは、高特異性抗体を使用するハイスループット抗原アッセイを開発した。
【0092】
第１の態様では、本発明は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤに結合する（単離された）モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関し、該モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、
ａ）表面プラズモン共鳴によって決定される２．５Ｅ＋０６Ｍ－１ｓ－１を超える会合速度定数（ｋａ）を有する、
及び／又は
ｂ）表面プラズモン共鳴によって決定される５．０Ｅ－０３ｓ－１未満の解離速度定数（ｋｄ）を有する、
及び／又は
ｃ）表面プラズモン共鳴によって決定される４分以上のｔ／２ｄｉｓｓの半減期時間を有する、
及び／又は
ｄ）１：１若しくは１：２の化学量論を有する。
ａ）表面プラズモン共鳴によって決定される２．５Ｅ＋０６Ｍ－１ｓ－１を超える会合速度定数（ｋａ）を有する、
及び／又は
ｂ）表面プラズモン共鳴によって決定される５．０Ｅ－０３ｓ－１未満の解離速度定数（ｋｄ）を有する、
及び／又は
ｃ）表面プラズモン共鳴によって決定される４分以上のｔ／２ｄｉｓｓの半減期時間を有する、
及び／又は
ｄ）１：１若しくは１：２の化学量論を有する。
【0093】
特定の実施形態では、第１の態様の抗体は中和抗体である。
【0094】
特定の実施形態では、第１の態様の抗体は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルス野生型及び変異型株（バリアント）のスパイクタンパク質のＲＢＤに結合する。
【0095】
特定の実施形態では、抗体は、２．０Ｅ＋０６Ｍ－１ｓ－１を超える、特に２．５Ｅ＋０６Ｍ－１ｓ－１を超える会合速度定数（ｋａ）を有する。特定の実施形態では、抗体は、２．７Ｅ＋０６Ｍ－１ｓ－１を超える、特に３．０Ｅ＋０６Ｍ－１ｓ－１を超える会合速度定数（ｋａ）を有する。特定の実施形態では、抗体は、３．３Ｅ＋０６Ｍ－１ｓ－１を超える会合速度定数（ｋａ）を有する。
【0096】
特定の実施形態では、抗体は、５．０Ｅ－０３ｓ－１未満、特に４．５Ｅ－０３ｓ－１未満、特に４．０Ｅ－０３ｓ－１未満、特に３．０Ｅ－０３ｓ－１未満、特に２．７Ｅ－０３ｓ－１未満の解離速度定数（ｋｄ）を有する。特定の実施形態では、抗体は、２．６Ｅ－０３ｓ－１未満、特に１．１Ｅ－０３ｓ－１未満の解離速度定数（ｋｄ）を有する。
【0097】
特定の実施形態では、抗体は、４分以上のｔ／２ｄｉｓｓ、６分以上のｔ／２ｄｉｓｓ、特に１１分以上のｔ／２ｄｉｓｓの抗体／抗原複合体半減時間を有する。
【0098】
特定の実施形態では、抗体は、３．３Ｅ＋０６Ｍ－１ｓ－１の会合速度定数（ｋａ）及び１．１Ｅ－０３ｓ－１の解離速度定数（ｋｄ）を有する。特定の実施形態では、抗体は、１１分のｔ／２ｄｉｓｓの抗体／抗原複合体半減期時間を有する。
【0099】
特定の実施形態では、抗体は、２．７Ｅ＋０６Ｍ－１ｓ－１の会合速度定数（ｋａ）及び２．７Ｅ－０３ｓ－１の解離速度定数（ｋｄ）を有する。特定の実施形態では、抗体は、４分のｔ／２ｄｉｓｓの抗体／抗原複合体半減期時間を有する。
【0100】
特定の実施形態では、抗体は、３．０Ｅ＋０６Ｍ－１ｓ－１の会合速度定数（ｋａ）及び２．６Ｅ－０３ｓ－１の解離速度定数（ｋｄ）を有する。特定の実施形態では、抗体は、４分のｔ／２ｄｉｓｓの抗体／抗原複合体半減期時間を有する。
【0101】
特定の実施形態では、抗体は、２．５Ｅ＋０６Ｍ－１ｓ－１の会合速度定数（ｋａ）及び１．９Ｅ－０３ｓ－１の解離速度定数（ｋｄ）を有する。特定の実施形態では、抗体は、６分のｔ／２ｄｉｓｓの抗体／抗原複合体半減期時間を有する。
【0102】
特定の実施形態では、抗体は、以下の態様２～５のいずれかについて記載される配列を有する。
【0103】
実施形態では、本発明の抗体又は抗原結合断片は、単離された抗体又は抗原結合断片である。したがって、抗体又は抗原結合断片は、精製された抗体又は抗原結合断片である。抗体の精製は、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）等の当技術分野で周知の方法によって達成され得る。したがって、抗体又は抗原結合断片は、抗体が産生された細胞から単離されているものとする。いくつかの実施形態では、単離された抗体又は抗原結合断片は、例えば、ローリー（Ｌｏｗｒｙ）法によって測定される場合、抗体の７０重量％超まで、いくつかの実施形態では、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９重量％超まで精製される。好ましい一実施形態では、本発明による単離された抗体又は抗原結合断片は、タンパク質検出のためにクーマシーブルー染色を使用する還元条件下でＳＤＳ－ＰＡＧＥによって決定される場合、９０％超の純度まで精製される。
【0104】
実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ネイキッド抗体又はネイキッド抗原結合断片である。実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、タグ又は標識を更に含む。特定の実施形態では、タグは、抗体又はその抗原結合断片を固相に直接又は間接的に結合することを可能にする。特定の実施形態では、タグは、バイオアフィン結合対のパートナーである。特定の実施形態では、タグは、ビオチン、ジゴキシン、ハプテン、又は相補的オリゴヌクレオチド配列（特に相補的ＬＮＡ配列）からなる群から選択される。特定の実施形態では、タグはビオチンである。
【0105】
特定の実施形態では、標識は、抗体又はその抗原結合断片の検出を可能にする。特定の実施形態では、標識は、電気化学発光ルテニウム又はイリジウム錯体である。特定の実施形態では、電気化学発光ルテニウム錯体は、負に帯電した電気化学発光ルテニウム錯体である。特定の実施形態では、標識は、１：１～１５：１の化学量論で抗原中に存在する負に帯電した電気化学発光ルテニウム錯体である。特定の実施形態では、化学量論は、２：１、２．５：１、３：１、５：１、１０：１、又は１５：１である。
【0106】
第２の態様では、本発明は、単離された抗体又はその抗原結合断片に関し、該抗体又はその抗原結合断片は、
ａ）それぞれ配列番号１、２、３、４、５及び６によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含むか、
ｂ）それぞれ配列番号１、２、３、４、５及び６によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）それぞれ配列番号１、２、３、４、５及び６によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する。
ａ）それぞれ配列番号１、２、３、４、５及び６によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含むか、
ｂ）それぞれ配列番号１、２、３、４、５及び６によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）それぞれ配列番号１、２、３、４、５及び６によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する。
【0107】
特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、上に具体的に列挙された配列を含む（すなわちアミノ酸変異のない）ＣＤＲを含む。
【0108】
特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、上記の配列の配列変異を有する１つ又は複数のＣＤＲを含む。特定の実施形態では、配列変異は、１又は２、特に１個のアミノ酸変化を含む。特定の実施形態では、１つ又は２つのアミノ酸変化は、互いに独立して、アミノ酸欠失、アミノ酸付加、又はアミノ酸置換である。特定の実施形態では、アミノ酸置換は保存的アミノ酸置換である。
【0109】
特定の実施形態では、第２の態様の抗体又は抗原結合断片は、更に、
ａ）それぞれ配列番号７、８、９、１０、１１、１２、１３及び１４によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３及びＦＲ－Ｌ４を含むか、
ｂ）それぞれ配列番号７、８、９、１０、１１、１２、１３及び１４によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３及びＦＲ－Ｌ４を含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）それぞれ配列番号７、８、９、１０、１１、１２、１３及び１４によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３、及びＦＲ－Ｌ４を含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する。
ａ）それぞれ配列番号７、８、９、１０、１１、１２、１３及び１４によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３及びＦＲ－Ｌ４を含むか、
ｂ）それぞれ配列番号７、８、９、１０、１１、１２、１３及び１４によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３及びＦＲ－Ｌ４を含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）それぞれ配列番号７、８、９、１０、１１、１２、１３及び１４によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３、及びＦＲ－Ｌ４を含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する。
【0110】
特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、上に具体的に列挙された配列を含む（すなわちアミノ酸変異のない）ＦＲを含む。
【0111】
特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、上記の配列の配列変異を有する１つ又は複数のＦＲを含む。特定の実施形態では、配列変異は、最大５個、特に１、２、３、４又は５個のアミノ酸変化を含む。特定の実施形態では、最大５個、特に１、２、３、４又は５個のアミノ酸の変化は、互いに独立して、アミノ酸の欠失、アミノ酸の付加又はアミノ酸の置換である。特定の実施形態では、アミノ酸置換は保存的アミノ酸置換である。
【0112】
特定の実施形態では、第２の態様の抗体又は抗原結合断片は、
ａ）配列番号１５によるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号１６によるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを含むか、
ｂ）配列番号１５によるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号１６によるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）配列番号１５によるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号１６によるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する。
ａ）配列番号１５によるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号１６によるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを含むか、
ｂ）配列番号１５によるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号１６によるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）配列番号１５によるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号１６によるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する。
【0113】
特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、上に具体的に列挙した配列を含む、すなわちアミノ酸変異のない重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含む。
【0114】
特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、上に列挙した配列の配列変異を有する重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含む。特定の実施形態では、バリアント配列は、上に具体的に列挙した配列と少なくとも８５％同一である。更なる一実施形態では、同一性は少なくとも９０％である。更なる実施形態では、同一性は少なくとも９５％、特に少なくとも９８％である。
【0115】
特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤに結合し、該抗体又はその抗原結合断片は、
ａ）表面プラズモン共鳴によって決定される２．０Ｅ＋０６Ｍ－１ｓ－１を超える会合速度定数（ｋａ）を有する、
及び／又は
ｂ）表面プラズモン共鳴によって決定される３．０Ｅ－０３ｓ－１未満の解離速度定数（ｋｄ）を有する、
及び／又は
ｃ）表面プラズモン共鳴によって決定される４分以上のｔ／２ｄｉｓｓの半減期時間を有する、
及び／又は
ｄ）１：１若しくは１：２の化学量論を有する。
ａ）表面プラズモン共鳴によって決定される２．０Ｅ＋０６Ｍ－１ｓ－１を超える会合速度定数（ｋａ）を有する、
及び／又は
ｂ）表面プラズモン共鳴によって決定される３．０Ｅ－０３ｓ－１未満の解離速度定数（ｋｄ）を有する、
及び／又は
ｃ）表面プラズモン共鳴によって決定される４分以上のｔ／２ｄｉｓｓの半減期時間を有する、
及び／又は
ｄ）１：１若しくは１：２の化学量論を有する。
【0116】
特定の実施形態では、抗体は、２．５Ｅ＋０６Ｍ－１ｓ－１を超える会合速度定数（ｋａ）を有する。特定の実施形態では、抗体は、２．７Ｅ＋０６Ｍ－１ｓ－１を超える、特に３．０Ｅ＋０６Ｍ－１ｓ－１を超える会合速度定数（ｋａ）を有する。特定の実施形態では、抗体は、３．３Ｅ＋０６Ｍ－１ｓ－１を超える会合速度定数（ｋａ）を有する。
【0117】
特定の実施形態では、抗体は、５．０Ｅ－０３ｓ－１未満、特に４．５Ｅ－０３ｓ－１未満、特に４．０Ｅ－０３ｓ－１未満、特に３．５Ｅ－０３ｓ－１未満、３．０Ｅ－０３ｓ－１、特に２．７Ｅ－０３ｓ－１未満の解離速度定数（ｋｄ）を有する。特定の実施形態では、抗体は、２．６Ｅ－０３ｓ－１未満、特に１．１Ｅ－０３ｓ－１未満の解離速度定数（ｋｄ）を有する。
【0118】
特定の実施形態では、抗体は、４分以上の抗体／抗原複合体半減期時間、６分以上のｔ／２ｄｉｓｓ、特に１１分以上のｔ／２ｄｉｓｓを有する。
【0119】
特定の実施形態では、抗体は、３．３Ｅ＋０６Ｍ－１ｓ－１の会合速度定数（ｋａ）及び１．１Ｅ－０３ｓ－１の解離速度定数（ｋｄ）を有する。特定の実施形態では、抗体は、１１分のｔ／２ｄｉｓｓの抗体／抗原複合体半減期時間を有する。特定の実施形態では、抗体は、３．３Ｅ＋０６Ｍ－１ｓ－１の会合速度定数（ｋａ）及び１．１Ｅ－０３ｓ－１の解離速度定数（ｋｄ）及び１１分のｔ／２ｄｉｓｓの抗体／抗原複合体半減期時間を有する。
