特表 2024-542618 抗ＴＲＥＭ２抗体による線維症治療法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-11-15

(54)【発明の名称】抗ＴＲＥＭ２抗体による線維症治療法

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/395 20060101AFI20241108BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20241108BHJP

   A61P 1/16 20060101ALI20241108BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20241108BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20241108BHJP

   C07K 16/28 20060101ALN20241108BHJP

   C07K 16/46 20060101ALN20241108BHJP

【ＦＩ】

A61K39/395 N

A61P43/00 105

A61P43/00 111

A61P1/16

A61P35/00

A61P37/04

C07K16/28 ZNA

C07K16/46

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024531629

(86)(22)【出願日】2022-11-29

(85)【翻訳文提出日】2024-07-08

(86)【国際出願番号】 US2022080560

(87)【国際公開番号】W WO2023097327

(87)【国際公開日】2023-06-01

(31)【優先権主張番号】63/283,738

(32)【優先日】2021-11-29

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】520046487

【氏名又は名称】パイオニア イミュノセラピューティクス インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100102978

【弁理士】

【氏名又は名称】清水 初志

(74)【代理人】

【識別番号】100205707

【弁理士】

【氏名又は名称】小寺 秀紀

(74)【代理人】

【識別番号】100160923

【弁理士】

【氏名又は名称】山口 裕孝

(74)【代理人】

【識別番号】100119507

【弁理士】

【氏名又は名称】刑部 俊

(74)【代理人】

【識別番号】100142929

【弁理士】

【氏名又は名称】井上 隆一

(74)【代理人】

【識別番号】100148699

【弁理士】

【氏名又は名称】佐藤 利光

(74)【代理人】

【識別番号】100128048

【弁理士】

【氏名又は名称】新見 浩一

(74)【代理人】

【識別番号】100129506

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 智彦

(74)【代理人】

【識別番号】100114340

【弁理士】

【氏名又は名称】大関 雅人

(74)【代理人】

【識別番号】100121072

【弁理士】

【氏名又は名称】川本 和弥

(72)【発明者】

【氏名】ユリッチ ブラディスラバ

(72)【発明者】

【氏名】エリオット セーラ

(72)【発明者】

【氏名】リービー アリシア

【テーマコード（参考）】

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C085AA14

4C085AA16

4C085BB33

4C085BB34

4C085BB35

4C085BB36

4C085BB37

4C085BB41

4C085BB42

4C085BB43

4C085CC23

4C085DD62

4C085EE01

4H045AA10

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045CA40

4H045DA75

4H045DA76

4H045EA20

4H045GA21

(57)【要約】

抗ＴＲＥＭ２抗体、ならびに抗ＴＲＥＭ２抗体を作製及び使用する関連する方法が本明細書で提供される。抗ＴＲＥＭ２抗体またはその抗原結合断片を使用して非刺激性骨髄細胞を死滅させるか、無効化するか、または枯渇させることを含む、免疫応答を増強するための、及び／または個体における免疫関連状態、例えば、線維性疾患、の治療のための、方法及び組成物もまた、本明細書で提供される。
【選択図】図９

【特許請求の範囲】

【請求項1】

対象において線維性疾患または状態を治療する方法であって、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１５）に結合し、マウスＴＲＥＭ２（配列番号１７）に対する結合について３７０１７抗体（配列番号３１及び３２）と競合する単離された抗体を投与することを含む、前記方法、あるいは
線維性疾患または状態を有する対象のＴＲＥＭ２＋骨髄細胞を死滅させるか、無効化するか、または枯渇させる方法であって、前記骨髄細胞を、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１５）に結合し、任意でマウスＴＲＥＭ２（配列番号１７）に対する結合について３７０１７抗体（配列番号３１及び３２）と競合する単離された抗体と接触させることを含む、前記方法。

【請求項2】

前記抗体が、
ａ．配列番号９に示される配列を含むＣＤＲ－Ｈ１と、
ｂ．配列番号１０に示される配列を含むＣＤＲ－Ｈ２と、
ｃ．配列番号１１に示される配列を含むＣＤＲ－Ｈ３と、
ｄ．配列番号１２に示される配列を含むＣＤＲ－Ｌ１と、
ｅ．配列番号１３に示される配列を含むＣＤＲ－Ｌ２と、
ｆ．配列番号１４に示される配列を含むＣＤＲ－Ｌ３と
を含む、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記抗体が、脱フコシル化されており、かつ、配列番号１に示されるＶＨ配列と、配列番号２に示されるＶＬ配列と、活性ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域と、を含む、請求項２に記載の方法。

【請求項4】

前記が、配列番号１に示されるＶＨ配列と、配列番号２に示されるＶＬ配列と、Ｎ２９７Ｑ変異を含むヒトアイソタイプＩｇＧ１またはＩｇＧ４ Ｆｃ－サイレント領域と、を含む、請求項２に記載の方法。

【請求項5】

前記抗体が、
配列番号７に示される配列の位置９７にＡからＴへの置換と、配列番号７に示される配列の位置９８にＫからＲへの置換と、を含むＶＨ配列
を含む、請求項２に記載の方法。

【請求項6】

前記抗体が、配列番号１、３、または５に示されるＶＨ配列を含む、請求項３または４に記載の方法。

【請求項7】

前記抗体が、配列番号１、３、または５に示されるＶＨ配列と、配列番号２、４、または６に示されるＶＬ配列と、を含む、請求項６に記載の方法。

【請求項8】

前記抗体が、配列番号１に示されるＶＨ配列を含む、請求項３または４に記載の方法。

【請求項9】

前記抗体が、配列番号１に示されるＶＨ配列と、配列番号２に示されるＶＬ配列と、を含む、請求項８に記載の方法。

【請求項10】

前記抗体が、３７０１２抗体である、請求項９に記載の方法。

【請求項11】

前記抗体が、配列番号２５に示される重鎖配列と、配列番号２６に示される軽鎖配列と、を含む、請求項１に記載の方法。

【請求項12】

対象において線維性疾患または状態を治療する方法、あるいは線維性疾患または状態を有する対象のＴＲＥＭ２＋骨髄細胞を死滅させるか、無効化するか、または枯渇させる方法であって、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１５）に結合する単離された抗体を投与することを含み、前記抗体が、
ｉ）任意で、マウスＴＲＥＭ２（配列番号１７）に対する結合について３７０１７抗体（配列番号３１及び３２）と競合し、
ｉｉ）ヒトＦｃを含む、
前記方法。

【請求項13】

対象において線維性疾患または状態を治療する方法、あるいは線維性疾患または状態を有する対象のＴＲＥＭ２＋骨髄細胞を死滅させるか、無効化するか、または枯渇させる方法であって、単離された抗体を投与することを含み、
前記抗体が、
ａ．配列番号９に示される配列を含むＣＤＲ－Ｈ１と、
ｂ．配列番号１０に示される配列を含むＣＤＲ－Ｈ２と、
ｃ．配列番号１１に示される配列を含むＣＤＲ－Ｈ３と、
ｄ．配列番号１２に示される配列を含むＣＤＲ－Ｌ１と、
ｅ．配列番号１３に示される配列を含むＣＤＲ－Ｌ２と、
ｆ．配列番号１４に示される配列を含むＣＤＲ－Ｌ３と
を含む、前記方法。

【請求項14】

前記抗体が、
配列番号７に示される配列の位置９７にＡからＴへの置換と、配列番号７に示される配列の位置９８にＫからＲへの置換と、を含むＶＨ配列
を含む、請求項１３に記載の方法。

【請求項15】

前記抗体が、配列番号１、３、または５に示されるＶＨ配列を含む、請求項１４に記載の方法。

【請求項16】

前記抗体が、配列番号１、３、または５に示されるＶＨ配列と、配列番号２、４、または６に示されるＶＬ配列と、を含む、請求項１５に記載の方法。

【請求項17】

前記抗体が、配列番号１に示されるＶＨ配列を含む、請求項１６に記載の方法。

【請求項18】

前記抗体が、配列番号１に示されるＶＨ配列と、配列番号２に示されるＶＬ配列と、を含む、請求項１７に記載の方法。

【請求項19】

前記抗体が、３７０１２抗体である、請求項１８に記載の方法。

【請求項20】

前記抗体が、配列番号２５に示される重鎖配列と、配列番号２６に示される軽鎖配列と、を含む、請求項１３に記載の方法。

【請求項21】

前記抗体が、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイによって測定される場合、約１、２、３、４、または５×１０^－９Ｍ以下のＫ_ＤでヒトＴＲＥＭ２に結合する、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。

【請求項22】

前記抗体が、ＴＲＥＭ２＋骨髄細胞、任意でＴＲＥＭ２＋マクロファージ、ＴＲＥＭ２＋ＣＤ９＋マクロファージ、マクロファージ、瘢痕関連マクロファージ（ＳＡＭ）、樹状細胞、好中球、または単球のうちの少なくとも１つを含む非刺激性骨髄細胞を特異的に死滅させるか、枯渇させるか、または無効化することができる、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。

【請求項23】

前記抗体が、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）活性を有する、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。

【請求項24】

前記抗体が、抗体媒介性細胞食作用（ＡＤＣＰ）活性を有する、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。

【請求項25】

前記抗体が、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）活性を有する、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。

【請求項26】

前記抗体が、モノクローナル抗体、中性抗体、アンタゴニスト抗体、アゴニスト抗体、ポリクローナル抗体、ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ３抗体、脱フコシル化抗体、二重特異性抗体、ヒト抗体、キメラ抗体、完全長抗体、及びそれらの抗原結合断片のうちの少なくとも１つである、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。

【請求項27】

前記抗体が、モノクローナル抗体である、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。

【請求項28】

前記抗体が、多重特異性である、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。

【請求項29】

前記抗体が、脱フコシル化されている、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。

【請求項30】

前記抗体が、その抗原結合断片、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、一本鎖抗体分子、二重可変ドメイン抗体、単一可変ドメイン抗体、線状抗体、またはＶドメイン抗体である、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。

【請求項31】

前記抗体が、足場を含み、任意で、前記足場が、Ｆｃ、任意でヒトＦｃである、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。

【請求項32】

前記抗体が、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、及びＩｇＭから選択されるアイソタイプである、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。

【請求項33】

前記抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４から選択されるサブクラスを含むＩｇＧアイソタイプである、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。

【請求項34】

前記抗体が、ＩｇＧ１抗体である、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。

【請求項35】

Ｆｃが、１つ以上の修飾を含み、前記１つ以上の修飾が、前記１つ以上の修飾を含まないＦｃと比較して、半減期の増加、ＡＤＣＣ活性の増加、ＡＤＣＰ活性の増加、またはＣＤＣ活性の増加をもたらす、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。

【請求項36】

前記Ｆｃが、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩｃ、ＦｃγＲＩＩＩａ、及びＦｃγＲＩＩＩｂからなる群から選択されるＦｃγ受容体に結合する、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。

【請求項37】

前記抗体が、ＴＲＥＭ２＋骨髄細胞上のＴＲＥＭ２の細胞外ドメインに結合する、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。

【請求項38】

前記抗体が、骨髄細胞上のＴＲＥＭ２の細胞外ドメインに結合し、前記骨髄細胞が、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ－ＤＲ＋、ＣＤ１１ｃ＋、ＣＤ１４＋、及びＢＤＣＡ３－である非刺激性骨髄細胞であり、前記抗体が、前記非刺激性骨髄細胞を前記抗体と接触させる前に前記線維性疾患に存在する非刺激性骨髄細胞のレベルよりも低いレベルまで、ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、及び／またはＡＤＣＰを介して前記非刺激性骨髄細胞を死滅させるか、無効化するか、または枯渇させ、前記非刺激性骨髄細胞が、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ－ＤＲ＋、ＣＤ１４－、ＣＤ１１ｃ＋、ＢＤＣＡ１－、及びＢＤＣＡ３＋である刺激性骨髄細胞と、前記非刺激性骨髄細胞と、を含む免疫細胞の集団中に存在し、前記非刺激性骨髄細胞を死滅させるか、無効化するか、または枯渇させることが、前記線維性疾患を治療する、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。

【請求項39】

前記抗体が、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）活性を有する、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。

【請求項40】

前記抗体が、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）活性を有する、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。

【請求項41】

前記抗体が、抗体媒介性食作用（ＡＤＣＰ）活性を有する、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。

【請求項42】

前記抗体が、受容体リガンド遮断活性、アゴニズム活性、またはアンタゴニズム活性を有する、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。

【請求項43】

前記対象がヒトである、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。

【請求項44】

前記ＴＲＥＭ２＋骨髄細胞が、ＴＲＥＭ２＋マクロファージ、ＴＲＥＭ２＋ＣＤ９＋マクロファージ、マクロファージ、瘢痕関連マクロファージ（ＳＡＭ）、樹状細胞、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）、好中球、または単球のうちの少なくとも１つを含む、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。

【請求項45】

前記線維性疾患または状態が、肝疾患である、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。

【請求項46】

前記肝疾患が、ＮＡＦＬＤである、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。

【請求項47】

前記肝疾患が、ＮＡＳＨである、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。

【請求項48】

前記肝疾患が、線維症、ＮＡＦＬ、肝硬変、または肝臓癌からなる群から選択される、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。

【請求項49】

前記肝疾患が、肥満から生じる脂肪肝疾患、糖尿病から生じる脂肪肝疾患、インスリン抵抗性から生じる脂肪肝疾患、高トリグリセリド血症から生じる脂肪肝疾患、無βリポタンパク血症、糖原病、ウェーバー・クリスチャン病、ウォルマン病、急性妊娠脂肪肝、及び脂肪萎縮症からなる群から選択される脂肪肝疾患である、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。

【請求項50】

前記接触させることが、前記対象における免疫応答を増強する、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。

【請求項51】

前記増強された免疫応答が、適応免疫応答である、請求項５０に記載の方法。

【請求項52】

前記増強された免疫応答が、自然免疫応答である、請求項５０に記載の方法。

【請求項53】

前記対象が、免疫療法を、以前に受けたことがあるか、同時に受けているか、または後に受けることになる、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年１１月２９日に出願された米国仮特許出願第６３／２８３，７３８号の利益を主張するものであり、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0002】

配列表
本出願は、配列表を含んでおり、配列表は、ＸＭＬフォーマットで電子的に提出され、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。上述の配列表ＸＭＬは、２０２２年１１月１５日に作成され、ＰＩＩ－０１４ＷＯ＿ＳＬ．ｘｍｌという名称であり、５５，８０４バイトのサイズである。

【背景技術】

【0003】

背景
米国では推定６００，０００人の個人が肝硬変を患っており、これらの患者のうち１４，０００人が末期状態の疾患を有しており、肝移植を待ち望んでいる。研究によると、肝硬変患者の最大４０～６０％が、筋肉消耗を伴うことが示唆されている。結果として生じる虚弱は、末期肝疾患（ＥＳＬＤ）を有する患者における機能低下、肝硬変関連合併症、入院、及び死亡の顕著な原因である。肝移植は、ＥＳＬＤの根治治療であるが、肝疾患の重症度とは独立した身体的な機能低下は、移植待機リストから除外されるリスクの増加と関連している。肝硬変患者の推定４０～５０％は、肝硬変性サルコペニアを呈する。肝硬変性サルコペニアは、肝硬変において頻繁に起こる合併症であり、患者の生存及び生活の質に悪影響を及ぼす。肝硬変性サルコペニアは、肝硬変における尿素サイクルの機能不全に起因する高アンモニア血症から生じる全身性疾患であり、筋肉がアンモニアを解毒するものの、筋肉質量が損なわれる。サルコペニアは、生存率を低下させ、移植を受ける機会を減少させ、肝硬変患者における肝硬変関連合併症のリスクを高める。ＥＳＬＤまたは肝硬変性サルコペニアを有する患者などの肝硬変を有する患者に対する現在の標準治療は、運動の増加及び食事介入などのライフスタイルの変更を含む。現時点で、承認された薬理学的介入は存在しない。

【0004】

非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）は、世界的な有病率が２５％であり、肝硬変及び肝細胞癌（ＨＣＣ）の主な原因である。ＮＡＦＬＤは、軽度の炎症を伴うか、または伴わない脂肪症（非アルコール性脂肪肝）から、壊死性炎症及び急速な線維化進行を特徴とする非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）までの連続した疾患を包含する。ＮＡＦＬＤは、メタボリックシンドロームの構成要素と双方向に関連しており、２型糖尿病は、肝硬変及び関連合併症のリスクを高める。ＮＡＳＨにおける慢性肝損傷は、肝硬変及び肝臓癌などの末期肝疾患のリスクを著しく高める。進行性肝線維症は、肝臓関連転帰及び全死亡率のリスク因子であり、非侵襲的検査の組み合わせで評価することができる。ＮＡＳＨを有する患者は、肝細胞癌（ＨＣＣ）の発症リスクが高い。

【0005】

ライフスタイルの変更及び体重減少は、現時点で、ＮＡＦＬＤの予防及び治療のための唯一の選択肢である。ＮＡＦＬＤに対する承認された医学療法は存在しないが、いくつかの薬物が、開発の進行段階にある。したがって、肝線維症及びＮＡＦＬＤを治療するための追加の療法が必要である。

【0006】

正常組織では、マクロファージなどの多くの骨髄細胞は、先天性免疫及び適応免疫の両方の適切な機能、特に創傷修復に有用である。最近、新しい瘢痕関連ＴＲＥＭ２＋ＣＤ９＋マクロファージ亜集団が特定され、これは、肝線維症において拡大し、循環単球から分化し、かつ線維原性であることが示された。Ｒａｍａｃｈａｎｄｒａｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ．２０１９ Ｎｏｖｅｍｂｅｒ；５７５（７７８３）：５１２－５１８（非特許文献1）。

【0007】

関連する特許及び特許出願には、２０１５年９月２８日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０５２６８２（特許文献1）、２０１６年９月２８日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０５４１０４（特許文献2）、及びＵＳＰＮ１０，８３６，８２８（特許文献3）が含まれる（これらの各々は、参照により、それらの全体が、あらゆる目的のために本明細書に組み込まれる）。

【0008】

本明細書で引用されるすべての特許、特許出願、刊行物、文書、及び記事は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0009】

【特許文献1】ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０５２６８２

【特許文献2】ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０５４１０４

【特許文献3】ＵＳＰＮ１０，８３６，８２８

【非特許文献】

【0010】

【非特許文献1】Ｒａｍａｃｈａｎｄｒａｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ．２０１９ Ｎｏｖｅｍｂｅｒ；５７５（７７８３）：５１２－５１８

【発明の概要】

【0011】

概要
対象において線維性疾患を治療する方法であって、対象に、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１５）に結合し、任意でマウスＴＲＥＭ２（配列番号１７）に対する結合について３７０１７抗体（配列番号３１及び３２）と競合する、単離された抗体を投与することを含む、方法が本明細書に記載される。

【0012】

いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号９に示される配列を含むＣＤＲ－Ｈ１と、配列番号１０に示される配列を含むＣＤＲ－Ｈ２と、配列番号１１に示される配列を含むＣＤＲ－Ｈ３と、配列番号１２に示される配列を含むＣＤＲ－Ｌ１と、配列番号１３に示される配列を含むＣＤＲ－Ｌ２と、配列番号１４に示される配列を含むＣＤＲ－Ｌ３と、を含む。

【0013】

いくつかの実施形態では、抗体は、脱フコシル化されており、かつ、配列番号１に示されるＶＨ配列と、配列番号２に示されるＶＬ配列と、活性ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域と、を含む。

【0014】

いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１に示されるＶＨ配列と、配列番号２に示されるＶＬ配列と、ヒトＦｃ－サイレント領域（任意でＩｇＧ１またはＩｇＧ４アイソタイプを有し、任意でＮ２９７Ｑ変異を含む）と、を含む。

【0015】

いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号７に示される配列の３つすべての重鎖ＣＤＲと、配列番号８に示される配列の３つすべての軽鎖ＣＤＲと、を含む。

【0016】

いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号７に示される配列の位置９７にＡからＴへの置換と、配列番号７に示される配列の位置９８にＫからＲへの置換と、を含む。

【0017】

いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１、３、または５に示されるＶＨ配列を含む。

【0018】

いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１、３、または５に示されるＶＨ配列と、配列番号２、４、または６に示されるＶＬ配列と、を含む。

【0019】

いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１に示されるＶＨ配列を含む。

【0020】

いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１に示されるＶＨ配列と、配列番号２に示されるＶＬ配列と、を含む。

【0021】

いくつかの実施形態では、抗体は、３７０１２抗体である。

【0022】

いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号２５に示される重鎖配列と、配列番号２６に示される軽鎖配列と、を含む。

【0023】

別の態様では、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１５）に結合する単離された抗体であって、抗体が、マウスＴＲＥＭ２（配列番号１７）に対する結合について３７０１７抗体（配列番号３１及び３２）と競合し、活性ヒトＦｃ領域を含む、単離された抗体が本明細書に記載される。

【0024】

いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト、ヒト化、またはキメラである。

【0025】

いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト化されている。

【0026】

いくつかの実施形態では、抗体は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイによって測定される場合、約１、２、３、４、または５×１０^－９以下のＫ_ＤでヒトＴＲＥＭ２に結合する。

【0027】

いくつかの実施形態では、抗体は、ＴＲＥＭ２＋骨髄細胞、任意で非刺激性骨髄細胞を特異的に死滅させるか、枯渇させるか、または無効化することができる。

【0028】

いくつかの実施形態では、抗体は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）活性を有する。いくつかの実施形態では、抗体は、抗体媒介性細胞食作用（ＡＤＣＰ）活性を有する。いくつかの実施形態では、抗体は、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）活性を有する。

【0029】

いくつかの実施形態では、抗体は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、抗体媒介性細胞食作用（ＡＤＣＰ）活性、または補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を介して、骨髄細胞を死滅させるか、無効化するか、または枯渇させる。

【0030】

いくつかの実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体、中性抗体、アンタゴニスト抗体、アゴニスト抗体、ポリクローナル抗体、ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ３抗体、脱フコシル化抗体、二重特異性抗体、ヒト抗体、キメラ抗体、完全長抗体、及びそれらの抗原結合断片のうちの少なくとも１つである。

【0031】

いくつかの実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体である。

【0032】

いくつかの実施形態では、抗体は、多重特異性である。

【0033】

いくつかの実施形態では、抗体は、脱フコシル化されている。

【0034】

いくつかの実施形態では、抗体は、その抗原結合断片、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）_２、一本鎖抗体分子、二重可変ドメイン抗体、単一可変ドメイン抗体、線状抗体、またはＶドメイン抗体である。

【0035】

いくつかの実施形態では、抗体は、足場を含み、任意で、足場は、Ｆｃ、任意でヒトＦｃである。

【0036】

いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、及びＩｇＭから選択されるクラスの重鎖定常領域を含む。

【0037】

いくつかの実施形態では、抗体は、クラスＩｇＧ、ならびにＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４から選択されるサブクラスの重鎖定常領域を含む。

【0038】

いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１の重鎖定常領域を含む。

【0039】

いくつかの実施形態では、Ｆｃは、１つ以上の修飾を含み、１つ以上の修飾は、１つ以上の修飾を含まないＦｃと比較して、半減期の増加、ＡＤＣＣ活性の増加、ＡＤＣＰ活性の増加、またはＣＤＣ活性の増加をもたらす。

【0040】

いくつかの実施形態では、Ｆｃは、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩｃ、ＦｃγＲＩＩＩａ、及びＦｃγＲＩＩＩｂからなる群から選択されるＦｃγ受容体に結合する。

【0041】

別の態様では、線維性疾患の治療に使用するための単離された抗体が本明細書に記載される。

【0042】

別の態様では、ヒトＴＲＥＭ２に対する結合について本明細書に記載の抗体と競合する単離された抗体が本明細書に記載される。

【0043】

別の態様では、本明細書に記載の抗体によって結合されたヒトＴＲＥＭ２エピトープに結合する単離された抗体が本明細書に記載される。

【0044】

別の態様では、本明細書に記載の抗体、そのＶ_Ｈ、そのＶ_Ｌ、その軽鎖、その重鎖、またはそれらの抗原結合部分をコードする単離されたポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドのセット、任意でｃＤＮＡが本明細書に記載される。

【0045】

別の態様では、本明細書に記載のポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドのセットを含むベクターまたはベクターのセットが本明細書に記載される。

【0046】

別の態様では、本明細書に記載のポリヌクレオチドもしくはポリヌクレオチドのセット、または本明細書に記載のベクターまたはベクターのセットを含む、宿主細胞が本明細書に記載される。

【0047】

別の態様では、本明細書に記載の宿主細胞により抗体を発現させることと、発現された抗体を単離することと、を含む、抗体を産生する方法が本明細書に記載される。

【0048】

別の態様では、本明細書に記載の抗体と、薬学的に許容される賦形剤と、を含む、薬学的組成物が本明細書に記載される。

【0049】

別の態様では、線維性疾患または状態を治療または予防することを必要とする対象においてそれを行う方法であって、対象に、例えば、有効量の本明細書に記載のＴＲＥＭ２に結合する抗体または薬学的組成物を投与することを含む、方法が本明細書に記載される。

【0050】

いくつかの実施形態では、疾患または状態は、肝疾患である。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞を死滅させるか、無効化するか、または枯渇させることは、肝疾患を治療する。いくつかの実施形態では、肝疾患は、線維症、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、または非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）である。いくつかの実施形態では、疾患は、がんではない。

【0051】

いくつかの実施形態では、抗体は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、抗体媒介性細胞食作用（ＡＤＣＰ）活性、または補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を介して、骨髄細胞を死滅させるか、無効化するか、または枯渇させる。いくつかの実施形態では、抗体は、受容体リガンド遮断活性、アゴニズム活性、またはアンタゴニズム活性を有する。

【0052】

いくつかの実施形態では、対象はヒトである。

【0053】

いくつかの実施形態では、接触させることは、対象における免疫応答を増強する。いくつかの実施形態では、増強された免疫応答は、適応免疫応答である。いくつかの実施形態では、増強された免疫応答は、自然免疫応答である。

【0054】

いくつかの実施形態では、抗体は、ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、及びＡＤＣＰのうちの少なくとも１つによって骨髄細胞を死滅させる。いくつかの実施形態では、抗体は、ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、及びＡＤＣＰのうちの少なくとも１つによって骨髄細胞を無効化する。いくつかの実施形態では、抗体は、ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、及びＡＤＣＰのうちの少なくとも１つによって骨髄細胞を枯渇させる。いくつかの実施形態では、抗体は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）活性を有する。いくつかの実施形態では、抗体は、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）活性を有する。いくつかの実施形態では、抗体は、抗体媒介性食作用（ＡＤＣＰ）活性を有する。いくつかの実施形態では、抗体は、受容体リガンド遮断活性、アゴニズム活性、またはアンタゴニズム活性を有する。

【0055】

いくつかの実施形態では、骨髄細胞は、刺激性骨髄細胞である。いくつかの実施形態では、骨髄細胞は、非刺激性骨髄細胞である。いくつかの実施形態では、骨髄細胞は、樹状細胞、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）、好中球、または単球のうちの少なくとも１つを含む。いくつかの実施形態では、骨髄細胞は、好中球である。いくつかの実施形態では、骨髄細胞は、腫瘍関連マクロファージである。いくつかの実施形態では、骨髄細胞は、刺激性骨髄細胞及び非刺激性骨髄細胞を含む免疫細胞の集団内にある。いくつかの態様では、骨髄細胞は、ＴＲＥＭ２＋骨髄細胞である。いくつかの態様では、ＴＲＥＭ２＋骨髄細胞は、ＴＲＥＭ２＋マクロファージ、ＴＲＥＭ２＋ＣＤ９＋マクロファージ、マクロファージ、瘢痕関連マクロファージ（ＳＡＭ）、樹状細胞、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）、好中球、または単球のうちの少なくとも１つを含む。

【0056】

いくつかの実施形態では、接触させることは、対象における免疫応答を増強する。いくつかの実施形態では、増強された免疫応答は、適応免疫応答である。いくつかの実施形態では、増強された免疫応答は、自然免疫応答である。

【0057】

いくつかの実施形態では、対象は、免疫療法を以前に受けたことがあるか、同時に受けているか、または後に受けることになる。

【0058】

別の態様では、線維性疾患を有する対象のＴＲＥＭ２＋骨髄細胞を死滅させるか、無効化するか、または枯渇させる方法であって、骨髄細胞を、抗ＴＲＥＭ２抗体（例えば、本明細書に記載されるもの）または本明細書に記載の薬学的組成物と接触させることを含む、方法が本明細書に記載される。

【0059】

いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞を死滅させるか、無効化するか、または枯渇させることは、線維性疾患に対する免疫応答を増強することによって線維症を治療する。

【0060】

別の態様では、疾患もしくは状態を有するか、または有することが疑われる対象においてＴＲＥＭ２を検出する方法であって、本方法が、（ａ）対象からの試料を受け取ることと、（ｂ）試料を本明細書に記載の抗体と接触させることによって、試料中のＴＲＥＭ２の存在またはレベルを検出することと、を含む、方法が本明細書に記載される。

【0061】

いくつかの実施形態では、疾患または状態は、肝疾患である。

【0062】

別の態様では、本明細書に開示される抗体または薬学的組成物と、使用説明書と、を含む、キットが本明細書に記載される。

【図面の簡単な説明】

【0063】

【図1】Ｈ＆Ｅ染色に加えて、抗ＣＤ６８を使用してマクロファージについても組織を染色した。細胞内マーカーＣＤ６８は、炎症組織及び腫瘍における単球／マクロファージを免疫染色するための信頼性の高い細胞化学マーカーとして文献で広く使用されている。肺（パネルＥ）において、また、分析された他の組織において、対照と比較して、治療群のいずれにおいても、ＣＤ６８＋マクロファージ数の識別可能な変化は観察されず、このことは、抗ＴＲＥＭ２媒介性の枯渇が、ＴＭＥにおいて特異的に生じたことを示している。

【0064】

【図2A】示された治療群からのＦＦＰＥ肺組織の抗ＣＤ６８染色。

【図2B】各セクションの８～９個のフィールドを、光学顕微鏡による定量化に使用した。

【0065】

【図3-1】選択された組織中の細胞では、ＴＲＥＭ２発現が欠如していたか、または非常に低かった。網掛けしたヒストグラムは、ＴＲＥＭ２ＫＯからのものであり、白色のヒストグラムは、野生型マウスからのものである。抗ＴＲＥＭ２染色に使用した抗体は、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ製のクローン２３７９２０であった。

【図3-2】図３－１の説明を参照。

【0066】

【図4】ＴＲＥＭ２の細胞表面発現（白色のヒストグラム）は、ＭＣ３８及びＣＴ２６腫瘍の両方内の顆粒球性または単球性のＭＤＳＣと比較して、ＴＡＭで著しく高かった。リンパ球は、ＴＲＥＭ２を発現しない。アイソタイプ対照染色は、灰色で塗りつぶされたヒストグラムで示される。

【0067】

【図5】ＴＲＥＭ２の細胞表面発現（白色のヒストグラム）は、任意のＰＢＭＣサブセットと比較して、ＣＤ１４由来マクロファージで著しく高かった。ヒトＰＢＭＣまたはマクロファージを、ＴＲＥＭ２（白色のヒストグラム）またはアイソタイプ対照（灰色のヒストグラム）のいずれかについて表面染色した。ＰＢＭＣサブセットを、事前に検証された多色ＦＡＣＳパネルを使用して、好中球、単球、またはＴ細胞として識別した。

