特表 2024-542914 ヒトＣＸＣＬ１６抗体およびその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-11-19

(54)【発明の名称】ヒトＣＸＣＬ１６抗体およびその使用

(51)【国際特許分類】

   C07K 16/24 20060101AFI20241112BHJP

   C07K 16/46 20060101ALI20241112BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20241112BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20241112BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20241112BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20241112BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20241112BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20241112BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20241112BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20241112BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20241112BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20241112BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20241112BHJP

   A61P 35/04 20060101ALI20241112BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20241112BHJP

   A61K 31/337 20060101ALI20241112BHJP

   G01N 33/574 20060101ALI20241112BHJP

【ＦＩ】

C07K16/24 ZNA

C07K16/46

C12N15/13

C12N15/63 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

C12P21/08

A61K39/395 N

A61K39/395 L

A61K47/68

A61P37/04

A61P35/00

A61P35/04

A61K45/00

A61K31/337

A61K39/395 U

G01N33/574 A

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023581056

(86)(22)【出願日】2022-11-22

(85)【翻訳文提出日】2024-02-27

(86)【国際出願番号】 IB2022061294

(87)【国際公開番号】W WO2023094995

(87)【国際公開日】2023-06-01

(31)【優先権主張番号】10-2021-0164723

(32)【優先日】2021-11-25

(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】524004009

【氏名又は名称】セラス インコーポレイテッド

【氏名又は名称原語表記】Ｃｅｌｌｕｓ， Ｉｎｃ．

【住所又は居所原語表記】＃４０９， Ｄａｅｈａｋ－ｒｏ ８０， Ｂｕｋ－ｇｕ， Ｄａｅｇｕ， Ｄａｅｇｕ， Ｒｅｐｕｂｌｉｃ ｏｆ Ｋｏｒｅａ

(74)【代理人】

【識別番号】100130845

【弁理士】

【氏名又は名称】渡邉 伸一

(72)【発明者】

【氏名】チョー， サン ウク

(72)【発明者】

【氏名】キム， ソン クン

【テーマコード（参考）】

4B064

4B065

4C076

4C084

4C085

4C086

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B064AG27

4B064CA02

4B064CA05

4B064CA06

4B064CA08

4B064CA10

4B064CA19

4B064CC24

4B064DA01

4B064DA05

4B064DA13

4B064DA14

4B065AA01X

4B065AA01Y

4B065AA57X

4B065AA57Y

4B065AA72X

4B065AA72Y

4B065AA83X

4B065AA83Y

4B065AA90X

4B065AA90Y

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA25

4B065CA44

4B065CA46

4C076AA95

4C076BB13

4C076CC07

4C076CC27

4C076EE41

4C076FF68

4C084AA19

4C084MA02

4C084MA65

4C084NA05

4C084NA14

4C084ZB09

4C084ZB26

4C085AA14

4C085AA26

4C085BB11

4C085BB12

4C085BB31

4C085DD62

4C085EE01

4C085GG02

4C086AA01

4C086AA02

4C086BA02

4C086MA01

4C086MA02

4C086MA04

4C086MA65

4C086NA05

4C086NA14

4C086ZB09

4C086ZB26

4H045AA10

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045CA40

4H045DA76

4H045EA20

4H045EA50

4H045EA51

4H045FA72

4H045FA74

(57)【要約】

本出願は、がん治療のためのＣＸＣＬ１６抗体を開示する。いくつかの実施形態において、本明細書に開示のＣＸＣＬ１６抗体は、がん、例えば、甲状腺がん、乳がん、および前立腺がんの増殖を阻害し得る。また、がん治療のためのＣＸＣＬ１６抗体と標的化抗がん剤および／または免疫チェックポイント阻害剤との組み合せについても記載される。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

配列番号１２のいずれか１つのＨＣＤＲ１、または前記配列に対して１、２、３、４、もしくは５個のアミノ酸が置換されているそのバリアント；
配列番号１３のいずれか１つのＨＣＤＲ２、または前記配列に対して１、２、３、４、もしくは５個のアミノ酸が置換されているそのバリアント；および
配列番号１４のいずれか１つのＨＣＤＲ３、または前記配列に対して１、２、３、４、もしくは５個のアミノ酸が置換されているそのバリアント
を含む重鎖可変領域、ならびに
配列番号１５のいずれか１つのＬＣＤＲ１、または前記配列に対して１、２、３、４、もしくは５個のアミノ酸が置換されているそのバリアント；
配列番号１６のいずれか１つのＬＣＤＲ２、または前記配列に対して１、２、もしくは３個のアミノ酸が置換されているそのバリアント；および
配列番号１７のいずれか１つのＬＣＤＲ３、または前記配列に対して１、２、３、４、もしくは５個のアミノ酸が置換されているそのバリアント
を含む軽鎖可変領域
を含む、ＣＸＣＬ１６に結合する抗体。

【請求項2】

抗体が、
配列番号２２と少なくとも８０％同一であるＨＣ－ＦＲ１；
配列番号２３と少なくとも８０％同一であるＨＣ－ＦＲ２；
配列番号２４と少なくとも８０％同一であるＨＣ－ＦＲ３；
配列番号２５と少なくとも８０％同一であるＨＣ－ＦＲ４；
配列番号２６と少なくとも８０％同一であるＬＣ－ＦＲ１；
配列番号２７と少なくとも８０％同一であるＬＣ－ＦＲ２；
配列番号２８と少なくとも８０％同一であるＬＣ－ＦＲ３；および
配列番号２９と少なくとも８０％同一であるＬＣ－ＦＲ４
の１つ以上を含む、請求項１に記載の抗体。

【請求項3】

抗体が、
配列番号２２のアミノ酸配列を有するＨＣ－ＦＲ１；
配列番号２３のアミノ酸配列を有するＨＣ－ＦＲ２；
配列番号２４のアミノ酸配列を有するＨＣ－ＦＲ３；
配列番号２５のアミノ酸配列を有するＨＣ－ＦＲ４；
配列番号２６のアミノ酸配列を有するＬＣ－ＦＲ１；
配列番号２７のアミノ酸配列を有するＬＣ－ＦＲ２；
配列番号２８と少なくとも８０％同一であるＬＣ－ＦＲ３；および
配列番号２９と少なくとも８０％同一であるＬＣ－ＦＲ４
を含む、請求項１に記載の抗体。

【請求項4】

抗体が、
配列番号２２のアミノ酸配列を有するＨＣ－ＦＲ１；
配列番号２３のアミノ酸配列を有するＨＣ－ＦＲ２；
配列番号２４のアミノ酸配列を有するＨＣ－ＦＲ３；
配列番号２５のアミノ酸配列を有するＨＣ－ＦＲ４；
配列番号２６のアミノ酸配列を有するＬＣ－ＦＲ１；
配列番号２７のアミノ酸配列を有するＬＣ－ＦＲ２；
配列番号２８と少なくとも８０％同一であるＬＣ－ＦＲ３；および
配列番号２９と少なくとも８０％同一であるＬＣ－ＦＲ４
の１つ以上を含む、請求項１に記載の抗体。

【請求項5】

抗体がＣＸＣＬ１６への結合についてＣＸＣＲ６（配列番号２１）と競合する、請求項１または２に記載の抗体。

【請求項6】

抗体が、
配列番号１２のいずれか１つのＨＣＤＲ１、またはその配列に対して１、２、３、４、もしくは５個のアミノ酸が置換されているそのバリアント；
配列番号１３のいずれか１つのＨＣＤＲ２、または前記配列に対して１、２、３、４、もしくは５個のアミノ酸が置換されているそのバリアント；および
配列番号１４のいずれか１つのＨＣＤＲ３、または前記配列に対して１、２、３、４、もしくは５個のアミノ酸が置換されているそのバリアント
を含む重鎖可変領域、ならびに
配列番号１５のいずれか１つのＬＣＤＲ１、または前記配列に対して１、２、３、４、もしくは５個のアミノ酸が置換されているそのバリアント；
配列番号１６のいずれか１つのＬＣＤＲ２、または前記配列に対して１、２、もしくは３個のアミノ酸が置換されているそのバリアント；および
配列番号１７のいずれか１つのＬＣＤＲ３、または前記配列に対して１、２、３、４、もしくは５個のアミノ酸が置換されているそのバリアント
を含む軽鎖可変領域
を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の抗体。

【請求項7】

配列番号１２～１７の６つのＣＤＲ全てを含む、請求項１または６に記載の抗体。

【請求項8】

抗体が、配列番号１～５のいずれか１つのＶ_Ｈアミノ酸配列、または前記Ｖ_Ｈアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、もしくは少なくとも９５％の同一性を有するアミノ配列を含むＶＨ領域を含む、ならびに／または
抗体が、配列番号６～１０のいずれか１つのＶ_Ｌアミノ酸配列を含む；および前記Ｖ_Ｌアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、もしくは少なくとも９５％の同一性を有するアミノ配列を含む、Ｖ_Ｌ領域を含む、
請求項１または７に記載の抗体。

【請求項9】

抗体が、ＨＣ４ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ２、ＨＣ５ＬＣ３、およびＨＣ５ＬＣ５からなる群より選択される抗体のＶ_Ｈ、またはそれらのバリアントを含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の抗体。

【請求項10】

抗体が、ＨＣ４ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ２、ＨＣ５ＬＣ３、およびＨＣ５ＬＣ５からなる群より選択される抗体のＶ_Ｌを含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体。

【請求項11】

抗体が、ＨＣ４ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ２、ＨＣ５ＬＣ３、およびＨＣ５ＬＣ５からなる群より選択される抗体のＶ_ＨとＶ_Ｌの両方を含む、請求項１～１０のいずれか一項に記載の抗体。

【請求項12】

置換の少なくとも１つまたは２つが保存的置換である；置換の少なくとも５０％が保存的置換である；または置換の全てが保存的置換である、請求項６に記載の抗体。

【請求項13】

請求項１～１２のいずれか一項に記載の単離された抗体または抗体フラグメント。

【請求項14】

抗体が、ヒト化抗体、キメラ抗体、多重特異性抗体、二重特異性抗体、ｓｃＦｖ、またはＦａｂである、請求項１～１３のいずれか一項に記載の抗体。

【請求項15】

請求項１～１４のいずれか一項に記載の抗体と結合について競合する抗体。

【請求項16】

配列番号１～５のいずれか１つのＶ_Ｈアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ領域および／もしくは配列番号６～１０のいずれか１つのＶ_Ｌアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ領域を含む抗体、または前記Ｖ_Ｈアミノ酸配列と少なくとも７０％の同一性を有するＶ_Ｈ領域および前記Ｖ_Ｌアミノ酸配列と少なくとも７０％の同一性を有するＶ_Ｌ領域を含む抗体であって、対応するＶ_ＨもしくはＶ_Ｌ領域への変化がフレームワーク領域のみに存在する抗体。

【請求項17】

抗体のＶ_Ｌ領域のＦＷ領域が、対応する抗体のいずれか１つのＶ_Ｌ領域に存在するＦＷ領域と少なくとも８０％同一である、請求項７に記載の抗体。

【請求項18】

請求項１～１６のいずれか一項に記載の抗体と、細胞傷害性薬剤とを含む免疫複合体。

【請求項19】

（１）配列番号１～５のいずれか１つのＶ_Ｈアミノ酸配列に対して少なくとも７０％のアミノ酸配列同一性を有するＶＨ配列、および／または配列番号６～１０のいずれか１つのＶ_Ｌアミノ酸配列に対して少なくとも７０％のアミノ酸配列同一性を有するＶ_Ｌ配列を含むポリペプチド。

【請求項20】

請求項１９記載のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。

【請求項21】

請求項１～２０のいずれか一項に記載の抗体のＶ_Ｈ領域および／またはＶ_Ｌ領域をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクター。

【請求項22】

請求項２１に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。

【請求項23】

請求項１～１７のいずれか一項に記載の抗体のＶ_Ｈ領域および／またはＶ_Ｌ領域をコードするポリヌクレオチドを含む宿主細胞。

【請求項24】

請求項１～１７のいずれか一項に記載の抗体または請求項１８に記載の免疫複合体と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。

【請求項25】

免疫応答を誘導する、および／またはがんを治療する方法であって、請求項１～１７のいずれか一項に記載の抗体、または請求項２４に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。

【請求項26】

腫瘍転移を阻害する方法であって、請求項１～１７のいずれか一項に記載の抗体または請求項２４に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。

【請求項27】

腫瘍転移が骨転移である、請求項２６に記載の腫瘍転移を阻害する方法。

【請求項28】

抗体が静脈内投与される、請求項２５記載の方法。

【請求項29】

ＣＸＣＬ１６に結合する抗体によって結合され得る腫瘍組織を有するがん患者を治療する方法であって、請求項１～１７のいずれか一項に記載の抗体を患者に投与することを含む、方法。

【請求項30】

がんが甲状腺がんまたは乳がんである、請求項２５～２９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項31】

乳がんがトリプルネガティブ乳がんである、請求項３０に記載の方法。

【請求項32】

抗体が静脈内投与される、請求項２５～３０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項33】

化学療法および／または放射線療法を施すことをさらに含む、請求項２５～３２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項34】

化学療法を施すことが、パクリタキセルを投与することを含む、請求項３３に記載の方法。

【請求項35】

免疫学的チェックポイント抗原を標的とする薬剤を投与することをさらに含む、請求項２５～３４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項36】

薬剤がモノクローナル抗体である、請求項３５に記載の方法。

【請求項37】

モノクローナル抗体がＰＤ－１リガンドのＰＤ－１への結合を阻害する、請求項３６に記載の方法。

【請求項38】

モノクローナル抗体が抗ＰＤ－１抗体である、請求項３７に記載の方法。

【請求項39】

ＣＸＣＬ１６に結合する抗体による治療に適した腫瘍を有する患者を同定する方法であって、患者からの腫瘍サンプルを請求項１～１７のいずれか一項に記載の抗体と接触させること、および腫瘍サンプルへの抗体の結合を検出することを含み、結合の検出がＣＸＣＬ１６に結合する抗体による治療に適した腫瘍を有する患者を指し示す、方法。

【請求項40】

抗体を生成する方法であって、重鎖をコードするポリヌクレオチドおよび軽鎖をコードするポリヌクレオチドが発現する条件下で、請求項２２または２３に記載の宿主細胞を培養することを含む、方法。

【請求項41】

腫瘍標的活性を有する抗体を同定する方法であって、請求項１～１７のいずれか一項に記載の抗体のＶ_ＨまたはＶ_Ｌ ＣＤＲ３をコードするポリヌクレオチドに変異を誘発すること、変異を誘発されたＶ_ＨまたはＶ_Ｌ ＣＤＲ３を含む抗体を発現させること；ならびにｉｎ ｖｉｖｏで腫瘍増殖を阻害する、または腫瘍サイズ、腫瘍浸潤、および／もしくは転移を減少させる抗体を選択することを含む、方法。

【請求項42】

がんを治療する方法のための、請求項１～１７のいずれか一項に記載の抗体の使用。

【請求項43】

がんがＣＸＣＬ１６発現の増加に関連している、請求項４２に記載の抗体の使用。

【請求項44】

がんが、乳がん、甲状腺がん、子宮頸がん、肺がん、膵臓がん、非小細胞肺がん、肝臓がん、結腸がん、結腸直腸がん、骨がん、皮膚がん、頭部がん、子宮頸がん、皮膚黒色腫、眼内黒色腫、子宮がん、卵巣がん、直腸がん、肝臓がん、脳腫瘍、膀胱がん、血液がん、胃がん、肛門周囲がん、乳がん、卵管がん、子宮内膜がん、膣がん、外陰がん、ホジキン病、食道がん、小腸がん、内分泌腺がん、甲状腺がん、副甲状腺がん、副腎がん、軟部肉腫、尿道がん、陰茎がん、前立腺がん、膀胱がん、腎臓がん、尿管がん、腎細胞がん、腎盂がん、ＣＮＳ中枢神経系腫瘍、原発性ＣＮＳリンパ腫、脊髄腫瘍、または脳幹神経膠腫である、請求項４２に記載の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願に対する相互参照
本出願は、２０２１年１１月２５日に韓国知的財産庁に出願された韓国特許出願第１０－２０２１－０１６４７２３号に対する優先権を主張する。前記出願の全内容は、あらゆる目的のために参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

分野
本発明は、がんを治療するために使用される治療用抗体に関する。

【背景技術】

【0003】

背景
がんは現在、世界中で最も多くの死亡者数を引き起こしている疾患の一つであり、がん発症年齢は徐々に低下し、平均寿命は徐々に延びているため、がん罹患率はさらに増加すると予想されている。がんは、遺伝的および環境的な因子によって異常な細胞分裂が起こると発症する。

【0004】

甲状腺未分化がんは、高分化型の甲状腺乳頭がんまたは濾胞性甲状腺がんとは異なり、増殖が早く、局所再発が多いために致死的な疾患であり、５年生存率は１．０％から７．１％である。平均生存期間は４カ月から１２カ月であることが知られている。どの治療も満足のいく結果を示していない。これまで、様々な治療法が試みられてきたが、それらは臨床転帰および予後に満足のいく結果を示していない。それが発生するのは非常にまれで、甲状腺がん全体に占める割合は通常５％から１０％以下であることが知られている。甲状腺未分化がんの増殖は短期間に急速に起こるため、診断時には、腫瘍が大きいだけでなく、局所浸潤および遠隔転移も重度で、外科的治療が不可能なケースが多い。したがって、甲状腺未分化がんの治療には、単一の治療法ではなく、多様式のアプローチが必要とされる。

【0005】

トリプルネガティブネガティブ乳がん（ＴＮＢＣ）には、乳がんによく見られる受容体を持たない。それはエストロゲン受容体またはプロゲステロン受容体を発現せず、ＨＥＲ２陰性（ＥＲ－／ＰＲ－／ＨＥＲ２－）である。ＴＮＢＣは、タキソール、タモキシフェン、および抗ＨＥＲ２受容体抗体（トラスツズマブ）など、数多くの従来的な乳がん治療剤に対する耐性を示す。トリプルネガティブ乳がんは、若年層において発生し、閉経前年齢でより一般的であり、局所再発率および遠隔再発率が高く、リンパ節転移よりも血行性転移の可能性が高く、他のタイプよりも核および組織悪性度が高く、そして腫瘍サイズが大きい。これらの特徴は全て、予後不良に関連している。しかしながら、トリプルネガティブ乳がんには、他の乳がんに比べて有効な分子標的療法または抗がん剤がまだ存在せず、そのため、様々な腫瘍生物学的調査を行う必要がある。

【0006】

最近の研究により、特定の標的を有する抗がん剤は、標的を持たない抗がん剤に比べて耐性（獲得耐性）が生じやすいことが報告されている。抗がん剤に対する獲得耐性を防ぎ、抗がん剤の効果を最大限に高めるために、獲得耐性を誘導する因子を阻害する薬剤との併用療法が登場している。また、標的抗がん剤の適用範囲はしばしば限定的であり、他の因子の阻害剤と同時投与することで適用範囲を拡大することも可能である。また、そのような併用投与により、抗がん剤への耐性が示された場合だけでなく、有効性が示された場合においても、抗がん剤の効果を増強して抗がん剤の投与量を低減することが可能である。これにより、身体の各臓器に対する抗がん剤の毒性および／または副作用を最小限に抑えながら、抗がん剤の効果を高めることが可能とである。

【発明の概要】

【0007】

簡単な概要
本出願は、がん治療のためのＣＸＣＬ１６抗体を開示する。いくつかの実施形態において、本明細書に開示のＣＸＣＬ１６抗体は、がん、例えば、甲状腺がん、乳がん、および前立腺がんの増殖を阻害し得る。また、がん治療のためのＣＸＣＬ１６抗体と標的化抗がん剤および／または免疫チェックポイント阻害剤との組み合せについても記載される。

【0008】

１つの態様において、本明細書で提供されるものは、配列番号１２またはその配列に対して１、２、３、４、もしくは５個のアミノ酸が置換されているそのバリアントのいずれか１つにおけるＨＣＤＲ１；配列番号１３またはその配列に対して１、２、３、４、もしくは５個のアミノ酸が置換されているそのバリアントのいずれか１つにおけるＨＣＤＲ２；ならびに、配列番号１４またはその配列に対して１、２、３、４、もしくは５個のアミノ酸が置換されているそのバリアントのいずれか１つにおけるＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；配列番号１５またはその配列に対して１、２、３、４、もしくは５個のアミノ酸が置換されているそのバリアントのいずれか１つにおけるＬＣＤＲ１；配列番号１６またはその配列に対して１、２、もしくは３個のアミノ酸が置換されているそのバリアントのいずれか１つにおけるＬＣＤＲ２；ならびに、配列番号１７またはその配列に対して１、２、３、４、もしくは５個のアミノ酸が置換されているそのバリアントのいずれか１つにおけるＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、ＣＸＣＬ１６に結合する抗体である。

【0009】

いくつかの実施形態において、抗体は、以下の１つ以上を含む：配列番号２２と少なくとも８０％同一であるＨＣ－ＦＲ１；配列番号２３と少なくとも８０％同一であるＨＣ－ＦＲ２；配列番号２４と少なくとも８０％同一であるＨＣ－ＦＲ３；配列番号２５と少なくとも８０％同一であるＨＣ－ＦＲ４；配列番号２６と少なくとも８０％同一であるＬＣ－ＦＲ１；配列番号２７と少なくとも８０％同一であるＬＣ－ＦＲ２；配列番号２８と少なくとも８０％同一であるＬＣ－ＦＲ３；および配列番号２９と少なくとも８０％同一であるＬＣ－ＦＲ４。

【0010】

いくつかの実施形態において、抗体は以下を含む：配列番号２２のアミノ酸配列を有するＨＣ－ＦＲ１；配列番号２３のアミノ酸配列を有するＨＣ－ＦＲ２；配列番号２４のアミノ酸配列を有するＨＣ－ＦＲ３；配列番号２５のアミノ酸配列を有するＨＣ－ＦＲ４；配列番号２６のアミノ酸配列を有するＬＣ－ＦＲ１；配列番号２７のアミノ酸配列を有するＬＣ－ＦＲ２；配列番号２８と少なくとも８０％同一であるＬＣ－ＦＲ３；および配列番号２９と少なくとも８０％同一であるＬＣ－ＦＲ４。

【0011】

いくつかの実施形態では、抗体は以下の１つ以上を含む：配列番号２２のアミノ酸配列を有するＨＣ－ＦＲ１；配列番号２３のアミノ酸配列を有するＨＣ－ＦＲ２；配列番号２４のアミノ酸配列を有するＨＣ－ＦＲ３；配列番号２５のアミノ酸配列を有するＨＣ－ＦＲ４；配列番号２６のアミノ酸配列を有するＬＣ－ＦＲ１；配列番号２７のアミノ酸配列を有するＬＣ－ＦＲ２；配列番号２８と少なくとも８０％同一であるＬＣ－ＦＲ３；および配列番号２９と少なくとも８０％同一であるＬＣ－ＦＲ４。いくつかの実施形態において、抗体は、ＣＸＣＬ１６への結合についてＣＸＣＲ６（配列番号２１）と競合する。

【0012】

いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１２またはその配列に対して１、２、３、４、もしくは５個のアミノ酸が置換されているそのバリアントのいずれか１つにおけるＨＣＤＲ１；配列番号１３またはその配列に対して１、２、３、４、もしくは５個のアミノ酸が置換されているそのバリアントのいずれか１つにおけるＨＣＤＲ２；ならびに、配列番号１４またはその配列に対して１、２、３、４、もしくは５個のアミノ酸が置換されているそのバリアントのいずれか１つにおけるＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；配列番号１５またはその配列に対して１、２、３、４、もしくは５個のアミノ酸が置換されているそのバリアントのいずれか１つにおけるＬＣＤＲ１；配列番号１６またはその配列に対して１、２、もしくは３個のアミノ酸が置換されているそのバリアントのいずれか１つにおけるＬＣＤＲ２；ならびに、配列番号１７またはその配列に対して１、２、３、４、もしくは５個のアミノ酸が置換されているそのバリアントのいずれか１つにおけるＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む。

【0013】

いくつかの実施形態では、抗体は配列番号１２～１７の６つのＣＤＲ全てを含む。

【0014】

いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１～５のいずれか１つのＶＨアミノ酸配列、またはそのＶＨアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、もしくは少なくとも９５％の同一性を有するアミノ配列を含む、ＶＨ領域を含み、ならびに／または、抗体は、配列番号６～１０のいずれか１つのＶＬアミノ酸配列、およびそのＶＬアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％の同一性を有するアミノ配列を含む、ＶＬ領域を含む。

【0015】

いくつかの実施形態では、抗体は、ＨＣ４ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ２、ＨＣ５ＬＣ３、およびＨＣ５ＬＣ５からなる群より選択される抗体またはそのバリアントのＶＨを含む。

【0016】

いくつかの実施形態では、抗体は、ＨＣ４ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ２、ＨＣ５ＬＣ３、およびＨＣ５ＬＣ５からなる群より選択される抗体のＶＬを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＨＣ４ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ２、ＨＣ５ＬＣ３、およびＨＣ５ＬＣ５からなる群より選択される抗体のＶＨおよびＶＬの両方を含む。

【0017】

いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号４２の重鎖および配列番号４３の軽鎖を含む。

【0018】

いくつかの実施形態では、置換の少なくとも１つまたは２つが保存的置換であるか；置換の少なくとも５０％が保存的置換であるか；または置換の全てが保存的置換である。

【0019】

別の態様では、本明細書において提供されるものは、本明細書に開示の単離された抗体または抗体フラグメントである。

【0020】

いくつかの実施形態では、抗体はヒト化抗体、キメラ抗体、多重特異性抗体、二重特異性抗体、ｓｃＦｖ、またはＦａｂである。いくつかの実施形態では、ＣＸＣＬ１６抗体はヒト化抗体であり、ヒトＩｇＧ１アイソタイプ定常ドメイン、配列番号４８を含む。いくつかの実施形態において、ヒト化ＣＸＣＬ１６抗体は、配列番号４９を含む。