【0120】
実施形態では、本発明の抗体又は抗原結合断片は、単離された抗体又は抗原結合断片である。したがって、抗体又は抗原結合断片は、精製された抗体又は抗原結合断片である。抗体の精製は、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）等の当技術分野で周知の方法によって達成され得る。したがって、抗体又は抗原結合断片は、抗体が産生された細胞から単離されているものとする。いくつかの実施形態では、単離された抗体又は抗原結合断片は、例えば、ローリー（Ｌｏｗｒｙ）法によって測定される場合、抗体の７０重量％超まで、いくつかの実施形態では、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９重量％超まで精製される。好ましい一実施形態では、本発明による単離された抗体又は抗原結合断片は、タンパク質検出のためにクーマシーブルー染色を使用する還元条件下でＳＤＳ－ＰＡＧＥによって決定される場合、９０％超の純度まで精製される。
【0121】
実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ネイキッド抗体又はネイキッド抗原結合断片である。実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、タグ又は標識を更に含む。特定の実施形態では、タグは、抗体又はその抗原結合断片を固相に直接又は間接的に結合することを可能にする。特定の実施形態では、タグは、バイオアフィン結合対のパートナーである。特定の実施形態では、タグは、ビオチン、ジゴキシン、ハプテン、又は相補的オリゴヌクレオチド配列（特に相補的ＬＮＡ配列）からなる群から選択される。特定の実施形態では、タグはビオチンである。
【0122】
特定の実施形態では、標識は、抗体又はその抗原結合断片の検出を可能にする。特定の実施形態では、標識は、電気化学発光ルテニウム又はイリジウム錯体である。特定の実施形態では、電気化学発光ルテニウム錯体は、負に帯電した電気化学発光ルテニウム錯体である。特定の実施形態では、標識は、１：１～１５：１の化学量論で抗原中に存在する負に帯電した電気化学発光ルテニウム錯体である。特定の実施形態では、化学量論は、２：１、２．５：１、３：１、５：１、１０：１、又は１５：１である。
【0123】
特定の実施形態では、第２の態様の抗体は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルス野生型及び変異型株（バリアント）のスパイクタンパク質のＲＢＤに結合する。
【0124】
第３の態様では、本発明は、抗体又はその抗原結合断片に関し、該抗体又はその抗原結合断片は、
ａ）それぞれ配列番号１７、１８、１９、２０、２１及び２２によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含むか、
ｂ）それぞれ配列番号１７、１８、１９、２０、２１及び２２によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）それぞれ配列番号１７、１８、１９、２０、２１及び２２によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する。
ａ）それぞれ配列番号１７、１８、１９、２０、２１及び２２によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含むか、
ｂ）それぞれ配列番号１７、１８、１９、２０、２１及び２２によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）それぞれ配列番号１７、１８、１９、２０、２１及び２２によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する。
【0125】
特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、上に具体的に列挙された配列を含む（すなわちアミノ酸変異のない）ＣＤＲを含む。
【0126】
特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、上記の配列の配列変異を有する１つ又は複数のＣＤＲを含む。特定の実施形態では、配列変異は、１又は２、特に１個のアミノ酸変化を含む。特定の実施形態では、１つ又は２つのアミノ酸変化は、互いに独立して、アミノ酸欠失、アミノ酸付加、又はアミノ酸置換である。特定の実施形態では、アミノ酸置換は保存的アミノ酸置換である。
【0127】
特定の実施形態では、第３の態様の抗体又は抗原結合断片は、更に、
ａ）それぞれ配列番号２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９及び３０によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３及びＦＲ－Ｌ４を含むか、
ｂ）それぞれ配列番号２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９及び３０によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３及びＦＲ－Ｌ４を含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）それぞれ配列番号２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９及び３０によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３、及びＦＲ－Ｌ４を含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する。
ａ）それぞれ配列番号２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９及び３０によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３及びＦＲ－Ｌ４を含むか、
ｂ）それぞれ配列番号２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９及び３０によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３及びＦＲ－Ｌ４を含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）それぞれ配列番号２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９及び３０によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３、及びＦＲ－Ｌ４を含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する。
【0128】
特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、上に具体的に列挙された配列を含む（すなわちアミノ酸変異のない）ＦＲを含む。
【0129】
特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、上記の配列の配列変異を有する１つ又は複数のＦＲを含む。特定の実施形態では、配列変異は、最大５個、特に１、２、３、４又は５個のアミノ酸変化を含む。特定の実施形態では、最大５個、特に１、２、３、４又は５個のアミノ酸の変化は、互いに独立して、アミノ酸の欠失、アミノ酸の付加又はアミノ酸の置換である。特定の実施形態では、アミノ酸置換は保存的アミノ酸置換である。
【0130】
特定の実施形態では、第３の態様の抗体又は抗原結合断片は、
ａ）配列番号３１によるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号３２によるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを含むか、
ｂ）配列番号３１によるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号３２によるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）配列番号３１によるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号３２によるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する。
ａ）配列番号３１によるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号３２によるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを含むか、
ｂ）配列番号３１によるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号３２によるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）配列番号３１によるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号３２によるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する。
【0131】
特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、上に具体的に列挙した配列を含む、すなわちアミノ酸変異のない重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含む。
【0132】
特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、上に列挙した配列の配列変異を有する重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含む。特定の実施形態では、バリアント配列は、上に具体的に列挙した配列と少なくとも８５％同一である。更なる一実施形態では、同一性は少なくとも９０％である。更なる実施形態では、同一性は少なくとも９５％、特に少なくとも９８％である。
【0133】
特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤに結合し、該抗体又はその抗原結合断片は、
ａ）表面プラズモン共鳴によって決定される２．５Ｅ＋０６Ｍ－１ｓ－１を超える会合速度定数（ｋａ）を有する、
及び／又は
ｂ）表面プラズモン共鳴によって決定される３．０Ｅ－０３ｓ－１未満の解離速度定数（ｋｄ）を有する、
及び／又は
ｃ）表面プラズモン共鳴によって決定される４分以上のｔ／２ｄｉｓｓの半減期時間を有する、
及び／又は
ｄ）１：１若しくは１：２の化学量論を有する。
ａ）表面プラズモン共鳴によって決定される２．５Ｅ＋０６Ｍ－１ｓ－１を超える会合速度定数（ｋａ）を有する、
及び／又は
ｂ）表面プラズモン共鳴によって決定される３．０Ｅ－０３ｓ－１未満の解離速度定数（ｋｄ）を有する、
及び／又は
ｃ）表面プラズモン共鳴によって決定される４分以上のｔ／２ｄｉｓｓの半減期時間を有する、
及び／又は
ｄ）１：１若しくは１：２の化学量論を有する。
【0134】
特定の実施形態では、抗体は、２．５Ｅ＋０６Ｍ－１ｓ－１を超える会合速度定数（ｋａ）を有する。特定の実施形態では、抗体は、２．７Ｅ＋０６Ｍ－１ｓ－１を超える、特に３．０Ｅ＋０６Ｍ－１ｓ－１を超える会合速度定数（ｋａ）を有する。特定の実施形態では、抗体は、３．３Ｅ＋０６Ｍ－１ｓ－１を超える会合速度定数（ｋａ）を有する。
【0135】
特定の実施形態では、抗体は、５．０Ｅ－０３ｓ－１未満、特に４．５Ｅ－０３ｓ－１未満、特に４．０Ｅ－０３ｓ－１未満、特に３．５Ｅ－０３ｓ－１未満、３．０Ｅ－０３ｓ－１、特に２．７Ｅ－０３ｓ－１未満の解離速度定数（ｋｄ）を有する。特定の実施形態では、抗体は、２．６Ｅ－０３ｓ－１未満、特に１．１Ｅ－０３ｓ－１未満の解離速度定数（ｋｄ）を有する。
【0136】
特定の実施形態では、抗体は、４分以上の抗体／抗原複合体半減期時間、６分以上のｔ／２ｄｉｓｓ、特に１１分以上のｔ／２ｄｉｓｓを有する。
【0137】
特定の実施形態では、抗体は、２．７Ｅ＋０６Ｍ－１ｓ－１の会合速度定数（ｋａ）及び２．７Ｅ－０３ｓ－１の解離速度定数（ｋｄ）を有する。特定の実施形態では、抗体は、４分のｔ／２ｄｉｓｓの抗体／抗原複合体半減期時間を有する。特定の実施形態では、抗体は、２．７Ｅ＋０６Ｍ－１ｓ－１の会合速度定数（ｋａ）及び２．７Ｅ－０３ｓ－１の解離速度定数（ｋｄ）及び４分のｔ／２ｄｉｓｓの抗体／抗原複合体半減期時間を有する。
【0138】
実施形態では、本発明の抗体又は抗原結合断片は、単離された抗体又は抗原結合断片である。したがって、抗体又は抗原結合断片は、精製された抗体又は抗原結合断片である。抗体の精製は、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）等の当技術分野で周知の方法によって達成され得る。したがって、抗体又は抗原結合断片は、抗体が産生された細胞から単離されているものとする。いくつかの実施形態では、単離された抗体又は抗原結合断片は、例えば、ローリー（Ｌｏｗｒｙ）法によって測定される場合、抗体の７０重量％超まで、いくつかの実施形態では、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９重量％超まで精製される。好ましい一実施形態では、本発明による単離された抗体又は抗原結合断片は、タンパク質検出のためにクーマシーブルー染色を使用する還元条件下でＳＤＳ－ＰＡＧＥによって決定される場合、９０％超の純度まで精製される。
【0139】
実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ネイキッド抗体又はネイキッド抗原結合断片である。実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、タグ又は標識を更に含む。特定の実施形態では、タグは、抗体又はその抗原結合断片を固相に直接又は間接的に結合することを可能にする。特定の実施形態では、タグは、バイオアフィン結合対のパートナーである。特定の実施形態では、タグは、ビオチン、ジゴキシン、ハプテン、又は相補的オリゴヌクレオチド配列（特に相補的ＬＮＡ配列）からなる群から選択される。特定の実施形態では、タグはビオチンである。
【0140】
特定の実施形態では、標識は、抗体又はその抗原結合断片の検出を可能にする。特定の実施形態では、標識は、電気化学発光ルテニウム又はイリジウム錯体である。特定の実施形態では、電気化学発光ルテニウム錯体は、負に帯電した電気化学発光ルテニウム錯体である。特定の実施形態では、標識は、１：１～１５：１の化学量論で抗原中に存在する負に帯電した電気化学発光ルテニウム錯体である。特定の実施形態では、化学量論は、２：１、２．５：１、３：１、５：１、１０：１、又は１５：１である。
【0141】
特定の実施形態では、第３の態様の抗体は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルス野生型及び変異型株（バリアント）のスパイクタンパク質のＲＢＤに結合する。
【0142】
