特表2024-542419組成物中のアピシジン濃度を低下させるための手段及び方法
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-11-15
(54)【発明の名称】組成物中のアピシジン濃度を低下させるための手段及び方法
(51)【国際特許分類】
C12N 1/20 20060101AFI20241108BHJP
A23K 20/147 20160101ALI20241108BHJP
A23K 10/16 20160101ALI20241108BHJP
A23L 33/00 20160101ALI20241108BHJP
A23L 33/135 20160101ALI20241108BHJP
A23L 5/20 20160101ALI20241108BHJP
C12N 15/11 20060101ALI20241108BHJP
【ＦＩ】
C12N1/20 F ZNA
A23K20/147
A23K10/16
A23L33/00
A23L33/135
A23L5/20
C12N15/11 Z
C12N1/20 A
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024527381
(86)(22)【出願日】2022-11-29
(85)【翻訳文提出日】2024-07-04
(86)【国際出願番号】 EP2022083729
(87)【国際公開番号】W WO2023099500
(87)【国際公開日】2023-06-08
(31)【優先権主張番号】21211878.0
(32)【優先日】2021-12-02
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】520222298
【氏名又は名称】デーエスエム オーストリア ゲーエムベーハー
(74)【代理人】
【識別番号】100107456
【弁理士】
【氏名又は名称】池田 成人
(74)【代理人】
【識別番号】100128381
【弁理士】
【氏名又は名称】清水 義憲
(74)【代理人】
【識別番号】100162352
【弁理士】
【氏名又は名称】酒巻 順一郎
(72)【発明者】
【氏名】クレイナー， フローリアン
(72)【発明者】
【氏名】ラブドヴァ， シルヴィア
(72)【発明者】
【氏名】ノバク， バーバラ
(72)【発明者】
【氏名】レイナー， バレンティナ
(72)【発明者】
【氏名】シャッツマイヤー， ディアン
【テーマコード（参考）】
2B150
4B018
4B035
4B065
【Ｆターム（参考）】
2B150AC01
2B150DC23
4B018MD85
4B018ME14
4B035LC09
4B035LG04
4B035LG50
4B035LP41
4B065AA01X
4B065BB23
4B065BB26
4B065BD50
4B065CA41
4B065CA43
(57)【要約】
本発明は、配列番号１～７からなる群から選択されるヌクレオチド配列と少なくとも９５％の同一性を有する微生物を提供することにより、組成物中のアピシジン濃度を低下させる方法及び前記微生物の使用に関する。
【選択図】図１
【選択図】図１
【特許請求の範囲】
【請求項1】
アピシジンを含む栄養組成物中のアピシジン濃度を低下させる方法であって、ａ）アピシジンを含む前記栄養組成物を提供するステップ；
ｂ）少なくとも１つの微生物を提供するステップであって、前記少なくとも１つの微生物は、配列番号１～７からなる群から選択されるヌクレオチド配列、好ましくは配列番号１～４からなる群から選択されるヌクレオチド配列、より好ましくは配列番号１のヌクレオチド配列と少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９６％の同一性、より好ましくは少なくとも９７％の同一性、より好ましくは少なくとも９８％の同一性、より好ましくは少なくとも９９％の同一性を有する１６Ｓ ｒＤＮＡを含み；好ましくは、前記少なくとも１つの微生物は、ラウルティバクター（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ）属に属する、ステップ；
ｃ）水、ａ）の前記栄養組成物及びｂ）の前記少なくとも１つの微生物を含む混合物を形成するステップ；
ｄ）ステップｃ）の前記混合物をインキュベートするステップ
を含む方法。
【請求項2】
ステップｃ）の前記混合物をインキュベートするステップｄ）は、少なくとも５分間、好ましくは少なくとも１時間、より好ましくは少なくとも２時間、更により好ましくは少なくとも１日、最も好ましくは少なくとも２日にわたって且つ少なくとも１０℃、好ましくは少なくとも１５℃、より好ましくは少なくとも２０℃の温度で行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
前記少なくとも１つの微生物は、ラウルティバクター種ノバ（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ ｓｐｅｃｉｅｓ ｎｏｖａ）、ラウルティバクター・マシリエンシス（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ ｍａｓｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）、ラウルティバクター・チモネンシス（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ ｔｉｍｏｎｅｎｓｉｓ）及びラウルティバクター・フォカエエンシス（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ ｐｈｏｃａｅｅｎｓｉｓ）からなる群から選択される、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項4】
前記少なくとも１つの微生物は、ＤＳＭ ３３９７９、ＤＳＭ ３３９８０、ＤＳＭ ３３９９１及びＤＳＭ ３３９９２からなる株の群から選択される、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項5】
ａ）の前記栄養組成物は、食料品；飼料；餌；食料品添加物；飼料添加物；餌添加物；湿潤蒸留粕；可溶分を有する乾燥蒸留粕；栄養補助食品；プレバイオティック；プロバイオティック；それらの中間体；及び／又はそれらの混合物からなる群から選択される、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項6】
食料品；飼料；餌；食料品添加物；飼料添加物；餌添加物；湿潤蒸留粕；可溶分を有する乾燥蒸留粕；栄養補助食品；プレバイオティック；プロバイオティック；それらの中間体；及び／又はそれらの混合物を処理する方法であって、前記食料品；飼料；餌；食料品添加物；飼料添加物；餌添加物；湿潤蒸留粕；可溶分を有する乾燥蒸留粕；栄養補助食品；プレバイオティック；プロバイオティック；それらの中間体；及び／又はそれらの混合物は、アピシジンを含み、前記方法は、ａ）少なくとも１つの微生物を提供するステップであって、前記少なくとも１つの微生物は、配列番号１～７からなる群から選択されるヌクレオチド配列、好ましくは配列番号１～４からなる群から選択されるヌクレオチド配列、より好ましくは配列番号１のヌクレオチド配列と少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９６％の同一性、より好ましくは少なくとも９７％の同一性、より好ましくは少なくとも９８％の同一性、より好ましくは少なくとも９９％の同一性を有する１６Ｓ ｒＤＮＡを含み；好ましくは、前記少なくとも１つの微生物は、ラウルティバクター（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ）属に属する、ステップと；
ｂ）ａ）の前記少なくとも１つの微生物を前記食料品；飼料；餌；食料品添加物；飼料添加物；餌添加物；湿潤蒸留粕；可溶分を有する乾燥蒸留粕；栄養補助食品；プレバイオティック；プロバイオティック；それらの中間体；及び／又はそれらの混合物に適用し、したがって処理混合物を形成するステップと；
ｃ）ステップｂ）の前記処理混合物をインキュベートするステップと
を含む、方法。
【請求項7】
ステップｂ）の前記処理混合物をインキュベートするステップｃ）は、少なくとも５分間、好ましくは少なくとも１時間、より好ましくは少なくとも２時間、更により好ましくは少なくとも１日、最も好ましくは少なくとも２日にわたって且つ少なくとも１０℃、好ましくは少なくとも１５℃、より好ましくは少なくとも２０℃の温度で行われる、請求項６に記載の方法。
