特表 2024-541961 ＣＤ４７に関連する疾患を処置するための多特異性抗体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-11-13

(54)【発明の名称】ＣＤ４７に関連する疾患を処置するための多特異性抗体

(51)【国際特許分類】

   C07K 16/28 20060101AFI20241106BHJP

   C07K 16/46 20060101ALI20241106BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20241106BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20241106BHJP

   A61P 1/18 20060101ALI20241106BHJP

   A61P 15/00 20060101ALI20241106BHJP

   A61P 1/04 20060101ALI20241106BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20241106BHJP

   A61P 13/08 20060101ALI20241106BHJP

   A61P 13/12 20060101ALI20241106BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20241106BHJP

   A61P 5/14 20060101ALI20241106BHJP

   C12N 15/09 20060101ALN20241106BHJP

【ＦＩ】

C07K16/28 ZNA

C07K16/46

A61K39/395 N

A61P35/00

A61P1/18

A61P15/00

A61P1/04

A61P11/00

A61P13/08

A61P13/12

A61P43/00 105

A61P5/14

C12N15/09 Z

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024525203

(86)(22)【出願日】2022-10-26

(85)【翻訳文提出日】2024-06-25

(86)【国際出願番号】 CN2022127745

(87)【国際公開番号】W WO2023072159

(87)【国際公開日】2023-05-04

(31)【優先権主張番号】PCT/CN2021/126743

(32)【優先日】2021-10-27

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＲＩＴＯＮ

(71)【出願人】

【識別番号】522444069

【氏名又は名称】ヴィルトゥオーソ ビンコ，インク．

【住所又は居所原語表記】１５００ Ｆａｓｈｉｏｎ Ｉｓｌａｎｄ Ｂｌｖｄ．， Ｓｕｉｔｅ １０２ Ｓａｎ Ｍａｔｅｏ， ＣＡ ９４４０４， ＵＳＡ

(74)【代理人】

【識別番号】110003797

【氏名又は名称】弁理士法人清原国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】ワン，シンホワ

(72)【発明者】

【氏名】チェン，シャオチェン

(72)【発明者】

【氏名】シー，レイ

(72)【発明者】

【氏名】ウォン，オイ クワン

(72)【発明者】

【氏名】フェイ，チー

(72)【発明者】

【氏名】ポスト，レオナルド

【テーマコード（参考）】

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C085AA14

4C085AA16

4C085BB36

4C085BB41

4C085BB42

4C085CC23

4C085DD62

4C085EE01

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA41

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA72

4H045FA74

(57)【要約】

【解決手段】本開示は、ＣＤ４７に特異的に結合する第１の標的化部分と、第２の標的化部分とを含む多特異性抗体を記載する。第２の標的化部分は、ＥｐＣＡＭまたはＥＧＦＲに特異的に結合することができる。さらに、本明細書には、多特異性抗体を含む医薬組成物、ならびにＣＤ４７＋細胞、例えば、ＣＤ４７＋ＥｐＣＡＭ＋細胞またはＣＤ４７＋ＥＧＦＲ＋細胞を死滅させるための、および増殖性疾患を治療するための使用方法も記載されている。
【選択図】図１Ａ

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む、多特異性抗体。

【請求項2】

前記多特異性抗体は二重特異性、三重特異性、または四重特異性である、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項3】

前記多特異性抗体は二重特異性である、請求項２に記載の多特異性抗体。

【請求項4】

前記多特異性抗体は二価、三価、または四価である、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項5】

前記多特異性抗体は二価である、請求項４に記載の多特異性抗体。

【請求項6】

前記多特異性抗体は、腫瘍細胞の表面上に発現されるＣＤ４７に対して、正常細胞、例えば、赤血球、血小板、Ｔ細胞、Ｂ細胞、またはＮＫ細胞の表面上に発現されるＣＤ４７に対するよりも高い親和性を有する、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項7】

前記腫瘍細胞はＥｐＣＡＭを発現する、請求項６に記載の多特異性抗体。

【請求項8】

（例えば、ヒト）赤血球への最大半量結合に必要な前記多特異性抗体の濃度は、約２００ナノモル（ｎＭ）超である、請求項１～７のいずれかに記載の多特異性抗体。

【請求項9】

前記多特異性抗体は、約１００ナノモル（ｎＭ）未満の解離定数（ＫＤ）で（例えば、ヒト）ＣＤ４７に結合する、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項10】

前記多特異性抗体は、約１ナノモル（ｎＭ）～約１００ｎＭ、約１ｎＭ～約５０ｎＭ、または約５ｎＭ～約５０ｎＭの解離定数（ＫＤ）で（例えば、ヒト）ＣＤ４７に結合する、請求項９に記載の多特異性抗体。

【請求項11】

前記多特異性抗体は、約５００ナノモル（ｎＭ）未満の解離定数（ＫＤ）でＥｐＣＡＭに結合する、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項12】

前記多特異性抗体は、約０．２ナノモル（ｎＭ）～約５００ｎＭ、約１ｎＭ～約３００ｎＭ、約５ｎＭ～約２００ｎＭ、または約１０ｎＭ～約１５０ｎＭの解離定数（ＫＤ）でＥｐＣＡＭに結合する、請求項１１に記載の多特異性抗体。

【請求項13】

前記解離定数（ＫＤ）は、表面プラズモン共鳴によって決定される、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項14】

前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、ヒトまたは操作されたヒトＥｐＣＡＭ結合ドメインである、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項15】

前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、ＥｐＣＡＭに特異的に結合する抗体、またはその機能的フラグメントもしくは機能的変異体を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項16】

ＥｐＣＡＭに特異的に結合する前記抗体、またはその機能的フラグメントもしくは機能的変異体は、抗ＥｐＣＡＭ重鎖および抗ＥｐＣＡＭ軽鎖を含む、請求項１５に記載の多特異性抗体。

【請求項17】

前記抗ＥｐＣＡＭ重鎖は、抗ＥｐＣＡＭ重鎖可変ドメインを含む、請求項１６に記載の多特異性抗体。

【請求項18】

前記抗ＥｐＣＡＭ重鎖可変ドメインは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４重鎖の可変ドメインを含む、請求項１６に記載の多特異性抗体。

【請求項19】

前記抗ＥｐＣＡＭ軽鎖は、抗ＥｐＣＡＭ軽鎖可変ドメインを含む、請求項１６に記載の多特異性抗体。

【請求項20】

前記抗ＥｐＣＡＭ軽鎖可変ドメインは、カッパまたはラムダ軽鎖を含む、請求項１９に記載の多特異性抗体。

【請求項21】

前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインは単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含む、請求項１６に記載の多特異性抗体。

【請求項22】

前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、抗原結合フラグメント（Ｆａｂ）を含む、請求項１６に記載の多特異性抗体。

【請求項23】

前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）定常領域を含む、請求項１６に記載の多特異性抗体。

【請求項24】

前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインの前記ＴＣＲ定常領域は、ＴＣＲα定常ドメインおよびＴＣＲβ定常ドメインを含む、請求項２３に記載の多特異性抗体。

【請求項25】

前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、ＶＨ－ＥｐＣＡＭドメインおよびＶＬ－ＥｐＣＡＭドメインを含み、前記ＶＨ－ＥｐＣＡＭドメインは、ＴＣＲα定常ドメインに融合しており、前記ＶＬ－ＥｐＣＡＭドメインは、ＴＣＲβ定常ドメインに融合している、請求項２３に記載の多特異性抗体。

【請求項26】

前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、ＶＨ－ＥｐＣＡＭドメインおよびＶＬ－ＥｐＣＡＭドメインを含み、前記ＶＨ－ＥｐＣＡＭドメインは、ＴＣＲβ定常ドメインに融合しており、前記ＶＬ－ＥｐＣＡＭドメインは、ＴＣＲα定常ドメインに融合している、請求項２３に記載の多特異性抗体。

【請求項27】

前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、ＶＨ－ＥｐＣＡＭドメインおよびＶＬ－ＥｐＣＡＭドメインを含み、前記ＶＨ－ＥｐＣＡＭドメインは、ＣＨ１ ＩｇＧドメインに融合しており、前記ＶＬ－ＥｐＣＡＭドメインは、ＣＬ ＩｇＧドメインに融合している、請求項２３に記載の多特異性抗体。

【請求項28】

前記ＣＤ４７結合ドメインは、ヒトまたは操作されたヒトＣＤ４７結合ドメインである、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項29】

前記ＣＤ４７結合ドメインは、ＣＤ４７に特異的に結合する抗体、またはその機能的フラグメントもしくは機能的変異体を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項30】

前記ＣＤ４７結合ドメインは、抗ＣＤ４７重鎖および抗ＣＤ４７軽鎖を含む、請求項２９に記載の多特異性抗体。

【請求項31】

前記抗ＣＤ４７重鎖は、抗ＣＤ４７重鎖可変ドメインを含む、請求項３０に記載の多特異性抗体。

【請求項32】

前記抗ＣＤ４７重鎖可変ドメインは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４重鎖の可変ドメインを含む、請求項３１に記載の多特異性抗体。

【請求項33】

前記抗ＣＤ４７軽鎖は、抗ＣＤ４７軽鎖可変ドメインを含む、請求項３０に記載の多特異性抗体。

【請求項34】

前記抗ＣＤ４７軽鎖可変ドメインは、カッパまたはラムダ軽鎖の可変ドメインを含む、請求項３３に記載の多特異性抗体。

【請求項35】

前記抗ＣＤ４７重鎖可変ドメインは、ＩｇＧ１重鎖の可変ドメインを含み、前記抗ＣＤ４７軽鎖可変ドメインはカッパ軽鎖を含む、請求項３０に記載の多特異性抗体。

【請求項36】

前記抗ＣＤ４７重鎖可変ドメインは、ＩｇＧ１重鎖の可変ドメインを含み、抗ＣＤ４７軽鎖可変ドメインはラムダ軽鎖を含む、請求項３０に記載の多特異性抗体。

【請求項37】

前記ＣＤ４７結合ドメインは単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含む、請求項３０に記載の多特異性抗体。

【請求項38】

前記ＣＤ４７結合ドメインは、抗原結合フラグメント（Ｆａｂ）を含む、請求項３０に記載の多特異性抗体。

【請求項39】

前記ＣＤ４７結合ドメインは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）定常領域を含む、請求項３０に記載の多特異性抗体。

【請求項40】

前記ＣＤ４７結合ドメインの前記ＴＣＲ定常領域は、ＴＣＲα定常ドメインおよびＴＣＲβ定常ドメインを含む、請求項３９に記載の多特異性抗体。

【請求項41】

前記ＣＤ４７結合ドメインは、ＶＨ－ＣＤ４７ドメインおよびＶＬ－ＣＤ４７ドメインを含み、前記ＶＨ－ＣＤ４７ドメインは、ＴＣＲα定常ドメインに融合しており、前記ＶＬ－ＣＤ４７ドメインは、ＴＣＲβ定常ドメインに融合している、請求項３９に記載の多特異性抗体。

【請求項42】

前記ＣＤ４７結合ドメインは、ＶＨ－ＣＤ４７ドメインおよびＶＬ－ＣＤ４７ドメインを含み、前記ＶＨ－ＣＤ４７ドメインは、ＴＣＲβ定常ドメインに融合しており、前記ＶＬ－ＣＤ４７ドメインは、ＴＣＲα定常ドメインに融合している、請求項３９に記載の多特異性抗体。

【請求項43】

前記ＣＤ４７結合ドメインは、ＶＨ－ＣＤ４７ドメインおよびＶＬ－ＣＤ４７ドメインを含み、前記ＶＨ－ＣＤ４７ドメインは、ＣＨ１ ＩｇＧドメインに融合しており、前記ＶＬ－ＣＤ４７ドメインは、ＣＬ ＩｇＧドメインに融合している、請求項３９に記載の多特異性抗体。

【請求項44】

Ｆｃドメインをさらに含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項45】

前記ＦｃドメインはヒトＦｃドメインである、請求項４４に記載の多特異性抗体。

【請求項46】

前記Ｆｃドメインのアイソタイプは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４である、請求項４４に記載の多特異性抗体。

【請求項47】

前記Ｆｃドメインはヘテロ二量体Ｆｃドメインであり、ヘテロ二量体Ｆｃ領域は、ノブ鎖（ｋｎｏｂ ｃｈａｉｎ）とホール鎖（ｈｏｌｅ ｃｈａｉｎ）とを含み、ノブイントゥホール（ｋｎｏｂ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅ）（ＫｉＨ）構造を形成する、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項48】

前記ノブ鎖は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４ドメインを含む、請求項４７に記載の多特異性抗体。

【請求項49】

前記ノブ鎖は変異Ｔ３６６Ｗを含み、前記ホール鎖は変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖを含み、アミノ酸位置の番号付けはＫａｂａｔらのＥＵインデックスによるものである、請求項４７に記載の多特異性抗体。

【請求項50】

前記ホール鎖は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４ドメインを含む、請求項４７に記載の多特異性抗体。

【請求項51】

前記多特異性抗体は、非対称の３鎖ノブイントゥホール構造を有する、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項52】

前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、３つの重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）：ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ここで、前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、表９に記載されるものから選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項53】

前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１は、配列番号２２２、２２５、２３１、２３４、２４３、および２４６から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項54】

前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ２は、配列番号２２３、２２６、２３２、２３５、２４４、および２４７から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項55】

前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２２４、２２７、２３３、２３６、２４５、および２４８から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項56】

前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、３つの軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）：ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３を含み、前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、表１０に記載されるものから選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項57】

前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１は、配列番号２７６、２７９、２８５、２８８、２９７、および３００から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項58】

前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ２は、配列番号２７７、２８０、２８６、２８９、２９８、および３０１から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項59】

前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２７８、２８１、２８７、２９０、２９９、および３０２から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項60】

前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、表１１に記載されるものから選択されるアミノ酸配列を含む重鎖フレームワーク領域（ＨＦＲ）を含み、ＨＦＲは０～３個のアミノ酸修飾を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項61】

前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、配列番号３３１～３３４、３３５～３３８、３４３～３４６、３４７～３５０、３５５～３５８、および３５９～３６２から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖フレームワーク領域（ＨＦＲ）を含み、ＨＦＲは０～３個のアミノ酸修飾を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項62】

前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＨＦＲは、０～２個のアミノ酸修飾を含む、請求項６０に記載の多特異性抗体。

【請求項63】

前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＨＦＲは、０～１個のアミノ酸修飾を含む、請求項６０に記載の多特異性抗体。

【請求項64】

前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、表１２に記載されるものから選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖フレームワーク領域（ＬＦＲ）を含み、ＬＦＲは０～３個のアミノ酸修飾を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項65】

前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、配列番号３６７～３７０、３７１～３７４、３７９～３８２、３８３～３８６、３９１～３９４、および３９５～３９８から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖フレームワーク領域（ＬＦＲ）を含み、ＨＦＲは０～３個のアミノ酸修飾を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項66】

前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＬＦＲは、０～２個のアミノ酸修飾を含む、請求項６４に記載の多特異性抗体。

【請求項67】

前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＬＦＲは、０～１個のアミノ酸修飾を含む、請求項６４に記載の多特異性抗体。

【請求項68】

前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、表１３に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む重鎖可変ドメインを含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項69】

前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、表１４に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項70】

前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、表１５に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む完全長の重鎖を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項71】

前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、表１６に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む完全長の軽鎖を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項72】

前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、表１７に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項73】

前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、表１８に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含むＴＣＲ定常ドメインを含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項74】

前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、表１８に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含むＴＣＲα定常ドメインを含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項75】

前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、表１８に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含むＴＣＲβ定常ドメインを含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項76】

前記ＣＤ４７結合ドメインは、３つの重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）である、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含み、前記ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、表１に記載されるものから選択されるアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３個のアミノ酸修飾を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項77】

前記ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～２個のアミノ酸修飾を含む、請求項７６に記載の多特異性抗体。

【請求項78】

前記ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～１個のアミノ酸修飾を含む、請求項７６に記載の多特異性抗体。

【請求項79】

前記ＣＤ４７結合ドメインは、３つの軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）である、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３を含み、前記ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、表２に記載されるものから選択されるアミノ酸配列を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３個のアミノ酸修飾を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項80】

前記ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～２個のアミノ酸修飾を含む、請求項７９に記載の多特異性抗体。

【請求項81】

前記ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～１個のアミノ酸修飾を含む、請求項７９に記載の多特異性抗体。

【請求項82】

前記ＣＤ４７結合ドメインは、表３に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む重鎖可変ドメインを含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項83】

前記ＣＤ４７結合ドメインは、表４に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項84】

前記ＣＤ４７結合ドメインは、表５に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む完全長の重鎖を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項85】

前記ＣＤ４７結合ドメインは、表６に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む完全長の軽鎖を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項86】

前記ＣＤ４７結合ドメインは、表７に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項87】

前記ＣＤ４７結合ドメインは、表８に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含むＴＣＲ定常ドメインを含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項88】

前記ＣＤ４７結合ドメインは、表８に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含むＴＣＲα定常ドメインを含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項89】

前記ＣＤ４７結合ドメインは、表８に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含むＴＣＲβ定常ドメインを含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項90】

前記多特異性抗体は、表２６に記載される対応する配列に対して、それぞれが少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する１つ以上の配列を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項91】

前記多特異性抗体は、表２７に記載される対応する配列に対して、それぞれが少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する１つ以上の配列を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項92】

前記多特異性抗体は、表２８に記載される対応する配列に対して、それぞれが少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する１つ以上の配列を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項93】

前記多特異性抗体は、表２９に記載される対応する配列に対して、それぞれが少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する１つ以上の配列を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項94】

前記多特異性抗体は、表３０に記載される対応する配列に対して、それぞれが少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する１つ以上の配列を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項95】

前記多特異性抗体は、表３１に記載される対応する配列に対して、それぞれが少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する１つ以上の配列を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項96】

前記多特異性抗体は、表３２に記載される対応する配列に対して、それぞれが少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する１つ以上の配列を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項97】

前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、３つの重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）：ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに、３つの軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）：ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３を含み、前記ＣＤ４７結合ドメインは、３つの重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）である、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含み、前記ＣＤ４７結合ドメインは、３つの軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）である、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項98】

前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ２は、配列番号２３５に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項99】

前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１：配列番号２３４、ＨＣ－ＣＤＲ２：配列番号２３５、およびＨＣ－ＣＤＲ３：配列番号２３６に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項100】

前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１：配列番号２３４、ＨＣ－ＣＤＲ２：配列番号２３５、およびＨＣ－ＣＤＲ３：配列番号２３６に記載のアミノ酸配列を含み、前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、ＬＣ－ＣＤＲ１：配列番号２８８、ＬＣ－ＣＤＲ２：配列番号２８９、およびＬＣ－ＣＤＲ３：配列番号２９０に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項101】

前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１：配列番号２３４、ＨＣ－ＣＤＲ２：配列番号２３５、およびＨＣ－ＣＤＲ３：配列番号２３６に記載のアミノ酸配列を含み、前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、ＬＣ－ＣＤＲ１：配列番号２８８、ＬＣ－ＣＤＲ２：配列番号２８９、およびＬＣ－ＣＤＲ３：配列番号２９０に記載のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１：配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２：配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３：配列番号３に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項102】

前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１：配列番号２３４、ＨＣ－ＣＤＲ２：配列番号２３５、およびＨＣ－ＣＤＲ３：配列番号２３６に記載のアミノ酸配列を含み、前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、ＬＣ－ＣＤＲ１：配列番号２８８、ＬＣ－ＣＤＲ２：配列番号２８９、およびＬＣ－ＣＤＲ３：配列番号２９０に記載のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１：配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２：配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３：配列番号３に記載のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、ＬＣ－ＣＤＲ１：配列番号６１、ＬＣ－ＣＤＲ２：配列番号６２、およびＬＣ－ＣＤＲ３：配列番号６３に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項103】

前記多特異性抗体は非対称の３鎖ノブイントゥホール構造を含み、前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインは単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含み、前記ＣＤ４７結合ドメインは抗原結合フラグメント（Ｆａｂ）を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項104】

前記多特異性抗体は、配列番号４８２、４８３、および４８４に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項105】

前記多特異性抗体は、配列番号４８２、４８３、および４８４に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項106】

前記多特異性抗体は、配列番号４８２、４８３、および５０７に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項107】

前記多特異性抗体は、配列番号４８２、４８３、および５０７に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項108】

前記多特異性抗体は非対称の３鎖ノブイントゥホール構造を含み、前記ＣＤ４７結合ドメインは単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含み、前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインは抗原結合フラグメント（Ｆａｂ）を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項109】

前記多特異性抗体は、配列番号５０３、５０４、および５０５に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項110】

前記多特異性抗体は、配列番号５０３、５０４、および５０５に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項111】

前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ２は、配列番号２４４に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項112】

前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１：配列番号２４３、ＨＣ－ＣＤＲ２：配列番号２４４、およびＨＣ－ＣＤＲ３：配列番号２４５に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項113】

前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１：配列番号２４３、ＨＣ－ＣＤＲ２：配列番号２４４、およびＨＣ－ＣＤＲ３：配列番号２４５に記載のアミノ酸配列を含み、前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、ＬＣ－ＣＤＲ１：配列番号２９７、ＬＣ－ＣＤＲ２：配列番号２９８、およびＬＣ－ＣＤＲ３：配列番号２９９に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項114】

前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１：配列番号２４３、ＨＣ－ＣＤＲ２：配列番号２４４、およびＨＣ－ＣＤＲ３：配列番号２４５に記載のアミノ酸配列を含み、前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、ＬＣ－ＣＤＲ１：配列番号２９７、ＬＣ－ＣＤＲ２：配列番号２９８、およびＬＣ－ＣＤＲ３：配列番号２９９に記載のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１：配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２：配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３：配列番号３に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項115】

前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１：配列番号２４３、ＨＣ－ＣＤＲ２：配列番号２４４、およびＨＣ－ＣＤＲ３：配列番号２４５に記載のアミノ酸配列を含み、前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、ＬＣ－ＣＤＲ１：配列番号２９７、ＬＣ－ＣＤＲ２：配列番号２９８、およびＬＣ－ＣＤＲ３：配列番号２９９に記載のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１：配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２：配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３：配列番号３に記載のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、ＬＣ－ＣＤＲ１：配列番号６１、ＬＣ－ＣＤＲ２：配列番号６２、およびＬＣ－ＣＤＲ３：配列番号６３に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項116】

前記多特異性抗体は非対称の３鎖ノブイントゥホール構造を含み、前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインは単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含み、前記ＣＤ４７結合ドメインは抗原結合フラグメント（Ｆａｂ）を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項117】

前記多特異性抗体は非対称の３鎖ノブイントゥホール構造を含み、前記ＣＤ４７結合ドメインは単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含み、前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインは抗原結合フラグメント（Ｆａｂ）を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項118】

前記多特異性抗体は、配列番号４８５、４８６、および４８７に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項119】

前記多特異性抗体は、配列番号４８５、４８６、および４８７に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項120】

前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１：配列番号２２２、ＨＣ－ＣＤＲ２：配列番号２２３、およびＨＣ－ＣＤＲ３：配列番号２２４に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項121】

前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１：配列番号２２２、ＨＣ－ＣＤＲ２：配列番号２２３、およびＨＣ－ＣＤＲ３：配列番号２２４に記載のアミノ酸配列を含み、前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、ＬＣ－ＣＤＲ１：配列番号２７６、ＬＣ－ＣＤＲ２：配列番号２７７、およびＬＣ－ＣＤＲ３：配列番号２７５に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項122】

前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１：配列番号２２２、ＨＣ－ＣＤＲ２：配列番号２２３、およびＨＣ－ＣＤＲ３：配列番号２２４に記載のアミノ酸配列を含み、前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、ＬＣ－ＣＤＲ１：配列番号２７６、ＬＣ－ＣＤＲ２：配列番号２７７、およびＬＣ－ＣＤＲ３：配列番号２７５に記載のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１：配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２：配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３：配列番号３に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項123】

前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１：配列番号２２２、ＨＣ－ＣＤＲ２：配列番号２２３、およびＨＣ－ＣＤＲ３：配列番号２２４に記載のアミノ酸配列を含み、前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、ＬＣ－ＣＤＲ１：配列番号２７６、ＬＣ－ＣＤＲ２：配列番号２７７、およびＬＣ－ＣＤＲ３：配列番号２７５に記載のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１：配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２：配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３：配列番号３に記載のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、ＬＣ－ＣＤＲ１：配列番号６１、ＬＣ－ＣＤＲ２：配列番号６２、およびＬＣ－ＣＤＲ３：配列番号６３に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項124】

前記多特異性抗体は非対称の３鎖ノブイントゥホール構造を含み、前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインは単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含み、前記ＣＤ４７結合ドメインは抗原結合フラグメント（Ｆａｂ）を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項125】

前記多特異性抗体は非対称の３鎖ノブイントゥホール構造を含み、前記ＣＤ４７結合ドメインは単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含み、前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインは抗原結合フラグメント（Ｆａｂ）を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項126】

前記多特異性抗体は、配列番号４８２、４８３、および５０６に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項127】

前記多特異性抗体は、配列番号４８２、４８３、および５０６に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項128】

約１ナノモル（ｎＭ）未満または約０．０１ｎＭ未満の多特異性抗体は、マクロファージによって貪食されるＨＣＴ－１５細胞の割合を、非特異性ＩｇＧ１抗体対照と比較して、少なくとも４倍増加させる、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項129】

マクロファージによるＥｐＣＡＭ陽性ＣＤ４７陽性腫瘍細胞の抗体依存性細胞食作用を媒介するために必要な抗体の濃度は、約０．００１ナノモル（ｎＭ）～約３ｎＭである、請求項９４に記載の多特異性抗体。

【請求項130】

前記ＥｐＣＡＭ陽性ＣＤ４７陽性腫瘍細胞は、ＨＣＴ－１５細胞である、請求項１２９に記載の多特異性抗体。

【請求項131】

前記ＥｐＣＡＭ陽性ＣＤ４７陽性腫瘍細胞は、腺管膵臓腺癌細胞、卵巣明細胞腺癌細胞、卵巣腺癌細胞、結腸腺癌細胞、直腸腺癌細胞、食道癌細胞、胃癌細胞、非小細胞肺癌細胞、小細胞肺癌細胞、子宮内膜癌細胞、肝細胞癌細胞、胆管癌細胞、前立腺腺癌細胞、甲状腺癌細胞、乳癌細胞、子宮頚癌細胞、腎細胞癌細胞、精巣癌細胞、または外陰扁平上皮癌細胞から選択される、請求項１２９に記載の多特異性抗体。

【請求項132】

約１００ナノモル（ｎＭ）の前記多特異性抗体は、細胞の表面上でのＣＤ４７へのＳＩＲＰαの結合を少なくとも約３０％阻害する、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項133】

前記細胞はＣＤ４７＋ＥｐＣＡＭ＋腫瘍細胞である、請求項１３２に記載の多特異性抗体。

【請求項134】

前記細胞はＨＣＣ－４４細胞と少なくとも同じ数のＥｐＣＡＭタンパク質をその表面に発現する、請求項１３３に記載の多特異性抗体。

【請求項135】

前記細胞は、少なくとも５０，０００個、少なくとも１００，０００個、少なくとも３００，０００個、少なくとも６００，０００個、または少なくとも１，５００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質をその表面に発現する、請求項１３３に記載の多特異性抗体。

【請求項136】

約１０００ナノモル（ｎＭ）の前記多特異性抗体は、赤血球凝集アッセイにおいて赤血球の溶血を誘導しない、請求項１に記載の多特異性抗体。

【請求項137】

請求項１に記載の多特異性抗体、およびＣＤ４７＋ＥｐＣＡＭ＋標的細胞を含む、複合体。

【請求項138】

前記標的細胞はＨＣＣ－４４細胞と少なくとも同じ数のＥｐＣＡＭタンパク質をその表面に発現する、請求項１３７に記載の複合体。

【請求項139】

前記標的細胞は、少なくとも５０，０００個、少なくとも１００，０００個、少なくとも３００，０００個、少なくとも６００，０００個、または少なくとも１，５００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質をその表面に発現する、請求項１３７に記載の複合体。

【請求項140】

前記ＣＤ４７＋ＥｐＣＡＭ＋標的細胞は癌細胞である、請求項１３７に記載の複合体。

【請求項141】

前記癌細胞は、腺管膵臓腺癌細胞、卵巣明細胞腺癌細胞、卵巣腺癌細胞、結腸腺癌細胞、直腸腺癌細胞、食道癌細胞、胃癌細胞、非小細胞肺癌細胞、小細胞肺癌細胞、子宮内膜癌細胞、肝細胞癌細胞、胆管癌細胞、前立腺腺癌細胞、甲状腺癌細胞、乳癌細胞、子宮頸癌細胞、腎細胞癌細胞、精巣癌細胞、または外陰扁平上皮癌細胞である、請求項１４０に記載の複合体。

【請求項142】

請求項１に記載の多特異性抗体を投与する工程を含む、ＣＤ４７＋ＥｐＣＡＭ＋標的細胞の食作用を誘導する方法。

【請求項143】

前記多特異性抗体は、約５ナノモル（ｎＭ）未満、約２ｎＭ未満、約１ｎＭ未満、約０．５ｎＭ未満、約０．２ｎＭ未満、約０．１ｎＭ未満、または約０．０５ｎＭ未満の濃度で投与される、請求項１４２に記載の方法。

【請求項144】

前記ＣＤ４７＋ＥｐＣＡＭ＋標的細胞は、ＨＣＴ－１５細胞、Ａ４３１細胞、ＨＣＣ－４４細胞、ＳＫＯＶ－３細胞、ＯＶＩＳＥ細胞、またはＣＦＰＡＣ－１細胞から選択される、請求項１４２または１４３に記載の方法。

【請求項145】

前記ＣＤ４７＋ＥｐＣＡＭ＋標的細胞は、腺管膵臓腺癌細胞、卵巣明細胞腺癌細胞、卵巣腺癌細胞、結腸腺癌細胞、直腸腺癌細胞、食道癌細胞、胃癌細胞、非小細胞肺癌細胞、小細胞肺癌細胞、子宮内膜癌細胞、肝細胞癌細胞、胆管癌細胞、前立腺腺癌細胞、甲状腺癌細胞、乳癌細胞、子宮頚癌細胞、腎細胞癌細胞、精巣癌細胞、または外陰扁平上皮癌細胞である、請求項１４２に記載の方法。

【請求項146】

請求項１に記載の多特異性抗体を投与する工程を含む、ＣＤ４７＋ＥｐＣＡＭ＋標的細胞を死滅させる方法であって、前記多特異性抗体は、ＣＤ４７＋ＥｐＣＡＭ＋標的細胞の表面上でのＣＤ４７へのＳＩＲＰαの結合を阻害する、方法。

【請求項147】

請求項１に記載の多特異性抗体を投与する工程を含む、ＣＤ４７＋ＥｐＣＡＭ＋標的細胞を死滅させる方法であって、前記多特異性抗体は、ＣＤ４７＋ＥｐＣＡＭ＋標的細胞を死滅させる抗体依存性細胞傷害を誘導する、方法。

【請求項148】

前記多特異性抗体は、約０．０１ナノモル（ｎＭ）～約１ｎＭ、約０．０１ｎＭ～約０．５ｎＭ、約０．０１ｎＭ～約０．２５ｎＭ、約０．０１ｎＭ～約０．１ｎＭ、約０．０１～約０．０５ｎＭ、または約０．０１ｎＭ未満の濃度で投与される、請求項１４７に記載の方法。

【請求項149】

前記ＣＤ４７＋ＥｐＣＡＭ＋標的細胞は、ＨＣＴ－１５細胞、Ａ４３１細胞、ＨＣＣ－４４細胞、ＳＫＯＶ－３細胞、ＯＶＩＳＥ細胞、またはＣＦＰＡＣ－１細胞から選択される、請求項１４７に記載の方法。

【請求項150】

前記ＣＤ４７＋ＥｐＣＡＭ＋標的細胞は、腺管膵臓腺癌細胞、卵巣明細胞腺癌細胞、卵巣腺癌細胞、結腸腺癌細胞、直腸腺癌細胞、食道癌細胞、胃癌細胞、非小細胞肺癌細胞、小細胞肺癌細胞、子宮内膜癌細胞、肝細胞癌細胞、胆管癌細胞、前立腺腺癌細胞、甲状腺癌細胞、乳癌細胞、子宮頚癌細胞、腎細胞癌細胞、精巣癌細胞、または外陰扁平上皮癌細胞である、請求項１４７に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

相互参照
本出願は、２０２１年１０月２７日に出願されたＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＣＮ２０２１／１２６７４３号の優先権を主張するものであり、この全体は参照によって本明細書に組み込まれる。

【0002】

配列表
本出願は配列表を包含しており、これは、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出され、その全体を参照することで本明細書に組み込まれる。２０２２年１０月２４日に作成された上記ＡＳＣＩＩのコピーは、ｔｘｔ＿５５４２９－７３９＿６０２＿ＳＬ．ｔｘｔのファイル名であり、１６キロバイトのサイズである。

【0003】

参照による組み込み
本明細書で言及されるすべての刊行物、特許、および特許出願は、個々の刊行物、特許、または特許出願が参照により組み込まれることが具体的かつ個別に示されている場合と同じ程度に、参照により本明細書に組み込まれる。

【発明の概要】

【0004】

本開示は、ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む多特異性抗体を提供する。いくつかの実施形態において、多特異性抗体は二重特異性、三重特異性、または四重特異性である。いくつかの実施形態において、多特異性抗体は二重特異性である。いくつかの実施形態において、多特異性抗体は二価、三価、または四価である。いくつかの実施形態において、多特異性抗体は二価である。

【0005】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む多特異性抗体のいくつかの実施形態において、多特異性抗体は、腫瘍細胞の表面上に発現されるＣＤ４７に対して、正常細胞、例えば、赤血球、血小板、Ｔ細胞、またはＮＫ細胞の表面上に発現されるＣＤ４７よりも高い親和性を有する。いくつかの実施形態において、腫瘍細胞はＥｐＣＡＭを発現する。いくつかの実施形態において、（例えば、ヒト）赤血球への最大半量結合に必要な多特異性抗体の濃度は、約５００ナノモル（ｎＭ）超である。

【0006】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む多特異性抗体のいくつかの実施形態において、多特異性抗体は、約１００ナノモル（ｎＭ）未満の解離定数（ＫＤ）で（例えば、ヒト）ＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、多特異性抗体は、約１ナノモル（ｎＭ）～約１００ｎＭ、約１ｎＭ～約５０ｎＭ、または約５ｎＭ～約５０ｎＭの解離定数（ＫＤ）で（例えば、ヒト）ＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、多特異性抗体は、約５００ナノモル（ｎＭ）未満の解離定数（ＫＤ）でＥｐＣＡＭに結合する。いくつかの実施形態において、多特異性抗体は、約０．２ナノモル（ｎＭ）～約５００ｎＭ、約１ｎＭ～約３００ｎＭ、約５ｎＭ～約２００ｎＭ、または約１０ｎＭ～約１５０ｎＭの解離定数（ＫＤ）でＥｐＣＡＭに結合する。いくつかの実施形態において、解離定数（ＫＤ）は、表面プラズモン共鳴によって決定される。

【0007】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む多特異性抗体のいくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、ヒトまたは操作されたヒトＥｐＣＡＭ結合ドメインである。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、ＥｐＣＡＭに特異的に結合する抗体、またはその機能的フラグメントもしくは機能的変異体を含む。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭに特異的に結合する抗体、またはその機能的フラグメントもしくは機能的変異体は、抗ＥｐＣＡＭ重鎖および抗ＥｐＣＡＭ軽鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗ＥｐＣＡＭ重鎖は、抗ＥｐＣＡＭ重鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗ＥｐＣＡＭ重鎖可変ドメインは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４重鎖の可変ドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗ＥｐＣＡＭ軽鎖は、抗ＥｐＣＡＭ軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗ＥｐＣＡＭ軽鎖可変ドメインは、カッパ（Ｋａｐｐａ）またはラムダ（Ｌａｍｂｄａ）軽鎖を含む。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含む。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、抗原結合フラグメント（Ｆａｂ）を含む。

【0008】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む多特異性抗体のいくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）定常領域を含む。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＴＣＲ定常領域は、ＴＣＲα定常ドメインおよびＴＣＲβ定常ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、ＶＨ－ＥｐＣＡＭドメインおよびＶＬ－ＥｐＣＡＭドメインを含み、ここで、ＶＨ－ＥｐＣＡＭドメインは、ＴＣＲα定常ドメインに融合しており、ＶＬ－ＥｐＣＡＭドメインは、ＴＣＲβ定常ドメインに融合している。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、ＶＨ－ＥｐＣＡＭドメインおよびＶＬ－ＥｐＣＡＭドメインを含み、ここで、ＶＨ－ＥｐＣＡＭドメインは、ＴＣＲβ定常ドメインに融合しており、ＶＬ－ＥｐＣＡＭドメインは、ＴＣＲα定常ドメインに融合している。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、ＶＨ－ＥｐＣＡＭドメインおよびＶＬ－ＥｐＣＡＭドメインを含み、ここで、ＶＨ－ＥｐＣＡＭドメインは、ＣＨ１ ＩｇＧドメインに融合しており、ＶＬ－ＥｐＣＡＭドメインは、ＣＬ ＩｇＧドメインに融合している。

【0009】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む多特異性抗体のいくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、３つの重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）：ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ここで、ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、表９に記載されるものから選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１は、配列番号２２２、２２５、２３１、２３４、２４３、および２４６から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ２は、配列番号２２３、２２６、２３２、２３５、２４４、および２４７から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２２４、２２７、２３３、２３６、２４５、および２４８から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0010】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む多特異性抗体のいくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、３つの軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）：ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３を含み、ここで、ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、表１０に記載されるものから選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１は、配列番号２７６、２７９、２８５、２８８、２９７、および３００から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ２は、配列番号２７７、２８０、２８６、２８９、２９８、および３０１から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２７８、２８１、２８７、２９０、２９９、および３０２から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0011】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む多特異性抗体のいくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、表１１に記載されるものから選択されるアミノ酸配列を含む重鎖フレームワーク領域（ＨＦＲ）を含み、ＨＦＲは０～３個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、配列番号３３１～３３４、３３５～３３８、３４３～３４６、３４７～３５０、３５５～３５８、および３５９～３６２から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖フレームワーク領域（ＨＦＲ）を含み、ＨＦＲは０～３個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、配列番号３３１～３３４のアミノ酸配列のセットを含む重鎖フレームワーク領域（ＨＦＲ）を含み、アミノ酸配列の少なくとも１つのセットは、０～３個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、配列番号３３５～３３８のアミノ酸配列のセットを含む重鎖フレームワーク領域（ＨＦＲ）を含み、アミノ酸配列の少なくとも１つのセットは０～３個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、配列番号３４３～３４６のアミノ酸配列のセットを含む重鎖フレームワーク領域（ＨＦＲ）を含み、アミノ酸配列の少なくとも１つのセットは、０～３個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、配列番号３４７～３５０のアミノ酸配列のセットを含む重鎖フレームワーク領域（ＨＦＲ）を含み、アミノ酸配列の少なくとも１つのセットは、０～３個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、配列番号３５５～３５８のアミノ酸配列のセットを含む重鎖フレームワーク領域（ＨＦＲ）を含み、アミノ酸配列の少なくとも１つのセットは、０～３個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、配列番号３５９～３６２のアミノ酸配列のセットを含む重鎖フレームワーク領域（ＨＦＲ）を含み、アミノ酸配列の少なくとも１つのセットは、０～３個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＨＦＲは、０～２個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＨＦＲは、０～１個のアミノ酸修飾を含む。

【0012】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む多特異性抗体のいくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、表１２に記載されるものから選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖フレームワーク領域（ＬＦＲ）を含み、ＬＦＲは０～３個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、配列番号３６７～３７０、３７１～３７４、３７９～３８２、３８３～３８６、３９１～３９４、および３９５～３９８から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖フレームワーク領域（ＬＦＲ）を含み、ＨＦＲは０～３個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、配列番号３６７～３７０のアミノ酸配列のセットを含む軽鎖フレームワーク領域（ＬＦＲ）を含み、アミノ酸配列の少なくとも１つのセットは、０～３個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、配列番号３７１～３７４のアミノ酸配列のセットを含む軽鎖フレームワーク領域（ＬＦＲ）を含み、アミノ酸配列の少なくとも１つのセットは、０～３個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、配列番号３７９～３８２のアミノ酸配列のセットを含む軽鎖フレームワーク領域（ＬＦＲ）を含み、アミノ酸配列の少なくとも１つのセットは、０～３個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、配列番号３８３～３８６のアミノ酸配列のセットを含む軽鎖フレームワーク領域（ＬＦＲ）を含み、アミノ酸配列の少なくとも１つのセットは、０～３個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、配列番号３９１～３９４のアミノ酸配列のセットを含む軽鎖フレームワーク領域（ＬＦＲ）を含み、アミノ酸配列の少なくとも１つのセットは、０～３個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、配列番号３９５～３９８のアミノ酸配列のセットを含む軽鎖フレームワーク領域（ＬＦＲ）を含み、アミノ酸配列の少なくとも１つのセットは、０～３個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＬＦＲは、０～２個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＬＦＲは、０～１個のアミノ酸修飾を含む。

【0013】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む多特異性抗体のいくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、表１３に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む重鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、表１４に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、表１５に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む完全長の重鎖を含む。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、表１６に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む完全長の軽鎖を含む。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、表１７に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含む。

【0014】

ＣＤ４７ドメインおよびＥｐＣＡＭドメインを含む多特異性抗体のいくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、表１８に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含むＴＣＲ定常ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、表１８に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含むＴＣＲα定常ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、表１８に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含むＴＣＲβ定常ドメインを含む。

【0015】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む多特異性抗体のいくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、ヒトまたは操作されたヒトＣＤ４７結合ドメインである。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、ＣＤ４７に特異的に結合する抗体、またはその機能的フラグメントもしくは機能的変異体を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に特異的に結合する抗体、またはその機能的フラグメントもしくは機能的変異体は、抗ＣＤ４７重鎖および抗ＣＤ４７軽鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ４７重鎖は、抗ＣＤ４７重鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ４７重鎖可変ドメインは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４重鎖の可変ドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ４７軽鎖は、抗ＣＤ４７軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ４７軽鎖可変ドメインは、カッパまたはラムダ軽鎖の可変ドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ４７重鎖可変ドメインは、ＩｇＧ１重鎖の可変ドメインを含み、抗ＣＤ４７軽鎖可変ドメインはカッパ軽鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ４７重鎖可変ドメインは、ＩｇＧ１重鎖の可変ドメインを含み、抗ＣＤ４７軽鎖可変ドメインはラムダ軽鎖を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、抗原結合フラグメント（Ｆａｂ）を含む。

【0016】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む多特異性抗体のいくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）定常領域を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＴＣＲ定常領域は、ＴＣＲα定常ドメインおよびＴＣＲβ定常ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、ＶＨ－ＣＤ４７ドメインおよびＶＬ－ＣＤ４７ドメインを含み、ここで、ＶＨ－ＣＤ４７ドメインは、ＴＣＲα定常ドメインに融合しており、ＶＬ－ＣＤ４７ドメインは、ＴＣＲβ定常ドメインに融合している。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、ＶＨ－ＣＤ４７ドメインおよびＶＬ－ＣＤ４７ドメインを含み、ここで、ＶＨ－ＣＤ４７ドメインは、ＴＣＲβ定常ドメインに融合しており、ＶＬ－ＣＤ４７ドメインは、ＴＣＲα定常ドメインに融合している。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、ＶＨ－ＣＤ４７ドメインおよびＶＬ－ＣＤ４７ドメインを含み、ここで、ＶＨ－ＣＤ４７ドメインは、ＣＨ１ ＩｇＧドメインに融合しており、ＶＬ－ＣＤ４７ドメインは、ＣＬ ＩｇＧドメインに融合している。

【0017】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む多特異性抗体のいくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、３つの重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）である、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ここで、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、表１に記載されるものから選択されるアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～２個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～１個のアミノ酸修飾を含む。

【0018】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む多特異性抗体のいくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、３つの軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）である、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３を含み、ここで、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、表２に記載されるものから選択されるアミノ酸配列を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～２個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～１個のアミノ酸修飾を含む。

【0019】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む多特異性抗体のいくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、表３に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む重鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、表４に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、表５に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む完全長の重鎖を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、表６に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む完全長の軽鎖を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、表７に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含む。

【0020】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む多特異性抗体のいくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、表８に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含むＴＣＲ定常ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、表８に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含むＴＣＲα定常ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、表８に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含むＴＣＲβ定常ドメインを含む。

【0021】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む多特異性抗体のいくつかの実施形態において、多特異性抗体はＦｃドメインをさらに含む。いくつかの実施形態において、ＦｃドメインはヒトＦｃドメインである。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメインのアイソタイプは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４である。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメインはヘテロ二量体Ｆｃドメインであり、ここで、ヘテロ二量体Ｆｃ領域は、ノブ鎖（ｋｎｏｂ ｃｈａｉｎ）とホール鎖（ｈｏｌｅ ｃｈａｉｎ）とを含み、ノブイントゥホール（ｋｎｏｂ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅ）（ＫｉＨ）構造を形成する。いくつかの実施形態において、ノブ鎖は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ノブ鎖は変異Ｔ３６６Ｗを含み、ホール鎖は変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖを含み、アミノ酸位置の番号付けはＫａｂａｔらのＥＵインデックスに従う。いくつかの実施形態において、ホール鎖は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４ドメインを含む。いくつかの実施形態において、多特異性抗体は、非対称の３鎖ノブイントゥホール構造を有する。

【0022】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む多特異性抗体のいくつかの実施形態において、多特異性抗体は、表２６に記載される対応する配列に対して、それぞれが少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する１つ以上の配列を含む。

【0023】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む多特異性抗体のいくつかの実施形態において、多特異性抗体は、表２７に記載される対応する配列に対して、それぞれが少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する１つ以上の配列を含む。

【0024】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む多特異性抗体のいくつかの実施形態において、多特異性抗体は、表２８に記載される対応する配列に対して、それぞれが少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する１つ以上の配列を含む。

【0025】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む多特異性抗体のいくつかの実施形態において、多特異性抗体は、表２９に記載される対応する配列に対して、それぞれが少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する１つ以上の配列を含む。

【0026】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む多特異性抗体のいくつかの実施形態において、多特異性抗体は、表３０に記載される対応する配列に対して、それぞれが少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する１つ以上の配列を含む。

【0027】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む多特異性抗体のいくつかの実施形態において、多特異性抗体は、表３１に記載される対応する配列に対して、それぞれが少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する１つ以上の配列を含む。

【0028】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む多特異性抗体のいくつかの実施形態において、多特異性抗体は、表３２に記載される対応する配列に対して、それぞれが少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する１つ以上の配列を含む。

【0029】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む多特異性抗体のいくつかの実施形態において、約１ナノモル（ｎＭ）未満または約０．００１ｎＭ未満の多特異性抗体は、マクロファージによって貪食されるＨＣＴ－１５細胞の割合を、非特異性ＩｇＧ１抗体対照と比較して少なくとも４倍増加させる。いくつかの実施形態において、マクロファージによるＥｐＣＡＭ陽性ＣＤ４７陽性腫瘍細胞の抗体依存性細胞食作用を媒介するために必要な抗体の濃度は、約０．００１ナノモル（ｎＭ）～約３ｎＭである。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ陽性ＣＤ４７陽性腫瘍細胞は、ＯＶＩＳＥ細胞またはＨＣＴ１５細胞である。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ陽性ＣＤ４７陽性腫瘍細胞は、腺管膵臓腺癌細胞、卵巣明細胞腺癌細胞、結腸腺癌細胞、肺腺癌細胞、肺扁平上皮癌細胞、肺小細胞癌細胞、肝細胞癌細胞、胃腺癌細胞、胆管癌細胞、頭頸部扁平上皮癌細胞、前立腺癌細胞、子宮内膜癌細胞、食道癌細胞、卵巣腺癌細胞、外陰扁平上皮癌細胞から選択される。