【0021】

いくつかの実施形態では、抗体は、本明細書に開示のＣＸＣＬ１６抗体との結合について競合する。

【0022】

いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１～５のいずれか１つのＶＨアミノ酸配列を含むＶＨ領域および／もしくは配列番号６～１０のいずれか１つのＶＬアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む抗体、または前記ＶＨアミノ酸配列と少なくとも７０％の同一性を有するＶＨ領域および前記ＶＬアミノ酸配列と少なくとも７０％の同一性を有するＶＬ領域を含み、対応するＶＨもしくはＶＬ領域への変化はフレームワーク領域のみに存在する。

【0023】

いくつかの実施形態では、抗体のＶＬ領域のＦＷ領域は、対応する抗体のいずれか１つのＶＬ領域に存在するＦＷ領域と少なくとも８０％同一である。

【0024】

別の態様において、本明細書において提供されるものは、抗体および細胞傷害性薬剤を含む免疫複合体である。

【0025】

別の態様において、本明細書において提供されるものは、（１）配列番号１～５のいずれか１つのＶＨアミノ酸配列に対して少なくとも７０％のアミノ酸配列同一性を有するＶＨ配列、および／または配列番号６～１０のいずれか１つのＶＬアミノ酸配列に対して少なくとも７０％のアミノ酸配列同一性を有するＶＬ配列を含むポリペプチドである。

【0026】

別の態様において、本明細書において提供されるものは、上記において開示のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。

【0027】

別の態様において、本明細書において提供されるものは、上記において開示の抗体のＶＨ領域および／またはＶＬ領域をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターである。

【0028】

別の態様において、本明細書において提供されるものは、実施例２０の発現ベクターを含む宿主細胞である。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、上記において開示の抗体のＶＨ領域および／またはＶＬ領域をコードするポリヌクレオチドを含む。

【0029】

別の態様において、本明細書で提供されるものは、（ｉ）上記において開の抗体またはその抗体の免疫抱合体と、（ｉｉ）薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物である。

【0030】

別の態様において、本明細書で提供されるものは、上記において開示の抗体または医薬組成物を投与することを含む、免疫応答を誘導する方法および／またはがんを治療する方法である。

【0031】

別の態様において、本明細書で提供されるものは、上記において開示の抗体または医薬組成物を投与することを含む、腫瘍転移を阻害する方法である。いくつかの実施形態では、腫瘍転移が骨転移である、腫瘍転移を阻害する方法である。いくつかの実施形態では、抗体は静脈内投与される。

【0032】

別の態様において、本明細書で提供されるものは、ＣＸＣＬ１６に結合する抗体によって結合され得る腫瘍組織を有するがん患者を治療する方法であって、上記において開示の抗体を患者に投与することを含む、方法である。いくつかの実施形態では、がんは甲状腺がんまたは乳がんである。いくつかの実施形態では、乳がんはトリプルネガティブ乳がんである。いくつかの実施形態では、抗体は静脈内投与される。

【0033】

いくつかの実施形態では、本方法は、化学療法および／または放射線療法を施すことをさらに含む。いくつかの実施形態において、化学療法はパクリタキセルである。いくつかの実施形態では、本方法は、免疫学的チェックポイント抗原を標的とする薬剤を投与することをさらに含む。

【0034】

いくつかの実施形態では、薬剤はモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、モノクローナル抗体はＰＤ－１へのＰＤ－１リガンド結合を阻害する。いくつかの実施形態では、モノクローナル抗体は抗ＰＤ－１抗体である。

【0035】

さらに別の態様において、本明細書で提供されるものは、ＣＸＣＬ１６に結合する抗体による治療に適した腫瘍を有する患者を同定する方法であって、患者からの腫瘍サンプルを上記において開示の抗体と接触させること、および腫瘍サンプルへの抗体の結合を検出することを含み、結合の検出がＣＸＣＬ１６に結合する抗体による治療に適した腫瘍を有する患者を指し示す、方法である。

【0036】

さらに別の態様において、本明細書で提供されるものは、抗体を生成する方法であって、重鎖をコードするポリヌクレオチドおよび軽鎖をコードするポリヌクレオチドが発現する条件下で、上記において開示の宿主細胞を培養することを含む、方法である。

【0037】

さらに別の態様において、本明細書で提供されるものは、腫瘍標的活性を有する抗体を同定する方法であって、上記において開示の抗体のＶＨまたはＶＬ ＣＤＲ３をコードするポリヌクレオチドに変異を誘発すること、変異を誘発されたＶＨまたはＶＬ ＣＤＲ３を含む抗体を発現させること；ならびにｉｎ ｖｉｖｏで腫瘍増殖を阻害する、または腫瘍サイズ、腫瘍浸潤、および／もしくは転移を減少させる抗体を選択することを含む、方法である。

【0038】

さらに別の態様において、本明細書で提供されるものは、がんを治療する方法のための、上記において開示の抗体の使用である。いくつかの実施形態において、がんはＣＸＣＬ１６発現の増加と関連している。いくつかの実施形態において、がんは、乳がん、甲状腺がん、子宮頸がん、肺がん、膵臓がん、非小細胞肺がん、肝臓がん、結腸がん、結腸直腸がん、骨がん、皮膚がん、頭部がん、子宮頸がん、皮膚黒色腫、眼内黒色腫、子宮がん、卵巣がん、直腸がん、肝臓がん、脳腫瘍、膀胱がん、血液がん、胃がん、肛門周囲がん、乳がん、卵管がん、子宮内膜がん、膣がん、外陰がん、ホジキン病、食道がん、小腸がん、内分泌腺がん、甲状腺がん、副甲状腺がん、副腎がん、軟部肉腫、尿道がん、陰茎がん、前立腺がん、膀胱がん、腎臓がん、尿管がん、腎細胞がん、腎盂がん、ＣＮＳ中枢神経系腫瘍、原発性ＣＮＳリンパ腫、脊髄腫瘍、または脳幹神経膠腫である。

【0039】

図面の簡単な説明

【図面の簡単な説明】

【0040】

【図1A】図１Ａおよび１Ｂは、ヒトＣＸＣＬ１６（図１Ａ）とマウスＣＸＣＬ１６（図１Ｂ）に対するヒト化ＣＸＣＬ１６抗体（ＨＣ４ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ２、およびＨＣ５ＬＣ５）の結合の結果を示している。

【図1B】図１Ａおよび１Ｂは、ヒトＣＸＣＬ１６（図１Ａ）とマウスＣＸＣＬ１６（図１Ｂ）に対するヒト化ＣＸＣＬ１６抗体（ＨＣ４ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ２、およびＨＣ５ＬＣ５）の結合の結果を示している。

【図2A】図２Ａ、２Ｂ、２Ｃ、および２Ｄは、がん細胞の走化性と遊走性の解析におけるヒト化ＣＸＣＬ１６抗体（ＨＣ４ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ２、およびＨＣ５ＬＣ５）の効果の結果を示している。がん細胞の走化性および移動を阻害するヒト化ＣＸＣＬ１６抗体の能力をいくつかの細胞株で評価した：ＣＸＣＲ６過剰発現ＣＨＯ－Ｋ１細胞（図２Ａ）、甲状腺がん細胞株ＢＨＰ１０－３Ｍ（図２Ｂ）、乳がん細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－２３１（図２Ｃ）、および単球細胞株ＴＨＰ－１（図２Ｄ）。

【図2B】図２Ａ、２Ｂ、２Ｃ、および２Ｄは、がん細胞の走化性と遊走性の解析におけるヒト化ＣＸＣＬ１６抗体（ＨＣ４ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ２、およびＨＣ５ＬＣ５）の効果の結果を示している。がん細胞の走化性および移動を阻害するヒト化ＣＸＣＬ１６抗体の能力をいくつかの細胞株で評価した：ＣＸＣＲ６過剰発現ＣＨＯ－Ｋ１細胞（図２Ａ）、甲状腺がん細胞株ＢＨＰ１０－３Ｍ（図２Ｂ）、乳がん細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－２３１（図２Ｃ）、および単球細胞株ＴＨＰ－１（図２Ｄ）。

【図2C】図２Ａ、２Ｂ、２Ｃ、および２Ｄは、がん細胞の走化性と遊走性の解析におけるヒト化ＣＸＣＬ１６抗体（ＨＣ４ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ２、およびＨＣ５ＬＣ５）の効果の結果を示している。がん細胞の走化性および移動を阻害するヒト化ＣＸＣＬ１６抗体の能力をいくつかの細胞株で評価した：ＣＸＣＲ６過剰発現ＣＨＯ－Ｋ１細胞（図２Ａ）、甲状腺がん細胞株ＢＨＰ１０－３Ｍ（図２Ｂ）、乳がん細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－２３１（図２Ｃ）、および単球細胞株ＴＨＰ－１（図２Ｄ）。

【図2D】図２Ａ、２Ｂ、２Ｃ、および２Ｄは、がん細胞の走化性と遊走性の解析におけるヒト化ＣＸＣＬ１６抗体（ＨＣ４ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ２、およびＨＣ５ＬＣ５）の効果の結果を示している。がん細胞の走化性および移動を阻害するヒト化ＣＸＣＬ１６抗体の能力をいくつかの細胞株で評価した：ＣＸＣＲ６過剰発現ＣＨＯ－Ｋ１細胞（図２Ａ）、甲状腺がん細胞株ＢＨＰ１０－３Ｍ（図２Ｂ）、乳がん細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－２３１（図２Ｃ）、および単球細胞株ＴＨＰ－１（図２Ｄ）。

【図3A】図３Ａ、３Ｂ、３Ｃ、および３Ｄは、Ａｋｔ活性化に対するヒト化ＣＸＣＬ１６抗体（ＨＣ４ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ２、およびＨＣ５ＬＣ５）の効果の結果を示している。がん細胞におけるＣＬ１６誘導性のＡｋｔ活性化を阻害するヒト化ＣＸＣＬ１６抗体の能力をいくつかの細胞株で評価した：ＣＸＣＲ６過剰発現ＣＨＯ－Ｋ１細胞（図３Ａ）、甲状腺がん細胞株ＢＨＰ１０－３Ｍ（図３Ｂ）、乳がん細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－１５７（図３Ｃ）、および前立腺がん細胞株ＰＣ３（図３Ｄ）。

【図3B】図３Ａ、３Ｂ、３Ｃ、および３Ｄは、Ａｋｔ活性化に対するヒト化ＣＸＣＬ１６抗体（ＨＣ４ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ２、およびＨＣ５ＬＣ５）の効果の結果を示している。がん細胞におけるＣＬ１６誘導性のＡｋｔ活性化を阻害するヒト化ＣＸＣＬ１６抗体の能力をいくつかの細胞株で評価した：ＣＸＣＲ６過剰発現ＣＨＯ－Ｋ１細胞（図３Ａ）、甲状腺がん細胞株ＢＨＰ１０－３Ｍ（図３Ｂ）、乳がん細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－１５７（図３Ｃ）、および前立腺がん細胞株ＰＣ３（図３Ｄ）。

【図3C】図３Ａ、３Ｂ、３Ｃ、および３Ｄは、Ａｋｔ活性化に対するヒト化ＣＸＣＬ１６抗体（ＨＣ４ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ２、およびＨＣ５ＬＣ５）の効果の結果を示している。がん細胞におけるＣＬ１６誘導性のＡｋｔ活性化を阻害するヒト化ＣＸＣＬ１６抗体の能力をいくつかの細胞株で評価した：ＣＸＣＲ６過剰発現ＣＨＯ－Ｋ１細胞（図３Ａ）、甲状腺がん細胞株ＢＨＰ１０－３Ｍ（図３Ｂ）、乳がん細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－１５７（図３Ｃ）、および前立腺がん細胞株ＰＣ３（図３Ｄ）。

【図3D】図３Ａ、３Ｂ、３Ｃ、および３Ｄは、Ａｋｔ活性化に対するヒト化ＣＸＣＬ１６抗体（ＨＣ４ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ２、およびＨＣ５ＬＣ５）の効果の結果を示している。がん細胞におけるＣＬ１６誘導性のＡｋｔ活性化を阻害するヒト化ＣＸＣＬ１６抗体の能力をいくつかの細胞株で評価した：ＣＸＣＲ６過剰発現ＣＨＯ－Ｋ１細胞（図３Ａ）、甲状腺がん細胞株ＢＨＰ１０－３Ｍ（図３Ｂ）、乳がん細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－１５７（図３Ｃ）、および前立腺がん細胞株ＰＣ３（図３Ｄ）。

【図4A】図４Ａおよび４Ｂは、トリプルネガティブ乳がん細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－２３１由来の腫瘍を有するマウスにおける腫瘍増殖（図４Ａ）または腫瘍重量（図４Ｂ）の結果を示している。これらのマウスは、抗マウスＣＸＣＬ１６抗体単独、または抗マウスＣＸＣＬ１６抗体とパクリタキセル（ＰＴＸ）の組み合わせのいずれかで処置した。結果は、抗マウスＣＸＣＬ１６抗体が乳がんマウスモデルにおいて腫瘍の体積と重量を有意に減少させたことを示している。

【図4B】図４Ａおよび４Ｂは、トリプルネガティブ乳がん細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－２３１由来の腫瘍を有するマウスにおける腫瘍増殖（図４Ａ）または腫瘍重量（図４Ｂ）の結果を示している。これらのマウスは、抗マウスＣＸＣＬ１６抗体単独、または抗マウスＣＸＣＬ１６抗体とパクリタキセル（ＰＴＸ）の組み合わせのいずれかで処置した。結果は、抗マウスＣＸＣＬ１６抗体が乳がんマウスモデルにおいて腫瘍の体積と重量を有意に減少させたことを示している。

【図5】図５は、レンバチニブ（標的抗がん剤）と抗マウスＣＸＣＬ１６抗体の併用療法によって処置した甲状腺がんを有するマウスにおける腫瘍増殖を示している。結果は、レンバチニブと抗マウスＣＸＣＬ１６抗体の併用療法が、甲状腺がんマウスモデルにおいて腫瘍体積を有意に低減させたことを示している。

【図6】図６は、レンバチニブ（標的抗がん剤）、ＰＤ－Ｌ１阻害剤（免疫チェックポイント阻害剤）、および抗マウスＣＸＣＬ１６抗体の併用療法によって処置した甲状腺がんを有するマウスにおける腫瘍増殖を示している。

【図7】図７は、パクリタキセル、ＰＤ－Ｌ１阻害剤（免疫チェックポイント阻害剤）、抗マウスＣＸＣＬ１６抗体の併用療法によって処置した乳がんを有するマウスにおける腫瘍増殖を示している。

【図8A】図８Ａは、骨の転移ニッチに似せた２チャンバー系を示している。

【図8B】図８Ｂは、ＣＤ１１ｂ＋細胞の遊走に対するＣＸＣＬ１６抗体（ＨＣ４ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ２、およびＨＣ５ＬＣ５）の効果を示している。

【図9A】図９Ａ、９Ｂ、および９Ｃは、ゾレンドロン酸（ＺＡ）耐性骨転移の骨髄血清において、より高い濃度のＣＸＣＬ１６が検出されたことを示している。図９Ａは、５週目および７週目の脛骨における骨腫瘍の生物発光画像（ＢＬＩ）を示している。図９Ｂは、骨転移のＺＡ－Ｒモデルの開発を示した概略図である。図９Ｃは、骨髄血清中のＣＸＣＬ１６濃度を指し示しているデータである。

【図9B】図９Ａ、９Ｂ、および９Ｃは、ゾレンドロン酸（ＺＡ）耐性骨転移の骨髄血清において、より高い濃度のＣＸＣＬ１６が検出されたことを示している。図９Ａは、５週目および７週目の脛骨における骨腫瘍の生物発光画像（ＢＬＩ）を示している。図９Ｂは、骨転移のＺＡ－Ｒモデルの開発を示した概略図である。図９Ｃは、骨髄血清中のＣＸＣＬ１６濃度を指し示しているデータである。

【図9C】図９Ａ、９Ｂ、および９Ｃは、ゾレンドロン酸（ＺＡ）耐性骨転移の骨髄血清において、より高い濃度のＣＸＣＬ１６が検出されたことを示している。図９Ａは、５週目および７週目の脛骨における骨腫瘍の生物発光画像（ＢＬＩ）を示している。図９Ｂは、骨転移のＺＡ－Ｒモデルの開発を示した概略図である。図９Ｃは、骨髄血清中のＣＸＣＬ１６濃度を指し示しているデータである。

【図10A】図１０Ａ、１０Ｂ、および１０Ｃは、抗ＣＸＣＬ１６抗体が骨転移の腫瘍増殖を低減させたことを示している。図１０Ａは、実験計画を示している。図１０Ｂは、骨転移の程度を指し示す代表的なＢＬＩを示している。図１０Ｃは、生物発光（ＢＬＩ）の結果を表すドットプロットを含んでいる。

【図10B】図１０Ａ、１０Ｂ、および１０Ｃは、抗ＣＸＣＬ１６抗体が骨転移の腫瘍増殖を低減させたことを示している。図１０Ａは、実験計画を示している。図１０Ｂは、骨転移の程度を指し示す代表的なＢＬＩを示している。図１０Ｃは、生物発光（ＢＬＩ）の結果を表すドットプロットを含んでいる。

【図10C】図１０Ａ、１０Ｂ、および１０Ｃは、抗ＣＸＣＬ１６抗体が骨転移の腫瘍増殖を低減させたことを示している。図１０Ａは、実験計画を示している。図１０Ｂは、骨転移の程度を指し示す代表的なＢＬＩを示している。図１０Ｃは、生物発光（ＢＬＩ）の結果を表すドットプロットを含んでいる。

【図11A】図１１Ａ、１１Ｂおよび１１Ｃは、抗ＣＸＣＬ１６抗体による処置が、ＺＡ耐性骨転移の腫瘍増殖を低減させた結果を示している。図１１Ａは、実験計画を示している。図１１Ｂは、骨転移の程度を指し示す代表的なＢＬＩを示している。図１１Ｃは、生物発光（ＢＬＩ）の結果を表すドットプロットを含んでいる。

【図11B】図１１Ａ、１１Ｂおよび１１Ｃは、抗ＣＸＣＬ１６抗体による処置が、ＺＡ耐性骨転移の腫瘍増殖を低減させた結果を示している。図１１Ａは、実験計画を示している。図１１Ｂは、骨転移の程度を指し示す代表的なＢＬＩを示している。図１１Ｃは、生物発光（ＢＬＩ）の結果を表すドットプロットを含んでいる。

【図11C】図１１Ａ、１１Ｂおよび１１Ｃは、抗ＣＸＣＬ１６抗体による処置が、ＺＡ耐性骨転移の腫瘍増殖を低減させた結果を示している。図１１Ａは、実験計画を示している。図１１Ｂは、骨転移の程度を指し示す代表的なＢＬＩを示している。図１１Ｃは、生物発光（ＢＬＩ）の結果を表すドットプロットを含んでいる。

【発明を実施するための形態】

【0041】

詳細な説明
本開示は、ＣＸＣＬ１６抗体を含む、がんを予防または治療するための医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態では、本医薬品は、標的抗がん剤および免疫チェックポイント阻害剤のうちの１つ以上をさらに含む。ＣＸＣＬ１６抗体は、全長抗体またはそのフラグメントの形態で提供されうる。

【0042】

用語
本明細書で使用される場合、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」は、内容が他を指示しない限り、複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「１つの抗体」への言及は、２つまたはそれ以上のそのような分子の組み合わせなどを含む。

【0043】

本明細書で使用される場合、「約」という用語は、この技術分野の当業者に容易に知られているそれぞれの値に対する通常の誤差範囲、例えば±２０％、±１０％、または±５％を指し、これらは記載された値の意図される意味の範囲内である。

【0044】

本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、抗原エピトープと特異的に結合するために必要な可変領域配列を含む単離された結合剤または組換え結合剤を意味する。したがって、本明細書で使用される「抗体」とは、所望の生物学的活性、例えば、特異的標的抗原との結合を示す、あらゆるクラスもしくはサブクラスの抗体またはそのフラグメントの任意の形態のである。よって、それは最も広い意味で使用され、それらが所望の生物学的活性を示す限り、モノクローナル抗体（全長モノクローナル抗体を含む）、ヒト抗体、キメラ抗体、ナノ抗体、ダイアボディ、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、およびｓｃＦｖ、Ｆａｂなどを含むが、これらに限定されない抗体フラグメントを特に包含する。本出願では、「抗ＣＸＣＬ１６抗体」および「ＣＸＣＬ１６抗体」という用語は互換的に使用される。

【0045】

「抗体フラグメント」は、インタクトな抗体の一部、例えば、インタクトな抗体の抗原結合領域または可変領域を含む。抗体フラグメントの例には、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖフラグメント；ダイアボディ；直鎖抗体（例えば、Ｚａｐａｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．８（１０）：１０５７－１０６２（１９９５））；一本鎖抗体分子（例えばｓｃＦｖ）；および抗体フラグメントから形成される多重特異性抗体が含まれる。抗体のパパイン消化は、各々が単一の抗原結合部位を有する「Ｆａｂ」フラグメントと呼ばれる２つの同一な抗原結合フラグメントと、残りの「Ｆｃ」フラグメント（容易に結晶化される能力を反映した呼称）を生成する。ペプシン処置は、２つの抗原結合部位を持ち、依然として抗原を架橋できるＦ（ａｂ’）_２フラグメントを生じさせる。本発明の文脈において、結合ドメインは、可変軽鎖（ＶＬ）および可変重鎖（ＶＨ）を含むＦｖを含む。これらは一般に、単一のポリペプチド鎖上の（Ｎ末端からＣ末端までの）ＶＬ－ｓｃＦｖリンカー－ＶＨまたはＶＨ－ｓｃＦｖリンカー－ＶＬを含むｓｃＦｖドメイン、あるいはＶＨ－ＣＨ１とＶＬ－ＣＬが結合した２つの異なるポリペプチド鎖上のＦａｂフラグメントのいずれかとして構成される。

【0046】

単鎖ＦｖまたはｓｃＦｖは、抗体のＶＨおよびＶＬドメインを含む抗体フラグメントを指し、これらのドメインは単一のポリペプチド鎖中に存在する。一般に、Ｆｖポリペプチドは、ＶＨドメインとＶＬドメインの間にポリペプチドリンカーをさらに含み、これは、ｓｃＦｖが抗原結合のために望ましい構造を形成することを可能とする。ｓｃＦｖの概要については、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ（１９９４）ＴＨＥ ＰＨＡＲＭＡＣＯＬＯＧＹ ＯＦ ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９－３１５を参照されたい。また、ＷＯ８８／０１６４９および米国特許第４，９４６，７７８号および第５，２６０，２０３号も参照のこと。

【0047】

本明細書で使用される場合、「Ｖ領域」または「可変領域」または「可変ドメイン」とは、フレームワーク１、ＣＤＲ１、フレームワーク２、ＣＤＲ２、フレームワーク３、ＣＤＲ３、およびフレームワーク４のセグメントを含む抗体可変領域ドメインを指す。重鎖のＶ領域であるＶＨは、Ｂ細胞分化の過程でＶ遺伝子（ＨＶ）、Ｄ遺伝子（ＨＤ）およびＪ遺伝子（ＨＪ）がＶ（Ｄ）Ｊ組換えとして知られる形で再配列した結果である。軽鎖のＶ領域であるＶＬは、抗体のＶ遺伝子（ＬＶ）とＪ遺伝子（ＬＪ）の再構成の結果であり、抗体の重鎖または軽鎖のアミノ末端ドメインを指す。重鎖の可変領域は「ＶＨ」または「Ｖ_Ｈ」と表記され、軽鎖の可変領域は「ＶＬ」または「Ｖ_Ｌ」と表記される。これらのドメインは一般に、抗体の最も可変な部分であり、抗原結合部位を含んでいる。

【0048】

本明細書で使用される「相補性決定領域（ＣＤＲ）」とは、軽鎖および重鎖可変領域によって確立される４つの「フレームワーク」領域を中断する、各鎖における３つの超可変領域（ＨＶＲ）を指す。ＣＤＲは、抗原のエピトープに結合するための主な寄与因子である。各鎖のＣＤＲは、Ｎ末端から順にナンバリングされ、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３と呼ばれ、また、ＣＤＲが位置する鎖によっても同定される。よって、Ｖ_Ｈ ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）は、それが見出される抗体の重鎖の可変ドメイン中にあり、その一方、Ｖ_Ｌ ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）は、それが位置する抗体の軽鎖の可変ドメインのＣＤＲ３である。「ＣＤＲ」という用語は、ＣＤＲの配列に言及する場合、「ＨＶＲ」と互換的に使用される。

【0049】

ＣＤＲおよびフレームワーク領域のアミノ酸配列は、当技術分野における様々な周知の定義、例えば、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、国際ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓデータベース（ＩＭＧＴ）、およびＡｂＭを用いて決定され得る（例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ ＆ Ｌｅｓｋ，１９８７，Ｃａｎｏｎｉｃａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ ｒｅｇｉｏｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６，９０１－９１７；Ｃｈｏｔｈｉａ Ｃ．ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ ｒｅｇｉｏｎｓ．Ｎａｔｕｒｅ ３４２，８７７－８８３；Ｃｈｏｔｈｉａ Ｃ．ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ ｏｆ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ＶＨ ｓｅｇｍｅｎｔｓ Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７，７９９－８１７；Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ １９９７，２７３（４）を参照）。抗原結合部位の定義は、以下においても記載されている：Ｒｕｉｚ ｅｔ ａｌ．，ＩＭＧＴ，ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ ｄａｔａｂａｓｅ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２８，２１９－２２１（２０００）；およびＬｅｆｒａｎｃ，Ｍ．－Ｐ．ＩＭＧＴ，ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ ｄａｔａｂａｓｅ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．Ｊａｎ １；２９（１）：２０７－９（２００１）；ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ，Ａｎｔｉｂｏｄｙ－ａｎｔｉｇｅｎ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ：Ｃｏｎｔａｃｔ ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｉｔｅ ｔｏｐｏｇｒａｐｈｙ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２６２（５），７３２－７４５（１９９６）；およびＭａｒｔｉｎ ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８６，９２６８－９２７２（１９８９）；Ｍａｒｔｉｎ，ｅｔ ａｌ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．，２０３，１２１－１５３，（１９９１）；Ｐｅｄｅｒｓｅｎ ｅｔ ａｌ，Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ，１，１２６，（１９９２）；およびＲｅｅｓ ｅｔ ａｌ，Ｉｎ Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇ Ｍ．Ｊ．Ｅ．（ｅｄ．），Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ．Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，１４１－１７２１９９６）。Ｋａｂａｔナンバリングによって決定されるＣＤＲへの言及は、例えば、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１））に基づく。Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲはＣｈｏｔｈｉａによって定義されたように決定される（例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７）を参照）。ＣＤＲのナンバリングおよび配置は、採用されているナンバリング系に応じて異なり得る。可変重鎖および／または可変軽鎖配列の開示には、採用されているナンバリング系に関係なく、関連するＣＤＲの開示が含まれると理解される。特に明示しない限り、本出願のＣＤＲ、例えば、表３に示されているものは、ＩＭＧＴとＫａｂａｔを組み合わせて定義されている。１つの例示的な例として、配列番号１のＣＤＲ１領域は、ＧＦＴＦＳＮＡＶＭＮであり、これは、ＧＦＴＦＳＮＡＶ（ＩＭＧＴによる）とＮＡＶＭＮ（Ｋａｂａｔによる）の残基の組み合わせである。

