特表 2024-543113 ピーナッツアレルギーの治療のための寛容化ナノ粒子の調製

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-11-19

(54)【発明の名称】ピーナッツアレルギーの治療のための寛容化ナノ粒子の調製

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/35 20060101AFI20241112BHJP

   A61K 47/34 20170101ALI20241112BHJP

   A61K 47/32 20060101ALI20241112BHJP

   A61K 47/36 20060101ALI20241112BHJP

   A61K 47/38 20060101ALI20241112BHJP

   A61K 47/42 20170101ALI20241112BHJP

   A61K 47/26 20060101ALI20241112BHJP

   A61K 47/12 20060101ALI20241112BHJP

   A61K 38/00 20060101ALI20241112BHJP

   A61P 37/08 20060101ALI20241112BHJP

   A61K 9/19 20060101ALI20241112BHJP

   A61K 9/51 20060101ALI20241112BHJP

   A61K 36/48 20060101ALI20241112BHJP

   C07K 14/415 20060101ALI20241112BHJP

【ＦＩ】

A61K39/35

A61K47/34 ZNA

A61K47/32

A61K47/36

A61K47/38

A61K47/42

A61K47/26

A61K47/12

A61K38/00

A61P37/08

A61K9/19

A61K9/51

A61K36/48

C07K14/415

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024529959

(86)(22)【出願日】2022-11-23

(85)【翻訳文提出日】2024-07-17

(86)【国際出願番号】 US2022080409

(87)【国際公開番号】W WO2023097260

(87)【国際公開日】2023-06-01

(31)【優先権主張番号】63/282,889

(32)【優先日】2021-11-24

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】515245424

【氏名又は名称】クール ファーマシューティカルズ ディベロップメント カンパニー インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100079108

【弁理士】

【氏名又は名称】稲葉 良幸

(74)【代理人】

【識別番号】100109346

【弁理士】

【氏名又は名称】大貫 敏史

(74)【代理人】

【識別番号】100117189

【弁理士】

【氏名又は名称】江口 昭彦

(74)【代理人】

【識別番号】100134120

【弁理士】

【氏名又は名称】内藤 和彦

(72)【発明者】

【氏名】プイシス，ジョン

(72)【発明者】

【氏名】ボイン，マイケル

(72)【発明者】

【氏名】ライリー，サマンサ

(72)【発明者】

【氏名】ウォダルチク，グレタ

(72)【発明者】

【氏名】シュー，チーチェン

(72)【発明者】

【氏名】リン，ヅーイー

(72)【発明者】

【氏名】トビー，ティモシー

【テーマコード（参考）】

4C076

4C084

4C085

4C088

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C076AA22

4C076AA29

4C076AA32

4C076AA65

4C076DD43

4C076DD66

4C076DD69

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4C076EE23

4C076EE25

4C076EE30

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4C076EE42

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4C076GG06

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4C088NA13

4C088ZB13

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA10

4H045CA33

4H045DA86

4H045EA20

4H045FA71

4H045GA01

4H045GA15

(57)【要約】

本開示は、ピーナッツアレルギーの治療のための、ピーナッツタンパク質を封入する寛容化免疫修飾ナノ粒子の調製のためのプロセス、その粒子を含む組成物、及びその使用に関する。
【選択図】図２

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ピーナッツタンパク質を封入する粒子を含む組成物を調製するための方法であって、前記方法が、
ａ．ピーナッツタンパク質の水溶液を、ポリマーを含む溶液と混合することによって一次エマルジョンを生成し、一次エマルジョンをもたらすことと、
ｂ．前記一次エマルジョンを１つ以上の界面活性剤及び／又は安定剤を含む溶液と混合して、二次エマルジョンを形成することと、
ｃ．溶媒を除去するための蒸発によって前記二次エマルジョンを硬化させ、コア内にピーナッツタンパク質を封入する、硬化した高分子ナノ粒子をもたらすことと、
ｄ．前記ナノ粒子を濾過、洗浄、及び濃縮することと、
ｅ．前記ナノ粒子を凍結乾燥させて、組成物を形成することと、を含む、方法。

【請求項2】

工程（ａ）の前記溶液が、溶媒を含む、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

工程（ｂ）の前記溶液が、溶媒を含む、請求項１に記載の方法。

【請求項4】

前記溶媒が、有機溶媒又は無機溶媒である、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項5】

工程（ａ）及び工程（ｂ）の前記溶液が、同じ溶媒を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項6】

工程（ａ）及び工程（ｂ）の前記溶液が、異なる溶媒を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項7】

前記有機溶媒が、ジクロロメタン、アセトン、エタノール、塩化メチレン、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、酢酸エチル、ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン、クロロホルム、及び酢酸である、請求項４に記載の方法。

【請求項8】

工程（ａ）から得られる前記エマルジョンが、油中水型エマルジョンである、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項9】

工程（ｂ）から得られる前記エマルジョンが、水中油型エマルジョンである、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項10】

工程（ａ）の前記ポリマーが、生分解性ポリマーである、請求項１～９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項11】

前記生分解性ポリマーが、ポリグリコール酸（ＰＧＡ）、ポリ乳酸（ＰＬＡ）、ポリセバシン酸（ＰＳＡ）、ポリ（乳－コ－グリコール）（ＰＬＧＡ）、ポリ（乳－コ－セバシン）酸（ＰＬＳＡ）、ポリ（グリコール－コ－セバシン）酸（ＰＧＳＡ）、ポリプロピレンスルフィド、ポリ（カプロラクトン）、キトサン、多糖、又は脂質である、請求項１０に記載の方法。

【請求項12】

工程（ｂ）の前記界面活性剤又は安定剤が、アニオン性、カチオン性、又は非イオン性である、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項13】

前記界面活性剤及び／又は安定剤が、ポロキサマー、ポリアミン、ＰＥＧ、Ｔｗｅｅｎ－８０、ゼラチン、デキストラン、ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ－６３、ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ－６８、ｐｌｕｒｏｎｉｃ １８８、ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ－１２７、ＰＶＡ、ＰＡＡ、メチルセルロース、レシチン、ＤＭＡＢ、ＰＥＭＡ、ビタミンＥ ＴＰＧＳ（Ｄ－ａ－トコフェリルポリエチレングリコール１０００サクシネート）、ヒアルロン酸、ポリアミノ酸（例えば、リジン、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、セリン、トレオニン、チロシン、及びシステインのポリマー、又はそれらのエナンチオマー）、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロリルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ゼラチン、コール酸ナトリウム、カルボマー、又はスルフェートポリマーである、請求項１２に記載の方法。

【請求項14】

工程（ａ）の前記一次エマルジョンが、均質化によって得られる、請求項１～１３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項15】

工程（ａ）の前記一次エマルジョンが、超音波処理によって得られる、請求項１～１３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項16】

工程（ｂ）の前記二次エマルジョンが、均質化によって得られる、請求項１～１５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項17】

工程（ｂ）の前記二次エマルジョンが、超音波処理によって得られる、請求項１～１５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項18】

工程（ｂ）の前記二次エマルジョンのｐＨが、約ｐＨ４又はｐＨ４未満である、請求項１～１７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項19】

均質化が、５、１０、１５、２０、２５、３０、３０、４０、４５、６０、９０、１２０、１５０、１８０、２１０、２４０、２７０、３００、３３０、３６０、３９０、４２０、４５０、４８０、５１０、５４０、５７０、又は６００秒間行われる、請求項１４又は１６に記載の方法。

【請求項20】

超音波処理が、５、１０、１５、２０、２５、３０、３０、４０、４５、６０、９０、１２０、１５０、１８０、２１０、２４０、２７０、３００、３３０、３６０、３９０、４２０、４５０、４８０、５１０、５４０、５７０、又は６００秒間行われる、請求項１５又は１７に記載の方法。

【請求項21】

工程（ｃ）におけるナノ粒子の前記硬化が、前記溶媒の蒸発によって行われる、請求項１～２０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項22】

蒸発が、能動的蒸発又は受動的蒸発である、請求項２１に記載の方法。

【請求項23】

能動的蒸発が、真空駆動蒸発である、請求項２２に記載の方法。

【請求項24】

前記真空駆動蒸発が、高圧又は低圧下で行われる、請求項２３に記載の方法。

【請求項25】

受動的蒸発が、攪拌によって行われる、請求項２２に記載の方法。

【請求項26】

蒸発が、０．２５、０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、４８、７２、又は９６時間行われる、請求項２５に記載の方法。

【請求項27】

工程（ｄ）における前記ナノ粒子の濾過、洗浄、及び濃縮が、濾過、ゲル濾過、膜濾過、透析、遠心分離、クロマトグラフィー、密度勾配遠心分離、又はそれらの組み合わせによって行われる、請求項１～２６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項28】

前記粒子が、負のゼータ電位を有する、請求項１～２７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項29】

前記粒子の前記ゼータ電位が、約０～－１００ｍＶである、請求項２８に記載の方法。

【請求項30】

前記粒子の前記ゼータ電位が、約－３０ｍＶ～－８０ｍＶである、請求項２９に記載の方法。

【請求項31】

前記粒子が、約０．３μｍ～３μｍの直径を有する、請求項１～３０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項32】

前記粒子が、約０．３μｍ～１μｍの直径を有する、請求項３１に記載の方法。

【請求項33】

前記粒子が、約０．４μｍ～１μｍの直径を有する、請求項３２に記載の方法。

【請求項34】

前記粒子の少なくとも９０％が、約０．３μｍ～３μｍの直径を有する、請求項１～３３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項35】

前記粒子の少なくとも９０％が、約０．３μｍ～１μｍの直径を有する、請求項３４に記載の方法。

【請求項36】

前記粒子の少なくとも９０％が、約０．４μｍ～１μｍの直径を有する、請求項３５に記載の方法。

【請求項37】

前記粒子の少なくとも５０％が、約０．３μｍ～３μｍの直径を有する、請求項１～３３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項38】

前記粒子の少なくとも５０％が、約０．３μｍ～１μｍの直径を有する、請求項３７に記載の方法。

【請求項39】

前記粒子の少なくとも５０％が、約０．４μｍ～１μｍの直径を有する、請求項３８に記載の方法。

【請求項40】

前記粒子の少なくとも１０％が、約０．３μｍ～３μｍの直径を有する、請求項１～３３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項41】

前記粒子の少なくとも１０％が、約０．３μｍ～１μｍの直径を有する、請求項４０に記載の方法。

【請求項42】

粒子組成物内に封入されたピーナッツタンパク質含有量が、約０．１～１００μｇ／ｍｇである、請求項１～４１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項43】

前記ピーナッツタンパク質が、Ａｒａ ｈタンパク質を含む、請求項１～４２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項44】

前記Ａｒａ ｈタンパク質が、Ａｒａ ｈ １、Ａｒａ ｈ ２、Ａｒａ ｈ ３、Ａｒａ ｈ ４、Ａｒａ ｈ ５、Ａｒａ ｈ６、Ａｒａ ｈ ７、Ａｒａ ｈ ８、Ａｒａ ｈ ９、Ａｒａ ｈ １０、Ａｒａ ｈ １１、Ａｒａ ｈ １２、Ａｒａ ｈ １３、Ａｒａ ｈ １４、Ａｒａ ｈ１５、Ａｒａ ｈ １６、Ａｒａ ｈ １７、及びＡｒａ ｈ １８である、請求項４３に記載の方法。

【請求項45】

前記粒子が、ピーナッツペプチドを封入する、請求項４２～４４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項46】

前記ピーナッツペプチドが、ピーナッツタンパク質からのアレルゲン性エピトープを含む、請求項４５に記載の方法。

【請求項47】

前記ペプチドが、Ａｒａ ｈ １、Ａｒａ ｈ ２、Ａｒａ ｈ ３、Ａｒａ ｈ ４、Ａｒａ ｈ ５、Ａｒａ ｈ６、Ａｒａ ｈ ７、Ａｒａ ｈ ８、Ａｒａ ｈ ９、Ａｒａ ｈ １０、Ａｒａ ｈ １１、Ａｒａ ｈ １２、Ａｒａ ｈ １３、Ａｒａ ｈ １４、Ａｒａ ｈ１５、Ａｒａ ｈ １６、Ａｒａ ｈ １７、及びＡｒａ ｈ １８からのアレルゲン性エピトープを含む、請求項４６に記載の方法。

【請求項48】

前記ペプチドが、天然のピーナッツタンパク質から精製されるか、又は合成的に産生される、請求項４７に記載の方法。

【請求項49】

前記ピーナッツタンパク質が、酸に溶解される、請求項１～４８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項50】

溶解したピーナッツタンパク質のｐＨが、１．０～６．０である、請求項４９に記載の方法。

【請求項51】

前記溶解したピーナッツタンパク質のｐＨが、１．０～４．０である、請求項５０に記載の方法。

【請求項52】

製造バッチサイズが、０．０１ｇ～１００ｋｇである、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。

【請求項53】

前記製造バッチサイズが、０．０１ｇ、０．１ｇ、１０ｇ、２０ｇ、４０ｇ、６０ｇ、８０ｇ、１００ｇ、１６０ｇ、２４０ｇ、３２０ｇ、４００ｇ、４８０ｇ、５６０ｇ、６４０ｇ、７２０ｇ、８００ｇ、１０００ｇ、５ｋｇ、１０ｋｇ、５０ｋｇ、又は１００ｋｇである、請求項５２に記載の方法。

【請求項54】

請求項１～５３のいずれか一項に記載の方法によって作製される、ピーナッツタンパク質を封入する粒子。

【請求項55】

請求項１～５３のいずれか一項に記載の方法によって作製される、ピーナッツタンパク質を封入する粒子を含む組成物。

【請求項56】

薬学的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤を更に含む、請求項５５に記載の組成物。

【請求項57】

前記賦形剤が、スクロース、マンニトール、及びクエン酸ナトリウムである、請求項５６に記載の組成物。

【請求項58】

ピーナッツタンパク質、スクロース、マンニトール、及びクエン酸ナトリウムを封入する負に帯電した粒子を含む、薬学的組成物。

【請求項59】

ピーナッツアレルギーを有する対象を治療する方法であって、請求項５４に記載の粒子又は請求項５５～５８のいずれか一項に記載の組成物を投与することを含む、方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、２０２１年１１月２４日に出願された、米国仮特許出願第６３／２８２，８８９号の優先権の利益を主張する。

【0002】

本開示は、ピーナッツアレルギーの治療のための、ピーナッツタンパク質を封入する寛容化免疫修飾ナノ粒子の調製のためのプロセスに関する。

【0003】

電子的に提出された資料の参照による組み込み
参照によりその全体が組み込まれるのは、本明細書と同時に提出され、以下：２７，２７６バイト、２０２２年１１月１５日に作成された「５７０３７＿Ｓｅｑｌｉｓｔｉｎｇ．ｈｍｌ」という名前のファイルとして識別されるコンピュータ可読ヌクレオチド／アミノ酸配列表である。

【背景技術】

【0004】

ピーナッツアレルギーは、米国全人口のほぼ１．２％及び小児人口の２．５％に影響を及ぼす最も一般的な食物アレルギーの１つであり、過去１０年間で発生率が上昇している^１。ピーナッツアレルギーは、病理学的高免疫反応によって引き起こされ、ピーナッツへの曝露は、吐き気、嘔吐、発疹、呼吸障害、血圧低下、更には死亡などの軽度から重度の症状につながる可能性がある。

