特表 2024-543469 巨核球由来細胞外小胞のバイオマーカー

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-11-21

(54)【発明の名称】巨核球由来細胞外小胞のバイオマーカー

(51)【国際特許分類】

   C12N 5/078 20100101AFI20241114BHJP

   C12N 15/12 20060101ALI20241114BHJP

   C12N 15/52 20060101ALI20241114BHJP

   C12N 15/113 20100101ALI20241114BHJP

   C12N 15/11 20060101ALI20241114BHJP

   C07K 17/04 20060101ALI20241114BHJP

   C07K 14/47 20060101ALI20241114BHJP

   C12N 15/09 20060101ALI20241114BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20241114BHJP

   C12N 15/62 20060101ALI20241114BHJP

   C12N 15/88 20060101ALI20241114BHJP

   C07K 17/02 20060101ALI20241114BHJP

   C12N 11/04 20060101ALI20241114BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20241114BHJP

   C12N 15/87 20060101ALI20241114BHJP

   C12N 15/89 20060101ALI20241114BHJP

   C07K 14/165 20060101ALI20241114BHJP

   C12N 15/50 20060101ALI20241114BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20241114BHJP

   A61K 35/545 20150101ALI20241114BHJP

   A61P 7/04 20060101ALI20241114BHJP

   A61P 31/14 20060101ALI20241114BHJP

   A61P 7/00 20060101ALI20241114BHJP

   A61P 7/06 20060101ALI20241114BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20241114BHJP

   A61K 31/7088 20060101ALI20241114BHJP

   A61K 35/19 20150101ALI20241114BHJP

   A61K 31/7105 20060101ALI20241114BHJP

   A61K 31/713 20060101ALI20241114BHJP

   A61K 31/711 20060101ALI20241114BHJP

   A61K 38/02 20060101ALI20241114BHJP

   A61K 38/19 20060101ALI20241114BHJP

   A61K 39/00 20060101ALI20241114BHJP

   A61K 47/46 20060101ALI20241114BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20241114BHJP

   A61K 31/7072 20060101ALI20241114BHJP

   A61K 35/28 20150101ALI20241114BHJP

   A61K 35/54 20150101ALI20241114BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20241114BHJP

   A61P 9/00 20060101ALI20241114BHJP

【ＦＩ】

C12N5/078

C12N15/12

C12N15/52 Z

C12N15/113 Z

C12N15/11 Z

C07K17/04

C07K14/47

C12N15/09 100

C12N15/09 110

C12N15/13

C12N15/62 Z

C12N15/88 Z

C07K17/02

C12N11/04

C12N5/10

C12N15/87 Z

C12N15/89 Z

C07K14/165

C12N15/50

A61K48/00

A61K35/545

A61P7/04

A61P31/14

A61P7/00

A61P7/06

A61P35/02

A61K31/7088

A61K35/19

A61K31/7105

A61K31/713

A61K31/711

A61K38/02

A61K38/19

A61K39/00 H

A61K39/00 G

A61K47/46

A61K39/395 D

A61K39/395 N

A61K31/7072

A61K35/28

A61K35/54

A61P43/00 107

A61P9/00

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024527849

(86)(22)【出願日】2022-11-11

(85)【翻訳文提出日】2024-06-24

(86)【国際出願番号】 US2022049737

(87)【国際公開番号】W WO2023086595

(87)【国際公開日】2023-05-19

(31)【優先権主張番号】63/380,576

(32)【優先日】2022-10-23

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/335,181

(32)【優先日】2022-04-26

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/278,378

(32)【優先日】2021-11-11

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】522442951

【氏名又は名称】ストーム バイオ インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】110001519

【氏名又は名称】弁理士法人太陽国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】トーン、ジョナサン

(72)【発明者】

【氏名】ボード、ダニエル

(72)【発明者】

【氏名】ゴールドバーグ、ラウラ

【テーマコード（参考）】

4B033

4B065

4C076

4C084

4C085

4C086

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B033NA37

4B033NB56

4B033NB62

4B033NC08

4B033ND12

4B065AA93X

4B065AA93Y

4B065AB01

4B065AC12

4B065AC20

4B065BA01

4B065BA30

4B065CA23

4B065CA44

4C076AA95

4C076BB13

4C076BB14

4C076BB15

4C076BB16

4C076BB21

4C076BB25

4C076BB27

4C076BB31

4C076CC14

4C076CC35

4C076EE57

4C076FF31

4C076FF68

4C084AA02

4C084AA13

4C084BA44

4C084CA53

4C084DA01

4C084MA59

4C084MA63

4C084MA65

4C084MA66

4C084NA05

4C084NA10

4C084NA13

4C084NA14

4C084ZA361

4C084ZA362

4C084ZA511

4C084ZA512

4C084ZA531

4C084ZA532

4C084ZA551

4C084ZA552

4C084ZB221

4C084ZB222

4C084ZB271

4C084ZB272

4C084ZB331

4C084ZB332

4C085AA03

4C085AA13

4C085AA14

4C085BB31

4C085CC22

4C085CC23

4C085DD62

4C085EE01

4C085EE03

4C085GG02

4C085GG03

4C085GG04

4C085GG06

4C085GG08

4C086AA01

4C086AA02

4C086EA16

4C086EA17

4C086MA02

4C086MA04

4C086NA05

4C086NA10

4C086NA13

4C086NA14

4C086ZA36

4C086ZA51

4C086ZA53

4C086ZA55

4C086ZB22

4C086ZB27

4C086ZB33

4C087AA01

4C087AA02

4C087BB34

4C087BB65

4C087CA12

4C087MA02

4C087NA05

4C087NA10

4C087NA13

4C087NA14

4C087ZA36

4C087ZA51

4C087ZA53

4C087ZA55

4C087ZB22

4C087ZB27

4C087ZB33

4H045AA10

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA61

4H045CA01

4H045CA42

4H045DA50

4H045DA86

4H045DA89

4H045EA20

4H045EA24

4H045EA31

4H045FA72

(57)【要約】

ヒト多能性幹細胞に由来する巨核球由来細胞外小胞に関する組成物及び方法であって、当該巨核球由来細胞外小胞が特有のバイオマーカーを提示する、組成物及び方法が本明細書に開示される。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

組成物であって、
ヒト多能性幹細胞に由来する複数の実質的に精製された巨核球由来細胞外小胞を含み、前記組成物が、他のタイプの細胞外小胞と比較して、前記巨核球由来細胞外小胞に特有であるか、または前記巨核球由来細胞外小胞に優先的に存在する１つ以上のタンパク質を含む、前記組成物。

【請求項2】

組成物であって、
ヒト多能性幹細胞に由来する複数の実質的に精製された巨核球由来細胞外小胞を含み、前記組成物が、他のタイプの細胞外小胞と比較して、前記巨核球由来細胞外小胞に特有であるか、または前記巨核球由来細胞外小胞に優先的に存在する１つ以上のタンパク質をコードする１つ以上の核酸を含む、前記組成物。

【請求項3】

前記１つ以上のタンパク質（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）、または１つ以上のタンパク質（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）をコードする前記１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）が、アミノアシル－ｔＲＮＡ生合成に関与し、任意選択で、ＹＡＲＳ１、ＡＡＲＳ１、ＧＡＲＳ１、ＬＡＲＳ１、ＥＰＲＳ１、ＴＡＲＳ１、ＤＡＲＳ１、ＷＡＲＳ１、ＶＡＲＳ１、ＮＡＲＳ１、ＲＡＲＳ１、ＳＡＲＳ１、ＫＡＲＳ１、ＩＡＲＳ１、ＣＡＲＳ１、ＱＡＲＳ、及びＨＡＲＳ１から選択される、請求項１または２に記載の組成物。

【請求項4】

前記１つ以上のタンパク質（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）、または１つ以上のタンパク質（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）をコードする前記１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）が、好中球細胞外トラップ形成に関与し、任意選択で、Ｈ４Ｃ１、Ｈ２ＡＣ２０、Ｈ３Ｃ１、Ｈ２ＢＣ１２、Ｈ３Ｃ１５、ＭＡＣＲＯＨ２Ａ１、Ｈ２ＡＸ、Ｈ２ＡＺ２、Ｈ３－３Ａ、Ｈ２ＡＣ１４、及びＭＡＣＲＯＨ２Ａ２から選択される、請求項１または２に記載の組成物。

【請求項5】

前記１つ以上のタンパク質（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）、または１つ以上のタンパク質（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）をコードする前記１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）が、Ｈ４Ｃ１６、Ｈ２ＡＣ１７、Ｈ３Ｃ１３、ＲＰＬ９Ｐ９、ＰＨＢ１、ＳＥＴＳＩＰ、Ｈ２ＡＺ１、ＸＰ３２、ＣＯＰＳ９、ＳＥＣ６１Ａ２、ＭＡＲＳ１、ＭＲＥ１１、ＡＴＰ５Ｆ１Ｃ、Ｈ４Ｃ１、Ｈ２ＡＣ２０、Ｈ３Ｃ１、Ｈ２ＢＣ１２、ＦＣＳＫ、ＣＡＶＩＮ２、ＹＡＲＳ１、Ｈ３Ｃ１５、ＭＡＣＲＯＨ２Ａ１、Ｈ２ＡＸ、Ｈ３－２、ＳＥＬＥＮＯＦ、ＭＰＩＧ６Ｂ、セプチン７、ＡＡＲＳ１、Ｈ１－５、Ｈ１－２、Ｈ２ＡＺ２、ＧＡＲＳ１、ＬＡＲＳ１、ＴＨＰＯ、ＲＡＣＫ１、Ｈ３－３Ａ、ＣＣＤＣ１９１、Ｈ２ＢＣ１９Ｐ、セプチン２、ＥＰＲＳ１、ＴＡＲＳ１、ＡＴＰ５Ｆ１Ｂ、ＥＲＢＩＮ、ＤＡＲＳ１、ＷＡＲＳ１、ＶＡＲＳ１、ＮＩＢＡＮ２、セプチン６、ＮＡＲＳ１、ＲＡＲＳ１、セプチン１１、セプチン５、ＳＡＲＳ１、ＮＩＢＡＮ１、ＳＮＲＰＧＰ１５、ＰＩＰ４Ｐ２、ＣＹＲＩＢ、ＣＡＲＭＩＬ１、ＫＡＲＳ１、ＩＡＲＳ１、セプチン９、Ｈ１－４、ＡＲＨＧＡＰ４５、Ｈ１－０、ＣＡＲＳ１、ＧＣＮ１、ＦＡＤＳ２、ＴＢＣ１Ｄ１３、ＧＥＴ３、ＲＯ６０、ＬＡＭＴＯＲ５、ＥＬＯＣ、Ｈ２ＡＣ１４、ＳＣＡＲＦ１、ＲＮＦ２４、ＧＣＳＡＭＬ、ＮＲＤＣ、ＥＣＰＡＳ、ＭＡＣＲＯＨ２Ａ２、ＡＴＰ５Ｆ１Ａ、ＤＭＴＮ、ＴＡＮＧＯ２、ＣＳＦ２ＲＢ、ＷＡＳＨＣ５、ＫＣＮＡ３、ＱＡＲＳ１、ＭＩＮＤＹ１、ＰＴＰＡ、ＥＸＯＣ３Ｌ２、ＰＲＵＮＥ１、ＰＬＰＢＰ、ＴＨＵＭＰＤ１、ＷＡＳＨＣ４、ＮＥＣＴＩＮ２、ＧＦＵＳ、ＡＤＧＲＥ２、ＡＫＡＰ８Ｌ、ＦＡＭ２３４Ａ、ＡＤＳＳ２、ＡＮＫＲＤ１３Ｄ、ＫＣＴ２、ＮＴ５Ｃ３Ａ、ＰＩＰ４Ｐ１、ＣＣＤＣ９、ＥＬＯＢ、ＨＰＧＤＳ、ＭＥＡＫ７、ＴＯＭＭ７０、ＳＭＩＭ１、ＨＡＲＳ１、ＡＴＰ５ＰＤ、ＯＧＡ、ＣＨＳＹ１、ＳＱＬＥ、ＳＵＳＤ６、ＩＧＫＶ１－２７、ＰＥＤＳ１－ＵＢＥ２Ｖ１、ＣＥＰ４４、ＭＹＧ１、ＮＲＲＯＳ、ＩＬ２１Ｒ、ＧＲＫ２、ＭＣＥＭＰ１、ＥＬＡＰＯＲ２、ＳＤＡＤ１、ＣＥＲＴ１、ＵＢＥ２Ｆ、ＣＡＬＨＭ５、Ｈ１－１０、ＥＩＰＲ１、ＰＢＤＣ１、ＡＲＭＨ３、ＶＩＰＡＳ３９、ＭＥＳＤ、ＰＲＯＳＥＲ２、ＲＡＢＬ６、ＦＹＢ１、Ｃ１７ｏｒｆ４９、ＲＭＤＮ３、ＫＹＡＴ３、ＴＴＭＰ、ＥＲＯ１Ａ、ＣＤ２４４、ＣＺＩＢ、ＰＬＰＰ３、ＢＡＢＡＭ２、Ｈ１－３、ＮＡＸＥ、ＥＮＳＡ、ＰＡＬＳ２、ＧＵＣＹ１Ｂ１、ＵＭＡＤ１、ＭＩＸ２３、ＰＲＸＬ２Ｂ、ＳＮＵ１３、ＲＴＲＡＦ、ＫＸＤ１、ＶＳＩＲ、ＥＰＯＲ、及びＭＡＲＣＨＦ２から選択される、請求項１または２に記載の組成物。

【請求項6】

組成物であって、
ヒト多能性幹細胞に由来する複数の実質的に精製された巨核球由来細胞外小胞を含み、前記組成物が、内腔を取り囲む脂質二重層膜を含み、
前記巨核球由来細胞外小胞の内腔が、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、調節ＲＮＡ、ならびにノンコーディングＲＮＡ及びコーディングＲＮＡから選択される１つ以上の巨核球由来核酸分子を含み、
前記脂質二重層膜が、会合しているか、または内部に埋め込まれた１つ以上のタンパク質を含み、前記１つ以上のタンパク質が、他のタイプの細胞外小胞と比較して、前記巨核球由来細胞外小胞に特有であるか、または前記巨核球由来細胞外小胞に優先的に存在する、前記組成物。

【請求項7】

組成物であって、
ヒト多能性幹細胞に由来する複数の実質的に精製された巨核球由来細胞外小胞を含み、前記組成物が、内腔を取り囲む脂質二重層膜を含み、
前記巨核球由来細胞外小胞の内腔が、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、調節ＲＮＡ、ならびにノンコーディングＲＮＡ及びコーディングＲＮＡから選択される１つ以上の巨核球由来核酸分子を含み、
前記脂質二重層膜が、１つ以上の核酸を含み、前記１つ以上の核酸が、前記脂質二重層膜と会合しているか、または前記脂質二重層膜内に埋め込まれた１つ以上のタンパク質をコードし、他のタイプの細胞外小胞と比較して、前記巨核球由来細胞外小胞に特有であるか、または前記巨核球由来細胞外小胞に優先的に存在する、前記組成物。

【請求項8】

前記脂質二重層膜が、ＣＡＶＩＮ２、ＭＰＩＧ６Ｂ、ＥＲＢＩＮ、ＥＬＯＣ、ＣＳＦ２ＲＢ、ＫＣＮＡ３、ＮＥＣＴＩＮ２、ＩＬ２１Ｒ、ＭＣＥＭＰ１、ＰＲＯＳＥＲ２、ＦＹＢ１、ＣＤ２４４、及びＥＰＯＲから選択される、前記１つ以上のタンパク質（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個）、または１つ以上のタンパク質（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個）をコードする前記１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個）を含む、請求項６または７に記載の組成物。

【請求項9】

前記巨核球由来細胞外小胞の約１％超、または約５％超、または約１０％超、または約１５％超、または約２０％超、または約２５％超、または約３０％超、または約３５％超、または約４０％超、または約４５％超、または約５０％超、または約５５％超、または約６０％超、または約６５％超、または約７０％超、または約７５％超、または約８０％超、または約８５％超、または約９０％超、または約９５％超が、前記１つ以上のタンパク質、または１つ以上のタンパク質をコードする前記１つ以上の核酸を含む脂質二重層膜を含む、請求項８に記載の組成物。

【請求項10】

前記巨核球由来細胞外小胞の約９５％未満、または約９０％未満、または約８５％未満、または約８０％未満、または約７５％未満、または約７０％未満、または約６５％未満、または約６０％未満、または約５５％未満、または約５０％未満、または約４５％未満、または約４０％未満、または約３５％未満、または約３０％未満、または約２５％未満、または約２０％未満、または約１５％未満、または約１０％未満、または約５％未満、または約１％未満が、前記１つ以上のタンパク質、または１つ以上のタンパク質をコードする前記１つ以上の核酸を含む脂質二重層膜を含む、請求項８に記載の組成物。

【請求項11】

組成物であって、
ヒト多能性幹細胞に由来する複数の実質的に精製された巨核球由来細胞外小胞を含み、 前記組成物が、他のタイプの細胞外小胞と比較して、前記巨核球由来細胞外小胞に特有であるか、または前記巨核球由来細胞外小胞に優先的に存在する１つ以上の核酸を含む、前記組成物。

【請求項12】

組成物であって、
ヒト多能性幹細胞に由来する複数の実質的に精製された巨核球由来細胞外小胞を含み、 前記組成物が、他のタイプの細胞外小胞と比較して、前記巨核球由来細胞外小胞に特有であるか、または前記巨核球由来細胞外小胞に優先的に存在する１つ以上の核酸によってコードされる１つ以上のタンパク質を含む、前記組成物。

【請求項13】

前記１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、または少なくとも５個、または少なくとも１０個、または少なくとも２５個、または少なくとも５０個、または少なくとも１００個、または少なくとも１５０個、または少なくとも１７５個、または少なくとも５００個、または少なくとも１０００個、または少なくとも１５００個、または少なくとも２０００個、または少なくとも２５００個）が表６に列記されている、請求項１１または１２に記載の組成物。

【請求項14】

前記１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）、または１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）によってコードされる前記１つ以上のタンパク質（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）が、好中球細胞外トラップ形成に関与し、任意選択で、Ｈ３－３Ａ、Ｈ４Ｃ１２、Ｈ２ＡＣ１８、Ｈ２ＡＣ１３、Ｈ２ＡＣ１９、Ｈ３－３Ｂ、Ｈ２ＢＣ１２、Ｈ４Ｃ３、Ｈ３Ｃ１０、Ｈ２ＡＣ１４、Ｈ２ＢＣ４、Ｈ２ＡＣ２０、Ｈ３Ｃ１３、Ｈ４Ｃ１４、Ｈ３Ｃ２、Ｈ２ＡＣ８、Ｈ２ＢＣ３、Ｈ３Ｃ７、Ｈ２ＡＣ１７、Ｈ３Ｃ４、Ｈ２ＢＣ１１、ＳＥＬＰ、Ｈ３Ｃ１１、Ｈ４Ｃ２、Ｈ２ＡＣ１５、Ｈ２ＡＣ１２、Ｈ３Ｃ１、Ｈ４Ｃ４、Ｈ２ＡＣ４、Ｈ４Ｃ１３、Ｈ２ＢＣ５、Ｈ２ＡＣ７、Ｈ２ＡＣ１６、Ｈ２ＢＣ１７、Ｈ２ＡＪ、Ｈ３Ｃ３、Ｈ２ＢＣ１０、Ｈ２ＡＣ２１、Ｈ３Ｃ１４、Ｈ３Ｃ１５、Ｈ２ＡＣ１１、Ｈ３Ｃ１２、ＦＰＲ１、Ｈ２ＢＣ１３、Ｈ４Ｃ１、ＭＡＣＲＯＨ２Ａ１、Ｈ２ＢＣ１４、Ｈ２ＡＸ、Ｈ２ＢＣ６、ＮＣＦ４、Ｈ４Ｃ６、Ｈ２ＢＣ１５、Ｈ２ＢＣ２１、Ｈ２ＢＣ７、Ｈ２ＢＣ８、ＣＹＢＢ、ＦＣＧＲ１Ａ、Ｈ２ＡＺ２、Ｈ４Ｃ５、ＡＱＰ９、Ｈ２ＢＣ９、ＣＬＣＮ４、ＦＰＲ２、Ｈ４Ｃ９、ＨＤＡＣ９、ＩＴＧＡＬ、ＦＣＧＲ３Ｂ、ＩＴＧＡＭ、Ｈ３Ｃ８、ＴＬＲ２、ＮＣＦ１、ＮＣＦ２、Ｈ３Ｃ６、ＣＡＭＰ、ＭＰＯ、ＥＬＡＮＥ、ＦＣＧＲ３Ａ、ＡＺＵ１、Ｈ２ＡＷ、ＳＩＧＬＥＣ９、ＣＬＥＣ７Ａ、ＰＬＣＢ４、ＣＡＳＰ１、Ｈ２ＢＵ１、ＴＬＲ４、及びＴＬＲ８から選択される、請求項１１または１２に記載の組成物。

【請求項15】

前記１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）、または１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）によってコードされる前記１つ以上のタンパク質（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）が、造血細胞系譜に関与し、任意選択で、ＣＤ３６、ＩＬ９Ｒ、ＦＣＧＲ１Ａ、ＣＳＦ３Ｒ、ＫＩＴ、ＧＰ５、ＣＳＦ１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ３３、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ７Ｒ、ＩＬ６Ｒ、ＨＬＡ－ＤＰＢ１、ＣＤ２４、ＣＤ２２、ＧＹＰＡ、ＭＭＥ、ＩＴＧＡ１、ＣＤ１Ｃ、ＩＬ３ＲＡ、ＨＬＡ－ＤＰＡ１、ＩＬ１Ｒ２、ＣＤ３４、ＨＬＡ－ＤＲＡ、ＨＬＡ－ＤＱＡ１、及びＣＤ７から選択される、請求項１１または１２に記載の組成物。

【請求項16】

前記１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）、または１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）によってコードされる前記１つ以上のタンパク質（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）が、細胞接着に関与し、任意選択で、ＣＤ２２６、ＳＥＬＰ、ＰＥＣＡＭ１、ＶＳＩＲ、ＰＴＰＲＣ、ＮＲＸＮ１、ＮＥＣＴＩＮ２、ＩＴＧＡＬ、ＩＴＧＡＭ、ＳＥＬＬ、ＣＤ２８、ＨＬＡ－ＤＰＢ１、ＣＮＴＮＡＰ２、ＣＬＤＮ５、ＪＡＭ２、ＣＤ４０ＬＧ、ＬＲＲＣ４、ＣＤ２７４、ＣＤ４０、ＣＤ２７６、ＣＤ２２、ＩＴＧＡ９、ＮＥＣＴＩＮ３、ＮＥＧＲ１、ＨＬＡ－ＤＰＡ１、ＣＮＴＮ１、ＩＴＧＢ８、ＣＤ３４、ＨＬＡ－ＤＲＡ、ＳＩＧＬＥＣ１、及びＨＬＡ－ＤＱＡ１から選択される、請求項１１または１２に記載の組成物。

【請求項17】

前記１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）、または１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）によってコードされる前記１つ以上のタンパク質（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）が、ＡＴＰ結合カセット（ＡＢＣ）輸送に関与し、任意選択で、ＣＦＴＲ、ＡＢＣＤ４、ＡＢＣＡ５、ＡＢＣＡ９、ＡＢＣＣ１、ＡＢＣＢ８、ＡＢＣＡ８、ＡＢＣＢ９、ＡＢＣＣ９、ＡＢＣＡ１、ＡＢＣＡ１０、及びＡＢＣＣ８から選択される、請求項１１または１２に記載の組成物。

【請求項18】

前記１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）、または１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）によってコードされる前記１つ以上のタンパク質（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）が、Ｒａｐ１シグナル伝達経路に関与し、任意選択で、Ｆ２Ｒ、ＬＣＰ２、ＦＹＢ１、ＦＰＲ１、Ｆ２ＲＬ３、Ｐ２ＲＹ１、ＲＡＰＧＥＦ２、ＫＩＴ、ＥＧＦ、ＣＳＦ１、ＡＮＧＰＴ１、ＰＤＧＦＣ、ＩＴＧＡＬ、ＶＡＶ１、ＶＡＶ３、ＰＤＧＦＲＡ、ＩＴＧＡＭ、ＲＡＰＧＥＦ５、ＭＡＧＩ２、ＦＡＲＰ２、ＣＴＮＮＤ１、ＦＧＦ２３、ＦＬＴ１、ＦＧＦ１、ＤＲＤ２、ＡＦＤＮ、ＰＬＣＢ４、ＡＰＢＢ１ＩＰ、ＰＬＣＥ１、ＭＡＧＩ３、ＫＤＲ、ＬＰＡＲ３、ＧＲＩＮ２Ｂ、ＡＤＣＹ１、ＦＧＦ７、ＡＮＧＰＴ４、及びＴＥＫから選択される、請求項１１または１２に記載の組成物。

【請求項19】

前記１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）、または１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）によってコードされる前記１つ以上のタンパク質（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）が、ケモカインシグナル伝達経路に関与し、任意選択で、ＰＦ４、ＣＣＬ５、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ８、ＥＬＭＯ１、ＧＲＫ２、ＧＮＧ８、ＣＣＲ４、ＰＦ４Ｖ１、ＶＡＶ１、ＶＡＶ３、ＰＩＫ３Ｒ６、ＰＩＫ３ＣＧ、ＳＨＣ４、ＧＲＫ３、ＮＣＦ１、ＨＣＫ、ＧＲＫ４、ＩＴＫ、ＧＮＧ２、ＣＸＣＲ２、ＣＣＲ１、ＣＸＣＬ５、ＣＣＬ３、ＰＬＣＢ４、ＣＸＣＬ６、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ８、ＣＣＬ４Ｌ２、ＣＸＣＬ１２、ＧＮＧＴ１、ＣＸＣＬ１１、ＡＤＣＹ１、及びＸＣＬ１から選択される、請求項１１または１２に記載の組成物。

【請求項20】

前記１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）、または１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）によってコードされる前記１つ以上のタンパク質（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）が、貪食に関与し、任意選択で、ＴＵＢＡ８、ＮＣＦ４、ＣＤ３６、ＣＹＢＢ、ＦＣＧＲ１Ａ、ＣＴＳＳ、ＦＣＧＲ３Ｂ、ＰＩＫＦＹＶＥ、ＩＴＧＡＭ、ＴＬＲ２、ＮＣＦ１、ＮＣＦ２、ＨＬＡ－ＤＰＢ１、ＭＰＯ、ＥＥＡ１、ＭＳＲ１、ＦＣＧＲ３Ａ、ＦＣＡＲ、ＤＹＮＣ１Ｉ１、ＣＬＥＣ７Ａ、ＦＣＧＲ２Ｂ、ＨＬＡ－ＤＰＡ１、ＡＴＰ６Ｖ０Ｄ２、ＭＲＣ２、ＴＬＲ４、ＴＬＲ６、ＨＬＡ－ＤＲＡ、ＭＡＲＣＯ、及びＨＬＡ－ＤＱＡ１から選択される、請求項１１または１２に記載の組成物。

【請求項21】

前記１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）、または１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）によってコードされる前記１つ以上のタンパク質（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）が、アミノアシル－ｔＲＮＡ生合成に関与し、任意選択で、ＲＡＲＳ１、ＤＡＲＳ１、ＫＡＲＳ１、ＳＡＲＳ１、ＡＡＲＳ１、ＴＡＲＳ１、ＮＡＲＳ１、ＷＡＲＳ１、ＧＡＴＢ、ＣＡＲＳ１、ＥＰＲＳ１、ＴＡＲＳ３、ＥＡＲＳ２、ＩＡＲＳ１、ＱＲＳＬ１、及びＷＡＲＳ２から選択される、請求項１１または１２に記載の組成物。

【請求項22】

前記１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）、または１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）によってコードされる前記１つ以上のタンパク質（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）が、Ｈ４Ｃ１６、Ｈ２ＡＣ１７、Ｈ３Ｃ１３、ＲＰＬ９Ｐ９、ＰＨＢ１、ＳＥＴＳＩＰ、Ｈ２ＡＺ１、ＸＰ３２、ＣＯＰＳ９、ＳＥＣ６１Ａ２、ＭＡＲＳ１、ＭＲＥ１１、ＡＴＰ５Ｆ１Ｃ、Ｈ４Ｃ１、Ｈ２ＡＣ２０、Ｈ３Ｃ１、Ｈ２ＢＣ１２、ＦＣＳＫ、ＣＡＶＩＮ２、ＹＡＲＳ１、Ｈ３Ｃ１５、ＭＡＣＲＯＨ２Ａ１、Ｈ２ＡＸ、Ｈ３－２、ＳＥＬＥＮＯＦ、ＭＰＩＧ６Ｂ、セプチン７、ＡＡＲＳ１、Ｈ１－５、Ｈ１－２、Ｈ２ＡＺ２、ＧＡＲＳ１、ＬＡＲＳ１、ＴＨＰＯ、ＲＡＣＫ１、Ｈ３－３Ａ、ＣＣＤＣ１９１、Ｈ２ＢＣ１９Ｐ、セプチン２、ＥＰＲＳ１、ＴＡＲＳ１、ＡＴＰ５Ｆ１Ｂ、ＥＲＢＩＮ、ＤＡＲＳ１、ＷＡＲＳ１、ＶＡＲＳ１、ＮＩＢＡＮ２、セプチン６、ＮＡＲＳ１、ＲＡＲＳ１、セプチン１１、セプチン５、ＳＡＲＳ１、ＮＩＢＡＮ１、ＳＮＲＰＧＰ１５、ＰＩＰ４Ｐ２、ＣＹＲＩＢ、ＣＡＲＭＩＬ１、ＫＡＲＳ１、ＩＡＲＳ１、セプチン９、Ｈ１－４、ＡＲＨＧＡＰ４５、Ｈ１－０、ＣＡＲＳ１、ＧＣＮ１、ＦＡＤＳ２、ＴＢＣ１Ｄ１３、ＧＥＴ３、ＲＯ６０、ＬＡＭＴＯＲ５、ＥＬＯＣ、Ｈ２ＡＣ１４、ＳＣＡＲＦ１、ＲＮＦ２４、ＧＣＳＡＭＬ、ＮＲＤＣ、ＥＣＰＡＳ、ＭＡＣＲＯＨ２Ａ２、ＡＴＰ５Ｆ１Ａ、ＤＭＴＮ、ＴＡＮＧＯ２、ＣＳＦ２ＲＢ、ＷＡＳＨＣ５、ＫＣＮＡ３、ＱＡＲＳ１、ＭＩＮＤＹ１、ＰＴＰＡ、ＥＸＯＣ３Ｌ２、ＰＲＵＮＥ１、ＰＬＰＢＰ、ＴＨＵＭＰＤ１、ＷＡＳＨＣ４、ＮＥＣＴＩＮ２、ＧＦＵＳ、ＡＤＧＲＥ２、ＡＫＡＰ８Ｌ、ＦＡＭ２３４Ａ、ＡＤＳＳ２、ＡＮＫＲＤ１３Ｄ、ＫＣＴ２、ＮＴ５Ｃ３Ａ、ＰＩＰ４Ｐ１、ＣＣＤＣ９、ＥＬＯＢ、ＨＰＧＤＳ、ＭＥＡＫ７、ＴＯＭＭ７０、ＳＭＩＭ１、ＨＡＲＳ１、ＡＴＰ５ＰＤ、ＯＧＡ、ＣＨＳＹ１、ＳＱＬＥ、ＳＵＳＤ６、ＩＧＫＶ１－２７、ＰＥＤＳ１－ＵＢＥ２Ｖ１、ＣＥＰ４４、ＭＹＧ１、ＮＲＲＯＳ、ＩＬ２１Ｒ、ＧＲＫ２、ＭＣＥＭＰ１、ＥＬＡＰＯＲ２、ＳＤＡＤ１、ＣＥＲＴ１、ＵＢＥ２Ｆ、ＣＡＬＨＭ５、Ｈ１－１０、ＥＩＰＲ１、ＰＢＤＣ１、ＡＲＭＨ３、ＶＩＰＡＳ３９、ＭＥＳＤ、ＰＲＯＳＥＲ２、ＲＡＢＬ６、ＦＹＢ１、Ｃ１７ｏｒｆ４９、ＲＭＤＮ３、ＫＹＡＴ３、ＴＴＭＰ、ＥＲＯ１Ａ、ＣＤ２４４、ＣＺＩＢ、ＰＬＰＰ３、ＢＡＢＡＭ２、Ｈ１－３、ＮＡＸＥ、ＥＮＳＡ、ＰＡＬＳ２、ＧＵＣＹ１Ｂ１、ＵＭＡＤ１、ＭＩＸ２３、ＰＲＸＬ２Ｂ、ＳＮＵ１３、ＲＴＲＡＦ、ＫＸＤ１、ＶＳＩＲ、ＥＰＯＲ、及びＭＡＲＣＨＦ２から選択される、請求項１１または１２に記載の組成物。

【請求項23】

前記巨核球由来細胞外小胞の約１％超、または約５％超、または約１０％超、または約１５％超、または約２０％超、または約２５％超、または約３０％超、または約３５％超、または約４０％超、または約４５％超、または約５０％超、または約５５％超、または約６０％超、または約６５％超、または約７０％超、または約７５％超、または約８０％超、または約８５％超、または約９０％超、または約９５％超が、前記１つ以上の核酸、または前記１つ以上の核酸によってコードされる前記１つ以上のタンパク質を含む、請求項１１～２２のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項24】

前記巨核球由来細胞外小胞の約９５％未満、または約９０％未満、または約８５％未満、または約８０％未満、または約７５％未満、または約７０％未満、または約６５％未満、または約６０％未満、または約５５％未満、または約５０％未満、または約４５％未満、または約４０％未満、または約３５％未満、または約３０％未満、または約２５％未満、または約２０％未満、または約１５％未満、または約１０％未満、または約５％未満、または約１％未満が、前記１つ以上の核酸、または前記１つ以上の核酸によってコードされる前記１つ以上のタンパク質を含む、請求項１１～２２のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項25】

前記巨核球由来細胞外小胞が、約１００ｎｍ～約６００ｎｍの範囲の直径を実質的に有する、請求項１～２４のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項26】

前記巨核球由来細胞外小胞が、約３０ｎｍ～約１００ｎｍの範囲の直径を実質的に有する、請求項１～２５のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項27】

前記巨核球由来細胞外小胞が、約１００ｎｍ～約３００ｎｍの範囲の直径を実質的に有する、請求項１～２６のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項28】

前記巨核球由来細胞外小胞の約９０％以上、または約９５％以上、または約９７％以上、または約９９％以上が、約１００ｎｍ～約６００ｎｍの直径を有する、請求項１～２７のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項29】

前記巨核球由来細胞外小胞の約９０％以上、または約９５％以上、または約９７％以上、または約９９％以上が、約１００ｎｍ～約３００ｎｍの直径を有する、請求項１～２７のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項30】

前記巨核球由来細胞外小胞が、自己ＤＮＡを実質的に含まない、請求項１～２９のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項31】

前記巨核球由来細胞外小胞が、
（ａ）巨核球、及び／または
（ｂ）血小板、を実質的に含まない、請求項１～２９のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項32】

前記巨核球由来細胞外小胞が、インビボ及び／またはインビトロでの造血幹細胞へのホーミングに好適である、請求項１～３１のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項33】

前記巨核球由来細胞外小胞が、インビボ及び／またはインビトロでの骨髄へのホーミングに好適である、請求項１～３１のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項34】

前記巨核球由来細胞外小胞が、インビボ及び／またはインビトロでのリンパ細胞へのホーミングに好適である、請求項３３に記載の組成物。

【請求項35】

前記巨核球由来細胞外小胞が、インビボ及び／またはインビトロでの制御性Ｔ細胞へのホーミングに好適である、請求項３４に記載の組成物。

【請求項36】

前記巨核球由来細胞外小胞が、前記巨核球由来細胞外小胞の内腔へのカーゴのロード及び／または前記巨核球由来細胞外小胞の表面と会合したカーゴのロードに好適である、請求項１～３５のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項37】

前記カーゴが、１つ以上の治療薬である、請求項３６に記載の組成物。

【請求項38】

前記治療薬が、核酸治療薬である、請求項３７に記載の組成物。

【請求項39】

前記核酸治療薬が、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、調節ＲＮＡ、ノンコーディングＲＮＡ及びコーディングＲＮＡ、直鎖ＤＮＡ、ＤＮＡ断片、またはＤＮＡプラスミドから選択される１つ以上の非自己核酸構築物及び／または組換え核酸構築物から選択される、請求項３８に記載の組成物。

【請求項40】

前記核酸治療薬がｍＲＮＡであり、任意選択で、インビトロ転写されるか、または合成である、及び／または任意選択でプソイドウリジン及び５－メトキシウリジンから選択される１つ以上の非標準ヌクレオチドを含む、請求項３９に記載の組成物。

【請求項41】

前記核酸治療薬が、機能性タンパク質をコードする、請求項４０に記載の組成物。

【請求項42】

前記核酸治療薬が、遺伝子編集タンパク質をコードする、及び／または遺伝子編集機能のための関連要素をコードする、請求項４０に記載の組成物。

【請求項43】

前記遺伝子編集タンパク質が、ジンクフィンガー（ＺＦ）、転写活性因子様エフェクター（ＴＡＬＥ）、メガヌクレアーゼ、及びクラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート（ＣＲＩＳＰＲ）関連タンパク質から選択される、請求項４２に記載の組成物。

【請求項44】

前記ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質が、Ｃａｓ９、ＣａｓＸ、ＣａｓＹ、Ｃｐｆ１、及びそれらのｇＲＮＡ複合体から選択される、請求項４３に記載の組成物。

【請求項45】

前記治療薬が、生物学的治療薬である、請求項３７に記載の組成物。

【請求項46】

前記生物学的治療薬が、タンパク質である、請求項４５に記載の組成物。

【請求項47】

前記生物学的治療薬が、組換えタンパク質である、請求項４６に記載の組成物。

【請求項48】

前記生物学的治療薬が、抗体または抗体断片、融合タンパク質、遺伝子編集タンパク質、サイトカイン、抗原、及びペプチドのうちの１つである、請求項４６または４７に記載の組成物。

【請求項49】

前記治療薬が、低分子治療薬である、請求項３７に記載の組成物。

【請求項50】

前記治療薬が、ワクチン及び／または免疫原性抗原である、請求項３７～４９のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項51】

前記ヒト多能性幹細胞が、初代ＣＤ３４＋造血幹細胞である、請求項１～５０のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項52】

前記初代ＣＤ３４＋造血幹細胞が、末梢血または臍帯血から供給される、請求項５１に記載の組成物。

【請求項53】

前記末梢血が、顆粒球コロニー刺激因子動員成体末梢血（ｍＰＢ）である、請求項５２に記載の組成物。

【請求項54】

前記ヒト多能性幹細胞が、胚性幹細胞（ＥＳＣ）である、請求項１～５３のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項55】

前記ヒト多能性幹細胞が、誘導多能性幹細胞（ｉＰＳ）である、請求項１～５４のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項56】

前記巨核球由来細胞外小胞が、エリスロポエチンが添加されていない状態で生成された巨核球から単離される、請求項１～５５のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項57】

前記巨核球由来細胞外小胞が、トロンボポエチンが添加された状態で生成された巨核球から単離される、請求項１～５６のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項58】

請求項１～５７のいずれか１項に記載の組成物と、薬学的に許容される賦形剤または担体と、を含む、医薬組成物。

【請求項59】

送達能を有する治療薬を移送するための方法であって、
（ａ）請求項１～５７のいずれか１項に記載の巨核球由来細胞外小胞を得ることと、
（ｂ）前記巨核球由来細胞外小胞を治療薬とともにインキュベートして、前記治療薬を、前記巨核球由来細胞外小胞の内腔に移入させる、及び／または前記巨核球由来細胞外小胞の表面と会合させるようにし、送達能を有する治療薬を産出することと、
（ｃ）前記送達能を有する治療薬を患者に投与すること、または前記送達能を有する治療薬を生体細胞とインビトロで接触させて、接触した前記生体細胞を患者に投与することと、を含む、前記方法。

【請求項60】

前記方法が、インビボ方法である、請求項５９に記載の方法。

【請求項61】

前記方法が、エクスビボ方法である、請求項５９に記載の方法。

【請求項62】

前記方法が、患者から生体細胞を得ることを更に含む、請求項６１に記載の方法。

【請求項63】

前記送達能を有する治療薬と前記生体細胞との前記接触が、前記送達能を有する治療薬を前記生体細胞と共培養することを含む、請求項６１または６２に記載の方法。

【請求項64】

前記巨核球由来細胞外小胞が、前記患者に対して自己である、請求項５９～６３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項65】

前記巨核球由来細胞外小胞が、前記患者と同種異系である、請求項５９～６３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項66】

前記巨核球由来細胞外小胞が、前記患者と異種である、請求項５９～６３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項67】

前記治療薬が、核酸治療薬である、請求項５９～６６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項68】

前記核酸治療薬が、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、調節ＲＮＡ、ノンコーディングＲＮＡ及びコーディングＲＮＡ、直鎖ＤＮＡ、ＤＮＡ断片、またはＤＮＡプラスミドから選択される１つ以上の非自己核酸構築物及び／または組換え核酸構築物から選択される、請求項６７に記載の方法。

【請求項69】

前記核酸治療薬が、前記患者に欠損している野生型遺伝子をコードする、請求項６７または６８に記載の方法。

【請求項70】

前記核酸治療薬が、遺伝子編集タンパク質をコードする、及び／または遺伝子編集機能のための関連要素をコードする、請求項６７～６９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項71】

前記遺伝子編集タンパク質が、ジンクフィンガー（ＺＦ）、転写活性因子様エフェクター（ＴＡＬＥ）、メガヌクレアーゼ、及びクラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート（ＣＲＩＳＰＲ）関連タンパク質から選択される、請求項７０に記載の方法。

【請求項72】

前記ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質が、Ｃａｓ９、ＣａｓＸ、ＣａｓＹ、Ｃｐｆ１、及びそれらのｇＲＮＡ複合体から選択される、請求項７１に記載の方法。

【請求項73】

前記治療薬が、生物学的治療薬であり、任意選択でウイルスである、請求項５９～６６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項74】

前記生物学的治療薬が、タンパク質である、請求項７３に記載の方法。

【請求項75】

前記生物学的治療薬が、組換えタンパク質である、請求項７４に記載の方法。

【請求項76】

前記治療薬が、抗体または抗体断片、融合タンパク質、遺伝子編集タンパク質、サイトカイン、抗原、及びペプチドのうちの１つである、請求項７４または７５に記載の方法。

【請求項77】

前記治療薬が、低分子治療薬である、請求項５９～６６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項78】

前記インキュベートが、超音波処理、サポニン透過処理、機械的振動、低張透析、多孔質膜を介した押し出し、コレステロール抱合、電流印加、及びそれらの組み合わせのうちの１つ以上を含む、請求項５９～６７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項79】

前記インキュベートが、エレクトロポレーションすること、形質転換すること、トランスフェクトすること、及びマイクロインジェクトすることのうちの１つ以上を含む、請求項５９～６８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項80】

前記巨核球由来細胞外小胞が、前記患者の細胞上の細胞表面受容体に結合する、請求項５９～７９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項81】

前記巨核球由来細胞外小胞が、ステップ（ｃ）の接触した前記生体細胞上の細胞表面受容体に結合する、請求項５９～８０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項82】

前記巨核球由来細胞外小胞が、前記患者の細胞の細胞外膜と融合する、請求項５９～８１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項83】

前記巨核球由来細胞外小胞が、ステップ（ｃ）の前記生体細胞の細胞外膜と融合する、請求項５９～８２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項84】

前記巨核球由来細胞外小胞が、前記患者の細胞によってエンドサイトーシスされる、請求項５９～８１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項85】

前記巨核球由来細胞外小胞が、ステップ（ｃ）の前記生体細胞によってエンドサイトーシスされる、請求項５９～８２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項86】

請求項１～５７のいずれか１項に記載の巨核球由来細胞外小胞を生成する方法であって、
（ａ）ヒト多能性幹細胞を得ることであって、前記ヒト多能性幹細胞が、末梢血または臍帯血から供給される初代ＣＤ３４＋造血幹細胞である、前記得ることと、
（ｂ）エリスロポエチンが添加されていない状態及びトロンボポエチンが添加された状態で、前記ヒト多能性幹細胞を巨核球に分化させることと、
（ｃ）前記巨核球から巨核球由来細胞外小胞を単離することと、を含む、前記方法。

【請求項87】

前記方法が、（ｄ）前記巨核球由来細胞外小胞を放射線と接触させることを更に含む、請求項８６に記載の方法。

【請求項88】

前記放射線が、ガンマ放射線である、請求項８７に記載の方法。

【請求項89】

前記ガンマ放射線が、約１２ｋＧｙ、または約２５ｋＧｙ、または約５０ｋＧｙを超える量である、請求項８８に記載の方法。

【請求項90】

前記方法が、実質的に無血清である、請求項８６～８９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項91】

感染性疾患を治療または予防するための方法であって、有効量の請求項１～５８のいずれか１項に記載の組成物を投与することを含む、前記方法。

【請求項92】

感染性疾患を治療または予防するための方法であって、請求項１～５８のいずれか１項に記載の組成物とインビトロで接触した細胞を含む有効量の組成物を投与することを含む、前記方法。

【請求項93】

前記組成物が、（ｉ）ワクチンタンパク質及び／または免疫原性抗原をコードする核酸分子、または（ｉｉ）ワクチンタンパク質及び／または免疫原性抗原を含む、巨核球由来細胞外小胞を含む、請求項９１または９２に記載の方法。

【請求項94】

前記組成物が、（ｉ）感染性に関連するタンパク質をコードする核酸分子、または（ｉｉ）感染性に関連するタンパク質を含む、巨核球由来細胞外小胞を含む、請求項９１または９２に記載の方法。

【請求項95】

前記感染性疾患が、コロナウイルス感染症である、請求項９１～９４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項96】

前記コロナウイルス感染症が、ベータコロナウイルスまたはアルファコロナウイルスによる感染症であり、任意選択で、前記ベータコロナウイルスが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、ＨＣｏＶ－ＨＫＵ１、及びＨＣｏＶ－ＯＣ４３から選択されるか、または前記アルファコロナウイルスが、ＨＣｏＶ－ＮＬ６３及びＨＣｏＶ－２２９Ｅから選択される、請求項９５に記載の方法。

【請求項97】

前記コロナウイルス感染症が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による感染症である、請求項９６に記載の方法。

【請求項98】

前記感染性疾患が、ＣＯＶＩＤ－１９である、請求項９７に記載の方法。

【請求項99】

前記ワクチンタンパク質が、ベータコロナウイルスタンパク質またはアルファコロナウイルスタンパク質であり、任意選択で、前記ベータコロナウイルスタンパク質が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、ＨＣｏＶ－ＨＫＵ１、及びＨＣｏＶ－ＯＣ４３タンパク質、もしくはそれらの抗原性断片から選択されるか、または前記アルファコロナウイルスタンパク質が、ＨＣｏＶ－ＮＬ６３及びＨＣｏＶ－２２９Ｅタンパク質、もしくはそれらの抗原性断片から選択される、請求項９５～９８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項100】

