特表 2024-542793 ＳＡＲＳ関連コロナウイルスに対する中和抗体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-11-15

(54)【発明の名称】ＳＡＲＳ関連コロナウイルスに対する中和抗体

(51)【国際特許分類】

   C07K 16/10 20060101AFI20241108BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20241108BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20241108BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20241108BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20241108BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20241108BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20241108BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20241108BHJP

   A61P 31/14 20060101ALI20241108BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20241108BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20241108BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20241108BHJP

【ＦＩ】

C07K16/10 ZNA

C12N15/13

C12N15/63 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

C12P21/08

A61P31/14

A61P11/00

A61K39/395 D

A61K39/395 N

A61K39/395 Y

A61P43/00 121

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024533080

(86)(22)【出願日】2022-12-01

(85)【翻訳文提出日】2024-07-26

(86)【国際出願番号】 EP2022084119

(87)【国際公開番号】W WO2023099688

(87)【国際公開日】2023-06-08

(31)【優先権主張番号】21211717.0

(32)【優先日】2021-12-01

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(31)【優先権主張番号】21215292.0

(32)【優先日】2021-12-16

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】524207585

【氏名又は名称】ウニヴェルズィテート ツー ケルン

(74)【代理人】

【識別番号】100149076

【弁理士】

【氏名又は名称】梅田 慎介

(74)【代理人】

【識別番号】100119183

【弁理士】

【氏名又は名称】松任谷 優子

(74)【代理人】

【識別番号】100173185

【弁理士】

【氏名又は名称】森田 裕

(74)【代理人】

【識別番号】100162503

【弁理士】

【氏名又は名称】今野 智介

(74)【代理人】

【識別番号】100144794

【弁理士】

【氏名又は名称】大木 信人

(74)【代理人】

【識別番号】100204582

【弁理士】

【氏名又は名称】大栗 由美

(72)【発明者】

【氏名】クライン，フロリアン

(72)【発明者】

【氏名】ヴァンシラ，カニカ

(72)【発明者】

【氏名】グリュル，ヘニング

【テーマコード（参考）】

4B064

4B065

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B064AG27

4B064CA19

4B064CC24

4B064CE12

4B064DA01

4B064DA20

4B065AA01X

4B065AA57X

4B065AA72X

4B065AA87X

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA25

4B065CA44

4B065CA45

4B065CA60

4C085AA03

4C085AA13

4C085AA14

4C085BB11

4C085BB36

4C085BB41

4C085BB42

4C085BB43

4C085CC23

4C085EE01

4C085EE03

4C085GG01

4C085GG02

4C085GG03

4C085GG04

4C085GG10

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045DA76

4H045EA29

4H045EA31

4H045EA60

4H045FA72

4H045FA74

4H045GA26

(57)【要約】

本発明は、ＳＡＲＳ関連コロナウイルスに対する抗体またはその抗原結合断片、そのような抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物、そのような抗体またはその抗原結合断片を含むキット、ならびに医薬としての、およびＳＡＲＳ関連コロナウイルスによって引き起こされる疾患の治療または予防における使用のための、抗体またはその抗原結合断片および医薬組成物およびキットに関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ＳＡＲＳ関連コロナウイルスに対する抗体またはその抗原結合断片であって、
Ｒ２００－１Ｂ９（配列番号２７のＣＤＲ－Ｈ１アミノ酸配列、配列番号２８のＣＤＲ－Ｈ２アミノ酸配列、配列番号２９のＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列、配列番号３０のＣＤＲ－Ｌ１アミノ酸配列、配列番号３１のＣＤＲ－Ｌ２アミノ酸配列、配列番号３２のＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列を有する）、
Ｒ２０７－２Ｆ１１（配列番号３３のＣＤＲ－Ｈ１アミノ酸配列、配列番号３４のＣＤＲ－Ｈ２アミノ酸配列、配列番号３５のＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列、配列番号３６のＣＤＲ－Ｌ１アミノ酸配列、配列番号３７のＣＤＲ－Ｌ２アミノ酸配列、配列番号３８のＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列を有する）、
Ｒ４０－１Ｇ８（配列番号３９のＣＤＲ－Ｈ１アミノ酸配列、配列番号４０のＣＤＲ－Ｈ２アミノ酸配列、配列番号４１のＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列、配列番号４２のＣＤＲ－Ｌ１アミノ酸配列、配列番号４３のＣＤＲ－Ｌ２アミノ酸配列、配列番号４４のＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列を有する）、
Ｒ５６８－２Ｇ５（配列番号４５のＣＤＲ－Ｈ１アミノ酸配列、配列番号４６のＣＤＲ－Ｈ２アミノ酸配列、配列番号４７のＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列、配列番号４８のＣＤＲ－Ｌ１アミノ酸配列、配列番号４９のＣＤＲ－Ｌ２アミノ酸配列、配列番号５０のＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列を有する）、
Ｒ５６８－２Ｂ１１（配列番号５１のＣＤＲ－Ｈ１アミノ酸配列、配列番号５２のＣＤＲ－Ｈ２アミノ酸配列、配列番号５３のＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列、配列番号５４のＣＤＲ－Ｌ１アミノ酸配列、配列番号５５のＣＤＲ－Ｌ２アミノ酸配列、配列番号５６のＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列を有する）、
Ｒ２０７－２Ｇ４（配列番号５７のＣＤＲ－Ｈ１アミノ酸配列、配列番号５８のＣＤＲ－Ｈ２アミノ酸配列、配列番号５９のＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列、配列番号６０のＣＤＲ－Ｌ１アミノ酸配列、配列番号６１のＣＤＲ－Ｌ２アミノ酸配列、配列番号６２のＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列を有する）、
Ｒ４０－１Ｃ８（配列番号６３のＣＤＲ－Ｈ１アミノ酸配列、配列番号６４のＣＤＲ－Ｈ２アミノ酸配列、配列番号６５のＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列、配列番号６６のＣＤＲ－Ｌ１アミノ酸配列、配列番号６７のＣＤＲ－Ｌ２アミノ酸配列、配列番号６８のＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列を有する）、
Ｒ５６８－２Ｂ９（配列番号６９のＣＤＲ－Ｈ１アミノ酸配列、配列番号７０のＣＤＲ－Ｈ２アミノ酸配列、配列番号７１のＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列、配列番号７２のＣＤＲ－Ｌ１アミノ酸配列、配列番号７３のＣＤＲ－Ｌ２アミノ酸配列、配列番号７４のＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列を有する）、
Ｒ５６８－１Ｂ３（配列番号７５のＣＤＲ－Ｈ１アミノ酸配列、配列番号７６のＣＤＲ－Ｈ２アミノ酸配列、配列番号７７のＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列、配列番号７８のＣＤＲ－Ｌ１アミノ酸配列、配列番号７９のＣＤＲ－Ｌ２アミノ酸配列、配列番号８０のＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列を有する）、
Ｒ５６８－２Ｅ１（配列番号８１のＣＤＲ－Ｈ１アミノ酸配列、配列番号８２のＣＤＲ－Ｈ２アミノ酸配列、配列番号８３のＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列、配列番号８４のＣＤＲ－Ｌ１アミノ酸配列、配列番号８５のＣＤＲ－Ｌ２アミノ酸配列、配列番号８６のＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列を有する）、
Ｒ５６８－１Ｇ９（配列番号８７のＣＤＲ－Ｈ１アミノ酸配列、配列番号８８のＣＤＲ－Ｈ２アミノ酸配列、配列番号８９のＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列、配列番号９０のＣＤＲ－Ｌ１アミノ酸配列、配列番号９１のＣＤＲ－Ｌ２アミノ酸配列、配列番号９２のＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列を有する）、
Ｒ１２１－１Ｆ１（配列番号９３のＣＤＲ－Ｈ１アミノ酸配列、配列番号９４のＣＤＲ－Ｈ２アミノ酸配列、配列番号９５のＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列、配列番号９６のＣＤＲ－Ｌ１アミノ酸配列、配列番号９７のＣＤＲ－Ｌ２アミノ酸配列、配列番号９８のＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列を有する）、
Ｒ２５９－１Ｂ９（配列番号９９のＣＤＲ－Ｈ１アミノ酸配列、配列番号１００のＣＤＲ－Ｈ２アミノ酸配列、配列番号１０１のＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列、配列番号１０２のＣＤＲ－Ｌ１アミノ酸配列、配列番号１０３のＣＤＲ－Ｌ２アミノ酸配列、配列番号１０４のＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列を有する）
を含む群から選択される１つの抗体の重鎖ＣＤＲ１～ＣＤＲ３および軽鎖ＣＤＲ１～ＣＤＲ３アミノ酸配列の組合せを含む、抗体またはその抗原結合断片。

【請求項2】

Ｒ２００－１Ｂ９（配列番号１の可変領域重鎖アミノ酸配列および配列番号２の可変領域軽鎖アミノ酸配列を有する）、
Ｒ２０７－２Ｆ１１（配列番号３の可変領域重鎖アミノ酸配列および配列番号４の可変領域軽鎖アミノ酸配列を有する）、
Ｒ４０－１Ｇ８（配列番号５の可変領域重鎖アミノ酸配列および配列番号６の可変領域軽鎖アミノ酸配列を有する）、
Ｒ５６８－２Ｇ５（配列番号７の可変領域重鎖アミノ酸配列および配列番号８の可変領域軽鎖アミノ酸配列を有する）、
Ｒ５６８－２Ｂ１１（配列番号９の可変領域重鎖アミノ酸配列および配列番号１０の可変領域軽鎖アミノ酸配列を有する）、
Ｒ２０７－２Ｇ４（配列番号１１の可変領域重鎖アミノ酸配列および配列番号１２の可変領域軽鎖アミノ酸配列を有する）、
Ｒ４０－１Ｃ８（配列番号１３の可変領域重鎖アミノ酸配列および配列番号１４の可変領域軽鎖アミノ酸配列を有する）、
Ｒ５６８－２Ｂ９（配列番号１５の可変領域重鎖アミノ酸配列および配列番号１６の可変領域軽鎖アミノ酸配列を有する）、
Ｒ５６８－１Ｂ３（配列番号１７の可変領域重鎖アミノ酸配列および配列番号１８の可変領域軽鎖アミノ酸配列を有する）、
Ｒ５６８－２Ｅ１（配列番号１９の可変領域重鎖アミノ酸配列および配列番号２０の可変領域軽鎖アミノ酸配列を有する）、
Ｒ５６８－１Ｇ９（配列番号２１の可変領域重鎖アミノ酸配列および配列番号２２の可変領域軽鎖アミノ酸配列を有する）、
Ｒ１２１－１Ｆ１（配列番号２３の可変領域重鎖アミノ酸配列および配列番号２４の可変領域軽鎖アミノ酸配列を有する）、
Ｒ２５９－１Ｂ９（配列番号２５の可変領域重鎖アミノ酸配列および配列番号２６の可変領域軽鎖アミノ酸配列を有する）
を含む群から選択される１つの抗体の可変領域重鎖アミノ酸配列および可変領域軽鎖アミノ酸配列の組合せを含む、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項3】

含まれる前記アミノ酸配列が、Ｒ２００－１Ｂ９、Ｒ２０７－２Ｆ１１、Ｒ４０－１Ｇ８、Ｒ５６８－２Ｇ５、Ｒ５６８－２Ｂ１１、Ｒ２０７－２Ｇ４、Ｒ４０－１Ｃ８、Ｒ５６８－２Ｂ９、およびＲ５６８－１Ｂ３を含む群から選択される１つの抗体、好ましくは、Ｒ２００－１Ｂ９、Ｒ２０７－２Ｆ１１、Ｒ４０－１Ｇ８、およびＲ５６８－２Ｇ５を含む群からの１つの抗体のものである、請求項１または２に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項4】

前記ＳＡＲＳ関連コロナウイルス株が、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）である、請求項１から３のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項5】

前記ＣＤＲまたはその中に含まれる前記可変領域のアミノ酸配列が、多くとも０．４μｇ／ｍｌ、好ましくは多くとも０．１μｇ／ｍｌ、より好ましくは多くとも０．０５μｇ／ｍｌ、さらにより好ましくは多くとも０．０２５μｇ／ｍｌ、さらにより好ましくは多くとも０．０１μｇ／ｍｌ、さらにより好ましくは多くとも０．００２５μｇ／ｍｌ、特に好ましくは多くとも０．００１５μｇ／ｍｌのＩＣ５０で、説明に記載されているシュードウイルス中和アッセイにおいてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２系統Ｂ．１、Ｂ．１．１．７、Ｂ．１．３５１、Ｂ．１．４２９、Ｂ．１．６１７およびＢ．１．６１７．２の各々を中和することができる抗体由来である、請求項１から４のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項6】

前記ＣＤＲまたはその中に含まれる前記可変領域のアミノ酸配列が、多くとも１．３μｇ／ｍｌ、好ましくは多くとも０．５μｇ／ｍｌ、より好ましくは多くとも０．０５μｇ／ｍｌ、さらにより好ましくは多くとも０．０２μｇ／ｍｌ、特に好ましくは多くとも０．０１μｇ／ｍｌのＩＣ５０で、説明に記載されているシュードウイルス中和アッセイにおいてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクエスケープ変異体６９－７０ｄｅｌ、Ｋ４１７Ｅ、Ｎ４３９Ｋ、Ｋ４４４Ｑ、Ｖ４４５Ａ、Ｇ４４６Ｖ、Ｌ４５２Ｒ、Ｙ４５３Ｆ、Ｌ４５５Ｆ、Ｇ４７６Ｓ、Ｓ４７７Ｎ、Ｅ４８４Ｋ、Ｆ４８６Ｖ、Ｆ４９０Ｓ、Ｑ４９３Ｒ、Ｑ４９３Ｋ、Ｓ４９４Ｐ、Ｎ５０１Ｙの各々を中和することができる抗体由来である、請求項１から５のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項7】

前記ＣＤＲまたは前記抗体もしくはその抗原結合断片に含まれる前記可変領域のアミノ酸配列が、多くとも０．００１５μｇ／ｍｌのＩＣ５０で、説明に記載されているシュードウイルス中和アッセイにおいて出現ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクエスケープ変異体Ｒ３４６Ｓ、Ｑ４１４Ｈ、Ｎ４４０Ｋ、およびＴ４７８Ｋの各々を中和することができる抗体から得られる、請求項１から６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項8】

前記ＣＤＲまたはその中に含まれる前記可変領域のアミノ酸配列が、多くとも０．０８μｇ／ｍｌ、好ましくは多くとも０．０２５μｇ／ｍｌ、より好ましくは多くとも０．０１μｇ／ｍｌ、さらにより好ましくは多くとも０．００６μｇ／ｍｌ、特に好ましくは多くとも０．００２μｇ／ｍｌの平均ＩＣ５０で、全てのバリアントおよび変異体にわたって説明に記載されているシュードウイルス中和アッセイにおいてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２バリアントＷｕ－０１、Ｂ．１、Ｂ．１．１．７、Ｂ．１．３５１、Ｂ．１．４２９、Ｂ．１．６１７およびＢ．１．６１７．２、ならびにＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２エスケープ変異体６９－７０ｄｅｌ、Ｋ４１７Ｅ、Ｎ４３９Ｋ、Ｋ４４４Ｑ、Ｖ４４５Ａ、Ｇ４４６Ｖ、Ｌ４５２Ｒ、Ｙ４５３Ｆ、Ｌ４５５Ｆ、Ｇ４７６Ｓ、Ｓ４７７Ｎ、Ｅ４８４Ｋ、Ｆ４８６Ｖ、Ｆ４９０Ｓ、Ｑ４９３Ｒ、Ｑ４９３Ｋ、Ｓ４９４Ｐ、Ｎ５０１Ｙ、Ｒ３４６Ｓ、Ｑ４１４Ｈ、Ｎ４４０Ｋ、およびＴ４７８Ｋを中和することができる抗体由来である、請求項１から７のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項9】

請求項１から８のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片、および少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物であって、好ましくは、ヒト対象に対するワクチン組成物である、医薬組成物。

【請求項10】

請求項１から８のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片、および容器を含むキット。

【請求項11】

医薬としての使用のための、請求項１から８のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、請求項９に記載の医薬組成物、または請求項１０に記載のキット。

【請求項12】

ワクチンとしての使用のための、請求項１から８のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、請求項９に記載の医薬組成物、または請求項１０に記載のキット。

【請求項13】

ヒト対象におけるＳＡＲＳ関連コロナウイルスによって引き起こされる疾患の治療または予防における使用のための、好ましくは、ヒト対象における重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）によって引き起こされる疾患の治療または予防における使用のための、請求項１から８のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、請求項９に記載の医薬組成物、または請求項１０に記載のキット。

【請求項14】

ＳＡＲＳ関連コロナウイルスを有するヒト対象の感染、好ましくは、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）を有するヒト対象の感染の予防における使用のための、請求項１から８のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、請求項９に記載の医薬組成物、または請求項１０に記載のキット。

【請求項15】

前記抗体またはその抗原結合断片が、静脈内注入、吸入適用、皮下注射または筋肉内注射によって投与され、好ましくは、前記抗体またはその抗原結合断片が、最大４０００ｍｇ、好ましくは最大２４００ｍｇ、より好ましくは最大１２００ｍｇ、さらにより好ましくは最大６００ｍｇ、さらにより好ましくは最大３００ｍｇ、特に好ましくは最大１５０ｍｇの絶対用量で投与される、請求項１１から１４のいずれか一項に記載の使用のための抗体またはその抗原結合断片。

【請求項16】

請求項１から８のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片をコードする核酸。

【請求項17】

発現制御配列と機能的に会合している請求項１６に記載の核酸を含む発現ベクター。

【請求項18】

請求項１６に記載の核酸または請求項１７に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。

【請求項19】

（ａ）前記抗体またはその抗原結合断片の発現を可能にする条件下で請求項１８に記載の宿主細胞を培養することと、
（ｂ）前記抗体またはその抗原結合断片を回収することと
を含む、請求項１から８のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片の作製方法。

【請求項20】

ＳＡＲＳ関連コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に対する少なくとも１つのさらなる抗体と組み合わせた医薬品における使用のための請求項１から８のいずれかに記載の抗体であって、前記さらなる抗体が異なる結合特異性を有する、抗体。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ＳＡＲＳ関連コロナウイルスに対する抗体またはその抗原結合断片、そのような抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物、そのような抗体またはその抗原結合断片を含むキット、ならびに医薬としての、およびＳＡＲＳ関連コロナウイルスによって引き起こされる疾患の治療または予防における使用のための、抗体またはその抗原結合断片および医薬組成物およびキットに関する。本発明はさらに、ＳＡＲＳ関連コロナウイルスによる感染を治療、予防またはその重症度を軽減する方法、ならびにそのような抗体またはその抗原結合断片をコードする核酸、そのような核酸を含む発現ベクター、そのような核酸または発現ベクターを含む宿主細胞、およびそのような抗体またはその抗原結合断片を作製するための方法に関する。

