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▶ ヘーフェイ ティージー イミュノファーマ カンパニー リミテッドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-11-19
(54)【発明の名称】二重特異性抗体及びその応用
(51)【国際特許分類】
C07K 16/28 20060101AFI20241112BHJP
C12N 15/13 20060101ALI20241112BHJP
C07K 16/46 20060101ALI20241112BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20241112BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20241112BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20241112BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20241112BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20241112BHJP
A61K 48/00 20060101ALI20241112BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20241112BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20241112BHJP
【ＦＩ】
C07K16/28
C12N15/13 ZNA
C07K16/46
C12N15/63 Z
C12N1/15
C12N1/19
C12N1/21
C12N5/10
A61K48/00
A61K39/395 N
A61P35/00
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023555735
(86)(22)【出願日】2022-06-22
(85)【翻訳文提出日】2023-09-11
(86)【国際出願番号】 CN2022100475
(87)【国際公開番号】W WO2023103335
(87)【国際公開日】2023-06-15
(31)【優先権主張番号】202111485404.0
(32)【優先日】2021-12-07
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】523346629
【氏名又は名称】ヘーフェイ ティージー イミュノファーマ カンパニー リミテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100120891
【弁理士】
【氏名又は名称】林 一好
(74)【代理人】
【識別番号】100165157
【弁理士】
【氏名又は名称】芝 哲央
(74)【代理人】
【識別番号】100205659
【弁理士】
【氏名又は名称】齋藤 拓也
(74)【代理人】
【識別番号】100126000
【弁理士】
【氏名又は名称】岩池 満
(74)【代理人】
【識別番号】100185269
【弁理士】
【氏名又は名称】小菅 一弘
(72)【発明者】
【氏名】ティエン ジーガン
(72)【発明者】
【氏名】チェン イン
(72)【発明者】
【氏名】シャオ ウェイファ
(72)【発明者】
【氏名】カオ グオシュアイ
(72)【発明者】
【氏名】スン ハオユー
(72)【発明者】
【氏名】スン ルイ
【テーマコード（参考）】
4B065
4C084
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B065AA92Y
4B065AA94Y
4B065AB01
4B065AC14
4B065BA01
4B065CA25
4B065CA44
4C084AA13
4C084NA05
4C084NA14
4C084ZB261
4C084ZB262
4C085AA14
4C085BB11
4C085BB36
4C085BB42
4C085DD62
4C085EE01
4H045AA11
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA10
4H045CA40
4H045DA76
4H045EA22
4H045EA28
4H045FA74
(57)【要約】
本発明は、二重特異性抗体及びその応用を提案し、該組換え抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１～６、及びＢ７Ｈ６抗体可変領域ＣＤＲ配列：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７～１２の少なくとも１つから選択されるＣＤＲ配列、またはそれと少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。本発明によって調製された組換え抗体は、同時にＣＤ３とＢ７Ｈ６を標的化することができ、且つ半減期が有意に延長され、単標的抗体より強い腫瘍抑制能力を示す。
【選択図】図１
【選択図】図１
【特許請求の範囲】
【請求項1】
組換え抗体であって、ＣＤ３抗体可変領域ＣＤＲ配列：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１～６、及び
Ｂ７Ｈ６抗体可変領域ＣＤＲ配列：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７～１２の少なくとも１つから選択されるＣＤＲ配列、またはそれと少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むことを特徴とする組換え抗体。
【請求項2】
ＣＤ３抗体の可変領域を含み、前記ＣＤ３抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４で示されている重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有することを特徴とする請求項１に記載の組換え抗体。
【請求項3】
前記抗体はＢ７Ｈ６抗体の可変領域を含み、前記Ｂ７Ｈ６抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３で示されているアミノ酸配列の重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、前記Ｂ７Ｈ６抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２で示されているアミノ酸配列の重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、
前記Ｂ７Ｈ６抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３で示されているアミノ酸配列の重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、
前記Ｂ７Ｈ６抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４で示されているアミノ酸配列の重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、
前記Ｂ７Ｈ６抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５で示されているアミノ酸配列の重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、
前記Ｂ７Ｈ６抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２で示されているアミノ酸配列の重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、
前記Ｂ７Ｈ６抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３で示されているアミノ酸配列の重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、
前記Ｂ７Ｈ６抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４で示されているアミノ酸配列の重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、
前記Ｂ７Ｈ６抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５で示されているアミノ酸配列の重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、
前記Ｂ７Ｈ６抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２で示されているアミノ酸配列の重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、
前記Ｂ７Ｈ６抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３で示されているアミノ酸配列の重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、
前記Ｂ７Ｈ６抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４で示されているアミノ酸配列の重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、
前記Ｂ７Ｈ６抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５で示されているアミノ酸配列の重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、
前記Ｂ７Ｈ６抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２で示されているアミノ酸配列の重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、
前記Ｂ７Ｈ６抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４で示されているアミノ酸配列の重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、
前記Ｂ７Ｈ６抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５で示されているアミノ酸配列の重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、
前記Ｂ７Ｈ６抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６で示されているアミノ酸配列の重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、
前記Ｂ７Ｈ６抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１で示されているアミノ酸配列の重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有することを特徴とする請求項１に記載の組換え抗体。
【請求項4】
連結ペプチドをさらに含み、任意選択に、前記連結ペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６で示されているアミノ酸配列を有することを特徴とする請求項１に記載の組換え抗体。
【請求項5】
前記連結ペプチドのＮ末端は前記ＣＤ３抗体軽鎖可変領域のＣ末端に連結され、前記連結ペプチドのＣ末端は前記ＣＤ３抗体重鎖可変領域のＮ末端に連結される請求項４に記載の組換え抗体。
【請求項6】
前記連結ペプチドのＮ末端は前記Ｂ７Ｈ６軽鎖可変領域のＣ末端に連結され、前記連結ペプチドのＣ末端は前記Ｂ７Ｈ６重鎖可変領域のＮ末端に連結される請求項４に記載の組換え抗体。
【請求項7】
第１のＦｃ領域と第２のＦｃ領域をさらに含み、前記第１のＦｃ領域と第２のＦｃ領域の少なくとも一部はマウス由来抗体、ヒト由来抗体、霊長類由来抗体又はその変異体の少なくとも１つに由来することを特徴とする請求項１に記載の組換え抗体。
【請求項8】
前記第１のＦｃ領域と第２のＦｃ領域の少なくとも一部はヒト由来ＩｇＧ又はその変異体に由来し、任意選択に、前記第１のＦｃ領域と第２のＦｃ領域の少なくとも一部はヒト由来ＩｇＧ１又はその変異体に由来することを特徴とする請求項７に記載の組換え抗体。
【請求項9】
前記第１のＦｃ領域は、野生型ＩｇＧ１ Ｆｃ領域に比べて、Ｓ３８４Ｃ変異とＴ３９６Ｗ変異のうちの少なくとも１つを有することを特徴とする請求項７に記載の組換え抗体。
【請求項10】
前記第２のＦｃ領域は、野生型ＩｇＧ１ Ｆｃ領域に比べて、Ｙ３８０Ｃ変異、Ｔ３９７Ｓ変異、Ｌ３９９Ａ変異及びＹ４０８Ｖ変異のうちの少なくとも１つを有することを特徴とする請求項９に記載の組換え抗体。
【請求項11】
前記第１の抗体Ｆｃ領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７で示されているアミノ酸配列を有し、前記第２の抗体Ｆｃ領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８で示されているアミノ酸配列を有することを特徴とする請求項７～１０のいずれか１項に記載の組換え抗体。
【請求項12】
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９及び６３で示されているアミノ酸配列を有することを特徴とする組換え抗体。
【請求項13】
請求項１～１２のいずれか１項に記載の組換え抗体をコードすることを特徴とする核酸。
【請求項14】
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９で示されているヌクレオチド配列、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０－８７で示されているヌクレオチド配列のうちの少なくとも１つを有することを特徴とする請求項１３に記載の核酸。
【請求項15】
請求項１３又は１４に記載の核酸分子を担持することを特徴とする発現ベクター。
【請求項16】
請求項１３又は１４に記載の核酸分子、請求項１５に記載の発現ベクター又は請求項１～１２のいずれか１項に記載の組換え抗体を担持することを特徴とする組換え細胞。
【請求項17】
請求項１～１２のいずれか１項に記載の組換え抗体、請求項１３又は１４に記載の核酸分子、請求項１５に記載の発現ベクター又は請求項１６に記載の組換え細胞を含むことを特徴とする組成物。
【請求項18】
請求項１～１２のいずれか１項に記載の組換え抗体、請求項１３又は１４に記載の核酸分子、請求項１５に記載の発現ベクター、請求項１６に記載の組換え細胞又は請求項１７に記載の組成物の、癌を治療及び予防するための薬物の調製における使用。
【請求項19】
前記癌症は、直腸癌、非小細胞肺癌、乳癌及び肝臓癌のうちの少なくとも１つを含むことを特徴とする請求項１８に記載の使用。
【請求項20】
薬物であって、請求項１～１２のいずれか１項に記載の組換え抗体、請求項１３又は１４に記載の核酸分子、請求項１５に記載の発現ベクター、請求項１６に記載の組換え細胞又は請求項１７に記載の組成物を含み、前記薬物は癌の治療及び予防に使用されることを特徴とする薬物。
【請求項21】
前記癌症は、直腸癌、非小細胞肺癌、乳癌及び肝臓癌のうちの少なくとも１つを含むことを特徴とする請求項２０に記載の薬物。
【請求項22】
請求項１～１２のいずれか１項に記載の組換え抗体を含むことを特徴とするキット。前記キットは、直腸癌、非小細胞肺癌、乳癌及び肝臓癌のうちの少なくとも１つを診断するために使用されることを特徴とする請求項２０に記載のキット。
【請求項23】
請求項１～１２のいずれか１項に記載の組換え抗体、請求項１３又は１４に記載の核酸分子、請求項１５に記載の発現ベクター、請求項１６に記載の組換え細胞、請求項１７に記載の組成物又は請求項２１～２２のいずれか１項に記載の薬物の、癌症の治療又は予防における使用。
【請求項24】
前記癌症は、直腸癌、非小細胞肺癌、乳癌及び肝臓癌のうちの少なくとも１つを含むことを特徴とする請求項２４に記載の使用。
【請求項25】
被験者に、１）請求項１－１２のいずれか１項に記載の組換え抗体、
２）請求項１３又は１４に記載の核酸分子、
３）請求項１５に記載の発現ベクター、
４）請求項１６に記載の組換え細胞、
５）請求項１７に記載の組成物、又は
６）請求項２１－２２のいずれか１項に記載の薬物のうちの少なくとも１つを投与するステップを含むことを特徴とする癌症の治療又は予防方法。
【請求項26】
前記癌症は、直腸癌、非小細胞肺癌、乳癌及び肝臓癌のうちの少なくとも１つを含むことを特徴とする請求項２６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明はバイオ医薬の分野に属し、具体的に、二重特異性抗体及びその応用に関し、より具体的に、組換え抗体、免疫細胞、核酸、発現ベクター、組換え細胞、組成物、薬物の調製における上記物質の使用、及びキットに関する。
【背景技術】
【0002】
二重特異性抗体とは、２つの抗原部位に同時に特異的に結合する抗体である。腫瘍治療のための二重特異性抗体は、その作用機序に従って、エフェクター細胞のリダイレクト、免疫調節及び腫瘍細胞受容体の二重結合の標的化の３つの種類に分類することができる。ここで、リダイレクト機能のための抗体がそれらの大部分を占め、現在市場に出回っている２つの腫瘍治療のための抗体もＴ細胞のリダイレクトに基づくものである。二重特異性抗体の特性に応じて、二重免疫調節や同じ細胞膜の２つの分子を標的とするなど、他の治療システムでも使用できる。
【0003】
Ｂ７Ｈ６は、２つの免疫グロブリンドメインを含むＢ７ファミリーに属するＩ型膜貫通タンパク質である。Ｂ７Ｈ６はＮＫ細胞活性化受容体ＮＫｐ３０のリガンドでもある。Ｂ７Ｈ６は多くの腫瘍細胞に発現しているが、ヒトの正常組織と健康末梢血単核細胞ではＢ７Ｈ６のｍＲＮＡは検出されていない。炎症環境では、ＩＬ－１βやＴＮＦなどの炎症誘発性サイトカインの一部は、ＣＤ１４＋およびＣＤ１６＋単球および好中球を刺激してＢ７Ｈ６の発現をアップレギュレートすることができる。Ｂ７Ｈ６は、白血病、リンパ腫、結腸直腸癌、非小細胞肺癌、乳癌、卵巣癌、胃癌および肝臓癌を含む幅広い腫瘍発現プロファイルを有する。Ｂ７Ｈ６の発現は、一部のがんの転移にも関連しているが、ほとんどの腫瘍におけるＢ７Ｈ６の役割は現在不明である。現在、Ｂ７Ｈ６は多くの腫瘍で発現しているが、この分子に対する腫瘍治療手段は多くない。研究者はＢ７Ｈ６に対する二重特異抗体を開発し、その構築形式はＢｉＴＥであり、この形式は天然抗体の定常領域を含まないため、この分子の体内での半減期が短く、その使用が大幅に制限されていることも決定した。
【0004】
Ｔ細胞リダイレクトベースの二重特異性抗体の中でも、ＣＤ３は非常に重要な標的である。免疫チェックポイント阻害抗体とは異なり、ＣＤ３関連二重特異性抗体はＴＣＲおよびペプチド（主要組織適合遺伝子複合体（ｐＭＨＣ））を越えてＴ細胞の活性化を媒介することができるが、シナプスにおける分子の作用過程は従来のＴＣＲ－ｐＭＨＣ相互作用とよく似ている。二重特異性抗体の活性はＣＤ３親和性の影響を受け、ＣＤ３高親和性二重特異性抗体はインビトロ実験でより良好な殺傷効果を有するが、インビボでは致命的なサイトカイン放出症候群毒性を有し、これはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞毒性と非常に類似している。同時に、研究により、非常に低親和性のＣＤ３抗体配列も、二重特異性抗体の構築後にＴ細胞の活性化を効果的に刺激できることがわかっている。ＣＤ３抗体の親和性が適切な範囲（２００±７８ ｎＭ）にあり、腫瘍標的関連抗体の親和性が高い場合、二重特異性抗体はＴ細胞が末梢を循環するのではなく腫瘍に選択的に局在することを促し、全身活性化を回避する。したがって、高度に標的化された二重特異性抗体の開発は、腫瘍の予防と治療に大きな価値がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0005】
本願は、発明者の以下の事実および問題に関する発見および知識に基づいて作成されたものである。
本発明において、発明者は、ＣＤ３およびＢ７Ｈ６抗原結合断片について様々な組み合わせおよびスクリーニングを行い、組換え二重特異性抗体を設計し、前記組換え二重特異性抗体は、ＣＤ３に特異的に結合し、Ｂ７Ｈ６に特異的に結合し、次いでＢ７Ｈ６分子を標的様式で腫瘍細胞の近くに持ち込むことができる。腫瘍細胞上のＢ７Ｈ６分子と結合することによってＣＤ３＋のリンパ球が腫瘍細胞と免疫シナプスを形成することを促し、これによってリンパ球が活性化してＢ７Ｈ６＋の腫瘍細胞を殺傷し、前記組換え二重特異性抗体は、高いＣＤ３およびＢ７Ｈ６結合活性を有するとともに、高い抗腫瘍活性を有する。
本発明において、発明者は、ＣＤ３およびＢ７Ｈ６抗原結合断片について様々な組み合わせおよびスクリーニングを行い、組換え二重特異性抗体を設計し、前記組換え二重特異性抗体は、ＣＤ３に特異的に結合し、Ｂ７Ｈ６に特異的に結合し、次いでＢ７Ｈ６分子を標的様式で腫瘍細胞の近くに持ち込むことができる。腫瘍細胞上のＢ７Ｈ６分子と結合することによってＣＤ３＋のリンパ球が腫瘍細胞と免疫シナプスを形成することを促し、これによってリンパ球が活性化してＢ７Ｈ６＋の腫瘍細胞を殺傷し、前記組換え二重特異性抗体は、高いＣＤ３およびＢ７Ｈ６結合活性を有するとともに、高い抗腫瘍活性を有する。
【課題を解決するための手段】
【0006】
このため、本発明の第１の態様において、本発明は組換え抗体を提案する。本発明の実施例によれば、前記組換え抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１～６、及びＢ７Ｈ６抗体可変領域ＣＤＲ配列：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７～１２の少なくとも１つから選択されるＣＤＲ配列、またはそれと少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。本発明の実施例による組換え抗体は、ＣＤ３およびＢ７Ｈ６に効果的に結合し、強力なインビボおよびインビトロ結合活性を有し、インビボ半減期が長く、有意な抗腫瘍効果を有する。
【0007】