前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質が、スパイク表面糖タンパク質、膜糖タンパク質Ｍ、エンベロープタンパク質Ｅ、及びヌクレオカプシドリンタンパク質、またはそれらの抗原性断片である、請求項９９に記載の方法。

【請求項101】

前記スパイク表面糖タンパク質が、Ｓ１サブユニットもしくはＳ２サブユニット、またはそれらの抗原性断片である、請求項１００に記載の方法。

【請求項102】

感染性に関連するタンパク質をコードする前記核酸分子がｍＲＮＡであり、前記ｍＲＮＡが、任意選択で、インビトロ転写されるか、または合成である、請求項９４～９８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項103】

前記ｍＲＮＡが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク表面糖タンパク質、膜糖タンパク質Ｍ、エンベロープタンパク質Ｅ、及びヌクレオカプシドリンタンパク質、またはそれらの抗原性断片をコードする、請求項１０２に記載の方法。

【請求項104】

前記ｍＲＮＡが、任意選択でプソイドウリジン及び５－メトキシウリジンから選択される１つ以上の非標準ヌクレオチドを含む、請求項１０２または１０３に記載の方法。

【請求項105】

前記感染性疾患が、任意選択でＡ型、Ｂ型、Ｃ型、及びＤ型インフルエンザから選択されるインフルエンザ感染症である、請求項９１～９４に記載の方法。

【請求項106】

前記感染性疾患が、任意選択でヒト免疫不全（ＨＩＶ）及びサル免疫不全（ＳＩＶ）から選択されるレトロウイルス感染症である、請求項９１～９４に記載の方法。

【請求項107】

前記組成物が、低下したＣ－Ｃケモカイン受容体５型（ＣＣＲ５）活性及びＣ－Ｘ－Ｃケモカイン受容体４型（ＣＸＣＲ４）活性を有するタンパク質をコードする核酸を含む巨核球由来細胞外小胞を含む、請求項１０６に記載の方法。

【請求項108】

前記組成物が、変異型ＣＣＲ５またはＣＸＣＲ４をコードする核酸分子を含む巨核球由来細胞外小胞を含む、請求項１０６または１０７に記載の方法。

【請求項109】

前記組成物が、Ｃ－Ｃケモカイン受容体５型（ＣＣＲ５）活性及びＣ－Ｘ－Ｃケモカイン受容体４型（ＣＸＣＲ４）活性を低下させることができる遺伝子編集タンパク質をコードする核酸分子を含む巨核球由来細胞外小胞を含む、請求項１０８に記載の方法。

【請求項110】

前記遺伝子編集タンパク質が、ジンクフィンガー（ＺＦ）、転写活性因子様エフェクター（ＴＡＬＥ）、メガヌクレアーゼ、及びクラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート（ＣＲＩＳＰＲ）関連タンパク質から選択される、請求項１０９に記載の方法。

【請求項111】

前記ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質が、Ｃａｓ９、ＣａｓＸ、ＣａｓＹ、Ｃｐｆ１、及びそれらのｇＲＮＡ複合体から選択される、請求項１１０に記載の方法。

【請求項112】

血小板減少症を治療するための方法であって、有効量の請求項１～５８のいずれか１項に記載の組成物を投与することを含み、前記組成物が、機能性血小板減少症関連遺伝子をコードする核酸もしくはそのタンパク質産物、または機能性血小板減少症関連遺伝子を作製することができる遺伝子編集タンパク質をコードする核酸もしくはそのタンパク質産物を含む、巨核球由来細胞外小胞を含む、前記方法。

【請求項113】

血小板減少症を治療するための方法であって、有効量の請求項１～５８のいずれか１項に記載の組成物とインビトロで接触した細胞を含む有効量の組成物を投与することを含み、前記組成物及び／または医薬組成物が、機能性血小板減少症関連遺伝子をコードする核酸もしくはそのタンパク質産物、または機能性血小板減少症関連遺伝子を作製することができる遺伝子編集タンパク質をコードする核酸もしくはそのタンパク質産物を含む、巨核球由来細胞外小胞を含む、前記方法。

【請求項114】

前記血小板減少症が、先天性無巨核球性血小板減少症（ＣＡＭＴ）、橈骨欠損を伴う血小板減少症、先天性血小板減少症を伴う橈尺骨癒合症、サラセミアを伴うＸ連鎖巨大血小板性血小板減少症、ＧＢ１１ｂ関連血小板減少症、Ｘ連鎖血小板減少症／ウィスコット・アルドリッチ症候群、フォン・ヴィレブランド病２Ｂ型、血小板型フォン・ヴィレブランド病、ＣＹＣＳ関連血小板減少症、免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病）、及び骨髄除去／化学療法誘発性血小板減少症から選択される、請求項１１２または１１３に記載の方法。

【請求項115】

前記血小板減少症が、ＣＡＭＴである、請求項１１４に記載の方法。

【請求項116】

前記方法により、前記患者に機能性トロンボポエチン（ＴＰＯ）受容体が提供される、請求項１１５に記載の方法。

【請求項117】

前記遺伝子が、機能性ｃ－Ｍｐｌ遺伝子であるか、または機能性ｃ－Ｍｐｌ遺伝子を形成することができる遺伝子編集タンパク質をコードする、請求項１１５または１１６に記載の方法。

【請求項118】

前記遺伝子編集タンパク質が、ジンクフィンガー（ＺＦ）、転写活性因子様エフェクター（ＴＡＬＥ）、メガヌクレアーゼ、及びクラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート（ＣＲＩＳＰＲ）関連タンパク質から選択される、請求項１１７に記載の方法。

【請求項119】

前記ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質が、Ｃａｓ９、ＣａｓＸ、ＣａｓＹ、Ｃｐｆ１、及びそれらのｇＲＮＡ複合体から選択される、請求項１１８に記載の方法。

【請求項120】

前記方法により、前記患者における巨核球形成が促進される、請求項１１２～１１９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項121】

前記方法により、前記患者における血小板数の増加が引き起こされる、請求項１１８～１２０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項122】

前記血小板数の増加が、約１００×１０^９血小板／Ｌを超える、または約１１０×１０^９血小板／Ｌを超える、または約１２０×１０^９血小板／Ｌを超える、または約１３０×１０^９血小板／Ｌを超える、または約１４０×１０^９血小板／Ｌを超える、または約１５０×１０^９血小板／Ｌを超える、請求項１２１に記載の方法。

【請求項123】

前記方法により、前記患者が再生不良性貧血及び／または白血病を発症する可能性が低下する、請求項１１２～１２２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項124】

前記方法により、造血幹細胞（ＨＳＣ）移植の必要性が取り除かれる、請求項１１２～１２３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項125】

前記患者が、乳幼児である、請求項１１２～１２４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項126】

異常ヘモグロビン症を治療するための方法であって、有効量の請求項１～５８のいずれか１項に記載の組成物を投与することを含み、前記組成物が、機能性異常ヘモグロビン症関連遺伝子をコードする核酸もしくはそのタンパク質産物、または機能性異常ヘモグロビン症関連遺伝子を作製することができる遺伝子編集タンパク質をコードする核酸もしくはそのタンパク質産物を含む、巨核球由来細胞外小胞を含む、前記方法。

【請求項127】

異常ヘモグロビン症を治療するための方法であって、請求項１～５８のいずれか１項に記載の組成物とインビトロで接触した細胞を含む有効量の組成物を投与することを含み、前記組成物が、機能性異常ヘモグロビン症関連遺伝子をコードする核酸もしくはそのタンパク質産物、または機能性異常ヘモグロビン症関連遺伝子を作製することができる遺伝子編集タンパク質をコードする核酸もしくはそのタンパク質産物を含む、巨核球由来細胞外小胞を含む、前記方法。

【請求項128】

前記機能性異常ヘモグロビン症関連遺伝子が、ヘモグロビンの一部をコードする遺伝子である、請求項１２６または１２７に記載の方法。

【請求項129】

前記機能性異常ヘモグロビン症関連遺伝子が、ヘモグロビンのグロビン鎖の一方をコードする遺伝子である、請求項１２６～１２８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項130】

前記機能性異常ヘモグロビン症関連遺伝子が、ヘモグロビン溶解性、安定性、及び／または酸素親和性を非疾患レベルに回復させる、請求項１２６～１２９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項131】

前記機能性異常ヘモグロビン症関連遺伝子が、ヘモグロビン量を非疾患レベルに回復させる、請求項１２６～１３０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項132】

前記機能性異常ヘモグロビン症関連遺伝子が、ベータグロビン（ＨＢＢ）である、請求項１２６～１３１に記載の方法。

【請求項133】

前記遺伝子が、機能性ベータグロビン（ＨＢＢ）遺伝子を形成することができる遺伝子編集タンパク質をコードする、請求項１２６または１２７に記載の方法。

【請求項134】

前記遺伝子編集タンパク質が、ジンクフィンガー（ＺＦ）、転写活性因子様エフェクター（ＴＡＬＥ）、メガヌクレアーゼ、及びクラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート（ＣＲＩＳＰＲ）関連タンパク質から選択される、請求項１３３に記載の方法。

【請求項135】

前記ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質が、Ｃａｓ９、ＣａｓＸ、ＣａｓＹ、Ｃｐｆ１、及びそれらのｇＲＮＡ複合体から選択される、請求項１３４に記載の方法。

【請求項136】

前記異常ヘモグロビン症が、鎌状赤血球症である、請求項１２６～１３５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項137】

前記異常ヘモグロビン症が、β－サラセミアである、請求項１２６～１３６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項138】

前記方法により、赤血球変形、溶血性貧血、微小血管閉塞、及び虚血性組織損傷のうちの１つ以上が軽減または予防される、請求項１２６～１３７のいずれか１項に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年１１月１１日に出願された米国仮特許出願第６３／２７８，３７８号、２０２２年４月２６日に出願された同第６３／３３５，１８１号、及び２０２２年１０月２３日に出願された同第６３／３８０，５７６号に対する優先権の利益を主張するものであり、これらは全て、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。

【0002】

本開示は、巨核球由来細胞外小胞のバイオマーカー及びそれを使用する方法に関する。

【背景技術】

【0003】

薬物の細胞傷害性及び副作用及び／または迅速なクリアランスを回避するために、様々なナノ小胞が、治療薬を投与するために開発されている。

【0004】

臨床的に承認されたナノ粒子の最も大きなカテゴリーはリポソームであり、これは水性区画を取り囲む単純な脂質二重層で構成されている。しかしながら、リポソームが限られた細胞または組織標的化機構しか有しない外来性の合成実体であるため、リポソームは、治療薬の標的非特異性及び非効率的なアンロードに加えて、免疫反応及び細胞傷害性を含む有害作用を患者に引き起こす可能性もある。アデノウイルスベクター、レトロウイルスベクター、ＡＡＶベクター、及びレンチウイルスベクターは、現在、遺伝子治療に用いられている最も人気のあるウイルスベクターである。それにもかかわらず、血清の存在下で接着細胞株及び一過性トランスフェクションを使用する従来のウイルスベクター産生方法は拡張可能ではない。

【0005】

その代替として、細胞外小胞のようなナノ小胞は、それらの生物学的特性及び組成的特性の更なる理解から利益を得るであろう。

【0006】

したがって、予測可能な単離及び標準化を可能にするために、カーゴパッケージング及び細胞への送達の有効性を高め、かつ十分に特徴付けられた組成物及び方法の必要性が存在する。

【発明の概要】

【0007】

製造された巨核球由来細胞外小胞に関する組成物及び方法が本明細書に開示される。具体的には、とりわけ、本巨核球由来細胞外小胞は、それらを治療的送達及び様々な疾患または障害の治療における利用によく適したものにする特有のバイオマーカープロファイルを示す。様々な実施形態では、本明細書に開示される組成物及び方法は、薬物送達及び１つ以上の遺伝性疾患の治療のために利用され得る。複数の実施形態では、本明細書に開示される組成物及び方法は、薬物送達及び感染性疾患の治療に利用され得る。複数の実施形態では、本明細書に開示される組成物及び方法は、薬物送達及び造血疾患または障害、例えば、血小板減少症／貧血の治療に利用され得る。複数の実施形態では、本明細書に開示される組成物及び方法は、薬物送達及び異常ヘモグロビン症の治療に利用され得る。本明細書に開示される方法は、インビボまたはエクスビボであり得、例えば、遺伝子置換療法及び遺伝子編集に使用され得る。

【0008】

一態様では、本発明は、ヒト多能性幹細胞に由来する複数の実質的に精製された巨核球由来細胞外小胞を含む組成物であって、当該組成物が、他のタイプの細胞外小胞と比較して、当該巨核球由来細胞外小胞に特有であるか、または当該巨核球由来細胞外小胞に優先的に存在する１つ以上のタンパク質を含む、組成物に関する。

【0009】

一態様では、本発明は、ヒト多能性幹細胞に由来する複数の実質的に精製された巨核球由来細胞外小胞を含む組成物であって、当該組成物が、他のタイプの細胞外小胞と比較して、当該巨核球由来細胞外小胞に特有であるか、または当該巨核球由来細胞外小胞に優先的に存在する１つ以上のタンパク質をコードする１つ以上の核酸を含む、組成物に関する。

【0010】

一態様では、本発明は、ヒト多能性幹細胞に由来する複数の実質的に精製された巨核球由来細胞外小胞を含む組成物であって、当該組成物が、内腔を取り囲む脂質二重層膜を含み、当該巨核球由来細胞外小胞の内腔が、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、調節ＲＮＡ、ならびにノンコーディングＲＮＡ及びコーディングＲＮＡから選択される１つ以上の巨核球由来核酸分子を含み、当該脂質二重層膜が、会合しているか、または内部に埋め込まれた１つ以上のタンパク質を含み、当該１つ以上のタンパク質が、他のタイプの細胞外小胞と比較して、当該巨核球由来細胞外小胞に特有であるか、または当該巨核球由来細胞外小胞に優先的に存在する、組成物に関する。

【0011】

一態様では、本発明は、ヒト多能性幹細胞に由来する複数の実質的に精製された巨核球由来細胞外小胞を含む組成物であって、当該組成物が、内腔を取り囲む脂質二重層膜を含み、当該巨核球由来細胞外小胞の内腔が、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、調節ＲＮＡ、ならびにノンコーディングＲＮＡ及びコーディングＲＮＡから選択される１つ以上の巨核球由来核酸分子を含み、当該脂質二重層膜が、１つ以上の核酸を含み、当該１つ以上の核酸が、当該脂質二重層膜と会合しているか、または当該脂質二重層膜内に埋め込まれた１つ以上のタンパク質をコードし、他のタイプの細胞外小胞と比較して、当該巨核球由来細胞外小胞に特有であるか、または当該巨核球由来細胞外小胞に優先的に存在する、組成物に関する。

【0012】

一態様では、本発明は、ヒト多能性幹細胞に由来する複数の実質的に精製された巨核球由来細胞外小胞を含む組成物であって、当該組成物が、他のタイプの細胞外小胞と比較して、当該巨核球由来細胞外小胞に特有であるか、または当該巨核球由来細胞外小胞に優先的に存在する１つ以上の核酸を含む、組成物に関する。

【0013】

一態様では、本発明は、ヒト多能性幹細胞に由来する複数の実質的に精製された巨核球由来細胞外小胞を含む組成物であって、当該組成物が、他のタイプの細胞外小胞と比較して、当該巨核球由来細胞外小胞に特有であるか、または当該巨核球由来細胞外小胞に優先的に存在する１つ以上の核酸によってコードされる１つ以上のタンパク質を含む、組成物に関する。

【0014】

別の態様では、本発明は、本明細書に開示される組成物と、薬学的に許容される賦形剤または担体と、を含む医薬組成物に関する。

【0015】

別の態様では、本発明は、送達能を有する治療薬を移送するための方法であって、（ａ）本明細書に開示される組成物の巨核球由来細胞外小胞を得ることと、（ｂ）当該巨核球由来細胞外小胞を治療薬とともにインキュベートして、当該治療薬を、当該巨核球由来細胞外小胞の内腔に移入させる、及び／または当該巨核球由来細胞外小胞の表面と会合させるようにし、送達能を有する治療薬を産出することと、（ｃ）当該送達能を有する治療薬を患者に投与すること、または当該送達能を有する治療薬を生体細胞とインビトロで接触させて、接触した当該生体細胞を患者に投与することと、を含む、方法に関する。

【0016】

別の態様では、本発明は、本明細書に開示される組成物の巨核球由来細胞外小胞を生成する方法であって、（ａ）ヒト多能性幹細胞を得ることであって、当該ヒト多能性幹細胞が、末梢血または臍帯血から供給される初代ＣＤ３４＋造血幹細胞である、得ることと、（ｂ）エリスロポエチンが添加されていない状態及びトロンボポエチンが添加された状態で、当該ヒト多能性幹細胞を巨核球に分化させることと、（ｃ）当該巨核球から巨核球由来細胞外小胞を単離することと、を含む、方法に関する。

【0017】

様々な実施形態では、本明細書に開示される組成物及び方法は、薬物送達及び１つ以上の遺伝性疾患の治療のために利用され得る。

【0018】

別の態様では、本発明は、感染性疾患を治療または予防するための方法であって、有効量の本明細書に開示される組成物を投与することを含む、方法に関する。

【0019】

別の態様では、本発明は、感染性疾患を治療または予防するための方法であって、本明細書に開示される組成物とインビトロで接触した細胞を含む有効量の組成物を投与することを含む、方法に関する。

【0020】

別の態様では、本発明は、造血疾患または障害を治療するための方法に関する。ある態様では、本発明は、血小板減少症を治療するための方法であって、有効量の本明細書に開示される組成物を投与することを含み、当該組成物が、機能性血小板減少症関連遺伝子をコードする核酸もしくはそのタンパク質産物、または機能性血小板減少症関連遺伝子を作製することができる遺伝子編集タンパク質をコードする核酸もしくはそのタンパク質産物を含む、巨核球由来細胞外小胞を含む、方法に関する。

【0021】

別の態様では、本発明は、血小板減少症を治療するための方法であって、本明細書に開示される組成物とインビトロで接触した細胞を含む有効量の組成物を投与することを含み、当該組成物が、機能性血小板減少症関連遺伝子をコードする核酸もしくはそのタンパク質産物、または機能性血小板減少症関連遺伝子を作製することができる遺伝子編集タンパク質をコードする核酸もしくはそのタンパク質産物を含む、巨核球由来細胞外小胞を含む、方法に関する。

【0022】

別の態様では、本発明は、異常ヘモグロビン症を治療するための方法であって、有効量の本明細書に開示される組成物を投与することを含み、当該組成物が、機能性異常ヘモグロビン症関連遺伝子をコードする核酸もしくはそのタンパク質産物、または機能性異常ヘモグロビン症関連遺伝子を作製することができる遺伝子編集タンパク質をコードする核酸もしくはそのタンパク質産物を含む、巨核球由来細胞外小胞を含む、方法に関する。

【0023】

別の態様では、本発明は、異常ヘモグロビン症を治療するための方法であって、本明細書に開示される組成物とインビトロで接触する細胞を含む有効量の組成物を投与することを含み、当該組成物が、機能性異常ヘモグロビン症関連遺伝子をコードする核酸もしくはそのタンパク質産物、または機能性異常ヘモグロビン症関連遺伝子を作製することができる遺伝子編集タンパク質をコードする核酸もしくはそのタンパク質産物を含む、巨核球由来細胞外小胞を含む、方法に関する。

【0024】

要約ならびに以下の発明を実施するための形態は、添付の図面と併せて読むことにより更に理解される。本開示の方法を例示する目的のために、本方法の例示的な実施形態が図面に示されているが、これらは開示される特定の実施形態に限定されるべきではない。

【図面の簡単な説明】

【0025】

【図1A】本開示のＭｋＥＶプロテオームと、データベースＥｘｏＣａｒｔａ（Ｋｅｅｒｔｈｉｋｕｍａｒ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２０１６；４２８（４）：６８８－６９２）（ワールドワイドウェブｅｘｏｃａｒｔａ．ｏｒｇ）で同定された上位１００個のエクソソームマーカータンパク質との重複を示す一連の円グラフである。これらのタンパク質のうちの９６個が本開示のＭｋＥＶプロテオームで同定されたが、４個は同定されなかった（図１Ａ）。図１Ｂに示すように、ＶｅｓｉｃｌｅＰｅｄｉａデータベース（Ｐａｔｈａｎ ｅｔ ａｌ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２０１９ Ｊａｎ ８；４７：Ｄ５１６－Ｄ５１９）（ワールドワイドウェブｍｉｃｒｏｖｅｓｉｃｌｅｓ．ｏｒｇ）によって定義される上位１００個のＥＶマーカータンパク質のうち、これらのタンパク質の９１個が本開示のＭｋＥＶプロテオームで同定されたが、９個は同定されなかった。まとめると、本開示のＭｋＥＶは、主に、共通の細胞外小胞及びエクソソームマーカーを含む。

【図1B】本開示のＭｋＥＶプロテオームと、データベースＥｘｏＣａｒｔａ（Ｋｅｅｒｔｈｉｋｕｍａｒ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２０１６；４２８（４）：６８８－６９２）（ワールドワイドウェブｅｘｏｃａｒｔａ．ｏｒｇ）で同定された上位１００個のエクソソームマーカータンパク質との重複を示す一連の円グラフである。これらのタンパク質のうちの９６個が本開示のＭｋＥＶプロテオームで同定されたが、４個は同定されなかった（図１Ａ）。図１Ｂに示すように、ＶｅｓｉｃｌｅＰｅｄｉａデータベース（Ｐａｔｈａｎ ｅｔ ａｌ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２０１９ Ｊａｎ ８；４７：Ｄ５１６－Ｄ５１９）（ワールドワイドウェブｍｉｃｒｏｖｅｓｉｃｌｅｓ．ｏｒｇ）によって定義される上位１００個のＥＶマーカータンパク質のうち、これらのタンパク質の９１個が本開示のＭｋＥＶプロテオームで同定されたが、９個は同定されなかった。まとめると、本開示のＭｋＥＶは、主に、共通の細胞外小胞及びエクソソームマーカーを含む。

【図2A】本開示のＭｋＥＶプロテオームと、ヒトＥＶプロテオームのＶｅｓｉｃｌｅＰｅｄｉａデータベース及びＥｘｏＣａｒｔａデータベース全体との重複を示す一連のベン図であり、本開示のＭｋＥＶに特有の１４７個のタンパク質を明らかにする（図２Ａ）。本開示のＭｋＥＶの細胞表面タンパク質とＶｅｓｉｃｌｅＰｅｄｉａデータベースによって捕捉された表面タンパク質との重複は、１３個の細胞表面タンパク質及び膜タンパク質が本開示のＭｋＥＶに特有であることを示した（図２Ｂ）。表面タンパク質及び膜タンパク質を、Ｂａｕｓｃｈ－Ｆｌｕｃｋ ｅｔ ａｌ．（Ｂａｕｓｃｈ－Ｆｌｕｃｋ ｅｔ ａｌ．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ．１０：ｅ０１２１３１４）及びｔｈｅ Ｈｕｍａｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｔｌａｓ（Ｔｈｕｌ Ｐ．Ｊ．，Ａｋｅｓｓｏｎ Ｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ．２０１７．３６５（６３４０））に従って定義した。

【図2B】本開示のＭｋＥＶプロテオームと、ヒトＥＶプロテオームのＶｅｓｉｃｌｅＰｅｄｉａデータベース及びＥｘｏＣａｒｔａデータベース全体との重複を示す一連のベン図であり、本開示のＭｋＥＶに特有の１４７個のタンパク質を明らかにする（図２Ａ）。本開示のＭｋＥＶの細胞表面タンパク質とＶｅｓｉｃｌｅＰｅｄｉａデータベースによって捕捉された表面タンパク質との重複は、１３個の細胞表面タンパク質及び膜タンパク質が本開示のＭｋＥＶに特有であることを示した（図２Ｂ）。表面タンパク質及び膜タンパク質を、Ｂａｕｓｃｈ－Ｆｌｕｃｋ ｅｔ ａｌ．（Ｂａｕｓｃｈ－Ｆｌｕｃｋ ｅｔ ａｌ．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ．１０：ｅ０１２１３１４）及びｔｈｅ Ｈｕｍａｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｔｌａｓ（Ｔｈｕｌ Ｐ．Ｊ．，Ａｋｅｓｓｏｎ Ｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ．２０１７．３６５（６３４０））に従って定義した。

【図3】本開示の特有のＭｋＥＶタンパク質中のＫＥＧＧ経路濃縮を示すヒストグラムである。本開示の特有のＭｋＥＶタンパク質の有意に濃縮されたＫＥＧＧ経路のリスト（ｐ値＜０．０５）を示し、アミノアシル－ｔＲＮＡ生合成及び好中球細胞外トラップ形成に関与する経路を含む。

【図4】特有のＭｋＥＶタンパク質の直接タンパク質間相互作用ネットワークを示す図である。このネットワークを、キュレートした直接タンパク質間相互作用（相互作用スコア＞０．４）を含むように構築した。輪郭強調は、関連相互作用スコア（相互作用の信頼度）を表す。３つより多くのノードを有するクラスターを強調表示し、降順に番号付けた。非相互作用ノードを除外した。番号１は、ヒストンクラスターを表し、番号２は、タンパク質翻訳クラスターのｔＲＮＡアミノアシル化を表し、番号３は、セプチンタンパク質のクラスターを表し、番号４は、ミトコンドリア関連クラスターを表し、番号５は、細胞生合成プロセス（転写及び翻訳）を表す。

【図5】特有のＭｋＥＶタンパク質の機能的及び物理的タンパク質間相互作用ネットワークを示す図である。このタンパク質ネットワークを、機能的会合及び直接タンパク質間相互作用を使用して構築した。実験的エビデンス及びデータベースエビデンスを含めた（相互作用スコア＞０．４）。３つより多くのノードを有するクラスターを強調表示し、降順に番号付けた。非相互作用ノードを除外した。番号１は、ヒストンクラスターを表し、番号２は、タンパク質翻訳クラスターのｔＲＮＡアミノアシル化を表し、番号３は、セプチンタンパク質のクラスターを表し、番号４は、細胞生合成プロセス（転写及び翻訳）を表し、番号５は、造血クラスターを表し、番号６は、ミトコンドリア関連クラスターを表す。

【図6】２つのＭｋＥＶバッチ間のタンパク質同定の重複を示すベン図である。２３３２個のタンパク質のうち、９７３個が両方のバッチ間で共有され、１２２６個が第１のバッチで同定され、１３３個が第２のＭｋＥＶバッチで同定された。

【図7】ＭｋＥＶバッチにわたるタンパク質量の強い一貫性を強調する、９７３個の重複ＭｋＥＶタンパク質のタンパク質強度のヒートマップである（試料ロード正規化）。

【図8】ＭｋＥＶプロテオームと血漿ＥＶタンパク質の包括的リスト（４つの公開されたソース及び新たに生成されたデータセットを組み合わせて作成したもの）との間の重複を可視化するベン図である。この比較により、ＭｋＥＶ中で特有に同定された５０８個のタンパク質が明らかになった。

【図9A】健常ドナー由来のＣＤ６１＋ＥＶ中で以前に同定されていないＭｋＥＶタンパク質セットを明らかにする一連のベン図である。（図９Ａ）．ＣＤ６１＋ＥＶと血漿ＥＶとの間の強い重複。（図２Ｂ）．合計２１０９個のタンパク質がＭｋＥＶで同定されたが、ＣＤ６１＋ＥＶには存在しなかった。

【図9B】健常ドナー由来のＣＤ６１＋ＥＶ中で以前に同定されていないＭｋＥＶタンパク質セットを明らかにする一連のベン図である。（図９Ａ）．ＣＤ６１＋ＥＶと血漿ＥＶとの間の強い重複。（図２Ｂ）．合計２１０９個のタンパク質がＭｋＥＶで同定されたが、ＣＤ６１＋ＥＶには存在しなかった。

【図10】本開示のＭｋＥＶ中のタンパク質コード転写物を示すベン図である。ＭｋＥＶタンパク質コード遺伝子（ＲＮＡ－ｓｅｑ）と、ＶｅｓｉｃｌｅＰｅｄｉａデータベース全体で同定された転写物との間の重複により、本開示のＭｋＥＶに特有の２７０１個のｍＲＮＡ転写物が明らかになる。

【図11】本開示のＭｋＥＶ中の特有のタンパク質コード転写物のＫＥＧＧ経路を示すヒストグラムである。全ての特有のＭｋＥＶタンパク質コード転写物（合計２７０１個の遺伝子）のＫＥＧＧ経路濃縮を示す。手動でキュレートしたＫＥＧＧ経路セットを表示する。

【図12】選択したＫＥＧＧ経路に関連する本明細書に開示されるＭｋＥＶに特有の遺伝子（ＲＮＡ－ｓｅｑ）を列記した表である。

【図13】ＧＦＰタグ付きＣａｓ９リボ核タンパク質（ＲＮＰ）をロードしたＭｋＥＶと共培養したＨＳＰＣ（系譜枯渇ＣＤ１５０＋ＣＤ４８－マウス骨髄細胞）の共焦点顕微鏡画像を示す。カーゴをロードしたＭｋＥＶと共培養した細胞はＧＦＰ陽性であり、ＧＦＰタグ付きＣａｓ９ロードＭｋＥＶの細胞取り込みを示した。対照的に、細胞のみを含む対照試料及びＭｋＥＶ＋ＲＮＰと共培養した細胞を含む対照試料（細胞との共培養前に、ＭＫＥＶをＲＮＰと混合したが、エレクトロポレーションでロードしなかった（ＥＰなし））は、ＧＦＰ陽性を示さなかった。これらのデータは、ＲＮＰカーゴをロードしたＭｋＥＶのＨＳＰＣへの送達の成功を示す。

【図14A】エクスビボでの造血幹細胞及び前駆細胞に対するＭｋＥＶの優先的な標的化を示す。ＧＦＰタグ付きＣａｓ９タンパク質をロードしたＭｋＥＶ（図１４Ａ）または親油性蛍光色素ＤｉＤで標識したＭｋＥＶ（図１４Ｂ）のいずれかを、野生型マウスに由来する初代全骨髄と共培養した。２４時間共培養した後、細胞を、ＧＦＰ＋またはＤｉＤ＋（すなわち、ＭｋＥＶ＋）であった細胞の％についてフローサイトメトリーにより分析した。加えて、系譜陽性（Ｌｉｎ＋）、系譜陰性（Ｌｉｎ－）、及び系譜陰性／ｃ－Ｋｉｔ＋／Ｓｃａ－１＋細胞パーセントを、系譜陽性マーカー、Ｓｃａ－１、及びｃ－Ｋｉｔ細胞表面タンパク質に対する蛍光標識抗体を使用して同時に決定した。不均一な全骨髄集団における細胞の各サブタイプのパーセンテージを図１４Ａに示す。ＧＦＰタグ付きＣａｓ９をロードしたＭｋＥＶと共培養した細胞の場合（図１４Ａの棒グラフによって示される）、培養中の細胞の大部分（９５％）がＬｉｎ＋細胞（分化細胞）であるにもかかわらず、これらの細胞の最大２３％のみがＭｋＥＶに対して陽性であった。対照的に、５％未満が造血幹細胞及び前駆細胞（Ｌｉｎ－細胞）であったが、これらの細胞のほぼ５０％が、細胞用量当たり３００個のＥＶでＭｋＥＶに対して陽性であった。最後に、これらの培養物で評価した最も珍しく最も多能性のある造血幹細胞である、集団のわずか０．２５％を構成するＬＳＫ細胞の場合、この集団のほぼ４０％がＭＫＥＶに対して陽性であった。これらのデータは、骨髄由来造血幹細胞及び前駆細胞の優先的なエクスビボ標的化を示す。同様に、図１４Ｂに示すように、ＤｉＤ標識ＭｋＥＶと共培養した全骨髄細胞の場合、Ｌｉｎ＋細胞の２０％のみがＭｋＥＶに対して陽性であった。対照的に、より珍しいＬｉｎ－細胞集団の３０％がＭｋＥＶに対して陽性であった。最後に、これらの培養物（ＬＳＫ）で評価した最も珍しく最も多能性のある造血幹細胞の場合、この集団の最大４８％％がＭＫＥＶに対して陽性であった。対照と比較して、ＭｋＥＶ共培養の全ての条件にわたって、全骨髄培養物中の合計Ｌｉｎ＋細胞及びＬｉｎ－細胞のパーセンテージに有意な変化はなかった（図１４Ｃ）。

【図14B】エクスビボでの造血幹細胞及び前駆細胞に対するＭｋＥＶの優先的な標的化を示す。ＧＦＰタグ付きＣａｓ９タンパク質をロードしたＭｋＥＶ（図１４Ａ）または親油性蛍光色素ＤｉＤで標識したＭｋＥＶ（図１４Ｂ）のいずれかを、野生型マウスに由来する初代全骨髄と共培養した。２４時間共培養した後、細胞を、ＧＦＰ＋またはＤｉＤ＋（すなわち、ＭｋＥＶ＋）であった細胞の％についてフローサイトメトリーにより分析した。加えて、系譜陽性（Ｌｉｎ＋）、系譜陰性（Ｌｉｎ－）、及び系譜陰性／ｃ－Ｋｉｔ＋／Ｓｃａ－１＋細胞パーセントを、系譜陽性マーカー、Ｓｃａ－１、及びｃ－Ｋｉｔ細胞表面タンパク質に対する蛍光標識抗体を使用して同時に決定した。不均一な全骨髄集団における細胞の各サブタイプのパーセンテージを図１４Ａに示す。ＧＦＰタグ付きＣａｓ９をロードしたＭｋＥＶと共培養した細胞の場合（図１４Ａの棒グラフによって示される）、培養中の細胞の大部分（９５％）がＬｉｎ＋細胞（分化細胞）であるにもかかわらず、これらの細胞の最大２３％のみがＭｋＥＶに対して陽性であった。対照的に、５％未満が造血幹細胞及び前駆細胞（Ｌｉｎ－細胞）であったが、これらの細胞のほぼ５０％が、細胞用量当たり３００個のＥＶでＭｋＥＶに対して陽性であった。最後に、これらの培養物で評価した最も珍しく最も多能性のある造血幹細胞である、集団のわずか０．２５％を構成するＬＳＫ細胞の場合、この集団のほぼ４０％がＭＫＥＶに対して陽性であった。これらのデータは、骨髄由来造血幹細胞及び前駆細胞の優先的なエクスビボ標的化を示す。同様に、図１４Ｂに示すように、ＤｉＤ標識ＭｋＥＶと共培養した全骨髄細胞の場合、Ｌｉｎ＋細胞の２０％のみがＭｋＥＶに対して陽性であった。対照的に、より珍しいＬｉｎ－細胞集団の３０％がＭｋＥＶに対して陽性であった。最後に、これらの培養物（ＬＳＫ）で評価した最も珍しく最も多能性のある造血幹細胞の場合、この集団の最大４８％％がＭＫＥＶに対して陽性であった。対照と比較して、ＭｋＥＶ共培養の全ての条件にわたって、全骨髄培養物中の合計Ｌｉｎ＋細胞及びＬｉｎ－細胞のパーセンテージに有意な変化はなかった（図１４Ｃ）。

【図14C】エクスビボでの造血幹細胞及び前駆細胞に対するＭｋＥＶの優先的な標的化を示す。ＧＦＰタグ付きＣａｓ９タンパク質をロードしたＭｋＥＶ（図１４Ａ）または親油性蛍光色素ＤｉＤで標識したＭｋＥＶ（図１４Ｂ）のいずれかを、野生型マウスに由来する初代全骨髄と共培養した。２４時間共培養した後、細胞を、ＧＦＰ＋またはＤｉＤ＋（すなわち、ＭｋＥＶ＋）であった細胞の％についてフローサイトメトリーにより分析した。加えて、系譜陽性（Ｌｉｎ＋）、系譜陰性（Ｌｉｎ－）、及び系譜陰性／ｃ－Ｋｉｔ＋／Ｓｃａ－１＋細胞パーセントを、系譜陽性マーカー、Ｓｃａ－１、及びｃ－Ｋｉｔ細胞表面タンパク質に対する蛍光標識抗体を使用して同時に決定した。不均一な全骨髄集団における細胞の各サブタイプのパーセンテージを図１４Ａに示す。ＧＦＰタグ付きＣａｓ９をロードしたＭｋＥＶと共培養した細胞の場合（図１４Ａの棒グラフによって示される）、培養中の細胞の大部分（９５％）がＬｉｎ＋細胞（分化細胞）であるにもかかわらず、これらの細胞の最大２３％のみがＭｋＥＶに対して陽性であった。対照的に、５％未満が造血幹細胞及び前駆細胞（Ｌｉｎ－細胞）であったが、これらの細胞のほぼ５０％が、細胞用量当たり３００個のＥＶでＭｋＥＶに対して陽性であった。最後に、これらの培養物で評価した最も珍しく最も多能性のある造血幹細胞である、集団のわずか０．２５％を構成するＬＳＫ細胞の場合、この集団のほぼ４０％がＭＫＥＶに対して陽性であった。これらのデータは、骨髄由来造血幹細胞及び前駆細胞の優先的なエクスビボ標的化を示す。同様に、図１４Ｂに示すように、ＤｉＤ標識ＭｋＥＶと共培養した全骨髄細胞の場合、Ｌｉｎ＋細胞の２０％のみがＭｋＥＶに対して陽性であった。対照的に、より珍しいＬｉｎ－細胞集団の３０％がＭｋＥＶに対して陽性であった。最後に、これらの培養物（ＬＳＫ）で評価した最も珍しく最も多能性のある造血幹細胞の場合、この集団の最大４８％％がＭＫＥＶに対して陽性であった。対照と比較して、ＭｋＥＶ共培養の全ての条件にわたって、全骨髄培養物中の合計Ｌｉｎ＋細胞及びＬｉｎ－細胞のパーセンテージに有意な変化はなかった（図１４Ｃ）。

【図15-1】野生型マウスへのインビボ送達後の蛍光標識ＭｋＥＶのインビボ生体内分布を示す。実験設計を図１５Ａに示す（ｎ＝３～５マウス／群）。蛍光標識ＭｋＥＶを、野生型マウスに尾静脈を介して静脈内注射し、注射の１６時間後に組織を採取し、蛍光について分析した。図１５Ｂは、マウスから解剖した大腿骨におけるＩＶＩＳによって検出された蛍光シグナルを示す。ｎ＝５マウス／群。プレートリーダーによりアッセイし、かつ組織重量により正規化した、各々の均質化組織における蛍光（図１５Ｃ）。図１５Ｃでは、各々の組織についての左から右への各々のデータポイントは、それぞれ、生理食塩水、色素のみ、及びＭｋＥＶである。図１５Ｄ及び図１５Ｅは、フローサイトメトリーにより分析して、ＭｋＥＶに対して陽性であった造血（ＣＤ４５＋細胞、図１５Ｄ）の％及び非常に原始的な長期造血幹細胞（ＣＤ４５＋／Ｌｉｎ－／ＣＤ１５０＋／ＣＤ２０１＋／ＣＤ４８－細胞、図１５Ｅ）の％を決定した、ＣＤ４５、系譜マーカー、ＣＤ１５０、ＣＤ２０１、及びＣＤ４８に対する抗体を使用して染色した骨髄細胞の実験データのグラフを示す。ＭｋＥＶは、骨髄内及びその区画内の造血細胞を優先的に標的とし（図１５Ｄ）、非常に珍しい（０．０３％未満の骨髄細胞）長期造血幹細胞を標的としている（図１５Ｅ）。ＭｋＥＶ注射の１６時間後の骨髄中の末梢白血球数（図１５Ｆ）、ヘモグロビン（図１５Ｇ）、血小板数（図１５Ｈ）、ＷＢＣ分画（図１５Ｉ）、またはＣＤ４５＋細胞及びＣＤ４５－細胞の％（図１１Ｊ）、または長期造血幹細胞の％（図１５Ｋ）に変化はなく、インビボ注射後の造血毒性の欠如を示す。

【図15-2】野生型マウスへのインビボ送達後の蛍光標識ＭｋＥＶのインビボ生体内分布を示す。実験設計を図１５Ａに示す（ｎ＝３～５マウス／群）。蛍光標識ＭｋＥＶを、野生型マウスに尾静脈を介して静脈内注射し、注射の１６時間後に組織を採取し、蛍光について分析した。図１５Ｂは、マウスから解剖した大腿骨におけるＩＶＩＳによって検出された蛍光シグナルを示す。ｎ＝５マウス／群。プレートリーダーによりアッセイし、かつ組織重量により正規化した、各々の均質化組織における蛍光（図１５Ｃ）。図１５Ｃでは、各々の組織についての左から右への各々のデータポイントは、それぞれ、生理食塩水、色素のみ、及びＭｋＥＶである。図１５Ｄ及び図１５Ｅは、フローサイトメトリーにより分析して、ＭｋＥＶに対して陽性であった造血（ＣＤ４５＋細胞、図１５Ｄ）の％及び非常に原始的な長期造血幹細胞（ＣＤ４５＋／Ｌｉｎ－／ＣＤ１５０＋／ＣＤ２０１＋／ＣＤ４８－細胞、図１５Ｅ）の％を決定した、ＣＤ４５、系譜マーカー、ＣＤ１５０、ＣＤ２０１、及びＣＤ４８に対する抗体を使用して染色した骨髄細胞の実験データのグラフを示す。ＭｋＥＶは、骨髄内及びその区画内の造血細胞を優先的に標的とし（図１５Ｄ）、非常に珍しい（０．０３％未満の骨髄細胞）長期造血幹細胞を標的としている（図１５Ｅ）。ＭｋＥＶ注射の１６時間後の骨髄中の末梢白血球数（図１５Ｆ）、ヘモグロビン（図１５Ｇ）、血小板数（図１５Ｈ）、ＷＢＣ分画（図１５Ｉ）、またはＣＤ４５＋細胞及びＣＤ４５－細胞の％（図１１Ｊ）、または長期造血幹細胞の％（図１５Ｋ）に変化はなく、インビボ注射後の造血毒性の欠如を示す。

【図15-3】野生型マウスへのインビボ送達後の蛍光標識ＭｋＥＶのインビボ生体内分布を示す。実験設計を図１５Ａに示す（ｎ＝３～５マウス／群）。蛍光標識ＭｋＥＶを、野生型マウスに尾静脈を介して静脈内注射し、注射の１６時間後に組織を採取し、蛍光について分析した。図１５Ｂは、マウスから解剖した大腿骨におけるＩＶＩＳによって検出された蛍光シグナルを示す。ｎ＝５マウス／群。プレートリーダーによりアッセイし、かつ組織重量により正規化した、各々の均質化組織における蛍光（図１５Ｃ）。図１５Ｃでは、各々の組織についての左から右への各々のデータポイントは、それぞれ、生理食塩水、色素のみ、及びＭｋＥＶである。図１５Ｄ及び図１５Ｅは、フローサイトメトリーにより分析して、ＭｋＥＶに対して陽性であった造血（ＣＤ４５＋細胞、図１５Ｄ）の％及び非常に原始的な長期造血幹細胞（ＣＤ４５＋／Ｌｉｎ－／ＣＤ１５０＋／ＣＤ２０１＋／ＣＤ４８－細胞、図１５Ｅ）の％を決定した、ＣＤ４５、系譜マーカー、ＣＤ１５０、ＣＤ２０１、及びＣＤ４８に対する抗体を使用して染色した骨髄細胞の実験データのグラフを示す。ＭｋＥＶは、骨髄内及びその区画内の造血細胞を優先的に標的とし（図１５Ｄ）、非常に珍しい（０．０３％未満の骨髄細胞）長期造血幹細胞を標的としている（図１５Ｅ）。ＭｋＥＶ注射の１６時間後の骨髄中の末梢白血球数（図１５Ｆ）、ヘモグロビン（図１５Ｇ）、血小板数（図１５Ｈ）、ＷＢＣ分画（図１５Ｉ）、またはＣＤ４５＋細胞及びＣＤ４５－細胞の％（図１１Ｊ）、または長期造血幹細胞の％（図１５Ｋ）に変化はなく、インビボ注射後の造血毒性の欠如を示す。

【図16】Ｃａｓ９のＭｋＥＶへのロードを示す実験データのグラフを示す。ＭｋＥＶをＣａｓ９でエレクトロポレーションし、プロテイナーゼＫで処理してあらゆる非内在化カーゴ（遊離カーゴ及び小胞表面会合カーゴ）を除去するか、または濾過により処理してあらゆる遊離カーゴを除去し、その後、ウエスタンブロッティングにより分析してＣａｓ９を定量した。対照には、エレクトロポレーションなし±プロテイナーゼＫ±濾過のＭｋＥＶ＋Ｃａｓ９が含まれた。Ｃａｓ９は、濾過後に、エレクトロポレーションしたＭｋＥＶに存在したが、対照のエレクトロポレーションしていないＭｋＥＶには存在せず、タンパク質カーゴの小胞会合及び／または内在化が成功したことを示す。Ｃａｓ９は、プロテイナーゼＫ消化後に、エレクトロポレーションしたＭｋＥＶに存在したが、対照のエレクトロポレーションしていないＭｋＥＶには存在せず、エレクトロポレーション後のタンパク質カーゴの内在化及び保護が成功したことを示す。

【図17A】ｐＤＮＡをロードしたＥＶのインビボ生体内分布を示し、分析した。本方法の非限定的な概略図を図１７Ａに示す。レポーターｐＤＮＡ（ＣＭＶ駆動ＧＦＰ）をエレクトロポレーションによりＭｋＥＶにロードし、ＤｉＤで標識し、その後、野生型マウスに尾静脈を介して注射した。注射の１６時間後に組織を単離し、フローサイトメトリーによりＥＶ会合について分析した。ビヒクルのみ注射（生理食塩水対照）は、陰性対照としての役割を果たした。図１７Ｂに示すように、カーゴをロードしたＥＶは、静脈内注射後に骨髄を標的とし、骨髄区画内の造血幹細胞及び前駆細胞において優先的な取り込みを示した。バーは、平均ＤｉＤ＋細胞パーセント±標準偏差を表し、ｎ＝１マウス／群である。

【図17B】ｐＤＮＡをロードしたＥＶのインビボ生体内分布を示し、分析した。本方法の非限定的な概略図を図１７Ａに示す。レポーターｐＤＮＡ（ＣＭＶ駆動ＧＦＰ）をエレクトロポレーションによりＭｋＥＶにロードし、ＤｉＤで標識し、その後、野生型マウスに尾静脈を介して注射した。注射の１６時間後に組織を単離し、フローサイトメトリーによりＥＶ会合について分析した。ビヒクルのみ注射（生理食塩水対照）は、陰性対照としての役割を果たした。図１７Ｂに示すように、カーゴをロードしたＥＶは、静脈内注射後に骨髄を標的とし、骨髄区画内の造血幹細胞及び前駆細胞において優先的な取り込みを示した。バーは、平均ＤｉＤ＋細胞パーセント±標準偏差を表し、ｎ＝１マウス／群である。

