2024-543404 親水性アザジベンゾシクロオクチン誘導体およびこれらの親水性アザジベンゾシクロオクチン誘導体との無金属クリック反応

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-11-21

(54)【発明の名称】親水性アザジベンゾシクロオクチン誘導体およびこれらの親水性アザジベンゾシクロオクチン誘導体との無金属クリック反応

(51)【国際特許分類】

   C07D 225/08 20060101AFI20241114BHJP

   C07D 401/14 20060101ALI20241114BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20241114BHJP

   A61K 49/16 20060101ALI20241114BHJP

   A61K 38/12 20060101ALI20241114BHJP

   A61K 31/537 20060101ALI20241114BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20241114BHJP

   C07D 498/18 20060101ALN20241114BHJP

【ＦＩ】

C07D225/08 CSP

C07D401/14

A61K47/68

A61K49/16

A61K38/12

A61K31/537

A61P35/00

C07D498/18

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024527554

(86)(22)【出願日】2022-11-09

(85)【翻訳文提出日】2024-05-10

(86)【国際出願番号】 EP2022081339

(87)【国際公開番号】W WO2023083895

(87)【国際公開日】2023-05-19

(31)【優先権主張番号】21207445.4

(32)【優先日】2021-11-10

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】591003013

【氏名又は名称】エフ． ホフマン－ラ ロシュ アーゲー

【氏名又は名称原語表記】Ｆ． ＨＯＦＦＭＡＮＮ－ＬＡ ＲＯＣＨＥ ＡＫＴＩＥＮＧＥＳＥＬＬＳＣＨＡＦＴ

(74)【代理人】

【識別番号】100118902

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 修

(74)【代理人】

【識別番号】100106208

【弁理士】

【氏名又は名称】宮前 徹

(74)【代理人】

【識別番号】100196508

【弁理士】

【氏名又は名称】松尾 淳一

(74)【代理人】

【識別番号】100187540

【弁理士】

【氏名又は名称】國枝 由紀子

(72)【発明者】

【氏名】ベルクマン，フランク

(72)【発明者】

【氏名】ハインドル，ディーター

(72)【発明者】

【氏名】ビンター，ニルス

【テーマコード（参考）】

4C076

4C084

4C085

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C076AA95

4C076CC41

4C076EE41

4C076EE59

4C076FF34

4C084AA01

4C084BA24

4C084BA41

4C084BA42

4C084MA05

4C084NA13

4C084NA14

4C084ZB26

4C085HH01

4C085KA04

4C085KA27

4C085KB56

4C086AA01

4C086AA02

4C086AA03

4C086CB22

4C086MA01

4C086MA04

4C086NA13

4C086NA14

4C086ZB26

(57)【要約】

本発明は、第１の態様において、ＤＩＢＡＣ構造のベンゾ環に特定の置換基を有し、ＤＩＢＡＣ構造の窒素原子に結合した特定の置換基を有する式（Ｉ）によるアザジベンゾシクロオクチン誘導体またはその塩に関する。本発明の第２の態様は、置換基Ｒ^６がリンカー構造－Ｃ（＝Ｏ）－［Ｌ］_ｎ－Ｚ－を介してＤＩＢＡＣ構造の８員環のＮ原子に結合している式（ＩＩ）の複合体に関する。本発明の第３の態様は、第２の態様による複合体を、１，３－双極子基または１，３－（ヘテロ）ジエン基を含む標的分子と反応させる、標的分子を修飾するための方法に関する。第４の態様では、本発明は、標的分子の生体直交標識および／または修飾のための第２の態様による複合体の使用に関する。本発明の第５の態様は、第２の態様による複合体の反応生成物を含む修飾標的分子、および第３の態様の方法から得られるかまたは得ることが可能な１，３－双極子基または１，３－（ヘテロ）ジエン基を含む標的分子に関する。第６の態様では、本発明は、検出試薬としての第５の態様による修飾標的分子と、好適な捕捉試薬とを含むキットに関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

式（Ｉ）

【化1】

（式中、
Ｒ^１、Ｒ^２は、同一であり、かついずれも－［（ＣＨ_２）_ａＣＲ^ｘＲ^ｙ］_ｂＲ^ｚ基であり、ａは、０または１～４までの範囲からの整数のいずれかであり、ｂは０または１のいずれかであり、
Ｒ^ｘ、Ｒ^ｙ、Ｒ^ｚは、水素原子、Ｃ１～Ｃ３アルキル基および（ＣＨ_２）_ｃＳＯ_３ ^－基からなる群から選択され、ｃは、０または１～４の範囲からの整数のいずれかであり、Ｒ^ｘ、Ｒ^ｙ、Ｒ^ｚの少なくとも１つは、以下の条件を有する（ＣＨ_２）_ｃＳＯ_３ ^－基であり：
－Ｒ^ｚが（ＣＨ_２）_ｃＳＯ_３ ^－基であり、ｃが０である場合、Ｒ^ｘ、Ｒ^ｙは、いずれも（ＣＨ_２）_ｃＳＯ_３ ^－基ではなく、ｃは０であるか、または
－ａが０である場合、Ｒ^ｘおよびＲ^ｙは、いずれも（ＣＨ_２）_ｃＳＯ_３ ^－基ではなく、ｃは０である；
Ｒ^３、Ｒ^４は、水素原子、Ｃ１～Ｃ３－アルキル基、ハロゲン原子および－Ｏ－Ｃ１～Ｃ３－アルキル基からなる群から独立して選択され；
Ｒ^５は、カルボキシル基、活性化カルボキシル基および－ＮＨＲ^５ａ基からなる群から選択され、Ｒ^５ａは水素原子またはＣ１～Ｃ５アルキル基であり；
Ｌは、主鎖を形成し、１～１００原子の範囲の長さを有する共有結合した原子の鎖（リンカー）を含み；
ｎは、Ｒ^５がカルボキシル基または活性化カルボキシル基である場合は０または１のいずれかであり、Ｒ^５が－ＮＨＲ^５ａ基である場合は１である。）のアザジベンゾシクロオクチン誘導体またはその塩。

【請求項2】

Ｒ^３、Ｒ^４が独立して水素原子またはメチル基であり、好ましくはＲ^３、Ｒ^４が同一であり、それぞれが水素原子である、請求項１のいずれか一項に記載のアザジベンゾシクロオクチン誘導体またはその塩。

【請求項3】

式（Ｉａ）または（Ｉｂ）：

【化2】

【化3】

（式中、Ｌ、ｎおよびＲ^５は請求項１または２に定義されたとおりである）を有する、請求項１または２に記載のアザジベンゾシクロオクチン誘導体またはその塩。

【請求項4】

式（Ｉａ－１）または（Ｉｂ－１）：

【化4】

【化5】

（式中、Ｒ^５は、請求項１または２に定義されたとおりである）を有する、請求項１～３のいずれか一項に記載のアザジベンゾシクロオクチン誘導体またはその塩。

【請求項5】

式（ＩＩ）

【化6】

（式中、Ｌ、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４およびｎは、式（Ｉ）のアザジベンゾシクロオクチン誘導体またはその塩について請求項１～４のいずれか一項に定義されたとおりであり；
Ｒ^６は、フルオロフォア、ハプテン、チラミン、ポリエチレングリコール鎖、ポリプロピレングリコール鎖、混合ポリエチレン／ポリプロピレングリコール鎖、金属錯体、放射性同位体、活性医薬成分、炭水化物、固相、脂質、アミノ酸、オリゴペプチド、ポリペプチド、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチドおよびポリヌクレオチドからなる群から選択され；好ましくは金属錯体であり；
Ｚは、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－、Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^７－、および－ＮＲ^７－Ｃ（＝Ｙ）－からなる群から選択され、Ｒ^７は、水素原子またはＣ１～Ｃ５アルキル基であり、Ｙは酸素原子または硫黄原子であり、好ましくは酸素原子である。）の複合体。

【請求項6】

Ｒ^６が、フルオロフォア、蛍光消光剤、色素、ハプテン、チラミン、金属錯体、放射性同位体、活性医薬成分（薬物）、炭水化物、固相、脂質、アミノ酸、オリゴペプチド、ポリペプチド、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチドおよびポリヌクレオチドからなる群から選択され、好ましくは金属錯体であり、好ましくはアルキル鎖、ポリエチレングリコール鎖、ポリプロピレングリコール鎖および混合ポリエチレン／ポリプロピレングリコール鎖からなる群から選択されるさらなるリンカーがＺとＲ^６との間に存在するか、または存在しない、請求項５に記載の式（ＩＩ）の複合体。

【請求項7】

式（ＩＩａ）または（ＩＩｂ）；

【化7】

【化8】

（式中、Ｌ、ｎおよびＲ^６は請求項５または６に定義されたとおりであり、Ｚ^１は－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－基または－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－基である。）を有する、請求項５または６に記載の複合体。

【請求項8】

式（ＩＩａ－１）、（ＩＩａ－２）、（ＩＩｂ－１）、または（ＩＩｂ－２）：

【化9】

【化10】

【化11】

【化12】

（式中、（ＩＩａ－１）、（ＩＩａ－２）、（ＩＩｂ－１）、または（ＩＩｂ－２）におけるＲ^６は、請求項５～７のいずれか一項に定義されたとおりである。）を有する、請求項５～７のいずれか一項に記載の複合体。

【請求項9】

請求項５～８のいずれか一項に記載の複合体を、１，３－双極子基または１，３－（ヘテロ）ジエン基を含む標的分子と反応させる、標的分子の修飾方法。

【請求項10】

前記標的分子が、フルオロフォア、蛍光消光剤、色素、ハプテン、チラミン、ポリエチレングリコール鎖、ポリプロピレングリコール鎖、混合ポリエチレン／ポリプロピレングリコール鎖、金属錯体、放射性同位体、活性医薬成分、炭水化物、固相、脂質、アミノ酸、オリゴペプチド、ポリペプチド、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチドおよびポリヌクレオチドからなる群から選択され、好ましくはポリペプチド、より好ましくは抗体、より好ましくは１，３－双極子基を有する修飾抗体、より好ましくはアジド基を有する修飾抗体である、請求項９に記載の方法。

【請求項11】

標的分子の生体直交標識および／または修飾のための、請求項５～８のいずれか一項に記載の複合体の使用。

【請求項12】

請求項５～８のいずれか一項に記載の複合体と、請求項９または１０に記載の方法から得られるか、または得ることが可能な１，３－双極子基または１，３－（ヘテロ）ジエン基を含む標的分子との反応生成物を含む修飾標的分子。

【請求項13】

検出試薬としての請求項１２に記載の修飾標的分子と、好適な捕捉試薬とを含むキット。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、第１の態様において、ＤＩＢＡＣ構造のベンゾ環に特定の置換基を有し、ＤＩＢＡＣ構造の窒素原子に結合した特定の置換基を有する式（Ｉ）によるアザジベンゾシクロオクチン誘導体またはその塩に関する。本発明の第２の態様は、置換基Ｒ^６がリンカー構造－Ｃ（＝Ｏ）－［Ｌ］_ｎ－Ｚ－を介してＤＩＢＡＣ構造の８員環のＮ原子に結合している式（ＩＩ）の複合体に関する。本発明の第３の態様は、第２の態様による複合体を、１，３－双極子基または１，３－（ヘテロ）ジエン基を含む標的分子と反応させる、標的分子を修飾するための方法に関する。第４の態様では、本発明は、標的分子の生体直交標識および／または修飾のための第２の態様による複合体の使用に関する。本発明の第５の態様は、第２の態様による複合体の反応生成物を含む修飾標的分子、および第３の態様の方法から得られるかまたは得ることが可能な１，３－双極子基または１，３－（ヘテロ）ジエン基を含む標的分子に関する。第６の態様では、本発明は、検出試薬としての第５の態様による修飾標的分子と、好適な捕捉試薬とを含むキットに関する。

【背景技術】

【0002】

生体直交反応は、生体分子の修飾のために現代の化学生物学において広く使用されている。本明細書において、安定な１，２，３トリアゾールをもたらすアジドとアルキンとの［３＋２］環化付加は、すなわち、いわゆる歪み促進アジド－アルキン環化付加（ＳＰＡＡＣ）と呼ばれ、最も頻繁に使用されるので、傑出した地位を有している。別のアプローチは、いわゆる歪み促進アルキン－ニトロン環化付加（ＳＰＡＮＣ）である。これらの反応は一般に銅触媒作用を必要とするが、例えば環状オクチンの固有の環歪み（歪み促進アジドアルキン環化付加、ＳＰＡＡＣ）を利用し、それによって任意の触媒の必要性を回避しているバリアントがある。

【0003】

国際公開第２０１４／１８９３７０号は、ベンゾ環に特定の置換基を有する置換ジベンゾアザシクロオクチン（ＤＩＢＡＣ）誘導体を開示している。Ｄｅｂｅｔｓら（Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．２０１０，４６，９７－９９）もまた、ＤＩＢＡＣ構造の８員環のＮ原子に特定の置換基を有するＤＩＢＡＣ誘導体を記載している。ＤＩＢＡＣ類似体を調製するための合成経路もまた、Ｄｅｂｅｔｓら（Ｏｒｇ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２０１４，１２，５０３１－５０３７）によって開示されている。

【0004】

それにもかかわらず、公知のＤＩＢＡＣ誘導体は、通常、疎水性分子であり、水溶液中での溶解性が低く、望ましくない疎水性相互作用を受けやすい複合体をもたらす。これまで、十分に水溶性の誘導体は報告されていない。

【0005】

したがって、本発明の根底にある技術的課題は、水溶液への溶解性が改善され、疎水性相互作用が最小限であるＤＩＢＡＣ誘導体の必要性であった。

【発明の概要】

【0006】

この課題は、独立特許請求項の特徴を有する本発明によって解決される。本発明の有利な開発は、個別にまたは組み合わせて実現し得、従属特許請求項で提示されており、かつ／または以下の明細書および詳述された実施形態において提示されている。

【0007】

以下で使用される場合、「有する（ｈａｖｅ）」、「備える（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」もしくは「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」という用語、またはそれらの任意の文法的変形は、非排他的な方法で使用される。したがって、これらの用語は、この文脈において説明されているエンティティに、これらの用語によって導入される特徴以外のさらなる特徴が存在しない状況、および１つ以上のさらなる特徴が存在する状況の双方を指すことがある。一例として、「ＡはＢを有する」、「ＡはＢを含む」、および「ＡはＢを含む」という表現は、Ｂの他に他の要素がＡに存在しない状況（すなわち、ＡがＢのみからなる状況）、およびＢの他に、要素Ｃ、要素Ｃ、およびＤ、またはさらなる要素などの１つまたは複数のさらなる要素がエンティティＡに存在する状況の両方を指し得る。

【0008】

更に、特徴または要素が１回または複数回存在し得ることを示す用語「少なくとも１」、「１もしくは複数」または同様の表現は、典型的には、各特徴または要素を導入するときに１回のみ使用されることに留意すべきである。以下、ほとんどの場合、各特徴または要素を指すとき、表現「少なくとも１」または「１もしくは複数」は、各特徴または要素が１回または複数回存在し得るという事実にもかかわらず、繰り返されない。

【0009】

さらに、以下で使用されるように、「好ましくは」、「より好ましくは」、「特に」、「より具体的には」、「具体的には」、「より具体的には」という用語または同様の用語は、代替の可能性を制限することなく、任意選択の特徴と共に使用される。したがって、これらの用語によって導入される特徴は任意選択の特徴であり、決して特許請求の範囲を限定することを意図するものではない。本発明は、当業者が認識するように、代替的な特徴を使用することによって実行され得る。同様に、「本発明の実施形態における」または同様の表現によって導入される特徴は、本発明の代替の実施形態に関する任意の限定なしの、本発明の範囲に関する任意の限定なしの、およびそのような方法で導入された特徴と、本発明の他の任意選択または非任意選択の特徴とを合わせる可能性に関する任意の限定なしの、任意選択の特徴であることが意図される。

【0010】

第１の態様－アザジベンゾシクロオクチン誘導体
第１の態様では、本発明は、式（Ｉ）

【化1】

（式中、
Ｒ^１、Ｒ^２は、独立して、
－［（ＣＨ_２）_ａＣＲ^ｘＲ^ｙ］_ｂＲ^ｚ基（式中、ａは、０または１～４の範囲の整数のいずれかであり、ｂは、０または１～３の範囲の整数のいずれかであり、Ｒ^ｘ、Ｒ^ｙ、Ｒ^ｚは、水素原子、Ｃ１～Ｃ３アルキル基および（ＣＨ_２）_ｃＳＯ_３ ^－基からなる群から独立して選択され、ｃは、０または１～４の範囲の整数のいずれかであり、Ｒ^ｘ、Ｒ^ｙ、Ｒ^ｚの少なくとも１つは、以下の条件を有する（ＣＨ_２）_ｃＳＯ_３ ^－基であり：
－Ｒ^ｚが（ＣＨ_２）_ｃＳＯ_３ ^－基であり、ｃが０である場合、Ｒ^ｘ、Ｒ^ｙは、いずれも（ＣＨ_２）_ｃＳＯ_３ ^－基ではなく、ｃは０であるか、または
－ａが０である場合、Ｒ^ｘおよびＲ^ｙは、いずれも（ＣＨ_２）_ｃＳＯ_３ ^－基ではなく、ｃは０である；
ならびに
－－［ＣＲ^ｒＲ^ｓ］_ｄ－Ｒ^ｔ基（式中、ｄは１から１０の範囲から選択される整数であり、Ｒ^ｒは、水素原子、ヒドロキシル基および－［ＣＲ’（ＯＨ）］_ｅ－Ｈ基からなる群から選択され、Ｒ^ｓは水素原子または
^－－［ＣＲ”（ＯＨ）］_ｆ－Ｈ基のいずれかであり、Ｒ^ｔは、水素原子、Ｃ１～Ｃ５アルキル基および－［ＣＲ”’（ＯＨ）］_ｇ－Ｈ基からなる群から選択され（各Ｒ’、Ｒ”、Ｒ”’は、独立して、水素原子または－［ＣＨ（ＯＨ）］_ｈ－Ｈ基のいずれかであり、ｄ、ｅ、ｆ、ｇおよびｈのそれぞれは、Ｒ^ｔが水素原子またはＣ１～Ｃ５アルキル基である場合、Ｒ^ｒ、Ｒ^ｓの少なくとも１つは水素原子ではないという条件で、独立して、１～１０の範囲から選択される整数である）であり；
Ｒ^３、Ｒ^４は、水素原子、Ｃ１～Ｃ３－アルキル基、ハロゲン原子および－Ｏ－Ｃ１～Ｃ３－アルキル基からなる群から独立して選択され；
Ｒ^５は、カルボキシル基、活性化カルボキシル基および－ＮＨＲ^５ａ基からなる群から選択され、Ｒ^５ａは水素原子またはＣ１～Ｃ５アルキル基であり；
Ｌは、主鎖を形成し、１～１００原子の範囲の長さを有する共有結合した原子の鎖（リンカー）を含み；
ｎは、Ｒ^５がカルボキシル基または活性化カルボキシル基である場合は０または１のいずれかであり、Ｒ^５が－ＮＨＲ^５ａ基である場合は１である。）のアザジベンゾシクロオクチン誘導体またはその塩に関する。

【0011】

リンカーＬのインデックス「ｎ」が０である場合、リンカーＬは存在せず、Ｃ＝ＯおよびＲ^５のＣ原子は単結合によって直接連結されている。Ｒ^１、Ｒ^２について示される－［ＣＲ^ｒＲ^ｓ］_ｄ－Ｒ^ｔ基は、直鎖または分枝鎖のポリヒドロキシル構造を表わす。Ｒ^１、Ｒ^２について示される－［（ＣＨ_２）_ａＣＲ^ｘＲ^ｙ］_ｂＲ^ｚ基は、少なくとも１つのスルホン酸基の残基を表わす。