【0030】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む多特異性抗体のいくつかの実施形態において、約１００ナノモル（ｎＭ）の多特異性抗体は、細胞の表面上でのＣＤ４７へのＳＩＲＰαの結合を少なくとも約３０％阻害する。いくつかの実施形態において、細胞はＣＤ４７＋ＥｐＣＡＭ＋腫瘍細胞である。いくつかの実施形態において、細胞はＨＣＣ－４４細胞と少なくとも同じ数のＥｐＣＡＭタンパク質をその表面に発現する。いくつかの実施形態において、細胞は、少なくとも５０，０００個、少なくとも１００，０００個、少なくとも３００，０００個、少なくとも６００，０００個、または少なくとも１，５００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質をその表面に発現する。いくつかの実施形態において、約１０００ナノモル（ｎＭ）の多特異性抗体は、赤血球凝集アッセイにおいて赤血球の溶血を誘導しない。

【0031】

本開示は、ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメイン（本明細書に記載される）を含む多特異性抗体と、ＣＤ４７＋ＥｐＣＡＭ標的細胞とを含む複合体を提供する。いくつかの実施形態において、標的細胞はＨＣＣ－４４細胞と少なくとも同じ数のＥｐＣＡＭタンパク質をその表面に発現する。いくつかの実施形態において、標的細胞は、少なくとも５０，０００個、少なくとも１００，０００個、少なくとも３００，０００個、少なくとも６００，０００個、または少なくとも１，５００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質をその表面に発現する。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７＋ＥｐＣＡＭ＋標的細胞は癌細胞である。いくつかの実施形態において、癌細胞は、腺管膵臓腺癌細胞、卵巣明細胞腺癌細胞、卵巣腺癌細胞、結腸腺癌細胞、直腸腺癌細胞、食道癌細胞、胃癌細胞、非小細胞肺癌細胞、小細胞肺癌細胞、子宮内膜癌細胞、前立腺腺癌細胞、甲状腺癌細胞、乳癌細胞、子宮頸癌細胞、腎細胞癌細胞、精巣癌細胞、または外陰扁平上皮癌細胞である。

【0032】

本開示は、ＣＤ４７＋ＥｐＣＡＭ＋標的細胞の食作用を誘導する方法であって、ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメイン（本明細書に記載される）を含む多特異性抗体を投与する工程を含む方法を提供する。いくつかの実施形態において、多特異性抗体は、約５ナノモル（ｎＭ）未満、約２ｎＭ未満、約１ｎＭ未満、約０．５ｎＭ未満、約０．２ｎＭ未満、約０．１ｎＭ未満、または約０．０５ｎＭ未満の濃度で投与される。

【0033】

本開示は、ＣＤ４７＋ＥｐＣＡＭ＋標的細胞を死滅させる方法であって、ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメイン（本明細書に記載される）を含む多特異性抗体を投与する工程を含み、多特異性抗体が、ＣＤ４７＋ＥｐＣＡＭ＋標的細胞の表面上でのＣＤ４７へのＳＩＲＰαの結合を阻害する方法を提供する。いくつかの実施形態において、抗体は、約０．０１ナノモル（ｎＭ）～約１ｎＭ、約０．０１ｎＭ～約０．５ｎＭ、約０．０１ｎＭ～約０．２５ｎＭ、約０．０１ｎＭ～約０．１ｎＭ、約０．０１～約０．０５ｎＭ、または約０．０１ｎＭ未満の濃度で投与される。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７＋ＥｐＣＡＭ＋標的細胞は、ＨＣＴ－１５細胞、Ａ４３１細胞、ＨＣＣ－４４細胞、ＳＫＯＶ－３細胞、ＯＶＩＳＥ細胞、またはＣＦＰＡＣ－１細胞から選択される。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７＋ＥｐＣＡＭ＋標的細胞は、腺管膵臓腺癌細胞、卵巣明細胞腺癌細胞、卵巣腺癌細胞、結腸腺癌細胞、直腸腺癌細胞、食道癌細胞、胃癌細胞、非小細胞肺癌細胞、小細胞肺癌細胞、子宮内膜癌細胞、前立腺腺癌細胞、甲状腺癌細胞、乳癌細胞、子宮頸癌細胞、腎細胞癌細胞、精巣癌細胞、または外陰扁平上皮癌細胞である。

【0034】

本開示は、ＣＤ４７＋ＥｐＣＡＭ＋標的細胞を死滅させる方法であって、ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメイン（本明細書に記載される）を含む多特異性抗体を投与する工程を含み、多特異性抗体が、ＣＤ４７＋ＥｐＣＡＭ＋標的細胞を死滅させる抗体依存性細胞傷害を誘導する方法を提供する。いくつかの実施形態において、抗体は、約０．０１ナノモル（ｎＭ）～約１ｎＭ、約０．０１ｎＭ～約０．５ｎＭ、約０．０１ｎＭ～約０．２５ｎＭ、約０．０１ｎＭ～約０．１ｎＭ、約０．０１～約０．０５ｎＭ、または約０．０１ｎＭ未満の濃度で投与される。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７＋ＥｐＣＡＭ＋標的細胞は、ＨＣＴ－１５細胞、Ａ４３１細胞、ＨＣＣ－４４細胞、ＳＫＯＶ－３細胞、ＯＶＩＳＥ細胞、またはＣＦＰＡＣ－１細胞から選択される。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７＋ＥｐＣＡＭ＋標的細胞は、腺管膵臓腺癌細胞、卵巣明細胞腺癌細胞、卵巣腺癌細胞、結腸腺癌細胞、直腸腺癌細胞、食道癌細胞、胃癌細胞、非小細胞肺癌細胞、小細胞肺癌細胞、子宮内膜癌細胞、前立腺腺癌細胞、甲状腺癌細胞、乳癌細胞、子宮頸癌細胞、腎細胞癌細胞、精巣癌細胞、または外陰扁平上皮癌細胞である。

【0035】

本開示は、ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメイン（本明細書に記載される）を含む多特異性抗体を含む医薬組成物を提供する。

【0036】

本開示は、癌を有する対象を処置する方法であって、ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメイン（本明細書に記載される）を含む多特異性抗体を含む医薬組成物を対象に投与する工程を含む方法を提供する。いくつかの実施形態において、癌は、腺管膵臓腺癌細胞、卵巣明細胞腺癌細胞、卵巣腺癌細胞、結腸腺癌細胞、肺腺癌、直腸腺癌、食道癌、胃癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、子宮内膜癌、前立腺癌、甲状腺癌、乳癌、子宮頸癌、腎細胞癌、精巣癌、または外陰扁平上皮癌である。

【0037】

本開示は、ＣＤ４７結合ドメインおよびＥＧＦＲ結合ドメインを含む多特異性抗体を提供する。いくつかの実施形態において、多特異性抗体は二重特異性、三重特異性、または四重特異性である。いくつかの実施形態において、多特異性抗体は二重特異性である。いくつかの実施形態において、多特異性抗体は二価、三価、または四価である。いくつかの実施形態において、多特異性抗体は二価である。

【0038】

いくつかの実施形態において、多特異性抗体は、腫瘍細胞の表面上に発現されるＣＤ４７に対して、正常細胞、例えば、赤血球、血小板、Ｔ細胞、Ｂ細胞、またはＮＫ細胞の表面上に発現されるＣＤ４７に対するよりも高い親和性を有する。いくつかの実施形態において、腫瘍細胞はＥＧＦＲを発現する。いくつかの実施形態において、（例えば、ヒト）赤血球への最大半量結合に必要な多特異性抗体の濃度は、約２００ナノモル（ｎＭ）超である。

【0039】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥＧＦＲ結合ドメインを含む多特異性抗体のいくつかの実施形態において、多特異性抗体は、約１００ナノモル（ｎＭ）未満の解離定数（ＫＤ）で（例えば、ヒト）ＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、多特異性抗体は、約１ナノモル（ｎＭ）～約１００ｎＭ、約１ｎＭ～約５０ｎＭ、または約５ｎＭ～約５０ｎＭの解離定数（ＫＤ）で（例えば、ヒト）ＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、多特異性抗体は、約２５ナノモル（ｎＭ）未満の解離定数（ＫＤ）でＥＧＦＲに結合する。いくつかの実施形態において、多特異性抗体は、約０．２ナノモル（ｎＭ）～約２５ｎＭ、約０．２ｎＭ～約１０ｎＭ、約０．２ｎＭ～約２ｎＭ、または約２ｎＭ～約１０ｎＭの解離定数（ＫＤ）でＥＧＦＲに結合する。いくつかの実施形態において、解離定数（ＫＤ）は、表面プラズモン共鳴によって決定される。

【0040】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥＧＦＲ結合ドメインを含む多特異性抗体のいくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、ヒトまたは操作されたヒトＣＤ４７結合ドメインである。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、ＣＤ４７に特異的に結合する抗体、またはその機能的フラグメントもしくは機能的変異体を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に特異的に結合する抗体、またはその機能的フラグメントもしくは機能的変異体は、抗ＣＤ４７重鎖および抗ＣＤ４７軽鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ４７重鎖は、抗ＣＤ４７重鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ４７重鎖可変ドメインは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４重鎖の可変ドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ４７軽鎖は、抗ＣＤ４７軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ４７軽鎖可変ドメインは、カッパまたはラムダ軽鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ４７重鎖可変ドメインは、ＩｇＧ１重鎖の可変ドメインを含み、抗ＣＤ４７軽鎖可変ドメインはカッパ軽鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ４７重鎖可変ドメインは、ＩｇＧ１重鎖の可変ドメインを含み、抗ＣＤ４７軽鎖可変ドメインはラムダ軽鎖を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、抗原結合フラグメント（Ｆａｂ）を含む。

【0041】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥＧＦＲ結合ドメインを含む多特異性抗体のいくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）定常領域を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＴＣＲ定常領域は、ＴＣＲα定常ドメインおよびＴＣＲβ定常ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、ＶＨ－ＣＤ４７ドメインおよびＶＬ－ＣＤ４７ドメインを含み、ここで、ＶＨ－ＣＤ４７ドメインは、ＴＣＲα定常ドメインに融合しており、ＶＬ－ＣＤ４７ドメインは、ＴＣＲβ定常ドメインに融合している。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、ＶＨ－ＣＤ４７ドメインおよびＶＬ－ＣＤ４７ドメインを含み、ここで、ＶＨ－ＣＤ４７ドメインは、ＴＣＲβ定常ドメインに融合しており、ＶＬ－ＣＤ４７ドメインは、ＴＣＲα定常ドメインに融合している。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、ＶＨ－ＣＤ４７ドメインおよびＶＬ－ＣＤ４７ドメインを含み、ここで、ＶＨ－ＣＤ４７ドメインは、ＣＨ１ ＩｇＧドメインに融合しており、ＶＬ－ＣＤ４７ドメインは、ＣＬ ＩｇＧドメインに融合している。

【0042】

ＣＤ４７ドメインおよびＥＧＦＲ結合ドメインを含む多特異性抗体のいくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、３つの重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）である、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ここで、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、表１に記載されるものから選択されるアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～２個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～１個のアミノ酸修飾を含む。

【0043】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥＧＦＲ結合ドメインを含む多特異性抗体のいくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、３つの軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）である、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３を含み、ここで、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、表２に記載されるものから選択されるアミノ酸配列を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～２個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～１個のアミノ酸修飾を含む。

【0044】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥＧＦＲ結合ドメインを含む多特異性抗体のいくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、表３に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む重鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、表４に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、表５に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む完全長の重鎖を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、表６に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む完全長の軽鎖を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、表７に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含む。

【0045】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥＧＦＲ結合ドメインを含む多特異性抗体のいくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、表８に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含むＴＣＲ定常ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、表８に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含むＴＣＲα定常ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、表８に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含むＴＣＲβ定常ドメインを含む。

【0046】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥＧＦＲ結合ドメインを含む多特異性抗体のいくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ結合ドメインは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）定常領域を含む。いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ結合ドメインのＴＣＲ定常領域は、ＴＣＲα定常ドメインおよびＴＣＲβ定常ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ結合ドメインは、ＶＨ－ＥＧＦＲドメインおよびＶＬ－ＥＧＦＲドメインを含み、ここで、ＶＨ－ＥＧＦＲドメインは、ＴＣＲα定常ドメインに融合しており、ＶＬ－ＥＧＦＲドメインは、ＴＣＲβ定常ドメインに融合している。いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ結合ドメインは、ＶＨ－ＥＧＦＲドメインおよびＶＬ－ＥＧＦＲドメインを含み、ここで、ＶＨ－ＥＧＦＲドメインは、ＴＣＲβ定常ドメインに融合しており、ＶＬ－ＥＧＦＲドメインは、ＴＣＲα定常ドメインに融合している。いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ結合ドメインは、ＶＨ－ＥＧＦＲドメインおよびＶＬ－ＥＧＦＲドメインを含み、ここで、ＶＨ－ＥＧＦＲドメインはＣＨ１ ＩｇＧドメインに融合しており、ＶＬ－ＥＧＦＲドメインはＣＬ ＩｇＧドメインに融合している。

【0047】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥＧＦＲ結合ドメインを含む多特異性抗体のいくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ結合ドメインは、３つの重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）である、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ここで、ＥＧＦＲ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、表１９に記載されるものから選択されるアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～２個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～１個のアミノ酸修飾を含む。

【0048】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥＧＦＲ結合ドメインを含む多特異性抗体のいくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ結合ドメインは、３つの軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）である、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３を含み、ここで、ＥＧＦＲ結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、表２０に記載されるものから選択されるアミノ酸配列を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～２個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～１個のアミノ酸修飾を含む。

【0049】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥＧＦＲ結合ドメインを含む多特異性抗体のいくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ結合ドメインは、表２１に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む重鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ結合ドメインは、表２２に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ結合ドメインは、表２３に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む完全長の重鎖を含む。いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ結合ドメインは、表２４に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む完全長の軽鎖を含む。

【0050】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥＧＦＲ結合ドメインを含む多特異性抗体のいくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ結合ドメインは、重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ結合ドメインは単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含む。いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ結合ドメインは、抗原結合フラグメント（Ｆａｂ）を含む。いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ結合ドメインは、表２５に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含むＦａｂドメインを含む。

【0051】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥＧＦＲ結合ドメインを含む多特異性抗体のいくつかの実施形態において、多特異性抗体はＦｃドメインをさらに含む。いくつかの実施形態において、ＦｃドメインはヒトＦｃドメインである。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメインのアイソタイプは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４である。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメインはヘテロ二量体Ｆｃドメインであり、ここで、ヘテロ二量体Ｆｃ領域は、ノブ鎖（ｋｎｏｂ ｃｈａｉｎ）とホール鎖（ｈｏｌｅ ｃｈａｉｎ）とを含み、ノブイントゥホール（ｋｎｏｂ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅ）（ＫｉＨ）構造を形成する。いくつかの実施形態において、ノブ鎖は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ノブ鎖は変異Ｔ３６６Ｗを含み、ホール鎖は変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖを含み、アミノ酸位置の番号付けはＫａｂａｔらのＥＵインデックスに従う。いくつかの実施形態において、ホール鎖は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４ドメインを含む。いくつかの実施形態において、多特異性抗体は、非対称の３鎖ノブイントゥホール構造を有する。

【0052】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥＧＦＲ結合ドメインを含む多特異性抗体のいくつかの実施形態において、多特異性抗体は、表３３に記載される対応する配列に対して、それぞれが少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する１つ以上の配列を含む。

【0053】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥＧＦＲ結合ドメインを含む多特異性抗体のいくつかの実施形態において、多特異性抗体は、表３４に記載される対応する配列に対して、それぞれが少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する１つ以上の配列を含む。

【0054】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥＧＦＲ結合ドメインを含む多特異性抗体のいくつかの実施形態において、多特異性抗体は、表３５に記載される対応する配列に対して、それぞれが少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する１つ以上の配列を含む。

【0055】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥＧＦＲ結合ドメインを含む多特異性抗体のいくつかの実施形態において、約１ナノモル（ｎＭ）未満または約０．０１ｎＭ未満の多特異性抗体は、マクロファージによって貪食されるＡ４３１細胞の割合を、非特異性ＩｇＧ１抗体対照と比較して少なくとも４倍増加させる。いくつかの実施形態において、マクロファージによるＥＧＦＲ陽性ＣＤ４７陽性腫瘍細胞の抗体依存性細胞食作用を媒介するために必要な抗体の濃度は、約０．０１ナノモル（ｎＭ）～約３ｎＭである。いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ陽性ＣＤ４７陽性腫瘍細胞は、ＯＶＩＳＥ細胞またはＡ４３１細胞である。いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ陽性ＣＤ４７陽性腫瘍細胞は、腺管膵臓腺癌細胞、卵巣明細胞腺癌細胞、結腸腺癌細胞、肺腺癌細胞、肺扁平上皮癌細胞、肺小細胞癌細胞、肝細胞癌細胞、胃腺癌細胞、胆管癌細胞、頭頸部扁平上皮癌細胞、前立腺癌細胞、子宮内膜癌細胞、卵巣腺癌細胞、外陰扁平上皮癌細胞から選択される。

【0056】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥＧＦＲ結合ドメインを含む多特異性抗体のいくつかの実施形態において、約１００ナノモル（ｎＭ）の多特異性抗体は、細胞の表面上でのＣＤ４７へのＳＩＲＰαの結合を少なくとも約３０％阻害する。いくつかの実施形態において、細胞はＣＤ４７＋ＥＧＦＲ＋腫瘍細胞である。いくつかの実施形態において、細胞はＨＣＣ－４４細胞と少なくとも同じ数のＥＧＦＲタンパク質をその表面に発現する。いくつかの実施形態において、細胞は、少なくとも５０，０００個、少なくとも１００，０００個、少なくとも３００，０００個、少なくとも６００，０００個、または少なくとも１，５００，０００個のＥＧＦＲタンパク質をその表面に発現する。いくつかの実施形態において、約４００ナノモル（ｎＭ）の多特異性抗体は、赤血球凝集アッセイにおいて赤血球の溶血を誘導しない。

【0057】

本開示は、ＣＤ４７結合ドメインおよびＥＧＦＲ結合ドメイン（本明細書に記載される）を含む多特異性抗体と、ＣＤ４７＋ＥＧＦＲ＋標的細胞とを含む複合体を提供する。いくつかの実施形態において、標的細胞はＨＣＣ－４４細胞と少なくとも同じ数のＥＧＦＲタンパク質をその表面に発現する。いくつかの実施形態において、標的細胞は、少なくとも５０，０００個、少なくとも１００，０００個、少なくとも３００，０００個、少なくとも６００，０００個、または少なくとも１，５００，０００個のＥＧＦＲタンパク質をその表面に発現する。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７＋ＥＧＦＲ＋標的細胞は癌細胞である。いくつかの実施形態において、癌細胞は、類表皮癌細胞、大腸腺癌細胞、頭頸部扁平上皮癌細胞、膀胱腺癌細胞、膵臓腺癌細胞、肺扁平上皮癌、胃癌細胞、腺管膵臓腺癌細胞、卵巣明細胞癌細胞、卵巣腺癌細胞、結腸腺癌細胞、肺腺癌、直腸腺癌、食道癌、胃癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、子宮内膜癌、前立腺腺癌、甲状腺癌、乳癌、子宮頚癌、腎細胞癌、精巣癌、または外陰扁平上皮癌である。

【0058】

本開示は、ＣＤ４７＋ＥＧＦＲ＋標的細胞の食作用を誘導する方法であって、ＣＤ４７結合ドメインおよびＥＧＦＲ結合ドメイン（本明細書に記載される）を含む多特異性抗体を投与する工程を含む方法を提供する。いくつかの実施形態において、多特異性抗体は、約５ナノモル（ｎＭ）未満、約２ｎＭ未満、約１ｎＭ未満、約０．５ｎＭ未満、約０．２ｎＭ未満、約０．１ｎＭ未満、または約０．０５ｎＭ未満の濃度で投与される。

【0059】

本開示は、ＣＤ４７＋ＥＧＦＲ＋標的細胞を死滅させる方法であって、ＣＤ４７結合ドメインおよびＥＧＦＲ結合ドメイン（本明細書に記載される）を含む多特異性抗体を投与する工程を含み、多特異性抗体が、ＣＤ４７＋ＥＧＦＲ＋標的細胞の表面上でのＣＤ４７へのＳＩＲＰαの結合を阻害する方法を提供する。いくつかの実施形態において、抗体は、約０．０１ナノモル（ｎＭ）～約１ｎＭ、約０．０１ｎＭ～約０．５ｎＭ、約０．０１ｎＭ～約０．２５ｎＭ、約０．０１ｎＭ～約０．１ｎＭ、約０．０１ｎＭ～約０．０５ｎＭ、または約０．０１ｎＭ未満の濃度で投与される。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７＋ＥＧＦＲ＋標的細胞は、Ａ４３１細胞、ＮＣＩ－Ｈ７４７細胞、ＡＳＰＣ－１細胞、ＥＢＣ－１細胞、またはＳＮＵ－５細胞から選択される。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７＋ＥＧＦＲ＋標的細胞は、類表皮癌細胞、大腸腺癌細胞、頭頸部扁平上皮癌細胞、膀胱癌細胞、膵臓腺癌細胞、肺扁平上皮癌細胞、肺腺癌細胞、胃癌細胞、腺管膵臓腺癌細胞、卵巣明細胞腺癌細胞、卵巣腺癌細胞、結腸腺癌細胞、直腸腺癌細胞、食道癌細胞、胃癌細胞、非小細胞肺癌細胞、小細胞肺癌細胞、子宮内膜癌細胞、前立腺腺癌細胞、甲状腺癌細胞、乳癌細胞、子宮頚癌細胞、腎細胞癌細胞、精巣癌細胞、および外陰扁平上皮癌細胞から選択される。

【0060】

本開示は、ＣＤ４７＋ＥＧＦＲ＋標的細胞を死滅させる方法であって、ＣＤ４７結合ドメインおよびＥＧＦＲ結合ドメイン（本明細書に記載される）を含む多特異性抗体を投与する工程を含み、多特異性抗体が、ＣＤ４７＋ＥＧＦＲ＋標的細胞を死滅させる抗体依存性細胞傷害を誘導する方法を提供する。いくつかの実施形態において、抗体は、約０．０１ナノモル（ｎＭ）～約１ｎＭ、約０．０１ｎＭ～約０．５ｎＭ、約０．０１ｎＭ～約０．２５ｎＭ、約０．０１ｎＭ～約０．１ｎＭ、約０．０１ｎＭ～約０．０５ｎＭ、または約０．０１ｎＭ未満の濃度で投与される。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７＋ＥＧＦＲ＋標的細胞は、Ａ４３１細胞、ＮＣＩ－Ｈ７４７細胞、ＡＳＰＣ－１細胞、ＥＢＣ－１細胞、またはＳＮＵ－５細胞から選択される。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７＋ＥＧＦＲ＋標的細胞は、類表皮癌細胞、大腸腺癌細胞、頭頸部扁平上皮癌細胞、膀胱癌細胞、膵臓腺癌細胞、肺扁平上皮癌細胞、肺腺癌細胞、胃癌細胞、腺管膵臓腺癌細胞、卵巣明細胞腺癌細胞、卵巣腺癌細胞、結腸腺癌細胞、直腸腺癌細胞、食道癌細胞、胃癌細胞、非小細胞肺癌細胞、小細胞肺癌細胞、子宮内膜癌細胞、前立腺腺癌細胞、甲状腺癌細胞、乳癌細胞、子宮頚癌細胞、腎細胞癌細胞、精巣癌細胞、および外陰扁平上皮癌細胞から選択される。

【0061】

本開示は、ＣＤ４７結合ドメインおよびＥＧＦＲ結合ドメイン（本明細書に記載される）を含む多特異性抗体を含む医薬組成物を提供する。

【0062】

本開示は、癌を有する対象を処置する方法であって、ＣＤ４７結合ドメインおよびＥＧＦＲ結合ドメイン（本明細書に記載される）を含む多特異性抗体を含む医薬組成物を対象に投与する工程を含む方法を提供する。いくつかの実施形態において、癌は、類表皮癌、大腸腺癌、頭頸部扁平上皮癌、膀胱癌、膵臓腺癌、肺扁平上皮癌、肺腺癌、胃癌、腺管膵臓腺癌、卵巣明細胞癌、卵巣腺癌、結腸腺癌、直腸腺癌、食道癌、胃癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、子宮内膜癌、前立腺腺癌、甲状腺癌、乳癌、子宮頚癌、腎細胞癌、精巣癌、または外陰扁平上皮癌である。

【0063】

参照による組み込み
本明細書で言及されるすべての刊行物、特許、および特許出願は、個々の刊行物、特許、または特許出願が参照により組み込まれることが具体的かつ個別に示されている場合と同じ程度に、参照により本明細書に組み込まれる。参照により組み込まれる刊行物および特許または特許出願が、本明細書に含まれる開示と矛盾する範囲において、本明細書は、そのような矛盾する資料に取って代わり、および／または優先されることが意図される。

【図面の簡単な説明】

【0064】

本発明の新規な特徴は、添付の特許請求の範囲に詳細に記載されている。本発明の特徴および利点のより良い理解は、本発明の原理が利用される例示的な実施形態を示す以下の詳細な説明、および添付の図面（本明細書では「図面（Ｆｉｇｕｒｅ）および（ＦＩＧ．）」とも称される）を参照することによって得られるであろう。

【図1A】例示的な３鎖、ノブイントゥホール、ＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭまたはＣＤ４７ｘＥＧＦＲ二重特異性抗体を示す。

【図1B】ＴＣＲ－キメラ抗体フォーマットにおける例示的な４鎖、ノブイントゥホール、ＣＤ４７×ＥｐＣＡＭまたはＣＤ４７×ＥＧＦＲ二重特異性抗体を示す。

【図2A】ヒトＣＤ４７（図２Ａ）およびヒトＥｐＣＡＭ組換えタンパク質（図２Ｂ）に対する例示的なＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ二重特異性抗体のＥＬＩＳＡ結合を示す。抗体の両アームは、それぞれの標的抗原に強く結合することが示された。

【図2B】ヒトＣＤ４７（図２Ａ）およびヒトＥｐＣＡＭ組換えタンパク質（図２Ｂ）に対する例示的なＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ二重特異性抗体のＥＬＩＳＡ結合を示す。抗体の両アームは、それぞれの標的抗原に強く結合することが示された。

【図3A】ＣＤ４７＋のみのＲａｊｉ腫瘍細胞に対する非常に弱いＳＩＲＰα遮断活性（図３Ａ）を有するが、ＥｐＣＡＭ＋／ＣＤ４７＋ＨＣＴ１５腫瘍細胞に対する強力な遮断活性（図３Ｂ）を有する例示的なＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ二重特異性抗体（「ＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ＿ｖ５」）を示す。

【図3B】ＣＤ４７＋のみのＲａｊｉ腫瘍細胞に対する非常に弱いＳＩＲＰα遮断活性（図３Ａ）を有するが、ＥｐＣＡＭ＋／ＣＤ４７＋ＨＣＴ１５腫瘍細胞に対する強力な遮断活性（図３Ｂ）を有する例示的なＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ二重特異性抗体（「ＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ＿ｖ５」）を示す。

【図4】ＥｐＣＡＭ＋／ＣＤ４７＋腫瘍細胞に対する強力な抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）活性を有する例示的なＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ二重特異性抗体（「ＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ＿ｖ５」）を示す。

【図5】ＥｐＣＡＭ＋／ＣＤ４７＋腫瘍細胞に対する強力な抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を有する例示的なＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ二重特異性抗体（「ＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ＿ｖ５」）を示す。

【図6A】平均蛍光強度ＭＦＩ（図６Ａ）および選択的結合の％（図６Ｂ）によって測定される参照抗体「ＢＭＫ－１」（本明細書に記載されるものなど）の結合と比較した、例示的なＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ二重特異性抗体（ＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ＿ｖ５）の赤血球（ＲＢＣ）結合の減少を示す。図６Ｃに示すように、「ＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ＿ｖ５」二重特異性抗体の処理では赤血球凝集は観察されなかった。

【図6B】平均蛍光強度ＭＦＩ（図６Ａ）および選択的結合の％（図６Ｂ）によって測定される参照抗体「ＢＭＫ－１」（本明細書に記載されるものなど）の結合と比較した、例示的なＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ二重特異性抗体（ＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ＿ｖ５）の赤血球（ＲＢＣ）結合の減少を示す。図６Ｃに示すように、「ＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ＿ｖ５」二重特異性抗体の処理では赤血球凝集は観察されなかった。

【図6C】平均蛍光強度ＭＦＩ（図６Ａ）および選択的結合の％（図６Ｂ）によって測定される参照抗体「ＢＭＫ－１」（本明細書に記載されるものなど）の結合と比較した、例示的なＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ二重特異性抗体（ＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ＿ｖ５）の赤血球（ＲＢＣ）結合の減少を示す。図６Ｃに示すように、「ＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ＿ｖ５」二重特異性抗体の処理では赤血球凝集は観察されなかった。

【図7】参照「ＢＭＫ－１」（本明細書に記載されるものなど）および「ＶＩＲ４７．Ｖ８」と比較して、例示的なＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ二重特異性抗体（「ＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ＿ｖ５」）のＴ細胞結合が少ないことを示す。

【図8A】より低用量でさえ、参照抗体「ＢＭＫ－１」および「ＢＭＫ－２」（本明細書に記載されるものなど）よりも優れた、例示的なＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ二重特異性抗体（「ＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ＿ｖ５」）によるＯＥ－１９モデルにおける完全な腫瘍阻害を示す。

【図8B】「ＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ＿ｖ５」二重特異性抗体がＫＡＴＯＩＩＩモデルにおいて完全な腫瘍退縮を誘導し、参照抗体：単一特異性ＥｐＣＡＭ ｍＡｂ（ｍＡｂ００２－１１）、ＣＤ４７ ｍＡｂ（「ＶＩＲ４７．Ｖ８」）、「ＢＭＫ－１」および「ＢＭＫ－２」（本明細書に記載されるものなど）よりも優れた有効性を示したことを示す。二重特異性抗体群のすべてのマウスには、最後の投与の１０日後でさえ腫瘍がなかった。

【図9A】ヒトＥＧＦＲ（図９Ａ）およびヒトＣＤ４７（図９Ｂ）組換えタンパク質での例示的なＣＤ４７×ＥＧＦＲ二重特異性抗体「パニツムマブ×ＶＩＲ４７．Ｖ８」のＥＬＩＳＡ結合を示す。

【図9B】ヒトＥＧＦＲ（図９Ａ）およびヒトＣＤ４７（図９Ｂ）組換えタンパク質での例示的なＣＤ４７×ＥＧＦＲ二重特異性抗体「パニツムマブ×ＶＩＲ４７．Ｖ８」のＥＬＩＳＡ結合を示す。

【図10A】大腸癌異種移植片モデルＤＬＤ－１における、単剤としての、および、オキサリプラチン（図１０Ａ）、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ、図１０Ｂ）、またはイリノテカン（図１０Ｃ）と組み合わせた、ＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ＿ｖ５二重特異性抗体の抗腫瘍活性を示す。

【図10B】大腸癌異種移植片モデルＤＬＤ－１における、単剤としての、および、オキサリプラチン（図１０Ａ）、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ、図１０Ｂ）、またはイリノテカン（図１０Ｃ）と組み合わせた、ＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ＿ｖ５二重特異性抗体の抗腫瘍活性を示す。

【図10C】単剤としての、および、大腸癌異種移植片モデルＤＬＤ－１においてオキサリプラチン（図１０Ａ）、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ、図１０Ｂ）、またはイリノテカン（図１０Ｃ）と組み合わせた、ＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ＿ｖ５二重特異性抗体の抗腫瘍活性を示す。

【図11A】大腸癌異種移植モデルＤＬＤ－１において、イリノテカンと、ベンチマークＣＤ４７抗体（ＢＭＫ－１）、抗ＣＤ４７二価抗体（ＶＩＲ４７．Ｖ８）、ならびに２つのＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ二重特異性抗体ＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ＿ｖ５およびＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ＿ｖ６とを組み合わせた抗腫瘍活性を示す。

【図11B】大腸癌異種移植モデルＤＬＤ－１において、イリノテカンと、ベンチマークＣＤ４７抗体（ＢＭＫ－１）、抗ＣＤ４７二価抗体（ＶＩＲ４７．Ｖ８）、ならびに２つのＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ二重特異性抗体ＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ＿ｖ５およびＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ＿ｖ６とを組み合わせた抗腫瘍活性を示す。

【図12】肝細胞癌異種移植片モデルＨｅｐ３Ｂ２．１－７における、単剤としての、または組み合わせでのイリノテカンおよびＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ二重特異性抗体ＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ＿ｖ５の抗腫瘍活性を示す。

【図13A】ヒトＥｐＣＡＭ（図１３Ａ）およびヒトＣＤ４７組換えタンパク質（図１３Ｂ）でのＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ二重特異性抗体ｖ９、ｖ１０、ｖ１１のＥＬＩＳＡ結合を示す。抗体の両方のアームは、それらのそれぞれの標的抗原に強く結合することが示された。

【図13B】ヒトＥｐＣＡＭ（図１３Ａ）およびヒトＣＤ４７組換えタンパク質（図１３Ｂ）でのＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ二重特異性抗体ｖ９、ｖ１０、ｖ１１のＥＬＩＳＡ結合を示す。抗体の両方のアームは、それらのそれぞれの標的抗原に強く結合することが示された。

【発明を実施するための形態】

【0065】

本発明の様々な実施形態が本明細書中で示され、記載されているが、このような実施形態はほんの一例として提供されるものであることは、当業者に明らかであろう。多くの変更、変化、および置換は、本発明から逸脱することなく当業者に理解され得る。本明細書に記載される本発明の実施形態の様々な代案が利用され得ることを理解されたい。

【0066】

インテグリン関連タンパク質（ＩＡＰ）としても知られる分化クラスター４７（ＣＤ４７）は、多数の血液癌および固形腫瘍において過剰発現される約５０ｋＤａの免疫グロブリンスーパーファミリー膜糖タンパク質である。高いＣＤ４７発現はしばしば、より侵襲性の疾患およびより不良な臨床転帰と相関する。

【0067】

ＣＤ４７＋細胞の表面上のＣＤ４７は、マクロファージおよび樹状細胞などの自然免疫系および適応免疫系の細胞上に発現されるシグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰα）と相互作用する。この相互作用は、食作用を阻害し、それによってＣＤ４７＋細胞が免疫監視を回避することを可能にする「ｄｏｎ’ｔ ｅａｔ ｍｅ」シグナルを送る。

【0068】

これらのデータは、ＣＤ４７が免疫チェックポイントとして役立ち得ること、およびＣＤ４７－ＳＩＲＰα相互作用の遮断が、「ｄｏｎ’ｔ ｅａｔ ｍｅ」シグナルのスイッチを切ることによって治療的価値を有し得ることを示唆する。したがって、ＣＤ４７を遮断することは、ＣＤ４７－ＳＩＲＰαシグナル伝達経路を中断することがｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏでヒト癌に対する抗腫瘍活性を促進することを示す多くの研究とともに、有望な治療戦略として出現した。

【0069】

いくつかの抗ＣＤ４７モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、急性骨髄性白血病細胞、非ホジキンリンパ腫細胞、乳癌細胞、および卵巣癌細胞の食作用を増加させることが示されている。臨床試験において、ＣＤ４７ ｍＡｂは、他の治療用抗体の抗腫瘍活性を増強した。少なくとも６つの抗ＣＤ４７ ｍＡｂおよび３つのＳＩＲＰα融合タンパク質が、ヒト血液悪性腫瘍および固形腫瘍の処置のための第Ｉ相または第ＩＩ相の臨床試験で進行中である。

【0070】

抗ＣＤ４７ ｍＡｂの有効性は、ＣＤ４７も発現する赤血球（ＲＢＣ）との相互作用によって制限される。ＲＢＣは、抗ＣＤ４７抗体を隔離するシンクとして作用し、それによって、それらが悪性のＣＤ４７発現（ＣＤ４７＋）細胞に結合するのを防ぐ。さらに、ＲＢＣへの抗ＣＤ４７ ｍＡｂ結合は、赤血球凝集およびＲＢＣの溶解をもたらし、貧血を生じさせる。したがって、腫瘍外（ｏｆｆ－ｔｕｍｏｒ）効果を低減させつつ、ＣＤ４７＋細胞によって媒介される悪性疾患を処置する改善された方法が必要とされている。

【0071】

ＣＤ２３６としても知られている上皮細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ）は、同種親和性のＣａ２＋非依存性細胞間接着分子として機能する約３５ｋＤａのＩ型膜貫通糖タンパク質である。ＥｐＣＡＭはさらに、細胞シグナル伝達、増殖、分化、臓器形態の形成および維持にも関与する。その過剰発現は、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、肺癌、結腸癌、腎臓癌、および胃癌などの多くの転移性上皮癌において見られ、免疫療法のための理想的な標的としてのその可能性に光を当てている（Ｓｐｉｚｚｏ ｅｔ．ａｌ，Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ Ｔｒｅａｔ ８６：２０７－２１３）。

【0072】

ＥｒｂＢ－１またはＨＥＲ１としても知られている上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）は、細胞外タンパク質リガンドの上皮成長因子ファミリーのメンバーの受容体である膜貫通タンパク質である。ＥＧＦＲは、４つの密接に関連する受容体チロシンキナーゼ：ＥＧＦＲ、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、Ｈｅｒ３、およびＨｅｒ４のサブファミリーである、受容体のＥｒｂＢファミリーのメンバーである。ＥＧＦＲの過剰発現は、肺の腺癌、大腸癌、神経膠芽腫、および頭頸部の上皮腫瘍を含む多くの癌と関連している。

【0073】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に対する標的化部分およびＥｐＣＡＭに対する標的化部分、またはそれらの組み合わせを含む、抗ＣＤ４７抗体、抗ＥｐＣＡＭ抗体、および多特異性抗体が本明細書に開示される。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に対する第１の標的化部分と、ＥｐＣＡＭに対する第２の標的化部分とを含む多特異性（例えば、二重特異性）抗体も本明細書に記載される。さらなる実施形態において、抗ＣＤ４７抗体、抗ＥｐＣＡＭ抗体、および多特異性抗体（例えば、二重特異性ＣＤ４７／ＥｐＣＡＭ抗体）を用いて癌を治療する方法が本明細書にさらに記載される。

【0074】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に対する標的化部分およびＥＧＦＲに対する標的化部分、またはそれらの組み合わせを含む、抗ＣＤ４７抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、および多特異性抗体が本明細書に開示される。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に対する第１の標的化部分と、ＥＧＦＲに対する第２の標的化部分とを含む多特異性（例えば、二重特異性）抗体も本明細書に記載される。さらなる実施形態において、抗ＣＤ４７抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、および多特異性抗体（例えば、二重特異性ＣＤ４７／ＥＧＦＲ抗体）を用いて癌を処置する方法が本明細書にさらに記載される。

【0075】

定義
他に定義されていない限り、本明細書で使用されているすべての技術的および科学的な用語は、主張された主題が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されているものと同じ意味を有する。前述の一般的な記載および以下の詳細な記載は、例示的かつ説明的なものに過ぎず、任意の主題に限定されるものではないことが理解されよう。本明細書に使用される段落の見出しは、組織化するためのものに過ぎず、記載される主題を制限するものと解釈されてはならない。本出願では、単数形の使用は、特に明記されない限り、複数形を含む。本明細書と添付の特許請求の範囲では、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、他にその内容が明確に指示しない限り、複数の指示対象を含むということに留意されたい。本出願では、「または」の使用は、特に明記されない限り、「および／または」を意味する。さらに、「含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」という用語の使用は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「含まれる（ｉｎｃｌｕｄｅｄ）」などの他の形態と同様、限定的なものではない。

【0076】

本明細書で使用されるように、範囲と量は、「約」特定の値または範囲として表現可能である。「約」は正確な量も含んでいる。したがって、「約５μＬ」は、「約５μＬ」と「５μＬ」も意味する。一般に、「約」という用語は、実験誤差内であると予想されることになる量を含んでいる。他に示されない限り、本明細書および請求項で使用される成分の量、反応条件などを表現する数はすべて、「約」という用語によってすべての例において修飾されているものとして理解されるべきである。したがって、反対の指示がない限り、本明細書および添付の特許請求の範囲に記載される数値パラメータは、本出願によって得ようとする所望の特性に応じて変動し得る近似値である。概して、重量、時間、用量などの量などの測定可能な値に言及する場合に本明細書で使用される「約」という用語は、特定された量から、一例では±２０％または±１０％、別の例では±５％、別の例では±１％、さらに別の例では±０．１％の変動を包含することを意味し、したがって、開示される方法を実施するには、変形形態が適切である。

【0077】

本明細書で使用される章の見出しは、構成上の目的のためにすぎず、記載される主題を限定するものと解釈されるべきではない。

【0078】

「抗体」および「免疫グロブリン」（Ｉｇ）は、同じ構造特徴を有する糖タンパク質である。これらの用語は同義的に使用される。いくつかの例では、免疫グロブリンの抗原特異性は既知である。

【0079】

「抗体」という用語は、最も広い意味で使用され、完全に組み立てられた抗体、抗原を結合することができる抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、単鎖抗体、ダイアボディ、抗体キメラ、ハイブリッド抗体、二重特異性抗体など）、および前述のものを含む組換えペプチドを包含する。

【0080】

本明細書で使用されるように、「モノクローナル抗体」および「ｍＡｂ」という用語は、抗体の実質的に均質な集団から得られる抗体を指し、すなわち、集団を含む個々の抗体は、少量で存在することもある起こりうる自然発生変異を除いて、同一である。

【0081】

「天然の（Ｎａｔｉｖｅ）抗体」および「天然の免疫グロブリン」は通常、２つの同一の軽（Ｌ）鎖と２つの同一の重（Ｈ）鎖で構成される、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。各軽鎖は１つの共有結合のジスルフィド結合により重鎖に結合するが、その一方で、ジスフィルド結合の数は、異なる免疫グロブリンのアイソタイプの重鎖の中で変動する。重鎖と軽鎖はそれぞれ規則的に距離をおいた鎖内ジスルフィド架橋も有する。各重鎖は一方の端部に可変ドメイン（ＶＨ）を有し、その後に多くの定常ドメインを有する。各軽鎖は一方の端部に可変ドメイン（ＶＬ）を有し、もう一方の端部に定常ドメインを有し、軽鎖の定常ドメインは重鎖の第１の定常ドメインとアラインメントされ、軽鎖可変ドメインは重鎖の可変ドメインとアラインメントされる。特定のアミノ酸残基は、軽鎖および重鎖の可変ドメインの間に界面を形成すると考えられている。

【0082】

本明細書で使用されるように、「可変」という用語は、可変ドメインの特定の部分が抗体中の配列で大きく異なるという事実を指す。可変領域は抗原結合特異性を付与する。しかしながら、可変性は抗体の可変ドメイン全体に均一に分布していない。可変性は、双方とも軽鎖および重鎖の可変ドメインにある、相補性決定領域（ＣＤＲ）または超可変領域と呼ばれる３つのセグメントに集中している。可変ドメインのより高度に保存された部分は、フレームワーク（ＦＲ）領域と呼ばれる。天然の重鎖および軽鎖の可変ドメインはそれぞれ、４つのＦＲ領域を含み、その大部分がβ－プリーツシート構成を採用し、ループ接続を形成する３つのＣＤＲによって接続され、場合によっては、β－プリーツシート構成の一部を形成する。各鎖におけるＣＤＲは、ＦＲ領域によって近接してともに保持され、他の鎖のＣＤＲとともに、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（１９９１） ＮＩＨ ＰｕｂＬ．Ｎｏ．９１－３２４２，Ｖｏｌ．Ｉ，ｐａｇｅｓ ６４７－６６９を参照）。定常ドメインは、抗体を抗原に結合することに直接関与しないが、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合、抗体依存性細胞傷害への抗体の関与、補体依存性細胞傷害の導入、および肥満細胞脱顆粒などの様々なエフェクター機能を呈する。

【0083】

本明細書で使用されるように、「超可変領域」という用語は、本明細書で使用される際、抗原結合を担う抗体のアミノ酸残基を指す。超可変領域は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」からのアミノ酸残基（すなわち、軽鎖可変ドメイン中の残基２４－３４（Ｌ１）、５０－５６（Ｌ２）、および８９－９７（Ｌ３）、ならびに重鎖可変ドメイン中の３１－３５（Ｈ１）、５０－６５（Ｈ２）、および９５－１０２（Ｈ３）；Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（１９９１） Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．）、ならびに／または、「超可変ループ」からのアミノ酸残基（すなわち、軽鎖可変ドメイン中の残基２６－３２（Ｌ１）、５０－５２（Ｌ２）、および９１－９６（Ｌ３）、ならびに重鎖可変ドメイン中の（Ｈ１）、５３－５５（Ｈ２）、および９６－１０１（１３）；Ｃｌｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１－９１７）を含む。「フレームワーク」または「ＦＲ」残基は、本明細書でみなされるように、超可変領域残基以外の可変ドメイン残基である。

【0084】

「抗体フラグメント」は、無傷の抗体の一部、好ましくは、無傷の抗体の抗原結合または可変領域を含む。抗体フラグメントの例は、Ｆａｂ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖフラグメント、ダイアボディ、線状の抗体（Ｚａｐａｔａ ｅｔ ａｌ．（１９９５） Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１０：１０５７－１０６２）、単鎖抗体分子、ならびに、抗体フラグメントから形成された多特異性抗体を含む。抗体のパパイン消化により、それぞれが単一の抗原結合部位を有する「Ｆａｂ」フラグメントと呼ばれる２つの同一の抗原結合フラグメントと、その名前が容易に結晶化する能力を反映している残基「Ｆｃ」フラグメントとが生成される。ペプシン処理により、２つの抗原結合部位を有するとともに依然として抗原を架橋結合することができるＦ（ａｂ’）２フラグメントが生成される。

【0085】

「Ｆｖ」は、完全な抗原認識および結合部位を含む最小限の抗体フラグメントである。この領域は、緊密な非共有結合的会合における、１つの重鎖可変ドメインと１つの軽鎖可変ドメインの二量体からなる。各可変ドメインの３つのＣＤＲが相互作用して、ＶＨ－ＶＬ二量体の表面上の抗原結合部位を定義するのは、この構成においてである。まとめて、６つのＣＤＲが抗体に対する抗原結合特異性を与える。しかしながら、結合部位全体よりも親和性は低いが、１つの可変ドメイン（または、抗原に特異的なわずか３つのＣＤＲしか含まないＦｖの半分）でも、抗原を認識して結合する能力を有している。

【0086】

Ｆａｂフラグメントは、軽鎖の定常ドメインおよび重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）も含む。Ｆａｂフラグメントは、抗体ヒンジ領域の１つ以上のシステインを含む、重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端での少数の残基の添加により、Ｆａｂ’フラグメントとは異なる。Ｆａｂ’－ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基が遊離チオール基を有しているＦａｂ’に関する本明細書での名称である。Ｆａｂ’フラグメントは、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントの重鎖ジスルフィド架橋の還元により生成される。抗体フラグメントの他の化学的カップリングも知られている。

【0087】

任意の脊椎動物種の抗体（免疫グロブリン）の「軽鎖」は、定常領域のアミノ酸配列に基づき、カッパ（κ）およびラムダ（λ）と呼ばれる、２つの明らかに異なるタイプのうちの１つに割り当てることができる。

【0088】

重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列によって、免疫グロブリンは異なるクラスに割り当てることができる。ヒト免疫グロブリンの５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、およびＩｇＹがあり、これらのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２にさらに分けてもよい。異なるクラスの免疫グロブリンに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれアルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、およびミューと呼ばれる。様々なクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造および三次元構造は周知である。異なるアイソタイプは異なるエフェクター機能を有する。例えば、ヒトＩｇＧ１とＩｇＧ３のアイソタイプは、ＡＤＣＣ（抗体依存性細胞媒介性細胞傷害）活性を有している。