第４の態様では、本発明は、抗体又はその抗原結合断片に関し、該抗体又はその抗原結合断片は、
ａ）それぞれ配列番号３３、３４、３５、３６、３７及び３８によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含むか、
ｂ）それぞれ配列番号３３、３４、３５、３６、３７及び３８によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）それぞれ配列番号３３、３４、３５、３６、３７及び３８によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する。
ａ）それぞれ配列番号３３、３４、３５、３６、３７及び３８によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含むか、
ｂ）それぞれ配列番号３３、３４、３５、３６、３７及び３８によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）それぞれ配列番号３３、３４、３５、３６、３７及び３８によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する。
【0143】
特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、上に具体的に列挙された配列を含む（すなわちアミノ酸変異のない）ＣＤＲを含む。
【0144】
特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、上記の配列の配列変異を有する１つ又は複数のＣＤＲを含む。特定の実施形態では、配列変異は、１又は２、特に１個のアミノ酸変化を含む。特定の実施形態では、１つ又は２つのアミノ酸変化は、互いに独立して、アミノ酸欠失、アミノ酸付加、又はアミノ酸置換である。特定の実施形態では、アミノ酸置換は保存的アミノ酸置換である。
【0145】
特定の実施形態では、第４の態様の抗体又は抗原結合断片は、更に、
ａ）それぞれ配列番号３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５及び４６によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３及びＦＲ－Ｌ４を含むか、
ｂ）それぞれ配列番号３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５及び４６によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３及びＦＲ－Ｌ４を含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）それぞれ配列番号３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５及び４６によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３、及びＦＲ－Ｌ４を含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する。
ａ）それぞれ配列番号３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５及び４６によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３及びＦＲ－Ｌ４を含むか、
ｂ）それぞれ配列番号３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５及び４６によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３及びＦＲ－Ｌ４を含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）それぞれ配列番号３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５及び４６によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３、及びＦＲ－Ｌ４を含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する。
【0146】
特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、上に具体的に列挙された配列を含む（すなわちアミノ酸変異のない）ＦＲを含む。
【0147】
特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、上記の配列の配列変異を有する１つ又は複数のＦＲを含む。特定の実施形態では、配列変異は、最大５個、特に１、２、３、４又は５個のアミノ酸変化を含む。特定の実施形態では、最大５個、特に１、２、３、４又は５個のアミノ酸の変化は、互いに独立して、アミノ酸の欠失、アミノ酸の付加又はアミノ酸の置換である。特定の実施形態では、アミノ酸置換は保存的アミノ酸置換である。
【0148】
特定の実施形態では、第４の態様の抗体又は抗原結合断片は、
ａ）配列番号４７によるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号４８によるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを含むか、
ｂ）配列番号４７によるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号４８によるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）配列番号４７によるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号４８によるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する。
ａ）配列番号４７によるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号４８によるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを含むか、
ｂ）配列番号４７によるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号４８によるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）配列番号４７によるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号４８によるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する。
【0149】
特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、上に具体的に列挙した配列を含む、すなわちアミノ酸変異のない重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含む。
【0150】
特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、上に列挙した配列の配列変異を有する重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含む。特定の実施形態では、バリアント配列は、上に具体的に列挙した配列と少なくとも８５％同一である。更なる一実施形態では、同一性は少なくとも９０％である。更なる実施形態では、同一性は少なくとも９５％、特に少なくとも９８％である。
【0151】
特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤに結合し、該抗体又はその抗原結合断片は、
ａ）表面プラズモン共鳴によって決定される２．０Ｅ＋０６Ｍ－１ｓ－１を超える会合速度定数（ｋａ）を有する、
及び／又は
ｂ）表面プラズモン共鳴によって決定される３．０Ｅ－０３ｓ－１未満の解離速度定数（ｋｄ）を有する、
及び／又は
ｃ）表面プラズモン共鳴によって決定される４分以上のｔ／２ｄｉｓｓの半減期時間を有する、
及び／又は
ｄ）１：１若しくは１：２の化学量論を有する。
ａ）表面プラズモン共鳴によって決定される２．０Ｅ＋０６Ｍ－１ｓ－１を超える会合速度定数（ｋａ）を有する、
及び／又は
ｂ）表面プラズモン共鳴によって決定される３．０Ｅ－０３ｓ－１未満の解離速度定数（ｋｄ）を有する、
及び／又は
ｃ）表面プラズモン共鳴によって決定される４分以上のｔ／２ｄｉｓｓの半減期時間を有する、
及び／又は
ｄ）１：１若しくは１：２の化学量論を有する。
【0152】
特定の実施形態では、抗体は、２．５Ｅ＋０６Ｍ－１ｓ－１を超える会合速度定数（ｋａ）を有する。特定の実施形態では、抗体は、２．７Ｅ＋０６Ｍ－１ｓ－１を超える、特に３．０Ｅ＋０６Ｍ－１ｓ－１を超える会合速度定数（ｋａ）を有する。特定の実施形態では、抗体は、３．３Ｅ＋０６Ｍ－１ｓ－１を超える会合速度定数（ｋａ）を有する。
【0153】
特定の実施形態では、抗体は、５．０Ｅ－０３ｓ－１未満、特に４．５Ｅ－０３ｓ－１未満、特に４．０Ｅ－０３ｓ－１未満、特に３．５Ｅ－０３ｓ－１未満、３．０Ｅ－０３ｓ－１、特に２．７Ｅ－０３ｓ－１未満の解離速度定数（ｋｄ）を有する。特定の実施形態では、抗体は、２．６Ｅ－０３ｓ－１未満、特に１．１Ｅ－０３ｓ－１未満の解離速度定数（ｋｄ）を有する。
【0154】
特定の実施形態では、抗体は、４分以上の抗体／抗原複合体半減期時間、６分以上のｔ／２ｄｉｓｓ、特に１１分以上のｔ／２ｄｉｓｓを有する。
【0155】
特定の実施形態では、抗体は、３．０Ｅ＋０６Ｍ－１ｓ－１の会合速度定数（ｋａ）及び２．６Ｅ－０３ｓ－１の解離速度定数（ｋｄ）を有する。特定の実施形態では、抗体は、４分のｔ／２ｄｉｓｓの抗体／抗原複合体半減期時間を有する。特定の実施形態では、抗体は、３．０Ｅ＋０６Ｍ－１ｓ－１の会合速度定数（ｋａ）及び２．６Ｅ－０３ｓ－１の解離速度定数（ｋｄ）及び４分のｔ／２ｄｉｓｓの抗体／抗原複合体半減期時間を有する。
【0156】
実施形態では、本発明の抗体又は抗原結合断片は、単離された抗体又は抗原結合断片である。したがって、抗体又は抗原結合断片は、精製された抗体又は抗原結合断片である。抗体の精製は、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）等の当技術分野で周知の方法によって達成され得る。したがって、抗体又は抗原結合断片は、抗体が産生された細胞から単離されているものとする。いくつかの実施形態では、単離された抗体又は抗原結合断片は、例えば、ローリー（Ｌｏｗｒｙ）法によって測定される場合、抗体の７０重量％超まで、いくつかの実施形態では、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９重量％超まで精製される。好ましい一実施形態では、本発明による単離された抗体又は抗原結合断片は、タンパク質検出のためにクーマシーブルー染色を使用する還元条件下でＳＤＳ－ＰＡＧＥによって決定される場合、９０％超の純度まで精製される。
【0157】
実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ネイキッド抗体又はネイキッド抗原結合断片である。実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、タグ又は標識を更に含む。特定の実施形態では、タグは、抗体又はその抗原結合断片を固相に直接又は間接的に結合することを可能にする。特定の実施形態では、タグは、バイオアフィン結合対のパートナーである。特定の実施形態では、タグは、ビオチン、ジゴキシン、ハプテン、又は相補的オリゴヌクレオチド配列（特に相補的ＬＮＡ配列）からなる群から選択される。特定の実施形態では、タグはビオチンである。
【0158】
特定の実施形態では、標識は、抗体又はその抗原結合断片の検出を可能にする。特定の実施形態では、標識は、電気化学発光ルテニウム又はイリジウム錯体である。特定の実施形態では、電気化学発光ルテニウム錯体は、負に帯電した電気化学発光ルテニウム錯体である。特定の実施形態では、標識は、１：１～１５：１の化学量論で抗原中に存在する負に帯電した電気化学発光ルテニウム錯体である。特定の実施形態では、化学量論は、２：１、２．５：１、３：１、５：１、１０：１、又は１５：１である。
【0159】
特定の実施形態では、第４の態様の抗体は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルス野生型及び変異型株（バリアント）のスパイクタンパク質のＲＢＤに結合する。
【0160】
第５の態様では、本発明は、単離された抗体又はその抗原結合断片に関し、該抗体又はその抗原結合断片は、
ａ）それぞれ配列番号４９、５０、５１、５２、５３及び５４によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含むか、
ｂ）それぞれ配列番号４９、５０、５１、５２、５３及び５４によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）それぞれ配列番号４９、５０、５１、５２、５３及び５４によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する。
ａ）それぞれ配列番号４９、５０、５１、５２、５３及び５４によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含むか、
ｂ）それぞれ配列番号４９、５０、５１、５２、５３及び５４によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）それぞれ配列番号４９、５０、５１、５２、５３及び５４によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する。
【0161】
特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、上に具体的に列挙された配列を含む（すなわちアミノ酸変異のない）ＣＤＲを含む。
【0162】
特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、上記の配列の配列変異を有する１つ又は複数のＣＤＲを含む。特定の実施形態では、配列変異は、１又は２、特に１個のアミノ酸変化を含む。特定の実施形態では、１つ又は２つのアミノ酸変化は、互いに独立して、アミノ酸欠失、アミノ酸付加、又はアミノ酸置換である。特定の実施形態では、アミノ酸置換は保存的アミノ酸置換である。
【0163】
特定の実施形態では、第２の態様の抗体又は抗原結合断片は、更に、
ａ）それぞれ配列番号５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１及び６２によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３及びＦＲ－Ｌ４を含むか、
ｂ）それぞれ配列番号５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１及び６２によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３及びＦＲ－Ｌ４を含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）それぞれ配列番号５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１及び６２によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３、及びＦＲ－Ｌ４を含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する。
