特表 2024-543080 ボツリヌス毒素組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-11-19

(54)【発明の名称】ボツリヌス毒素組成物

(51)【国際特許分類】

   A61K 35/742 20150101AFI20241112BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20241112BHJP

   A61P 17/10 20060101ALI20241112BHJP

   A61P 17/02 20060101ALI20241112BHJP

   A61P 25/06 20060101ALI20241112BHJP

   A61K 9/19 20060101ALI20241112BHJP

   A61K 47/26 20060101ALI20241112BHJP

   A61K 47/18 20170101ALI20241112BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20241112BHJP

【ＦＩ】

A61K35/742

A61P17/00

A61P17/10

A61P17/02

A61P25/06

A61K9/19

A61K47/26

A61K47/18

A61K9/08

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024528620

(86)(22)【出願日】2022-11-11

(85)【翻訳文提出日】2024-06-13

(86)【国際出願番号】 KR2022017751

(87)【国際公開番号】W WO2023085849

(87)【国際公開日】2023-05-19

(31)【優先権主張番号】10-2021-0156686

(32)【優先日】2021-11-15

(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR

(31)【優先権主張番号】10-2021-0156703

(32)【優先日】2021-11-15

(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】513243723

【氏名又は名称】メディトックス インク．

(74)【代理人】

【識別番号】110002077

【氏名又は名称】園田・小林弁理士法人

(72)【発明者】

【氏名】クァク， セオンソン

(72)【発明者】

【氏名】クォン， ジンヒ

(72)【発明者】

【氏名】ビョン， ジェユン

【テーマコード（参考）】

4C076

4C087

【Ｆターム（参考）】

4C076AA11

4C076AA29

4C076BB31

4C076CC18

4C076DD38

4C076DD46

4C076DD51

4C076DD67

4C087AA01

4C087AA02

4C087BC68

4C087MA17

4C087MA44

4C087MA63

4C087NA14

4C087ZA08

4C087ZA89

(57)【要約】

本開示は、低減された拡散効果、及び／または延長された期間の間の効果を有するボツリヌス毒素組成物に係わるものである。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

治療が必要な患者の疾患を治療するための方法に使用するための、動物タンパク質を含まず、有効成分としてボツリヌス毒素を含む組成物であり、
前記方法は、前記組成物の治療有効量を、治療が必要な対象体に局所投与する段階を含み、
投与部位において、動物タンパク質を含むボツリヌス毒素組成物より拡散が低減された、ボツリヌス毒素組成物。

【請求項2】

前記ボツリヌス毒素は、非複合体ボツリヌス毒素である、請求項１に記載のボツリヌス毒素組成物。

【請求項3】

前記組成物は、投与部位において、動物タンパク質を含むボツリヌス毒素組成物より延長された期間の間の効果を有する、請求項１または２に記載のボツリヌス毒素組成物。

【請求項4】

前記組成物は、凍結乾燥された組成物である、請求項１または２に記載のボツリヌス毒素組成物。

【請求項5】

凍結乾燥された組成物は、ボツリヌス毒素、ポリソルベート、メチオニン；並びに糖、糖アルコール及びイオン性化合物によって構成された群のうちから選択される１以上の成分を含む、請求項４に記載のボツリヌス毒素組成物。

【請求項6】

動物タンパク質を含まないボツリヌス毒素組成物は、液状組成物である、請求項１または２に記載のボツリヌス毒素組成物。

【請求項7】

液状組成物は、ボツリヌス毒素、ポリソルベート及びメチオニンを含む、請求項５に記載のボツリヌス毒素組成物。

【請求項8】

前記組成物は、皮膚しわ、エラ張り顎、尖り顎、傷、皮膚軟化、傷痕、にきび、毛孔、弾力またはケロイド症状を改善させるか、あるいは顔面痙攣、瞼痙攣、斜頸、眼瞼痙攣、頸部筋緊張異常症、咽頭中央部筋緊張異常症、痙攣性発声障害、偏頭痛、肛門掻痒症または多汗症を治療するためのものである、請求項１ないし７のうちいずれか１項に記載のボツリヌス毒素組成物。

【請求項9】

低減された拡散効果、または延長された期間の間の効果は、２回以上の繰り返し投与で生じる、請求項１または３に記載のボツリヌス毒素組成物。

【請求項10】

前記組成物の前記投与部位筋肉と隣接した筋肉の複合筋肉活動電位測定値は、動物タンパク質含有組成物を、同一投与部位及び同一投与位置に、同一用量投与したときの投与部位筋肉と隣接した筋肉の複合筋肉活動電位測定値より高い値を有する、請求項１または２に記載の組成物。

【請求項11】

前記組成物の前記投与部位筋肉の複合筋肉活動電位測定値は、動物タンパク質含有組成物を、同一投与部位及び同一投与位置に、同一用量投与したときの投与部位筋肉の複合筋肉活動電位測定値より低い値を有する、請求項１ないし３のうちいずれか１項に記載の組成物。

【請求項12】

治療が必要な患者の疾患を治療するための方法に使用するための、動物タンパク質を含まず、有効成分として非複合体ボツリヌス毒素を含む組成物であり、
前記方法は、前記組成物の治療有効量を、治療が必要な対象体に局所投与する段階を含み、
投与部位において、動物タンパク質を含むボツリヌス毒素組成物より延長された期間の間の効果を有する、ボツリヌス毒素組成物。

【請求項13】

皮膚しわ、エラ張り顎、尖り顎、傷、皮膚軟化、傷痕、にきび、毛孔、弾力またはケロイド症状を改善させるか、あるいは顔面痙攣、瞼痙攣、斜頸、眼瞼痙攣、頸部筋緊張異常症、咽頭中央部筋緊張異常症、痙攣性発声障害、偏頭痛、肛門掻痒症または多汗症を治療するための医薬品の製造において、請求項１、２及び１２のうちいずれか１項に記載のボツリヌス毒素組成物の用途。

【請求項14】

請求項１、２及び１２のうちいずれか１項に記載のボツリヌス毒素組成物の治療有効量を個体に投与する段階を含む、皮膚しわ、エラ張り顎、尖り顎、傷、皮膚軟化、傷痕、にきび、毛孔、弾力またはケロイド症状を改善させるか、あるいは顔面痙攣、瞼痙攣、斜頸、眼瞼痙攣、頸部筋緊張異常症、咽頭中央部筋緊張異常症、痙攣性発声障害、偏頭痛、肛門掻痒症または多汗症を治療するための方法。

【請求項15】

低減された拡散効果は、２回以上の繰り返し投与で生じる、請求項１４に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ボツリヌス毒素組成物に関する。

