特表 2024-543496 アンギオテンシノゲン（ＡＧＴ）タンパク質の発現を阻害する組成物及び方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-11-21

(54)【発明の名称】アンギオテンシノゲン（ＡＧＴ）タンパク質の発現を阻害する組成物及び方法

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/113 20100101AFI20241114BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20241114BHJP

   A61K 31/713 20060101ALI20241114BHJP

   A61K 47/54 20170101ALI20241114BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20241114BHJP

   A61P 9/12 20060101ALI20241114BHJP

   A61P 27/02 20060101ALI20241114BHJP

   A61P 27/06 20060101ALI20241114BHJP

   A61P 9/00 20060101ALI20241114BHJP

   A61P 13/12 20060101ALI20241114BHJP

   A61P 9/10 20060101ALI20241114BHJP

   A61P 9/04 20060101ALI20241114BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20241114BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20241114BHJP

【ＦＩ】

C12N15/113 Z ZNA

C12N5/10

A61K31/713

A61K47/54

A61K48/00

A61P9/12

A61P27/02

A61P27/06

A61P9/00

A61P13/12

A61P9/10 101

A61P9/04

A61P43/00 105

A61K45/00

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024528580

(86)(22)【出願日】2022-11-15

(85)【翻訳文提出日】2024-07-05

(86)【国際出願番号】 CN2022131861

(87)【国際公開番号】W WO2023088227

(87)【国際公開日】2023-05-25

(31)【優先権主張番号】PCT/CN2021/130832

(32)【優先日】2021-11-16

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(31)【優先権主張番号】PCT/CN2022/081578

(32)【優先日】2022-03-18

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】524109142

【氏名又は名称】シャンハイ アルゴ バイオファーマシューティカル カンパニー，リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100092783

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 浩

(74)【代理人】

【識別番号】100095360

【弁理士】

【氏名又は名称】片山 英二

(74)【代理人】

【識別番号】100120134

【弁理士】

【氏名又は名称】大森 規雄

(74)【代理人】

【識別番号】100153693

【弁理士】

【氏名又は名称】岩田 耕一

(72)【発明者】

【氏名】シュ，ドンシュ

(72)【発明者】

【氏名】シャオ，ペンチェン パトリック

【テーマコード（参考）】

4B065

4C076

4C084

4C086

【Ｆターム（参考）】

4B065AA93X

4B065AB01

4B065CA44

4C076AA95

4C076BB13

4C076BB16

4C076CC11

4C076CC41

4C076DD63

4C076DD69

4C076EE59

4C076FF70

4C084AA13

4C084AA19

4C084MA02

4C084MA65

4C084NA05

4C084NA13

4C084NA14

4C084ZA33

4C084ZA36

4C084ZA42

4C084ZA45

4C084ZA81

4C084ZB21

4C086AA01

4C086AA02

4C086EA16

4C086MA01

4C086MA02

4C086MA04

4C086MA65

4C086NA05

4C086NA13

4C086NA14

4C086ZA33

4C086ZA36

4C086ZA42

4C086ZA45

4C086ZA81

4C086ZB21

(57)【要約】

アンギオテンシノゲン（ＡＧＴ）タンパク質発現を阻害する組成物及び方法が提供される。具体的には、ＡＧＴ遺伝子発現を低減するため、且つＡＧＴ関連疾患及び障害を治療するために使用することができる組成物及び方法が提供される。細胞及び対象におけるＡＧＴ発現を低減するために使用することができるＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤、ＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤を含有する組成物、並びにＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤を含有する組成物が提供される。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

アンギオテンシノゲン（ＡＧＴ）の発現を阻害する二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）剤であって、前記ｄｓＲＮＡ剤がセンス鎖及びアンチセンス鎖を含み、前記アンチセンス鎖におけるヌクレオチド２～１８位が、ＡＧＴ ＲＮＡ転写物に対して相補性の領域を含み
、前記相補性の領域が、表１～４の１つに示すアンチセンス配列の１つと、０、１、２、又は３ヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の隣接ヌクレオチドを含み、任意に標的化リガンドを含む、ｄｓＲＮＡ剤。

【請求項2】

前記ＡＧＴ ＲＮＡ転写物に対する相補性の領域が、表１～４の１つに示すアンチセンス配列の１つと、３個以下のヌクレオチドが異なる少なくとも１５、１６、１７、１８、又は１９個の隣接ヌクレオチドを含む、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。

【請求項3】

前記ｄｓＲＮＡの前記アンチセンス鎖が、配列番号５１９のいずれかの標的領域と少なくとも実質的に相補的であり、且つ表１～４のいずれか１つに提供される、請求項１又は２に記載のｄｓＲＮＡ剤。

【請求項4】

前記ｄｓＲＮＡの前記アンチセンス鎖が、配列番号５１９のいずれかの標的領域と少なくとも完全に相補的であり、且つ表１～４のいずれか１つに提供される、請求項３に記載のｄｓＲＮＡ剤。

【請求項5】

前記ｄｓＲＮＡ剤が、表１～４のいずれか１つに記載のセンス鎖配列を含み、前記センス鎖配列が、前記ｄｓＲＮＡ剤における前記アンチセンス鎖配列に対して少なくとも実質的に相補的である、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。

【請求項6】

前記ｄｓＲＮＡ剤が、表１～４のいずれか１つに記載のセンス鎖配列を含み、前記センス鎖配列が、前記ｄｓＲＮＡ剤における前記アンチセンス鎖配列に対して完全に相補的である、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。

【請求項7】

表１～４のいずれか１つに記載のアンチセンス鎖配列を含む、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。

【請求項8】

表１～４のいずれか１つに二重鎖配列として示す配列を含む、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。

【請求項9】

少なくとも１つの修飾ヌクレオチドを含む、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。

【請求項10】

前記アンチセンス鎖におけるすべての、又は実質的にすべてのヌクレオチドが修飾ヌクレオチドである、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。

【請求項11】

前記少なくとも１つの修飾ヌクレオチドが：２’－Ｏ－メチルヌクレオチド、２’－フルオロヌクレオチド、２’－デオキシヌクレオチド、２’，３’－セコヌクレオチドミミック、ロック（ｌｏｃｋｅｄ）ヌクレオチド、アンロック核酸（ＵＮＡ）ヌクレオチド、グリコール核酸（ＧＮＡ）ヌクレオチド、２’－Ｆ－アラビノヌクレオチド、２’－メトキシエチルヌクレオチド、脱塩基ヌクレオチド、リビトール、逆位ヌクレオチド、逆位脱塩基ヌクレオチド、逆位２’－ＯＭｅヌクレオチド、逆位２’－デオキシヌクレオチド、２’－アミノ修飾ヌクレオチド、２’－アルキル修飾ヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド及び３’－ＯＭｅヌクレオチド、５’－ホスホロチオエート基を含むヌクレオチド、又はコレステロール誘導体若しくはドデカン酸ビスデシルアミド基に連結された末端ヌクレオチド、２’－アミノ修飾ヌクレオチド、ホスホロアミダート、又は非天然塩基含有ヌクレオチドを含む、請求項５又は６に記載のｄｓＲＮＡ剤。

【請求項12】

Ｅ－ビニルホスホネートヌクレオチドが、ガイド鎖の５’末端に含まれる、請求項９又は１０に記載のｄｓＲＮＡ剤。

【請求項13】

少なくとも１つのホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。

【請求項14】

前記センス鎖が、少なくとも１つのホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。

【請求項15】

前記アンチセンス鎖が、少なくとも１つのホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。

【請求項16】

前記センス鎖が、１、２、３、４、５、又は６個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。

【請求項17】

前記アンチセンス鎖が、１、２、３、４、５、又は６個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。

【請求項18】

前記センス及びアンチセンス鎖のすべての、又は実質的にすべてのヌクレオチドが修飾ヌクレオチドである、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。

【請求項19】

前記修飾センス鎖が、表２～４の１つに示す修飾センス鎖配列である、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。

【請求項20】

前記修飾アンチセンス鎖が、表２～４の１つに示す修飾アンチセンス鎖配列である、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。

【請求項21】

前記センス鎖が、前記アンチセンス鎖に対して相補的又は実質的に相補的であり、且つ前記相補性の領域が、１６～２３ヌクレオチドの長さである、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。

【請求項22】

前記相補性の領域が、１９～２１ヌクレオチドの長さである、請求項２１に記載のｄｓＲＮＡ剤。

【請求項23】

各鎖が、３０ヌクレオチド以下の長さである、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。

【請求項24】

各鎖が、２５ヌクレオチド以下の長さである、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。

【請求項25】

各鎖が、２３ヌクレオチド以下の長さである、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。

【請求項26】

少なくとも１つの修飾ヌクレオチドを含み、且つ１つ若しくは複数の標的化基又は連結基をさらに含む、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。

【請求項27】

前記１つ若しくは複数の標的化基又は連結基が、前記センス鎖にコンジュゲートされる、請求項２６に記載のｄｓＲＮＡ剤。

【請求項28】

前記標的化基又は連結基がＮ－アセチル－ガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）を含む、請求項２６又は２７に記載のｄｓＲＮＡ剤。

【請求項29】

各標的化基が以下の構造：

【化1】

【化2】

【化3】

【化4】

【化5】

【化6】

【化7】

【化8】

【化9】

【化10】

【化11】

を有する、請求項２６又は２７に記載のｄｓＲＮＡ剤。

【請求項30】

前記センス鎖の５’末端にコンジュゲートされた標的化基を含む、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。

【請求項31】

前記センス鎖の３’末端にコンジュゲートされた標的化基を含む、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。

【請求項32】

前記アンチセンス鎖が、前記３’末端に逆位脱塩基残基を含む、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。

【請求項33】

前記センス鎖が、前記３’又は／及び５’末端に１つ又は２つの逆位脱塩基残基を含む、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。

【請求項34】

２つの平滑末端を含む、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。

【請求項35】

少なくとも１つの鎖が少なくとも１ヌクレオチドの３’オーバーハングを含む、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。

【請求項36】

少なくとも１つの鎖が少なくとも２ヌクレオチドの３’オーバーハングを含む、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。

【請求項37】

請求項１から３６のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤を含む、組成物。

【請求項38】

薬剤として許容される担体をさらに含む、請求項３７に記載の組成物。

【請求項39】

１種又は複数種の追加の治療薬をさらに含む、請求項３８に記載の組成物。

【請求項40】

キット、容器、パック、ディスペンサー、プレフィルドシリンジ又はバイアルにパッケージされる、請求項３９に記載の組成物。

【請求項41】

皮下投与用に製剤化される、又は静脈内（ＩＶ）投与用に製剤化される、請求項３７に記載の組成物。

【請求項42】

請求項１から３６のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤を含む、細胞。

【請求項43】

哺乳動物細胞、任意にヒト細胞である、請求項４２に記載の細胞。

【請求項44】

（ｉ）請求項１から３６のいずれか一項に記載の二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）剤又は請求項３７から４１のいずれか一項に記載の組成物を、有効量で含む細胞を調製することを含む、細胞におけるＡＧＴ遺伝子発現を阻害する方法。

【請求項45】

（ｉｉ）請求項４４に記載の（ｉ）で調製された細胞を、前記ＡＧＴ遺伝子のｍＲＮＡ転写物の分解を得るのに十分な時間維持し、それによって前記細胞における前記ＡＧＴ遺伝子の発現が阻害されることをさらに含む、請求項４４に記載の方法。

【請求項46】

前記細胞が対象中にあり、且つ前記ｄｓＲＮＡ剤が、前記対象に皮下投与される、請求項４４に記載の方法。

【請求項47】

前記細胞が対象中にあり、且つ前記ｄｓＲＮＡ剤が、前記対象にＩＶ投与される、請求項４４に記載の方法。

【請求項48】

前記対象に前記ｄｓＲＮＡ剤を投与した後に、前記ＡＧＴ遺伝子の阻害を評価することをさらに含む方法であって、
（ｉ）前記対象における前記ＡＧＴ関連疾患又は病状の１つ又は複数の生理学的特徴を決定すること、及び
（ｉｉ）前記ＡＧＴ関連疾患若しくは病状のベースラインの治療前生理学的特徴及び／又は前記ＡＧＴ関連疾患若しくは病状の対照の生理学的特徴に対して、決定された生理学的特徴を比較すること、を含み、
前記比較から、前記対象における前記ＡＧＴ遺伝子の発現の阻害の有無の１つ又は複数が示される、請求項４６又は４７に記載の方法。

【請求項49】

前記生理学的特徴が、本態性高血圧、二次性高血圧、高血圧緊急症（悪性高血圧症及び加速型高血圧など）、急性高血圧症、妊娠関連性高血圧症、及び治療抵抗性高血圧を含む高血圧症である、請求項４８に記載の方法。

【請求項50】

対象の血圧の減少が、前記対象におけるＡＧＴ遺伝子発現の減少を示す、請求項４９に記載の方法。

【請求項51】

対象におけるＡＧＴ遺伝子発現を阻害する方法であって、請求項１から３６のいずれか一項に記載の二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）剤又は請求項３７から４１のいずれか一項に記載の組成物を有効量で前記対象に投与することを含む、方法。

【請求項52】

前記ｄｓＲＮＡ剤が、前記対象に皮下投与される、請求項５１に記載の方法。

【請求項53】

前記ｄｓＲＮＡ剤が、前記対象にＩＶ投与される、請求項５１に記載の方法。

【請求項54】

前記対象に前記ｄｓＲＮＡ剤を投与した後に、前記ＡＧＴ遺伝子の阻害を評価することをさらに含む方法であって、
（ｉ）前記対象における前記ＡＧＴ関連疾患又は病状の１つ又は複数の生理学的特徴を決定すること、及び
（ｉｉ）前記ＡＧＴ関連疾患若しくは病状のベースラインの治療前生理学的特徴及び／又は前記ＡＧＴ関連疾患若しくは病状の対照の生理学的特徴に対して、決定された生理学的特徴を比較すること、を含み、
前記比較から、前記対象における前記ＡＧＴ遺伝子の発現の阻害の有無の１つ又は複数が示される、請求項５１から５３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項55】

前記生理学的特徴が、本態性高血圧、二次性高血圧、高血圧緊急症（悪性高血圧症及び加速型高血圧など）、急性高血圧症、妊娠関連性高血圧症、及び治療抵抗性高血圧を含む高血圧症である、請求項５４に記載の方法。

【請求項56】

対象の血圧の減少が、前記対象におけるＡＧＴ遺伝子発現の減少を示す、請求項５５に記載の方法。

【請求項57】

ＡＧＴタンパク質と関連する疾患又は病状を治療する方法であって、ＡＧＴ遺伝子発現を阻害するために、請求項１から３６のいずれか一項に記載の二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）剤、又は請求項３７から４１のいずれか一項に記載の組成物を有効量で前記対象に投与することを含む、方法。

【請求項58】

前記疾患又は病状が、レニン－アンギオテンシン－アルドステロン系（ＲＡＡＳ）の活性化によって起こる、又はそれと関連する、或いはＲＡＡＳの活性化に応じたその症状若しくは進行であり、前記疾患又は病状が、限定されないが、以下の高血圧疾患、高血圧症、境界型高血圧、本態性高血圧、二次性高血圧、孤立性高血圧症、収縮期又は拡張期高血圧、妊娠関連性高血圧症、糖尿病性高血圧症、治療抵抗性高血圧、難治性高血圧、発作性高血圧、腎血管性高血圧症、ゴールドブラット高血圧症、高眼圧、緑内障、肺高血圧症、門脈圧亢進、全身性静脈性高血圧、収縮期高血圧、不安定性高血圧症、高血圧性心疾患、高血圧性腎症、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、血管症、糖尿病性腎症、糖尿病性網膜症、慢性心不全、心筋症、糖尿病性心筋症、糸球体硬化症、大動脈狭窄、大動脈瘤、心室繊維化、心不全、心筋梗塞、アンギナ、脳卒中、腎疾患、腎不全、全身性硬化症、子宮内発育遅延（ＩＵＧＲ）、及び胎児発育遅延のうちの１つ又は複数を含む、高血圧症と通常関連する、請求項５７に記載の方法。

【請求項59】

前記対象に追加の治療レジメンをさらに施すことを含む、請求項５７に記載の方法。

【請求項60】

前記追加の治療レジメンが、本発明の１種又は複数種のＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチドを前記対象に投与すること、非ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ治療薬を投与すること、及び行動修飾を前記対象に行うこと、を含む、請求項５９に記載の方法。

【請求項61】

前記非ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ治療薬は、以下の：追加の治療薬、例えば利尿剤、アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、アンギオテンシンＩＩ受容体アンタゴニスト、β遮断薬、血管拡張薬、カルシウムチャネルブロッカー、アルドステロンアンタゴニスト、α－２アゴニスト、レニン阻害剤、α遮断薬、末梢作用性アドレナリン作動薬、選択的Ｄ１受容体部分アゴニスト、非選択的α－アドレナリン拮抗薬、合成ステロイド性抗鉱質コルチコイド、又は上述のいずれかの組合せ、及び作用剤の組み合わせへとして製剤化される高血圧症の治療薬のうちの１つ又は複数である、請求項６０に記載の方法。

【請求項62】

前記ｄｓＲＮＡ剤が、前記対象に皮下投与される、請求項５７に記載の方法。

【請求項63】

前記ｄｓＲＮＡ剤が、前記対象にＩＶ投与される、請求項５７に記載の方法。

【請求項64】

前記対象における前記の投与された二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）剤の有効性を決定することをさらに含む、請求項５７から６３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項65】

前記対象における治療の有効性を決定する方法が：
（ｉ）前記対象における前記ＡＧＴ関連疾患又は病状の１つ又は複数の生理学的特徴を決定すること、及び
（ｉｉ）前記ＡＧＴ関連疾患又は病状のベースラインの治療前生理学的特徴に対して、決定された生理学的特徴を比較すること、を含み、
前記比較から、前記対象に投与された二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）剤の有効性の有無、及びレベルのうちの１つ又は複数が示される、請求項６４に記載の方法。

【請求項66】

決定された前記生理学的特徴が、本態性高血圧、二次性高血圧、高血圧緊急症（悪性高血圧症及び加速型高血圧など）、急性高血圧症、妊娠関連性高血圧症、及び治療抵抗性高血圧を含む高血圧症である、請求項６５に記載の方法。

【請求項67】

対象の血圧の減少が、前記対象への前記二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）剤の投与の有効性の存在を示す、請求項６５に記載の方法。

【請求項68】

対象におけるＡＧＴタンパク質のレベルを、前記対象におけるＡＧＴタンパク質のベースラインの治療前レベルと比較して低減する方法であって、ＡＧＴ遺伝子発現のレベルを低減するために、請求項１から３６のいずれか一項に記載の二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）剤、又は請求項３７から４１のいずれか一項に記載の組成物を有効量で前記対象に投与することを含む、方法。

【請求項69】

前記ｄｓＲＮＡ剤が、前記対象に皮下又はＩＶ投与される、請求項６８に記載の方法。

【請求項70】

対象におけるＡＧＴ関連疾患又は病状の生理学的特徴を、前記対象におけるＡＧＴ関連疾患又は病状のベースラインの治療前生理学的特徴と比較して改変する方法であって、前記対象におけるＡＧＴ関連疾患又は病状の前記生理学的特徴を変化させるために、請求項１から３６のいずれか一項に記載の二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）剤、又は請求項３７から４１のいずれか一項に記載の組成物を有効量で前記対象に投与することを含む、方法。

【請求項71】

前記ｄｓＲＮＡ剤が、前記対象に皮下又はＩＶ投与される、請求項７０に記載の方法。

【請求項72】

前記生理学的特徴が、本態性高血圧、二次性高血圧、高血圧緊急症（悪性高血圧症及び加速型高血圧など）、急性高血圧症、妊娠関連性高血圧症、及び治療抵抗性高血圧を含む高血圧症である、請求項７０に記載の方法。

【請求項73】

式（Ａ）：５’－Ｚ_１ＡＧＣＵＵＧＵＵＵＧＵＧＡＡＡＣＺ_２－３’と０、１、２、又は３ヌクレオチドが異なるセンス鎖を含み、式中、Ｚ_１が、０～１５ヌクレオチドモチーフを含むヌクレオチド配列であり、且つＺ_２が、Ａ、Ｕ、Ｃ、Ｇの１つから選択されるか、又は存在しない、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。

【請求項74】

式（Ｂ）：５’－Ｚ_３ＧＵＵＵＣＡＣＡＡＡＣＡＡＧＣＵＺ_４－３’と、０、１、２、又は３ヌクレオチドが異なるアンチセンス鎖を含み、式中、Ｚ_３が、Ａ、Ｕ、Ｃ、Ｇの１つから選択されるか、又は存在せず、且つＺ_４が、０～１５ヌクレオチドモチーフを含むヌクレオチド配列である、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明の実施形態の一部は、アンギオテンシノゲン（ＡＧＴ）タンパク質の発現の阻害に有用な組成物及び方法に関する。

【背景技術】

【0002】

レニン－アンギオテンシン－アルドステロン系（ＲＡＡＳ）は、血圧調節に重要な役割を果たす。ＲＡＡＳカスケードは、腎臓の傍糸球体細胞による循環へのレニンの分泌で開始する。レニン分泌は、遠位尿細管におけるＮａ^＋ローディング、β交感神経刺激及び／又は腎臓血流の低下など、いくつかの因子によって刺激される。血漿中の活性レニンは、アンギオテンシノゲン（肝臓によって産生される）をアンギオテンシンＩへと分解し、続いて循環し、且つ局所的に発現されたアンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）によって、アンギオテンシンＩＩへと変換される。ＲＡＡＳに対するアンギオテンシンＩＩの作用の大部分は、アンギオテンシンＩＩ型１受容体（ＡＴ１Ｒ）へのその結合により発揮され、Ｎａ^＋再吸収又は糸球体濾過量の調節の向上など、動脈血管収縮、尿細管及び糸球体作用が生じる。さらに、他の刺激（副腎皮質刺激ホルモン、抗利尿ホルモン、カテコールアミン、エンドセリン、及びセロトニンなど）、並びにＭｇ^２＋及びＫ^＋レベルと共に、ＡＴ１Ｒ刺激がアルドステロンの放出を導き、続いて遠位尿細管におけるＮａ^＋及びＫ^＋の排出が促進される。

【0003】

例えば、過剰なアンギオテンシンＩＩ産生及び／又はＡＴ１Ｒ刺激を生じる結果となるＲＡＡＳの調節不全は、高血圧の原因となり、例えば心臓、腎臓、及び動脈における酸化ストレスの増加、炎症の促進、肥大化を引き起こし、例えば、左心室繊維化、動脈リモデリング、及び糸球体硬化も引き起こし得る。