【0005】

ピーナッツタンパク質に対するアレルギー性免疫応答は、Ｔヘルパー２型応答の上方制御、ピーナッツタンパク質特異的ＩｇＥ抗体の産生につながるＢ細胞クラスの切り替え、並びに肥満細胞及び好塩基球の脱顆粒化を伴うＴ細胞依存メカニズムによって媒介される^２。

【0006】

現在、ピーナッツアレルギーの治癒はなく、ピーナッツ抗原への曝露の厳密な回避及びアナフィラキシーの管理が患者に利用可能な唯一の選択肢である。アレルゲン性ピーナッツタンパク質に対するＴ細胞寛容を誘発することができる免疫寛容化療法は、ピーナッツアレルギーの治療のための絶対的基準とみなされているが、そのような療法は、達成困難であった。

【0007】

免疫寛容化療法の開発の試みは、経口免疫療法（ＯＩＴ）、皮下免疫療法（ＳＣＩＴ）、上皮免疫療法（ＥＰＩＴ）、及び舌下免疫療法（ＳＬＩＴ）を使用して行われている^３。これらのアプローチの成功は非常に可変的であり、ピーナッツタンパク質に対する脱感作のみが報告されており、これは偶発的な曝露に対してのみ保護を提供するが、治癒ではない^４～６。更に、これらのアプローチは、遊離ピーナッツタンパク質を含有する製剤の慢性投与に依存する。その結果、これらの治療法は、これらのアレルゲンに対する既存の感受性を有する免疫系への遊離アレルゲン性ピーナッツタンパク質の曝露に起因する、ピーナッツアレルギー患者におけるアナフィラキシーを含む有害反応のリスクをもたらす^６～７。

【発明の概要】

【0008】

１つ以上の抗原を含む、寛容化免疫修飾粒子（ＴＩＭＰ）は、抗原特異的免疫寛容の誘発を介した免疫媒介性障害（例えば、自己免疫疾患及びアレルギー）の治療のために以前に記載されている（参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１３／１９２５３２及びＷＯ２０１５／０２３７９６）。ＴＩＭＰコア内のピーナッツタンパク質の封入は、免疫活性化を誘導することなく（例えば、ＩｇＥへの曝露によって）、封入されたタンパク質のＡＰＣへの安全な送達を確実にし、ピーナッツアレルギー患者における遊離ピーナッツタンパク質の投与に関連する有害反応（例えば、アナフィラキシー）のリスクを低減するため、利点である。

【0009】

ＴＩＭＰ－ＰＰＥの製造のためのプロセスは、多数の工程を含み、その各々が、安全かつ治療的投与に不可欠な、得られる組成物の理化学的特性に影響を与える。重要なことに、プロセスは、粒子コア内のピーナッツタンパク質の効率的な封入を確実にするように最適化されなければならない。

【0010】

本開示は、ピーナッツタンパク質を封入する負に帯電した粒子（ＴＩＭＰ－ＰＰＥ）を含む組成物を製造するためのプロセスを提供する。プロセスは、ピーナッツアレルギーの治療のための、ＴＩＭＰ－ＰＰＥの安全かつ治療的投与のために最適化された粒子を製造するプロセスを対象とする。様々な実施形態では、本方法は、（ａ）ピーナッツタンパク質（ＰＰＥ）の水溶液を、ポリマーを含む油相と混合することによって、一次エマルジョンを生成することと、（ｂ）一次エマルジョンを１つ以上の界面活性剤及び／又は安定剤を含む溶液と混合して、二次エマルジョンを形成することと、（ｃ）溶媒を除去するための蒸発によって二次エマルジョンを硬化させ、コア内にピーナッツタンパク質を封入する、硬化した高分子ナノ粒子をもたらすことと、（ｄ）ナノ粒子を濾過、洗浄、及び濃縮することと、（ｅ）ナノ粒子を凍結乾燥させることと、を含む。様々な実施形態では、工程（ａ）の一次エマルジョンは、油中水型エマルジョンである。様々な実施形態では、工程（ｂ）の二次エマルジョンは、水中油型エマルジョンである。

【0011】

様々な実施形態では、工程（ａ）の水溶液は、溶媒を含む。様々な実施形態では、溶媒は、有機溶媒である。様々な実施形態では、溶媒は、無機溶媒である。様々な実施形態では、有機溶媒は、ジクロロメタン、アセトン、エタノール、塩化メチレン、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、酢酸エチル、ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン、クロロホルム、及び酢酸である。様々な実施形態では、無機溶媒は、水、アンモニア、硫酸、二硫化炭素、三フッ化臭素、オキシ塩化リン、フッ化水素、及び二酸化硫黄である。様々な実施形態では、水溶液中の溶媒は、１、２、３、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、又は５０％（ｖ／ｖ）の濃度である。様々な実施形態では、水溶液中の溶媒は、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７．０、７．５、８．０、８．５、９．０、又は１０．０ｍＭの濃度である。様々な実施形態では、水溶液中の溶媒は、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７．０、７．５、８．０、８．５、９．０、又は１０．０Ｍの濃度である。

【0012】

様々な実施形態では、工程（ｂ）の界面活性剤及び／又は安定剤溶液は、溶媒を含む。様々な実施形態では、溶媒は、有機溶媒である。様々な実施形態では、溶媒は、無機溶媒である。様々な実施形態では、有機溶媒は、ジクロロメタン、アセトン、エタノール、塩化メチレン、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、酢酸エチル、ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン、クロロホルム、及び酢酸である。様々な実施形態では、無機溶媒は、水、アンモニア、硫酸、二硫化炭素、三フッ化臭素、オキシ塩化リン、フッ化水素、及び二酸化硫黄である。様々な実施形態では、水溶液中の溶媒は、１、２、３、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、又は５０％（ｖ／ｖ）の濃度である。様々な実施形態では、水溶液中の溶媒は、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７．０、７．５、８．０、８．５、９．０、又は１０．０ｍＭの濃度である。様々な実施形態では、水溶液中の溶媒は、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７．０、７．５、８．０、８．５、９．０、又は１０．０Ｍの濃度である。様々な実施形態では、工程（ａ）及び工程（ｂ）の溶液中の溶媒は、同じである。様々な実施形態では、工程（ａ）及び工程（ｂ）の溶液中の溶媒は、異なる。

【0013】

様々な実施形態では、工程（ａ）の水溶液は、０．１、０．２、０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、又は１００ｍｇ／ｍＬのピーナッツタンパク質を含む。様々な実施形態では、ピーナッツタンパク質は、０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、４８、７２、又は９６時間混合することによって、水溶液中に溶解される。様々な実施形態では、ＴＩＭＰ－ＰＰＥを製造するプロセスで使用されるピーナッツタンパク質は、ローストされたピーナッツから得られる。様々な実施形態では、ピーナッツタンパク質は、生のピーナッツから得られる。様々な実施形態では、ＴＩＭＰ－ＰＰＥを製造するプロセスで使用されるピーナッツタンパク質は、（ａ）生のピーナッツをペーストに摩砕することと、（ｂ）ピーナッツペーストを脱脂することと、（ｃ）脱脂されたピーナッツペーストを乾燥させることと、（ｄ）乾燥したピーナッツペーストを粉末にすることと、（ｅ）重炭酸アンモニウムを使用してピーナッツ粉末からピーナッツタンパク質を抽出することと、（ｆ）ピーナッツタンパク質を濃縮及び清澄化し、精製ピーナッツ抽出物をもたらすことと、を含む方法を使用して得られる。様々な実施形態では、精製ピーナッツ抽出物を更に精製して、アレルゲン性ピーナッツタンパク質を単離する。様々な実施形態では、単離されたアレルゲン性ピーナッツタンパク質は、分別によって得られる。様々な実施形態では、アレルゲン性ピーナッツタンパク質は、Ａｒａ ｈ １、Ａｒａ ｈ ２、Ａｒａ ｈ ３、Ａｒａ ｈ ４、Ａｒａ ｈ ５、Ａｒａ ｈ６、Ａｒａ ｈ ７、Ａｒａ ｈ ８、Ａｒａ ｈ ９、Ａｒａ ｈ １０、Ａｒａ ｈ １１、Ａｒａ ｈ １２、Ａｒａ ｈ １３、Ａｒａ ｈ １４、Ａｒａ ｈ１５、Ａｒａ ｈ １６、Ａｒａ ｈ １７、及びＡｒａ ｈ １８である。様々な実施形態では、工程（ａ）の水溶液は、アレルゲン性ピーナッツタンパク質からのペプチドを含有する。様々な実施形態では、ペプチドは、アレルゲン性ピーナッツタンパク質Ａｒａ ｈ １、Ａｒａ ｈ ２、Ａｒａ ｈ ３、Ａｒａ ｈ ４、Ａｒａ ｈ ５、Ａｒａ ｈ６、Ａｒａ ｈ ７、Ａｒａ ｈ ８、Ａｒａ ｈ ９、Ａｒａ ｈ １０、Ａｒａ ｈ １１、Ａｒａ ｈ １２、Ａｒａ ｈ １３、Ａｒａ ｈ １４、Ａｒａ ｈ１５、Ａｒａ ｈ １６、Ａｒａ ｈ １７、及びＡｒａ ｈ １８からのアレルゲン性エピトープを含む。様々な実施形態では、ペプチドは、天然に存在するピーナッツタンパク質から得られる。様々な実施形態では、ペプチドは、合成的に製造される。様々な実施形態では、ペプチドは、固相ペプチド合成又は溶液相ペプチド合成によって製造される。

【0014】

様々な実施形態では、工程（ａ）で使用される精製ピーナッツ抽出物は、溶媒中に溶解される。様々な実施形態では、溶媒は、有機溶媒である。様々な実施形態では、溶媒は、無機溶媒である。様々な実施形態では、工程（ａ）において使用される精製ピーナッツ抽出物は、１つ以上の酸及び／又は１つ以上の塩基を含む無機溶媒中に溶解される。様々な実施形態では、溶媒は、１．０～１４．０のｐＨを有する。様々な実施形態では、ｐＨは、１．０、１．５、２．０、２．５、３．０、３．５、４．０、４．５、５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、７．５、８．０、８．５、９．０、９．５、１０．０、１０．５、１１．０、１１．５、１２．０、１２．５、１３．０、１３．５、１４．０であり、この範囲内にある全ての値を含む。様々な実施形態では、溶媒は、酢酸、硫酸、塩酸、硝酸、ギ酸、安息香酸、アスコルビン酸、トリクロロ酢酸、ジクロロ酢酸、クロロ酢酸、トリフルオロ酢酸、フルオロ酢酸、酒石酸、乳酸、グルコン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、ポリスチレンスルホン酸、臭化水素酸、ヒドロヨウ酸、次亜塩素酸、塩素酸、塩素酸、過塩素酸、フルオロ硫酸、フルオロアンチモン酸、フルオロホウ酸、ヘキサフルオロリン酸、クロム酸、リン酸、フッ化水素酸、シュウ酸、ホウ酸、炭酸、水酸化バリウム、水酸化カルシウム、水酸化クロム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化亜鉛、水酸化バリウム、重炭酸ナトリウム、メチルアミン、ジエチルアミン、水酸化ナトリウム、水酸化マグネシウム、重炭酸アンモニウム、アンモニア、水酸化アルミニウム、炭酸ナトリウム、水酸化マグネシウム、水酸化亜鉛、水酸化第一鉄、アセトン、水酸化リチウム、ピリジン、水酸化ルビジウムである。様々な実施形態では、溶媒濃度は、０．０１％～１００％（ｖ／ｖ）である。様々な実施形態では、溶媒の濃度は、約０．０１％、約０．０５％、約０．１％、約０．２％、約０．３％、約０．４％、約０．５％、約０．６％、約０．７％、約０．８％、約０．９％、約１％、約１０％、約２５％、約５０％、約７５％、約９９％、約１００％（ｖ／ｖ）であり、この範囲内にある全ての値を含む。様々な実施形態では、溶媒濃度は、０．１Ｍ～３６Ｍである。様々な実施形態では、溶媒濃度は、約０．１Ｍ、約０．５Ｍ、約１Ｍ、約２Ｍ、約３Ｍ、約４Ｍ、約５Ｍ、約６Ｍ、約７Ｍ、約８Ｍ、約９Ｍ、約１０Ｍ、約１１Ｍ、約１２Ｍ、約１３Ｍ、約１４Ｍ、約１５Ｍ、約１６Ｍ、約１７Ｍ、約１８Ｍ、約２０Ｍ、約３０Ｍ、約３６Ｍであり、この範囲内にある全ての値を含む。様々な実施形態では、溶解した精製ピーナッツ抽出物の濃度は、約０．１、約０．２、約０．５、約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、約１５、約２０、約２５、約３０、約３５、約４０、約４５、約５０、約５５、約６０、約６５、約７０、約７５、約８０、約８５、約９０、約９５、又は約１００ｍｇ／ｍＬであり、この範囲内にある全ての値を含む。様々な実施形態では、精製ピーナッツ抽出物は、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、４８、７２、又は９６時間混合することによって、溶媒中に溶解される。

【0015】

様々な実施形態では、溶解したピーナッツタンパク質抽出物は、１．０～ｐＨ６のｐＨを有し、この範囲内にある全ての値を含む。様々な実施形態では、溶解したピーナッツタンパク質抽出物は、約ｐＨ１～約ｐＨ６、約ｐＨ２～約ｐＨ６、約ｐＨ３～約ｐＨ６、約ｐＨ２～約ｐＨ４、又は約ｐＨ１、約ｐＨ１．５、約ｐＨ２、約ｐＨ２．５、約ｐＨ３、約ｐＨ３．５、約ｐＨ４、約ｐＨ４．５、約ｐＨ５、約ｐＨ５．５、若しくは約ｐＨ６のｐＨを有する。

【0016】

様々な実施形態では、工程（ａ）におけるポリマーは、生分解性ポリマーである。様々な実施形態では、生分解性ポリマーは、ポリグリコール酸（ＰＧＡ）、ポリ乳酸（ＰＬＡ）、ポリセバシン酸（ＰＳＡ）、ポリ（乳－コ－グリコール）（ＰＬＧＡ）、ポリ（乳－コ－セバシン）酸（ＰＬＳＡ）、ポリ（グリコール－コ－セバシン）酸（ＰＧＳＡ）、ポリプロピレンスルフィド、ポリ（カプロラクトン）、キトサン、多糖類、又は脂質である。様々な実施形態では、ポリマーは、コポリマーである。様々な実施形態では、コポリマーは、様々なモル比の構成ポリマーを有する。様々な実施形態では、モル比は、２５：７５、３０：７０、３５：６５、４０：６０、４５：５５、５０：５０、５５：４５、６０：４０、６５：３５、７０：３０、７５：２５、８０：２０、８１：１９、８２：１８、８３：１７、８４：１６、８５：１５、８６：１４、８７：１３、８８：１２、８９：１１、９０：１０、９１：９、９２：８、９３：７、９４：６、９５：５、９６：４、９７：３、９８：２、９９：１、又は１００：０である。