ＲＡＳＱＤＩＲＮＹＬＮ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）。
ＹＴＳＲＬＥＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）。
ＱＱＧＮＴＬＰＷＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）。
ＧＹＴＭＮ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）。
ＬＩＮＰＹＫＧＶＳＴＹＮＱＫＦＫＤ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）。
ＳＧＹＹＧＤＳＤＷＹＦＤＶ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）。
ＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＳＹＭＮ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７）。
ＡＡＳＴＬＨＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）。
ＱＱＳＫＥＤＰＲＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）。
ＤＹＮＭＤ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）。
ＤＩＮＰＮＮＧＧＴＬＹＮＱＫＦＲＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）。
ＳＥＶＦＹＧＮＹＡＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）。
ＹＴＳＲＬＥＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）。
ＱＱＧＮＴＬＰＷＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）。
ＧＹＴＭＮ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）。
ＬＩＮＰＹＫＧＶＳＴＹＮＱＫＦＫＤ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）。
ＳＧＹＹＧＤＳＤＷＹＦＤＶ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）。
ＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＳＹＭＮ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７）。
ＡＡＳＴＬＨＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）。
ＱＱＳＫＥＤＰＲＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）。
ＤＹＮＭＤ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）。
ＤＩＮＰＮＮＧＧＴＬＹＮＱＫＦＲＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）。
ＳＥＶＦＹＧＮＹＡＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）。
【0008】
本発明の第２の態様では、本発明は、組換え抗体を提案する。本発明の実施例によれば、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９及び６３に示すアミノ酸配列を有する。本発明の実施例による組換え抗体はＣＤ３およびＢ７Ｈ６に効果的に結合し、強力なインビボおよびインビトロ結合活性を有し、インビボ半減期が長く、有意な抗腫瘍効果を有する。
【0009】
ＭＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＲＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＲＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＮＴＬＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＹＳＦＴＧＹＴＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＬＩＮＰＹＫＧＶＳＴＹＮＱＫＦＫＤＲＦＴＩＳＶＤＫＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＧＹＹＧＤＳＤＷＹＦＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＣＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９）。
ＤＩＶＬＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＳＹＭＮＷＹＬＱＫＰＧＱＰＰＱＬＬＩＹＡＡＳＴＬＨＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＱＱＳＫＥＤＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＭＤＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＤＩＮＰＮＮＧＧＴＬＹＮＱＫＦＲＧＲＶＴＬＴＶＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＶＦＹＧＮＹＡＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３）。
ＤＩＶＬＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＳＹＭＮＷＹＬＱＫＰＧＱＰＰＱＬＬＩＹＡＡＳＴＬＨＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＱＱＳＫＥＤＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＭＤＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＤＩＮＰＮＮＧＧＴＬＹＮＱＫＦＲＧＲＶＴＬＴＶＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＶＦＹＧＮＹＡＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３）。
【0010】
本発明の第３の態様では、本発明は、核酸を提案する。本発明の実施例によれば、前記核酸で第１の態様に記載の組換え抗体をコードする。本発明の実施例による核酸でコードされた組換え抗体は、ＣＤ３およびＢ７Ｈ６に効果的に結合し、強力なインビボおよびインビトロ結合活性を有し、インビボ半減期が長く、有意な抗腫瘍効果を有する。
【0011】
本発明の第４の態様では、本発明は、発現ベクターを提案する。本発明の実施例によれば、前記発現ベクターは第３の態様に記載の核酸分子を担持する。前記発現ベクターは、選択可能な制御配列を含んでもよく、前記制御配列は前記核酸分子と動作可能に結合される。ここで、前記制御配列は、宿主における核酸分子の発現を指示することができる１つ以上の制御配列である。本発明の実施例による発現ベクターは、適切な宿主細胞において前記組換え抗体を効率的且つ大量に発現させることができ、そして、腫瘍、特にＢ７Ｈ６を発現する腫瘍の特異的治療または予防に効果的に使用できる。
【0012】
本発明の第５の態様では、本発明は、組換え細胞を提案する。本発明の実施例によれば、前記組換え細胞は、第３の態様に記載の核酸分子、第４の態様に記載の発現ベクター又は第１の態様に記載の組換え抗体を担持する。前記組換え細胞は前記発現ベクターのトランスフェクションまたは形質転換によって得られる。本発明の実施例によれば、前記組換え細胞は適当な条件では上記組換え抗体を効率的且つ大量に発現させることができ、前記組換え細胞は腫瘍、特にＢ７Ｈ６を発現する腫瘍に対する特異的な治療や予防に効果的に使用できる。
【0013】
本発明の第６の態様では、本発明は、組成物を提案する。本発明の実施例によれば、第１の態様又は第２の態様に記載の組換え抗体、第３の態様に記載の核酸分子、第４の態様に記載の発現ベクター又は第５の態様に記載の組換え細胞を含む。上記のように、本発明の実施例による組換え抗体はＣＤ３またはＢ７Ｈ６タンパク質分子に効果的に結合することができ、さらに前記Ｂ７Ｈ６の高発現を有する腫瘍細胞を特異的に認識することができ、Ｔ細胞が末梢を循環するのではなく腫瘍の局所に選択的に局在化するように促し、全身活性化を回避し、前記組換え抗体を含む薬物は同様にＢ７Ｈ６を発現する腫瘍を治療または予防する有意な作用があり、その安全性はより高く、副作用はより小さい。
【0014】
本発明の第７の態様では、本発明は第１の態様又は第２の態様に記載の組換え抗体、第３の態様に記載の核酸分子、第４の態様に記載の発現ベクター、第５の態様に記載の組換え細胞又は第６の態様に記載の組成物の、薬物調製における使用を提案する。本発明の実施例によれば、前記薬物は、腫瘍を治療または予防することに用いられる。上記のように、本発明の実施例による組換え抗体は、ＣＤ３およびＢ７Ｈ６タンパク質に効果的に結合することができ、さらにＢ７Ｈ６の高発現を有する腫瘍細胞を特異的に認識し、前記組換え抗体及びそれに対応する一連の物質を用いて調製された薬物は、同様にＢ７Ｈ６を発現する腫瘍を治療または予防する有意な作用があり、その安全性はより高く、副作用はより小さい。
【0015】
本発明の第８の態様では、本発明は、薬物を提案する。本発明の実施例によれば、第１の態様又は第２の態様に記載の組換え抗体、第３の態様に記載の核酸分子、第４の態様に記載の発現ベクター、第５の態様に記載の組換え細胞又は第６の態様に記載の組成物を含み、前記薬物は癌の治療及び予防に使用される。上記のように、本発明の実施例による組換え抗体は、ＣＤ３およびＢ７Ｈ６タンパク質に効果的に結合することができ、さらにＢ７Ｈ６の高発現を有する腫瘍細胞を特異的に認識し、前記組換え抗体及びそれに対応する一連の物質を用いて調製された薬物は同様にＢ７Ｈ６を発現する腫瘍を治療または予防する有意な作用があり、その安全性はより高く、副作用はより小さい。
【0016】
本発明の第９の態様では、本発明は、キットを提案する。本発明の実施例によれば、第１の態様又は第２の態様に記載の組換え抗体を含む。本発明の実施例による抗体は、ＣＤ３およびＢ７Ｈ６タンパク質分子に効果的に結合することができ、さらに、Ｂ７Ｈ６を発現する特異性の高い腫瘍細胞を特異的に認識でき、このため、前記組換え抗体は、直腸癌、非小細胞肺癌、乳癌および肝臓癌の少なくとも１つを診断または検出するためのキットを製造するために使用され得る。前記キットは、生物学的サンプル中のＣＤ３および／またはＢ７Ｈ６タンパク質分子の定性的または定量的検出などの科学的研究に使用できる。
【0017】
本発明の付加的な態様と利点を以下の説明から部分的に示し、部分的に以下の説明から明らかになったり、または本発明の実践を通じて了解したりする。
【図面の簡単な説明】
【0018】
本発明の上記及び／又は付加的な態様と利点は、以下の図面を参照して実施例の説明から明らかになり、理解しやすい。
【図1】本発明の実施例による組換え二重特異性抗体の構造模式図である。
【図2A】本発明の実施例によるＣＤ３×Ｂ７Ｈ６組換え二重特異性抗体とヒトのＢ７Ｈ６タンパク質との結合解析結果を示す図である。
【図2B】本発明の実施例によるＣＤ３×Ｂ７Ｈ６組換え二重特異性抗体とヒトのＣＤ３タンパク質との結合解析結果を示す図である。
【図2C】本発明の実施例によるＣＤ３×Ｂ７Ｈ６組換え二重特異性抗体とＢ７Ｈ６及びヒトのＣＤ３二重抗原のＥＬＩＳＡ検出結果グラフである。
【図3A】本発明の実施例によるＣＤ３×Ｂ７Ｈ６組換え二重特異性抗体及びＴ細胞のＨＣＴ－１５細胞に対するインビトロ細胞毒性実験の分析結果グラフである。
【図3B】本発明の実施例によるＣＤ３×Ｂ７Ｈ６組換え二重特異性抗体及びＴ細胞のＬｏＶｏ細胞に対するインビトロ細胞毒性実験の分析結果グラフである。
【図3C】本発明の実施例によるＣＤ３×Ｂ７Ｈ６組換え二重特異性抗体及びＴ細胞のＨｅｐ Ｇ２細胞に対するインビトロ細胞毒性実験の結果グラフである。
【図3D】本発明の実施例によるＣＤ３×Ｂ７Ｈ６組換え二重特異性抗体及びＴ細胞のＳＫ－ＢＲ－３細胞に対するインビトロ細胞毒性実験の結果グラフである。
【図4A】本発明の実施例によるＴ細胞とルシフェラーゼを過剰発現するＨｏ８９１０細胞とを混合した後、ＣＤ３×Ｂ７Ｈ６組換え二重特異性抗体分子を勾配濃度で添加し、２４時間後基質を添加して反応した後に検出された化学発光値の分析結果グラフである。
【図4B】本発明の実施例によるＴ細胞とルシフェラーゼを過剰発現するＫ５６２細胞とを混合した後ＣＤ３×Ｂ７Ｈ６二重特異性抗体分子を勾配濃度で添加し、２４時間後基質を添加して反応した後に検出された化学発光値の分析結果グラフである。
【図5A】本発明の実施例によるＨＣＴ－１５細胞が存在する場合ＣＤ３×Ｂ７Ｈ６組換え二重特異性抗体分子のＴ細胞増殖への影響の結果グラフである。
【図5B】本発明の実施例によるＨＣＴ－１５細胞が存在する場合ＣＤ３×Ｂ７Ｈ６組換え二重特異性抗体分子のＴ細胞増殖への影響の統計分析チャートである。
【図6A】本発明の実施例によるＨＣＴ－１５細胞が存在する場合ＣＤ３×Ｂ７Ｈ６組換え二重特異性抗体分子のＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化への影響の結果グラフである。
【図6B】本発明の実施例によるＨＣＴ－１５細胞が存在する場合ＣＤ３×Ｂ７Ｈ６組換え二重特異性抗体分子のＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の脱顆粒のレベルへの影響の結果グラフである。
【図7A】本発明の実施例によるＨＣＴ－１５細胞が存在する場合ＣＤ３×Ｂ７Ｈ６組換え二重特異性抗体分子のＴ細胞によるＩＦＮ－γ分泌への影響の結果グラフである。
【図7B】本発明の実施例によるＨＣＴ－１５細胞が存在する場合ＣＤ３×Ｂ７Ｈ６組換え二重特異性抗体分子のＴ細胞によるＩＬ－２分泌への影響の結果グラフである。
【図7C】本発明の実施例によるＨＣＴ－１５細胞が存在する場合ＣＤ３×Ｂ７Ｈ６組換え二重特異性抗体分子のＴ細胞によるＩＬ－１０分泌への影響の結果グラフである。
【図7D】本発明の実施例によるＨＣＴ－１５細胞が存在する場合ＣＤ３×Ｂ７Ｈ６組換え二重特異性抗体分子のＴ細胞によるＩＬ－１７Ａ分泌への影響の結果グラフである。
【図8】本発明の実施例によるＣＤ３×Ｂ７Ｈ６組換え二重特異性抗体分子のＨＣＴ－１５細胞のインビボ抗腫瘍活性に対する結果グラフである。
【発明を実施するための形態】
【0019】
以下、本発明の実施例を詳細に説明し、前記実施例の例が図面に示される。以下、図面を参照して説明する実施例は例示的なものであり、本発明を解釈することを主旨とし、本発明を制限するものとして理解されるべきではない。
【0020】
なお、「第１の」、「第２の」といった用語は目的を説明するためのものにすぎず、相対的に重要性を示す若しくは暗に示す、または技術的特徴を明示する数を暗に示すとみなすことはできない。したがって、「第１の」、「第２の」と限定している特徴は少なくとも１つの該特徴を含むことを明示するまたは暗に示すことができ、本考案の説明において、特に明確かつ具体的に限定している場合を除き、「複数」の概念は少なくとも２つ、例えば２つまたは３つなどである。
【0021】
組換え抗体
本発明の第１の態様において、本発明は、組換え抗体を提案する。本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、前記組換え抗体は、ＣＤ３に結合する第１の抗原結合領域及びＢ７Ｈ６に特異的に結合する第２の抗原結合領域を含む。本発明の実施例による組換え抗体はＴ細胞でのＣＤ３及び腫瘍細胞でのＢ７Ｈ６に効果的に結合することができ、強力なインビボおよびインビトロ結合活性を有し、インビボ半減期が長く、Ｔ細胞及び腫瘍細胞に同時に結合することにより、この２種の細胞が細胞シナプスを形成し、有意な抗腫瘍効果を有する。
本発明の第１の態様において、本発明は、組換え抗体を提案する。本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、前記組換え抗体は、ＣＤ３に結合する第１の抗原結合領域及びＢ７Ｈ６に特異的に結合する第２の抗原結合領域を含む。本発明の実施例による組換え抗体はＴ細胞でのＣＤ３及び腫瘍細胞でのＢ７Ｈ６に効果的に結合することができ、強力なインビボおよびインビトロ結合活性を有し、インビボ半減期が長く、Ｔ細胞及び腫瘍細胞に同時に結合することにより、この２種の細胞が細胞シナプスを形成し、有意な抗腫瘍効果を有する。
【0022】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、上記組換え抗体はさらに、次のような追加技術的特徴の少なくとも１つを含んでもよい。
【0023】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、前記組換え抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１～６及びＢ７Ｈ６抗体可変領域ＣＤＲ配列：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７～１２の少なくとも１つから選択されるＣＤＲ配列、またはそれと少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。本発明の実施例による組換え抗体はＣＤ３およびＢ７Ｈ６に効果的に結合し、強力なインビボおよびインビトロ結合活性を有し、インビボ半減期が長く、有意な抗腫瘍効果を有する。
【0024】
ＲＡＳＱＤＩＲＮＹＬＮ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）。
ＹＴＳＲＬＥＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）。
ＱＱＧＮＴＬＰＷＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）。
ＧＹＴＭＮ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）。
ＬＩＮＰＹＫＧＶＳＴＹＮＱＫＦＫＤ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）。
ＳＧＹＹＧＤＳＤＷＹＦＤＶ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）。
ＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＳＹＭＮ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７）。
ＡＡＳＴＬＨＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）。
ＱＱＳＫＥＤＰＲＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）。
ＤＹＮＭＤ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）。
ＤＩＮＰＮＮＧＧＴＬＹＮＱＫＦＲＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）。
ＳＥＶＦＹＧＮＹＡＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）。
ＹＴＳＲＬＥＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）。
ＱＱＧＮＴＬＰＷＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）。
ＧＹＴＭＮ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）。
ＬＩＮＰＹＫＧＶＳＴＹＮＱＫＦＫＤ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）。
ＳＧＹＹＧＤＳＤＷＹＦＤＶ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）。
ＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＳＹＭＮ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７）。
ＡＡＳＴＬＨＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）。
ＱＱＳＫＥＤＰＲＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）。
ＤＹＮＭＤ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）。
ＤＩＮＰＮＮＧＧＴＬＹＮＱＫＦＲＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）。
ＳＥＶＦＹＧＮＹＡＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）。
【0025】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、ＣＤ３抗体の可変領域を含み、前記ＣＤ３抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３で示されている軽鎖可変領域、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４で示されている重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。
【0026】
ＭＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＲＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＲＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＮＴＬＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３）。