【0089】

本明細書に開示される抗体のＣＤＲ配列、または本明細書に開示される抗ＣＤ４７もしくは抗ＩＣＡＭ１結合ドメイン配列は、（ｉ）Ｋａｂａｔ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇシステム（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（１９７ ） Ａｎｎ．ＮＹ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１９０：３８２－３９１ ａｎｄ，Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（１９９１） Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２）、または、（ｉｉ）本明細書では「Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＲＤ」とも呼ばれる、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングスキーム（例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，１９８７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１－９１７；Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２７３：９２７－９４８；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：７９９－８１７；Ｔｒａｍｏｎｔａｎｏ Ａ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５（１）：１７５－８２；および、Ｕ．Ｓ．Ｐａｔｅｎｔ Ｎｏ．７，７０９，２２６を参照）；または、（ｉｉｉ）例えば、Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．－Ｐ．，１９９９，Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｓｔ，７：１３２－１３６、およびＬｅｆｒａｎｃ，Ｍ．－Ｐ．ｅｔ ａｌ，１９９９，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２７：２０９－２１２に記載されるようなＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）ナンバリングシステム（「ＩＭＧＴ ＣＤＲ」）；または、（ｉｖ）ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ，１９９６，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２６２：７３２－７４５に従って、定義または決定されてもよい。例えば、Ｍａｒｔｉｎ，Ａ．，“Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｄｏｍａｉｎｓ，”ｉｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ ａｎｄ Ｄｉｉｂｅｌ，ｅｄｓ．，Ｃｈａｐｔｅｒ ３１，ｐｐ．４２２－４３９，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－ Ｖｅｒｌａｇ，Ｂｅｒｌｉｎ （２００１）をさらに参照。

【0090】

Ｋａｂａｔ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇシステムに関して、抗体重鎖分子内のＣＤＲは、典型的には、３５（Ｋａｂａｔ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇスキームでは、３５Ａおよび３５Ｂと呼ばれる）後に１つまたは２つの追加のアミノ酸を任意選択で含むことができるアミノ酸位３１～３５（ＣＤＲ１）、アミノ酸位５０～６５（ＣＤＲ２）、およびアミノ酸位９５～１０２（ＣＤＲ３）に存在する。Ｋａｂａｔ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇシステムを使用すると、抗体軽鎖分子内のＣＤＲは典型的には、アミノ酸位２４～３４（ＣＤＲ１）、アミノ酸位５０～５６（ＣＤＲ２）、およびアミノ酸位８９～９７（ＣＤＲ３）に存在する。当業者に周知であるように、Ｋａｂａｔ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇシステムを使用すると、抗体可変ドメインの実際の線形アミノ酸配列は、ＦＲおよび／またはＣＤＲの短縮または延長に起因して、より少ないアミノ酸または追加のアミノ酸を含むことができ、そのため、アミノ酸のＫａｂａｔナンバーは、その線形アミノ酸番号と必ずしも同じわけではない。

【0091】

「キメラ」抗体という用語は、重鎖および／または軽鎖の一部が特定の供給源または種に由来し、重鎖および／または軽鎖の残りの部分が異なる供給源または種に由来する抗体を指す。

【0092】

本明細書で使用されるような「ヒト抗体」または「ヒト化抗体」という用語は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域を有する抗体を含むように意図している。ヒト抗体は当技術分野において周知である（ｖａｎ Ｄｉｊｋ，Ｍ．Ａ．，ａｎｄ ｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ，Ｊ．Ｇ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．５（２００１）３６８－３７４）。いくつかの例では、ヒト抗体はさらに、免疫化時に、内因性免疫グロブリン産生の非存在下でヒト抗体の全レパートリーまたは選択をもたらすことができるトランスジェニック動物（例えば、マウス）において産生される。このような生殖系列変異体マウスにおけるヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子アレイの移入は、抗原投与時にヒト抗体の産生をもたらす（例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ，Ａ．ｅｔ ａｌ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０（１９９３）２５５１－２５５５；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ，Ａ．，ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ ３６２（１９９３）２５５－２５８；，ｅｔ ａｌ，Ｙｅａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．７（１９９３）３３－４０を参照）。さらなる例において、ヒト抗体はさらに、ファージディスプレイライブラリーにおいて産生される（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ，Ｈ．Ｒ．，ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｇ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７（１９９２）３８１－３８８；，ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２（１９９１）５８１－５９７）。ＣｏｌｅらおよびＢｏｅｒｎｅｒらの技術は、ヒトモノクローナル抗体（Ｃｏｌｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，ｐ．７７（１９８５）；およびＢｏｅｒｎｅｒ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７（１９９１）８６－９５）の調製にも利用可能である。

【0093】

本明細書で使用されるような「組換えヒト抗体」という用語は、ＮＳＯもしくはＣＨＯ細胞などの宿主細胞から、またはヒト免疫グロブリン遺伝子についてトランスジェニックな動物（例えば、マウス）から単離された抗体、あるいは宿主細胞にトランスフェクトされた組換え発現ベクターを使用して発現された抗体などの、組換え手段によって調製、発現、作製、または単離されたすべてのヒト抗体を含むことを意図している。このような組換えヒト抗体は、再構成された形態の可変領域および定常領域を有する。場合によっては、組換えヒト抗体は、インビボ体細胞超変異に晒されている。したがって、組換え抗体のＶＨおよびＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列ＶＨおよびＶＬ配列に由来し、関連しているが、ｉｎ ｖｉｖｏでヒト抗体生殖系列レパートリー内に天然には存在し得ない配列である。

【0094】

本明細書で使用される「価」という用語は、抗原結合分子中の特定の数の結合部位の存在を意味する。したがって、「二価」、「四価」、および「六価」という用語は、抗原結合分子においてそれぞれ２つの結合部位、４つの結合部位、および６つの結合部位の存在を意味する。本発明による二重特異性抗体は、少なくとも「二価」であり、「三価「または「多価」（例えば、「四価」または「六価」）であり得る。特定の態様では、本発明の抗体は、２つ以上の結合部位を有し、二重特異性である。すなわち、抗体は、２つを超える結合部位（すなわち、抗体は三価または多価である）が存在する場合でさえ、二重特異性であり得る。特に、本発明は、特異的に結合する各抗原に対して１つの結合部位を有する二重特異性の二価抗体に関する。

【0095】

「二重特異性」という用語は、抗体が、２つの異なる抗原決定基、例えば、異なる抗原に結合する抗体重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と抗体軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）のペアによってそれぞれ形成される２つの結合部位に特異的に結合することができることを意味する。このような二重特異性抗体は、１＋１フォーマットである。他の二重特異性抗体フォーマットは、２＋１フォーマット（第１の抗原またはエピトープに対する２つの結合部位、および第２の抗原またはエピトープに対する１つの結合部位を含む）、または２＋２フォーマット（第１の抗原またはエピトープに対する２つの結合部位、および第２の抗原またはエピトープに対する２つの結合部位を含む）である。典型的には、二重特異性抗体は、それぞれが異なる抗原決定基に特異的である２つの抗原結合部位を含む。「多特異性」という用語は、抗体が、２つ以上の異なる抗原決定基、例えば、異なる抗原に対して抗体重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と抗体軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）のペアによってそれぞれ形成される少なくとも２つの結合部位に特異的に結合することができることを意味する。

【0096】

「個体」、「対象」、および「患者」という用語は、本明細書では交換可能に使用され、任意の哺乳動物を指す。いくつかの実施形態において、哺乳動物はヒトである。いくつかの実施形態において、哺乳動物は非ヒトである。いかなる用語も、保健従事者（例えば、医師、正看護師、臨床看護師、医師助手、看護助手、またはホスピスの職員）の監督（例えば、常時または断続的）を特徴とする状況を必要とするものでなければ、こうした状況に限定されるものでもない。

【0097】

本明細書で使用されるように、配列に対する「パーセント（％）アミノ酸配列同一性」という用語は、最大のパーセント配列同一性を達成するために、必要に応じて配列をアラインメントしてギャップを導入した後に、かつ、いかなる保存的置換も配列同一性の一部として考慮することなく、特定の配列中のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基の割合として定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定する目的のためのアラインメントは、当技術分野内の様々な方法で、例えば、ＥＭＢＯＳＳ ＭＡＴＣＨＥＲ、ＥＭＢＯＳＳ ＷＡＴＥＲ、ＥＭＢＯＳＳ ＳＴＲＥＴＣＨＥＲ、ＥＭＢＯＳＳ ＮＥＥＤＬＥ、ＥＭＢＯＳＳ ＬＡＬＩＧＮ、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを用いて達成可能である。当業者は、比較されている配列の完全長での最大のアラインメントを達成するために必要とされるあらゆるアルゴリズムを含む、アラインメントを測定するための適切なパラメータを決定することができる。

【0098】

ＡＬＩＧＮ－２がアミノ酸配列比較に使用される状況では、所与のアミノ酸配列Ｂに対する所与のアミノ酸配列Ａの％アミノ酸配列同一性（所与のアミノ酸配列Ｂに対して特定の％アミノ酸配列同一性を有するか、または含む所与のアミノ酸配列Ａとして代替的に表現され得る）は、以下のように、１００×分数Ｘ／Ｙで計算され、ここで、Ｘは、配列アラインメントプログラムＡＬＩＧＮ－２によって、そのプログラムのＡとＢのアラインメントにおいて同一のマッチとしてスコア化されたアミノ酸残基の数であり、ここで、Ｙは、Ｂにおけるアミノ酸残基の総数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合、Ａ対Ｂの％アミノ酸配列同一性は、Ｂ対Ａの％アミノ酸配列同一性と等しくないことを理解されたい。特段の定めのない限り、ＡＬＩＧＮ－２コンピュータプログラムを使用して、直前のパラグラフに記載されているように、本明細書で使用される％アミノ酸配列同一性の値がすべて得られる。

【0099】

「癌」および「腫瘍」という用語は本明細書では交換可能に使用され、すべてのタイプの発癌プロセスおよび／または癌性増殖を包含する。実施形態において、癌には、原発腫瘍、および転移組織または悪性形質転換細胞、組織、または器官が含まれる。実施形態において、癌は、癌のすべての病理組織診断およびステージ、例えば、侵襲性／重症度のステージを包含する。実施形態において、癌は、再発癌および／または耐性癌を含む。

【0100】

本明細書で使用される場合、「処置」（およびその文法的変形、例えば「処置する（ｔｒｅａｔ）」または「処置すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」）は、処置される個体の自然経過を変更する試みにおける臨床的介入を指し、予防のために、または臨床病理の経過中に実施することができる。処置の望ましい効果としては、限定されないが、疾患の発生または再発の予防、症状の緩和、疾患の任意の直接的または間接的な病理学的結果の減少、転移の予防、疾患進行速度の減少、疾患状態の改善または緩和、および寛解または予後の改善が挙げられる。いくつかの実施形態において、本発明の分子は、疾患の発症を遅らせるため、または疾患の進行を遅らせるために使用される。

【0101】

本明細書で使用する場合、「抗体依存性細胞傷害」および「ＡＤＣＣ」という用語は、非特異的細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、およびマクロファージ）が標的細胞上の結合抗体を認識し、その後、標的細胞の溶解を引き起こす細胞媒介反応を指す。

【0102】

抗ＣＤ４７結合ドメイン
特定の実施形態において、抗ＣＤ４７結合ドメインが本明細書に開示される。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、ヒトまたは操作されたヒトＣＤ４７結合ドメインである。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、ＣＤ４７に特異的に結合する抗体、またはその機能的フラグメントもしくは機能的変異体を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に特異的に結合する抗体、またはその機能的フラグメントもしくは機能的変異体は、抗ＣＤ４７重鎖および抗ＣＤ４７軽鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ４７重鎖は、抗ＣＤ４７重鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ４７重鎖可変ドメインは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４重鎖の可変ドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ４７軽鎖は、抗ＣＤ４７軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ４７軽鎖可変ドメインは、カッパまたはラムダ軽鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ４７重鎖可変ドメインは、ＩｇＧ１重鎖の可変ドメインを含み、抗ＣＤ４７軽鎖可変ドメインはカッパ軽鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ４７重鎖可変ドメインは、ＩｇＧ１重鎖の可変ドメインを含み、抗ＣＤ４７軽鎖可変ドメインはラムダ軽鎖を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、抗原結合フラグメント（Ｆａｂ）を含む。

【0103】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、３つの重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）である、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ここで、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、表１に記載されるものから選択されるアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～２個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～１個のアミノ酸修飾を含む。

【0104】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号１～３のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0105】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号４～６のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0106】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号７～９のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0107】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号１０～１２のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0108】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号１３～１５のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0109】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号１６～１８のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0110】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号１９～２１のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0111】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２２～２４のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0112】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２５～２７のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0113】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２８～３０のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0114】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号３１～３３のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0115】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号３４～３６のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0116】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号３７～３９のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0117】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号４０～４２のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0118】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号４３～４５のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0119】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号４６～４８のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0120】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号４９～５１のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0121】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号５２～５４のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0122】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号５５～５７のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0123】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号５８～６０のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0124】

【表1】

【0125】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、３つの軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）である、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３を含み、ここで、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、表２に記載されるものから選択されるアミノ酸配列を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～２個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～１個のアミノ酸修飾を含む。

【0126】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号６１～６３のアミノ酸配列を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0127】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号６４～６６のアミノ酸配列を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0128】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号６７～６９のアミノ酸配列を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0129】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号７０～７２のアミノ酸配列を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0130】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号７３～７５のアミノ酸配列を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0131】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号７６～７８のアミノ酸配列を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0132】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号７９～８１のアミノ酸配列を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0133】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号８２～８４のアミノ酸配列を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0134】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号８５～８７のアミノ酸配列を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0135】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号８８～９０のアミノ酸配列を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0136】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号９１～９３のアミノ酸配列を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0137】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号９４～９６のアミノ酸配列を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0138】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号９７～９９のアミノ酸配列を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0139】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号１００～１０２のアミノ酸配列を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0140】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号１０３～１０５のアミノ酸配列を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0141】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号１０６～１０８のアミノ酸配列を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0142】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号１０９～１１１のアミノ酸配列を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0143】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号１１２～１１４のアミノ酸配列を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0144】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号１１５～１１７のアミノ酸配列を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0145】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号１１８～１２０のアミノ酸配列を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0146】

【表2】

【0147】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号１～３のアミノ酸配列を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号６１～６３のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0148】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号４～６のアミノ酸配列を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号６４～６６のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0149】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号７～９のアミノ酸配列を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号６７～６９のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0150】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号１０～１２のアミノ酸配列を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号７０～７２のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0151】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号１３～１５のアミノ酸配列を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号７３～７５のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0152】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号１６～１８のアミノ酸配列を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号７６～７８のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0153】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号１９～２１のアミノ酸配列を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号７９～８１のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0154】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２２～２４のアミノ酸配列を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号８２～８４のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0155】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２５～２７のアミノ酸配列を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号８５～８７のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0156】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２８～３０のアミノ酸配列を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号８８～９０のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0157】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号３１～３３のアミノ酸配列を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号９１～９３のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0158】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号３４～３６のアミノ酸配列を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号９４～９６のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0159】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号３７～３９のアミノ酸配列を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号９７～９９のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0160】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号４０～４２のアミノ酸配列を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号１００～１０２のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0161】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号４３～４５のアミノ酸配列を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号１０３～１０５のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0162】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号４６～４８のアミノ酸配列を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号１０６～１０８のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0163】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号４９～５１のアミノ酸配列を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号１０９～１１１のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0164】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号５２～５４のアミノ酸配列を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号１１２～１１４のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0165】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号５５～５７のアミノ酸配列を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号１１５～１１７のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0166】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号５８～６０のアミノ酸配列を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号１１８～１２０のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0167】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、表３に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む重鎖可変ドメインを含む。

【0168】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、配列番号１２１～１４３から選択される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む重鎖可変ドメインを含む。

【0169】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、表４に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。

【0170】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、配列番号１４４～１６４から選択される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。

【0171】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、表３に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む重鎖可変ドメインと、表４に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む。

【0172】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、配列番号１２１～１４３から選択される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号１４４～１６４から選択される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む。

【0173】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、表５に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む完全長の重鎖を含む。

【0174】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、配列番号１６５～１８８から選択される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む完全長の重鎖を含む。

【0175】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、表６に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む完全長の軽鎖を含む。

【0176】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、配列番号１８９～２１２から選択される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む完全長の軽鎖を含む。

【0177】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、表５に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む完全長の重鎖と、表６に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む完全長の軽鎖とを含む。

【0178】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、配列番号１６５～１８８から選択される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む完全長の重鎖と、配列番号１８９～２１２から選択される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む完全長の軽鎖とを含む。

【0179】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、表７に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含む。

【0180】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、配列番号２１３に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含む。

【0181】

【表3-1】

【0182】

【表3-2】

【0183】

【表4-1】

【0184】

【表4-2】

【0185】

【表5-1】

【0186】

【表5-2】

【0187】

【表5-3】

【0188】

【表5-4】

【0189】

【表6-1】

【0190】

【表6-2】

【0191】

【表6-3】

【0192】

【表7】

【0193】

【表8】

【0194】

本明細書に記載される抗ＣＤ４７結合ドメインのいくつかの実施形態において、抗ＣＤ４７結合ドメインの重鎖可変フラグメント（ＶＨ）は、第１のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）定常領域に融合しており、抗ＣＤ４７結合ドメインの軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）は、第２のＴＣＲ定常領域に融合しており、ここで、第１および第２のＴＣＲ定常領域は二量体を形成することができる。いくつかの実施形態において、ＴＣＲ定常領域は、ＴＣＲαおよびＴＣＲβ定常領域である。いくつかの実施形態において、ＶＨ－ＴＣＲ融合ポリペプチドは、ヒトＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１）Ｆｃドメインに融合される。ＷＯ２０１９／０５７１２２を参照。

【0195】

いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＣＤ４７結合ドメインは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）定常領域を含む。いくつかの実施形態において、ＴＣＲ定常領域は、ＴＣＲα定常ドメインおよびＴＣＲβ定常ドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ４７結合ドメインは、ＶＨ－ＣＤ４７ドメインおよびＶＬ－ＣＤ４７ドメインを含み、ここで、ＶＨ－ＣＤ４７ドメインは、ＴＣＲβ定常ドメインに融合しており、ＶＬ－ＣＤ４７ドメインは、ＴＣＲα定常ドメインに融合している。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ４７結合ドメインは、ＶＨ－ＣＤ４７ドメインおよびＶＬ－ＣＤ４７ドメインを含み、ＶＨ－ＣＤ４７ドメインは、重鎖（ＣＨ１）ＩｇＧドメインの第１の定常ドメインに融合しており、ＶＬ－ＣＤ４７ドメインは、軽鎖（ＣＬ）ＩｇＧドメインの定常ドメインに融合している。

【0196】

いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＣＤ４７結合ドメインは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）定常領域を含む。いくつかの実施形態において、ＴＣＲ定常領域は、ＴＣＲα定常ドメインおよびＴＣＲβ定常ドメインを含む。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＣＤ４７結合ドメインは、ＶＨ－ＣＤ４７ドメインおよびＶＬ－ＣＤ４７ドメインを含み、ここで、ＶＨ－ＣＤ４７ドメインは、ＴＣＲα定常ドメインに融合しており、ＶＬ－ＣＤ４７ドメインは、ＴＣＲβ定常ドメインに融合している。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ４７結合ドメインは、ＶＨ－ＣＤ４７ドメインおよびＶＬ－ＣＤ４７ドメインを含み、ＶＨ－ＣＤ４７ドメインは、重鎖（ＣＨ１）ＩｇＧドメインの第１の定常ドメインに融合しており、ＶＬ－ＣＤ４７ドメインは、軽鎖（ＣＬ）ＩｇＧドメインの定常ドメインに融合している。

【0197】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、表８に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含むＴＣＲ定常ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、配列番号２１４～２１８から選択される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含むＴＣＲ定常ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、表８に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含むＴＣＲα定常ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、配列番号２１４に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含むＴＣＲα定常ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、表８に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含むＴＣＲβ定常ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、配列番号２１５に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含むＴＣＲβ定常ドメインを含む。

【0198】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、表８に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含むＴＣＲα定常ドメインと、表８に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含むＴＣＲβ定常ドメインとを含む。

【0199】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、配列番号２１４に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含むＴＣＲα定常ドメインと、配列番号２１５に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含むＴＣＲβ定常ドメインとを含む。

【0200】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、配列番号２１６に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含むＴＣＲ定常ドメインを含む。

【0201】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、配列番号２１７に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含むＴＣＲ定常ドメインを含む。

【0202】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、配列番号２１８に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含むＴＣＲ定常ドメインを含む。

【0203】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインは、配列番号２１７に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含むＴＣＲ定常ドメインと、配列番号２１８に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含むＴＣＲ定常ドメインとを含む。

【0204】

いくつかの実施形態において、抗ＣＤ４７結合ドメインは完全長の抗体を含む。他の実施形態において、抗ＣＤ４７結合ドメインは、結合フラグメントを含む。いくつかの例では、抗ＣＤ４７結合ドメインは、抗体もしくはその結合フラグメント、モノクローナル抗体もしくはその結合フラグメント、キメラ抗体もしくはその結合フラグメント、ヒト化抗体もしくはその結合フラグメント、または操作された抗体もしくはその結合フラグメントを含む。場合によっては、抗ＣＤ４７結合ドメインは、一価Ｆａｂ、二価Ｆａｂ’２、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、またはその結合フラグメントを含む。

【0205】

いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＣＤ４７結合ドメインは、約０．０２ｎＭ～約２．２７ｎＭのＥＣ_５０を有する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＣＤ４７結合ドメインは、少なくとも約０．０２ｎＭのＥＣ_５０を有する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＣＤ４７結合ドメインは、最大で約２．２７ｎＭのＥＣ_５０を有する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＣＤ４７結合ドメインは、例えば、マクロファージを使用して、および大腸癌からの転移性癌細胞、例えば、ＨＣＴ－１５細胞、または、食道由来の転移性癌細胞、例えば、ＫＹＳＥ－１５０細胞などの癌細胞を標的として、ＡＤＣＰ活性を決定するために、食作用アッセイまたはｉｎ ｖｉｔｒｏ食作用アッセイにおいて、約０．０２ｎＭ～約０．１６ｎＭ、約０．０２ｎＭ～約０．２１ｎＭ、約０．０２ｎＭ～約１．０３ｎＭ、約０．０２ｎＭ～約１．２ｎＭ、約０．０２ｎＭ～約２．２７ｎＭ、約０．１６ｎＭ～約０．２１ｎＭ、約０．１６ｎＭ～約１．０３ｎＭ、約０．１６ｎＭ～約１．２ｎＭ、約０．１６ｎＭ～約２．２７ｎＭ、約０．２１ｎＭ～約１．０３ｎＭ、約０．２１ｎＭ～約１．２ｎＭ、約０．２１ｎＭ～約２．２７ｎＭ、約１．０３ｎＭ～約１．２ｎＭ、約１．０３ｎＭ～約２．２７ｎＭ、または約１．２ｎＭ～約２．２７ｎＭのＥＣ_５０を有する。

【0206】

いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＣＤ４７結合ドメインは、約０．００２ｎＭ～約０．１３８ｎＭのＥＣ_５０を有する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＣＤ４７結合ドメインは、少なくとも約０．００２ｎＭのＥＣ_５０を有する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＣＤ４７結合ドメインは、最大で約０．１３８ｎＭのＥＣ_５０を有する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＣＤ４７の結合ドメインは、例えば、ＮＫ９２／ＣＤ１６ａ１７６ＶまたはＰＢＭＣエフェクター細胞を使用して、および大腸癌からの転移性癌細胞、例えば、ＨＣＴ－１５細胞、または、食道由来の転移性癌細胞、例えば、ＫＹＳＥ－１５０細胞などの癌細胞を標的として、ＡＤＣＣ活性を決定するために、細胞毒性アッセイまたはｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞毒性アッセイにおいて、約０．００２ｎＭ～約０．０１２ｎＭ、約０．００２ｎＭ～約０．０５３ｎＭ、約０．００２ｎＭ～約０．１０８ｎＭ、約０．００２ｎＭ～約０．１３８ｎＭ、約０．０１２ｎＭ～約０．０５３ｎＭ、約０．０１２ｎＭ～約０．１０８ｎＭ、約０．０１２ｎＭ～約０．１３８ｎＭ、約０．０５３ｎＭ～約０．１０８ｎＭ、約０．０５３ｎＭ～約０．１３８ｎＭ、または約０．１０８ｎＭ～約０．１３８ｎＭのＥＣ_５０を有する。

【0207】

いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＣＤ４７結合ドメインは、ＣＤ４７ ＢＭＫ－１（本明細書に記載されるなど）と比較して、赤血球（ＲＢＣ）結合を減少させた。場合によっては、ＲＢＣ結合の減少は、参照抗体ＣＤ４７ ＢＭＫ－１と比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または１００％の減少である。

【0208】

いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＣＤ４７抗体は、参照抗体ＣＤ４７ ＢＭＫ－２またはＣＤ４７ ＢＭＫ－１（本明細書に記載されるものなど）と比較して改善された血清半減期を有する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＣＤ４７抗体は、参照抗体ＣＤ４７ ＢＭＫ－２またはＣＤ４７ ＢＭＫ－１と比較して改善された血清半減期を有する。いくつかの例では、改善された血清半減期は、参照抗体ＣＤ４７ＢＭＫ－２またはＣＤ４７ＢＭＫ－１よりも、少なくとも３０分、１時間、１．５時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１８時間、２４時間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、１４日間、３０日間、またはそれ以上長い。いくつかの例では、改善された血清半減期は、参照抗体ＣＤ４７ＢＭＫ－２またはＣＤ４７ＢＭＫ－１よりも、少なくとも３０分、１時間、１．５時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１８時間、２４時間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、１４日間、３０日間、またはそれ以上長い。

【0209】

場合によっては、本明細書に記載される抗ＣＤ４７結合ドメインの血清半減期は、少なくとも３０分、１時間、１．５時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１８時間、２４時間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、１４日間、３０日間、またはそれ以上である。場合によっては、本明細書に記載される抗ＣＤ４７結合ドメインの血清半減期は、約３０分、１時間、１．５時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１８時間、２４時間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、１４日間、３０日間、またはそれ以上である。

【0210】

抗ＥｐＣＡＭ結合ドメイン
特定の実施形態において、抗ＥｐＣＡＭ結合ドメインが本明細書に開示される。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、ヒトまたは操作されたヒトＥｐＣＡＭ結合ドメインである。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、ＥｐＣＡＭに特異的に結合する抗体、またはその機能的フラグメントもしくは機能的変異体を含む。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭに特異的に結合する抗体、またはその機能的フラグメントもしくは機能的変異体は、抗ＥｐＣＡＭ重鎖および抗ＥｐＣＡＭ軽鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗ＥｐＣＡＭ重鎖は、抗ＥｐＣＡＭ重鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗ＥｐＣＡＭ重鎖可変ドメインは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４重鎖の可変ドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗ＥｐＣＡＭ軽鎖は、抗ＥｐＣＡＭ軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗ＥｐＣＡＭ軽鎖可変ドメインは、カッパまたはラムダ軽鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗ＥｐＣＡＭ軽鎖可変ドメインは、カッパ軽鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗ＥｐＣＡＭ軽鎖可変ドメインは、ラムダ軽鎖を含む。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含む。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、抗原結合フラグメント（Ｆａｂ）を含む。

【0211】

いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、３つの重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）：ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ここで、ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、表９に記載されるものから選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１は、配列番号２２２、２２５、２３１、２３４、２４３、および２４６から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ２は、配列番号２２３、２２６、２３２、２３５、２４４、および２４７から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２２４、２２７、２３３、２３６、２４５、および２４８から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～２個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～１個のアミノ酸修飾を含む。

【0212】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２１９～２２１のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0213】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２２２～２２４のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0214】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２２５～２２７のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0215】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２２８～２３０のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0216】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２３１～２３３のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0217】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２３４～２３６のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0218】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２３７～２３９のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0219】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２４０～２４２のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0220】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２４３～２４５のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0221】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２４６～２４８のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0222】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２４９～２５１のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0223】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２５２～２５４のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0224】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２５５～２５７のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0225】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２５８～２６０のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0226】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２６１～２６３のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0227】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２６４～２６６のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0228】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２６７～２６９のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0229】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２７０～２７２のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0230】

いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、３つの軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）：ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３を含み、ここで、ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、表１０に記載されるものから選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１は、配列番号２７６、２７９、２８５、２８８、２９７、および３００から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ２は、配列番号２７７、２８０、２８６、２８９、２９８、および３０１から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２７８、２８１、２８７、２９０、２９９、および３０２から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～２個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～１個のアミノ酸修飾を含む。

【0231】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２７３～２７５のアミノ酸配列を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0232】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２７６～２７８のアミノ酸配列を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0233】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２７９～２８１のアミノ酸配列を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0234】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２８２～２８４のアミノ酸配列を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0235】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２８５～２８７のアミノ酸配列を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0236】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２８８～２９０のアミノ酸配列を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0237】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２９１～２９３のアミノ酸配列を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0238】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２９４～２９６のアミノ酸配列を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0239】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２９７～２９９のアミノ酸配列を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0240】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号３００～３０２のアミノ酸配列を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0241】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号３０３～３０５のアミノ酸配列を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0242】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号３０６～３０８のアミノ酸配列を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0243】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号３０９～３１１のアミノ酸配列を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0244】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号３１２～３１４のアミノ酸配列を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0245】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号３１５～３１７のアミノ酸配列を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0246】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号３１８～３２０のアミノ酸配列を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0247】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号３２１～３２３のアミノ酸配列を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0248】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号３２４～３２６のアミノ酸配列を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0249】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２１９～２２１のアミノ酸配列を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２７３～２７５のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0250】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２２２～２２４のアミノ酸配列を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２７６～２７８のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0251】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２２５～２２７のアミノ酸配列を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２７９～２８１のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0252】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２２８～２３０のアミノ酸配列を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２８２～２８４のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0253】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２３１～２３３のアミノ酸配列を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２８５～２８７のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0254】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２３４～２３６のアミノ酸配列を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２８８～２９０のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0255】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２３７～２３９のアミノ酸配列を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２９１～２９３のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0256】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２４０～２４２のアミノ酸配列を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２９４～２９６のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0257】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２４３～２４５のアミノ酸配列を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２９７～２９９のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0258】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２４６～２４８のアミノ酸配列を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号３００～３０２のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0259】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２４９～２５１のアミノ酸配列を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号３００～３０５のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0260】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２５２～２５４のアミノ酸配列を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号３０６～３０８のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0261】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２５５～２５７のアミノ酸配列を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号３０９～３１１のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0262】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２５８～２６０のアミノ酸配列を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号３１２～３１４のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0263】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２６１～２６３のアミノ酸配列を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号３１５～３１７のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0264】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２６４～２６６のアミノ酸配列を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号３１８～３２０のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0265】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２６７～２６９のアミノ酸配列を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号３２１～３２３のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0266】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２７０～２７２のアミノ酸配列を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号３２４～３２６のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0267】

いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、表１１に記載されるものから選択されるアミノ酸配列を含む重鎖フレームワーク領域（ＨＦＲ）を含み、ＨＦＲは０～３個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、配列番号３３１～３３４、３３５～３３８、３４３～３４６、３４７～３５０、３５５～３５８、および３５９～３６２から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖フレームワーク領域（ＨＦＲ）を含み、ＨＦＲは０～３個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＨＦＲは、０～２個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＨＦＲは、０～１個のアミノ酸修飾を含む。

【0268】

いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインの重鎖フレームワーク領域（ＨＦＲ）は、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域は、配列番号３２７～３３０のアミノ酸配列を含み、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～５個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～４個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～３個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～２個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～１個のアミノ酸修飾を含む。

【0269】

いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインの重鎖フレームワーク領域（ＨＦＲ）は、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域は、配列番号３３１～３３４のアミノ酸配列を含み、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～５個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～４個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～３個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～２個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～１個のアミノ酸修飾を含む。

【0270】

いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインの重鎖フレームワーク領域（ＨＦＲ）は、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域は、配列番号３３５～３３８のアミノ酸配列を含み、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～５個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～４個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～３個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～２個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～１個のアミノ酸修飾を含む。

【0271】

いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインの重鎖フレームワーク領域（ＨＦＲ）は、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域は、配列番号３３９～３４２のアミノ酸配列を含み、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～５個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～４個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～３個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～２個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～１個のアミノ酸修飾を含む。

【0272】

いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインの重鎖フレームワーク領域（ＨＦＲ）は、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域は、配列番号３４３～３４６のアミノ酸配列を含み、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～５個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～４個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～３個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～２個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～１個のアミノ酸修飾を含む。

【0273】

いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインの重鎖フレームワーク領域（ＨＦＲ）は、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域は、配列番号３４７～３５０のアミノ酸配列を含み、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～５個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～４個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～３個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～２個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～１個のアミノ酸修飾を含む。

【0274】

いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインの重鎖フレームワーク領域（ＨＦＲ）は、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域は、配列番号３５１～３５４のアミノ酸配列を含み、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～５個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～４個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～３個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～２個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～１個のアミノ酸修飾を含む。

【0275】

いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインの重鎖フレームワーク領域（ＨＦＲ）は、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域は、配列番号３５５～３５８のアミノ酸配列を含み、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～５個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～４個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～３個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～２個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～１個のアミノ酸修飾を含む。

【0276】

いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインの重鎖フレームワーク領域（ＨＦＲ）は、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域は、配列番号３５９～３６２のアミノ酸配列を含み、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～５個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～４個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～３個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～２個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～１個のアミノ酸修飾を含む。

【0277】

いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、表１２に記載されるものから選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖フレームワーク領域（ＬＦＲ）を含み、ＬＦＲは０～３個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、配列番号３６７～３７０、３７１～３７４、３７９～３８２、３８３～３８６、３９１～３９４、および３９５～３９８から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖フレームワーク領域（ＬＦＲ）を含み、ＨＦＲは０～３個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＬＦＲは、０～２個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＬＦＲは、０～１個のアミノ酸修飾を含む。

【0278】

いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインの軽鎖フレームワーク領域（ＬＦＲ）は、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域は、配列番号３６３～３６６のアミノ酸配列を含み、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～５個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～４個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～３個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～２個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～１個のアミノ酸修飾を含む。

【0279】

いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインの軽鎖フレームワーク領域（ＬＦＲ）は、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域は、配列番号３６７～３７０のアミノ酸配列を含み、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～５個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～４個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～３個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～２個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～１個のアミノ酸修飾を含む。

【0280】

いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインの軽鎖フレームワーク領域（ＬＦＲ）は、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域は、配列番号３７１～３７４のアミノ酸配列を含み、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～５個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～４個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～３個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～２個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～１個のアミノ酸修飾を含む。

【0281】

いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインの軽鎖フレームワーク領域（ＬＦＲ）は、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域は、配列番号３７５～３７８のアミノ酸配列を含み、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～５個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～４個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～３個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～２個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～１個のアミノ酸修飾を含む。

【0282】

いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインの軽鎖フレームワーク領域（ＬＦＲ）は、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域は、配列番号３７９～３８２のアミノ酸配列を含み、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～５個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～４個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～３個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～２個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～１個のアミノ酸修飾を含む。

【0283】

いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインの軽鎖フレームワーク領域（ＬＦＲ）は、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域は、配列番号３８３～３８６のアミノ酸配列を含み、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～５個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～４個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～３個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～２個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～１個のアミノ酸修飾を含む。

【0284】

いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインの軽鎖フレームワーク領域（ＬＦＲ）は、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域は、配列番号３８７～３９０のアミノ酸配列を含み、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～５個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～４個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～３個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～２個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～１個のアミノ酸修飾を含む。

【0285】

いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインの軽鎖フレームワーク領域（ＬＦＲ）は、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域は、配列番号３９１～３９４のアミノ酸配列を含み、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～５個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～４個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～３個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～２個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～１個のアミノ酸修飾を含む。

【0286】

いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインの軽鎖フレームワーク領域（ＬＦＲ）は、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域は、配列番号３９５～３９８のアミノ酸配列を含み、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～５個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～４個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～３個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～２個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～１個のアミノ酸修飾を含む。

【0287】

いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインの重鎖フレームワーク領域（ＨＦＲ）のｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域は、配列番号３２７～３３０のアミノ酸配列を含み、ＥｐＣＡＭ結合ドメインの軽鎖フレームワーク領域（ＬＦＲ）のｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域は、配列番号３６３～３６６のアミノ酸配列を含み、ＥｐＣＡＭ結合ドメインの重鎖フレームワーク領域（ＨＦＲ）のｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～５（例えば、０～４、０～３、０～２、または０～１）個のアミノ酸修飾を含み、ＥｐＣＡＭ結合ドメインの軽鎖フレームワーク領域（ＬＦＲ）のｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～５（例えば、０～４、０～３、０～２、または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0288】

いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインの重鎖フレームワーク領域（ＨＦＲ）のｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域は、配列番号３３１～３３４のアミノ酸配列を含み、ＥｐＣＡＭ結合ドメインの軽鎖フレームワーク領域（ＬＦＲ）のｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域は、配列番号３６７～３７０のアミノ酸配列を含み、ＥｐＣＡＭ結合ドメインの重鎖フレームワーク領域（ＨＦＲ）のｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～５（例えば、０～４、０～３、０～２、または０～１）個のアミノ酸修飾を含み、ＥｐＣＡＭ結合ドメインの軽鎖フレームワーク領域（ＬＦＲ）のｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～５（例えば、０～４、０～３、０～２、または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0289】

いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインの重鎖フレームワーク領域（ＨＦＲ）のｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域は、配列番号３３５～３３８のアミノ酸配列を含み、ＥｐＣＡＭ結合ドメインの軽鎖フレームワーク領域（ＬＦＲ）のｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域は、配列番号３７１～３７４のアミノ酸配列を含み、ＥｐＣＡＭ結合ドメインの重鎖フレームワーク領域（ＨＦＲ）のｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～５（例えば、０～４、０～３、０～２、または０～１）個のアミノ酸修飾を含み、ＥｐＣＡＭ結合ドメインの軽鎖フレームワーク領域（ＬＦＲ）のｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～５（例えば、０～４、０～３、０～２、または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0290】

いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインの重鎖フレームワーク領域（ＨＦＲ）のｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域は、配列番号３３９～３４２のアミノ酸配列を含み、ＥｐＣＡＭ結合ドメインの軽鎖フレームワーク領域（ＬＦＲ）のｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域は、配列番号３７５～３７８のアミノ酸配列を含み、ＥｐＣＡＭ結合ドメインの重鎖フレームワーク領域（ＨＦＲ）のｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～５（例えば、０～４、０～３、０～２、または０～１）個のアミノ酸修飾を含み、ＥｐＣＡＭ結合ドメインの軽鎖フレームワーク領域（ＬＦＲ）のｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～５（例えば、０～４、０～３、０～２、または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0291】

いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインの重鎖フレームワーク領域（ＨＦＲ）のｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域は、配列番号３４３～３４６のアミノ酸配列を含み、ＥｐＣＡＭ結合ドメインの軽鎖フレームワーク領域（ＬＦＲ）のｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域は、配列番号３７９～３８２のアミノ酸配列を含み、ＥｐＣＡＭ結合ドメインの重鎖フレームワーク領域（ＨＦＲ）のｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～５（例えば、０～４、０～３、０～２、または０～１）個のアミノ酸修飾を含み、ＥｐＣＡＭ結合ドメインの軽鎖フレームワーク領域（ＬＦＲ）のｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～５（例えば、０～４、０～３、０～２、または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0292】

いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインの重鎖フレームワーク領域（ＨＦＲ）のｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域は、配列番号３４７～３５０のアミノ酸配列を含み、ＥｐＣＡＭ結合ドメインの軽鎖フレームワーク領域（ＬＦＲ）のｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域は、配列番号３８３～３８６のアミノ酸配列を含み、ＥｐＣＡＭ結合ドメインの重鎖フレームワーク領域（ＨＦＲ）のｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～５（例えば、０～４、０～３、０～２、または０～１）個のアミノ酸修飾を含み、ＥｐＣＡＭ結合ドメインの軽鎖フレームワーク領域（ＬＦＲ）のｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～５（例えば、０～４、０～３、０～２、または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0293】

いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインの重鎖フレームワーク領域（ＨＦＲ）のｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域は、配列番号３５１～３５４のアミノ酸配列を含み、ＥｐＣＡＭ結合ドメインの軽鎖フレームワーク領域（ＬＦＲ）のｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域は、配列番号３８７～３９０のアミノ酸配列を含み、ＥｐＣＡＭ結合ドメインの重鎖フレームワーク領域（ＨＦＲ）のｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～５（例えば、０～４、０～３、０～２、または０～１）個のアミノ酸修飾を含み、ＥｐＣＡＭ結合ドメインの軽鎖フレームワーク領域（ＬＦＲ）のｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～５（例えば、０～４、０～３、０～２、または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0294】

いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインの重鎖フレームワーク領域（ＨＦＲ）のｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域は、配列番号３５５～３５８のアミノ酸配列を含み、ＥｐＣＡＭ結合ドメインの軽鎖フレームワーク領域（ＬＦＲ）のｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域は、配列番号３９１～３９４のアミノ酸配列を含み、ＥｐＣＡＭ結合ドメインの重鎖フレームワーク領域（ＨＦＲ）のｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～５（例えば、０～４、０～３、０～２、または０～１）個のアミノ酸修飾を含み、ＥｐＣＡＭ結合ドメインの軽鎖フレームワーク領域（ＬＦＲ）のｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～５（例えば、０～４、０～３、０～２、または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0295】

いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインの重鎖フレームワーク領域（ＨＦＲ）のｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域は、配列番号３５９～３６２のアミノ酸配列を含み、ＥｐＣＡＭ結合ドメインの軽鎖フレームワーク領域（ＬＦＲ）のｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域は、配列番号３９５～３９８のアミノ酸配列を含み、ＥｐＣＡＭ結合ドメインの重鎖フレームワーク領域（ＨＦＲ）のｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～５（例えば、０～４、０～３、０～２、または０～１）個のアミノ酸修飾を含み、ＥｐＣＡＭ結合ドメインの軽鎖フレームワーク領域（ＬＦＲ）のｐｒｅ－ＣＤＲ１領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ１／２領域、ｉｎｔｅｒ－ＣＤＲ２／３領域、およびｐｏｓｔ－ＣＤＲ３領域の少なくとも１つは、０～５（例えば、０～４、０～３、０～２、または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0296】

いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、表１３に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む重鎖可変ドメインを含む。

【0297】

いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、配列番号３９９～４１６から選択される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む重鎖可変ドメインを含む。

【0298】

いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、表１４に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。

【0299】

いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、配列番号４１７～４３４から選択される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。

【0300】

いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、表１３に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む重鎖可変ドメインと、表１４に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む。

【0301】

いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、配列番号３９９～４１６から選択される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号４１７～４３４または配列番号５１３～５１４から選択される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む。

【0302】

いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、表１５に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む完全長の重鎖を含む。

【0303】

いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、配列番号４３５～４４３または配列番号５１５～５１６から選択される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む完全長の重鎖を含む。

【0304】

いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、表１６に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む完全長の軽鎖を含む。

【0305】

いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、配列番号４４４～４５２または配列番号５１７～５１８から選択される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む完全長の軽鎖を含む。

【0306】

いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、表１５に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む完全長の重鎖と、表１６に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む完全長の軽鎖とを含む。

【0307】

いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、配列番号４３５～４４３から選択される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む完全長の重鎖と、配列番号４４４～４５２から選択される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む完全長の軽鎖とを含む。

【0308】

いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、表１７に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含む。

【0309】

いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、配列番号４５３～４５７から選択される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含む。

【0310】

本明細書に記載される抗ＥｐＣＡＭ結合ドメインのいくつかの実施形態において、抗ＥｐＣＡＭ結合ドメインの重鎖可変フラグメント（ＶＨ）は、第１のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）定常領域に融合しており、抗ＥｐＣＡＭ結合ドメインの軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）は、第２のＴＣＲ定常領域に融合しており、ここで、第１および第２のＴＣＲ定常領域は二量体を形成することができる。いくつかの実施形態において、ＴＣＲ定常領域は、ＴＣＲαおよびＴＣＲβ定常領域である。いくつかの実施形態において、ＶＨ－ＴＣＲ融合ポリペプチドは、ヒトＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１）Ｆｃドメインに融合される。ＷＯ２０１９／０５７１２２を参照。

【0311】

いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）定常領域を含む。いくつかの実施形態において、ＴＣＲ定常領域は、ＴＣＲα定常ドメインおよびＴＣＲβ定常ドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、ＶＨ－ＥｐＣＡＭドメインおよびＶＬ－ＥｐＣＡＭドメインを含み、ここで、ＶＨ－ＥｐＣＡＭドメインは、ＴＣＲβ定常ドメインに融合しており、ＶＬ－ＥｐＣＡＭドメインは、ＴＣＲα定常ドメインに融合している。いくつかの実施形態において、抗ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、ＶＨ－ＥｐＣＡＭドメインおよびＶＬ－ＥｐＣＡＭドメインを含み、ＶＨ－ＥｐＣＡＭドメインは、重鎖（ＣＨ１）ＩｇＧドメインの第１の定常ドメインに融合しており、ＶＬ－ＥｐＣＡＭドメインは、軽鎖（ＣＬ）ＩｇＧドメインの定常ドメインに融合している。

【0312】

いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）定常領域を含む。いくつかの実施形態において、ＴＣＲ定常領域は、ＴＣＲα定常ドメインおよびＴＣＲβ定常ドメインを含む。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、ＶＨ－ＥｐＣＡＭドメインおよびＶＬ－ＥｐＣＡＭドメインを含み、ここで、ＶＨ－ＥｐＣＡＭドメインは、ＴＣＲα定常ドメインに融合しており、ＶＬ－ＥｐＣＡＭドメインは、ＴＣＲβ定常ドメインに融合している。いくつかの実施形態において、抗ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、ＶＨ－ＥｐＣＡＭドメインおよびＶＬ－ＥｐＣＡＭドメインを含み、ＶＨ－ＥｐＣＡＭドメインは、重鎖（ＣＨ１）ＩｇＧドメインの第１の定常ドメインに融合しており、ＶＬ－ＥｐＣＡＭドメインは、軽鎖（ＣＬ）ＩｇＧドメインの定常ドメインに融合している。

【0313】

いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、表１８に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含むＴＣＲα定常ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、表１８に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含むＴＣＲβ定常ドメインを含む。

【0314】

いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、表１８に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含むＴＣＲα定常ドメインと、表１８に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含むＴＣＲβ定常ドメインとを含む。

【0315】

いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、配列番号４５８に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含むＴＣＲα定常ドメインを含む。

【0316】

いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、配列番号４５９に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含むＴＣＲβ定常ドメインを含む。

【0317】

いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、配列番号４５８に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含むＴＣＲα定常ドメインと、配列番号４５９に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含むＴＣＲβ定常ドメインとを含む。

【0318】

【表9】

【0319】

【表10】

【0320】

【表11】

【0321】

【表12】

【0322】

【表13-1】

【0323】

【表13-2】

【0324】

【表14】

【0325】

【表15-1】

【0326】

【表15-2】

【0327】

【表16】

【0328】

【表17】

【0329】

【表18】

【0330】

抗ＥＧＦＲ結合ドメイン
特定の実施形態において、抗ＥＧＦＲ結合ドメインが本明細書に開示される。いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ結合ドメインは、重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ結合ドメインは単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含む。いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ結合ドメインは、抗原結合フラグメント（Ｆａｂ）を含む。

【0331】

いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ結合ドメインは、３つの重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）である、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ここで、ＥＧＦＲ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、表１９に記載されるものから選択されるアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～２個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～１個のアミノ酸修飾を含む。

【0332】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号４６０～４６２のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0333】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号４６３～４６５のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0334】

いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ結合ドメインは、３つの軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）である、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３を含み、ここで、ＥＧＦＲ結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、表２０に記載されるものから選択されるアミノ酸配列を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～２個のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～１個のアミノ酸修飾を含む。

【0335】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号４６６～４６８のアミノ酸配列を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0336】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号４６９～４７１のアミノ酸配列を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0337】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号４６０～４６２のアミノ酸配列を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号４６６～４６８のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0338】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号４６３～４６５のアミノ酸配列を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号４６９～４７１のアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３（例えば、０～２または０～１）個のアミノ酸修飾を含む。

【0339】

いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ結合ドメインは、表２１に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む重鎖可変ドメインを含む。

【0340】

いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ結合ドメインは、配列番号４７２または４７３に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む重鎖可変ドメインを含む。

【0341】

いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ結合ドメインは、表２２に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。

【0342】

いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ結合ドメインは、配列番号４７４または４７５に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。

【0343】

いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ結合ドメインは、表２１に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む重鎖可変ドメインと、表２２に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む。