【0017】

様々な実施形態では、工程（ａ）のポリマーは、ＰＬＧＡである。様々な実施形態では、ＰＬＧＡのコポリマーのモル比は、２５：７５、３０：７０、３５：６５、４０：６０、４５：５５、５０：５０、５５：４５、６０：４０、６５：３５、７０：３０、７５：２５、８０：２０、８１：１９、８２：１８、８３：１７、８４：１６、８５：１５、８６：１４、８７：１３、８８：１２、８９：１１、９０：１０、９１：９、９２：８、９３：７、９４：６、９５：５、９６：４、９７：３、９８：２、９９：１、又は１００：０である。様々な実施形態では、ＰＬＧＡは、高分子量を有する。様々な実施形態では、ＰＬＧＡは、低分子量を有する。様々な実施形態では、ＰＬＧＡは、１０～１０，０００ｋＤａ（例えば、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、５００、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００、６０００、７０００、８０００、９０００、又は１００００ｋＤａの間で、この範囲内にある全ての値を含む）の分子量を有する。様々な実施形態では、工程（ａ）の溶液中のＰＬＧＡの量は、重量で０．０５～１００％（例えば、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、又は１００％の間で、この範囲内にある全ての値を含む）である。

【0018】

様々な実施形態では、工程（ｂ）で使用される界面活性剤及び／又は安定剤は、陰イオン性、陽イオン性、又は非イオン性である。様々な実施形態では、界面活性剤及び／又は安定剤は、ポロキサマー、ポリアミン、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、Ｔｗｅｅｎ－８０、ゼラチン、デキストラン、ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ－６３、ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ－６８、ｐｌｕｒｏｎｉｃ １８８、ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ－１２７、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリアクリル酸（ＰＡＡ）、メチルセルロース、レシチン、ジドデシルジメチルアンモニウムブロミド（ＤＭＡＢ）、ポリ（エチレン－アルト－マレイン酸）（ＰＥＭＡ）、ビタミンＥ ＴＰＧＳ（Ｄ－ａ－トコフェリルポリエチレングリコール１０００サクシネート）、ヒアルロン酸、ポリアミノ酸（例えば、リジン、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、セリン、トレオニン、チロシン、及びシステインのポリマー、又はそれらのエナンチオマー）、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロリルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ゼラチン、コール酸ナトリウム、カルボマー、又はスルフェートポリマー（例えば、ヘパルスルフェート、コンドロイチンスルフェート、フコイダン、ウルヴァン、及びカラギナン）である。様々な実施形態では、工程（ｂ）の溶液中に存在する界面活性剤及び／又は安定剤の量は、重量又は体積で、０．０５～１００％（例えば、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、又は１００％の間で、この範囲内にある全ての値を含む）である。様々な実施形態では、界面活性剤及び／又は安定剤は、０．１～１０，０００ｋＤａの分子量（例えば、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、５００、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００、６０００、７０００、８０００、９０００、又は１００００ｋＤａの間で、この範囲内にある全ての値を含む）を有する。

【0019】

様々な実施形態では、（ｂ）における水中油型二次エマルジョンを形成する１つ以上の界面活性剤及び／又は安定剤を含む溶液は、約４又は約４．０未満のｐＨを有する。様々な実施形態では、水中油型二次エマルジョンは、約ｐＨ１～約ｐＨ４、約ｐＨ２～約ｐＨ４、約ｐＨ３～約ｐＨ４、又は約ｐＨ１、約ｐＨ１．５、約ｐＨ２、約ｐＨ２．５、約ｐＨ３、約ｐＨ３．５、若しくは約ｐＨ４のｐＨを有する。

【0020】

様々な実施形態では、本方法は、（ａ）ピーナッツタンパク質の水溶液を、ポリマーを含む油相と混合することによって一次エマルジョンを生成し、油中水型一次エマルジョンをもたらすことと、（ｂ）一次エマルジョンを、１つ以上の界面活性剤及び／又は安定剤を含む溶液と混合して、水中油型二次エマルジョンを形成することと、（ｃ）二次エマルジョンを硬化させて、溶媒を除去し、コア内にＰＰＥを封入する高分子ナノ粒子をもたらすことと、（ｄ）ナノ粒子を濾過、洗浄、及び濃縮することと、（ｅ）ナノ粒子を凍結乾燥させることと、を含む。

【0021】

様々な実施形態では、工程（ａ）の油中水型一次エマルジョンは、ポリマーを含む油相によるピーナッツタンパク質の水溶液の均質化によって得られる。様々な実施形態では、均質化は、５、１０、１５、２０、２５、３０、３０、４０、４５、６０、９０、１２０、１５０、１８０、２１０、２４０、２７０、３００、３３０、３６０、３９０、４２０、４５０、４８０、５１０、５４０、５７０、６００、７００、８００、９００、又は１０００秒間行われる。様々な実施形態では、工程（ｂ）の水中油型二次エマルジョンは、１つ以上の界面活性剤及び／又は安定剤を含む溶液による一次エマルジョンの均質化によって得られる。様々な実施形態では、均質化は、５、１０、１５、２０、２５、３０、３０、４０、４５、６０、９０、１２０、１５０、１８０、２１０、２４０、２７０、３００、３３０、３６０、３９０、４２０、４５０、４８０、５１０、５４０、５７０、６００、７００、８００、９００、又は１０００秒間行われる。様々な実施形態では、工程（ａ）の油中水型一次エマルジョンは、ポリマーを含む油相によるピーナッツタンパク質の水溶液の超音波処理によって得られる。様々な実施形態では、超音波処理は、５、１０、１５、２０、２５、３０、３０、４０、４５、６０、９０、１２０、１５０、１８０、２１０、２４０、２７０、３００、３３０、３６０、３９０、４２０、４５０、４８０、５１０、５４０、５７０、又は６００秒間行われる。様々な実施形態では、工程（ｂ）の水中油型二次エマルジョンは、１つ以上の界面活性剤及び／又は安定剤を含む溶液による一次エマルジョンの超音波処理によって得られる。様々な実施形態では、超音波処理は、５、１０、１５、２０、２５、３０、３０、４０、４５、６０、９０、１２０、１５０、１８０、２１０、２４０、２７０、３００、３３０、３６０、３９０、４２０、４５０、４８０、５１０、５４０、５７０、又は６００秒間行われる。

【0022】

様々な実施形態では、二次エマルジョンは、蒸発によって硬化される。様々な実施形態では、蒸発は、能動的蒸発である。様々な実施形態では、蒸発は、受動的蒸発である。様々な実施形態では、能動的蒸発は、真空駆動蒸発である。様々な実施形態では、蒸発は、０．２５、０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、４８、７２、又は９６時間行われる。様々な実施形態では、二次エマルジョンは、蒸発によって硬化される。様々な実施形態では、蒸発は、能動的蒸発である。様々な実施形態では、蒸発は、受動的蒸発である。様々な実施形態では、能動的蒸発は、攪拌を使用してか、又は真空下で行われる。様々な実施形態では、能動的蒸発は、高圧真空下で行われる。様々な実施形態では、能動的蒸発は、低圧真空下で行われる。様々な実施形態では、蒸発は、０．２５、０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、４８、７２、又は９６時間行われる。様々な実施形態では、蒸発は、０．０１～１０００ｍＢａｒ（例えば、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、又は１０００ｍＢａｒの間で、この範囲内にある全ての値を含む）の圧力で行われる。

【0023】

様々な実施形態では、工程（ｄ）における粒子の濾過、洗浄、及び濃縮は、ゲル濾過、膜濾過、透析、遠心分離、クロマトグラフィー、密度勾配遠心分離、又はそれらの組み合わせによって行われる。

【0024】

本開示はまた、ピーナッツタンパク質を封入する負に帯電したＴＩＭＰ（ＴＩＭＰ－ＰＰＥ）を含む組成物を製造するためのプロセスを企図する。様々な実施形態では、ＴＩＭＰ－ＰＰＥ粒子は、負のゼータ電位を有する。様々な実施形態では、ＴＩＭＰ－ＰＰＥ粒子の負のゼータ電位は、約－１００ｍＶ～約０ｍＶである。様々な実施形態では、粒子のゼータ電位は、約－１００ｍＶ～約－２５ｍＶ、約－１００～約－３０ｍＶ、約－８０ｍＶ～約－３０ｍＶ、約－７５ｍＶ～約－３０ｍＶ、約－７０ｍＶ～約－３０ｍＶ、約－７５～約－３５ｍＶ、約－７０～約－２５ｍＶ、約－６０ｍＶ～約－３０ｍＶ、約－６０ｍＶ～約－３５ｍＶ、又は約－５０ｍＶ～約－３０ｍＶである。様々な実施形態では、ゼータ電位は、約－２５ｍＶ、－３０ｍＶ、－３５ｍＶ、－４０ｍＶ、－４５ｍＶ、－５０ｍＶ、－５５ｍＶ、－６０ｍＶ、－６５ｍＶ、－７０ｍＶ、－７５ｍＶ、－８０ｍＶ、－８５ｍＶ、－９０ｍＶ、－９５ｍＶ、又は－１００ｍＶである。

【0025】

様々な実施形態では、ＴＩＭＰ－ＰＰＥ粒子のサイズ、又は直径は、０．０５μｍ～約１０μｍである。様々な実施形態では、ＴＩＭＰ－ＰＰＥ粒子の直径は、０．１μｍ～約１０μｍである。様々な実施形態では、ＴＩＭＰ－ＰＰＥ粒子の直径は、０．１μｍ～約５μｍである。様々な実施形態では、ＴＩＭＰ－ＰＰＥ粒子の直径は、０．１μｍ～約３μｍである。様々な実施形態では、ＴＩＭＰ－ＰＰＥ粒子の直径は、０．３μｍ～約５μｍである。様々な実施形態では、ＴＩＭＰ－ＰＰＥ粒子の直径は、約０．３μｍ～約３μｍである。様々な実施形態では、ＴＩＭＰ－ＰＰＥ粒子の直径は、約０．３μｍ～約１μｍである。様々な実施形態では、ＴＩＭＰ－ＰＰＥ粒子の直径は、約０．４μｍ～約１μｍである。様々な実施形態では、ＴＩＭＰ－ＰＰＥ粒子は、約１００～１００００ｎｍ、約１００～５０００ｎｍ、約１００～３０００ｎｍ、約１００～２０００ｎｍ、約３００～５０００ｎｍ、約３００～３０００ｎｍ、約３００～１０００ｎｍ、約３００～８００ｎｍ、約４００～８００ｎｍ、又は約２００～７００ｎｍの直径を有する。様々な実施形態では、ＴＩＭＰ－ＰＰＥ粒子は、約５０ｎｍ、１００ｎｍ、２００ｎｍ、３００ｎｍ、４００ｎｍ、５００ｎｍ、６００ｎｍ、７００ｎｍ、８００ｎｍ、９００ｎｍ、１０００ｎｍ、１１００ｎｍ、１２００ｎｍ、１３００ｎｍ、１４００ｎｍ、１５００ｎｍ、又は２０００ｎｍの直径を有する。様々な実施形態では、負に帯電した粒子の直径は、４００ｎｍ～８００ｎｍである。様々な実施形態では、粒子サイズについての多分散性指数（ＰＤＩ）又は不均一性指数は、０．０１～１．０（例えば、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、及び１、この範囲内にある全ての値を含む）である。

【0026】

様々な実施形態では、粒子は、均質なサイズ分布を有する。様々な実施形態では、粒子は、均質なサイズ分布を有し、少なくとも９０％の粒子が、０．０５μｍ～約１０、０．１μｍ～約１０、０．１μｍ～約５、０．１μｍ～約３、０．３μｍ～約５、０．３μｍ～約３μｍの直径を有する。様々な実施形態では、粒子は、均質なサイズ分布を有し、少なくとも９０％の粒子が、約１００～１００００ｎｍ、約１００～５０００ｎｍ、約１００～３０００ｎｍ、約１００～２０００ｎｍ、約３００～５０００ｎｍ、約３００～３０００ｎｍ、約３００～１０００ｎｍ、約３００～８００ｎｍ、約４００～８００ｎｍ、又は約２００～７００ｎｍの直径を有する。様々な実施形態では、ＴＩＭＰ－ＰＰＥ粒子は、約５０ｎｍ、１００ｎｍ、２００ｎｍ、３００ｎｍ、４００ｎｍ、５００ｎｍ、６００ｎｍ、７００ｎｍ、８００ｎｍ、９００ｎｍ、１０００ｎｍ、１１００ｎｍ、１２００ｎｍ、１３００ｎｍ、１４００ｎｍ、１５００ｎｍ、又は２０００ｎｍの直径を有する。様々な実施形態では、粒子は、均質なサイズ分布を有し、少なくとも５０％の粒子が、約０．０５μｍ～約１０μｍ、約０．１μｍ～約１０μｍ、約０．１μｍ～約５μｍ、約０．１μｍ～約３μｍ、約０．３μｍ～約５μｍ、及び約０．３μｍ～約３μｍの直径を有する。様々な実施形態では、粒子は、均質なサイズ分布を有し、少なくとも５０％の粒子が、約１００～１００００ｎｍ、約１００～５０００ｎｍ、約１００～３０００ｎｍ、約１００～２０００ｎｍ、約３００～５０００ｎｍ、約３００～３０００ｎｍ、約３００～１０００ｎｍ、約３００～８００ｎｍ、約４００～８００ｎｍ、又は約２００～７００ｎｍの直径を有する。様々な実施形態では、ＴＩＭＰ－ＰＰＥ粒子は、約５０ｎｍ、１００ｎｍ、２００ｎｍ、３００ｎｍ、４００ｎｍ、５００ｎｍ、６００ｎｍ、７００ｎｍ、８００ｎｍ、９００ｎｍ、１０００ｎｍ、１１００ｎｍ、１２００ｎｍ、１３００ｎｍ、１４００ｎｍ、１５００ｎｍ、又は２０００ｎｍの直径を有する。様々な実施形態では、粒子は、均質なサイズ分布を有し、少なくとも１０％の粒子が、約０．０５μｍ～約１０μｍ、約０．１μｍ～約１０μｍ、約０．１μｍ～約５μｍ、約０．１μｍ～約３μｍ、約０．３μｍ～約５μｍ、及び約０．３μｍ～約３μｍの直径を有する。様々な実施形態では、粒子は、均質なサイズ分布を有し、少なくとも１０％の粒子が、約１００～１００００ｎｍ、約１００～５０００ｎｍ、約１００～３０００ｎｍ、約１００～２０００ｎｍ、約３００～５０００ｎｍ、約３００～３０００ｎｍ、約３００～１０００ｎｍ、約３００～８００ｎｍ、約４００～８００ｎｍ、又は約２００～７００ｎｍの直径を有する。様々な実施形態では、ＴＩＭＰ－ＰＰＥ粒子は、約５０ｎｍ、１００ｎｍ、２００ｎｍ、３００ｎｍ、４００ｎｍ、５００ｎｍ、６００ｎｍ、７００ｎｍ、８００ｎｍ、９００ｎｍ、１０００ｎｍ、１１００ｎｍ、１２００ｎｍ、１３００ｎｍ、１４００ｎｍ、１５００ｎｍ、又は２０００ｎｍの直径を有する。