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＹＳＦＴＧＹＴＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＬＩＮＰＹＫＧＶＳＴＹＮＱＫＦＫＤＲＦＴＩＳＶＤＫＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＧＹＹＧＤＳＤＷＹＦＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４）。
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＹＳＦＴＧＹＴＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＬＩＮＰＹＫＧＶＳＴＹＮＱＫＦＫＤＲＦＴＩＳＶＤＫＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＧＹＹＧＤＳＤＷＹＦＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４）。
【0027】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、前記抗体はＢ７Ｈ６抗体の可変領域を含み、前記Ｂ７Ｈ６抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３で示されているアミノ酸配列の重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。
【0028】
ＤＩＶＬＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＳＹＭＮＷＹＬＱＫＰＧＱＰＰＱＬＬＩＹＡＡＳＴＬＨＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＱＱＳＫＥＤＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０）。
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＭＤＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＤＩＮＰＮＮＧＧＴＬＹＮＱＫＦＲＧＲＶＴＬＴＶＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＶＦＹＧＮＹＡＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３）。
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＭＤＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＤＩＮＰＮＮＧＧＴＬＹＮＱＫＦＲＧＲＶＴＬＴＶＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＶＦＹＧＮＹＡＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３）。
【0029】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、前記Ｂ７Ｈ６抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２で示されているアミノ酸配列の重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。
【0030】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、前記Ｂ７Ｈ６抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３で示されているアミノ酸配列の重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。
【0031】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、前記Ｂ７Ｈ６抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４で示されているアミノ酸配列の重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。
【0032】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、前記Ｂ７Ｈ６抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５で示されているアミノ酸配列の重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。
【0033】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、前記Ｂ７Ｈ６抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２で示されているアミノ酸配列の重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。
【0034】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、前記Ｂ７Ｈ６抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３で示されているアミノ酸配列の重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。
【0035】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、前記Ｂ７Ｈ６抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４で示されているアミノ酸配列の重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。
【0036】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、前記Ｂ７Ｈ６抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５で示されているアミノ酸配列の重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。
【0037】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、前記Ｂ７Ｈ６抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２で示されているアミノ酸配列の重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。
【0038】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、前記Ｂ７Ｈ６抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３で示されているアミノ酸配列の重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。
【0039】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、前記Ｂ７Ｈ６抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４で示されているアミノ酸配列の重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。
【0040】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、前記Ｂ７Ｈ６抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５で示されているアミノ酸配列の重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。
【0041】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、前記Ｂ７Ｈ６抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２で示されているアミノ酸配列の重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。
【0042】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、前記Ｂ７Ｈ６抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４で示されているアミノ酸配列の重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。
【0043】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、前記Ｂ７Ｈ６抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５で示されているアミノ酸配列の重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。
【0044】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、前記Ｂ７Ｈ６抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６で示されているアミノ酸配列の重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。
【0045】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、前記Ｂ７Ｈ６抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１で示されているアミノ酸配列の重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。
【0046】
ＤＩＶＬＴＱＳＰＶＳＬＡＶＰＬＧＱＲＡＴＩＳＣＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＳＹＭＮＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＨＳＧＩＰＶＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＮＩＨＰＶＥＥＥＤＡＡＳＹＹＣＱＱＳＫＥＤＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５）。
ＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＳＹＭＮＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＨＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＳＫＥＤＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６）。
ＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＳＹＭＮＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＨＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＳＫＥＤＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７）。
ＤＩＶＬＴＱＳＰＶＳＬＡＶＰＬＧＱＲＡＴＩＳＣＫＡＳＱＳＶＤＹＤＡＤＳＹＭＮＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＨＳＧＩＰＶＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＮＩＨＰＶＥＥＥＤＡＡＳＹＹＣＱＱＳＫＥＤＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８）。
ＤＩＶＬＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＳＹＭＮＷＹＬＱＫＰＧＱＰＰＱＬＬＩＹＡＡＳＴＬＨＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＱＱＳＫＥＤＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）。
ＥＶＬＬＱＱＳＧＰＥＶＶＫＰＧＡＳＶＫＩＴＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＭＤＷＶＫＱＳＨＧＫＳＬＥＷＩＧＤＩＮＰＮＮＧＧＴＬＹＮＱＫＦＲＧＲＶＴＬＩＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＬＲＳＬＴＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＶＦＹＧＮＹＡＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１）。
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＭＤＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＤＩＮＰＮＮＧＧＴＬＹＮＱＫＦＲＧＲＶＴＭＴＶＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＶＦＹＧＮＹＡＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２）。
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＭＤＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＤＩＮＰＮＮＧＧＴＬＹＮＱＫＦＲＧＲＶＴＬＴＶＤＫＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＶＦＹＧＮＹＡＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）。
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＭＤＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＤＩＮＰＮＮＧＧＴＬＹＮＱＫＦＲＧＲＶＴＬＴＶＤＫＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＶＦＹＧＮＹＡＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５）。
ＥＶＬＬＱＱＳＧＰＥＶＶＫＰＧＡＳＶＫＩＴＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＭＤＷＶＫＱＳＨＧＫＳＬＥＷＩＧＤＩＮＰＮＮＡＧＴＬＹＮＱＫＦＲＧＲＶＴＬＩＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＬＲＳＬＴＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＶＦＹＧＮＹＡＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６）。
ＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＳＹＭＮＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＨＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＳＫＥＤＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６）。
ＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＳＹＭＮＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＨＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＳＫＥＤＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７）。
ＤＩＶＬＴＱＳＰＶＳＬＡＶＰＬＧＱＲＡＴＩＳＣＫＡＳＱＳＶＤＹＤＡＤＳＹＭＮＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＨＳＧＩＰＶＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＮＩＨＰＶＥＥＥＤＡＡＳＹＹＣＱＱＳＫＥＤＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８）。
ＤＩＶＬＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＳＹＭＮＷＹＬＱＫＰＧＱＰＰＱＬＬＩＹＡＡＳＴＬＨＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＱＱＳＫＥＤＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）。
ＥＶＬＬＱＱＳＧＰＥＶＶＫＰＧＡＳＶＫＩＴＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＭＤＷＶＫＱＳＨＧＫＳＬＥＷＩＧＤＩＮＰＮＮＧＧＴＬＹＮＱＫＦＲＧＲＶＴＬＩＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＬＲＳＬＴＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＶＦＹＧＮＹＡＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１）。
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＭＤＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＤＩＮＰＮＮＧＧＴＬＹＮＱＫＦＲＧＲＶＴＭＴＶＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＶＦＹＧＮＹＡＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２）。
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＭＤＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＤＩＮＰＮＮＧＧＴＬＹＮＱＫＦＲＧＲＶＴＬＴＶＤＫＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＶＦＹＧＮＹＡＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）。
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＭＤＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＤＩＮＰＮＮＧＧＴＬＹＮＱＫＦＲＧＲＶＴＬＴＶＤＫＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＶＦＹＧＮＹＡＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５）。
ＥＶＬＬＱＱＳＧＰＥＶＶＫＰＧＡＳＶＫＩＴＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＭＤＷＶＫＱＳＨＧＫＳＬＥＷＩＧＤＩＮＰＮＮＡＧＴＬＹＮＱＫＦＲＧＲＶＴＬＩＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＬＲＳＬＴＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＶＦＹＧＮＹＡＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６）。
【0047】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、連結ペプチドをさらに含む。
【0048】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、前記連結ペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６で示されているアミノ酸配列を有する。
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６）。
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６）。
【0049】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、前記連結ペプチドのＮ末端は前記ＣＤ３抗体軽鎖可変領域のＣ末端に連結され、前記連結ペプチドのＣ末端は前記ＣＤ３抗体重鎖可変領域のＮ末端に連結される。
【0050】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、前記連結ペプチドのＮ末端は前記Ｂ７Ｈ６軽鎖可変領域のＣ末端に連結され、前記連結ペプチドのＣ末端は前記Ｂ７Ｈ６重鎖可変領域のＮ末端に連結される。
【0051】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、第１のＦｃ領域と第２のＦｃ領域をさらに含み、前記第１のＦｃ領域と第２のＦｃ領域の少なくとも一部はマウス由来抗体、ヒト由来抗体、霊長類由来抗体又はその変異体の少なくとも１つに由来する。
