(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-11-21
(54)【発明の名称】保存製剤
(51)【国際特許分類】
A61K 38/28 20060101AFI20241114BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20241114BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20241114BHJP
A61K 9/08 20060101ALI20241114BHJP
A61K 47/68 20170101ALI20241114BHJP
A61K 47/10 20170101ALI20241114BHJP
A61K 47/08 20060101ALI20241114BHJP
A61K 47/02 20060101ALI20241114BHJP
A61K 39/395 20060101ALN20241114BHJP
【ＦＩ】
A61K38/28
A61P43/00 111
A61P3/10
A61K9/08
A61K47/68
A61K47/10
A61K47/08
A61K47/02 ZNA
A61K39/395 Y
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024527771
(86)(22)【出願日】2022-11-14
(85)【翻訳文提出日】2024-05-13
(86)【国際出願番号】 US2022079791
(87)【国際公開番号】W WO2023086980
(87)【国際公開日】2023-05-19
(31)【優先権主張番号】63/279,390
(32)【優先日】2021-11-15
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】594197872
【氏名又は名称】イーライ リリー アンド カンパニー
(74)【代理人】
【識別番号】100145403
【弁理士】
【氏名又は名称】山尾 憲人
(74)【代理人】
【識別番号】100126778
【弁理士】
【氏名又は名称】品川 永敏
(74)【代理人】
【識別番号】100162684
【弁理士】
【氏名又は名称】呉 英燦
(72)【発明者】
【氏名】アレン，デイビッド ポール
(72)【発明者】
【氏名】ビールス，ジョン マイケル
(72)【発明者】
【氏名】コーバリ，ビンセント ジョン
(72)【発明者】
【氏名】ドノヴァン，パトリック ダニエル
(72)【発明者】
【氏名】チャン，カン カンイー
(72)【発明者】
【氏名】ワン，ウェイ
【テーマコード（参考）】
4C076
4C084
4C085
【Ｆターム（参考）】
4C076AA12
4C076AA94
4C076BB16
4C076CC21
4C076CC41
4C076DD09F
4C076DD23D
4C076DD26Z
4C076DD37R
4C076DD38D
4C076DD39R
4C076DD43Z
4C076DD67D
4C076EE23F
4C076EE59
4C076FF14
4C076FF16
4C076FF39
4C076FF61
4C084AA02
4C084AA03
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4C084BA44
4C084DB34
4C084MA66
4C084NA03
4C084NA12
4C084ZC031
4C084ZC032
4C084ZC351
4C084ZC352
4C085AA33
4C085BB42
(57)【要約】
インスリン－Ｆｃ融合体の保存製剤を本明細書に記載する。製剤は、糖尿病の治療において週１回投与するのに十分な長期の薬物動態学的及び薬力学的プロファイルを有するインスリン－Ｆｃ融合体を含み、化学的又は物理的安定性の許容できない損失なしに保管及び使用を可能にするのに十分に安定である。
【選択図】なし
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
水性無菌薬学的組成物であって、ａ）インスリン－Ｆｃ融合体と、
ｂ）フェノールと、
ｃ）フェノキシエタノール及びベンジルアルコールからなる群から選択される１つ以上のさらなる防腐剤と、
ｄ）等張化剤と、
ｅ）界面活性剤と、
ｆ）緩衝液とを含み、
６～７．５のｐＨを有し、
前記フェノール及び１つ以上のさらなる防腐剤が、安定性の許容できない損失なしに少なくとも１２週間の使用時有効期間を可能にする濃度で存在する、水性無菌薬学的組成物。
【請求項2】
フェノールの濃度が、１．５～４ｍｇ／ｍＬである、請求項１に記載の組成物。
【請求項3】
フェノールの濃度が、約１．８ｍｇ／ｍＬである、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項4】
前記さらなる防腐剤が、フェノキシエタノールである、請求項１～３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項5】
フェノキシエタノールの濃度が、４～１４ｍｇ／ｍＬである、請求項４に記載の組成物。
【請求項6】
フェノキシエタノールの濃度が、約４ｍｇ／ｍＬである、請求項４に記載の組成物。
【請求項7】
フェノキシエタノールの濃度が、約８ｍｇ／ｍＬである、請求項４に記載の組成物。
【請求項8】
前記さらなる防腐剤が、ベンジルアルコールである、請求項１～３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項9】
ベンジルアルコールの濃度が、５～１０ｍｇ／ｍＬである、請求項８に記載の組成物。
【請求項10】
ベンジルアルコールの濃度が、約９ｍｇ／ｍＬである、請求項９に記載の組成物。
【請求項11】
前記インスリン－Ｆｃ融合体が、基礎インスリン－Ｆｃ（ＢＩＦ）である、請求項１～１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項12】
ＢＩＦの濃度が、５～３０ｍｇ／ｍＬである、請求項１１に記載の組成物。
【請求項13】
ＢＩＦの濃度が、約７．１５、１４．３、及び２８．６ｍｇ／ｍＬからなる群から選択される、請求項１２に記載の組成物。
【請求項14】
前記組成物のｐＨが、６．３～６．８である、請求項１～１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項15】
前記組成物のｐＨが、約６．５である、請求項１～１４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項16】
前記等張化剤が、塩化ナトリウム、マンニトール及びグリセリンからなる群から選択される、請求項１～１５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項17】
前記等張化剤が、グリセリンである、請求項１～１６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項18】
グリセリンの濃度が、１５～３５ｍｇ／ｍＬである、請求項１７に記載の組成物。
【請求項19】
グリセリンの濃度が、約１７ｍｇ／ｍＬである、請求項１８に記載の組成物。
【請求項20】
前記界面活性剤が、ポロキサマー１８８、ポリソルベート２０及びポリソルベート８０からなる群から選択される、請求項１～１９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項21】
前記界面活性剤が、ポロキサマー１８８である、請求項１９～２０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項22】
ポロキサマー１８８の濃度が、０．０１～０．５ｍｇ／ｍＬである、請求項２１に記載の組成物。
【請求項23】
ポロキサマー１８８の濃度が、約０．４ｍｇ／ｍＬである、請求項２２に記載の組成物。
【請求項24】
前記緩衝液が、リン酸塩、クエン酸塩及びＴＲＩＳからなる群から選択される、請求項１～２３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項25】
前記緩衝液が、リン酸塩である、請求項２４に記載の組成物。
【請求項26】
リン酸塩の濃度が、５～１０ｍＭである、請求項２５に記載の組成物。