【0012】

式（Ｉ）によるアザジベンゾシクロオクチン誘導体またはその塩は、水溶液への溶解性に関して著しく改善されており、そのため、水性系に使用するための広い適合性を有する。－［ＣＲ^ｒＲ^ｓ］_ｄ－Ｒ^ｔ基を有する式（Ｉ）によるアザジベンゾシクロオクチン誘導体またはその塩は、今や、［（ＣＨ_２）_ａＣＲ^ｘＲ^ｙ］_ｂＲ^ｚ基を有する式（Ｉ）の化合物においてさらに改善された親水性を有する。さらに、式（Ｉ）によるアザジベンゾシクロオクチン誘導体またはその塩は、タンパク質凝集のような望ましくない疎水性相互作用を回避し、その結果、診断アッセイにおける潜在的な非特異的結合を回避することを可能にする。本明細書に記載の式（Ｉ）によるアザジベンゾシクロオクチン誘導体またはその塩は、場合により本明細書で以下により詳細に記載される式（ＩＩ）の複合体のようなさらなる置換基を有し、１，３－双極子基または１，３－（ヘテロ）ジエン基を含む標的分子と反応させる場合、環化付加のための銅触媒の必要性を回避する。

【0013】

式（Ｉ）に含まれるリンカーＬは、骨格を形成する原子の鎖を含み、好ましくはそれからなり、骨格は、１～１００個の原子の範囲の長さ、好ましくは４～５０個の原子の範囲の長さ、より好ましくは５～２０個の原子の範囲の長さ、より好ましくは６～１５個の原子の範囲の長さを有する。骨格を形成する全ての原子は、互いに共有結合している。一実施形態では、骨格は、炭素原子と、Ｏ、ＮおよびＳから選択される１個以上のヘテロ原子とからなり、場合により少なくとも１個のアリール、ヘテロアリール、置換アリールまたは置換ヘテロアリール基（例えばフェニレン環は、４個の原子の長さを占める）を含む。内部位置のヘテロ原子は、非置換であるか、または水素原子、Ｃ１～Ｃ５アルキルおよび＝Ｏからなる群から選択される１つ以上の置換基を有する。いくつかの実施形態では、１個以上のヘテロ原子は連結の一部であり、この連結は、好ましくは、アミド結合、エステル結合、エーテル結合、カルバメート結合および尿素結合からなる群から選択される。骨格の原子鎖中の炭素原子は、水素原子およびＣ１～Ｃ１０アルキル基からなる群から選択される１つ以上の置換基で置換されている。「アルキル」という用語は、それ自体でまたは別の置換基の一部として、特に明記しない限り、指定された数の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐鎖、または環状炭化水素ラジカル、またはそれらの組み合わせを意味する（すなわち、Ｃ１～Ｃ１０は、１～１０個の炭素原子を意味する）。飽和炭化水素ラジカルの例としては、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、ｔ－ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、シクロヘキシル、（シクロヘキシル）メチル、シクロプロピルメチル、例えばｎ－ペンチル、ｎ－ヘキシルのホモログおよび異性体などの基が挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態では、骨格は、セグメント間に１つ以上のヘテロ原子を有する２つ以上の直鎖アルキル鎖セグメントからなる。好ましくは、骨格は、６～１５個の原子の範囲の長さを有し、好ましくは非置換である２つ以上の直鎖アルキル鎖セグメントからなり、セグメント間に１つ以上のヘテロ原子を有し、１つ以上のヘテロ原子はＯおよびＮから選択される。より好ましくは、骨格は、６～１０個の原子の範囲の長さを有し、好ましくは非置換である２つの直鎖アルキル鎖セグメントからなり、セグメント間の結合は、エーテル結合、尿素結合、カルバメート結合およびアミド結合からなる群から選択される。

【0014】

アザジベンゾシクロオクチン誘導体の塩
Ｒ^１および／またはＲ^２が－ＳＯ_３ ^－基を含む場合、当該基は脱プロトン化形態で存在し、負電荷は、好ましくはアルカリ金属カチオン、好ましくはＮａ^＋またはＫ^＋、およびトリアルキルアンモニウムカチオンＮＲ^ｋＲ^ｐＲ^ｑから選択される適切なカチオンによって補償され、好ましくはＲ^ｋ、Ｒ^ｐ、Ｒ^ｑは独立してＣ１～Ｃ６アルキル基であり、より好ましくはＲ^ｋ、Ｒ^ｐ、Ｒ^ｑは同一であり、それぞれＣ１～Ｃ６アルキル基である。Ｒ^５がカルボキシル基である場合、当該基は、そのプロトン化形態またはその脱プロトン化形態のいずれかで存在し、負電荷は、好ましくはアルカリ金属カチオン、好ましくはＮａ^＋またはＫ^＋、およびトリアルキルアンモニウムカチオンＮＲ^ｋＲ^ｐＲ^ｑから選択される適切なカチオンによって補償され、好ましくはＲ^ｋ、Ｒ^ｐ、Ｒ^ｑは、独立してＣ１～Ｃ６アルキル基であり、より好ましくはＲ^ｋ、Ｒ^ｐ、Ｒ^ｑは同一であり、それぞれＣ１～Ｃ６アルキル基である。好ましいトリアルキルアンモニウムカチオンは、Ｎ，Ｎ，Ｎ－トリエチルアンモニウムである。

【0015】

アザジベンゾシクロオクチン誘導体またはその塩の一実施形態によれば、Ｒ^３、Ｒ^４は独立して水素原子またはメチル基であり、好ましくはＲ^３、Ｒ^４は同一であり、それぞれ水素原子である。

【0016】

アザジベンゾシクロオクチン誘導体またはその塩の一実施形態によれば、
Ｒ^１、Ｒ^２は、それぞれ［（ＣＨ_２）_ａＣＲ^ｘＲ^ｙ］_ｂＲ^ｚ基であり、各Ｒ^１、Ｒ^２について、独立して、ａは０または１～４の範囲の整数のいずれかであり、ｂは０または１～３の範囲の整数のいずれかであり、Ｒ^ｘ、Ｒ^ｙ、Ｒ^ｚは、水素原子、Ｃ１～Ｃ３アルキル基および（ＣＨ_２）_ｃＳＯ_３ ^－基からなる群から選択され、ｃは０または１～４の範囲の整数のいずれかであり、Ｒ^ｘ、Ｒ^ｙ、Ｒ^ｚの少なくとも１つは、以下の条件を有する（ＣＨ_２）_ｃＳＯ_３ ^－基であり；
－Ｒ^ｚが（ＣＨ_２）_ｃＳＯ_３ ^－基であり、ｃが０である場合、Ｒ^ｘ、Ｒ^ｙは、いずれも（ＣＨ_２）_ｃＳＯ_３ ^－基ではなく、ｃは０であるか、または
－ａが０である場合、Ｒ^ｘおよびＲ^ｙは、いずれも（ＣＨ_２）_ｃＳＯ_３ ^－基ではなく、ｃは０である。

【0017】

アザジベンゾシクロオクチン誘導体またはその塩の一実施形態によれば、
Ｒ^１、Ｒ^２は、それぞれ［（ＣＨ_２）_ａＣＲ^ｘＲ^ｙ］_ｂＲ^ｚ基であり、各Ｒ^１、Ｒ^２について、独立して、ａは０または１～４の範囲の整数のいずれかであり、ｂは０または１～３の範囲の整数のいずれかであり、Ｒ^ｘおよびＲ^ｚは、水素原子、Ｃ１～Ｃ３アルキル基および（ＣＨ_２）_ｃＳＯ_３ ^－基からなる群から選択され、ｃは０または１～４の範囲の整数のいずれかであり、Ｒ^ｙ、は水素原子、Ｃ１～Ｃ３アルキル基および（ＣＨ_２）_ｃＳＯ_３ ^－基からなる群から選択され、ｃは１～４の範囲の整数であり、
Ｒ^ｘ、Ｒ^ｙ、Ｒ^ｚの少なくとも１つが（ＣＨ_２）_ｃＳＯ_３ ^－基である
（ただし、Ｒ^ｘが（ＣＨ_２）_ｃＳＯ_３ ^－基であり、ｃが０である場合、Ｒ^ｚは（ＣＨ_２）_ｃＳＯ_３ ^－－基でｃが０ではないことを条件とする。）。

【0018】

アザジベンゾシクロオクチン誘導体またはその塩の一実施形態によれば、
Ｒ^１、Ｒ^２は、それぞれ［（ＣＨ_２）_ａＣＲ^ｘＲ^ｙ］_ｂＲ^ｚ基であり、各Ｒ^１、Ｒ^２について、独立して、ａは０または１～４の範囲の整数のいずれかであり、ｂは１であり、Ｒ^ｘ、Ｒ^ｚは、水素原子、Ｃ１～Ｃ３アルキル基および（ＣＨ_２）_ｃＳＯ_３ ^－基からなる群から選択され、ｃは０または１～４の範囲の整数のいずれかであり、Ｒ^ｙは、水原子、Ｃ１～Ｃ３アルキル基および（ＣＨ_２）_ｃＳＯ_３ ^－基からなる群から選択され、ｃは１～４の範囲の整数であり、
Ｒ^ｘ、Ｒ^ｙ、Ｒ^ｚの少なくとも１つは（ＣＨ_２）_ｃＳＯ_３ ^－基である
（ただし、Ｒ^ｘが（ＣＨ_２）_ｃＳＯ_３ ^－基であり、ｃが０である場合、Ｒ^ｚは（ＣＨ_２）_ｃＳＯ_３ ^－－基でｃが０ではないことを条件とする。）。

【0019】

アザジベンゾシクロオクチン誘導体またはその塩の一実施形態によれば、
Ｒ^１、Ｒ^２は、それぞれ［（ＣＨ_２）_ａＣＲ^ｘＲ^ｙ］_ｂＲ^ｚ基であり、各Ｒ^１、Ｒ^２について、独立して、ａは０または１～４の範囲の整数のいずれかであり、ｂは１であり、Ｒ^ｘ、Ｒ^ｚは、水素原子、Ｃ１～Ｃ３アルキル基および（ＣＨ_２）_ｃＳＯ_３ ^－基からなる群から選択され、ｃは０または１～４の範囲の整数のいずれかであり、Ｒ^ｙは水素原子であり、
Ｒ^ｘ、Ｒ^ｚの少なくとも１つは、（ＣＨ_２）_ｃＳＯ_３ ^－基である
（ただし、Ｒ^ｘが（ＣＨ_２）_ｃＳＯ_３ ^－基であり、ｃが０である場合、Ｒ^ｚは（ＣＨ_２）_ｃＳＯ_３ ^－－基でｃが０ではないことを条件とする。）。

【0020】

アザジベンゾシクロオクチン誘導体またはその塩の一実施形態によれば、
Ｒ^１、Ｒ^２は、それぞれ［（ＣＨ_２）_ａＣＲ^ｘＲ^ｙ］_ｂＲ^ｚ基であり、各Ｒ^１、Ｒ^２について、独立して、ａは０または１～４の範囲の整数のいずれかであり、ｂは０または１～３の範囲の整数のいずれかであり、Ｒ^ｘ、Ｒ^ｙ、Ｒ^ｚは水素原子および（ＣＨ_２）_ｃＳＯ_３ ^－基からなる群から選択され、ｃは０または１～４の範囲の整数のいずれかであり、
Ｒ^ｘ、Ｒ^ｙ、Ｒ^ｚの少なくとも１つは、以下の条件を有する（ＣＨ_２）_ｃＳＯ_３ ^－基である。
－Ｒ^ｚが（ＣＨ_２）_ｃＳＯ_３ ^－基であり、ｃが０である場合、Ｒ^ｘ、Ｒ^ｙは、いずれも（ＣＨ_２）_ｃＳＯ_３ ^－基ではなく、ｃは０であるか、または
－ａが０である場合、Ｒ^ｘおよびＲ^ｙは、いずれも（ＣＨ_２）_ｃＳＯ_３ ^－基ではなく、ｃは０である。

【0021】

アザジベンゾシクロオクチン誘導体またはその塩の一実施形態によれば、Ｒ^１、Ｒ^２は同一であり、いずれも［（ＣＨ_２）_ａＣＲ^ｘＲ^ｙ］_ｂＲ^ｚ基であり、ｂは０または１である。インデックス「ａ」およびＲ^ｘ、Ｒ^ｙ、Ｒ^ｚは上記で定義した通りである。

【0022】

アザジベンゾシクロオクチン誘導体またはその塩の一実施形態によれば、Ｒ^１、Ｒ^２はそれぞれ－［ＣＲ^ｒＲ^ｓ］_ｄ－Ｒ^ｔ基であり、各Ｒ^１、Ｒ^２について、独立して、Ｒ^ｒは、水素原子、ヒドロキシル基および－［ＣＨ（ＯＨ）］_ｅ－Ｈからなる群から選択され、Ｒ^ｓは、水素原子または－［ＣＨ（ＯＨ）］_ｆ－Ｈ基のいずれかであり、Ｒ^ｔは、水素原子、Ｃ１～Ｃ５アルキルおよび－［ＣＨ（ＯＨ）］_ｇ－Ｈ基からなる群から選択され、ｄ、ｅ、ｆ、ｇのそれぞれは、Ｒ^ｔが水素原子またはＣ１～Ｃ５アルキル基である場合、Ｒ^ｒ、Ｒ^ｓの少なくとも１つは水素原子ではないという条件で、独立して、１～１０の範囲から選択される整数である。

【0023】

アザジベンゾシクロオクチン誘導体またはその塩の一実施形態によれば、Ｒ^１、Ｒ^２は同一であり、それぞれ－［ＣＨ（ＯＨ）］_ｄ－Ｈ基であり、ｄは１～１０の範囲、好ましくは１～５の範囲から選択される整数であり、より好ましくはｄは２または３である。

【0024】

アザジベンゾシクロオクチン誘導体またはその塩の一実施形態によれば、Ｒ^５は活性化カルボキシル基であり、Ｒ^５の活性化基は４－ニトロフェニル基、ペンタフルオロフェニル基およびＮ－スクシンイミジル基からなる群から選択され、好ましくはＮ－スクシンイミジル基である。

【0025】

Ｒ^５がカルボキシル基である場合、当該基は、例えば、ＨＡＴＵ（１－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム３－オキシドヘキサフルオロホスフェート）、ＨＢＴＵ（３－［ビス（ジメチルアミノ）メチリウミル］－３Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－オキシドヘキサフルオロホスフェート）、好ましくはＮ，Ｎ’－ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）、Ｎ，Ｎ’－ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）および１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）からなる群から選択されるカルボジイミド、またはホスホニウム塩、好ましくはベンゾトリアゾール－１－イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）またはベンゾトリアゾール－１－イルオキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰｙＢＯＰ）によってインサイチューで活性化し得る。

【0026】

アザジベンゾシクロオクチン誘導体またはその塩の実施形態によれば、Ｌは構造－（ＣＨ_２）_ｐ－（Ｘ）_ｍ－（ＣＨ_２）_ｑ－であり、
ｐ、ｑは、独立して、２～１０の範囲から選択される整数であり；
Ｘは、－Ｃ（＝Ｙ）－ＮＨ－、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｙ）－、－Ｃ（＝Ｙ）－Ｏ－および－Ｏ－Ｃ（＝Ｙ）－（式中、Ｙは酸素原子または硫黄原子である）からなる群から選択され；
ｍは、０または１である［ｍが０である場合、Ｘは存在せず、（ＣＨ_２）_ｐ、（ＣＨ_２）_ｑは単結合によって直接接続されている］。

【0027】

アザジベンゾシクロオクチン誘導体またはその塩の一実施形態によれば、ｍは１であり、Ｘは－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－基であり、および／またはｐ、ｑは同一であり、いずれも２～５、好ましくは２または３の範囲から選択される整数である。

【0028】

一実施形態によれば、アザジベンゾシクロオクチン誘導体またはその塩は、式（Ｉａ）、（Ｉｂ）または（Ｉｃ）：

【化2】

【化3】

【化4】

（式中、Ｌ、ｎおよびＲ^５は上に定義されるとおりである）を有する。

【0029】

一実施形態によれば、アザジベンゾシクロオクチン誘導体またはその塩は、式（Ｉａ－１）、（Ｉｂ－１）または（Ｉｃ－１）：

【化5】

【化6】

【化7】

式中、Ｒ^５は、上に定義されるとおりである）を有する。

【0030】

一実施形態によれば、アザジベンゾシクロオクチン誘導体またはその塩は、式（Ｉａ－１）または（Ｉｂ－１）、好ましくは（Ｉａ－１）を有する。

【化8】

【化9】

【0031】

第２の態様－複合体
第２の態様では、本発明は、式（ＩＩ）

【化10】

（式中、Ｌ、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４およびｎは、式（Ｉ）のアザジベンゾシクロオクチン誘導体またはその塩についての第１の態様に関して上に定義されるとおりであり；
Ｒ^６は、フルオロフォア、蛍光消光剤、色素、ハプテン、チラミン、ポリエチレングリコール鎖、ポリプロピレングリコール鎖、混合ポリエチレン／ポリプロピレングリコール鎖、金属錯体、放射性同位体、活性医薬成分、炭水化物、固相、脂質、アミノ酸、オリゴペプチド、ポリペプチド、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチドおよびポリヌクレオチドからなる群から選択され；好ましくは金属錯体であり；
Ｚは、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－、Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^７－、および－ＮＲ^７－Ｃ（＝Ｙ）－からなる群から選択され、Ｒ^７は、水素原子またはＣ１～Ｃ５アルキル基であり、Ｙは酸素原子または硫黄原子であり、好ましくは酸素原子である。）の複合体に関する。

【0032】

第１の態様に関連するセクションで上に与えられた全ての定義は、第２の態様の複合体に関しても適用される。

【0033】

式（ＩＩ）の複合体の一実施形態によれば、Ｒ^６は、ルオロフォア、蛍光消光剤、色素、ハプテン、チラミン、金属錯体、放射性同位体、活性医薬成分（薬物）、炭水化物、固相、脂質、アミノ酸、オリゴペプチド、ポリペプチド、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチドおよびポリヌクレオチドからなる群から選択され、好ましくは金属錯体であり、鎖、ポリプロピレングリコール鎖および混合ポリエチレン／ポリプロピレングリコール鎖からなる群から選択されるさらなるリンカーがＺとＲ^６との間に存在するか、または存在しない。

【0034】

金属錯体は、好ましくはルテニウム（ＩＩ）またはイリジウム（ＩＩＩ）系錯体であり、より好ましくはルテニウム（ＩＩ）またはイリジウム（ＩＩＩ）系の電気化学発光錯体である。電気化学発光（ＥＣＬ）は、高感度で選択的な方法として分析用途に非常に有用であることが証明された。ＥＣＬは、化学発光分析の分析上の利点（背景光シグナルの非存在）を、電極電位を適用することによる反応制御の容易さと組み合わせている。一般に、ルテニウム（ＩＩ）錯体、特に液相または液体－固体界面でＴＰＡ（トリプロピルアミン）で再生する［Ｒｕ（ｂｐｙ）_３］^２＋（約６２０ｎｍで光子を放出する）がＥＣＬ標識として使用される。ＥＣＬ標識として使用可能なルテニウム（ＩＩ）錯体は、国際公開第２００３／００２９７４号に記載されている。ＥＣＬ標識として使用可能なイリジウム（ＩＩＩ）錯体は、国際公開第２０１２／１０７４１９号、国際公開第２０１２／１０７４２０号ならびに国際公開第２０１４／０１９７０９号および国際公開第２０１４／０１９７０８号にも記載されている。好ましくは、イリジウム（ＩＩＩ）錯体は、Ｉｒ^３＋と、２つの置換または非置換の６－フェニルフェナントリジン配位子とを含み、場合により修飾されていてもよいピリジン－２－カルボン酸または２－（１Ｈ－ピラゾール－３－イル）ピリジンを含む。特にさらなる結合を考慮して、２－（１Ｈ－ピラゾール－３－イル）ピリジンは反応性単位で修飾され、例えば、２－（１Ｈ－ピラゾール－３－イル）ピリジン配位子は３－アルキルカルボン酸基で置換され、これは共役のためにＮＨＳ基によって活性化され得る。