【0052】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、前記第１のＦｃ領域と第２のＦｃ領域の少なくとも一部はヒト由来ＩｇＧ又はその変異体に由来する。
【0053】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、前記第１のＦｃ領域と第２のＦｃ領域の少なくとも一部はヒト由来ＩｇＧ１又はその変異体に由来する。
【0054】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、前記第１のＦｃ領域は、野生型ＩｇＧ１ Ｆｃ領域に比べて、Ｓ３８４Ｃ変異とＴ３９６Ｗ変異のうちの少なくとも１つを有する。
【0055】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、前記第２のＦｃ領域は、野生型ＩｇＧ１ Ｆｃ領域に比べて、Ｙ３８０Ｃ変異、Ｔ３９７Ｓ変異、Ｌ３９９Ａ変異及びＹ４０８Ｖ変異のうちの少なくとも１つを有する。
【0056】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、前記第１の抗体Ｆｃ領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７で示されているアミノ酸配列を有し、前記第２の抗体Ｆｃ領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８で示されているアミノ酸配列を有する。
【0057】
ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＣＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７）。
ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８）。
ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８）。
【0058】
本発明の第２の態様では、本発明は、組換え抗体を提案する。本発明の実施例によれば、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９及び６３で示されているアミノ酸配列を有する。本発明の実施例による組換え抗体はＣＤ３およびＢ７Ｈ６に効果的に結合することができ、強力なインビボおよびインビトロ結合活性を有し、インビボ半減期が長く、有意な抗腫瘍効果を有する。
【0059】
ＭＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＲＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＲＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＮＴＬＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＹＳＦＴＧＹＴＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＬＩＮＰＹＫＧＶＳＴＹＮＱＫＦＫＤＲＦＴＩＳＶＤＫＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＧＹＹＧＤＳＤＷＹＦＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＣＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９）。
ＤＩＶＬＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＳＹＭＮＷＹＬＱＫＰＧＱＰＰＱＬＬＩＹＡＡＳＴＬＨＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＱＱＳＫＥＤＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＭＤＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＤＩＮＰＮＮＧＧＴＬＹＮＱＫＦＲＧＲＶＴＬＴＶＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＶＦＹＧＮＹＡＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３）。
ＤＩＶＬＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＳＹＭＮＷＹＬＱＫＰＧＱＰＰＱＬＬＩＹＡＡＳＴＬＨＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＱＱＳＫＥＤＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＭＤＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＤＩＮＰＮＮＧＧＴＬＹＮＱＫＦＲＧＲＶＴＬＴＶＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＶＦＹＧＮＹＡＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３）。
【0060】
予防又は治療組成物
本発明の第３の態様では、本発明は、核酸を提案し、前記核酸は以上のような組換え抗体をコードする。本発明のいくつかの具体的な実施例による核酸でコードされた組換え抗体はＣＤ３およびＢ７Ｈ６に効果的に結合することができ、強力なインビボおよびインビトロ結合活性を有し、インビボ半減期が長く、有意な抗腫瘍効果を有する。
本発明の第３の態様では、本発明は、核酸を提案し、前記核酸は以上のような組換え抗体をコードする。本発明のいくつかの具体的な実施例による核酸でコードされた組換え抗体はＣＤ３およびＢ７Ｈ６に効果的に結合することができ、強力なインビボおよびインビトロ結合活性を有し、インビボ半減期が長く、有意な抗腫瘍効果を有する。
【0061】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、前記核酸はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９で示されているヌクレオチド配列、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０－８７で示されているヌクレオチド配列のうちの少なくとも１つを有する。
【0062】
ＣＤ３抗体をコードするヌクレオチド配列
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【0077】
Ｂ７Ｈ６－１５をコードするヌクレオチド配列
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Ｂ７Ｈ６－１６抗体をコードするヌクレオチド配列
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Ｂ７Ｈ６－１８抗体をコードするヌクレオチド配列
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ＧＡＣＡＴＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＣＣＣＣＧＴＧＴＣＣＣＴＧＧＣＣＧＴＧＣＣＣＣＴＧＧＧＣＣＡＧＡＧＧＧＣＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＣＴＣＣＣＡＧＴＣＣＧＴＧＧＡＣＴＡＣＧＡＣＧＣＣＧＡＣＴＣＣＴＡＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧＣＣＡＧＣＣＣＣＣＣＡＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＧＣＣＧＣＣＴＣＣＡＣＣＣＴＧＣＡＣＴＣＣＧＧＣＡＴＣＣＣＣＧＴＧＡＧＧＴＴＣＴＣＣＧＧＣＴＣＣＧＧＣＴＣＣＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＡＣＡＴＣＣＡＣＣＣＣＧＴＧＧＡＧＧＡＧＧＡＧＧＡＣＧＣＣＧＣＣＴＣＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＴＣＣＡＡＧＧＡＧＧＡＣＣＣＣＡＧＧＡＣＣＴＴＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＧＧＧＡＧＧＣＧＧＴＧＧＡＴＣＡＧＧＣＧＧＡＧＧＴＧＧＣＴＣＡＧＧＴＧＧＡＧＧＣＧＧＴＴＣＴＧＡＧＧＴＧＣＴＧＣＴＧＣＡＧＣＡＧＴＣＣＧＧＣＣＣＣＧＡＧＧＴＧＧＴＧＡＡＧＣＣＣＧＧＣＧＣＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＡＴＣＡＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＣＴＣＣＧＧＣＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＣＧＡＣＴＡＣＡＡＣＡＴＧＧＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＧＣＡＧＴＣＣＣＡＣＧＧＣＡＡＧＴＣＣＣＴＧＧＡＧＴＧＧＡＴＣＧＧＣＧＡＣＡＴＣＡＡＣＣＣＣＡＡＣＡＡＣＧＧＣＧＧＣＡＣＣＣＴＧＴＡＣＡＡＣＣＡＧＡＡＧＴＴＣＡＧＧＧＧＣＡＧＧＧＴＧＡＣＣＣＴＧＡＴＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＴＣＣＴＣＣＴＣＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＣＴＧＡＧＧＴＣＣＣＴＧＡＣＣＴＣＣＧＡＣＧＡＣＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＣＡＧＧＴＣＣＧＡＧＧＴＧＴＴＣＴＡＣＧＧＣＡＡＣＴＡＣＧＣＣＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＧＴＧＴＣＣＴＣＣＧＡＧＣＣＣＡＡＧＴＣＣＴＧＣＧＡＣＡＡＧＡＣＣＣＡＣＡＣＣＴＧＣＣＣＣＣＣＣＴＧＣＣＣＣＧＣＣＣＣＣＧＡＧＧＣＣＧＣＣＧＧＣＧＧＣＣＣＣＴＣＣＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＣＣＣＣＣＣＣＡＡＧＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＧＡＴＧＡＴＣＴＣＣＡＧＧＡＣＣＣＣＣＧＡＧＧＴＧＡＣＣＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＴＣＣＣＡＣＧＡＧＧＡＣＣＣＣＧＡＧＧＴＧＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＣＣＡＡＧＣＣＣＡＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＴＣＣＡＣＣＴＡＣＡＧＧＧＴＧＧＴＧＴＣＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＧＴＧＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＧＴＣＣＡＡＣＡＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＣＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＧＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＧＧＣＣＡＡＧＧＧＣＣＡＧＣＣＣＡＧＧＧＡＧＣＣＣＣＡＧＧＴＧＴＧＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＣＴＣＣＡＧＧＧＡＣＧＡＧＣＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＧＴＣＣＣＴＧＴＣＣＴＧＣＧＣＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＴＣＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＴＣＣＡＡＣＧＧＣＣＡＧＣＣＣＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＣＣＣＣＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＧＧＴＧＴＣＣＡＡＧＣＴＧＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＴＣＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＣＡＡＣＧＴＧＴＴＣＴＣＣＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＣＧＡＧＧＣＣＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＣＣＡＧＡＡＧＴＣＣＣＴＧＴＣＣＣＴＧＴＣＣＣＣＣＧＧＣＡＡＧＴＡＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８７）。
【0081】
なお、本発明の明細書と請求の範囲に言及された核酸について、実際には相補二本鎖のいずれか一方、または両方を含むことが当業者にとって理解されるべきである。便宜上で、本明細書と請求の範囲では、多くの場合、一本の鎖しか示されているが、実際にはそれと相補的なもう一つの鎖も示される。また、本願における核酸配列はＤＮＡ形式又はＲＮＡ形式を含み、一方が開示されているということは、他方も開示されていることを意味する。
【0082】
本発明の第４の態様では、本発明は、発現ベクターを提案し、前記発現ベクターは以上のような核酸分子を担持する。前記発現ベクターは選択可能な制御配列を含んでもよく、前記制御配列は前記核酸分子と動作可能に結合される。前記制御配列は宿主における核酸分子の発現を指示することができる１つ以上の制御配列である。本発明のいくつかの具体的な実施例で提案された発現ベクターは適切な宿主細胞で前記組換え抗体を効率よく発現することができ、そして、腫瘍、特にＢ７Ｈ６を発現する腫瘍の特異的治療または予防に効果的に使用できる。
【0083】
本発明の第５の態様では、本発明は、組換え細胞を提案し、前記組換え細胞は第３の態様に記載の核酸分子、第４の態様に記載の発現ベクター又は第１の態様又は第２の態様に記載の組換え抗体を担持する。前記組換え細胞は前記発現ベクターのトランスフェクションまたは形質転換によって得られる。本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、前記組換え細胞は適当な条件では上記組換え抗体を効率よく発現することができ、前記組換え細胞は腫瘍、特にＢ７Ｈ６を発現する腫瘍に対する特異的な治療や予防に効果的に使用できる。
【0084】
なお、本願の明細書に記載の「適当な条件」とは、本願に記載の組換え抗体の発現に適する条件を指す。当業者が容易に理解できるように、組換え抗体の発現に適する条件は、適切な形質転換又はトランスフェクション方式、適切な形質転換又はトランスフェクション条件、健康な宿主細胞状態、適切な宿主細胞密度、適切な細胞培養環境、適切な細胞培養時間を含むが、これらに制限されない。「適当な条件」は特に制限されず、当業者は実験室の具体的な環境に応じて、最適な前記組換え抗体発現の条件を最適化する。
【0085】
本発明の第６の態様では、本発明は、組成物を提案し、第１の態様又は第２の態様に記載の組換え抗体、第３の態様に記載の核酸分子、第４の態様に記載の発現ベクター又は第５の態様に記載の組換え細胞を含む。上記のように、本発明の実施例による組換え抗体はＣＤ３またはＢ７Ｈ６タンパク質分子に効果的に結合し、さらにＢ７Ｈ６の高発現を有する腫瘍細胞を特異的に認識し、Ｔ細胞が末梢を循環するのではなく腫瘍の局所に選択的に局在化するように促し、全身活性化を回避し、前記組換え抗体及び対応する一連の物質の組成物、例えば食品組成物又は薬物組成物を含み、同様にＢ７Ｈ６を発現する腫瘍を治療または予防する有意な作用があり、その安全性はより高く、副作用はより小さい。
【0086】
本発明の第８の態様では、本発明は、薬物を提案し、第１の態様又は第２の態様に記載の組換え抗体、第３の態様に記載の核酸分子、第４の態様に記載の発現ベクター、第５の態様に記載の組換え細胞又は第６の態様に記載の組成物を含み、前記薬物は癌の治療及び予防に使用される。上記のように、本発明の実施例による組換え抗体はＣＤ３またはＢ７Ｈ６タンパク質分子に効果的に結合し、さらにＢ７Ｈ６の高発現を有する腫瘍細胞を特異的に認識し、Ｔ細胞が末梢を循環するのではなく腫瘍の局所に選択的に局在化するように促し、全身活性化を回避し、前記組換え抗体系物質を含む薬物は同様にＢ７Ｈ６を発現する腫瘍を治療または予防する有意な作用があり、その安全性はより高く、副作用はより小さい。
【0087】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、前記癌症は、直腸癌、非小細胞肺癌、乳癌及び肝臓癌のうちの少なくとも１つを含む。
【0088】
本発明のいくつかの具体的な実施例による薬物は、薬学的に許容できるベクターと有効量の前記抗体活性成分を含む。
【0089】
本明細書で使用されるように、「有効量」又は「有効投与量」という用語は、人及び／又は動物に対して機能又は活性を発生させ、且つ人及び／又は動物に受け入れられる量を指す。
【0090】
本明細書で使用されるように、「薬学的に許容できる」成分は、人及び／又は哺乳動物に適用されるが、過度の有害な副作用（例えば毒性、刺激及びアレルギー反応）のない、即ち合理的な利益／リスク比を有する物質である。「薬学的に許容できるベクター」という用語は、様々な賦形剤と希釈剤を含む治療薬の投与に使用されるベクターを指す。
【0091】
本発明の薬物は安全で有効な量の本発明の活性成分及び薬学的に許容できるベクターを含む。このようなベクターは、食塩水、緩衝液、グルコース、水、グリセリン、エタノール、及びその組み合わせを含む（これらに制限されない）。通常の薬物製剤は投与方式とマッチすべきであり、本発明の薬物の剤形は、注射剤、経口製剤（錠剤、カプセル、経口液）、経皮剤、徐放剤である。例えば生理食塩水やグルコース及び他の補助剤を含む水溶液を用いて通常の方法により製造する。前記の薬物は無菌条件下で製造するほうがよい。
【0092】
本発明に記載の活性成分の有効量は投与の方式と治療対象の疾患の重症度などによって変化する。好ましい有効量の選択は当業者が様々な要素（例えば臨床試験）によって決定することができる。前記の因素は、例えばバイオアベイラビリティ、代謝、半減期などの前記活性成分の薬物動態パラメータ、患者が治療する疾患の重症度、患者の体重、患者の免疫状態、投与経路などを含むが、これらに制限されない。例えば、治療状況の切実な需要により、１日に複数回の別々の投与量を投与したり、投与量を割合して減少させたりすることができる。
【0093】
本発明に記載の薬学的に許容できるベクターは、水、食塩水、リポソーム、脂質、タンパク質、タンパク質－抗体複合体、ペプチド類物質、セルロース、ナノゲル、又はその組み合わせを含む（これらに制限されない）。ベクターの選択は投与方式とマッチすべきであり、これらは、当業者によく知られているものである。
【0094】
使用
本発明の第７の態様では、本発明は第１の態様又は第２の態様に記載の組換え抗体、第３の態様に記載の核酸分子、第４の態様に記載の発現ベクター、第５の態様に記載の組換え細胞又は第６の態様に記載の組成物の、薬物調製における使用を提案し、前記薬物は腫瘍を治療または予防することに用いられる。上記のように、本発明のいくつかの具体的な実施例で提供された組換え抗体はＣＤ３およびＢ７Ｈ６タンパク質に効果的に結合することができ、さらに、Ｂ７Ｈ６を発現する特異性の高い腫瘍細胞を特異的に認識でき、前記組換え抗体及びそれに対応する一連の物質を用いて調製された薬物は同様にＢ７Ｈ６を発現する腫瘍を治療または予防する有意な作用があり、その安全性はより高く、副作用はより小さい。
本発明の第７の態様では、本発明は第１の態様又は第２の態様に記載の組換え抗体、第３の態様に記載の核酸分子、第４の態様に記載の発現ベクター、第５の態様に記載の組換え細胞又は第６の態様に記載の組成物の、薬物調製における使用を提案し、前記薬物は腫瘍を治療または予防することに用いられる。上記のように、本発明のいくつかの具体的な実施例で提供された組換え抗体はＣＤ３およびＢ７Ｈ６タンパク質に効果的に結合することができ、さらに、Ｂ７Ｈ６を発現する特異性の高い腫瘍細胞を特異的に認識でき、前記組換え抗体及びそれに対応する一連の物質を用いて調製された薬物は同様にＢ７Ｈ６を発現する腫瘍を治療または予防する有意な作用があり、その安全性はより高く、副作用はより小さい。
【0095】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、上記使用はさらに、次のような追加技術的特徴の少なくとも１つを含んでもよい。
【0096】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、前記腫瘍は、直腸癌、非小細胞肺癌、乳癌及び肝臓癌のうちの少なくとも１つを含む。
【0097】
キット
本発明の第９の態様では、本発明は、キットを提案し、第１の態様又は第２の態様に記載の組換え抗体を含む。本発明のいくつかの具体的な実施例で提供された前記組換え抗体はＢ７Ｈ６タンパク質と結合することができ、このため、前記組換え抗体を含むキットは、前記Ｂ７Ｈ６タンパク質を高発現する腫瘍を効果的に診断又は検出するために使用できる。
本発明の第９の態様では、本発明は、キットを提案し、第１の態様又は第２の態様に記載の組換え抗体を含む。本発明のいくつかの具体的な実施例で提供された前記組換え抗体はＢ７Ｈ６タンパク質と結合することができ、このため、前記組換え抗体を含むキットは、前記Ｂ７Ｈ６タンパク質を高発現する腫瘍を効果的に診断又は検出するために使用できる。
【0098】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、前記キットは、直腸癌、非小細胞肺癌、乳癌及び肝臓癌のうちの少なくとも１つを診断又は検出するために使用される。本発明のいくつかの具体的な実施例で提供された組換え抗体はＣＤ３およびＢ７Ｈ６タンパク質分子に効果的に結合することができ、さらにＢ７Ｈ６を発現する特異性の高い腫瘍細胞を特異的に認識でき、このため、前記組換え抗体は直腸癌、非小細胞肺癌、乳癌および肝臓癌の少なくとも１つを診断または検出するためのキットを製造するために使用され得、前記キットは、生物学的サンプル中のＣＤ３および／またはＢ７Ｈ６タンパク質分子の定性的または定量的検出などの科学的研究に使用できる。