【0344】

いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ結合ドメインは、配列番号４７２または４７３に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む重鎖可変ドメインと、配列番号４７４または４７５に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む軽鎖可変ドメインとを含む。

【0345】

いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ結合ドメインは、表２３に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む完全長の重鎖を含む。

【0346】

いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ結合ドメインは、配列番号４７６または４７７に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む完全長の重鎖を含む。

【0347】

いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ結合ドメインは、表２４に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む完全長の軽鎖を含む。

【0348】

いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ結合ドメインは、配列番号４７８または４７９に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む完全長の軽鎖を含む。

【0349】

いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ結合ドメインは、表２３に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む完全長の重鎖と、表２４に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む完全長の軽鎖とを含む。

【0350】

いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ結合ドメインは、配列番号４７６または４７７に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む完全長の重鎖と、配列番号４７８または４７９に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む完全長の軽鎖とを含む。

【0351】

いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ結合ドメインは、表２５に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む。

【0352】

いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ結合ドメインは、配列番号４８０または４８１に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む。

【0353】

本明細書に記載される抗ＥＧＦＲ結合ドメインのいくつかの実施形態において、抗ＥＧＦＲ結合ドメインの重鎖可変フラグメント（ＶＨ）は、第１のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）定常領域に融合しており、抗ＥＧＦＲ結合ドメインの軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）は、第２のＴＣＲ定常領域に融合しており、ここで、第１および第２のＴＣＲ定常領域は二量体を形成することができる。いくつかの実施形態において、ＴＣＲ定常領域は、ＴＣＲαおよびＴＣＲβ定常領域である。いくつかの実施形態において、ＶＨ－ＴＣＲ融合ポリペプチドは、ヒトＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１）Ｆｃドメインに融合される。ＷＯ２０１９／０５７１２２を参照。

【0354】

いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＥＧＦＲ結合ドメインは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）定常領域を含む。いくつかの実施形態において、ＴＣＲ定常領域は、ＴＣＲα定常ドメインおよびＴＣＲβ定常ドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗ＥＧＦＲ結合ドメインは、ＶＨ－ＥＧＦＲドメインおよびＶＬ－ＥＧＦＲドメインを含み、ここで、ＶＨ－ＥＧＦＲドメインは、ＴＣＲβ定常ドメインに融合しており、ＶＬ－ＥＧＦＲドメインは、ＴＣＲα定常ドメインに融合している。いくつかの実施形態において、抗ＥＧＦＲ結合ドメインは、ＶＨ－ＥＧＦＲドメインおよびＶＬ－ＥＧＦＲドメインを含み、ＶＨ－ＥＧＦＲドメインは、重鎖（ＣＨ１）ＩｇＧドメインの第１の定常ドメインに融合しており、ＶＬ－ＥＧＦＲドメインは、軽鎖（ＣＬ）ＩｇＧドメインの定常ドメインに融合している。

【0355】

いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＥＧＦＲ結合ドメインは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）定常領域を含む。いくつかの実施形態において、ＴＣＲ定常領域は、ＴＣＲα定常ドメインおよびＴＣＲβ定常ドメインを含む。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＥＧＦＲ結合ドメインは、ＶＨ－ＥＧＦＲドメインおよびＶＬ－ＥＧＦＲドメインを含み、ここで、ＶＨ－ＥＧＦＲドメインは、ＴＣＲα定常ドメインに融合しており、ＶＬ－ＥＧＦＲドメインは、ＴＣＲβ定常ドメインに融合している。いくつかの実施形態において、抗ＥＧＦＲ結合ドメインは、ＶＨ－ＥＧＦＲドメインおよびＶＬ－ＥＧＦＲドメインを含み、ＶＨ－ＥＧＦＲドメインは、重鎖（ＣＨ１）ＩｇＧドメインの第１の定常ドメインに融合しており、ＶＬ－ＥＧＦＲドメインは、軽鎖（ＣＬ）ＩｇＧドメインの定常ドメインに融合している。

【0356】

いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＥＧＦＲ結合ドメインは、参照抗体と比較して、ヒトＥＧＦＲタンパク質への結合を増強した。場合によっては、結合の増強は、参照抗体と比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％のＫＤの減少である。

【0357】

いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＥＧＦＲ結合ドメインは、約０．０２３ｎＭ～約３．０７ｎＭのＥＣ_５０を有する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＥＧＦＲ結合ドメインは、少なくとも約０．０２３ｎＭのＥＣ_５０を有する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＥＧＦＲ結合ドメインは、最大で約３．０７ｎＭからのＥＣ_５０を有する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＥＧＦＲ結合ドメインは、例えば、ＮＫ９２／ＣＤ１６ａ１７６Ｖエフェクター細胞を使用して、および外陰扁平上皮癌からの転移性癌細胞、例えば、Ａ４３１細胞を標的として、ＡＤＣＣ活性を決定するために、細胞毒性アッセイまたはｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞毒性アッセイにおいて、約０．０２３ｎＭ～約０．０２４ｎＭ、約０．０２３ｎＭ～約０．０３６ｎＭ、約０．０２３ｎＭ～約０．０３８ｎＭ、約０．０２３ｎＭ～約０．０４ｎＭ、約０．０２３ｎＭ～約０．０５９ｎＭ、約０．０２３ｎＭ～約０．０６９ｎＭ、約０．０２３ｎＭ～約０．０８６ｎＭ、約０．０２３ｎＭ～約３．０７ｎＭ、約０．０２４ｎＭ～約０．０３６ｎＭ、約０．０２４ｎＭ～約０．０３８ｎＭ、約０．０２４ｎＭ～約０．０４ｎＭ、約０．０２４ｎＭ～約０．０５９ｎＭ、約０．０２４ｎＭ～約０．０６９ｎＭ、約０．０２４ｎＭ～約０．０８６ｎＭ、約０．０２４ｎＭ～約３．０７ｎＭ、約０．０３６ｎＭ～約０．０３８ｎＭ、約０．０３６ｎＭ～約０．０４ｎＭ、約０．０３６ｎＭ～約０．０５９ｎＭ、約０．０３６ｎＭ～約０．０６９ｎＭ、約０．０３６ｎＭ～約０．０８６ｎＭ、約０．０３６ｎＭ～約３．０７ｎＭ、約０．０３８ｎＭ～約０．０４ｎＭ、約０．０３８ｎＭ～約０．０５９ｎＭ、約０．０３８ｎＭ～約０．０６９ｎＭ、約０．０３８ｎＭ～約０．０８６ｎＭ、約０．０３８ｎＭ～約３．０７ｎＭ、約０．０４ｎＭ～約０．０５９ｎＭ、約０．０４ｎＭ～約０．０６９ｎＭ、約０．０４ｎＭ～約０．０８６ｎＭ、約０．０４ｎＭ～約３．０７ｎＭ、約０．０５９ｎＭ～約０．０６９ｎＭ、約０．０５９ｎＭ～約０．０８６ｎＭ、約０．０５９ｎＭ～約３．０７ｎＭ、約０．０６９ｎＭ～約０．０８６ｎＭ、約０．０６９ｎＭ～約３．０７ｎＭ、または約０．０８６ｎＭ～約３．０７ｎＭのＥＣ_５０を有する。

【0358】

【表19】

【0359】

【表20】

【0360】

【表21】

【0361】

【表22】

【0362】

【表23】

【0363】

【表24】

【0364】

【表25】

【0365】

多特異性抗体
特定の実施形態において、多特異性抗ＣＤ４７および抗ＥｐＣＡＭ抗体、またはその結合フラグメントが本明細書に記載される。いくつかの例では、多特異性抗ＣＤ４７および抗ＥｐＣＡＭ抗体は、ＣＤ４７に特異的に結合する少なくとも１つの標的化部分、およびＥｐＣＡＭに特異的に結合する少なくとも１つの標的化部分を含む。いくつかの実施形態において、多特異性抗体は、本明細書に記載されるＣＤ４７結合ドメインを含む。いくつかの実施形態において、多特異性抗体は、本明細書に記載されるＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む。いくつかの実施形態において、多特異性抗体は、本明細書に記載されるＣＤ４７結合ドメイン、および本明細書に記載されるＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む。いくつかの実施形態において、多特異性抗体は二重特異性、三重特異性、または四重特異性である。いくつかの実施形態において、多特異性抗体は二重特異性である。いくつかの実施形態において、多特異性抗体は二価、三価、または四価である。いくつかの実施形態において、多特異性抗体は二価である。いくつかの例では、多特異性抗体は、ＣＤ４７に結合する１つを超える結合部位を有する。いくつかの例では、多特異性抗体は、ＥｐＣＡＭに結合する１つを超える結合部位を有する。いくつかの例では、多特異性抗体またはその結合フラグメントは、多特異性抗体コンジュゲート、ハイブリッド多特異性ＩｇＧ、可変ドメインのみの多特異性抗体、ＣＨ１／ＣＬ融合タンパク質、Ｆａｂ融合タンパク質、非免疫グロブリン融合タンパク質、Ｆｃ修飾ＩｇＧ、付加およびＦｃ修飾ＩｇＧ、修飾ＦｃおよびＣＨ３融合タンパク質、付加ＩｇＧ－ＨＣ融合体、Ｆｃ融合体、ＣＨ３融合体、ＩｇＥ／ＩｇＭ ＣＨ２融合体、またはＦ（ａｂ’）２融合体である。いくつかの実施形態において、多特異性抗体はＦｃドメインをさらに含む。いくつかの実施形態において、ＦｃドメインはヒトＦｃドメインである。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメインのアイソタイプは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４である。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメインはヘテロ二量体Ｆｃドメインであり、ここで、ヘテロ二量体Ｆｃ領域は、ノブ鎖（ｋｎｏｂ ｃｈａｉｎ）とホール鎖（ｈｏｌｅ ｃｈａｉｎ）とを含み、ノブイントゥホール（ｋｎｏｂ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅ）（ＫｉＨ）構造を形成する。いくつかの実施形態において、ノブ鎖は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ノブ鎖は変異Ｔ３６６Ｗを含み、ホール鎖は変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖを含み、アミノ酸位置の番号付けはＫａｂａｔらのＥＵインデックスに従う。いくつかの実施形態において、ホール鎖は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４ドメインを含む。いくつかの実施形態において、多特異性抗体は、非対称の３鎖ノブイントゥホール構造を有する。

【0366】

特定の実施形態において、多特異性抗ＣＤ４７および抗ＥＧＦＲ抗体、またはその結合フラグメントが本明細書に記載される。いくつかの例では、多特異性抗ＣＤ４７および抗ＥＧＦＲ抗体は、ＣＤ４７に特異的に結合する少なくとも１つの標的化部分、およびＥＧＦＲに特異的に結合する少なくとも１つの標的化部分を含む。いくつかの実施形態において、多特異性抗体は、本明細書に記載されるＣＤ４７結合ドメインを含む。いくつかの実施形態において、多特異性抗体は、本明細書に記載されるＥＧＦＲ結合ドメインを含む。いくつかの実施形態において、多特異性抗体は、本明細書に記載されるＣＤ４７結合ドメイン、および本明細書に記載されるＥＧＦＲ結合ドメインを含む。いくつかの実施形態において、多特異性抗体は二重特異性、三重特異性、または四重特異性である。いくつかの実施形態において、多特異性抗体は二重特異性である。いくつかの実施形態において、多特異性抗体は二価、三価、または四価である。いくつかの実施形態において、多特異性抗体は二価である。いくつかの例では、多特異性抗体は、ＣＤ４７に結合する１つを超える結合部位を有する。いくつかの例では、多特異性抗体は、ＥＧＦＲに結合する１つを超える結合部位を有する。いくつかの例では、多特異性抗体またはその結合フラグメントは、多特異性抗体コンジュゲート、ハイブリッド多特異性ＩｇＧ、可変ドメインのみの多特異性抗体、ＣＨ１／ＣＬ融合タンパク質、Ｆａｂ融合タンパク質、非免疫グロブリン融合タンパク質、Ｆｃ修飾ＩｇＧ、付加およびＦｃ修飾ＩｇＧ、修飾ＦｃおよびＣＨ３融合タンパク質、付加ＩｇＧ－ＨＣ融合体、Ｆｃ融合体、ＣＨ３融合体、ＩｇＥ／ＩｇＭ ＣＨ２融合体、またはＦ（ａｂ’）２融合体である。いくつかの実施形態において、多特異性抗体はＦｃドメインをさらに含む。いくつかの実施形態において、ＦｃドメインはヒトＦｃドメインである。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメインのアイソタイプは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４である。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメインはヘテロ二量体Ｆｃドメインであり、ここで、ヘテロ二量体Ｆｃ領域は、ノブ鎖（ｋｎｏｂ ｃｈａｉｎ）とホール鎖（ｈｏｌｅ ｃｈａｉｎ）とを含み、ノブイントゥホール（ｋｎｏｂ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅ）（ＫｉＨ）構造を形成する。いくつかの実施形態において、ノブ鎖は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ノブ鎖は変異Ｔ３６６Ｗを含み、ホール鎖は変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖを含み、アミノ酸位置の番号付けはＫａｂａｔらのＥＵインデックスに従う。いくつかの実施形態において、ホール鎖は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４ドメインを含む。いくつかの実施形態において、多特異性抗体は、非対称の３鎖ノブイントゥホール構造を有する。

【0367】

場合によっては、多特異性抗体は、フレームワーク領域において、例えば、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、ヒンジ領域、またはその組み合わせにおいて、１つ以上の変異を含む。いくつかの例では、１つ以上の変異は、抗体を安定させるための、および／または半減期を増大させるためのものである。いくつかの例では、１つ以上の変異は、ＡＤＣＣまたは抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）を増大させるために、Ｆｃ受容体相互作用を調節することである。他の例では、１つ以上の変異は、Ｆｃエフェクター機能、例えば、ＦｃγＲ結合、ＡＤＣＣ、またはＡＤＣＰを減少させるか、除去することである。さらなる例では、１つ以上の変異はグリコシル化を修飾するためのものである。場合によっては、１つ以上の変異は、安定性を増強し、半減期を増加させ、グリコシル化を減少させ、ならびに／または、例えば、ＡＤＣＣおよび／もしくはＡＤＣＰを増加もしくは減少させるために、Ｆｃ受容体相互作用を調節する。

【0368】

場合によっては、多特異性抗体は、ＩｇＧ１フレームワークを含む。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ４７または抗ＥｐＣＡＭまたはＥＧＦＲ抗体の定常領域は、Ｆｃ受容体相互作用を変化させるために１つ以上のアミノ酸位置で修飾される。Ｆｃ受容体相互作用を調節するまたは変化させる例示的な残基としては、限定されないが、Ｇ２３６、Ｓ２３９、Ｔ２５０、Ｍ２５２、Ｓ２５４、Ｔ２５６、Ｋ３２６、Ａ３３０、Ｉ３３２、Ｅ３３３Ａ、Ｍ４２８、Ｈ４３３、またはＮ４３４（Ｋａｂａｔ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ；Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ １９９１ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ＩｎｔｅｒｅｓｔのＥＵインデックス）が挙げられる。いくつかの例では、変異は、Ｇ２３６Ａ、Ｓ２３９Ｄ、Ｔ２５０Ｑ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｋ３２６Ｗ、Ａ３３０Ｌ、Ｉ３３２Ｅ、Ｅ３３３Ａ、Ｅ３３３Ｓ、Ｍ４２８Ｌ、Ｈ４３３Ｋ、またはＮ４３４Ｆを含む。

【0369】

いくつかの実施形態において、Ｆｃ受容体相互作用を変化させるためのＩｇＧ１定常領域中の１つ以上のアミノ酸位置での修飾は、半減期の増加をもたらす。いくつかの例では、１つ以上のアミノ酸位における修飾は、Ｔ２５０、Ｍ２５２、Ｓ２５４、Ｔ２５６、Ｍ４２８、Ｈ４３３、Ｎ４３４、またはそれらの組み合わせを含み、例えば、Ｔ２５０Ｑ／Ｍ４２８Ｌ、またはＭ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ、およびＨ４３３Ｋ／Ｎ４３４Ｆを含む。

【0370】

いくつかの実施形態において、上に記載された多特異性抗体はホールの中へのノブ（ＫＩＨ）フォーマットを含む。場合によっては、ＫＩＨはＦｃ領域に位置し、上記Ｆｃ領域では、ＣＨ３ドメイン内の残基は、ＷＯ９６／０２７０１１；Ｒｉｄｇｗａｙ，ｅｔ．ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．９ （１９９６） ６１７－６２１、または、Ｍｅｒｃｈａｎｔ，ｅｔ．ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１６ （１９９８） ６７７－６８１の開示に基づいて、任意選択で修飾される。場合によっては、ＣＨ３ドメイン対の一方は「ノブ」鎖であり、他方は「ホール」鎖であり、さらなるジスルフィド架橋が、抗体をさらに安定化させるために、および／または収率を増加させるために、任意選択で導入される。

【0371】

いくつかの例では、多特異性抗体はＩｇＧ１であり、「ｋｎｏｂ」鎖のＣＨ３ドメインはＴ３６６Ｗ変異を含み、「ｈｏｌｅ」鎖のＣＨ３ドメインは変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖを含む。場合によっては、「ノブ」鎖のＣＨ３ドメインは、「ホール」鎖のＣＨ３ドメイン中のＥ３５６ＣまたはＳ３５４Ｃのいずれかと鎖間ジスルフィド架橋を形成するＹ３４９Ｃ変異をさらに含む。

【0372】

いくつかの例では、「ノブ」鎖のＣＨ３ドメインはＲ４０９ＤおよびＫ３７０Ｅ変異を含み、「ホール」鎖のＣＨ３ドメインはＤ３９９ＫおよびＥ３５７Ｋを含む。場合によっては、「ｋｎｏｂ」鎖のＣＨ３ドメインは、Ｔ３６６Ｗ変異をさらに含み、「ｈｏｌｅ」鎖のＣＨ３ドメインは、変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖをさらに含む。

【0373】

いくつかの実施形態において、Ｆｃ受容体相互作用を変化させるためのＩｇＧ１定常領域中の１つ以上のアミノ酸位置での修飾は、ＡＤＣＣおよび／またはＡＤＣＰの増加をもたらす。いくつかの例では、１つ以上のアミノ酸位における修飾は、Ｓ２３９、Ｋ３２６、Ａ３３０、Ｉ３３２、Ｅ３３３、またはそれらの組み合わせを含む。いくつかの例では、ＡＤＣＣおよび／またはＡＤＣＰの増加のための１つ以上のアミノ酸位置での修飾は、例えば、Ｅ３３３Ａ、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、またはＫ３２６Ｗ／Ｅ３３３Ｓを含む。場合によっては、ＡＤＣＣの増加のための１つ以上のアミノ酸位置における修飾は、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅを含む。場合によっては、ＡＤＣＰの増加のための１つ以上のアミノ酸位置における修飾は、Ｋ３２６Ｗ／Ｅ３３３Ｓを含む。

【0374】

いくつかの実施形態において、ＩｇＧ１定常領域は、脱フコシル化（ａｆｕｃｏｓｙｌａｔｅｄ）される。他の実施形態において、ＩｇＧ１は、フコシル化ができない細胞において発現される。いくつかの実施形態において、細胞はチャイニーズハムスター卵巣細胞株などの哺乳動物細胞である。いくつかの実施形態において、細胞はフコシルトランスフェラーゼ８（ＦＵＴ８）を発現することができない。

【0375】

いくつかの実施形態において、多特異性抗体は、ＩｇＧ２フレームワークを含む。いくつかの例では、ＩｇＧ２フレームワーク中の１つ以上のアミノ酸位置は、Ｆｃ受容体相互作用を変化させ、例えば、ＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣを増加させるために修飾される。場合によっては、ＩｇＧ２フレームワーク中の１つ以上のアミノ酸位置は、抗体を安定化させ、および／または半減期を増加させるために修飾される。いくつかの例では、ＩｇＧ２フレームワーク中の１つ以上のアミノ酸位置は、グリコシル化を調節するために修飾される。場合によっては、ＩｇＧ２定常領域は、脱フコシル化される。いくつかの実施形態において、ＩｇＧ２定常領域は、フコシル化ができない細胞において発現される。いくつかの実施形態において、細胞はチャイニーズハムスター卵巣細胞株などの哺乳動物細胞である。いくつかの実施形態において、細胞はフコシルトランスフェラーゼ８（ＦＵＴ８）を発現することができない。

【0376】

いくつかの実施形態において、多特異性抗体は、ＩｇＧ３フレームワークを含む。いくつかの例では、ＩｇＧ３フレームワーク中の１つ以上のアミノ酸位置は、Ｆｃ受容体相互作用を変化させ、例えば、ＡＤＣＣおよび／またはＡＤＣＰを増加させるために修飾される。場合によっては、ＩｇＧ３フレームワーク中の１つ以上のアミノ酸位置は、抗体を安定化させ、および／または半減期を増加させるために修飾される。いくつかの例では、ＩｇＧ３フレームワーク中の１つ以上のアミノ酸位置は、グリコシル化を調節するために修飾される。場合によっては、抗体の定常領域は、半減期（例えば、Ｒ４３５Ｈ）（Ｋａｂａｔ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ）を延長するためにアミノ酸Ｒ４３５で修飾される。いくつかの例では、定常領域は残基Ｎ２９７で脱グリコシル化される。いくつかの例では、ＩｇＧ３定常領域は、フコシル化ができない細胞において発現される。いくつかの実施形態において、細胞はチャイニーズハムスター卵巣細胞株などの哺乳動物細胞である。いくつかの実施形態において、細胞はフコシルトランスフェラーゼ８（ＦＵＴ８）を発現することができない。

【0377】

いくつかの実施形態において、多特異性抗体は、ＩｇＧ４フレームワークを含む。いくつかの例では、ＩｇＧ４フレームワーク中の１つ以上のアミノ酸位置は、Ｆｃ受容体相互作用を変化させ、例えば、ＡＤＣＣおよび／またはＡＤＣＰを増加させるために修飾される。例えば、ＡＤＣＣを増加させる変異は、いくつかの実施形態において、米国特許第８，０９３，３５９号に記載されているものなどの、Ｓ２３９Ｄ、Ｉ３３２Ｅ、およびＡ３３０Ｌ（アミノ酸ナンバリングはＫａｂａｔらのＥＵインデックスによるものである）を含む。場合によっては、ＩｇＧ４フレームワーク中の１つ以上のアミノ酸位置は、抗体を安定化させ、および／または半減期を増加させるために修飾される。いくつかの例では、ＩｇＧ４フレームワーク中の１つ以上のアミノ酸位置は、グリコシル化を調節するために修飾される。場合によっては、定常領域は、鎖交換を防ぐか減少させるためにヒンジ領域で修飾される。いくつかの例では、修飾されたアミノ酸は、Ｓ２２８（例えば、Ｓ２２８Ｐ）である。いくつかの例では、ＩｇＧ４定常領域は、フコシル化ができない細胞において発現される。いくつかの実施形態において、細胞はチャイニーズハムスター卵巣細胞株などの哺乳動物細胞である。いくつかの実施形態において、細胞はフコシルトランスフェラーゼ８（ＦＵＴ８）を発現することができない。

【0378】

いくつかの実施形態において、ヒトＩｇＧ定常領域は、例えば、Ｎａｔｓｕｍｅ ｅｔ ａｌ．，２００８ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，６８（１０）：３８６３－７２；Ｉｄｕｓｏｇｉｅ ｅｔ ａｌ．，２００１ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，１６６（４）：２５７１－５；Ｍｏｏｒｅ ｅｔ ａｌ．，２０１０ ｍＡｂｓ，２（２）：１８１－１８９；Ｌａｚａｒ ｅｔ ａｌ．，２００６ ＰＮＡＳ，１０３（１１）：４００５－４０１０，Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，２００１ ＪＢＣ，２７６（９）：６５９１－６６０４；Ｓｔａｖｅｎｈａｇｅｎ ｅｔ ａｌ．，２００７ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，６７（１８）：８８８２－８８９０；Ｓｔａｖｅｎｈａｇｅｎ ｅｔ ａｌ．，２００８ Ａｄｖａｎ．Ｅｎｚｙｍｅ Ｒｅｇｕｌ．，４８：１５２－１６４；Ａｌｅｇｒｅ ｅｔ ａｌ，１９９２ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，１４８：３４６１－３４６８；Ｒｅｖｉｅｗｅｄ ｉｎ Ｋａｎｅｋｏ ａｎｄ Ｎｉｗａ，２０１１ Ｂｉｏｄｒｕｇｓ，２５（１）：１－１１に記載されるアミノ酸修飾で、そのＡＤＣＣおよび／またはＡＤＣＰ活性を変化させるために修飾される。

【0379】

いくつかの実施形態において、ヒトＩｇＧ定常領域は、ヘテロ二量体化を誘導するために修飾される。例えば、より大きな（ｍｏｒｅ ｂｕｌｋｙ）アミノ酸、例えば、Ｔｒｐ（Ｔ３６６Ｗ）で置換される場合、Ｔｈｒ３６６においてＣＨ３ドメイン内にアミノ酸修飾を有することは、位置Ｔｈｒ３６６、Ｌｅｕ３６８、およびＴｙｒ４０７におけるより小さな（ｌｅｓｓ ｂｕｌｋｙ）アミノ酸、例えば、それぞれＳｅｒ、Ａｌａ、およびＶａｌへのアミノ酸修飾（Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ）を有する第２のＣＨ３ドメインと優先的に対合することができる。場合によっては、ＣＨ３修飾を介したヘテロ二量体化は、ジスルフィド結合の導入によって、例えば、反対のＣＨ３ドメイン上でＳｅｒ３５４をＣｙｓ（Ｓ３５４Ｃ）に、およびＹ３４９をＣｙｓ（Ｙ３４９Ｃ）に変化させることによって、さらに安定化される（Ｃａｒｔｅｒ，２００１ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ，２４８：７－１５に概説されている）。

【0380】

いくつかの例では、本明細書に記載される多特異性抗体は、グリコシル化が減少しているか、またはグリコシル化を欠いているが、アミノ酸Ａｓｎ２９７（Ｋａｂａｔ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ）で修飾されていない。これらの例において、グリコシル化は、例えば、翻訳後グリコシル化能力を欠く宿主細胞、例えば、細菌もしくは酵母由来の系、または改変された哺乳動物細胞発現系における抗体の産生によって排除される。いくつかの実施形態において、細胞はチャイニーズハムスター卵巣細胞株などの哺乳動物細胞である。いくつかの実施形態において、細胞はフコシルトランスフェラーゼ８（ＦＵＴ８）を発現することができない。特定の態様では、このような系は無細胞発現系である。

【0381】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する第１の成分とＥｐＣＡＭに結合する第２の成分を含む多特異性タンパク質は、表面プラズモン共鳴によって測定されるようなそれぞれの標的抗原に対する様々な親和性（ＫＤ）を有する。

【0382】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む多特異性抗体に関するいくつかの実施形態において、多特異性抗体は、腫瘍細胞の表面上に発現されるＣＤ４７に対して、正常細胞、例えば、赤血球、血小板、Ｔ細胞、またはＮＫ細胞の表面上に発現されるＣＤ４７よりも高い親和性を有する。いくつかの実施形態において、腫瘍細胞はＥｐＣＡＭを発現する。いくつかの実施形態において、（例えば、ヒト）赤血球への最大半量結合に必要な多特異性抗体の濃度は、約５００ナノモル（ｎＭ）超である。いくつかの実施形態において、多特異性抗体は、約１００ナノモル（ｎＭ）未満の解離定数（ＫＤ）で（例えば、ヒト）ＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、多特異性抗体は、約１ナノモル（ｎＭ）～約１００ｎＭ、約１ｎＭ～約５０ｎＭ、または約５ｎＭ～約５０ｎＭの解離定数（ＫＤ）で（例えば、ヒト）ＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、多特異性抗体は、約５００ナノモル（ｎＭ）未満の解離定数（ＫＤ）でＥｐＣＡＭに結合する。いくつかの実施形態において、多特異性抗体は、約０．２ナノモル（ｎＭ）～約５００ｎＭ、約１ｎＭ～約３００ｎＭ、約５ｎＭ～約２００ｎＭ、または約１０ｎＭ～約１５０ｎＭの解離定数（ＫＤ）でＥｐＣＡＭに結合する。いくつかの実施形態において、解離定数（ＫＤ）は、表面プラズモン共鳴によって決定される。いくつかの実施形態において、約１ナノモル（ｎＭ）未満または約０．０１ｎＭ未満の多特異性抗体は、マクロファージによって貪食されるＡ４３１細胞の割合を、非特異性ＩｇＧ１抗体対照と比較して、少なくとも４倍増加させる。

【0383】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む多特異性抗体は、少なくとも２：１、少なくとも５：１、少なくとも１０：１、少なくとも２０：１、または少なくとも１００：１のＣＤ４７結合ドメインのＫＤ対ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＫＤの比を特徴とする。

【0384】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む多特異性抗体に関するいくつかの実施形態において、マクロファージによるＥｐＣＡＭ陽性ＣＤ４７陽性腫瘍細胞の抗体依存性細胞食作用を媒介するのに必要な抗体の濃度は、約０．０１ナノモル（ｎＭ）～約３ｎＭである。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ陽性ＣＤ４７陽性腫瘍細胞は、ＯＶＩＳＥ細胞またはＡ４３１細胞である。いくつかの実施形態において、ＥｐＣＡＭ陽性ＣＤ４７陽性腫瘍細胞は、腺管膵臓腺癌細胞、卵巣明細胞腺癌細胞、結腸腺癌細胞、肺腺癌細胞、肺扁平上皮癌細胞、肺小細胞癌細胞、肝細胞癌細胞、胃腺癌細胞、胆管癌細胞、頭頸部扁平上皮癌細胞、前立腺癌細胞、子宮内膜癌細胞、食道癌細胞、卵巣腺癌細胞、外陰扁平上皮癌細胞から選択される。いくつかの実施形態において、約１００ナノモル（ｎＭ）の多特異性抗体は、細胞の表面上でのＣＤ４７へのＳＩＲＰαの結合を少なくとも約３０％阻害する。いくつかの実施形態において、細胞はＣＤ４７＋ＥｐＣＡＭ＋腫瘍細胞である。いくつかの実施形態において、細胞はＨＣＣ－４４細胞と少なくとも同じ数のＥｐＣＡＭタンパク質をその表面に発現する。いくつかの実施形態において、細胞は、少なくとも５０，０００個、少なくとも１００，０００個、少なくとも３００，０００個、少なくとも６００，０００個、または少なくとも１，５００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質をその表面に発現する。いくつかの実施形態において、約４００ナノモル（ｎＭ）の多特異性抗体は、赤血球凝集アッセイにおいて赤血球の溶血を誘導しない。

【0385】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む多特異性抗体に関するいくつかの実施形態において、多特異性抗体は、表２６に記載される対応する配列に対して、それぞれが少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する１つ以上の配列（例えば、２つ以上、または３）を含む。

【0386】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む多特異性抗体に関するいくつかの実施形態において、多特異性抗体は、配列番号４８２に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列と、配列番号４８３に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列と、配列番号４８４に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列とを含む。

【0387】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む多特異性抗体に関するいくつかの実施形態において、多特異性抗体は、表２７に記載される対応する配列に対して、それぞれが少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する１つ以上の配列（例えば、２つ以上、または３）を含む。

【0388】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む多特異性抗体に関するいくつかの実施形態において、多特異性抗体は、配列番号４８５に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列と、配列番号４８６に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列と、配列番号４８７に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列とを含む。

【0389】

【表26】

【0390】

【表27】

【0391】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む多特異性抗体に関するいくつかの実施形態において、多特異性（例えば、二重特異性）抗体、およびその結合フラグメントは、第１のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）定常領域に融合された抗ＣＤ４７結合ドメインの重鎖可変フラグメント（ＶＨ）と、第２のＴＣＲ定常領域に融合された抗ＣＤ４７結合ドメインの軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含み、第１および第２のＴＣＲ定常領域は二量体を形成することができる。いくつかの実施形態において、ＴＣＲ定常領域は、ＴＣＲαおよびＴＣＲβ定常領域である。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ４７ＶＨ－ＴＣＲ融合ポリペプチドは、ヒトＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１）Ｆｃドメインに融合される。ＷＯ２０１９／０５７１２２を参照。いくつかの実施形態において、抗ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、抗原結合フラグメント（Ｆａｂ）ドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）ドメインを含む。

【0392】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む多特異性抗体に関するいくつかの実施形態において、抗ＣＤ４７結合ドメインは、ＶＨ－ＣＤ４７ドメインおよびＶＬ－ＣＤ４７ドメインを含み、ここで、ＶＨ－ＣＤ４７ドメインは、ＴＣＲβ定常ドメインに融合しており、ＶＬ－ＣＤ４７ドメインは、ＴＣＲα定常ドメインに融合している。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ４７結合ドメインは、ＶＨ－ＣＤ４７ドメインおよびＶＬ－ＣＤ４７ドメインを含み、ここで、ＶＨ－ＣＤ４７ドメインは、ＣＨ１ ＩｇＧドメインに融合しており、ＶＬ－ＣＤ４７ドメインは、ＣＬ ＩｇＧドメインに融合している。いくつかの実施形態において、抗ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、抗原結合フラグメント（Ｆａｂ）ドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）ドメインを含む。

【0393】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む多特異性抗体に関するいくつかの実施形態において、多特異性（例えば、二重特異性）抗体、およびその結合フラグメントは、第１のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）定常領域に融合された抗ＥｐＣＡＭ結合ドメインの重鎖可変フラグメント（ＶＨ）と、第２のＴＣＲ定常領域に融合された抗ＥｐＣＡＭ結合ドメインの軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含み、第１および第２のＴＣＲ定常領域は二量体を形成することができる。いくつかの実施形態において、ＴＣＲ定常領域は、ＴＣＲαおよびＴＣＲβ定常領域である。いくつかの実施形態において、抗ＥｐＣＡＭ ＶＨ－ＴＣＲ融合ポリペプチドは、ヒトＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１）Ｆｃドメインに融合される。ＷＯ２０１９／０５７１２２を参照。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ４７結合ドメインは、抗原結合フラグメント（Ｆａｂ）ドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ４７結合ドメインは、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）ドメインを含む。

【0394】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む多特異性抗体に関するいくつかの実施形態において、抗ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、ＶＨ－ＥｐＣＡＭドメインおよびＶＬ－ＥｐＣＡＭドメインを含み、ここで、ＶＨ－ＥｐＣＡＭドメインは、抗ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＴＣＲβ定常ドメインに融合しており、ＶＬ－ＥｐＣＡＭドメインは、抗ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＴＣＲα定常ドメインに融合している。いくつかの実施形態において、抗ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、ＶＨ－ＥｐＣＡＭドメインおよびＶＬ－ＥｐＣＡＭドメインを含み、ここで、ＶＨ－ＥｐＣＡＭドメインは、抗ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＣＨ１ ＩｇＧドメインに融合しており、ＶＬ－ＥｐＣＡＭドメインは、抗ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＣＬ ＩｇＧドメインに融合している。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ４７結合ドメインは、抗原結合フラグメント（Ｆａｂ）ドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ４７結合ドメインは、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）ドメインを含む。

【0395】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む多特異性抗体に関するいくつかの実施形態において、多特異性抗体は、表２８に記載される対応する配列に対して、それぞれが少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する１つ以上の配列（例えば、２つ以上、または３）を含む。

【0396】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む多特異性抗体に関するいくつかの実施形態において、多特異性抗体は、配列番号４８８に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列と、配列番号４８９に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列と、配列番号４９０に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列と、配列番号４９１に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列とを含む。

【0397】

【表28】

【0398】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む多特異性抗体に関するいくつかの実施形態において、多特異性抗体は、表２９に記載される対応する配列に対して、それぞれが少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する１つ以上の配列（例えば、２つ以上、または３）を含む。

【0399】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む多特異性抗体に関するいくつかの実施形態において、多特異性抗体は、配列番号４９２に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列と、配列番号４９３に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列と、配列番号４９４に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列と、配列番号４９５に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列とを含む。

【0400】

【表29】

【0401】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む多特異性抗体に関するいくつかの実施形態において、多特異性抗体は、表３０に記載される対応する配列に対して、それぞれが少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する１つ以上の配列（例えば、２つ以上、または３）を含む。

【0402】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む多特異性抗体に関するいくつかの実施形態において、多特異性抗体は、配列番号５０３に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列と、配列番号５０４に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列と、配列番号５０５に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列とを含む。

【0403】

【表30】

【0404】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む多特異性抗体に関するいくつかの実施形態において、多特異性抗体は、表３１に記載される対応する配列に対して、それぞれが少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する１つ以上の配列（例えば、２つ以上、または３）を含む。

【0405】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む多特異性抗体に関するいくつかの実施形態において、多特異性抗体は、配列番号４８２に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列と、配列番号４８３に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列と、配列番号５０６に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列とを含む。

【0406】

【表31】

【0407】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む多特異性抗体に関するいくつかの実施形態において、多特異性抗体は、表３２に記載される対応する配列に対して、それぞれが少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する１つ以上の配列（例えば、２つ以上、または３）を含む。

【0408】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む多特異性抗体に関するいくつかの実施形態において、多特異性抗体は、配列番号４８２に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列と、配列番号４８３に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列と、配列番号５０７に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列とを含む。

【0409】

【表32】

【0410】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥＧＦＲ結合ドメインを含む多特異性抗体に関するいくつかの実施形態において、多特異性抗体は、腫瘍細胞の表面上に発現されるＣＤ４７に対して、正常細胞、例えば、赤血球、血小板、Ｔ細胞、Ｂ細胞、またはＮＫ細胞の表面上に発現されるＣＤ４７に対するよりも高い親和性を有する。いくつかの実施形態において、腫瘍細胞はＥＧＦＲを発現する。いくつかの実施形態において、（例えば、ヒト）赤血球への最大半量結合に必要な多特異性抗体の濃度は、約５００ナノモル（ｎＭ）超である。いくつかの実施形態において、多特異性抗体は、約１００ナノモル（ｎＭ）未満の解離定数（ＫＤ）で（例えば、ヒト）ＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、多特異性抗体は、約１ナノモル（ｎＭ）～約１００ｎＭ、約１ｎＭ～約５０ｎＭ、または約５ｎＭ～約５０ｎＭの解離定数（ＫＤ）で（例えば、ヒト）ＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、解離定数（ＫＤ）は、表面プラズモン共鳴によって決定される。いくつかの実施形態において、多特異性抗体は、約２５ナノモル（ｎＭ）未満の解離定数（ＫＤ）でＥＧＦＲに結合する。いくつかの実施形態において、多特異性抗体は、約０．２ナノモル（ｎＭ）～約２５ｎＭ、約０．２ｎＭ～約１０ｎＭ、約０．２ｎＭ～約２ｎＭ、または約２ｎＭ～約１０ｎＭの解離定数（ＫＤ）でＥＧＦＲに結合する。いくつかの実施形態において、解離定数（ＫＤ）は、表面プラズモン共鳴によって決定される。いくつかの実施形態において、約１ナノモル（ｎＭ）未満または約０．０１ｎＭ未満の多特異性抗体は、マクロファージによって貪食されるＡ４３１細胞の割合を、非特異性ＩｇＧ１抗体対照と比較して、少なくとも４倍増加させる。

【0411】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥＧＦＲ結合ドメインを含む多特異性抗体に関するいくつかの実施形態において、マクロファージによるＥＧＦＲ陽性ＣＤ４７陽性腫瘍細胞の抗体依存性細胞食作用を媒介するのに必要な抗体の濃度は、約０．０１ナノモル（ｎＭ）～約３ｎＭである。いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ陽性ＣＤ４７陽性腫瘍細胞は、ＯＶＩＳＥ細胞またはＡ４３１細胞である。いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲ陽性ＣＤ４７陽性腫瘍細胞は、類表皮癌細胞、大腸腺癌細胞、頭頸部扁平上皮癌細胞、膀胱癌細胞、膵臓腺癌細胞、肺扁平上皮癌細胞、肺腺癌細胞、腎細胞癌細胞、食道癌細胞、または胃癌細胞から選択される。いくつかの実施形態において、約１００ナノモル（ｎＭ）の多特異性抗体は、細胞の表面上でのＣＤ４７へのＳＩＲＰαの結合を少なくとも約３０％阻害する。いくつかの実施形態において、細胞はＣＤ４７＋ＥＧＦＲ＋腫瘍細胞である。いくつかの実施形態において、細胞はＨＣＣ－４４細胞と少なくとも同じ数のＥＧＦＲタンパク質をその表面に発現する。いくつかの実施形態において、細胞は、少なくとも５０，０００個、少なくとも１００，０００個、少なくとも３００，０００個、少なくとも６００，０００個、または少なくとも１，５００，０００個のＥＧＦＲタンパク質をその表面に発現する。いくつかの実施形態において、約４００ナノモル（ｎＭ）の多特異性抗体は、赤血球凝集アッセイにおいて赤血球の溶血を誘導しない。

【0412】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥＧＦＲ結合ドメインを含む多特異性抗体に関するいくつかの実施形態において、多特異性抗体は、表３３に記載される対応する配列に対して、それぞれが少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する１つ以上（例えば、２つ以上、または３）の配列を含む。

【0413】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥＧＦＲ結合ドメインを含む多特異性抗体に関するいくつかの実施形態において、多特異性抗体は、配列番号４９６に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列と、配列番号４９７に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列と、配列番号４９８に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列とを含む。

【0414】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥＧＦＲ結合ドメインを含む多特異性抗体に関するいくつかの実施形態において、多特異性（例えば、二重特異性）抗体、およびその結合フラグメントは、第１のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）定常領域に融合された抗ＣＤ４７結合ドメインの重鎖可変フラグメント（ＶＨ）と、第２のＴＣＲ定常領域に融合された抗ＣＤ４７結合ドメインの軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含み、第１および第２のＴＣＲ定常領域は二量体を形成することができる。いくつかの実施形態において、ＴＣＲ定常領域は、ＴＣＲαおよびＴＣＲβ定常領域である。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ４７ＶＨ－ＴＣＲ融合ポリペプチドは、ヒトＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１）Ｆｃドメインに融合される。ＷＯ２０１９／０５７１２２を参照。いくつかの実施形態において、抗ＥＧＦＲ結合ドメインは、抗原結合フラグメント（Ｆａｂ）ドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗ＥＧＦＲ結合ドメインは、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）ドメインを含む。

【0415】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥＧＦＲ結合ドメインを含む多特異性抗体に関するいくつかの実施形態において、抗ＣＤ４７結合ドメインは、ＶＨ－ＣＤ４７ドメインおよびＶＬ－ＣＤ４７ドメインを含み、ここで、ＶＨ－ＣＤ４７ドメインは、ＴＣＲβ定常ドメインに融合しており、ＶＬ－ＣＤ４７ドメインは、ＴＣＲα定常ドメインに融合している。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ４７結合ドメインは、ＶＨ－ＣＤ４７ドメインおよびＶＬ－ＣＤ４７ドメインを含み、ここで、ＶＨ－ＣＤ４７ドメインは、ＣＨ１ ＩｇＧドメインに融合しており、ＶＬ－ＣＤ４７ドメインは、ＣＬ ＩｇＧドメインに融合している。いくつかの実施形態において、抗ＥＧＦＲ結合ドメインは、抗原結合フラグメント（Ｆａｂ）ドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗ＥＧＦＲ結合ドメインは、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）ドメインを含む。

【0416】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥＧＦＲ結合ドメインを含む多特異性抗体に関するいくつかの実施形態において、多特異性（例えば、二重特異性）抗体、およびその結合フラグメントは、第１のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）定常領域に融合された抗ＥＧＦＲ結合ドメインの重鎖可変フラグメント（ＶＨ）と、第２のＴＣＲ定常領域に融合された抗ＥＧＦＲ結合ドメインの軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含み、第１および第２のＴＣＲ定常領域は二量体を形成することができる。いくつかの実施形態において、ＴＣＲ定常領域は、ＴＣＲαおよびＴＣＲβ定常領域である。いくつかの実施形態において、抗ＥＧＦＲ ＶＨ－ＴＣＲ融合ポリペプチドは、ヒトＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１）Ｆｃドメインに融合される。ＷＯ２０１９／０５７１２２を参照。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ４７結合ドメインは、抗原結合フラグメント（Ｆａｂ）ドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ４７結合ドメインは、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）ドメインを含む。

【0417】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥＧＦＲ結合ドメインを含む多特異性抗体に関するいくつかの実施形態において、抗ＥＧＦＲ結合ドメインは、ＶＨ－ＥＧＦＲドメインおよびＶＬ－ＥＧＦＲドメインを含み、ここで、ＶＨ－ＥＧＦＲドメインは、抗ＥＧＦＲ結合ドメインのＴＣＲβ定常ドメインに融合しており、ＶＬ－ＥＧＦＲドメインは、抗ＥＧＦＲ結合ドメインのＴＣＲα定常ドメインに融合している。いくつかの実施形態において、抗ＥＧＦＲ結合ドメインは、ＶＨ－ＥＧＦＲドメインおよびＶＬ－ＥＧＦＲドメインを含み、ここで、ＶＨ－ＥＧＦＲドメインは、抗ＥＧＦＲ結合ドメインのＣＨ１ ＩｇＧドメインに融合しており、ＶＬ－ＥＧＦＲドメインは、抗ＥＧＦＲ結合ドメインのＣＬ ＩｇＧドメインに融合している。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ４７結合ドメインは、抗原結合フラグメント（Ｆａｂ）ドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ４７結合ドメインは、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）ドメインを含む。

【0418】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥＧＦＲ結合ドメインを含む多特異性抗体に関するいくつかの実施形態において、多特異性抗体は、表３４に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する１つ以上（例えば、２つ以上、３つ以上、または４）の配列を含む。

【0419】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥＧＦＲ結合ドメインを含む多特異性抗体に関するいくつかの実施形態において、多特異性抗体は、配列番号４９９に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列と、配列番号５００に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列と、配列番号５０１に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列と、配列番号５０２に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列とを含む。

【0420】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥＧＦＲ結合ドメインを含む多特異性抗体に関するいくつかの実施形態において、多特異性抗体は、表３５に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する１つ以上（例えば、２つ以上、３つ以上、または４）の配列を含む。

【0421】

ＣＤ４７結合ドメインおよびＥＧＦＲ結合ドメインを含む多特異性抗体に関するいくつかの実施形態において、多特異性抗体は、配列番号５０８に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列と、配列番号５０９に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列と、配列番号５１０に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列とを含む。

【0422】

【表33】

【0423】

【表34】

【0424】

【表35】

【0425】

いくつかの実施形態において、多特異性（例えば、二重特異性）抗体、およびその結合フラグメントは、非ヒト（例えば、ウサギまたはマウス）抗体に由来する。いくつかの例では、非ヒト抗体のヒト化形態は、元の抗原特異性を維持するために最小限の非ヒト配列を含有する。場合によっては、ヒト化抗体はヒト免疫グロブリン（アクセプター抗体）であり、アクセプター抗体のＣＤＲは、所望の特異性、親和性、結合活性、結合動態、および／または能力を有するラット、ウサギ、またはマウスドナーなどの非ヒト免疫グロブリン（ドナー抗体）のＣＤＲの残基によって置き換えられる。場合によっては、ヒト免疫グロブリンの１つ以上のフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、ドナー抗体の対応する非ヒト残基によって置き換えられる。

【0426】

標的細胞に結合する多特異性抗体
いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する第１の成分と、ＥｐＣＡＭに結合する第２の成分とを含む本開示の多特異性（例えば、二重特異性）抗体は、多特異性（例えば、二重特異性）タンパク質の標的抗原をその表面上に発現する細胞に、ＣＤ４７またはＥｐＣＡＭの一方にのみ二価である抗体の細胞に対する結合親和性と比較して、少なくとも２～５０倍、１０～１００倍、２倍、５倍、１０倍、２５倍、５０倍、もしくは１００倍、または２０～５０％、５０～１００％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％もしくはそれ以上の高い親和性で結合する（例えば、優先的に結合する）。