【請求項27】
水性無菌薬学的組成物であって、ａ）濃度５～３０ｍｇ／ｍＬのＢＩＦと、
ｂ）濃度１．５～４ｍｇ／ｍＬのフェノールと、
ｃ）濃度４～１４ｍｇ／ｍＬのベンジルアルコールと、
ｄ）濃度１５～３５ｍｇ／ｍＬのグリセリンと、
ｅ）濃度０．０１～０．５ｍｇ／ｍＬのポロキサマー１８８と、
ｆ）濃度５～１０ｍＭのリン酸塩とを含み、
６．３～６．８のｐＨを有する、水性無菌薬学的組成物。
【請求項28】
ａ）ＢＩＦの濃度が、約７．１５、約１４．３、及び約２８．６ｍｇ／ｍＬからなる群から選択され、ｂ）フェノールの濃度が、約１．８ｍｇ／ｍＬであり、
ｃ）ベンジルアルコールの濃度が、約９ｍｇ／ｍＬであり；
ｄ）グリセリンの濃度が、約１７ｍｇ／ｍＬであり；
ｅ）ポロキサマー１８８の濃度が、約０．４ｍｇ／ｍＬであり、
ｆ）リン酸塩の濃度が、約５ｍＭ及び約１０ｍＭからなる群から選択される、組成物であって、約６．５のｐＨを有する、請求項２７に記載の組成物。
【請求項29】
ＢＩＦの濃度が、約１４．３ｍｇ／ｍＬであり、リン酸塩の濃度が、約５ｍＭである、請求項２８に記載の組成物。
【請求項30】
ＢＩＦの濃度が、約２８．６ｍｇ／ｍＬであり、リン酸塩の濃度が、約１０ｍＭである、請求項２８に記載の組成物。
【請求項31】
ＢＩＦの濃度が、約７．１５ｍｇ／ｍＬである、請求項２８に記載の組成物。
【請求項32】
糖尿病を治療する方法であって、糖尿病の治療を必要とするヒトに、請求項１～３１のいずれか一項に記載の薬学的組成物の有効量を投与することを含む、方法。
【請求項33】
請求項１～３１に記載の薬学的組成物のうちのいずれか１つを含む、製品。
【請求項34】
複数回使用バイアルである、請求項３３に記載の製品。
【請求項35】
複数回使用ペン型注射器である、請求項３３に記載の製品。
【請求項36】
持続皮下インスリン注入療法のためのポンプデバイスである、請求項３３に記載の製品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、インスリン－Ｆｃ融合体の保存製剤に関する。製剤は、糖尿病の治療において週１回投与するのに十分な長期の薬物動態学的及び薬力学的プロファイルを有するインスリン－Ｆｃ融合体を含み、化学的又は物理的安定性の許容できない損失なしに保管及び使用を可能にするのに十分に安定である。
【背景技術】
【0002】
糖尿病は、インスリン分泌、インスリン作用、又は両方の欠陥に起因する高血糖症を特徴とする慢性疾患である。１型糖尿病（Ｔ１Ｄ）は、インスリン分泌能がほとんど又は全くないことを特徴とし、Ｔ１Ｄ患者は、生存のためにインスリン療法を必要とする。２型糖尿病（Ｔ２Ｄ）は、インスリン分泌不全、インスリン抵抗性、過剰な肝臓でのグルコース生産、及び／又は上記のうちの全ての寄与に起因する血糖値の上昇を特徴とする。Ｔ２Ｄ患者の多くは、疾患が進行してインスリン療法が必要になる。
【0003】
Ｔ１Ｄ患者はインスリンをほとんど又は全く産生しないため、有効なインスリン療法は、一般に、ボーラス注射によって提供される速効型の食事時インスリン、並びに食間血糖値を制御するために１日１回又は２回投与される長時間作用型の基礎インスリンという、２種類の体外投与インスリンの使用を伴う。Ｔ２Ｄ患者の治療は典型的に、処方された減量、運動、及び糖尿病食から始まるが、これらの手段で血糖の上昇を制御できない場合は、経口薬及びインクレチンベースの療法が必要になることがある。これらの薬剤が依然として不十分である場合、インスリンによる治療が検討される。疾患がインスリン療法を必要とするところまで進行しているＴ２Ｄ患者は、一般に、長時間作用型の基礎インスリンの１日１回の注射を始める。
【0004】
現在入手可能な基礎インスリンには、商品名ＬＡＮＴＵＳ（登録商標）で販売されているインスリングラルギン、商品名ＬＥＶＥＭＩＲ（登録商標）で販売されているインスリンデテミル、並びに商品名ＴＲＥＳＩＢＡ（登録商標）で販売されているインスリンデグルデクが含まれる。これらのインスリンはそれぞれ、１日１回投与が指示され、単一の容器又はデバイスからの複数回投与を可能にするのに十分な抗菌効果を有する保存製剤で利用可能である。
【0005】
既存のインスリン療法の毎日の注射を伴う治療レジメンは、複雑かつ投与に痛みを伴い得、低血糖及び体重増加などの望ましくない副作用をもたらし得る。より長い作用持続時間を有し、したがって、現在利用可能なインスリン製品よりも少ない回数、例えば週１回程度の低頻度の注射しか必要としないインスリン製品を開発するための研究が行われている。
【0006】
そのようなインスリン製品の１つのカテゴリーは、本明細書ではインスリン－Ｆｃ融合体と呼ばれる、抗体のＦｃ領域に結合したインスリン受容体を活性化する部分を含む。そのような製品の例は、上記の１日１回の基礎インスリンを含むインスリン製品で一般的に使用されるフェノール系防腐剤ｍ－クレゾールを含有する製剤を含む化合物及びその製剤を記載した米国特許第９，８５５，３１８号に記載されている。
【0007】
しかしながら、米国特許第９，８５５，３１８号に記載されている、及び／又は現在入手可能なインスリン製品の濃度の防腐剤を含むインスリン－Ｆｃ融合体の製剤は、許容できない安定性の不利益をもたらし得ることが見出されている。したがって、十分な抗菌効果を提供するが、許容できない安定性の不利益をもたらさない防腐剤を含む新しい製剤が必要とされている。
【0008】
本発明は、これらの必要性を満たすことを目的とする。
【発明を実施するための形態】
【0009】
したがって、一態様では、本発明は、水性無菌薬学的組成物であって
ａ）インスリン－Ｆｃ融合体と、
ｂ）フェノールと、
ｃ）フェノキシエタノール及びベンジルアルコールからなる群から選択される１つ以上のさらなる防腐剤と、
ｄ）等張化剤と、
ｅ）界面活性剤と、
ｆ）緩衝液とを含み、
６～７．５のｐＨを有し、
フェノール及び１つ以上のさらなる防腐剤が、安定性の許容できない損失なしに少なくとも１２週間の使用時有効期間を可能にする濃度で存在する、水性無菌薬学的組成物を提供する。
ａ）インスリン－Ｆｃ融合体と、
ｂ）フェノールと、
ｃ）フェノキシエタノール及びベンジルアルコールからなる群から選択される１つ以上のさらなる防腐剤と、
ｄ）等張化剤と、
ｅ）界面活性剤と、
ｆ）緩衝液とを含み、
６～７．５のｐＨを有し、
フェノール及び１つ以上のさらなる防腐剤が、安定性の許容できない損失なしに少なくとも１２週間の使用時有効期間を可能にする濃度で存在する、水性無菌薬学的組成物を提供する。
【0010】
別の態様では、本発明は、水性無菌薬学的組成物であって、
ａ）濃度５～３０ｍｇ／ｍＬの基礎ＢＩＦと、
ｂ）濃度１．５～４ｍｇ／ｍＬのフェノールと、
ｃ）濃度４～１４ｍｇ／ｍＬのベンジルアルコールと、
ｄ）濃度１５～３５ｍｇ／ｍＬのグリセリンと、
ｅ）濃度０．０１～０．５ｍｇ／ｍＬのポロキサマー１８８と、
ｆ）濃度５～１０ｍＭのリン酸塩とを含み、
６～７．５のｐＨを有する、組成物を提供する。
ａ）濃度５～３０ｍｇ／ｍＬの基礎ＢＩＦと、
ｂ）濃度１．５～４ｍｇ／ｍＬのフェノールと、
ｃ）濃度４～１４ｍｇ／ｍＬのベンジルアルコールと、
ｄ）濃度１５～３５ｍｇ／ｍＬのグリセリンと、
ｅ）濃度０．０１～０．５ｍｇ／ｍＬのポロキサマー１８８と、
ｆ）濃度５～１０ｍＭのリン酸塩とを含み、
６～７．５のｐＨを有する、組成物を提供する。
【0011】
別の態様では、本発明は、血糖コントロールを改善する方法であって、血糖コントロールの改善を必要とするヒトに、本発明の水性無菌薬学的組成物の有効量を投与することを含む方法を提供する。
【0012】
加えて、本発明は、療法に使用するための本発明の水性無菌薬学的組成物を提供する。より詳細には、本発明は、血糖コントロールの改善に使用するための薬学的組成物を提供する。本発明はまた、血糖コントロールを改善するための医薬品の製造における薬学的組成物の使用を提供する。
【0013】
加えて、本発明は、本発明の水性無菌薬学的組成物を含む製品を提供する。より詳細には、ある特定の態様では、製品は、複数回使用バイアル、カートリッジ、再使用可能なペン型注射器、使い捨てペン型デバイス、持続皮下インスリン注入療法のためのポンプデバイス、又は持続皮下インスリン注入療法のためのポンプデバイスにおいて使用するための容器施栓系である。
【0014】