【0004】

高血圧症は、成人母集団の２０～５０％が罹患している、先進国における最も蔓延している、管理しやすい疾患である。高血圧症は、余命の短縮、慢性腎臓疾患、脳卒中、心筋梗塞、心不全、動脈瘤（例えば、大動脈瘤）、末梢血管疾患、心外傷（例えば、心拡大又は肥大）及び他の心血管関連疾患、障害及び／又は病状（ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ）など、様々な疾患、障害、及び病状の主要な危険因子である。さらに、高血圧症は、心血管罹患率及び死亡率の重要な危険因子であることが判明しており、すべての脳卒中の６２％、及びすべての心疾患の４９％を占める、又は構成する。２０１７年に、高血圧症の診断、予防、及び治療のガイドラインが変更され、高血圧関連疾患及び障害のリスクをさらに低減するために、さらに低い血圧目標が提供された（例えば、Ｒｅｂｏｕｓｓｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｒｅｖｉｅｗ ｆｏｒ ｔｈｅ ２０１７ＡＣＣ／ＡＨＡ／ＡＡＰＡ／ＡＢＣ／ＡＣＰＭ／ＡＧＳ／ＡＰｈＡ／ＡＳＨ／ＡＳＰＣ／ＮＭＡ／ＰＣＮＡ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ，Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ，Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｉｇｈ Ｂｌｏｏｄ Ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｉｎ Ａｄｕｌｔｓ：Ａ Ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ／Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｈｅａｒｔ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ Ｔａｓｋ Ｆｏｒｃｅ ｏｎ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｒａｃｔｉｃｅ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ．Ｊ Ａｍ Ｃｏｌｌ Ｃａｒｄｉｏｌ．２０１７ Ｎｏｖ７．ｐｉｉ：Ｓ０７３５－１０９７（１７）４１５１７－８．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｊａｃｃ．２０１７．１１．００４；及びＷｈｅｌｔｏｎ ｅｔ ａｌ．（２０１７ＡＣＣ／ＡＨＡ／ＡＡＰＡ／ＡＢＣ／ＡＣＰＭ／ＡＧＳ／ＡＰｈＡ／ＡＳＨ／ＡＳＰＣ／ＮＭＡ／ＰＣＮＡ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ，Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ，Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｉｇｈ Ｂｌｏｏｄ Ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｉｎ Ａｄｕｌｔｓ：Ａ Ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ／Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｈｅａｒｔ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ Ｔａｓｋ Ｆｏｒｃｅ ｏｎ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｒａｃｔｉｃｅ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ．Ｊ Ａｍ Ｃｏｌｌ Ｃａｒｄｉｏｌ．２０１７ Ｎｏｖ７．ｐｉｉ：Ｓ０７３５－１０９７（１７）４１５１９－１．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｊａｃｃ．２０１７．１１．００６参照）。

【0005】

高血圧を治療するのに利用可能な抗高血圧薬が多数あるにもかかわらず、対象の３分の２を超える人数において、症状を１種類の抗高血圧薬によってコントロールすることができず、異なる薬物のクラスから選択される２種類以上の抗高血圧薬が必要とされている。このためさらに、服薬コンプライアンスの低下、及び多量の薬物使用で経験する副作用の増加が原因で、血圧がコントロールされる対象の数が減少する。

【0006】

したがって、高血圧症及び他のアンギオテンシノゲン関連疾患の治療の代替及び併用療法が、当技術分野で必要とされている。

【発明の概要】

【0007】

本発明の一態様に従って、アンギオテンシノゲン（ＡＧＴ）発現を阻害する二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）薬剤が提供され、前記ｄｓＲＮＡ剤は、センス鎖及びアンチセンス鎖を含み、アンチセンス鎖におけるヌクレオチド２～１８位は、ＡＧＴ ＲＮＡ転写物に対して相補性の領域を含み、その相補性の領域は、表１～４に示すアンチセンス配列の１つと０、１、２、又は３ヌクレオチドが異なる少なくとも１５個の隣接ヌクレオチドを含み、任意に標的化リガンドを含む。一部の実施形態において、ＡＧＴ ＲＮＡ転写物に対して相補性の領域は、表１～４に示すアンチセンス配列の１つと、３ヌクレオチド以下が異なる少なくとも１５、１６、１７、１８、又は１９個の隣接ヌクレオチドを含む。特定の実施形態において、ｄｓＲＮＡのアンチセンス鎖は、配列番号５１９のいずれかの標的領域と少なくとも実質的に相補的であり、且つ表１～４のうちの１つに提供される。一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡのアンチセンス鎖は、配列番号５１９のいずれかの標的領域と完全に相補的であり、且つ表１～４のうちの１つに提供される。一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、表１～４に示すセンス鎖配列のいずれか１つを含み、センス鎖配列は、ｄｓＲＮＡ剤におけるアンチセンス鎖配列と少なくとも実質的に相補的である。特定の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、表１～４に示すセンス鎖配列のいずれかを含み、そのセンス鎖配列は、ｄｓＲＮＡ剤におけるアンチセンス鎖配列と完全に相補的である。一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、表１～４に示すセンス鎖配列のいずれかを含む。一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、表１～４に二重鎖配列として示す配列のいずれかを含む。

【0008】

一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、式（Ａ）：５’－Ｚ_１ＡＧＣＵＵＧＵＵＵＧＵＧＡＡＡＣＺ_２－３’と０、１、２、又は３ヌクレオチドが異なるセンス鎖を含み、式中、Ｚ１は、０～１５個のヌクレオチドモチーフを含むヌクレオチド配列であり、且つＺ_２は、Ａ、Ｕ、Ｃ、Ｇの１つから選択されるか、又は存在しない。特定の実施形態において、Ｚ_１は、１～４個のヌクレオチドモチーフを含むヌクレオチド配列である。特定の実施形態において、Ｚ_１は、１、２、３、又は４個のヌクレオチドモチーフを含むヌクレオチド配列である。特定の実施形態において、Ｚ_２はＡである。特定の実施形態において、Ｚ_１は、ＣＡＣＣ又はＧＡＣＣモチーフを含むヌクレオチド配列である。特定の実施形態において、Ｚ_１ヌクレオチド配列は、以下のモチーフ：Ｃ、ＡＣ、ＵＣ、ＧＣ、ＣＣ、ＡＣＣ、ＵＣＣ、ＧＣＣ、ＣＣＣ、ＧＡＣＣ、ＡＡＣＣ、ＵＡＣＣ、ＣＡＣＣ、ＣＧＡＣＣ、ＣＣＧＡＣＣ、ＡＣＣＧＡＣＣ、ＡＡＣＣＧＡＣＣ、ＣＡＡＣＣＧＡＣＣ、ＣＣＡＡＣＣＧＡＣＣ、ＵＣＣＡＡＣＣＧＡＣＣ、ＵＵＣＣＡＡＣＣＧＡＣＣ、ＡＵＵＣＣＡＡＣＣＧＡＣＣ、ＡＡＵＵＣＣＡＡＣＣＧＡＣＣ又はＧＡＡＵＵＣＣＡＡＣＣＧＡＣＣのうちの１つから選択される。一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、式（Ｂ）：５’－Ｚ_３ＧＵＵＵＣＡＣＡＡＡＣＡＡＧＣＵＺ_４－３’と、０、１、２、又は３ヌクレオチドが異なるアンチセンス鎖を含み、上記式中、Ｚ_３は、Ａ、Ｕ、Ｃ、Ｇのうちの１つから選択されるか、又は存在せず、且つＺ_４は、０～１５個のヌクレオチドモチーフを含むヌクレオチド配列である。特定の実施形態において、Ｚ_４は、１～４個のヌクレオチドモチーフを含むヌクレオチド配列である。特定の実施形態において、Ｚ_４は、１、２、３、又は４個のヌクレオチドモチーフを含むヌクレオチド配列である。特定の実施形態において、Ｚ_３はＵである。特定の実施形態において、Ｚ_４ヌクレオチド配列は、ＧＧＵＣ又はＧＧＵＧモチーフを含むヌクレオチド配列から選択される。特定の実施形態において、Ｚ_４ヌクレオチド配列は、以下のモチーフ：Ｇ、ＧＵ、ＧＣ、ＧＡ、ＧＧ、ＧＧＵ、ＧＧＡ、ＧＧＣ、ＧＧＧ、ＧＧＵＧ、ＧＧＵＣ、ＧＧＵＵ、ＧＧＵＡ、ＧＧＵＣＧ、ＧＧＵＣＧＧ、ＧＧＵＣＧＧＵ、ＧＧＵＣＧＧＵＵ、ＧＧＵＣＧＧＵＵＧ、ＧＧＵＣＧＧＵＵＧＧ、ＧＧＵＣＧＧＵＵＧＧＡ、ＧＧＵＣＧＧＵＵＧＧＡＡ、ＧＧＵＣＧＧＵＵＧＧＡＡＵ、ＧＧＵＣＧＧＵＵＧＧＡＡＵＵ又はＧＧＵＣＧＧＵＵＧＧＡＡＵＵＣのうちの１つから選択される。一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤はセンス鎖及びアンチセンス鎖を含み、そのセンス鎖及びアンチセンス鎖はそれぞれ、本明細書に記載の式（Ａ）及び式（Ｂ）と、０、１、２、又は３ヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列を含み、任意に標的化リガンドを含む。特定の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤のセンス鎖（Ａ）及びアンチセンス鎖（Ｂ）はそれぞれ、３５個以下のヌクレオチドの長さである。特定の実施形態において、Ｚ_１及びＺ_４ヌクレオチドモチーフは完全に、又は部分的に相補的である。一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、式（Ａ’）：５’－Ｚ_１’ＣＡＧＣＵＵＧＵＵＵＧＵＧＡＡＡＣＡ－３’と０、１、２、又は３ヌクレオチドが異なるセンス鎖を含み、且つ式（Ｂ’）：５’－ＵＧＵＵＵＣＡＣＡＡＡＣＡＡＧＣＵＧＺ_４’－３’と０、１、２又は３ヌクレオチドが異なるアンチセンス鎖を含み、式中、Ｚ_１’及びＺ_４’はそれぞれ独立して、ヌクレオチドモチーフ０～１３ヌクレオチド配列を含む。特定の実施形態において、Ｚ_１’及びＺ_４’はそれぞれ独立して、ヌクレオチドモチーフ１、２、又は３ヌクレオチド配列を含む。特定の実施形態において、Ｚ_１’ヌクレオチド配列は、以下のモチーフ：Ａ、Ｕ、Ｇ、Ｃ、ＡＣ、ＵＣ、ＧＣ、ＣＣ、ＧＡＣ、ＡＡＣ、ＵＡＣ、ＣＡＣ、ＣＧＡＣ、ＣＣＧＡＣ、ＡＣＣＧＡＣ、ＡＡＣＣＧＡＣ、ＣＡＡＣＣＧＡＣ又はＧＡＡＵＵＣＣＡＡＣＣＧＡＣのうちの１つから選択される。Ｚ_４’ヌクレオチド配列は、以下のモチーフ：Ｕ、Ｃ、Ａ、Ｇ、ＧＵ、ＧＡ、ＧＣ、ＧＧ、ＧＵＧ、ＧＵＣ、ＧＵＵ、ＧＵＡ、ＧＵＣＧ、ＧＵＣＧＧ、ＧＵＣＧＧＵ、ＧＵＣＧＧＵＵ、ＧＵＣＧＧＵＵＧ又はＧＵＣＧＧＵＵＧＧＡＡＵＵＣのうちの１つから選択される。

【0009】

一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤はセンス鎖及びアンチセンス鎖を含み、アンチセンス鎖は、以下に示すアンチセンス配列
５’－ＵＡＣＵＣＡＵＵＡＧＡＡＧＡＡＡＧＧＵＧ－３’（配列番号１６２）；
５’－ＵＣＵＵＡＧＡＣＣＡＡＧＧＡＧＡＡＡＣＧＧ－３’（配列番号１６３）；
５’－ＵＧＵＵＵＣＡＣＡＡＡＣＡＡＧＣＵＧＧＵＣ－３’（配列番号１６７）；
５’－ＵＧＵＵＵＣＡＣＡＡＡＣＡＡＧＣＵＧＧＵＧ－３’（配列番号５２３）；
５’－ＵＵＣＧＧＵＵＧＧＡＡＵＵＣＵＵＵＵＵＧＣ－３’（配列番号１８４）；
５’－ＧＵＵＵＣＡＣＡＡＡＣＡＡＧＣＵＧＧ－３’（配列番号６５３）；
のうちの１つと、０、１、２、又は３ヌクレオチドが異なる、少なくとも１５個の隣接ヌクレオチドを含む。

【0010】

一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤はセンス鎖及びアンチセンス鎖を含み、そのそれぞれが以下に示すヌクレオチド配列：
センス鎖：５’－ＣＡＣＣＵＵＵＵＣＵＵＣＵＡＡＵＧＡＧＵＡ－３’（配列番号６５）、
アンチセンス鎖：５’－ＵＡＣＵＣＡＵＵＡＧＡＡＧＡＡＡＡＧＧＵＧ－３’（配列番号１６２）
のうちの１つと、０、１、２、又は３ヌクレオチドが異なる、少なくとも１５個の隣接ヌクレオチドを含む。

【0011】

一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤はセンス鎖及びアンチセンス鎖を含み、そのそれぞれが以下に示すヌクレオチド配列：
センス鎖：５’－ＣＣＧＵＵＵＣＵＣＣＵＵＧＧＵＣＵＡＡＧＡ－３’（配列番号６６）、
アンチセンス鎖：５’－ＵＣＵＵＡＧＡＣＣＡＡＧＧＡＧＡＡＡＣＧＧ－３’（配列番号１６３）
のうちの１つと、０、１、２、又は３ヌクレオチドが異なる、少なくとも１５個の隣接ヌクレオチドを含む。

【0012】

一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤はセンス鎖及びアンチセンス鎖を含み、そのそれぞれが以下に示すヌクレオチド配列：
センス鎖：５’－ＧＡＣＣＡＧＣＵＵＧＵＵＵＧＵＧＡＡＡＣＡ－３’（配列番号７０）、
アンチセンス鎖：５’－ＵＧＵＵＵＣＡＣＡＡＡＣＡＡＧＣＵＧＧＵＣ－３’（配列番号１６７）
のうちの１つと、０、１、２、又は３ヌクレオチドが異なる、少なくとも１５個の隣接ヌクレオチドを含む。

【0013】

一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤はセンス鎖及びアンチセンス鎖を含み、そのそれぞれが以下に示すヌクレオチド配列：
センス鎖：５’－ＣＡＣＣＡＧＣＵＵＧＵＵＵＧＵＧＡＡＡＣＡ－３’（配列番号：５２２）
アンチセンス鎖：５’－ＵＧＵＵＵＣＡＣＡＡＡＣＡＡＧＣＵＧＧＵＧ－３’（番号：５２３）；
のうちの１つと、０、１、２、又は３ヌクレオチドが異なる、少なくとも１５個の隣接ヌクレオチドを含む。
一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤はセンス鎖及びアンチセンス鎖を含み、そのそれぞれが以下に示すヌクレオチド配列：
センス鎖：５’－ＧＣＡＡＡＡＡＧＡＡＵＵＣＣＡＡＣＣＧＡＡ－３’（配列番号８７）、
アンチセンス鎖：５’－ＵＵＣＧＧＵＵＧＧＡＡＵＵＣＵＵＵＵＵＧＣ－３’（配列番号１８４）
のうちの１つと、０、１、２、又は３ヌクレオチドが異なる、少なくとも１５個の隣接ヌクレオチドを含む。

【0014】

一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤はセンス鎖及びアンチセンス鎖を含み、そのそれぞれが以下に示すヌクレオチド配列：
センス鎖：５’－ＣＣＡＧＣＵＵＧＵＵＵＧＵＧＡＡＡＣ－３’（配列番号６５２）、
アンチセンス鎖：５’－ＧＵＵＵＣＡＣＡＡＡＣＡＡＧＣＵＧＧ－３’（配列番号６５３）
のうちの１つと、０、１、２、又は３ヌクレオチドが異なる、少なくとも１５個の隣接ヌクレオチドを含む。

【0015】

一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤二重鎖は、表１におけるＡＤ００１５８－１９－２、ＡＤ００１５８－１９－１、ＡＤ００１５８－３、ＡＤ００１５８－１、ＡＤ００１５８－２、ＡＤ００１５８、ＡＤ００１５９、ＡＤ００１５９－１、ＡＤ００１５９－２、ＡＤ００１５９－１９－１、ＡＤ００１５９－１９－２、ＡＤ００１６３、ＡＤ００１６３－１、ＡＤ００１６３－２、ＡＤ００１６３－１９－１、ＡＤ００１６３－１９－２、ＡＤ００１６３－３、ＡＤ００３００－１、ＡＤ００３００－１９－１及びＡＤ００３００－１９－２のいずれか１つの二重鎖から選択される。

【0016】

一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤二重鎖は、表１におけるＡＶ０１２２７、ＡＶ０１２２８、ＡＶ０１２２９、ＡＶ０１２３０、ＡＶ０１２３１、ＡＶ０１２３２、ＡＶ０１２３３、ＡＶ０１２３４、ＡＶ０１２３５、ＡＶ０１２３６、ＡＶ０１２３７、ＡＶ０１２３８、ＡＶ０１２３９、ＡＶ０１２４０、ＡＶ０１２４１、ＡＶ０１２４２、ＡＶ０１２４３、ＡＶ０１２４４、ＡＶ０１２４５、ＡＶ０１２４６、ＡＶ０１２４７、ＡＶ０１２４８、ＡＶ０１２４９、ＡＶ０１２５０、ＡＶ０１２５１、ＡＶ０１２５２、ＡＶ０１２５３、ＡＶ０１２５４、ＡＶ０１２５５、ＡＶ０１２５６、ＡＶ０１２５７又はＡＶ０１７１１のいずれか１つの二重鎖から選択される。

【0017】

一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、少なくとも１つの修飾ヌクレオチドを含む。特定の実施形態において、アンチセンス鎖のヌクレオチドのすべて、又は実質的にすべてが修飾ヌクレオチドである。一部の実施形態において、その少なくとも１つの修飾ヌクレオチドとしては、２’－Ｏ－メチルヌクレオチド、２’－フルオロヌクレオチド、２’－デオキシヌクレオチド、２’，３’－セコヌクレオチドミミック、ロック（ｌｏｃｋｅｄ）ヌクレオチド、アンロック核酸（ＵＮＡ）ヌクレオチド、グリコール核酸（ＧＮＡ）ヌクレオチド、２’－Ｆ－アラビノヌクレオチド、２’－メトキシエチルヌクレオチド、脱塩基ヌクレオチド、リビトール、逆位ヌクレオチド、逆位脱塩基ヌクレオチド、逆位２’－ＯＭｅヌクレオチド、逆位２’－デオキシヌクレオチド、２’－アミノ修飾ヌクレオチド、２’－アルキル修飾ヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド及び３’－ＯＭｅヌクレオチド、５’－ホスホロチオエート基を含むヌクレオチド、又はコレステロール誘導体若しくはドデカン酸ビスデシルアミド基に連結された末端ヌクレオチド、２’－アミノ修飾ヌクレオチド、ホスホロアミダート若しくは非天然塩基含有ヌクレオチドが挙げられる。

【0018】

一部の実施形態において、これらの二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）剤は、センス鎖と、標的遺伝子に相当するｍＲＮＡの少なくとも一部に相補的であるアンチセンス鎖と、を含み、ｄｓＲＮＡ剤は、式（Ｃ）によって示されるアンチセンス鎖を有するヌクレオチド配列、及び式（Ｄ）によって示されるセンス鎖を有するヌクレオチド配列を含む。

【0019】

アンチセンス鎖は、３’から５’の方向に示される式（Ｃ）：
３’－（Ｎ_Ｌ）_ｎＮ_Ｍ１Ｎ_ＬＮ_Ｍ２Ｎ_ＬＮ_ＦＮ_ＬＮ_Ｍ３Ｎ_ＬＮ_Ｍ４Ｎ_ＬＮ_Ｍ５Ｎ_Ｍ６Ｎ_ＬＮ_Ｍ７Ｎ_Ｍ８Ｎ_ＬＮ_ＦＮ_Ｌ－５’式（Ｃ）を含み、且つ
センス鎖は、５’から３’の方向に示される式（Ｄ）：
５’－（Ｎ’_Ｌ）_ｎ’Ｎ’_ＬＮ’_ＬＮ’_ＬＮ’_Ｎ１Ｎ’_Ｎ２Ｎ’_Ｎ３Ｎ’_Ｎ４Ｎ’_ＦＮ’_ＬＮ’_Ｎ５Ｎ’_Ｎ６Ｎ’_ＬＮ’_ＬＮ’_ＬＮ’_ＬＮ’_ＬＮ’_ＬＮ’_Ｌ－３’式（Ｄ）
を含む。

【0020】

上記式中、Ｎ_Ｆがそれぞれ、２’－フルオロ－修飾ヌクレオチドを表す。Ｎ_Ｍ１、Ｎ_Ｍ２、Ｎ_Ｍ３、Ｎ_Ｍ４、Ｎ_Ｍ５、Ｎ_Ｍ６、Ｎ_Ｍ７及びＮ_Ｍ８は独立して、修飾又は未修飾ヌクレオチドを表す。Ｎ_Ｍ１、Ｎ_Ｍ２、Ｎ_Ｍ３、Ｎ_Ｍ４、Ｎ_Ｍ５、Ｎ_Ｍ６、Ｎ_Ｍ７及びＮ_Ｍ８において３個のみ２’－フルオロ－修飾ヌクレオチド、又は１個のみの２’－フルオロ－修飾ヌクレオチドが存在する。Ｎ_Ｌはそれぞれ独立して、修飾又は未修飾ヌクレオチドを表し、この修飾は２’－フルオロ－修飾ヌクレオチドではない。Ｎ’_Ｆはそれぞれ、２’－フルオロ－修飾ヌクレオチドを表す。Ｎ’_Ｎ１、Ｎ’_Ｎ２、Ｎ’_Ｎ３、Ｎ’_Ｎ４、Ｎ’_Ｎ５及びＮ’_Ｎ６は独立して、修飾又は未修飾ヌクレオチドを表す。Ｎ’_Ｎ１、Ｎ’_Ｎ２、Ｎ’_Ｎ３、Ｎ’_Ｎ４、Ｎ’_Ｎ５及びＮ’_Ｎ６において２’－フルオロ－修飾ヌクレオチドが２つのみ存在する。Ｎ’_Ｌはそれぞれ独立して、修飾又は未修飾ヌクレオチドを表し、この修飾は２’－フルオロ－修飾ヌクレオチドではない。ｎ及びｎ’はそれぞれ独立して、０～７の整数であり得る。

【0021】

特定の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤における式（Ｃ）によって表されるアンチセンス鎖の２、７、１２、１４、及び１６位（５’末端の最初の対のヌクレオチドからカウントする）のヌクレオチドは、２’－フッ素（ｆｌｕｏｒｉｎｅ）－修飾ヌクレオチドであり；式（Ｄ）によって表されるセンス鎖の９、１１及び１３位（３’末端の最初の対のヌクレオチドからカウントする）は２’－フルオロ－修飾ヌクレオチドである。特定の実施形態において、式（Ｃ）によって表されるアンチセンス鎖のＮＭ２、ＮＭ３、ＮＭ６位のヌクレオチドは、２’－フルオロ－修飾ヌクレオチドであり、式（Ｄ）によって表されるセンス鎖のＮ’_Ｎ３、Ｎ’_Ｎ５位のヌクレオチドは２’－フルオロ－修飾ヌクレオチドである。

【0022】

一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、ガイド鎖の５’末端にＥ－ビニルホスホネートヌクレオチドを含む。特定の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、少なくとも１つのホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。特定の実施形態において、センス鎖は少なくとも１つのホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。一部の実施形態において、アンチセンス鎖は少なくとも１つのホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。一部の実施形態において、センス鎖は１、２、３、４、５、又は６個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。一部の実施形態において、アンチセンス鎖は１、２、３、４、５、又は６個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。