【0427】

いくつかの実施形態において、本明細書で提供される多特異性（例えば、二重特異性）タンパク質は、その表面上で、ＣＤ４７よりもＥｐＣＡＭを高レベルで発現している標的細胞に結合する。例えば、標的細胞表面上でのＥｐＣＡＭ対ＣＤ４７のタンパク質発現の比は、フローサイトメトリーによって測定されるように、約１、１．５、２．０、２．５、５、１０、１５、２０、２５、５０、１００であるか、または２００よりも大きい。

【0428】

いくつかの実施形態において、本明細書で提供される多特異性（例えば、二重特異性）タンパク質は、その表面上で、ＥｐＣＡＭよりもＣＤ４７を高レベルで発現している標的細胞に結合する。例えば、標的細胞表面上でのＣＤ４７対ＥｐＣＡＭのタンパク質発現の比は、フローサイトメトリーで測定されるように、約１、１．５、２．０、２．５、５、１０、１５、２０、５０、１００であるか、または２００よりも大きい。

【0429】

いくつかの実施形態において、本明細書で提供される多特異性（例えば、二重特異性）タンパク質は、その表面上で、ＣＤ４７およびＥｐＣＡＭを等しいレベルで発現する標的細胞に結合する。例えば、標的細胞表面上でのＣＤ４７対ＥｐＣＡＭのタンパク質発現の比は、フローサイトメトリーによって測定すると約１である。

【0430】

場合によっては、細胞は、約３５，０００個のＣＤ４７タンパク質～約２５０，０００個のＣＤ４７タンパク質を発現する。場合によっては、細胞は、少なくとも約３５，０００個のＣＤ４７タンパク質を発現する。場合によっては、細胞は、最大で約２５０，０００個のＣＤ４７タンパク質を発現する。場合によっては、細胞は、約３５，０００個のＣＤ４７タンパク質～約４０，０００個のＣＤ４７タンパク質、約３５，０００個のＣＤ４７タンパク質～約４５，０００個のＣＤ４７タンパク質、約３５，０００個のＣＤ４７タンパク質～約６０，０００個のＣＤ４７タンパク質、約３５，０００個のＣＤ４７タンパク質～約１００，０００個のＣＤ４７タンパク質、約３５，０００個のＣＤ４７タンパク質～約１５０，０００個のＣＤ４７タンパク質、約３５，０００個のＣＤ４７タンパク質～約２５０，０００個のＣＤ４７タンパク質、約４０，０００個のＣＤ４７タンパク質～約４５，０００個のＣＤ４７タンパク質、約４０，０００個のＣＤ４７タンパク質～約６０，０００個のＣＤ４７タンパク質、約４０，０００個のＣＤ４７タンパク質～約１２０，０００個のＣＤ４７タンパク質、約４０，０００個のＣＤ４７タンパク質～約１５０，０００個のＣＤ４７タンパク質、約４０，０００個のＣＤ４７タンパク質～約２５０，０００個のＣＤ４７タンパク質、約４５，０００個のＣＤ４７タンパク質～約６０，０００個のＣＤ４７タンパク質、約４５，０００個のＣＤ４７タンパク質～約１２０，０００個のＣＤ４７タンパク質、約４５，０００個のＣＤ４７タンパク質～約１５０，０００個のＣＤ４７タンパク質、約４５，０００個のＣＤ４７タンパク質～約２５０，０００個のＣＤ４７タンパク質、約６０，０００個のＣＤ４７タンパク質～約１２０，０００個のＣＤ４７タンパク質、約６０，０００個のＣＤ４７タンパク質～約１５０，０００個のＣＤ４７タンパク質、約６０，０００個のＣＤ４７タンパク質～約２５０，０００個のＣＤ４７タンパク質、約１２０，０００個のＣＤ４７タンパク質～約１５０，０００個のＣＤ４７タンパク質、約１２０，０００個のＣＤ４７タンパク質～約２５０，０００個のＣＤ４７タンパク質、または約１５０，０００個のＣＤ４７タンパク質～約２５０，０００個のＣＤ４７タンパク質を発現する。場合によっては、ＣＤ４７タンパク質は細胞の表面上で発現される。場合によっては、細胞は腫瘍細胞である。場合によっては、細胞は、腺管膵臓腺癌、卵巣明細胞腺癌細胞、結腸腺癌、肺腺癌、肺扁平上皮癌、肺小細胞癌、肝細胞癌、胃腺癌、食道癌、胆管癌、頭頸部扁平上皮癌、前立腺癌、子宮内膜癌、卵巣腺癌、または、外陰扁平上皮癌に由来する。場合によっては、細胞上で発現されるＣＤ４７タンパク質の数は、フローサイトメトリーによって測定される。場合によっては、細胞上で発現されるＣＤ４７タンパク質の数は、定量的フローサイトメトリーによって測定される。

【0431】

場合によっては、細胞は、約３５，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約２ｘ１０^７個のＥｐＣＡＭタンパク質を発現する。場合によっては、細胞は、少なくとも約３５，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質を発現する。場合によっては、細胞は、最大で約２ｘ１０^７個のＥｐＣＡＭタンパク質を発現する。場合によっては、細胞は、約３５，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約８５，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質、約３５，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約１７０，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質、約３５，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約３００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質、約３５，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約４００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質、約３５，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約６５０，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質、約３５，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約７５０，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質、約３５，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約１，５００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質、約３５，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約１，９００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質、約３５，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約４ｘ１０^６個のＥｐＣＡＭタンパク質、約３５，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約６ｘ１０^６個のＥｐＣＡＭタンパク質、約３５，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約７ｘ１０^６個のＥｐＣＡＭタンパク質、約３５，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約１５ｘ１０^６個のＥｐＣＡＭタンパク質、約３５，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約２ｘ１０^７個のＥｐＣＡＭタンパク質、約８５，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約１７０，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質、約８５，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約３００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質、約８５，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約４００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質、約８５，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約６５０，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質、約８５，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約７５０，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質、約８５，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約１，５００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質、約８５，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約１，９００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質、約８５，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約４ｘ１０^６個のＥｐＣＡＭタンパク質、約８５，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約６ｘ１０^６個のＥｐＣＡＭタンパク質、約８５，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約７ｘ１０^６個のＥｐＣＡＭタンパク質、約８５，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約１５ｘ１０^６個のＥｐＣＡＭタンパク質、約８５，０００ＥｐＣＡＭタンパク質～約２ｘ１０^７個のＥｐＣＡＭタンパク質、約１７０，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約３００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質、約１７０，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約４００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質、約１７０，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約６５０，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質、約１７０，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約７５０，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質、約１７０，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約１，５００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質、約１７０，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約１，９００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質、約１７０，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約４ｘ１０^６個のＥｐＣＡＭタンパク質、約１７０，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約６ｘ１０^６個のＥｐＣＡＭタンパク質、約１７０，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約７ｘ１０^６個のＥｐＣＡＭタンパク質、約１７０，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約１５ｘ１０^６個のＥｐＣＡＭタンパク質、約１７０，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約２ｘ１０^７個のＥｐＣＡＭタンパク質、約３００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約４００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質、約３００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約６５０，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質、約３００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約７５０，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質、約３００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約１，５００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質、約３００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約１，９００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質、約３００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約４ｘ１０^６個のＥｐＣＡＭタンパク質、約３００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約６ｘ１０^６個のＥｐＣＡＭタンパク質、約３００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約７ｘ１０^６個のＥｐＣＡＭタンパク質、約３００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約１５ｘ１０^６個のＥｐＣＡＭタンパク質、約３００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約２ｘ１０^７個のＥｐＣＡＭタンパク質、約４００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約６５０，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質、約４００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約７５０，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質、約４００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約１，５００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質、約４００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約１，９００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質、約４００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約４ｘ１０^６個のＥｐＣＡＭタンパク質、約４００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約６ｘ１０^６個のＥｐＣＡＭタンパク質、約４００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約７ｘ１０^６個のＥｐＣＡＭタンパク質、約４００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約１５ｘ１０^６個のＥｐＣＡＭタンパク質、約４００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約２ｘ１０^７個のＥｐＣＡＭタンパク質、約６５０，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約７５０，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質、約６５０，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約１，５００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質、約６５０，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約１，９００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質、約６５０，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約４ｘ１０^６個のＥｐＣＡＭタンパク質、約６５０，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約６ｘ１０^６個のＥｐＣＡＭタンパク質、約６５０，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約７ｘ１０^６個のＥｐＣＡＭタンパク質、約６５０，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約１５ｘ１０^６個のＥｐＣＡＭタンパク質、約６５０，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約２ｘ１０^７個のＥｐＣＡＭタンパク質、約７５０，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約１，５００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質、約７５０，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約１，９００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質、約７５０，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約４ｘ１０^６個のＥｐＣＡＭタンパク質、約７５０，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約６ｘ１０^６個のＥｐＣＡＭタンパク質、約７５０，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約７ｘ１０^６個のＥｐＣＡＭタンパク質、約７５０，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約１５ｘ１０^６個のＥｐＣＡＭタンパク質、約７５０，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約２ｘ１０^７個のＥｐＣＡＭタンパク質、約１，５００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約１，９００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質、約１，５００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約４ｘ１０^６個のＥｐＣＡＭタンパク質、約１，５００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約６ｘ１０^６個のＥｐＣＡＭタンパク質、約１，５００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約７ｘ１０^６個のＥｐＣＡＭタンパク質、約１，５００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約１５ｘ１０^６個のＥｐＣＡＭタンパク質、約１，５００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約２ｘ１０^７個のＥｐＣＡＭタンパク質、約１，９００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約４ｘ１０^６個のＥｐＣＡＭタンパク質、約１，９００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約６ｘ１０^６個のＥｐＣＡＭタンパク質、約１，９００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約７ｘ１０^６個のＥｐＣＡＭタンパク質、約１，９００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約１５ｘ１０^６個のＥｐＣＡＭタンパク質、約１，９００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質～約２ｘ１０^７個のＥｐＣＡＭタンパク質、約４ｘ１０^６個のＥｐＣＡＭタンパク質～約６ｘ１０^６個のＥｐＣＡＭタンパク質、約４ｘ１０^６個のＥｐＣＡＭタンパク質～約７ｘ１０^６個のＥｐＣＡＭタンパク質、約４ｘ１０^６個のＥｐＣＡＭタンパク質～約１５ｘ１０^６個のＥｐＣＡＭタンパク質、約４ｘ１０^６個のＥｐＣＡＭタンパク質～約２ｘ１０^７個のＥｐＣＡＭタンパク質、約６ｘ１０^６個のＥｐＣＡＭタンパク質～約７ｘ１０^６個のＥｐＣＡＭタンパク質、約６ｘ１０^６個のＥｐＣＡＭタンパク質～約１５ｘ１０^６個のＥｐＣＡＭタンパク質、約６ｘ１０^６個のＥｐＣＡＭタンパク質～約２ｘ１０^７個のＥｐＣＡＭタンパク質、または約１５ｘ１０^６個のＥｐＣＡＭタンパク質～約２ｘ１０^７個のＥｐＣＡＭタンパク質を発現する。場合によっては、ＥｐＣＡＭタンパク質は細胞の表面上で発現される。場合によっては、細胞は腫瘍細胞である。場合によっては、細胞は、腺管膵臓腺癌、卵巣明細胞腺癌、結腸腺癌、肺腺癌、肺扁平上皮癌、肺小細胞癌、肝細胞癌、胃腺癌、胆管癌、食道癌、頭頸部扁平上皮癌、前立腺癌、子宮内膜癌、卵巣腺癌、または、外陰扁平上皮癌に由来する。場合によっては、細胞上で発現されるＥｐＣＡＭタンパク質の数は、フローサイトメトリーによって測定される。場合によっては、細胞上で発現されるＥｐＣＡＭタンパク質の数は、定量的フローサイトメトリーによって測定される。

【0432】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを有する多特異性（例えば、二重特異性）タンパク質は、１つ以上のＣＤ４７結合ドメインを有する二価タンパク質、および／または１つ以上のＥｐＣＡＭ結合ドメインを有する二価タンパク質と比較して、ＣＤ４７およびＥｐＣＡＭを発現する細胞に対して増強された親和性を有する。いくつかの例では、多特異性（例えば、二重特異性）タンパク質は、ＣＤ４７に結合する二価タンパク質またはＥｐＣＡＭに結合する二価タンパク質よりもＣＤ４７発現細胞に対して１．５、２、３、４、５、または１０倍高い親和性を有する。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを有する多特異性（例えば、二重特異性）タンパク質は、ＣＤ４７結合ドメインを有する二価タンパク質と比較して、ＥｐＣＡＭよりも高いレベルのＣＤ４７を発現する細胞に対して増強された親和性を有する。いくつかの例では、多特異性（例えば、二重特異性）タンパク質は、ＣＤ４７に結合する二価タンパク質と比較して、ＣＤ４７発現よりも高いＥｐＣＡＭ発現を有する細胞に対して１．５、２、３、４、５、または１０倍高い親和性を有する。

【0433】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを有する多特異性（例えば、二重特異性）抗体は、ＣＤ４７ ＢＭＫ－１またはＣＤ４７ ＢＭＫ－２（本明細書に記載されるものなど）と比較して、減少した赤血球（ＲＢＣ）結合を有する。場合によっては、ＲＢＣ結合の減少は、ＣＤ４７ ＢＭＫ－１と比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または１００％の減少である。場合によっては、ＲＢＣ結合の減少は、ＣＤ４７ ＢＭＫ－２と比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または１００％の減少である。

【0434】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する第１の成分と、ＥＧＦＲに結合する第２の成分とを含む本開示の多特異性（例えば、二重特異性）抗体は、多特異性（例えば、二重特異性）タンパク質の標的抗原をその表面上に発現する細胞に、ＣＤ４７またはＥＧＦＲの一方にのみ二価である抗体の細胞に対する結合親和性と比較して、少なくとも２～５０倍、１０～１００倍、２倍、５倍、１０倍、２５倍、５０倍、もしくは１００倍、または２０～５０％、５０～１００％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％もしくはそれ以上の高い親和性で結合する（例えば、優先的に結合する）。

【0435】

いくつかの実施形態において、本明細書で提供される多特異性（例えば、二重特異性）タンパク質は、その表面上で、ＣＤ４７よりもＥＧＦＲを高レベルで発現している標的細胞に結合する。例えば、標的細胞表面上でのＥＧＦＲ対ＣＤ４７のタンパク質発現の比は、フローサイトメトリーによって測定されるように、約１、１．５、２．０、２．５、５、１０、１５、２０、２５、５０、１００、または２００よりも大きい。

【0436】

いくつかの実施形態において、本明細書で提供される多特異性（例えば、二重特異性）タンパク質は、その表面上で、ＥＧＦＲよりもＣＤ４７を高レベルで発現している標的細胞に結合する。例えば、標的細胞表面上でのＣＤ４７対ＥＧＦＲのタンパク質発現の比は、フローサイトメトリーで測定されるように、約１、１．５、２．０、２．５、５、１０、１５、２０、５０、１００であるか、または２００よりも大きい。

【0437】

いくつかの実施形態において、本明細書で提供される多特異性（例えば、二重特異性）タンパク質は、その表面上で、ＣＤ４７およびＥＧＦＲを等しいレベルで発現する標的細胞に結合する。例えば、標的細胞表面上でのＣＤ４７対ＥＧＦＲのタンパク質発現の比は、フローサイトメトリーによって測定すると約１である。

【0438】

場合によっては、細胞は、約３５，０００個のＣＤ４７タンパク質～約２５０，０００個のＣＤ４７タンパク質を発現する。場合によっては、細胞は、少なくとも約３５，０００個のＣＤ４７タンパク質を発現する。場合によっては、細胞は、最大で約２５０，０００個のＣＤ４７タンパク質を発現する。場合によっては、細胞は、約３５，０００個のＣＤ４７タンパク質～約４０，０００個のＣＤ４７タンパク質、約３５，０００個のＣＤ４７タンパク質～約４５，０００個のＣＤ４７タンパク質、約３５，０００個のＣＤ４７タンパク質～約６０，０００個のＣＤ４７タンパク質、約３５，０００個のＣＤ４７タンパク質～約１００，０００個のＣＤ４７タンパク質、約３５，０００個のＣＤ４７タンパク質～約１５０，０００個のＣＤ４７タンパク質、約３５，０００個のＣＤ４７タンパク質～約２５０，０００個のＣＤ４７タンパク質、約４０，０００個のＣＤ４７タンパク質～約４５，０００個のＣＤ４７タンパク質、約４０，０００個のＣＤ４７タンパク質～約６０，０００個のＣＤ４７タンパク質、約４０，０００個のＣＤ４７タンパク質～約１２０，０００個のＣＤ４７タンパク質、約４０，０００個のＣＤ４７タンパク質～約１５０，０００個のＣＤ４７タンパク質、約４０，０００個のＣＤ４７タンパク質～約２５０，０００個のＣＤ４７タンパク質、約４５，０００個のＣＤ４７タンパク質～約６０，０００個のＣＤ４７タンパク質、約４５，０００個のＣＤ４７タンパク質～約１２０，０００個のＣＤ４７タンパク質、約４５，０００個のＣＤ４７タンパク質～約１５０，０００個のＣＤ４７タンパク質、約４５，０００個のＣＤ４７タンパク質～約２５０，０００個のＣＤ４７タンパク質、約６０，０００個のＣＤ４７タンパク質～約１２０，０００個のＣＤ４７タンパク質、約６０，０００個のＣＤ４７タンパク質～約１５０，０００個のＣＤ４７タンパク質、約６０，０００個のＣＤ４７タンパク質～約２５０，０００個のＣＤ４７タンパク質、約１２０，０００個のＣＤ４７タンパク質～約１５０，０００個のＣＤ４７タンパク質、約１２０，０００個のＣＤ４７タンパク質～約２５０，０００個のＣＤ４７タンパク質、または約１５０，０００個のＣＤ４７タンパク質～約２５０，０００個のＣＤ４７タンパク質を発現する。場合によっては、ＣＤ４７タンパク質は細胞の表面上で発現される。場合によっては、細胞は腫瘍細胞である。場合によっては、細胞は、腺管膵臓腺癌、卵巣明細胞腺癌、結腸腺癌、肺腺癌、肺扁平上皮癌、肺小細胞癌、肝細胞癌、胃腺癌、食道癌、胆管癌、頭頸部扁平上皮癌、前立腺癌、子宮内膜癌、卵巣腺癌、または、外陰扁平上皮癌に由来する。場合によっては、細胞上で発現されるＣＤ４７タンパク質の数は、フローサイトメトリーによって測定される。場合によっては、細胞上で発現されるＣＤ４７タンパク質の数は、定量的フローサイトメトリーによって測定される。

【0439】

場合によっては、細胞は、約３５，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約２ｘ１０^７個のＥＧＦＲタンパク質を発現する。場合によっては、細胞は、少なくとも約３５，０００個のＥＧＦＲタンパク質を発現する。場合によっては、細胞は、最大で約２ｘ１０^７個のＥＧＦＲタンパク質を発現する。場合によっては、細胞は、約３５，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約８５，０００個のＥＧＦＲタンパク質、約３５，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約１７０，０００個のＥＧＦＲタンパク質、約３５，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約３００，０００個のＥＧＦＲタンパク質、約３５，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約４００，０００個のＥＧＦＲタンパク質、約３５，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約６５０，０００個のＥＧＦＲタンパク質、約３５，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約７５０，０００個のＥＧＦＲタンパク質、約３５，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約１，５００，０００個のＥＧＦＲタンパク質、約３５，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約１，９００，０００個のＥＧＦＲタンパク質、約３５，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約４ｘ１０^６個のＥＧＦＲタンパク質、約３５，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約６ｘ１０^６個のＥＧＦＲタンパク質、約３５，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約７ｘ１０^６個のＥＧＦＲタンパク質、約３５，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約１５ｘ１０^６個のＥＧＦＲタンパク質、約３５，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約２ｘ１０^７個のＥＧＦＲタンパク質、約８５，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約１７０，０００個のＥＧＦＲタンパク質、約８５，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約３００，０００個のＥＧＦＲタンパク質、約８５，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約４００，０００個のＥＧＦＲタンパク質、約８５，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約６５０，０００個のＥＧＦＲタンパク質、約８５，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約７５０，０００個のＥＧＦＲタンパク質、約８５，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約１，５００，０００個のＥＧＦＲタンパク質、約８５，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約１，９００，０００個のＥＧＦＲタンパク質、約８５，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約４ｘ１０^６個のＥＧＦＲタンパク質、約８５，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約６ｘ１０^６個のＥＧＦＲタンパク質、約８５，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約７ｘ１０^６個のＥＧＦＲタンパク質、約８５，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約１５ｘ１０^６個のＥＧＦＲタンパク質、約８５，０００ＥＧＦＲタンパク質～約２ｘ１０^７個のＥＧＦＲタンパク質、約１７０，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約３００，０００個のＥＧＦＲタンパク質、約１７０，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約４００，０００個のＥＧＦＲタンパク質、約１７０，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約６５０，０００個のＥＧＦＲタンパク質、約１７０，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約７５０，０００個のＥＧＦＲタンパク質、約１７０，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約１，５００，０００個のＥＧＦＲタンパク質、約１７０，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約１，９００，０００個のＥＧＦＲタンパク質、約１７０，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約４ｘ１０^６個のＥＧＦＲタンパク質、約１７０，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約６ｘ１０^６個のＥＧＦＲタンパク質、約１７０，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約７ｘ１０^６個のＥＧＦＲタンパク質、約１７０，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約１５ｘ１０^６個のＥＧＦＲタンパク質、約１７０，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約２ｘ１０^７個のＥＧＦＲタンパク質、約３００，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約４００，０００個のＥＧＦＲタンパク質、約３００，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約６５０，０００個のＥＧＦＲタンパク質、約３００，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約７５０，０００個のＥＧＦＲタンパク質、約３００，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約１，５００，０００個のＥＧＦＲタンパク質、約３００，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約１，９００，０００個のＥＧＦＲタンパク質、約３００，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約４ｘ１０^６個のＥＧＦＲタンパク質、約３００，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約６ｘ１０^６個のＥＧＦＲタンパク質、約３００，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約７ｘ１０^６個のＥＧＦＲタンパク質、約３００，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約１５ｘ１０^６個のＥＧＦＲタンパク質、約３００，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約２ｘ１０^７個のＥＧＦＲタンパク質、約４００，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約６５０，０００個のＥＧＦＲタンパク質、約４００，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約７５０，０００個のＥＧＦＲタンパク質、約４００，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約１，５００，０００個のＥＧＦＲタンパク質、約４００，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約１，９００，０００個のＥＧＦＲタンパク質、約４００，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約４ｘ１０^６個のＥＧＦＲタンパク質、約４００，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約６ｘ１０^６個のＥＧＦＲタンパク質、約４００，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約７ｘ１０^６個のＥＧＦＲタンパク質、約４００，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約１５ｘ１０^６個のＥＧＦＲタンパク質、約４００，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約２ｘ１０^７個のＥＧＦＲタンパク質、約６５０，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約７５０，０００個のＥＧＦＲタンパク質、約６５０，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約１，５００，０００個のＥＧＦＲタンパク質、約６５０，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約１，９００，０００個のＥＧＦＲタンパク質、約６５０，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約４ｘ１０^６個のＥＧＦＲタンパク質、約６５０，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約６ｘ１０^６個のＥＧＦＲタンパク質、約６５０，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約７ｘ１０^６個のＥＧＦＲタンパク質、約６５０，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約１５ｘ１０^６個のＥＧＦＲタンパク質、約６５０，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約２ｘ１０^７個のＥＧＦＲタンパク質、約７５０，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約１，５００，０００個のＥＧＦＲタンパク質、約７５０，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約１，９００，０００個のＥＧＦＲタンパク質、約７５０，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約４ｘ１０^６個のＥＧＦＲタンパク質、約７５０，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約６ｘ１０^６個のＥＧＦＲタンパク質、約７５０，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約７ｘ１０^６個のＥＧＦＲタンパク質、約７５０，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約１５ｘ１０^６個のＥＧＦＲタンパク質、約７５０，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約２ｘ１０^７個のＥＧＦＲタンパク質、約１，５００，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約１，９００，０００個のＥＧＦＲタンパク質、約１，５００，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約４ｘ１０^６個のＥＧＦＲタンパク質、約１，５００，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約６ｘ１０^６個のＥＧＦＲタンパク質、約１，５００，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約７ｘ１０^６個のＥＧＦＲタンパク質、約１，５００，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約１５ｘ１０^６個のＥＧＦＲタンパク質、約１，５００，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約２ｘ１０^７個のＥＧＦＲタンパク質、約１，９００，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約４ｘ１０^６個のＥＧＦＲタンパク質、約１，９００，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約６ｘ１０^６個のＥＧＦＲタンパク質、約１，９００，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約７ｘ１０^６個のＥＧＦＲタンパク質、約１，９００，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約１５ｘ１０^６個のＥＧＦＲタンパク質、約１，９００，０００個のＥＧＦＲタンパク質～約２ｘ１０^７個のＥＧＦＲタンパク質、約４ｘ１０^６個のＥＧＦＲタンパク質～約６ｘ１０^６個のＥＧＦＲタンパク質、約４ｘ１０^６個のＥＧＦＲタンパク質～約７ｘ１０^６個のＥＧＦＲタンパク質、約４ｘ１０^６個のＥＧＦＲタンパク質～約１５ｘ１０^６個のＥＧＦＲタンパク質、約４ｘ１０^６個のＥＧＦＲタンパク質～約２ｘ１０^７個のＥＧＦＲタンパク質、約６ｘ１０^６個のＥＧＦＲタンパク質～約７ｘ１０^６個のＥＧＦＲタンパク質、約６ｘ１０^６個のＥＧＦＲタンパク質～約１５ｘ１０^６個のＥＧＦＲタンパク質、約６ｘ１０^６個のＥＧＦＲタンパク質～約２ｘ１０^７個のＥＧＦＲタンパク質、または約１５ｘ１０^６個のＥＧＦＲタンパク質～約２ｘ１０^７個のＥＧＦＲタンパク質を発現する。場合によっては、ＥＧＦＲタンパク質は細胞の表面上で発現される。場合によっては、細胞は腫瘍細胞である。場合によっては、細胞は、腺管膵臓腺癌、卵巣明細胞腺癌、結腸腺癌、肺腺癌、肺扁平上皮癌、肺小細胞癌、肝細胞癌、胃腺癌、食道癌、胆管癌、頭頸部扁平上皮癌、前立腺癌、子宮内膜癌、卵巣腺癌、または、外陰扁平上皮癌に由来する。場合によっては、細胞上で発現されるＥＧＦＲタンパク質の数は、フローサイトメトリーによって測定される。場合によっては、細胞上で発現されるＥＧＦＲタンパク質の数は、定量的フローサイトメトリーによって測定される。

【0440】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインおよびＥＧＦＲ結合ドメインを有する多特異性（例えば、二重特異性）タンパク質は、１つ以上のＣＤ４７結合ドメインを有する二価タンパク質、および／または１つ以上のＥＧＦＲ結合ドメインを有する二価タンパク質と比較して、ＣＤ４７およびＥＧＦＲを発現する細胞に対して増強された親和性を有する。いくつかの例では、多特異性（例えば、二重特異性）タンパク質は、ＣＤ４７に結合する二価タンパク質またはＥＧＦＲに結合する二価タンパク質よりもＣＤ４７発現細胞に対して１．５、２、３、４、５、または１０倍高い親和性を有する。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインおよびＥＧＦＲ結合ドメインを有する多特異性（例えば、二重特異性）タンパク質は、ＣＤ４７結合ドメインを有する二価タンパク質と比較して、ＥＧＦＲよりも高いレベルのＣＤ４７を発現する細胞に対して増強された親和性を有する。いくつかの例では、多特異性（例えば、二重特異性）タンパク質は、ＣＤ４７に結合する二価タンパク質と比較して、ＣＤ４７発現よりも高いＥＧＦＲ発現を有する細胞に対して１．５、２、３、４、５、または１０倍高い親和性を有する。

【0441】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインおよびＥＧＦＲ結合ドメインを有する多特異性（例えば、二重特異性）抗体は、ＣＤ４７ ＢＭＫ－１またはＣＤ４７ ＢＭＫ－２（本明細書に記載されるものなど）と比較して、減少した赤血球（ＲＢＣ）結合を有する。場合によっては、ＲＢＣ結合の減少は、ＣＤ４７ ＢＭＫ－１と比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または１００％の減少である。場合によっては、ＲＢＣ結合の減少は、ＣＤ４７ ＢＭＫ－２と比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または１００％の減少である。

【0442】

標的細胞上での多特異性抗体の免疫学的活性
いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを有する多特異性抗体は、ＣＤ４７結合ドメインを有する二価抗体および／またはＥｐＣＡＭ結合ドメインを有する二価抗体と比較して、ＣＤ４７発現細胞に対して高い免疫活性を有する。いくつかの例では、多特異性抗体は、ＣＤ４７結合ドメインを有する二価抗体および／またはＥｐＣＡＭ結合ドメインを有する二価抗体よりも、１．５、２、３、４、５、または１０倍高い免疫活性を有する。多特異性抗体の様々な免疫活性は、ＡＤＣＣアッセイおよびＡＤＣＰアッセイなどのｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイで測定可能である。いくつかの例では、多特異性抗体は、ＣＤ４７結合ドメインを有する二価抗体および／またはＥｐＣＡＭ結合ドメインを有する二価抗体よりも、１．５、２、３、４、５、または１０倍高いＡＤＣＣ活性を有する。いくつかの例では、多特異性抗体は、ＣＤ４７結合ドメインを有する二価抗体および／またはＥｐＣＡＭ結合ドメインを有する二価抗体よりも、１．５、２、３、４、５、または１０倍高いＡＤＣＰ活性を有する。

【0443】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを有する多特異性抗体は、ＣＤ４７結合ドメインを有する二価抗体および／またはＥｐＣＡＭ結合ドメインを有する二価抗体と比較して、ＣＤ４７発現細胞に対して高い免疫活性を有する。いくつかの例では、多特異性抗体は、ＣＤ４７結合ドメインを有する二価抗体および／またはＥｐＣＡＭ結合ドメインを有する二価抗体よりも、１０～２０％、２１～３０％、３１～４０％、４１～５０％、または少なくとも５１％高い免疫活性を有する。多特異性抗体の様々な免疫活性は、ＡＤＣＣアッセイおよびＡＤＣＰアッセイなどのｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイで測定可能である。いくつかの例では、多特異性抗体は、ＣＤ４７結合ドメインを有する二価抗体および／またはＥｐＣＡＭ結合ドメインを有する二価抗体よりも、１０～２０％、２１～３０％、３１～４０％、４１～５０％、または少なくとも５１％高いＡＤＣＣ活性を有する。いくつかの例では、多特異性抗体は、ＣＤ４７結合ドメインを有する二価抗体および／またはＥｐＣＡＭ結合ドメインを有する二価抗体よりも、１０～２０％、２１～３０％、３１～４０％、４１～５０％、または少なくとも５１％高いＡＤＣＰ活性を有する。

【0444】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に特異的に結合する第１の標的化部分と、ＥｐＣＡＭに特異的に結合する第２の標的化部分とを含む多特異性抗体が本明細書に記載される。いくつかの例では、多特異性抗体は、参照抗体ＣＤ４７ＢＭＫ－１（本明細書に記載されるものなど）によるＡＤＣＰ効果と比較して、増強されたＡＤＣＰ効果をさらに含む。いくつかの例では、多特異性抗体は、参照抗体ＣＤ４７ＢＭＫ－２によるＡＤＣＣ効果と比較して、増強されたＡＤＣＣ効果をさらに含む。場合によっては、増強されたＡＤＣＰは、参照抗体ＣＤ４７ ＢＭＫ－１のＡＤＣＰ効果よりも、少なくとも２倍、３倍、４倍、またはそれ以上高い。場合によっては、増強されたＡＤＣＰは、参照抗体ＣＤ４７ ＢＭＫ－１のＣＤ４７ ＢＭＫ－１効果よりも、少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれ以上高い。場合によっては、増強されたＡＤＣＣは、参照抗体ＣＤ４７ ＢＭＫ－２のＡＤＣＣ効果よりも、少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、またはそれ以上高い。場合によっては、増強されたＡＤＣＣは、参照抗体ＣＤ４７ ＢＭＫ－２のＡＤＣＣ効果よりも、少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれ以上高い。

【0445】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に特異的に結合する第１の標的化部分と、ＥｐＣＡＭに特異的に結合する第２の標的化部分とを含む多特異性抗体が本明細書に記載される。いくつかの例では、多特異性抗体は、参照抗体ＣＤ４７ＢＭＫ－１（本明細書に記載されるものなど）によるＡＤＣＰ効果と比較して、増強されたＡＤＣＰ効果をさらに含む。いくつかの例では、多特異性抗体は、参照抗体ＣＤ４７ＢＭＫ－２によるＡＤＣＣ効果と比較して、増強されたＡＤＣＣ効果をさらに含む。場合によっては、増強されたＡＤＣＰは、参照抗体ＣＤ４７ ＢＭＫ－２のＡＤＣＰ効果よりも、少なくとも２倍、３倍、４倍、またはそれ以上高い。場合によっては、増強されたＡＤＣＰは、参照抗体ＣＤ４７ ＢＭＫ－２のＣＤ４７ ＢＭＫ－２効果よりも、少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれ以上高い。場合によっては、増強されたＡＤＣＣは、参照抗体ＣＤ４７ ＢＭＫ－２のＡＤＣＣ効果よりも、少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、またはそれ以上高い。場合によっては、増強されたＡＤＣＣは、参照抗体ＣＤ４７ ＢＭＫ－２のＡＤＣＣ効果よりも、少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれ以上高い。

【0446】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に特異的に結合する第１の成分と、ＥｐＣＡＭに特異的に結合する第２の成分とを含む多特異性抗体が本明細書に記載され、多特異性抗体は、第１の成分または第２の成分のいずれかを含む二価抗体よりも効率的にＡＤＣＣを媒介し、ＡＤＣＣ活性は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞毒性アッセイを用いて決定される。いくつかの実施形態において、多特異性抗体は、ＡＤＣＣアッセイおよびｉｎ ｖｉｔｒｏＡＤＣＣアッセイにおいて、第１の成分または第２の成分のいずれかを含む二価抗体よりも、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約７５％、少なくとも約１００％高い最大細胞傷害性を媒介する。いくつかの実施形態において、多特異性抗体は、ＡＤＣＣアッセイおよびｉｎ ｖｉｔｒｏＡＤＣＣアッセイにおいて、第１の成分または第２の成分のいずれかを含む二価抗体よりも、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、または少なくとも１０倍高い最大細胞傷害性を媒介する。

【0447】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に特異的に結合する第１の成分と、ＥｐＣＡＭに特異的に結合する第２の成分とを含む多特異性抗体が本明細書に記載され、多特異性抗体は、第１の成分または第２の成分のいずれかを含む二価抗体よりも、効率的に抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）を媒介し、ＡＤＣＰ活性は、ｉｎ ｖｉｔｒｏＦＡＣＳベースの食作用アッセイを使用して決定される。いくつかの実施形態において、多特異性抗体は、ＡＤＣＰアッセイおよびｉｎ ｖｉｔｒｏ ＡＤＣＣアッセイにおいて、第１の成分または第２の成分のいずれかを含む二価抗体よりも、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約７５％、少なくとも約１００％高い最大食作用を媒介する。

【0448】

いくつかの例では、多特異性抗体は、参照抗体ＣＤ４７ ＢＭＫ－１（本明細書に記載されるものなど）の免疫細胞による死滅と比較して、免疫細胞による改善された癌細胞の死滅をさらに含む。場合によっては、癌細胞の死滅は、参照抗体ＣＤ４７ ＢＭＫ－１の存在下で死滅した癌細胞と比較して、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれ以上改善される。場合によっては、免疫細胞はナチュラルキラー細胞である。場合によっては、免疫細胞は食細胞である。場合によっては、免疫細胞はマクロファージである。

【0449】

いくつかの例では、多特異性抗体は、参照抗体ＣＤ４７ ＢＭＫ－２（本明細書に記載されるものなど）の免疫細胞による死滅と比較して、免疫細胞による改善された癌細胞の死滅をさらに含む。場合によっては、癌細胞の死滅は、参照抗体ＣＤ４７ ＢＭＫ－２の存在下で死滅した癌細胞と比較して、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれ以上改善される。場合によっては、免疫細胞はナチュラルキラー細胞である。場合によっては、免疫細胞は食細胞である。場合によっては、免疫細胞はマクロファージである。

【0450】

免疫活性は細胞株由来の異種移植片アッセイでも測定可能であり、ここで、形質転換細胞はマウスに注入され、腫瘍を形成する。いくつかの例では、ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを有する多特異性タンパク質は、同じＣＤ４７結合ドメインを有する二価タンパク質および／または同じＥｐＣＡＭ結合ドメインを有する二価タンパク質よりも、ＣＤ４７発現細胞を含む腫瘍の成長を大幅に阻害する。いくつかの例では、多特異性タンパク質は、ＣＤ４７結合ドメインを有する二価タンパク質および／またはＥｐＣＡＭ結合ドメインを有する二価タンパク質と比較して、１．５、２、３、４、５、または１０倍高い異種移植片腫瘍の成長の阻害を示す。

【0451】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインおよびＥＧＦＲ結合ドメインを有する多特異性抗体は、ＣＤ４７結合ドメインを有する二価抗体および／またはＥＧＦＲ結合ドメインを有する二価抗体と比較して、ＣＤ４７発現細胞に対して高い免疫活性を有する。いくつかの例では、多特異性抗体は、ＣＤ４７結合ドメインを有する二価抗体および／またはＥＧＦＲ結合ドメインを有する二価抗体よりも、１．５、２、３、４、５、または１０倍高い免疫活性を有する。多特異性抗体の様々な免疫活性は、ＡＤＣＣアッセイおよびＡＤＣＰアッセイなどのｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイで測定可能である。いくつかの例では、多特異性抗体は、ＣＤ４７結合ドメインを有する二価抗体および／またはＥＧＦＲ結合ドメインを有する二価抗体よりも、１．５、２、３、４、５、または１０倍高いＡＤＣＣ活性を有する。いくつかの例では、多特異性抗体は、ＣＤ４７結合ドメインを有する二価抗体および／またはＥＧＦＲ結合ドメインを有する二価抗体よりも、１．５、２、３、４、５、または１０倍高いＡＤＣＰ活性を有する。

【0452】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７結合ドメインおよびＥＧＦＲ結合ドメインを有する多特異性抗体は、ＣＤ４７結合ドメインを有する二価抗体および／またはＥＧＦＲ結合ドメインを有する二価抗体と比較して、ＣＤ４７発現細胞に対して高い免疫活性を有する。いくつかの例では、多特異性抗体は、ＣＤ４７結合ドメインを有する二価抗体および／またはＥＧＦＲ結合ドメインを有する二価抗体よりも、１０～２０％、２１～３０％、３１～４０％、４１～５０％、または少なくとも５１％高い免疫活性を有する。多特異性抗体の様々な免疫活性は、ＡＤＣＣアッセイおよびＡＤＣＰアッセイなどのｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイで測定可能である。いくつかの例では、多特異性抗体は、ＣＤ４７結合ドメインを有する二価抗体および／またはＥＧＦＲ結合ドメインを有する二価抗体よりも、１０～２０％、２１～３０％、３１～４０％、４１～５０％、または少なくとも５１％高いＡＤＣＣ活性を有する。いくつかの例では、多特異性抗体は、ＣＤ４７結合ドメインを有する二価抗体および／またはＥＧＦＲ結合ドメインを有する二価抗体よりも、１０～２０％、２１～３０％、３１～４０％、４１～５０％、または少なくとも５１％高いＡＤＣＰ活性を有する。

【0453】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に特異的に結合する第１の標的化部分と、ＥＧＦＲに特異的に結合する第２の標的化部分とを含む多特異性抗体が本明細書に記載される。いくつかの例では、多特異性抗体は、参照抗体ＣＤ４７ＢＭＫ－１（本明細書に記載されるものなど）によるＡＤＣＰ効果と比較して、増強されたＡＤＣＰ効果をさらに含む。いくつかの例では、多特異性抗体は、参照抗体ＣＤ４７ ＢＭＫ－１によるＡＤＣＣ効果と比較して、増強されたＡＤＣＣ効果をさらに含む。場合によっては、増強されたＡＤＣＰは、参照抗体ＣＤ４７ ＢＭＫ－１のＡＤＣＰ効果よりも、少なくとも２倍、３倍、４倍、またはそれ以上高い。場合によっては、増強されたＡＤＣＰは、参照抗体ＣＤ４７ ＢＭＫ－１のＡＤＣＰ効果よりも、少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれ以上高い。場合によっては、増強されたＡＤＣＣは、参照抗体ＣＤ４７ ＢＭＫ－１のＡＤＣＣ効果よりも、少なくとも１倍、３倍、４倍、５倍、またはそれ以上高い。場合によっては、増強されたＡＤＣＣは、参照抗体ＣＤ４７ ＢＭＫ－１のＡＤＣＣ効果よりも、少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれ以上高い。

【0454】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に特異的に結合する第１の標的化部分と、ＥＧＦＲに特異的に結合する第２の標的化部分とを含む多特異性抗体が本明細書に記載される。いくつかの例では、多特異性抗体は、参照抗体ＣＤ４７ ＢＭＫ－２（本明細書に記載されるものなど）によるＡＤＣＰ効果と比較して、増強されたＡＤＣＰ効果をさらに含む。いくつかの例では、多特異性抗体は、参照抗体ＣＤ４７ＢＭＫ－２によるＡＤＣＣ効果と比較して、増強されたＡＤＣＣ効果をさらに含む。場合によっては、増強されたＡＤＣＰは、参照抗体ＣＤ４７ ＢＭＫ－２のＡＤＣＰ効果よりも、少なくとも２倍、３倍、４倍、またはそれ以上高い。場合によっては、増強されたＡＤＣＰは、参照抗体ＣＤ４７ ＢＭＫ－２のＡＤＣＰ効果よりも、少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれ以上高い。場合によっては、増強されたＡＤＣＣは、参照抗体ＣＤ４７ ＢＭＫ－２のＡＤＣＣ効果よりも、少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、またはそれ以上高い。場合によっては、増強されたＡＤＣＣは、参照抗体ＣＤ４７ ＢＭＫ－２のＡＤＣＣ効果よりも、少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれ以上高い。

【0455】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に特異的に結合する第１の成分と、ＥＧＦＲに特異的に結合する第２の成分とを含む多特異性抗体が本明細書に記載され、多特異性抗体は、第１の成分または第２の成分のいずれかを含む二価抗体よりも効率的にＡＤＣＣを媒介し、ＡＤＣＣ活性は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞毒性アッセイを用いて決定される。いくつかの実施形態において、多特異性抗体は、ＡＤＣＣアッセイおよびｉｎ ｖｉｔｒｏＡＤＣＣアッセイにおいて、第１の成分または第２の成分のいずれかを含む二価抗体よりも、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約７５％、少なくとも約１００％高い最大細胞傷害性を媒介する。いくつかの実施形態において、多特異性抗体は、ＡＤＣＣアッセイおよびｉｎ ｖｉｔｒｏＡＤＣＣアッセイにおいて、第１の成分または第２の成分のいずれかを含む二価抗体よりも、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、または少なくとも１０倍高い最大細胞傷害性を媒介する。

【0456】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に特異的に結合する第１の成分と、ＥＧＦＲに特異的に結合する第２の成分とを含む多特異性抗体が本明細書に記載され、多特異性抗体は、第１の成分または第２の成分のいずれかを含む二価抗体よりも、効率的に抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）を媒介し、ＡＤＣＰ活性は、ｉｎ ｖｉｔｒｏＦＡＣＳベースの食作用アッセイを使用して決定される。いくつかの実施形態において、多特異性抗体は、ＡＤＣＰアッセイおよびｉｎ ｖｉｔｒｏ ＡＤＣＣアッセイにおいて、第１の成分または第２の成分のいずれかを含む二価抗体よりも、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約７５％、少なくとも約１００％高い最大食作用を媒介する。

【0457】

いくつかの例では、多特異性抗体は、参照抗体ＣＤ４７ ＢＭＫ－１（本明細書に記載されるものなど）の免疫細胞による死滅と比較して、免疫細胞による改善された癌細胞の死滅をさらに含む。場合によっては、癌細胞の死滅は、参照抗体ＣＤ４７ ＢＭＫ－１の存在下で死滅した癌細胞と比較して、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれ以上改善される。場合によっては、免疫細胞はナチュラルキラー細胞である。場合によっては、免疫細胞は食細胞である。場合によっては、免疫細胞はマクロファージである。

【0458】

いくつかの例では、多特異性抗体は、参照抗体ＣＤ４７ ＢＭＫ－２（本明細書に記載されるものなど）の免疫細胞による死滅と比較して、免疫細胞による改善された癌細胞の死滅をさらに含む。場合によっては、癌細胞の死滅は、参照抗体ＣＤ４７ ＢＭＫ－２の存在下で死滅した癌細胞と比較して、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれ以上改善される。場合によっては、免疫細胞はナチュラルキラー細胞である。場合によっては、免疫細胞は食細胞である。場合によっては、免疫細胞はマクロファージである。

【0459】

免疫活性は細胞株由来の異種移植片アッセイでも測定可能であり、ここで、形質転換細胞はマウスに注入され、腫瘍を形成する。いくつかの例では、ＣＤ４７結合ドメインおよびＥＧＦＲ結合ドメインを有する多特異性タンパク質は、同じＣＤ４７結合ドメインを有する二価タンパク質および／または同じＥＧＦＲ結合ドメインを有する二価タンパク質よりも、ＣＤ４７発現細胞を含む腫瘍の成長を大幅に阻害する。いくつかの例では、多特異性タンパク質は、ＣＤ４７結合ドメインを有する二価タンパク質および／またはＥＧＦＲ結合ドメインを有する二価タンパク質と比較して、１．５、２、３、４、５、または１０倍高い異種移植片腫瘍の成長の阻害を示す。

【0460】

本明細書で使用される場合、「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」および「ＡＤＣＣ」とは、非特異的細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、およびマクロファージ）が標的細胞上の結合した抗体を認識し、その後、標的細胞の溶解を引き起こす細胞媒介反応を指す。１つの実施形態において、標的細胞は、腫瘍（または癌）細胞（例えば、骨髄腫細胞）などのヒト細胞である。いくつかの実施形態において、腫瘍細胞は、腺管膵臓腺癌細胞、卵巣明細胞腺癌細胞、卵巣腺癌細胞、結腸腺癌細胞、直腸腺癌細胞、食道癌細胞、胃癌細胞、食道癌細胞、非小細胞肺癌細胞、小細胞肺癌細胞、子宮内膜癌細胞、肝細胞癌細胞、胆管癌細胞、前立腺腺癌細胞、甲状腺癌細胞、乳癌細胞、子宮頸癌細胞、腎細胞癌細胞、精巣癌細胞、または外陰扁平上皮癌細胞である。いくつかの実施形態において、腫瘍細胞は腺癌、リンパ腫、癌腫に由来する。場合によっては、腺癌は、腺管膵臓腺癌、卵巣明細胞腺癌、結腸腺癌、肺腺癌、胃腺癌細胞、または卵巣腺癌である。その他の場合において、癌腫は、肺扁平上皮癌細胞、肺小細胞癌細胞、肝細胞癌細胞、前立腺癌細胞、子宮内膜癌細胞、胆管癌細胞、または外陰扁平上皮癌である。任意の特定の作用機序に拘束されることを望むものではないが、ＡＤＣＣを媒介する細胞傷害性細胞は一般にＦｃ受容体（ＦｃＲ）を発現する。ＡＤＣＣを媒介する細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩを発現し、一方で、単球はＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩ、および／またはＦｃγＲＩＶを発現する。造血細胞上でのＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，９：４５７－９２（１９９１）に要約されている。

【0461】

本明細書に記載される多特異性タンパク質のＡＤＣＣ活性を評価するために、癌細胞株を使用する細胞傷害性アッセイなどのｉｎ ｖｉｔｒｏ ＡＤＣＣアッセイが、いくつかの実施形態において実施される。そのようなアッセイに有用なエフェクター細胞は、限定されないが、辺縁の血中単核細胞（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む。代替的にまたはさらに、関心対象の多特異性タンパク質のＡＤＣＣ活性は、いくつかの実施形態において、ｉｎ ｖｉｖｏで、例えば、動物において評価される。