本発明は、長期間の作用を有するインスリン－Ｆｃ融合体の保存製剤に関する。インスリン－Ｆｃ融合体は、例えば、米国特許第９，８５５，３１８号、ＣＮ１０３５０９１１８、ＷＯ２０１１／１２２９２１、ＵＳ２０１５／０１９６６４３、ＷＯ２０１８／１８５１３１、ＷＯ２０２０／００６５２９、ＷＯ２０２０／０７４５４４、ＷＯ２０２１１２６５８４、ＵＳ２０２１０３００９８３、ＵＳ２０２１／０３２４０３３、及びＵＳ２０２１３４０２１２に記載されている。
【0015】
ある特定の好ましい実施形態では、インスリン－Ｆｃ融合体は、基礎インスリンＦｃ（basal insulin Fc、ＢＩＦ）又はインスリンｅｆｓｉｔｏｒａ ａｌｆａ（ＣＡＳ登録番号２１３１０３８－１１－２）として公知の米国特許第９，８５５，３１８号に記載の化合物である。ＢＩＦは、ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域に融合したインスリン受容体アゴニストの二量体を含み、インスリン受容体アゴニストは、第１のペプチドリンカーの使用によってインスリンＡ鎖類似体に融合したインスリンＢ鎖類似体を含み、インスリンＡ鎖類似体のＣ末端残基は、第２のペプチドリンカーのＮ末端残基に直接融合され、第２のペプチドリンカーのＣ末端残基は、ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域のＮ末端残基に直接融合される。ＢＩＦの各単量体は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する。
ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＥＬＶＣＧＥＲＧＦＨＹＧＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＧＩＶＥＱＣＣＴＳＴＣＳＬ
ＤＱＬＥＮＹＣＧＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＧＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰ
ＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮ
ＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱ
ＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭ
ＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ
（配列番号１）。各単量体は、７位と４４位、１９位と５７位、４３位と４８位、１１４位と１７４位、及び２２０位と２７８位のシステイン残基間に鎖内ジスルフィド結合を含む。２つの単量体は、８０位と８３位のシステイン残基間のジスルフィド結合によって結合して二量体を形成する。ＢＩＦの構造、機能及び製造については、米国特許第９，８５５，３１８号により詳細に記載されている。
ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＥＬＶＣＧＥＲＧＦＨＹＧＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＧＩＶＥＱＣＣＴＳＴＣＳＬ
ＤＱＬＥＮＹＣＧＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＧＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰ
ＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮ
ＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱ
ＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭ
ＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ
（配列番号１）。各単量体は、７位と４４位、１９位と５７位、４３位と４８位、１１４位と１７４位、及び２２０位と２７８位のシステイン残基間に鎖内ジスルフィド結合を含む。２つの単量体は、８０位と８３位のシステイン残基間のジスルフィド結合によって結合して二量体を形成する。ＢＩＦの構造、機能及び製造については、米国特許第９，８５５，３１８号により詳細に記載されている。
【0016】
本明細書で使用される場合、「ＢＩＦ」という用語は、配列番号１のアミノ酸配列を有する２つの単量体で構成された任意のインスリン受容体アゴニストを指し、インスリン受容体アゴニスト製品の承認を求める当事者が、実際にそのインスリン受容体アゴニストをＢＩＦとして同定しているか、又はいくつかの他の用語を使用しているかにかかわらず、ＢＩＦに関してＥｌｉ Ｌｉｌｌｙ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙによって規制当局に提出された全体的又は部分的なデータに依存する、当該製品の承認を求める規制提出書類の対象である任意のタンパク質を含む。
【0017】
本発明の組成物中のインスリン－Ｆｃ融合体の濃度は、広範囲のインスリン要件を有するＴ２ＤＭ及びＴ１ＤＭを有する患者が必要とするインスリン用量の範囲の投与を可能にするのに十分でなければならない。ＬＡＮＴＵＳ（インスリングラルギン）、ＴＯＵＪＥＯ（インスリングラルギン）、ＴＲＥＳＩＢＡ（インスリンデグルデク）及びＬＥＶＥＭＩＲ（インスリンデテミル）などの１日１回投与に適した現在入手可能な基礎インスリン製品は、１００インスリン単位（ＩＵ）／ｍＬ～３００ＩＵ／ｍＬの範囲の濃度で入手可能である。本発明のある特定の実施形態では、インスリン－Ｆｃ融合体は、約１００～約２０００インスリン単位（ＩＵ）／ｍＬの範囲の濃度で存在する。ある特定の実施形態では、インスリン－Ｆｃ融合体は、約２５０ＩＵ／ｍＬ、５００ＩＵ／ｍＬ又は１０００ＩＵ／ｍＬの濃度で存在する。インスリン－Ｆｃ融合体の濃度は、体積当たりの質量として表すこともできる。例えば、インスリン－Ｆｃ融合体がＢＩＦである特定の実施形態では、ＢＩＦの濃度は約５～３０ｍｇ／ｍＬである。ある特定の実施形態では、ＢＩＦの濃度は、７．１５、１４．３、及び２８．６ｍｇ／ｍＬからなる群から選択される。
【0018】
本発明の製剤は、最初に製造された時は無菌であるが、組成物が複数回使用バイアル又はカートリッジで提供される場合は、インスリン－Ｆｃ融合体及び製剤の任意の他の成分と適合性である抗菌性防腐剤が、複数回使用製品についての規制及び薬局方の抗菌性防腐剤要件を満たすのに十分な強度で添加される。これらの要件は、製品に不注意に導入され得る微生物を阻害又は死滅させる防腐剤の能力に挑戦するように設計された試験を含む。これらの試験を実施するためのガイドラインは、米国薬局方（ＵＳＰ）＜５１＞「Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ Ｔｅｓｔｉｎｇ」及び欧州薬局方（Ｐｈ．Ｅｕｒ．又はＥＰ）５．１．３「Ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ」に提供されている。例えば、Ｍｅｙｅｒ，Ｂ．Ｄ．ら、Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｖｅ ｕｓｅ ｉｎ ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ ｐｒｏｄｕｃｔｓ：Ｐａｓｔ ａｎｄ ｐｒｅｓｅｎｔ、ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥＳ ２００７，９６，（１２），３１５５－３１６７；Ｍｏｓｅｒ，Ｃ．Ｌ．、Ｍｅｙｅｒ，Ｂ．Ｋ．、Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｃｏｍｐｅｎｄｉａｌ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ ｔｅｓｔｓ：Ａ ｒｅｖｉｅｗ．ＡＡＰＳ ＰＨＡＲＭ．ＳＣＩ．ＴＥＣＨ、２０１１年、１２、（１）、２２２～２２６頁を参照されたい。
【0019】