【背景技術】

【0002】

新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の大流行により、過去１年半において世界中で４００万人以上の命が失われた。重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）感染の大多数は軽度であるが、入院および死亡はあらゆる年齢層で起こる可能性があり、併存疾患を有する高齢者は特にリスクにさらされている。効果的なＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ワクチンの迅速かつ成功的な開発は、非常に重要な打開策である。ワクチンは重症疾患および死亡を防ぐだけでなく、感染拡大を軽減することができる。

【0003】

しかしながら、ワクチン未接種の個体および十分な免疫応答を開始することができない免疫不全患者などの脆弱な集団は、依然として感染症および重篤な合併症にかかりやすいままである。さらに、抗原エスケープ変異を有するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２バリアントの現在の増加は、承認された治療薬およびワクチンの有効性を低減させ、ブレイクスルー感染の発生率を増加させる可能性がある。これにより、重症疾患を予防し、罹患率を低減させることによってＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染を効果的に治療できる介入の必要性が正当化される。

【0004】

中和抗体（ＮＡｂ）は、ウイルス感染を予防および駆除するための体液性免疫系の重要な部分である。それらは細胞内へのウイルス侵入を阻止し、Ｆｃ媒介性エフェクター機能を介してウイルス粒子のクリアランスを媒介することができる。高度な単一Ｂ細胞クローニング戦略は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するＢ細胞応答を解明するのに役立ち、いくつかの強力なモノクローナル抗体（ｍＡｂ）の単離をもたらした（Ａｎｄｒｅａｎｏ，Ｅ．ら、（２０２１）．Ｃｅｌｌ １８４、１８２１～１８３５ ｅ１８１６；Ｊｕ，Ｂ．ら、（２０２０）．Ｎａｔｕｒｅ ５８４、１１５～１１９；Ｋｒｅｅｒ，Ｃ．ら、（２０２０）．Ｃｅｌｌ １８２、８４３～８５４ ｅ８１２；Ｌｉｕ，Ｌ．ら、（２０２０）．Ｎａｔｕｒｅ ５８４、４５０～４５６；Ｒｏｂｂｉａｎｉ，Ｄ．Ｆ．ら、（２０２０）．Ｎａｔｕｒｅ ５８４、４３７～４４２；Ｒｏｇｅｒｓ，Ｔ．Ｆ．ら、（２０２０）．Ｓｃｉｅｎｃｅ ３６９、９５６～９６３；Ｚｏｓｔ，Ｓ．Ｊ．ら、（２０２０）．Ｎａｔ Ｍｅｄ ２６、１４２２～１４２７．）。

【0005】

これらのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体は、ウイルス表面上で発現するスパイク（Ｓ）タンパク質に対するものであり、ヒトＡＣＥ－２受容体に結合することによってヒト細胞へのウイルス侵入を促進する。スパイクタンパク質上では、ＮＡｂ応答の大部分はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクＳ１ドメインの受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）またはＮ末端ドメイン（ＮＴＤ）に向けられる。スパイクタンパク質のＳ２ドメインは、β－コロナウイルス（β－ＣｏＶ）の中ではＳ１よりも保存されているが、Ｓ２ドメインを標的とするｍＡｂはまれであり、効力が低い（Ｐｉｎｔｏ，Ｄ．ら、（２０２１）．Ｓｃｉｅｎｃｅ ３７３、１１０９～１１１６；Ｓａｕｅｒ，Ｍ．Ｍ．ら、（２０２１）．Ｎａｔ Ｓｔｒｕｃｔ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２８、４７８～４８６．）。

【0006】

ＲＢＤ指向性抗体の非常に強力な中和能力は、ＣＯＶＩＤ－１９を治療および予防するためのｍＡｂの臨床開発につながった。ｍＡｂによる受動免疫は、曝露された個体の感染を予防するだけでなく、ＣＯＶＩＤ－１９を治療し、重症疾患に進行するのを防ぐことができる。これらのｍＡｂのいくつかはＣＯＶＩＤ－１９の治療のためのＦＤＡおよびＥＭＡの承認による使用の認可を受けているか、または現在、第ＩＩＩ相臨床試験において調査されている。

【0007】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染の抗体媒介性治療の成功にもかかわらず、スパイクタンパク質における抗原エスケープ変異を有するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２バリアントの最近の出現により、中和活性の喪失に起因して、有効性が低減するか、または認可された抗体の効果が効かなくなっている。

【0008】

特に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２オミクロンバリアント（系統Ｂ．１．１．５２９）が、最近、世界的規模でさらなるおよび新たなリスクを引き起こす可能性のある懸念すべきバリアントとして出現した。このバリアントは異常に多数の変異を示し、そのうちのかなりの数は、オミクロンバリアントを発見した時点では、ほとんどのＣＯＶＩＤ－１９ワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２中和モノクローナル抗体が標的とするスパイクタンパク質に影響を及ぼしている。この変異レベルは現在、その感染性、免疫系の回避、およびワクチン耐性に関する懸念につながっている。

【発明の概要】

【0009】

したがって、新規のオミクロンバリアントを含む、循環または出現ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２バリアントに対する効力および有効性を保持する次世代のｍＡｂを開発することが不可欠である。

【0010】

十分詳細に公開されている公的に入手可能な抗体と比較して、自己反応性を示さず、懸念される循環ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２バリアントおよび出現エスケープバリアントに対して優れた中和効力を有する、ＳＡＲＳ関連コロナウイルスに対するヒト抗体に対する要求が依然として存在している。

【0011】

したがって、本発明の目的は、自己反応性を示さず、懸念される循環ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２バリアントおよび出現エスケープバリアントに対して優れた中和効力を有する、ＳＡＲＳ関連コロナウイルスに対する新規モノクローナル抗体を提供することである。本発明のさらなる目的は、ヒトまたは動物対象におけるＳＡＲＳ関連コロナウイルスによって引き起こされる疾患の治療または予防、およびＳＡＲＳ関連コロナウイルスによるヒトまたは動物対象の感染の予防に使用することができる、ＳＡＲＳ関連コロナウイルスに対する新規モノクローナル抗体を提供することである。

【0012】

さらに、本発明の目的は、最近同定されたＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２オミクロンバリアントに対して優れた中和効力を有する新規モノクローナル抗体を提供することである。

【0013】

これらの目的は、本明細書以下に規定される本発明の態様によって解決された。

【0014】

本発明の第１の態様によれば、ＳＡＲＳ関連コロナウイルスに対する抗体またはその抗原結合断片であって、Ｒ２００－１Ｂ９（配列番号２７のＣＤＲ－Ｈ１アミノ酸配列、配列番号２８のＣＤＲ－Ｈ２アミノ酸配列、配列番号２９のＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列、配列番号３０のＣＤＲ－Ｌ１アミノ酸配列、配列番号３１のＣＤＲ－Ｌ２アミノ酸配列、配列番号３２のＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列を有する）、Ｒ２０７－２Ｆ１１（配列番号３３のＣＤＲ－Ｈ１アミノ酸配列、配列番号３４のＣＤＲ－Ｈ２アミノ酸配列、配列番号３５のＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列、配列番号３６のＣＤＲ－Ｌ１アミノ酸配列、配列番号３７のＣＤＲ－Ｌ２アミノ酸配列、配列番号３８のＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列を有する）、Ｒ４０－１Ｇ８（配列番号３９のＣＤＲ－Ｈ１アミノ酸配列、配列番号４０のＣＤＲ－Ｈ２アミノ酸配列、配列番号４１のＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列、配列番号４２のＣＤＲ－Ｌ１アミノ酸配列、配列番号４３のＣＤＲ－Ｌ２アミノ酸配列、配列番号４４のＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列を有する）、Ｒ５６８－２Ｇ５（配列番号４５のＣＤＲ－Ｈ１アミノ酸配列、配列番号４６のＣＤＲ－Ｈ２アミノ酸配列、配列番号４７のＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列、配列番号４８のＣＤＲ－Ｌ１アミノ酸配列、配列番号４９のＣＤＲ－Ｌ２アミノ酸配列、配列番号５０のＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列を有する）、Ｒ５６８－２Ｂ１１（配列番号５１のＣＤＲ－Ｈ１アミノ酸配列、配列番号５２のＣＤＲ－Ｈ２アミノ酸配列、配列番号５３のＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列、配列番号５４のＣＤＲ－Ｌ１アミノ酸配列、配列番号５５のＣＤＲ－Ｌ２アミノ酸配列、配列番号５６のＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列を有する）、Ｒ２０７－２Ｇ４（配列番号５７のＣＤＲ－Ｈ１アミノ酸配列、配列番号５８のＣＤＲ－Ｈ２アミノ酸配列、配列番号５９のＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列、配列番号６０のＣＤＲ－Ｌ１アミノ酸配列、配列番号６１のＣＤＲ－Ｌ２アミノ酸配列、配列番号６２のＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列を有する）、Ｒ４０－１Ｃ８（配列番号６３のＣＤＲ－Ｈ１アミノ酸配列、配列番号６４のＣＤＲ－Ｈ２アミノ酸配列、配列番号６５のＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列、配列番号６６のＣＤＲ－Ｌ１アミノ酸配列、配列番号６７のＣＤＲ－Ｌ２アミノ酸配列、配列番号６８のＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列を有する）、Ｒ５６８－２Ｂ９（配列番号６９のＣＤＲ－Ｈ１アミノ酸配列、配列番号７０のＣＤＲ－Ｈ２アミノ酸配列、配列番号７１のＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列、配列番号７２のＣＤＲ－Ｌ１アミノ酸配列、配列番号７３のＣＤＲ－Ｌ２アミノ酸配列、配列番号７４のＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列を有する）、Ｒ５６８－１Ｂ３（配列番号７５のＣＤＲ－Ｈ１アミノ酸配列、配列番号７６のＣＤＲ－Ｈ２アミノ酸配列、配列番号７７のＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列、配列番号７８のＣＤＲ－Ｌ１アミノ酸配列、配列番号７９のＣＤＲ－Ｌ２アミノ酸配列、配列番号８０のＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列を有する）、Ｒ５６８－２Ｅ１（配列番号８１のＣＤＲ－Ｈ１アミノ酸配列、配列番号８２のＣＤＲ－Ｈ２アミノ酸配列、配列番号８３のＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列、配列番号８４のＣＤＲ－Ｌ１アミノ酸配列、配列番号８５のＣＤＲ－Ｌ２アミノ酸配列、配列番号８６のＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列を有する）、Ｒ５６８－１Ｇ９（配列番号８７のＣＤＲ－Ｈ１アミノ酸配列、配列番号８８のＣＤＲ－Ｈ２アミノ酸配列、配列番号８９のＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列、配列番号９０のＣＤＲ－Ｌ１アミノ酸配列、配列番号９１のＣＤＲ－Ｌ２アミノ酸配列、配列番号９２のＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列を有する）、Ｒ１２１－１Ｆ１（配列番号９３のＣＤＲ－Ｈ１アミノ酸配列、配列番号９４のＣＤＲ－Ｈ２アミノ酸配列、配列番号９５のＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列、配列番号９６のＣＤＲ－Ｌ１アミノ酸配列、配列番号９７のＣＤＲ－Ｌ２アミノ酸配列、配列番号９８のＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列を有する）、Ｒ２５９－１Ｂ９（配列番号９９のＣＤＲ－Ｈ１アミノ酸配列、配列番号１００のＣＤＲ－Ｈ２アミノ酸配列、配列番号１０１のＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列、配列番号１０２のＣＤＲ－Ｌ１アミノ酸配列、配列番号１０３のＣＤＲ－Ｌ２アミノ酸配列、配列番号１０４のＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列を有する）を含む群から選択される１つの抗体の重鎖ＣＤＲ１～ＣＤＲ３および軽鎖ＣＤＲ１～ＣＤＲ３アミノ酸配列の組合せを含む、抗体またはその抗原結合断片が提供される。

【0015】

本発明の第１の態様の一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、Ｒ２００－１Ｂ９（配列番号１の可変領域重鎖アミノ酸配列および配列番号２の可変領域軽鎖アミノ酸配列を有する）、Ｒ２０７－２Ｆ１１（配列番号３の可変領域重鎖アミノ酸配列および配列番号４の可変領域軽鎖アミノ酸配列を有する）、Ｒ４０－１Ｇ８（配列番号５の可変領域重鎖アミノ酸配列および配列番号６の可変領域軽鎖アミノ酸配列を有する）、Ｒ５６８－２Ｇ５（配列番号７の可変領域重鎖アミノ酸配列および配列番号８の可変領域軽鎖アミノ酸配列を有する）、Ｒ５６８－２Ｂ１１（配列番号９の可変領域重鎖アミノ酸配列および配列番号１０の可変領域軽鎖アミノ酸配列を有する）、Ｒ２０７－２Ｇ４（配列番号１１の可変領域重鎖アミノ酸配列および配列番号１２の可変領域軽鎖アミノ酸配列を有する）、Ｒ４０－１Ｃ８（配列番号１３の可変領域重鎖アミノ酸配列および配列番号１４の可変領域軽鎖アミノ酸配列を有する）、Ｒ５６８－２Ｂ９（配列番号１５の可変領域重鎖アミノ酸配列および配列番号１６の可変領域軽鎖アミノ酸配列を有する）、Ｒ５６８－１Ｂ３（配列番号１７の可変領域重鎖アミノ酸配列および配列番号１８の可変領域軽鎖アミノ酸配列を有する）、Ｒ５６８－２Ｅ１（配列番号１９の可変領域重鎖アミノ酸配列および配列番号２０の可変領域軽鎖アミノ酸配列を有する）、Ｒ５６８－１Ｇ９（配列番号２１の可変領域重鎖アミノ酸配列および配列番号２２の可変領域軽鎖アミノ酸配列を有する）、Ｒ１２１－１Ｆ１（配列番号２３の可変領域重鎖アミノ酸配列および配列番号２４の可変領域軽鎖アミノ酸配列を有する）、Ｒ２５９－１Ｂ９（配列番号２５の可変領域重鎖アミノ酸配列および配列番号２６の可変領域軽鎖アミノ酸配列を有する）を含む群から選択される１つの抗体の可変領域重鎖アミノ酸配列および可変領域軽鎖アミノ酸配列の組合せを含む。

【0016】

本発明の第１の態様の一実施形態によれば、含まれるアミノ酸配列は、Ｒ２００－１Ｂ９、Ｒ２０７－２Ｆ１１、Ｒ４０－１Ｇ８、Ｒ５６８－２Ｇ５、Ｒ５６８－２Ｂ１１、Ｒ２０７－２Ｇ４、Ｒ４０－１Ｃ８、Ｒ５６８－２Ｂ９、およびＲ５６８－１Ｂ３を含む群から選択される１つの抗体、好ましくは、Ｒ２００－１Ｂ９、Ｒ２０７－２Ｆ１１、Ｒ４０－１Ｇ８、およびＲ５６８－２Ｇ５を含む群からの１つの抗体のものである。

【0017】

本発明の第１の態様の別の実施形態によれば、ＳＡＲＳ関連コロナウイルス株は、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）である。

【0018】

本発明の第１の態様のさらに別の実施形態によれば、ＣＤＲまたは抗体もしくはその抗原結合断片に含まれる可変領域のアミノ酸配列は、多くとも０．４μｇ／ｍｌ、好ましくは多くとも０．１μｇ／ｍｌ、より好ましくは多くとも０．０５μｇ／ｍｌ、さらにより好ましくは多くとも０．０２５μｇ／ｍｌ、さらにより好ましくは多くとも０．０１μｇ／ｍｌ、さらにより好ましくは多くとも０．００２５μｇ／ｍｌ、特に好ましくは多くとも０．００１５μｇ／ｍｌのＩＣ５０で、説明に記載されているシュードウイルス中和アッセイにおいてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２系統Ｂ．１、Ｂ．１．１．７、Ｂ．１．３５１、Ｂ．１．４２９、Ｂ．１．６１７およびＢ．１．６１７．２の各々を中和することができる抗体から得られる。

【0019】

本発明の第１の態様のさらに別の実施形態によれば、ＣＤＲまたは抗体もしくはその抗原結合断片に含まれる可変領域のアミノ酸配列は、多くとも１．３μｇ／ｍｌ、好ましくは多くとも０．５μｇ／ｍｌ、より好ましくは多くとも０．０５μｇ／ｍｌ、さらにより好ましくは多くとも０．０２μｇ／ｍｌ、特に好ましくは多くとも０．０１μｇ／ｍｌのＩＣ５０で、説明に記載されているシュードウイルス中和アッセイにおいてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクエスケープ変異体６９－７０ｄｅｌ、Ｋ４１７Ｅ、Ｎ４３９Ｋ、Ｋ４４４Ｑ、Ｖ４４５Ａ、Ｇ４４６Ｖ、Ｌ４５２Ｒ、Ｙ４５３Ｆ、Ｌ４５５Ｆ、Ｇ４７６Ｓ、Ｓ４７７Ｎ、Ｅ４８４Ｋ、Ｆ４８６Ｖ、Ｆ４９０Ｓ、Ｑ４９３Ｒ、Ｑ４９３Ｋ、Ｓ４９４Ｐ、Ｎ５０１Ｙの各々を中和することができる抗体から得られる。

【0020】

本発明の第１の態様の一実施形態によれば、ＣＤＲまたは抗体もしくはその抗原結合断片に含まれる可変領域のアミノ酸配列は、多くとも０．００１５μｇ／ｍｌのＩＣ５０で、説明に記載されているシュードウイルス中和アッセイにおいて出現ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２エスケープバリアントＲ３４６Ｓ、Ｑ４１４Ｈ、Ｎ４４０Ｋ、およびＴ４７８Ｋの各々を中和することができる抗体から得られる。

【0021】

本発明の第１の態様のさらに別の実施形態によれば、ＣＤＲまたは抗体もしくはその抗原結合断片に含まれる可変領域のアミノ酸配列は、多くとも０．０８μｇ／ｍｌ、好ましくは多くとも０．０２５μｇ／ｍｌ、より好ましくは多くとも０．０１μｇ／ｍｌ、さらにより好ましくは多くとも０．００６μｇ／ｍｌ、特に好ましくは多くとも０．００２μｇ／ｍｌの平均ＩＣ５０で、全てのバリアントおよび変異体にわたって説明に記載されているシュードウイルス中和アッセイにおいてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２バリアントＷｕ－０１、Ｂ．１、Ｂ．１．１．７、Ｂ．１．３５１、Ｂ．１．４２９、Ｂ．１．６１７およびＢ．１．６１７．２、ならびにＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２エスケープ変異体６９－７０ｄｅｌ、Ｋ４１７Ｅ、Ｎ４３９Ｋ、Ｋ４４４Ｑ、Ｖ４４５Ａ、Ｇ４４６Ｖ、Ｌ４５２Ｒ、Ｙ４５３Ｆ、Ｌ４５５Ｆ、Ｇ４７６Ｓ、Ｓ４７７Ｎ、Ｅ４８４Ｋ、Ｆ４８６Ｖ、Ｆ４９０Ｓ、Ｑ４９３Ｒ、Ｑ４９３Ｋ、Ｓ４９４Ｐ、Ｎ５０１Ｙ、Ｒ３４６Ｓ、Ｑ４１４Ｈ、Ｎ４４０Ｋ、およびＴ４７８Ｋを中和することができる抗体から得られる。