【0462】

「抗体依存性細胞食作用」または「ＡＤＣＰ」とは、食細胞（例えば、マクロファージ）が抗体被覆標的細胞を排除する能力を指す。いくつかの実施形態において、ＡＤＣＰ効果を測定するために食作用アッセイが使用される。

【0463】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７およびＥｐＣＡＭに結合する本明細書に記載される多特異性タンパク質は、ＣＤ４７／ＥｐＣＡＭ＋癌細胞の指数関数的に増殖する集団における細胞の少なくとも５０％の抗体依存性細胞食作用を媒介する。いくつかの実施形態において、腫瘍（または癌）細胞は、腺癌、リンパ腫、癌腫に由来する。場合によっては、腺癌は、腺管膵臓腺癌、卵巣明細胞腺癌、結腸腺癌、肺腺癌、胃腺癌細胞、または卵巣腺癌である。

【0464】

いくつかの実施形態において、本明細書に記載される多特異性タンパク質はＣＤ４７に結合し、ＥｐＣＡＭはＣＤ４７－ＳＩＲＰα相互作用の阻害を媒介する。いくつかの実施形態において、多特異性抗体は、ＳＩＲＰαのＣＤ４７への結合を少なくとも５０％阻害する。いくつかの実施形態において、結合阻害はＥＬＩＳＡによって測定される。いくつかの実施形態において、結合阻害はＣＤ４７＋細胞で測定される。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７＋細胞はＣＤ４７＋ＥｐＣＡＭ＋腫瘍（または癌）細胞である。

【0465】

いくつかの実施形態において、多特異性抗体は、赤血球および血小板などのＣＤ４７＋非腫瘍細胞に対する結合が減少している。場合によっては、ＣＤ４７＋非腫瘍細胞への結合は、参照抗体ＣＤ４７ ＢＭＫ－１（本明細書に記載されるものなど）と比較して、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％減少する。場合によっては、ＣＤ４７＋非腫瘍細胞への多特異性抗体の結合は、赤血球（ＲＢＣ）結合アッセイまたはフローサイトメトリーアッセイによって測定される。

【0466】

いくつかの実施形態において、多特異性抗体は、赤血球および血小板などのＣＤ４７＋非腫瘍細胞に対する結合が減少している。場合によっては、ＣＤ４７＋非腫瘍細胞への結合は、参照抗体ＣＤ４７ ＢＭＫ－２（本明細書に記載されるものなど）と比較して、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％減少する。場合によっては、ＣＤ４７＋非腫瘍細胞への多特異性抗体の結合は、赤血球（ＲＢＣ）結合アッセイまたはフローサイトメトリーアッセイによって測定される。

【0467】

いくつかの実施形態において、ＲＢＣ溶解を誘導するために必要な多特異性抗体の濃度は、参照抗体ＣＤ４７ ＢＭＫ－１（本明細書に記載されるものなど）の溶血効果の少なくとも２倍、３倍、４倍、またはそれ以上に高い。

【0468】

いくつかの実施形態において、ＲＢＣ溶解を誘導するために必要な多特異性抗体の濃度は、参照抗体ＣＤ４７ ＢＭＫ－２（本明細書に記載されるものなど）の溶血効果の少なくとも２倍、３倍、４倍、またはそれ以上に高い。

【0469】

抗体またはその結合フラグメントの産生
いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるポリペプチド（例えば、抗体とその結合フラグメント）は、とりわけ、化学合成によって、または組換え発現によって、ポリペプチド（例えば、抗体）の合成に役立つように当該技術分野で知られている任意の方法を使用して生成され、および、好ましくは組換え発現技術によって生成される。

【0470】

いくつかの例では、抗体またはその結合フラグメントは組換え発現され、抗体またはその結合フラグメントをコードする核酸は、化学的に合成されたオリゴヌクレオチドから（例えば、Ｋｕｔｍｅｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９４，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １７：２４２に記載されるように）組み立てられ、これは、抗体をコードする配列の一部を含有する重複オリゴヌクレオチドの合成、それらのオリゴヌクレオチドのアニーリングとライゲーション、および、その後のＰＣＲによるライゲートされたオリゴヌクレオチドの増幅を含む。

【0471】

代替的に、抗体をコードする核酸分子は、配列の３’末端と５’末端へハイブリダイズすることができる合成プライマーを使用するＰＣＲ増幅によって、または特定の遺伝子配列に特異的なオリゴヌクレオチドプローブを使用してクローンを作ることによって、適切なソース（例えば、抗体ｃＤＮＡライブラリー、または免疫グロブリンを発現する任意の組織もしくは細胞から生成されたｃＤＮＡライブラリー）から任意選択的に生成される。

【0472】

いくつかの例では、抗体またはその結合は、ポリクローナル抗体を産生するためにマウスなどの動物を免疫化することにより、または、より好ましくは、例えば、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５，Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５－４９７）によって記載されるように、もしくは、Ｋｏｚｂｏｒら（１９８３，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ ４：７２）、もしくはＣｏｌｅら（１９８５ ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，ｐｐ．７７－９６）によって記載されるように、モノクローナル抗体を産生することによって、任意選択的に生成される。代替的に、抗体の少なくともＦａｂ部分をコードするクローンは、特異的抗原に結合するＦＡｂフラグメントのクローンについてＦａｂ発現ライブラリーをスクリーニングすることにより（例えば、Ｈｕｓｅ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：１２７５－１２８１に記載される）、または抗体ライブラリーをスクリーニングすることにより（Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４；Ｈａｎｅ ｅｔ ａｌ．，１９９７ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９４：４９３７を参照）、任意選択的に得られる。

【0473】

いくつかの実施形態において、適切な生物学的活性のヒト抗体分子からの遺伝子と一緒に、適切な抗原特異性のマウス抗体分子からの遺伝子をスプライシングすることにより、「キメラ抗体」の産生のために開発された技術（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８１：８５１－８５５；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８４，Ｎａｔｕｒｅ ３１２：６０４－６０８；Ｔａｋｅｄａ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｎａｔｕｒｅ ３１４：４５２－４５４）が使用される。キメラ抗体は、異なる部分が、マウスモノクローナル抗体に由来する可変領域、およびヒト免疫グロブリン定常領域を有する動物種などの様々な動物種に由来する分子である。

【0474】

いくつかの実施形態において、一本鎖抗体の産生について記載された技術（Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．４，６９４，７７８；Ｂｉｒｄ，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２；Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９－５８８３、および、Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｎａｔｕｒｅ ３３４：５４４－５４）は、一本鎖抗体を産生するために適合される。一本鎖抗体は、アミノ酸架橋によってＦｖ領域の重鎖および軽鎖のフラグメントを結合することによって形成され、結果として一本鎖ポリペプチドを生じさせる。大腸菌中の機能的なＦｖフラグメントの組み立てのための技術も任意選択で使用される（Ｓｋｅｒｒａ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：１０３８－１０４１）。

【0475】

いくつかの実施形態において、抗体のヌクレオチド配列を含む発現ベクターまたは抗体のヌクレオチド配列は、従来の技術（例えば、エレクトロポレーション、リポソームトランスフェクション、および、リン酸カルシウム沈澱反応）によって宿主細胞に導入され、トランスフェクトされた細胞はその後、従来の技術によって培養されて、抗体を産生する。特定の実施形態において、抗体の発現は、構成的な、誘導可能な、または組織特異的なプロモーターによって調節される。

【0476】

いくつかの実施形態において、様々な宿主発現ベクター系が、本明細書に記載される抗体またはその結合フラグメントを発現するために利用される。そのような宿主発現系は、抗体のコード配列が生成され、その後精製されるビヒクルを表すだけでなく、適切なヌクレオチドコード配列で形質転換されるか、またはトランスフェクトされるときに、抗体またはその結合フラグメントをｉｎ ｓｉｔｕで発現する細胞も表す。これらは、限定されないが、組換えバクテリオファージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、または抗体もしくはその結合フラグメントコード配列を含むコスミドＤＮＡ発現ベクターで形質転換された細菌（例えば、大腸菌と枯草菌）などの微生物、抗体またはその結合フラグメントコード配列を含む組換え酵母発現ベクターで形質転換された酵母（例えば、サッカロミケス・ピキア）、抗体またはその結合フラグメントコード配列を含む組換えウイルス発現ベクター（例えば、バキュロウイルス）に感染した昆虫細胞系、組換えウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワーモザイクウイルス（ＣａＭＶ）およびタバコモザイクウイルス（ＴＭＶ））に感染した、あるいは、抗体またはその結合フラグメントコード配列を含む組換えプラスミド発現ベクター（例えば、Ｔｉプラスミド）で形質転換された植物細胞系、あるいは、哺乳動物細胞のゲノムに由来するプロモーター（例えば、メタロチオネインプロモーター）、または、哺乳動物ウイルスに由来するプロモーター（例えば、アデノウイルス後期プロモーター、ワクシニアウイルス７．５Ｋプロモーター）を含む、組換え発現構築物を有する哺乳動物細胞系（例えば、ＣＯＳ、ＣＨＯ、ＢＨ、２９３、２９３Ｔ、３Ｔ３細胞）を含む。

【0477】

組換えタンパク質の長期的かつ高収率の生成のためには、安定した発現が好ましい。いくつかの例では、安定して抗体を発現する細胞株が任意選択的に操作される。ウイルスの複製開始点を含む発現ベクターを使用するのではなく、宿主細胞は、適切な発現制御要素（例えば、プロモーター、エンハンサー、配列、転写ターミネーター、ポリアデニル化部位など）および選択可能なマーカーによって制御されたＤＮＡで形質転換される。外来性ＤＮＡの導入後に、操作した細胞を富化培地で１～２日間成長させ、その後、選択培地に切り替える。組換えプラスミドにおける選択可能なマーカーは、選択に対する耐性を与え、細胞がプラスミドをその染色体に安定的に組み込み、成長させてフォーカスを形成することをできるようにし、フォーカスはクローン化されて細胞株へと拡大する。この方法は、抗体またはその結合フラグメントを発現する細胞株を操作するために有利に使用することができる。

【0478】

いくつかの例では、限定されないが、それぞれｔｋ細胞、ｈｇｐｒｔ細胞、またはａｐｒｔ細胞で利用される、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（Ｗｉｇｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９７７，Ｃｅｌｌ １１：２２３）、ヒポキサンチン－グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｓｚｙｂａｌｓｋａ ＆ Ｓｚｙｂａｌｓｋｉ，１９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ４８：２０２）、およびアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｌｏｗｙ ｅｔ ａｌ．，１９８０，Ｃｅｌｌ ２２：８１７）遺伝子を含む多くの選択系が使用される。同様に、代謝拮抗薬の耐性は、以下の遺伝子の選定基準として使用される：メトトレキサートに対する耐性を与えるｄｈｆｒ（Ｗｉｇｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：３５７；Ｏ’Ｈａｒｅ ｅｔ ａｌ．，１９８１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７８：１５２７）；ミコフェノール酸に対する耐性を与えるｇｐｔ（Ｍｕｌｌｉｇａｎ ＆ Ｂｅｒｇ，１９８１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７８：２０７２）；アミノグリコシドＧ－４１８に対する耐性を与えるｎｅｏ（Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｙ １２：４８８－５０５；Ｗｕ ａｎｄ Ｗｕ，１９９１，Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ ３：８７－９５；Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ，１９９３，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．３２：５７３－５９６；Ｍｕｌｌｉｇａｎ，１９９３，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６０：９２６－９３２、およびＭｏｒｇａｎ ａｎｄ Ａｎｄｅｒｓｏｎ，１９９３，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６２：１９１－２１７；Ｍａｙ，１９９３，ＴＩＢ ＴＥＣＨ １１（５）：１５５－２１５）、ならびに、ヒグロマイシンに対する耐性を与えるｈｙｇｒｏ（Ｓａｎｔｅｒｒｅ ｅｔ ａｌ．，１９８４，Ｇｅｎｅ ３０：１４７）。使用可能な組換えＤＮＡ技術の技術分野で一般的に知られている方法は、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．，１９９３，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ＮＹ；Ｋｒｉｅｇｌｅｒ，１９９０，Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ；および Ｃｈａｐｔｅｒｓ １２ ａｎｄ １３，Ｄｒａｃｏｐｏｌｉ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ），１９９４，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ＮＹ．；Ｃｏｌｂｅｒｒｅ－Ｇａｒａｐｉｎ ｅｔ ａｌ．，１９８１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５０：１）に記載される。

【0479】

いくつかの例では、抗体の発現レベルは、ベクター増幅によって増加する（検討のために、Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏｎ ａｎｄ Ｈｅｎｔｓｃｈｅｌ，Ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ ｖｅｃｔｏｒｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｇｅｎｅ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｃｌｏｎｅｄ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ＤＮＡ ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｖｏｌ．３．（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７を参照））。抗体を発現するベクター系におけるマーカーが増幅可能である場合、宿主細胞の培養物中に存在する阻害剤のレベルが増加すると、マーカー遺伝子のコピーの数が増加する。増幅領域が抗体のヌクレオチド配列に関連しているため、抗体の産生も増加する（Ｃｒｏｕｓｅ ｅｔ ａｌ．，１９８３，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．３：２５７）。

【0480】

いくつかの例では、当該技術分野で知られている抗体の精製のための任意の方法は、例えば、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換、親和性、とりわけ、プロテインＡの後の特異的な抗原への親和性、および、サイジングカラムクロマトグラフィー）、遠心分離、差次的溶解性によって、またはタンパク質の精製のための他の標準的な技術によって使用される。

【0481】

発現ベクター
いくつかの実施形態において、ベクターは、真核生物または原核生物の供給源に由来するあらゆる適切なベクターを含む。場合によっては、ベクターは、細菌（例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ））、昆虫、酵母（例えば、ピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ））、藻類、または哺乳動物の供給源から得られる。例示的な細菌ベクターは、ｐＡＣＹＣ１７７、ｐＡＳＫ７５、ｐＢＡＤベクター系、ｐＢＡＤＭベクター系、ｐＥＴベクター系、ｐＥＴＭベクター系、ｐＧＥＸベクター系、ｐＨＡＴ、ｐＨＡＴ２、ｐＭａｌ－ｃ２、ｐＭａｌ－ｐ２、ｐＱＥベクター系、ｐＲＳＥＴ Ａ、ｐＲＳＥＴ Ｂ、ｐＲＳＥＴ Ｃ、ｐＴｒｃＨｉｓ２系、ｐＺＡ３１－Ｌｕｃ、ｐＺＥ２１－ＭＣＳ－１、ｐＦＬＡＧ ＡＴＳ、ｐＦＬＡＧ ＣＴＳ、ｐＦＬＡＧ ＭＡＣ、ｐＦＬＡＧ Ｓｈｉｆｔ－１２ｃ、ｐＴＡＣ－ＭＡＴ－１、ｐＦＬＡＧ ＣＴＣ、またはｐＴＡＣ－ＭＡＴ－２を含む。

【0482】

例示的な昆虫ベクターは、ｐＦａｓｔＢａｃ１、ｐＦａｓｔＢａｃ ＤＵＡＬ、ｐＦａｓｔＢａｃ ＥＴ、ｐＦａｓｔＢａｃ ＨＴａ、ｐＦａｓｔＢａｃ ＨＴｂ、ｐＦａｓｔＢａｃ ＨＴｃ、ｐＦａｓｔＢａｃ Ｍ３０ａ、ｐＦａｓｔＢａｃｔ Ｍ３０ｂ、ｐＦａｓｔＢａｃ、Ｍ３０ｃ、ｐＶＬ１３９２、ｐＶＬ１３９３、ｐＶＬ１３９３ Ｍ１０、ｐＶＬ１３９３ Ｍ１１、ｐＶＬ１３９３ Ｍ１２、ＦＬＡＧベクター、例えば、ｐＰｏｌｈ－ＦＬＡＧ１もしくはｐＰｏｌｈ－ＭＡＴ ２、またはＭＡＴベクター、例えば、ｐＰｏｌｈ－ＭＡＴ１もしくはｐＰｏｌｈ－ＭＡＴ２を含む。

【0483】

場合によっては、酵母ベクターは、Ｇａｔｅｗａｙ（登録商標）ｐＤＥＳＴ（商標）１４ベクター、Ｇａｔｅｗａｙ（登録商標）ｐＤＥＳＴ（商標）１５ベクター、Ｇａｔｅｗａｙ（登録商標）ｐＤＥＳＴ（商標）１７ベクター、Ｇａｔｅｗａｙ（登録商標）ｐＤＥＳＴ（商標）２４ベクター、Ｇａｔｅｗａｙ（登録商標）ｐＹＥＳ－ＤＥＳＴ５２ベクター、ｐＢＡＤ－ＤＥＳＴ４９ Ｇａｔｅｗａｙ（登録商標）デスティネーションベクター、ｐＡＯ８１５ Ｐｉｃｈｉａベクター、ｐＦＬＤ１ Ｐｉｃｈｉ ｐａｓｔｏｒｉｓベクター、ｐＧＡＰＺＡ、Ｂ、およびＣのＰｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓベクター、ｐＰＩＣ３．５Ｋ Ｐｉｃｈｉａベクター、ｐＰＩＣ６ Ａ、Ｂ、およびＣのＰｉｃｈｉａベクター、ｐＰＩＣ９Ｋ Ｐｉｃｈｉａベクター、ｐＴＥＦ１／Ｚｅｏ、ｐＹＥＳ２酵母ベクター、ｐＹＥＳ２／ＣＴ酵母ベクター、ｐＹＥＳ２／ＮＴ Ａ、Ｂ、およびＣの酵母ベクター、またはｐＹＥＳ３／ＣＴ酵母ベクターを含む。

【0484】

例示的な藻類ベクターはｐＣｈｌａｍｙ－４ベクターまたはＭＣＳベクターを含む。

【0485】

哺乳動物ベクターの例は、一過性発現ベクターまたは安定した発現ベクターを含む。哺乳動物の一過性発現ベクターは、ｐＲＫ５、ｐ３ｘＦＬＡＧ－ＣＭＶ ８、ｐＦＬＡＧ－Ｍｙｃ－ＣＭＶ １９、ｐＦＬＡＧ－Ｍｙｃ－ＣＭＶ ２３、ｐＦＬＡＧ－ＣＭＶ ２、ｐＦＬＡＧ－ＣＭＶ ６ａ，ｂ，ｃ、ｐＦＬＡＧ－ＣＭＶ ５．１、ｐＦＬＡＧ－ＣＭＶ ５ａ，ｂ，ｃ、ｐ３ｘＦＬＡＧ－ＣＭＶ ７．１、ｐＦＬＡＧ－ＣＭＶ ２０、ｐ３ｘＦＬＡＧ－Ｍｙｃ－ＣＭＶ ２４、ｐＣＭＶ－ＦＬＡＧ－ＭＡＴ１、ｐＣＭＶ－ＦＬＡＧ－ＭＡＴ２、ｐＢＩＣＥＰ－ＣＭＶ ３、または、ｐＢＩＣＥＰ－ＣＭＶ ４を含み得る。哺乳動物の安定した発現ベクターは、ｐＦＬＡＧ－ＣＭＶ ３、ｐ３ｘＦＬＡＧ－ＣＭＶ ９、ｐ３ｘＦＬＡＧ－ＣＭＶ １３、ｐＦＬＡＧ－Ｍｙｃ－ＣＭＶ ２１、ｐ３ｘＦＬＡＧ－Ｍｙｃ－ＣＭＶ ２５、ｐＦＬＡＧ－ＣＭＶ ４、ｐ３ｘＦＬＡＧ－ＣＭＶ １０、ｐ３ｘＦＬＡＧ－ＣＭＶ １４、ｐＦＬＡＧ－Ｍｙｃ－ＣＭＶ ２２、ｐ３ｘＦＬＡＧ－Ｍｙｃ－ＣＭＶ ２６、ｐＢＩＣＥＰ－ＣＭＶ １、またはｐＢＩＣＥＰ－ＣＭＶ ２を含み得る。

【0486】

いくつかの例では、無細胞系は、細胞からの細胞質成分および／または核成分の混合物であり、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの核酸合成に使用される。場合によっては、無細胞系は原核細胞成分または真核細胞成分のいずれかを利用する。しばしば、核酸合成は、例えば、ショウジョウバエ細胞（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｃｅｌｌ）、ツメガエル卵子（Ｘｅｎｏｐｕｓ ｅｇｇ）、またはＨｅＬａ細胞に基づいた無細胞系において得られる。例示的な無細胞系は、限定されないが、大腸菌Ｓ３０抽出物系、大腸菌Ｔ７ Ｓ３０系、またはＰＵＲＥｘｐｒｅｓｓ（登録商標）を含む。

【0487】

宿主細胞
いくつかの実施形態において、宿主細胞は、任意の適切な細胞、例えば、天然由来の細胞または遺伝子組換えされた細胞を含む。いくつかの例では、宿主細胞は産生宿主細胞である。いくつかの例では、宿主細胞は真核細胞である。他の例では、宿主細胞は原核細胞である。場合によっては、真核細胞は真菌（例えば、酵母細胞）、動物細胞、または植物細胞を含む。場合によっては、原核細胞は細菌細胞である。細菌細胞の例はグラム陽性菌またはグラム陰性菌を含む。グラム陰性菌はしばしば、嫌気性、桿状、またはその両方である。

【0488】

いくつかの例では、グラム陽性菌は放線菌門（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒｉａ）、ファーミキューテス門（Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ）、またはテネリクテス門（Ｔｅｎｅｒｉｃｕｔｅｓ）を含む。場合によっては、グラム陰性菌は、アクウィフェクス門（Ａｑｕｉｆｉｃａｅ）、デイノコッカス－サーマス門（Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ－Ｔｈｅｒｍｕｓ）、フィブロバクター門（Ｆｉｂｒｏｂａｃｔｅｒｅｓ）－クロロビウム門（Ｃｈｌｏｒｏｂｉ）／バクテロイデス門（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ）（ＦＣＢ群）、フソバクテリウム門（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉａ）、ゲンマティモナス門（Ｇｅｍｍａｔｉｍｏｎａｄｅｔｅｓ）、ニトロスピラ門（Ｎｉｔｒｏｓｐｉｒａｅ）、プランクトミケス門（Ｐｌａｎｃｔｏｍｙｃｅｔｅｓ）－ベルコミクロビウム門（Ｖｅｒｒｕｃｏｍｉｃｒｏｂｉａ）／クラミジア属（Ｃｈｌａｍｙｄｉａｅ）（ＰＶＣ群）、プロテオバクテリア（Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ）、スピロヘータ門（Ｓｐｉｒｏｃｈａｅｔｅｓ）、またはシネルギステス門（Ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｅｔｅｓ）を含む。他の細菌は、アシドバクテリウム門（Ａｃｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ）、緑色非硫黄細菌門（Ｃｈｌｏｒｏｆｌｅｘｉ）、クリシオゲネス門（Ｃｈｒｙｓｉｏｇｅｎｅｔｅｓ）、シアノバクテリア（Ｃｙａｎｏｂａｃｔｅｒｉａ）、デフェリバクター門（Ｄｅｆｅｒｒｉｂａｃｔｅｒｅｓ）、ディクチオグロムス門（Ｄｉｃｔｙｏｇｌｏｍｉ）、サーモデスルフォバクテリア門（Ｔｈｅｒｍｏｄｅｓｕｌｆｏｂａｃｔｅｒｉａ）、またはテルモトガ門（Ｔｈｅｒｍｏｔｏｇａｅ）であり得る。細菌細胞は大腸菌、ボツリヌス菌、または大腸菌であり得る。

【0489】

例示的な原核生物宿主細胞は、限定されないが、ＢＬ２１、Ｍａｃｈ１（商標）、ＤＨ１０Ｂ（商標）、ＴＯＰ１０、ＤＨ５α、ＤＨ１０Ｂａｃ（商標）、ＯｍｎｉＭａｘ（商標）、ＭｅｇａＸ（商標）、ＤＨ１２Ｓ（商標）、ＩＮＶ１１０、ＴＯＰ１０Ｆ’、ＩＮＶαＦ、ＴＯＰ１０／Ｐ３、ｃｃｄＢ Ｓｕｒｖｉｖａｌ、ＰＩＲ１、ＰＩＲ２、Ｓｔｂｌ２（商標）、Ｓｔｂｌ３（商標）、またはＳｔｂｌ４（商標）を含む。

【0490】

いくつかの例では、動物細胞は脊椎動物または無脊椎動物に由来する細胞を含む。場合によっては、動物細胞は、海洋無脊椎動物、魚、昆虫、両生類、爬虫類、または哺乳動物に由来する細胞を含む。場合によっては、真菌細胞は、ビール酵母、パン酵母、またはワイン酵母などの酵母菌を含む。

【0491】

真菌は子嚢菌、例えば、酵母菌、カビ、糸状菌、担子菌、または接合菌を含む。いくつかの例では、酵母菌は子嚢菌または担子菌を含む。場合によっては、子嚢菌は、サッカロミケス亜門（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｏｔｉｎａ）（真正酵母菌、例えば、ビール酵母菌）（パン酵母））またはタフリナ菌亜門（Ｔａｐｈｒｉｎｏｍｙｃｏｔｉｎａ）（例えば、シゾサッカロミセス綱（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｔｅｓ）（分裂酵母））を含む。場合によっては、担子菌はハラタケ亜門（Ａｇａｒｉｃｏｍｙｃｏｔｉｎａ）（例えば、シロキクラゲ綱（Ｔｒｅｍｅｌｌｏｍｙｃｅｔｅｓ））またはサビキン亜門（Ｐｕｃｃｉｎｉｏｍｙｃｏｔｉｎａ）（例えば、ミクロボトリウム菌綱（Ｍｉｃｒｏｂｏｔｒｙｏｍｙｃｅｔｅｓ））を含む。

【0492】

例示的な酵母菌または糸状菌としては、例えば、属：サッカロミケス、分裂酵母、カンジダ属、ピキア、ハンゼヌラ、クリベロマイセス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）、チゴサッカロミセス（Ｚｙｇｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）、ヤロウイア属（Ｙａｒｒｏｗｉａ）、トリコスポロン属（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ）、ロドスポリデウム属（Ｒｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉ）、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）、フザリウム属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）、またはトリコデルマ属（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）が挙げられる。例示的な酵母菌または糸状菌は、例えば、種：ビール酵母菌、分裂酵母、カンジダ・ユチリス（Ｃａｎｄｉｄａ ｕｔｉｌｉｓ）、カンジダ・ボイジニ（Ｃａｎｄｉｄａ ｂｏｉｄｉｎｉ）、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）、カンジダ・トロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）、カンジダ・ステラトイデア（Ｃａｎｄｉｄａ ｓｔｅｌｌａｔｏｉｄｅａ）、カンジダ・グラブラータ（Ｃａｎｄｉｄａ ｇｌａｂｒａｔａ）、カンジダ・クルセイ（Ｃａｎｄｉｄａ ｋｒｕｓｅｉ）、カンジダ・パラプシローシス（Ｃａｎｄｉｄａ ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ）、カンジダ・ギリエルモンジイ（Ｃａｎｄｉｄａ ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ）、カンジダ・ビスワナチイ（Ｃａｎｄｉｄａ ｖｉｓｗａｎａｔｈｉｉ）、カンジダ・ルシタニエ（Ｃａｎｄｉｄａ ｌｕｓｉｔａｎｉａｅ）、ロドトルラ・ムチラギノーザ（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ ｍｕｃｉｌａｇｉｎｏｓａ）、ピキア・メタノリカ（Ｐｉｃｈｉａ ｍｅｔａｎｏｌｉｃａ）、ピキア・アングスタ（Ｐｉｃｈｉａ ａｎｇｕｓｔａ）、ピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）、ピキア・アノマラ（Ｐｉｃｈｉａ ａｎｏｍａｌａ）、ハンゼヌラ・ポリモルファ（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ）、クルイベロマイセス・ラクチス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｌａｃｔｉｓ）、チゴサッカロミセス・ローキシ（Ｚｙｇｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｒｏｕｘｉｉ）、ヤロウイア・リポリティカ（Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ）、トリコスポロン・プルランス（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ ｐｕｌｌｕｌａｎｓ）、ロスポリジウム・トル－アスペルギルス・ニガー（Ｒｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｔｏｒｕ－Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）、アスペルギルス・ニードランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓ）、アスペルギルス・アワモリ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉ）、アスペルギルス・オリゼ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ）、トリコデルマ・リーゼイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）、ヤロウイア・リポティカ（Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ）、ブレタノミセス・ブルセレンシス（Ｂｒｅｔｔａｎｏｍｙｃｅｓ ｂｒｕｘｅｌｌｅｎｓｉｓ）、カンジダ・ステラータ（Ｃａｎｄｉｄａ ｓｔｅｌｌａｔａ）、分裂酵母、Ｔｏｒｕｌａｓｐｏｒａ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ、Ｚｙｇｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂａｉｌｉｉ、クリプトコッカス－ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、クリプトコッカス・ガッティ（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｇａｔｔｉｉ）、またはサッカロマイセス・ブラウディ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂｏｕｌａｒｄｉｉ）を含む。

【0493】

例示的な酵母宿主細胞は、限定されないが、ＧＳ１１５、ＫＭ７１Ｈ、ＳＭＤ１１６８、ＳＭＤ１１６８Ｈ、およびＸ－３３などのピキア・パストリス酵母菌株、ＩＮＶＳｃ１などのサッカロミセス・セレビシエ酵母菌株を含む。

【0494】

いくつかの実施形態において、さらなる動物細胞は、軟体動物、節足動物、環形動物、または海綿動物から得られる細胞を含む。いくつかの実施形態において、さらなる動物細胞は、例えば、霊長類、類人猿、ウマ、ウシ、ブタ、イヌ、ネコ、またはげっ歯類に由来する哺乳動物細胞である。場合によっては、げっ歯類は、マウス、ラット、ハムスター、スナネズミ、ハムスター、チンチラ、ファンシーラット、またはモルモットを含む。

【0495】

例示的な哺乳動物宿主細胞としては、限定されないが、２９３Ａ細胞株、２９３ＦＴ細胞株、２９３Ｆ細胞、２９３Ｈ細胞、ＣＨＯ ＤＧ４４細胞、ＣＨＯ－Ｓ細胞、ＣＨＯ－Ｋ１細胞、Ｅｘｐｉ２９３Ｆ（商標）細胞、Ｆｌｐ－Ｉｎ（商標）Ｔ－ＲＥｘ（商標）２９３細胞株、Ｆｌｐ－Ｉｎ（商標）－２９３細胞株、Ｆｌｐ－Ｉｎ（商標）－３Ｔ３細胞株、Ｆｌｐ－Ｉｎ（商標）－ＢＨＫ細胞株、Ｆｌｐ－Ｉｎ（商標）－ＣＨＯ細胞株、Ｆｌｐ－Ｉｎ（商標）－ＣＶ－１細胞株、Ｆｌｐ－Ｉｎ（商標）－Ｊｕｒｋａｔ細胞株、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）２９３－Ｆ細胞、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）ＣＨＯ－Ｓ細胞、ＧｒｉｐＴｉｔｅ（商標）２９３ ＭＳＲ細胞株、ＧＳ－ＣＨＯ細胞株、ＨｅｐａＲＧ（商標）細胞、Ｔ－ＲＥｘ（商標）Ｊｕｒｋａｔ細胞株、Ｐｅｒ．Ｃ６細胞、Ｔ－ＲＥｘ（商標）－２９３細胞株、Ｔ－ＲＥｘ（商標）ＣＨＯ細胞株、およびＴ－ＲＥｘ（商標）－ＨｅＬａ細胞株が挙げられる。

【0496】

いくつかの例では、哺乳動物宿主細胞は、安定した細胞株であるか、または関心対象の遺伝物質をそれ自体のゲノムに組み込み、多くの世代の細胞分裂の後に遺伝物質の生成物を発現する能力を有する細胞株である。場合によっては、哺乳動物宿主細胞は、一過性の細胞株であるか、または対象の遺伝物質をそれ自体のゲノムに組み込んでおらず、多くの世代の細胞分裂の後に遺伝物質の生成物を発現する能力を有していない細胞株である。

【0497】

例示的な昆虫宿主細胞としては、限定されないが、ショウジョウバエＳ２細胞、Ｓｆ９細胞、Ｓｆ２１細胞、Ｈｉｇｈ Ｆｉｖｅ（商標）細胞、およびｅｘｐｒｅｓＳＦ＋（登録商標）細胞が挙げられる。

【0498】

いくつかの例では、植物細胞は藻類からの細胞を含む。例示的な昆虫細胞株としては、限定されないが、コナミドリムシ（Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ ｒｅｉｎｈａｒｄｔｉｉ）１３７ｃまたはシネココッカス（Ｓｙｎｅｃｈｏｃｏｃｃｕｓ ｅｌｏｎｇａｔｕｓ）ＰＰＣ ７９４２からの株が挙げられる。

【0499】

複合体
特定の実施形態において、本明細書に記載されるＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む多特異性抗体と、ＣＤ４７＋ＥｐＣＡＭ＋標的細胞とを含む複合体が本明細書に開示される。いくつかの実施形態において、標的細胞はＨＣＣ－４４細胞と少なくとも同じ数のＥｐＣＡＭタンパク質をその表面に発現する。いくつかの実施形態において、標的細胞は、少なくとも５０，０００個、少なくとも１００，０００個、少なくとも３００，０００個、少なくとも６００，０００個、または少なくとも１，５００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質をその表面に発現する。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７＋ＥｐＣＡＭ＋標的細胞は癌細胞である。いくつかの実施形態において、癌細胞は、腺管膵臓腺癌細胞、卵巣明細胞腺癌細胞、結腸腺癌細胞、肺腺癌細胞、卵巣腺癌細胞、または外陰扁平上皮癌細胞である。いくつかの実施形態において、癌細胞は、腺管膵臓腺癌細胞、卵巣明細胞腺癌細胞、卵巣腺癌細胞、結腸腺癌細胞、直腸腺癌細胞、食道癌細胞、胃癌細胞、非小細胞肺癌細胞、小細胞肺癌細胞、子宮内膜癌細胞、肝細胞癌細胞、胆管癌細胞、前立腺腺癌細胞、甲状腺癌細胞、乳癌細胞、子宮頸癌細胞、腎細胞癌細胞、精巣癌細胞、または外陰扁平上皮癌細胞である。

【0500】

特定の実施形態において、本明細書に記載されるＣＤ４７結合ドメインおよびＥＧＦＲ結合ドメインを含む多特異性抗体と、ＣＤ４７＋ＥＧＦＲ＋標的細胞とを含む複合体が本明細書に開示される。いくつかの実施形態において、標的細胞はＨＣＣ－４４細胞と少なくとも同じ数のＥＧＦＲタンパク質をその表面に発現する。いくつかの実施形態において、標的細胞は、少なくとも５０，０００個、少なくとも１００，０００個、少なくとも３００，０００個、少なくとも６００，０００個、または少なくとも１，５００，０００個のＥＧＦＲタンパク質をその表面に発現する。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７＋ＥＧＦＲ＋標的細胞は癌細胞である。いくつかの実施形態において、癌細胞は、類表皮癌細胞、大腸腺癌細胞、頭頸部扁平上皮癌細胞、膀胱癌細胞、膵臓腺癌細胞、肺扁平上皮癌細胞、肺腺癌細胞、胃癌細胞、腺管膵臓腺癌細胞、卵巣明細胞腺癌細胞、卵巣腺癌細胞、結腸腺癌細胞、直腸腺癌細胞、食道癌細胞、胃癌細胞、非小細胞肺癌細胞、小細胞肺癌細胞、子宮内膜癌細胞、肝細胞癌細胞、胆管癌細胞、前立腺腺癌細胞、甲状腺癌細胞、乳癌細胞、子宮頚癌細胞、腎細胞癌細胞、精巣癌細胞、および外陰扁平上皮癌細胞から選択される。

【0501】

医薬組成物
特定の実施形態において、本明細書に開示されるＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む多特異性（例えば、二重特異性）抗体を含む医薬組成物が本明細書に開示される。

【0502】

特定の実施形態において、本明細書に開示されるＣＤ４７結合ドメインおよびＥＧＦＲ結合ドメインを含む多特異性（例えば、二重特異性）抗体を含む医薬組成物が本明細書に開示される。

【0503】

方法または使用
特定の実施形態において、ＣＤ４７＋ＥｐＣＡＭ＋標的細胞の食作用を誘導する方法が本明細書に開示され、上記方法は、それを必要とする対象に、本明細書に記載されるＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む多特異性抗体、または本明細書に記載されるその医薬組成物を投与する工程を含む。いくつかの実施形態において、多特異性抗体は、約５ナノモル（ｎＭ）未満、約２ｎＭ未満、約１ｎＭ未満、約０．５ｎＭ未満、約０．２ｎＭ未満、約０．１ｎＭ未満、または約０．０５ｎＭ未満の濃度で投与される。

【0504】

特定の実施形態において、ＣＤ４７＋ＥＧＦＲ＋標的細胞の食作用を誘導する方法が本明細書に開示され、上記方法は、それを必要とする対象に、本明細書に記載されるＣＤ４７結合ドメインおよびＥＧＦＲ結合ドメインを含む多特異性抗体、または本明細書に記載されるその医薬組成物を投与する工程を含む。いくつかの実施形態において、多特異性抗体は、約５ナノモル（ｎＭ）未満、約２ｎＭ未満、約１ｎＭ未満、約０．５ｎＭ未満、約０．２ｎＭ未満、約０．１ｎＭ未満、または約０．０５ｎＭ未満の濃度で投与される。

【0505】

特定の実施形態において、ＣＤ４７＋ＥｐＣＡＭ＋標的細胞を死滅させる方法が本明細書に開示され、上記方法は、本明細書に記載されるＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む多特異性抗体、または本明細書に記載されるその医薬組成物を投与する工程を含み、ここで、多特異性抗体は、ＣＤ４７＋ＥｐＣＡＭ＋標的細胞の表面上でのＣＤ４７へのＳＩＲＰαの結合を阻害する。いくつかの実施形態において、多特異性抗体は、約０．０１ナノモル（ｎＭ）～約１ｎＭ、約０．０１ｎＭ～約０．５ｎＭ、約０．０１ｎＭ～約０．２５ｎＭ、約０．０１ｎＭ～約０．１ｎＭ、約０．０１～約０．０５ｎＭ、または約０．０１ｎＭ未満の濃度で投与される。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７＋ＥｐＣＡＭ＋標的細胞は、ＨＣＴ－１５細胞、Ａ４３１細胞、ＨＣＣ－４４細胞、ＳＫＯＶ－３細胞、ＯＶＩＳＥ細胞、またはＣＦＰＡＣ－１細胞から選択される。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７＋ＥｐＣＡＭ＋標的細胞は、腺管膵臓腺癌細胞、卵巣明細胞腺癌細胞、結腸腺癌細胞、肺腺癌細胞、または外陰扁平上皮癌細胞から選択される。いくつかの実施形態において、標的細胞は、腺管膵臓腺癌細胞、卵巣明細胞腺癌細胞、卵巣腺癌細胞、結腸腺癌細胞、直腸腺癌細胞、食道癌細胞、胃癌細胞、非小細胞肺癌細胞、小細胞肺癌細胞、子宮内膜癌細胞、肝細胞癌細胞、胆管癌細胞、前立腺腺癌細胞、甲状腺癌細胞、乳癌細胞、子宮頚癌細胞、腎細胞癌細胞、精巣癌細胞、または外陰扁平上皮癌細胞である。

【0506】

特定の実施形態において、ＣＤ４７＋ＥＧＦＲ＋標的細胞を死滅させる方法が本明細書に開示され、上記方法は、本明細書に記載されるＣＤ４７結合ドメインおよびＥＧＦＲ結合ドメインを含む多特異性抗体、または本明細書に記載されるその医薬組成物を投与する工程を含み、ここで、多特異性抗体は、ＣＤ４７＋ＥＧＦＲ＋標的細胞の表面上でのＣＤ４７へのＳＩＲＰαの結合を阻害する。いくつかの実施形態において、多特異性抗体は、約０．０１ナノモル（ｎＭ）～約１ｎＭ、約０．０１ｎＭ～約０．５ｎＭ、約０．０１ｎＭ～約０．２５ｎＭ、約０．０１ｎＭ～約０．１ｎＭ、約０．０１ｎＭ～約０．０５ｎＭ、または約０．０１ｎＭ未満の濃度で投与される。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７＋ＥＧＦＲ＋標的細胞は、Ａ４３１細胞、ＮＣＩ－Ｈ７４７細胞、ＡＳＰＣ－１細胞、ＥＢＣ－１細胞、またはＳＮＵ－５細胞から選択される。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７＋ＥＧＦＲ＋標的細胞は、類表皮癌細胞、大腸腺癌細胞、頭頸部扁平上皮癌細胞、膀胱癌細胞、膵臓腺癌細胞、肺扁平上皮癌細胞、肺腺癌細胞、胃癌細胞、腺管膵臓腺癌細胞、卵巣明細胞腺癌細胞、卵巣腺癌細胞、結腸腺癌細胞、直腸腺癌細胞、食道癌細胞、胃癌細胞、非小細胞肺癌細胞、小細胞肺癌細胞、子宮内膜癌細胞、肝細胞癌細胞、胆管癌細胞、前立腺腺癌細胞、甲状腺癌細胞、乳癌細胞、子宮頚癌細胞、腎細胞癌細胞、精巣癌細胞、および外陰扁平上皮癌細胞から選択される。

【0507】

特定の実施形態において、ＣＤ４７＋ＥｐＣＡＭ＋標的細胞を死滅させる方法が本明細書に開示され、上記方法は、本明細書に記載されるＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む多特異性抗体、または本明細書に記載されるその医薬組成物を投与する工程を含み、ここで、多特異性抗体は、ＣＤ４７＋ＥｐＣＡＭ＋標的細胞を死滅させる抗体依存性細胞傷害を誘導する。いくつかの実施形態において、多特異性抗体は、約０．０１ナノモル（ｎＭ）～約１ｎＭ、約０．０１ｎＭ～約０．５ｎＭ、約０．０１ｎＭ～約０．２５ｎＭ、約０．０１ｎＭ～約０．１ｎＭ、約０．０１～約０．０５ｎＭ、または約０．０１ｎＭ未満の濃度で投与される。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７＋ＥｐＣＡＭ＋標的細胞は、ＨＣＴ－１５細胞、Ａ４３１細胞、ＨＣＣ－４４細胞、ＳＫＯＶ－３細胞、ＯＶＩＳＥ細胞、またはＣＦＰＡＣ－１細胞から選択される。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７＋ＥｐＣＡＭ＋標的細胞は、腺管膵臓腺癌細胞、卵巣明細胞腺癌細胞、結腸腺癌細胞、肺腺癌細胞、または外陰扁平上皮癌細胞から選択される。いくつかの実施形態において、標的細胞は、腺管膵臓腺癌細胞、卵巣明細胞腺癌細胞、卵巣腺癌細胞、結腸腺癌細胞、直腸腺癌細胞、食道癌細胞、胃癌細胞、非小細胞肺癌細胞、小細胞肺癌細胞、子宮内膜癌細胞、肝細胞癌細胞、胆管癌細胞、前立腺腺癌細胞、甲状腺癌細胞、乳癌細胞、子宮頚癌細胞、腎細胞癌細胞、精巣癌細胞、または外陰扁平上皮癌細胞である。

【0508】

特定の実施形態において、ＣＤ４７＋ＥＧＦＲ＋標的細胞を死滅させる方法が本明細書に開示され、上記方法は、それを必要としている対象に、本明細書に記載されるＣＤ４７結合ドメインおよびＥＧＦＲ結合ドメインを含む多特異性抗体、または本明細書に記載されるその医薬組成物を投与する工程を含み、ここで、多特異性抗体は、ＣＤ４７＋ＥＧＦＲ＋標的細胞を死滅させる抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導する。いくつかの実施形態において、多特異性抗体は、約０．０１ナノモル（ｎＭ）～約１ｎＭ、約０．０１ｎＭ～約０．５ｎＭ、約０．０１ｎＭ～約０．２５ｎＭ、約０．０１ｎＭ～約０．１ｎＭ、約０．０１ｎＭ～約０．０５ｎＭ、または約０．０１ｎＭ未満の濃度で投与される。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７＋ＥＧＦＲ＋標的細胞は、Ａ４３１細胞、ＮＣＩ－Ｈ７４７細胞、ＡＳＰＣ－１細胞、ＥＢＣ－１細胞、またはＳＮＵ－５細胞から選択される。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７＋ＥＧＦＲ＋標的細胞は、類表皮癌細胞、大腸腺癌細胞、頭頸部扁平上皮癌細胞、膀胱癌細胞、膵臓腺癌細胞、肺扁平上皮癌細胞、肺腺癌細胞、胃癌細胞、腺管膵臓腺癌細胞、卵巣明細胞腺癌細胞、卵巣腺癌細胞、結腸腺癌細胞、直腸腺癌細胞、食道癌細胞、胃癌細胞、非小細胞肺癌細胞、小細胞肺癌細胞、子宮内膜癌細胞、肝細胞癌細胞、胆管癌細胞、前立腺腺癌細胞、甲状腺癌細胞、乳癌細胞、子宮頚癌細胞、腎細胞癌細胞、精巣癌細胞、および外陰扁平上皮癌細胞から選択される。

【0509】

特定の実施形態において、癌を有する対象を処置する方法が本明細書に開示され、上記方法は、本明細書に記載されるＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む（例えば、有効量の）多特異性抗体、または本明細書に記載される（例えば、有効量の）その医薬組成物を対象に投与する工程を含む。いくつかの実施形態において、癌は、腺管膵臓腺癌細胞、卵巣明細胞腺癌細胞、卵巣腺癌細胞、結腸腺癌細胞、肺腺癌、直腸腺癌、食道癌、胃癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、子宮内膜癌、肝細胞癌細胞、胆管癌細胞、前立腺腺癌、甲状腺癌、乳癌、子宮頸癌、腎細胞癌、精巣癌、または外陰扁平上皮癌である。

【0510】

特定の実施形態において、癌を有する対象を処置する方法が本明細書に開示され、上記方法は、本明細書に記載されるＣＤ４７結合ドメインおよびＥＧＦＲ結合ドメインを含む（例えば、有効量の）多特異性抗体、または本明細書に記載される（例えば、有効量の）その医薬組成物を対象に投与する工程を含む。いくつかの実施形態において、癌は、類表皮癌、大腸腺癌、頭頸部扁平上皮癌、膀胱癌、膵臓腺癌、肺扁平上皮癌、肺腺癌、胃癌、腺管膵臓腺癌、卵巣明細胞腺癌、卵巣腺癌、結腸腺癌、直腸腺癌、食道癌、胃癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、子宮内膜癌、肝細胞癌細胞、胆管癌細胞、前立腺腺癌、甲状腺癌、乳癌、子宮頚癌、腎細胞癌、精巣癌、または外陰扁平上皮癌である。

【0511】

実施形態
実施形態１．ＣＤ４７結合ドメインおよびＥｐＣＡＭ結合ドメインを含む、多特異性抗体。

【0512】

実施形態２．多特異性抗体は二重特異性、三重特異性、または四重特異性である、実施形態１に記載の多特異性抗体。

【0513】

実施形態３．多特異性抗体は二重特異性である、実施形態２に記載の多特異性抗体。

【0514】

実施形態４．多特異性抗体は二価、三価、または四価である、実施形態１に記載の多特異性抗体。

【0515】

実施形態５．多特異性抗体は二価である、実施形態４に記載の多特異性抗体。

【0516】

実施形態６．多特異性抗体は、腫瘍細胞の表面上に発現されるＣＤ４７に対して、正常細胞、例えば、赤血球、血小板、Ｔ細胞、Ｂ細胞、またはＮＫ細胞の表面上に発現されるＣＤ４７に対するよりも高い親和性を有する、実施形態１～５のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0517】

実施形態７．腫瘍細胞はＥｐＣＡＭを発現する、実施形態６に記載の多特異性抗体。

【0518】

実施形態８．（例えば、ヒト）赤血球への最大半量結合に必要な多特異性抗体の濃度は、約２００ナノモル（ｎＭ）超である、実施形態１～７のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0519】

