特表 2024-542324 抗炎症活性を有するポリケチド化合物及びその製造方法と使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-11-14

(54)【発明の名称】抗炎症活性を有するポリケチド化合物及びその製造方法と使用

(51)【国際特許分類】

   C07D 407/04 20060101AFI20241107BHJP

   C12N 1/14 20060101ALI20241107BHJP

   C12P 1/02 20060101ALI20241107BHJP

   C12P 17/00 20060101ALI20241107BHJP

   A61K 31/335 20060101ALI20241107BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20241107BHJP

   A61K 36/062 20060101ALI20241107BHJP

【ＦＩ】

C07D407/04

C12N1/14 A

C12P1/02 Z

C12P17/00

A61K31/335

A61P29/00

A61K36/062

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024533327

(86)(22)【出願日】2022-06-28

(85)【翻訳文提出日】2024-06-04

(86)【国際出願番号】 CN2022101720

(87)【国際公開番号】W WO2023240679

(87)【国際公開日】2023-12-21

(31)【優先権主張番号】202210664749.0

(32)【優先日】2022-06-13

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】517234538

【氏名又は名称】大▲連▼大学

(74)【代理人】

【識別番号】100095407

【弁理士】

【氏名又は名称】木村 満

(74)【代理人】

【識別番号】100132883

【弁理士】

【氏名又は名称】森川 泰司

(74)【代理人】

【識別番号】100148633

【弁理士】

【氏名又は名称】桜田 圭

(74)【代理人】

【識別番号】100147924

【弁理士】

【氏名又は名称】美恵 英樹

(72)【発明者】

【氏名】盧 軒

(72)【発明者】

【氏名】唐 小渊

(72)【発明者】

【氏名】唐 川

(72)【発明者】

【氏名】馮 偉星

(72)【発明者】

【氏名】馮 宝民

【テーマコード（参考）】

4B064

4B065

4C086

4C087

【Ｆターム（参考）】

4B064AE43

4B064CA05

4B064CC03

4B064CC06

4B064CC12

4B064CC15

4B064CD22

4B064CD30

4B064CE02

4B064CE08

4B064CE10

4B064CE20

4B064DA08

4B064DA20

4B065AA57X

4B065AC14

4B065BB26

4B065BB40

4B065BC03

4B065BC26

4B065BC50

4B065CA18

4B065CA44

4B065CA60

4C086AA01

4C086AA02

4C086BA10

4C086GA02

4C086MA01

4C086MA04

4C086NA14

4C086ZB11

4C087AA01

4C087AA02

4C087AA05

4C087BC04

4C087CA10

4C087CA25

4C087CA37

4C087NA14

4C087ZB11

(57)【要約】

本発明は、抗炎症活性を有するポリケチド化合物及びその製造方法と使用を開示し、医薬技術分野に属する。本願は、チベットイワベンケイＲｈｏｄｉｏｌａ ｔｉｂｅｔｉｃａの葉部位からＡｌｔｅｒｎａｒｉａ属内生菌（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｐ．）ＨＪＴ－Ｙ７を分離し、得られたＡｌｔｅｒｎａｒｉａ属内生菌（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｐ．）ＨＪＴ－Ｙ７に対して固体発酵を行い、一連の分離精製方法で分離して２つのポリケチド化合物を得、その２つのポリケチド化合物はいずれも良好な抗炎症活性を有し、抗炎症薬剤の開発のための新たなアプローチを提供する。
【選択図】図１３

【特許請求の範囲】

【請求項1】

下式に示す構造を有するポリケチド化合物又はその薬学的に許容される塩。

【化1】

【請求項2】

２０２２年５月６日に中国微生物菌種保蔵管理委員会普通微生物センターに寄託され、寄託番号がＣＧＭＣＣ Ｎｏ．４０１６６で、寄託機関の住所が北京市朝陽区北辰西路一号院三号であるＡｌｔｅｒｎａｒｉａ属内生菌（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｐ．）ＨＪＴ－Ｙ７。