【0099】
疾患の治療使用及び方法
本発明の第１０の態様では、本発明は、以上のような組換え抗体、核酸分子、発現ベクター、組換え細胞、組成物又は薬物の、癌症の治療又は予防における使用を提案する。上記のように、前記組換え抗体は上記ＣＤ３及び／又はＢ７Ｈ６タンパク質を特異的に認識でき、ＣＤ３抗体親和性が適切な範囲にあり、且つ腫瘍標的関連抗体は高い親和性を有する場合、二重特異性抗体によって、Ｔ細胞が末梢循環ではなく腫瘍局所に選択的に局在化し、癌症を効果的に治療、予防すると同時に、全身活性化を回避し、このため、本発明の実施例による組換え抗体、前記組換え抗体の組成物、薬物及び適当な条件では発現して前記組換え抗体を得ることができる一連の物質、例えば上記核酸分子、発現ベクター、組換え細胞などはいずれも癌症を治療又は予防するために使用できる。
本発明の第１０の態様では、本発明は、以上のような組換え抗体、核酸分子、発現ベクター、組換え細胞、組成物又は薬物の、癌症の治療又は予防における使用を提案する。上記のように、前記組換え抗体は上記ＣＤ３及び／又はＢ７Ｈ６タンパク質を特異的に認識でき、ＣＤ３抗体親和性が適切な範囲にあり、且つ腫瘍標的関連抗体は高い親和性を有する場合、二重特異性抗体によって、Ｔ細胞が末梢循環ではなく腫瘍局所に選択的に局在化し、癌症を効果的に治療、予防すると同時に、全身活性化を回避し、このため、本発明の実施例による組換え抗体、前記組換え抗体の組成物、薬物及び適当な条件では発現して前記組換え抗体を得ることができる一連の物質、例えば上記核酸分子、発現ベクター、組換え細胞などはいずれも癌症を治療又は予防するために使用できる。
【0100】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、前記癌症は、直腸癌、非小細胞肺癌、乳癌及び肝臓癌のうちの少なくとも１つを含む。
【0101】
本発明の第１１の態様では、本発明は、癌症の治療又は予防方法を提案する。本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、被験者に、１）以上のような組換え抗体、２）以上のような核酸分子、３）以上のような発現ベクター、４）以上のような組換え細胞、又は５）以上のような組成物のうちの少なくとも１つを投与するステップを含む。上記のように、前記組換え抗体は上記ＣＤ３及び／又はＢ７Ｈ６タンパク質を特異的に認識でき、ＣＤ３抗体親和性が適切な範囲にあり、且つ腫瘍標的関連抗体は高い親和性を有する場合、二重特異性抗体によって、Ｔ細胞が末梢循環ではなく腫瘍局所に選択的に局在化し、癌症を効果的に治療、予防すると同時に全身活性化を回避し、このため、本発明の実施例による方法は癌症を効果的に治療、予防し、Ｔ細胞の全身活性化を回避することができる。
【0102】
本発明のいくつかの具体的な実施例によれば、前記癌症は、直腸癌、非小細胞肺癌、乳癌及び肝臓癌のうちの少なくとも１つを含む。
【0103】
以下、実施例を具体的に説明する。実施例に具体的な技術または条件が示されない場合、当該分野の文献に記載されている技術または条件に従って、または製品の明細書に従って実行する。用いられる試薬または機器にメーカーが示されない場合、市販によって購入できる従来の製品である。
【0104】
実施例１ ＣＤ３×Ｂ７Ｈ６二重特異性抗体分子の設計及び構築
【0105】
本実施例では、複数の配置をスクリーニングすることにより、発明者は、ｓｃＦｖ－Ｆｃで配置する二重特異性抗体を決定し、この二重特異性抗体はＣＤ３×Ｂ７Ｈ６と名付けられる。前記抗体は２つの一価単位を含み、そのうちの１つの一価単位は抗ＣＤ３のＳｃＦｖ－Ｆｃ形式であり、もう１つの一価単位は抗Ｂ７Ｈ６のＳｃＦｖ－Ｆｃ形式であり、１本の連結ペプチドで前記ＣＤ３抗体の軽鎖可変領域と重鎖可変領域を連結し、以上と同様な１本の連結ペプチドで前記Ｂ７Ｈ６抗体の軽鎖可変領域と重鎖可変領域を連結し、前記連結ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６で示されているアミノ酸配列を有し、前記ＣＤ３抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３で示されている軽鎖可変領域、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４で示されている重鎖可変領域を有し、前記Ｂ７Ｈ６抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５－２０で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１－２６で示されている重鎖可変領域を有する。ここで、発明者は異なるＢ７Ｈ６抗体可変領域とＣＤ３抗体の可変領域の組み合わせをスクリーニングし、１８個のＣＤ３×Ｂ７Ｈ６組換え抗体分子を構築し、且つアミノ酸変異により一価単位のＦｃが改変され、抗ＣＤ３のＦｃ領域のアミノ酸が位置３８４でシステイン（Ｓ３８４Ｃ）に変化し、及び位置３９６でトリプトファン（Ｔ３９６Ｗ）に変化し、抗Ｂ７Ｈ６のＦｃ領域のアミノ酸が位置３８０でシステイン（Ｙ３８０Ｃ）に変化し、位置３９７でセリン（Ｔ３９７Ｓ）に変化し、位置３９９でアラニン（Ｌ３９９Ａ）に変化し及び位置４０８でバリン（Ｙ４０８Ｖ）に変化することにより、それぞれホモダイマーの形成は容易ではないが、ヘテロダイマーの形成は容易であり、該ヘテロダイマーは二重特異性抗体ＣＤ３×Ｂ７Ｈ６であり、具体的な構造は図１に示すように、前記１８個のＣＤ３×Ｂ７Ｈ６組換え抗体分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７で示されているＣＤ３一本鎖抗体、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８－４５で示されているＢ７Ｈ６一本鎖抗体、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７で示されている第１の抗体Ｆｃ領域、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８で示されている第２の抗体Ｆｃ領域を有し、両方は上記変異後にｋｎｏｂ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅ構造で連結される。
【0106】
一般的な分子生物学的技術を使用し、ＣＤ３及びＢ７Ｈ６（１－１８）一価単位のポリペプチド鎖をコードする核酸配列をそれぞれ発現ベクターｐＴＴ５（優宝生物、カタログ番号ＶＴ２２０２）にクローニングし、具体的なヌクレオチド配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０－８７で示されているヌクレオチド配列のうちの少なくとも１つである。同時に、ＣＨＯ細胞で効率よく発現させ培地内に分泌させるために、マウス由来抗体ｋａｐｐａ鎖のリードペプチドを分泌シグナルペプチドとして選択して発現ベクターに挿入し、シグナルペプチドは抗体可変領域のＮ末端に位置し、そのアミノ酸配列は、ＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８）であり、前記シグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８に示される。
【0107】
ＡＴＧＧＡＧＡＣＣＧＡＣＡＣＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＴＧＧＧＴＧＣＴＧＣＴＧＣＴＧＴＧＧＧＴＧＣＣＣＧＧＣＴＣＣＡＣＣＧＧＣ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８）。
【0108】
ＣＤ３一本鎖抗体
ＭＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＲＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＲＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＮＴＬＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＹＳＦＴＧＹＴＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＬＩＮＰＹＫＧＶＳＴＹＮＱＫＦＫＤＲＦＴＩＳＶＤＫＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＧＹＹＧＤＳＤＷＹＦＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７）。
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【0109】
Ｂ７Ｈ６－１一本鎖抗体
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【0110】
Ｂ７Ｈ６－２一本鎖抗体
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【0111】
Ｂ７Ｈ６－３一本鎖抗体
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【0112】
Ｂ７Ｈ６－４一本鎖抗体
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【0113】
Ｂ７Ｈ６－５一本鎖抗体
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【0114】
Ｂ７Ｈ６－６一本鎖抗体
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【0115】
Ｂ７Ｈ６－７一本鎖抗体
ＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＳＹＭＮＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＨＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＳＫＥＤＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＭＤＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＤＩＮＰＮＮＧＧＴＬＹＮＱＫＦＲＧＲＶＴＬＴＶＤＫＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＶＦＹＧＮＹＡＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４）。
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【0116】
Ｂ７Ｈ６－８一本鎖抗体
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【0117】
Ｂ７Ｈ６－９一本鎖抗体
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【0118】
Ｂ７Ｈ６－１０一本鎖抗体
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【0119】
Ｂ７Ｈ６－１１一本鎖抗体
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【0120】
Ｂ７Ｈ６－１２一本鎖抗体
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【0121】
Ｂ７Ｈ－１３一本鎖抗体
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【0122】
Ｂ７Ｈ６－１４一本鎖抗体
ＤＩＶＬＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＳＹＭＮＷＹＬＱＫＰＧＱＰＰＱＬＬＩＹＡＡＳＴＬＨＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＱＱＳＫＥＤＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＭＤＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＤＩＮＰＮＮＧＧＴＬＹＮＱＫＦＲＧＲＶＴＬＴＶＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＶＦＹＧＮＹＡＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１）。
ＤＩＶＬＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＳＹＭＮＷＹＬＱＫＰＧＱＰＰＱＬＬＩＹＡＡＳＴＬＨＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＱＱＳＫＥＤＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＭＤＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＤＩＮＰＮＮＧＧＴＬＹＮＱＫＦＲＧＲＶＴＬＴＶＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＶＦＹＧＮＹＡＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１）。
【0123】
Ｂ７Ｈ６－１５一本鎖抗体
ＤＩＶＬＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＳＹＭＮＷＹＬＱＫＰＧＱＰＰＱＬＬＩＹＡＡＳＴＬＨＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＱＱＳＫＥＤＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＭＤＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＤＩＮＰＮＮＧＧＴＬＹＮＱＫＦＲＧＲＶＴＬＴＶＤＫＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＶＦＹＧＮＹＡＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２）。
ＤＩＶＬＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＳＹＭＮＷＹＬＱＫＰＧＱＰＰＱＬＬＩＹＡＡＳＴＬＨＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＱＱＳＫＥＤＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＭＤＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＤＩＮＰＮＮＧＧＴＬＹＮＱＫＦＲＧＲＶＴＬＴＶＤＫＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＶＦＹＧＮＹＡＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２）。
【0124】
Ｂ７Ｈ６－１６一本鎖抗体
ＤＩＶＬＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＳＹＭＮＷＹＬＱＫＰＧＱＰＰＱＬＬＩＹＡＡＳＴＬＨＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＱＱＳＫＥＤＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＭＤＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＤＩＮＰＮＮＧＧＴＬＹＮＱＫＦＲＧＲＶＴＬＴＶＤＫＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＶＦＹＧＮＹＡＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３）。
ＤＩＶＬＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＳＹＭＮＷＹＬＱＫＰＧＱＰＰＱＬＬＩＹＡＡＳＴＬＨＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＱＱＳＫＥＤＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＭＤＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＤＩＮＰＮＮＧＧＴＬＹＮＱＫＦＲＧＲＶＴＬＴＶＤＫＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＶＦＹＧＮＹＡＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３）。
【0125】
Ｂ７Ｈ６－１７一本鎖抗体
ＤＩＶＬＴＱＳＰＶＳＬＡＶＰＬＧＱＲＡＴＩＳＣＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＳＹＭＮＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＨＳＧＩＰＶＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＮＩＨＰＶＥＥＥＤＡＡＳＹＹＣＱＱＳＫＥＤＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＬＬＱＱＳＧＰＥＶＶＫＰＧＡＳＶＫＩＴＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＭＤＷＶＫＱＳＨＧＫＳＬＥＷＩＧＤＩＮＰＮＮＡＧＴＬＹＮＱＫＦＲＧＲＶＴＬＩＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＬＲＳＬＴＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＶＦＹＧＮＹＡＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４）。
ＤＩＶＬＴＱＳＰＶＳＬＡＶＰＬＧＱＲＡＴＩＳＣＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＳＹＭＮＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＨＳＧＩＰＶＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＮＩＨＰＶＥＥＥＤＡＡＳＹＹＣＱＱＳＫＥＤＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＬＬＱＱＳＧＰＥＶＶＫＰＧＡＳＶＫＩＴＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＭＤＷＶＫＱＳＨＧＫＳＬＥＷＩＧＤＩＮＰＮＮＡＧＴＬＹＮＱＫＦＲＧＲＶＴＬＩＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＬＲＳＬＴＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＶＦＹＧＮＹＡＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４）。
【0126】
Ｂ７Ｈ６－１８一本鎖抗体
ＤＩＶＬＴＱＳＰＶＳＬＡＶＰＬＧＱＲＡＴＩＳＣＫＡＳＱＳＶＤＹＤＡＤＳＹＭＮＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＨＳＧＩＰＶＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＮＩＨＰＶＥＥＥＤＡＡＳＹＹＣＱＱＳＫＥＤＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＬＬＱＱＳＧＰＥＶＶＫＰＧＡＳＶＫＩＴＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＭＤＷＶＫＱＳＨＧＫＳＬＥＷＩＧＤＩＮＰＮＮＧＧＴＬＹＮＱＫＦＲＧＲＶＴＬＩＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＬＲＳＬＴＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＶＦＹＧＮＹＡＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５）。
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【0127】
第１のＦｃ領域のアミノ酸配列
ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＣＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７）。
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【0128】
第２のＦｃ領域のアミノ酸配列
ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８）。
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【0129】
実施例２ ＣＤ３×Ｂ７Ｈ６二重特異性抗体の発現及び精製
【0130】
２．１ ＣＤ３×Ｂ７Ｈ６二重特異性抗体分子の発現