【0023】

特定の実施形態において、センス鎖及びアンチセンス鎖のすべての、又は実質的にすべてのヌクレオチドが修飾ヌクレオチドである。一部の実施形態において、修飾センス鎖は、表２～４に示す修飾センス鎖配列である。一部の実施形態において、修飾アンチセンス鎖は、表２～４に示す修飾アンチセンス鎖配列である。

【0024】

特定の実施形態において、センス鎖は、アンチセンス鎖に対して相補的又は実質的に相補的であり、相補性の領域は、１６～２３ヌクレオチドの長さである。一部の実施形態において、相補性の領域は１９～２１ヌクレオチドの長さである。特定の実施形態において、相補性の領域は、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、又は３０ヌクレオチドの長さである。

【0025】

一部の実施形態において、各鎖の長さは４０ヌクレオチド以下である。一部の実施形態において、各鎖は、３０ヌクレオチド以下の長さである。一部の実施形態において、各鎖は２５ヌクレオチド以下の長さである。一部の実施形態において、各鎖は２３ヌクレオチド以下の長さである。一部の実施形態において、各鎖は４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、又は３０ヌクレオチドの長さである。

【0026】

特定の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は少なくとも１つの修飾ヌクレオチドを含み、さらに１つ又は複数の標的化又は連結（ｌｉｎｋｉｎｇ）基を含む。一部の実施形態において、１つ又は複数の標的化基又は連結基は、センス鎖にコンジュゲートされる。一部の実施形態において、標的化基又は連結基はＮ－アセチル－ガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）を含む。一部の実施形態において、標的化基は以下の構造：

【化1】

【化2】

【化3】

【化4】

【化5】

【化6】

【化7】

【化8】

【化9】

【化10】

【化11】

を有する。

【0027】

特定の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、センス鎖の５’末端にコンジュゲートされた標的化基を含む。一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、センス鎖の３’末端にコンジュゲートされた標的化基を含む。一部の実施形態において、アンチセンス鎖は、３’末端に逆位脱塩基残基を含む。特定の実施形態において、センス鎖は、３’及び／又は５’末端に１つ又は２つの逆位脱塩基残基を含む。一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は２つの平滑末端を有する。一部の実施形態において、少なくとも１つの鎖は、少なくとも１ヌクレオチドの長さである３’オーバーハングを含む。一部の実施形態において、少なくとも１つの鎖は、少なくとも２ヌクレオチドの長さである３’オーバーハングを含む。

【0028】

特定の実施形態において、本発明は、治療において使用されるオープンな核酸（ＵＮＡ）オリゴマーに関する。アンロック核酸（ＵＮＡ）は、リボース間のＣ２’原子とＣ３’原子との結合が切断されている、ＲＮＡの非環式類似体である。ＵＮＡの取込みは忍容性がよいことが判明しており、場合によっては、ｓｉＲＮＡ遺伝子サイレンシングの活性を増強する（Ｍｅｇｈａｎ Ａ．ｅｔ ａｌ．Ｌｏｃｋｅｄ ｖｓ．ｕｎｌｏｃｋｅｄ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄｓ（ＬＮＡ ｖｓ．ＵＮＡ）：ｃｏｎｔｒａｓｔｉｎｇ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｗｏｒｋ ｔｏｗａｒｄｓ ｃｏｍｍｏｎ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｇｏａｌｓ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｒｅｖ．，２０１１、４０，５６８０－５６８９）。

【0029】

ＵＮＡは熱不安定な修飾であり、リボヌクレオチドをＵＮＡで置き換えることによって、塩基対の強度及び二重鎖の安定性が低下する。ｓｉＲＮＡアンチセンス鎖のシード領域におけるＵＮＡの戦略的配置は、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）によって仲介される遺伝子サイレンシングメカニズムにおけるオフターゲット活性を低減することができる。ｍｉＲＮＡは主に、アンチセンスシード領域（末端から２～８位）と、遺伝子抑制の標的ｍＲＮＡとの塩基対を介して標的遺伝子を認識する。各ｍｉＲＮＡは、多数の遺伝子を調節する可能性を有する。ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）によってロードされたｓｉＲＮＡアンチセンス鎖もまた、ｍｉＲＮＡ仲介メカニズムを介して、意図しない多数の遺伝子を調節できる可能性がある。したがって、ｓｉＲＮＡのシード領域に、ＵＮＡなどの熱不安定なヌクレオチドを付加することによって、オフターゲット活性を低減することができる（Ｌａｍ ＪＫ，Ｃｈｏｗ ＭＹ，Ｚｈａｎｇ Ｙ，Ｌｅｕｎｇ ＳＷ．ｓｉＲＮＡ Ｖｅｒｓｕｓ ｍｉＲＮＡ ａｓ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ｆｏｒ Ｇｅｎｅ Ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ．Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ．２０１５ Ｓｅｐ１５；４（９）：ｅ２５２．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｍｔｎａ．２０１５．２３．ＰＭＩＤ：２６３７２０２２；ＰＭＣＩＤ：ＰＭＣ４８７７４４８．）。特に、かかるＲＮＡオリゴヌクレオチド又はＲＮＡオリゴヌクレオチドの複合体は、シード領域に少なくとも１つのＵＮＡヌクレオチドモノマーを含有する（Ｎａｒｅｎｄｒａ Ｖａｉｓｈ ｅｔ ａｌ．Ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ ｇｅｎｅ ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ ｂｙ ｓｉＲＮＡｓ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｕｎｌｏｃｋｅｄ ｎｕｃｌｅｏｂａｓｅ ａｎａｌｏｇ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０１１，Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．５ １８２３－１８３２）。

【0030】

本発明の技術的解決策に従って、ＲＮＡオリゴヌクレオチド又はＲＮＡオリゴヌクレオチドの複合体にＵＮＡを組込む潜在的な利点としては、限定されないが、以下のことが挙げられる：
１．オフターゲット活性の低減。ｉＲＮＡシード領域にＵＮＡを付加すると、シード領域の塩基対強度が低減され、それによってミクロ－ＲＮＡによって起こる潜在的なオフターゲット活性が減少する。
２．ｓｉＲＮＡ活性の点でのＵＮＡの良好な寛容（ｔｏｌｅｒａｔｉｏｎ）。場合によっては、ＵＮＡは、活性の増加を引き起こし得る。

【0031】

技術的解決策で使用することができる例示的なＵＮＡモノマーとしては、限定されないが：

【化12】

が挙げられる。

【0032】

一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、表２～４における二重鎖ＡＤ００１５８－１９－２、ＡＤ００１５８－１９－１、ＡＤ００１５８－３、ＡＤ００１５８－１、ＡＤ００１５８－２、ＡＤ００１５８、ＡＤ００１５９、ＡＤ００１５９－１、ＡＤ００１５９－２、ＡＤ００１５９－１９－１、ＡＤ００１５９－１９－２、ＡＤ００１６３、ＡＤ００１６３－１、ＡＤ００１６３－２、ＡＤ００１６３－１９－１、ＡＤ００１６３－１９－２、ＡＤ００１６３－３、ＡＤ００３００－１、ＡＤ００３００－１９－１及びＡＤ００３００－１９－２のいずれか一つから選択される修飾二重鎖である。

【0033】

一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、表２～４における二重鎖ＡＶ０１２２７、ＡＶ０１２２８、ＡＶ０１２２９、ＡＶ０１２３０、ＡＶ０１２３１、ＡＶ０１２３２、ＡＶ０１２３３、ＡＶ０１２３４、ＡＶ０１２３５、ＡＶ０１２３６、ＡＶ０１２３７、ＡＶ０１２３８、ＡＶ０１２３９、ＡＶ０１２４０、ＡＶ０１２４１、ＡＶ０１２４２、ＡＶ０１２４３、ＡＶ０１２４４、ＡＶ０１２４５、ＡＶ０１２４６、ＡＶ０１２４７、ＡＶ０１２４８、ＡＶ０１２４９、ＡＶ０１２５０、ＡＶ０１２５１、ＡＶ０１２５２、ＡＶ０１２５３、ＡＶ０１２５４、ＡＶ０１２５５、ＡＶ０１２５６及びＡＶ０１２５７のいずれかから選択される修飾二重鎖である。

【0034】

本発明の一態様に従って、本発明の上述のｄｓＲＮＡ剤の態様のいずれかの実施形態を含む組成物が提供される。特定の実施形態において、その組成物はさらに、薬剤として許容される担体を含む。一部の実施形態において、組成物はさらに、１種又は複数種の追加の治療薬を含む。特定の実施形態において、組成物は、キット、容器、パック、ディスペンサー、プレフィルドシリンジ、又はバイアルにパッケージされる。一部の実施形態において、組成物は、皮下又は静脈内（ＩＶ）投与用に製剤化される。

【0035】

本発明の別の態様に従って、発明の上述のｄｓＲＮＡ剤の態様のいずれかの実施形態を含む細胞が提供される。一部の実施形態において、その細胞は哺乳動物細胞、任意にヒト細胞である。

【0036】

本発明の別の態様に従って、細胞におけるＡＧＴ遺伝子の発現を阻害する方法が提供され、前記方法は：（ｉ）前述のｄｓＲＮＡ剤又は本発明の前述の組成物のいずれかの実施形態を有効量で含む細胞を調製することを含む。特定の実施形態において、その方法はさらに：（ｉｉ）ＡＧＴ遺伝子のｍＲＮＡ転写物を分解するのに十分な時間、調製細胞を維持し、それによって、細胞におけるＡＧＴ遺伝子の発現が阻害されることを含む。一部の実施形態において、細胞は対象における細胞であり、ｄｓＲＮＡ剤は、対象に皮下投与される。一部の実施形態において、細胞は対象における細胞であり、ｄｓＲＮＡ剤は、対象にＩＶ投与される。特定の実施形態において、その方法はさらに、対象にｄｓＲＮＡ剤を投与した後に、ＡＧＴ遺伝子の阻害を評価することを含み、この評価の手段は：（ｉ）対象におけるＡＧＴ関連疾患又は病状の１つ又は複数の生理学的特徴を決定すること；ＡＧＴ関連疾患若しくは病状のベースラインの治療前生理学的特徴及び／又はＡＧＴ関連疾患若しくは病状の対照の生理学的特徴と、決定された生理学的特徴を比較することであって、その比較が、対象におけるＡＧＴ遺伝子の発現の阻害の有無を示すこと；を含む。一部の実施形態において、その決定された生理学的特徴は、血中のＡＧＴのレベルである。一部の実施形態において、決定された生理学的特徴は、収縮期血圧（ＳＢＰ）、弛緩期血圧（ＤＢＰ）、及び平均動脈圧（ＭＡＰＲ）などの血圧である。血中のＡＧＴレベル及び／又は血圧の減少は、対象におけるＡＧＴ遺伝子発現の減少を意味する。

【0037】

本発明の別の態様に従って、対象におけるＡＧＴ遺伝子発現を阻害する方法であって、上記のｄｓＲＮＡ剤態様の実施形態又は上記の組成物の実施形態を有効量で対象に投与することを含む方法が提供される。一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、対象に皮下投与される。特定の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は対象にＩＶ投与される。一部の実施形態において、その方法はさらに、ｄｓＲＮＡ剤の投与後に、ＡＧＴ遺伝子の阻害を評価することを含み、この評価の手段は：（ｉ）対象におけるＡＧＴ関連疾患又は病状の１つ又は複数の生理学的特徴を決定すること；（ｉｉ）ＡＧＴ関連疾患若しくは病状のベースラインの治療前生理学的特徴及び／又はＡＧＴ関連疾患若しくは病状の対照の生理学的特徴と、決定された生理学的特徴を比較することであって、その比較が、対象におけるＡＧＴ遺伝子の発現の阻害の有無を示すこと；を含む。一部の実施形態において、その決定された生理学的特徴は、血中のＡＧＴのレベルであり；一部の実施形態において、決定された生理学的特徴は、収縮期血圧（ＳＢＰ）、弛緩期血圧（ＤＢＰ）、及び平均動脈圧（ＭＡＰＲ）などの血圧である。血中のＡＧＴレベル及び／又は血圧の減少は、対象におけるＡＧＴ遺伝子発現の減少を意味する。

【0038】

本発明の別の態様に従って、ＡＧＴタンパク質と関連する疾患又は病状を治療する方法であって、ＡＧＴ遺伝子発現を阻害するために、本発明の上記のｄｓＲＮＡ剤の態様のいずれかの実施形態又は本発明の上記の組成物を有効量で対象に投与することを含む方法が提供される。特定の実施形態において、ＡＧＴ関連障害は：高血圧症、高血圧、境界型高血圧、本態性高血圧、二次性高血圧、孤立性収縮期若しくは又は拡張期高血圧、妊娠関連性高血圧、糖尿病性高血圧、治療抵抗性高血圧、難治性高血圧、発作性高血圧、腎血管性高血圧症、ゴールドブラット高血圧、高眼圧、緑内障、肺高血圧症、門脈圧亢進、全身性静脈性高血圧、収縮期高血圧、不安定性高血圧；高血圧性心疾患、高血圧性腎症、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、血管症、糖尿病性腎症、糖尿病性網膜症、慢性心不全、心筋症、糖尿病性心筋症、糸球体硬化症、大動脈狭窄、大動脈瘤、心室繊維化、心不全、心筋梗塞、アンギナ、脳卒中、腎疾患、腎不全、全身性硬化症、子宮内胎児発育遅延（ＩＵＧＲ）、及び胎児発育遅延から選択される。一部の実施形態において、この方法はさらに、対象に追加の治療レジメンを施すことを含む。一部の実施形態において、その追加の治療レジメンは、ＡＧＴ関連疾患又は病状の治療を含む。特定の実施形態において、追加の治療レジメンは：本発明の１種又は複数種のＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチドを対象に投与すること；非ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ治療薬を対象に投与すること；及び対象において行動上の変化をもたらすこと；を含む。一部の実施形態において、非ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ治療薬は、以下の：追加の治療薬、例えば利尿剤、アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、アンギオテンシンＩＩ受容体アンタゴニスト、β遮断薬、血管拡張薬、カルシウムチャネルブロッカー、アルドステロンアンタゴニスト、α２－アゴニスト、レニン阻害剤、α－遮断薬、末梢作用性アドレナリン作動薬、選択的Ｄ１受容体部分アゴニスト、非選択的α－アドレナリン拮抗薬、合成ステロイド性抗ミネラルコルチコイド、又は上述のいずれかの組合せ、及び薬剤の組合せとして製剤化された高血圧用の治療薬のうちの１つである。

【0039】

一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は対象に皮下投与される。特定の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は対象にＩＶ投与される。一部の実施形態において、その方法はさらに、対象において投与された二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）剤の有効性を決定することを含む。一部の実施形態において、対象において治療の有効性を決定する手段は：（ｉ）対象における１つ又は複数の生理学的特徴を決定すること；（ｉｉ）ＡＧＴ関連疾患若しくは病状と、決定された生理学的特徴を相関させることであって、その比較が、対象に投与された二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）剤の有効性の有無、及び有効性のレベルのうちの１つ又は複数を示すこと；を含む。一部の実施形態において、決定されたその生理学的特徴は、血中のＡＧＴのレベルであり；一部の実施形態において、決定された生理学的特徴は、収縮期血圧（ＳＢＰ）、弛緩期血圧（ＤＢＰ）、及び平均動脈圧（ＭＡＰＲ）などの血圧である。血中のＡＧＴレベル及び／又は血圧の減少は、対象に投与された二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）剤の有効性の存在を意味する。

【0040】

本発明の別の態様に従って、対象におけるＡＧＴタンパク質のベースラインの治療前レベルと比較して、対象におけるＡＧＴタンパク質のレベルを低減する方法であって、ＡＧＴ遺伝子発現のレベルを低減するために、本発明の上記のｄｓＲＮＡ剤態様のいずれかの実施形態又は本発明の上記の組成物のいずれかの実施形態を、有効量で対象に投与することを含む方法が提供される。一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、対象に皮下投与又はＩＶ投与される。

【0041】

本発明の別の態様に従って、対象におけるＡＧＴ関連疾患又は病状のベースラインの治療前生理学的特徴と比較して、対象におけるＡＧＴ関連疾患又は病状の生理学的特徴を改変する方法が提供され、前記方法が、対象におけるＡＧＴ関連疾患又は病状の生理学的特徴を改変するために、本発明の上記のｄｓＲＮＡ剤態様のいずれかの実施形態又は本発明の上記の組成物のいずれかの実施形態を、有効量で対象に投与することを含む。一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、対象に皮下又はＩＶ投与される。特定の実施形態において、生理学的特徴は、血中のＡＧＴのレベルであり；一部の実施形態において、決定された生理学的特徴は、収縮期血圧（ＳＢＰ）、弛緩期血圧（ＤＢＰ）、及び平均動脈圧（ＭＡＰＲ）などの血圧である。

【0042】

配列の説明
二重鎖ＡＤ０００５１～ＡＤ００１２２－１９－２、ＡＤ００１６３－３、ＡＶ０１２２７～ＡＶＡＶ０１２５７及びＡＶ０１７１１を表１に示し、且つそのセンス鎖配列を示す。

【0043】

二重鎖ＡＤ０００５１～ＡＤ００１２２－１９－２、ＡＤ００１６３－３、ＡＶ０１２２７～ＡＶＡＶ０１２５７及びＡＶ０１７１１を表１に示し、且つ、そのアンチセンス鎖配列を示す。

【0044】

配列番号５１９はヒトアンギオテンシノゲン（ＡＧＴ）ｍＲＮＡである［ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００１３８４４７９．１］：

【化13】

【化14】

【0045】

配列番号５２０はマウスアンギオテンシノゲン（ＡＧＴ）ｍＲＮＡである［ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００７４２８．４］

【化15】

【0046】

配列番号５２１はカニクイザルアンギオテンシノゲン（ＡＧＴ）ｍＲＮＡである［ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００１２８３６３４．１］

【化16】

【0047】

表２に示す配列において、化学修飾は、大文字：２’－フルオロ；小文字：２’－ＯＭｅ；チオリン酸：^＊として示される。

【0048】

表３に示す配列において、生体内（ｉｎ ｖｉｖｏ）での研究で使用される送達分子は、各センス鎖の３’末端の「ＧＬＯ－０」によって示される。化学修飾は、大文字：２’－フルオロ；小文字：２’－ＯＭｅ；チオリン酸：^＊；アンロック核酸：ＵＮＡ；と表される（注：ＡＤ０００５２，ＡＤ００１１３－ＡＤ００２６０：ＵＮＡなし；ＡＤ００２８２－ＡＤ００３０１：ＵＮＡバージョン）。

【0049】

表４に示す配列において、化学修飾は、大文字：２’－フルオロ；小文字：２’－ＯＭｅ；チオリン酸：^＊；Ｉｎｖａｂ＝逆位脱塩基；と示される。

【図面の簡単な説明】

【0050】

【図1】ＡＤ００１５８－１、ＡＤ００１５８－２、ＡＤ００１６３－１、ＡＤ００１５９－１、及びＡＤ００３００－１をそれぞれ２ｍｇ／ｋｇで投与した後の、カニクイザルにおける血清ＡＧＴタンパク質レベルを示すグラフである。

【図2】ＡＤ００１６３－３ １０ｍｇ／ｋｇの投与後の、カニクイザルにおける血清ＡＧＴタンパク質レベルを示すグラフである。

【図3】ＡＤ００１６３－３ １０ｍｇ／ｋｇの投与後の、カニクイザルにおける血清ＳＢＰの変化を示すグラフである。

【図4】ＡＤ００１６３－３ １０ｍｇ／ｋｇの投与後の、カニクイザルにおける平均血圧（ＭＢＰ）を示すグラフである。

【図5】ＡＤ００１６３－３ １０ｍｇ／ｋｇの投与後の、カニクイザルにおける弛緩期血圧（ＤＢＰ）を示すグラフである。

【発明を実施するための形態】

【0051】

本発明の一部の実施形態は、限定されないが、二本鎖（ｄｓ）ＲＮＡｉ剤などの、アンギオテンシノゲン（ＡＧＴ）遺伝子の発現を阻害することができるＲＮＡｉ剤を含む。本発明の一部の実施形態は、ＡＧＴ ＲＮＡｉ剤を含む組成物、及びその組成物を使用する方法も含む。本明細書に開示のＡＧＴ ＲＮＡｉ剤は、肝細胞への送達など、細胞への送達用の送達化合物に取り付けることができる。本発明の医薬組成物は、少なくとも１つのｄｓＡＧＴ剤及び送達化合物を含み得る。本発明の一部の実施形態において、送達化合物はＧａｌＮＡｃ含有送達化合物である。細胞に送達されるＡＧＴ ＲＮＡｉ剤は、ＡＧＴ遺伝子の発現を阻害することができ、それによって細胞における遺伝子のＡＧＴタンパク質産生が低減される。本発明のｄｓＲＮＡｉ剤を使用して、ＡＧＴ関連疾患及び病状を治療することができる。かかるｄｓＲＮＡｉ剤としては、例えば、表１に示す二重鎖ＡＤ０００５１～ＡＤ００１２２－１９－２が挙げられる。一部の実施形態において、好ましいｄｓＲＮＡｉ剤としては、例えば、二重鎖ＡＤ００１５８、ＡＤ００１６３、ＡＤ００１５９、ＡＤ００２９０、ＡＤ００３００、又はＡＤ００１２２が挙げられる。他の実施形態において、好ましいｄｓＲＮＡｉ剤としては、例えば、ＡＤ００１５８－１、ＡＤ００１５８－２、ＡＤ００１６３－１、ＡＤ００１６３－３．ＡＤ００１５９－１又はＡＤ００３００－１が挙げられる。一部の他の実施形態において、かかるｄｓＲＮＡｉ剤としては、二重鎖ＡＤ００１５８、ＡＤ００１６３、ＡＤ００１６３－３、ＡＤ００１５９、ＡＤ００２９０、ＡＤ００３００又はＡＤ００１２２のバリアントなど、二重鎖バリアントが挙げられる。

【0052】

本発明の一部の実施形態において、細胞又は対象におけるＡＧＴ発現の低減によって、細胞又は対象それぞれにおいてＡＧＴ発現と関連する疾患又は病状が治療される。ＡＧＴ活性の低減によって治療することができる、疾患及び病状の非制限的な例は、高血圧症、高血圧、境界型高血圧、本態性高血圧、二次性高血圧、孤立性収縮期又は拡張期高血圧、妊娠関連性高血圧、糖尿病性高血圧、治療抵抗性高血圧、難治性高血圧、発作性高血圧、腎血管性高血圧症、ゴールドブラット高血圧、高眼圧、緑内障、肺高血圧症、門脈圧亢進、全身性静脈性高血圧、収縮期高血圧、不安定性高血圧；高血圧性心疾患、高血圧性腎症、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、血管症、糖尿病性腎症、糖尿病性網膜症、慢性心不全、心筋症、糖尿病性心筋症、糸球体硬化症、大動脈狭窄、大動脈瘤、心室繊維化、心不全、心筋梗塞、アンギナ、脳卒中、腎疾患、腎不全、全身性硬化症、子宮内発育遅延（ＩＵＧＲ）、及び胎児発育遅延である。