【請求項3】

請求項２に記載のＡｌｔｅｒｎａｒｉａ属内生菌（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｐ．）ＨＪＴ－Ｙ７を真菌４号培地に接種して、振とう培養し、得られた発酵液を菌糸体とともに米固体培地に接種し、２０～３０℃で１０～４０日間静置して発酵させ、固体発酵生成物を得るステップ（１）と、
ステップ（１）で得られた固体発酵生成物を、メタノールを用いて抽出してろ過し、得られた抽出液をシリカゲルクロマトグラフィーカラムにロードし、体積比１００：０～０：１００のクロロホルム／メタノールを移動相として勾配溶出を行い、ＴＬＣの結果に基づき、画分１～１６を順次に得、画分７をシリカゲルクロマトグラフィーカラムにロードし、体積比１０：１～１０：９の石油エーテル／酢酸エチルを移動相として勾配溶出を行い、ＴＬＣの結果に基づき、画分７－１～７－１０を順次に得、画分７－６をＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ－２０ゲルカラムにロードし、体積比１：１のジクロロメタン／メタノール混合液を移動相して溶出を行い、画分７－６－１～７－６－６を順次に得、画分７－６－３をＡｇｉｌｅｎｔ Ｃ１８高速液体クロマトグラフィーカラムにロードし、５５％のメタノール水溶液を移動相として溶出を行って、化合物１と化合物２を得るステップ（２）と、を含む、請求項１に記載のポリケチド化合物の製造方法。

【請求項4】

ステップ（１）における前記振とう培養の条件は、２０～３０℃で、１００～２００ｒ／分である、請求項３に記載の製造方法。

【請求項5】

ステップ（１）における前記米固体培地は、米と純水を８０：８０～１２０ｇ／ｍＬの質量体積比で調製して得られる、請求項３に記載の製造方法。

【請求項6】

ステップ（１）における前記真菌４号培地は、２％のマンニトール、２％のブドウ糖、０．５％の酵母エキス、１％のペプトン、０．０５％のＫＨ_２ＰＯ_４、０．０３％のＭｇＳＯ_４・７Ｈ_２Ｏ、０．１％のコーンスティープリカー、脱イオン水により構成される、請求項３に記載の製造方法。

【請求項7】

ステップ（２）における前記勾配溶出の過程において、クロロホルム／メタノールの体積比は、１００：０、１００：１、１００：２、１００：３、１００：５、１００：１０、０：１００である、請求項３に記載の製造方法。

【請求項8】

ステップ（２）における前記勾配溶出の過程において、石油エーテル／酢酸エチルの体積比は１０：１、１０：３、１０：５、１０：６、１０：７、１０：９である、請求項３に記載の製造方法。

【請求項9】

請求項１に記載のポリケチド化合物又はその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される添加剤を含む、医薬組成物。

【請求項10】

請求項１に記載のポリケチド化合物又はその薬学的に許容される塩又は請求項９に記載の医薬組成物の、抗炎症薬物の製造のための使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、医薬技術分野に関し、具体的には、抗炎症活性を有する新たな骨格のポリケチド系エピマー及びその製造方法と使用に関する。

【背景技術】

【0002】

薬用植物内生菌には多様性があり、内生菌のそれぞれに豊富な二次代謝産物があり、現在、内生菌の二次代謝産物から生物活性を有するアルカロイド、ポリペプチド、ポリケチド類、テルペノイドなどの物質が多数発見され、これらの二次代謝産物は、例えば抗菌、抗炎症、抗腫瘍、抗高血糖、抗寄生虫など、寄主植物と同じ又は似た生物活性を持つだけでなく、新たな生物活性を多数有する。そのため、薬用植物内生菌の二次代謝産物は、膨大な潜在の薬用物質資源庫となり、良好な開発見込みがある。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0003】