【0022】

本発明の別の実施形態によれば、抗体またはその抗原結合断片は、１００μｇ／ｍｌの濃度の抗体またはその抗原結合断片で、抗核抗体（ＡＮＡ）検査キット（ＮＯＶＡ－Ｌｉｔｅ ＨＥｐ－２ ＡＮＡキット；Ｉｎｏｖａ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を使用して透過処理したＨＥｐ－２細胞に対して検査した場合、検出可能な結合パターンとして規定される自己反応性を示さない。

【0023】

本発明の第２の態様によれば、本発明の第１の態様による抗体またはその抗原結合断片、および少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物が提供される。

【0024】

本発明の第２の態様の実施形態によれば、医薬組成物は、ヒトまたは動物対象に対するワクチン組成物である。

【0025】

本発明の第３の態様によれば、本発明の第１の態様による抗体またはその抗原結合断片、および容器を含むキットが提供される。

【0026】

本発明の第４の態様によれば、医薬としての使用のための、好ましくはワクチンとしての使用のための、本発明の第１の態様による抗体またはその抗原結合断片、本発明の第２の態様による医薬組成物、または本発明の第３の態様によるキットが提供される。

【0027】

本発明の第５の態様によれば、ヒトまたは動物対象におけるＳＡＲＳ関連コロナウイルスによって引き起こされる疾患の治療または予防における使用のための、好ましくは、ヒトまたは動物対象における重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）によって引き起こされる疾患の治療または予防における使用のための、本発明の第１の態様による抗体またはその抗原結合断片、本発明の第２の態様による医薬組成物、または本発明の第３の態様によるキットが提供される。

【0028】

本発明の第６の態様によれば、ＳＡＲＳ関連コロナウイルスによるヒトまたは動物対象の感染、好ましくは重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）によるヒトまたは動物対象の感染の予防における使用のための、本発明の第１の態様による抗体またはその抗原結合断片、本発明の第２の態様による医薬組成物、または本発明の第３の態様によるキットが提供される。

【0029】

本発明の第７の態様によれば、ヒトおよび／または動物対象におけるＳＡＲＳ関連コロナウイルス感染を治療もしくは予防するか、または疾患の重症度を軽減する方法であって、本発明の第１の態様による少なくとも１つの抗体および／またはその抗原結合断片の治療有効量を前記対象に投与することを含む、方法が提供される。

【0030】

本発明の第４の態様または第５の態様または第６の態様または第７の態様の実施形態によれば、抗体は、ＳＡＲＳ関連コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に対する少なくとも１つのさらなる抗体と組み合わせて提供され、前記さらなる抗体は異なる結合特異性を有する。

【0031】

本発明の第４の態様または第５の態様または第６の態様または第７の態様の実施形態によれば、抗体は、静脈内注入、皮下注射、筋肉内注射、または吸入適用によって投与される。

【0032】

本発明の第４の態様または第５の態様または第６の態様または第７の態様の一実施形態では、本発明の抗体または抗原結合断片は、最大４０００ｍｇ、好ましくは最大２４００ｍｇ、より好ましくは最大１２００ｍｇ、さらにより好ましくは最大６００ｍｇ、さらにより好ましくは最大３００ｍｇ、特に好ましくは最大１５０ｍｇの絶対用量で投与される。

【0033】

本発明の第８の態様によれば、本発明の第１の態様による抗体またはその抗原結合断片をコードする核酸が提供される。

【0034】

本発明の第９の態様によれば、発現制御配列と機能的に会合している本発明の第８の態様による核酸を含む発現ベクターが提供される。

【0035】

本発明の第１０の態様によれば、本発明の第８の態様による核酸または本発明の第９の態様による発現ベクターを含む宿主細胞が提供される。

【0036】

本発明の第１１の態様によれば、本発明の第１の態様による抗体またはその抗原結合断片の作製方法であって、抗体またはその抗原結合断片の発現を可能にする条件下で本発明の第１０の態様による宿主細胞を培養することと、抗体またはその抗原結合断片を回収することとを含む、作製方法が提供される。

【図面の簡単な説明】

【0037】

【図1】（Ａ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２エリート中和者からモノクローナル抗体を同定および単離するために使用した研究設計の概略図；（Ｂ）研究したＣＯＶＩＤ－１９回復期コホートにおけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｗｕ０１シュードウイルスに対する血清または血漿ＩｇＧ中和ＩＣ_５０値を示すヒートマップを示す図である（Ｖａｎｓｈｙｌｌａ，Ｋ．ら、（２０２１）．Ｃｅｌｌ Ｈｏｓｔ Ｍｉｃｒｏｂｅ ２９、９１７～９２９）。円グラフはコホートにおけるエリート中和者の割合（３．３％）を示す。

【図2】２５個のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクシュードウイルスバリアントに対する本発明のエリート中和者ＮＡｂ（上のパネル）および参照抗体（下のパネル）の中和プロファイルを示す図である。平均ＩＣ_５０値およびバリアントにわたる相対的中和幅、ならびにＩＧＨＶ３－５３の使用量を右の列に示す。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１およびコウモリ－ＣｏＶ ＷＩＶ－１シュードウイルスに対する中和活性を有する交差中和抗体Ｒ１２１－３Ｇ２およびＲ４０－１Ｅ１を中央のパネルに示す。

【図3】臨床使用のために承認された抗体を含む、公開されたモノクローナル参照抗体と比較した、循環バリアントＢ．１、Ｂ．１．１．７、Ｂ．１．３５１、Ｂ．１．４２９、Ｂ．１．６１７およびＢ．１．６１７．２のスパイク配列を有するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２シュードウイルスバリアントに対する本発明の最も広域（１００％）かつ最も強力なエリートＮａｂのＩＣ_５０値を示すプロットを示す図である。灰色の領域は０．０２μｇ／ｍｌ未満の値を強調表示し、線は全てのバリアントにわたる幾何平均ＩＣ_５０値を示す。

【図4】４つの出現スパイク変異、Ｒ３４６Ｓ、Ｑ４１４Ｈ、Ｎ４４０ＫおよびＴ４７８Ｋのうちの１つを有するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２シュードウイルスに対して試験した公開された抗体とともに、本発明の１３個の最も強力かつ広域なｂＮＡｂの中和分析を示す図である。

【図5】研究で使用したＶＯＣまたはＶＯＩにおける変異した残基を強調したＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２スパイクドメインの概略図を示す。

【図6A】真のウイルス単離株に対して（μｇ／ｍｌでＩＣ_１００として示した）、および図２に示した２５個のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクシュードウイルスバリアントに対して、ならびに図４に示した４個の出現スパイク変異、Ｒ３４６Ｓ、Ｑ４１４Ｈ、Ｎ４４０ＫおよびＴ４７８Ｋのうちの１つを有するＳＲＡＳ－ＣｏＶ－２シュードウイルスに対して（μｇ／ｍｌでＩＣ_５０として示した）、試験した公開された抗体とともに、本発明の１３個の最も強力かつ広域なｂＮＡｂ、ならびに本発明の交差中和抗体Ｒ１２１－３Ｇ２およびＲ４０－１Ｅ１の中和効力の個々の値を示す図である。試験した２５個全てのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２シュードウイルスバリアントにわたる平均中和効力、ならびにＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１シュードウイルスおよびＷＩＶ－１（コウモリコロナウイルス）シュードウイルスに対する中和効力がさらに示される。

【図6B】同上。

【図6C】同上。

【図6D】同上。

【図7】オミクロンバリアントのＢＡ．１系統において同定されたスパイクタンパク質変異を有するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク疑似バリアントに対して（μｇ／ｍｌでＩＣ_５０として示した）、試験した公開された抗体とともに、本発明の１３個の最も強力かつ広域なｂＮＡｂ、ならびに本発明の交差中和抗体Ｒ１２１－３Ｇ２およびＲ４０－１Ｅ１の中和効力についての個々の値を示す図である。

【発明を実施するための形態】

【0038】

本説明をより容易に理解できるように、最初に特定の用語を定義する。さらなる定義は詳細な説明を通して記載される。

【0039】

「１つの（ａ）」または「１つの（ａｎ）」実体という用語は、その実体の１つまたは複数を指すことに留意されたい；例えば、「ヌクレオチド配列」は、１つまたは複数のヌクレオチド配列を表すと理解される。このように、「１つの（ａ）」（または「１つの（ａｎ）」）、「１つまたは複数」、および「少なくとも１つ」という用語は、本明細書において互換的に使用され得る。

【0040】

さらに、本明細書で使用される「および／または」は、他の有無にかかわらず、２つの指定された特徴または構成要素の各々の具体的な開示とみなされる。したがって、本明細書において「Ａおよび／またはＢ」などの語句で使用される場合、「および／または」という用語は、「ＡおよびＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」（単独）、および「Ｂ」（単独）を含むことを意図する。同様に、「Ａ、Ｂ、および／またはＣ」などの語句で使用される場合、「および／または」という用語は、以下の態様の各々を包含することを意図する：Ａ、Ｂ、およびＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；ＡおよびＣ；ＡおよびＢ；ＢおよびＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；ならびにＣ（単独）。

【0041】

本明細書において「含む」という言語で態様が記載されている場合はいつでも、「からなる」および／または「から本質的になる」という用語で記載されている他の類似の態様も提供されることが理解される。

【0042】

他に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本開示が関連する技術分野における当業者によって一般的に理解されているものと同じ意味を有する。例えば、Ｃｏｎｃｉｓｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｊｕｏ，Ｐｅｉ－Ｓｈｏｗ、２ｎｄ ｅｄ．、２００２、ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ；Ｔｈｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、３ｒｄ ｅｄ．、１９９９、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；およびＯｘｆｏｒｄ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ Ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｒｅｖｉｓｅｄ、２０００、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓは、本開示で使用される多くの用語の一般的な辞書を当業者に提供する。

【0043】

単位、接頭辞、および記号は、それらの国際単位系（ＳＩ）で認められている形式で表記される。数値範囲は、その範囲を定義する数値を含む。別段の指示がない限り、ヌクレオチド配列は５’から３’の方向で左から右に書かれている。アミノ酸配列は、アミノからカルボキシの方向で左から右に書かれている。本明細書で提供される見出しは、本明細書全体を参照することによって得ることができる本開示の様々な態様を限定するものではない。したがって、直後に定義される用語は、本明細書の全体を参照することによってより完全に定義される。

【0044】

「約」という用語は、本明細書において、およそ、おおよそ、その周辺、またはその領域を意味するために使用される。「約」という用語が数値範囲とともに使用される場合、それは、記載された数値の上下に境界を拡張することによってその範囲を修飾する。一般に、「約」という用語は、例えば１０パーセントの上または下（より高いまたはより低い）の変動によって、述べられた値の上下の数値を修飾することができる。

【0045】

本明細書において、「抗体」という用語は、免疫グロブリン様ドメイン（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤまたはＩｇＥ）を有する分子を指すために最も広い意味で使用され、モノクローナル、組換え、ポリクローナル、キメラ、ヒト、ヒト化、二重特異性抗体を含む多重特異性抗体、およびヘテロコンジュゲート抗体；単一可変ドメイン（例えば、Ｖ_Ｈ、Ｖ_ＨＨ、Ｖ_Ｌ、ドメイン抗体）、抗原結合抗体断片、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ、ジスルフィド結合ｓｃＦｖ、ダイアボディなどを含み、前述のいずれかの修飾型を含む。

【0046】

本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、生殖細胞系列の免疫グロブリン配列に由来し、抗原またはその抗原結合部分に特異的に結合することができるタンパク質を指す。この用語は、任意のクラスまたはアイソタイプ（すなわち、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭおよび／またはＩｇＹ）の全長抗体、および任意の一本鎖またはそれらの断片を含む。抗原またはその抗原結合部分に特異的に結合する抗体は、その抗原もしくはその部分のみに結合し得るか、またはそれは、限られた数の相同抗原もしくはその部分に結合し得る。全長抗体は通常、少なくとも４つのポリペプチド鎖：ジスルフィド結合によって相互に連結されている２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖を含む。

【0047】

特に製薬上関心のある免疫グロブリンサブクラスの１つは、ＩｇＧファミリーである。ヒトでは、ＩｇＧクラスは、それらの重鎖定常領域の配列に基づいて４つのサブクラス：ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３およびＩｇＧ_４に細分され得る。軽鎖は、それらの配列組成の相違に基づいて、２種類、カッパおよびラムダに分けられ得る。ＩｇＧ分子は、２つ以上のジスルフィド結合によって連結された２つの重鎖、および各々がジスルフィド結合によって重鎖に結合した２つの軽鎖から構成される。重鎖は、重鎖可変領域（ＶＨ）および最大３つの重鎖定常（ＣＨ）領域：ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３を含み得る。軽鎖は、軽鎖可変領域（ＶＬ）および軽鎖定常領域（ＣＬ）を含み得る。

【0048】

ＶＨおよびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる、より保存されている領域により点在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる、超可変性の領域にさらに細分され得る。ＶＨおよびＶＬ領域は典型的に、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲから構成され、アミノ末端からカルボキシ末端に対して以下の順序で並んでいる：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。重鎖および軽鎖の超可変領域は、抗原と相互作用可能な結合ドメインを形成し、一方、抗体の定常領域は、特に限定されないが、免疫系の様々な細胞（エフェクター細胞）、Ｆｃ受容体および古典的補体系の第１の成分（Ｃ１ｑ）を含む、宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合を媒介することができる。本発明の抗体は単離されてもよい。

【0049】

「単離された抗体」という用語は、それが産生された環境中の（他の）成分から分離および／もしくは回収された抗体、ならびに／またはそれが産生された環境中に存在する成分の混合物から精製された抗体を指す。抗体の抗原結合機能は、全長抗体の断片によって実行され得ることが示されているため、抗体のある特定の抗原結合断片は、本発明の文脈において好適であり得る。

【0050】

抗体の「抗原結合部分」、「結合断片」または「抗原結合断片」という用語は、本明細書に記載されているように、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイク（Ｓ）タンパク質などの抗原に特異的に結合する能力を保持している抗体の１つまたは複数の断片を指す。

【0051】

抗原結合断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ）２、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）Ｓ、Ｆｖ（典型的には、抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメイン）、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ；例えば、Ｂｉｒｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２Ｓ－４２６（１９８８）；Ｈｕｓｔｏｎら、ＰＮＡＳ ８５：５８７９－５８８３（１９８８）を参照のこと）、ｄｓＦｖ、Ｆｄ（典型的には、ＶＨおよびＣＨ１ドメイン）、およびｄＡｂ（典型的には、Ｖ_Ｈドメイン）断片；Ｖ_Ｈ、Ｖ_Ｌ、Ｖ_ＨＨ、およびＶ－ＮＡＲドメイン；単一のＶ_Ｈ鎖および単一のＶ_Ｌ鎖を含む一価分子；ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、およびカッパボディ（例えば、Ｉｌｌら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ １０：９４９～５７（１９９７）を参照のこと）；ラクダＩｇＧ；ＩｇＮＡＲ；ならびに１つもしくは複数の単離されたＣＤＲまたは機能的パラトープが挙げられ、単離されたＣＤＲまたは抗原結合残基またはポリペプチドは、機能的抗体断片を形成するように一緒に会合または連結され得る。

【0052】

様々な種類の抗体断片が、例えば、ＨｏｌｌｉｇｅｒおよびＨｕｄｓｏｎ、Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２Ｓ：１１２６～１１３６（２００５）；国際公開番号ＷＯ２００５／０４０２１９、ならびに米国公開第２００５／０２３８６４６号および同第２００２／０１６１２０１号に記載または概説されている。これらの抗体断片は、当業者に公知の従来の技術を使用して得ることができ、断片は、インタクトな抗体と同様の方法で有用性に関してスクリーニングすることができる。

【0053】

「ヒト」抗体（ＨｕＭＡｂ）とは、フレームワークおよびＣＤＲ領域の両方がヒト生殖細胞系列の免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する抗体を指す。さらに、抗体が定常領域を含む場合、定常領域もヒト生殖細胞系列の免疫グロブリン配列に由来する。本明細書に記載されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体は、ヒト生殖細胞系列の免疫グロブリン配列によってコードされていないアミノ酸残基（例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのランダム変異誘発もしくは部位特異的変異誘発、またはｉｎ ｖｉｖｏでの体細胞変異によって導入された変異）を含むことができる。しかしながら、本明細書で使用される場合、「ヒト抗体」という用語は、マウスなどの別の哺乳動物種の生殖細胞系列に由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列に移植された抗体を含むことを意図するものではない。「ヒト」抗体および「完全ヒト」抗体という用語は、同義的に使用される。

【0054】

「ヒト化」抗体とは、非ヒト免疫グロブリンに由来する１つまたは複数の配列（ＣＤＲ領域またはその一部）を含むヒト／非ヒトキメラ抗体を指す。したがって、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域からの少なくとも残基が、所望の特異性、親和性、配列組成および機能性を有するマウス、ラット、ウサギまたは非ヒト霊長類由来などの非ヒト種由来の抗体（ドナー抗体）の超可変領域からの残基によって置換されているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。一部の場合、ヒト免疫グロブリンのＦＲ残基は、対応する非ヒト残基によって置換される。このような修飾の例は、１つまたは複数のいわゆる復帰突然変異の導入であり、これは典型的にはドナー抗体に由来するアミノ酸残基である。

【0055】

抗体のヒト化は、当業者に公知の組換え技術を使用して実施することができる（例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、ｖｏｌ．２４８、Ｂｅｎｎｙ Ｋ．Ｃ．Ｌｏによる編集を参照のこと）。軽鎖および重鎖可変ドメインの両方に対して適切なヒトレシピエントフレームワークは、例えば、配列相同性または構造相同性によって同定され得る。あるいは、固定したレシピエントフレームワークを、例えば、構造、生物物理学的および生化学的特性に関する知識に基づいて使用することもできる。レシピエントフレームワークは生殖細胞系列由来であってもよいか、または成熟抗体配列に由来してもよい。ドナー抗体からのＣＤＲ領域は、ＣＤＲ移植によって移入することができる。

【0056】

ＣＤＲ移植されたヒト化抗体は、ドナー抗体からのアミノ酸残基の再導入（復帰突然変異）がヒト化抗体の特性に有益な影響を与える重要なフレームワーク位置の同定によって、例えば、親和性、機能性および生物物理学的特性をさらに最適化することができる。ドナー抗体由来の復帰突然変異に加えて、ヒト化抗体は、ＣＤＲまたはフレームワーク領域における生殖細胞系列残基の導入、免疫原性エピトープの除去、部位特異的変異誘発、親和性成熟などによって操作することができる。

