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特表2024-543040化学療法誘発性末梢神経障害を評価及び治療するための組成物及び方法
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-11-19
(54)【発明の名称】化学療法誘発性末梢神経障害を評価及び治療するための組成物及び方法
(51)【国際特許分類】
G01N 33/483 20060101AFI20241112BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20241112BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20241112BHJP
A61K 45/06 20060101ALI20241112BHJP
C12Q 1/02 20060101ALI20241112BHJP
G01N 33/49 20060101ALI20241112BHJP
【ＦＩ】
G01N33/483 F
A61P35/00
A61K45/00
A61K45/06
C12Q1/02
G01N33/49 A
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024526787
(86)(22)【出願日】2022-11-03
(85)【翻訳文提出日】2024-07-05
(86)【国際出願番号】 US2022079254
(87)【国際公開番号】W WO2023081784
(87)【国際公開日】2023-05-11
(31)【優先権主張番号】63/275,271
(32)【優先日】2021-11-03
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/275,279
(32)【優先日】2021-11-03
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】519344682
【氏名又は名称】ランケナウ・インスティテュート・フォー・メディカル・リサーチ
(74)【代理人】
【識別番号】110000741
【氏名又は名称】弁理士法人小田島特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】ワロン，ユー．・マルガレータ
(72)【発明者】
【氏名】メッツ，ノーラン・エル．
【テーマコード（参考）】
2G045
4B063
4C084
【Ｆターム（参考）】
2G045AA25
2G045CA02
2G045FB05
4B063QA19
4B063QQ03
4B063QQ08
4B063QQ61
4B063QR72
4B063QR77
4B063QS03
4B063QS28
4B063QS36
4B063QS39
4B063QX02
4C084AA17
4C084AA20
4C084NA06
4C084ZB261
4C084ZB262
(57)【要約】
対象の赤血球のＧＳＨリサイクル依存的抗酸化活性の１つ以上の測定値を取得することを含む、化学療法誘発性神経障害（ＣＩＰＮ）に対する対象の易罹患性を評価するための方法及び組成物が提供される。
【選択図】なし
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
化学療法剤が投与される対象における化学療法誘発性神経障害（ＣＩＰＮ）に対する易罹患性またはＣＩＰＮの重症度を評価する方法であって、前記方法が、（ａ）化学療法剤の第１の投与の前に前記対象から取得される赤血球（ＲＢＣ）を含む１つ以上の生物学的試料におけるグルタチオン（ＧＳＨ）リサイクル活性のベースライン測定値を取得することと、
（ｂ）前記化学療法剤の第１の投与の後であるが、前記化学療法剤の第２の投与の前に前記対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の第１の測定値を取得することと、
（ｃ）前記化学療法剤の第２の投与の後であるが、前記化学療法剤の第３の投与の前に前記対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の第２の測定値を取得することと、
（ｄ）前記化学療法剤の第３の投与の後であるが、前記化学療法剤の第４の投与の前に前記対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の第３の測定値を取得することと、
（ｅ）前記ベースライン測定値、前記第１の測定値、前記第２の測定値、及び前記第３の測定値の平均値を取得することと、
を含み、
１．８５以下の平均値が、ＣＩＰＮに対する易罹患性またはＣＩＰＮの重症度を示す、前記方法。
【請求項2】
化学療法剤が投与される対象における化学療法誘発性神経障害（ＣＩＰＮ）に対する易罹患性またはＣＩＰＮの重症度を評価する方法であって、前記方法が、（ａ）前記化学療法剤の第１の投与の後であるが、前記化学療法剤の第２の投与の前に前記対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の第１の測定値を取得することと、
（ｂ）前記化学療法剤の第３の投与の後であるが、前記化学療法剤の第４の投与の前に前記対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の第２の測定値を取得することと、
（ｃ）前記ベースライン測定値、前記第１の測定値、及び前記第２の測定値の平均値を取得することと、
を含み、
１．８以下の平均値が、ＣＩＰＮに対する易罹患性またはＣＩＰＮの重症度を示す、前記方法。
【請求項3】
化学療法剤が投与される対象における化学療法誘発性神経障害（ＣＩＰＮ）に対する易罹患性の評価またはＣＩＰＮの重症度の予測を行う方法であって、前記方法が、（ａ）化学療法剤の第１の投与の前に前記対象から取得される赤血球（ＲＢＣ）を含む１つ以上の生物学的試料におけるグルタチオン（ＧＳＨ）リサイクル活性のベースライン測定値を取得することと、
（ｂ）（ｉ）前記化学療法剤の第１の投与の後であるが、前記化学療法剤の第２の投与の前に前記対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の測定値、
（ｉｉ）前記化学療法剤の第２の投与の後であるが、前記化学療法剤の第３の投与の前に前記対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の測定値、または
（ｉｉｉ）前記化学療法剤の第３の投与の後であるが、前記化学療法剤の第４の投与の前に前記対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の測定値を取得することと、
を含み、
ＧＳＨリサイクル活性の減少が、ＣＩＰＮに対する易罹患性またはＣＩＰＮの重症度の増加を予測する、前記方法。
【請求項4】
前記ＧＳＨリサイクル活性の減少が、（（ｉ）、（ｉｉ）、または（ｉｉｉ）から取得される測定値－ベースライン）／ベースライン）として計算される減少パーセントである、請求項３に記載の方法。
【請求項5】
前記ＧＳＨリサイクル活性の減少が、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、または少なくとも５０％である、請求項４に記載の方法。
【請求項6】
前記方法が、前記化学療法剤での前記対象の治療を変更すること、及び／またはＣＩＰＮの治療を投与すること、をさらに含む、請求項１～５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項7】
治療レジメンの一部として、前記化学療法剤での治療が、少なくとも少なくとも２回、少なくとも３回、少なくとも４回、少なくとも５回、少なくとも６回、少なくとも７回、少なくとも８回、少なくとも９回、少なくとも１０回、少なくとも１１回、少なくとも１２回、少なくとも１３回、少なくとも１４回、少なくとも１５回、または少なくとも１６回、前記対象に投与される、請求項１または６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項8】
前記方法が、グレード０ ＣＩＰＮ、グレード１ ＣＩＰＮ、グレード２ ＣＩＰＮ、またはグレード３ ＣＩＰＮに対する易罹患性の増加を予測する、請求項１～７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項9】
前記対象の治療が、タキサン、白金化合物、任意選択でオキサリプラチンもしくはシスプラチン、ビンカアルカロイド、サリドマイド、エポチロン、エリブリン、イピリムマブ、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、もしくはボルテゾミブ、ＦＯＬＦＯＸ、またはオキシプラチン（ｏｘｉｐｌａｔｉｎ）及びＦＯＬＦＯＸの組み合わせを含む、請求項１～８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項10】
化学療法剤での治療の後のＣＩＰＮに対する易罹患性を低減する方法であって、前記方法が、（ａ）化学療法剤の第１の投与の前に前記対象から取得される赤血球（ＲＢＣ）を含む１つ以上の生物学的試料におけるグルタチオン（ＧＳＨ）リサイクル活性のベースライン測定値を取得することと、
（ｂ）前記化学療法剤の第１の投与の後であるが、前記化学療法剤の第２の投与の前に前記対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の第１の測定値を取得することと、
（ｃ）前記化学療法剤の第２の投与の後であるが、前記化学療法剤の第３の投与の前に前記対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の第２の測定値を取得することと、
（ｄ）前記化学療法剤の第３の投与の後であるが、前記化学療法剤の第４の投与の前に前記対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の第３の測定値を取得することと、
（ｅ）前記ベースライン測定値、前記第１の測定値、前記第２の測定値、及び前記第３の測定値の平均値を取得することであって、１．８５以下の平均値が、ＣＩＰＮに対する易罹患性またはＣＩＰＮの重症度を示す、前記取得することと、
（ｆ）化学療法誘発性神経障害（ＣＩＰＮ）に対する易罹患性もしくはＣＩＰＮの重症
度を低減するために前記対象の治療レジメンを変更し、及び／またはＣＩＰＮの治療を投与することと、
を含む、前記方法。
【請求項11】
化学療法剤での治療の後のＣＩＰＮに対する易罹患性を低減する方法であって、前記方法が、（ａ）前記化学療法剤の第１の投与の後であるが、前記化学療法剤の第２の投与の前に前記対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の第１の測定値を取得することと、
（ｂ）前記化学療法剤の第３の投与の後であるが、前記化学療法剤の第４の投与の前に前記対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の第２の測定値を取得することと、
（ｃ）前記第１の測定値及び前記第２の測定値の平均値を取得することであって、１．８以下の平均値が、ＣＩＰＮに対する易罹患性またはＣＩＰＮの重症度を示す、前記取得することと、
（ｄ）化学療法誘発性神経障害（ＣＩＰＮ）に対する易罹患性もしくはＣＩＰＮの重症度を低減するために前記対象の治療レジメンを変更し、及び／またはＣＩＰＮの治療を投与することと、
を含む、前記方法。
【請求項12】
化学療法剤での治療の後のＣＩＰＮに対する易罹患性を低減する方法であって、前記方法が、（ａ）化学療法剤の第１の投与の前に前記対象から取得される赤血球（ＲＢＣ）を含む１つ以上の生物学的試料におけるグルタチオン（ＧＳＨ）リサイクル活性のベースライン測定値を取得することと、
（ｂ）（ｉ）前記化学療法剤の第１の投与の後であるが、前記化学療法剤の第２の投与の前に前記対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の測定値、
（ｉｉ）前記化学療法剤の第２の投与の後であるが、前記化学療法剤の第３の投与の前に前記対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の測定値、または
（ｉｉｉ）前記化学療法剤の第３の投与の後であるが、前記化学療法剤の第４の投与の前に前記対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の測定値を取得することであって、ＧＳＨリサイクル活性の減少が、ＣＩＰＮの重症度またはＣＩＰＮに対する易罹患性の増加を予測する、前記取得することと、
（ｃ）化学療法誘発性神経障害（ＣＩＰＮ）に対する易罹患性もしくはＣＩＰＮの重症度を低減するために前記対象の治療レジメンを変更し、及び／またはＣＩＰＮの治療を投与することと、
を含む、前記方法。
【請求項13】
前記ＧＳＨリサイクル活性の減少が、（（ｉ）、（ｉｉ）、または（ｉｉｉ）から取得される測定値－ベースライン）／ベースライン）として計算される減少パーセントである、請求項１２に記載の方法。
【請求項14】
前記ＧＳＨリサイクル活性の減少が、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、または少なくとも５０％である、請求項１３に記載の方法。
【請求項15】
治療レジメンの一部として、前記化学療法剤での治療が、少なくとも少なくとも２回、少なくとも３回、少なくとも４回、少なくとも５回、少なくとも６回、少なくとも７回、少なくとも８回、少なくとも９回、少なくとも１０回、少なくとも１１回、少なくとも１２回、少なくとも１３回、少なくとも１４回、少なくとも１５回、または少なくとも１６回、前記対象に投与される、請求項１０～１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項16】
前記方法が、グレード０ ＣＩＰＮ、グレード１ ＣＩＰＮ、グレード２ ＣＩＰＮ、またはグレード３ ＣＩＰＮに対する易罹患性の増加を予測する、請求項１０～１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項17】
前記対象の治療が、タキサン、白金化合物、任意選択でオキサリプラチンもしくはシスプラチン、ビンカアルカロイド、サリドマイド、エポチロン、エリブリン、イピリムマブ、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、もしくはボルテゾミブ、ＦＯＬＦＯＸ、またはオキシプラチン（ｏｘｉｐｌａｔｉｎ）及びＦＯＬＦＯＸの組み合わせを含む、請求項１０～１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項18】
前記対象の治療を変更することが、前記化学療法剤のその後の用量または投与量を低減することを含む、請求項１０～１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項19】
前記対象の治療を変更することが、異なる化学療法剤での治療を含む、請求項１０～１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項20】
前記対象の治療を変更することが、代替または追加の化学療法剤を投与することを含む、請求項１０～１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項21】
前記対象の治療を変更することが、前記化学療法剤の投与を中止することを含む、請求項１０～２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項22】
前記対象の治療を変更することが、異なる化学療法剤での治療を含む、請求項１０～２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項23】
対象における化学療法誘発性神経障害（ＣＩＰＮ）に対する易罹患性またはＣＩＰＮの重症度を治療が変える能力を評価するための方法であって、前記方法が、（ａ）化学療法剤の第１の投与の前に前記対象から取得される赤血球（ＲＢＣ）を含む１つ以上の生物学的試料におけるグルタチオン（ＧＳＨ）リサイクル活性のベースライン測定値を取得することと、
（ｂ）前記化学療法剤の第１の投与の後であるが、前記化学療法剤の第２の投与の前に前記対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の第１の測定値を取得することと、
（ｃ）前記化学療法剤の第２の投与の後であるが、前記化学療法剤の第３の投与の前に前記対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の第２の測定値を取得することと、
（ｄ）前記化学療法剤の第３の投与の後であるが、前記化学療法剤の第４の投与の前に前記対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の第３の測定値を取得することと、
（ｅ）前記ベースライン測定値、前記第１の測定値、前記第２の測定値、及び前記第３の測定値の平均値を取得することであって、１．８５以下の平均値が、ＣＩＰＮに対する易罹患性またはＣＩＰＮの重症度を示す、前記取得することと、
（ｆ）ＣＩＰＮの前記治療を前記対象に投与することと、
を含む、前記方法。
【請求項24】
対象における化学療法誘発性神経障害（ＣＩＰＮ）に対する易罹患性またはＣＩＰＮの重症度を治療が変える能力を評価するための方法であって、前記方法が、（ａ）前記化学療法剤の第１の投与の後であるが、前記化学療法剤の第２の投与の前に前記対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の第１の測定値を取得することと、
（ｂ）前記化学療法剤の第３の投与の後であるが、前記化学療法剤の第４の投与の前に前記対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の第２の測定値を取得することと、
（ｃ）前記ベースライン測定値、前記第１の測定値、及び前記第２の投与の平均値を取得することであって、１．８以下の平均値が、ＣＩＰＮに対する易罹患性またはＣＩＰＮの重症度を示す、前記取得することと、
（ｄ）ＣＩＰＮの前記治療を前記対象に投与することと、
を含む、前記方法。
【請求項25】