本発明は、上記に鑑みてなされたものであり、抗炎症活性を有するポリケチド化合物及びその製造方法と使用を提供することを目的とする。本発明は、植物内生菌資源を十分に活用するよう植物内生菌に対して研究を行い、チベットイワベンケイ（Ｒｈｏｄｉｏｌａ ｔｉｂｅｔｉｃａ）の葉部位からＡｌｔｅｒｎａｒｉａ属内生菌（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｐ．）ＨＪＴ－Ｙ７を分離し、これは２０２２年５月６日に中国微生物菌種保蔵管理委員会普通微生物センターに寄託され、寄託番号はＣＧＭＣＣ Ｎｏ．４０１６６で、寄託機関の住所は北京市朝陽区北辰西路一号院三号であり、得られたＡｌｔｅｒｎａｒｉａ属内生菌（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｐ．）ＨＪＴ－Ｙ７に対して固体発酵を行い、一連の分離精製方法を用いて分離して１対の新規構成を有するポリケチド系エピマーを得、薬剤の開発のための新たなリード化合物を提供する。

【課題を解決するための手段】

【0004】

本発明の目的は以下の技術的手段により達成することができる。

【0005】

本発明の一態様によれば、下式に示す構造を有するポリケチド化合物又はその薬学的に許容される塩を提供する。

【化1】

【0006】

本発明の他の態様によれば、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ属内生菌（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｐ．）ＨＪＴ－Ｙ７を提供し、該ＨＪＴ－Ｙ７は２０２２年５月６日に中国微生物菌種保蔵管理委員会普通微生物センターに寄託され、寄託番号がＣＧＭＣＣ Ｎｏ．４０１６６、寄託機関の住所が北京市朝陽区北辰西路一号院三号である。

【0007】

本発明の他の態様によれば、前記ポリケチド化合物の製造方法を提供し、主に以下のステップ（１）とステップ（２）と、を含む。
ステップ（１）：上記Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ属内生菌（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｐ．）ＨＪＴ－Ｙ７を真菌４号培地に接種して、振とう培養し、得られた発酵液を菌糸体とともに米の固体培地に接種し、２０～３０℃で１０～４０日間静置して発酵させ、固体発酵生成物を得る。
ステップ（２）：ステップ（１）で得られた固体発酵生成物を、メタノールを用いて抽出してろ過し、得られた抽出液をシリカゲルクロマトグラフィーカラムにロードし、体積比１００：０～０：１００のクロロホルム／メタノールを移動相として勾配溶出を行い、ＴＬＣの結果に基づき、画分１～１６を順次に得、画分７をシリカゲルクロマトグラフィーカラムにロードし、体積比１０：１～１０：９の石油エーテル／酢酸エチルを移動相として勾配溶出を行い、ＴＬＣの結果に基づき、画分７－１～７－１０を順次に得、画分７－６をＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ－２０ゲルカラムにロードし、体積比１：１のジクロロメタン／メタノール混合液を移動相して溶出を行い、画分７－６－１～７－６－６を順次に得、画分７－６－３をＡｇｉｌｅｎｔ Ｃ１８高速液体クロマトグラフィーカラムにロードし、５５％のメタノール水溶液を移動相として溶出を行って、化合物１と化合物２を得る。

【0008】

さらに、ステップ（１）における上記振とう培養の条件は、２０～３０℃で、１００～２００ｒ／分である。

【0009】

さらに、ステップ（１）における上記米固体培地は、米と純水を８０：８０～１２０ｇ／ｍｌの質量体積比で調製して得られる。

【0010】

さらに、ステップ（１）における上記真菌４号培地は、２％のマンニトール、２％のブドウ糖、０．５％の酵母エキス、１％のペプトン、０．０５％のＫＨ_２ＰＯ_４、０．０３％のＭｇＳＯ_４・７Ｈ_２Ｏ、０．１％のコーンスティープリカー、脱イオン水により構成される。