【0050】

「Ｆｃ領域」とは、抗体の定数領域から最初の定数領域免疫グロブリンドメインを除いた領域を指す。ヒトの免疫グロブリンの場合、Ｆｃは、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＧの最後の２つの定常領域免疫グロブリンドメイン、ＩｇＥおよびＩｇＭの最後の３つの定常領域免疫グロブリンドメイン、ならびにこれらのドメインのＮ末端にある柔軟なヒンジを指す。ＩｇＡおよびＩｇＭの場合、ＦｃにはＪ鎖が含まれうる。ＩｇＧの場合、Ｆｃは免疫グロブリンドメインＣγ２およびＣγ３、ならびにＣγ１とＣγ２の間のヒンジを含む。Ｆｃ領域の境界は変動しうることが当技術分野で理解されているが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は通常、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（１９９１，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ９１－３２４２，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｓｐｒｉｎｇｆｉｅｌｄ，ＶＡ）におけるように、ＥＵインデックスに従ったナンバリングを用いて、残基Ｃ２２６またはＰ２３０からそのカルボキシル末端までを含むと定義される。「Ｆｃ領域」という用語は、この領域を単独で指す場合もあれば、抗体または抗体フラグメントの文脈におけるこの領域を指す場合もある。「Ｆｃ領域」には、天然に存在するＦｃ領域の対立遺伝子バリアント、ならびにエフェクター機能を調節する修飾が含まれる。また、Ｆｃ領域には、生物学的な機能に変化をもたらさないバリアントも含まれる。例えば、免疫グロブリンのＦｃ領域のＮ末端またはＣ末端から、生物学的機能を実質的に損なうことなく、１つ以上のアミノ酸が欠失され得る。そのようなバリアントは、活性への影響が最小になるように、当技術分野で知られている一般的な規則に従って選択され得る（例えば、Ｂｏｗｉｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４７：３０６－１３１０，１９９０を参照のこと）。例えば、ＩｇＧ４抗体では、組換えＩｇＧ４抗体で観察される不均一性をなくすために、単一のアミノ酸置換（ＫａｂａｔナンバリングによるとＳ２２８Ｐ；ＩｇＧ４Ｐｒｏと命名）が導入されうる（例えば、Ａｎｇａｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３０：１０５－１０８，１９９３を参照）。特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、抗体の薬物動態特性を改善する置換、例えば、血清半減期を増加させる置換を含む。Ｆｃ領域の置換の非限定的な例は、米国特許第８，０８８，３７６号に見出すことができ、その内容は参照によりその全体が組み込まれる。

【0051】

本明細書で使用される「重鎖」という用語は、抗原に対する特異性を付与するのに十分な可変領域配列を有するアミノ酸配列を含む、可変領域ドメインＶＨと３つの定常ドメインドメインＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３とを含む全長重鎖を指し、そのフラグメントは全てを意味する。

【0052】

さらに、本明細書で使用される「軽鎖」という用語は、抗原に対する特異性を付与するのに十分な可変領域配列を有するアミノ酸配列を含む、可変領域ドメインＶＬと定常領域ＣＬとを含む、全長軽鎖およびそのフラグメントの両方を指す。

【0053】

「同一」またはパーセント「同一性」という用語は、２つ以上のポリペプチド配列の文脈において、特定の領域、例えば、比較ウィンドウまたは指定された領域にわたって対応が最大となるように比較し、アライメントした場合の２つの配列の長さにわたって、同一であるか、または同一であるアミノ酸残基の特定の割合（例えば少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の同一性を有する２つ以上の配列または部分配列を指す。アミノ酸配列のパーセント同一性を決定するためのアライメントは、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの一般に入手可能なコンピューターソフトウェアを使用するものを含む様々な方法で実施され得る。パーセント配列同一性および配列類似性を決定するのに適したアルゴリズムの例は、ＢＬＡＳＴ ２．０アルゴリズムであり、これは、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９－３４０２（１９７７）およびＡｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－４１０（１９９０）に記載されている。したがって、本発明の目的のため、パーセント配列同一性を決定するために、ＢＬＡＳＴ ２．０がデフォルトのパラメーターで使用され得る。

【0054】

本発明の抗体またはそのフラグメントは、当技術分野で知られている方法、例えば、ファージディスプレイ法または酵母細胞表面発現系を使用して生成され得る。例えば、ｓｃＦｖを調製するために、米国特許第４，９４６，７７８号および第５，２５８，４９８号に記載の方法が使用されてもよく、また、組換えＦａｂ、Ｆａｂ’、およびＦ（ａｂ’）_２フラグメントを生成するために、ＷＯ９２／２２３２４に記載の方法が使用され得る。

【0055】

本発明の抗体は、ヒトを含む哺乳動物、鳥類等の任意の動物由来のものでありうる。好ましくは、抗体は、ヒト、マウス、ロバ、ヒツジ、ウサギ、ヤギ、モルモット、ラクダ、ウマ、またはニワトリの抗体でありうる。

【0056】

ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を有する抗体であり、ヒト免疫グロブリンライブラリーから単離された抗体、または内因性免疫グロブリンを発現しない１つ以上のヒト免疫グロブリンをトランスフェクトされた動物から単離された抗体のいずれかを含む（米国特許第５，９３９，５９８号を参照）。

【0057】

本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントには、上記の配列により定義される抗体における１つ以上の置換、欠失、逆位または転座などの変異を通して本発明の所望の効果を達成する全ての変異体が含まれる。

【0058】

「核酸」および「ポリヌクレオチド」という用語は互換的に使用され、本明細書で使用される場合、ＲＮＡ、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、および上記の合成形態および混合されたポリマーのセンス鎖およびアンチセンス鎖の両方を指す。特定の実施形態において、ヌクレオチドは、リボヌクレオチド、デオキシヌクレオチド、またはいずれかのタイプのヌクレオチドの修飾型、およびそれらの組み合わせを指す。この用語には、ＤＮＡの一本鎖および二本鎖の形態も含まれるが、これらに限定されるものではない。さらに、ポリヌクレオチド、例えば、ｃＤＮＡまたはｍＲＮＡは、天然に存在するヌクレオチドと、天然に存在するヌクレオチドおよび／または天然に存在しないヌクレオチドの結合によって一緒に連結された修飾ヌクレオチドのいずれかまたは両方を含みうる。当業者には容易に理解されるように、核酸分子は、化学的もしくは生化学的に修飾されていてもよく、または非天然もしくは誘導体化されたヌクレオチド塩基を含んでいてもよい。そのような修飾には、例えば、標識、メチル化、１つ以上のアナログでの天然に存在するヌクレオチドの置換、非荷電連結（例えば、メチルホスホネート、ホスホトリエステル、ホスホルアミデート、カルバメートなど）、荷電連結（例えば、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエートなど）、ペンダント部分（例えば、ポリペプチド）、インターカレーター（例えば、アクリジン、プソラレンなど）、キレーター、アルキレーター、および修飾連結（例えば、αアノマー核酸など）などのヌクレオチド間修飾が含まれる。上記の用語はまた、一本鎖、二本鎖、部分的二本鎖、三本鎖、ヘアピン型、環状型、および南京錠型コンフォメーションを含む、あらゆる位相幾何学的コンフォメーションを含むことも意図されている。核酸配列への言及は、特に断りのない限り、その相補体を包含する。よって、特定の配列を有する核酸分子への言及は、その相補的配列を有するその相補鎖を包含すると理解すべきである。また、この用語には、同じポリペプチド配列をコードするコドン最適化核酸も含まれる。

【0059】

本明細書で使用される「ベクター」という用語は、それが連結している別の核酸を増殖させることができる核酸分子を指す。この用語には、自己複製性の核酸構造体としてのベクターと、それが導入された宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターが含まれる。本明細書で使用される「ベクター」とは、目的の核酸配列がベクター中に挿入された組換えコンストラクトを指す。特定のベクターは、それが作動可能に連結されている核酸の発現を指示し得る。そのようなベクターは、本明細書では「発現ベクター」と呼ばれる。

【0060】

本明細書で使用される「置換」は、１つ以上のアミノ酸またはヌクレオチドが、それぞれ異なるアミノ酸またはヌクレオチドに置換されることを示す。

【0061】

「単離された」核酸とは、その自然環境の成分から分離された核酸分子を指す。単離された核酸には、通常、核酸分子を含む細胞内に含まれる核酸分子が含まれるが、その核酸分子は染色体外に、あるいは天然の染色体位置とは異なる染色体位置に存在する。

【0062】

「抗体またはそのフラグメントをコードする単離された核酸」とは、抗体の重鎖および軽鎖（またはそのフラグメント）をコードする１つ以上の核酸分子であって、単一のベクターまたは別々のベクター中にそのような核酸分子が含まれており、宿主細胞内の１つ以上の位置にそのような核酸分子が存在するものを指す。

【0063】

「宿主細胞」、「宿主細胞株」、および「宿主細胞培養」という用語は互換的に使用され、外来性核酸が導入された細胞（そのような細胞の子孫を含む）を指す。よって、宿主細胞は、組換え宿主細胞であり、継代回数に関係なく、一次形質転換細胞およびそれに由来する子孫細胞を含む。

【0064】

本明細書で使用されるポリペプチドの「バリアント」とは、典型的には、１つ以上の置換、欠失、付加、および／または挿入の点で、本明細書に具体的に開示されるポリペプチドと異なるポリペプチドである。本明細書で使用される場合、「バリアント」とは、天然に存在する配列ではなく、改変された配列を指す。

【0065】

同じ標的に対する２つの抗体の結合の強さを表す文脈において、「同等」という用語は、２つの結合反応から計算される２つの解離定数（Ｋ_Ｄ）の値が、互いに３倍以内であることを指す。別の言い方をすれば、第１のＫ_Ｄ（第１の抗体と標的との間の結合反応のＫ_Ｄ）と第２のＫ_Ｄ（第２の抗体と標的との間の結合反応のＫ_Ｄ）との間の比は、端点を含めずに１：３または３：１の範囲内である。Ｋ_Ｄ値が低いほど、結合が強いことを示す。例えば、基準抗体よりも強い結合力を持つ抗体バリアントは、同じ標的に対して基準抗体で測定されるＫ_Ｄの少なくとも１／３のＫ_Ｄで標的に結合する。

【0066】

本明細書で使用される場合、「治療剤」とは、疾患に罹患している患者に治療上有効な用量で投与されると、疾患の症状および疾患に関連する合併症を治癒するか、または少なくとも部分的に阻止する薬剤を指す。

【0067】

本明細書で使用される「個体」という用語は、疾患の治療を必要とする対象、例えば、ヒトまたは非ヒト霊長類、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ウマ、ウシなどを指す。いくつかの実施形態では、個体は哺乳動物である。

【0068】

本明細書で使用される場合、「投与」という用語は、任意の適切な方法によって対象に本発明の所定の組成物を提供することを指す。

【0069】

本明細書で使用される場合、「予防」という用語は、標的疾患の発症を抑制または遅らせるあらゆる作用を指す。

【0070】

本明細書において使用される場合、「治療」という用語は、標的疾患およびその代謝異常が改善されることを意味する。

【0071】

本明細書で使用される場合、「改善」という用語は、所望の疾患に関連するパラメーター、例えば、本明細書に開示の組成物の投与による症状の程度を低減するあらゆる作用を意味する。

【0072】

本明細書で使用される場合、「骨転移」という用語は、がん細胞が元の部位から骨に広がることを指す。ほぼ全てのタイプのがん、例えば、乳がん細胞、甲状腺がん細胞、前立腺がん細胞などが、骨に広がる（転移する）可能性を有する。
ＣＸＣＬ１６

【0073】

ＣＸＣＬ１６（ＮＭ＿０２２０５９）は、ケモカイン（Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフ）リガンド１６（ＣＸＣＬ１６）をコードする遺伝子である。ＣＸＣＬ１６タンパク質は、ＣＸＣケモカインファミリーに属する小さなサイトカインである。それは、ＣＸＣケモカインドメイン、ムシン様ストーク、膜貫通ドメイン、およびＳＨ２に結合できる潜在的なチロシンリン酸化領域を含む細胞質尾部から成る。ＣＸＣＬ１６の発現は、炎症性サイトカインのＩＦＮ－ガンマおよびＴＮＦ－アルファによって誘導される。ＣＸＣＬ１６は、甲状腺がんの予後を予測するマーカーとして報告されている。韓国特許第１０－２０１９－０１４５７３２号を参照。

【0074】

ヒトＣＸＣＬ１６タンパク質（配列番号１１）は２５４個のアミノ酸を含み、ケモカイン受容体ＣＸＣＲ６に結合することができる。Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ，９：１３２８８ ｜ ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０３８／ｓ４１５９８－０１９－４９６１３－ｚ。他のケモカインとは異なり、ＣＸＣＬ１６は膜結合分子としてだけでなく、可溶性ケモカインとしても発現される。Ａｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７２，６３６２－６３７２（２００４）．ＣＸＣＬ１６はマクロファージおよび樹状細胞によって産生され、ＣＸＣＬ１６が豊富な環境への免疫細胞の走化性を制御する。Ｊｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｌ．Ｒｅｐ．３７，３２７９－３２８６（２０１７）．

【0075】

ヒトＣＸＣＬ１６：
ＭＧＲＤＬＲＰＧＳＲＶＬＬＬＬＬＬＬＬＬＶＹＬＴＱＰＧＮＧＮＥＧＳＶＴＧＳＣＹＣＧＫＲＩＳＳＤＳＰＰＳＶＱＦＭＮＲＬＲＫＨＬＲＡＹＨＲＣＬＹＹＴＲＦＱＬＬＳＷＳＶＣＧＧＮＫＤＰＷＶＱＥＬＭＳＣＬＤＬＫＥＣＧＨＡＹＳＧＩＶＡＨＱＫＨＬＬＰＴＳＰＰＩＳＱＡＳＥＧＡＳＳＤＩＨＴＰＡＱＭＬＬＳＴＬＱＳＴＱＲＰＴＬＰＶＧＳＬＳＳＤＫＥＬＴＲＰＮＥＴＴＩＨＴＡＧＨＳＬＡＡＧＰＥＡＧＥＮＱＫＱＰＥＫＮＡＧＰＴＡＲＴＳＡＴＶＰＶＬＣＬＬＡＩＩＦＩＬＴＡＡＬＳＹＶＬＣＫＲＲＲＧＱＳＰＱＳＳＰＤＬＰＶＨＹＩＰＶＡＰＤＳＮＴ（配列番号１１）

【0076】

ＣＸＣＬ１６抗体
いくつかの実施形態において、本明細書に開示のＣＸＣＬ１６抗体は、ＣＸＣＬ１６（配列番号１１）に結合し、配列番号１２を含むＨＣＤＲ１、またはその配列に対して１、２、３、４、もしくは５個のアミノ酸が置換されたバリアントＨＣＤＲ１；配列番号１３を含むＨＣＤＲ２、またはその配列に対して１、２、３、４、もしくは５個のアミノ酸が置換されたバリアントＨＣＤＲ２；ならびに、配列番号１４を含むＨＣＤＲ３、またはその配列に対して１、２、３、４、もしくは５個のアミノ酸が置換されているバリアントＨＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１５またはその配列に対して１、２、３、４、もしくは５個のアミノ酸が置換されているバリアントＬＣＤＲ１のいずれか１つを含むＬＣＤＲ１；配列番号１６またはその配列に対して１、２、もしくは３個のアミノ酸が置換されているバリアントＬＣＤＲ２のいずれか１つを含むＬＣＤＲ２；ならびに配列番号１７またはその配列に対して１、２、３、４、または５個のアミノ酸が置換されているバリアントＬＣＤＲ３のいずれか１つを含むＬＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域を含む。

【0077】

いくつかの実施形態では、ＣＸＣＬ１６に結合する抗体は、配列番号１～５のいずれか１つと少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ；および配列番号６～１０のいずれか１つと９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶ_Ｌを含む。

【0078】

いくつかの実施形態では、ＣＸＣＬ１６抗体は、表３に記載のＶＬ配列と比較して、ＶＬアミノ酸配列中に少なくとも１つの変異を有し、かつ１０、２０、３０、４０、または５０以下の変異を有する。いくつかの実施形態では、ＶＬアミノ酸配列は、表３に記載のＶＬ配列と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸の挿入または欠失を含みうる。いくつかの実施形態では、ＶＬアミノ酸配列は、表２に示されるＣＤＲ配列に対する欠失または挿入、例えば、１、２、３、４、５、６、または７個のアミノ酸の欠失または挿入を含みうる。いくつかの実施形態では、本開示のＣＸＣＬ１６抗体は、表２に示されているように、各々がＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３に対して少なくとも７０％の同一性を有するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、本発明のＣＸＣＬ１６抗体は、表２に示されているように、各々がＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３に対して少なくとも８０％の同一性を有するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、本発明のＣＸＣＬ１６抗体は、それぞれ配列番号１５～１７に記載のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３のうちの１つ、２つ、または３つ全てを含む。

【0079】

いくつかの実施形態では、ＣＸＣＬ１６抗体は、表３に記載のＶＨ配列と比較して、ＶＨアミノ酸配列中に少なくとも１つの変異を有し、かつ１０、２０、３０、４０、または５０以下の変異を有する。いくつかの実施形態では、ＶＨアミノ酸配列は、表３に記載のＶＨ配列と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸の挿入または欠失を含みうる。いくつかの実施形態では、ＶＨアミノ酸配列は、表１に示されているＣＤＲ配列に対する欠失または挿入、例えば１、２、３、４、５、６、または７個のアミノ酸の欠失または挿入を含みうる。いくつかの実施形態では、ＶＨ領域は、表１に示されるＨＣＤＲ１配列と比較して、１つまたは２つの置換を有するＨＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ１は、表１に示されるＨＣＤＲ１配列と比較して、３つ、４つ、または５つの置換を有する。いくつかの実施形態では、ＶＨ領域は、表１に示されるＨＣＤＲ２配列と比較して、１つもしくは２つ；または１つ、２つ、もしくは３つの置換を有するＣＤＲ２を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨ領域は、表１に示されるＨＣＤＲ３配列と比較して、１つ、２つ、もしくは３つ；または１つ、２つ、３つ、もしくは４つの置換を有するＨＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、本開示のＣＸＣＬ１６抗体は、表１に示されているように、各々がＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３に対して少なくとも７０％の同一性を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、本発明のＣＸＣＬ１６抗体は、表１に示されているように、各々がＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３に対して少なくとも８０％の同一性を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、本発明の抗腫瘍抗体は、それぞれ配列番号１２～１４に記載のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３のうちの１つ、２つ、または３つ全てを含む。

【0080】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＸＣＬ１６抗体のＶ_Ｈ領域のＦＲ１領域は、配列番号２２と少なくとも８０％または少なくとも９０％同一である。いくつかの実施形態では、ＣＸＣＬ１６抗体のＶ_Ｈ領域のＦＲ１領域は、配列番号２２の配列を有する。

【0081】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＸＣＬ１６抗体のＶ_Ｈ領域のＦＲ２領域は、配列番号２３と少なくとも８０％または少なくとも９０％同一である。いくつかの実施形態では、ＣＸＣＬ１６抗体のＶ_Ｈ領域のＦＲ２領域は、配列番号２３の配列を有する。

【0082】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＸＣＬ１６抗体のＶ_Ｈ領域のＦＲ３領域は、配列番号２４と少なくとも８０％または少なくとも９０％同一である。いくつかの実施形態では、ＣＸＣＬ１６抗体のＶ_Ｈ領域のＦＲ３領域は、配列番号２４の配列を有する。

【0083】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＸＣＬ１６抗体のＶ_Ｈ領域のＦＲ４領域は、配列番号２５と少なくとも８０％または少なくとも９０％同一である。いくつかの実施形態では、ＣＸＣＬ１６抗体のＶ_Ｈ領域のＦＲ４領域は、配列番号２５の配列を有する。

【0084】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＸＣＬ１６抗体のＶ_Ｌ領域のＦＲ１領域は、配列番号２６と少なくとも８０％または少なくとも９０％同一である。いくつかの実施形態では、ＣＸＣＬ１６抗体のＶ_Ｌ領域のＦＲ１領域は、配列番号２６の配列を有する。

【0085】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＸＣＬ１６抗体のＶ_Ｌ領域のＦＲ２領域は、配列番号２７と少なくとも８０％または少なくとも９０％同一である。いくつかの実施形態では、ＣＸＣＬ１６抗体のＶ_Ｌ領域のＦＲ２領域は、配列番号２７の配列を有する。

【0086】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＸＣＬ１６抗体のＶ_Ｌ領域のＦＲ３領域は、配列番号２８と少なくとも８０％または少なくとも９０％同一である。いくつかの実施形態では、ＣＸＣＬ１６抗体のＶ_Ｌ領域のＦＲ３領域は、配列番号２８の配列を有する。

【0087】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＸＣＬ１６抗体のＶ_Ｌ領域のＦＲ４領域は、配列番号２９と少なくとも８０％または少なくとも９０％同一である。いくつかの実施形態では、ＣＸＣＬ１６抗体のＶ_Ｌ領域のＦＲ４領域は、配列番号２９の配列を有する。

【0088】

いくつかの実施形態では、ＣＸＣＬ１６抗体は、ＨＣ４ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ２、ＨＣ５ＬＣ３、およびＨＣ５ＬＣ５のうちのいずれか１つである。いくつかの実施形態では、ＣＸＣＬ１６抗体はＨＣ５ＬＣ１である。

【0089】

【表1】

【0090】

【表2】

【0091】

【表3】

【0092】

注：本開示における各ＣＸＣＬ１６抗体の名前は２つの部分から成る：第１の部分は重鎖を表し、第２の部分は軽鎖を表す。一例として、抗体ＨＣ５ＬＣ１は、重鎖ＨＣ５（配列番号４２を含む）と軽鎖ＬＣ１（配列番号４３を含む）を含む、など。表４を参照。

【0093】

【表4】

【0094】

【表5】

【0095】

本開示の目的上、ＨＣ－ＦＲ１は、重鎖可変領域のフレームワーク１（ＦＲ１）領域を指す；ＨＣ－ＦＲ２は、重鎖可変領域のＦＲ２領域を指す；ＨＣ－ＦＲ３は、重鎖可変領域のＦＲ３領域を指す；ＬＣ－ＦＲ１は、軽鎖可変領域のフレームワーク１（ＦＲ１）領域を指す；ＬＣ－ＦＲ２は、軽鎖可変領域のＦＲ２領域を指す；ＬＣ－ＦＲ３は、軽鎖可変領域のＦＲ３領域を指す。

【0096】

バリアント
いくつかの実施形態では、本明細書に開示の任意のＣＸＣＬ１６抗体のバリアントが、重鎖および／または軽鎖配列に変異を導入することによって生成され得る。いくつかの実施形態では、変異は、本明細書に開示のＣＸＣＬ１６抗体、例えば、抗体ＨＣ４ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ２、ＨＣ５ＬＣ３、およびＨＣ５ＬＣ５のいずれか１つのＣＤＲの１つ以上に導入される。いくつかの実施形態では、変異はフレームワーク領域に導入される。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＣＸＣＬ１６抗体は、配列番号１～５のいずれか１つのＶＨ領域および／もしくは配列番号６～１０のいずれか１つのＶＬ領域を含む、または配列番号１～５のいずれか１つと少なくとも８０％の同一性を有するＶＨ領域および配列番号６～１０のいずれか１つと少なくとも８０％の同一性を有するＶＬ領域を含む抗体であって、対応するＶＨ領域またはＶＬ領域に対する変異はフレームワーク領域のみに存在している。

【0097】

本明細書に開示の抗体は、腫瘍細胞に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗体はがん細胞株に添加され、結合はバイオライトインターフェロメトリー（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）を用いて分析される。ＨＣ４ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ２、ＨＣ５ＬＣ３、およびＨＣ５ＬＣ５は全て、ヒトＣＸＣＬ１６に対して強い結合を示した。表６および実施例１を参照。

【0098】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＣＸＣＬ１６抗体は、配列番号１２のＨＣＤＲ１、配列番号１３のＨＣＤＲ２、配列番号１４のＨＣＤＲ３、配列番号１５のＬＣＤＲ１、配列番号１６のＬＣＤＲ２、配列番号１７のＬＣＤＲ３を含み；ＶＨ領域内のＦＷ領域は、配列番号１～５のいずれか１つのＶＨ領域内に存在するＦＷ領域と少なくとも８０％同一であり、ＶＬ領域内のＦＷ領域は、配列番号６～１０のいずれか１つのＶＬ領域内に存在するＦＷ領域と少なくとも８０％同一である。

【0099】

腫瘍結合活性
本明細書に記載のＣＸＣＬ１６抗体は、当技術分野で周知のアッセイによって評価されるように、腫瘍細胞に結合し得る。好適なアッセイの非限定的な例には、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）システムなどのバイオセンサーシステムを用いた表面プラズモン共鳴分析、またはフローサイトメトリーアッセイ、またはバイオライトインターフェロメトリーアッセイが含まれ、これらは実施例のセクションでさらに説明される。

【0100】

いくつかの実施形態において、バリアント活性を評価するための結合アッセイは、ｅｘ ｖｉｖｏの腫瘍組織または腫瘍細胞に対して、例えば、同系（免疫適合）マウスでｉｎ ｖｉｖｏで腫瘍移植片として増殖させ、２４～４８時間以内に採取して処理した腫瘍細胞に対して行われる。結合は、フローサイトメトリーを含む数多くの手段により評価され得る。