対象における化学療法誘発性神経障害（ＣＩＰＮ）に対する易罹患性またはＣＩＰＮの重症度を治療が変える能力を評価するための方法であって、前記方法が、（ａ）化学療法剤の第１の投与の前に前記対象から取得される赤血球（ＲＢＣ）を含む１つ以上の生物学的試料におけるグルタチオン（ＧＳＨ）リサイクル活性のベースライン測定値を取得することと、
（ｂ）（ｉ）前記化学療法剤の第１の投与の後であるが、前記化学療法剤の第２の投与の前に前記対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の測定値、
（ｉｉ）前記化学療法剤の第２の投与の後であるが、前記化学療法剤の第３の投与の前に前記対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の測定値、または
（ｉｉｉ）前記化学療法剤の第３の投与の後であるが、前記化学療法剤の第４の投与の前に前記対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の測定値を取得することであって、ＧＳＨリサイクル活性の減少が、ＣＩＰＮに対する易罹患性またはＣＩＰＮの重症度の増加を予測する、前記取得することと、
（ｃ）ＣＩＰＮの前記治療を前記対象に投与することと、
を含む、前記方法。
【請求項26】
前記ＧＳＨリサイクル活性の減少が、（（ｉ）、（ｉｉ）、または（ｉｉｉ）から取得される測定値－ベースライン）／ベースライン）として計算される減少パーセントである、請求項２５に記載の方法。
【請求項27】
前記ＧＳＨリサイクル活性の減少が、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、または少なくとも５０％である、請求項２６に記載の方法。
【請求項28】
治療レジメンの一部として、前記化学療法剤での治療が、少なくとも少なくとも２回、少なくとも３回、少なくとも４回、少なくとも５回、少なくとも６回、少なくとも７回、少なくとも８回、少なくとも９回、少なくとも１０回、少なくとも１１回、少なくとも１２回、少なくとも１３回、少なくとも１４回、少なくとも１５回、または少なくとも１６回、前記対象に投与される、請求項２３～２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項29】
前記方法が、グレード０ ＣＩＰＮ、グレード１ ＣＩＰＮ、グレード２ ＣＩＰＮ、またはグレード３ ＣＩＰＮに対する易罹患性の増加を予測する、請求項２３～２８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項30】
前記対象の治療が、タキサン、白金化合物、任意選択でオキサリプラチンもしくはシスプラチン、ビンカアルカロイド、サリドマイド、エポチロン、エリブリン、イピリムマブ、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、もしくはボルテゾミブ、ＦＯＬＦＯＸ、またはオキシプラチン（ｏｘｉｐｌａｔｉｎ）及びＦＯＬＦＯＸの組み合わせを含む、請求項２３～２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項31】
前記１つ以上の生物学的試料が、全血を含む、請求項１～３０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項32】
（ｉ）治療の前に前記対象から取得される前記１つ以上の血液試料が１日以上の日に取得され、及び／または（ｉｉ）治療の後に前記対象から取得される前記１つ以上の血液試料が１日以上の日に取得される、請求項１～３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項33】
ＧＳＨリサイクル活性の１回以上の測定が、ヒドロキシエチルジスルフィド（ＨＥＤＳ）の酵素的な変換を測定することを含む、請求項１～３２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項34】
生物学的試料をヒドロキシエチルジスルフィド（ＨＥＤＳ）と接触させることと、前記ＨＥＤＳで処理された前記試料によって放出されるメルカプトエタノール（ＭＥ）の量を定量化し、ＭＥの吸光度読み取り値を分光光度的に測定することと、吸光度読み取り値をＭＥ濃度に変換することと、前記試料が取得された時点での総ＲＢＣ数にＭＥ濃度を正規化することと、前記試料におけるインタクトなＲＢＣのＧＳＨリサイクル依存的抗酸化活性を評価することと、を含む、請求項１～３３のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【0001】
化学療法誘発性末梢神経障害（ＣＩＰＮ）は、シスプラチン、オキサリプラチン、及びカルボプラチンのような白金ベースの化学療法の身体障害性の副作用である。この副作用はすべての患者に生じるわけではないが、この副作用が生じる患者は、生涯続く慢性神経障害のリスクを有する。
【0002】
がんサバイバーシップ問題は、がん治療の前向きな成果と並行して大きくなっている。結果として、ＣＩＰＮ症例の診断、予後、及び治療に目が向けられることが増えている。さまざまな抗腫瘍薬及びそれらの用量に起因するＣＩＰＮの有病率は大きく異なる。実際、化学療法を受けている患者のおよそ７０％が治療の最初の１ヶ月の間にＣＩＰＮを発症する一方で、こうした患者の２０～３０％は、化学療法の休止から６ヶ月以降に慢性ＣＩＰＮへと移行する。重要なことに、こうした遅発性の合併症の症状は、数ヶ月間持続するだけでなく、進行性に増悪もし得る。軽度の神経障害が悪化する症例または新たな形態のＣＩＰＮを発症する症例は、「コースティング」と呼ばれている。コースティングの発症時には化学療法剤は投与されていない上に、患者は無がん状態であり得るが、その早期がん治療によって引き起こされた神経障害に依然として罹患していることもあって、この障害は臨床医に大きな課題を突き付けている。
【0003】
予防または治療向けに薬理学的方法は開発されているが、慢性ＣＩＰＮのリスクが最も高い患者を特定するための組成物及び方法を開発することも不可欠である。
【発明の概要】
【0004】
本発明者らは、化学療法剤の投与の前、間、及び後の対象の血流における酸化ストレスのレベルを評価することによって慢性化学療法誘発性末梢神経障害（ＣＩＰＮ）に対する患者の易罹患性を評価するための方法を発見した。したがって、本発明者らは、血液における酸化ストレス及び毒性の検出向けのアッセイの新規の使用を明らかにしており、患者の治療または化学療法レジメンを最適化するためにこうした測定を使用する。
【0005】
一態様では、化学療法剤が投与される対象における化学療法誘発性神経障害（ＣＩＰＮ）に対する易罹患性またはＣＩＰＮの重症度を評価する方法が本明細書で提供され、この方法は、（ａ）化学療法剤の第１の投与の前に対象から取得される赤血球（ＲＢＣ）を含む１つ以上の生物学的試料におけるグルタチオン（ＧＳＨ）リサイクル活性のベースライン測定値を取得することと、（ｂ）化学療法剤の第１の投与の後であるが、化学療法剤の第２の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の第１の測定値を取得することと、（ｃ）化学療法剤の第２の投与の後であるが、化学療法剤の第３の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の第２の測定値を取得することと、（ｄ）化学療法剤の第３の投与の後であるが、化学療法剤の第４の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の第３の測定値を取得することと、（ｅ）ベースライン測定値、第１の測定値、第２の測定値、及び第３の測定値の平均値を取得することと、を含む。
【0006】
一態様では、化学療法剤が投与される対象における化学療法誘発性神経障害（ＣＩＰＮ）に対する易罹患性またはＣＩＰＮの重症度を評価する方法が本明細書で提供され、この方法は、（ａ）化学療法剤の第１の投与の後であるが、化学療法剤の第２の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の第１の測定値を取得することと、（ｂ）化学療法剤の第３の投与の後であるが、化学療法
剤の第４の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の第２の測定値を取得することと、（ｃ）ベースライン測定値、第１の測定値、及び第２の測定値の平均値を取得することと、を含む。
剤の第４の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の第２の測定値を取得することと、（ｃ）ベースライン測定値、第１の測定値、及び第２の測定値の平均値を取得することと、を含む。
【0007】
別の態様では、化学療法剤が投与される対象における化学療法誘発性神経障害（ＣＩＰＮ）に対する易罹患性の評価またはＣＩＰＮの重症度の予測を行う方法が本明細書で提供され、この方法は、（ａ）化学療法剤の第１の投与の前に対象から取得される赤血球（ＲＢＣ）を含む１つ以上の生物学的試料におけるグルタチオン（ＧＳＨ）リサイクル活性のベースライン測定値を取得することと、（ｂ）（ｉ）化学療法剤の第１の投与の後であるが、化学療法剤の第２の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の測定値、（ｉｉ）化学療法剤の第２の投与の後であるが、化学療法剤の第３の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の測定値、または（ｉｉｉ）化学療法剤の第３の投与の後であるが、化学療法剤の第４の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の測定値を取得することであって、ＧＳＨリサイクル活性の減少が、ＣＩＰＮに対する易罹患性またはＣＩＰＮの重症度の増加を予測する、取得することと、を含む。
【0008】
さらに別の態様では、化学療法剤での治療の後のＣＩＰＮに対する易罹患性を低減する方法が本明細書で提供され、この方法は、（ａ）化学療法剤の第１の投与の前に対象から取得される赤血球（ＲＢＣ）を含む１つ以上の生物学的試料におけるグルタチオン（ＧＳＨ）リサイクル活性のベースライン測定値を取得することと、（ｂ）化学療法剤の第１の投与の後であるが、化学療法剤の第２の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の第１の測定値を取得することと、（ｃ）化学療法剤の第２の投与の後であるが、化学療法剤の第３の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の第２の測定値を取得することと、（ｄ）化学療法剤の第３の投与の後であるが、化学療法剤の第４の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の第３の測定値を取得することと、（ｅ）ベースライン測定値、第１の測定値、第２の測定値、及び第３の測定値の平均値を取得することであって、１．８５以下の平均値が、ＣＩＰＮに対する易罹患性またはＣＩＰＮの重症度を示す、取得することと、（ｆ）化学療法誘発性神経障害（ＣＩＰＮ）に対する易罹患性もしくはＣＩＰＮの重症度を低減するために対象の治療レジメンを変更し、及び／またはＣＩＰＮの治療を投与することと、を含む。
【0009】
さらに別の態様では、化学療法剤での治療の後のＣＩＰＮに対する易罹患性を低減する方法が本明細書で提供され、この方法は、（ａ）化学療法剤の第１の投与の後であるが、化学療法剤の第２の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の第１の測定値を取得することと、（ｂ）化学療法剤の第３の投与の後であるが、化学療法剤の第４の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の第２の測定値を取得することと、（ｃ）第１の測定値及び第２の測定値の平均値を取得することであって、１．８以下の平均値が、ＣＩＰＮに対する易罹患性またはＣＩＰＮの重症度を示す、取得することと、（ｄ）化学療法誘発性神経障害（ＣＩＰＮ）に対する易罹患性もしくはＣＩＰＮの重症度を低減するために対象の治療レジメンを変更し、及び／またはＣＩＰＮの治療を投与することと、を含む。
【0010】
さらに別の態様では、化学療法剤での治療の後のＣＩＰＮに対する易罹患性を低減する方法が本明細書で提供され、この方法は、（ａ）化学療法剤の第１の投与の前に対象から取得される赤血球（ＲＢＣ）を含む１つ以上の生物学的試料におけるグルタチオン（ＧＳ
Ｈ）リサイクル活性のベースライン測定値を取得することと、（ｂ）（ｉ）化学療法剤の第１の投与の後であるが、化学療法剤の第２の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の測定値、（ｉｉ）化学療法剤の第２の投与の後であるが、化学療法剤の第３の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の測定値、または（ｉｉｉ）化学療法剤の第３の投与の後であるが、化学療法剤の第４の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の測定値を取得することであって、ＧＳＨリサイクル活性の減少が、ＣＩＰＮの重症度またはＣＩＰＮに対する易罹患性の増加を予測する、取得することと、（ｃ）化学療法誘発性神経障害（ＣＩＰＮ）に対する易罹患性もしくはＣＩＰＮの重症度を低減するために対象の治療レジメンを変更し、及び／またはＣＩＰＮの治療を投与することと、を含む。
Ｈ）リサイクル活性のベースライン測定値を取得することと、（ｂ）（ｉ）化学療法剤の第１の投与の後であるが、化学療法剤の第２の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の測定値、（ｉｉ）化学療法剤の第２の投与の後であるが、化学療法剤の第３の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の測定値、または（ｉｉｉ）化学療法剤の第３の投与の後であるが、化学療法剤の第４の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の測定値を取得することであって、ＧＳＨリサイクル活性の減少が、ＣＩＰＮの重症度またはＣＩＰＮに対する易罹患性の増加を予測する、取得することと、（ｃ）化学療法誘発性神経障害（ＣＩＰＮ）に対する易罹患性もしくはＣＩＰＮの重症度を低減するために対象の治療レジメンを変更し、及び／またはＣＩＰＮの治療を投与することと、を含む。
【0011】
別の態様では、対象における化学療法誘発性神経障害（ＣＩＰＮ）に対する易罹患性またはＣＩＰＮの重症度を治療が変える能力を評価するための方法が本明細書で提供され、この方法は、（ａ）化学療法剤の第１の投与の前に対象から取得される赤血球（ＲＢＣ）を含む１つ以上の生物学的試料におけるグルタチオン（ＧＳＨ）リサイクル活性のベースライン測定値を取得することと、（ｂ）化学療法剤の第１の投与の後であるが、化学療法剤の第２の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の第１の測定値を取得することと、（ｃ）化学療法剤の第２の投与の後であるが、化学療法剤の第３の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の第２の測定値を取得することと、（ｄ）化学療法剤の第３の投与の後であるが、化学療法剤の第４の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の第３の測定値を取得することと、（ｅ）ベースライン測定値、第１の測定値、第２の測定値、及び第３の測定値の平均値を取得することであって、１．８５以下の平均値が、ＣＩＰＮに対する易罹患性またはＣＩＰＮの重症度を示す、取得することと、（ｆ）ＣＩＰＮの治療を対象に投与することと、を含む。
【0012】
別の態様では、対象における化学療法誘発性神経障害（ＣＩＰＮ）に対する易罹患性またはＣＩＰＮの重症度を治療が変える能力を評価するための方法が本明細書で提供され、この方法は、（ａ）化学療法剤の第１の投与の後であるが、化学療法剤の第２の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の第１の測定値を取得することと、（ｂ）化学療法剤の第３の投与の後であるが、化学療法剤の第４の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の第２の測定値を取得することと、（ｃ）ベースライン測定値、第１の測定値、及び第２の投与の平均値を取得することであって、１．８以下の平均値が、ＣＩＰＮに対する易罹患性またはＣＩＰＮの重症度を示す、取得することと、（ｄ）ＣＩＰＮの治療を対象に投与することと、を含む。
【0013】
別の態様では、対象における化学療法誘発性神経障害（ＣＩＰＮ）に対する易罹患性またはＣＩＰＮの重症度を治療が変える能力を評価するための方法が本明細書で提供され、この方法は、（ａ）化学療法剤の第１の投与の前に対象から取得される赤血球（ＲＢＣ）を含む１つ以上の生物学的試料におけるグルタチオン（ＧＳＨ）リサイクル活性のベースライン測定値を取得することと、（ｂ）（ｉ）化学療法剤の第１の投与の後であるが、化学療法剤の第２の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の測定値、（ｉｉ）化学療法剤の第２の投与の後であるが、化学療法剤の第３の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の測定値、または（ｉｉｉ）化学療法剤の第３の投与の後であるが、化学療法剤の第４の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の測定値を取得することであって、ＧＳＨリサ
イクル活性の減少が、ＣＩＰＮに対する易罹患性またはＣＩＰＮの重症度の増加を予測する、取得することと、（ｃ）ＣＩＰＮの治療を対象に投与することと、を含む。
イクル活性の減少が、ＣＩＰＮに対する易罹患性またはＣＩＰＮの重症度の増加を予測する、取得することと、（ｃ）ＣＩＰＮの治療を対象に投与することと、を含む。
【0014】
これらの方法の他の態様及び利点は、以下の詳細な説明にさらに記載される。
【図面の簡単な説明】
【0015】
【図1】神経系障害のグレード分類基準を含む表を提供する。