【0068】

【図6】ＴＲＥＭ２の細胞表面発現（白色のヒストグラム）は、他の浸潤物または非ＣＤ４５陽性細胞と比較して、ＴＡＭで著しく高かった。ヒト腫瘍組織からの単細胞懸濁液を、ＴＲＥＭ２（白色のヒストグラム）またはアイソタイプ対照（灰色のヒストグラム）のいずれかについて表面染色した。免疫サブセット及び非免疫サブセットを、事前に検証された多色ＦＡＣＳパネルを使用して識別した。

【0069】

【図7】乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）放出によって測定される相対細胞傷害性パーセントは、複数のＡｂ濃度にわたってアイソタイプ対照Ａｂで治療された細胞と比較して、脱フコシル化抗ＴＲＥＭ２ ｍＡｂ（ＰＩ３７０１２）で治療された標的ＨＥＫ－２９３細胞において著しく高かった。

【0070】

【図8】ＡＤＣＣ誘導の代替物としてのＮＦＡＴレポーター活性を測定する相対発光は、脱フコシル化抗ＴＲＥＭ２ ｍＡｂ（Ａｆｕｃ－ＰＩ－７０１２）及び非脱フコシル化抗ＴＲＥＭ２ ｍＡｂ（ＰＩ－７０１２）の濃度を増加させつつ治療された細胞において用量依存的な増加を示した。任意の濃度のＦｃ－サイレントｍＡｂで治療された細胞において、測定可能な相対発光は観察されなかった。

【0071】

【図9】左パネルに、アイソタイプ対照ＩｇＧ２ａ抗体または脱フコシル化抗ＴＲＥＭ２ ｍＡｂ（Ａｆｕｃ－ＰＩ－７０１２）による治療後のマウス肝臓細胞のＨ＆Ｅ染色を提供する。右パネルに、アイソタイプ対照ＩｇＧ２ａ抗体、脱フコシル化抗ＴＲＥＭ２ ｍＡｂ（Ａｆｕｃ－ＰＩ－７０１２）、またはＯＣＡによる治療後のマウス肝臓におけるコラーゲン減少を提供する。未治療マウスまたはＩｇＧ２ａ治療マウスと比較して、脱フコシル化抗ＴＲＥＭ２ ｍＡｂ（Ａｆｕｃ－ＰＩ－７０１２）で治療されたマウスにおいて、線維症における統計的に有意な減少（＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）が観察された。

【発明を実施するための形態】

【0072】

詳細な説明
本明細書を解釈する目的において、以下の定義が適用され、適当な場合はいつでも、単数形で使用される用語は複数形も含み、その逆も同様である。以下に記載されている定義が参照により本明細書に組み込まれる文書と矛盾する場合、記載されている定義が優先されるものとする。

【0073】

本明細書に記載される本発明の態様及び実施形態が、態様及び実施形態「を含む」、「からなる」、及び「から本質的になる」を含むことが理解される。

【0074】

本明細書に記載のすべての組成物、及び本明細書に記載の組成物を使用するすべての方法について、組成物は、列挙された構成要素またはステップを含むことができるか、または列挙された構成要素もしくはステップ「から本質的になる」ことができる。組成物が、列挙される構成要素「から本質的になる」と記載される場合、その組成物は、列挙される構成要素を含有し、治療されている状態に実質的に影響を与えない他の構成要素を含有してもよいが、明示的に列挙される構成要素以外の治療される状態に実質的に影響を与える他の構成要素を含有せず、あるいは、組成物が、治療されている状態に実質的に影響を与える列挙される構成要素以外の余分な構成要素を含有しない場合、その組成物は、治療されている状態に実質的に影響を与えるのに十分な濃度または量の余分な構成要素を含有しない。ある方法が、列挙されたステップ「から本質的になる」と記載される場合、その方法は、列挙されたステップを含み、治療されている状態に実質的に影響を与えない他のステップを含んでいてもよいが、その方法は、明示的に列挙されたそれらのステップ以外の治療されている状態に実質的に影響を与える他のステップを含有しない。非限定的な具体例として、組成物が、ある構成要素「から本質的になる」と記載される場合、その組成物は、治療されている状態に実質的に影響を及ぼさない任意の量の薬学的に許容される担体、ビヒクル、または希釈剤、及び他のそのような構成要素をさらに含んでもよい。

【0075】

「任意で」という用語は、連続して使用される場合、列挙された組み合わせのうちの１つからすべてを含むことを意味し、すべての部分的な組み合わせを企図する。

【0076】

本明細書で使用される「有効量」または「治療有効量」は、単回用量または一連の用量の一部としてのいずれかで個体に投与される抗ＴＲＥＭ２抗原結合剤または抗ＴＲＥＭ２抗体などの治療化合物の量を指し、これは、単独で、または別の治療モダリティと組み合わせて、所望の治療効果をもたらすか、またはそれに寄与するのに有効なものである。所望の治療効果の例は、免疫応答の増強、疾患の安定化、１つ以上の症状の改善である。有効量は、１回以上の投薬量で与えられ得る。

【0077】

本明細書で使用される「治療すること」という用語は、状態の進行を遅延または逆転させることを指す。本明細書で使用される「治療すること」という用語はまた、線維性疾患などの状態の進行を遅延または逆転させることを指す。「治療」という用語は、本明細書で使用される場合、線維性疾患などの状態を治療する行為も指す。

【0078】

線維性疾患または線維症は、細胞外マトリックス分子の蓄積である。この蓄積は、慢性組織損傷の共通の特徴である瘢痕組織または瘢痕領域を構成し得る。線維症の例としては、肺線維症、腎線維症、及び肝硬変が挙げられる。線維症の影響を受ける可能性のある臓器には、肝臓、肺、腎臓、及び皮膚が含まれる。線維性疾患は、ＮＡＳＨなどの肝疾患を含み得る。

【0079】

本明細書で使用される「個体」または「対象」は、ヒト、家畜及び農場動物、ならびにイヌ、ウマ、ウサギ、ウシ、ブタ、ハムスター、カワウソ、マウス、フェレット、ラット、ネコなどの動物園動物、スポーツ動物、またはペット動物を含む、哺乳動物として分類される任意の動物を指す。いくつかの実施形態では、個体は、ヒトである。いくつかの実施形態では、個体は、マウスである。

【0080】

「調節する」及び「調節」という用語は、列挙された変数を低減または阻害する、または代替的に、活性化または増加させることを指す。

【0081】

「増加させる」及び「活性化する」という用語は、列挙された変数における１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍以上の増加を指す。

【0082】

「低減させる」及び「阻害する」という用語は、列挙された変数における１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍以上の減少を指す。

【0083】

「アゴナイズする」という用語は、受容体の活性化に関連する生物学的応答を誘導するための受容体シグナル伝達の活性化を指す。「アゴニスト」は、受容体に結合し、受容体をアゴナイズする実体である。

【0084】

「アンタゴナイズする」という用語は、受容体の活性化に関連する生物学的応答を阻害するための受容体シグナル伝達の阻害を指す。「アンタゴニスト」は、受容体に結合し、受容体をアンタゴナイズする実体である。

【0085】

本明細書で使用される「約」という用語は、この技術分野の当業者であれば容易に理解するそれぞれの値の通常の誤差範囲を指す。例示的な誤差範囲は、±５％である。本明細書における「約」値またはパラメータへの言及は、その値またはパラメータ自体を対象とする実施形態を含む（かつ説明する）。

【0086】

本明細書及び添付の特許請求の範囲において使用される場合、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、及び「その（ｔｈｅ）」は、文脈によってそうでない旨が明示されない限り、複数の指示対象を含む点に留意されなければならない。

【0087】

本明細書に記載される構造特性及び機能特性のいずれについても、これらの特性を決定する方法は、当該技術分野で既知である。

【0088】

抗体
構造
本出願は、非刺激性骨髄細胞を無効化する抗体を含むＴＲＥＭ２タンパク質に結合する抗体を含む、抗体及び組成物を提供する。

【0089】

「抗体」という用語は、その最も広い意味で本明細書で使用され、抗原またはエピトープに特異的に結合する１つ以上の抗原結合ドメインを含む特定の種類の免疫グロブリン分子を含む。抗体は、無傷の抗体（例えば、無傷の免疫グロブリン）、抗体断片、及び多重特異性抗体を特異的に含む。

【0090】

認識されている免疫グロブリン遺伝子には、カッパ、ラムダ、アルファ、ガンマ、デルタ、イプシロン及びミュー定常領域遺伝子、ならびに無数の免疫グロブリン可変領域遺伝子が含まれる。軽鎖は、カッパまたはラムダのいずれかに分類される。抗体または免疫グロブリンの「クラス」は、その重鎖によって保有される定常ドメインまたは定常領域の種類を指す。抗体には、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭの５つの主要なクラスがあり、これらのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、ＩｇＧ_４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ_２にさらに分割され得る。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインはそれぞれ、α、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。

【0091】

例示的な免疫グロブリン（抗体）構造単位は、２つのポリペプチド鎖対から構成され、各対は、１つの「軽」鎖（約２５ｋＤ）と、１つの「重」鎖（約５０～７０ｋＤ）とを有する。各鎖のＮ末端ドメインは、抗原認識に主に関与する約１００～１１０以上のアミノ酸の可変領域を定義する。可変軽鎖（ＶＬ）及び可変重鎖（ＶＨ）という用語は、それぞれ、これらの軽鎖ドメイン及び重鎖ドメインを指す。ＩｇＧ１重鎖は、Ｎ末端からＣ末端まで、それぞれ、ＶＨ、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３ドメインを含む。軽鎖は、Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＬドメイン及びＣＬドメインを含む。ＩｇＧ１重鎖は、ＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインとの間にヒンジを含む。ある特定の実施形態では、免疫グロブリン構築物は、治療用ポリペプチドに接続されたＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、またはＩｇＥ由来の少なくとも１つの免疫グロブリンドメインを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体中に見出される免疫グロブリンドメインは、ダイアボディまたはナノボディなどの免疫グロブリン系の構築物からのものであるか、またはそれに由来する。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の免疫グロブリン構築物は、ラクダ科抗体などの重鎖抗体由来の少なくとも１つの免疫グロブリンドメインを含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される免疫グロブリン構築物は、ウシ抗体、ヒト抗体、ラクダ科抗体、マウス抗体、または任意のキメラ抗体などの哺乳動物抗体由来の少なくとも１つの免疫グロブリンドメインを含む。

【0092】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、重鎖を含む。一実施形態では、重鎖は、ＩｇＡである。一実施形態では、重鎖は、ＩｇＤである。一実施形態では、重鎖は、ＩｇＥである。一実施形態では、重鎖は、ＩｇＧである。一実施形態では、重鎖は、ＩｇＭである。一実施形態では、重鎖は、ＩｇＧ１である。一実施形態では、重鎖は、ＩｇＧ２である。一実施形態では、重鎖は、ＩｇＧ３である。一実施形態では、重鎖は、ＩｇＧ４である。一実施形態では、重鎖は、ＩｇＡ１である。一実施形態では、重鎖は、ＩｇＡ２である。

【0093】

「超可変領域」または「ＨＶＲ」という用語は、本明細書で使用される場合、配列が超可変である、及び／または構造的に定義されたループ（「超可変ループ」）を形成する抗体可変ドメインの各領域を指す。一般に、天然４本鎖抗体は、６つのＨＶＲを含み、３つはＶＨ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）中にあり、３つはＶＬ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）中にある。ＨＶＲは、一般に、超可変ループ及び／または相補性決定領域（ＣＤＲ）からのアミノ酸残基を含み、後者は最高の配列可変性のものであり、及び／または抗原認識に関与する。ＶＨにおけるＣＤＲ１を除いて、ＣＤＲは一般に、超可変ループを形成するアミノ酸残基を含む。超可変領域（ＨＶＲ）は、「相補性決定領域」（ＣＤＲ）とも称され、これらの用語は、本明細書において、抗原結合領域を形成する可変領域の部分を参照して互換的に使用される。この特定の領域は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（１９８３）及びＣｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １９６：９０１－９１７（１９８７）によって記載されており、定義には、互いに対して比較した場合のアミノ酸残基の重複またはサブセットが含まれる。それにもかかわらず、抗体またはそのバリアントのＣＤＲを指すいずれかの定義の適用は、本明細書で定義され、使用される用語の範囲内であることが意図される。特定のＣＤＲを包含する正確な残基の数は、ＣＤＲの配列及びサイズに応じて変動するであろう。当業者であれば、抗体の可変領域アミノ酸配列を考慮して、どの残基が特定のＣＤＲを含むかを日常的に決定することができる。

【0094】

ＣＤＲのアミノ酸配列境界は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（上記）（「Ｋａｂａｔ」付番スキーム）、Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２７３：９２７－９４８（「Ｃｈｏｔｈｉａ」付番スキーム）、ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２－７４５（Ｃｏｎｔａｃｔ」付番スキーム）、Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００３，２７：５５－７７（「ＩＭＧＴ」付番スキーム）、及びＨｏｎｅｇｇｅ ａｎｄ Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２００１，３０９：６５７－７０（「ＡＨｏ」付番スキーム）（これらの各々は、参照によりその全体が組み込まれる）によって記載されるものを含め、いくつかの既知の付番スキームのいずれかを使用して、当業者によって決定され得る。

【0095】

表Ａは、Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａスキームによって特定されるように、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３の位置を提供する。ＣＤＲ－Ｈ１については、Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａの両方の付番スキームを使用して、残基の付番が提供される。

【0096】

ＣＤＲは、例えば、ｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ／ａｂｎｕｍ／で利用可能であり、参照によりその全体が組み込まれるＡｂｈｉｎａｎｄａｎ ａｎｄ Ｍａｒｔｉｎ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２００８，４５：３８３２－３８３９に記載されるＡｂｎｕｍなどの抗体付番ソフトウェアを使用して、割り当てられてもよい。

【0097】

【表A】

【0098】

「ＥＵ付番スキーム」は、一般に、抗体重鎖定常領域内の残基を指す場合に使用される（例えば、上記のＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．に報告される通り）。別段の記載がない限り、ＥＵ付番スキームは、本明細書に記載される抗体重鎖定常領域中の残基を指すために使用される。

【0099】

本明細書で使用される場合、「一本鎖」という用語は、ペプチド結合によって直鎖状に連結されたアミノ酸モノマーを含む分子を指す。特定のそのような実施形態では、Ｆａｂ軽鎖のＣ末端は、一本鎖Ｆａｂ分子中のＦａｂ重鎖のＮ末端に接続される。本明細書でより詳細に記載されるように、ｓｃＦｖは、ポリペプチド鎖によって重鎖（ＶＨ）の可変ドメインのそのＣ末端からＮ末端に接続された軽鎖（ＶＬ）の可変ドメインを有する。代替的に、ｓｃＦｖは、ポリペプチド鎖を含み、ＶＨのＣ末端が、ポリペプチド鎖によってＶＬのＮ末端に接続されている。

【0100】

「Ｆａｂ断片」（断片抗原結合とも称される）は、軽鎖の定常ドメイン（ＣＬ）及び重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）を、それぞれ、軽鎖及び重鎖上の可変ドメインＶＬ及びＶＨとともに含有する。可変ドメインは、抗原結合に関与する相補性決定ループ（ＣＤＲ、超可変領域とも称される）を含む。Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域からの１つ以上のシステインを含む重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端にいくつかの残基を付加することによって、Ｆａｂ断片とは異なる。

【0101】

「Ｆ（ａｂ’）_２」断片は、ジスルフィド結合によってヒンジ領域の近くで接続された２つのＦａｂ’断片を含有する。Ｆ（ａｂ’）_２断片は、例えば、組換え方法によって、または無傷の抗体のペプシン消化によって、生成され得る。Ｆ（ａｂ’）断片は、例えば、β－メルカプトエタノールで処理することによって解離させることができる。

【0102】

「Ｆｖ」断片は、１つの重鎖可変ドメイン及び１つの軽鎖可変ドメインの非共有結合した二量体を含む。

【0103】

「一本鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」は、抗体のＶＨドメイン及びＶＬドメインを含み、これらのドメインは、単一のポリペプチド鎖に存在する。一実施形態では、Ｆｖポリペプチドは、ｓｃＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成することを可能にするポリペプチドリンカーをＶＨドメインとＶＬドメインとの間にさらに含む。ｓｃＦｖの総説については、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９－３１５（１９９４）を参照されたい。ＨＥＲ２抗体ｓｃＦｖ断片は、ＷＯ９３／１６１８５、米国特許第５，５７１，８９４号、及び米国特許第５，５８７，４５８号に記載されている。

【0104】

「ｓｃＦｖ－Ｆｃ」断片は、Ｆｃドメインに接続したｓｃＦｖを含む。例えば、Ｆｃドメインは、ｓｃＦｖのＣ末端に接続し得る。Ｆｃドメインは、ｓｃＦｖ内の可変ドメインの配向（すなわち、Ｖ_Ｈ－Ｖ_ＬまたはＶ_Ｌ－Ｖ_Ｈ）に応じて、Ｖ_ＨまたはＶ_Ｌに続いてもよい。当該技術分野で既知であるか、または本明細書に記載される任意の好適なＦｃドメインを使用し得る。ある場合には、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ４ Ｆｃドメインを含む。

【0105】

「単一ドメイン抗体」または「ｓｄＡｂ」という用語は、抗体の一方の可変ドメインが他方の可変ドメインの存在なしに抗原に特異的に結合する分子を指す。単一ドメイン抗体、及びその断片は、Ａｒａｂｉ Ｇｈａｈｒｏｕｄｉ ｅｔ ａｌ．，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ，１９９８，４１４：５２１－５２６及びＭｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．，２００１，２６：２３０－２４５に記載され、これらの各々は参照によりその全体が組み込まれる。単一ドメイン抗体は、ｓｄＡｂまたはナノボディとしても知られている。Ｓｄａｂは、かなり安定しており、抗体のＦｃ鎖との融合パートナーとして発現しやすい（Ｈａｒｍｓｅｎ ＭＭ，Ｄｅ Ｈａａｒｄ ＨＪ（２００７）．“Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，ａｎｄ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｃａｍｅｌｉｄ ｓｉｎｇｌｅ－ｄｏｍａｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｆｒａｇｍｅｎｔｓ”．Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．７７（１）：１３－２２）。

【0106】

「完全長抗体」、「インタクト抗体」、及び「全抗体」という用語は、本明細書において互換的に使用され、天然に存在する抗体構造と実質的に類似した構造を有し、Ｆｃ領域を含む重鎖を有する抗体を指す。例えば、ＩｇＧ分子を指すために使用される場合、「完全長抗体」は、２本の重鎖及び２本の軽鎖を含む抗体である。

【0107】

「エピトープ」という用語は、抗体に特異的に結合する抗原の一部分を意味する。エピトープは、多くの場合、表面アクセス可能なアミノ酸残基及び／または糖側鎖からなり、特異的三次元構造特性及び特異的電荷特性を有し得る。立体配座エピトープ及び非立体配座エピトープは、変性溶媒の存在下で前者に対する結合は失われ得るが、後者に対する結合は失われないという点で識別される。エピトープは、結合に直接関与するアミノ酸残基、及び結合に直接関与しない他のアミノ酸残基を含み得る。抗体が結合するエピトープは、例えば、異なる点変異を有するＴＲＥＭ２バリアントに対する抗体結合の試験、またはキメラＴＲＥＭ２バリアントに対する抗体結合の試験などのエピトープ決定のための既知の技術を使用して決定することができる。

【0108】

「多重特異性抗体」は、２つ以上の異なるエピトープに集合的に特異的に結合する２つ以上の異なる抗原結合ドメインを含む抗体である。２つ以上の異なるエピトープは、同じ抗原（例えば、細胞によって発現される単一のＴＲＥＭ２分子）上のエピトープであってもよく、または異なる抗原（例えば、同じ細胞によって発現される異なるＴＲＥＭ２分子、もしくはＴＲＥＭ２分子及び非ＴＲＥＭ２分子）上のエピトープであってもよい。いくつかの態様では、多重特異性抗体は、２つの異なるエピトープに結合する（すなわち、「二重特異性抗体」）。いくつかの態様では、多重特異性抗体は、３つの異なるエピトープに結合する（すなわち、「三重特異性抗体」）。

【0109】

「単一特異性抗体」は、単一のエピトープに特異的に結合する１つ以上の結合部位を含む抗体である。単一特異性抗体の一例は、二価であるが（すなわち、２つの抗原結合ドメインを有する）、２つの抗原結合ドメインの各々で同じエピトープを認識する天然に存在するＩｇＧ分子である。結合特異性は、任意の好適な価数で存在してもよい。

【0110】

「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均質な抗体の集団由来の抗体を指す。実質的に均一な抗体の集団は、モノクローナル抗体の産生中に通常生じ得るバリアントを除いて、実質的に類似しており、同じエピトープ（複数可）に結合する抗体を含む。かかるバリアントは、一般に、わずかな量でのみ存在する。モノクローナル抗体は、典型的には、複数の抗体から単一の抗体を選択することを含む工程によって得られる。例えば、選択工程は、ハイブリドーマクローン、ファージクローン、酵母クローン、細菌クローン、または他の組換えＤＮＡクローンのプールなどの複数のクローンからの固有のクローンの選択であり得る。選択された抗体は、例えば、標的に対する親和性（「親和性成熟」）を改善するために、抗体をヒト化するために、細胞培養物におけるその産生を改善するために、及び／または対象におけるその免疫原性を低減するために、さらに改変され得る。

【0111】

「エフェクター機能」とは、抗体のＦｃ領域によって媒介される生物学的活性を指し、その活性は、抗体アイソタイプに応じて変動し得る。抗体エフェクター機能の例としては、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を活性化するためのＣ１ｑ結合、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を活性化するためのＦｃ受容体結合、及び抗体媒介性細胞食作用（ＡＤＣＰ）、受容体リガンド遮断、またはアンタゴニズムが挙げられる。

【0112】

抗ＴＲＥＭ２抗体は、表に示されるクローンなどの本明細書に記載されるものを含み得る。いくつかの実施形態では、抗体は、代替的な足場を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、代替的な足場からなる。いくつかの実施形態では、抗体は、本質的に代替的な足場からなる。いくつかの実施形態では、抗体は、抗体断片を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、抗体断片からなる。いくつかの実施形態では、抗体は、本質的に抗体断片からなる。「ＴＲＥＭ２抗体」、「抗ＴＲＥＭ２抗体」、または「ＴＲＥＭ２特異的抗体」は、本明細書で提供される場合、抗原ＴＲＥＭ２に特異的に結合する抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、ＴＲＥＭ２の細胞外ドメインに結合する。ある特定の実施形態では、本明細書で提供されるＴＲＥＭ２抗体は、異なる種に由来するＴＲＥＭ２タンパク質間で、またはそれらにわたって保存されるＴＲＥＭ２のエピトープに結合する。

【0113】

「キメラ抗体」という用語は、重鎖及び／または軽鎖の一部分が特定の供給源もしくは種に由来し、一方で、重鎖及び／または軽鎖の残りが異なる供給源もしくは種に由来する抗体を指す。

【0114】

非ヒト抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト抗体に由来する最小限の配列を含有するキメラ抗体である。ヒト化抗体は、一般に、１つ以上のＣＤＲ由来の残基が、非ヒト抗体（ドナー抗体）の１つ以上のＣＤＲ由来の残基によって置き換えられるヒト抗体（レシピエント抗体）である。ドナー抗体は、所望の特異性、親和性、または生物学的効果を有する、任意の好適な非ヒト抗体、例えば、マウス、ラット、ウサギ、ニワトリ、または非ヒト霊長類抗体であり得る。ヒト化抗体は、ヒト対象に投与されるとき、非ヒト種抗体と比較して、免疫応答を誘導する可能性が低く、及び／またはそれほど重症ではない免疫応答を誘導する。いくつかの場合では、レシピエント抗体の選択されたフレームワーク領域残基は、ドナー抗体由来の対応するフレームワーク領域残基によって置き換えられる。ヒト化抗体はまた、レシピエント抗体またはドナー抗体のいずれにも見られない残基を含んでもよい。かかる修飾は、抗体機能をさらに微調整するために行われ得る。ヒト化抗体を作製する方法の例は、それらの各々が参照によりその全体が組み込まれる米国特許第６，０５４，２９７号、同第５，８８６，１５２号及び同第５，８７７，２９３号に見出すことができる。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９８６，３２１：５２２－５２５、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９８８，３３２：３２３－３２９、及びＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，１９９２，２：５９３－５９６（その各々が、参照によりその全体が組み込まれる）を参照されたい。

【0115】

一実施形態では、ヒト抗体由来の定常ドメイン（複数可）は、非ヒト種の可変ドメイン（複数可）に融合される。別の実施形態では、非ヒト抗体の１つ以上のＣＤＲ配列内の１つ以上のアミノ酸残基は、ヒト対象に投与されるときに、非ヒト抗体の免疫原性の可能性を低減するように変更され、変更されたアミノ酸残基は、抗体のその抗原に対する免疫特異的結合にとって重要ではないか、または作製されるアミノ酸配列への変化は、保存的な変化のいずれかであるため、ヒト化抗体の抗原に対する結合は、非ヒト抗体の抗原に対する結合よりも著しく悪くはない。

【0116】

「ヒト抗体」は、ヒトもしくはヒト細胞によって産生される抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列、またはヒト抗体レパートリーもしくはヒト抗体コード配列を利用する非ヒト源に由来するアミノ酸配列（例えば、ヒト源から得られるか、もしくは新規に設計される）を有するものである。ヒト抗体は、ヒト化抗体を特異的に除外する。一実施形態では、可変ドメイン及び定常ドメインのすべてが、ヒト免疫グロブリン配列（完全ヒト抗体）に由来する。これらの抗体は、ヒト重鎖及び／または軽鎖をコードする遺伝子に由来する抗体を発現するように遺伝子改変されるマウスの目的の抗原による免疫付与によるものを含む様々な方式で調製され得る。

【0117】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、抗体断片を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、抗体断片からなる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、本質的に抗体断片からなる。いくつかの実施形態では、抗体断片は、Ｆｖ断片である。いくつかの実施形態では、抗体断片は、Ｆａｂ断片である。いくつかの実施形態では、抗体断片は、Ｆ（ａｂ’）_２断片である。いくつかの実施形態では、抗体断片は、Ｆａｂ’断片である。いくつかの実施形態では、抗体断片は、ｓｃＦｖ（ｓＦｖ）断片である。いくつかの実施形態では、抗体断片は、ｓｃＦｖ－Ｆｃ断片である。いくつかの実施形態では、抗体断片は、単一ドメイン抗体の断片である。

【0118】

ＴＲＥＭ２抗体の配列
Ｖ_Ｈドメイン
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号１、３、５、及び７から選択されるＶ_Ｈ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号１のＶ_Ｈ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号３のＶ_Ｈ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号５のＶ_Ｈ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号７のＶ_Ｈ配列を含む。

【0119】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号１、３、５、及び７で提供される例解的なＶ_Ｈ配列に対して少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するＶ_Ｈ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号１、３、５、及び７で提供され、最大で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５個のアミノ酸置換を有するＶ_Ｈ配列を含む。いくつかの態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載の抗体は、本明細書では「バリアント」と称される。いくつかの実施形態では、そのようなバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当該技術分野で既知であるか、もしくは本明細書に記載の任意の他の方法によって、本明細書で提供される配列に由来する。いくつかの実施形態では、そのようなバリアントは、本明細書で提供される配列に由来せず、例えば、抗体を得るために本明細書で提供される方法に従って、新たに（ｄｅ ｎｏｖｏ）単離され得る。

【0120】

Ｖ_Ｌドメイン
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号２、４、６、及び８から選択されるＶ_Ｌ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号２のＶ_Ｌ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号４のＶ_Ｌ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号６のＶ_Ｌ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号８のＶ_Ｌ配列を含む。

【0121】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号２、４、６、及び８で提供される例解的なＶ_Ｌ配列に対して少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するＶ_Ｌ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号２、４、６、及び８で提供され、最大で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５個のアミノ酸置換を有するＶ_Ｌ配列を含む。いくつかの態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載の抗体は、本明細書では「バリアント」と称される。いくつかの実施形態では、そのようなバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当該技術分野で既知であるか、もしくは本明細書に記載の任意の他の方法によって、本明細書で提供される配列に由来する。いくつかの実施形態では、そのようなバリアントは、本明細書で提供される配列に由来せず、例えば、抗体を得るために本明細書で提供される方法に従って、新たに（ｄｅ ｎｏｖｏ）単離され得る。

【0122】

Ｖ_Ｈ－Ｖ_Ｌの組み合わせ
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号１、３、５、及び７から選択されるＶ_Ｈ配列と、配列番号２、４、６、及び８から選択されるＶ_Ｌ配列と、を含む。

【0123】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号１のＶ_Ｈ配列と、配列番号２のＶ_Ｌ配列と、を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号３のＶ_Ｈ配列と、配列番号４のＶ_Ｌ配列と、を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号５のＶ_Ｈ配列と、配列番号６のＶ_Ｌ配列と、を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号７のＶ_Ｈ配列と、配列番号８のＶ_Ｌ配列と、を含む。特定の態様では、配列番号１、３、５、及び７のいずれかを、配列番号２、４、６、及び８のいずれかと組み合わせることができる。例えば、配列番号１を、配列番号２、４、６、または８のいずれかと組み合わせることができる。別の例として、配列番号２を、配列番号１、３、５、または７のいずれかと組み合わせることができる。

【0124】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号１、３、５、及び７で提供される例解的なＶ_Ｈ配列に対して少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するＶ_Ｈ配列と、配列番号２、４、６、及び８で提供される例解的なＶＬ配列に対して少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するＶ_Ｌ配列と、を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号１、３、５、及び７で提供され、最大で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５個のアミノ酸置換を有するＶＨ配列と、配列番号２、４、６、及び８で提供され、最大で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５個のアミノ酸置換を有するＶＬ配列と、を含む。いくつかの態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載の抗体は、本明細書では「バリアント」と称される。いくつかの実施形態では、そのようなバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当該技術分野で既知であるか、もしくは本明細書に記載の任意の他の方法によって、本明細書で提供される配列に由来する。いくつかの実施形態では、そのようなバリアントは、本明細書で提供される配列に由来せず、例えば、抗体を得るために本明細書で提供される方法に従って、新たに（ｄｅ ｎｏｖｏ）単離され得る。

【0125】

ＣＤＲ
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号１、３、５、及び７から選択されるＶ_Ｈドメインの１～３個のＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号１、３、５、及び７から選択されるＶ_Ｈドメインの２～３個のＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号１、３、５、及び７から選択されるＶＨドメインの３個のＣＤＲを含む。いくつかの態様では、ＣＤＲは、例示的なＣＤＲである。いくつかの態様では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ ＣＤＲである。いくつかの態様では、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲである。いくつかの態様では、ＣＤＲは、ＡｂＭ ＣＤＲである。いくつかの態様では、ＣＤＲは、Ｃｏｎｔａｃｔ ＣＤＲである。いくつかの態様では、ＣＤＲは、ＩＭＧＴ ＣＤＲである。