上で参照した許容基準は、種々の規定された時点での微生物数のｌｏｇ１０減少を評価し、それらの数を最初の時点ゼロ接種レベルと比較する。例えば、ＵＳＰ基準は、７日後に初期細菌数から１．０ｌｏｇ以上の減少、１４日後に初期細菌数から３．０ｌｏｇ以上の減少、及び２８日後に１４日後の細菌数から増加なしであることを要求する。ＥＰ Ｂ基準は、ＥＵ規制機関によって必須であると見なされ、初期細菌数と比較して、２４時間後に１ｌｏｇの減少及び７日後に３ｌｏｇの減少を少なくとも必要とする。ＥＰ Ｂ基準はＵＳＰ基準よりも厳格であるので、ＥＰ Ｂ基準を満たす製剤はいずれも、ＵＳＰ＜５１＞基準も満たす。ＥＰ Ａ基準は最も厳格であり、６時間後に２ｌｏｇの減少及び２４時間後に３ｌｏｇの減少を必要とする。多くの防腐剤系では、ＥＰ Ａ基準を達成することが困難であり、ＥＰ Ａを達成するために添加される防腐剤は、多くの場合、製品に有害な影響を及ぼし、及び／又は、患者にとっては毒性であるレベルであるが、より達成可能であると考えられている。
【0020】
現在皮下投与に利用可能な治療用インスリン製品は、複数回使用製品であり、したがって、ＵＳＰ基準及びＥＰ Ｂ基準を含む抗菌効果についての規制要件を満たさなければならない。これらの要件を満たすために一般的に使用される防腐剤としては、以下の表１に列挙される製品におけるように、フェノール（ＣＡＳ番号１０８－９５－２、分子式Ｃ６Ｈ５０Ｈ、分子量９４．１１）、及びｍ－クレゾール（ＣＡＳ番号１０８－３９－４、分子式Ｃ７Ｈ８０、分子量１０８．１４）が挙げられる。
【表1】
【0021】
しかしながら、ＢＩＦのようなインスリン－Ｆｃ融合体の製剤では、これらの濃度のｍ－クレゾール及びフェノールは、タンパク質の沈殿をもたらし、したがって、ＵＳＰ要件及びＥＰ要件を満たすのに十分な抗菌効力を提供するために使用することができない。したがって、本発明の製剤は、異なる防腐剤：フェノキシエタノール（ＣＡＳ番号１２２－９９－６、分子式Ｃ８Ｈ１０Ｏ２、分子量１３８．１６ｇ／ｍｏｌ）及び／又はベンジルアルコール（ＣＡＳ番号１００－５１－６、分子式Ｃ７Ｈ８Ｏ、分子量１０８．１４ｇ／ｍｏｌ）の使用に依存する。具体的には、ベンジルアルコール及び／又はフェノキシエタノールと組み合わせて特定の濃度のフェノールを使用することにより、物理的安定性の許容できない損失を引き起こすことなく、ＢＩＦの所望のｐＨ範囲内の製剤において抗菌効果基準を満たすことができることが分かった。
【0022】
本発明の製剤中のフェノール及びベンジルアルコール及び／又はフェノキシエタノールは、製剤がＵＳＰ及びＥＰ Ｂのガイドラインに記載されている非経口製品の最低無菌性要件を確実に満たすのに十分な濃度でなければならない。本明細書で使用される場合、「無菌」という用語は、これらの最低無菌性要件を満たす製剤を指す。
【0023】
しかし、これらの防腐剤の濃度は、インスリン－Ｆｃ融合体タンパク質に許容できない物理的又は化学的安定性の問題を引き起こすほど高くてはならない。本発明の組成物は、安定性の許容できない損失なしに保管及び複数週間の使用（本明細書では「使用時」有効期間と称される）を可能にするのに十分に安定である。ある特定の実施形態では、組成物は、少なくとも１２週間の使用時有効期間を可能にするのに十分に安定である。ある特定の実施形態では、組成物は、３０℃で２週間の冷蔵下で１２週間の使用時有効期間を可能にするのに十分に安定である。ある特定の実施形態では、組成物は、２５℃で８週間の使用時有効期間を可能にするのに十分に安定である。ある特定の実施形態では、組成物は、２５℃で１２週間の使用時有効期間を可能にするのに十分に安定である。ある特定の実施形態では、組成物は、３０℃で８週間の使用時有効期間を可能にするのに十分に安定である。ある特定の実施形態では、組成物は、３０℃で１２週間の使用時有効期間を可能にするのに十分に安定である。
【0024】
フェノールに関して、いくつかの複数回投与非経口薬剤製品は、防腐剤として５ｍｇ／ｍＬのフェノールを使用するが、この濃度は、ＢＩＦ製剤においてタンパク質沈殿をもたらすことが見出されたので、濃度は５ｍｇ／ｍＬ未満でなければならない。本発明のある特定の実施形態におけるフェノールの濃度は、１．５～４ｍｇ／ｍＬの範囲である。本発明のある特定の実施形態におけるフェノールの濃度は、約１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９又は４．０ｍｇ／ｍＬである。ある特定の好ましい実施形態では、フェノールの濃度は、１．８～３．５ｍｇ／ｍＬの範囲である。ある特定の好ましい実施形態におけるフェノールの濃度は、約１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４又は３．５ｍｇ／ｍＬである。ある特定の好ましい実施形態では、フェノールの濃度は、約１．８、２、２．５、３又は３．５ｍ／ｍＬである。特に好ましい実施形態では、フェノールの濃度は約１．８ｍｇ／ｍＬである。フェノールは、その物理的特性のために、典型的には、本明細書に記載されるものなどの水性組成物に９０％水溶液の形態で添加されることに留意されたい。例えば、後述の試験の多くでは、フェノールは、９０％フェノール＋１０％水である「液化蒸留フェノール」として添加された。これらの試験では、列挙されたフェノール濃度は、組成物に添加された９０％溶液の濃度を指す。したがって、２ｍｇ／ｍＬの９０％フェノール溶液を用いて調製された組成物中の絶対フェノール含有量は、１．８ｍｇ／ｍＬである。特に明記しない限り、例えば、９０％フェノール溶液を使用するとして以下に記載する試験におけるように、本発明の組成物中に含まれるフェノールの濃度は、絶対フェノール含有量を指す。
【0025】
本発明の製剤中のフェノキシエタノール又はベンジルアルコールのいずれかの濃度は、フェノールの濃度に依存するが、製剤が所望のｐＨで無菌であるのに十分な濃度で存在しなければならない。例えば、ｐＨ６．５のある特定の実施形態では、９ｍｇ／ｍＬのフェノキシエタノールは、フェノールの非存在下ではＥＰ Ｂ基準に合格するのに十分ではないが、４ｍｇ／ｍＬという低い濃度を１．８ｍｇ／ｍＬという低いフェノール濃度と組み合わせて使用した場合には、ＥＰ Ｂ基準を満たすことができる。同様に、ある特定の実施形態では、９ｍｇ／ｍＬのベンジルアルコールは、ＵＳＰ基準にさえ合格するのに十分ではないが、５ｍｇ／ｍＬという低い濃度であっても、１．８ｍｇ／ｍＬのフェノールと組み合わせて使用するとＵＳＰ基準を満たす。
【0026】
ある特定の実施形態では、フェノキシエタノールの濃度は、４ｍｇ／ｍＬ～１４ｍｇ／ｍＬの範囲である。ある特定の実施形態では、フェノキシエタノールの濃度は、約４、５、６、７、８、９．１０、１１、１２、１３又は１４ｍｇ／ｍＬである。ある特定の好ましい実施形態では、フェノキシエタノールの濃度は、約４又は約８ｍｇ／ｍＬである。
【0027】
ある特定の実施形態では、ベンジルアルコールの濃度は、５～１０ｍｇ／ｍＬの範囲である。ある特定の実施形態では、ベンジルアルコールの濃度は、約５、６、７、８、９又は１０ｍｇ／ｍＬである。ある特定の好ましい実施形態では、ベンジルアルコールの濃度は、約９ｍｇ／ｍＬである。
【0028】
本発明の製剤のｐＨは、５．５～７．５の範囲である。ある特定の実施形態では、ｐＨは、約５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４又は７．５である。ある特定の実施形態では、ｐＨは６～７の範囲である。ある特定の実施形態では、ｐＨは、約６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９又は７．０である。好ましくは、本発明の製剤のｐＨは、少なくともインスリン－Ｆｃ融合体のＰＩである。ＢＩＦを含む製剤の場合、ｐＨは好ましくは少なくとも約６．１である。ＢＩＦを含むある特定の実施形態では、ｐＨは、６．２～７．４の範囲である。ＢＩＦを含むある特定の実施形態では、ｐＨは、６．２～６．９の範囲である。ＢＩＦを含むある特定の実施形態では、ｐＨは、６．３～６．８の範囲である。ＢＩＦを含む特に好ましい実施形態では、ｐＨは約６．５である。
【0029】