【0027】

様々な実施形態では、本開示の本発明は、ピーナッツタンパク質を封入する負に帯電した粒子（ＴＩＭＰ－ＰＰＥ）を含む組成物を製造するためのプロセスを提供する。様々な実施形態では、ＴＩＭＰ－ＰＰＥ組成物内に封入されるピーナッツタンパク質含有量は、０．１～１００μｇ／ｍｇである。様々な実施形態では、ピーナッツタンパク質含有量は、０．１～１００μｇ／ｍｇ（例えば、０．１、０．５、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、又は１００μｇ／ｍｇ）であり、これらの値の間にある全ての値及び範囲を含む。様々な実施形態では、ＴＩＭＰ－ＰＰＥ組成物内に封入されるピーナッツタンパク質は、Ａｒａ ｈタンパク質を含む。様々な実施形態では、Ａｒａ ｈタンパク質は、Ａｒａ ｈ １、Ａｒａ ｈ ２、Ａｒａ ｈ ３、Ａｒａ ｈ ４、Ａｒａ ｈ ５、Ａｒａ ｈ６、Ａｒａ ｈ ７、Ａｒａ ｈ ８、Ａｒａ ｈ ９、Ａｒａ ｈ １０、Ａｒａ ｈ １１、Ａｒａ ｈ １２、Ａｒａ ｈ １３、Ａｒａ ｈ １４、Ａｒａ ｈ１５、Ａｒａ ｈ １６、Ａｒａ ｈ １７、及びＡｒａ ｈ １８である。様々な実施形態では、ＴＩＭＰ－ＰＰＥ組成物中のＡｒａ ｈタンパク質のうちのいずれか１つ又はそれらの組み合わせの含有量は、０．０１～１００μｇ／ｍｇ（例えば、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．５、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、又は１００μｇ／ｍｇ、これらの値の間にある全ての値及び範囲を含む）である。様々な実施形態では、本明細書に記載のＴＩＭＰ－ＰＰＥを作製するプロセスは、１～１００％（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、又は１００％、これらの値の間にある全ての値及び範囲を含む）の封入効率をもたらす。様々な実施形態では、プロセスは、少なくとも２０％の封入効率をもたらす。ＴＩＭＰ－ＰＰＥ組成物中のピーナッツタンパク質含有量は、ＥＬＩＳＡ、質量分析、ＨＰＬＣ、ＣＢＱＣＡ、及びウェスタンブロットを含む、文献に記載の方法によって決定することができる。

【0028】

様々な実施形態では、本開示は、ピーナッツタンパク質を封入する負に帯電した粒子（ＴＩＭＰ－ＰＰＥ）を含む組成物を製造するためのプロセスを提供し、粒子表面は、低レベルのピーナッツタンパク質を含有する。様々な実施形態では、粒子表面は、本質的にピーナッツタンパク質を含まない。様々な実施形態では、粒子の表面に存在するピーナッツタンパク質の量は、ＴＩＭＰ－ＰＰＥ組成物の総タンパク質含有量の０～３０％（例えば、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、又は３０％、これらの値の間にある全ての値及び範囲を含む）である。様々な実施形態では、表面にピーナッツタンパク質を含有する粒子の頻度は、陰性対照と比較して、０～３０％（例えば、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、又は３０％、これらの値の間にある全ての値及び範囲を含む）高い。様々な実施形態では、表面にピーナッツタンパク質を含有する粒子の頻度は、陽性対照と比較して、０～１００％（例えば、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、及び１００％、これらの値の間にある全ての値及び範囲を含む）低い。様々な実施形態では、粒子の表面のピーナッツタンパク質の量は、陰性対照よりも０～１０倍（例えば、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０倍、これらの値の間にある全ての値及び範囲を含む）高い。様々な実施形態では、粒子の表面のピーナッツタンパク質の量は、陽性対照よりも０～１００倍（例えば、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、又は１００倍、これらの値の間にある全ての値及び範囲を含む）低い。様々な実施形態では、表面にピーナッツタンパク質を有するＴＩＭＰ－ＰＰＥ粒子の数は、フローサイトメトリー、質量分析、ＥＬＩＳＡ、ＣＢＱＣＡ、及びウェスタンブロットなどの前述の方法を使用して決定される。

【0029】

様々な実施形態では、本開示は、ピーナッツタンパク質を封入する負に帯電した粒子（ＴＩＭＰ－ＰＰＥ）を含む組成物を製造するためのプロセスを提供し、粒子は、低バースト放出を示す。様々な実施形態では、粒子は、バースト放出を示さない。様々な実施形態では、粒子バースト放出は、０～７５％（例えば、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、又は７５％、これらの値の間にある全ての値及び範囲を含む）である。

【0030】

様々な実施形態では、賦形剤は、工程（ｅ）において凍結乾燥する前に、ナノ粒子組成物に添加される。様々な実施形態では、賦形剤は、緩衝剤及び／又は凍結保護剤である。様々な実施形態では、賦形剤は、スクロース、マンニトール、トレハロース、ソルビトール、デキストラン、Ｆｉｃｏｌｌ、デキストラン７０ｋ、クエン酸ナトリウム、ラクトース、Ｌ－アルギニン、又はグリシンからなる群から選択される。様々な実施形態では、凍結乾燥前にナノ粒子組成物に添加される賦形剤の量は、重量又は体積で、０．０５～１００％（例えば、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、又は１００％の間で、この範囲内にある全ての値を含む）である。様々な実施形態では、凍結乾燥前にナノ粒子組成物に添加される賦形剤の量は、ナノ粒子１グラム当たり０．０１～５００ｇ（例えば、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、又は５００ｇ）である。

【0031】

様々な実施形態では、ＴＩＭＰ－ＰＰＥの製造バッチサイズは、拡大又は縮小することができる。様々な実施形態では、製造バッチサイズは、０．０１ｇ～１００ｋｇである。様々な実施形態では、バッチサイズは、０．０１ｇ、０．１ｇ、１０ｇ、２０ｇ、４０ｇ、６０ｇ、８０ｇ、１００ｇ、１６０ｇ、２４０ｇ、３２０ｇ、４００ｇ、４８０ｇ、５６０ｇ、６４０ｇ、７２０ｇ、８００ｇ、１０００ｇ、５ｋｇ、１０ｋｇ、５０ｋｇ、又は１００ｋｇであり、これらの値の間にある全ての値及び範囲を含む。

【0032】

本明細書に記載の方法によって作製されるピーナッツタンパク質を封入する粒子が本明細書で企図される。本明細書に記載の方法によって作製されるピーナッツタンパク質を封入する粒子を含む組成物も提供される。様々な実施形態では、組成物は、薬学的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤を更に含む。様々な実施形態では、薬学的組成物は、滅菌薬学的組成物である。

【0033】

また、ピーナッツタンパク質抽出物を含む粒子を含む製剤が提供される。様々な実施形態では、ＴＩＭＰ－ＰＰＥの製剤又は薬学的組成物は、精製タンパク質抽出物を封入する負に帯電した粒子、及び賦形剤を含む。様々な実施形態では、賦形剤は、スクロース、マンニトール、トレハロース、ソルビトール、デキストラン、Ｆｉｃｏｌｌ、デキストラン７０ｋ、クエン酸ナトリウム、ラクトース、Ｌ－アルギニン、又はグリシンからなる群から選択される。様々な実施形態では、ＴＩＭＰ－ＰＰＥ製剤は、１～１１個の賦形剤を含有する。様々な実施形態では、ＴＩＭＰ－ＰＰＥ製剤は、１つ以上、２つ以上、３つ以上、４つ以上、５つ以上、６つ以上、７つ以上、８つ以上、９つ以上、又は１０個以上の賦形剤を含有する。

【0034】

様々な実施形態では、ＴＩＭＰ－ＰＰＥ製剤は、精製ピーナッツタンパク質、スクロース、マンニトール、及びクエン酸ナトリウムを封入する負に帯電した粒子を含有する。様々な実施形態では、ＴＩＭＰ－ＰＰＥ製剤中の負に帯電した粒子濃度は、１～１００％、２０～５０％、又は３０～４０％であり、これらの範囲の間にある全ての範囲及び値を含む。様々な実施形態では、ＴＩＭＰ－ＰＰＥ製剤中の負に帯電した粒子濃度は、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３５．６％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、又は約４０％である。

【0035】

様々な実施形態では、ＴＩＭＰ－ＰＰＥ製剤中のスクロース濃度は、１～１００％、２０～５０％、又は３０～４０％であり、これらの範囲の間にある全ての範囲及び値を含む。様々な実施形態では、ＴＩＭＰ－ＰＰＥ製剤中のスクロース濃度は、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３５．６％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、又は約４０％である。

【0036】

様々な実施形態では、ＴＩＭＰ－ＰＰＥ製剤中のマンニトール濃度は、１～１００％、１５～３５％、又は２０～３０％であり、これらの範囲の間にある全ての範囲及び値を含む。様々な実施形態では、ＴＩＭＰ－ＰＰＥ製剤中のスクロース濃度は、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２５％、約２６％、約２６．７％、約２７％、約２８％、約２９％、又は約３０％である。

【0037】

様々な実施形態では、クエン酸ナトリウム濃度は、０．０１～２５％又は０．５～３．５％であり、これらの範囲の間にある全ての範囲及び値を含む。様々な実施形態では、クエン酸ナトリウム濃度は、約０．５％、約１％、約１．５％、約２％、約２．１％、約２．５％、約３％、又は約３．５％である。

【0038】

様々な実施形態では、ＴＩＭＰ－ＰＰＥ製剤中の精製ピーナッツタンパク質は、ＰＬＧＡ１ミリグラム（ｍｇ）当たり０．３μｇ～３０μｇ（マイクログラム）のピーナッツタンパク質、又はＰＬＧＡ１ｍｇ当たり１μｇ～１０μｇのピーナッツタンパク質であり、これらの範囲の間にある全ての範囲及び値を含む。様々な実施形態では、ＴＩＭＰ－ＰＰＥ製剤中の精製ピーナッツタンパク質は、ＰＬＧＡ１ｍｇ当たり約１μｇ、約２μｇ、約３μｇ、約４μｇ、約５μｇ、約６μｇ、約７μｇ、約８μｇ、約９μｇ、又は約１０μｇのピーナッツタンパク質である。

【0039】

本開示は、対象におけるピーナッツアレルギーを治療する方法であって、対象に本明細書に記載のピーナッツタンパク質を封入する対象粒子を投与することを含む、方法が提供される。また、ピーナッツアレルギーの治療に使用するための、本明細書に記載のＴＩＭＰ－ＰＰＥを含む組成物も企図される。様々な実施形態では、本開示は、ピーナッツアレルギーを治療するための薬剤の調製における、本明細書に記載のＴＩＭＰ－ＰＰＥを含む組成物の使用を提供する。

【0040】

本明細書に記載される、各特徴若しくは実施形態、又は組み合わせは、本発明の態様のいずれかの非限定的、例示的な例であり、そのようなものとして、本明細書に記載される、任意の他の特徴若しくは実施形態、又は組み合わせと組み合わせ可能であることを意味することが理解される。例えば、特徴が「一実施形態」、「いくつかの実施形態」、「特定の実施形態」、「更なる実施形態」、「特定の例示的な実施形態」、及び／又は「別の実施形態」などの言語で説明される場合、これらのタイプの実施形態の各々は、本明細書に記載される任意の他の特徴、又は特徴の組み合わせと組み合わされることが意図される特徴の非限定的な例であり、全ての可能な組み合わせを列挙する必要はない。そのような特徴又は特徴の組み合わせは、本発明の態様のいずれかに適用される。範囲内に該当する値の例が開示される場合、これらの例のいずれかは、範囲の可能なエンドポイントとして企図され、そのようなエンドポイント間の任意及び全ての数値が企図され、上限及び下限エンドポイントの任意及び全ての組み合わせが想定される。

【図面の簡単な説明】

【0041】

【図1】ＳＤＳ－ＰＡＧＥによるＰＰＥの特徴付け。ＰＰＥを、非還元条件下で電気泳動移動度によって分離し、染色して、タンパク質の縞模様を可視化した。標準分子量サイズ基準を並行して実行した。ＳＤＳ－ＰＡＧＥによる特性評価の結果、Ａｒａ ｈ１、ｈ２、ｈ３、及びｈ６バンド群が、予想されるサイズで明白に識別された。

【図2】ピーナッツタンパク質を封入する寛容化ナノ粒子（ＴＩＭＰ－ＰＰＥ）の製造に関与する主な工程を示す、高レベルの製造プロセスフロー図である。

【図3】走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）を使用して８０ｇバッチで製造されたＴＩＭＰ－ＰＰＥ粒子の理化学的特徴付け。１０，０００倍の倍率でのナノ粒子の代表的なＳＥＭ画像を示す。

【図4】走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）を使用して１６０ｇバッチで製造されたＴＩＭＰ－ＰＰＥ粒子の理化学的特徴付け。１０，０００倍の倍率でのナノ粒子の代表的なＳＥＭ画像を示す。

【発明を実施するための形態】

【0042】

ＴＩＭＰは、自己免疫疾患及びアレルギーなどの炎症状態に関連する抗原性タンパク質又はペプチドエピトープを封入する、表面官能化された負に帯電したポリ（ラクチド－コ－グリコリド）粒子である。ＴＩＭＰは、封入されたタンパク質／ペプチドを単核食作用細胞系の抗原提示細胞（ＡＰＣ）に標的送達し、非炎症経路を介したＡＰＣ媒介性Ｔ細胞リプログラミングをもたらすように設計されている。

【0043】

自己免疫疾患及びアレルギーの前臨床モデルにおいて、ＴＩＭＰは、抗原性／アレルゲン性タンパク質及びペプチドに対するＴ細胞耐性を誘導する際に治療有効性を示し、疾患症状の改善をもたらした^８～１２。ピーナッツタンパク質（ＴＩＭＰ－ＰＰＥ）を封入するＴＩＭＰは、免疫系を再プログラムし、ピーナッツタンパク質に対する抗原特異的Ｔ細胞耐性を誘導することによって、ピーナッツアレルギーを潜在的に治療することができる。患者を有害事象のリスクにさらすことなく、長期的な治療上の利益のためにアレルゲン性ピーナッツタンパク質に対するＴ細胞耐性を誘導することができる免疫寛容化療法の現在の必要性がある。

【0044】

本開示は、ピーナッツタンパク質（ＴＩＭＰ－ＰＰＥ）を封入する負に帯電した粒子、及び粒子を含む薬学的組成物を製造するためのプロセスを提供する。

【0045】

定義
別段に記載されない限り、本明細書及び特許請求の範囲を含む、本出願で使用される以下の用語は、以下に与えられる定義を有する。

【0046】

本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、不定冠詞「ａ」及び「ａｎ」並びに定冠詞「ｔｈｅ」は、文脈が明らかに別段の指示をしない限り、複数及び単数の指示対象を含む。

【0047】

「約」又は「およそ」という用語は、当業者によって決定される特定の値についての許容誤差を意味し、それは値がどのように測定又は決定されるかに一部依存する。特定の実施形態では、「約」又は「およそ」という用語は、１、２、３、又は４標準偏差以内を意味する。特定の実施形態では、「約」又は「およそ」という用語は、所与の値又は範囲の３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、又は０．０５％以内を意味する。一連の２つ以上の数値における最初の数値に「約」又は「およそ」という用語が先行するときはいつでも、「約」又は「およそ」という用語は、その一連における数値の各１つに適用されることが理解される。

【0048】

本明細書で使用される「粒子」は、任意の非組織由来組成物を指し、スフェア若しくはスフェア様実体、ビーズ、又はリポソームであり得る。「粒子」という用語、「免疫修飾粒子」という用語、「担体粒子」という用語、及び「ビーズ」という用語は、文脈に応じて交換可能に使用され得る。更に、「粒子」という用語は、ビーズ及びスフェアを包含するように使用され得る。