【0011】

さらに、ステップ（２）における上記勾配溶出の過程において、クロロホルムとメタノールとの体積比は１００：０、１００：１、１００：２、１００：３、１００：５、１００：１０、０：１００である。

【0012】

さらに、ステップ（２）における上記勾配溶出の過程において石油エーテルと酢酸エチルとの体積比は、１０：１、１０：３、１０：５、１０：６、１０：７、１０：９である。

【0013】

本発明は、さらに、上記ポリケチド化合物又はその薬学的に許容される塩と薬学的に許容される添加剤を含む医薬組成物を提供する。

【0014】

本発明は、さらに、上記ポリケチド化合物又はその薬学的に許容される塩又は前記医薬組成物の、抗炎症薬物の製造のための使用を提供する。

【発明の効果】

【0015】

従来技術と比べると、本発明は、以下のメリットがある。
本発明は、植物内生菌資源を活用するよう植物内生菌に対して研究を行って、新規ポリケチド系活性化合物を探し出し、抗炎症活性実験の結果、モデル群と比較して、化合物１と化合物２は、濃度によってＮＯの放出を異なる程度に抑制し、濃度が５μＭの場合、陽性対照群よりも優れた抑制能力を示し、化合物１と化合物２は良好な抗炎症効果があることを表明する。

【図面の簡単な説明】

【0016】

以下、本発明の実施例をより明確に説明するために、実施例に係る図面を簡単に説明する。

【0017】

【図1】実施例１で分離された化合物１の^１Ｈ－ＮＭＲ図である。

【図2】実施例１で分離された化合物１の^１３Ｃ－ＮＭＲ図である。

【図3】実施例１で分離された化合物１のＨＳＱＣ図である。

【図4】実施例１で分離された化合物１のＨＭＢＣ図である。

【図5】実施例１で分離された化合物１のＮＯＥＳＹ図である。

【図6】実施例１で分離された化合物２の^１Ｈ－ＮＭＲ図である。

【図7】実施例１で分離された化合物２の^１３Ｃ－ＮＭＲ図である。

【図8】実施例１で分離された化合物２のＨＳＱＣ図である。

【図9】実施例１で分離された化合物２のＨＭＢＣ図である。

【図10】実施例１で分離された化合物２のＮＯＥＳＹ図である。

【図11】実施例１で分離された化合物１－２のＣＤ図である。

【図12】実施例１で分離された化合物１－２のＤＰ４＋図である。

【図13】実施例１で分離された化合物１－２の抗炎症効果図である。

【発明を実施するための形態】

【0018】

以下、実施例に関連して本発明を詳細に説明するが、本発明の実施形態はこれに限定されるものではない。以下に説明する実施例は本発明の実施例の一部に過ぎず、当業者にとって創造的労働を行うことなく得た他の同様の実施例は本発明が保護する範囲に含まれることは明らかである。特に説明がない限り、本発明で使用される実験方法は全て通常の方法であり、使用される実験器具、材料、試薬等はすべて市販されているものである。

【0019】

（実施例１）
ポリケチド化合物の製造方法は、主にステップ（１）とステップ（２）を含む。

【0020】

（１）菌種発酵：チベットイワベンケイの葉部位から採集したＡｌｔｅｒｎａｒｉａ属内生菌（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｐ．）ＨＪＴ－Ｙ７を真菌４号培地（２％のマンニトール、２％のブドウ糖、０．５％の酵母エキス、１％のペプトン、０．０５％のＫＨ_２ＰＯ_４、０．０３％のＭｇＳＯ_４・７Ｈ_２Ｏ、０．１％のコーンスティープリカー、脱イオン水により調製したものである）で振とう培養し、培養条件は、２８℃、１８０ｒ／分であり、振とう培養して得られた発酵液を菌糸体とともに、米固体培地（米と純水を８０ｇ：１１０ｍＬの質量体積比で調製したものである）が加えている三角フラスコに接種し、培養温度２８℃で４０日間静置して発酵培養し、固体発酵生成物を得る。