【請求項8】
前記少なくとも１つの微生物は、ラウルティバクター種ノバ（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ ｓｐｅｃｉｅｓ ｎｏｖａ）、ラウルティバクター・マシリエンシス（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ ｍａｓｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）、ラウルティバクター・チモネンシス（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ ｔｉｍｏｎｅｎｓｉｓ）及びラウルティバクター・フォカエエンシス（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ ｐｈｏｃａｅｅｎｓｉｓ）からなる群から選択され、好ましくは、前記少なくとも１つの微生物は、ＤＳＭ ３３９７９、ＤＳＭ ３３９８０、ＤＳＭ ３３９９１及びＤＳＭ ３３９９２からなる株の群から選択される、請求項６又は７に記載の方法。
【請求項9】
前記少なくとも１つの微生物は、液体組成物の１ｍＬ当たり少なくとも１０４ｃｆｕ又は固体組成物、例えば食料品；飼料；餌；食料品添加物、飼料添加物若しくは餌添加物などの添加物；湿潤蒸留粕；可溶分を有する乾燥蒸留粕；栄養補助食品；プレバイオティック；プロバイオティック；それらの中間体；及び／又はそれらの混合物の１ｇ当たり少なくとも１０４ｃｆｕの濃度；好ましくは液体組成物の１ｍＬ当たり少なくとも１．７＊１０４ｃｆｕ又は固体組成物、例えば食料品；飼料；餌；食料品添加物、飼料添加物若しくは餌添加物などの添加物；湿潤蒸留粕；可溶分を有する乾燥蒸留粕；栄養補助食品；プレバイオティック；プロバイオティック；それらの中間体；及び／又はそれらの混合物の１ｇ当たり少なくとも１．７＊１０４ｃｆｕの濃度を達成するような量で適用される、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項10】
請求項１～９のいずれか一項に記載の方法によって製造可能であるか又は製造される食料品；飼料；餌；添加物（例えば、食料品、飼料若しくは餌添加物）；湿潤蒸留粕；可溶分を有する乾燥蒸留粕；栄養補助食品；プレバイオティック；プロバイオティック；それらの中間体；及び／又はそれらの混合物。
【請求項11】
アピシジンを含む組成物中のアピシジン濃度を低下させるための少なくとも１つの微生物の使用において、前記少なくとも１つの微生物は、配列番号１～７からなる群から選択されるヌクレオチド配列、好ましくは配列番号１～４からなる群から選択されるヌクレオチド配列、より好ましくは配列番号１のヌクレオチド配列と少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９６％の同一性、より好ましくは少なくとも９７％の同一性、より好ましくは少なくとも９８％の同一性、より好ましくは少なくとも９９％の同一性を有する１６Ｓ ｒＤＮＡを含み；好ましくは、前記少なくとも１つの微生物は、ラウルティバクター（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ）属に属することを特徴とする使用。
【請求項12】
前記少なくとも１つの微生物は、ラウルティバクター種ノバ（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ ｓｐｅｃｉｅｓ ｎｏｖａ）、ラウルティバクター・マシリエンシス（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ ｍａｓｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）、ラウルティバクター・チモネンシス（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ ｔｉｍｏｎｅｎｓｉｓ）及びラウルティバクター・フォカエエンシス（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ ｐｈｏｃａｅｅｎｓｉｓ）からなる群から選択され、好ましくは、前記少なくとも１つの微生物は、ＤＳＭ ３３９７９、ＤＳＭ ３３９８０、ＤＳＭ ３３９９１及びＤＳＭ ３３９９２からなる株の群から選択される、請求項１１に記載の使用。
【請求項13】
マイコトキシン症、特にアピシジン中毒症によって引き起こされる症状の治療、改善、予防及び／又は診断に使用するための微生物において、配列番号１～７からなる群から選択されるヌクレオチド配列、好ましくは配列番号１～４からなる群から選択されるヌクレオチド配列、より好ましくは配列番号１のヌクレオチド配列と少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９６％の同一性、より好ましくは少なくとも９７％の同一性、より好ましくは少なくとも９８％の同一性、より好ましくは少なくとも９９％の同一性を有する１６Ｓ ｒＤＮＡを含み；好ましくはラウルティバクター（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ）属に属することを特徴とする微生物。
【請求項14】
ラウルティバクター種ノバ（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ ｓｐｅｃｉｅｓ ｎｏｖａ）、ラウルティバクター・マシリエンシス（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ ｍａｓｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）、ラウルティバクター・チモネンシス（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ ｔｉｍｏｎｅｎｓｉｓ）及びラウルティバクター・フォカエエンシス（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ ｐｈｏｃａｅｅｎｓｉｓ）からなる群から選択され、好ましくはＤＳＭ ３３９７９、ＤＳＭ ３３９８０、ＤＳＭ ３３９９１及びＤＳＭ ３３９９２からなる株の群から選択される、請求項１３に記載の微生物。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【0001】
［０００１］本発明は、微生物を提供することにより、栄養組成物中のアピシジン濃度を低下させる方法、食料品、餌等を処理する方法及び前記微生物の使用に関する。
【0002】
［０００２］アピシジン（ＣＡＳ番号：１８３５０６－６６－３；例えば、（３Ｓ，６Ｓ，９Ｓ，１５ａＲ）－９－［（２Ｓ）－ブタン－２－イル］－６－［（１－メトキシ－１Ｈ－インドール－３－イル）メチル］－３－（６－オキソオクチル）オクタヒドロ－２Ｈ－ピリド［１，２－ａ］［１，４，７，１０］テトラアザシクロドデシン－１，４，７，１０（３Ｈ，１２Ｈ）－テトラオンとも言われる）は、フザリウム属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）菌、例えばＦ．セミテクツム（Ｆ．ｓｅｍｉｔｅｃｔｕｍ）によって産生される、毒性が高い代謝物である。アピシジンは、以下に示される分子構造を有する環状テトラペプチドであり、ヒストン脱アセチル化酵素を阻害すると記載されている。
【化1】
【0003】
［０００３］２８種の他の試験された菌代謝物の中で、アピシジンは、最も低いＩＣ５０値を有すること、すなわち最も強い細胞毒性作用を示すことが見出された（Ｎｏｖａｋ ｅｔ ａｌ．２０１９．Ｔｏｘｉｎｓ １１：５３７）。アピシジンの毒性効果は、ラット給飼トライアル、ブラインシュリンプ並びにヒト及びマウス細胞株で示された（Ｐａｒｋ ｅｔ ａｌ．１９９９．Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ ６５：１２６）。菌代謝物であるため、アピシジンは、例えば、農作物などの一次産品に由来する組成物中に見出され得る。とりわけ、アピシジンは、デオキシニバレノールなどの他の毒性物質と同時に現れ得る。特にデオキシニバレノール及びアピシジンでの同時汚染の場合、アピシジンの共存在なしでは細胞に影響を及ぼさないであろう濃度のデオキシニバレノールで複合毒素との接触時に上皮細胞のバリア機能の欠陥が観察されている（Ｓｐｒｉｎｇｌｅｒ ｅｔ ａｌ．２０１６．Ｔｏｘｉｎｓ ８：３４５）。