ＣＤ３×Ｂ７Ｈ６鎖コード遺伝子を担持したｐＴＴ５ベクターで瞬時にＥｘｐｉＣＨＯ－Ｓ細胞（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号Ａ２９１２７）をトランスフェクションしてＣＤ３とＢ７Ｈ６に結合される二重特異性分子を調製し、ここで、１８個のＣＤ３×Ｂ７Ｈ６鎖コード遺伝子のそれぞれは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９で示されている抗ＣＤ３のＳｃＦｖ－Ｆｃ、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０－６７で示されている抗Ｂ７Ｈ６のＳｃＦｖ－Ｆｃを有する。具体的な実験操作は以下の通りであり、トランスフェクションの前日に、ＥｘｐｉＣＨＯ－Ｓ細胞を細胞密度が（３－４）×１０６／ｍＬに調整し、３７℃で、８％のＣＯ２、１２０ｒｐｍで一晩揺動培養した。トランスフェクションの当日、細胞は７×１０６－１×１０７／ｍＬまで成長し、生存率が９５％を超えると、トランスフェクションの準備をし、新鮮で予熱されたＥｘｐｉＣＨＯ培地（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号Ａ２９１０００２）で細胞を６×１０６／ｍＬまで希釈し、ＣＤ３ポリペプチド鎖とＢ７Ｈ６ポリペプチド鎖を含むプラスミドを１：１の質量比で、ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ ＣＨＯトランスフェクション試薬（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号Ａ２９１２９）でＥｘｐｉＣＨＯ－Ｓ細胞にトランスフェクションし、３７℃で、８％のＣＯ２、１２０ｒｐｍで揺動培養した。トランスフェクション後の１８－２２ｈに、ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ ＣＨＯ Ｅｎｈａｎｃｅｒ及びＥｘｐｉＣＨＯ Ｆｅｅｄを均一に混合した後に直ちにトランスフェクション後の細胞に加え、均一に混合し、３２℃で、５％のＣＯ２、１２０ｒｐｍで揺動培養した。トランスフェクション後５日目、細胞に８ｍＬのＥｘｐｉＣＨＯ Ｆｅｅｄを再添加し、均一に混合してから培養し続く。毎日に細胞数と細胞生存率の変化を観察し、細胞生存率が８０％以下に低下するまで待つか、１０－１４日培養した後、遠心分離して細胞を取得し、上清を精製するか、－８０℃で凍結して予備に使用する。
ＣＤ３×Ｂ７Ｈ６鎖コード遺伝子を担持したｐＴＴ５ベクターで瞬時にＥｘｐｉＣＨＯ－Ｓ細胞（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号Ａ２９１２７）をトランスフェクションしてＣＤ３とＢ７Ｈ６に結合される二重特異性分子を調製し、ここで、１８個のＣＤ３×Ｂ７Ｈ６鎖コード遺伝子のそれぞれは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９で示されている抗ＣＤ３のＳｃＦｖ－Ｆｃ、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０－６７で示されている抗Ｂ７Ｈ６のＳｃＦｖ－Ｆｃを有する。具体的な実験操作は以下の通りであり、トランスフェクションの前日に、ＥｘｐｉＣＨＯ－Ｓ細胞を細胞密度が（３－４）×１０６／ｍＬに調整し、３７℃で、８％のＣＯ２、１２０ｒｐｍで一晩揺動培養した。トランスフェクションの当日、細胞は７×１０６－１×１０７／ｍＬまで成長し、生存率が９５％を超えると、トランスフェクションの準備をし、新鮮で予熱されたＥｘｐｉＣＨＯ培地（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号Ａ２９１０００２）で細胞を６×１０６／ｍＬまで希釈し、ＣＤ３ポリペプチド鎖とＢ７Ｈ６ポリペプチド鎖を含むプラスミドを１：１の質量比で、ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ ＣＨＯトランスフェクション試薬（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号Ａ２９１２９）でＥｘｐｉＣＨＯ－Ｓ細胞にトランスフェクションし、３７℃で、８％のＣＯ２、１２０ｒｐｍで揺動培養した。トランスフェクション後の１８－２２ｈに、ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ ＣＨＯ Ｅｎｈａｎｃｅｒ及びＥｘｐｉＣＨＯ Ｆｅｅｄを均一に混合した後に直ちにトランスフェクション後の細胞に加え、均一に混合し、３２℃で、５％のＣＯ２、１２０ｒｐｍで揺動培養した。トランスフェクション後５日目、細胞に８ｍＬのＥｘｐｉＣＨＯ Ｆｅｅｄを再添加し、均一に混合してから培養し続く。毎日に細胞数と細胞生存率の変化を観察し、細胞生存率が８０％以下に低下するまで待つか、１０－１４日培養した後、遠心分離して細胞を取得し、上清を精製するか、－８０℃で凍結して予備に使用する。
【0131】
２．２ ＣＤ３×Ｂ７Ｈ６二重特異性抗体分子の精製
２．１ 実験で得られた上清を０．２２μｍのフィルターメンブレンでろ過し、Ｍａｂｓｅｌｅｃｔ ｐｒｉｓｍ Ａアフィニティークロマトグラフィーカラム（ＧＥ会社、カタログ番号１７５４９８５４）を用いて発現上清からＦｃ構造ドメインを持つ抗体を捕獲し、ｐＨ７．２のリン酸塩緩衝液でクロマトグラフィーカラムを平衡化した後、上清にアフィニティークロマトグラフィーカラムを通過させ、溶出緩衝液（１００ｍＭ クエン酸、ｐＨ２．７）で溶出し、最終的に、ＰＢＳ緩衝液で濃縮して置換し、精製後の抗体は、純度が９５％以上であるとＳＤＳ－ＰＡＧＥで同定した。
２．１ 実験で得られた上清を０．２２μｍのフィルターメンブレンでろ過し、Ｍａｂｓｅｌｅｃｔ ｐｒｉｓｍ Ａアフィニティークロマトグラフィーカラム（ＧＥ会社、カタログ番号１７５４９８５４）を用いて発現上清からＦｃ構造ドメインを持つ抗体を捕獲し、ｐＨ７．２のリン酸塩緩衝液でクロマトグラフィーカラムを平衡化した後、上清にアフィニティークロマトグラフィーカラムを通過させ、溶出緩衝液（１００ｍＭ クエン酸、ｐＨ２．７）で溶出し、最終的に、ＰＢＳ緩衝液で濃縮して置換し、精製後の抗体は、純度が９５％以上であるとＳＤＳ－ＰＡＧＥで同定した。
【0132】
ＣＤ３ ＳｃＦｖ－Ｆｃアミノ酸配列
ＭＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＲＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＲＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＮＴＬＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＹＳＦＴＧＹＴＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＬＩＮＰＹＫＧＶＳＴＹＮＱＫＦＫＤＲＦＴＩＳＶＤＫＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＧＹＹＧＤＳＤＷＹＦＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＣＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９）。
ＭＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＲＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＲＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＮＴＬＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＹＳＦＴＧＹＴＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＬＩＮＰＹＫＧＶＳＴＹＮＱＫＦＫＤＲＦＴＩＳＶＤＫＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＧＹＹＧＤＳＤＷＹＦＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＣＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９）。
【0133】
Ｂ７Ｈ６－１ＳｃＦｖ－Ｆｃアミノ酸配列
ＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＳＹＭＮＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＨＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＳＫＥＤＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＭＤＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＤＩＮＰＮＮＧＧＴＬＹＮＱＫＦＲＧＲＶＴＭＴＶＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＶＦＹＧＮＹＡＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０）。
ＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＳＹＭＮＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＨＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＳＫＥＤＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＭＤＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＤＩＮＰＮＮＧＧＴＬＹＮＱＫＦＲＧＲＶＴＭＴＶＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＶＦＹＧＮＹＡＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０）。
【0134】
Ｂ７Ｈ６－２ ＳｃＦｖ－Ｆｃアミノ酸配列
ＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＳＹＭＮＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＨＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＳＫＥＤＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＭＤＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＤＩＮＰＮＮＧＧＴＬＹＮＱＫＦＲＧＲＶＴＬＴＶＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＶＦＹＧＮＹＡＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５１）。
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【0135】
Ｂ７Ｈ６－３ ＳｃＦｖ－Ｆｃアミノ酸配列
ＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＳＹＭＮＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＨＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＳＫＥＤＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＭＤＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＤＩＮＰＮＮＧＧＴＬＹＮＱＫＦＲＧＲＶＴＬＴＶＤＫＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＶＦＹＧＮＹＡＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５２）。
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【0136】
Ｂ７Ｈ６－４ ＳｃＦｖ－Ｆｃアミノ酸配列
ＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＳＹＭＮＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＨＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＳＫＥＤＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＭＤＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＤＩＮＰＮＮＧＧＴＬＹＮＱＫＦＲＧＲＶＴＬＴＶＤＫＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＶＦＹＧＮＹＡＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５３）。
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【0137】
Ｂ７Ｈ６－５ ＳｃＦｖ－Ｆｃアミノ酸配列
ＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＳＹＭＮＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＨＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＳＫＥＤＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＭＤＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＤＩＮＰＮＮＧＧＴＬＹＮＱＫＦＲＧＲＶＴＭＴＶＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＶＦＹＧＮＹＡＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５４）。
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【0138】
Ｂ７Ｈ６－６ ＳｃＦｖ－Ｆｃアミノ酸配列
ＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＳＹＭＮＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＨＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＳＫＥＤＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＭＤＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＤＩＮＰＮＮＧＧＴＬＹＮＱＫＦＲＧＲＶＴＬＴＶＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＶＦＹＧＮＹＡＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５５）。
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【0139】
Ｂ７Ｈ６－７ ＳｃＦｖ－Ｆｃアミノ酸配列
ＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＳＹＭＮＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＨＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＳＫＥＤＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＭＤＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＤＩＮＰＮＮＧＧＴＬＹＮＱＫＦＲＧＲＶＴＬＴＶＤＫＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＶＦＹＧＮＹＡＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６）。
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【0140】
Ｂ７Ｈ６－８ ＳｃＦｖ－Ｆｃアミノ酸配列
ＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＳＹＭＮＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＨＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＳＫＥＤＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＭＤＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＤＩＮＰＮＮＧＧＴＬＹＮＱＫＦＲＧＲＶＴＬＴＶＤＫＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＶＦＹＧＮＹＡＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７）。
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【0141】
Ｂ７Ｈ６－９ ＳｃＦｖ－Ｆｃアミノ酸配列
ＤＩＶＬＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＳＹＭＮＷＹＬＱＫＰＧＱＰＰＱＬＬＩＹＡＡＳＴＬＨＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＱＱＳＫＥＤＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＭＤＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＤＩＮＰＮＮＧＧＴＬＹＮＱＫＦＲＧＲＶＴＭＴＶＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＶＦＹＧＮＹＡＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８）。
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【0142】
Ｂ７Ｈ６－１０ ＳｃＦｖ－Ｆｃアミノ酸配列
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【0143】
Ｂ７Ｈ６－１１ ＳｃＦｖ－Ｆｃアミノ酸配列
ＤＩＶＬＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＳＹＭＮＷＹＬＱＫＰＧＱＰＰＱＬＬＩＹＡＡＳＴＬＨＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＱＱＳＫＥＤＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＭＤＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＤＩＮＰＮＮＧＧＴＬＹＮＱＫＦＲＧＲＶＴＬＴＶＤＫＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＶＦＹＧＮＹＡＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０）。
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【0144】
Ｂ７Ｈ６－１２ ＳｃＦｖ－Ｆｃアミノ酸配列
ＤＩＶＬＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＳＹＭＮＷＹＬＱＫＰＧＱＰＰＱＬＬＩＹＡＡＳＴＬＨＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＱＱＳＫＥＤＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＭＤＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＤＩＮＰＮＮＧＧＴＬＹＮＱＫＦＲＧＲＶＴＬＴＶＤＫＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＶＦＹＧＮＹＡＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１）。
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【0145】
Ｂ７Ｈ６－１３ ＳｃＦｖ－Ｆｃアミノ酸配列
ＤＩＶＬＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＳＹＭＮＷＹＬＱＫＰＧＱＰＰＱＬＬＩＹＡＡＳＴＬＨＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＱＱＳＫＥＤＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＭＤＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＤＩＮＰＮＮＧＧＴＬＹＮＱＫＦＲＧＲＶＴＭＴＶＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＶＦＹＧＮＹＡＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２）。
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【0146】
Ｂ７Ｈ６－１４ ＳｃＦｖ－Ｆｃアミノ酸配列
ＤＩＶＬＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＳＹＭＮＷＹＬＱＫＰＧＱＰＰＱＬＬＩＹＡＡＳＴＬＨＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＱＱＳＫＥＤＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＭＤＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＤＩＮＰＮＮＧＧＴＬＹＮＱＫＦＲＧＲＶＴＬＴＶＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＶＦＹＧＮＹＡＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３）。
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【0147】
Ｂ７Ｈ６－１５ ＳｃＦｖ－Ｆｃアミノ酸配列
ＤＩＶＬＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＳＹＭＮＷＹＬＱＫＰＧＱＰＰＱＬＬＩＹＡＡＳＴＬＨＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＱＱＳＫＥＤＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＭＤＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＤＩＮＰＮＮＧＧＴＬＹＮＱＫＦＲＧＲＶＴＬＴＶＤＫＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＶＦＹＧＮＹＡＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４）。
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【0148】
Ｂ７Ｈ６－１６ ＳｃＦｖ－Ｆｃアミノ酸配列
ＤＩＶＬＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＳＹＭＮＷＹＬＱＫＰＧＱＰＰＱＬＬＩＹＡＡＳＴＬＨＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＱＱＳＫＥＤＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＭＤＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＤＩＮＰＮＮＧＧＴＬＹＮＱＫＦＲＧＲＶＴＬＴＶＤＫＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＶＦＹＧＮＹＡＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５）。
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【0149】
Ｂ７Ｈ６－１７ ＳｃＦｖ－Ｆｃアミノ酸配列
ＤＩＶＬＴＱＳＰＶＳＬＡＶＰＬＧＱＲＡＴＩＳＣＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＳＹＭＮＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＨＳＧＩＰＶＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＮＩＨＰＶＥＥＥＤＡＡＳＹＹＣＱＱＳＫＥＤＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＬＬＱＱＳＧＰＥＶＶＫＰＧＡＳＶＫＩＴＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＭＤＷＶＫＱＳＨＧＫＳＬＥＷＩＧＤＩＮＰＮＮＡＧＴＬＹＮＱＫＦＲＧＲＶＴＬＩＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＬＲＳＬＴＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＶＦＹＧＮＹＡＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６）。
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【0150】
Ｂ７Ｈ６－１８ ＳｃＦｖ－Ｆｃアミノ酸配列
ＤＩＶＬＴＱＳＰＶＳＬＡＶＰＬＧＱＲＡＴＩＳＣＫＡＳＱＳＶＤＹＤＡＤＳＹＭＮＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＨＳＧＩＰＶＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＮＩＨＰＶＥＥＥＤＡＡＳＹＹＣＱＱＳＫＥＤＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＬＬＱＱＳＧＰＥＶＶＫＰＧＡＳＶＫＩＴＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＭＤＷＶＫＱＳＨＧＫＳＬＥＷＩＧＤＩＮＰＮＮＧＧＴＬＹＮＱＫＦＲＧＲＶＴＬＩＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＬＲＳＬＴＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＶＦＹＧＮＹＡＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７）。
ＤＩＶＬＴＱＳＰＶＳＬＡＶＰＬＧＱＲＡＴＩＳＣＫＡＳＱＳＶＤＹＤＡＤＳＹＭＮＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＨＳＧＩＰＶＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＮＩＨＰＶＥＥＥＤＡＡＳＹＹＣＱＱＳＫＥＤＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＬＬＱＱＳＧＰＥＶＶＫＰＧＡＳＶＫＩＴＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＮＭＤＷＶＫＱＳＨＧＫＳＬＥＷＩＧＤＩＮＰＮＮＧＧＴＬＹＮＱＫＦＲＧＲＶＴＬＩＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＬＲＳＬＴＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＥＶＦＹＧＮＹＡＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７）。
【0151】
実施例３ ＣＤ３×Ｂ７Ｈ６二重特異性抗体と抗原の結合活性の検出（ＥＬＩＳＡ）
【0152】
本実施例はそれぞれ前記ＣＤ３×Ｂ７Ｈ６二重特異性抗体と単一抗原（Ｂ７Ｈ６抗原又はＣＤ３抗原）の結合活性、及びＣＤ３×Ｂ７Ｈ６二重特異性抗体と二重抗原（Ｂ７Ｈ６抗原、ＣＤ３抗原）が同時に結合する結合活性を検出し、具体的な実験操作は以下のとおりである。
【0153】
３．１ ＣＤ３×Ｂ７Ｈ６二重特異性抗体と単一抗原の結合活性の測定
ヒトのＢ７Ｈ６（ＡＣＲＯ ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号Ｂ７６－Ｈ５２Ｈ８）、ヒトのＣＤ３抗原（ＡＣＲＯ ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号ＣＤＤ－Ｈ５２Ｗ１）をそれぞれコーティング緩衝液（３５ｍＭのＮａＨＣＯ３、１５ｍＭのＮａ２ＣＯ３、ｐＨ９．６）で２μｇ／ｍＬに希釈し、ウェルあたり１００μＬを酵素結合プレートに加え、４℃で一晩静置する。その後、ＰＢＳＴ（０．０５％のＴｗｅｅｎ ２０－ＰＢＳ、ｐＨ７．２）で３回洗浄した。プレートに３００μＬのブロッキング緩衝液（１％のＢＳＡ、０．０５％のＴｗｅｅｎ２０－ＰＢＳ、ｐＨ７．２）を加え、室温で２ｈ静置した。さらに、ＰＢＳＴで３回洗浄した。ウェルあたりに対応する二重特異性抗体を加え、室温で１時間インキュベートした。ＰＢＳＴで３回洗浄した。ウェルあたりに１００μＬのブロッキング緩衝液で希釈したＨＲＰ－ウサギ抗ヒトＩｇＧ二次抗体（ｂｏｓｔｅｒ、カタログ番号ＢＡ１０７０）を加え、室温で１時間インキュベートした。ＰＢＳＴで３回洗浄し、ウェルあたりにＴＭＢを加え、室温で２－５分間遮光反応させ、各ウェルは２Ｍの硫酸で反応を停止し、最終的にマイクロプレートリーダーでＯＤ４５０の数値を読み取る。
ヒトのＢ７Ｈ６（ＡＣＲＯ ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号Ｂ７６－Ｈ５２Ｈ８）、ヒトのＣＤ３抗原（ＡＣＲＯ ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号ＣＤＤ－Ｈ５２Ｗ１）をそれぞれコーティング緩衝液（３５ｍＭのＮａＨＣＯ３、１５ｍＭのＮａ２ＣＯ３、ｐＨ９．６）で２μｇ／ｍＬに希釈し、ウェルあたり１００μＬを酵素結合プレートに加え、４℃で一晩静置する。その後、ＰＢＳＴ（０．０５％のＴｗｅｅｎ ２０－ＰＢＳ、ｐＨ７．２）で３回洗浄した。プレートに３００μＬのブロッキング緩衝液（１％のＢＳＡ、０．０５％のＴｗｅｅｎ２０－ＰＢＳ、ｐＨ７．２）を加え、室温で２ｈ静置した。さらに、ＰＢＳＴで３回洗浄した。ウェルあたりに対応する二重特異性抗体を加え、室温で１時間インキュベートした。ＰＢＳＴで３回洗浄した。ウェルあたりに１００μＬのブロッキング緩衝液で希釈したＨＲＰ－ウサギ抗ヒトＩｇＧ二次抗体（ｂｏｓｔｅｒ、カタログ番号ＢＡ１０７０）を加え、室温で１時間インキュベートした。ＰＢＳＴで３回洗浄し、ウェルあたりにＴＭＢを加え、室温で２－５分間遮光反応させ、各ウェルは２Ｍの硫酸で反応を停止し、最終的にマイクロプレートリーダーでＯＤ４５０の数値を読み取る。
【0154】
具体的な実験結果は、図２Ａに示すように、図２Ａは異なるＢ７Ｈ６配列とＣＤ３配列からなるＣＤ３×Ｂ７Ｈ６二重特異性抗体分子とＢ７Ｈ６抗原との結合状況を示し、これらの二重特異性抗体分子はいずれもＢ７Ｈ６抗原に結合することができ、ここで、ＣＤ３×Ｂ７Ｈ６－１４の結合活性が最も強く、このため、後続の実験は、主にＣＤ３×Ｂ７Ｈ６－１４に焦点を当て、図２ＢはＣＤ３×Ｂ７Ｈ６－１４二重特異性抗体分子がＣＤ３抗原に結合することができることを示す。
【0155】
３．２ ＣＤ３×Ｂ７Ｈ６二重特異性抗体と二重抗原の結合活性の測定
ヒトＢ７Ｈ６（ＡＣＲＯ ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号Ｂ７６－Ｈ８２Ｗｂ）をコーティング緩衝液（３５ｍＭのＮａＨＣＯ３、１５ｍＭのＮａ２ＣＯ３、ｐＨ９．６）で２μｇ／ｍＬに希釈し、ウェルあたり１００μＬを酵素結合プレートに加え、４℃で一晩静置する。その後、ＰＢＳＴ（０．０５％のＴｗｅｅｎ ２０－ＰＢＳ、ｐＨ７．２）で３回洗浄した。プレートに３００μＬのブロッキング緩衝液（１％のＢＳＡ、０．０５％のＴｗｅｅｎ２０－ＰＢＳ、ｐＨ７．２）を加え、室温で２ｈ静置した。ＰＢＳＴで３回洗浄した。ウェルあたりに対応する二重特異性抗体を加え、室温で１時間インキュベートした。ＰＢＳＴで３回洗浄した。ウェルあたりに１００μＬのブロッキング緩衝液で希釈したヒトのＣＤ３抗原（ＡＣＲＯ ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号ＣＤＤ－Ｈ５２Ｗ１）を加え、室温で１時間インキュベートした。ＰＢＳＴで３回洗浄した。ウェルあたりにブロッキング緩衝液で希釈した１００μＬのＨＲＰ－抗Ｈｉｓタグ付きの二次抗体（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ、カタログ番号Ａ００６１２）を加え、室温で１時間インキュベートした。ＰＢＳＴで３回洗浄し、ウェルあたりにＴＭＢを加え、室温で２－５分間遮光反応させ、各ウェルは２Ｍの硫酸で反応を停止し、最終的にマイクロプレートリーダーでＯＤ４５０の数値を読み取る。具体的な結果は、図２Ｃに示すように、結果から、ＣＤ３×Ｂ７Ｈ６－１４二重特異性抗体分子の濃度の増加に伴い、そのＯＤ４５０の読み取り値が徐々に増加し、該二重特異性抗体分子がヒトのＣＤ３とＢ７Ｈ６に同時に結合することができることを示す。
ヒトＢ７Ｈ６（ＡＣＲＯ ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号Ｂ７６－Ｈ８２Ｗｂ）をコーティング緩衝液（３５ｍＭのＮａＨＣＯ３、１５ｍＭのＮａ２ＣＯ３、ｐＨ９．６）で２μｇ／ｍＬに希釈し、ウェルあたり１００μＬを酵素結合プレートに加え、４℃で一晩静置する。その後、ＰＢＳＴ（０．０５％のＴｗｅｅｎ ２０－ＰＢＳ、ｐＨ７．２）で３回洗浄した。プレートに３００μＬのブロッキング緩衝液（１％のＢＳＡ、０．０５％のＴｗｅｅｎ２０－ＰＢＳ、ｐＨ７．２）を加え、室温で２ｈ静置した。ＰＢＳＴで３回洗浄した。ウェルあたりに対応する二重特異性抗体を加え、室温で１時間インキュベートした。ＰＢＳＴで３回洗浄した。ウェルあたりに１００μＬのブロッキング緩衝液で希釈したヒトのＣＤ３抗原（ＡＣＲＯ ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号ＣＤＤ－Ｈ５２Ｗ１）を加え、室温で１時間インキュベートした。ＰＢＳＴで３回洗浄した。ウェルあたりにブロッキング緩衝液で希釈した１００μＬのＨＲＰ－抗Ｈｉｓタグ付きの二次抗体（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ、カタログ番号Ａ００６１２）を加え、室温で１時間インキュベートした。ＰＢＳＴで３回洗浄し、ウェルあたりにＴＭＢを加え、室温で２－５分間遮光反応させ、各ウェルは２Ｍの硫酸で反応を停止し、最終的にマイクロプレートリーダーでＯＤ４５０の数値を読み取る。具体的な結果は、図２Ｃに示すように、結果から、ＣＤ３×Ｂ７Ｈ６－１４二重特異性抗体分子の濃度の増加に伴い、そのＯＤ４５０の読み取り値が徐々に増加し、該二重特異性抗体分子がヒトのＣＤ３とＢ７Ｈ６に同時に結合することができることを示す。
【0156】
実施例４ 二重特異性抗体分子のインビトロ死滅検出
【0157】
４．１ ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の分離
抗凝固ヒト末梢血を同体積の無菌ＰＢＳに加え、５０ｍＬの無菌遠心分離管を取り、２５ｍＬの希釈後の末梢血を１５ｍＬのリンパ分離液（ＧＥ ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、カタログ番号１７１４４００３）に軽く加え、過程全体で界面がはっきりと揺れないように保ち、２１℃で、４００ｇで３０ｍｉｎ遠心分離を行い、遠心分離機を１加速し、０減速した。遠心分離後、管の内部を３層に分割し、中間層はリンパ球層であり、中間の白色フィルム層を新しい５０ｍＬの遠心分離管に吸い取り、吸い取った後にＰＢＳで５０ｍＬに充填し、５００ｇで１０ｍｉｎ遠心分離した。上清を捨て、１ｍＬのＰＢＳを加えて軽く均一に吹き、ＰＢＳで４０ｍＬに充填し、２５０ｇで１０ｍｉｎ遠心分離した。
抗凝固ヒト末梢血を同体積の無菌ＰＢＳに加え、５０ｍＬの無菌遠心分離管を取り、２５ｍＬの希釈後の末梢血を１５ｍＬのリンパ分離液（ＧＥ ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、カタログ番号１７１４４００３）に軽く加え、過程全体で界面がはっきりと揺れないように保ち、２１℃で、４００ｇで３０ｍｉｎ遠心分離を行い、遠心分離機を１加速し、０減速した。遠心分離後、管の内部を３層に分割し、中間層はリンパ球層であり、中間の白色フィルム層を新しい５０ｍＬの遠心分離管に吸い取り、吸い取った後にＰＢＳで５０ｍＬに充填し、５００ｇで１０ｍｉｎ遠心分離した。上清を捨て、１ｍＬのＰＢＳを加えて軽く均一に吹き、ＰＢＳで４０ｍＬに充填し、２５０ｇで１０ｍｉｎ遠心分離した。
【0158】
遠心分離後、上清を捨て、１ｍＬのＭＡＣＳ緩衝液（０．５％ＢＳＡ、２．５ｍＭのＥＤＴＡ－ＰＢＳ）で再懸濁した後、希釈してカウントする。
【0159】
４．２ 精製されたＴ細胞の分離
ヒトＴ細胞は、磁気ビーズ選別（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ会社、カタログ番号１３００９６５３５）の方法を用いて末梢血から分離された。ＰＢＭＣを収集してから上清を完全に捨て、１０７個の細胞ごとに４０μＬのＭＡＣＳ ｂｕｆｆｅｒを加えて細胞を再懸濁した後、さらに１０μＬのＴ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｔｉｎ－Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃｏｃｋｔａｉｌを加え、均一に混合し、４℃で１０ｍｉｎインキュベートした。１０７個の細胞ごとにさらに３０μＬのＭＡＣＳ ｂｕｆｆｅｒと２０μＬのＴ Ｃｅｌｌ ＭｉｃｒｏＢｅａｄ Ｃｏｃｋｔａｉｌを加え、均一に混合し、４℃で１５ｍｉｎインキュベートする。ＬＳ分離カラムを磁場に入れ、３ｍＬのＭＡＣＳ ｂｕｆｆｅｒで分離カラムを濡らし、細胞懸濁液を分離カラムに加え、１ｍＬのＭＡＣＳ ｂｕｆｆｅｒで遠心分離管を洗浄した後、分離カラムを加え、流出液を収集した。３ｍＬのＭＡＣＳ ｂｕｆｆｅｒで分離カラムを洗浄し、流出液を収集した。均一に混合した後、細胞をカウントする。３００ｇの細胞懸濁液、４℃で、１０ｍｉｎ遠心分離してから培地で再懸濁した。
ヒトＴ細胞は、磁気ビーズ選別（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ会社、カタログ番号１３００９６５３５）の方法を用いて末梢血から分離された。ＰＢＭＣを収集してから上清を完全に捨て、１０７個の細胞ごとに４０μＬのＭＡＣＳ ｂｕｆｆｅｒを加えて細胞を再懸濁した後、さらに１０μＬのＴ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｔｉｎ－Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃｏｃｋｔａｉｌを加え、均一に混合し、４℃で１０ｍｉｎインキュベートした。１０７個の細胞ごとにさらに３０μＬのＭＡＣＳ ｂｕｆｆｅｒと２０μＬのＴ Ｃｅｌｌ ＭｉｃｒｏＢｅａｄ Ｃｏｃｋｔａｉｌを加え、均一に混合し、４℃で１５ｍｉｎインキュベートする。ＬＳ分離カラムを磁場に入れ、３ｍＬのＭＡＣＳ ｂｕｆｆｅｒで分離カラムを濡らし、細胞懸濁液を分離カラムに加え、１ｍＬのＭＡＣＳ ｂｕｆｆｅｒで遠心分離管を洗浄した後、分離カラムを加え、流出液を収集した。３ｍＬのＭＡＣＳ ｂｕｆｆｅｒで分離カラムを洗浄し、流出液を収集した。均一に混合した後、細胞をカウントする。３００ｇの細胞懸濁液、４℃で、１０ｍｉｎ遠心分離してから培地で再懸濁した。
【0160】
４．３ 付着培養腫瘍細胞のインビトロ死滅の検出
付着培養の腫瘍細胞を消化してからカウントし、細胞密度を２×１０５／ｍＬに調整する。ＲＴＣＡ機器（アジレント）、機器タイプＤＰを選択し、実験モードを選択し、細胞情報と薬物情報を入力する。ｓｃｈｅｄｕｌｅ設定実験ステップに入り、プレートに５０μＬの新鮮な培地（８９％のＲＰＭＩ １６４０培地＋１０％ウシ胎児血清＋１％ペニシリン）を加えた後、機器に入れて閉合し、最初のステップをクリックして開始する。Ｄｏｎｅ完了後、プレートを取り出して、１００μＬの細胞懸濁液を加え、室温で１５－３０ｍｉｎ静置してエッジ効果を防止し、機器に入れ、開始をクリックした。対数期まで成長した後、一時停止し、５０μＬの精製されたＴ細胞（１×１０６／ｍＬ）を加え、二重特異性抗体を勾配濃度で添加し、開始をクリックし、一定の時間後分析した。
付着培養の腫瘍細胞を消化してからカウントし、細胞密度を２×１０５／ｍＬに調整する。ＲＴＣＡ機器（アジレント）、機器タイプＤＰを選択し、実験モードを選択し、細胞情報と薬物情報を入力する。ｓｃｈｅｄｕｌｅ設定実験ステップに入り、プレートに５０μＬの新鮮な培地（８９％のＲＰＭＩ １６４０培地＋１０％ウシ胎児血清＋１％ペニシリン）を加えた後、機器に入れて閉合し、最初のステップをクリックして開始する。Ｄｏｎｅ完了後、プレートを取り出して、１００μＬの細胞懸濁液を加え、室温で１５－３０ｍｉｎ静置してエッジ効果を防止し、機器に入れ、開始をクリックした。対数期まで成長した後、一時停止し、５０μＬの精製されたＴ細胞（１×１０６／ｍＬ）を加え、二重特異性抗体を勾配濃度で添加し、開始をクリックし、一定の時間後分析した。
【0161】
具体的な実験結果は、図に示すように、ＣＤ３×Ｂ７Ｈ６－１４二重特異性抗体の濃度の増加に伴い、Ｔ細胞がＨＣＴ－１５細胞（図３Ａ）、ＬｏＶｏ細胞（図３Ｂ）、Ｈｅｐ Ｇ２細胞（図３Ｃ）及びＳＫ－ＢＲ－３細胞（図３Ｄ）に対する死滅効率は徐々に増加し、ＣＤ３×Ｂ７Ｈ６－１４はＴ細胞によるＢ７Ｈ６＋の腫瘍細胞の死滅を促進できることを示す。
【0162】
実施例５ ルシフェラーゼ反応法による浮遊細胞のインビトロ死滅の検出実験
ルシフェラーゼを過剰発現する腫瘍細胞を収集してから細胞密度を２×１０５／ｍＬに調整し、実施例４．１及び４．２に述べるように、Ｔ細胞を分離精製、収集、精製して細胞密度を５×１０５／ｍＬに調整する。それぞれ５０μＬの腫瘍細胞と精製されたＴ細胞を９６ウェルのフラットプレートに取り、二重特異性抗体を勾配濃度で添加し、均一に混合した。３７℃で、５％のＣＯ２で４時間インキュベートした後にウェルあたりに１００μＬ（１５ｍｇ／ｍＬ）のフルオレセインカリウム塩溶液（Ｇｏｌｄｂｉｏ会社、カタログ番号ＬＵＣＫ－１Ｇ）を加え、迅速で均一に混合し、マイクロプレートリーダーで化学発光値を検出する。
ルシフェラーゼを過剰発現する腫瘍細胞を収集してから細胞密度を２×１０５／ｍＬに調整し、実施例４．１及び４．２に述べるように、Ｔ細胞を分離精製、収集、精製して細胞密度を５×１０５／ｍＬに調整する。それぞれ５０μＬの腫瘍細胞と精製されたＴ細胞を９６ウェルのフラットプレートに取り、二重特異性抗体を勾配濃度で添加し、均一に混合した。３７℃で、５％のＣＯ２で４時間インキュベートした後にウェルあたりに１００μＬ（１５ｍｇ／ｍＬ）のフルオレセインカリウム塩溶液（Ｇｏｌｄｂｉｏ会社、カタログ番号ＬＵＣＫ－１Ｇ）を加え、迅速で均一に混合し、マイクロプレートリーダーで化学発光値を検出する。
【0163】
具体的な実験結果は、図に示すように、ＣＤ３×Ｂ７Ｈ６－１４二重特異性抗体の添加濃度の増加に伴い、Ｈｏ８９１０とＫ５６２の化学発光値が徐々に低下すると検出し、生存腫瘍細胞が少なくなり、即ちＣＤ３×Ｂ７Ｈ６－１４は、Ｔ細胞によるＨｏ８９１０細胞（図４Ａ）とＫ５６２細胞（図４Ｂ）の死滅を有意に促進できることを示す。
【0164】
実施例６ Ｂ７Ｈ６陽性腫瘍細胞が存在する場合でＴ細胞の増殖状況を検出する