【図18A】ｐＤＮＡをロードしたＭｋＥＶが、インビボでｐＤＮＡカーゴを造血幹前駆細胞（ＨＳＰＣ）に送達することを示す。本方法の非限定的な概略図を図１８Ａに示す。レポーターｐＤＮＡ（ＣＭＶ駆動ＧＦＰをコードするｐＤＮＡ）をエレクトロポレーションによりＭｋＥＶにロードし、ＤｉＤで標識し、その後、野生型マウスに尾静脈を介して注射した。注射の１６時間後にＨＳＰＣ（系譜陰性／ｃ－Ｋｉｔ＋／Ｓｃａ－１＋細胞）を単離し、ｑＰＣＲによりｐＤＮＡ送達について分析した。２つの代表的な実験を図１８Ｂ～１８Ｃに示す。図１８Ｂ中、バーは、ビヒクルのみ（生理食塩水対照）、１００ｎｇ ｐＤＮＡのみ（ｐＤＮＡのみ対照）、及びｐＤＮＡをロードしたＥＶを注射したマウスにおけるＨＳＰＣ中の相対的なｐＤＮＡレベル（生理食塩水対照に対する倍率変化）を表す。ｎ＝１マウス／群。示すように、静脈内注射後にｐＤＮＡのＨＳＰＣへの送達に成功した。図１８Ｃ中、バーは、ビヒクルのみ（生理食塩水対照）及びｐＤＮＡをロードしたＥＶを注射したマウスにおけるＨＳＰＣ中の相対的なｐＤＮＡレベル（生理食塩水対照に対する倍率変化）を表す。示すように、静脈内注射後にｐＤＮＡのＨＳＰＣへの送達に成功した。更に、静脈内注射後にＥＶに対して陽性であった（ＤｉＤ＋）ＨＳＰＣからのみｐＤＮＡカーゴが回収された。対照的に、静脈内注射後にＥＶを取り込まなかった（ＤｉＤ－）ＨＳＰＣからは、あったとしても最小限のｐＤＮＡしか回収されなかった。ｎ＝１マウス／群。

【図18B】ｐＤＮＡをロードしたＭｋＥＶが、インビボでｐＤＮＡカーゴを造血幹前駆細胞（ＨＳＰＣ）に送達することを示す。本方法の非限定的な概略図を図１８Ａに示す。レポーターｐＤＮＡ（ＣＭＶ駆動ＧＦＰをコードするｐＤＮＡ）をエレクトロポレーションによりＭｋＥＶにロードし、ＤｉＤで標識し、その後、野生型マウスに尾静脈を介して注射した。注射の１６時間後にＨＳＰＣ（系譜陰性／ｃ－Ｋｉｔ＋／Ｓｃａ－１＋細胞）を単離し、ｑＰＣＲによりｐＤＮＡ送達について分析した。２つの代表的な実験を図１８Ｂ～１８Ｃに示す。図１８Ｂ中、バーは、ビヒクルのみ（生理食塩水対照）、１００ｎｇ ｐＤＮＡのみ（ｐＤＮＡのみ対照）、及びｐＤＮＡをロードしたＥＶを注射したマウスにおけるＨＳＰＣ中の相対的なｐＤＮＡレベル（生理食塩水対照に対する倍率変化）を表す。ｎ＝１マウス／群。示すように、静脈内注射後にｐＤＮＡのＨＳＰＣへの送達に成功した。図１８Ｃ中、バーは、ビヒクルのみ（生理食塩水対照）及びｐＤＮＡをロードしたＥＶを注射したマウスにおけるＨＳＰＣ中の相対的なｐＤＮＡレベル（生理食塩水対照に対する倍率変化）を表す。示すように、静脈内注射後にｐＤＮＡのＨＳＰＣへの送達に成功した。更に、静脈内注射後にＥＶに対して陽性であった（ＤｉＤ＋）ＨＳＰＣからのみｐＤＮＡカーゴが回収された。対照的に、静脈内注射後にＥＶを取り込まなかった（ＤｉＤ－）ＨＳＰＣからは、あったとしても最小限のｐＤＮＡしか回収されなかった。ｎ＝１マウス／群。

【図18C】ｐＤＮＡをロードしたＭｋＥＶが、インビボでｐＤＮＡカーゴを造血幹前駆細胞（ＨＳＰＣ）に送達することを示す。本方法の非限定的な概略図を図１８Ａに示す。レポーターｐＤＮＡ（ＣＭＶ駆動ＧＦＰをコードするｐＤＮＡ）をエレクトロポレーションによりＭｋＥＶにロードし、ＤｉＤで標識し、その後、野生型マウスに尾静脈を介して注射した。注射の１６時間後にＨＳＰＣ（系譜陰性／ｃ－Ｋｉｔ＋／Ｓｃａ－１＋細胞）を単離し、ｑＰＣＲによりｐＤＮＡ送達について分析した。２つの代表的な実験を図１８Ｂ～１８Ｃに示す。図１８Ｂ中、バーは、ビヒクルのみ（生理食塩水対照）、１００ｎｇ ｐＤＮＡのみ（ｐＤＮＡのみ対照）、及びｐＤＮＡをロードしたＥＶを注射したマウスにおけるＨＳＰＣ中の相対的なｐＤＮＡレベル（生理食塩水対照に対する倍率変化）を表す。ｎ＝１マウス／群。示すように、静脈内注射後にｐＤＮＡのＨＳＰＣへの送達に成功した。図１８Ｃ中、バーは、ビヒクルのみ（生理食塩水対照）及びｐＤＮＡをロードしたＥＶを注射したマウスにおけるＨＳＰＣ中の相対的なｐＤＮＡレベル（生理食塩水対照に対する倍率変化）を表す。示すように、静脈内注射後にｐＤＮＡのＨＳＰＣへの送達に成功した。更に、静脈内注射後にＥＶに対して陽性であった（ＤｉＤ＋）ＨＳＰＣからのみｐＤＮＡカーゴが回収された。対照的に、静脈内注射後にＥＶを取り込まなかった（ＤｉＤ－）ＨＳＰＣからは、あったとしても最小限のｐＤＮＡしか回収されなかった。ｎ＝１マウス／群。

【発明を実施するための形態】

【0026】

本発明は、部分的には、バイオマーカー組成（例えば、タンパク質バイオマーカー（複数可）または遺伝子バイオマーカー（複数可）の存在、不在、または量）及びサイズなどの特定の物理的特徴のセットに特徴付けられ、かつ治療薬の送達に使用するために内腔内にカーゴを運搬することができる、実質的に精製された巨核球由来細胞外小胞の組成物、及びそれを作製または使用するための方法の発見に基づく。複数の実施形態では、本開示の巨核球由来細胞外小胞は、全血（無血小板血漿）から収集されるか、または活性化血小板（血小板ＥＶ）に由来する天然に存在する生成物とは異なる。したがって、複数の態様では、本発明は、望ましい特性を有するように一貫して産生され、かつ特定のカーゴを運搬して、それらの治療的使用が成功する可能性を高める、巨核球由来細胞外小胞の組成物ならびにそれを得る及び使用するための方法を提供する。

【0027】

比較的免疫不顕性（ｉｍｍｕｎｅ ｓｉｌｅｎｔ）である巨核球由来細胞外小胞は、繰り返し投与することができ、これは免疫原性ウイルスベクターと比較して明白な利点である。いくつかの態様では、巨核球由来細胞外小胞は、コンディショニング治療を必要としないインビボゲノム医療に有用であり、そのため、人々は外来診療の場で巨核球由来細胞外小胞を受けることができる。このプラットフォームは、エクスビボ送達からインビボ送達への遺伝子治療の重要なパラダイムシフトであり、治療までの時間を短縮してコストを削減することにより遺伝子治療を民主化するようになる。

【0028】

一態様では、本発明は、ヒト多能性幹細胞に由来する複数の実質的に精製された巨核球由来細胞外小胞を含む組成物であって、当該組成物が、他のタイプの細胞外小胞と比較して、当該巨核球由来細胞外小胞に特有であるか、または当該巨核球由来細胞外小胞に優先的に存在する１つ以上のタンパク質を含む、組成物に関する。

【0029】

一態様では、本発明は、ヒト多能性幹細胞に由来する複数の実質的に精製された巨核球由来細胞外小胞を含む組成物であって、当該組成物が、他のタイプの細胞外小胞と比較して、当該巨核球由来細胞外小胞に特有であるか、または当該巨核球由来細胞外小胞に優先的に存在する１つ以上のタンパク質をコードする１つ以上の核酸を含む、組成物に関する。複数の実施形態では、１つ以上のタンパク質または１つ以上のタンパク質をコードする１つ以上の核酸は、アミノアシル－ｔＲＮＡ生合成及び／または好中球細胞外トラップ形成に関与する。

【0030】

一態様では、本発明は、ヒト多能性幹細胞に由来する複数の実質的に精製された巨核球由来細胞外小胞を含む組成物であって、当該組成物が、内腔を取り囲む脂質二重層膜を含み、当該巨核球由来細胞外小胞の内腔が、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、調節ＲＮＡ、ならびにノンコーディングＲＮＡ及びコーディングＲＮＡから選択される１つ以上の巨核球由来核酸分子を含み、当該脂質二重層膜が、会合しているか、または内部に埋め込まれた１つ以上のタンパク質を含み、当該１つ以上のタンパク質が、他のタイプの細胞外小胞と比較して、当該巨核球由来細胞外小胞に特有であるか、または当該巨核球由来細胞外小胞に優先的に存在する、組成物に関する。

【0031】

一態様では、本発明は、ヒト多能性幹細胞に由来する複数の実質的に精製された巨核球由来細胞外小胞を含む組成物であって、当該組成物が、内腔を取り囲む脂質二重層膜を含み、当該巨核球由来細胞外小胞の内腔が、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、調節ＲＮＡ、ならびにノンコーディングＲＮＡ及びコーディングＲＮＡから選択される１つ以上の巨核球由来核酸分子を含み、当該脂質二重層膜が、１つ以上の核酸を含み、当該１つ以上の核酸が、当該脂質二重層膜と会合しているか、または当該脂質二重層膜内に埋め込まれた１つ以上のタンパク質をコードし、他のタイプの細胞外小胞と比較して、当該巨核球由来細胞外小胞に特有であるか、または当該巨核球由来細胞外小胞に優先的に存在する、組成物に関する。複数の実施形態では、核酸分子は、外因由来である。

【0032】

一態様では、本発明は、ヒト多能性幹細胞に由来する複数の実質的に精製された巨核球由来細胞外小胞を含む組成物であって、当該組成物が、他のタイプの細胞外小胞と比較して、当該巨核球由来細胞外小胞に特有であるか、または当該巨核球由来細胞外小胞に優先的に存在する１つ以上の核酸を含む、組成物に関する。

【0033】

一態様では、本発明は、ヒト多能性幹細胞に由来する複数の実質的に精製された巨核球由来細胞外小胞を含む組成物であって、当該組成物が、他のタイプの細胞外小胞と比較して、当該巨核球由来細胞外小胞に特有であるか、または当該巨核球由来細胞外小胞に優先的に存在する１つ以上の核酸によってコードされる１つ以上のタンパク質を含む、組成物に関する。複数の実施形態では、１つ以上の核酸、または１つ以上の核酸によってコードされる１つ以上のタンパク質は、好中球細胞外トラップ形成、造血細胞系譜、細胞接着、ＡＴＰ結合カセット（ＡＢＣ）輸送、ケモカインシグナル伝達経路、貪食、及び／またはアミノアシル－ｔＲＮＡ生合成に関与する。

【0034】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、巨核球由来細胞外小胞の内腔へのカーゴのロード及び／または巨核球由来細胞外小胞の表面と会合したカーゴのロードに好適である。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の内腔内に位置するカーゴに加えて、またはその代替として、カーゴが巨核球にロードされて、細胞外小胞にパッケージングされる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の内腔内に位置するカーゴに加えて、またはその代替として、カーゴは、巨核球由来細胞外小胞に直接ロードされる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の内腔内に位置するカーゴに加えて、またはその代替として、カーゴが巨核球にロードされて、細胞外小胞にパッケージングされる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の内腔内に位置するカーゴに加えて、またはその代替として、カーゴは、巨核球由来細胞外小胞に直接ロードされる。

【0035】

複数の実施形態では、カーゴは、本明細書に記載の治療薬を含む１つ以上の治療薬である。複数の実施形態では、カーゴは、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、調節ＲＮＡ、ならびにノンコーディングＲＮＡ及びコーディングＲＮＡから選択される１つ以上の巨核球由来核酸分子を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の内腔内に位置するカーゴに加えて、またはその代替として、カーゴが巨核球にロードされて、細胞外小胞にパッケージングされる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の内腔内に位置するカーゴに加えて、またはその代替として、カーゴは、巨核球由来細胞外小胞に直接ロードされる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、巨核球由来細胞外小胞の表面と会合したカーゴのロードに好適である。

【0036】

別の態様では、本発明は、本明細書に開示される組成物と、薬学的に許容される賦形剤または担体と、を含む医薬組成物に関する。

【0037】

別の態様では、本発明は、送達能を有する治療薬を移送するための方法であって、（ａ）本明細書に開示される組成物の巨核球由来細胞外小胞を得ることと、（ｂ）当該巨核球由来細胞外小胞を治療薬とともにインキュベートして、当該治療薬を、当該巨核球由来細胞外小胞の内腔に移入させるようにし、送達能を有する治療薬を産出することと、（ｃ）当該送達能を有する治療薬を患者に投与すること、または当該送達能を有する治療薬を生体細胞とインビトロで接触させて、接触した当該生体細胞を患者に投与することと、を含む、方法に関する。

【0038】

別の態様では、本発明は、様々な疾患または障害を本巨核球由来細胞外小胞で治療するための方法に関する。

【0039】

バイオマーカープロファイルまたはフィンガープリント
様々な実施形態では、本巨核球由来細胞外小胞は、それらを、例えば、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞及び／または血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞と区別する、特有のバイオマーカープロファイルまたはフィンガープリントに特徴付けられる。様々な実施形態では、本巨核球由来細胞外小胞は、同一性（例えば、存在もしくは不在）または量（例えば、巨核球由来細胞外小胞集団中のバイオマーカーの実質的な存在もしくは実質的な非存在、または集団中の巨核球由来細胞外小胞の大部分の存在もしくは不在、またはバイオマーカーを有する巨核球由来細胞外小胞のパーセンテージ）を含む、かかるバイオマーカープロファイルまたはフィンガープリントに特徴付けられる。

【0040】

タンパク質バイオマーカー
複数の実施形態では、本組成物は、内腔を取り囲む脂質二重層膜を含み、かつヒト多能性幹細胞に由来する実質的に精製された巨核球由来細胞外小胞を含み、脂質二重層膜は、会合しているか、または内部に埋め込まれた１つ以上のタンパク質（バイオマーカーとも称される）を含む。

【0041】

複数の実施形態では、本組成物は、他のタイプの細胞外小胞と比較して、巨核球由来細胞外小胞に特有であるか、または巨核球由来細胞外小胞に優先的に存在する１つ以上のタンパク質をコードする１つ以上の核酸を含む実質的に精製された巨核球由来細胞外小胞を含む。

【0042】

複数の実施形態では、直接タンパク質間相互作用は、本開示の特有のＭｋＥＶタンパク質間に存在する。複数の実施形態では、ネットワークは、キュレートされた直接タンパク質間相互作用（相互作用スコア０．４超）を含み、ここで、クラスター番号１は、ヒストンクラスターを表し、クラスター番号２は、タンパク質翻訳クラスターのｔＲＮＡアミノアシル化を表し、クラスター番号３は、セプチンタンパク質のクラスターを表し、クラスター番号４は、ミトコンドリア関連クラスターを表し、クラスター番号５は、細胞生合成プロセス（いずれも転写及び翻訳）を表す。

【0043】

複数の実施形態では、１つ以上のタンパク質（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）、または１つ以上のタンパク質（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）をコードする１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）は、アミノアシル－ｔＲＮＡ生合成に関与し、任意選択で、ＹＡＲＳ１、ＡＡＲＳ１、ＧＡＲＳ１、ＬＡＲＳ１、ＥＰＲＳ１、ＴＡＲＳ１、ＤＡＲＳ１、ＷＡＲＳ１、ＶＡＲＳ１、ＮＡＲＳ１、ＲＡＲＳ１、ＳＡＲＳ１、ＫＡＲＳ１、ＩＡＲＳ１、ＣＡＲＳ１、ＱＡＲＳ、及びＨＡＲＳ１から選択される。

【0044】

複数の実施形態では、１つ以上のタンパク質（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）、または１つ以上のタンパク質（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）をコードする１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）は、好中球細胞外トラップ形成に関与し、任意選択で、Ｈ４Ｃ１、Ｈ２ＡＣ２０、Ｈ３Ｃ１、Ｈ２ＢＣ１２、Ｈ３Ｃ１５、ＭＡＣＲＯＨ２Ａ１、Ｈ２ＡＸ、Ｈ２ＡＺ２、Ｈ３－３Ａ、Ｈ２ＡＣ１４、及びＭＡＣＲＯＨ２Ａ２から選択される。

【0045】

複数の実施形態では、１つ以上のタンパク質（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）、または１つ以上のタンパク質（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）をコードする１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）は、Ｈ４Ｃ１６、Ｈ２ＡＣ１７、Ｈ３Ｃ１３、ＲＰＬ９Ｐ９、ＰＨＢ１、ＳＥＴＳＩＰ、Ｈ２ＡＺ１、ＸＰ３２、ＣＯＰＳ９、ＳＥＣ６１Ａ２、ＭＡＲＳ１、ＭＲＥ１１、ＡＴＰ５Ｆ１Ｃ、Ｈ４Ｃ１、Ｈ２ＡＣ２０、Ｈ３Ｃ１、Ｈ２ＢＣ１２、ＦＣＳＫ、ＣＡＶＩＮ２、ＹＡＲＳ１、Ｈ３Ｃ１５、ＭＡＣＲＯＨ２Ａ１、Ｈ２ＡＸ、Ｈ３－２、ＳＥＬＥＮＯＦ、ＭＰＩＧ６Ｂ、セプチン７、ＡＡＲＳ１、Ｈ１－５、Ｈ１－２、Ｈ２ＡＺ２、ＧＡＲＳ１、ＬＡＲＳ１、ＴＨＰＯ、ＲＡＣＫ１、Ｈ３－３Ａ、ＣＣＤＣ１９１、Ｈ２ＢＣ１９Ｐ、セプチン２、ＥＰＲＳ１、ＴＡＲＳ１、ＡＴＰ５Ｆ１Ｂ、ＥＲＢＩＮ、ＤＡＲＳ１、ＷＡＲＳ１、ＶＡＲＳ１、ＮＩＢＡＮ２、セプチン６、ＮＡＲＳ１、ＲＡＲＳ１、セプチン１１、セプチン５、ＳＡＲＳ１、ＮＩＢＡＮ１、ＳＮＲＰＧＰ１５、ＰＩＰ４Ｐ２、ＣＹＲＩＢ、ＣＡＲＭＩＬ１、ＫＡＲＳ１、ＩＡＲＳ１、セプチン９、Ｈ１－４、ＡＲＨＧＡＰ４５、Ｈ１－０、ＣＡＲＳ１、ＧＣＮ１、ＦＡＤＳ２、ＴＢＣ１Ｄ１３、ＧＥＴ３、ＲＯ６０、ＬＡＭＴＯＲ５、ＥＬＯＣ、Ｈ２ＡＣ１４、ＳＣＡＲＦ１、ＲＮＦ２４、ＧＣＳＡＭＬ、ＮＲＤＣ、ＥＣＰＡＳ、ＭＡＣＲＯＨ２Ａ２、ＡＴＰ５Ｆ１Ａ、ＤＭＴＮ、ＴＡＮＧＯ２、ＣＳＦ２ＲＢ、ＷＡＳＨＣ５、ＫＣＮＡ３、ＱＡＲＳ１、ＭＩＮＤＹ１、ＰＴＰＡ、ＥＸＯＣ３Ｌ２、ＰＲＵＮＥ１、ＰＬＰＢＰ、ＴＨＵＭＰＤ１、ＷＡＳＨＣ４、ＮＥＣＴＩＮ２、ＧＦＵＳ、ＡＤＧＲＥ２、ＡＫＡＰ８Ｌ、ＦＡＭ２３４Ａ、ＡＤＳＳ２、ＡＮＫＲＤ１３Ｄ、ＫＣＴ２、ＮＴ５Ｃ３Ａ、ＰＩＰ４Ｐ１、ＣＣＤＣ９、ＥＬＯＢ、ＨＰＧＤＳ、ＭＥＡＫ７、ＴＯＭＭ７０、ＳＭＩＭ１、ＨＡＲＳ１、ＡＴＰ５ＰＤ、ＯＧＡ、ＣＨＳＹ１、ＳＱＬＥ、ＳＵＳＤ６、ＩＧＫＶ１－２７、ＰＥＤＳ１－ＵＢＥ２Ｖ１、ＣＥＰ４４、ＭＹＧ１、ＮＲＲＯＳ、ＩＬ２１Ｒ、ＧＲＫ２、ＭＣＥＭＰ１、ＥＬＡＰＯＲ２、ＳＤＡＤ１、ＣＥＲＴ１、ＵＢＥ２Ｆ、ＣＡＬＨＭ５、Ｈ１－１０、ＥＩＰＲ１、ＰＢＤＣ１、ＡＲＭＨ３、ＶＩＰＡＳ３９、ＭＥＳＤ、ＰＲＯＳＥＲ２、ＲＡＢＬ６、ＦＹＢ１、Ｃ１７ｏｒｆ４９、ＲＭＤＮ３、ＫＹＡＴ３、ＴＴＭＰ、ＥＲＯ１Ａ、ＣＤ２４４、ＣＺＩＢ、ＰＬＰＰ３、ＢＡＢＡＭ２、Ｈ１－３、ＮＡＸＥ、ＥＮＳＡ、ＰＡＬＳ２、ＧＵＣＹ１Ｂ１、ＵＭＡＤ１、ＭＩＸ２３、ＰＲＸＬ２Ｂ、ＳＮＵ１３、ＲＴＲＡＦ、ＫＸＤ１、ＶＳＩＲ、ＥＰＯＲ、またはＭＡＲＣＨＦ２から選択される。

【0046】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％超、または約５％超、または約１０％超、または約１５％超、または約２０％超、または約２５％超、または約３０％超、または約３５％超、または約４０％超、または約４５％超、または約５０％超、または約５５％超、または約６０％超、または約６５％超、または約７０％超、または約７５％超、または約８０％超、または約８５％超、または約９０％超、または約９５％超が、１つ以上のタンパク質、または１つ以上のタンパク質をコードする１つ以上の核酸を含む。

【0047】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％超、約２％超、約３％超、約４％超、約５％超、約６％超、約７％超、約８％超、約９％超、約１０％超、約１１％超、約１２％超、約１３％超、約１４％超、約１５％超、約１６％超、約１７％超、約１８％超、約１９％超、約２０％超、約２１％超、約２２％超、約２３％超、約２４％超、約２５％超、約２６％超、約２７％超、約２８％超、約２９％超、約３０％超、約３１％超、約３２％超、約３３％超、約３４％超、約３５％超、約３６％超、約３７％超、約３８％超、約３９％超、約４０％超、約４１％超、約４２％超、約４３％超、約４４％超、約４５％超、約４６％超、約４７％超、約４８％超、約４９％超、約５０％超、約５１％超、約５２％超、約５３％超、約５４％超、約５５％超、約５６％超、約５７％超、約５８％超、約５９％超、約６０％超、約６１％超、約６２％超、約６３％超、約６４％超、約６５％超、約６６％超、約６７％超、約６８％超、約６９％超、約７０％超、約７１％超、約７２％超、約７３％超、約７４％超、約７５％超、約７６％超、約７７％超、約７８％超、約７９％超、約８０％超、約８１％超、約８２％超、約８３％超、約８４％超、約８５％超、約８６％超、約８７％超、約８８％超、約８９％超、約９０％超、約９１％超、約９２％超、約９３％超、約９４％超、約９５％超、約９６％超、約９７％超、約９８％超、約９９％超、またはそれ以上が、１つ以上のタンパク質、または１つ以上のタンパク質をコードする１つ以上の核酸を含む。

【0048】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％未満、または約９０％未満、または約８５％未満、または約８０％未満、または約７５％未満、または約７０％未満、または約６５％未満、または約６０％未満、または約５５％未満、または約５０％未満、または約４５％未満、または約４０％未満、または約３５％未満、または約３０％未満、または約２５％未満、または約２０％未満、または約１５％未満、または約１０％未満、または約５％未満、または約１％未満が、１つ以上のタンパク質、または１つ以上のタンパク質をコードする１つ以上の核酸を含む。

【0049】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％未満、または約９８％未満、または約９７％未満、または約９６％未満、または約９５％未満、または約９４％未満、または約９３％未満、または約９２％未満、または約９１％未満、または約９０％未満、または約８９％未満、または約８８％未満、または約８７％未満、または約８６％以下、未満、約８５％未満、または約８４％未満、または約８３％未満、または約８２％未満、または約８１％未満、または約８０％未満、または約７９％未満、または約７８％未満、または約７７％未満、または約７６％未満、または約７５％未満、または約７４％未満、または約７３％未満、または約７２％未満、または約７１％未満、または約７０％未満、または約６９％未満、または約６８％未満、または約６７％未満、または約６６％未満、または約６５％未満、または約６４％未満、または約６３％未満、または約６２％未満、または約６１％未満、または約６０％未満、または約５９％未満、または約５８％未満、または約５７％未満、または約５６％未満、または約５５％未満、または約５４％未満、または約５３％未満、または約５２％未満、または約５１％未満、または約５０％未満、または約４９％未満、または約４８％未満、または約４７％未満、または約４６％未満、または約４５％未満、または約４４％未満、または約４３％未満、または約４２％未満、または約４１％未満、または約４０％未満、または約３９％未満、または約３８％未満、または約３７％未満、または約３６％以下、未満、約３５％未満、または約３４％未満、または約３３％未満、または約３２％未満、または約３１％未満、または約３０％未満、または約２９％未満、または約２８％未満、または約２７％未満、または約２６％未満、または約２５％未満、または約２４％未満、または約２３％未満、または約２２％未満、または約２１％未満、または約２０％未満、または約１９％未満、または約１８％未満、または約１７％未満、または約１６％未満、または約１５％未満、または約１４％未満、または約１３％未満、または約１２％未満、または約１１％未満、または約１０％未満、または約９％未満、または約８％未満、または約７％未満、または約６％未満、または約５％未満、または約４％未満、または約３％未満、または約２％未満、または約１％が、１つ以上のタンパク質、または１つ以上のタンパク質をコードする１つ以上の核酸を含む。

【0050】

複数の実施形態では、脂質二重層膜は、ＣＡＶＩＮ２、ＭＰＩＧ６Ｂ、ＥＲＢＩＮ、ＥＬＯＣ、ＣＳＦ２ＲＢ、ＫＣＮＡ３、ＮＥＣＴＩＮ２、ＩＬ２１Ｒ、ＭＣＥＭＰ１、ＰＲＯＳＥＲ２、ＦＹＢ１、ＣＤ２４４、及びＥＰＯＲから選択される、１つ以上のタンパク質（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個）、または１つ以上のタンパク質（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個）をコードする１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個）を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％超、または約５％超、または約１０％超、または約１５％超、または約２０％超、または約２５％超、または約３０％超、または約３５％超、または約４０％超、または約４５％超、または約５０％超、または約５５％超、または約６０％超、または約６５％超、または約７０％超、または約７５％超、または約８０％超、または約８５％超、または約９０％超、または約９５％超が、１つ以上のタンパク質、または１つ以上のタンパク質をコードする１つ以上の核酸を含む脂質二重層膜を含む。

【0051】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％超、約２％超、約３％超、約４％超、約５％超、約６％超、約７％超、約８％超、約９％超、約１０％超、約１１％超、約１２％超、約１３％超、約１４％超、約１５％超、約１６％超、約１７％超、約１８％超、約１９％超、約２０％超、約２１％超、約２２％超、約２３％超、約２４％超、約２５％超、約２６％超、約２７％超、約２８％超、約２９％超、約３０％超、約３１％超、約３２％超、約３３％超、約３４％超、約３５％超、約３６％超、約３７％超、約３８％超、約３９％超、約４０％超、約４１％超、約４２％超、約４３％超、約４４％超、約４５％超、約４６％超、約４７％超、約４８％超、約４９％超、約５０％超、約５１％超、約５２％超、約５３％超、約５４％超、約５５％超、約５６％超、約５７％超、約５８％超、約５９％超、約６０％超、約６１％超、約６２％超、約６３％超、約６４％超、約６５％超、約６６％超、約６７％超、約６８％超、約６９％超、約７０％超、約７１％超、約７２％超、約７３％超、約７４％超、約７５％超、約７６％超、約７７％超、約７８％超、約７９％超、約８０％超、約８１％超、約８２％超、約８３％超、約８４％超、約８５％超、約８６％超、約８７％超、約８８％超、約８９％超、約９０％超、約９１％超、約９２％超、約９３％超、約９４％超、約９５％超、約９６％超、約９７％超、約９８％超、約９９％超、またはそれ以上が、１つ以上のタンパク質、または１つ以上のタンパク質をコードする１つ以上の核酸を含む脂質二重層膜を含む。

【0052】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％未満、または約９０％未満、または約８５％未満、または約８０％未満、または約７５％未満、または約７０％未満、または約６５％未満、または約６０％未満、または約５５％未満、または約５０％未満、または約４５％未満、または約４０％未満、または約３５％未満、または約３０％未満、または約２５％未満、または約２０％未満、または約１５％未満、または約１０％未満、または約５％未満、または約１％未満が、１つ以上のタンパク質、または１つ以上のタンパク質をコードする１つ以上の核酸を含む脂質二重層膜を含む。

【0053】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％未満、または約９８％未満、または約９７％未満、または約９６％未満、または約９５％未満、または約９４％未満、または約９３％未満、または約９２％未満、または約９１％未満、または約９０％未満、または約８９％未満、または約８８％未満、または約８７％未満、または約８６％以下、未満、約８５％未満、または約８４％未満、または約８３％未満、または約８２％未満、または約８１％未満、または約８０％未満、または約７９％未満、または約７８％未満、または約７７％未満、または約７６％未満、または約７５％未満、または約７４％未満、または約７３％未満、または約７２％未満、または約７１％未満、または約７０％未満、または約６９％未満、または約６８％未満、または約６７％未満、または約６６％未満、または約６５％未満、または約６４％未満、または約６３％未満、または約６２％未満、または約６１％未満、または約６０％未満、または約５９％未満、または約５８％未満、または約５７％未満、または約５６％未満、または約５５％未満、または約５４％未満、または約５３％未満、または約５２％未満、または約５１％未満、または約５０％未満、または約４９％未満、または約４８％未満、または約４７％未満、または約４６％未満、または約４５％未満、または約４４％未満、または約４３％未満、または約４２％未満、または約４１％未満、または約４０％未満、または約３９％未満、または約３８％未満、または約３７％未満、または約３６％以下、未満、約３５％未満、または約３４％未満、または約３３％未満、または約３２％未満、または約３１％未満、または約３０％未満、または約２９％未満、または約２８％未満、または約２７％未満、または約２６％未満、または約２５％未満、または約２４％未満、または約２３％未満、または約２２％未満、または約２１％未満、または約２０％未満、または約１９％未満、または約１８％未満、または約１７％未満、または約１６％未満、または約１５％未満、または約１４％未満、または約１３％未満、または約１２％未満、または約１１％未満、または約１０％未満、または約９％未満、または約８％未満、または約７％未満、または約６％未満、または約５％未満、または約４％未満、または約３％未満、または約２％未満、または約１％が、１つ以上のタンパク質、または１つ以上のタンパク質をコードする１つ以上の核酸を含む脂質二重層膜を含む。

【0054】

複数の実施形態では、脂質二重層膜は、ＣＤ５４、ＣＤ１８、ＣＤ４３、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ６２Ｐ、ＣＤ４１、ＣＤ６１、ＣＤ２１、ＣＤ５１、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ＣＬＥＣ－２、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７ａ）、ＣＤ６３、ＣＤ４２ｂ、ＣＤ９、ＣＤ３１、ＣＤ４７、ＣＤ１４７、ＣＤ３２ａ、及びＧＰＶＩから選択される、１つ以上のタンパク質（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個）、または１つ以上のタンパク質（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個）をコードする１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個）を含む。

【0055】

複数の実施形態では、脂質二重層膜は、例えば、アネキシンＶの検査によって限定されない、ホスファチジルセリンを含む。

【0056】

複数の実施形態では、脂質二重層膜は、ＣＤ６２Ｐ、ＣＤ４１、及びＣＤ６１から選択される１つ以上のタンパク質を含む。

【0057】

複数の実施形態では、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む巨核球由来細胞外小胞の約４０％超、約５０％超、約６０％超、約７０％超、約８０％超、約９０％超、約９５％超、または約９９％超が、脂質二重層膜にＣＤ６１も含む。

【0058】

複数の実施形態では、本巨核球由来細胞外小胞は、ＣＤ５４、ＣＤ１８、ＣＤ４３、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ６２Ｐ、ＣＤ４１、ＣＤ６１、ＣＤ２１、ＣＤ５１、及びＣＬＥＣ－２のうちの１つ以上の発現及び／または存在に特徴付けられる。複数の実施形態では、本巨核球由来細胞外小胞は、ＰＳ、ＣＤ６２Ｐ、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７ａ）、ＣＤ４２ｂ、ＣＤ９、ＣＤ４３、ＣＤ３１、及びＣＤ１１ｂのうちの１つ以上の発現及び／または存在に特徴付けられる。複数の実施形態では、本巨核球由来細胞外小胞は、ＰＳ、ＣＤ６１、ＣＤ６２Ｐ、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７ａ）、ＣＬＥＣ－２、及びＣＤ６３のうちの１つ以上の発現及び／または存在に特徴付けられる。複数の実施形態では、本巨核球由来細胞外小胞は、ＰＳ、ＣＤ６２Ｐ、ＣＬＥＣ－２、ＣＤ９、ＣＤ３１、ＣＤ１４７、ＣＤ３２ａ、及びＧＰＶＩのうちの１つ以上の発現及び／または存在に特徴付けられる。複数の実施形態では、本巨核球由来細胞外小胞は、ＰＳ、ＣＤ６２Ｐ、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７ａ）、ＣＬＥＣ－２、ＣＤ９、及びＣＤ３１のうちの１つ以上の発現及び／または存在に特徴付けられる。複数の実施形態では、本巨核球由来細胞外小胞は、ＣＤ６２Ｐ、ＣＤ４１、及びＣＤ６１のうちの１つ以上の発現及び／または存在に特徴付けられる。複数の実施形態では、本巨核球由来細胞外小胞は、ＣＤ５４、ＣＤ１８、ＣＤ４３、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ６２Ｐ、ＣＤ４１、ＣＤ６１、ＣＤ２１、ＣＤ５１、及びＣＬＥＣ－２のうちの１つ以上の実質的な発現及び／または存在に特徴付けられる。複数の実施形態では、本巨核球由来細胞外小胞は、ＣＤ６２Ｐ、ＣＤ４１、及びＣＤ６１のうちの１つ以上の実質的な発現及び／または存在に特徴付けられる。複数の実施形態では、本巨核球由来細胞外小胞は、相当量のＤＲＡＱ５を発現しないこと及び／またはそれを含まないことに特徴付けられる。複数の実施形態では、本巨核球由来細胞外小胞は、ＤＲＡＱ５を実質的に含まないことに特徴付けられる。

【0059】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％超が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％超が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％超が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％超が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％超が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％超が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％超が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％超が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。

【0060】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％以下が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％以下が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％以下が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％以下が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％以下が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以下が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％以下が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％以下が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。

【0061】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％未満が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約３０％未満が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２５％未満が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２０％未満が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１５％未満が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１０％未満が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５％未満が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。

【0062】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約９９％が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５０％が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２５％が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約１０％が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５％が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２％が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％～約９９％が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７５％～約９９％が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％～約９９％が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％～約９９％が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。

【0063】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％超が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。

【0064】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、ＣＤ６２Ｐを含まない、またはそれを実質的に含まない。

【0065】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも高いＣＤ６２Ｐの発現及び／または存在に特徴付けられる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の約２倍、または約１０倍、または約５０倍、または約１００倍、または約３００倍、または約５００倍、または約１０００倍の量のＣＤ６２Ｐを有する。

【0066】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも低いＣＤ６２Ｐの発現及び／または存在に特徴付けられる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の約２分の１、または約１０分の１、または約５０分の１、または約１００分の１、または約３００分の１、または約５００分の１、または約１０００分の１の量のＣＤ６２Ｐを有する。

【0067】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの約４分の１～約３２分の１または約８分の１～約１６分の１の量のＣＤ６２Ｐを有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの約１５分の１または約１６分の１の量のＣＤ６２Ｐを有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）の約３２分の１～約１２８分の１、約５０分の１～約７５分の１、または約６０分の１～約７０分の１の量のＣＤ６２Ｐを有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）の約６０分の１、約６４分の１、または約７０分の１の量のＣＤ６２Ｐを有する。

【0068】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％超が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％超が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％超が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％超が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％超が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％超が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％超が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％超が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。

【0069】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％以下が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％以下が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％以下が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％以下が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％以下が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以下が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％以下が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％以下が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。

【0070】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％未満が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約３０％未満が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２５％未満が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２０％未満が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１５％未満が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１０％未満が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５％未満が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。

【0071】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約９９％が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５０％が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２５％が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約１０％が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５％が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２％が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％～約９９％が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７５％～約９９％が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％～約９９％が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％～約９９％が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。

【0072】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％超が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。

【0073】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、ＣＤ４１を含む。

【0074】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも高いＣＤ４１の発現及び／または存在に特徴付けられる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の約２倍、または約１０倍、または約５０倍、または約１００倍、または約３００倍、または約５００倍、または約１０００倍の量のＣＤ４１を有する。

【0075】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも低いＣＤ４１の発現及び／または存在に特徴付けられる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の約２分の１、または約１０分の１、または約５０分の１、または約１００分の１、または約３００分の１、または約５００分の１、または約１０００分の１の量のＣＤ４１を有する。

【0076】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの約２倍～約８倍または約２倍～約４倍の量のＣＤ４１／ＣＤ６１を有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの約２倍、約３倍、または約４倍の量のＣＤ４１／ＣＤ６１を有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）の約１．１倍～約２倍の量のＣＤ４１／ＣＤ６１を有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）の約１．１倍または約１．２倍の量のＣＤ４１／ＣＤ６１を有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）と実質的に同じ量のＣＤ４１／ＣＤ６１を有する。

【0077】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％超が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％超が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％超が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％超が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％超が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％超が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％超が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％超が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。

【0078】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％以下が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％未満が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％以下が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％以下が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％以下が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％未満が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％以下が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％以下が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。

【0079】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％未満が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約３０％未満が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２５％未満が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２０％未満が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１５％未満が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１０％未満が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５％未満が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。

【0080】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約９９％が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５０％が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２５％が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約１０％が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５％が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２％が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％～約９９％が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７５％～約９９％が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％～約９９％が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％～約９９％が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。

【0081】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％超が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。

【0082】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも高いＣＤ６１の発現及び／または存在に特徴付けられる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の約２倍、または約１０倍、または約５０倍、または約１００倍、または約３００倍、または約５００倍、または約１０００倍の量のＣＤ６１を有する。

【0083】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも低いＣＤ６１の発現及び／または存在に特徴付けられる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の約２分の１、または約１０分の１、または約５０分の１、または約１００分の１、または約３００分の１、または約５００分の１、または約１０００分の１の量のＣＤ６１を有する。

【0084】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの約２倍～約８倍または約２倍～約４倍の量のＣＤ６１を有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの約２倍、約３倍、または約４倍の量のＣＤ６１を有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）の約１．１分の１～約２分の１の量のＣＤ６１を有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）の約１．１分の１または約１．２分の１の量のＣＤ６１を有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）と実質的に同じ量のＣＤ６１を有する。

【0085】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％超が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％超が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％超が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％超が、ＣＤ４を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％超が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％超が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％超が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％超が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。

【0086】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％以下が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％以下が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％以下が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％以下が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％以下が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以下が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％以下が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％以下が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。

【0087】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％未満が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約３０％未満が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２５％未満が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２０％未満が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１５％未満が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１０％未満が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５％未満が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。

【0088】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約９９％が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５０％が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２５％が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約１０％が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５％が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２％が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％～約９９％が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７５％～約９９％が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％～約９９％が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％～約９９％が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。

【0089】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％超が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。

【0090】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも高いＣＤ５４の発現及び／または存在に特徴付けられる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の約２倍、または約１０倍、または約５０倍、または約１００倍、または約３００倍、または約５００倍、または約１０００倍の量のＣＤ５４を有する。

【0091】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの約２倍～約１０倍または約２倍～約４倍の量のＣＤ５４を有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの約３倍の量のＣＤ５４を有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）の約１．１倍～約４倍または約１．１倍～約２倍の量のＣＤ５４を有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）の約１．５倍の量のＣＤ５４を有する。

【0092】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも低いＣＤ５４の発現及び／または存在に特徴付けられる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の約２分の１、または約１０分の１、または約５０分の１、または約１００分の１、または約３００分の１、または約５００分の１、または約１０００分の１の量のＣＤ５４を有する。

【0093】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％超が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％超が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％超が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％超が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％超が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％超が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％超が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％超が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。

【0094】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％以下が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％以下が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％以下が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％以下が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％以下が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以下が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％以下が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％以下が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。

【0095】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％未満が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約３０％未満が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２５％未満が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２０％未満が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１５％未満が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１０％未満が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５％未満が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。

【0096】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約９９％が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５０％が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２５％が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約１０％が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５％が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２％が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％～約９９％が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７５％～約９９％が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％～約９９％が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％～約９９％が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。

【0097】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％超が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。

【0098】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも高いＣＤ１８の発現及び／または存在に特徴付けられる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の約２倍、または約１０倍、または約５０倍、または約１００倍、または約３００倍、または約５００倍、または約１０００倍の量のＣＤ１８を有する。

【0099】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの約２倍～約１０倍、８倍～約６４倍、または約１６倍～約３２倍、または約１６倍～約２４倍の量のＣＤ１８を有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの約２０倍の量のＣＤ１８を有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）の約１．１倍～約４倍または約１．１倍～約２倍の量のＣＤ１８を有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）の約１．５倍の量のＣＤ１８を有する。

【0100】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも低いＣＤ１８の発現及び／または存在に特徴付けられる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の約２分の１、または約１０分の１、または約５０分の１、または約１００分の１、または約３００分の１、または約５００分の１、または約１０００分の１の量のＣＤ１８を有する。

【0101】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％超が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％超が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％超が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％超が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％超が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％超が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％超が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％超が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。

【0102】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％以下が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％以下が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％以下が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％以下が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％以下が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以下が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％以下が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％以下が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。

【0103】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％未満が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約３０％未満が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２５％未満が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２０％未満が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１５％未満が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１０％未満が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５％未満が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。

【0104】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約９９％が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５０％が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２５％が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約１０％が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５％が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２％が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％～約９９％が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７５％～約９９％が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％～約９９％が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％～約９９％が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。

【0105】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％超が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。

【0106】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも高いＣＤ４３の発現及び／または存在に特徴付けられる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の約２倍、または約１０倍、または約５０倍、または約１００倍、または約３００倍、または約５００倍、または約１０００倍の量のＣＤ４３を有する。

【0107】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの約４倍～約６４倍、または約８倍～約３２倍、または約８倍～約１６倍の量のＣＤ４３を有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの約１０倍または約１２倍の量のＣＤ４３を有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）の約１．５倍～約８倍または約２倍～約４倍の量のＣＤ４３を有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）の約３倍または約４倍の量のＣＤ４３を有する。

【0108】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも低いＣＤ４３の発現及び／または存在に特徴付けられる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の約２分の１、または約１０分の１、または約５０分の１、または約１００分の１、または約３００分の１、または約５００分の１、または約１０００分の１の量のＣＤ４３を有する。

【0109】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％超が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％超が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％超が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％超が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％超が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％超が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％超が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％超が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。

【0110】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％以下が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％以下が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％以下が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％以下が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％以下が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以下が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％以下が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％以下が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。

【0111】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％未満が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約３０％未満が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２５％未満が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２０％未満が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１５％未満が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１０％未満が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５％未満が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。

【0112】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約９９％が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５０％が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２５％が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約１０％が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５％が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２％が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％～約９９％が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７５％～約９９％が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％～約９９％が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％～約９９％が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。

【0113】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％超が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。

【0114】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも高いＣＤ１１ｂの発現及び／または存在に特徴付けられる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の約２倍、または約１０倍、または約５０倍、または約１００倍、または約３００倍、または約５００倍、または約１０００倍の量のＣＤ１１ｂを有する。

【0115】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの約２倍～約８倍または約２倍～約４倍の量のＣＤ１１ｂを有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの約３倍の量のＣＤ１１ｂを有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）の約１．１倍～約４倍または約１．１倍～約２倍の量のＣＤ１１ｂを有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）の約１．５倍の量のＣＤ１１ｂを有する。

【0116】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも高いＣＤ１１ｂの発現及び／または存在に特徴付けられる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の約２倍、または約１０倍、または約５０倍、または約１００倍、または約３００倍、または約５００倍、または約１０００倍の量のＣＤ１１ｂを有する。

【0117】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも低いＣＤ１１ｂの発現及び／または存在に特徴付けられる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の約２分の１、または約１０分の１、または約５０分の１、または約１００分の１、または約３００分の１、または約５００分の１、または約１０００分の１の量のＣＤ１１ｂを有する。

【0118】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％超が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％超が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％超が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％超が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％超が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％超が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％超が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％超が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。

【0119】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％以下が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％以下が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％以下が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％以下が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％以下が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以下が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％以下が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％以下が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。

【0120】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％未満が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約３０％未満が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２５％未満が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２０％未満が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１５％未満が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１０％未満が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５％未満が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。

【0121】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約９９％が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５０％が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２５％が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約１０％が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５％が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２％が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％～約９９％が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７５％～約９９％が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％～約９９％が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％～約９９％が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。

【0122】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％超が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。

【0123】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも高いＣＤ２１の発現及び／または存在に特徴付けられる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の約２倍、または約１０倍、または約５０倍、または約１００倍、または約３００倍、または約５００倍、または約１０００倍の量を有する。

【0124】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの約２倍～約６４倍、約４倍～約３２倍、または約８倍～約１６倍の量のＣＤ２１を有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの約１０倍または約１２倍の量のＣＤ２１を有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）の約２倍～約８倍または約４倍～約８倍の量のＣＤ２１を有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）の約４倍または約５倍の量のＣＤ２１を有する。

【0125】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも低いＣＤ２１の発現及び／または存在に特徴付けられる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の約２分の１、または約１０分の１、または約５０分の１、または約１００分の１、または約３００分の１、または約５００分の１、または約１０００分の１の量のＣＤ２１を有する。

【0126】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％超が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％超が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％超が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％超が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％超が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％超が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％超が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％超が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。