【背景技術】

【0002】

ボツリヌス毒素（ＢｏＮＴ：Botulinum neurotoxin）は、嫌気性ボツリヌス菌（Clostridium botulinum）のポリペプチド生成物であり、神経と筋肉とが出合う部分において、神経伝達物質が分泌されないようにし、筋肉を麻痺させる役割を行う。ボツリヌス毒素は、本来致死を起こす毒性物質であるが、斜眼（strabismus）治療を含む、筋肉が過度に収縮されて生じる疾患に初めて使用された後、使用範囲が広くなり、現在は、多様な目的に使用されている。主に、筋肉緊張異常や片側顔面痙攣（hemifacial spasm）、震顫（tremor）、痙縮（spasticity）のようなその他の非筋肉緊張異常運動疾患を治療するために、ボツリヌス毒素が使用される。それ以外に、眼疾患（ocular disease）、偏頭痛（migraine）のような痛症関連疾患、泌尿器疾患（urologic disease）、及び美容目的のしわ治療のように、多様な適応症に使用されている。

【0003】

韓国公開ＫＲ２０１６－０１１３５９７は、疾患、障害または異常の治療が必要な患者における、動物タンパク質を含まないボツリヌス毒素組成物、及びその用途に係わるものであり、動物タンパク質を含まないボツリヌス毒素組成物は、動物タンパク質を含むボツリヌス毒素組成物と比較し、ボツリヌス毒素の効果が延長されることを開示している。

【0004】

しかし、これまで、低減された拡散効果を有するボツリヌス毒素組成物は、知られていない。

【0005】

なお、韓国公開ＫＲ２００８－００５０６３６と同ＫＲ２００８－００４９１５２は、それぞれボツリヌス神経毒素、またはボツリヌス神経毒素と、ボツリヌス神経毒素と共に自然に形成される複合タンパク質がないボツリヌス神経毒素との混合物によって構成された薬剤学的組成物について開示している。また、韓国公開ＫＲ２０１６－０１１３５９７は、疾患、障害または異常の治療が必要な患者における、動物タンパク質を含まないボツリヌス毒素組成物、及びその用途に係わるものであり、動物タンパク質を含まないボツリヌス毒素組成物は、動物タンパク質を含むボツリヌス毒素組成物と比較し、ボツリヌス毒素の効果が延長されることを開示している。

【0006】

しかし、これまで、非複合体ボツリヌス毒素を有効成分にし、動物タンパク質を含まないボツリヌス毒素組成物の効果を延ばそうとする試みはなかった。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0007】

本発明の一目的は、低減された拡散効果を有するボツリヌス毒素組成物、その疾患治療用途、またはそれを必要な対象体に投与し、疾患を治療する方法を提供することである。

【0008】

本発明の一目的は、非複合体ボツリヌス毒素を有効成分として含み、動物タンパク質を含まないボツリヌス毒素組成物、疾患治療用医薬品製造におけるその用途、またはそれを必要な対象体に投与し、疾患を治療する方法を提供することである。

【課題を解決するための手段】

【0009】

本発明は、低減された拡散効果、及び／または延長された期間の間の効果を有するボツリヌス毒素組成物に係わるものである。

【発明の効果】

【0010】

本発明の一実施例によれば、低減された拡散効果を有することにより、拡散による副作用発生危険を減らしたボツリヌス毒素組成物、疾患治療用医薬品製造におけるその用途、及びそれを利用した治療方法が提供される。

【0011】

本開示によれば、延長された効果を有するようになり、治療効果、及び患者の好都合性が高くなった非複合体ボツリヌス毒素を有効成分にし、動物タンパク質を含まないボツリヌス毒素組成物、疾患治療用組成物製造におけるその用途、及びそれを利用した治療方法が提供される。

【図面の簡単な説明】

【0012】

【図1】本明細書の実施例１に記載されたマウスにおいて、ボツリヌス毒素Ａ型製品２種（コアトックス（Coretox）、ニューロノクス（Neuronox））及びプラセボ（placebo）を右側ふくらはぎ筋肉に投与した後、７日目の、投与部位筋肉及び反対側非投与筋肉に係わる複合筋肉活動電位（ＣＭＡＰ）数値を示すグラフである。ＣＭＡＰ値について、両側（two-tailed）ｔ検定を使用して分析した。

【図2】本明細書の実施例２に記載されたラットにおいて、互いに異なる剤形の複合体化されたボツリヌス毒素Ａ型２種（ＴＦＸＡ２１００４（アルブミン剤形）、ＮＸＡ２０００１（非アルブミン剤形））及びプラセボ（placebo）を、右側前脛骨筋に投与した後、１４日目、右側前脛骨筋（投与筋肉）及び右側ふくらはぎ筋（非投与筋肉）におけるＣＭＡＰ値を示す。ＣＭＡＰ値について、両側（two－tailed）ｔ検定を使用して分析した。

【図3】本明細書の実施例３に記載されたマウスにおいて、ボツリヌス毒素Ａ型製品５種（コアトックス（Coretox）、ゼオミン（Xeomin）、ボトックス（Botox）、ニューロノクス（Neuronox）、イノトックス（Innotox））及びプラセボ（placebo）を、３回、右側ふくらはぎ筋肉における繰り返し投与によるＤＡＳ数値の経時的な変化を示すグラフである。グラフ上端の矢印は、各ボツリヌス毒素Ａ型製品を投与した時期を示す。

【図4】本明細書の実施例３に記載されたマウスでボツリヌス毒素Ａ型製品５種（コアトックス（Coretox）、ゼオミン（Xeomin）、ボトックス（Botox）、ニューロノクス（Neuronox）、イノトックス（Innotox））及びプラセボ（placebo）を３回右側ふくらはぎ筋肉における繰り返し投与による、投与部位ふくらはぎ筋肉ＣＭＡＰ数値の経時的な変化を示すグラフである。グラフ上端の矢印は、各ボツリヌス毒素Ａ型製品を投与した時期を示し、終了時点（一次投与後２５２日目）において、各ボツリヌス毒素投与群のＣＭＡＰ値について、一元配置分散分析（one-way ＡＮＯＶＡ）を行い、グループ間比較のために、チューキー事後検定（Tukey’s post-hoc test）を使用して分析した。ａ、ｂ及びｃ互いに異なる文字は統計的に有意な差を示す。

【図5】本明細書の実施例３に記載されたマウスでボツリヌス毒素Ａ型製品５種（コアトックス（Coretox）、ゼオミン（Xeomin）、ボトックス（Botox）、ニューロノクス（Neuronox）、イノトックス（Innotox））及びプラセボ（placebo）を、３回、右側ふくらはぎ筋肉に投与した後、６～７日目反対側部位ふくらはぎ筋肉のＣＭＡＰ数値を示すグラフである。各ボツリヌス毒素投与群の反対側筋肉のＣＭＡＰ値について、一元配置分散分析（one-way ＡＮＯＶＡ）（one-way ＡＮＯＶＡ）を行い、グループ間比較のためにチューキー事後検定（Tukey’s post-hoc test）を使用して分析した。ａ、ｂ及びｃの互いに異なる文字は、統計的に有意な差を示す。