【0004】
［０００４］これらの好ましくない効果にもかかわらず、且つフモニシン、デオキシニバレノール又はゼラレノンなどの他の有毒菌代謝物とは対照的に、アピシジンの毒性効果を弱めるための手段は、現在まで見出されていない。
【0005】
［０００５］上記で概説されたような先行技術を考慮して、したがって、栄養組成物中のアピシジンの濃度を低下させるための手段及び対策を提供することが本発明の目的である。
【0006】
［０００６］この目的は、アピシジンを含む栄養組成物中のアピシジン濃度を低下させる方法であって、ａ）アピシジンを含む栄養組成物を提供するステップ；ｂ）少なくとも１つの微生物を提供するステップであって、少なくとも１つの微生物は、配列番号１～７からなる群から選択されるヌクレオチド配列、好ましくは配列番号１～４からなる群から選択されるヌクレオチド配列、より好ましくは配列番号１のヌクレオチド配列と少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９６％の同一性、より好ましくは少なくとも９７％の同一性、より好ましくは少なくとも９８％の同一性、より好ましくは少なくとも９９％の同一性を有する１６Ｓ ｒＤＮＡを含み；好ましくは、少なくとも１つの微生物は、ラウルティバクター（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ）属に属する、ステップ；ｃ）水、ａ）の栄養組成物及びｂ）の少なくとも１つの微生物を含む混合物を形成するステップ；ｄ）ステップｃ）の混合物をインキュベートするステップを含む方法を提供することによって達成されることが見出された。本明細書により、栄養組成物は、処理前と比較してより少ない又は更にゼロのアピシジンを含有するように改変され得、したがってアピシジン及び前記アピシジンによって引き起こされる毒性効果を低下させるか又は更に排除することができる。一実施形態では、本発明は、アピシジンを含む栄養組成物中のアピシジン濃度を低下させる方法であって、ａ）アピシジンを含む栄養組成物を提供するステップ；ｂ）少なくとも１つの微生物を提供するステップであって、少なくとも１つの微生物は、ラウルティバクター（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ）属に属する、ステップ；ｃ）水、ａ）の栄養組成物及びｂ）の少なくとも１つの微生物を含む混合物を形成するステップ；ｄ）ステップｃ）の混合物をインキュベートするステップを含む方法に関する。
【図面の簡単な説明】
【0007】
【図1】微生物（１．７＊１０７ｃｆｕ／ｍＬ出発濃度）による組成物中のアピシジンの低下を示す。
【図2】飼料の１ｇ当たり１．７＊１０４ｃｆｕ（コロニー形成濃度）のみのラウルティバクター（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ）種を使用する飼料からのアピシジンの除去を示す。
【0008】
［０００７］本明細書で言及されるような栄養組成物は、栄養価を有する１種以上の成分を含む組成物である。多くの場合そのような成分は、エネルギーを栄養組成物の消費者に提供する。栄養組成物は、一般的に使用される動物飼料組成物など、完全に又は少なくとも部分的に草木又は植物ベースであり得る。ステップｃ）の混合物中に含まれる水は、栄養組成物中に含まれる水分に由来し得、例えば水分の形態で存在し得るか、又はその水は、本方法のオペレータによって添加され得るか、又は水は、唾液に由来し得るであろう。
【0009】
［０００８］用語「１６Ｓ ｒＤＮＡ」は、原核細胞リボソームの３０Ｓサブユニットの１６Ｓリボ核酸成分をコードするリボソームデオキシリボ核酸（ｒＤＮＡ）を指す。２つ以上の核酸配列（例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡ）の類似度又は関連性は、配列同一性の観点から説明することができる。配列同一性は、当業者に公知の一般的な方法によって決定することができる。本明細書では、２つ以上の１６Ｓ ｒＤＮＡ配列の中での配列同一性の好ましい決定方法は、デフォルト設定を用いたＥＭＢＬ－ＥＢＩのＣｌｕｓｔａｌ Ｏｍｅｇａヌクレオチド配列アラインメントツール（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｍｓａ／ｃｌｕｓｔａｌｏ／；Ｓｉｅｖｅｒｓ ｅｔ ａｌ．２０１１．Ｍｏｌ．Ｓｙｓｔ．Ｂｉｏｌ．７：５３９）の使用である。代わりに、例えば、全米バイオテエクノロジー情報センターによって提供されるようなデフォルト設定（Ｍａｔｃｈ／Ｍｉｓｍａｔｃｈ Ｓｃｏｒｅｓ：２，－３；Ｇａｐ Ｃｏｓｔｓ：Ｅｘｉｓｔｅｎｃｅ：５ Ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ ２）を使用する、グローバル配列アラインメンのためのＮｅｅｄｌｅｍａｎ－Ｗｕｎｓｃｈアルゴリズム（「Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ－Ｗｕｎｓｃｈ Ｇｌｏｂａｌ Ａｌｉｇｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ」）が使用され得る。
【0010】
［０００９］酵素又は微生物などの生物系によって触媒される反応などの化学反応は、環境条件に応じてより速く又はより遅く起こり得る。好ましい方法で本出願の方法を行うために、したがって、少なくとも５分間、好ましくは少なくとも１時間、より好ましくは少なくとも２時間、更により好ましくは少なくとも１日、最も好ましくは少なくとも２日にわたり、上記に記載された方法のステップｄ）を行うことが考えられる。更に、上記に記載された方法のステップｄ）を少なくとも１０℃、好ましくは少なくとも１５℃、より好ましくは少なくとも２０℃の温度で行うことが好ましい。最大で５０℃、好ましくは最大で４０℃の温度で前記インキュベーションを行うことが更に好ましい。一実施形態では、本出願の方法は、通常の周囲温度（すなわち１５～３５℃、好ましくは１８～３０℃、より好ましくは１８～２５℃）で行われる。本明細書で記載される方法を前記条件下で行う場合、組成物中のアピシジン濃度又は含有量の特に効率的な低下が達成され得る。ステップｄ）のインキュベーションがより長く行われるほど、より多くのアピシジンが栄養組成物から除去されるであろう。とりわけ、そのような長いインキュベーション時間の全体を通してさえ、微生物は、アピシジンを除去できることが見出され得る。それにもかかわらず、当業者は、本明細書で記載されるようなタイプの反応が前記好ましい条件外でも達成され得ることを知っている。単に明確にするために、インキュベーションは、本明細書で言及されるような微生物と、本明細書で言及されるようなアピシジンを含む組成物とが接触すると直ちに始まると考えられる。当業者は、組成物中に存在するアピシジン濃度を所望の程度まで低下させるのに適切なインキュベーション条件を良好に選択することができる。
【0011】
［００１０］意外にも、特に、種ラウルティバクター種ノバ（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ ｓｐｅｃｉｅｓ ｎｏｖａ）、ラウルティバクター・マシリエンシス（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ ｍａｓｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）、ラウルティバクター・チモネンシス（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ ｔｉｍｏｎｅｎｓｉｓ）及びラウルティバクター・フォカエエンシス（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ ｐｈｏｃａｅｅｎｓｉｓ）からなる群から選択される微生物は、栄養組成物中のアピシジン濃度の低下を達成するための効率的な微生物触媒であることが本発明者らによって見出された。