所望であれば、緩衝剤が含まれてもよい。そのような緩衝剤の例は、二塩基性リン酸ナトリウムなどのリン酸塩、クエン酸塩、酢酸ナトリウム及びトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、又はＴＲＩＳである。緩衝化合物が必要な場合、クエン酸塩緩衝液又はリン酸塩緩衝液が好ましい。ある特定の実施形態では、本発明の組成物は、クエン酸塩緩衝液を５～１０ｍＭの範囲の濃度で含む。ある特定の実施形態では、本発明の組成物は、リン酸塩を５～１０ｍＭの範囲の濃度で含む。ある特定の好ましい実施形態では、本発明の組成物は、リン酸塩を約５、６、７、８、９又は１０ｍＭの濃度で含む。ある特定の好ましい実施形態では、本発明の組成物は、リン酸塩を約５ｍＭ又は約１０ｍＭのいずれかの濃度で含む。
【0030】
体液とほぼ等張ではない溶液が、投与する際に痛みを伴う刺すような感覚を生じるため、組成物を投与する時に、注入部位の体液の張度（すなわち、浸透圧）を可能な限り厳密に一致させることが望ましい。したがって、組成物は、注入の部位で体液とほぼ等張であることが望ましい。等張化剤の非存在下での組成物の浸透圧が組織の浸透圧（血液については、約３００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ；浸透圧に関する欧州薬局方の要件は＞２４０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇである）よりも十分に低い場合、一般には等張化剤を添加して、組成物の張度を約３００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇに上げるべきである。組成物の浸透圧は、安定化剤を含む組成物中の他の賦形剤の正体及び濃度によって決定される。したがって、等張化剤を添加しなければならないかどうかを決定するためには、組成物中の様々な賦形剤の全ての濃度を評価しなければならず、そのような評価及び決定は、標準的な技術を使用して容易に行われる。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、Ｄａｖｉｄ Ｂ．Ｔｒｏｙ及びＰａｕｌベリンジャー編、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ、２００６年、２５７～２５９頁；Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｅｓｓｅｎｔｉａｌｓ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ、Ｌｉｎｄａ Ｅｄ Ｆｅｌｔｏｎ、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ、２０１３年、２７７～３００頁を参照されたい。典型的な等張化剤には、グリセロール（グリセリン）、マンニトール及び塩化ナトリウムが含まれる。等張化剤の添加が必要な場合、グリセリンが好ましい。ある特定の実施形態では、グリセロールの濃度は、約１０～約５０ｍｇ／ｍＬである。ある特定の実施形態では、グリセロールの濃度は、約１５～約３５ｍｇ／ｍＬである。ある特定の実施形態では、グリセロールの濃度は、約１５、１７、２０、２１及び３５ｍｇ／ｍＬからなる群から選択される。ある特定の好ましい実施形態では、グリセリンの濃度は、約１７ｍｇ／ｍＬである。
【0031】
本発明の組成物はまた、界面活性剤などの安定化剤を含む、他の賦形剤を含んでもよい。非経口薬学的組成物に使用するために開示された界面活性剤の例には、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）及びポリソルベート８０（ＴＷＥＥＮ８０）などのポリソルベート、ＰＥＧ４００、ＰＥＧ３０００、ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００などのポリエチレングリコール、ポリオキシエチレン（２３）ラウリルエーテル（ＣＡＳ番号：９００２－９２－０、商品名ＢＲＩＪ（登録商標）で販売）などのポリエチレングリコール、ＭＹＲＪ（商標）などのアルコキシル化脂肪酸、ポリプロピレングリコール、ポロキサマー１８８（ＣＡＳ番号９００３－１１－６、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｆ－６８の商品名で販売）及びポロキサマー４０７（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｆ１２７）などのブロックコポリマー、ソルビタンアルキルエステル（例えば、ＳＰＡＮ（登録商標））、ポリエトキシル化ヒマシ油（例えば、ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）、ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（登録商標））、並びにトレハロース及びトレハロースラウレートエステルなどのその誘導体が含まれる。
【0032】
ある特定の好ましい実施形態では、組成物は、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０及びポロキサマー１８８からなる群から選択される界面活性剤を含む。ポロキサマー１８８が最も好ましい。ある特定の実施形態では、界面活性剤の濃度は、０．０１～１０ｍｇ／ｍＬ又は０．１～０．５ｍｇ／ｍＬの範囲である。界面活性剤がポロキサマー１８８である好ましい実施形態では、ポロキサマー１８８の濃度は、約０．４ｍｇ／ｍＬである。
【0033】
ある特定の実施形態では、本発明の組成物は、複数回使用バイアル、カートリッジ、再使用可能なペン型注射器、使い捨てペン型デバイス、持続皮下インスリン注入療法のためのポンプデバイス、又は持続皮下インスリン注入療法のためのポンプデバイスで使用するための別の容器施栓系などの製品において提供される。ある特定の実施形態では、組成物は、特定の増分で調整され得るインスリンの可変用量を提供するために使用され得る再使用可能なペン型注射器で提供される。例えば、ある特定の実施形態では、そのようなペン型注射器は、１５００単位のインスリンを含み、１回の注射で最大４００単位の用量を送達するように５単位の増分で調整することができる。他の実施形態では、そのようなペン型注射器は、３０００単位のインスリンを含み、１回の注射で最大８００単位の用量を送達するように１０単位の増分で調整することができる。
【0034】
本明細書で使用される場合、「約」という用語は、測定の性質又は精度を考慮して、示された量（amount）又は量（quantity）の許容誤差の程度を指すことを意図している。例えば、誤差の程度は、当技術分野で理解されているように、測定のために提供された有効数字の数によって示すことができ、量（amount）又は量（quantity）について報告された最も正確な有効数字の±１の変動を含むが、これに限定されない。典型的には、例示的な誤差の程度は、所与の値又は値の範囲の２０パーセント（％）以内、好ましくは１０％以内、より好ましくは５％以内である。本明細書に示される数値は、別段の記載がない限り近似値であり、「約」という用語は、明示的に記載されていない場合に推測できることを意味する。
【実施例】
【0035】
防腐剤の存在下での立体配座安定性
様々なフェノール系防腐剤と共に製剤化された場合のＢＩＦの立体配座安定性に関する試験を行った。組成を以下の表２に示す。
様々なフェノール系防腐剤と共に製剤化された場合のＢＩＦの立体配座安定性に関する試験を行った。組成を以下の表２に示す。
【表2】
【0036】
外因性蛍光測定を実施して、ＢＩＦの立体配座安定性を評価した。１－アニリノナフタレン－８－スルホネート（ＡＮＳ）などの外因性蛍光色素は、水性環境では最小限に蛍光性であるが、極性有機溶媒中では高度に蛍光性になる。これらの蛍光色素は、タンパク質表面上の疎水性パッチの露出を検出し、タンパク質のフォールディングプロセス及びアンフォールディングプロセスについての情報を提供するために使用されている。例えば、Ｈａｗｅ，Ａ．ら、Ｅｘｔｒｉｎｓｉｃ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｄｙｅｓ ａｓ ｔｏｏｌｓ ｆｏｒ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ．ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＲＥＳＥＡＲＣＨ、２００８年、２５（７）、１４８７～１４９９頁を参照されたい。外因性蛍光法は、溶液中のタンパク質の表面疎水性を測定するためにＢｉｓ－ＡＮＳ蛍光プローブを使用するプレートベースの方法である。ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ ｉ３ｘマルチモードマイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ、米国サンノゼ）を使用して蛍光スペクトルを測定した。試料を、黒色ポリプロピレン９６ウェルｃｏｒｎｉｎｇハーフエリアフラットプレートに配置した。５μＭ色素を含有する約１００μＬの試料組成物を各ウェルに移し、２５℃で測定した。励起波長（λＥｘ）は３９０ｎｍであり、発光スペクトルを４２０ｎｍから６００ｎｍまで２ｎｍ刻みで走査した。