【0021】

（２）代謝産物の抽出分離：ステップ（１）で得られた固体発酵生成物を、等体積のメタノールで超音波抽出し、８層のガーゼでろ過し、抽出液を菌糸体及び米から分離し、抽出液を濃縮し、抽出液をシリカゲルクロマトグラフィーカラムにロードして分離を行い、ここで、３００－４００メッシュのシリカゲルを固定相とし、クロロホルム／メタノールを移動相として勾配溶出を行い、勾配が順にクロロホルム：メタノール＝１００：０、１００：１、１００：２、１００：３、１００：５、１００：１０、０：１００（ｖ／ｖ）であり、溶出剤（移動相）の流速は３０ｍＬ／分で、勾配ごとに１００００ｍＬを溶出させ、溶出液（５００ｍＬごとに１瓶）を収集して濃縮し、ＴＬＣの結果に基づき、瓶を合わせて、画分１～１６を順次に得、画分７をシリカゲルクロマトグラフィーカラムにロードして分離を行い、ここで、２００－３００メッシュのシリカゲルを固定相とし、石油エーテル／酢酸エチルを移動相として勾配溶出を行い、勾配が順に石油エーテル：酢酸エチル＝１０：１、１０：３、１０：５、１０：６、１０：７、１０：９（ｖ／ｖ）であり、溶出剤の流速は３０ｍＬ／分で、溶出液（５００ｍＬごとに１瓶）を収集して濃縮し、ＴＬＣの結果に基づき、瓶を合わせて、画分７－１～７－１０を順次に得、画分７－６をＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ－２０ゲルカラムにロードして分離を行い、ここで、移動相はジクロロメタン／メタノール＝１：１（ｖ／ｖ）の混合液であり、流速は０．３ｍＬ／分であり、溶出液（１０ｍｌごとに１回集める）を収集し、溶出液を４つずつ合わせて一つの画分とし、順に画分７－６－１～７－６－６を得、画分７－６－３をＡｇｉｌｅｎｔ Ｃ１８高速液体クロマトグラフィーカラムにロードして分離を行い、ここで、移動相は５５％のメタノール水溶液であり、流速が３ｍＬ／分であり、検出器が２１０ｎｍの紫外線検出器で、保持時間５９分で単量体化合物１が得られ、保持時間６２分で単量体化合物２が得られる。

【0022】

（３）構造同定：重水素置換のジメチルスルホキシドを溶媒とし、Ｂｒｕｋｅｒ ＡｖａｎｃｅＩＩ ５００Ｍ 核磁気共鳴スペクトロメータを用いて、分離された化合物１と化合物２の核磁気共鳴スペクトルを測定し、質量スペクトルを利用して分子式を推定し、円偏光二色性分析器Ｊ－８１０－１５０Ｓを用いて化合物１と化合物２の円偏光二色スペクトルを検測し、使用ＤＰ４＋ソフトを用いて化合物１と化合物２の立体構造を計算し、核磁気共鳴スペクトル、ＣＤの結果及び計算の結果に基づき、最終的に生成物の構造を同定する。