【0126】

Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、Ｃｏｎｔａｃｔ、及びＩＭＧＴを使用して定義される配列番号１のＶＨ及び配列番号２のＶＬのＣＤＲを以下の表Ｂに示す。ＶＨの例示的なＣＤＲは、配列番号９、１０、及び１１として提供される。ＶＬの例示的なＣＤＲは、配列番号１２、１３、及び１４として提供される。

【0127】

【表B】

【0128】

いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、配列番号１、３、５、及び７のＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、またはＣＤＲ－Ｈ３と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有するＣＤＲである。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号１、３、５、及び７から選択され、最大で１、２、３、４、または５個のアミノ酸置換を有するＶＨドメインのＣＤＲ－Ｈ１である。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号１、３、５、及び７から選択され、最大で１、２、３、４、５、６、７、または８個のアミノ酸置換を有するＶＨドメインのＣＤＲ－Ｈ２である。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号１、３、５、及び７から選択され、最大で１、２、３、４、５、６、７、または８個のアミノ酸置換を有するＶＨドメインのＣＤＲ－Ｈ３である。いくつかの態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載の抗体は、本明細書では「バリアント」と称される。いくつかの実施形態では、そのようなバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当該技術分野で既知であるか、もしくは本明細書に記載の任意の他の方法によって、本明細書で提供される配列に由来する。いくつかの実施形態では、そのようなバリアントは、本明細書で提供される配列に由来せず、例えば、抗体を得るために本明細書で提供される方法に従って、新たに（ｄｅ ｎｏｖｏ）単離され得る。

【0129】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号２、４、６、及び８から選択されるＶＬドメインの１～３個のＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号２、４、６、及び８から選択されるＶＬドメインの２～３個のＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号２、４、６、及び８から選択されるＶＬドメインの３個のＣＤＲを含む。いくつかの態様では、ＣＤＲは、例示的なＣＤＲである。いくつかの態様では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ ＣＤＲである。いくつかの態様では、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲである。いくつかの態様では、ＣＤＲは、ＡｂＭ ＣＤＲである。いくつかの態様では、ＣＤＲは、Ｃｏｎｔａｃｔ ＣＤＲである。いくつかの態様では、ＣＤＲは、ＩＭＧＴ ＣＤＲである。

【0130】

いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、配列番号２、４、６、及び８のＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、またはＣＤＲ－Ｌ３と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有するＣＤＲである。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｌ１は、配列番号２、４、６、及び８から選択され、最大で１、２、３、４、または５個のアミノ酸置換を有するＶＬドメインのＣＤＲ－Ｌ１である。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号２、４、６、及び８から選択され、最大で１、２、３、４、５、６、７、または８個のアミノ酸置換を有するＶＬドメインのＣＤＲ－Ｌ２である。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号２、４、６、及び８から選択され、最大で１、２、３、４、５、６、７、または８個のアミノ酸置換を有するＶＬドメインのＣＤＲ－Ｌ３である。いくつかの態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載の抗体は、本明細書では「バリアント」と称される。いくつかの実施形態では、そのようなバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当該技術分野で既知であるか、もしくは本明細書に記載の任意の他の方法によって、本明細書で提供される配列に由来する。いくつかの実施形態では、そのようなバリアントは、本明細書で提供される配列に由来せず、例えば、抗体を得るために本明細書で提供される方法に従って、新たに（ｄｅ ｎｏｖｏ）単離され得る。

【0131】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号１、３、５、及び７から選択されるＶＨドメインの１～３個のＣＤＲと、配列番号２、４、６、及び８から選択されるＶＬドメインの１～３個のＣＤＲと、を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号１、３、５、及び７から選択されるＶＨドメインの２～３個のＣＤＲと、配列番号２、４、６、及び８から選択されるＶＬドメインの２～３個のＣＤＲと、を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号１、３、５、及び７から選択されるＶＨドメインの３個のＣＤＲと、配列番号２、４、６、及び８から選択されるＶＬドメインの３個のＣＤＲと、を含む。いくつかの態様では、ＣＤＲは、例示的なＣＤＲである。いくつかの態様では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ ＣＤＲである。いくつかの態様では、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲである。いくつかの態様では、ＣＤＲは、ＡｂＭ ＣＤＲである。いくつかの態様では、ＣＤＲは、Ｃｏｎｔａｃｔ ＣＤＲである。いくつかの態様では、ＣＤＲは、ＩＭＧＴ ＣＤＲである。

【0132】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号１１、３９、５１、または５２から選択されるＣＤＲ－Ｈ３を含む。いくつかの態様では、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号１１、３９、５１、または５２のＣＤＲ－Ｈ３と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号１１、３９、５１、または５２から選択され、最大で１、２、３、４、５、６、７、または８個のアミノ酸置換を有するＣＤＲ－Ｈ３である。いくつかの態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載の抗体は、本明細書では「バリアント」と称される。いくつかの実施形態では、そのようなバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当該技術分野で既知であるか、もしくは本明細書に記載の任意の他の方法によって、本明細書で提供される配列に由来する。いくつかの実施形態では、そのようなバリアントは、本明細書で提供される配列に由来せず、例えば、抗体を得るために本明細書で提供される方法に従って、新たに（ｄｅ ｎｏｖｏ）単離され得る。

【0133】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号１０、４７、４８、４９、または５０のＣＤＲ－Ｈ２を含む。いくつかの態様では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号１０、４７、４８、４９、または５０のＣＤＲ－Ｈ２と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、最大で１、２、３、４、５、６、７、または８個のアミノ酸置換を有する、配列番号１０、４７、４８、４９、または５０のＣＤＲ－Ｈ２である。いくつかの態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載の抗体は、本明細書では「バリアント」と称される。いくつかの実施形態では、そのようなバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当該技術分野で既知であるか、もしくは本明細書に記載の任意の他の方法によって、本明細書で提供される配列に由来する。いくつかの実施形態では、そのようなバリアントは、本明細書で提供される配列に由来せず、例えば、抗体を得るために本明細書で提供される方法に従って、新たに（ｄｅ ｎｏｖｏ）単離され得る。

【0134】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号９、３７、４３、４４、４５、または４６のＣＤＲ－Ｈ１を含む。いくつかの態様では、ＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号９、３７、４３、４４、４５、または４６のＣＤＲ－Ｈ１と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ１は、最大で１、２、３、４、５、６、７、または８個のアミノ酸置換を有する、配列番号９、３７、４３、４４、４５、または４６のＣＤＲ－Ｈ１である。いくつかの態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載の抗体は、本明細書では「バリアント」と称される。いくつかの実施形態では、そのようなバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当該技術分野で既知であるか、もしくは本明細書に記載の任意の他の方法によって、本明細書で提供される配列に由来する。いくつかの実施形態では、そのようなバリアントは、本明細書で提供される配列に由来せず、例えば、抗体を得るために本明細書で提供される方法に従って、新たに（ｄｅ ｎｏｖｏ）単離され得る。

【0135】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号１１、３９、５１、または５２のＣＤＲ－Ｈ３と、配列番号１０のＣＤＲ－Ｈ２と、を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号１１、３９、５１、または５２のＣＤＲ－Ｈ３と、配列番号１０、４７、４８、４９、または５０のＣＤＲ－Ｈ２と、配列番号９、３７、４３、４４、４５、または４６のＣＤＲ－Ｈ１と、を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号１１、３９、５１、または５２のＣＤＲ－Ｈ３と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有し、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号１０、４７、４８、４９、または５０のＣＤＲ－Ｈ２と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有し、ＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号９、３７、４３、４４、４５、または４６のＣＤＲ－Ｈ１と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ３は、最大で１、２、３、４、５、６、７、または８個のアミノ酸置換を有する、配列番号１１、３９、５１、または５２のＣＤＲ－Ｈ３であり、ＣＤＲ－Ｈ２は、最大で１、２、３、４、５、６、７、または８個のアミノ酸置換を有する、配列番号１０、４７、４８、４９、または５０のＣＤＲ－Ｈ２であり、ＣＤＲ－Ｈ１は、最大で１、２、３、４、または５個のアミノ酸置換を有する、配列番号９、３７、４３、４４、４５、または４６のＣＤＲ－Ｈ１である。いくつかの態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載の抗体は、本明細書では「バリアント」と称される。いくつかの実施形態では、そのようなバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当該技術分野で既知であるか、もしくは本明細書に記載の任意の他の方法によって、本明細書で提供される配列に由来する。いくつかの実施形態では、そのようなバリアントは、本明細書で提供される配列に由来せず、例えば、抗体を得るために本明細書で提供される方法に従って、新たに（ｄｅ ｎｏｖｏ）単離され得る。

【0136】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号１４、４２、または５７のＣＤＲ－Ｌ３を含む。いくつかの態様では、ＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号１４、４２、または５７のＣＤＲ－Ｌ３と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｌ３は、最大で１、２、３、４、５、６、７、または８個のアミノ酸置換を有する、配列番号１４、４２、または５７のＣＤＲ－Ｌ３である。いくつかの態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載の抗体は、本明細書では「バリアント」と称される。いくつかの実施形態では、そのようなバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当該技術分野で既知であるか、もしくは本明細書に記載の任意の他の方法によって、本明細書で提供される配列に由来する。いくつかの実施形態では、そのようなバリアントは、本明細書で提供される配列に由来せず、例えば、抗体を得るために本明細書で提供される方法に従って、新たに（ｄｅ ｎｏｖｏ）単離され得る。

【0137】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号１３または５５のＣＤＲ－Ｌ２を含む。いくつかの態様では、ＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号１３または５５のＣＤＲ－Ｌ２と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｌ２は、最大で１、２、３、４、５、６、７、または８個のアミノ酸置換を有する、配列番号１３または５５のＣＤＲ－Ｌ２である。いくつかの態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載の抗体は、本明細書では「バリアント」と称される。いくつかの実施形態では、そのようなバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当該技術分野で既知であるか、もしくは本明細書に記載の任意の他の方法によって、本明細書で提供される配列に由来する。いくつかの実施形態では、そのようなバリアントは、本明細書で提供される配列に由来せず、例えば、抗体を得るために本明細書で提供される方法に従って、新たに（ｄｅ ｎｏｖｏ）単離され得る。

【0138】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号１２のＣＤＲ－Ｌ１を含む。いくつかの態様では、ＣＤＲ－Ｌ１は、配列番号１２、４０、５３、または５４のＣＤＲ－Ｌ１と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｌ１は、最大で１、２、３、４、５、６、７、または８個のアミノ酸置換を有する、配列番号１２、４０、５３、または５４のＣＤＲ－Ｌ１である。いくつかの態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載の抗体は、本明細書では「バリアント」と称される。いくつかの実施形態では、そのようなバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当該技術分野で既知であるか、もしくは本明細書に記載の任意の他の方法によって、本明細書で提供される配列に由来する。いくつかの実施形態では、そのようなバリアントは、本明細書で提供される配列に由来せず、例えば、抗体を得るために本明細書で提供される方法に従って、新たに（ｄｅ ｎｏｖｏ）単離され得る。

【0139】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号１４、４２、または５７のＣＤＲ－Ｌ３と、配列番号１３または５５のＣＤＲ－Ｌ２と、を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号１４、４２、または５７のＣＤＲ－Ｌ３と、配列番号１３または５５のＣＤＲ－Ｌ２と、配列番号１２、４０、５３、または５４のＣＤＲ－Ｌ１と、を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号１４、４２、または５７のＣＤＲ－Ｌ３と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有し、ＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号１３または５５のＣＤＲ－Ｌ２と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有し、ＣＤＲ－Ｌ１は、配列番号１２、４０、５３、または５４のＣＤＲ－Ｌ１と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｌ３は、最大で１、２、３、４、または５個のアミノ酸置換を有する、配列番号１４、４２、または５７のＣＤＲ－Ｌ３であり、ＣＤＲ－Ｌ２は、最大で１、２、３、または４個のアミノ酸置換を有する、配列番号１３または５５のＣＤＲ－Ｌ２であり、ＣＤＲ－Ｌ１は、最大で１、２、３、４、５、または６個のアミノ酸置換を有する、配列番号１２、４０、５３、または５４のＣＤＲ－Ｌ１である。いくつかの態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載の抗体は、本明細書では「バリアント」と称される。いくつかの実施形態では、そのようなバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当該技術分野で既知であるか、もしくは本明細書に記載の任意の他の方法によって、本明細書で提供される配列に由来する。いくつかの実施形態では、そのようなバリアントは、本明細書で提供される配列に由来せず、例えば、抗体を得るために本明細書で提供される方法に従って、新たに（ｄｅ ｎｏｖｏ）単離され得る。

【0140】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号１１、３９、５１、または５２のＣＤＲ－Ｈ３と、配列番号１０、４７、４８、４９、または５０のＣＤＲ－Ｈ２と、配列番号９、３７、４３、４４、４５、または４６のＣＤＲ－Ｈ１と、配列番号１４、４２、または５７のＣＤＲ－Ｌ３と、配列番号１３または５５のＣＤＲ－Ｌ２と、配列番号１２、４０、５３、または５４のＣＤＲ－Ｌ１と、を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号１１、３９、５１、または５２のＣＤＲ－Ｈ３と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有し、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号１０、４７、４８、４９、または５０のＣＤＲ－Ｈ２と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有し、ＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号９、３７、４３、４４、４５、または４６のＣＤＲ－Ｈ１と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有し、ＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号１４、４２、または５７のＣＤＲ－Ｌ３と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有し、ＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号１３または５５のＣＤＲ－Ｌ２と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有し、ＣＤＲ－Ｌ１は、配列番号１２、４０、５３、または５４のＣＤＲ－Ｌ１と少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ３は、最大で１、２、３、４、５、６、７、または８個のアミノ酸置換を有する、配列番号１１、３９、５１、または５２のＣＤＲ－Ｈ３であり、ＣＤＲ－Ｈ２は、最大で１、２、３、４、５、６、７、または８個のアミノ酸置換を有する、配列番号１０、４７、４８、４９、または５０のＣＤＲ－Ｈ２であり、ＣＤＲ－Ｈ１は、最大で１、２、３、４、または５個のアミノ酸置換を有する、配列番号９、３７、４３、４４、４５、または４６のＣＤＲ－Ｈ１であり、ＣＤＲ－Ｌ３は、最大で１、２、３、４、または５個のアミノ酸置換を有する、配列番号１４、４２、または５７のＣＤＲ－Ｌ３であり、ＣＤＲ－Ｌ２は、最大で１、２、３、または４個のアミノ酸置換を有する、配列番号１３または５５のＣＤＲ－Ｌ２であり、ＣＤＲ－Ｌ１は、最大で１、２、３、４、５、または６個のアミノ酸置換を有する、配列番号１２、４０、５３、または５４のＣＤＲ－Ｌ１である。いくつかの態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載の抗体は、本明細書では「バリアント」と称される。いくつかの実施形態では、そのようなバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当該技術分野で既知であるか、もしくは本明細書に記載の任意の他の方法によって、本明細書で提供される配列に由来する。いくつかの実施形態では、そのようなバリアントは、本明細書で提供される配列に由来せず、例えば、抗体を得るために本明細書で提供される方法に従って、新たに（ｄｅ ｎｏｖｏ）単離され得る。

【0141】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、配列番号９のＣＤＲ－Ｈ１と、配列番号１０のＣＤＲ－Ｈ２と、配列番号１１のＣＤＲ－Ｈ３と、配列番号１２のＣＤＲ－Ｌ１と、配列番号１３のＣＤＲ－Ｌ２と、配列番号１４のＣＤＲ－Ｌ１と、を含む。

【0142】

Ｆｃ領域
本明細書の「Ｆｃドメイン」または「Ｆｃ領域」という用語は、定常領域の少なくとも一部分を含有する免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。この用語は、天然配列Ｆｃ領域及びバリアントＦｃ領域を含む。本明細書に別段の定めがない限り、Ｆｃ領域または定常領域におけるアミノ酸残基の付番は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１に記載されるように、ＥＵ付番システム（ＥＵインデックスとも呼ばれる）に従う。本明細書で使用される二量体Ｆｃの「Ｆｃポリペプチド」は、二量体Ｆｃドメインを形成する２つのポリペプチドのうちの１つ、すなわち、安定した自己会合が可能な免疫グロブリン重鎖のＣ末端定常領域を含むポリペプチドを指す。例えば、二量体ＩｇＧ ＦｃのＦｃポリペプチドは、ＩｇＧ ＣＨ２及びＩｇＧ ＣＨ３定常ドメイン配列を含む。Ｆｃは、クラスＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭのものであってもよく、これらのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、ＩｇＧ_４、ＩｇＡ_１、及びＩｇＡ_２にさらに分割され得る。

【0143】

「Ｆｃ受容体」及び「ＦｃＲ」という用語は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を記載するために使用される。例えば、ＦｃＲは、天然配列ヒトＦｃＲであってもよい。一般に、ＦｃＲは、ＩｇＧ抗体（ガンマ受容体）に結合するものであり、これらの受容体の対立遺伝子バリアント及び代替的にスプライスされた形態を含む、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体を含む。ＦｃγＲＩＩ受容体は、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）及びＦｃγＲＩＩＢ（「阻害受容体」）を含み、これらは、主にその細胞質ドメインが異なる同様のアミノ酸配列を有する。他のアイソタイプの免疫グロブリンはまた、特定のＦｃＲに結合することができる（例えば、Ｊａｎｅｗａｙ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｙ：ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｅ ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅ，（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｌｔｄ．，ＮＹ）（４ｔｈ ｅｄ．，１９９９）を参照されたい）。活性化受容体ＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質ドメインに免疫受容体チロシン系活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含有する。阻害受容体ＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質ドメインに免疫受容体チロシン系阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）を含有する（Ｄａｅｒｏｎ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：２０３－２３４（１９９７）に概説される）。ＦｃＲは、Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ ９：４５７－９２（１９９１）、Ｃａｐｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ ４：２５－３４（１９９４）、及びｄｅ Ｈａａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１２６：３３０－４１（１９９５）に概説される。将来的に特定されるものを含む他のＦｃＲは、本明細書における「ＦｃＲ」という用語に包含される。この用語には、胎児への母体ＩｇＧの移行を担う新生児受容体であるＦｃＲｎも含まれる（Ｇｕｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）、及びＫｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））。

【0144】

いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１抗体である。

【0145】

いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ３抗体である。

【0146】

いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ２抗体である。

【0147】

いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ４抗体である。

【0148】

ＣＨ２ドメイン中の修飾は、Ｆｃに対するＦｃＲの結合に影響を及ぼし得る。異なるＦｃガンマ（Ｆｃγ）受容体に対するＦｃの親和性を選択的に改変するための、Ｆｃ領域内のいくつかのアミノ酸修飾が当該技術分野で既知である。一実施形態では、Ｆｃは、Ｆｃ－ガンマ受容体の選択的結合を促進するための１つ以上の修飾を含む。別の実施形態では、Ｆｃは、Ｆｃ－ガンマ受容体に対する結合親和性を低減する１つ以上の修飾を含む。

【0149】

Ｆｃに対するＦｃＲの結合を変化させる例示的な変異を以下に列挙する。

【0150】

Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａ、Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａ／Ｋ３２６Ａ（Ｌｕ Ｙ，Ｖｅｒｎｅｓ ＪＭ，Ｃｈｉａｎｇ Ｎ，ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．２０１１ Ｆｅｂ ２８；３６５（１－２）：１３２－４１）。

【0151】

Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｖ３０５Ｉ／Ｐ３９６Ｌ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｌ２３５Ｖ／Ｐ３９６Ｌ（Ｓｔａｖｅｎｈａｇｅｎ ＪＢ，Ｇｏｒｌａｔｏｖ Ｓ，Ｔｕａｉｌｌｏｎ Ｎ，ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２００７ Ｓｅｐ １５；６７（１８）：８８８２－９０、Ｎｏｒｄｓｔｒｏｍ ＪＬ，Ｇｏｒｌａｔｏｖ Ｓ，Ｚｈａｎｇ Ｗ，ｅｔ ａｌ．Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１１ Ｎｏｖ ３０；１３（６）：Ｒ１２３）。

【0152】

Ｆ２４３Ｌ（Ｓｔｅｗａｒｔ Ｒ，Ｔｈｏｍ Ｇ，Ｌｅｖｅｎｓ Ｍ，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ Ｄｅｓ Ｓｅｌ．２０１１ Ｓｅｐ；２４（９）：６７１－８．）、Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａ（Ｓｈｉｅｌｄｓ ＲＬ，Ｎａｍｅｎｕｋ ＡＫ，Ｈｏｎｇ Ｋ，ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２００１ Ｍａｒ ２；２７６（９）：６５９１－６０４）。

【0153】

Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ａ３３０Ｌ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ（Ｌａｚａｒ ＧＡ，Ｄａｎｇ Ｗ，Ｋａｒｋｉ Ｓ，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．２００６ Ｍａｒ １４；１０３（１１）：４００５－１０）。

【0154】

Ｓ２３９Ｄ／Ｓ２６７Ｅ、Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ（Ｃｈｕ ＳＹ，Ｖｏｓｔｉａｒ Ｉ，Ｋａｒｋｉ Ｓ，ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００８ Ｓｅｐ；４５（１５）：３９２６－３３）。

【0155】

Ｓ２３９Ｄ／Ｄ２６５Ｓ／Ｓ２９８Ａ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｅ／Ｓ２９８Ａ／Ｋ３２６Ａ／Ａ３２７Ｈ、Ｇ２３７Ｆ／Ｓ２９８Ａ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ｓ２９８Ａ、Ｓ２３９Ｄ／Ｋ３２６Ｅ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ／Ｓ２９８Ａ、Ｇ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ｄ２７０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｅ／Ｓ２６７Ｅ／Ｈ２６８Ｄ、Ｌ２３４Ｆ／Ｓ２６７Ｅ／Ｎ３２５Ｌ、Ｇ２３７Ｆ／Ｖ２６６Ｌ／Ｓ２６７Ｄ、ならびにＷＯ２０１１／１２０１３４及びＷＯ２０１１／１２０１３５（参照により本明細書に組み込まれる）に列挙される他の変異。Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（Ｗｉｌｌｉａｍ Ｒ．Ｓｔｒｏｈｌ ａｎｄ Ｌｉｌａ Ｍ．Ｓｔｒｏｈｌ，Ｗｏｏｄｈｅａｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ ｓｅｒｉｅｓ ｉｎ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｎｏ １１，ＩＳＢＮ １ ９０７５６８ ３７ ９，Ｏｃｔ ２０１２による）は、ページ２８３に変異を列挙している。

【0156】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体は、エフェクター機能を媒介するその能力を改善するための修飾を含む。かかる修飾は、当該技術分野で既知であり、脱フコシル化、または活性化受容体（主にＡＤＣＣの場合はＦＣＧＲ３ａ）に対する、及びＣＤＣの場合はＣ１ｑに対するＦｃの親和性の操作を含む。以下の表Ｃは、エフェクター機能操作の文献に報告された様々な設計をまとめたものである。

【0157】

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、ＡＤＣＣを改善する１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の位置２９８、３３３、及び３３４のうちの１つ以上での置換を有するＦｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、Ｌａｚａｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，２００６，１０３：４００５－４０１０（参照によりその全体が組み込まれる）に記載されるように、位置２３９、３３２、及び３３０での１つ以上のアミノ酸置換を有するＦｃ領域を含む。

【0158】

いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、Ｃ１ｑ結合及び／またはＣＤＣを改善または減少させる１つ以上の改変を含む。米国特許第６，１９４，５５１号、ＷＯ ９９／５１６４２、及びＩｄｕｓｏｇｉｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０００，１６４：４１７８－４１８４（その各々が、参照によりその全体が組み込まれる）を参照されたい。

【0159】

したがって、一実施形態では、本明細書に記載の抗体は、改良されたエフェクター機能を付与する表Ｂに記載されるような１つ以上のアミノ酸修飾を含む二量体Ｆｃを含み得る。別の実施形態では、抗体は、エフェクター機能を改善するために脱フコシル化され得る。

【0160】

【表C】

【0161】

ＦｃγＲ及び／または補体結合及び／またはエフェクター機能を低減するＦｃ修飾は、当該技術分野で既知である。かかる修飾を含む抗体は、「Ｆｃ－サイレント」抗体と呼称される。最近の刊行物では、エフェクター活性が低下またはサイレンシングされた抗体を操作するために使用されている戦略が記載されている（Ｓｔｒｏｈｌ，ＷＲ（２００９），Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ ２０：６８５－６９１、及びＳｔｒｏｈｌ，ＷＲ ａｎｄ Ｓｔｒｏｈｌ ＬＭ，“Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｆｃ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｆｏｒ ｏｐｔｉｍａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ”Ｉｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ：Ｗｏｏｄｈｅａｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ（２０１２），ｐｐ２２５－２４９を参照されたい）。これらの戦略には、グリコシル化の修飾によるエフェクター機能の低下、ＩｇＧ２／ＩｇＧ４足場の使用、またはＦｃのヒンジもしくはＣＨ２領域への変異の導入が含まれる。例えば、米国特許公開第２０１１／０２１２０８７号（Ｓｔｒｏｈｌ）、国際特許公開第ＷＯ２００６／１０５３３８号（Ｘｅｎｃｏｒ）、米国特許公開第２０１２／０２２５０５８号（Ｘｅｎｃｏｒ）、米国特許公開第２０１２／０２５１５３１号（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、米国特許公開第２０１１／００５９０７５号（Ｒｏｃｋｅｆｅｌｌｅｒ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ／ＭＩＴ）、及びＳｔｒｏｐ ｅｔ ａｌ（（２０１２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４２０：２０４－２１９）は、Ｆｃに対するＦｃγＲまたは補体の結合を低減するための特異的修飾を記載している。

【0162】

Ｆｃに対するＦｃγＲまたは補体の結合を低減するための既知のアミノ酸修飾の特定の非限定的な例としては、以下の表Ｄで特定されるものが挙げられる。

【0163】

【表D】

【0164】

アミノ酸配列を変更することなく、Ｆｃグリコシル化部位（Ａｓｎ ２９７ ＥＵ番号付け）上にほとんどまたは全くフコースを伴わない抗体を産生する方法は、当該技術分野で周知である。ＧｌｙｍａｘＸ（登録商標）技術（ＰｒｏＢｉｏＧｅｎ ＡＧ）は、フコース生合成の細胞経路を抗体産生に使用される細胞へと変える酵素のための遺伝子の導入に基づいている。これにより、抗体産生細胞によるＮ結合抗体炭水化物部分への糖「フコース」の付加を防止する。（ｖｏｎ Ｈｏｒｓｔｅｎ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ．２０１０ Ｄｅｃ；２０（１２）：１６０７－１８。）脱フコシル化抗体を産生することができる細胞株の例としては、細菌オキシドレダクターゼＧＤＰ－６－デオキシ－Ｄ－リキソ－４－ヘキシロースレダクターゼ（ＲＭＤ）の安定した発現を伴うＣＨＯ－ＤＧ４４（Ｈｅｎｎｉｎｇ ｖｏｎ Ｈｏｒｓｔｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌ ２０１０，２０：１６０７－１６１８を参照されたい）、またはタンパク質フコシル化が欠損しているＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞（その各々が、参照によりその全体が組み込まれる、Ｒｉｐｋａ ｅｔ ａｌ．，Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．，１９８６，２４９：５３３－５４５、米国特許公開第２００３／０１５７１０８号、ＷＯ２００４／０５６３１２を参照されたい）、ならびにアルファ－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子またはＦＵＴ８ノックアウトＣＨＯ細胞などのノックアウト細胞株（Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．，２００４，８７：６１４－６２２、Ｋａｎｄａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，２００６，９４：６８０－６８８、及びＷＯ２００３／０８５１０７（その各々が、参照によりその全体が組み込まれる））が挙げられる。フコシル化のレベルを低下させた抗体を得るための別のアプローチは、米国特許第８，４０９，５７２号に見出すことができ、このことは、抗体上でのフコシル化のレベルを低下させる能力について、抗体産生のための細胞株を選択することを教示する。

【0165】

抗体は、完全に脱フコシル化することができ（検出可能なフコースを含有しないことを意味する）、または部分的に脱フコシル化することができ、このことは、単離された抗体が、哺乳動物発現系によって産生される同様の抗体について通常検出されるフコースの量の９５％未満、８５％未満、７５％未満、６５％未満、５５％未満、４５％未満、３５％未満、２５％未満、１５％未満、または５％未満を含有することを意味する。

【0166】

いくつかの態様では、本明細書で提供される抗体は、天然に存在するＩｇＧ１ドメインと比較して、位置Ａｓｎ２９７でのフコース含有量が減少したＩｇＧ１ドメインを含む。かかるＦｃドメインは、改善されたＡＤＣＣを有することが知られている。参照によりその全体が組み込まれるＳｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２００２，２７７：２６７３３－２６７４０を参照されたい。いくつかの態様では、そのような抗体は、位置Ａｓｎ２９７に何らフコースを含まない。フコースの量は、例えば、参照によりその全体が組み込まれるＷＯ２００８／０７７５４６に記載されるような任意の好適な方法を使用して決定され得る。

【0167】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、二分されたオリゴ糖、例えば、ＧｌｃＮＡｃによって二分される抗体のＦｃ領域に結合された二分岐オリゴ糖を含む。かかる抗体バリアントは、低減されたフコシル化及び／または改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。そのような抗体バリアントの例は、例えば、ＷＯ２００３／０１１８７８、米国特許第６，６０２，６８４号、及び米国特許公開第２００５／０１２３５４６号に記載され、これらの各々は、その全体が参照により組み込まれる。

【0168】

本明細書に提供される抗体に組み込まれ得る他の例解的なグリコシル化バリアントは、例えば、米国特許公開第２００３／０１５７１０８号、同第２００４／００９３６２１号、同第２００３／０１５７１０８号、同第２００３／０１１５６１４号、同第２００２／０１６４３２８号、同第２００４／００９３６２１号、同第２００４／０１３２１４０号、同第２００４／０１１０７０４号、同第２００４／０１１０２８２号、同第２００４／０１０９８６５号、国際特許公開第２０００／６１７３９号、同第２００１／２９２４６号、同第２００３／０８５１１９号、同第２００３／０８４５７０号、同第２００５／０３５５８６号、同第２００５／０３５７７８号、同第２００５／０５３７４２号、同第２００２／０３１１４０号、Ｏｋａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２００４，３３６：１２３９－１２４９、及びＹａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．，２００４，８７：６１４～６２２に記載され、それらの各々が、参照によりその全体が組み込まれる。

【0169】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、Ｆｃ領域に接続されたオリゴ糖内に少なくとも１つのガラクトース残基を有するＦｃ領域を含む。かかる抗体バリアントは、改善されたＣＤＣ機能を有し得る。そのような抗体バリアントの例は、例えば、ＷＯ１９９７／３００８７、ＷＯ１９９８／５８９６４、及びＷＯ１９９９／２２７６４に記載され、これらの各々は、その全体が参照により組み込まれる。