ａ）それぞれ配列番号５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１及び６２によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３及びＦＲ－Ｌ４を含むか、
ｂ）それぞれ配列番号５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１及び６２によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３及びＦＲ－Ｌ４を含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）それぞれ配列番号５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１及び６２によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３、及びＦＲ－Ｌ４を含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する。
【0164】
特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、上に具体的に列挙された配列を含む（すなわちアミノ酸変異のない）ＦＲを含む。
【0165】
特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、上記の配列の配列変異を有する１つ又は複数のＦＲを含む。特定の実施形態では、配列変異は、最大５個、特に１、２、３、４又は５個のアミノ酸変化を含む。特定の実施形態では、最大５個、特に１、２、３、４又は５個のアミノ酸の変化は、互いに独立して、アミノ酸の欠失、アミノ酸の付加又はアミノ酸の置換である。特定の実施形態では、アミノ酸置換は保存的アミノ酸置換である。
【0166】
特定の実施形態では、第２の態様の抗体又は抗原結合断片は、
ａ）配列番号６３によるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号６４によるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを含むか、
ｂ）配列番号６３によるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号６４によるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）配列番号６３によるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号６４によるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する。
ａ）配列番号６３によるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号６４によるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを含むか、
ｂ）配列番号６３によるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号６４によるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）配列番号６３によるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号６４によるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する。
【0167】
特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、上に具体的に列挙した配列を含む、すなわちアミノ酸変異のない重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含む。
【0168】
特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、上に列挙した配列の配列変異を有する重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含む。特定の実施形態では、バリアント配列は、上に具体的に列挙した配列と少なくとも８５％同一である。更なる一実施形態では、同一性は少なくとも９０％である。更なる実施形態では、同一性は少なくとも９５％、特に少なくとも９８％である。
【0169】
特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤに結合し、該抗体又はその抗原結合断片は、
ａ）表面プラズモン共鳴によって決定される２．０Ｅ＋０６Ｍ－１ｓ－１を超える会合速度定数（ｋａ）を有する、
及び／又は
ｂ）表面プラズモン共鳴によって決定される３．０Ｅ－０３ｓ－１未満の解離速度定数（ｋｄ）を有する、
及び／又は
ｃ）表面プラズモン共鳴によって決定される４分以上のｔ／２ｄｉｓｓの半減期時間を有する、
及び／又は
ｄ）１：１若しくは１：２の化学量論を有する。
ａ）表面プラズモン共鳴によって決定される２．０Ｅ＋０６Ｍ－１ｓ－１を超える会合速度定数（ｋａ）を有する、
及び／又は
ｂ）表面プラズモン共鳴によって決定される３．０Ｅ－０３ｓ－１未満の解離速度定数（ｋｄ）を有する、
及び／又は
ｃ）表面プラズモン共鳴によって決定される４分以上のｔ／２ｄｉｓｓの半減期時間を有する、
及び／又は
ｄ）１：１若しくは１：２の化学量論を有する。
【0170】
特定の実施形態では、抗体は、２．５Ｅ＋０６Ｍ－１ｓ－１を超える会合速度定数（ｋａ）を有する。特定の実施形態では、抗体は、２．７Ｅ＋０６Ｍ－１ｓ－１を超える、特に３．０Ｅ＋０６Ｍ－１ｓ－１を超える会合速度定数（ｋａ）を有する。特定の実施形態では、抗体は、３．３Ｅ＋０６Ｍ－１ｓ－１を超える会合速度定数（ｋａ）を有する。
【0171】
特定の実施形態では、抗体は、５．０Ｅ－０３ｓ－１未満、特に４．５Ｅ－０３ｓ－１未満、特に４．０Ｅ－０３ｓ－１未満、特に３．５Ｅ－０３ｓ－１未満、３．０Ｅ－０３ｓ－１、特に２．７Ｅ－０３ｓ－１未満の解離速度定数（ｋｄ）を有する。特定の実施形態では、抗体は、２．６Ｅ－０３ｓ－１未満、特に１．１Ｅ－０３ｓ－１未満の解離速度定数（ｋｄ）を有する。
【0172】
特定の実施形態では、抗体は、４分以上のｔ／２ｄｉｓｓ、６分以上のｔ／２ｄｉｓｓ、特に１１分以上のｔ／２ｄｉｓｓの抗体／抗原複合体半減時間を有する。
【0173】
特定の実施形態では、抗体は、２．５Ｅ＋０６Ｍ－１ｓ－１の会合速度定数（ｋａ）及び１．９Ｅ－０３ｓ－１の解離速度定数（ｋｄ）を有する。特定の実施形態では、抗体は、６分のｔ／２ｄｉｓｓの抗体／抗原複合体半減期時間を有する。特定の実施形態では、抗体は、２．５Ｅ＋０６Ｍ－１ｓ－１の会合速度定数（ｋａ）及び１．９Ｅ－０３ｓ－１の解離速度定数（ｋｄ）及び６分のｔ／２ｄｉｓｓの抗体／抗原複合体半減期時間を有する。
【0174】
実施形態では、本発明の抗体又は抗原結合断片は、単離された抗体又は抗原結合断片である。したがって、抗体又は抗原結合断片は、精製された抗体又は抗原結合断片である。抗体の精製は、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）等の当技術分野で周知の方法によって達成され得る。したがって、抗体又は抗原結合断片は、抗体が産生された細胞から単離されているものとする。いくつかの実施形態では、単離された抗体又は抗原結合断片は、例えば、ローリー（Ｌｏｗｒｙ）法によって測定される場合、抗体の７０重量％超まで、いくつかの実施形態では、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９重量％超まで精製される。好ましい一実施形態では、本発明による単離された抗体又は抗原結合断片は、タンパク質検出のためにクーマシーブルー染色を使用する還元条件下でＳＤＳ－ＰＡＧＥによって決定される場合、９０％超の純度まで精製される。
【0175】
実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ネイキッド抗体又はネイキッド抗原結合断片である。実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、タグ又は標識を更に含む。特定の実施形態では、タグは、抗体又はその抗原結合断片を固相に直接又は間接的に結合することを可能にする。特定の実施形態では、タグは、バイオアフィン結合対のパートナーである。特定の実施形態では、タグは、ビオチン、ジゴキシン、ハプテン、又は相補的オリゴヌクレオチド配列（特に相補的ＬＮＡ配列）からなる群から選択される。特定の実施形態では、タグはビオチンである。
【0176】
特定の実施形態では、標識は、抗体又はその抗原結合断片の検出を可能にする。特定の実施形態では、標識は、電気化学発光ルテニウム又はイリジウム錯体である。特定の実施形態では、電気化学発光ルテニウム錯体は、負に帯電した電気化学発光ルテニウム錯体である。特定の実施形態では、標識は、１：１～１５：１の化学量論で抗原中に存在する負に帯電した電気化学発光ルテニウム錯体である。特定の実施形態では、化学量論は、２：１、２．５：１、３：１、５：１、１０：１、又は１５：１である。
【0177】
第６の態様では、本発明は、本発明の第１の態様、第２の態様、第３の態様、第４の態様、又は第５の態様について上述した抗体の群から選択される少なくとも１つの抗体を含むキトに関する。したがって、実施形態において、キットは、本発明の第１の態様について上述した抗体を含み得る。更なる実施形態では、キットは、本発明の第２の態様について上述した抗体を含み得る。更なる実施形態では、キットは、本発明の第３の態様について上述した抗体を含み得る。更なる実施形態では、キットは、本発明の第４の態様について上述した抗体を含み得る。更なる実施形態では、キットは、本発明の第５の態様について上述した抗体を含み得る。
【0178】
特定の実施形態では、キットは、本発明の第１の態様、第２の態様、第３の態様、第４の態様、又は第５の態様について上述した抗体の群から選択される第２の抗体を更に含む。
【0179】
したがって、実施形態では、キットは、本発明の第１の態様について上述した抗体及び第２の態様について上述した抗体を含み得る。更なる実施形態では、キットは、本発明の第１の態様について上述した抗体及び第３の態様について上述した抗体を含み得る。更なる実施形態では、キットは、本発明の第１の態様について上述した抗体及び第４の態様について上述した抗体を含み得る。更なる実施形態では、キットは、本発明の第１の態様について上述した抗体及び第５の態様について上述した抗体を含み得る。更なる実施形態では、キットは、本発明の第２の態様について上述した抗体及び第３の態様について上述した抗体を含み得る。更なる実施形態では、キットは、本発明の第２の態様について上述した抗体及び第４の態様について上述した抗体を含み得る。更なる実施形態では、キットは、本発明の第２の態様について上述した抗体及び第５の態様について上述した抗体を含み得る。更なる実施形態では、キットは、本発明の第３の態様について上述した抗体及び第４の態様について上述した抗体を含み得る。更なる実施形態では、キットは、本発明の第３の態様について上述した抗体及び第５の態様について上述した抗体を含み得る。更なる実施形態では、キットは、本発明の第４の態様について上述した抗体及び第５の態様について上述した抗体を含み得る。
【0180】
特定の実施形態では、キットは、本発明の第１の態様、第２の態様、第３の態様、第４の態様、又は第５の態様について上述した抗体の群から選択される第３の抗体を更に含む。したがって、実施形態では、キットは、本発明の第１の態様について上述した抗体、第２の態様について上述した抗体、及び第３の態様について上述した抗体を含み得る。更なる実施形態では、キットは、本発明の第１の態様について上述した抗体、第２の態様について上述した抗体、及び第４の態様について上述した抗体を含み得る。特定の実施形態では、キットは、本発明の第１の態様、第２の態様、第３の態様、第４の態様、又は第５の態様による３つの抗体の任意の組み合わせを含み得る。
【0181】
第７の態様では、本発明は、本発明の第１の態様、第２の態様、第３の態様、第４の態様、又は第５の態様について上述した抗体の群から選択される抗体をコードする核酸に関する。
【0182】
第８の態様では、本発明は、本発明の第７の態様について上述した核酸を含む宿主細胞、及び／又は本発明の第１の態様、第２の態様、第３の態様、第４の態様、又は第５の態様について上述した抗体を産生する宿主細胞に関する。
【0183】
好ましい実施形態では、宿主細胞はハイブリドーマ細胞である。更に、宿主細胞は、本発明による抗体を生成するように操作することができる任意の種類の細胞系であり得る。例えば、宿主細胞は動物細胞、特に哺乳動物細胞であり得る。一実施形態では、実施例の欄で使用されるＨＥＫ ２９３－Ｆ細胞等のＨＥＫ２９３（ヒト胎児腎臓細胞）又はＣＨＯ（チャイニーズハムスター卵巣）細胞が宿主細胞として使用される。別の実施形態では、宿主細胞は、非ヒト動物又は哺乳動物細胞である。
【0184】
宿主細胞は、好ましくは、本発明の抗体又はその断片をコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドを含む。特定の実施形態では、宿主細胞は、本発明の第７の態様の核酸を含む。特に、宿主細胞は、本発明の抗体の軽鎖をコードする少なくとも１つのポリヌクレオチド、及び本発明の抗体の重鎖をコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドを含む。当該ポリヌクレオチド（複数可）は、適切なプロモーターに作動可能に連結されているものとする。
【0185】
第９の態様では、本発明は、本発明の第１の態様、第２の態様、第３の態様、第４の態様、又は第５の態様について上述した抗体の群から選択される少なくとも１つの抗体を含む組成物に関する。したがって、実施形態では、組成物は、本発明の第１の態様について上述した抗体を含み得る。更なる実施形態では、組成物は、本発明の第２の態様について上述した抗体を含み得る。更なる実施形態では、組成物は、本発明の第３の態様について上述した抗体を含み得る。更なる実施形態では、組成物は、本発明の第４の態様について上述した抗体を含み得る。更なる実施形態では、組成物は、本発明の第５の態様について上述した抗体を含み得る。
【0186】
特定の実施形態では、組成物は、本発明の第１の態様、第２の態様、第３の態様、第４の態様、又は第５の態様について上述した抗体の群から選択される第２の抗体を更に含む。
【0187】