【0049】

本明細書で使用される「負に帯電した粒子」は、ゼロ未満である実効表面電荷を有するように修飾された粒子を指す。

【0050】

本明細書で使用される「表面官能化された」は、表面に１つ以上の官能基を有する粒子を指す。いくつかの実施形態では、表面官能化は、１つ以上の官能基を粒子の表面に導入することによって生じる。様々な実施形態では、表面官能化は、カルボキシル化（すなわち、１つ以上のカルボキシル基の粒子表面への付加）又は他の化学基（例えば、負の表面電荷を付与する他の化学基）の付加によって達成され得る。

【0051】

「カルボキシル化粒子」又は「カルボキシル化ビーズ」又は「カルボキシル化スフェア」は、粒子表面に１つ以上のカルボキシル基を付加するように修飾又は表面官能化された任意の粒子を含む。粒子のカルボキシル化は、ポリ（エチレン－マレイン酸無水物）（ＰＥＭＡ）、ポリ（アクリル酸）、又はカルボキシル側鎖からなるポリアミノ酸（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）を含むがこれらに限定されない、カルボキシル基を付加する任意の化合物を使用して達成することができる。カルボキシル化はまた、天然のカルボキシル基（例えば、ＰＬＧＡ）を有するポリマーを使用して、粒子を形成することによって達成され得、製造プロセスは、すなわち、ポリマーによって天然に発現されるものに加えて、粒子の表面上に位置する追加のカルボキシル基をもたらす。

【0052】

「ポリペプチド」及び「タンパク質」は、ペプチド結合又はペプチド結合アイソステアを介して結合した、アミノ酸残基、関連する天然に存在する構造バリアント、及びその合成の天然に存在しないアナログで構成されるポリマーを指す。合成ポリペプチドは、例えば、自動ポリペプチド合成装置を使用して、合成することができる。「ポリペプチド」及び「タンパク質」という用語は、産生物の最小長に限定されない。「タンパク質」という用語は、典型的には、大きなポリペプチドを指す。「ペプチド」という用語は、典型的には、短いポリペプチドを指す。よって、ペプチド、オリゴペプチド、ダイマー、マルチマーなどが定義内に含まれる。完全長タンパク質及びその断片の両方が定義によって包含される。「ポリペプチド」及び「タンパク質」という用語はまた、ポリペプチド又はタンパク質の発現後修飾、例えば、グリコシル化、アセチル化、リン酸化などを含む。更に、本開示の目的のために、「ポリペプチド」は、ネイティブ配列への「修飾」、例えば、欠失、付加、置換（本質的に保存的であり得るか、あるいはヒトタンパク質に一般に存在する２０個のアミノ酸のうちのいずれか、又は任意の他の天然に存在するか、若しくは天然に存在しないか、若しくは非定型のアミノ酸での置換を含み得る）、及び化学修飾（例えば、ペプチド模倣物の付加又はそれによる置換）を含むことができる。これらの修飾は、部位特異的変異誘発を通して、又は化学部分を除去若しくは結合するためのアミノ酸の化学修飾を通して、意図的であり得るか、あるいはタンパク質を産生する宿主細胞を介して発生する変異を通して、又は宿主細胞トランスフェクション前のＰＣＲ増幅に起因するエラーを通してなど、偶発的であり得る。

【0053】

本明細書で使用される「抗原性部分」又は「抗原」は、宿主の免疫系によって認識される任意の部分、例えば、ペプチドを指す。抗原性部分の例としては、これらに限定されないが、自己抗原、アレルゲン、酵素、及び／又は細菌若しくはウイルスタンパク質、ペプチド、薬物、又は成分が挙げられる。

【0054】

「薬学的に許容される担体」は、標準的な薬学的担体、緩衝剤などのいずれか、例えば、リン酸緩衝生理食塩水、デキストロースの５％水溶液、及びエマルジョン（例えば、油／水又は水／油エマルジョン）を指す。賦形剤の非限定的な例としては、アジュバント、結合剤、充填剤、希釈剤、崩壊剤、乳化剤、湿潤剤、潤滑剤、流動促進剤、甘味剤、香味剤、及び着色剤が挙げられる。好適な薬学的担体、賦形剤、及び希釈剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１９ｔｈ Ｅｄ．（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，１９９５）に記載される。好ましい薬学的担体は、活性剤の意図される投与様式に依存する。典型的な投与様式には、経腸（例えば、経口）又は非経口（例えば、皮下、筋肉内、静脈内、若しくは腹腔内注射、又は局所、経皮、若しくは経粘膜投与）又は吸入を介するものが含まれる。

【0055】

「薬学的に許容される」又は「薬理学的に許容される」という用語は、生物学的に又は別段に望ましくないものではない材料を意味し、すなわち、材料は、いずれの望ましくない生物学的効果も引き起こすことなく、あるいはそれが含有される組成物の成分のうちのいずれとも、又は個体の体上若しくは体内に存在するいずれの成分とも有害な様式で相互作用することなく、個体に投与され得る。

【0056】

「対象」という用語は、哺乳動物及び非哺乳動物を包含する。哺乳動物の例としては、哺乳動物クラスの任意のメンバー：ヒト、チンパンジーなどの非ヒト霊長類、並びに他の類人猿及びサル種；ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ブタなどの家畜；ウサギ、イヌ、及びネコなどの飼育動物；ラット、マウス、及びモルモットなどのげっ歯類などを含む実験動物が挙げられるが、これらに限定されない。非哺乳動物の例としては、鳥類、魚類などが挙げられるが、これらに限定されない。用語は、特定の年齢又は性別を示すものではない。

【0057】

「エピトープ」という用語は、抗原結合領域のうちの１つ以上で選択的結合剤によって認識され、結合することができる任意の分子の部分を指す。エピトープは、通常、アミノ酸又は炭水化物側鎖などの、分子の化学的に活性な表面グルーピングからなり、特異的三次元構造特徴及び特異的電荷特徴を有する。本明細書で使用されるエピトープは、連続又は不連続であり得る。また、エピトープは、抗体を生成するために使用されるエピトープと同一であるが、抗体免疫応答を刺激するために使用された、標的において見られたアミノ酸残基のいずれも含まないか、又はいくつかのみを含む、三次元構造を含むという点で、模倣（ミモトープ）であり得る。本明細書で使用される場合、ミモトープは、選択的結合剤によって結合したエピトープとは異なる抗原とみなされず、選択的結合剤は、エピトープ及びミモトープの同じ三次元構造を認識する。本明細書で使用される「エピトープ」は、「抗原決定基」としても知られており、これは、免疫系によって、具体的には抗体、Ｂ細胞、又はＴ細胞によって認識される抗原の部分である。例えば、エピトープは、抗体が結合する抗原の特定の一部分である。エピトープと結合する抗体の部分は、パラトープと呼ばれる。エピトープは通常、非自己タンパク質であるが、（自己免疫疾患の場合のように）認識することができる宿主に由来する配列もエピトープである。Ｔ細胞エピトープは、抗原提示細胞の表面上に提示され、それらは、ＭＨＣ（主要組織適合性複合体）分子に結合される。ヒトにおいて、プロフェッショナル抗原提示細胞は、ＭＨＣクラスＩＩペプチドを提示するように特化されているが、ほとんどの有核体細胞は、ＭＨＣクラスＩペプチドを提示する。ＭＨＣクラスＩ分子によって提示されるＴ細胞エピトープは、典型的には８～１１個のアミノ酸長の間のペプチドであるが、ＭＨＣクラスＩＩ分子は、より長いペプチド、１３～１７個のアミノ酸長を提示し、非古典的ＭＨＣ分子はまた、糖脂質などの非ペプチドエピトープを提示する。

【0058】

本明細書における方法に関して使用される「治療する」、「治療される」、「治療すること」、及び「治療」という用語は、一時的又は永続的のいずれか、部分的又は完全のいずれかで、事象、疾患、又は状態の１つ以上の臨床症状、兆候、又は進行を排除すること、低減すること、抑制すること、又は改善することを指す。そのような治療することは、有用であるために絶対的である必要はない。本開示の目的のために、有益又は所望の臨床結果は、これらに限定されないが、検出可能であるか検出不可能であるかにかかわらず、症状の緩和、疾患の範囲の減少、疾患の安定化された（すなわち、悪化していない）状態、疾患進行の遅延又は減速、疾患状態の改善又は軽減、並びに寛解（部分的又は完全であるかにかかわらず）を含む。「治療」はまた、治療を受けない場合の予想される生存と比較して、生存を延長することを意味し得る。治療を必要とするものには、既に状態若しくは障害を有するもの、並びに状態若しくは障害を有する傾向があるもの、又は状態若しくは障害が防止されるべきものが含まれる。

【0059】

粒子
粒子のサイズ及び電荷は、許容誘発のために重要である。粒子は、粒子内に封入された抗原に基づいてサイズ及び電荷が異なるが、一般に、本明細書に記載される粒子は、それらが約１００ナノメートル～約１５００ナノメートルであり、０～約－１００ｍＶの負の電荷を有するとき、寛容を誘発する際に有効である。様々な実施形態では、粒子は、直径が４００～８００ナノメートルであり、約－２５ｍＶ～－７０ｍＶの電荷を有する。様々な実施形態では、粒子は、直径が４００～１０００ナノメートルであり、約－２５ｍＶ～－７０ｍＶの電荷を有する。平均粒子サイズ及び粒子の電荷は、凍結乾燥プロセスにおいてわずかに改変され得、したがって、合成後平均及び凍結乾燥後平均の両方が記載される。本明細書で使用される場合、「合成後サイズ」及び「合成後電荷」という用語は、凍結乾燥前の粒子のサイズ及び電荷を指す。「凍結乾燥後サイズ」及び「凍結乾燥後電荷」という用語は、凍結乾燥後の粒子のサイズ及び電荷を指す。

【0060】

いくつかの実施形態では、粒子は、非金属である。これらの実施形態では、粒子は、ポリマーから形成され得る。好ましい実施形態では、粒子は、個体において生分解性である。この実施形態では、粒子は、個体における粒子の蓄積なしに、複数回の用量にわたって個体において提供することができる。好適な粒子の例としては、ポリスチレン粒子、ＰＧＡ粒子、ＰＬＡ粒子、ＰＬＧＡ粒子、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ安定化ポリプロピレンスルフィド粒子、及びダイヤモンド粒子が挙げられる。

【0061】

好ましくは、粒子表面は、非特異的又は望ましくない生物学的相互作用を最小限に抑える材料で構成される。粒子表面と間質との間の相互作用は、リンパ取り込みにおいて役割を果たす因子であり得る。粒子表面は、非特異的相互作用を防止又は減少させる材料でコーティングされ得る。ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）及びそのコポリマー、例えば、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（登録商標）（ポリ（エチレングリコール）－ｂｌ－ポリ（プロピレングリコール）－ｂｌ－ポリ（エチレングリコール）のコポリマーを含む）などの親水性層で粒子をコーティングすることによる立体安定化は、皮下注射後の改善されたリンパ取り込みによって実証されるように、間質のタンパク質との非特異的相互作用を低減し得る。これらの事実の全ては、リンパ取り込みの観点から、粒子の物理的特性の関連性を示す。生分解性ポリマーは、ポリマー及び／又は粒子及び／又は層の全部又は一部を作製するために使用され得る。生分解性ポリマーは、例えば、官能基が溶液中の水と反応する結果によって、分解され得る。本明細書で使用される「分解」という用語は、分子量の低減又は疎水性基の親水性基への変換のいずれかによって、可溶性になることを指す。エステル基を有するポリマー、例えば、ポリラクチド及びポリグリコリドは、一般に、自発的加水分解に供される。

【0062】

本明細書に開示される粒子はまた、追加の成分を含有し得る。例えば、担体は、担体に組み込まれるか、又はコンジュゲートされた造影剤を有し得る。現在市販されている造影剤を有する担体ナノスフェアの例は、Ｋｏｄａｋ Ｘ－ｓｉｇｈｔナノスフェアである。量子ドット（ＱＤ）として知られる、無機量子閉じ込め発光ナノ結晶は、ＦＲＥＴ用途において理想的なドナーとして現れた：それらの高い量子収率及び調節可能なサイズ依存的ストークスシフトは、単一の紫外線波長で励起されるとき青から赤外線まで異なるサイズを放出することを可能にする。（Ｂｒｕｃｈｅｚ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９８，２８１，２０１３、Ｎｉｅｍｅｙｅｒ，Ｃ．Ｍ Ａｎｇｅｗ．Ｅｄ．２００３，４２，５７９６、Ｗａｇｇｏｎｅｒ，Ａ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１９９５，２４６，３６２、Ｂｒｕｓ，Ｌ．Ｅ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｐｈｙｓ．１９９３，７９，５５６６）。デンドリマーとして知られるポリマーのクラスに基づくハイブリッド有機／無機量子ドットなどの、量子ドットは、生物学的標識、イメージング、及び光学バイオセンシングシステムにおいて使用され得る。（Ｌｅｍｏｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２０００，１２２，１２８８６）。無機量子ドットの従来の合成とは異なり、これらのハイブリッド量子ドットナノ粒子の合成は、高温又は高毒性の、不安定な試薬を必要としない。（Ｅｔｉｅｎｎｅ，ｅｔ ａｌ．，Ａｐｐｌ．Ｐｈｙｓ．Ｌｅｔｔ．８７，１８１９１３，２００５）。

【0063】

粒子は、広範囲の材料から形成することができる。粒子は、好ましくは、生物学的使用に好適な材料で構成される。例えば、粒子は、ガラス、シリカ、クエン酸塩、ヒドロキシカルボン酸のポリエステル、ジカルボン酸のポリ無水物、又はヒドロキシカルボン酸とジカルボン酸とのコポリマーで構成され得る。より一般的には、担体粒子は、直鎖若しくは分岐、置換若しくは非置換、飽和若しくは不飽和、線状若しくは架橋、アルカニル、ハロアルキル、チオアルキル、アミノアルキル、アリール、アラルキル、アルケニル、アラルケニル、ヘテロアリール、若しくはアルコキシヒドロキシ酸のポリエステル、又は直鎖若しくは分岐、置換若しくは非置換、飽和若しくは不飽和、線状若しくは架橋、アルカニル、ハロアルキル、チオアルキル、アミノアルキル、アリール、アラルキル、アルケニル、アラルケニル、ヘテロアリール、若しくはアルコキシジカルボン酸のポリ無水物で構成され得る。更に、担体粒子は、量子ドットポリスチレン粒子などの量子ドットであり得るか、又は量子ドットで構成され得る（Ｊｏｕｍａａ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｌａｎｇｍｕｉｒ ２２：１８１０－６）。エステル及び無水物結合の混合物（例えば、グリコール酸及びセバシン酸のコポリマー）を含む担体粒子も使用され得る。例えば、担体粒子は、ポリグリコール酸ポリマー（ＰＧＡ）、ポリ乳酸ポリマー（ＰＬＡ）、ポリセバシン酸ポリマー（ＰＳＡ）、ポリ（乳－コ－グリコール）酸コポリマー（ＰＬＧＡ又はＰＬＧ；用語は互換性がある）、ポリ（乳－コ－セバシン）酸コポリマー（ＰＬＳＡ）、ポリ（グリコール－コ－セバシン）酸コポリマー（ＰＧＳＡ）、ポリプロピレンスルフィドポリマー、ポリ（カプロラクトン）、キトサンなどを含む材料を含み得る。本発明で有用な他の生体適合性、生分解性ポリマーとしては、カプロラクトン、炭酸塩、アミド、アミノ酸、オルトエステル、アセタール、シアノアクリレート、及び分解性ウレタンのポリマー又はコポリマー、並びに直鎖若しくは分枝鎖、置換若しくは非置換のアルカニル、ハロアルキル、チオアルキル、アミノアルキル、アルケニル、又は芳香族ヒドロキシ若しくはジカルボン酸を有するこれらのコポリマーが挙げられる。加えて、リジン、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、セリン、トレオニン、チロシン、及びシステインなどの、反応性側鎖基を有する生物学的に重要なアミノ酸、又はそれらのエナンチオマーは、抗原ペプチド及びタンパク質にコンジュゲートするための反応性基及びコンジュゲート部分を提供するために、前述の材料のいずれかとのコポリマーに含まれ得る。本発明に好適な生分解性材料には、ダイヤモンド、ＰＬＡ、ＰＧＡ、ポリプロピレンスルフィド、及びＰＬＧＡポリマーが含まれる。生体適合性であるが非生分解性の材料も、本発明の担体粒子に使用され得る。例えば、アクリレート、エチレン－ビニルアセテート、アシル置換セルロースアセテートの非生分解性ポリマー、非分解性ウレタン、スチレン、塩化ビニル、フッ化ビニル、ビニルイミダゾール、クロロスルホン化オレフィン、エチレンオキシド、ビニルアルコール、ＴＥＦＬＯＮ（登録商標）（ＤｕＰｏｎｔ、Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、Ｄｅｌ．）、及びナイロンが利用され得る。