【0170】

脱フコシル化抗体を産生することができる細胞株の例としては、細菌オキシドレダクターゼＧＤＰ－６－デオキシ－Ｄ－リキソ－４－ヘキシロースレダクターゼ（ＲＭＤ）の安定した発現を伴うＣＨＯ－ＤＧ４４（Ｈｅｎｎｉｎｇ ｖｏｎ Ｈｏｒｓｔｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌ ２０１０，２０：１６０７－１６１８を参照されたい）、またはタンパク質フコシル化が欠損しているＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞（それらの各々が、参照によりその全体が組み込まれる、Ｒｉｐｋａ ｅｔ ａｌ．，Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．，１９８６，２４９：５３３－５４５、米国特許公開第２００３／０１５７１０８号、ＷＯ２００４／０５６３１２を参照されたい）、ならびにアルファ－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子またはＦＵＴ８ノックアウトＣＨＯ細胞などのノックアウト細胞株（Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．，２００４，８７：６１４－６２２、Ｋａｎｄａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，２００６，９４：６８０－６８８、及びＷＯ２００３／０８５１０７（その各々が、参照によりその全体が組み込まれる））が挙げられる。

【0171】

いくつかの実施形態では、抗体は、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）活性を有する。ＡＤＣＰは、抗体が標的細胞の表面上の抗原に結合するときに生じ得る。単球及びマクロファージを含む、それらの細胞表面上にＦｃ受容体を有する食細胞は、標的細胞に結合した抗体のＦｃ領域を認識し、結合する。Ｆｃ受容体の抗体結合標的細胞に対する結合時に、標的細胞の食作用を開始することができる。ＡＤＣＰは、ＡＤＣＣの一形態とみなすことができる。

【0172】

いくつかの実施形態では、抗体は、免疫複合体を形成することができる。例えば、免疫複合体は、抗体によって覆われた細胞であってもよい。

【0173】

いくつかの実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体である。

【0174】

いくつかの実施形態では、抗体は、ポリクローナル抗体である。

【0175】

いくつかの実施形態では、抗体は、ハイブリドーマによって産生される。他の実施形態では、抗体は、所望の可変ドメイン及び定常ドメインを発現するように操作された組換え細胞によって産生される。

【0176】

いくつかの実施形態では、抗体は、抗原特異性及び下部ヒンジ領域を保持する一本鎖抗体もしくは他の抗体誘導体、またはそのバリアントであってもよい。

【0177】

いくつかの実施形態では、抗体は、多官能性抗体、組換え抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、それらの断片またはバリアントであり得る。特定の実施形態では、抗体断片またはその誘導体は、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’２断片、ＣＤＲ及びＳｃＦｖから選択される。

【0178】

いくつかの実施形態では、抗体は、ＴＲＥＭ２タンパク質などの表面抗原に特異的である。いくつかの実施形態では、治療用抗体は、抗原（例えば、抗原保有標的細胞によって特異的に発現される分子）に特異的である。特定の実施形態では、治療用抗体は、ヒトまたは非ヒト霊長類ＩｇＧ１またはＩｇＧ３のＦｃ部分を有してもよい。

【0179】

結合
標的分子に対する抗体の結合に関して、特定の抗原（例えば、ポリペプチド標的）または特定の抗原上のエピトープに対する「結合」、「特異的結合」、「～に特異的に結合する」、「～に対して特異的に結合する」、「選択的に結合する」、及び「～に対して選択的」という用語は、（例えば、非標的分子との）非特異的または非選択的相互作用とは測定可能に異なる結合を意味する。特異的結合は、例えば、標的分子に対する結合を測定し、それを非標的分子に対する結合と比較することによって、測定することができる。特異的結合は、標的分子上で認識されるエピトープを模倣する対照分子との競合によって決定することもできる。その場合、標的分子に対する抗体の結合が対照分子によって競合的に阻害される場合、特異的結合が示される。

【0180】

「親和性」は、分子（例えば、抗体）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原またはエピトープ）との間の非共有結合相互作用の合計強度を指す。別段の指示がない限り、本明細書で使用される場合、「親和性」は、結合対のメンバー（例えば、抗体及び抗原またはエピトープ）間の１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は、解離平衡定数（Ｋ_Ｄ）によって表すことができる。解離平衡定数に寄与する動態成分は、以下により詳細に記載される。親和性は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標））またはバイオレイヤー干渉法（例えば、ＦＯＲＴＥＢＩＯ（登録商標））などの本明細書に記載されるものを含む、当該技術分野で既知の一般的な方法によって測定することができる。

【0181】

「ｋ_ｄ」（ｓｅｃ^－１）という用語は、本明細書で使用される場合、特定の抗体－抗原相互作用の解離速度定数を指す。この値は、ｋ_ｏｆｆ値とも称される。

【0182】

「ｋ_ａ」（Ｍ^－１×ｓｅｃ^－１）という用語は、本明細書で使用される場合、特定の抗体－抗原相互作用の会合速度定数を指す。この値は、ｋ_ｏｎ値とも称される。

【0183】

「Ｋ_Ｄ」（Ｍ）という用語は、本明細書で使用される場合、特定の抗体－抗原相互作用の解離平衡定数を指す。Ｋ_Ｄ＝ｋ_ｄ／ｋ_ａ。いくつかの実施形態では、抗体の親和性は、そのような抗体とその抗原との間の相互作用に対するＫ_Ｄに関して記載される。明確にするために、当該技術分野で知られているように、より小さいＫ_Ｄ値は、より大きい親和性相互作用を示し、より大きいＫ_Ｄ値は、より小さい親和性相互作用を示す。

【0184】

「Ｋ_Ａ」（Ｍ^－１）という用語は、本明細書で使用される場合、特定の抗体－抗原相互作用の会合平衡定数を指す。Ｋ_Ａ＝ｋ_ａ／ｋ_ｄ。

【0185】

２つ以上の抗体に関して本明細書で使用される場合、「～と競合する」または「～と交差競合する」という用語は、２つ以上の抗体が抗原（例えば、ＴＲＥＭ２）に対する結合について競合することを示す。１つの例示的なアッセイでは、ＴＲＥＭ２を表面上にコーティングし、第１のＴＲＥＭ２抗体と接触させ、その後、第２のＴＲＥＭ２抗体を添加する。別の例示的なアッセイでは、第１のＴＲＥＭ２抗体を表面上にコーティングし、ＴＲＥＭ２と接触させ、その後、第２のＴＲＥＭ２抗体を添加する。第１のＴＲＥＭ２抗体の存在が、いずれかのアッセイにおいて、第２のＴＲＥＭ２抗体の結合を低減する場合、これらの抗体は互いに競合する。「～と競合する」という用語はまた、ある抗体が別の抗体の結合を低減するが、抗体が逆の順序で添加されるときに競合が観察されない抗体の組み合わせを含む。しかしながら、いくつかの実施形態では、第１及び第２の抗体は、それらが添加される順序にかかわらず、互いの結合を阻害する。いくつかの実施形態では、１つの抗体は、別の抗体のその抗原に対する結合を、少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％減少させる。当業者は、ＴＲＥＭ２に対する抗体の親和性及び抗体の価数に基づいて、競合アッセイで使用される抗体の濃度を選択することができる。この定義に記載のアッセイは例解的であり、当業者は、任意の好適なアッセイを利用して、抗体が互いに競合するかどうかを決定することができる。好適なアッセイは、例えば、Ｃｏｘ ｅｔ ａｌ．，“Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ Ｍｅｔｈｏｄｓ，”ｉｎ Ａｓｓａｙ Ｇｕｉｄａｎｃｅ Ｍａｎｕａｌ［Ｉｎｔｅｒｎｅｔ］，Ｕｐｄａｔｅｄ Ｄｅｃｅｍｂｅｒ ２４，２０１４（ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｂｏｏｋｓ／ＮＢＫ９２４３４／；２０１５年９月２９日にアクセスした）、Ｓｉｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，２００１，４４：３０－３７、及びＦｉｎｃｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ａｎａｌ．，２０１１，５４：３５１－３５８に記載されており、その各々は、参照によりその全体が組み込まれる。

【0186】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、Ｂｉａｃｏｒｅアッセイによって測定される場合、約０．００１、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、１．９５、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０×１０^－９Ｍ以下のＫ_ＤでヒトＴＲＥＭ２に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体のＫ_Ｄは、Ｂｉａｃｏｒｅアッセイによって測定される場合、約０．００１～０．０１、０．０１～０．１、０．０１～０．０５、０．０５～０．１、０．１～０．５、０．５～１、０．２５～０．７５、０．２５～０．５、０．５～０．７５、０．７５～１、０．７５～２、１．１～１．２、１．２～１．３、１．３～１．４、１．４～１．５、１．５～１．６、１．６～１．７、１．７～１．８、１．８～１．９、１．９～２、１～２、１～５、２～７、３～８、３～５、４～６、５～７、６～８、７～９、７～１０、または５～１０×１０^－９Ｍである。

【0187】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、Ｂｉａｃｏｒｅアッセイによって測定される場合、約２、１．９８、１．９５、１．９、１．８５、１．８、１．７５、１．７、１．６５、１．６、１．５５、１．５０、１．４５、または１．４×１０^－９Ｍ以下、またはそれ未満のＫ_ＤでヒトＴＲＥＭ２に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、Ｂｉａｃｏｒｅアッセイによって測定される場合、１．９～１．８、１．８～１．７、１．７～１．６、１．６～１．５、または１．９～１．５×１０^－９ＭのＫ_ＤでヒトＴＲＥＭ２に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、Ｂｉａｃｏｒｅアッセイによって測定される場合、約１０、９．５６、９．５、９．０、８．８８、８．８４、８．５、８、７．５、７．３２、７、６．５、６、５．５、５、４．５、４、３．５、３、２．５、２、１．５、または１×１０^－４（１／ｓ）以下、またはそれ未満のＫ_ｄでヒトＴＲＥＭ２に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、Ｂｉａｃｏｒｅアッセイによって測定される場合、７～１０、７～８、８～９、９～１０、７～７．５、７．５～８、８．～８．５、８．５～９、９～９．５、または９．５～１０×１０^－４（１／ｓ）のＫ_ｄでヒトＴＲＥＭ２に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、Ｂｉａｃｏｒｅアッセイによって測定される場合、約４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、４５、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６、７、８、９、または１０×１０^５（１／Ｍｓ）以上、またはそれより大きいＫ_ａでヒトＴＲＥＭ２に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、Ｂｉａｃｏｒｅアッセイによって測定される場合、４～７、４～４．５、４．５～５、５～５．５、５．５～６、６～６．５、または６．５～７、７～８、８～９、または９～１０×１０^５（１／Ｍｓ）のＫ_ａでヒトＴＲＥＭ２に結合する。

【0188】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、フローサイトメトリーによって測定されることによって測定される場合、２、１．９、１．８、１．７、１．６、１．５、１．４、１．３、１．２、１．１、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、または０．１ｎＭ以下のＥＣ５０でヒトＴＲＥＭ２に結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、フローサイトメトリーによって測定されることによって測定される場合、０．６～１．４ｎＭのＥＣ５０でヒトＴＲＥＭ２に結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、フローサイトメトリーによって測定されることによって測定される場合、約０．５、０．６、０．９、１．１、１．２、１．３、１．４、または１．５ｎＭのＥＣ５０でヒトＴＲＥＭ２に結合する。

【0189】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、フローサイトメトリーによって測定されることによって測定される場合、２、１．９、１．８、１．７、１．６、１．５、１．４、１．３、１．２、１．１、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、または０．１ｎＭ以下のＥＣ５０でヒトＴＲＥＭ２に結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、フローサイトメトリーによって測定されることによって測定される場合、０．６～１．４ｎＭのＥＣ５０でマウスＴＲＥＭ２に結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、フローサイトメトリーによって測定されることによって測定される場合、約０．５、０．６、０．９、１．１、１．２、１．３、１．４、または１．５ｎＭのＥＣ５０でマウスＴＲＥＭ２に結合する。

【0190】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、フローサイトメトリーによって測定されることによって測定される場合、２０ｎＭ以上、またはそれより大きいＥＣ５０でヒトＴＲＥＭ２に結合しない。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、フローサイトメトリーによって測定されることによって測定される場合、３ｎＭ以上、またはそれより大きいＥＣ５０でマウスＴＲＥＭ２に結合しない。

【0191】

目的の抗体（例えば、ＴＲＥＭ２）によって結合される標的抗原上のエピトープに結合する抗体をスクリーンするために、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｅｄ Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｄａｖｉｄ Ｌａｎｅ（１９８８）に記載されるものなどの通常の交差遮断アッセイを行うことができる。代替的に、またはこれに加えて、エピトープマッピングは、当該技術分野で既知の方法によって行うことができる。

【0192】

抗体間の競合は、試験中の抗体が、共通の抗原に対する参照抗体の特異的結合を阻害または遮断するアッセイによって決定することができる（例えば、Ｊｕｎｇｈａｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５０：１４９５，１９９０、Ｆｅｎｄｌｙ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５０：１５５０－１５５８、ＵＳ６，９４９，２４５を参照されたい）。過剰な試験抗体（例えば、少なくとも２倍、５倍、１０倍、２０倍、または１００倍）が、参照抗体の結合を、例えば、競合結合アッセイで測定される場合、少なくとも５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％まで阻害または遮断する場合、その試験抗体は、参照抗体と競合する。競合アッセイによって特定された抗体（競合抗体）としては、参照抗体と同じエピトープに結合する抗体、及び立体障害が生じるために参照抗体によって結合されたエピトープに十分に近位の隣接するエピトープに対する抗体結合が挙げられる。例えば、ＴＲＥＭ２に対する結合について本明細書に記載の第１の抗体と競合する第２の競合する抗体が特定され得る。特定の場合では、第２の抗体は、競合結合アッセイで測定される場合、第１の抗体の結合を、例えば、少なくとも５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％遮断または阻害することができる。特定の場合では、第２の抗体は、第１の抗体を、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％よりも大きく置き換えることができる。

【0193】

機能
いくつかの実施形態では、抗体は、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）活性を有する。ＡＤＣＣは、抗体が標的細胞の表面上の抗原に結合するときに生じ得る。細胞傷害性Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、好中球、好酸球、樹状細胞、または単球を含む、それらの細胞表面上にＦｃガンマ受容体（ＦｃγＲまたはＦＣＧＲ）を有するエフェクター細胞は、標的細胞に結合された抗体のＦｃ領域を認識し、結合する。そのような結合は、細胞死につながる細胞内シグナル伝達経路の活性化を引き起こすことができる。特定の実施形態では、抗体の免疫グロブリンＦｃ領域サブタイプ（アイソタイプ）は、ヒトＩｇＧ１及びＩｇＧ３を含む。本明細書で使用される場合、ＡＤＣＣは、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を発現する非特異的細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、及びマクロファージ）が標的細胞上の結合抗体を認識し、その後、標的細胞の溶解を引き起こす細胞媒介性反応を指す。ＡＤＣＣを媒介するための主要な細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、一方で単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。まとめられた状態での造血細胞上のＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ ９：４５７－９２（１９９１）のページ４６４の表３にある。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、米国特許第５，５００，３６２号または同第５，８２１，３３７号に記載されているものなどのインビトロＡＤＣＣアッセイを行ってもよい。かかるアッセイに有用なエフェクター細胞には、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。代替的に、またはそれに加えて、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、インビボで、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）９５：６５２－６５６（１９９８）に開示されるものなどの動物モデルで評価され得る。

【0194】

いくつかの実施形態では、抗体は、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）活性を有する。抗体誘導ＣＤＣは、古典的補体カスケードのタンパク質を介して媒介され、補体タンパク質Ｃｌｑの抗体に対する結合によって誘発される。Ｃｌｑに結合する抗体Ｆｃ領域は、補体カスケードの活性化を誘導することができる。特定の実施形態では、抗体の免疫グロブリンＦｃ領域サブタイプ（アイソタイプ）は、ヒトＩｇＧ１及びＩｇＧ３を含む。本明細書で使用される場合、ＣＤＣは、補体の存在下で標的を溶解する分子の能力を指す。補体活性化経路は、補体系の第１の成分（Ｃ１ｑ）が同種の抗原と複合体化した分子（例えば、ポリペプチド（例えば、抗体））に結合することによって開始される。補体活性化を評価するために、例えば、Ｇａｚｚａｎｏ－Ｓａｎｔｏｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２：１６３（１９９６）に記載されるようなＣＤＣアッセイを実施してもよい。

【0195】

いくつかの実施形態では、抗体は、アゴニスト抗体である。アゴニスト抗体は、抗体が細胞上で発現されるＴＲＥＭ２タンパク質に結合した後、ＮＳＭの１つ以上の活性または機能を誘導する（例えば、増加させる）ことができる。アゴニスト抗体は、ＮＳＭに結合し、ＮＳＭを活性化し、細胞の増殖の変化を引き起こすか、または抗原提示能力を改変し得る。アゴニスト抗体は、ＮＳＭに結合し、ＮＳＭを活性化し、改変された細胞成長またはアポトーシスをもたらす細胞内シグナル伝達経路を誘発し得る。

【0196】

いくつかの実施形態では、抗体は、アンタゴニスト抗体である。アンタゴニスト抗体は、抗体が細胞上で発現されるＴＲＥＭ２タンパク質に結合した後、ＮＳＭの１つ以上の活性または機能を遮断する（例えば、減少させる）ことができる。例えば、アンタゴニスト抗体は、１つ以上のＮＳＭタンパク質に結合し、１つ以上のＮＳＭタンパク質に結合するリガンドを遮断し、細胞の分化及び増殖を防止し、または抗原提示能力を改変し得る。アンタゴニスト抗体は、そのリガンドによってＴＲＥＭ２タンパク質に結合し、その活性化を防止し、細胞の成長及び生存に寄与する細胞内シグナル伝達経路を改変し得る。

【0197】

いくつかの実施形態では、抗体は、枯渇抗体である。枯渇抗体は、分子の他の免疫細胞との抗体の相互作用を介して接触すると非刺激性骨髄細胞を死滅させるものである。例えば、抗体は、ＴＲＥＭ２タンパク質を有する細胞に結合したとき、補体タンパク質と係合し、補体依存性細胞溶解を誘導することができる。抗体はまた、ＴＲＥＭ２タンパク質を有する細胞に結合したとき、Ｆｃ受容体を有する隣接細胞を誘発して、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）によってそれらを死滅させることができる。

【0198】

いくつかの実施形態では、抗体は、中和抗体であり、抗体は、ＮＳＭの１つ以上の生物学的活性を中和する。いくつかの実施形態では、ＴＲＥＭ２タンパク質は、非刺激性骨髄細胞の表面上で発現され、抗体は、ＴＲＥＭ２タンパク質の細胞外ドメインを認識する。

【0199】

いくつかの実施形態では、抗体は、ＮＳＭに対して選択的である（ＴＲＥＭ２に優先的に結合する）。ある特定の実施形態では、ＮＳＭに選択的に結合する抗体は、０．０００１ｎＭ～１μＭの範囲の解離定数（Ｋｄ）を有する。ある特定の実施形態では、抗体は、異なる種由来のタンパク質にわたって保存されているＴＲＥＭ２タンパク質上のエピトープに特異的に結合する。別の実施形態では、選択的結合は、排他的結合を含むが、必須ではない。

【0200】

一実施形態では、その標的に結合した抗ＴＲＥＭ２抗体は、それが結合した非刺激性骨髄細胞のインビボでの枯渇を引き起こす原因となる。いくつかの実施形態では、クラスター化された抗体によって誘導されるエフェクタータンパク質は、炎症性サイトカインの放出、抗原産生の調節、エンドサイトーシス、または細胞死滅を含む様々な応答を誘発し得る。一実施形態では、抗体は、インビボで補体を動員及び活性化するか、または抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を媒介するか、またはインビボでＦｃ受容体に結合することによって食作用を媒介することが可能である。抗体はまた、結合時に非刺激性骨髄細胞のアポトーシスまたは壊死を誘導することによって、非刺激性骨髄細胞を枯渇させ得る。

【0201】

いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞の無効化は、インビトロであり、ａ）非刺激性骨髄細胞の死滅によって、ｂ）非刺激性骨髄細胞の磁気ビーズ枯渇によって、またはｃ）非刺激性骨髄細胞の蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）選別によって、達成される。

【0202】

いくつかの実施形態では、抗体は、エフェクター分子に結合されるか、またはエフェクター分子にコンジュゲートされる。

【0203】

ある特定の実施形態では、抗体は、薬物にコンジュゲートされる。

【0204】

非刺激性骨髄細胞（ＮＳＭ）
抗ＴＲＥＭ２抗体の使用を含む、非刺激性骨髄細胞（ＮＳＭ）を無効化及び／または検出するための方法及び組成物が本明細書で提供される。また、ＮＳＭタンパク質を発現する非刺激性骨髄細胞を標的化及び／または検出するための方法及び組成物も本明細書で提供される。

【0205】

また、ヒトＮＳＭタンパク質の非ヒトホモログに向けられた抗体を、その非ヒト個体において使用することを含む、非刺激性骨髄細胞を無効化し、及び／または検出するための方法及び組成物も本明細書に提供される。

【0206】

本明細書で使用される場合、非刺激性骨髄細胞は、免疫応答を刺激するのに十分に有効ではない（例えば、刺激性骨髄細胞と比較して免疫応答を刺激するのに有効ではない）骨髄細胞である。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、刺激性骨髄細胞と比較して、Ｔ細胞への抗原の提示にそれほど効果的ではないか、または抗原特異的Ｔ細胞応答の刺激にそれほど効果的ではない。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、刺激性骨髄細胞と比較して、Ｔ細胞への抗原の取り込み、処理、及び／または提示能力の低下を示すことができる。非刺激性骨髄細胞は、細胞傷害性Ｔリンパ球を再プライミングする能力が低下しているか、または全くないか、または場合によっては効果的な細胞死滅を刺激することができない場合がある。非刺激性骨髄細胞は、刺激性骨髄細胞と比較して、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＭＨＣＩ、及びＭＨＣＩＩを含むがこれらに限定されない、抗原プロセシング、抗原提示及び／または抗原共刺激に関与する遺伝子及び細胞表面マーカーのより低い発現を示し得る。

【0207】

非刺激性骨髄細胞は、刺激性骨髄細胞と比較した場合、ＴＡＰ１、ＴＡＰ２、ＰＳＭＢ８、ＰＳＭＢ９、ＴＡＰＢＰ、ＰＳＭＥ２、ＣＤ２４ａ、ＣＤ２７４、ＢＴＬＡ、ＣＤ４０、ＣＤ２４４、ＩＣＯＳＬ、ＩＣＡＭ１、ＴＩＭ３、ＰＤＬ２、ＲＡＮＫ、ＦＬＴ３、ＣＳＦ２ＲＢ、ＣＳＦ２ＲＢ２、ＣＳＦ２ＲＡ、ＩＬ１２ｂ、ＸＣＲ１、ＣＣＲ７、ＣＣＲ２、ＣＣＬ２２、ＣＸＣＬ９、及びＣＣＬ５のうちのいずれか１つ以上を含むがこれらに限定されない、交差提示、共刺激、及び／または刺激性サイトカインに関連する遺伝子のより低い発現、ならびに抗炎症性サイトカインＩＬ－１０の増加した発現を示し得る。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、分化及び生存のために転写因子ＩＲＦ４及びサイトカインＧＭ－ＣＳＦまたはＣＳＦ－１に依存している。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）及び一酸化窒素シンターゼ（ＮＯＳ）を分泌することによって血管新生に寄与し、上皮成長因子（ＥＧＦ）を分泌することによって細胞成長を補助することができる。

【0208】

いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）、好中球、単球、または樹状細胞（ＤＣ）である。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、樹状細胞（ＤＣ）ではない。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、好中球である。

【0209】

いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞及び刺激性骨髄細胞は、それらが発現するマーカー、またはそれらが選択的に発現するマーカーに基づいて識別される。細胞表面マーカーの発現は、「＋」または「陽性」として説明することができる。細胞表面マーカーの不在は、「－」または「陰性」として説明することができる。細胞表面マーカーの発現は、「高」（高レベルのメイカー（ｍａｋｅｒ）を発現する細胞）または「低」（低レベルのマーカーを発現する細胞）としてさらに説明することができ、これは、細胞表面上の各マーカーの相対的発現を示す。マーカーのレベルは、当該技術分野で既知の様々な方法、例えば、免疫染色及びＦＡＣＳ分析、またはゲル電気泳動及びウェスタンブロッティングによって決定され得る。

【0210】

いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、樹状細胞（ＤＣ）である。いくつかの実施形態では、樹状細胞は、棘状または樹状の形態によって識別することができる。一実施形態では、非刺激性樹状細胞は、少なくともＣＤ４５＋、ＨＬＡ－ＤＲ＋、ＣＤ１４－、ＣＤ１１ｃ＋、及びＢＤＣＡ１＋（ＤＣ１細胞とも称される）である。一実施形態では、非刺激性樹状細胞は、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ－ＤＲ＋、ＣＤ１４－、ＣＤ１１ｃ＋、及びＢＤＣＡ３＋（ＤＣ２細胞とも称される）ではない。一実施形態では、ＣＤ４５＋、ＨＬＡ－ＤＲ＋、ＣＤ１４－、ＣＤ１１ｃ＋、及びＢＤＣＡ３＋である樹状細胞は、刺激性骨髄細胞である。

【0211】

いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、非刺激性マクロファージである。いくつかの実施形態では、例えば、ヒトにおいて、非刺激性マクロファージは、少なくともＣＤ４５＋、ＨＬＡ－ＤＲ＋、ＣＤ１４＋である。いくつかの実施形態では、非刺激性マクロファージは、少なくともＣＤ４５^＋、ＨＬＡ－ＤＲ^＋、ＣＤ１４^＋、ＣＤ１１ｂ^＋である。いくつかの実施形態では、非刺激性マクロファージは、少なくともＣＤ４５^＋、ＨＬＡ－ＤＲ^＋、ＣＤ１４^＋、ＣＤ１１ｃ^＋である。いくつかの実施形態では、非刺激性マクロファージは、少なくともＣＤ４５^＋、ＨＬＡ－ＤＲ^＋、ＣＤ１４^＋、ＢＤＣＡ３^－である。いくつかの実施形態では、非刺激性マクロファージは、少なくともＣＤ４５^＋、ＨＬＡ－ＤＲ^＋、ＣＤ１４^＋、ＢＤＣＡ３^－、ＣＤ１１ｂ^＋である。いくつかの実施形態では、非刺激性マクロファージは、少なくともＣＤ４５^＋、ＨＬＡ－ＤＲ^＋、ＣＤ１４^＋、ＢＤＣＡ３^－、ＣＤ１１ｃ^＋である。いくつかの実施形態では、非刺激性マクロファージは、少なくともＣＤ４５^＋、ＨＬＡ－ＤＲ^＋、ＣＤ１４^＋、ＣＤ１１ｂ^＋、及びＣＤ１１ｃ^＋である。いくつかの実施形態では、非刺激性マクロファージは、少なくともＣＤ４５^＋、ＨＬＡ－ＤＲ^＋、ＣＤ１４^＋、ＢＤＣＡ３^－、ＣＤ１１ｂ^＋、及びＣＤ１１ｃ^＋である。

【0212】

いくつかの実施形態では、本発明の方法及び組成物は、他の哺乳動物、例えばマウスにおいてＴＡＭ及びＤＣを標的とするのに有用である。そのような実施形態では、マウスＴＡＭ及びＤＣをＴＲＥＭ２抗体と接触させる。一実施形態では、例えば、マウスにおいて、マクロファージは、少なくともＣＤ４５＋、ＨＬＡ－ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、ＣＤ１１ｂ^高、及びＣＤ１１ｃ^低（ＴＡＭ１とも称される）である。一実施形態では、例えば、マウスにおいて、マクロファージは、少なくともＣＤ４５＋、ＨＬＡ－ＤＲ＋、ＣＤ１４＋、ＣＤ１１ｂ^低、及びＣＤ１１ｃ^高（ＴＡＭ２とも称される）である。「ＣＤ１１ｂ^高マクロファージ」という用語は、本明細書で使用される場合、高レベルのＣＤ１１ｂを発現するマクロファージに関する。「ＣＤ１１ｂ^低マクロファージ」という用語は、本明細書で使用される場合、ＣＤ１１ｂ^高マクロファージのレベルよりも実質的に低いＣＤ１１ｂのレベルをその表面上で発現するマクロファージに関する。「ＣＤ１１ｃ^高マクロファージ」という用語は、本明細書で使用される場合、高レベルのＣＤ１１ｃを発現するマクロファージに関する。「ＣＤ１１ｃ^低マクロファージ」という用語は、本明細書で使用される場合、ＣＤ１１ｃ^高マクロファージのレベルよりも実質的に低いＣＤ１１ｃのレベルをその表面上で発現するマクロファージに関する。

【0213】

いくつかの実施形態では、本発明の非刺激性骨髄細胞は、ＴＡＭ及びＤＣ１細胞のうちの１つ以上を含む。

【0214】

いくつかの実施形態では、例えば、マウスにおいて、本発明の非刺激性骨髄細胞は、ＴＡＭ１、ＴＡＭ２、及びＤＣ１細胞のうちの１つ以上を含む。そのような実施形態では、本発明の非刺激性骨髄細胞を、ＴＲＥＭ２抗体と接触させる。

【0215】

いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、骨髄細胞であり、腫瘍内である。

【0216】

いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、刺激性骨髄細胞及び非刺激性骨髄細胞を含む免疫細胞の集団内にある。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、非刺激性骨髄細胞のみを含む免疫細胞の集団内にある。本発明の免疫細胞の集団は、純粋であり、均質であり、不均一であり、様々な供給源（例えば、疾患組織、健康な組織、細胞バンク）に由来し、一次細胞培養物中で維持し、不死化培養物中で維持し、及び／またはエクスビボ培養物中で維持し得る。

【0217】

いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、腫瘍関連マクロファージである。

【0218】

いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、樹状細胞である。

【0219】

いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５^＋、ＨＬＡ－ＤＲ^＋、ＣＤ１４^－、ＣＤ１１ｃ^＋、及びＢＤＣＡ１^＋である。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５^＋、ＨＬＡ－ＤＲ^＋、ＣＤ１４^－、ＣＤ１１ｃ^＋、及びＢＤＣＡ１^＋である細胞を含む。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５^＋、ＨＬＡ－ＤＲ^＋、ＣＤ１４^－、ＣＤ１１ｃ^＋、及びＢＤＣＡ１^＋である細胞からなる。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５^＋、ＨＬＡ－ＤＲ^＋、ＣＤ１４^－、ＣＤ１１ｃ^＋、及びＢＤＣＡ１^＋である細胞から本質的になる。

【0220】

いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５^＋、ＨＬＡ－ＤＲ^＋、ＣＤ１４^＋、ＢＤＣＡ３^－である。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５^＋、ＨＬＡ－ＤＲ^＋、ＣＤ１４^＋、ＢＤＣＡ３^－である細胞を含む。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５^＋、ＨＬＡ－ＤＲ^＋、ＣＤ１４^＋、ＢＤＣＡ３^－である細胞からなる。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５^＋、ＨＬＡ－ＤＲ^＋、ＣＤ１４^＋、ＢＤＣＡ３^－である細胞から本質的になる。