【0053】

ＡＧＴ遺伝子発現を阻害するＡＧＴ一本鎖（ｓｓＲＮＡ）及び二本鎖（ｄｓＲＮＡ）剤を含む組成物をどのように調製及び使用するか、並びにＡＧＴ遺伝子発現によって生じる、又は調節される疾患及び病状を治療するための組成物及び方法が以下に記述される。「ＲＮＡｉ」という用語は当技術分野で公知であり、「ｓｉＲＮＡ」とも呼ばれ得る。

【0054】

本明細書で使用される、「ＲＮＡｉ」という用語は、ＲＮＡを含み、且つＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）経路を介してＲＮＡ転写物の標的化された切断を仲介する、作用（ａｇｅｎｔ）剤を意味する。当技術分野で公知のように、ＲＮＡｉ標的領域とは、一次転写産物のＲＮＡ処理産物であるメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）などの、遺伝子転写中に形成されるＲＮＡ分子のヌクレオチド配列の隣接部分を意味する。配列の標的部分は、この部分での、又はこの部分付近でのＲＮＡｉ指向性切断の基質としての役割を果たすのに少なくとも十分に長い。標的配列は８～３０ヌクレオチド長さ（含めて）、１０～３０ヌクレオチド長さ（含めて）、１２～２５ヌクレオチド長さ（含めて）、１５～２３ヌクレオチド長さ（含めて）、１６～２３ヌクレオチド長さ（含めて）、又は１８～２３ヌクレオチド長さ（含めて）であり得て、各指定範囲内のより短いすべての長さを含む。本発明の一部の実施形態において、標的配列は、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５又は２６ヌクレオチド長さである。特定の実施形態において、標的配列は、その間のすべての部分範囲及び整数を含む、９～２６ヌクレオチドの長さ（含めて）である。例えば、本発明の特定の実施形態において制限されることを意図しないが、標的配列は、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９又は３０ヌクレオチド長さであり、且つＡＧＴ遺伝子のＲＮＡ転写物の少なくとも一部に対して完全に、又は少なくとも実質的に相補的である。本発明の一部の態様は、１種又は複数種のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤と、薬剤として許容される担体と、を含む医薬組成物を含む。本発明の特定の実施形態において、本明細書に記載のＡＧＴ ＲＮＡｉは、ＡＧＴタンパク質の発現を阻害する。

【0055】

本明細書において使用される、「ｄｓＲＮＡ剤」とは、標的ｍＲＮＡ転写物を分解する、又は標的ｍＲＮＡ転写物の翻訳を阻害することができるＲＮＡ又はＲＮＡ様（例えば、化学修飾されたＲＮＡ）オリゴヌクレオチド分子を含む組成物を意味する。特定の理論に束縛されることは望まないが、本発明のｄｓＲＮＡ剤は、ＲＮＡ干渉メカニズムを介して作用し得て（つまり、哺乳動物細胞のＲＮＡ干渉経路の仕組み（ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体又はＲＩＳＣ）と相互作用することによってＲＮＡ干渉を誘導する）、又は代替のメカニズム若しくは経路を介して作用し得る。植物、無脊椎動物及び脊椎動物細胞における遺伝子をサイレンシングする方法は当技術分野でよく知られており（例えばＳｈａｒｐ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．２００１，１５：４８５；Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ，ｅｔ ａｌ．，（２００１）Ｎａｔｕｒｅ４０９：３６３；Ｎｙｋａｎｅｎ、ｅｔ ａｌ．，（２００１）Ｃｅｌｌ １０７：３０９；及びＥｌｂａｓｈｉｒ，ｅｔ ａｌ．，（２００１）Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．１５：１８８）参照）、その開示内容全体が、参照により本明細書に組み込まれる。当技術分野で公知の遺伝子サイレンシング手段は、ＡＧＴ発現の阻害を達成するために、本明細書において提供される開示内容と併せて使用することができる。

【0056】

本明細書に開示のｄｓＲＮＡ剤は、センス鎖及びアンチセンス鎖からなり、且つ限定されないが：短鎖干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、ＲＮＡｉ剤、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）及びダイサー基質が挙げられる。本明細書に記載のｄｓＲＮＡ剤のアンチセンス鎖は、標的化ｍＲＮＡに対して少なくとも部分的に相補的であり、且つ種々の長さのｄｓＲＮＡ二重鎖を用いて、標的遺伝子発現を阻害することができることは当技術分野で理解されている。例えば、１９、２０、２１、２２、及び２３塩基対の二重鎖構造を有するｄｓＲＮＡは、ＲＮＡ干渉を有効に誘導することが知られている（Ｅｌｂａｓｈｉｒｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ ２００１、２０：６８７７－６８８８）。それより短い、又は長いＲＮＡ二重鎖構造もまた、ＲＮＡ干渉の誘導に有効であることも当技術分野で公知である。本発明の特定の実施形態におけるＡＧＴ ｄｓＲＮＡは、少なくとも２１ヌクレオチドの長さの少なくとも１つの鎖を含み得て、又は二重鎖は、表１～４に示す配列の少なくとも１つに基づく長さから、１、２若しくは３ヌクレオチドを引いた長さ、又はそれ以下の長さを有し得る。表１～４に示すｄｓＲＮＡと比較して、一方の末端又は両方の末端での４ヌクレオチドの減少もそれぞれ、有効であり得る。本発明の一部の実施形態において、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤は、表１～４の１つ又は複数の配列からの少なくとも１５、１６、１７、１８、１９、２０又はそれ以上の隣接ヌクレオチドの部分配列を有し得て、且つ全配列（本明細書において「親」配列とも呼ばれる）を含むｄｓＲＮＡによって生じる阻害のレベルと、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、又は３０％を超えるレベルでＡＧＴ遺伝子発現を阻害するその能力が異なる。

【0057】

本発明の組成物及び方法の特定の実施形態は、組成物中に一本鎖ＲＮＡを含み、且つ／又は一本鎖ＲＮＡを対象に投与する。例えば、表１～４のいずれかに示すアンチセンス鎖を組成物として、又は組成物内で使用することができ、対象に投与した場合に、対象においてＡＧＴポリペプチド活性及び／又はＡＧＴ遺伝子の発現が低減される。表１～４は、アンチセンス及びセンス鎖のコアが、一部のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤のベース配列をどのように伸ばすかを示す。本発明の特定の組成物に含有され得て、及び／又は本発明の特定の方法で投与され得る一本鎖アンチセンス分子は、本明細書において「一本鎖アンチセンス剤」又は「アンチセンスポリヌクレオチド剤」と呼ばれる。本発明の特定の組成物に含有され得て、及び／又は本発明の特定の方法で投与され得る一本鎖センス分子は、本明細書において「一本鎖センス剤」又は「センスポリヌクレオチド剤」と呼ばれる。本明細書で使用される、「ベース配列」という用語は、化学修飾又は送達化合物を含まないポリヌクレオチド配列を意味する。例えば、表１に示すセンス鎖は、表３における、それに対応するベース配列に相当し；表３における対応する配列は、それぞれの化学修飾及び送達化合物を示す。本明細書に開示される配列は、割り当てられた識別子であり得る。例えば、一本鎖センス配列は、「センス鎖ＳＳ番号」によって同定され得て；一本鎖アンチセンス配列は、「アンチセンス鎖ＡＳ番号」によって同定され得て；且つセンス鎖及びアンチセンス鎖を含む二重鎖は、「二重鎖ＡＤ番号」によって同定され得る。

【0058】

表１は、センス及びアンチセンス鎖を含み、且つ表１の同じ列にあるセンス及びアンチセンス鎖によって形成される二重鎖の識別番号を提供する。本発明の特定の実施形態において、アンチセンス配列は、その最初の位置に核酸塩基ｕ又は核酸塩基ａを含有する。本発明の特定の実施形態において、アンチセンス配列は、その最初の位置に核酸塩基ｕを含む。本明細書において使用される、「マッチング位置」という用語は、２つの鎖が二重鎖として働く場合に、ある意味では、互いに「対をなす」各鎖における位置を意味する。例えば、２１核酸塩基センス鎖及び２１核酸塩基アンチセンス鎖において、センス鎖の１位にある核酸塩基は、アンチセンス鎖の２１位の核酸塩基との「マッチング位置」にある。２３核酸塩基センス鎖及び２３核酸塩基アンチセンス鎖における別の非制限的な例において、センス鎖の２位の核酸塩基は、アンチセンス鎖の２２位とのマッチング位置にある。１８核酸塩基センス鎖及び１８核酸塩基アンチセンス鎖における別の非制限的な例において、センス鎖の１位の核酸塩基は、アンチセンス鎖の１８位とのマッチング位置にある。センス鎖の４位にある核酸塩基は、アンチセンス鎖の１５位にある核酸塩基とのマッチング位置にある。当業者であれば、二重鎖及び対をなす鎖のセンス及びアンチセンス鎖間のマッチング位置をどのように同定するかは理解されよう。

【0059】

表１における最後の欄は、表の同じ列におけるセンス及びアンチセンス配列を含む二重鎖の二重鎖ＡＤ番号／ＡＶ番号を示す。例えば、表１は、対応するセンス及びアンチセンス鎖配列を含む、「二重鎖ＡＤ番号ＡＤ０００５１」と名付けられた二重鎖を開示する。したがって、表１の各列は、同じ列に示すセンス及びアンチセンス配列をそれぞれが含む、本発明の二重鎖を識別し、各二重鎖に対して名付けられた識別子は、欄の列の最後に示される。

【0060】

本発明の方法の一部の実施形態において、表１に記載のポリヌクレオチド配列を含むＲＮＡｉ剤が対象に投与される。本発明の一部の実施形態において、対象に投与されるＲＮＡｉ剤は、表１に示すベース配列のうちの少なくとも１つを含み、且つ０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３又は２４の配列修飾を含む、二重鎖を包含する。本発明の方法の一部の実施形態において、表１に示すポリヌクレオチド配列のＲＮＡｉ剤を送達分子に連結することがさらに含まれ、その非制限的な例は、ＧａｌＮＡｃを含む送達化合物である。

【0061】

【表1】

【0062】

【表2】

【0063】

【表3】

【0064】

【表4】

【0065】

【表5】

【0066】

【表6】

【0067】

【表7】

【0068】

【表8】

【0069】

【表9】

【0070】

【表10】

【0071】

表２は、本発明の特定の化学修飾ＡＧＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス及びセンス鎖配列を示す。本発明の一部の実施形態において、表２に示すポリヌクレオチド配列を有するＲＮＡｉ剤が、細胞及び／又は対象に投与される。本発明の一部の実施形態において、表２に記載のポリヌクレオチド配列を有するＲＮＡｉ剤が対象に投与される。本発明の一部の実施形態において、対象に投与されるＲＮＡｉ剤は、表２の最初の欄に示す二重鎖を含み、且つ表２における同じ列の第３番目及び６番目の欄にそれぞれ示すセンス及びアンチセンス鎖配列の配列修飾を含む。本発明の一部の実施形態において、表２に示す配列は、対象の細胞及び／又は組織にＲＮＡｉ剤を送達することができる化合物に連結（本明細書においてコンジュゲートとも呼ばれる）することができる。本発明の特定の実施形態において有用な送達化合物の非制限的な例は、ＧａｌＮＡｃ含有化合物である。表２において、第１欄は、表１に対応するベース配列の二重鎖ＡＤ番号又はＡＶ番号を表す。二重鎖のＡＤ番号によって識別されるベース配列に関して、センス及びアンチセンス鎖に含有されるベース配列が示されるだけでなく、指定の化学修飾もまた表２の同じ列に示される。例えば、表１の第１列は、二重鎖ＡＤ番号ＡＤ０００５１として識別される、二重鎖を共に形成する、一本鎖センス及びアンチセンスベース配列を示すのに対して、表２に示す二重鎖ＡＤ番号ＡＤ０００５１において二重鎖として、それはＡＤ０００５１－ＳＳ及びＡＤ０００５１－ＡＳのベース配列を含み、且つ第３欄及び第６欄それぞれに示すセンス及びアンチセンス配列において化学修飾を含有する。表２の第２欄における「センス鎖ＳＳ番号」は、同じ列の第３欄に示すセンス配列（修飾を含む）の指定の識別子である。表２の第５欄における「アンチセンス鎖ＡＳ番号」は、第６欄に示すアンチセンス配列（修飾を含む）の指定の識別子である。

【0072】

【表11】

【0073】

【表12】

【0074】

【表13】

【0075】

【表14】

【0076】

【表15】

【0077】

表３は、本発明の特定の化学修飾ＡＧＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス及びセンス鎖配列を示す。本発明の一部の実施形態において、表３に示すＲＮＡｉ剤が細胞及び／又は対象に投与される。本発明の一部の実施形態において、表３に記載のポリヌクレオチド配列を有するＲＮＡｉ剤が対象に投与される。本発明の一部の実施形態において、対象に投与されるＲＮＡｉ剤は、表３の第１欄において識別される二重鎖を含み、且つ表３の同じ列の第３欄及び第６欄それぞれのセンス及びアンチセンス鎖配列で示される配列修飾及び／又は送達化合物を含む。その配列は、本明細書において他に記載の特定の生体内（ｉｎ ｖｉｖｏ）試験研究で使用された。本発明の一部の実施形態において、表３に示す配列は、送達のための化合物に連結（本明細書においてコンジュゲートとも呼ばれる）することができ、その化合物の非制限的な例は、ＧａｌＮＡｃ含有化合物であり、つまり「ＧＬＸ－ｎ」と識別される送達化合物が、表３の第３欄におけるセンス鎖上に存在する。本明細書で使用される、「ＧＬＸ」は、「ＧＬＳ」又は「ＧＬＯ」送達化合物（「Ｘ」は「Ｓ」又は「Ｏ」であることができる）を意味するために使用され、ＧＬＸ－ｎは、合成プロセス中に本発明のオリゴヌクレオチドの３’又は５末端に連結することができる、いずれかのＧＬＳ及びＧＬＯであり得る。非制限的な例として、ＧＬＸ－１３及びＧＬＸ－１４は、合成プロセス中に本発明のオリゴヌクレオチドの３’末端に連結することができ、ＧＬＸ－５及びＧＬＸ－１５は、合成プロセス中に本発明のオリゴヌクレオチドの５’末端に連結することができる。一部の実施形態において、本明細書で使用され、且つ表３に示される、「ＧＬＸ－ｎ」は、結合されたＧａｌＮＡｃ含有化合物を表すために使用され、且つ化合物ＧＬＳ－１、ＧＬＳ－２、ＧＬＳ－３、ＧＬＳ－４、ＧＬＳ－５、ＧＬＳ－６、ＧＬＳ－７、ＧＬＳ－８、ＧＬＳ－９、ＧＬＳ－１０、ＧＬＳ－１１、ＧＬＳ－１２、ＧＬＳ－１３、ＧＬＳ－１４、ＧＬＳ－１５、ＧＬＳ－１６、ＧＬＯ－１．ＧＬＯ－２、ＧＬＯ－３、ＧＬＯ－４、ＧＬＯ－５、ＧＬＯ－６、ＧＬＯ－７、ＧＬＯ－８、ＧＬＯ－９、ＧＬＯ－１０、ＧＬＯ－１１、ＧＬＯ－１２、ＧＬＯ－１３、ＧＬＯ－１４、ＧＬＯ－１５及びＧＬＯ－１６のいずれかである。一部の実施において、限定されないが、そのすべてが本明細書に記載されている、Ｊａｙａｐｒａｋａｓｈ，ｅｔ ａｌ．，（２０１４）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１３６，１６９５８に開示のライゲーションに有用なＧａｌＮＡｃ含有など、ＧＬＯ－０は、ライゲーションに使用可能として先行技術で開示されているＧａｌＮＡｃ含有化合物を表す。一部の実施において、当業者は、限定されないが：ＧＬＳ－１、ＧＬＳ－２、ＧＬＳ－３、ＧＬＳ－４、ＧＬＳ－５と、ＧＬＳ－６、ＧＬＳ－７、ＧＬＳ－８、ＧＬＳ－９、ＧＬＳ－１０、ＧＬＳ－１１、ＧＬＳ－１２、ＧＬＳ－１３、ＧＬＳ－１４、ＧＬＳ－１５、ＧＬＳ－１６、ＧＬＯ－１、ＧＬＯ－２、ＧＬＯ－３、ＧＬＯ－４、ＧＬＯ－５、ＧＬＯ－６、ＧＬＯ－７、ＧＬＯ－８、ＧＬＯ－９、ＧＬＯ－１０、ＧＬＯ－１１、ＧＬＯ－１２、ＧＬＯ－１３、ＧＬＯ－１４、ＧＬＯ－１５及びＧＬＯ－１６のうちの１つと、を含む結合された送達化合物と共に、本発明のｄｓＲＮＡ化合物を調製し、使用することができるだろう。これらのそれぞれの構造が本明細書の他の箇所で提供される。表３の第１欄は、表のその列におけるセンス及びアンチセンス配列に割り当てられた二重鎖の二重鎖ＡＤ番号を提供する。例えば、二重鎖ＡＤ番号ＡＤ０００５２は、センス鎖ＡＤ０００５２－ＳＳ及びアンチセンス鎖ＡＤ０００５２－ＡＳで構成される二重鎖である。表３の各列は、１つのセンス鎖及び１つのアンチセンス鎖を提供し、示されるセンス鎖及びアンチセンス鎖によって構成される二重鎖を開示する。表３の第２欄における「センス鎖ＳＳ番号」は、同じ列の第３欄に示すセンス配列（修飾を含む）に対する指定の識別子である。表３の第５欄における「アンチセンス鎖ＡＳ番号」は、第６欄に示すアンチセンス配列（修飾を含む）に対する指定の識別子である。特定の連結ＧａｌＮＡｃ含有ＧＬＯ化合物の識別子はＧＬＯ－０と示され、且つＧＬＯ－ｎ又はＧＬＳ－ｎ化合物のもう１つが、ＧＬＯ－０と示される化合物の代わりに置換され得ること、且つ得られる化合物はまた、本発明の方法及び／又は組成物の実施形態に包含されることを理解されたい。

【0078】

【表16】

【0079】

【表17】

【0080】

【表18】

【0081】

【表19】

【0082】

【表20】

【0083】

【表21】

【0084】

表４は、本発明の特定の化学修飾ＡＧＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス及びセンス鎖配列を示す。本発明の一部の実施形態において、表４に示すポリヌクレオチド配列を有するＲＮＡｉ剤が対象に投与される。本発明の一部の実施形態において、対象に投与されるＲＮＡｉ剤は、表４の第１欄の列で識別される二重鎖を含み、且つ表４の第３及び第６欄における同じ列のセンス及びアンチセンス鎖配列で示される配列修飾及び／又は送達化合物を含む。本発明の一部の実施形態において、表４に示す配列は、ＲＮＡｉ剤を、対象の細胞及び／又は組織に送達することができる化合物に連結することができる。本発明の特定の実施形態において有用な送達化合物の非制限的な例は、ＧａｌＮＡｃ含有化合物である。表４において、「ＧＬＸ－ｎ」という用語は、示されるセンス鎖においてＧａｌＮＡｃを含有する化合物を意味する。例えば、「ＧＬＯ－０」及び「ＧＬＳ－５」という用語はそれぞれ、センス鎖に結合された異なるＧａｌＮＡｃ含有化合物を表す。ＧＬＯ－０と示される化合物は、ＧＬＯ－ｎ又はＧＬＳ－ｎ化合物のうちもう１つによって置換され得ること、且つ得られる化合物もまた、本発明の方法及び／又は組成物に包含されることを理解されたい。同様に、ＧＬＳ－５と示される化合物もまた、ＧＬＳ－ｎ又はＧＬＯ－ｎ化合物のもう１つによって置換され得て、且つ得られる化合物は、本発明の方法及び／又は組成物の実施形態に包含される。表４において、結合されたＧａｌＮＡＣ含有化合物を示すために使用される化合物ＧＬＸ－ｎは、化合物ＧＬＳ－１、ＧＬＳ－２、ＧＬＳ－３、ＧＬＳ－４、ＧＬＳ－５、ＧＬＳ－６、ＧＬＳ－７、ＧＬＳ－８．ＧＬＳ－９、ＧＬＳ－１０、ＧＬＳ－１１、ＧＬＳ－１２、ＧＬＳ－１３、ＧＬＳ－１４、ＧＬＳ－１５、ＧＬＳ－１６、ＧＬＯ－１、ＧＬＯ－２、ＧＬＯ－３、ＧＬＯ－４、ＧＬＯ－５、ＧＬＯ－６、ＧＬＯ－７、ＧＬＯ－８、ＧＬＯ－９、ＧＬＯ－１０、ＧＬＯ－１１、ＧＬＯ－１２、ＧＬＯ－１３、ＧＬＯ－１４、ＧＬＯ－１５及びＧＬＯ－１６であり、そのそれぞれの構造は、本明細書における他の箇所で提供される。表４の第１欄は、表３に示す二重鎖に対応する二重鎖ＡＤ番号を表す。二重鎖ＡＤ番号は、表３に対応する二重鎖配列を識別し、表４におけるセンス、アンチセンス、及び二重鎖配列が、表３における同じ二重鎖ＡＤ番号を有するベース配列と同一であるが、表４における配列及び二重鎖は、表３に示す対応する配列及び二重鎖と比較して異なる化学修飾及び／又は送達化合物を有することを示す。例えば、表４に示すように、配列ＡＤ００１１３－１－ＳＳ及びＡＤ００１１３－１－ＡＳ及びその二重鎖ＡＤ番号ＡＤ００１１３－１はそれぞれ、表３に示すＡＤ００１１３－ＳＳ（センス）、ＡＤ００１１３－ＡＳ（アンチセンス）及び二本鎖ＡＤ番号ＡＤ００１１３と同じベース配列を有するが、各表に示すように化学修飾及び／又は送達化合物を有する。表４の第１欄は二重鎖ＡＤ番号番号を識別し；各列において番号によって識別される二重鎖は、同じ列で第３及び第６欄それぞれに示すセンス及びアンチセンス鎖を含み、且つ修飾を含み、それぞれが、センス鎖の３’又は５’末端に結合されたＧＬＯ－又はＧＬＳ－送達化合物を有する。

【0085】

【表22】

【0086】

【表23】

【0087】

【表24】

【0088】

【表25】

【0089】

【表26】

【0090】

【表27】

【0091】

【表28】

【0092】

【表29】

【0093】

ミスマッチ
特にミスマッチがｄｓＲＮＡの末端領域内にある場合に、ミスマッチがｄｓＲＮＡの効力に耐えることは当業者には知られている。ゆらいだ塩基対Ｇ：Ｕ及びＡ：Ｃを有するミスマッチなど、特定のミスマッチはより良く耐える（Ｄｕｅｔ ａｌ．，Ａ ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ａｎ ａｃｔｉｖｅ ｓｉＲＮＡ ａｔ ａｌｌ ｓｉｎｇｌｅ－ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｍｉｓｍａｔｃｈｅｄ ｔａｒｇｅｔ ｓｉｔｅｓ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２００５ Ｍａｒ２１；３３（５）：１６７１－７．Ｄｏｉ：１０．１０９３／ｎａｒ／ｇｋｉ３１２．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２００５；３３（１１）：３６９８）。本発明の方法及び化合物の一部の実施形態において、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤は、ＡＧＴ標的配列に対して１つ又は複数のミスマッチを含有し得る。一部の実施形態において、本発明のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤は、ミスマッチを含有しない。特定の実施形態において、本発明のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤は、１以下のミスマッチを含有する。一部の実施形態において、本発明のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤は、２以下のミスマッチを含有する。特定の実施形態において、本発明のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤は、３つ以下のミスマッチを含有する。本発明の一部の実施形態において、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤のアンチセンス鎖は、相補性の領域の中央に位置しないＡＧＴ標的配列に対してミスマッチを含有する。一部の実施形態において、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤のアンチセンス鎖は、相補性の領域の５’又は３’末端の一方又は両方から最後の５、４、３、２又は１ヌクレオチド内に位置する１、２、３、４、又はそれ以上のミスマッチを含有する。ＡＧＴ標的配列に対するミスマッチを含有するＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤が、ＡＧＴ遺伝子の発現の阻害に有効か否かを決定するために、本明細書に記載の方法及び／又は当技術分野で公知の方法を使用することができる。