【0064】

特定の実施形態では、粒子は、約８０：２０～約１００：０又は２０：８０～１００：０のモル比を有するコポリマーである。本免疫修飾粒子の好適なコポリマー比は、２５：７５、３０：７０、３５：６５、４０：６０、４５：５５、５０：５０、５５：４５、６０：４０、６５：３５、７０：３０、７５：２５、８０：２０、８１：１９、８２：１８、８３：１７、８４：１６、８５：１５、８６：１４、８７：１３、８８：１２、８９：１１、９０：１０、９１：９、９２：８、９３：７、９４：６、９５：５、９６：４、９７：３、９８：２、９９：１、又は１００：０であり得る。特定の実施形態では、粒子は、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ安定化ポリプロピレンスルフィド粒子、ポリグリコール酸粒子（ＰＧＡ）、ポリ乳酸粒子（ＰＬＡ）、又はポリ（乳－コ－グリコール酸）粒子、又はカルボキシル化ポリグリコール酸粒子（ＰＧＡ）、カルボキシル化ポリ乳酸粒子（ＰＬＡ）、又はカルボキシル化ポリ（乳－コ－グリコール酸）粒子である。特定の実施形態では、粒子は、ポリ乳酸／ポリグリコール酸８０：２０、ポリ乳酸／ポリグリコール酸９０：１０、又はポリ乳酸：ポリグリコール酸／５０：５０のコポリマー比を有する。様々な実施形態では、粒子は、ポリ（乳－コ－グリコール酸）粒子であり、約５０：５０のポリ乳酸：ポリグリコール酸のコポリマー比を有する。

【0065】

粒子が界面活性剤及び／又は安定剤を更に含み得ることが企図される。界面活性剤及び／又は安定剤は、アニオン性、カチオン性、又は非イオン性であり得る。ポロキサマー及びポロキサミンファミリーの界面活性剤は、粒子合成において一般的に使用されている。使用され得る界面活性剤及び／又は安定剤としては、これらに限定されないが、ＰＥＧ、Ｔｗｅｅｎ－８０、ゼラチン、デキストラン、ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ－６３、ＰＶＡ、ＰＡＡ、メチルセルロース、レシチン、ＤＭＡＢ、及びＰＥＭＡが挙げられる。更に、生分解性及び生体適合性界面活性剤は、ビタミンＥ ＴＰＧＳ（Ｄ－α－トコフェリルポリエチレングリコール１０００サクシネート）、ポリアミノ酸（例えば、リジン、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、セリン、トレオニン、チロシン、及びシステインのポリマー、又はそれらのエナンチオマー）、コール酸ナトリウム、及び硫酸塩ポリマーを含むが、これらに限定されない。特定の実施形態では、２つの界面活性剤が使用される。特定の実施形態では、２つの安定剤が使用される。特定の実施形態では、２つ以上の界面活性剤及び安定剤の組み合わせが使用される。例えば、粒子が二重エマルジョン法によって産生される場合、２つの界面活性剤は、第１のエマルジョンのための疎水性界面活性剤、及び第２のエマルジョンのための疎水性界面活性剤を含むことができる。例えば、安定剤は、本明細書に記載の一次エマルジョン及び／又は二次エマルジョンを、エマルジョン内の隣接するナノ粒子液滴の間に物理的な障壁又はエネルギー障壁を提供することによって安定化させ、それによって、より大きなナノ粒子液滴を結合及び形成する確率を低減する化合物であり得る。

【0066】

特定の実施形態では、ポリペプチド抗原は、単一エマルジョンプロセスによって粒子中に封入される。更なる実施形態では、ポリペプチド抗原は、より疎水性である。時には、二重エマルジョンプロセスは、親水性活性成分の漏出及び低い捕捉効率をもたらし得る大きな粒子の形成をもたらす。合体及びオストヴァルト熟成は、二重エマルジョン液滴を不安定化し得る２つのメカニズムであり、親水性活性成分の有機相を通した拡散は、低レベルの捕捉活性成分の原因となる主なメカニズムである。いくつかの実施形態では、ナノ粒子サイズを低減することが有益であり得る。これを達成するための１つの戦略は、第２の強力なせん断速度を適用することである。漏出効果は、高ポリマー濃度及び高ポリマー分子量を使用することによって低減することができ、内部水相の粘度の増加及び界面活性剤分子量の増加を伴う。特定の実施形態では、抗原を封入する粒子は、ナノ沈殿、共沈殿、不活性ガス縮合、スパッタリング、マイクロエマルジョン、ゾル－ゲル法、レイヤー－バイ－レイヤー技法、又はイオンゲル化法によって製造される。ナノ粒子を製造するためのいくつかの方法は、文献に記載されており、参照により本明細書に組み込まれる（Ｓａｎｃｈｅｚ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２５（１６）：３７６０，２０２０、Ｚｉｅｌｉｎｓｋａ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ．２５（１６）：３７３１，２０２０）。

【0067】

抗原
抗原は、分子の個別部分、例えば、ポリペプチド又はペプチド配列、ポリペプチド又はペプチドの３Ｄ構造形成、宿主免疫細胞によって認識され得る多糖又はポリヌクレオチドを指す。抗原特異的とは、対象の宿主細胞が、エピトープ又はミモトープと同様に、抗原単独に対する、又は抗原に非常に類似した分子に対する免疫応答を認識し、生成する能力を指す。

【0068】

「アナジー」、「寛容」、又は「抗原特異的寛容」は、Ｔ細胞受容体媒介性刺激に対するＴ細胞の非感受性を指す。そのような非感受性は、一般に、抗原特異的であり、抗原性ペプチドへの曝露が停止した後に持続する。例えば、Ｔ細胞におけるアナジーは、サイトカイン産生、例えば、ＩＬ－２の欠如を特徴とする。Ｔ細胞アナジーは、Ｔ細胞が抗原に曝露され、第２のシグナル（共刺激シグナル）の不在下で第１のシグナル（Ｔ細胞受容体又はＣＤ－３媒介性シグナル）を受けるときに発生する。これらの条件下では、細胞の同じ抗原への再曝露は（共刺激分子の存在下で再曝露が発生する場合でも）、サイトカイン産生の失敗、及びその後の増殖の失敗をもたらす。よって、サイトカイン産生の失敗は、増殖を防止する。しかしながら、アナジー性Ｔ細胞は、サイトカイン（例えば、ＩＬ－２）で培養される場合に増殖することができる。

【0069】

本明細書に記載される寛容化療法は、抗原特異的であることが企図される。例えば、寛容化療法として投与されるＴＩＭＰは、当該寛容化療法、及び治療される関連疾患又は状態に関連する１つ以上の抗原を封入する。寛容化療法に使用されるＴＩＭＰは、１つ以上のピーナッツ抗原を含むことが企図される。１つ以上のピーナッツ抗原は、ピーナッツタンパク質抽出物に由来するか、又は既知のピーナッツタンパク質に由来する、例えば、タンパク質から単離されるか、若しくは合成的に作製されるペプチドであり得る。

【0070】

これまでに１５個以上のピーナッツアレルゲンが、ＷＨＯ／ＩＵＩＳ Ａｌｌｅｒｇｅｎ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ Ｓｕｂ－Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ｗｗｗ．ａｌｌｅｒｇｅｎ．ｏｒｇで維持されているデータベース）によって認識されており、Ａｒａ ｈ１～Ａｒａ ｈ１８がある。ピーナッツアレルゲンは、Ａｒａ ｈ１、ｈ２、ｈ３、ｈ５、ｈ６、及びｈ８に基づくそれらのアーキテクチャー（例えば、トリマー、モノマー、クピン、アルブミン、プロラミン、プロフィリン、オレオシン、ディフェンシン、ビンシリン、非特異的脂質輸送タンパク質（ｎｓＬＴＰ））に基づいて異なる群に分類することができ、これらの群の各々は、異なる程度のアレルゲン効力を有する（Ｏｚｉａｓ－Ａｋｉｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ａｌｌｅｒｇｙ ７４：８８８－８９８，２０１９）。既知のピーナッツアレルゲンには、Ａｒａｃｈｉｓ ｈｙｐｏｇａｅａ Ａｒａ ｈ１、Ａｒａ ｈ２、Ａｒａ ｈ３、Ａｒａ ｈ５、Ａｒａ ｈ６、Ａｒａ ｈ７、及びＡｒａ ｈ８に由来するものが含まれる。例えば、Ａｒａ ｈ１ポリペプチド配列（配列番号１）を示すＵＮＩＰＲＯＴ Ｅ５Ｇ０７６、Ａｒａ ｈ２ポリペプチド（配列番号２）についてのＵＮＩＰＲＯＴ Ａ０Ａ４４５ＢＹＩ５、Ａｒａ ｈ３ポリペプチド（配列番号３）についてのＵＮＩＰＲＯＴ Ｅ５Ｇ０７７（それぞれ、Ａｒａ ｈ３イソアレルゲン１及び２（以前のＡｒａ ｈ４）についてのＵＮＩＰＲＯＴデータベース番号Ｏ８２５８０（配列番号４）及びＱ９ＳＱＨ７（配列番号５）も参照されたい）、Ａｒａ ｈ５ポリペプチド（配列番号６）についてのＵＮＩＰＲＯＴ Ｌ７ＱＨ５２、Ａｒａ ｈ６ポリペプチド（配列番号７）についてのＵＮＩＰＲＯＴ Ａ５Ｚ１Ｒ０、Ａｒａ ｈ７ポリペプチド（配列番号８）についてのＵＮＩＰＲＯＴ Ｂ４ＸＩＤ４、又はＡｒａ ｈ８ポリペプチド配列（配列番号９）についてのＵＮＩＰＲＯＴ Ｑ６ＶＴ８３、Ａｒａ ｈ９、イソアレルゲン１及び２、それぞれＵＮＩＰＲＯＴデータベース番号Ｂ６ＣＥＸ８及びＢ６ＣＧ４１（配列番号１０及び１１）；Ａｒａ ｈ１０、イソアレルゲン１及び２、それぞれＵＮＩＰＲＯＴデータベース番号Ｑ６４７Ｇ５及びＱ６４７Ｇ４（配列番号１２及び１３）；Ａｒａ ｈ１１、イソアレルゲン１及び２、それぞれＵＮＩＰＲＯＴデータベース番号Ｑ４５Ｗ８７及びＱ４５Ｗ８６（配列番号１４及び１５）；Ａｒａ ｈ１２ ＵＮＩＰＲＯＴデータベース番号Ｂ３ＥＷＰ３（配列番号１６）；Ａｒａ ｈ１３、イソアレルゲン１及び２、それぞれＵＮＩＰＲＯＴデータベース番号Ｂ３ＥＷＰ４及びＣ０ＨＪＺ１（配列番号１７及び１８）；Ａｒａ ｈ１４、イソアレルゲン１、２、及び３、それぞれＵＮＩＰＲＯＴデータベース番号Ｑ９ＡＸＩ１、Ｑ９ＡＸＩ０、及びＱ６Ｊ１Ｊ８（配列番号１９～２１）；Ａｒａ ｈ１５、ＵＮＩＰＲＯＴデータベース番号Ｑ６４７Ｇ３（配列番号２２）；Ａｒａ ｈ１６、ＵＮＩＰＲＯＴデータベース番号Ａ０Ａ５０９ＺＸ５１（配列番号２３）；Ａｒａ ｈ１７、ＵＮＩＰＲＯＴ Ａデータベース番号０Ａ５１０Ａ９Ｓ３（配列番号２４）；並びにＡｒａ ｈ１８、ＵＮＩＰＲＯＴデータベース番号Ａ０Ａ４４４ＸＳ９６（配列番号２５）を参照されたい。

【0071】

特定の実施形態では、１つ、２つ、３つ、又はより多数の抗原又は抗原性ペプチドがＴＩＭＰにおいて使用される。特定の実施形態では、１つ以上のピーナッツ抗原は、粒子の内面への共有結合によってＴＩＭＰに封入される（例えば、参照により本明細書に組み込まれる、米国特許公開第２０１９／０２８２７０７号を参照されたい）。特定の実施形態では、例えば、Ａｒａ ｈ１、Ａｒａ ｈ２、Ａｒａ ｈ３、Ａｒａ ｈ５、Ａｒａ ｈ６、Ａｒａ ｈ７、及び／又はＡｒａ ｈ８由来の、２つ以上のピーナッツタンパク質の配列は、融合タンパク質において結合しており、本明細書に記載されるＴＩＭＰ内に封入されることが企図される。結合したエピトープを有するＴＩＭＰを作製するための方法は、参照により本明細書に組み込まれる、米国特許公開第２０１９／０３６５６５６号に記載される。

【0072】

エマルジョンは、多くの加工形態で発生し、食品、化粧品、及び薬物送達によって広く使用されている。油－水（単一）又は水－油－水（二重）エマルジョンは、ＰＬＧＡを使用して、疎水性及び親水性の薬物をマイクロ又はナノスケールの形態で封入することができる方法である。要約すると、ＰＬＧＡは、界面活性剤又は安定剤（水）で乳化される有機相（油）に溶解される。疎水性薬物及び／又は他の薬剤は、油相に直接添加されるが、親水性薬物及び／又は他の薬剤（水）は、粒子の形成前にポリマー溶液で最初に乳化され得る。高強度均質化（例えば、超音波処理バースト）は、小さなポリマー液滴の形成を促進する。得られたエマルジョンは、より大きな水相に添加され、数時間攪拌され、これにより溶媒が蒸発する。硬化したナノ粒子は、収集され、遠心分離によって洗浄される。特定の実施形態では、硬化したエマルジョン粒子は、油相の蒸発によって得ることができる。