したがって、実施形態では、組成物は、本発明の第１の態様について上述した抗体及び第２の態様について上述した抗体を含み得る。更なる実施形態では、組成物は、本発明の第１の態様について上述した抗体及び第３の態様について上述した抗体を含み得る。更なる実施形態では、組成物は、本発明の第１の態様について上述した抗体及び第４の態様について上述した抗体を含み得る。更なる実施形態では、組成物は、本発明の第１の態様について上述した抗体及び第５の態様について上述した抗体を含み得る。更なる実施形態では、組成物は、本発明の第２の態様について上述した抗体及び第３の態様について上述した抗体を含み得る。更なる実施形態では、組成物は、本発明の第２の態様について上述した抗体及び第４の態様について上述した抗体を含み得る。更なる実施形態では、組成物は、本発明の第２の態様について上述した抗体及び第５の態様について上述した抗体を含み得る。更なる実施形態では、組成物は、本発明の第３の態様について上述した抗体及び第４の態様について上述した抗体を含み得る。更なる実施形態では、組成物は、本発明の第３の態様について上述した抗体及び第５の態様について上述した抗体を含み得る。更なる実施形態では、組成物は、本発明の第４の態様について上述した抗体及び第５の態様について上述した抗体を含み得る。
【0188】
特定の実施形態では、組成物は、本発明の第１の態様、第２の態様、第３の態様、第４の態様、又は第５の態様について上述した抗体の群から選択される第３の抗体を更に含む。したがって、実施形態では、組成物は、本発明の第１の態様について上述した抗体、第２の態様について上述した抗体、及び第３の態様について上述した抗体を含み得る。更なる実施形態では、組成物は、本発明の第１の態様について上述した抗体、第２の態様について上述した抗体、及び第４の態様について上述した抗体を含み得る。更なる実施形態では、組成物は、本発明の第２の態様について上述した抗体、第３の態様について上述した抗体、及び第４の態様について上述した抗体を含み得る。更なる実施形態では、組成物は、本発明の第１の態様について上述した抗体、第３の態様について上述した抗体、及び第４の態様について上述した抗体を含み得る。更なる実施形態では、組成物は、本発明の第１の態様について上述した抗体、第２の態様について上述した抗体、及び第４の態様について上述した抗体を含み得る。特定の実施形態では、キットは、本発明の第１の態様、第２の態様、第３の態様、第４の態様、又は第５の態様による３つの抗体の任意の組み合わせを含み得る。
【0189】
特定の実施形態では、組成物は診断用組成物である。したがって、特定の実施形態では、組成物は診断用である。
【0190】
第１０の態様では、本発明は、ｉｎ ｖｉｔｒｏイムノアッセイのための、本発明の第１の態様、第２の態様、第３の態様、第４の態様若しくは第５の態様の抗体若しくは抗原結合断片、又は本発明の第６の態様のキット、又は本発明の第９の態様の組成物の使用に関する。特定の実施形態では、イムノアッセイは異種イムノアッセイである。
【0191】
第１１の態様では、本発明は、患者から得られた試料中のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスの存在を検出するための ｉｎ ｖｉｔｒｏ方法であって、
ａ）試料を、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＳｐｉｋｅタンパク質のＲＢＤに結合する少なくとも１つの抗体又はその抗体結合断片と共にインキュベートし、それによって少なくとも１つの抗体又は抗体結合断片とＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＳｐｉｋｅタンパク質のＲＢＤとの間に複合体を生成させることと、
ｂ）任意に、形成された複合体を固相、特に微粒子に固定化することと、
ｃ）工程ａ）で形成された複合体を検出することにより、試料中のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスの存在を検出することと、を含むｉｎ ｖｉｔｒｏ方法に関する。
ａ）試料を、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＳｐｉｋｅタンパク質のＲＢＤに結合する少なくとも１つの抗体又はその抗体結合断片と共にインキュベートし、それによって少なくとも１つの抗体又は抗体結合断片とＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＳｐｉｋｅタンパク質のＲＢＤとの間に複合体を生成させることと、
ｂ）任意に、形成された複合体を固相、特に微粒子に固定化することと、
ｃ）工程ａ）で形成された複合体を検出することにより、試料中のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスの存在を検出することと、を含むｉｎ ｖｉｔｒｏ方法に関する。
【0192】
一実施形態では、前述の方法は、対象からの試料の採取を包含しない。むしろ、（例えば、主治医の監督下で）対象から得られた試料が提供される。例えば、試料は、当該試料中のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスの存在の検出を行う検査室に試料を送達することによって提供することができる。
【0193】
特定の実施形態では、少なくとも１つの抗体又は抗体結合断片は、本発明の第１の態様、第２の態様、第３の態様、第４の態様及び／又は第５の態様の抗体又は抗体結合断片である。
【0194】
実施形態では、試料は、工程ａ）において、本発明の第１の態様について上述した抗体と共にインキュベートされる。更なる実施形態では、試料は、本発明の第２の態様について上述した抗体と共にインキュベートされる。更なる実施形態では、試料は、本発明の第３の態様について上述した抗体と共にインキュベートされる。更なる実施形態では、試料は、本発明の第４の態様について上述した抗体と共にインキュベートされる。更なる実施形態では、試料は、本発明の第５の態様について上述した抗体と共にインキュベートされる。
【0195】
特定の実施形態では、試料は、工程ａ）において、本発明の本発明の第１の態様、第２の態様、第３の態様、第４の態様、又は第５の態様について上述した抗体の群から選択される第２の抗体と更にインキュベートされる。
【0196】
特定の実施形態では、工程ａ）において、試料は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質のＲＢＤに結合する２つの抗体と共にインキュベートされる。当業者に明らかなように、試料は、第１の抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＢＤ－抗体／ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＤＢ－抗原／第２の抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＢＤ－抗体の複合体を形成するために十分な時間及び条件下で、いずれかの所望の順序で、すなわち、最初に第１の抗体、次いで第２の抗体と、又は最初に第２の抗体、次いで第１の抗体と、又は同時に、第１の抗体及び第２の抗体と接触させることができる。当業者であれば容易に理解するように、特異的抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＢＤ抗体とＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＢＤ－抗原／分析物との間の複合体（＝抗ＳＡＲ－ＣｏＶ－２ Ｓ－複合体）の形成、又は第１の抗体である抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＢＤ－抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＢＤ－抗原（分析物）と、第２の抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＢＤ－抗体を含む二次複合体若しくはサンドイッチ複合体（＝第１の抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＢＤ－抗体／ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＢＤ－抗原／第２の抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＢＤ－抗体複合体）の形成に適切な、又は十分な時間及び条件を確立することは日常的な実験にすぎない。
【0197】
抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＢＤ－抗体／ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＢＤ－抗原複合体の検出は、任意の適切な手段によって行うことができる。第１の抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＢＤ－抗体／ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＢＤ－抗原／第２の抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＢＤ－抗体複合体の検出は、任意の適切な手段によって行うことができる。当業者は、このような手段／方法に完全に精通している。
【0198】
したがって、実施形態では、試料は、工程ａ）において、本発明の第１の態様について上述した抗体及び第２の態様について上述した抗体と共にインキュベートされる。更なる実施形態では、試料は、本発明の第１の態様について上述した抗体及び第３の態様について上述した抗体と共にインキュベートされる。更なる実施形態では、試料は、本発明の第１の態様について上述した抗体及び第４の態様について上述した抗体と共にインキュベートされる。更なる実施形態では、試料は、本発明の第１の態様について上述した抗体及び第５の態様について上述した抗体と共にインキュベートされる。更なる実施形態では、試料は、本発明の第２の態様について上述した抗体及び第３の態様について上述した抗体と共にインキュベートされる。更なる実施形態では、試料は、本発明の第２の態様について上述した抗体及び第４の態様について上述した抗体と共にインキュベートされる。更なる実施形態では、試料は、本発明の第２の態様について上述した抗体及び第５の態様について上述した抗体と共にインキュベートされる。更なる実施形態では、試料は、本発明の第３の態様について上述した抗体及び第４の態様について上述した抗体と共にインキュベートされる。更なる実施形態では、試料は、本発明の第３の態様について上述した抗体及び第５の態様について上述した抗体と共にインキュベートされる。更なる実施形態では、試料は、本発明の第４の態様について上述した抗体及び第５の態様について上述した抗体と共にインキュベートされる。
【0199】
特定の実施形態では、試料は、工程ａ）において、本発明の本発明の第１の態様、第２の態様、第３の態様、第４の態様、又は第５の態様について上述した抗体の群から選択される第３の抗体と更にインキュベートされる。したがって、実施形態では、試料は、本発明の第１の態様について上述した抗体、第２の態様について上述した抗体、及び第３の態様について上述した抗体と共にインキュベートされる。更なる実施形態では、試料は、本発明の第１の態様について上述した抗体、第２の態様について上述した抗体、及び第４の態様について上述した抗体と共にインキュベートされる。更なる実施形態では、試料は、工程ａ）において、本発明の第２の態様について上述した抗体、第３の態様について上述した抗体、及び第４の態様について上述した抗体と共にインキュベートされる。更なる実施形態では、試料は、本発明の第１の態様について上述した抗体、第３の態様について上述した抗体、及び第４の態様について上述した抗体と共にインキュベートされる。更なる実施形態では、試料は、本発明の第１の態様について上述した抗体、第２の態様について上述した抗体、及び第４の態様について上述した抗体と共にインキュベートされる。特定の実施形態では、試料は、本発明の第１の態様、第２の態様、第３の態様、第４の態様、又は第５の態様による３つの抗体の任意の組み合わせと共にインキュベートされる。
【0200】
実施形態では、第１の抗体は固相に固定化することができ、第２の抗体は検出可能な標識で標識される。実施形態では、検出可能な標識は、発光色素、特に化学発光色素又は電気化学発光色素である。実施形態では、固相上に固定化することのできる抗体を、特に、バイオアフィン結合対のパートナー、特にビオチン又は相補的ＬＮＡ配列と一緒にタグ付けする。
【0201】
実施形態では、第１の抗体は検出可能な標識で標識され、第２の抗体は固相に固定化することができる。実施形態では、検出可能な標識は、発光色素、特に化学発光色素又は電気化学発光色素である。実施形態では、固相上に固定化することのできる抗体を、特に、バイオアフィン結合対のパートナー、特にビオチン又は相補的ＬＮＡ配列と一緒にタグ付けする。
【0202】
実施形態では、第１の抗体は固相に固定化することができ、第２の抗体は検出可能な標識で標識され、第３の抗体は検出可能な標識で標識される。実施形態では、検出可能な標識は、発光色素、特に化学発光色素又は電気化学発光色素である。実施形態では、固相上に固定化することのできる抗体を、特に、バイオアフィン結合対のパートナー、特にビオチン又は相補的ＬＮＡ配列と一緒にタグ付けする。
【0203】
実施形態では、第１の抗体は検出可能な標識で標識され、第２の抗体は固相に固定化することができ、第３の抗体は検出可能な標識で標識される。実施形態では、検出可能な標識は、発光色素、特に化学発光色素又は電気化学発光色素である。実施形態では、固相上に固定化することのできる抗体を、特に、バイオアフィン結合対のパートナー、特にビオチン又は相補的ＬＮＡ配列と一緒にタグ付けする。
【0204】
実施形態では、方法は、酵素結合免疫アッセイ（ＥＬＩＳＡ）又は電気化学発光免疫アッセイ（ＥＣＬＩＡ）又はラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）である。特定の実施形態では、方法は、ＥＬＩＣＡ法である。
【0205】
特定の実施形態では、患者の試料は、流体試料、特に体液試料である。特定の実施形態では、試料は、鼻咽頭スワブ、中咽頭スワブ、痰、唾液、全血、血清、又は血漿からなる群から選択される。特定の実施形態では、試料は、鼻咽頭スワブ、中咽頭スワブ、痰、唾液からなる群から選択される。特定の実施形態では、試料は、鼻咽頭スワブ又は中咽頭スワブである。実施形態では、試料はｉｎ ｖｉｔｒｏ試料であり、すなわち、それは ｉｎ ｖｉｔｒｏで分析され、体内に戻されない。
【0206】
特定の実施形態では、患者は実験動物、家畜又は霊長類である。特定の実施形態では、患者はヒト患者である。
【0207】
特定の実施形態では、本発明の第１１の態様に従って患者から得られた試料中のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスの存在を検出するための方法は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の変異体（バリアント）も検出することができる。
【0208】
更なる実施形態では、本発明は、以下の項目に関する。
１．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤに結合する（単離された）モノクローナル抗体又はその抗原結合断片であって、
ａ）表面プラズモン共鳴によって決定される２．５Ｅ＋０６Ｍ－１ｓ－１を超える会合速度定数（ｋａ）を有する、
及び／又は
ｂ）表面プラズモン共鳴によって決定される５．０Ｅ－０３ｓ－１未満の解離速度定数（ｋｄ）を有する、
及び／又は
ｃ）表面プラズモン共鳴によって決定される４分以上のｔ／２ｄｉｓｓの半減期時間を有する、
及び／又は
ｄ）１：１若しくは１：２の化学量論を有する、
（単離された）モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