【0057】

さらに、ヒト化抗体はレシピエント抗体またはドナー抗体において見出されない残基を含むことができる。これらの修飾は抗体の性能をさらに改良させるために行われる。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインを含み、ＣＤＲ領域の全てまたは実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲ残基の全てまたは実質的に全てがヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリンの定常領域を含むこともできる。「ヒト化抗体誘導体」という用語は、抗体および別の薬剤または抗体のコンジュゲートなどの、ヒト化抗体の修飾された形態を指す。

【0058】

本明細書で使用される場合、「組換えヒト抗体」という用語は、（ａ）ヒト免疫グロブリン遺伝子に対してトランスジェニックもしくはトランス染色体である動物（例えばマウス）から単離された抗体、またはそれから調製されたハイブリドーマ、（ｂ）抗体を発現するように形質転換された宿主細胞、例えば、トランスフェクトーマから単離された抗体、（ｃ）組換え、コンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体、および（ｄ）ヒト免疫グロブリン遺伝子配列の他のＤＮＡ配列へのスプライシングを伴う任意の他の手段によって調製、発現、作製または単離された抗体などの、組換え手段によって調製、発現、作製または単離された全てのヒト抗体を含む。

【0059】

このような組換えヒト抗体は、生殖細胞系列遺伝子によってコードされる特定のヒト生殖細胞系列の免疫グロブリン配列を利用する可変領域および定常領域を含むが、例えば、抗体成熟の間に生じるその後の再編成および変異を含む。当該技術分野で知られているように（例えば、Ｌｏｎｂｅｒｇ Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３（９）：１１１７～１１２５（２００５）を参照のこと）、可変領域は抗原結合ドメインを含み、これは、外来抗原に特異的な抗体を形成するために再編成する様々な遺伝子によってコードされる。再編成に加えて、可変領域は、外来抗原に対する抗体の親和性を増加させるために複数の単一アミノ酸の変化（体細胞変異またはハイパーミューテーションと称される）によってさらに改変され得る。定常領域は抗原に応答してさらに変化する（すなわち、アイソタイプスイッチ）。

【0060】

したがって、抗原に応答して軽鎖および重鎖免疫グロブリンポリペプチドをコードする、再編成され、体細胞変異した核酸分子は、元の核酸分子と配列同一性を有することはできないが、代わりに実質的に同一または類似している（すなわち、少なくとも８０％の同一性を有する）。

【0061】

「キメラ抗体」とは、可変領域がある種に由来し、定常領域が別の種に由来する抗体、例えば、可変領域がマウス抗体に由来し、定常領域がヒト抗体に由来する抗体を指す。

【0062】

代替抗体フォーマットには、抗原結合部分の１つまたは複数のＣＤＲを、アフィボディ、ＳｐＡスキャフォールド、ＬＤＬ受容体クラスＡドメイン、アビマーまたはＥＧＦドメインなどの適切な非免疫グロブリンタンパク質スキャフォールドまたは骨格上に配置することができる代替スキャフォールドが含まれる。

【0063】

「ドメイン」という用語は、タンパク質の残りの部分とは独立した三次構造を保持する、折り畳まれたタンパク質構造を指す。一般に、ドメインはタンパク質の個別の機能的特性を担っており、多くの場合、タンパク質の残りの部分および／またはドメインの機能を喪失することなく、他のタンパク質に付加、除去、または移入させることができる。

【0064】

「単一可変ドメイン」という用語は、抗体可変ドメインに特徴的な配列を含む折り畳まれたポリペプチドドメインを指す。したがって、それは、Ｖ_Ｈ、Ｖ_ＨＨおよびＶ_Ｌなどの完全な抗体可変ドメイン、ならびに例えば、１つまたは複数のループが抗体可変ドメインに特徴的ではない配列によって置換された修飾された抗体可変ドメイン、あるいは短縮された、またはＮ末端もしくはＣ末端の伸長を含む抗体可変ドメイン、ならびに少なくとも全長ドメインの結合活性および特異性を保持する可変ドメインの折り畳まれた断片を含む。

【0065】

単一可変ドメインは、異なる可変領域またはドメインとは独立して抗原またはエピトープに結合することができる。「ドメイン抗体」または「ｄＡｂ（商標）」は、「単一可変ドメイン」と同じとみなすことができる。単一可変ドメインはヒトの単一可変ドメインであり得るが、げっ歯類、コモリザメおよびラクダ科のＶ_ＨＨ ｄＡｂ（商標）などの他の種由来の単一可変ドメインも含む。ラクダ科のＶ_ＨＨは、ラクダ、ラマ、アルパカ、ヒトコブラクダ、およびグアナコを含む種に由来する免疫グロブリン単一可変ドメインポリペプチドであり、軽鎖を天然に欠いている重鎖抗体を産生する。このようなＶ_ＨＨドメインは、当該技術分野で利用可能な標準的な技術に従ってヒト化することができ、このようなドメインは「単一可変ドメイン」であるとみなされる。本明細書で使用される場合、Ｖ_Ｈはラクダ科のＶ_ＨＨドメインを含む。

【0066】

抗原結合断片は、非抗体タンパク質スキャフォールド上の１つまたは複数のＣＤＲの配置によって提供され得る。本明細書で使用される場合、「タンパク質スキャフォールド」には、免疫グロブリン（Ｉｇ）スキャフォールド、例えば、ＩｇＧスキャフォールドが含まれるが、これらに限定されず、これは４つの鎖もしくは２つの鎖の抗体であってもよいか、またはこれは抗体のＦｃ領域のみを含んでもよいか、またはこれは抗体由来の１つもしくは複数の定常領域を含んでもよく、その定常領域はヒトもしくは霊長類起源であってもよいか、またはこれはヒトおよび霊長類の定常領域の人工キメラであってもよい。

【0067】

本明細書で使用される「アイソタイプ」とは、重鎖定常領域遺伝子によってコードされる抗体クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、およびＩｇＥ抗体）を指す。

【0068】

「アロタイプ」とは、特定のアイソタイプ群内で天然に存在するバリアントを指し、このバリアントは少しのアミノ酸が異なる（Ｊｅｆｆｅｒｉｓら、ｍＡｂｓ １：１（２００９）を参照のこと）。

【0069】

「抗原を認識する抗体」および「抗原に特異的な抗体」という語句は、本明細書では「抗原に特異的に結合する抗体」という用語と互換的に使用される。

【0070】

用語「治療する」、「治療すること」、または「の治療」（または文法的に等価の用語）とは、対象の状態の重症度が低減されるか、または少なくとも部分的に好転もしくは改善されること、および／または少なくとも１つの臨床症状において何らかの緩和、軽減もしくは減少が達成されること、および／または状態の進行を遅延させることを意味する。

【0071】

本明細書で使用される用語「予防する（ｐｒｅｖｅｎｔ）」、「予防する（ｐｒｅｖｅｎｔｓ）」、または「予防」、および「阻害する（ｉｎｈｉｂｉｔ）」、「阻害する（ｉｎｈｉｂｉｔｓ）」、または「阻害」（およびそれらの文法的等価物）は、疾患の完全な消滅を示すことを意味するものではなく、状態の発生を低減させ、状態の発症を遅延させ、および／または発症後の状態に関連する症状を低減させる任意の種類の予防的処置を包含する。

【0072】

本明細書で使用される「有効な」、「予防的に有効な」、または「治療的に有効な」量は、対象にある程度の改善または利益をもたらすのに十分な量である。別の言い方をすると、「有効な」、「予防的に有効な」、または「治療的に有効な」量は、対象における少なくとも１つの臨床症状において、ある程度の遅延、緩和、軽減、または減少をもたらす量である。当業者は、ある程度の利益が対象にもたらされる限り、効果は完全または治癒的である必要はないことを理解するであろう。

【0073】

本明細書で使用される「中和抗体」は、病原体に結合し、病原体が細胞に感染する能力および／または対象において疾患を引き起こす能力を妨げる任意の抗体またはその抗原結合断片である。

【0074】

本明細書で使用される「ペプチド」は、本明細書で具体的に例示されるペプチドの保存的変異であるペプチドを含む。本明細書で使用される「保存的変異」および「保存的アミノ酸置換」は、別の生物学的に類似した残基によるアミノ酸残基の置換を示す。保存的変異の例としては、イソロイシン、バリン、ロイシン、アラニン、システイン、グリシン、フェニルアラニン、プロリン、トリプトファン、チロシン、ノルロイシンもしくはメチオニンなどの、ある疎水性残基の別の残基への置換、またはアルギニンのリジンへの置換、グルタミン酸のアスパラギン酸への置換、もしくはグルタミンのアスパラギンへの置換などの、ある極性残基の別の残基への置換が挙げられるが、これらに限定されない。互いに置換され得る中性親水性アミノ酸としては、アスパラギン、グルタミン、セリンおよびスレオニンが挙げられる。

【0075】

「保存的変異」はまた、置換されたポリペプチドに対して惹起された抗体が置換されていないポリペプチドとも免疫反応することを条件として、置換されていない親アミノ酸の代わりに置換されたアミノ酸の使用も含む。このような保存的置換は、本発明のペプチドのクラスの定義の範囲内である。ペプチドの生物学的活性は、当業者に公知であり、本明細書に記載される標準的な方法によって決定することができる。

【0076】

核酸に関して、「実質的な相同性」という用語は、２つの核酸、またはその指定された配列が、最適に整列して比較された場合に、適切なヌクレオチドの挿入または欠失を伴って、ヌクレオチドの少なくとも約８０％、少なくとも約９０％～９５％、またはヌクレオチドの少なくとも約９８％～９９．５％において同一であることを示す。あるいは、セグメントが選択的ハイブリダイゼーション条件下で鎖の相補体にハイブリダイズする場合、実質的な相同性が存在する。

【0077】

ポリペプチドに関して、「実質的な相同性」という用語は、２つのポリペプチド、またはその指定された配列が、最適に整列して比較された場合に、適切なアミノ酸の挿入または欠失を伴って、アミノ酸の少なくとも約８０％、少なくとも約９０％～９５％、またはアミノ酸の少なくとも約９８％～９９．５％において同一であることを示す。

【0078】

２つの配列間の同一性パーセントは、２つの配列の最適なアラインメントのために導入される必要のあるギャップの数、および各ギャップの長さを考慮した、配列によって共有される同一位置の数の関数である（すなわち、相同性％＝同一位置の数／全ての位置の数×１００）。配列の比較および２つの配列間の同一性パーセントの決定は、以下の非限定的な例に記載されるように数学的アルゴリズムを使用して達成され得る。

【0079】

核酸は、全細胞中、細胞溶解物中、または部分的に精製された形態もしくは実質的に純粋な形態で存在することができる。核酸は、アルカリ／ＳＤＳ処理、ＣｓＣｌバンディング、カラムクロマトグラフィー、アガロースゲル電気泳動、および当該技術分野で周知の他のものを含む、標準的な技術によって、他の細胞成分または他の汚染物質、例えば、他の細胞核酸（例えば、染色体の他の部分）またはタンパク質から離れて精製された場合に、「単離される」または「実質的に純粋になる」。Ｆ．Ａｕｓｕｂｅｌら、ｅｄ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８７）を参照のこと。

【0080】

核酸、例えば、ｃＤＮＡは、遺伝子配列を提供するための標準的な技術に従って変異させることができる。コード配列に関して、これらの変異は、所望のアミノ酸配列に影響を与え得る。特に、天然のＶ、Ｄ、Ｊ、定常、スイッチおよび本明細書に記載される他のこのような配列に実質的に相同であるか、またはこのような配列に由来するＤＮＡ配列が企図される（ここで、「由来する」は、配列が別の配列と同一であるか、または別の配列から修飾されていることを示す）。

【0081】

本明細書で使用される「ベクター」という用語は、連結している別の核酸を輸送することができる核酸分子を指すことを意図する。ある種類のベクターは「プラスミド」であり、これは追加のＤＮＡセグメントがライゲーションされ得る環状二本鎖ＤＮＡループを指す。別の種類のベクターはウイルスベクターであり、追加のＤＮＡまたはＲＮＡセグメントがウイルスゲノムにライゲーションされ得る。ある特定のベクターは、導入される宿主細胞内で自律複製が可能である（例えば、細菌複製起点を有する細菌ベクターおよびエピソーマル哺乳動物ベクター）。

【0082】

他のベクター（例えば、非エピソーマル哺乳動物ベクター）は、宿主細胞に導入されると宿主細胞のゲノムに組み込まれ得、それによって宿主ゲノムとともに複製される。さらに、ある特定のベクターは、それらが作動可能に連結している遺伝子の発現を指揮することができる。このようなベクターは、本明細書では「組換え発現ベクター」（または単に「発現ベクター」）と称される。一般に、組換えＤＮＡ技術において有用な発現ベクターは、多くの場合、プラスミドの形態である。本明細書において、「プラスミド」および「ベクター」は、プラスミドが最も一般的に使用されるベクターの形態であるため、互換的に使用することができる。しかしながら、ウイルスベクター（例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルス）などの他の形態の発現ベクターも含まれ、これらは同等の機能を果たす。

【0083】

本明細書で使用される「組換え宿主細胞」（または単に「宿主細胞」）という用語は、細胞中に天然には存在しない核酸を含む細胞を指すことを意図し、組換え発現ベクターが導入されている細胞であり得る。このような用語は、特定の対象細胞だけでなく、そのような細胞の子孫を指すことを意図していることを理解すべきである。変異または環境の影響のいずれかに起因して、ある特定の修飾が後の世代に起こり得るので、このような子孫は、実際には、親細胞と同一ではあり得ないが、それでもなお、本明細書で使用される場合、「宿主細胞」という用語の範囲内に含まれる。

【0084】

本明細書で使用される「連結した」という用語は、２つ以上の分子の会合を指す。連結は共有結合であってもよいか、または非共有結合であってもよい。連結はまた、遺伝的（すなわち、組換えにより融合された）であってもよい。このような連結は、化学的コンジュゲーションおよび組換えタンパク質の産生などの、当該技術分野で認められている多種多様の技術を使用して達成することができる。

【0085】

「エフェクター機能」とは、抗体Ｆｃ領域とＦｃ受容体もしくはリガンドとの相互作用、またはそれから生じる生化学的事象を指す。例示的な「エフェクター機能」には、Ｃ１ｑ結合、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、ＡＤＣＣおよび抗体依存性細胞媒介性食作用（ＡＤＣＰ）などのＦｃγＲ媒介性エフェクター機能、ならびに細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体；ＢＣＲ）の下方調節が含まれる。このようなエフェクター機能は一般に、Ｆｃ領域が結合ドメイン（例えば、抗体可変ドメイン）と組み合わされることを必要とする。

【0086】

「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」は、免疫グロブリンのＦｃ領域に結合する受容体である。ＩｇＧ抗体に結合するＦｃＲは、これらの受容体の対立遺伝子バリアントおよび選択的スプライシング型を含む、ＦｃγＲファミリーの受容体を含む。ＦｃγＲファミリーは、３つの活性化（マウスではＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＩ、およびＦｃ．ＲＩＶ；ヒトではＦｃγＲＩＡ、ＦｃγＲＩＩＡ、およびＦｃγＲＩＩＩＡ）および１つの抑制性（ＦｃγＲＩＩＢ）受容体からなる。ヒトＦｃγＲの様々な特性は当該技術分野で公知である。大多数の先天性エフェクター細胞型は、１つまたは複数の活性化ＦｃγＲおよび抑制性ＦｃγＲＩＩＢを共発現するのに対して、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞は、１つの活性化Ｆｃ受容体（マウスではＦｃγＲＩＩＩ、およびヒトではＦｃγＲＩＩＩＡ）を選択的に発現するが、マウスおよびヒトでは抑制性ＦｃγＲＩＩＢを発現しない。ヒトＩｇＧ１はほとんどのヒトＦｃ受容体に結合し、それが結合する活性化Ｆｃ受容体の型に関してはマウスＩｇＧ２ａと同等と考えられている。

【0087】

「Ｆｃ領域」（断片結晶化可能領域）または「Ｆｃドメイン」または「Ｆｃ」とは、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）に存在するＦｃ受容体への結合、または古典的補体系の第１の成分（Ｃ１ｑ）への結合を含む、宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合を媒介する抗体の重鎖のＣ末端領域を指す。したがって、Ｆｃ領域は、第１の定常領域免疫グロブリンドメイン（例えば、ＣＨ１またはＣＬ）を除く抗体の定常領域を含む。

【0088】

「天然配列Ｆｃ領域」または「天然配列Ｆｃ」は、天然に見出されるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一であるアミノ酸配列を含む。天然配列ヒトＦｃ領域には、天然配列ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域；天然配列ヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域；天然配列ヒトＩｇＧ３ Ｆｃ領域；および天然配列ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域、ならびに天然に存在するそれらのバリアントが含まれる。天然配列Ｆｃは、Ｆｃの様々なアロタイプを含む（例えば、Ｊｅｆｆｅｒｉｓら、ｍＡｂｓ １：１（２００９）を参照されたい）。

【0089】

「バリアント配列Ｆｃ領域」または「天然に存在しないＦｃ」は、典型的には、とりわけ、血清半減期、補体結合、Ｆｃ受容体結合、タンパク質安定性および／もしくは抗原依存性細胞傷害、またはそれらの欠如などの、その機能的特性の１つまたは複数を変化させるための修飾を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体は、化学的に修飾され得る（例えば、１つまたは複数の化学部分が抗体に結合され得る）か、またはそのグリコシル化を変化させるように、また、抗体の１つもしくは複数の機能的特性を変化させるように修飾され得る。

【0090】

「ヒンジ」、「ヒンジドメイン」、「ヒンジ領域」、および「抗体ヒンジ領域」という用語は、ＣＨ１ドメインをＣＨ２ドメインに結合する重鎖定常領域のドメインを指し、ヒンジの上部、中部、および下部を含む（Ｒｏｕｘら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６１：４０８３（１９９８））。ヒンジは、抗体の結合領域とエフェクター領域との間に様々なレベルの柔軟性を提供し、２つの重鎖定常領域間の分子間ジスルフィド結合のための部位も提供する。野生型ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４ヒンジの配列は、当該技術分野で公知である（例えば、国際ＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１７／０８７６７８）。一実施形態では、抗体のＣＨ１のヒンジ領域は、ヒンジ領域におけるシステイン残基の数が変化するように、例えば、増加または減少するように修飾される。このアプローチは、例えば、米国特許第５，６７７，４２５号にさらに記載されている。