実施形態９．多特異性抗体は、約１００ナノモル（ｎＭ）未満の解離定数（ＫＤ）で（例えば、ヒト）ＣＤ４７に結合する、実施形態１～８のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0520】

実施形態１０．多特異性抗体は、約１ナノモル（ｎＭ）～約１００ｎＭ、約１ｎＭ～約５０ｎＭ、または約５ｎＭ～約５０ｎＭの解離定数（ＫＤ）で（例えば、ヒト）ＣＤ４７に結合する、実施形態９に記載の多特異性抗体。

【0521】

実施形態１１．多特異性抗体は、約５００ナノモル（ｎＭ）未満の解離定数（ＫＤ）でＥｐＣＡＭに結合する、実施形態１～１０のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0522】

実施形態１２．多特異性抗体は、約０．２ナノモル（ｎＭ）～約５００ｎＭ、約１ｎＭ～約３００ｎＭ、約５ｎＭ～約２００ｎＭ、または約１０ｎＭ～約１５０ｎＭの解離定数（ＫＤ）でＥｐＣＡＭに結合する、実施形態１１に記載の多特異性抗体。

【0523】

実施形態１３．解離定数（ＫＤ）は、表面プラズモン共鳴によって決定される、実施形態９～１２のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0524】

実施形態１４．ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、ヒトまたは操作されたヒトＥｐＣＡＭ結合ドメインである、実施形態１～１３のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0525】

実施形態１５．ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、ＥｐＣＡＭに特異的に結合する抗体、またはその機能的フラグメントもしくは機能的変異体を含む、実施形態１～１４のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0526】

実施形態１６．ＥｐＣＡＭに特異的に結合する抗体、またはその機能的フラグメントもしくは機能的変異体は、抗ＥｐＣＡＭ重鎖および抗ＥｐＣＡＭ軽鎖を含む、実施形態１５に記載の多特異性抗体。

【0527】

実施形態１７．抗ＥｐＣＡＭ重鎖は、抗ＥｐＣＡＭ重鎖可変ドメインを含む、実施形態１６に記載の多特異性抗体。

【0528】

実施形態１８．抗ＥｐＣＡＭ重鎖可変ドメインは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４重鎖の可変ドメインを含む、実施形態１６に記載の多特異性抗体。

【0529】

実施形態１９．抗ＥｐＣＡＭ軽鎖は、抗ＥｐＣＡＭ軽鎖可変ドメインを含む、実施形態１６～１８のいずれか１つに記載の多特異性抗体。

【0530】

実施形態２０．抗ＥｐＣＡＭ軽鎖可変ドメインは、カッパまたはラムダ軽鎖を含む、実施形態１９に記載の多特異性抗体。

【0531】

実施形態２１．ＥｐＣＡＭ結合ドメインは単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含む、実施形態１６～２０のいずれか１つに記載の多特異性抗体。

【0532】

実施形態２２．ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、抗原結合フラグメント（Ｆａｂ）を含む、実施形態１６～２０のいずれか１つに記載の多特異性抗体。

【0533】

実施形態２３．ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）定常領域を含む、実施形態１６に記載の多特異性抗体。

【0534】

実施形態２４．ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＴＣＲ定常領域は、ＴＣＲα定常ドメインおよびＴＣＲβ定常ドメインを含む、実施形態２３に記載の多特異性抗体。

【0535】

実施形態２５．ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、ＶＨ－ＥｐＣＡＭドメインおよびＶＬ－ＥｐＣＡＭドメインを含み、ＶＨ－ＥｐＣＡＭドメインは、ＴＣＲα定常ドメインに融合しており、ＶＬ－ＥｐＣＡＭドメインは、ＴＣＲβ定常ドメインに融合している、実施形態２３に記載の多特異性抗体。

【0536】

実施形態２６．ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、ＶＨ－ＥｐＣＡＭドメインおよびＶＬ－ＥｐＣＡＭドメインを含み、ＶＨ－ＥｐＣＡＭドメインは、ＴＣＲβ定常ドメインに融合しており、ＶＬ－ＥｐＣＡＭドメインは、ＴＣＲα定常ドメインに融合している、実施形態２３に記載の多特異性抗体。

【0537】

実施形態２７．ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、ＶＨ－ＥｐＣＡＭドメインおよびＶＬ－ＥｐＣＡＭドメインを含み、ここで、ＶＨ－ＥｐＣＡＭドメインは、ＣＨ１ ＩｇＧドメインに融合しており、ＶＬ－ＥｐＣＡＭドメインは、ＣＬ ＩｇＧドメインに融合している、実施形態２３～２６のいずれか１つに記載の多特異性抗体。

【0538】

実施形態２８．ＣＤ４７結合ドメインは、ヒトまたは操作されたヒトＣＤ４７結合ドメインである、実施形態１～２７のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0539】

実施形態２９．ＣＤ４７結合ドメインは、ＣＤ４７に特異的に結合する抗体、またはその機能的フラグメントもしくは機能的変異体を含む、実施形態１～２８のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0540】

実施形態３０．ＣＤ４７結合ドメインは、抗ＣＤ４７重鎖および抗ＣＤ４７軽鎖を含む、実施形態２９に記載の多特異性抗体。

【0541】

実施形態３１．抗ＣＤ４７重鎖は、抗ＣＤ４７重鎖可変ドメインを含む、実施形態３０に記載の多特異性抗体。

【0542】

実施形態３２．抗ＣＤ４７重鎖可変ドメインは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４重鎖の可変ドメインを含む、実施形態３１に記載の多特異性抗体。

【0543】

実施形態３３．抗ＣＤ４７軽鎖は、抗ＣＤ４７軽鎖可変ドメインを含む、実施形態３０～３２のいずれか１つに記載の多特異性抗体。

【0544】

実施形態３４．抗ＣＤ４７軽鎖可変ドメインは、カッパまたはラムダ軽鎖の可変ドメインを含む、実施形態３３に記載の多特異性抗体。

【0545】

実施形態３５．抗ＣＤ４７重鎖可変ドメインは、ＩｇＧ１重鎖の可変ドメインを含み、抗ＣＤ４７軽鎖可変ドメインはカッパ軽鎖を含む、実施形態３０に記載の多特異性抗体。

【0546】

実施形態３６．抗ＣＤ４７重鎖可変ドメインは、ＩｇＧ１重鎖の可変ドメインを含み、抗ＣＤ４７軽鎖可変ドメインはラムダ軽鎖を含む、実施形態３０に記載の多特異性抗体。

【0547】

実施形態３７．ＣＤ４７結合ドメインは単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含む、実施形態３０に記載の多特異性抗体。

【0548】

実施形態３８．ＣＤ４７結合ドメインは、抗原結合フラグメント（Ｆａｂ）を含む、実施形態３０に記載の多特異性抗体。

【0549】

実施形態３９．ＣＤ４７結合ドメインは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）定常領域を含む、実施形態３０に記載の多特異性抗体。

【0550】

実施形態４０．ＣＤ４７結合ドメインのＴＣＲ定常領域は、ＴＣＲα定常ドメインおよびＴＣＲβ定常ドメインを含む、実施形態３９に記載の多特異性抗体。

【0551】

実施形態４１．ＣＤ４７結合ドメインは、ＶＨ－ＣＤ４７ドメインおよびＶＬ－ＣＤ４７ドメインを含み、ＶＨ－ＣＤ４７ドメインは、ＴＣＲα定常ドメインに融合しており、ＶＬ－ＣＤ４７ドメインは、ＴＣＲβ定常ドメインに融合している、実施形態３９に記載の多特異性抗体。

【0552】

実施形態４２．ＣＤ４７結合ドメインは、ＶＨ－ＣＤ４７ドメインおよびＶＬ－ＣＤ４７ドメインを含み、ＶＨ－ＣＤ４７ドメインは、ＴＣＲβ定常ドメインに融合しており、ＶＬ－ＣＤ４７ドメインは、ＴＣＲα定常ドメインに融合している、実施形態３９に記載の多特異性抗体。

【0553】

実施形態４３．ＣＤ４７結合ドメインは、ＶＨ－ＣＤ４７ドメインおよびＶＬ－ＣＤ４７ドメインを含み、ＶＨ－ＣＤ４７ドメインは、ＣＨ１ ＩｇＧドメインに融合しており、ＶＬ－ＣＤ４７ドメインは、ＣＬ ＩｇＧドメインに融合している、実施形態３９～４２のいずれか１つに記載の多特異性抗体。

【0554】

実施形態４４．Ｆｃドメインをさらに含む、実施形態１～４３のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0555】

実施形態４５．ＦｃドメインはヒトＦｃドメインである、実施形態４４に記載の多特異性抗体。

【0556】

実施形態４６．Ｆｃドメインのアイソタイプは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４である、実施形態４４または４５に記載の多特異性抗体。

【0557】

実施形態４７．Ｆｃドメインはヘテロ二量体Ｆｃドメインであり、ヘテロ二量体Ｆｃ領域は、ノブ鎖（ｋｎｏｂ ｃｈａｉｎ）とホール鎖（ｈｏｌｅ ｃｈａｉｎ）とを含み、ノブイントゥホール（ｋｎｏｂ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅ）（ＫｉＨ）構造を形成する、実施形態１～４６のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0558】

実施形態４８．ノブ鎖は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４ドメインを含む、実施形態４７に記載の多特異性抗体。

【0559】

実施形態４９．ノブ鎖は変異Ｔ３６６Ｗを含み、ホール鎖は変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖを含み、アミノ酸位置の番号付けはＫａｂａｔらのＥＵインデックスによるものである、実施形態４７または４８に記載の多特異性抗体。

【0560】

実施形態５０．ホール鎖は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４ドメインを含む、実施形態４７～４９のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0561】

実施形態５１．多特異性抗体は、非対称の３鎖ノブイントゥホール構造を有する、実施形態１～５０のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0562】

実施形態５２．ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、３つの重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）：ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ここで、ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、表９に記載されるものから選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態１～５１のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0563】

実施形態５３．ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１は、配列番号２２２、２２５、２３１、２３４、２４３、および２４６から選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態１～５２のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0564】

実施形態５４．ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ２は、配列番号２２３、２２６、２３２、２３５、２４４、および２４７から選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態１～５３のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0565】

実施形態５５．ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２２４、２２７、２３３、２３６、２４５、および２４８から選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態１～５４のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0566】

実施形態５６．ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、３つの軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）：ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３を含み、ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、表１０に記載されるものから選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態１～５５のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0567】

実施形態５７．ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１は、配列番号２７６、２７９、２８５、２８８、２９７、および３００から選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態１～５６のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0568】

実施形態５８．ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ２は、配列番号２７７、２８０、２８６、２８９、２９８、および３０１から選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態１～５７のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0569】

実施形態５９．ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２７８、２８１、２８７、２９０、２９９、および３０２から選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態１～５８のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0570】

実施形態６０．ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、表１１に記載されるものから選択されるアミノ酸配列を含む重鎖フレームワーク領域（ＨＦＲ）を含み、ＨＦＲは０～３個のアミノ酸修飾を含む、実施形態１～５９のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0571】

実施形態６１．ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、配列番号３３１～３３４、３３５～３３８、３４３～３４６、３４７～３５０、３５５～３５８、および３５９～３６２から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖フレームワーク領域（ＨＦＲ）を含み、ＨＦＲは０～３個のアミノ酸修飾を含む、実施形態１～５９のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0572】

実施形態６２．ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＨＦＲは、０～２個のアミノ酸修飾を含む、実施形態６０または６１に記載の多特異性抗体。

【0573】

実施形態６３．ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＨＦＲは、０～１個のアミノ酸修飾を含む、実施形態６０または６１に記載の多特異性抗体。

【0574】

実施形態６４．ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、表１２に記載されるものから選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖フレームワーク領域（ＬＦＲ）を含み、ＬＦＲは０～３個のアミノ酸修飾を含む、実施形態１～６３のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0575】

実施形態６５．ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、配列番号３６７～３７０、３７１～３７４、３７９～３８２、３８３～３８６、３９１～３９４、および３９５～３９８から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖フレームワーク領域（ＬＦＲ）を含み、ＨＦＲは０～３個のアミノ酸修飾を含む、実施形態１～６３のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0576】

実施形態６６．ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＬＦＲは、０～２個のアミノ酸修飾を含む、実施形態６４または６５に記載の多特異性抗体。

【0577】

実施形態６７．ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＬＦＲは、０～１個のアミノ酸修飾を含む、実施形態６４または６５に記載の多特異性抗体。

【0578】

実施形態６８．ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、表１３に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む重鎖可変ドメインを含む、実施形態１～６７のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0579】

実施形態６９．ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、表１４に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、実施形態１～６８のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0580】

実施形態７０．ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、表１５に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む完全長の重鎖を含む、実施形態１～６９のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0581】

実施形態７１．ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、表１６に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む完全長の軽鎖を含む、実施形態１～７０のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0582】

実施形態７２．ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、表１７に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含む、実施形態１～７１のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0583】

実施形態７３．ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、表１８に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含むＴＣＲ定常ドメインを含む、実施形態１～７１のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0584】

実施形態７４．ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、表１８に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含むＴＣＲα定常ドメインを含む、実施形態１～７１のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0585】

実施形態７５．ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、表１８に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含むＴＣＲβ定常ドメインを含む、実施形態１～７１のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0586】

実施形態７６．ＣＤ４７結合ドメインは、３つの重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）である、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、表１に記載されるものから選択されるアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３個のアミノ酸修飾を含む、実施形態１～７５のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0587】

実施形態７７．ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～２個のアミノ酸修飾を含む、実施形態７６に記載の多特異性抗体。

【0588】

実施形態７８．ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～１個のアミノ酸修飾を含む、実施形態７６に記載の多特異性抗体。

【0589】

実施形態７９．ＣＤ４７結合ドメインは、３つの軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）である、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、表２に記載されるものから選択されるアミノ酸配列を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３個のアミノ酸修飾を含む、実施形態１～７８のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0590】

実施形態８０．ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～２個のアミノ酸修飾を含む、実施形態７９に記載の多特異性抗体。

【0591】

実施形態８１．ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～１個のアミノ酸修飾を含む、実施形態７９に記載の多特異性抗体。

【0592】

実施形態８２．ＣＤ４７結合ドメインは、表３に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む重鎖可変ドメインを含む、実施形態１～８１のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0593】

実施形態８３．ＣＤ４７結合ドメインは、表４に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、実施形態１～８２のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0594】

実施形態８４．ＣＤ４７結合ドメインは、表５に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む完全長の重鎖を含む、実施形態１～８３のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0595】

実施形態８５．ＣＤ４７結合ドメインは、表６に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む完全長の軽鎖を含む、実施形態１～８４のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0596】

実施形態８６．ＣＤ４７結合ドメインは、表７に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含む、実施形態１～８４のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0597】

実施形態８７．ＣＤ４７結合ドメインは、表８に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含むＴＣＲ定常ドメインを含む、実施形態１～８４のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0598】

実施形態８８．ＣＤ４７結合ドメインは、表８に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含むＴＣＲα定常ドメインを含む、実施形態１～８４のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0599】

実施形態８９．ＣＤ４７結合ドメインは、表８に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含むＴＣＲβ定常ドメインを含む、実施形態１～８４のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0600】

実施形態９０．多特異性抗体は、表２６に記載される対応する配列に対して、それぞれが少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する１つ以上の配列を含む、実施形態１～８６のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0601】

実施形態９１．多特異性抗体は、表２７に記載される対応する配列に対して、それぞれが少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する１つ以上の配列を含む、実施形態１～８６のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0602】

実施形態９２．多特異性抗体は、表２８に記載される対応する配列に対して、それぞれが少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する１つ以上の配列を含む、実施形態１～８６のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0603】

実施形態９３．多特異性抗体は、表２９に記載される対応する配列に対して、それぞれが少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する１つ以上の配列を含む、実施形態１～８６のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0604】

実施形態９４．多特異性抗体は、表３０に記載される対応する配列に対して、それぞれが少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する１つ以上の配列を含む、実施形態１～８６のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0605】

実施形態９５．多特異性抗体は、表３１に記載される対応する配列に対して、それぞれが少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する１つ以上の配列を含む、実施形態１～８６のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0606】

実施形態９６．多特異性抗体は、表３２に記載される対応する配列に対して、それぞれが少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する１つ以上の配列を含む、実施形態１～８６のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0607】

実施形態９７．ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、３つの重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）：ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに、３つの軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）：ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３を含み、ＣＤ４７結合ドメインは、３つの重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）である、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＣＤ４７結合ドメインは、３つの軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）である、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３を含む、実施形態１～９６のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0608】

実施形態９８．ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ２は、配列番号２３５に記載のアミノ酸配列を含む、実施形態１～９７のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0609】

実施形態９９．ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１：配列番号２３４、ＨＣ－ＣＤＲ２：配列番号２３５、およびＨＣ－ＣＤＲ３：配列番号２３６に記載のアミノ酸配列を含む、実施形態１～９８のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0610】

実施形態１００．ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１：配列番号２３４、ＨＣ－ＣＤＲ２：配列番号２３５、およびＨＣ－ＣＤＲ３：配列番号２３６に記載のアミノ酸配列を含み、ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、ＬＣ－ＣＤＲ１：配列番号２８８、ＬＣ－ＣＤＲ２：配列番号２８９、およびＬＣ－ＣＤＲ３：配列番号２９０に記載のアミノ酸配列を含む、実施形態１～９９のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0611】

実施形態１０１．ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１：配列番号２３４、ＨＣ－ＣＤＲ２：配列番号２３５、およびＨＣ－ＣＤＲ３：配列番号２３６に記載のアミノ酸配列を含み、ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、ＬＣ－ＣＤＲ１：配列番号２８８、ＬＣ－ＣＤＲ２：配列番号２８９、およびＬＣ－ＣＤＲ３：配列番号２９０に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１：配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２：配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３：配列番号３に記載のアミノ酸配列を含む、実施形態１～１００のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0612】

実施形態１０２．ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１：配列番号２３４、ＨＣ－ＣＤＲ２：配列番号２３５、およびＨＣ－ＣＤＲ３：配列番号２３６に記載のアミノ酸配列を含み、ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、ＬＣ－ＣＤＲ１：配列番号２８８、ＬＣ－ＣＤＲ２：配列番号２８９、およびＬＣ－ＣＤＲ３：配列番号２９０に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１：配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２：配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３：配列番号３に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、ＬＣ－ＣＤＲ１：配列番号６１、ＬＣ－ＣＤＲ２：配列番号６２、およびＬＣ－ＣＤＲ３：配列番号６３に記載のアミノ酸配列を含む、実施形態１～１０１のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0613】

実施形態１０３．多特異性抗体は非対称の３鎖ノブイントゥホール構造を含み、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含み、ＣＤ４７結合ドメインは抗原結合フラグメント（Ｆａｂ）を含む、実施形態１～１０２のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0614】

実施形態１０４．多特異性抗体は、配列番号４８２、４８３、および４８４に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１～９７のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0615】

実施形態１０５．多特異性抗体は、配列番号４８２、４８３、および４８４に記載のアミノ酸配列を含む、実施形態１～９７または１０４のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0616】

実施形態１０６．多特異性抗体は、配列番号４８２、４８３、および５０７に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１～９７または１０４～１０５のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0617】

実施形態１０７．多特異性抗体は、配列番号４８２、４８３、および５０７に記載のアミノ酸配列を含む、実施形態１～９７または１０４～１０６のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0618】

実施形態１０８．多特異性抗体は非対称の３鎖ノブイントゥホール構造を含み、ＣＤ４７結合ドメインは単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含み、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは抗原結合フラグメント（Ｆａｂ）を含む、実施形態１～９７または１０４～１０７のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0619】

実施形態１０９．多特異性抗体は、配列番号５０３、５０４、および５０５に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１～９７または１０４～１０８のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0620】

実施形態１１０．多特異性抗体は、配列番号５０３、５０４、および５０５に記載のアミノ酸配列を含む、実施形態１～９７または１０４～１０９のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0621】

実施形態１１１．ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ２は、配列番号２４４に記載のアミノ酸配列を含む、実施形態１～９７のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0622】

実施形態１１２．ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１：配列番号２４３、ＨＣ－ＣＤＲ２：配列番号２４４、およびＨＣ－ＣＤＲ３：配列番号２４５に記載のアミノ酸配列を含む、実施形態１～９７または１１１のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0623】

実施形態１１３．ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１：配列番号２４３、ＨＣ－ＣＤＲ２：配列番号２４４、およびＨＣ－ＣＤＲ３：配列番号２４５に記載のアミノ酸配列を含み、ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、ＬＣ－ＣＤＲ１：配列番号２９７、ＬＣ－ＣＤＲ２：配列番号２９８、およびＬＣ－ＣＤＲ３：配列番号２９９に記載のアミノ酸配列を含む、実施形態１～９７または１１１～１１２のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0624】

実施形態１１４．ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１：配列番号２４３、ＨＣ－ＣＤＲ２：配列番号２４４、およびＨＣ－ＣＤＲ３：配列番号２４５に記載のアミノ酸配列を含み、ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、ＬＣ－ＣＤＲ１：配列番号２９７、ＬＣ－ＣＤＲ２：配列番号２９８、およびＬＣ－ＣＤＲ３：配列番号２９９に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１：配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２：配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３：配列番号３に記載のアミノ酸配列を含む、実施形態１～９７または１１１～１１３のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0625】

実施形態１１５．ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１：配列番号２４３、ＨＣ－ＣＤＲ２：配列番号２４４、およびＨＣ－ＣＤＲ３：配列番号２４５に記載のアミノ酸配列を含み、ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、ＬＣ－ＣＤＲ１：配列番号２９７、ＬＣ－ＣＤＲ２：配列番号２９８、およびＬＣ－ＣＤＲ３：配列番号２９９に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１：配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２：配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３：配列番号３に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、ＬＣ－ＣＤＲ１：配列番号６１、ＬＣ－ＣＤＲ２：配列番号６２、およびＬＣ－ＣＤＲ３：配列番号６３に記載のアミノ酸配列を含む、実施形態１～９７または１１１～１１４のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0626】

実施形態１１６．多特異性抗体は非対称の３鎖ノブイントゥホール構造を含み、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含み、ＣＤ４７結合ドメインは抗原結合フラグメント（Ｆａｂ）を含む、実施形態１～９７または１１１～１１５のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0627】

実施形態１１７．多特異性抗体は非対称の３鎖ノブイントゥホール構造を含み、ＣＤ４７結合ドメインは単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含み、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは抗原結合フラグメント（Ｆａｂ）を含む、実施形態１～９７または１１１～１１６のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0628】

実施形態１１８．多特異性抗体は、配列番号４８５、４８６、および４８７に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１～９７または１１１～１１７のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0629】

実施形態１１９．多特異性抗体は、配列番号４８５、４８６、および４８７に記載のアミノ酸配列を含む、実施形態１～９７または１１１～１１８のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0630】

実施形態１２０．ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１：配列番号２２２、ＨＣ－ＣＤＲ２：配列番号２２３、およびＨＣ－ＣＤＲ３：配列番号２２４に記載のアミノ酸配列を含む、実施形態１～９７のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0631】

実施形態１２１．ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１：配列番号２２２、ＨＣ－ＣＤＲ２：配列番号２２３、およびＨＣ－ＣＤＲ３：配列番号２２４に記載のアミノ酸配列を含み、ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、ＬＣ－ＣＤＲ１：配列番号２７６、ＬＣ－ＣＤＲ２：配列番号２７７、およびＬＣ－ＣＤＲ３：配列番号２７５に記載のアミノ酸配列を含む、実施形態１～９７または１２０のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0632】

実施形態１２２．ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１：配列番号２２２、ＨＣ－ＣＤＲ２：配列番号２２３、およびＨＣ－ＣＤＲ３：配列番号２２４に記載のアミノ酸配列を含み、ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、ＬＣ－ＣＤＲ１：配列番号２７６、ＬＣ－ＣＤＲ２：配列番号２７７、およびＬＣ－ＣＤＲ３：配列番号２７５に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１：配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２：配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３：配列番号３に記載のアミノ酸配列を含む、実施形態１～９７または１２０～１２１のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0633】

実施形態１２３．ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１：配列番号２２２、ＨＣ－ＣＤＲ２：配列番号２２３、およびＨＣ－ＣＤＲ３：配列番号２２４に記載のアミノ酸配列を含み、ＥｐＣＡＭ結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、ＬＣ－ＣＤＲ１：配列番号２７６、ＬＣ－ＣＤＲ２：配列番号２７７、およびＬＣ－ＣＤＲ３：配列番号２７５に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１：配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２：配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３：配列番号３に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、ＬＣ－ＣＤＲ１：配列番号６１、ＬＣ－ＣＤＲ２：配列番号６２、およびＬＣ－ＣＤＲ３：配列番号６３に記載のアミノ酸配列を含む、実施形態１～９７または１２０～１２２のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0634】

実施形態１２４．多特異性抗体は非対称の３鎖ノブイントゥホール構造を含み、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含み、ＣＤ４７結合ドメインは抗原結合フラグメント（Ｆａｂ）を含む、実施形態１～９７または１２０～１２３のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0635】

実施形態１２５．多特異性抗体は非対称の３鎖ノブイントゥホール構造を含み、ＣＤ４７結合ドメインは単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含み、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは抗原結合フラグメント（Ｆａｂ）を含む、実施形態１～９７または１２０～１２４のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0636】

実施形態１２６．多特異性抗体は、配列番号４８２、４８３、および５０６に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１～９７または１２０～１２５のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0637】

実施形態１２７．多特異性抗体は、配列番号４８２、４８３、および５０６に記載のアミノ酸配列を含む、実施形態１～９７または１２０～１２７のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0638】

実施形態１２８．約１ナノモル（ｎＭ）未満または約０．０１ｎＭ未満の多特異性抗体は、マクロファージによって貪食されるＨＣＴ－１５細胞の割合を、非特異性ＩｇＧ１抗体対照と比較して、少なくとも４倍増加させる、実施形態１～９３のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0639】

実施形態１２９．マクロファージによるＥｐＣＡＭ陽性ＣＤ４７陽性腫瘍細胞の抗体依存性細胞食作用を媒介するために必要な抗体の濃度は、約０．００１ナノモル（ｎＭ）～約３ｎＭである、実施形態９４に記載の多特異性抗体。

【0640】

実施形態１３０．ＥｐＣＡＭ陽性ＣＤ４７陽性腫瘍細胞は、ＨＣＴ－１５細胞である、実施形態１２９に記載の多特異性抗体。

【0641】

実施形態１３１．ＥｐＣＡＭ陽性ＣＤ４７陽性腫瘍細胞は、腺管膵臓腺癌細胞、卵巣明細胞腺癌細胞、卵巣腺癌細胞、結腸腺癌細胞、直腸腺癌細胞、食道癌細胞、胃癌細胞、非小細胞肺癌細胞、小細胞肺癌細胞、子宮内膜癌細胞、肝細胞癌細胞、胆管癌細胞、前立腺腺癌細胞、甲状腺癌細胞、乳癌細胞、子宮頚癌細胞、腎細胞癌細胞、精巣癌細胞、または外陰扁平上皮癌細胞である、実施形態１２９に記載の多特異性抗体。

【0642】

実施形態１３２．約１００ナノモル（ｎＭ）の多特異性抗体は、細胞の表面上でのＣＤ４７へのＳＩＲＰαの結合を少なくとも約３０％阻害する、実施形態１～１３１のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0643】

実施形態１３３．細胞はＣＤ４７＋ＥｐＣＡＭ＋腫瘍細胞である、実施形態１３２に記載の多特異性抗体。

【0644】

実施形態１３４．細胞はＨＣＣ－４４細胞と少なくとも同じ数のＥｐＣＡＭタンパク質をその表面に発現する、実施形態１３３に記載の多特異性抗体。

【0645】

実施形態１３５．細胞は、少なくとも５０，０００個、少なくとも１００，０００個、少なくとも３００，０００個、少なくとも６００，０００個、または少なくとも１，５００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質をその表面に発現する、実施形態１３３に記載の多特異性抗体。

【0646】

実施形態１３６．約１０００ナノモル（ｎＭ）の多特異性抗体は、赤血球凝集アッセイにおいて赤血球の溶血を誘導しない、実施形態１～１３３のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0647】

実施形態１３７．実施形態１～１３６のいずれかに記載の多特異性抗体、およびＣＤ４７＋ＥｐＣＡＭ＋標的細胞を含む、複合体。

【0648】

実施形態１３８．標的細胞はＨＣＣ－４４細胞と少なくとも同じ数のＥｐＣＡＭタンパク質をその表面に発現する、実施形態１３７に記載の複合体。

【0649】

実施形態１３９．標的細胞は、少なくとも５０，０００個、少なくとも１００，０００個、少なくとも３００，０００個、少なくとも６００，０００個、または少なくとも１，５００，０００個のＥｐＣＡＭタンパク質をその表面に発現する、実施形態１３７に記載の複合体。

【0650】

実施形態１４０．ＣＤ４７＋ＥｐＣＡＭ＋標的細胞は癌細胞である、実施形態１３７～１３９のいずれかに記載の複合体。

【0651】

実施形態１４１．癌細胞は、腺管膵臓腺癌細胞、卵巣明細胞腺癌細胞、卵巣腺癌細胞、結腸腺癌細胞、直腸腺癌細胞、食道癌細胞、胃癌細胞、非小細胞肺癌細胞、小細胞肺癌細胞、子宮内膜癌細胞、肝細胞癌細胞、胆管癌細胞、前立腺腺癌細胞、甲状腺癌細胞、乳癌細胞、子宮頸癌細胞、腎細胞癌細胞、精巣癌細胞、または外陰扁平上皮癌細胞である、実施形態１４０に記載の複合体。

【0652】

実施形態１４２．実施形態１～１３６のいずれかに記載の多特異性抗体を投与する工程を含む、ＣＤ４７＋ＥｐＣＡＭ＋標的細胞の食作用を誘導する方法。

【0653】

実施形態１４３．多特異性抗体は、約５ナノモル（ｎＭ）未満、約２ｎＭ未満、約１ｎＭ未満、約０．５ｎＭ未満、約０．２ｎＭ未満、約０．１ｎＭ未満、または約０．０５ｎＭ未満の濃度で投与される、実施形態１４２に記載の方法。

【0654】

実施形態１４４．ＣＤ４７＋ＥｐＣＡＭ＋標的細胞は、ＨＣＴ－１５細胞、Ａ４３１細胞、ＨＣＣ－４４細胞、ＳＫＯＶ－３細胞、ＯＶＩＳＥ細胞、またはＣＦＰＡＣ－１細胞から選択される、実施形態１４２または１４３に記載の方法。

【0655】

実施形態１４５．ＣＤ４７＋ＥｐＣＡＭ＋標的細胞は、腺管膵臓腺癌細胞、卵巣明細胞腺癌細胞、卵巣腺癌細胞、結腸腺癌細胞、直腸腺癌細胞、食道癌細胞、胃癌細胞、非小細胞肺癌細胞、小細胞肺癌細胞、子宮内膜癌細胞、肝細胞癌細胞、胆管癌細胞、前立腺腺癌細胞、甲状腺癌細胞、乳癌細胞、子宮頚癌細胞、腎細胞癌細胞、精巣癌細胞、または外陰扁平上皮癌細胞である、実施形態１４２または１４３に記載の方法。

【0656】

実施形態１４６．実施形態１～１３６のいずれかに記載の多特異性抗体を投与する工程を含む、ＣＤ４７＋ＥｐＣＡＭ＋標的細胞を死滅させる方法であって、ここで、多特異性抗体は、ＣＤ４７＋ＥｐＣＡＭ＋標的細胞の表面上でのＣＤ４７へのＳＩＲＰαの結合を阻害する、方法。

【0657】

実施形態１４７．実施形態１～１３６のいずれかに記載の多特異性抗体を投与する工程を含む、ＣＤ４７＋ＥｐＣＡＭ＋標的細胞を死滅させる方法であって、多特異性抗体は、ＣＤ４７＋ＥｐＣＡＭ＋標的細胞を死滅させる抗体依存性細胞傷害を誘導する、方法。

【0658】

実施形態１４８．抗体は、約０．０１ナノモル（ｎＭ）～約１ｎＭ、約０．０１ｎＭ～約０．５ｎＭ、約０．０１ｎＭ～約０．２５ｎＭ、約０．０１ｎＭ～約０．１ｎＭ、約０．０１～約０．０５ｎＭ、または約０．０１ｎＭ未満の濃度で投与される、実施形態１４７に記載の方法。

【0659】

実施形態１４９．ＣＤ４７＋ＥｐＣＡＭ＋標的細胞は、ＨＣＴ－１５細胞、Ａ４３１細胞、ＨＣＣ－４４細胞、ＳＫＯＶ－３細胞、ＯＶＩＳＥ細胞、またはＣＦＰＡＣ－１細胞から選択される、実施形態１４７または１４８に記載の方法。

【0660】

実施形態１５０．ＣＤ４７＋ＥｐＣＡＭ＋標的細胞は、腺管膵臓腺癌細胞、卵巣明細胞腺癌細胞、卵巣腺癌細胞、結腸腺癌細胞、直腸腺癌細胞、食道癌細胞、胃癌細胞、非小細胞肺癌細胞、小細胞肺癌細胞、子宮内膜癌細胞、肝細胞癌細胞、胆管癌細胞、前立腺腺癌細胞、甲状腺癌細胞、乳癌細胞、子宮頚癌細胞、腎細胞癌細胞、精巣癌細胞、または外陰扁平上皮癌細胞である、実施形態１４７または１４８に記載の方法。

【0661】

実施形態１５１．実施形態１～１３６のいずれかに記載の多特異性抗体を含む、医薬組成物。

【0662】

実施形態１５２．抗癌剤をさらに含む、実施形態１５１に記載の医薬組成物。

【0663】

実施形態１５３．抗癌剤は化学療法剤または生物学的製剤である、実施形態１５２に記載の医薬組成物。

【0664】

実施形態１５４．化学療法剤はトポイソメラーゼ阻害剤を含む、実施形態１５３に記載の医薬組成物。

【0665】

実施形態１５５．トポイソメラーゼ阻害剤は、カンプトテシンまたはカンプトテシン誘導体を含む、実施形態１５４に記載の医薬組成物。

【0666】

実施形態１５６．カンプトテシン誘導体はイリノテカンを含む、実施形態１５５に記載の医薬組成物。

【0667】

実施形態１５７．化学療法剤はオキサリプラチンを含む、実施形態１５６に記載の医薬組成物。

【0668】

実施形態１５８．化学療法剤は５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）を含む、実施形態１５７に記載の医薬組成物。

【0669】

実施形態１５９．化学療法剤はイリノテカン、オキサリプラチン、または５－ＦＵを含む、実施形態１５８に記載の医薬組成物。

【0670】

実施形態１６０．癌を有する対象を処置する方法であって、実施形態１５１の医薬組成物を対象に投与する工程を含む、方法。

【0671】

実施形態１６１．癌は、腺管膵臓腺癌、卵巣明細胞腺癌、卵巣腺癌、結腸腺癌、肺腺癌、直腸腺癌、食道癌、胃癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、子宮内膜癌、肝細胞癌、胆管癌、前立腺腺癌、甲状腺癌、乳癌、子宮頸癌、腎細胞癌、精巣癌、または外陰扁平上皮癌である、実施形態１６０に記載の方法。

【0672】

実施形態１６２．抗癌剤を対象に投与する工程をさらに含む、実施形態１６１に記載の方法。

【0673】

実施形態１６３．抗癌剤は化学療法剤または生物学的製剤である、実施形態１６２に記載の方法。

【0674】

実施形態１６４．多特異性抗体が対象に投与される前に、抗癌剤は対象に投与される、実施形態１６２～１６３のいずれか１つに記載の方法。

【0675】

実施形態１６５．多特異性抗体が対象に投与された後に、抗癌剤は対象に投与される、実施形態１６２～１６３のいずれか１つに記載の方法。

【0676】

実施形態１６６．多特異性抗体が対象に投与されると同時に、抗癌剤は対象に投与される、実施形態１６２～１６３のいずれか１つに記載の方法。

【0677】

実施形態１６７．化学療法剤はトポイソメラーゼ阻害剤を含む、実施形態１６２～１６６のいずれか１つに記載の方法。

【0678】

実施形態１６８．トポイソメラーゼ阻害剤は、カンプトテシンまたはカンプトテシン誘導体を含む、実施形態１６７に記載の方法。

【0679】

実施形態１６９．カンプトテシン誘導体はイリノテカンを含む、実施形態１６８に記載の方法。

【0680】

実施形態１７０．化学療法剤はオキサリプラチンを含む、実施形態１６２～１６６のいずれか１つに記載の方法。

【0681】

実施形態１７１．化学療法剤は５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）を含む、実施形態１６２～１６６のいずれか１つに記載の方法。

【0682】

実施形態１７２．化学療法剤はイリノテカン、オキサリプラチン、または５－ＦＵを含む、実施形態１６２～１６６のいずれか１つに記載の方法。

【0683】

実施形態１７３．ＣＤ４７結合ドメインおよびＥＧＦＲ結合ドメインを含む、多特異性抗体。

【0684】

実施形態１７４．多特異性抗体は二重特異性、三重特異性、または四重特異性である、実施形態１７３に記載の多特異性抗体。

【0685】

実施形態１７５．多特異性抗体は二重特異性である、実施形態１７４に記載の多特異性抗体。

【0686】

実施形態１７６．多特異性抗体は二価、三価、または四価である、実施形態１７３に記載の多特異性抗体。

【0687】

実施形態１７７．多特異性抗体は二価である、実施形態１７６に記載の多特異性抗体。

【0688】

実施形態１７８．多特異性抗体は、腫瘍細胞の表面上に発現されるＣＤ４７に対して、正常細胞、例えば、赤血球、血小板、Ｔ細胞、またはＮＫ細胞の表面上に発現されるＣＤ４７よりも高い親和性を有する、実施形態１７６または１７７に記載の多特異性抗体。

【0689】

実施形態１７９．腫瘍細胞はＥＧＦＲを発現する、実施形態１７８に記載の多特異性抗体。

【0690】

実施形態１８０．（例えば、ヒト）赤血球への最大半量結合に必要な多特異性抗体の濃度は、約２００ナノモル（ｎＭ）超である、実施形態１７６～１７９のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0691】

実施形態１８１．多特異性抗体は、約１００ナノモル（ｎＭ）未満の解離定数（ＫＤ）で（例えば、ヒト）ＣＤ４７に結合する、実施形態１７６～１８０のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0692】

実施形態１８２．多特異性抗体は、約１ナノモル（ｎＭ）～約１００ｎＭ、約１ｎＭ～約５０ｎＭ、または約５ｎＭ～約５０ｎＭの解離定数（ＫＤ）で（例えば、ヒト）ＣＤ４７に結合する、実施形態１８１に記載の多特異性抗体。

【0693】

実施形態１８３．多特異性抗体は、約２５ナノモル（ｎＭ）未満の解離定数（ＫＤ）でＥＧＦＲに結合する、実施形態１７６～１８２のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0694】

実施形態１８４．多特異性抗体は、約０．２ナノモル（ｎＭ）～約２５ｎＭ、約０．２ｎＭ～約１０ｎＭ、約０．２ｎＭ～約２ｎＭ、または約２ｎＭ～約１０ｎＭの解離定数（ＫＤ）でＥＧＦＲに結合する、実施形態１８３に記載の多特異性抗体。

【0695】

実施形態１８５．解離定数（ＫＤ）は、表面プラズモン共鳴によって決定される、実施形態１８１～１８４のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0696】

実施形態１８６．ＣＤ４７結合ドメインは、ヒトまたは操作されたヒトＣＤ４７結合ドメインである、実施形態１７６～１８５のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0697】

実施形態１８７．ＣＤ４７結合ドメインは、ＣＤ４７に特異的に結合する抗体、またはその機能的フラグメントもしくは機能的変異体を含む、実施形態１７６～１８６のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0698】

実施形態１８８．ＣＤ４７結合ドメインは、抗ＣＤ４７重鎖および抗ＣＤ４７軽鎖を含む、実施形態１８７に記載の多特異性抗体。

【0699】

実施形態１８９．抗ＣＤ４７重鎖は、抗ＣＤ４７重鎖可変ドメインを含む、実施形態１８８に記載の多特異性抗体。

【0700】

実施形態１９０．抗ＣＤ４７重鎖可変ドメインは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４重鎖の可変ドメインを含む、実施形態１８９に記載の多特異性抗体。

【0701】

実施形態１９１．抗ＣＤ４７軽鎖は、抗ＣＤ４７軽鎖可変ドメインを含む、実施形態１８７～１９０のいずれか１つに記載の多特異性抗体。

【0702】

実施形態１９２．抗ＣＤ４７軽鎖可変ドメインは、カッパまたはラムダ軽鎖を含む、実施形態１９１に記載の多特異性抗体。

【0703】

実施形態１９３．抗ＣＤ４７重鎖可変ドメインは、ＩｇＧ１重鎖の可変ドメインを含み、抗ＣＤ４７軽鎖可変ドメインはカッパ軽鎖を含む、実施形態１８８に記載の多特異性抗体。

【0704】

実施形態１９４．抗ＣＤ４７重鎖可変ドメインは、ＩｇＧ１重鎖の可変ドメインを含み、抗ＣＤ４７軽鎖可変ドメインはラムダ軽鎖を含む、実施形態１８８に記載の多特異性抗体。

【0705】

実施形態１９５．ＣＤ４７結合ドメインは単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含む、実施形態１８７に記載の多特異性抗体。

【0706】

実施形態１９６．ＣＤ４７結合ドメインは、抗原結合フラグメント（Ｆａｂ）を含む、実施形態１８７に記載の多特異性抗体。

【0707】

実施形態１９７．ＣＤ４７結合ドメインは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）定常領域を含む、実施形態１８７に記載の多特異性抗体。

【0708】

実施形態１９８．ＣＤ４７結合ドメインのＴＣＲ定常領域は、ＴＣＲα定常ドメインおよびＴＣＲβ定常ドメインを含む、実施形態１９７に記載の多特異性抗体。

【0709】

実施形態１９９．ＣＤ４７結合ドメインは、ＶＨ－ＣＤ４７ドメインおよびＶＬ－ＣＤ４７ドメインを含み、ＶＨ－ＣＤ４７ドメインは、ＴＣＲα定常ドメインに融合しており、ＶＬ－ＣＤ４７ドメインは、ＴＣＲβ定常ドメインに融合している、実施形態１９７に記載の多特異性抗体。

【0710】

実施形態２００．ＣＤ４７結合ドメインは、ＶＨ－ＣＤ４７ドメインおよびＶＬ－ＣＤ４７ドメインを含み、ＶＨ－ＣＤ４７ドメインは、ＴＣＲβ定常ドメインに融合しており、ＶＬ－ＣＤ４７ドメインは、ＴＣＲα定常ドメインに融合している、実施形態１９７に記載の多特異性抗体。

【0711】

実施形態２０１．ＣＤ４７結合ドメインは、ＶＨ－ＣＤ４７ドメインおよびＶＬ－ＣＤ４７ドメインを含み、ＶＨ－ＣＤ４７ドメインは、ＣＨ１ ＩｇＧドメインに融合しており、ＶＬ－ＣＤ４７ドメインは、ＣＬ ＩｇＧドメインに融合している、実施形態１９７～２００のいずれか１つに記載の多特異性抗体。

【0712】

実施形態２０２．ＥＧＦＲ結合ドメインは、重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む、実施形態１７６～２０１のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0713】

実施形態２０３．ＥＧＦＲ結合ドメインは単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含む、実施形態２０２に記載の多特異性抗体。

【0714】

実施形態２０４．ＥＧＦＲ結合ドメインは、抗原結合フラグメント（Ｆａｂ）を含む、実施形態２０２に記載の多特異性抗体。

【0715】

実施形態２０５．ＥＧＦＲ結合ドメインは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）定常領域を含む、実施形態２０２に記載の多特異性抗体。

【0716】

実施形態２０６．ＥＧＦＲ結合ドメインのＴＣＲ定常領域は、ＴＣＲα定常ドメインおよびＴＣＲβ定常ドメインを含む、実施形態２０５に記載の多特異性抗体。

【0717】

実施形態２０７．ＥＧＦＲ結合ドメインは、ＶＨ－ＥＧＦＲドメインおよびＶＬ－ＥＧＦＲドメインを含み、ＶＨ－ＥＧＦＲドメインは、ＴＣＲα定常ドメインに融合しており、ＶＬ－ＥＧＦＲドメインは、ＴＣＲβ定常ドメインに融合している、実施形態２０５に記載の多特異性抗体。

【0718】

実施形態２０８．ＥＧＦＲ結合ドメインは、ＶＨ－ＥＧＦＲドメインおよびＶＬ－ＥＧＦＲドメインを含み、ＶＨ－ＥＧＦＲドメインは、ＴＣＲβ定常ドメインに融合しており、ＶＬ－ＥＧＦＲドメインは、ＴＣＲα定常ドメインに融合している、実施形態２０５に記載の多特異性抗体。

【0719】

実施形態２０９．ＥＧＦＲ結合ドメインは、ＶＨ－ＥＧＦＲドメインおよびＶＬ－ＥＧＦＲドメインを含み、ＶＨ－ＥＧＦＲドメインはＣＨ１ ＩｇＧドメインに融合しており、ＶＬ－ＥＧＦＲドメインはＣＬ ＩｇＧドメインに融合している、実施形態２０５～２０８のいずれか１つに記載の多特異性抗体。

【0720】

実施形態２１０．Ｆｃドメインをさらに含む、実施形態１７６～２０９のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0721】

実施形態２１１．ＦｃドメインはヒトＦｃドメインである、実施形態２０３に記載の多特異性抗体。

【0722】

実施形態２１２．Ｆｃドメインのアイソタイプは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４である、実施形態２０３または２１１に記載の多特異性抗体。

【0723】

実施形態２１３．Ｆｃドメインはヘテロ二量体Ｆｃドメインであり、ヘテロ二量体Ｆｃ領域は、ノブ鎖（ｋｎｏｂ ｃｈａｉｎ）とホール鎖（ｈｏｌｅ ｃｈａｉｎ）とを含み、ノブイントゥホール（ｋｎｏｂ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅ）（ＫｉＨ）構造を形成する、実施形態１７６～２１２のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0724】

実施形態２１４．ノブ鎖は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４ドメインを含む、実施形態２１３に記載の多特異性抗体。

【0725】

実施形態２１５．ノブ鎖は変異Ｔ３６６Ｗを含み、ホール鎖は変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖを含み、アミノ酸位置の番号付けはＫａｂａｔらのＥＵインデックスによるものである、実施形態２１３または２１４に記載の多特異性抗体。

【0726】

実施形態２１６．ホール鎖は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４ドメインを含む、実施形態２１３～２１５のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0727】

実施形態２１７．多特異性抗体は、非対称の３鎖ノブイントゥホール構造を有する、実施形態１７６～２１６のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0728】

実施形態２１８．ＣＤ４７結合ドメインは、３つの重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）である、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、表１に記載されるものから選択されるアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３個のアミノ酸修飾を含む、実施形態１７６～２１７のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0729】

実施形態２１９．ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～２個のアミノ酸修飾を含む、実施形態２１８に記載の多特異性抗体。

【0730】

実施形態２２０．ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～１個のアミノ酸修飾を含む、実施形態２１８に記載の多特異性抗体。

【0731】

実施形態２２１．ＣＤ４７結合ドメインは、３つの軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）である、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、表２に記載されるものから選択されるアミノ酸配列を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３個のアミノ酸修飾を含む、実施形態１７６～２２０のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0732】

実施形態２２２．ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～２個のアミノ酸修飾を含む、実施形態２２１に記載の多特異性抗体。

【0733】

実施形態２２３．ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～１個のアミノ酸修飾を含む、実施形態２２１に記載の多特異性抗体。

【0734】

実施形態２２４．ＣＤ４７結合ドメインは、表３に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む重鎖可変ドメインを含む、実施形態１７６～２２３のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0735】

実施形態２２５．ＣＤ４７結合ドメインは、表４に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、実施形態１７６～２２４のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0736】

実施形態２２６．ＣＤ４７結合ドメインは、表５に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む完全長の重鎖を含む、実施形態１７６～２２５のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0737】

実施形態２２７．ＣＤ４７結合ドメインは、表６に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む完全長の軽鎖を含む、実施形態１７６～２２６のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0738】

