特表 2024-543370 ウイルスアダプター及びその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-11-21

(54)【発明の名称】ウイルスアダプター及びその使用

(51)【国際特許分類】

   C07K 14/705 20060101AFI20241114BHJP

   C07K 14/52 20060101ALI20241114BHJP

   C07K 14/015 20060101ALI20241114BHJP

   C12N 15/864 20060101ALI20241114BHJP

   A61K 35/76 20150101ALI20241114BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20241114BHJP

   C12N 7/01 20060101ALN20241114BHJP

   C12N 1/15 20060101ALN20241114BHJP

   C12N 1/21 20060101ALN20241114BHJP

   C12N 1/19 20060101ALN20241114BHJP

   C12N 5/04 20060101ALN20241114BHJP

   C12N 5/10 20060101ALN20241114BHJP

   C12N 15/09 20060101ALN20241114BHJP

【ＦＩ】

C07K14/705 ZNA

C07K14/52

C07K14/015

C12N15/864 100Z

A61K35/76

A61K48/00

C12N7/01

C12N1/15

C12N1/21

C12N1/19

C12N5/04

C12N5/10

C12N15/09 Z

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024527318

(86)(22)【出願日】2022-11-07

(85)【翻訳文提出日】2024-07-02

(86)【国際出願番号】 EP2022080988

(87)【国際公開番号】W WO2023083750

(87)【国際公開日】2023-05-19

(31)【優先権主張番号】2116101.3

(32)【優先日】2021-11-09

(33)【優先権主張国・地域又は機関】GB

(31)【優先権主張番号】2116104.7

(32)【優先日】2021-11-09

(33)【優先権主張国・地域又は機関】GB

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】519041013

【氏名又は名称】ザ フランシス クリック インスティテュート リミテッド

【氏名又は名称原語表記】Ｔｈｅ Ｆｒａｎｃｉｓ Ｃｒｉｃｋ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｌｉｍｉｔｅｄ

【住所又は居所原語表記】１ Ｍｉｄｌａｎｄ Ｒｏａｄ Ｌｏｎｄｏｎ Ｇｒｅａｔｅｒ Ｌｏｎｄｏｎ ＮＷ１ １ＡＴ Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ

(74)【代理人】

【識別番号】110000796

【氏名又は名称】弁理士法人三枝国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】ロドリケス サミュエル ゴードン

(72)【発明者】

【氏名】チェルベッティーニ ダニエレ

(72)【発明者】

【氏名】スダルシャン ブーヴァナ

【テーマコード（参考）】

4B065

4C084

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA01X

4B065AA57X

4B065AA72X

4B065AA89X

4B065AA90X

4B065AA90Y

4B065AA95X

4B065AA95Y

4B065AB01

4B065BA02

4B065CA43

4B065CA44

4C084AA13

4C084NA13

4C084ZC80

4C087AA01

4C087BC83

4C087CA12

4C087NA13

4C087ZC80

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA09

4H045BA10

4H045CA01

4H045CA40

4H045DA01

4H045DA50

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

本発明は、ウイルスの結合プロファイルを変化させ、及び／又はウイルスの細胞指向性を改変することが可能なウイルスアダプタータンパク質に関する。一態様において、本発明は、ウイルスの結合プロファイルを変化させ、及び／又はウイルスの細胞指向性を改変することが可能なウイルス用の共有結合アダプタータンパク質に関する。本発明は、ウイルスの結合プロファイル及び細胞指向性を改変するための、また薬剤として使用される形質導入ベクターとしての特許請求されたウイルスアダプタータンパク質の使用にも関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上のシステイン残基を含む単離ポリペプチド。

【請求項2】

（ｉ）ウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上のシステイン残基を含む単離ポリペプチドと、（ｉｉ）リガンドとを含むウイルスアダプター分子。

【請求項3】

前記ウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上のシステイン残基が前記単離ポリペプチドに対して異種である、請求項１に記載の単離ポリペプチド。

【請求項4】

（ｉ）ウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上のシステイン残基を含む単離ポリペプチドと、（ｉｉ）リガンドとを含み、前記１つ以上のシステイン残基が前記単離ポリペプチドに対して異種である、請求項２に記載のウイルスアダプター分子。

【請求項5】

非修飾野生型ウイルスカプシドに結合することが可能である、請求項１～４のいずれか一項に記載の単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子。

【請求項6】

野生型ウイルスカプシドと比較して５つ以下の（例えば５つ、４つ、３つ、２つ又は１つの）アミノ酸点突然変異を有するウイルスカプシドに結合することが可能である、請求項１～５のいずれか一項に記載の単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子。

【請求項7】

野生型ウイルスカプシドに対して５アミノ酸以下の（すなわち１アミノ酸、２アミノ酸、３アミノ酸、４アミノ酸又は５アミノ酸の）アミノ酸挿入又はアミノ酸欠失を有するウイルスカプシドに結合することが可能である、請求項１～６のいずれか一項に記載の単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子。

【請求項8】

野生型ウイルスカプシドに対して挿入又は欠失を有しないウイルスカプシドに結合することが可能である、請求項１～６のいずれか一項に記載の単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子。

【請求項9】

１つ以上のシステイン残基を有し、アデノ随伴ウイルスカプシドに共有結合することが可能なアデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）の一部を含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子。

【請求項10】

前記単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子がコクサッキーウイルス－アデノウイルス受容体（ＣＸＡＤＲ）の一部を含み、任意にＣＸＡＤＲ配列が配列番号２０である、請求項１～８のいずれか一項に記載の単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子。

【請求項11】

中和抗体Ａ２０の抗原結合部分を含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子。

【請求項12】

前記リガンドが細胞表面分子に結合することが可能である、請求項１～１１のいずれか一項に記載の単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子。

【請求項13】

前記リガンドがＨｅｒ２、インターロイキン－１受容体、インターロイキン－２受容体、インターロイキン－３受容体、インターロイキン－４受容体、インターロイキン－５受容体、インターロイキン－６受容体、インターロイキン－７受容体、インターロイキン－８受容体、インターロイキン－９受容体、インターロイキン－１０受容体、インターロイキン－１１受容体、インターロイキン－１２受容体、インターロイキン－１３受容体、インターロイキン－１５受容体、インターロイキン－１８受容体、インターロイキン－２０受容体、インターロイキン－２１受容体、インターロイキン－２２受容体、インターロイキン－２３受容体、インターロイキン－２７受容体、インターロイキン－２８受容体、インスリン受容体、トランスフェリン受容体、ＣＤ５８、ＣＤ２、ＣＤ２、ＣＤ５９、ＣＤ４０、ＣＤ７２、ＣＤ５、ＣＤ３６、ＣＤ１９、ＣＤ２１、ＣＤ８１、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ－４、ＣＤ８５ｊ、ＣＤ９５、ＣＤ９６、α４β１インテグリン、ＣＤ１１５、ＣＤ６、ＣＤ１７８、ＬＦＡ－１、ＴＮＦＲＳＦ４、ＤＲ４、ＤＲ５、ＲＡＮＫ／ＣＤ２６５、ＴＡＣＩ／ＣＤ２６７、ＣＤ２６７、ＣＤ２６８、ＣＤ２６９、ＨＶＥＭ、ＰＤ１／ＣＤ２７９、Ｂ７－１／ＣＤ８０、ＣＤ２７８、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＮＭＤＡＲ、ＡＭＰＡＲ、ｍＧｌｕＲ５、ＤＲＤ１、ＤＲＤ２、Ｂｍｐ４、ＧＬＰ１Ｒ、レプチン受容体、α５β５インテグリン及びｇｌｙｃｏＲＮＡからなるリストから選択される１つ以上の細胞表面分子と結合する、請求項１～１２のいずれか一項に記載の単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子。

【請求項14】

前記アデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）の一部がＰＫＤ１ドメインの少なくとも一部、ＰＫＤ２ドメインの少なくとも一部、ＰＫＤ３ドメインの少なくとも一部、ＰＫＤ４ドメインの少なくとも一部、ＰＫＤ５ドメインの少なくとも一部又はそれらの任意の組合せを含む、請求項９～１３のいずれか一項に記載の単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子。

【請求項15】

請求項１～１４のいずれか一項に記載の少なくとも１つの単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子に共有結合したウイルス粒子。

【請求項16】

前記ウイルスがアデノ随伴ウイルスであり、任意に該アデノ随伴ウイルスがＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶｒｈ．８、ＡＡＶｒｈ．１０、ＡＡＶｒｈ．７４からなるリストから選択される、請求項１５に記載のウイルス粒子。

【請求項17】

前記アデノ随伴ウイルス粒子がヘパラン硫酸プロテオグリカン（ＨＳＰＧ）、Ｏ－結合型シアル酸、Ｎ－結合型シアル酸、Ｎ－結合型ガラクトース等の非タンパク質結合剤との相互作用を媒介するカプシドタンパク質における１つ以上のアミノ酸変化を含む、請求項１５又は１６に記載のウイルス粒子。

【請求項18】

請求項１５～１７のいずれか一項に記載のウイルス粒子を含む医薬組成物。

【請求項19】

ウイルス粒子を共有結合修飾する方法であって、
ウイルス粒子を準備することと、
前記ウイルス粒子のウイルスカプシドに共有結合することが可能な単離ポリペプチドを準備することと、
前記ウイルス粒子と前記単離ポリペプチドとを、該単離ポリペプチドが該ウイルス粒子に共有結合するように組み合わせることと、
を含む、方法。

【請求項20】

ウイルス粒子を共有結合修飾する方法であって、
ウイルス粒子を準備することと、
前記ウイルス粒子のウイルスカプシドに共有結合することが可能な単離ポリペプチドとリガンドとを含むウイルスアダプター分子を準備することと、
前記ウイルス粒子と前記ウイルスアダプター分子とを、単離融合ポリペプチドが該ウイルス粒子に共有結合するように組み合わせることと、
を含む、方法。

【請求項21】

前記単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子に１つ以上の異種システイン残基、例えば１つ、２つ又は３つの異種システイン残基を導入することを更に含む、請求項１９又は２０に記載のウイルス粒子を共有結合修飾する方法。

【請求項22】

前記単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子と前記ウイルス粒子との共有結合が、１つ以上のウイルスカプシドタンパク質の天然指向性を減少又は消失させる、請求項１９～２１のいずれか一項に記載のウイルス粒子を共有結合修飾する方法。

【請求項23】

前記単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子と前記ウイルス粒子との共有結合が、１つ以上の細胞型に対する前記ウイルス粒子の指向性を増大させる、請求項１９～２１のいずれか一項に記載のウイルス粒子を共有結合修飾する方法。

【請求項24】

薬剤として使用される、請求項１５～１７のいずれか一項に記載のウイルス粒子又は請求項１８に記載の医薬組成物。

【請求項25】

標的細胞とウイルス粒子とを接触させることにより、目的の核酸配列を標的細胞に送達することを含む、治療を必要とする対象において疾患を治療する方法に使用される、請求項１５～１７のいずれか一項に記載のウイルス粒子又は請求項１８に記載の医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ウイルスの結合プロファイルを変化させ、及び／又はウイルスの細胞指向性を改変することが可能なウイルスアダプタータンパク質に関する。一態様において、本発明は、ウイルスの結合プロファイルを変化させ、及び／又はウイルスの細胞指向性を改変することが可能なウイルス用の共有結合アダプタータンパク質に関する。本発明は、ウイルスの結合プロファイル及び細胞指向性を改変するための、また薬剤として使用される形質導入ベクターとしての特許請求されたウイルスアダプタータンパク質の使用にも関する。一態様において、本発明は、ＡＡＶの結合プロファイルを変化させ、及び／又はＡＡＶの細胞指向性を改変することが可能なアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）用のアダプターに関する。本発明は、ＡＡＶの結合プロファイル及び細胞指向性を改変するための、また薬剤として使用される形質導入ベクターとしての特許請求されたＡＡＶアダプターの使用にも関する。

【背景技術】

【0002】

アデノ随伴ウイルス
ウイルスのアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）は、パルボウイルス科に属する。これらは、１８ｎｍ～３０ｎｍの直径を有し、約５ｋｂの直鎖状一本鎖ＤＮＡを含む正二十面体の無エンベロープカプシドによって区別される。ＡＡＶの効率的な複製には、ヘルパーウイルス、例えばアデノウイルス、ヘルペスウイルス又はワクシニアウイルスによる宿主細胞の同時感染が必要とされる。代替的には、ＡＡＶの複製を補助するのに必要とされるヘルパーウイルスに由来するウイルスタンパク質を、ヘルパープラスミドの一部として分離した状態で補充することで、ｉｎ ｖｉｔｒｏにてヘルパーウイルスの非存在下で複製を促すことができる。この作製方法は最も一般的であり、ヘルパーフリーＡＡＶ作製と称される。ヘルパーウイルスの非存在下で、ＡＡＶは潜伏状態に入り、ウイルスゲノムは、宿主細胞ゲノムに安定して組み込まれることが可能であるが、これはめったに起こらない。ＡＡＶは、広範な分裂細胞及び非分裂細胞に感染することができ、ウイルスゲノムを感染細胞内でエピソームとして存続させるか、又は宿主ゲノム内に組み込むことができるため、哺乳動物細胞用の形質導入ベクターとして特に興味が持たれている。

【0003】

一般に、ベクターの機能には約１４５ｂｐの長さの２つの逆方向末端反復（ＩＴＲ）で十分である。これらは複製、パッケージング、及び宿主細胞ゲノムへの組込みに必要とされる「シス」シグナルを運ぶ。組換えベクター粒子へのパッケージングのためには、非構造タンパク質（Ｒｅｐタンパク質）及び構造タンパク質（Ｃａｐタンパク質）の遺伝子を有するベクタープラスミドを、パッケージングに適した細胞、例えばＨｅＬａ細胞又はＨＥＫ２９３細胞にトランスフェクトし、続いて細胞に、例えばアデノウイルスを感染させるか、又はヘルパープラスミドをコトランスフェクトする。

【0004】

ＡＡＶカプシドは、３つの異なるタンパク質：ＶＰ１、ＶＰ２及びＶＰ３からなり、それらの相対的比率は、それぞれおよそ１：１：１０であり、これは８．３％のＶＰ１、８．３％のＶＰ２及び８３．３％のＶＰ３に相当する。ＡＡＶカプシド遺伝子は、ＡＡＶゲノムの末端に位置し、異なる開始コドンを用いる同じオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）によってコードされている。ＶＰ１遺伝子は、ＶＰ２遺伝子配列全体を含み、ＶＰ２遺伝子は、特定のＮ末端領域を有するＶＰ３遺伝子配列全体を含む。１つのリーディングフレームが３つ全てのＡＡＶカプシドタンパク質をコードするということが、異なる程度ではあるが全てのカプシドタンパク質の同時発現が必須であることの原因である。

【0005】

カプシドタンパク質の分子質量は、ＶＰ１が８７ｋＤａ、ＶＰ２が７３ｋＤａ、ＶＰ３が６２ｋＤａである。カプシド遺伝子の配列は、例えば非特許文献１、非特許文献２、非特許文献３又は非特許文献４（その全体が引用することにより本明細書の一部をなす）に記載されている。ＡＡＶゲノムの物理的地図及び遺伝学的地図は、例えば非特許文献５（その全体が引用することにより本明細書の一部をなす）に記載されている。例示的なＡＡＶカプシド配列が、本明細書において図７～図１９及び配列番号７～配列番号１９にも提示される。

【0006】

また、様々なＡＡＶ血清型が知られており、中でもヒトＡＡＶ血清型２（ＡＡＶ２）は、体細胞遺伝子療法に有利な特性を有するウイルスベクターである。その本質的な利点は、ヒトに対して病原性がないこと、ウイルスゲノムが感染細胞においてエピソームとして存続すること、又は細胞ゲノムへの安定した組込み、非分裂細胞に感染する能力、ビリオンの安定性により、高力価への精製が可能であること、免疫原性が低いこと、組換えＡＡＶベクター中にウイルス遺伝子及び遺伝子産物が実質的に存在しないことであり、これは遺伝子療法に使用する際の安全性の観点から有利である。現在、ＡＡＶベクターへの遺伝子のクローニングは、例えば特許文献１、非特許文献６又は非特許文献５（その全体が引用することにより本明細書の一部をなす）に記載されているように、当業者に一般的に知られている方法によって行われている。

【0007】

例えばＡＡＶ２は、一般に広い活性スペクトル（指向性）を有する。ヒト上皮性腫瘍細胞株等の上皮組織だけでなく、子宮頸癌若しくは卵巣癌、又は黒色腫等の原発腫瘍材料、及びヒトケラチノサイトにも非常に効率的に感染するが（７０％～８０％）、リンパ造血細胞等の造血細胞には、１０分の１～１００分の１（０．５％～５％）で感染する（非特許文献７、その全体が引用することにより本明細書の一部をなす）。

【0008】

この理由の１つは、細胞表面上でのＡＡＶとＡＡＶ受容体との相互作用が細胞へのＡＡＶの取込みに必要とされることであり得る。このため、例えば、推定上の一次ＡＡＶ２受容体は、１５０ｋＤａの細胞膜糖タンパク質（非特許文献８、その全体が引用することにより本明細書の一部をなす）又はヘパラン硫酸プロテオグリカン（非特許文献９、その全体が引用することにより本明細書の一部をなす）である。決定されている潜在的二次受容体は、α Ｖβ ５インテグリン（非特許文献１０、その全体が引用することにより本明細書の一部をなす）及びヒト線維芽細胞増殖因子受容体１（非特許文献１１、その全体が引用することにより本明細書の一部をなす）である。結合研究により、この受容体の表面密度が、ＡＡＶ２が非効率的に感染する細胞で減少していることが現在示されている。

【0009】

レトロウイルス及びアデノウイルスのカプシドタンパク質の遺伝子修飾により、特定の細胞でのみ発現する受容体の結合部位を導入することが可能であることが知られており、これによりベクターの受容体媒介標的化が可能となっている（例えば、非特許文献１２、非特許文献１３、非特許文献１４、非特許文献１５又は非特許文献１６（その全体が引用することにより本明細書の一部をなす）を参照されたい）。

【0010】

また、特許文献２にはＡＡＶカプシド融合タンパク質が言及されており、これは臨床的に関連する抗原の異種エピトープを含むと言われ、免疫応答を誘導すると言われ、カプシド形成を妨げないと言われている。非特許文献１７（その全体が引用することにより本明細書の一部をなす）は、以前にバキュロ系において発現されたＡＡＶ粒子のｉｎ ｖｉｔｒｏアセンブリに関するものであった。ｃａｐ遺伝子にも突然変異が加えられているが、これは指向性の変化ではなく、いずれの場合にも１つのＶＰタンパク質のみが発現されるプラスミド構築物をもたらすことを意図している。非特許文献１８（その全体が引用することにより本明細書の一部をなす）は、ＡＡＶ２の天然指向性を調査することを意図するものであった。この目的で、突然変異をＡＡＶ２ ＶＰタンパク質のＣ末端に導入し、このようにしてＲＧＤモチーフを変化させることが基本前提であった。

【0011】

ＡＡＶの間接的標的化は、非特許文献１９（その全体が引用することにより本明細書の一部をなす）に開示されている。この場合、ＡＡＶ２カプシド及び標的細胞の両方に対して指向される二重特異性抗体が使用された。非特許文献２０（その全体が引用することにより本明細書の一部をなす）には、ＶＰ１のＮ末端に直接挿入されたＶＰ２のＮ末端に融合したＣＤ３４分子に対する一本鎖抗体フラグメントが開示されている。しかしながら、この方法には２つの明らかな不利点がある。第一に、感染価が非常に低く、第二に、パッケージングの成功のために、融合タンパク質と未変異のカプシドタンパク質ＶＰ１、ＶＰ２及びＶＰ３との同時発現が必要であった。しかしながら、これによりキメラカプシドタンパク質と野生型カプシドタンパク質との混合物が生じ、その組成、ひいては活性は予測不可能であった。さらに、ＨｅＬａ細胞の野生型受容体を介したパッケージング効率及び感染性も野生型と比較して大幅に低下した。

【0012】

したがって、本発明の目的の１つは、既知のＡＡＶベクターよりも特異的かつ効率的な遺伝子導入が可能となるようにＡＡＶを修飾することである。

【0013】

驚くべきことに、ＡＡＶ結合タンパク質、例えばＡＡＶ受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）又はその一部を、融合タンパク質の一部としてＡＡＶに強固に結合するように修飾することができ、この融合パートナーを用いてＡＡＶの指向性を変化させ得ることが今回見出された。幾つかの態様において、結合タンパク質は、ウイルスに共有結合することができる。同様に、他のウイルス結合タンパク質を、融合タンパク質の一部としてウイルスカプシドに一貫して共有結合するように修飾することができ、この融合パートナーを用いてウイルスの指向性を変化させることができる。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0014】

【特許文献1】国際公開第９５／２３８６７号

【特許文献2】国際公開第９６／００５８７号

【非特許文献】

【0015】

【非特許文献1】Srivastava, A. et al. (1983), J. Virol., 45, 555-564

【非特許文献2】Muzyczka, N. (1992), Curr. Top. Micro. Immunol., 158, 97-129

【非特許文献3】Ruffing, N. et al. (1992), J. Virol., 66, 6922-6930

【非特許文献4】Rutledge, E. A. et al. (1998) J. Virol. 72, 309-319

【非特許文献5】Kotin, R. M. (1994), Human Gene Therapy, 5, 793-801

【非特許文献6】Chiorini J. A. et al. (1995), Human Gene Therapy, 6, 1531-1541

【非特許文献7】Mass et al. (1998) Human Gene Therapy, 9, 1049-1059

【非特許文献8】Mizukami, H. et al. (1996), Virology, 217, 124-130

【非特許文献9】Summerford, C. & Samulski, R. J. (1998), J. Virol., 72, 1438-1445

【非特許文献10】Summerford et al., (1999), Nature Medicine 5, 78-82

【非特許文献11】Qing et al., (1999) Nature Medicine 5, 71-77

【非特許文献12】Cosset, F. L. & Russell, S. J. (1996), Gene Ther., 3, 946-956

【非特許文献13】Douglas, J. T. et al. (1996), Nat. Biotechnol., 14, 1574-1578

【非特許文献14】Krasnykh, V. N. et al. (1996), J. Virol., 70, 6839-6846

【非特許文献15】Stevenson, S. C. et al. (1997), J. Virol., 71, 4782-4790

【非特許文献16】Wickman, T. J. et al. (1996), Nat. Biotechnol., 14, 1570-1573

【非特許文献17】Steinbach et al. (1997) Biol. Abstr. 104, Ref. 46570

【非特許文献18】Ruffing et al. (1994) J. Gen. Virol. 75, 3385-3392

【非特許文献19】Bartlett et al. (1999) Nat. Biotechnol. 17, 181-186

【非特許文献20】Yang et al. (1998) Hum. Gene Ther. 1, 1929-1937

【発明の概要】

【0016】

本概要は、詳細な説明で詳細に記載される概念を紹介する。これは、主張される主題の必須の特徴を特定するために使用されるべきではなく、主張される主題の範囲を限定するために使用されるべきでもない。

【0017】

本発明は、ウイルスカプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドを提供する。

【0018】

本発明は、ウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上のシステイン残基を含む単離ポリペプチドを提供する。

【0019】

本発明はまた、（ｉ）ウイルスカプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドと、（ｉｉ）リガンドとを含むウイルスアダプター分子を提供する。

【0020】

本発明はまた、（ｉ）ウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上のシステイン残基を含む単離ポリペプチドと、（ｉｉ）リガンドとを含むウイルスアダプター分子を提供する。

【0021】

幾つかの実施の形態において、ウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上のシステイン残基は、単離ポリペプチドに対して異種である。幾つかの実施の形態において、ウイルスアダプタータンパク質は、（ｉ）ウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上のシステイン残基を含む単離ポリペプチドと、（ｉｉ）リガンドとを含み、１つ以上のシステイン残基は、単離ポリペプチドに対して異種である。幾つかの実施の形態において、単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子は、非修飾野生型ウイルスカプシドに結合することが可能である。

【0022】

幾つかの実施の形態において、単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子は、野生型ウイルスカプシドと比較して５つ以下の（例えば５つ、４つ、３つ、２つ又は１つの）アミノ酸点突然変異を有するウイルスカプシドに結合することが可能である。幾つかの実施の形態において、単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子は、野生型ウイルスカプシドに対して５アミノ酸以下の（すなわち１アミノ酸、２アミノ酸、３アミノ酸、４アミノ酸又は５アミノ酸の）アミノ酸挿入又はアミノ酸欠失を有するウイルスカプシドに結合することが可能である。幾つかの実施の形態において、単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子は、野生型ウイルスカプシドに対して挿入又は欠失を有しないウイルスカプシドに結合することが可能である。

【0023】

幾つかの実施の形態において、単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子は、アデノ随伴ウイルスカプシドに結合することが可能なアデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）の一部を含む。幾つかの実施の形態において、単離ポリペプチド又はＡＡＶアダプター分子は、アデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）の完全長配列を含む。幾つかの実施の形態において、アデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）の配列は、配列番号１のアミノ酸配列を含む。幾つかの実施の形態において、単離ポリペプチド又はＡＡＶアダプター分子は、ＡＡＶＲポリペプチドにおける１つ以上の点突然変異を含み、任意に、１つ以上の点突然変異は、配列番号１を参照して定義される。

【0024】

幾つかの実施の形態において、単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子は、１つ以上のシステイン残基を有し、アデノ随伴ウイルスカプシドに共有結合することが可能なアデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）の一部を含む。幾つかの実施の形態において、単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子は、１つ以上のシステイン残基を有し、アデノ随伴ウイルスカプシドに共有結合することが可能なアデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）の完全長配列を含む。幾つかの実施の形態において、アデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）の配列は、配列番号１のアミノ酸配列を含む。幾つかの実施の形態において、単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子は、ＡＡＶＲポリペプチドにおける１つ以上の点突然変異を含み、任意に、１つ以上の点突然変異は、配列番号１を参照して定義される。

【0025】

幾つかの実施の形態において、単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子は、１つ以上の異種システイン残基を導入するためのＡＡＶＲポリペプチドにおける１つ以上の点突然変異を含み、任意に、１つ以上の点突然変異は、配列番号１を参照して定義される。

【0026】

幾つかの実施の形態において、単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子は、ＤＡＲＰｉｎ、ナノボディ、好適な抗体様タンパク質、リポカリンフォールドに由来するタンパク質、アフィボディ（affibody）（例えば、プロテインＡのＺドメインに由来するアフィボディ）、フィブロネクチンのドメイン、ＦｙｎのＳＨ３ドメイン、プロテアーゼ阻害剤ステフィンＡ（stefin A）に由来するアフィマー（affimer）又はスキャフォールド、非抗体スキャフォールドタンパク質（アディロン（Adhiron））、及び抗体又はその抗原結合フラグメントからなるリストから選択されるポリペプチドの一部を含む。幾つかの実施形態において、単離ポリペプチド又はＡＡＶアダプター分子は、抗体又はその抗原結合フラグメントを含む。

【0027】

幾つかの実施の形態において、単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子は、ＤＡＲＰｉｎ、ナノボディ、好適な抗体様タンパク質、リポカリンフォールドに由来するタンパク質、アフィボディ（例えば、プロテインＡのＺドメインに由来するアフィボディ）、フィブロネクチンのドメイン、ＦｙｎのＳＨ３ドメイン、プロテアーゼ阻害剤ステフィンＡに由来するアフィマー又はスキャフォールド、非抗体スキャフォールドタンパク質（アディロン）、及び抗体又はその抗原結合フラグメントからなるリストから選択されるポリペプチドを含む。幾つかの実施形態において、単離ポリペプチド又はＡＡＶアダプター分子は、抗体又はその抗原結合フラグメントを含む。

【0028】

幾つかの実施の形態において、単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子は、中和抗体Ａ２０の抗原結合部分を含む。幾つかの実施の形態において、単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子は、中和抗体Ａ２０の１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）と実質的に同一の配列を含み、例えば、中和抗体Ａ２０の１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）が１つ、２つ又は３つのアミノ酸点突然変異を含んでいてもよく、任意に、点突然変異の１つ以上が異種システイン残基である。幾つかの実施の形態において、単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子は、中和抗体Ａ２０の相補性決定領域（ＣＤＲ）の各々と実質的に同一の１つ以上の配列を含み、例えば、中和抗体Ａ２０の相補性決定領域（ＣＤＲ）の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つが１つ、２つ又は３つのアミノ酸点突然変異を含んでいてもよく、任意に、点突然変異の１つ以上が異種システイン残基である。

【0029】

幾つかの実施の形態において、単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子は、中和抗体Ａ２０の１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）の完全長配列を含み、例えば、ポリペプチドは、抗体Ａ２０のＶＨＣＤＲ１（配列番号２６）、抗体Ａ２０のＶＨＣＤＲ２（配列番号２７）、抗体Ａ２０のＶＨＣＤＲ３（配列番号２８）、抗体Ａ２０のＶＬＣＤＲ１（配列番号２２）、抗体Ａ２０のＶＬＣＤＲ２（配列番号２３）及び抗体Ａ２０のＶＬＣＤＲ３（配列番号２４）の１つ以上を含む。

【0030】

幾つかの実施の形態において、単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子は、中和抗体Ａ２０の相補性決定領域（ＣＤＲ）の全てを含む。幾つかの実施の形態において、単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子は、中和抗体Ａ２０の完全長ＶＨ鎖（配列番号２５）及びＶＬ鎖（配列番号２１）の配列と実質的に同一の１つ以上の配列を含み、例えば、中和抗体Ａ２０のＶＨ配列及び／又はＶＬ配列が１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個又は１０個のアミノ酸点突然変異を含んでいてもよく、任意に、点突然変異の１つ以上が異種システイン残基である。

【0031】

幾つかの実施の形態において、単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子は、中和抗体Ａ２０の完全長ＶＨ鎖（配列番号２５）及びＶＬ鎖（配列番号２１）の配列を含む。

【0032】

幾つかの実施の形態において、単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子は、
１つ以上の非天然アミノ酸、
ポリペプチドに架橋した１つ以上の化学的部分、
ビオチンタグ、例えばビオチン化ＡＡＶＲ、
ＳｐｙＴａｇペプチド、例えばＡＡＶＲ－ＳｐｙＴａｇ、及び／又は、
プロテインＡポリペプチド若しくはプロテインＧポリペプチド、
の１つ以上を更に含む。

【0033】

幾つかの実施の形態において、リガンドは、細胞表面分子に結合することが可能である。幾つかの実施の形態において、リガンドは、抗体又はその抗原結合フラグメント等のヒトタンパク質である。幾つかの実施の形態において、リガンドは、インターロイキン－１、インターロイキン－２、インターロイキン－３、インターロイキン－４、インターロイキン－５、インターロイキン－６、インターロイキン－７、インターロイキン－８、インターロイキン－９、インターロイキン－１０、インターロイキン－１１、インターロイキン－１２、インターロイキン－１３、インターロイキン－１４、インターロイキン－１５、インターロイキン－１６、インターロイキン－１７、インターロイキン－１８、インターロイキン－１９、インターロイキン－２０、インターロイキン－２１、インターロイキン－２２、インターロイキン－２３、インターロイキン－２４、インターロイキン－２５、インターロイキン－２６、インターロイキン－２７、インターロイキン－２８、インターロイキン－２９、インターロイキン－３０、インターロイキン－３１、インターロイキン－３２、インターロイキン－３３、インターロイキン－３４、インターロイキン－３５、インスリン、トランスフェリン、ＣＤ２、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ２、ＣＤ４０Ｌ／ＣＤ１５４、ＣＤ５、ＣＤ７２、ＣＤ５Ｌ、ＣＤ２３、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｓ１００Ａｐ、ＣＤ１７８、ＣＤ１５５、ＣＤ１０６、ＣＳＦ１、ＣＤ１６６、ＦａｓＬ、ＣＤ２４２、ＣＤ２５２、ＴＲＡＩＬ、ＲＡＮＫＬ、ＡＰＲＩＬ、ＣＤ２５７、ＣＤ２７２、ＣＤ２７３、ＣＤ２７４、ＣＤ２７５、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、Ｃａｓ１３及びＣａｓ７－１１、エンドセリン、レプチン、バソプレッシン、ＣＤ１０、ＣＤ３１、ＣＤ１１９、アペリン、エラベラ（elabela）、アドレノメデュリン、ボツリヌス毒素に由来する標的化ドメイン、神経ペプチド、サイトカイン又は小分子からなるリストから選択される１つ以上のリガンドである。

【0034】

幾つかの実施の形態において、リガンドは、小分子であり、任意に、小分子は、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）又はマレイミドを介して単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子に連結される。幾つかの実施の形態において、リガンドは、小分子であり、任意に、単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子は、小分子を単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子に連結する非標準アミノ酸を含む。

【0035】

幾つかの実施の形態において、リガンドは、Ｈｅｒ２、インターロイキン－１受容体、インターロイキン－２受容体、インターロイキン－３受容体、インターロイキン－４受容体、インターロイキン－５受容体、インターロイキン－６受容体、インターロイキン－７受容体、インターロイキン－８受容体、インターロイキン－９受容体、インターロイキン－１０受容体、インターロイキン－１１受容体、インターロイキン－１２受容体、インターロイキン－１３受容体、インターロイキン－１５受容体、インターロイキン－１８受容体、インターロイキン－２０受容体、インターロイキン－２１受容体、インターロイキン－２２受容体、インターロイキン－２３受容体、インターロイキン－２７受容体、インターロイキン－２８受容体、インスリン受容体、トランスフェリン受容体、ＣＤ５８、ＣＤ２、ＣＤ２、ＣＤ５９、ＣＤ４０、ＣＤ７２、ＣＤ５、ＣＤ３６、ＣＤ１９、ＣＤ２１、ＣＤ８１、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ－４、ＣＤ８５ｊ、ＣＤ９５、ＣＤ９６、α４β１インテグリン、ＣＤ１１５、ＣＤ６、ＣＤ１７８、ＬＦＡ－１、ＴＮＦＲＳＦ４、ＤＲ４、ＤＲ５、ＲＡＮＫ／ＣＤ２６５、ＴＡＣＩ／ＣＤ２６７、ＣＤ２６７、ＣＤ２６８、ＣＤ２６９、ＨＶＥＭ、ＰＤ１／ＣＤ２７９、Ｂ７－１／ＣＤ８０、ＣＤ２７８、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＮＭＤＡＲ、ＡＭＰＡＲ、ｍＧｌｕＲ５、ＤＲＤ１、ＤＲＤ２、Ｂｍｐ４、ＧＬＰ１Ｒ、レプチン受容体、α５β５インテグリン及びｇｌｙｃｏＲＮＡからなるリストから選択される１つ以上の細胞表面分子と結合する。

【0036】

幾つかの実施の形態において、アデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）の一部は、ＰＫＤ１ドメインの少なくとも一部、ＰＫＤ２ドメインの少なくとも一部、ＰＫＤ３ドメインの少なくとも一部、ＰＫＤ４ドメインの少なくとも一部、ＰＫＤ５ドメインの少なくとも一部又はそれらの任意の組合せを含む。

【0037】

幾つかの実施の形態において、アデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）の一部は、ＰＫＤ１ドメイン、ＰＫＤ２ドメイン、ＰＫＤ３ドメイン、ＰＫＤ４ドメイン、ＰＫＤ５ドメイン又はそれらの任意の組合せを含む。アデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）の一部が配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５及び配列番号６からなるリストから選択される配列を含む、請求項９～３０のいずれか一項に記載の単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子。

【0038】

幾つかの実施の形態において、アデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）の一部は、アデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）の完全長配列を含み、任意に、完全配列は配列番号１を含む。

【0039】

本発明はまた、本発明による少なくとも１つの単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子に結合したウイルス粒子を提供する。幾つかの実施の形態において、ウイルス粒子は、本発明による少なくとも１つの単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子に共有結合する。

【0040】

幾つかの実施の形態において、１つ以上のウイルスカプシドタンパク質は、単離ポリペプチドに共有結合することが可能な１つ以上のシステイン残基を含む。幾つかの実施の形態において、１つ以上のウイルスカプシドタンパク質は、単離ポリペプチド中の１つ以上のシステイン残基とジスルフィド架橋を形成することが可能な１つ以上のシステイン残基を含む。

【0041】

幾つかの実施の形態において、ウイルスは、アデノ随伴ウイルスであり、任意に、アデノ随伴ウイルスは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶｒｈ．８、ＡＡＶｒｈ．１０、ＡＡＶｒｈ．７４からなるリストから選択される。幾つかの実施の形態において、アデノ随伴ウイルスがＡＡＶ１である。幾つかの実施の形態において、アデノ随伴ウイルスは、ＡＡＶ２である。幾つかの実施の形態において、アデノ随伴ウイルスは、野生型ＡＡＶである。

【0042】

幾つかの実施の形態において、アデノ随伴ウイルスは、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９からなる群から選択されるカプシドアミノ酸配列の一部を含む。

【0043】

幾つかの実施の形態において、アデノ随伴ウイルスは、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９からなる群から選択されるカプシドアミノ酸配列の完全長を含む。

【0044】

幾つかの実施の形態において、アデノ随伴ウイルスは、野生型アミノ酸配列に対して１つ以上の保存的アミノ酸変化、例えば野生型アミノ酸配列に対して１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個又は２０個の保存的アミノ酸変化を有し、任意に、野生型アミノ酸配列は、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９からなる群から選択される。幾つかの実施の形態において、アデノ随伴ウイルスは、野生型アミノ酸配列に対して５つ以下の非保存的アミノ酸変化、例えば野生型アミノ酸配列に対して５つ、４つ、３つ、２つ又は１つの非保存的アミノ酸変化を有し、任意に、野生型アミノ酸配列は、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９からなる群から選択される。

【0045】

幾つかの実施の形態において、ウイルスは、アデノウイルス、アイチウイルス、オーストラリアコウモリリッサウイルス、ＢＫポリオーマウイルス、バンナウイルス、バーマ森林ウイルス、ブニヤムウェラウイルス、ブニヤウイルス、ラクロスブニヤウイルス、カンジキウサギブニヤウイルス、サルヘルペスウイルス、チャンディプラウイルス、チクングニアウイルス、コサウイルス、牛痘ウイルス、コクサッキーウイルス、クリミア－コンゴ出血熱ウイルス、デングウイルス、ドーリウイルス、ジュグベウイルス、ドゥベンヘイジウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、エボラウイルス、エコーウイルス、脳心筋炎ウイルス、エプスタインバーウイルス、ヨーロッパコウモリリッサウイルス、ＧＢウイルス、Ｃ／Ｇ型肝炎ウイルス、ハンタンウイルス、ヘンドラウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス、デルタ肝炎ウイルス、馬痘ウイルス、ヒトアデノウイルス、ヒトアストロウイルス、ヒトコロナウイルス、ヒトサイトメガロウイルス、ヒトエンテロウイルス、ヒトヘルペスウイルス、ヒトヘルペスウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、ヒトパピローマウイルス、ヒトパピローマウイルス、ヒトパラインフルエンザウイルス、ヒトパルボウイルス、ヒト呼吸器合胞体ウイルス、ヒトライノウイルス、ヒトＳＡＲＳコロナウイルス、ヒトスプマレトロウイルス、ヒトＴリンパ球向性ウイルス、ヒトトロウイルス、インフルエンザＡウイルス、インフルエンザＢウイルス、インフルエンザＣウイルス、イスファハンウイルス、ＪＣポリオーマウイルス、日本脳炎ウイルス、フニンアレナウイルス、ＫＩポリオーマウイルス、クンジンウイルス、ラゴスコウモリウイルス、ビクトリア湖マールブルグウイルス、ランガットウイルス、ラッサウイルス、ローズデールウイルス、跳躍病ウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、マチュポウイルス、マヤロウイルス、ＭＥＲＳコロナウイルス、麻疹ウイルス、メンゴ脳心筋炎ウイルス、メルケル細胞ポリオーマウイルス、モコラウイルス、伝染性軟属腫ウイルス、サル痘ウイルス、ムンプスウイルス、マレーバレー脳炎ウイルス、ニュージャージーポリオーマウイルス、ニューヨークウイルス、ニパウイルス、ノーウォークウイルス、オニョンニョンウイルス、オルフウイルス、オロプーシュウイルス、ピチンデウイルス、ポリオウイルス、プンタトロフレボウイルス、プウマラウイルス、狂犬病ウイルス、リフトバレー熱ウイルス、ロサウイルスＡ、ロスリバーウイルス、ロタウイルスＡ、ロタウイルスＢ、ロタウイルスＣ、風疹ウイルス、サギヤマウイルス、サリウイルスＡ、シチリア型サシチョウバエ熱ウイルス、サッポロウイルス、ＳＡＲＳコロナウイルス、セムリキ森林ウイルス、ソウルウイルス、サルフォーミーウイルス、シミアンウイルス４０、シンドビスウイルス、サウサンプトンウイルス、セントルイス脳炎ウイルス、ダニ媒介ポワサンウイルス、トルクテノウイルス、トスカーナウイルス、ウークニエミウイルス、ワクシニアウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、天然痘ウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、水疱性口内炎ウイルス、西部ウマ脳炎ウイルス、ＷＵポリオーマウイルス、ウエストナイルウイルス、ヤバサル腫瘍ウイルス、ヤバ様疾患ウイルス、黄熱ウイルス及びジカウイルスからなるリストから選択される。幾つかの実施の形態において、ウイルスは野生型ウイルスである。