Ｔ細胞の増殖を測定するために、本実施例では２＊２二因子実験に設定され、Ｔ細胞＋ＰＢＳ群、Ｔ細胞＋ＣＤ３×Ｂ７Ｈ６－１４群、ＨＣＴ－１５＋Ｔ細胞＋ＰＢＳ群、ＨＣＴ－１５＋Ｔ細胞＋ＣＤ３×Ｂ７Ｈ６－１４群を含み、実施例４．１及び４．２に述べるように、Ｔ細胞を分離精製し、５μＭの細胞Ｔｒａｃｅ ＣＦＳＥ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号Ｃ３４５５４）で精製されたＴ細胞をマークした。続いて、マークされたＴ細胞とヒト結腸癌細胞（ＨＣＴ－１５細胞）を標的比２：１で混合し、その中にＰＢＳ又は二重特異性抗体を加え、３日後に細胞を回収して、フローサイトメトリーでＴ細胞の増殖状況を検出する。
Ｔ細胞の増殖を測定するために、本実施例では２＊２二因子実験に設定され、Ｔ細胞＋ＰＢＳ群、Ｔ細胞＋ＣＤ３×Ｂ７Ｈ６－１４群、ＨＣＴ－１５＋Ｔ細胞＋ＰＢＳ群、ＨＣＴ－１５＋Ｔ細胞＋ＣＤ３×Ｂ７Ｈ６－１４群を含み、実施例４．１及び４．２に述べるように、Ｔ細胞を分離精製し、５μＭの細胞Ｔｒａｃｅ ＣＦＳＥ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号Ｃ３４５５４）で精製されたＴ細胞をマークした。続いて、マークされたＴ細胞とヒト結腸癌細胞（ＨＣＴ－１５細胞）を標的比２：１で混合し、その中にＰＢＳ又は二重特異性抗体を加え、３日後に細胞を回収して、フローサイトメトリーでＴ細胞の増殖状況を検出する。
【0165】
具体的な実験結果は、図に示すように、ＣＤ３×Ｂ７Ｈ６－１４二重特異性抗体はＨＣＴ－１５が存在する場合でＴ細胞の増殖（図５Ａ）を有意に促進でき、また、二重特異性抗体ＣＤ３×Ｂ７Ｈ６－１４の濃度の増加に伴い、Ｔ細胞の増殖の促進効果が有意になる（図５Ｂ）。
【0166】
実施例７ Ｂ７Ｈ６陽性腫瘍細胞が存在する場合でＴ細胞の活性化と脱顆粒レベルを検出する
実施例４．１と４．２に述べるように、Ｔ細胞を分離精製し、実験では、合計２つの群に設定され、対照群はＴ細胞群であり、実験群は、Ｔ細胞とＨＣＴ－１５標的細胞を標的比１：１で９６ウェルプレート内に加え、ＣＤ３×Ｂ７Ｈ６二重特異性抗体を勾配濃度で添加し、均一に混合した。３７℃で２４時間インキュベートした後に遠心分離して細胞を収集し、ＰＢＳで細胞を再懸濁し、マウス血清を加えて室温で１５分間閉鎖し、表面分子を検出するフローサイトメトリー抗体を加え、４℃で３０分間遮光インキュベートした後、ＰＢＳで洗浄し、さらに固定膜貫通液（ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号００５１２３４３）を加え、室温で半時間以上固定した。さらに膜貫通緩衝液（ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号００８３３３５６）を加えて洗浄し、マウス血清を加えて室温で１５分間閉鎖し、その後、対応する細胞内分子マーク抗体を加え、室温で３０分間遮光インキュベートし、さらに、ＰＢＳを加えて２回洗浄した後、フローサイトメトリーで検出する。
実施例４．１と４．２に述べるように、Ｔ細胞を分離精製し、実験では、合計２つの群に設定され、対照群はＴ細胞群であり、実験群は、Ｔ細胞とＨＣＴ－１５標的細胞を標的比１：１で９６ウェルプレート内に加え、ＣＤ３×Ｂ７Ｈ６二重特異性抗体を勾配濃度で添加し、均一に混合した。３７℃で２４時間インキュベートした後に遠心分離して細胞を収集し、ＰＢＳで細胞を再懸濁し、マウス血清を加えて室温で１５分間閉鎖し、表面分子を検出するフローサイトメトリー抗体を加え、４℃で３０分間遮光インキュベートした後、ＰＢＳで洗浄し、さらに固定膜貫通液（ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号００５１２３４３）を加え、室温で半時間以上固定した。さらに膜貫通緩衝液（ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号００８３３３５６）を加えて洗浄し、マウス血清を加えて室温で１５分間閉鎖し、その後、対応する細胞内分子マーク抗体を加え、室温で３０分間遮光インキュベートし、さらに、ＰＢＳを加えて２回洗浄した後、フローサイトメトリーで検出する。
【0167】
具体的な実験結果は、図６Ａ及び６Ｂに示すように、Ｂ７Ｈ６＋細胞に（＋ＨＣＴ－１５）が存在する場合、ＣＤ３×Ｂ７Ｈ６－１４二重特異性抗体の濃度の増加に伴い、ＣＤ４＋Ｔ細胞とＣＤ８＋Ｔ細胞の表面にＣＤ６９分子（図６Ａ）を発現し、細胞内にＣＤ１０７ａ（図６Ｂ）を発現する割合は徐々に増加し、Ｂ７Ｈ６＋腫瘍細胞（－ＨＣＴ－１５）が存在しない場合、Ｔ細胞は二重特異性抗体によってインキュベートされた後、活性化と脱顆粒能力は非常に限られ、該二重特異性抗体はＴ細胞とＢ７Ｈ６＋腫瘍細胞を特異的に標的化し、且つＴ細胞の活性化と脱顆粒を促進できることを示す。
【0168】
実施例８ Ｂ７Ｈ６陽性腫瘍細胞が存在する場合でＴ細胞の分泌細胞因子を検出する
実施例４．１及び４．２に述べるように、Ｔ細胞を分離精製し、対照群はＴ細胞しかなく、実験群はＴ細胞とＨＣＴ－１５細胞を含み、５×１０５個のＴ細胞、５×１０５個のＴ細胞及び５×１０５個のＨＣＴ－１５細胞をそれぞれ２４ウェルプレート内を加え、全体積は５００μＬであり、さらにＣＤ３×Ｂ７Ｈ６二重特異性抗体（０、１００、１０１、１０２、１０３）を勾配濃度で添加し、均一に混合した。３７℃で２４時間インキュベートした後に遠心分離し、上清液を収集し、ＣＢＡ人Ｔｈ１／Ｔｈ２／Ｔｈ１７細胞因子検出キット（ＢＤ、カタログ番号５６０４８４）で上清中の各種の細胞因子の濃度を検出し、最終的にフローサイトメトリーで検出した。
実施例４．１及び４．２に述べるように、Ｔ細胞を分離精製し、対照群はＴ細胞しかなく、実験群はＴ細胞とＨＣＴ－１５細胞を含み、５×１０５個のＴ細胞、５×１０５個のＴ細胞及び５×１０５個のＨＣＴ－１５細胞をそれぞれ２４ウェルプレート内を加え、全体積は５００μＬであり、さらにＣＤ３×Ｂ７Ｈ６二重特異性抗体（０、１００、１０１、１０２、１０３）を勾配濃度で添加し、均一に混合した。３７℃で２４時間インキュベートした後に遠心分離し、上清液を収集し、ＣＢＡ人Ｔｈ１／Ｔｈ２／Ｔｈ１７細胞因子検出キット（ＢＤ、カタログ番号５６０４８４）で上清中の各種の細胞因子の濃度を検出し、最終的にフローサイトメトリーで検出した。
【0169】
具体的な実験結果は、図７Ａ－Ｄに示すように、上清中のＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－１０及びＩＬ－１７Ａ細胞因子を共インキュベートする細胞の濃度を示し、ＨＣＴ－１５腫瘍細胞が存在する場合、ＣＤ３×Ｂ７Ｈ６－１４抗体の濃度の増加に伴い、Ｔ細胞はこの４種の細胞因子を分泌するレベルも徐々に増強し、該二重特異性抗体はＴ細胞の活性化を促進して細胞因子を分泌することができることを示す。
【0170】
実施例９ 生体内異種移植の効果に関する研究
ＣＤ３×Ｂ７Ｈ６二重特異性抗体分子がＨＣＴ－１５腫瘍細胞に対するインビボ抗腫瘍活性を検出するために、本実施例では、合計３つの群に設定して実験を行い、緩衝液群、ヒト免疫グロブリン（ＩＧｇ）群及びＣＤ３×Ｂ７Ｈ６－１４二重特異性抗体分子群を含む。実施例４．１及び４．２に述べるように、Ｔ細胞を分離精製し、さらに、Ｔ細胞拡張キット（ｇｉｂｃｏ、カタログ番号１１１３１Ｄ）を使用してＴ細胞を７日拡張した。ＨＣＴ－１５大腸癌細胞（１×１０６）と拡張Ｔ細胞（２×１０６）を混合した後、（ｓ．ｃ．）を雄性のＮＯＤ－Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ Ｉｌ２ｒｇｅｍ１／Ｓｍｏｃマウスの皮下に注射し、接種後、２日ごとにＣＤ３×Ｂ７Ｈ６二重特異性抗体（１ｍｇ／ｋｇ、ＰＢＳに溶ける）、ＩｇＧ対照抗体（ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｉ４５０６）又は緩衝液（対照溶剤）をマウス体内に静脈注射し、合計３回注射した。外部ノギス測定によって腫瘍の長さと幅を検出して標準式で腫瘍の体積を計算する。
ＣＤ３×Ｂ７Ｈ６二重特異性抗体分子がＨＣＴ－１５腫瘍細胞に対するインビボ抗腫瘍活性を検出するために、本実施例では、合計３つの群に設定して実験を行い、緩衝液群、ヒト免疫グロブリン（ＩＧｇ）群及びＣＤ３×Ｂ７Ｈ６－１４二重特異性抗体分子群を含む。実施例４．１及び４．２に述べるように、Ｔ細胞を分離精製し、さらに、Ｔ細胞拡張キット（ｇｉｂｃｏ、カタログ番号１１１３１Ｄ）を使用してＴ細胞を７日拡張した。ＨＣＴ－１５大腸癌細胞（１×１０６）と拡張Ｔ細胞（２×１０６）を混合した後、（ｓ．ｃ．）を雄性のＮＯＤ－Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ Ｉｌ２ｒｇｅｍ１／Ｓｍｏｃマウスの皮下に注射し、接種後、２日ごとにＣＤ３×Ｂ７Ｈ６二重特異性抗体（１ｍｇ／ｋｇ、ＰＢＳに溶ける）、ＩｇＧ対照抗体（ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｉ４５０６）又は緩衝液（対照溶剤）をマウス体内に静脈注射し、合計３回注射した。外部ノギス測定によって腫瘍の長さと幅を検出して標準式で腫瘍の体積を計算する。
【0171】
図８はＣＤ３×Ｂ７Ｈ６－１４二重特異性抗体分子がＨＣＴ－１５細胞に対するインビボ抗腫瘍活性を示す。ＣＤ３×Ｂ７Ｈ６－１４二重特異性抗体による治療によってＨＣＴ－１５腫瘍の退縮を有意に促進することができるが、対照ＩｇＧ又は対照溶剤を使用すると、治療効果を達成できず、ＣＤ３×Ｂ７Ｈ６二重特異性抗体は有意なインビボ抗腫瘍活性を有することを示す。
【0172】
本明細書の説明では、「一実施例」、「いくつかの実施例」、「例」、「具体例」、または「いくつかの例」という参考用語などの説明は、該実施例または例を組み合わせて説明する具体的な特徴、構造、材料または特点は本発明の少なくとも１つの実施例または例に含まれる。本明細書では、上記用語例示的な叙述は必ずしも同じ実施例または例を対象とする必要がない。また、説明する具体的な特徴、構造、材料または特点はいずれかまたは複数の実施例または例では適切な方式で結合することができる。なお、互いに衝突しない場合、当業者は本明細書に説明される異なる実施例または例及び異なる実施例または例の特徴を結合と組み合わせることができる。
【0173】
本発明の実施例を提示し記述したが、上記実施例は例示的なものであり、本発明を制限するためのものとして理解することができなく、当業者であれば、本発明の範囲で上記実施例について様々な変化、修正、置換および変形が可能であることが理解できる。
【関連出願の相互参照】
【0174】
本願は、２０２１年１２月０７日に中国知的財産局に提案された、出願番号が２０２１１１４８５４０４．０である中国特許出願の優先権及び権利を主張し、上記中国特許出願の全部の内容はここで参照として本願に組み込まれる。
【図1】
【図2A】
【図2B】
【図2C】
【図3A】
【図3B】
【図3C】
【図3D】
【図4A】
【図4B】
【図5A】
【図5B】
【図6A】
【図6B】
【図7A】
【図7B】
【図7C】
【図7D】
【図8】
【配列表】
【手続補正書】
【提出日】2024-05-21
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
組換え抗体であって、ＣＤ３抗体可変領域ＣＤＲ配列：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１～６、及び
Ｂ７Ｈ６抗体可変領域ＣＤＲ配列：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７～１２の少なくとも１つから選択されるＣＤＲ配列、またはそれと少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むことを特徴とする組換え抗体。
【請求項2】
ＣＤ３抗体の可変領域を含み、前記ＣＤ３抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４で示されている重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有することを特徴とする請求項１に記載の組換え抗体。
【請求項3】
前記抗体はＢ７Ｈ６抗体の可変領域を含み、前記Ｂ７Ｈ６抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３で示されているアミノ酸配列の重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、前記Ｂ７Ｈ６抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２で示されているアミノ酸配列の重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、
前記Ｂ７Ｈ６抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３で示されているアミノ酸配列の重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、
前記Ｂ７Ｈ６抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４で示されているアミノ酸配列の重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、
前記Ｂ７Ｈ６抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５で示されているアミノ酸配列の重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、
前記Ｂ７Ｈ６抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２で示されているアミノ酸配列の重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、
前記Ｂ７Ｈ６抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３で示されているアミノ酸配列の重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、
前記Ｂ７Ｈ６抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４で示されているアミノ酸配列の重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、
前記Ｂ７Ｈ６抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５で示されているアミノ酸配列の重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、
前記Ｂ７Ｈ６抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２で示されているアミノ酸配列の重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、
前記Ｂ７Ｈ６抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３で示されているアミノ酸配列の重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、
前記Ｂ７Ｈ６抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４で示されているアミノ酸配列の重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、
前記Ｂ７Ｈ６抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５で示されているアミノ酸配列の重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、
前記Ｂ７Ｈ６抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２で示されているアミノ酸配列の重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、
前記Ｂ７Ｈ６抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４で示されているアミノ酸配列の重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、
前記Ｂ７Ｈ６抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５で示されているアミノ酸配列の重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、
前記Ｂ７Ｈ６抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６で示されているアミノ酸配列の重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、
前記Ｂ７Ｈ６抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８で示されている軽鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１で示されているアミノ酸配列の重鎖可変領域、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１で示されているアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有することを特徴とする請求項１に記載の組換え抗体。
【請求項4】
連結ペプチドをさらに含み、任意選択に、前記連結ペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６で示されているアミノ酸配列を有することを特徴とする請求項１に記載の組換え抗体。
【請求項5】
前記連結ペプチドのＮ末端は前記ＣＤ３抗体軽鎖可変領域のＣ末端に連結され、前記連結ペプチドのＣ末端は前記ＣＤ３抗体重鎖可変領域のＮ末端に連結される請求項４に記載の組換え抗体。
【請求項6】
前記連結ペプチドのＮ末端は前記Ｂ７Ｈ６軽鎖可変領域のＣ末端に連結され、前記連結ペプチドのＣ末端は前記Ｂ７Ｈ６重鎖可変領域のＮ末端に連結される請求項４に記載の組換え抗体。
【請求項7】
第１のＦｃ領域と第２のＦｃ領域をさらに含み、前記第１のＦｃ領域と第２のＦｃ領域の少なくとも一部はマウス由来抗体、ヒト由来抗体、霊長類由来抗体又はその変異体の少なくとも１つに由来することを特徴とする請求項１に記載の組換え抗体。
【請求項8】
前記第１のＦｃ領域と第２のＦｃ領域の少なくとも一部はヒト由来ＩｇＧ又はその変異体に由来し、任意選択に、前記第１のＦｃ領域と第２のＦｃ領域の少なくとも一部はヒト由来ＩｇＧ１又はその変異体に由来することを特徴とする請求項７に記載の組換え抗体。
【請求項9】
前記第１のＦｃ領域は、野生型ＩｇＧ１ Ｆｃ領域に比べて、Ｓ３８４Ｃ変異とＴ３９６Ｗ変異のうちの少なくとも１つを有することを特徴とする請求項７に記載の組換え抗体。
【請求項10】
前記第２のＦｃ領域は、野生型ＩｇＧ１ Ｆｃ領域に比べて、Ｙ３８０Ｃ変異、Ｔ３９７Ｓ変異、Ｌ３９９Ａ変異及びＹ４０８Ｖ変異のうちの少なくとも１つを有することを特徴とする請求項９に記載の組換え抗体。
【請求項11】
前記第１の抗体Ｆｃ領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７で示されているアミノ酸配列を有し、前記第２の抗体Ｆｃ領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８で示されているアミノ酸配列を有することを特徴とする請求項７～１０のいずれか１項に記載の組換え抗体。
【請求項12】
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９及び６３で示されているアミノ酸配列を有することを特徴とする組換え抗体。
【請求項13】
請求項１２に記載の組換え抗体をコードすることを特徴とする核酸。
【請求項14】
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９で示されているヌクレオチド配列、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０－８７で示されているヌクレオチド配列のうちの少なくとも１つを有することを特徴とする請求項１３に記載の核酸。
【請求項15】
請求項１３に記載の核酸分子を担持することを特徴とする発現ベクター。
【請求項16】
請求項１３又は１４に記載の核酸分子、請求項１５に記載の発現ベクター又は請求項１２に記載の組換え抗体を担持することを特徴とする組換え細胞。
【請求項17】
請求項１２に記載の組換え抗体、請求項１３に記載の核酸分子、又は請求項１５に記載の発現ベクターを含むことを特徴とする組成物。
【請求項18】
請求項１２に記載の組換え抗体、請求項１３又は１４に記載の核酸分子、又は請求項１５に記載の発現ベクターの、癌を治療及び予防するための薬物の調製における使用。
【請求項19】
前記癌症は、直腸癌、非小細胞肺癌、乳癌及び肝臓癌のうちの少なくとも１つを含むことを特徴とする請求項１８に記載の使用。
【請求項20】
薬物であって、請求項１２に記載の組換え抗体、請求項１３又は１４に記載の核酸分子、又は請求項１５に記載の発現ベクターを含み、前記薬物は癌の治療及び予防に使用されることを特徴とする薬物。
【請求項21】
前記癌症は、直腸癌、非小細胞肺癌、乳癌及び肝臓癌のうちの少なくとも１つを含むことを特徴とする請求項２０に記載の薬物。
【請求項22】
請求項１２に記載の組換え抗体を含むことを特徴とするキット。
【請求項23】
前記キットは、直腸癌、非小細胞肺癌、乳癌及び肝臓癌のうちの少なくとも１つを診断するために使用されることを特徴とする請求項２２に記載のキット。
【請求項24】
請求項１２に記載の組換え抗体、請求項１３又は１４に記載の核酸分子、又は請求項１５に記載の発現ベクターの、癌症の治療又は予防における使用。
【請求項25】
前記癌症は、直腸癌、非小細胞肺癌、乳癌及び肝臓癌のうちの少なくとも１つを含むことを特徴とする請求項２４に記載の使用。
【請求項26】
被験者に、１）請求項１２に記載の組換え抗体、
２）請求項１３又は１４に記載の核酸分子、又は
３）請求項１５に記載の発現ベクターの少なくとも１つを投与するステップを含むことを特徴とする癌症の治療又は予防方法。
【請求項27】
前記癌症は、直腸癌、非小細胞肺癌、乳癌及び肝臓癌のうちの少なくとも１つを含むことを特徴とする請求項２６に記載の方法。
【国際調査報告】