【0101】

いくつかの実施形態では、腫瘍細胞に結合する抗体の結合は、標準的な免疫染色手順を使用して、新鮮な凍結ヒト腫瘍サンプルまたは固定腫瘍サンプルに対して実施される免疫蛍光法によって評価される。

【0102】

本明細書に開示の抗体は、腫瘍細胞に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗体はがん細胞株に添加され、結合はバイオライトインターフェロメトリーアッセイを用いて分析される。ＨＣ４ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ２、ＨＣ５ＬＣ３、およびＨＣ５ＬＣ５は、ヒトＣＸＣＬ１６に対して強い結合を示した。例えば、表６、および実施例１を参照。

【0103】

腫瘍阻害活性
本明細書に開示のＣＸＣＬ１６抗体のｉｎ ｖｉｖｏ腫瘍阻害活性は、腫瘍増殖および動物生存率のモニタリングを含むがこれらに限定されない、いくつかのアッセイを使用することによって評価されうる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＸＣＬ１６抗体は、腫瘍増殖の速度、サイズ、腫瘍浸潤および／または転移の減少を含む、腫瘍に対する阻害効果を示す。１つの例示的な例において、ＣＸＣＬ１６抗体は、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞に由来する腫瘍を有するマウスにおける腫瘍増殖を阻害する（実施例２を参照）。そのような抗体は、例えば、ＣＸＣＬ１６を発現または過剰発現する腫瘍を有する対象に投与した場合、ｉｎ ｖｉｖｏで腫瘍を標的とした効果を示す。

【0104】

いくつかの実施形態において、本明細書に開示のＣＸＣＬ１６抗体は、がん細胞の走化性および遊走を阻害する。がん細胞の走化性および遊走は、当技術分野で周知の方法を使用して評価され得る。ＣＸＣＲ６を発現する細胞はＣＸＣＬ１６サイトカインを含む培地に向かって遊走する傾向があるため、これらのアッセイが典型的にデザインされる。１つの例示的なアッセイは、トランスウェル遊走アッセイである。簡単に説明すると、容器が上部チャンバーと下部チャンバーへと分割され、ＣＸＣＲ６を発現する細胞が上部チャンバーに播種され、ＣＸＣＬ１６が下部チャンバーに含まれる培地に添加される。上部チャンバーは、細胞が通過することを可能とするポリカーボネート膜で下部チャンバーから分離されている。一定の期間が経過して、ＣＸＣＲ６を発現する細胞がＣＸＣＬ１６を含む下部チャンバー内の培地へと遊走した後、下部チャンバー内の細胞が計数され、これが下部チャンバーに遊走する細胞の数を表す。ＣＸＣＲ６発現細胞を本明細書に開示のＣＸＣＬ１６抗体で処理すると、下部チャンバーへと遊走する細胞の数が減少し、ＣＸＣＬ１６抗体が走化性遊走を阻害できることが指し示される。１つの例示的なアッセイは、実施例２に開示されている。結果は図８Ｂに示されており、これは、ＨＣ５ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ２、およびＨＣ５ＬＣ５を含む様々なＣＸＣＬ１６抗体が走化性および遊走を阻害することを指し示している。

【0105】

いくつかの実施形態では、本明細書に開示のＣＸＣＬ１６抗体は、がん細胞の骨転移を阻害する。骨転移の阻害における抗体の活性は、当技術分野で周知の方法で評価される。１つの例示的な方法は、骨の転移ニッチを模倣した２チャンバー系を使用する。簡単に説明すると、メッシュインサートである上部チャンバーが、下部チャンバー内に吊り下げられている。下部チャンバーには、がん細胞／全骨髄細胞の共培養物とＣＸＣＬ１６濃縮液が含まれており、骨の転移ニッチの微小環境を模倣している。上部チャンバーには、骨髄からの前破骨細胞（例えば、ヒトＣＤ１１ｂ＋骨髄骨髄細胞）が存在する。典型的には、前破骨細胞は破骨細胞へと分化し、これが骨の転移ニッチにおける腫瘍の形成を支持する。したがって、破骨細胞前駆体の遊走を阻害することで、骨の転移ニッチにおける腫瘍の進行を効果的にブロックすること、すなわち、骨転移を抑制することができる。上部チャンバー内の細胞をＣＸＣＬ１６抗体と接触させた後、上部チャンバー（別名、インサートのメッシュ）に保持されている細胞が計数される；これらの細胞の数は、転移ニッチへの細胞の動員を阻害する抗体の能力と正の相関を有する。

【0106】

抗体の形式
本発明のさらなる態様において、本開示に係るＣＸＣＬ１６抗体は、抗体フラグメント、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、またはＦ（ａｂ’）_２フラグメントでありうる。別の実施形態では、抗体は実質的に全長の抗体であり、例えば、ＩｇＧ抗体、または本明細書で定義される他の抗体クラスもしくはアイソタイプである。具体的な抗体フラグメントのレビューについては、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４（２００３）を参照されたい。抗体フラグメントは、インタクトな抗体のタンパク質分解消化および組換え宿主細胞による産生を含むが、これらに限定されない様々な技術によって作製され得る。

【0107】

いくつかの実施形態では、患者に投与される本開示に係るＣＸＣＬ１６抗体は、ＩｇＧ１サブクラスのＩｇＧである。いくつかの実施形態では、そのような抗体は、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４サブクラスのＩｇＧである。いくつかの実施形態では、そのような抗体はＩｇＭである。いくつかの実施形態では、そのような抗体はラムダ軽鎖定常領域を有する。いくつかの実施形態では、そのような抗体はカッパ軽鎖定常領域を有する。

【0108】

いくつかの実施形態では、本開示に係るＣＸＣＬ１６抗体は一価の形式である。いくつかの実施形態では、腫瘍標的抗体はフラグメントの形式であり、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、またはＦ（ａｂ’）_２フラグメントである。

【0109】

いくつかの実施形態において、本開示の抗体フラグメントを含む、本明細書に開示のＣＸＣＬ１６抗体は、エフェクター機能、例えば、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞貪食性（ＡＤＣＰ）、および／または補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を示すＦｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、血清半減期、補体固定、Ｆｃ受容体結合、および／またはＡＤＣＣなどの抗体の１つ以上の機能特性を変更するように改変されたＦｃ領域でありうる。したがって、Ｆｃ領域は、エフェクター機能、すなわち、免疫細胞上に発現されるＦｃ受容体に結合した際に特定の生物学的機能を誘導する能力を増加または減少させるための追加の変異を含み得る。免疫細胞には、単球、マクロファージ、好中球、樹状細胞、好酸球、マスト細胞、血小板、Ｂ細胞、大型顆粒リンパ球、ランゲルハンス細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、および細胞傷害性Ｔ細胞が含まれるが、これらに限定はされない。

【0110】

いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＦｃ領域は、エフェクター機能を調節する追加の修飾を含み得る。エフェクター機能を調節するＦｃ領域アミノ酸変異の例には、Ｆｃ領域の２２８位、２３３位、２３４位、２３５位、２３６位、２３７位、２３８位、２３９位、２４３位、２６５位、２６９位、２７０位、２９７位、２９８位、３１８位、３２６位、３２７位、３２９位、３３０位、３３１位、３３２位、３３３位、および３３４位（ＥＵナンバリングスキーム）における１つ以上の置換が含まれるが、これらに限定はされない。

【0111】

エフェクター機能を低下させる例示的な置換には、以下が含まれる：３２９位は、プロリンがグリシンもしくはアルギニン、またはＦｃのプロリン３２９とＦｃγＲＩＩＩのトリプトファン残基Ｔｒｐ ８７およびＴｒｐ １１０との間に形成されるＦｃ／Ｆｃγ受容体界面を破壊するのに十分な大きさのアミノ酸残基で置換されている変異を有しうる。エフェクター機能を低下させる追加の例示的な置換には、Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３５Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｄ、およびＰ３３１Ｓが含まれる。エフェクター機能を低下させるために複数の置換、例えば、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域のＬ２３４ＡおよびＬ２３５Ａ；ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域のＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＰ３２９Ｇ；ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域のＳ２２８ＰおよびＬ２３５Ｅ；ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域のＬ２３４ＡおよびＧ２３７Ａ；ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域のＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＧ２３７Ａ；ヒトＩｇＧ２Ｆｃ領域のＶ２３４ＡおよびＧ２３７Ａ；ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域のＬ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、およびＥ３１８Ａ；ならびにヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域のＳ２２８ＰおよびＬ２３６Ｅが存在してもよい。エフェクター機能を増加させる置換の例には、例えば、Ｅ３３３Ａ、Ｋ３２６Ｗ／Ｅ３３３Ｓ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ｇ２３６Ａ、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、Ｇ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、Ｆ２４３Ｌ、Ｇ２３６Ａ、およびＳ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａが含まれる。いくつかの実施形態において、Ｆｃ変異はＰ３２９Ｇ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、またはそれらの組み合わせを含む。エフェクター機能を増加または減少させることができるＦｃ領域のアミノ酸変異の記述は、例えば、Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｅｌｌ．９（１）：６３－７３，２０１８；Ｓａｕｎｄｅｒｓ，Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｊｕｎ ７，ｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，２０１９；Ｋｅｌｌｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｓｆｕｓ Ｍｅｄ Ｈｅｍｏｔｈｅｒ．４４（５）：３２７－３３６，２０１７；およびＬｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２９２（９）：３９００－３９０８，２０１７に見出され得る。

【0112】

いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、ＡＤＣＣを調節する１つ以上のアミノ酸置換、例えば、ＥＵナンバリングスキームに従ってＦｃ領域の２９８位、３３３位、および／または３３４位における置換を有しうる。具体的には、Ｓ２９８Ａ、Ｅ３３３Ａ、およびＫ３３４ＡをＦｃ領域に導入して、ＦｃγＲＩＩＩａに対するＦｃ領域の親和性を増加させ、ＦｃγＲＩＩａおよびＦｃγＲＩＩｂに対するＦｃ領域の親和性を減少させることができる。

【0113】

また、Ｆｃ領域は、血清半減期を増加させるために追加の変異を含み得る。Ｆｃ領域におけるそのような変異は、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合の強化を通じて、抗体の薬物動態を改善し得る。抗体の血清半減期を増加させるＦｃ領域の置換の例には、例えば、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ、Ｔ２５０Ｑ／Ｍ４２８Ｌ、Ｎ４３４Ａ、Ｎ４３４Ｈ、Ｔ３０７Ａ／Ｅ３８０Ａ／Ｎ４３４Ａ、Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ、Ｍ２５２Ｙ／Ｍ４２８Ｌ、Ｄ２５９Ｉ／Ｖ３０８Ｆ、Ｎ４３４Ｓ、Ｖ３０８Ｗ、Ｖ３０８Ｙ、およびＶ３０８Ｆが含まれる。抗体の血清半減期を増加させ得るＦｃ領域のアミノ酸変異に関する記述は、例えば、Ｄｕｍｅｔ ｅｔ ａｌ．，ＭＡｂｓ．２６：１－１０，２０１９；Ｂｏｏｔｈ ｅｔ ａｌ．，ＭＡｂｓ．１０（７）：１０９８－１１１０，２０１８；およびＤａｌｌ’Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２８１（３３）：２３５１４－２４，２００６に見出され得る。

【0114】

さらに、いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、化学的に修飾されるか（例えば、１つ以上の化学的部分が抗体に結合され得る）、または抗体の１つ以上の機能的特性を変化させるために修飾されていてもよく、例えば、そのグリコシル化（例えば、低フコシル化、アフコシル化、または増加したシアリル化）を変化させるための細胞株および／または細胞培養条件下で産生されうる。例えば、抗体は、様々なポリマー、例えば、ポリエチレングリコールのうちの１つに連結され得る。いくつかの実施形態では、抗体は、化学的部分への連結を容易にするため、および／または翻訳後修飾、例えば、グリコシル化の対象となる残基を変化させるための変異を含みうる。

【0115】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＸＣＬ１６抗体は、ＮＫ細胞を動員する、および／またはＡＤＣＣを増加させる抗体の能力を高めるグリコシル化の変化を有するＦｃ領域を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、フコースを含まないグリカンを含む（すなわち、Ｆｃ領域がアフコシル化されている）。アフコシル化抗体は、細胞内のフコースプールを枯渇させる異種酵素を発現する細胞株（例えば、ＰｒｏＢｉｏＧｅｎ ＡＧのＧＬＹＭＡＸＸ（登録商標）、ベルリン、ドイツ）を使用して産生され得る。また、非フコシル化抗体は、内因性α－１，６－フコシルトランスフェラーゼ（ＦＵＴ８）遺伝子が欠失した宿主細胞株を用いて産生することもできる。Ｓａｔｏｈ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，”Ｎｏｎ－ｆｕｃｏｓｙｌａｔｅｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｓ ｎｅｘｔ－ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，” Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｏｎ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｔｈｅｒａｐｙ，６：１１，１１６１－１１７３，ＤＯＩ：１０．１５１７／１４７１２５９８．６．１１．１１６１を参照。

【0116】

いくつかの実施形態では、ＣＸＣＬ１６抗体は多価抗体として構築される。いくつかの実施形態では、ＣＸＣＬ１６抗体は、１分子当たり４つのＣＸＣＬ１６結合アームを含む４価の分子として構築される。そのようなコンストラクトは、ＡＤＣＣ活性の増加、ならびにフローサイトメトリーによって測定される腫瘍細胞への結合の増加を示す。

【0117】

いくつかの実施形態において、本開示のＣＸＣＬ１６抗体は、二重特異性または多重特異性の形式、例えば、三重特異性の形式で使用される。例えば、いくつかの実施形態では、抗体は、同一かまたは異なる抗原に結合するさらなる結合ドメインを含む二重特異性または多重特異性抗体に組み込まれてもよい。

【0118】

二重特異性または多重特異性抗体で使用され得る様々な形式がありうる。形式は、結合アームの数、各結合アームの形式（例えば、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂ、またはＶＨのみ）、結合アーム上に存在する抗原結合ドメインの数、互いに対する各アームの連結性および結合構造、Ｆｃドメインの存在または非存在、Ｉｇクラス（例えば、ＩｇＧまたはＩｇＭ）、Ｆｃサブクラス（例えば、ｈＩｇＧ１、ｈＩｇＧ２、またはｈＩｇＧ４）、およびＦｃに対する変異（例えば、エフェクター機能を低減もしくは高めるため、または血清半減期を延長するための変異）などの要素を変更し得る。二重特異性および多重特異性形式の例については、Ｓｐｅｉｓｓ ｅｔ ａｌ．，Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｆｏｒｍａｔｓ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ，６７，９５－１０６（２０１５）の図１も参照されたい。

【0119】

ＣＸＣＬ１６抗体コンジュゲート／共刺激剤
さらなる態様では、本発明のＣＸＣＬ１６抗体は、治療用部分、画像化／検出用部分、または酵素にコンジュゲートまたは連結されうる。例えば、腫瘍標的抗体は、検出可能なマーカー、細胞傷害性薬剤、免疫調節剤、造影剤、治療剤、オリゴヌクレオチド、または酵素にコンジュゲートされうる。抗体を所望の分子にコンジュゲートまたは連結するための方法は、当技術分野でよく知られている。この部分は、共有結合または非共有結合で抗体に連結されうる。

【0120】

いくつかの実施形態では、抗体は、細胞傷害性部分または生存に必要な重要な細胞プロセスに影響を与える他の部分（「ペイロード」）に直接的に、または切断可能もしくは切断不可能なリンカーを介してコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ペイロードは、例えば、Ｇ２／Ｍで細胞周期停止を引き起こすことによって、有糸分裂中の細胞においてアポトーシスを誘導する微小管阻害剤である。使用され得る微小管阻害剤の非限定的な例には、メイタンシン誘導体（ＤＭ１／ＤＭ４）、またはオーリスタチン（ＭＭＡＥ／ＭＭＡＦ）およびそのバリアント、例えば、モノメチルオーリスタチンＤ、ＰＦ－０６３８０１０１、デュオスタチン５、ＡＳ２６９、Ｔａｐ１８Ｈｒ１、ＡＧＤ－０１８２、ＨＰＡ－オーリスタチンＦが含まれる。いくつかの実施形態では、ペイロードは、チューブリン標的剤、例えば、ヘミアステリン、チューブリシン、またはエリブリンである。いくつかの実施形態では、ペイロードは、エンジイン（カリケアマイシン）、デュオカルマイシン誘導体、ピロロベンゾジアゼピン二量体（ＰＢＤ二量体）、およびインドリノベンゾジアゼピン擬似二量体を含む、ＤＮＡ損傷ペイロードである。

【0121】

いくつかの実施形態において、抗体は、例えば、アウリスタチン、リシンＡ鎖、ドキソルビシン、ダウノルビシン、メイタンシノイドタキソール、臭化エチジウム、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ジヒドロキシアントラシンジオン、メトトレキサート、アクチノマイシン、ジフテリア毒素、シュードモナス由来外毒素Ａ、シュードモナス外毒素４０、アブリン、アブリンＡ鎖、モデクチンＡ鎖、アルファサルシン、ジェロニン、ミトジェリン、リストリクトシン、コブラ毒因子、リボヌクレアーゼ、改変志賀毒素、フェノマイシン、エノマイシン、キュリシン、クロチン、カリケアマイシン、サポナリアオフィシナリスインヒビター、グルココルチコイド、オーリスタチン、オーロマイシン、イットリウム、ビスマス、コンブレスタチン、デュオカルマイシン、ドラスタチン、ｃｃ１０６５、またはシスプラチンを含むが、これらに限定はされない細胞傷害性薬物にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、抗体は、酵素阻害剤、増殖阻害剤、溶解剤、ＤＮＡまたはＲＮＡ合成阻害剤、膜透過性修飾剤、ＤＮＡ代謝産物、ジクロロエチルスルフィド誘導体、タンパク質生成阻害剤、リボソーム阻害剤、またはアポトーシス誘導剤などの薬剤と連結されうる。いくつかの実施形態では、抗体はトポイソメリアーゼ阻害剤、例えば、トポイソメリアーゼＩ阻害剤などの薬物にコンジュゲートされる。トポイソメラーゼＩ阻害剤には、キノリンアルカロイド（ＳＮ－３８、ＤＸｄ）が含まれるが、これに限定はされない。

【0122】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＸＣＬ１６抗体は、例えば、膜の透過性を高め、膜を横切るタンパク質の移行を促進することにより、生体膜を通過する抗体の輸送を促進する分子に連結される。よって、例えば、抗体は、細胞透過性ペプチドなどの細胞透過剤に連結されうる。細胞透過性ペプチドの例には、ＴＡＴ、浸透性ポリアルギニン分子、クニッツドメイン由来ペプチド、例えば、アンジオペップ－２、ＳｙｎＢ、ブフォリン、トランスポルタン、両親媒性ペプチドなどが含まれる。いくつかの実施形態では、抗体は、ポリアミンなどのカチオン性分子にコンジュゲートされうる。いくつかの実施形態では、抗体は、血液脳関門を通過する輸送、例えば、トランスサイトーシスを促進する薬剤にコンジュゲートされうる。よって、例えば、抗体は内在化した内皮細胞受容体、例えば、ＣＸＣＲ６受容体、インスリン受容体、インスリン様成長因子受容体、低比重リポタンパク質受容体などに結合する薬剤とコンジュゲートしていてもよい。いくつかの実施形態では、抗体は、細胞質への抗体の侵入を促進する毒素、例えば、志賀毒素とコンジュゲートしていてもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＸＣＬ１６抗体は、細胞内への抗体の内部移行を促進するために、改変毒素体（ＥＴＢ）にコンジュゲートされ得る。

【0123】

いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＸＣＬ１６抗体は、ポリペプチド免疫調節剤、例えば、アジュバントと共にコンジュゲートまたは投与される。免疫調節剤の例には、サイトカイン（例えば、トランスフォーミング成長因子β（ＴＧＦβ））、成長因子、リンホトキシン、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、造血因子、インターロイキン（例えば、インターロイキン－１（ＩＬ－１）、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－６、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα、例えば、Ｓｕｓｈｉドメイン複合体、ＩＬ－１８、およびＩＬ－２１）、コロニー刺激因子（例えば、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）および顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ））、インターフェロン（例えば、インターフェロン－α、－β、または－γ、エリスロポエチンおよびトロンボポエチン、またはそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定はされない。いくつかの実施形態では、抗体は、アジュバント、トール様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト、Ｃ型レクチン受容体（ＣＬＲ）アゴニスト、レチノイン酸誘導性遺伝子Ｉ様受容体（ＲＬＲ）アゴニスト、サポニン、キチン、キトサンなどの多糖類、β－グルカン、ＩＳＣＯＭ、ＱＳ－２１、インターフェロン遺伝子刺激因子（ＳＴＩＮＧ）アゴニストなどの自然免疫系を刺激する化合物、または別の免疫増強剤と共に連結または投与される。

【0124】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＸＣＬ１６抗体は、ＩＬ－１５融合コンストラクト、ＩＬ－１５：ＩＬ－１５Ｒα融合コンストラクト、または単鎖ＩＬ－１５：ＩＬ－１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）融合コンストラクトなどのＩＬ－１５受容体アゴニストにコンジュゲートされるか、またはそれと共に投与される。１つの実施形態では、ＩＬ－１５受容体アゴニストにコンジュゲートされた腫瘍標的抗体は、二重特異性抗体または多重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、ＩＬ－１５受容体アゴニストをさらに含む、本明細書に記載の抗原結合ドメインを含む二重特異性抗体または多重特異性抗体である。

【0125】

１つの実施形態では、本明細書に記載のＣＸＣＬ１６抗体は、単鎖ＩＬ－１５：ＩＬ－１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）融合コンストラクトと共に投与される。いくつかの実施形態では、ＣＸＣＬ１６抗体は、ＮＫＴＲ－２５５などのポリマーをコンジュゲートさせたＩＬ－１５コンストラクトと共に投与される。

【0126】

例えば、体重１ｋｇあたり０．０１ｍｇ未満から体重１ｋｇあたり約２５ｍｇまたは０．１～１０ｍｇ／ｋｇの範囲で、または患者あたり１ｍｇ～２ｇまたは患者あたり約５０ｍｇ～１０００ｍｇの範囲の治療有効量を含む、ＩＬ－１５：ＩＬ－１５Ｒα一本鎖コンストラクトが対象に投与され得る。

【0127】

１つの実施形態では、単鎖ＩＬ－１５融合コンストラクトは、ポリペプチドリンカーを用いてＩＬ－１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）に結合されたＩＬ－１５を含む。１つの実施形態では、単鎖ＩＬ－１５融合コンストラクトは、長い半減期のために、Ｆｃなどの別のタンパク質にポリペプチドリンカーを介して結合される。例えば、ＷＯ２０１８０７１９１９Ａ１（米国特許第１０５５０１８５号に対応）の図９Ｂを参照のこと。１つの実施形態では、ＩＬ－１５が、Ｆｃの重鎖のＮ末端と結合または融合され、重鎖ヘテロ二量化技術を用いて、ＩＬ－１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）が、もう一方のＦｃ重鎖Ｎ末端に結合または融合されて、所望のハイブリッドＦｃが形成される。例えば、ＷＯ２０１８０７１９１９Ａ１の図９Ａを参照。

【0128】

いくつかの実施形態では、抗体は、放射性核種、鉄関連化合物、色素、蛍光剤、または画像化剤と連結されうる。いくつかの実施形態では、抗体は、限定はされないが、金属；金属キレート剤；ランタニド；ランタニドキレート剤；放射性金属；放射性金属キレート剤；陽電子放出原子核；マイクロバブル（超音波用）；リポソーム；リポソームまたはナノスフェア中にマイクロカプセル化された分子；単結晶酸化鉄ナノ化合物；磁気共鳴画像造影剤；光吸収剤、光反射剤および／または散乱剤；コロイド粒子；近赤外蛍光色素分子などの蛍光色素分子などの薬剤に連結されうる。

【0129】

上記コンストラクトのいずれかの１つの実施形態において、ＣＸＣＬ１６抗体は、ＨＣ４ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ２、ＨＣ５ＬＣ３、およびＨＣ５ＬＣ５のうちのいずれか１つである。上記コンストラクトのいずれかの１つの実施形態において、腫瘍標的結合ドメインはＨＣ４ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ２、ＨＣ５ＬＣ３、およびＨＣ５ＬＣ５のＶＨ配列およびＶＬ配列を含む。

【0130】

抗体の生成
開示の抗体は一般的に、当技術分野でよく知られているベクターおよび組換え法を用いて生成される（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ＆ Ｒｕｓｓｅｌｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ；Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙを参照）。遺伝子操作のための試薬、クローニングベクター、およびキットは、商業ベンダーから入手可能である。したがって、本発明のさらなる態様において、本明細書で提供されるものは、本明細書に記載の腫瘍標的抗体のいずれかのＶ_Ｈ領域および／またはＶ_Ｌ領域、またはそのフラグメントをコードする単離された核酸；そのような核酸を含むベクター、ならびに抗体コード核酸を複製するため、および／または抗体を発現させるために使用される、核酸が導入された宿主細胞である。そのような核酸は、腫瘍標的抗体（例えば、抗体の軽鎖および／または重鎖）のＶ_Ｌを含むアミノ酸配列、および／またはＶ_Ｈを含むアミノ酸配列をコードしうる。いくつかの実施形態において、宿主細胞は、（１）Ｖ_Ｌアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドおよびＶ_Ｈアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを含むベクター、または（２）Ｖ_Ｌアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを含む第１のベクターおよびＶ_Ｈアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを含む第２のベクターを含む。

【0131】

さらなる態様において、本発明は、本明細書に記載のＣＸＣＬ１６抗体を作製する方法を提供する。いくつかの実施形態において、本方法は、抗体の発現に適した条件下で、前段落に記載の宿主細胞を培養することを含む。いくつかの実施形態では、抗体はその後、宿主細胞（または宿主細胞培養液）から回収される。