【0127】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％以下が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％以下が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％以下が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％以下が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％以下が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以下が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％以下が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％以下が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。

【0128】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％未満が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約３０％未満が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２５％未満が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２０％未満が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１５％未満が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１０％未満が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５％未満が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。

【0129】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約９９％が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５０％が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２５％が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約１０％が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５％が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２％が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％～約９９％が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７５％～約９９％が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％～約９９％が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％～約９９％が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。

【0130】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％超が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。

【0131】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも高いＣＤ５１の発現及び／または存在に特徴付けられる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の約２倍、または約１０倍、または約５０倍、または約１００倍、または約３００倍、または約５００倍、または約１０００倍の量のＣＤ５１を有する。

【0132】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも低いＣＤ５１の発現及び／または存在に特徴付けられる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の約２分の１、または約１０分の１、または約５０分の１、または約１００分の１、または約３００分の１、または約５００分の１、または約１０００分の１の量のＣＤ５１を有する。

【0133】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの約１．１分の１～約４分の１または約１．１分の１～約２分の１の量のＣＤ５１を有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの約１．５分の１の量のＣＤ５１を有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）の約１．１分の１～約４分の１または約１．１分の１～約２分の１の量のＣＤ５１を有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）の約１．５分の１の量のＣＤ５１を有する。

【0134】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％超が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％超が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％超が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％超が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％超が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％超が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％超が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％超が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。

【0135】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％以下が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％以下が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％以下が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％以下が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％以下が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以下が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％以下が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％以下が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。

【0136】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％未満が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約３０％未満が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２５％未満が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２０％未満が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１５％未満が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１０％未満が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５％未満が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。

【0137】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約９９％が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５０％が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２５％が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約１０％が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５％が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２％が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％～約９９％が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７５％～約９９％が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％～約９９％が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％～約９９％が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。

【0138】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％超が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。

【0139】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも高いＣＬＥＣ－２の発現及び／または存在に特徴付けられる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の約２倍、または約１０倍、または約５０倍、または約１００倍、または約３００倍、または約５００倍、または約１０００倍の量のＣＬＥＣ－２を有する。

【0140】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも低いＣＬＥＣ－２の発現及び／または存在に特徴付けられる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の約２分の１、または約１０分の１、または約５０分の１、または約１００分の１、または約３００分の１、または約５００分の１、または約１０００分の１の量のＣＬＥＣ－２を有する。

【0141】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの約２分の１～約１６分の１または約４分の１～約８分の１の量のＣＬＥＣ－２を有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの約４分の１または約５分の１の量のＣＬＥＣ－２を有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）の約４分の１～約３２分の１または約８分の１～約１６分の１の量のＣＬＥＣ－２を有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）の約１０分の１または約１２分の１の量のＣＬＥＣ－２を有する。

【0142】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％超が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％超が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％超が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％超が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％超が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％超が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％超が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％超が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。

【0143】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％以下が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％以下が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％以下が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％以下が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％以下が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以下が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％以下が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％以下が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。

【0144】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％未満が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約３０％未満が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２５％未満が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２０％未満が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１５％未満が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１０％未満が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５％未満が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。

【0145】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約９９％が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５０％が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２５％が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約１０％が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５％が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２％が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％～約９９％が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７５％～約９９％が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％～約９９％が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％～約９９％が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。

【0146】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％超が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。

【0147】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含まない、またはそれを実質的に含まない。

【0148】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも高いＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）の発現及び／または存在に特徴付けられる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の約２倍、または約１０倍、または約５０倍、または約１００倍、または約３００倍、または約５００倍、または約１０００倍の量のＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を有する。

【0149】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも低いＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）の発現及び／または存在に特徴付けられる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の約２分の１、または約１０分の１、または約５０分の１、または約１００分の１、または約３００分の１、または約５００分の１、または約１０００分の１の量のＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を有する。

【0150】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの約１分の１～約２分の１の量のＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶと実質的に同じ量のＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）の約２分の１～約８分の１または約２分の１～約４分の１の量のＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）の約３分の１または約４分の１の量のＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を有する。

【0151】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％超が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％超が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％超が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％超が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％超が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％超が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％超が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％超が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。

【0152】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％以下が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％以下が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％以下が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％以下が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％以下が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以下が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％以下が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％以下が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。

【0153】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％未満が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約３０％未満が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２５％未満が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２０％未満が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１５％未満が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１０％未満が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５％未満が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。

【0154】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約９９％が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５０％が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２５％が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約１０％が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５％が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２％が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％～約９９％が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７５％～約９９％が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％～約９９％が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％～約９９％が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。

【0155】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％超が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。

【0156】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約３０％が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５％～約２５％が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１０％～約２０％が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１３％～約１９％が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。

【0157】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも高いＣＤ６３の発現及び／または存在に特徴付けられる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の約２倍、または約１０倍、または約５０倍、または約１００倍、または約３００倍、または約５００倍、または約１０００倍の量のＣＤ６３を有する。

【0158】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも低いＣＤ６３の発現及び／または存在に特徴付けられる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の約２分の１、または約１０分の１、または約５０分の１、または約１００分の１、または約３００分の１、または約５００分の１、または約１０００分の１の量のＣＤ６３を有する。

【0159】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの約２倍～約８倍または約２倍～約４倍の量のＣＤ６３を有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの約２倍または約３倍の量のＣＤ６３を有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）の約１．１分の１～約２分の１の量のＣＤ６３を有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）の約１．１分の１または約１．２分の１の量のＣＤ６３を有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）と実質的に同じ量のＣＤ６３を有する。

【0160】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％超が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％超が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％超が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％超が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％超が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％超が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％超が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％超が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。

【0161】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％以下が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％以下が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％以下が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％以下が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％以下が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以下が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％以下が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％以下が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。

【0162】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％未満が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約３０％未満が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２５％未満が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２０％未満が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１５％未満が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１０％未満が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５％未満が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。

【0163】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約９９％が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５０％が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２５％が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約１０％が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５％が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２％が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％～約９９％が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７５％～約９９％が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％～約９９％が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％～約９９％が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。

【0164】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％超が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。

【0165】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも高いＣＤ４２ｂの発現及び／または存在に特徴付けられる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の約２倍、または約１０倍、または約５０倍、または約１００倍、または約３００倍、または約５００倍、または約１０００倍の量のＣＤ４２ｂを有する。

【0166】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも低いＣＤ４２ｂの発現及び／または存在に特徴付けられる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の約２分の１、または約１０分の１、または約５０分の１、または約１００分の１、または約３００分の１、または約５００分の１、または約１０００分の１の量のＣＤ４２ｂを有する。

【0167】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの約８分の１～約３２分の１または約１０分の１～約２０分の１の量のＣＤ４２ｂを有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの約１６分の１または約２０分の１の量のＣＤ４２ｂを有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）の約６４分の１～約１２８分の１または約５０分の１～約７５分の１の量のＣＤ４２ｂを有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）の約６４分の１または約７０分の１の量のＣＤ４２ｂを有する。

【0168】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％超が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％超が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％超が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％超が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％超が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％超が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％超が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％超が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。

【0169】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％以下が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％以下が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％以下が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％以下が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％以下が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以下が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％以下が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％以下が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。

【0170】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％未満が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約３０％未満が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２５％未満が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２０％未満が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１５％未満が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１０％未満が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５％未満が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。

【0171】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約９９％が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５０％が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２５％が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約１０％が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５％が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２％が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％～約９９％が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７５％～約９９％が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％～約９９％が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％～約９９％が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。

【0172】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％超が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。

【0173】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％～約７０％が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％～約７０％が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６２％～約６８％が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６５％～約６６％が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。

【0174】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％～約９９％が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。

【0175】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも高いＣＤ９の発現及び／または存在に特徴付けられる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の約２倍、または約１０倍、または約５０倍、または約１００倍、または約３００倍、または約５００倍、または約１０００倍の量のＣＤ９を有する。

【0176】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも低いＣＤ９の発現及び／または存在に特徴付けられる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の約２分の１、または約１０分の１、または約５０分の１、または約１００分の１、または約３００分の１、または約５００分の１、または約１０００分の１の量のＣＤ９を有する。

【0177】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの約１．５倍～約４倍または約２倍～約４倍の量のＣＤ９を有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの約２倍の量のＣＤ９を有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）の約１．１分の１～約２分の１の量のＣＤ９を有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）の約１．１分の１または約１．２分の１の量のＣＤ９を有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）と実質的に同じ量のＣＤ９を有する。

【0178】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％超が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％超が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％超が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％超が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％超が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％超が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％超が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％超が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。

【0179】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％以下が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％以下が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％以下が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％以下が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％以下が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以下が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％以下が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％以下が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。

【0180】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％未満が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約３０％未満が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２５％未満が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２０％未満が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１５％未満が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１０％未満が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５％未満が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。

【0181】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約９９％が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５０％が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２５％が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約１０％が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５％が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２％が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％～約９９％が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７５％～約９９％が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％～約９９％が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％～約９９％が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。

【0182】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％超が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。

【0183】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５％～約５０％が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１０％～約４０％が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１０％～約３５％が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１３％～約３１％が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。

【0184】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも高いＣＤ３１の発現及び／または存在に特徴付けられる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の約２倍、または約１０倍、または約５０倍、または約１００倍、または約３００倍、または約５００倍、または約１０００倍の量のＣＤ３１を有する。

【0185】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも低いＣＤ３１の発現及び／または存在に特徴付けられる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の約２分の１、または約１０分の１、または約５０分の１、または約１００分の１、または約３００分の１、または約５００分の１、または約１０００分の１の量のＣＤ３１を有する。

【0186】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの約１．１分の１～約４分の１または約１．１分の１～約２分の１の量のＣＤ３１を有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの約１．５分の１の量のＣＤ３１を有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）の約２分の１～約４分の１の量のＣＤ３１を有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）の約２分の１または約３分の１の量のＣＤ３１を有する。

【0187】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％超が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％超が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％超が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％超が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％超が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％超が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％超が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％超が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。

【0188】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％以下が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％以下が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％以下が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％以下が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％以下が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以下が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％以下が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％以下が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。

【0189】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％未満が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約３０％未満が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２５％未満が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２０％未満が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１５％未満が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１０％未満が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５％未満が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。

【0190】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約９９％が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５０％が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２５％が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約１０％が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５％が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２％が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％～約９９％が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７５％～約９９％が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％～約９９％が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％～約９９％が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。

【0191】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％超が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。

【0192】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５０％が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１０％～約４０％が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２０％～約４０％が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２５％～約３５％が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。

【0193】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも高いＣＤ４７の発現及び／または存在に特徴付けられる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の約２倍、または約１０倍、または約５０倍、または約１００倍、または約３００倍、または約５００倍、または約１０００倍の量のＣＤ４７を有する。

【0194】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも低いＣＤ４７の発現及び／または存在に特徴付けられる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の約２分の１、または約１０分の１、または約５０分の１、または約１００分の１、または約３００分の１、または約５００分の１、または約１０００分の１の量のＣＤ４７を有する。

【0195】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの約１２８倍～約５１２倍、または約２５６倍～約５１２倍、または約２５０倍～約３００倍の量のＣＤ４７を有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの約２５６倍または約３００倍の量のＣＤ４７を有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）の約１．１分の１～約２分の１の量のＣＤ４７を有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）の約１．１分の１または約１．５分の１の量のＣＤ４７を有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）と実質的に同じ量のＣＤ４７を有する。

【0196】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％超が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％超が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％超が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％超が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％超が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％超が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％超が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％超が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。

【0197】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％以下が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％以下が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％以下が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％以下が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％以下が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以下が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％以下が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％以下が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。

【0198】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％未満が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約３０％未満が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２５％未満が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２０％未満が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１５％未満が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１０％未満が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５％未満が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。

【0199】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約９９％が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５０％が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２５％が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約１０％が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５％が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２％が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％～約９９％が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７５％～約９９％が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％～約９９％が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％～約９９％が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。

【0200】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％超が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。

【0201】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約１５％が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約１０％が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約３％～約８％が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４％～約７％が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。

【0202】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも高いＣＤ１４７の発現及び／または存在に特徴付けられる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の約２倍、または約１０倍、または約５０倍、または約１００倍、または約３００倍、または約５００倍、または約１０００倍の量のＣＤ１４７を有する。

【0203】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも低いＣＤ１４７の発現及び／または存在に特徴付けられる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の約２分の１、または約１０分の１、または約５０分の１、または約１００分の１、または約３００分の１、または約５００分の１、または約１０００分の１の量のＣＤ１４７を有する。

【0204】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの約２分の１～約８分の１または約２分の１～約４分の１の量のＣＤ１４７を有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの約２分の１または約３分の１の量のＣＤ１４７を有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）の約１．１分の１～約２分の１の量のＣＤ１４７を有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）の約１．１分の１または約１．２分の１の量のＣＤ１４７を有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）と実質的に同じ量のＣＤ１４７を有する。

【0205】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％超が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％超が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％超が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％超が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％超が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％超が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％超が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％超が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。

【0206】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％以下が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％以下が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％以下が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％以下が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％以下が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以下が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％以下が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％以下が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。

【0207】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％未満が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約３０％未満が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２５％未満が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２０％未満が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１５％未満が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１０％未満が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５％未満が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。

【0208】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約９９％が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５０％が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２５％が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約１０％が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５％が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２％が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％～約９９％が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７５％～約９９％が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％～約９９％が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％～約９９％が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。

【0209】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％超が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。

【0210】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、ＣＤ３２ａを含まない、またはそれを実質的に含まない。

【0211】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも高いＣＤ３２ａの発現及び／または存在に特徴付けられる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の約２倍、または約１０倍、または約５０倍、または約１００倍、または約３００倍、または約５００倍、または約１０００倍の量のＣＤ３２ａを有する。

【0212】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも低いＣＤ３２ａの発現及び／または存在に特徴付けられる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の約２分の１、または約１０分の１、または約５０分の１、または約１００分の１、または約３００分の１、または約５００分の１、または約１０００分の１の量のＣＤ３２ａを有する。

【0213】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの約５０分の１～約１００分の１、１２８分の１～約５１２分の１、または約２５６分の１～約５１２分の１、または約２５０分の１～約３００分の１の量のＣＤ３２ａを有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの約２５０分の１または約２５６分の１の量のＣＤ３２ａを有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）の約２５０分の１～約４００分の１または２５６分の１～約５１２分の１の量のＣＤ３２ａを有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）の約２５６分の１または約３００分の１の量のＣＤ３２ａを有する。

【0214】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％超が、ＧＰＶＩを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％超が、ＧＰＶＩを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％超が、ＧＰＶＩを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％超が、ＧＰＶＩ ａを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％超が、ＧＰＶＩを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％超が、ＧＰＶＩを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％超が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％超が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。

【0215】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％以下が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％以下が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％以下が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％以下が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％以下が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以下が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％以下が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％以下が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。

【0216】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％未満が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約３０％未満が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２５％未満が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２０％未満が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１５％未満が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１０％未満が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５％未満が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。

【0217】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約９９％が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５０％が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２５％が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約１０％が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５％が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２％が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％～約９９％が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７５％～約９９％が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％～約９９％が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％～約９９％が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。

【0218】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％超が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。

【0219】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも高いＧＰＶＩの発現及び／または存在に特徴付けられる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の約２倍、または約１０倍、または約５０倍、または約１００倍、または約３００倍、または約５００倍、または約１０００倍の量のＧＰＶＩを有する。

【0220】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも低いＧＰＶＩの発現及び／または存在に特徴付けられる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の約２分の１、または約１０分の１、または約５０分の１、または約１００分の１、または約３００分の１、または約５００分の１、または約１０００分の１の量のＧＰＶＩを有する。

【0221】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの約８倍～約６４倍または約１６倍～約３２倍の量のＧＰＶＩを有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの約３０倍または約３２倍の量のＧＰＶＩを有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）の約２分の１～約１６分の１または約４分の１～約８分の１の量のＧＰＶＩを有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）の約４分の１または約５分の１の量のＧＰＶＩを有する。

【0222】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含まない、またはそれを実質的に含まない。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞及び／または血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞よりも少ないＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を有する。

【0223】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２０％未満、または約１５％未満、または約１０％未満、または約５％未満が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。

【0224】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、ＣＤ６２Ｐを有し、かつＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含まない、またはそれを実質的に含まないことに特徴付けられる。

【0225】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、巨核球由来細胞外小胞の約２０％未満、または約１５％未満、または約１０％未満、または約５％未満がＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含み、かつ約４０％超、約５０％超、約６０％超、約７０％超、約８０％超、約９０％超、約９５％超、または約９９％超がＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む、巨核球由来細胞外小胞集団に特徴付けられる。

【0226】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％未満、または約６０％未満、または約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、または約１％未満が、ホスファチジルセリン（ＰＳ）を含む脂質二重層膜を含む。

【0227】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも低いホスファチジルセリン（ＰＳ）の発現及び／または存在に特徴付けられる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の約２分の１、または約１０分の１、または約５０分の１、または約１００分の１、または約３００分の１、または約５００分の１、または約１０００分の１の量のホスファチジルセリン（ＰＳ）を有する。

【0228】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、ホスファチジルセリン（ＰＳ）を含まない、またはそれを実質的に含まないことに特徴付けられる。

【0229】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、または約１％未満がホスファチジルセリン（ＰＳ）を含む脂質二重層膜を含み、かつ巨核球由来細胞外小胞の約４０％超、約５０％超、約６０％超、約７０％超、約８０％超、約９０％超、約９５％超、または約９９％超がＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む、巨核球由来細胞外小胞集団に特徴付けられる。

【0230】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞及び／または血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞よりも高いＣＤ４１の発現及び／または存在に特徴付けられる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞及び／または血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞の約２倍、または約１０倍、または約５０倍、または約１００倍、または約３００倍、または約５００倍、または約１０００倍の量のＣＤ４１を有する。

【0231】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞及び／または血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞よりも低いＣＤ４１の発現及び／または存在に特徴付けられる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞及び／または血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞の約２分の１、または約１０分の１、または約５０分の１、または約１００分の１、または約３００分の１、または約５００分の１、または約１０００分の１の量のＣＤ４１を有する。

【0232】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、全長フィラミンＡを含む。

【0233】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、ホスファチジルセリンを含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、その約４０％超、約５０％超、約６０％超、約７０％超、約８０％超、約９０％超、約９５％超、または約９９％超がホスファチジルセリンを含む脂質二重層膜を含む、巨核球由来細胞外小胞集団に特徴付けられる。

【0234】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、アネキシンＶに対して陽性である脂質二重層膜を含む。例えば、ホスファチジルセリン（ＰＳ）と相互作用するアネキシンＶは、ホスファチジルセリンの発現及び／または存在もしくは不在の代理として使用することができる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、その約４０％超、約５０％超、約６０％超、約７０％超、約８０％超、約９０％超、または約９５％超がＰＳに対して陽性である、巨核球由来細胞外小胞集団に特徴付けられる。

【0235】

複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の実質的に全てが、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ＣＤ６２Ｐ、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７ａ）、ＣＤ４２ｂ、ＣＤ９、ＣＤ４３、ＣＤ３１、及びＣＤ１１ｂのうちの２、３、４、５、６、７、または８個を含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の実質的に全てが、ＰＳ、ＣＤ６２Ｐ、ＣＤ９、及びＣＤ１１ｂのうちの２、３、または４個を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の約２倍、または約１０倍、または約５０倍、または約１００倍、または約３００倍、または約５００倍、または約１０００倍の量のホスファチジルセリン（ＰＳ）、ＣＤ６２Ｐ、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７ａ）、ＣＤ４２ｂ、ＣＤ９、ＣＤ４３、ＣＤ３１、及びＣＤ１１ｂのうちの１つ以上を有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、相当量のＤＲＡＱ５を発現しないことに特徴付けられる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、ＤＲＡＱ５を実質的に含まないことに特徴付けられる。

【0236】

複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の実質的に全てが、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ＣＤ６１、ＣＤ６２Ｐ、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７ａ）、ＣＬＥＣ－２、及びＣＤ６３のうちの２、３、４、５、または６個を含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の実質的に全てが、ＰＳ、ＣＤ６１、及びＣＤ６３のうちの２個または３個を含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の実質的に全てが、ホスファチジルセリン（ＰＳ）及びＣＤ６１を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の約２倍、または約１０倍、または約５０倍、または約１００倍、または約３００倍、または約５００倍、または約１０００倍の量のホスファチジルセリン（ＰＳ）、ＣＤ６１、ＣＤ６２Ｐ、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７ａ）、ＣＬＥＣ－２、及びＣＤ６３のうちの１つ以上を有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、相当量のＤＲＡＱ５を発現しないことに特徴付けられる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、ＤＲＡＱ５を実質的に含まないことに特徴付けられる。

【0237】

複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の実質的に全てが、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ＣＤ６２Ｐ、ＣＬＥＣ－２、ＣＤ９、ＣＤ３１、ＣＤ１４７、ＣＤ３２ａ、及びＧＰＶＩのうちの２、３、４、５、６、７、または８個を含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の実質的に全てが、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ＣＤ９、ＣＤ３１、及びＣＤ１４７のうちの２、３、または４個を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の約２倍、または約１０倍、または約５０倍、または約１００倍、または約３００倍、または約５００倍、または約１０００倍の量のホスファチジルセリン（ＰＳ）、ＣＤ６２Ｐ、ＣＬＥＣ－２、ＣＤ９、ＣＤ３１、ＣＤ１４７、ＣＤ３２ａ、及びＧＰＶＩのうちの１つ以上を有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、相当量のＤＲＡＱ５を発現しないことに特徴付けられる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、ＤＲＡＱ５を実質的に含まないことに特徴付けられる。

【0238】

複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の実質的に全てが、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ＣＤ６２Ｐ、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７ａ）、ＣＬＥＣ－２、ＣＤ９、及びＣＤ３１のうちの２、３、４、５、または６個を含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の実質的に全てが、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ＣＤ６２Ｐ、及びＣＤ９のうちの２個または３個を含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の実質的に全てが、ＰＳ及びＣＤ９を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴ ＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の約２倍、または約１０倍、または約５０倍、または約１００倍、または約３００倍、または約５００倍、または約１０００倍の量のホスファチジルセリン（ＰＳ）、ＣＤ６２Ｐ、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７ａ）、ＣＬＥＣ－２、ＣＤ９、及びＣＤ３１のうちの１つ以上を有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、相当量のＤＲＡＱ５を発現しないことに特徴付けられる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、ＤＲＡＱ５を実質的に含まないことに特徴付けられる。

【0239】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞及び／または複数の巨核球由来細胞外小胞及び／または巨核球由来細胞外小胞集団は、脂質二重層膜を含み、
巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、もしくは約４０％未満、もしくは約３０％未満、もしくは約２０％未満、もしくは約１０％未満、もしくは約５％未満、もしくは約１％未満が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む、及び／または
巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、もしくは約４０％未満、もしくは約３０％未満、もしくは約２０％未満、もしくは約１０％未満、もしくは約５％未満、もしくは約１％未満が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む、及び／または
巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、もしくは約４０％未満、もしくは約３０％未満、もしくは約２０％未満、もしくは約１０％未満、もしくは約５％未満、もしくは約１％未満が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む、及び／または
巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、もしくは約４０％未満、もしくは約３０％未満、もしくは約２０％未満、もしくは約１０％未満、もしくは約５％未満、もしくは約１％未満が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む、及び／または
巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、もしくは約４０％未満、もしくは約３０％未満、もしくは約２０％未満、もしくは約１０％未満、もしくは約５％未満、もしくは約１％未満が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む、及び／または
巨核球由来細胞外小胞の約４０％超、または約５０％超、または約６０％超、または約７０％超、または約８０％超、または約９０％超、約９５％超、または約９９％超が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む、及び／または
巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、もしくは約４０％未満、もしくは約３０％未満、もしくは約２０％未満、もしくは約１０％未満、もしくは約５％未満、もしくは約１％未満が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む、及び／または
巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、もしくは約４０％未満、もしくは約３０％未満、もしくは約２０％未満、もしくは約１０％未満、もしくは約５％未満、もしくは約１％未満が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む、及び／または
巨核球由来細胞外小胞の約４０％超、または約５０％超、または約６０％超、または約７０％超、または約８０％超、または約９０％超、約９５％超、または約９９％超が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む、及び／または
巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、もしくは約４０％未満、もしくは約３０％未満、もしくは約２０％未満、もしくは約１０％未満、もしくは約５％未満、もしくは約１％未満が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む、及び／または
巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、もしくは約４０％未満、もしくは約３０％未満、もしくは約２０％未満、もしくは約１０％未満、もしくは約５％未満、もしくは約１％未満が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む、及び／または
巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、もしくは約４０％未満、もしくは約３０％未満、もしくは約２０％未満、もしくは約１０％未満、もしくは約５％未満、もしくは約１％未満が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む、及び／または
巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、もしくは約４０％未満、もしくは約３０％未満、もしくは約２０％未満、もしくは約１０％未満、もしくは約５％未満、もしくは約１％未満が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む、及び／または
巨核球由来細胞外小胞の約４０％超、または約５０％超、または約６０％超、または約７０％超、または約８０％超、または約９０％超、約９５％超、または約９９％超が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む、及び／または
巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、もしくは約４０％未満、もしくは約３０％未満、もしくは約２０％未満、もしくは約１０％未満、もしくは約５％未満、もしくは約１％未満が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む、及び／または
巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、もしくは約４０％未満、もしくは約３０％未満、もしくは約２０％未満、もしくは約１０％未満、もしくは約５％未満、もしくは約１％未満が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７ａ）を含む脂質二重層膜を含む、及び／または
巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、もしくは約４０％未満、もしくは約３０％未満、もしくは約２０％未満、もしくは約１０％未満、もしくは約５％未満、もしくは約１％未満が、ＣＤ２４ｂを含む脂質二重層膜を含む、及び／または
巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、もしくは約４０％未満、もしくは約３０％未満、もしくは約２０％未満、もしくは約１０％未満、もしくは約５％未満、もしくは約１％未満が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む、及び／または
巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、もしくは約４０％未満、もしくは約３０％未満、もしくは約２０％未満、もしくは約１０％未満、もしくは約５％未満、もしくは約１％未満が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む、及び／または
巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、もしくは約４０％未満、もしくは約３０％未満、もしくは約２０％未満、もしくは約１０％未満、もしくは約５％未満、もしくは約１％未満が、ホスファチジルセリン（ＰＳ）を含む脂質二重層膜を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞及び／または複数の巨核球由来細胞外小胞及び／または巨核球由来細胞外小胞集団の約４０％超、約５０％超、または約６０％超、または約７０％超、または約８０％超、または約９０％超、約９５％超、または約９９％超が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。

【0240】

核酸バイオマーカー
複数の実施形態では、本組成物は、他のタイプの細胞外小胞と比較して、巨核球由来細胞外小胞に特有であるか、または巨核球由来細胞外小胞に優先的に存在する、１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個、もしくは少なくとも５００個、もしくは少なくとも１０００個、もしくは少なくとも１５００個、もしくは少なくとも２０００個、もしくは少なくとも２５００個）、または１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個、もしくは少なくとも５００個、もしくは少なくとも１０００個、もしくは少なくとも１５００個、もしくは少なくとも２０００個、もしくは少なくとも２５００個）によってコードされる１つ以上のタンパク質（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個、もしくは少なくとも５００個、もしくは少なくとも１０００個、もしくは少なくとも１５００個、もしくは少なくとも２０００個、もしくは少なくとも２５００個）を含み、これらの１つ以上の核酸は、以下の表６に列記されている。

【表1-1】

【表1-2】

【表1-3】

【表1-4】

【表1-5】

【表1-6】

【表1-7】

【表1-8】

【表1-9】

【0241】

複数の実施形態では、他のタイプの細胞外小胞と比較して、本開示の巨核球由来細胞外小胞に特有であるか、または本開示の巨核球由来細胞外小胞に優先的に存在する、１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）、または１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）によってコードされる１つ以上のタンパク質（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）は、好中球細胞外トラップ形成に関与し、任意選択で、Ｈ３－３Ａ、Ｈ４Ｃ１２、Ｈ２ＡＣ１８、Ｈ２ＡＣ１３、Ｈ２ＡＣ１９、Ｈ３－３Ｂ、Ｈ２ＢＣ１２、Ｈ４Ｃ３、Ｈ３Ｃ１０、Ｈ２ＡＣ１４、Ｈ２ＢＣ４、Ｈ２ＡＣ２０、Ｈ３Ｃ１３、Ｈ４Ｃ１４、Ｈ３Ｃ２、Ｈ２ＡＣ８、Ｈ２ＢＣ３、Ｈ３Ｃ７、Ｈ２ＡＣ１７、Ｈ３Ｃ４、Ｈ２ＢＣ１１、ＳＥＬＰ、Ｈ３Ｃ１１、Ｈ４Ｃ２、Ｈ２ＡＣ１５、Ｈ２ＡＣ１２、Ｈ３Ｃ１、Ｈ４Ｃ４、Ｈ２ＡＣ４、Ｈ４Ｃ１３、Ｈ２ＢＣ５、Ｈ２ＡＣ７、Ｈ２ＡＣ１６、Ｈ２ＢＣ１７、Ｈ２ＡＪ、Ｈ３Ｃ３、Ｈ２ＢＣ１０、Ｈ２ＡＣ２１、Ｈ３Ｃ１４、Ｈ３Ｃ１５、Ｈ２ＡＣ１１、Ｈ３Ｃ１２、ＦＰＲ１、Ｈ２ＢＣ１３、Ｈ４Ｃ１、ＭＡＣＲＯＨ２Ａ１、Ｈ２ＢＣ１４、Ｈ２ＡＸ、Ｈ２ＢＣ６、ＮＣＦ４、Ｈ４Ｃ６、Ｈ２ＢＣ１５、Ｈ２ＢＣ２１、Ｈ２ＢＣ７、Ｈ２ＢＣ８、ＣＹＢＢ、ＦＣＧＲ１Ａ、Ｈ２ＡＺ２、Ｈ４Ｃ５、ＡＱＰ９、Ｈ２ＢＣ９、ＣＬＣＮ４、ＦＰＲ２、Ｈ４Ｃ９、ＨＤＡＣ９、ＩＴＧＡＬ、ＦＣＧＲ３Ｂ、ＩＴＧＡＭ、Ｈ３Ｃ８、ＴＬＲ２、ＮＣＦ１、ＮＣＦ２、Ｈ３Ｃ６、ＣＡＭＰ、ＭＰＯ、ＥＬＡＮＥ、ＦＣＧＲ３Ａ、ＡＺＵ１、Ｈ２ＡＷ、ＳＩＧＬＥＣ９、ＣＬＥＣ７Ａ、ＰＬＣＢ４、ＣＡＳＰ１、Ｈ２ＢＵ１、ＴＬＲ４、及びＴＬＲ８から選択される。

【0242】

複数の実施形態では、他のタイプの細胞外小胞と比較して、本開示の巨核球由来細胞外小胞に特有であるか、または本開示の巨核球由来細胞外小胞に優先的に存在する、１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）、または１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）によってコードされる１つ以上のタンパク質（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）は、好中球細胞外トラップ形成、造血細胞系譜、細胞接着、ＡＴＰ結合カセット（ＡＢＣ）輸送、ケモカインシグナル伝達経路、貪食、及び／またはアミノアシル－ｔＲＮＡ生合成に関与する。

【0243】

複数の実施形態では、１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）、または１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）によってコードされる１つ以上のタンパク質（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）は、好中球細胞外トラップ形成に関与し、任意選択で、Ｈ３－３Ａ、Ｈ４Ｃ１２、Ｈ２ＡＣ１８、Ｈ２ＡＣ１３、Ｈ２ＡＣ１９、Ｈ３－３Ｂ、Ｈ２ＢＣ１２、Ｈ４Ｃ３、Ｈ３Ｃ１０、Ｈ２ＡＣ１４、Ｈ２ＢＣ４、Ｈ２ＡＣ２０、Ｈ３Ｃ１３、Ｈ４Ｃ１４、Ｈ３Ｃ２、Ｈ２ＡＣ８、Ｈ２ＢＣ３、Ｈ３Ｃ７、Ｈ２ＡＣ１７、Ｈ３Ｃ４、Ｈ２ＢＣ１１、ＳＥＬＰ、Ｈ３Ｃ１１、Ｈ４Ｃ２、Ｈ２ＡＣ１５、Ｈ２ＡＣ１２、Ｈ３Ｃ１、Ｈ４Ｃ４、Ｈ２ＡＣ４、Ｈ４Ｃ１３、Ｈ２ＢＣ５、Ｈ２ＡＣ７、Ｈ２ＡＣ１６、Ｈ２ＢＣ１７、Ｈ２ＡＪ、Ｈ３Ｃ３、Ｈ２ＢＣ１０、Ｈ２ＡＣ２１、Ｈ３Ｃ１４、Ｈ３Ｃ１５、Ｈ２ＡＣ１１、Ｈ３Ｃ１２、ＦＰＲ１、Ｈ２ＢＣ１３、Ｈ４Ｃ１、ＭＡＣＲＯＨ２Ａ１、Ｈ２ＢＣ１４、Ｈ２ＡＸ、Ｈ２ＢＣ６、ＮＣＦ４、Ｈ４Ｃ６、Ｈ２ＢＣ１５、Ｈ２ＢＣ２１、Ｈ２ＢＣ７、Ｈ２ＢＣ８、ＣＹＢＢ、ＦＣＧＲ１Ａ、Ｈ２ＡＺ２、Ｈ４Ｃ５、ＡＱＰ９、Ｈ２ＢＣ９、ＣＬＣＮ４、ＦＰＲ２、Ｈ４Ｃ９、ＨＤＡＣ９、ＩＴＧＡＬ、ＦＣＧＲ３Ｂ、ＩＴＧＡＭ、Ｈ３Ｃ８、ＴＬＲ２、ＮＣＦ１、ＮＣＦ２、Ｈ３Ｃ６、ＣＡＭＰ、ＭＰＯ、ＥＬＡＮＥ、ＦＣＧＲ３Ａ、ＡＺＵ１、Ｈ２ＡＷ、ＳＩＧＬＥＣ９、ＣＬＥＣ７Ａ、ＰＬＣＢ４、ＣＡＳＰ１、Ｈ２ＢＵ１、ＴＬＲ４、及びＴＬＲ８から選択される。

【0244】

複数の実施形態では、１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）、または１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）によってコードされる１つ以上のタンパク質（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）は、造血細胞系譜に関与し、任意選択で、ＣＤ３６、ＩＬ９Ｒ、ＦＣＧＲ１Ａ、ＣＳＦ３Ｒ、ＫＩＴ、ＧＰ５、ＣＳＦ１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ３３、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ７Ｒ、ＩＬ６Ｒ、ＨＬＡ－ＤＰＢ１、ＣＤ２４、ＣＤ２２、ＧＹＰＡ、ＭＭＥ、ＩＴＧＡ１、ＣＤ１Ｃ、ＩＬ３ＲＡ、ＨＬＡ－ＤＰＡ１、ＩＬ１Ｒ２、ＣＤ３４、ＨＬＡ－ＤＲＡ、ＨＬＡ－ＤＱＡ１、及びＣＤ７から選択される。

【0245】

複数の実施形態では、１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）、または１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）によってコードされる１つ以上（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）のタンパク質は、細胞接着に関与し、任意選択で、ＣＤ２２６、ＳＥＬＰ、ＰＥＣＡＭ１、ＶＳＩＲ、ＰＴＰＲＣ、ＮＲＸＮ１、ＮＥＣＴＩＮ２、ＩＴＧＡＬ、ＩＴＧＡＭ、ＳＥＬＬ、ＣＤ２８、ＨＬＡ－ＤＰＢ１、ＣＮＴＮＡＰ２、ＣＬＤＮ５、ＪＡＭ２、ＣＤ４０ＬＧ、ＬＲＲＣ４、ＣＤ２７４、ＣＤ４０、ＣＤ２７６、ＣＤ２２、ＩＴＧＡ９、ＮＥＣＴＩＮ３、ＮＥＧＲ１、ＨＬＡ－ＤＰＡ１、ＣＮＴＮ１、ＩＴＧＢ８、ＣＤ３４、ＨＬＡ－ＤＲＡ、ＳＩＧＬＥＣ１、及びＨＬＡ－ＤＱＡ１から選択される。

【0246】

複数の実施形態では、１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）、または１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）によってコードされる１つ以上のタンパク質（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）は、ＡＴＰ結合カセット（ＡＢＣ）輸送に関与し、任意選択で、ＣＦＴＲ、ＡＢＣＤ４、ＡＢＣＡ５、ＡＢＣＡ９、ＡＢＣＣ１、ＡＢＣＢ８、ＡＢＣＡ８、ＡＢＣＢ９、ＡＢＣＣ９、ＡＢＣＡ１、ＡＢＣＡ１０、及びＡＢＣＣ８から選択される。

【0247】

複数の実施形態では、１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）、または１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）によってコードされる１つ以上のタンパク質（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）は、Ｒａｐ１シグナル伝達経路に関与し、任意選択で、Ｆ２Ｒ、ＬＣＰ２、ＦＹＢ１、ＦＰＲ１、Ｆ２ＲＬ３、Ｐ２ＲＹ１、ＲＡＰＧＥＦ２、ＫＩＴ、ＥＧＦ、ＣＳＦ１、ＡＮＧＰＴ１、ＰＤＧＦＣ、ＩＴＧＡＬ、ＶＡＶ１、ＶＡＶ３、ＰＤＧＦＲＡ、ＩＴＧＡＭ、ＲＡＰＧＥＦ５、ＭＡＧＩ２、ＦＡＲＰ２、ＣＴＮＮＤ１、ＦＧＦ２３、ＦＬＴ１、ＦＧＦ１、ＤＲＤ２、ＡＦＤＮ、ＰＬＣＢ４、ＡＰＢＢ１ＩＰ、ＰＬＣＥ１、ＭＡＧＩ３、ＫＤＲ、ＬＰＡＲ３、ＧＲＩＮ２Ｂ、ＡＤＣＹ１、ＦＧＦ７、ＡＮＧＰＴ４、及びＴＥＫから選択される。

【0248】

複数の実施形態では、１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）、または１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）によってコードされる１つ以上のタンパク質（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）は、ケモカインシグナル伝達経路に関与し、任意選択で、ＰＦ４、ＣＣＬ５、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ８、ＥＬＭＯ１、ＧＲＫ２、ＧＮＧ８、ＣＣＲ４、ＰＦ４Ｖ１、ＶＡＶ１、ＶＡＶ３、ＰＩＫ３Ｒ６、ＰＩＫ３ＣＧ、ＳＨＣ４、ＧＲＫ３、ＮＣＦ１、ＨＣＫ、ＧＲＫ４、ＩＴＫ、ＧＮＧ２、ＣＸＣＲ２、ＣＣＲ１、ＣＸＣＬ５、ＣＣＬ３、ＰＬＣＢ４、ＣＸＣＬ６、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ８、ＣＣＬ４Ｌ２、ＣＸＣＬ１２、ＧＮＧＴ１、ＣＸＣＬ１１、ＡＤＣＹ１、及びＸＣＬ１から選択される。

【0249】

複数の実施形態では、１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）、または１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）によってコードされる１つ以上のタンパク質（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）は、貪食に関与し、任意選択で、ＴＵＢＡ８、ＮＣＦ４、ＣＤ３６、ＣＹＢＢ、ＦＣＧＲ１Ａ、ＣＴＳＳ、ＦＣＧＲ３Ｂ、ＰＩＫＦＹＶＥ、ＩＴＧＡＭ、ＴＬＲ２、ＮＣＦ１、ＮＣＦ２、ＨＬＡ－ＤＰＢ１、ＭＰＯ、ＥＥＡ１、ＭＳＲ１、ＦＣＧＲ３Ａ、ＦＣＡＲ、ＤＹＮＣ１Ｉ１、ＣＬＥＣ７Ａ、ＦＣＧＲ２Ｂ、ＨＬＡ－ＤＰＡ１、ＡＴＰ６Ｖ０Ｄ２、ＭＲＣ２、ＴＬＲ４、ＴＬＲ６、ＨＬＡ－ＤＲＡ、ＭＡＲＣＯ、及びＨＬＡ－ＤＱＡ１から選択される。

【0250】

複数の実施形態では、１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）、または１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）によってコードされる１つ以上のタンパク質（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）は、様々な経路に関与し、任意選択で、Ｈ３－３Ａ、Ｈ４Ｃ１２、Ｈ２ＡＣ１８、Ｈ２ＡＣ１３、Ｈ２ＡＣ１９、Ｈ３－３Ｂ、Ｈ２ＢＣ１２、Ｈ４Ｃ３、Ｈ３Ｃ１０、Ｈ２ＡＣ１４、Ｈ２ＢＣ４、Ｈ２ＡＣ２０、Ｈ３Ｃ１３、Ｈ４Ｃ１４、Ｈ３Ｃ２、Ｈ２ＡＣ８、Ｈ２ＢＣ３、Ｈ３Ｃ７、Ｈ２ＡＣ１７、Ｈ３Ｃ４、Ｈ２ＢＣ１１、ＳＥＬＰ、Ｈ３Ｃ１１、Ｈ４Ｃ２、Ｈ２ＡＣ１５、Ｈ２ＡＣ１２、Ｈ３Ｃ１、Ｈ４Ｃ４、Ｈ２ＡＣ４、Ｈ４Ｃ１３、Ｈ２ＢＣ５、Ｈ２ＡＣ７、Ｈ２ＡＣ１６、Ｈ２ＢＣ１７、Ｈ２ＡＪ、Ｈ３Ｃ３、Ｈ２ＢＣ１０、Ｈ２ＡＣ２１、Ｈ３Ｃ１４、Ｈ３Ｃ１５、Ｈ２ＡＣ１１、Ｈ３Ｃ１２、ＦＰＲ１、Ｈ２ＢＣ１３、Ｈ４Ｃ１、ＭＡＣＲＯＨ２Ａ１、Ｈ２ＢＣ１４、Ｈ２ＡＸ、Ｈ２ＢＣ６、ＮＣＦ４、Ｈ４Ｃ６、Ｈ２ＢＣ１５、Ｈ２ＢＣ２１、Ｈ２ＢＣ７、Ｈ２ＢＣ８、ＣＹＢＢ、ＦＣＧＲ１Ａ、Ｈ２ＡＺ２、Ｈ４Ｃ５、ＡＱＰ９、Ｈ２ＢＣ９、ＣＬＣＮ４、ＦＰＲ２、Ｈ４Ｃ９、ＨＤＡＣ９、ＩＴＧＡＬ、ＦＣＧＲ３Ｂ、ＩＴＧＡＭ、Ｈ３Ｃ８、ＴＬＲ２、ＮＣＦ１、ＮＣＦ２、Ｈ３Ｃ６、ＣＡＭＰ、ＭＰＯ、ＥＬＡＮＥ、ＦＣＧＲ３Ａ、ＡＺＵ１、Ｈ２ＡＷ、ＳＩＧＬＥＣ９、ＣＬＥＣ７Ａ、ＰＬＣＢ４、ＣＡＳＰ１、Ｈ２ＢＵ１、ＴＬＲ４、ＴＬＲ８、ＣＤ３６、ＩＬ９Ｒ、ＦＣＧＲ１Ａ、ＣＳＦ３Ｒ、ＫＩＴ、ＧＰ５、ＣＳＦ１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ３３、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ７Ｒ、ＩＬ６Ｒ、ＨＬＡ－ＤＰＢ１、ＣＤ２４、ＣＤ２２、ＧＹＰＡ、ＭＭＥ、ＩＴＧＡ１、ＣＤ１Ｃ、ＩＬ３ＲＡ、ＨＬＡ－ＤＰＡ１、ＩＬ１Ｒ２、ＣＤ３４、ＨＬＡ－ＤＲＡ、ＨＬＡ－ＤＱＡ１、ＣＤ７、ＣＤ２２６、ＳＥＬＰ、ＰＥＣＡＭ１、ＶＳＩＲ、ＰＴＰＲＣ、ＮＲＸＮ１、ＮＥＣＴＩＮ２、ＩＴＧＡＬ、ＩＴＧＡＭ、ＳＥＬＬ、ＣＤ２８、ＨＬＡ－ＤＰＢ１、ＣＮＴＮＡＰ２、ＣＬＤＮ５、ＪＡＭ２、ＣＤ４０ＬＧ、ＬＲＲＣ４、ＣＤ２７４、ＣＤ４０、ＣＤ２７６、ＣＤ２２、ＩＴＧＡ９、ＮＥＣＴＩＮ３、ＮＥＧＲ１、ＨＬＡ－ＤＰＡ１、ＣＮＴＮ１、ＩＴＧＢ８、ＣＤ３４、ＨＬＡ－ＤＲＡ、ＳＩＧＬＥＣ１、ＨＬＡ－ＤＱＡ１、ＣＦＴＲ、ＡＢＣＤ４、ＡＢＣＡ５、ＡＢＣＡ９、ＡＢＣＣ１、ＡＢＣＢ８、ＡＢＣＡ８、ＡＢＣＢ９、ＡＢＣＣ９、ＡＢＣＡ１、ＡＢＣＡ１０、ＡＢＣＣ８、Ｆ２Ｒ、ＬＣＰ２、ＦＹＢ１、ＦＰＲ１、Ｆ２ＲＬ３、Ｐ２ＲＹ１、ＲＡＰＧＥＦ２、ＫＩＴ、ＥＧＦ、ＣＳＦ１、ＡＮＧＰＴ１、ＰＤＧＦＣ、ＩＴＧＡＬ、ＶＡＶ１、ＶＡＶ３、ＰＤＧＦＲＡ、ＩＴＧＡＭ、ＲＡＰＧＥＦ５、ＭＡＧＩ２、ＦＡＲＰ２、ＣＴＮＮＤ１、ＦＧＦ２３、ＦＬＴ１、ＦＧＦ１、ＤＲＤ２、ＡＦＤＮ、ＰＬＣＢ４、ＡＰＢＢ１ＩＰ、ＰＬＣＥ１、ＭＡＧＩ３、ＫＤＲ、ＬＰＡＲ３、ＧＲＩＮ２Ｂ、ＡＤＣＹ１、ＦＧＦ７、ＡＮＧＰＴ４、ＴＥＫ、ＰＦ４、ＣＣＬ５、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ８、ＥＬＭＯ１、ＧＲＫ２、ＧＮＧ８、ＣＣＲ４、ＰＦ４Ｖ１、ＶＡＶ１、ＶＡＶ３、ＰＩＫ３Ｒ６、ＰＩＫ３ＣＧ、ＳＨＣ４、ＧＲＫ３、ＮＣＦ１、ＨＣＫ、ＧＲＫ４、ＩＴＫ、ＧＮＧ２、ＣＸＣＲ２、ＣＣＲ１、ＣＸＣＬ５、ＣＣＬ３、ＰＬＣＢ４、ＣＸＣＬ６、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ８、ＣＣＬ４Ｌ２、ＣＸＣＬ１２、ＧＮＧＴ１、ＣＸＣＬ１１、ＡＤＣＹ１、ＸＣＬ１、ＴＵＢＡ８、ＮＣＦ４、ＣＤ３６、ＣＹＢＢ、ＦＣＧＲ１Ａ、ＣＴＳＳ、ＦＣＧＲ３Ｂ、ＰＩＫＦＹＶＥ、ＩＴＧＡＭ、ＴＬＲ２、ＮＣＦ１、ＮＣＦ２、ＨＬＡ－ＤＰＢ１、ＭＰＯ、ＥＥＡ１、ＭＳＲ１、ＦＣＧＲ３Ａ、ＦＣＡＲ、ＤＹＮＣ１Ｉ１、ＣＬＥＣ７Ａ、ＦＣＧＲ２Ｂ、ＨＬＡ－ＤＰＡ１、ＡＴＰ６Ｖ０Ｄ２、ＭＲＣ２、ＴＬＲ４、ＴＬＲ６、ＨＬＡ－ＤＲＡ、ＭＡＲＣＯ、ＨＬＡ－ＤＱＡ１、ＲＡＲＳ１、ＤＡＲＳ１、ＫＡＲＳ１、ＳＡＲＳ１、ＡＡＲＳ１、ＴＡＲＳ１、ＮＡＲＳ１、ＷＡＲＳ１、ＧＡＴＢ、ＣＡＲＳ１、ＥＰＲＳ１、ＴＡＲＳ３、ＥＡＲＳ２、ＩＡＲＳ１、ＱＲＳＬ１、及びＷＡＲＳ２から選択される。