【0094】

相補性
別段の指定がない限り、本明細書において使用される、「相補性／相補的」という用語は、第２ヌクレオチド配列（例えば、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤アンチセンス鎖又は一本鎖アンチセンスポリヌクレオチド）に対する、第１ヌクレオチド配列（例えば、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤センス鎖又は標的化ＡＧＴ ｍＲＮＡ）の関連を説明するために使用される場合、第２ヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドとハイブリダイズし、且つ特定の条件下にて二重らせん若しくは二重鎖構造を形成する［哺乳類の生理学的条件（又は生体外での類似の条件）下にて塩基対の間で水素結合を形成する］、第１ヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチド又はポリヌクレオチドの能力を意味する。生体において遭遇し得る生理的に関連する条件など、他の条件も当てはまり得る。ハイブリダイズされたヌクレオチドの最終的な適用に基づいて２つの配列の相補性を試験するのに最も適している条件のセットを当業者は決定することができるだろう。相補的配列は、ワトソン・クリック塩基対又は非ワトソン・クリック塩基対を含み、且つ上記のハイブリダイゼーションの必定条件が少なくとも満たされる程度まで、天然若しくは修飾ヌクレオチド又はヌクレオチドミミックを含む。配列同一性又は相補性は修飾に依存しない。

【0095】

例えば、本明細書に記載のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ内の相補的配列は、一方若しくは両方のヌクレオチド配列の長さ全体にわたって、第２ヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチド又はポリヌクレオチドに対して、第１ヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチド又はポリヌクレオチドの塩基対を含む。かかる配列は、互いに「完全に相補的」と本明細書において呼ばれ得る。２つのオリゴヌクレオチドが、ハイブリダイゼーションすると１つ又は複数の一本鎖オーバーハングを形成するようにデザインされる実施形態において、かかるオーバーハングは、本明細書において相補性に基づいて決定されるミスマッチと考えられない理解すべきである。例えば、長さが１９ヌクレオチドである１つのオリゴヌクレオチドと、長さが２０ヌクレオチドであるもう一方のオリゴヌクレオチドを含むＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤であって、長いオリゴヌクレオチドが、短いオリゴヌクレオチドに対して完全に相補的である１９ヌクレオチドの配列を含むＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤は、本明細書に記載の目的のために、「完全に相補的」と呼ばれ得る。したがって、本明細書で使用される「完全に相補的」とは、第１ポリヌクレオチドの隣接配列における塩基すべて（１００％）が、第２ポリヌクレオチドの隣接配列における同じ数の塩基とハイブリダイズすることを意味する。隣接配列は、第１又は第２ヌクレオチド配列のすべて又は一部を含み得る。

【0096】

本明細書で使用される、「実質的に相補的」という用語は、核酸塩基配列のハイブリッド対において、第１ポリヌクレオチドの隣接配列における塩基の少なくとも約８５％（すべてではない）が、第２ポリヌクレオチドの隣接配列における同じ数の塩基とハイブリダイズすることを意味する。ハイブリダイズされた場合に、２つの配列が１つ又は複数のミスマッチ塩基対、例えば少なくとも１、２、３、４又は５個のミスマッチ塩基対を含有する場合に、「実質的に相補的」という用語は、その最終用途に、例えばＲＩＳＣ経路を介したＡＧＴ遺伝子発現の阻害に最も関連する条件下にてハイブリダイズする能力を保持ながら、第２配列に対して第１配列によって形成される１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、又は３０塩基対（ｂｐ）までの二重鎖に関して使用され得る。「部分的に相補的」という用語は、第１ポリヌクレオチドの隣接配列における塩基の少なくとも７５％（すべてではない）が、第２ポリヌクレオチドの隣接配列における同じ数の塩基とハイブリダイズする、核酸塩基配列のハイブリダイズ対を意味するために、本明細書において使用され得る。一部の実施形態において、「部分的に相補的」とは、第１ポリヌクレオチドの隣接配列における塩基の少なくとも７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％が、第２ポリヌクレオチドの隣接配列における同じ数の塩基とハイブリダイズすることを意味する。

【0097】

「相補的」、「完全に相補的」、「実質的に相補的」及び「部分的に相補的」は、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤のセンス鎖とアンチセンス鎖との、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤のアンチセンス鎖と標的ＡＧＴ ｍＲＮＡの配列との、又は一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドと標的ＡＧＴ ｍＲＮＡの配列との、塩基ミスマッチを意味するために使用され得る。「ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤のアンチセンス鎖」は、「ＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤」の同じ配列を意味し得ることを理解されたい。

【0098】

本明細書で使用される、核酸配列に言及する場合に、「実質的に同一」又は「実質的な同一性」という用語は、核酸配列が、参照配列に対して少なくとも約８５％以上の配列同一性、好ましくは少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含むことを意味する。配列同一性のパーセンテージは、比較窓にわたって最適にアライメントされた２つの配列を比較することによって決定される。そのパーセンテージは、同じ核酸塩基が両方の配列に存在する位置の数を決定して、マッチ位置の数を得て、比較窓における位置の総数でマッチ位置の数を割り、その結果に１００を掛けて配列同一性のパーセンテージを得ることによって計算される。本明細書に開示の本発明は、本明細書（例えば、表１～５）に開示の配列と実質的に同一であるヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態において、そのヌクレオチド配列は、本明細書（例えば、表１～４）に開示の配列と同一、又は少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％若しくは９９％同一である。

【0099】

本明細書で使用される、「配列を含む鎖」という用語は、標準的なヌクレオチド命名法を用いて参照される配列によって記述されるヌクレオチドの鎖を含むオリゴヌクレオチドを意味する。本明細書で使用される、「二本鎖ＲＮＡ」又は「ｄｓＲＮＡ」という用語は、ＲＮＡ分子、或いは標的ＡＧＴ ＲＮＡに対して「センス」及び「アンチセンス」配向を有すると呼ばれる、逆平行な、及び実質的に若しくは完全に相補的な２つの核酸鎖を含むハイブリダイズされた二重鎖領域を有するＲＮＡｉ分子の複合体を含む配列を意味する。二重鎖領域は、ＲＩＳＣ経路によって標的ＡＧＴ ＲＮＡの特異的な分解を可能にする任意の所望の長さであり得るが、通常、９～３０塩基対長さ、例えば１５～３０塩基対長さである。９～３０塩基対の二重鎖を考えると、その二重鎖は、この範囲内の任意の長さ、例えば、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９又は３０塩基対、及びその中の部分範囲内、限定されないが、１５～３０塩基対、１５～２６塩基対；１５～２３塩基対、１５～２２塩基対、１５～２１塩基対、１５～２０塩基対、１５～１９塩基対、１５～１８塩基対、１５～１７塩基対、１８～３０塩基対、１８～２６塩基対、１８～２３塩基対、１８～２２塩基対、１８～２１塩基対、１８～２０塩基対、１９～３０塩基対、１９～２６塩基対、１９～２３塩基対、１９～２２塩基対、１９～２１塩基対、１９～２０塩基対、２０～３０塩基対、２０～２６塩基対、２０～２５塩基対、２０～２４塩基対、２０～２３塩基対、２０～２２塩基対、２０～２１塩基対、２１～３０塩基対、２１～２６塩基対、２１～２５塩基対、２１～２４塩基対、２１～２３塩基対、又は２１～２２塩基対の長さであり得る。ダイサー及び同様な酵素での処理によって細胞において産生されるＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤は通常、１９～２２塩基対の範囲の長さである。ＡＧＴ ｄｓＤＮＡ剤の二重鎖領域の１つの鎖は、標的ＡＧＴ ＲＮＡの領域に対して実質的に相補的である配列を含む。二重鎖構造を形成する２つの鎖は、少なくとも１つの自己相補的領域を有する単一ＲＮＡ分子から生じ得て、又は２つ以上の別のＲＮＡ分子から形成され得る。二重鎖領域が単一分子から形成される場合には、分子は、ヌクレオチドの一本鎖の３’末端の一方の鎖と、相当する５’末端の別の鎖との間で形成される二重鎖構造を有する（本明細書において「ヘアピンループ」と呼ばれる）。本発明の一部の実施形態において、ヘアピン立体配置は少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０又はそれ以上の不対ヌクレオチドを含む。ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤の実質的に相補的な２つの鎖が、別々のＲＮＡ分子からなる場合、これらの分子は共有結合する必要はないが、共有結合し得る。２つの鎖が、ヘアピンループ以外の手段によって共有結合される場合、連結構造は、「リンカー」と呼ばれる。「ｓｉＲＮＡ」という用語はまた、本明細書に記載のｄｓＲＮＡ剤を意味するため本明細書で使用される。

【0100】

本発明の一部の実施形態において、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤は、ｄｓＲＮＡ剤の一方の又は両方の端に不対ヌクレオチド又はヌクレオチド類似体を有するセンス及びアンチセンス配列を含み得る。不対ヌクレオチドを含まない末端は、「平滑末端」と呼ばれ、且つヌクレオチドオーバーハングを持たない。ｄｓＲＮＡ剤の両方の末端が平滑である場合、ｄｓＲＮＡは、「平滑末端」と言われる。本発明の一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤の第１末端が平滑である場合、一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤の第２末端は平滑であり、本発明の特定の実施形態において、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤の両方の末端は平滑である。

【0101】

本発明のｄｓＲＮＡ剤の一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡには、１つ又は２つの平滑末端がない。この場合には、ｄｓＲＮＡ剤の鎖の末端に少なくとも１つの不対ヌクレオチドがある。例えば、ｄｓＲＮＡの一方の鎖の３’末端は、もう一方の鎖の５’末端を超えて伸び、又はその逆も同じである場合、ヌクレオチドオーバーハングが存在する。ｄｓＲＮＡは、少なくとも１、２、３、４、５、６、又はそれ以上のヌクレオチドのオーバーハングを含有し得る。ヌクレオチドオーバーハングは、デオキシヌクレオチド／ヌクレオシドなどの、ヌクレオチド／ヌクレオシド類似体を含み得る、又はからなり得る。一部の実施形態において、ヌクレオチドオーバーハングはｄｓＲＮＡ剤のセンス鎖上、ｄｓＲＮＡ剤のアンチセンス鎖上、又はｄｓＲＮＡ剤の両方の末端にあり、且つオーバーハングのヌクレオチドは、ｄｓＲＮＡのアンチセンス鎖又はセンス鎖のいずれかの５’末端、３’末端若しくは両方の末端に存在し得ることを理解されたい。本発明の特定の実施形態において、オーバーハングにおける１つ又は複数のヌクレオチドは、ヌクレオシドチオリン酸で置き換えられる。

【0102】

本明細書で使用される、「アンチセンス鎖」又は「ガイド鎖」という用語は、ＡＧＴ標的配列に対して実質的に相補的な領域を含むＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤の鎖を意味する。本明細書で使用される、「センス鎖」又は「パッセンジャー鎖」という用語は、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤のアンチセンス鎖の領域に対して実質的に相補的な領域を含有するＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤の鎖を意味する。

【0103】

修飾
本発明の一部の実施形態において、ＡＧＴ ＲＮＡｉ剤のＲＮＡは化学修飾されて、安定性の向上及び／又は１つ若しくは複数の他の有益な特性が得られる。本発明の特定の実施形態における核酸は、当技術分野でよく知られている方法によって合成及び／又は修飾することができ、例えば、参照により本明細書に組み込まれる、“Ｃｕｒｒｅｎｔ ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”，Ｂｅａｕｃａｇｅ，ＳＬ ｅｔ ａｌ．（Ｅｄｓ．），Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ，ＵＳＡを参照のこと。本発明のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤の特定の実施形態に存在し得る修飾としては、例えば：（ａ）末端修飾、例えば５’末端修飾（リン酸化、抱合、逆位結合等）、３’末端修飾（抱合、ＤＮＡヌクレオチド、逆位結合等）；（ｂ）塩基修飾、例えば安定化塩基、拡大されたパートナープールを有する塩基若しくは塩基ペアリング、欠損塩基（脱塩基ヌクレオチド）若しくはコンジュゲートされた塩基での置換；（ｃ）糖修飾（例えば、２’位又は４’位での）又は糖の置換；及び（ｄ）リン酸ジエステル結合の修飾又は置換などの、主鎖の修飾が挙げられる。本発明のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤、ＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド、及びＡＧＴセンスポリヌクレオチドの特定の実施形態において有用なＲＮＡ化合物の特異的な例としては、限定されないが、修飾主鎖を含む、又は天然ヌクレオシド間結合を欠くＲＮＡが挙げられる。非制限的な例として、主鎖修飾を有するＲＮＡは、主鎖にリン原子を保有しない。そのヌクレオシド間主鎖にリン原子を持たないＲＮＡは、オリゴヌクレオシドと呼ばれ得る。本発明の特定の実施形態において、修飾ＲＮＡは、そのヌクレオシド間主鎖にリン原子を有する。

【0104】

「ＲＮＡ分子」又は「ＲＮＡ」又は「リボ核酸分子」という用語は、天然で発現又は見出されるＲＮＡ分子だけでなく、本明細書に記載の、又は当技術分野で公知のリボヌクレオチド／分子類似体又は誘導体を含む、ＲＮＡの類似体及び誘導体も包含すると理解されたい。「分子」及び「リボヌクレオチド」という用語は、本明細書で区別なく使用され得る。ＲＮＡ分子は、核酸塩基構造又はリボース－リン酸主鎖構造（例えば、以下に記載される）において修飾され得て、分子類似体又は誘導体を含有する分子は、二重鎖を形成する能力を保持しなければならない。非制限的な例としては、ＲＮＡ分子はまた、少なくとも１つの修飾分子、例えば、限定されないが、ロックされたヌクレオシド、脱塩基ヌクレオシド、２’－デオキシ－２’－フルオロ修飾ヌクレオシド、２’－アミノ修飾ヌクレオシド、２’－アルキル修飾ヌクレオシド、モルホリノヌクレオシド、ホスホロアミダート又は非天然塩基含有ヌクレオシド、或いはその組み合わせなどを含み得る。本発明の一部の実施形態において、ＲＮＡ分子は、以下の数の修飾リボヌクレオシド：少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、又は完全長までの、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤分子のリボヌクレオシドを含む。かかるＲＮＡ分子における多数の修飾リボヌクレオシドのそれぞれに関して、修飾は同じである必要はない。

【0105】

一部の実施形態において、本発明のｄｓＲＮＡ剤、ＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド、及び／又はＡＧＴセンスポリヌクレオチドは、１つ若しくは複数の独立して選択される修飾ヌクレオチド及び／又は１つ若しくは複数の独立して選択される非リン酸ジエステル結合を含み得る。本明細書で使用される、修飾ヌクレオチド、非リン酸ジエステル結合等の選択される要素を意味するために使用される場合、「独立して選択される」という用語は、２つ以上の選択される要素が、互いに同一である必要はないが、互いに同一であり得ることを意味する。本明細書で使用される、「ヌクレオチド塩基」、「ヌクレオチド」又は「核酸塩基」とは、すべての核酸の標準構成要素である複素環式ピリミジン又はプリン化合物であり、ヌクレオチドを形成する塩基：アデニン（ａ）、グアニン（ｇ）、シトシン（ｃ）、チミン（ｔ）及びウラシル（ｕ）を含む。核酸塩基はさらに、それに限定することを意図しないが、ユニバーサル塩基、疎水性塩基、プロミスキャス（ｐｒｏｍｉｓｃｕｏｕｓ）な塩基、サイズ拡張塩基、及びフッ素化塩基を含むように修飾され得る。本明細書において「リボヌクレオチド」又は「ヌクレオチド」という用語は、未修飾ヌクレオチド、修飾ヌクレオチド、又は別の部位を意味するために使用され得る。かかる置換部位を保持するヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドの塩基対特性を著しく改変することなく、グアニン、シトシン、アデニン及びウラシルを他の部位によって置換することができることは、当業者は認識されよう。

【0106】

一実施形態において、本明細書に記載の方法及び組成物での使用が企図される修飾ＲＮＡは、目的の二重鎖構造を形成し、且つＲＩＳＣ経路を介した標的の特異的な分解を可能にする、又は仲介する能力を有するペプチド核酸（ＰＮＡ）である。本発明の特定の実施形態において、ＡＧＴ ＲＮＡ干渉剤は、標的ＡＧＴ ＲＮＡ配列と相互作用して、標的ＡＧＴ ＲＮＡの切断を指示する一本鎖ＲＮＡを含む。

【0107】

修飾ＲＮＡ主鎖は、例えば、ホスホロチオエート、キラルホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホトリエステル、アミノアルキルホスホトリエステル、メチル及び他のアルキルホスホネート（３’－アルキレンホスホネート及びキラルホスホネートなど）、ホスフィネート、ホスホロアミダート（３’－アミノホスホロアミダート及びアミノアルキルホスホロアミダートなど）、チオホスホロアミダート、チオアルキルホスホネート、チオアルキルホスホトリエステル、及びボラノホスフェート（通常の３’－５’結合、並びにこれらの２’－５’結合類似体を有し、且つヌクレオシド単位の隣接対が、３’－５’ないし５’－３’又は２’－５’ないし５’－２’形式で連結される、逆極性のものを有する）を含み得る。種々の塩、混合塩及び遊離酸形態も含まれる。リン含有結合を形成する方法は当技術分野において通常、実施されており、かかる方法を用いて、本発明の特定の修飾ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤、特定の修飾ＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド、及び／又は特定の修飾ＡＧＴセンスポリヌクレオチドを調製することができる。

【0108】

リン原子を含有しない修飾ＲＮＡ主鎖は、短鎖アルキル若しくはシクロアルキルヌクレオシド間結合、混合ヘテロ原子及びアルキル若しくはシクロアルキルヌクレオシド間結合、又は１種若しくは複数の短鎖ヘテロ原子若しくは複素環式ヌクレオシド間結合で形成された構造を有する。モルホリノ結合（ヌクレオシドの糖部分から一部形成された）；シロキサン主鎖；スルフィド、スルホキシド及びスルホン主鎖；メチルアセチル及びチオメチルアセチル主鎖；メチレンメチルアセチル及びチオメチルアセチル主鎖；アルケン含有主鎖；スルファメート主鎖；メチレンイミノ及びメチレンヒドラジノ主鎖；スルホネート及びスルホンアミド主鎖；アミド主鎖；並びに混合Ｎ、Ｏ、Ｓ及びＣＨ_２成分を有する他の部分を有するものが挙げられる。リン原子を含有しない修飾ＲＮＡ主鎖を製造する方法は、当技術分野で通常、実施されており、かかる方法を用いて、本発明の特定の修飾ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤、特定の修飾ＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド、及び／又は特定の修飾ＡＧＴセンスポリヌクレオチドを調製することができる。

【0109】

本発明の特定の実施形態において、限定されないが、例えば、ヌクレオチド単位の糖及びヌクレオシド間結合（つまり、主鎖）の代わりに新たな基を用いて、ＲＮＡミメティックを、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ、ＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド、及び／又はＡＧＴセンスポリヌクレオチドに含ませる。かかる実施形態において、塩基単位は、適切なＡＧＴ核酸標的化合物とのハイブリダイゼーションのために維持される。優れたハイブリダイゼーション特性を有することが分かっている、かかるオリゴマー化合物、ＲＮＡミメティックは、ペプチド核酸（ＰＮＡ）と呼ばれる。ＰＮＡ化合物において、ＲＮＡの糖主鎖は、アミド含有主鎖、具体的にはアミノエチルグリシン主鎖によって置換される。核酸塩基は、主鎖のアミド部分のアザ窒素原子に直接又は間接的に保持及び結合される。ＲＮＡミメティックを製造する方法は、当技術分野で通常、実施されており、かかる方法を用いて、本発明の特定の修飾ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤を製造することができる。

【0110】

本発明の一部の実施形態は、ホスホロチオエート主鎖を有するＲＮＡ、及びヘテロ原子主鎖、特に－－ＣＨ_２－－ＮＨ－－ＣＨ_２－、－－ＣＨ_２－－Ｎ（ＣＨ_３）－－Ｏ－－ＣＨ_２－－［メチレン（メチルイミノ）又はＭＭＩ主鎖として知られる］、－－ＣＨ_２－－Ｏ－－Ｎ（ＣＨ_３）－－ＣＨ_２－－、－－ＣＨ_２－－Ｎ（ＣＨ_３）－－Ｎ（ＣＨ_３）－－ＣＨ_２－－及び－－Ｎ（ＣＨ_３）－－ＣＨ_２－－－－［天然ホスホジエステル主鎖は－－Ｏ－－Ｐ－－Ｏ－－ＣＨ_２－－と表される］を有するオリゴヌクレオシドを含む。ホスホロチオエート主鎖を有するＲＮＡ、及びヘテロ原子主鎖を有するオリゴヌクレオチドを製造する方法は当技術分野で通常、実施されており、かかる方法を用いて、本発明の特定の修飾ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤、特定のＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド及び／又は特定のＡＧＴセンスポリヌクレオチドを製造することができる。

【0111】

修飾ＲＮＡは、１つ又は複数の置換糖部位も含有し得る。本発明のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ、ＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド及び／又はＡＧＴセンスポリヌクレオチドは、２’位置に以下の：ＯＨ；Ｆ；Ｏ－－、Ｓ－－、若しくはＮ－アルキル；Ｏ－－、Ｓ－－若しくはＮ－アルケニル；Ｏ－、Ｓ－若しくはＮ－アルキニル；又はＯ－アルキル－Ｏ－アルキル；のうちの１つを含み得て、ここで、アルキル、アルケニル及びアルキニルは、置換若しくは未置換Ｃ_１～Ｃ_１０アルキル又はＣ_２～Ｃ_１０アルケニル及びアルキニルであり得る。例示的な適切な修飾は：Ｏ［（ＣＨ_２）_ｎＯ］_ｍＣＨ_３、Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＯＣＨ_３、Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＮＨ_２、Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＣＨ_３、Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＯＮＨ_２、及びＯ（ＣＨ_２）_ｎＯＮ［（ＣＨ_２）_ｎＣＨ_３）］_２（ｎ及びｍは１～約１０である）を含む。他の実施形態において、ｄｓＲＮＡは、２’位置に以下の：Ｃ_１～Ｃ_１０低級アルキル、置換低級アルキル、アルカリール、アラルキル、Ｏ－アルカリール又はＯ－アラルキル、ＳＨ、ＳＣＨ_３、ＯＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＮ、ＣＦ_３、ＯＣＦ_３、ＳＯＣＨ_３、ＳＯ_２ＣＨ_３、ＯＮＯ_２、ＮＯ_２、Ｎ_３、ＮＨ_２、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルカリル、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ、置換シリル、ＲＮＡ切断基、レポーター基、インターカレーター（ｉｎｔｅｒｃａｌａｔｏｒ）、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤の薬物動態学的特性を改善するために使用される基、或いはＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤、ＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド及び／又はＡＧＴセンスポリヌクレオチドの薬力学的特性を改善するために使用される基、及び類似の特性を有する他の基；のうちの１つを含む。一部の実施形態において、修飾は、２’－メトキシエトキシ（２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）又は２’－ＭＯＥとしても知られる２’－Ｏ－－ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_３）（Ｍａｒｔｉｎｅｔ ａｌ．，Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ，１９９５，７８：４８６－５０４）、つまりアルコキシ－アルコキシ基を含む。別の例示的な修飾は、２’－ジメチルアミノエトキシエトキシ、つまり、以下の実施例に記載の２’－ＤＭＡＯＥとしても知られるＯ（ＣＨ_２）_２ＯＮ（ＣＨ_３）_２基、及び２’－ジメチルアミノエトキシエトキシ（２’－Ｏ－ジメチルアミノエトキシエチル又は２’－ＤＭＡＥＯＥとしても当技術分野で知られる）、つまり２’－Ｏ－－ＣＨ_２－Ｏ－－ＣＨ_２－－Ｎ（ＣＨ_２）_２である。記載のものなど、修飾ＲＮＡを製造する方法は、当技術分野で通常、実施されており、かかる方法を用いて、本発明の特定の修飾ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤を製造することができる。