【0046】

幾つかの実施の形態において、ウイルスはアデノウイルスであり、ウイルスカプシドに結合することが可能な単離ポリペプチド、又はウイルスカプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドとリガンドとを含むウイルスアダプター分子は、コクサッキーウイルス－アデノウイルス受容体（ＣＸＡＤＲ）の一部を含み、任意に、ＣＸＡＤＲ配列は配列番号２０である。

【0047】

幾つかの実施の形態において、ウイルスはアデノウイルスであり、ウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上のシステイン残基を含む単離ポリペプチド、又はウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上のシステイン残基を含む単離ポリペプチドとリガンドとを含むウイルスアダプター分子は、コクサッキーウイルス－アデノウイルス受容体（ＣＸＡＤＲ）の一部を含み、任意に、ＣＸＡＤＲ配列は配列番号２０である。

【0048】

幾つかの実施の形態において、ウイルスはアデノウイルスであり、ウイルスカプシドに結合することが可能な単離ポリペプチド、又はウイルスカプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドとリガンドとを含むウイルスアダプター分子は、ＣＤ４６の一部を含み、任意に、ＣＤ４６配列は配列番号２９である。

【0049】

幾つかの実施の形態において、ウイルスはアデノウイルスであり、ウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上のシステイン残基を含む単離ポリペプチド、又はウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上のシステイン残基を含む単離ポリペプチドとリガンドとを含むウイルスアダプター分子は、ＣＤ４６の一部を含み、任意に、ＣＤ４６配列は配列番号２９である。

【0050】

幾つかの実施の形態において、ウイルスはアデノウイルスであり、ウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上のシステイン残基を含む単離ポリペプチド、又はウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上のシステイン残基を含む単離ポリペプチドとリガンドとを含むウイルスアダプター分子は、コクサッキーウイルス－アデノウイルス受容体（ＣＸＡＤＲ）の完全長配列を含み、任意に、ＣＸＡＤＲ配列は配列番号２０である。幾つかの実施の形態において、１つ以上のウイルスカプシドに、野生型アミノ酸配列に対して１つ以上の異種システイン残基、例えば野生型アミノ酸配列に対して１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個又は１０個の異種システイン残基が導入されている。幾つかの実施の形態において、１つ以上の異種システイン残基は、単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子とウイルスカプシドとの界面に導入される。

【0051】

幾つかの実施の形態において、ウイルスはＡＡＶ１であり、単離ポリペプチド又は単離融合ポリペプチドは、アデノ随伴ウイルスカプシドに共有結合することが可能なアデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）の一部を含み、ＡＡＶ１は、Ｇｌｙ２６６Ｃｙｓ、Ｔｈｒ５０４Ｃｙｓ及びＡｓｐ５９０Ｃｙｓから選択される１つ以上の突然変異を含み、ＡＡＶＲポリペプチド又は融合ポリペプチドは、Ｔｈｒ４３４Ｃｙｓ、Ａｓｐ４２９Ｃｙｓ及びＳｅｒ４２５Ｃｙｓから選択される１つ以上の突然変異を含む。

【0052】

幾つかの実施の形態において、ウイルスはＡＡＶ２であり、単離ポリペプチド又は単離融合ポリペプチドは、アデノ随伴ウイルスカプシドに共有結合することが可能なアデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）の一部を含み、ＡＡＶ２はＧｌｙ２６５Ｃｙｓ、Ｔｈｒ５０３Ｃｙｓ及びＧｌｎ５８９Ｃｙｓから選択される１つ以上の突然変異を含み、ＡＡＶＲポリペプチド又は融合ポリペプチドはＴｈｒ４３４Ｃｙｓ、Ａｓｐ４２９Ｃｙｓ及びＳｅｒ４２５Ｃｙｓから選択される１つ以上の突然変異を含む。

【0053】

幾つかの実施の形態において、ウイルスはＡＡＶ２であり、単離ポリペプチド又は単離融合ポリペプチドは、アデノ随伴ウイルスカプシドに共有結合することが可能なアデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）の一部を含み、ＡＡＶ２はＧｌｎ５８９Ｃｙｓ突然変異を含み、ＡＡＶＲポリペプチド又は融合ポリペプチドは、Ｓｅｒ４２５Ｃｙｓ及びＶａｌ４８０Ｇｌｕから選択される１つ以上の突然変異を含み、任意に、ＡＡＶＲポリペプチド又は融合ポリペプチドは、Ｓｅｒ４２５Ｃｙｓ突然変異及びＶａｌ４８０Ｇｌｕ突然変異の両方を含む。

【0054】

幾つかの実施の形態において、ウイルスはＡＡＶ２であり、単離ポリペプチド又は単離融合ポリペプチドは、アデノ随伴ウイルスカプシドに共有結合することが可能なアデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）のＰＫＤ２ドメイン（例えば配列番号３）を含み、ＡＡＶ２はＧｌｎ５８９Ｃｙｓ突然変異を含み、ＡＡＶＲポリペプチド又は融合ポリペプチドは、Ｓｅｒ４２５Ｃｙｓ及びＶａｌ４８０Ｇｌｕから選択される１つ以上の突然変異を含み、任意に、ＡＡＶＲポリペプチド又は融合ポリペプチドは、Ｓｅｒ４２５Ｃｙｓ突然変異及びＶａｌ４８０Ｇｌｕ突然変異の両方を含む。

【0055】

幾つかの実施の形態において、ウイルスはＡＡＶ１であり、単離ポリペプチド又は単離融合ポリペプチドは、アデノ随伴ウイルスカプシドに共有結合することが可能なアデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）の一部を含み、ＡＡＶ２はＧｌｎ５８９Ｃｙｓ突然変異を含み、ＡＡＶＲポリペプチド又は融合ポリペプチドは、Ｓｅｒ４２５Ｃｙｓ及びＶａｌ４８０Ｇｌｕから選択される１つ以上の突然変異を含み、任意に、ＡＡＶＲポリペプチド又は融合ポリペプチドは、Ｓｅｒ４２５Ｃｙｓ突然変異及びＶａｌ４８０Ｇｌｕ突然変異の両方を含む。

【0056】

幾つかの実施の形態において、ウイルスはＡＡＶ１であり、単離ポリペプチド又は単離融合ポリペプチドは、アデノ随伴ウイルスカプシドに共有結合することが可能なアデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）のＰＫＤ２ドメイン（例えば配列番号３）を含み、ＡＡＶ２はＧｌｎ５８９Ｃｙｓ突然変異を含み、ＡＡＶＲポリペプチド又は融合ポリペプチドは、Ｓｅｒ４２５Ｃｙｓ及びＶａｌ４８０Ｇｌｕから選択される１つ以上の突然変異を含み、任意に、ＡＡＶＲポリペプチド又は融合ポリペプチドは、Ｓｅｒ４２５Ｃｙｓ突然変異及びＶａｌ４８０Ｇｌｕ突然変異の両方を含む。

【0057】

幾つかの実施の形態において、ウイルスはＡＡＶ５であり、単離ポリペプチド又は単離融合ポリペプチドは、アデノ随伴ウイルスカプシドに共有結合することが可能なアデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）の一部を含み、ＡＡＶ５はＧｌｎ６９７Ｃｙｓ突然変異を含み、ＡＡＶＲポリペプチド又は融合ポリペプチドは、Ｓｅｒ３５６Ｃｙｓ突然変異を含む。

【0058】

幾つかの実施の形態において、ウイルスはＡＡＶ５であり、単離ポリペプチド又は単離融合ポリペプチドは、アデノ随伴ウイルスカプシドに共有結合することが可能なアデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）のＰＫＤ１ドメイン（例えば配列番号２）を含み、ＡＡＶ５はＧｌｎ６９７Ｃｙｓ突然変異を含み、ＡＡＶＲポリペプチド又は融合ポリペプチドは、Ｓｅｒ３５６Ｃｙｓ突然変異を含む。

【0059】

幾つかの実施の形態において、ウイルスはＡＡＶ２であり、単離ポリペプチド又は単離融合ポリペプチドは、中和抗体Ａ２０の抗原結合部分を含み、ＡＡＶ２はＳｅｒ２６４Ｃｙｓ、Ｖａｌ７０８Ｃｙｓ及びＡｓｎ７１７Ｃｙｓから選択される１つ以上の突然変異を含み、中和抗体Ａ２０ポリペプチド又は融合ポリペプチドは、ＶＨ Ｔｙｒ１０２Ｃｙｓ、ＶＨ Ｓｅｒ５６Ｃｙｓ及びＶＬ Ｉｌｅ９３Ｃｙｓから選択される１つ以上の突然変異を含む。

【0060】

幾つかの実施の形態において、ウイルスはＡＡＶ２であり、単離ポリペプチド又は単離融合ポリペプチドは、中和抗体Ａ２０の抗原結合部分を含み、ＡＡＶ２はＧｌｙ２６６Ｃｙｓ、Ｔｈｒ５０４Ｃｙｓ及びＡｓｐ５９０Ｃｙｓから選択される１つ以上の突然変異を含み、中和抗体Ａ２０ポリペプチド又は融合ポリペプチドは、ＶＨ Ｔｙｒ１０２Ｃｙｓ、ＶＨ Ｓｅｒ５６Ｃｙｓ及びＶＬ Ｉｌｅ９３Ｃｙｓから選択される１つ以上の突然変異を含む。

【0061】

幾つかの実施の形態において、アデノ随伴ウイルス粒子は、ヘパラン硫酸プロテオグリカン（ＨＳＰＧ）、Ｏ－結合型シアル酸、Ｎ－結合型シアル酸、Ｎ－結合型ガラクトース等の非タンパク質結合剤との相互作用を媒介するカプシドタンパク質における１つ以上のアミノ酸変化を含む。

【0062】

幾つかの実施の形態において、アデノ随伴ウイルス粒子は、ＡＡＶ２のアルギニン残基５８５及び５８８での突然変異を含む。

【0063】

本発明はまた、本発明によるウイルス粒子を含む医薬組成物を提供する。

【0064】

本発明はまた、ウイルス粒子を共有結合修飾する方法であって、
ウイルス粒子を準備することと、
ウイルス粒子のウイルスカプシドに共有結合することが可能な単離ポリペプチドを準備することと、
ウイルス粒子と単離ポリペプチドとを、単離ポリペプチドがウイルス粒子に共有結合するように組み合わせることと、
を含む、方法を提供する。

【0065】

本発明はまた、ウイルス粒子を共有結合修飾する方法であって、
ウイルス粒子を準備することと、
ウイルス粒子のウイルスカプシドに共有結合することが可能な単離ポリペプチドとリガンドとを含むウイルスアダプター分子を準備することと、
ウイルス粒子とウイルスアダプター分子とを、単離融合ポリペプチドがウイルス粒子に共有結合するように組み合わせることと、
を含む、方法を提供する。

【0066】

幾つかの実施の形態において、方法は、単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子に１つ以上の異種システイン残基、例えば１つ、２つ又は３つの異種システイン残基を導入することを更に含む。幾つかの実施の形態において、方法は、ウイルスカプシドに１つ以上の異種システイン残基、例えば１つ、２つ又は３つの異種システイン残基を導入することを更に含む。

【0067】

幾つかの実施の形態において、方法は、単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子とウイルスカプシドとの両方に１つ以上の異種システイン残基、例えば単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子とウイルスカプシドとの両方に１つ、２つ又は３つの異種システイン残基を導入することを更に含む。

【0068】

幾つかの実施の形態において、単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子とウイルス粒子との結合は、１つ以上のウイルスカプシドタンパク質の天然指向性を減少又は消失させる。幾つかの実施の形態において、単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子とウイルス粒子との結合は、１つ以上の細胞型に対するウイルス粒子の指向性を増大させる。

【0069】

幾つかの実施の形態において、単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子とウイルス粒子との共有結合は、神経細胞、マクロファージ、小膠細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、抗原提示細胞、ＮＫ細胞、癌細胞、筋細胞、肝細胞、視細胞（photoreceptors）、膵β細胞、腎細胞及び肺細胞からなるリストから選択される１つ以上の細胞型に対するウイルス粒子の指向性を増大及び／又は減少させる。

【0070】

幾つかの実施の形態において、ウイルス粒子は、単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子を含まないウイルス粒子の天然指向性と比較して少なくとも１０％、例えば少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％又は少なくとも１００％減少又は増大した指向性を有する。幾つかの実施の形態において、単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子とウイルス粒子との結合により、ウイルス粒子がウイルスをスキャフォールドとして用いて多量体様式でタンパク質抗原を提示することが可能になる。

【0071】

幾つかの実施の形態において、単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子とウイルス粒子との共有結合は、細胞溶解を選択的に誘導し、任意に、細胞溶解が神経細胞、マクロファージ、小膠細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、抗原提示細胞、ＮＫ細胞、癌細胞、筋細胞、肝細胞、視細胞、膵β細胞、及び肺細胞からなるリストから選択される１つ以上の細胞型において誘導される。

【0072】

本発明はまた、ウイルス粒子を標的細胞に標的化する方法であって、
ウイルス粒子を準備することと、
ウイルス粒子のウイルスカプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドと標的細胞に特異的なリガンドとを含むウイルスアダプター分子を準備することと、
ウイルス粒子とウイルスアダプター分子とを、ウイルスアダプター分子がウイルス粒子に結合するように組み合わせ、それにより修飾ウイルス粒子を生成することと、
標的細胞を含む細胞の混合物と修飾ウイルス粒子とを接触させることと、
を含む、方法を提供する。

【0073】

本発明の方法の幾つかの実施の形態において、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドは、アデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）の一部を含む。本発明の方法の幾つかの実施の形態において、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドは、アデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）のＰＫＤ１ドメインの少なくとも一部、ＰＫＤ２ドメインの少なくとも一部、ＰＫＤ３ドメインの少なくとも一部、ＰＫＤ４ドメインの少なくとも一部、ＰＫＤ５ドメインの少なくとも一部又はそれらの任意の組合せを含む。本発明の方法の、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドは、アデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）の完全なＰＫＤ１ドメイン、完全なＰＫＤ２ドメイン、完全なＰＫＤ３ドメイン、完全なＰＫＤ４ドメイン、完全なＰＫＤ５ドメイン又はそれらの任意の組合せを含む。幾つかの実施の形態において、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドは、ＡＡＶＲポリペプチドにおける１つ以上の突然変異を含み、任意に、１つ以上の突然変異が配列番号１を参照して定義される。アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドは、アデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）のＰＫＤ１ドメインの少なくとも一部、ＰＫＤ２ドメインの少なくとも一部、ＰＫＤ３ドメインの少なくとも一部、ＰＫＤ４ドメインの少なくとも一部、ＰＫＤ５ドメインの少なくとも一部又はそれらの任意の組合せを含み、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドは、ＡＡＶＲポリペプチドにおける１つ以上の突然変異を含み、任意に、１つ以上の突然変異が配列番号１を参照して定義される。幾つかの実施の形態において、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドは、アデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）の完全なＰＫＤ１ドメイン、完全なＰＫＤ２ドメイン、完全なＰＫＤ３ドメイン、完全なＰＫＤ４ドメイン、完全なＰＫＤ５ドメイン又はそれらの任意の組合せを含み、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドは、ＡＡＶＲポリペプチドにおける１つ以上の突然変異を含み、任意に、１つ以上の突然変異が配列番号１を参照して定義される。

【0074】

本発明の方法の幾つかの実施の形態において、ウイルスカプシドに共有結合することが可能な単離ポリペプチドは、アデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）の一部を含む。本発明の方法の幾つかの実施の形態において、ウイルスカプシドに共有結合することが可能な単離ポリペプチドは、アデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）のＰＫＤ１ドメインの少なくとも一部、ＰＫＤ２ドメインの少なくとも一部、ＰＫＤ３ドメインの少なくとも一部、ＰＫＤ４ドメインの少なくとも一部、ＰＫＤ５ドメインの少なくとも一部又はそれらの任意の組合せを含む。本発明の方法の幾つかの実施の形態において、ウイルスカプシドに共有結合することが可能な単離ポリペプチドは、アデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）のＰＫＤ１ドメイン、ＰＫＤ２ドメイン、ＰＫＤ３ドメイン、ＰＫＤ４ドメイン、ＰＫＤ５ドメイン又はそれらの任意の組合せを含む。

【0075】

本発明の方法の幾つかの実施の形態において、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドに共有結合することが可能な単離ポリペプチドは、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５及び配列番号６からなるリストから選択される配列を含む。本発明の方法の幾つかの実施の形態において、ウイルスカプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドは、アデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）の完全長配列を含み、任意に、完全配列は配列番号１を含む。

【0076】

本発明はまた、標的細胞と本発明による修飾ウイルス粒子又は本発明による医薬組成物とを接触させることを含む、目的の核酸配列を標的細胞に送達する方法であって、ウイルス粒子が目的の核酸配列を含む、方法を提供する。

【0077】

本発明の方法の幾つかの実施の形態において、目的の核酸配列は、ＲＡＢエスコートタンパク質１、ＲＰＥ６５、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、コクリン（Cochlin）、ＣＬＮ７、酸性α－グルコシダーゼ（ＧＡＡ）、アクアポリン１、グリア細胞株由来神経栄養因子、アスパルトアシラーゼ、芳香族Ｌ－アミノ酸脱炭酸酵素、網膜色素変性症ＧＴＰアーゼ調節因子欠損、筋小胞体カルシウムＡＴＰアーゼ、環状ヌクレオチド感受性チャネルβ３、ニュールツリン、ガラクトシダーゼβ１、グルコース－６－ホスファターゼ、フェニルアラニンヒドロキシラーゼ、オルニチントランスカルバミラーゼ、ジストロフィン及びカルニチンパルミトイルトランスフェラーゼＩＩ、フェニルアラニンヒドロキシラーゼ（ＰＡＨ）、嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子（ＣＦＴＲ）からなるリストから選択されるタンパク質をコードする。

【0078】

幾つかの実施の形態において、標的細胞はｉｎ ｖｉｔｒｏである。幾つかの実施の形態において、標的細胞は対象においてｉｎ ｖｉｖｏである。幾つかの実施の形態において、標的細胞は神経細胞、マクロファージ、小膠細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、抗原提示細胞、ＮＫ細胞、癌細胞、筋細胞、肝細胞、視細胞、膵β細胞、腎細胞及び肺細胞からなるリストから選択される。幾つかの実施の形態において、対象はヒトである。幾つかの実施の形態において、標的細胞はヒト標的細胞である。

【0079】

本発明はまた、薬剤として使用される本発明によるウイルス粒子又は本発明による医薬組成物を提供する。本発明は、本発明によるウイルス粒子又は本発明による医薬組成物を治療有効量投与することを含む、治療を必要とする患者を治療する方法も提供する。

【0080】

本発明はまた、標的細胞とウイルス粒子とを接触させることにより、目的の核酸配列を標的細胞に送達することを含む、治療を必要とする対象における疾患を治療する方法に使用される本発明によるウイルス粒子又は本発明による医薬組成物を提供する。本発明は、治療を必要とする対象において疾患を治療する方法であって、本発明によるウイルス粒子又は本発明による医薬組成物を治療有効量投与し、それにより標的細胞とウイルス粒子とを接触させることによって、目的の核酸配列を標的細胞に送達することを含む、方法も提供する。

【0081】

幾つかの実施の形態において、疾患は、神経変性障害、癌、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、血友病、先天盲障害、糖尿病、嚢胞性線維症、コロイデレミア、血友病Ａ、血友病Ｂ、ＣＬＮ７疾患、ポンペ病、パーキンソン病、カナバン病、脱髄疾患、ＲＰＥ６５突然変異による遺伝性網膜ジストロフィー、芳香族Ｌ－アミノ酸脱炭酸酵素（ＡＡＤＣ）欠損症、Ｘ連鎖性網膜色素変性症、レーバー先天性黒内障、チャーグ－ストラウス症候群（ＣＳＳ）、重症虚血肢、色覚異常、アルツハイマー病、黄斑変性、オルニチントランスカルバミラーゼ欠損症、ウィルソン病、糖原病ＩＡ型、クリグラーナジャー症候群、テイ－サックス病、サンドホフ病、多発性骨髄腫、多系統萎縮症、ガングリオシドーシス、ダノン病、ファブリー病、バッテン病、フェニルケトン尿症、関節リウマチ、ムコ多糖症ＩＩＩａ型、サンフィリポ症候群Ｂ、ムコ多糖症ＶＩ型、α１－アンチトリプシン欠損症、脊髄性筋萎縮症１型、クラッベ病、ベッカー型筋ジストロフィー、シャルコー－マリー－トゥースニューロパチー１ａ型、カルニチンパルミトイルトランスフェラーゼＩＩ（ＣＰＴ ＩＩ）欠損症及びトリメチルアミン尿症、嚢胞性線維症、フェニルケトン尿症からなるリストから選択される。

【0082】

本発明の幾つかの実施の形態において、本発明のウイルス粒子又は組成物は、標的細胞とウイルス粒子とを接触させることにより、目的の核酸配列を標的細胞に送達することを含む、治療を必要とする対象における疾患を治療する方法に使用され、以下のリスト：
神経変性障害の治療のための神経細胞、
癌の治療のための免疫細胞（例えばマクロファージ、小膠細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、抗原提示細胞、ＮＫ細胞）、
免疫応答を惹起するための免疫細胞（例えばマクロファージ、小膠細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、抗原提示細胞、ＮＫ細胞）、
癌の治療のための癌細胞又は腫瘍細胞、
デュシェンヌ型筋ジストロフィーの治療のための筋細胞、
血友病の治療のための肝細胞、
先天盲障害のための視細胞、
糖尿病の治療のための膵β細胞、又は、
嚢胞性線維症の治療のための肺細胞、
による指定の標的細胞の標的化が、指定の疾患を治療又は改善する。

【0083】

幾つかの実施の形態において、ウイルス粒子又は医薬組成物を対象に対してエアロゾルにより（例えば肺細胞に）、筋肉内に、動脈内に（例えば肝動脈を介して）、関節内に、網膜下に、頭蓋内に、静脈内に、髄腔内に、冠動脈内に又は皮下に投与する。

【0084】

本発明の幾つかの実施の形態において、リガンドは、Ｃａｓ１３分子等の配列特異的ＲＮＡ結合分子からなり得る。この場合、これにより標的ＲＮＡを表面上に発現する細胞に対する指向性がウイルスに付与される。具体的には、この場合、アダプター分子は、Ｃａｓ１３とＰＫＤ２ドメインの一部又は完全長との融合からなる。Ｃａｓ１３は、続いてＣａｓ１３に適したシングルガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）と複合体を形成し、ｓｇＲＮＡのプロトスペーサー領域に相補的なＲＮＡと結合する能力をこれに付与することができる。

【0085】

本発明の幾つかの実施の形態において、ウイルスアダプタータンパク質を生成する方法は、ウイルスカプシドタンパク質を準備することと、ウイルスカプシドタンパク質と標的細胞に対して高い特異性を有する標的化分子とを反応させることとを含む。反応は、ＮＨＳ若しくはマレイミド化学を用いて行ってもよく、又は反応性基（アジド又はアルキン又はテトラジン又はトランス－シクロオクテン等）を有する非標準アミノ酸をウイルスカプシド分子の特定の位置に組み込むことによって行ってもよい。本発明の幾つかの実施の形態において、ウイルスアダプタータンパク質は、ウイルスカプシドタンパク質と、標的細胞に対して高い特異性を有する標的化分子とを含む。

【0086】

幾つかの実施の形態において、ウイルスカプシド分子をスプリットインテイン、ＳｐｙＴａｇ、テトラシステインＦＣＭモチーフ（ＦＬＮＣＣＰＧＣＣＭＥＰ）又はｙｂｂＲモチーフ（ＴＶＬＤＳＬＥＦＩＡＳＫＬＡ）等の標的化分子に結合することが可能な特定のペプチド配列と組み合わせる。

【0087】

この場合、標的化分子は、特定の受容体に結合するように選ぶことができる。幾つかの実施の形態において、標的化分子は、標的細胞型で発現された受容体に対する抗体等のタンパク質であり得る。

【0088】

幾つかの実施の形態において、標的化分子は小分子であり得る。例えば、セロトニン又はドーパミン等の神経伝達物質をウイルスカプシドタンパク質に結合させることにより、ウイルス粒子と組み合わせた場合にそれぞれセロトニン受容体又はドーパミン受容体を発現する細胞に特異的なウイルス粒子を生成するアダプター分子を作製することが可能である。

【0089】

幾つかの実施の形態において、ＡＡＶ粒子を本発明による２つ以上の単離ポリペプチド又はＡＡＶアダプター分子に結合させてもよい。幾つかの実施の形態において、ＡＡＶ粒子を本発明による２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個又はそれ以上の異なる単離ポリペプチド又は異なるＡＡＶアダプター分子に結合させてもよい。幾つかの実施の形態において、ＡＡＶ粒子を本発明による２つの異なる単離ポリペプチド又は異なるＡＡＶアダプター分子に結合させてもよい。幾つかの実施の形態において、ＡＡＶ粒子を本発明による３つの異なる単離ポリペプチド又は異なるＡＡＶアダプター分子に結合させてもよい。幾つかの実施の形態において、ＡＡＶ粒子を本発明による４つの異なる単離ポリペプチド又は異なるＡＡＶアダプター分子に結合させてもよい。幾つかの実施の形態において、ＡＡＶ粒子を本発明による５つの異なる単離ポリペプチド又は異なるＡＡＶアダプター分子に結合させてもよい。かかる実施の形態は、複数の異なる細胞型に対する特異性を提供する。例えば、単一のＡＡＶ粒子と、幾つかがＣＤ４に特異的であり、幾つかがＣＤ８に特異的なアダプター分子の混合物とを組み合わせることによって、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋の両方のＴ細胞系列を標的とする単一のＡＡＶベースの遺伝子療法を策定し得る。

【0090】

幾つかの実施の形態において、ウイルス粒子を本発明による２つ以上の単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子に共有結合させてもよい。幾つかの実施の形態において、ウイルス粒子を本発明による２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個又はそれ以上の異なる単離ポリペプチド又は異なるウイルスアダプター分子に共有結合させてもよい。幾つかの実施の形態において、ウイルス粒子を本発明による２つの異なる単離ポリペプチド又は異なるウイルスアダプター分子に共有結合させてもよい。幾つかの実施の形態において、ウイルス粒子を本発明による３つの異なる単離ポリペプチド又は異なるウイルスアダプター分子に共有結合させてもよい。幾つかの実施の形態において、ウイルス粒子を本発明による４つの異なる単離ポリペプチド又は異なるウイルスアダプター分子に共有結合させてもよい。幾つかの実施の形態において、ウイルス粒子を本発明による５つの異なる単離ポリペプチド又は異なるウイルスアダプター分子に共有結合させてもよい。かかる実施の形態は、複数の異なる細胞型に対する特異性を提供する。例えば、単一のウイルス粒子と、幾つかがＣＤ４に特異的であり、幾つかがＣＤ８に特異的なアダプター分子の混合物とを組み合わせることによって、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋の両方のＴ細胞系列を標的とする単一のウイルス遺伝子療法を策定し得る。

【0091】

幾つかの実施の形態において、ＡＡＶ粒子を本発明による２つ以上の単離ポリペプチド又はＡＡＶアダプター分子に結合させてもよい。幾つかの実施の形態において、ＡＡＶ粒子を本発明による２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個又はそれ以上の異なる単離ポリペプチド又は異なるＡＡＶアダプター分子に結合させてもよい。幾つかの実施の形態において、ＡＡＶ粒子を本発明による２つの異なる単離ポリペプチド又は異なるＡＡＶアダプター分子に結合させてもよい。幾つかの実施の形態において、ＡＡＶ粒子を本発明による３つの異なる単離ポリペプチド又は異なるＡＡＶアダプター分子に結合させてもよい。幾つかの実施の形態において、ＡＡＶ粒子を本発明による４つの異なる単離ポリペプチド又は異なるＡＡＶアダプター分子に結合させてもよい。幾つかの実施の形態において、ＡＡＶ粒子を本発明による５つの異なる単離ポリペプチド又は異なるＡＡＶアダプター分子に結合させてもよい。かかる実施の形態は、複数の異なる細胞型に対する特異性を提供する。例えば、単一のＡＡＶ粒子と、幾つかがＣＤ４に特異的であり、幾つかがＣＤ８に特異的なアダプター分子の混合物とを組み合わせることによって、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋の両方のＴ細胞系列を標的とする単一のＡＡＶ遺伝子療法を策定し得る。

【0092】

幾つかの実施の形態において、本発明の単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子は、Schweizer A, Rusert P, Berlinger L, Ruprecht CR, Mann A, Corthesy S, et al. (2008) CD4-Specific Designed Ankyrin Repeat Proteins Are Novel Potent HIV Entry Inhibitors with Unique Characteristics. PLoS Pathog 4(7): e1000109に開示されているようにＣＤ４特異的設計アンキリンリピートタンパク質（ＤＡＲＰｉｎ）の少なくとも一部を含む。幾つかの実施の形態において、本発明の単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子は、Schweizer A, Rusert P, Berlinger L, Ruprecht CR, Mann A, Corthesy S, et al. (2008) CD4-Specific Designed Ankyrin Repeat Proteins Are Novel Potent HIV Entry Inhibitors with Unique Characteristics. PLoS Pathog 4(7): e1000109に開示されているようなＣＤ４特異的設計アンキリンリピートタンパク質（ＤＡＲＰｉｎ）の完全長を含む。

【0093】

本発明の幾つかの実施の形態において、本発明の単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子は、ウイルスカプシドに結合することが可能な任意の好適な抗体様タンパク質の少なくとも一部を含む（Kondo T et al., Antibody-like proteins that capture and neutralize SARS-CoV-2. Sci Adv. 2020 Oct 14;6(42):eabd3916）。本発明の幾つかの実施の形態において、本発明の単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子は、ウイルスカプシドと結合することが可能な任意の好適な抗体様タンパク質の完全長タンパク質を含む。

【0094】

本発明の幾つかの実施の形態において、本発明の単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子は、ウイルスカプシドと結合することが可能なリポカリンフォールドに由来するタンパク質の少なくとも一部を含む（Beste et al., Small antibody-like proteins with prescribed ligand specificities derived from the lipocalin fold, PNAS March 2, 1999 96 (5) 1898-1903）。本発明の幾つかの実施の形態において、本発明の単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子は、ウイルスカプシドと結合することが可能なリポカリンフォールドに由来する完全長タンパク質を含む。

【0095】

本発明の幾つかの実施の形態において、本発明の単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子は、ウイルスカプシドと結合することが可能なプロテインＡのＺドメインに由来するアフィボディの少なくとも一部を含む（Nord et al., Binding proteins selected from combinatorial libraries of an α-helical bacterial receptor domain, Nature Biotechnology, volume 15, pages 772-777 (1997)）。本発明の幾つかの実施の形態において、本発明の単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子は、ウイルスカプシドと結合することが可能なプロテインＡのＺドメインに由来する完全長アフィボディを含む。

【0096】

本発明の幾つかの実施の形態において、本発明の単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子は、ウイルスカプシドと結合することが可能なフィブロネクチンのドメインの少なくとも一部を含む（Koide, et al., The fibronectin type III domain as a scaffold for novel binding proteins, Journal of Molecular Biology, Volume 284, Issue 4, 1998, Pages 1141-1151）。本発明の幾つかの実施の形態において、本発明の単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子は、ウイルスカプシドと結合することが可能なフィブロネクチンのドメインの完全長配列を含む。

【0097】

本発明の幾つかの実施の形態において、本発明の単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子は、ウイルスカプシドと結合することが可能なＦｙｎのＳＨ３ドメインの少なくとも一部を含む（Grabulovski, et al., A Novel, Non-immunogenic Fyn SH3-derived Binding Protein with Tumor Vascular Targeting Properties, Journal of Biological Chemistry, Volume 282, Issue 5, 2007, Pages 3196-3204）。本発明の幾つかの実施の形態において、本発明の単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子は、ウイルスカプシドと結合することが可能なＦｙｎのＳＨ３ドメインの完全長配列を含む。

【0098】

本発明の幾つかの実施の形態において、本発明の単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子は、ウイルスカプシドと結合することが可能なプロテアーゼ阻害剤ステフィンＡに由来するアフィマー又はスキャフォールドの誘導体の少なくとも一部を含む（Woodman R, Yeh JT, Laurenson S, Ko Ferrigno P. Design and validation of a neutral protein scaffold for the presentation of peptide aptamers. J Mol Biol. 2005 Oct 7;352(5):1118-33）。本発明の幾つかの実施の形態において、本発明の単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子は、ウイルスカプシドと結合することが可能なプロテアーゼ阻害剤ステフィンＡに由来するアフィマー又はスキャフォールドの誘導体の完全長配列を含む。

【0099】

本発明の幾つかの実施の形態において、本発明の単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子は、ウイルスカプシドと結合することが可能な非抗体スキャフォールドタンパク質（アディロン）の少なくとも一部を含む（Tiede et al., Adhiron: a stable and versatile peptide display scaffold for molecular recognition applications, Protein Eng Des Sel. 2014 May; 27(5): 145-155）。本発明の幾つかの実施の形態において、本発明の単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子は、ウイルスカプシドと結合することが可能な非抗体スキャフォールドタンパク質（アディロン）の完全長配列を含む。

【0100】

幾つかの実施の形態において、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチド、又はアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドとリガンドとを含むＡＡＶアダプター分子は、単離ポリペプチド又はアダプター分子の溶解度を増大させる１つ以上の点突然変異、例えば単離ポリペプチド又はアダプター分子の溶解度を増大させる１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又はそれ以上の点突然変異を含む。

【0101】

幾つかの実施の形態において、ウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上のシステイン残基を含む単離ポリペプチド、又はウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上のシステイン残基を含む単離ポリペプチドとリガンドとを含むウイルスアダプター分子は、単離ポリペプチド又はアダプター分子の溶解度を増大させる１つ以上の点突然変異、例えば単離ポリペプチド又はアダプター分子の溶解度を増大させる１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又はそれ以上の点突然変異を含む。

【0102】

幾つかの実施の形態において、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチド、又はアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドとリガンドとを含むＡＡＶアダプター分子は、細菌系及び／又は哺乳動物系における単離ポリペプチド又はアダプター分子のタンパク質発現及び／又は精製の収率を増大させる１つ以上の点突然変異、例えば細菌系及び／又は哺乳動物系における単離ポリペプチド又はアダプター分子のタンパク質発現及び／又は精製の収率を増大させる１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又はそれ以上の点突然変異を含む。

【0103】

幾つかの実施の形態において、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチド、又はアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドとリガンドとを含むＡＡＶアダプター分子は、単離ポリペプチド又はアダプター分子の溶解度を増大させる１つ以上の点突然変異、例えば単離ポリペプチド又はアダプター分子の溶解度を増大させる１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又はそれ以上の点突然変異を含むＡＡＶＲのＰＫＤ２ドメインを含む。

【0104】

幾つかの実施の形態において、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチド、又はアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドとリガンドとを含むＡＡＶアダプター分子は、細菌系及び／又は哺乳動物系における単離ポリペプチド又はアダプター分子のタンパク質発現及び／又は精製の収率を増大させる１つ以上の点突然変異、例えば細菌系及び／又は哺乳動物系における単離ポリペプチド又はアダプター分子のタンパク質発現及び／又は精製の収率を増大させる１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又はそれ以上の点突然変異を含むＡＡＶＲのＰＫＤ２ドメインを含む。

【0105】

本発明の特定の利点は、アダプター分子の一部としてＡＡＶ結合タンパク質を使用することにより、ウイルスのカプシドへの組換えＡＡＶベクターのパッケージング効率を損なうことなく、ＡＡＶの指向性を本質的に変化させることができることであり、特に、低感受性の細胞に対する感染性を数倍増大させることができるか、又は高感受性の細胞に対する感染性を数分の１に低下させることができる。したがって、本発明は、例えば体細胞遺伝子療法のための特定の細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏでの形質導入の改善に特に適している。

【0106】

幾つかの実施の形態において、ウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上のシステイン残基を含む単離ポリペプチド、又はウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上のシステイン残基を含む単離ポリペプチドとリガンドとを含むウイルスアダプター分子は、細菌系及び／又は哺乳動物系における単離ポリペプチド又はアダプター分子のタンパク質発現及び／又は精製の収率を増大させる１つ以上の点突然変異、例えば細菌系及び／又は哺乳動物系における単離ポリペプチド又はアダプター分子のタンパク質発現及び／又は精製の収率を増大させる１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又はそれ以上の点突然変異を含む。

【0107】

幾つかの実施の形態において、ウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上のシステイン残基を含む単離ポリペプチド、又はウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上のシステイン残基を含む単離ポリペプチドとリガンドとを含むウイルスアダプター分子は、単離ポリペプチド又はアダプター分子の溶解度を増大させる１つ以上の点突然変異、例えば単離ポリペプチド又はアダプター分子の溶解度を増大させる１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又はそれ以上の点突然変異を含むＡＡＶＲのＰＫＤ２ドメインを含む。

【0108】

幾つかの実施の形態において、ウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上のシステイン残基を含む単離ポリペプチド、又はウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上のシステイン残基を含む単離ポリペプチドとリガンドとを含むウイルスアダプター分子は、細菌系及び／又は哺乳動物系における単離ポリペプチド又はアダプター分子のタンパク質発現及び／又は精製の収率を増大させる１つ以上の点突然変異、例えば細菌系及び／又は哺乳動物系における単離ポリペプチド又はアダプター分子のタンパク質発現及び／又は精製の収率を増大させる１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又はそれ以上の点突然変異を含むＡＡＶＲのＰＫＤ２ドメインを含む。

【0109】

本発明の幾つかの実施の形態において、本発明による単離ポリペプチド、ＡＡＶアダプター分子又は共有結合ウイルスアダプター分子は、還元剤の存在下でＡＡＶ粒子、ＡＡＶカプシド、ウイルス粒子又はウイルスカプシドに結合することができる。本発明の幾つかの実施の形態において、還元剤はトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩（ＴＣＥＰ）である。本発明の幾つかの実施の形態において、本発明による単離ポリペプチド、ＡＡＶアダプター分子又は共有結合ウイルスアダプター分子は、カップリング反応の前に部分的に酸化されていてもよい。本発明の幾つかの実施の形態において、本発明によるＡＡＶ粒子、ＡＡＶカプシド、ウイルス粒子又はウイルスカプシドは、カップリング反応の前に部分的に酸化されていてもよい。本発明の幾つかの実施の形態において、本発明による単離ポリペプチド、ＡＡＶアダプター分子又は共有結合ウイルスアダプター分子及び本発明によるＡＡＶ粒子、ＡＡＶカプシド、ウイルス粒子又はウイルスカプシドは、カップリング反応の前に部分的に酸化されていてもよい。