【図2】患者の年齢を平均ＣＩＰＮグレードと比較する分析から得られた結果を示す。
【図3】患者の性別と１年のうちの時期とを比較するＣｈｅｍｏｔｏｘスコアの分析から得られた結果を示す。
【図4】４つの異なる収集時点の最小値を利用して、患者についてＣｈｅｍｏｔｏｘスコア対平均ＣＩＰＮグレードを決定する分析から得られた結果を示す。
【図5】患者ベースライン／治療前Ｃｈｅｍｏｔｏｘスコアを使用してグレード３ ＣＩＰＮ対グレード０ ＣＩＰＮを予測する能力を示す。
【図6】第１の治療の後であるが、第２の治療の前（「プレ２」）に決定された患者Ｃｈｅｍｏｔｏｘスコアを使用してグレード３ ＣＩＰＮ対グレード０ ＣＩＰＮを予測する能力を示す。
【図7】一連の４つの時点から取得された患者Ｃｈｅｍｏｔｏｘスコアを使用してグレード３ ＣＩＰＮ対グレード０ ＣＩＰＮを予測する能力を示す。
【図8】ＣＩＰＮを予測する上で、ベースライン／治療前評価のみを使用する方法よりも、治療の間の複数のＣｈｅｍｏｘスコアを利用する手法の方が優れていることを実証するＲＯＣ曲線を含むグラフを示す。分析に使用した患者の総数は２６０（Ｎ＝２６０）である。最初の４回の被検試料採取の平均値を使用すると、ＲＯＣは０．８に近づいている。
【図9A】４つの異なる時点（Ａ）または２つの異なる時点（Ｂ）で取得されたＣｈｅｍｏｔｏｘスコアを使用する患者の平均Ｃｈｅｍｏｔｏｘスコア対ＣＩＰＮ重症度を示す。
【図9B】４つの異なる時点（Ａ）または２つの異なる時点（Ｂ）で取得されたＣｈｅｍｏｔｏｘスコアを使用する患者の平均Ｃｈｅｍｏｔｏｘスコア対ＣＩＰＮ重症度を示す。
【図10】治療の間の個々の患者内での変動及びＣｈｅｍｏｔｏｘスコアの相対変化の例を示すグラフを提供する。
【図11】４つの時点から取得されたＣｈｅｍｏｔｏｘスコアを使用して、タキソールを含む治療（Ａ）またはオキサリプラチン／ＦＯＬＦＯＸ併用治療（Ｂ）を受けている患者においてグレード３ ＣＩＰＮ対グレード０を予測する上での精度を示す。
【図12】本明細書で提供されるハイスループットアッセイにおいて利用される８つのウェルストリップを示す。これら８つのウェルストリップは、インキュベートステップ、遠心分離ステップ、及び吸光度読み取りステップの間に試料を保持するフレーム内にロードできるものである（最大１２個）。
【図13】本明細書で提供されるハイスループットプレートベースのアッセイ及び以前に説明されたチューブベースの方法を使用した試料の並行分析から得られた結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【0016】
本明細書に記載の方法及び組成物は、対象における化学療法誘発性末梢神経障害（ＣＩＰＮ）に対する易罹患性を評価すること、及び化学療法剤の投与を含む治療レジメンを創出または改変するためにその評価を使用することを対象とする。
【0017】
本発明者らは、血液における抗酸化グルタチオン（ＧＳＨ）のリサイクルの測定値が対
象におけるＣＩＰＮまたはＣＩＰＮの重症度を予測することを示している。具体的には、化学療法の投与の前後の患者の血液における経時変化を利用することで、ＣＩＰＮのリスクが上昇している患者を特定できることが実証されている。具体的には、ベースラインＧＳＨリサイクル能力のレベルが低下したままであり、化学療法の複数サイクルの間にリバウンドしない場合、患者は、ＣＩＰＮのリスクが上昇している。
象におけるＣＩＰＮまたはＣＩＰＮの重症度を予測することを示している。具体的には、化学療法の投与の前後の患者の血液における経時変化を利用することで、ＣＩＰＮのリスクが上昇している患者を特定できることが実証されている。具体的には、ベースラインＧＳＨリサイクル能力のレベルが低下したままであり、化学療法の複数サイクルの間にリバウンドしない場合、患者は、ＣＩＰＮのリスクが上昇している。
【0018】
理論によって拘束されることを望むものではないが、白金ベースの治療は、ニューロン障害、軸索障害、及び／または髄鞘障害を含む末梢神経の構造変化を誘発し得る活性酸素種（ＲＯＳ）のバーストを引き起こす。グルタチオンは天然の体内抗酸化物質であり、還元酸化（レドックス）ホメオスタシスにおいて重要な役割を担う。化学療法後に患者によっては生じるＧＳＨリサイクル能力の変化は、下記の理由からＣＩＰＮを予測するものであると仮定されている。活性酸素種（ＲＯＳ）は、さまざまな組織及び細胞成分を破壊することが知られている。神経障害は、イオンチャネル、微小管、後根神経節、小神経線維、ミトコンドリア、及びミエリンに対する損傷によって引き起こされ、ＲＯＳは、ミトコンドリア、ミエリンシート、及びカルシウムイオンホメオスタシスに損傷を与えることが知られている。ＧＳＨは、ＲＯＳの中和に重要な抗酸化物質である。ＲＯＳがＧＳＨによって中和される場合、後者は酸化されて二量体形態（ＧＳＳＧ）となり、このＧＳＳＧは、より多くのＲＯＳを中和し得るその還元型単量体形態（ＧＳＨ）へのリサイクルに必要となる。したがって、より多くのＲＯＳが、それらの中和に利用可能な存在ＧＳＨよりも多く生成された場合は組織損傷が生じ得る。何故、ＧＳＳＧを効率的にリサイクルし、ＲＯＳのクエンチに十分なレベルに化学療法中にＧＳＨレベルを維持できる患者がいる一方で、それができない患者もいるのかは不明である。
【0019】
本発明者らは、化学療法ががん患者に投与される期間の間にフリーラジカルが効率的に除去されるようにＧＳＨをリサイクルする能力に自然に生じる個体差を患者のＣＩＰＮリスクが反映し得ると結論付けた。ＧＳＨリサイクルによって維持されるレドックスホメオスタシスを化学療法の間にアッセイされるバイオマーカーとして使用することで、個体における慢性ＣＩＰＮのリスクが予測される。
【0020】
ＧＳＨ活性は、化学療法治療によって生成されるフリーラジカルのバーストを細胞が生き延びる能力における極めて重要な決定因子であることが知られている。したがって、細胞がＲＯＳを解毒し、組織損傷を最小化するには、効率的なＧＳＨリサイクルが不可欠である。本発明者らは、グルタチオン（ＧＳＨ）によって維持されるレドックスホメオスタシスと対象における慢性ＣＩＰＮに対する易罹患性との間の関連性を特定した。
【0021】
現在のところ、ＣＩＰＮを治療または予防するための承認された薬理学的手段は存在しない。救命の可能性のある化学療法の用量低減、遅延、または中止のみが、ＣＩＰＮの発症及び進行を唯一制限し得る。一方で、多くのがん患者及びがん専門医がＣＩＰＮのリスクに関心を強めており、これと同時に、この副作用を軽減または予防するための研究が続けられている。したがって、リスクが最も高い患者を特定し、治療レジメンを適切に変更または付加してＣＩＰＮを除くか、またはその重症度を低減することに高い関心が寄せられている。
【0022】
本明細書で使用される場合、「化学療法誘発性末梢神経障害」または「ＣＩＰＮ」という用語は、化学療法で治療されているまたは治療されたことがある患者における末梢神経の損傷から生じる症状を指すか、または当該症状を説明するものである。患部神経に応じて、症状には、限定されないが、刺痛（「ピリピリ感」）、疼痛、灼熱感、感覚の低下、接触、温度、圧力、または疼痛に対する感受性の増加、感触の喪失（圧力、接触、高温、または低温に対する知覚麻痺または感知能力低下であり得る）、物を持ち上げるまたは保持するための指の使用困難、手からの物の落下、平衡感覚障害、つまづきまたはよろめき
による歩行困難、圧力または温度に対する通常以上の痛み（例えば、低温感受性）、筋肉縮小、筋力低下、嚥下困難、便秘、排尿困難、血圧変化、及び反射の低下または喪失を伴う神経伝導速度の変化が含まれる。ＣＩＰＮの重症度の評価にはグレード分類スケールを利用することができる（例えば、図１を参照のこと）。Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｍｅｄ Ｒｅｐ．２０１７ Ｍａｒ；６（３）：２６７－２７１も参照のこと（当該文献は、参照によって本明細書に組み込まれる）。
による歩行困難、圧力または温度に対する通常以上の痛み（例えば、低温感受性）、筋肉縮小、筋力低下、嚥下困難、便秘、排尿困難、血圧変化、及び反射の低下または喪失を伴う神経伝導速度の変化が含まれる。ＣＩＰＮの重症度の評価にはグレード分類スケールを利用することができる（例えば、図１を参照のこと）。Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｍｅｄ Ｒｅｐ．２０１７ Ｍａｒ；６（３）：２６７－２７１も参照のこと（当該文献は、参照によって本明細書に組み込まれる）。
【0023】
本明細書で使用される場合、「痛覚過敏」は、疼痛に対する感受性の増加を指し、これは、侵害受容器または末梢神経の損傷（すなわち、神経障害）によって引き起こされ得る。この用語は、一時的及び永続的な痛覚過敏を指し、一次性痛覚過敏（すなわち、損傷組織に直接的に生じる疼痛感受性）及び二次性痛覚過敏（すなわち、損傷組織の周辺の非損傷組織に生じる疼痛感受性）の両方を包含する。この用語は、限定されないが、薬物毒性によって引き起こされる神経障害、薬物毒性に起因する神経障害、またはその他の様式で薬物毒性と関連する神経障害によって引き起こされる痛覚過敏を包含する。いくつかの実施形態では、痛覚過敏は、化学療法誘発性末梢神経障害によって引き起こされる。
【0024】
一態様では、ＣＩＰＮに対する易罹患性を評価するための方法は、酸化ストレスのレベルについて、赤血球（ＲＢＣ）を含む哺乳類対象の生物学的試料をアッセイすることを含む。酸化ストレスは、本質的には、フリーラジカルの生成と、抗酸化物質による中和を介してその有害作用を体が相殺または解毒する能力と間の不均衡である。一実施形態では、アッセイは、酸化ストレスに対する抗酸化応答における品質の指標として、試料におけるＲＢＣのＧＳＨリサイクル活性を評価することによって実施される。このアッセイは、化学療法の間に対象のＲＢＣのＧＳＨリサイクル能力の低下（すなわち、高酸化ストレスを生き延びる能力の相対的な低下）が、対象がＣＩＰＮを発症するリスクの上昇と逆相関したという発見に基づく。
【0025】
本明細書に記載の方法によれば、生物学的試料は、化学療法剤の投与の前及び後に哺乳類対象から取得される。「生物学的試料」または「試料」は、本明細書で言及される場合、赤血球を含む生物学的体液を意味する。ある特定の実施形態では、生物学的試料は、全血である。ある特定の実施形態では、試料は、ＲＢＣを含む別の体液である。ある特定の実施形態では、試料は、希釈される。ある特定の実施形態では、試料は、濃縮試料である。
【0026】
「患者」または「対象」は、本明細書で使用される場合、ヒト、獣医学的動物または家畜、飼育動物またはペット、ならびに臨床研究に通常は使用される動物（マウス及びラットなど）を含む哺乳類動物を意味する。より具体的には、こうした方法及び組成物の対象はヒトである。ある特定の実施形態では、対象は、がんを有する。
【0027】
「担体」は、本明細書で使用される場合、例えば、本発明の活性剤が維持され得る希釈剤、マトリックス、補助剤、保存剤（例えば、チメロソール（Ｔｈｉｍｅｒｓｏｌ）、ベンジルアルコール）、抗酸化物質（例えば、アスコルビン酸、メタ重亜硫酸ナトリウム）、可溶化剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ８０、Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ８０）、乳化剤、緩衝剤（例えば、トリスＨＣｌ、酢酸塩、リン酸塩）、抗微生物剤、増量物質（例えば、ラクトース、マンニトール）、賦形剤、助剤、または媒体を指す。担体は、石油起源、動物起源、植物起源、または合成起源のものを含む、水及び油などの滅菌液体であり得る。水または生理食塩水ならびにデキストロース水溶液及びグリセロール水溶液も担体として用いられ得る。
【0028】
「化学療法剤」は、本明細書で使用される場合、がんの治療に使用され得る任意の化合物（その誘導体を含む）を指す。化学療法剤（例えば、抗がん剤）は当業者によく知られ
ており、こうした化学療法剤には、限定されないが、アントラセンジオン（アントラキノン）（アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン（ダウノマイシン；ルビドマイシン）、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、及びバルルビシン）など）、ミトキサントロン、ならびにピクサントロン；白金ベースの薬剤（例えば、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、サトラプラチン、ピコプラチン、ネダプラチン、トリプラチン、及びリポプラチン）；タモキシフェン及びその代謝物（４－ヒドロキシタモキシフェン（アフィモキシフェン）及びＮ－デスメチル－４－ヒドロキシタモキシフェン（エンドキシフェン）など）；タキサン（パクリタキセル（タキソール）及びドセタキセルなど）；アルキル化剤（例えば、ナイトロジェンマスタード（メクロレタミン（ＨＮ２）、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファラン（Ｌ－サルコリシン）、及びクロラムブシルなど））；エチレンイミン及びメチルメラミン（例えば、ヘキサメチルメラミン、チオテパ、スルホン酸アルキル（ブスルファンなど）、ニトロソ尿素（カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＬＪ）、セムスチン（メチル－ＣＣＮ－－Ｕ）、及びストレプトゾエイン（ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｅｉｎ）（ストレプトゾトシン）など）、ならびにトリアゼン（デカルバジン（ｄｅｃａｒｂａｚｉｎｅ）（ＤＴＩＣ；ジメチルトリアゼノイミダゾールカルボキサミド）など）；代謝拮抗剤（例えば、葉酸類似体（メトトレキサート（アメトプテリン）など）、ピリミジン類似体（フルオロウラシル（５－フルオロウラシル；５－ＦＵ）、フロクスウリジン（フルオロデオキシウリジン；ＦＵｄＲ）、及びシタラビン（シトシンアラビノシド）など）、ならびにプリン類似体及び関連阻害剤（メルカプトプリン（６－メルカプトプリン；６－ＭＰ）、チオグアニン（６－チオグアニン；６－ＴＧ）、及びペントスタチン（２’－デオキシコフォンニシン（ｃｏｆｏｎｎｙｃｉｎ））など））；天然物（例えば、ビンカアルカロイド（ビンブラスチン（ＶＬＢ）及びビンクリスチンなど）、エピポドフィロトキシン（エトポシド及びテニポシドなど）、ならびに抗生物質（ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）、ブレオマイシン、プリカマイシン（ミスラマイシン）、及びマイトマイシン（マイトマイシンＱ）など）；酵素（Ｌ－アスパラギナーゼなど）；生物学的応答調節剤（インターフェロンアルファなど）；置換尿素（ヒドロキシ尿素など）；メチルヒドラジン誘導体（プロカルバジン（Ｎ－メチルヒドラジン；ＭＩＨ）など）；副腎皮質機能抑制剤（ミトタン（ｏ，ｐ’－ＤＤＤ）及びアミノグルテチミドなど）；それらの類似体、それらの誘導体、ならびにそれらの組み合わせが含まれる。当該技術分野において知られるさらに他の細胞増殖抑制性化学療法剤もまた、本明細書に記載の方法に有用であり得る。例えば、米国特許第９，１８６，３５７号に記載の化学療法（参照によって組み込まれる）を参照のこと。
ており、こうした化学療法剤には、限定されないが、アントラセンジオン（アントラキノン）（アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン（ダウノマイシン；ルビドマイシン）、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、及びバルルビシン）など）、ミトキサントロン、ならびにピクサントロン；白金ベースの薬剤（例えば、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、サトラプラチン、ピコプラチン、ネダプラチン、トリプラチン、及びリポプラチン）；タモキシフェン及びその代謝物（４－ヒドロキシタモキシフェン（アフィモキシフェン）及びＮ－デスメチル－４－ヒドロキシタモキシフェン（エンドキシフェン）など）；タキサン（パクリタキセル（タキソール）及びドセタキセルなど）；アルキル化剤（例えば、ナイトロジェンマスタード（メクロレタミン（ＨＮ２）、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファラン（Ｌ－サルコリシン）、及びクロラムブシルなど））；エチレンイミン及びメチルメラミン（例えば、ヘキサメチルメラミン、チオテパ、スルホン酸アルキル（ブスルファンなど）、ニトロソ尿素（カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＬＪ）、セムスチン（メチル－ＣＣＮ－－Ｕ）、及びストレプトゾエイン（ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｅｉｎ）（ストレプトゾトシン）など）、ならびにトリアゼン（デカルバジン（ｄｅｃａｒｂａｚｉｎｅ）（ＤＴＩＣ；ジメチルトリアゼノイミダゾールカルボキサミド）など）；代謝拮抗剤（例えば、葉酸類似体（メトトレキサート（アメトプテリン）など）、ピリミジン類似体（フルオロウラシル（５－フルオロウラシル；５－ＦＵ）、フロクスウリジン（フルオロデオキシウリジン；ＦＵｄＲ）、及びシタラビン（シトシンアラビノシド）など）、ならびにプリン類似体及び関連阻害剤（メルカプトプリン（６－メルカプトプリン；６－ＭＰ）、チオグアニン（６－チオグアニン；６－ＴＧ）、及びペントスタチン（２’－デオキシコフォンニシン（ｃｏｆｏｎｎｙｃｉｎ））など））；天然物（例えば、ビンカアルカロイド（ビンブラスチン（ＶＬＢ）及びビンクリスチンなど）、エピポドフィロトキシン（エトポシド及びテニポシドなど）、ならびに抗生物質（ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）、ブレオマイシン、プリカマイシン（ミスラマイシン）、及びマイトマイシン（マイトマイシンＱ）など）；酵素（Ｌ－アスパラギナーゼなど）；生物学的応答調節剤（インターフェロンアルファなど）；置換尿素（ヒドロキシ尿素など）；メチルヒドラジン誘導体（プロカルバジン（Ｎ－メチルヒドラジン；ＭＩＨ）など）；副腎皮質機能抑制剤（ミトタン（ｏ，ｐ’－ＤＤＤ）及びアミノグルテチミドなど）；それらの類似体、それらの誘導体、ならびにそれらの組み合わせが含まれる。当該技術分野において知られるさらに他の細胞増殖抑制性化学療法剤もまた、本明細書に記載の方法に有用であり得る。例えば、米国特許第９，１８６，３５７号に記載の化学療法（参照によって組み込まれる）を参照のこと。