【0035】

画像化および治療目的のための標識として適したさらなる金属錯体は、当技術分野で周知である（例えば、国際公開第２０１７／１５３５７４号を参照されたい）。

【0036】

放射性標識は、放射性同位体（放射性核種）、例えば、３Ｈ、１１Ｃ、１４Ｃ、１８Ｆ、３２Ｐ、３５Ｓ、６４Ｃｕ、６８Ｇｎ、８６Ｙ、８９Ｚｒ、９９ＴＣ、１１１Ｉｎ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１３３Ｘｅ、１７７Ｌｕ、２１１Ａｔ、または１３１Ｂｉを採用する。

【0037】

「フルオロフォア」としては、希土類キレート（ユーロピウムキレート）、ＦＩＴＣを含むフルオレセイン型標識、５－カルボキシフルオレセイン、６－カルボキシフルオレセイン；ＴＡＭＲＡ、リサミン、テキサスレッドを含むローダミン型標識；ダンシル；シアニン；クマリン、フィコエリトリン；およびその類似体が挙げられる。蛍光標識は、当業者に公知の方法を使用して、好ましくはアミド結合の形成を介して、本発明のアザジベンゾシクロオクチン誘導体に結合させ得る。Ａｌｅｘａ、ＡｔｔｏおよびＤＹ染料も含む蛍光色素および非蛍光色素ならびに標識試薬は、例えば、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ／Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ（米国オレゴン州ユージーン）、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（米国マサチューセッツ州ウォルサム）、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ａｔｔｏ－Ｔｅｃ ＧｍｂＨ（Ｓｉｅｇｅｎ）、Ｄｙｏｍｉｃｓ ＧｍｂＨ（ＪｅｎａおよびＰｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．（イリノイ州ロックフォード）から市販されている。例えば、ブラックホールクエンチャー（ＢＨＱ）などの「蛍光クエンチャー」は、当業者に公知である。「色素」、例えば、ダブシルまたはダブシルのようなアゾ色素も当業者に知られている。

【0038】

「ハプテン」は、１００～２０００ダルトンの分子量を有する有機分子である。一実施形態では、ハプテンは１００～１０００ダルトンの分子量を有する。通常、そのような分子量の有機分子は免疫原性ではないか、または比較的低い免疫原性である。ハプテンは、担体分子に結合することによって免疫原性にし得、抗ハプテン抗体は、標準的な手順に従って生成し得る。一実施形態では、ハプテンは、ステロール、胆汁酸、性ホルモン、コルチコイド、カルデノリド、カルデノリド－グリコシド、ブファジエノリド、ステロイド－サポゲニンおよびステロイドアルカロイド、カルデノリド、カルデノリド－グリコシドおよびビタミンを含む群から選択され得る。これらの物質クラスの代表例は、ジゴキシゲニン、ジギトキシゲンン、ジトキシゲニン、ストロファンチジン、ジゴキシン、ジギトキシン、ジトキシン、ストロファンチンフルオレセイン、ビオチン、ジニトロフェニルである。

【0039】

「チラミン」は、４－（２－アミノエチル）フェノールである。対応するアミドを介して標識にカップリングされると、セイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、例えば抗体－ＨＲＰ複合体（例えば、Ｐｅｒｋｉｎ－Ｅｌｍｅｒ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒを参照されたい）による活性化によるチラミドシグナル増幅のための試薬として使用される。

【0040】

「オリゴペプチド」は、２～９個の範囲のアミノ酸残基を含むペプチドである。「ポリペプチド」は、少なくとも１０個のアミノ酸残基を含むペプチドである。いくつかの実施形態では、ペプチドは、少なくとも１０個のアミノ酸残基、または少なくとも２０個のアミノ酸残基を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドは、１０００個以下のアミノ酸残基、例えば５００個以下のアミノ酸残基、例えば１００個以下のアミノ酸残基を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは酵素または抗体である。

【0041】

「オリゴヌクレオチド」は、２～９個の範囲の共有結合したヌクレオチドモノマーを含む。「ポリヌクレオチド」は、少なくとも１０個の共有結合したヌクレオチドモノマーを含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、１０００個以下のヌクレオチドモノマーを含む。オリゴヌクレオチドおよび／またはポリヌクレオチドは、一本鎖または二本鎖のいずれかである。オリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドという用語は、広く解されるべきであり、ＤＮＡおよびＲＮＡならびにそれらの類似体および修飾体を含む。「類似体」は、例えば、標準塩基アデニン、グアニン、シトシン、チミン、ウラシルに置換基を有する置換ヌクレオチドを含み得る。置換された核酸塩基を含むそのようなヌクレオシドの例は、５－メチル－ｄＣ、アミノアリル－ｄＵまたは－ｄＣ、５－（アミノエチル－３－アクリルイミド）－ｄＵ、５－プロピニル－ｄＵまたは－ｄＣ、５－ハロゲン化ｄＵまたはｄＣのような５－置換ピリミジン；Ｎ４－エチル－ｄＣのようなＮ－置換ピリミジン；Ｎ６－エチル－ｄＡ、Ｎ２－エチル－ｄＧのようなＮ－置換プリン；８－［（６－アミノ－ヘキサ－１－イル）－アミノ］－ｄＧまたは－ｄＡ、８－ハロゲン化ｄＡまたはｄＧ、８－アルキル－ｄＧまたは－ｄＡのような８－置換プリン；および２－アミノ－ｄＡのような２－置換ｄＡである。「類似体」は、ヌクレオチドまたはヌクレオシド類似体を含み得る。すなわち、天然に存在する核酸塩基は、５－ニトロインドール－ｄ－リボシド；３－ニトロピロール－ｄ－リボシド、デオキシイノシン（ｄＩ）、デオキシキサントシン（ｄＸ）；７－デアザ－ｄＧ、－ｄＡ、－ｄＩまたは－ｄＸ；７－デアザ－８－アザ－ｄＧ、－ｄＡ、－ｄＩまたは－ｄＸ；８－アザ－ｄＡ、－ｄＧ、－ｄＩまたは－ｄＸ；ｄ－ホルマイシン；シュード－ｄＵ；シュード－イソ－ｄＣ；４－チオ－ｄＴ；６－チオ－ｄＧ；２－チオ－ｄＴ；イソ－ｄＧ；５－メチル－イソ－ｄＣ；Ｎ８－結合８－アザ－７－デアザ－ｄＡ；５，６－ジヒドロ－５－アザ－ｄＣ；およびエテノ－ｄＡまたはピロロ－ｄＣのような核酸塩基類似体を使用することによって交換し得る。当業者に明らかなように、二本鎖の場合、相補鎖中の核酸塩基は、二本鎖形成が特異的であるように選択されなければならない。例えば、５－メチル－イソ－ｄＣが一方の鎖（例えば、（ａ））に使用される場合、イソ－ｄＧは相補鎖（例えば、（ａ’））になければならない。「類似体」では、オリゴ－／ポリヌクレオチド骨格は、置換糖残基、糖類似体、ヌクレオシド間リン酸部分の修飾を含有するように修飾されてもよく、および／またはＰＮＡであってもよい。オリゴヌクレオチドは、例えば、２’－メトキシ、２’－フルオロ、２’－メチルセレノ、２’－アリルオキシ、４’－メチル－ｄＮ（式中、Ｎは核酸塩基、例えばＡ、Ｇ、Ｃ、ＴまたはＵである）のような置換デオキシリボースを有するヌクレオチドを含有し得る。

【0042】

いくつかの好ましい実施形態では、Ｒ^６はオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドであり、好ましくは４～１２個の範囲のヌクレオチドを有する一本鎖ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）であり、より好ましくは、全てのヌクレオチドは非天然ヌクレオチドであり、すなわちヌクレオチド類似体またはヌクレオシド類似体を含む。

【0043】

いくつかの好ましい実施形態では、Ｒ^６は、オリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドであり、好ましくはＬＮＡギャップマー（「ＬＮＡ」はロックド核酸を意味し、「ギャップマー」は、配列の両側にＲＮＡ様セグメントを有する短いＤＮＡアンチセンスオリゴヌクレオチド構造である；Ｐ．Ｈ．Ｈａｇｅｄｏｒｎら，Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｔｏｄａｙ２０１８，２３（１），１０１－１１４）を参照されたい）である。

【0044】

いくつかの好ましい実施形態では、Ｒ^６は、オリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドであり、好ましくはベータ－Ｌ－ＬＮＡ一本鎖（「ベータ－Ｌ－ＬＮＡ」は、ＬＮＡのＬ－構成立体異性体を意味し、国際公開第２０１９／２４３３９１号、国際公開第２０２０／２４５３７７号を参照されたい）である。

【0045】

糖類似体は、例えばキシロース；（２’－Ｏ，４’－Ｃ－メチレン）架橋リボース（ＬＮＡとして知られるオリゴマー）または（２’－Ｏ，４’－Ｃ－エチレン）架橋リボース（ＥＮＡとして知られるオリゴマー）のような２’、４’架橋リボース；Ｌ－リボース、Ｌ－ｄ－リボース、ヘキシトール（ＨＮＡとして知られるオリゴマー）；シクロヘキセニル（ＣｅＮＡとして知られているオリゴマー）；アルトリトール（ＡＮＡとして知られるオリゴマー）；Ｃ３’およびＣ５’原子がシクロプロパン環に縮合したエチレン架橋によって連結されている三環式リボース類似体（トリシクロＤＮＡとして知られているオリゴマー）；グリセロール（ＧＮＡとして知られるオリゴマー）；グルコピラノース（ホモＤＮＡとして知られるオリゴマー）；カルバリボース（テトラヒドロフランサブユニットの代わりにシクロペンタンを含む）；ヒドロキシメチル－モルホリン（モルホリノＤＮＡとして知られるオリゴマー）である。

【0046】

修飾されたヌクレオシド間リン酸部分を含む多数の修飾もまた、ハイブリダイゼーション特性を妨害しないことが知られており、かかる骨格修飾を置換ヌクレオチドまたはヌクレオチド類似体と組み合わせ得る。例は、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホルアミデートおよびメチルホスホネートオリゴヌクレオチドである。

【0047】

ＰＮＡ（リン酸およびｄ－リボースを含まない骨格を有する）もＤＮＡ類似体として使用し得る。

【0048】

「固相」は、典型的にはガラスまたはポリマーであり、最も一般的に使用されるポリマーは、セルロース、ポリアクリルアミド、ナイロン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、またはポリプロピレンである。当業者であれば理解するように、固相は、その性質によりアルデヒド官能基を含有し得るか、またはアルデヒド基を導入するように化学的に修飾し得る。さらに明らかなように、固相は、ポリペプチド、炭水化物、ヌクレオチドおよび核酸のいずれかでコーティングされ得る。いくつかの実施形態では、固相をストレプトアビジンでコーティングする。固相は、マイクロプレートのチューブ、ビーズ、またはディスクの形態であり得る。一実施形態では、固相は、ガラスまたは上述のポリマーのいずれかに基づく常磁性ビーズである。

【0049】

「炭水化物」は、炭素（Ｃ）、水素（Ｈ）および酸素（Ｏ）原子からなる生物学的分子であり、通常、水素－酸素原子比は２：１（水中のように）である。換言すれば、実験式Ｃ_ｖ（Ｈ_２Ｏ）_ｗ（式中、ｖは通常ｗと同じである）を用いて計算し得る。いくつかの例外が存在する（ｖはｗとは異なる）；例えば、ＤＮＡの糖成分であるデオキシリボースは、実験式Ｃ５Ｈ１０Ｏ４を有する。炭水化物は、技術的には炭素の水和物である；構造的には、それらをポリヒドロキシアルデヒドおよびケトンと見なすことがより正確である。

【0050】

糖質という用語は生化学において最も一般的であり、糖、デンプンおよびセルロースを含む分子群「糖類」の同義語である。一実施形態では、炭水化物は、糖、デンプンおよびセルロースから選択される。

【0051】

本明細書における「抗体」という用語は、最も広義に使用され、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも２つのインタクトな抗体から形成された多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、および抗体断片を具体的に包含するが、これは、それらが所望の生物学的活性を示す場合に限る。

【0052】

「単離された」抗体は、その自然環境の成分から同定および分離および／または回収されたものである。その自然環境の夾雑物成分は、抗体の試験的、診断的、または治療的使用を妨害するであろう物質であり、それらとしては、酵素、ホルモン、および他のタンパク質性または非タンパク質性溶質が挙げられる。いくつかの実施形態では、抗体は、（１）例えば、ローリー法によって決定される、９５重量％超、いくつかの実施形態では、９９重量％超になるまで、（２）例えば、スピニング・カップ・シークエネーターを使用して、Ｎ末端または内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るのに十分な程度まで、または（３）例えば、クマシーブルーまたは銀染色を使用して、還元または非還元条件下でＳＤＳ－ＰＡＧＥによって均質性が得られるまで精製される。単離された抗体は、抗体の自然環境の少なくとも１つの成分が存在しないため、組換え細胞内のインサイチュー抗体を含む。しかしながら、通常、単離された抗体は、少なくとも１つの精製工程によって調製される。

【0053】

「天然抗体」は、通常、２つの同一の軽（Ｌ）鎖および２つの同一の重（Ｈ）鎖から構成される、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。各軽鎖が１つのジスルフィド共有結合により重鎖に連結される一方で、ジスルフィド結合の数は、異なる免疫グロブリンアイソタイプの重鎖間で異なる。各重鎖および軽鎖はまた、規則的に間隔を置いた鎖内ジスルフィド架橋も有する。各重鎖は、一方の端に可変ドメイン（ＶＨ）を有し、その後いくつかの定常ドメインが続く。各軽鎖は、一方の端に可変ドメイン（ＶＬ）を有し、その他方の端に定常ドメインを有し、軽鎖の定常ドメインは、重鎖の第１の定常ドメインと整列し、軽鎖可変ドメインは、重鎖の可変ドメインと整列する。特定のアミノ酸残基は、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインとの間に接触面を形成すると考えられている。

【0054】

抗体の「可変領域」または「可変ドメイン」は、抗体の重鎖または軽鎖のアミノ末端ドメインを指す。重鎖の可変ドメインは、「ＶＨ」と称され得る。軽鎖の可変ドメインは、「ＶＬ」と称され得る。これらのドメインは、一般に、抗体の最も可変性の高い部分であり、抗原結合部位を含有する。

【0055】

「可変」という用語は、可変ドメインの特定の部分の配列が抗体間で広く異なり、かつ各特定の抗体の特定の抗原に対する結合および特異性において使用されるという事実を指す。しかしながら、可変性は、抗体の可変ドメイン全体にわたって均等に分布していない。これは、軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインの両方における超可変領域（ＨＶＲ）と呼ばれる３つのセグメントに集中している。可変ドメインのより高度に保存された部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。天然の重鎖および軽鎖の可変ドメインは各々、ベータ－シート構造を接続し、かついくつかの場合では、ベータ－シート構造の一部を形成するループを形成する３つのＨＶＲによって接続されたベータシート立体配置を大いに採用する４つのＦＲ領域を含む。各鎖内のＨＶＲは、ＦＲ領域によって近接して互いに保持され、他方の鎖からのＨＶＲと共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）を参照されたい）。定常ドメインは、抗体の抗原への結合に直接関与していないが、抗体の抗体依存性細胞毒性への関与等の様々なエフェクタ機能を呈する。

【0056】

任意の脊椎動物種由来の抗体（免疫グロブリン）の「軽鎖」は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）およびラムダ（λ）と呼ばれる２つの明らかに異なる型のうちの１つに割り当て得る。

【0057】

それらの重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、抗体（免疫グロブリン）は、異なるクラスに割り当てられ得る。免疫グロブリンには５つの主なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭが存在し、これらのうちのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２に更に分ける場合がある。種々のクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造および三次元構成は周知であり、例えば、Ａｂｂａｓら，Ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｎｄ Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，第４版，Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ，Ｃｏ．（２０００）に記載されている。抗体は、抗体と１以上の他のタンパク質もしくはペプチドとの共有的または非共有的結合により形成される、より大きな融合分子の一部であってもよい。

【0058】

「全長抗体」、「インタクトな抗体」、および「全抗体」という用語は、以下に定義される抗体断片ではなく、その実質的にインタクトな形態にある抗体を指すために、本明細書において互換的に使用される。これらの用語は、具体的には、Ｆｃ領域を含む重鎖を有する抗体を指す。

【0059】

「抗体断片」とは、無傷の抗体の一部を含み、好ましくはその抗原結合領域を含む。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖ断片；ダイアボディ；直鎖状抗体；単鎖抗体分子；および抗体断片から形成された多重特異性抗体が挙げられる。

【0060】

抗体のパパイン消化により、各々単一の抗原結合部位を有する「Ｆａｂ」断片と、容易に結晶化するその能力を反映して命名された残りの「Ｆｃ」断片と呼ばれる２つの同一の抗原結合断片が産生される。ペプシン処理により、２つの抗原結合部位を有し、なおかつ抗原を架橋し得るＦ（ａｂ’）２断片が得られる。

【0061】

「Ｆｖ」は、完全な抗原結合部位を含む最小抗体断片である。一実施形態では、二本鎖Ｆｖ種は、密接に非共有会合した１つの重鎖可変ドメインおよび１つの軽鎖可変ドメインの二量体からなる。一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）種において、１つの重鎖可変ドメインおよび１つの軽鎖可変ドメインは、軽鎖および重鎖が二本鎖Ｆｖ種における構造に類似の「二量体」構造で会合し得るように、可動性ペプチドリンカーによって共有結合し得る。各可変ドメインの３つのＨＶＲが相互作用して、ＶＨ－ＶＬ二量体の表面上に抗原結合部位を規定するのは、この立体配置においてである。集合的に、６つのＨＶＲが抗体に抗原結合特異性を与える。しかし、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的なＨＶＲを３つしか含まないＦｖの半分）であっても、全結合部位よりも低い親和性であるが、抗原を認識し、それに結合する能力を有する。

【0062】

Ｆａｂ断片は、重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含有し、軽鎖定常ドメインおよび第１の重鎖定常ドメイン（ＣＨ１）も含有する。Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域由来の１つ以上のシステインを含め、重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端での数個の残基の付加によって、Ｆａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ’－ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基が、遊離チオール基を持つＦａｂ’の本明細書での呼称である。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は、元々、それらの間にヒンジシステインを有するＦａｂ’断片の対として産生された。抗体断片の他の化学的カップリングも既知である。

【0063】

「単鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体断片は、抗体のＶＨドメインおよびＶＬドメインを含み、これらのドメインは単一のポリペプチド鎖中に存在する。一般に、ｓｃＦｖポリペプチドは、ｓｃＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成することを可能にする、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間のポリペプチドリンカーをさらに含む。ｓｃＦｖの概説については、例えば、Ｐｌｕｅｃｋｔｈｕｎ，Ｉｎ：Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ（編），Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９４）ｐｐ．２６９－３１５を参照されたい。

【0064】

「ダイアボディ」という用語は、２つの抗原結合部位を有する抗体断片を指し、これらの断片は、同じポリペプチド鎖内の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に接続した重鎖可変ドメイン（ＶＨ）（ＶＨ－ＶＬ）を含む。同一鎖上の２つのドメイン間の対合を可能にするには短すぎるリンカーを使用することにより、これらのドメインは、別の鎖の相補的ドメインと対合させられ、２つの抗原結合部位を生成する。ダイアボディは二価でも二特異性でもよい。ダイアボディは、例えば、欧州特許出願公開第０４０４０９７号明細書；国際公開第１９９３／０１１６１号；Ｈｕｄｓｏｎ，Ｐ．Ｊ．ら，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９（２００３）１２９－１３４；およびＨｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．ら，ＰＮＡＳ ＵＳＡ ９０（１９９３）６４４４－６４４８により詳細に記載されている。トリアボディおよびテトラボディはまた、Ｈｕｄｓｏｎ，Ｐ．Ｊ．ら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９（２００３）１２９－１３４）においても記載されている。