【0132】

本開示の抗体またはそのフラグメントをコードするポリヌクレオチドを含む適切なベクターには、クローニングベクターおよび発現ベクターが含まれる。選択されるクローニングベクターは、使用される宿主細胞によって異なりうるが、有用なクローニングベクターは一般に自己複製が可能であり、特定の制限エンドヌクレアーゼに対する単一の標的を有していてもよく、および／またはそのベクターを含むクローンを選択する際に使用され得るマーカーの遺伝子を保有しうる。例には、プラスミドおよび細菌ウイルス、例えば、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（例えば、ｐＢＳ ＳＫ＋）およびその誘導体、ｍｐｌ８、ｍｐｌ９、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９、ＣｏｌＥ１プラスミド、ｐＣＲ１、ＲＰ４、ファージＤＮＡ、およびシャトルベクターが含まれる。これらならびにｐＦＵＳＥ、ｐＴＲＩＯＺ、ｐＥＴＥｖ２、ＴＧＥＸ－ＨＣ－ｈＧ１、ＴＧＥＸ－ＬＣ－ｈｋ、ｐＯｐｔｉ ＶＥＣ、ｐＣＤＮＡ３．３、ｐＴＲＩＯｚ、ｐＦＵＳＥＣＨｉｇ、ｐＦＵＳＥ－ＣＬｉｇ、またはｐＯｐｔｉＶＥＣなどの他の多くのクローニングベクターが商業ベンダーから入手可能である。

【0133】

発現ベクターは一般に、本開示の核酸を含む複製可能なポリヌクレオチドコンストラクトである。発現ベクターは宿主細胞内でエピソームとして、あるいは染色体ＤＮＡの一部として複製可能であり得る。好適な発現ベクターとしては、プラスミドならびに、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルス、およびその他のベクターを含むウイルスベクターが挙げられるが、これらに限定されるものではない。

【0134】

本明細書に記載の抗体を発現させるのに適した宿主細胞には、原核細胞または真核細胞の両方が含まれる。例えば、グリコシル化およびＦｃエフェクター機能を必要としない場合、ＣＸＣＬ１６抗体は細菌中で生成されうる。発現後、抗体は細菌細胞ペーストから可溶性画分として単離され、さらに精製されうる。あるいは、宿主細胞は真核宿主細胞であってもよく、これには、糸状菌もしくは酵母などの真核微生物、グリコシル化経路が「ヒト化」され、部分的または完全にヒトのグリコシル化パターンを有する抗体の生成がもたらされる真菌もしくは酵母株、脊椎動物、無脊椎動物、および植物細胞が含まれる。無脊椎動物細胞の例には、昆虫細胞が含まれる。昆虫細胞と組み合せて使用されうるバキュロウイルス株が数多く同定されている。植物細胞培養物も宿主細胞として利用され得る。

【0135】

いくつかの実施形態では、本開示の抗体を生成するために脊椎動物宿主細胞が使用される。例えば、ＳＶ４０（ＣＯＳ－７）によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株などの哺乳動物細胞株；ヒト胎児腎臓株（例えば、Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６：５９，１９７７に記載の２９３または２９３細胞）；ベビーハムスター腎細胞（ＢＨＫ）；マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３－２５１，１９８０に記載のＴＭ４細胞）；サル腎臓細胞（ＣＶ１）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６）；ヒト子宮頸がん細胞（ＨＥＬＡ）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ）；バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ ３Ａ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）；マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２）；例えば、Ｍａｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４－６８，１９８２に記載のＴＲＩ細胞；ＭＲＣ ５細胞；およびＦＳ４細胞が、腫瘍を標的とする抗体を発現するために使用されうる。他の有用な哺乳動物宿主細胞株には、ＤＨＦＲ－ＣＨＯ細胞を含むチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（Ｕｒｌａｕｂ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６，１９８０）；ならびにＹ０、ＮＳ０およびＳｐ２／０などの骨髄腫細胞株が含まれる。また、本開示の宿主細胞には、限定されるものではないが、単離された細胞、ｉｎ ｖｉｔｒｏ培養細胞、およびｅｘ ｖｉｖｏ培養細胞も含まれる。抗体の生成に適した特定の哺乳動物宿主細胞株の総説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ ａｎｄ Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ），ｐｐ．２５５－２６８，２００３を参照のこと。

【0136】

いくつかの実施形態において、本発明のＣＸＣＬ１６抗体は、ＣＨＯ細胞株、例えば、ＣＨＯ－Ｋ１細胞株によって産生される。重鎖配列および軽鎖配列をコードする１つ以上の発現プラスミドが導入され得る。例えば、１つの実施形態では、重鎖をコードする発現プラスミドおよび軽鎖をコードする発現プラスミドが、Ｆｒｅｅｓｔｙｌｅ Ｍａｘ試薬などの試薬を使用して、ＣＨＯ－Ｋ１宿主細胞株において１：１の割合で、線状化プラスミドとして宿主細胞にトランスフェクトされる。生産細胞株を取得するためのクローニング方法としては、単一細胞イメージングと組み合わせた蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）が使用され得る。

【0137】

本開示のＣＸＣＬ１６抗体またはそのフラグメントをコードする発現ベクターでトランスフェクトされた宿主細胞は、ポリペプチドの発現が起こることを可能とする適切な条件下で培養され得る。ポリペプチドは分泌され、ポリペプチドを含む細胞および培地の混合物から単離されうる。あるいは、ポリペプチドは、細胞質または膜画分中に保持され、細胞を採取、溶解して、所望の方法でポリペプチドを単離してもよい。

【0138】

いくつかの実施形態では、本開示の抗体はｉｎ ｖｉｔｒｏ合成によって生成され得る（例えば、Ｓｕｔｒｏ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ生化学的タンパク質合成プラットフォームを参照）。

【0139】

いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるものは、本明細書に開示のＣＸＣＬ１６抗体のバリアントを作製する方法である。よって、例えば、本明細書に記載のＶ_Ｈ ＣＤＲ３のバリアントをコードするコンストラクトを修飾することができ、修飾されたコンストラクトによってコードされるＶ_Ｈ領域は、本明細書に記載のＶ_Ｌ領域またはバリアント領域と対になる本明細書に記載のＶ_Ｈ領域の文脈で、標的細胞（例えば、乳がん細胞）への結合活性および／またはｉｎ ｖｉｖｏ腫瘍標的活性について試験され得る。同様に、本明細書に記載のＶ_Ｌ ＣＤＲ３のバリアントをコードする構築物を修飾することができ、修飾されたコンストラクトによってコードされるＶ_Ｌ領域は、標的細胞もしくは他の腫瘍細胞への結合、および／またはｉｎ ｖｉｖｏ腫瘍標的活性の有効性について試験され得る。また、そのような解析は、他のＣＤＲまたはフレームワーク領域で行われてもよく、所望の活性を有する抗体が選択され得る。

【0140】

がんの治療
さらなる態様において、本明細書において提供されるＣＸＣＬ１６抗体、または本明細書に記載のそのバリアントは、がんを治療するための治療剤として使用され得る。

【0141】

いくつかの態様において、本開示は、腫瘍標的化効果を有するＣＸＣＬ１６抗体による治療の候補となる対象を同定する方法を提供する。よって、１つの実施形態では、本発明は、本開示のＣＸＣＬ１６抗体による治療から利益を得ることができる患者を同定する方法を提供する。１つの実施形態では、患者は、ＣＸＣＬ１６を過剰発現するがん、すなわち、正常組織よりも少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも８０％、または１００％高いレベルでＣＸＣＬ１６を発現するがんを有する。いくつかの実施形態では、がんサンプルは原発腫瘍に由来する。代替的な実施形態では、がんサンプルは転移性病変である。ＣＸＣＬ１６との結合相互作用を介したがん細胞への抗体の結合は、バイオライトインターフェロメトリー（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）、免疫組織化学またはフローサイトメトリーなどの任意のアッセイを使用して測定され得る。いくつかの実施形態では、サンプル中の腫瘍細胞の少なくとも０．２％、０．５％もしくは１％、または少なくとも５％もしくは１０％、または少なくとも２０％、３０％もしくは５０％への抗体の結合が、本明細書に記載のように、ＣＸＣＬ１６で治療される患者を決定するための選択基準として使用されうる。

【0142】

本明細書に開示のＣＸＣＬ１６抗体は、がんを治療するために使用され得る。一般に腫瘍とは、身体組織の自律的な過剰増殖により異常に成長した腫瘤を指し、腫瘍は良性腫瘍と悪性腫瘍に分けられ得る。悪性腫瘍は良性腫瘍に比べて非常に早く増殖し、周囲の組織に浸潤しながら転移を起こし、生命を脅かす。そのような悪性腫瘍は一般に「がん」と呼ばれる。よって、「がん」という用語は、細胞死の制御に関連する疾患、または正常なアポトーシスのバランスが崩れた際の過剰な細胞増殖によって引き起こされる疾患を指す。場合によっては、これらの異常な増殖亢進細胞が周囲の組織および臓器に浸潤して塊を形成し、その浸潤が構造の破壊もしくは変形を引き起こすことがあり、この状態が総称してがんと呼ばれる。

【0143】

いくつかの実施形態において、本明細書に開示のＣＸＣＬ１６抗体の治療から利益を得ることができるがんは、子宮頸がん、肺がん、膵臓がん、非小細胞肺がん、肝臓がん、結腸がん、結腸直腸がん、骨がん、皮膚がん、頭部がん、子宮頸がん、皮膚黒色腫、眼内黒色腫、子宮がん、卵巣がん、直腸がん、肝臓がん、脳腫瘍、膀胱がん、血液がん、胃がん、肛門周囲がん、乳がん、卵管がん、子宮内膜がん、膣がん、外陰がん、ホジキン病、食道がん、小腸がん、内分泌腺がん、甲状腺がん、副甲状腺がん、副腎がん、軟部肉腫、尿道がん、陰茎がん、前立腺がん、膀胱がん、腎臓がん、尿管がん、腎細胞がん、腎盂がん、中枢神経系腫瘍、原発性ＣＮＳリンパ腫、脊髄腫瘍、脳である。いくつかの実施形態では、がんは神経膠腫および下垂体腺腫である。

【0144】

いくつかの実施形態において、本明細書に開示のＣＸＣＬ１６抗体によって治療され得る甲状腺がんは、甲状腺未分化がんである。組織非形成性甲状腺がんとも呼ばれる甲状腺未分化がんは、甲状腺がんの中で最も予後が悪い。肺または骨への遠隔転移が最初から見つかることが多く、確認された場合はステージＩＶとみなされる。平均生存期間は約３から６ヶ月であり、生存率は０％に近い。

【0145】

いくつかの実施形態では、本明細書に開示のＣＸＣＬ１６抗体で治療され得る乳がんは、トリプルネガティブ乳がんである。トリプルネガティブ乳がんは、エストロゲンおよびプロゲステロン受容体（ＥＲ－／ＰＲ－）が欠如していることが知られており、ＨＥＲ２遺伝子は発現されない。したがって、ＴＮＢＣはエストロゲン受容体モジュレーター（タモキシフェン）およびＨＥＲ２阻害剤（トラスツズマブ）に対して耐性である。トリプルネガティブ乳がんは、米国では全乳がん患者の約１２～１７％、韓国では全乳がん患者の約１５．９％を占めている。トリプルネガティブ乳がん患者の５年生存率は約７７％であると報告されており、これは、他のタイプの乳がん患者の約９３％よりも低い。これらのがん患者は、本明細書に開示のＣＸＣＬ１６抗体の治療による恩恵を受けうる。

【0146】

併用療法
いくつかの実施形態では、本明細書に開示のＣＸＣＬ１６抗体は、本出願では併用剤とも呼ばれる１つ以上の追加の治療剤と共に投与されうる。いくつかの実施形態では、本明細書に開示のＣＸＣＬ１６抗体は、１つ以上の標的抗がん剤と組み合わせて投与され得る。いくつかの実施形態では、標的化抗がん剤は、腫瘍細胞抗原を標的とするような治療抗体である。標的抗がん剤の非限定的な例には、セツキシマブ、トラスツズマブ、イブリツモマブ、リツキシマブ、ブレンツキシマブ、アレムツズマブ、イマチニブ、ニロチニブ、ラドチニブ、ゲフィチニブ、エルロチニブ、アファチニブ、オルムチニブ、オシメルチニブ、セリチニブ、ラパチニブ、ルキソリチニブ、トファシチニブ、ベムラチニブ、スニチニブ、アキシチニブ、バンデタニブ、ダサチニブ、クリゾチニブ、ゾパニブ、レゴラフェニブ、ベバシズマブ、パクリタキセル、ゲムシタビン、ドセタキセル、アキシチニブ、ニンテダニブ、およびレンバチニブが含まれる。

【0147】

いくつかの実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、およびＣＴＬＡ－４阻害剤からなる群より選択されるが、これらに限定はされない。

【0148】

いくつかの実施形態において、併用剤はＰＤ－Ｌ１阻害剤である。ＰＤ－Ｌ１阻害剤の非限定的な例には、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュバルマブ、エンバフォリマブ、コシベリマブ、ＡＵＮＰ１２、ＣＡ－１７０、ＢＭＳ－９８６１８９、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、セミプリマブ、スパルタリズマブ、カムレリズマブ、シンチリマブが含まれ、ティスレリズマブ、トリパリマブ、ドスターリマブ、ＩＮＣＭＧＡ０００１２、ＡＭＰ－２２４、およびＡＭＰ－５１４から成る群より選択される１つ以上でありうる。

【0149】

いくつかの実施形態において、併用剤はＣＴＬＡ－４阻害剤である。ＣＴＬＡ－４阻害剤の非限定的な例には、イピリムマブおよびトレメリムマブが含まれる。

【0150】

いくつかの実施形態では、ＣＸＣＬ１６抗体および併用剤は、同時に、別々に、または連続して投与されうる。

【0151】

いくつかの実施形態では、ＣＸＣＬ１６抗体はコハク酸代謝を阻害する。

【0152】

いくつかの実施形態では、標的化抗がん剤は経口投与されうる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は注射によって投与されうる。

【0153】

いくつかの実施形態では、ＣＸＣＬ１６抗体および併用剤は、それぞれ単一の剤形または単一の用量で提供されうる。

【0154】

いくつかの実施形態では、医薬組成物は、腫瘍のサイズを低減させるか、または腫瘍の転移を阻害するためのものでありうる。

【0155】

本明細書に開示の医薬組成物はまた、薬学的に許容される塩も含みうる。本明細書における「薬学的に許容される塩」という用語には、薬学的に許容される無機酸、有機酸、または塩基に由来する塩が含まれる。

【0156】

適切な酸の例には、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、過塩素酸、フマル酸、マレイン酸、リン酸、グリコール酸、乳酸、サリチル酸、コハク酸、トルエン－ｐ－スルホン酸、酒石酸、酢酸、クエン酸、メタンスルホン酸、ギ酸、安息香酸、マロン酸、グルコン酸、ナフタレン－２－スルホン酸、ベンゼンスルホン酸等が含まれる。酸付加塩は、従来的な方法、例えば、過剰な酸の水溶液に化合物を溶解し、メタノール、エタノール、アセトン、またはアセトニトリルなどの水混和性有機溶媒を使用して塩を沈殿させることによって調製され得る。それはまた、等モル量の化合物と酸もしくはアルコールを水中で加熱し、次いで混合物を蒸発乾固することによって、または沈殿した塩を吸引濾過することによっても調製され得る。

【0157】

適切な塩基から誘導される塩には、ナトリウムおよびカリウムなどのアルカリ金属、マグネシウムなどのアルカリ土類金属、ならびにアンモニウムが含まれるが、これらに限定はされない。アルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩は、例えば、化合物を過剰のアルカリ金属水酸化物またはアルカリ土類金属水酸化物溶液中に溶解させ、未溶解の化合物塩を濾過し、次いで濾液を蒸発および乾燥させることによって得ることができる。この場合、金属塩としてナトリウム、カリウム、またはカルシウム塩を調製することが薬学的に適切であり、対応する銀塩は、アルカリ金属またはアルカリ土類金属塩と適切な銀塩（例えば、硝酸銀）とを反応させることによって得ることができる。

【0158】

医薬組成物中のＣＸＣＬ１６抗体および／または１つ以上の併用剤（例えば、標的抗がん剤、免疫チェックポイント阻害剤）は、疾患の症状、症状の進行度合い、患者の状態等に応じて、例えば、組成物の総重量に対して０．０００１から０．０００１で適宜調整され得るが、それは９９．９重量％であってもよく、または０．００１から５０重量％でありうるが、これらに限定されるものではない。含有率は、溶剤を除いた乾燥量に基づく。

【0159】

本発明の医薬組成物は、疾患の程度および／または目的に応じて有効成分の含有量が変動しうる。いくつかの実施形態では、それは１回投与時に０．０１μｇから１００００ｍｇ、好ましくは０．１μｇから１０００ｍｇの有効用量である。それは１日に数回、反復投与され得る。しかしながら、医薬組成物の投与量は、製剤方法、投与経路、処置の回数、ならびに患者の年齢、体重、健康状態、性別、疾患の重症度、食事、および排泄率などの様々な因子を考慮して決定され、患者に対する有効な投与量が決定される。したがって、この点を考慮して、当業者であれば、本発明の組成物の適切な有効用量を決定することができるであろう。本発明の医薬組成物は、本発明の効果が示される限り、その製剤、投与経路および投与方法は特に限定されない。

【0160】

本発明に係る医薬組成物は、医薬組成物の調製に一般的に使用される適切な担体、賦形剤および希釈剤をさらに含みうる。賦形剤は、例えば、希釈剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、吸着剤、湿潤剤、フィルムコーティング材料、および放出制御添加剤からなる群より選択される少なくとも１つでありうる。

【0161】

本発明に係る医薬組成物は、それぞれ常法に従って、調製され得るが、パウダー、顆粒、徐放性顆粒、腸溶性顆粒、液剤、点眼剤、エリキシル剤、乳剤、懸濁剤、スピリッツ剤、トローチ剤、香料、およびリモネード剤、タブレット、徐放性タブレット、腸溶性タブレット、舌下タブレット、硬カプセル剤、軟カプセル剤、徐放性カプセル剤、腸溶性カプセル剤、丸剤、チンキ剤、軟エキス剤、乾燥エキス剤、液状エキス剤、注射剤、カプセル剤、灌流剤、石膏剤、ローション剤、パスタ剤、スプレー剤、吸入剤、パッチ剤、無菌注射液、またはエアロゾルなどの外用剤を製剤化して使用できる。外用剤は、クリーム、ゲル、パッチ、スプレー、軟膏、警告剤、ローション、リニメント、パスタ、またはパップ剤でありうる。

【0162】

本発明に係る医薬組成物中に含まれうる担体、賦形剤、および希釈剤には、乳糖、ブドウ糖、ショ糖、オリゴ糖、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトール、デンプン、アカシアゴム、アルギン酸塩、ゼラチン、リン酸カルシウム、ケイ酸カルシウム、セルロース、メチルセルロース、微結晶セルロース、ポリビニルピロリドン、水、ヒドロキシ安息香酸メチル、ヒドロキシ安息香酸プロピル、タルク、ステアリン酸マグネシウム、およびミネラルオイルが含まれうる。

【0163】

製剤の場合、それは通常使用される充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、界面活性剤などの希釈剤または賦形剤を用いて調製される。

【0164】

本発明に係るタブレット、パウダー、顆粒、カプセル、丸薬、およびトローチのための添加剤としては、コーンスターチ、バレイショデンプン、小麦デンプン、乳糖、白糖、ブドウ糖、果糖、ジマンニトール、沈降炭酸カルシウム、合成ケイ酸アルミニウム、リン酸一水素カルシウム、硫酸カルシウム、塩化ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、精製ラノリン、結晶セルロース、デキストリン、アルギン酸ナトリウム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カオリン、尿素、コロイダルシリカゲル、ヒドロキシプロピルスターチ、セルロース（ＨＰＭＣ）、ＨＰＭＣ １９２８、ＨＰＭＣ ２２０８、ＨＰＭＣ ２９０６、ＨＰＭＣ ２９１０などのヒドロキシプロピルメチル賦形剤、プロピレングリコール、カゼイン、乳酸カルシウム、プリモジェル；ゼラチン、アラビアガム、エタノール、寒天粉末、酢酸フタル酸セルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、ブドウ糖、精製水、カゼインナトリウム、グリセリン、ステアリン酸、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、結晶セルロース、デキストリン、ヒドロキシセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、ヒドロキシメチルセルロース、精製シェラック、澱粉粉末、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドンなど、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、コーンスターチ、寒天粉末、メチルセルロース、ベントナイト、ヒドロキシプロピルスターチ、カルボキシメチルセルロースナトリウム、アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、クエン酸カルシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、無水ケイ酸、１－ヒドロキシプロピルセルロース、デキストラン、イオン交換樹脂、ポリ酢酸ビニル、ホルムアルデヒド処理カゼインおよびゼラチン、アルギン酸、アミロース、グアーガム、重炭酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、リン酸カルシウム、ゲル化デンプン、アラビアゴム、アミロペクチン、ペクチン、ポリリン酸ナトリウムなどの崩壊剤、エチルセルロース、スクロース、ケイ酸マグネシウムアルミニウム、ジソルビトール溶液、軽質無水ケイ酸；ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、硬化植物油、タルク、石灰石、カオリン、ワセリン、ステアリン酸ナトリウム、カカオ脂、サリチル酸ナトリウム、サリチル酸マグネシウム、ポリエチレングリコール４０００、６０００、流動パラフィン、硬化大豆油（Ｌｕｂｒｉ ｗａｘ）、ステアリン酸アルミニウム、ステアリン酸亜鉛、ラウリル硫酸ナトリウム、酸化マグネシウム、マクロゴール（Ｍａｃｒｏｇｏｌ）、合成ケイ酸アルミニウム、無水ケイ酸、高級脂肪酸、高級アルコール、シリコーンオイル、パラフィン油、ポリエチレングリコール脂肪酸エーテル、デンプン、塩化ナトリウム、ナトリウム酢酸塩、オレイン酸ナトリウム、ｄｌ－ロイシン、軽質無水ケイ酸等、潤滑剤が使用され得る。

【0165】

本発明に係る液体製剤のための添加剤としては、水、希塩酸、希硫酸、クエン酸ナトリウム、モノステアリン酸ショ糖、ポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステル（Ｔｗｉｎｅｓｔｅｒ）、ポリオキシエチレンモノアルキルエーテル、ラノリンエーテル、ラノリンエステル、酢酸、塩酸、アンモニア水、炭酸アンモニウム、水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、プロラミン、ポリビニルピロリドン、エチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム等が使用され得る。

【0166】

本発明に係るシロップには、ショ糖液、その他の糖類または甘味料が使用されてもよく、必要に応じて、香料、着色剤、保存剤、安定化剤、懸濁化剤、乳化剤、増粘剤等が使用されうる。

【0167】

精製水が本発明に係る乳化物において使用されてもよく、必要に応じて、乳化剤、保存剤、安定化剤、香料等が使用されうる。

【0168】

本発明に係る懸濁化剤においては、アカシア、トラガカンサ、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、微結晶セルロース、アルギン酸ナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ＨＰＭＣ １８２８、ＨＰＭＣ ２９０６、ＨＰＭＣ ２９１０などの懸濁化剤が使用されうる。必要であれば、界面活性剤、防腐剤、安定化剤、着色剤、および香料が使用されてもよい。

【0169】

本発明に係る注射液は、注射液用蒸留水、０．９％塩化ナトリウム注射液、リングゲル注射液、ブドウ糖注射液、ブドウ糖＋塩化ナトリウム注射液、ＰＥＧ（ペグ）、乳酸リングゲル注射液、エタノール、プロピレングリコール、不揮発性油－ゴマ油、綿実油、落花生油、大豆油、コーン油、オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル、および安息香酸ベンゼンなどの溶剤；安息香酸ナトリウム、サリチル酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、尿素、ウレタン、モノエチルアセトアミド、ブタゾリジン、プロピレングリコール、ツイーン、ニジョンチンアミド、ヘキサミン、およびジメチルアセトアミドなどの溶解補助剤；弱酸およびその塩（酢酸および酢酸ナトリウム）、弱塩基およびその塩（アンモニアおよび酢酸アンモニウム）、有機化合物、タンパク質、アルブミン、ペプトン、ガムなどのバッファー；塩化ナトリウムなどの等張化剤；亜硫酸水素ナトリウム（ＮａＨＳＯ_３）、炭酸ガス、メタ重亜硫酸ナトリウム（Ｎａ_２Ｓ２Ｏ_５）、亜硫酸ナトリウム（Ｎａ_２ＳＯ_３）、窒素ガス（Ｎ_２）、エチレンジアミン四酢酸などの安定化剤；０．１％重硫化ナトリウム、ホルムアルデヒドスルホキシレートナトリウム、チオ尿素、エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム、アセトン重亜硫酸ナトリウムなどの硫酸化剤；ベンジルアルコール、クロロブタノール、塩酸プロカイン、ブドウ糖、およびグルコン酸カルシウムなどの鎮痛剤；ＳｉＭＣナトリウム、アルギン酸ナトリウム、Ｔｗｅｅｎ８０、およびモノステアリン酸アルミニウムなどの懸濁剤を含む。

【0170】

本発明に係る坐剤は、カカオ脂、ラノリン、ウィテプソール、ポリエチレングリコール、グリセロゼラチン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸とオレイン酸の混合物、スバナール、綿実油、落花生油、パーム油、カカオバター＋コレステロール、レシチン、ラネットワックス、モノステアリン酸グリセリン、ツイーンまたはスパン、イムハウゼン、モノレン（モノステアリン酸プロピレングリコール）、グリセリン、アデプス ソリダス、ブチラムテゴ－Ｇ）、セベスファーマ１６、ヘキサリドベース９５、コトマール、ヒドロキソートＳＰ、Ｓ－７０－ＸＸＡ、Ｓ－７０－ＸＸ７５（Ｓ－７０－ＸＸ９５）、ハイドロハイドロコート２５、ハイドロコート７１１、イドロポスタル、マッサエストラリウム、Ａ、ＡＳ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｉ、Ｔ、マッサ－ＭＦ、マスポール、マスポール－１５、ネオポスタル－Ｎ、パラマウンド－Ｂ、スポシロ（ＯＳＩ、ＯＳＩＸ、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｈ、Ｌ）、ＩＶ型坐剤（ＡＢ、Ｂ、Ａ、ＢＣ、ＢＢＧ、Ｅ、ＢＧＦ、Ｃ、Ｄ、２９９）、サポスタル（Ｎ、Ｅｓ）、ウェコビ（Ｗ、Ｒ、Ｓ、Ｍ、Ｆｓ）、テスタートリグリセリドベース（ＴＧ－９５、ＭＡ、５７）などを含む。