【0037】
ＢＩＦ含有組成物のピーク蛍光シグナルを以下の表３に示す。
【表3】
【0038】
表３に示すように、防腐剤の非存在下では、いくらかの蛍光が検出され、これは、その天然の折り畳まれた状態であっても、ＢＩＦの表面上に疎水性パッチがあることを示す。防腐剤が添加されると、蛍光強度が増加する。ＢＩＦの非存在下では、Ｂｉｓ－ＡＮＳ及び防腐剤は、いかなる蛍光シグナルも生成しない。したがって、観察された強度は、ＢＩＦと防腐剤分子との間の相互作用、及び結果として生じるタンパク質の部分的なアンフォールディングに起因し、より疎水性の高いパッチの露出をもたらす。
【0039】
更に、蛍光シグナルの強度は防腐剤の疎水性と相関し、ｍ－クレソールが最も疎水性であり、最も強いシグナルを生成し、フェノール及びベンジルアルコールがこれに続いた。３つの防腐剤の中で疎水性が最も低いベンジルアルコールは、ＢＩＦ配座への摂動が最も少なかった。
【0040】
現在入手可能なインスリン製品に使用されている防腐剤の存在下での物理的安定性
２８．６ｍｇ／ｍＬのＢＩＦと、複数回用量として販売されているインスリン製品に使用されている濃度のｍ－クレゾール及び／又はフェノールとを含有する製剤をｐＨ６．５で調製した。製剤をガラスバイアルに充填し、室温で保管し、目視検査によって試験した。結果を以下の表４に示す：
２８．６ｍｇ／ｍＬのＢＩＦと、複数回用量として販売されているインスリン製品に使用されている濃度のｍ－クレゾール及び／又はフェノールとを含有する製剤をｐＨ６．５で調製した。製剤をガラスバイアルに充填し、室温で保管し、目視検査によって試験した。結果を以下の表４に示す：
【表4】
【0041】
製剤１及び２はそれぞれ、ＢＩＦ原薬の沈殿をもたらし、物理的不安定性を示している。製剤３及び４は透明なままであり、ＢＩＦ原薬が物理的に安定なままであることを示している。
【0042】
ｐＨの関数としての安定性
生物物理学的開発可能性／ハイスループットプロファイリング試験を、異なる緩衝液マトリックス及びｐＨ条件でＢＩＦの２ｍｇ／ｍＬ製剤に対して行った。示差走査熱量測定（ＤＳＣ）を使用して、溶融開始温度Ｔｍ（Ｔｍ，Ｏｎｓｅｔ）を測定した。Ｔｍ，Ｏｎｓｅｔは、折り畳まれたタンパク質がその天然の立体配座を失い始める温度でありすなわち、Ｔｍ，Ｏｎｓｅｔが高いほど、タンパク質は変性に対して感受性が低い。結果を以下の表５に示す。
生物物理学的開発可能性／ハイスループットプロファイリング試験を、異なる緩衝液マトリックス及びｐＨ条件でＢＩＦの２ｍｇ／ｍＬ製剤に対して行った。示差走査熱量測定（ＤＳＣ）を使用して、溶融開始温度Ｔｍ（Ｔｍ，Ｏｎｓｅｔ）を測定した。Ｔｍ，Ｏｎｓｅｔは、折り畳まれたタンパク質がその天然の立体配座を失い始める温度でありすなわち、Ｔｍ，Ｏｎｓｅｔが高いほど、タンパク質は変性に対して感受性が低い。結果を以下の表５に示す。
【表5】
【0043】
溶液ｐＨが５．５から７．５に増加するにつれて、緩衝液タイプ又はイオン強度にかかわらず、Ｔｍ，Ｏｎｓｅｔが相応に増加する。
【0044】
防腐剤を含む場合と含まない場合のＢＩＦのコロイド安定性についても、ＢＩＦのｐＩである約６．１を下回るｐＨ条件及び上回るｐＨ条件で試験を行った。クエン酸塩緩衝液中で調製したＢＩＦ原薬を、１．５Ｎクエン酸又は１Ｎ ＮａＯＨを使用してｐＨ滴定に使用した。
【0045】
潜在的な液相分離の前駆体と考えられる乳白について組成物を目視検査した。Ｒａｕｔ，Ａ．Ｓ．；Ｋａｌｏｎｉａ，Ｄ．Ｓ．、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ ｏｎ ｏｐａｌｅｓｃｅｎｃｅ ａｎｄ ｌｉｑｕｉｄ－ｌｉｑｕｉｄ ｐｈａｓｅ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ、２０１６年、１３（５）、１４３１－１４４４頁。組成物は、防腐剤を含む場合と含まない場合との両方で、ｐＨが原薬のｐＩに近づくにつれて乳白色に見え、ｐＩを超えるｐＨで透明になった。
【0046】
これらの試験は、ＢＩＦのｐＩよりも高いｐＨはＢＩＦの立体配座安定性及びコロイド安定性に有利であることを示している。
【0047】
防腐剤濃度及び抗菌効力
試験を、フェノールを含有するか又は含有しない様々な濃度のフェノキシエタノール及びベンジルアルコールを含むＢＩＦ薬剤製品の製剤の抗菌効力を試験するように設計した。組成物を調製するために使用した材料を、以下の表７に示す。
試験を、フェノールを含有するか又は含有しない様々な濃度のフェノキシエタノール及びベンジルアルコールを含むＢＩＦ薬剤製品の製剤の抗菌効力を試験するように設計した。組成物を調製するために使用した材料を、以下の表７に示す。
【表6】
【0048】
ＢＩＦ及びフェノールとフェノキシエタノール又はベンジルアルコールのいずれかとの混合物を含有する組成物を、以下の表８及び表９に記載するように調製した。
【表7】
【表8】
【0049】
約１５０ｍＬの溶液を０．２２μｍのＰＶＤＦフィルタで濾過し、直ちに滅菌ガラス容器に移した。抗菌効力試験を行うまで、試料を５℃で保管した。
【0050】
ＡＥＴを、一般的な潜在的微生物汚染物質を表すために、試験溶液に様々な微生物の純粋な培養物を接種することによって行った。具体的には、溶液に、ＵＳＰ＜５１＞及びＥＰ ５．１．３に列挙されている以下の微生物：Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ胞子Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ及びＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓを接種した。接種された溶液を、冷蔵インキュベータ内で制御された室温（２０℃～２５℃）で保管した。接種されたバイアル中の生存細胞濃度を、接種後初期、６時間後、２４時間後、７日後、１４日後、及び２８日後にプレート計数によって計測した。結果をＥＰ ５．１．３及びＵＳＰ＜５１＞に記載の合格基準と比較し、製剤を各試験基準に合格又は不合格のいずれかとして判定した。ＥＰ「Ａ」基準が最も厳格であり、ＥＰ「Ｂ」基準、次いでＵＳＰ基準が続くと考えられる。本試験の目的は、ＥＰ Ｂ基準及びＵＳＰ基準を満たすＢＩＦ薬剤製品の製剤を明らかにすることである。
【0051】
フェノキシエタノール含有組成物の結果を以下の表１０に示す：
【表9】
【0052】
表１０に示すように、フェノキシエタノールは単独で有効な防腐剤となり得る。１０ｍｇ／ｍＬ以上の濃度では、ＥＰ Ｂ基準及びＵＳＰ基準が満たされる。加えて、４ｍｇ／ｍＬのフェノキシエタノール及び２ｍｇ／ｍＬ以上の液化フェノールの組み合わせもまた、ＥＰ Ｂ基準及びＵＳＰ基準を満たすことができる。最後に、ＥＰ Ｂ基準及びＵＳＰ基準は、ある範囲のｐＨにわたって満たされる。
【0053】
ベンジルアルコール含有組成物の結果を以下の表１１に示す。
【表10】
【0054】
表１１に示すように、９ｍｇ／ｍＬのベンジルアルコールを含有し、フェノールを含有しない溶液は、おそらくベンジルアルコールに最適と考えられるｐＨ範囲を超えるという事実のために、ＥＰ Ｂ基準及びＵＳＰ基準を満たすことができない。Ｍｅｙｅｒ，Ｂ．Ｄ．ら、Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｖｅ ｕｓｅ ｉｎ ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ ｐｒｏｄｕｃｔｓ：Ｐａｓｔ ａｎｄ ｐｒｅｓｅｎｔ．ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥＳ、２００７年、９６、（１２）、３１５５～３１６７頁を参照されたい。しかしながら、フェノールと組み合わせた場合、ＢＩＦ薬剤製品のｐＨ範囲にわたる溶液は、ＵＳＰ基準を満たし、ベンジルアルコール及びフェノールの試験した最も低い濃度を含有する製剤を例外として、ＥＰ Ｂ基準を満たす。加えて、驚くべきことに、９ｍｇ／ｍＬのベンジルアルコール及び様々な濃度の液化フェノールを含有する製剤は、より厳格なＥＰ Ａ基準を満たす。