【0110】

本発明の幾つかの実施の形態において、本発明による部分的に酸化された単離ポリペプチド、ＡＡＶアダプター分子又は共有結合ウイルスアダプター分子は、還元剤の存在下でＡＡＶ粒子、ＡＡＶカプシド、ウイルス粒子又はウイルスカプシドに結合することができる。本発明の幾つかの実施の形態において、本発明による単離ポリペプチド、ＡＡＶアダプター分子又は共有結合ウイルスアダプター分子は、還元剤の存在下で部分的に酸化されたＡＡＶ粒子、ＡＡＶカプシド、ウイルス粒子又はウイルスカプシドに結合することができる。本発明の幾つかの実施の形態において、本発明による部分的に酸化された単離ポリペプチド、ＡＡＶアダプター分子又は共有結合ウイルスアダプター分子は、還元剤の存在下で部分的に酸化されたＡＡＶ粒子、ＡＡＶカプシド、ウイルス粒子又はウイルスカプシドに結合することができる。本発明の幾つかの実施の形態において、還元剤はトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩（ＴＣＥＰ）である。

【0111】

本発明の幾つかの実施の形態において、「ウイルス粒子」又は「ＡＡＶ粒子」は、ウイルス様粒子であってもよい。本発明の幾つかの実施の形態において、「ウイルス粒子」又は「ＡＡＶ粒子」は、カプシドタンパク質の組換え発現後にｉｎ ｖｉｔｒｏで組み立てられたウイルス様粒子であってもよい。本発明の幾つかの実施の形態において、「ウイルス粒子」又は「ＡＡＶ粒子」は、細胞発現系においてｉｎ ｖｉｖｏで組み立てられたウイルス様粒子であってもよい。本発明の幾つかの実施の形態において、細胞発現系は、細菌（例えばＥ．コリ（E. coli））、酵母（例えばＳ．セレビシエ（S. cerevisiae））、植物、昆虫（例えばキンウワバ）又は哺乳動物（例えばヒト）の細胞発現系であり得る。

【0112】

本発明の特定の利点は、アダプター分子の一部としてウイルスカプシドに共有結合することが可能な結合タンパク質を使用することにより、ウイルスのカプシドへの組換えベクターのパッケージング効率を損なうことなく、ウイルスの指向性を本質的に変化させることができることであり、特に、低感受性の細胞に対する感染性を数倍増大させることができるか、又は高感受性の細胞に対する感染性を数分の１に低下させることができる。したがって、本発明は、例えば体細胞遺伝子療法のための特定の細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏでの形質導入の改善に特に適している。

【0113】

本明細書に記載される本発明の実施の形態のいずれにおいても、ウイルスカプシドに結合することが可能な単離ポリペプチド、又はウイルスカプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドとリガンドとを含むウイルスアダプター分子（「ウイルスアダプター分子」）は、ウイルスカプシドに共有結合することが可能であり得る。単離ポリペプチドとウイルスカプシドとの非共有結合に関する上記の記載のいずれも、ウイルスカプシドに共有結合することが可能な単離ポリペプチドに準用される。単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子とウイルスカプシドとの共有結合に関する特定の実施の形態を本明細書に記載する。

【0114】

これより、本発明の実施形態を、例にすぎないが、添付の図面を参照しながら説明する。

【図面の簡単な説明】

【0115】

【図1】ＡＡＶに曝露した細胞におけるｍＳｃａｒｌｅｔ遺伝子の発現を示す画像である。合成膜アンカー型抗ｓｆＧＦＰナノボディを発現するＨＥＫ２９３ＦＴを記載のように処理した。Ａ － ＨＥＫ２９３ＦＴ細胞に、ｍＳｃａｒｌｅｔ遺伝子を有する野生型ＡＡＶ２を感染させた。Ｂ － ＨＥＫ２９３ＦＴ細胞に、ｍＳｃａｒｌｅｔ遺伝子を有するＡＡＶ２ウイルスＡｒｇ５８５Ａｌａ Ａｒｇ５８８Ａｌａを感染させた。Ｃ － ＨＥＫ２９３ＦＴ細胞をｓｆＧＦＰ－ＰＫＤ２アダプタータンパク質に曝露した後、ｍＳｃａｒｌｅｔ遺伝子を有するＡＡＶ２ウイルスＡｒｇ５８５Ａｌａ Ａｒｇ５８８Ａｌａを感染させた。データは、ｓｆＧＦＰ－ＰＫＤ２タンパク質融合が、パートナー受容体を発現する細胞においてＡＡＶ２ Ａｒｇ５８５Ａｌａ Ａｒｇ５８８Ａｌａの感染性を大幅に回復させることを示す（実施例６を参照されたい）。

【図2】ＤＡＰＲｉｎ－ＰＫＤ２アダプタータンパク質を有する及び有しない野生型ＡＡＶ２による感染を示すＳＫＢＲ３細胞株実験を示す図である。Ａ － ＳＫＢＲ３＋ＡＡＶ２ ｗｔ（－）ＤＡＰＲｉｎ－ＰＫＤ２、Ｂ － ＳＫＢＲ３＋ＡＡＶ２ ｗｔ（＋）ＤＡＰＲｉｎ－ＰＫＤ２。画像は、Ｈｅｒ２特異的ＤＡＲＰｉｎ－ＰＫＤ２融合タンパク質が、ＳＫＢＲ３細胞におけるＡＡＶ２野生型の感染性を大幅に増強することを示す。

【図3】ｍＳｃａｒｌｅｔ－ＰＫＤ２＋ＡＡＶ２ミックスによる感染を示すＨＥＫ２９３ＦＴ細胞を用いた実験を示す図である。データは、溶液中のｍＳｃａｒｌｅｔ－ＰＫＤ２融合タンパク質の存在が、ＡＡＶ２野生型の感染性を濃度依存的に阻害することを示し、融合タンパク質のＰＫＤ２ドメインが、ウイルスと効果的に相互作用し、結合について細胞ＡＡＶＲに競り勝つことができ、感染を防ぐことが示唆される。

【図4】ＰＫＤ２融合タンパク質とＡＡＶ２との結合動態の表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）測定を示す図である。ＳＰＲシグナルにより、固定化されたＡＡＶ２と融合タンパク質との相互作用が確認され、測定された親和性は６μＭ前後である。

【図5】ＰＫＤ２融合タンパク質とＡＡＶ１との結合動態の表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）測定を示す図である。ＳＰＲシグナルにより、固定化されたＡＡＶ２と融合タンパク質との相互作用が確認され、測定された親和性は２μＭ前後である。

【図6】例示的なＡＡＶ受容体アミノ酸配列を示す図である。ＵｎｉｐｒｏｔエントリＱ８ＩＺＡ０から得られ、配列番号１として開示される。ＰＫＤ１は残基３１２～４０１であり、ＰＫＤ２は残基４０９～４９８であり、ＰＫＤ３は残基５０４～５９４であり、ＰＫＤ４は残基６００～６８８であり、ＰＫＤ５は残基６９４～７８５であり、全て太字で強調表示し、配列番号２～配列番号６として表す。

【図7】例示的なＡＡＶ１ ｃａｐ遺伝子アミノ酸配列を示す図である。ＮＣＢＩエントリＮＰ＿０４９５４２から得られ、配列番号７として開示される。

【図8】例示的なＡＡＶ２ ｃａｐ遺伝子アミノ酸配列を示す図である。ＮＣＢＩエントリＹＰ＿６８０４２６から得られ、配列番号８として開示される。

【図9】例示的なＡＡＶ３ ｃａｐ遺伝子アミノ酸配列を示す図である。ＮＣＢＩエントリＮＰ＿０４３９４１．１から得られ、配列番号９として開示される。

【図10】例示的なＡＡＶ４ ｃａｐ遺伝子アミノ酸配列を示す図である。ＮＣＢＩエントリＮＰ＿０４４９２７から得られ、配列番号１０として開示される。

【図11】例示的なＡＡＶ５ ｃａｐ遺伝子アミノ酸配列を示す図である。ＮＣＢＩエントリＹＰ＿０６８４０９から得られ、配列番号１１として開示される。

【図12】例示的なＡＡＶ６ ｃａｐ遺伝子アミノ酸配列を示す図である。ＵｎｉｐｒｏｔエントリＯ５６１３７＿９ＶＩＲＵから得られ、配列番号１２として開示される。

【図13】例示的なＡＡＶ７ ｃａｐ遺伝子アミノ酸配列を示す図である。ＮＣＢＩエントリＹＰ＿０７７１７８から得られ、配列番号１３として開示される。

【図14】例示的なＡＡＶ８ ｃａｐ遺伝子アミノ酸配列を示す図である。ＮＣＢＩエントリＹＰ＿０７７１８０から得られ、配列番号１４として開示される。

【図15】例示的なＡＡＶ９ ｃａｐ遺伝子アミノ酸配列を示す図である。ＵｎｉｐｒｏｔエントリＱ６ＪＣ４０＿９ＶＩＲＵから得られ、配列番号１５として開示される。

【図16】例示的なＡＡＶ１０ ｃａｐ遺伝子アミノ酸配列を示す図である。ＮＣＢＩエントリＡＡＴ４６３３７から得られ、配列番号１６として開示される。

【図17】例示的なＡＡＶ１１ ｃａｐ遺伝子アミノ酸配列を示す図である。ＵｎｉｐｒｏｔエントリＱ５Ｙ９Ｂ２＿９ＶＩＲＵから得られ、配列番号１７として開示される。

【図18】例示的なＡＡＶ１２ ｃａｐ遺伝子アミノ酸配列を示す図である。ＵｎｉｐｒｏｔエントリＡ９ＲＡＩ０から得られ、配列番号１８として開示される。

【図19】例示的なＡＡＶ１３ ｃａｐ遺伝子アミノ酸配列を示す図である。ＵｎｉｐｒｏｔエントリＢ５ＳＵＹ７から得られ、配列番号１９として開示される。

【図20】ＡＡＶ１（Ａｓｐ５９０Ｃｙｓ）突然変異体の残基Ｃｙｓ５９０とｓｆＧＦＰ－ＰＫＤ２（Ｓｅｒ４２５Ｃｙｓ）アダプター融合タンパク質のＣｙｓ４２５との間のジスルフィド結合の形成を示す図である。この図は、それぞれジスルフィド結合したｓｆＧＦＰ－ＰＫＤ２＋ＶＰ１、ｓｆＧＦＰ－ＰＫＤ２＋ＶＰ２及びｓｆＧＦＰ－ＰＫＤ２＋ＶＰ３に対応する、１５０ｋＤａマーカーと１００ｋＤａマーカーとの間を移動する３つのバンドの形成を示す。これら３つのバンドは、突然変異Ａｓｐ５９０Ｃｙｓを有するＡＡＶ１カプシドと突然変異Ｓｅｒ４２５Ｃｙｓを有するｓｆＧＦＰ－ＰＫＤ２とを混合した場合にのみ非還元ゲル（上）で観察することができ、それ以外では観察されない。さらに、これらのバンドは、β－メルカプトエタノール（βＭＥ）等の還元剤の存在下で不安定である（下のゲル）。実施例６を参照されたい。

【図21】アダプタータンパク質と複合体を形成した共有結合ＡＡＶ１の単離を示す図である。この図は、イオジキサノール段階勾配超遠心法により精製したＡＡＶ１－ｓｆＧＦＰ ＣＡＲ－Ｖ複合体の組成を示す。ＰＫＤ２突然変異融合タンパク質とウイルスカプシドタンパク質ＶＰ１、ＶＰ２及びＶＰ３との安定に結合したヘテロ二量体を、４０％イオジキサノール画分から回収することができた（１００ｋＤａ超のバンド）。これにより、共有結合したＡＡＶ１Ｃｙｓ＜＞ｓｆＧＦＰ粒子の形成の成功が証明される（実施例２を参照されたい）。

【図22】アダプターに共有結合したＡＡＶ１の指向性を示す図である。データは、ＡＡＶ１（Ａｓｐ５９０Ｃｙｓ）＜＞ｓｆＧＦＰ ＣＡＲ－Ｖが、キメラｓｆＧＦＰ受容体を発現していないＨＥＫ２９３Ｔ細胞に対する指向性が低下しているが、標的細胞がキメラ受容体を発現する場合に感染性が回復することを示す。データは、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞が、アダプタータンパク質を有しないＡＡＶ１（Ａｓｐ５９０Ｃｙｓ）による感染に対して感受性が高いことを更に示す（実施例３を参照されたい）。

【図23】例示的なコクサッキーウイルス及びアデノウイルス受容体（ＣｘＡｄＲ）ｃａｐ遺伝子アミノ酸配列を示す図である。ＵｎｉｐｒｏｔエントリＰ７８３１０から得られ、配列番号２０として開示される。

【図24】例示的なＡ２０抗体配列を示す図である。McCraw et al., Structure of adeno-associated virus-2 in complex with neutralizing monoclonal antibody, Volume 431, Issues 1-2, 15-30 September 2012, Pages 40-49から得られ、配列番号２１～配列番号２８として開示される。

【図25】例示的なＣＤ４６配列を示す図である。ＵｎｉｐｒｏｔエントリＰ１５５２９から得られ、配列番号２９として開示される。

【図26】ＡＡＶ１カプシドに対するＰＫＤ２（Ｖ４８０Ｅ）突然変異体の親和性を示す図である。野生型（四角で示す、実線でフィッティング）又はＶａｌ４８０Ｇｌｕ突然変異（丸で示す、破線でフィッティング）のいずれかのＡＡＶ１カプシドとＡＡＶＲのＰＫＤ２ドメインとの間の親和性についての応答－濃度プロット（Ｙ軸：任意単位、Ｘ軸：モル濃度）。プロットは、ＰＫＤ２野生型について測定されたＫｄが１２．１８μＭであり、ＰＫＤ２（Ｖ４８０Ｅ）突然変異体については６．１３μＭであることを示し、突然変異体がＡＡＶ１カプシドに対してより高い親和性を有することが示される。このように、ＰＫＤ２（Ｖ４８０Ｅ）変異体がＡＡＶカプシドに対して改善された親和性を有し、アダプタータンパク質として優れていることを発見した。

【図27】ＣＡＲ由来アダプタータンパク質とのＡｄＶ－５ファイバーノブ（fibre knob）カップリングを示す図である。突然変異Ｖ４４１Ｃを有するアデノウイルス－５に由来するファイバーノブタンパク質と、突然変異Ｖ７０Ｃを有するヒトコクサッキーウイルス－アデノウイルス受容体（ＣＡＲ）に由来するアダプタータンパク質との反応。反応は２０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ８）、１５０ｍＭ ＮａＣｌ及び０．１ｍＭ ＣｕＳＯ_４中で行った。ノブタンパク質（２２ｋＤａ）の最終濃度は２μＭとし、アダプタータンパク質（４２ｋＤａ）の濃度は４μＭとした。タンパク質バンドを非還元４％～１２％ビス－トリスゲルで分離した。レーン３は、ノブタンパク質とＣＡＲ由来アダプタータンパク質との共有結合付加体に相当する分子量６５ｋＤａ前後のバンドの形成を示す。したがって、ウイルスを再標的化するためのアダプタータンパク質の使用が、アダプターとしてＣＡＲ融合タンパク質を用いるアデノウイルスに適用され得ることが実証された。

【図28】ＡＡＶＲ由来アダプタータンパク質に共有結合したＡＡＶ粒子の陰性染色電子顕微鏡法を示す図である。倍率５２０００倍でのＡＡＶ粒子の陰性染色電子顕微鏡法。Ａ）ＡＡＶ１（Ａｓｐ５９０Ｃｙｓ）粒子をアフィニティークロマトグラフィー（CytivaのＡＶＢセファロース樹脂）、続いてイオジキサノール勾配超遠心法によって精製し、リンタングステン酸によって染色し、電子顕微鏡法によって撮像した。図から粒子の輪郭が滑らかであることが明らかである。Ｂ）ＡＡＶ１（Ａｓｐ５９０Ｃｙｓ）粒子をアフィニティークロマトグラフィー（CytivaのＡＶＢセファロース樹脂）によって精製した後、ｓｆＧＦＰ－ＰＫＤ２（Ｓｅｒ４２５Ｃｙｓ）アダプタータンパク質（３μＭ）とインキュベートした（室温で２０時間）。次いで、粒子をイオジキサノール勾配超遠心法によって精製し、リンタングステン酸によって染色し、電子顕微鏡法によって撮像した。図から粒子の輪郭が粗く、天然粒子よりも大きいことが明らかである。Ｃ）粒子の直径の定量。Ａ）の天然粒子の平均直径は２６．０ｎｍであるが、Ｂ）のアダプタータンパク質コーティング粒子の平均直径は２９．０ｎｍである。この図は、ＡＡＶ１（Ａｓｐ５９０Ｃｙｓ）とアダプタータンパク質との複合体を示す。

【図29】ＰＫＤ２由来アダプタータンパク質とのＡＡＶ１^{Ａｓｐ５９０Ｃｙｓ}カップリングを示す図である。システインを含み、様々な融合パートナーを包含するＰＫＤ２由来融合タンパク質がＡＡＶ１^{Ａｓｐ５９０Ｃｙｓ}と共有結合を形成し得ることを示すクマシー染色ＳＤＳ ＰＡＧＥ。使用した融合パートナーは、ｅＧＦＰに対するシングルドメイン抗体（ａ：ｅＧＦＰ ｓｄＡｂ）、Ｈｅｒ２に結合するように進化させたＤＡＲＰｉｎ（ａ：Ｈｅｒ２ ＤＡＲＰｉｎ）、スーパーフォルダーＧＦＰの単量体変異体（ｍｓｆＧＦＰ）、及びＥ．コリ由来のマルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）である。全てのアダプタータンパク質を室温で２時間、最終濃度３μＭでＡＡＶ１^{Ａｓｐ５９０Ｃｙｓ}とカップリングした。タンパク質を非還元４％～１２％ビス－トリス勾配ゲル上で泳動した。この図は、ＰＫＤ２（Ｓｅｒ４２５Ｃｙｓ）とともにアダプタータンパク質を構成する融合パートナーの同一性が、共有結合付加体を形成する能力を維持しながらモジュール方式でカスタマイズされ得ることを示す。これにより、本発明者らの技術を用いて、融合パートナーの同一性を変化させることにより、ＡＡＶを多くの異なる受容体に対して再標的化し得ることが示唆される。図の凡例：^＊はカプシドタンパク質を表し、†はアダプタータンパク質を表し、††はアダプタータンパク質二量体を表し、^＊†はアダプタータンパク質とウイルスタンパク質とのコンジュゲート種を表す。

【図30】１ｍＭ ＴＣＥＰ中でのＰＫＤ２由来アダプタータンパク質とのＡＡＶ１^{Ａｓｐ５９０Ｃｙｓ}カップリングを示す図である。ウイルスを分離した状態で（マーカーの後の最初のレーン）、又はＰＫＤ２（Ｓｅｒ４２５Ｃｙｓ－Ｖａｌ４８０Ｇｌｕ）とともに、図に示すような融合パートナーから構成されるアダプタータンパク質３μＭとインキュベートした場合のＡＡＶ１^{Ａｓｐ５９０Ｃｙｓ}カプシドタンパク質に対するブロット。インキュベーションは１ｍＭ ＴＣＥＰの存在下、室温で２０時間行った。インキュベーション後、反応物をＭＯＰＳバッファー中、２００Ｖで３７分間、８％ビス－トリス非還元ゲル上で泳動した。泳動後、ゲルをＰＶＤＦ膜に転写し、ＡＡＶ ＶＰ１／２／３に対する一次マウスモノクローナルＢ１抗体（Progen、カタログ番号６９００５８）及び赤外ＩＲＤｙｅ（商標） ８００ＣＷヤギ抗マウスＩｇＧ二次抗体（Li-COR、カタログ番号９２６－３２２１０）を用いてイムノブロットした。図は、１ｍＭの還元剤ＴＣＥＰの存在下であってもアダプタータンパク質とウイルスカプシドタンパク質との共有結合付加体が形成され得ることを示し、タンパク質間のジスルフィド結合が、完全に溶媒に曝されていない界面で形成されることが示される。注目すべきことに、アダプターが細菌細胞で発現される場合（例えばｓｆＧＦＰ及びＤＡＲＰｉｎ）及びアダプターが哺乳動物細胞で発現される場合（例えばａ：ＩＣＡＭ ｓｃＦｖ）の両方でウイルスタンパク質とアダプターとの間に付加体が形成され得る。

【図31】ＡＡＶ１野生型又は抗ＥＧＦＲ－ＡＡＶ１によるＳＫＯＶ３細胞の感染を示す図である。（抗ＥＧＦＲ）ＤＡＲＰｉｎ－ＰＫＤ２（Ｓｅｒ４２５Ｃｙｓ－Ｖａｌ４８０Ｇｌｕ）融合タンパク質でコーティングされたＡＡＶによるＳＫＯＶ３細胞の感染により、この細胞株が通常、高用量（培地１μＬ当たり１．５×１０^７ｖｇ）で投与されるＡＡＶ１に対して感受性が低いことが示され、この細胞株が、コーティングされたウイルスによる感染に対して３倍感受性が高いことが示される。感染性は、７２時間の感染後にＧＦＰ（その遺伝子はウイルスによって送達された）を発現した細胞の割合によって測定した。データを３回の反復試験の平均としてプロットし、対応のない両側ｔ検定により分析した。エラーバーは標準偏差を示す。有意性はｎｓ：ｐ＞０．０５、^＊＝ｐ＜０．０５、^＊＊＝ｐ＜０．０１、^＊＊＊＝ｐ＜０．００１で表す。この図は、アダプタータンパク質によるＡＡＶ１（Ａｓｐ５９０Ｃｙｓ）の再標的化が、その感染性を実質的に増大させ得ることを示す。

【図32】ＡＤＫ１ａ中和 － ｒＡＡＶ１導入遺伝子発現に対する抗ＡＡＶ１ ｍＡｂの影響を示す図である。０．５×１０^９ｖｇの組換えＡＡＶ１又は０．５×１０^９ｖｇのＡＡＶ１（Ａｓｐ５９０Ｃｙｓ）＜＞（抗ＥＧＦＲ）ＤＡＲＰｉｎ－ＰＫＤ２（Ｓｅｒ４２５Ｃｙｓ－Ｖａｌ４８０Ｇｌｕ）ＣＡＲ－ＶをＡＤＫ１ａ中和抗体（Progen、カタログ番号６１０１５０）の段階希釈物とともに室温で１時間インキュベートした後、混合物を用いて、９６ウェルプレートに播種したＨＥＫ２９３Ｔ細胞に感染させた。ＧＦＰレポーターの発現によって測定される感染細胞の割合を２４時間後に測定し、使用した抗体の濃度の関数としてプロットした。プロットから、組換えＡＡＶ１がＡＤＫ１ａ抗体によって中和されるのに対し、コーティングされたＣＡＲ－Ｖ粒子が、中和抗体の濃度に関わらず、同じレベルの感染性を維持し、したがって中和に抵抗性を示すことが示される。

【図33】コーティングされたＡＡＶ（Ａｓｐ５９０Ｃｙｓ）による２９３Ｔ細胞株、ＣＨＯ細胞株及びＳＫＢＲ３細胞株の感染を示す図である。細胞培地１μＬ当たり２．０×１０^６ｖｇの最終濃度でのコーティングされた及びコーティングされていないＡＡＶ１（Ａｓｐ５９０Ｃｙｓ）ウイルス粒子による感染の４８時間後の形質導入細胞のパーセンテージ。ウイルスのコーティングは、１μＭ ＰＫＤ２（Ｓｅｒ４２５Ｃｙｓ－Ｖａｌ４８０Ｇｌｕ）アダプタータンパク質の存在下、室温で２時間行った。定量は、レーザー走査共焦点顕微鏡法によって評価されるウイルスによって送達されたレポーターを発現する細胞の数に基づくものであった。ｘ軸は、ウイルスのコーティングに用いられたアダプタータンパク質によって標的化された受容体を示す。データは、２回の反復試験の平均としてプロットした。高レベルのＨＥＲ２及びＥＧＦＲを発現するＳＫＢＲ３細胞株（Ｃ）の感染は、対応するＰＫＤ２（Ｓｅｒ４２５Ｃｙｓ－Ｖａｌ４８０Ｇｌｕ）アダプタータンパク質でコーティングされたＡＡＶ１（Ａｓｐ５９０Ｃｙｓ）ウイルス粒子による感染性がより高いことを示す。ＡＡＶ１（Ａｓｐ５９０Ｃｙｓ）のコーティングにより、対応する受容体を有しないＣＨＯ細胞（Ｂ）における感染性が低下する。このデータは、アダプタータンパク質によるＡＡＶ１（Ａｓｐ５９０Ｃｙｓ）のコーティングが、アダプタータンパク質と相互作用する受容体を発現する細胞型に対するその特異性を増強し得ることを示す。

【図34】ＴＺＭ－ｂｌ異種移植モデルにおける肝ＡＡＶ形質導入を示す図である。コーティングされていないＡＡＶ１（Ａｓｐ５９０Ｃｙｓ）と比べた、ｓｆＧＦＰ－ＰＫＤ２（Ｓｅｒ４２５Ｃｙｓ－Ｖａｌ４８０Ｇｌｕ）及び（抗ＣＤ４）ＤＡＲＰｉｎ－ＰＫＤ２（Ｓｅｒ４２５Ｃｙｓ－Ｖａｌ４８０Ｇｌｕ）でコーティングされたＡＡＶ１（Ａｓｐ５９０Ｃｙｓ）による肝臓感染性。コーティングされた及びコーティングされていないＡＡＶ１（Ａｓｐ５９０Ｃｙｓ）粒子をＣ５７ＢＬ／６Ｊａｘマウスに３．２×１０^１０ｖｇ／マウスで静脈注射してから１４日後に肝臓を採取した。マウスは、ＴＺＭ－ｂｌ細胞から構成される腫瘍を宿していた。データは、アダプタータンパク質によるウイルスのコーティングが、ＡＡＶのオフターゲット感染の主な部位である肝臓の感染を消失させることを示す。定量は、各マウスの肝臓の５０μｍ切片３つに基づくものであった。画像は、レーザー走査共焦点顕微鏡で取得した。データは、３回の反復試験の平均としてプロットした。

【図35】ＰＫＤ１^{Ｓ３５６Ｃ}由来ＡＰとのＡＡＶ５^{Ｑ６９７Ｃ}カップリングを示す図である。分離した状態の（マーカー後の最初のレーン）又はＰＫＤ１（Ｓｅｒ３５６Ｃｙｓ）と融合したスーパーフォルダーＧＦＰから構成される１０μＭのアダプタータンパク質（３８．２ｋＤａ）とインキュベートしたウイルスのＡＡＶ５^{Ｇｌｎ６９７Ｃｙｓ}上のＡＡＶ５カプシドタンパク質に対するブロット。インキュベーションは、室温で１６時間行った。インキュベーション後、反応物をＭＯＰＳバッファー中、２００Ｖで３７分間、８％ビス－トリス非還元ゲル上で泳動した。次いで、ゲルをＰＶＤＦ膜に転写し、ＡＡＶ ＶＰ１／２／３に対する一次マウスモノクローナルＢ１抗体（Progen、カタログ番号６９００５８）及び赤外ＩＲＤｙｅ（商標） ８００ＣＷヤギ抗マウスＩｇＧ二次抗体（Li-COR、カタログ番号９２６－３２２１０）を用いてイムノブロットした。図は、カプシドタンパク質の分子量のシフトによって示されるアダプタータンパク質とウイルスカプシドタンパク質との共有結合付加体を示す。重要なことには、アダプタータンパク質とのインキュベーション後に遊離ＶＰタンパク質に対応する測定可能なバンドを観察することができず、カップリングが完了に至ったことが示される。これにより、ＰＫＤ１由来アダプタータンパク質がＡＡＶ５^{Ｑ６９７Ｃ}の再標的化に使用され得ることが示される。

【図36】ＤＳＧ２由来ＡＰとのＡｄＶ Ｂ３ノブカップリングを示す図である。アデノウイルスＢ３ファイバーノブ（残基１２８～３１９、Ｕｎｉｐｒｏｔ ＩＤ Ｐ０４５０１、ｓｔｒｅｐタグ付き、Ａｓｎ１９２Ｃｙｓ突然変異体、２３．４ｋＤａ）と、スーパーフォルダーＧＦＰをデスモグレイン２（残基１５０～３８５、Ａｌａ１７４Ｃｙｓ突然変異体）に融合することによって得られたアダプタータンパク質（ＡＰ）との共有結合カップリングを示すクマシー染色ゲル。ＡＰの分子量は５４．４ｋＤａである。３μｇの精製ノブを４μｇの精製アダプタータンパク質とともにインキュベートし、１ｍＭ ＣａＣｌ_２の非存在下（左）又は存在下（右）にてＰＢＳ中、室温で１８時間、総反応量１５μＬでインキュベートした。次いで、反応物を４％～１２％ビス－トリスアクリルアミドゲル上でＭＥＳ泳動バッファーを用いて非還元条件にて２００Ｖで４０分間泳動した。次いで、ゲルをクマシー色素で染色した。ゲルは、カルシウムイオンの存在下でのみ観察されるファイバーノブとアダプタータンパク質との共有結合付加体の形成を示し、結合の形成がノブとデスモグレイン２との間のＣａ^２＋依存性相互作用に依存することが示される。したがって、ＤＳＧ２由来アダプタータンパク質は、アデノウイルスＢ３に共有結合させ、その指向性をリダイレクトするのに使用することができる。

【図37】例示的なヒトアデノウイルスＢ３繊維タンパク質配列を示す図である。ＵｎｉｐｒｏｔエントリＰ０４５０１から得られ、配列番号３０として開示される。

【図38】例示的なデスモグレイン２（ＤＳＧ２）配列を示す図である。ＵｎｉｐｒｏｔエントリＱ１４１２６から得られ、配列番号３１として開示される。

【図39】コーティングされたＡＡＶ２（Ｇｌｎ５８９Ｃｙｓ）による２９３Ｔ細胞の感染を示す図である。細胞培地１μＬ当たり１．６×１０^６ｖｇの最終濃度でのコーティングされた及びコーティングされていないＡＡＶ２（Ｇｌｎ５８９Ｃｙｓ）ウイルス粒子による感染の４８時間後の形質導入細胞のパーセンテージ。ウイルスのコーティングは、３μＭ ＰＫＤ２（Ｓｅｒ４２５Ｃｙｓ－Ｖａｌ４８０Ｇｌｕ）アダプタータンパク質の存在下、室温で２４時間行った。定量は、レーザー走査顕微鏡法によって評価されるウイルスによって送達されたレポーターを発現する細胞の数に基づくものであった。ｘ軸は、ウイルスのコーティングに用いられたアダプタータンパク質によって標的化された受容体を示す。データは、２回の反復試験の平均としてプロットした。細胞表面に発現されるＨＥＲ２及びＥＧＦＲに対するアダプタータンパク質でコーティングした場合、ウイルスは２９３Ｔ細胞に対してより感染性が高い。細胞表面受容体が存在しないＧＦＰでコーティングすると感染性が低下する。データは、アダプタータンパク質によるＡＡＶ２（Ｇｌｎ５８９Ｃｙｓ）のコーティングが、アダプタータンパク質と相互作用する受容体を発現する細胞に対するその特異性を増強し得ることを示す。

【図40】ＰＫＤ２由来アダプタータンパク質とのＡＡＶ２（Ｇｌｎ５８９Ｃｙｓ）カップリングを示す図である。分離した状態の（それぞれマーカーの後の最初及び３番目のレーン）、又はＰＫＤ２（Ｓｅｒ４２５Ｃｙｓ－Ｖａｌ４８０Ｇｌｕ）と融合した５μＭのスーパーフォルダーＧＦＰとインキュベートしたウイルスを用いたＡＡＶ１^{Ａｓｐ５９０Ｃｙｓ}及びＡＡＶ２^{Ｇｌｎ５８９Ｃｙｓ}カプシドタンパク質に対するブロット。インキュベーションは、室温で２２時間行った。インキュベーション後、反応物をＭＯＰＳバッファー中、２００Ｖで４０分間、８％ビス－トリス非還元ゲル上で泳動した。次いで、ゲルをＰＶＤＦ膜に転写し、ＡＡＶ ＶＰ１／２／３に対する一次マウスモノクローナルＢ１抗体（Progen、カタログ番号６９００５８）及び赤外ＩＲＤｙｅ（商標） ８００ＣＷヤギ抗マウスＩｇＧ二次抗体（Li-COR、カタログ番号９２６－３２２１０）を用いてイムノブロットした。図は、マーカーの後のレーン２及びレーン５におけるカプシドタンパク質の分子量のシフトによって示されるアダプタータンパク質とウイルスカプシドタンパク質との共有結合付加体を示す。重要なことには、付加体のバンドは、ＡＡＶ１及びＡＡＶ２の両方の突然変異ウイルスについて形成される。これにより、ＰＫＤ２由来アダプタータンパク質がＡＡＶ１及びＡＡＶ２の指向性をリダイレクトするのに使用され得ることが確認される。

【図41】コーティングされたＡＡＶ５（Ｇｌｎ６９７Ｃｙｓ）によるＳＫＢＲ３細胞の感染を示す図である。細胞培地１μＬ当たり１．０×１０^７ｖｇの最終濃度でのコーティングされた及びコーティングされていないＡＡＶ５（Ｇｌｎ６９７Ｃｙｓ）ウイルス粒子による感染の６日後の形質導入細胞のパーセンテージ。ウイルスのコーティングは、０．５μＭ ＰＫＤ１（Ｓｅｒ３５６Ｃｙｓ）アダプタータンパク質の存在下、室温で２４時間行った。定量は、レーザー走査顕微鏡法によって評価されるウイルスによって送達されたレポーターを発現する細胞の数に基づくものであった。ｘ軸は、ウイルスのコーティングに用いられたアダプタータンパク質によって標的化された受容体を示す。データは、２回の反復試験の平均としてプロットした。細胞表面で高度に発現されるＨＥＲ２に対するアダプタータンパク質でコーティングした場合、ウイルスはＳＫＢＲ３細胞に対してより感染性が高い。細胞表面受容体が存在しないＧＦＰでコーティングすると感染性が低下する。データは、アダプタータンパク質によるＡＡＶ５（Ｇｌｎ６９７Ｃｙｓ）のコーティングが、対応する受容体を発現する細胞に対するその特異性を増強することにより、再標的化を可能にし得ることを示す。

【発明を実施するための形態】

【0116】

本発明がより容易に理解されるように、まず或る特定の用語を以下に定義する。以下の用語及び他の用語に対する更なる定義は、本明細書を通して記載される。

【0117】

本明細書において使用される場合、１以上の目的の値に適用される「およそ」又は「約」という用語は、規定の基準値に類似する値を指す。或る特定の実施形態において、「およそ」又は「約」という用語は、（かかる数が可能性のある値の１００％を超える場合を除いて）別段の指定がない限り又は文脈から明らかでない限り、規定の基準値のいずれかの方向の（より大きい又はより少ない）２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％）、６％）、５％、４％、３％、２％、１％）以内に含まれる値の範囲を指す。

【0118】

本明細書において使用される場合、「改善」という用語は、状態の予防、低減若しくは緩和又は対象の状態の好転を意味する。改善は、疾患状態の完全な回復又は完全な予防を含むが、これらを必要とするわけではない。

【0119】

本明細書において使用される場合、「比較可能な」という用語は、科学的に合理的な比較を可能にするために、試験システム、条件のセット、効果又は結果と十分に類似しているシステム、条件のセット、効果又は結果を指す。どのシステム、条件のセット、効果又は結果が、本明細書に記載の任意の特定の試験システム、条件のセット、効果又は結果と「比較可能な」ほど十分に類似しているかを当業者は認識し、理解するであろう。

【0120】

本明細書において使用される場合、「相関する」という用語は、「と相関を示す」というその通常の意味を有する。２つの特徴、項目又は値は、これらが一緒に出現及び／又は変動する傾向を示す場合、互いに相関を示すことを当業者は認識するであろう。幾つかの実施形態において、相関は、そのｐ値が０．０５未満である場合に統計学的に有意であり、幾つかの実施形態において、相関は、そのｐ値が０．０１未満である場合に統計学的に有意である。幾つかの実施形態において、相関は、回帰分析によって評価される。幾つかの実施形態において、相関は相関係数である。

【0121】

本明細書において使用される場合、「向上させる」、「増加させる」若しくは「低減させる」という用語又は文法的同等物は、参照に対する値（例えば、ベースライン）測定値、例えば、本明細書に記載される、比較可能な条件で取られた測定値（例えば、本明細書に記載の治療の開始より前の同じ個体において、又は治療がない場合の１対照個体（又は複数の対照個体）の測定値）を示す。

【0122】

本明細書において使用される場合、「ポリペプチド」は、一般的に言えば、ペプチド結合によって互いに結合した少なくとも２つのアミノ酸の列（string）である。幾つかの実施形態において、ポリペプチドは少なくとも３個～５個のアミノ酸を含むことができ、それらのそれぞれは、少なくとも１つのペプチド結合によって他のアミノ酸に結合している。ポリペプチドは、場合により、「非天然」アミノ酸又は他のエンティティを含むこともあり、これらは任意でポリペプチド鎖に組み込むことができることを当業者は認識するであろう。

【0123】

本明細書において使用される場合、「タンパク質」という用語は、ポリペプチド（すなわち、ペプチド結合によって互いに連結した少なくとも２つのアミノ酸の列）を指す。タンパク質は、アミノ酸以外の部分（例えば、糖タンパク質、プロテオグリカン等であってもよい）を含むことができ、及び／又はそうでなければプロセッシング若しくは修飾を受けていてもよい。「タンパク質」は、細胞によって産生される（シグナル配列を有するか又は有さない）完全なポリペプチド鎖であってもよく、又はその特徴的な部分であってもよいことを当業者は認識するであろう。タンパク質は、例えば、１つ以上のジスルフィド結合によって連結した、又は他の手段によって結合した、２つ以上のポリペプチド鎖を含むことができることもあることを当業者は認識するであろう。ポリペプチドは、Ｌ－アミノ酸、Ｄ－アミノ酸又は両方を含有することができ、当該技術分野で既知の様々なアミノ酸修飾又は類似体のうちのいずれかを含有することができる。有用な修飾としては、例えば、末端アセチル化、アミド化、メチル化等が挙げられる。幾つかの実施形態において、タンパク質は、天然アミノ酸、非天然アミノ酸、合成アミノ酸及びこれらの組合せを含むことができる。「ペプチド」という用語は、一般に、約１００アミノ酸未満、約５０アミノ酸未満、２０アミノ酸未満又は１０アミノ酸未満の長さを有するポリペプチドを指すのに使用される。

【0124】

本明細書において使用される場合、「リガンド」という用語は、生体分子との相互作用を媒介することができる分子、例えば細胞表面受容体を指す。リガンドは、タンパク質若しくはポリペプチドの一部、又はタンパク質若しくはポリペプチドの全長配列を含み得る。リガンドはまた、生体分子との相互作用を媒介することができる任意の他の分子、例えば、適切な小分子等の細胞表面受容体を含んでいてもよい。本発明の幾つかの実施形態において、リガンドは標的細胞との生物学的相互作用を媒介する。本発明の幾つかの実施形態において、リガンドは、単離ポリペプチド又はアダプター分子と、ウイルス粒子又はウイルスカプシドとの相互作用とは異なる生物学的相互作用を媒介する。

【0125】

本明細書において使用される場合、タンパク質又はポリペプチドの「全長」という用語は、配列中に示されるアミノ酸の全てを実質的に含む標準タンパク質（canonical protein）全体を指す。本明細書において使用される場合、タンパク質又はポリペプチドの「一部」という用語は、全長タンパク質と同じ機能（例えば、標的の結合）を実質的に実現することができる全長タンパク質の特徴的な部分を指す。タンパク質又はポリペプチドの「一部」という用語は、全長タンパク質又はポリペプチドのアミノ酸の少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％を含むタンパク質部分又はポリペプチド部分を指してもよい。本明細書において使用される場合、タンパク質又はポリペプチドの「一部」は、少なくとも１００、２００、３００、４００、５００又はそれ以上のアミノ酸を含んでいてもよい。