【発明を実施するための形態】

【0013】

取り立てての定義がない限り、本明細書に使用された技術的及び科学的な用語は、本開示が属した分野において一般的に使用されるところと同一な意味を有する。本開示の理解のために、下記定義が適用されるが、単数の表現は、文脈上、明白に取り立てての意味がない限り、複数の表現を含み、その逆もまたしかりである。

【0014】

本明細書で使用される、用語「ボツリヌス毒素（botulinum toxin）」は、全ての血清型（serotype）、その変異体または融合タンパク質を含み、細菌または組み換えによって生成されるボツリヌス毒素タンパク質分子を意味する。

【0015】

一態様において、ボツリヌス毒素は、血清型に制限なしに使用可能であり、タイプＡ（ＢｏＮＴ／Ａ）、タイプＢ（ＢｏＮＴ／Ｂ）、タイプＣ（ＢｏＮＴ／Ｃ）、タイプＤ（ＢｏＮＴ／Ｄ）、タイプＥ（ＢｏＮＴ／Ｅ）、タイプＦ（ＢｏＮＴ／Ｆ）、タイプＧ（ＢｏＮＴ／Ｇ）、タイプＨ（ＢｏＮＴ／Ｈ）、タイプＸ（ＢｏＮＴ／Ｘ）、エンテロコッカス種ボツリヌス毒素Ｊ（ｅＢｏＮＴ／Ｊ）及びモザイクボツリヌス毒素、及び／またはその変異体によってなる群のうちから選択されうる。モザイク毒素の例は、ＢｏＮＴ／ＤＣ、ＢｏＮＴ／ＣＤ及びＢｏＮＴ／ＦＡを含む。例えば、タイプＡを使用しうる。

【0016】

一態様において、ボツリヌス毒素は、多様なＢｏＮＴ／Ａサブタイプ、例えば、ＢｏＮＴ／Ａ１，Ａ２，Ａ３，Ａ４，Ａ５，Ａ６，Ａ７，Ａ９，Ａ１０；ＢｏＮＴ／Ｂサブタイプ、例えば、ＢｏＮＴ／Ｂ１，Ｂ２，Ｂ３，Ｂ４，Ｂ５，Ｂ６，Ｂ７，Ｂ８，Ｂｎｐ及びＢｂｖ；ＢｏＮＴ／Ｃサブタイプ、例えば、ＢｏＮＴ／Ｃ及びＣＤ；ＢｏＮＴ／Ｄサブタイプ、例えば、ＢｏＮＴ／Ｄ及びＤＣ；ＢｏＮＴ／Ｅサブタイプ、例えば、ＢｏＮＴ／Ｅ１，Ｅ２，Ｅ３，Ｅ４，Ｅ５，Ｅ６，Ｅ７，Ｅ８，Ｅ９；ＢｏＮＴ／Ｆサブタイプ、例えば、ＢｏＮＴ／Ｆ１，Ｆ２，Ｆ３，Ｆ４，Ｆ５，Ｆ６，Ｆ７；及びＢｏＮＴ／Ｇサブタイプ、例えば、ＢｏＮＴ／サブタイプＧに由来する。該ＢｏＮＴサブタイプは、キメラＢｏＮＴ、例えば、ＢｏＮＴ／ＤＣ、ＢｏＮＴ／ＣＤ、ＢｏＮＴ／ＦＡなどを含む。

【0017】

ボツリヌス毒素は、ボツリヌス毒素誘導体を含む。該ボツリヌス毒素誘導体は、ボツリヌス毒素活性を有する天然ボツリヌス毒素または組み換え原型（recombinant native）ボツリヌス毒素の一部または一部鎖上に、１以上の化学的または機能的な変形を含む誘導体でもある。例えば、該ボツリヌス毒素誘導体は、欠失、変形または置換された１以上のアミノ酸を有する変形された毒素でもある。該ボツリヌス毒素は、組み換えペプチド、融合タンパク質、または例えば、異なる毒素血清型のサブユニットまたはドメインから製造されたハイブリッド神経毒素でもある。該ボツリヌス毒素は、また毒素活性を有する全体分子の一部でもあり、その組み合わせ、または共役分子、例えば、融合タンパク質の一部として利用されうる。

【0018】

用語「複合蛋白質」は、ヘマグルチニン（hemagglutinin）、及びヘマグルチニン活性を有さない非毒性成分（ＮＴＮＨ：nontoxic nonhemagglutinin）を意味する。

【0019】

ボツリヌス菌の菌株は、免疫学的に区別される神経毒素（タイプＡ－Ｇ）を生産する。タイプＡ－Ｇ神経毒素（ＮＴＸ）の分子量（molecular masses）は、約１５０ｋＤａ（７Ｓ）である。酸性条件を有する培養培地及び食品において、ＮＴＸは、非毒性成分と結合し、ＰＴＸ（progenitor toxins）と呼ばれる大きい複合体を形成する。ＰＴＸは、９００ｋＤａ（１９Ｓ）、５００ｋＤａ（１６Ｓ）及び３００ｋＤａ（１２Ｓ）の分子量を有しうる。１２Ｓ毒素は、ＮＴＸと、ヘマグルチニン活性を有さない非毒性成分（ＮＴＮＨ）とによってなり、１９Ｓ毒素及び１６Ｓ毒素は、ＮＴＸ、ＮＴＮＨ及びヘマグルチニンによってなる。タイプＡ菌株は、３種形態の毒素（１９Ｓ、１６Ｓ及び１２Ｓ）を生産し、タイプＢ，Ｃ及びＤ菌株は１６Ｓ毒素と１２Ｓ毒素とを生産する。アルカリ条件において、ＰＴＸは、ＮＴＸと非毒性成分とに解離され、１９Ｓ毒素及び１６Ｓ毒素は、ＮＴＸ、ＮＴＮＨ、及びヘマグルチニンの非毒性成分に解離され、１２Ｓ毒素は、ＮＴＸとＮＴＮＨとに解離される。

【0020】

本発明のボツリヌス毒素組成物は、複合蛋白質を含む複合体ボツリヌス毒素組成物でもある。例えば、該複合体ボツリヌス毒素は、ＮＴＮＨまたはヘマグルチニンを含むものでもあり、その場合、複合体ボツリヌス毒素の分子量は、約９００ｋＤａでもある。

【0021】

本発明のボツリヌス毒素組成物は、複合蛋白質を含まない非複合体ボツリヌス毒素組成物でもある。例えば、該非複合体ボツリヌス毒素は、ＮＴＮＨまたはヘマグルチニンを含まないものでもあり、その場合、該非複合体ボツリヌス毒素の分子量は、約１５０ｋＤａでもある。