【0112】

他の修飾としては、２’－メトキシ（２’－ＯＣＨ_３）、２’－アミノプロポキシ（２’－ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ_２）及び２’－フルオロ（２’－Ｆ）が挙げられる。類似の修飾は、本発明のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤、ＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド、ＡＧＴセンスポリヌクレオチド及び／又はＡＧＴセンスポリヌクレオチドのＲＮＡ上の他の位置、特に、３’末端ヌクレオチド上の糖の３’位置、又は２’－５’連結ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ、ＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド、若しくはＡＧＴセンスポリヌクレオチドにおける３’位置、及び５’末端ヌクレオチドの５’位置でも加えることができる。ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤、ＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド、及び／又はＡＧＴセンスポリヌクレオチドは、ペントフラノシル糖の代わりにシクロブチル部位などの糖ミメティックも有し得る。記述されるものなど、修飾ＲＮＡを製造する方法は当技術分野で通常、実施されており、かかる方法を用いて、本発明の特定の修飾ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤、ＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド、及び／又はＡＧＴセンスポリヌクレオチドを製造することができる。

【0113】

一部の実施形態において、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤、ＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド、及び／又はＡＧＴセンスポリヌクレオチドは、核酸塩基（当技術分野で通常、「塩基」と呼ばれる）修飾又は置換を含み得る。本明細書で使用される、「未修飾」又は「天然」核酸塩基としては、プリン塩基アデニン（Ａ）及びグアニン（Ｇ）、及びピリミジン塩基チミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）、及びウラシル（Ｕ）が挙げられる。修飾核酸塩基としては、他の合成及び天然核酸塩基、例えば５－メチルシトシン（５－ｍｅ－Ｃ）、５－ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２－アミノアデニン、アデニン及びグアニンの６－メチル及び他のアルキル誘導体、アデニン及びグアニンの２－プロピル及び他のアルキル誘導体、２－チオウラシル、２－チオチミン及び２－チオシトサン（ｔｈｉｏｃｙｔｏｓａｎ）ピリミジン、５－ハロウラシル及びシトシン、５－プロピニルウラシル及びシトシン、６－アゾウラシル、シトシン及びチミン、５－ウラシル（偽ウラシル）、４－チオウラシル、８－ハロ、８－アミノ、８－チオール、８－チオアルキル、８－ヒドロキシル及び他の８－置換アデニン及びグアニン、５－ハロ、特に５－ブロモ、５－トリフルオロメチル及び他の５－置換ウラシル及びシトシン；７－メチルグアニン及び７－メチルアデニン、８－アザグアニン及び８－アザアデニン、７－アザグアニン及び７－アザアデニン、並びに３－アザグアニン及び３－アザアデニンが挙げられる。本発明のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤の特定の実施形態に含まれ得る追加の核酸塩基は、当技術分野で公知であり、例えば：Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｈｅｒｄｅｗｉｊｎ，Ｐ．Ｅｄ．Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ２００８；Ｔｈｅ Ｃｏｎｃｉｓｅ Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ Ｏｆ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ａｎｄ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ｐａｇｅｓ ８５８－８５９，Ｋｒｏｓｃｈｗｉｔｚ，Ｊ．Ｌ，Ｅｄ．Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，１９９０，Ｅｎｇｌｉｓｈ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ Ｃｈｅｍｉｅ，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９１，３０，６１３，Ｓａｎｇｈｖｉ，Ｙ Ｓ．，Ｃｈａｐｔｅｒ１５，ｄｓＲＮＡ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐａｇｅｓ２８９－３０２、及びＣｒｏｏｋｅ，ＳＴ ａｎｄ Ｌｅｂｌｅｕ，Ｂ．，Ｅｄ．，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，１９９３を参照されたい。本明細書に記載のものなど、核酸塩基修飾及び／又は置換を含む、ｄｓＲＮＡ、ＡＧＴアンチセンス鎖ポリヌクレオチド、及び／又はＡＧＴセンス鎖ポリヌクレオチドを製造する方法は、当技術分野で通常、実施されており、かかる方法を用いて、本発明の特定の修飾ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤、ＡＧＴセンスポリヌクレオチド及び／又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチドを製造することができる。

【0114】

本発明のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤、ＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド、及び／又はＡＧＴセンスポリヌクレオチドの特定の実施形態は、１つ又は複数のロック核酸（ＬＮＡ）を含むように修飾されたＲＮＡを含む。ロック核酸は、２’及び４’炭素を連結する追加の架橋を含む修飾リボース部位を有するヌクレオチドである。この構造は、３’末端構造コンフォメーションにおけるリボースを有効に「ロック」する。本発明のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤、ＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド及び／又はＡＧＴセンスポリヌクレオチドにロック核酸を付加することによって、血清中の安定性が増加し、且つオフターゲット効果が低減され得る（Ｅｌｍｅｎ，Ｊ．ｅｔａｌ．，（２００５）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３３（１）：４３９－４４７；Ｍｏｏｋ，Ｏ Ｒ．ｅｔ ａｌ．，（２００７）Ｍｏｌ Ｃａｎｃ Ｔｈｅｒ６（３）：８３３－８４３；Ｇｒｕｎｗｅｌｌｅｒ，Ａ．ｅｔ ａｌ．，（２００３）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３１（１２）：３１８５－３１９３）。ロック核酸を含む、ｄｓＲＮＡ剤、ＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド、及び／又はＡＧＴセンスポリヌクレオチドを製造する方法は、当技術分野で通常、実施されており、かかる方法を用いて、本発明の特定の修飾ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤を製造することができる。本発明のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ化合物、センスポリヌクレオチド及び／又はアンチセンスポリヌクレオチドの特定の実施形態は、少なくとも１つの修飾ヌクレオチドを含み、その少なくとも１つの修飾ヌクレオチドは：２’－Ｏ－メチルヌクレオチド、２’－フルオロヌクレオチド、２’－デオキシヌクレオチド、２’，３’－セコヌクレオチドミミック、ロックされたヌクレオチド、２’－Ｆ－アラビノヌクレオチド、２’－メトキシエチルヌクレオチド、２’－アミノ修飾ヌクレオチド、２’－アルキル修飾ヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド及び３’－Ｏｍｅヌクレオチド、５’－ホスホロチオエート基を含有するヌクレオチド、又はコレステロール誘導体若しくはドデカン酸ビスデシルアミド基に連結された末端ヌクレオチド、２’－アミノ修飾ヌクレオチド、ホスホロアミダート、又は非天然塩基含有ヌクレオチドを含む。一部の実施形態において、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ化合物は、アンチセンス鎖（本明細書においてガイド鎖とも呼ばれる）の５’末端にＥ－ビニルホスホネートヌクレオチドを含有する。

【0115】

本発明の特定の実施形態において、少なくとも１つの修飾ヌクレオチドは、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ化合物、センスポリヌクレオチドの３’及び５’末端、及び／又はアンチセンスポリヌクレオチドの３’末端にて含まれ、その少なくとも１つの修飾ヌクレオチドは、脱塩基ヌクレオチド、リビトール、逆位ヌクレオチド、逆位脱塩基ヌクレオチド、逆位２’－ＯＭｅヌクレオチド、及び逆位２’－デオキシヌクレオチドを含む。オリゴヌクレオチドの末端に脱塩基又は逆位脱塩基ヌクレオチドを含めることによって、安定性を高めることができることは当業者には公知である（Ｃｚａｕｄｅｒｎａ ｅｔ ａｌ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｖａｒｉａｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｓｔａｂｉｌｉｚｉｎｇ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｓｉＲＮＡｓ ｉｎ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌｌｓ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２００３；３１（１１）：２７０５－２７１６．ｄｏｉ：１０．１０９３／ｎａｒ／ｇｋｇ３９３）。

【0116】

本発明の特定の実施形態において、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ化合物及びアンチセンスポリヌクレオチドは少なくとも１つの修飾ヌクレオチドを含み、前記少なくとも１つの修飾ヌクレオチドは、アンロック核酸（ＵＮＡ）ヌクレオチド及び／又はグリコール核酸（ＧＮＡ）ヌクレオチドを含む。ＵＮＡ及びＧＮＡが、ｓｉＲＮＡ化合物のオフターゲットプロファイルを有意に改善し得る、熱に不安定な化学修飾であることは当業者には公知である（Ｊａｎａｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ＧａｌＮＡｃ－ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ ｓｉＲＮＡｓ ｗｉｔｈ ｌｉｍｉｔｅｄ ｏｆｆ－ｔａｒｇｅｔ－ｄｒｉｖｅｎ ｒａｔ ｈｅｐａｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ．Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ ２０１８；９（１）：７２３．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｓ４１４６７－０１８－０２９８９－４；Ｌａｕｒｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｕｎｌｏｃｋｅｄ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ（ＵＮＡ）ｔｏ ｅｎｈａｎｃｅ ｓｉＲＮＡ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｖｏ．Ｍｏｌ ＢｉｏＳｙｓｔ．２０１０；６：８６２－７０）。

【0117】

本発明のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤、ＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド、及び／又はＡＧＴセンスポリヌクレオチドの特定の実施形態のＲＮＡに含まれ得る別の修飾は、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤、ＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド及び／又はＡＧＴセンスポリヌクレオチドそれぞれの１つ又は複数の特徴を高める、ＲＮＡに化学結合された１つ又は複数のリガンド、部位又はコンジュゲートを含む。高めることができる特徴の非制限的な例は：ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤、ＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド及び／又はＡＧＴセンスポリヌクレオチド活性、細胞分布、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤の送達、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤の薬物動態学的特性、及びＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤の細胞内取り込み；である。本発明の一部の実施形態において、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤は、本発明の特定の実施形態において、センス鎖にコンジュゲートされる、１つ又は複数の標的化又は連結基を含む。標的化基の非制限的な例は、Ｎ－アセチル－ガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）を含む化合物である。「標的化剤」、「連結剤（ｌｉｎｋｉｎｇ ａｇｅｎｔ）」、「標的化化合物」、及び「標的化リガンド」は本明細書において区別なく使用され得る。本発明の特定の実施形態において、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤は、センス鎖の５’末端にコンジュゲートされた標的化化合物を含む。本発明の特定の実施形態において、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤は、センス鎖の３’末端にコンジュゲートされた標的化化合物を含む。本発明の一部の実施形態において、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤はＧａｌＮＡｃ含有標的化基を含む。本発明の特定の実施形態において、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤は、センス鎖の３’末端及び５’末端の一方又は両方にコンジュゲートされた標的化化合物を含まない。本発明の特定の実施形態において、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤は、センス鎖の５’末端及び３’末端の一方又は両方にコンジュゲートされたＧａｌＮＡｃ含有標的化化合物を含まない。

【0118】

追加の標的化及び連結作用剤は当技術分野でよく知られており、例えば、本発明の特定の実施形態において有用な標的化及び連結作用剤としては、限定されないが、コレステロール部位などの脂質部位（Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃｉｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９８９，８６：６５５３－６５５６）、コール酸（Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔ．，１９９４，４：１０５３－１０６０）、ベリル（ｂｅｒｙｌ）－Ｓ－トリチルチオールなどのチオエーテル（Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．ＮＹ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，１９９２，６６０：３０６－３０９；Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔ．，１９９３，３：２７６５－２７７０）、チオコレステロール（Ｏｂｅｒｈａｕｓｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９９２，２０：５３３－５３８）、ドデカンジオール又はウンデシル残基などの脂肪族鎖（Ｓａｉｓｏｎ－Ｂｅｈｍｏａｒａｓ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ，１９９１，１０：１１１１－１１１８；Ｋａｂａｎｏｖ ｅｔ ａｌ．，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．，１９９０，２５９：３２７－３３０；Ｓｖｉｎａｒｃｈｕｋ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ，１９９３，７５：４９－５４）、リン脂質、例えば２－ヘキサデシル－ｒａｃ－グリセロール又はトリエチルアンモニウム１，２－ジ－Ｏ－ヘキサデシル－ｒａｃ－グリセロール－３－ホスホネート（Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．，１９９５，３６：３６５１－３６５４；Ｓｈｅａ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９９０，１８：３７７７－３７８３）、ポリアミン又はポリエチレングリコール鎖（Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ ＆ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，１９９５，１４：９６９－９７３）又はアダマンタン酢酸（Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．，１９９５，３６：３６５１－３６５４）、パルミトイル部位（Ｍｉｓｈｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，１９９５，１２６４：２２９－２３７）又はオクタデシルアミン若しくはヘキシルアミノ－カルボニルオキシコレステロール部位（Ｃｒｏｏｋｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．，１９９６，２７７：９２３－９３７）が挙げられる。

【0119】

ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤、ＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド、及び／又はＡＧＴセンスポリヌクレオチを含む組成物の特定の実施形態は、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤の分布、標的化等の特性を変化させるリガンドを含み得る。本発明のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤を含む組成物の一部の実施形態において、例えば、リガンドは、かかるリガンドが存在しない種と比較して、選択された標的（例えば、分子、細胞又は細胞型、コンパートメント、例えば、細胞若しくは臓器コンパートメント、組織、臓器又は身体領域）に対する親和性を増加する。本発明の組成物及び／又は方法において有用なリガンドは、タンパク質（例えば、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）又はグロブリン）、炭水化物（例えば、デキストラン、アミロペクチン、キチン、キトサン、イヌリン、シクロデキストリン又はヒアルロン酸）又は脂質などの天然物質であり得る。リガンドは、組換え又は合成分子、例えば合成ポリアミノ酸又はポリアミンなどの合成ポリマーであってもよい。ポリアミノ酸の例は、ポリリジン（ＰＬＬ）、ポリＬ－アスパラギン酸、ポリＬ－グルタミン酸、スチレン－無水マレイン酸コポリマー、ポリ（Ｌ－ラクチド－ｃｏ－グリコール酸）コポリマー、ジビニルエーテル－無水マレイン酸コポリマー、Ｎ－（２－ヒドロキシプロピル）メタクリルアミドコポリマー（ＨＭＰＡ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリウレタン、ポリ（２－エチルアクリル酸）、Ｎ－イソプロピルアクリルアミドポリマー、又はポリホスファゼンである。ポリアミンの例としては：ポリエチレンイミン、ポリリジン（ＰＬＬ）、スペルミン、スペルミジン、ポリアミン、偽ペプチド－ポリアミン、ペプチドミメティックポリアミン、樹状ポリアミン、アルギニン、アミジン、プロタミン、カチオン性脂質、カチオン性ポルフィリン、ポリアミンの第４級塩、又はαヘリックスペプチドが挙げられる。

【0120】

本発明の組成物及び／又は方法に含まれるリガンドは、標的化基を含み得て、その非制限的な例は、細胞若しくは組織標的化剤、例えば、レクチン、糖タンパク質、脂質又はタンパク質、例えば、腎臓細胞若しくは肝細胞などの特異的な細胞型に結合する抗体である。標的化基は、甲状腺刺激ホルモン、メラノゲン、レクチン、糖タンパク質、界面活性剤タンパク質Ａ、ムチン炭水化物、多価ラクトース、多価ガラクトース、Ｎ－アセチル－ガラクトサミン、Ｎ－アセチル－グルコサミン多価マンノース、多価フコース、グリコシル化ポリアミノ酸、多価ガラクトース、トランスフェリン、ビスホスホネート、ポリグルタミン酸、ポリアスパラギン酸、脂質、コレステロール、ステロイド、胆汁酸、葉酸、ビタミンＢ１２、ビタミンＡ、ビオチン又はＲＧＤペプチド若しくはＲＧＤペプチドミメティックであり得る。

【0121】

リガンドの他の例としては、染料、インターカレーター（例えば、アクリジン）、架橋剤（例えば、ソラレン、マイトマイシンＣ）、ポルフィリン（ＴＰＰＣ４、テキサフィリン、サフィリン（ｓａｐｐｈｙｒｉｎ））、多環式芳香族炭化水素（例えば、フェナジン、ジヒドロフェナジン）、人工エンドヌクレアーゼ（例えば、ＥＤＴＡ）、親油性分子例えば、コレステロール、コール酸、アダマンタン酢酸、１－ピレン酪酸、ジヒドロテストステロン、１，３－ビス－Ｏ（ヘキサデシル）グリセリン、ゲラニルオキシヘキシル、ヘキサデシルグリセロール、ボルネオール、メントール、１，３－プロパンジオール、ヘプタデシル、パルミチン酸、ミリスチン酸、Ｏ３－（オレオイル）リトコール酸、Ｏ３－（オレオイル）コール酸、ジメトキシトリチル又はフェノキサジン及びペプチドコンジュゲート（例えば、アンテナペディアペプチド、Ｔａｔペプチド）、アルキル化剤、リン酸、アミノ、メルカプト、ＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ－４０Ｋ）、ＭＰＥＧ、［ＭＰＥＧ］_２、ポリアミノ、アルキル、置換アルキル、放射性標識マーカー、酵素、ハプテン（例えば、ビオチン）、輸送／吸収エンハンサー（例えば、アスピリン、ビタミンＥ、葉酸）、合成リボヌクレアーゼ（例えば、イミダゾール、ビスイミダゾール、ヒスタミン、イミダゾールクラスター、アクリジン－イミダゾールコンジュゲート、テトラアザ大環状分子のＥｕ^３＋複合体）、ジニトロフェニル、ＨＲＰ又はＡＰが挙げられる。

【0122】

本発明の組成物及び／又は方法に含まれるリガンドは、糖タンパク質又はペプチドなどのタンパク質、例えば共リガンドに対する特異的な親和性を有する分子、又は抗体、例えば癌細胞、内皮細胞、心筋細胞若しくは骨細胞などの特異的な細胞型に結合する抗体であり得る。本発明の組成物及び／又は方法の実施形態において有用なリガンドはホルモン又はホルモン受容体であり得る。本発明の組成物及び／又は方法の実施形態において有用なリガンドは脂質、レクチン、炭水化物、ビタミン、補酵素、多価ラクトース、多価ガラクトース、Ｎ－アセチル－ガラクトサミン、Ｎ－アセチル－グルコサミン多価マンノース又は多価フコースであり得る。本発明の組成物及び／又は方法の実施形態において有用なリガンドは、例えば、細胞の細胞骨格を破壊することによって（例えば、細胞の微小管、ミクロフィラメント、及び／又は中間径フィラメントを破壊することによって）、細胞内へのＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤の取込みを増加する物質であり得る。かかる作用剤の非制限的な例は：タクソン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、サイトカラシン、ノコダゾール、ジャスプラキノリド、ラトランクリンＡ、ファロイジン、スウィンホリドＡ、インダノシン及びミオセルビン（ｍｙｏｓｅｒｖｉｎ）であり得る。

【0123】

一部の実施形態において、本発明のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤に結合されるリガンドは、薬物動態学的（ＰＫ）修飾因子としての役割を果たす。本発明の組成物及び方法において有用なＰＫ修飾因子の例としては、限定されないが、親油性作用剤、胆汁酸、ステロイド、リン脂質類似体、ペプチド、タンパク質バインダー、ＰＥＧ、ビタミン、コレステロール、脂肪酸、コール酸、リトコール酸、ジアルキルグリセリド、ジアシルグリセリド、リン脂質、スフィンゴ脂質、ナプロキセン、イブプロフェン、ビタミンＥ、ビオチン、及び血清タンパク質に結合するアプタマー等が挙げられる。多くのホスホロチオエート結合を含有するオリゴヌクレオチドは、血清タンパク質に結合することも知られており、したがって、主鎖に複数のホスホロチオエート結合を含有する短いオリゴヌクレオチド、例えば約５塩基、１０塩基、１５塩基又は２０塩基のオリゴヌクレオチドもまた、本発明の組成物及び／又は方法においてリガンドとして使用され得る。

【0124】

ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤組成物
本発明の一部の実施形態において、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤は組成物中にある。本発明の組成物は、１種又は複数種のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤、及び任意に１種又は複数種の薬剤として許容される担体、送達剤、標的化剤、検出可能な標識等を含み得る。本発明の方法の一部の実施形態に従って有用であり得る標的化剤の非制限的な例は、本発明のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤を、処理すべき細胞に、且つ／又は処理すべき細胞内に方向付ける作用剤である。標的化剤の選択は、ＡＧＴ関連疾患又は病状の性質、及び標的細胞型に応じて異なる。非制限的な例において、本発明の一部の実施形態では、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤を肝細胞に、且つ／又は肝細胞内に標的化することが望ましい。本発明の一部の実施形態において、治療薬は、追加の連結要素なく、Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）を含む送達剤などの送達剤のみと共にＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤を含むことを理解されたい。例えば、本発明の一部の態様において、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤は、ＧａｌＮＡｃを含む送達化合物に連結することができ、且つ薬剤として許容される担体を含有する組成物中に含ませることができ、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤に連結された検出可能な標識若しくは標的化剤等の非存在下にて、細胞又は対象に投与することができる。

【0125】

本発明のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤は、１種又は複数種の送達剤、標的化剤、標識化剤等と共に投与され、且つ／又は１種又は複数種の送達剤、標的化剤、標識化剤等に連結される場合、当業者は、本発明の方法で使用される適切な作用剤を選択及び使用することができることは理解されよう。標識化剤は、細胞及び組織におけるＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤の位置を決定するために、本発明に特定の方法で使用され得て、且つ本発明の方法で投与されるＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤を含む治療組成物の細胞、組織、又は臓器位置を同定するために使用され得る。酵素標識、色素、放射標識等を取り付け、且つ使用する手段は当技術分野でよく知られている。本発明の組成物及び方法の一部の実施形態において、標識化剤は、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤に含まれるセンス及びアンチセンスポリヌクレオチドの一方又は両方に連結されることを理解されたい。

【0126】

ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤及びＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤の送達
本発明の方法の特定の実施形態は、細胞内へのＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤の送達を含む。本明細書で使用される、「送達」という用語は、細胞内取り込み若しくは吸収を促進すること、又は細胞内取り込み若しくは吸収に影響を及ぼすこと意味する。ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤の吸収又は取り込みは、非依存的な拡散的若しくは能動的な細胞プロセスによって、又は本発明のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤と結合し得る送達剤、標的化剤等の使用によって起こり得る。本発明の方法での使用に適した送達様式としては、限定されないが、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤が組織部位に注入される、又は全身投与される、生体内（ｉｎ ｖｉｖｏ）送達が挙げられる。本発明の一部の実施形態において、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤は送達剤に連結される。