【0251】

複数の実施形態では、１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）、または１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）によってコードされる１つ以上のタンパク質（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）は、アミノアシル－ｔＲＮＡ生合成に関与し、任意選択で、ＲＡＲＳ１、ＤＡＲＳ１、ＫＡＲＳ１、ＳＡＲＳ１、ＡＡＲＳ１、ＴＡＲＳ１、ＮＡＲＳ１、ＷＡＲＳ１、ＧＡＴＢ、ＣＡＲＳ１、ＥＰＲＳ１、ＴＡＲＳ３、ＥＡＲＳ２、ＩＡＲＳ１、ＱＲＳＬ１、及びＷＡＲＳ２から選択される。

【0252】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％超、または約５％超、または約１０％超、または約１５％超、または約２０％超、または約２５％超、または約３０％超、または約３５％超、または約４０％超、または約４５％超、または約５０％超、または約５５％超、または約６０％超、または約６５％超、または約７０％超、または約７５％超、または約８０％超、または約８５％超、または約９０％超、または約９５％超が、１つ以上の核酸、または１つ以上の核酸によってコードされる１つ以上のタンパク質を含む。

【0253】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％超、約２％超、約３％超、約４％超、約５％超、約６％超、約７％超、約８％超、約９％超、約１０％超、約１１％超、約１２％超、約１３％超、約１４％超、約１５％超、約１６％超、約１７％超、約１８％超、約１９％超、約２０％超、約２１％超、約２２％超、約２３％超、約２４％超、約２５％超、約２６％超、約２７％超、約２８％超、約２９％超、約３０％超、約３１％超、約３２％超、約３３％超、約３４％超、約３５％超、約３６％超、約３７％超、約３８％超、約３９％超、約４０％超、約４１％超、約４２％超、約４３％超、約４４％超、約４５％超、約４６％超、約４７％超、約４８％超、約４９％超、約５０％超、約５１％超、約５２％超、約５３％超、約５４％超、約５５％超、約５６％超、約５７％超、約５８％超、約５９％超、約６０％超、約６１％超、約６２％超、約６３％超、約６４％超、約６５％超、約６６％超、約６７％超、約６８％超、約６９％超、約７０％超、約７１％超、約７２％超、約７３％超、約７４％超、約７５％超、約７６％超、約７７％超、約７８％超、約７９％超、約８０％超、約８１％超、約８２％超、約８３％超、約８４％超、約８５％超、約８６％超、約８７％超、約８８％超、約８９％超、約９０％超、約９１％超、約９２％超、約９３％超、約９４％超、約９５％超、約９６％超、約９７％超、約９８％超、約９９％超、またはそれ以上が、１つ以上の核酸、または１つ以上の核酸によってコードされる１つ以上のタンパク質を含む。

【0254】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％未満、または約９０％未満、または約８５％未満、または約８０％未満、または約７５％未満、または約７０％未満、または約６５％未満、または約６０％未満、または約５５％未満、または約５０％未満、または約４５％未満、または約４０％未満、または約３５％未満、または約３０％未満、または約２５％未満、または約２０％未満、または約１５％未満、または約１０％未満、または約５％未満、または約１％未満が、１つ以上の核酸、または１つ以上の核酸によってコードされる１つ以上のタンパク質を含む。

【0255】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％未満、または約９８％未満、または約９７％未満、または約９６％未満、または約９５％未満、または約９４％未満、または約９３％未満、または約９２％未満、または約９１％未満、または約９０％未満、または約８９％未満、または約８８％未満、または約８７％未満、または約８６％以下、未満、約８５％未満、または約８４％未満、または約８３％未満、または約８２％未満、または約８１％未満、または約８０％未満、または約７９％未満、または約７８％未満、または約７７％未満、または約７６％未満、または約７５％未満、または約７４％未満、または約７３％未満、または約７２％未満、または約７１％未満、または約７０％未満、または約６９％未満、または約６８％未満、または約６７％未満、または約６６％未満、または約６５％未満、または約６４％未満、または約６３％未満、または約６２％未満、または約６１％未満、または約６０％未満、または約５９％未満、または約５８％未満、または約５７％未満、または約５６％未満、または約５５％未満、または約５４％未満、または約５３％未満、または約５２％未満、または約５１％未満、または約５０％未満、または約４９％未満、または約４８％未満、または約４７％未満、または約４６％未満、または約４５％未満、または約４４％未満、または約４３％未満、または約４２％未満、または約４１％未満、または約４０％未満、または約３９％未満、または約３８％未満、または約３７％未満、または約３６％以下、未満、約３５％未満、または約３４％未満、または約３３％未満、または約３２％未満、または約３１％未満、または約３０％未満、または約２９％未満、または約２８％未満、または約２７％未満、または約２６％未満、または約２５％未満、または約２４％未満、または約２３％未満、または約２２％未満、または約２１％未満、または約２０％未満、または約１９％未満、または約１８％未満、または約１７％未満、または約１６％未満、または約１５％未満、または約１４％未満、または約１３％未満、または約１２％未満、または約１１％未満、または約１０％未満、または約９％未満、または約８％未満、または約７％未満、または約６％未満、または約５％未満、または約４％未満、または約３％未満、または約２％未満、または約１％が、１つ以上の核酸、または１つ以上の核酸によってコードされる１つ以上のタンパク質を含む。

【0256】

サイズプロファイル
様々な実施形態では、本巨核球由来細胞外小胞は、それらを、例えば、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞及び／または血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞と区別する、特有のサイズ（例えば、小胞直径）プロファイルに特徴付けられる。様々な実施形態では、本発明の巨核球由来細胞外小胞は、例えば、それらのより高い運搬能力に望ましい、例えば、天然に存在する巨核球由来細胞外小胞及び／または血小板由来の小胞もしくは細胞外小胞と比較して、より大きい粒子を好む、サイズプロファイルに特徴付けられる。

【0257】

様々な実施形態では、本巨核球由来細胞外小胞は、約３０ｎｍ～約１００ｎｍの粒子に対するバイアスに特徴付けられる。

【0258】

様々な実施形態では、本巨核球由来細胞外小胞は、約３０ｎｍ～約４００ｎｍの粒子に対するバイアスに特徴付けられる。

【0259】

様々な実施形態では、本巨核球由来細胞外小胞は、約１００ｎｍ～約２００ｎｍの粒子に対するバイアスに特徴付けられる。

【0260】

様々な実施形態では、本巨核球由来細胞外小胞は、約１００ｎｍ～約３００ｎｍの粒子に対するバイアスに特徴付けられる。

【0261】

様々な実施形態では、本巨核球由来細胞外小胞は、約１００ｎｍ～約５００ｎｍの粒子に対するバイアスに特徴付けられる。

【0262】

様々な実施形態では、本巨核球由来細胞外小胞は、約１００ｎｍ～約６００ｎｍの粒子に対するバイアスに特徴付けられる。

【0263】

様々な実施形態では、本巨核球由来細胞外小胞は、平均して直径約２００ｎｍの粒子に対するバイアスに特徴付けられる。

【0264】

様々な実施形態では、本巨核球由来細胞外小胞は、平均して直径約２５０ｎｍの粒子に対するバイアスに特徴付けられる。

【0265】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、約１００ｎｍ未満の直径を実質的に有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、約３０ｎｍ～約３００ｎｍの範囲の直径を実質的に有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、約３０ｎｍ～約４００ｎｍの範囲の直径を実質的に有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、約１００ｎｍ～約３００ｎｍの範囲の直径を実質的に有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、約２００ｎｍ～約３００ｎｍの範囲の直径を実質的に有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、約３００ｎｍ～約４００ｎｍの範囲の直径を実質的に有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、約４００ｎｍ～約５００ｎｍの範囲の直径を実質的に有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、約５００ｎｍ～約６００ｎｍの範囲の直径を実質的に有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、約６００ｎｍ～約７００ｎｍの範囲の直径を実質的に有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、約７００ｎｍ～約８００ｎｍの範囲の直径を実質的に有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、約８００ｎｍ～約９００ｎｍの範囲の直径を実質的に有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、約９００ｎｍ～約１０００ｎｍの範囲の直径を実質的に有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、約５００ｎｍ～約１０００ｎｍの範囲の直径を実質的に有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、約６００ｎｍ～約１０００ｎｍの範囲の直径を実質的に有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、約１００ｎｍ～約５００ｎｍの範囲の直径を実質的に有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、約１００ｎｍ～約６００ｎｍの範囲の直径を実質的に有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、約１５０ｎｍ～約５００ｎｍの範囲の直径を実質的に有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、約１００ｎｍ～約２００ｎｍの範囲の直径を実質的に有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、約１００ｎｍ～約２００ｎｍの範囲の直径を実質的に有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、約２００ｎｍ～約６００ｎｍの範囲の直径を実質的に有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、約３０ｎｍ～１００ｎｍ、または約３０ｎｍ～４００ｎｍ、または約１００ｎｍ～約２００ｎｍ、または約１００ｎｍ～約５００ｎｍ、または約２００ｎｍ～約３５０ｎｍ、または約４００ｎｍ～約６００ｎｍの範囲の直径を実質的に有する。

【0266】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以上、または約９５％以上、または約９７％以上、または約９９％以上が、約３０～１００ｎｍの直径を有する。

【0267】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以上、または約９５％以上、または約９７％以上、または約９９％以上が、約３０～４００ｎｍの直径を有する。

【0268】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以上、または約９５％以上、または約９７％以上、または約９９％以上が、約１００ｎｍ～約２００ｎｍの直径を有する。

【0269】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以上、または約９５％以上、または約９７％以上、または約９９％以上が、約１００ｎｍ～約３００ｎｍの直径を有する。

【0270】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以上、または約９５％以上、または約９７％以上、または約９９％以上が、約２００ｎｍ～約３５０ｎｍの直径を有する。

【0271】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以上、または約９５％以上、または約９７％以上、または約９９％以上が、約１００ｎｍ～約６００ｎｍの直径を有する。

【0272】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以上、または約９５％以上、または約９７％以上、または約９９％以上が、約４００ｎｍ～約６００ｎｍの直径を有する。

【0273】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以上、または約９５％以上、または約９７％以上、または約９９％以上が、約２００ｎｍ～約２００ｎｍの直径を有する。

【0274】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以上、または約９５％以上、または約９７％以上、または約９９％以上が、約３０～約１００ｎｍ及び／または約３０～約４００ｎｍ及び／または約１００ｎｍ～約２００ｎｍ及び／または約１００ｎｍ～約３００ｎｍ及び／または約２００ｎｍ～約３５０ｎｍ及び／または約４００ｎｍ～約６００ｎｍの直径を有する。

【0275】

複数の実施形態では、本組成物は、異なる直径を有する小胞の様々な亜集団を含む。例えば、複数の実施形態では、本組成物は、直径約５０ｎｍの亜集団、直径約１５０ｎｍの亜集団、直径約２００ｎｍの亜集団、直径約２５０ｎｍの亜集団、直径約３００ｎｍの亜集団、直径約４００ｎｍの亜集団、直径約５００ｎｍの亜集団、及び直径約６００ｎｍの亜集団のうちの１つ以上（例えば、１つ、または２つ、または３つ、または４つ）を含む。複数の実施形態では、本組成物は、直径約４５ｎｍの亜集団、直径約１３５ｎｍの亜集団、直径約２８５ｎｍの亜集団、及び直径約５２５ｎｍの亜集団のうちの１つ以上（例えば、１つ、または２つ、または３つ、または４つ）を含む。

【0276】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以上、または約９５％以上、または約９７％以上、または約９９％以上が、直径約５０ｎｍ及び／または直径約１５０ｎｍ及び／または直径約３００ｎｍ及び／または直径約５００ｎｍを有する。

【0277】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞集団は、以下の特徴を呈する：
ａ）集団中の巨核球由来細胞外小胞の約８０％以上、約８５％以上、約９０％以上、約９５％以上、約９７％以上、または約９９％以上が、核を実質的に含まない、
ｂ）巨核球由来細胞外小胞の約９０％以上、または約９５％以上、または約９７％以上、または約９９％以上が、約１００ｎｍ～約６００ｎｍの直径を有する、
ｃ）集団中の巨核球由来細胞外小胞の約４０％以上、約５０％以上、約６０％以上、約７０％以上、約８０％以上、または約９０％以上が、ＣＤ４１を有する、及び
ｄ）集団が、約１×１０^７個以上、約１．５×１０^７個以上、約５×１０^７個以上、約１×１０^８個以上、約１．５×１０^８個以上、約５×１０^８個以上、約１×１０^９個以上、約５×１０^９個以上、約１×１０^１０個以上、または約１×１０^１０個以上の巨核球由来細胞外小胞を含む。

【0278】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞集団は、以下の特徴を呈する：
ａ）集団中の巨核球由来細胞外小胞の約８０％以上、約８５％以上、約９０％以上、約９５％以上、約９７％以上、または約９９％以上が、核を実質的に含まない、
ｂ）巨核球由来細胞外小胞の約９０％以上、または約９５％以上、または約９７％以上、または約９９％以上が、約１００ｎｍ～約６００ｎｍの直径を有する、
ｃ）集団中の巨核球由来細胞外小胞の約４０％以上、約５０％以上、約６０％以上、約７０％以上、約８０％以上、または約９０％以上が、ＣＤ６１を有する、及び
ｄ）集団が、約１×１０^７個以上、約１．５×１０^７個以上、約５×１０^７個以上、約１×１０^８個以上、約１．５×１０^８個以上、約５×１０^８個以上、約１×１０^９個以上、約５×１０^９個以上、約１×１０^１０個以上、または約１×１０^１０個以上の巨核球由来細胞外小胞を含む。

【0279】

巨核球由来細胞外小胞集団における核の量を決定するためのあらゆる方法が、本開示によって企図される。方法の非限定的な例としては、巨核球由来細胞外小胞をＤＲＡＱ５などの核染色で染色することが挙げられ、この際、染色の欠如は、巨核球由来細胞外小胞が核を実質的に含まないことを示す。

【0280】

巨核球由来細胞外小胞の供給源及び特徴付け
巨核球は、ＣＤ３４^＋細胞区画内に含まれている、造血幹細胞及び前駆細胞に由来する大きい多倍体細胞である。複数の実施形態では、巨核球は、ＣＤ４１、ＣＤ６２Ｐ、ＧＰＶＩ、ＣＬＥＣ－２、ＣＤ４２ｂ、及びＣＤ６１のうちの１つ以上の発現及び／または存在に特徴付けられる。複数の実施形態では、巨核球は、ＣＤ４２ｂ＋、ＣＤ６１＋、及びＤＮＡ＋のうちの１つ以上である。成熟巨核球の形態学的特徴の１つは、大きい多葉核の発達である。成熟巨核球は、増殖を止めることができるが、エンドミトーシスによりそれらのＤＮＡ含量を増加させ続け、それに並行して、細胞サイズも増大させる。

【0281】

複数の実施形態では、細胞外小胞に加えて、巨核球は、前血小板及び血小板前駆体ならびに血小板様粒子を脱落させることができる。これらの脱落部分は、血小板に成熟することができる。複数の実施形態では、前血小板及び血小板前駆体ならびに血小板様粒子は全て異なる産物であり、これらは、サイズ、形態、バイオマーカーの発現及び／または存在、ならびに機能によって区別され得る。

【0282】

巨核球は、多能性造血幹細胞（ＨＳＣ）前駆体に由来する。ＨＳＣは、主に肝臓、腎臓、脾臓、及び骨髄で産生され、それらが受け取るシグナルに応じて様々な血液細胞を産生することができる。

【0283】

トロンボポエチン（ＴＰＯ）は、ＨＳＣの巨核球への分化を誘導するための主要なシグナルである。巨核球分化を誘導するための他の分子シグナルには、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、インターロイキン－３（ＩＬ－３）、ＩＬ－６、ＩＬ－１１、ＳＣＦ、ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（ＦＬＴ３Ｌ）、インターロイキン９（ＩＬ－９）などがある。産生の詳細は、本明細書の他の個所にも記載されている。

【0284】

複数の実施形態では、本組成物は、ヒト多能性幹細胞に由来する実質的に精製された巨核球由来細胞外小胞を含む。

【0285】

複数の実施形態では、ヒト多能性幹細胞は、初代ＣＤ３４＋造血幹細胞である。複数の実施形態では、初代ＣＤ３４＋造血幹細胞は、末梢血または臍帯血から供給される。複数の実施形態では、末梢血は、顆粒球コロニー刺激因子動員成体末梢血（ｍＰＢ）である。複数の実施形態では、ヒト多能性幹細胞は、肝臓、腎臓、脾臓、または骨髄によって産生されたＨＳＣである。複数の実施形態では、ＨＳＣは、肝臓によって産生される。複数の実施形態では、ＨＳＣは、腎臓によって産生される。複数の実施形態では、ＨＳＣは、脾臓によって産生される。複数の実施形態では、ＨＳＣは、骨髄によって産生される。複数の実施形態では、ＨＳＣは、ＴＰＯ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－３、ＩＬ－６、ＩＬ－１１、ＳＣＦ、Ｆｌｔ３Ｌ、ＩＬ－９などのうちの１つ以上から選択される分子シグナルを受け取ることによって巨核球に分化するように誘導される。複数の実施形態では、分子シグナルは、ＴＰＯである。複数の実施形態では、分子シグナルは、ＧＭ－ＣＳＦである。複数の実施形態では、分子シグナルは、ＩＬ－３である。複数の実施形態では、分子シグナルは、ＩＬ－６である。複数の実施形態では、分子シグナルは、ＩＬ－１１である。複数の実施形態では、分子シグナルは、ＩＬ－６である。複数の実施形態では、分子シグナルは、ＳＣＦである。複数の実施形態では、分子シグナルは、ＩＬ－６である。複数の実施形態では、分子シグナルは、Ｆｌｔ３Ｌである。複数の実施形態では、分子シグナルは、ＩＬ－６である。複数の実施形態では、分子シグナルは、ＩＬ－９である。

【0286】

複数の実施形態では、分子シグナルは、ケモカインである。

【0287】

複数の実施形態では、分子シグナルは、巨核球形成に向かう細胞の運命決定を促進する。

【0288】

複数の実施形態では、分子シグナルは、エリスロポエチン（ＥＰＯ）を欠いている。

【0289】

複数の実施形態では、ヒト多能性幹細胞は、胚性幹細胞（ＥＳＣ）である。ＥＳＣは、ＥＳＣが得られる方法にかかわらず、体の３つの胚葉全てから細胞を形成する能力を有する。ＥＳＣは、機能的に、以下の特徴のうちの１つ以上を有することができる幹細胞である：（ａ）免疫不全マウスに移植したときに奇形腫を誘発することができる、（ｂ）３つの胚葉全ての細胞型（すなわち、外胚葉、中胚葉、及び内胚葉細胞型）に分化することができる、（ｃ）胚性幹細胞の１つ以上のマーカー（例えば、Ｏｃｔ ４、アルカリホスファターゼ、ＳＳＥＡ－３表面抗原、ＳＳＥＡ－４表面抗原、ＳＳＥＡ－５表面抗原、Ｎａｎｏｇ、ＴＲＡ－ｌ－６０、ＴＲＡ－１－８１、ＳＯＸ２、ＲＥＸ１など）を発現する。

【0290】

複数の実施形態では、ヒト多能性幹細胞は、誘導多能性幹細胞（ｉＰＣｓ）である。成熟分化細胞は、胚性幹細胞様の特性を有する胚様細胞にリプログラミング及び脱分化することができる。ｉＰＳＣは、胎児体細胞、生後体細胞、新生児体細胞、幼若体細胞、または成体体細胞を使用して生成することができる。線維芽細胞は、例えば、ある特定の転写因子のレトロウイルス導入により、多能性に逆転させることができ、その結果、ｉＰＳがもたらされる。複数の実施形態では、ｉＰＳは、線維芽細胞、ケラチノサイト、メラニン細胞血液細胞、骨髄細胞、脂肪細胞、及び組織常在性前駆細胞を含む様々な組織から生成される。複数の実施形態では、ｉＰＳＣは、１つ以上のリプログラミング因子またはＹａｍａｎａｋａ因子、例えば、Ｏｃｔ３／４、Ｓｏｘ２、Ｋｌｆ４、及びｃ－Ｍｙｃを介して生成される。ある特定の実施形態では、少なくとも２つ、３つ、または４つのリプログラミング因子が体細胞で発現されて、体細胞が再プログラミングされる。

【0291】

多能性細胞が分化を完了して成熟巨核球になると、核を有さず、かつ直径約１～３ｕｍであり得る血小板を産生するプロセスを開始する。巨核球は、細胞外小胞も産生する。

【0292】

複数の実施形態では、本巨核球は、血小板よりも巨核球由来細胞外小胞の産生を好むように誘導される。すなわち、複数の実施形態では、本巨核球は、血小板よりも実質的に多くの巨核球由来細胞外小胞を産生する。複数の実施形態では、本組成物は、血小板を実質的に含まない。複数の実施形態では、本発明の組成物は、約１０％未満、または約７％未満、または約５％未満、または約３％未満、または約２％未満、または約１％未満の血小板を含む。

【0293】

複数の実施形態では、本組成物は、血小板に由来する細胞外小胞を実質的に含まない。複数の実施形態では、本発明の組成物は、約１０％未満、または約７％未満、または約５％未満、または約３％未満、または約２％未満、または約１％未満の血小板に由来する細胞外小胞を含む。

【0294】

複数の実施形態では、本開示の巨核球由来細胞外小胞は、細胞小器官を実質的に含まない。汚染細胞小器官の非限定的な例としては、ミトコンドリア及び核が挙げられるが、これらに限定されない。複数の実施形態では、本開示の巨核球由来細胞外小胞は、ミトコンドリアを実質的に含まない。複数の実施形態では、本開示の巨核球由来細胞外小胞を含む調製物は、エクソソームを実質的に含まない。複数の実施形態では、本開示の巨核球由来細胞外小胞は、細胞小器官を含む。

【0295】

複数の実施形態では、本開示の巨核球由来細胞外小胞は、核を実質的に含まない。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の約８０％～約１００％、約８５％～約１００％、約９０％～約１００％、または約９５％～約１００％が、核を実質的に含まない。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の約約８０％超、約８５％超、約９０％超、約９５％超、約９９％超、または約１００％が、核を実質的に含まない。

【0296】

標的化
巨核球由来細胞外小胞は、様々な標的細胞にホーミングすることができる。巨核球由来細胞外小胞が標的細胞に結合すると、これらは、標的細胞による巨核球由来細胞外小胞の内在化の様々なメカニズムを介して、カーゴを放出することができる。

【0297】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、インビボでの骨髄へのホーミングに好適である。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、インビトロでの骨髄へのホーミングに好適である。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、別の細胞型、または別の臓器、または組み合わされた全ての他の細胞型よりも約２倍、または約３倍、または約４倍、または約５倍、または約６倍、または約７倍、または約８倍、または約９倍、または約１０倍高い特異性で、骨髄にインビボでホーミングする。

【0298】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、骨髄中の１つ以上の骨髄産生（ｍｙｅｌｏｐｏｅｉｔｉｃ）細胞にインビボでホーミングする。複数の実施形態では、１つ以上の骨髄造血性細胞は、骨髄芽球、前骨髄球、好中球性骨髄球、好酸球性骨髄球、好中球性後骨髄球、好酸球性後骨髄球、好中球桿状球、好酸性桿状球、分葉核好中球、分葉核好酸球、好塩基球、及びマスト細胞から選択される。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、骨髄中の１つ以上の赤血球産生（ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｃ）細胞にインビボでホーミングする。複数の実施形態では、１つ以上の赤血球産生細胞は、前正赤芽球、好塩基性正赤芽球、多染性正赤芽球、及び正染性正赤芽球から選択される。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、インビボで形質細胞、細網細胞、リンパ球、単球、及び巨核球のうちの１つ以上にインビボでホーミングする。

【0299】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、骨髄中の１つ以上の造血細胞にインビボでホーミングする。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、骨髄中の１つ以上の造血細胞、例えば、血小板産生細胞にインビボでホーミングする。

【0300】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、骨髄中の１つ以上の造血幹細胞にインビボでホーミングする。

【0301】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、骨髄中の１つ以上の造血幹細胞にエクスビボでホーミングする。複数の実施形態では、１つ以上の造血幹細胞は、ＣＤ４５＋ＨＳＣを含む、及び／またはそれからなる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、骨髄中の１つ以上の造血幹細胞にエクスビボでホーミングし、この際、造血幹細胞は、長期造血幹細胞を含む、及び／またはそれからなる。複数の実施形態では、長期造血幹細胞は、ＣＤ４５＋／Ｌｉｎ－／ＣＤ１５０＋／ＣＤ２０１＋／ＣＤ４８－ ＨＳＣを含む、及び／またはそれからなる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、骨髄中の１つ以上の造血幹細胞にエクスビボでホーミングし、この際、造血幹細胞は、多能性造血幹細胞を含む、及び／またはそれからなる。複数の実施形態では、多能性造血幹細胞は、系譜陰性／ｃ－Ｋｉｔ＋／Ｓｃａ－１＋（ＬＳＫ）ＨＳＣを含む、及び／またはそれからなる。

【0302】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、インビボでのＨＳＣへのホーミングに好適である。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、インビトロでのＨＳＣへのホーミングに好適である。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、エクスビボでのＨＳＣへのホーミングに好適である。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、別の細胞型、または別の臓器、または組み合わされた全ての他の細胞型よりも約２倍高い特異性で、ＨＳＣにインビボでホーミングする。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、別の細胞型、または別の臓器、または組み合わされた全ての他の細胞型よりも約３倍高い特異性で、ＨＳＣにインビボでホーミングする。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、別の細胞型、または別の臓器、または組み合わされた全ての他の細胞型よりも約４倍高い特異性で、ＨＳＣにインビボでホーミングする。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、別の細胞型、または別の臓器、または組み合わされた全ての他の細胞型よりも約５倍高い特異性で、ＨＳＣにインビボでホーミングする。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、別の細胞型、または別の臓器、または組み合わされた全ての他の細胞型よりも約６倍高い特異性で、ＨＳＣにインビボでホーミングする。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、別の細胞型、または別の臓器、または組み合わされた全ての他の細胞型よりも約７倍高い特異性で、ＨＳＣにインビボでホーミングする。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、別の細胞型、または別の臓器、または組み合わされた全ての他の細胞型よりも約８倍高い特異性で、ＨＳＣにインビボでホーミングする。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、別の細胞型、または別の臓器、または組み合わされた全ての他の細胞型よりも約９倍高い特異性で、ＨＳＣにインビボでホーミングする。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、別の細胞型、または別の臓器、または組み合わされた全ての他の細胞型よりも約１０倍高い特異性で、ＨＳＣにインビボでホーミングする。

【0303】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、エクスビボでのＨＳＣへのホーミングに好適である。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、エクスビボでのＨＳＣへのホーミングに好適である。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、エクスビボでのＨＳＣへのホーミングに好適である。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、別の細胞型、または別の臓器、または組み合わされた全ての他の細胞型よりも約２倍高い特異性で、ＨＳＣにエクスビボでホーミングする。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、別の細胞型、または別の臓器、または組み合わされた全ての他の細胞型よりも約３倍高い特異性で、ＨＳＣにエクスビボでホーミングする。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、別の細胞型、または別の臓器、または組み合わされた全ての他の細胞型よりも約４倍高い特異性で、ＨＳＣにエクスビボでホーミングする。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、別の細胞型、または別の臓器、または組み合わされた全ての他の細胞型よりも約５倍高い特異性で、ＨＳＣにエクスビボでホーミングする。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、別の細胞型、または別の臓器、または組み合わされた全ての他の細胞型よりも約６倍高い特異性で、ＨＳＣにエクスビボでホーミングする。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、別の細胞型、または別の臓器、または組み合わされた全ての他の細胞型よりも約７倍高い特異性で、ＨＳＣにエクスビボでホーミングする。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、別の細胞型、または別の臓器、または組み合わされた全ての他の細胞型よりも約８倍高い特異性で、ＨＳＣにエクスビボでホーミングする。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、別の細胞型、または別の臓器、または組み合わされた全ての他の細胞型よりも約９倍高い特異性で、ＨＳＣにエクスビボでホーミングする。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、別の細胞型、または別の臓器、または組み合わされた全ての他の細胞型よりも約１０倍高い特異性で、ＨＳＣにエクスビボでホーミングする。

【0304】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、骨髄中及び／または骨髄由来の１つ以上の造血幹細胞及び／またはＨＳＣ集団及び／または複数のＨＳＣにエクスビボでホーミングする。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、１つ以上の造血幹細胞及び／またはＨＳＣ集団及び／または複数のＨＳＣへのインビボでのホーミングに好適である。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、１つ以上の造血幹細胞及び／またはＨＳＣ集団及び／または複数のＨＳＣへのインビトロでのホーミングに好適である。複数の実施形態では、ＨＳＣ及び／または複数のＨＳＣの集団中、ＨＳＣの約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％超が、カーゴをロードしたＭｋＥＶ及び／またはカーゴをロードしたＭｋＥＶ由来のカーゴが含まれるが、これらに限定されない、本開示のＭｋＥＶを含む。複数の実施形態では、ＨＳＣは、系譜陰性（Ｌｉｎ－）ＨＳＣである。複数の実施形態では、ＨＳＣは、多能性ＨＳＣである。多能性ＨＳＣの非限定的な実施形態としては、系譜陰性／ｃ－Ｋｉｔ＋／Ｓｃａ－１＋（ＬＳＫ）ＨＳＣが挙げられる。複数の実施形態では、ＨＳＣは、長期ＨＳＣである。複数の実施形態では、ＨＳＣは、ＣＤ４５＋ＨＳＣである。複数の実施形態では、ＨＳＣは、ＣＤ４５＋／Ｌｉｎ－／ＣＤ１５０＋／ＣＤ２０１＋／ＣＤ４８－ＨＳＣである。

【0305】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、骨髄中及び／または骨髄由来の１つ以上の造血幹細胞及び／またはＨＳＣ集団及び／または複数のＨＳＣにエクスビボでホーミングする。複数の実施形態では、ＨＳＣ及び／または複数のＨＳＣの集団の約５０％が、カーゴをロードしたＭｋＥＶ及び／またはカーゴをロードしたＭｋＥＶ由来のカーゴを含むが、これらに限定されない、本開示のＭｋＥＶを含む。複数の実施形態では、ＨＳＣ及び／または複数のＨＳＣの集団の約５０％以下が、カーゴをロードしたＭｋＥＶ及び／またはカーゴをロードしたＭｋＥＶ由来のカーゴを含むが、これらに限定されない、本開示のＭｋＥＶを含む。複数の実施形態では、ＨＳＣ及び／または複数のＨＳＣの集団の約３０％が、カーゴをロードしたＭｋＥＶ及び／またはカーゴをロードしたＭｋＥＶ由来のカーゴを含むが、これらに限定されない、本開示のＭｋＥＶを含む。複数の実施形態では、ＨＳＣ及び／または複数のＨＳＣの集団の約３０％以下が、カーゴをロードしたＭｋＥＶ及び／またはカーゴをロードしたＭｋＥＶ由来のカーゴを含むが、これらに限定されない、本開示のＭｋＥＶを含む。複数の実施形態では、ＨＳＣは、系譜陰性（Ｌｉｎ－）ＨＳＣを含む、及び／またはそれからなる。

【0306】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、骨髄中及び／または骨髄由来の１つ以上の造血幹細胞及び／またはＨＳＣ集団及び／または複数のＨＳＣにエクスビボでホーミングする。複数の実施形態では、ＨＳＣ及び／または複数のＨＳＣの集団の約３０％が、カーゴをロードしたＭｋＥＶ及び／またはカーゴをロードしたＭｋＥＶ由来のカーゴを含むが、これらに限定されない、本開示のＭｋＥＶを含む。複数の実施形態では、ＨＳＣ及び／または複数のＨＳＣの集団の約３０％以下が、カーゴをロードしたＭｋＥＶ及び／またはカーゴをロードしたＭｋＥＶ由来のカーゴを含むが、これらに限定されない、本開示のＭｋＥＶを含む。複数の実施形態では、ＨＳＣ及び／または複数のＨＳＣの集団の約５０％が、カーゴをロードしたＭｋＥＶ及び／またはカーゴをロードしたＭｋＥＶ由来のカーゴを含むが、これらに限定されない、本開示のＭｋＥＶを含む。複数の実施形態では、ＨＳＣ及び／または複数のＨＳＣの集団の約５０％以下が、カーゴをロードしたＭｋＥＶ及び／またはカーゴをロードしたＭｋＥＶ由来のカーゴを含むが、これらに限定されない、本開示のＭｋＥＶを含む。複数の実施形態では、ＨＳＣは、系譜陰性／ｃ－Ｋｉｔ＋／Ｓｃａ－１＋（ＬＳＫ）ＨＳＣを含む、及び／またはそれからなる。

【0307】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、インビボでのリンパ細胞へのホーミングに好適である。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、インビトロでのリンパ細胞へのホーミングに好適である。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、別の細胞型、または別の臓器、または組み合わされた全ての他の細胞型よりも約２倍高い特異性で、リンパ細胞にインビボでホーミングする。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、別の細胞型、または別の臓器、または組み合わされた全ての他の細胞型よりも約３倍高い特異性で、リンパ細胞にインビボでホーミングする。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、別の細胞型、または別の臓器、または組み合わされた全ての他の細胞型よりも約４倍高い特異性で、リンパ細胞にインビボでホーミングする。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、別の細胞型、または別の臓器、または組み合わされた全ての他の細胞型よりも約５倍高い特異性で、リンパ細胞にインビボでホーミングする。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、別の細胞型、または別の臓器、または組み合わされた全ての他の細胞型よりも約６倍高い特異性で、リンパ細胞にインビボでホーミングする。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、別の細胞型、または別の臓器、または組み合わされた全ての他の細胞型よりも約７倍高い特異性で、リンパ細胞にインビボでホーミングする。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、別の細胞型、または別の臓器、または組み合わされた全ての他の細胞型よりも約８倍高い特異性で、リンパ細胞にインビボでホーミングする。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、別の細胞型、または別の臓器、または組み合わされた全ての他の細胞型よりも約９倍高い特異性で、リンパ細胞にインビボでホーミングする。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、別の細胞型、または別の臓器、または組み合わされた全ての他の細胞型よりも約１０倍高い特異性で、リンパ細胞にインビボでホーミングする。

【0308】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、インビボでの制御性Ｔ細胞へのホーミングに好適である。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、インビトロでの制御性Ｔ細胞へのホーミングに好適である。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、別の細胞型、または別の臓器、または組み合わされた全ての他の細胞型よりも約２倍高い特異性で、制御性Ｔ細胞にインビボでホーミングする。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、別の細胞型、または別の臓器、または組み合わされた全ての他の細胞型よりも約３倍高い特異性で、制御性Ｔ細胞にインビボでホーミングする。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、別の細胞型、または別の臓器、または組み合わされた全ての他の細胞型よりも約４倍高い特異性で、制御性Ｔ細胞にインビボでホーミングする。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、別の細胞型、または別の臓器、または組み合わされた全ての他の細胞型よりも約５倍高い特異性で、制御性Ｔ細胞にインビボでホーミングする。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、別の細胞型、または別の臓器、または組み合わされた全ての他の細胞型よりも約６倍高い特異性で、制御性Ｔ細胞にインビボでホーミングする。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、別の細胞型、または別の臓器、または組み合わされた全ての他の細胞型よりも約７倍高い特異性で、制御性Ｔ細胞にインビボでホーミングする。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、別の細胞型、または別の臓器、または組み合わされた全ての他の細胞型よりも約８倍高い特異性で、制御性Ｔ細胞にインビボでホーミングする。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、別の細胞型、または別の臓器、または組み合わされた全ての他の細胞型よりも約９倍高い特異性で、制御性Ｔ細胞にインビボでホーミングする。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、別の細胞型、または別の臓器、または組み合わされた全ての他の細胞型よりも約１０倍高い特異性で、制御性Ｔ細胞にインビボでホーミングする。

【0309】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、インビボでの肝臓細胞へのホーミングに好適である。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、エクスビボでの肝臓細胞へのホーミングに好適である。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、インビトロでの肝臓細胞へのホーミングに好適である。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、別の細胞型、または別の臓器、または組み合わされた全ての他の細胞型よりも約２倍高い特異性で、肝臓細胞にインビボでホーミングする。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、別の細胞型、または別の臓器、または組み合わされた全ての他の細胞型よりも約３倍高い特異性で、肝臓細胞にインビボでホーミングする。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、別の細胞型、または別の臓器、または組み合わされた全ての他の細胞型よりも約４倍高い特異性で、肝臓細胞にインビボでホーミングする。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、別の細胞型、または別の臓器、または組み合わされた全ての他の細胞型よりも約５倍高い特異性で、肝臓細胞にインビボでホーミングする。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、別の細胞型、または別の臓器、または組み合わされた全ての他の細胞型よりも約６倍高い特異性で、肝臓細胞にインビボでホーミングする。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、別の細胞型、または別の臓器、または組み合わされた全ての他の細胞型よりも約７倍高い特異性で、肝臓細胞にインビボでホーミングする。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、別の細胞型、または別の臓器、または組み合わされた全ての他の細胞型よりも約８倍高い特異性で、肝臓細胞にインビボでホーミングする。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、別の細胞型、または別の臓器、または組み合わされた全ての他の細胞型よりも約９倍高い特異性で、肝臓細胞にインビボでホーミングする。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、別の細胞型、または別の臓器、または組み合わされた全ての他の細胞型よりも約１０倍高い特異性で、肝臓細胞にインビボでホーミングする。

【0310】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、インビボでの脾臓細胞へのホーミングに好適である。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、エクスビボでの脾臓細胞へのホーミングに好適である。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、インビトロでの脾臓細胞へのホーミングに好適である。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、別の細胞型、または別の臓器、または組み合わされた全ての他の細胞型よりも約２倍高い特異性で、脾臓細胞にインビボでホーミングする。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、別の細胞型、または別の臓器、または組み合わされた全ての他の細胞型よりも約３倍高い特異性で、脾臓細胞にインビボでホーミングする。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、別の細胞型、または別の臓器、または組み合わされた全ての他の細胞型よりも約４倍高い特異性で、脾臓細胞にインビボでホーミングする。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、別の細胞型、または別の臓器、または組み合わされた全ての他の細胞型よりも約５倍高い特異性で、脾臓細胞にインビボでホーミングする。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、別の細胞型、または別の臓器、または組み合わされた全ての他の細胞型よりも約６倍高い特異性で、脾臓細胞にインビボでホーミングする。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、別の細胞型、または別の臓器、または組み合わされた全ての他の細胞型よりも約７倍高い特異性で、脾臓細胞にインビボでホーミングする。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、別の細胞型、または別の臓器、または組み合わされた全ての他の細胞型よりも約８倍高い特異性で、脾臓細胞にインビボでホーミングする。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、別の細胞型、または別の臓器、または組み合わされた全ての他の細胞型よりも約９倍高い特異性で、脾臓細胞にインビボでホーミングする。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、別の細胞型、または別の臓器、または組み合わされた全ての他の細胞型よりも約１０倍高い特異性で、脾臓細胞にインビボでホーミングする。

【0311】

複数の実施形態では、送達能を有する治療薬を移送するための本方法は、（ａ）巨核球由来細胞外小胞を得ることと、（ｂ）当該巨核球由来細胞外小胞を治療薬とともにインキュベートして、当該治療薬を、当該巨核球由来細胞外小胞の内腔に移入させるようにし、送達能を有する治療薬を産出することと、（ｃ）当該送達能を有する治療薬を患者に投与すること、または当該送達能を有する治療薬を生体細胞とインビトロで接触させて、接触した当該生体細胞を患者に投与することと、を含む。

【0312】

複数の実施形態では、送達能を有する治療薬を移送するための本方法は、（ａ）巨核球由来細胞外小胞を得ることと、（ｂ）当該巨核球由来細胞外小胞を治療薬とともにインキュベートして、当該治療薬を、当該巨核球由来細胞外小胞の表面と会合させるようにし、送達能を有する治療薬を産出することと、（ｃ）当該送達能を有する治療薬を患者に投与すること、または当該送達能を有する治療薬を生体細胞とインビトロで接触させて、接触した当該生体細胞を患者に投与することと、を含む。

【0313】

一態様では、本開示は、送達能を有する治療薬を移送するためのエクスビボ方法を提供する。複数の実施形態では、本方法は、（ａ）巨核球由来細胞外小胞を得ることと、（ｂ）当該巨核球由来細胞外小胞を治療薬とともにインキュベートして、当該治療薬を、当該巨核球由来細胞外小胞の内腔に移入させるようにし、送達能を有する治療薬を産出することと、（ｃ）患者から生体細胞を得ることと、（ｄ）当該送達能を有する治療薬を患者に投与すること、または当該送達能を有する治療薬を当該生体細胞とインビトロで接触させて、接触した当該生体細胞を当該患者に投与することと、を含む。

【0314】

複数の実施形態では、本方法は、（ａ）巨核球由来細胞外小胞を得ることと、（ｂ）当該巨核球由来細胞外小胞を治療薬とともにインキュベートして、当該治療薬を、当該巨核球由来細胞外小胞の表面と会合させるようにし、送達能を有する治療薬を産出することと、（ｃ）患者から生体細胞を得ることと、（ｄ）当該送達能を有する治療薬を患者に投与すること、または当該送達能を有する治療薬を当該生体細胞とインビトロで接触させて、接触した当該生体細胞を当該患者に投与することと、を含む。

【0315】

複数の実施形態では、送達能を有する治療薬と生体細胞との接触は、送達能を有する治療薬を生体細胞と共培養して、送達能を有する治療薬から生体細胞へのカーゴの移送を提供することを含む。

【0316】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、患者の細胞上の細胞表面受容体に結合する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、ステップ（ｃ）の接触した生体細胞上の細胞表面受容体に結合する。複数の実施形態では、生体細胞は、がん細胞、腫瘍細胞、ウイルスに感染した細胞、上皮細胞、内皮細胞、神経細胞、筋肉細胞、結合組織細胞、健常細胞、疾患細胞、分化細胞、及び多能性細胞のうちの１つ以上である。

【0317】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、患者の細胞の細胞外膜と融合する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、ステップ（ｃ）の生体細胞の細胞外膜と融合する。複数の実施形態では、生体細胞は、がん細胞、腫瘍細胞、ウイルスに感染した細胞、上皮細胞、内皮細胞、神経細胞、筋肉細胞、結合組織細胞、健常細胞、疾患細胞、分化細胞、及び多能性細胞のうちの１つ以上である。

【0318】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、患者の細胞によってエンドサイトーシスされる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、ステップ（ｃ）の生体細胞によってエンドサイトーシスされる。複数の実施形態では、生体細胞は、がん細胞、腫瘍細胞、ウイルスに感染した細胞、上皮細胞、内皮細胞、神経細胞、筋肉細胞、結合組織細胞、健常細胞、疾患細胞、分化細胞、及び多能性細胞のうちの１つ以上である。

【0319】

巨核球由来細胞外小胞を産生する方法
複数の実施形態では、細胞培養プロセスは、初代ヒト末梢血ＣＤ３４＋ＨＳＣから同種巨核球由来細胞外小胞を産生するように適合されている。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、商用供給業者から供給された初代ヒト末梢血ＣＤ３４＋ＨＳＣを得ることと、幹細胞維持培地からＨＳＣ増殖培地に移行させることと、を含む方法によって産生される。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、初代ヒト臍帯血ＣＤ３４＋ＨＳＣを得ることを含む方法によって産生される。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、初代ヒト骨髄ＣＤ３４＋ＨＳＣを得ることを含む方法によって産生される。複数の実施形態では、本方法は、ＨＳＣ培養物を巨核球分化培地に入れることと、培養上清から巨核球由来細胞外小胞を収集することと、を更に伴う。したがって、複数の実施形態では、本巨核球由来細胞外小胞は、出発ＣＤ３４＋ＨＳＣから産生される。複数の実施形態では、製造された本巨核球由来細胞外小胞は、操作されており、特有のバイオマーカーを含む。

【0320】

複数の実施形態では、巨核球分化は、ＣＤ４１、ＣＤ６１、ＣＤ４２ｂ、巨核球特異的細胞骨格タンパク質 β１－チューブリン、アルファ顆粒成分（例えば、血小板因子４及びフォン・ヴィレブランド因子）、分泌顆粒、ならびに超構造的特徴（例えば、陥入した膜系、高密度の管系、多小胞体）のうちの１つ以上のバイオマーカー発現及び／または存在によって確認される。

【0321】

複数の実施形態では、巨核球は、直径約１００～約６００ｎｍ（平均約２００ｎｍ）、ＤＮＡ－、かつＣＤ４１＋である、約５００～約１５００個の巨核球由来細胞外小胞／細胞を産出する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、接線流濾過によって更に単離／濃縮され、約１．５×１０^８巨核球由来細胞外小胞／ｍＬの標的濃度でパッケージングされる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、巨核球及び血小板特異的バイオマーカー、ＲＮＡ、ならびに細胞質タンパク質のロバストな発現及び／または存在を呈する。

【0322】

複数の実施形態では、ナノ粒子分析、電子顕微鏡法、フローサイトメトリー、及び／またはウエスタンブロットを使用して、巨核球由来細胞外小胞のバイオマーカー発現及び／または存在及び組成を確認する。

【0323】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、エリスロポエチンが添加されていない状態で生成された巨核球から単離される。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、トロンボポエチンが添加された状態で生成された巨核球から単離される。

【0324】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、（例えば、源細胞への）生体力学的ストレスの外部適用を実質的に含まない方法を使用して、巨核球などの源細胞から単離される。生体力学的ストレスの外部適用を実質的に含まない単離方法の非限定的な例としては、接線流濾過及び分画遠心分離が挙げられる。