【0126】

本明細書において使用される場合、「保存的」変化又は「保存的アミノ酸変化」という用語は、置換アミノ酸が類似の構造特性又は化学特性を有する場合を指す。タンパク質又はポリペプチドに関して、保存的変化とは、タンパク質又はポリペプチドの少なくとも１つの機能に影響を与えないアミノ酸変化（例えば、ウイルスカプシドの機能に影響を与えないアミノ酸変化）である。保存的アミノ酸置換の１つのタイプは、類似の側鎖を有する残基の互換性を指す。例えば、脂肪族側鎖を有するアミノ酸のグループは、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、及びイソロイシンであり、脂肪族ヒドロキシル側鎖を有するアミノ酸のグループはセリン及びトレオニンであり、アミド含有側鎖を有するアミノ酸のグループはアスパラギン及びグルタミンであり、芳香族側鎖を有するアミノ酸のグループは、フェニルアラニン、チロシン、及びトリプトファンであり、塩基性側鎖を有するアミノ酸のグループは、リシン、アルギニン、及びヒスチジンであり、硫黄含有側鎖を有するアミノ酸のグループはシステイン及びメチオニンである。好ましい保存的アミノ酸置換グループは、バリン－ロイシン－イソロイシン、フェニルアラニン－チロシン、リシン－アルギニン、アラニン－バリン、及びアスパラギン－グルタミンである。

【0127】

本明細書において使用される場合、「非保存的」変化又は「非保存的アミノ酸変化」という用語は、アミノ酸を、異なる構造特性又は化学特性を有する別のアミノ酸で置き換えること、例えばグリシンをトリプトファンで置き換えることを指す。タンパク質又はポリペプチドに関して、非保存的変化とは、タンパク質又はポリペプチドの少なくとも１つの機能に影響を与えるアミノ酸変化（例えば、ウイルスカプシドの機能に影響を与えるアミノ酸変化）である。生物学的活性に影響を与えることなくどのアミノ酸残基をどれだけ置換、挿入又は欠失し得るかを決定する手引きは、当該技術分野で既知のコンピュータープログラム、例えばＤＮＡＳｔａｒソフトウェアを使用して見出され得る。変異体は機能性アッセイにおいて試験することができる。或る特定の変異体は、１０％未満、好ましくは５％未満、更により好ましくは２％未満、又は１％未満で置換されたアミノ酸を有する。本明細書において使用される場合、「点突然変異」という用語は単一のアミノ酸置換を指す。

【0128】

本明細書において使用される場合、「挿入」という用語は、１つ以上の連続する異種アミノ酸残基（すなわち、野生型アミノ酸配列中の対応する位置に現れないアミノ酸）の導入を指す。挿入は、長さが１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０又はそれ以上のアミノ酸であってもよい。挿入を有しないウイルスカプシドについて言及する場合、好ましくは、ウイルスカプシドは、長さが５を超えるアミノ酸の挿入を含まない。挿入を導入する手段は、例えば遺伝的手段又は化学的手段を介して、当業者には既知であろう。

【0129】

本明細書において使用される場合、「欠失」という用語は、アミノ酸配列からの１つ以上の連続するアミノ酸残基の除去を指す。欠失は、長さが１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０又はそれ以上のアミノ酸であってもよい。欠失を有しないウイルスカプシドについて言及する場合、好ましくは、ウイルスカプシドは、長さが５を超えるアミノ酸の欠失を含まない。欠失を導入する手段は、例えば遺伝的手段又は化学的手段を介して、当業者には既知であろう。

【0130】

本明細書において使用される場合、「対象」、「個体」又は「患者」という用語は、例えば、実験的、診断的、予防的及び／又は治療的な目的のために、本発明の実施形態を使用する又は施すことができる任意の生物を指す。典型的な対象としては、動物（例えば、哺乳動物、例えば、マウス、ラット、ウサギ、非ヒト霊長類及びヒト；昆虫；蠕虫等）が挙げられる。本発明の好ましい実施形態において、対象はヒトである。

【0131】

本明細書において使用される場合、「標的細胞」又は「標的組織」という用語は、任意の細胞、組織、又は生物を指す。幾つかの実施形態において、標的細胞又は標的組織は、ウイルスベクターを介した遺伝子治療による治療の影響を受けやすい病的状態に関与する細胞又は組織である。

【0132】

本明細書において使用される場合、「治療レジメン」という用語は、部分的に又は完全に、特定の疾患、障害及び／又は状態の１つ以上の症状若しくは特徴を軽減する、該症状若しくは特徴を改善する、該症状若しくは特徴を除去する、該症状若しくは特徴を阻害する、該症状若しくは特徴を予防する、該症状若しくは特徴の発症を遅延させる、該症状若しくは特徴の重症度を低減させる、及び／又は該症状若しくは特徴の発生率を低減させる任意の方法を指す。これは、場合により、規則的な又は変化のある時間間隔によって間隔があけられた１つ以上の用量の投与を含むことができる。幾つかの実施形態において、治療レジメンは、その実行が、（例えば、細胞、組織又は生物の関連する集団にわたって）特定の効果、例えば、有害な状態若しくは疾患の低減若しくは排除を達成する、及び／又は該低減若しくは排除の達成と相関するように設計されているものである。幾つかの実施形態において、治療は、同じ又は異なる時間量にわたって、同時に、連続して、又は異なる時点のいずれかでの１つ以上の治療剤の投与を含む。幾つかの実施形態において、「治療レジメン」は、遺伝学的方法、例えば、遺伝子療法、遺伝子破壊、又は発現（例えば、特定の遺伝子産物、例えば、一次転写産物又はｍＲＮＡの転写、プロセシング及び／又は翻訳）を誘導する若しくは低減させることが知られている他の方法を含む。

【0133】

本明細書において使用される場合、「治療有効量」という用語は、任意の医療的治療に適用可能な合理的な利益／危険比で、治療される対象に治療効果を与える治療剤の量を指す。そのような治療効果は、客観的（すなわち、何らかの試験又はマーカーによって測定可能）又は主観的（すなわち、対象が効果の指標を示すか又は効果を感じる）であってもよい。幾つかの実施形態において、「治療有効量」は、例えば、疾患と関連する症状を改善することによって、疾患の発症を予防する若しくは遅延させることによって、及び／又は疾患の症状の重症度若しくは頻度を減らすことによっても、関連する疾患若しくは状態を治療する、改善する若しくは予防する（例えば、関連する疾患若しくは状態の発症を遅延させる）のに、及び／又は検出可能な治療効果若しくは予防効果を示すのに有効な、治療剤又は組成物の量を指す。治療有効量は、一般に、複数の単位用量を含むことができる投与レジメンで投与される。任意の特定の治療剤に関して、治療有効量（及び／又は有効な投与レジメン内の適切な単位用量）は、例えば、投与経路又は他の治療剤との組合せに応じて変動してもよい。代替的に又は付加的に、任意の特定の患者のための特定の治療有効量（及び／又は単位用量）は、用いられる特定の治療剤の活性；用いられる特定の組成物；患者の年齢、体重、全体的な健康状態、性別及び食事；用いられる特定の治療剤の投与時間、投与経路及び／又は排出若しくは代謝の速度；治療の継続期間；医療技術分野で既知であるような因子を含めて、様々な因子に依存してもよい。

【0134】

本発明の幾つかの実施形態において、治療方法は、本明細書に記載の組成物又はウイルス粒子を治療有効量で投与することを含む。本発明の幾つかの実施形態において、本明細書で使用するために記載される組成物は、治療有効量で投与される。

【0135】

本明細書において使用される場合、「治療」（さらに「治療する」又は「治療すること」）という用語は、部分的に又は完全に、特定の疾患、障害及び／又は状態の１つ以上の症状若しくは特徴を軽減する、該症状若しくは特徴を改善する、該症状若しくは特徴を除去する、該症状若しくは特徴を阻害する、該症状若しくは特徴の発症を遅延させる、該症状若しくは特徴の重症度を低減させる及び／又は該症状若しくは特徴の発生率を低減させるという点において所望の効果を達成する、治療レジメンによる治療剤の任意の投与を指す。幾つかの実施形態において、治療レジメンによる治療剤の投与が、所望の効果の達成と相関している。そのような治療は、関連する疾患、障害及び／又は状態の徴候を示さない対象のもの、及び／又は疾患、障害及び／又は状態の初期徴候しか示さない対象のものであってもよい。代替的に又は付加的に、そのような治療は、関連する疾患、障害及び／又は状態の１つ以上の確立された徴候を示す対象のものであってもよい。幾つかの実施形態において、治療は、関連する疾患、障害及び／又は状態を患っていると診断された対象のものであってもよい。幾つかの実施形態において、治療は、関連する疾患、障害及び／又は状態の発生の危険性の増大と統計的に相関している１つ以上の罹病性因子を有すると知られている対象のものであってもよい。

【0136】

「抗体」という用語には、ジスルフィド結合によって相互接続された、２つの重（Ｈ）鎖及び２つの軽（Ｌ）鎖の４つのポリペプチド鎖を含む免疫グロブリン分子が含まれる。各重鎖は、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び重鎖定常領域（ＣＨ）を含む。重鎖定常領域は、少なくとも３つのドメインＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、及び任意にＣＨ４を含む。各軽鎖は、軽鎖可変ドメイン（ＣＨ）及び軽鎖定常領域（ＣＬ）を含む。重鎖及び軽鎖可変ドメインは、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存された領域が組み入れられた、相補的決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変領域に更に細分することができる。各重鎖及び軽鎖可変ドメインは、アミノ末端からカルボキシ末端まで次の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４で配置された３つのＣＤＲ及び４つのＦＲを含む（重鎖ＣＤＲは、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３と略してもよく、軽鎖ＣＤＲは、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と略してもよい）。典型的な四量体抗体構造は、２つの同一の抗原結合ドメインを含み、該抗原結合ドメインはそれぞれ、ＶＨドメインとＶＬドメインとの会合によって形成され、それぞれが各々のＣＨドメイ及びＣＬドメインとともに、抗体のＦｖ領域を形成する。単一ドメイン抗体は、単一の抗原結合ドメイン、例えばＶＨ又はＶＬを含む。抗体の抗原結合ドメイン、例えば、抗原の特異的結合対の第１のメンバーを認識して結合する抗体の一部分は、「パラトープ」とも称される。それは、抗体のＦｖ領域の（５～１０のアミノ酸の）小領域、すなわち抗原結合フラグメント（Ｆａｂ領域）の一部分であり、抗体の重鎖及び／又は軽鎖の一部分を含有する場合がある。パラトープが特異的結合対の第１のメンバーに高い親和性で結合する場合、パラトープは、特異的結合対の第１のメンバーに特異的に結合する。「高親和性」抗体という用語は、特異的結合対の標的の第１のメンバーに関して、約１０^－９Ｍ以下（例えば、約１×１０^－９Ｍ、１×１０Ｍ^－１０Ｍ、１×１０^－１１Ｍ、又は約１×１０^－１２Ｍ）のＫＤを有する抗体を指す。一実施形態において、ＫＤは表面プラズモン共鳴、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）によって測定され、別の実施形態では、ＫＤはＥＬＩＳＡによって測定される。

【0137】

「相補的決定領域」という語句又は「ＣＤＲ」という用語には、通常（すなわち、野生型動物において）免疫グロブリン分子（例えば、抗体又はＴ細胞受容体）の軽鎖又は重鎖の可変領域における２つのフレームワーク領域の間に現れる生物の免疫グロブリン遺伝子の核酸配列によってコードされるアミノ酸配列が含まれる。ＣＤＲは、例えば、生殖系列配列、又は再配置された若しくは再配置されていない配列によって、また例えば、ナイーブ又は成熟Ｂ細胞又はＴ細胞によってコードされ得る。ＣＤＲは、体細胞変異（例えば、動物の生殖系列においてコードされる配列とは異なる）、ヒト化、及び／又は、アミノ酸の置換、挿入若しくは欠失による修飾が可能である。状況によっては（例えば、ＣＤＲ３の場合）、ＣＤＲは、（例えば、再配置されていない核酸配列内では）連続していないが、Ｂ細胞核酸配列内では、例えば、配列のスプライシング又は接続（例えば、重鎖ＣＤＲ３を形成するためのＶ－Ｄ－Ｊ組換え）の結果として連続している、２つ以上の配列（例えば、生殖系列配列）によってコードされ得る。

【0138】

「重鎖」又は「免疫グロブリン重鎖」という語句には、任意の生物由来の、免疫グロブリン重鎖定常領域配列を含む免疫グロブリン重鎖配列が含まれる。重鎖可変ドメインは、特に指定のない限り３つの重鎖ＣＤＲ及び４つのＦＲ領域を含む。重鎖のフラグメントとしては、ＣＤＲ、ＣＤＲ及びＦＲ、並びにそれらの組合せが挙げられる。典型的な重鎖は、（Ｎ末端からＣ末端までの）可変ドメインに続いて、ＣＨ１ドメイン、ヒンジ、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメインを有する。重鎖の機能性フラグメントには、特異的結合対の第１のメンバーを特異的に認識する（例えば、マイクロモル、ナノモル又はピコモル範囲のＫＤを有する特異的結合対の第１のメンバーを認識する）ことができ、細胞から発現及び分泌することができ、かつ少なくとも１つのＣＤＲを含むフラグメントが含まれる。重鎖可変ドメインは、生殖系列に存在するＶＨ、ＤＨ及びＪＨセグメントのレパートリーに由来するＶＨ、ＤＨ及びＪＨセグメントを総じて含む可変領域ヌクレオチド配列によってコードされる。

【0139】

「軽鎖」という語句には、任意の生物由来の免疫グロブリン軽鎖配列が含まれ、特に指定のない限り、ヒトκ及びλ軽鎖、及びＶｐｒｅＢ、並びに代替軽鎖が含まれる。軽鎖可変ドメインは典型的に、特に指定のない限り、３つの軽鎖ＣＤＲ及び４つのフレームワーク（ＦＲ）領域を含む。概して、全長軽鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端まで、ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４を含む可変ドメイン、及び軽鎖定常領域を含む。軽鎖可変ドメインは、生殖系列に存在するＶセグメント及びＪセグメントのレパートリーに由来するＶＬセグメント及びＪＬセグメントを総じて含む軽鎖可変領域遺伝子配列によってコードされる。様々な生物のＶ軽鎖セグメント及びＪ軽鎖セグメントの配列、位置及び命名法は、ＩＭＧＴデータベース（www.imgt.org）で見ることができる。軽鎖には、例えば、それらが現れる、特異的結合対と結合するタンパク質の第１のメンバーによって選択的に結合される、特異的結合対の第１又は第２の第１のメンバーいずれかと選択的に結合しないものを含む。軽鎖にはまた、それらが現れる、特異的結合対と結合するタンパク質の第１のメンバーによって選択的に結合される、特異的結合対の１つ以上の第１のメンバーに結合して認識することで、重鎖又は別の軽鎖に結合、認識又は補助するものも含まれる。共通又はユニバーサル軽鎖には、ヒトＶκ１－３９Ｊκ遺伝子又はヒトＶκ３－２０Ｋκ遺伝子に由来するものが含まれ、またそれらの体細胞変異（例えば、親和性成熟）型が含まれる。例示的なヒトＶＬセグメントとしては、ヒトＶκ１－３９遺伝子セグメント、ヒトＶκ３－２０遺伝子セグメント、ヒトＶλ１－４０遺伝子セグメント、ヒトＶλ１－４４遺伝子セグメント、ヒトＶλ２－８遺伝子セグメント、ヒトＶλ２－１４遺伝子セグメント、及びヒトＶλ３－２１遺伝子セグメントが挙げられ、またそれらの体細胞変異（例えば、親和性成熟）型が挙げられる。或る１つの生物（例えば、ヒト、又は齧歯類、例えばラット若しくはマウス、又はトリ、例えばニワトリ）由来の可変ドメイン、及び同じ又は異なる生物（例えば、ヒト、又は齧歯類、例えばラット若しくはマウス、又はトリ、例えばニワトリ）由来の定常領域を含む軽鎖を生成することができる。

【0140】

「カプシドタンパク質」という用語には、ウイルスのカプシドの一部分であるタンパク質が含まれる。アデノ随伴ウイルスの場合、カプシドタンパク質は概して、ＶＰ１、ＶＰ２及び／又はＶＰ３を指し、また単一のｃａｐ遺伝子によってコードされる。ＡＡＶの場合、３つのＡＡＶカプシドタンパク質は、３つのタンパク質全てが共通の終止コドンを使用するが、ｍＲＮＡの選択的スプライシング及び／又は翻訳開始コドンの選択的使用を介して、ｃａｐオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）から重複して生成される。

【0141】

本明細書で使用される「野生型」という用語には、（突然変異体、病変したもの、変性したもの等と対比して）「正常な」状態又は状況において自然界に見られるような構造及び／又は活性を有する存在が含まれる。当業者は、野生型ウイルスベクター、例えば野生型カプシドタンパク質を、修飾カプシドとの比較研究において参照ウイルスベクターとして使用し得ることを理解するであろう。概して、参照ウイルスカプシドタンパク質／カプシド／ベクターは、効果を試験するための変化を除いて、被検ウイルスカプシドタンパク質／カプシド／ベクターと同一である。ポリヌクレオチド又はポリペプチドに関して使用される場合、「野生型」とは、野生型生物内に見られるか又は野生型生物によって発現されるポリヌクレオチド又はポリペプチドの天然（未修飾）形態を指す。

【0142】

本明細書において使用される場合、「共有結合性」、「共有結合」又は「共有結合した」という用語は、原子間の電子対の共有を伴う化学結合を指す。これらの電子対は共有電子対又は結合電子対として知られており、原子間の引力と反発力との安定したバランスにより共有結合が形成される。多くの分子では、電子の共有により、各原子は、安定した電子配置に対応する完全な価電子殻と同等の状態に達することができる。本発明の好ましい実施形態において、共有結合は、ジスルフィド（ＳＳ結合）であり、２つのチオール基のカップリングによって誘導され得る。２つのシステイン残基のチオール基間の共有結合は、タンパク質の二次構造及び三次構造の重要な要素である。共有結合は、イオン結合又は電磁分子間力等の他の結合形態よりも１つ以上の生体分子間に強力な連結をもたらし得る。

【0143】

本明細書において使用される場合、「ウイルスアダプター分子」という用語は、ウイルスカプシドに結合することが可能なポリペプチドとリガンドとを含むタンパク質、融合タンパク質、又は接合化合物を指す。「ウイルスアダプター」という用語も、かかる化合物を指すのに使用されることがある。幾つかの実施形態において、「ウイルスアダプター分子」という用語は、ウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上のシステイン残基を含むポリペプチドとリガンドとを含むタンパク質、融合タンパク質、又は接合化合物を指す。「ウイルスアダプター」又は「共有結合性ウイルスアダプター」という用語も、かかる化合物を指すのにも使用されることがある。本明細書において使用される場合、「ＡＡＶアダプター分子」という用語は、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドに結合することが可能なポリペプチドとリガンドとを含むタンパク質、融合タンパク質、又は接合化合物を指す。「ＡＡＶアダプター」という用語もかかる化合物を指すのに使用されることがある。

【0144】

遺伝子療法
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の組換えウイルスベクターは、ウイルスカプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドに結合したウイルス粒子、又はウイルスカプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドとリガンドとを含むウイルスアダプター分子を含み、なお、ウイルス粒子は目的のヌクレオチドを封入する。幾つかの実施形態において、目的のヌクレオチドは、ウイルスプロモーター、細菌プロモーター、哺乳動物プロモーター、鳥類プロモーター、魚プロモーター、昆虫プロモーター、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択されるプロモーターの制御下にある。幾つかの実施形態において、目的のヌクレオチドは非ヒトプロモーターの制御下にある。幾つかの実施形態において、プロモーターはサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターである。幾つかの実施形態において、プロモーターはＥＦ１αプロモーターである。幾つかの実施形態において、プロモーターはＣＡＧＧプロモーターである。幾つかの実施形態において、プロモーターはユビキチンＣ（ＵｂＣ）プロモーターである。

【0145】

幾つかの実施形態において、本明細書に記載の組換えウイルスベクターは、ウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上の異種システイン残基を含む単離ポリペプチドに共有結合したウイルス粒子、又はウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上の異種システイン残基を含む単離ポリペプチドとリガンドとを含むウイルスアダプター分子を含み、なお、ウイルス粒子は目的のヌクレオチドを封入する。幾つかの実施形態において、目的のヌクレオチドは、ウイルスプロモーター、細菌プロモーター、哺乳動物プロモーター、鳥類プロモーター、魚プロモーター、昆虫プロモーター、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択されるプロモーターの制御下にある。幾つかの実施形態において、目的のヌクレオチドは非ヒトプロモーターの制御下にある。幾つかの実施形態において、プロモーターはサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターである。幾つかの実施形態において、プロモーターはＥＦ１αプロモーターである。幾つかの実施形態において、プロモーターはＣＡＧＧプロモーターである。幾つかの実施形態において、プロモーターはユビキチンＣ（ＵｂＣ）プロモーターである。

【0146】

概して、目的のヌクレオチド又は遺伝子は、検出可能なマーカー、例えばレポーター、又は治療用ポリペプチドをコードし得る１つ以上の遺伝子であり得る。幾つかの実施形態において、目的のヌクレオチドはレポーター遺伝子である。幾つかの実施形態において、目的のヌクレオチド又は遺伝子は、緑色蛍光タンパク質、ルシフェラーゼ、β－ガラクトシダーゼ等からなる群から選択される検出可能なマーカーをコードするレポーター遺伝子である。幾つかの実施形態において、検出可能なマーカーは緑色蛍光タンパク質である。他の実施形態において、目的のヌクレオチドは、自殺遺伝子、抗体又はそのフラグメントをコードするヌクレオチド、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステム又はその一部（複数の場合もある）をコードするヌクレオチド、アンチセンスＲＮＡをコードするヌクレオチド、ｓｉＲＮＡをコードするヌクレオチド、分泌酵素、治療用タンパク質をコードする遺伝子等からなる群から選択される。一実施形態において、目的のヌクレオチドは、マルチドメイン治療薬、例えば、２つの異なる機能をもたらす少なくとも２つのドメインを含むタンパク質をコードする。

【0147】

本明細書に記載の組成物は、本明細書に記載の組換えウイルス粒子を含み、例えば、ウイルスカプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドに結合したウイルス粒子、又はウイルスカプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドとリガンドとを含むウイルスアダプター分子を含み、なお、ウイルス粒子が目的のヌクレオチド又は遺伝子を封入する、ウイルスベクターを含んでいてもよい。

【0148】

本明細書に記載の組成物は、本明細書に記載の組換えウイルス粒子を含み、例えば、ウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上の異種システイン残基を含む単離ポリペプチドに共有結合したウイルス粒子、又はウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上の異種システイン残基を含む単離ポリペプチドとリガンドとを含むウイルスアダプター分子を含み、なお、ウイルス粒子が目的のヌクレオチド又は遺伝子を封入する、ウイルスベクターを含んでいてもよい。

【0149】

また、本明細書には、組換えウイルスカプシドタンパク質、それを含むウイルスベクター、組成物等を製造及び使用する方法が記載される。幾つかの実施形態において、ウイルス、例えば、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス等をリダイレクトし、診断用／治療用カーゴを標的細胞等に送達する方法は、標的細胞（ｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｉｎ ｖｉｖｏ、例えばヒトにおけるものであってもよい）を、本明細書に記載の組換えウイルスカプシドタンパク質を含む組換えウイルスベクターと接触させることを含む。かかる方法は、第１の工程としてウイルスベクターを生成すること、例えば、ウイルスベクターの生成に十分な条件でパッケージング細胞を培養することを含んでいてもよく、なお、パッケージング細胞は、ウイルスカプシドに結合することが可能な単離ポリペプチド、又はウイルスカプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドとリガンドとを含むウイルスアダプター分子をコードするプラスミドを含む。かかる方法は、第１の工程としてウイルスベクターを生成すること、例えば、ウイルスベクターの生成に十分な条件でパッケージング細胞を培養することを含んでいてもよく、なお、パッケージング細胞は、ウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上の異種システイン残基を含む単離ポリペプチド、又はウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上の異種システイン残基を含む単離ポリペプチドとリガンドとを含むウイルスアダプター分子をコードするプラスミドを含む。

【0150】

幾つかの実施形態において、標的細胞は（ヒト）肝細胞であり、（モザイク）組換えウイルスベクターは、アシアロ糖タンパク質受容体、例えば（ｈ）ＡＳＧＲ１に特異的に結合する標的化リガンドを含む。幾つかの実施形態において、標的細胞は（ヒト）神経細胞であり、（モザイク）組換えウイルスベクターは、ＧＡＢＡ、トランスフェリン受容体等に特異的に結合する標的化リガンドを含む。幾つかの実施形態において、標的細胞は（ヒト）Ｔ細胞であり、（モザイク）組換えウイルスベクターは、ＣＤ３、例えばＣＤ３εに特異的に結合する標的化リガンドを含む。幾つかの実施形態において、標的細胞は（ヒト）造血幹細胞であり、（モザイク）組換えウイルスベクターは、ＣＤ３４に特異的に結合する標的化リガンドを含む。幾つかの実施形態において、標的細胞は（ヒト）腎臓細胞である。幾つかの実施形態において、標的細胞は（ヒト）筋細胞であり、（モザイク）組換えウイルスベクターは、インテグリンに特異的に結合する標的化リガンドを含む。幾つかの実施形態において、標的細胞は（ヒト）癌細胞であり、（モザイク）組換えウイルスベクターは、腫瘍関連抗原、例えば、Ｅ６及びＥ７、Ｈｅｒ２等に特異的に結合する標的化リガンドを含む。幾つかの実施形態において、標的化リガンドはヒトグルカゴン受容体（ｈＧＣＧＲ）に結合する。

【0151】

本明細書に提示されるウイルス粒子の（例えば、目的のヌクレオチドの）遺伝学的なカーゴ容量は様々な値をとることができる。ウイルス粒子の遺伝学的なカーゴ容量は、５．０ｋｂ、５．１ｋｂ、５．２ｋｂ、５．３ｋｂ、５．４ｋｂ、５．５ｋｂ、５．６ｋｂ、５．７ｋｂ、５．８ｋｂ、５．９ｋｂ、６．０ｋｂ、６．１ｋｂ、６．２ｋｂ、６．３ｋｂ、６．４ｋｂ、６．５ｋｂ、６．６ｋｂ、６．７ｋｂ、６．８ｋｂ、６．９ｋｂ、７．０ｋｂ、７．１ｋｂ、７．２ｋｂ、７．３ｋｂ、７．４ｋｂ、７．５ｋｂ、７．６ｋｂ、７．７ｋｂ、７．８ｋｂ、７．９ｋｂ、８．０ｋｂ、８．１ｋｂ、８．２ｋｂ、８．３ｋｂ、８．４ｋｂ、８．５ｋｂ、８．６ｋｂ、８．７ｋｂ、８．８ｋｂ、８．９ｋｂ、９．０ｋｂ、９．１ｋｂ、９．２ｋｂ、９．３ｋｂ、９．４ｋｂ、９．５ｋｂ、９．６ｋｂ、９．７ｋｂ、９．８ｋｂ、９．９ｋｂ、１０．０ｋｂ、又はこれらの値のいずれか２つの間の数値若しくは範囲であってもよく、又はおよそこれらとすることができる。ウイルス粒子の遺伝学的なカーゴ容量は、少なくとも５．０ｋｂ、５．１ｋｂ、５．２ｋｂ、５．３ｋｂ、５．４ｋｂ、５．５ｋｂ、５．６ｋｂ、５．７ｋｂ、５．８ｋｂ、５．９ｋｂ、６．０ｋｂ、６．１ｋｂ、６．２ｋｂ、６．３ｋｂ、６．４ｋｂ、６．５ｋｂ、６．６ｋｂ、６．７ｋｂ、６．８ｋｂ、６．９ｋｂ、７．０ｋｂ、７．１ｋｂ、７．２ｋｂ、７．３ｋｂ、７．４ｋｂ、７．５ｋｂ、７．６ｋｂ、７．７ｋｂ、７．８ｋｂ、７．９ｋｂ、８．０ｋｂ、８．１ｋｂ、８．２ｋｂ、８．３ｋｂ、８．４ｋｂ、８．５ｋｂ、８．６ｋｂ、８．７ｋｂ、８．８ｋｂ、８．９ｋｂ、９．０ｋｂ、９．１ｋｂ、９．２ｋｂ、９．３ｋｂ、９．４ｋｂ、９．５ｋｂ、９．６ｋｂ、９．７ｋｂ、９．８ｋｂ、９．９ｋｂ、又は１０．０ｋｂであってもよく、又は最大でこれらとすることができる。遺伝学的なカーゴ容量は、（ｉ）ウイルス粒子がＤＮＡｓｅ Ｉ消化から保護することができる一本鎖ＤＮＡ分子の最大長、及び／又は（ｉｉ）ウイルス粒子がＤＮＡｓｅ Ｉ消化から保護することができる二本鎖ＤＮＡ分子の最大長であってもよい。一本鎖ＤＮＡ分子は、自己ハイブリダイズして二本鎖領域を形成することができる。一本鎖ＤＮＡ分子は、自己相補的ＡＡＶ（ｓｃＡＡＶ）ベクターを含んでいてもよい。

【0152】

アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）
アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）は、ヒト及び他の幾つかの霊長類種に感染する小型ウイルスである。それらはディペンドパルボウイルス（Dependoparvovirus）属に属し、更にパルボウイルス（Parvoviridae）科に属する。それらは小型（２０ｎｍ）の複製欠陥のある無エンベロープウイルスであり、およそ４．８キロベース（ｋｂ）の直鎖状一本鎖ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）ゲノムを有する。

【0153】

ＡＡＶが疾患を引き起こすことは現在知られていない。ウイルスは非常に穏やかな免疫反応を引き起こす。幾つかの追加の特徴により、ＡＡＶは、遺伝子治療用のウイルスベクターの生成にとって、また同一遺伝子型ヒト疾患モデルの生成にとって魅力的な候補となっている。ＡＡＶを使用した遺伝子療法ベクターは、分裂細胞及び静止細胞の両方に感染し、宿主細胞のゲノムに組み込まれることなく染色体外状態で存続し得るが、天然ウイルスでは、ウイルスによって運搬された遺伝子の宿主ゲノムへの組込みが起こる。

【0154】

ＡＡＶゲノムは、ポジティブセンス又はネガティブセンスいずれかの一本鎖デオキシリボ核酸（ｓｓＤＮＡ）で構築されており、その長さは約４．７キロベースである。ゲノムは、ＤＮＡ鎖の両端の逆方向末端反復（ＩＴＲ）配列と、２つのオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）：ｒｅｐ及びｃａｐとを含む。前者は、ＡＡＶライフサイクルに必要なＲｅｐタンパク質をコードする４つの重複遺伝子で構成され、後者には、カプシドタンパク質ＶＰ１、ＶＰ２及びＶＰ３の重複ヌクレオチド配列が含まれ、これらが相互作用して正二十面体対称のカプシドを形成する。

【0155】

逆方向末端反復（ＩＴＲ）配列はそれぞれ１４５塩基を含む。それらは、ＡＡＶゲノムの効率的な増殖に必要であることが示された対称性のためにそのように名付けられている。この特性を与えるこれらの配列の特徴は、ヘアピンを形成する能力であり、これは、第２ＤＮＡ鎖のプライマーゼ非依存性合成を可能にする、いわゆるセルフプライミングに寄与する。ＩＴＲは、ＡＡＶ ＤＮＡの宿主細胞ゲノム（ヒトでは１９番目の染色体）への組込みと、そこからの救出の両方に必要であること、また、完全に組み立てられたデオキシリボヌクレアーゼ耐性ＡＡＶ粒子の生成と組み合わせたＡＡＶ ＤＮＡの効率的なカプシド形成にも必要であることも示された。

【0156】

ゲノムの「左側」には、ｐ５及びｐ１９と呼ばれる２つのプロモーターがあり、そこから、異なる長さの２つの重複するメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）が生成され得る。これらはそれぞれ、スプライスアウトされる場合とされない場合があるイントロンを含有する。これらの可能性を考慮すると、４つのｍＲＮＡ、したがって重複する配列を有する４つのＲｅｐタンパク質を合成することができる。それらの名前であるＲｅｐ７８、Ｒｅｐ６８、Ｒｅｐ５２及びＲｅｐ４０は、それらのサイズをキロダルトン（ｋＤａ）で表す。Ｒｅｐ７８及びＲｅｐ６８は、セルフプライミング作用でＩＴＲによって形成されたヘアピンに特異的に結合し、ヘアピン内の指定された末端解離部位である特定の領域で切断することができる。それらはまた、ＡＡＶゲノムのＡＡＶＳ１特異的組込みに必要であることも示された。４つのＲｅｐタンパク質は全て、ＡＴＰに結合し、ヘリカーゼ活性を有することが示された。また、それらはｐ４０プロモーター（後述）からの転写を上方制御し、ｐ５及びｐ１９プロモーターの両方を下方制御することが示された。

【0157】

ポジティブセンスＡＡＶゲノムの右側は、ｐ４０と表される１つのプロモーターから開始する３つのカプシドタンパク質ＶＰ１、ＶＰ２及びＶＰ３の重複配列をコードする。これらのタンパク質の分子量はそれぞれ、８７キロダルトン、７２キロダルトン及び６２キロダルトンである。ＡＡＶカプシドは、１：１：１０の比率で正二十面体対称に配置された合計６０モノマーのＶＰ１、ＶＰ２及びＶＰ３の混合物で構成され、推定サイズは３．９メガダルトンである。

【0158】

ｃａｐ遺伝子は、アセンブリ活性化タンパク質（ＡＡＰ）と呼ばれる追加の非構造タンパク質を生成する。このタンパク質はＯＲＦ２から生成され、カプシド構築プロセスに不可欠である。

【0159】

３つのＶＰは全て１つのｍＲＮＡから翻訳される。このｍＲＮＡは合成した後、２つの異なる方法でスプライシングされ得る。長いイントロン又は短いイントロンのいずれかが切除され、２．３ｋｂ長及び２．６ｋｂ長のｍＲＮＡプールの２つのｍＲＮＡプールが形成され得る。通常、特にアデノウイルスの存在下では、長いイントロンが好ましいため、２．３ｋｂ長のｍＲＮＡがいわゆる「メジャースプライス」に相当する。この形態では、ＶＰ１タンパク質の合成が開始される最初のＡＵＧコドンがスプライスアウトされ、ＶＰ１タンパク質合成の全体的なレベルが低下する。メジャースプライスに残る第１のＡＵＧコドンは、ＶＰ３タンパク質の開始コドンである。しかしながら、同じオープンリーディングフレーム内のそのコドンの上流には、最適なコダックコンテキストに囲まれたＡＣＧ配列がある。

【0160】

より大きなイントロンが好ましくはスプライスアウトされ、メジャースプライスでは、ＡＣＧコドンが遥かに弱い翻訳開始シグナルであるため、ＡＡＶ構造タンパク質がｉｎ ｖｉｖｏで合成される比率は約１：１：１０であり、成熟ウイルス粒子と同じである。ＶＰ１タンパク質のＮ末端にある特有のフラグメントは、おそらく後期エンドソームからのＡＡＶ粒子の放出に必要なホスホリパーゼＡ２（ＰＬＡ２）活性を有することが示された。

【0161】

ＡＡＶは、ヒト及び他の霊長類において高度に蔓延しており、幾つかの血清型が様々な組織試料から単離されている。血清型２、３、５及び６がヒト細胞で発見され、ＡＡＶ血清型１、４及び７～１１が非ヒト霊教類試料で発見された。ＡＡＶカプシドタンパク質には１２の超可変表面領域が含まれ、殆どの変化は三重の近位ピーク（threefold proximal peaks）で発生するが、パルボウイルスゲノムは一般に、血清型全体にわたって高度に保存された複製及び構造遺伝子を示す。既知の血清型は全て、複数の多様な組織型の細胞に感染し得る。組織特異性はカプシド血清型によって決定され、ＡＡＶベクターの指向性範囲を変更するシュードタイピングは、治療におけるそれらの使用にとって重要となり得ると考えられる。

【0162】

血清型２（ＡＡＶ２）は、これまでに最も広範囲に検査されている。ＡＡＶ２は、骨格筋、ニューロン、血管平滑筋細胞及び肝細胞に対する自然な指向性を示す。ＡＡＶ２については、へパラン硫酸プロテオグリカン（ＨＳＰＧ）、ａＶβ５インテグリン及び線維芽細胞増殖因子受容体１（ＦＧＦＲ－１）の３つの細胞受容体が述べられている。前者は一次受容体として機能するのに対し、後の２つは共受容体活性を有し、受容体媒介エンドサイトーシスによってＡＡＶが細胞に侵入することができるようにする。ＨＳＰＧは一次受容体として機能するが、細胞外マトリックスに豊富に存在するとＡＡＶ粒子を捕捉して、感染効率を損なう可能性がある。

【0163】

研究により、ウイルス血清型２（ＡＡＶ２）癌細胞は健康な細胞に害を及ぼさないことが示されている。「我々の結果から、アデノ随伴ウイルス型２は、人口の大部分に感染しているものの悪影響は知られておらず、複数の種類の癌細胞を死滅させるが、健康な細胞には影響を及ぼさないことが示唆される」と、２００５年にペンシルバニア州立大学医学校（ペンシルバニア州）の免疫学と微生物学の教授であるCraig Meyersは述べた［６９］［７０］。これは新たな抗癌剤につながると考えられる。

【0164】

他の血清型。ＡＡＶ２は様々なＡＡＶに基づく研究において最も一般的な血清型であるが、他の血清型も遺伝子送達ベクターとしてより効果的であり得ることが示されている。例えば、ＡＡＶ６は気道上皮細胞への感染において遥かに優れているように見受けられ、ＡＡＶ７はネズミ骨格筋細胞の非常に高い形質導入率を示し（ＡＡＶ１及びＡＡＶ５も同様）、ＡＡＶ８は肝細胞への形質導入に優れており、ＡＡＶ１及びＡＡＶ５は、血管内皮細胞への遺伝子送達において非常に効率的であることが示された。脳では、殆どのＡＡＶ血清型が神経向性を示す一方、ＡＡＶ５は星状膠細胞にも形質導入する。また、ＡＡＶ１とＡＡＶ２とのハイブリッドであるＡＡＶ６はＡＡＶ２よりも低い免疫原性を示す。

【0165】

血清型は、それらが結合する受容体に関して異なり得る。例えば、ＡＡＶ４及びＡＡＶ５の形質導入は、可溶性シアル酸（これらの血清型毎に異なる形態）によって阻害される場合があり、ＡＡＶ５は、血小板由来増殖因子受容体を介して細胞に侵入することが示された。

【0166】

臨床及び研究の両方の目的で、新たなＡＡＶ変異体を改変及び改良するために多くの努力がなされてきた。このような修飾には、特定の組織を標的とする新たな指向性、及び免疫系による検出を回避するための修飾表面残基が含まれる。研究者等は、特定の細胞を標的とするために特定の組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）株を選ぶだけでなく、更に精細な標的にアプローチするために或る特定のＡＡＶ株のハイブリッドを作製する実践であるＡＡＶシュードタイピングも研究してきた。ハイブリッドは、或る１つの株からカプシドを取得し、別の株からゲノムを取得することによって作製される。例えば、ＡＡＶ２のゲノムとＡＡＶ５のカプシドとのハイブリッドであるＡＡＶ２／５を伴う研究では、脳細胞において、ハイブリダイズしていないＡＡＶ２が実現するよりも高い精度及び範囲を実現することができた。研究者等は、ハイブリッドカプシドを有する株を作製することにより、シュードタイピングの実験を続けてきた。ＡＡＶ－ＤＪは、８つの異なるＡＡＶ株からのハイブリッドカプシドを有するため、体の多くの領域の種々の細胞に感染することができ、これは、限られた指向性を有する単一株のＡＡＶには存在しない特性である。新たなＡＡＶ変異体を改変及び改良する他の取組みは、臨床用途及びＡＡＶ生物学の研究向けに特性を強化した新たなベクターを生成するために、ウイルス変異体の祖先を再構築することを伴っている。