【0127】

細胞、組織、及び／又は対象へのＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤の送達に使用することができる方法の非制限的な例としては：ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ－ＧａｌＮＡｃコンジュゲート、ＳＡＭｉＲＮＡ技術、ＬＮＰベースの送達法、及び裸のＲＮＡ送達が挙げられる。様々な疾患及び病状、限定されないが肝臓疾患、急性間欠性ポルフィリン症（ＡＩＰ）、血友病、肺線維症等の治療においてＲＮＡｉ治療薬を送達するために、これらの及び他の送達法が当技術分野でうまく使用されている。種々の送達法の詳細が、Ｎｉｋａｍ，Ｒ．Ｒ．＆ Ｋ．Ｒ．Ｇｏｒｅ（２０１８）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｔｈｅｒ，２８（４），２０９－２２４ Ａｕｇ ２０１８；Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ａ．Ｄ．＆Ｓ．Ｆ．Ｄｏｗｄｙ（２０１８）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｔｈｅｒ．Ｊｕｎ１；２８（３）：１０９－１１８；Ｌｅｅ，Ｋ．ｅｔ ａｌ．，（２０１８）Ａｒｃｈ Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ，４１（９），８６７－８７４；及びＮａｉｒ，Ｊ．Ｋ．ｅｔ ａｌ．，（２０１４）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１３６：１６９５８－１６９６１などの出版物に記載されており、その内容が参照により本明細書に組み込まれる。

【0128】

本発明の一部の実施形態は、本発明のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤を細胞、組織及び／又は対象に送達するための脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）の使用を含む。ＬＮＰは、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ治療剤などのＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤の生体内送達に通常、使用される。ＬＮＰ又は他の送達剤を使用する１つの利点は、ＬＮＰ又は他の送達剤を使用して対象に送達された場合に、ＡＧＴ ＲＮＡ剤の安定性が高められることである。本発明の一部の実施形態において、ＬＮＰは、本発明の１つ又は複数のＡＧＴ ＲＮＡｉ分子をロードされたカチオン性ＬＮＰを含む。ＡＧＴ ＲＮＡｉ分子を含むＬＮＰは対象に投与され、ＬＮＰ及びその結合されたＡＧＴ ＲＮＡｉ分子は、エンドサイトーシスを経て細胞によって取り込まれ、その存在によって、ＲＮＡｉトリガー分子が放出され、それによってＲＮＡｉが仲介される。

【0129】

本発明のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤を細胞、組織及び／又は対象に送達するために、本発明の実施形態で使用され得る送達剤の別の非制限的な例は、本発明のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤に連結され、且つＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤を細胞、組織、及び／又は対象に送達する、ＧａｌＮＡｃを含む作用剤である。本発明の方法及び組成物の特定の実施形態において使用され得る、特定の他のＧａｌＮＡｃ含有送達剤の例は、ＰＣＴ出願国際公開第２０２０１９１１８３Ａ１号パンフレットに開示されている。ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤を細胞に送達するために本発明の組成物及び方法で使用することができるＧａｌＮＡｃ標的化リガンドの非制限的な例は、標的化リガンドクラスターである。本明細書において提案される標的化リガンドクラスターの例は：リン酸ジエステル結合（ＧＬＯ）を有するＧａｌＮＡｃリガンド及びホスホロチオエート結合（ＧＬＳ）を有するＧａｌＮＡｃリガンドである。「ＧＬＸ－ｎ」という用語は本明細書において、結合されたＧａｌＮＡＣ含有化合物が、化合物ＧＬＳ－１、ＧＬＳ－２、ＧＬＳ－３、ＧＬＳ－４、ＧＬＳ－５、ＧＬＳ－６、ＧＬＳ－７、ＧＬＳ－８、ＧＬＳ－９、ＧＬＳ－１０、ＧＬＳ－１１、ＧＬＳ－１２、ＧＬＳ－１３、ＧＬＳ－１４、ＧＬＳ－１５、ＧＬＳ－１６、ＧＬＯ－１、ＧＬＯ－２、ＧＬＯ－３、ＧＬＯ－４、ＧＬＯ－５、ＧＬＯ－６、ＧＬＯ－７、ＧＬＯ－８、ＧＬＯ－９、ＧＬＯ－１０、ＧＬＯ－１１、ＧＬＯ－１２、ＧＬＯ－１３、ＧＬＯ－１４、ＧＬＯ－１５及びＧＬＯ－１６のうちのいずれか１つであることを意味するために使用され得て、それぞれの構造を以下に示す。以下の図において、本発明のＧａｌＮＡｃ標的化リガンド及びＲＮＡｉ剤の連結位置は、各標的化リガンドの最も右側にある。本発明のいずれかのＲＮＡｉ及びｄｓＲＮＡ分子は、ＧＬＳ－１、ＧＬＳ－２、ＧＬＳ－３、ＧＬＳ－４、ＧＬＳ－５、ＧＬＳ－６、ＧＬＳ－７、ＧＬＳ－８、ＧＬＳ－９、ＧＬＳ－１０、ＧＬＳ－１１、ＧＬＳ－１２、ＧＬＳ－１３、ＧＬＳ－１４、ＧＬＳ－１５、ＧＬＳ－１６、ＧＬＯ－１、ＧＬＯ－２、ＧＬＯ－３、ＧＬＯ－４、ＧＬＯ－５、ＧＬＯ－６、ＧＬＯ－７、ＧＬＯ－８、ＧＬＯ－９、ＧＬＯ－１０、ＧＬＯ－１１、ＧＬＯ－１２、ＧＬＯ－１３、ＧＬＯ－１４、ＧＬＯ－１５及びＧＬＯ－１６に連結することができると理解されたい。ＧＬＯ－１～ＧＬＯ－１６及びＧＬＳ－１～ＧＬＳ－１６の構造を以下に示す。

【化17】

【化18】

【化19】

【化20】

【化21】

【化22】

【化23】

【化24】

【化25】

【化26】

【化27】

【0130】

本発明の一部の実施形態において、生体内送達は、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第５，０３２，４０１号明細書及び米国特許第５，６０７，６７７号明細書、米国特許出願公開第２００５／０２８１７８１号明細書に記載の送達システムなど、β‐グルカン送達システムによる送達でもあり得る。ＡＧＴ ＲＮＡｉ剤は、電気穿孔法及びリポフェクションなどの当技術分野で公知の方法を用いて、生体外で細胞に導入することもできる。本発明の方法の特定の実施形態において、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡは、標的化剤なしで送達される。これらのＲＮＡは、「裸の」ＲＮＡ分子として送達することができる。非制限的な例として、本発明のＡＧＴ ｄｓＲＮＡは、標的化剤（例えば、ＧａｌＮＡｃ標的化化合物）ではなく、ＲＮＡｉ剤を含む医薬組成物中で対象に投与して、高血圧症などの対象におけるＡＧＴ関連疾患又は病状を治療することができる。

【0131】

本明細書に記載の特定の送達様式の他に、他のＲＮＡｉ送達様式が、本明細書に記載のＡＧＴ ＲＮＡｉ剤及び治療方法の実施形態、限定されないが、本明細書に記載のもの、及び当技術分野で使用されるものなどと共に使用され得ることを理解されたい。

【0132】

本発明のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤は、細胞及び／又は対象におけるＡＧＴポリペプチドのレベル及び活性を低減するのに有効な量及び手法で対象に投与することができる。本発明の一部の実施形態において、１種又は複数種のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤が対象に投与されて、ＡＧＴ発現及び活性と関連する疾患又は病状が治療される。一部の実施形態において、本発明の方法は、対象におけるＡＧＴ発現と関連する疾患又は病状を軽減するために、かかる治療を必要とする対象に、１種又は複数種のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤を投与することを含む。本発明のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤を投与して、試験管内、生体外、及び生体内の細胞の１つ又は複数においてＡＧＴ発現及び／又は活性を低減することができる。

【0133】

本発明の一部の実施形態において、細胞におけるＡＧＴポリペプチドのレベル、したがってその活性は、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤を細胞内へ送達（例えば、導入）することによって低減される。標的化剤及び方法を用いて、特異的な細胞型、細胞サブタイプ、臓器、又は対象内の空間領域及び／又は細胞内の細胞下領域へのＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤の送達を促進することができる。ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤は、本発明の特定の方法において、単独で、或いは１つ又は複数の追加のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤と併せて投与される。一部の実施形態において、２、３、４、又はそれ以上の、独立して選択されたＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤が対象に投与される。本発明の特定の実施形態において、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤は、ＡＧＴ関連疾患又は病状の治療のための１つ又は複数の追加の治療法と併せて、ＡＧＴ関連疾患又は病状を治療するために対象に投与される。追加の治療レジメンの非制限的な例は、本発明の１つ又は複数のＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチドの投与、非ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ治療薬の投与、及び行動修飾である。追加の治療レジメンは、以下の時点：本発明のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤の投与前、投与と同時、及び投与後のうちの１つ又は複数の時点で施され得る。本明細書で使用される「同時に」とは、ゼロ時点の５分以内、ゼロ時点の１０分以内、ゼロ時点の３０分以内、ゼロ時点の４５分以内、及びゼロ時点の６０分以内を意味し、「ゼロ時点」は、本発明のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤が対象に投与される時点であると理解れたい。非ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ治療剤の非制限的な例は：利尿剤、アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、アンギオテンシンＩＩ受容体アンタゴニスト、β遮断薬、血管拡張薬、カルシウムチャネルブロッカー、アルドステロンアンタゴニスト、α－２アゴニスト、レニン阻害剤、α遮断薬、末梢作用性アドレナリン作動薬、選択的Ｄ１受容体部分アゴニスト、非選択的α－アドレナリン拮抗薬、合成、ステロイド性抗鉱質コルチコイド、又は上述のいずれかの組合せなどの追加の治療薬、及び製薬的組み合わせへと製剤化される高血圧の治療薬である。行動的修飾の非制限的な例は：投与計画、カウンセリング及び運動療法である。これらの、及び他の治療薬及び行動的修飾は技術分野で公知であり、対象におけるＡＧＴ疾患又は病状を治療するために使用され得て、ＡＧＴ疾患又は病状を治療するために、本発明の１つ又は複数のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤と併せて対象に施され得る。ＡＧＴ関連疾患又は病状を治療するために細胞又は対象に投与される、本発明のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤は、１種又は複数種の他の治療薬又は有効成分と相乗効果的に作用することができ、それによって、１種又は複数種の他の治療薬若しくは有効成分の有効性がブーストされ、且つ／又はＡＧＴ関連疾患若しくは病状の治療におけるＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤の有効性が高められる。

【0134】

本発明の治療方法は、ＡＧＴ関連疾患若しくは病状の発症前、及び／又はＡＧＴ関連疾患若しくは病状が存在する場合に、例えば疾患若しくは病状の初期、中期、末期、及びこれらのステージのいずれか前若しくは後いつでも使用され得る、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤の投与を含む。本発明の方法では、対象のＡＧＴ関連疾患又は病状の治療で不成功であった、最小限の成功であった、且つ／或いはもはや成功しなかった、１種若しくは複数種の他の治療薬及び／又は治療有効成分で、ＡＧＴ関連疾患若しくは病状に対して予め治療されている対象も治療され得る。

【0135】

ベクターコード化ｄｓＲＮＡ
本発明の特定の実施形態において、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤を細胞に送達するために、ベクターを使用することができる。ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤転写単位が、ＤＮＡ又はＲＮＡベクターに含まれ得る。細胞及び／又は対象に配列を送達するための、かかる導入遺伝コード化ベクターの作製及び使用は当技術分野でよく知られている。例えば、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０時間又はそれ以上の時間、又は少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０週又はそれ以上の週の間、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡの一過的発現が起こるベクターを本発明の方法において使用することができる。一過的発現の長さは、限定されないが、選択される特異的なベクター構築物、及び標的細胞及び／又は組織などの因子に基づく従来の方法を用いて決定することができる。かかる導入遺伝子は、組込み又は非組込みベクターであり得る、直鎖状構築物、環状プラスミド又はウイルスベクターとして導入することができる。導入遺伝子は、染色体外プラスミドとして受け継がれるように、導入遺伝子を作成することもできる（Ｇａｓｓｍａｎｎ，ｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９９５）９２：１２９２）。

【0136】

ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤の１つ又は複数の一本鎖は、発現ベクター上でプロモーターから転写され得る。２つの別々の鎖が、例えば、ｄｓＲＮＡを産生するように発現される場合には、２つの別々の発現ベクターが、トランスフェクション又は感染などの手段を用いて細胞に同時導入され得る。特定の実施形態において、本発明のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤の個々の鎖それぞれが、同じ発現ベクター上に含まれるプロモーターから転写され得る。本発明の特定の実施形態において、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤は、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤が幹（ｓｔｅｍ）及びループ構造を有するように、リンカーポリヌクレオチド配列によって連結される逆位反復ポリヌクレオチドとして発現される。

【0137】

ＲＮＡ発現ベクターの非制限的な例は、ＤＮＡプラスミド又はウイルスベクターである。本発明の実施形態において有用な発現ベクターは、真核細胞と適合性であり得る。真核生物の発現ベクターは通常、当技術分野で使用されており、多くの商業上の供給元から入手可能である。ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ発現ベクターの送達は、例えば静脈内又は筋肉内投与による、対象から取り出され、対象に再導入される標的細胞への投与による、或いは目的の標的細胞の導入を可能にするいずれかの手段による、全身的送達であり得る。

【0138】

方法の実施形態に含まれ得るウイルスベクターシステムとしては、限定されないが：（ａ）アデノウイルスベクター；（ｂ）レトロウイルスベクター、限定されないが、レンチウイルスのベクター、モロニーマウス白血病ウイルス等；（ｃ）アデノ随伴ウイルスベクター；（ｄ）単純ヘルペスウイルスベクター；（ｅ）ＳＶ４０ベクター；（ｆ）ポリオーマウイルスベクター；（ｇ）乳頭腫ウイルスベクター；（ｈ）ピコルナウイルスベクター；（ｉ）ポックスウイルスベクター、例えばオルソポックスウイルスベクター、例えば、ワクシニアウイルスベクター又はカナリヤ若しくは家禽ポックスウイルスベクターなどのトリポックスウイルスベクター；（ｊ）ヘルパー依存性若しくはガットレス（ｇｕｔｌｅｓｓ）アデノウイルスベクターが挙げられる。ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤の組換え発現のための構築物は、構成的又は調節／誘導発現を提供するように選択され得る、プロモーター、エンハンサー等の調節因子を含有し得る。ウイルスベクターシステム、並びにプロモーター及びエンハンサー等の使用は、当技術分野では慣例であり、且つ本明細書に記載の方法及び組成物と組み合わせて使用することができる。

【0139】

本発明の特定の実施形態は、細胞にＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤を送達するためのウイルスベクターの使用を含む。多くのアデノウイルスベースの送達システムは、例えば肺、肝臓、中枢神経系、内皮細胞、及び筋肉に送達するために当技術分野で通常、使用されている。本発明の方法で使用され得るウイルスベクターの非制限的な例は：ＡＡＶベクター、ワクシニアウイルスなどのポックスウイルス、修飾ウイルスアンカラ（ＭＶＡ）、ＮＹＶＡＣ、又は家禽若しくはカナリヤポックスウイルスなどのトリポックスウイルスである。

【0140】

本発明の特定の実施形態は、ベクターを用いてＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤を細胞に送達する方法を含み、かかるベクターは、遺伝子送達ベクターが埋め込まれる徐放性マトリックスを含む必要はないが、含み得る、薬剤として許容されるベクターであり得る。一部の実施形態において、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡを送達するためのベクターは、組換え細胞によって産生することができ、本発明の医薬組成物は、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ送達システムを産生する１種又は複数種の細胞を含み得る。

【0141】

ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ又はｓｓＲＮＡ剤を含有する医薬組成物
本発明の特定の実施形態は、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤と、薬剤として許容される担体と、を含有する医薬組成物の使用を含む。ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤を含有する医薬組成物は、細胞におけるＡＧＴ遺伝子発現及びＡＧＴ活性を低減するために本発明の方法において使用することができ、関連疾患又は病状を治療するために使用することができる。かかる医薬組成物は、送達様式に基づいて製剤化され得る。送達様式に対する製剤の非制限的な例は：皮下送達用に製剤化された組成物、非経口的送達による全身投与用に製剤化された組成物、静脈内（ＩＶ）送達用に製剤化された組成物、髄腔内送達用に製剤化された組成物、及び脳内に直接送達するために製剤化された組成物等である。本発明の医薬組成物は、細胞にＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤を送達するために１種又は複数の手段を用いて、例えば：局所（例えば、経皮パッチによる）投与；経肺投与、例えば、ネブライザーを介してなど、粉末若しくはエアロゾルの吸入又は通気による投与；気管内、鼻腔内、表皮及び経皮、経口若しくは非経口投与で投与され得る。非経口投与としては、静脈内、動脈内、皮下、腹腔内若しくは筋肉内注射又は注入；例えば植込みデバイスによる皮下投与；或いは例えば実質内、髄腔内又は脳室内投与による頭蓋内投与；を用いて投与され得る。ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤は、肝臓に直接、腎臓に直接など、標的組織に直接、送達することもできる。細胞に「ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤を送達する」又は「ＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤を送達する」は、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤をそれぞれ送達すること、細胞において直接ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤を発現すること、並びに細胞に送達されたコード化ベクターからＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤を発現すること、或いは細胞にＡＧＴ ｄｓＲＮＡ又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤を存在させる、いずれかの適切な手段を包含すると理解されたい。製剤の調製及び使用、並びに阻害性ＲＮＡを送達する手段は当技術分野でよく知られており、通常使用されている。

【0142】

本明細書で使用される、「医薬組成物」は、本発明の薬理学的有効量のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤と、薬剤として許容される担体と、を含む。「薬剤として許容される担体」という用語は、治療薬を投与するために使用される担体を意味する。かかる担体としては、限定されないが、生理食塩水、緩衝生理食塩水、グルコース、水、グリセロール、エタノール、及びその組み合わせが挙げられる。この用語は具体的には、細胞培養培地を除外する。経口投与される薬物に関して、薬剤として許容される担体としては、限定されないが、薬剤として許容される賦形剤、例えば不活性希釈剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、甘味料、着香剤、着色剤及び保存剤が挙げられる。適切な不活性希釈剤としては、炭酸ナトリウム及び炭酸カルシウム、リン酸ナトリウム及びリン酸カルシウム、及びラクトースが挙げられ、トウモロコシデンプン及びアルギン酸が適切な崩壊剤である。結合剤としては、デンプン及びゼラチンが挙げられ、白色滑沢剤が、存在する場合には、通常、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、又はタルクである。所望の場合には、錠剤は、胃腸管での吸収を遅らせるために、モノステアリン酸グリセリン又はジステアリン酸グリセリルなどの材料で被覆され得る。医薬製剤に含まれる作用剤（ａｇｅｎｔ）は、以下にさらに記述される。本明細書で使用される、「薬理学的有効量」、「治療有効量」、及び「有効量」などの用語は、意図する薬理学的、治療的、又は予防的結果を生み出す、本発明のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤の量を意味する。例えば、それが、疾患又は障害と関連する測定可能なパラメーターを少なくとも１０％低減した場合に、所定の臨床的治療が有効とみなされるとすると、その疾患又は病状を治療するために使用される薬物の治療有効量は、そのパラメーターを少なくとも１０％低減する必要がある量である。例えば、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤の治療有効量は、ＡＧＴポリペプチドレベルを少なくとも１０％低減することができる。医薬組成物は、表１に示すＡＤ０００５１～ＡＤ００１２２－１９－２、ＡＤ００１６３－３、ＡＶ０１２２７～ＡＶＡＶ０１２５７、及びＡＶ０１７１１などの二重鎖を含むｄｓＲＮＡｉ剤を含み得る。一部の実施形態において、好ましいｄｓＲＮＡｉ剤としては、例えば、二重鎖ＡＤ００１５８、ＡＤ００１６３、ＡＤ００１５９、ＡＤ００２９０、ＡＤ００３００、又はＡＤ００１２２が挙げられる。他の実施形態において、好ましいｄｓＲＮＡｉ剤としては、例えば、ＡＤ００１５８－１、ＡＤ００１５８－２、ＡＤ００１６３－１、ＡＤ００１５９－１、又はＡＤ００３００－１が挙げられる。一部の他の実施形態において、かかるｄｓＲＮＡｉ剤としては、二重鎖バリアント、例えば、二重鎖ＡＤ００１５８、ＡＤ００１６３、ＡＤ００１６３－３、ＡＤ００１５９、ＡＤ００２９０、ＡＤ００３００又はＡＤ００１２２のバリアントが挙げられる。

【0143】

有効量
一部の態様において、本発明の方法は、接触細胞におけるＡＧＴ遺伝子発現を低減するために、有効量のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤と細胞を接触させることを含む。本発明の方法の特定の実施形態は、ＡＧＴ遺伝子発現を低減し、且つ対象におけるＡＧＴ関連疾患又は病状を治療するのに有効な量で、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤を対象に投与することを含む。ＡＧＴの発現を低減するための、且つ／又はＡＧＴ関連疾患若しくは病状の治療のための使用の場合、「有効量」は、所望の生物学的効果を認識するのに必要な、又は十分な量である。例えば、ＡＧＴ関連疾患又は病状を治療するための、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤の有効量は、疾患又は病状の進行を遅らせる、或いは停止する；（ｉｉ）疾患又は病状の１つ又は複数の症状を逆戻りさせる、低減する、或いは解消する；のに必要な量であり得る。本発明の一部の態様において、有効量は、ＡＧＴ関連疾患又は病状の治療を必要とする対象に投与した場合に、治療反応をもたらし、疾患又は病状が予防及び／又は治療される、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤の量である。本発明の一部の態様に従って、有効量は、ＡＧＴ関連疾患又は病状の別の治療的処置と組み合わせた、又は同時投与した場合に、治療反応をもたらし、疾患又は病状が予防及び／又は治療される、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤の量である。本発明の一部の実施形態において、本発明のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤で対象を治療する生物学的効果は、ＡＧＴ関連疾患又は病状によって起こる症状の緩和及び／又は完全な解消であり得る。本発明の一部の実施形態において、生物学的効果は、例えば、対象にＡＧＴ関連疾患又は病状がないことを示す診断試験によって実証される、ＡＧＴ関連疾患又は病状の完全な阻止である。検出可能な生理学的症状の非制限的な例としては、本発明の作用剤の投与後の、対象の肝臓における脂質蓄積の低減が挙げられる。ＡＧＴ関連疾患又は病状の状態を評価する、当技術分野で知られる他の手段を使用して、ＡＧＴ関連疾患若しくは病状に対する本発明の作用剤及び／又は方法の効果が決定され得る。