【0029】
ある特定の実施形態では、方法は、タキサン、白金化合物、任意選択でオキサリプラチンまたはシスプラチン、ビンカアルカロイド、サリドマイド、エポチロン、エリブリン、イピリムマブ、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、またはボルテゾミブである化学療法剤を対象に投与することを含む。
【0030】
本明細書で使用される場合、「がん」という用語は、無制御の細胞増殖によって典型的には特徴付けられる哺乳類における生理学的状態を指すか、または当該生理学的状態を説明するものである。一実施形態では、「がん」という用語は、固形腫瘍の存在によって特徴付けられる任意のがんを意味する。別の実施形態では、がんは、血液がんである。本明細書で言及される場合、がんには、限定されないが、黒色腫、乳がん、脳がん、結腸／直腸がん、肺がん、卵巣がん、副腎がん、肛門がん、胆管がん、膀胱がん、骨がん、子宮内膜がん、食道がん、眼がん、腎がん、喉頭がん、肝がん、頭頸部がん、鼻咽頭がん、骨肉腫、口腔がん、卵巣がん、膵がん、前立腺がん、横紋筋肉腫、唾液腺がん、胃がん、精巣がん、甲状腺がん、腟がん、肺がん、リンパ腫、骨髄腫、及び神経内分泌がんが含まれる。
【0031】
「化学療法レジメン」は、本明細書に記載の方法において使用される場合、一般に、１
つもしくは２つの異なる化学療法剤の併用投与もしくは連続投与、または３～１０個の異なる化学療法剤の併用投与もしくは連続投与、のいずれかを意味する。本明細書に記載の方法では、２剤以下のレジメン（化学療法剤を含まなくてもよい）の選択または３剤以上のレジメンの選択は、血液試料の酸化レベルに依存する。対象由来の試料が高いグルタチオン（ＧＳＨ）リサイクル依存的抗酸化活性（すなわち、高酸化ストレス）を示す場合、化学療法レジメンが変更されて、レジメンが含む化学療法剤の数が増やされ得る。対象由来の試料が低いグルタチオン（ＧＳＨ）リサイクル依存的抗酸化活性（すなわち、低酸化ストレス）を示す場合、投薬レジメンが変更されて、レジメンが含む化学療法剤の数が減らされるか、または治療の化学療法剤レジメンの終了時期が早められるか、もしくはそれが不要なものとして使用されないことさえもあり得る。ある特定の実施形態では、化学療法レジメンは、フォリン酸（ロイコボリン、ＦＯＬ）、フルオロウラシル（５－ＦＵ、Ｆ）、及びオキサリプラチン（Ｅｌｏｘａｔｉｎ、ＯＸ）（すなわち、ＦＯＬＦＯＸ）の組み合わせを含む。ある特定の実施形態では、化学療法レジメンは、Ｒ－ＣＨＯＰ（リツキシマブ、シクロホスファミド、ドキソルビシン塩酸塩／ヒドロキシダウノマイシン、ビンクリスチン硫酸塩／Ｏｎｃｏｖｉｎ、及びプレドニゾン）の組み合わせを含む。ある特定の実施形態では、化学療法レジメンは、ＡＢＶＤ（ドキソルビシン塩酸塩／アドリアマイシン、ブレオマイシン、ビンブラスチン硫酸塩、及びダカルバジン）を含む。ある特定の実施形態では、化学療法レジメンは、Ｒ－ＣＶＰ（リツキシマブ、シクロホスファミド、ビンクリスチン硫酸塩／Ｏｎｃｏｖｉｎ、及びプレドニゾン）を含む。
つもしくは２つの異なる化学療法剤の併用投与もしくは連続投与、または３～１０個の異なる化学療法剤の併用投与もしくは連続投与、のいずれかを意味する。本明細書に記載の方法では、２剤以下のレジメン（化学療法剤を含まなくてもよい）の選択または３剤以上のレジメンの選択は、血液試料の酸化レベルに依存する。対象由来の試料が高いグルタチオン（ＧＳＨ）リサイクル依存的抗酸化活性（すなわち、高酸化ストレス）を示す場合、化学療法レジメンが変更されて、レジメンが含む化学療法剤の数が増やされ得る。対象由来の試料が低いグルタチオン（ＧＳＨ）リサイクル依存的抗酸化活性（すなわち、低酸化ストレス）を示す場合、投薬レジメンが変更されて、レジメンが含む化学療法剤の数が減らされるか、または治療の化学療法剤レジメンの終了時期が早められるか、もしくはそれが不要なものとして使用されないことさえもあり得る。ある特定の実施形態では、化学療法レジメンは、フォリン酸（ロイコボリン、ＦＯＬ）、フルオロウラシル（５－ＦＵ、Ｆ）、及びオキサリプラチン（Ｅｌｏｘａｔｉｎ、ＯＸ）（すなわち、ＦＯＬＦＯＸ）の組み合わせを含む。ある特定の実施形態では、化学療法レジメンは、Ｒ－ＣＨＯＰ（リツキシマブ、シクロホスファミド、ドキソルビシン塩酸塩／ヒドロキシダウノマイシン、ビンクリスチン硫酸塩／Ｏｎｃｏｖｉｎ、及びプレドニゾン）の組み合わせを含む。ある特定の実施形態では、化学療法レジメンは、ＡＢＶＤ（ドキソルビシン塩酸塩／アドリアマイシン、ブレオマイシン、ビンブラスチン硫酸塩、及びダカルバジン）を含む。ある特定の実施形態では、化学療法レジメンは、Ｒ－ＣＶＰ（リツキシマブ、シクロホスファミド、ビンクリスチン硫酸塩／Ｏｎｃｏｖｉｎ、及びプレドニゾン）を含む。
【0032】
「一緒に投与される」または「組み合わせられる」化合物は、同じ治療レジメンにおいて同じ時点または別々の時点に、同じ組成物の一部として投与され得るか、または別々に投与され得る。
【0033】
「グルタチオンリサイクル活性」は、どの程度、ＲＢＣがトリペプチドＧＳＨをその酸化状態から還元状態へと変換し、それによってＲＯＳを中和し得るかを意味する。ＧＳＨリサイクル活性が相対的に上昇すると、酸化型アイソフォームであるグルタチオンジスルフィド（ＧＳＳＧ）が還元型アイソフォームであるグルタチオンモノマー（ＧＳＨ）へとリサイクルされることによって酸化ストレス及びＲＯＳから細胞が保護される。適切なＧＳＨリサイクル依存的抗酸化活性は、こうした方法の生物学的試料において測定可能であり、一実施形態では、ＯｘＰｈｏｓ（商標）Ｃｅｌｌ Ｓｕｒｖｉｖａｌ Ｋｉｔ，カタログ番号ＫＬＤ－０２，Ｒｏｃｋｌａｎｄ Ｉｎｃを使用することによって測定可能である。このアッセイでは、β－メルカプトエタノール（ＭＥ）を放出するＧＳＨ→ＧＳＳＧ→ＧＳＨの変換を伴うグルタチオン依存的な解毒の間接的な指標としてヒドロキシエチルジスルフィド（ＨＥＤＳ）が使用される。ある特定の実施形態では、方法では、試薬で処理された血液試料によって放出されるβ－メルカプトエタノール（ＭＥ）の量を定量化し、ＭＥの吸光度読み取り値を分光光度化学的に測定し、吸光度読み取り値をＭＥ濃度に変換し、血液採取時点の総赤血球数にＭＥ濃度を正規化し、試料におけるインタクトな赤血球のＧＳＨリサイクル依存的抗酸化活性を評価することによってＧＳＨリサイクル活性の測定値が利用される。Ｏｘ－Ｐｈｏｓ（商標）アッセイでは、事前に混合されたジチオビスニトロ安息香酸（ＤＮＴＢ）試薬を使用してＨＥＤＳからＭＥへの変換が分光光度的に決定され、吸光度読み取り値がＭＥ濃度に変換され、血液採取時点で決定される総赤血球数（ＲＢＣ×１０６個）に正規化される。ある特定の実施形態では、ＧＳＨ依存的抗酸化活性は、ＯｘＰｈｏｓ（商標）アッセイプロトコールと共に提供される変換係数を使用して計算され、総赤血球数に正規化される。ある特定の実施形態では、ＧＳＨアッセイは、米国特許第８,６９７,３９１号に記載のものであり、当該文献は、参照によって本明細書に組み込まれる。ＧＳＨアッセイは、還元状態から酸化状態へとＧＳＨを確実に繰り返し変換し得る６つの別々の経路における酵素の効率の測定値を与える。本明細書で提供される方法及びアッセイを使用して取得される測定値は、場合によっては、「Ｃｈｅｍｏｔｏｘ」スコアと称される。ある特定の実施形態では、Ｃｈｅｍｏｔｏｘスコアは、単一の試
料から取得される。他の実施形態では、Ｃｈｅｍｏｔｏｘスコアは、複数の試料から取得され、例えば、平均値に相当する。複数の試料は、患者の治療の間の異なる時点で取得され得る。
料から取得される。他の実施形態では、Ｃｈｅｍｏｔｏｘスコアは、複数の試料から取得され、例えば、平均値に相当する。複数の試料は、患者の治療の間の異なる時点で取得され得る。
【0034】
ＧＳＨリサイクル活性を測定するための方法及びアッセイについては、ＷＯ２０１８／０７１３２３Ａ１、Ｋｕｔｎｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｓｕｐｐｏｒｔ Ｃａｒｅ Ｃａｎｃｅｒ．２０１７ Ｆｅｂ；２５（２）：５８１－５８７．ｄｏｉ：１０．１００７／ｓ００５２０－０１６－３４４２－５、及びＭｃＣｏｕｒｔ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｕｎｅｘｐｌｏｒｅｄ Ｍｅｄ Ｄａｔａ ２０１９；４：６．ｄｏｉ：１０．２０５１７／２５７２－８１８０．２０１９．０１にさらに記載されており、これらの文献はすべて、参照によって本明細書に組み込まれる。
【0035】
一態様では、ＣＩＰＮに対する対象の易罹患性を予測または評価する方法が提供され、この方法は、酸化ストレスのレベルについてＲＢＣを含む生物学的試料をアッセイすることを含み、試料は、化学療法剤の投与の前及び／または後に哺乳類対象から取得される。方法を実施することで、対象においてＣＩＰＮの発症のリスクが評価され、及び／またはＣＩＰＮの重症度が予測され得る。
【0036】
ある特定の実施形態では、酸化ストレスの指標は、ＧＳＨリサイクル能力である。したがって、対象の血液は、化学療法剤での治療の前に取得される。ある特定の実施形態では、試料（例えば、全血の試料）は、化学療法剤の投与の前に哺乳類対象から取得される。試料は、試料におけるＲＢＣの酸化能力（血液細胞のＧＳＨリサイクル依存的抗酸化活性など）の評価を可能にするアッセイ成分と接触される。一実施形態では、血液は、採取直後にＧＳＨリサイクル活性について検査される。他の実施形態では、血液は、保管後にＧＳＨリサイクル活性について検査される。血液のＧＳＨリサイクル活性は、採取から数時間～数日の間は安定性を保つことが見込まれる。
【0037】
ある特定の実施形態では、方法は、試料をＨＥＤＳと接触させることを含み、これに加えて、ＧＳＨアッセイについて上に記載されるステップ、すなわち、ＨＥＤＳで処理された試料によって放出されるＭＥの量を定量化し、ＭＥの吸光度読み取り値を分光光度的に測定するステップ、吸光度読み取り値をＭＥ濃度に変換するステップ、ＭＥ濃度を総ＲＢＣ数に正規化するステップ、及び当該試料におけるインタクトなＲＢＣのＧＳＨリサイクル依存的抗酸化活性を評価するステップをさらに含む。これらのステップは、対象の血液試料または生物学的試料が低いまたは低下した（ＧＳＨ）リサイクル依存的抗酸化活性を有するものとして特徴付けられるかどうかを決定するために実施される。この方法は、対象がＣＩＰＮを発症し易いかどうかの評価をさらに可能にする。
【0038】
方法は、化学療法剤での治療を必要とするがんを有する対象に適用可能である。化学療法剤は、任意の従来の方法において投与され得る。ある特定の実施形態では、化学療法剤は、静脈内に投与される。ある特定の実施形態では、化学療法剤は、経口的に投与される。
【0039】
一態様では、化学療法剤を投与される患者における化学療法誘発性神経障害（ＣＩＰＮ）に対する易罹患性を評価する方法が本明細書で提供され、この方法は、（ａ）化学療法剤の投与の前に患者から取得される赤血球（ＲＢＣ）を含む１つ以上の生物学的試料におけるグルタチオン（ＧＳＨ）リサイクル活性の測定値を取得することと、（ｂ）化学療法剤での治療の後に患者から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の測定値を取得することと、（ｃ）（ａ）におけるＧＳＨリサイクル活性の１つ以上の測定値を（ｂ）におけるＧＳＨリサイクル活性の１つ以上の測定値と比較することと、を含む。ある特定の実施形態では、治療後のＧＳＨリサイクルの減少は、Ｃ
ＩＰＮに対する易罹患性の増加を予測する。ある特定の実施形態では、治療後のＧＳＨリサイクルの減少は、重症度、頻度、及び／またはＣＩＰＮ症状の増加を予測する。
ＩＰＮに対する易罹患性の増加を予測する。ある特定の実施形態では、治療後のＧＳＨリサイクルの減少は、重症度、頻度、及び／またはＣＩＰＮ症状の増加を予測する。
【0040】
一態様では、化学療法剤での患者の治療を管理し、ＣＩＰＮに対する患者の易罹患性を低減するための方法が提供される。この方法は、（ａ）化学療法剤の投与の前に患者から取得される赤血球（ＲＢＣ）を含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の測定値を取得することと、（ｂ）化学療法剤での治療の後に患者から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の測定値を取得することと、（ｃ）（ａ）におけるＧＳＨリサイクル活性の１つ以上の測定値を（ｂ）におけるＧＳＨリサイクル活性の１つ以上の測定値と比較することと、（ｄ）化学療法剤での対象の治療を変更し、及び／またはＣＩＰＮの治療を投与することと、を含む。
【0041】
ある特定の実施形態では、方法は、対象のＲＢＣがＧＳＨリサイクル活性の低下を示す場合、化学療法剤の投与の間または後に治療レジメンを変更することを含む。ある特定の実施形態では、対象のＲＢＣが、化学療法剤での治療の後にグルタチオンリサイクル能力の低下を示す場合、化学療法レジメンは、対象に送達される化学療法剤のその後の用量または投与量が低減されるように変更される。ある特定の実施形態では、方法は、１つ以上の化学療法剤を含むレジメンを中止することを含む。ある特定の実施形態では、方法は、異なるまたは追加の化学療法剤での治療を開始することを含む。治療レジメンの改変後にＧＳＨリサイクル活性の追加の測定値が取得され得る。
【0042】
ある特定の実施形態では、方法は、対象のＲＢＣがＧＳＨリサイクル活性の低下を示さない場合、化学療法剤の投与の間または後に治療レジメンを変更することを含む。ある特定の実施形態では、化学療法レジメンは、対象に送達される化学療法剤のその後の用量または投与量が増加するように変更される。ある特定の実施形態では、方法は、１つ以上の化学療法剤を含むレジメンを継続することを含む。ある特定の実施形態では、方法は、異なるまたは追加の化学療法剤での治療を開始することを含む。治療レジメンの改変後にＧＳＨリサイクル活性の追加の測定値が取得され得る。
【0043】
一態様では、がんを有する患者を治療するための方法が本明細書で提供され、この方法は、（ａ）化学療法剤の投与の前に患者から取得される赤血球（ＲＢＣ）を含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の測定値を取得することと、（ｂ）化学療法剤を投与することと、（ｃ）化学療法剤での治療の後に患者から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の測定値を取得することと、（ｄ）化学療法剤での対象の治療を変更し化学療法剤での対象の治療を変更し、及び／またはＣＩＰＮの治療を投与することと、を含む。
【0044】
ある特定の実施形態では、患者を治療する方法は、対象のＲＢＣがＧＳＨリサイクル活性の低下を示す場合、患者に送達される化学療法剤の用量または投与量を変更することを含む。ある特定の実施形態では、対象のＲＢＣが、化学療法剤での治療の後にグルタチオンリサイクル能力の低下を示す場合、化学療法レジメンは、対象に送達される化学療法剤のその後の用量または投与量が低減されるように変更される。ある特定の実施形態では、方法は、１つ以上の化学療法剤での対象の治療を中止することを含む。ある特定の実施形態では、方法は、異なるまたは追加の化学療法剤での治療を開始することを含む。
【0045】
ある特定の実施形態では、患者を治療する方法は、対象のＲＢＣがＧＳＨリサイクル活性の低下を示さない場合、患者に送達される化学療法剤の用量または投与量を変更することを含む。ある特定の実施形態では、方法は、対象に送達される化学療法剤送達のその後の用量または投与量を増加させることを含む。ある特定の実施形態では、方法は、１つ以上の化学療法剤での対象の治療を継続することを含む。ある特定の実施形態では、方法は
、異なるまたは追加の化学療法剤での治療を開始することを含む。
、異なるまたは追加の化学療法剤での治療を開始することを含む。
【0046】
一態様では、化学療法剤での治療の後のＣＩＰＮに対する易罹患性を低減する方法が本明細書で提供され、この方法は、（ａ）化学療法剤の投与の前に患者から取得される赤血球（ＲＢＣ）を含む１つ以上の生物学的試料におけるグルタチオン（ＧＳＨ）リサイクル活性の測定値を取得することと、（ｂ）化学療法剤での治療の後に患者から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の測定値を取得することと、（ｃ）（ａ）におけるＧＳＨリサイクル活性の１つ以上の測定値を（ｂ）におけるＧＳＨリサイクル活性の１つ以上の測定値と比較することと、（ｄ）（ｃ）において決定されるＧＳＨリサイクル活性の変化に応じて患者の治療を変更してＣＩＰＮに対する易罹患性を低減し、及び／またはＣＩＰＮの治療を投与することと、を含む。
【0047】
ある特定の実施形態では、対象におけるＣＩＰＮに対する易罹患性を低減する方法は、対象のＲＢＣがＧＳＨリサイクル活性の低下を示す場合、対象に送達される化学療法剤の用量または投与量を変更することを含む。ある特定の実施形態では、対象のＲＢＣが、化学療法剤での治療の後にグルタチオンリサイクル能力の低下を示す場合、対象に送達される化学療法剤のその後の用量または投与量が低減される。ある特定の実施形態では、対象におけるＣＩＰＮに対する易罹患性を低減する方法は、１つ以上の化学療法剤での対象の治療を中止することを含む。ある特定の実施形態では、方法は、異なるまたは追加の化学療法剤での治療を開始することを含む。ある特定の実施形態では、ＣＩＰＮに対する易罹患性を低減する方法は、ＣＩＰＮまたはその症状についての１又は治療を含む。
【0048】
一態様では、対象におけるＣＩＰＮに対する易罹患性を治療が変える能力を評価するための方法が本明細書で提供され、この方法は、（ａ）化学療法剤の投与の前に対象から取得される赤血球（ＲＢＣ）を含む１つ以上の生物学的試料におけるグルタチオン（ＧＳＨ）リサイクル活性の測定値を取得することと、（ｂ）化学療法剤での治療の後に患者から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の測定値を取得することと、（ｃ）（ａ）におけるＧＳＨリサイクル活性の１つ以上の測定値を（ｂ）におけるＧＳＨリサイクル活性の１つ以上の測定値と比較することと、（ｄ）ＣＩＰＮの治療を対象に投与することと、を含む。
【0049】