【0171】

経口投与用の固体製剤には、タブレット、丸剤、パウダー、顆粒、カプセルなどが含まれ、そのような製剤には、抽出物中に少なくとも１つの賦形剤、例えば、デンプン、炭酸カルシウム、ショ糖もしくは乳糖、ゼラチンなどが含まれる。単純な賦形剤に加えて、ステアリン酸マグネシウム、タルクなどの潤滑剤も使用され得る。

【0172】

経口投与のための液体製剤には、懸濁液、内服液、乳濁液、シロップなどが含まれる。一般的に使用される単純な希釈剤である水および流動パラフィンに加えて、湿潤剤、甘味料、香料、および保存料などの様々な賦形剤が含められうる。非経口投与用の製剤には、滅菌水溶液、非水溶液、懸濁液、乳濁液、凍結乾燥製剤、および坐剤が含まれる。非水性溶媒および懸濁剤には、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油などの植物油、オレイン酸エチルなどの注射用エステルが含まれる。

【0173】

本発明に係る医薬組成物は、薬学的に有効な量で投与される。本発明において、「薬学的に有効な量」とは、医学的処置に適用され得る妥当なベネフィット／リスク比で疾患を治療するのに十分な量を意味し、有効な量のレベルは、患者の疾患の種類、重症度、薬物活性およびタイプによって決定される；薬物に対する感受性、投与時間、投与経路および排泄率、治療期間、併用薬を含む因子、ならびに医療分野において周知の他の因子が決定され得る。例示的な実施形態では、ＣＸＣＬ１６抗体は、１００ｍｃｇ／２０ｇ／日、週に２回、腹腔内注射によって；または、５０ｍｃｇ／２０ｇ／日、週３回、静脈内注射によって投与される；ＰＤ－Ｌ１ペプチドは、腹腔内注射により０．１ｍｇ／２０ｇ／日、週５回投与される；レンバチニブは、経口投与により３０ｍ／ｋｇ／日で投与される；パクリタキセルは、腹腔内注射により週２回、１０ｍｇ／ｋｇ、または腹腔内注射により週１回、１０ｍｇ／ｋｇ／日で投与される。

【0174】

本発明に係る医薬組成物は、個々の治療剤として、または他の治療剤と組み合わせて投与されてもよく、従来的な治療剤と連続して、または同時に投与されうる。

【0175】

医薬組成物および他の治療剤は、単回または複数回投与されうる。当業者は、上記の全ての因子を考慮して、最小限の量で、または副作用なしで最大の効果を得ることができる量を決定しうる。

【0176】

本発明の医薬組成物は、様々な経路を介して個体に投与されうる。あらゆる投与様式、例えば、経口投与、皮下注射、腹腔内投与、静脈内注射、筋肉内注射、傍脊髄（髄腔内）注射、舌下投与、頬側投与、直腸挿入、膣内投与が想定され得る。それは、内部挿入、眼投与、耳投与、経鼻投与、吸入、口または鼻への噴霧、皮膚投与、経皮投与等により投与され得る。

【0177】

本発明の医薬組成物は、治療すべき疾患、投与の経路、患者の年齢、性別、体重、疾患の重症度などの様々な関連因子と共に有効成分としての薬物のタイプに応じて決定される。

【0178】

いくつかの実施形態において、本開示は、ＣＸＣＬ１６抗体；ならびに標的抗がん剤および免疫チェックポイント阻害剤からなる群より選択される１つ以上の併用剤を有効成分として提供し、ここで、ＣＸＣＬ１６抗体；および併用剤は、同時に、別々に、または連続的に投与され、それは、がんの予防もしくは治療のための薬学的併用製剤を提供する。

【0179】

本発明の薬学的併用製剤の成分であるＣＸＣＬ１６抗体、標的抗がん剤、および免疫チェックポイント阻害剤はそのまま、または塩、好ましくは薬学的に許容される塩の形態で使用されうる。

【0180】

本発明の薬学的併用製剤は、投与方法および投与の経路に応じて、成分としてＣＸＣＬ１６抗体を含みうる。いくつかの実施形態では、標的抗がん剤および免疫チェックポイント阻害剤からなる群より選択される１つ以上の薬剤の組み合わせもまた、ＣＸＣＬ１６抗体と共に同時に１つの製剤に含まれうる。いくつかの実施形態では、併用剤およびＣＸＣＬ１６抗体は、毎日または１日１回の投与単位に応じて、個別に製剤化され、１つのパッケージに含まれていてもよい。本明細書に開示の医薬組合せの具体的な製剤化方法は、当業者には公知または明らかであり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（第１９版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、ペンシルバニア州イーストン、１９９５年）に記載されている。本発明に係る医薬組合せ製剤の成分であるＣＸＣＬ１６抗体と、標的抗がん剤および免疫チェックポイント阻害剤からなる群より選択される１つ以上の併用剤は、同時に、または別々に、または所定の順序に従って投与され得る。本明細書で使用される場合、「同時投与」という用語は、経口投与の場合、２つの成分が同時に胃の中に存在するように、ＣＸＣＬ１６抗体とその組み合わせが一緒に、または実質的に同時に服用されることを意味する（例えば、投与の間隔が１５分以内）。同時に投与される場合、その組み合わせは、１つの製剤中に同時に含まれるように製剤化されうる。経口投与の場合、好ましくは１日量が１回の投与量に含まれるように製剤化されうる；しかしながら、１日２回、３回、４回などの分割用量で投与されるように製剤化されてもよい。

【0181】

例示的な実施形態
実施形態１：ＣＸＣＬ１６抗体を有効成分として含む、がんを予防または治療するための医薬組成物。

【0182】

実施形態２：実施形態１の医薬組成物と、化学療法剤、標的抗がん剤および免疫チェックポイント阻害剤からなる群より選択される１つ以上の併用剤とを投与することを含む、対象におけるがんを予防または治療する方法。

【0183】

実施形態３：標的抗がん剤が、セツキシマブ、トラスツズマブ、イブリツモマブ、リツキシマブ、ブレンツキシマブ、アレムツズマブ、イマチニブ、ニロチニブ、ラドチニブ、ゲフィチニブ、エルロチニブ、アファチニブ、オルムチニブ、オシメルチニブ、セリチニブ、ラパチニブ、ルキソリチニブ、トファシチニブ、ベムラチニブ、スニチニブ、アキシチニブ、バンデタニブ、ダサチニブ、クリゾチニブ、パゾパニブ、レゴラフェニブ、ベバシズマブ、パクリタキセル、ゲムシタビン、ドセタキセル、アキシチニブ、ニンテダニブ、およびレンバチニブからなる群より選択される少なくとも１つであることを特徴とする、実施形態２に記載の方法。

【0184】

実施形態４：免疫チェックポイント阻害剤が、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、およびＣＴＬＡ－４阻害剤からなる群より選択される１つである、実施形態２に記載の方法。

【0185】

実施形態５：ＰＤ－Ｌ１阻害剤が、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュバルマブ、エンバフォリマブ、コシベリマブ、ＡＵＮＰ１２、ＣＡ－１７０、またはＢＭＳ－９８６１８９のうちの１つである、実施形態４に記載の方法。

【0186】

実施形態６：ＰＤ－１阻害剤が、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、セミプリマブ、スパルタリズマブ、カムレリズマブ、シンチリマブ、ティスレリズマブ（ティスレリズマブ）、トリパリマブ、ドスターリマブ、ＩＮＣＭＧＡ０００１２、ＡＭＰ－２２４、またはＡＭＰ－５１４である、実施形態４に記載の方法。

【0187】

実施形態７：ＣＴＬＡ－４阻害剤が、イピリムマブまたはトレメリムマブである、実施形態４に記載の方法。

【0188】

実施形態８：ＣＸＣＬ１６抗体および併用剤が、同時に、別々に、または連続的に投与される、実施形態２に記載の方法。

【0189】

実施形態９：ＣＸＣＬ１６抗体が、コハク酸代謝を阻害することを特徴とする、実施形態２に記載の方法、医薬組成物。

【0190】

実施形態１０：がんが、子宮頸がん、肺がん、膵臓がん、非小細胞肺がん、肝臓がん、結腸がん、結腸直腸がん、骨がん、皮膚がん、頭部がん、子宮頸がん、皮膚黒色腫、眼内黒色腫、子宮がん、卵巣がん、直腸がん、肝臓がん、脳腫瘍、膀胱がん、血液がん、胃がん、肛門周囲がん、乳がん、卵管がん、子宮内膜がん、膣がん、外陰がん、ホジキン病、食道がん、小腸がん、内分泌腺がん、甲状腺がん、副甲状腺がん、副腎がん、軟部肉腫、尿道がん、陰茎がん、前立腺がん、膀胱がん、腎臓がん、尿管がん、腎細胞がん、腎盂がん、ＣＮＳ中枢神経系腫瘍、原発性ＣＮＳリンパ腫、脊髄腫瘍、脳幹神経膠腫、および下垂体腫瘍である、実施形態２に記載の方法。

【0191】

実施形態１１：標的抗がん剤が経口投与される、実施形態２に記載の方法。

【0192】

実施形態１２：ＣＸＣＬ１６抗体および併用剤が、それぞれ、単一の剤形または単一の用量で提供される、実施形態２に記載の方法。

【0193】

実施形態１３：医薬組成物が腫瘍のサイズを縮小させるか、または腫瘍の転移を阻害する、実施形態１または２に記載の方法。

【0194】

実施形態１４：有効成分として、ＣＸＣＬ１６抗体と、化学療法剤、標的抗がん剤、および免疫チェックポイント阻害剤からなる群より選択される１つ以上の併用剤とを含む、がんの予防または治療のための医薬併用製剤であって、ＣＸＣＬ１６抗体および併用剤薬剤が同時に、別々に、または連続的に投与される、医薬併用製剤。

【0195】

実施形態１５：がん転移を阻害するための医薬組成物であって、医薬組成物が有効成分としてＣＸＣＬ１６抗体を含む、医薬組成物。

【0196】

実施形態１６：有効成分として、がん転移を阻害するためのＣＸＣＬ１６抗体と、化学療法剤、標的抗がん剤、および免疫チェックポイント阻害剤からなる群より選択される１つ以上の併用剤とを含む医薬組成物。

【0197】

実施形態１７：ＣＸＣＬ１６抗体を有効成分として含む、がんを診断するための組成物。

【0198】

実施形態１８：実施形態１７に記載の組成物を含む、がんを診断するためのキット。

【0199】

本明細書において言及される全ての文献は、その内容が本明細書に記載されているかのように、参照により本明細書に組み込まれる。本発明の要素またはその好ましい態様を導入する際、冠詞「ａ（１つの）」、「ａｎ（１つの）」、「ｔｈｅ（その）」、「ｓａｉｄ（前記）」は、要素のうちの１つ以上を指す。「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ（含む）」、「ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ（含む）」、および「ｈａｖｉｎｇ（有する）」という用語は、包括的であることが意図され、列挙された要素以外の追加の要素が存在しうることを意味する。本発明を特定の態様に関して説明してきたが、これらの態様の詳細を限定するものとして解釈されるべきではない。

【0200】

以下、本発明の理解を助けるために好ましい実施例を提示する。しかしながら、以下の実施例は、本発明の理解をより容易にするために提供されるに過ぎず、本発明の内容は以下の実施例によって限定されるものではない。

【0201】

非公式な配列表：
配列番号１：ＨＣ１の重鎖可変領域
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＡＶＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＲＴＫＰＮＮＹＡＴＦＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＦＳＲＤＮＳＫＴＭＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＴＡＷＴＴＥＧＩＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ

【0202】

配列番号２：ＨＣ２の重鎖可変領域
ＡＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＫＩＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＡＶＭＮＷＶＲＱＡＳＧＫＧＬＥＷＶＧＲＩＲＴＫＰＮＮＹＡＴＦＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＭＹＹＣＴＡＷＴＴＥＧＩＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ

【0203】

配列番号３：ＨＣ３の重鎖可変領域
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＡＶＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＲＩＲＴＫＰＮＮＹＡＴＦＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＦＳＲＤＤＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＩＬＫＴＥＤＴＡＭＹＹＣＴＡＷＴＴＥＧＩＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ

【0204】

配列番号４：ＨＣ４の重鎖可変領域
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＡＶＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＲＴＫＰＮＮＹＡＴＦＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＦＳＲＤＤＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＴＡＷＴＴＥＧＩＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ

【0205】

配列番号５：ＨＣ５の重鎖可変領域
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＡＶＭＮＷＶＲＱＡＳＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＲＴＫＰＮＮＹＡＴＦＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＦＳＲＤＤＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＭＹＹＣＴＡＷＴＴＥＧＩＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ

【0206】

配列番号６：ＬＣ１の軽鎖可変領域
ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＡＧＥＴＶＴＩＮＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＧＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＱＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＹＹＤＴＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ

【0207】

配列番号７：ＬＣ２の軽鎖可変領域
ＤＩＶＭＴＱＳＰＳＳＬＡＶＳＬＧＥＴＡＴＩＮＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＧＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＱＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＡＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＬＡＩＹＹＣＱＱＹＹＤＴＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ

【0208】

配列番号８：ＬＣ３の軽鎖可変領域
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＧＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＱＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＹＤＴＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ

【0209】

配列番号９：ＬＣ４の軽鎖可変領域
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＧＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＬＡＩＹＹＣＱＱＹＹＤＴＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＬＫ

【0210】

配列番号１０：ＬＣ５の軽鎖可変領域
ＤＩＶＭＴＱＳＰＳＳＬＡＶＳＡＧＥＲＡＴＩＮＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＧＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＱＳＧＶＰＤＲＦＩＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＩＹＹＣＱＱＹＹＤＴＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＬＫ

【0211】

配列番号１１：ヒトＣＸＣＬ１６
ＭＧＲＤＬＲＰＧＳＲＶＬＬＬＬＬＬＬＬＬＶＹＬＴＱＰＧＮＧＮＥＧＳＶＴＧＳＣＹＣＧＫＲＩＳＳＤＳＰＰＳＶＱＦＭＮＲＬＲＫＨＬＲＡＹＨＲＣＬＹＹＴＲＦＱＬＬＳＷＳＶＣＧＧＮＫＤＰＷＶＱＥＬＭＳＣＬＤＬＫＥＣＧＨＡＹＳＧＩＶＡＨＱＫＨＬＬＰＴＳＰＰＩＳＱＡＳＥＧＡＳＳＤＩＨＴＰＡＱＭＬＬＳＴＬＱＳＴＱＲＰＴＬＰＶＧＳＬＳＳＤＫＥＬＴＲＰＮＥＴＴＩＨＴＡＧＨＳＬＡＡＧＰＥＡＧＥＮＱＫＱＰＥＫＮＡＧＰＴＡＲＴＳＡＴＶＰＶＬＣＬＬＡＩＩＦＩＬＴＡＡＬＳＹＶＬＣＫＲＲＲＧＱＳＰＱＳＳＰＤＬＰＶＨＹＩＰＶＡＰＤＳＮＴ

【0212】

配列番号１２：ＨＣＤＲ１
ＧＦＴＦＳＮＡＶＭＮ

【0213】

配列番号１３：ＨＣＤＲ２
ＲＩＲＴＫＰＮＮＹＡＴＦＹＡＤＳＶＫＧ

【0214】

配列番号１４：ＨＣＤＲ３
ＴＡＷＴＴＥＧＩＹ

【0215】

配列番号１５：ＬＣＤＲ１
ＫＳＳＱＳＬＬＹＳＧＮＱＫＮＹＬＡ

【0216】

配列番号１６：ＬＣＤＲ２
ＷＡＳＴＲＱＳ

【0217】

配列番号１７：ＬＣＤＲ３
ＱＱＹＹＤＴＰＷＴ

【0218】

配列番号１８：重鎖シグナルペプチド
ＭＧＷＴＬＶＦＬＦＬＬＳＶＴＡＧＶＨＳ

【0219】

配列番号１９：軽鎖シグナルペプチド
ＭＶＳＳＡＱＦＬＧＬＬＬＬＣＦＱＧＴＲＣ

【0220】

配列番号２０：ＣＸＣＲ６
ＭＡＥＨＤＹＨＥＤＹＧＦＳＳＦＮＤＳＳＱＥＥＨＱＤＦＬＱＦＳＫＶＦＬＰＣＭＹＬＶＶＦＶＣＧＬＶＧＮＳＬＶＬＶＩＳＩＦＹＨＫＬＱＳＬＴＤＶＦＬＶＮＬＰＬＡＤＬＶＦＶＣＴＬＰＦＷＡＹＡＧＩＨＥＷＶＦＧＱＶＭＣＫＳＬＬＧＩＹＴＩＮＦＹＴＳＭＬＩＬＴＣＩＴＶＤＲＦＩＶＶＶＫＡＴＫＡＹＮＱＱＡＫＲＭＴＷＧＫＶＴＳＬＬＩＷＶＩＳＬＬＶＳＬＰＱＩＩＹＧＮＶＦＮＬＤＫＬＩＣＧＹＨＤＥＡＩＳＴＶＶＬＡＴＱＭＴＬＧＦＦＬＰＬＬＴＭＩＶＣＹＳＶＩＩＫＴＬＬＨＡＧＧＦＱＫＨＲＳＬＫＩＩＦＬＶＭＡＶＦＬＬＴＱＭＰＦＮＬＭＫＦＩＲＳＴＨＷＥＹＹＡＭＴＳＦＨＹＴＩＭＶＴＥＡＩＡＹＬＲＡＣＬＮＰＶＬＹＡＦＶＳＬＫＦＲＫＮＦＷＫＬＶＫＤＩＧＣＬＰＹＬＧＶＳＨＱＷＫＳＳＥＤＮＳＫＴＦＳＡＳＨＮＶＥＡＴＳＭＦＱＬ

【0221】

配列番号２１：ＨＣ－ＦＲ１
Ｘ_１ＶＱＬＶＥＳＧＧＧＸ_２ＶＸ_３ＰＸ_４Ｘ_５ＳＬＸ_６Ｘ_７ＳＣＡＡＳ；ここで、Ｘ_１はＡもしくはＱまたはＥであり得る；Ｘ_２はＬまたはＶであり得る；Ｘ_３はＱまたはＫであり得る；Ｘ_４はＫまたはＧであり得る；Ｘ_５はＥまたはＧであり得る；Ｘ_６はＫまたはＲであり得る；Ｘ_７はＩまたはＬであり得る

【0222】

配列番号２２：ＨＣ－ＦＲ２
ＷＶＲＱＡＸ_１ＧＫＧＬＥＷＶＸ_２；ここでＸ_１はＰまたはＳであり得る；Ｘ_２はＡまたはＧであり得る。

【0223】

配列番号２３：ＨＣ－ＦＲ３
ＦＴＸ_１ＳＲＤＸ_２ＳＫＸ_３Ｘ_４Ｘ_５ＹＬＱＭＸ_６Ｘ_７ＬＸ_８Ｘ_９ＥＤＴＡＸ_１０ＹＹＣ；ここで、Ｘ_１はＦまたはＩであり得る；Ｘ_２はＤまたはＮであり得る；Ｘ_３はＳ、Ｔ、またはＮであり得る；Ｘ_４はＭまたはＴであり得る；Ｘ_５はＶ、Ｌ、またはＡであり得る；Ｘ_６はＤまたはＮであり得る；Ｘ_７はＮ、Ｓ、またはＩであり得る；Ｘ_８はＫまたはＲであり得る；Ｘ_９はＴまたはＡであり得る；Ｘ_１０はＭまたはＶであり得る。

【0224】

配列番号２４：ＨＣ－ＦＲ４
ＷＧＱＧＴＸ_１ＶＴＶＳＳ；ここで、Ｘ_１はＬまたはＴであり得る

【0225】

配列番号２５：ＬＣ－ＦＲ１
ＤＩＸ_１ＭＴＱＳＰＸ_２ＳＬＸ_３Ｘ_４ＳＸ_５ＧＸ_６Ｘ_７Ｘ_８ＴＩＸ_９Ｃ；ここで、Ｘ_１はＶ、Ｑであり得る；Ｘ_２はＳであり得る；Ｄ；Ｘ_３はＡ、Ｓであり得る；Ｘ_４はＶ、Ａであり得る；Ｘ_５はＡ、Ｌ、Ｖであり得る；Ｘ_６はＥ、Ｄであり得る；Ｘ_７はＴ、Ｒであり得る；Ｘ_８はＶ、Ａあり得る；Ｘ_９はＮ、Ｔであり得る。

【0226】

配列番号２６：ＬＣ－ＦＲ２
ＷＹＱＱＫＰＧＱＸ_１ＰＫＬＬＩＹ；Ｘ_１はＳまたはＰであり得る。

【0227】

配列番号２７：ＬＣ－ＦＲ３
ＧＶＰＸ_１ＲＦＸ_２ＧＳＧＸ_３ＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＸ_４ＱＸ_５ＥＤＸ_６ＡＸ_７ＹＹＣ；Ｘ_１はＤ、Ｓであり得る；Ｘ_２はＩ、Ｓ、またはＴであり得る；Ｘ_３はＳまたはＡであり得る；Ｘ_４はＶまたはＬであり得る；Ｘ_５はＡ、Ｐであり得る；Ｘ_６はＬ、Ｖ、またはＦであり得る；Ｘ_７はＩ、Ｖ、またはＴであり得る。

【0228】

配列番号２８：ＬＣ－ＦＲ４
ＧＧＧＴＫＸ_１ＥＸ_２Ｋ；ここで、Ｘ_１はＬまたはＶであり得る；そしてＸ_２はＬまたはＩであり得る。

【0229】

配列番号２９：キメラ抗体ＣＬＳ－Ａ１ＨＣ０ＬＣ０重鎖配列
ＡＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＫＥＳＬＫＩＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＡＶＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＲＴＫＰＮＮＹＡＴＦＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＦＳＲＤＤＳＫＳＭＶＹＬＱＭＤＮＬＫＴＥＤＴＡＭＹＹＣＴＡＷＴＴＥＧＩＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳ

【0230】

配列番号３０：キメラ抗体ＣＬＳ－Ａ１ＨＣ０ＬＣ０軽鎖配列
ＤＩＶＭＴＱＳＰＳＳＬＡＶＳＡＧＥＴＶＴＩＮＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＧＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＱＳＧＶＰＤＲＦＩＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＬＡＩＹＹＣＱＱＹＹＤＴＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＬＫ

【0231】

配列番号３１：マウスＣＸＣＬ１６配列
ＭＲＲＧＦＧＰＬＳＬＡＦＦＬＦＬＬＡＬＬＴＬＰＧＤＧＮＱＧＳＶＡＧＳＣＳＣＤＲＴＩＳＳＧＴＱＩＰＱＧＴＬＤＨＩＲＫＹＬＫＡＦＨＲＣＰＦＦＩＲＦＱＬＱＳＫＳＶＣＧＧＳＱＤＱＷＶＲＥＬＶＤＣＦＥＲＫＥＣＧＴＧＨＧＫＳＦＨＨＱＫＨＬＰＱＡＳＴＱＴＰＥＡＡＥＧＴＰＳＤＴＳＴＰＡＨＳＱＳＴＱＨＳＴＬＰＳＧＡＬＳＬＮＫＥＨＴＱＰＷＥＭＴＴＬＰＳＧＹＧＬＥＡＲＰＥＡＥＡＮＥＫＱＱＤＤＲＱＱＥＡＰＧＡＧＡＳＴＰＡＷＶＰＶＬＳＬＬＡＩＶＦＦＬＴＡＡＭＡＹＶＬＣＮＲＲＡＴＱＱＮＳＡＧＬＱＬＷＹＴＰＶＥＰＲＰ

【0232】

配列番号３２：キメラ抗体（ＨＣ０）の重鎖のアミノ酸配列
ＡＣＣＭＧＷＴＬＶＦＬＦＬＬＳＶＴＡＧＶＨＳＡＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＫＥＳＬＫＩＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＡＶＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＲＴＫＰＮＮＹＡＴＦＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＦＳＲＤＤＳＫＳＭＶＹＬＱＭＤＮＬＫＴＥＤＴＡＭＹＹＣＴＡＷＴＴＥＧＩＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＥＴＴＡＰＳＶＹＰＬＡＰＧＴＡＬＫＳＮＳＭＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹＦＰＥＰＶＴＶＴＷＮＳＧＡＬＳＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＧＬＹＴＬＴＳＳＶＴＶＰＳＳＴＷＳＳＱＡＶＴＣＮＶＡＨＰＡＳＳＴＫＶＤＫＫＩＶＰＲＥＣＮＰＣＧＣＴＧＳＥＶＳＳＶＦＩＦＰＰＫＴＫＤＶＬＴＩＴＬＴＰＫＶＴＣＶＶＶＤＩＳＱＮＤＰＥＶＲＦＳＷＦＩＤＤＶＥＶＨＴＡＱＴＨＡＰＥＫＱＳＮＳＴＬＲＳＶＳＥＬＰＩＶＨＲＤＷＬＮＧＫＴＦＫＣＫＶＮＳＧＡＦＰＡＰＩＥＫＳＩＳＫＰＥＧＴＰＲＧＰＱＶＹＴＭＡＰＰＫＥＥＭＴＱＳＱＶＳＩＴＣＭＶＫＧＦＹＰＰＤＩＹＴＥＷＫＭＮＧＱＰＱＥＮＹＫＮＴＰＰＴＭＤＴＤＧＳＹＦＬＹＳＫＬＮＶＫＫＥＴＷＱＱＧＮＴＦＴＣＳＶＬＨＥＧＬＨＮＨＨＴＥＫＳＬＳＨＳＰＧＫ