したがって、一実施形態では、本発明は、少なくとも１つの微生物が、ラウルティバクター種ノバ（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ ｓｐｅｃｉｅｓ ｎｏｖａ）、ラウルティバクター・マシリエンシス（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ ｍａｓｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）、ラウルティバクター・チモネンシス（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ ｔｉｍｏｎｅｎｓｉｓ）及びラウルティバクター・フォカエエンシス（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ ｐｈｏｃａｅｅｎｓｉｓ）からなる群から選択される、本明細書で記載されるような方法に関する。更により好ましくは及び具体的には、少なくとも１つの微生物は、ＤＳＭ ３３９７９、ＤＳＭ ３３９８０、ＤＳＭ ３３９９１及びＤＳＭ ３３９９２からなる株の群から選択される。ラベル「ＤＳＭ ３３９７９、ＤＳＭ ３３９８０、ＤＳＭ ３３９９１及びＤＳＭ ３３９９２」は、Ｌｅｉｂｎｉｚ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ＤＳＭＺ－Ｇｅｒｍａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ及びＣｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ ＧｍｂＨに寄託された株の識別子番号を示す。組成物中のアピシジンの傑出した及び信頼性の高い低下は、ＤＳＭ ３３９７９、ＤＳＭ ３３９８０、ＤＳＭ ３３９９１及びＤＳＭ ３３９９２から選択される微生物株が使用された場合に達成可能であることが見出された。
【0012】
［００１１］組成物は、１種以上の固体成分及び／又は１種以上の液体成分からなるか又はそれを含み得る。例えば、栄養組成物（上記で記載される本方法のステップａ）で言及されるような）は、食料品；飼料；餌；食料品添加物；飼料添加物；餌添加物；湿潤蒸留粕；可溶分を有する乾燥蒸留粕；栄養補助食品；プレバイオティック；プロバイオティック；それらの中間体；及び／又はそれらの混合物からなる群から選択され得る。そのような組成物は、餌／食品チェーンの一環であり、したがってアピシジンの低下又は更に除去から実質的に恩恵を受け得る。そのような組成物中のアピシジンの低下又は更に除去は、したがって、食品生産におけるより小さい損失並びにより健康的な動物及び消費者に貢献し得る。単に明確にするために、飼料又は餌は、例えば、トウモロコシ、干し草、麦わら敷きわら、大豆又はそれらから得られる生成物を含み得るか又はそれからなり得る。飼料又は餌は、押し出された餌生成物、例えばペレットも含み得るか又はそれからなり得る。食料品、飼料又は餌用の添加物は、特性を改善するか又は特性を食料品、飼料若しくは餌に追加するために使用される。例えば、そのような添加物は、感覚刺激性特性を改善するため、例えば食料品、飼料又は餌の味覚、匂い、外観、色を改善するために添加され得る。添加物は、おいしさ、栄養素利用性を改善するか、又はプロバイオティック微生物を食料品、飼料若しくは餌に追加するか、又は食料品、飼料若しくは餌のプレバイオティック活性を追加するか若しくは高めるためにも添加され得る。そのような添加物は、食料品、飼料又は餌に含まれる１種以上の望ましくない成分の除去又は減少など、食料品、飼料又は餌の潜在的に望ましくない効果を弱めるためにも添加され得る。
【0013】
［００１２］代わりに、食料品；飼料；餌；添加物（例えば、食料品、飼料若しくは餌添加物）；湿潤蒸留粕；可溶分を有する乾燥蒸留粕；栄養補助食品；プレバイオティック；プロバイオティック；それらの中間体；及び／又はそれらの混合物から選択される組成物は、その組成物が、好適な処理後に前記処理前のアピシジン濃度と比較して低下したアピシジン濃度を有することを必要とされ得ると考えられる。この目的は、食料品；飼料；餌；食料品添加物；飼料添加物；餌添加物；湿潤蒸留粕；可溶分を有する乾燥蒸留粕；栄養補助食品；プレバイオティック；プロバイオティック；それらの中間体；及び／又はそれらの混合物を処理する方法であって、食料品；飼料；餌；食料品添加物；飼料添加物；餌加物；湿潤蒸留粕；可溶分を有する乾燥蒸留粕；栄養補助食品；プレバイオティック；プロバイオティック；それらの中間体；及び／又はそれらの混合物は、アピシジンを含み、本方法は、ａ）少なくとも１つの微生物を提供するステップであって、少なくとも１つの微生物は、配列番号１～７からなる群から選択されるヌクレオチド配列、好ましくは配列番号１～４からなる群から選択されるヌクレオチド配列、より好ましくは配列番号１のヌクレオチド配列と少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９６％の同一性、より好ましくは少なくとも９７％の同一性、より好ましくは少なくとも９８％の同一性、より好ましくは少なくとも９９％の同一性を有する１６Ｓ ｒＤＮＡを含み；好ましくは、少なくとも１つの微生物は、ラウルティバクター（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ）属に属する、ステップと；ｂ）ａ）の少なくとも１つの微生物を食料品；飼料；餌；食料品添加物；飼料添加物；餌添加物；湿潤蒸留粕；可溶分を有する乾燥蒸留粕；栄養補助食品；プレバイオティック；プロバイオティック；それらの中間体；及び／又はそれらの混合物に適用し、したがって処理混合物を形成するステップと；ｃ）ステップｂ）の処理混合物をインキュベートするステップとを含む、方法を提供することによって達成された。上記の処理方法前に、食料品；飼料；餌；食料品添加物；飼料添加物；餌添加物；湿潤蒸留粕；可溶分を有する乾燥蒸留粕；栄養補助食品；プレバイオティック；プロバイオティック；それらの中間体；及び／又はそれらの混合物は、（例えば、３０ｐｐｂ超若しくは更に４０ｐｐｂ、５０ｐｐｂ、６０ｐｐｂ、７０ｐｐｂ、８０ｐｐｂ、９０ｐｐｂ、１００ｐｐｂ超又は更にそれを超える濃度で）アピシジンを含む。しかしながら、そのような方法によって得られた食料品；飼料；餌；食料品添加物；飼料添加物；餌添加物；湿潤蒸留粕；可溶分を有する乾燥蒸留粕；栄養補助食品；プレバイオティック；プロバイオティック；それらの中間体；及び／又はそれらの混合物は、もはやより少ないか又は更にゼロのアピシジンを含有し、したがってアピシジン誘導悪影響を弱めるために必要ないかなる更なる手段もなしに、意図される目的のために便利に使用され得る。ａ）の微生物又は食料品；飼料；餌；食料品添加物；飼料添加物；餌添加物；湿潤蒸留粕；可溶分を有する乾燥蒸留粕；栄養補助食品；プレバイオティック；プロバイオティック；それらの中間体；及び／若しくはそれらの混合物が（例えば、水分の形態の）水を含まない場合、水は、ステップｃ）において、特にステップｃ）前に添加され得る。
【0014】
［００１３］一実施形態では、本発明は、食料品；飼料；餌；食料品添加物；飼料添加物；餌添加物；湿潤蒸留粕；可溶分を有する乾燥蒸留粕；栄養補助食品；プレバイオティック；プロバイオティック；それらの中間体；及び／又はそれらの混合物を処理する方法であって、ａ）少なくとも１つの微生物を提供するステップであって、少なくとも１つの微生物は、ラウルティバクター（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ）属に属する、ステップと；ｂ）ａ）の少なくとも１つの微生物を食料品；飼料；餌；食料品添加物；飼料添加物；餌添加物；湿潤蒸留粕；可溶分を有する乾燥蒸留粕；栄養補助食品；プレバイオティック；プロバイオティック；それらの中間体；及び／又はそれらの混合物に適用し、したがって処理混合物を形成するステップと；ｃ）ステップｂ）の処理混合物をインキュベートするステップとを含む方法に関する。好ましくは、食料品；飼料；餌；添加物（例えば、食料品、飼料若しくは餌添加物）；湿潤蒸留粕；可溶分を有する乾燥蒸留粕；栄養補助食品；プレバイオティック；プロバイオティック；それらの中間体；及び／又はそれらの混合物を処理する方法が行われ、ステップｂ）の処理混合物をインキュベートするステップｃ）は、少なくとも５分間、好ましくは少なくとも１時間、より好ましくは少なくとも２時間、更により好ましくは少なくとも１日、最も好ましくは少なくとも２日にわたって行われる。好ましくは、本方法は、少なくとも１０℃、好ましくは少なくとも１５℃、より好ましくは少なくとも２０℃の温度で更に行われる。前記インキュベーションを最大で５０℃、好ましくは最大で４０℃の温度で行うことが更に好ましい。例えば、本出願の方法は、通常の周囲温度（すなわち１５～３５℃、好ましくは１８～３０℃、より好ましくは１８～２５℃）で行われる。
【0015】