ある特定の実施形態では、方法は、ＣＩＰＮの治療と組み合わせて化学療法剤を投与することを含む。ある特定の実施形態では、ＣＩＰＮ治療は、化学療法剤を投与する前に投与される。ある特定の実施形態では、ＣＩＰＮ治療は、化学療法剤の投与の後に投与される。ある特定の実施形態では、方法は、化学療法剤及びＣＩＰＮの治療の投与の前に対象から取得される赤血球（ＲＢＣ）を含む１つ以上の生物学的試料におけるグルタチオン（ＧＳＨ）リサイクル活性の測定値を取得することを含む。ある特定の実施形態では、方法は、化学療法剤及びＣＩＰＮの治療の投与の後に対象から取得される赤血球（ＲＢＣ）を含む１つ以上の生物学的試料におけるグルタチオン（ＧＳＨ）リサイクル活性の測定値を取得することを含む。ある特定の実施形態では、方法は、化学療法剤の投与の後及びＣＩＰＮの治療の前に対象から取得される赤血球（ＲＢＣ）を含む１つ以上の生物学的試料におけるグルタチオン（ＧＳＨ）リサイクル活性の測定値を取得することを含む。ある特定の実施形態では、方法は、ＣＩＰＮの治療の後及び化学療法剤の投与の前に対象から取得される赤血球（ＲＢＣ）を含む１つ以上の生物学的試料におけるグルタチオン（ＧＳＨ）リサイクル活性の測定値を取得することを含む。
【0050】
本明細書で提供される方法は、化学療法のレジメンの間に患者の治療を評価することを含めて、臨床現場において使用されることが意図される。レジメンは、数日、数週間、または数年の期間にわたり、複数回の化学療法剤治療または化学療法剤投与を伴い得る。ある特定の実施形態では、治療レジメンの一部として、化学療法剤での治療が、少なくとも
少なくとも２回、少なくとも３回、少なくとも４回、少なくとも５回、少なくとも６回、少なくとも７回、少なくとも８回、少なくとも９回、少なくとも１０回、少なくとも１１回、少なくとも１２回、少なくとも１３回、少なくとも１４回、少なくとも１５回、または少なくとも１６回、対象に投与される。ある特定の実施形態では、測定値は、治療の開始前（化学療法の投与の前の治療日当日を含む）に獲得される試料から取得される。場合によっては、この測定値は、ベースライン測定値、治療前測定値、または「プレ１」測定値と称される。さらに、１つ以上の測定値は、化学療法剤の第１の投与の後であるが、化学療法剤の第２の投与の前（第２の投与の当日を含む）、または化学療法剤の第２の投与の後であるが、化学療法剤の第３の投与の前（第３の投与の当日を含む）などの時点で獲得される試料から取得され得る。
少なくとも２回、少なくとも３回、少なくとも４回、少なくとも５回、少なくとも６回、少なくとも７回、少なくとも８回、少なくとも９回、少なくとも１０回、少なくとも１１回、少なくとも１２回、少なくとも１３回、少なくとも１４回、少なくとも１５回、または少なくとも１６回、対象に投与される。ある特定の実施形態では、測定値は、治療の開始前（化学療法の投与の前の治療日当日を含む）に獲得される試料から取得される。場合によっては、この測定値は、ベースライン測定値、治療前測定値、または「プレ１」測定値と称される。さらに、１つ以上の測定値は、化学療法剤の第１の投与の後であるが、化学療法剤の第２の投与の前（第２の投与の当日を含む）、または化学療法剤の第２の投与の後であるが、化学療法剤の第３の投与の前（第３の投与の当日を含む）などの時点で獲得される試料から取得され得る。
【0051】
一態様では、化学療法剤が投与される対象における化学療法誘発性神経障害（ＣＩＰＮ）に対する易罹患性またはＣＩＰＮの重症度を評価する方法が本明細書で提供され、この方法は、（ａ）化学療法剤の第１の投与の前に対象から取得される赤血球（ＲＢＣ）を含む１つ以上の生物学的試料におけるグルタチオン（ＧＳＨ）リサイクル活性のベースライン測定値を取得することと、（ｂ）化学療法剤の第１の投与の後であるが、化学療法剤の第２の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の第１の測定値を取得することと、（ｃ）化学療法剤の第２の投与の後であるが、化学療法剤の第３の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の第２の測定値を取得することと、（ｄ）化学療法剤の第３の投与の後であるが、化学療法剤の第４の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の第３の測定値を取得することと、（ｅ）ベースライン測定値、第１の測定値、第２の測定値、及び第３の測定値の平均値を取得することと、を含む。ある特定の実施形態では、１．８５以下の平均値は、ＣＩＰＮに対する易罹患性またはＣＩＰＮの重症度を示す。ある特定の実施形態では、１．５０以下、１．５５以下、１．６５以下、１．７０以下、１．７５以下、１．８０以下、１．９０以下、１．９５以下、または２．００以下の平均値は、ＣＩＰＮに対する易罹患性またはＣＩＰＮの重症度を示す。
【0052】
別の態様では、化学療法剤が投与される対象における化学療法誘発性神経障害（ＣＩＰＮ）に対する易罹患性またはＣＩＰＮの重症度を評価する方法が本明細書で提供され、この方法は、（ａ）化学療法剤の第１の投与の後であるが、化学療法剤の第２の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の第１の測定値を取得することと、（ｂ）化学療法剤の第３の投与の後であるが、化学療法剤の第４の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の第２の測定値を取得することと、（ｃ）ベースライン測定値、第１の測定値、及び第２の測定値の平均値を取得することと、を含む。ある特定の実施形態では、１．８以下の平均値は、ＣＩＰＮに対する易罹患性またはＣＩＰＮの重症度を示す。ある特定の実施形態では、１．５０以下、１．５５以下、１．６５以下、１．７０以下、１．７５以下、１．８５以下、１．９０以下、１．９５以下、または２．００以下の平均値は、ＣＩＰＮに対する易罹患性またはＣＩＰＮの重症度を示す。
【0053】
別の態様では、化学療法剤が投与される対象における化学療法誘発性神経障害（ＣＩＰＮ）に対する易罹患性の評価またはＣＩＰＮの重症度の予測を行う方法が本明細書で提供され、この方法は、（ａ）化学療法剤の第１の投与の前に対象から取得される赤血球（ＲＢＣ）を含む１つ以上の生物学的試料におけるグルタチオン（ＧＳＨ）リサイクル活性のベースライン測定値を取得することと、（ｂ）（ｉ）化学療法剤の第１の投与の後であるが、化学療法剤の第２の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の測定値、（ｉｉ）化学療法剤の第２の投与の後であるが、化学療法剤の第３の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学
的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の測定値、または（ｉｉｉ）化学療法剤の第３の投与の後であるが、化学療法剤の第４の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の測定値を取得することであって、ＧＳＨリサイクル活性の減少が、ＣＩＰＮに対する易罹患性またはＣＩＰＮの重症度の増加を予測する、取得することと、を含む。
的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の測定値、または（ｉｉｉ）化学療法剤の第３の投与の後であるが、化学療法剤の第４の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の測定値を取得することであって、ＧＳＨリサイクル活性の減少が、ＣＩＰＮに対する易罹患性またはＣＩＰＮの重症度の増加を予測する、取得することと、を含む。
【0054】
別の態様では、化学療法剤での治療の後のＣＩＰＮに対する易罹患性を低減する方法が本明細書で提供され、この方法は、（ａ）化学療法剤の第１の投与の前に対象から取得される赤血球（ＲＢＣ）を含む１つ以上の生物学的試料におけるグルタチオン（ＧＳＨ）リサイクル活性のベースライン測定値を取得することと、（ｂ）化学療法剤の第１の投与の後であるが、化学療法剤の第２の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の第１の測定値を取得することと、（ｃ）化学療法剤の第２の投与の後であるが、化学療法剤の第３の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の第２の測定値を取得することと、（ｄ）化学療法剤の第３の投与の後であるが、化学療法剤の第４の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の第３の測定値を取得することと、（ｅ）ベースライン測定値、第１の測定値、第２の測定値、及び第３の測定値の平均値を取得することと、（ｆ）化学療法誘発性神経障害（ＣＩＰＮ）に対する易罹患性もしくはＣＩＰＮの重症度を低減するために対象の治療レジメンを変更し、及び／またはＣＩＰＮの治療を投与することと、を含む。ある特定の実施形態では、１．８５以下の平均値は、ＣＩＰＮに対する易罹患性またはＣＩＰＮの重症度を示す。ある特定の実施形態では、１．５０以下、１．５５以下、１．６５以下、１．７０以下、１．７５以下、１．８０以下、１．９０以下、１．９５以下、または２．００以下の平均値は、ＣＩＰＮに対する易罹患性またはＣＩＰＮの重症度を示す。
【0055】
別の態様では、化学療法剤での治療の後のＣＩＰＮに対する易罹患性を低減する方法が本明細書で提供され、この方法は、（ａ）化学療法剤の第１の投与の後であるが、化学療法剤の第２の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の第１の測定値を取得することと、（ｂ）化学療法剤の第３の投与の後であるが、化学療法剤の第４の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の第２の測定値を取得することと、（ｃ）第１の測定値及び第２の測定値の平均値を取得することと、（ｄ）化学療法誘発性神経障害（ＣＩＰＮ）に対する易罹患性もしくはＣＩＰＮの重症度を低減するために対象の治療レジメンを変更し、及び／またはＣＩＰＮの治療を投与することと、を含む。ある特定の実施形態では、１．８以下の平均値は、ＣＩＰＮに対する易罹患性またはＣＩＰＮの重症度を示す。ある特定の実施形態では、１．５０以下、１．５５以下、１．６５以下、１．７０以下、１．７５以下、１．８５以下、１．９０以下、１．９５以下、または２．００以下の平均値は、ＣＩＰＮに対する易罹患性またはＣＩＰＮの重症度を示す。
【0056】
別の態様では、化学療法剤での治療の後のＣＩＰＮに対する易罹患性を低減する方法が本明細書で提供され、この方法は、（ａ）化学療法剤の第１の投与の前に対象から取得される赤血球（ＲＢＣ）を含む１つ以上の生物学的試料におけるグルタチオン（ＧＳＨ）リサイクル活性のベースライン測定値を取得することと、（ｂ）（ｉ）化学療法剤の第１の投与の後であるが、化学療法剤の第２の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の測定値、（ｉｉ）化学療法剤の第２の投与の後であるが、化学療法剤の第３の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の測定値、または（ｉｉｉ）化学療法剤の第３の投与の後であるが、化学療法剤の第４の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の測定値を取得することであって、ＧＳＨリサイクル活性の減少が、ＣＩＰＮに対する易罹患性またはＣＩＰＮの
重症度の増加を予測する、取得することと、（ｃ）化学療法誘発性神経障害（ＣＩＰＮ）に対する易罹患性もしくはＣＩＰＮの重症度を低減するために対象の治療レジメンを変更し、及び／またはＣＩＰＮの治療を投与することと、を含む。
重症度の増加を予測する、取得することと、（ｃ）化学療法誘発性神経障害（ＣＩＰＮ）に対する易罹患性もしくはＣＩＰＮの重症度を低減するために対象の治療レジメンを変更し、及び／またはＣＩＰＮの治療を投与することと、を含む。
【0057】
ある特定の実施形態では、対象の治療を変更することは、化学療法剤のその後の用量または投与量を低減することを含む。例えば、患者の予定治療レジメンは、測定されたＧＳＨリサイクル活性に基づいて変更され得る。ある特定の実施形態では、対象の治療を変更することは、異なる化学療法剤での治療を含む。ある特定の実施形態では、対象の治療を変更することは、代替または追加の化学療法剤を投与することを含む。別の実施形態では、対象の治療を変更することは、化学療法剤の投与を中止することを含む。ある特定の実施形態では、対象の治療を変更することは、異なる化学療法剤での治療を含む。
【0058】
一態様では、対象における化学療法誘発性神経障害（ＣＩＰＮ）に対する易罹患性またはＣＩＰＮの重症度を治療が変える能力を評価するための方法が本明細書で提供され、この方法は、（ａ）化学療法剤の第１の投与の前に対象から取得される赤血球（ＲＢＣ）を含む１つ以上の生物学的試料におけるグルタチオン（ＧＳＨ）リサイクル活性のベースライン測定値を取得することと、（ｂ）化学療法剤の第１の投与の後であるが、化学療法剤の第２の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の第１の測定値を取得することと、（ｃ）化学療法剤の第２の投与の後であるが、化学療法剤の第３の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の第２の測定値を取得することと、（ｄ）化学療法剤の第３の投与の後であるが、化学療法剤の第４の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の第３の測定値を取得することと、（ｅ）ベースライン測定値、第１の測定値、第２の測定値、及び第３の測定値の平均値を取得することと、（ｆ）ＣＩＰＮの治療を対象に投与することと、を含む。ある特定の実施形態では、１．８５以下の平均値は、ＣＩＰＮに対する易罹患性またはＣＩＰＮの重症度を示す。ある特定の実施形態では、１．５０以下、１．５５以下、１．６５以下、１．７０以下、１．７５以下、１．８０以下、１．９０以下、１．９５以下、または２．００以下の平均値は、ＣＩＰＮに対する易罹患性またはＣＩＰＮの重症度を示す。
【0059】
一態様では、対象における化学療法誘発性神経障害（ＣＩＰＮ）に対する易罹患性またはＣＩＰＮの重症度を治療が変える能力を評価するための方法が本明細書で提供され、この方法は、（ａ）化学療法剤の第１の投与の後であるが、化学療法剤の第２の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の第１の測定値を取得することと、（ｂ）化学療法剤の第３の投与の後であるが、化学療法剤の第４の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の第２の測定値を取得することと、（ｃ）ベースライン測定値、第１の測定値、及び第２の投与の平均値を取得することと、（ｄ）ＣＩＰＮの治療を対象に投与することと、を含む。ある特定の実施形態では、１．８以下の平均値は、ＣＩＰＮに対する易罹患性またはＣＩＰＮの重症度を示す。ある特定の実施形態では、１．５０以下、１．５５以下、１．６５以下、１．７０以下、１．７５以下、１．８５以下、１．９０以下、１．９５以下、または２．００以下の平均値は、ＣＩＰＮに対する易罹患性またはＣＩＰＮの重症度を示す。
【0060】
一態様では、対象における化学療法誘発性神経障害（ＣＩＰＮ）に対する易罹患性またはＣＩＰＮの重症度を治療が変える能力を評価するための方法が本明細書で提供され、この方法は、（ａ）化学療法剤の第１の投与の前に対象から取得される赤血球（ＲＢＣ）を含む１つ以上の生物学的試料におけるグルタチオン（ＧＳＨ）リサイクル活性のベースライン測定値を取得することと、（ｂ）（ｉ）化学療法剤の第１の投与の後であるが、化学
療法剤の第２の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の測定値、（ｉｉ）化学療法剤の第２の投与の後であるが、化学療法剤の第３の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の測定値、または（ｉｉｉ）化学療法剤の第３の投与の後であるが、化学療法剤の第４の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の測定値を取得することであって、ＧＳＨリサイクル活性の減少が、ＣＩＰＮに対する易罹患性またはＣＩＰＮの重症度の増加を予測する、取得することと、（ｃ）ＣＩＰＮの治療を対象に投与することと、を含む。
療法剤の第２の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の測定値、（ｉｉ）化学療法剤の第２の投与の後であるが、化学療法剤の第３の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の測定値、または（ｉｉｉ）化学療法剤の第３の投与の後であるが、化学療法剤の第４の投与の前に対象から取得されるＲＢＣを含む１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の測定値を取得することであって、ＧＳＨリサイクル活性の減少が、ＣＩＰＮに対する易罹患性またはＣＩＰＮの重症度の増加を予測する、取得することと、（ｃ）ＣＩＰＮの治療を対象に投与することと、を含む。
【0061】
ある特定の実施形態では、提供される方法は、グレード０ ＣＩＰＮ、グレード１ ＣＩＰＮ、グレード２ ＣＩＰＮ、またはグレード３ ＣＩＰＮに対する易罹患性の増加を予測する。方法は、治療レジメンの間または治療レジメンの後に発症するＣＩＰＮを予測し得る。ある特定の実施形態では、方法は、ＣＩＰＮまたは重度ＣＩＰＮの症状が生じる少なくとも１週間前、少なくとも２週間前、少なくとも３週間前、少なくとも４週間前、少なくとも５週間前、少なくとも６週間前、少なくとも７週間前、少なくとも８週間前、少なくとも９週間前、少なくとも１０週間前、少なくとも１１週間前、少なくとも１２週間前、少なくとも１３週間前、少なくとも１４週間前、少なくとも１５週間前、少なくとも１６週間前、少なくとも１７週間前、少なくとも１８週間前、少なくとも１９週間前、少なくとも２０週間前、少なくとも３ヶ月前、少なくとも６ヶ月前、または少なくとも１年前にＣＩＰＮの発症を予測する。