【0233】

配列番号３３：キメラ抗体（ＨＣ０）の重鎖の最適化されたコード配列（チャイニーズハムスター（Ｃｒｉｃｅｔｕｌｕｓ ｇｒｉｓｅｕｓ）（ＣＨＯ）用）
ＡＣＣＡＴＧＧＧＣＴＧＧＡＣＣＣＴＧＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＣＣＴＧＣＴＡＡＧＣＧＴＧＡＣＧＧＣＧＧＧＣＧＴＣＣＡＣＴＣＣＧＣＴＧＴＧＣＡＡＣＴＣＧＴＧＧＡＧＡＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＣＴＧＧＴＧＣＡＧＣＣＴＡＡＧＧＡＧＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＣＡＧＣＴＧＣＧＣＣＧＣＴＡＧＣＧＧＣＴＴＣＡＣＡＴＴＣＡＧＣＡＡＣＧＣＣＧＴＧＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＧＡＣＡＡＧＣＣＣＣＴＧＧＣＡＡＧＧＧＣＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＧＧＣＴＡＧＡＡＴＣＡＧＡＡＣＣＡＡＧＣＣＴＡＡＣＡＡＣＴＡＣＧＣＣＡＣＣＴＴＣＴＡＣＧＣＣＧＡＣＡＧＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＡＧＡＴＴＴＡＣＧＴＴＣＡＧＣＡＧＡＧＡＴＧＡＣＡＧＣＡＡＧＡＧＣＡＴＧＧＴＧＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＧＡＣＡＡＣＣＴＧＡＡＧＡＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＣＡＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＡＣＣＧＣＣＴＧＧＡＣＣＡＣＣＧＡＧＧＧＣＡＴＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＣＡＣＣＣＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＡＧＣＡＧＣＧＣＣＧＡＧＡＣＣＡＣＣＧＣＣＣＣＴＡＧＣＧＴＧＴＡＣＣＣＴＣＴＧＧＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＧＣＣＣＴＧＡＡＡＡＧＣＡＡＴＡＧＣＡＴＧＧＴＧＡＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＴＧＴＧＡＡＧＧＧＣＴＡＴＴＴＣＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＴＧＡＣＣＧＴＧＡＣＣＴＧＧＡＡＣＴＣＣＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＧＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＴＧＣＣＧＴＧＣＴＧＣＡＧＡＧＣＧＧＣＣＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＡＣＡＡＧＣＡＧＣＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＴＡＧＣＡＧＣＡＣＣＴＧＧＡＧＣＡＧＣＣＡＡＧＣＣＧＴＧＡＣＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＧＣＣＣＡＣＣＣＴＧＣＴＡＧＣＡＧＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＧＡＴＣＧＴＧＣＣＴＡＧＡＧＡＧＴＧＣＡＡＣＣＣＴＴＧＣＧＧＣＴＧＣＡＣＣＧＧＣＡＧＣＧＡＧＧＴＧＡＧＣＡＧＣＧＴＧＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＴＣＣＴＡＡＧＡＣＣＡＡＧＧＡＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＣＣＴＡＡＧＧＴＧＡＣＣＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＡＴＣＴＣＴＣＡＧＡＡＣＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＧＡＧＡＴＴＣＡＧＣＴＧＧＴＴＣＡＴＣＧＡＣＧＡＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＣＡＣＣＧＣＴＣＡＧＡＣＣＣＡＣＧＣＣＣＣＴＧＡＧＡＡＧＣＡＡＡＧＣＡＡＣＡＧＣＡＣＣＣＴＴＡＧＡＡＧＣＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＴＧＣＣＴＡＴＣＧＴＧＣＡＣＡＧＡＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＡＧＡＣＣＴＴＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＧＡＡＣＡＧＣＧＧＣＧＣＣＴＴＣＣＣＴＧＣＣＣＣＴＡＴＣＧＡＧＡＡＧＡＧＣＡＴＣＡＧＣＡＡＧＣＣＴＧＡＧＧＧＣＡＣＣＣＣＴＡＧＡＧＧＣＣＣＴＣＡＡＧＴＧＴＡＣＡＣＣＡＴＧＧＣＣＣＣＴＣＣＴＡＡＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＡＧＣＣＡＡＧＴＧＡＧＣＡＴＣＡＣＣＴＧＣＡＴＧＧＴＧＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＣＣＣＴＣＣＴＧＡＣＡＴＣＴＡＣＡＣＣＧＡＧＴＧＧＡＡＧＡＴＧＡＡＣＧＧＡＣＡＧＣＣＴＣＡＡＧＡＧＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＡＣＡＣＣＣＣＴＣＣＴＡＣＣＡＴＧＧＡＣＡＣＣＧＡＣＧＧＣＡＧＣＴＡＣＴＴＣＣＴＧＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＧＡＡＣＧＴＧＡＡＧＡＡＧＧＡＧＡＣＣＴＧＧＣＡＧＣＡＡＧＧＣＡＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＣＴＧＣＡＧＣＧＴＧＣＴＧＣＡＣＧＡＧＧＧＣＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＣＡＣＡＣＣＧＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＧＡＧＣＣＡＣＡＧＣＣＣＴＧＧＣＡＡＧ

【0234】

配列番号３４：キメラ抗体（ＬＣ０）の軽鎖のアミノ酸配列
ＡＣＣＭＶＳＳＡＱＦＬＧＬＬＬＬＣＦＱＧＴＲＣＤＩＶＭＴＱＳＰＳＳＬＡＶＳＡＧＥＴＶＴＩＮＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＧＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＱＳＧＶＰＤＲＦＩＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＬＡＩＹＹＣＱＱＹＹＤＴＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＬＫＲＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰＳＴＥＱＬＡＴＧＧＡＳＶＶＣＬＭＮＮＦＹＰＲＤＩＳＶＫＷＫＩＤＧＴＥＲＲＤＧＶＬＤＳＶＴＤＱＤＳＫＤＳＴＹＳＭＳＳＴＬＳＬＴＫＡＤＹＥＳＨＮＬＹＴＣＥＶＶＨＫＴＳＳＳＰＶＶＫＳＦＮＲＮＥＣ

【0235】

配列番号３５：キメラ抗体＿ＬＣ（ＬＣ０）の軽鎖の最適化されたコード配列（チャイニーズハムスター（Ｃｒｉｃｅｔｕｌｕｓ ｇｒｉｓｅｕｓ）（ＣＨＯ）用）
ＡＣＣＡＴＧＧＴＧＡＧＣＡＧＣＧＣＴＣＡＧＴＴＣＣＴＧＧＧＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＴＧＴＧＣＴＴＣＣＡＡＧＧＣＡＣＡＡＧＡＴＧＣＧＡＣＡＴＣＧＴＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＡＧＣＣＣＴＡＧＣＡＧＣＣＴＧＧＣＣＧＴＧＡＧＣＧＣＣＧＧＣＧＡＧＡＣＣＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＡＣＴＧＣＡＡＧＡＧＣＴＣＴＣＡＧＡＧＣＣＴＧＣＴＧＴＡＣＡＧＣＧＧＣＡＡＴＣＡＧＡＡＧＡＡＣＴＡＣＣＴＧＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＡＣＡＧＡＧＣＣＣＴＡＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＴＧＧＧＣＴＡＧＣＡＣＡＡＧＡＣＡＧＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＣＴＧＡＣＡＧＡＴＴＣＡＴＣＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＣＡＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＣＴＧＧＣＣＡＴＣＴＡＣＴＡＣＴＧＴＣＡＧＣＡＧＴＡＣＴＡＣＧＡＣＡＣＣＣＣＴＴＧＧＡＣＣＴＴＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＣＴＧＡＡＧＡＧＡＧＣＣＧＡＣＧＣＣＧＣＣＣＣＴＡＣＣＧＴＧＡＧＣＡＴＣＴＴＣＣＣＴＣＣＴＡＧＣＡＣＣＧＡＧＣＡＧＣＴＧＧＣＣＡＣＣＧＧＣＧＧＣＧＣＴＡＧＣＧＴＧＧＴＧＴＧＣＣＴＧＡＴＧＡＡＣＡＡＣＴＴＣＴＡＣＣＣＴＡＧＡＧＡＣＡＴＣＡＧＣＧＴＧＡＡＧＴＧＧＡＡＧＡＴＣＧＡＣＧＧＣＡＣＣＧＡＧＡＧＡＡＧＡＧＡＣＧＧＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＡＧＣＧＴＧＡＣＣＧＡＣＣＡＡＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＡＴＧＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＡＣＣＡＡＧＧＣＣＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＧＣＣＡＣＡＡＣＣＴＧＴＡＣＡＣＣＴＧＣＧＡＧＧＴＧＧＴＧＣＡＣＡＡＧＡＣＡＡＧＣＡＧＣＡＧＣＣＣＴＧＴＧＧＴＧＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＡＡＡＣＧＡＧＴＧＣ

【0236】

配列番号３６：キメラ抗体ＨＣ０ＬＣ０のＶＨドメインは、以下の配列を有していた
ＡＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＧＰＫＥＳＬＫＩＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＡＶＭＮＷＶＲＧＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＲＴＫＰＮＮＹＡＴＦＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＦＳＲＤＤＳＫＳＭＶＹＬＱＭＤＮＬＫＴＥＤＴＡＭＹＹＣＴＡＷＴＴＥＧＩＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３６）（ＣＤＲの残基に下線が引かれている）。

【0237】

配列番号３７：最も近いヒト生殖系列遺伝子Ｖ領域は、ホモ・サピエンス（Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ）ＩＧＨＶ３－７３＊０１である
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＧＳＡＭＨＷＶＲＱＧＡＳＧＫＧＬＥＷＶＧＲＩＲＳＫＡＮＳＹＡＴＡＹＡＡＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲ

【0238】

配列番号３８：重鎖ＨＣ１
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＡＶＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＲＴＫＰＮＮＹＡＴＦＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＦＳＲＤＮＳＫＴＭＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＴＡＷＴＴＥＧＩＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ

【0239】

配列番号３９：重鎖ＨＣ２
ＡＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＫＩＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＡＶＭＮＷＶＲＱＡＳＧＫＧＬＥＷＶＧＲＩＲＴＫＰＮＮＹＡＴＦＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＭＹＹＣＴＡＷＴＴＥＧＩＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ

【0240】

配列番号４０：重鎖ＨＣ３
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＡＶＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＲＩＲＴＫＰＮＮＹＡＴＦＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＦＳＲＤＤＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＩＬＫＴＥＤＴＡＭＹＹＣＴＡＷＴＴＥＧＩＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ

【0241】

配列番号４１：重鎖ＨＣ４
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＡＶＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＲＴＫＰＮＮＹＡＴＦＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＦＳＲＤＤＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＴＡＷＴＴＥＧＩＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ

【0242】

配列番号４２：重鎖ＨＣ５
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＡＶＭＮＷＶＲＱＡＳＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＲＴＫＰＮＮＹＡＴＦＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＦＳＲＤＤＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＭＹＹＣＴＡＷＴＴＥＧＩＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ

【0243】

配列番号４３：軽鎖ＬＣ１
ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＡＧＥＴＶＴＩＮＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＧＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＱＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＹＹＤＴＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ

【0244】

配列番号４４：軽鎖ＬＣ２
ＤＩＶＭＴＱＳＰＳＳＬＡＶＳＬＧＥＴＡＴＩＮＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＧＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＱＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＡＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＬＡＩＹＹＣＱＱＹＹＤＴＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ

【0245】

配列番号４５：軽鎖ＬＣ３
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＧＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＱＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＹＤＴＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ

【0246】

配列番号４６：軽鎖ＬＣ４
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＧＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＬＡＩＹＹＣＱＱＹＹＤＴＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＬＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ

【0247】

配列番号４７：軽鎖ＬＣ５
ＤＩＶＭＴＱＳＰＳＳＬＡＶＳＡＧＥＲＡＴＩＮＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＧＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＱＳＧＶＰＤＲＦＩＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＩＹＹＣＱＱＹＹＤＴＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＬＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ

【0248】

配列番号４８：ヒトＩｇＧ１アイソタイプ定常ドメイン
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ

【0249】

配列番号４９：ヒトＩｇＫアイソタイプ定常ドメイン
ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ

【実施例】

【0250】

実施例
実施例１．ヒトＣＸＣＬ１６のＣＸＣＬ１６への結合
２５種類のＣＸＣＬ１６抗体の結合特性をバイオライトインターフェロメトリー（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）を使用して分析した。抗体は全て、新たに調製したランニングバッファーで希釈した。捕捉法を使用して、抗体を０．３μｇ／ｍＬで一連のバイオセンサーの表面に固定化した。組換えヒトＣＸＣＬ１６（ｒｈＣＸＣＬ１６）タンパク質（１００ｎＭ）を表面上に通過させ、１０分間結合反応を起こさせた。抗体と抗原の相互作用の結合データをバイオセンサー上において２５℃で収集した。その後、ランニングバッファーを１０分間流し、それらを解離させた。結合定数（ｋ_ａ）と解離定数（ｋ_ｄ）を観測し、平衡結合定数（Ｋ_Ｄ））を計算した。作製した２５種類の抗体のうち、５つの抗体が有意な結合親和性を示した（Ｋ_Ｄ＜１×１０^－８Ｍ）。Ｒ^２：適合データと実験データがどの程度相関しているかを示す値；Ｘ２：実験データとフィットさせた直線の間の誤差の尺度。

【0251】

選択した６つのＣＸＣＬ１６抗体の結合親和性をさらに特徴付けるために、タンパク質ベースのＥＬＩＳＡを行った。組換えヒトＣＸＣＬ１６抗原（９７６－ＣＸ、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、米国）を９６ウェルプレート上に固定化し、室温で２時間インキュベートした。非特異的な結合部位は、ＰＢＳ中１％のＢＳＡと共に４℃で一晩インキュベートすることによりブロックした。次いで、プレートをＰＢＳで洗浄した。様々な濃度（０．００１～１０ｎＭ）のヒト化ＣＸＣＬ１６抗体を固定化抗原と共に室温で２時間インキュベートした。インキュベーション後、プレートを洗浄し、ＨＲＰ標識抗ヒトＩｇＧ抗体（Ｗ４０３１、Ｐｒｏｍｅｇａ、米国）と共に０．５時間インキュベートし、基質溶液（ＤＹ００８Ｂ、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して現像した。結果を図１Ａに示すが、これは、ヒト化抗体ＨＣ４ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ２、ＨＣ５ＬＣ３、およびＨＣ５ＬＣ５の結合親和性が対照のＩｇＧ抗体よりも有意に高かったことを指し示している。

【0252】

マウスＣＸＣＬ１６抗原との交差反応性を評価するために、同じＥＬＩＳＡ実験を組換えマウスＣＸＣＬ１６抗原（５０３－ＣＸ、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて実施した。室温で２時間インキュベートすることにより、マウスＣＸＣＬ１６抗原を９６ウェルプレート上に固定化した。非特異的な結合部位は、ＰＢＳ中１％のＢＳＡと共に４℃で一晩インキュベートすることによりブロックした。コーティング後、プレートをＰＢＳで洗浄した。様々な濃度（０．００１～１０ｎＭ）のヒト化ＣＸＣＬ１６抗体を固定化抗原と共に室温で２時間インキュベートした。結合の後、プレートを洗浄し、ＨＲＰ標識抗ヒトＩｇＧ抗体（Ｗ４０３１、Ｐｒｏｍｅｇａ、米国）と共に０．５時間インキュベートし、基質溶液（ＤＹ００８Ｂ、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して現像した。結果が図１Ｂに示されている。ヒト化抗体の結合親和性はＩｇＧ抗体と同様であった。この結果は、ヒト化ＣＸＣＬ１６抗体がヒトＣＸＣＬ１６に特異的に結合することを指し示している。表６を参照。

【0253】

【表6】

【0254】

注：ＨＣ０ＬＣ０はヒトＣＸＣＬ１６に結合するキメラ抗体である；実施例７の関連する開示を参照のこと。ＮＤはシグナルが検出できなかったことを指す。「Ｒｅｓ＠３．７ｎＭ」は３．７ｎＭでの分解能を意味する。

【0255】

実施例２ 機能アッセイ
ａ．がん細胞の走化性および遊走の阻害

【0256】

ＣＸＣＲ６はケモカインＣＸＣＬ１６の受容体であり、ＣＸＣＲ６を保有する細胞はＣＸＣＬ１６に応答して遊走する。したがって、ＣＸＣＬ１６とＣＸＣＲ６の相互作用によって誘導される細胞遊走の阻害におけるＣＸＣＬ１６抗体の活性を評価するために、トランスウェル遊走アッセイを実施した。孔径８μｍのポリカーボネート膜（Ｃｏｒｎｉｎｇ、ニューヨーク州、米国）をゼラチンでプレコートし、膜を２４ウェルプレート中に配置した。膜は、各ウェルを上部チャンバーと下部チャンバーに分離した。上部チャンバーにはＣＸＣＲ６を過剰発現したＣＨＯ－Ｋ１細胞を播種した。下部チャンバーは、１００ｎｇ／ｍＬのｒｈＣＸＣＬ１６を含む培地で満たした。４～５時間後、下部チャンバーを１％クリスタルバイオレット溶液で染色し、下部チャンバーの遊走細胞数を数えた。結果は、ヒト化ＣＸＣＬ１６抗体ＨＣ４ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ２、ＨＣ５ＬＣ３、およびＨＣ５ＬＣ５が、ＣＸＣＲ６過剰発現ＣＨＯ－Ｋ１細胞の上部チャンバーから下部チャンバーへの遊走を阻害したことを示している。結果は、ｒｈＣＸＣＬ１６の処置がＣＸＣＲ６過剰発現ＣＨＯ－Ｋ１細胞の下部チャンバーへの細胞遊走を増加させた一方で、ヒト化ＣＸＣＬ１６抗体の処置が遊走を減少させたことを示している。図２Ａを参照。

【0257】

ＣＸＣＬ１６のブロックが、がん細胞の遊走の阻害を導き得ることを評価するために、トランスウェル遊走アッセイを行った。アッセイのために、孔径８μｍのポリカーボネート膜（Ｃｏｒｎｉｎｇ、ニューヨーク州、米国）を使用した。孔径８μｍのポリカーボネート膜（Ｃｏｒｎｉｎｇ、ニューヨーク州、米国）をゼラチンでプレコートし、膜を２４ウェルプレート中に配置した。膜は、各ウェルを上部チャンバーと下部チャンバーに分離した。ＣＸＣＬ１６抗体（１０～１００μｇ／ｍＬ）を上部および下部チャンバー内で０．５時間プレインキュベートした。上部チャンバーと下部チャンバーに甲状腺がん細胞ＢＨＰ１０－３Ｍ（１×１０^５／１００μＬ）と共培養馴化培地（０．５×共培養－ＣＭ）をそれぞれ播種した。

【0258】

共培養－ＣＭは、ＢＨＰ１０－３Ｍ細胞とＴＨＰ－１細胞の共培養から得られる馴化培地である。ＢＨＰ１０－３Ｍ細胞を１０ｍｌのＲＰＭＩ１６４０培地中、３×１０^６細胞で１００ｍｍ培養皿に播種した。２４時間培養後、ＴＨＰ－１細胞を６×１０^６個、追加的に播種した。その後、１０μＬの５ｍＭ ＰＭＡストック溶液（Ｖ１１７１、Ｐｒｏｍｅｇａ）を１０ｍＬのＲＰＭＩ培地に加えて、５μＭのＰＭＡを調製した。それはマクロファージの分化を誘導した。２４時間のインキュベーション後、甲状腺がん細胞とマクロファージの共培養から得られた馴化培地（共培養－ＣＭ）を回収したところ、それにはＣＸＣＬ１６が豊富に含まれていた。上部チャンバーで甲状腺がん細胞を、下部チャンバーで共培養－ＣＭを６時間インキュベートした後、下部チャンバーを１％クリスタルバイオレット溶液で染色し、遊走した細胞の数を計測した。共培養－ＣＭはＢＨＰ１０－３Ｍ細胞の下部チャンバーへの細胞遊走を増加させ、ヒト化ＣＸＣＬ１６抗体ＨＣ４ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ２、ＨＣ５ＬＣ３、およびＨＣ５ＬＣ５は遊走を減少させた。図２Ｂを参照。

【0259】

ＣＸＣＬ１６のブロックが、がん細胞の遊走の阻害を導くことを評価するために、トランスウェル遊走アッセイを行った。アッセイのために、孔径８μｍのポリカーボネート膜（Ｃｏｒｎｉｎｇ、ニューヨーク州、米国）を使用した。膜をゼラチンでプレコートし、インサートを２４ウェルプレート中に配置した。ＣＸＣＬ１６抗体（１０～１００μｇ／ｍＬ）を上部および下部チャンバー内で３０分間プレインキュベートした。上部チャンバーと下部チャンバーに乳がん細胞ＭＤＡ－ＭＢ－２３１（１×１０^５／１００μＬ）と共培養馴化培地（０．５×共培養－ＣＭ）をそれぞれ播種した。

【0260】

共培養－ＣＭは、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞とＴＨＰ－１細胞の共培養から得られる馴化培地である。ＢＨＰ１０－３Ｍ細胞を１０ｍｌのＲＰＭＩ１６４０培地中、３×１０^６細胞で１００ｍｍ培養皿に播種した。２４時間培養後、ＴＨＰ－１細胞を６×１０^６個、追加的に播種した。その後、１０μＬの５ｍＭ ＰＭＡストック溶液（Ｖ１１７１、Ｐｒｏｍｅｇａ）を１０ｍＬのＲＰＭＩ培地に加えて、５μＭのＰＭＡを調製した。それはマクロファージの分化を誘導した。２４時間のインキュベーション後、甲状腺がん細胞とマクロファージの共培養から得られた馴化培地（共培養－ＣＭ）を回収したところ、それにはＣＸＣＬ１６が豊富に含まれていた。上部チャンバーで乳がん細胞を、下部チャンバーで共培養－ＣＭを６時間インキュベートした後、下部チャンバーを１％クリスタルバイオレット溶液で染色し、遊走した細胞の数を計測した。共培養－ＣＭはＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞の下部チャンバーへの細胞遊走を増加させ、ヒト化ＣＸＣＬ１６抗体はそれを減少させた。図２Ｃを参照。

【0261】

ＣＸＣＬ１６のブロックが単球／マクロファージの遊走の阻害を導き得ることを評価するために、トランスウェル遊走アッセイを行った。アッセイのために、孔径５μｍのポリカーボネート膜（Ｃｏｒｎｉｎｇ、ニューヨーク州、米国）を使用した。膜をゼラチンでプレコートし、インサートを２４ウェルプレート中に配置した。ヒト化ＣＸＣＬ１６抗体（１０～１００μｇ／ｍＬ）を上部および下部チャンバー内で３０分間プレインキュベートした。上部チャンバーと下部チャンバーに単球細胞ＴＨＰ－１と共培養馴化培地を播種した。４時間後、下部チャンバーを１％クリスタルバイオレット溶液で染色し、遊走した細胞の数を数えた。共培養－ＣＭはＴＨＰ－１細胞の下部チャンバーへの細胞遊走を増加させ、ヒト化ＣＸＣＬ１６抗体はそれを減少させた。結果は、ヒト化ＣＸＣＬ１６抗体がＣＸＣＬ１６とＣＸＣＲ６の相互作用によって誘導される細胞遊走を阻害することを示唆した。ヒト化ＣＸＣＬ１６抗体は、甲状腺がん細胞および乳がん細胞を含むがん細胞の遊走を阻害する。ヒト化ＣＸＣＬ１６抗体によるがん細胞の遊走の阻害は、抗がん効果を指し示した。図２Ｄを参照。

【0262】

ｂ．細胞内Ａｋｔシグナル伝達経路の活性化、ＣＸＣＬ１６－Ａｋｔシグナル伝達が細胞遊走を媒介する
ＣＸＣＬ１６－ＣＸＣＲ６相互作用は、細胞内Ａｋｔシグナル伝達経路を活性化し、細胞遊走を促進する。この実験は、ＣＸＣＬ１６－ＣＸＣＲ６相互作用によって誘導されるＡｋｔシグナル伝達をブロックするＣＸＣＬ１６抗体の能力を評価するために設計した。がん細胞を、１０μｇ／ｍＬのヒト化ＣＸＣＬ１６抗体（ＨＣ４ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ２、ＨＣ５ＬＣ３、もしくはＨＣ５ＬＣ５）または対照抗体（ＭＡＢ９７６、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、ミネアポリス、ミネソタ州）の存在下で、１００ｎｇ／ｍＬのｒｈＣＸＣＬ１６（９７６－ＣＸ、Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ）により３０分間処置した。細胞溶解物を採取した。抗ｐＡｋｔ（希釈比１：１０００、＃９１０２；Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）、抗Ａｋｔ（希釈比１：１０００、＃４３７０；Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）、および抗βアクチン抗体（希釈比１：１０，０００、ＳＴＪ９１４６４、Ｓｔ Ｊｏｈｎ’ｓ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、英国）を使用した。結果は、ｒｈＣＸＣＬ１６が甲状腺がん細胞（図３Ｂ）、乳がん細胞（図３Ｃ）、および前立腺がん細胞（図３Ｄ）を含む様々ながん細胞においてＡｋｔのリン酸化を活性化する一方、ＣＸＣＬ１６抗体のＨＣ４ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ１、ＨＣ５ＬＣ２、ＨＣ５ＬＣ３、およびＨＣ５ＬＣ５がＡｋｔのリン酸化を抑止することを示している。

【0263】

ｃ．骨転移のｉｎ ｖｉｔｒｏ モデルにおける細胞遊走の阻害
骨の転移ニッチに似せた２チャンバー系を構築した。下部チャンバーには、ＣＸＣＬ１６が豊富に含まれるがん細胞／全骨髄細胞の共培養（ＣＭ）の馴化培地（共培養－ＣＭと呼ばれる）が含まれている。がん細胞培養物のみからのＣＭは、単独－ＣＭと呼ばれ、対照として使用される。単独－ＣＭには、無視できる濃度のＣＸＣＬ１６が含まれている。上部チャンバー（インサートを使用）は、転移チャンバーへと動員され得る細胞を収容している。ヒトＣＤ１１ｂ＋骨髄系細胞をＣＸＣＬ１６抗体で１時間処置し、処置細胞を上部チャンバーに加えた。４時間後、インサート（別名、上部チャンバー）を回収し、インサート内の細胞を染色し、転移ニッチへの細胞動員を阻害するＣＸＣＬ１６抗体の能力を評価した。図８Ａおよび図８Ｂに示すように、共培養－ＣＭ（高濃度のｓＣＸＣＬ１６）は単独－ＣＭ群と比較して増強された細胞遊走ポテンシャルを示した。