【0167】

キメラ抗原受容体ウイルス（ＣＡＲ－Ｖ）
本明細書において使用される場合、キメラ抗原受容体ウイルス、すなわちＣＡＲ－Ｖは、細胞表面リガンド又は抗原に結合することが可能な合成タンパク質（キメラ抗原受容体）の表面提示によって指向性が変更されたウイルス粒子である。提示される例では、ＣＡＲ－Ｖは、室温で５００μＬ反応中、０．１μｇ～１μｇのカプシドを、改変した表面発現抗ｓｆＧＦＰナノボディの形態で合成表面抗原に結合することが可能な濃度１５μＭのｓｆＧＦＰ－ＰＫＤ２アダプター分子の形態の合成受容体と一晩カップリングすることによって、ＡＡＶ１ Ａｓｐ５９０Ｃｙｓビリオンから得ることができる。

【0168】

ウイルス様粒子（ＶＬＰ）
ウイルス様粒子（ＶＬＰ）は、ウイルスに似た分子であるが、ウイルス遺伝物質を含まないため非感染性である。それらは、天然に存在することもあれば、ウイルス構造タンパク質の個々の発現によって合成され、次いでウイルス様構造に自己組織化することもある（Zeltins, Molecular Biotechnology volume 53, pages 92-107 (2013)）。種々のウイルス由来の構造カプシドタンパク質の組合せを使用して、組換えＶＬＰを作製することができる。ｉｎ ｖｉｖｏでの組織化（すなわち、複数のタンパク質の組換え共発現を介したＥ．コリ（E. coli）等の細胞内での組織化）及びｉｎ ｖｉｔｒｏでの組織化（すなわち、化学量論量の精製済みタンパク質を使用した反応容器内におけるタンパク質の自己組織化）の両方を使用して、ウイルス様粒子を形成することができる。

【0169】

ＶＬＰは、パルボウイルス科（例えば、アデノ随伴ウイルス）、レトロウイルス科（例えば、ＨＩＶ）、フラビウイルス科（例えば、Ｃ型肝炎ウイルス）、パラミクソウイルス科（例えば、ニパ）及びバクテリオファージ（例えば、Ｑβ、ＡＰ２０５）を含む多種多様なウイルスファミリーのコンポーネントから生成されている。ＶＬＰは、細菌、哺乳動物細胞株、昆虫細胞株、酵母及び植物細胞を含む複数の細胞培養系で生成することができる。

【0170】

ＶＬＰは、自然界の幾つかのＬＴＲレトロトランスポゾンによって生成される構造を指す場合もある。これらは、欠陥のある未熟なビリオンであり、遺伝物質を含有することもあるが、機能性ウイルスエンベロープが欠如しているため一般に非感染性である。

【0171】

作用物質の医薬組成物
本発明の他の態様はまた、本発明による単離ポリペプチド、ＡＡＶアダプター分子、ウイルスアダプター分子、ウイルス粒子、ウイルス様粒子、核酸又は細胞、必要に応じて、例えば生理食塩水、安定剤若しくはプロテイナーゼ阻害剤等の適切な賦形剤及び添加剤を含む、医薬品又は診断補助薬に関する。

【0172】

キット
本発明の幾つかの実施形態において、本明細書に記載の作用物質（例えば、単離ポリペプチド、ＡＡＶアダプター分子、ウイルスアダプター分子、ウイルス粒子、ウイルス様粒子、核酸、細胞、又は医薬組成物）はキットで提供することができる。幾つかの例では、キットは、（ａ）本明細書に記載の作用物質を含む容器と、場合により（ｂ）情報資料とを含む。情報資料は、本明細書に記載の方法及び／又は例えば治療的利益のための作用物質の使用に関する、説明資料、指示的資料、マーケティング資料又は他の資料であり得る。

【0173】

キットの情報資料は、その形式が制限されない。幾つかの例では、情報資料は、治療剤の製造、治療剤の分子量、濃度、有効期限、バッチ又は製造場所の情報等に関する情報を含むことができる。他の局面では、情報資料は、例えば、投与の適切な量、方式又は様式（例えば、本明細書に記載の投与の用量、剤形又は様式）で治療剤を投与する方法に関する。

【0174】

或る場合には、情報資料、例えば指示書は、印刷物、例えば、印刷された文章、図面及び／又は写真、例えば、ラベル又は印刷されたシートで提供される。情報資料は、他の型式、例えば、点字、コンピューター可読資料、ビデオ録画物又は録音物で提供することもできる。他の例では、キットの情報資料は、キットの使用者が、その中の治療剤及び／又は本明細書に記載の方法におけるその使用に関して本質的な情報を得ることができる、問い合わせ先、例えば、物理アドレス、電子メールアドレス、ウェブサイト又は電話番号である。情報資料は、型式の任意の組合せで提供することもできる。

【0175】

治療剤に加えて、キットは、他の成分、例えば、溶媒若しくは緩衝液、安定化剤又は防腐剤を含むことができる。キットは、更なる作用物質、例えば、第２又は第３の作用物質、例えば、他の治療剤を含むこともできる。成分は、任意の形態、例えば、液体、乾燥又は凍結乾燥形態で提供することができる。成分は、実質的に純粋（しかし、これらを、一緒に組み合わせるか若しくは互いに別々に送達することができる）及び／又は無菌であり得る。成分が液状溶液で提供される場合、液状溶液は、水溶液、例えば、無菌の水溶液であり得る。成分が乾燥形態として提供される場合、再構成は、一般に、適切な溶媒の添加による。溶媒、例えば、無菌の水又は緩衝液を、場合によりキット中に提供することができる。

【0176】

キットは、治療剤又は他の作用物質のための１つ以上の容器を含むことができる。或る場合には、キットは、治療剤及び情報資料のための別々の容器、ディバイダー又はコンパートメントを含む。例えば、治療剤をボトル、バイアル又はシリンジに入れることができ、情報資料をプラスチック製のスリーブ又はパケットに入れることができる。他の局面では、キットの別々の要素は単一の分割されていない容器に含まれる。例えば、ラベルの形態で情報資料が添付されたボトル、バイアル又はシリンジに治療剤を入れることができる。或る場合には、キットは、それぞれ治療剤の１つ以上の単位剤形（例えば、本明細書に記載の剤形）を含む、複数（例えば、１パック）の個々の容器を含むことができる。容器は、単位用量、例えば、治療剤を含む単位を含むことができる。例えば、キットは、例えば、それぞれ単位用量を含む、複数のシリンジ、アンプル、ホイルパケット、ブリスターパック又は医療装置を含むことができる。キットの容器は、気密性、防水性（例えば、湿気又は蒸発の変化に対して不浸透性）及び／又は遮光性であり得る。

【0177】

キットは、場合により、治療剤の投与に適した装置、例えば、シリンジ又は他の適切な送達装置を含むことができる。装置は、例えば単位用量の治療剤を予め充填して提供することができ、又は空であってもよいが、充填に適しているものとする。

【0178】

併用療法
幾つかの実施形態において、本発明は、本発明による、ウイルスカプシドに結合することが可能な単離ポリペプチド、又はウイルスカプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドとリガンドとを含むウイルスアダプター分子、及び第２の治療薬を含む組成物（例えば、１つ以上の組成物、製剤又は投与製剤）又は医薬配合剤を特徴とする。幾つかの実施形態において、第２の治療薬は、鎮痛薬、麻酔薬、抗菌剤、抗痙攣薬、抗認知症薬、抗鬱薬、解毒剤、制吐薬、抗真菌剤、抗痛風薬、抗炎症剤、抗片頭痛薬、抗筋無力症薬、抗マイコバクテリア薬、抗悪性腫瘍薬、抗寄生虫薬、抗パーキンソン病薬、抗精神病薬、鎮痙薬、抗ウイルス薬、抗不安薬、双極性薬、血糖調節薬、心血管治療薬、中枢神経系作用薬、歯科用薬及び経口薬、外皮用剤、酵素補充剤／修飾剤、胃腸薬、泌尿生殖器薬、ホルモン剤、炎症性腸疾患薬、骨代謝疾患薬、眼科用薬、耳用薬、気道用薬、鎮静剤／催眠剤、骨格筋弛緩剤、治療用栄養素／ミネラル及び電解質からなるリストから選択される１つ以上の作用物質から選ばれる。

【0179】

幾つかの実施形態において、組成物は薬学的に許容可能な担体を含む。幾つかの実施形態において、ウイルスカプシドに結合することが可能な単離ポリペプチド、又はウイルスカプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドとリガンドとを含むウイルスアダプター分子、及び第２の作用物質は、単一組成物中に、又は２つ以上の異なる組成物として存在することができる。ウイルスカプシドに結合することが可能な単離ポリペプチド、又はウイルスカプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドとリガンドとを含むウイルスアダプター分子、及び第２の作用物質は、同じ投与経路を介して、又は異なる投与経路を介して投与することができる。ウイルスカプシドに結合することが可能な単離ポリペプチド、又はウイルスカプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドとリガンドとを含むウイルスアダプター分子、及び第２の作用物質は、同時に又は連続的に投与することができる。幾つかの実施形態において、医薬配合剤は、ウイルスカプシドに結合することが可能な単離ポリペプチド、又はウイルスカプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドとリガンドとを含むウイルスアダプター分子、及び第２の作用物質を別々に又は一緒に含む。

【0180】

投与経路
作用物質又は医薬組成物は、経口、非経口、舌下、経皮、直腸、経粘膜、局所、吸入、口腔投与、胸膜内、静脈内、動脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、鼻腔内、くも膜下腔内、及び／又は関節内、又はそれらの組合せを含む様々な経路によって投与することができる。幾つかの実施形態では、作用物質又は医薬組成物は経口投与される。

【0181】

形質導入効率
幾つかの実施形態において、本発明のウイルスカプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドに結合したウイルス粒子は、適切な対照野生型ウイルス粒子と比較して、形質導入効率の少なくとも１０％の低下を示す。幾つかの実施形態において、本発明のウイルスカプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドに結合したウイルス粒子は、適切な対照野生型ウイルス粒子と比較して、形質導入効率の少なくとも２０％の低下を示す。幾つかの実施形態において、本発明のウイルスカプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドに結合したウイルス粒子は、適切な対照野生型ウイルス粒子と比較して、形質導入効率の少なくとも３０％の低下を示す。幾つかの実施形態において、本発明のウイルスカプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドに結合したウイルス粒子は、適切な対照野生型ウイルス粒子と比較して、形質導入効率の少なくとも４０％の低下を示す。幾つかの実施形態において、本発明のウイルスカプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドに結合したウイルス粒子は、適切な対照野生型ウイルス粒子と比較して、形質導入効率の少なくとも５０％の低下を示す。幾つかの実施形態において、本発明のウイルスカプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドに結合したウイルス粒子は、適切な対照野生型ウイルス粒子と比較して、形質導入効率の少なくとも６０％の低下を示す。幾つかの実施形態において、本発明のウイルスカプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドに結合したウイルス粒子は、適切な対照野生型ウイルス粒子と比較して、形質導入効率の少なくとも７０％の低下を示す。幾つかの実施形態において、本発明のウイルスカプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドに結合したウイルス粒子は、適切な対照野生型ウイルス粒子と比較して、形質導入効率の少なくとも８０％の低下を示す。幾つかの実施形態において、本発明のウイルスカプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドに結合したウイルス粒子は、適切な対照野生型ウイルス粒子と比較して、形質導入効率の少なくとも９０％の低下を示す。幾つかの実施形態において、本発明のウイルスカプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドに結合したウイルス粒子は、適切な対照野生型ウイルス粒子と比較して、形質導入効率の少なくとも９５％の低下を示す。幾つかの実施形態において、本発明のウイルスカプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドに結合したウイルス粒子は、適切な対照野生型ウイルス粒子と比較して、形質導入効率の少なくとも９９％の低下を示す。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の組換えウイルス粒子分子を含むウイルス粒子による対照細胞への形質導入は無効とされ、例えば目的のヌクレオチドの発現を測定する方法、例えばレポーターアッセイ等による場合に、例えば検出不可能である。

【0182】

反対に、リガンドを含むウイルスアダプター分子に結合したウイルス粒子は、標的細胞に感染することができ、例えば、参照ウイルスカプシド、例えば参照ウイルスカプシドタンパク質、例えば野生型対照ウイルスカプシドタンパク質を含むカプシドの能力と比較して、形質導入について本来許容される参照細胞を標的として結合する能力が部分的又は完全に回復したものである。幾つかの実施形態において、本発明のウイルスカプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドとリガンドとを含むウイルスアダプター分子に結合したウイルス粒子は、適切な対照野生型ウイルスカプシドの形質導入効率より少なくとも１０％高い形質導入効率を示す。幾つかの実施形態において、本発明のウイルスカプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドとリガンドとを含むウイルスアダプター分子に結合したウイルス粒子は、適切な対照野生型ウイルスカプシドの形質導入効率より少なくとも２０％高い形質導入効率を示す。幾つかの実施形態において、本発明のウイルスカプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドとリガンドとを含むウイルスアダプター分子に結合したウイルス粒子は、適切な対照野生型ウイルスカプシドの形質導入効率より少なくとも３０％高い形質導入効率を示す。幾つかの実施形態において、本発明のウイルスカプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドとリガンドとを含むウイルスアダプター分子に結合したウイルス粒子は、適切な対照野生型ウイルスカプシドの形質導入効率より少なくとも４０％高い形質導入効率を示す。幾つかの実施形態において、本発明のウイルスカプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドとリガンドとを含むウイルスアダプター分子に結合したウイルス粒子は、適切な対照野生型ウイルスカプシドの形質導入効率より少なくとも５０％高い形質導入効率を示す。幾つかの実施形態において、本発明のウイルスカプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドとリガンドとを含むウイルスアダプター分子に結合したウイルス粒子は、適切な対照野生型ウイルスカプシドの形質導入効率より少なくとも６０％高い形質導入効率を示す。幾つかの実施形態において、本発明のウイルスカプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドとリガンドとを含むウイルスアダプター分子に結合したウイルス粒子は、適切な対照野生型ウイルスカプシドの形質導入効率より少なくとも７０％高い形質導入効率を示す。幾つかの実施形態において、本発明のウイルスカプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドとリガンドとを含むウイルスアダプター分子に結合したウイルス粒子は、適切な対照野生型ウイルスカプシドの形質導入効率より少なくとも８０％高い形質導入効率を示す。幾つかの実施形態において、本発明のウイルスカプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドとリガンドとを含むウイルスアダプター分子に結合したウイルス粒子は、適切な対照野生型ウイルスカプシドの形質導入効率より少なくとも９０％高い形質導入効率を示す。幾つかの実施形態において、本発明のウイルスカプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドとリガンドとを含むウイルスアダプター分子に結合したウイルス粒子は、適切な対照野生型ウイルスカプシドの形質導入効率より少なくとも１００％高い形質導入効率を示す。

【0183】

幾つかの実施形態において、本発明のウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上の異種システイン残基を含む単離ポリペプチドに共有結合したウイルス粒子は、適切な対照野生型ウイルス粒子と比較して、形質導入効率の少なくとも１０％の低下を示す。幾つかの実施形態において、本発明のウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上の異種システイン残基を含む単離ポリペプチドに共有結合したウイルス粒子は、適切な対照野生型ウイルス粒子と比較して、形質導入効率の少なくとも２０％の低下を示す。幾つかの実施形態において、本発明のウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上の異種システイン残基を含む単離ポリペプチドに共有結合したウイルス粒子は、適切な対照野生型ウイルス粒子と比較して、形質導入効率の少なくとも３０％の低下を示す。幾つかの実施形態において、本発明のウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上の異種システイン残基を含む単離ポリペプチドに共有結合したウイルス粒子は、適切な対照野生型ウイルス粒子と比較して、形質導入効率の少なくとも４０％の低下を示す。幾つかの実施形態において、本発明のウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上の異種システイン残基を含む単離ポリペプチドに共有結合したウイルス粒子は、適切な対照野生型ウイルス粒子と比較して、形質導入効率の少なくとも５０％の低下を示す。幾つかの実施形態において、本発明のウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上の異種システイン残基を含む単離ポリペプチドに共有結合したウイルス粒子は、適切な対照野生型ウイルス粒子と比較して、形質導入効率の少なくとも６０％の低下を示す。幾つかの実施形態において、本発明のウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上の異種システイン残基を含む単離ポリペプチドに共有結合したウイルス粒子は、適切な対照野生型ウイルス粒子と比較して、形質導入効率の少なくとも７０％の低下を示す。幾つかの実施形態において、本発明のウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上の異種システイン残基を含む単離ポリペプチドに共有結合したウイルス粒子は、適切な対照野生型ウイルス粒子と比較して、形質導入効率の少なくとも８０％の低下を示す。幾つかの実施形態において、本発明のウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上の異種システイン残基を含む単離ポリペプチドに共有結合したウイルス粒子は、適切な対照野生型ウイルス粒子と比較して、形質導入効率の少なくとも９０％の低下を示す。幾つかの実施形態において、本発明のウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上の異種システイン残基を含む単離ポリペプチドに共有結合したウイルス粒子は、適切な対照野生型ウイルス粒子と比較して、形質導入効率の少なくとも９５％の低下を示す。幾つかの実施形態において、本発明のウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上の異種システイン残基を含む単離ポリペプチドに共有結合したウイルス粒子は、適切な対照野生型ウイルス粒子と比較して、形質導入効率の少なくとも９９％の低下を示す。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の組換えウイルス粒子分子を含むウイルス粒子による対照細胞への形質導入は無効とされ、例えば目的のヌクレオチドの発現を測定する方法、例えばレポーターアッセイ等による場合に、例えば検出不可能である。

【0184】

反対に、リガンドを含むウイルスアダプター分子が共有結合したウイルス粒子は、標的細胞に感染することができ、例えば、参照ウイルスカプシド、例えば参照ウイルスカプシドタンパク質、例えば野生型対照ウイルスカプシドタンパク質を含むカプシドの能力と比較して、形質導入について本来許容される参照細胞を標的として結合する能力が部分的又は完全に回復したものである。幾つかの実施形態において、本発明のウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上の異種システイン残基を含む単離ポリペプチドとリガンドとを含むウイルスアダプター分子に共有結合したウイルス粒子は、適切な対照野生型ウイルスカプシドの形質導入効率より少なくとも１０％高い形質導入効率を示す。幾つかの実施形態において、本発明のウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上の異種システイン残基を含む単離ポリペプチドとリガンドとを含むウイルスアダプター分子に共有結合したウイルス粒子は、適切な対照野生型ウイルスカプシドの形質導入効率より少なくとも２０％高い形質導入効率を示す。幾つかの実施形態において、本発明のウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上の異種システイン残基を含む単離ポリペプチドとリガンドとを含むウイルスアダプター分子に共有結合したウイルス粒子は、適切な対照野生型ウイルスカプシドの形質導入効率より少なくとも３０％高い形質導入効率を示す。幾つかの実施形態において、本発明のウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上の異種システイン残基を含む単離ポリペプチドとリガンドとを含むウイルスアダプター分子に共有結合したウイルス粒子は、適切な対照野生型ウイルスカプシドの形質導入効率より少なくとも４０％高い形質導入効率を示す。幾つかの実施形態において、本発明のウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上の異種システイン残基を含む単離ポリペプチドとリガンドとを含むウイルスアダプター分子に共有結合したウイルス粒子は、適切な対照野生型ウイルスカプシドの形質導入効率より少なくとも５０％高い形質導入効率を示す。幾つかの実施形態において、本発明のウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上の異種システイン残基を含む単離ポリペプチドとリガンドとを含むウイルスアダプター分子に共有結合したウイルス粒子は、適切な対照野生型ウイルスカプシドの形質導入効率より少なくとも６０％高い形質導入効率を示す。幾つかの実施形態において、本発明のウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上の異種システイン残基を含む単離ポリペプチドとリガンドとを含むウイルスアダプター分子に共有結合したウイルス粒子は、適切な対照野生型ウイルスカプシドの形質導入効率より少なくとも７０％高い形質導入効率を示す。幾つかの実施形態において、本発明のウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上の異種システイン残基を含む単離ポリペプチドとリガンドとを含むウイルスアダプター分子に共有結合したウイルス粒子は、適切な対照野生型ウイルスカプシドの形質導入効率より少なくとも８０％高い形質導入効率を示す。幾つかの実施形態において、本発明のウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上の異種システイン残基を含む単離ポリペプチドとリガンドとを含むウイルスアダプター分子に共有結合したウイルス粒子は、適切な対照野生型ウイルスカプシドの形質導入効率より少なくとも９０％高い形質導入効率を示す。幾つかの実施形態において、本発明のウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上の異種システイン残基を含む単離ポリペプチドとリガンドとを含むウイルスアダプター分子に共有結合したウイルス粒子は、適切な対照野生型ウイルスカプシドの形質導入効率より少なくとも１００％高い形質導入効率を示す。

【0185】

カプシドタンパク質及び結合剤タンパク質の突然変異に適した残基の同定
ジスルフィド結合を形成することができるシステインに突然変異する可能性のある残基対を同定するために、受容体又はリガンドに結合したウイルスの構造を、ＰＤＢ等の公共のデータベースから検索した（例えば、ＡＡＶＲのＰＫＤ２ドメインと複合体を形成したＡＡＶ１構造、ＰＢＤエントリ６ｊｃｑ）。２つのパートナー間の界面に並ぶ残基を検査して、（ｉ）ウイルス粒子上の残基と（ｉｉ）受容体又はリガンド上の残基との対を、以下のように同定した：
Ｐｙｍｏｌ又はＣｈｉｍｅｒａ等のソフトウェアを使用してコンピューター上でシステイン残基に突然変異させた場合、側鎖が界面を破壊すると考えられる主要な立体衝突を誘発しない（すなわち、システイン残基の側鎖が、別の残基が既に存在する空間領域を占有するものではない）；
残基（ｉ）及び残基（ｉｉ）を置換するシステインのベータ炭素の距離が５．５Å未満となる；
システイン残基（ｉ）及び残基（ｉｉ）の側鎖には、Ｃ（α）－Ｃ（β）の周りの側鎖の回転によって得られる配向が存在し、側鎖のガンマ位の硫黄原子の距離が２．５Å未満となる；
Ｃ（β）１－Ｓ（γ）１－Ｓ（γ）２、Ｓ（γ）１－Ｓ（γ）２－Ｃ（β）の原子によって形成される角度が、文献（例えば、Dombkowski et al., Protein disulphide engineering, FEBS Letters Volume 588, Issue 2, 21 January 2014, Pages 206-212）に示されているように、天然に存在するジスルフィド結合で観察される最適な角度と著しく（４０％超）異ならない。

【0186】

タンパク質の柔軟性が静的構造によって正確に表されないことを考慮するために、最小限の構造的制約を示す表面残基については参照パラメーターからの任意の偏差が許容された。

【0187】

アダプタータンパク質（Ａ）は、以下のように、ウイルス粒子（Ｖ）と相互作用することができるウイルス結合タンパク質（Ｂ）に由来し得る：
１）結合タンパク質（Ｂ）が、当該技術分野において標準的な方法で測定した場合に、Ｋｄ＜１００μＭの親和性でウイルス（Ｖ）に結合することができる；
２）少なくとも１対の残基Ｘ及び残基Ｙが存在し、ここで、Ｘは結合タンパク質Ｂの一部分であり、Ｙはウイルス粒子Ｖの一部分であり、結合タンパク質Ｂがウイルス粒子Ｖとの複合体を形成する場合、それらそれぞれのβ炭素の間隔が５．５Å未満となる；
３）システイン側鎖が界面を破壊すると考えられる主要な立体衝突を誘発しない（すなわち、システイン残基の側鎖が、別の残基が既に存在する空間領域を占有するものではない）ように、残基Ｘ及び残基Ｙがシステインに突然変異することができる；
４）残基Ｘ及び残基Ｙの側鎖には、システインへの突然変異後に、Ｃ（α）－Ｃ（β）の周りの側鎖の回転によって得られる配向が存在し、側鎖のガンマ位の硫黄原子の距離が２．５Å未満となる；及び／又は、
５）Ｃ（β）１－Ｓ（γ）１－Ｓ（γ）２、Ｓ（γ）１－Ｓ（γ）２－Ｃ（β）の原子によって形成される角度が、文献（例えば、Dombkowski et al., Protein disulphide engineering, FEBS Letters Volume 588, Issue 2, 21 January 2014, Pages 206-212）に示されているように、天然に存在するジスルフィド結合で観察される最適な角度と著しく異ならない（例えば、４０％以下である）。

【0188】

これらの基準の１つ以上が満たされる場合、Ｘのシステインへの突然変異によって結合タンパク質（Ｂ）から得られるアダプタータンパク質（Ａ）、及びＹのシステインへの突然変異によってＶから得られる改変ウイルス（Ｖ’）は、本発明によれば、合理的な可能性を伴って、互いに共有結合することが予期され得る候補アダプタータンパク質－ウイルス対である。

【0189】

本発明の幾つかの実施形態において、候補アダプタータンパク質－ウイルス対は、上記の基準の１つ以上に基づき選択され得る。本発明の幾つかの実施形態において、候補アダプタータンパク質－ウイルス対は、上記リストの少なくとも１つの要件を満たす。本発明の幾つかの実施形態において、候補アダプタータンパク質－ウイルス対は、上記リストの少なくとも２つの要件を満たす。本発明の幾つかの実施形態において、候補アダプタータンパク質－ウイルス対は、上記リストの少なくとも３つの要件を満たす。本発明の幾つかの実施形態において、候補アダプタータンパク質－ウイルス対は、上記リストの少なくとも４つの要件を満たす。本発明の幾つかの実施形態において、候補アダプタータンパク質－ウイルス対は、上記リストの５つの要件を全て満たす。

【0190】

本発明の幾つかの実施形態において、ウイルスカプシド中、及び／又はウイルスカプシドに結合するのに適した単離ポリペプチド中の残基は、本明細書に記載の方法を使用することによって、システイン残基への突然変異のために選択され得る。アミノ酸残基をシステイン残基に突然変異させる手段は、例えば遺伝的手段又は化学的手段により当業者に知られている。

【0191】

以下の実施例において本発明を更に説明する。これらの実施例は、本発明の実施形態を示しているが、単なる例示を目的として与えられていることが理解されるべきである。上記の議論及びこれらの実施例から、当業者は、本発明の本質的な特徴を確認することができ、本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく、本発明を様々な用途及び条件に適合させるために様々な変更及び修正をなすことができる。したがって、本明細書に図示し説明したものに加えて、本発明の様々な修正が、前述の説明から当業者には明らかとなるであろう。かかる修正も、添付の特許請求の範囲に含まれることが意図されている。

【実施例】

【0192】

実施例１－ＡＡＶ１（Ａｓｐ５９０Ｃｙｓ）突然変異体の残基Ｃｙｓ５９０と、ｓｆＧＦＰ－ＰＫＤ２（Ｓｅｒ４２５Ｃｙｓ）アダプター融合タンパク質のＣｙｓ４２５との間のジスルフィド結合の形成
図２０の上のゲルを参照されたい。野生型（凡例ではＡＡＶ１ＷＴ）又はＡｓｐ５９０Ｃｙｓ（凡例ではＡＡＶ１Ｃｙｓ）いずれかのウイルス２μＬを、ｗｔ（凡例ではＰＫＤ２ＷＴ）又はＳｅｒ４２５Ｃｙｓ（凡例ではＰＫＤ２Ｃｙｓ）いずれかのｓｆＧＦＰ－ＰＫＤ２融合タンパク質の１００μＭストック１．５μＬと、最終反応量１０μＬ（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ ＨＣｌ ｐＨ ８、１００ｍＭ ＮａＣｌ）において、図に示す組合せで混合した。反応物を室温で１時間インキュベートし、次いで４％～１２％のＮｕＰＡＧＥ上、２００Ｖで１時間泳動した。適切な個々のコンポーネントも対照として泳動した。ゲルローディングダイには還元剤を含めなかった。

【0193】

図２０の下のゲルを参照されたい。野生型（凡例ではＡＡＶ１ＷＴ）又はＡｓｐ５９０Ｃｙｓ（凡例ではＡＡＶ１Ｃｙｓ）いずれかのウイルスストック４μＬを、ｗｔ（凡例ではＰＫＤ２ＷＴ）又はＳｅｒ４２５Ｃｙｓ（凡例ではＰＫＤ２Ｃｙｓ）いずれかのｓｆＧＦＰ－ＰＫＤ２融合タンパク質の１００μＭストック３μＬと、最終反応量２０μＬ（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ ＨＣｌ ｐＨ ８、１００ｍＭ ＮａＣｌ）において、図に示す組合せで混合した。反応物を室温で１時間インキュベートし、次いで試料を２つに分割した。反応物の半分を非還元ローディングダイと混合し（左のレーン）、反応物の半分を、βＭＥを含有する還元ローディングダイと混合した。試料は４％～１２％のＮｕＰＡＧＥ上、２００Ｖで１時間泳動した。適切な個々のコンポーネントも対照として泳動した。

【0194】

ゲルは、１５０ｋＤａと１００ｋＤａとの間を移動する、ｓｆＧＦＰ－ＰＫＤ２＋ＡＡＶ１、ｓｆＧＦＰ－ＰＫＤ２＋ＶＰ２及びｓｆＧＦＰ－ＰＫＤ２＋ＶＰ３に対応するバンドの形成を示し、これは、ＡＡＶ１カプシド及びｓｆＧＦＰ－ＰＫＤ２アダプタータンパク質が両方ともシステイン残基を含有する場合にのみ観察することができ、還元剤の存在下で不安定になり、ジスルフィド結合ヘテロ二量体と一致する（図２０）。

【0195】

実施例２－共有結合したＡＡＶ１ ＣＡＲ－Ｖ複合体の精製
ＡＡＶ１（Ａｓｐ５９０Ｃｙｓ）ウイルスを、ｓｆＧＦＰ－ＰＫＤ２（Ｓｅｒ４２５Ｃｙｓ）融合タンパク質５０μＭの存在下、ＰＢＳ中で一晩インキュベートした。ここで、ＰＫＤ２（Ｓｅｒ４２５Ｃｙｓ）とは、ＡＡＶＲ（Ｓｅｒ４２５Ｃｙｓ）突然変異体（融合タンパク質５０μＭ）のＰＫＤ２ドメインを指す。

【0196】

インキュベーション後、ウイルス粒子を未反応の過剰なｓｆＧＦＰ－ＰＫＤ２（Ｓｅｒ４２５Ｃｙｓ）融合ポリペプチドから分離するために、反応物を、イオジキサノール段階勾配を使用する超遠心分離にかけた。超遠心分離後、４０％イオジキサノール画分に分配された粒子を収集し、バッファーを交換し、４％～１２％のＳＤＳ ＰＡＧＥ上で泳動した。

【0197】

ゲルは、勾配が、未結合のｓｆＧＦＰ－ＰＫＤ２（Ｓｅｒ４２５Ｃｙｓ）アダプタータンパク質の大部分を精製して除去するのに有効であったことを示している（３７ｋＤａ～５０ｋＤａの間のバンド、及び７５ｋＤａ～１００ｋＤａの間のバンドを比較）。さらに、ゲルは、ＰＫＤ２突然変異体融合タンパク質と、ウイルスカプシドタンパク質ＶＰ１、ＶＰ２及びＶＰ３との安定に結合したヘテロ二量体を回収することができたことを示している（１００ｋＤａを超えるバンド）。これは、共有結合したＡＡＶ１Ｃｙｓ＜＞ｓｆＧＦＰ粒子の形成が成功したことを証明した（図２１）。

【0198】

実施例３－アダプターに共有結合したＡＡＶ１の指向性
ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を２４ウェルプレートに播種した。細胞がおよそ６０％の細胞占有面積率に達したとき、２つウェルに、膜結合抗ｓｆＧＦＰナノボディの形態でキメラｓｆＧＦＰ受容体を発現するプラスミドをトランスフェクトし（右列）、他のウェルにはトランスフェクトしなかった（左列）。細胞を３７℃で２４時間インキュベートして、トランスフェクトされた細胞内でのキメラ受容体の発現を可能にした。続いて、細胞をＡＡＶ１（Ａｓｐ５９０Ｃｙｓ）＜＞ｓｆＧＦＰ（ＣＡＲ－Ｖ）、又はＡＡＶ１（Ａｓｐ５９０Ｃｙｓ）いずれかに感染させた。ウイルスは両方とも、赤色蛍光タンパク質ｍＳｃａｒｌｅｔをコードする遺伝子を保有していた。画像は位相差（灰色）又はｍＳｃａｒｌｅｔ（赤）を示している。

【0199】

データは、ＡＡＶ１（Ａｓｐ５９０Ｃｙｓ）＜＞ｓｆＧＦＰ ＣＡＲ－Ｖ（実施例１に記載）が、キメラｓｆＧＦＰ受容体を発現していないＨＥＫ２９３Ｔ細胞に対する指向性を低下させたものの、標的細胞がキメラ受容体を発現すると、感染力が回復することを示している。データは、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞が、アダプタータンパク質を有しないＡＡＶ１（Ａｓｐ５９０Ｃｙｓ）による感染に対して非常に感受性が高いことを更に示している。これらのデータは、アダプタータンパク質が、対応するキメラ受容体を発現しない細胞に対するＡＡＶ１の感染力を低下させるが、対応するキメラ受容体を発現する細胞に対する感染力を回復させることを実証している（図２２）。

【0200】

実施例４－小分子リガンドの使用
ウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上のシステイン残基を含む単離ポリペプチドを取得すること、及びそれを、標的細胞に対して高い特異性を有する標的化分子と反応させることによって、アダプタータンパク質を生成することが可能である。この反応は、ＮＨＳ若しくはマレイミド化学を使用して実施することも、又は、ウイルスカプシド結合分子内の特定の位置に反応性基（アジド又はアルキン又はテトラジン又はトランスシクロオクテン等）を有する非標準アミノ酸を組み込むことによって実施することもできる。

【0201】

それは、ウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上のシステイン残基を含む単離ポリペプチドを、標的化分子に結合することが可能な特定のペプチド配列、例えばスプリットインテイン、ＳｐｙＴａｇ、テトラシステインＦＣＭモチーフ（ＦＬＮＣＣＰＧＣＣＭＥＰ）又はｙｂｂＲモチーフ（ＴＶＬＤＳＬＥＦＩＡＳＫＬＡ）と融合することによっても実施することができる。このような場合、標的化分子は、反応性エレメントの反対側、例えばスプリットインテインの反対側；ＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ；フルオレセインヒ素ヘアピン、又はコエンザイムＡをそれぞれ含むように設計される。

【0202】

次いで標的化分子は、特定の受容体に結合するように選ばれ得る。場合によっては、標的化分子がタンパク質、例えば、標的細胞型上で発現される受容体に対する抗体であってもよい。抗体の場合、抗体をアルキン基で修飾し、次いでクリックケミストリーを介して、ウイルスカプシド分子上のアジド基に反応させてもよい。

【0203】

場合によっては、標的化分子は小分子であってもよい。例えば、セロトニン又はドーパミン等の神経伝達物質をウイルスカプシドに接続させることによって、ウイルス粒子と合わせると、それぞれセロトニン受容体又はドーパミン受容体を発現する細胞に特異的なウイルス粒子を生成するアダプター分子を作製することが可能となる。このアプローチ（すなわち、ウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上のシステイン残基を含む単離ポリペプチドと反応性基とを含むアダプタータンパク質を作製すること、次いでそれを標的化分子と反応させること）は、標的化分子が、ウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上のシステイン残基を含む単離ポリペプチドとの融合として発現することができない場合（例えば、標的化分子が、単鎖タンパク質でない場合、又は小分子である場合）、又はウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上のシステイン残基を含む単離ポリペプチドに対する標的化分子の融合により、効率的に精製することができない場合に、特に有用である。

【0204】

実施例５－種々のウイルスの使用
アデノウイルス
本発明は、ＡＡＶにとって大きすぎるペイロードの送達のためにアデノウイルスを使用して実施することができる。例えば、アデノウイルス（ＡｄＶ）は、全長スパイクタンパク質を送達するためにAstraZeneca製のＣＯＶＩＤ－１９ワクチンに使用されており、アデノウイルスは、他の幾つかの遺伝子療法でも試験中である。ＡＡＶの場合と同様に、細胞型特異的なＡｄＶは、より特異的でより効率的、かつ毒性の低い遺伝子療法を可能にする。幾つかのアデノウイルスは、コクサッキーウイルス及びアデノウイルス受容体（ＣＸＡＤＲ）に特異的である。したがって、ＣＸＡＤＲとリガンドとの融合を含むアダプター分子は、アデノウイルスを特定の細胞型に再標的化するのに使用することができると考えられる。本発明の幾つかの実施形態において、アダプター分子は、ＣＸＡＤＲの少なくとも一部とリガンドとの融合からなる。幾つかのアデノウイルスはＣＤ４６に特異的である。したがって、ＣＤ４６の一部又は全長とリガンドとの融合を含むアダプター分子は、アデノウイルスを特定の細胞型に再標的化するのに使用することができると考えられる。本発明の幾つかの実施形態において、アダプター分子は、ＣＤ４６の少なくとも一部とリガンドとの融合からなる。本発明は、アデノウイルス－ＣＸＡＤＲ ＣＡＲ－Ｖ又はアデノウイルス－ＣＤ４６ ＣＡＲ－Ｖ、又はＡＡＶ－Ａ２０抗体ＣＡＲ－Ｖを使用して実施することができると考えられる。本発明の幾つかの実施形態において、ＣＸＡＤＲタンパク質は配列番号２０の一部を含んでいてもよい。本発明の幾つかの実施形態において、ＣＸＡＤＲタンパク質は配列番号２０の全長配列を含んでいてもよい。

【0205】

レンチウイルス
本発明は、ゲノムの組込みを目的としたペイロードを送達するためにレンチウイルスを使用して実施することができる。例えば、レンチウイルスは、そのペイロードを標的細胞に組み込むことで、特定の遺伝子挿入を伴う安定な細胞株の作製が可能になるため、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの細胞改変に使用されることが多い。細胞型特異的レンチウイルスベクターは、細胞療法における遺伝子編集工程の特異性及び効率を高めるために使用することができると考えられる。レンチウイルスはＣＤ４受容体に対して極めて特異的であるため、リガンドに融合したＣＤ４受容体の一部からなるアダプター分子は、レンチウイルスベクターの特定の細胞型への再標的化を促進させる可能性がある。

【0206】

ウイルス上の残基と結合剤との組合せ
ヒトアデノウイルスＤ３７繊維タンパク質とヒト（ｈ）ＣｘＡｄＲ（結晶構造アクセッション番号ＰＤＢ ２ｊ１２、Seiradake et al., Structural and Mutational Analysis of Human (h) Ad37 and Canine Adenovirus 2 Fiber Heads in Complex with the D1 Domain of Coxsackie and Adenovirus Receptor, JBC, Volume 281, Issue 44, 3 November 2006, Pages 33704-33716を参照）との組合せについては、ｈＣｘＡｄＲの少なくとも一部を含有するアダプター融合タンパク質と対で、以下の突然変異を含有するｈＡｄＶ－Ｄ３７を使用することによって、共有結合したアデノウイルス（ｈＡｄＶ）ＣＡＲ－Ｖを得ることができ、なお、ｈＣｘＡｄＲは、以下の対応する点突然変異を含有する［ＰＤＢファイルに示される番号付け］：
ｈＡｄＶ－Ｄ３７上のＶａｌ２２６Ｃｙｓ及びｈＣｘＡｄＲにおけるＶａｌ７０Ｃｙｓ
ｈＡｄＶ－Ｄ３７上のＳｅｒ１９３Ｃｙｓ及びｈＣｘＡｄＲにおけるＧｌｕ５６Ｃｙｓ
ｈＡｄＶ－Ｄ３７上のＳｅｒ２７４Ｃｙｓ及びｈＣｘＡｄＲにおけるＶａｌ１２８Ｃｙｓ