【0023】

化合物１のスペクトルデータは、以下に示すとおりである。
^１Ｈ－ＮＭＲ （５００ Ｈｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ： ３．１４ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ １３．５ Ｈｚ， Ｈ－１ａ）， ４．１７ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ １３．５ Ｈｚ， Ｈ－１ｂ）， ９．４５ （１Ｈ， ｓ， Ｈ－３ＯＨ）， ６．６３ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， Ｈ－４）， ７．００ （１Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， Ｈ－５）， ６．７２ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， Ｈ－６）， ６．５６ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ １２．５ Ｈｚ， Ｈ－８）， ６．０１ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ １２．５Ｈｚ， Ｈ－９）， ３．７２ （１Ｈ， ｑ， Ｊ ＝ ６．０ Ｈｚ， Ｈ－１１）， ０．８７ （３Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ ６．０ Ｈｚ， Ｈ－１２）， ５．０４ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ １２．５ Ｈｚ， Ｈ－１’ａ）， ５．２３ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ １２．５ Ｈｚ， Ｈ－１’ｂ）， ９．６７ （１Ｈ， ｓ， Ｈ－３’ＯＨ）， ６．８３ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， Ｈ－４’）， ７．０５ （１Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， Ｈ－５’）， ６．７６ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， Ｈ－６’）， ４．０４ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ １０．０Ｈｚ， Ｈ－８’）， ４．５４ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ １０．０ Ｈｚ， Ｈ－９’）， ３．６６ （１Ｈ， ｓ， Ｈ－１０’）， ２．１７ （３Ｈ， ｓ， Ｈ－１２’）。
^１３Ｃ－ＮＭＲ （１２５ Ｈｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ： ５９．５ （Ｃ－１）， １２６．８ （Ｃ－２）， １５３．３（Ｃ－３）， １１４．４ （Ｃ－４）， １２８．３ （Ｃ－５）， １２１．２ （Ｃ－６）， １３７．４ （Ｃ－７）， １３１．１ （Ｃ－８）， １３７．１ （Ｃ－９）， ９３．７ （Ｃ－１０）， ８１．７ （Ｃ－１１）， １２．９ （Ｃ－１２）， ６１．０ （Ｃ－１’）， １２２．８ （Ｃ－２’）， １５６．１ （Ｃ－３’）， １１５．３ （Ｃ－４’）， １２８．６ （Ｃ－５’）， １２３．３ （Ｃ－６’）， １３９．３ （Ｃ－７’）， ５９．８ （Ｃ－８’）， ７９．３ （Ｃ－９’）， ７９．７ （Ｃ－１０’）， ２０９．５ （Ｃ－１１’）， ２８．０ （Ｃ－１２’）。

【0024】

化合物１のＨＭＢＣスペクトルの結果は、以下に示すとおりである。

【化2】

【0025】

化合物１のＮＯＥＳＹスペクトルの結果は、以下に示すとおりである。

【化3】

【0026】

化合物２のスペクトルデータは、以下に示すとおりである。
^１Ｈ－ＮＭＲ （５００ Ｈｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ： ４．３３ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ １３．５ Ｈｚ， Ｈ－１ａ）， ５．１１ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ １３．５ Ｈｚ， Ｈ－１ｂ）， ９．６２ （１Ｈ， ｓ， Ｈ－３ＯＨ）， ６．８３ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， Ｈ－４）， ７．１６ （１Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８．０Ｈｚ， Ｈ－５）， ６．８５ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ）， ６．６３ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ １２．５ Ｈｚ， Ｈ－８）， ５．８５ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ １２．５ Ｈｚ， Ｈ－９）， ４．３１ （１Ｈ， ｑ， Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ， Ｈ－１１）， １．３１ （３Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ， Ｈ－１２）， ４．３３ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ １３．５ Ｈｚ， Ｈ－１’ａ）， ５．２７ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ １３．５ Ｈｚ， Ｈ－１’ｂ）， ９．４０ （１Ｈ， ｓ， Ｈ－３’ＯＨ）， ６．５８ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ ７．８ Ｈｚ， Ｈ－４’）， ６．５３ （１Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ７．８ Ｈｚ， Ｈ－５’）， ６．８２ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ ７．８ Ｈｚ， Ｈ－６’）， ３．８４ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ １０．０ Ｈｚ， Ｈ－８’）， ３．７５ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ １０．０ Ｈｚ， Ｈ－９’）， ４．０１ （１Ｈ， ｓ， Ｈ－１０’）， ２．１４ （３Ｈ， ｓ， Ｈ－１２’）。
^１３Ｃ－ＮＭＲ （１２５ Ｈｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ： ５９．１ （Ｃ－１）， １２６．０ （Ｃ－２）， １５４．０ （Ｃ－３）， １１５．２ （Ｃ－４）， １２８．６ （Ｃ－５）， １２２．１ （Ｃ－６）， １３７．５ （Ｃ－７）， １３１．６ （Ｃ－８）， １３２．９ （Ｃ－９）， ９２．５ （Ｃ－１０）， ８４．６ （Ｃ－１１）， ２０．７ （Ｃ－１２）， ６４．０ （Ｃ－１’）， １２６．４ （Ｃ－２’）， １５４．４ （Ｃ－３’）， １１３．８ （Ｃ－４’）， １２７．９ （Ｃ－５’）， １１９．８ （Ｃ－６’）， １３６．７ （Ｃ－７’）， ５２．５ （Ｃ－８’）， ７８．７ （Ｃ－９’）， ９１．５ （Ｃ－１０’）， ２０５．３ （Ｃ－１１’）， ２７．７ （Ｃ－１２’）．