１．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤに結合する（単離された）モノクローナル抗体又はその抗原結合断片であって、
ａ）表面プラズモン共鳴によって決定される２．５Ｅ＋０６Ｍ－１ｓ－１を超える会合速度定数（ｋａ）を有する、
及び／又は
ｂ）表面プラズモン共鳴によって決定される５．０Ｅ－０３ｓ－１未満の解離速度定数（ｋｄ）を有する、
及び／又は
ｃ）表面プラズモン共鳴によって決定される４分以上のｔ／２ｄｉｓｓの半減期時間を有する、
及び／又は
ｄ）１：１若しくは１：２の化学量論を有する、
（単離された）モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【0209】
２．
ａ）それぞれ配列番号１、２、３、４、５及び６によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含むか、
ｂ）それぞれ配列番号１、２、３、４、５及び６によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）それぞれ配列番号１、２、３、４、５及び６によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する、
項目１に記載の単離されたモノクローナル抗体又は抗原結合断片。
ａ）それぞれ配列番号１、２、３、４、５及び６によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含むか、
ｂ）それぞれ配列番号１、２、３、４、５及び６によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）それぞれ配列番号１、２、３、４、５及び６によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する、
項目１に記載の単離されたモノクローナル抗体又は抗原結合断片。
【0210】
３．
ａ）それぞれ配列番号７、８、９、１０、１１、１２、１３及び１４によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３及びＦＲ－Ｌ４を含むか、
ｂ）それぞれ配列番号７、８、９、１０、１１、１２、１３及び１４によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３及びＦＲ－Ｌ４を含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）それぞれ配列番号７、８、９、１０、１１、１２、１３及び１４によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３、及びＦＲ－Ｌ４を含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する、
項目２に記載の単離されたモノクローナル抗体又は抗原結合断片。
ａ）それぞれ配列番号７、８、９、１０、１１、１２、１３及び１４によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３及びＦＲ－Ｌ４を含むか、
ｂ）それぞれ配列番号７、８、９、１０、１１、１２、１３及び１４によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３及びＦＲ－Ｌ４を含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）それぞれ配列番号７、８、９、１０、１１、１２、１３及び１４によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３、及びＦＲ－Ｌ４を含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する、
項目２に記載の単離されたモノクローナル抗体又は抗原結合断片。
【0211】
４．
ａ）配列番号１５によるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号１６によるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを含むか、
ｂ）配列番号１５によるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号１６によるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）配列番号１５によるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号１６によるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する、
項目１～３のいずれかに記載の単離されたモノクローナル抗体又は抗原結合断片。
ａ）配列番号１５によるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号１６によるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを含むか、
ｂ）配列番号１５によるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号１６によるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）配列番号１５によるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号１６によるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する、
項目１～３のいずれかに記載の単離されたモノクローナル抗体又は抗原結合断片。
【0212】
５．
ａ）それぞれ配列番号１７、１８、１９、２０、２１及び２２によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含むか、
ｂ）それぞれ配列番号１７、１８、１９、２０、２１及び２２によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）それぞれ配列番号１７、１８、１９、２０、２１及び２２によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する、
項目１に記載の単離されたモノクローナル抗体又は抗原結合断片。
ａ）それぞれ配列番号１７、１８、１９、２０、２１及び２２によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含むか、
ｂ）それぞれ配列番号１７、１８、１９、２０、２１及び２２によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）それぞれ配列番号１７、１８、１９、２０、２１及び２２によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する、
項目１に記載の単離されたモノクローナル抗体又は抗原結合断片。
【0213】
６．
ａ）それぞれ配列番号２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９及び３０によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３及びＦＲ－Ｌ４を含むか、
ｂ）それぞれ配列番号２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９及び３０によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３及びＦＲ－Ｌ４を含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）それぞれ配列番号２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９及び３０によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３、及びＦＲ－Ｌ４を含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する、
項目５に記載の単離されたモノクローナル抗体又は抗原結合断片。
ａ）それぞれ配列番号２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９及び３０によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３及びＦＲ－Ｌ４を含むか、
ｂ）それぞれ配列番号２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９及び３０によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３及びＦＲ－Ｌ４を含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）それぞれ配列番号２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９及び３０によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３、及びＦＲ－Ｌ４を含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する、
項目５に記載の単離されたモノクローナル抗体又は抗原結合断片。
【0214】
７．
ａ）配列番号３１によるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号３２によるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを含むか、
ｂ）配列番号３１によるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号３２によるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）配列番号３１によるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号３２によるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する、
項目１、５、又は６のいずれかに記載の単離されたモノクローナル抗体又は抗原結合断片。
ａ）配列番号３１によるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号３２によるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを含むか、
ｂ）配列番号３１によるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号３２によるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）配列番号３１によるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号３２によるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する、
項目１、５、又は６のいずれかに記載の単離されたモノクローナル抗体又は抗原結合断片。
【0215】
８．
ａ）それぞれ配列番号３３、３４、３５、３６、３７及び３８によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含むか、
ｂ）それぞれ配列番号３３、３４、３５、３６、３７及び３８によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）それぞれ配列番号３３、３４、３５、３６、３７及び３８によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する、
項目１に記載の単離されたモノクローナル抗体又は抗原結合断片。
ａ）それぞれ配列番号３３、３４、３５、３６、３７及び３８によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含むか、
ｂ）それぞれ配列番号３３、３４、３５、３６、３７及び３８によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）それぞれ配列番号３３、３４、３５、３６、３７及び３８によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する、
項目１に記載の単離されたモノクローナル抗体又は抗原結合断片。
【0216】
９．
ａ）それぞれ配列番号３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５及び４６によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３及びＦＲ－Ｌ４を含むか、
ｂ）それぞれ配列番号３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５及び４６によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３及びＦＲ－Ｌ４を含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）それぞれ配列番号３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５及び４６によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３、及びＦＲ－Ｌ４を含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する、
項目８に記載の単離されたモノクローナル抗体又は抗原結合断片。
ａ）それぞれ配列番号３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５及び４６によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３及びＦＲ－Ｌ４を含むか、
ｂ）それぞれ配列番号３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５及び４６によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３及びＦＲ－Ｌ４を含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）それぞれ配列番号３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５及び４６によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３、及びＦＲ－Ｌ４を含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する、
項目８に記載の単離されたモノクローナル抗体又は抗原結合断片。
【0217】
１０．
ａ）配列番号４７によるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号４８によるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを含むか、