【0065】

本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に同種の抗体の集団から得られる抗体を指し、例えば、その集団を構成する個々の抗体は、少量で存在し得る可能な変異、例えば、天然に存在する変異を除いて同一である。したがって、「モノクローナル」という修飾語は、別個の抗体の混合物ではないという抗体の特徴を示す。特定の実施形態では、このようなモノクローナル抗体は、典型的には、標的に結合するポリペプチド配列を含む抗体を含み、該標的結合ポリペプチド配列は、複数のポリペプチド配列から単一の標的結合ポリペプチド配列の選択を含むプロセスによって得られたものである。例えば、この選択プロセスは、ハイブリドーマクローン、ファージクローン、または組換えＤＮＡクローンのプール等の複数のクローンからの特有のクローンの選択であり得る。選択された標的結合配列が、例えば、標的への親和性を改善し、標的結合配列をヒト化し、細胞培養におけるその産生を改善し、インビボでのその免疫原性を低減し、多重特異性抗体を作製するように更に改変されてもよく、かつ改変された標的結合配列を含む抗体が本発明のモノクローナル抗体でもあることを理解されたい。典型的には異なる決定基（エピトープ）に対して指向する異なる抗体を含むポリクローナル抗体製剤とは対照的に、モノクローナル抗体製剤のそれぞれのモノクローナル抗体は、１つの抗原上の単一の決定基に対して指向する。それらの特異性に加えて、モノクローナル抗体調製物は、それらが典型的には他の免疫グロブリンで汚染されていないという点で有利である。

【0066】

「脂質」は、水に完全にまたは少なくとも大部分は不溶性である（疎水性）が、極性が低いためにヘキサンなどの疎水性（または親油性）溶媒に非常によく溶解する、好ましくは天然の物質である。脂質は、好ましくは、脂肪酸、トリグリセリド（脂肪および脂肪油）、ワックス、リン脂質、スフィンゴ脂質、リポ多糖およびイソプレノイドからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、イソプレノイドはステロイドである。「ステロイド」は、炭化水素ステランの誘導体である。

【0067】

「活性医薬成分」は、何らかの薬理学的効果を提供し、病的状態または疾患を処置または予防するために使用される、任意の薬学的に活性な化学的または生物学的化合物および任意の薬学的に許容され得るその塩およびそれらの任意の混合物を含む。好ましくは、特に抗体－薬物－複合体（ＡＤＣ）との関連において、活性医薬成分は、アマニチンまたはマイタンシンなどの毒素または細胞毒素である。

【0068】

ポリエチレングリコール鎖、ポリプロピレングリコール鎖、混合ポリエチレン／ポリプロピレングリコール鎖という用語の意味は、当業者には明らかである。好ましくは、これらの鎖型のそれぞれは、１００～１０，０００Ｄａの範囲の平均分子量を有する。

【0069】

一実施形態によれば、複合体は、式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）または（ＩＩｃ）：

【化11】

【化12】

【化13】

（式中、Ｌ、ｎおよびＲ^６は上記と同じ意味を表し、Ｚ^１は－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－基または－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－基である。）を有する。

【0070】

一実施形態によれば、複合体は、式（ＩＩａ－１）、（ＩＩａ－２）、（ＩＩｂ－１）、（ＩＩｂ－２）、（ＩＩｃ－１）または（ＩＩｃ－２）：

【化14】

【化15】

【化16】

【化17】

【化18】

【化19】

（式中、（ＩＩａ－１）、（ＩＩａ－２）、（ＩＩｂ－１）、（ＩＩｂ－２）、（ＩＩｃ－１）または（ＩＩｃ－２）におけるＲ^６は上記と同じ意味を表す。）を有する。

【0071】

第３の態様－標的分子を修飾する方法
第３の態様では、本発明は、第２の態様による複合体を、１，３－双極子基または１，３－（ヘテロ）ジエン基を含む標的分子と反応させる、標的分子を修飾する方法に関する。

【0072】

反応は、本発明のシクロアルキン誘導体の、例えばアジド（ＳＰＡＡＣ）との歪み促進付加環化によって実施される。シクロオクチンと１，３－（ヘテロ）ジエンとの反応は、（ヘテロ）ディールス・アルダー反応としても知られている。これらの反応は、無金属クリック反応とも呼ばれる。アルコキシ置換コアは、市販の誘導体と比較して環化付加の速度を増加させる。標的分子との反応のために第２の態様による複合体を使用することは、環化付加のための銅触媒の必要性を回避する、すなわち、反応は、好ましくは銅触媒の非存在下で、より好ましくは触媒の非存在下で実施される。

【0073】

複合体に関しては、全ての定義が、第２の態様に関連するセクションで上述したように適用される。

【0074】

標的分子の修飾方法の一実施形態によれば、１，３－双極子基は、アジド、ニトロン、ジアゾアルカン、ジアゾアセトアミドおよびニトリルオキシドからなる群から選択され、好ましくはアジドである。

【0075】

標的分子の修飾方法の一実施形態によれば、１，３－ジエン基は、１，３－ブタジエン、１，３－シクロペンタジエン、１，３－シクロヘキサジエン、フランおよびピロールからなる群から選択される。

【0076】

標的分子の修飾方法の一実施形態によれば、１，３－ヘテロジエン基は、テトラジン、１－オキサ－１，３－ブタジエン、１－アザ－１，３－ブタジエン、２－アザ－１，３－ブタジエンおよび３－アザ－１，３－ブタジエンからなる群から選択される。

【0077】

修飾のための方法の一実施形態によれば、標的分子は、フルオロフォア、蛍光消光剤、色素、ハプテン、チラミン、ポリエチレングリコール鎖、ポリプロピレングリコール鎖、混合ポリエチレン／ポリプロピレングリコール鎖、金属錯体、放射性同位体、活性医薬成分、炭水化物、固相、脂質、アミノ酸、オリゴペプチド、ポリペプチド、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、およびポリヌクレオチドからなる群から選択され；好ましくはポリペプチド、より好ましくは抗体、より好ましくは１，３－双極子基を有する修飾抗体、より好ましくはアジド基を有する修飾抗体である。

【0078】

フルオロフォア、蛍光消光剤、色素、ハプテン、チラミン、ポリエチレングリコール鎖、ポリプロピレングリコール鎖、混合ポリエチレン／ポリプロピレングリコール鎖、金属錯体、放射性同位体、ステロイド、活性医薬成分、炭水化物、固相、アミノ酸、オリゴペプチド、ポリペプチド、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチドおよびポリヌクレオチドという用語の意味は、上で説明した通りである。

【0079】

いくつかの実施形態では、式（ＩＩ）の複合体のＲ^６は、フルオロフォア、蛍光消光剤、色素、ハプテン、チラミン、金属錯体、活性医薬化合物（薬物）、固相、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド、脂質、ポリペプチド、特に酵素または抗体、オリゴペプチド、ポリペプチドおよびポリエチレングリコールからなる群から選択され、好ましくは標的分子は、抗体、オリゴヌクレオチドおよびポリヌクレオチドからなる群から選択される。オリゴおよびポリヌクレオチドに関して、いくつかの実施形態では、これらがＬＮＡギャップマーまたはＬ－ＬＮＡ一本鎖のようなアンチセンスオリゴヌクレオチドであることが好ましい。したがって、第２の態様による複合体と標的分子（本明細書では「標的分子複合体」とも略される（以下の^第５の態様を参照））との反応から得られるまたは得ることが可能な複合体は、抗体金属錯体複合体、抗体薬物複合体、抗体オリゴヌクレオチド複合体、抗体固相複合体、抗体フルオロフォア複合体、抗体蛍光消光剤複合体、抗体ハプテン複合体、抗体酵複合体、抗体抗体抗体抗体抗体複合体、抗体ポリエチレングリコール複合体、オリゴヌクレオチドオリゴ－またはポリペプチド複合体、オリゴヌクレオチド脂質複合体、オリゴヌクレオチド固相複合体、チラミド色複合体などを含み得るが、これらに限定されない。抗体オリゴヌクレオチド複合体の例は、ＬＮＡギャップマー（Ｐ．Ｈ．Ｈａｇｅｄｏｒｎら，Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｔｏｄａｙ ２０１８，２３（１），１０１－１１４）またはＬ－ＬＮＡ一本鎖（国際公開第２０１９／２４３３９１号、国際公開第２０２０／２４５３７７号）のようなアンチセンスオリゴヌクレオチドで修飾された抗体であるが、これらに限定されない。抗体オリゴヌクレオチド複合体および標的化送達のためのそれらの使用は、例えば国際公開第２０２０／２４７７３８号に記載されている。抗体は上で定義した通りであり、より好ましくはＩｇＧおよびＦａｂ断片から選択される。

【0080】

第４の態様－複合体の使用
本発明の第４の態様は、標的分子の生体直交標識および／または修飾のための第２の態様による複合体の使用に関する。

【0081】

第２の態様に関連するセクションで上に与えられた全ての定義は、本明細書に記載された使用に関しても適用される。標的分子の選択肢または生体直交標識および／または修飾に関して、全ての定義は、第３の態様に関連するセクションにおいて上に与えられたように適用される。

【0082】

第５の態様－修飾標的分子
第５の態様では、本発明は、第２の態様による複合体の反応生成物を含む修飾標的分子、および第３の態様の方法から得られるかまたは得ることが可能な１，３－双極子基または１，３－（ヘテロ）ジエン基を含む標的分子に関する。

【0083】

第２の態様に関連するセクションで上に与えられた全ての定義は、本明細書に記載された使用に関しても適用される。標的分子の選択肢または生体直交標識および／または修飾に関して、全ての定義は、第３の態様に関連するセクションにおいて上に与えられたように適用される。

【0084】

第２の態様による複合体と、「標的分子複合体」とも略される１，３－双極子基または１，３－（ヘテロ）ジエン基を含む標的分子との反応生成物は、最新技術による参照ＤＢＣＯ複合体の反応生成物と比較して、バックグラウンドシグナル結合体の還元を可能にする。その理論に束縛されるものではないが、バックグラウンドシグナルの当該減少は、そうでなければ疎水性部分の親水化（スルホン化またはヒドロキシル化による）に起因し得ると仮定される。

【0085】

安定性試験により、最新技術による参照ＤＢＣＯコンジュゲートと比較して、本発明の標的分子コンジュゲートのＥＣＬシグナルがより高い回収率であることが明らかになった。

【0086】

第６の態様－キット
本発明の第６の態様は、第５の態様による修飾標的分子を検出試薬として含み、標的分子が好ましくは抗体であり、Ｒ^６が好ましくは金属錯体であり、適切な捕捉試薬であるキットに関する。

【0087】

第２の態様に関連するセクションで上に与えられた全ての定義は、本明細書に記載された使用に関しても適用される。標的分子の選択肢または生体直交標識および／または修飾に関して、全ての定義は、第３の態様に関連するセクションにおいて上に与えられたように適用される。

【0088】

上に示されるように、標的分子は、好ましくは抗体であり、抗体は、好ましくは、第３の態様に関連する第２のものにおいて上に定義される通りであり、より好ましくは、ＩｇＧおよびＦａｂ断片から選択される。上述したように、金属錯体は、第３の態様に関するセクションで上述したようなルテニウム（ＩＩ）系錯体またはイリジウム（ＩＩＩ）系錯体であることが好ましい。固相もまた、好ましくはキットの一部であり、当該固相は、第３の態様に関するセクションで上に定義される通りであり、好ましくはストレプトアビジンによるコーティングを有する。

【0089】

本発明は、以下の実施形態ならびに各従属および後方参考文献によって示される実施形態の組み合わせによって更に例示される。特に、実施形態の範囲が言及される各例において、例えば「実施形態１～４のいずれか１つのプロセス」などの用語の文脈において、この範囲内のすべての実施形態は、当業者に明示的に開示されることを意味する、すなわち、この用語の文言は、「実施形態１、２、３、および４のいずれか１つのプロセス」と同義であるとして当業者によって理解されるべきであることに留意されたい。

【0090】

１．式（Ｉ）

【化20】

（式中、
Ｒ^１、Ｒ^２は、独立して、
－［（ＣＨ_２）_ａＣＲ^ｘＲ^ｙ］_ｂＲ^ｚ基（式中、ａは、０または１～４の範囲の整数のいずれかであり、ｂは、０または１～３の範囲の整数のいずれかであり、Ｒ^ｘ、Ｒ^ｙ、Ｒ^ｚは、水素原子、Ｃ１～Ｃ３アルキル基および（ＣＨ_２）_ｃＳＯ_３ ^－基からなる群から独立して選択され、ｃは、０または１～４の範囲の整数のいずれかであり、Ｒ^ｘ、Ｒ^ｙ、Ｒ^ｚの少なくとも１つは、以下の条件を有する（ＣＨ_２）_ｃＳＯ_３ ^－基であり：
－Ｒ^ｚが（ＣＨ_２）_ｃＳＯ_３ ^－基であり、ｃが０である場合、Ｒ^ｘ、Ｒ^ｙは、いずれも（ＣＨ_２）_ｃＳＯ_３ ^－基ではなく、ｃは０であるか、または
－ａが０である場合、Ｒ^ｘおよびＲ^ｙは、いずれも（ＣＨ_２）_ｃＳＯ_３ ^－基ではなく、ｃは０である；
ならびに
^－－［ＣＲ^ｒＲ^ｓ］_ｄ－Ｒ^ｔ基（式中、ｄは１から１０の範囲から選択される整数であり、Ｒ^ｒは、水素原子、ヒドロキシル基および－［ＣＲ’（ＯＨ）］_ｅ－Ｈ基からなる群から選択され、Ｒ^ｓは水素原子または－［ＣＲ”（ＯＨ）］_ｆ－Ｈ基のいずれかであり、Ｒ^ｔは、水素原子、Ｃ１～Ｃ５アルキル基および－［ＣＲ”’（ＯＨ）］_ｇ－Ｈ基からなる群から選択され（各Ｒ’、Ｒ”、Ｒ”’は、独立して、水素原子または－［ＣＨ（ＯＨ）］_ｈ－Ｈ基のいずれかであり、ｄ、ｅ、ｆ、ｇおよびｈのそれぞれは、Ｒ^ｔが水素原子またはＣ１～Ｃ５アルキル基である場合、Ｒ^ｒ、Ｒ^ｓの少なくとも１つは水素原子ではないという条件で、独立して、１～１０の範囲から選択される整数である）；
Ｒ^３、Ｒ^４は、水素原子、Ｃ１～Ｃ３－アルキル基、ハロゲン原子および－Ｏ－Ｃ１～Ｃ３－アルキル基からなる群から独立して選択され；
Ｒ^５は、カルボキシル基、活性化カルボキシル基および－ＮＨＲ^５ａ基からなる群から選択され、Ｒ^５ａは水素原子またはＣ１～Ｃ５アルキル基であり；
Ｌは、主鎖を形成し、１～１００原子の範囲の長さを有する共有結合した原子の鎖（リンカー）を含み；
ｎは、Ｒ^５がカルボキシル基または活性化カルボキシル基である場合は０または１のいずれかであり、Ｒ^５が－ＮＨＲ^５ａ基である場合は１である。）のアザジベンゾシクロオクチン誘導体またはその塩。

【0091】

２．Ｒ^３、Ｒ^４が独立して水素原子またはメチル基であり、好ましくはＲ^３、Ｒ^４が同一であり、それぞれが水素原子である、実施形態１に記載のアザジベンゾシクロオクチン誘導体またはその塩。

【0092】

３．Ｒ^１、Ｒ^２が、それぞれ［（ＣＨ_２）_ａＣＲ^ｘＲ^ｙ］_ｂＲ^ｚ基であり、各Ｒ^１、Ｒ^２について、独立して、ａは０または１～４の範囲の整数のいずれかであり、ｂは０または１～３の範囲の整数のいずれかであり、Ｒ^ｘ、Ｒ^ｙ、Ｒ^ｚは、水素原子、Ｃ１～Ｃ３アルキル基および（ＣＨ_２）_ｃＳＯ_３ ^－基からなる群から選択され、ｃは０または１～４の範囲の整数のいずれかであり、Ｒ^ｘ、Ｒ^ｙ、Ｒ^ｚの少なくとも１つは、以下の条件を有する（ＣＨ_２）_ｃＳＯ_３ ^－基であり；
－Ｒ^ｚが（ＣＨ_２）_ｃＳＯ_３ ^－基であり、ｃが０である場合、Ｒ^ｘ、Ｒ^ｙは、いずれも（ＣＨ_２）_ｃＳＯ_３ ^－基ではなく、ｃは０であるか、または
－ａが０である場合、Ｒ^ｘおよびＲ^ｙは、いずれも（ＣＨ_２）_ｃＳＯ_３ ^－基ではなく、ｃは０である、実施形態１または２に記載のアザジベンゾシクロオクチン誘導体またはその塩。

【0093】

４．Ｒ^１、Ｒ^２が、それぞれ［（ＣＨ_２）_ａＣＲ^ｘＲ^ｙ］_ｂＲ^ｚ基であり、各Ｒ^１、Ｒ^２について、独立して、ａは０または１～４の範囲の整数のいずれかであり、ｂは０または１～３の範囲の整数のいずれかであり、Ｒ^ｘ、Ｒ^ｙ、Ｒ^ｚは水素原子および（ＣＨ_２）_ｃＳＯ_３ ^－基からなる群から選択され、ｃは０または１～４の範囲の整数のいずれかであり、
Ｒ^ｘ、Ｒ^ｙ、Ｒ^ｚの少なくとも１つは、以下の条件を有する（ＣＨ_２）_ｃＳＯ_３ ^－基であり：
－Ｒ^ｚが（ＣＨ_２）_ｃＳＯ_３ ^－基であり、ｃが０である場合、Ｒ^ｘ、Ｒ^ｙは、いずれも（ＣＨ_２）_ｃＳＯ_３ ^－基ではなく、ｃは０であるか、または
－ａが０である場合、Ｒ^ｘおよびＲ^ｙは、いずれも（ＣＨ_２）_ｃＳＯ_３ ^－基ではなく、ｃは０である、実施形態１～３のいずれか一項に記載のアザジベンゾシクロオクチン誘導体またはその塩。

【0094】

５．Ｒ^１、Ｒ^２が同一であり、いずれも－（ＣＨ_２）_ａＣＲ^ｘＲ^ｙ］_ｂＲ^ｚ基であり、ｂが０または１である、実施形態１～４のいずれか一項に記載のアザジベンゾシクロオクチン誘導体またはその塩。

【0095】

６．Ｒ^１、Ｒ^２が、それぞれ－［ＣＲ^ｒＲ^ｓ］_ｄ－Ｒ^ｔ基であり、各Ｒ^１、Ｒ^２について、独立して、Ｒ^ｒは、水素原子、ヒドロキシル基および－［ＣＨ（ＯＨ）］_ｅ－Ｈからなる群から選択され、Ｒ^ｓは、水素原子または－［ＣＨ（ＯＨ）］_ｆ－Ｈ基のいずれかであり、Ｒ^ｔは、水素原子、Ｃ１～Ｃ５アルキルおよび－［ＣＨ（ＯＨ）］_ｇ－Ｈ基からなる群から選択され、ここで、ｄ、ｅ、ｆ、ｇのそれぞれは、Ｒ^ｔが水素原子またはＣ１～Ｃ５アルキル基である場合、Ｒ^ｒ、Ｒ^ｓの少なくとも１つは水素原子ではないという条件で、独立して、１～１０の範囲から選択される整数である、実施形態１または２に記載のアザジベンゾシクロオクチン誘導体またはその塩。

【0096】

７．Ｒ^１、Ｒ^２が同一であり、それぞれ－［ＣＨ（ＯＨ）］_ｄ－Ｈ基であり、ｄが１～１０の範囲であり、好ましくは１～５の範囲から選択される整数であり、より好ましくはｄが２または３である、実施形態１、２または６のいずれか一項に記載のアザジベンゾシクロオクチン誘導体またはその塩。