【0221】

いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５^＋、ＨＬＡ－ＤＲ^＋、ＣＤ１４^＋、ＣＤ１１ｂ^＋である。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５^＋、ＨＬＡ－ＤＲ^＋、ＣＤ１４^＋、ＣＤ１１ｂ^＋である細胞を含む。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５^＋、ＨＬＡ－ＤＲ^＋、ＣＤ１４^＋、ＣＤ１１ｂ^＋である細胞からなる。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５^＋、ＨＬＡ－ＤＲ^＋、ＣＤ１４^＋、ＣＤ１１ｂ^＋である細胞から本質的になる。

【0222】

いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５^＋、ＨＬＡ－ＤＲ^＋、ＣＤ１４^＋、ＣＤ１１ｃ^＋である。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５^＋、ＨＬＡ－ＤＲ^＋、ＣＤ１４^＋、ＣＤ１１ｃ^＋である細胞を含む。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５^＋、ＨＬＡ－ＤＲ^＋、ＣＤ１４^＋、ＣＤ１１ｃ^＋である細胞からなる。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５^＋、ＨＬＡ－ＤＲ^＋、ＣＤ１４^＋、ＣＤ１１ｃ^＋である細胞から本質的になる。

【0223】

いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５^＋、ＨＬＡ－ＤＲ^＋、ＣＤ１４^＋、ＢＤＣＡ３^－、及びＣＤ１１ｃ^＋である。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５^＋、ＨＬＡ－ＤＲ^＋、ＣＤ１４^＋、ＢＤＣＡ３^－、及びＣＤ１１ｃ^＋である細胞を含む。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５^＋、ＨＬＡ－ＤＲ^＋、ＣＤ１４^＋、ＢＤＣＡ３^－、及びＣＤ１１ｃ^＋である細胞からなる。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５^＋、ＨＬＡ－ＤＲ^＋、ＣＤ１４^＋、ＢＤＣＡ３^－、及びＣＤ１１ｃ^＋である細胞から本質的になる。

【0224】

いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５^＋、ＨＬＡ－ＤＲ^＋、ＣＤ１４^＋、ＢＤＣＡ３^－、ＣＤ１１ｂ^＋である。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５^＋、ＨＬＡ－ＤＲ^＋、ＣＤ１４^＋、ＢＤＣＡ３^－、ＣＤ１１ｂ^＋である細胞を含む。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５^＋、ＨＬＡ－ＤＲ^＋、ＣＤ１４^＋、ＢＤＣＡ３^－、ＣＤ１１ｂ^＋である細胞からなる。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５^＋、ＨＬＡ－ＤＲ^＋、ＣＤ１４^＋、ＢＤＣＡ３^－、ＣＤ１１ｂ^＋である細胞から本質的になる。

【0225】

いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５^＋、ＨＬＡ－ＤＲ^＋、ＣＤ１４^＋、ＣＤ１１ｂ^＋、及びＣＤ１１ｃ^＋である。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５^＋、ＨＬＡ－ＤＲ^＋、ＣＤ１４^＋、ＣＤ１１ｂ^＋、及びＣＤ１１ｃ^＋である細胞を含む。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５^＋、ＨＬＡ－ＤＲ^＋、ＣＤ１４^＋、ＣＤ１１ｂ^＋、及びＣＤ１１ｃ^＋である細胞からなる。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５^＋、ＨＬＡ－ＤＲ^＋、ＣＤ１４^＋、ＣＤ１１ｂ^＋、及びＣＤ１１ｃ^＋である細胞から本質的になる。

【0226】

いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５^＋、ＨＬＡ－ＤＲ^＋、ＣＤ１４^＋、ＢＤＣＡ３^－、ＣＤ１１ｂ^＋、及びＣＤ１１ｃ^＋である。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５^＋、ＨＬＡ－ＤＲ^＋、ＣＤ１４^＋、ＢＤＣＡ３^－、ＣＤ１１ｂ^＋、及びＣＤ１１ｃ^＋である細胞を含む。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５^＋、ＨＬＡ－ＤＲ^＋、ＣＤ１４^＋、ＢＤＣＡ３^－、ＣＤ１１ｂ^＋、及びＣＤ１１ｃ^＋である細胞からなる。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５^＋、ＨＬＡ－ＤＲ^＋、ＣＤ１４^＋、ＢＤＣＡ３^－、ＣＤ１１ｂ^＋、及びＣＤ１１ｃ^＋である細胞から本質的になる。

【0227】

いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５^＋、ＨＬＡ－ＤＲ^＋、ＣＤ１４^－、ＣＤ１１ｃ^＋、及びＢＤＣＡ３^＋ではない。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５^＋、ＨＬＡ－ＤＲ^＋、ＣＤ１４^－、ＣＤ１１ｃ^＋、及びＢＤＣＡ３^＋ではない細胞を含む。

【0228】

いくつかの実施形態では、例えば、マウスにおいて、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５^＋、ＨＬＡ－ＤＲ^＋、ＣＤ１４^＋、ＣＤ１１ｂ^高、及びＣＤ１１ｃ^低である。いくつかの実施形態では、例えば、マウスにおいて、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５^＋、ＨＬＡ－ＤＲ^＋、ＣＤ１４^＋、ＣＤ１１ｂ^高、及びＣＤ１１ｃ^低である細胞を含む。いくつかの実施形態では、例えば、マウスにおいて、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５^＋、ＨＬＡ－ＤＲ^＋、ＣＤ１４^＋、ＣＤ１１ｂ^高、及びＣＤ１１ｃ^低である細胞からなる。いくつかの実施形態では、例えば、マウスにおいて、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５^＋、ＨＬＡ－ＤＲ^＋、ＣＤ１４^＋、ＣＤ１１ｂ^高、及びＣＤ１１ｃ^低である細胞から本質的になる。そのような実施形態では、非刺激性マウス骨髄細胞を、ＴＲＥＭ２抗体と接触させる。

【0229】

いくつかの実施形態では、例えば、マウスにおいて、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５^＋、ＨＬＡ－ＤＲ^＋、ＣＤ１４^＋、ＣＤ１１ｂ^低、及びＣＤ１１ｃ^高である。いくつかの実施形態では、例えば、マウスにおいて、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５^＋、ＨＬＡ－ＤＲ^＋、ＣＤ１４^＋、ＣＤ１１ｂ^低、及びＣＤ１１ｃ^高である細胞を含む。いくつかの実施形態では、例えば、マウスにおいて、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５^＋、ＨＬＡ－ＤＲ^＋、ＣＤ１４^＋、ＣＤ１１ｂ^低、及びＣＤ１１ｃ^高である細胞からなる。いくつかの実施形態では、例えば、マウスにおいて、非刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５^＋、ＨＬＡ－ＤＲ^＋、ＣＤ１４^＋、ＣＤ１１ｂ^低、及びＣＤ１１ｃ^高である細胞から本質的になる。そのような実施形態では、非刺激性マウス骨髄細胞を、ＴＲＥＭ２抗体と接触させる。

【0230】

いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、線維性組織内にある。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、肝臓組織内にある。

【0231】

いくつかの実施形態では、免疫細胞の集団は、線維性組織内にある。いくつかの実施形態では、免疫細胞の集団は、肝臓組織内にある。

【0232】

いくつかの実施形態では、非刺激性細胞及び刺激性骨髄細胞は、線維性組織内にある。いくつかの実施形態では、非刺激性細胞及び刺激性骨髄細胞は、肝臓組織内にある。

【0233】

いくつかの実施形態では、生体試料は、非刺激性骨髄細胞及び刺激性骨髄細胞を含む免疫細胞の集団を含む。

【0234】

ＮＳＭ細胞は、腫瘍組織中に存在し、それらのＮＳＭ細胞マーカーの発現によって他の細胞型から識別され得るＤＣ１、ＴＡＭ１、及びＴＡＭ２細胞を総称して指すことができる。例えば、ＳＤＣよりもＮＳＭ細胞においてより高い存在量で発現または翻訳される遺伝子及び関連タンパク質は、ＮＳＭマーカーとして機能し得る。例示的なＮＳＭマーカーは、ＣＤ１１ｂである。追加の例示的なＮＳＭマーカーを表Ａに列挙する。ＮＳＭ細胞は、その細胞表面上でＴＲＥＭ２、ＭＳ４Ａ７、Ｃ５ＡＲ１、ＬＹＶＥ１、ＡＢＣＣ３、ＬＩＬＲＢ４、ＭＲＣ１／ＣＤ２０６、ＳＩＧＬＥＣ１、ＳＴＡＢ１、ＴＭＥＭ３７、ＭＥＲＴＫ、及びＴＭＥＭ１１９を発現することができる。いくつかの態様では、ＮＳＭ細胞は、ＫＩＴ、ＣＣＲ７、ＢＡＴＦ３、ＦＬＴ３、ＺＢＴＢ４６、ＩＲＦ８、ＢＴＬＡ、ＭＹＣＬ１、ＣＬＥＣ９Ａ、ＢＤＣＡ３、及びＸＣＲ１のうちの少なくとも１つを発現しない。

【0235】

一実施形態では、ＮＳＭ細胞は、表Ａに列挙されるＮＳＭマーカー遺伝子の１つ以上を発現する。別の実施形態では、ＮＳＭ細胞は、表Ｄに列挙されるＮＳＭマーカーのうちの２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８個以上を発現する。別の実施形態では、ＮＳＭ細胞は、表Ｄに列挙されるＮＳＭマーカーの大部分またはすべてを発現する。別の実施形態では、ＮＳＭ細胞は、ＭＲＣ１、ＭＳ４Ａ７、Ｃ１ＱＣ、ＡＰＯＥ、Ｃ１ＱＢ、Ｃ１ＱＡ、及びＣ５ＡＲ１を発現するものとして特定される。

【0236】

【表D】

【0237】

刺激性骨髄細胞
本明細書で使用される場合、刺激性骨髄細胞（特定の態様ではＳＤＣとも呼ばれる）は、免疫応答を刺激するのに有効である（例えば、非刺激性骨髄細胞と比較して免疫応答を刺激するのにより有効である）骨髄細胞である。いくつかの実施形態では、刺激性骨髄細胞は、非刺激性骨髄細胞と比較して、Ｔ細胞への抗原の提示に有効であるか、または特定のＴ細胞応答の刺激に有効である。いくつかの実施形態では、刺激性骨髄細胞は、非刺激性骨髄細胞と比較して、Ｔ細胞への抗原の取り込み、処理、及び／または提示能力の増加を示すことができる。刺激性骨髄細胞は、非刺激性骨髄細胞と比較して、細胞傷害性Ｔリンパ球を再プライミングする能力の増加を有するか、または場合によっては、効果的な細胞死滅を刺激することができる。刺激性骨髄細胞は、刺激性骨髄細胞と比較して、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＭＨＣＩ、及びＭＨＣＩＩを含むがこれらに限定されない、抗原プロセシング、抗原提示及び／または抗原共刺激に関与する遺伝子及び細胞表面マーカーのより高い発現を示し得る。

【0238】

例示的な刺激性骨髄細胞マーカーを表Ａに列挙する。例えば、ヒトＳＤＣにおいて、Ｘｃｒ１、Ｃｌｅｃ９ａ、及びＢＤＣＡ３（ＣＤ１４１）の発現は、ＳＤＣ同一性のマーカーである。マウスにおいて、ＣＤ１０３もまた、ＳＤＣ同一性の強力なマーカーとして使用することができるが、これはヒトＳＤＣでは発現されないことに留意されたい。

【0239】

一実施形態では、ＳＤＣは、樹状細胞同一性を有し、表Ａに列挙されるＳＤＣマーカーのうちの１つ以上も発現する骨髄細胞である。別の実施形態では、ＳＤＣは、樹状細胞同一性を有し、表Ａに列挙されるＳＤＣマーカーのうちの２、３、４、５、６、７、８、９個、またはすべても発現する骨髄細胞である。別の実施形態では、ＳＤＣは、ＢＤＣＡ３、ＫＩＴ、ＣＣＲ７、ＢＡＴＦ３、ＦＬＴ３、ＺＢＴＢ４６、ＩＲＦ８、ＢＴＬＡ、ＭＹＣＬ１、ＸＣＲ１及びＣＬＥＣ９Ａを発現する骨髄樹状細胞として特定される。ＳＤＣの細胞は、ＫＩＴ、ＣＣＲ７、ＢＡＴＦ３、ＦＬＴ３、ＺＢＴＢ４６、ＩＲＦ８、ＢＴＬＡ、ＭＹＣＬ１、ＣＬＥＣ９Ａ、ＢＤＣＡ３、及びＸＣＲ１のうちの少なくとも１つを発現することができる。いくつかの実施形態では、ＳＤＣは、その細胞表面上でＴＲＥＭ２、ＭＳ４Ａ７、Ｃ５ＡＲ１、ＬＹＶＥ１、ＡＢＣＣ３、ＬＩＬＲＢ４、ＭＲＣ１／ＣＤ２０６、ＳＩＧＬＥＣ１、ＳＴＡＢ１、ＴＭＥＭ３７、ＭＥＲＴＫ、及び／またはＴＭＥＭ１１９を実質的に発現しない。いくつかの実施形態では、ＳＤＣは、Ｃ５ＡＲ１、ＬＹＶＥ１、ＡＢＣＣ３、ＭＲＣ１、ＳＩＧＬＥＣ１、ＳＴＡＢ１、Ｃ１ＱＢ、Ｃ１ＱＡ、ＴＭＥＭ３７、ＭＥＲＴＫ、Ｃ１ＱＣ、ＴＭＥＭ１１９、ＭＳ４Ａ７、ＡＰＯＥ、ＣＹＰ４Ｆ１８、ＴＲＥＭ２、ＴＬＲ７、及び／またはＬＩＬＲＢ４を実質的に発現しない。フローサイトメトリー及びＰＣＲは、他の技術分野で認識されているアッセイの中でも、本明細書に開示されるマーカーの発現を評価するために使用することができる。

【0240】

刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５^＋、ＨＬＡ－ＤＲ^＋、ＣＤ１４^－、ＣＤ１１ｃ^＋、及びＢＤＣＡ３^＋であり得る。刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５^＋、ＨＬＡ－ＤＲ^＋、及びＢＤＣＡ３^＋であり得る。刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５^＋、ＨＬＡ－ＤＲ^＋、ＣＤ１４^－、及びＢＤＣＡ３^＋であり得る。刺激性骨髄細胞は、ＣＤ４５^＋、ＨＬＡ－ＤＲ^＋、ＣＤ１１ｃ^＋、及びＢＤＣＡ３^＋であり得る。

【0241】

タンパク質、ヌクレオチド、及びホモログ
ＮＳＭタンパク質を発現する非刺激性ヒト骨髄細胞を無効化及び／または検出するための方法及び組成物が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、本発明は、ＮＳＭタンパク質ホモログを発現する非ヒト哺乳動物細胞由来の非刺激性骨髄細胞の無効化及び／または検出を対象とする。例えば、マウス中のＮＳＭタンパク質は、そのヒトホモログと同等の制限された発現パターンを発現することができる。したがって、一実施形態では、ＮＳＭタンパク質を発現する非刺激性マウス骨髄細胞を無効化及び／または検出するための方法及び組成物が本明細書で提供される。また、本明細書では、ＮＳＭタンパク質のホモログを発現する任意の個体からの非刺激性細胞を、ＮＳＭタンパク質のホモログと同様の発現パターンで無効化及び／または検出するための同様の方法及び組成物も提供され、これらの細胞は、ＮＳＭタンパク質のものと同等の発現パターンを示す。

【0242】

ＮＳＭタンパク質またはヌクレオチドは、Ｃ５ＡＲ１、ＬＹＶＥ１、ＡＢＣＣ３、ＭＲＣ１、ＳＩＧＬＥＣ１、ＳＴＡＢ１、Ｃ１ＱＢ、Ｃ１ＱＡ、ＴＭＥＭ３７、ＭＥＲＴＫ、Ｃ１ＱＣ、ＴＭＥＭ１１９、ＭＳ４Ａ７、ＡＰＯＥ、ＣＹＰ４Ｆ１８、ＴＲＥＭ２、ＴＬＲ７、及びＬＩＬＲＢ４、ならびにそれらのホモログのうちの少なくとも１つ以上を含み得る。ＳＤＣタンパク質またはヌクレオチドは、ＫＩＴ、ＣＣＲ７、ＢＡＴＦ３、ＦＬＴ３、ＺＢＴＢ４６、ＩＲＦ８、ＢＴＬＡ、ＭＹＣＬ１、ＣＬＥＣ９Ａ、ＢＤＣＡ３、及びＸＣＲ１、ならびにそれらのホモログのうちの少なくとも１つ以上を含み得る。細胞表面ＮＳＭタンパク質は、ＴＲＥＭ２、ＭＳ４Ａ７、Ｃ５ＡＲ１、ＬＹＶＥ１、ＡＢＣＣ３、ＬＩＬＲＢ４、ＭＲＣ１／ＣＤ２０６、ＳＩＧＬＥＣ１、ＳＴＡＢ１、ＴＭＥＭ３７、ＭＥＲＴＫ、及びＴＭＥＭ１１９のうちの少なくとも１つ以上を含み得る。細胞表面ＮＳＭタンパク質は、単独で、または組み合わせて、１つ以上の抗ＴＲＥＭ２抗体によって標的化することができる。一般に、ＮＳＭは、ＮＳＭタンパク質またはヌクレオチドに対して陽性であり、ＳＤＣタンパク質またはヌクレオチドに対して陰性である。逆に、ＳＤＣは、一般に、ＳＤＣタンパク質またはヌクレオチドに対して陽性であり、ＮＳＭタンパク質またはヌクレオチドに対して陰性である。

【0243】

本明細書に記載の抗体は、少なくとも１つのポリペプチドを含むが、典型的には、ＨＣ／ＬＣの二量体、すなわち４つのポリペプチドを含む。本明細書に記載のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドも記載される。抗体は、典型的には、単離される。

【0244】

本明細書で使用される場合、「単離された」とは、その天然細胞培養環境の構成要素から特定され、分離及び／または回収されている薬剤（例えば、ポリペプチドまたはポリヌクレオチド）を意味する。その天然環境の汚染構成要素は、抗体の診断または治療用途を妨げる材料であり、酵素、ホルモン、及び他のタンパク質性または非タンパク質性溶質を含み得る。単離されたとはまた、例えば、ヒトの介入によって合成的に生成されている薬剤を指す。

【0245】

「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」という用語は、アミノ酸残基のポリマーを指すために本明細書で互換的に使用される。すなわち、ポリペプチドに関する説明は、ペプチドの説明及びタンパク質の説明に等しく適用され、逆もまた同様である。これらの用語は、天然に存在するアミノ酸ポリマー、及び１つ以上のアミノ酸残基が非天然にコードされたアミノ酸であるアミノ酸ポリマーに適用される。本明細書で使用される場合、この用語は、完全長タンパク質を含む任意の長さのアミノ酸鎖を包含し、アミノ酸残基は、共有結合ペプチド結合によって連結される。

【0246】

「アミノ酸」という用語は、天然に存在するアミノ酸及び非天然に存在するアミノ酸、ならびに天然に存在するアミノ酸と同様の様式で機能するアミノ酸類似体及びアミノ酸模倣物を指す。天然にコードされるアミノ酸は、２０個の一般的なアミノ酸（アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プラリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、及びバリン）ならびにピロリシン及びセレノシステインである。アミノ酸類似体とは、天然に存在するアミノ酸と同じ基本化学構造を有する化合物、すなわち、水素、カルボキシル基、アミノ基、及びホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムなどのＲ基に結合する炭素を指す。そのような類似体は、修飾されたＲ基（例えば、ノルロイシン）または修飾されたペプチド骨格を有するが、天然に存在するアミノ酸と同じ基本的な化学構造を保持する。アミノ酸への言及としては、例えば、天然に存在するタンパク質を構成するＬ－アミノ酸、Ｄ－アミノ酸、アミノ酸バリアント及び誘導体などの化学修飾アミノ酸、β－アラニン、オルニチンなどの天然に存在するタンパク質を構成しないアミノ酸、ならびにアミノ酸の特徴であることが当該技術分野で既知の特性を有する化学合成化合物が挙げられる。天然に存在しないアミノ酸の例としては、α－メチルアミノ酸（例えば、α－メチルアラニン）、Ｄ－アミノ酸、ヒスチジン様アミノ酸（例えば、２－アミノ－ヒスチジン、β－ヒドロキシ－ヒスチジン、ホモヒスチジン）、側鎖に余分なメチレンを有するアミノ酸（「ホモ」アミノ酸）、及び側鎖のカルボン酸官能基がスルホン酸基（例えば、システイン酸）で置き換えられているアミノ酸が挙げられるが、これらに限定されない。合成の天然に存在しないアミノ酸、置換アミノ酸、または１つ以上のＤ－アミノ酸を含む、天然に存在しないアミノ酸を本発明のタンパク質に組み込むことは、多くの異なる方式で有利であり得る。Ｄ－アミノ酸含有ペプチドなどは、Ｌ－アミノ酸含有対応物と比較して、インビトロまたはインビボで増加した安定性を示す。したがって、Ｄ－アミノ酸を組み込んだペプチドなどの構築は、より大きい細胞内安定性が所望される場合または必要とされる場合に特に有用であり得る。より具体的には、Ｄ－ペプチドなどは、内因性ペプチダーゼ及びプロテアーゼに耐性があり、それによって、そのような特性が望ましい場合に、分子の改善されたバイオアベイラビリティ、及びインビボでの延長された寿命を提供する。加えて、Ｄ－ペプチドなどは、Ｔヘルパー細胞への主要な組織適合性複合体クラスＩＩ制限された提示のために効率的に処理することができず、したがって、全生物において体液性免疫応答を誘導する可能性が低い。

【0247】

アミノ酸は、本明細書では、一般に知られている３文字の記号、またはＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎによって推奨された１文字の記号のいずれかによって称され得る。ヌクレオチドも同様に、一般に認められた１文字のコードによって称され得る。

【0248】

また、本発明には、抗体のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドも含まれる。「ポリヌクレオチド」または「ヌクレオチド配列」という用語は、２つ以上のヌクレオチド分子の連続した伸長部を示すことが意図される。ヌクレオチド配列は、ゲノム、ｃＤＮＡ、ＲＮＡ、半合成もしくは合成起源、またはそれらの任意の組み合わせのものであり得る。

【0249】

「核酸」という用語は、一本鎖または二本鎖のいずれかの形態のデオキシリボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオシド、リボヌクレオシド、またはリボヌクレオチド、及びそれらのポリマーを指す。特に限定されない限り、この用語は、参照核酸と同様の結合特性を有し、天然に存在するヌクレオチドと同様の様式で代謝される天然ヌクレオチドの既知の類似体を含む核酸を包含する。特に限定されない限り、この用語はまた、ＰＮＡ（ペプチド核酸）、アンチセンス技術で使用されるＤＮＡの類似体（ホスホロチオエート、ホスホロアミデートなど）を含むオリゴヌクレオチド類似体を指す。別段の指示がない限り、特定の核酸配列はまた、明示的に示される配列と同様に、その保存的に改変されたバリアント（縮退コドン置換を含むがこれらに限定されない）及び相補的配列を暗黙的に包含する。具体的には、縮重コドン置換は、１つ以上の選択された（またはすべての）コドンの第３の位置が混合塩基及び／またはデオキシイノシン残基で置換されている配列を生成することによって達成され得る（Ｂａｔｚｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．１９：５０８１（１９９１）、Ｏｈｔｓｕｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：２６０５－２６０８（１９８５）、Ｒｏｓｓｏｌｉｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｐｒｏｂｅｓ ８：９１－９８（１９９４））。

【0250】

「保存的に修飾されたバリアント」は、アミノ酸及び核酸配列の両方に適用される。特定の核酸配列に関して、「保存的に修飾されたバリアント」は、同一または本質的に同一のアミノ酸配列をコードするか、または核酸が本質的に同一の配列にアミノ酸配列をコードしない核酸を指す。遺伝暗号の縮退のために、多数の機能的に同一の核酸が任意の所与のタンパク質をコードする。例えば、コドンＧＣＡ、ＧＣＣ、ＧＣＧ及びＧＣＵはすべて、アミノ酸アラニンをコードする。したがって、アラニンがコドンによって指定されるすべての位置において、コドンは、コードされたポリペプチドを改変することなく、記載される対応するコドンのいずれかに改変され得る。そのような核酸バリエーションは、保存的に修飾されたバリエーションの１つの種である「サイレントバリエーション」である。ポリペプチドをコードする本明細書のすべての核酸配列はまた、核酸のすべての可能なサイレント変異を説明する。当業者であれば、核酸中の各コドン（通常はメチオニンの唯一のコドンであるＡＵＧ、及び通常はトリプトファンの唯一のコドンであるＴＧＧを除く）は、機能的に同一の分子をもたらすように修飾され得ることを認識するであろう。したがって、ポリペプチドをコードする核酸の各サイレント変異は、記載されている各配列において暗黙的である。

【0251】

アミノ酸配列に関して、当業者は、コードされた配列中の単一のアミノ酸または小さい割合のアミノ酸を改変、付加または欠失させる核酸、ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質配列への個々の置換、欠失、または付加が、「保存的に改変されたバリアント」であり、改変が、アミノ酸の欠失、アミノ酸の付加、またはアミノ酸の化学的に類似したアミノ酸による置換をもたらすことを認識するであろう。機能的に類似したアミノ酸を提供する保存的置換表は、当業者に知られている。このような保存的に修飾されたバリアントは、本明細書に記載の多型バリアント、種間ホモログ、及び対立遺伝子に加えてであり、また、これらを除外しない。

【0252】

機能的に類似したアミノ酸を提供する保存的置換表は、当業者に知られている。以下の８つの群は、各々、互いに保存的な置換であるアミノ酸を含有する。１）アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、２）アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、３）アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、４）アルギニン（Ｒ）、リジン（Ｋ）、５）イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）、６）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）、７）セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、及び［０１３９］８）システイン（Ｃ）、メチオニン（Ｍ）（例えば、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ（Ｗ Ｈ Ｆｒｅｅｍａｎ ＆ Ｃｏ．；２ｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｄｅｃｅｍｂｅｒ １９９３を参照されたい）。

【0253】

「同一の」または「同一性」パーセントという用語は、２つ以上の核酸配列またはポリペプチド配列に関して、同じである２つ以上の配列またはサブ配列を指す。配列は、以下の配列比較アルゴリズム（または当業者に利用可能な他のアルゴリズム）のうちの１つを使用して、または手動アラインメント及び目視検査によって測定されるように、比較ウィンドウまたは指定された領域にわたって、最大一致について比較され、アラインメントされたときに、同じ（すなわち、指定された領域にわたる約６０％の同一性、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、または約９５％の同一性）であるアミノ酸残基またはヌクレオチドの割合を有する場合、「実質的に同一」である。アミノ酸配列同一性パーセントを決定する目的のためのアラインメントは、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、ＭＥＧＡＬＩＧＮ（ＤＮＡＳＴＡＲ）、ＣＬＵＳＴＡＬＷ、ＣＬＵＳＴＡＬ ＯＭＥＧＡ、またはＭＵＳＣＬＥソフトウェアなどの公的に利用可能なコンピュータソフトウェアを使用して、当該技術分野の技術の範囲内にある様々な方式で達成することができる。この定義はまた、試験配列の相補体を指す。同一性は、少なくとも約５０アミノ酸もしくはヌクレオチド長の領域にわたって、または７５～１００アミノ酸もしくはヌクレオチド長の領域にわたって、または特定されない場合、ポリヌクレオチドもしくはポリペプチドの配列全体にわたって存在し得る。ヒト以外の種由来のホモログを含む本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、本明細書に記載のポリヌクレオチド配列またはその断片を有する標識されたプローブを用いたストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でライブラリをスクリーニングし、完全長ｃＤＮＡ及び上述のポリヌクレオチド配列を含有するゲノムクローンを単離するステップを含む工程によって得られ得る。かかるハイブリダイゼーション技術は、当業者に周知である。

【0254】

配列比較のために、典型的には、１つの配列が参照配列として機能し、これと試験配列を比較する。配列比較アルゴリズムを使用する場合、試験配列及び参照配列をコンピュータに入力し、必要に応じてサブシーケンス座標を指定し、配列アルゴリズムプログラムパラメータを指定する。デフォルトのプログラムパラメータを使用することができ、または代替的なパラメータを指定することができる。その後、配列比較アルゴリズムは、プログラムパラメータに基づいて、参照配列に対する試験配列の配列同一性パーセントを算出する。

【0255】

「比較ウィンドウ」は、本明細書で使用される場合、２つの配列が最適にアラインメントされた後に、配列が同じ数の連続位置の参照配列と比較され得る、２０～６００、通常は約５０～約２００、より通常は約１００～約１５０からなる群から選択される連続位置の数のうちのいずれか１つのセグメントへの参照を含む。比較のための配列のアラインメントの方法は、当業者に既知である。比較のための配列の最適なアラインメントは、限定されないが、Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｗａｔｅｒｍａｎ（１９７０）Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２ｃの局所的な相同性アルゴリズムによって、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３の相同性アラインメントアルゴリズムによって、Ｐｅａｒｓｏｎ ａｎｄ Ｌｉｐｍａｎ（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：２４４４の類似性方法のサーチによって、これらのアルゴリズム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．におけるＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、及びＴＦＡＳＴＡ）のコンピュータによる実装によって、または手動のアラインメント及び目視検査（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（１９９５ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）を参照されたい）によって、行うことができる。

【0256】

配列同一性パーセント及び配列類似性を決定するのに好適なアルゴリズムの一例は、ＢＬＡＳＴ及びＢＬＡＳＴ ２．０アルゴリズムであり、それぞれ、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９－３４０２、及びＡｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－４１０に記載されている。ＢＬＡＳＴ分析を実行するためのソフトウェアは、Ｗｏｒｌｄ Ｗｉｄｅ Ｗｅｂのｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ．において利用可能なＮａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎによって公的に利用可能である。ＢＬＡＳＴアルゴリズムパラメータＷ、Ｔ、及びＸは、アラインメントの感度及び速度を決定する。ＢＬＡＳＴＮプログラム（ヌクレオチド配列用）は、デフォルトとして、１１のワード長（Ｗ）、期待値（Ｅ）または１０、Ｍ＝５、Ｎ＝－４及び両方の鎖の比較を使用する。アミノ酸配列については、ＢＬＡＳＴＰプログラムは、３のワード長、及び１０の期待値（Ｅ）、及びＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリックス（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ ａｎｄ Ｈｅｎｉｋｏｆｆ（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１０９１５を参照されたい）５０のアラインメント（Ｂ）、１０の期待値（Ｅ）、Ｍ＝５、Ｎ＝－４、及び両方の鎖の比較を使用する。ＢＬＡＳＴアルゴリズムは、典型的には、「低複雑性（ｌｏｗ ｃｏｍｐｌｅｘｉｔｙ）」フィルターをオフにして実行される。

【0257】

ＢＬＡＳＴアルゴリズムはまた、２つの配列間の類似性の統計分析を行う（例えば、Ｋａｒｌｉｎ ａｎｄ Ａｌｔｓｃｈｕｌ（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：５８７３－５７８７を参照されたい）。ＢＬＡＳＴアルゴリズムが提供する類似性の１つの測定は、最小合計確率（Ｐ（Ｎ））であり、これは、２つのヌクレオチドまたはアミノ酸配列の間の一致が偶然に起こる確率の指標を提供する。例えば、核酸は、試験核酸と参照核酸との比較における最小合計確率が約０．２未満、または約０．０１未満、または約０．００１未満である場合、参照配列と類似であるとみなされる。