【0091】

定常領域は、例えば、二価抗体が２つの一価のＶＨ－ＶＬ断片に分離するリスクを低減させるために、抗体を安定化させるように修飾され得る。例えば、ＩｇＧ４定常領域では、残基Ｓ２２８（ＥＵインデックスに従った残基番号）は、ヒンジでの重鎖間ジスルフィド架橋形成を安定化させるようにプロリン（Ｐ）残基に変異させることができる（例えば、Ａｎｇａｌら、Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．３０：１０５～８（１９９５）を参照のこと）。抗体またはその断片は、それらの相補性決定領域（ＣＤＲ）の観点から定義することもできる。

【0092】

「相補性決定領域」または「超可変領域」という用語は、本明細書で使用される場合、抗原結合に関与するアミノ酸残基が位置する抗体の領域を指す。超可変性の領域またはＣＤＲは、抗体可変ドメインのアミノ酸アラインメントにおいて最も変動が大きい領域として同定することができる。ＫａｂａｔデータベースなどのデータベースをＣＤＲ同定のために使用することができ、ＣＤＲは、例えば、軽鎖可変ドメインのアミノ酸残基２４～３４（ＣＤＲ１）、５０～５９（ＣＤＲ２）および８９～９７（ＣＤＲ３）、ならびに重鎖可変ドメインにおけるアミノ酸残基３１～３５（ＣＤＲ１）、５０～６５（ＣＤＲ２）および９５～１０２（ＣＤＲ３）を含むと定義される；（Ｋａｂａｔら、１９９１；Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１～３２４２）。あるいは、ＣＤＲは、「超可変ループ」（軽鎖可変ドメインにおける残基２６～３３（Ｌ１）、５０～５２（Ｌ２）および９１～９６（Ｌ３）、ならびに重鎖可変ドメインにおける残基２６～３２（Ｈ１）、５３～５５（Ｈ２）および９６～１０１（Ｈ３）からの残基として定義することができる（ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ １９６：９０１～９１７（１９８７））。本明細書に記載される抗体配列のＣＤＲ領域は、好ましくは、Ｃｈｏｔｈｉａの番号付けスキームを適応したＩＭＧＴの番号付けスキームに従って定義される（ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ（商標）；Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．－Ｐ．ら、ＩＭＧＴ、国際ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓデータベース、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ２７、２０９～２１２（１９９９）；ｈｔｔｐ：／／ｉｍｇｔ．ｏｒｇ）。

【0093】

「エピトープ」または「抗原決定基」という用語は、例えば、それを同定するために使用される特定の方法によって定義される、免疫グロブリンまたは抗体が特異的に結合する抗原上の部位を指す。エピトープは、連続アミノ酸から（通常、線状エピトープ）またはタンパク質の三次フォールディングによって並置された非連続アミノ酸（通常、立体構造エピトープ）の両方から形成され得る。連続アミノ酸から形成されるエピトープは、典型的には、変性溶媒に曝露されても保持されるが、必ずしもそうとは限らず、一方、三次フォールディングによって形成されるエピトープは、典型的には、変性溶媒で処理すると喪失する。

【0094】

エピトープは、典型的には、特有の空間的立体構造において少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５個のアミノ酸を含む。どのエピトープが所与の抗体と結合しているかを決定するための方法（すなわち、エピトープマッピング）は、当該技術分野において周知であり、例えば、免疫ブロット法および免疫沈降アッセイが挙げられ、（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイク（Ｓ）タンパク質からの）重複または連続ペプチドが所与の抗体との反応性について試験される。エピトープの空間的立体構造を決定する方法としては、当該技術分野の技術、例えば、Ｘ線結晶構造解析、抗原変異解析、２次元核磁気共鳴、およびＨＤＸ－ＭＳが挙げられる（例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｖｏｌ．６６、Ｇ．Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ、Ｅｄ．（１９９６）を参照のこと）。

【0095】

２つ以上の抗体に関して「同じエピトープに結合する」という用語は、所与の方法によって決定されるように、抗体がアミノ酸残基の同じセグメントに結合することを意味する。抗体が、本明細書に記載される抗体と、「同じエピトープ」に結合するかどうかを決定するための技術としては、例えば、エピトープマッピング法、例えば、エピトープの原子分解能を提供する抗原：抗体複合体の結晶のＸ線解析、および水素／重水素交換質量分析（ＨＤＸ－ＭＳ）が挙げられる。

【0096】

他の方法は、抗原断片または抗原の変異したバリエーションへの抗体の結合をモニタリングし、抗原配列内のアミノ酸残基の修飾に起因する結合の喪失は、エピトープ成分の指標とみなされる場合が多い。さらに、エピトープマッピングのための計算的コンビナトリアル法を使用することもできる。これらの方法は、特定の短いペプチドをコンビナトリアルファージディスプレイペプチドライブラリーから親和性単離する、目的の抗体の能力に依存する。同じＶ_ＨおよびＶ_Ｌまたは同じＣＤＲ１、２および３配列を有する抗体は、同じエピトープに結合すると予測される。

【0097】

「標的への結合について別の抗体と競合する」抗体は、標的への当該別の抗体の結合を（部分的または完全に）阻害する抗体を指す。２つの抗体が標的への結合について互いに競合するかどうか、すなわち、一方の抗体が標的への他方の抗体の結合を阻害するかどうか、およびどの程度まで阻害するかは、公知の競合実験、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）解析を使用して決定することができる。ある特定の実施形態では、抗体は、少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％または１００％だけ標的への結合について別の抗体と競合し、標的への別の抗体の結合を阻害する。阻害または競合のレベルは、どの抗体が「遮断抗体」（すなわち、標的と最初にインキュベートされるコールド抗体（cold antibody））であるかに応じて異なり得る。

【0098】

競合アッセイは、例えば、Ｅｄ ＨａｒｌｏｗおよびＤａｖｉｄ Ｌａｎｅ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ Ｐｒｏｔｏｃ；２００６；ｄｏｉ：１０．１１０１／ｐｄｂ．ｐｒｏｔ４２７７またはＥｄ ＨａｒｌｏｗおよびＤａｖｉｄ Ｌａｎｅによる「Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」の第１１章、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．、ＵＳＡ １９９９に記載されているように行うことができる。２つの抗体の「交差競合」は、抗体が両方の方法で少なくとも５０％、すなわち、一方の抗体または他方の抗体が競合実験において最初に抗原と接触するかどうかにかかわらず、互いに遮断する場合である。

【0099】

本明細書で使用される「特異的結合」、「選択的結合」、「選択的に結合する」、および「特異的に結合する」という用語は、抗体が所定の抗原上のエピトープに結合することを指す。好ましくは、抗体は、所定の抗原または密接に関連している抗原以外の非特異的抗原（例えば、ＢＳＡ、カゼイン）に結合する親和性よりも少なくとも２倍大きい親和性で所定の抗原に結合する。

【0100】

本明細書において「結合親和性」という用語は、２つの分子、例えば、抗体またはその断片と抗原との間の非共有結合性相互作用の強度の測定値を指す。「結合親和性」という用語は、一価の相互作用（内因活性）を示すために使用される。
一価相互作用を介した、２つの分子間、例えば、抗体またはその断片と抗原との間の結合親和性は、平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）の決定によって定量化され得る。次に、Ｋ_Ｄは、例えば、ＳＰＲ法による、複合体の形成および解離の速度論の測定によって決定され得る。一価複合体の会合および解離に対応する速度定数は、それぞれ、会合速度定数ｋ_ａ（またはｋ_ｏｎ）および解離速度定数ｋ_ｄ（またはｋ_ｏｆｆ）と称される。Ｋ_Ｄは、方程式Ｋ_Ｄ＝ｋ_ｄ／ｋ_ａを介して、ｋ_ａおよびｋ_ｄと関連付けられる。上記定義によれば、異なる分子相互作用と関連する結合親和性、例えば、所与の抗原に対する異なる抗体の結合親和性の比較は、個々の抗体／抗原複合体についてのＫ_Ｄ値の比較によって比較され得る。

【0101】

本明細書において「結合特異性」という用語は、単一の排他的抗原、または限られた数の相同性の高い抗原（またはエピトープ）との、抗体またはその断片などの分子の相互作用を指す。対照的に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイク（Ｓ）タンパク質に特異的に結合することができる抗体は、非類似の分子に結合することができない。

【0102】

相互作用の特異性および平衡結合定数の値は、周知の方法によって直接的に決定され得る。リガンド（抗体など）がそれらの標的に結合する能力を評価するための標準的なアッセイは、当該技術分野で公知であり、例えば、ＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロット、ＲＩＡ、およびフローサイトメトリー解析が挙げられる。抗体の結合速度論および結合親和性もまた、ＳＰＲなどの、当該技術分野で公知の標準的なアッセイによって評価され得る。

【0103】

「天然に存在する」という用語は、物体に適用して本明細書で使用される場合、物体が天然に見出され得るという事実を指す。例えば、天然の起源から単離され得、実験室においてヒトによって故意に修飾されていない、生物（ウイルスを含む）中に存在するポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列は天然に存在する。

【0104】

「ポリペプチド」とは、少なくとも２つの連続して連結したアミノ酸残基を含む鎖を指し、鎖の長さについて上限はない。タンパク質中の１つまたは複数のアミノ酸残基が、グリコシル化、リン酸化またはジスルフィド結合形成などであるが、これらに限定されない修飾を含み得る。「タンパク質」は、１つまたは複数のポリペプチドを含み得る。

【0105】

本明細書で使用される「核酸分子」という用語は、ＤＮＡ分子およびＲＮＡ分子を含むことを意図する。核酸分子は、一本鎖または二本鎖であってもよく、ｃＤＮＡであってもよい。

【0106】

「対象」という用語は、予防的処置または治療的処置のいずれかを受けるヒトおよび他の哺乳動物対象を含む。本明細書で使用される「対象」という用語は、任意のヒトまたは非ヒト動物を含む。「非ヒト動物」という用語は、全ての脊椎動物、例えば、哺乳動物および非哺乳動物、例えば、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ウシ、ニワトリ、両生類、爬虫類などを含む。

【0107】

本明細書で使用される「ｕｇ」および「ｕＭ」という用語は、それぞれ、「μｇ」および「μΜ」と互換的に使用される。

【0108】

本明細書で使用される「投与すること」とは、当業者に公知の様々な方法および送達系のいずれかを使用した、治療剤を含む組成物の、対象への物理的導入を指す。本明細書に記載される抗体のための異なる経路の投与には、例えば、注射または注入による、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、脊髄または他の非経口経路の投与が含まれる。

【0109】

本明細書で使用される「非経口投与」という語句は、通常は注射による、経腸および局所投与以外の投与の様式を意味し、静脈内、腹腔内、筋肉内、動脈内、くも膜下腔内、リンパ内、病巣内、嚢内、眼窩内、心臓内、真皮内、経気管、皮下、表皮下、関節内、嚢下、くも膜下、脊髄内、硬膜外および胸骨内の注射および注入、ならびにｉｎ ｖｉｖｏエレクトロポレーションが含まれるが、これらに限定されない。

【0110】

あるいは、本明細書に記載される抗体は、非経口ではない経路、例えば、局所、表皮または粘膜経路の投与を介して、例えば、鼻腔内、経口、膣、直腸、舌下または局所的に投与され得る。投与することはまた、例えば、１回、複数回、および／または１つもしくは複数の延長された期間にわたって、実施され得る。

【0111】

本明細書で使用される「ワクチン組成物」は、能動免疫および／または受動免疫を提供することができる、本発明の少なくとも１つの抗体またはその抗原結合部分を含む医薬組成物を意味する。本明細書で使用される「能動免疫」は、抗原に対する対象の免疫応答を誘導または増強することを意味する。本明細書で使用される「受動免疫」は、抗原を中和する抗体および／またはその抗原結合部分を提供することによって抗原または病原体に対する対象の免疫応答を補足することを意味する。

【0112】

本発明者らは、本発明者ら自身で本発明の課題を解決することに専念し、公的に入手可能な中和抗体と比較して、懸念される循環ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２バリアントおよび出現エスケープバリアントに対して優れた中和効力を有する、ＳＡＲＳ関連コロナウイルスに対する新規かつ有用な超強力なヒトモノクローナル抗体を見出すことに成功した。

【0113】

本発明者らは最近、ＣＯＶＩＤ－１９回復個体のごく一部が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１に対する高度の交差反応性を有するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する非常に強力な抗体応答を開始することを実証した（Ｖａｎｓｈｙｌｌａ，Ｋ．ら、（２０２１）．Ｃｅｌｌ Ｈｏｓｔ Ｍｉｃｒｏｂｅ ２９、９１７～９２９）。これらのエリート中和者において、１０人の個体からの１２６個のモノクローナル抗体の単離および特性評価を含む、単一Ｂ細胞レベルでの抗体応答を詳細に解析した。

【0114】

１，３６１個のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２反応性Ｂ細胞の塩基配列解析により、大部分がポリクローナルであるが、収束性の抗体応答であることが明らかになった。いくつかの抗体はサルベコウイルス交差反応性であり、メルベコウイルスおよびエンベコウイルス反応性を示すものもあった。包括的な中和マップに基づいて、いくつかの広域中和抗体（ｂＮＡｂ）を、本発明の一部として、循環Ｗｕ－０１、Ｂ．１、Ｂ．１．１．７、Ｂ１．３５１、Ｂ．１．４２９、Ｂ．１．６１７、およびＢ．１．６１７．２ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２バリアント、ならびに抗原エスケープの様々な顕著な部位に対して非常に有効であると同定することができた。

【0115】

さらに、本発明者らは、７１６，８０６個以上の固有の品質管理された配列を使用した、世界的に循環しているＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２バリアントの時系列系統樹に基づいて、抗原エスケープの可能性がある新たな部位を同定することができた（データ非掲載）。この世界的データを使用して、出現スパイクエスケープ部位としての有力な候補として、４つのＲＢＤ変異体、Ｒ３４６Ｓ、Ｑ４１４Ｈ、Ｎ４４０Ｋ、およびＴ４７８Ｋを同定した。

【0116】

これらの変異体は現在高頻度で循環していないが、それらは、将来的に役割を果たす可能性があり、したがって本発明の抗体の中和効力の分析に含まれている。驚くべきことに、本発明の抗体は、ＤＺＩＦ－１０ｃ、Ｓ３０９、またはＲＥＧＮ１０９８７などの臨床試験された抗体とは対照的に、これらのＲＢＤ変異体を高い効力で中和することもできた。

【0117】

したがって、エリート中和者から単離されたこれらのｂＮＡｂは、現在、循環および出現しているＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２バリアント、ならびにそのようなウイルスによって引き起こされる将来の潜在的なＣｏＶパンデミックに対抗するための重要なリソースとして機能する。

【0118】

したがって、本発明は、ＳＡＲＳ関連コロナウイルスに対する抗体またはその抗原結合断片を提供し、抗体またはその抗原結合断片は、
Ｒ２００－１Ｂ９（配列番号２７のＣＤＲ－Ｈ１アミノ酸配列、配列番号２８のＣＤＲ－Ｈ２アミノ酸配列、配列番号２９のＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列、配列番号３０のＣＤＲ－Ｌ１アミノ酸配列、配列番号３１のＣＤＲ－Ｌ２アミノ酸配列、配列番号３２のＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列を有する）、
Ｒ２０７－２Ｆ１１（配列番号３３のＣＤＲ－Ｈ１アミノ酸配列、配列番号３４のＣＤＲ－Ｈ２アミノ酸配列、配列番号３５のＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列、配列番号３６のＣＤＲ－Ｌ１アミノ酸配列、配列番号３７のＣＤＲ－Ｌ２アミノ酸配列、配列番号３８のＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列を有する）、
Ｒ４０－１Ｇ８（配列番号３９のＣＤＲ－Ｈ１アミノ酸配列、配列番号４０のＣＤＲ－Ｈ２アミノ酸配列、配列番号４１のＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列、配列番号４２のＣＤＲ－Ｌ１アミノ酸配列、配列番号４３のＣＤＲ－Ｌ２アミノ酸配列、配列番号４４のＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列を有する）、
Ｒ５６８－２Ｇ５（配列番号４５のＣＤＲ－Ｈ１アミノ酸配列、配列番号４６のＣＤＲ－Ｈ２アミノ酸配列、配列番号４７のＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列、配列番号４８のＣＤＲ－Ｌ１アミノ酸配列、配列番号４９のＣＤＲ－Ｌ２アミノ酸配列、配列番号５０のＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列を有する）、
Ｒ５６８－２Ｂ１１（配列番号５１のＣＤＲ－Ｈ１アミノ酸配列、配列番号５２のＣＤＲ－Ｈ２アミノ酸配列、配列番号５３のＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列、配列番号５４のＣＤＲ－Ｌ１アミノ酸配列、配列番号５５のＣＤＲ－Ｌ２アミノ酸配列、配列番号５６のＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列を有する）、
Ｒ２０７－２Ｇ４（配列番号５７のＣＤＲ－Ｈ１アミノ酸配列、配列番号５８のＣＤＲ－Ｈ２アミノ酸配列、配列番号５９のＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列、配列番号６０のＣＤＲ－Ｌ１アミノ酸配列、配列番号６１のＣＤＲ－Ｌ２アミノ酸配列、配列番号６２のＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列を有する）、
Ｒ４０－１Ｃ８（配列番号６３のＣＤＲ－Ｈ１アミノ酸配列、配列番号６４のＣＤＲ－Ｈ２アミノ酸配列、配列番号６５のＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列、配列番号６６のＣＤＲ－Ｌ１アミノ酸配列、配列番号６７のＣＤＲ－Ｌ２アミノ酸配列、配列番号６８のＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列を有する）、
Ｒ５６８－２Ｂ９（配列番号６９のＣＤＲ－Ｈ１アミノ酸配列、配列番号７０のＣＤＲ－Ｈ２アミノ酸配列、配列番号７１のＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列、配列番号７２のＣＤＲ－Ｌ１アミノ酸配列、配列番号７３のＣＤＲ－Ｌ２アミノ酸配列、配列番号７４のＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列を有する）、
Ｒ５６８－１Ｂ３（配列番号７５のＣＤＲ－Ｈ１アミノ酸配列、配列番号７６のＣＤＲ－Ｈ２アミノ酸配列、配列番号７７のＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列、配列番号７８のＣＤＲ－Ｌ１アミノ酸配列、配列番号７９のＣＤＲ－Ｌ２アミノ酸配列、配列番号８０のＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列を有する）、
Ｒ５６８－２Ｅ１（配列番号８１のＣＤＲ－Ｈ１アミノ酸配列、配列番号８２のＣＤＲ－Ｈ２アミノ酸配列、配列番号８３のＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列、配列番号８４のＣＤＲ－Ｌ１アミノ酸配列、配列番号８５のＣＤＲ－Ｌ２アミノ酸配列、配列番号８６のＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列を有する）、
Ｒ５６８－１Ｇ９（配列番号８７のＣＤＲ－Ｈ１アミノ酸配列、配列番号８８のＣＤＲ－Ｈ２アミノ酸配列、配列番号８９のＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列、配列番号９０のＣＤＲ－Ｌ１アミノ酸配列、配列番号９１のＣＤＲ－Ｌ２アミノ酸配列、配列番号９２のＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列を有する）、
Ｒ１２１－１Ｆ１（配列番号９３のＣＤＲ－Ｈ１アミノ酸配列、配列番号９４のＣＤＲ－Ｈ２アミノ酸配列、配列番号９５のＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列、配列番号９６のＣＤＲ－Ｌ１アミノ酸配列、配列番号９７のＣＤＲ－Ｌ２アミノ酸配列、配列番号９８のＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列を有する）、
Ｒ２５９－１Ｂ９（配列番号９９のＣＤＲ－Ｈ１アミノ酸配列、配列番号１００のＣＤＲ－Ｈ２アミノ酸配列、配列番号１０１のＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列、配列番号１０２のＣＤＲ－Ｌ１アミノ酸配列、配列番号１０３のＣＤＲ－Ｌ２アミノ酸配列、配列番号１０４のＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列を有する）
を含む群から選択される１つの抗体の重鎖ＣＤＲ１～ＣＤＲ３および軽鎖ＣＤＲ１～ＣＤＲ３アミノ酸配列の組合せを含む。