【0022】

用語「動物タンパク質」は、血液由来の、血液混入、または他動物由来の産物を称する。

【0023】

本発明のボツリヌス毒素組成物は、動物タンパク質を含まないボツリヌス毒素組成物でもある。例えば、本発明のボツリヌス毒素組成物は、動物に由来するタンパク質安定剤を含まないものでもある。一具体例において、本発明のボツリヌス毒素組成物は、ヒト血清アルブミンまたは組み換えヒトアルブミンを含まないものでもある。

【0024】

用語「有効成分」は、生物学的または生理学的に有効な製剤または組成物の物質を示す。特に、薬剤学的な製剤または組成物の脈絡において、前記用語「有効成分」は、目標とする薬剤学的効果を示す成分物質を示す。例えば、本発明の有効成分は、複合タンパク質がないボツリヌス毒素でもある。

【0025】

「投与」または「投与すること」は、製薬組成物または製薬有効成分を対象に提供する段階を意味する。該製薬組成物は、多様な適切な経路を介して投与されうる。

【0026】

一態様において、製薬組成物の投与は、経皮、皮下、または筋肉内の投与によってもなされる。一具体例において、前記組成物を筋肉または筋肉群に局所的に投与することによってもなされる。例えば、額しわ、皮膚しわの低減は、前記組成物を当該しわの経皮または皮下に投与することによってもなされる。例えば、一実施例の組成物は、皮下または筋肉内の注射投与がなされうる。一実施例による組成物は、プレフィルド・シリンジ（pre－filled syringe）を介し、皮下または筋肉内に注射投与されうる。一実施例の組成物は、経皮パッチまたはマイクロニードルを利用し、経皮投与されうる。

【0027】

「製薬組成物」は、有効成分を含む製剤を意味する。「製薬組成物」は、有効成分（例：ボツリヌス毒素）以外に、少なくとも１種のさらなる成分、例えば、アルブミン（ヒト血清アルブミンまたは組み換えヒトアルブミン）及び／または塩化ナトリウムを含むものでもある。該製薬組成物は、ヒトを始めとする哺乳類のような対象に投与するのに適する製剤である。該製薬組成物は、液体形態、または凍結乾燥された形態でもある。該製薬組成物が凍結乾燥製剤である場合、例えば、食塩水または水を使用し、凍結乾燥された製薬組成物を再溶解させて使用しうる。溶液形態でもある。該製薬組成物は、液体または固体でもある。該製薬組成物には、動物由来タンパク質及び／またはアルブミンがないのである。

【0028】

「治療する」、「治療すること」または「治療（treatment）」は、例えば、負傷したり損傷されたりする組織の治癒、または既存のものであったり、認知されたりする疾患、障害または異常を、変更、変化、強化、改善、改良及び／または美化させることにより、所望する治療上の結果を達成するようにする、疾患、障害または異常の軽減または低減（一部の低減、相当な低減、ほとんど完全な低減、及び完全な低減を含む）、解決または予防（一時的でもあり永久でもある）を意味する。本明細書において「治療」は、予防を含む概念である。「予防」は、疾病、障害または疾患の発病遅延を意味する。疾病、障害または疾患の発病が予定された期間の間遅延された場合、予防は完全なものであると見なされうる。

【0029】

一態様において、「治療（treatment）」は、下記のうち１以上を含む、哺乳動物（特に、ヒト）のような患者において、疾患、障害または医学的病態の治療を意味する：
（ａ）前述の疾患、障害または医学的病態の発生防止、すなわち、前述の疾患または医学的病態の再発防止、または前述の疾患または医学的病態にかかりやすい（pre-disposed）患者の予防的治療（prophylactic treatment）；
（ｂ）他の治療剤の効果に拮抗作用を行うことを含み、前述の疾患、障害または医学的病態の改善（ameliorating）、すなわち、患者における、前述の疾患、障害または医学的病態の除去または退行（regression）；
（ｃ）前述の疾患、障害または医学的病態の抑制（suppressing）、すなわち、患者において、前述の疾患、障害または医学的病態の発展を鈍化または阻止させること；または
（ｄ）患者における、前述の疾患、障害または医学的病態の症状緩和。

【0030】

本明細書で使用される、「ユニット」、「unit(s)」または「Ｕ」という用語は、ボツリヌス毒素注射を打たれたマウスのうち５０％を死滅させたボツリヌス毒素の量として定義される、ＬＤ５０用量を称するものであり、１つの製品内において、互換可能に使用される。

【0031】

一態様において、ボツリヌス毒素の治療有効量は、約０．０１Ｕ／kgないし約１００Ｕ／kg、約０．１Ｕ／kgないし約１００Ｕ／kg、約０．２Ｕ／kgないし約１００Ｕ／kg、約０．２Ｕ／kgないし約５０Ｕ／kg、約０．２Ｕ／kgないし約３０Ｕ／kg、約０．２Ｕ／kgないし約１０Ｕ／kg、約０．２Ｕ／kgないし約１Ｕ／kgである。他の態様において、体重６０kg大人基準で約１Ｕないし約１０、０００Ｕ、約１Ｕないし約５、０００Ｕ、約１Ｕないし約２、５００Ｕ、約１Ｕないし約１、０００Ｕ、約１Ｕないし約５００Ｕ、約１Ｕないし約３００Ｕ、約１Ｕないし約２００Ｕ、約１０Ｕないし約２００Ｕ、約１０Ｕないし約１００Ｕ、約１０Ｕないし約５０Ｕでもある。

【0032】

本発明の一実施例によれば、動物タンパク質を含まないボツリヌス毒素組成物が提供される。該ボツリヌス毒素組成物は、薬剤学的に許容され、動物タンパク質由来ではない賦形剤または添加剤を含むものでもある。一実施例の組成物は、治療が必要な患者の疾患を治療するための方法に使用するための、動物タンパク質を含まず、有効成分としてボツリヌス毒素を含む組成物であり、前記方法は、前記組成物の治療有効量を、治療が必要な対象体に局所投与する段階を含み、投与部位において、動物タンパク質を含むボツリヌス毒素組成物より拡散（diffusion）が低減されたものでもある。

【0033】

一実施例において、ボツリヌス毒素は、非複合体ボツリヌス毒素でもある。

【0034】

一実施例の組成物は、投与部位において、動物タンパク質を含むボツリヌス毒素組成物より延長された期間の間の効果を有するものでもある。

【0035】

一態様において、薬剤学的に許容される賦形剤または添加剤は、安定化剤、イオン化合物（ionic compound）、界面活性剤、緩衝剤、凍結乾燥保護剤、またはそれらの組み合わせ、例えば、アミノ酸（例：メチオニン）、塩（例：ＮａＣｌ）、緩衝液、非イオン性界面活性剤（例：ポリソルベート、例えば、ポリソルベート２０）、糖（例：白糖のようなジサッカライド）、糖アルコール（例：ソルビトール）、またはそれらの組み合わせでもある。

【0036】

本発明のボツリヌス毒素組成物は、固体製剤または液体製剤、例えば、凍結乾燥粉末、液状、またはプレフィルド・シリンジ（pre－filled syringe）製剤のように、いかなる形態にも製剤化されうる。