【0027】

化合物２のＨＭＢＣスペクトルの結果は、以下に示すとおりである。

【化4】

【0028】

化合物２のＮＯＥＳＹスペクトルの結果は、以下に示すとおりである。

【化5】

【0029】

（実施例２）
実施例１で製造された化合物１－２の抗炎症活性に対する研究
マウスＲＡＷ ２６４．７マクロファージの培養：ＲＡＷ ２６４．７マクロファージを、１０％のウシ胎仔血清（＜０．５ＥＵ／ｍＬ）、１％のペニシリンとストレプトマイシンを含む高糖質ＤＭＥＭの培地に接種し、３７℃、５％のＣＯ_２インキュベーターに置いて培養する。細胞被覆率が約９０％に達すると、上清を捨て、直接３７℃の培地を加えて吹き付け、継代培養する。対数増殖期の細胞を取って、後の実験に用いる。

【0030】

ＬＰＳ誘発によるＲＡＷ ２６４．７マクロファージ炎症モデルの作成：対数増殖期のＲＡＷ ２６４．７細胞を取って、一ウェル当たり１×１０^４個の細胞を９６ウェルの細胞培養プレートに接種し、２４時間経って細胞が接着されてから、正常対照群、ＬＰＳモデル群、陽性対照群及び化合物群を設置し、各群は６ウェルずつ設ける。正常対照群とＬＰＳモデル群は、まず無血清ＤＭＥＭ培地で細胞を培養し、化合物群はそれぞれ終濃度が４０．００、２０．００、１０．００、５μＭの化合物１又は化合物２を含む無血清ＤＭＥＭで細胞を培養し、陽性対照群は終濃度が２００μＭのＬ－ＮＡＭＥ（一酸化窒素シンターゼ阻害剤）を含む無血清ＤＭＥＭで細胞を培養し、上記のようにして細胞を４時間培養してから、正常対照群を無血清ＤＭＥＭで引き続き培養する他、ほかの群に終濃度が１μｇ／ｍＬのＬＰＳを加えて細胞を刺激し、２４時間後に各ウェル当たり５０μＬの培地を収集し、一酸化窒素スクリーニングキットでＮＯの分泌状況を検出し、且つ各ウェルに濃度が５ｇ／ＬのＭＴＴを１０μＬ加え、引き続き４時間培養してから上清を捨て、各ウェルにＤＭＳＯを１５０μＬ加え、１０分振とうし、５７０ｎｍ下で各ウェルの吸光度を測定する。

【0031】

ＭＴＴの結果は、実施例１で製造された化合物１と化合物２のＩＣ_５０が１００μＭより大きい（ＩＣ_５０＞１００μＭ）ことを示し、抗炎症実験の結果は図１３に示し、モデル群と比べて、化合物１と化合物２は、濃度によって、ＮＯの放出を異なる程度で抑制し、その中、５μＭの濃度でいずれも陽性対照群よりも優れた抑制活性を示し、これにより、化合物１と化合物２は良好な抗炎症活性を有することは明らかである。