［００１４］食料品；飼料；餌；食料品添加物；飼料添加物；餌添加物；湿潤蒸留粕；可溶分を有する乾燥蒸留粕；栄養補助食品；プレバイオティック；プロバイオティック；それらの中間体；及び／又はそれらの混合物を処理する方法の好ましい実施形態では、少なくとも１つの微生物が、ラウルティバクター種ノバ（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ ｓｐｅｃｉｅｓ ｎｏｖａ）、ラウルティバクター・マシリエンシス（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ ｍａｓｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）、ラウルティバクター・チモネンシス（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ ｔｉｍｏｎｅｎｓｉｓ）及びラウルティバクター・フォカエエンシス（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ ｐｈｏｃａｅｅｎｓｉｓ）からなる群から選択され、好ましくは、少なくとも１つの微生物が、ＤＳＭ ３３９７９、ＤＳＭ ３３９８０、ＤＳＭ ３３９９１及びＤＳＭ ３３９９２からなる株の群から選択される方法で行われる。
【0016】
［００１５］液体組成物の１ｍＬ当たり少なくとも１０４ｃｆｕ又は固体組成物（例えば、食料品；飼料；餌；添加物（例えば、食料品、飼料若しくは餌添加物）；湿潤蒸留粕；可溶分を有する乾燥蒸留粕；栄養補助食品；プレバイオティック；プロバイオティック；それらの中間体；及び／又はそれらの混合物）の１ｇ当たり少なくとも１０４ｃｆｕの濃度、好ましくは液体組成物の１ｍＬ当たり少なくとも１．７＊１０４ｃｆｕ又は固体組成物（例えば、食料品；飼料；餌；添加物（例えば、食料品、飼料若しくは餌添加物）；湿潤蒸留粕；可溶分を有する乾燥蒸留粕；栄養補助食品；プレバイオティック；プロバイオティック；それらの中間体；及び／又はそれらの混合物）の１ｇ当たり少なくとも１．７＊１０４ｃｆｕの濃度を達成するような量で少なくとも１つの微生物が適用される方法において、本明細書に記載される任意の方法を行うことが好ましい。換言すれば、組成物中の少なくとも１つの微生物の最終濃度、すなわち作業濃度は、組成物（例えば、食料品；飼料；餌；添加物（例えば、食料品、飼料若しくは餌添加物）；湿潤蒸留粕；可溶分を有する乾燥蒸留粕；栄養補助食品；プレバイオティック；プロバイオティック；それらの中間体；及び／又はそれらの混合物）の１ｍＬ当たり又は１ｇ当たり好ましくは少なくとも１０４ｃｆｕ、より好ましくは組成物（例えば、食料品；飼料；餌；添加物（例えば、食料品、飼料若しくは餌添加物）；湿潤蒸留粕；可溶分を有する乾燥蒸留粕；栄養補助食品；プレバイオティック；プロバイオティック；それらの中間体；及び／又はそれらの混合物）の１ｍＬ当たり又は１ｇ当たり少なくとも１．７＊１０４ｃｆｕの濃度である。
【0017】
［００１６］当業者は、本発明が、より低い濃度の微生物を使用する場合にも行われ得ることを知っている。それにもかかわらず、上記で記載されたような最低濃度を適用する場合、アピシジン低下又は除去は、最も都合のよい時間枠内で達成され得る。
【0018】
［００１７］用語「ｃｆｕ」は、当技術分野で知られているように、「コロニー形成単位」を指す。例えば、再生産可能な最小生物学的単位（例えば、細菌性細胞）は、コロニー形成単位である。典型的には、単一生細菌性細胞は、コロニー形成単位である。実際には、組成物中のコロニー形成単位の濃度は、その目的のために当業者に知られている任意の一般的な好適な方法、例えば栄養寒天プレート上でコロニーを計数すること又は当業者に知られているように生きている微生物を数値化するのに適したフローサイトメトリーを適用することによって決定され得る。
【0019】
［００１８］本発明の別の態様は、本明細書で記載されるような方法によって製造可能であるか又は製造される食料品；飼料；餌；添加物（例えば、食料品、飼料若しくは餌添加物）；湿潤蒸留粕；可溶分を有する乾燥蒸留粕；栄養補助食品；プレバイオティック；プロバイオティック；それらの中間体；及び／又はそれらの混合物に関する。本明細書で記載されるような方法によって製造可能であるか又は製造される食料品；飼料；餌；添加物（例えば、食料品、飼料若しくは餌添加物）；湿潤蒸留粕；可溶分を有する乾燥蒸留粕；栄養補助食品；プレバイオティック；プロバイオティック；それらの中間体；及び／又はそれらの混合物は、本明細書で記載されるような方法によって製造されなかった食料品；飼料；餌；添加物（例えば、食料品、飼料若しくは餌添加物）；湿潤蒸留粕；可溶分を有する乾燥蒸留粕；栄養補助食品；プレバイオティック；プロバイオティック；それらの中間体；及び／又はそれらの混合物と比較してゼロの又は少なくともより低い量のアピシジンを含む。結果として、本発明によるそのような食料品；飼料；餌；添加物（例えば、食料品、飼料若しくは餌添加物）；湿潤蒸留粕；可溶分を有する乾燥蒸留粕；栄養補助食品；プレバイオティック；プロバイオティック；それらの中間体；及び／又はそれらの混合物は、そのような食料品；飼料；餌；添加物（例えば、食料品、飼料若しくは餌添加物）；湿潤蒸留粕；可溶分を有する乾燥蒸留粕；栄養補助食品；プレバイオティック；プロバイオティック；それらの中間体；及び／又はそれらの混合物の消費者にアピシジン誘導毒性効果を引き起こすより低い脅威を呈する。本明細書で記載されるような方法によって製造可能であるか又は製造される食料品；飼料；餌；添加物（例えば、食料品、飼料若しくは餌添加物）；湿潤蒸留粕；可溶分を有する乾燥蒸留粕；栄養補助食品；プレバイオティック；プロバイオティック；それらの中間体；及び／又はそれらの混合物は、本明細書で言及されるような少なくとも１つの微生物を含み、この少なくとも１つの微生物は、配列番号１～７からなる群から選択されるヌクレオチド配列、好ましくは配列番号１～４からなる群から選択されるヌクレオチド配列、より好ましくは配列番号１のヌクレオチド配列と少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９６％の同一性、より好ましくは少なくとも９７％の同一性、より好ましくは少なくとも９８％の同一性、より好ましくは少なくとも９９％の同一性を有する１６Ｓ ｒＤＮＡを含み；好ましくは、少なくとも１つの微生物は、ラウルティバクター（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ）属に属すると考えられる。したがって、そのような食料品；飼料；餌；添加物（例えば、食料品、飼料若しくは餌添加物）；湿潤蒸留粕；可溶分を有する乾燥蒸留粕；栄養補助食品；プレバイオティック；プロバイオティック；それらの中間体；及び／又はそれらの混合物は、本明細書で言及される少なくとも１つの微生物を含まない食料品；飼料；餌；添加物（例えば、食料品、飼料若しくは餌添加物）；湿潤蒸留粕；可溶分を有する乾燥蒸留粕；栄養補助食品；プレバイオティック；プロバイオティック；それらの中間体；及び／又はそれらの混合物と比較して、結果として起こる菌の生育によってアピシジンでの更なる汚染のリスクがより低いものである。好ましくは、本明細書で記載されるような方法によって製造可能であるか又は製造される食料品；飼料；餌；添加物（例えば、食料品、飼料若しくは餌添加物）；湿潤蒸留粕；可溶分を有する乾燥蒸留粕；栄養補助食品；プレバイオティック；プロバイオティック；それらの中間体；及び／又はそれらの混合物は、液体組成物の１ｍＬ当たり少なくとも１０４ｃｆｕ又は固体組成物の１ｇ当たり少なくとも１０４ｃｆｕ、より好ましくは液体組成物の１ｍＬ当たり少なくとも１．７＊１０４ｃｆｕ又は固体組成物の１ｇ当たり少なくとも１．７＊１０４ｃｆｕの濃度で本発明による微生物を含む。
【0020】
［００１９］ある実施形態では、本明細書で記載されるような方法によって製造可能であるか又は製造されるそのような食料品；飼料；餌；添加物（例えば、食料品、飼料若しくは餌添加物）；湿潤蒸留粕；可溶分を有する乾燥蒸留粕；栄養補助食品；プレバイオティック；プロバイオティック；それらの中間体；及び／又はそれらの混合物は、３０ｐｐｂ未満のアピシジン（例えば、２５ｐｐｂ若しくは１５ｐｐｂ又は３０～２０ｐｐｂ、若しくは３０～１０ｐｐｂ、若しくは３０～５ｐｐｂのアピシジン）、好ましくは２０ｐｐｂ未満のアピシジン（例えば、１５ｐｐｂ又は２０～５ｐｐｂのアピシジン）、より好ましくは１０ｐｐｂ未満のアピシジン（例えば、１０～５ｐｐｂのアピシジン又は５ｐｐｂ、４ｐｐｂ、３ｐｐｂ、２ｐｐｂ等のアピシジン）を含む。