【0037】

一実施例の組成物は、凍結乾燥された組成物でもある。一実施例の凍結乾燥組成物は、ボツリヌス毒素、ポリソルベートのような非イオン性界面活性剤、及び／またはアミノ酸を含み、糖、糖アルコール及びイオン性化合物によって構成された群のうちから選択される１以上の成分を含むものでもある。

【0038】

一実施例において、ポリソルベートは、例えば、ポリソルベート２０，４０，６０，８０または１００を含むものでもあり、例えば、ポリソルベート２０を含むものでもある。一実施例において、アミノ酸は、メチオニンまたはイソロイシンでもある。例えば、一実施例の液状組成物は、安定化剤として、ポリソルベート２０及びメチオニンを含むものでもある。

【0039】

一実施例において、糖は、トレハロース（trehalose）、スクロース（sucrose）、マルトース（maltose）、フラクトース（fructose）、ラピノース（raffinose）、ラクトース（lactose）またはグルコース（glucose）を含むものでもある。糖アルコールは、シクロデキストリン（cyclodextrin）、マンニトール（mannitol）、ソルビトール（sorbitol）、グリセロール（glycerol）、キシリトール（xylitol）またはイノシトール（inositol）を含むものでもある。例えば、一実施例の凍結乾燥組成物は、白糖（スクロース）を含むものでもある。

【0040】

一実施例において、イオン性化合物は、塩化ナトリウム（sodium chloride）、リン酸ナトリウム（sodium phosphate）、リン酸アンモニウム（ammonium phosphate）、硫酸マグネシウム（magnesium sulfate）、酢酸ナトリウム（sodium acetate）、乳酸ナトリウム（sodium lactate）、コハク酸ナトリウム（sodium succinate）、プロピオン酸ナトリウム（sodium propionate）またはリン酸カリウム（potassium phosphate）を含むものでもある。

【0041】

一実施例の凍結乾燥組成物において、ポリソルベートは、ボツリヌス毒素１００ユニット当たり０．０１ないし２ｍｇ、メチオニンは、０．０１ないし１０ｍｇ、糖は、０．１ないし５０ｍｇ、糖アルコールは、０．１ないし５０ｍｇ、イオン化合物は、０．１ないし１０ｍｇで含まれうる。

【0042】

一実施例の組成物は、液状組成物でもある。一実施例の液状組成物は、ボツリヌス毒素、及びポリソルベートのような非イオン性界面活性剤、及び／またはアミノ酸を含むものでもある。一実施例において、ポリソルベートは、例えば、ポリソルベート２０，４０，６０，８０または１００を含むものでもあり、例えば、ポリソルベート２０を含むものでもある。一実施例において、アミノ酸は、メチオニンまたはイソロイシンでもある。例えば、一実施例の液状組成物は、安定化剤として、ポリソルベート２０及びメチオニンを含むものでもある。一実施例の液状組成物において、ポリソルベートの濃度は、０．０５ないし２．５ｍｇ／ｍＬ、または０．１ないし２．５ｍｇ／ｍＬであり、メチオニンの濃度は、０．５ないし５０ｍＭ、または２５ないし７５ｍＭでもある。一実施例の液状組成物のｐＨは、５．５ないし７．０でもある。

【0043】

一実施例の組成物の低減された拡散効果または延長された期間の間の効果は、１回以上、２回以上、３回以上、４回以上または５回以上の繰り返し投与で生じるものでもある。一実施例の組成物の投与部位筋肉と隣接した筋肉の複合筋肉活動電位測定値は、動物タンパク質含有組成物を、同一投与部位及び同一投与位置に、同一用量投与したときの投与部位筋肉と隣接した筋肉の複合筋肉活動電位測定値より高い値を有するものでもある。本明細書において、「投与部位筋肉と隣接した筋肉」は、投与部位筋肉と、所定の距離ほど離隔されている筋肉を意味する。また、「投与部位筋肉と隣接した筋肉」は、一実施例の組成物による影響（薬理作用）を受けないことが望ましい部位でもある。

【0044】

一実施例の組成物の投与部位筋肉の複合筋肉活動電位測定値は、動物タンパク質含有組成物を、同一投与部位及び同一投与位置に、同一用量投与したときの投与部位筋肉の複合筋肉活動電位測定値より低い値を有しうる。

【0045】

本発明の一実施例によれば、治療が必要な患者の疾患を治療するための方法に使用するための、動物タンパク質を含まず、有効成分として非複合体ボツリヌス毒素を含む組成物であり、前記方法は、一実施例の組成物の治療有効量を、治療が必要な対象体に局所投与する段階を含み、投与部位において、動物タンパク質を含むボツリヌス毒素組成物より延長された期間の間の効果を有するものであるボツリヌス毒素組成物が提供されうる。

【0046】

本明細書において、ボツリヌス毒素組成物について説明された部分は、矛盾しない限り、ボツリヌス毒素組成物を利用した治療方法、及び疾病治療のための医薬品製造において、ボツリヌス毒素組成物の用途においても、同一に適用されうるということは、言うまでもない。

【0047】

本発明の一実施例によれば、動物タンパク質を含まないボツリヌス毒素組成物を個体に投与し、疾患を改善させるか、あるいは治療するための用途が提供される。

【0048】

一実施例の用途は、ボツリヌス毒素、薬剤学的に許容される賦形剤または添加剤を含む組成物の治療有効量を個体に投与し、皮膚しわ、エラ張り顎、尖り顎、傷、皮膚軟化、傷痕、にきび、毛孔、弾力またはケロイドを改善させるための用途、あるいは顔面痙攣、瞼痙攣、斜頸、眼瞼痙攣、頸部筋緊張異常症、咽頭中央部筋緊張異常症、痙攣性発声障害、偏頭痛、肛門掻痒症または多汗症を治療するための用途でもある。

【0049】

本開示の他の態様によれば、前記ボツリヌス毒素、及び薬剤学的に許容される賦形剤または添加剤を含む組成物を個体に投与し、疾患を改善させるか、あるいは治療するための方法を提供する。一実施例の方法は、動物タンパク質を含まず、有効成分として、ボツリヌス毒素、薬剤学的に許容される賦形剤または添加剤を含む組成物を個体に投与し、皮膚しわ、エラ張り顎、尖り顎、傷、皮膚軟化、傷痕、にきび、毛孔、弾力またはケロイドを改善させるための用途、あるいは顔面痙攣、瞼痙攣、斜頸、眼瞼痙攣、頸部筋緊張異常症、咽頭中央部筋緊張異常症、痙攣性発声障害、偏頭痛、肛門掻痒症または多汗症を治療するための方法でもある。一実施例において、皮膚しわは、眉間しわ、額しわ（例：額の水平しわ）、口元しわ、目元しわ（例：目元外側しわ（目元の小じわ）、目下しわ）、マリオネットラインまたは鼻筋しわを含むものでもある。