ｂ）配列番号４７によるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号４８によるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）配列番号４７によるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号４８によるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する、
項目１、８、又は９のいずれかに記載の単離されたモノクローナル抗体又は抗原結合断片。
ａ）配列番号４７によるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号４８によるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを含むか、
ｂ）配列番号４７によるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号４８によるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）配列番号４７によるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号４８によるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する、
項目１、８、又は９のいずれかに記載の単離されたモノクローナル抗体又は抗原結合断片。
【0218】
１１．
ａ）それぞれ配列番号４９、５０、５１、５２、５３及び５４によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含むか、
ｂ）それぞれ配列番号４９、５０、５１、５２、５３及び５４によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）それぞれ配列番号４９、５０、５１、５２、５３及び５４によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する、
項目１に記載の単離されたモノクローナル抗体又は抗原結合断片。
ａ）それぞれ配列番号４９、５０、５１、５２、５３及び５４によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含むか、
ｂ）それぞれ配列番号４９、５０、５１、５２、５３及び５４によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）それぞれ配列番号４９、５０、５１、５２、５３及び５４によるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する、
項目１に記載の単離されたモノクローナル抗体又は抗原結合断片。
【0219】
１２．
ａ）それぞれ配列番号５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１及び６２によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３及びＦＲ－Ｌ４を含むか、
ｂ）それぞれ配列番号５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１及び６２によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３及びＦＲ－Ｌ４を含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）それぞれ配列番号５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１及び６２によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３、及びＦＲ－Ｌ４を含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する、
項目８に記載の単離されたモノクローナル抗体又は抗原結合断片。
ａ）それぞれ配列番号５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１及び６２によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３及びＦＲ－Ｌ４を含むか、
ｂ）それぞれ配列番号５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１及び６２によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３及びＦＲ－Ｌ４を含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）それぞれ配列番号５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１及び６２によるＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、ＦＲ－Ｈ４、ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３、及びＦＲ－Ｌ４を含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する、
項目８に記載の単離されたモノクローナル抗体又は抗原結合断片。
【0220】
１３．
ａ）配列番号６３によるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号６４によるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを含むか、
ｂ）配列番号６３によるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号６４によるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）配列番号６３によるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号６４によるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する、
項目１、８、又は９のいずれかに記載の単離されたモノクローナル抗体又は抗原結合断片。
ａ）配列番号６３によるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号６４によるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを含むか、
ｂ）配列番号６３によるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号６４によるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを含む抗体と同じエピトープに結合するか、
又は
ｃ）配列番号６３によるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号６４によるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを含む抗体と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質のＲＢＤへの結合について競合する、
項目１、８、又は９のいずれかに記載の単離されたモノクローナル抗体又は抗原結合断片。
【0221】
１４．少なくとも１つの、項目２～４のいずれかに記載の抗体と、任意に、第２の、項目５～７のいずれかに記載の抗体と、任意に、第３の、項目８～１０のいずれかに記載の抗体と、任意に、第４の、項目１１～１３のいずれかに記載の抗体と、を含む、キット。
【0222】
１５．項目１～１３のいずれかに記載の抗体をコードする核酸。
【0223】
１６．項目１５に記載の核酸を含む、及び／又は項目１～１３のいずれかに記載の抗体を産生する、宿主細胞。
【0224】
１７．項目１～１３のいずれかに記載の抗体を含む、組成物。
【0225】
１８．ｉｎ ｖｉｔｒｏイムノアッセイのための、項目１～１３のいずれか一項に記載の抗体、項目１４に記載のキット、又は項目１７に記載の組成物の使用。
【0226】
１９．患者から得られた試料中のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスの存在を検出するためのｉｎ ｖｉｔｒｏ方法であって、
ａ）前記試料を、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質のＲＢＤに結合する少なくとも１つの抗体又はその抗体結合断片、特に項目１～１３のいずれか一項に記載の少なくとも１つの抗体又はその抗体結合断片と共にインキュベートし、それによって前記抗体とＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質の前記ＲＢＤとの間に複合体を生成することと、
ｂ）任意に、形成された前記複合体を固相、特に微粒子に固定化することと、
ｃ）前記試料中のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスの存在を検出することと、を含む、ｉｎ ｖｉｔｒｏ方法。
ａ）前記試料を、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質のＲＢＤに結合する少なくとも１つの抗体又はその抗体結合断片、特に項目１～１３のいずれか一項に記載の少なくとも１つの抗体又はその抗体結合断片と共にインキュベートし、それによって前記抗体とＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質の前記ＲＢＤとの間に複合体を生成することと、
ｂ）任意に、形成された前記複合体を固相、特に微粒子に固定化することと、
ｃ）前記試料中のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスの存在を検出することと、を含む、ｉｎ ｖｉｔｒｏ方法。
【0227】
２０．前記患者の試料が、鼻咽頭スワブ、中咽頭スワブ、痰、唾液…からなる群から選択される、項目１９に記載の方法。
【0228】
以下の実施例及び図は、本発明の理解を助けるために提供されており、本発明の真の範囲は、添付の特許請求の範囲に示されている。本発明の思想から逸脱することなく、定められた手順に変更を加えることができると理解される。
【実施例】
【0229】
実施例
実施例１：抗体の生成
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質のＲＢＤに対する特異性の高い抗体を生成するために、本発明者らは、ニュージーランド白ウサギ及びＮＭＲＩマウスをスパイク糖タンパク質のＳ１サブユニットのＲＢＤで免疫し、その後ＲＢＤ結合抗体についてスクリーニングした。
実施例１：抗体の生成
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質のＲＢＤに対する特異性の高い抗体を生成するために、本発明者らは、ニュージーランド白ウサギ及びＮＭＲＩマウスをスパイク糖タンパク質のＳ１サブユニットのＲＢＤで免疫し、その後ＲＢＤ結合抗体についてスクリーニングした。
【0230】
免疫原：ＨＥＫ細胞で発現させたＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＢＤ（全長スパイクタンパク質の３１９－５４１位のアミノ酸に相当、ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ／ｕｎｉｐｒｏｔ／Ｐ０ＤＴＣ２に開示されている配列に従う）。
【0231】
スクリーニング試薬：ビオチン化ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ｍＳｐｉｋｅ及びＲＢＤタンパク質（Ａｍａｎａｔ ｅｔ ａｌ．，Ａ ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌ ａｓｓａｙ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ｓｅｒｏｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎｓ，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｖｏｌ．２６，１０３３－１０３６（２０２０）に記載）。
【0232】
免疫処置の結果、様々な個々のウサギ及びマウスＩｇＧクローンがＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＳ１－ＲＢＤタンパク質と特異的に反応したが、他のコロナウイルス（ＨＫＵ－１、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１、ＭＥＲＳ、及びＯＣ４３ － データは示さず）とは反応しなかった。これらのＲＢＤ抗体の特異性は、それぞれＢ細胞上清及びマウスハイブリドーマ上清のＥＬＩＳＡアッセイ及びＳＰＲ Ｂｉａｃｏｒｅ分析によって実証された（示していない）。
【0233】
実施例２：抗体ＳＰＲスクリーニング
生成された抗体の速度論的スクリーニングを、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）８Ｋ＋、８Ｋ及びＢ４０００機器で３７℃で行った。Ｂｉａｃｏｒｅ ＣＭ－５シリーズＳセンサを機器に取り付け、製造業者の指示に従ってプレコンディショニングした。
生成された抗体の速度論的スクリーニングを、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）８Ｋ＋、８Ｋ及びＢ４０００機器で３７℃で行った。Ｂｉａｃｏｒｅ ＣＭ－５シリーズＳセンサを機器に取り付け、製造業者の指示に従ってプレコンディショニングした。
【0234】
システム緩衝液は、ＨＢＳ ＥＴ ｐＨ７．４、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、０．０５％（ｗ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ２０であった。システム緩衝液に１ｍｇ／ｍＬ ＣＭＤ（カルボキシメチルデキストラン、Ｆｌｕｋａ）を補充し、希釈系列を調製するための試料緩衝液として使用した。
【0235】
ウサギ又はマウスに特異的な抗体捕捉システムが、システム緩衝液としてＨＢＳ－Ｎ ｐＨ７．４を使用してセンサ表面に固定化された。ポリクローナルヤギ抗ウサギＩｇＧ Ｆｃ捕捉抗体ＧＡＲｂＦｃγ（コード番号１１１－００５－０４６、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、又はポリクローナルヤギ抗マウスＦｃｙ捕捉抗体ＰＡＫ＜Ｍ－ＩｇＧ（Ｆｃｙ）＞Ｚ（コード番号１１５－００５－０７１、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）を、ＥＤＣ／ＮＨＳ化学を用いて、製造業者の指示に従ってアミンカップリングした。３０μｇ／ｍＬの捕捉抗体を１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液中で使用した。ウサギ抗体捕捉用には溶液をｐＨ４．５に調整し、マウス捕捉用には溶液をｐＨ５に調整した。捕捉抗体は、約１００００ＲＵ～１５０００ＲＵのリガンド密度で固定化された。続いて、遊離活性化カルボキシル基を１ＭエタノールアミンｐＨ８．５で飽和させた。