【0325】

複数の実施形態では、製造された本巨核球由来細胞外小胞は、核酸を実質的に含まない。複数の実施形態では、製造された巨核球由来細胞外小胞は、自己核酸を実質的に含まない。複数の実施形態では、製造された巨核球由来細胞外小胞は、ＲＮＡを実質的に含まない。複数の実施形態では、製造された巨核球由来細胞外小胞は、核酸を含む。複数の実施形態では、製造された巨核球由来細胞外小胞は、自己核酸を含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、自己ＲＮＡを含む。ＲＮＡの非限定的な例としては、ｒＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、調節ＲＮＡ、及び／またはノンコーディングＲＮＡ及びコーディングＲＮＡが挙げられる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、小胞が由来する細胞由来のＲＮＡを実質的に含まない。非限定的な例では、巨核球由来細胞外小胞は、小胞を調製する方法及び／または天然ＲＮＡを除去するためのＲＮａｓｅの使用に起因して、ＲＮＡを含まない。

【0326】

複数の実施形態では、製造された本巨核球由来細胞外小胞は、自己ＤＮＡを実質的に含まない。複数の実施形態では、本巨核球由来細胞外小胞は、小胞が由来する細胞由来のＤＮＡを実質的に含まない。非限定的な例では、巨核球由来細胞外小胞は、小胞を調製する方法及び／または天然ＤＮＡを除去するＤＮａｓｅの使用に起因して、ＤＮＡを含まない。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、（ａ）巨核球、（ｂ）巨核球由来血小板、及び（ｃ）血小板に由来する細胞外小胞のうちの１つ以上を実質的に含まない。

【0327】

複数の実施形態では、凍結顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）を動員したヒト末梢血ＣＤ３４＋細胞を得て、培養して巨核球を得た後に、培養前にＣＤ４１＋細胞（巨核球）を濃縮し、その後、フローサイトメーターまたはナノ粒子分析により細胞培養物中の巨核球由来細胞外小胞のＣＤ４１発現及び／または存在及び濃度を測定する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、一連の遠心分離、例えば、漸増速度／力によって生成される。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、（ａ）例えば、約１０分間の、例えば、約１５０×ｇでの遠心分離により、培養培地から細胞を除去すること、（ｂ）例えば、約１０分間の、例えば、約１０００×ｇでの遠心分離より、血小板様粒子（ＰＬＰ）及び細胞残屑を除去すること、及び（ｃ）例えば、約４℃で、例えば、約１時間の、例えば、約２５，０００ｒｐｍ（３８０００×ｇ）での超遠心分離により、上清から巨核球由来細胞外小胞を濃縮することによって生成される。

【0328】

複数の実施形態では、異なるｐＨ及びｐＯ_２またはｐＣＯ_２ならびに異なるサイトカインカクテルとの多相培養プロセスを使用して、巨核球産生を大幅に増加させる。

【0329】

複数の実施形態では、巨核球は、（ａ）巨核球前駆細胞産生を促進する分子シグナル／因子／サイトカインカクテルとともにＣＤ３４＋ＨＳＣを培養すること、及び（ｂ）細胞を異なる条件にシフトさせて、前駆細胞から成熟巨核球を増殖させることによって生成される。複数の実施形態では、商用培地が使用される。複数の実施形態では、無血清培地が使用される。複数の実施形態では、ｐＨは、巨核球産生を増加させるようにシフトされる。複数の実施形態では、ＣＯ_２パーセントは、巨核球産生を増加させるようにシフトされる。複数の実施形態では、分子シグナル／因子／サイトカインの同一性は、巨核球産生を増加させるように変更される。複数の実施形態では、分子シグナル／因子／サイトカインカクテルは、ＴＰＯ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－３、ＩＬ－６、ＩＬ－１１、ＳＣＦ、Ｆｌｔ３Ｌ、ＩＬ－９などのうちの１つ以上を含む。

【0330】

複数の実施形態では、本産生方法は、Ｈ４Ｃ１６、Ｈ２ＡＣ１７、Ｈ３Ｃ１３、ＲＰＬ９Ｐ９、ＰＨＢ１、ＳＥＴＳＩＰ、Ｈ２ＡＺ１、ＸＰ３２、ＣＯＰＳ９、ＳＥＣ６１Ａ２、ＭＡＲＳ１、ＭＲＥ１１、ＡＴＰ５Ｆ１Ｃ、Ｈ４Ｃ１、Ｈ２ＡＣ２０、Ｈ３Ｃ１、Ｈ２ＢＣ１２、ＦＣＳＫ、ＣＡＶＩＮ２、ＹＡＲＳ１、Ｈ３Ｃ１５、ＭＡＣＲＯＨ２Ａ１、Ｈ２ＡＸ、Ｈ３－２、ＳＥＬＥＮＯＦ、ＭＰＩＧ６Ｂ、セプチン７、ＡＡＲＳ１、Ｈ１－５、Ｈ１－２、Ｈ２ＡＺ２、ＧＡＲＳ１、ＬＡＲＳ１、ＴＨＰＯ、ＲＡＣＫ１、Ｈ３－３Ａ、ＣＣＤＣ１９１、Ｈ２ＢＣ１９Ｐ、セプチン２、ＥＰＲＳ１、ＴＡＲＳ１、ＡＴＰ５Ｆ１Ｂ、ＥＲＢＩＮ、ＤＡＲＳ１、ＷＡＲＳ１、ＶＡＲＳ１、ＮＩＢＡＮ２、セプチン６、ＮＡＲＳ１、ＲＡＲＳ１、セプチン１１、セプチン５、ＳＡＲＳ１、ＮＩＢＡＮ１、ＳＮＲＰＧＰ１５、ＰＩＰ４Ｐ２、ＣＹＲＩＢ、ＣＡＲＭＩＬ１、ＫＡＲＳ１、ＩＡＲＳ１、セプチン９、Ｈ１－４、ＡＲＨＧＡＰ４５、Ｈ１－０、ＣＡＲＳ１、ＧＣＮ１、ＦＡＤＳ２、ＴＢＣ１Ｄ１３、ＧＥＴ３、ＲＯ６０、ＬＡＭＴＯＲ５、ＥＬＯＣ、Ｈ２ＡＣ１４、ＳＣＡＲＦ１、ＲＮＦ２４、ＧＣＳＡＭＬ、ＮＲＤＣ、ＥＣＰＡＳ、ＭＡＣＲＯＨ２Ａ２、ＡＴＰ５Ｆ１Ａ、ＤＭＴＮ、ＴＡＮＧＯ２、ＣＳＦ２ＲＢ、ＷＡＳＨＣ５、ＫＣＮＡ３、ＱＡＲＳ１、ＭＩＮＤＹ１、ＰＴＰＡ、ＥＸＯＣ３Ｌ２、ＰＲＵＮＥ１、ＰＬＰＢＰ、ＴＨＵＭＰＤ１、ＷＡＳＨＣ４、ＮＥＣＴＩＮ２、ＧＦＵＳ、ＡＤＧＲＥ２、ＡＫＡＰ８Ｌ、ＦＡＭ２３４Ａ、ＡＤＳＳ２、ＡＮＫＲＤ１３Ｄ、ＫＣＴ２、ＮＴ５Ｃ３Ａ、ＰＩＰ４Ｐ１、ＣＣＤＣ９、ＥＬＯＢ、ＨＰＧＤＳ、ＭＥＡＫ７、ＴＯＭＭ７０、ＳＭＩＭ１、ＨＡＲＳ１、ＡＴＰ５ＰＤ、ＯＧＡ、ＣＨＳＹ１、ＳＱＬＥ、ＳＵＳＤ６、ＩＧＫＶ１－２７、ＰＥＤＳ１－ＵＢＥ２Ｖ１、ＣＥＰ４４、ＭＹＧ１、ＮＲＲＯＳ、ＩＬ２１Ｒ、ＧＲＫ２、ＭＣＥＭＰ１、ＥＬＡＰＯＲ２、ＳＤＡＤ１、ＣＥＲＴ１、ＵＢＥ２Ｆ、ＣＡＬＨＭ５、Ｈ１－１０、ＥＩＰＲ１、ＰＢＤＣ１、ＡＲＭＨ３、ＶＩＰＡＳ３９、ＭＥＳＤ、ＰＲＯＳＥＲ２、ＲＡＢＬ６、ＦＹＢ１、Ｃ１７ｏｒｆ４９、ＲＭＤＮ３、ＫＹＡＴ３、ＴＴＭＰ、ＥＲＯ１Ａ、ＣＤ２４４、ＣＺＩＢ、ＰＬＰＰ３、ＢＡＢＡＭ２、Ｈ１－３、ＮＡＸＥ、ＥＮＳＡ、ＰＡＬＳ２、ＧＵＣＹ１Ｂ１、ＵＭＡＤ１、ＭＩＸ２３、ＰＲＸＬ２Ｂ、ＳＮＵ１３、ＲＴＲＡＦ、ＫＸＤ１、ＶＳＩＲ、ＥＰＯＲ、及びＭＡＲＣＨＦ２から選択される１つ以上のタンパク質（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）、及び／または１つ以上のタンパク質（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）をコードする１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）について結果として得られた巨核球由来細胞外小胞を特徴付けるステップを更に伴う。

【0331】

複数の実施形態では、本産生方法は、Ｈ４Ｃ１、Ｈ２ＡＣ２０、Ｈ３Ｃ１、Ｈ２ＢＣ１２、ＦＣＳＫ、ＣＡＶＩＮ２、ＹＡＲＳ１、Ｈ３Ｃ１５、ＭＡＣＲＯＨ２Ａ１、Ｈ２ＡＸ、Ｈ３－２、ＳＥＬＥＮＯＦ、ＭＰＩＧ６Ｂ、セプチン７、ＡＡＲＳ１、Ｈ１－５、Ｈ１－２、Ｈ２ＡＺ２、ＧＡＲＳ１、ＬＡＲＳ１、ＴＨＰＯ、ＲＡＣＫ１、Ｈ３－３Ａ、ＣＣＤＣ１９１、Ｈ２ＢＣ１９Ｐ、セプチン２、ＥＰＲＳ１、ＴＡＲＳ１、ＡＴＰ５Ｆ１Ｂ、ＥＲＢＩＮ、ＤＡＲＳ１、ＷＡＲＳ１、ＶＡＲＳ１、ＮＩＢＡＮ２、セプチン６、ＮＡＲＳ１、ＲＡＲＳ１、セプチン１１、セプチン５、ＳＡＲＳ１、ＮＩＢＡＮ１、ＳＮＲＰＧＰ１５、ＰＩＰ４Ｐ２、ＣＹＲＩＢ、ＣＡＲＭＩＬ１、ＫＡＲＳ１、ＩＡＲＳ１、セプチン９、Ｈ１－４、ＡＲＨＧＡＰ４５、Ｈ１－０、ＣＡＲＳ１、ＧＣＮ１、ＦＡＤＳ２、ＴＢＣ１Ｄ１３、ＧＥＴ３、ＲＯ６０、ＬＡＭＴＯＲ５、ＥＬＯＣ、Ｈ２ＡＣ１４、ＳＣＡＲＦ１、ＲＮＦ２４、ＧＣＳＡＭＬ、ＮＲＤＣ、ＥＣＰＡＳ、ＭＡＣＲＯＨ２Ａ２、ＡＴＰ５Ｆ１Ａ、ＤＭＴＮ、ＴＡＮＧＯ２、ＣＳＦ２ＲＢ、ＷＡＳＨＣ５、ＫＣＮＡ３、ＱＡＲＳ１、ＭＩＮＤＹ１、ＰＴＰＡ、ＥＸＯＣ３Ｌ２、ＰＲＵＮＥ１、ＰＬＰＢＰ、ＴＨＵＭＰＤ１、ＷＡＳＨＣ４、ＮＥＣＴＩＮ２、ＧＦＵＳ、ＡＤＧＲＥ２、ＡＫＡＰ８Ｌ、ＦＡＭ２３４Ａ、ＡＤＳＳ２、ＡＮＫＲＤ１３Ｄ、ＫＣＴ２、ＮＴ５Ｃ３Ａ、ＰＩＰ４Ｐ１、ＣＣＤＣ９、ＥＬＯＢ、ＨＰＧＤＳ、ＭＥＡＫ７、ＴＯＭＭ７０、ＳＭＩＭ１、ＨＡＲＳ１、ＡＴＰ５ＰＤ、ＯＧＡ、ＣＨＳＹ１、ＳＱＬＥ、ＳＵＳＤ６、ＩＧＫＶ１－２７、ＰＥＤＳ１－ＵＢＥ２Ｖ１、ＣＥＰ４４、ＭＹＧ１、ＮＲＲＯＳ、ＩＬ２１Ｒ、ＧＲＫ２、ＭＣＥＭＰ１、ＥＬＡＰＯＲ２、ＳＤＡＤ１、ＣＥＲＴ１、ＵＢＥ２Ｆ、ＣＡＬＨＭ５、Ｈ１－１０、ＥＩＰＲ１、ＰＢＤＣ１、ＡＲＭＨ３、ＶＩＰＡＳ３９、ＭＥＳＤ、ＰＲＯＳＥＲ２、ＲＡＢＬ６、ＦＹＢ１、Ｃ１７ｏｒｆ４９、ＲＭＤＮ３、ＫＹＡＴ３、ＴＴＭＰ、ＥＲＯ１Ａ、ＣＤ２４４、ＣＺＩＢ、ＰＬＰＰ３、ＢＡＢＡＭ２、Ｈ１－３、ＮＡＸＥ、ＥＮＳＡ、ＰＡＬＳ２、ＧＵＣＹ１Ｂ１、ＵＭＡＤ１、ＭＩＸ２３、ＰＲＸＬ２Ｂ、ＳＮＵ１３、ＲＴＲＡＦ、ＫＸＤ１、ＶＳＩＲ、ＥＰＯＲ、及びＭＡＲＣＨＦ２から選択される１つ以上のタンパク質（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）、及び／または１つ以上のタンパク質（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）をコードする１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）について結果として得られた巨核球由来細胞外小胞を特徴付けるステップを更に伴う。

【0332】

複数の実施形態では、本産生方法は、ＣＡＶＩＮ２、ＭＰＩＧ６Ｂ、ＥＲＢＩＮ、ＥＬＯＣ、ＣＳＦ２ＲＢ、ＫＣＮＡ３、ＮＥＣＴＩＮ２、ＩＬ２１Ｒ、ＭＣＥＭＰ１、ＰＲＯＳＥＲ２、ＦＹＢ１、ＣＤ２４４、及びＥＰＯＲから選択される１つ以上のタンパク質（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）、及び／または１つ以上のタンパク質（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）をコードする１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）について結果として得られた巨核球由来細胞外小胞を特徴付けるステップを更に伴う。

【0333】

複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の約０％～約５％、約０％～約１０％、約１５％～約９０％、約３０％～約８０％、または約５０％～約７０％が、Ｈ４Ｃ１６、Ｈ２ＡＣ１７、Ｈ３Ｃ１３、ＲＰＬ９Ｐ９、ＰＨＢ１、ＳＥＴＳＩＰ、Ｈ２ＡＺ１、ＸＰ３２、ＣＯＰＳ９、ＳＥＣ６１Ａ２、ＭＡＲＳ１、ＭＲＥ１１、ＡＴＰ５Ｆ１Ｃ、Ｈ４Ｃ１、Ｈ２ＡＣ２０、Ｈ３Ｃ１、Ｈ２ＢＣ１２、ＦＣＳＫ、ＣＡＶＩＮ２、ＹＡＲＳ１、Ｈ３Ｃ１５、ＭＡＣＲＯＨ２Ａ１、Ｈ２ＡＸ、Ｈ３－２、ＳＥＬＥＮＯＦ、ＭＰＩＧ６Ｂ、セプチン７、ＡＡＲＳ１、Ｈ１－５、Ｈ１－２、Ｈ２ＡＺ２、ＧＡＲＳ１、ＬＡＲＳ１、ＴＨＰＯ、ＲＡＣＫ１、Ｈ３－３Ａ、ＣＣＤＣ１９１、Ｈ２ＢＣ１９Ｐ、セプチン２、ＥＰＲＳ１、ＴＡＲＳ１、ＡＴＰ５Ｆ１Ｂ、ＥＲＢＩＮ、ＤＡＲＳ１、ＷＡＲＳ１、ＶＡＲＳ１、ＮＩＢＡＮ２、セプチン６、ＮＡＲＳ１、ＲＡＲＳ１、セプチン１１、セプチン５、ＳＡＲＳ１、ＮＩＢＡＮ１、ＳＮＲＰＧＰ１５、ＰＩＰ４Ｐ２、ＣＹＲＩＢ、ＣＡＲＭＩＬ１、ＫＡＲＳ１、ＩＡＲＳ１、セプチン９、Ｈ１－４、ＡＲＨＧＡＰ４５、Ｈ１－０、ＣＡＲＳ１、ＧＣＮ１、ＦＡＤＳ２、ＴＢＣ１Ｄ１３、ＧＥＴ３、ＲＯ６０、ＬＡＭＴＯＲ５、ＥＬＯＣ、Ｈ２ＡＣ１４、ＳＣＡＲＦ１、ＲＮＦ２４、ＧＣＳＡＭＬ、ＮＲＤＣ、ＥＣＰＡＳ、ＭＡＣＲＯＨ２Ａ２、ＡＴＰ５Ｆ１Ａ、ＤＭＴＮ、ＴＡＮＧＯ２、ＣＳＦ２ＲＢ、ＷＡＳＨＣ５、ＫＣＮＡ３、ＱＡＲＳ１、ＭＩＮＤＹ１、ＰＴＰＡ、ＥＸＯＣ３Ｌ２、ＰＲＵＮＥ１、ＰＬＰＢＰ、ＴＨＵＭＰＤ１、ＷＡＳＨＣ４、ＮＥＣＴＩＮ２、ＧＦＵＳ、ＡＤＧＲＥ２、ＡＫＡＰ８Ｌ、ＦＡＭ２３４Ａ、ＡＤＳＳ２、ＡＮＫＲＤ１３Ｄ、ＫＣＴ２、ＮＴ５Ｃ３Ａ、ＰＩＰ４Ｐ１、ＣＣＤＣ９、ＥＬＯＢ、ＨＰＧＤＳ、ＭＥＡＫ７、ＴＯＭＭ７０、ＳＭＩＭ１、ＨＡＲＳ１、ＡＴＰ５ＰＤ、ＯＧＡ、ＣＨＳＹ１、ＳＱＬＥ、ＳＵＳＤ６、ＩＧＫＶ１－２７、ＰＥＤＳ１－ＵＢＥ２Ｖ１、ＣＥＰ４４、ＭＹＧ１、ＮＲＲＯＳ、ＩＬ２１Ｒ、ＧＲＫ２、ＭＣＥＭＰ１、ＥＬＡＰＯＲ２、ＳＤＡＤ１、ＣＥＲＴ１、ＵＢＥ２Ｆ、ＣＡＬＨＭ５、Ｈ１－１０、ＥＩＰＲ１、ＰＢＤＣ１、ＡＲＭＨ３、ＶＩＰＡＳ３９、ＭＥＳＤ、ＰＲＯＳＥＲ２、ＲＡＢＬ６、ＦＹＢ１、Ｃ１７ｏｒｆ４９、ＲＭＤＮ３、ＫＹＡＴ３、ＴＴＭＰ、ＥＲＯ１Ａ、ＣＤ２４４、ＣＺＩＢ、ＰＬＰＰ３、ＢＡＢＡＭ２、Ｈ１－３、ＮＡＸＥ、ＥＮＳＡ、ＰＡＬＳ２、ＧＵＣＹ１Ｂ１、ＵＭＡＤ１、ＭＩＸ２３、ＰＲＸＬ２Ｂ、ＳＮＵ１３、ＲＴＲＡＦ、ＫＸＤ１、ＶＳＩＲ、ＥＰＯＲ、及びＭＡＲＣＨＦ２から選択される１つ以上のタンパク質（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）をコードする１つ以上のタンパク質（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）、及び／または１つ以上のタンパク質（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）をコードする１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、もしくは少なくとも５個、もしくは少なくとも１０個、もしくは少なくとも２５個、もしくは少なくとも５０個、もしくは少なくとも１００個、もしくは少なくとも１５０個、もしくは少なくとも１７５個）を含む。

【0334】

複数の実施形態では、本産生方法は、表６（本明細書の他の個所に提供される）に列記される１つ以上の核酸（例えば、少なくとも３個、または少なくとも５個、または少なくとも１０個、または少なくとも２５個、または少なくとも５０個、または少なくとも１００個、または少なくとも１５０個、または少なくとも１７５個、または少なくとも５００個、または少なくとも１０００個、または少なくとも１５００個、または少なくとも２０００個、または少なくとも２５００個）について結果として得られた巨核球由来細胞外小胞を特徴付けるステップを更に伴う。

【0335】

複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の約０％～約５％、約０％～約１０％、約１５％～約９０％、約３０％～約８０％、または約５０％～約７０％が、表６に列記される１つ以上の核酸及び／または１つ以上の核酸によってコードされる１つ以上のタンパク質を含む。

【0336】

複数の実施形態では、本産生方法は、例であって、限定されない、ナノ粒子分析、電子顕微鏡法、フローサイトメトリー、及び／またはウエスタンブロット分析により、ＣＤ５４、ＣＤ１８、ＣＤ４３、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ６２Ｐ、ＣＤ４１、ＣＤ６１、ＣＤ２１、ＣＤ５１、ＣＬＥＣ－２、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７ａ）、ＣＤ６３、ＣＤ４２ｂ、ＣＤ９、ＣＤ３１、ＣＤ４７、ＣＤ１４７、ＣＤ３２ａ、及びＧＰＶＩのうちの１つ以上について結果として得られた巨核球由来細胞外小胞を特徴付けるステップを更に伴う。複数の実施形態では、本産生方法は、例であって、限定されない、アネキシンＶの検査により、例であって、限定されない、ナノ粒子分析、電子顕微鏡法、フローサイトメトリー、及び／またはウエスタンブロット分析により、ホスファチジルセリンについて結果として得られた巨核球由来細胞外小胞を特徴付けるステップを更に伴う。

【0337】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、成熟巨核球から生成される。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、未成熟巨核球から生成される。

【0338】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞を生成するための方法は、大規模生産を可能にするように標準化される。

【0339】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞を生成するための本方法のバッチ間／ドナー間変動性は、約２０％未満、または約１５％未満、または約１０％未満、または約５％未満である。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞を生成するための方法は、バッチ間／ドナー間変動性が１２．５％未満になるように開発される。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞を生成するための方法は、バッチ間／ドナー間変動性が１０％未満になるように開発される。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞を生成するための方法は、バッチ間／ドナー間変動性が７．５％未満になるように開発される。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞を生成するための方法は、バッチ間／ドナー間変動性が５％未満になるように開発される。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞を生成するための方法は、バッチ間／ドナー間変動性が２．５％未満になるように開発される。

【0340】

複数の実施形態では、集団は、約１×１０^７個以上、約１．５×１０^７個以上、約５×１０^７個以上、１×１０^８個以上、約１．５×１０^８個以上、約５×１０^８個以上、約１×１０^９個以上、約５×１０^９個以上、約１×１０^１０個以上、または約１×１０^１０個以上の巨核球由来細胞外小胞を含む。

【0341】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、集団として単離される。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞集団は、実質的に均一である。

【0342】

複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の実質的に全てが、ＣＤ５４を含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の約０％～約５％、約０％～約１０％、約１５％～約９０％、約３０％～約８０％、または約５０％～約７０％が、ＣＤ５４を含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の約２０％超、約３０％超、約４０％超、約５０％超、約６０％超、約７０％超、約８０％超、約９０％超、または約９５％超、または約９９％超が、ＣＤ５４を含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の約３０％未満、約２５％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、または約１％未満が、ＣＤ５４を含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の全てが、ＣＤ５４を含まない、またはそれを実質的に含まない。

【0343】

複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の実質的に全てが、ＣＤ１８を含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の約０％～約５％、約０％～約１０％、約１５％～約９０％、約３０％～約８０％、または約５０％～約７０％が、ＣＤ１８を含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の約２０％超、約３０％超、約４０％超、約５０％超、約６０％超、約７０％超、約８０％超、約９０％超、または約９５％超、または約９９％超が、ＣＤ１８を含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の約３０％未満、約２５％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、または約１％未満が、ＣＤ１８を含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の全てが、ＣＤ１８を含まない、またはそれを実質的に含まない。

【0344】

複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の実質的に全てが、ＣＤ４３を含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の約１％～約３０％、約１％～約２５％、約１％～約２０％、または約１％～約１５％、約０％～約５％、または約０％～約１０％が、ＣＤ４３を含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の約３０％未満、約２５％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、または約１％未満が、ＣＤ４３を含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の全てが、ＣＤ４３を含まない、またはそれを実質的に含まない。

【0345】

複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の実質的に全てが、ＣＤ１１ｂを含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の約０％～約５％、約０％～約１０％、約１％～約５０％、約５％～約４０％、または約１０％～約３５％が、ＣＤ１１ｂを含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、または約４５％未満、または約４０％未満、約３５％未満、約３０％未満、約２５％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、または約５％未満が、ＣＤ１１ｂを含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の全てが、ＣＤ１１ｂを含まない、またはそれを実質的に含まない。

【0346】

複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の実質的に全てが、ＣＤ６２Ｐを含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の約０％～約４０％、約０％～約３０％、約０％～約２０％、約０％～約１０％、または約０％～約５％が、ＣＤ６２Ｐを含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、約１０％未満が、ＣＤ６２Ｐを含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の全てが、ＣＤ６２Ｐを含まない、またはそれを実質的に含まない。

【0347】

複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の実質的に全てが、ＣＤ４１を含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の約約１５％～約９０％、約３０％～約８０％、または約５０％～約７０％が、ＣＤ４１を含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の約２０％超、約３０％超、約４０％超、約５０％超、約６０％超、約７０％超、約８０％超、約９０％超、または約９５％超、または約９９％超が、ＣＤ４１を含む。

【0348】

複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の実質的に全てが、ＣＤ６１を含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の約約４０％～約１００％、約６０％～約１００％、または約８５％～約１０％が、ＣＤ６１を含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の約４０％超、約５０％超、約６０％超、約７０％超、約８０％超、約８５％超、約９０％超、または約９５％超、または約９９％超が、ＣＤ６１を含む。

【0349】

複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の実質的に全てが、ＣＤ２１を含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の約０％～約１０％、約０％～約５％、約１５％～約９０％、約３０％～約８０％、または約５０％～約７０％が、ＣＤ２１を含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の約２０％超、約３０％超、約４０％超、約５０％超、約６０％超、約７０％超、約８０％超、約９０％超、または約９５％超、または約９９％超が、ＣＤ２１を含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、または約４５％未満、または約４０％未満、約３５％未満、約３０％未満、約２５％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、または約５％未満が、ＣＤ２１を含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の全てが、ＣＤ２１を含まない、またはそれを実質的に含まない。

【0350】

複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の実質的に全てが、ＣＤ５１を含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の約０％～約１０％、約０％～約５％、約１５％～約９０％、約３０％～約８０％、または約５０％～約７０％が、ＣＤ５１を含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の約２０％超、約３０％超、約４０％超、約５０％超、約６０％超、約７０％超、約８０％超、約９０％超、または約９５％超、または約９９％超が、ＣＤ５１を含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、または約４５％未満、または約４０％未満、約３５％未満、約３０％未満、約２５％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、または約５％未満が、ＣＤ５１を含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の全てが、ＣＤ５１を含まない、またはそれを実質的に含まない。

【0351】

複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の実質的に全てが、ＣＬＥＣ－２を含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の約０％～約１０％、約０％～約５％、または約０％～約１２％が、ＣＬＥＣ－２を含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の約１０％未満、約５％未満、または約２％未満が、ＣＬＥＣ－２を含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の全てが、ＣＬＥＣ－２を含まない、またはそれを実質的に含まない。

【0352】

複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の実質的に全てが、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７ａ）を含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の約０％～約２０％、約１％～約１５％、約２％～約１０％、約０％～約５％、または約０％～約５％が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７ａ）を含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、または約５％未満が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７ａ）を含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の全てが、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７ａ）を含まない、またはそれを実質的に含まない。

【0353】

複数の実施形態では、ＣＤ４１＋巨核球由来細胞外小胞集団の約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、または約５％未満が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７ａ）を含む。

【0354】

複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞が、ＤＲＡＱ５を実質的に含まない。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の約０％～約２０％、約０％～約１５％、約０％～約１０％、または約０％～約５％が、ＤＲＡＱ５を含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、または約５％未満が、ＤＲＡＱ５を含む。

【0355】

複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の実質的に全てが、ＣＤ６３を含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の約約１％～約２０％、約１％～約１５％、または約１％～約１０％が、ＣＤ６３を含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、または約１％未満が、ＣＤ６３を含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の全てが、ＣＤ６３を含まない、またはそれを実質的に含まない。

【0356】

複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の実質的に全てが、ＣＤ４２ｂを含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の約０％～約２０％、約０％～約１５％、約０％～約１０％、または約０％～約５％が、ＣＤ４２ｂを含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、または約１％未満が、ＣＤ４２ｂを含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の全てが、ＣＤ４２ｂを含まない、またはそれを実質的に含まない。

【0357】

複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の実質的に全てが、ＣＤ９を含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の約約４０％～約１００％、約５０％～約８０％、または約６０％～約７０％が、ＣＤ９を含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の約３０％超、約４０％超、約５０％超、約６０％超、約７０％超、約８０％超、約９０％超、または約９５％超、または約９９％超が、ＣＤ９を含む。

【0358】

複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の実質的に全てが、ＣＤ３１を含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の約１％～約３０％、約１％～約２５％、約１％～約２０％、または約１％～約１５％が、ＣＤ３１を含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の約３０％未満、約２５％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、または約１％未満が、ＣＤ３１を含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の全てが、ＣＤ３１を含まない、またはそれを実質的に含まない。

【0359】

複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の実質的に全てが、ＣＤ４７を含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の約１％～約４０％、約１％～約３５％、約１％～約２０％、約２０％～約３０％、約３０％～約４０％、または約１％～約１５％が、ＣＤ４７を含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の約４０％未満、約３０％未満、約２５％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、または約１％未満が、ＣＤ４７を含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の全てが、ＣＤ４７を含まない、またはそれを実質的に含まない。

【0360】

複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の実質的に全てが、ＣＤ１４７を含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の約１％～約３０％、約１％～約２５％、約１％～約２０％、約２０％～約３０％、または約１％～約１５％が、ＣＤ１４７を含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の約３０％未満、約２５％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、または約１％未満が、ＣＤ１４７を含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の全てが、ＣＤ１４７を含まない、またはそれを実質的に含まない。

【0361】

複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の実質的に全てが、ＣＤ３２ａを含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の約約０％～約２０％、約１％～約１５％、または約１％～約１０％が、ＣＤ３２ａを含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、または約１％未満が、ＣＤ３２ａを含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の全てが、ＣＤ３２ａを含まない、またはそれを実質的に含まない。

【0362】

複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の実質的に全てが、ＧＶＰＩを含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の約０％～約５％、約０％～約１０％、約０％～約３０％、約０％～約１５％、または約０％～約１０％が、ＧＶＰＩを含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の約３０％未満、約２５％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、または約１％未満が、ＧＶＰＩを含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の全てが、ＧＶＰＩを含まない、またはそれを実質的に含まない。

【0363】

複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の実質的に全てが、ホスファチジルセリンを含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の約約１５％～約９０％、約３０％～約８０％、または約５０％～約７０％が、ホスファチジルセリンを含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の約２０％超、約３０％超、約４０％超、約５０％超、約６０％超、約７０％超、約８０％超、約９０％超、または約９５％超、または約９９％超が、ホスファチジルセリンを含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の約３０％未満、約２５％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、または約１％未満が、ＧＶＰＩを含む。複数の実施形態では、集団中の巨核球由来細胞外小胞の全てが、ホスファチジルセリンを含まない、またはそれを実質的に含まない。

【0364】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、（ａ）末梢血または臍帯血から供給される初代ＣＤ３４＋ＨＳＣであるヒト多能性幹細胞を得ることと、（ｂ）ＥＰＯが添加されていない状態及びＴＰＯが添加された状態で、当該ヒト多能性幹細胞を巨核球に分化させることと、（ｃ）当該巨核球から巨核球由来細胞外小胞を単離することとによって生成される。

【0365】

複数の実施形態では、本方法は、インビボ方法である。複数の実施形態では、本方法は、エクスビボ方法である。

【0366】

複数の実施形態では、末梢血から供給されるＣＤ３４＋ＨＳＣは、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）及び顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）などの動員剤の投与によって幹細胞が血流に動員された志願者に由来する多能性幹細胞である。

【0367】

複数の実施形態では、臍帯血は、出産後に胎盤及び付着した臍帯に残っている血液に由来する多能性幹細胞を含む。

【0368】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、患者に対して自己である。複数の実施形態では、ヒト多能性幹細胞が患者から抽出され、巨核球を生成するために使用され、巨核球から、選択したカーゴを含む巨核球由来細胞外小胞が生成され、その後、患者に投与される。複数の実施形態では、分化細胞が患者から抽出され、ｉＰＳＣを生成するために使用され、次いで、巨核球を生成するために使用され、選択したカーゴを含む巨核球由来細胞外小胞が生成され、その後、患者に投与される。

【0369】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、患者と同種異系である。複数の実施形態では、ヒト多能性幹細胞が患者ではないヒト対象から抽出され、巨核球を生成するために使用され、巨核球から、選択したカーゴを含む巨核球由来細胞外小胞が生成され、その後、患者に投与される。複数の実施形態では、分化細胞が患者ではないヒト対象から抽出され、ｉＰＳＣを生成するために使用され、次いで、巨核球を生成するために使用され、選択したカーゴを含む巨核球由来細胞外小胞が生成され、その後、患者に投与される。

【0370】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、患者と異種である。複数の実施形態では、多能性幹細胞が非ヒト対象から抽出され、巨核球を生成するために使用され、巨核球から、選択したカーゴを含む巨核球由来細胞外小胞が生成され、その後、患者に投与される。複数の実施形態では、分化細胞が非ヒト対象から抽出され、ｉＰＳＣを生成するために使用され、次いで、巨核球を生成するために使用され、選択したカーゴを含む巨核球由来細胞外小胞が生成され、その後、患者に投与される。

【0371】

複数の実施形態では、インキュベートは、超音波処理、サポニン透過処理、機械的振動、低張透析、多孔質膜を介した押し出し、コレステロール抱合、電流印加、及びそれらの組み合わせのうちの１つ以上を含む。複数の実施形態では、インキュベートが、エレクトロポレーションすること、形質転換すること、トランスフェクトすること、及びマイクロインジェクトすることのうちの１つ以上を含む。

【0372】

複数の実施形態では、本方法は、（ｄ）巨核球由来細胞外小胞を放射線と接触させることを更に含む。複数の実施形態では、放射線は、ガンマ放射線である。複数の実施形態では、ガンマ放射線は、約１２ｋＧｙ、２５ｋＧｙ、または５０ｋＧｙを超える量である。複数の実施形態では、ガンマ放射線は、約１２ｋＧｙ～１５ｋＧｙの量である。複数の実施形態では、ガンマ放射線は、約１５ｋＧｙ～２０ｋＧｙの量である。複数の実施形態では、ガンマ放射線は、約２０ｋＧｙ～２５ｋＧｙの量である。複数の実施形態では、ガンマ放射線は、約２５ｋＧｙ～３０ｋＧｙの量である。複数の実施形態では、ガンマ放射線は、約３０ｋＧｙ～３５ｋＧｙの量である。複数の実施形態では、ガンマ放射線は、約３５ｋＧｙ～４０ｋＧｙの量である。複数の実施形態では、ガンマ放射線は、約４０ｋＧｙ～４５ｋＧｙの量である。複数の実施形態では、ガンマ放射線は、約４５ｋＧｙ～５０ｋＧｙの量である。複数の実施形態では、ガンマ放射線は、約５０ｋＧｙ～５５ｋＧｙの量である。複数の実施形態では、ガンマ放射線は、約５５ｋＧｙ～６０ｋＧｙの量である。

【0373】

複数の実施形態では、本方法は、実質的に無血清である。複数の実施形態では、本方法は、６０％超無血清である。複数の実施形態では、本方法は、７０％超無血清である。複数の実施形態では、本方法は、８０％超無血清である。複数の実施形態では、本方法は、９０％超無血清である。

【0374】

様々な実施形態では、本組成物は、実質的に精製された巨核球由来細胞外小胞を含む。複数の実施形態では、実質的に精製されたとは、生物学的に純粋であることと同義である。複数の実施形態では、実質的に精製された巨核球由来細胞外小胞は、大部分は、その天然状態で見つけられるようにそれを通常伴う成分から様々な程度で遊離している。「単離」とは、元の源または周囲からの分離の程度を示す。複数の実施形態では、実質的に精製された巨核球由来細胞外小胞は、いずれの不純物も巨核球由来細胞外小胞の生物学的特性に物質的に影響を及ぼさないか、または他の悪影響を引き起こさないように、他の物質を十分には含まない（ｓｕｆｆｉｃｉｅｎｔｌｙ ｆｒｅｅ）。複数の実施形態では、実質的に精製された巨核球由来細胞外小胞は、産生に必要とされ得る細胞物質、ウイルス物質、または培養培地を十分には含まない。純度及び均一性は、典型的には、当該技術分野で既知の生化学的技法を使用して決定される。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、サイズ排除濾過を使用して精製される。複数の実施形態では、フィルターは、約６５０ｎｍの孔径を有する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、サイズ排除濾過を使用して精製される。複数の実施形態では、フィルターは、約５０ｎｍ～約６００ｎｍの範囲の孔径を有する。複数の実施形態では、フィルターは、少なくとも５０ｎｍの孔径を有する。複数の実施形態では、フィルターは、約６００ｎｍの孔径を有する。

【0375】

巨核球由来細胞外小胞のカーゴ
巨核球由来細胞外小胞は、ｍＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、及びサイトカインなどの多様なカーゴを含み得る。巨核球由来細胞外小胞は、それらのカーゴを移送して、標的細胞の機能を改変することができる。それらは、表面受容体シグナル伝達、形質膜融合、及び内在化により標的細胞に影響を及ぼす。巨核球または巨核球由来細胞外小胞に生物学的カーゴまたは治療的カーゴをロードすることにより、巨核球由来細胞外小胞は、標的治療効果を達成するための送達ビヒクルとして更に使用することができる。これまで、低分子ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ及びｍｉＲＮＡ）、低分子直鎖ＤＮＡ、及びプラスミドＤＮＡは全て、様々な送達適用のための巨核球由来細胞外小胞へのロードに成功している。巨核球由来細胞外小胞の標的化は、表面タンパク質のそれらの相補体によって規定され、目的とする特定のバイオマーカーを発現または除去するように更に操作されて、生体内分布及び細胞間認識を改良することができる。例えば、特有のバイオマーカープロファイルを有する本巨核球由来細胞外小胞は、ペイロード、例えば、療法の送達に特に適している。

【0376】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、内腔へのカーゴのロードに好適である。複数の実施形態では、カーゴは、ＲＮＡ、ＤＮＡ、タンパク質、炭水化物、脂質、生体分子、及び小分子のうちの１つ以上から選択される。複数の実施形態では、カーゴは、生物学的に産生された成分である。複数の実施形態では、カーゴは、合成的に生成された成分である。複数の実施形態では、カーゴは、巨核球由来細胞外小胞に事前ロードされる。複数の実施形態では、生物学的成分は、生成された巨核球由来細胞外小胞が生物学的成分を含むように巨核球で過剰発現する。複数の実施形態では、カーゴは、巨核球由来細胞外小胞に事後ロードされる。複数の実施形態では、精製された巨核球由来細胞外小胞がカーゴと混合されて、カーゴをロードした巨核球由来細胞外小胞が生成される。複数の実施形態では、カーゴは、疎水性である。複数の実施形態では、カーゴは、親水性である。複数の実施形態では、カーゴは、巨核球由来細胞外小胞の脂質二重層に組み込まれる。複数の実施形態では、カーゴは、巨核球由来細胞外小胞の内腔内に位置する。

【0377】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の内腔内に位置するカーゴに加えて、またはその代替として、カーゴは、巨核球由来細胞外小胞と会合している。複数の実施形態では、カーゴは、巨核球由来細胞外小胞の表面及び／または外側と会合している。巨核球由来細胞外小胞と会合したカーゴの非限定的な例としては、小胞の表面に共有結合的に接合したカーゴ、または静電相互作用により表面と会合したカーゴが挙げられる。当業者に理解されるであろうように、巨核球由来細胞外小胞と会合したカーゴは、小胞の内腔にロードされていない場合でも、依然として輸送することができる。

【0378】

複数の実施形態では、カーゴは、物理的に誘導される及び／または化学的に誘導されるアクティブロード戦略を使用して巨核球由来細胞外小胞にロードされる。複数の実施形態では、アクティブロード戦略は、物理的に誘導される。複数の実施形態では、物理的に誘導されるアクティブロード戦略は、エレクトロポレーション、超音波処理、凍結融解サイクリング、及び押し出しなどの外力による巨核球由来細胞外小胞脂質二重層の機械的または物理的破壊を含む。複数の実施形態では、エレクトロポレーションは、カーゴが巨核球由来細胞外小胞によって取り込まれた後に、電界の存在が脂質二重層を破壊する一方で、電界の除去が脂質層の細孔閉鎖及び再形成を可能にする、巨核球由来細胞外小胞二重層における自発的な細孔形成を誘導するための電界の使用を伴う。複数の実施形態では、超音波処理は、巨核球由来細胞外小胞脂質二重層の剛性を低下させて、カーゴの拡散を可能にする、ソニケータープローブにより加えられた超音波エネルギーを伴う。複数の実施形態では、凍結融解サイクリングは、熱エネルギーを使用して、巨核球由来細胞外小胞カーゴロードを容易にする。複数の実施形態では、押し出しは、巨核球由来細胞外小胞が遊離カーゴと混合され、ナノ規模の細孔を含む膜を通過し、その力が脂質二重層を破壊し、外因性カーゴが巨核球由来細胞外小胞に入ることを可能にする、合成リポソームの形成のための確立されたプロトコルに従って行われる。

【0379】

複数の実施形態では、アクティブロード戦略は、化学的に誘導される。複数の実施形態では、化学的に誘導されるアクティブロード戦略は、サポニンまたはトランスフェクション試薬などの化学薬剤を使用して巨核球由来細胞外小胞脂質二重層をバイパスすることを含む。複数の実施形態では、化学薬剤は、サポニンなどの洗剤である。複数の実施形態では、サポニンは、巨核球由来細胞外小胞脂質二重層からコレステロールを選択的に除去して、脂質二重層内の細孔を開くために使用される。複数の実施形態では、化学薬剤は、トランスフェクション剤である。複数の実施形態では、トランスフェクション剤は、脂質二重層との相互作用及びその後の内在化を促進するカチオン性物質を利用することによって核酸を巨核球由来細胞外小胞に送達するために使用される。複数の実施形態では、トランスフェクション剤は、リポフェクタミン及び／または脂質ベースの薬剤である。

【0380】

複数の実施形態では、核酸（すなわち、１小胞当たりの核酸のコピー数）の本開示の巨核球由来細胞外小胞へのロード比は、約１～約１０００、約１～約５００、約１～約１００、約１０～約１０００、約１００～約１０００、約５００～約１０００、約１００～約５００，０００、約１０００～約３００，０００、約１００，０００～約３００，０００、約１０００～約１０，０００、または約１０００～約５０００の範囲である。複数の実施形態では、核酸は、ＤＮＡである。複数の実施形態では、核酸は、プラスミドＤＮＡである。

【0381】

複数の実施形態では、本開示の巨核球由来細胞外小胞に核酸などのカーゴをロードするロード効率は、約１％～約９９％、約１０％～約９０％、約３０％～約７０％、約４０％～約６０％、約４０％～約５０％、または約５０％～約６０％の範囲である。複数の実施形態では、カーゴは、核酸である。複数の実施形態では、核酸は、ＤＮＡである。複数の実施形態では、核酸は、プラスミドＤＮＡである。複数の実施形態では、ロード効率は、以下の等式を使用して計算される：
ロード効率（％）＝カーゴ＋ＭＶ数／総ＭＶ数

【0382】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の表面は、巨核球由来細胞外小胞の生体内分布及び標的化能力に影響を及ぼすように修飾される。複数の実施形態では、表面リガンドが、遺伝子操作により巨核球由来細胞外小胞に付加される。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、それらの脂質二重層で融合タンパク質を発現するように生成される。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞脂質二重層中の内因性タンパク質は、細胞操作により標的リガンドと融合される。

【0383】

複数の実施形態では、カーゴは、１つ以上の治療薬である。複数の実施形態では、治療薬は、核酸治療薬である。複数の実施形態では、核酸治療薬は、機能性タンパク質をコードする。

【0384】

複数の実施形態では、核酸治療薬は、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、調節ＲＮＡ、ノンコーディングＲＮＡ及びコーディングＲＮＡ、直鎖ＤＮＡ、ＤＮＡ断片、またはＤＮＡプラスミドから選択される１つ以上の非自己核酸構築物及び／または組換え核酸構築物から選択される。複数の実施形態では、核酸治療薬は、ｍＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、及びｓｎｏＲＮＡのうちの１つ以上から選択される。

【0385】

複数の実施形態では、核酸治療薬は、患者に欠損している野生型遺伝子をコードする。複数の実施形態では、核酸治療薬は、ｍＲＮＡであり、任意選択で、インビトロ転写されるか、または合成である、及び／または任意選択でプソイドウリジン及び５－メトキシウリジンから選択される１つ以上の非標準ヌクレオチドを含む。