【0097】

８．Ｒ^５が活性化カルボキシル基であり、Ｒ^５の活性化基が４－ニトロフェニル基、ペンタフルオロフェニル基およびＮ－スクシンイミジル基からなる群から選択され、好ましくはＮ－スクシンイミジル基である、実施形態１～７のいずれか一項に記載のアザジベンゾシクロオクチン誘導体またはその塩。

【0098】

９．Ｌが、構造－（ＣＨ_２）_ｐ－（Ｘ）_ｍ－（ＣＨ_２）_ｑ－であり、
ｐ、ｑが、独立して、２～１０の範囲から選択される整数であり；
Ｘが、－Ｃ（＝Ｙ）－ＮＨ－、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｙ）－、－Ｃ（＝Ｙ）－Ｏ－および－Ｏ－Ｃ（＝Ｙ）－（式中、Ｙは酸素原子または硫黄原子である）からなる群から選択され；
ｍが、０または１である［ｍが０である場合、Ｘは存在せず、（ＣＨ_２）_ｐ、（ＣＨ_２）_ｑは単結合によって直接接続されている］、実施形態１～８のいずれか一項に記載のアザジベンゾシクロオクチン誘導体またはその塩。

【0099】

１０．ｍが１であり、Ｘが－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－基であり、および／またはｐ、ｑが同一であり、いずれも２～５、好ましくは２または３の範囲から選択される整数である、実施形態９に記載のアザジベンゾシクロオクチン誘導体またはその塩。

【0100】

１１．式（Ｉａ）、（Ｉｂ）または（Ｉｃ）：

【化21】

【化22】

【化23】

（式中、Ｌ、ｎおよびＲ^５は、実施形態１～９のいずれか一項で定義されるとおりである）を有する、実施形態１～１０のいずれか一項に記載のアザジベンゾシクロオクチン誘導体またはその塩。

【0101】

１２．式（Ｉａ－１）、（Ｉｂ－１）または（Ｉｃ－１）：

【化24】

（式中、Ｒ^５は、実施形態１～９のいずれか一項で定義されるとおりである）、実施形態１～１１のいずれか一項に記載のアザジベンゾシクロオクチン誘導体またはその塩。

【0102】

１３．式（Ｉａ－１）または（Ｉｂ－１）、好ましくは（Ｉａ－１）を有する、実施形態１～１２のいずれか一項に記載のアザジベンゾシクロオクチン誘導体またはその塩。

【化25】

【化26】

【0103】

１４．式（ＩＩ）

【化27】

（式中、Ｌ、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４およびｎは、式（Ｉ）のアザジベンゾシクロオクチン誘導体またはその塩について、実施形態１～１３のいずれか一項で定義されるとおりであり；
Ｒ^６は、フルオロフォア、蛍光消光剤、色素、ハプテン、チラミン、ポリエチレングリコール鎖、ポリプロピレングリコール鎖、混合ポリエチレン／ポリプロピレングリコール鎖、金属錯体、放射性同位体、活性医薬成分、炭水化物、固相、脂質、アミノ酸、オリゴペプチド、ポリペプチド、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチドおよびポリヌクレオチドからなる群から選択され；好ましくは金属錯体であり；
Ｚは、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－、Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^７－、および－ＮＲ^７－Ｃ（＝Ｙ）－からなる群から選択され、Ｒ^７は、水素原子またはＣ１～Ｃ５アルキル基であり、Ｙは酸素原子または硫黄原子であり、好ましくは酸素原子である。）の複合体。

【0104】

１５．Ｒ^６が、フルオロフォア、蛍光消光剤、色素、ハプテン、チラミン、金属錯体、放射性同位体、活性医薬成分（薬物）、炭水化物、固相、脂質、アミノ酸、オリゴペプチド、ポリペプチド、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチドおよびポリヌクレオチドからなる群から選択され、好ましくは金属錯体であり、好ましくはアルキル鎖、ポリエチレングリコール鎖、ポリプロピレングリコール鎖および混合ポリエチレン／ポリプロピレングリコール鎖からなる群から選択されるさらなるリンカーがＺとＲ^６との間に存在するか、または存在しない、実施形態１４に記載の式（ＩＩ）の複合体。

【0105】

１６．式（ＩＩａ）または（ＩＩｂ）または（ＩＩｃ）；

【化28】

【化29】

【化30】

（式中、Ｌ、ｎおよびＲ^６、は実施形態１４または１５で定義されるとおりであり、Ｚ^１は－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－基または－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－基である。）を有する、実施形態１４または１５に記載の複合体。

【0106】

１７．式（ＩＩａ－１）、（ＩＩａ－２）、（ＩＩｂ－１）、（ＩＩｂ－２）、（ＩＩｃ－１）または（ＩＩｃ－２）：

【化31】

【化32】

【化33】

【化34】

【化35】

【化36】

（式中、（ＩＩａ－１）、（ＩＩａ－２）、（ＩＩｂ－１）、（ＩＩｂ－２）、（ＩＩｃ－１）または（ＩＩｃ－２）におけるＲ^６は、実施形態１４～１６のいずれか一つで定義される通りである。）を有する、実施形態１４～１６のいずれか一項に記載の複合体。

【0107】

１８．実施形態１４～１７のいずれか一項に記載の複合体を、１，３－双極子基または１，３－（ヘテロ）ジエン基を含む標的分子と反応させる、標的分子を修飾する方法。

【0108】

１９．１，３－双極子基が、アジド、ニトロン、ジアゾアルカン、ジアゾアセトアミドおよびニトリルオキシドからなる群から選択され、好ましくはアジドである、実施形態１８に記載の方法。

【0109】

２０．１，３－ジエン基が、１，３－ブタジエン、１，３－シクロペンタジエン、１，３－シクロヘキサジエン、フランおよびピロールからなる群から選択される、実施形態１８に記載の方法。

【0110】

２１．１，３－ヘテロジエン基が、テトラジン、１－オキサ－１，３－ブタジエン、１－アザ－１，３－ブタジエン、２－アザ－１，３－ブタジエンおよび３－アザ－１，３－ブタジエンからなる群から選択される、実施形態１８に記載の方法。

【0111】

２２．標的分子が、フルオロフォア、蛍光消光剤、色素、ハプテン、チラミン、ポリエチレングリコール鎖、ポリプロピレングリコール鎖、混合ポリエチレン／ポリプロピレングリコール鎖、金属錯体、放射性同位体、活性医薬成分、炭水化物、固相、脂質、アミノ酸、オリゴペプチド、ポリペプチド、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、およびポリヌクレオチドからなる群から選択され；好ましくはポリペプチド、より好ましくは抗体、より好ましくは１，３－双極子基を有する修飾抗体、より好ましくはアジド基を有する修飾抗体である、実施形態１８～２１のいずれか一項に記載の方法。

【0112】

２３．標的分子の生体直交標識および／または修飾のための、実施形態１４～１７のいずれか一項に記載の複合体の使用。

【0113】

２４．実施形態１４～１７のいずれか一項に記載の複合体と、実施形態１８～２２のいずれか一項に記載の方法から得られるか、または得ることが可能な１，３－双極子基または１，３－（ヘテロ）ジエン基を含む標的分子との反応生成物を含む修飾標的分子。

【0114】

２５．実施形態２４に記載の修飾標的分子を検出試薬として含み、標的分子が好ましくは抗体であり、Ｒ^６が好ましくは金属錯体であり、適切な捕捉試薬であるキット。

【0115】

実施例
以下の実施例は、単に本発明を例示するものにすぎない。いかなる場合でも、それらは本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。

【0116】

実験手順：

【化37】

アニリン１：ｍ－アニシジン（２．４８ｍｌ、２２．０ｍｍｏｌ）およびｍ－アニスアルデヒド（２．４４ｍｌ、２０ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２００ｍｌ）中溶液を室温で１．５時間撹拌後、ＮａＢＨ_４（２．２６ｇ、６０．０ｍｍｏｌ）を添加し、反応物をその温度でさらに１．５時間撹拌した。水（１００ｍｌ）を添加し、混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機相を１Ｍ ＮａＯＨ、水および食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、減圧濃縮した。得られた残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝５：１、Ｒ_ｆ＝０．３）によって精製し、アニリン１（４．４７ｇ、１８．４ｍｍｏｌ、９２％）を黄色がかった油状物として得た。

【0117】

Ｒ_ｆ＝０．３［ヘキサン／ＥｔＯＡｃ，５：１］．
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ＝７．２５（ｔ，Ｊ＝７．８４ Ｈｚ，１Ｈ），７．０７（ｔ，Ｊ＝８．０９ Ｈｚ，１Ｈ），６．９５（ｄｄ，Ｊ＝７．５３，０．６３ Ｈｚ，１Ｈ），６．９２（ｍ，１Ｈ），６．８１（ｍ，１Ｈ），６．２７（ｄｄｄｄ，Ｊ＝１１．２６，８．１３，２．３２，０．７５ Ｈｚ，２Ｈ），６．１９（ｔ，Ｊ＝２．２６ Ｈｚ，１Ｈ），４．２９（ｓ，２Ｈ），４．０５（ｂｒｓ，１Ｈ），３．７９（ｓ，３Ｈ），３．７５（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ．
^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝１８０．８，１５９．９，１４９．５，１４１．０，１３０．０，１２９．６，１１９．７，１１３．０，１１２．７，１０６．０，１０２．７，９８．９，５５．２，５５．１，４８．３ ｐｐｍ．
ＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_１５Ｈ_１８ＮＯ_２ ^＋について計算値：２４４．１［Ｍ＋Ｈ］^＋
実測値 ２４４．４［Ｍ＋Ｈ］^＋．

【化38】

アシルアミン２：ＤＩＰＥＡ（４．３１ｍｌ、２４．７ｍｍｏｌ）を、アニリン１（３．００ｇ、１２．３ｍｍｏｌ）、グルタル酸モノメチル（２．０１ｍｌ、１６．７ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（６．３５ｇ、１６．７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３１ｍｌ）中溶液に添加し、反応物を室温で３日間撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、１Ｍ ＨＣｌ、水および食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、減圧濃縮した。得られた残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：１）によって精製し、アシルアミン２（４．４２ｇ、１１．９ｍｍｏｌ、９７％）を淡黄色油状物として得た。

【0118】

Ｒ_ｆ＝０．４［ヘキサン／ＥｔＯＡｃ，１：１］。

【0119】

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ＝７．１９（ｍ，２Ｈ），６．８２（ｄｄ，Ｊ＝８．３４，２．２ Ｈｚ，１Ｈ），６．７５（ｍ，３Ｈ），６．５５（ｂｒｄ，Ｊ＝７．５３ Ｈｚ，１Ｈ），６．４８（ｍ，１Ｈ），４．８１（ｓ，２Ｈ），３．７４（ｓ，３Ｈ），３．７０（ｓ，３Ｈ），３．５９（ｓ，３Ｈ），２．３０（ｔ，Ｊ＝７．３４ Ｈｚ，２Ｈ），２．１５（ｔ，Ｊ＝７．２２ Ｈｚ，２Ｈ），１．９２（ｑ，Ｊ＝７．２２ Ｈｚ，２Ｈ）ｐｐｍ．
^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝１７３．６，１７１．９，１６０．３，１５９．６，１４３．３，１３９．１，１３０．２，１２９．３，１２１．１，１２０．６，１１４．１，１１３．５，１１３．０，５５．３，５５．２，５２．８，５１．４，３３．２４，３３．１６，２０．７ ｐｐｍ．
ＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_２１Ｈ_２６ＮＯ_５ ^＋について計算値：３７２．２［Ｍ＋Ｈ］^＋
実測値 ３７２．４［Ｍ＋Ｈ］^＋．

【化39】

シクロオクテン３：テトラクロロシクロプロペン（０．８０ｍｌ、６．５５ｍｍｏｌ）をＡｌＣｌ_３（３．１７ｇ、２３．８ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２（５０ｍｌ）中の懸濁液に滴下し、反応物を室温で１５分間撹拌した。その溶液を－７８℃に冷却し、アシルアミン２（２．２１ｇ、５．９５ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２中溶液をゆっくりと添加した。反応物を室温に一晩加温した後、水（４５ｍｌ）を添加し、反応物を室温で３０分間撹拌した。混合物をＣＨ_２Ｃｌ_２で抽出し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、減圧濃縮した。得られた残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ、１００：１、Ｒ_ｆ＝０．４）によって精製し、シクロオクテン３（１．１３ｇ、２．６７ｍｍｏｌ、４５％）を黄色油状物として得た。

【0120】

Ｒ_ｆ＝０．４［ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ，１００：１］。

【0121】

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ＝８．０２（ｄ，Ｊ＝８．８３ Ｈｚ，１Ｈ），７．９０（ｄ，Ｊ＝８．５１ Ｈｚ，１Ｈ），７．２６，（ｄ，Ｊ＝２．５２ Ｈｚ，１Ｈ），７．０６（ｄｄ，Ｊ＝８．５１，２．５２ Ｈｚ，１Ｈ），６．９６（ｄｄ，Ｊ＝８．３５，２．６８ Ｈｚ，１Ｈ），６．８９（ｄ，Ｊ＝２．５２ Ｈｚ，１Ｈ），５．１８（ｄ，Ｊ＝１４．５ ｈｚ，１Ｈ），４．１０（ｄ，Ｊ＝１４．２ Ｈｚ，１Ｈ），３．９３（ｓ，３Ｈ），３．９２（ｓ，３Ｈ），３．５６（ｓ，３Ｈ），２．３３（ｍ，１Ｈ），２．１４（ｍ，１Ｈ），２．００（ｍ，１Ｈ），１．９３（ｍ，１Ｈ），１．７５（ｍ，２Ｈ）ｐｐｍ．
^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝１７３．２，１７２．６，１６３．１，１６２．７，１５２．５，１４６．０，１４３．２，１４１．６，１３９．０，１３５．８，１３５．２，１１８．２，１１５．５，１１５．３，１１４．９，１１３．９，１１３．７，５６．１，５５．９，５５．６，５１．５，３３．５，３２．６，２０．６ ｐｐｍ．
ＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_２４Ｈ_２４ＮＯ_６ ^＋について計算値：４２２．２［Ｍ＋Ｈ］^＋
実測値：４２２．４［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0122】

【化40】

アミン４：４－アミノ酪酸（５．００ｇ、４８．５ｍｍｏｌ）のＳＯＣｌ_２（３５ｍｌ、４８５ｍｍｏｌ）中溶液を室温で２時間撹拌し、減圧濃縮した。ＮａＨＣＯ_３（８．９５ｇ、１０７ｍｍｏｌ）およびｔ－ＢｕＯＨ（１０５ｍｌ）を添加し、得られた懸濁液を室温で一晩撹拌した。全ての揮発性物質を減圧下で除去し、残渣をＥｔＯＡｃと１Ｍ ＮａＯＨとの間で分割した。有機相を水および食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、減圧濃縮して、アミン４（１．５０ｇ、９．３９ｍｍｏｌ、１９％）を淡褐色油状物として得た。

【0123】

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ＝２．７２（ｔ，Ｊ＝７．０３ Ｈｚ，２Ｈ），２．２７（ｔ，Ｊ＝７．４７ Ｈｚ，２Ｈ），１．７３（ｑ，Ｊ＝７．２２ Ｈｚ，２Ｈ），１．４５（ｓ，３Ｈ），１．２６（ｂｒｓ，２Ｈ）ｐｐｍ．
^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝１７２．９，８０．２，４１．６，３３．０，２９．１，２８．１ ｐｐｍ．

【化41】

アミド５：ＢＢｒ_３（ＣＨ_２Ｃｌ_２中１．０Ｍ、２６．６ｍｌ、２６．６ｍｍｏｌ）を、シクロオクタン３（１．１２ｇ、２．６６ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２（１２８ｍｌ）中溶液にゆっくり添加し、溶液を－７８℃で１時間、および室温で４８時間撹拌した。反応物を水でクエンチし、４Ｍ ＮａＯＨで塩基性化し、ＣＨ_２Ｃｌ_２で洗浄した。（この段階で２つの等しいバッチを合わせた。）水層を、濃ＨＣｌで酸性化し、得られた沈殿物を回収した。水相をＥｔＯＡｃで抽出し、合わせた有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、フィルタにかけ、減圧濃縮した。固体を合わせ、ＭｅＯＨ（１３ｍｌ）、ＴＨＦ（１３ｍｌ）および１Ｍ ＮａＯＨ（２１ｍｌ）に溶解し、室温で３時間撹拌した。反応混合物を濃ＨＣｌで酸性化し、得られた沈殿物を回収した。水相をＥｔＯＡｃで抽出し、有機相を合わせ、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、フィルタにかけ、減圧濃縮した。合わせた固体（１．０６ｇ）およびアミン４（８５２ｍｇ、５．３５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２８７ｍｌ）に溶解した。ＨＡＴＵ（２．０３ｇ、５．３５ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（３．７３ｍｌ、２１．４ｍｍｏｌ）を順次添加し、得られた混合物を室温で２０時間撹拌し、減圧濃縮した。得られた残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ_２Ｃｌ_２中６％ＭｅＯＨ）によって精製し、アミド５（１．１４ｇ、２．１８ｍｍｏｌ、３段階で４１％）を淡褐色固体として得た。

【0124】

Ｒ_ｆ＝０．３［ＭｅＯＨ／ＣＨ_２Ｃｌ_２，６：９４］。

【0125】

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ｄ_４－ＭｅＯＨ）δ＝７．９１（ｄ，Ｊ＝８．５１ Ｈｚ，１Ｈ），７．７７（ｄ，Ｊ＝８．２ Ｈｚ，１Ｈ），７．１４（ｄ，Ｊ＝２．２１ Ｈｚ，１Ｈ），７．０１（ｄｄ，Ｊ＝８．５１，２．２１ Ｈｚ，１Ｈ），６．９３（ｄ，Ｊ＝２．２１ Ｈｚ，１Ｈ），６．８７（ｄｄ，Ｊ＝８．３５，２．３６ Ｈｚ，１Ｈ），５．１０（ｄ，Ｊ＝１４．８２ Ｈｚ，１Ｈ），４．２１（ｄ，Ｊ＝１４．５ Ｈｚ，１Ｈ），３．０６（ｍ，２Ｈ），２．３１（ｍ，１Ｈ），２．１８（ｔ，Ｊ＝７．４１ Ｈｚ，２Ｈ），１．９３（ｍ，３Ｈ），１．６５（ｍ，４Ｈ），１．４３（ｓ，９Ｈ）ｐｐｍ．
^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝１７５．３，１７５．０，１７４．４，１６４．１，１６３．３，１５４．６，１４８．０，１４４．４，１４２．５，１３８．９，１３７．０，１３６．４，１２０．９，１１７．８，１１７．４，１１６．５，１１５．１，１１４．５，８１．７，５７．２，３９．７，３５．９，３５．０，３３．８，２８．５，２６．０，２２．８ ｐｐｍ．
ＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_２９Ｈ_３３Ｎ_２Ｏ_７ ^＋について計算値：５２１．２［Ｍ＋Ｈ］^＋
実測値 ５２１．３［Ｍ＋Ｈ］^＋．

【化42】

アセトニド６：ＤＥＡＤ（ＰｈＭｅ中４０％、１．７５ｍｌ、３．０８ｍｍｏｌ）を、アミド５（４００ｍｇ、０．７６８ｍｍｏｌ）、ＰＰｈ_３（８０８ｍｇ、３．０８ｍｍｏｌ）および（Ｒ）－（－）－２，２－ジメチル－１，３－ジオキソラン－４－メタノール（０．３８ｍｌ、３．０８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２０ｍｌ）中攪拌溶液に滴加した後、反応物を室温で２０時間攪拌し、減圧濃縮した。得られた残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ_２Ｃｌ_２中３０～６０％アセトン）によって精製し、アセトニド６（４７８ｍｇ、０．６３８ｍｍｏｌ、８３％）を淡白色固体として得た。