【0062】
治療の前及び治療の間に取得される測定値、または治療の間（例えば、さまざまな回数の治療の後）に取得される測定値を使用して、個体についてのＧＳＨリサイクル活性の変化が測定され得る。ある特定の実施形態では、ＧＳＨリサイクル活性の減少は、（治療の間の一時点で取得される測定値－ベースライン）／ベースライン）として計算される減少パーセントである。ＣＩＰＮに対する易罹患性またはＣＩＰＮの重症度の増加を予測するＧＳＨリサイクルの減少は、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、または少なくとも５０％であり得る。
【0063】
ある特定の実施形態では、提供される方法は、ある特定の年齢または性別の患者を対象とする。ある特定の実施形態では、患者は男性である。ある特定の実施形態では、患者は女性である。ある特定の実施形態では、患者は、２５～１００歳、２５～５０歳、２５～７５歳、５０～７５歳、または５０～１００歳である。
【0064】
本明細書で使用される場合、「治療」または「治療すること」という用語は、疾患または状態の１つ以上の症状の改善を目的とする組成物（複数可）及び／または方法（複数可）を指す。例えば、ＣＩＰＮの治療は、症状（四肢の疼痛など）の頻度、重症度、及び／または持続期間の予防または低減を含めて、神経障害または痛覚過敏を緩和するために組成物を投与することを含み得る。したがって、治療は、ＣＩＰＮの発症もしくは進行を低減すること、ＣＩＰＮを予防すること、ＣＩＰＮ症状（例えば、四肢の疼痛）の頻度及び／もしくは重症度を低減すること、ＣＩＰＮの進行を遅延させること、ならびに／またはＣＩＰの進行を鈍化させること、のうちの１つ以上を含み得る。ＣＩＰＮの治療には、限定されないが、経口鎮痛薬、抗鬱薬、リドカインパッチ、メントールクリーム、セロトニン・ノルエピネフリン再取り込み阻害剤（ＳＮＲＩ）（例えば、デュロキセチン）、三環系抗鬱薬（ＴＣＡ）、抗痙攣薬、配合外用剤、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、及びオピオイド療法、理学療法、ならびに作業療法が含まれる。ある特定の実施形態では、治療は、非治療対照対象と比較して治療対象における症状の頻度及び／または重症度を低減する。本明細書で使用される場合、ＣＩＰＮの治療は、ＣＩＰＮの治療としての潜在力が調査中である組成物（すなわち、試験化合物）を含み得る。
【0065】
ある特定の実施形態では、ＣＩＰＮの治療は、「ナトリウムチャネル遮断薬」を投与することを含み、「ナトリウムチャネル遮断薬」は、ナトリウムチャネルに選択的に結合し、それによってナトリウムチャネルを不活性化する化合物である。具体的には、ナトリウムチャネル遮断薬には、ナトリウムチャネルのアルファサブユニットのＳＳ１またはＳＳ２細胞外ドメインに結合する化合物が含まれる。ナトリウムチャネルのＳＳ１またはＳＳ２サブユニットに結合するナトリウムチャネル遮断化合物、具体的には、テトロドトキシン及びサキシトキシンは、同様の医薬活性を有することが明らかになっている（例えば、ＵＳ６，４０７，０８８を参照のこと。当該文献は、参照によって本明細書に組み込まれる）。
【0066】
ある特定の実施形態では、ＣＩＰＮの治療は、対象にカルシウム／マグネシウム補給を施すことを含む。ある特定の実施形態では、ＣＩＰＮの治療は、カルパイン阻害剤を含む。
【0067】
ある特定の実施形態では、ＣＩＰＮの治療は、１つ以上のフィトカンナビノイドまたはその合成誘導体を含む組成物を投与することを含む。ある特定の実施形態では、ＣＩＰＮの治療は、カンナビジオール（ＣＢＤ）を含む組成物を投与することを含む。
【0068】
本明細書で使用される場合、生物学的試料における低いグルタチオン（ＧＳＨ）リサイクル依存的抗酸化活性（すなわち、高酸化ストレス）という語句は、ＣＩＰＮに対する素因を示すために使用される。ある特定の実施形態では、低いＧＳＨリサイクル依存的抗酸化活性スコアは、≦１．０である。本明細書で使用される場合、生物学的試料における高いグルタチオンリサイクル依存的抗酸化活性（すなわち、低酸化ストレス）という語句は、ＣＩＰＮのリスクの上昇を示すために使用される。ある特定の実施形態では、高いＧＳＨリサイクル依存的抗酸化活性スコアは、＞１．０である。
【0069】
本明細書に記載のように、本発明者らは、例えば、化学療法剤を投与する前に取得される患者試料におけるＧＳＨリサイクル活性の１つ以上の測定値を、化学療法剤を投与した後に取得される患者試料におけるＧＳＨリサイクル活性の１つ以上の測定値と比較することを利用する方法を明らかにしている。ある特定の実施形態では、方法は、化学療法剤の投与の前及び／または後の複数日間に、または数週間もしくは数ヶ月の過程にわたって測定値を取得することを含む。ある特定の実施形態では、方法は、化学療法剤の投与の前及び／または後の１日に取得されるＧＳＨリサイクル活性の測定値の平均値を比較することを含む。ある特定の実施形態では、方法は、化学療法剤を対象に投与する前の同じ日に、または数日もしくは数週間の過程にわたって取得される測定値に基づいてＧＳＨリサイクル活性の平均値を取得することを含む。ある特定の実施形態では、方法は、化学療法剤を対象に投与した後の同じ日に、または数日もしくは数週間の過程にわたって取得される測定値に基づいてＧＳＨリサイクル活性の平均値を取得することを含む。したがって、ＧＳＨリサイクル活性の「測定値」は、（例えば、化学療法剤での治療の前または化学療法剤での治療の後に）取得される一連の試料から取得される測定値の平均値を指し得る。
【0070】
ある特定の実施形態では、方法は、化学療法剤での治療の前の１２時間未満、２４時間未満、または３６時間未満の間に対象から取得される１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の１つ以上の測定値を取得することを含む。ある特定の実施形態では、方法は、化学療法剤での治療の後の１２時間未満、２４時間未満、または３６時間未満の間に対象から取得される１つ以上の生物学的試料におけるＧＳＨリサイクル活性の１つ以上の測定値を取得することを含む。
【0071】
化学療法剤での対象の治療の後のＧＳＨリサイクル活性の低下または低下したＧＳＨリ
サイクル活性は、ＣＩＰＮのリスクの上昇と関連する。ある特定の実施形態では、方法は、治療前測定値と比較して約１０％以上、約２０％以上、約２５％以上、約３０％以上、約３５％以上、約４０％以上、約４５％以上、約５０％以上、約５５％以上、約６０％以上、約６５％以上、約７０％以上、約７５％以上、約８５％以上、約９０％以上、もしくは少なくとも約９５％以上の低下、またはこれらの具体的に記載されるパーセントの間の任意の低下量が存在するＧＳＨリサイクル活性の低下を特定することを含む。
サイクル活性は、ＣＩＰＮのリスクの上昇と関連する。ある特定の実施形態では、方法は、治療前測定値と比較して約１０％以上、約２０％以上、約２５％以上、約３０％以上、約３５％以上、約４０％以上、約４５％以上、約５０％以上、約５５％以上、約６０％以上、約６５％以上、約７０％以上、約７５％以上、約８５％以上、約９０％以上、もしくは少なくとも約９５％以上の低下、またはこれらの具体的に記載されるパーセントの間の任意の低下量が存在するＧＳＨリサイクル活性の低下を特定することを含む。
【0072】
ある特定の実施形態では、方法は、ＧＳＨリサイクル活性の低下の不在、または治療前試料から取得される測定値と比較した場合の治療後のＧＳＨリサイクル活性の相対的な不変を特定することを含む。ある特定の実施形態では、方法は、治療後に取得される測定値の治療前測定値（複数可）からの逸脱が約５％未満、約１０％未満、約１５％未満、約２０％未満、約２５％未満、約３０％未満、約３５％未満、約４０％未満、約４５％未満、約５０％未満、またはこれらの具体的に記載されるパーセントの間の任意の低下量である、ＧＳＨリサイクル活性の低下の不在（またはＧＳＨリサイクル活性の不変）を特定すること含む。
【0073】
ある特定の実施形態では、方法は、対象においてＣＩＰＮを診断することまたはＣＩＰＮの重症度を評価することを含む。ＣＩＰＮの診断は、主観的な及び／または客観的な評価方法の両方の結果に基づき得る。ある特定の実施形態では、方法は、患者考慮事項、以前及び現在の治療（化学療法剤及び非化学療法剤の両方）、ならびに社会歴などの主観的な評価を含む。ある特定の実施形態では、方法は、身体検査、臨床検査、標準化アンケート、電気診断検査、及び神経生検などの客観的な評価方針を含む。全米総合がん情報ネットワーク（ＮＣＣＮ）は、ＣＩＰＮの重症度の評価に使用される最も一般的な医師ベースのグレード分類スケールについて詳述している。こうしたグレード分類スケールには、Ａｊａｎｉ Ｓｅｎｓｏｒｙ、米国東海岸がん臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）、国立がん研究所－有害事象共通用語基準（ＮＣＩ－ＣＴＣＡＥ）、及び世界保健機関（ＷＨＯ）システム（０（正常）～５（死亡）のスケールでＣＩＰＮ重症度をグレード分類する）が含まれる。
【0074】
さらに別の態様では、がんを有する個々のヒト対象向けに個別化された化学療法レジメンを決定する方法が提供され、この方法は、化学療法を開始する前に対象の血液試料のグルタチオンリサイクル依存的抗酸化活性及びフリーラジカル除去効率を評価するためにアッセイを実施することを含む。
【0075】
後述の実施例に示されるように、血液におけるＧＳＨリサイクルを測定することが可能なレドックスアッセイを使用して、化学療法を受ける前の患者固有のＧＳＨリサイクル能力を、治療を受けた後の患者のその後のＣＩＮＶ易罹患性と比較した。実施例では、白金ベースの治療に焦点を当てた。しかしながら、後述の実施例に示される添付データは、より広い患者人口に拡張し得るものである。実施例は、血液におけるＧＳＨリサイクル能力の低下がＣＩＰＮの発症の客観的な指標となることを示す予備結果を説明するものである。
【0076】
アッセイ
上記のように、試料における抗酸化グルタチオンのリサイクル能力を評価するための方法は当該技術分野で知られている。本発明者らは、生体内還元機構を介するヒドロキシエチルジスルフィド（ＨＥＤＳ）からメルカプトエタノール（ＭＥ）への変換を利用するＯｘＰｈｏｓ（商標）Ｃｅｌｌ Ｓｕｒｖｉｖａｌ Ｋｉｔ（カタログ番号ＫＬＤ－０２、Ｒｏｃｋｌａｎｄ Ｉｎｃ．）を含むこれまでのアッセイに改良を加えた方法を開発した（米国特許第８，６９７，３９１号も併せて参照のこと。当該文献は、参照によって本明細書に組み込まれる）。改良法では、（例えば、９６ウェルプレート形式において）多く
の試料を処理することが容易になっており、ＣＬＩＡ公認の臨床検査室に典型的には見られる自動化プレートリーダーを使用した場合に正確な測定値が得られる。注目すべきことに、ある特定の方法は、スルホサリチル酸（ＳＳＡ）緩衝液で試料を処理することを必要としない。
上記のように、試料における抗酸化グルタチオンのリサイクル能力を評価するための方法は当該技術分野で知られている。本発明者らは、生体内還元機構を介するヒドロキシエチルジスルフィド（ＨＥＤＳ）からメルカプトエタノール（ＭＥ）への変換を利用するＯｘＰｈｏｓ（商標）Ｃｅｌｌ Ｓｕｒｖｉｖａｌ Ｋｉｔ（カタログ番号ＫＬＤ－０２、Ｒｏｃｋｌａｎｄ Ｉｎｃ．）を含むこれまでのアッセイに改良を加えた方法を開発した（米国特許第８，６９７，３９１号も併せて参照のこと。当該文献は、参照によって本明細書に組み込まれる）。改良法では、（例えば、９６ウェルプレート形式において）多く
の試料を処理することが容易になっており、ＣＬＩＡ公認の臨床検査室に典型的には見られる自動化プレートリーダーを使用した場合に正確な測定値が得られる。注目すべきことに、ある特定の方法は、スルホサリチル酸（ＳＳＡ）緩衝液で試料を処理することを必要としない。
【0077】
一態様では、赤血球（ＲＢＣ）を含む試料におけるグルタチオン（ＧＳＨ）リサイクル能力を測定するためのアッセイが本明細書で提供され、このアッセイは、（ａ）試料をヒドロキシ－エチル－ジスルフィド（ＨＥＤＳ）含有溶液と混合して第１の体積を取得し、当該第１の体積をインキュベートして、試料由来の実質的なＲＢＣ画分を沈降させることと、（ｂ）ＲＢＣを実質的に含まない第１の体積の一定分量を取得し、当該第１の体積の一定分量を磁気ナノビーズ含有溶液と混合して第２の体積を取得することと、（ｃ）第２の体積またはその一定分量を磁場に晒すことと、（ｄ）第２の体積から上清を取得し、上清またはその一定分量を５，５’－ジスルファンジイルビス（２－ニトロ安息香酸）（ＤＮＴＢ）含有溶液と混合して第３の体積を取得することと、（ｅ）第３の体積またはその一定分量を分光光度分析に供して吸光度読み取り値を取得することと、を含み、（ｅ）において測定される吸光度は、ＲＢＣを含む試料におけるＧＳＨリサイクル能力を示す。
【0078】
別の態様では、ＲＢＣを含む一連の試料におけるＧＳＨリサイクル能力を測定するためのアッセイが本明細書で提供され、このアッセイは、（ａ）試料のそれぞれをＨＥＤＳ含有溶液と混合して一連の第１の体積を取得し、当該一連の第１の体積をインキュベートして、試料由来の実質的なＲＢＣ画分を沈降させることと、（ｂ）ＲＢＣを実質的に含まない当該第１の体積のそれぞれの一定分量を取得し、それぞれの一定分量を磁気ナノビーズ含有溶液と混合して一連の第２の体積を取得することと、（ｃ）一連の第２の体積またはその一定分量を磁場に晒すことと、（ｄ）第２の体積から一連の上清を取得し、上清またはその一定分量のそれぞれを５，５’－ジスルファンジイルビス（２－ニトロ安息香酸）（ＤＮＴＢ）含有溶液と混合して一連の第３の体積を取得することと、（ｅ）一連の第３の体積またはその一定分量を分光光度分析に供して一連の吸光度読み取り値を取得することと、を含み、（ｅ）において測定される吸光度は、ＲＢＣを含む試料におけるＧＳＨリサイクル能力を示す。
【0079】
別の態様では、ＲＢＣを含む一連の試料におけるＧＳＨリサイクル能力を測定するためのアッセイが本明細書で提供され、（ａ）試料のそれぞれをＨＥＤＳ含有溶液と混合して一連の第１の体積を取得し、当該一連の第１の体積をインキュベートし、（ｂ）試料を遠心分離して懸濁液由来のＲＢＣ及びデブリを除去し、（ｃ）ＲＢＣ及びデブリを実質的に含まない当該第１の体積のそれぞれの一定分量を取得し、それぞれの一定分量をトリクロロ酢酸（ＴＣＡ）と混合して一連の第２の体積を取得し、（ｄ）一連の第２の体積またはその一定分量を遠心分離に供し、（ｅ）第２の体積から一連の上清を取得し、上清またはその一定分量のそれぞれを５，５’－ジスルファンジイルビス（２－ニトロ安息香酸）（ＤＮＴＢ）含有溶液と混合して一連の第３の体積を取得し、（ｆ）一連の第３の体積またはその一定分量を分光光度分析に供して一連の吸光度読み取り値を取得し、（ｅ）において取得される吸光度読み取り値は、ＲＢＣを含む試料におけるＧＳＨリサイクル能力を示す。
【0080】
実施例３に記載のように、本発明者らは、１つの８ウェルストリップまたは一連の８ウェルストリップを使用して実施できるアッセイを開発した。このアッセイのある特定の実施形態では、各８ウェルストリップは各試料に割り当てられる。アッセイの設計は、試料の処理を容易にし、利用可能なアッセイと比較して測定値の精度を改善するものである。８ウェルストリップは容易に入手可能であり、最大で１２個のストリップを保持するフレームに適合するように設計されている（例えば、Ｊ Ｇ Ｆｉｎｎｅｒａｎ ａｎｄ Ｐｏｒｖａｉｒ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，モデル番号２０８１０７，９６ウェルプレート，１２
×８フレーム上８ウェルストリップの設計を参照のこと）。８ウェルストリップは、用途応じてＶ底、Ｕ底、及び平底のものが入手可能である。
×８フレーム上８ウェルストリップの設計を参照のこと）。８ウェルストリップは、用途応じてＶ底、Ｕ底、及び平底のものが入手可能である。
【0081】
例えば、図１２に示されるように、８ウェルストリップのウェルは、ＲＢＣ含有試料の希釈液に加えて、ブランク、陰性対照、陽性対照のうちの１つ以上を可能にする。ある特定の実施形態では、ウェルは、精度を制御するために２連にされる。８ウェルストリップにおける試料体積の配置は、清澄化ステップ（例えば、遠心分離）後の上清の移動を含めて、アッセイのさまざまなステップでの試料の移動及びその秩序化を容易にする。
【0082】
本明細書に記載のように、本発明者らは、ＧＳＨリサイクル活性を測定するためのアッセイに含めることができる有用な陽性対照としてＬ－システイン塩酸塩一水和物（ＬＣＨＭ）を同定した。Ｌ－システイン塩酸塩一水和物（ＬＣＨＭ）は、例えば、凍結乾燥形態または緩衝液に溶解した状態ものがさまざまな供給業者（例えば、Ａｌｆａ Ａｅｓａｒ，ＣＡＳ７０４８－０４－６）を介して容易に入手可能である。陽性対照は、１つ以上の濃度でアッセイに含められ得る。ある特定の実施形態では、ＬＣＨＭは、約２５μＭｏｌ、約５０μＭｏｌ、及び／または約２５μＭｏｌ～約５０μＭｏｌの濃度で溶液に含められる。ＬＣＨＭは、例えば、低ｐＨの超純水（Ｃａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）に溶解され得る。
【0083】
ある特定の実施形態では、第１の体積（一連の第１の体積中の各体積）は、約２５０μｌ以下、約２００μｌ以下、約１５０μｌ以下、約１００μｌ以下、約７５μｌ以下、約５０μｌ以下、または約２５μｌ以下である。ある特定の実施形態では、第２の体積（または一連の第２の体積中の各体積）は、約２５０μｌ以下、約２００μｌ以下、約１５０μｌ以下、約１００μｌ以下、約７５μｌ以下、約５０μｌ以下、または約２５μｌ以下である。ある特定の実施形態では、第３の体積（または一連の第３の体積中の各体積）は、約３５０μｌ以下、約３００μｌ以下、約２５０μｌ以下、約２００μｌ以下、約１５０μｌ以下、約１００μｌ以下、約７５μｌ以下、約５０μｌ以下、または約２５μｌ以下である。ある特定の実施形態では、方法は、少なくとも約５つ、少なくとも約１０個、少なくとも約２０個、少なくとも約５０個、少なくとも約１００個、少なくとも約２００個、少なくとも約２５０個、少なくとも約３００個、または少なくとも約３５０個の第１の体積、第２の体積、及び／または第３の体積を含む。
【0084】