【0386】

複数の実施形態では、１つ以上の非標準ヌクレオチドは、２－チオウリジン、５－アザウリジン、プソイドウリジン、４－チオウリジン、５－メチルウリジン、５－メチルプソイドウリジン、５－アミノウリジン、５－アミノプソイドウリジン、５－ヒドロキシウリジン、５－ヒドロキシプソイドウリジン、５－メトキシウリジン、５－メトキシプソイドウリジン、５－エトキシウリジン、５－エトキシプソイドウリジン、５－ヒドロキシメチルウリジン、５－ヒドロキシメチルプソイドウリジン、５－カルボキシウリジン、５－カルボキシプソイドウリジン、５－ホルミルウリジン、５－ホルミルプソイドウリジン、５－メチル－５－アザウリジン、５－アミノ－５－アザウリジン、５－ヒドロキシ－５－アザウリジン、５－メチルプソイドウリジン、５－アミノプソイドウリジン、５－ヒドロキシプソイドウリジン、４－チオ－５－アザウリジン、４－チオプソイドウリジン、４－チオ－５－メチルウリジン、４－チオ－５－アミノウリジン、４－チオ－５－ヒドロキシウリジン、４－チオ－５－メチル－５－アザウリジン、４－チオ－５－アミノ－５－アザウリジン、４－チオ－５－ヒドロキシ－５－アザウリジン、４－チオ－５－メチルプソイドウリジン、４－チオ－５－アミノプソイドウリジン、４－チオ－５－ヒドロキシプソイドウリジン、２－チオシチジン、５－アザシチジン、プソイドイソシチジン、Ｎ４－メチルシチジン、Ｎ４－アミノシチジン、Ｎ４－ヒドロキシシチジン、５－メチルシチジン、５－アミノシチジン、５－ヒドロキシシチジン、５－メトキシシチジン、５－エトキシシチジン、５－ヒドロキシメチルシチジン、５－カルボキシシチジン、５－ホルミルシチジン、５－メチル－５－アザシチジン、５－アミノ－５－アザシチジン、５－ヒドロキシ－５－アザシチジン、５－メチルプソイドイソシチジン、５－アミノプソイドイソシチジン、５－ヒドロキシプソイドイソシチジン、Ｎ４－メチル－５－アザシチジン、Ｎ４－メチルプソイドイソシチジン、２－チオ－５－アザシチジン、２－チオプソイドイソシチジン、２－チオ－Ｎ４－メチルシチジン、２－チオ－Ｎ４－アミノシチジン、２－チオ－Ｎ４－ヒドロキシシチジン、２－チオ－５－メチルシチジン、２－チオ－５－アミノシチジン、２－チオ－５－ヒドロキシシチジン、２－チオ－５－メチル－５－アザシチジン、２－チオ－５－アミノ－５－アザシチジン、２－チオ－５－ヒドロキシ－５－アザシチジン、２－チオ－５－メチルプソイドイソシチジン、２－チオ－５－アミノプソイドイソシチジン、２－チオ－５－ヒドロキシプソイドイソシチジン、２－チオ－Ｎ４－メチル－５－アザシチジン、２－チオ－Ｎ４－メチルプソイドイソシチジン、Ｎ４－メチル－５－メチルシチジン、Ｎ４－メチル－５－アミノシチジン、Ｎ４－メチル－５－ヒドロキシシチジン、Ｎ４－メチル－５－メチル－５－アザシチジン、Ｎ４－メチル－５－アミノ－５－アザシチジン、Ｎ４－メチル－５－ヒドロキシ－５－アザシチジン、Ｎ４－メチル－５－メチルプソイドイソシチジン、Ｎ４－メチル－５－アミノプソイドイソシチジン、Ｎ４－メチル－５－ヒドロキシプソイドイソシチジン、Ｎ４－アミノ－５－アザシチジン、Ｎ４－アミノプソイドイソシチジン、Ｎ４－アミノ－５－メチルシチジン、Ｎ４－アミノ－５－アミノシチジン、Ｎ４－アミノ－５－ヒドロキシシチジン、Ｎ４－アミノ－５－メチル－５－アザシチジン、Ｎ４－アミノ－５－アミノ－５－アザシチジン、Ｎ４－アミノ－５－ヒドロキシ－５－アザシチジン、Ｎ４－アミノ－５－メチルプソイドイソシチジン、Ｎ４－アミノ－５－アミノプソイドイソシチジン、Ｎ４－アミノ－５－ヒドロキシプソイドイソシチジン、Ｎ４－ヒドロキシ－５－アザシチジン、Ｎ４－ヒドロキシプソイドイソシチジン、Ｎ４－ヒドロキシ－５－メチルシチジン、Ｎ４－ヒドロキシ－５－アミノシチジン、Ｎ４－ヒドロキシ－５－ヒドロキシシチジン、Ｎ４－ヒドロキシ－５－メチル－５－アザシチジン、Ｎ４－ヒドロキシ－５－アミノ－５－アザシチジン、Ｎ４－ヒドロキシ－５－ヒドロキシ－５－アザシチジン、Ｎ４－ヒドロキシ－５－メチルプソイドイソシチジン、Ｎ４－ヒドロキシ－５－アミノプソイドイソシチジン、Ｎ４－ヒドロキシ－５－ヒドロキシプソイドイソシチジン、２－チオ－Ｎ４－メチル－５－メチルシチジン、２－チオ－Ｎ４－メチル－５－アミノシチジン、２－チオ－Ｎ４－メチル－５－ヒドロキシシチジン、２－チオ－Ｎ４－メチル－５－メチル－５－アザシチジン、２－チオ－Ｎ４－メチル－５－アミノ－５－アザシチジン、２－チオ－Ｎ４－メチル－５－ヒドロキシ－５－アザシチジン、２－チオ－Ｎ４－メチル－５－メチルプソイドイソシチジン、２－チオ－Ｎ４－メチル－５－アミノプソイドイソシチジン、２－チオ－Ｎ４－メチル－５－ヒドロキシプソイドイソシチジン、２－チオ－Ｎ４－アミノ－５－アザシチジン、２－チオ－Ｎ４－アミノプソイドイソシチジン、２－チオ－Ｎ４－アミノ－５－メチルシチジン、２－チオ－Ｎ４－アミノ－５－アミノシチジン、２－チオ－Ｎ４－アミノ－５－ヒドロキシシチジン、２－チオ－Ｎ４－アミノ－５－メチル－５－アザシチジン、２－チオ－Ｎ４－アミノ－５－アミノ－５－アザシチジン、２－チオ－Ｎ４－アミノ－５－ヒドロキシ－５－アザシチジン、２－チオ－Ｎ４－アミノ－５－メチルプソイドイソシチジン、２－チオ－Ｎ４－アミノ－５－アミノプソイドイソシチジン、２－チオ－Ｎ４－アミノ－５－ヒドロキシプソイドイソシチジン、２－チオ－Ｎ４－ヒドロキシ－５－アザシチジン、２－チオ－Ｎ４－ヒドロキシプソイドイソシチジン、２－チオ－Ｎ４－ヒドロキシ－５－メチルシチジン、Ｎ４－ヒドロキシ－５－アミノシチジン、２－チオ－Ｎ４－ヒドロキシ－５－ヒドロキシシチジン、２－チオ－Ｎ４－ヒドロキシ－５－メチル－５－アザシチジン、２－チオ－Ｎ４－ヒドロキシ－５－アミノ－５－アザシチジン、２－チオ－Ｎ４－ヒドロキシ－５－ヒドロキシ－５－アザシチジン、２－チオ－Ｎ４－ヒドロキシ－５－メチルプソイドイソシチジン、２－チオ－Ｎ４－ヒドロキシ－５－アミノプソイドイソシチジン、２－チオ－Ｎ４－ヒドロキシ－５－ヒドロキシプソイドイソシチジン、Ｎ６－メチルアデノシン、Ｎ６－アミノアデノシン、Ｎ６－ヒドロキシアデノシン、７－デアザアデノシン、８－アザアデノシン、Ｎ６－メチル－７－デアザアデノシン、Ｎ６－メチル－８－アザアデノシン、７－デアザ－８－アザアデノシン、Ｎ６－メチル－７－デアザ－８－アザアデノシン、Ｎ６－アミノ－７－デアザアデノシン、Ｎ６－アミノ－８－アザアデノシン、Ｎ６－アミノ－７－デアザ－８－アザアデノシン、Ｎ６－ヒドロキシアデノシン、Ｎ６－ヒドロキシ－７－デアザアデノシン、Ｎ６－ヒドロキシ－８－アザアデノシン、Ｎ６－ヒドロキシ－７－デアザ－８－アザアデノシン、６－チオグアノシン、７－デアザグアノシン、８－アザグアノシン、６－チオ－７－デアザグアノシン、６－チオ－８－アザグアノシン、７－デアザ－８－アザグアノシン、及び６－チオ－７－デアザ－８－アザグアノシンから選択される。

【0387】

複数の実施形態では、本方法は、遺伝子編集及び／または遺伝子修正を含む。複数の実施形態では、本方法は、例えば、非標準ヌクレオチドを含むＲＮＡ、例えば、ヌクレアーゼ、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、メガヌクレアーゼ、ニッカーゼ、クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート（ＣＲＩＳＰＲ）関連タンパク質、ＤＮＡ修復タンパク質、ＤＮＡ修飾タンパク質、塩基修飾タンパク質、ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ、ＤＮＡ脱メチル化を引き起こすタンパク質、ＤＮＡを基質とする酵素、またはそれらの天然もしくは操作バリアント、ファミリーメンバー、オルソログ、断片、または融合構築物のうちの１つ以上をコードするＲＮＡを用いた、合成ＲＮＡベースの遺伝子編集及び／または遺伝子修正を包含する。複数の実施形態では、遺伝子編集及び／または遺伝子修正の効率は、例えば、ＤＮＡベースの遺伝子編集及び／または遺伝子修正よりも高い。複数の実施形態では、本遺伝子編集法及び／または本遺伝子修正法は、インビボ適用に十分に効率的である。複数の実施形態では、本遺伝子編集法及び／または本遺伝子修正法は、細胞選択（例えば、編集された細胞の選択）を必要としない程度に十分に効率的である。複数の実施形態では、本方法の遺伝子編集の効率は、約１％、または約２％、または約３％、または約４％、または約５％、または約６％、または約７％、または約８％、または約９％、または約１０％、または約２０％、または約３０％、または約４０％、または約５０％、または約６０％、または約７０％、または約８０％、または約９０％、または約１００％である。複数の実施形態では、本方法の遺伝子修正の効率は、約１％、または約２％、または約３％、または約４％、または約５％、または約６％、または約７％、または約８％、または約９％、または約１０％、または約２０％、または約３０％、または約４０％、または約５０％、または約６０％、または約７０％、または約８０％、または約９０％、または約１００％である。

【0388】

複数の実施形態では、本方法は、操作されたヌクレアーゼ切断またはＤＮＡ修飾ドメインを含む高効率遺伝子編集タンパク質を含む。複数の実施形態では、本方法は、操作されたヌクレアーゼ切断またはＤＮＡ修飾ドメインを含む高忠実度遺伝子編集タンパク質を含む。複数の実施形態では、高効率遺伝子編集タンパク質は、操作されたＤＮＡ結合ドメインを含む。複数の実施形態では、高忠実度遺伝子編集タンパク質は、操作されたＤＮＡ結合ドメインを含む。複数の実施形態では、本方法は、操作されたリピート配列を含む遺伝子編集タンパク質を含む。複数の実施形態では、本方法は、１つ以上のＣＲＩＳＰＲ関連ファミリーメンバーを含む遺伝子編集タンパク質を含む。複数の実施形態では、本方法は、細胞に遺伝子編集タンパク質をトランスフェクトするか、または遺伝子編集タンパク質を発現するように細胞を誘導することによって細胞のＤＮＡ配列を改変することを含む。複数の実施形態では、本方法は、インビトロ培養物中に存在する細胞のＤＮＡ配列を改変することを含む。複数の実施形態では、本方法は、インビボに存在する細胞のＤＮＡ配列を改変することを含む。

【0389】

複数の実施形態では、本方法は、トランスフェクション培地中に１つ以上のステロイド及び／または１つ以上の抗酸化剤を含み、インビボトランスフェクション効率、インビボリプログラミング効率、及びインビボ遺伝子編集効率を増加させることができる。複数の実施形態では、本方法は、細胞または患者を、ヒドロコルチゾン、プレドニゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、デキサメタゾン、またはベタメタゾンなどのグルココルチコイドと接触させることを含む。複数の実施形態では、本方法は、細胞を、ステロイドを含む培地と接触させ、かつ細胞を１つ以上の核酸分子と接触させることによって、目的とするタンパク質を発現させるように細胞を誘導することを含む。複数の実施形態では、核酸分子は、合成ＲＮＡを含む。複数の実施形態では、ステロイドは、ヒドロコルチゾンである。複数の実施形態では、ヒドロコルチゾンは、約０．１ｕＭ～約１０ｕＭ、または約１ｕＭの濃度で培地中に存在する。複数の実施形態では、本方法は、細胞を、抗酸化剤を含む培地と接触させ、かつ細胞を１つ以上の核酸分子と接触させることによって、目的とするタンパク質を発現させるように細胞をインビボで誘導することを含む。複数の実施形態では、酸化防止剤は、アスコルビン酸またはアスコルビン酸－２－ホスフェートである。複数の実施形態では、アスコルビン酸またはアスコルビン酸－２－ホスフェートは、約０．５ｍｇ／Ｌ～約５００ｍｇ／Ｌ（約５０ｍｇ／Ｌを含む）の濃度で培地中に存在する。複数の実施形態では、本方法は、細胞を、ステロイド及び／または酸化防止剤を含む培地と接触させ、かつ細胞を１つ以上の核酸分子と接触させることによって、細胞をインビボでリプログラミング及び／または遺伝子編集することを含み、この際、１つ以上の核酸分子は、１つ以上のリプログラミング及び／または遺伝子編集タンパク質をコードする。複数の実施形態では、細胞は生物内に存在し、ステロイド及び／または抗酸化剤がその生物に送達される。

【0390】

複数の実施形態では、核酸治療薬は、遺伝子編集タンパク質及び／または遺伝子編集機能のための関連要素をコードする。複数の実施形態では、遺伝子編集タンパク質は、ジンクフィンガー（ＺＦ）、転写活性因子様エフェクター（ＴＡＬＥ）、メガヌクレアーゼ、及びクラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート（ＣＲＩＳＰＲ）関連タンパク質から選択される。複数の実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質は、Ｃａｓ９、ＣａｓＸ、ＣａｓＹ、Ｃｐｆ１、及びそれらのｇＲＮＡ複合体から選択される。複数の実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質は、Ｃａｓ９、ｘＣａｓ９、Ｃａｓ１２ａ（Ｃｐｆ１）、Ｃａｓ１３ａ、Ｃａｓ１４、ＣａｓＸ、ＣａｓＹ、クラス１ Ｃａｓタンパク質、クラス２ Ｃａｓタンパク質、ＭＡＤ７、及びそれらのｇＲＮＡ複合体から選択される。

【0391】

複数の実施形態では、治療薬は、生物学的治療薬である。複数の実施形態では、生物学的治療薬は、タンパク質である。複数の実施形態では、生物学的治療薬は、インターフェロン、モノクローナル抗体、及び／またはインターロイキンである。複数の実施形態では、生物学的治療薬は、特異的能動免疫療法、非特異的能動免疫療法、受動免疫療法、及び細胞傷害性療法のうちの１つ以上から選択される免疫療法をもたらすために使用される。

【0392】

複数の実施形態では、生物学的治療薬は、組換えタンパク質である。

【0393】

複数の実施形態では、生物学的治療薬は、ウイルスである。

【0394】

複数の実施形態では、生物学的治療薬は、抗体または抗体断片、融合タンパク質、遺伝子編集タンパク質、サイトカイン、抗原、及びペプチドのうちの１つである。

【0395】

複数の実施形態では、治療薬は、低分子治療薬である。複数の実施形態では、低分子治療薬は、薬物、阻害剤、または補因子のうちの１つ以上である。複数の実施形態では、がん療法に使用するための薬物。複数の実施形態では、阻害剤は、キナーゼ阻害剤、プロテアソーム阻害剤、及びアポトーシスを標的とする阻害剤のうちの１つ以上である。

【0396】

複数の実施形態では、治療薬は、ワクチン及び／または免疫原性抗原である。

【0397】

巨核球由来細胞外小胞を使用した治療方法
様々な実施形態では、本明細書に開示される組成物及び方法は、薬物送達及び１つ以上の遺伝性疾患の治療のために利用され得る。

【0398】

感染性疾患
感染性疾患は、細菌、ウイルス、菌類、または寄生虫などの病原性微生物によって引き起こされる疾患である。人畜共通感染性疾患は、ヒトに伝染すると疾患を引き起こす可能性のある動物の感染性疾患である。

【0399】

別の態様では、本発明は、感染性疾患を治療または予防するための方法であって、有効量の本明細書に開示される組成物を投与することを含む、方法に関する。

【0400】

別の態様では、本発明は、感染性疾患を治療または予防するための方法であって、本明細書に開示される組成物とインビトロで接触した細胞を含む有効量の組成物を投与することを含む、方法に関する。

【0401】

別の態様では、本発明は、感染性疾患を治療または予防するための方法であって、有効量の本明細書に開示される組成物を投与することを含み、当該組成物が、カーゴを含む巨核球由来細胞外小胞を含む、方法に関する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、内腔を取り囲む脂質二重層膜を含み、ヒト多能性幹細胞に由来し、巨核球由来細胞外小胞内腔は、カーゴを含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の内腔内に位置するカーゴに加えて、またはその代替として、カーゴは、小胞の表面と会合している。複数の実施形態では、カーゴは、ＲＮＡ、ＤＮＡ、タンパク質、炭水化物、脂質、生体分子、及び小分子のうちの１つ以上から選択される。複数の実施形態では、カーゴは、１つ以上の治療薬である。

【0402】

複数の実施形態では、本組成物及び本方法の巨核球由来細胞外小胞は、患者におけるウイルスによって引き起こされる感染症（ウイルス感染症）を治療するために使用され、ウイルス感染症は、（ａ）主にライノウイルス、コロナウイルス、及びアデノウイルスによって生じる風邪、（ｂ）エンテロウイルス及び単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、ならびにウェストナイルウイルスに起因する脳炎及び髄膜炎、（ｃ）ＨＰＶ及びＨＳＶが原因となる疣贅及び皮膚感染症、（ｄ）ノロウイルスによって引き起こされる胃腸炎、（ｅ）ジカ、（ｆ）ＡＩＤＳ／ ＨＩＶ、（ｇ）肝炎、（ｈ）ポリオ、（ｉ）Ｈ１Ｎ１豚インフルエンザを含むインフルエンザ、（ｊ）デング熱、ならびに（ｋ）エボラのうちの１つ以上から選択される。

【0403】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、患者における細菌によって引き起こされる感染症（細菌感染症）を治療するために使用され、細菌感染症は、コレラ、ジフテリア、赤痢、腺ペスト、結核、腸チフス、細菌性髄膜炎、中耳炎、肺炎、上気道感染症、胃炎、食中毒、眼感染症、副鼻腔炎、尿路感染症、皮膚感染症、及び性感染症のうちの１つ以上から選択される。

【0404】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、患者における真菌によって引き起こされる感染症（真菌感染症）を治療するために使用され、真菌感染症は、渓谷熱（コクシジオイデス症）、ヒストプラスマ症、カンジダ症、足白癬、白癬、眼感染症、及び皮膚感染症のうちの１つ以上から選択される。

【0405】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、患者における寄生虫によって引き起こされる感染症（寄生虫感染症）を治療するために使用され、寄生虫感染症は、マラリア、睡眠病、アメーバ症、トリパノソーマ症、シラミ寄生症、シャーガス病、サイクロスポーラ症、条虫症、エキノコックス症、食物媒介疾患、ジアルジア症、角膜炎、リーシュマニア症、オンコセルカ症、旋毛虫症、水系感染症、及び人畜共通感染性疾患のうちの１つ以上から選択される。

【0406】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、コロナウイルス感染症に関連する１つ以上の症状を治療するために使用される。

【0407】

コロナウイルス（ＣｏＶ）は、ヒトに侵入することが比較的最近知られるようになった、ベータコロナウイルス及びアルファコロナウイルス呼吸器病原体を含むＣｏｒｏｎａｖｉｒｉｄａｅファミリーのメンバーである。コロナウイルスファミリーには、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、中東呼吸器症候群コロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）、ＨＣｏＶ－ＨＫＵ１、及びＨＣｏＶ－ＯＣ４３などのベータコロナウイルスが含まれる。アルファコロナウイルスには、例えば、ＨＣｏＶ－ＮＬ６３及びＨＣｏＶ－２２９Ｅが含まれる。複数の実施形態では、本発明は、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、中東呼吸器症候群コロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）、ＨＣｏＶ－ＨＫＵ１、及びＨＣｏＶ－ＯＣ４３のうちのいずれかによる感染症の１つ以上の症状を治療するための、本巨核球由来細胞外小胞の治療的使用に関する。アルファコロナウイルスには、例えば、ＨＣｏＶ－ＮＬ６３及びＨＣｏＶ－２２９Ｅが含まれる。

【0408】

理論に拘束されることなく、コロナウイルスは、宿主細胞へのウイルスの侵入を促進する哺乳類宿主の膜貫通受容体であるアンギオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）のウイルス認識に関与する「スパイク」表面糖タンパク質を利用して細胞に侵入する。（Ｚｈｏｕ ｅｔ ａｌ．，Ａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ ｏｕｔｂｒｅａｋ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ａ ｎｅｗ ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ ｏｆ ｐｒｏｂａｂｌｅ ｂａｔ ｏｒｉｇｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ ２０２０）。

【0409】

コロナウイルス感染症に関連する症状には、発熱、疲労、乾性咳 、痛み及び疼痛、息切れ及び他の呼吸困難、下痢、上気道症状（例えば、くしゃみ、鼻水、鼻づまり、咳、咽頭痛）、及び／または肺炎が含まれるが、これらに限定されない。複数の実施形態では、本組成物及び本方法は、これらの症状のうちのいずれかの治療または緩和に有用である。

【0410】

複数の実施形態では、本発明は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（例えば、２０１９－ｎＣｏＶ）によって引き起こされるコロナウイルス感染症２０１９（ＣＯＶＩＤ－１９）を含むＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による感染症の１つ以上の症状を治療するための、本巨核球由来細胞外小胞の治療的使用に関する。

【0411】

複数の実施形態では、感染性疾患は、コロナウイルス感染症である。複数の実施形態では、コロナウイルス感染症は、ベータコロナウイルスまたはアルファコロナウイルスによる感染症であり、任意選択で、ベータコロナウイルスが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、ＨＣｏＶ－ＨＫＵ１、及びＨＣｏＶ－ＯＣ４３から選択されるか、またはアルファコロナウイルスが、ＨＣｏＶ－ＮＬ６３及びＨＣｏＶ－２２９Ｅから選択される。複数の実施形態では、コロナウイルス感染症は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による感染症である。複数の実施形態では、感染性疾患は、ＣＯＶＩＤ－１９である。

【0412】

複数の実施形態では、感染性疾患は、任意選択でＡ型、Ｂ型、Ｃ型、及びＤ型インフルエンザから選択されるインフルエンザ感染症である。

【0413】

複数の実施形態では、感染性疾患は、任意選択でヒト免疫不全（ＨＩＶ）及びサル免疫不全（ＳＩＶ）から選択されるレトロウイルス感染症である。

【0414】

複数の実施形態では、本組成物は、ワクチンタンパク質及び／または免疫原性抗原をコードする核酸分子を含む巨核球由来細胞外小胞を含む。複数の実施形態では、本組成物は、感染性に関連するタンパク質をコードする核酸分子を含む巨核球由来細胞外小胞を含む。

【0415】

複数の実施形態では、ワクチンタンパク質は、ベータコロナウイルスタンパク質またはアルファコロナウイルスタンパク質であり、任意選択で、ベータコロナウイルスタンパク質が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、ＨＣｏＶ－ＨＫＵ１、及びＨＣｏＶ－ＯＣ４３タンパク質、もしくはそれらの抗原性断片から選択されるか、またはアルファコロナウイルスタンパク質が、ＨＣｏＶ－ＮＬ６３及びＨＣｏＶ－２２９Ｅタンパク質、もしくはそれらの抗原性断片から選択される。

【0416】

複数の実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、スパイク表面糖タンパク質、膜糖タンパク質Ｍ、エンベロープタンパク質Ｅ、及びヌクレオカプシドリンタンパク質、またはそれらの抗原性断片である。複数の実施形態では、スパイク表面糖タンパク質は、Ｓ１サブユニットもしくはＳ２サブユニット、またはそれらの抗原性断片である。

【0417】

複数の実施形態では、感染性に関連するタンパク質をコードする核酸分子はｍＲＮＡであり、ｍＲＮＡは、任意選択で、インビトロ転写されるか、または合成である。複数の実施形態では、ｍＲＮＡは、任意選択でプソイドウリジン及び５－メトキシウリジンから選択される１つ以上の非標準ヌクレオチドを含む。

【0418】

複数の実施形態では、ｍＲＮＡは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク表面糖タンパク質、膜糖タンパク質Ｍ、エンベロープタンパク質Ｅ、及びヌクレオカプシドリンタンパク質、またはそれらの抗原性断片をコードする。

【0419】

複数の実施形態では、本組成物は、低下したＣ－Ｃケモカイン受容体５型（ＣＣＲ５）活性及びＣ－Ｘ－Ｃケモカイン受容体４型（ＣＸＣＲ４）活性を有するタンパク質をコードする核酸を含む巨核球由来細胞外小胞を含む。複数の実施形態では、本組成物は、変異型ＣＣＲ５またはＣＸＣＲ４をコードする核酸分子を含む巨核球由来細胞外小胞を含む。

【0420】

複数の実施形態では、本組成物は、Ｃ－Ｃケモカイン受容体５型（ＣＣＲ５）活性及びＣ－Ｘ－Ｃケモカイン受容体４型（ＣＸＣＲ４）活性を低下させることができる遺伝子編集タンパク質をコードする核酸分子を含む巨核球由来細胞外小胞を含む。複数の実施形態では、遺伝子編集タンパク質をコードする核酸分子は、ケモカイン受容体５型（ＣＣＲ５）活性及びＣ－Ｘ－Ｃケモカイン受容体４型（ＣＸＣＲ４）活性を約１０％～約２０％低下させる。複数の実施形態では、遺伝子編集タンパク質をコードする核酸分子は、ケモカイン受容体５型（ＣＣＲ５）活性及びＣ－Ｘ－Ｃケモカイン受容体４型（ＣＸＣＲ４）活性を約２０％～約３０％低下させる。複数の実施形態では、遺伝子編集タンパク質をコードする核酸分子は、ケモカイン受容体５型（ＣＣＲ５）活性及びＣ－Ｘ－Ｃケモカイン受容体４型（ＣＸＣＲ４）活性を約３０％～約４０％低下させる。複数の実施形態では、遺伝子編集タンパク質をコードする核酸分子は、ケモカイン受容体５型（ＣＣＲ５）活性及びＣ－Ｘ－Ｃケモカイン受容体４型（ＣＸＣＲ４）活性を約４０％～約５０％低下させる。複数の実施形態では、遺伝子編集タンパク質をコードする核酸分子は、ケモカイン受容体５型（ＣＣＲ５）活性及びＣ－Ｘ－Ｃケモカイン受容体４型（ＣＸＣＲ４）活性を約５０％～約６０％低下させる。複数の実施形態では、遺伝子編集タンパク質をコードする核酸分子は、ケモカイン受容体５型（ＣＣＲ５）活性及びＣ－Ｘ－Ｃケモカイン受容体４型（ＣＸＣＲ４）活性を約６０％～約７０％低下させる。複数の実施形態では、遺伝子編集タンパク質をコードする核酸分子は、ケモカイン受容体５型（ＣＣＲ５）活性及びＣ－Ｘ－Ｃケモカイン受容体４型（ＣＸＣＲ４）活性を約７０％～約８０％低下させる。

【0421】

血小板減少症／貧血
様々な実施形態では、本発明は、血液細胞の異常数または異常機能に特徴付けられる疾患または障害を治療するための方法に関する。かかる疾患または障害は、複数の実施形態では、遺伝性疾患または障害である。

【0422】

様々な実施形態では、本発明は、造血の疾患または障害を治療するための方法に関する。

【0423】

血小板減少症は、１５０，０００／μＬ未満の血清血小板数に関連する。血小板減少症は、軽度、中等度、及び重度に層別化することができる（それぞれ、７５，０００－１５０，０００／μＬ、５０，０００－７５，０００／μＬ、及び５０，０００／μＬ未満の血小板数に相当する）。

【0424】

ある態様では、本発明は、血小板減少症を治療するための方法であって、有効量の本明細書に開示される組成物を投与することを含み、当該組成物が、カーゴを含む巨核球由来細胞外小胞を含む、方法に関する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、内腔を取り囲む脂質二重層膜を含み、ヒト多能性幹細胞に由来し、巨核球由来細胞外小胞内腔は、カーゴを含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の内腔内に位置するカーゴに加えて、またはその代替として、カーゴは、小胞の表面と会合している。複数の実施形態では、カーゴは、ＲＮＡ、ＤＮＡ、タンパク質、炭水化物、脂質、生体分子、及び小分子のうちの１つ以上から選択される。複数の実施形態では、カーゴは、１つ以上の治療薬である。

【0425】

ある態様では、本発明は、血小板減少症を治療するための方法であって、有効量の本明細書に開示される組成物を投与することを含み、当該組成物が、機能性血小板減少症関連遺伝子をコードする核酸もしくはそのタンパク質産物、または機能性血小板減少症関連遺伝子を作製することができる遺伝子編集タンパク質をコードする核酸もしくはそのタンパク質産物を含む、巨核球由来細胞外小胞を含む、方法に関する。

【0426】

別の態様では、本発明は、血小板減少症を治療するための方法であって、本明細書に開示される組成物とインビトロで接触した細胞を含む有効量の組成物を投与することを含み、当該組成物が、機能性血小板減少症関連遺伝子をコードする核酸もしくはそのタンパク質産物、または機能性血小板減少症関連遺伝子を作製することができる遺伝子編集タンパク質をコードする核酸もしくはそのタンパク質産物を含む、巨核球由来細胞外小胞を含む、方法に関する。

【0427】

複数の実施形態では、本組成物及び本方法の巨核球由来細胞外小胞は、軽度の血小板減少症を有する患者を治療するために使用される。複数の実施形態では、本組成物及び本方法の巨核球由来細胞外小胞は、中等度の血小板減少症を有する患者を治療するために使用される。複数の実施形態では、本組成物及び本方法の巨核球由来細胞外小胞は、重度の血小板減少症を有する患者を治療するために使用される。

【0428】

複数の実施形態では、血小板減少症を有する患者は、（ａ）血小板輸血及び（ｂ）ＴＰＯ受容体アゴニストの投与のうちの１つ以上から選択される治療と組み合わせて、巨核球由来細胞外小胞を含む治療を投与される。

【0429】

複数の実施形態では、血小板減少症は、先天性無巨核球性血小板減少症（ＣＡＭＴ）、橈骨欠損を伴う血小板減少症、先天性血小板減少症を伴う橈尺骨癒合症、サラセミアを伴うＸ連鎖巨大血小板性血小板減少症、ＧＢ１１ｂ関連血小板減少症、Ｘ連鎖血小板減少症／ウィスコット・アルドリッチ症候群、フォン・ヴィレブランド病２Ｂ型、血小板型フォン・ヴィレブランド病、ＣＹＣＳ関連血小板減少症、免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病）、及び骨髄除去／化学療法誘発性血小板減少症から選択される。

【0430】

複数の実施形態では、血小板減少症は、ＣＡＭＴである。

【0431】

複数の実施形態では、本方法により、患者における巨核球形成が促進される。

【0432】

複数の実施形態では、本方法により、患者における血小板数の増加がもたらされる。

【0433】

複数の実施形態では、血小板数の増加は、約１００×１０^７血小板／Ｌを超える、または約１００×１０^８血小板／Ｌを超える、または約１００×１０^９血小板／Ｌを超える、または約１１０×１０^９血小板／Ｌを超える、または約１２０×１０^９血小板／Ｌを超える、または約１３０×１０^９血小板／Ｌを超える、または約１４０×１０^９血小板／Ｌを超える、または約１５０×１０^９血小板／Ｌを超える。

【0434】

複数の実施形態では、本方法により、患者が再生不良性貧血及び／または白血病を発症する可能性が低下する。

【0435】

複数の実施形態では、本方法により、造血幹細胞（ＨＳＣ）移植の必要性が取り除かれる。

【0436】

複数の実施形態では、患者は、進行性肝疾患を有する。複数の実施形態では、進行性肝疾患を有する患者は、進行性肝疾患を有しないヒトと比較して増加した濃度のフォン・ヴィレブランド因子を有する。複数の実施形態では、進行性肝疾患を有する患者は、増加した濃度の抗凝固因子、例えば、アンチトロンビン及びタンパク質Ｃを有する、及び／または上昇したレベルの凝血促進因子ＶＩＩＩを有する。

【0437】

複数の実施形態では、患者は、乳幼児である。

【0438】

複数の実施形態では、本方法により、患者に機能性トロンボポエチン（ＴＰＯ）受容体が提供される。

【0439】

複数の実施形態では、遺伝子は、機能性ｃ－Ｍｐｌ遺伝子であるか、または機能性ｃ－Ｍｐｌ遺伝子を形成することができる遺伝子編集タンパク質をコードする。

【0440】

複数の実施形態では、疾患または障害は、異常な（例えば、非疾患状態と比較して低下した）血液細胞機能に特徴付けられる。例えば、複数の実施形態では、本疾患または本障害は、血液細胞数の減少ではなく、（例えば、機能不全タンパク質に起因する）活性に特徴付けられ得る。

【0441】

異常ヘモグロビン症
異常ヘモグロビン症は、世界中で最もよく見られる遺伝性疾患の１つである。複数の実施形態では、本発明の方法及び本組成物の巨核球由来細胞外小胞は、患者における異常ヘモグロビン症を治療するために使用される。複数の実施形態では、異常ヘモグロビン症は、（ａ）サラセミア症候群の群または（ｂ）構造ヘモグロビン（Ｈｂ）バリアント（異常ヘモグロビン）の群に分類される。複数の実施形態では、サラセミア症候群は、α－サラセミアまたはβ－サラセミアである。複数の実施形態では、構造ヘモグロビンバリアントは、Ｈｂバリアントである。複数の実施形態では、構造ヘモグロビンバリアントは、ＨｂＳ、ＨｂＥ、またはＨｂＣである。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、軽度の低色素性貧血、中等度の血液疾患、及び多臓器関与を伴う重度の生涯にわたる輸血依存性貧血から選択される異常ヘモグロビン症の臨床兆候のうちの１つ以上を治療するために使用される。

【0442】

複数の実施形態では、異常ヘモグロビン症は、鎌状赤血球症（ＳＣＤ）である。鎌状赤血球症（ＳＣＤ）は、ＳＮＰ ｒｓ３３４の１１番染色体の一方または両方の対立遺伝子における正常なアデニンからチミンへの単一ヌクレオチド－単一遺伝子変異転位によって引き起こされる血液障害の群を包含する。アデニンの代わりにチミンが転位すると、虚血及び／または梗塞の間欠的または永続的エピソードを引き起こす異常ヘモグロビン（例えば、ＨｂＳ）の転写が引き起こされる。鎌状ヘモグロビンは、正常なヘモグロビンの解剖学的構造及び弾性特性を変化させ、鎌状ヘモグロビンに含まれる赤血球の粘性を高め、酸素及び栄養素を遠位の臓器及び組織に輸送及び送達する能力を低下させる。複数の実施形態では、本組成物及び本方法は、ＳＮＰ ｒｓ３３４においてアデニン（Ａ）の代わりにチミン（Ｔ）が転位することにより両方の対立遺伝子に影響が及ぼされるヘテロ接合性鎌状ヘモグロビン（別名、鎌状赤血球貧血）を治療する。複数の実施形態では、本組成物及び本方法は、１つの対立遺伝子に影響が及ぼされる（Ａ／Ｔ）ヘテロ接合性鎌状ヘモグロビンを治療する。

【0443】

別の態様では、本発明は、異常ヘモグロビン症を治療するための方法であって、有効量の本明細書に開示される組成物を投与することを含み、当該組成物が、カーゴを含む巨核球由来細胞外小胞を含む、方法に関する。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、内腔を取り囲む脂質二重層膜を含み、ヒト多能性幹細胞に由来し、巨核球由来細胞外小胞内腔は、カーゴを含む。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の内腔内に位置するカーゴに加えて、またはその代替として、カーゴは、小胞の表面と会合している。複数の実施形態では、カーゴは、ＲＮＡ、ＤＮＡ、タンパク質、炭水化物、脂質、生体分子、及び小分子のうちの１つ以上から選択される。複数の実施形態では、カーゴは、１つ以上の治療薬である。

【0444】

ある態様では、本発明は、異常ヘモグロビン症を治療するための方法であって、有効量の本明細書に開示される組成物を投与することを含み、当該組成物が、機能性異常ヘモグロビン症関連遺伝子をコードする核酸もしくはそのタンパク質産物、または機能性異常ヘモグロビン症関連遺伝子を作製することができる遺伝子編集タンパク質をコードする核酸もしくはそのタンパク質産物を含む、巨核球由来細胞外小胞を含む、方法に関する。

【0445】

別の態様では、本発明は、異常ヘモグロビン症を治療するための方法であって、本明細書に開示される組成物とインビトロで接触する細胞を含む有効量の組成物を投与することを含み、当該組成物が、機能性異常ヘモグロビン症関連遺伝子をコードする核酸もしくはそのタンパク質産物、または機能性異常ヘモグロビン症関連遺伝子を作製することができる遺伝子編集タンパク質をコードする核酸もしくはそのタンパク質産物を含む、巨核球由来細胞外小胞を含む、方法に関する。

【0446】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞による治療は、（ａ）幹細胞移植、（ｂ）鉄キレート化と組み合わせた生涯にわたる定期的な輸血、及び（ｃ）鎮痛剤、抗生物質、ＡＣＥ阻害剤、及びヒドロキシ尿素を含む薬物、のうちの１つ以上と組み合わせられる。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞による治療は、診断試験と組み合わせられる。複数の実施形態では、診断試験は、（ａ）鉄欠乏検査、（ｂ）赤血球数、（ｃ）ＤＮＡ検査、及び（ｄ）ヘモグロビン検査、のうちの１つ以上から選択される。

【0447】

複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、サラセミアヘモグロビン合成障害を治療するために使用される。複数の実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、異常ヘモグロビンを有する患者を治療するために使用される。鎌状赤血球症には、異常なＨｂＳレベル、特に５０％超のＨｂＳを有する全ての兆候が含まれる。

【0448】

複数の実施形態では、異常ヘモグロビン症は、鎌状赤血球症である。複数の実施形態では、異常ヘモグロビン症は、β－サラセミアである。

【0449】

複数の実施形態では、本方法により、赤血球変形、溶血性貧血、微小血管閉塞、及び虚血性組織損傷のうちの１つ以上が軽減または予防される。

【0450】

複数の実施形態では、機能性異常ヘモグロビン症関連遺伝子は、ヘモグロビンの一部をコードする遺伝子である。複数の実施形態では、機能性異常ヘモグロビン症関連遺伝子は、ヘモグロビンのグロビン鎖の一方をコードする遺伝子である。

【0451】

複数の実施形態では、機能性異常ヘモグロビン症関連遺伝子は、ヘモグロビン溶解性、安定性、及び／または酸素親和性を非疾患レベルに回復させる。複数の実施形態では、機能性異常ヘモグロビン症関連遺伝子は、ヘモグロビン溶解性、安定性、及び／または酸素親和性を、非疾患レベルの約４０％～約５０％まで回復させる。複数の実施形態では、機能性異常ヘモグロビン症関連遺伝子は、ヘモグロビン溶解性、安定性、及び／または酸素親和性を、非疾患レベルの約５０％及び約６０％まで回復させる。複数の実施形態では、機能性異常ヘモグロビン症関連遺伝子は、ヘモグロビン溶解性、安定性、及び／または酸素親和性を、非疾患レベルの約６０％及び約７０％まで回復させる。複数の実施形態では、機能性異常ヘモグロビン症関連遺伝子は、ヘモグロビン溶解性、安定性、及び／または酸素親和性を、非疾患レベルの約７０％及び約８０％まで回復させる。複数の実施形態では、機能性異常ヘモグロビン症関連遺伝子は、ヘモグロビン溶解性、安定性、及び／または酸素親和性を、非疾患レベルの約８０％及び約９０％まで回復させる。複数の実施形態では、機能性異常ヘモグロビン症関連遺伝子は、ヘモグロビン溶解性、安定性、及び／または酸素親和性を、非疾患レベルの約９０％及び約１００％まで回復させる。複数の実施形態では、機能性異常ヘモグロビン症関連遺伝子は、ヘモグロビン溶解性、安定性、及び／または酸素親和性を、非疾患レベルと比較して改善する。複数の実施形態では、機能性異常ヘモグロビン症関連遺伝子は、ヘモグロビン溶解性、安定性、及び／または酸素親和性を増加させる。複数の実施形態では、機能性異常ヘモグロビン症関連遺伝子は、ヘモグロビン溶解性、安定性、及び／または酸素親和性を、非疾患レベルと比較して増加させる。

【0452】

複数の実施形態では、機能性異常ヘモグロビン症関連遺伝子は、ヘモグロビン量を非疾患レベルに回復させる。複数の実施形態では、機能性異常ヘモグロビン症関連遺伝子は、ヘモグロビン量を非疾患レベルの約４０％～約５０％まで回復させる。複数の実施形態では、機能性異常ヘモグロビン症関連遺伝子は、ヘモグロビン量を非疾患レベルの約５０％及び約６０％まで回復させる。複数の実施形態では、機能性異常ヘモグロビン症関連遺伝子は、ヘモグロビン量を非疾患レベルの約６０％及び約７０％まで回復させる。複数の実施形態では、機能性異常ヘモグロビン症関連遺伝子は、ヘモグロビン量を非疾患レベルの約７０％及び約８０％まで回復させる。複数の実施形態では、機能性異常ヘモグロビン症関連遺伝子は、ヘモグロビン量を非疾患レベルの約８０％及び約９０％まで回復させる。複数の実施形態では、機能性異常ヘモグロビン症関連遺伝子は、ヘモグロビン量を非疾患レベルの約９０％及び約１００％まで回復させる。複数の実施形態では、機能性異常ヘモグロビン症関連遺伝子は、ヘモグロビン量を非疾患レベルと比較して改善する。複数の実施形態では、機能性異常ヘモグロビン症関連遺伝子は、ヘモグロビン量を増加させる。複数の実施形態では、機能性異常ヘモグロビン症関連遺伝子は、ヘモグロビン量を非疾患レベルと比較して増加させる。

【0453】

複数の実施形態では、機能性異常ヘモグロビン症関連遺伝子は、ＲＢＣ鎌状化を予防または軽減する。

【0454】

複数の実施形態では、機能性異常ヘモグロビン症関連遺伝子は、鎌状ヘモグロビン重合を予防または軽減する。

【0455】

複数の実施形態では、機能性異常ヘモグロビン症関連遺伝子は、ベータグロビン（ＨＢＢ）である。複数の実施形態では、遺伝子は、機能性ベータグロビン（ＨＢＢ）遺伝子を形成することができる遺伝子編集タンパク質をコードする。

【0456】

医薬組成物
治療的治療は、治療が投与される患者に対する毒性を最小限に抑えながら、有効用量で治療効果を達成するように設計された１つ以上の投与経路及び１つ以上の製剤の使用を含む。

【0457】

複数の実施形態では、有効用量は、インビボでの細胞傷害性を実質的に回避する量である。様々な実施形態では、有効用量は、ヒト患者における免疫反応を実質的に回避する量である。例えば、免疫反応は、自然免疫系によって媒介される免疫応答であり得る。免疫応答は、当該技術分野で既知のマーカー（例えば、サイトカイン、インターフェロン、ＴＬＲ）を使用して監視することができる。複数の実施形態では、有効用量は、残留毒性を緩和するために使用される免疫抑制剤によるヒト患者の治療の必要性を取り除く。

【0458】

製剤化の際に、溶液が、本明細書に記載されるように、投薬製剤と適合した様式で、かつ治療的に有効であるような量で、投与され得る。製剤は、注射用溶液などの多様な剤形で容易に投与され得る。水溶液での非経口投与のために、例えば、溶液は、一般に、好適に緩衝化され、液体希釈剤は、最初に、例えば、十分な生理食塩水またはグルコースで等張化される。かかる水溶液は、例えば、静脈内、筋肉内、皮下、及び腹腔内投与のために使用され得る。好ましくは、当業者に既知のように、滅菌水媒体が用いられる。

【0459】

医薬調製物は、送達試薬（別名「トランスフェクション試薬」、別名「ビヒクル」、別名「送達ビヒクル」）及び／または賦形剤を更に含み得る。薬学的に許容される送達試薬、賦形剤、及びそれらの調製及び使用方法（医薬調製物を調製するための方法及びそれを患者に投与するための方法を含む）は、当該技術分野で周知であり、例えば、参照により全体が本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第ＵＳ２００８／０２１３３７７号を含む多数の刊行物に記載されている。複数の態様では、本発明は、本明細書に開示される組成物と、薬学的に許容される賦形剤または担体と、を含む、医薬組成物に関する。

【0460】

例えば、本組成物は、薬学的に許容される塩の形態とすることができる。かかる塩としては、例えば、参照により全体が本明細書に組み込まれる、Ｊ．Ｐｈａｒｍａ．Ｓｃｉ．６６，２－１９（１９７７）及びＴｈｅ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ；Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ ＵｓｅＰ．Ｈ．Ｓｔａｈｌ ａｎｄ Ｃ．Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ（ｅｄｓ．），Ｖｅｒｌａｇ，Ｚｕｒｉｃｈ（Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）２００２に列記されているものが挙げられる。薬学的に許容される塩の非限定的な例としては、硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、重酒石酸塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチジン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、サッカラート、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩、カンファースルホン酸塩、パモ酸塩、フェニル酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、アクリル酸塩、クロロ安息香酸塩、ジニトロ安息香酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、メトキシ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ｏ－アセトキシ安息香酸塩、ナフタレン－２－安息香酸塩、イソ酪酸塩、フェニル酪酸塩、α－ヒドロキシ酪酸塩、ブチン－１，４－ジカルボン酸塩、ヘキシン－１，４－ジカルボン酸塩、カプリン酸塩、カプリル酸塩、桂皮酸塩、グリコール酸塩、ヘプタン酸塩、馬尿酸塩、リンゴ酸塩、ヒドロキシマレイン酸塩、マロン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、ニコチン酸塩、フタル酸塩、テレフタル酸塩、プロピオル酸塩、プロピオン酸塩、フェニルプロピオン酸塩、セバシン酸塩、スベリン酸塩、ｐ－ブロモブベンゼンスルホン酸塩、クロロベンゼンスルホン酸塩、エチルスルホン酸塩、２－ヒドロキシエチルスルホン酸塩、メチルスルホン酸塩、ナフタレン－１－スルホン酸塩、ナフタレン－２－スルホン酸塩、ナフタレン－１，５－スルホン酸塩、キシレンスルホン酸塩、酒石酸塩、ナトリウム、カリウム、リチウムなどのアルカリ金属の水酸化物；カルシウム及びマグネシウムなどのアルカリ土類金属の水酸化物；アルミニウム及び亜鉛などの他の金属の水酸化物；非置換またはヒドロキシ置換モノ－、ジ－、またはトリ－アルキルアミン、ジシクロヘキシルアミンなどのアンモニア及び有機アミン；トリブチルアミン；ピリジン；Ｎ－メチル、Ｎ－エチルアミン；ジエチルアミン；トリエチルアミン；モノ－、ビス－、またはトリス－（２－ヒドロキシエチル）アミン、２－ヒドロキシ－ｔｅｒｔ－ブチルアミン、またはトリス－（ヒドロキシメチル）メチルアミンなどのモノ－、ビス－、またはトリス－（２－ＯＨ－低級アルキルアミン）；Ｎ，Ｎ－ジメチル－Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）アミンまたはトリ－（２－ヒドロキシエチル）アミンなどのＮ，Ｎ－ジ－低級アルキル－Ｎ－（ヒドロキシル－低級アルキル）－アミン；Ｎ－メチル－Ｄ－グルカミン；ならびにアルギニン、リジンなどのアミノ酸などが挙げられる。