【0073】

「水中油中水型」（Ｗ／Ｏ／Ｗ）エマルジョンは、二重エマルジョンの一例であり、より大きい油滴内の小さい水滴の分散体自体が連続した水相に分散される。それらの区画化された内部構造のために、二重エマルジョンは、封入のための単純な水中油型エマルジョンよりも、極性及び非極性カーゴ（薬学的／生物学的因子、例えば、タンパク質）の両方を担持する能力、並びに治療用分子の放出に対する改善された制御などの利点を提供することができる。二重エマルジョンの調製は、典型的には、安定性のために界面活性剤又はそれらの混合物を必要とする。界面活性剤は、極端な流れに供される液滴を安定化させ、様々な産業におけるナノ構造封入用途に適合する堅牢な二重ナノエマルジョンの直接的な大量生産につながる。一実施例では、二重エマルジョンプロセスは、薬学的／生物学的薬剤（複数可）の水溶液を、ポリマーを含む溶液と混合することによって一次エマルジョンを生成し、油中水型一次エマルジョンをもたらすことを伴う。次いで、一次エマルジョンを、１つ以上の界面活性剤を含む溶液と混合して、水中油型二次エマルジョンを形成する。次いで、二次エマルジョンを、溶媒（複数可）を除去するための蒸発によって硬化させ、薬学的／生物学的薬剤（複数可）を封入する硬化した高分子ナノ粒子をもたらす。

【0074】

本明細書で使用される「均質化」は、液体－液体分散体中の液滴のサイズを低減するように調整された、ホモジナイザーと呼ばれる処理装置のクラスを使用する操作に関する。粒子又は液滴サイズに影響を与える要因には、これらに限定されないが、乳化剤の種類、乳化剤濃度、溶液条件、及び機械的デバイス（均質化パワー、圧力、回転速度、時間）が含まれる。ホモジナイザーの非限定的な例としては、高速ブレンダー、高圧ホモジナイザー、コロイドミル、高せん断分散器、超音波ディスラプター膜ホモジナイザー、及び超音波処理器が挙げられる。機械的ホモジナイザー、手動ホモジナイザー、超音波破砕機、ミキサーミル、ボルテクサーなどは、本開示の範囲内で機械的及び物理的破壊のために利用され得る。

【0075】

本明細書で使用される「バッチサイズ」は、最終製品の重量に応じた製造スケールに関する。製造プロセスは、変更、拡大、又は縮小することができる。製造プロセスは、溶媒、抗原／タンパク質、ポリマー、界面活性剤、安定剤、凍結保護剤、又は賦形剤の量又は体積を変更することによって、変更、拡大、又は縮小することができる。製造プロセスは、均質化、超音波処理、蒸発、濾過、濃縮、洗浄、又は凍結乾燥の時間を変更することによって、拡大又は縮小することができる。

【0076】

粒子中又は溶液中のタンパク質含有量を決定するための方法としては、ＥＬＩＳＡ、質量分析、ＨＰＬＣ、ＣＢＱＣＡ、及びウェスタンブロットが挙げられる。

【0077】

分子プローブＣＢＱＣＡタンパク質定量キットは、溶液中のタンパク質の定量のための迅速かつ高感度の方法を提供する。本キットは、もともとアミン用のクロマトグラフ誘導体化試薬として開発されたＡＴＴＯ－ＴＡＧ ＣＢＱＣＡ試薬（３－（４－カルボキシベンゾイル）キノリン－２－カルボキシルデヒド）を利用する。この試薬はまた、タンパク質中のアクセス可能なアミンを含む、溶液中のアミンを定量するのに非常に有用であることが証明されている。ＡＴＴＯ－ＴＡＧ ＣＢＱＣＡ試薬は、水溶液中では事実上非蛍光性であるが、シアン化物の存在下で、タンパク質中に見られるものなどの一級アミンと反応して、高蛍光性誘導体を形成する。

【0078】

薬学的製剤
本明細書に記載されるＴＩＭＰ－ＰＰＥを活性成分として含有する本開示の薬学的組成物は、投与経路に応じて、薬学的に許容される担体又は添加剤を含有し得る。そのような担体又は添加剤の例としては、水、薬学的に許容される有機溶媒、コラーゲン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリルナトリウム、アルギン酸ナトリウム、水溶性デキストラン、カルボキシメチルデンプンナトリウム、ペクチン、メチルセルロース、エチルセルロース、キサンタンガム、アラビアガム、カゼイン、ゼラチン、寒天、ジグリセリン、グリセリン、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ワセリン、パラフィン、ステアリルアルコール、ステアリン酸、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、マンニトール、ソルビトール、ラクトース、薬学的に許容される界面活性剤などが挙げられる。使用される添加剤は、本開示の剤形に応じて、必要に応じて、上記又はそれらの組み合わせから選択されるが、これらに限定されない。

【0079】

薬学的組成物の製剤は、選択される投与経路（例えば、溶液、エマルジョン）に従って変動するであろう。投与される治療剤を含む適切な組成物は、生理学的に許容されるビヒクル又は担体中で調製することができる。溶液又はエマルジョンについて、好適な担体としては、例えば、生理食塩水及び緩衝媒体を含む、水性又はアルコール性／水性溶液、エマルジョン、又は懸濁液が挙げられる。非経口ビヒクルは、塩化ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース、デキストロース及び塩化ナトリウム、乳酸リンゲル又は固定油を含むことができる。静脈内ビヒクルは、様々な添加剤、保存剤、又は液体、栄養素、若しくは電解質補充剤を含むことができる。

【0080】

様々な水性担体、例えば、無菌リン酸緩衝生理食塩水、静菌水、水、緩衝水、０．４％生理食塩水、０．３％グリシンなどは、軽度化学修飾などに供された、アルブミン、リポタンパク質、グロブリンなどのような、増強された安定性のための他のタンパク質を含み得る。

【0081】

阻害剤の治療用製剤は、所望の純度を有する阻害剤を、凍結乾燥製剤又は水溶液の形態で、任意選択的な生理学的に許容される担体、賦形剤、又は安定剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０））と混合することによって、保存用に調製される。許容される担体、賦形剤、又は安定剤は、使用される投与量及び濃度でレシピエントに対して非毒性であり、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸などの緩衝剤；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル、若しくはベンジルアルコール；メチル若しくはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；及びｍ－クレゾールなど）；低分子量（約１０個未満の残基）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、若しくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギン、若しくはリジンなどのアミノ酸；単糖類、二糖類、及びグルコース、マンノース、若しくはデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース、若しくはソルビトールなどの糖類；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）；並びに／又はＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）、若しくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤を含む。

【0082】

インビボ投与に使用される製剤は、無菌でなければならない。これは、無菌濾過膜を通した濾過によって容易に達成される。

【0083】

水性懸濁液は、水性懸濁液の製造に好適な賦形剤と混合した活性化合物を含有し得る。そのような賦形剤は、懸濁剤、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントガム及びアカシアガムであり、分散剤又は湿潤剤は、天然に存在するホスファチド、例えば、レシチン、又は酸化アルキレンと脂肪酸との縮合産生物、例えば、ステアリン酸ポリオキシエチレン、又は酸化エチレンと長鎖脂肪族アルコールとの縮合産生物、例えば、ヘプタデカエチル－エンオキシセタノール、又は酸化エチレンと脂肪酸及びヘキシトールに由来する部分エステルとの縮合産生物、例えば、ソルビトールモノステアリン酸ポリオキシエチレン、又は酸化エチレンと脂肪酸及びヘキシトール無水物に由来する部分エステルとの縮合産生物、例えば、モノステアリン酸ポリエチレンソルビタンであり得る。水性懸濁液はまた、１つ以上の防腐剤、例えば、エチル、又はｎ－プロピル、ｐ－ヒドロキシ安息香酸塩を含有し得る。

【0084】

本明細書に記載されるＴＩＭＰ－ＰＰＥは、保存のために凍結乾燥させ、使用前に好適な担体中で再構成することができる。

【0085】

経口投与のための固体剤形としては、カプセル剤、錠剤、丸剤、粉末剤、及び顆粒剤が挙げられる。そのような固体剤形では、修飾粒子は、少なくとも１つの不活性な、薬学的に許容される賦形剤又は担体、例えば、クエン酸ナトリウム若しくはリン酸二カルシウム、並びに／又はａ）デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、及びケイ酸などの充填剤若しくはエクステンダー、ｂ）例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリジノン、スクロース、及びアカシアなどの結合剤、ｃ）グリセロールなどの保湿剤、ｄ）寒天－寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモ若しくはタピオカデンプン、アルギン酸、特定のケイ酸塩、及び炭酸ナトリウムなどの崩壊剤、ｅ）パラフィンなどの溶液遅延剤、ｆ）四級アンモニウム化合物などの吸収促進剤、ｇ）例えば、セチルアルコール及びモノステアリン酸グリセロールなどの湿潤剤、ｈ）カオリン及びベントナイトクレーなどの吸収剤、並びにｉ）タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル酸ナトリウムなどの潤滑剤、並びにそれらの混合物と混合される。カプセル剤、錠剤、及び丸剤の場合、剤形はまた、緩衝剤を含み得る。

【0086】

ピーナッツタンパク質抽出物及び賦形剤を含む粒子を含む製剤が提供される。例示的な賦形剤としては、スクロース、マンニトール、トレハロース、ソルビトール、デキストラン、Ｆｉｃｏｌｌ、デキストラン７０ｋ、クエン酸ナトリウム、ラクトース、Ｌ－アルギニン、又はグリシンが挙げられる。様々な実施形態では、ＴＩＭＰ－ＰＰＥ製剤は、１～１１個の賦形剤を含有する。様々な実施形態では、ＴＩＭＰ－ＰＰＥ製剤は、１つ以上、２つ以上、３つ以上、４つ以上、５つ以上、６つ以上、７つ以上、８つ以上、９つ以上、又は１０個以上の賦形剤を含有する。

【0087】

いくつかの実施形態では、ＴＩＭＰ－ＰＰＥ製剤は、精製ピーナッツタンパク質、スクロース、マンニトール、及びクエン酸ナトリウムを封入する負に帯電した粒子を含有する。様々な実施形態では、ＴＩＭＰ－ＰＰＥ製剤中の負に帯電した粒子濃度は、１～１００％、２０～５０％、又は３０～４０％であり、これらの範囲の間にある全ての範囲及び値を含む。様々な実施形態では、ＴＩＭＰ－ＰＰＥ製剤中の負に帯電した粒子濃度は、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３５．６％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、又は約４０％である。

【0088】

様々な実施形態では、ＴＩＭＰ－ＰＰＥ製剤中のスクロース濃度は、１～１００％、２０～５０％、又は３０～４０％であり、これらの範囲の間にある全ての範囲及び値を含む。様々な実施形態では、ＴＩＭＰ－ＰＰＥ製剤中のスクロース濃度は、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３５．６％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、又は約４０％である。

【0089】

様々な実施形態では、ＴＩＭＰ－ＰＰＥ製剤中のマンニトール濃度は、１～１００％、１５～３５％、又は２０～３０％であり、これらの範囲の間にある全ての範囲及び値を含む。様々な実施形態では、ＴＩＭＰ－ＰＰＥ製剤中のスクロース濃度は、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２５％、約２６％、約２６．７％、約２７％、約２８％、約２９％、又は約３０％である。

【0090】

様々な実施形態では、クエン酸ナトリウム濃度は、０．０１～２５％又は０．５～３．５％であり、これらの範囲の間にある全ての範囲及び値を含む。様々な実施形態では、クエン酸ナトリウム濃度は、約０．５％、約１％、約１．５％、約２％、約２．１％、約２．５％、約３％、又は約３．５％である。

【0091】

様々な実施形態では、ＴＩＭＰ－ＰＰＥ製剤中の精製ピーナッツタンパク質は、ＰＬＧＡ１ミリグラム（ｍｇ）当たり０．３μｇ～３０μｇ（マイクログラム）のピーナッツタンパク質、又はＰＬＧＡ１ｍｇ当たり１μｇ～１０μｇのピーナッツタンパク質であり、これらの範囲の間にある全ての範囲及び値を含む。様々な実施形態では、ＴＩＭＰ－ＰＰＥ製剤中の精製ピーナッツタンパク質は、ＰＬＧＡ１ｍｇ当たり約１μｇ、約２μｇ、約３μｇ、約４μｇ、約５μｇ、約６μｇ、約７μｇ、約８μｇ、約９μｇ、又は約１０μｇのピーナッツタンパク質である。

【0092】

使用方法
本明細書では、対象におけるピーナッツアレルギーを治療する方法であって、対象にＴＩＭＰ－ＰＰＥを投与することを含み、ＴＩＭＰ－ＰＰＥが、０．００１～１２ｍｇ／ｋｇ又は０．１～１２ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、方法が提供される。また、本明細書では、ピーナッツアレルギーに罹患している対象におけるピーナッツ抗原に対するアレルギー性免疫応答を低減する方法であって、対象にＴＩＭＰ－ＰＰＥを投与することを含み、ＴＩＭＰ－ＰＰＥが、０．００１～１２ｍｇ／ｋｇ又は０．１～１２ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、方法が提供される。

【0093】

ＴＩＭＰ－ＰＰＥは、約０．００１～１０ｍｇ／ｋｇ、約０．００５～１２ｍｇ／ｋｇ、約０．０１～１２ｍｇ／ｋｇ、約０．０５～１２ｍｇ／ｋｇ、約０．１～１２ｍｇ／ｋｇ、約０．５～１０ｍｇ／ｋｇ、約１～８ｍｇ／ｋｇ、約１．５～１０ｍｇ／ｋｇ、約２～１２ｍｇ／ｋｇ、約２～１０ｍｇ／ｋｇ、約３～１０ｍｇ／ｋｇ、約４～１０ｍｇ／ｋｇ、約４～１２ｍｇ／ｋｇ、又は約５～１２ｍｇ／ｋｇの用量で投与されることも企図される。任意に、ＴＩＭＰ－ＰＰＥは、約０．００１ｍｇ／ｋｇ、０．００２５ｍｇ／ｋｇ、０．００５ｍｇ／ｋｇ、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０２５ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．２５、０．５ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、８．０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、又は１２ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。あるいは、ＴＩＭＰ－ＰＰＥは、約０．１ｍｇ、０．２５ｍｇ、０．５ｍｇ、１ｍｇ、２ｍｇ、２．５ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１２５ｍｇ、１５０ｍｇ、１７５ｍｇ、２００ｍｇ、２２５ｍｇ、２５０ｍｇ、２７５ｍｇ、３００ｍｇ、３２５ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４２５ｍｇ、４５０ｍｇ、４７５ｍｇ、５００ｍｇ、５２５ｍｇ、５５０ｍｇ、５７５ｍｇ、６００ｍｇ、６２５ｍｇ、６５０ｍｇ、６７５ｍｇ、７００ｍｇ、７２５ｍｇ、７５０ｍｇ、７７５ｍｇ、又は８００ｍｇの用量で投与される。別の実施形態では、ＴＩＭＰ－ＰＰＥは、約０．０００５ｍｇ／ｍＬ～約５０ｍｇ／ｍＬ又は約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約５０ｍｇ／ｍＬ、任意に、約０．０００５ｍｇ／ｍＬ、０．００１ｍｇ／ｍＬ、０．００５ｍｇ／ｍＬ、０．０１ｍｇ／ｍＬ、０．０５ｍｇ／ｍＬ、０．１ｍｇ／ｍＬ、０．５ｍｇ／ｍＬ、１ｍｇ／ｍＬ、２ｍｇ／ｍＬ、３ｍｇ／ｍＬ、４ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ、６ｍｇ／ｍＬ、７ｍｇ／ｍＬ、８ｍｇ／ｍＬ、９ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、１１ｍｇ／ｍＬ、１２．５ｍｇ／ｍＬ、１５ｍｇ／ｍＬ、１７．５ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ、２５ｍｇ／ｍＬ、３０ｍｇ／ｍＬ、４０ｍｇ／ｍＬ、又は５０ｍｇ／ｍＬの濃度で投与される。