【0207】

本発明の幾つかの実施形態において、本発明の単離ポリペプチド又はアダプタータンパク質は、上記の点突然変異の１つ以上を含むｈＡｄＶ－Ｄ３７と組み合わせた、ｈＣｘＡｄＲの少なくとも一部を含んでいてもよい。本発明の幾つかの実施形態において、本発明の単離ポリペプチド又はアダプタータンパク質は、ヒトアデノウイルス５（例えば、ｈＡｄＶ－Ｄ３７を含む）と組み合わせた、ｈＣｘＡｄＲの少なくとも一部を含んでいてもよく、なお、ｈＣｘＡｄＲはＶａｌ７０Ｃｙｓ突然変異を含み、ＡｄＶ－５はＶａｌ４４１Ｃｙｓ突然変異を含む。

【0208】

他のアデノウイルスはＣｘＡｄＲに結合しないこともあるが、ＣＤ４６を含む他の細胞受容体には結合する場合がある（Seiradake et al., Structural and Mutational Analysis of Human Ad37 and Canine Adenovirus 2 Fiber Heads in Complex with the D1 Domain of Coxsackie and Adenovirus Receptor, JBC, Volume 281, Issue 44, 3 November 2006, Pages 33704-33716を参照）。それ故、本発明は、アデノウイルスカプシド又はウイルス粒子と、ＣＤ４６等の別の適切なアデノウイルス結合タンパク質との組合せを使用して実施することができる。

【0209】

ｈＣＤ４６と複合体を形成したｈＡｄＶ１１ｐの繊維タンパク質の構造（ＰＤＢエントリ２Ｏ３９、Persson et al., Adenovirus type 11 binding alters the conformation of its receptor CD46, Nature Structural & Molecular Biology volume 14, pages164-166 (2007)を参照）は、ｈＣＤ４６のフラグメントを含有するアダプター融合タンパク質と対で、以下の点突然変異を含有するｈＡｄＶ－１１ｐを使用することによって、共有結合したｈＡｄＶ ＣＡＲ－Ｖを得ることができることを示しており、なお、ｈＣＤ４６は以下の対応する点突然変異を含有する：
ｈＡｄＶ－１１ｐ上のＡｓｎ２８３Ｃｙｓ及びｈＣＤ４６におけるＴｈｒ４２Ｃｙｓ

【0210】

本発明の幾つかの実施形態において、本発明の単離ポリペプチド又はアダプタータンパク質は、上記の点突然変異を含むｈＡｄＶ－１１ｐと組み合わせた、ＣＤ４６の少なくとも一部を含んでいてもよい。

【0211】

ＡＡＶ２は、Ａ２０中和抗体（ＰＤＢエントリ３ｊ１ｓ（McCraw et al., Structure of adeno-associated virus-2 in complex with neutralizing monoclonal antibody, Volume 431, Issues 1-2, 15-30 September 2012, Pages 40-49を参照）に結合することができる。

【0212】

Ａ２０中和抗体（ｎＡｂ）の一部を含有するアダプター融合タンパク質と対で、以下の突然変異を含有するＡＡＶ２を使用することによって、Ａ２０抗体に共有結合したＡＡＶ２ ＣＡＲ－Ｖを得ることができ、なお、Ａ２０ ｎＡｂは以下の対応する突然変異を含有する：
Ａ２０抗体に結合したＡＡＶ２（Ｓｅｒ２６４Ｃｙｓ）（重鎖Ｔｙｒ１０２Ｃｙｓ→これはＡ２０のＣＤＲ３に位置する）
Ａ２０抗体に結合したＡＡＶ２（Ｖａｌ７０８Ｃｙｓ）（重鎖Ｓｅｒ５６Ｃｙｓ→これはＡ２０のＣＤＲ２に位置する）
Ａ２０抗体に結合したＡＡＶ２（Ａｓｎ７１７Ｃｙｓ）（軽鎖Ｉｌｅ９３Ｃｙｓ→これはＡ２０のＣＤＲ３に位置する）

【0213】

本発明の幾つかの実施形態において、本発明の単離ポリペプチド又はアダプタータンパク質は、上記の点突然変異の１つ以上を含むＡＡＶ２と組み合わせた、Ａ２０抗体の少なくとも一部を含んでいてもよい。本発明の幾つかの実施形態において、ＡＡＶ２は、配列番号８に対して少なくとも８５％、９０％、９５％、９９％又は１００％の同一性を有する配列を含み、Ａ２０抗体の一部は、配列番号２１～配列番号２８のいずれか１つに対して少なくとも８５％、９０％、９５％、９９％又は１００％の同一性を有する１つ以上の配列を含む。

【0214】

ＡＡＶ５は、ＡＡＶＲのＰＫＤ１ドメインに結合することができる。ＡＡＶ５とＡＡＶＲのＰＫＤ１ドメインとの間の共有結合は、ＡＡＶＲのＰＫＤ１ドメインの少なくとも一部を含有するアダプター融合タンパク質と対で、以下の突然変異の１つ以上を含有するＡＡＶ５を使用することによって得ることができ、なお、ＡＡＶＲのＰＫＤ１ドメインは以下の対応する突然変異を含有する：
ＡＡＶ５上の突然変異Ｇｌｎ６９７Ｃｙｓ及びＰＫＤ１上のＳｅｒ３５６Ｃｙｓ；
ＡＡＶ５上の突然変異Ｌｅｕ５４３Ｃｙｓ及びＰＫＤ１上のＬｅｕ３７６Ｃｙｓ

【0215】

本発明の幾つかの実施形態において、本発明の単離ポリペプチド又はアダプタータンパク質は、上記の点突然変異の１つ以上を含むＡＡＶ５と組み合わせた、ＡＡＶＲのＰＫＤ１ドメインの少なくとも一部を含んでいてもよい。本発明の幾つかの実施形態において、ＡＡＶ５は、配列番号１１に対して少なくとも８５％、９０％、９５％、９９％又は１００％の同一性を有する配列を含み、ＡＡＶＲのＰＫＤ１ドメインは、配列番号２に対して少なくとも８５％、９０％、９５％、９９％又は１００％の同一性を有する配列を含む。

【0216】

ヒトアデノウイルスＢ３（その繊維タンパク質、Ｕｎｉｐｒｏｔ配列Ｐ０４５０１を介して）は、デスモグレイン２（ＤＳＧ２、Ｕｎｉｐｒｏｔ配列ＩＤ：Ｑ１４１２６）に結合することができる。ヒトアデノウイルスＢ３とデスモグレイン２との間の共有結合は、デスモグレイン２の少なくとも一部を含有するアダプター融合タンパク質と対で、以下の突然変異の１つ以上を含有するヒトアデノウイルスＢ３を使用することによって得ることができ、なお、デスモグレイン２は以下の対応する突然変異を含有する：
繊維タンパク質上の突然変異Ｔｙｒ１４７Ｃｙｓ及びＤＳＧ２上の突然変異Ｈｉｓ１７５Ｃｙｓ；
繊維タンパク質上の突然変異Ａｓｎ１８８Ｃｙｓ及びＤＳＧ２上の突然変異Ｔｈｒ２２６Ｃｙｓ；
繊維タンパク質上の突然変異Ａｓｎ１９２Ｃｙｓ及びＤＳＧ２上の突然変異Ａｌａ１７４Ｃｙｓ；
繊維タンパク質上の突然変異Ａｓｐ２６１Ｃｙｓ及びＤＳＧ２上の突然変異Ｌｙｓ３６２Ｃｙｓ；
繊維タンパク質上の突然変異Ｐｈｅ２６５Ｃｙｓ及びＤＳＧ２上の突然変異Ｓｅｒ３６６Ｃｙｓ

【0217】

本発明の幾つかの実施形態において、本発明の単離ポリペプチド又はアダプタータンパク質は、上記の点突然変異の１つ以上を含むヒトアデノウイルスＢ３と組み合わせた、デスモグレイン２の少なくとも一部を含んでいてもよい。本発明の幾つかの実施形態において、ヒトアデノウイルスＢ３は、配列番号３０に対して少なくとも８５％、９０％、９５％、９９％又は１００％の同一性を有する配列を含み、デスモグレイン２は、配列番号３１に対して少なくとも８５％、９０％、９５％、９９％又は１００％の同一性を有する配列を含む。幾つかの実施形態において、本発明の単離ポリペプチド又はアダプタータンパク質は、ヒトアデノウイルスＢ３と組み合わせたデスモグレイン２の少なくとも一部を含んでいてもよく、なお、ヒトアデノウイルスＢ３は繊維タンパク質上にＡｓｎ１９２Ｃｙｓ突然変異を含み、デスモグレイン２の一部はＡｌａ１７４Ｃｙｓ突然変異を含む。

【0218】

実施例６－ｓｆＧＦＰ－ＰＫＤ２融合タンパク質
２４ウェルプレートにおいて、ＨＥＫ２９３ＦＴ細胞をウェルＡ、ウェルＢ及びウェルＣに播種し、７０％～８０％の細胞占有面積率に達するまで待った。次いで細胞を３つのウェル全てにおいてプラスミドでトランスフェクトし、膜アンカー型抗ｓｆＧＦＰナノボディの発現を可能にした。トランスフェクトの２４時間後、５μＬのｓｆＧＦＰ－ＰＫＤ２融合タンパク質（約２ｍｇ／ｍＬ）をウェルＡ３に添加し、ナノボディによる融合タンパク質の捕捉を可能にするために３０分間インキュベートした後、未結合の融合タンパク質を洗い流し、細胞培地を交換した。

【0219】

ウェルＡ（図１Ａ）は、ｍＳｃａｒｌｅｔ遺伝子を保有するＡＡＶ２野生型に感染させた。ウェルＢ及びウェルＣ（図１Ｂ及び図１Ｃ）は、ｍＳｃａｒｌｅｔ遺伝子を保有するＡＡＶ２ウイルスＡｒｇ５８５Ａｌａ Ａｒｇ５８８Ａｌａに感染させた。感染の２４時間後、細胞を画像化して、ｍＳｃａｒｌｅｔを視覚化した。画像は、ｓｆＧＦＰ－ＰＫＤ２融合タンパク質が、合成膜アンカー型抗ｓｆＧＦＰナノボディを発現する細胞におけるＡＡＶ２ Ａｒｇ５８５Ａｌａ Ａｒｇ５８８Ａｌａの感染力を増強することを示している（図１）。

【0220】

実施例７－ＤＡＲＰｉｎ－ＰＫＤ２融合タンパク質を有するＳＫＢＲ３細胞
２つの３５ｍｍディッシュにＳＫＢＲ３細胞を播種した。細胞が約６０％の細胞占有面積率に達したら、培地を１ｍＬのＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳに交換し、１００μＬのＤＡＲＰｉｎ－ＰＫＤ２（２μＭ）（ＤＡＲＰｉｎリガンドはＨｅｒ２に対する高親和性結合剤とした）をディッシュの１つに加え、他のディッシュは対照として保管した。ウェルを３０分間インキュベートして、ＤＡＲＰｉｎ－ＰＫＤ２融合タンパク質のＤＡＲＰｉｎドメインがＳＫＢＲ３細胞株によって内因的に発現されるＨｅｒ２受容体に結合することができるようにした後、培地を除去し、細胞をＰＢＳで洗浄し、新たな培地を加えた。

【0221】

次いで両方のディッシュを、ｍＳｃａｒｌｅｔ遺伝子を保有するＡＡＶ２野生型に感染させた。２４時間後、細胞を免疫染色用に固定した（ＤＮＡ＝青、Ｈｅｒ２＝緑、ｍＳｃａｒｌｅｔ＝赤、位相差＝灰色）。画像は、ＤＡＲＰｉｎ－ＰＫＤ２融合タンパク質が、ＳＫＢＲ３細胞におけるＡＡＶ２野生型の感染力を大幅に増強することを示している（図２）。

【0222】

実施例８－ｍＳｃａｒｌｅｔ－ＰＫＤ２融合タンパク質はＡＡＶ２の感染性を遮断する
ＨＥＫ２９３ＦＴ細胞を、マトリゲルでコーティングした２４ウェルプレートに播種し、細胞が約９０％の細胞占有面積率に達するまで培養した。ｍＳｃａｒｌｅｔ－ＰＫＤ２融合タンパク質（図３に示す濃度）を、強力なプロモーターの下でＧＦＰ遺伝子を保有するＡＡＶ２野生型（図３に示す濃度）と混合し、各試料の融合タンパク質の濃度を変化させながら、その量のウイルスを固定した。１０分のインキュベート後、細胞をｍＳｃａｒｌｅｔ－ＰＫＤ２＋ＡＡＶ２混合物で感染させた。２４時間後、感染のマーカーとして細胞のＧＦＰ発現を画像化した。

【0223】

データは、溶液中のｍＳｃａｒｌｅｔ－ＰＫＤ２融合タンパク質の存在が濃度依存的にＡＡＶ２野生型の感染力を阻害することを示し、融合タンパク質のＰＫＤ２ドメインがウイルスと効果的に相互作用して、結合について細胞ＡＡＶＲと競合し、感染を防ぐことを示唆している（図３）。

【0224】

実施例９－ＡＡＶ２へのＰＫＤ２融合タンパク質の結合
１０μＬの市販のＡＡＶ２ウイルス（１０^１３ｖｇ／ｍＬ）をＣＭ３チップ上に固定化し、アミンカップリングによる表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を実施した。ＡＡＶ２チャネルのＳＰＲシグナルを、ｓｆＧＦＰ－ＰＫＤ２融合タンパク質の濃度を増加させることにより得られる参照チャネルと比べて測定した。

【0225】

ＳＰＲシグナルは、固定化ＡＡＶ２と融合タンパク質との間の相互作用を確認し、測定された親和性は約６μＭであった（図４）。

【0226】

実施例１０－ＡＡＶ１へのＰＫＤ２融合タンパク質の結合
１０μＬの市販のＡＡＶ１ウイルス（１０^１３ｖｇ／ｍＬ）をＣＭ３チップ上に固定化し、アミンカップリングによる表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を実施した。ＡＡＶ２チャネルのＳＰＲシグナルを、ｓｆＧＦＰ－ＰＫＤ２融合タンパク質の濃度を増加させることにより得られる参照チャネルと比べて測定した。

【0227】

ＳＰＲシグナルは、固定化ＡＡＶ１と融合タンパク質との間の相互作用を確認し、測定された親和性は約２μＭであった（図５）。

【0228】

実施例１１－小分子リガンドの使用
アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチド（例えば、ＰＫＤ２ドメイン含有タンパク質）を取得し、それを、標的細胞に対して高い特異性を有する標的化分子と反応させることによって、アダプタータンパク質を生成することが可能である。この反応は、ＮＨＳ又はマレイミド化学を使用して実施することも、又は、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチド内の特定の位置に反応性基（アジド又はアルキン又はテトラジン又はトランスシクロオクテン等）を有する非標準アミノ酸を組み込むことによって実施することもできる。

【0229】

それは、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシド分子に結合することが可能な単離ポリペプチドを、標的化分子に結合することが可能な特定のペプチド配列、例えばスプリットインテイン、ＳｐｙＴａｇ、テトラシステインＦＣＭモチーフ（ＦＬＮＣＣＰＧＣＣＭＥＰ）又はｙｂｂＲモチーフ（ＴＶＬＤＳＬＥＦＩＡＳＫＬＡ）と融合することによって実施することもできる（Fernandes, D.D., et al. Characterization of Fluorescein Arsenical Hairpin (FlAsH) as a Probe for Single-Molecule Fluorescence Spectroscopy. Sci Rep 7, 13063 (2017)を参照）。このような場合、標的化分子は、反応性エレメントの反対側、例えばスプリットインテインの反対側；ＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ；フルオレセインヒ素ヘアピン、又はコエンザイムＡをそれぞれ含むように設計される。

【0230】

次いで標的化分子は、特定の受容体に結合するように選ばれ得る。場合によっては、標的化分子がタンパク質、例えば、標的細胞型上で発現される受容体に対する抗体であってもよい。抗体の場合、抗体をアルキン基で修飾し、次いでクリックケミストリーを介して、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチド上のアジド基に反応させてもよい。

【0231】

場合によっては、標的化分子は小分子であってもよい。場合によっては、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドは、ＰＫＤ２ドメイン含有タンパク質である。例えば、セロトニン又はドーパミン等の神経伝達物質を、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドに接続させることによって、ＡＡＶと合わせると、それぞれセロトニン受容体又はドーパミン受容体を発現する細胞に特異的なＡＡＶを生成するアダプター分子を作製することが可能となる。このアプローチ（すなわち、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドと反応性基とを含むアダプター分子を作製すること、次いでそれを標的化分子と反応させること）は、標的化分子が、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドとの融合として発現することができない場合（例えば、標的化分子が単鎖タンパク質でない場合、又は小分子である場合）、又はアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドに対する標的化分子の融合により、効率的に精製することができない場合に、特に有用である。

【0232】

実施例１２－本発明の更なる例
本発明者等は、本発明の特に有利な特徴を生み出す本発明の数多くの態様を特定した。

【0233】

ＡＡＶＲのＰＫＤ２（Ｖ４８０Ｅ）変異体は、ＡＡＶカプシドに対する親和性が向上しており、これによりアダプタータンパク質として優れている（図２６参照）。

【0234】

ウイルスを再標的化するためのウイルスアダプタータンパク質の使用は、ＣＡＲ－融合タンパク質をアダプターとして使用してアデノウイルスに適用することができる（図２７参照）。

【0235】

複合体は、ＡＡＶ１（Ａｓｐ５９０Ｃｙｓ）とアダプタータンパク質との間で生成され得る（図２８参照）。

【0236】

ＰＫＤ２（Ｓｅｒ４２５Ｃｙｓ）とともにアダプタータンパク質を構成する融合パートナーの同一性は、共有結合付加体を形成する能力を維持しながら、モジュール方式でカスタマイズすることができる。これは、本技術を使用して、融合パートナーの同一性を変更することにより、多くの異なる受容体に対してＡＡＶを再標的化することができることを意味する（図２９参照）。

【0237】

アダプタータンパク質とウイルスカプシドタンパク質との間の共有結合付加体は、１ｍＭの還元剤トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩（ＴＣＥＰ）の存在下でも形成することができ、これはタンパク質間のジスルフィド結合が、溶媒に完全に曝されていない界面に形成されることを示す（図３０参照）。ＴＣＥＰ等の還元剤の存在下でのカップリングは、アダプタータンパク質とウイルスとのカップリングにも有利であり、カップリング反応前にタンパク質及びウイルスを部分的に酸化しておいてもよい。

【0238】

アダプタータンパク質によるＡＡＶ１（Ａｓｐ５９０Ｃｙｓ）の再標的化は、その感染力を実質的に増加させることができる（図３１参照）。

【0239】

組換えＡＡＶ１はＡＤＫ１ａ抗体によって中和されるが、コーティングされたウイルス粒子（ＣＡＲ－Ｖ粒子）は、中和抗体の濃度にかかわらず同じレベルの感染力を維持し、それ故、中和に対して抵抗性である（図３２参照）。

【0240】

ＡＡＶ１（Ａｓｐ５９０Ｃｙｓ）をアダプタータンパク質でコーティングすると、アダプタータンパク質と相互作用する受容体を発現する細胞型に対するその特異性を高めることができる（図３３参照）。

【0241】

ウイルスをアダプタータンパク質でコーティングすると、ＡＡＶのオフターゲット感染の主要部位である肝臓に感染しなくなる（図３４参照）。

【0242】

アダプタータンパク質とのインキュベート後、遊離ＶＰタンパク質に対応する認識可能なバンドは観察することができず、これはカップリングが完了したことを示している。これにより、ＰＫＤ１由来のアダプタータンパク質を使用して、ＡＡＶ５^{Ｑ６９７Ｃ}を再標的化し得ることが示される（図３５参照）。

【0243】

ファイバーノブとアダプタータンパク質との間の共有結合付加体の形成は、専らカルシウムイオンの存在下で観察され、このため、結合の形成がノブとデスモグレイン２との間のＣａ^２＋依存性相互作用に依存していることが示される。故に、ＤＳＧ２由来のアダプタータンパク質は、アデノウイルスＢ３に共有結合し、その指向性を変えるために使用することができる（図３６参照）。

【0244】

図３９は、ＡＡＶ２（Ｇｌｎ５８９Ｃｙｓ）をアダプタータンパク質でコーティングすると、アダプタータンパク質と相互作用する受容体を発現する細胞に対するその特異性を高めることができることを示している。

【0245】

図４０は、マーカー後のレーン２及びレーン５におけるカプシドタンパク質の分子量のシフトによって示される、アダプタータンパク質とウイルスカプシドタンパク質との間の共有結合付加体を示している。重要なことは、ＡＡＶ１及びＡＡＶ２突然変異体ウイルスの両方に付加体のバンドが形成されることである。これにより、ＰＫＤ２由来のアダプタータンパク質を使用して、ＡＡＶ１及びＡＡＶ２の指向性を変えることができることが確認される。

【0246】

図４１は、ＡＡＶ５（Ｇｌｎ６９７Ｃｙｓ）をアダプタータンパク質でコーティングすると、対応する受容体を発現する細胞に対するその特異性を高めることによって再標的化を可能にすることを示している。

【0247】

これらの追加のデータは、本明細書に記載の原理が複数の異なるウイルスアダプタータンパク質及び複数の異なるウイルス型に包括的に利用可能であることを実証するものである。特に、本出願は、５つの別個のウイルス－アダプタータンパク質対にわたる包括的な効果を裏付ける証拠を提供する：
ＰＫＤ２（Ｓｅｒ４２５Ｃｙｓ－Ｖａｌ４８０Ｇｌｕ）＋ＡＡＶ１（Ａｓｐ５９０Ｃｙｓ）
ＰＫＤ２（Ｓｅｒ４２５Ｃｙｓ－Ｖａｌ４８０Ｇｌｕ）＋ＡＡＶ２（Ｇｌｎ５８９Ｃｙｓ）
ＰＫＤ１（Ｓｅｒ３５６Ｃｙｓ）＋ＡＡＶ５（Ｇｌｎ６９７Ｃｙｓ）
ＤＳＧ２（Ａｌａ１７４Ｃｙｓ）＋ＡｄＶ－Ｂ３（Ａｓｎ１９２Ｃｙｓ）
ＣＡＲ（Ｖａｌ７０Ｃｙｓ）＋ＡｄＶ－５（Ｖａｌ４４１Ｃｙｓ）

【0248】

本発明の組成物及び方法に対して様々な修飾及び変更を行うことができることは、当業者には明らかであろう。したがって、本発明は、添付の特許請求の範囲及びそれらの均等物の範囲内にある限り、そのような修飾及び変更を包含することが意図される。

【0249】

本明細書で言及される全ての刊行物、特許及び特許出願は、個々の刊行物、特許又は特許出願が、引用することにより本明細書の一部をなすように具体的かつ個別に示されているようかのように、引用することによりその全体が本明細書の一部をなすものとする。加えて、本出願におけるいずれかの引用文献の引用又は特定は、かかる引用文献が本発明の先行技術として利用可能であることを認めるものとして解釈されるべきではない。セクションの見出しが使用されている限りにおいて、それは必ずしも限定的なものとして解釈されるべきではない。