【0119】

本発明の文脈において、本明細書において生成され、記載されている抗体は、完全なモノクローナルヒト抗体として、またはその任意の機能的断片もしくは抗原結合断片として使用され、特許請求され得る。好ましくは、抗体またはその機能的断片もしくは抗原結合断片の任意の種類は、抗体の重鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）１～３および軽鎖のＣＤＲ１～３を少なくとも含むべきである。

【0120】

本明細書に記載される抗体配列のＣＤＲ領域は、好ましくは、Ｃｈｏｔｈｉａの番号付けスキームを適応したＩＭＧＴの番号付けスキームに従って定義される（ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ（商標）；Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．－Ｐ．ら、ＩＭＧＴ、国際ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓデータベース、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ２７、２０９～２１２（１９９９）；ｈｔｔｐ：／／ｉｍｇｔ．ｏｒｇ）。

【0121】

本発明の抗体の可変領域重鎖アミノ酸配列および可変領域軽鎖アミノ酸配列に関する一般的な知識および本明細書で与えられる情報に基づいて、ＣＤＲは当業者によって容易かつ一義的に決定することができる。

【0122】

本発明の好ましい一実施態様によれば、本明細書に記載される抗体およびその抗原結合断片の軽鎖および重鎖配列のＣＤＲ配列は以下の通りである：

【0123】

【表1】

【0124】

本発明の一実施形態によれば、抗体またはその抗原結合断片は、抗体Ｒ２００－１Ｂ９の重鎖アミノ酸配列（配列番号１２１）、または抗体Ｒ２０７－２Ｆ１１の重鎖アミノ酸配列（配列番号１２３）、または抗体Ｒ４０－１Ｇ８の重鎖アミノ酸配列（配列番号１２５）、または抗体Ｒ５６８－２Ｇ５の重鎖アミノ酸配列（配列番号１２７）、または抗体Ｒ５６８－２Ｂ１１の重鎖アミノ酸配列（配列番号１２９）、または抗体Ｒ２０７－２Ｇ４の重鎖アミノ酸配列（配列番号１３１）、または抗体Ｒ４０－１Ｃ８の重鎖アミノ酸配列（配列番号１３３）、または抗体Ｒ５６８－２Ｂ９の重鎖アミノ酸配列（配列番号１３５）、または抗体Ｒ５６８－１Ｂ３の重鎖アミノ酸配列（配列番号１３７）、または抗体Ｒ５６８－２Ｅ１の重鎖アミノ酸配列（配列番号１３９）、または抗体Ｒ５６８－１Ｇ９の重鎖アミノ酸配列（配列番号１４１）、または抗体Ｒ１２１－１Ｆ１の重鎖アミノ酸配列（配列番号１４３）、または抗体Ｒ２５９－１Ｂ９の重鎖アミノ酸配列（配列番号１４５）を含む。

【0125】

本発明の一実施形態によれば、抗体またはその抗原結合断片は、抗体Ｒ２００－１Ｂ９の軽鎖アミノ酸配列（配列番号１２２）、または抗体Ｒ２０７－２Ｆ１１の軽鎖アミノ酸配列（配列番号１２４）、または抗体Ｒ４０－１Ｇ８の軽鎖アミノ酸配列（配列番号１２６）、または抗体Ｒ５６８－２Ｇ５の軽鎖アミノ酸配列（配列番号１２８）、または抗体Ｒ５６８－２Ｂ１１の軽鎖アミノ酸配列（配列番号１３０）、または抗体Ｒ２０７－２Ｇ４の軽鎖アミノ酸配列（配列番号１３２）、または抗体Ｒ４０－１Ｃ８の軽鎖アミノ酸配列（配列番号１３４）、または抗体Ｒ５６８－２Ｂ９の軽鎖アミノ酸配列（配列番号１３６）、または抗体Ｒ５６８－１Ｂ３の軽鎖アミノ酸配列（配列番号１３８）、または抗体Ｒ５６８－２Ｅ１の軽鎖アミノ酸配列（配列番号１４０）、または抗体Ｒ５６８－１Ｇ９の軽鎖アミノ酸配列（配列番号１４２）、または抗体Ｒ１２１－１Ｆ１の軽鎖アミノ酸配列（配列番号１４４）、または抗体Ｒ２５９－１Ｂ９の軽鎖アミノ酸配列（配列番号１４６）を含む。

【0126】

本発明の好ましい実施形態によれば、抗体は、配列番号１２１の重鎖アミノ酸配列および配列番号１２２の軽鎖アミノ酸配列を含むか、または抗体は、配列番号１２３の重鎖アミノ酸配列および配列番号１２４の軽鎖アミノ酸配列を含むか、または抗体は、配列番号１２５の重鎖アミノ酸配列および配列番号１２６の軽鎖アミノ酸配列を含むか、または抗体は、配列番号１２７の重鎖アミノ酸配列および配列番号１２８の軽鎖アミノ酸配列を含むか、または抗体は、配列番号１２９の重鎖アミノ酸配列および配列番号１３０の軽鎖アミノ酸配列を含むか、または抗体は、配列番号１３１の重鎖アミノ酸配列および配列番号１３２の軽鎖アミノ酸配列を含むか、または抗体は、配列番号１３３の重鎖アミノ酸配列および配列番号１３４の軽鎖アミノ酸配列を含むか、または抗体は、配列番号１３５の重鎖アミノ酸配列および配列番号１３６の軽鎖アミノ酸配列を含むか、または抗体は、配列番号１３７の重鎖アミノ酸配列および配列番号１３８の軽鎖アミノ酸配列を含むか、または抗体は、配列番号１３９の重鎖アミノ酸配列および配列番号１４０の軽鎖アミノ酸配列を含むか、または抗体は、配列番号１４１の重鎖アミノ酸配列および配列番号１４２の軽鎖アミノ酸配列を含むか、または抗体は、配列番号１４３の重鎖アミノ酸配列および配列番号１４４の軽鎖アミノ酸配列を含むか、または抗体は、配列番号１４５の重鎖アミノ酸配列および配列番号１４６の軽鎖アミノ酸配列を含む。

【0127】

本発明の特定の実施形態によれば、抗体は、配列番号１２１の配列の２つの重鎖および配列番号１２２の配列の２つの軽鎖からなるか、または抗体は、配列番号１２３の配列の２つの重鎖および配列番号１２４の配列の２つの軽鎖からなるか、または抗体は、配列番号１２５の配列の２つの重鎖および配列番号１２６の配列の２つの軽鎖からなるか、または抗体は、配列番号１２７の配列の２つの重鎖および配列番号１２８の配列の２つの軽鎖からなるか、または抗体は、配列番号１２９の配列の２つの重鎖および配列番号１３０の配列の２つの軽鎖からなるか、または抗体は、配列番号１３１の配列の２つの重鎖および配列番号１３２の配列の２つの軽鎖からなるか、または抗体は、配列番号１３３の配列の２つの重鎖および配列番号１３４の配列の２つの軽鎖からなるか、または抗体は、配列番号１３５の配列の２つの重鎖および配列番号１３６の配列の２つの軽鎖からなるか、または抗体は、配列番号１３７の配列の２つの重鎖および配列番号１３８の配列の２つの軽鎖からなるか、または抗体は、配列番号１３９の配列の２つの重鎖および配列番号１４０の配列の２つの軽鎖からなるか、または抗体は、配列番号１４１の配列の２つの重鎖および配列番号１４２の配列の２つの軽鎖からなるか、または抗体は、配列番号１４３の配列の２つの重鎖および配列番号１４４の配列の２つの軽鎖からなるか、または抗体は、配列番号１４５の配列の２つの重鎖および配列番号１４６の配列の２つの軽鎖からなる。

【0128】

本発明の好ましい実施形態によれば、本発明による抗体またはその抗原結合断片に含まれる配列の起源として使用される抗体は、Ｒ２００－１Ｂ９、Ｒ２０７－２Ｆ１１、Ｒ４０－１Ｇ８、Ｒ５６８－２Ｇ５、Ｒ５６８－２Ｂ１１、Ｒ２０７－２Ｇ４、Ｒ４０－１Ｃ８、Ｒ５６８－２Ｂ９、Ｒ５６８－１Ｂ３、Ｒ５６８－２Ｅ１、Ｒ５６８－１Ｇ９、Ｒ１２１－１Ｆ１、およびＲ２５９－１Ｂ９を含む群から選択され、好ましくは、Ｒ２００－１Ｂ９、Ｒ２０７－２Ｆ１１、Ｒ４０－１Ｇ８、Ｒ５６８－２Ｇ５、Ｒ５６８－２Ｂ１１、Ｒ２０７－２Ｇ４、Ｒ４０－１Ｃ８、Ｒ５６８－２Ｂ９、およびＲ５６８－１Ｂ３を含む群から選択され、より好ましくは、Ｒ２００－１Ｂ９、Ｒ２０７－２Ｆ１１、Ｒ４０－１Ｇ８、およびＲ５６８－２Ｇ５を含む群から選択される。

【0129】

本発明の別の好ましい実施形態によれば、本発明による抗体またはその抗原結合断片に含まれる配列の起源として使用される抗体は、Ｒ２００－１Ｂ９、Ｒ２０７－２Ｆ１１およびＲ５６８－１Ｇ９を含む群から、好ましくはＲ２０７－２Ｆ１１およびＲ５６８－１Ｇ９から選択される。全ての変異およびバリアントに対して非常に高く広域な中和効力を有することに加えて、これらの抗体はオミクロンバリアントに対して非常に優れた中和効力を特徴とする。

【0130】

本発明の一実施形態では、本発明の抗体に含まれる配列の起源として使用される抗体は、Ｒ２００－１Ｂ９である。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体に含まれる配列の起源として使用される抗体は、Ｒ２０７－２Ｆ１１である。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体に含まれる配列の起源として使用される抗体は、Ｒ４０－１Ｇ８である。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体に含まれる配列の起源として使用される抗体は、Ｒ５６８－２Ｇ５である。

【0131】

本発明の別の実施形態では、本発明の抗体に含まれる配列の起源として使用される抗体は、Ｒ１２１－３Ｇ２である。この抗体は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の異なるバリアントに加えて、ＳＡＲＳ関連コロナウイルス株ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１およびコウモリコロナウイルスＷＩＶ－１を効率的に交差中和することができる。本発明のさらに別の実施形態では、本発明の抗体に含まれる配列の起源として使用される抗体は、Ｒ４０－１Ｅ１である。この抗体もまた、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の異なるバリアントに加えて、ＳＡＲＳ関連コロナウイルス株ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１およびコウモリコロナウイルスＷＩＶ－１を効率的に交差中和することができる。

【0132】

本発明の別の好ましい実施形態によれば、ＳＡＲＳ関連コロナウイルス株は、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）である。

【0133】

本発明の一実施態様によれば、本発明による抗体またはその抗原結合断片に含まれるＣＤＲまたは可変領域のアミノ酸配列は、多くとも０．４μｇ／ｍｌ、好ましくは多くとも０．１μｇ／ｍｌ、より好ましくは多くとも０．０５μｇ／ｍｌ、さらにより好ましくは多くとも０．０２５μｇ／ｍｌ、さらにより好ましくは多くとも０．０１μｇ／ｍｌ、特に好ましくは多くとも０．００２５μｇ／ｍｌのＩＣ５０で、説明に記載されているシュードウイルス中和アッセイにおいてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２系統Ｂ．１、Ｂ．１．１．７、Ｂ．１．３５１、Ｂ．１．４２９、Ｂ．１．６１７およびＢ．１．６１７．２の各々を中和することができる抗体由来である。

【0134】

本発明の別の実施形態によれば、本発明による抗体またはその抗原結合断片に含まれるＣＤＲまたは可変領域のアミノ酸配列は、多くとも１．３μｇ／ｍｌ、好ましくは多くとも０．５μｇ／ｍｌ、より好ましくは多くとも０．０５μｇ／ｍｌ、さらにより好ましくは多くとも０．０２μｇ／ｍｌ、特に好ましくは多くとも０．０１μｇ／ｍｌのＩＣ５０で、説明に記載されているシュードウイルス中和アッセイにおいてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクエスケープ変異体６９－７０ｄｅｌ、Ｋ４１７Ｅ、Ｎ４３９Ｋ、Ｋ４４４Ｑ、Ｖ４４５Ａ、Ｇ４４６Ｖ、Ｌ４５２Ｒ、Ｙ４５３Ｆ、Ｌ４５５Ｆ、Ｇ４７６Ｓ、Ｓ４７７Ｎ、Ｅ４８４Ｋ、Ｆ４８６Ｖ、Ｆ４９０Ｓ、Ｑ４９３Ｒ、Ｑ４９３Ｋ、Ｓ４９４Ｐ、Ｎ５０１Ｙの各々を中和することができる抗体由来である。

【0135】

本発明の別の実施形態によれば、抗体またはその抗原結合断片に含まれるＣＤＲまたは可変領域のアミノ酸配列は、多くとも０．００１５μｇ／ｍｌのＩＣ５０で、説明に記載されているシュードウイルス中和アッセイにおいて出現ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２エスケープバリアントＲ３４６Ｓ、Ｑ４１４Ｈ、Ｎ４４０Ｋ、およびＴ４７８Ｋの各々を中和することができる抗体から得られる。

【0136】

本発明の実施形態によれば、本発明による抗体またはその抗原結合断片に含まれるＣＤＲまたは可変領域のアミノ酸配列は、多くとも０．０８μｇ／ｍｌ、好ましくは多くとも０．０２５μｇ／ｍｌ、より好ましくは多くとも０．０１μｇ／ｍｌ、さらにより好ましくは多くとも０．００６μｇ／ｍｌ、特に好ましくは多くとも０．００２μｇ／ｍｌの平均ＩＣ５０で、全てのバリアントおよび変異体にわたって説明に記載されているシュードウイルス中和アッセイにおいてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２バリアントＷｕ－０１、Ｂ．１、Ｂ．１．１．７、Ｂ．１．３５１、Ｂ．１．４２９、Ｂ．１．６１７およびＢ．１．６１７．２、ならびにＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２エスケープ変異体６９－７０ｄｅｌ、Ｋ４１７Ｅ、Ｎ４３９Ｋ、Ｋ４４４Ｑ、Ｖ４４５Ａ、Ｇ４４６Ｖ、Ｌ４５２Ｒ、Ｙ４５３Ｆ、Ｌ４５５Ｆ、Ｇ４７６Ｓ、Ｓ４７７Ｎ、Ｅ４８４Ｋ、Ｆ４８６Ｖ、Ｆ４９０Ｓ、Ｑ４９３Ｒ、Ｑ４９３Ｋ、Ｓ４９４Ｐ、Ｎ５０１Ｙ、Ｒ３４６Ｓ、Ｑ４１４Ｈ、Ｎ４４０Ｋ、およびＴ４７８Ｋを中和することができる抗体由来である。

【0137】

本発明によれば、ＩＣ_５０値を決定するためのシュードウイルス中和アッセイは、以下の「ＩｇＧ中和活性を決定するためのシュードウイルス中和アッセイ」の節に記載されるように実施される。

【0138】

本発明の一実施形態によれば、本発明による抗体またはその抗原結合断片は、１００μｇ／ｍｌの濃度の抗体またはその抗原結合断片で、抗核抗体（ＡＮＡ）検査キット（ＮＯＶＡ－Ｌｉｔｅ ＨＥｐ－２ ＡＮＡキット；Ｉｎｏｖａ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を使用して透過処理したＨＥｐ－２細胞に対して検査した場合、検出可能な結合として規定される自己反応性を示さない。

【0139】

本発明の好ましい実施態様によれば、自己反応性を測定するためのアッセイは、以下の「Ｈｅｐ－２自己反応性アッセイ」の節に記載されるように実施される。

【0140】

本発明の実施形態によれば、本明細書に記載される抗体の軽鎖および重鎖配列のＣＤＲ配列は以下の通りである：

【0141】

【表2】

【0142】

本発明の一実施形態によれば、抗体は、抗体Ｒ１２１－３Ｇ２の重鎖アミノ酸配列（配列番号１４７）、または抗体Ｒ４０－１Ｅ１の重鎖アミノ酸配列（配列番号１４９）を有する。本発明の実施形態によれば、抗体は、抗体Ｒ１２１－３Ｇ２の軽鎖アミノ酸配列（配列番号１４８）、または抗体Ｒ４０－１Ｅ１の軽鎖アミノ酸配列（配列番号１５０）を有する。

【0143】

本発明の好ましい実施形態によれば、抗体は、配列番号１４７の重鎖アミノ酸配列および配列番号１４８の軽鎖アミノ酸配列を含むか、または抗体は、配列番号１４９の重鎖アミノ酸配列および配列番号１５０の軽鎖アミノ酸配列を含む。

【0144】

本発明の特定の実施形態によれば、抗体は、配列番号１４７の配列の２つの重鎖および配列番号１４８の配列の２つの軽鎖からなるか、または抗体は、配列番号１４９の配列の２つの重鎖および配列番号１５０の配列の２つの軽鎖からなる。

【0145】

一般に、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合断片は、依然として配列番号１５１のようなＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイク（Ｓ）タンパク質に対するものである限り、好ましくは依然として配列番号１５２のようなＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイク（Ｓ）タンパク質の受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）に対するものである限り、上記に定義される配列と少なくとも８０％同一である抗体アミノ酸配列をさらに包含する。

【0146】

一実施形態によれば、抗体またはその抗原結合断片が向けられるべき、配列番号１５１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイク（Ｓ）タンパク質または配列番号１５２のその受容体結合ドメインの特定の配列は、配列変異６９－７０ｄｅｌ、Ｒ３４６Ｓ、Ｑ４１４Ｈ、Ｋ４１７Ｅ、Ｎ４３９Ｋ、Ｎ４４０Ｋ、Ｋ４４４Ｑ、Ｖ４４５Ａ、Ｇ４４６Ｖ、Ｌ４５２Ｒ、Ｙ４５３Ｆ、Ｌ４５５Ｆ、Ｇ４７６Ｓ、Ｓ４７７Ｎ、Ｔ４７８Ｋ、Ｅ４８４Ｋ、Ｆ４８６Ｖ、Ｆ４９０Ｓ、Ｑ４９３Ｒ、Ｑ４９３Ｋ、Ｓ４９４ＰおよびＮ５０１Ｙの１つまたは複数をさらに含み得る。