【0050】

一態様において、ボツリヌス毒素は、単回または多回の治療セッションに投与されうる。投与量は、注射部位に、単一注入または分割注入によって投与されうる。多回治療セッションにおいてボツリヌス毒素は、１年以下、１０ヵ月以下、８ヵ月以下、６ヵ月以下、５ヵ月以下、４ヵ月以下または３ヵ月以下の間隔で投与しうる。例えば、投与間隔は、３ヵ月以上１年以下、３ヵ月以上６ヵ月以下、または４ヵ月以上６ヵ月以下でもある。多回治療セッションにおいて、ボツリヌス毒素の投与間隔は、一次治療と二次治療とを含み、該二次治療の投与量は、該一次治療の投与量より少ないか、多いか、あるいは同一でもある。

【0051】

ボツリヌス毒素の投与用量、投与時間、投与方法、投与期間または間隔などは、患者の体重、年齢、性別、健康状態、疾患の重症度などにより、通常の技術者が適切に選択して使用しうる。

【0052】

ボツリヌス毒素、またはそれを含む組成物が投与される対象は、ヒトや動物、例えば、ヒト、豚、犬、猫、牛、馬、鼠などを制限なしに含むものでもある。

【0053】

本発明の一実施例によれば、皮膚しわ、エラ張り顎、尖り顎、傷、皮膚軟化、傷痕、にきび、毛孔、弾力またはケロイド症状を改善させるか、あるいは顔面痙攣、瞼痙攣、斜頸、眼瞼痙攣、頸部筋緊張異常症、咽頭中央部筋緊張異常症、痙攣性発声障害、偏頭痛、肛門掻痒症または多汗症を治療するための医薬品の製造において、請求項１、請求項２または請求項１２によるボツリヌス毒素組成物の用途が提供されうる。

【0054】

本開示のさらに他の態様によれば、前記ボツリヌス毒素を有効成分にし、薬剤学的に許容される賦形剤または添加剤を含む組成物を個体に投与し、投与部位において、動物タンパク質を含むボツリヌス毒素組成物対比で、低減された拡散を示すボツリヌス毒素組成物を製造する方法が提供される。

【0055】

以下、本開示について、実施例を挙げてさらに詳細に説明するが、それらは、本開示について説明するためのものであるのみ、その範囲をいかよういにも制限するものではない。

【0056】

１．一実施例による組成物の拡散低減効果
実施例１：マウスにおけるコアトックス（Coretox）及びニューロノクス（Neuronox）の非臨床効能試験
メス５週齢ＣＤ１（ＩＣＲ）マウスをオリエントバイオから購入し、１週間順化させて検疫した後、６週齢マウスを実験に使用した。飼料は、滅菌された実験動物用固形飼料（Ｒ４０－１０（ＳＡＦＥ（フランス）））を自由給餌し、飲水は、上水道水を高温高圧滅菌（autoclave）し、自由給餌させた。順化期間、検疫期間及び実験期間の間該マウスは、温度２３±３℃、相対湿度５５±１５％、照明時間１２時間（午前８時～午後８時）、換気回数１５回／時間、及び照度１５０～３００Ｌｕｘに設定された特定病原体不在条件下において飼育された。本実験は、(株)メディトックス動物実験倫理委員会の検討及び承認（Ａ－２０２０－０１６）後に行われた。

【0057】

試験物質は、以下のように準備された。コアトックス（Coretox（Ｌｏｔ Ｎｏ：ＮＳＡ２００１１（メディトックス）））及びニューロノクス（Neuronox（Ｌｏｔ Ｎｏ：ＴＦＡＡ２００２４（メディトックス）））が使用された（表１）。プラセボ（偽薬投与群）は、滅菌生理食塩水（大韓薬品工業）が使用された。各試験物質を、滅菌生理食塩水を使用し、６０Ｕ／ｍｌ濃度に希釈した。

【0058】

【表1】

【0059】

試験物質が投与された日を０日にし、注射麻酔剤（１００ｍｇ／ｋｇ塩酸ケタミン＋１０ｍｇ／ｋｇキシラジン）を利用し、マウスに麻酔をかけた後、表２により、それぞれの試験物質を、マウスの右側ふくらはぎ筋肉に、ハミルトン注射器を利用し、０．２ｍＬ／ｋｇで投与した。

【0060】

評価は、外部的な電気刺激に反応する筋肉の活動電位を測定する複合筋肉活動電位（ＣＭＡＰ：compound muscle action potential）試験法が使用された。該ＣＭＡＰは、Nicolet Viking Quest (Viasys Healthcare, Inc.)装備を利用し、各マウスの右側ふくらはぎ筋部位で測定した。注射麻酔剤でもって麻酔をかけた後、測定部位の毛を除毛し、うつ伏せにした姿勢にマウスを位置させた。測定する足側の座骨神経部位に負極を位置させ、その部位から脊椎を基準に、１ｃｍ離れた部位に正極を位置させた。記録電極と基準電極とを、ふくらはぎ筋部位とアキレス腱部位とにそれぞれ位置させ、接地電極を大腿直筋部位に位置させた。刺激のレベルと期間は、７～８ｍＡ、０．１ｍｓにし、増幅器のフィルタ範囲は、６０Ｈｚにおいて、２～１０Ｋで設定した。当該条件で測定したとき、波形の基底部から最高点までの高さを、ＣＭＡＰ測定値でデータ化した。試験物質投与後７日目、投与部位ふくらはぎ筋肉と反対側足のふくらはぎ筋肉とについて測定した。

【0061】

Graphpad Prism 7.05 (GraphPad Software Inc., CA（米国）)は、グラフ提示に使用され、SPSS software 25.0 (SPSS Inc., IL（米国）)及びExcel (2013, MS（米国）)は、統計分析に使用された。実験の結果は、平均±標準偏差で表示された。コルモゴロフ・スミルノフ検定を利用し、正規性検定を実施した。非母数データは、マン・ホイットニー検定を介して統計分析を行い、母数データの場合、両側（two－tailed）ｔ検定を行い、ｐ値が０．０５より小さい場合、統計的に有意性があると判断した。

【0062】

【表2】

【0063】

マウス右側ふくらはぎ筋肉に、ボツリヌス毒素Ａ型製品２種（コアトックス（Coretox）、ニューロノクス（Neuronox））を１２Ｕ／ｋｇ用量で投与した後７日目、投与部位筋肉と反対側非投与部位筋肉とについてＣＭＡＰ測定を実施した。その結果、投与部位筋肉のＣＭＡＰ値は、コアトックス（Coretox）投与群とニューロノクス（Neuronox）投与群との間において有意な差が観察されていないが、反対側筋肉におけるＣＭＡＰ値は、コアトックス（Coretox）投与群がニューロノクス（Neuronox）投与群対比で、有意に高く観察された（図１）。そのような結果から、非アルブミン剤形であるコアトックス（Coretox）投与群において、アルブミン剤形であるニューロノクス（Neuronox）投与群対比で、ボツリヌス毒素の拡散（diffusion）低減効果を確認した。