【0055】
防腐剤比較－化学的及び物理的安定性
試験を、フェノールとフェノキシエタノール又はベンジルアルコールのいずれかとの組み合わせを含有する２つのＢＩＦ製剤の物理的及び化学的安定性を試験するように設計した。使用した原薬及び賦形剤を以下の表１２に列挙する。
試験を、フェノールとフェノキシエタノール又はベンジルアルコールのいずれかとの組み合わせを含有する２つのＢＩＦ製剤の物理的及び化学的安定性を試験するように設計した。使用した原薬及び賦形剤を以下の表１２に列挙する。
【表11】
【0056】
５０ｍｇ／ｍＬのＢＩＦと、一塩基性リン酸ナトリウム一水和物及び二塩基性リン酸ナトリウム七水和物の組み合わせを含む緩衝液とを含む溶液を調製して、５ｍＭリン酸塩及び以下の表１３に示す他の成分の緩衝液強度を得た。
【表12】
【0057】
溶液を０．２２μｍのＰＶＤＦフィルタで濾過し、直ちに滅菌ガラス容器に移し、次いで５ｍＬガラスバイアルに充填した。バイアルに蓋をし、５℃、２５℃、及び３０℃で最長６ヶ月間保管した。試料を、様々な時点で様々な安定性を示すアッセイによる試験に供した。
【0058】
結果を以下の表１４～表１９に示す。
【表13】
【表14】
【表15】
【表16】
【表17】
【表18】
【0059】
表１４に示すように、溶液ｐＨは、試験期間を通して一定のままであった。ＳＥＣ及び肉眼で見えない粒子からの結果によって、総凝集体（表１５）及びＨＩＡＣ又はＭＦＩによる粒子状物質（表１６及び表１７）に示すように、試料が各ｐＨで物理的に安定であることも確認された。製剤の化学的安定性を、ＲＰ－ＨＰＬＣ及びＡＥＸを用いて評価した。製剤は、総不純物（表１８）及び総酸性変異体（表１９）に反映されるように、同等の化学的安定性を示し、本試験では、ｐＨ６．４で最も安定であった。
【0060】
安定性
試験を、３ｍＬカートリッジ中の複数回使用ＢＩＦ薬剤製品の安定性及び機能性を評価するように設計した。全ての組成物を、５ｍＭリン酸塩、２１ｍｇ／ｍＬグリセリン及び０．４ｍｇ／ｍＬポロキサマーを用いて作製した。組成物の他の特徴を以下の表２０に示す。
試験を、３ｍＬカートリッジ中の複数回使用ＢＩＦ薬剤製品の安定性及び機能性を評価するように設計した。全ての組成物を、５ｍＭリン酸塩、２１ｍｇ／ｍＬグリセリン及び０．４ｍｇ／ｍＬポロキサマーを用いて作製した。組成物の他の特徴を以下の表２０に示す。
【表19】
【0061】
組成物を３ｍＬガラスカートリッジに充填し、シリコーン処理されたクロロブチルプランジャー及びＤＮＲを含まないディスクシールで閉じた。カートリッジを５℃、２５℃、３０℃又は３５℃で最大６ヶ月間保管した。以下の表２１に示すように、試料を試験に供した。
【表20】
【0062】
ｐＨ、保管条件又は製剤組成に関して、ＨＩＡＣ又はＭＦＩデータに明らかな傾向は観察されなかった。ＨＩＡＣによる粒子数は全て、１０μｍ以上の測定値及び２５μｍ以上の測定値の仕様範囲内であった。
【0063】
ＳＥＣ、ＲＰ－ＨＰＬＣ及びＡＥＸの結果を以下の表２２～表２４に示す。
【表21】
【表22】
【表23】
【表24】
【0064】
表２２に示すように、全ての製剤は、５℃、２５℃、及び３０℃で良好に挙動し、対照試料と試験試料との間に顕著な差はなく、試験濃度のベンジルアルコール及びフェノールが有意なタンパク質変性を誘導しなかったことを示唆している。試料間に明確な傾向がないため、３５℃で観察された凝集体の成長は主に熱ストレスによって促進されている。
【0065】
表２３に示すように、５℃では、対照試料と試験試料との間に差はない。差は、２５℃、３０℃、及び３５℃で見られる。これらの温度では、ｐＨが上昇するにつれて総不純物の成長が促進される。
【0066】
同様に、表２４に示すように、５℃では、ＴＡＶの成長は無視できる程度である。ＴＡＶ成長は、高温（２５℃、３０℃及び３５℃）で有意であり、ｐＨの上昇と相関している。
【0067】
要約すると、試験した防腐剤は、製剤安定性に対して最小限の影響しか示さず、安定性に影響を及ぼす主な要因はｐＨ及び温度であった。５℃では、製剤は凝集の成長及び化学分解がほとんどなく安定なままであったが、保管温度が上昇するにつれて（２５℃、３０℃及び３５℃）、分解が相応に加速された。肉眼では見えない粒子状物質は、全ての試験群の仕様範囲内であった。全体として、この試験からの結果は、試験した製剤全体にわたってロバスト性を示している。
【0068】
ｐＨの関数としての化学的安定性
試験を、防腐剤を含む場合及び含まない場合のＢＩＦ製剤のそのｐＩを超えるｐＨ条件での化学的安定性を研究するように設計した。
試験を、防腐剤を含む場合及び含まない場合のＢＩＦ製剤のそのｐＩを超えるｐＨ条件での化学的安定性を研究するように設計した。
【0069】
防腐剤含有組成物を以下の表２５に示すように調製した。
【表25】
【0070】
防腐剤非含有組成物を以下の表２６に示すように調製した。
【表26】
【0071】
全ての溶液を０．２２－μｍのＰＶＤＦフィルタで濾過し、直ちに滅菌ガラス容器に移した。層流フード内で、溶液をガラスバイアルに充填した。バイアルに蓋をし、５℃及び３０℃で最長３ヶ月間保管した。適切な時点で試料を取り出し、試験に供した。
【0072】
化学的安定性を、陰イオン交換クロマトグラフィー（ＡＥＸ）によって評価した。結果を以下の表２７に示す。
【表27】
【表28】
【0073】
表２７及び表２８に示すように、５℃では、総酸性変異体（ＴＡＶ）の成長はごくわずかであったが、３０℃では、成長がｐＨに応答して起こった。これらの組成物中の防腐剤の存在は、安定性に実質的な影響を及ぼさなかった。
【0074】
貯蔵寿命及び使用時
ＴＡＶは、ＢＩＦの最も適切な化学的安定性を示すアッセイであると考えられ、したがって、表２７及び表２８に上述した結果を、貯蔵寿命及び使用時の推定のために使用した。以下の式を用いて、時点（ｔ）での保管温度（Ｔ）の促進効果を因数分解して、時間スケールを単一の任意の基準温度（ＴＲｅｆ）に崩壊させた。
２１．５ｋｃａｌ／ｍｏｌの見かけの活性化エネルギー（Ｅａ）値を使用し、基準温度は５℃であった。Ｒａｕｔ，Ａ．Ｓ．；Ｋａｌｏｎｉａ，Ｄ．Ｓ．、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ ｏｎ ｏｐａｌｅｓｃｅｎｃｅ ａｎｄ ｌｉｑｕｉｄ－ｌｉｑｕｉｄ ｐｈａｓｅ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ、２０１６年、１３（５）、１４３１～１４４４頁。Ｅａが約２１．５ｋｃａｌ／ｍｏｌであるという仮定の妥当性は、時間に対する分析観察をグラフ化することによって経験的に評価されるか、又はＥａ＝２１．５ｋｃａｌ／ｍｏｌで５℃にスケーリングされる。真のＥａが仮定された値と異なる場合、温度のうちの１つで一貫した傾向が生じ、すなわち、仮定されたＥａが温度の影響を適切に説明せず、真のＥａが現在の推定値とは異なるという証拠が生じる。現在の安定性の結果は、Ｅａが２１．５ｋｃａｌ／ｍｏｌであるという仮定が不当であることを示していない。したがって、上記の表２７及び表２８のデータは、冷蔵条件下での長期安定性を判定するためのツールとして役立つ。使用時条件での各製品貯蔵寿命についての５℃での相当月数を表２９に示す。
ＴＡＶは、ＢＩＦの最も適切な化学的安定性を示すアッセイであると考えられ、したがって、表２７及び表２８に上述した結果を、貯蔵寿命及び使用時の推定のために使用した。以下の式を用いて、時点（ｔ）での保管温度（Ｔ）の促進効果を因数分解して、時間スケールを単一の任意の基準温度（ＴＲｅｆ）に崩壊させた。
【数1】
【表29】
【0075】
表２７及び表２８のデータは、そのような実施形態における好ましい薬剤製品ｐＨが約６．５以下であることを示している。
【0076】
臨床研究