【0126】

Ｒ_ｆ＝０．５［アセトン／ＣＨ_２Ｃｌ_２，１：１］。

【0127】

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ＝７．９８（ｄ，Ｊ＝８．７１ Ｈｚ，１Ｈ），７．８７（ｄ，Ｊ＝８．３１ Ｈｚ，１Ｈ），７．２５（ｍ，１Ｈ），７．０６（ｄ，Ｊ＝８．７１ Ｈｚ，１Ｈ），６．９６（ｍ，２Ｈ），５．９６（ｂｒｓ，１Ｈ），５．１２（ｄ，Ｊ＝１４．２５ Ｈｚ，１Ｈ），４．５０（ｍ，２Ｈ），４．１４（ｍ，６Ｈ），４．０５（ｄ，Ｊ＝１５．０４ Ｈｚ，１Ｈ），３．９２（ｍ，２Ｈ），３．１６（ｍ，２Ｈ），２．３３（ｍ，１Ｈ），２．２０（ｔ，Ｈｚ＝７．１２ Ｈｚ，２Ｈ），１．９９（ｍ，１Ｈ），１．９１（ｍ，２Ｈ），１．７０（ｍ，４Ｈ），１．４５（ｓ，６Ｈ），１．４０（ｍ，１５Ｈ）ｐｐｍ．
^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝１７２．８，１７２．７，１７２．４，１６２．１，１６１．６，１５２．４，１４５．８，１４３．３，１４１．６，１３９．３，１３５．８，１３５．２，１１８．８，１１５．８，１１５．２，１１４．７，１１４．２，１１０．１，１０９．９，８０．６，７９．７７，７３．７４，７３．７０，６９．４，６９．０，６６．６，６６．５，５６．１，３９．１，３４．８，３３．５，３２．９，３０．９，２９．３，２８．１，２６．８，２５．３２，２５．２７，２４．６ ｐｐｍ．
ＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_４１Ｈ_５３Ｎ_２Ｏ_１１ ^＋について計算値：７４９．４［Ｍ＋Ｈ］＋
実測値：７４９．４［Ｍ＋Ｈ］＋。

【0128】

【化43】

アルキン７：ｉＰｒ_３ＳｉＨ（０．２０ｍｌ）、水（０．２ｍｌ）およびＴＦＡ（６ｍｌ）を、アセトニド６（４００ｍｇ、０．５３４ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２（２ｍｌ）中溶液に添加した。反応物を室温で６時間撹拌し、濃縮した。残渣をＭｅＯＨ（２０ｍｌ）に溶解し、ＤＩＰＥＡ（０．９４ｍｌ）を添加し、反応物に２時間照射し（３６０ｎｍ）、濃縮した。残渣をＭｅＯＨ（３ｍｌ）および１Ｍ ＮａＯＨ（２ｍｌ）に溶解し、室温で１時間撹拌した。反応混合物を逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィー（ＹＭＣ－Ｔｒｉａｒｔ Ｃ１８、Ｈ_２Ｏ中２９～４５％ ＭｅＣＮ、０．１％ ＴＦＡ、３０分かけて）に直接供し、アルキン７（２１５ｍｇ、０．３６８ｍｍｏｌ、３段階で６９％）を白色固体として得た。

【0129】

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ｄ_４－ＭｅＯＨ）δ＝７．２９（ｄ，Ｊ＝８．３９ Ｈｚ，１Ｈ），７．２７．（ｄ，Ｊ＝２．２９ Ｈｚ，１Ｈ），７．１２（ｍ，２Ｈ），７．０３（ｄｄ，Ｊ＝８．５６，２．４８ Ｈｚ，１Ｈ），６．９０（ｄｄ，Ｊ＝８．３９，２．２９ Ｈｚ，１Ｈ），５．０４（ｄ，Ｊ＝１３．７３ Ｈｚ，１Ｈ），４．１３（ｍ，２Ｈ），４．０４（ｍ，２Ｈ），３．９９（ｍ，２Ｈ），３．６８（ｍ，５Ｈ），３．０９（ｔ，Ｊ＝７．０６ Ｈｚ，２Ｈ），２．３１（ｍ，１Ｈ），２．２５（ｔ，Ｊ＝７．４４ Ｈｚ，２Ｈ），１．９５（ｍ，３Ｈ），１．６８（ｍ，４Ｈ）ｐｐｍ．
^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ ＭＨｚ，ｄ_４－ＭｅＯＨ）：δ＝１７７．０，１７５．４，１７５．１，１６０．７，１６０．３，１５３．８，１５１．１，１２８．５，１２７．３，１２０．５１，１２０．４５，１１７．７，１１６．９，１１６．２，１１５．９，１１５．０，１１４．７，１０７．９，７１．９，７１．８，７１．４，７０．７，６４．３，６４．２，５７．０，３９．８，３６．１，３５．２，３２．４，２５．９，２２．９ ｐｐｍ．
ＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_３０Ｈ_３７Ｎ_２Ｏ_１０ ^＋について計算値：５８５．２［Ｍ＋Ｈ］^＋
実測値：５８５．４［Ｍ＋Ｈ］^＋．

【化44】

ＮＨＳ－エステル８：ＤＩＰＥＡ（３１μＬ、０．１７６ｍｍｏｌ）を、アルキン７（４３ｍｇ、０．０７４ｍｍｏｌ）およびＴＳＴＵ（４４ｍｇ、０．１４７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２ｍｌ）中溶液に添加し、溶液を室温で２時間撹拌した。反応物を減圧濃縮し、得られた残渣を逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィー（ＹＭＣ－Ｔｒｉａｒｔ Ｃ１８、Ｈ_２Ｏ中３２～４８％ ＭｅＣＮ、０．１％ ＴＦＡ、３０分かけて）によって精製し、ＮＨＳ－エステル８（３１ｍｇ、０．０４５ｍｍｏｌ、６１％）を白色固体として得た。

【0130】

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ｄ_４－ＭｅＯＨ）δ＝７．３０（ｄ，Ｊ＝８．５３ Ｈｚ，１Ｈ），７．２７（ｄ，Ｊ＝２．３８ Ｈｚ，１Ｈ），７．１３（ｍ，２Ｈ），７．０３（ｄｄ，Ｊ＝８．５３，２．５１ Ｈｚ，１Ｈ），６．９０（ｄｄ，Ｊ＝８．４１，２．５１ Ｈｚ，１Ｈ），５．０４（ｄ，Ｊ＝１３．９３ Ｈｚ，１Ｈ），４．１１（ｍ，２Ｈ），４．００（ｍ，４Ｈ），３．７０（ｄ，Ｊ＝９．１６ Ｈｚ，１Ｈ），３．６６（ｍ，４Ｈ），３．１６（ｔ，Ｊ＝，６．８４ Ｈｚ，２Ｈ），２．８０（ｓ，４Ｈ），２．６０（ｔ，Ｊ＝７．４ Ｈｚ，２Ｈ），２．２７（ｍ，１Ｈ），１．９３（ｍ，３Ｈ），１．７９（ｑ，Ｊ＝７．１２ Ｈｚ，２Ｈ），１．６５（ｍ，２Ｈ）ｐｐｍ．
^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ ＭＨｚ，ｄ_４－ＭｅＯＨ）：δ＝１７４．０，１７３．５，１７０．４，１６８．５，１５９．１，１５８．７，１５５．９，１５２．２，１４９．５，１２７．３，１２７．０，１２５．７，１１９．５，１１８．９，１１６．１，１１５．３，１１４．６，１１４．３，７０．３，７０．２，６９．５，６２．７，６２．６，５５．４，３７．８，３４．５，３３．６，２７．７，２５．１，２４．０，２１．３ ｐｐｍ．
ＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_３４Ｈ_４０Ｎ_３Ｏ_１２ ^＋について計算値：６８２．３［Ｍ＋Ｈ］＋
実測値：６８２．４［Ｍ＋Ｈ］＋．

【化45】

スルホン酸９：アミド５（１００ｍｇ、０．１９２ｍｍｏｌ）、Ｋ_２ＣＯ_３（１５９ｍｇ、１．１５ｍｍｏｌ）および２－ブロモエタンスルホン酸ナトリウム（２４３ｍｇ、１．１５ｍｍｏｌ）のＭｅＣＮ（２．８ｍｌ）中懸濁液を８０℃で５日間撹拌した。逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィー（ＹＭＣ－Ｔｒｉａｒｔ Ｃ１８、Ｈ_２Ｏ中２３～３９％ＭｅＣＮ、０．１％ ＴＦＡ、３０分にわたって）によって反応混合物を精製し、スルホン酸９（１０４ｍｇ、０．１３１ｍｍｏｌ、６８％）を白色固体として得た。

【0131】

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ｄ_４－ＭｅＯＨ）δ＝７．９２（ｄ，Ｊ＝８．５１ Ｈｚ，１Ｈ），７．７６（ｄ，Ｊ＝８．５１ Ｈｚ，１Ｈ），７．２６（ｄ，Ｊ＝１．８９ Ｈｚ，１Ｈ），７．１９（ｄ，Ｊ＝２．２１ Ｈｚ，１Ｈ），７．１４（ｄｄ，Ｊ＝８．５１，２．２１ Ｈｚ，１Ｈ），６．９８（ｄｄ，Ｊ＝８．５１，１．８９ Ｈｚ，１Ｈ），５．１０（ｄ，Ｊ＝１４．５ Ｈｚ，１Ｈ），４．４３（ｍ，４Ｈ），４．１３（ｄ，Ｊ＝１４．５ Ｈｚ，１Ｈ），３．２４（ｍ，５Ｈ），３．１０（ｔ，Ｊ＝６．９４ Ｈｚ，２Ｈ），２．３８（ｍ，１Ｈ），２．２１（ｔ，Ｊ＝７．２５ Ｈｚ，１Ｈ），２．１２（ｍ，１Ｈ），２．０７（ｍ，１Ｈ），１．８４（ｍ，１Ｈ），１．６２（ｍ，４Ｈ），１．３３（ｓ，５Ｈ），１．３３（ｓ，５．５Ｈ）１．１３（ｓ，２Ｈ９，１．０９（ｓ，０．５Ｈ）ｐｐｍ（回転異性体の混合物）．
^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ ＭＨｚ，ｄ_４－ＭｅＯＨ）：δ＝１７７．０，１７６．９，１７４．８，１７４．１，１７３．７，１６３．９，１６３．２，１５４．３，１４７．４，１４４．０，１４３．０，１３９．６，１３６．６，１３６．１，１１９．９，１１７．０，１１６．３，１１５．６，１１５．２，８１．５，６５．７，６５．２，５６．９，５１．５，５１．３，４０．７，４０．６，３６．７，３４．６３，３４．５５，３３．２，３１．７，３１．０，２８．２，２７．１，２４．９，２４．８，２２．４３，２２．３９ ｐｐｍ（回転異性体の混合物）．
ＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_３３Ｈ_４１Ｎ_２Ｏ_１３Ｓ_２ ^＋について計算値：７３７．２［Ｍ＋Ｈ］＋
実測値：７３７．４［Ｍ＋Ｈ］＋．

【化46】

カルボン酸１０：：スルホン酸９（８４ｍｇ、０．１０５ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２（０．８３ｍｌ）、ｉＰｒ_３ＳｉＨ（０．０８ｍｌ）、水（０．０８ｍｌ）およびＴＦＡ（２．５ｍｌ）中溶液を室温で２時間撹拌し、減圧濃縮した。残渣をアセトンおよびＭｅＣＮと２回共蒸発させた。得られた残渣をＭｅＯＨ（６．７ｍｌ）およびＤＩＰＥＡ（０．４０ｍｌ）に溶解し、１．５時間照射し（３６０ｎｍ）、減圧濃縮した。得られた残渣を逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィー（ＹＭＣ－Ｔｒｉａｒｔ Ｃ１８、Ｈ_２Ｏ中２２～３８％ ＭｅＣＮ、０．１％ ＴＦＡ、３０分にわたって）によって精製して、カルボン酸１０（４１ｍｇ、０．０４５ｍｍｏｌ、２段階で４３％）を白色固体として得た。

【0132】

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ｄ_４－ＭｅＯＨ）δ＝７．２９（ｄ，Ｊ＝８．５３ Ｈｚ，１Ｈ），７．２５（ｄ，Ｊ＝２．２６ Ｈｚ，１Ｈ），７．１５（ｄ，Ｊ＝２．３８ Ｈｚ，１Ｈ），７．１２（ｄ，Ｊ＝８．４１ Ｈｚ，１Ｈ）），７．０３（ｄｄ，Ｊ＝８．６０，２．４５ Ｈｚ，１Ｈ），６．９０（ｄｄ，Ｊ＝８．５３，２．３８ Ｈｚ，１Ｈ），５．０４（ｄ，Ｊ＝１４．０５ Ｈｚ，１Ｈ），４．４２（ｍ，５Ｈ），３．６９（ｓｐｔ，Ｊ＝６．６１ Ｈｚ，４Ｈ），３．２９（ｍ，４Ｈ），３．１８（ｍ，６Ｈ），２．３０（ｍ，４Ｈ），２．０７（ｍ，１Ｈ），１．９０（ｍ １Ｈ），１．７３（ｍ，４Ｈ），１．３４（ｍ，３０Ｈ）ｐｐｍ．
^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ ＭＨｚ，ｄ_４－ＭｅＯＨ）：δ＝１７４．９，１７３．７，１７３．１，１５８．６，１５８．２，１５２．１，１４９．６，１２７．０，１２５．８，１１９．１，１１６．３，１１５．４，１１４．７，１１４．５，１１３．２，１１３．０，１０６．４，６４．０，６３．６，５５．４，５０．４，５０．１，４２．４，３８．８，３４．０，３３．５，３０．５，２３．８，２１．３，１７．３，１５．９ ｐｐｍ．
ＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_２８Ｈ_３３Ｎ_２Ｏ_１２Ｓ_２ ^＋について計算値：６５３．１［Ｍ＋Ｈ］^＋
実測値：６５３．１［Ｍ＋Ｈ］^＋．

【化47】

ＮＨＳ－エステル１１：ＤＩＰＥＡ（０．１７ｍｌ、０．９９８ｍｍｏｌ）を、カルボン酸１０（８７ｍｇ、０．０９５ｍｍｏｌ）およびＴＳＴＵ（８０ｍｇ、０．２６６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３ｍｌ）中溶液に添加した。反応物を室温で２時間撹拌し、減圧濃縮した。得られた残渣を逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィー（ＹＭＣ－Ｔｒｉａｒｔ Ｃ１８、Ｈ_２Ｏ中２４～４０％ ＭｅＣＮ、０．１％ ＴＦＡ、３０分かけて）によって生成し、ＮＨＳ－エステル１０（３９ｍｇ、０．０４５ｍｍｏｌ、４１）を白色固体として得た。

【0133】

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ｄ_４－ＭｅＯＨ）δ＝７．３１（ｄ，Ｊ＝８．５３ Ｈｚ，１Ｈ），７．２７（ｄ，Ｊ＝２．５１ Ｈｚ，１Ｈ），７．１７（ｄ，Ｊ＝２．５１ Ｈｚ，１Ｈ），７．１４（ｄ，Ｊ＝８．４１ Ｈｚ，１Ｈ），７．０５（ｄｄ，Ｊ＝８．５３，２．５１ Ｈｚ，１Ｈ），６．９２（ｄｄ，Ｊ＝８．４７，２．４５ Ｈｚ，１Ｈ），５．０６（ｄ，Ｊ＝１３．９３ Ｈｚ，１Ｈ），４．４４（ｍ，５Ｈ），３．７１（ｍ，４Ｈ），３．３１（ｍ，４Ｈ），３．２１（ｍ，６Ｈ），２．８３（ｓ，４Ｈ），２．６８（ｍ，１Ｈ），２．６３（ｔ，Ｊ＝７．３４ Ｈｚ，１Ｈ），２．３４（ｍ，２Ｈ），２．２６（ｑ，Ｊ＝７．４９ Ｈｚ，１Ｈ），２．０８（ｍ，１Ｈ），１．９０（ｍ，４Ｈ），１．３６（ｍ，３０Ｈ）ｐｐｍ．
ＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_３２Ｈ_３６Ｎ_３Ｏ_１４Ｓ_２ ^＋について計算値：７５０．２［Ｍ＋Ｈ］^＋
実測値：７５０．４［Ｍ＋Ｈ］^＋．

【化48】

アシルアミン１２：ＤＩＰＥＡ（３．８５ｍｌ、１１．１ｍｍｏｌ）を、アニリン１（５．６６ｇ、１１．１ｍｍｏｌ）、コハク酸モノメチル（１．９８ｇ、１４．９ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（５．６６ｇ、１４．９ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２８ｍｌ）中溶液に添加し、反応物を室温で３日間撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、１Ｍ ＨＣｌ、水および食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、減圧濃縮した。得られた残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：１、Ｒ_ｆ＝０．５））によって精製し、アシルアミン１２（３．８５ｇ、１０．８ｍｍｏｌ、９８％）を淡黄色油状物として得た。

【0134】

Ｒ_ｆ＝０．５［ヘキサン／ＥｔＯＡｃ，１：１］。

【0135】

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ＝７．２２（ｔ，Ｊ＝８．０９ Ｈｚ，１Ｈ），７．１６（ｄｄ，Ｊ＝９．０６ Ｈｚ，７．２８ Ｈｚ，１Ｈ），６．８３（ｄｄ，Ｊ＝８．２８，２．１３ Ｈｚ，１Ｈ），６．７６（ｍ，３Ｈ），６．６４（ｄ，Ｊ＝７．６５ Ｈｚ，１Ｈ），６．５６（ｍ，１Ｈ），４．８６（ｓ，２Ｈ），３．７５（ｓ，１Ｈ），３．７１（ｓ，１Ｈ），３．６６（ｓ，１Ｈ），２．６３（ｍ，２Ｈ），２．３９（ｍ，２Ｈ）ｐｐｍ．
^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝１７３．５，１７１．２，１６０．３，１５９．６，１４３．２，１３９．１，１３０．２，１２９．３，１２１．０，１２０．６，１１４．１，１１３．９，１１３．１，５５．３，５５．２，５３．０，５１．７，２９．３ ｐｐｍ．
ＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_２０Ｈ_２４ＮＯ_５ ^＋について計算値：３５８．２［Ｍ＋Ｈ］^＋
実測値：３５８．４［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0136】

【化49】

シクロオクテン１３：テトラクロロシクロプロペン（０．５７ｍｌ、５．７２ｍｍｏｌ）をＡｌＣｌ_３（２．７４ｇ、２０．７ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２（４５ｍｌ）中の懸濁液に滴下し、反応物を室温で１５分間撹拌した。その溶液を－７８℃に冷却し、アシルアミン１２（１．８５ｇ、５．１６ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２（３０ｍｌ）中溶液をゆっくりと添加した。反応物を室温に一晩加温した後、水（３９ｍｌ）を添加し、反応物を室温で３０分間撹拌した。混合物をＣＨ_２Ｃｌ_２で抽出し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、減圧濃縮した。得られた残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ、１００：１、Ｒ_ｆ＝０．４）によって精製し、シクロオクテン１３（１．６０ｇ、３．９３ｍｍｏｌ、３８％）を黄色がかった油状物として得た。