【0147】

他の一実施形態によれば、抗体またはその抗原結合断片が向けられるべき、配列番号１５１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイク（Ｓ）タンパク質または配列番号１５２のその受容体結合ドメインの特定の配列は、一般に知られているＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２バリアントＷｕ０１、Ｂ．１、Ｂ．１．１．７、Ｂ１．３５１、Ｂ．１．４２９、Ｂ．１．６１７、またはＢ．１．６１７．２のうちの１つから得られ得る。

【0148】

本明細書に包含される配列変異は、構造的折り畳みおよびスパイク（Ｓ）タンパク質に対する抗体の親和性を妨げない、抗体アミノ酸配列の些細な変異、すなわち保存的変異を有する配列を含むことを意味する。好ましくは、本明細書に明示的に開示された個別の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％の全体的同一性をもたらすアミノ酸配列の逸脱は、本発明による抗体のＣＤＲ領域の外側にのみ存在する。特に、本発明は、抗体の定常領域内に１、２、３、４、５、または６個の変異を有する抗体アミノ酸配列を包含する。

【0149】

本発明による抗体は、好ましくはヒト起源のものである。したがって、少なくとも、抗体のフレームワークおよび定常領域などのＣＤＲ以外の配列は、好ましくはヒト起源のものであるか、またはヒト起源によるものとすることができる。さらに、本発明の抗体は好ましくはモノクローナルである。

【0150】

好ましい一実施形態では、抗体は、結合特異性および感染性病原体を中和する能力を保持するモノクローナル抗体またはその断片である。好ましい一実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４抗体である。例えば、抗体は、任意のヒトＩｇＧアイソタイプ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４）のＦｃドメインを含む抗体であり得る。

【0151】

任意選択で、抗原結合化合物は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ）_２、Ｆｖ、ダイアボディ、一本鎖抗体断片、もしくは複数の異なる抗体断片を含む多重特異性抗体からなるか、またはそれらを含む。

【0152】

本発明において、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイク（Ｓ）タンパク質に対する抗体または抗原結合断片は、関連のないエピトープ、タンパク質またはタンパク質領域と比較して、少なくとも１０倍、より好ましくは少なくとも５０倍、特に好ましくは少なくとも１００倍高い親和性でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイク（Ｓ）タンパク質に結合する抗体を意味する。

【0153】

ある程度の同一性を示す抗体が、上記または一般的な知識に基づいてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイク（Ｓ）タンパク質に対するものであるかどうかを決定することは、当業者にとって些細な作業である。

【0154】

２つの配列間の同一性パーセントの決定は、ＫａｒｌｉｎおよびＡｌｔｓｃｈｕｌの数学的アルゴリズム（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９９３）９０：５８７３～５８７７）を使用することによって本発明に従って達成される。このようなアルゴリズムは、ＡｌｔｓｃｈｕｌらのＢＬＡＳＴＮおよびＢＬＡＳＴＰプログラム（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（１９９０）２１５：４０３～４１０）の基礎となっている。ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索はＢＬＡＳＴＮプログラムで実行される。比較目的のためにギャップドアラインメントを得るために、Ａｌｔｓｃｈｕｌら（Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．（１９９７）２５：３３８９～３４０２）によって記載されているように、ギャップドＢＬＡＳＴが利用される。ＢＬＡＳＴおよびギャップドＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合、それぞれのプログラムのデフォルトパラメーターが使用される。

【0155】

本発明の好ましい実施形態によれば、抗体アミノ酸配列は、上記で定義され、本明細書に開示される配列と少なくとも８５％同一、より好ましくは少なくとも９０％同一、さらにより好ましくは少なくとも９５％同一である核酸配列からなるか、またはそれを含む本発明の一部を形成する。

【0156】

本発明の好ましい実施形態によれば、ＳＡＲＳ関連コロナウイルス株は、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）であり、これは、当該技術分野において代替的にＳＡＲＳ関連コロナウイルス２と称され得る。本発明の別の好ましい実施形態によれば、ＳＡＲＳ関連コロナウイルス株は、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶまたはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１）またはコウモリＳＡＲＳ様コロナウイルスＷＩＶ－１、好ましくは、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶまたはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１）である。

【0157】

本発明の別の好ましい実施形態によれば、抗体またはその抗原結合断片は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイク（Ｓ）タンパク質のエクトドメインに対するものである。

【0158】

本発明のより好ましい実施形態によれば、抗体またはその抗原結合断片は、Ｈｏｆｆｍａｎｎ Ｍ．ら、（２０２０）．Ｃｅｌｌ １８１、２７１～２８０（ＥＰＩ＿ＩＳＬ＿４０６７１６に記載されているＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＷｕ０１スパイク（Ｓ）ホモトリマーに対するものである。このウイルス単離株は集中的に研究されており、出願時点で最もよく理解されている。

【0159】

しかしながら、好ましくは、抗体またはその抗原結合断片は、他のウイルスバリアントの等価配列に対するものでもあるべきである。特定の一実施形態によれば、抗体またはその抗原結合断片は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイク（Ｓ）タンパク質（配列番号１５２）の受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）に対するものである。

【0160】

本発明の好ましい実施形態によれば、抗体またはその抗原結合断片は、１００μｇ／ｍｌの濃度の抗体またはその抗原結合断片で、抗核抗体（ＡＮＡ）検査キット（ＮＯＶＡ－Ｌｉｔｅ ＨＥｐ－２ ＡＮＡキット；Ｉｎｏｖａ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を使用して透過処理したＨＥｐ－２細胞に対して検査した場合、検出可能な結合パターンとして規定されるヒト細胞に対する自己反応性を示さない。あるいは好ましくは、抗体またはその抗原結合断片の自己反応性を決定または除外するために、当該技術分野で公知の他のアッセイを使用してもよい。

【0161】

本出願の説明において、抗体の名称を使用することができる。抗体は重鎖および軽鎖からなり、これらも本説明の一部を形成することが指摘される。名称または配列番号によって抗体を参照する場合、これらの参照方法は交換可能であることを理解されたい。

【0162】

本発明はさらに、本明細書で定義され、さらに記載される本発明による抗体またはその抗原結合断片、および少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物に関する。一態様では、医薬組成物は、ヒトおよび／または動物対象のためのワクチン組成物である。

【0163】

本発明はまた、本明細書で定義され、さらに記載される本発明による抗体またはその抗原結合断片、および容器を含むキットを包含する。

【0164】

一態様では、本発明はまた、医薬としての使用のための、好ましくはワクチンとしての使用のための、本明細書で定義され、さらに記載される本発明による抗体またはその抗原結合断片、本明細書に記載される医薬組成物、およびキットも対象とする。

【0165】

別の態様では、本発明はまた、ヒトまたは動物対象におけるＳＡＲＳ関連コロナウイルスによって引き起こされる疾患の治療または予防における使用のための、好ましくは、ヒトまたは動物対象におけるＳＡＲＳ関連コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）によって引き起こされる疾患の治療または予防における使用のための、本明細書で定義され、さらに記載される本発明による抗体またはその抗原結合断片、本明細書に記載される医薬組成物、およびキットも対象とする。

【0166】

一態様では、本発明は、ＳＡＲＳ関連コロナウイルスを有するヒトおよび／または動物対象の感染、好ましくは、ＳＡＲＳ関連コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）を有するヒトおよび／または動物対象の感染の予防における使用のための、本明細書で定義され、さらに記載される本発明による抗体またはその抗原結合断片、本明細書に記載される医薬組成物、およびキットを対象とする。

【0167】

別の態様では、本発明は、ＳＡＲＳ関連コロナウイルス感染を治療もしくは予防するか、またはヒトおよび／もしくは動物対象における疾患の重症度を軽減する方法であって、本明細書に記載される少なくとも１つの抗体および／またはその抗原結合断片の治療有効量を前記対象に投与することを含み、好ましくはＳＡＲＳ関連コロナウイルスがＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である、方法を対象とする。

【0168】

本発明の一態様では、本発明による抗体および／またはその抗原結合断片は、静脈内注射もしくは注入、皮下注射、筋肉内注射、または吸入適用によって、好ましくは静脈内注射によって、それを必要とする患者に投与される。

【0169】

好ましい実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、最大４０００ｍｇ、好ましくは最大２０００ｍｇ、より好ましくは最大１２００ｍｇ、さらにより好ましくは最大６００ｍｇ、さらにより好ましくは最大３００ｍｇ、特に好ましくは最大１５０ｍｇの絶対用量で静脈内注入によって投与される。

【0170】

対象に投与される本発明の抗体またはその抗原結合断片の用量は、示された症状の重症度、ならびに対象の年齢、性別、および健康状態のような事柄に応じてさらに変化し得る。

【0171】

本発明の別の態様では、本発明による抗体は、吸入適用によってそれを必要とする患者に投与される。好ましい実施形態では、抗体は吸入適用によって投与され、投与前にメッシュネブライザーまたはジェットネブライザーによって霧状にされる液体医薬組成物で提供される。

【0172】

本発明の医薬組成物は、その意図する投与経路に適合するように製剤化される。投与経路の例としては、非経口、例えば、静脈内、皮内、皮下、経口、経鼻（例えば、吸入および口から吸入する）、経皮（例えば、局所）、経粘膜、および直腸投与が挙げられるが、これらに限定されない。

【0173】

特定の実施形態では、組成物は、ヒトへの、静脈内、皮下、筋肉内、経口、経鼻、または局所投与に適合した医薬組成物として、日常的な手順に従って製剤化される。典型的には、静脈内投与用の組成物は、滅菌等張水性緩衝液中の溶液である。必要に応じて、組成物は、可溶化剤、および注射部位の痛みを和らげるためのリグノカインなどの局所麻酔剤も含むことができる。

【0174】

本発明の方法は、エアロゾル化剤を配合した組成物の、例えば、吸入器またはネブライザーの使用による肺内投与を含み得る。例えば、米国特許第６，０１９，９６８号、同第５，９８５，３２０号、同第５，９８５，３０９号、同第５，９３４，２７２号、同第５，８７４，０６４号、同第５，８５５，９１３号、同第５，２９０，５４０号、および同第４，８８０，０７８号；ならびにＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／１９２４４、ＷＯ９７／３２５７２、ＷＯ９７／４４０１３、ＷＯ９８／３１３４６、およびＷＯ９９／６６９０３を参照されたく、これらの各々は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0175】

本発明の方法はまた、注射による（例えば、ボーラス注射または持続注入による）非経口投与のために製剤化された組成物の投与を含み得る。本発明の医薬製剤は、液体形態で提供され得るか、または凍結乾燥形態で提供され得る。

【0176】

一態様では、本発明は、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合断片をコードする核酸に関する。別の態様では、本発明は、発現制御配列と機能的に会合する本明細書に記載される核酸を含む発現ベクターに関する。

【0177】

別の態様では、本発明は、本明細書に記載される核酸を含む宿主細胞に関する。一態様では、本発明は、本明細書に記載される発現ベクターを含む宿主細胞に関する。

【0178】

別の態様では、本発明は、
（ａ）抗体またはその抗原結合断片の発現を可能にする条件下で本明細書に記載される宿主細胞を培養することと、
（ｂ）抗体またはその抗原結合断片を回収することと
を含む、本明細書に記載される抗体または抗原結合断片の作製方法に関する。

【0179】

別の実施態様では、本発明は、ＳＡＲＳ関連コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に対する少なくとも１つのさらなる抗体と組み合わせた医薬品における使用のための、本明細書に記載されるＳＡＲＳ関連コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に対する抗体またはその抗原結合断片であって、前記さらなる抗体が異なる結合特異性を有する、抗体またはその抗原結合断片に関する。

【0180】

別の態様では、本発明はまた、ヒトまたは動物対象におけるＳＡＲＳ関連コロナウイルスによって引き起こされる疾患の治療、好ましくは、ヒトまたは動物対象におけるＣＯＶＩＤ－１９の治療または予防のための医薬の製造における、本発明による抗体もしくはその抗原結合断片または本発明の医薬組成物の使用も対象とする。

【0181】

本明細書に記載される本発明の全ての実施形態は、当業者がそのような組合せが技術的に意味をなさないと考えない限り、任意の組合せで組合せ可能であるとみなされる。

【実施例】

【0182】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染個体および試料採取
血液試料は、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃｏｌｏｇｎｅの施設内審査委員会（ＩＲＢ）により承認されたプロトコール２０－１１８７および１６－０５４に基づき、書面による同意を得たドナーから採取した。

【0183】

血清、血漿および全血試料の処理
血液試料をヘパリンシリンジまたはＥＤＴＡモノベット（ｍｏｎｏｖｅｔｔｅ）チューブ（Ｓａｒｓｔｅｄｔ）に採取し、Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ－１０７７（Ｓｉｇｍａ）を使用した密度勾配遠心分離により血漿および末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）に分画した。血漿アリコートを使用するまで－８０℃で保存した。血清を遠心分離によって血清ゲルチューブ（Ｓａｒｓｔｅｄｔ）から採取し、使用するまで－８０℃で保存した。ＰＢＭＣは使用するまで－１５０℃で保存した。

【0184】

血清および血漿試料からのＩｇＧの単離
全ＩｇＧを単離するために、０．５～１ｍＬの血漿を５６℃で４５分間熱不活性化し、ＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）中のプロテインＧセファロース４ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗビーズ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）と４℃で一晩インキュベートした。翌日、ビーズをクロマトグラフィーカラム（ＢｉｏＲａｄ）上でＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）を用いて洗浄し、プロテインＧ結合ＩｇＧを、０．１ＭのグリシンｐＨ＝３を使用して溶出し、直ちに１ＭのＴｒｉｓ ｐＨ＝８で緩衝化した。３０ｋＤａのカットオフＡｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ－１５カラム（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用してＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）への緩衝液交換を行い、精製したＩｇＧを４℃で保存した。

【0185】

細胞株
ＶｅｒｏＥ６細胞、ＨＥＫ－２９３Ｔ細胞および２９３Ｔ－ＡＣＥ２細胞を、１０％のＦＢＳ、１％のＰＳ、１ｍＭのＬ－グルタミンおよび１ｍＭのピルビン酸ナトリウムを含有するＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ）中に維持した。細胞をＴ７５フラスコ（Ｓａｒｓｔｅｄｔ）内の組織培養処理済みディッシュ上で３７℃および５％ＣＯ_２で成長させた。２９３－６Ｅ細胞を、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｍｅｄｉｕｍ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）中に３７℃および６％ＣＯ_２で維持し、１１０～１２０ｒｐｍで一定の振盪下に保った。

【0186】

単一Ｂ細胞選別
融合前のスパイクを確認したＨｅｘａＰｒｏと呼ばれるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２バリアント（Ｈｓｉｅｈ，Ｃ．Ｌ．ら、（２０２０）．Ｓｃｉｅｎｃｅ ３６９、１５０１～１５０５）を、２色選別戦略を使用してエリート中和者からスパイク特異的Ｂ細胞を選別するためのベイトタンパク質として使用した。ＨｅｘａＰｒｏタンパク質を、製造業者のプロトコールに従って、ＤｙＬｉｇｈｔ ４８８またはＤｙｌｉｇｈｔ ６５０抗体標識キット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を使用して標識した。Ｂ細胞を、製造業者のプロトコールに従って、ＣＤ１９ Ｍｉｃｒｏｂｅａｄｓキット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を使用して末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）画分から濃縮した。

【0187】

濃縮したＢ細胞を、ヒトＣＤ２０（ＡＦ７００標識化；クローン２Ｈ７；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓカタログ＃５６０６３１）およびヒトＩｇＧ（ＰＥ標識化；クローンＧ１８－１４５；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓカタログ＃５５５７８７）に対する抗体、ＤＡＰＩ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒカタログ＃Ｄ１３０６）、ＨｅｘａＰｒｏ－Ｄｙｌｉｇｈｔ－４８８およびＨｅｘａＰｒｏ－Ｄｙｌｉｇｈｔ－６５０で染色した。ＤＡＰＩ陰性、ＣＤ２０陽性、ＩｇＧ陽性、ＨｅｘａＰｒｏ－Ｄｙｌｉｇｈｔ－４８８陽性、およびＨｅｘａＰｒｏ－Ｄｙｌｉｇｈｔ－６５０陽性であったＢ細胞を、０．２μｌのＲＮＡｓｉｎ（４０Ｕ／μｌのＰｒｏｍｅｇａ）、０．１μｌのＲＮＡｓｅＯｕｔ（４０Ｕ／μｌのＴｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）、０．２μｌの１０Ｘ ＰＢＳ、０．４μｌのＤＴＴ（１００ｍＭのＰｒｏｍｅｇａ）、および３．１μｌのヌクレアーゼフリーＨ_２Ｏ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）から構成される選別緩衝液を含有する９６ウェルプレートに選別した。選別を、ＢＤ ＦＡＣＳＡｒｉａ（商標）Ｆｕｓｉｏｎ細胞選別機（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）で行い、選別された細胞をさらに処理するまで－８０℃で凍結した。

【0188】

単一細胞ｃＤＮＡ産生およびＰＣＲ
選別した単一Ｂ細胞を、０．７５μｌのＲａｎｄｏｍ Ｈｅｘａｍｅｒ Ｐｒｉｍｅｒ（２００ｎｇ／μｌのＴｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）、０．５μｌのＮＰ－４０（１０％のＴｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）、０．１５μｌのＲＮＡｓｅＯＵＴ（１００ｍＭのＴｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）、および５．６μｌのヌクレアーゼフリーＨ_２Ｏ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を用いて６５℃で１分間溶解した。その後、２μｌのヌクレアーゼフリーＨ_２Ｏ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）、３μｌの５×ＲＴ緩衝液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、０．５μｌのｄＮＴＰ（２５ｍＭのＴｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）、１μｌのＤＴＴ（１００ｍＭのＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、０．１μｌのＲＮＡｓｉｎ（４０Ｕ／μｌのＰｒｏｍｅｇａ）、０．１μｌのＲＮａｓｅＯＵＴ（４０Ｕ／μｌのＴｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）、および０．２５μｌのＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ ＩＶ（２００Ｕ／μｌのＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を加え、ＲＴで１０分間、４２℃で１０分間、２５℃で１０分間、５０℃で１０分間、および９４℃で５分間インキュベートすることによって逆転写を行った。