健康な参加者における臨床研究を、防腐剤及び等張化剤を含有するマトリックスに関連する急性注入部位疼痛強度を比較するように設計した。各参加者は、期間１～５の１日目に１回の０．６ｍＬ ＳＣ注射を受けた。活性薬剤は投与しなかった。５つの溶液製剤は以下の通りであった：
健康な参加者における臨床研究を、防腐剤及び等張化剤を含有するマトリックスに関連する急性注入部位疼痛強度を比較するように設計した。各参加者は、期間１～５の１日目に１回の０．６ｍＬ ＳＣ注射を受けた。活性薬剤は投与しなかった。５つの溶液製剤は以下の通りであった：
【表30】
【0077】
注入部位の疼痛を評価し、１００ｍｍビジュアルアナログスケール（ＶＡＳ）を用いて定量化した。ここで、０は「疼痛なし」を示し、１００は「想像できる最悪の疼痛」を示した。データを列挙し、処置及び時点ごとにまとめた。
【0078】
混合効果モデルを使用して、各製剤について注射後の各時間におけるＶＡＳ疼痛スコアからの持続注入部位疼痛を分析した。モデルは、注射後の測定時点によるものであり、処置（溶液製剤）、コホート内の注射順序（期間の１回目、２回目、３回目、４回目、又は５回目の注射）、コホート（注射順序群参加者を無作為化した）を固定因子として、参加者を無作為効果として含んだ。Ｋｅｎｗａｒｄ－Ｒｏｇｅｒ法を用いて、分母自由度を推定した。最小二乗（ＬＳ）平均についてのＩＩＩ型検定を統計学的比較のために使用した。差の９５％信頼区間（ＣＩ）も報告した。ＬＳ平均の差は、９５％ＣＩが０を除外した場合、統計的に有意であると見なした。
【0079】
全ての有害事象（ＡＥ）を列挙した。治療下で発現したＡＥをまとめた。任意の重篤な有害事象（ＳＡＥ）を列挙した。
【0080】
注入部位反応（ＩＳＲ）アンケートを、予め指定された時点で、自発的に報告されたＩＳＲについて収集した。ＩＳＲデータを頻度表に列挙し、処置ごとにまとめた。
【0081】
基準製剤を含む全ての溶液製剤は、ほとんどの参加者が低重症度（１０ｍｍ未満）の注入部位疼痛を報告しており、忍容性が良好であった。全ての製剤について、全ての時点（注射後０～６０分）にわたって、参加者の７６％～１００％が１０ｍｍ未満のＶＡＳ疼痛スコアを報告し、平均ＶＡＳ疼痛スコアは０．２～７．１ｍｍの範囲であった。
【0082】
ＳＣ注射によって投与された、基準製剤を含む全ての溶液製剤は、参加者によって十分に忍容された。死亡又はＳＡＥはなかった。１人の参加者は、治験責任医師が判断したところ、研究介入に関連しないＡＥのため中止された。ＡＥの頻度は全体的に低かった。治験責任医師が判断したところ、治療下で発現した有害事象（ＴＥＡＥ）は全て軽度又は中等度の重症度であり、ＴＥＡＥは試験介入に関連していなかった。基準製剤と比較して、試験製剤の注射後１０～６０分の所定の時点でＩＳＲを報告した参加者は少なく、自発的に報告されたＩＳＲは少なかった。軽度の疼痛は、所定の時点及び自発的に報告された事象について報告された最も一般的なＩＳＲパラメータであった。
【0083】
配列
配列番号１
配列番号１
【表31】
【配列表】
【手続補正書】
【提出日】2024-05-13
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
水性無菌薬学的組成物であって、ａ）インスリン－Ｆｃ融合体と、
ｂ）フェノールと、
ｃ）フェノキシエタノール及びベンジルアルコールからなる群から選択される１つ以上のさらなる防腐剤と、
ｄ）等張化剤と、
ｅ）界面活性剤と、
ｆ）緩衝液とを含み、
６～７．５のｐＨを有し、
前記フェノール及び１つ以上のさらなる防腐剤が、安定性の許容できない損失なしに少なくとも１２週間の使用時有効期間を可能にする濃度で存在する、水性無菌薬学的組成物。
【請求項2】
フェノールの濃度が、１．５～４ｍｇ／ｍＬである、請求項１に記載の組成物。
【請求項3】
フェノールの濃度が、約１．８ｍｇ／ｍＬである、請求項１に記載の組成物。
【請求項4】
前記さらなる防腐剤が、フェノキシエタノールである、請求項１に記載の組成物。
【請求項5】
フェノキシエタノールの濃度が、４～１４ｍｇ／ｍＬである、請求項４に記載の組成物。
【請求項6】
フェノキシエタノールの濃度が、約４ｍｇ／ｍＬである、請求項４に記載の組成物。
【請求項7】
フェノキシエタノールの濃度が、約８ｍｇ／ｍＬである、請求項４に記載の組成物。
【請求項8】
前記さらなる防腐剤が、ベンジルアルコールである、請求項１に記載の組成物。
【請求項9】
ベンジルアルコールの濃度が、５～１０ｍｇ／ｍＬである、請求項８に記載の組成物。
【請求項10】
ベンジルアルコールの濃度が、約９ｍｇ／ｍＬである、請求項９に記載の組成物。
【請求項11】
前記インスリン－Ｆｃ融合体が、基礎インスリン－Ｆｃ（ＢＩＦ）である、請求項１に記載の組成物。
【請求項12】
ＢＩＦの濃度が、５～３０ｍｇ／ｍＬである、請求項１１に記載の組成物。
【請求項13】
ＢＩＦの濃度が、約７．１５、１４．３、及び２８．６ｍｇ／ｍＬからなる群から選択される、請求項１２に記載の組成物。
【請求項14】
前記組成物のｐＨが、６．３～６．８である、請求項１に記載の組成物。
【請求項15】
前記組成物のｐＨが、約６．５である、請求項１に記載の組成物。
【請求項16】
前記等張化剤が、塩化ナトリウム、マンニトール及びグリセリンからなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項17】
前記等張化剤が、グリセリンである、請求項１に記載の組成物。
【請求項18】
グリセリンの濃度が、１５～３５ｍｇ／ｍＬである、請求項１７に記載の組成物。
【請求項19】
グリセリンの濃度が、約１７ｍｇ／ｍＬである、請求項１８に記載の組成物。
【請求項20】
前記界面活性剤が、ポロキサマー１８８、ポリソルベート２０及びポリソルベート８０からなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項21】
前記界面活性剤が、ポロキサマー１８８である、請求項２０に記載の組成物。
【請求項22】
ポロキサマー１８８の濃度が、０．０１～０．５ｍｇ／ｍＬである、請求項２１に記載の組成物。
【請求項23】
ポロキサマー１８８の濃度が、約０．４ｍｇ／ｍＬである、請求項２２に記載の組成物。
【請求項24】
前記緩衝液が、リン酸塩、クエン酸塩及びＴＲＩＳからなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項25】
前記緩衝液が、リン酸塩である、請求項２４に記載の組成物。
【請求項26】
リン酸塩の濃度が、５～１０ｍＭである、請求項２５に記載の組成物。
【請求項27】
水性無菌薬学的組成物であって、ａ）濃度５～３０ｍｇ／ｍＬのＢＩＦと、
ｂ）濃度１．５～４ｍｇ／ｍＬのフェノールと、
ｃ）濃度４～１４ｍｇ／ｍＬのベンジルアルコールと、
ｄ）濃度１５～３５ｍｇ／ｍＬのグリセリンと、
ｅ）濃度０．０１～０．５ｍｇ／ｍＬのポロキサマー１８８と、
ｆ）濃度５～１０ｍＭのリン酸塩とを含み、
６．３～６．８のｐＨを有する、水性無菌薬学的組成物。
【請求項28】
ａ）ＢＩＦの濃度が、約７．１５、約１４．３、及び約２８．６ｍｇ／ｍＬからなる群から選択され、ｂ）フェノールの濃度が、約１．８ｍｇ／ｍＬであり、
ｃ）ベンジルアルコールの濃度が、約９ｍｇ／ｍＬであり；
ｄ）グリセリンの濃度が、約１７ｍｇ／ｍＬであり；
ｅ）ポロキサマー１８８の濃度が、約０．４ｍｇ／ｍＬであり、
ｆ）リン酸塩の濃度が、約５ｍＭ及び約１０ｍＭからなる群から選択される、組成物であって、約６．５のｐＨを有する、請求項２７に記載の組成物。
【請求項29】
ＢＩＦの濃度が、約１４．３ｍｇ／ｍＬであり、リン酸塩の濃度が、約５ｍＭである、請求項２８に記載の組成物。
【請求項30】
ＢＩＦの濃度が、約２８．６ｍｇ／ｍＬであり、リン酸塩の濃度が、約１０ｍＭである、請求項２８に記載の組成物。
【請求項31】
ＢＩＦの濃度が、約７．１５ｍｇ／ｍＬである、請求項２８に記載の組成物。
【請求項32】
糖尿病を治療するための、請求項１～３１のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項33】
請求項１～３１に記載の薬学的組成物のうちのいずれか１つを含む、製品。
【請求項34】
複数回使用バイアルである、請求項３３に記載の製品。
【請求項35】
複数回使用ペン型注射器である、請求項３３に記載の製品。
【請求項36】
持続皮下インスリン注入療法のためのポンプデバイスである、請求項３３に記載の製品。
【国際調査報告】