【0258】

「～に選択的に（または特異的に）ハイブリダイゼーションする」という語句は、その配列が複合体混合物（全細胞またはライブラリＤＮＡまたはＲＮＡを含むが、これらに限定されない）中に存在する場合、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、分子が特定のヌクレオチド配列にのみ結合するか、二本鎖化するか、またはハイブリダイゼーションすることを指す。

【0259】

「ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件」という語句は、当該技術分野で既知であるように、低いイオン強度及び高温の条件下でのＤＮＡ、ＲＮＡ、または他の核酸の配列、またはそれらの組み合わせのハイブリダイゼーションを指す。典型的には、ストリンジェントな条件下で、プローブは、核酸（限定されないが、全細胞またはライブラリＤＮＡまたはＲＮＡを含む）の複合体混合物中でその標的子配列にハイブリダイズするが、複合体混合物中の他の配列にはハイブリダイズしない。ストリンジェントな条件は、配列依存性であり、異なる環境で異なることになる。より長い配列は、より高い温度で特異的にハイブリダイゼーションする。核酸のハイブリダイゼーションに関する広範なガイドは、Ｔｉｊｓｓｅｎ，Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ－－Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ｐｒｏｂｅｓ，“Ｏｖｅｒｖｉｅｗ ｏｆ ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅ ｓｔｒａｔｅｇｙ ｏｆ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ ａｓｓａｙｓ”（１９９３）に見出される。

【0260】

本明細書で使用される場合、「操作する、操作された、操作すること」という用語は、ペプチド骨格の任意の操作、または天然に存在するもしくは組換えポリペプチドもしくはその断片の翻訳後修飾を含むとみなされる。操作することには、アミノ酸配列、グリコシル化パターン、または個々のアミノ酸の側鎖基の改変、ならびにこれらのアプローチの組み合わせが含まれる。操作されたタンパク質は、標準的な分子生物学的技術によって発現され、産生される。

【0261】

「単離された核酸分子またはポリヌクレオチド」とは、その天然環境から取り出されている核酸分子、ＤＮＡまたはＲＮＡを意図する。例えば、ベクターに含まれたポリペプチドをコードする組換えポリヌクレオチドは、単離されたものとみなされる。単離されたポリヌクレオチドのさらなる例としては、異種宿主細胞に維持された組換えポリヌクレオチド、または溶液中で精製された（部分的もしくは実質的に）ポリヌクレオチドが挙げられる。単離されたポリヌクレオチドは、通常、ポリヌクレオチド分子を含む細胞に含まれるポリヌクレオチド分子を含むが、ポリヌクレオチド分子は、染色体外に、またはその天然の染色体位置とは異なる染色体位置に存在する。単離されたＲＮＡ分子としては、インビボまたはインビトロＲＮＡ転写産物、及び陽性及び陰性の鎖形態、ならびに二本鎖形態が挙げられる。本明細書に記載の単離されたポリヌクレオチドまたは核酸は、例えば、ＰＣＲまたは化学合成を介して合成的に生成されるかかる分子をさらに含む。加えて、ある特定の実施形態では、ポリヌクレオチドまたは核酸は、プロモーター、リボソーム結合部位、または転写終結因子などの調節エレメントを含む。

【0262】

「ポリメラーゼ連鎖反応」または「ＰＣＲ」という用語は、一般に、例えば、米国特許第４，６８３，１９５号に記載されるように、インビトロで所望のヌクレオチド配列を増幅するための方法を指す。一般に、ＰＣＲ方法は、テンプレート核酸に優先的にハイブリダイゼーションすることができるオリゴヌクレオチドプライマーを使用して、プライマー伸長合成の繰り返しサイクルを伴う。

【0263】

本発明の参照ヌクレオチド配列に対して、少なくとも、例えば、９５％「同一」のヌクレオチド配列を有する核酸またはポリヌクレオチドとは、ポリヌクレオチド配列が参照ヌクレオチド配列の１００個のヌクレオチドごとに最大５個の点変異を含み得ることを除いて、ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が参照配列に対して同一であることが意図される。言い換えれば、参照ヌクレオチド配列に対して少なくとも９５％同一のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを得るために、参照配列中のヌクレオチドの最大５％が欠失しているか、または別のヌクレオチドで置換されてもよく、または参照配列中の全ヌクレオチドの最大５％の数のヌクレオチドが参照配列に挿入されてもよい。参照配列のこれらの変化は、参照ヌクレオチド配列の５’もしくは３’末端位置、またはそれらの末端位置の間の任意の場所で生じてもよく、参照配列内の残基の間に個々に散在するか、または参照配列内の１つ以上の連続した基の中にかのいずれかで散在する。実用的な問題として、任意の特定のポリヌクレオチド配列が、本発明のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるかどうかは、ポリペプチドについて上で考察されたもの（例えば、ＡＬＩＧＮ－２）などの既知のコンピュータプログラムを使用して、慣例的に決定することができる。

【0264】

ポリペプチドの誘導体、またはバリアントは、その誘導体またはバリアントのアミノ酸配列が、元のペプチドからの１００個のアミノ酸配列と少なくとも５０％の同一性を有する場合、ペプチドと「相同性」を共有するか、または「相同性である」と言われる。ある特定の実施形態では、誘導体またはバリアントは、誘導体と同じ数のアミノ酸残基を有するペプチドまたはペプチドの断片のいずれかと少なくとも７５％同じである。ある特定の実施形態では、誘導体またはバリアントは、誘導体と同じ数のアミノ酸残基を有するペプチドまたはペプチドの断片のいずれかと少なくとも８５％同じである。ある特定の実施形態では、誘導体のアミノ酸配列は、誘導体と同じ数のアミノ酸残基を有するペプチドまたはペプチドの断片のいずれかと少なくとも９０％同じである。いくつかの実施形態では、誘導体のアミノ酸配列は、誘導体と同じ数のアミノ酸残基を有するペプチドまたはペプチドの断片のいずれかと少なくとも９５％同じである。ある特定の実施形態では、誘導体またはバリアントは、誘導体と同じ数のアミノ酸残基を有するペプチドまたはペプチドの断片のいずれかと少なくとも９９％同じである。

【0265】

「修飾された」という用語は、本明細書で使用される場合、ポリペプチドの長さ、アミノ酸配列、化学構造、共翻訳修飾、またはポリペプチドの翻訳後修飾の変化など、所与のポリペプチドに加えられた任意の変更を指す。「（修飾された）」という形態の用語は、考察さられているポリペプチドが任意で修飾されていること、すなわち、考察中のポリペプチドが修飾されていてもよく、または修飾されていなくてもよいことを意味する。

【0266】

いくつかの態様では、ポリペプチドは、本明細書に開示される表（複数可）または受託番号（複数可）に示される関連する（例えば、ポリペプチド及び／または抗体）アミノ酸配列またはその断片に対して少なくとも８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、本明細書に開示される単離された抗体またはタンパク質は、本明細書に開示される表（複数可）または受託番号（複数可）に示される関連するヌクレオチド配列またはその断片に対して少なくとも８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％同一であるポリヌクレオチドによってコードされるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ヌクレオチド配列は、本明細書に開示される表（複数可）または受託番号（複数可）に示されるものなど、本明細書に開示されるヌクレオチド配列に対して少なくとも８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％同一であるヌクレオチド配列を含む。

【0267】

薬学的組成物
本出願は、本明細書に記載の抗体のうちのいずれか１つ以上を、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤とともに含む薬学的組成物を含む、抗体を含む組成物を提供する。いくつかの実施形態では、組成物は、滅菌である。薬学的組成物は、一般に、有効量の抗体を含む。

【0268】

これらの組成物は、本明細書に開示される抗体のうちの１つ以上に加えて、薬学的に許容される賦形剤、担体、緩衝液、安定剤、または当業者に周知の他の材料を含み得る。そのような材料は、非毒性でなければならず、活性成分の有効性を妨げてはならない。担体または他の材料の正確な性質は、投与経路、例えば、経口、静脈内、皮膚または皮下、鼻、筋肉内、腹腔内経路に依存し得る。

【0269】

ポリペプチド、抗体（例えば、抗ＴＲＥＭ２抗体）、核酸、低分子、または個体に与えられる他の薬学的に有用な化合物であるかどうかにかかわらず、投与は、好ましくは、「治療有効量」または「予防有効量」（場合によっては、予防は療法とみなすことができるが）での投与であり、これは、個体に有益性を示すのに十分である。投与される実際の量、及び投与の速度及び時間経過は、治療されているタンパク質凝集疾患の性質及び重症度に依存するであろう。治療の処方、例えば、投薬量の決定などは、一般開業医及び他の医師の責任の範囲内であり、典型的には、治療される障害、個々の対象の状態、送達部位、投与方法、及び開業医に知られている他の要因を考慮に入れる。上述の技術及びプロトコルの例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．（ｅｄ），１９８０に見出すことができる。

【0270】

組成物は、治療すべき状態に応じて、単独で、または他の治療と組み合わせて、同時にまたは逐次にかのいずれかで投与することができる。

【0271】

方法
調製方法
本明細書に記載の抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に記載されるように、組換え方法及び組成物を使用して産生することができる。

【0272】

一実施形態では、本明細書に記載される抗体をコードする単離された核酸が提供される。かかる核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び／または抗体のＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖及び／または重鎖）、または単一ドメイン抗体のＶＨＨを含むアミノ酸配列をコードし得る。さらなる実施形態では、かかる核酸を含む１つ以上のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。一実施形態では、核酸は、マルチシストロンベクターにおいて提供される。さらなる実施形態では、かかる核酸を含む宿主細胞が提供される。そのような一実施形態では、宿主細胞は、以下を含む（例えば、以下により、形質転換されている）。（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び抗原結合ポリペプチド構築物のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、または（２）抗原結合ポリペプチド構築物のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクター、及び抗原結合ポリペプチド構築物のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２のベクター。一実施形態では、宿主細胞は、真核細胞、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、またはヒト胚腎（ＨＥＫ）細胞、またはリンパ球細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。一実施形態では、抗体を作製する方法が提供され、この方法は、上で提供されるように、抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を、抗体の発現に好適な条件下で培養することと、任意で、抗体を宿主細胞（または宿主細胞培養培地）から回収することと、を含む。

【0273】

抗体の組換え産生のために、例えば、上述のような抗体をコードする核酸を単離し、宿主細胞におけるさらなるクローニング及び／または発現のために１つ以上のベクターに挿入する。かかる核酸は、従来の手順を使用して（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合可能であるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）、容易に単離され、配列決定され得る。

【0274】

「実質的に精製された」という用語は、ある特定の実施形態では、実質的に細胞物質を含まない組換え産生ヘテロ多量体の場合には、その天然に存在する環境に見られるように、タンパク質、すなわち天然細胞、または宿主細胞に通常付随するか、またはそれらと相互作用する構成要素を実質的にまたは本質的に含まなくてもよい本明細書に記載の構築物、またはそのバリアントを指し、約３０％未満、約２５％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、約４％未満、約３％未満、約２％未満、または約１％未満（乾燥重量）の汚染タンパク質を有するタンパク質の調製物を含む。ヘテロ多量体またはそのバリアントが、宿主細胞によって組換え的に産生される場合、ある特定の実施形態では、タンパク質は、細胞の乾燥重量の約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約５％、約４％、約３％、約２％、または約１％以下で存在する。ヘテロ多量体またはそのバリアントが、宿主細胞によって組換え産生される場合、ある特定の実施形態では、タンパク質は、細胞の乾燥重量の約５ｇ／Ｌ、約４ｇ／Ｌ、約３ｇ／Ｌ、約２ｇ／Ｌ、約１ｇ／Ｌ、約７５０ｍｇ／Ｌ、約５００ｍｇ／Ｌ、約２５０ｍｇ／Ｌ、約１００ｍｇ／Ｌ、約５０ｍｇ／Ｌ、約１０ｍｇ／Ｌ、または約１ｍｇ／Ｌ以下で培養培地中に存在する。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法によって生成される「実質的に精製された」ヘテロ多量体は、ＳＤＳ／ＰＡＧＥ分析、ＲＰ－ＨＰＬＣ、ＳＥＣ、及びキャピラリー電気泳動などの適切な方法によって決定される場合、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％の純度レベル、具体的には、少なくとも約７５％、８０％、８５％の純度レベル、より具体的には、少なくとも約９０％の純度レベル、少なくとも約９５％の純度レベル、少なくとも約９９％以上の純度レベルを有する。

【0275】

抗体コードベクターのクローニングまたは発現に好適な宿主細胞には、本明細書に記載される原核細胞または真核細胞が含まれる。

【0276】

「組換え宿主細胞」または「宿主細胞」は、挿入に使用される方法、例えば、組換え宿主細胞を作製するための直接取り込み、形質導入、ｆ－交配、または当該技術分野で既知の他の方法にかかわらず、外因性ポリヌクレオチドを含む細胞を指す。外因性ポリヌクレオチドは、非組み込みベクターとして維持されてもよく、例えば、プラスミドとして維持されてもよく、または代替的に、宿主ゲノムに組み込まれてもよい。宿主細胞は、ＣＨＯ、ＣＨＯの誘導体、ＮＳ０、Ｓｐ２Ｏ、ＣＶ－１、ＶＥＲＯ－７６、ＨｅＬａ、ＨｅｐＧ２、Ｐｅｒ．Ｃ６、またはＢＨＫを含み得る。

【0277】

本明細書で使用される場合、「真核生物」という用語は、動物（哺乳動物、昆虫、爬虫類、鳥などを含むがこれらに限定されない）、毛様体、植物（単子葉植物、双子葉植物、藻などを含むがこれらに限定されない）、真菌、酵母、鞭毛虫、小胞子体、原生生物などの系統発生ドメインに属する生物を指す。

【0278】

本明細書で使用される場合、「原核生物」という用語は、原核生物を指す。例えば、非真核生物は、真正細菌（大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、サーモス・サーモフィルス（Ｔｈｅｒｍｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、バシラス・ステアロサーモフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、シュードモナス・フルオレッセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）、シュードモナス・エルジノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、シュードモナス・プチダ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐｕｔｉｄａ）などを含むが、これらに限定されない）系統発生ドメイン、または古細菌（メタノコッカス・ヤンナスキ（Ｍｅｔｈａｎｏｃｏｃｃｕｓ ｊａｎｎａｓｃｈｉｉ）、メタノバクテリウム・サーモオートトロフィカム（Ｍｅｔｈａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｈｅｒｍｏａｕｔｏｔｒｏｐｈｉｃｕｍ）、ハロバクテリウム（Ｈａｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、例えば、ハロフェラックス・ボルカニ（Ｈａｌｏｆｅｒａｘ ｖｏｌｃａｎｉｉ）およびハロバクテリウム（Ｈａｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属の種ＮＲＣ－１、アルケオグロブス・フルギダス（Ａｒｃｈａｅｏｇｌｏｂｕｓ ｆｕｌｇｉｄｕｓ）、ピロコッカス・フリオスス（Ｐｙｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆｕｒｉｏｓｕｓ）、ピロコッカス・ホリコシイ（Ｐｙｒｏｃｏｃｃｕｓ ｈｏｒｉｋｏｓｈｉｉ）、アエロピルム・ペルニクス（Ａｅｕｒｏｐｙｒｕｍ ｐｅｒｎｉｘ）などを含むが、これらに限定されない）系統発生ドメインに属し得る。

【0279】

例えば、抗体は、特にグリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要とされない場合、細菌において産生され得る。細菌における抗体断片及びポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号、同第５，７８９，１９９号、及び同第５，８４０，５２３号を参照されたい。（また、大腸菌における抗体断片の発現を記載する、Ｃｈａｒｌｔｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎ．Ｊ．，２００３），ｐｐ．２４５－２５４を参照されたい。）発現後、抗体は、可溶性画分で細菌細胞ペーストから単離されてもよく、さらに精製され得る。

【0280】

原核生物に加えて、糸状菌または酵母等の真核微生物は、抗体コードベクターに好適なクローニングまたは発現宿主であり、それには、グリコシル化経路が「ヒト化」されており、部分的または完全ヒトグリコシル化パターンを有する抗体の産生をもたらす、真菌及び酵母株が含まれる。Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９－１４１４（２００４）、及びＬｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０－２１５（２００６）を参照されたい。

【0281】

グリコシル化抗体の発現に好適な宿主細胞はまた、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）に由来する。無脊椎動物細胞の例としては、植物及び昆虫細胞が挙げられる。特に、ヨトウガ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）細胞のトランスフェクションのために、昆虫細胞と併せて使用され得る多数のバキュロウイルス株が特定されている。

【0282】

植物細胞培養物もまた、宿主として利用することができる。例えば、米国特許第５，９５９，１７７号、同第６，０４０，４９８号、同第６，４２０，５４８号、同第７，１２５，９７８号、及び同第６，４１７，４２９号（トランスジェニック植物において抗体を産生するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）技術について記載する）を参照されたい。

【0283】

脊椎動物細胞もまた、宿主として使用され得る。例えば、懸濁液中で成長するように適合される哺乳動物細胞株が、有用であり得る。有用な哺乳動物宿主細胞株の他の例は、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ－７）、ヒト胚性腎臓株（例えば、Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７）に記載されるような、２９３または２９３細胞）、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）、マウスセルトリ細胞（Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３－２５１（１９８０）に記載されるような、ＴＭ４細胞）、サル腎臓細胞（ＣＶ１）、アフリカグリーンサル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６）、ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ）、イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ ３Ａ）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８）、ヒト肝細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）、マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２）、例えば、Ｍａｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４－６８（１９８２）に記載されるような、ＴＲＩ細胞、ＭＲＣ５細胞、及びＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳動物宿主細胞株には、ＤＨＦＲ^－ＣＨＯ細胞を含むチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（Ｕｒｌａｕｂ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６（１９８０））、ならびにＹ０、ＮＳ０及びＳｐ２／０などの骨髄腫細胞株が含まれる。抗体産生に好適な特定の哺乳動物宿主細胞株の概説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ ａｎｄ Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎ．Ｊ．），ｐｐ．２５５－２６８（２００３）を参照されたい。

【0284】

一実施形態では、本明細書に記載の抗体は、安定した哺乳動物細胞において、少なくとも１つの安定した哺乳動物細胞を、抗体をコードする核酸により、所定の比率でトランスフェクションすることと、少なくとも１つの哺乳動物細胞において核酸を発現させることと、を含む方法によって産生される。いくつかの実施形態では、核酸の所定の比率は、一過性トランスフェクション実験において決定され、発現産物中の抗体の最高割合をもたらす入力核酸の相対比率を決定する。

【0285】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の安定した哺乳動物細胞において抗体を産生する方法であり、少なくとも１つの安定した哺乳動物細胞の発現産物は、単量体重鎖または軽鎖ポリペプチド、または他の抗体と比較して、所望のグリコシル化抗体をより高い割合で含む。

【0286】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の安定した哺乳動物細胞においてグリコシル化抗体を産生する方法であり、この方法は、所望のグリコシル化抗体を特定し、精製することを含む。いくつかの実施形態では、上述の特定は、液体クロマトグラフィー及び質量分析の一方または両方によるものである。

【0287】

必要に応じて、抗体は、発現後に精製または単離され得る。タンパク質は、当業者に既知の様々な方式で単離または精製され得る。標準的な精製方法には、ＦＰＬＣ及びＨＰＬＣなどのシステムを使用して、大気圧または高圧で実施する、イオン交換、疎水性相互作用、親和性、サイジングまたはゲル濾過、及び逆相を含むクロマトグラフィー技術が含まれる。精製方法には、電気泳動技術、免疫学的技術、沈殿技術、透析技術、及びクロマトフォーカシング技術も含まれる。限外濾過及びダイアフィルトレーション技術も、タンパク質濃度と併せて有用である。当該技術分野で周知であるように、様々な天然タンパク質は、Ｆｃ及び抗体に結合し、これらのタンパク質は、本発明において、抗体の精製のための使用を見出すことができる。例えば、細菌タンパク質Ａ及びＧは、Ｆｃ領域に結合する。同様に、細菌タンパク質Ｌは、いくつかの抗体のＦａｂ領域に結合する。精製は、多くの場合、特定の融合パートナーによって可能にすることができる。例えば、ＧＳＴ融合を用いる場合はグルタチオン樹脂、Ｈｉｓタグを用いる場合はＮｉ^＋２親和性クロマトグラフィー、またはフラグタグを使用する場合は固定化抗フラグ抗体を使用して、抗体を精製してもよい。好適な精製技術の一般的なガイダンスについては、例えば、参照により完全に組み込まれた参考文献Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，３^ｒｄ Ｅｄ．，Ｓｃｏｐｅｓ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，ＮＹ，１９９４を参照されたい。必要な精製の程度は、抗体の使用に応じて変動することになる。いくつかの場合では、精製は必要ではない。

【0288】

ある特定の実施形態では、抗体は、Ｑ－セファロース、ＤＥＡＥセファロース、ｐｏｒｏｓ ＨＱ、ｐｏｒｏｓ ＤＥＡＦ、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ Ｑ、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＱＡＥ、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＤＥＡＥ、Ｒｅｓｏｕｒｃｅ／Ｓｏｕｒｃｅ Ｑ ａｎｄ ＤＥＡＥ、Ｆｒａｃｔｏｇｅｌ Ｑ及びＤＥＡＥカラムでのクロマトグラフィーを含むが、これらに限定されないアニオン交換クロマトグラフィーを使用して精製される。

【0289】

特定の実施形態では、本明細書に記載のタンパク質は、ＳＰ－セファロース、ＣＭセファロース、ｐｏｒｏｓ ＨＳ、ｐｏｒｏｓ ＣＭ、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＳＰ、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＣＭ、Ｒｅｓｏｕｒｃｅ／Ｓｏｕｒｃｅ Ｓ ａｎｄ ＣＭ、Ｆｒａｃｔｏｇｅｌ Ｓ及びＣＭカラム、ならびにそれらの等価物及び匹敵するものを含むが、これらに限定されないカチオン交換クロマトグラフィーを使用して精製される。

【0290】

加えて、本明細書に記載の抗体は、当該技術分野で既知の技術を使用して化学合成することができる（例えば、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，１９８３，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ＆ Ｃｏ．，Ｎ．Ｙ ａｎｄ Ｈｕｎｋａｐｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３１０：１０５－１１１（１９８４）を参照されたい）。例えば、ポリペプチドの断片に対応するポリペプチドは、ペプチド合成器の使用によって合成することができる。さらに、必要に応じて、非古典的アミノ酸または化学アミノ酸類似体を、ポリペプチド配列への置換または付加として導入することができる。非古典的アミノ酸としては、一般的なアミノ酸のＤ異性体、２，４－ジアミノ酪酸、アルファ－アミノイソ酪酸、４アミノ酪酸、Ａｂｕ、２－アミノ酪酸、ｇ－Ａｂｕ、ｅ－Ａｈｘ、６アミノヘキサン酸、Ａｉｂ、２－アミノイソ酪酸、３－アミノプロピオン酸、オルニチン、ノルロイシン、ノルバリン、ヒドロキシプロリン、サルコシン、シトルリン、ホモシトルリン、システイン酸、ｔ－ブチルグリシン、ｔ－ブチルアラニン、フェニルグリシン、シクロヘキシルアラニン、アラニン、フルオロ－アミノ酸、デザイナーアミノ酸、例えば、メチルアミノ酸、Ｃ－メチルアミノ酸、Ｎ－メチルアミノ酸、及び一般的なアミノ酸類似体が挙げられるが、これらに限定されない。さらに、アミノ酸は、Ｄ（右旋性）またはＬ（左旋性）であり得る。

【0291】

使用方法
一態様では、本出願は、対象において線維性疾患または状態を治療する方法であって、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１５）に結合し、マウスＴＲＥＭ２（配列番号１７）に対する結合について３７０１７抗体（配列番号３１及び３２）と競合する単離された抗体を投与することを含む、方法、あるいは線維性疾患または状態を有する対象のＴＲＥＭ２＋骨髄細胞を死滅させるか、無効化するか、または枯渇させる方法であって、骨髄細胞を、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１５）に結合し、任意でマウスＴＲＥＭ２（配列番号１７）に対する結合について３７０１７抗体（配列番号３１及び３２）と競合する単離された抗体と接触させることを含む、方法を提供する。

【0292】

いくつかの実施形態では、抗体は、
配列番号９、３７、４３、４４、４５、または４６に示される配列を含むＣＤＲ－Ｈ１と、
配列番号１０、４７、４８、４９、または５０に示される配列を含むＣＤＲ－Ｈ２と、
配列番号１１、３９、５１、または５２に示される配列を含むＣＤＲ－Ｈ３と、
配列番号１２、４０、５３、または５４に示される配列を含むＣＤＲ－Ｌ１と、
配列番号１３または５５に示される配列を含むＣＤＲ－Ｌ２と、
配列番号１４、４２、または５７に示される配列を含むＣＤＲ－Ｌ３と、を含む。

【0293】

いくつかの実施形態では、ＴＲＥＭ２抗体の投与は、アイソタイプ対照抗体の投与と比較して、対象における線維症を低減する。例えば、ＴＲＥＭ２抗体の投与は、アイソタイプ対照抗体の投与と比較して、対象における線維症を少なくとも約１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、もしくは１００倍以上、または１～２倍、２～３倍、３～４倍、４～５倍、５～６倍、６～７倍、７～８倍、８～９倍、９～１０倍、１０～２０倍、２０～３０倍、３０～４０倍、４０～５０倍、５０～６０倍、６０～７０倍、７０～８０倍、８０～９０倍、９０～１００倍以上低減することができる。他の実施例では、ＴＲＥＭ２抗体の投与は、対象における線維症を、アイソタイプ対照抗体の投与と比較して、少なくとも約１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、２００％、３００％、４００％、５００％、６００％、７００％、８００％、９００％、１０００％以上、または１～１０％、１０～２０％、２０～３０％、３０～４０％、４０～５０％、５０～６０％、６０～７０％、７０～８０％、８０～９０％、もしくは９０～１００％、１００～２００％、２００～３００％、３００～４００％、４００～５００％、５００～６００％、６００～７００％、７００～８００％、８００～９００％、９００～１０００％以上低減することができる。線維症の低減は、肝生検または肝バイオマーカーもしくは画像化のための血清アッセイなどの当業者に既知の任意の非侵襲的アッセイによって決定することができる。そのような非侵襲的アッセイは、Ｐａｐａｓｔｅｒｇｉｏｕ ｅｔ ａｌ，Ｎｏｎ－ｉｎｖａｓｉｖｅ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ ｌｉｖｅｒ ｆｉｂｒｏｓｉｓ，Ａｎｎ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．２０１２；２５（３）：２１８－２３１に記載されており、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0294】

いくつかの態様では、線維症を治療することを必要とする対象においてそれを行う方法であって、有効量のＴＲＥＭ２発現（ＴＲＥＭ２＋）細胞に結合し、枯渇させるか、無効化するか、または死滅させるための手段を投与することを含み、ＴＲＥＭ２＋細胞に結合し、枯渇させるか、無効化するか、または死滅させるための手段の量が、ＴＲＥＭ２＋細胞においてアポトーシスを促進するのに有効であり、それによって、細胞を枯渇させるか、無効化するか、または死滅させ、それによって、対照において線維症を治療する、方法が本明細書で提供される。いくつかの態様では、線維症を治療することを必要とする対象においてそれを行う方法であって、有効量のＴＲＥＭ２の阻害剤を投与することを含み、阻害剤が、ＴＲＥＭ２に結合するための手段であり、阻害剤が結合するＴＲＥＭ２が、配列番号１５に示される配列を含む、方法が本明細書で提供される。

【0295】

一態様では、本出願は、非刺激性骨髄細胞をヒト抗体などの抗ＴＲＥＭ２抗体と接触させ、非刺激性骨髄細胞の無効化をもたらす方法を提供する。

【0296】

別の態様では、本出願は、非刺激性骨髄細胞を抗ＴＲＥＭ２マウス抗体と接触させ、非刺激性骨髄細胞の無効化をもたらす方法を提供する。

【0297】

いくつかの実施形態では、非刺激性細胞は、ＤＣ１細胞、及びＴＡＭ細胞のうちの１つ以上である。

【0298】

いくつかの実施形態では、本出願は、非刺激性骨髄細胞を無効化する方法であって、非刺激性骨髄細胞をＴＲＥＭ２抗体と接触させ、それによって非刺激性骨髄細胞を死滅させることを含む、方法を提供する。無効化とは、細胞を部分的または完全に機能的ではない状態にすることを指す。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞の無効化は、細胞において成長停止を誘導することをもたらす。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞の無効化は、細胞内のアポトーシスをもたらす。いくつかの実施形態では、非刺激性細胞の無効化は、例えば、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）または抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）によって、細胞の溶解をもたらす。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞の無効化は、細胞内の壊死をもたらす。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞の無効化は、細胞において成長停止を誘導することをもたらす。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞の無効化は、細胞を不活性化することをもたらす。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞の無効化は、細胞内のＴＲＥＭ２タンパク質の活性を中和することをもたらす。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞の無効化は、細胞の増殖の減少をもたらす。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞の無効化は、細胞の分化をもたらす。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞の無効化は、阻害性抗原提示細胞として作用する細胞の能力の低下をもたらすか、または活性化抗原提示細胞として作用する細胞の能力の増加をもたらす。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞の無効化は、腫瘍組織または腫瘍微小環境（ＴＭＥ）内の細胞の誤った局在化をもたらす。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞の無効化は、腫瘍組織または腫瘍微小環境内の細胞の空間的組織の変化をもたらす。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞の無効化は、腫瘍組織またはＴＭＥ内の細胞の時間的発現の変化をもたらす。いくつかの実施形態では、本方法は、非刺激性骨髄系細胞を除去することをさらに含む。

【0299】

本明細書に記載の非刺激性骨髄細胞の無効化のありとあらゆる態様では、特性（複数可）または機能（複数可）の態様の任意の増加または減少または変化は、抗ＴＲＥＭ２抗体と接触していない細胞と比較した場合のものである。

【0300】

別の態様では、本出願は、非刺激性骨髄細胞を抗ＴＲＥＭ２抗体と接触させる方法を提供し、これにより、非刺激性骨髄細胞の機能の調節をもたらす。調節は、以下のうちのいずれか１つ以上であり得る。いくつかの実施形態では、非刺激性細胞は、ＤＣ１細胞、ＴＡＭ１細胞、及びＴＡＭ２細胞のうちの１つ以上である。いくつかの実施形態では、機能の調節は、非刺激性骨髄細胞の無効化をもたらす。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞の機能の調節は、例えば、ＭＨＣＩ分子上の抗原をナイーブＣＤ８＋Ｔ細胞に交差提示する非刺激性細胞の能力を増加させることによって、天然及び活性化ＣＤ８＋Ｔ細胞の両方を刺激する細胞の能力の増加をもたらす。いくつかの実施形態では、調節は、例えば、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）シグナル伝達、Ｔ細胞増殖、またはＴ細胞サイトカイン産生を誘発する細胞の能力を含む、非刺激性骨髄細胞のＴ細胞刺激機能を増加させる。一実施形態では、非刺激細胞の生存が減少するか、または非刺激細胞の増殖が減少する。一実施形態では、刺激性骨髄細胞の非刺激性骨髄細胞に対する比率が増加する。