【0064】

実施例２：ラットでボツリヌス毒素Ａ型の互いに異なる剤形に対する非臨床効能試験
そのような非アルブミン剤形の拡散低減効果は、９００ｋＤａの毒素を使用した場合にも、同一に示されることが、以下の実験を介して確認された。

【0065】

メス６週齢ＳＤラットマウスを(株)オリエントバイオから購入し、１週間順化させて検疫した後、７週齢ラットを実験に使用した。飼料は、滅菌された実験動物用固形飼料（Ｒ４０－１０（ＳＡＦＥ（フランス）））を自由給餌し、飲水は、上水道水を高温高圧滅菌（autoclave）して自由給餌させた。順化期間、検疫期間及び実験期間の間マウスは、温度２３±３℃、相対湿度５５±１５％、照明時間１２時間（午前８時～午後８時）、換気回数１５回／時間、及び照度１５０～３００Ｌｕｘに設定された特定病原体不在条件下において飼育された。本研究は、(株)メディトックス動物実験倫理委員会の検討及び承認（Ａ－２０２１－００１）後に行われた。

【0066】

試験物質は、以下のように準備された。１００ユニット単位の複合体化されたボツリヌス毒素Ａ型完製品であるＴＦＸＡ２１００４（メディトックス）、ＮＸＡ２０００１（メディトックス）を使用した（表３）。プラセボ（偽薬投与群）は、滅菌生理食塩水（大韓薬品工業）が使用された。各試験物質を、滅菌生理食塩水を使用し、１００Ｕ／ｍＬ濃度に希釈した。

【0067】

【表3】

【0068】

試験物質が投与された日を０日にし、注射麻酔剤（６０ｍｇ／ｋｇ塩酸ケタミン＋１０ｍｇ／ｋｇキシラジン）を利用し、ラットに麻酔をかけた後、群構成（表４）により、それぞれの試験物質を、ラットの右側前脛骨筋（tibialis anterior）に、ハミルトン注射器を利用し、０．０２ｍＬ／ｋｇで投与した。

【0069】

【表4】

【0070】

複合筋肉活動電位（ＣＭＡＰ）試験法を使用して評価した。ＣＭＡＰは、UltraPro S100 (Natus neurology Inc.)装備を利用し、試験物質投与後１４日目、各ラットの右側前脛骨筋（投与筋肉）及びふくらはぎ筋（非投与筋肉）部位において、それぞれ測定された。注射麻酔剤でもって麻酔をかけた後、測定部位の毛を除毛し、うつ伏せにした姿勢に位置させた。正極は、ラットの４，５番目腰椎右側腰筋に位置させ、負極は、５，６番目腰椎を基準に、右側座骨神経に位置させた。正極と負極との距離は、１．５ｃｍを維持させた。記録電極は、前脛骨筋及びふくらはぎ筋に位置させ、基準電極は、アキレス腱部位に位置させ、接地電極は、大腿直筋部位に位置させた。刺激のレベルと期間は、２０～３０ｍＡ、０．２ｍｓにし、増幅器のフィルタ範囲は、６０Ｈｚにおいて、２～１０Ｋに設定した。当該条件で測定したとき、波形の潜在期以後、ベースラインから最高点までの高さをＣＭＡＰ測定値でデータ化した。得られたデータは、実施例１と同一方法で統計処理した。

【0071】

ラット右側前脛骨筋に、互いに異なる剤形の複合体化されたボツリヌス毒素Ａ型２種（ＴＦＸＡ２１００４（アルブミン剤形）、ＮＸＡ２０００１（非アルブミン剤形））を２Ｕ／ｋｇ用量で投与した後１４日目、右側前脛骨筋（投与筋肉）及び右側ふくらはぎ筋（非投与筋肉）についてＣＭＡＰ測定を実施した。その結果、右側前脛骨筋において、２つの試験物質間にＣＭＡＰ値差は、観察されていないが、非投与筋肉である右側ふくらはぎ筋において、ＴＦＸＡ２１００４投与群対比で、ＮＸＡ２０００１投与群において、有意に増大されたＣＭＡＰ値が観察された（図２）。そのような結果から、非動物性複合体化されたボツリヌス毒素Ａ型剤形において、動物性剤形対比で、隣接筋肉におけるボツリヌス毒素の拡散低減効果を確認した。

【0072】

実施例３：マウスにおけるボツリヌス毒素製品５種非臨床効能試験
メス５週齢ＣＤ１（ＩＣＲ）マウスをオリエントバイオから購入し、１週間順化させて検疫した後、６週齢マウスを実験に使用した。飼料は、滅菌された実験動物用固形飼料（Ｒ４０－１０（ＳＡＦＥ（フランス）））を自由給餌し、飲水は、上水道水を高温高圧滅菌（autoclave）して自由給餌させた。順化期間、検疫期間及び実験期間の間マウスは、温度２３±３℃、相対湿度５５±１５％、照明時間１２時間（午前８時～午後８時）、換気回数１５回／時間、及び照度１５０～３００Ｌｕｘに設定された特定病原体不在条件下において飼育された。本実験は、(株)メディトックス動物実験倫理委員会の検討及び承認（Ａ－２０２０－０１６）後に行われた。

【0073】

試験物質は、以下のように準備された。コアトックス（Coretox（Ｌｏｔ Ｎｏ：ＮＳＡ２００１１（メディトックス）））、ニューロノクス（Neuronox（Ｌｏｔ Ｎｏ：ＴＦＡＡ２００２４（メディトックス）））、イノトックス（Innotox（Ｌｏｔ Ｎｏ：Ｄ０２０００３（メディトックス））、ゼオミン（Xeomin（Ｌｏｔ Ｎｏ：９２５５５９（Merz））、ボトックス（Botox（Ｌｏｔ Ｎｏ：Ｃ５３９４Ｃ３（Allergan））が使用された（表５）。プラセボ（偽薬投与群）は、滅菌生理食塩水（大韓薬品工業）が使用された。各試験物質を、滅菌生理食塩水を使用し、６０Ｕ／ｍｌ濃度に希釈し、イノトックス（Innotox）は、液状製品をそのまま使用した。

【0074】

【表5】

【0075】

試験物質が投与された日を０日にし、注射麻酔剤（１００ｍｇ／ｋｇ塩酸ケタミン＋１０ｍｇ／ｋｇキシラジン）を利用し、マウスに麻酔をかけた後、表６により、それぞれの試験物質を、マウスの右側ふくらはぎ筋肉に、ハミルトン注射器を利用し、コアノックス（Coretox）、ニューロノクス（Neuronox）、ゼオミン（Xeomin）、ボトックス（Botox）は、０．２ｍＬ／ｋｇで投与し、イノトックス（Innotox）は、０．３ｍＬ／ｋｇで投与した。一次投与後、８４日間隔で、一次投与と同一に、二次及び三次の試験物質を調製し、同一位置に同一用量で投与した。