【0461】

本医薬組成物は、水及び油（石油、動物油、植物油、もしくは合成起源油、例えば、ピーナッツ油、ダイズ油、鉱油、ゴマ油などを含む）などの液体を含む賦形剤を含むことができる。医薬賦形剤は、例えば、生理食塩水、アカシアガム、ゼラチン、デンプン糊、タルク、ケラチン、コロイド状シリカ、尿素などとすることができる。加えて、補助剤、安定化剤、増粘剤、滑沢剤、及び着色剤を使用することができる。複数の実施形態では、薬学的に許容される賦形剤は、患者に投与された際に滅菌である。好適な医薬賦形剤には、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、乾燥脱脂乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなども含まれる。本明細書に記載のいずれの薬剤も、所望の場合、微量の湿潤剤もしくは乳化剤、またはｐＨ緩衝剤も含むことができる。

【0462】

複数の実施形態では、本組成物は、局所、髄腔内、病巣内、冠状動脈内、静脈内（ＩＶ）、関節内、筋肉内、鼻腔内、及び気管支内投与、ならびに膵臓内血管内注射、髄核内、腰椎穿刺、心筋内、心内膜内、瘻管内、髄間腔、鼻腔内、及び硬膜腔内注射を介した投与のうちの１つ以上用に製剤化される。

【0463】

複数の実施形態では、本組成物は、注入用に製剤化される。複数の実施形態では、本組成物は、注入用に製剤化され、当該組成物は、末梢ライン、中心ライン、トンネル型ライン、植込み型ポート、及び／またはカテーテルを介して、患者の静脈内に針を介して、患者の血流に送達される。複数の実施形態では、患者は、注入により、水分補給などの支持薬または支持治療を受ける場合もある。複数の実施形態では、本組成物は、静脈内注入用に製剤化される。複数の実施形態では、注入は、連続注入、二次静脈内療法（ＩＶ）、及び／またはＩＶプッシュである。複数の実施形態では、本組成物の注入は、注入ポンプ、皮下注射針、点滴チャンバ、末梢カニューレ、及び圧力バッグのうちの１つ以上から選択される機器の使用により施され得る。

【0464】

複数の実施形態では、本組成物は、例えば、外皮内、皮内、または皮下に、薬用化粧品の形態で、皮膚内または皮膚上に導入される（例えば、Ｅｐｓｔｅｉｎ，Ｈ．，Ｃｌｉｎ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．２７（５）：４５３－４６０（２００９）を参照されたい）。複数の実施形態では、本組成物は、クリーム、ローション、軟膏、ゲル、スプレー、溶液などの形態である。複数の実施形態では、本組成物は、界面活性剤、脂肪酸、胆汁酸塩、キレート剤、非キレート非界面活性剤などであるが、これらに限定されない浸透促進剤を更に含む。複数の実施形態では、本組成物は、芳香剤、着色剤、日焼け止め剤、抗菌剤、及び／または保湿剤も含み得る。

【0465】

本明細書に開示される本発明がより効率的に理解されるように、実施例が以下に提供される。これらの実施例は説明のみを目的としており、いかなる方法によっても本発明を限定するものと解釈されるべきではないことを理解されたい。

【実施例】

【0466】

これより、本発明を以下の実施例を参照して説明する。これらの実施例は、説明のみを目的として提供されており、本発明は、決してこれらの実施例に限定されるものと解釈されるべきではなく、本明細書に提供される教示の結果として明らかになるありとあらゆる変形を包含すると解釈されるべきである。

【0467】

更なる説明なしに、当業者であれば、前述の説明及び以下の説明的実施例を使用して、本発明の化合物を作製及び利用し、特許請求される方法を実施することができると考えられる。したがって、以下の実施例は、本発明の好ましい実施形態を具体的に指摘し、いかなる方法によっても本開示の残りの部分を限定するものと解釈されるべきではない。

【0468】

これより、本明細書に開示される実験に用いた材料及び方法を説明する。

【0469】

材料及び方法
ＭＫＥＶを、１００ＫＤａのスピンフィルターを使用して濃縮し、サイズ排除クロマトグラフィーにより単離し、プロテオミクス分析及びトランスクリプトーム分析のために処理した。

【0470】

プロテオミクス分析のために、細胞外小胞タンパク質を、アセトン中でインキュベートすることによって沈殿させ、続いて、尿素を補充した炭酸水素アンモニウム緩衝液中で遠心分離及び再懸濁した。タンパク質ペレットをトリプシン／Ｌｙｓ－Ｃ消化のために再懸濁し、ペプチドをＣ１８カラム上で抽出した。ペプチド試料を、ｔｉｍｓＴＯＦ Ｐｒｏ質量分析計（Ｂｒｕｋｅｒ Ｄａｌｔｏｎｉｃｓ，ＵＳＡ）上でＬＣ－ＭＳ／ＭＳを使用して分析した。データを、１００～１７００ｍ／ｚの質量範囲でデータ依存的自動ＭＳ／ＭＳを使用して取得し、ＰＡＳＥＦを、１０（デューティサイクル１．２７秒）に設定したいくつかのＰＡＳＥＦスキャン、ならびに０．４分の動的除外、ｍ／ｚ依存的分離ウィンドウ、及び４２．０ｅＶの衝突エネルギーで有効にした。目標強度を２０，０００に設定し、強度閾値を２，５００に設定した。データ処理のために、初期検索を、Ｐｒｅｖｉｅｗ（商標）バージョン４．０．１２（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｍｅｔｒｉｃｓ，ＵＳＡ）を用いて、ホモサピエンス参照プロテオーム（Ｕｎｉｐｒｏｔ、７８，１２０個のタンパク質及び２０，６００個の遺伝子（２０２１年３月７日現在））に対して行い、Ｂｙｏｎｉｃ（商標）バージョン４．０．１２（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｍｅｔｒｉｃｓ，ＵＳＡ）によるその後の完全な検索のために、質量誤差、消化特異性、及び修飾を測定した。Ｂｙｏｎｉｃ（商標）検索戦略を、以下のパラメータを用いて、同じタンパク質データベース上でＰｒｅｖｉｅｗ（商標）によって設定した：前駆イオンの場合２０ｐｐｍの質量耐性及び断片イオンの場合４０ｐｐｍの質量耐性、ペプチド－スペクトル一致（ＰＳＭ）レベルでの連結フォワード－リバースデータベース検索を使用して推定した１％未満の偽発見率（ＦＤＲ）、最大２つの欠損切断を伴う半特異的Ｎ末端不規則（Ｎ－ｒａｇｇｅｄ）トリプシン切断、及び静的システインカルバミドメチル化（＋５７．０２１４６４Ｄａ）。以下の可変修飾が特定された：メチオニンモノ／ジ酸化（＋１５．９９４９１５／＋３１．９８９８２９Ｄａ）、メチオニンの脱チオメチル化（－４８．００３３７１Ｄａ）、アスパラギンの脱アミド化（＋０．９８４０１６Ｄａ）、ピロ－ＧｌｕへのＮ末端グルタミン／グルタミン酸変換（－１７．０２６５４９／－１８．０１０５６５Ｄａ）、Ｎ末端アンモニア欠損（－１７．０２６５４９Ｄａ）、ペプチドＮ末端に加えてリジン及びアルギニンのカルバミル化（＋４３．００５８１４Ｄａ）、及びＮ末端ペプチドアセチル化（＋４２．０１０５６５Ｄａ）。６つの複製物に対応するＢｙｏｎｉｃ出力ファイルをＢａｔｃｈｅｒ（商標）バージョン４．０（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｍｅｔｒｉｃｓ，ＵＳＡ）と統合した。デコイタンパク質ＩＤ及び共通の汚染物質を最終データセットからフィルターで除外した（例えば、トリプシン、血清アルブミン、ヒトケラチンなど）。識別ｐ値０．００１以下（すなわち、タンパク質ｐ値３以上のｌｏｇ１０）を有するタンパク質のみを報告した。

【0471】

トランスクリプトーム分析のために、ＲＮＡを抽出し、トランスクリプトーム分析を、Ｉｌｌｕｍｉｎａに対するＮＥＢＮｅｘｔ ｕｌｔｒａＩＩ指向性ＲＮＡライブラリ調製キットを使用して、各ライブラリにつき４０ｎｇの全ＲＮＡで行った。具体的には、製造業者の指示に従って、Ｉｌｌｕｍｉｎａに対するＮＥＢＮｅｘｔ Ｕｌｔｒａ ＩＩ指向性ＲＮＡライブラリ調製キット（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄｓ Ｂｉｏｌａｂｓ Ｉｎｃ．，Ｉｐｓｗｉｃｈ，ＭＡ，ＵＳＡ）を使用して、全ＲＮＡ配列決定ライブラリを調製した。断片化ＲＮＡを、ランダムプライマーを用いた逆転写酵素によるｃＤＮＡ合成の鋳型として使用した。ｃＤＮＡを二本鎖ＤＮＡに変換し、末端修復した。アダプターをライゲートした後に、ＡｘｙＰｒｅｐ Ｍａｇ ＰＣＲクリーンアップキット（Ａｘｙｇｅｎ，Ｂｉｇ Ｆｌａｔｓ，ＮＹ，ＵＳＡ）を用いた精製ステップ、ｄＵＴＰを含む鎖の切除、最後に、多重化のための特定のインデックス付きアダプターを組み込むための８サイクルのＰＣＲ濃縮ステップを行った。最終増幅ライブラリの品質を、ＴａｐｅＳｔａｔｉｏｎ ２２００（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｓａｎｔａ Ｃｌａｒａ，ＵＳＡ）上でＤＮＡスクリーンテープＤ１０００を用いて調べ、定量をＱＢｉｔ ３．０蛍光計（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｎａｄａ）上で行った。固有のインデックスを有する全ＲＮＡ－ｓｅｑライブラリを等モル比で一緒にプールし、次世代シーケンシングプラットフォームであるＧｅｎｏｍｉｃｓ Ｃｅｎｔｅｒ（ＣＨＵ ｄｅ Ｑｕｅｂｅｃ－Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｅ Ｌａｖａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｑｕｅｂｅｃ Ｃｉｔｙ，Ｃａｎａｄａ）で、ＮｏｖａＳｅｑ ６０００ ｆｌｏｗｃｅｌｌ Ｓ１上で対合末端１００ｐｂシーケンシングのために配列決定した。ライブラリの平均挿入サイズは、２４０ｂｐであった。平均被覆度／試料は、７５Ｍの対合末端リードであった。配列決定の質を、ｆａｓｔｑｃ（０．１１．２）を使用してシーケンサーから得た全ての１００ｂｐリードについて確保した（ワールドワイドウェブｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ．ｂａｂｒａｈａｍ．ａｃ．ｕｋ／ｐｒｏｊｅｃｔｓ／ｆａｓｔｑｃ／）。トリミング後に３０ｂｐを超える長さのリードのみを保持し、ヒトゲノムトランスクリプトーム（Ｈｏｍｏ＿ｓａｐｉｅｎｓ．ＧＲＣｈ３８．ｃｄｎａ．ａｌｌ．ｆａ）（ｒｅｌｅａｓｅ－１０４、Ｈｙｐｅｒｔｅｘｔ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｐｒｏｔｏｃｏｌ Ｓｅｃｕｒｅ ｆｔｐ．ｅｎｓｅｍｂｌ．ｏｒｇ／ｐｕｂ／ｒｅｌｅａｓｅ－１０４／ｆａｓｔａ／ｈｏｍｏ＿ｓａｐｉｅｎｓ／ｃｄｎａ／）と整列させた。転写物の存在量を、トランスクリプトームインデックス付け手順及びＫａｌｌｉｓｔｏ（Ｂｒａｙ ｅｔ ａｌ．２０１６）の擬似整列手順を使用して得た。

【0472】

ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ及びバルクＲＮＡ－ｓｅｑデータのデータ分析及び可視化を、Ｒ（バージョン４．０．３）を使用して実施した。ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ：３つ未満の特有のペプチドを有する同定及び定量したタンパク質群を下流分析から除外した。取得した本開示のＭｋＥＶプロテオームを、ＥｘｏＣａｒｔａデータベース及びＶｅｓｉｃｌｅＰｅｄｉａデータベースと比較した（Ｋｅｅｒｔｈｉｋｕｍａｒ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２０１６ Ｆｅｂ ２２；４２８（４）：６８８－６９２、Ｐａｔｈａｎ ｅｔ ａｌ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２０１９ Ｊａｎ ８；４７（Ｄ１）：Ｄ５１６－Ｄ５１９）。加えて、ＳＴＲＭ ＭｋＥＶプロテオームを、健常ドナーの以前に公開された新たに生成された血漿ＥＶプロテオームの集合と比較した（Ｋａｒｉｍｉ ｅｔ ａｌ．Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．２０１８；７５（１５）：２８７３－２８８６、Ｍｕｒａｏｋａ ｅｔ ａｌ．ｉＳｃｉｅｎｃｅ．２０２２；２５（４）：１０４０１２、Ｋｅｅｒｔｈｉｋｕｍａｒ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２０１６ Ｆｅｂ ２２；４２８（４）：６８８－６９２、Ｐａｔｈａｎ ｅｔ ａｌ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２０１９ Ｊａｎ ８；４７（Ｄ１）：Ｄ５１６－Ｄ５１９）。手短に言えば、ヒトエクソソーム／ＥＶ試料由来の同定されたタンパク質を、ＥｘｏＣａｒｔａ及びＶｅｓｉｃｌｅＰｅｄｉａから抽出した。ＥｘｏＣａｒｔａ／ＶｅｓｉｃｌｅＰｅｄｉａに含まれていない本開示のＭｋＥＶタンパク質を、以前に特徴付けられていないＭｋＥＶ特異的タンパク質として同定した。表面タンパク質及び膜タンパク質を、前述のように定義した（Ｂａｕｓｃｈ－Ｆｌｕｃｋ ｅｔ ａｌ，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ．２０１５ Ａｐｒ ２０；１０（３）：ｅ０１２１３１４、Ｔｈｕｌ ｅｔ ａｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ．２０１７ Ｍａｙ ２６；３５６（６３４０）：ｅａａｌ３３２１）。Ｋｙｏｔｏ Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ Ｇｅｎｅｓ ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｅｓ（ＫＥＧＧ）経路分析（Ｋａｎｅｈｉｓａ ａｎｄ Ｇｏｔｏ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２０００ Ｊａｎ １；２８（１）：２７－３０）を、Ｌｉｍｍａ（バージョン３．４４．３）を使用して行った。タンパク質間相互作用ネットワークを、ＳＴＲＩＮＧデータベース（Ｓｚｋｌａｒｃｙｋ ｅｔ ａｌ．２０２１）を使用して構築し、Ｃｙｔｏｓｃａｐｅ（バージョン３．８．２）を使用して可視化した。物理的相互作用ネットワーク及び機能的／物理的ＳＴＲＩＮＧネットワーク（データベースエビデンス及び実験的エビデンスのみ）を、相互作用信頼度スコアカットオフ０．４を使用して計算した。ＳＴＲＭ ＭｋＥＶバッチのプロテオームを再現性について検査し、試料毎に別個の正規化を必要とした。タンパク質強度を、各々の所与の試料中のタンパク質強度の合計を使用して、試料ロード正規化した。ＲＮＡ－ｓｅｑ：未加工数（ｒａｗ ｃｏｕｎｔ）を、１００万当たりの転写物（ＴＰＭ）値を計算することにより、遺伝子の長さ及び配列決定の深さに対して正規化した。タンパク質コード遺伝子を抽出し、低発現遺伝子を分析から除外した（カットオフ：技術的複製毎に１ＴＰＭ未満）。導出した同定されたタンパク質コード転写物セットを、ＥｘｏＣａｒｔａ及びＶｅｓｉｃｌｅＰｅｄｉａに含まれるヒトエクソソーム／ＥＶ試料からのｍＲＮＡエビデンスと比較した。いずれのデータベースでも以前に同定されなかった遺伝子を、特有のＭｋＥＶ転写物として分類した。ＫＥＧＧ経路分析を前述のように行った。

【0473】

共焦点顕微鏡法を行い、初代ＨＳＰＣによるＭｋＥＶ送達カーゴの内在化を決定した。最初に、野生型マウスから骨髄を採取し、ＮＨ_４Ｃｌ（ＳＴＥＭＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）及び系譜枯渇（ＳＴＥＭＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して赤血球溶解に供した。ＨＳＰＣを蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）によって単離し、系譜枯渇ＣＤ１５０＋ＣＤ４８－細胞として定義した。ＭｋＥＶにＧＦＰタグ付きＣａｓ９（Ｓｉｇｍａ）及びガイドＲＮＡ（Ｓｉｇｍａ）をロードし、ＲＮＰに事前形成した。ＨＳＰＣを、ロードしたＭｋＥＶと１８時間共培養した。インキュベーション期間後に、未固定細胞を顕微鏡スライド上に移し、Ｚｅｉｓｓ ７８０共焦点顕微鏡及び６３倍対物レンズを使用して撮像した。Ｚｅｎ Ｂｌａｃｋソフトウェアを画像捕捉及び処理に使用した。

【0474】

共培養を、ＮＨ_４Ｃｌ（ＳＴＥＭＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用した赤血球溶解後の初代野生型全骨髄細胞を使用して実施した。ＭｋＥＶにＧＦＰタグ付きＣａｓ９をロードするか、またはＭｋＥＶをＤｉＤ Ｖｙｂｒａｎｔ色素（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で標識した。ＤｉＤ標識を製造業者の指示に従って行い、その後、２回の洗浄ステップを行った。ロードしたＭｋＥＶまたは標識ＭｋＥＶを、１ｅ６個の全骨髄細胞と２４時間共培養した。その後、共培養物を、以下の抗体：ＣＤ３、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１９、ＧＲ－１、ＴＥＲ１１９、ＣＤ４５Ｒ／Ｂ２２０、７ＡＡＤ、ｃＫｉｔ、Ｓｃａ－１を使用して、フローサイトメトリー（ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａ Ｘ－２０，ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）により分析したフローサイトメトリーデータ分析を、ＦｌｏｗＪｏ（バージョン１０．８．１、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を使用して実施した。

【0475】

実施例１：巨核球由来細胞外小胞（ＭｋＥＶ）は特有のタンパク質マーカーを含む。
図１Ａ～１Ｂに示すように、本開示のＭｋＥＶプロテオームと、上位１００個のエクソソームマーカータンパク質との重複が、データベースＥｘｏＣａｒｔａ（Ｋｅｅｒｔｈｉｋｕｍａｒ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２０１６；４２８（４）：６８８－６９２）（ワールドワイドウェブｅｘｏｃａｒｔａ．ｏｒｇ）で同定された。これらのタンパク質のうちの９６個が本開示のＭｋＥＶプロテオームで同定されたが、４個は同定されなかった（図１Ａ）。図１Ｂに示すように、ＶｅｓｉｃｌｅＰｅｄｉａデータベース（Ｐａｔｈａｎ ｅｔ ａｌ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２０１９ Ｊａｎ ８；４７：Ｄ５１６－Ｄ５１９）（ワールドワイドウェブｍｉｃｒｏｖｅｓｉｃｌｅｓ．ｏｒｇ）によって定義される上位１００個のＥＶマーカータンパク質のうち、これらのタンパク質の９１個が本ＭｋＥＶプロテオームで同定されたが、９個は同定されなかった。まとめると、本開示のＭｋＥＶは、特有の細胞外小胞及びエクソソームマーカーのみならず、共通の細胞外小胞及びエクソソームマーカーも含む。

【0476】

図２Ａ～２Ｂのベン図に示すように、本開示のＭｋＥＶに特有の１４７個のタンパク質（図２Ａ）。本開示のＭｋＥＶの細胞表面タンパク質とＶｅｓｉｃｌｅＰｅｄｉａデータベースによって捕捉された表面タンパク質との重複は、１３個の細胞表面タンパク質及び膜タンパク質が本開示のＭｋＥＶに特有であることを示した（図２Ｂ）。表面タンパク質及び膜タンパク質を、Ｂａｕｓｃｈ－Ｆｌｕｃｋ ｅｔ ａｌ．（Ｂａｕｓｃｈ－Ｆｌｕｃｋ ｅｔ ａｌ．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ．１０：ｅ０１２１３１４）及びｔｈｅ Ｈｕｍａｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｔｌａｓ（Ｔｈｕｌ Ｐ．Ｊ．，Ａｋｅｓｓｏｎ Ｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ．２０１７．３６５（６３４０））に従って定義した。

【0477】

以下の表１は、キュレートしたＶｅｓｉｃｌｅＰｅｄｉａデータベース及びＥｘｏＣａｒｔａデータベースに捕捉された、高スループットスクリーニング及び低スループットスクリーニングで報告される、細胞外小胞及びエクソソームで以前に同定されていない、本開示のＭｋＥＶに特有のタンパク質の完全なリストを提供する。

【表2-1】

【表2-2】

【表2-3】

【表2-4】

【表2-5】

【0478】

本開示のＭｋＥＶに特有のタンパク質の分析により、細胞表面及び細胞膜に特異的なタンパク質が同定された。

【0479】

表２は、細胞外小胞及びエクソソームの実証された（ＶｅｓｉｃｌｅＰｅｄｉａ及びＥｘｏＣａｒｔａ）プロテオームと比較して、本開示のＭｋＥＶに特有であると同定された表面タンパク質または膜タンパク質のリストを示す。

【表3】

【0480】

本開示の特有のＭｋＥＶタンパク質の有意に濃縮されたＫＥＧＧ経路のリスト（ｐ値＜０．０５）を図３に示し、アミノアシル－ｔＲＮＡ生合成及び好中球細胞外トラップ形成に関与する経路を含む。

【0481】

以下の表３は、選択されたＫＥＧＧ経路と会合した本開示のＭｋＥＶに特有のタンパク質のリストを提供する。

【表4】

【0482】

図４に示すように、本開示の特有のＭｋＥＶタンパク質の直接タンパク質間相互作用ネットワークが存在する。このネットワークを、キュレートした直接タンパク質間相互作用（相互作用スコア＞０．４）を含むように構築した。輪郭強調は、関連相互作用スコア（相互作用の信頼度）を表す。３つより多くのノードを有するクラスターを強調表示し、降順に番号付けた。非相互作用ノードを除外した。番号１は、ヒストンクラスターを表し、番号２は、タンパク質翻訳クラスターのｔＲＮＡアミノアシル化を表し、番号３は、セプチンタンパク質のクラスターを表し、番号４は、ミトコンドリア関連クラスターを表し、番号５は、細胞生合成プロセス（転写及び翻訳）を表す。

【0483】

より具体的には、本発明の特有のＭｋＥＶタンパク質の機能的及び物理的タンパク質間相互作用ネットワークが同定された（図５）。

【0484】

ＭｋＥＶの再現性を決定するために、第２のバッチをプロテオミクススクリーニングに供し、前のデータセットと比較して、両方のバッチ間のタンパク質ＩＤの８８％の重複を明らかにした（図６）。

【0485】

新たに同定された１３３個のＭｋＥＶタンパク質のうち１３個は、包括的ＥＶプロテオームデータベース（ＶｅｓｉｃｌｅＰｅｄｉａ及びＥｘｏＣａｒｔａ）によって以前に捕捉されなかったものであった。結果として得られた特有のＭｋＥＶタンパク質セットを表４に列記する。

【表5-1】

【表5-2】

【表5-3】

【表5-4】

【表5-5】

【0486】

９７３個の重複タンパク質のタンパク質強度を、試料ロード（ＳＬ）正規化した。正規化したタンパク質強度の階層的クラスタリングを両方のＭｋＥＶバッチに行い、タンパク質存在量のバッチ間変動を概説した。低存在量タンパク質と高存在量タンパク質の両方の大部分が、バッチ間で強い再現性を示した（図７）。

【0487】

健常ドナー由来のＭｋＥＶと天然に存在する血漿ＥＶとの間の分子的重複を決定するために、包括的血漿ＥＶ参照プロテオームを生成した（材料及び方法に記載されている）。ＭｋＥＶプロテオーム（２つのバッチ由来の全ての特有のタンパク質）とのその後の比較により、５０８個のＭｋＥＶ特異的タンパク質が明らかになった（図８）。

【0488】

ＭｋＥＶ特異的表面タンパク質及び／または膜タンパク質を表５に列記する。

【表6-1】

【表6-2】

【0489】

健常ドナーから単離したＣＤ６１＋ＥＶのプロテオームは、天然に存在する血漿ＥＶと強く重複しており、ＣＤ６１＋ＥＶタンパク質の９６％が天然に存在する血漿ＥＶにおいて同定されている（図９Ａ）。対照的に、ＭｋＥＶプロテオームとＣＤ６１＋ＥＶとの重複は４６％に制限された（図９Ｂ）。

【0490】

実施例２：巨核球由来細胞外小胞（ＭｋＥＶ）は特有の遺伝子マーカーを含む。
本開示のＭｋＥＶは、特有のタンパク質コード転写物を含む。図１０のベン図に示すように、ＭｋＥＶタンパク質コード遺伝子（ＲＮＡ－ｓｅｑ）と、ＶｅｓｉｃｌｅＰｅｄｉａデータベースにわたって同定された転写物との間に重複が存在する。この図は、本開示のＭｋＥＶに特有の２７０１個のｍＲＮＡ転写物も明らかにした。

【0491】

以下の表６は、これらの特有の転写物の詳細なリストを提供する。

【表7-1】

【表7-2】

【表7-3】

【表7-4】

【表7-5】

【表7-6】

【表7-7】

【表7-8】

【表7-9】

【表7-10】

【0492】

ＫＥＧＧ経路分析により、選択された経路と会合した本開示のＭｋＥＶに特有の遺伝子のリストが明らかになった。これらの経路関連遺伝子には、Ｈ３－３Ａ、Ｈ４Ｃ１２、Ｈ２ＡＣ１８、Ｈ２ＡＣ１３、Ｈ２ＡＣ１９、Ｈ３－３Ｂ、Ｈ２ＢＣ１２、Ｈ４Ｃ３、Ｈ３Ｃ１０、Ｈ２ＡＣ１４、Ｈ２ＢＣ４、Ｈ２ＡＣ２０、Ｈ３Ｃ１３、Ｈ４Ｃ１４、Ｈ３Ｃ２、Ｈ２ＡＣ８、Ｈ２ＢＣ３、Ｈ３Ｃ７、Ｈ２ＡＣ１７、Ｈ３Ｃ４、Ｈ２ＢＣ１１、ＳＥＬＰ、Ｈ３Ｃ１１、Ｈ４Ｃ２、Ｈ２ＡＣ１５、Ｈ２ＡＣ１２、Ｈ３Ｃ１、Ｈ４Ｃ４、Ｈ２ＡＣ４、Ｈ４Ｃ１３、Ｈ２ＢＣ５、Ｈ２ＡＣ７、Ｈ２ＡＣ１６、Ｈ２ＢＣ１７、Ｈ２ＡＪ、Ｈ３Ｃ３、Ｈ２ＢＣ１０、Ｈ２ＡＣ２１、Ｈ３Ｃ１４、Ｈ３Ｃ１５、Ｈ２ＡＣ１１、Ｈ３Ｃ１２、ＦＰＲ１、Ｈ２ＢＣ１３、Ｈ４Ｃ１、ＭＡＣＲＯＨ２Ａ１、Ｈ２ＢＣ１４、Ｈ２ＡＸ、Ｈ２ＢＣ６、ＮＣＦ４、Ｈ４Ｃ６、Ｈ２ＢＣ１５、Ｈ２ＢＣ２１、Ｈ２ＢＣ７、Ｈ２ＢＣ８、ＣＹＢＢ、ＦＣＧＲ１Ａ、Ｈ２ＡＺ２、Ｈ４Ｃ５、ＡＱＰ９、Ｈ２ＢＣ９、ＣＬＣＮ４、ＦＰＲ２、Ｈ４Ｃ９、ＨＤＡＣ９、ＩＴＧＡＬ、ＦＣＧＲ３Ｂ、ＩＴＧＡＭ、Ｈ３Ｃ８、ＴＬＲ２、ＮＣＦ１、ＮＣＦ２、Ｈ３Ｃ６、ＣＡＭＰ、ＭＰＯ、ＥＬＡＮＥ、ＦＣＧＲ３Ａ、ＡＺＵ１、Ｈ２ＡＷ、ＳＩＧＬＥＣ９、ＣＬＥＣ７Ａ、ＰＬＣＢ４、ＣＡＳＰ１、Ｈ２ＢＵ１、ＴＬＲ４、ＴＬＲ８、ＣＤ３６、ＩＬ９Ｒ、ＦＣＧＲ１Ａ、ＣＳＦ３Ｒ、ＫＩＴ、ＧＰ５、ＣＳＦ１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ３３、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ７Ｒ、ＩＬ６Ｒ、ＨＬＡ－ＤＰＢ１、ＣＤ２４、ＣＤ２２、ＧＹＰＡ、ＭＭＥ、ＩＴＧＡ１、ＣＤ１Ｃ、ＩＬ３ＲＡ、ＨＬＡ－ＤＰＡ１、ＩＬ１Ｒ２、ＣＤ３４、ＨＬＡ－ＤＲＡ、ＨＬＡ－ＤＱＡ１、ＣＤ７、ＣＤ２２６、ＳＥＬＰ、ＰＥＣＡＭ１、ＶＳＩＲ、ＰＴＰＲＣ、ＮＲＸＮ１、ＮＥＣＴＩＮ２、ＩＴＧＡＬ、ＩＴＧＡＭ、ＳＥＬＬ、ＣＤ２８、ＨＬＡ－ＤＰＢ１、ＣＮＴＮＡＰ２、ＣＬＤＮ５、ＪＡＭ２、ＣＤ４０ＬＧ、ＬＲＲＣ４、ＣＤ２７４、ＣＤ４０、ＣＤ２７６、ＣＤ２２、ＩＴＧＡ９、ＮＥＣＴＩＮ３、ＮＥＧＲ１、ＨＬＡ－ＤＰＡ１、ＣＮＴＮ１、ＩＴＧＢ８、ＣＤ３４、ＨＬＡ－ＤＲＡ、ＳＩＧＬＥＣ１、ＨＬＡ－ＤＱＡ１、ＣＦＴＲ、ＡＢＣＤ４、ＡＢＣＡ５、ＡＢＣＡ９、ＡＢＣＣ１、ＡＢＣＢ８、ＡＢＣＡ８、ＡＢＣＢ９、ＡＢＣＣ９、ＡＢＣＡ１、ＡＢＣＡ１０、ＡＢＣＣ８、Ｆ２Ｒ、ＬＣＰ２、ＦＹＢ１、ＦＰＲ１、Ｆ２ＲＬ３、Ｐ２ＲＹ１、ＲＡＰＧＥＦ２、ＫＩＴ、ＥＧＦ、ＣＳＦ１、ＡＮＧＰＴ１、ＰＤＧＦＣ、ＩＴＧＡＬ、ＶＡＶ１、ＶＡＶ３、ＰＤＧＦＲＡ、ＩＴＧＡＭ、ＲＡＰＧＥＦ５、ＭＡＧＩ２、ＦＡＲＰ２、ＣＴＮＮＤ１、ＦＧＦ２３、ＦＬＴ１、ＦＧＦ１、ＤＲＤ２、ＡＦＤＮ、ＰＬＣＢ４、ＡＰＢＢ１ＩＰ、ＰＬＣＥ１、ＭＡＧＩ３、ＫＤＲ、ＬＰＡＲ３、ＧＲＩＮ２Ｂ、ＡＤＣＹ１、ＦＧＦ７、ＡＮＧＰＴ４、ＴＥＫ、ＰＦ４、ＣＣＬ５、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ８、ＥＬＭＯ１、ＧＲＫ２、ＧＮＧ８、ＣＣＲ４、ＰＦ４Ｖ１、ＶＡＶ１、ＶＡＶ３、ＰＩＫ３Ｒ６、ＰＩＫ３ＣＧ、ＳＨＣ４、ＧＲＫ３、ＮＣＦ１、ＨＣＫ、ＧＲＫ４、ＩＴＫ、ＧＮＧ２、ＣＸＣＲ２、ＣＣＲ１、ＣＸＣＬ５、ＣＣＬ３、ＰＬＣＢ４、ＣＸＣＬ６、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ８、ＣＣＬ４Ｌ２、ＣＸＣＬ１２、ＧＮＧＴ１、ＣＸＣＬ１１、ＡＤＣＹ１、ＸＣＬ１、ＴＵＢＡ８、ＮＣＦ４、ＣＤ３６、ＣＹＢＢ、ＦＣＧＲ１Ａ、ＣＴＳＳ、ＦＣＧＲ３Ｂ、ＰＩＫＦＹＶＥ、ＩＴＧＡＭ、ＴＬＲ２、ＮＣＦ１、ＮＣＦ２、ＨＬＡ－ＤＰＢ１、ＭＰＯ、ＥＥＡ１、ＭＳＲ１、ＦＣＧＲ３Ａ、ＦＣＡＲ、ＤＹＮＣ１Ｉ１、ＣＬＥＣ７Ａ、ＦＣＧＲ２Ｂ、ＨＬＡ－ＤＰＡ１、ＡＴＰ６Ｖ０Ｄ２、ＭＲＣ２、ＴＬＲ４、ＴＬＲ６、ＨＬＡ－ＤＲＡ、ＭＡＲＣＯ、ＨＬＡ－ＤＱＡ１、ＲＡＲＳ１、ＤＡＲＳ１、ＫＡＲＳ１、ＳＡＲＳ１、ＡＡＲＳ１、ＴＡＲＳ１、ＮＡＲＳ１、ＷＡＲＳ１、ＧＡＴＢ、ＣＡＲＳ１、ＥＰＲＳ１、ＴＡＲＳ３、ＥＡＲＳ２、ＩＡＲＳ１、ＱＲＳＬ１、及びＷＡＲＳ２が含まれる。

【0493】

いくつかのＫＥＧＧ関連経路には、例えば、好中球細胞外トラップ形成、造血細胞系譜、細胞接着、ＡＴＰ結合カセット（ＡＢＣ）輸送、ケモカインシグナル伝達経路、貪食、及びアミノアシル－ｔＲＮＡ生合成が含まれる（以下の図１１及び図１２ならびに表７の詳細を参照されたい）。

【表8-1】

【表8-2】

【表8-3】

【0494】

実施例３：ＭｋＥＶに関する生体内分布データ
本実施例は、カーゴをロードしたＭｋＥＶの送達、エクスビボでのＭｋＥＶの標的化、及びインビボでのＭｋＥＶ生体内分布データを含む、ＭｋＥＶの生体内分布データに関するデータを説明する。

【0495】

ＧＦＰタグ付きＣａｓ９リボ核タンパク質（ＲＮＰ）をロードしたＭｋＥＶと共培養したＨＳＰＣ（系譜枯渇ＣＤ１５０＋ＣＤ４８－マウス骨髄細胞）の共焦点顕微鏡画像を取得した（図１３）。カーゴをロードしたＭｋＥＶと共培養した細胞はＧＦＰ陽性細胞を示し、ＧＦＰタグ付きＣａｓ９ロードＭｋＥＶの細胞取り込みを示した。対照的に、細胞のみを含む対照試料及びＲＮＰを偽ロードしたＭｋＥＶ（エレクトロポレーションなし（ＥＰなし））と共培養した細胞を含む対照試料は、ＧＦＰ陽性を示さなかった。これらのデータは、ＲＮＰカーゴをロードしたＭｋＥＶのＨＳＰＣへの送達の成功を示す。

【0496】

図１４Ａ～１４Ｃに示すように、ＭｋＥＶは、エクスビボで造血幹細胞及び前駆細胞を優先的に標的とする。ＧＦＰタグ付きＣａｓ９タンパク質をロードしたＭｋＥＶ（図１４Ａ）または親油性蛍光色素ＤｉＤで標識したＭｋＥＶ（図１４Ｂ）のいずれか。その後、ロードしたＭｋＥＶ及びＤｉＤ標識ＭｋＥＶを、野生型マウスに由来する初代全骨髄と共培養した。２４時間共培養した後、細胞を、ＧＦＰ＋またはＤｉＤ＋（すなわち、ＭｋＥＶ＋）であった細胞の％についてフローサイトメトリーにより分析した。細胞取り込み／ＭｋＥＶとの会合を示すＧＦＰ＋またはＤＩＤ＋であった細胞のパーセントを、フローサイトメトリーにより定量した。加えて、系譜陽性（Ｌｉｎ＋）、系譜陰性（Ｌｉｎ－）、及び系譜陰性／ｃ－Ｋｉｔ＋／Ｓｃａ－１＋（ＬＳＫ）細胞パーセントを、系譜陽性マーカー、Ｓｃａ－１、及びｃ－Ｋｉｔ細胞表面タンパク質に対する蛍光標識抗体を使用して同時に決定した。不均一な全骨髄集団における細胞の各サブタイプのパーセンテージを図１４Ａに示す。ＧＦＰタグ付きＣａｓ９をロードしたＭｋＥＶと共培養した細胞の場合（図１４Ａの棒グラフによって示される）、培養中の細胞の大部分（９５％）がＬｉｎ＋細胞（分化細胞）であるにもかかわらず、これらの細胞の最大２３％のみがＭｋＥＶに対して陽性であった。対照的に、５％未満が造血幹細胞及び前駆細胞（Ｌｉｎ－細胞）であったが、これらの細胞のほぼ５０％が、細胞用量当たり３００個のＥＶでＭｋＥＶに対して陽性であった。最後に、これらの培養物で評価した最も珍しく最も多能性のある造血幹細胞である、集団のわずか０．２５％を構成するＬＳＫ細胞の場合、この集団のほぼ４０％がＭＫＥＶに対して陽性であった。これらのデータは、骨髄由来造血幹細胞及び前駆細胞の優先的なエクスビボ標的化を示す。同様に、図１４Ｂに示すように、ＤｉＤ標識ＭｋＥＶと共培養した全骨髄細胞の場合、Ｌｉｎ＋細胞の２０％のみがＭｋＥＶに対して陽性であった。対照的に、より珍しいＬｉｎ－細胞集団の３０％がＭｋＥＶに対して陽性であった。最後に、これらの培養物（ＬＳＫ）で評価した最も珍しく最も多能性のある造血幹細胞の場合、この集団の最大４８％がＭＫＥＶに対して陽性であった。対照と比較して、ＭｋＥＶ共培養の全ての条件にわたって、全骨髄培養物中の合計Ｌｉｎ＋細胞及びＬｉｎ－細胞のパーセンテージに有意な変化はなく（図１４Ｃ）、毒性の欠如を示した。

【0497】

図１５Ａ～１５Ｋに示すように、蛍光標識ＭｋＥＶのインビボ生体内分布を、野生型マウスへのインビボ送達後に調べた。実験設計を図１５Ａに示す（ｎ＝３～５マウス／群）。蛍光標識ＭｋＥＶを、野生型マウスに尾静脈を介して静脈内注射し、注射の１６時間後に組織を採取し、蛍光について分析した。図１５Ｂは、マウスから解剖した大腿骨におけるＩＶＩＳによって検出された蛍光シグナルを示す。Ｎ＝５マウス／群。プレートリーダーによりアッセイし、かつ組織重量により正規化した、各々の均質化組織における蛍光（図１５Ｃ）。図１５Ｃに示すように、注射後に、骨髄へのインビボＭｋＥＶ標的化が有意に存在した。図１５Ｄ及び図１５Ｅは、フローサイトメトリーにより分析して、ＭｋＥＶに対して陽性であった造血（ＣＤ４５＋細胞、図１５Ｄ）の％及び非常に原始的な長期造血幹細胞（ＣＤ４５＋／Ｌｉｎ－／ＣＤ１５０＋／ＣＤ２０１＋／ＣＤ４８－細胞、図１５Ｅ）の％を決定した、ＣＤ４５、系譜マーカー、ＣＤ１５０、ＣＤ２０１、及びＣＤ４８に対する抗体を使用して染色した骨髄細胞の実験データのグラフを示す。ＭｋＥＶは、骨髄内及びその区画内の造血細胞を優先的に標的とし（図１５Ｄ）、非常に珍しい（０．０３％未満の骨髄細胞）長期造血幹細胞を標的としている（図１５Ｅ）。ＭｋＥＶ注射の１６時間後の骨髄中の末梢白血球数（図１５Ｆ）、ヘモグロビン（図１５Ｇ）、血小板数（図１５Ｈ）、ＷＢＣ分画（図１５Ｉ）、またはＣＤ４５＋細胞及びＣＤ４５－細胞の％（図１５Ｊ）、または長期造血幹細胞の％（図１５Ｋ）に変化がなかったことによって示されるように、造血区画に関する毒性の証拠は存在しなかった。

【0498】

図１６に示すように、Ｃａｓ９をＭｋＥＶにロードした。ＭｋＥＶをＣａｓ９でエレクトロポレーションし、プロテイナーゼＫで処理してあらゆる非内在化カーゴ（遊離カーゴ及び小胞表面会合カーゴ）を除去するか、または濾過により処理してあらゆる遊離カーゴを除去するかのいずれかを行い、その後、ウエスタンブロッティングにより分析してＣａｓ９を定量した。対照には、エレクトロポレーションなし±プロテイナーゼＫ±濾過のＭｋＥＶ＋Ｃａｓ９が含まれた。Ｃａｓ９は、濾過後に、エレクトロポレーションしたＭｋＥＶに存在したが、対照のエレクトロポレーションしていないＭｋＥＶには存在せず、タンパク質カーゴの小胞会合及び／または内在化が成功したことを示す。同様に、Ｃａｓ９は、プロテイナーゼＫ消化後に、エレクトロポレーションしたＭｋＥＶに存在したが、対照のエレクトロポレーションしていないＭｋＥＶには存在せず、エレクトロポレーション後のタンパク質カーゴの内在化及び保護の両方が成功したことを示す。

【0499】

遺伝子治療利点は、インビボ投与後に骨髄細胞に送達することができる。ＭｋＥＶをＤｉＤで標識し、エレクトロポレーション（２００Ｖ、６パルス）によりＣＭＶプロモーター駆動ＧＦＰ発現ｐＤＮＡをロードし、尾静脈注射を介して免疫能のある野生型マウスに注射した。注射の１６時間後に組織を単離し、フローサイトメトリーによりＥＶ会合について分析した。ビヒクルのみ注射（生理食塩水対照）は、陰性対照としての役割を果たした（図１７Ａ）。図１７Ｂに示すように、カーゴをロードしたＥＶは、静脈内注射後に骨髄を標的とし、骨髄区画内の造血幹細胞及び前駆細胞において優先的な取り込みを示した。最後に、静脈内投与後の骨髄内のＨＳＰＣ（系譜－／ｃ－Ｋｉｔ＋／Ｓｃａ－１＋細胞）へのｐＤＮＡカーゴ送達を評価するために、ＭｋＥＶに、エレクトロポレーション（２００Ｖ、６パルス）によりｐＤＮＡカーゴ（ＣＭＶプロモーター駆動ＧＦＰ）をロードし、尾静脈注射を介して免疫能のある野生型マウスに注射した。静脈内注射の１６時間後にＨＳＰＣを単離し、細胞内のｐＤＮＡをｑＰＣＲにより定量した（図１８Ａ）。図１８Ｂに示すように、ｐＤＮＡをロードしたＭｋＥＶを受けたマウスではｐＤＮＡのＨＳＰＣへの送達に成功したが、生理食塩水またはｐＤＮＡのみを注射した対照マウスでは成功しなかった。更に、別個の実験では、図１８Ｃに示すように、静脈内注射後にＥＶに対して陽性であった（ＤｉＤ＋）ＨＳＰＣからｐＤＮＡカーゴが回収された。対照的に、静脈内注射後にＥＶを取り込まなかった（ＤｉＤ－）ＨＳＰＣからは、あったとしても最小限のｐＤＮＡしか回収されなかった。これらのデータは、インビボ送達後に、ＭＰＮ利点がＭｋＥＶにロードされ、骨髄内の造血細胞に首尾よく送達され得ることを示す。

【0500】

等価物
本発明は、その特定の実施形態に関連して説明されているが、更なる修正が可能であり、本出願が、概して本発明の原理に従い、かつ本発明が属する技術分野で既知の実務または慣行に含まれるような本開示からの逸脱、前述の本質的な特徴に適用され得るもののような本開示からの逸脱、及び添付の特許請求の範囲に含まれるような本開示からの逸脱を含む、本発明のあらゆる変形、使用、または適用を包含するよう意図されていることが理解される。

【0501】

当業者であれば、単なる日常的な実験を使用して、本明細書に具体的に記載されている特定の実施形態の多数の等価物を認識するか、または確認することができるであろう。かかる等価物は、以下の特許請求の範囲内に包含されるよう企図される。

【0502】

参照による組み込み
本明細書で参照される全ての特許及び刊行物は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。

【0503】

本明細書で論じられる刊行物は、本出願の出願日前のそれらの開示に対してのみ提供されている。本明細書におけるいずれの内容も、本発明が先行発明によりかかる刊行物に先行する資格がないことを認めるものと解釈されるべきではない。

【0504】

本明細書で使用される場合、全ての見出しは単に構成のためのものであり、いかなる方法によっても本開示を限定するようには意図されていない。いかなる個々の節の内容も、全ての節に等しく適用可能であり得る。

【0505】

参考文献
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７．Ｓｚｋｌａｒｃｚｙｋ Ｄ，Ｇａｂｌｅ ＡＬ，Ｎａｓｔｏｕ ＫＣ，Ｌｙｏｎ Ｄ，Ｋｉｒｓｃｈ Ｒ，Ｐｙｙｓａｌｏ Ｓ，Ｄｏｎｃｈｅｖａ ＮＴ，Ｌｅｇｅａｙ Ｍ，Ｆａｎｇ Ｔ，Ｂｏｒｋ Ｐ，Ｊｅｎｓｅｎ ＬＪ，ｖｏｎ Ｍｅｒｉｎｇ Ｃ．Ｔｈｅ ＳＴＲＩＮＧ ｄａｔａｂａｓｅ ｉｎ ２０２１：ｃｕｓｔｏｍｉｚａｂｌｅ ｐｒｏｔｅｉｎ－ｐｒｏｔｅｉｎ ｎｅｔｗｏｒｋｓ，ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｕｓｅｒ－ｕｐｌｏａｄｅｄ ｇｅｎｅ／ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｓｅｔｓ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２０２１ Ｊａｎ ８；４９（Ｄ１）：Ｄ６０５－Ｄ６１２．ｄｏｉ：１０．１０９３／ｎａｒ／ｇｋａａ１０７４．Ｅｒｒａｔｕｍ ｉｎ：Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２０２１ Ｏｃｔ １１；４９（１８）：１０８００．ＰＭＩＤ：３３２３７３１１；ＰＭＣＩＤ：ＰＭＣ７７７９００４．

【図1A】

【図1B】

【図2A】

【図2B】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9A】

【図9B】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14A】

【図14B】

【図14C】

【図15-1】

【図15-2】

【図15-3】

【図16】

【図17A】

【図17B】

【図18A】

【図18B】

【図18C】

【国際調査報告】