【0236】
全てのチャネルのフローセル１は、８Ｋ機器のリファレンスとして機能した。Ｂ４０００を使用し、スポット２と４をリファレンスとして使用した。ウサギ又はマウスの各抗体溶液を試料緩衝液で希釈し、５μｌ／分又は１０μＬ／分で２分間注入した。共鳴単位（ＲＵ）における抗体捕捉レベル（ＣＬ）をモニターした。９０ｎＭＲＢＤ（Ｒｏｃｈｅ自社製、４２ｋＤａ）を、捕捉された抗ＲＢＤ抗体に３０μｌ／分で注入した。別の実施形態では、抗体を４０μｌ／分で注入した。分析物の会合相は３～５分間モニターされ、解離相は５、１０、又は１４分間モニターされた。各測定サイクルの後、１０ｍＭグリシン緩衝液ｐＨ２．０及びｐＨ２．２５を２０μＬ／分で６０秒間その後注入することによって、捕捉システムを再生した。
【0237】
単一濃度反応速度の結合シグネチャは、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）８Ｋ Ｃｏｎｔｒｏｌ－ＳＷ Ｖ３．０．１１．１５４２３によってモニターし、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）Ｉｎｓｉｇｈｔ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ＳＷ Ｖ３．０．１１．１５４２３によって評価した（それぞれＢ４０００ Ｃｏｎｔｒｏｌ ＳＷ Ｖ１．１及びＥｖａｌｕａｔｉｏｎ ＳＷ Ｖ１．１．）。
【0238】
速度論的データは、レポートポイントの特徴付けと速度論的決定によって解釈された。２つの報告点、すなわち、分析物注入の終了直前に記録されたシグナルである分析物Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｌａｔｅ（ＢＬ）、及び解離時間の終了直前のシグナルであるＳｔａｂｉｌｉｔｙ Ｌａｔｅ（ＳＬ）を使用して、抗体／抗原結合の安定性を特徴付けた。
【0239】
ラングミュアモデルに従って解離速度定数ｋｄ（ｓ－１）を計算し、式ｔ／２ ｄｉｓｓ＝ｌｎ（２）／（ｋｄ＊６０）に従って抗体／抗原複合体半減期を分単位で計算した。
【0240】
モル比、結合化学量論を以下の式によって計算した。
ＭＲ＝Ｂ（抗原）＊ＭＷ（抗体）／（ＭＷ（抗原）＊ＣＬ（抗体））。
ＭＲ＝Ｂ（抗原）＊ＭＷ（抗体）／（ＭＷ（抗原）＊ＣＬ（抗体））。
【0241】
実施例３：ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＢＤ抗体の速度論的特徴付け
速度論的スクリーニングによって選択されたモノクローナルウサギ及びマウスＲＢＤ抗体を更に詳細に特徴付けた。
速度論的スクリーニングによって選択されたモノクローナルウサギ及びマウスＲＢＤ抗体を更に詳細に特徴付けた。
【0242】
測定は、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）８Ｋ及び８Ｋ＋機器を使用して行った。０．２～１８０ｎＭのＲＢＤ濃度系列を３０－６０μｌ／ｍｉｎの流速で注入した。３７℃で、会合相を３～５分間、解離相を５～６０分間モニターした。
【0243】
クローン４Ｈ１０、１Ｆ１２、７Ｇ５及び１４Ｆ１０の速度論的特性評価のために、システムと試料緩衝液は上記の通りであったが、２ｍｇ／ｍＬのウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を補充した。速度論的速度定数及び解離平衡定数ＫＤは、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）Ｉｎｓｉｇｈｔ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ＳＷ Ｖ３．０．１１．１５４２３によるラングミュア１：１適合モデルを使用して、又はＳｃｒｕｂｂｅｒ－ＳＷ Ｖ２．０ｃからのラングミュア１：１適合モデルを使用して計算した。
【0244】
【0245】
本発明者らのストリンジェントな選択基準を満たす全ての抗体は、＞１．０Ｅ＋０５Ｍ－１ｓ－１の範囲の速い会合速度（ｋａ）及び５．０Ｅ－０３ｓ－１未満の解離速度（ｋｄ）を示す。全ての抗体は、それぞれナノモル及びサブナノモルの範囲の親和性を示す。図１は、上で定義した選択基準を満たした抗体（図１Ｂ）、及び本発明者らの目的に適していない速度論的シグネチャを示したため、更なる調査を行わずに選択解除された抗体（図１Ａ）の例を示している。抗体１Ｆ１２は０．３４ｎＭ±０．１％の高い親和性を示した。抗体４Ｈ１０は、ＲＢＤに対して１．０ｎＭ±０．１％の親和性を示す。抗体７Ｇ５及び１４Ｆ１０は、それぞれ０．８６ｎＭ±０．１％及び０．７８ｎＭ±０．３％の高い親和性を示す（図２を参照）。抗体４Ｈ１０、１Ｆ１２、７Ｇ５、１４Ｆ１０と異なる濃度のＲＢＤ（０．２ｎＭ～１３．３ｎＭ）との相互作用を、ＢＳＡ存在下、３７℃で測定した。濃度１３．３ｎＭ（黒）の複製を含む濃度系列を、ラングミュア１：１フィッティングモデル、Ｒｍａｘグローバル、ＲＩ＝０（灰色）で重ね合わせた（図３）。
【0246】
同様に、生成された抗体の動態スクリーニングは、Ｂｒｕｋｅｒ ＳＲＰ－３２－Ｐｒｏ機器を使用して、異なる変異体ＲＢＳ（バリアント）を使用して行われた。クローン１Ｆ１２とバリアントとの結合に関するＳＰＲ動態スクリーニングと特徴付けの例示的な結果を図８～図１２に示す。
【0247】
結論：ＲＢＤ免疫化の結果として、本発明者らはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＢＤ（野生型及び変異体）に特異的であるが、風邪コロナウイルス又はＭＥＲＳ由来のＲＢＤタンパク質とは反応しない、ウサギ及びマウスのモノクローナルＩｇＧを生成した（データは示さず）。これは、Ｂｉａｃｏｒｅ ＳＰＲ及びイムノアッセイ分析の結果によって支持される。
【0248】
合計で１３２４８個のウサギ抗体及び２１５０４個のマウス抗体をＲＢＤ標的特異的ＥＬＩＳＡで予備スクリーニングした。３４２７個のウサギ抗体及びマウス抗体をＳＰＲ実験で試験した。速度論的スクリーニングによって同定された１５７個のウサギ及びマウスのＲＢＤ抗体を、ＲＢＤへの結合に関して更に速度論的に特徴付けた。Ｅｌｅｃｓｙｓ（登録商標）プラットフォームの基準を満たす速度論的特性を有する６３個のクローンを同定した。
【0249】
実施例４：サンドイッチ複合体形成実験
抗体／抗原サンドイッチ形成実験は、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）８Ｋ＋装置で２５℃で行った。Ｂｉａｃｏｒｅ ２Ｄ－ＰＥＧセンサ表面を機器に取り付け、製造業者の指示に従ってプレコンディショニングした。ウサギ又はマウス抗体捕捉システムを上記のように利用した。ＥＤＣ／ＮＨＳ混合物の活性化時間は３０秒であった。捕捉システムを最大４００ＲＵで固定した。システム及び試料緩衝液は上記の通りであった。システム緩衝液は、ＨＢＳ－ＥＴ＋ ｐＨ７．４（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、０．０５％（ｗ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ２０、ｐＨ７．４）であった。１ｍｇ／ｍＬ ＣＭＤ（カルボキシメチルデキストラン、Ｆｌｕｋａ）を補充したシステム緩衝液を試料緩衝液として使用した。ウサギ又はマウスのＲＢＤ ｍＡｂを、ＲＢＤタンパク質とのサンドイッチ複合体形成について試験した。
抗体／抗原サンドイッチ形成実験は、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）８Ｋ＋装置で２５℃で行った。Ｂｉａｃｏｒｅ ２Ｄ－ＰＥＧセンサ表面を機器に取り付け、製造業者の指示に従ってプレコンディショニングした。ウサギ又はマウス抗体捕捉システムを上記のように利用した。ＥＤＣ／ＮＨＳ混合物の活性化時間は３０秒であった。捕捉システムを最大４００ＲＵで固定した。システム及び試料緩衝液は上記の通りであった。システム緩衝液は、ＨＢＳ－ＥＴ＋ ｐＨ７．４（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、０．０５％（ｗ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ２０、ｐＨ７．４）であった。１ｍｇ／ｍＬ ＣＭＤ（カルボキシメチルデキストラン、Ｆｌｕｋａ）を補充したシステム緩衝液を試料緩衝液として使用した。ウサギ又はマウスのＲＢＤ ｍＡｂを、ＲＢＤタンパク質とのサンドイッチ複合体形成について試験した。
【0250】
一次抗体上清を希釈し、各Ｆｃ２センサチャネル上で１０μＬ／分で２分間捕捉した。捕捉システムを、１μＭウサギ正常ＩｇＧ又はマウス抗体ブロッキングカクテルで３０μＬ／分で３分間ブロックした。その後、４５ｎＭのＲＢＤを３分間注入した。１：２０から１：５０に希釈した一次抗体上清を、３０μＬ／分で２分間繰り返し注入した。二次抗体溶液を１：２０から１：５０に希釈し、３分間注入し、続いて３０μＬ／分で５分間の解離時間を設けた。システムは記載されたように再生された。
【0251】
システムは上記のように再生された。
【0252】
免疫複合体の安定性は、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）Ｉｎｓｉｇｈｔ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ＳＷ Ｖ３．０．１１．１５４２３のＳＷ拡張「エピトープビニング」を使用して評価した。サンドイッチ複合体形成実験は、報告点評価によって解釈された。２つの報告点である捕捉レベル（ＣＬ）（一次抗体の捕捉の終了直後に記録されたシグナル）、及び早期の分析物安定性（二次抗体注入の終了直後に記録されたシグナル）を使用して、免疫複合体安定性を特徴付けた。エピトープのアクセシビリティを、二次抗体結合応答シグナルの共鳴単位と一次抗体の捕捉レベルとの間の商を形成することによってモル比（ＭＲ）として定量した。
【0253】
異なる実験からの情報を組み合わせることにより、２１の異なるＲＢＤエピトープ領域が同定された（データは示さず）。
【0254】
実施例５：ＡＣＥ－２ ＲＢＤ接触面バインダーの同定
抗ＲＢＤ抗体は、ＡＣＥ－２とＲＢＤの相互作用を妨害する可能性について更に検討された。実験はＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）８Ｋ＋及び８Ｋ装置を用いて３７℃で行った。ウサギのｍＡｂは上記のようにリガンドとして捕捉された。ＲＢＤ及びＡＣＥ２－ＦＬ－Ｈｉｓ８（Ｒｏｃｈｅ、８７ｋＤａ）を溶液中の分析物として使用し、連続して注入した。５０ｎＭ ＲＢＤを４０μｌ／分で３分間注入し、続いて２５０ｎＭ ＡＣＥ２－ＦＬ－Ｈｉｓ８を４０μｌ／分で３分間注入し、その後５分間の解離時間を設けた。
抗ＲＢＤ抗体は、ＡＣＥ－２とＲＢＤの相互作用を妨害する可能性について更に検討された。実験はＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）８Ｋ＋及び８Ｋ装置を用いて３７℃で行った。ウサギのｍＡｂは上記のようにリガンドとして捕捉された。ＲＢＤ及びＡＣＥ２－ＦＬ－Ｈｉｓ８（Ｒｏｃｈｅ、８７ｋＤａ）を溶液中の分析物として使用し、連続して注入した。５０ｎＭ ＲＢＤを４０μｌ／分で３分間注入し、続いて２５０ｎＭ ＡＣＥ２－ＦＬ－Ｈｉｓ８を４０μｌ／分で３分間注入し、その後５分間の解離時間を設けた。
【0255】
図６Ａは、ＡＣＥ－２／ＲＢＤ接触面内又はその近くでＲＢＤに結合し、ＡＣＥ－２／ＲＢＤドッキングを完全にブロックする抗体の例を示す。
【0256】
図６Ｂは、ＡＣＥ２／ＲＢＤ接触面から離れて結合する抗体の例を示す。
【0257】
したがって、ＢＩＡｃｏｒｅアッセイを使用して、抗体がＡＣＥ－２／ＲＢＤ接触面内又はその近くに結合するか、あるいはＡＣＥ２／ＲＢＤ接触面から離れた場所に結合するかを判定することができる。
【0258】
実施例６：電気化学発光免疫測定法（ＥＣＬＩＡ）への適用
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクに反応する抗体を検出し、野生型ＲＢＤ及びＲＢＤの変異体に結合する抗体を検出するために、ＲＢＤ抗体を使用したＥＣＬＩＡアッセイが確立された（データは示さず）。ＲＢＤに結合するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）も同様にこのアッセイで検出できる。ｍＡｂは無制限の量で同一に再現でき、絶対ＳＩ単位（体積あたりの質量）で定量できるため、アッセイの標準化に非常に適した参照キャリブレーターとなる。このようなｍＡｂがＡＣＥ２－ＲＢＤ結合を妨害する能力は興味深いものであり、このアッセイが阻害性抗体を検出できるという固有の証拠を提供する。
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクに反応する抗体を検出し、野生型ＲＢＤ及びＲＢＤの変異体に結合する抗体を検出するために、ＲＢＤ抗体を使用したＥＣＬＩＡアッセイが確立された（データは示さず）。ＲＢＤに結合するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）も同様にこのアッセイで検出できる。ｍＡｂは無制限の量で同一に再現でき、絶対ＳＩ単位（体積あたりの質量）で定量できるため、アッセイの標準化に非常に適した参照キャリブレーターとなる。このようなｍＡｂがＡＣＥ２－ＲＢＤ結合を妨害する能力は興味深いものであり、このアッセイが阻害性抗体を検出できるという固有の証拠を提供する。
【0259】
ＡＣＥ２－ＲＢＤ結合に対するｍＡｂの妨害能力に関する情報を生成するために、本発明者らはＥｌｅｃｓｙｓ（登録商標）プラットフォーム上で競合イムノアッセイをセットアップした。ＡＣＥ２及びＲＢＤはシグナル指定子として機能するように標識され、定義された濃度でアッセイのインキュベートに添加された。ＡＣＥ２とＲＢＤの本来の親和性がこれらの分子の結合を引き起こし、シグナルを発生させた（ＣＬＩＡ法）。ベースライン反応性は、ＲＢＤ特異的抗体を含まない試料（２０１９年１０月より前に収集されたパンデミック前の試料）で得られた平均シグナルを使用して定義された。ブランク試料（希釈剤）と比較して、陰性試料のシグナルに有意な差は観察されなかった。次に、ｍＡｂを反応液に添加し、規定濃度のＲＢＤ特異的Ａｂを含む「試料」を形成させた。ＲＢＤ ｍＡｂを含む試料で観察されたシグナルとベースラインシグナルの比は、ＡＣＥ２－ＲＢＤ結合を妨害するｍＡｂの能力を評価するのに役立った。ＩＣ５０は、ｍＡｂの段階希釈に回帰分析を適用することによって決定された。
【0260】
阻害性であると同定されたｍＡｂの例示的な結果を図７に示す。
【0261】
Ｅｌｅｃｓｙｓ（登録商標）でのＡＣＥ２－ＲＢＤの阻害の評価を、Ｂｉａｃｏｒｅ測定で生成された阻害データと比較した。得られたＥｌｅｃｓｙｓ（登録商標）とＢｉａｃｏｒｅの結果は相互に確認され、中和ｍＡｂｓの自動スクリーニング用にＥｌｅｃｓｙｓ（登録商標）セットアップを確立することができた。ＢＩＡｃｏｒｅアッセイと同様に、Ｅｌｅｃｓｙｓ（登録商標）アッセイは患者試料中の阻害／中和抗体を検出することができる。この結果は、患者の疾患の進行をモニターするために使用することができる。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4-1】
【図4-2】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【配列表】
【国際調査報告】