【0021】
［００２０］別の態様では、本発明は、アピシジンを含む組成物（例えば、栄養組成物）中のアピシジン濃度を低下させるための少なくとも１つの微生物の使用（例えば、非医学的使用）であって、少なくとも１つの微生物は、配列番号１～７からなる群から選択されるヌクレオチド配列、好ましくは配列番号１～４からなる群から選択されるヌクレオチド配列、より好ましくは配列番号１のヌクレオチド配列と少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９６％の同一性、より好ましくは少なくとも９７％の同一性、より好ましくは少なくとも９８％の同一性、より好ましくは少なくとも９９％の同一性を有する１６Ｓ ｒＤＮＡを含み；好ましくは、少なくとも１つの微生物は、ラウルティバクター（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ）属に属する、使用に関する。意外にも、そのような微生物は、食料品；飼料；餌；添加物（例えば、食料品、飼料若しくは餌加物）；湿潤蒸留粕；可溶分を有する乾燥蒸留粕；栄養補助食品；プレバイオティック；プロバイオティック；それらの中間体；及び／又はそれらの混合物など、組成物中のアピシジンの濃度を低下させ得ることが見出された。これにより、低下した又は更にゼロのアピシジンを有するそのよう組成物の消費者は、アピシジンの毒性効果により少なく曝されるか又は曝されない。特に、アピシジン中毒症など、かび毒症を患っていない動物（例えば、家禽、豚、反すう動物等）は、改善された性能（例えば、体重増加の増大及び／又は飼料要求率の低下）を示すことが見出され得る。本発明の微生物は、したがって、動物がアピシジンを含む栄養組成物で飼われる場合、前記動物の性能を改善するために使用され得る。一実施形態では、本発明は、組成物（例えば、栄養組成物）中のアピシジン濃度を低下させるための少なくとも１つの微生物の使用であって、少なくとも１つの微生物は、ラウルティバクター（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ）属に属する、使用に関する。
【0022】
［００２１］好ましくは、本明細書で記載されるような組成物中のアピシジン濃度を低下させるための少なくとも１つの微生物の使用は、少なくとも１つの微生物が、ラウルティバクター種ノバ（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ ｓｐｅｃｉｅｓ ｎｏｖａ）、ラウルティバクター・マシリエンシス（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ ｍａｓｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）、ラウルティバクター・チモネンシス（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ ｔｉｍｏｎｅｎｓｉｓ）及びラウルティバクター・フォカエエンシス（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ ｐｈｏｃａｅｅｎｓｉｓ）からなる群から選択され、好ましくは、少なくとも１つの微生物が、ＤＳＭ ３３９７９、ＤＳＭ ３３９８０、ＤＳＭ ３３９９１及びＤＳＭ ３３９９２からなる株の群から選択される方法で行われる。
【0023】
［００２２］更なる態様では、本発明は、微生物に関し、且つ薬剤（例えば、獣医学における）として並びに／又は疾病の治療、改善、予防及び／若しくは診断で使用され得、微生物は、配列番号１～７からなる群から選択されるヌクレオチド配列、好ましくは配列番号１～４からなる群から選択されるヌクレオチド配列、より好ましくは配列番号１のヌクレオチド配列と少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９６％の同一性、より好ましくは少なくとも９７％の同一性、より好ましくは少なくとも９８％の同一性、より好ましくは少なくとも９９％の同一性を有する１６Ｓ ｒＤＮＡを含み、好ましくは、微生物は、ラウルティバクター（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ）属に属する。一実施形態では、本発明は、薬剤（例えば、獣医学における）として並びに／又は疾病の治療、改善、予防及び／若しくは診断で使用するための微生物であって、ラウルティバクター（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ）属に属する微生物に関する。
【0024】
［００２３］本発明の微生物がアピシジンを除去することができるという意外な発見により、疾病の治療、改善、予防又は診断での薬剤としてのその使用は、非常に好都合である。したがって、マイコトキシン症、特にアピシジン中毒症によって引き起こされる症状の治療、改善、予防及び／又は診断に使用するための微生物であって、配列番号１～７からなる群から選択されるヌクレオチド配列、好ましくは配列番号１～４からなる群から選択されるヌクレオチド配列、より好ましくは配列番号１のヌクレオチド配列と少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９６％の同一性、より好ましくは少なくとも９７％の同一性、より好ましくは少なくとも９８％の同一性、より好ましくは少なくとも９９％の同一性を有する１６Ｓ ｒＤＮＡを含み；好ましくは、ラウルティバクター（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ）属に属する微生物を提供することが本発明の更なる態様である。一実施形態では、本発明は、マイコトキシン症、特にアピシジン中毒症によって引き起こされる症状の治療、改善、予防及び／又は診断で使用するための微生物であって、ラウルティバクター（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ）属に属する微生物に関する。
【0025】
［００２４］微生物は、微生物を含む栄養組成物を提供することによってヒトに又は動物（例えば、ペット、家禽、豚、反すう動物等）に投与され得る。
【0026】
［００２５］本明細書で言及されるような少なくとも１つの微生物を含む組成物は、１種以上のキノコ／植物／細菌毒を解毒することができる１種以上の追加の微生物；１種以上の更なるキノコ／植物／細菌毒素を解毒することができる１種以上の単離ポリペプチド（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｄ２Ｄ３Ｂ６に例えば記載されるようなフモニシンエステラーゼ及び／若しくはその変異体；並びに／又は例えばＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｑ８ＮＫＢ０に記載されるようなゼラレノンラクトナーゼ及び／若しくはその変異体）；並びに／又は１種以上の有機吸収性成分（例えば、不活性化／乾燥／凍結乾燥／生酵母、例えばサッカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）種、例えばＳ．セレビシエ（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、ピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ））；並びに／又は１種以上の無機吸収性成分（例えば、粘土製品、ベントナイト、ゼオライト、ベントナイト－モンモリロナイト、珪藻土）；並びに／又は１種以上の植物製品（例えば、藻類製品、アザミエキス）；並びに／又は１種以上のビタミン；並びに／又は１種以上の風味化合物；並びに／又は１種以上のプレバイオティック化合物（例えば、マンナン）；並びに／又は１種以上のプロバイオティック化合物などの１種以上の更なる成分を含み得る。
【0027】