【0250】

本発明の更なる実施形態を以下に開示する：
１．アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチド。
２．（ｉ）アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドと、（ｉｉ）リガンドとを含むＡＡＶアダプター分子。
３．非修飾野生型ウイルスカプシドに結合することが可能である、実施形態１又は２のいずれか１つによる単離ポリペプチド又はＡＡＶアダプター分子。
４．野生型ウイルスカプシドと比較して５つ以下の（例えば５つ、４つ、３つ、２つ又は１つの）アミノ酸点突然変異を有するウイルスカプシドに結合することが可能である、実施形態１～３のいずれか１つによる単離ポリペプチド又はＡＡＶアダプター分子。
５．野生型ウイルスカプシドに対して５アミノ酸以下の（すなわち１アミノ酸、２アミノ酸、３アミノ酸、４アミノ酸又は５アミノ酸の）アミノ酸挿入又はアミノ酸欠失を有するウイルスカプシドに結合することが可能である、実施形態１～４のいずれか１つによる単離ポリペプチド又はＡＡＶアダプター分子。
６．野生型ウイルスカプシドに対して挿入又は欠失を有しないウイルスカプシドに結合することが可能である、実施形態１～５のいずれか１つによる単離ポリペプチド又はＡＡＶアダプター分子。
７．アデノ随伴ウイルスカプシドに結合することが可能なアデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）の一部を含む、実施形態１～６のいずれか１つによる単離ポリペプチド又はＡＡＶアダプター分子。
８．アデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）の完全長配列を含む、実施形態１～７のいずれか１つによる単離ポリペプチド又はＡＡＶアダプター分子。
９．アデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）の配列が配列番号１のアミノ酸配列を含む、実施形態７又は８のいずれか１つによる単離ポリペプチド又はＡＡＶアダプター分子。
１０．ＡＡＶＲポリペプチドにおける１つ以上の点突然変異を含み、任意に、１つ以上の点突然変異が配列番号１を参照して定義される、実施形態７～９のいずれか１つによる単離ポリペプチド又はＡＡＶアダプター分子。
１１．ＡＡＶＲポリペプチドにおける１つ以上の点突然変異を含み、任意に、１つ以上の点突然変異が配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５及び配列番号６からなるリストから選択される配列を参照して定義される、実施形態７～１０のいずれか１つによる単離ポリペプチド又はＡＡＶアダプター分子。
１２．ＰＫＤ２ドメインにおけるＶ４８０Ｅ突然変異を含み、任意に、１つ以上の点突然変異が配列番号１を参照して定義される、実施形態７～１０のいずれか１つによる単離ポリペプチド又はＡＡＶアダプター分子。
１３．Ｖ４８０Ｅ突然変異を有する配列番号１の配列を含む、実施形態７～１２のいずれか１つによる単離ポリペプチド又はＡＡＶアダプター分子。
１４．Ｖ４８０Ｅ突然変異を有する配列番号３の配列を含む、実施形態７～１１のいずれか１つによる単離ポリペプチド又はＡＡＶアダプター分子。
１５．ＰＫＤ２ドメインにおけるＳ４２５Ｃ突然変異を含み、任意に、１つ以上の点突然変異が配列番号１を参照して定義される、実施形態７～１４のいずれか１つによる単離ポリペプチド又はＡＡＶアダプター分子。
１６．Ｓ４２５Ｃ突然変異を有する配列番号１の配列を含む、実施形態７～１４のいずれか１つによる単離ポリペプチド又はＡＡＶアダプター分子。
１７．Ｓ４３５Ｃ突然変異を有する配列番号３の配列を含む、実施形態７～１４のいずれか１つによる単離ポリペプチド又はＡＡＶアダプター分子。
１８．ＰＫＤ２ドメインにおけるＳ４２５Ｃ突然変異及びＶ４８０Ｅ突然変異を含み、任意に、１つ以上の点突然変異が配列番号１又は配列番号３を参照して定義される、実施形態７～１７のいずれか１つによる単離ポリペプチド又はＡＡＶアダプター分子。
１９．ＤＡＲＰｉｎ、ナノボディ、好適な抗体様タンパク質、リポカリンフォールドに由来するタンパク質、アフィボディ（例えば、プロテインＡのＺドメインに由来するアフィボディ）、フィブロネクチンのドメイン、ＦｙｎのＳＨ３ドメイン、プロテアーゼ阻害剤ステフィンＡに由来するアフィマー又はスキャフォールド、非抗体スキャフォールドタンパク質（アディロン）、及び抗体又はその抗原結合フラグメントからなるリストから選択されるポリペプチドの一部を含む、実施形態１～６のいずれか１つによる単離ポリペプチド又はＡＡＶアダプター分子。
２０．ＤＡＲＰｉｎ、ナノボディ、好適な抗体様タンパク質、リポカリンフォールドに由来するタンパク質、アフィボディ（例えば、プロテインＡのＺドメインに由来するアフィボディ）、フィブロネクチンのドメイン、ＦｙｎのＳＨ３ドメイン、プロテアーゼ阻害剤ステフィンＡに由来するアフィマー又はスキャフォールド、非抗体スキャフォールドタンパク質（アディロン）、及び抗体又はその抗原結合フラグメントからなるリストから選択されるポリペプチドを含む、実施形態１～６のいずれか１つによる単離ポリペプチド又はＡＡＶアダプター分子。
２１．
ａ）１つ以上の非天然アミノ酸、
ｂ）ポリペプチドに架橋した１つ以上の化学的部分、
ｃ）ビオチンタグ、例えばビオチン化ＡＡＶＲ、
ｄ）ＳｐｙＴａｇペプチド、例えばＡＡＶＲ－ＳｐｙＴａｇ、及び／又は、
ｅ）プロテインＡポリペプチド若しくはプロテインＧポリペプチド、
の１つ以上を更に含む、実施形態１～２０のいずれか１つによる単離ポリペプチド又はＡＡＶアダプター分子。
２２．リガンドが細胞表面分子に結合することが可能である、実施形態１～２１のいずれか１つによる単離ポリペプチド又はＡＡＶアダプター分子。
２３．リガンドが抗体又はその抗原結合フラグメント等のヒトタンパク質である、実施形態１～２２のいずれか１つによる単離ポリペプチド又はＡＡＶアダプター分子。
２４．リガンドがインターロイキン－１、インターロイキン－２、インターロイキン－３、インターロイキン－４、インターロイキン－５、インターロイキン－６、インターロイキン－７、インターロイキン－８、インターロイキン－９、インターロイキン－１０、インターロイキン－１１、インターロイキン－１２、インターロイキン－１３、インターロイキン－１４、インターロイキン－１５、インターロイキン－１６、インターロイキン－１７、インターロイキン－１８、インターロイキン－１９、インターロイキン－２０、インターロイキン－２１、インターロイキン－２２、インターロイキン－２３、インターロイキン－２４、インターロイキン－２５、インターロイキン－２６、インターロイキン－２７、インターロイキン－２８、インターロイキン－２９、インターロイキン－３０、インターロイキン－３１、インターロイキン－３２、インターロイキン－３３、インターロイキン－３４、インターロイキン－３５、インスリン、トランスフェリン、ＣＤ２、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ２、ＣＤ４０Ｌ／ＣＤ１５４、ＣＤ５、ＣＤ７２、ＣＤ５Ｌ、ＣＤ２３、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｓ１００Ａｐ、ＣＤ１７８、ＣＤ１５５、ＣＤ１０６、ＣＳＦ１、ＣＤ１６６、ＦａｓＬ、ＣＤ２４２、ＣＤ２５２、ＴＲＡＩＬ、ＲＡＮＫＬ、ＡＰＲＩＬ、ＣＤ２５７、ＣＤ２７２、ＣＤ２７３、ＣＤ２７４、ＣＤ２７５、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、Ｃａｓ１３及びＣａｓ７－１１、エンドセリン、レプチン、バソプレッシン、ＣＤ１０、ＣＤ３１、ＣＤ１１９、アペリン、エラベラ、アドレノメデュリン、ボツリヌス毒素に由来する標的化ドメイン、神経ペプチド、サイトカイン又は小分子からなるリストから選択される１つ以上のリガンドである、実施形態１～２３のいずれか１つによる単離ポリペプチド又はＡＡＶアダプター分子。
２５．リガンドが小分子であり、任意に、小分子がＮ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）又はマレイミドを介して単離ポリペプチド又はＡＡＶアダプター分子に連結される、実施形態１～２４のいずれか１つによる単離ポリペプチド又はＡＡＶアダプター分子。
２６．リガンドが小分子であり、任意に、単離ポリペプチド又はＡＡＶアダプター分子が、小分子を単離ポリペプチド又はＡＡＶアダプター分子に連結する非標準アミノ酸を含む、実施形態１～２４のいずれか１つによる単離ポリペプチド又はＡＡＶアダプター分子。
２７．リガンドがＨｅｒ２、インターロイキン－１受容体、インターロイキン－２受容体、インターロイキン－３受容体、インターロイキン－４受容体、インターロイキン－５受容体、インターロイキン－６受容体、インターロイキン－７受容体、インターロイキン－８受容体、インターロイキン－９受容体、インターロイキン－１０受容体、インターロイキン－１１受容体、インターロイキン－１２受容体、インターロイキン－１３受容体、インターロイキン－１５受容体、インターロイキン－１８受容体、インターロイキン－２０受容体、インターロイキン－２１受容体、インターロイキン－２２受容体、インターロイキン－２３受容体、インターロイキン－２７受容体、インターロイキン－２８受容体、インスリン受容体、トランスフェリン受容体、ＣＤ５８、ＣＤ２、ＣＤ２、ＣＤ５９、ＣＤ４０、ＣＤ７２、ＣＤ５、ＣＤ３６、ＣＤ１９、ＣＤ２１、ＣＤ８１、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ－４、ＣＤ８５ｊ、ＣＤ９５、ＣＤ９６、α４β１インテグリン、ＣＤ１１５、ＣＤ６、ＣＤ１７８、ＬＦＡ－１、ＴＮＦＲＳＦ４、ＤＲ４、ＤＲ５、ＲＡＮＫ／ＣＤ２６５、ＴＡＣＩ／ＣＤ２６７、ＣＤ２６７、ＣＤ２６８、ＣＤ２６９、ＨＶＥＭ、ＰＤ１／ＣＤ２７９、Ｂ７－１／ＣＤ８０、ＣＤ２７８、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＮＭＤＡＲ、ＡＭＰＡＲ、ｍＧｌｕＲ５、ＤＲＤ１、ＤＲＤ２、Ｂｍｐ４、ＧＬＰ１Ｒ、レプチン受容体、α５β５インテグリン及びｇｌｙｃｏＲＮＡからなるリストから選択される１つ以上の細胞表面分子と結合する、実施形態１～２６のいずれか１つによる単離ポリペプチド又はＡＡＶアダプター分子。
２８．アデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）の一部がＰＫＤ１ドメインの少なくとも一部、ＰＫＤ２ドメインの少なくとも一部、ＰＫＤ３ドメインの少なくとも一部、ＰＫＤ４ドメインの少なくとも一部、ＰＫＤ５ドメインの少なくとも一部又はそれらの任意の組合せを含む、実施形態７～２７のいずれか１つによる単離ポリペプチド又はＡＡＶアダプター分子。
２９．アデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）の一部が、完全なＰＫＤ１ドメイン、完全なＰＫＤ２ドメイン、完全なＰＫＤ３ドメイン、完全なＰＫＤ４ドメイン、完全なＰＫＤ５ドメイン又はそれらの任意の組合せを含む、実施形態７～２８のいずれか１つによる単離ポリペプチド又はＡＡＶアダプター分子。
３０．アデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）の一部が配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５及び配列番号６からなるリストから選択される配列を含む、実施形態７～２９のいずれか１つによる単離ポリペプチド又はＡＡＶアダプター分子。
３１．アデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）の一部がアデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）の完全長配列を含み、任意に、完全配列が配列番号１を含む、実施形態７～３０のいずれか１つによる単離ポリペプチド又はＡＡＶアダプター分子。
３２．実施形態１～３１のいずれか１つによる少なくとも１つの単離ポリペプチド又はＡＡＶアダプター分子に結合したアデノ随伴ウイルス粒子。
３３．実施形態１～３２のいずれか１つによる少なくとも２つ、３つ、４つ又は５つの単離ポリペプチド又はＡＡＶアダプター分子に結合したアデノ随伴ウイルス粒子。
３４．２つ以上の異なる標的細胞に対して特異性を有する、実施形態３３によるアデノ随伴ウイルス粒子。
３５．２つ以上の異なる標的細胞に対して増大した指向性を有する、実施形態３３によるアデノ随伴ウイルス粒子。
３６．２つ以上の標的細胞が異なる細胞表面分子を発現する、実施形態３４又は３５によるアデノ随伴ウイルス粒子。
３７．少なくとも２つ、３つ、４つ又は５つの単離ポリペプチド又はＡＡＶアダプター分子が、２つ以上の標的細胞上の異なる細胞表面分子に特異的に結合する、実施形態３４～３６のいずれか１つによるアデノ随伴ウイルス粒子。
３８．２つ以上の異なる細胞表面分子を発現する標的細胞に対して特異性を有する、実施形態３３によるアデノ随伴ウイルス粒子。
３９．２つ以上の異なる細胞表面分子を発現する標的細胞に対して増大した指向性を有する、実施形態３３によるアデノ随伴ウイルス粒子。
４０．少なくとも２つ、３つ、４つ又は５つの単離ポリペプチド又はＡＡＶアダプター分子が、標的細胞上の２つ以上の異なる細胞表面分子に特異的に結合する、実施形態３８又は３９によるアデノ随伴ウイルス粒子。
４１．アデノ随伴ウイルスがＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶｒｈ．８、ＡＡＶｒｈ．１０、ＡＡＶｒｈ．７４からなるリストから選択される、実施形態３２によるアデノ随伴ウイルス粒子。
４２．アデノ随伴ウイルスがＡＡＶ２である、実施形態３２又は４１のいずれか１つによるアデノ随伴ウイルス粒子。
４３．アデノ随伴ウイルスが野生型ＡＡＶである、実施形態３２～４２のいずれか１つによるアデノ随伴ウイルス粒子。
４４．アデノ随伴ウイルスが配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９からなる群から選択されるカプシドアミノ酸配列の一部を含む、実施形態３２～４３のいずれか１つによるアデノ随伴ウイルス粒子。
４５．アデノ随伴ウイルスが配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９からなる群から選択されるカプシドアミノ酸配列の完全長を含む、実施形態３２～４４のいずれか１つによるアデノ随伴ウイルス粒子。
４６．アデノ随伴ウイルスが、野生型アミノ酸配列に対して１つ以上の保存的アミノ酸変化、例えば野生型アミノ酸配列に対して１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個又は２０個の保存的アミノ酸変化を有し、任意に、野生型アミノ酸配列が配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９からなる群から選択される、実施形態３２～４５のいずれか１つによるアデノ随伴ウイルス粒子。
４７．アデノ随伴ウイルスが、野生型アミノ酸配列に対して５つ以下の非保存的アミノ酸変化、例えば野生型アミノ酸配列に対して５つ、４つ、３つ、２つ又は１つの非保存的アミノ酸変化を有し、任意に、野生型アミノ酸配列が配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９からなる群から選択される、実施形態３２～４６のいずれか１つによるアデノ随伴ウイルス粒子。
４８．ヘパラン硫酸プロテオグリカン（ＨＳＰＧ）、Ｏ－結合型シアル酸、Ｎ－結合型シアル酸、Ｎ－結合型ガラクトース等の非タンパク質結合剤との相互作用を媒介するカプシドタンパク質における１つ以上のアミノ酸変化を含む、実施形態３２～４７のいずれか１つによるアデノ随伴ウイルス粒子。
４９．１つ以上の突然変異がＡＡＶ２のアルギニン残基５８５及び５８８を含む、実施形態４８によるアデノ随伴ウイルス粒子。
５０．実施形態３２～４９のいずれか１つによるアデノ随伴ウイルス粒子を含む医薬組成物。
５１．ＡＡＶ粒子を修飾する方法であって、
ＡＡＶ粒子を準備することと、
アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドを準備することと、
ＡＡＶ粒子と単離ポリペプチドとを、単離ポリペプチドがＡＡＶ粒子に結合するように組み合わせることと、
を含む、方法。
５２．ＡＡＶ粒子を修飾する方法であって、
ＡＡＶ粒子を準備することと、
アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドとリガンドとを含むＡＡＶアダプター分子を準備することと、
ＡＡＶ粒子とＡＡＶアダプター分子とを、単離融合ポリペプチドがＡＡＶ粒子に結合するように組み合わせることと、
を含む、方法。
５３．ＡＡＶ粒子を修飾する方法であって、
ＡＡＶ粒子を準備することと、
アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドに結合することが可能な２つ以上の（例えば２つ、３つ、４つ又は５つの）単離ポリペプチドを準備することと、
ＡＡＶ粒子と単離ポリペプチドとを、単離ポリペプチドがＡＡＶ粒子に結合するように組み合わせることと、
を含む、方法。
５４．ＡＡＶ粒子を修飾する方法であって、
ＡＡＶ粒子を準備することと、
アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドとリガンドとを含む２つ以上の（例えば２つ、３つ、４つ又は５つの）ＡＡＶアダプター分子を準備することと、
ＡＡＶ粒子とＡＡＶアダプター分子とを、ＡＡＶアダプター分子がＡＡＶ粒子に結合するように組み合わせることと、
を含む、方法。
５５．単離ポリペプチド又はＡＡＶアダプター分子とＡＡＶ粒子との結合が、１つ以上のＡＡＶカプシドタンパク質の天然指向性を減少又は消失させる、実施形態５１～５４のいずれか１つによるＡＡＶ粒子を修飾する方法。
５６．単離ポリペプチド又はＡＡＶアダプター分子とＡＡＶ粒子との結合が、１つ以上の細胞型に対するＡＡＶ粒子の指向性を増大させる、実施形態５１～５５のいずれか１つによるＡＡＶ粒子を修飾する方法。
５７．単離ポリペプチド又はＡＡＶアダプター分子とＡＡＶ粒子との結合が、神経細胞、マクロファージ、小膠細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、抗原提示細胞、ＮＫ細胞、癌細胞、筋細胞、肝細胞、視細胞、膵β細胞、腎細胞及び肺細胞からなるリストから選択される１つ以上の細胞型に対するＡＡＶ粒子の指向性を増大させる、実施形態５１～５６のいずれか１つによるＡＡＶ粒子を修飾する方法。
５８．ＡＡＶ粒子が、単離ポリペプチド又はＡＡＶアダプター分子を含まないＡＡＶ粒子の天然指向性と比較して少なくとも１０％、例えば少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％又は少なくとも１００％減少又は増大した指向性を有する、実施形態５１～５７のいずれか１つによるＡＡＶ粒子を修飾する方法。
５９．ＡＡＶ粒子が２つ以上の異なる標的細胞に対して特異性を有する、実施形態５１～５８のいずれか１つによるＡＡＶ粒子を修飾する方法。
６０．ＡＡＶ粒子が２つ以上の異なる標的細胞に対して増大した指向性を有する、実施形態５１～５８のいずれか１つによるＡＡＶ粒子を修飾する方法。
６１．２つ以上の標的細胞が異なる細胞表面分子を発現する、実施形態５９又は６０によるＡＡＶ粒子を修飾する方法。
６２．少なくとも２つ、３つ、４つ又は５つの単離ポリペプチド又はＡＡＶアダプター分子が、２つ以上の標的細胞上の異なる細胞表面分子に特異的に結合する、実施形態５９～６１のいずれか１つによるＡＡＶ粒子を修飾する方法。
６３．アデノ随伴ウイルス粒子が、２つ以上の異なる細胞表面分子を発現する標的細胞に対して特異性を有する、実施形態５１～５８のいずれか１つによるＡＡＶ粒子を修飾する方法。
６４．アデノ随伴ウイルス粒子が、２つ以上の異なる細胞表面分子を発現する標的細胞に対して増大した指向性を有する、実施形態５１～５８のいずれか１つによるＡＡＶ粒子を修飾する方法。
６５．少なくとも２つ、３つ、４つ又は５つの単離ポリペプチド又はＡＡＶアダプター分子が、標的細胞上の２つ以上の異なる細胞表面分子に特異的に結合する、実施形態６３又は６４によるＡＡＶ粒子を修飾する方法。
６６．ＡＡＶ粒子を標的細胞に標的化する方法であって、
ＡＡＶ粒子を準備することと、
アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドと、標的細胞に特異的なリガンドとを含むＡＡＶアダプター分子を準備することと、
ＡＡＶ粒子とＡＡＶアダプター分子とを、ＡＡＶアダプター分子がＡＡＶ粒子に結合するように組み合わせ、それにより修飾ＡＡＶ粒子を生成することと、
標的細胞を含む細胞の混合物と修飾ＡＡＶ粒子とを接触させることと、
を含む、方法。
６７．ＡＡＶ粒子を標的細胞に標的化する方法であって、
ＡＡＶ粒子を準備することと、
アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドと、標的細胞に特異的なリガンドとを含む２つ以上の（例えば２つ、３つ、４つ又は５つの）ＡＡＶアダプター分子を準備することと、
ＡＡＶ粒子と２つ以上のＡＡＶアダプター分子とを、ＡＡＶアダプター分子がＡＡＶ粒子に結合するように組み合わせ、それにより修飾ＡＡＶ粒子を生成することと、
標的細胞を含む細胞の混合物と修飾ＡＡＶ粒子とを接触させることと、
を含み、標的細胞が２つ以上の異なる細胞表面分子を発現し、任意に、ＡＡＶアダプター分子が標的細胞上の２つ以上の異なる細胞表面分子に特異的に結合する、方法。
６８．ＡＡＶ粒子を２つ以上の標的細胞に標的化する方法であって、
ＡＡＶ粒子を準備することと、
アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドと、２つ以上の標的細胞の少なくとも１つに特異的なリガンドとを含む２つ以上の（例えば２つ、３つ、４つ又は５つの）ＡＡＶアダプター分子を準備することと、
ＡＡＶ粒子と２つ以上のＡＡＶアダプター分子とを、ＡＡＶアダプター分子がＡＡＶ粒子に結合するように組み合わせ、それにより修飾ＡＡＶ粒子を生成することと、
２つ以上の標的細胞を含む細胞の混合物と修飾ＡＡＶ粒子とを接触させることと、
を含み、２つ以上の標的細胞が２つ以上の異なる細胞表面分子を発現し、任意に、ＡＡＶアダプター分子が２つ以上の標的細胞上の異なる細胞表面分子に特異的に結合する、方法。
６９．アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドが、アデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）の一部を含む、実施形態５１～６８のいずれか１つによるＡＡＶ粒子を修飾する方法又はＡＡＶ粒子を標的細胞に標的化する方法。
７０．アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドが、アデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）のＰＫＤ１ドメインの少なくとも一部、ＰＫＤ２ドメインの少なくとも一部、ＰＫＤ３ドメインの少なくとも一部、ＰＫＤ４ドメインの少なくとも一部、ＰＫＤ５ドメインの少なくとも一部又はそれらの任意の組合せを含む、実施形態５１～６９のいずれか１つによるＡＡＶ粒子を修飾する方法又はＡＡＶ粒子を標的細胞に標的化する方法。
７１．アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドが、アデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）の完全なＰＫＤ１ドメイン、完全なＰＫＤ２ドメイン、完全なＰＫＤ３ドメイン、完全なＰＫＤ４ドメイン、完全なＰＫＤ５ドメイン又はそれらの任意の組合せを含む、実施形態５１～７０のいずれか１つによるＡＡＶ粒子を修飾する方法又はＡＡＶ粒子を標的細胞に標的化する方法。
７２．アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドが、ＡＡＶＲポリペプチドにおける１つ以上の突然変異を含み、任意に、１つ以上の突然変異が配列番号１を参照して定義される、実施形態５１～７１のいずれか１つによるＡＡＶ粒子を修飾する方法又はＡＡＶ粒子を標的細胞に標的化する方法。
７３．アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドが、アデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）のＰＫＤ１ドメインの少なくとも一部、ＰＫＤ２ドメインの少なくとも一部、ＰＫＤ３ドメインの少なくとも一部、ＰＫＤ４ドメインの少なくとも一部、ＰＫＤ５ドメインの少なくとも一部又はそれらの任意の組合せを含み、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドが、ＡＡＶＲポリペプチドにおける１つ以上の突然変異を含み、任意に、１つ以上の突然変異が配列番号１を参照して定義される、実施形態５１～７２のいずれか１つによるＡＡＶ粒子を修飾する方法又はＡＡＶ粒子を標的細胞に標的化する方法。
７４．アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドが、アデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）の完全なＰＫＤ１ドメイン、完全なＰＫＤ２ドメイン、完全なＰＫＤ３ドメイン、完全なＰＫＤ４ドメイン、完全なＰＫＤ５ドメイン又はそれらの任意の組合せを含み、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドが、ＡＡＶＲポリペプチドにおける１つ以上の突然変異を含み、任意に、１つ以上の突然変異が配列番号１を参照して定義される、実施形態５１～７３のいずれか１つによるＡＡＶ粒子を修飾する方法又はＡＡＶ粒子を標的細胞に標的化する方法。
７５．アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドが配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５及び配列番号６からなるリストから選択される配列を含む、実施形態５１～７４のいずれか１つによるＡＡＶ粒子を修飾する方法又はＡＡＶ粒子を標的細胞に標的化する方法。
７６．アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドが、アデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）の完全長配列を含み、任意に、完全配列が配列番号１を含む、実施形態５１～７５のいずれか１つによるＡＡＶ粒子を修飾する方法又はＡＡＶ粒子を標的細胞に標的化する方法。
７７．アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドが、１つ以上の点突然変異を有するアデノ随伴ウイルス受容体の一部を含み、任意に、１つ以上の点突然変異が配列番号１を参照して定義される、実施形態５１～７６のいずれか１つによるＡＡＶ粒子を修飾する方法又はＡＡＶ粒子を標的細胞に標的化する方法。
７８．アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドが、１つ以上の点突然変異を有するアデノ随伴ウイルス受容体の一部を含み、任意に、１つ以上の点突然変異が配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５及び配列番号６からなるリストから選択される配列を参照して定義される、実施形態５１～７６のいずれか１つによるＡＡＶ粒子を修飾する方法又はＡＡＶ粒子を標的細胞に標的化する方法。
７９．アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドが、ＰＫＤ２ドメインにおけるＶ４８０Ｅ突然変異を含み、任意に、１つ以上の点突然変異が配列番号１を参照して定義される、実施形態５１～７７のいずれか１つによるＡＡＶ粒子を修飾する方法又はＡＡＶ粒子を標的細胞に標的化する方法。
８０．アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドが、Ｖ４８０Ｅ突然変異を有する配列番号１の配列を含む、実施形態５１～７９のいずれか１つによるＡＡＶ粒子を修飾する方法又はＡＡＶ粒子を標的細胞に標的化する方法。
８１．アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドが、Ｖ４８０Ｅ突然変異を有する配列番号３の配列を含む、実施形態５１～７８のいずれか１つによるＡＡＶ粒子を修飾する方法又はＡＡＶ粒子を標的細胞に標的化する方法。
８２．アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドが、ＰＫＤ２ドメインにおけるＳ４２５Ｃ突然変異を含み、任意に、１つ以上の点突然変異が配列番号１を参照して定義される、実施形態５１～８１のいずれか１つによるＡＡＶ粒子を修飾する方法又はＡＡＶ粒子を標的細胞に標的化する方法。
８３．アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドが、Ｓ４２５Ｃ突然変異を有する配列番号１の配列を含む、実施形態５１～８２のいずれか１つによるＡＡＶ粒子を修飾する方法又はＡＡＶ粒子を標的細胞に標的化する方法。
８４．アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドが、Ｓ４２５Ｃ突然変異を有する配列番号３の配列を含む、実施形態５１～８３のいずれか１つによるＡＡＶ粒子を修飾する方法又はＡＡＶ粒子を標的細胞に標的化する方法。
８５．アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドが、ＰＫＤ２ドメインにおけるＳ４２５Ｃ突然変異及びＶ４８０Ｅ突然変異を含み、任意に、１つ以上の点突然変異が配列番号１又は配列番号３を参照して定義される、実施形態５１～８４のいずれか１つによるＡＡＶ粒子を修飾する方法又はＡＡＶ粒子を標的細胞に標的化する方法。
８６．目的の核酸配列を標的細胞に送達する方法であって、標的細胞と実施形態３２～４９のいずれか１つによる修飾ＡＡＶ粒子又は実施形態５０による医薬組成物とを接触させることを含み、ＡＡＶ粒子が目的の核酸配列を含む、方法。
８７．目的の核酸配列がＲＡＢエスコートタンパク質１、ＲＰＥ６５、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、コクリン、ＣＬＮ７、酸性α－グルコシダーゼ（ＧＡＡ）、アクアポリン１、グリア細胞株由来神経栄養因子、アスパルトアシラーゼ、芳香族Ｌ－アミノ酸脱炭酸酵素、網膜色素変性症ＧＴＰアーゼ調節因子欠損、筋小胞体カルシウムＡＴＰアーゼ、環状ヌクレオチド感受性チャネルβ３、ニュールツリン、ガラクトシダーゼβ１、グルコース－６－ホスファターゼ、フェニルアラニンヒドロキシラーゼ、オルニチントランスカルバミラーゼ、ジストロフィン及びカルニチンパルミトイルトランスフェラーゼＩＩ、フェニルアラニンヒドロキシラーゼ（ＰＡＨ）、嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子（ＣＦＴＲ）からなるリストから選択されるタンパク質をコードする、実施形態８６の方法。
８８．標的細胞がｉｎ ｖｉｔｒｏである、実施形態６６～８７のいずれか１つによる方法。
８９．標的細胞が対象においてｉｎ ｖｉｖｏである、実施形態６６～８７のいずれか１つによる方法。
９０．標的細胞が神経細胞、マクロファージ、小膠細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、抗原提示細胞、ＮＫ細胞、癌細胞、筋細胞、肝細胞、視細胞、膵β細胞、腎細胞及び肺細胞からなるリストから選択される、実施形態６６～８９のいずれか１つによる方法。
９１．対象がヒトである、実施形態８９又は９０による方法。
９２．標的細胞がヒト標的細胞である、実施形態６６～９３のいずれか１つによる方法。
９３．薬剤として使用される、実施形態３２～４９のいずれか１つによるＡＡＶ粒子又は実施形態５０による医薬組成物。
９４．標的細胞とＡＡＶ粒子とを接触させることにより、目的の核酸配列を標的細胞に送達することを含む、治療を必要とする対象における疾患を治療する方法に使用される、実施形態３２～４９のいずれか１つによるＡＡＶ粒子又は実施形態５０による医薬組成物。
９５．疾患が神経変性障害、癌、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、血友病、先天盲障害、糖尿病、嚢胞性線維症、コロイデレミア、血友病Ａ、血友病Ｂ、ＣＬＮ７疾患、ポンペ病、パーキンソン病、カナバン病、脱髄疾患、ＲＰＥ６５突然変異による遺伝性網膜ジストロフィー、芳香族Ｌ－アミノ酸脱炭酸酵素（ＡＡＤＣ）欠損症、Ｘ連鎖性網膜色素変性症、レーバー先天性黒内障、チャーグ－ストラウス症候群（ＣＳＳ）、重症虚血肢、色覚異常、アルツハイマー病、黄斑変性、オルニチントランスカルバミラーゼ欠損症、ウィルソン病、糖原病ＩＡ型、クリグラーナジャー症候群、テイ－サックス病、サンドホフ病、多発性骨髄腫、多系統萎縮症、ガングリオシドーシス、ダノン病、ファブリー病、バッテン病、フェニルケトン尿症、関節リウマチ、ムコ多糖症ＩＩＩａ型、サンフィリポ症候群Ｂ、ムコ多糖症ＶＩ型、α１－アンチトリプシン欠損症、脊髄性筋萎縮症１型、クラッベ病、ベッカー型筋ジストロフィー、シャルコー－マリー－トゥースニューロパチー１ａ型、カルニチンパルミトイルトランスフェラーゼＩＩ（ＣＰＴ ＩＩ）欠損症及びトリメチルアミン尿症、嚢胞性線維症、フェニルケトン尿症からなるリストから選択される、実施形態９４による使用のためのＡＡＶ粒子又は医薬組成物。
９６．標的細胞とＡＡＶ粒子とを接触させることにより、目的の核酸配列を標的細胞に送達することを含む、治療を必要とする対象における疾患を治療する方法に使用され、以下のリスト：
ａ）神経変性障害の治療のための神経細胞、
ｂ）癌の治療のための免疫細胞（例えばマクロファージ、小膠細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、抗原提示細胞、ＮＫ細胞）、
ｃ）免疫応答を惹起するための免疫細胞（例えばマクロファージ、小膠細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、抗原提示細胞、ＮＫ細胞）、
ｄ）癌の治療のための癌細胞又は腫瘍細胞、
ｅ）デュシェンヌ型筋ジストロフィーの治療のための筋細胞、
ｆ）血友病の治療のための肝細胞、
ｇ）先天盲障害のための視細胞、
ｈ）糖尿病の治療のための膵β細胞、又は、
ｉ）嚢胞性線維症の治療のための肺細胞、
による指定の標的細胞の標的化が、指定の疾患を治療又は改善する、実施形態３２～４９のいずれか１つによるＡＡＶ粒子又は実施形態５０による医薬組成物。
９７．ＡＡＶ粒子又は医薬組成物を対象に対してエアロゾルにより（例えば肺細胞に）、筋肉内に、動脈内に（例えば肝動脈を介して）、関節内に、網膜下に、頭蓋内に、静脈内に、髄腔内に、冠動脈内に又は皮下に投与する、実施形態９３～９７のいずれか１つによる使用のためのＡＡＶ粒子又は医薬組成物。
９８．ウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上のシステイン残基を含む単離ポリペプチド。
９９．（ｉ）ウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上のシステイン残基を含む単離ポリペプチドと、（ｉｉ）リガンドとを含むウイルスアダプター分子。
１００．ウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上のシステイン残基が単離ポリペプチドに対して異種である、実施形態９８による単離ポリペプチド。
１０１．（ｉ）ウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上のシステイン残基を含む単離ポリペプチドと、（ｉｉ）リガンドとを含み、１つ以上のシステイン残基が単離ポリペプチドに対して異種である、実施形態９９によるウイルスアダプター分子。
１０２．非修飾野生型ウイルスカプシドに結合することが可能である、実施形態９８～１０１のいずれか１つによる単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子。
１０３．野生型ウイルスカプシドと比較して５つ以下の（例えば５つ、４つ、３つ、２つ又は１つの）アミノ酸点突然変異を有するウイルスカプシドに結合することが可能である、実施形態９８～１０２のいずれか１つによる単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子。
１０４．野生型ウイルスカプシドに対して５アミノ酸以下の（すなわち１アミノ酸、２アミノ酸、３アミノ酸、４アミノ酸又は５アミノ酸の）アミノ酸挿入又はアミノ酸欠失を有するウイルスカプシドに結合することが可能である、実施形態９８～１０３のいずれか１つによる単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子。
１０５．野生型ウイルスカプシドに対して挿入又は欠失を有しないウイルスカプシドに結合することが可能である、実施形態９８～１０３のいずれか１つによる単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子。
１０６．１つ以上のシステイン残基を有し、アデノ随伴ウイルスカプシドに共有結合することが可能なアデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）の一部を含む、実施形態９８～１０５のいずれか１つによる単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子。
１０７．１つ以上のシステイン残基を有し、アデノ随伴ウイルスカプシドに共有結合することが可能なアデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）の完全長配列を含む、実施形態９８～１０６のいずれか１つによる単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子。
１０８．アデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）の配列が配列番号１のアミノ酸配列を含む、実施形態１０６又は１０７のいずれか１つによる単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子。
１０９．ＡＡＶＲポリペプチドにおける１つ以上の点突然変異を含み、任意に、１つ以上の点突然変異が配列番号１を参照して定義される、実施形態１０６～１０８のいずれか１つによる単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子。
１１０．ＡＡＶＲポリペプチドにおける１つ以上の点突然変異を含み、任意に、１つ以上の点突然変異が配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５及び配列番号６からなるリストから選択される配列を参照して定義される、実施形態１０６～１０９のいずれか１つによる単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子。
１１１．ＰＫＤ２ドメインにおけるＶ４８０Ｅ突然変異を含み、任意に、１つ以上の点突然変異が配列番号１を参照して定義される、実施形態１０６～１１０のいずれか１つによる単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子。
１１２．Ｖ４８０Ｅ突然変異を有する配列番号１の配列を含む、実施形態１０６～１１０のいずれか１つによる単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子。
１１３．Ｖ４８０Ｅ突然変異を有する配列番号３の配列を含む、実施形態１０６～１１０のいずれか１つによる単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子。
１１４．ＰＫＤ２ドメインにおけるＳ４２５Ｃ突然変異を含み、任意に、１つ以上の点突然変異が配列番号１を参照して定義される、実施形態１０６～１１３のいずれか１つによる単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子。
１１５．Ｓ４２５Ｃ突然変異を有する配列番号１の配列を含む、実施形態１０６～１１４のいずれか１つによる単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子。
１１６．Ｓ４２５Ｃ突然変異を有する配列番号３の配列を含む、実施形態１０６～１１５のいずれか１つによる単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子。
１１７．ＰＫＤ２ドメインにおけるＳ４２５Ｃ突然変異及びＶ４８０Ｅ突然変異を含み、任意に、１つ以上の点突然変異が配列番号１又は配列番号３を参照して定義される、実施形態１０６～１１６のいずれか１つによる単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子。
１１８．１つ以上の異種システイン残基を導入するためのＡＡＶＲポリペプチドにおける１つ以上の点突然変異を含み、任意に、１つ以上の点突然変異が配列番号１を参照して定義される、実施形態１０６～１１７のいずれか１つによる単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子。
１１９．１つ以上の異種システイン残基を導入するためのＡＡＶＲポリペプチドにおける１つ以上の点突然変異を含み、任意に、１つ以上の点突然変異が配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５及び配列番号６からなるリストから選択される配列を参照して定義される、実施形態１０６～１１８のいずれか１つによる単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子。
１２０．単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子がＤＡＲＰｉｎ、ナノボディ、好適な抗体様タンパク質、リポカリンフォールドに由来するタンパク質、アフィボディ（例えば、プロテインＡのＺドメインに由来するアフィボディ）、フィブロネクチンのドメイン、ＦｙｎのＳＨ３ドメイン、プロテアーゼ阻害剤ステフィンＡに由来するアフィマー又はスキャフォールド、非抗体スキャフォールドタンパク質（アディロン）、及び抗体又はその抗原結合フラグメントからなるリストから選択されるポリペプチドの一部を含む、実施形態９８～１０５のいずれか１つによる単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子。幾つかの実施形態において、単離ポリペプチド又はＡＡＶアダプター分子は、抗体又はその抗原結合フラグメントを含む。
１２１．単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子がＤＡＲＰｉｎ、ナノボディ、好適な抗体様タンパク質、リポカリンフォールドに由来するタンパク質、アフィボディ（例えば、プロテインＡのＺドメインに由来するアフィボディ）、フィブロネクチンのドメイン、ＦｙｎのＳＨ３ドメイン、プロテアーゼ阻害剤ステフィンＡに由来するアフィマー又はスキャフォールド、非抗体スキャフォールドタンパク質（アディロン）、及び抗体又はその抗原結合フラグメントからなるリストから選択されるポリペプチドを含む、実施形態９８～１０５のいずれか１つによる単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子。幾つかの実施形態において、単離ポリペプチド又はＡＡＶアダプター分子は、抗体又はその抗原結合フラグメントを含む。
１２２．単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子が、コクサッキーウイルス－アデノウイルス受容体（ＣＸＡＤＲ）の一部を含み、任意に、ＣＸＡＤＲ配列が配列番号２０である、実施形態９８～１０５、１２０又は１２１のいずれか１つによる単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子。
１２３．単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子が、コクサッキーウイルス－アデノウイルス受容体（ＣＸＡＤＲ）の完全長配列を含み、任意に、ＣＸＡＤＲ配列が配列番号２０である、実施形態９８～１０５、１２０又は１２１のいずれか１つによる単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子。
１２４．中和抗体Ａ２０の抗原結合部分を含む、実施形態９８～１０５、１２０又は１２１のいずれか１つによる単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子。
１２５．単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子が、中和抗体Ａ２０の１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）と実質的に同一の配列を含み、例えば、中和抗体Ａ２０の１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）が１つ、２つ又は３つのアミノ酸点突然変異を含んでいてもよく、任意に、点突然変異の１つ以上が異種システイン残基である、実施形態１２４による単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子。
１２６．単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子が、中和抗体Ａ２０の相補性決定領域（ＣＤＲ）の各々と実質的に同一の１つ以上の配列を含み、例えば、中和抗体Ａ２０の相補性決定領域（ＣＤＲ）の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つが１つ、２つ又は３つのアミノ酸点突然変異を含んでいてもよく、任意に、点突然変異の１つ以上が異種システイン残基である、実施形態１２５による単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子。
１２７．単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子が、中和抗体Ａ２０の１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）の完全長配列を含み、例えば、ポリペプチドが抗体Ａ２０のＶＨＣＤＲ１（配列番号２６）、抗体Ａ２０のＶＨＣＤＲ２（配列番号２７）、抗体Ａ２０のＶＨＣＤＲ３（配列番号２８）、抗体Ａ２０のＶＬＣＤＲ１（配列番号２２）、抗体Ａ２０のＶＬＣＤＲ２（配列番号２３）及び抗体Ａ２０のＶＬＣＤＲ３（配列番号２４）の１つ以上を含む、実施形態１２４による単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子。
１２８．中和抗体Ａ２０の相補性決定領域（ＣＤＲ）の全てを含む、実施形態１２７による単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子。
１２９．ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子が、中和抗体Ａ２０の完全長ＶＬ鎖（配列番号２１）及びＶＨ鎖（配列番号２５）の配列と実質的に同一の１つ以上の配列を含み、例えば、中和抗体Ａ２０のＶＬ配列及び／又はＶＨ配列が１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個又は１０個のアミノ酸点突然変異を含んでいてもよく、任意に、点突然変異の１つ以上が異種システイン残基である、実施形態９８～１０５又は１２０～１２８のいずれか１つによる１つ以上のシステイン残基を含む単離ポリペプチド。
１３０．ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子が、中和抗体Ａ２０の完全長ＶＬ鎖（配列番号２１）及びＶＨ鎖（配列番号２５）の配列を含む、実施形態９８～１０５又は１２０～１２８のいずれか１つによる１つ以上のシステイン残基を含む単離ポリペプチド。
１３１．
ａ）１つ以上の非天然アミノ酸、
ｂ）ポリペプチドに架橋した１つ以上の化学的部分、
ｃ）ビオチンタグ、
ｄ）ＳｐｙＴａｇペプチド、及び／又は、
ｅ）プロテインＡポリペプチド若しくはプロテインＧポリペプチド、
の１つ以上を更に含む、実施形態９８～１３０のいずれか１つによる単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子。
１３２．リガンドが細胞表面分子に結合することが可能である、実施形態９８～１３１のいずれか１つによる単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子。
１３３．リガンドが抗体又はその抗原結合フラグメント等のヒトタンパク質である、実施形態９８～１３２のいずれか１つによる単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子。
１３４．リガンドがインターロイキン－１、インターロイキン－２、インターロイキン－３、インターロイキン－４、インターロイキン－５、インターロイキン－６、インターロイキン－７、インターロイキン－８、インターロイキン－９、インターロイキン－１０、インターロイキン－１１、インターロイキン－１２、インターロイキン－１３、インターロイキン－１４、インターロイキン－１５、インターロイキン－１６、インターロイキン－１７、インターロイキン－１８、インターロイキン－１９、インターロイキン－２０、インターロイキン－２１、インターロイキン－２２、インターロイキン－２３、インターロイキン－２４、インターロイキン－２５、インターロイキン－２６、インターロイキン－２７、インターロイキン－２８、インターロイキン－２９、インターロイキン－３０、インターロイキン－３１、インターロイキン－３２、インターロイキン－３３、インターロイキン－３４、インターロイキン－３５、インスリン、トランスフェリン、ＣＤ２、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ２、ＣＤ４０Ｌ／ＣＤ１５４、ＣＤ５、ＣＤ７２、ＣＤ５Ｌ、ＣＤ２３、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｓ１００Ａｐ、ＣＤ１７８、ＣＤ１５５、ＣＤ１０６、ＣＳＦ１、ＣＤ１６６、ＦａｓＬ、ＣＤ２４２、ＣＤ２５２、ＴＲＡＩＬ、ＲＡＮＫＬ、ＡＰＲＩＬ、ＣＤ２５７、ＣＤ２７２、ＣＤ２７３、ＣＤ２７４、ＣＤ２７５、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、Ｃａｓ１３及びＣａｓ７－１１、エンドセリン、レプチン、バソプレッシン、ＣＤ１０、ＣＤ３１、ＣＤ１１９、アペリン、エラベラ、アドレノメデュリン、ボツリヌス毒素に由来する標的化ドメイン、神経ペプチド、サイトカイン又は小分子からなるリストから選択される１つ以上のリガンドである、実施形態９８～１３３のいずれか１つによる単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子。
１３５．リガンドが小分子であり、任意に、小分子がＮ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）又はマレイミドを介して単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子に連結される、実施形態９８～１３４のいずれか１つによる単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子。
１３６．リガンドが小分子であり、任意に、単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子が、小分子を単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子に連結する非標準アミノ酸を含む、実施形態９８～１３４のいずれか１つによる単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子。