【0264】

ｄ．単独またはパクリタキセル（ＰＴＸ）と組み合わせた、同所性異種移植モデルにおける腫瘍増殖の阻害
本実施例は、ヒト化ＣＸＣＬ１６が単独またはパクリタキセル（ＰＴＸ）との組み合わせで、同所性異種移植モデルにおける腫瘍増殖を阻害することを示している。乳がんマウスモデルを作製するために、トリプルネガティブ乳がん細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－２３１（６．５×１０^５細胞）を、Ｔ細胞を欠くＢＡＬＢ／ｃヌードマウスの背中に移植した。細胞移植後５日目から各実験群に抗がん剤を投与した。「ＩｇＧ対照」群には、ＩｇＧ抗体を投与した。ＩｇＧ抗体（ＭＡＢ００６、Ｒ＆Ｄシステム）を５０ｍｃｇ／２０ｇ／日で週３回静脈内投与した。「ＰＴＸ」群には、パクリタキセルを投与した。パクリタキセル（Ｓ１１５０、Ｓｅｌｌｅｃｋｃｈｅｍ）を週に１回、１０ｍｇ／ｋｇ／マウスで腹腔内投与した。「抗ＣＸＣＬ１６」群には、抗ＣＸＣＬ１６抗体を投与した。抗マウスＣＸＣＬ１６抗体（ＭＡＢ５０３、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社、ミネアポリス、ＭＮ）を５０ｍｃｇ／２０ｇ／ｄａｙで週３回静脈内投与した。ＰＴＸ＋抗ＣＸＣＬ１６」群には、パクリタキセルと抗ＣＸＣＬ１６抗体の両方を投与した。腫瘍のサイズを７、１１、１３、１５、１８、２０日目に測定した。腫瘍のサイズをノギスで測定し、次の式を使用して腫瘍体積を計算した：体積＝１／２×ａ×ｂ２、ここで、ａ＝腫瘍の長径、ｂ＝腫瘍の短径。マウスを２０日目に屠殺し、腫瘍を除去し、腫瘍重量を測定した。結果は、マウスＣＸＣＬ１６抗体がマウス腫瘍モデルにおいて腫瘍の体積と重量を有意に減少させたことを示している。ＣＸＣＬ１６群における腫瘍の体積および重量の低減は、ＰＴＸ群と同等であった。それは、ヒト化ＣＸＣＬ１６抗体が腫瘍の増殖を阻害し、ｉｎ ｖｉｖｏで抗がん作用を有しうることを示唆している。図４Ａおよび図４Ｂを参照。

【0265】

実施例３．甲状腺がんモデルマウスに対する標的抗がん剤との併用効果
２×１０^６細胞の甲状腺未分化がん細胞株ＦＲＯをＴ細胞欠損ｎｕ／ｎｕマウスの背部に注射し、腫瘍が形成された５日目から各実験群に抗がん剤を投与した。対照群には、抗がん剤を投与せず、実験群１には、抗ＶＥＧＦ標的抗がん剤であるレンバチニブ（ＬＥＮＶＩＭＡ（登録商標））を３０ｍｇ／ｋｇ／日で週５回経口投与し、実験群２には、レンバチニブを投与し、抗ＣＸＣＬ１６治療抗体を１００ｍｃｇ／２０ｇ／日で週２回腹腔内投与した。腫瘍のサイズをノギスで測定し、次の式を使用して腫瘍体積を計算した：体積＝１／２×ａ×ｂ２、ここで、ａ＝腫瘍の長径、ｂ＝腫瘍の短径。

【0266】

図５に示すように、レンバチニブの治療効果が維持された第Ｉ相（２２日目まで）では、実験群１と実験群２の腫瘍増殖率は同程度であった。それでも、レンバチニブの治療効果が低下したため、割合が対照群のものと同じとなった。腫瘍が再び増殖し始める第２相（２２日後）では、ＣＸＣＬ１６治療抗体（抗ＣＸＣＬ１６抗体）を投与した実験群２では、実験群１に比べて、腫瘍の増殖率が有意に低減し、併用治療の相乗効果が指し示された。
実施例４．甲状腺がんマウスモデルに対する標的抗がん剤および／またはＰＤ－Ｌ１阻害剤との併用効果

【0267】

５×１０^６細胞の甲状腺未分化がん細胞株ＴＢＰ３７４３をＣ５７Ｂｌ／６マウスの背部に注射し、腫瘍が形成された５日目から各実験群に抗がん剤を投与した。対照群には、抗がん剤は投与しなかった。標的抗がん剤レンバチニブを実験群１に３０ｍｇ／ｋｇで週５回経口投与し、実験群２には、レンバチニブ経口投与と抗マウスＣＸＣＬ１６抗体を１００ｍｃｇ／２０ｇ／日で週２回注射し、レンバチニブを実験群３に投与し、レンバチニブの経口投与およびペプチドＰＤ－Ｌ１阻害剤（ＫＲ－２０１９００７２４６６－Ａに記載のとおり、その開示は全て参照により本明細書に組み込まれる）を週５回投与し、実験群４には、レンバチニブの経口投与、週５回のＰＤ－Ｌ１阻害剤（ペプチド）の注射、週２回の抗ＣＸＣＬ１６治療抗体の注射を併用した。

【0268】

実験の１５日目からは、レンバチニブ単独（実験群１）、レンバチニブ＋抗ＣＸＣＬ１６治療抗体（実験群２）、レンバチニブ＋ＰＤ－Ｌ１阻害剤（実験群３）と比較して、併用投与群では治療効果がより良好であった。実験１９日目には、レンバチニブ＋ＰＤ－Ｌ１阻害剤＋抗ＣＸＣＬ１６治療抗体の３剤併用療法群（実験群４）が最も良好な治療効果を示すことが確認された。図６を参照されたい。

【0269】

実施例５．乳がんマウスモデルに対する標的抗がん剤および／またはＰＤ－Ｌ１阻害剤との併用効果
２×１０^６個の乳がん細胞株４Ｔ１をＣ３Ｈマウスの背部に注射し、腫瘍が形成された５日目から各実験群に抗がん剤を投与した。対照群には、抗がん剤を投与せず、標的抗がん剤パクリタキセル（タキソール）を実験群に１０ｍｇ／ｋｇ／日で週２回腹腔内投与し、実験群２には、パクリタキセル投与と抗ＣＸＣＬ１６治療抗体を１００ｍｃｇ／２０ｇ／日で週２回腹腔内投与し、実験群３投与には、パクリタキセルを注射し、ＰＤ－Ｌ１阻害剤（ペプチド）を０．１ｍｇ／２０ｇ／日で週５回腹腔内投与し、実験グループ４には、パクリタキセルを注射し、ＰＤ－Ｌ１阻害剤（ペプチド）を週５回注射し、そして抗ＣＸＣＬ１６治療抗体を週２回注射した。

【0270】

図７に示すように、実験群１（タキソール単独）と実験群２および３（２剤併用療法）には明らかな治療効果はなかったが、実験の１７日目と１９日目には、パクリタキセル＋ＰＤ－Ｌ１阻害剤＋抗ＣＸＣＬ１６治療抗体（実験群４）の３剤併用療法が最も良好な治療効果を示した。

【0271】

よって、ＣＸＣＬ１６抗体は、標的抗がん剤および／またはＰＤ－Ｌ１阻害剤と組み合わせることで、相乗効果を示すことになる。したがって、がんを予防または治療するために、本発明のＣＸＣＬ１６抗体、標的抗がん剤および／または免疫チェックポイント阻害剤を組み合わせて使用できると期待される。

【0272】

実施例６．ＣＸＣＬ１６抗体はマウスモデルにおいて骨転移を阻害し得る
１．ゾレンドロン酸（ＺＡ）耐性骨転移の骨髄血清における、より高いＣＸＣＬ１６濃度
甲状腺未分化がん細胞株ＦＲＯ（２×１０^５）細胞／１０μＬ ＰＢＳ）を、生後６週の雌ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスの右脛骨に移植した。マウスを対照群とゾレドロン酸（ＺＡ）処置群に分けた。ゾレドロン酸は、骨転移の治療に有効であることが知られている薬剤である。ＺＡ処置群には、３日目から週に１回、ゾレンドロン酸（ＺＡ）を４μｇ／マウスで静脈内注射した。毎週、バイオルミネッセンスイメージング（ＢＬＩ）を評価した。細胞移植の４～５週間後にＢＬＩを観察した際のＺＡに対する治療反応は様々である。ＺＡ処置マウス１６匹中７匹で骨腫瘍が観察された。骨腫瘍を有していなかった９匹を「ＺＡ非耐性（ＺＡ＿ｎｏｎＲ）」群と定義し、骨腫瘍を有していた７匹を「ＺＡ耐性（ＺＡ－Ｒ）」群と指定した。ＺＡ＿ｎｏｎＲ群は７週目まで脛骨で無視できるＢＬＩシグナルを示したが、ＺＡ－Ｒは４～５週から７週までに腫瘍増殖を示した。

【0273】

細胞移植から５週間後、ＺＡ－Ｒの初期段階でマウスを屠殺した。骨髄血清を採取し、ＥＬＩＳＡを使用してＣＸＣＬ１６濃度を測定した。結果は、ＺＡ＿ＲにおけるＣＸＣＬ１６濃度がＺＡ＿ｎｏｎＲ群および対照群よりも有意に高かったことを示している。ＺＡ＿ｎｏｎＲにおけるＣＸＣＬ１６濃度は対照群よりも低かった。図９Ｂ～９Ｃを参照。結果は、骨転移におけるＺＡ耐性が、高いＣＸＣＬ１６濃度と関連していることを指し示している。
２． 抗ＣＸＣＬ１６抗体は骨転移の腫瘍増殖を低減させた

【0274】

甲状腺未分化がん細胞株ＦＲＯ（２×１０^５）細胞／１０μＬ ＰＢＳ）を、生後６週の雌ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスの右脛骨に移植した。３日目に、マウスを対照群、ＣＸＣＬ１６抗体（ａＣＸＣＬ１６）群、およびゾレドロン酸（ＺＡ）群に分けた。ＣＸＣＬ１６群では、抗ＣＸＣＬ１６抗体（ヒトＣＸＣＬ１６タンパク質に対するラットＩｇＧ、配列番号１２～１７のＣＤＲを有するラットＩｇＧ）を週に１回、２５μｇ／マウスで腹腔内注射した。ＺＡ処置群には、週に１回、ゾレンドロン酸（ＺＡ）を４μｇ／マウスで静脈内注射した。毎週、バイオルミネッセンスイメージング（ＢＬＩ）を評価した。図１０Ｂおよび図１０Ｃに示すように、２１日目では、ＣＸＣＬ１６群のＢＬＩシグナルは対照群よりも有意に低かったが、ＺＡ群とは同程度であった。これらの結果から、抗ＣＸＣＬ１６抗体は骨転移の腫瘍増殖を低減させることが指し示された。結果は、ＣＸＣＬ１６抗体がＺＡと同様な程度に骨転移の進行を阻害し、ＣＸＣＬ１６抗体が骨転移の阻害において潜在的な治療効果を有することも示唆している。

【0275】

３．ａＣＸＣＬ１６の処置はＺＡ耐性骨転移の腫瘍増殖を低減させた
甲状腺未分化がん細胞株ＦＲＯ（２×１０^５）細胞／１０μＬ ＰＢＳ）を、生後６週の雌ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスの右脛骨に移植した。３日目に、ＺＡを週１回、４μｇ／マウスで静脈注射した。２８日目に、ＺＡ耐性マウス、ＺＡ処置にもかかわらず骨腫瘍を有するマウスを選択した。それらをＺＡ群とＺＡ ａＣＸＣＬ１６群に分けた。ＺＡ群では、ＺＡを単独で注射したが、ＺＡ＋ａＣＸＣＬ１６群では、ＺＡと抗ヒトＣＸＣＬ１６抗体（配列番号１２～１７のＣＤＲを有するラットＩｇＧ）の両方を注射した。抗ＣＸＣＬ１６抗体を２５μｇ／マウスで週に１回、２８日目から４２日目まで２週間、腹腔内注射した。毎週、バイオルミネッセンスイメージング（ＢＬＩ）を評価した。図１１Ａ～１１Ｃに示すように、４２日目では、ＺＡ＋ａＣＸＣＬ１６群のＢＬＩシグナルは、ＺＡ群のものよりも有意に低かった。これらの結果から、抗ＣＸＣＬ１６抗体がＺＡ耐性骨腫瘍の増殖を低減させることが指し示された。

【0276】

実施例７．ヒト化ＣＸＣＬ１６抗体の生成
１．キメラ抗体ＨＣ０ＬＣ０の生成
ラットで産生された抗ヒトＣＸＣＬ１６抗体を取得した。質量分析法を使用して抗体をシークエンシングし、配列番号１２～１７に開示されるＣＤＲ配列を有することを決定した。ラット抗体のバリアントの配列は、以下にさらに説明するように、ラット抗体の定常領域配列をヒトＩｇＧ１抗体の定常領域配列で置き換えることによって設計した。キメラ抗体はＨＣ０ＬＣ０と呼ばれる。

【0277】

バリアント抗体の重鎖および軽鎖（それぞれ配列番号３２および配列番号３４）をコードするＤＮＡ配列（配列番号３３および配列番号３５）を合成し、哺乳動物一過性発現プラスミドｐＥＴＥｖ２にクローニングした（ＴＧＥＸ－ＨＣ－ｈＧ１、ＴＧＥＸ－ＬＣ－ｈｋ、ｐＯｐｔｉ ＶＥＣ、ｐＣＤＮＡ３．３、ｐＴＲＩＯｚ、ｐＦＵＳＥＣＨｉｇ、ｐＦＵＳＥ－ＣＬｉｇも使用され得る）。キメラ抗体の重鎖および軽鎖の発現には、ＣＨＯ細胞でより高いレベルの発現をもたらし得ることから、マウス抗体シグナルペプチドＭＧＷＴＬＶＦＬＦＬＬＳＶＴＡＧＶＨＳ（配列番号１８）およびＭＶＳＳＡＱＦＬＧＬＬＬＬＣＦＱＧＴＲＣ（配列番号１９）をそれぞれ使用した。

【0278】

ＣＨＯ細胞ベースの一過性発現系を使用してバリアント抗体を発現させ、得られた抗体を含む細胞培養上清を遠心分離と濾過によって回収した。これらのバリアント抗体を細胞培養上清からアフィニティークロマトグラフィーによって精製した（最先端のＡＫＴＡクロマトグラフィー装置を使用）。精製した抗体をリン酸緩衝生理食塩水中にバッファー交換した。最終的に、キメラ抗体ＨＣ０ＬＣ０を精製した。

【0279】

２．キメラ抗体ＨＣ０ＬＣ０のヒト化
ＣＤＲループ構造の最適な保持のために、ＩＭＧＴおよびＫａｂａｔ抗体ナンバリング系の組み合わせを用いて、キメラ抗体ＨＣ０ＬＣ０可変ドメインをシークエンシングし、ＣＤＲを同定した。ＩＭＧＴおよびＫａｂａｔ抗体ナンバリング系はよく知られており、例えば、Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．－Ｐ．ｅｔ ａｌ．，”ＩＭＧＴ ｕｎｉｑｕｅ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ ｆｏｒ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ａｎｄ Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｖａｒｉａｂｌｅ ｄｏｍａｉｎｓ ａｎｄ Ｉｇ ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ Ｖ－ｌｉｋｅ ｄｏｍａｉｎｓ”．Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２７，５５－７７（２００３）ＰＭＩＤ：１２４７７５０１ ＬＩＧＭ：２６８；ａｎｄ Ｄｕｎｂａｒ Ｊ ａｎｄ Ｄｅａｎｅ ＣＭ．ＡＮＡＲＣＩ：Ａｎｔｉｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ ａｎｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ．Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ（２０１６）を参照されたい。

【0280】

キメラ抗体ＨＣ０ＬＣ０のＶＨドメインは、シグナルペプチド配列を含まない以下の配列を有していた。

【0281】

ＡＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＧＰＫＥＳＬＫＩＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＡＶＭＮＷＶＲＧＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＲＴＫＰＮＮＹＡＴＦＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＦＳＲＤＤＳＫＳＭＶＹＬＱＭＤＮＬＫＴＥＤＴＡＭＹＹＣＴＡＷＴＴＥＧＩＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３６）（ＣＤＲの残基に下線が引かれている）。

【0282】

最も近いヒト生殖系列遺伝子Ｖ領域は、ホモ・サピエンス（Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ）ＩＧＨＶ３－７３＊０１である：

【0283】

ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＧＳＡＭＨＷＶＲＱＧＡＳＧＫＧＬＥＷＶＧＲＩＲＳＫＡＮＳＹＡＴＡＹＡＡＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲ（配列番号３７）（ＣＤＲの残基に下線が引かれている）

【0284】

げっ歯類のＶＨドメインとの比較のために、ＢＬＡＳＴ検索アルゴリズムを用いてヒトＩｇＧ配列のデータベースを検索し、上位２００のＢＬＡＳＴの結果からヒト可変ドメインの候補を選択した。３つのヒト可変ドメインが、フレームワークの相同性、重要なフレームワーク残基の維持、および標準的なループ構造の組み合わせに基づいて選択され、それらがアクセプターフレームワークとして使用される。その後、ＨＣ０ＬＣ０のＶＨのＣＤＲをこれらのアクセプターフレームワークにグラフトし、ヒト化ＶＨバリアントを作製する。場合によっては、生殖系列配列との緊密な類似性を維持しつつ、抗体を親抗体（ラットＣＸＣＬ１６抗体）により類似させるために、復帰突然変異を加えた。ＣＤＲの残基には下線が引かれている。

【0285】

＞ＶＨ１（配列番号１）
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＡＶＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＲＴＫＰＮＮＹＡＴＦＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＦＳＲＤＮＳＫＴＭＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＴＡＷＴＴＥＧＩＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ

【0286】

＞ＶＨ２（配列番号２）
ＡＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＫＩＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＡＶＭＮＷＶＲＱＡＳＧＫＧＬＥＷＶＧＲＩＲＴＫＰＮＮＹＡＴＦＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＭＹＹＣＴＡＷＴＴＥＧＩＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ

【0287】

＞ＶＨ３（配列番号３）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＡＶＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＲＩＲＴＫＰＮＮＹＡＴＦＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＦＳＲＤＤＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＩＬＫＴＥＤＴＡＭＹＹＣＴＡＷＴＴＥＧＩＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ

【0288】

＞ＶＨ４（配列番号４）

【0289】

ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＡＶＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＲＴＫＰＮＮＹＡＴＦＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＦＳＲＤＤＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＴＡＷＴＴＥＧＩＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ

【0290】

＞ＶＨ５（配列番号５）

【0291】

ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＡＶＭＮＷＶＲＱＡＳＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＲＴＫＰＮＮＹＡＴＦＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＦＳＲＤＤＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＭＹＹＣＴＡＷＴＴＥＧＩＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ

【0292】

同様に、ＣＤＲ－ループコンフォメーションの最適な保持のために、ＩＭＧＴとＫａｂａｔ抗体ナンバリング系の組み合わせを使用して、キメラ抗体ＨＣ０ＬＣ０の軽鎖の可変ドメインを決定した。

【0293】

キメラ抗体ＨＣ０ＬＣ０のＶＬドメインは、シグナルペプチド配列を含まない以下の配列を有していた。

【0294】

ＤＩＶＭＴＱＳＰＳＳＬＡＶＳＡＧＥＴＶＴＩＮＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＧＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＱＳＧＶＰＤＲＦＩＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＬＡＩＹＹＣＱＱＹＹＤＴＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＬＫ

【0295】

黄色でハイライトされたＣＤＲ残基はＩＭＧＴナンバリング系を使用して同定され、赤色でハイライトされたＣＤＲ残基はＫａｂａｔナンバリング系を使用して同定された。

【0296】

最も近いヒト生殖系列遺伝子Ｖ領域は、ホモ・サピエンス（Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ）ＩＧＫＶ４－１＊０１である：

【0297】

ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＳＳＱＳＶＬＹＳＳＮＮＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＣＶＡＶＹＹＣＱＱＹＹＳＴＰ

【0298】

ラットのＶＬドメインとの比較のために、ＢＬＡＳＴ検索アルゴリズムを用いてヒトＩｇＫ配列のデータベースを検索し、上位２００のＢＬＡＳＴの結果からヒト可変ドメインの候補を選択した。これらの候補を、フレームワークの相同性、重要なフレームワーク残基の維持、および標準的なループ構造の組み合わせに基づいて２つにまで絞った。これらのアクセプターフレームワークにＨＣ０ＬＣ０のＶＬのＣＤＲをグラフトしたものが、ヒト化バリアントとなる。ＶＨ１－５には、ヒト生殖細胞系列配列との緊密な類似性を維持しつつ、抗体を親抗体（ラットＣＸＣＬ１６抗体）により類似させるための復帰突然変異が含まれている。

【0299】

＞ＶＬ１（配列番号６）
ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＡＧＥＴＶＴＩＮＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＧＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＱＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＹＹＤＴＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ

【0300】

＞ＶＬ２（配列番号７）

【0301】

ＤＩＶＭＴＱＳＰＳＳＬＡＶＳＬＧＥＴＡＴＩＮＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＧＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＱＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＡＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＬＡＩＹＹＣＱＱＹＹＤＴＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ

【0302】

＞ＶＬ３（配列番号８）

【0303】

ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＧＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＱＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＹＤＴＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ

【0304】

＞ＶＬ４（配列番号９）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＧＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＬＡＩＹＹＣＱＱＹＹＤＴＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＬＫ

【0305】

＞ＶＬ５（配列番号１０）
ＤＩＶＭＴＱＳＰＳＳＬＡＶＳＡＧＥＲＡＴＩＮＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＧＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＱＳＧＶＰＤＲＦＩＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＩＹＹＣＱＱＹＹＤＴＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＬＫ

【0306】

３．ヒト化の検証
ヒト化バリアントをチェックして、それらがヒト化されているかどうかをＷＨＯのヒト化抗体の定義に従って確認した。Ｅｈｒｅｎｍａｎｎ Ｆ．，Ｋａａｓ Ｑ．ａｎｄ Ｌｅｆｒａｎｃ Ｍ．－Ｐ．２０１０ ＩＭＧＴ／３Ｄｓｔｒｕｃｔｕｒｅ－ＤＢ ａｎｄ ＩＭＧＴ／ＤｏｍａｉｎＧａｐＡｌｉｇｎ：ａ ｄａｔａｂａｓｅ ａｎｄ ａ ｔｏｏｌ ｆｏｒ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ ｏｒ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，ＭＨＣ，ＩｇＳＦ ａｎｄ ＭｈｃＳＦ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．３８，Ｄ３０１－３０７を参照。ヒト化鎖の可変ドメインは、全体として分析すると、他の種よりもヒトに近いＶ領域のアミノ酸配列を有している（ＩＭＭＵＮＯＧＥＮＥＴＩＣＳ ＩＮＦＯＲＭＡＴＩＯＮ ＳＹＳＴＥＭ（登録商標）（ＩＭＧＴ（登録商標））ＤｏｍａｉｎＧａｐＡｌｉｇｎツールを用いて評価）。表７を参照。

【0307】

【表7】

【0308】

４．Ｔ細胞エピトープスクリーニング
ＭＨＣクラスＩＩ分子の溝にペプチド配列が提示されると、ＣＤ４＋Ｔ細胞の活性化と免疫原性応答が引き起こされる。この反応を低減させるため、ＭＨＣクラスＩＩ分子への結合親和性を低下させることでＴ細胞を活性化し得る「Ｔ細胞エピトープ」の組み込みを回避するように、治療用タンパク質を設計することができる。

【0309】

元のラット抗体のＶＨおよびＶＬとヒト化バリアント配列をＭＨＣ ＩＩ結合ペプチドについてスクリーニングし、ｉｎ ｓｉｌｉｃｏアルゴリズムを使用してヒト化プロセスが高い親和性を持つペプチド配列を除去したことを確認した。以下の８つの対立遺伝子は世界人口の９９％以上を占め、ＭＨＣクラスＩＩエピトープの予測に使用される標準的な対立遺伝子セットである：ＤＲＢ１＊０１：０１；ＤＲＢ１＊０３：０１；ＤＲＢ１＊０４：０１；ＤＲＢ１＊０７：０１；ＤＲＢ１＊０８：０２；ＤＲＢ１＊１１：０１；ＤＲＢ１＊１３：０２；ＤＲＢ１＊１５：０１。Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｐｅｐｔｉｄｅ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ＨＬＡ ＤＲ，ＤＰ ａｎｄ ＤＱ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ．ＢＭＣ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ．１１：５６８；Ｇｏｎｚａｌｅｚ－Ｇａｌａｒｚａ ＦＦ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，３９（２０１１），Ｄ９１３－Ｄ９１９；Ｇｒｅｅｎｂａｕｍ Ｊ，ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ ６３（６）：３２５－３５を参照。

【0310】

本発明の以上の説明は例示のためのものであり、本発明が属する技術分野の当業者であれば、本発明の技術的精神または本質的な特徴を変更することなく、他の特定の形態に容易に変更できることを理解できる。したがって、上記の実施形態は、あらゆる点で例示的なものであり、制限的なものではない。

【図1A】

【図1B】

【図2A】

【図2B】

【図2C】

【図2D】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図3D】

【図4A】

【図4B】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8A】

【図8B】

【図9A】

【図9B】

【図9C】

【図10A】

【図10B】

【図10C】

【図11A】

【図11B】

【図11C】

【配列表】

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【国際調査報告】