【0094】

ＴＩＭＰ－ＰＰＥは、単回用量又は複数回用量で投与されることが企図される。様々な実施形態では、ＴＩＭＰ－ＰＰＥは、１週間に１回、２週間毎に１回、３週間毎に１回、４週間毎に１回、２ヶ月毎に１回、３ヶ月毎に１回、６ヶ月毎に１回、又は１年当たり１回投与される。特定の実施形態では、ＴＩＭＰ－ＰＰＥは、１週間間隔の２回用量で投与される。

【0095】

様々な実施形態では、ＴＩＭＰ－ＰＰＥは、静脈内、皮下、筋肉内、腹腔内、鼻腔内、又は経口投与される。ＴＩＭＰ－ＰＰＥが静脈内に与えられる場合、約１、２、３、４、５、６、７、８、１０、１２、１８、又は２０時間持続する静脈内注入を介し得ることが企図される。

【0096】

ＴＩＭＰ－ＰＰＥは、単独で又は１つ以上の追加の治療剤と組み合わせて投与されることが更に企図される。例示的な追加の治療剤としては、これらに限定されないが、ＩｇＥの阻害剤、好塩基球活性化の阻害剤、マスト細胞活性化の阻害剤、抗ヒスタミン、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、又は小分子若しくは生物学的治療剤が挙げられる。

【0097】

ＴＩＭＰ－ＰＰＥを、単独で又は１つ以上の追加の治療剤と組み合わせて、それを必要とする対象に投与することは、ピーナッツアレルギーの１つ以上の症状を緩和することが提供される。ピーナッツアレルギーの症状は、皮膚反応、蕁麻疹、皮膚発赤、皮膚腫脹、かゆみ、喉の絞扼感、呼吸困難、息切れ、及びアナフィラキシーを含む。

【0098】

ＴＩＭＰ－ＰＰＥを、単独で又は１つ以上の追加の治療剤と組み合わせて、それを必要とする対象に投与することは、ピーナッツタンパク質に対する、又はピーナッツタンパク質への曝露後の、アレルギー性免疫応答の持続時間及び重症度を低減することも企図される。本明細書において企図されるアレルギー性免疫応答は、Ｔｈ２ Ｔ細胞応答、Ｂ細胞活性化、好塩基球活性化、好酸球活性化、マスト細胞活性化、及び／又はＩｇＥ誘発を含む。

【0099】

キット
追加の態様としては、本開示は、本開示の方法を実施するためのそれらの使用を促進する方法でパッケージされた１つ以上の化合物又は組成物を含むキットを含む。一実施形態では、そのようなキットは、本明細書に記載される化合物又は組成物（例えば、ＴＩＭＰを単独で、又は第２の薬剤と組み合わせて含む組成物）を含み、密封されたボトル又はベッセルなどの容器にパッケージされ、方法の実施における化合物又は組成物の使用を説明する、容器に貼付されるか又はパッケージに含まれるラベルを有する。好ましくは、化合物又は組成物は、単位剤形でパッケージされる。キットは、特定の投与経路に従って組成物を投与するため、又はスクリーニングアッセイを実施するため、好適なデバイスを更に含み得る。好ましくは、キットは、阻害剤組成物の使用を説明するラベルを含む。

【0100】

更なる実施形態では、本開示は、（ａ）本明細書に記載のＴＩＭＰ－ＰＰＥを含む組成物と、（ｂ）当該組成物を含む容器と、（ｃ）本明細書に記載のピーナッツアレルギーの治療における当該ＴＩＭＰ－ＰＰＥの使用に関する、当該容器に貼付されたラベル、又は当該容器に含まれる添付文書と、を含む、製造品、又は単位用量形態を提供する。

【0101】

本開示の追加の態様及び詳細は、限定的ではなく例示的であることが意図される、以下の例から明らかであろう。

【実施例】

【0102】

実施例１．ピーナッツタンパク質を封入する寛容化ナノ粒子（ＴＩＭＰ－ＰＰＥ）の製造のための精製ピーナッツ抽出物を調製するためのプロセス
ＰＰＥ製造の１つのプロセスは、市販ベンダーから調達することができる生のピーナッツ（Ａｒａｃｈｉｓ ｈｙｐｏｇａｅａ）を利用する。簡潔に述べると、このプロセスは、生のピーナッツを細かいペーストに摩砕することから始まる。次に、摩砕したピーナッツをアセトン抽出によって脱脂処理する。脱脂したピーナッツ材料を１～５日間空気乾燥させ、次いで１２～２４時間加熱乾燥させる。乾燥した材料を、２．０ｍｍ以下のメッシュを有するふるいにそれを通すことによって粉末化する。次に、タンパク質を、粉末状のピーナッツ原料から重炭酸アンモニウムで抽出し、遠心分離によって分離し、１μｍの濾過によって清澄化する。最終溶液を、中空繊維カートリッジを使用して濃縮／透析し、再遠心分離し、清澄化する。

【0103】

ＴＩＭＰ－ＰＰＥの製造に使用する前に、ピーナッツタンパク質抽出物を特徴付けて、ＳＤＳ－ＰＡＧＥによる抗原性ピーナッツタンパク質（例えば、Ａｒａ ｈ １、Ａｒａ ｈ ２、Ａｒａ ｈ ３、Ａｒａ ｈ ４、Ａｒａ ｈ ５、Ａｒａ ｈ６、Ａｒａ ｈ ７、Ａｒａ ｈ ８、Ａｒａ ｈ ９、Ａｒａ ｈ １０、Ａｒａ ｈ １１、Ａｒａ ｈ １２、Ａｒａ ｈ １３、Ａｒａ ｈ １４、Ａｒａ ｈ１５、Ａｒａ ｈ １６、Ａｒａ ｈ １７、及びＡｒａ ｈ １８）の存在及びＣＢＱＣＡによる総タンパク質含有量を確認した。ＳＤＳ－ＰＡＧＥアッセイの結果を図１に示す。ピーナッツタンパク質抽出物中のタンパク質含有量は、０．７３ｍｇ／ｍＬであると決定した。

【0104】

実施例２．ピーナッツタンパク質（ＴＩＭＰ－ＰＰＥ）を封入する寛容化ナノ粒子を製造するためのプロセス
ＴＩＭＰ－ＰＰＥ（ＣＮＰ－２０１）を、二重エマルジョン溶媒蒸発プロセスを使用して製造した。高レベルの製造プロセスフロー図を図２に示す。簡潔に述べると、１Ｍの酢酸（１０ｍｇ／ｍＬ）に溶解した精製ピーナッツ抽出物を、酢酸エチル中の５％ＰＬＧＡ溶液（５０：５０；１０，０００～６０，０００Ｄａの分子量）と急速に混合して、一次油中水型エマルジョンを生成した。次いで、一次エマルジョンを、酢酸エチル中に溶解した４％ＰＶＡ及びＰＡＡ（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、１００ＫＤａ、３５重量％）を含有する界面活性剤及び安定剤溶液と急速に混合して、水中油型二次エマルジョンを形成した。ＰＶＡ／ＰＡＡ／酢酸エチルのブレンドの組成は、４．０未満のｐＨで維持する。一次及び二次エマルジョンの混合は、均質化によって行った。

【0105】

溶媒を二次エマルジョンから、合計で少なくとも３～４時間、加圧下で蒸発させることによって除去した。次いで、硬化したナノ粒子を滅菌水で洗浄し、２０μｍのフィルターを使用して濾過によって濃縮した。凍結保護剤のスクロース及びマンニトール、並びに緩衝剤のクエン酸ナトリウム二水和物を、硬化したナノ粒子に添加した。次いで、製剤を凍結乾燥した。

【0106】

最終的なＣＮＰ－２０１製剤を特徴付けて、粒子直径、ゼータ電位、総タンパク質含有量、Ａｒａ ｈタンパク質の存在、バースト放出、及び粒子の表面上のタンパク質の存在などの理化学的特性を決定した。８０ｇバッチサイズ又は１６０ｇバッチサイズで製造されたＣＮＰ－２０１特性評価の結果を表１及び表２に提供する。ＣＮＰ－２０１粒子を、走査型電子顕微鏡によって検査し、８０ｇバッチサイズ（図３）及び１６０ｇバッチサイズ（図４）で製造された、滑らかな表面を有する無傷の粒子の均質な組成物を示す。

【表1】

【表2】

【0107】

実施例３．表面にタンパク質が存在するＴＩＭＰ－ＰＰＥ粒子（ＣＮＰ－２０１）の頻度を決定する
ＣＮＰ－２０１の１つのバイアルを水中で再構成して、安定した懸濁液を形成した。同様に、他のタンパク質又はペプチドを含まない対照粒子の１つのバイアル（陰性対照）及び既知の高い表面タンパク質レベルを有する対照粒子の１つのバイアル（陽性対照）を水中で再構成した。粒子が懸濁液中に均一に分散することを確実にするために、粒子を混合した。

【0108】

ＣＮＰ－２０１、陽性対照、及び陰性対照粒子を、一次ポリクローナル抗ピーナッツタンパク質抗体を含有する染色緩衝液（ＰＢＳ中のウシ血清アルブミン）とともにインキュベートした。別個の粒子セットを、実験のための内部陰性対照として機能する染色緩衝液単独でインキュベートした。染色された粒子を、遠心分離によって染色緩衝液中で３回洗浄し、フルオロフォア抱合された二次抗体を含有する染色緩衝液でインキュベートした。次いで、粒子を染色緩衝液中で３回洗浄した。

【0109】

染色された粒子をフローサイトメーターで取得し、ピーナッツタンパク質に対して陽性に染色したＣＮＰ－２０１粒子の頻度を、陰性及び陽性対照試料と比較した。結果は、陰性対照と比較した場合の表面タンパク質に対する陽性の粒子の割合として表した（表１及び表２）。

【0110】

実施例４．ＴＩＭＰ－ＰＰＥの薬学的組成物
ＴＩＭＰ－ＰＰＥの例示的な医薬製剤又は組成物は、表３に列挙される個々の成分を含む。

【表3】

【0111】

本明細書に記載の本開示の全ての実施形態は、任意に、本明細書に記載の他の実施形態のうちのいずれか１つ以上と組み合わせられ得ることが理解される。本明細書で引用される全ての特許文献及び全ての非特許文献は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。

【0112】

したがって、本発明は、開示された特定の実施形態に限定されず、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の趣旨及び範囲、上記の説明内にあり、及び／又は添付の図面に示されている全ての変更を網羅することが意図されていることを理解されたい。結果として、添付の特許請求の範囲において現れるような限定のみが、本開示に課されるべきである。

【0113】

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６．Ｖｉｃｋｅｒｙ ＢＰ，Ｖｅｒｅｄａ Ａ，Ｃａｓａｌｅ ＴＢ，ｅｔ ａｌ．ＡＲ１０１ Ｏｒａｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ Ｐｅａｎｕｔ Ａｌｌｅｒｇｙ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ．２０１８；３７９（２１）：１９９１－２００１．

【0119】

７．Ｄｕｎｌｏｐ ＪＨ．Ｏｒａｌ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｐｅａｎｕｔ ａｌｌｅｒｇｙ．Ｊ Ｉｎｖｅｓｔｉｇ Ｍｅｄ．２０２０；６８（６）：１１５２－１１５５．

【0120】

８．Ｇｅｔｔｓ ＤＲ，Ｍａｒｔｉｎ ＡＪ，ＭｃＣａｒｔｈｙ ＤＰ，ｅｔ ａｌ．Ｍｉｃｒｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｂｅａｒｉｎｇ ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｏｇｅｎｉｃ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｉｎｄｕｃｅ Ｔ－ｃｅｌｌ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ａｎｄ ａｍｅｌｉｏｒａｔｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ．Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．２０１２；３０（１２）：１２１７－１２２４．

【0121】

９．Ｈｕｎｔｅｒ Ｚ，ＭｃＣａｒｔｈｙ ＤＰ，Ｙａｐ ＷＴ，ｅｔ ａｌ．Ａ ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ ｐｌａｔｆｏｒｍ ｆｏｒ ｔｈｅ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｔｉｇｅｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｉｍｍｕｎｅ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｆｏｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｄｉｓｅａｓｅ．ＡＣＳ Ｎａｎｏ．２０１４；８（３）：２１４８－２１６０．

【0122】

１０．Ｋｅｌｌｙ ＣＰ，Ｍｕｒｒａｙ ＪＡ，Ｌｅｆｆｌｅｒ ＤＡ，ｅｔ ａｌ．ＴＡＫ－１０１ Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ Ｉｎｄｕｃｅ Ｇｌｕｔｅｎ－Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｉｎ Ｃｅｌｉａｃ Ｄｉｓｅａｓｅ：Ａ Ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ，Ｄｏｕｂｌｅ－Ｂｌｉｎｄ，Ｐｌａｃｅｂｏ－Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｓｔｕｄｙ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ．２０２１；１６１（１）：６６－８０．ｅ６８．

【0123】

１１．Ｐｒａｓａｄ Ｓ，Ｎｅｅｆ Ｔ，Ｘｕ Ｄ，ｅｔ ａｌ．Ｔｏｌｅｒｏｇｅｎｉｃ Ａｇ－ＰＬＧ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｉｎｄｕｃｅ ｔｒｅｇｓ ｔｏ ｓｕｐｐｒｅｓｓ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｄｉａｂｅｔｏｇｅｎｉｃ ＣＤ４ ａｎｄ ＣＤ８ Ｔ ｃｅｌｌｓ．Ｊ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ．２０１８；８９：１１２－１２４．

【0124】

１２．Ｓｍａｒｒ ＣＢ，Ｙａｐ ＷＴ，Ｎｅｅｆ ＴＰ，ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ ａｎｔｉｇｅｎ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ＰＬＧ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｔｏｌｅｒｉｚｅ Ｔｈ２－ｍｅｄｉａｔｅｄ ａｌｌｅｒｇｉｃ ａｉｒｗａｙ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ｐｒｅ－ａｎｄ ｐｏｓｔｓｅｎｓｉｔｉｚａｔｉｏｎ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．２０１６；１１３（１８）：５０５９－５０６４．

【0125】

１３．Ｋｅｅｔ ＣＡ，Ｊｏｈｎｓｏｎ Ｋ，Ｓａｖａｇｅ ＪＨ，Ｈａｍｉｌｔｏｎ ＲＧ，Ｗｏｏｄ ＲＡ．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｒａ ｈ２ ＩｇＥ ｔｈｒｅｓｈｏｌｄｓ ｉｎ ｔｈｅ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｐｅａｎｕｔ ａｌｌｅｒｇｙ ｉｎ ａ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ．Ｊ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｐｒａｃｔ．２０１３；１（１）：１０１－１０３．

【0126】

１４．Ｏｚｉａｓ－Ａｋｉｎｓ Ｐ，Ｂｒｅｉｔｅｎｅｄｅｒ Ｈ．Ｔｈｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｐｅａｎｕｔ ａｌｌｅｒｇｅｎｓ ａｎｄ ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｌｉｎｋｓ ｔｏ ｔｈｅｉｒ ａｌｌｅｒｇｅｎｉｃｉｔｙ．Ａｌｌｅｒｇｙ．２０１９；７４（５）：８８８－８９８

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【配列表】

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【国際調査報告】