【0137】

Ｒ_ｆ＝０．４［ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ，１００：１］。

【0138】

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ＝８．００（ｄ，Ｊ＝８．６６ Ｈｚ，１Ｈ），７．９０（ｄ，Ｊ＝８．５３ Ｈｚ，１Ｈ），７．２５（ｄ，Ｊ＝２．５１ Ｈｚ，１Ｈ），７．１８（ｄ，Ｊ＝２．５１ Ｈｚ，１Ｈ），７．０６（ｄｄ，Ｊ＝８．６６，２．５１ Ｈｚ，１Ｈ），６．９５（ｄｄ，Ｊ＝８．４７，２．５７ Ｈｚ，１Ｈ），５．２１（ｄ，Ｊ＝１４．４ Ｈｚ，１Ｈ），４．１２（ｄ，Ｊ＝１４．４ Ｈｚ，１Ｈ），３．９４（ｓ，３Ｈ），３．９１（ｓ，３Ｈ），３．５９（ｓ，３Ｈ），２．７６（ｍ，１Ｈ），２．６６（ｍ，１Ｈ），２．３６（ｍ，１Ｈ），１．９４（ｍ，１Ｈ）ｐｐｍ．
ＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_２４Ｈ_２４ＮＯ_６ ^＋について計算値：４０８．１［Ｍ＋Ｈ］^＋
実測値：４０８．３［Ｍ＋Ｈ］^＋．

【化50】

フェノール１４：ＢＢｒ_３（ＣＨ_２Ｃｌ_２中１．０Ｍ、２０ｍｌ、２０ｍｍｏｌ）を、シクロオクテン１３（８１７ｍｇ、２．００ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２（９５ｍｌ）中溶液にゆっくり添加し、溶液を－７８℃で１時間および室温で４８時間撹拌した。反応物を水でクエンチし、４Ｍ ＮａＯＨで塩基性化し、ＣＨ_２Ｃｌ_２で洗浄した。水層を、濃ＨＣｌで酸性化し、得られた沈殿物を回収した。水相をＥｔＯＡｃで抽出し、合わせた有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、フィルタにかけ、減圧濃縮した。合わせた固体をＭｅＯＨ（２０ｍｌ）に溶解した。Ｈ_２ＳＯ_４（０．４ｍｌ）を添加し、反応物を６５℃で３時間撹拌した。混合物を室温に冷却し、水で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、減圧濃縮した。得られた残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ_２Ｃｌ_２中６～８％ＭｅＯＨ）によって精製し、フェノール１４（４２４ｍｇ、１．１２ｍｍｏｌ、２段階で５６％）を褐色がかった固体として得られた。

【0139】

ＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_２１Ｈ_１８ＮＯ_６ ^＋について計算値：３８０．１［Ｍ＋Ｈ］^＋
実測値：３８０．３［Ｍ＋Ｈ］^＋．

【化51】

アセトニド１５：ＤＥＡＤ（ＰｈＭｅ中４０％、９４μＬ、０．２０７ｍｍｏｌ）を、フェノール１４（２６ｍｇ、０．０６９ｍｍｏｌ）、ＰＰｈ_３（５４ｍｇ、０．２０７ｍｍｏｌ）および（Ｒ）－（－）－２，２－ジメチル－１，３－ジオキソラン－４－メタノール（２６μＬ、０．２０７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１．５ｍｌ）中攪拌溶液に滴加した後、反応物を室温で２０時間攪拌し、減圧濃縮した。得られた残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ_２Ｃｌ_２中１０～３０％アセトン、Ｒ_ｆ＝０．３（ＣＨ_２Ｃｌ_２中２０％アセトン））によって精製し、アセトニド１５（３３ｍｇ、０．０５４ｍｍｏｌ、７９％）を淡白色固体として得た。

【0140】

Ｒ_ｆ＝０．３［アセトン／ＣＨ_２Ｃｌ_２，１：４］。

【0141】

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ＝７．９９（ｄ，Ｊ＝８．６６ Ｈｚ，１Ｈ），７．８９（ｄ，Ｊ＝８．４１ Ｈｚ，１Ｈ），７．２５（ｔ，Ｊ＝２．６４ Ｈｚ，１Ｈ），７．２１（ｔ，Ｊ＝２．２６ Ｈｚ，１Ｈ），７．０７（ｍ，１Ｈ），８．９６（ｄｔ，Ｊ＝８．４７，２．６０ Ｈｚ，１Ｈ），５．１７（ｄ，Ｊ＝１４．３ Ｈｚ，１Ｈ），４．５０（ｍ，２Ｈ），４．１８（ｍ，７Ｈ），３．９３（ｍ，２Ｈ），３．５８（ｓ，３Ｈ），２．６８（ｍ，２Ｈ），２．３５（ｍ，１Ｈ），１．９２（ｍ，１Ｈ），１．４７（ｓ，６Ｈ），１．４１（ｓ，６Ｈ）ｐｐｍ．
ＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_３３Ｈ_３８ＮＯ_１０ ^＋について計算値：６０８．２［Ｍ＋Ｈ］＋
実測値：６０８．３［Ｍ＋Ｈ］＋．

【化52】

テトラオール１６：１Ｍ ＨＣｌ（０．１ｍｌ）を、アセトニド１５（１１ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（０．２ｍｌ）中溶液にゆっくり添加し、反応物を室温で２時間撹拌した。混合物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ_２Ｃｌ_２中１０％ ＭｅＯＨ）に直接供し、テトラオール１６（９．７ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ、１００％）を無色油状物として得た。

【0142】

Ｒ_ｆ＝０．２［メタノール／ＣＨ_２Ｃｌ_２，１：９］。

【0143】

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ｄ_４－ＭｅＯＨ）δ＝８．０４（ｄ，Ｊ＝８．６６ Ｈｚ，１Ｈ），７．８８（ｄ，Ｊ＝８．５３ Ｈｚ，１Ｈ），７．３４（ｍ，２Ｈ），７．２４（ｄ，Ｊ＝８．６０，２．４５ Ｈｚ，１Ｈ），７．０８（ｄｄ，Ｊ＝８．５３，２．５１ Ｈｚ，１Ｈ），５．１７（ｄ，Ｊ＝１４．６ Ｈｚ，１Ｈ），４．２８（ｄ，Ｊ＝１４．３ Ｈｚ，１Ｈ），４．２０（ｍ，４Ｈ），４．０２（ｍ，２Ｈ），３．７０（ｍ，４Ｈ），３．４６（ｓ，３Ｈ）．２．６５（ｍ，１Ｈ），２．４２（ｍ，２Ｈ），２．０３（ｍ，１Ｈ）ｐｐｍ．
ＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_２７Ｈ_３０ＮＯ_１０ ^＋について計算値：５２８．２［Ｍ＋Ｈ］＋
実測値：５２８．４［Ｍ＋Ｈ］＋．

【化53】

アルキン１７：テトラオール１６（９．７ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１．５ｍｌ）中溶液に３０分間放射線（３６０ｎｍ）した。この溶液を減圧濃縮し、得られた残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ_２Ｃｌ_２中１０％ ＭｅＯＨ、Ｒ_ｆ＝０．２）によって精製し、アルキン１７（４．３ｍｇ、８．６μｍｏｌ、４８％）を無色油状物として得た。

【0144】

Ｒ_ｆ＝０．２［メタノール／ＣＨ_２Ｃｌ_２，１：９］。

【0145】

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ｄ_４－ＭｅＯＨ）δ＝７．３１（ｄ，Ｊ＝８．５３ Ｈｚ，１Ｈ），７．２６（ｍ，２Ｈ），７．１２（ｄ，Ｊ＝８．４１ Ｈｚ，１Ｈ），７．０５（ｄｄ，Ｊ＝８．６，２．５７ Ｈｚ，１Ｈ），６．９０（ｄｄ，Ｊ＝８．４７，２．５７ Ｈｚ，１Ｈ）５．０１４（ｄ，Ｊ＝１４．１ Ｈｚ，１Ｈ）．，４．０６（ｍ，６Ｈ），３．７３（ｄ，Ｊ＝１３．８ Ｈｚ，１Ｈ），３．６７（ｍ，４Ｈ），３．５３（ｓ，３Ｈ），２．７４（ｍ，１Ｈ），２．４７（ｍ，１Ｈ），２．３８（ｍ，１Ｈ），２．０１（ｍ，１Ｈ）ｐｐｍ．
ＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_３３Ｈ_３８ＮＯ_１０ ^＋について計算値：５００．２［Ｍ＋Ｈ］＋
実測値：５００．４［Ｍ＋Ｈ］＋．

【化54】

カルボン酸１８：１Ｍ ＮａＯＨ（１００μＬ）を、アルキン１７（１５．８ｍｇ、０．０３２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１ｍｌ）およびＭｅＯＨ（１ｍｌ）中溶液に添加し、反応物を室温で一晩撹拌した。反応物を減圧濃縮し、得られた残渣を逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィー（Ｃｈｒｏｍｏｌｉｔｈ ＲＰ１８ｅ、Ｃ_１８、Ｈ_２Ｏ中１８～３４％ ＭｅＣＮ、０．１％ ＴＦＡ、３０分かけて）によって精製し、カルボン酸１８（３．２ｍｇ、６．６μｍｏｌ、２１％）を白色固体として得た。

【0146】

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ｄ_４－ＭｅＯＨ）δ＝７．３０（ｍ，２Ｈ），７．２６（ｄ，Ｊ＝２．３８ Ｈｚ，１Ｈ），７．１２（ｄ，Ｊ＝８．４１ Ｈｚ，１Ｈ），７．０４（ｄｄ，Ｊ＝８．５３，２．５１ Ｈｚ，１Ｈ），６．９０（ｄｄ，Ｊ＝８．４１，２．５１ Ｈｚ，１Ｈ），５．０５（ｄ，Ｊ＝１４．１ Ｈｚ，１Ｈ），４．０７（ｍ，６Ｈ），３．７３（ｄ，Ｊ＝１３．９ Ｈｚ，１Ｈ），３．６８（ｍ，４Ｈ），２．７６（ｍ，１Ｈ），２．５０（ｍ，１Ｈ），２．３１（ｍ，１Ｈ），１．９６（ｍ，１Ｈ）ｐｐｍ．
ＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_２５Ｈ_２８ＮＯ_９ ^＋について計算値：４８６．２［Ｍ＋Ｈ］＋
実測値：４８６．４［Ｍ＋Ｈ］＋．

【化55】

ｔｅｒｔ－ブチルエステル１９：ＢＢｒ_３（ＣＨ_２Ｃｌ_２中１．０Ｍ、３９ｍｌ、３９ｍｍｏｌ）を、シクロオクタン１３（１．６０ｇ、３．９３ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２（１９０ｍｌ）中溶液にゆっくり添加し、溶液を－７８℃で１時間および室温で４８時間撹拌した。反応物を水でクエンチし、４Ｍ ＮａＯＨで塩基性化し、ＣＨ_２Ｃｌ_２で洗浄した。水層を、濃ＨＣｌで酸性化し、得られた沈殿物を回収した。水相をＥｔＯＡｃで抽出し、有機相を合わせ、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、フィルタにかけ、減圧濃縮した。固体を合わせ、ＭｅＯＨ（１０ｍｌ）、ＴＨＦ（１０ｍｌ）および１Ｍ ＮａＯＨ（１６ｍｌ）に溶解し、室温で３時間撹拌した。反応混合物を濃ＨＣｌで酸性化し、得られた沈殿物を回収した。水相をＥｔＯＡｃで抽出し、有機相を合わせ、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、フィルタにかけ、減圧濃縮した。合わせた固体（７０２ｍｇ）およびグリシンｔｅｒｔ－ブチルエステル塩酸塩（３２２ｍｇ、１．９２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２２ｍｌ）に溶解した。ＨＡＴＵ（７２８ｍｇ、１．９２ｍｍｏｌおよびＤＩＰＥＡ（１．３２ｍｌ、７．６３ｍｍｏｌ）を順次添加し、得られた混合物を室温で２０時間撹拌し、減圧濃縮した。得られた残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ_２Ｃｌ_２中４～６％ ＭｅＯＨ、Ｒ_ｆ＝０．４、ＣＨ_２Ｃｌ_２中６％ ＭｅＯＨ）によって精製し、ｔｅｒｔ－ブチルエステル１９（３３３ｍｇ、０．６９６ｍｍｏｌ、３段階で１８％）を褐色がかった固体として得た。

【0147】

Ｒ_ｆ＝０．４ ［メタノール／ＣＨ_２Ｃｌ_２，６：９４］．
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ｄ_４－ＭｅＯＨ）δ＝７．９０（ｄ，Ｊ＝８．５３ Ｈｚ，１Ｈ），７．７５（ｄ，Ｊ＝８．２８ Ｈｚ，１Ｈ），７，１２（ｍ，１Ｈ），７．０２（ｍ，２Ｈ），６．８５（ｄｄ，Ｊ＝８．３４，２．３２ Ｈｚ，１Ｈ），５．０８（ｄ，Ｊ＝１４．６ Ｈｚ，１ｈ），４．２０（ｄ，Ｊ＝１４．４ Ｈｚ，１Ｈ），３．６８（ｓ，２Ｈ），２．７１（ｍ，１Ｈ），２．４１（ｍ，１Ｈ），２．２４（ｍ，１Ｈ），２．０５（ｍ，１Ｈ），１．４２（ｓ，９Ｈ）ｐｐｍ．
ＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_２６Ｈ_２７Ｎ_２Ｏ_７ ^＋について計算値：４７９．２［Ｍ＋Ｈ］^＋
実測値：４７９．０［Ｍ＋Ｈ］^＋．

【化56】

アセトニド２０：ＤＥＡＤ（ＰｈＭｅ中４０％、０．４８ｍｌ、０．８３６ｍｍｏｌ）を、ｔｅｒｔ－ブチルエステル１９（１００ｍｇ、０．２０９ｍｍｏｌ）、ＰＰｈ_３（２１９ｍｇ、０．８３６ｍｍｏｌ）および（Ｒ）－（－）－２，２－ジメチル－１，３－ジオキソラン－４－メタノール（１０３μＬ、０．８３６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５．５ｍｌ）中溶液に滴下した。反応物を室温で一晩撹拌した後、溶媒を減圧下で除去し、残渣をカラムクロマトグラフィー（ＣＨ_２Ｃｌ_２中３０～５０％アセトン、Ｒ_ｆ＝０．５（ＣＨ_２Ｃｌ_２中４０％アセトン））によって精製した。アセトニド２０（１２８ｍｇ、０．１８１ｍｍｏｌ、８７％）を白色固体として得た。

【0148】

Ｒ_ｆ＝０．５［アセトン／ＣＨ_２Ｃｌ_２，２：３］。

【0149】

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ＝７．９５（ｄ，Ｊ＝８．２８ Ｈｚ，１Ｈ），７．８６（ｄ，Ｊ＝８．４１ Ｈｚ，１Ｈ），７．２４（ｍ，２Ｈ），７．０５（ｄｔ，Ｊ＝８．６６，２．８９ Ｈｚ，１Ｈ），６．９４（ｄｔ，Ｊ＝８．５３，２．３２ Ｈｚ，１Ｈ），６．０５（ｂｒｔ，Ｊ＝４．７７ Ｈｚ，１Ｈ），５．１５（ｄ，Ｊ＝１４．４ Ｈｚ，１Ｈ），４．４９（ｍ，２Ｈ），４．１２（ｍ，７Ｈ），３．９０（ｍ，２Ｈ），３．８３（ｄ，Ｊ＝５－１４ Ｈｚ，２Ｈ），２．８５（ｍ，１Ｈ），２，６０（ｍ，１Ｈ），２．１６（ｍ，１Ｈ），１．８９（ｍ，１Ｈ），１．４５（ｓ，６Ｈ），１．４４（ｓ，９Ｈ），１．３９（ｓ，６Ｈ）ｐｐｍ．
ＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_３８Ｈ_４７Ｎ_２Ｏ_１１ ^＋について計算値：７０７．３［Ｍ＋Ｈ］^＋
実測値：７０７．６［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0150】

【化57】

カルボン酸２１：ＴＦＡ（０．５ｍｌ）を、アセトニド２０（６４ｍｇ、０．０９１ｍｍｏｌ）、ｉＰｒ_３ＳｉＨ（０．１ｍｌ）、水（０．１ｍｌ）およびＣＨ_２Ｃｌ_２（１ｍｌ）の混合物に添加した。反応物を室温で６時間撹拌し、ＣＨ_２Ｃｌ_２で希釈し、水で抽出した。合わせた水相を凍結乾燥してカルボン酸２１（４８．５ｍｇ、０．０８５ｍｍｏｌ、９３％）を得た。

【0151】

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ｄ_４－ＭｅＯＨ）δ＝８．００（ｄ，Ｊ＝８．６６ Ｈｚ，１Ｈ），７．８４（ｄ，Ｊ＝８．５３ Ｈｚ，１Ｈ），７．３６（ｔ，Ｊ＝２．１３ Ｈｚ，１Ｈ），７．３１（ｄ，Ｊ＝２．５１ Ｈｚ，１Ｈ），７．２０（ｄｄ，Ｊ＝８．６０，２．３２ Ｈｚ，１Ｈ），７．０４（ｄｄ，Ｊ＝８．４７，２．４５ Ｈｚ，１Ｈ），５．１５（ｄ，Ｊ＝１４．５６ Ｈｚ，１Ｈ），４．１８（ｍ，５Ｈ），４．０２（ｍ，２Ｈ），３．７７（ｓ，２Ｈ），３．７０（ｍ，４Ｈ），２．７３（ｍ，１Ｈ），２．４４（ｍ，１Ｈ），２．２６（ｍ，１Ｈ），２．０１（ｍ，１Ｈ）ｐｐｍ．
^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ ＭＨｚ，ｄ_４－ＭｅＯＨ）：δ＝１７４．８，１７４．３，１７３．１，１６３．２，１６２．３，１５３．２，１４６．２，１４２．６，１４１．６，１３８．３，１３５．２，１３４．６，１１８．５，１１５．６，１１５．２，１１５．０，１１４．２，１１３．９，７０．２，７０．１，６９．９，６９．４，６２．６，６２．５，５５．７，４０．３，３０．０，２９．４ ｐｐｍ．
ＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_３５Ｈ_４５Ｎ_４Ｏ_１２ ^＋について計算値：５７１．２［Ｍ＋Ｈ］^＋
実測値：５７１．４［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0152】

【化58】

アミド２２：ＤＩＰＥＡ（２９μＬ、０．１６８ｍｍｏｌ）を、カルボン酸２１（４８ｍｇ、０．０８４ｍｍｏｌ）、Ｎ－Ｂｏｃ－エチレンジアミン（２７ｍｇ、０．１６８ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（６４ｍｇ、０．１６８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１ｍｌ）中溶液に添加した。反応物を室温で一晩撹拌した後、溶媒を減圧下で除去し、残渣を逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィー（Ｃｈｒｏｍｏｌｉｔｈ ＲＰ１８ｅ、Ｃ_１８、Ｈ_２Ｏ中１４～３０％ ＭｅＣＮ、０．１％ ＴＦＡ、３０分かけて）によって精製した。アミド２２（３０ｍｇ、０．０４２ｍｍｏｌ、５０％）を白色固体として得た。

【0153】

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ｄ_４－ＭｅＯＨ）δ＝８．０２（ｄ，Ｊ＝８．５３ Ｈｚ，１Ｈ），７．８６（ｄ，Ｊ＝８．５３，１Ｈ），７．３４（ｍ，２Ｈ），７．２３（ｄｄ，Ｊ＝８．６６，２．３８ Ｈｚ，１Ｈ），７．０７（ｄｄ，Ｊ＝８．５３，２．５１ Ｈｚ，１Ｈ），５．２１（ｄ，Ｊ＝１４．８ Ｈｚ，１Ｈ），４．１９（ｍ，５Ｈ），４．０２（ｍ，２Ｈ），３．８２（ｄ，Ｊ＝１６．８ Ｈｚ，１Ｈ），３．６９（ｍ，４Ｈ），３．６０（ｄ，Ｊ＝１６．８ Ｈｚ，１Ｈ），３．１８（ｍ，２Ｈ），２．８３（ｍ，１Ｈ），２．２９（ｍ，２Ｈ），２．０３（ｍ，１Ｈ），１．４２（ｓ，９Ｈ）ｐｐｍ．
ＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_３５Ｈ_４５Ｎ_４Ｏ_１２ ^＋について計算値：７１３．３［Ｍ＋Ｈ］^＋
実測値：７１３．６［Ｍ＋Ｈ］^＋．