ある特定の実施形態では、記載の方法のステップ（ａ）は、試料（複数可）を少なくとも約１５分間、少なくとも約３０分間、少なくとも約１時間、少なくとも約１．５時間、または少なくとも約２時間インキュベートすることを含む。インキュベート時間によって、ヒドロキシエチルジスルフィド（ＨＥＤＳ）からメルカプトエタノール（ＭＥ）への変換及びＲＢＣの沈降が可能になる。ある特定の実施形態では、ステップ（ａ）は、インキュベート時間のすべてまたは一部の間に試料を例えば７００ｒｐｍで振とうさせることを含む。ある特定の実施形態では、第１の体積は、Ｖ底マイクロプレートにおいてインキュベートされる。ある特定の実施形態では、プレートは、９６ウェルマイクロプレートである。ある特定の実施形態では、プレートは、３８４ウェルマイクロプレートである。ある特定の場合、ステップ（ａ）は、２１℃または約２１℃で試料体積をインキュベートすることを含む。インキュベートが２１℃で実施されない場合、下記の式を利用して、調整された最終的なＧＳＨ活性測定値を取得することができる：
【数1】
【0085】
ある特定の実施形態では、記載の方法の磁気ナノビーズは、グルタチオン磁気アガロースビーズである（例えば、Ｐｉｅｒｃｅ（商標）Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ Ｍａｇｎｅｔｉｃ Ａｇａｒｏｓｅ Ｂｅａｄｓ；カタログ番号：７８６０１を参照のこと）。ある特定の実施形態では、ナノビーズは、シリカ（ＳｉＯ２）及びマグヘマイト（γ－Ｆｅ２Ｏ３）から構成される。シリカ（ＳｉＯ２）及びマグヘマイト（γ－Ｆｅ２Ｏ３）から構成される適切なナノビーズまたは同様のものは、Ｓｔｏｅｂｅｒ，Ｗｅｒｎｅｒ；Ｆｉｎｋ，Ａｒｔｈｕｒ；Ｂｏｈｎ，Ｅｒｎｓｔ（Ｊａｎｕａｒｙ １９６８）．“Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｍｏｎｏｄｉｓｐｅｒｓｅ ｓｉｌｉｃａ ｓｐｈｅｒｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｍｉｃｒｏｎ ｓｉｚｅ ｒａｎｇｅ”．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｏｌｌｏｉｄ ａｎｄ Ｉｎｔｅｒｆａｃｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ．に記載の方法に従って生成させることができ、当該文献は、参照によって本明細書に組み込まれる。
【0086】
磁気分離は、当業者が利用可能な従来の手段を使用して達成できる。ある特定の実施形態では、方法は、試料を含むプレートまたは試料含有ウェルを磁気分離デバイス（例えば、Ｄｅｘｔｅｒ ＬｉｆｅＳｅｐ（登録商標）ｂｉｏｍａｇｎｅｔｉｃ ｓｅｐａｒａｔｏｒ ｔｒａｙ；Ｄｅｘｔｅｒ Ｍａｇｅｎｔｉｃ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）と接触させることを含む。適切な磁気分離デバイスは、当該技術分野で他にも知られている。
【0087】
以前に報告されたように、生物学的試料における細胞外ＭＥは、５，５－ジチオビス２－ニトロ安息香酸（ＤＴＮＢ）アッセイによって測定できる（例えば、Ａｙｅｎｅ ｅｔ
ａｌ．（２００２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７７：９９２９－３５を参照のこと）。例えば、細胞外培地がＤＴＮＢと混合され、その後に４１２ｎｍでＯ．Ｄ．が測定され得る。ＭＥの濃度は、還元型ＤＴＮＢの吸光係数１．３６×１０４を使用して計算され得る。ある特定の実施形態では、記載の方法における吸光度の測定値は、自動化プレートリーダーを使用して取得される。ある特定の実施形態では、吸光度を測定するステップは、平底プレート中の試料に対して実施される。ある特定の実施形態では、プレートは、９６ウェルマイクロプレートである。ある特定の実施形態では、プレートは、３８４ウェルマイクロプレートである。ある特定の実施形態では、プレートは、オプティカルボトムマイクロプレートである。ある特定の実施形態では、吸光度の測定は、最大で１２個の８ウェルストリップを保持することが可能なフレーム内の１つ以上の８ウェルストリップに対して実施される。ある特定の実施形態では、方法は、被検試料由来の吸光度の量を少なくとも１つの標準と比較することを含む。例えば、標準は、生物学的試料（例えば、対象）由来の量であり得る。ある特定の実施形態では、標準は、ヒドロキシ－エチル－ジスルフィド（ＨＥＤＳ）及びＬ－システイン塩酸塩一水和物（ＬＣＨＭ）を含む溶液である。
ａｌ．（２００２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７７：９９２９－３５を参照のこと）。例えば、細胞外培地がＤＴＮＢと混合され、その後に４１２ｎｍでＯ．Ｄ．が測定され得る。ＭＥの濃度は、還元型ＤＴＮＢの吸光係数１．３６×１０４を使用して計算され得る。ある特定の実施形態では、記載の方法における吸光度の測定値は、自動化プレートリーダーを使用して取得される。ある特定の実施形態では、吸光度を測定するステップは、平底プレート中の試料に対して実施される。ある特定の実施形態では、プレートは、９６ウェルマイクロプレートである。ある特定の実施形態では、プレートは、３８４ウェルマイクロプレートである。ある特定の実施形態では、プレートは、オプティカルボトムマイクロプレートである。ある特定の実施形態では、吸光度の測定は、最大で１２個の８ウェルストリップを保持することが可能なフレーム内の１つ以上の８ウェルストリップに対して実施される。ある特定の実施形態では、方法は、被検試料由来の吸光度の量を少なくとも１つの標準と比較することを含む。例えば、標準は、生物学的試料（例えば、対象）由来の量であり得る。ある特定の実施形態では、標準は、ヒドロキシ－エチル－ジスルフィド（ＨＥＤＳ）及びＬ－システイン塩酸塩一水和物（ＬＣＨＭ）を含む溶液である。
【0088】
キット
本明細書に記載の方法を実施するためのキットも提供される。
本明細書に記載の方法を実施するためのキットも提供される。
【0089】
ある特定の実施形態では、キットは、ＨＥＤＳ及びナノビーズを含む。別の実施形態では、キットは、ＨＥＤＳ、ナノビーズ、及びＤＴＮＢを含む。ある特定の実施形態では、ＨＥＤＳ、ナノビーズ、及びＤＴＮＢのうちの１つ以上は、担体を含む組成物に含められる。ある特定の実施形態では、キットは、１つ以上のマイクロタイタープレートをさらに含む。ある特定の実施形態では、キットは、Ｖ底マイクロプレートを含む。
【0090】
別の実施形態では、キットは、ヒドロキシ－エチル－ジスルフィド（ＨＥＤＳ）及び陽性対照としてのＬ－システイン塩酸塩一水和物（ＬＣＨＭ）を含む。ある特定の実施形態では、ＬＣＨＭは、凍結乾燥されたものである。他の実施形態では、ＬＣＨＭは、約２５μＭｏｌ、約５０μＭｏｌ、及び／または約２５μＭｏｌ～約５０μＭｏｌの濃度で溶液中に存在するものである。ある特定の実施形態では、は、ＤＴＮＢ（エルマン試薬）、Ｖ底８ウェルストリップ、平底８ウェルストリップ、最大で１２個の８ウェルストリップを
保持することが可能なフレーム、トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）、及びグルタチオン緩衝液のうちの１つ以上も含む。
保持することが可能なフレーム、トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）、及びグルタチオン緩衝液のうちの１つ以上も含む。
【0091】
ここでは、本発明は下記の実施例に関連して説明される。これらの実施例は例示のみを目的として与えられており、いかなる様式においても本発明をこれらの実施例に限定されるものとして解釈すべきではなく、むしろ、本明細書で提供される教示の結果として明らかになるありとあらゆる変形形態を包含するものと解釈すべきである。
【実施例】
【0092】
実施例１：ＣＩＰＮに対する易罹患性を評価するためのＧＳＨリサイクル活性の測定及びＣＩＰＮの重症度の予測
ビンカアルカロイド（ビンクリスチンなど）は、血液がんの治療に主に用いられる重要な抗がん剤である。その抗腫瘍作用の主な機序は微小管破壊である。一方で、こうした薬剤は、酸化ストレス及び活性酸素種（ＲＯＳ）の生成を引き起こすミトコンドリア損傷も引き起こす。この機序、すなわち、酸化ストレスの増加によって末梢神経障害を引き起こすことが示唆される他の化学療法剤には、タキサン及び白金化合物が含まれる。末梢ニューロンに対する酸化的損傷は、ミエリン鞘、ミトコンドリアタンパク質、及び他の抗酸化酵素に損傷を引き起こして、末梢ニューロンの過剰興奮性を生じさせ得る。この神経損傷は、一般に見られる用量制限神経学的副作用である化学療法誘発性末梢神経障害（ＣＩＰＮ）を生じさせる。
ビンカアルカロイド（ビンクリスチンなど）は、血液がんの治療に主に用いられる重要な抗がん剤である。その抗腫瘍作用の主な機序は微小管破壊である。一方で、こうした薬剤は、酸化ストレス及び活性酸素種（ＲＯＳ）の生成を引き起こすミトコンドリア損傷も引き起こす。この機序、すなわち、酸化ストレスの増加によって末梢神経障害を引き起こすことが示唆される他の化学療法剤には、タキサン及び白金化合物が含まれる。末梢ニューロンに対する酸化的損傷は、ミエリン鞘、ミトコンドリアタンパク質、及び他の抗酸化酵素に損傷を引き起こして、末梢ニューロンの過剰興奮性を生じさせ得る。この神経損傷は、一般に見られる用量制限神経学的副作用である化学療法誘発性末梢神経障害（ＣＩＰＮ）を生じさせる。
【0093】
本発明者らは、ミトコンドリアに対して同様の作用を有する化学療法剤（ビンカアルカロイド、タキサン、及び白金化合物）であれば、ＣＩＰＮに罹患し易い患者において特定のグルタチオンリサイクルパターンをもたらすであろうと仮定した。
【0094】
方法：この探索的単一施設前向きＩＲＢ承認試験への参加承諾書を提出した患者から、各治療サイクルの前に血液試料の提供を得た。治療レジメンの開始前にベースライン／治療前試料を取得した。いずれの化学療法の投与前にも各治療の当日に追加の試料を取得した。各来診時にロッテルダム症状チェックリスト（ＲＳＣＬ）に記入してもらい、診療記録の内容と比較することによって報告症状を確認した。
【0095】
生物活性プローブであるヒドロキシエチルジスルフィド（ＨＥＤＳ）を使用してグルタチオンリサイクル能力について全血を分析し、穏やかに混合しなら室温で２時間インキュベートした。分光光度的な決定に先立って、酸沈殿及び遠心分離によって血液細胞及びタンパク質性チオールを試料から除去した。ＯｘＰｈｏアッセイキット（Ｒｏｃｋｌａｎｄ
Ｉｎｃ）において提供される変換係数を使用して最終的な分光光度的読み取り値を生成ＭＥに変換して「ｃｈｅｍｏｔｏｘ」スコアを取得した。リサイクル能力（Ｃｈｅｍｏｔｏｘスコア）をＣＩＰＮの自己申告グレードと比較した。「重度ＣＩＰＮ」は、３回以上の連続する治療来診でグレード３ ＣＩＰＮを自己申告した患者を指す。図１は、ＣＩＰＮを含む神経系障害をグレード分類するためのガイドラインを示す表を提供する。
Ｉｎｃ）において提供される変換係数を使用して最終的な分光光度的読み取り値を生成ＭＥに変換して「ｃｈｅｍｏｔｏｘ」スコアを取得した。リサイクル能力（Ｃｈｅｍｏｔｏｘスコア）をＣＩＰＮの自己申告グレードと比較した。「重度ＣＩＰＮ」は、３回以上の連続する治療来診でグレード３ ＣＩＰＮを自己申告した患者を指す。図１は、ＣＩＰＮを含む神経系障害をグレード分類するためのガイドラインを示す表を提供する。
【0096】
結果：登録患者は４２８人であり、患者の平均年齢は６３．８４歳（１２．８５ＳＴＤＥＶ±１３．００；範囲；２５～９２）であった。患者は主にコーカサス系の人種背景（８２％）から構成され、これに加えて、アフリカ系アメリカ人系の人種背景（１６．５９％）及びアジア人系の人種背景（０．４３％）、ならびにラテン系の人種背景（０．４８％）である。コホートの５７．９４％を女性が構成している。これまでに、経過観察期間が２４ヶ月超の患者は３０６人存在し、これらの患者のうち１９．２８％でグレード３ ＣＩＰＮが報告され、２４．５１％でグレード２の症状が報告された一方で、３２．３５％ではＣＩＰＮの症状は報告されなかった。図２は、患者年齢が重大なＣＩＰＮリスク因子であることを示す。性別及び１年のうちの時期に基づくＣｈｅｍｏｔｏｘスコアの分析
から、一般に女性よりも男性の方が低いｃｈｅｍｏｔｏｘスコアを有し（すなわち、グルタチオンリサイクルのレベルが低い）、レベルは１年のうちの時期によって変動し得ることが示された（図３）。一連の４つの患者Ｃｈｅｍｏｔｏｘスコアの最初の分析から、ＣＩＰＮに対する患者の易罹患性の決定には時点を組み合わせることが有用であり得ることが明らかになった（図４及び図８）。グレード２または３のＣＩＰＮ症状を発症する５～１２週間前にＣＩＰＮの予測が得られた。この方法を使用することで、持続性ＣＩＰＮ（３回の治療サイクルまたは経過観察来診を超えて持続するものと定義される）を有する患者のうち８０．７７％が正しく特定された（ＡＵＣ０．８６９２８１）（図８）。ベースライン／治療前測定値を単独で使用することは、重度ＣＩＰＮの予測に有用ではなく、このことは、ＡＵＣが０．４７であることによって明らかになった（図５）。代替的に、第１の治療の後（かつ第２の治療の前）に取得した測定値を使用すると０．７４のＡＵＣが得られた（図６）。次に、さまざまな時点で患者から得られたＣｈｅｍｏｔｏｘスコアと追加の因子（患者の年齢及び性別など）との組み合わせを使用することで重度ＣＩＰＮが予測可能であるかどうかを評価した。４つの測定値（１＝治療前／ベースライン、２＝第１の治療の後／第２の治療の前、２＝第２の治療の後／第３の治療の前、及び４＝第３の治療の後／第４の治療の前）の平均値ならびに追加の基準を使用することで、評価のＡＵＣが０．８１に改善した（図７）。化学療法レジメンを受ける患者における重度ＣＩＰＮの予測に平均ｃｈｅｍｏｔｏｘスコアを使用可能であることが、さらなる解析から示された。４つのＣｈｅｍｏｔｏｘスコアの平均値を使用することで、重度ＣＩＰＮの予測のカットオフ値が１．８５であることが明らかになった（図９Ａ）。驚くべきことに、第１の治療の後／第２の治療の前に取得されるＣｈｅｍｏｔｏｘスコアと、取得される第２のスコアと、第３の治療の後／第４の治療の前に取得されるＣｈｅｍｏｔｏｘスコアとの平均値を利用するだけでも、１．８のカットオフ値で重度ＣＩＰＮが高度に予測された（図９Ｂ）。図１１Ａ及び図１１Ｂは、４つの時点で取得されるＣｈｅｍｏｔｏｘスコアの平均値を使用する解析が、タキソールを含む治療またはオキサリプラチン／ＦＯＬＦＯＸ併用治療を受けているコホートにおけるＣＩＰＮを予測可能な有用なものであることを示す。追加のリスク因子／変数を含めてＣｈｅｍｏｔｏｘスコアと組み合わせて利用することで、ＣＩＰＮの予測を改善することができる。因子には、患者年齢、人種、性別、特定の治療レジメン、がん型、併存疾患、がん罹患歴及び治療歴、体格指数、遺伝因子、ならびに赤血球数が含まれる。
から、一般に女性よりも男性の方が低いｃｈｅｍｏｔｏｘスコアを有し（すなわち、グルタチオンリサイクルのレベルが低い）、レベルは１年のうちの時期によって変動し得ることが示された（図３）。一連の４つの患者Ｃｈｅｍｏｔｏｘスコアの最初の分析から、ＣＩＰＮに対する患者の易罹患性の決定には時点を組み合わせることが有用であり得ることが明らかになった（図４及び図８）。グレード２または３のＣＩＰＮ症状を発症する５～１２週間前にＣＩＰＮの予測が得られた。この方法を使用することで、持続性ＣＩＰＮ（３回の治療サイクルまたは経過観察来診を超えて持続するものと定義される）を有する患者のうち８０．７７％が正しく特定された（ＡＵＣ０．８６９２８１）（図８）。ベースライン／治療前測定値を単独で使用することは、重度ＣＩＰＮの予測に有用ではなく、このことは、ＡＵＣが０．４７であることによって明らかになった（図５）。代替的に、第１の治療の後（かつ第２の治療の前）に取得した測定値を使用すると０．７４のＡＵＣが得られた（図６）。次に、さまざまな時点で患者から得られたＣｈｅｍｏｔｏｘスコアと追加の因子（患者の年齢及び性別など）との組み合わせを使用することで重度ＣＩＰＮが予測可能であるかどうかを評価した。４つの測定値（１＝治療前／ベースライン、２＝第１の治療の後／第２の治療の前、２＝第２の治療の後／第３の治療の前、及び４＝第３の治療の後／第４の治療の前）の平均値ならびに追加の基準を使用することで、評価のＡＵＣが０．８１に改善した（図７）。化学療法レジメンを受ける患者における重度ＣＩＰＮの予測に平均ｃｈｅｍｏｔｏｘスコアを使用可能であることが、さらなる解析から示された。４つのＣｈｅｍｏｔｏｘスコアの平均値を使用することで、重度ＣＩＰＮの予測のカットオフ値が１．８５であることが明らかになった（図９Ａ）。驚くべきことに、第１の治療の後／第２の治療の前に取得されるＣｈｅｍｏｔｏｘスコアと、取得される第２のスコアと、第３の治療の後／第４の治療の前に取得されるＣｈｅｍｏｔｏｘスコアとの平均値を利用するだけでも、１．８のカットオフ値で重度ＣＩＰＮが高度に予測された（図９Ｂ）。図１１Ａ及び図１１Ｂは、４つの時点で取得されるＣｈｅｍｏｔｏｘスコアの平均値を使用する解析が、タキソールを含む治療またはオキサリプラチン／ＦＯＬＦＯＸ併用治療を受けているコホートにおけるＣＩＰＮを予測可能な有用なものであることを示す。追加のリスク因子／変数を含めてＣｈｅｍｏｔｏｘスコアと組み合わせて利用することで、ＣＩＰＮの予測を改善することができる。因子には、患者年齢、人種、性別、特定の治療レジメン、がん型、併存疾患、がん罹患歴及び治療歴、体格指数、遺伝因子、ならびに赤血球数が含まれる。
【0097】
実施例２：グルタチオンリサイクル能力を測定するための改良型アッセイ
活性酸素種によって誘発される酸化ストレス及び有害作用のレベルの決定には、抗酸化グルタチオンのリサイクル能力を測定するための現存するチューブベースのアッセイ（Ｏｘｐｈｏｓ（商標）Ｃｅｌｌ Ｓｕｒｖｉｖａｌ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ；Ｒｏｃｋｌａｎｄ，Ｉｎｃ．）が使用されている。本発明者らは、このこれまでのマイクロ遠心チューブベースのアッセイを９６ウェルハイスループットアッセイへと改変し、古い化学のいくつかを置き換えることで、ＣＬＩＡ公認の臨床検査室に典型的には見られる自動化プレートリーダーを使用して正確な最終測定値が確実に得られるようにした。
活性酸素種によって誘発される酸化ストレス及び有害作用のレベルの決定には、抗酸化グルタチオンのリサイクル能力を測定するための現存するチューブベースのアッセイ（Ｏｘｐｈｏｓ（商標）Ｃｅｌｌ Ｓｕｒｖｉｖａｌ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ；Ｒｏｃｋｌａｎｄ，Ｉｎｃ．）が使用されている。本発明者らは、このこれまでのマイクロ遠心チューブベースのアッセイを９６ウェルハイスループットアッセイへと改変し、古い化学のいくつかを置き換えることで、ＣＬＩＡ公認の臨床検査室に典型的には見られる自動化プレートリーダーを使用して正確な最終測定値が確実に得られるようにした。