１３７．リガンドがＨｅｒ２、インターロイキン－１受容体、インターロイキン－２受容体、インターロイキン－３受容体、インターロイキン－４受容体、インターロイキン－５受容体、インターロイキン－６受容体、インターロイキン－７受容体、インターロイキン－８受容体、インターロイキン－９受容体、インターロイキン－１０受容体、インターロイキン－１１受容体、インターロイキン－１２受容体、インターロイキン－１３受容体、インターロイキン－１５受容体、インターロイキン－１８受容体、インターロイキン－２０受容体、インターロイキン－２１受容体、インターロイキン－２２受容体、インターロイキン－２３受容体、インターロイキン－２７受容体、インターロイキン－２８受容体、インスリン受容体、トランスフェリン受容体、ＣＤ５８、ＣＤ２、ＣＤ２、ＣＤ５９、ＣＤ４０、ＣＤ７２、ＣＤ５、ＣＤ３６、ＣＤ１９、ＣＤ２１、ＣＤ８１、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ－４、ＣＤ８５ｊ、ＣＤ９５、ＣＤ９６、α４β１インテグリン、ＣＤ１１５、ＣＤ６、ＣＤ１７８、ＬＦＡ－１、ＴＮＦＲＳＦ４、ＤＲ４、ＤＲ５、ＲＡＮＫ／ＣＤ２６５、ＴＡＣＩ／ＣＤ２６７、ＣＤ２６７、ＣＤ２６８、ＣＤ２６９、ＨＶＥＭ、ＰＤ１／ＣＤ２７９、Ｂ７－１／ＣＤ８０、ＣＤ２７８、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＮＭＤＡＲ、ＡＭＰＡＲ、ｍＧｌｕＲ５、ＤＲＤ１、ＤＲＤ２、Ｂｍｐ４、ＧＬＰ１Ｒ、レプチン受容体、α５β５インテグリン及びｇｌｙｃｏＲＮＡからなるリストから選択される１つ以上の細胞表面分子と結合する、実施形態９８～１３６のいずれか１つによる単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子。
１３８．アデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）の一部がＰＫＤ１ドメインの少なくとも一部、ＰＫＤ２ドメインの少なくとも一部、ＰＫＤ３ドメインの少なくとも一部、ＰＫＤ４ドメインの少なくとも一部、ＰＫＤ５ドメインの少なくとも一部又はそれらの任意の組合せを含む、実施形態１０６～１３７のいずれか１つによる単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子。
１３９．アデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）の一部がＰＫＤ１ドメイン、ＰＫＤ２ドメイン、ＰＫＤ３ドメイン、ＰＫＤ４ドメイン、ＰＫＤ５ドメイン又はそれらの任意の組合せを含む、実施形態１０６～１３７のいずれか１つによる単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子。
１４０．アデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）の一部が配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５及び配列番号６からなるリストから選択される配列を含む、実施形態１０６～１３８のいずれか１つによる単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子。
１４１．アデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）の一部が、アデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）の完全長配列を含み、任意に、完全配列が配列番号１を含む、実施形態１０６～１４０のいずれか１つによる単離ポリペプチド又は共有結合ウイルスアダプター分子。
１４２．実施形態９８～１４１のいずれか１つによる少なくとも１つの単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子に共有結合したウイルス粒子。
１４３．実施形態９８～１４１のいずれか１つによる少なくとも２つ、３つ、４つ又は５つの単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子に共有結合したウイルス粒子。
１４４．２つ以上の異なる標的細胞に対して特異性を有する、実施形態１４３によるウイルス粒子。
１４５．２つ以上の異なる標的細胞に対して増大した指向性を有する、実施形態１４３によるウイルス粒子。
１４６．２つ以上の標的細胞が異なる細胞表面分子を発現する、実施形態１４４又は１４５によるウイルス粒子。
１４７．少なくとも２つ、３つ、４つ又は５つの単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子が、２つ以上の標的細胞上の異なる細胞表面分子に特異的に結合する、実施形態１４４～１４６のいずれか１つによるウイルス粒子。
１４８．２つ以上の異なる細胞表面分子を発現する標的細胞に対して特異性を有する、実施形態１４３によるウイルス粒子。
１４９．２つ以上の異なる細胞表面分子を発現する標的細胞に対して増大した指向性を有する、実施形態１４３によるウイルス粒子。
１５０．少なくとも２つ、３つ、４つ又は５つの単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子が、標的細胞上の２つ以上の異なる細胞表面分子に特異的に結合する、実施形態１４８又は１４９によるウイルス粒子。
１５１．１つ以上のウイルスカプシドタンパク質が、単離ポリペプチドに共有結合することが可能な１つ以上のシステイン残基を含む、実施形態１４２～１５０のいずれか１つによるウイルス粒子。
１５２．１つ以上のウイルスカプシドタンパク質が、単離ポリペプチド中の１つ以上のシステイン残基とジスルフィド架橋を形成することが可能な１つ以上のシステイン残基を含む、実施形態１４２～１５１のいずれか１つによるウイルス粒子。
１５３．ウイルスがアデノ随伴ウイルスであり、任意に、アデノ随伴ウイルスがＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶｒｈ．８、ＡＡＶｒｈ．１０、ＡＡＶｒｈ．７４からなるリストから選択される、実施形態１４２～１５２のいずれか１つによるウイルス粒子。
１５４．アデノ随伴ウイルスがＡＡＶ２である、実施形態１４２～１５３のいずれか１つによるウイルス粒子。
１５５．アデノ随伴ウイルスが野生型ＡＡＶである、実施形態１４２～１５４のいずれか１つによるウイルス粒子。
１５６．アデノ随伴ウイルスが配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９からなる群から選択されるカプシドアミノ酸配列の一部を含む、実施形態１４２～１５５のいずれか１つによるウイルス粒子。
１５７．アデノ随伴ウイルスが配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９からなる群から選択されるカプシドアミノ酸配列の完全長を含む、実施形態１４２～１５６のいずれか１つによるウイルス粒子。
１５８．アデノ随伴ウイルスが、野生型アミノ酸配列に対して１つ以上の保存的アミノ酸変化、例えば野生型アミノ酸配列に対して１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個又は２０個の保存的アミノ酸変化を有し、任意に、野生型アミノ酸配列が配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９からなる群から選択される、実施形態１４２～１５５のいずれか１つによるウイルス粒子。
１５９．アデノ随伴ウイルスが、野生型アミノ酸配列に対して５つ以下の非保存的アミノ酸変化、例えば野生型アミノ酸配列に対して５つ、４つ、３つ、２つ又は１つの非保存的アミノ酸変化を有し、任意に、野生型アミノ酸配列が配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９からなる群から選択される、実施形態１４２～１５８のいずれか１つによるウイルス粒子。
１６０．ウイルスがアデノウイルス、アイチウイルス、オーストラリアコウモリリッサウイルス、ＢＫポリオーマウイルス、バンナウイルス、バーマ森林ウイルス、ブニヤムウェラウイルス、ブニヤウイルス、ラクロスブニヤウイルス、カンジキウサギブニヤウイルス、サルヘルペスウイルス、チャンディプラウイルス、チクングニアウイルス、コサウイルス、牛痘ウイルス、コクサッキーウイルス、クリミア－コンゴ出血熱ウイルス、デングウイルス、ドーリウイルス、ジュグベウイルス、ドゥベンヘイジウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、エボラウイルス、エコーウイルス、脳心筋炎ウイルス、エプスタインバーウイルス、ヨーロッパコウモリリッサウイルス、ＧＢウイルス、Ｃ／Ｇ型肝炎ウイルス、ハンタンウイルス、ヘンドラウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス、デルタ肝炎ウイルス、馬痘ウイルス、ヒトアデノウイルス、ヒトアストロウイルス、ヒトコロナウイルス、ヒトサイトメガロウイルス、ヒトエンテロウイルス、ヒトヘルペスウイルス、ヒトヘルペスウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、ヒトパピローマウイルス、ヒトパピローマウイルス、ヒトパラインフルエンザウイルス、ヒトパルボウイルス、ヒト呼吸器合胞体ウイルス、ヒトライノウイルス、ヒトＳＡＲＳコロナウイルス、ヒトスプマレトロウイルス、ヒトＴリンパ球向性ウイルス、ヒトトロウイルス、インフルエンザＡウイルス、インフルエンザＢウイルス、インフルエンザＣウイルス、イスファハンウイルス、ＪＣポリオーマウイルス、日本脳炎ウイルス、フニンアレナウイルス、ＫＩポリオーマウイルス、クンジンウイルス、ラゴスコウモリウイルス、ビクトリア湖マールブルグウイルス、ランガットウイルス、ラッサウイルス、ローズデールウイルス、跳躍病ウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、マチュポウイルス、マヤロウイルス、ＭＥＲＳコロナウイルス、麻疹ウイルス、メンゴ脳心筋炎ウイルス、メルケル細胞ポリオーマウイルス、モコラウイルス、伝染性軟属腫ウイルス、サル痘ウイルス、ムンプスウイルス、マレーバレー脳炎ウイルス、ニュージャージーポリオーマウイルス、ニューヨークウイルス、ニパウイルス、ノーウォークウイルス、オニョンニョンウイルス、オルフウイルス、オロプーシュウイルス、ピチンデウイルス、ポリオウイルス、プンタトロフレボウイルス、プウマラウイルス、狂犬病ウイルス、リフトバレー熱ウイルス、ロサウイルスＡ、ロスリバーウイルス、ロタウイルスＡ、ロタウイルスＢ、ロタウイルスＣ、風疹ウイルス、サギヤマウイルス、サリウイルスＡ、シチリア型サシチョウバエ熱ウイルス、サッポロウイルス、ＳＡＲＳコロナウイルス、セムリキ森林ウイルス、ソウルウイルス、サルフォーミーウイルス、シミアンウイルス４０、シンドビスウイルス、サウサンプトンウイルス、セントルイス脳炎ウイルス、ダニ媒介ポワサンウイルス、トルクテノウイルス、トスカーナウイルス、ウークニエミウイルス、ワクシニアウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、天然痘ウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、水疱性口内炎ウイルス、西部ウマ脳炎ウイルス、ＷＵポリオーマウイルス、ウエストナイルウイルス、ヤバサル腫瘍ウイルス、ヤバ様疾患ウイルス、黄熱ウイルス及びジカウイルスからなるリストから選択される、実施形態１４２～１５９のいずれか１つによるウイルス粒子。
１６１．ウイルスが野生型ウイルスである、実施形態１６０によるウイルス粒子。
１６２．ウイルスがアデノウイルスであり、ウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上のシステイン残基を含む単離ポリペプチド、又はウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上のシステイン残基を含む単離ポリペプチドとリガンドとを含むウイルスアダプター分子が、ＣＤ４６の一部を含み、任意に、ＣＤ４６配列が配列番号２９である、実施形態１６０によるウイルス粒子。
１６３．ウイルスがアデノウイルスであり、ウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上のシステイン残基を含む単離ポリペプチド、又はウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上のシステイン残基を含む単離ポリペプチドとリガンドとを含むウイルスアダプター分子が、ＣＤ４６の完全長配列を含み、任意に、ＣＤ４６配列が配列番号２９である、実施形態１６２によるウイルス粒子。
１６４．ウイルスがアデノウイルスであり、ウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上のシステイン残基を含む単離ポリペプチド、又はウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上のシステイン残基を含む単離ポリペプチドとリガンドとを含むウイルスアダプター分子が、コクサッキーウイルス－アデノウイルス受容体（ＣＸＡＤＲ）の一部を含み、任意に、ＣＸＡＤＲ配列が配列番号２０である、実施形態１６０によるウイルス粒子。
１６５．ウイルスがアデノウイルスであり、ウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上のシステイン残基を含む単離ポリペプチド、又はウイルスカプシドに共有結合することが可能な１つ以上のシステイン残基を含む単離ポリペプチドとリガンドとを含むウイルスアダプター分子が、コクサッキーウイルス－アデノウイルス受容体（ＣＸＡＤＲ）の完全長配列を含み、任意に、ＣＸＡＤＲ配列が配列番号２０である、実施形態１６４によるウイルス粒子。
１６６．１つ以上のウイルスカプシドに、野生型アミノ酸配列に対して１つ以上の異種システイン残基、例えば野生型アミノ酸配列に対して１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個又は１０個の異種システイン残基が導入されている、実施形態１４２～１６５のいずれか１つによるウイルス粒子。
１６７．１つ以上の異種システイン残基が、単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子とウイルスカプシドとの界面に導入される、実施形態１６６によるウイルス粒子。
１６８．ウイルスがＡＡＶ１であり、単離ポリペプチド又は単離融合ポリペプチドが、アデノ随伴ウイルスカプシドに共有結合することが可能なアデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）の一部を含み、
ＡＡＶ１がＧｌｙ２６６Ｃｙｓ、Ｔｈｒ５０４Ｃｙｓ及びＡｓｐ５９０Ｃｙｓから選択される１つ以上の突然変異を含み、
ＡＡＶＲポリペプチド又は融合ポリペプチドがＴｈｒ４３４Ｃｙｓ、Ａｓｐ４２９Ｃｙｓ及びＳｅｒ４２５Ｃｙｓから選択される１つ以上の突然変異を含む、実施形態１６６又は１６７によるウイルス粒子。
１６９．ウイルスがＡＡＶ２であり、単離ポリペプチド又は単離融合ポリペプチドが、アデノ随伴ウイルスカプシドに共有結合することが可能なアデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）の一部を含み、
ＡＡＶ２がＧｌｙ２６５Ｃｙｓ、Ｔｈｒ５０３Ｃｙｓ及びＧｌｎ５８９Ｃｙｓから選択される１つ以上の突然変異を含み、
ＡＡＶＲポリペプチド又は融合ポリペプチドがＴｈｒ４３４Ｃｙｓ、Ａｓｐ４２９Ｃｙｓ及びＳｅｒ４２５Ｃｙｓから選択される１つ以上の突然変異を含む、実施形態１６６又は１６７によるウイルス粒子。
１７０．ウイルスがＡＡＶ２であり、単離ポリペプチド又は単離融合ポリペプチドが中和抗体Ａ２０の抗原結合部分を含み、
ＡＡＶ２がＳｅｒ２６４Ｃｙｓ、Ｖａｌ７０８Ｃｙｓ及びＡｓｎ７１７Ｃｙｓから選択される１つ以上の突然変異を含み、
中和抗体Ａ２０ポリペプチド又は融合ポリペプチドがＶＨ Ｔｙｒ１０２Ｃｙｓ、ＶＨ Ｓｅｒ５６Ｃｙｓ及びＶＬ Ｉｌｅ９３Ｃｙｓから選択される１つ以上の突然変異を含む、実施形態１６６又は１６７によるウイルス粒子。
１７１．ウイルスがｈＡｄＶ－１１ｐであり、単離ポリペプチド又は単離融合ポリペプチドがｈＣＤ４６の一部を含み、
ｈＡｄＶ－１１ｐが突然変異Ａｓｎ２８３Ｃｙｓを含み
ｈＣＤ４６が突然変異Ｔｈｒ４２Ｃｙｓを含む、実施形態１６６又は１６７によるウイルス粒子。
１７２．アデノ随伴ウイルス粒子がヘパラン硫酸プロテオグリカン（ＨＳＰＧ）、Ｏ－結合型シアル酸、Ｎ－結合型シアル酸、Ｎ－結合型ガラクトース等の非タンパク質結合剤との相互作用を媒介するカプシドタンパク質における１つ以上のアミノ酸変化を含む、実施形態１４２～１７１のいずれか１つによるウイルス粒子。
１７３．実施形態１４２～１７２のいずれか１つによるウイルス粒子を含む医薬組成物。
１７４．ウイルス粒子を共有結合修飾する方法であって、
ウイルス粒子を準備することと、
ウイルス粒子のウイルスカプシドに共有結合することが可能な単離ポリペプチドを準備することと、
ウイルス粒子と単離ポリペプチドとを、単離ポリペプチドがウイルス粒子に共有結合するように組み合わせることと、
を含む、方法。
１７５．ウイルス粒子を共有結合修飾する方法であって、
ウイルス粒子を準備することと、
ウイルス粒子のウイルスカプシドに共有結合することが可能な単離ポリペプチドとリガンドとを含むウイルスアダプター分子を準備することと、
ウイルス粒子とウイルスアダプター分子とを、ウイルスアダプター分子がウイルス粒子に共有結合するように組み合わせることと、
を含む、方法。
１７６．ウイルス粒子を共有結合修飾する方法であって、
ウイルス粒子を準備することと、
ウイルス粒子のウイルスカプシドに共有結合することが可能な２つ以上の（例えば２つ、３つ、４つ又は５つの）単離ポリペプチドを準備することと、
ウイルス粒子と２つ以上の単離ポリペプチドとを、単離ポリペプチドがウイルス粒子に共有結合するように組み合わせることと、
を含む、方法。
１７７．ウイルス粒子を共有結合修飾する方法であって、
ウイルス粒子を準備することと、
ウイルス粒子のウイルスカプシドに共有結合することが可能な単離ポリペプチドとリガンドとを含む２つ以上の（例えば２つ、３つ、４つ又は５つの）ウイルスアダプター分子を準備することと、
ウイルス粒子と２つ以上のウイルスアダプター分子とを、ウイルスアダプター分子がウイルス粒子に共有結合するように組み合わせることと、
を含む、方法。
１７８．単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子に１つ以上の異種システイン残基、例えば１つ、２つ又は３つの異種システイン残基を導入することを更に含む、実施形態１７４～１７７のいずれか１つによるウイルス粒子を共有結合修飾する方法。
１７９．ウイルスカプシドに１つ以上の異種システイン残基、例えば１つ、２つ又は３つの異種システイン残基を導入することを更に含む、実施形態１７４～１７８のいずれか１つによるウイルス粒子を共有結合修飾する方法。
１８０．単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子とウイルスカプシドとの両方に１つ以上の異種システイン残基、例えば単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子とウイルスカプシドとの両方に１つ、２つ又は３つの異種システイン残基を導入することを更に含む、実施形態１７４～１７９のいずれか１つによるウイルス粒子を共有結合修飾する方法。
１８１．単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子とウイルス粒子との共有結合が、１つ以上のウイルスカプシドタンパク質の天然指向性を減少又は消失させる、実施形態１７４～１８０のいずれか１つによるウイルス粒子を共有結合修飾する方法。
１８２．単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子とウイルス粒子との共有結合が、１つ以上の細胞型に対するウイルス粒子の指向性を増大させる、実施形態１７４～１８０のいずれか１つによるウイルス粒子を共有結合修飾する方法。
１８３．ＡＡＶ粒子が２つ以上の異なる標的細胞に対して特異性を有する、実施形態１７４～１８２のいずれか１つによるウイルス粒子を共有結合修飾する方法。
１８４．単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子とウイルス粒子との共有結合が、２つ以上の異なる標的細胞に対するウイルス粒子の指向性を増大させる、実施形態１７４～１８２のいずれか１つによるウイルス粒子を共有結合修飾する方法。
１８５．２つ以上の標的細胞が異なる細胞表面分子を発現する、実施形態１８３又は１８４によるウイルス粒子を共有結合修飾する方法。
１８６．少なくとも２つ、３つ、４つ又は５つの単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子が、２つ以上の標的細胞上の異なる細胞表面分子に特異的に結合する、実施形態１８３～１８５のいずれか１つによるウイルス粒子を共有結合修飾する方法。
１８７．ウイルス粒子が、２つ以上の異なる細胞表面分子を発現する標的細胞に対して特異性を有する、実施形態１７４～１８４のいずれか１つによるウイルス粒子を共有結合修飾する方法。
１８８．ウイルス粒子が、２つ以上の異なる細胞表面分子を発現する標的細胞に対して増大した指向性を有する、実施形態１７４～１８４のいずれか１つによるウイルス粒子を共有結合修飾する方法。
１８９．少なくとも２つ、３つ、４つ又は５つの単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子が、標的細胞上の２つ以上の異なる細胞表面分子に特異的に結合する、実施形態１８７又は１８８によるウイルス粒子を共有結合修飾する方法。
１９０．単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子とウイルス粒子との共有結合が、神経細胞、マクロファージ、小膠細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、抗原提示細胞、ＮＫ細胞、癌細胞、筋細胞、肝細胞、視細胞、膵β細胞、腎細胞及び肺細胞からなるリストから選択される１つ以上の細胞型に対するウイルス粒子の指向性を増大及び／又は減少させる、実施形態１７４～１８９のいずれか１つによるウイルス粒子を共有結合修飾する方法。
１９１．ウイルス粒子が、単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子を含まないウイルス粒子の天然指向性と比較して少なくとも１０％、例えば少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％又は少なくとも１００％減少又は増大した指向性を有する、実施形態１７４～１９０のいずれか１つによるウイルス粒子を共有結合修飾する方法。
１９２．単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子とウイルス粒子との共有結合により、ウイルス粒子がウイルスをスキャフォールドとして用いて多量体様式でタンパク質抗原を提示することが可能になる、実施形態１７４～１９１のいずれか１つによるウイルス粒子を共有結合修飾する方法。
１９３．単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子とウイルス粒子との共有結合が、細胞溶解を選択的に誘導し、任意に、細胞溶解が神経細胞、マクロファージ、小膠細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、抗原提示細胞、ＮＫ細胞、癌細胞、筋細胞、肝細胞、視細胞、膵β細胞、腎細胞及び肺細胞からなるリストから選択される１つ以上の細胞型において誘導される、実施形態１７４～１９２のいずれか１つによるウイルス粒子を共有結合修飾する方法。
１９４．ウイルス粒子を標的細胞に標的化する方法であって、
ウイルス粒子を準備することと、
ウイルス粒子のウイルスカプシドに共有結合することが可能な単離ポリペプチドと標的細胞に特異的なリガンドとを含むウイルスアダプター分子を準備することと、
ウイルス粒子とウイルスアダプター分子とを、ウイルスアダプター分子がウイルス粒子に共有結合するように組み合わせ、それにより修飾ウイルス粒子を生成することと、
標的細胞を含む細胞の混合物と修飾ウイルス粒子とを接触させることと、
を含む、方法。
１９５．ウイルス粒子を標的細胞に標的化する方法であって、
ウイルス粒子を準備することと、
ウイルス粒子のウイルスカプシドに共有結合することが可能な単離ポリペプチドと標的細胞に特異的なリガンドとを含む２つ以上の（例えば２つ、３つ、４つ又は５つの）ウイルスアダプター分子を準備することと、
ウイルス粒子と２つ以上のウイルスアダプター分子とを、ウイルスアダプター分子がウイルス粒子に結合するように組み合わせ、それにより修飾ウイルス粒子を生成することと、
標的細胞を含む細胞の混合物と修飾ウイルス粒子とを接触させることと、
を含み、標的細胞が２つ以上の異なる細胞表面分子を発現し、任意に、ウイルスアダプター分子が標的細胞上の２つ以上の異なる細胞表面分子に特異的に結合する、方法。
１９６．ウイルス粒子を２つ以上の標的細胞に標的化する方法であって、
ウイルス粒子を準備することと、
ウイルス粒子のウイルスカプシドに共有結合することが可能な単離ポリペプチドと、２つ以上の標的細胞の少なくとも１つに特異的なリガンドとを含む２つ以上の（例えば２つ、３つ、４つ又は５つの）ウイルスアダプター分子を準備することと、
ウイルス粒子と２つ以上のウイルスアダプター分子とを、ウイルスアダプター分子がウイルス粒子に結合するように組み合わせ、それにより修飾ウイルス粒子を生成することと、
２つ以上の標的細胞を含む細胞の混合物と修飾ウイルス粒子とを接触させることと、
を含み、２つ以上の標的細胞が２つ以上の異なる細胞表面分子を発現し、任意に、ウイルスアダプター分子が２つ以上の標的細胞上の異なる細胞表面分子に特異的に結合する、方法。
１９７．ウイルスカプシドに共有結合することが可能な単離ポリペプチドが、アデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）の一部を含む、実施形態１７４～１９６のいずれか１つによるウイルス粒子を共有結合修飾する方法又はウイルス粒子を標的細胞に標的化する方法。
１９８．ウイルスカプシドに共有結合することが可能な単離ポリペプチドが、１つ以上の点突然変異を有するアデノ随伴ウイルス受容体の一部を含み、任意に、１つ以上の点突然変異が配列番号１を参照して定義される、実施形態１７４～１９７のいずれか１つによるウイルス粒子を共有結合修飾する方法又はウイルス粒子を標的細胞に標的化する方法。
１９９．ウイルスカプシドに共有結合することが可能な単離ポリペプチドが、１つ以上の点突然変異を有するアデノ随伴ウイルス受容体の一部を含み、任意に、１つ以上の点突然変異が配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５及び配列番号６からなるリストから選択される配列を参照して定義される、実施形態１７４～１９８のいずれか１つによるウイルス粒子を共有結合修飾する方法又はウイルス粒子を標的細胞に標的化する方法。
２００．ウイルスカプシドに共有結合することが可能な単離ポリペプチドがＰＫＤ２ドメインにおけるＶ４８０Ｅ突然変異を含み、任意に、１つ以上の点突然変異が配列番号１を参照して定義される、実施形態１７４～１９８のいずれか１つによるウイルス粒子を共有結合修飾する方法又はウイルス粒子を標的細胞に標的化する方法。
２０１．ウイルスカプシドに共有結合することが可能な単離ポリペプチドが、Ｖ４８０Ｅ突然変異を有する配列番号１の配列を含む、実施形態１７４～１９９のいずれか１つによるウイルス粒子を共有結合修飾する方法又はウイルス粒子を標的細胞に標的化する方法。
２０２．ウイルスカプシドに共有結合することが可能な単離ポリペプチドが、Ｖ４８０Ｅ突然変異を有する配列番号３の配列を含む、実施形態１７４～２００のいずれか１つによるウイルス粒子を共有結合修飾する方法又はウイルス粒子を標的細胞に標的化する方法。
２０３．ウイルスカプシドに共有結合することが可能な単離ポリペプチドがＰＫＤ２ドメインにおけるＳ４２５Ｃ突然変異を含み、任意に、１つ以上の点突然変異が配列番号１を参照して定義される、実施形態１７４～２０２のいずれか１つによるウイルス粒子を共有結合修飾する方法又はウイルス粒子を標的細胞に標的化する方法。
２０４．ウイルスカプシドに共有結合することが可能な単離ポリペプチドが、Ｓ４２５Ｃ突然変異を有する配列番号１の配列を含む、実施形態１７４～２０３のいずれか１つによるウイルス粒子を共有結合修飾する方法又はウイルス粒子を標的細胞に標的化する方法。
２０５．ウイルスカプシドに共有結合することが可能な単離ポリペプチドが、Ｓ４２５Ｃ突然変異を有する配列番号３の配列を含む、実施形態１７４～２０４のいずれか１つによるウイルス粒子を共有結合修飾する方法又はウイルス粒子を標的細胞に標的化する方法。
２０６．ウイルスカプシドに共有結合することが可能な単離ポリペプチドが、ＰＫＤ２ドメインにおけるＳ４２５Ｃ突然変異及びＶ４８０Ｅ突然変異を含み、任意に、１つ以上の点突然変異が配列番号１又は配列番号３を参照して定義される、実施形態１７４～２０５のいずれか１つによるウイルス粒子を共有結合修飾する方法又はウイルス粒子を標的細胞に標的化する方法。
２０７．ウイルスカプシドに共有結合することが可能な単離ポリペプチドが、アデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）のＰＫＤ１ドメインの少なくとも一部、ＰＫＤ２ドメインの少なくとも一部、ＰＫＤ３ドメインの少なくとも一部、ＰＫＤ４ドメインの少なくとも一部、ＰＫＤ５ドメインの少なくとも一部又はそれらの任意の組合せを含む、実施形態１７４～２０６のいずれか１つによるウイルス粒子を共有結合修飾する方法又はウイルス粒子を標的細胞に標的化する方法。
２０８．ウイルスカプシドに共有結合することが可能な単離ポリペプチドが、アデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）のＰＫＤ１ドメイン、ＰＫＤ２ドメイン、ＰＫＤ３ドメイン、ＰＫＤ４ドメイン、ＰＫＤ５ドメイン又はそれらの任意の組合せを含む、実施形態１７４～２０７のいずれか１つによるウイルス粒子を共有結合修飾する方法又はウイルス粒子を標的細胞に標的化する方法。
２０９．アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドに共有結合することが可能な単離ポリペプチドが配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５及び配列番号６からなるリストから選択される配列を含む、実施形態１７４～２０８のいずれか１つによるウイルス粒子を共有結合修飾する方法又はウイルス粒子を標的細胞に標的化する方法。
２１０．ウイルスカプシドに共有結合することが可能な単離ポリペプチドが、アデノ随伴ウイルス受容体（ＡＡＶＲ、ＫＩＡＡ０３１９Ｌ）の完全長配列を含み、任意に、完全配列が配列番号１を含む、実施形態１７４～２０９のいずれか１つによるウイルス粒子を共有結合修飾する方法又はウイルス粒子を標的細胞に標的化する方法。
２１１．目的の核酸配列を標的細胞に送達する方法であって、標的細胞と実施形態１４２～１７２のいずれか１つによる修飾ウイルス粒子又は実施形態１７３による医薬組成物とを接触させることを含み、ウイルス粒子が目的の核酸配列を含む、方法。
２１２．目的の核酸配列がＲＡＢエスコートタンパク質１、ＲＰＥ６５、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、コクリン、ＣＬＮ７、酸性α－グルコシダーゼ（ＧＡＡ）、アクアポリン１、グリア細胞株由来神経栄養因子、アスパルトアシラーゼ、芳香族Ｌ－アミノ酸脱炭酸酵素、網膜色素変性症ＧＴＰアーゼ調節因子欠損、筋小胞体カルシウムＡＴＰアーゼ、環状ヌクレオチド感受性チャネルβ３、ニュールツリン、ガラクトシダーゼβ１、グルコース－６－ホスファターゼ、フェニルアラニンヒドロキシラーゼ、オルニチントランスカルバミラーゼ、ジストロフィン及びカルニチンパルミトイルトランスフェラーゼＩＩ、フェニルアラニンヒドロキシラーゼ（ＰＡＨ）、嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子（ＣＦＴＲ）からなるリストから選択されるタンパク質をコードする、実施形態２１１の方法。
２１３．標的細胞がｉｎ ｖｉｔｒｏである、実施形態１９４～２１２のいずれか１つによる方法。
２１４．標的細胞が対象においてｉｎ ｖｉｖｏである、実施形態１９４～２１２のいずれか１つによる方法。
２１５．標的細胞が神経細胞、マクロファージ、小膠細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、抗原提示細胞、ＮＫ細胞、癌細胞、筋細胞、肝細胞、視細胞、膵β細胞、腎細胞及び肺細胞からなるリストから選択される、実施形態１９４～２１４のいずれか１つによる方法。
２１６．対象がヒトである、実施形態２１４又は２１５による方法。
２１７．標的細胞がヒト標的細胞である、実施形態１９４～２１６のいずれか１つによる方法。
２１８．薬剤として使用される、実施形態１４２～１７２のいずれか１つによるウイルス粒子又は実施形態１７３による医薬組成物。
２１９．標的細胞とウイルス粒子とを接触させることにより、目的の核酸配列を標的細胞に送達することを含む、治療を必要とする対象における疾患を治療する方法に使用される、実施形態１４２～１７２のいずれか１つによるウイルス粒子又は実施形態１７３による医薬組成物。
２２０．疾患が神経変性障害、癌、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、血友病、先天盲障害、糖尿病、嚢胞性線維症、コロイデレミア、血友病Ａ、血友病Ｂ、ＣＬＮ７疾患、ポンペ病、パーキンソン病、カナバン病、脱髄疾患、ＲＰＥ６５突然変異による遺伝性網膜ジストロフィー、芳香族Ｌ－アミノ酸脱炭酸酵素（ＡＡＤＣ）欠損症、Ｘ連鎖性網膜色素変性症、レーバー先天性黒内障、チャーグ－ストラウス症候群（ＣＳＳ）、重症虚血肢、色覚異常、アルツハイマー病、黄斑変性、オルニチントランスカルバミラーゼ欠損症、ウィルソン病、糖原病ＩＡ型、クリグラーナジャー症候群、テイ－サックス病、サンドホフ病、多発性骨髄腫、多系統萎縮症、ガングリオシドーシス、ダノン病、ファブリー病、バッテン病、フェニルケトン尿症、関節リウマチ、ムコ多糖症ＩＩＩａ型、サンフィリポ症候群Ｂ、ムコ多糖症ＶＩ型、α１－アンチトリプシン欠損症、脊髄性筋萎縮症１型、クラッベ病、ベッカー型筋ジストロフィー、シャルコー－マリー－トゥースニューロパチー１ａ型、カルニチンパルミトイルトランスフェラーゼＩＩ（ＣＰＴ ＩＩ）欠損症及びトリメチルアミン尿症、嚢胞性線維症、フェニルケトン尿症からなるリストから選択される、実施形態２１９による使用のためのウイルス粒子又は医薬組成物。
２２１．標的細胞とウイルス粒子とを接触させることにより、目的の核酸配列を標的細胞に送達することを含む、治療を必要とする対象における疾患を治療する方法に使用され、以下のリスト：
ａ）神経変性障害の治療のための神経細胞、
ｂ）癌の治療のための免疫細胞（例えばマクロファージ、小膠細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、抗原提示細胞、ＮＫ細胞）、
ｃ）免疫応答を惹起するための免疫細胞（例えばマクロファージ、小膠細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、抗原提示細胞、ＮＫ細胞）、
ｄ）癌の治療のための癌細胞又は腫瘍細胞、
ｅ）デュシェンヌ型筋ジストロフィーの治療のための筋細胞、
ｆ）血友病の治療のための肝細胞、
ｇ）先天盲障害のための視細胞、
ｈ）糖尿病の治療のための膵β細胞、又は、
ｉ）嚢胞性線維症の治療のための肺細胞、
による指定の標的細胞の標的化が、指定の疾患を治療又は改善する、実施形態１４２～１７２のいずれか１つによるウイルス粒子又は実施形態１７３による医薬組成物。
２２２．ウイルス粒子又は医薬組成物を対象に対してエアロゾルにより（例えば肺細胞に）、筋肉内に、動脈内に（例えば肝動脈を介して）、関節内に、網膜下に、頭蓋内に、静脈内に、髄腔内に、冠動脈内に又は皮下に投与する、実施形態２１８～２２１のいずれか１つによる使用のためのウイルス粒子又は医薬組成物。
２２３．少なくとも１つの単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子に共有結合したウイルス粒子であって、単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子とウイルスとが１００μＭ未満の親和性（Ｋｄ）を有する、ウイルス粒子。
２２４．少なくとも１対の残基Ｘ及び残基Ｙが存在し、Ｘが単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子の一部であり、Ｙがウイルス粒子の一部であり、単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子がウイルス粒子と複合体を形成する際に、それぞれのβ炭素が５．５Å未満離れている、実施形態２２３のウイルス粒子。
２２５．システイン側鎖が界面を破壊する主要な立体衝突を誘導しないように、残基Ｘ及び残基Ｙをシステインに突然変異させることができる、実施形態２２４のウイルス粒子。
２２６．残基Ｘ及び残基Ｙの側鎖について、システインへの突然変異後に、Ｃ（α）－Ｃ（β）の周りの側鎖の回転によって得られ、側鎖のγ位における硫黄原子の距離が２．５Å未満離れているような配向が存在する、実施形態２２４又は２２５のウイルス粒子。
２２７．少なくとも１つの単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子に共有結合したウイルス粒子であって、少なくとも１対の残基Ｘ及び残基Ｙが存在し、Ｘが単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子の一部であり、Ｙがウイルス粒子の一部であり、単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子がウイルス粒子と複合体を形成する際に、それぞれのβ炭素が５．５Å未満離れている、ウイルス粒子。
２２８．システイン側鎖が界面を破壊する主要な立体衝突を誘導しないように、残基Ｘ及び残基Ｙをシステインに突然変異させることができる、実施形態２２７のウイルス粒子。
２２９．残基Ｘ及び残基Ｙの側鎖について、システインへの突然変異後に、Ｃ（α）－Ｃ（β）の周りの側鎖の回転によって得られ、側鎖のγ位における硫黄原子の距離が２．５Å未満離れているような配向が存在する、実施形態２２７又は２２８のウイルス粒子。
２３０．Ｃ（β）１－Ｓ（γ）１－Ｓ（γ）２、Ｓ（γ）１－Ｓ（γ）２－Ｃ（β）の原子によって形成される角度が、自然発生ジスルフィド結合において観察される最適な角度とは著しく異ならない（例えば４０％超大きくはならない）、実施形態２２３～２２９のいずれか１つのウイルス粒子。
２３１．少なくとも１つの単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子に共有結合したウイルス粒子であって、Ｃ（β）１－Ｓ（γ）１－Ｓ（γ）２、Ｓ（γ）１－Ｓ（γ）２－Ｃ（β）の原子によって形成される角度が、自然発生ジスルフィド結合において観察される最適な角度とは著しく異ならない（例えば４０％超大きくはならない）、ウイルス粒子。
２３２．実施形態１～３１のいずれか１つによる少なくとも１つの単離ポリペプチド若しくはＡＡＶアダプター分子又は実施形態９８～１４１のいずれか１つによる少なくとも１つの単離ポリペプチド若しくはウイルスアダプター分子に結合したウイルス様粒子（ＶＬＰ）。
２３３．実施形態１～３１のいずれか１つによる少なくとも２つ、３つ、４つ又は５つの単離ポリペプチド若しくはＡＡＶアダプター分子又は実施形態９８～１４１のいずれか１つによる少なくとも１つの単離ポリペプチド若しくはウイルスアダプター分子に結合したウイルス様粒子（ＶＬＰ）。
２３４．２つ以上の異なる標的細胞に対して特異性を有する、実施形態２３３によるウイルス様粒子（ＶＬＰ）。
２３５．２つ以上の異なる標的細胞に対して増大した指向性を有する、実施形態２３３によるウイルス様粒子（ＶＬＰ）。
２３６．２つ以上の標的細胞が異なる細胞表面分子を発現する、実施形態２３４又は２３５によるウイルス様粒子（ＶＬＰ）。
２３７．少なくとも２つ、３つ、４つ又は５つの単離ポリペプチド又はＡＡＶアダプター分子が、２つ以上の標的細胞上の異なる細胞表面分子に特異的に結合する、実施形態２３３～２３５のいずれか１つによるウイルス様粒子（ＶＬＰ）。
２３８．２つ以上の異なる細胞表面分子を発現する標的細胞に対して特異性を有する、実施形態２３３によるウイルス様粒子（ＶＬＰ）。
２３９．２つ以上の異なる細胞表面分子を発現する標的細胞に対して増大した指向性を有する、実施形態２３３によるウイルス様粒子（ＶＬＰ）。
２４０．少なくとも２つ、３つ、４つ又は５つの単離ポリペプチド又はＡＡＶアダプター分子が、標的細胞上の２つ以上の異なる細胞表面分子に特異的に結合する、実施形態２３８又は２３９によるウイルス様粒子（ＶＬＰ）。
２４１．配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９からなる群から選択されるカプシドアミノ酸配列の一部を含む、実施形態２３２～２４０のいずれか１つによるウイルス様粒子（ＶＬＰ）。
２４２．配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９からなる群から選択されるカプシドアミノ酸配列の完全長を含む、実施形態２３２～２４１のいずれか１つによるウイルス様粒子（ＶＬＰ）。
２４３．ウイルス様粒子のカプシドタンパク質がアデノウイルス、アイチウイルス、オーストラリアコウモリリッサウイルス、ＢＫポリオーマウイルス、バンナウイルス、バーマ森林ウイルス、ブニヤムウェラウイルス、ブニヤウイルス、ラクロスブニヤウイルス、カンジキウサギブニヤウイルス、サルヘルペスウイルス、チャンディプラウイルス、チクングニアウイルス、コサウイルス、牛痘ウイルス、コクサッキーウイルス、クリミア－コンゴ出血熱ウイルス、デングウイルス、ドーリウイルス、ジュグベウイルス、ドゥベンヘイジウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、エボラウイルス、エコーウイルス、脳心筋炎ウイルス、エプスタインバーウイルス、ヨーロッパコウモリリッサウイルス、ＧＢウイルス、Ｃ／Ｇ型肝炎ウイルス、ハンタンウイルス、ヘンドラウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス、デルタ肝炎ウイルス、馬痘ウイルス、ヒトアデノウイルス、ヒトアストロウイルス、ヒトコロナウイルス、ヒトサイトメガロウイルス、ヒトエンテロウイルス、ヒトヘルペスウイルス、ヒトヘルペスウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、ヒトパピローマウイルス、ヒトパピローマウイルス、ヒトパラインフルエンザウイルス、ヒトパルボウイルス、ヒト呼吸器合胞体ウイルス、ヒトライノウイルス、ヒトＳＡＲＳコロナウイルス、ヒトスプマレトロウイルス、ヒトＴリンパ球向性ウイルス、ヒトトロウイルス、インフルエンザＡウイルス、インフルエンザＢウイルス、インフルエンザＣウイルス、イスファハンウイルス、ＪＣポリオーマウイルス、日本脳炎ウイルス、フニンアレナウイルス、ＫＩポリオーマウイルス、クンジンウイルス、ラゴスコウモリウイルス、ビクトリア湖マールブルグウイルス、ランガットウイルス、ラッサウイルス、ローズデールウイルス、跳躍病ウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、マチュポウイルス、マヤロウイルス、ＭＥＲＳコロナウイルス、麻疹ウイルス、メンゴ脳心筋炎ウイルス、メルケル細胞ポリオーマウイルス、モコラウイルス、伝染性軟属腫ウイルス、サル痘ウイルス、ムンプスウイルス、マレーバレー脳炎ウイルス、ニュージャージーポリオーマウイルス、ニューヨークウイルス、ニパウイルス、ノーウォークウイルス、オニョンニョンウイルス、オルフウイルス、オロプーシュウイルス、ピチンデウイルス、ポリオウイルス、プンタトロフレボウイルス、プウマラウイルス、狂犬病ウイルス、リフトバレー熱ウイルス、ロサウイルスＡ、ロスリバーウイルス、ロタウイルスＡ、ロタウイルスＢ、ロタウイルスＣ、風疹ウイルス、サギヤマウイルス、サリウイルスＡ、シチリア型サシチョウバエ熱ウイルス、サッポロウイルス、ＳＡＲＳコロナウイルス、セムリキ森林ウイルス、ソウルウイルス、サルフォーミーウイルス、シミアンウイルス４０、シンドビスウイルス、サウサンプトンウイルス、セントルイス脳炎ウイルス、ダニ媒介ポワサンウイルス、トルクテノウイルス、トスカーナウイルス、ウークニエミウイルス、ワクシニアウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、天然痘ウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、水疱性口内炎ウイルス、西部ウマ脳炎ウイルス、ＷＵポリオーマウイルス、ウエストナイルウイルス、ヤバサル腫瘍ウイルス、ヤバ様疾患ウイルス、黄熱ウイルス及びジカウイルスからなるリストの１つ以上のウイルスから選択される、実施形態２３２～２４２のいずれか１つによるウイルス様粒子（ＶＬＰ）。
２４４．ウイルス様粒子が、野生型ウイルスカプシドアミノ酸配列に対して１つ以上の保存的アミノ酸変化、例えば野生型ウイルスカプシドアミノ酸配列に対して１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個又は２０個の保存的アミノ酸変化を有し、任意に、野生型ウイルスカプシドアミノ酸配列が配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９からなる群から選択される、実施形態２３２～２４３のいずれか１つによるウイルス様粒子（ＶＬＰ）。
２４５．ウイルス様粒子が野生型ウイルスカプシドアミノ酸配列に対して５つ以下の非保存的アミノ酸変化、例えば野生型ウイルスカプシドアミノ酸配列に対して５つ、４つ、３つ、２つ又は１つの非保存的アミノ酸変化を有し、任意に、野生型ウイルスカプシドアミノ酸配列が配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９からなる群から選択される、実施形態２３２～２４３のいずれか１つによるウイルス様粒子（ＶＬＰ）。
２４６．ヘパラン硫酸プロテオグリカン（ＨＳＰＧ）、Ｏ－結合型シアル酸、Ｎ－結合型シアル酸、Ｎ－結合型ガラクトース等の非タンパク質結合剤との相互作用を媒介するカプシドタンパク質における１つ以上のアミノ酸変化を含む、実施形態２３２～２４５のいずれか１つによるウイルス様粒子（ＶＬＰ）。
２４７．１つ以上の突然変異がＡＡＶ２のアルギニン残基５８５及び５８８を含む、実施形態２４６によるウイルス様粒子（ＶＬＰ）。
２４８．実施形態２３２～２４７のいずれか１つによるウイルス様粒子（ＶＬＰ）を含む医薬組成物。
２４９．ウイルス様粒子を修飾する方法であって、
ウイルス様粒子を準備することと、
ウイルス様粒子カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドを準備することと、
ウイルス様粒子と単離ポリペプチドとを、単離ポリペプチドがウイルス様粒子に結合するように組み合わせることと、
を含む、方法。
２５０．ウイルス様粒子を修飾する方法であって、
ウイルス様粒子を準備することと、
ウイルス様粒子カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドとリガンドとを含むＡＡＶアダプター分子を準備することと、
ウイルス様粒子とＡＡＶアダプター分子とを、単離融合ポリペプチドがウイルス様粒子に結合するように組み合わせることと、
を含む、方法。
２５１．ウイルス様粒子を修飾する方法であって、
ウイルス様粒子を準備することと、
ウイルス様粒子カプシドに結合することが可能な２つ以上の（例えば２つ、３つ、４つ又は５つの）単離ポリペプチドを準備することと、
ウイルス様粒子と単離ポリペプチドとを、単離ポリペプチドがウイルス様粒子に結合するように組み合わせることと、
を含む、方法。
２５２．ウイルス様粒子を修飾する方法であって、
ウイルス様粒子を準備することと、
ウイルス様粒子カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドとリガンドとを含む２つ以上の（例えば２つ、３つ、４つ又は５つの）ＡＡＶアダプター分子を準備することと、
ウイルス様粒子とＡＡＶアダプター分子とを、ＡＡＶアダプター分子がウイルス様粒子に結合するように組み合わせることと、
を含む、方法。
２５３．単離ポリペプチド又はＡＡＶアダプター分子とＡＡＶ粒子との結合が、１つ以上のＡＡＶカプシドタンパク質の天然指向性を減少又は消失させる、実施形態２４９～２５２のいずれか１つによるウイルス様粒子を修飾する方法。
２５４．単離ポリペプチド又はＡＡＶアダプター分子とＡＡＶ粒子との結合が、１つ以上の細胞型に対するＡＡＶ粒子の指向性を増大させる、実施形態２４９～２５３のいずれか１つによるウイルス様粒子を修飾する方法。
２５５．ウイルス様粒子を標的細胞に標的化する方法であって、
ウイルス様粒子を準備することと、
ウイルス様粒子カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドと、標的細胞に特異的なリガンドとを含むＡＡＶアダプター分子を準備することと、
ウイルス様粒子とＡＡＶアダプター分子とを、ＡＡＶアダプター分子がウイルス様粒子に結合するように組み合わせ、それによりウイルス様粒子を生成することと、
標的細胞を含む細胞の混合物と修飾ウイルス様粒子とを接触させることと、
を含む、方法。
２５６．ウイルス様粒子を標的細胞に標的化する方法であって、
ウイルス様粒子を準備することと、
ウイルス様粒子カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドと標的細胞に特異的なリガンドとを含む２つ以上の（例えば２つ、３つ、４つ又は５つの）ＡＡＶアダプター分子を準備することと、
ウイルス様粒子と２つ以上のＡＡＶアダプター分子とを、ＡＡＶアダプター分子がウイルス様粒子に結合するように組み合わせ、それにより修飾ウイルス様粒子を生成することと、
標的細胞を含む細胞の混合物と修飾ウイルス様粒子とを接触させることと、
を含み、標的細胞が２つ以上の異なる細胞表面分子を発現し、任意に、ＡＡＶアダプター分子が標的細胞上の２つ以上の異なる細胞表面分子に特異的に結合する、方法。
２５７．ウイルス様粒子を２つ以上の標的細胞に標的化する方法であって、
ウイルス様粒子を準備することと、
ウイルス様粒子カプシドに結合することが可能な単離ポリペプチドと、２つ以上の標的細胞の少なくとも１つに特異的なリガンドとを含む２つ以上の（例えば２つ、３つ、４つ又は５つの）ＡＡＶアダプター分子を準備することと、
ウイルス様粒子と２つ以上のＡＡＶアダプター分子とを、ＡＡＶアダプター分子がウイルス様粒子に結合するように組み合わせ、それにより修飾ウイルス様粒子を生成することと、
２つ以上の標的細胞を含む細胞の混合物と修飾ウイルス様粒子とを接触させることと、
を含み、２つ以上の標的細胞が２つ以上の異なる細胞表面分子を発現し、任意に、ＡＡＶアダプター分子が２つ以上の標的細胞上の異なる細胞表面分子に特異的に結合する、方法。
２５８．ウイルス様粒子を共有結合修飾する方法であって、
ウイルス様粒子を準備することと、
ウイルス様粒子のウイルスカプシドに共有結合することが可能な単離ポリペプチドを準備することと、
ウイルス様粒子と単離ポリペプチドとを、単離ポリペプチドがウイルス様粒子に共有結合するように組み合わせることと、
を含む、方法。
２５９．ウイルス様粒子を共有結合修飾する方法であって、
ウイルス様粒子を準備することと、
ウイルス様粒子のウイルスカプシドに共有結合することが可能な単離ポリペプチドとリガンドとを含むウイルスアダプター分子を準備することと、
ウイルス様粒子とウイルスアダプター分子とを、ウイルスアダプター分子がウイルス様粒子に共有結合するように組み合わせることと、
を含む、方法。
２６０．ウイルス粒子を共有結合修飾する方法であって、
ウイルス様粒子を準備することと、
ウイルス様粒子のウイルスカプシドに共有結合することが可能な２つ以上の（例えば２つ、３つ、４つ又は５つの）単離ポリペプチドを準備することと、
ウイルス様粒子と２つ以上の単離ポリペプチドとを、単離ポリペプチドがウイルス様粒子に共有結合するように組み合わせることと、
を含む、方法。
２６１．ウイルス様粒子を共有結合修飾する方法であって、
ウイルス様粒子を準備することと、
ウイルス様粒子のウイルスカプシドに共有結合することが可能な単離ポリペプチドとリガンドとを含む２つ以上の（例えば２つ、３つ、４つ又は５つの）ウイルスアダプター分子を準備することと、
ウイルス様粒子と２つ以上のウイルスアダプター分子とを、ウイルスアダプター分子がウイルス様粒子に共有結合するように組み合わせることと、
を含む、方法。
２６２．単離ポリペプチド又はウイルスアダプター分子に１つ以上の異種システイン残基、例えば１つ、２つ又は３つの異種システイン残基を導入することを更に含む、実施形態２５８～２６２のいずれか１つによるウイルス様粒子を共有結合修飾する方法。
２６３．ウイルス様粒子のウイルスカプシドに１つ以上の異種システイン残基、例えば１つ、２つ又は３つの異種システイン残基を導入することを更に含む、実施形態２５８～２６３のいずれか１つによるウイルス様粒子を共有結合修飾する方法。

【図1-1】

【図1-2】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23】

【図24】

【図25】

【図26】

【図27】

【図28】

【図29】

【図30】

【図31】

【図32】

【図33-1】

【図33-2】

【図34】

【図35】

【図36】

【図37】

【図38】

【図39】

【図40】

【図41】

【配列表】

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【国際調査報告】