【0076】

評価は、マウス筋肉マヒ位置を肉眼で評価する足指外転点数（ＤＡＳ：digit abduction score）評価法と、外部的な電気刺激に反応する筋肉の活動電位を測定する複合筋肉活動電位（ＣＭＡＰ）試験法とが使用された。表７に表記されたＤＡＳ数値は、マウスにおいて投与された側の足指形態による筋肉マヒ程度を示し、ＣＭＡＰ値は、神経遮断によって示される直接的な筋肉の収縮阻害程度を示す。ＤＡＳ回復期間は、試験物質投与後、ＤＡＳ点数が０点に回復される期間を示す。ＣＭＡＰ測定は、実施例１と同一に進められた。

【0077】

Graphpad Prism 7.05 (GraphPad Software Inc., CA（米国）)は、グラフ提示に使用され、SPSS software 25.0 (SPSS Inc., IL（米国）)及びExcel (2013, MS（米国）)は、統計分析に使用された。実験の結果は、平均±標準偏差で表示された。ＤＡＳグラフ及びＣＭＡＰグラフにおいて、ＡＵＣ（area under the curve）値及びＡＡＣ（area above the curve）値は、Graphpad Prism softwareを利用して計算された。一元配置分散分析（one-way ＡＮＯＶＡ）を行い、グループ間比較のために、チューキー事後検定（Tukey’s post-hoc test）を遂行した。分析時、ｐ値が０．０５より小さい場合、統計的に有意性があると判断した。

【0078】

【表6】

【0079】

【表7】

【0080】

マウス右側ふくらはぎ筋肉に、ボツリヌス毒素Ａ型製品５種（コアトックス（Coretox）、ゼオミン（Xeomin）、ボトックス（Botox）、ニューロノクス（Neuronox）、イノトックス（Innotox））を、１２Ｕ／ｋｇ用量で、８４日間隔で３回投与した後、ＤＡＳ評価の結果、一次投与後、ＤＡＳ回復期間には、有意な差が観察されていないが、二次及び三次の投与後、ゼオミン（Xeomin）投与群対比で、コアトックス（Coretox）投与群及びイノトックス（Innotox）投与群のＤＡＳ回復期間の有意な増大が観察された。また、三次投与後、ボトックス（Botox）投与群及びニューロノクス（Neuronox）投与群の対比で、コアトックス（Coretox）投与群のＤＡＳ回復期間の有意な増大が観察された（表８）。ＤＡＳグラフにおいて、１６８日目三次投与後、コアトックス（Coretox）投与群及びイノトックス（Innotox）投与群は、２５２日目、全個体の回復が観察され、ボトックス（Botox）投与群及びニューロノクス（Neuronox）投与群は、２３１日目、全個体の回復が観察され、ゼオミン（Xeomin）は、２１７日目、全個体の回復が観察され、コアトックス（Coretox）投与群及びイノトックス（Innotox）投与群において、長い作用期間が観察された（図３）。それと類似して、経時的な累積薬理学的効果を示す指標であるＤＡＳ_ＡＵＣにおいて、二次及び三次の投与後、ゼオミン（Xeomin）投与群対比で、コアトックス（Coretox）投与群、イノトックス（Innotox）投与群、ニューロノクス（Neuronox）投与群のＤＡＳ_ＡＵＣが有意に高く観察され、三次投与後、ボトックス（Botox）投与群対比で、コアトックス（Coretox）投与群及びイノトックス（Innotox）投与群のＤＡＳ_ＡＵＣが有意に高く観察された（表８）。

【0081】

ＤＡＳ評価と類似して、ＣＭＡＰ測定において、１６８日目三次投与後、終了時点である２５２日目、投与部位筋肉のＣＭＡＰ測定結果、ゼオミン（Xeomin）投与群対比で、コアトックス（Coretox）投与群及びイノトックス（Innotox）投与群において、有意に低いＣＭＡＰ値が測定され、強い効力が観察された（図４）。また、ＣＭＡＰ_ＡＡＣ比較結果、一次投与後、ゼオミン（Xeomin）投与群対比で、コアトックス（Coretox）投与群、ニューロノクス（Neuronox）投与群、ボトックス（Botox）投与群のＣＭＡＰ_ＡＡＣが有意に高く観察され、イノトックス（Innotox）投与群対比で、コアトックス（Coretox）投与群のＣＭＡＰ_ＡＡＣが有意に高く観察された。二次投与後、ゼオミン（Xeomin）投与群対比で、コアトックス（Coretox）投与群、ニューロノクス（Neuronox）投与群、ボトックス（Botox）投与群、イノトックス（Innotox）投与群のＣＭＡＰ_ＡＡＣが有意に高く観察され、三次投与後、ゼオミン（Xeomin）投与群対比で、コアトックス（Coretox）投与群のＣＭＡＰ_ＡＡＣが有意に高く観察された（表９）。図５を参照すれば、それぞれのボツリヌス毒素投与後６，７日目、反対側筋肉のＣＭＡＰ測定結果、二次投与後、ボトックス（Botox）投与群、ニューロノクス（Neuronox）投与群対比で、コアトックス（Coretox）投与群、イノトックス（Innotox）投与群の反対側筋肉ＣＭＡＰ値の有意な増大が観察された。ゼオミン（Xeomin）の場合、４種類のボツリヌス毒素対比で、弱い効力を有していることが確認されるので（図４参照）、ゼオミン投与群において、反対側筋肉のＣＭＡＰ値の有意な増大は、拡散防止効果のためではなく、４種類のボツリヌス毒素製品対比で、弱い効力に起因した結果と判断される。

【0082】

そのような結果から、ボツリヌス毒素Ａ型製品５種に係わる３回繰り返し投与による効果を、マウスで比較した結果、アルブミン剤形のボツリヌス毒素製品（ゼオミン（Xeomin）、ボトックス（Botox）、ニューロノクス（Neuronox））対比で、非アルブミン剤形のボツリヌス毒素（コアトックス（Coretox）、イノトックス（Innotox））の強い効力、及び増大された作用期間と拡散低減効果とを確認した。

【0083】

【表8】

【0084】

ａ、ｂ及びｃ：互いに異なる上添え字は、統計的に有意な差を示す（一元配置分散分析（one-way ＡＮＯＶＡ）、チューキー事後検定（Tukey’s post-hoc test））

【0085】

【表9】

【0086】

ａ、ｂ及びｃ：互いに異なる上添え字は、統計的に有意な差を示す（一元配置分散分析（one-way ＡＮＯＶＡ）、チューキー事後検定（Tukey’s post-hoc test））

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【国際調査報告】