実施形態２２８．ＣＤ４７結合ドメインは、表７に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含む、実施形態１７６～２２７のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0739】

実施形態２２９．ＣＤ４７結合ドメインは、表８に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含むＴＣＲ定常ドメインを含む、実施形態１７６～２２８のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0740】

実施形態２３０．ＣＤ４７結合ドメインは、表８に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含むＴＣＲα定常ドメインを含む、実施形態１７６～２２９のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0741】

実施形態２３１．ＣＤ４７結合ドメインは、表８に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含むＴＣＲβ定常ドメインを含む、実施形態１７６～２２９のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0742】

実施形態２３２．ＥＧＦＲ結合ドメインは、３つの重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）である、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＥＧＦＲ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、表１９に記載されるものから選択されるアミノ酸配列を含み、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３個のアミノ酸修飾を含む、実施形態１７６～２３１のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0743】

実施形態２３３．ＥＧＦＲ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～２個のアミノ酸修飾を含む、実施形態２３２に記載の多特異性抗体。

【0744】

実施形態２３４．ＥＧＦＲ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～１個のアミノ酸修飾を含む、実施形態２３２に記載の多特異性抗体。

【0745】

実施形態２３５．ＥＧＦＲ結合ドメインは、３つの軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）である、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３を含み、ＥＧＦＲ結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、表２０に記載されるものから選択されるアミノ酸配列を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～３個のアミノ酸修飾を含む、実施形態１７６～２３３のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0746】

実施形態２３６．ＥＧＦＲ結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～２個のアミノ酸修飾を含む、実施形態２３５に記載の多特異性抗体。

【0747】

実施形態２３７．ＥＧＦＲ結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つは、０～１個のアミノ酸修飾を含む、実施形態２３５に記載の多特異性抗体。

【0748】

実施形態２３８．ＥＧＦＲ結合ドメインは、表２１に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む重鎖可変ドメインを含む、実施形態１７６～２３７のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0749】

実施形態２３９．ＥＧＦＲ結合ドメインは、表２２に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、実施形態１７６～２３８のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0750】

実施形態２４０．ＥＧＦＲ結合ドメインは、表２３に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む完全長の重鎖を含む、実施形態１７６～２３９のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0751】

実施形態２４１．ＥＧＦＲ結合ドメインは、表２４に記載される配列に対して、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する配列を含む完全長の軽鎖を含む、実施形態１７６～２４０のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0752】

実施形態２４２．多特異性抗体は、表３３に記載される対応する配列に対して、それぞれが少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する１つ以上の配列を含む、実施形態１７６～２４１のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0753】

実施形態２４３．多特異性抗体は、表３４に記載される対応する配列に対して、それぞれが少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する１つ以上の配列を含む、実施形態１７６～２４１のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0754】

実施形態２４４．多特異性抗体は、表３５に記載される対応する配列に対して、それぞれが少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する１つ以上の配列を含む、実施形態１７６～２４１のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0755】

実施形態２４５．ＥＧＦＲ結合ドメインは、３つの重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）：ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに、３つの軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）：ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３を含み、ＣＤ４７結合ドメインは、３つの重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）である、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＣＤ４７ドメインは、３つの軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）である、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３を含む、実施形態１７３～２４４のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0756】

実施形態２４６．ＥＧＦＲ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１：配列番号４６０、ＨＣ－ＣＤＲ２：配列番号４６１、およびＨＣ－ＣＤＲ３：配列番号４６２に記載のアミノ酸配列を含む、実施形態２４５に記載の多特異性抗体。

【0757】

実施形態２４７．ＥＧＦＲ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１：配列番号４６０、ＨＣ－ＣＤＲ２：配列番号４６１、およびＨＣ－ＣＤＲ３：配列番号４６２に記載のアミノ酸配列を含み、ＥＧＦＲ結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、ＬＣ－ＣＤＲ１：配列番号４６６、ＬＣ－ＣＤＲ２：配列番号４６７、およびＬＣ－ＣＤＲ３：配列番号４６８に記載のアミノ酸配列を含む、実施形態２４５～２４６のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0758】

実施形態２４８．ＥＧＦＲ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１：配列番号４６０、ＨＣ－ＣＤＲ２：配列番号４６１、およびＨＣ－ＣＤＲ３：配列番号４６２に記載のアミノ酸配列を含み、ＥＧＦＲ結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、ＬＣ－ＣＤＲ１：配列番号４６６、ＬＣ－ＣＤＲ２：配列番号４６７、およびＬＣ－ＣＤＲ３：配列番号４６８に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１：配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２：配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３：配列番号３に記載のアミノ酸配列を含む、実施形態２４５～２４７のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0759】

実施形態２４９．ＥＧＦＲ結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１：配列番号４６０、ＨＣ－ＣＤＲ２：配列番号４６１、およびＨＣ－ＣＤＲ３：配列番号４６２に記載のアミノ酸配列を含み、ＥＧＦＲ結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、ＬＣ－ＣＤＲ１：配列番号４６６、ＬＣ－ＣＤＲ２：配列番号４６７、およびＬＣ－ＣＤＲ３：配列番号４６８に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、およびＨＣ－ＣＤＲ３は、ＨＣ－ＣＤＲ１：配列番号１、ＨＣ－ＣＤＲ２：配列番号２、およびＨＣ－ＣＤＲ３：配列番号３に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤ４７結合ドメインのＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、およびＬＣ－ＣＤＲ３は、ＬＣ－ＣＤＲ１：配列番号６１、ＬＣ－ＣＤＲ２：配列番号６２、およびＬＣ－ＣＤＲ３：配列番号６３に記載のアミノ酸配列を含む、実施形態２４５～２４８のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0760】

実施形態２５０．多特異性抗体は非対称の３鎖ノブイントゥホール構造を含み、ＥＧＦＲ結合ドメインは単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含み、ＣＤ４７結合ドメインは抗原結合フラグメント（Ｆａｂ）を含む、実施形態２４５～２４９のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0761】

実施形態２５１．多特異性抗体は非対称の３鎖ノブイントゥホール構造を含み、ＣＤ４７結合ドメインは単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含み、ＥＧＦＲ結合ドメインは抗原結合フラグメント（Ｆａｂ）を含む、実施形態２４５～２５０のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0762】

実施形態２５２．多特異性抗体は、配列番号５０８、５０９、および５１０に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態２４５～２５１のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0763】

実施形態２５３．多特異性抗体は、配列番号５０８、５０９、および５１０に記載のアミノ酸配列を含む、実施形態２４５～２５２のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0764】

実施形態２５４．約１ナノモル（ｎＭ）未満または約０．０１ｎＭ未満の多特異性抗体は、マクロファージによって貪食されるＡ４３１細胞の割合を、非特異性ＩｇＧ１抗体対照と比較して、少なくとも４倍増加させる、実施形態１７６～２４３のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0765】

実施形態２５５．マクロファージによるＥＧＦＲ陽性ＣＤ４７陽性腫瘍細胞の抗体依存性細胞食作用を媒介するために必要な抗体の濃度は、約０．０１ナノモル（ｎＭ）～約３ｎＭである、実施形態２４４に記載の多特異性抗体。

【0766】

実施形態２５６．ＥＧＦＲ陽性ＣＤ４７陽性腫瘍細胞は、ＯＶＩＳＥ細胞またはＡ４３１細胞である、実施形態２５５に記載の多特異性抗体。

【0767】

実施形態２５７．ＥＧＦＲ陽性ＣＤ４７陽性腫瘍細胞は、類表皮癌細胞、大腸腺癌細胞、頭頸部扁平上皮癌細胞、膀胱癌細胞、膵臓腺癌細胞、肺扁平上皮癌細胞、肺腺癌細胞、胃癌細胞、腺管膵臓腺癌細胞、卵巣明細胞腺癌細胞、卵巣腺癌細胞、結腸腺癌細胞、直腸腺癌細胞、食道癌細胞、胃癌細胞、非小細胞肺癌細胞、小細胞肺癌細胞、子宮内膜癌細胞、肝細胞癌細胞、胆管癌細胞、前立腺腺癌細胞、甲状腺癌細胞、乳癌細胞、子宮頚癌細胞、腎細胞癌細胞、精巣癌細胞、および外陰扁平上皮癌細胞から選択される、実施形態２５５に記載の多特異性抗体。

【0768】

実施形態２５８．約１００ナノモル（ｎＭ）の多特異性抗体は、細胞の表面上でのＣＤ４７へのＳＩＲＰαの結合を少なくとも約３０％阻害する、実施形態１７６～２４３のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0769】

実施形態２５９．細胞はＣＤ４７＋ＥＧＦＲ＋腫瘍細胞である、実施形態２５８に記載の多特異性抗体。

【0770】

実施形態２６０．細胞はＨＣＣ－４４細胞と少なくとも同じ数のＥＧＦＲタンパク質をその表面に発現する、実施形態２５９に記載の多特異性抗体。

【0771】

実施形態２６１．細胞は、少なくとも５０，０００個、少なくとも１００，０００個、少なくとも３００，０００個、少なくとも６００，０００個、または少なくとも１，５００，０００個のＥＧＦＲタンパク質をその表面に発現する、実施形態２５９に記載の多特異性抗体。

【0772】

実施形態２６２．約４００ナノモル（ｎＭ）の多特異性抗体は、赤血球凝集アッセイにおいて赤血球の溶血を誘導しない、実施形態１７６～２５９のいずれかに記載の多特異性抗体。

【0773】

実施形態２６３．実施形態１７６～２６２のいずれかに記載の多特異性抗体、およびＣＤ４７＋ＥＧＦＲ＋標的細胞を含む、複合体。

【0774】

実施形態２６４．標的細胞はＨＣＣ－４４細胞と少なくとも同じ数のＥＧＦＲタンパク質をその表面に発現する、実施形態２６３に記載の複合体。

【0775】

実施形態２６５．標的細胞は、少なくとも５０，０００個、少なくとも１００，０００個、少なくとも３００，０００個、少なくとも６００，０００個、または少なくとも１，５００，０００個のＥＧＦＲタンパク質をその表面に発現する、実施形態２６３に記載の複合体。

【0776】

実施形態２６６．ＣＤ４７＋ＥＧＦＲ＋標的細胞は癌細胞である、実施形態２６３～２６５のいずれかに記載の複合体。

【0777】

実施形態２６７．癌細胞は、類表皮癌細胞、大腸腺癌細胞、頭頸部扁平上皮癌細胞、膀胱腺癌細胞、膵臓腺癌細胞、肺扁平上皮癌、胃癌細胞、腺管膵臓腺癌細胞、卵巣明細胞腺癌細胞、卵巣腺癌細胞、結腸腺癌細胞、肺腺癌、直腸腺癌、食道癌、胃癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、子宮内膜癌、肝細胞癌、胆管癌、前立腺腺癌、甲状腺癌、乳癌、子宮頚癌、腎細胞癌、精巣癌、または外陰扁平上皮癌である、実施形態２６６に記載の複合体。

【0778】

実施形態２６８．実施形態１７６～２６２のいずれかに記載の多特異性抗体を投与する工程を含む、ＣＤ４７＋ＥＧＦＲ＋標的細胞の食作用を誘導する方法。

【0779】

実施形態２６９．多特異性抗体は、約５ナノモル（ｎＭ）未満、約２ｎＭ未満、約１ｎＭ未満、約０．５ｎＭ未満、約０．２ｎＭ未満、約０．１ｎＭ未満、または約０．０５ｎＭ未満の濃度で投与される、実施形態２６８に記載の方法。

【0780】

実施形態２７０．実施形態１７６～２６２のいずれかに記載の多特異性抗体を投与する工程を含む、ＣＤ４７＋ＥＧＦＲ＋標的細胞を死滅させる方法であって、多特異性抗体は、ＣＤ４７＋ＥＧＦＲ＋標的細胞の表面上でのＣＤ４７へのＳＩＲＰαの結合を阻害する、方法。

【0781】

実施形態２７１．抗体は、約０．０１ナノモル（ｎＭ）～約１ｎＭ、約０．０１ｎＭ～約０．５ｎＭ、約０．０１ｎＭ～約０．２５ｎＭ、約０．０１ｎＭ～約０．１ｎＭ、約０．０１ｎＭ～約０．０５ｎＭ、または約０．０１ｎＭ未満の濃度で投与される、実施形態２７０に記載の方法。

【0782】

実施形態２７２．ＣＤ４７＋ＥＧＦＲ＋標的細胞は、Ａ４３１細胞、ＮＣＩ－Ｈ７４７細胞、ＡＳＰＣ－１細胞、ＥＢＣ－１細胞、またはＳＮＵ－５細胞から選択される、実施形態２７０または２７１に記載の方法。

【0783】

実施形態２７３．ＣＤ４７＋ＥＧＦＲ＋標的細胞は、類表皮癌細胞、大腸腺癌細胞、頭頸部扁平上皮癌細胞、膀胱癌細胞、膵臓腺癌細胞、肺扁平上皮癌細胞、肺腺癌細胞、胃癌細胞、腺管膵臓腺癌細胞、卵巣明細胞腺癌細胞、卵巣腺癌細胞、結腸腺癌細胞、直腸腺癌細胞、食道癌細胞、胃癌細胞、非小細胞肺癌細胞、小細胞肺癌細胞、子宮内膜癌細胞、肝細胞癌細胞、胆管癌細胞、前立腺腺癌細胞、甲状腺癌細胞、乳癌細胞、子宮頚癌細胞、腎細胞癌細胞、精巣癌細胞、および外陰扁平上皮癌細胞から選択される、実施形態２７０または２７１に記載の方法。

【0784】

実施形態２７４．実施形態１７６～２６２のいずれかに記載の多特異性抗体を投与する工程を含む、ＣＤ４７＋ＥＧＦＲ＋標的細胞を死滅させる方法であって、多特異性抗体は、ＣＤ４７＋ＥＧＦＲ＋標的細胞を死滅させる抗体依存性細胞傷害を誘導する、方法。

【0785】

実施形態２７５．抗体は、約０．０１ナノモル（ｎＭ）～約１ｎＭ、約０．０１ｎＭ～約０．５ｎＭ、約０．０１ｎＭ～約０．２５ｎＭ、約０．０１ｎＭ～約０．１ｎＭ、約０．０１ｎＭ～約０．０５ｎＭ、または約０．０１ｎＭ未満の濃度で投与される、実施形態２７４に記載の方法。

【0786】

実施形態２７６．ＣＤ４７＋ＥＧＦＲ＋標的細胞は、Ａ４３１細胞、ＮＣＩ－Ｈ７４７細胞、ＡＳＰＣ－１細胞、ＥＢＣ－１細胞、またはＳＮＵ－５細胞から選択される、実施形態２７４または２７５に記載の方法。

【0787】

実施形態２７７．ＣＤ４７＋ＥＧＦＲ＋標的細胞は、類表皮癌細胞、大腸腺癌細胞、頭頸部扁平上皮癌細胞、膀胱癌細胞、膵臓腺癌細胞、肺扁平上皮癌細胞、肺腺癌細胞、胃癌細胞、腺管膵臓腺癌細胞、卵巣明細胞腺癌細胞、卵巣腺癌細胞、結腸腺癌細胞、直腸腺癌細胞、食道癌細胞、胃癌細胞、非小細胞肺癌細胞、小細胞肺癌細胞、子宮内膜癌細胞、肝細胞癌細胞、胆管癌細胞、前立腺腺癌細胞、甲状腺癌細胞、乳癌細胞、子宮頚癌細胞、腎細胞癌細胞、精巣癌細胞、および外陰扁平上皮癌細胞から選択される、実施形態２７４または２７５に記載の方法。

【0788】

実施形態２７８．実施形態１７６～２６２のいずれかに記載の多特異性抗体を含む、医薬組成物。

【0789】

実施形態２７９．癌を有する対象を処置する方法であって、実施形態２７８に記載の医薬組成物を対象に投与する工程を含む、方法。

【0790】

実施形態２８０．癌は、類表皮癌、大腸腺癌、頭頸部扁平上皮癌、膀胱癌、膵臓腺癌、肺扁平上皮癌、肺腺癌、胃癌、腺管膵臓腺癌、卵巣明細胞腺癌、卵巣腺癌、結腸腺癌、直腸腺癌、食道癌、胃癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、子宮内膜癌、肝細胞癌、胆管癌、前立腺腺癌、甲状腺癌、乳癌、子宮頚癌、腎細胞癌、精巣癌、または外陰扁平上皮癌である、実施形態２７９に記載の方法。

【実施例】

【0791】

実施例１：ベンチマーク抗体および試薬
本試験で使用したベンチマーク抗体および試薬の配列を特許文献から解析し、表３６に示すようにヒトＩｇＧ骨格にクローン化した。

【0792】

【表36】

【0793】

実施例２．抗ＥｐＣＡＭ結合ドメインのヒト化
マウスハイブリドーマ由来の抗ＥｐＣＡＭ抗体、Ｍａｂ－００１、Ｍａｂ－００２、およびＭａｂ－００８を、それらのＣＤＲ配列をヒトフレームワークに移植することによってヒト化した。ＣＤＲ移植片変異体は、キメラ抗体と比較して、それらの抗原に対する親和性が低下しており、安定性を低下させ得る配列を含有していた。したがって、それらは、結合に寄与する位置でヒトフレームワーク残基を対応するマウスフレームワーク残基で置換し、潜在的な化学的ホットスポットを、化学的傾向を有していない残基で置換することによって、さらに操作された。

【0794】

Ｍａｂ－００１可変ドメインの配列を、ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ（登録商標）（ＩＭＧＴ（登録商標））ライブラリーからの配列にアラインメントすることで、Ｍａｂ－００１のＨＶ鎖およびＶＬ鎖との相同性を有するヒト生殖系列ＶＨおよびＶＬ－κ配列を同定した。ＩＧＫＶ１－３９^＊０１をＶＬヒト生殖系列アクセプター配列として選択した。ＩＧＨＶ１－４６^＊０１をＶＨヒト生殖系列アクセプター配列として選択した。

【0795】

Ｍａｂ－００２可変ドメインの配列を、ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ（登録商標）（ＩＭＧＴ（登録商標））ライブラリーからの配列にアラインメントすることで、Ｍａｂ－００２のＨＶ鎖およびＶＬ鎖との相同性を有するヒト生殖系列ＶＨおよびＶＬ－κ配列を同定した。ＩＧＫＶ１－３９^＊０１をＶＬヒト生殖系列アクセプター配列として選択した。ＩＧＨＶ３－２３^＊０４をＶＨヒト生殖系列アクセプター配列として選択した。

【0796】

Ｍａｂ－００８可変ドメインの配列を、ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ（登録商標）（ＩＭＧＴ（登録商標））ライブラリーからの配列にアラインメントすることで、Ｍａｂ－００８のＨＶ鎖およびＶＬ鎖との相同性を有するヒト生殖系列ＶＨおよびＶＬ－κ配列を同定した。ＩＧＫＶ１－３９^＊０１をＶＬヒト生殖系列アクセプター配列として選択した。ＩＧＨＶ１－６９^＊０４をＶＨヒト生殖系列アクセプター配列として選択した。

【0797】

実施例３：ＥＬＩＳＡによって測定された抗原に結合する抗体
９６ウェルプレートを４℃で一晩、１μｇ／ｍｌの組換えヒトＣＤ４７またはヒトＥｐＣＡＭでコーティングした。３回洗浄した後、プレートをＰＢＳＴ中１％ＢＳＡ ３００μｌで３７℃で１時間ブロッキングした。段階希釈した抗体を添加し、３７℃で１時間インキュベートした。その後、プレートをＰＢＳＴで４回洗浄し、１：５０００希釈ペルオキシダーゼ標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆａｂ特異的）二次抗体（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ａ０２９３）とともに３７℃で１時間インキュベートした。プレートを再度ＰＢＳＴで４回洗浄し、３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）基質とともに室温で１５分間インキュベートし、１ＮのＨＣｌで終結させ、その後、４５０ｎｍで読み取った。Ｍａｂ－００１、Ｍａｂ－００２、およびＭａｂ－００８のヒト化バージョンのＥｐＣＡＭへの結合は、ＥＬＩＳＡによって確認されており、すべてのヒト化抗ＥｐＣＡＭ変異体はヒトＥｐＣＡＭ組換えタンパク質への強固な結合を示した。

【0798】

実施例４．抗ＣＤ４７／抗ＥｐＣＡＭ二重特異性抗体の生成
抗ＣＤ４７抗体ＶＩＲ４７．Ｖ８および抗ＥｐＣＡＭ抗体配列由来のＶ_ＨおよびＶ_Ｌ配列を使用して、異なる結合化学量論および幾何学的形状を有するＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ二重特異性抗体を設計および作製した。対応する重鎖（ＨＣ）および軽鎖（ＬＣ）ＤＮＡを合成し、ｐＲＫ５哺乳動物発現ベクター（ＡＴＣＣ）にクローン化した。その後、各ＨＣおよびＬＣ対をＣＨＯ細胞に同時形質導入した。条件培地を遠心分離（４℃、４０００ｒｐｍで４０分間）によって回収し、その後、濾過して細胞片を除去した。浄化した培地を、緩衝液Ａ（２５ｍＭのＴｒｉｓ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ８．０）であらかじめ平衡化したＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅカラム（ＧＥ、１７－５４３８）にロードした。カラムを５カラム体積の緩衝液Ａ、その後、３０カラム体積の緩衝液Ｂ（緩衝液Ａ＋０．１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ１００＋０．１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ１１４）、その後、１５カラム体積の緩衝液Ａで順次洗浄した。抗体を緩衝液Ｃ（１００ｍＭのクエン酸ナトリウム、１５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ３．０）で溶出し、緩衝液Ｄ（２００ｍＭのアルギニン、１３７ｍＭのコハク酸、ｐＨ５．０）ですぐに中和した。最終生成物を緩衝液ＰＢＳ、ｐＨ７．４に対して透析し、濃縮し、ＭＩＬＬＥＸ－ＭＰ ０．２２ｕｍ（ＭＩＬＬＩＰＯＲＥ）で濾過した。

【0799】

図２Ａ～図２Ｂは、それぞれヒトＣＤ４７およびヒトＥｐＣＡＭに対する抗ＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ二重特異性抗体ＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ＿ｖ５のＥＬＩＳＡ結合結果を示した。

【0800】

実施例５：ＣＤ４７＋細胞に結合するＳＩＲＰαの阻害
腫瘍細胞を回収し、遠心分離し、その後、２×１０^６細胞／ｍＬの濃度でＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳに加えて２％ＦＢＳ）に再懸濁した。細胞懸濁液１００μＬを９６ウェルプレートの各ウェルに分注した。プレートを３００×ｇで５分間遠心分離し、上清を廃棄した。細胞を、ＦＡＣＳ緩衝液中の段階希釈した二重特異性抗ＣＤ４７抗体または二価抗ＣＤ４７抗体を各ウェルあたり５０μＬ、および一定量のＳＩＲＰα－ｍＩｇＧ２ａ融合タンパク質（ｆｕｓｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ）（Ｒａｊｉ細胞に０．２μｇ／ｍＬ；ＨＣＴ－１５細胞に１μｇ／ｍＬ）ととともに４℃で１時間インキュベートした。その後、プレートをＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８ロバ抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）二次抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号Ａ２１２０２、１：１０００）１００μＬとともに暗所で４℃で１時間インキュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した後、プレートを３００μＬのＦＡＣＳ緩衝液で再懸濁し、フローサイトメトリーによって分析した。

【0801】

図３Ａにおいて、ＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ＿ｖ５は、１００ｎＭを超えるＩＣ_５０でＥｐＣＡＭ陰性Ｒａｊｉ細胞に対して弱いＳＩＲＰａ遮断活性を示した。図３Ｂにおいて、ＥｐＣＡＭ高ＨＣＴ－１５細胞において、ＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ＿ｖ５は、Ｒａｊｉ細胞のものよりほぼ５００倍低いナノモル以下のＩＣ_５０で強力なＳＩＲＰａ遮断活性を示した。他方で、ＢＭＫ－１および親ＶＩＲ４７．Ｖ８は、区別なしに、これらの２つの腫瘍細胞株に対して同様のＳＩＲＰａ遮断活性を示した。したがって、ＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ＿ｖ５は、ＣＤ４７＋のみの細胞よりもＥｐＣＡＭ＋／ＣＤ４７＋腫瘍細胞に対して強い選択性を示すが、抗ＣＤ４７二価抗体は選択性を有していない。

【0802】

実施例６．二重特異性ＣＤ４７×ＥｐＣＡＭ抗体は、ＣＤ４７＋ＥｐＣＡＭ＋細胞の食作用を誘導する
二重特異性抗体および二価抗体を、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）アッセイにおいて試験した。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）をヒトドナーから単離した。ＣＤ１６枯渇を伴わないヒト単球濃縮キット（Ｈｕｍａｎ Ｍｏｎｏｃｙｔｅ Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ Ｋｉｔ）（ＳＴＥＭＣＥＬＬ、カタログ番号１９０５８）を使用して、単球を濃縮した。単離された単球を、２０ｎｇ／ｍＬのヒトマクロファージコロニー刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ、Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ、カタログ番号：３－２５－１０）を含む完全培養培地（ＲＰＭＩ１６４０＋１０％ＦＢＳ）中で単球を培養することによって、マクロファージに分化させた。培地を３日毎に交換した。Ｍ－ＣＳＦ含有培養培地中で７日間培養した後、マクロファージを回収し、計数した。標的腫瘍細胞を回収し、Ｄ－ＰＢＳで２回洗浄することで、残りのＦＢＳを除去した。洗浄した腫瘍細胞を、５－１０×１０^６／ｍＬの細胞濃度でＰＢＳに再懸濁した。癌細胞を３μＭの最終濃度のＣＦＳＥ（ｅｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号：６５－０５８０－８４）で染色し、すぐに混合した。細胞を暗所にて室温で１０分間染色した。４～５容量の冷たい完全培地を添加し、氷上で５分間インキュベートすることによって、染色を終了させた。染色した細胞をＲＰＭＩ １６４０＋１０％ＦＢＳで３回洗浄した。細胞を１ｍＬのＲＰＭＩ １６４０＋１０％ＦＢＳに再懸濁し、計数し、その後、細胞数を３×１０^５細胞／ｍＬに調整した。５０μＬの細胞を９６ウェルのディープＵプレート（Ａｘｙｇｅｎ、カタログ番号：Ｐ－ＤＷ－２０－Ｃ）に播種し、各ウェルは１．５×１０^４の細胞を含有した。５０μＬの希釈抗体を各ウェルに添加した。１００μＬのマクロファージ（１．５×１０^４細胞）を各ウェルに添加し、３７℃、５％ＣＯ２で１．５時間インキュベートした。インキュベーション後、細胞をＤ－ＰＢＳ中の２％ＦＢＳ２ｍＬで１回洗浄した。１００μＬの希釈Ｆｃブロッカー（Ｈｕｍａｎ ＴｒｕＳｔａｉｎ ＦｃＸ（Ｆｃ受容体遮断溶液）、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄカタログ番号：４２２３０２））を添加し、細胞を室温で１０分間インキュベートした。２０μＬの希釈した抗ヒトＣＤ１１ｂ抗体を各ウェルに添加し、暗所にて４℃で３０分間インキュベートした。細胞を２％ＦＢＳ－Ｄ－ＰＢＳで１回洗浄した。腫瘍細胞を貪食したマクロファージを示すＣＦＳＥ／ＣＤ１１ｂダブルポジティブ細胞の出現により、フローサイトメーターで食作用を検出した。

【0803】

図４において、ＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ＿ｖ５は、その親ＣＤ４７抗体ＶＩＲ４７．Ｖ８およびＢＭＫ－１よりも強力な、ＣＤ４７＋／ＥｐＣＡＭ＋ＨＣＴ－１５細胞に対する強いＡＤＣＰを示した。

【0804】

実施例７．抗体依存性細胞傷害
抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介する抗ＣＤ４７抗体の能力を、高レベルのＣＤ４７およびＥｐＣＡＭを発現するＫＹＳＥ－１５０食道癌細胞で試験した。細胞を平衡塩類溶液または培養培地で１回洗浄し、細胞数を１×１０^６細胞／ｍＬに調整した。その後、２μＬのＢＡＴＤＡ蛍光増強リガンド（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ、カタログ番号Ｃ１３６－１００）を各ｍＬの細胞に添加し、細胞インキュベーター中で３７℃で２０分間インキュベートした。インキュベーション後、細胞を遠心分離し、培養培地を吸引した。標識細胞をＰＢＳで４回洗浄した。最終洗浄後、細胞を培養培地に再懸濁し、５×１０^４細胞／ｍＬに調整した。その後、２００μＬの細胞懸濁液を９６ウェルプレートの各ウェルに添加して、ウェルあたりの細胞数を１×１０^４にした。標識標的細胞のアリコートを取り出すこと、つまり、遠心分離によってバックグラウンド放出（ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ ｒｅｌｅａｓｅ）を決定し、上清を空のウェルに移した。読み取り値はバックグラウンド放出であった。１ｘ１０^４標識標的細胞を滅菌した９６ウェルアッセイプレートに移した。抗体を、１０％ＦＢＳを含有するＲＰＭＩ－１６４０で段階希釈した。５０μＬの段階希釈抗体を、標的細胞を含むアッセイプレートに添加し、３７℃、５％ＣＯ２で５～１０分間インキュベートした。エフェクター細胞ＰＢＭＣを回収し、１０％ＦＢＳを含有するＲＰＭＩ－１６４０に懸濁した。５０μＬ／ウェルのエフェクター細胞を、異なるエフェクター対標的比でアッセイプレートの各ウェルに添加した。対照の設定：標的自発的（標的細胞＋１００μＬ培地）、標的最大値（標的細胞＋１００μＬ培地＋１０μＬ溶解緩衝液）、バックグラウンド（１００μＬの標識標的細胞上清および１００μＬの希釈培地）。プレートを加湿した５％ＣＯ２雰囲気中で３７℃で２時間インキュベートした。インキュベーションの最後に、１０μＬの溶解緩衝液（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ、カタログ番号４００５－００１０）を最大放出ウェルに添加した。プレートを５００×ｇで５分間遠心分離した。各ウェルからの上清２０μＬを平底検出プレートに移した。その後、２００μＬのユーロピウム溶液（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ、カタログ番号Ｃ１３５－１００）を、検出プレートの各ウェルに添加した。プレートを室温で１５分間２５０ｒｐｍで振盪し、その後、蛍光を時間分解蛍光光度計で５時間以内に測定した。

【0805】

図５において、ＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ＿ｖ５は、ＢＭＫ－２およびその二価ＣＤ４７親抗体ＶＩＲ４７．Ｖ８よりも強力な、ＣＤ４７＋／ＥｐＣＡＭ＋腫瘍細胞ＫＹＳＥ－１５０に対する強いＡＤＣＣ活性を示した。

【0806】

実施例８：赤血球への結合および血球凝集
赤血球または血小板に発現されるＣＤ４７の形態と比較して、腫瘍細胞に発現されるＣＤ４７の形態に優先的に結合するＣＤ４７結合ドメインは、治療剤の安全性プロファイルを増強するために望ましい。

【0807】

ＲＢＣ上での抗体の結合

【0808】

ＲＢＣ結合アッセイは、新鮮なヒト全血を２００×ｇで１０分間遠心沈殿させることによって行った。回収したＲＢＣをＰＢＳで２回洗浄し、フローサイトメトリーを用いて計数した。１×１０^６細胞を９６ウェル培養プレートの各ウェルに分注した。段階希釈した抗ＣＤ４７抗体を添加し、４℃で１時間インキュベートした。細胞をＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ＋２％ＦＢＳ）で２回洗浄した。二次抗体（Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４８８ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）を添加し、４℃で１時間インキュベートした。細胞を２回洗浄し、２００μＬのＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁し、フローサイトメトリーによって分析した。

【0809】

図６Ａでは、ＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ＿ｖ５は、ＢＭＫ－１およびＶＩＲ４７．Ｖ８と比較して、はるかに弱いＲＢＣ結合を示した。

【0810】

混合腫瘍細胞およびＲＢＣ上での抗体の結合

【0811】

混合腫瘍細胞およびＲＢＣ上での抗体の結合はＦＡＣＳによって行った。手短に言えば、抗体をＨＣＴ－１５腫瘍細胞およびＲＢＣ（２０倍過剰の腫瘍中）の混合物とともに４℃で１時間インキュベートした。ＨＣＴ－１５細胞およびＲＢＣ上での抗体の結合を、異なるＦＡＣＳマーカーを使用することによって同定し、フローサイトメトリーによって検出した。図６Ｂでは、ＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ＿ｖ５およびＢＭＫ－１の両方が、同様の結合ＥＣ_５０で、ＨＣＴ－１５腫瘍細胞に対して強い結合を示した。ＲＢＣ上では、ＢＭＫ－１結合は強いままであったが、ＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ＿ｖ５の結合は、試験した最高濃度でもかろうじて検出できる程度であった。腫瘍細胞でのＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ＿ｖ５の結合ＥＣ_５０は、ＲＢＣでのその結合ＥＣ_５０よりも＞２００倍高い。

【0812】

血球凝集アッセイ

【0813】

血球凝集アッセイは、ヒト赤血球（ＲＢＣ）を希釈し、丸底９６ウェルプレート中でＣＤ４７抗体（１００μｇ／ｍＬから）の滴定とともに３７℃で２時間ＲＢＣをインキュベートすることによって行った。血球凝集は、架橋ＲＢＣの存在によって実証され、これは、非血球凝集ＲＢＣとは対照的に、ウェルの底に沈降しないため、濁りとして現れる。

【0814】

ＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ＿ｖ５は、図６Ｃに示すように、１μＭの処理でも血球凝集を引き起こさなかった。

【0815】

実施例９．ＰＢＭＣ単離からのヒトＴ細胞への結合
ヒトＰＢＭＣを９６ウェルディープウェルプレートにウェル当たり１×１０^６で播種した。室温で１５分間インキュベートすることによって細胞を生死色素（ｌｉｖｅ－ｄｅａｄ ｄｙｅ）で染色し、その後、１回洗浄した。Ｆｃブロッカー（５μＬ／試験）をすべての試料に添加し、室温で１０分間インキュベートした。その後、試料を、１００ｎＭの最高濃度で段階希釈した試験抗体とともに４℃で３０分間インキュベートした。その後、抗ＣＤ３抗体を各試料に添加し、さらに４℃で３０分間インキュベートした後、４℃で３０分間二次抗体とともにインキュベートした。試料を２回洗浄した後、フローサイトメトリーによって分析した。

【0816】

図７において、ＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ＿ｖ５は、ＢＭＫ－１およびその親抗ＣＤ４７二価抗体ＶＩＲ４７．Ｖ８と比較して、ヒトＴ細胞に対して弱い結合を示した。

【0817】

実施例１０．ＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ二重特異性抗体およびＣＤ４７またはＥｐＣＡＭ二価抗体のｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍活性を、ＫＡＴＯＩＩＩ胃癌異種移植片モデルおよびＯＥ－１９食道癌モデルにおいて調査した。
ＫＡＴＯＩＩＩ腫瘍細胞またはＯＥ－１９腫瘍細胞を培養し、腫瘍接種のために回収した。６～７週齢の雌ＮＣＧまたはＣＢ１７／ＳＣＩＤマウス（Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｌｉｎｇｃｈａｎｇ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）に、腫瘍を発生させるために、Ｍａｔｒｉｇｅｌを補充した（１：１）０．２ｍＬのＰＢＳ中の１０^７細胞を皮下接種した。腫瘍接種後６～８日目に、平均腫瘍体積が約１７５ｍｍ^３に達した時点で、動物を腫瘍体積によって無作為化して、１群当たり６匹の動物にした。試験抗体を、グラフに記載した用量で、ボーラス尾静脈注射により投与した。腫瘍体積を週２回測定した。動物の腫瘍体積が３０００ｍｍ^３を超える場合、または動物が２０％を超える体重減少を経験した場合、動物を人道的に安楽死させた。黒い矢印は投与日を示す。αＣＤ４７およびαＥｐＣＡＭ抗体は、ＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ＿ｖ５に対する親の二価抗ＣＤ４７および抗ＥｐＣＡＭ抗体を表す。

【0818】

図８Ａにおいて、ＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ＿ｖ５は、食道癌モデルであるＯＥ－１９において、ＢＭＫ－１およびＢＭＫ－２よりも優れて、腫瘍増殖を完全に阻害した。図８Ｂにおいて、ＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ＿ｖ５は、ＫＡＴＯＩＩＩにおいて完全な腫瘍退縮をもたらし、すべての動物は、処置が終了した１０日後でさえ腫瘍のないままであった。比較すると、ＣＤ４７ｘＥＰＣＡＭ＿ｖ５は、その親の二価抗体ＢＭＫ－１およびＢＭＫ－２よりも優れている。

【0819】

本発明者らの知見は、新規のＣＤ４７×ＥｐＣＡＭ二重特異性抗体であるＣＤ４７×ＥｐＣＡＭ＿ｖ５がＣＤ４７に選択的に結合し、ＥｐＣＡＭ過剰発現腫瘍細胞上でのＣＤ４７／ＳＩＲＰα結合を遮断することを示唆している。そのヒトＩｇＧ１骨格は、強力な単剤抗腫瘍活性のためにＡＤＣＰおよびＡＤＣＣの両方の関与を可能にする。ＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ＿ｖ５は、二価ＣＤ４７単一特異性抗体と比較して減少したＲＢＣ結合を有し、したがって、より少ない血液学的毒性を誘導すると予想される。結論として、ＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ＿ｖ５は、ＥｐＣＡＭ陽性腫瘍細胞に対する特異性、ならびに強固な単剤のｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏ活性を示す。ＣＤ４７×ＥｐＣＡＭ二重特異性抗体は、ＥｐＣＡＭ陽性腫瘍を処置するための新規のアプローチを表す。

【0820】

実施例１１．抗ＣＤ４７／抗ＥＧＦＲ二重特異性抗体の生成
抗ＣＤ４７抗体ＶＩＲ４７．Ｖ８および抗ＥＧＦＲ抗体パニツムマブ（ｐａｎｉｔｕｍｕｍａｂ）またはセツキシマブ（ｃｅｔｕｘｉｍａｂ）配列由来のＶ_ＨおよびＶ_Ｌ配列を使用して、異なる結合化学量論および幾何学的形状を有する抗ＣＤ４７／ＥＧＦＲ二重特異性抗体を設計および作製した。対応する重鎖（ＨＣ）および軽鎖（ＬＣ）ＤＮＡを合成し、ｐＲＫ５哺乳動物発現ベクター（ＡＴＣＣ）にクローン化した。その後、各ＨＣおよびＬＣ対をＣＨＯ細胞に同時形質導入した。条件培地を遠心分離（４℃、４０００ｒｐｍで４０分間）によって回収し、その後、濾過して細胞片を除去した。浄化した培地を、緩衝液Ａ（２５ｍＭのＴｒｉｓ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ８．０）であらかじめ平衡化したＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅカラム（ＧＥ、１７－５４３８）に充填した。カラムを５カラム体積の緩衝液Ａ、その後、３０カラム体積の緩衝液Ｂ（緩衝液Ａ＋０．１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ１００＋０．１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ１１４）、その後、１５カラム体積の緩衝液Ａで順次洗浄した。抗体を緩衝液Ｃ（１００ｍＭのクエン酸ナトリウム、１５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ３．０）で溶出し、緩衝液Ｄ（２００ｍＭのアルギニン、１３７ｍＭのコハク酸、ｐＨ５．０）ですぐに中和した。最終生成物を緩衝液ＰＢＳ、ｐＨ７．４に対して透析し、濃縮し、ＭＩＬＬＥＸ－ＭＰ ０．２２ｕｍ（ＭＩＬＬＩＰＯＲＥ）で濾過した。

【0821】

実施例１２：ＥＬＩＳＡによって測定された抗原に結合する抗体
９６ウェルプレートを４℃で一晩、１μｇ／ｍｌの組換えヒトＣＤ４７またはヒトＥＧＦＲでコーティングした。３回洗浄した後、プレートをＰＢＳＴ中１％ＢＳＡ３００μｌで３７℃で１時間ブロッキングした。段階希釈した抗体を添加し、３７℃で１時間インキュベートした。その後、プレートをＰＢＳＴで４回洗浄し、１：５０００希釈ペルオキシダーゼ標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆａｂ特異的）二次抗体（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ａ０２９３）と共に３７℃で１時間インキュベートした。プレートを再度ＰＢＳＴで４回洗浄し、３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）基質と共に室温で１５分間インキュベートし、１ＮのＨＣｌで終結させ、その後、４５０ｎｍで読み取った。図９Ａ～９Ｂは、それぞれヒトＣＤ４７およびヒトＥＧＦＲ上での抗ＣＤ４７／ＥＧＦＲ二重特異性抗体パニツムマブｘＶＩＲ４７．Ｖ８についてのＥＬＩＳＡ結合結果を示した。

【0822】

実施例１３：ＤＬＤ－１大腸癌異種移植片モデルにおけるＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ二重特異性抗体と標準治療化学療法剤との組み合わせ
ＤＬＤ－１腫瘍細胞を、１０％ＦＢＳを補充したＲＰＭＩ １６４０培地中で３７℃、空気中５％ＣＯ_２の雰囲気下で培養した。６～８週齢の雌Ｂａｌｂ／ｃヌードマウス（Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｌｉｎｇｃｈａｎｇ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）に、腫瘍を発生させるために、０．１ｍＬのＰＢＳ中の５×１０^６細胞を皮下接種した。平均腫瘍体積が約１５０～２００ｍｍ^３に達すると、動物を１群あたり６匹に無作為化し、処置を開始した。オキサリプラチンおよび５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）を、それぞれ８ｍｇ／ｋｇおよび３５ｍｇ／ｋｇの用量で週３回腹腔内注射により投与した。合計４用量のオキサリプラチンおよび５用量の５－ＦＵを与えた。イリノテカンを、週２回、３０ｍｇ／ｋｇの用量で、腹腔内注射により合計６回投与した。ＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ＿ｖ５二重特異性抗体を、毎週２０ｍｇ／ｋｇでボーラス尾静脈注射により合計５回投与した。併用群については、経路および投与スケジュールは単剤処置群と同じであった。腫瘍体積を週２回測定した。

【0823】

図１０Ａおよび１０Ｂに示すように、ＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ＿ｖ５二重特異性抗体単独での処置は、腫瘍増殖をわずかに遅くしただけであった。ＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ＿ｖ５をオキサリプラチンまたは５－ＦＵの処置のいずれかと組み合わせることは、抗腫瘍有効性を改善しなかった。驚くべきことに、イリノテカンおよびＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ＿ｖ５を組み合わせることは、相乗的かつ効果的に腫瘍進行を阻害したが、イリノテカンまたはＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ単独では、あまり有効ではなかった（図１０Ｃ）。

【0824】

実施例１４：ＤＬＤ－１大腸癌異種移植片モデルにおける、ＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ二重特異性抗体、ベンチマーク、または二価単一特異性抗体とイリノテカンとの組み合わせ
ＤＬＤ－１異種移植片モデルを、実施例１３に記載されるように確立した。平均腫瘍体積が約１５０～２００ｍｍ^３に達すると、処置を開始した。イリノテカンを、週２回、３０ｍｇ／ｋｇの用量で、腹腔内注射により合計５回投与した。試験した抗体をすべて、毎週２０ｍｇ／ｋｇでボーラス尾静脈注射により合計５回投与した。併用群は、それらの対応する単独療法群と同じ投与スケジュールおよび投与経路に従った。

【0825】

図１１Ａに示すように、イリノテカン、ＢＭＫ－１、ＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ＿ｖ５二重特異性抗体、またはその親の二価抗ＣＤ４７抗体ＶＩＲ４７．Ｖ８による単剤処置は、部分的な腫瘍増殖阻害をもたらすだけであった。イリノテカン処置をＢＭＫ－１または抗ＣＤ４７二価抗体ＶＩＲ４７．Ｖ８と組み合わせることは、単剤処置よりも抗腫瘍活性をわずかに改善しただけであった。対照的に、イリノテカンとＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ＿ｖ５二重特異性抗体との組み合わせは、再度、最大の抗腫瘍効果をもたらした。図１１Ｂは、イリノテカンとＣＤ４７ｘＥＰＣＡＭ＿ｖ６との組み合わせが、ＣＤ４７ｘＥＰＣＡＭ＿ｖ５との組み合わせと同様の抗腫瘍有効性をもたらしたことを示す。まとめると、これらの結果は、イリノテカンおよびＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ二重特異性抗体を組み合わせることの相乗効果は、ベンチマーク（ＢＭＫ－１）または親ＣＤ４７（ＶＩＲ４７．Ｖ８）二価抗体と組み合わせることによって再現することができなかったことを実証する。イリノテカンの組み合わせは、ＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ＿ｖ５またはＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ＿６などのＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ二重特異性抗体を必要とする。

【0826】

実施例１５：Ｈｅｐ３Ｂ２．１－７肝細胞癌異種移植片モデルにおける、ＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ二重特異性抗体とイリノテカンとの組み合わせ
Ｈｅｐ３Ｂ２．１－７腫瘍細胞を、１０％ＦＢＳを補充したＥＭＥＭ培地中で３７℃、空気中５％ＣＯ_２を含有する雰囲気下で培養した。６～８週齢の雌Ｂａｌｂ／ｃヌードマウス（Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｌｉｎｇｃｈａｎｇ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）に、腫瘍を発生させるために、０．１ｍＬのＰＢＳ中の８×１０^６細胞を皮下接種した。平均腫瘍体積が約１５０～２００ｍｍ^３に達すると、動物を１群あたり６匹に無作為化し、処置を開始した。イリノテカンを、週２回、１５ｍｇ／ｋｇの用量で、腹腔内注射により合計４回投与した。ＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ＿ｖ５二重特異性抗体を、毎週２０ｍｇ／ｋｇでボーラス尾静脈注射により合計４回投与した。併用群は、それらの対応する単独療法群と同じ投与スケジュールおよび投与経路に従った。腫瘍体積を週２回測定した。

【0827】

図１２に示すように、イリノテカンまたはＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ＿ｖ５二重特異性抗体のいずれかによる単剤処置は、腫瘍増殖を遅らせたが、阻害しなかった。興味深いことに、イリノテカンおよびＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ＿ｖ５処置の組み合わせは、有効な腫瘍退縮をもたらした。

【0828】

実施例１６：ＥＬＩＳＡによって測定された抗原に結合する抗体
ＥＬＩＳＡアッセイを実施例３に記載されるように行った。ヒトＥｐＣＡＭおよびヒトＣＤ４７でのＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ＿ｖ９、ｖ１０、およびｖ１１の結合を試験した。

【0829】

図１３Ａ～図１３Ｂは、それぞれヒトＥｐＣＡＭおよびヒトＣＤ４７での抗ＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ二重特異性抗体ＣＤ４７ｘＥｐＣＡＭ＿ｖ９、ｖ１０、およびｖ１１のＥＬＩＳＡ結合結果を示した。

【0830】

本発明の好ましい実施形態が本明細書に示され、説明されてきたが、そのような実施形態はほんの一例として提供されているに過ぎないことが当業者には明らかであろう。本発明が明細書内で提供される特定の例によって制限されることは意図されていない。本発明は前述の明細書に関して記載されているが、本明細書中の実施形態の記載および例示は、限定的な意味で解釈されることを意味するものではない。当業者であれば、多くの変形、変更、および置換が、本発明から逸脱することなく思い浮かぶであろう。さらに、本発明のすべての態様は、様々な条件および変数に依存する、本明細書で説明された特定の描写、構成、または相対的な比率に限定されないことが理解されよう。本明細書に記載される本発明の実施形態の様々な代替案が、本発明の実施に際して利用され得ることを理解されたい。それゆえ、本発明は、いかなるそのような代替物、修正物、変形物、または同等物にも及ぶものと企図される。以下の特許請求の範囲は本発明の範囲を定義し、この特許請求の範囲内の方法および構造、ならびにその均等物がそれによって包含されることが意図されている。

【図1A】

【図1B】

【図2A】

【図2B】

【図3A】

【図3B】

【図4】

【図5】

【図6A】

【図6B】

【図6C】

【図7】

【図8A】

【図8B】

【図9A】

【図9B】

【図10A】

【図10B】

【図10C】

【図11A】

【図11B】

【図12】

【図13A】

【図13B】

【配列表】

2024541961000001.xml

【国際調査報告】