【化59】

アミン２３：ＴＦＡ（０．５ｍｌ）を、アミド２２（３０ｍｇ、０．０４２ｍｍｏｌ）、ｉＰｒ_３ＳｉＨ（０．１ｍｌ）、水（０．１ｍｌ）およびＣＨ_２Ｃｌ_２（１ｍｌ）の混合物に添加した。反応物を室温で３間撹拌し、ＣＨ_２Ｃｌ_２で希釈し、水で抽出した。合わせた水相を凍結乾燥して、未精製の脱保護アミンを得た。

【0154】

残渣をＭｅＯＨ（３ｍｌ）に溶解し、４５分間照射した（３６０ｎｍ）。全ての揮発性物質を減圧下で除去し、得られた残渣を逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィー（Ｃｈｒｏｍｏｌｉｔｈ ＲＰ１８ｅ、Ｃ_１８、Ｈ_２Ｏ中１５～３１％ ＭｅＣＮ、０．１％ ＴＦＡ、３０分かけて）によって精製して、アミン２３（１８．７ｍｇ、０．０２７ｍｍｏｌ、２段階で６４％）を白色固体として得た。

【0155】

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ｄ_４－ＭｅＯＨ）δ＝７．３２（ｄ，Ｊ＝８．６６，１Ｈ），７．２３（ｄ，Ｊ＝２．５１ Ｈｚ，２Ｈ），７．１４（ｄ，Ｊ＝８．５３ Ｈｚ，１Ｈ），７．０６（ｄｄ，Ｊ＝８．６０，２．５７ Ｈｚ，１Ｈ），６．９２（ｄｄ，Ｊ＝８．４７，２．３２ Ｈｚ，１Ｈ），５．０４（ｄ，Ｊ＝１４．２ Ｈｚ，１Ｈ），４．０６（ｍ，６Ｈ），３．８７（ｄｄ，Ｊ＝１７．１，１．６９ Ｈｚ，１Ｈ），３．７６（ｄ，Ｊ＝１４．１ Ｈｚ，１Ｈ），３．６８（ｍ，５Ｈ），３．５１（ｔ，Ｊ＝５．８４ Ｈｚ，２Ｈ），３．０７，ｍ，２Ｈ），２．８５（ｍ，１Ｈ），２．２９（ｍ，２Ｈ），２．０７（ｍ，１Ｈ）ｐｐｍ．
^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ ＭＨｚ，ｄ_４－ＭｅＯＨ）：δ＝１７４．７，１７３．０，１７１．８，１５９．２，１５９．２，１５８．５，１５１．９，１４９．６，１２７．０，１２５．９，１１９．２，１１９．２，１１６．２，１１５．５，１１４．６，１１４．４，１１２．８，１０６．３，７０．３，７０．２，６９．５，６９．２，６２．７，６２．６，４２．５，３９．７，３６．６，３０．５，２９．８ ｐｐｍ．
ＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_２９Ｈ_３７Ｎ_４Ｏ_９ ^＋について計算値：５８５．３［Ｍ＋Ｈ］^＋
実測値；５８５．５［Ｍ＋Ｈ］^＋．

【化60】

エーテル２４：ＮａＯＨ（３０％、４２ｍｌ）を、Ｎ－Ｚ－エタノールアミン（４．００ｇ、２０．５ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ－ブチルブロモアセテート（６．０６ｍｌ、４１．０ｍｍｏｌ）およびＢｕ_４ＮＨＳＯ_４（２．９６ｇ，８．７２ｍｍｏｌ）のＰｈＭｅ（８４ｍｌ）中の混合物にゆっくり添加し、反応物を室温で一晩撹拌した。ｔｅｒｔ－ブチルブロモアセテート（１．７４ｍｌ、１１．８ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を室温で６時間撹拌した。層を分離し、有機相を５％ ＡｃＯＨおよび水で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、減圧濃縮した。得られた残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：４）によって精製し、エーテル２４（１．３５ｇ、４．３６ｍｍｏｌ、２１％）を無色油状物として得た。

【0156】

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ＝７．３４（ｍ，４Ｈ），５．４４（ｂｒｓ，１Ｈ），５．１０（ｓ，２Ｈ），３．９５（ｓ，２Ｈ），３．６１（ｍ，２Ｈ），３．４１（ｍ，２Ｈ），１．４６（ｓ，９Ｈ）ｐｐｍ．

【化61】

アミン２５：Ｐｄ／Ｃ（７１０ｍｇ）をエーテル２４（１．３５ｇ、４．３６ｍｍｏｌ）のＥｔＯＡｃ（１５ｍｌ）中溶液に添加し、反応容器をＨ_２雰囲気下に置いた。反応物を室温で３時間撹拌し、次いで、セライトでフィルタにかけた。この溶液を減圧濃縮し、アミン２５（６７０ｍｇ、３．８２ｍｍｏｌ、８８％）を無色油状物として得た。

【0157】

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ＝３．９９（ｓ，２Ｈ），３．５７（ｔ，Ｊ＝５．０４ Ｈｚ，２Ｈ），２．９１（ｔ，Ｊ＝５．２０ Ｈｚ，２Ｈ），１．８７（ｂｒｓ，２Ｈ），１．４８（ｓ，９Ｈ）ｐｐｍ．

【化62】

アミド２７：ＤＩＰＥＡ（４８μＬ、０．１７８ｍｍｏｌ）を、カルボン酸２６（５０ｍｇ、０．１３７ｍｍｏｌ）およびＴＳＴＵ（５４ｍｇ、０．１７８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２ｍｌ）中溶液に添加し、反応物を室温で２時間撹拌した。アミン２５（３１ｍｇ、０．１７８ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を室温で４時間攪拌し、減圧濃縮した。得られた残渣を逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィー（Ｃｈｒｏｍｏｌｉｔｈ ＲＰ１８ｅ、Ｃ_１８、Ｈ_２Ｏ中３５～５１％ ＭｅＣＮ、０．１％ ＴＦＡ、３０分かけて）によって精製して、アミド２７（３１．６ｍｇ、６０μｍｏｌ、４４％）を白色固体として得た。

【0158】

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ｄ_４－ＭｅＯＨ）δ＝７．９１（ｄ，Ｊ＝８．７１ Ｈｚ，１Ｈ），７．７６（ｄ，Ｊ＝８．３１ Ｈｚ，１Ｈ），７．１３（ｄ，Ｊ＝２．３７ Ｈｚ，１Ｈ），７．０５（ｄ，Ｊ＝１．９８ Ｈｚ，１Ｈ），７．０１（ｄｄ，Ｊ＝８．３１，２．３７ Ｈｚ，１Ｈ），６．８６（ｄｄ，Ｊ＝８．５１，２．１８ Ｈｚ，１Ｈ），５．０９（ｄ，Ｊ＝１４．６ Ｈｚ，１Ｈ），４．２１（ｄ，Ｊ＝１４．３ Ｈｚ，１Ｈ），３．９５（ｓ，２Ｈ），３．４５（ｍ，２Ｈ），３．２３（ｍ，２Ｈ），２．６８（ｍ，１Ｈ），２．３４（ｍ，１Ｈ），２．２３（ｍ，１Ｈ），２．０６（ｍ，１Ｈ），１．４６（ｓ，９Ｈ）ｐｐｍ．
ＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_１６Ｈ_２４ＮＯ_５ ^＋について計算値：５２３．２［Ｍ＋Ｈ］^＋
実測値：５２３．４［Ｍ＋Ｈ］^＋．

【化63】

スルホン酸２８：アミド２７（１００ｍｇ、０．１９１ｍｍｏｌ）、Ｋ_２ＣＯ_３（１３２ｍｇ、０．９５５ｍｍｏｌ）および２－ブロモエタンスルホン酸ナトリウム（２０２ｍｇ、０．９５５ｍｍｏｌ）のＭｅＣＮ（２．０ｍｌ）中懸濁液を８０℃で２０時間撹拌した。反応混合物を逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィー（Ｃｈｒｏｍｏｌｉｔｈ ＲＰ１８ｅ、Ｃ_１８、Ｈ_２Ｏ中２２～３８％ ＭｅＣＮ、０．１％ ＴＦＡ、３０分かけて）によって精製し、スルホン酸２８（４６ｍｇ、０．０５８ｍｍｏｌ、３０％）を白色固体として得た。

【0159】

ＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_３２Ｈ_３９Ｎ_２Ｏ_１４Ｓ_２ ^＋について計算値：７３９．２［Ｍ＋Ｈ］＋
実測値：７３９．３［Ｍ＋Ｈ］＋。

【0160】

【化64】

カルボン酸２９：：スルホン酸２８（４５ｍｇ、０．０６１ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２（２ｍｌ）、ｉＰｒ_３ＳｉＨ（０．２ｍｌ）、水（０．２ｍｌ）およびＴＦＡ（１ｍｌ）中溶液を室温で６時間撹拌し、水で希釈し、凍結乾燥した。得られた残渣を逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィー（Ｃｈｒｏｍｏｌｉｔｈ ＲＰ１８ｅ、Ｃ_１８、Ｃ１８、Ｈ_２Ｏ中１６～３２％ ＭｅＣＮ、０．１％ ＴＦＡ、３０分かけて）によって精製して、カルボン酸２９（１５．２ｍｇ、０．０２１ｍｍｏｌ、３４％）を白色固体として得た。

【0161】

ＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_２８Ｈ_３１Ｎ_２Ｏ_１４Ｓ_２ ^＋について計算値：６８３．１［Ｍ＋Ｈ］^＋
実測値：６８３．３［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0162】

【化65】

アルキン３０：カルボン酸２９（１７ｍｇ、０．０２３ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２ｍｌ）およびＤＩＰＥＡ（０．１０ｍｌ）中溶液を０．５時間照射し（３６０ｎｍ）、減圧濃縮した。得られた残渣を逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィー（ＹＭＣ－Ｔｒｉａｒｔ Ｃ１８、Ｈ_２Ｏ中１８～３０％ ＭｅＣＮ、０．１％ ＴＦＡ、３０分かけて）によって精製して、カルボン酸３０（１６．７ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ、８０％）を白色固体として得た。

【0163】

ＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_２７Ｈ_３１Ｎ_２Ｏ_１３Ｓ_２ ^＋について計算値：６５５．１［Ｍ＋Ｈ］^＋
実測値：６５５．３［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0164】

【化66】

ルテニウム錯体３３：ＤＩＰＥＡ（２８μＬ、０．１５８ｍｍｏｌ）、ＮＨＳ（５．０ｍｇ、４３．５μｍｏｌ）およびＥＤＣ ＨＣｌ（１５．２ｍｇ、７９．０μｍｏｌ）を、１０（３６ｍｇ、４０μｍｏｌ）のＤＭＦ（１．０ｍｌ）溶液に順次加え、反応物を室温で２時間撹拌した。アミン３４（４５ｍｇ、４０μｍｏｌ）を添加し、反応物を室温で一晩撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、得られた残渣をＨＰＬＣクロマトグラフィー（Ｃ１８、Ｈ_２Ｏ中２～９０％ ＭｅＣＮ、０．０５％ ＴＦＡ、９０分かけて）によって精製して、ルテニウム錯体３３（３１ｍｇ、２１．６ｍｍｏｌ、５５％）を赤色固体として得た。

【0165】

ＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_６９Ｈ_７４Ｎ_１０Ｏ_１４Ｓ_２Ｒｕ^＋について計算値：７１７．２０［Ｍ＋２Ｈ］^２＋／２
実測値：７１７．２７［Ｍ＋２Ｈ］^２＋／２。

【0166】

【化67】

【化68】

ルテニウム錯体３５：アミド３６（７．７ｍｇ、７．１ｍｍｏｌ）、ＮＨＳ－エステル８（７．２ｍｇ、１０．６ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（２．５μＬ、１４．４μｍｏｌ）のＤＭＦ（１．０ｍｌ）中溶液を室温で１日間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、得られた残渣をＨＰＬＣクロマトグラフィー（Ｃ１８、Ｈ_２Ｏ中０～１００％ ＭｅＣＮ、０．１％ ＴＦＡ、８０分にわたって）によって精製して、ルテニウム錯体３５（３．７ｍｇ、２．２ｍｍｏｌ、３１％）を赤色固体として得た。

【0167】

ＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_７１Ｈ_８０Ｎ_１０Ｏ_１２Ｒｕ^＋について計算値：６８３．２６［Ｍ＋２Ｈ］^２＋／２
実測値：６８３．３９［Ｍ＋２Ｈ］^２＋／２。

【0168】

溶解度実験：

【化69】

本発明の化合物８（１６．９ｍｇ、０．０２４８ｍｍｏｌ）、本発明の化合物１１（１０．４ｍｇ、０．０１３９ｍｍｏｌ）、標準化合物３１（５．０ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）および標準化合物３２（４．２ｍｇ、０．０１０４ｍｍｏｌ）をそれぞれ水と連続的に混合して、５１５ｍＭ、１６．５ｍＭ、１２．４ｍＭ、６ｍＭおよび０．６ｍＭの理論濃度に達した。各添加後、混合物を１０秒間超音波処理した。固体化合物が依然として肉眼で見える場合、これは溶解していないと考えられた。固体化合物が見えない場合、これは溶解していると考えられた。目視検査の結果を表１に列挙し、「あり」または「なし」は、目視検査に基づいて化合物が溶解したと考えられたかどうかを示す。

【0169】

【表1】

【0170】

本発明の化合物は、水へのより良好な溶解度によって示されるように、著しく高い親水性を有する。本発明の化合物から、ＳＯ_３ ^－基を有するものは、ヒドロキシル基を有する本発明の化合物よりもさらに親水性であることが明らかである。

【0171】

ＨＰＬＣによって示される疎水性：

【化70】

本発明の化合物７および１０ならびに標準化合物３１の逆相（ＲＰ ＨＰＬＣ、ＹＭＣ－Ｔｒｉａｒｔ Ｃ_１８、Ｈ_２Ｏ中０～１００％ ＭｅＣＮ、２５分で０．１％ ＴＦＡ）でのＨＰＬＣクロマトグラムを取得し、それぞれの保持時間を表２に列挙する。保持が遅いことは、疎水性固定相とのより良好な相互作用に対応し、したがって、化合物はより疎水性であると考え得る。逆に、より保持が早いことは、より高い親水性に対応していた。

【0172】

【表2】

【0173】

本発明の化合物はより親水性であることが分かり、ＳＯ_３ ^－基を有する本発明の化合物はヒドロキシル基を有する本発明の化合物よりもさらに親水性であることが明らかであった。

【0174】

抗体複合体化
式（ＩＩ）の複合体と標的分子との反応生成物を含む修飾標的分子、本明細書ではＭＡＢ＜Ｔｎ－Ｔ＞ｃｈｉｍ－５Ｄ８－ＩｇＧ抗体（ドイツ、ペンツベルクのＲｏｃｈｅにより調製された抗トロポニンＴモノクローナルＩｇＧ抗体、Ｒｏｃｈｅ物質番号０５０７４９９１００１；モノクローナル抗体５Ｄ８は、例えばＪａｆｆｅ Ａ．Ｓ．ら．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ ５８（２０１１）１８１９－１８２４から当技術分野で知られている）（１，３－双極子基、ここではアジド基を含む）を調製した。これらの標的分子複合体は、以下では「複合体」とも略される。

【0175】

ＭＡＢ＜Ｔｎ－Ｔ＞ｃｈｉｍ－５Ｄ８－ＩｇＧ抗体を、増加する過剰（５，１０，１５，２０倍）のＮＨＳ－ＰＥＧ５－ＤＢＣＯ（基準化合物の場合；エントリ１－４）またはＮＨＳ－ＰＥＧ４－アジド（本発明の化合物について；エントリ５－１２）で処理した。複合体化していない過剰標識を透析によって除去した。これらの複合体を、それぞれ３倍過剰の（以前に使用されたＮＨＳエステルと比較して）ＢＰＲｕ－（Ｏ２ＯＣ）_３－アジド（エントリ１～４）または３３（エントリ５～８）または３５（エントリ９～１２）でさらに処理した。反応後、リン酸緩衝液５０ｍＭ Ｋ^＋リン酸塩、１５０ｍＭ ＫＣｌ ｐＨ７．４中５％ ＤＭＳＯを使用するＳｕｐｅｒｄｅｘ（商標）２００ Ｉｎｃｒｅａｓｅ １０／３００ＧＬによるサイズ排除クロマトグラフィーによって、複合体化していない過剰標識を分離した。３３で処理した抗体は、参照化合物と比較して標識のより高い組み込みを達成した（表３）。

【0176】

【表3】

【0177】

全ての複合体を、読み出しとしてＥＣＬシグナルを使用してＥｌｅｃｓｙｓ ｅ１７０モジュールで測定したストレプトアビジン被覆ビーズ（Ｒｏｃｈｅ：０５０９２７４４）を含むモデルサンドイッチイムノアッセイ（Ｅｌｅｃｓｙｓ Ｔｒｏｐｏｎｉｎ Ｔ ｈｓ，Ｒｏｃｈｅ：０５０９２７４４ １９０）で評価した。緩衝液中に分析物を含まない測定（希釈剤ユニバーサル、Ｒｏｃｈｅ：１１７３２２７７ １２２）は、３３がバックグラウンドを７１～２８１倍、３５が２～８倍低減し得ることを示した。血清（Ｄｉｌｕｅｎｔ ＭｕｌｔｉＡｓｓａｙ、Ｒｏｃｈｅ：０３６０９９８７ １９０）を使用すると、バックグラウンドシグナルの減少は、３３について５６～１０６５倍、３５について９～６２倍に増加した（表４）。

【0178】

参照ＤＢＣＯコンジュゲートのバックグラウンドシグナルと比較した３３および３５複合体のバックグラウンドシグナルの減少は、疎水性部分の親水化（スルホン化またはヒドロキシル化による）に起因し得る。

【0179】

較正器２（ｉｄ．０５０９２７５２ １９０）の測定は、参照複合体が使用されたときにバックグラウンド内またはバックグラウンドをわずかに上回った信号をもたらす（上記のＣａｌ２／ＭＡを参照されたい）。３３および３５を使用して、シグナル対バックグラウンドの比をそれぞれ３７４および３３４まで増加させた（上記Ｃａｌ２／ＭＡを参照されたい）。

【0180】

安定性試験では、３５℃で８日間貯蔵した後、参照化合物と比較して、３３および３５との複合体のＥＣＬシグナルがより高い回収率を示した。

【0181】

【表4】

【0182】

引用文献
－ 欧州特許第３００４０６２号
－ 国際公開第２０１４／１８９３７０号
－ Ｄｅｂｅｔｓら，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．２０１０，４６，９７－９９
－ Ｏｒｇ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２０１４，１２，５０３１－５０３７
－ 米国特許第８，９１２，３２２号
－ 国際公開第２００３／００２９７４号
－ 国際公開第２０１２／１０７４１９号
－ 国際公開第２０１２／１０７４２０号
－ 国際公開第２０１４／０１９７０９号
－ 国際公開第２０１４／０１９７０８号
－ 国際公開第２０１７／１５３５７４号
－ Ｐ．Ｈ．Ｈａｇｅｄｏｒｎら，Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｔｏｄａｙ ２０１８，２３（１），１０１－１１４
－ 国際公開第２０１９／２４３３９１号
－ 国際公開第２０２０／２４５３７７号
－ Ａｂｂａｓら，Ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｎｄ Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，第４版，Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ，Ｃｏ．（２０００）
－ Ｐｌｕｅｃｋｔｈｕｎ，Ｉｎ：Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｖｏｌ．１１３，ＲｏｓｅｎｂｕｒｇおよびＭｏｏｒｅ（編），Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９４）ｐｐ．２６９－３１５
－ 欧州特許出願公開第０４０４０９７号
－ 国際公開第１９９３／０１１６１号
－ Ｈｕｄｓｏｎ，Ｐ．Ｊ．ら，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９（２００３）１２９－１３４
－ Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．ら，ＰＮＡＳ ＵＳＡ ９０（１９９３）６４４４－６４４８

【国際調査報告】