［００２６］好ましい実施形態では、薬剤（例えば、獣医学における）として且つ／又は疾病の治療、改善、予防及び／若しくは診断で使用するための、並びに／或いは特に本明細書で言及されるようなマイコトキシン症によって（例えば、アピシジン中毒症によって）引き起こされる症状の治療、改善、予防及び／又は診断に使用するための少なくとも１つの微生物は、ラウルティバクター種ノバ（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ ｓｐｅｃｉｅｓ ｎｏｖａ）、ラウルティバクター・マシリエンシス（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ ｍａｓｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）、ラウルティバクター・チモネンシス（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ ｔｉｍｏｎｅｎｓｉｓ）及びラウルティバクター・フォカエエンシス（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ ｐｈｏｃａｅｅｎｓｉｓ）からなる群から選択され、より好ましくは、微生物は、ＤＳＭ ３３９７９、ＤＳＭ ３３９８０、ＤＳＭ ３３９９１及びＤＳＭ ３３９９２からなる株からなる群から選択される。アピシジンの信頼性の高い低下のため、これらの好ましい実施形態による微生物は、薬剤として、特にマイコトキシン症、特にアピシジン中毒症によって引き起こされる症状の治療、改善、予防及び／又は診断での使用の目的にかなうのに特に好適であることが見出された。
【0028】
［００２７］好ましくは、薬剤（例えば、獣医学における）として並びに／又は疾病の治療、改善、予防及び／若しくは診断で使用するための本発明の微生物；並びに／又はマイコトキシン症によって（例えば、アピシジン中毒症によって）引き起こされる症状の治療、改善、予防及び／若しくは診断で使用するための本発明の組成物は、そのような組成物中に含まれる微生物が、液体組成物の１ｍＬ当たり少なくとも１０４ｃｆｕ若しくは固体の１ｇ当たり少なくとも１０４ｃｆｕの濃度、好ましくは液体組成物の１ｍＬ当たり少なくとも１．７＊１０４ｃｆｕ若しくは固体組成物の１ｇ当たり少なくとも１．７＊１０４ｃｆｕの濃度を達成するために適用される方法で適用される。換言すれば、そのような組成物中の本発明による少なくとも１つの微生物の最終濃度、すなわち作業濃度は、組成物の１ｍＬ当たり又は１ｇ当たり好ましくは少なくとも１０４ｃｆｕ、より好ましくは組成物の１ｍＬ当たり又は１ｇ当たり少なくとも１．７＊１０４ｃｆｕの濃度である。
【0029】
［００２８］以下では、本発明を非限定的な図及び実施例によって更に説明し、図１は、実験セットアップでの本発明に従った微生物株によるアピシジン濃度の低下を示し；図２は、本発明による添加物による餌中のアピシジン濃度の低下を示す。
【0030】
［００２９］本明細書で示される及び説明される図は、単に例示的な例としての役割を果たすにすぎず、本発明の実施形態を限定するものとして解釈されるべきではない。
【0031】
［実施例］
［００３０］本明細書で開示されるような本発明は、本明細書で記載される特定の実施形態、図、方法論、実施例、プロトコル等に限定されないが、特許請求の範囲によって専ら明確に規定される。以下に開示される実施例は、特許請求の範囲で明確に規定されるような根底にある本発明の例示的な実施形態に言及すると考えられるのみであり得る。
［００３０］本明細書で開示されるような本発明は、本明細書で記載される特定の実施形態、図、方法論、実施例、プロトコル等に限定されないが、特許請求の範囲によって専ら明確に規定される。以下に開示される実施例は、特許請求の範囲で明確に規定されるような根底にある本発明の例示的な実施形態に言及すると考えられるのみであり得る。
【0032】
［００３１］［実施例１：アピシジン低下］
【0033】
［００３２］本発明による微生物でのアピシジン濃度の低下を実験的に実証するために、以下のステップを行った。アピシジンをＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）に溶解させて１ｐｐｍ原液を得た。以下の微生物：ラウルティバクター種ノバ（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ ｓｐｅｃｉｅｓ ｎｏｖａ）（Ｒ．ｓｐｅｃ．ｎｏｖ．；ＤＳＭ ３３９７９）、ラウルティバクター・マシリエンシス（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ ｍａｓｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）（Ｒ．ｍａｓｓｉｌｉｅｎｓｉｓ；ＤＳＭ ３３９８０）、ラウルティバクター・チモネンシス（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ ｔｉｍｏｎｅｎｓｉｓ）（Ｒ．ｔｉｍｏｎｅｎｓｉｓ；ＤＳＭ ３３９９１）、ラウルティバクター・フォカエエンシス（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ ｐｈｏｃａｅｅｎｓｉｓ）（Ｒ．ｐｈｏｃａｅｅｎｓｉｓ；ＤＳＭ ３３９９２）のいずれかの前培養液を調製した。この目的のため、細菌種のいずれかからの生存能力のあるサンプルを使用して、気密の密封可能な実験室ガラス瓶又は嫌気性培養管（ハンゲイト型）中の無菌のＷｉｌｋｉｎｓ－Ｃｈａｌｇｒｅｎ培地（１０ｇ／Ｌ トリプトン、１０ｇ／Ｌ ゼラチンペプトン、５ｇ／Ｌ 酵母エキス、１ｇ／Ｌ グルコース、５ｇ／Ｌ ＮａＣｌ、１ｇ／Ｌ Ｌ－アルギニン、１ｇ／Ｌ ピルビン酸ナトリウム、０．０００５ｇ／Ｌ メナジオン、０．００５ｇ／ｌ ヘミン、２５℃でｐＨ７；Ｗｉｌｋｉｎｓ ａｎｄ Ｃｈａｌｇｒｅｎ．１９７６．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．１０：９２６－９２８）であって、更に０．５ｍＬ／Ｌの０．１％（ｗ／ｖ）レザズリンナトリウム溶液、０．３ｇ／ＬのＬ－システイン塩酸塩一水和物及び１０～２０ｍｇ／Ｌの亜ジチオン酸ナトリウムを含む培地に水素雰囲気中で植菌した。詳細には、Ｗｉｌｋｉｎｓ－Ｃｈａｌｇｒｅｎ培地の成分を蒸留水に溶解させ、次いでレザズリンナトリウムを添加することによって培地ブイヨンを調製した。この溶液を沸騰させ、次いで窒素を溶液中に分散させながら室温に冷却した。次いで、Ｌ－システイン塩酸塩一水和物及び亜ジチオン酸ナトリウムを無菌で添加した。これらの前培養物を３７℃で３日間インキュベートした。前培養物のアリコートを使用して、１．７＊１０４ｃｆｕ／ｍＬ又は１．７＊１０８ｃｆｕ／ｍＬのいずれかの細菌濃度まで上記のような培地での本培養物に植菌した。ｃｆｕ／ｍＬ単位での細菌濃度は、当業者に知られている任意の方法好適な方法、例えば平板計数（すなわち培養物アリコートを栄養寒天プレート上に置くこと及びインキュベーション後の形成コロニーの数を数えること）又はフローサイトメトリーによって決定され得る。最後に、アピシジンを８３ｐｐｂのターゲット濃度まで本培養物に添加した。したがって、調製された本培養物を３７℃でインキュベートした。インキュベーションの全体を通してサンプルを定期的に採取して、残存アピシジンを測定した。全てのステップを水素雰囲気中で行った。対照として、本培養物を熱不活性化微生物で植菌した。熱不活性化は、９５℃で１５分間のインキュベーションによって達成された。
【0034】
［００３３］インキュベーション後、サンプルをＬＣ－ＭＳ／ＭＳによって分析した。この目的のため、本培養物から採取された１００μＬのサンプルを１００μＬのアセトニトリルと混合し、これに１６，６００×ｇでの１０分の遠心分離、更に無水メタノールでの１：６希釈が続いた。
【0035】
［００３４］Ａｇｉｌｅｎｔ製のＩｎｆｉｎｉｔｙ ＩＩ １２９０クロマトグラフィーシステムを使用して、Ｚｏｒｂａｘ Ｅｃｌｉｐｓｅ Ｐｌｕｓ Ｃ１８ ＲＲＨＤ ５０×２．１ｍｍ、１．８μｍカラムでサンプルをクロマトグラフィー的に分離した。溶離液は、Ａ：５％メタノール、９４．９％水、０．１％ギ酸、１ｍＭギ酸アンモニア；及びＢ：９９．９％メタノール、０．１％キサン、１ｍＭギ酸アンモニウムであった。グラジエントは、７０％のＢから始まり、０．７分で１００％まで増加した。次いで、それを０．９分まで一定に保った。０．９１分で溶離液組成を７０％に戻した。アピシジンの溶出時間は、０．３分であった。Ｓｃｉｅｘ製の質量分析計ＴｒｉｐｌｅＱｕａｄ ５５００は、エレクトロスプレーイオン化イオン源を装備していた。それを負モードで使用した。イオンスプレー電圧は、－４５００Ｖであった。イオン源の温度を５００℃に設定した。カーテンガス設定は、４０であった。質量分析計は、多重反応モニタリングモードで使用した。量化記号転移は、６２２／４６２（衝突エネルギー－３０Ｖ）であった。量化記号転移は、６２２／２５２（衝突エネルギー－４６Ｖ）であった。滞留時は、１５０ｍｓであった。
【0036】