【0032】

最後に以下のことを説明すべきである。以上の各実施例は本発明の技術的手段を説明するためのものにすぎなく、それを限定するものではない。上述した各実施例を参照しながら本発明を詳細に説明したが、上述した各実施例に記載の技術的手段を修正するか、またはその技術的特徴の一部または全部に同等な取り替えを実施することも可能であり、それらの修正や取り替えによって、対応する技術的手段の本質が本発明の各実施例の技術的手段の範囲から逸脱しないことは当業者に理解されよう。

【0033】

［付記］
［付記１］
下式に示す構造を有するポリケチド化合物又はその薬学的に許容される塩。

【化6】

【0034】

［付記２］
２０２２年５月６日に中国微生物菌種保蔵管理委員会普通微生物センターに寄託され、寄託番号がＣＧＭＣＣ Ｎｏ．４０１６６で、寄託機関の住所が北京市朝陽区北辰西路一号院三号であるＡｌｔｅｒｎａｒｉａ属内生菌（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｐ．）ＨＪＴ－Ｙ７。

【0035】

［付記３］
付記２に記載のＡｌｔｅｒｎａｒｉａ属内生菌（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｐ．）ＨＪＴ－Ｙ７を真菌４号培地に接種して、振とう培養し、得られた発酵液を菌糸体とともに米固体培地に接種し、２０～３０℃で１０～４０日間静置して発酵させ、固体発酵生成物を得るステップ（１）と、
ステップ（１）で得られた固体発酵生成物を、メタノールを用いて抽出してろ過し、得られた抽出液をシリカゲルクロマトグラフィーカラムにロードし、体積比１００：０～０：１００のクロロホルム／メタノールを移動相として勾配溶出を行い、ＴＬＣの結果に基づき、画分１～１６を順次に得、画分７をシリカゲルクロマトグラフィーカラムにロードし、体積比１０：１～１０：９の石油エーテル／酢酸エチルを移動相として勾配溶出を行い、ＴＬＣの結果に基づき、画分７－１～７－１０を順次に得、画分７－６をＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ－２０ゲルカラムにロードし、体積比１：１のジクロロメタン／メタノール混合液を移動相して溶出を行い、画分７－６－１～７－６－６を順次に得、画分７－６－３をＡｇｉｌｅｎｔ Ｃ１８高速液体クロマトグラフィーカラムにロードし、５５％のメタノール水溶液を移動相として溶出を行って、化合物１と化合物２を得るステップ（２）と、を含む、付記１に記載のポリケチド化合物の製造方法。

【0036】

［付記４］
ステップ（１）における前記振とう培養の条件は、２０～３０℃で、１００～２００ｒ／分である、付記３に記載の製造方法。

【0037】

［付記５］
ステップ（１）における前記米固体培地は、米と純水を８０：８０～１２０ｇ／ｍＬの質量体積比で調製して得られる、付記３に記載の製造方法。

【0038】

［付記６］
ステップ（１）における前記真菌４号培地は、２％のマンニトール、２％のブドウ糖、０．５％の酵母エキス、１％のペプトン、０．０５％のＫＨ_２ＰＯ_４、０．０３％のＭｇＳＯ_４・７Ｈ_２Ｏ、０．１％のコーンスティープリカー、脱イオン水により構成される、付記３に記載の製造方法。

【0039】

［付記７］
ステップ（２）における前記勾配溶出の過程において、クロロホルム／メタノールの体積比は、１００：０、１００：１、１００：２、１００：３、１００：５、１００：１０、０：１００である、付記３に記載の製造方法。

【0040】

［付記８］
ステップ（２）における前記勾配溶出の過程において、石油エーテル／酢酸エチルの体積比は１０：１、１０：３、１０：５、１０：６、１０：７、１０：９である、付記３に記載の製造方法。

【0041】

［付記９］
付記１に記載のポリケチド化合物又はその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される添加剤を含む、医薬組成物。

【0042】

［付記１０］
付記１に記載のポリケチド化合物又はその薬学的に許容される塩又は付記９に記載の医薬組成物の、抗炎症薬物の製造のための使用。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【国際調査報告】