【0098】
アッセイに対する第１の改変では、血液試料と生物活性プローブであるヒドロキシ－エチル－ジスルフィドとのインキュベートにＶ形状９６ウェルマイクロプレートを使用するようにした。標準的なインキュベート時間を経ると、血液細胞がウェルの底に沈降して上清を新たなプレートに移せるようになる。損傷細胞から放出されている可能性のある干渉物質を除去するためにナノビーズのスラリーを添加する。ナノビーズは、Ｓｔｏｂｅｒ プロセスに従って創出されるシリカ（ＳｉＯ２）及びマグヘマイト（γ－Ｆｅ２Ｏ３）または同様のものから構成されている（Ｓｔｏｅｂｅｒ，Ｗｅｒｎｅｒ；Ｆｉｎｋ，Ａｒｔｈｕｒ；Ｂｏｈｎ，Ｅｒｎｓｔ（Ｊａｎｕａｒｙ １９６８）．“Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ
ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｍｏｎｏｄｉｓｐｅｒｓｅ ｓｉｌｉｃａ ｓｐｈｅｒｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｍｉｃｒｏｎ ｓｉｚｅ ｒａｎｇｅ”．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｏｌｌ
ｏｉｄ ａｎｄ Ｉｎｔｅｒｆａｃｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ．２６（１）：６２－６９．Ｂｉｂｃｏｄｅ：１９６８ＪＣＩＳ２６－６２－Ｓ．ｄｏｉ：１０．１０１６／００２１－９７９７（６８）９０２７２－５．）。ビーズは、最終的な光学的測定を妨害し得る分子に結合する表面リガンドを有する。プレートを磁気分離器ユニット上に置くことによって、リガンドに結合した物質を含むビーズがウェルの底に沈降し、その後に、これまでの方法論（Ｏｘｐｈｏｓ（商標）Ｃｅｌｌ Ｓｕｒｖｉｖａｌ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ；Ｒｏｃｋｌａｎｄ，Ｉｎｃ．）で行われるようなジチオビスニトロ安息香酸を使用する４１２ｎｍでのプレートリーダーでの測定のためのオプティカルボトムプレートに清澄化上清を移すことができる。
ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｍｏｎｏｄｉｓｐｅｒｓｅ ｓｉｌｉｃａ ｓｐｈｅｒｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｍｉｃｒｏｎ ｓｉｚｅ ｒａｎｇｅ”．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｏｌｌ
ｏｉｄ ａｎｄ Ｉｎｔｅｒｆａｃｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ．２６（１）：６２－６９．Ｂｉｂｃｏｄｅ：１９６８ＪＣＩＳ２６－６２－Ｓ．ｄｏｉ：１０．１０１６／００２１－９７９７（６８）９０２７２－５．）。ビーズは、最終的な光学的測定を妨害し得る分子に結合する表面リガンドを有する。プレートを磁気分離器ユニット上に置くことによって、リガンドに結合した物質を含むビーズがウェルの底に沈降し、その後に、これまでの方法論（Ｏｘｐｈｏｓ（商標）Ｃｅｌｌ Ｓｕｒｖｉｖａｌ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ；Ｒｏｃｋｌａｎｄ，Ｉｎｃ．）で行われるようなジチオビスニトロ安息香酸を使用する４１２ｎｍでのプレートリーダーでの測定のためのオプティカルボトムプレートに清澄化上清を移すことができる。
【0099】
こうした改良によって、自動化ハイスループット機器が利用される臨床検査室における大量検査が容易になり、患者におけるグルタチオンリサイクル能力の決定を迅速化することが可能になる。
【0100】
マルチウェルアッセイのためのプロトコール
非キット材料：
－２つのＶ底９６ウェルプレート
－１つの平底９６ウェルプレート
－平衡／洗浄緩衝液：１２５ｍＭ トリス－ＨＣＬ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ，ｐＨ ７．４
－Ｐｉｅｒｃｅグルタチオン磁気アガロースビーズ。カタログ番号７８６０１
－Ｄｅｘｔｅｒ ＬｉｆｅＳｅｐ ９６Ｆ磁気プレート分離器
－０．９％塩化ナトリウム
非キット材料：
－２つのＶ底９６ウェルプレート
－１つの平底９６ウェルプレート
－平衡／洗浄緩衝液：１２５ｍＭ トリス－ＨＣＬ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ，ｐＨ ７．４
－Ｐｉｅｒｃｅグルタチオン磁気アガロースビーズ。カタログ番号７８６０１
－Ｄｅｘｔｅｒ ＬｉｆｅＳｅｐ ９６Ｆ磁気プレート分離器
－０．９％塩化ナトリウム
【0101】
Ｍａｇｎａｂｅａｄの調製
１．各患者につき、１００ｕＬのビーズスラリー（２５ｕＬの安定沈降ビーズ）を１．５ｍＬのマイクロ遠心チューブに添加する。
注記：多数の患者にはより大きなチューブを使用し、ビーズの体積及び平衡／洗浄緩衝液の体積をそれぞれ増やす。
２．４００ｕＬの平衡／洗浄緩衝液をビーズに添加し、１０秒間ボルテックスする。
３．チューブを磁気スタンドに置いてチューブの壁面にビーズを集める。上清を除去し、捨てる。
４．５００ｕＬの平衡／洗浄緩衝液をチューブに添加する。ビーズを１０秒間ボルテックスし、磁気スタンドを用いてビーズを集める。上清を除去し、捨てる。
５．４００ｕＬの平衡／洗浄緩衝液をチューブに添加し、１０秒間ボルテックスする。
注記：ビーズを乾燥させないこと。必要な場合はビーズを平衡／洗浄緩衝液中で保管する。
１．各患者につき、１００ｕＬのビーズスラリー（２５ｕＬの安定沈降ビーズ）を１．５ｍＬのマイクロ遠心チューブに添加する。
注記：多数の患者にはより大きなチューブを使用し、ビーズの体積及び平衡／洗浄緩衝液の体積をそれぞれ増やす。
２．４００ｕＬの平衡／洗浄緩衝液をビーズに添加し、１０秒間ボルテックスする。
３．チューブを磁気スタンドに置いてチューブの壁面にビーズを集める。上清を除去し、捨てる。
４．５００ｕＬの平衡／洗浄緩衝液をチューブに添加する。ビーズを１０秒間ボルテックスし、磁気スタンドを用いてビーズを集める。上清を除去し、捨てる。
５．４００ｕＬの平衡／洗浄緩衝液をチューブに添加し、１０秒間ボルテックスする。
注記：ビーズを乾燥させないこと。必要な場合はビーズを平衡／洗浄緩衝液中で保管する。
【0102】
試薬
試薬＃１：（ＨＥＤＳ）
２－ヒドロキシエチルジスルフィド（ＣＡＳ１８９２－２９－１，ＭＷ１５４．２５ｇ／ｍｏｌ）
試薬＃２：（ＰＢＳ）
リン酸緩衝生理食塩水，ｐＨ７．４
２．０ｇのＫＣＬ、２．４０ｇのＫＨ２ＰＯ４、８０．０ｇのＮａＣｌ、及び１４．４のＮａ２ＨＰＯ４×７Ｈ２Ｏを蒸留水に溶解し、ｐＨを調整し、体積を１Ｌに調整する。
試薬＃３：（ＳＳ酸）
［１００ｍＭ ５－スルホサリチル酸二水和物，ＢｉｏＸｔｒａ≧９９％］
［Ｓｉｇｍａ Ｓ７４２２－１００Ｇ］
ＣＡＳ５９６５－８３－３，Ｃ７Ｈ６Ｏ６Ｓ・２Ｈ２Ｏ，ＭＷ２５４．２１ｇ／ｍｏｌ
５００ｍｌを調製するには１２．７１グラムを蒸留Ｈ２Ｏに溶解する。溶解時点でさらに水を加えて体積を５００ｍｌに調整する。
試薬＃４：（ＧＳＨ緩衝液）
［０．１Ｍ ＮａＨ２ＰＯ４・０．５ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ７．５］
［リン酸二水素ナトリウム無水ＵＳＰ，Ｆｉｓｈｅｒ Ｓ３９７－５００］ ＣＡＳ７５５８－８０－７，ＭＷ１１９．９６ｇ／ｍｏｌ ＮａＨ２ＰＯ４；
［エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ），二ナトリウム塩，無水ＵＳＰ，Ｆｉｓｈｅｒ Ｓ３１２－５００］
ＣＡＳ６３８１－９２－６，ＭＷ３７２．２４，Ｃ１０Ｈ１４Ｎ２Ｎａ２Ｈ８・２Ｈ２Ｏ１Ｌを調製するには、１１．９９６グラムのリン酸二水素ナトリウムを溶解する。０．１８６２グラムのＥＤＴＡを添加し、溶液の撹拌を継続する。すべてのＥＤＴＡを溶解させるにはｐＨ調整が必要になることもあり得る。
完全溶解時点でｐＨを７．５に調整する。
試薬＃５：（ＤＴＮＢ）
［１０ｍＭ ５，５’－ジチオビス（２－ニトロ－安息香酸）］
［Ｓｉｇｍａ Ｄ８１３０－１０Ｇ］
ＣＡＳ６９－７８－３；ＭＷ３９６．３５；Ｃ１３Ｈ８Ｎ２Ｏ８Ｓ２
２５０ｍｌを調製するには、０．９９０８グラムのＤＮＴＢを試薬４に溶解する。
試薬＃１：（ＨＥＤＳ）
２－ヒドロキシエチルジスルフィド（ＣＡＳ１８９２－２９－１，ＭＷ１５４．２５ｇ／ｍｏｌ）
試薬＃２：（ＰＢＳ）
リン酸緩衝生理食塩水，ｐＨ７．４
２．０ｇのＫＣＬ、２．４０ｇのＫＨ２ＰＯ４、８０．０ｇのＮａＣｌ、及び１４．４のＮａ２ＨＰＯ４×７Ｈ２Ｏを蒸留水に溶解し、ｐＨを調整し、体積を１Ｌに調整する。
試薬＃３：（ＳＳ酸）
［１００ｍＭ ５－スルホサリチル酸二水和物，ＢｉｏＸｔｒａ≧９９％］
［Ｓｉｇｍａ Ｓ７４２２－１００Ｇ］
ＣＡＳ５９６５－８３－３，Ｃ７Ｈ６Ｏ６Ｓ・２Ｈ２Ｏ，ＭＷ２５４．２１ｇ／ｍｏｌ
５００ｍｌを調製するには１２．７１グラムを蒸留Ｈ２Ｏに溶解する。溶解時点でさらに水を加えて体積を５００ｍｌに調整する。
試薬＃４：（ＧＳＨ緩衝液）
［０．１Ｍ ＮａＨ２ＰＯ４・０．５ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ７．５］
［リン酸二水素ナトリウム無水ＵＳＰ，Ｆｉｓｈｅｒ Ｓ３９７－５００］ ＣＡＳ７５５８－８０－７，ＭＷ１１９．９６ｇ／ｍｏｌ ＮａＨ２ＰＯ４；
［エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ），二ナトリウム塩，無水ＵＳＰ，Ｆｉｓｈｅｒ Ｓ３１２－５００］
ＣＡＳ６３８１－９２－６，ＭＷ３７２．２４，Ｃ１０Ｈ１４Ｎ２Ｎａ２Ｈ８・２Ｈ２Ｏ１Ｌを調製するには、１１．９９６グラムのリン酸二水素ナトリウムを溶解する。０．１８６２グラムのＥＤＴＡを添加し、溶液の撹拌を継続する。すべてのＥＤＴＡを溶解させるにはｐＨ調整が必要になることもあり得る。
完全溶解時点でｐＨを７．５に調整する。
試薬＃５：（ＤＴＮＢ）
［１０ｍＭ ５，５’－ジチオビス（２－ニトロ－安息香酸）］
［Ｓｉｇｍａ Ｄ８１３０－１０Ｇ］
ＣＡＳ６９－７８－３；ＭＷ３９６．３５；Ｃ１３Ｈ８Ｎ２Ｏ８Ｓ２
２５０ｍｌを調製するには、０．９９０８グラムのＤＮＴＢを試薬４に溶解する。
【0103】
マルチウェルアッセイ
ステップ１
表１に示されるように生理食塩水及び試薬６を含むＶ底９６ウェルプレートを準備して、５ｕＬ及び１０ｕＬの血液試料を２連にして患者当たりの総ウェル数を５とする。血液を各ウェルに入れて穏やかに混合した後、マイクロプレート密封フィルムでプレートをカバーしてから、ロッカー上で２時間インキュベートする。
ステップ１
表１に示されるように生理食塩水及び試薬６を含むＶ底９６ウェルプレートを準備して、５ｕＬ及び１０ｕＬの血液試料を２連にして患者当たりの総ウェル数を５とする。血液を各ウェルに入れて穏やかに混合した後、マイクロプレート密封フィルムでプレートをカバーしてから、ロッカー上で２時間インキュベートする。
【表1】
【0104】
ステップ２
２時間のインキュベート後、ステップ１由来の各ウェルに由来する上清７５ｕＬを、洗浄済磁気ビーズ溶液を各ウェル中に７５ｕＬ含む新たなＶ底９６ウェルプレートに移し、１０分間インキュベートする。
２時間のインキュベート後、ステップ１由来の各ウェルに由来する上清７５ｕＬを、洗浄済磁気ビーズ溶液を各ウェル中に７５ｕＬ含む新たなＶ底９６ウェルプレートに移し、１０分間インキュベートする。
【0105】
ステップ３
インキュベート後、ステップ２由来のＶ底９６ウェルプレートをＤｅｘｔｅｒ磁気プレート上に３０～６０秒間置く。磁気ビーズは、各ウェルの底に引き寄せられる。表２に示されるように試薬４及び５を含む平底９６ウェルプレートに各ウェル由来の上清１０ｕＬを移して患者当たりの総ウェル数を５とし、さらに１つのブランクを用意する。
平底９６ウェルプレート上に蓋を置き、４１２ｎｍで吸光度を読み取る。実験試料からブランクを差し引く。
インキュベート後、ステップ２由来のＶ底９６ウェルプレートをＤｅｘｔｅｒ磁気プレート上に３０～６０秒間置く。磁気ビーズは、各ウェルの底に引き寄せられる。表２に示されるように試薬４及び５を含む平底９６ウェルプレートに各ウェル由来の上清１０ｕＬを移して患者当たりの総ウェル数を５とし、さらに１つのブランクを用意する。
【表2】
【0106】
実施例３：Ｃｈｅｍｏｔｏｘハイスループットアッセイ
改良型アッセイを開発して、多数の患者試料を効率的に分析できるようにした。
改良型アッセイを開発して、多数の患者試料を効率的に分析できるようにした。
【0107】
試料ごとに必要な材料
－３つの空の９６ウェルプレートフレーム
－試料当たり２つのＶ底８ウェルストリップ
－試料当たり１つの平底８ウェルストリップ
－試料当たり４つの８ウェルストリップキャップ
－試薬＃１：ヒドロキシエチルジスルフィド（ＨＥＤＳ）（ＣＡＳ１８９２－２９－１、ＭＷ１５４．２５ｇ／ｍｏｌ）
－試薬＃２：トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）
－試薬＃３：発色試薬，エルマン試薬（ＤＴＮＢ）［１０ｍＭ ５，５’－ジチオビス（２－ニトロ－安息香酸）］［Ｓｉｇｍａ Ｄ８１３０－１０Ｇ］ＣＡＳ６９－７８－３；ＭＷ３９６．３５；Ｃ１３Ｈ８Ｎ２Ｏ８Ｓ２
－試薬＃４（グルタチオン緩衝液）
－凍結乾燥Ｌ－システイン塩酸塩一水和物（ＬＣＨＭ）［Ａｌｆａ Ａｅｓａｒ：ＣＡＳ７０４８－０４－６
－３つの空の９６ウェルプレートフレーム
－試料当たり２つのＶ底８ウェルストリップ
－試料当たり１つの平底８ウェルストリップ
－試料当たり４つの８ウェルストリップキャップ
－試薬＃１：ヒドロキシエチルジスルフィド（ＨＥＤＳ）（ＣＡＳ１８９２－２９－１、ＭＷ１５４．２５ｇ／ｍｏｌ）
－試薬＃２：トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）
－試薬＃３：発色試薬，エルマン試薬（ＤＴＮＢ）［１０ｍＭ ５，５’－ジチオビス（２－ニトロ－安息香酸）］［Ｓｉｇｍａ Ｄ８１３０－１０Ｇ］ＣＡＳ６９－７８－３；ＭＷ３９６．３５；Ｃ１３Ｈ８Ｎ２Ｏ８Ｓ２
－試薬＃４（グルタチオン緩衝液）
－凍結乾燥Ｌ－システイン塩酸塩一水和物（ＬＣＨＭ）［Ａｌｆａ Ａｅｓａｒ：ＣＡＳ７０４８－０４－６
【0108】
以下のリストは、アッセイのための特定の試薬を含む、使用準備ができた状態の８ウェルストリップのレイアウトである（それぞれの３つのストリップは、図１２に示されるウェルＡ～Ｈを含む）。患者試料ごとにストリップのうちの１つが必要であり、最大で１２個のストリップを単一のプレートフレームが並行して保持して（８×１２）、一度に１２個の患者試料に対するアッセイを実施できる。
【表3】
【表4】
【表5】
【0109】
アッセイの実施：
１．２１０μＬの試薬＃４をプレート＃１のウェルＢ及びＣに添加する。
２．２連の全血２０μＬをウェルＥ及びＦ（１８０μＬの生理食塩水を含む）に添加し、６０μＬの血液をＧ及びＨ（１４０μＬの生理食塩水を含む）に添加する。
３．キャップストリップでプレートを密封し、７００ＲＰＭの振とう機上に２時間置いて室温でインキュベートする。
注記：最適な性能は２１℃で得られる。環境温度が２１℃と異なる場合は、下記の式を使用して最終的なＣｈｅｍｏｔｏｘスコアを取得する：
４．２時間のインキュベート後、遠心分離のバランスが適切であることを事前に確認して、プレート＃１を２，０００Ｇで６分間遠心分離する。
５．ペレットを乱さないようにしながら、各ウェル由来の上清５０μＬをプレート＃２中の対応ウェルに慎重に移す。新たなストリップでプレートを密封する。
６．遠心分離のバランスが適切であることを確認して、プレート＃２を２，０００Ｇで６分間遠心分離する。
７．プレート＃２由来の上清３０μＬをプレート＃３に移し、ピペットチップを洗浄する。透明から黄色へと色が即座に変化する。
８．３０分以内に４１２ｎｍで吸光度値を読み取る。
１．２１０μＬの試薬＃４をプレート＃１のウェルＢ及びＣに添加する。
２．２連の全血２０μＬをウェルＥ及びＦ（１８０μＬの生理食塩水を含む）に添加し、６０μＬの血液をＧ及びＨ（１４０μＬの生理食塩水を含む）に添加する。
３．キャップストリップでプレートを密封し、７００ＲＰＭの振とう機上に２時間置いて室温でインキュベートする。
注記：最適な性能は２１℃で得られる。環境温度が２１℃と異なる場合は、下記の式を使用して最終的なＣｈｅｍｏｔｏｘスコアを取得する：
【数2】
５．ペレットを乱さないようにしながら、各ウェル由来の上清５０μＬをプレート＃２中の対応ウェルに慎重に移す。新たなストリップでプレートを密封する。
６．遠心分離のバランスが適切であることを確認して、プレート＃２を２，０００Ｇで６分間遠心分離する。
７．プレート＃２由来の上清３０μＬをプレート＃３に移し、ピペットチップを洗浄する。透明から黄色へと色が即座に変化する。
８．３０分以内に４１２ｎｍで吸光度値を読み取る。
【0110】
商業的に利用可能なチューブベースの方法から得られた結果をハイスループットプレートベースの形式から得られた結果と比較する患者試料の並行分析から、プレートベースの
アッセイが少なくとも同等かそれ以上に正確であることが明らかになった（図１３）。陽性対照（ＬＣＨＭ）の追加は、アッセイの信頼性をさらに高めるものである。
アッセイが少なくとも同等かそれ以上に正確であることが明らかになった（図１３）。陽性対照（ＬＣＨＭ）の追加は、アッセイの信頼性をさらに高めるものである。
【0111】
特許、特許出願、及び刊行物の１つ１つが、参照によって本明細書に組み込まれる。２０２１年１１月３日出願の米国仮特許出願第６３／２７５，２７１号及び２０２１年１１月３日出願の米国仮特許出願第６３／２７５，２７９号は、参照によって本明細書に組み込まれる。本発明は、特定の実施形態に関連して説明されているが、本発明の趣旨から逸脱することなく改変形態をつくれることが理解されよう。そのような改変形態は、添付の特許請求の範囲に含まれることが意図される。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9A】
【図9B】
【図10】
【図11A】
【図11B】
【図12】
【図13】
【国際調査報告】