【0301】

本明細書に記載の非刺激性骨髄細胞の機能の減少のありとあらゆる態様では、特性（複数可）または機能（複数可）の態様の任意の増加または減少または変化は、抗ＴＲＥＭ２抗体と接触していない細胞と比較した場合のものである。

【0302】

いくつかの実施形態では、本出願は、非刺激性骨髄細胞を死滅させる（細胞死を誘導するとも称される）方法であって、非刺激性骨髄細胞を抗ＴＲＥＭ２抗体と接触させ、それによって非刺激性骨髄細胞を死滅させることを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、死滅は、抗ＴＲＥＭ２抗体と接触していない非刺激性骨髄細胞と比較して増加する。いくつかの実施形態では、接触は、非刺激性骨髄細胞においてアポトーシスを誘導する。いくつかの実施形態では、接触は、非刺激性骨髄細胞においてアポトーシスを誘導する。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、非刺激性骨髄細胞及び刺激性骨髄細胞を含む免疫細胞の集団内にある。いくつかの実施形態では、本方法は、非刺激性骨髄系細胞を除去することをさらに含む。いくつかの実施形態では、細胞の１０％～８０％が死滅する。いくつかの実施形態では、細胞の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、または８０％が死滅する。

【0303】

いくつかの実施形態では、本発明の出願は、刺激性骨髄細胞及び非刺激性骨髄細胞を含む免疫細胞の集団における刺激性骨髄細胞の非刺激性骨髄細胞に対する比率を増加させる方法であって、免疫細胞の集団を抗ＴＲＥＭ２抗体と接触させることを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、比率は、抗ＴＲＥＭ２抗体と接触していない細胞の集団と比較して、増加する。いくつかの実施形態では、ＤＣ２細胞のＤＣ１細胞に対する比率が増加する。いくつかの実施形態では、ＤＣ２細胞のＴＡＭ１細胞に対する比率が増加する。いくつかの実施形態では、ＤＣ２細胞のＴＡＭ２細胞に対する比率が増加する。いくつかの実施形態では、ＤＣ２細胞のＴＡＭ１＋ＴＡＭ２細胞に対する比率が増加する。いくつかの実施形態では、ＤＣ２細胞のＴＡＭ１＋ＤＣ１細胞に対する比率が増加する。いくつかの実施形態では、ＤＣ２細胞のＤＣ１＋ＴＡＭ２細胞に対する比率が増加する。いくつかの実施形態では、ＤＣ２細胞のＤＣ１＋ＴＡＭ１＋ＴＡＭ２細胞に対する比率が増加する。いくつかの実施形態では、少なくとも比率は、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％増加する。

【0304】

いくつかの実施形態では、接触前の刺激性骨髄細胞の非刺激性骨髄細胞に対する比率は、０．００１：１～０．１：１の範囲である。いくつかの実施形態では、接触後の刺激性骨髄細胞の非刺激性骨髄細胞に対する比率は、０．１：１～１００：１の範囲である。

【0305】

いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞の数は減少している。いくつかの実施形態では、刺激性骨髄細胞は、ＤＣ２細胞である。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、例えば、壊死またはアポトーシスによって死滅する。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、成長停止を受けるように誘導される。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞は、もはや増殖しない。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞の空間的局在化が変化し、ＴＭＥの特定の領域において比率が増加する。いくつかの実施形態では、非刺激性骨髄細胞の時間的発現は変化し、比率は特定の時間中に増加する。

【0306】

いくつかの実施形態では、接触はインビトロである。いくつかの実施形態では、接触はインビボである。いくつかの特定の実施形態では、接触は、ヒトにおいてインビボである。いくつかの実施形態では、接触は、抗ＴＲＥＭ２抗体を投与することによって行われる。いくつかの実施形態では、線維性疾患は、がんではない。

【0307】

いくつかの実施形態では、抗体を受ける個体（ヒトなど）は、線維性疾患、例えば、肝疾患を有する。いくつかの実施形態では、肝疾患は、線維症、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪肝（ＮＡＦＬ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、肝硬変、または肝臓癌である。いくつかの実施形態では、肝疾患は、肝炎から生じる肝疾患、肥満から生じる脂肪肝疾患、糖尿病から生じる脂肪肝疾患、インスリン抵抗性から生じる脂肪肝疾患、高トリグリセリド血症から生じる脂肪肝疾患、無βリポタンパク血症、糖原病、ウェーバー・クリスチャン病、ウォルマン病、急性妊娠脂肪肝、及び脂肪萎縮症などの脂肪肝疾患である。

【0308】

ＮＡＳＨは、炎症、肝細胞傷害、及び様々な程度の線維症の存在として特徴付けられる。ＮＡＳＨの病因に関与する根本的な機構は、完全には理解されていない。肝臓マクロファージがＮＡＳＨの進行及び修復の両方を調整することが示されている。ＮＡＳＨ進行中の肝臓マクロファージの活性化は、サイトカイン、脂質代謝産物、及び他のシグナル分子などの様々な刺激に依存する動的な手順である。周囲の細胞とともに、肝臓マクロファージは、炎症応答、線維形成、血管リモデリングなどを引き起こし得る。肝臓マクロファージと周囲の細胞との間の細胞間シグナル伝達は、ＮＡＳＨ発達に関与することが知られている。肝臓マクロファージは、ＮＡＳＨ治療のための魅力的な標的である。

【0309】

ＴＲＥＭ２発現は、ＮＡＳＨの重症度と強く関連していた。肝臓の疾患が多いほど、細胞は、より多くのＴＲＥＭ２を産生する。マクロファージは、疾患肝臓において実質的により高い割合で存在し、より活発にＴＲＥＭ２を産生していた。高発現ＴＲＥＭ２によってマークされるＮＡＳＨ特異的マクロファージ集団は、ＮＡＳＨ関連マクロファージ（ＮＡＭ）と呼称され、マウス及びヒトの両方のＮＡＳＨ肝臓において観察された。ＴＲＥＭ２＋ＣＤ９＋マクロファージの病原性亜集団は、ｓｃａｒ関連マクロファージ（ＳＡＭａｃｓ）と名付けられ、ＮＡＳＨを有するヒト肝臓の線維化ニッチにおいても特定された。ＳＡＭａｃｓの拡大は、ＮＡＳＨ誘導性肝線維症の程度と正の相関があった。

【0310】

いくつかの実施形態では、個体に、有効量の抗ＴＲＥＭ２抗体を含む組成物を投与することを含む、個体において線維性疾患を治療する方法。

【0311】

いくつかの実施形態では、ヒトにおける線維性疾患を治療すること、または治療は、（１）線維性疾患を発症するリスクを防止もしくは軽減すること、すなわち、線維性疾患の素因があり得るが、線維性疾患の症状をまだ経験していないか、または示していない対象において線維性疾患の臨床症状を発症させないこと（すなわち、予防）、（２）線維性疾患を阻害すること、すなわち、線維性疾患もしくはその臨床症状の発症を阻止もしくは軽減すること、及び／または（３）線維性疾患を軽減すること、すなわち、線維性疾患の退縮、逆転、もしくは改善を引き起こすこと、もしくはその臨床症状の数、頻度、持続時間もしくは重症度を低下させること、のうちの１つ以上を含む。

【0312】

いくつかの実施形態では、ヒトにおけるＮＡＦＬＤまたはＮＡＳＨなどの肝疾患を治療すること、または治療は、（１）ＮＡＦＬＤもしくはＮＡＳＨを発症するリスクを防止もしくは軽減すること、すなわち、ＮＡＦＬＤもしくはＮＡＳＨの素因があり得るが、ＮＡＦＬＤもしくはＮＡＳＨの症状をまだ経験していないか、または示していない対象においてＮＡＦＬＤもしくはＮＡＳＨの臨床症状を発症させないこと（すなわち、予防）、（２）ＮＡＦＬＤもしくはＮＡＳＨを阻害すること、すなわち、ＮＡＦＬＤもしくはＮＡＳＨもしくはその臨床症状の発症を阻止もしくは軽減すること、及び（３）ＮＡＦＬＤもしくはＮＡＳＨを軽減すること、すなわち、ＮＡＦＬＤもしくはＮＡＳＨの退縮、逆転、もしくは改善を引き起こすこと、もしくはその臨床症状の数、頻度、持続時間もしくは重症度を低下させること、のうちの１つ以上を含む。

【0313】

特定の対象の治療有効量は、治療される対象の健康及び身体状態、ＮＡＦＬＤまたはＮＡＳＨの程度、医療状況の評価、及び他の関連する要因に応じて変化する。治療有効量は、日常的な試験を通じて決定することができる比較的広い範囲に収まることが予想される。線維性疾患の治療の当業者であれば、過度の実験なしに、個人的な知識及び本出願の開示に依存して、疾患の特定の段階に対する治療有効量を確認して、治療有効量を達成することができるであろう。

【0314】

別の態様では、本発明は、個体に、有効量の抗ＴＲＥＭ２抗体を含む組成物を投与することを含む、個体において免疫関連状態を治療する方法を提供する。別の態様では、本発明は、個体に、有効量の抗ＴＲＥＭ２抗体を含む組成物を投与することを含む、個体において免疫応答を増強する方法を提供する。いくつかの実施形態では、これらの方法は、ＰＤＬ遮断療法、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、ＣＴＬＡ４遮断療法、抗ＣＴＬＡ－４抗体、Ｔ細胞上の阻害分子が遮断される一般化されたチェックポイント遮断療法、養子Ｔ細胞療法、ＣＡＲ Ｔ細胞療法、樹状細胞または他の細胞療法、ならびに従来の化学療法などの他の併用療法と組み合わせてさらに提供される。

【0315】

いくつかの実施形態では、本方法は、個体からの生体試料中のＴＲＥＭ２タンパク質の発現レベルを決定することをさらに含む。いくつかの実施形態では、生体試料は、限定されないが、体液、組織試料、臓器試料、尿、糞便、血液、唾液、ＣＳＦ、及びそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、生体試料は、組織に由来する。いくつかの実施形態では、発現レベルは、ＴＲＥＭ２タンパク質をコードするｍＲＮＡのｍＲＮＡ発現レベルを含む。いくつかの実施形態では、ＴＲＥＭ２タンパク質の発現レベルは、ＮＳＭのタンパク質発現レベルを含む。いくつかの実施形態では、ＴＲＥＭ２タンパク質の発現レベルは、ＦＡＣＳ、ウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡ、免疫沈降、免疫組織化学、免疫蛍光、放射免疫アッセイ、ドットブロッティング、免疫検出方法、ＨＰＬＣ、表面プラズモン共鳴、光学分光法、質量分析、ＨＰＬＣ、ｑＰＣＲ、ＲＴ－ｑＰＣＲ、多重ｑＰＣＲまたはＲＴ－ｑＰＣＲ、ＲＮＡ－ｓｅｑ、マイクロアレイ分析、ＳＡＧＥ、ＭａｓｓＡＲＲＡＹ技術、及びＦＩＳＨ、ならびにそれらの組み合わせからなる群から選択される方法を使用して、試料中で検出される。

【0316】

別の態様では、本出願は、一般に非刺激性骨髄細胞の存在もしくは不在を決定するための方法、または特定の非刺激性骨髄細胞（例えば、ＤＣ１細胞、ＴＡＭ１細胞、及び／またはＴＡＭ２細胞）の存在もしくは不在を決定するための方法であって、非刺激性骨髄細胞を含む細胞の集団を抗ＴＲＥＭ２抗体と接触させることと、非刺激性骨髄細胞の数を定量化することと、を含む、方法を提供する。別の態様では、本出願は、非刺激性骨髄細胞の存在もしくは不在を決定するための方法であって、非刺激性骨髄細胞及び刺激性骨髄細胞を含む免疫細胞の集団を抗ＴＲＥＭ２抗体と接触させることと、抗体の細胞に対する結合を示す複合体または部分を検出することと、任意で、集団内の非刺激性骨髄細胞の数を定量化することと、を含む、方法を提供する。別の態様では、非刺激性骨髄細胞の刺激性骨髄細胞に対する相対比率を決定する方法であって、非刺激性骨髄細胞及び刺激性骨髄細胞を含む免疫細胞の集団を抗ＴＲＥＭ２抗体と接触させることと、刺激性骨髄細胞及び非刺激性骨髄細胞の数を定量化することと、非刺激性骨髄細胞の刺激性骨髄細胞に対する相対比率を決定すること、を含む、方法が提供される。

【0317】

検出及び／または定量化のために本明細書に記載される実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合するが、必ずしもＡＤＣＣなどの生物学的応答に影響を及ぼす必要はないが、生物学的応答に影響を及ぼしてもよい。

【0318】

別の態様では、本発明は、免疫関連状態の治療のために免疫療法（例えば、抗ＴＲＥＭ２抗体による）に応答し得る個体を特定するための方法であって、個体からの生体試料中のＴＲＥＭ２タンパク質の発現レベルを検出することと、ＴＲＥＭ２タンパク質の発現レベルに基づいて、個体が免疫療法に応答し得るかどうかを決定することと、を含み、健康な個体と比較して個体におけるＴＲＥＭ２タンパク質のレベルの上昇が、その個体が免疫療法に応答し得ることを示す、方法を提供する。いくつかの実施形態では、これらの方法はまた、個体における免疫関連状態を診断するために使用されてもよく、ＴＲＥＭ２タンパク質の発現レベルに基づいており、健康な個体と比較して、個体におけるＴＲＥＭ２タンパク質のレベルの上昇が、その個体が線維性疾患に罹患していることを示す。いくつかの実施形態では、発現レベルは、ＴＲＥＭ２タンパク質をコードするｍＲＮＡのｍＲＮＡ発現レベルを含む。他の実施形態では、ＴＲＥＭ２タンパク質の発現レベルは、ＴＲＥＭ２タンパク質のタンパク質発現レベルを含む。いくつかの実施形態では、ＴＲＥＭ２タンパク質の発現レベルは、ＦＡＣＳ、ウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡ、免疫沈降、免疫組織化学、免疫蛍光、放射免疫アッセイ、ドットブロッティング、免疫検出方法、ＨＰＬＣ、表面プラズモン共鳴、光学分光法、質量分析、ＨＰＬＣ、ｑＰＣＲ、ＲＴ－ｑＰＣＲ、多重ｑＰＣＲまたはＲＴ－ｑＰＣＲ、ＲＮＡ－ｓｅｑ、マイクロアレイ分析、ＳＡＧＥ、ＭａｓｓＡＲＲＡＹ技術、及びＦＩＳＨ、ならびにそれらの組み合わせからなる群から選択される方法を使用して、試料中で検出される。これらの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合するが、必ずしもＡＤＣＣなどの生物学的応答に影響を及ぼす必要はない。いくつかの実施形態では、生体試料は、組織に由来する。いくつかの実施形態では、生体試料は、限定されないが、体液、組織試料、臓器試料、尿、糞便、血液、唾液、ＣＳＦ、及びそれらの任意の組み合わせを含む。

【0319】

また、対象の免疫応答を増強するか、または免疫療法治療の有効性を増強する方法が本明細書に開示される。一般に、ＳＤＣの存在量を増加させる治療は、無再発生存時間などの対象の転帰を改善し、免疫療法治療の有効性を増強する。治療により、対象においてＳＤＣ細胞の相対的または絶対的存在量を増加させることができる。治療により、対象においてＮＳＭ細胞の相対的または絶対的存在量を減少させることができる。

【0320】

一般的な治療戦略の例示的な方法は、Ｆｌｔ３Ｌの全身導入によってＳＤＣの数を増加させることを含む。別の方法は、ＣＳＦ１を同時に遮断しながら、Ｆｌｔ３Ｌで対象の自己骨髄または血液細胞を治療することである。骨髄または血液前駆細胞集団におけるＩＲＦ８、Ｍｙｃｌ１またはＢＡＴＦ３またはＺＢＴＢ４６などのＳＤＣ転写因子の発現、例えばレトロウイルスによる発現もまた、ＳＤＣ発生を促進するために使用してもよい。治療の別の戦略には、ＳＤＣを選択的に制限しながら、ＮＳＭ細胞を体系的に除去することが含まれる。これにより、これらの集団の比率に全体的に好ましい変化を生じさせることができる。ＮＳＭ細胞の除去は、ＴＲＥＭ２表面タンパク質に対する抗体の投与を含む任意の手段によって達成され得る。

【0321】

いくつかの実施形態では、ＳＤＣ増強治療は、対象の自然免疫系が疾患を制御または根絶することをよりよく可能にするために、療法的治療として適用される。別の実施形態では、本発明のＳＤＣ増強治療は、免疫療法治療などの療法的治療と組み合わせて適用され（そのような適用は、免疫療法治療の前、同時、または後である）、ＳＤＣ増強治療は、療法的治療の有効性を増加させるための補助治療またはアジュバント治療として機能する。

【0322】

投与方法
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法は、個体における免疫関連状態の治療に有用である。一実施形態では、個体はヒトであり、抗体はＴＲＥＭ２抗体である。別の実施形態では、個体はマウスであり、抗体はＴＲＥＭ２抗体である。

【0323】

任意の線維性疾患を、本明細書で提供される抗体で治療してもよい。疾患は、線維症、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、肝硬変、または医学分野で知られている肝臓癌であり得る。いくつかの実施形態では、免疫関連状態は、肝疾患などの線維性疾患であり得る。

【0324】

いくつかの実施形態では、免疫関連状態は、非刺激性骨髄細胞（ヒトにおける）上のＴＲＥＭ２タンパク質の発現または非ヒト種におけるＴＲＥＭ２タンパク質のホモログの発現に関連する免疫関連状態である。いくつかの実施形態では、免疫関連状態は、刺激性骨髄細胞と比較して、非刺激性骨髄細胞上のＴＲＥＭ２タンパク質の過剰発現に関連する免疫関連状態である。いくつかの実施形態では、ＴＲＥＭ２ ｍＲＮＡまたはＴＲＥＭ２タンパク質の過剰発現は、刺激性骨髄細胞と比較して、およそ少なくとも２倍、５倍、１０倍、２５倍、５０倍、または１００倍高い。

【0325】

いくつかの実施形態では、治療は、対象における免疫応答を増強する。いくつかの実施形態では、増強された免疫応答は、適応免疫応答である。いくつかの実施形態では、増強された免疫応答は、自然免疫応答である。

【0326】

いくつかの実施形態では、抗体は、静脈内に、筋肉内に、皮下に、局所的に、経口的に、経皮的に、腹腔内に、眼窩内に、移植によって、吸入によって、髄腔内に、脳室内に、または鼻腔内に投与される。有効量の抗ＴＲＥＭ２抗体を、疾患の治療のために投与してもよい。抗ＴＲＥＭ２抗体の適切な投薬量は、治療される疾患の種類、抗ＴＲＥＭ２抗体の種類、疾患の重症度及び経過、個体の臨床状態、治療に対する個体の臨床歴及び応答、ならびに主治医の裁量に基づいて決定され得る。

【0327】

併用療法
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、少なくとも１つの追加の治療剤とともに投与される。任意の好適な追加の治療剤は、本明細書で提供される抗体とともに投与され得る。

【0328】

線維性疾患の治療のために、抗ＴＲＥＭ２抗体は、１つ以上の追加の治療剤と組み合わされてもよい。

【0329】

キット及び製造物品
本出願は、本明細書に記載の抗体組成物のうちのいずれか１つ以上を含むキットを提供する。いくつかの実施形態では、キットは、二次抗体、免疫組織化学分析のための試薬、薬学的に許容される賦形剤及び取扱マニュアル、ならびにそれらの任意の組み合わせのうちのいずれかから選択される構成要素をさらに含む。１つの特定の実施形態では、キットは、本明細書に記載の抗体組成物のうちのいずれか１つ以上を、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤とともに含む薬学的組成物を含む。

【0330】

本出願はまた、本明細書に記載の抗体組成物またはキットのうちのいずれか１つを含む製造物品を提供する。製造物品の例としては、バイアル（密封バイアルを含む）が挙げられる。

【実施例】

【0331】

以下は、本発明を実施するための特定の実施形態の実施例である。これらの実施例は、例解目的で提示されているにすぎず、決して本発明の範囲を限定することを意図するものではない。使用される数値（例えば、量、温度など）に対する正確さを確保する努力がなされているが、当然いくつかの実験によるエラー及び偏差が許容されるはずである。

【0332】

本発明の実施は、別途指示のない限り、当業者の範囲内で、タンパク質化学、生化学、組換えＤＮＡ技術、及び薬理学の従来の方法を用いるであろう。そのような技術は、文献で完全に説明される。例えば、Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ（Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９３）、Ａ．Ｌ．Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｗｏｒｔｈ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．，ｃｕｒｒｅｎｔ ａｄｄｉｔｉｏｎ）、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９８９）、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ｓ．Ｃｏｌｏｗｉｃｋ ａｎｄ Ｎ．Ｋａｐｌａｎ ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ：Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９０）、Ｃａｒｅｙ ａｎｄ Ｓｕｎｄｂｅｒｇ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３^ｒｄ Ｅｄ．（Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ）Ｖｏｌｓ Ａ ａｎｄ Ｂ（１９９２）を参照されたい。

【0333】

実施例１：抗ＴＲＥＭ２抗体。
抗ＴＲＥＭ２抗体は、あらゆる目的のために参照により本明細書に組み込まれるＵＳＰＮ１０，８３６，８２８に開示されるように得られた。表１Ａは、ヒト化態様の抗ＴＲＥＭ２抗体のＶＬ、ＶＨ、及び完全重鎖及び軽鎖配列を示す。３７０１７は、追加の変異を介して他のヒト化態様が作製された親ヒト化クローンである。表１Ｂは、ＣＤＲ配列を示す（ＣＤＲ定義を比較する表については、Ｄｒ．Ａｎｄｒｅｗ Ｃ．Ｒ．Ｍａｒｔｉｎ ｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ／のウェブサイトを参照されたい）。

【0334】

【表1A】

【0335】

【表1B】

【0336】

【0337】

ＶＬドメインでは、ＣＤＲにおいて、Ａｓｎ２８、Ａｓｎ３１、Ａｓｎ３２及びＡｓｎ５３は、配列及び配座に基づいて脱アミド化の可能性が低い。Ａｓｎ９３は、脱アミド化の可能性が低程度から中程度であり、この翻訳後修飾の低レベルを示す可能性がある。ＶＨドメインでは、Ａｓｎ３１は、配列及び配座に基づいて脱アミド化の可能性が低い。ＣＤＲ－Ｈ２では、Ａｓｎ５３は、脱アミド化の中程度の可能性を有し、翻訳後修飾を防止するために、Ａｓｎ５３をＧｌｎ、ＳｅｒまたはＡｌａに改変し、結合の維持を実験的に決定することができる。ＣＤＲ－Ｈ３では、Ｔｒｐ１００は、特にストレス条件下で、溶媒曝露されてもよく、酸化の可能性を有し得る。

【0338】

溶液内エンドプロテイナーゼ消化
モノクローナル抗体（ｍＡｂ）の溶液内エンドプロテイナーゼ消化を、ｍＡｂ配列決定分析のために行った。５０μｇの抗体をＤＴＴで還元し、ヨードアセトアミドを用いてアルキル化し、アセトン沈殿を行い、１μｇ／μＬの濃度の水中で再構成させた。抗体試料の溶液内消化を、Ａｓｐ－Ｎ、キモトリプシン、エラスターゼ、トリプシン及びペプシンの５つの個々の酵素消化を使用して、製造業者の指示に従って行った。次に、試料を凍結乾燥し、０．１％ＴＦＡ中に再懸濁させ、Ｃ１８ Ｚｉｐ－Ｔｉｐを使用して精製した。その後、試料を高減圧遠心分離によって乾燥させ、質量分析まで凍結させたままにした。

【0339】

質量分析
インタクトな質量測定
ｍＡｂ試料を変性させ、還元し、酸性化した。次いで、タンパク質を、Ｗａｔｅｒｓ ＱＴｏＦ Ｕｌｔｉｍａ Ｇｌｏｂａｌ質量分析計（ＬＣ－ＥＳＩ－ＴＯＦ ＭＳ）に接続されたＡｇｉｌｅｎｔ １１００ ＨＰＬＣを使用して分析した。適切なＬＣ－ＭＳスペクトルを、Ｗａｔｅｒｓ ＭａｓｓＬｙｎｘ４．１ソフトウェアを使用して処理した（結合、減算、平滑化、及びデコンボルーション）。

【0340】

ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析
精製されたペプチドを、０．１％のギ酸に再懸濁させ、各消化物の半分を、ナノスプレー源及びＥＡＳＹ－ｎＬＣ １０００システム（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を装備したＯｒｂｉｔｒａｐ分析機（Ｑ－Ｅｘａｃｔｉｖｅ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で分析した。ペプチドを、ＰｅｐＭａｐ（登録商標）ＲＳＬＣ ２μｍ Ｃ１８樹脂（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を充填した５０ｃｍ（内径７５μｍ）のＥＡＳＹ－Ｓｐｒａｙカラムに８００Ｂａｒの圧力でロードした。ペプチドを、０．１％のギ酸中０％～３０％のアセトニトリルとしての勾配設定を使用して、６０分間かけて２５０ｎｌ／分の速度で溶出させた。ペプチドを、ナノエレクトロスプレーイオン源によってＱ－Ｅｘａｃｔｉｖｅ質量分析計（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に導入した。機器の方法は、自動ゲイン制御（ＡＧＣ）ターゲットが１Ｅ６、最大イオン注入時間が１２０ｍｓ、分解能が７００００のＯｒｂｉｔｒａｐ質量分析機で１回のＭＳフルスキャン（４００～１６００ｍ／ｚ）、その後、分解能が１７５００、ＡＧＣターゲットが５Ｅ５、最大イオン時間が１００ｍｓの１０回のデータ依存性ＭＳ／ＭＳスキャン、及び１回のマイクロスキャンからなっていた。ＭＳ／ＭＳスキャンをトリガする強度閾値を１．０％のアンダーフィル比に設定した。正規化された衝突エネルギーが３０に設定されたＨＣＤ衝突セルで断片化を行った。動的除外は、８秒の設定を使用して適用した。

【0341】

表２は、ヒト化クローンの生物物理学的特性をまとめたものである。分子量及び消光係数は、四次構造における寄与タンパク質鎖の合計について推定される。デフォルトでは、計算は、各鎖からの等しい単量体の寄与を想定している。消光係数は、Ｍ^－１ｃｍ^－１の単位で、タンパク質１モル当たり２８０ｎｍでの予測吸光度である。グリコシル化、リン酸化、及びタンパク質分解などの潜在的な翻訳後修飾は、分子量または消光係数の推定では考慮されない。

【0342】

【表2】

【0343】

実施例２：抗ＴＲＥＭ２抗体の産生及び特性決定
抗体産生及び特性決定
標準的なタンパク質発現ベクターを、標準的な方法を使用してＨＥＫ２９３にトランスフェクトし、その後、細胞を７日間成長させ、収穫した。ＨＥＫ２９３に加えて、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９編集（Ａｌｅｘａｎｄｅｒ Ｗｅｉｓｓ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｏｒｏｎｔｏ）によって、哺乳動物ａ１，６－フコシルトランスフェラーゼ（ＦＵＴ８）が欠損した２９３細胞でも抗体を産生した。上清ｐＨを１ＭのＨｅｐｅｓ ｐＨ７．４で調節し、アジ化ナトリウムを添加して微生物の成長を防止した。ＫａｎＣａｐ Ａ樹脂を使用してタンパク質を捕捉し、ＰＢＳ、及び１Ｍの塩化ナトリウムを含有するＰＢＳで洗浄した後、抗体を５０ｍＭのクエン酸塩ｐＨ３．５、１００ｍＭのＮａＣＬで溶出させた。溶出直後に、溶液を０．５Ｍのアルギニンを含有する１ＭのＴｒｉｓ（ｐＨ８）で中和した。標準的な技術を使用して、緩衝液をＰＢＳに交換したタンパク質について、生物物理学的特性決定を行った。タンパク質をＯＤ２８０によって定量化し、量及び濃度を、計算された消光係数を使用して決定した。還元型及び非還元型のＳＤＳ－ＰＡＧＥ（Ｂｉｏｒａｄ ｃｒｉｔｅｒｉｏｎ Ｔｒｉｓ／グリシン／ＳＤＳ、４～２０％）またはＰｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ ＧＸＩＩキャピラリー電気泳動システムを使用して、純度及びおおよその分子質量を決定した。凝集状態を、Ｓｅｐａｘ Ｚｅｎｉｘ－Ｃ ＳＥＣ－３００、３ｕｍ、３００Å、４．６×１５０ｍｍサイズ排除カラム及びＰＢＳランニング緩衝液を使用して２８０ｎｍで検出するＨＰＬＣによって決定した。

【0344】

表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用した抗体親和性測定
結合動態は、ヒトＴＲＥＭ２ Ｈｉｓ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ，Ｂｅｉｊｉｎｇ，Ｐ．Ｒ．Ｃｈｉｎａ）または抗ＨｉｓキャプチャによってＳｅｒｉｅｓ Ｓ ＣＭ５チップ上で捕捉されたヒト、またはアミンカップリングによってチップに直接固定化されたＴＲＥＭ２ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ融合タンパク質（純度９５％超に精製された社内ＳＥＣ）を用いた、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，ＵＫ）を使用する表面プラズモン共鳴によって決定した。示された抗体の連続希釈液を３０μｌ／分で２分間注入した。次に、ＰＢＳまたは系の緩衝液を３０μｌ／分で４００秒間注入して、解離を観察した。結合応答は、ブランクフローセル上の応答を減算することによって修正した。動態分析のために、ｋ_ｏｎ及びｋ_ｏｆｆ値のグローバルフィッティングの１：１ Ｌａｎｇｍｕｉｒモデルを使用した。Ｋ_ｄ値は、ｋ_ｏｎ及びｋ_ｏｆｆの比率から決定した。

【0345】

【表3】

【0346】

【表4】

【0347】

低いリガンド密度（ＲＬ＝５００ＲＵ）では、ヒトＴＲＥＭ２－Ｆｃに対するＰＩ３７０１７の結合動態は、良好な適合をもたらさなかった。

【0348】

実施例３：抗ＴＲＥＭ２抗体の細胞結合
細胞結合（ＥＣ５０測定）：
１００，０００～５００，０００個のＥｘｐｉ ２９３親細胞またはＥｘｐｉ ２９３を過剰発現するヒトまたはマウスのＴＲＥＭ２を９６ウェルプレートにプレーティングし、死滅細胞をＺｏｍｂｉｅ Ｎｅａｒ Ｉｎｆｒａｒｅｄ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で染色した。示される非コンジュゲート抗体の滴定を、８～１０点にわたる１：３の希釈範囲で０μｇ／ｍｌ～１０μｇ／ｍｌの範囲内のこれらの細胞とともにインキュベートした。それらのアイソタイプ（ｈＩｇＧ１またはｍＩｇＧ２ａ）に応じて、これらの一次非コンジュゲート抗体を、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７コンジュゲート抗ヒトＦｃまたは抗マウスＦｃ二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ）で検出した。Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７シグナルを、フローサイトメトリー（ＢＤ Ｆｏｒｔｅｓｓａ Ｘ－１４，ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）によって測定した。ＥＣ５０値を、Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ（Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ）でＨＥＫ２９３親細胞から生成したバックグラウンド蛍光を超えて過剰発現細胞に結合する抗体から生成した曲線フィッティングシグナルによって計算した。