［００３５］図１において、微生物（１．７＊１０７ｃｆｕ／ｍＬ出発濃度）による組成物中のアピシジンの低下を示す。ｘ軸は、インキュベーションの時間経過を示す。ｙ軸は、インキュベーションの全体を通したアピシジンの濃度を示し、最初のアピシジン濃度を１００％に設定した。灰色線は、対照のアピシジン濃度を、黒色実線は、Ｒ．種ノバ（Ｒ．ｓｐｅｃ．ｎｏｖ．）株のアピシジン濃度を、黒色点線は、Ｒ．チモネンシス（Ｒ．ｔｉｍｏｎｅｎｓｉｓ）株のアピシジン濃度を、黒色破線は、Ｒ．マシリエンシス（Ｒ．ｍａｓｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）株のアピシジン濃度を、且つ黒色一点鎖線は、Ｒ．フォカエエンシス（Ｒ．ｐｈｏｃａｅｅｎｓｉｓ）株のアピシジン濃度を示す。エラーバーは、サンプリング及び／又は分析中に避けることができなかった不正確さを表すための１５％のエラーを示す。
【0037】
［００３６］熱不活性化ラウルティバクター（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ）種を用いたインキュベーション時、アピシジン濃度の一定の下落が観察された。理論に制約されることを望むものではないが、本発明者らは、一定量のアピシジンが実験管壁に可逆的及び／又は不可逆的に吸着し、したがって対照バッチでのアピシジン濃度の下落を説明し得ると仮定する。とりわけ、全ての試験された種がおよそ４日以内にアピシジンを効果的に及び効率的に除去した。
【0038】
［００３７］［実施例２：配列比較］
【0039】
［００３８］本発明の微生物株を互いに比較するために、１６Ｓ ｒＤＮＡ配列比較を行った。この目的のため、ＥＭＢＬ－ＥＢＩのＣｌｕｓｔａｌ Ｏｍｅｇａヌクレオチド配列アラインメント（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｍｓａ／ｃｌｕｓｔａｌｏ／；Ｓｉｅｖｅｒｓ ｅｔ ａｌ．２０１１ Ｍｏｌ．Ｓｙｓｔ．Ｂｉｏｌ．７：５３９）をデフォルト設定で使用した。しかしながら、任意の好適な配列アラインメントアルゴリズムが当業者によって選択され得る。
【0040】
［００３９］以下の表１は、本発明による７つの例示的な微生物の１６Ｓ ｒＤＮＡ配列の同一性を示し、配列番号１は、Ｒ．種ノバ（Ｒ．ｓｐｅｃｉｅｓ ｎｏｖａ）ＤＳＭ ３３９７９からの、配列番号２は、Ｒ．マシリエンシス（Ｒ．ｍａｓｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）ＤＳＭ ３３９８０からの、配列番号３は、Ｒ．チモネンシス（Ｒ．ｔｉｍｏｎｅｎｓｉｓ）ＤＳＭ ３３９９１からの、配列番号４は、Ｒ．フォカエエンシス（Ｒ．ｐｈｏｃａｅｅｎｓｉｓ）ＤＳＭ ３３９９２からの、配列番号５は、Ｒ．チモネンシス（Ｒ．ｔｉｍｏｎｅｎｓｉｓ）株ＧＡＭＢ－Ｄ３５－６５（ＧｅｎＢａｎｋ ＩＤ：ＭＴ９０２９６１．１）からの、配列番号６は、ラウルティバクター（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ）種株ｚｇ－ＱＤ－９７８（ＧｅｎＢａｎｋ ＩＤ：ＭＮ９３８１７３．１）からの、且つ配列番号７は、ラウルティバクター・マシリエンシス（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ ｍａｓｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）株ｂａｎ４－ＲＹ－Ｄ５－２３（ＧｅｎＢａｎｋ ＩＤ：ＭＴ９０２９６０．１）からの１６Ｓ ｒＤＮＡ配列である。
【0041】
【表1】
【0042】
［００４０］［実施例３：飼料添加物］
【0043】
［００４１］飼料などの複雑なマトリックス中のアピシジン濃度を低下させる本発明による微生物の能力を更に研究するために、以下の実験ステップを行った。以下の微生物：ラウルティバクター種ノバ（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ ｓｐｅｃｉｅｓ ｎｏｖａ）（Ｒ．ｓｐｅｃ．ｎｏｖ．；ＤＳＭ ３３９７９）、ラウルティバクター・マシリエンシス（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ ｍａｓｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）（Ｒ．ｍａｓｓｉｌｉｅｎｓｉｓ；ＤＳＭ ３３９８０）、ラウルティバクター・チモネンシス（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ ｔｉｍｏｎｅｎｓｉｓ）（Ｒ．ｔｉｍｏｎｅｎｓｉｓ；ＤＳＭ ３３９９１）、ラウルティバクター・フォカエエンシス（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ ｐｈｏｃａｅｅｎｓｉｓ）（Ｒ．ｐｈｏｃａｅｅｎｓｉｓ；ＤＳＭ ３３９９２）のいずれかの前培養物を、実施例１に記載されるように調製した。１２５ｍｇの無菌の典型的な豚飼料（例えば、Ｍａｓｃｈｉｎｇ ｅｔ ａｌ．２０１６．Ｔｏｘｉｎｓ ８：（３）：８４；Ｓｃｈｗａｒｔｚ－Ｚｉｍｍｅｒｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．２０１８．Ｗｏｒｌｄ Ｍｙｃｏｔｏｘｉｎ Ｊｏｕｒｎａｌ，ＤＯＩ １０．３９２０／ＷＭＪ２０１７．２２６５）であって、飼料の１ｇ当たり１．７＊１０４ｃｆｕ又は飼料の１ｇ当たり１．７＊１０７ｃｆｕのいずれかの微生物濃度を達成するためのアピシジン低下添加物としての適切な量の前培養物と共にターゲット濃度の８３ｐｐｂのアピシジンを含む豚飼料を植菌することによって本培養物を調製した。本培養物を３７℃で更にインキュベートした。インキュベーション期間の全体を通して、実施例１で記載されたようにサンプルを定期的に採取し、分析した。周囲温度、すなわち１５℃～３５℃でインキュベートされた場合、同様の結果を得ることができた。
【0044】
［００４２］実施例１に記載されたセットアップと同様に、飼料への添加物として微生物を使用した場合、インキュベーションの全体を通してアピシジン濃度を低下させることができた。実際に、アピシジン低下は、飼料への微生物の添加時に直ちに達成され、より長いインキュベーション時に更に進行させることができた。とりわけ、アピシジン濃度は、２４ｈのインキュベーション後に全てのバッチで既に２０ｐｐｂ未満であった。以下の表２は、飼料の１ｇ当たり１．７＊１０７ｃｆｕの濃度で適用されたラウルティバクター（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ）種によるアピシジンの除去を示す。
【0045】
【表2】
【0046】
［００４３］更により低い濃度の本発明による微生物を使用する場合、同様の結果を得ることができる。これに関連して、飼料の１ｇ当たり１．７＊１０４ｃｆｕ（コロニー形成濃度）のみのラウルティバクター（Ｒａｏｕｌｔｉｂａｃｔｅｒ）種を使用する飼料からのアピシジンの除去を図２に示す。その中で、ｘ軸は、インキュベーションの時間経過を示す。ｙ軸は、インキュベーションの全体を通したアピシジンの濃度を示し、最初のアピシジン濃度を１００％に設定した。黒色実線は、Ｒ．種ノバ（Ｒ．ｓｐｅｃ．ｎｏｖ．）株で処理された組成物中の、黒色点線は、Ｒ．チモネンシス（Ｒ．ｔｉｍｏｎｅｎｓｉｓ）株で処理された組成物中の、黒色破線は、Ｒ．マシリエンシス（Ｒ．ｍａｓｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）株で処理された組成物中の、且つ黒色一点鎖線は、Ｒ．フォカエエンシス（Ｒ．ｐｈｏｃａｅｅｎｓｉｓ）株で処理された組成物中のアピシジン濃度を示す。とりわけ、１日のみのインキュベーション後、アピシジン濃度は、既に飼料中で５０％超だけ低下した。
【0047】
［００４４］１．７＊１０４ｃｆｕ／ｇ飼料よりも低い微生物濃度も、本発明によればアピシジン濃度を低下させるのに好適であろうことは、当業者に明らかである。非常に低い濃度を使用する場合、当業者は、アピシジンを除去するためにインキュベーション時間を延ばすことを考え得る。しかしながら、理論上、単一の生細胞でも、十分な時間を与えられた場合に組成物からアピシジンを除去することができるであろう。上記のように処理された組成物を給餌される場合、動物（例えば、ペット、豚、家禽、反すう動物等）は、非処理の組成物を給餌される場合よりもアピシジン中毒のより少ない効果を示す。
【図1】
【図2】
【配列表】
【国際調査報告】