【0189】

個々の抗体配列はセミネステッドＰＣＲを使用して増幅した。重鎖、カッパ鎖およびラムダ鎖は、３’Ｃｇ－ＲＴ（Ｏｚａｗａ，Ｔ．ら、（２００６）．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４０、４６９～４７０、４７２、４７４諸所）、３’Ｃκ５４３（Ｔｉｌｌｅｒ，Ｔ．ら、（２００８）．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ３２９、１１２～１２４）、および３’Ｃκ４９４（Ｔｉｌｌｅｒら、２００８）とともに５’ｏＰＲ－ＩＧＨＶ、ｏＰＲ－ＩＧＫＶおよびｏＰＲ－ＩＧＬＶプライマーミックス（Ｋｒｅｅｒ，Ｃ．ら、（２０２０）．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ４８０、１１２７５２）を用いるＰｌａｔｉｎｕｍ Ｔａｑ（商標）ＤＮＡポリメラーゼ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を使用して１回目のＰＣＲで同時に増幅した。

【0190】

１回目のＰＣＲは、９４℃で１分間行い、９４℃で３０秒間、５７℃で３０秒間、７２℃で５５秒間を５０サイクル行い、最終伸長は７２℃で５分間行った。

【0191】

２回目のＰＣＲでは、抗体鎖は、５’ｏＰＲ－ＩＧＨＶ＋３’ＩｇＧ内部（Ｔｉｌｌｅｒら、２００８）（重鎖）、５’ｏＰＲ－ＩＧＫＶ＋３’Ｃκ４９４（カッパ鎖）、および５’ｏＰＲ－ＩＧＬＶ＋３’ＸｈｏＩ Ｃλ（Ｔｉｌｌｅｒら、２００８）（ラムダ鎖）のプライマー対を使用して別々の反応で増幅した。２回目のＰＣＲは、９４℃で１分間行い、９４℃で３０秒間、５７℃で３０秒間、７２℃で４５秒間を５０サイクル行い、最終伸長は７２℃で５分間行った。２回目のＰＣＲ産物を、後の配列解析のためにサンガーシーケンスによって配列決定した。

【0192】

抗体配列解析
２４０ヌクレオチドの最小長、および２８アミノ酸以上の平均Ｐｈｒｅｄスコアを有するＢ細胞配列を、ＩｇＢＬＡＳＴ（Ｙｅ，Ｊ．ら、（２０１３）．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ４１、Ｗ３４－４０）で注釈を付け、フレームワーク領域（ＦＷＲ）１から可変領域のＪ遺伝子の末端までをトリミングした。１６未満のＰｈｒｅｄスコアを有する基礎細胞をマスクし、１５超のマスクしたヌクレオチド、フレームシフトまたは終止コドンを有する配列をさらなる解析から除外した。

【0193】

これらの産生配列から、同一のＶ遺伝子をグループ化することによってクローン性を解析し、それらのＣＤＲＨ３のペアワイズＬｅｖｅｎｓｈｔｅｉｎ距離を決定した。個々の配列は、同じＶ遺伝子を共有し、ＣＤＲＨ３の最小同一性が７５％であった場合にクローンにグループ化した。１０ラウンドのランダム化入力の後に残った配列を非クローンであると指定した。ＣＤＲＨ３の長さをＩＭＧＴ番号付けに基づいて算出し、配列の％は、個体内の全配列のうちの特定のＶ遺伝子を有する配列を表す。

【0194】

タンパク質合成のための抗体クローニング
単一Ｂ細胞由来抗体のクローニングを、以前に公開されたプロトコールに従って行った（Ｇｉｅｓｅｌｍａｎｎ，Ｌ．ら、（２０２１）．Ｎａｔ Ｐｒｏｔｏｃ １６、３６３９～３６７１）。１回目のＰＣＲ産物を使用し、５’プライマーＳＬＩＣ－ｏＰＲ－ＩＧＨＶ、ＳＬＩＣ－ｏＰＲ－ＩＧＫＶおよびＳＬＩＣ－ｏＰＲ－ＩＧＬＶ（Ｋｒｅｅｒら、２０２０）、ならびに重鎖、カッパ鎖およびラムダ鎖のそれぞれについて３’プライマーＳＬＩＣ＿ＩｇＧ＿ＨＣ＿ｒｅｖ、ＳＬＩＣ＿ＫＣ＿ｒｅｖおよびＳＬＩＣ＿ＬＣ＿ｒｅｖ（Ｔｉｌｌｅｒら、２００８）を使用して、別々の反応で各抗体鎖の可変領域を増幅した。

【0195】

ＰＣＲは、Ｑ５ Ｈｏｔ Ｓｔａｒｔ Ｈｉｇｈ Ｆｉｄｅｌｉｔｙ ＤＮＡ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ（ＮＥＢ）を使用して実施し、９８℃で３０秒間行い、９８℃で１０秒間、７２℃で４５秒間を３５サイクル行い、最終伸長は７２℃で２分間行った。ＰＣＲ産物を、製造業者のプロトコールに従って、ＮｕｃｌｅｏＳｐｉｎ（商標）９６ ＰＣＲ Ｃｌｅａｎ－ｕｐキット（Ｍａｃｈｅｒｅｙ－Ｎａｇｅｌ）を使用して精製し、制限消化およびＳＬＩＣアセンブリによってそれぞれのｐＩｇ発現ベクター（ｐＩｇＧ１、ｐＩｇＫ、またはｐＩｇＬ）にクローニングした（ｖｏｎ Ｂｏｅｈｍｅｒ，Ｌ．ら、（２０１６）．Ｎａｔ Ｐｒｏｔｏｃ １１、１９０８～１９２３）。

【0196】

抗体合成
分枝ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）２５ｋＤａ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を使用して２９３－６Ｅ細胞（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｕｎｃｉｌ Ｃａｎａｄａ）の、１ｍｌの２９３－６Ｅ培養あたり０．５μｇの重鎖プラスミドおよび０．５μｇの軽鎖プラスミドによるトランスフェクションによって抗体を作製した。細胞を３７℃、および６％ＣＯ_２のＦｒｅｅＳｔｙｌｅ ２９３ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｍｅｄｉｕｍ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）および０．２％のペニシリン／ストレプトマイシンで１１０～１２０ｒｐｍにて維持した。トランスフェクションから７日後、細胞を遠心分離し、細胞培養上清を採取し、０．４５μｍのＮａｌｇｅｎｅ Ｒａｐｉｄ Ｆｌｏｗフィルター（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）でろ過し、プロテインＧセファロース４ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）の一晩とともに４℃で一晩インキュベートした。

【0197】

抗体結合セファロースビーズを、クロマトグラフィーカラム（ＢｉｏＲａｄ）上でＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）を用いて洗浄し、０．１ＭのグリシンｐＨ＝３を使用して抗体を溶出し、直ちに１ＭのＴｒｉｓ ｐＨ＝８で緩衝化した。その後、５０ｋＤａのＡｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ－１５スピンカラム（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用してＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）への緩衝液交換を行い、抗体を４℃で保存した。

【0198】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクバリアントのクローニング
コドン最適化したＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｗｕ０１スパイク（Ｈｏｆｆｍａｎｎ，Ｍ．ら、（２０２０）．Ｃｅｌｌ １８１、２７１～２８０．ｅ８）（単離株ＥＰＩ＿ＩＳＬ＿４０６７１６）を、ｐＣＤＮＡ（商標）３．１／Ｖ５－ＨｉｓＴＯＰＯベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にクローニングした。Ｄ６１４Ｇ（Ｂ．１）、６９～７０欠失およびＲＢＤ変異体を、Ｑ５（登録商標）部位特異的変異誘発キット（ＮＥＢ）を使用し、製造業者のプロトコールに従って、対応するアミノ酸変異を導入することによって生成した。

【0199】

ＳＡＲＳ－２－Ｓ ＲＢＤバリアントを、Ｂ．１バックグラウンドで生成し、Ｒ３４６Ｓ；Ｑ４１４Ｈ；Ｋ４１７Ｅ；Ｎ４３９Ｋ；Ｎ４４０Ｋ；Ｋ４４４Ｑ；Ｖ４４５Ａ；Ｇ４４６Ｖ；Ｙ４５３Ｆ；Ｇ４７６Ｓ；Ｓ４７７Ｎ；Ｔ４７８Ｋ；Ｅ４８４Ｋ；Ｆ４８６Ｖ；Ｆ４９０Ｓ；Ｑ４９３Ｒ；Ｑ４９３Ｋ；Ｓ４９４ＰおよびＮ５０１Ｙを含めた。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクバリアントＢ１．１．７、Ｂ１．３５１、Ｂ．１．４２９、Ｂ．１．６１７およびＢ．１．６１７．２を、製造業者のプロトコールに従って、ＰＣＲおよび重複するセグメントのＨｉＦｉアセンブリ（ＮＥＢｕｉｌｄｅｒ（登録商標）ＨｉＦｉ ＤＮＡ Ａｓｓｅｍｂｌｙ Ｋｉｔ、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ）を使用して、対応するアミノ酸変異（図５を参照のこと）を導入することによって生成した。
本研究で試験したＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のオミクロンバリアントを、Ｐａｎｇｏ ｖ．３．１．１７ ２０２１－１１－２５に従ってＢＡ．１系統と定義する。

【0200】

Ｗｕ０１参照株（ＧＩＳＡＩＤ受託ＩＤ ＥＰＩ＿ＩＳＬ＿４０６７１６；ウイルス名：ｈＣｏＶ－１９／Ｗｕｈａｎ／ＷＨＵ０１／２０２０）のスパイク糖タンパク質アミノ酸配列と比較して、本明細書で使用したオミクロンバリアント（ＢＡ．１系統）は、スパイク糖タンパク質アミノ酸配列に以下の変化を有する：Ａ６７Ｖ、ｄｅｌ６９－７０、Ｔ９５Ｉ、Ｇ１４２Ｄ、ｄｅｌ１４３－１４５、Ｎ２１１Ｉ、ｄｅｌ２１２、ｉｎｓ２１５ＥＰＥ、Ｇ３３９Ｄ、Ｓ３７１Ｌ、Ｓ３７３Ｐ、Ｓ３７５Ｆ、Ｋ４１７Ｎ、Ｎ４４０Ｋ、Ｇ４４６Ｓ、Ｓ４７７Ｎ、Ｔ４７８Ｋ、Ｅ４８４Ａ、Ｑ４９３Ｒ、Ｇ４９６Ｓ、Ｑ４９８Ｒ、Ｎ５０１Ｙ、Ｙ５０５Ｈ、Ｔ５４７Ｋ、Ｄ６１４Ｇ、Ｈ６５５Ｙ、Ｎ６７９Ｋ、Ｐ６８１Ｈ、Ｎ７６４Ｋ、Ｄ７９６Ｙ、Ｎ８５６Ｋ、Ｑ９５４Ｈ、Ｎ９６９Ｋ、およびＬ９８１Ｆ。前記オミクロンバリアントで得られた結果を図７に示す。

【0201】

シュードウイルス粒子の作製および滴定
ＨＩＶ－１ Ｔａｔ、ＨＩＶ－１ Ｇａｇ／Ｐｏｌ、ＨＩＶ－１ Ｒｅｖ、ルシフェラーゼに続いてＩＲＥＳおよびＺｓＧｒｅｅｎをコードする個々のプラスミド（Ｃｒａｗｆｏｒｄ，Ｋ．Ｈ．Ｄ．ら、（２０２０）．Ｖｉｒｕｓｅｓ １２、５１３に記載されている試薬）、ならびにＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１またはＷＩＶ－１のスパイクタンパク質の共トランスフェクションによってシュードウイルス粒子を生成した。シュードウイルスの作製のために、製造業者のプロトコールに従ってＦｕＧＥＮＥ（商標）６トランスフェクション試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用してＨＥＫ ２９３Ｔ細胞にシュードウイルスコードプラスミドをトランスフェクトした。トランスフェクションから４８時間および７２時間後、細胞残屑を遠心分離し、ウイルス培養上清を採取し、使用するまで－８０℃で保存した。

【0202】

各ウイルスバッチを、２９３Ｔ－ＡＣＥ２細胞（ヒトＡＣＥ２受容体を発現する２９３Ｔ細胞）に感染させることによって滴定し、３７℃および５％ＣＯ_２での４８時間のインキュベーション時間の後、ルシフェリン／溶解緩衝液（Ｔｒｉｓ－ＨＣＬ中の１０ｍＭのＭｇＣｌ２、０．３ｍＭのＡＴＰ、０．５ｍＭのコエンザイムＡ、１７ｍＭのＩＧＥＰＡＬ（全てＳｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、および１ｍＭのＤ－ルシフェリン（ＧｏｌｄＢｉｏ））を加えた後、マイクロプレートリーダー（Ｂｅｒｔｈｏｌｄ）を使用してルシフェラーゼ活性を測定した。感染細胞と非感染細胞との間で約１０００倍の相対発光単位（ＲＬＵ）差を生じるシュードウイルス希釈液を、シュードウイルス中和アッセイに使用した。

【0203】

ＩｇＧ中和活性を決定するためのシュードウイルス中和アッセイ
ＩｇＧ（モノクローナル抗体を含む）の中和活性を試験するために、ＩｇＧの３倍希釈系列を中和アッセイ培地（１０％のＦＢＳ、１００Ｕ／ｍｌのペニシリン、１００Ｕ／ｍｌのストレプトマイシン、１ｍＭのＬ－グルタミン、および１ｍＭのピルビン酸ナトリウムを補足したＤＭＥＭ）中で調製した。希釈したＩｇＧを、９６ウェルプレート中で１００μＬの総体積で３７℃および５％ＣＯ_２で１時間、上記（「シュードウイルス粒子の作製および滴定」の節）のように作製および滴定したシュードウイルス上清と共インキュベートした。希釈系列は、モノクローナル抗体では１０μｇ／ｍｌ、精製血清または血漿ＩｇＧでは７５０μｇ／ｍｌの開始濃度（ＩｇＧおよびシュードウイルスの共インキュベーション中の濃度を指す）を有した。その後、５μｇ／ｍｌの最終濃度でポリブレンを補足した１．２５×１０^４個の細胞の２９３Ｔ－ＡＣＥ２細胞（Ｃｒａｗｆｏｒｄら、２０２０に記載されている細胞）を各ウェルに加えた。

【0204】

３７℃および５％ＣＯ_２での４８時間のインキュベーション後、上記（「シュードウイルス粒子の作製および滴定」の節）のルシフェリン／溶解緩衝液試薬を使用してルシフェラーゼ活性を測定した。１００μｌのルシフェリン／溶解緩衝液を添加する前に、５０μｌの細胞培養上清を除去した。２分間の溶解およびピペッティングによる混合の後、１５０μｌの上清を別の９６ウェルプレートに移して、マイクロプレートリーダーでＲＬＵを測定した（１ウェルあたり１秒で測定した）。

【0205】

非感染細胞（シュードウイルスとインキュベートしなかった細胞を含有するウェル）の平均バックグラウンドＲＬＵを差し引いた後、５０％阻害濃度（ＩＣ_５０）を、未処理のウイルス対照ウェル（ＩｇＧを含まない細胞およびシュードウイルスを含有するウェル）の平均と比較して５０％のＲＬＵ減少をもたらすＩｇＧ濃度として決定した。

【0206】

最小二乗フィッティング法を使用して可変勾配を有するアゴニスト対正規化用量応答曲線をプロットする非線形フィットモデルを使用することによってＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ７．０においてＩｇＧ ＩＣ_５０値を算出した。この用量応答曲線に基づいて、５０％のＹ値を使用して、対応するＸ値またはＩＣ_５０を算出した。各ＩｇＧ試料を異なる日に２回の独立した実験で測定し、平均ＩＣ_５０値を報告した。

【0207】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の真のウイルス中和アッセイ
真のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ＣＯＶ２－Ｐ３）を、以前に記載されているように（Ｖａｎｓｈｙｌｌａら、２０２１、Ｃｅｌｌ ｈｏｓｔ ＆ Ｍｉｃｒｏｂｅ、２９（６）：９１７～９２９．ｅ４）、ＶｅｒｏＥ６細胞を使用してＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２陽性スワブ試料から事前に成長させた。中和アッセイのために、２％のＦＢＳ、１％のＰＳ、１ｍＭのＬ－グルタミンおよび１ｍＭのピルビン酸ナトリウムを含有するＤＭＥＭ中のモノクローナルＩｇＧの５倍系列希釈液を調製し、３７℃で１時間、ウイルス（１０００～２０００ＴＣＩＤ_５０）と共インキュベートした後、２％のＦＢＳ、１％のＰＳ、１ｍＭのＬ－グルタミンおよび１ｍＭのピルビン酸ナトリウムを含有するＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ）中のＶｅｒｏＥ６細胞を加えた。希釈系列は、モノクローナル抗体について１０μｇ／ｍｌの開始濃度（ＩｇＧおよびウイルスの共インキュベーション中の濃度を指す）を有した。

【0208】

３７℃および５％ＣＯ_２での４日のインキュベーション後、明視野顕微鏡を使用して細胞変性効果（ＣＰＥ）を観察することによって中和を解析し、ＣＰＥが認められなかった最高希釈ウェルの抗体濃度をその抗体のＩＣ_１００とした。全ての試料を別の日に２回の独立した実験で測定し、全ての測定値からの平均ＩＣ_１００を報告した。

【0209】

Ｈｅｐ－２自己反応性アッセイ
ＤＰＢＳ中の１００μｇ／ｍｌのモノクローナル抗体を用いたＮＯＶＡ Ｌｉｔｅ Ｈｅｐ－２ ＡＮＡキット（Ｉｎｏｖａ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を使用して製造業者のプロトコールに従ってＨｅｐ－２細胞自己反応性アッセイを実施した。陽性対照として、Ｈｅｐ－２細胞反応性ＨＩＶ－１中和抗体４Ｅ１０を含めた。１５ｍｓの露光時間および１０のゲインでＬｅｉｃａ ＤＭＩ３０００ Ｂ顕微鏡を使用して画像を取得した。画像をＡｄｏｂｅ Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐで処理し、Ａｄｏｂｅ Ｉｌｌｕｓｔｒａｔｏｒ ＣＣ２０１８（登録商標）でアセンブルした。このアッセイで試験した本発明の抗体（Ｒ２００－１Ｂ９、Ｒ２０７－２Ｆ１１、Ｒ４０－１Ｇ８、Ｒ５６８－２Ｇ５、Ｒ５６８－２Ｂ１１、Ｒ２０７－２Ｇ４、Ｒ４０－１Ｃ８、Ｒ５６８－２Ｂ９、Ｒ５６８－１Ｂ３、Ｒ５６８－２Ｅ１、Ｒ５６８－１Ｇ９およびＲ１２１－１Ｆ１）のいずれも、このアッセイにおいて自己反応性を示さなかった（データは示さず）。

【0210】

本発明の抗体で得られた結果の概要を図２、３、４、６および７に示す。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6A】

【図6B】

【図6C】

【図6D】

【図7】

【配列表】

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【国際調査報告】