【0349】

【表5】

【0350】

実施例４：抗ＴＲＥＭ２療法に関連する明白な毒性はない
材料及び方法
７０１２抗体（ＰＩ３７０１２のＣＤＲ配列を有し、マウスＩｇＧ２ａフォーマットでマウス化されている）で処理されたマウス由来の組織（肺、肝臓、脳、腎臓、及び心臓）を、１０％中性緩衝ホルマリン中で少なくとも２４時間保存し、組織学のために通常通り処理し、５～６μｍに切断し、切片をヘマトキシリン及びエオシンで染色した。染色されたスライドを低出力（４０～１００倍）の光学顕微鏡を使用して検査し、ＨｉｓｔｏＷｉｚによって画像を得た。抗ＣＤ６８抗体（ＡｂＤ Ｓｅｒｏｔｅｃ）を使用してＣＤ６８陽性細胞を検出し、光学顕微鏡を使用して４０倍断面の８～９個のフィールドを定量化した。

【0351】

結果
治療後のマウス組織（肺、肝臓、心臓、腎臓、及び脳）のＨ＆Ｅ染色による肉眼的形態学的分析は、アイソタイプ対照治療マウスと比較して、ＰＩ－７０１２、ａｆｕｃ－ＰＩ－７０１２、及び抗ＰＤ－１併用治療マウスにおける形態学的変化を明らかにしなかった（図１は、肺組織の染色を示す）。

【0352】

Ｈ＆Ｅ染色に加えて、抗ＣＤ６８を使用してマクロファージについても組織を染色した。細胞内マーカーＣＤ６８は、炎症組織及び腫瘍における単球／マクロファージを免疫染色するための信頼性の高い細胞化学マーカーとして文献で広く使用されている。肺（図２Ａ）において、また、分析された他の組織において、対照と比較して、治療群のいずれにおいても、ＣＤ６８＋マクロファージ数の識別可能な変化は観察されず（図２Ｂ）、このことは、抗ＴＲＥＭ２媒介性の枯渇が、ＴＭＥにおいて特異的に生じたことを示している。

【0353】

実施例５：健康なマウス組織におけるＴＲＥＭ２の限定的な発現
材料及び方法
すべての動物試験は、Ｍｕｒｉｇｅｎｉｃｓ Ａｎｉｍａｌ Ｓｔｕｄｉｅｓ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅによって承認された。Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ－Ｔｒｅｍ２^{ｅｍ２Ａｄｉｕｊ}／Ｊ（以下、ＴＲＥＭ２ＫＯと称される）及び対照Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスは、Ｔｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙからのものであった。全肺、脾臓、及び骨を採取し、フローサイトメトリーのために直ちに処理した。血液は、並行して心臓穿刺によって採取した。組織を、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ＭＡＣＳ組織解離キットを使用して単一細胞懸濁液に処理した。赤血球を、１倍の赤血球溶解緩衝液（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を使用して溶解した。細胞表面染色のために処理する前に、細胞をＦｉｘａｂｌｅ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ｄｙｅ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で染色した。抗マウス免疫表現型抗体をＦｃブロックとともにＦＡＣＳ緩衝液（２％ＦＢＳ、２ｍＭ ＥＤＴＡ、１倍のＰＢＳ）中で希釈し、氷上で３０分間染色した。染色後、細胞をＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、次いで、ＰＢＳ中の２％のパラホルムアルデヒド中で１５分間固定した。ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーター（ＢＤ）またはＡｔｔｕｎｅフローサイトメーター（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）ですべてのデータを収集し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用して分析した。ＴＲＥＭ２ＫＯ細胞染色は、網掛けしたプロットで示され、野生型細胞染色は、白色のプロットで示される。

【0354】

結果
ＴＲＥＭ２は、活性化マクロファージ、未成熟樹状細胞、破骨細胞、及びミクログリア上で発現される^２、３。高レベルのＴＲＥＭ２を発現する細胞は、免疫サーベイランス、細胞間相互作用、組織破片クリアランス、及び潜在的な炎症反応の解決に関与すると考えられている^４。遺伝子ノックダウンまたはノックアウトによるこれらの細胞上のＴＲＥＭ２発現の欠如は、細胞破片を食作用させる能力を損なわせ、調節サイトカインの産生を増加させる^５。生理学的設定では、ＦＡＣＳプロットに見られるように、末梢血、脾臓、肝臓、または肺におけるＴＲＥＭ２の検出可能な発現は、非常に低いか、または全くない（図３）。しかしながら、肺または肝臓に存在するマクロファージを単離し、純粋な細胞集団としてＴＲＥＭ２について染色すると、ＴＲＥＭ２の発現が検出可能になる。

【0355】

実施例６：ＴＲＥＭ２は主にマウスＴＡＭ上で発現される。
材料及び方法
腫瘍組織を処理して、標準的な方法によって単一細胞懸濁液を単離した。簡潔に述べると、腫瘍をかみそり刃で細かく粉砕し、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ＭＡＣＳ解離キットからの酵素を含有するＲＰＭＩ－１６４０培地中で消化した。腫瘍を、製造業者の推奨に従ってＧｅｎｔｌｅＭＡＣで処理し、３７℃で約４０分間インキュベートした。消化混合物を、２ｍＭのＥＤＴＡ及び２％ウシ胎児血清を含有するＰＢＳでクエンチした。次いで、単一細胞懸濁液を７０μｍのフィルターに通し、次いで、細胞をＦＡＣＳ緩衝液ですすいだ。遠心分離後、細胞ペレットをＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁させ、抗体カクテルで染色して、腫瘍関連マクロファージ及び他の免疫細胞集団を特定した^６。ＴＲＥＭ２ＫＯ細胞染色は、網掛けしたプロットで示され、野生型細胞染色は、白色のプロットで示される。

【0356】

結果
Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、及び他の非骨髄性細胞集団、ならびにＣＤ４５陰性細胞は、細胞表面上で検出可能なＴＲＥＭ２発現を発現しない。しかしながら、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）及び骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）を含む骨髄細胞サブセットは、細胞表面上でＴＲＥＭ２を様々な程度に発現する。腫瘍微小環境においてＴＲＥＭ２が陽性である細胞型のうち、ＴＡＭ上の受容体発現密度は、腫瘍起源にかかわらず、他の細胞型よりも著しく高かった（図４に示すＣＴ２６及びＭＣ３８）。

【0357】

実施例７：ヒト末梢血白血球における限定的なＴＲＥＭ２発現
材料及び方法
正常なヒトボランティアから得られた末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）大比陰性選別されたＣＤ１４＋単球は、ＡｌｌＣｅｌｌｓ Ｉｎｃ．によって提供された。ＣＤ１４＋単球は、標準プロトコルを使用して、インビトロで分化された^５。ＣＤ１４^＋単球を、２ｍＭのＬ－グルタミン、１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシン、１００Ｕ／ｍｌのペニシリン、及び１０％の熱不活性化ＦＢＳを補充したＲＰＭＩ－１６４０培地からなる完全培地中で培養した。マクロファージへの分化を誘発するために、５０ｎｇ／ｍＬのＭ－ＣＳＦを培地に加えた。培地を２～３日ごとに補充した。７日後、マクロファージをピペッティングによって収集し、付着細胞をその後のトリプシン化によって収集した。次いで、細胞を遠心分離し、抗生物質、２％のＦＢＳ、及び組換えヒトＩＦＮ－ｇ、及び１００ｎｇ／ｍＬのＬＰＳを補充したＲＰＭＩ－１６４０中に再懸濁させた。これらのマクロファージを、標準的な骨髄性カクテルを使用してＰＢＭＣと並行して表面染色して、細胞サブセットにおけるＴＲＥＭ２の細胞表面染色を評価した。対照ｍＡｂで染色した細胞を網掛けしたプロットで示す。抗ＴＲＥＭ２ ｍＡｂで染色した細胞を白色のプロットで示す。

【0358】

結果
図５に見られるように、エクスビボ分化マクロファージは、評価された任意のＰＢＭＣベースの細胞型と比較して、ＴＲＥＭ２の著しく高い細胞表面受容体密度を示す。文献で報告された観察と同様に、単球及びいくつかの好中球は、より低いレベルのＴＲＥＭ２を発現する。

【0359】

実施例８：ＴＲＥＭ２は主にヒトＴＡＭ上で発現される。
材料及び方法
ヒト腫瘍組織は、Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ Ｈｕｍａｎ Ｔｉｓｓｕｅ Ｎｅｔｗｏｒｋ（ＣＨＴＮ）から得た。新鮮なヒト腫瘍組織を、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ＭＡＣＳ解離キット及びｇｅｎｔｌｅＭＡＣＳプロトコルを使用して単一細胞懸濁液に解離させた。ヒト腫瘍組織の単一細胞懸濁液を、事前検証済みのマルチカラーＦＡＣＳパネルを使用して表面染色した。ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーター（ＢＤ）またはＡｔｔｕｎｅフローサイトメーター（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）ですべてのデータを収集し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用して分析した。数字は、抗ＴＲＥＭ２染色－アイソタイプ対照染色として定義される、各集団の染色指数を示す。

【0360】

結果
腫瘍微小環境内では、ＴＲＥＭ２発現は、他の細胞と比較して、ＴＡＭ上で高レベルに差異的に発現され（図６）、ＴＡＭにとって翻訳上関連するマーカーとなる。粘液性腺癌における様々な細胞集団におけるＴＲＥＭ２抗体（白色）またはアイソタイプ対照（網掛け）染色の代表的なヒストグラムを示す。まとめると、このデータは、ＴＲＥＭ２標的化剤が、末梢細胞または他の組織常駐免疫サブセットへの巻き添えの影響が比較的低いか、または全くない特異的なＴＡＭ枯渇を補助するという仮説を裏付けている。

【0361】

実施例９：抗ＴＲＥＭ２抗体によるＡＤＣＣ誘導
材料及び方法
ＴＹＲＯＢＰに融合したヒトＴＲＥＭ２を過剰発現するＨＥＫ－２９３細胞（ＤＡＰ１２）を標的細胞として用いた。高純度で選別され、ＣＤ１６を発現するように評価された一次ヒトＮＫ細胞を、１００ｎｇ／ｍＬの組換えＩＬ－２含有培地中での培養に適応させた後、エフェクター細胞として使用した。標的細胞を最初に、示された濃度の抗体（ＰＩ３７０１２抗ＴＲＥＭ２ ｍＡｂまたはアイソタイプ対照）とともに、Ｕ底９６ウェルプレート中で２０分間インキュベートした。２０分後、エフェクター細胞を培養プレートに添加して、１：５のエフェクター対標的比（ウェル当たり１０，０００標的細胞：５０，０００個のＮＫ細胞）を得た。アッセイプレートを３７℃で４～６時間インキュベートし、続いて、供給業者（Ｐｒｏｍｅｇａ）の指示に従って市販のキットを使用して、標的細胞傷害性の尺度としての乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）放出について上清を試験した。

【0362】

結果
図７に見られるように、ＬＤＨ放出によって測定される相対細胞傷害性は、すべての試験されたｍＡｂ濃度にわたってアイソタイプ対照（白色のバー、右側に示される）と比較して、抗ＴＲＥＭ２ ｍＡｂとともにインキュベートされた標的細胞（黒色のバー、左側に示される）において、増加した。これらの結果は、抗ＴＲＥＭ２抗体が、ＴＲＥＭ２を発現する標的細胞においてＡＤＣＣを誘導することを示す。

【0363】

実施例１０：Ｆｃドメイン脱フコシル化は、ＡＤＣＣの誘導を促進する
材料及び方法
マウスＴＲＥＭ２またはＧＦＰのみを安定的に発現する緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）標識Ｅｘｐｉ２９３細胞を、８％ＣＯ_２、及び３７℃でＥｘｐｉ２９３培地（Ｇｉｂｃｏ）中で維持した。マウスＦｃγＲＩＶ発現Ｊｕｒｋａｔ／ＮＦＡＴ－ルシフェラーゼレポーター細胞株（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて、マウス抗ＴＲＥＭ２抗体のＦｃγＲ依存性の活性を評価した。標的細胞を１ｍＬ当たり１×１０^６個の細胞でアッセイ培地（１０％ウシ胎児血清及び５５μＭの２－メルカプトエタノールを含有するＲＰＭＩ １６４０）に再懸濁させ、２５，０００個の細胞を含有する細胞懸濁液２５μＬを白壁の平底９６ウェルアッセイプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）にプレーティングした。アッセイ培地中、３倍の濃度でモノクローナル抗体（脱フコシル化ＰＩ－７０１２抗ＴＲＥＭ２、ＰＩ－７０１２抗ＴＲＥＭ２、及びＰＩ－７０１２抗ＴＲＥＭ２ Ｆｃサイレント抗体を含む）の用量滴定を調製し、２５μＬの抗体を細胞懸濁液に添加した。抗体の添加後、７５，０００個の細胞を含有する２５μＬのエフェクター細胞懸濁液をウェルに添加して、３：１のエフェクター：標的細胞比を得た。細胞を５％ＣＯ_２、３７℃に設定したインキュベーターで約５．５時間共培養した後、７５μＬのＢｉｏ－Ｇｌｏルシフェラーゼアッセイ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を各ウェルに加え、アッセイプレートをさらに遮光しながら１５分間インキュベートした。発光（ＲＬＵ）をＴｅｃａｎ Ｓｐａｒｋプレートリーダーで評価し、ＡＤＣＣ活性の代理測定として使用した。

【0364】

結果
図８に見られるように、脱フコシル化抗ＴＲＥＭ２ ｍＡｂ（円形のデータポイントによって示される）は、ＮＦＡＴレポーター活性によって測定されるように、ＡＤＣＣの最大の誘導を引き起こした。脱フコシル化されていない抗ＴＲＥＭ２抗体も、相対レベルが低下しているにもかかわらず、ＡＤＣＣを誘導した。対照的に、ＡＤＣＣの測定可能な誘導は、Ｆｃ－サイレント抗ＴＲＥＭ２ ｍＡｂで治療された標的細胞において観察されなかった。

【0365】

実施例１１：肝線維症の抗ＴＲＥＭ２抗体治療
げっ歯類における以前の研究は、肝線維症の進行及び退縮の両方を調整するマクロファージ亜集団を強調しており、局所増殖は、げっ歯類モデルにおける線維症の部位におけるマクロファージの拡大において重要な役割を果たす。Ｄｕｆｆｉｅｌｄ ＪＳ，ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．２００５；１１５：５６－６５．、Ｒａｍａｃｈａｎｄｒａｎ Ｐ，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ．２０１２；１０９：Ｅ３１８６－Ｅ３１９５．、Ｋａｒｌｍａｒｋ ＫＲ，ｅｔ ａｌ．Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ．２００９；５０：２６１－２７４．、Ｍｉｎｕｔｔｉ ＣＭ，ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ（８０－．）．２０１７；３５６：１０７６－１０８０。

【0366】

８～１０週齢の成体雄Ｃ５７ＢＬ／６ＪＣｒｌマウスは、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒから購入する。マウスは、特定の病原体を含まない条件下で収容される。すべての実験プロトコルは倫理的に承認されている。肝線維症は、以前に記載されているように、オリーブ油中で１：３で希釈した、０．４μｌ／体重ｇ数の用量の週２回の腹腔内四塩化炭素（ＣＣｌ４）の４週間（９回の注射）で誘導される（Ｒａｍａｃｈａｎｄｒａｎ Ｐ，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ．２０１２；１０９：Ｅ３１８６－Ｅ３１９５．）。マウスは、ＣＣｌ４を受けるか、または健康な対照として機能するようにランダムに割り当てられる。

【0367】

マウスに、ＣＣｌ４投与後に抗体治療を行う。抗体は、抗ＴＲＥＭ２またはアイソタイプ対照のいずれかである。例示的な抗体投与プロトコルを以下の表６に示す。ＰＩ－７０１２、Ｆｃ－サイレントＰＩ－７０１２、及びＡｆｕｃ－ＰＩ－７０１２（ＰＩ３７０１２のＣＤＲ配列を有し、マウスＩｇＧ２ａフォーマットでマウス化されている）を、ＵＳＰＮ １０，８３６，８２８（あらゆる目的のために参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるように生成した。

【0368】

【表6】

【0369】

肝臓組織は、最終的なＣＣｌ４注射の後の異なる時点で採取される。

【0370】

抗ＴＲＥＭ２抗体の投与は、対照と比較して線維症の退縮または線維症進行の遅延をもたらす。

【0371】

抗ＴＲＥＭ２抗体の投与は、対照と比較して、瘢痕領域におけるＴＲＥＭ２＋マクロファージの数の減少をもたらす。

【0372】

抗ＴＲＥＭ２抗体の投与は、対照と比較して、肝硬変性肝臓（例えば、線維化ニッチ内）におけるＴＲＥＭ２＋マクロファージの数の減少をもたらす。

【0373】

加えて、体重、肝臓重量、肝臓酵素、生存、ヒドロキシプロリン、及び／または組織病理学は、対照と比較して、抗ＴＲＥＭ２抗体治療群の改善を示す。

【0374】

実施例１２：追加の線維症モデルにおける抗ＴＲＥＭ２抗体治療
肺、ＮＡＳＨ、皮膚、及び腎臓を含む追加の線維症モデルを試験する。

【0375】

肺
肺線維症は、Ｄｅｌｌａ Ｌａｔｔａ，Ｖ，ｅｔ ａｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｒｅｓ．２０１５；９７：１２２－１３０、Ｉｚｂｉｃｋｉ，Ｇ，ｅｔ ａｌ．Ｉｎｔ Ｊ Ｅｘｐ Ｐａｔｈｏｌ．２００２；８３：１１１－１１９、及びＭｏｕｒａｔｉｓ，ＭＡ，ｅｔ ａｌ．Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｐｕｌ Ｍｅｄ．２０１１；１７：３５５－３６１（これらは、あらゆる目的のために参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるように、ブレオマイシン投与（中咽頭）によって誘導される。代替的に、肺線維症は、Ｂａｒｂａｒｉｎ，Ｖ，ｅｔ ａｌ．Ｒｅｓｐｉｒ Ｒｅｓ．２００５；６：１１２、及びＢｒａｓｓ，ＤＭ，ｅｔ ａｌ．Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｌｕｎｇ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｐｈｙｓｉｏ ２０１０；２００：Ｌ６６４－Ｌ６７１に記載されるように、中咽頭経路を介して送達されるシリカによって誘導される。マウスに、ブレオマイシン投与後に抗体治療を行う。抗体は、抗ＴＲＥＭ２またはアイソタイプ対照のいずれかである。例示的な抗体投与プロトコルを以下の表７に示す。

【0376】

【表7】

【0377】

抗ＴＲＥＭ２抗体の投与は、対照と比較して線維症の退縮または線維症進行の遅延をもたらす。

【0378】

抗ＴＲＥＭ２抗体の投与は、対照と比較して、瘢痕領域におけるＴＲＥＭ２＋マクロファージの数の減少をもたらす。

【0379】

加えて、体重、正規化された肺重量、ＢＡＬ白血球数、ＢＡＬサイトカインレベル、及び／またはＳｉｒｃｏｌアッセイは、対照と比較して、抗ＴＲＥＭ２抗体治療群の改善を示す。

【0380】

ＮＡＳＨ
非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）は、Ｎａｋａｍｕｒａ，Ａ ｅｔ ａｌ．Ｉｎｔ Ｊ Ｍｏｌ Ｓｃｉ．２０１３；１４：２１２４０－２１２５７、Ｘｕ，Ｚ－Ｊ，ｅｔ ａｌ．Ｄｉｇ Ｄｉｓ Ｓｃｉ．２０１０；５５：９３１－９４０、及びＬａｒｔｅｒ，ＣＺ，ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｇａｓｔｒｏｅｎ Ｈｅｐａｔｏｌ．２００８；２３：１６３５－１６４８（これらは、あらゆる目的のために参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるように、１４週間にわたって高脂肪餌を与えることによって誘導される。

【0381】

マウスに、高脂肪餌投与後に抗体治療を行う。抗体は、抗ＴＲＥＭ２またはアイソタイプ対照のいずれかである。例示的な抗体投与プロトコルを以下の表８に示す。

【0382】

【表8】

【0383】

抗ＴＲＥＭ２抗体の投与は、対照と比較して線維症の退縮または線維症進行の遅延をもたらす。

【0384】

抗ＴＲＥＭ２抗体の投与は、対照と比較して、瘢痕領域におけるＴＲＥＭ２＋マクロファージの数の減少をもたらす。

【0385】

加えて、体重、肝臓重量、肝臓酵素、組織学、生存、ヒドロキシプロリン、ＭＣＰ１、コラーゲン、ＳＭＡ－ａ、トリグリセリド、コレステロール、及び／または組織病理学は、対照と比較して、抗ＴＲＥＭ２抗体治療群の改善を示す。

【0386】

皮膚
皮膚線維症は、Ｙａｍａｍｏｔｏ，Ｔ，ｅｔ ａｌ．Ｅｘｐ Ｄｅｒｍａｔｏｌ．２００５；１４：８１－９５、Ｒｕｚｅｈａｊｉ，Ｎ，ｅｔ ａｌ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｅｓ Ｔｈｅｒ．２０１５；１７：１４５、及びＹａｍａｍｏｔｏ，Ｔ，ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｎｖｅｓｔ Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１９９９；１１２：４５６－４６２（これらは、あらゆる目的のために参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるように、ブレオマイシン投与によって誘導される。

【0387】

マウスに、ブレオマイシン投与後に抗体治療を行う。抗体は、抗ＴＲＥＭ２またはアイソタイプ対照のいずれかである。例示的な抗体投与プロトコルを以下の表９に示す。

【0388】

【表9】

【0389】

抗ＴＲＥＭ２抗体の投与は、対照と比較して線維症の退縮または線維症進行の遅延をもたらす。

【0390】

抗ＴＲＥＭ２抗体の投与は、対照と比較して、瘢痕領域におけるＴＲＥＭ２＋マクロファージの数の減少をもたらす。

【0391】

加えて、体重、組織学、及び／またはヒドロキシプロリンは、対照と比較して、抗ＴＲＥＭ２抗体治療群の改善を示す。

【0392】

腎臓
腎線維症は、Ｃｈａｖａｌｉｅｒ，ＲＬ，ｅｔ ａｌ．Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ．２００９；７５：１１４５－１１５２及びＮｏｇｕｅｉｒａ，Ａ，ｅｔ ａｌ．Ｉｎ Ｖｉｖｏ．２０１７；３１：１－２２（これらは、あらゆる目的のために参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるように、尿管閉塞によって誘導される。代替的に、Ｙａｎｇ，Ｈ－Ｃ，ｅｔ ａｌ．Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｔｏｄａｙ Ｄｉｓ Ｍｏｄｅｌｓ．２０１０；７：１３－１９及びＳｔｒｅｅｔ，ＪＭ，ｅｔ ａｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｒｅｐ．２０１４；２：ｅ１２０８８（これらは、あらゆる目的のために参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるように、葉酸による処理によって、腎線維症が誘導される。

【0393】

マウスに、尿管閉塞後に抗体治療を行う。抗体は、抗ＴＲＥＭ２またはアイソタイプ対照のいずれかである。例示的な抗体投与プロトコルを以下の表１０に示す。

【0394】

【表10】

【0395】

抗ＴＲＥＭ２抗体の投与は、対照と比較して線維症の退縮または線維症進行の遅延をもたらす。

【0396】

抗ＴＲＥＭ２抗体の投与は、対照と比較して、瘢痕領域におけるＴＲＥＭ２＋マクロファージの数の減少をもたらす。

【0397】

加えて、腎臓重量、組織学、及び／またはヒドロキシプロリンは、対照と比較して、抗ＴＲＥＭ２抗体治療群の改善を示す。

【0398】

心臓
心臓線維症は、Ｋａｕｒ，Ｈ，ｅｔ ａｌ．Ｃｉｒｃ Ｒｅｓ．２０１６；１１８：１９０６－１９１７、Ｓｏｐｅｌ，ＭＪ，ｅｔ ａｌ．Ｌａｂ Ｉｎｖｅｓｔ．２０１１；９１：５６５－５７８、及びＷａｎｇ，Ｎ－Ｐ，Ａ，ｅｔ ａｌ．．Ｊ Ｒｅｎｉｎ Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ Ａｌｄｏｓｔｅｒｏｎｅ Ｓｙｓｔ．２０１７；１８：１４７０３２０３１７７０６６５３（これらは、あらゆる目的のために参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるように、アンジオテンシンＩＩの注入によって誘導される。

【0399】

マウスに、アンジオテンシンＩＩによる治療後に抗体治療を行う。抗体は、抗ＴＲＥＭ２またはアイソタイプ対照のいずれかである。例示的な抗体投与プロトコルを以下の表１１に示す。

【0400】

【表11】

【0401】

抗ＴＲＥＭ２抗体の投与は、対照と比較して線維症の退縮または線維症進行の遅延をもたらす。

【0402】

抗ＴＲＥＭ２抗体の投与は、対照と比較して、瘢痕領域におけるＴＲＥＭ２＋マクロファージの数の減少をもたらす。

【0403】

加えて、心臓重量、組織学、及び／またはヒドロキシプロリンは、対照と比較して、抗ＴＲＥＭ２抗体治療群の改善を示す。

【0404】

実施例１３：肝線維症の抗ＴＲＥＭ２抗体治療
材料及び方法
Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙからの６～８週齢のＣ５７ＢＬ／６Ｊ雄マウスを５つの群に分けた。すべての群に、２４週間にわたって週１回のＣＣｌ４注射（０．２μｌ、１００％ＣＣｌ４／体重のグラム数）を加えたＷｅｓｔｅｒｎ餌と砂糖水（フルクトース／グルコース混合物）を与えた。Ｊｉａｏ，Ｊ．，ｅｔ ａｌ，２０１２ Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｃａｒｂｏｎ ｔｅｔｒａｃｈｌｏｒｉｄｅ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｍｕｒｉｎｅ ｌｉｖｅｒ ｆｉｂｒｏｓｉｓ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ．Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ ５５，２４４－２５５を参照されたい。群３（アイソタイプ対照）及び群４（抗ＴＲＥＭ２［Ａｆｕｃ ＰＩ－７０１２、）の各々３匹の動物を２２週間にわたって治療した。オベチコール酸（ＯＣＡ）を陽性対照として使用した。すべてのマウス群に、１２週間にわたって治療を行わず餌のみを与えた。抗体またはＯＣＡによる治療は、１３週目に開始した。プロトコルは、以下の表１２に提供される。

【0405】

【表12】

【0406】

動物を、ＣＣｌ４注射の前に１週間に１回計量した。薬物及びビヒクルを、５日ごとまたは１日１回（群５）、１２週間（１３～２４週間）にわたって腹腔内投与した。薬物の量を体重に合わせて調整した。順応期間及び薬物治療期間中、すべての動物を投与期間中毎日検査した。動物の状態に関する任意の公然の行動／生理学的影響または他の関連する観察を記録した。

【0407】

ビヒクル及び抗ＴＲＥＭ２抗体群の各々３匹の動物を２２週目に安楽死させ、ｓｃＲＮＡ分析を進めるかどうかを決定した。これらの動物からの肝臓を計量し、１０％ホルマリンで固定し、切片化し、Ｈ＆Ｅ及びシリウスレッドで染色した。実験の終了時に、マウスの体重、肝臓及び脾臓の重量を記録した。血清トランスアミナーゼ（ＡＬＴ及びＡＳＴ）、血清中の総コレステロール及びトリグリセリド、投与前１６週、投与後４時間及び終了時の抗ＴＲＥＭ２抗体曝露分析（データ図示せず）を含む血清分析のために血液を採取した。

【0408】

肝葉を１０％ホルマリンで固定し、埋包し、切片化し、Ｈ＆Ｅ及びシリウスレッドで染色した。一般形態は、盲検化された病理医によって評価され、ＮＡＦＬＤ活性スコア（小葉炎症、脂肪症、風船様肝細胞）及び線維症ステージを評価した。形態測定によるコラーゲン定量化は、製造業者の指示に従ってＢｉｏｑｕａｎｔ（商標）で決定した。標準的なプロトコルに従って、ｍＲＮＡ及びタンパク質抽出のために、急速凍結肝臓組織を調製した。以下の線維原性遺伝子についてｑＰＣＲを行った。コラーゲンＩ、アルファ－１平滑筋アクチン、ベータ－ＰＤＧＦ受容体、ＭＭＰ２、及びＴＩＭＰ２。データを、好適なハウスキーピング遺伝子に対して正規化した。ａ－ＳＭＡ及びコラーゲンのウェスタンブロッティングも行った。

【0409】

結果
図９に示されるように、対照と比較して、抗ＴＲＥＭ２抗体治療後の肝線維症の著しい減少が観察された。図９の左パネルは、ｍＩｇＧ２ａアイソタイプ対照抗体または抗ＴＲＥＭ２抗体で治療されたマウス由来の肝臓のＨ＆Ｅ染色を示す。肝線維症の著しい減少が、抗ＴＲＥＭ２抗体で治療されたマウスの肝臓において観察された。個々のマウス肝臓中のコラーゲン量も、ＰＳＲ染色を介して定量化した。図９の右パネルに示されるように、抗ＴＲＥＭ２抗体による治療は、１２週間または２４週間の未治療マウス及びアイソタイプ対照マウスと比較して、コラーゲンを著しく減少させた。図９の右パネルにも示されるように、抗ＴＲＥＭ２抗体による治療は、対照ＯＣＡ治療マウスよりもコラーゲンを減少させた。表１３及び１４は、ＴＲＥＭ２抗体（表１３）及びＯＣＡ（表１４）で治療された個々のマウスにおけるＰＳＲ陽性面積を提供する。

【0410】

【表13】

【0411】

ＴＲＥＭ２抗体治療マウスのうち２匹は、０．０１未満のＰＳＲ陽性面積を有し、１２匹のＴＲＥＭ２抗体治療マウスのうち１０匹は、０．１未満のＰＳＲ陽性面積を有していた（８３．３％）。対照的に、ＯＣＡ治療マウスのいずれも０．０１未満のＰＳＲ陽性面積を有しておらず、１３匹のＯＣＡ治療マウスのうちの７匹のみが０．１未満のＰＳＲ陽性面積を有していた（５３．８％）。したがって、ＴＲＥＭ２抗体治療は、ＯＣＡ治療と比較して、線維症の低減において、より効果的であった。

【0412】

したがって、抗ＴＲＥＭ２抗体治療は、インビボ肝線維症モデルにおいて、線維症を首尾良く低減した。
参考文献
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【0413】

本発明は、好ましい実施形態及び様々な代替実施形態を参照して特に示され、説明されてきたが、本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく、形態及び詳細における様々な変更が本明細書になされ得ることは、関連する技術分野の当業者には理解されよう。

【0414】

本明細書の本文中で引用したすべての参考文献、発行済特許、及び特許出願は、それらの全体があらゆる目的のために参照により本明細書に組み込まれる。

【0415】

配列

【図1】

【図2A】

【図2B】

【図3-1】

【図3-2】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【配列表】

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【国際調査報告】