【0144】

ＡＧＴ関連疾患又は病状を治療するレベルに、ＡＧＴポリペプチドの活性を低減するＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤の有効量は臨床試験で通常決定され、対照集団に対する試験集団の盲検試験において有効用量が確立される。一部の実施形態において、有効量は、疾患若しくは病状に罹患している細胞、組織、及び／又は対象におけるＡＧＴ関連疾患若しくは病状の低減など、所望の反応がもたらされる量である。したがって、ＡＧＴポリペプチド活性を低減することによって治療可能なＡＧＴ関連疾患若しくは病状を治療するためのＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤の有効量は、投与した場合に、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤を投与しない細胞、組織及び／又は対象に存在するであろう量を下回る量に、対象におけるＡＧＴポリペプチド活性の量を低減する量であり得る。本発明の特定の態様において、本発明のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤に曝露されていない、又は投与されていない細胞、組織及び／又は対象に存在するＡＧＴポリペプチド活性及び／又はＡＧＴ遺伝子発現のレベルは、「対照」量と呼ばれる。本発明の一部の実施形態において、対象の対照量は、対象の治療前の量であり、言い換えると、ＡＧＴ剤の投与前の対象におけるレベルは対象の対照レベルであり得て、対象へのｓｉＲＮＡの投与後の、対象におけるＡＧＴポリペプチド活性及び／又はＡＧＴ遺伝子発現のレベルとの比較のために使用され得る。ＡＧＴ関連疾患又は病状を治療する場合には、所望の反応とは、細胞、組織、及び／又は対象における疾患又は病状の１つ又は複数の症状が低減されること、或いは解消されることであり得る。低減又は解消は一時的又は永続的であり得る。ＡＧＴポリペプチド活性、ＡＧＴ遺伝子発現、症状の評価、臨床試験等を決定する方法を用いて、ＡＧＴ関連疾患又は病状の状態をモニターすることができることを理解されたい。本発明の一部の態様において、ＡＧＴ関連疾患又は病状の治療に対する所望の反応は、症状又は病状の発症を遅らせる、又はさらには予防する。

【0145】

ＡＧＴポリペプチドの活性を低減する化合物の有効量は、投与後のＡＧＴ関連疾患又は病状の低減など、細胞又は対象に対するＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤の投与の生理学的効果を評価することによっても決定することができる。対象におけるアッセイ及び／又は症状のモニタリングを用いて、本発明のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤（本発明の医薬化合物中で投与することができる）の有効性を決定することができ、且つ治療に対する反応があるかどうかを決定することができる。非制限的な例は、当技術分野で公知の１つ又は複数の血圧試験である。別の非制限的な例は、本発明のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤で対象を治療する前及び後に、対象のＡＧＴ関連障害の状態を決定するための、当技術分野で公知の１つ又は複数の血圧試験である。別の非制限的な例において、血圧レベルを下げる、当技術分野で公知の１つ又は複数の試験を用いて、対象におけるＡＧＴ関連疾患の状態が決定される。この例において、疾患は、高血圧症を含み、その試験を用いて、本発明のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤で治療する前及び後の対象における血圧レベルの低下が決定される。

【0146】

本発明の一部の実施形態は、対象におけるＡＧＴ関連疾患又は病状の１つ又は複数の「生理学的特徴」を評価及び／又はモニタリングすることによって、ＡＧＴ関連疾患又は病状を治療するために対象に投与された、本発明のｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤の有効性を決定する方法を含む。ＡＧＴ関連疾患又は病状の生理学的特徴の非制限的な例は、対象における血清ＡＧＴレベル、平均血圧、及び弛緩期血圧である。かかる生理学的特徴を決定するための標準法は当技術分野で公知であり、限定されないが、血液検査、画像化研究、身体的検査等が挙げられる。

【0147】

対象に投与されるＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤の量は、対象によって決定される疾患のかかる決定要因及び／又は病状の状態及び／又は生理学的特徴に少なくとも一部基づいて修飾され得ることを理解されたい。ＡＧＴ－ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤の量を増加又は低減するために、例えば、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤がその中で投与される組成を変えることによって、投与経路を変えることによって、投与のタイミングを変えることによって、治療量を変更することができる。ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤の有効量は、治療される具体的な病状、治療される対象の年齢及び病状、状態の重症度、治療期間、同時治療の性質（もしあれば）、具体的な投与経路、並びに健康な医師の知識及び専門的意見内の他の因子に応じて異なる。例えば、有効量は、ＡＧＴ関連疾患又は病状の治療に有効なＡＧＴポリペプチド活性及び／又はＡＧＴ遺伝子発現の目的のレベルに応じて異なり得る。当業者は経験的に、必要以上に実験を行うことなく、本発明の方法で使用される特定のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤の有効量を決定することができる。本明細書で提供される教示と共に、本発明の種々のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤、及び重視される因子、例えば効力、相対的なバイオアベイラビリティ、患者の体重、有害な副作用の重症度、及び好ましい投与形式の中から選択することによって、具体的な対象を有効に治療するための、有効な予防的又は治療的療法を考案することが可能である。本発明の実施形態において使用される、本発明のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤の有効量は、それと接触した場合に、細胞において所望の生物学的効果がもたらされる量であることができる。

【0148】

ＡＧＴ遺伝子サイレンシングは、構成的に、又はＡＧＴを発現するいずれかの細胞においてゲノムエンジニアリングによって実施することができ、適切なアッセイによって決定することができると認識されよう。本発明の一部の実施形態において、ＡＧＴ遺伝子発現は、本発明のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤を投与することによって、少なくとも５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％低減される。本発明の一部の実施形態において、ＡＧＴ遺伝子発現は、本発明のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤を投与することによって５～１０％、５～２５％、１０～５０％、１０～７５％、２５～７５％、２５～１００％又は５０～１００％低減される。

【0149】

投薬
ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤及びＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤は、ＡＧＴ遺伝子の発現を阻害するのに十分な投薬量で、医薬組成物中で送達される。本発明の特定の実施形態において、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤の用量は、レシピエントの体重１キログラム当たり、１日に０．０１～２００．０ｍｇ、一般に１～５０ｍｇ／ｋｇ体重、５～４０ｍｇ／ｋｇ体重、１０～３０ｍｇ／ｋｇ体重、１～２０ｍｇ／ｋｇ体重、１～１０ｍｇ／ｋｇ体重、又は４～１５ｍｇ／ｋｇ体重／日である。例えば、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤の各単回投与は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１．１ｍｇ／ｋｇ、１．２ｍｇ／ｋｇ、１．３ｍｇ／ｋｇ、１．４ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、１．６ｍｇ／ｋｇ、１．７ｍｇ／ｋｇ、１．８ｍｇ／ｋｇ、１．９ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、２．１ｍｇ／ｋｇ、２．２ｍｇ／ｋｇ、２．３ｍｇ／ｋｇ、２．４ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、２．６ｍｇ／ｋｇ、２．７ｍｇ／ｋｇ、２．８ｍｇ／ｋｇ、２．９ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、３．１ｍｇ／ｋｇ、３．２ｍｇ／ｋｇ、３．３ｍｇ／ｋｇ、３．４ｍｇ／ｋｇ、３．５ｍｇ／ｋｇ、３．６ｍｇ／ｋｇ、３．７ｍｇ／ｋｇ、３．８ｍｇ／ｋｇ、３．９ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、４．１ｍｇ／ｋｇ、４．２ｍｇ／ｋｇ、４．３ｍｇ／ｋｇ、４．４ｍｇ／ｋｇ、４．５ｍｇ／ｋｇ、４．６ｍｇ／ｋｇ、４．７ｍｇ／ｋｇ、４．８ｍｇ／ｋｇ、４．９ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、５．１ｍｇ／ｋｇ、５．２ｍｇ／ｋｇ、５．３ｍｇ／ｋｇ、５．４ｍｇ／ｋｇ、５．５ｍｇ／ｋｇ、５．６ｍｇ／ｋｇ、５．７ｍｇ／ｋｇ、５．８ｍｇ／ｋｇ、５．９ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、６．１ｍｇ／ｋｇ、６．２ｍｇ／ｋｇ、６．３ｍｇ／ｋｇ、６．４ｍｇ／ｋｇ、６．５ｍｇ／ｋｇ、６．６ｍｇ／ｋｇ、６．７ｍｇ／ｋｇ、６．８ｍｇ／ｋｇ、６．９ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、７．１ｍｇ／ｋｇ、７．２ｍｇ／ｋｇ、７．３ｍｇ／ｋｇ、７．４ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ、７．６ｍｇ／ｋｇ、７．７ｍｇ／ｋｇ、７．８ｍｇ／ｋｇ、７．９ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、８．１ｍｇ／ｋｇ、８．２ｍｇ／ｋｇ、８．３ｍｇ／ｋｇ、８．４ｍｇ／ｋｇ、８．５ｍｇ／ｋｇ、８．６ｍｇ／ｋｇ、８．７ｍｇ／ｋｇ、８．８ｍｇ／ｋｇ、８．９ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、９．１ｍｇ／ｋｇ、９．２ｍｇ／ｋｇ、９．３ｍｇ／ｋｇ、９．４ｍｇ／ｋｇ、９．５ｍｇ／ｋｇ、９．６ｍｇ／ｋｇ、９．７ｍｇ／ｋｇ、９．８ｍｇ／ｋｇ、９．９ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１１ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１３ｍｇ／ｋｇ、１４ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、１６ｍｇ／ｋｇ、１７ｍｇ／ｋｇ、１８ｍｇ／ｋｇ、１９ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２１ｍｇ／ｋｇ、２２ｍｇ／ｋｇ、２３ｍｇ／ｋｇ、２４ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、２６ｍｇ／ｋｇ、２７ｍｇ／ｋｇ、２８ｍｇ／ｋｇ、２９ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、３１ｍｇ／ｋｇ、３２ｍｇ／ｋｇ、３３ｍｇ／ｋｇ、３４ｍｇ／ｋｇ、３５ｍｇ／ｋｇ、３６ｍｇ／ｋｇ、３７ｍｇ／ｋｇ、３８ｍｇ／ｋｇ、３９ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、４１ｍｇ／ｋｇ、４２ｍｇ／ｋｇ、４３ｍｇ／ｋｇ、４４ｍｇ／ｋｇ、４５ｍｇ／ｋｇ、４６ｍｇ／ｋｇ、４７ｍｇ／ｋｇ、４８ｍｇ／ｋｇ、４９～５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の用量で投与され得る。

【0150】

本発明のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤の投薬量及び送達のタイミングを決定する場合に、様々な因子が考慮され得る。送達されるＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤の絶対量は、同時処置、投与回数、並びに年齢、体調、サイズ、及び体重などの個々の対象パラメーターなど、様々な因子に応じて異なる。これらの因子は当業者にはよく知られており、慣例的な実験によって取り組むことができる。一部の実施形態において、極量、つまり健全な医学的判断に従った最高安全用量が使用され得る。

【0151】

一部の実施形態において、本発明の方法は、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０回用量又はそれ以上の用量を対象に投与することを含み得る。場合によっては、医薬化合物の用量（例えば、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤を含む、又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤を含む）が、少なくとも毎日、隔日に、毎週、隔週に、毎月等に対象に投与され得る。用量は、１日に１回若しくは複数回、例えば、２４時間の間に、２、３、４、５回若しくはそれ以上の回数で投与され得る。本発明の医薬組成物は、１日１回投与することができ；或いはＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤は、その日全体を通して適切な間隔にて２回、３回若しくはそれ以上の部分用量で、又は持続注入若しくは徐放性製剤による送達を用いて、投与することができる。本発明の一部の実施形態において、本発明の医薬組成物は、１日１回又は複数回、毎週１回又は複数回、毎月１回又は複数回、或いは毎年１回又は複数回、対象に投与される。

【0152】

特定の態様において、本発明の方法は、医薬化合物を単独で、１種又は複数種の他のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤と組み合わせて、且つ／或いはＡＧＴ関連疾患若しくは病状に罹患している対象に施される他の薬物療法又は治療活動又は投与計画と組み合わせて、投与することを含む。医薬化合物は、医薬組成物の形態で投与され得る。本発明の方法で使用される医薬組成物は無菌であり、且つ対象に投与するのに適した重量又は体積の単位で所望の反応をもたらすのに十分なレベルにＡＧＴポリペプチドの活性を低減する、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤の量を含有し得る。ＡＧＴタンパク質活性を低減するために、対象に投与されるＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤を含む医薬組成物の投薬量は、様々なパラメーター、特に用いられる投与形式及び対象の状態に応じて選択され得る。他の因子としては、必要とされる治療の期間が挙げられる。初回用量での対象の反応が不十分である場合には、患者によって耐えられる限り、それより高い用量が投与され得る（又は異なる、より局所的な送達経路を介して、有効に用量が増加され得る）。

【0153】

治療
本明細書で使用される、ＡＧＴ遺伝子発現の低減から利益を得るであろう、疾患、障害、又は病状を意味するために使用される場合、「予防」又は「予防する」という用語は、対象が、例えば、高血圧などのレニン－アンギオテンシン－アルドステロン系（ＲＡＡＳ）の活性化によって起こる、或いはそれと関連する症状である、疾患、障害、又は病状と関連する症状を発症する可能性が低いことを意味する。かかる状況において、高血圧症を発症する可能性が低下し；例えば、個体が高血圧症の１つ又は複数の危険因子を有するが、高血圧症を発症しない、又は重症度の低い高血圧症を発症するのみであるか、又は疾患、障害、若しくは病状を発症しない、又はかかる疾患、障害、若しくは病状と関連する症状の発症が、本明細書に記載の治療を受けていない同じ危険因子を有する母集団と比べて低減される（例えば、臨床上のセッティングにける疾患又は病状のスケールの少なくとも１０％の低減）、又は症状の発現が遅れる（例えば、日数、週数、月数、又は年数単位で）場合に、予防は有効であるとみなされる。

【0154】

２回以上の来院中に正確に測定された端座位血圧読み取り値の平均に基づいて、正常血圧対象は、収縮期血圧約９０～１１９ｍｍＨｇ（約１２～１５．９ｋＰａ（ｋＮ／ｍ^２））及び弛緩期血圧約６０～７９ｍｍＨｇ（約８．０～１０．５ｋＰａ（ｋＮ／ｍ^２））を有する。高血圧前症の対象は、収縮期血圧約１２０～１３９ｍｍＨｇ（約１６．１～１８．５ｋＰａ（ｋＮ／ｍ^２））及び弛緩期血圧約６０～７９ｍｍＨｇ（約８．０～１０．５ｋＰａ（ｋＮ／ｍ^２））を有し；高血圧症の対象（例えば、ステージＩ高血圧症）は、収縮期血圧約１４０～１５９ｍｍＨｇ（約１８．７～２１．２ｋＰａ（ｋＮ／ｍ^２））及び弛緩期血圧約９０～９９ｍｍＨｇ（約１２．０～１３．２ｋＰａ（ｋＮ／ｍ^２））を有し；高血圧症の対象（例えば、ステージＩＩ高血圧症）は、収縮期血圧約≧１６０ｍｍＨｇ（約≧２１．３ｋＰａ（ｋＮ／ｍ≧））及び弛緩期血圧約≧１００ｍｍＨｇ（約≧１３．３ｋＰａ（ｋＮ／ｍ^２））を有する。

【0155】

特定の実施形態において、アンギオテンシノゲン関連疾患は本態性高血圧である。「本態性高血圧」は環境又は遺伝因子の結果（例えば、明確な、根底にある医学的原因のない結果）である。

【0156】

特定の実施形態において、アンギオテンシノゲン関連疾患は二次性高血圧である。「二次性高血圧」は、同定可能な根底にある条件を有し、且つ腎臓、血管、及び内分泌の原因、例えば腎実質性疾患（例えば、多発性嚢胞腎、糸球体又は間質性疾患）、腎血管疾患（例えば、腎動脈狭窄、線維筋性形成異常）、内分泌障害（例えば、副腎皮質ステロイド又は鉱質コルチコイド過剰症、褐色細胞腫、甲状腺機能亢進症又は甲状腺機能低下症、成長ホルモン過剰症、副甲状腺機能亢進症）、大動脈の縮窄、又は経口避妊薬の使用などの、複数の病因を有し得る。

【0157】

特定の実施形態において、アンギオテンシノゲン関連疾患は、悪性高血圧及び加速型高血圧などの高血圧性緊急症である。「加速型高血圧」とは、１つ又は複数の終末器官への直接的なダメージを伴う血圧の重篤な上昇（つまり、収縮期血圧１８０ｍｍＨｇ以上又は弛緩期血圧１１０ｍｍＨｇ）を意味する。血圧は、更なる臓器の損傷を防ぐために、即座に下げなければならない。「悪性高血圧症」とは、１つ又は複数の終末器官への直接的なダメージ及び乳頭浮腫を伴う、重度の高血圧（つまり、収縮期血圧１８０ｍｍＨｇ以上又は弛緩期血圧１１０ｍｍＨｇ）を意味する。血圧は、更なる臓器の損傷を防ぐために、即座に下げなければならない。血圧がコントロールされていないことが原因の神経終末器官の損傷としては、高血圧性脳障害、脳血管障害／脳梗塞、くも膜下出血及び／又は頭蓋内出血が挙げられ得る。心血管終末器官の損傷としては、心筋虚血／梗塞、急性左心室機能不全、急性肺浮腫、及び／又は動脈解離が挙げられる。他の器官系もまた、急性腎不全／機能不全、網膜症、子癇、又は細血管障害性溶血性貧血を引き起こし得る、未コントロールの高血圧によって影響を受け得る。

【0158】

特定の実施形態において、アンギオテンシノゲン関連疾患は急性高血圧症である。「急性高血圧症」とは、１つ又は複数の器官に直接的なダメージを及ぼさない、血圧の重篤な上昇（つまり、収縮期血圧１８０ｍｍＨｇ以上又は弛緩期血圧１１０ｍｍＨｇ）を意味する。血圧は、数時間以内に安全に下げることができる。

【0159】

特定の実施形態において、アンギオテンシノゲン関連疾患は妊娠関連性高血圧症、例えば妊娠の慢性高血圧症、妊娠高血圧症、子癇前症、子癇、慢性高血圧症に加重される子癇前症、ＨＥＬＬＰ症候群、及び妊娠誘発高血圧症（一過性妊娠高血圧症、妊娠後期に見られる慢性高血圧症、及び妊娠高血圧（ＰＩＨ）とも呼ばれる）である。「慢性妊娠高血圧症」の対象は、妊娠前又は妊娠２０週前に、その血圧が１４０／９０ｍｍＨｇを超える対象である。「妊娠高血圧症」又は「妊娠誘発高血圧症」とは、子癇前症の他の特徴なく、妊娠後期（妊娠２０週を超える）に発症し、且つ分娩後に正常に戻る高血圧症を意味する。「軽度子癇前症」は、妊娠２０週前に正常血圧の女性に少なくとも６時間おいて起こるが、終末器官損傷の証拠がない、高血圧症（血圧≧１４０／９０ｍｍＨｇ）の２つのエピソードとして定義される。既存の本態性高血圧を有する対象において、子癇前症は、収縮期血圧が３０ｍｍＨｇ上昇するか、又は弛緩期血圧が１５ｍｍＨｇ上昇した場合に診断される。「重症子癇前症」は、子癇前症の以下の徴候又は症状：少なくとも６時間おいて収縮期血圧１６０ｍｍＨｇ以上、又は弛緩期血圧１１０ｍｍＨｇ以上の２つのエピソード；２４時間にわたって採取された５ｇを超えるタンパク尿、又は少なくとも４時間おいて採取される２つのランダムな尿試料において３＋を超える；肺浮腫又はチアノーゼ；尿量過少（２４時間で４００ｍＬ未満）；持続性の頭痛、心窩部痛、及び／又は肝機能障害；血小板減少、羊水過少、胎児発育遅延、又は胎盤剥離；のうちの１つの存在として定義される。「子癇」は、子癇前症を有する女性における他の原因に起因し得ない発作として定義される。「ＨＥＬＬＰ症候群」（浮腫－タンパク尿－高血圧妊娠中毒症Ｂ型としても知られる）とは、妊娠中の対象における溶血、肝臓酵素レベルの上昇、及び血小板レベルの減少を意味する。

【0160】

特定の実施形態において、アンギオテンシノゲン関連疾患は治療抵抗性高血圧である。「治療抵抗性高血圧症」とは、そのうちの１つがチアジド系利尿薬である、抗高血圧薬の３つの異なるクラスの同時使用にも関わらず、上記の目標値を超えた値（例えば、１４０／９０ｍｍＨｇ）のままである血圧を意味する。４種類以上の薬物で血圧をコントロールした対象も、治療抵抗性高血圧を有するとみなされる。

【0161】

ＡＧＴポリペプチドのレベル及び／又は活性の減少が、疾患又は病状の治療において有効である、ＡＧＴ関連疾患及び病状を、本発明の方法及びＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤を使用して治療し、ＡＧＴ発現を阻害することができる。本発明のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤及び本発明の方法で治療することができる疾患及び病状の例としては、限定されないが、高血圧性疾患、高血圧症、境界型高血圧、本態性高血圧、二次性高血圧、孤立性収縮期若しくは拡張期高血圧、妊娠関連性高血圧、糖尿病性高血圧、治療抵抗性高血圧、難治性高血圧、発作性高血圧、腎血管性高血圧症、ゴールドブラット高血圧、高眼圧、緑内障、肺高血圧症、門脈圧亢進、全身性静脈性高血圧、収縮期高血圧、不安定性高血圧；高血圧性心疾患、高血圧性腎症、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、血管疾患、糖尿病性腎症、糖尿病性網膜症、慢性心不全、心筋症、糖尿病性心筋症、糸球体硬化症、大動脈狭窄、大動脈瘤、心室繊維化、心不全、心筋梗塞、アンギナ、脳卒中、腎疾患、腎不全、全身性硬化症、子宮内発育遅延（ＩＵＧＲ）、及び胎児発育遅延が挙げられる。かかる疾患及び病状は、本明細書において「ＡＧＴ関連疾患及び病状」及び「ＡＧＴによって起こり、且つ／又は調節される疾患及び病状」と呼ばれ得る。

【0162】

本発明の特定の態様において、本発明のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤は、ＡＧＴ関連疾患又は病状の診断前又は後に１回又は複数回、対象に投与することができる。本発明の一部の態様において、対象は、ＡＧＴ関連疾患又は病状に罹患する、或いは発症するリスクがある。ＡＧＴ関連疾患又は病状を発症するリスクのある対象は、ＡＧＴ関連疾患又は病状を発症する対照リスクと比較して、ＡＧＴ関連疾患又は病状を発症する可能性が高くなる対象である。本発明の一部の実施形態において、リスクのレベルは、リスクの対照レベルと比較して統計学的に有意である。リスクのある対象としては、例えば：既存の疾患若しくは遺伝的異常のない対照対象よりも、ＡＧＴ関連疾患又は病状をその対象が発症しやすくなる、既存の疾患及び／又は遺伝的異常を有する対象である、又は対象となるだろう対象；ＡＧＴ関連疾患又は病状の家族歴及び／又は個人歴を有する対象；並びにＡＧＴ関連疾患又は病状の治療を以前に受けている対象；が挙げられる。ＡＧＴ関連疾患又は病状に対象が罹りやすくなる、既存の疾患及び／又は遺伝的異常は、存在する場合、ＡＧＴ関連疾患又は病状を発症する可能性が高くなることと関連することが以前に決定されている疾患又は遺伝的異常であり得ることは理解されたい。

【0163】

ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤は、個々の対象の病状に基づいて対象に投与され得ることを理解されたい。例えば、対象に提供される健康管理によって、対象から採取した試料中で測定されるＡＧＴレベルが評価され得て、且つ本発明のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤を投与することによって、対象のＡＧＴレベルを低減することが望ましいかどうかが決定され得る。非制限的な例において、血液又は血清試料などの生体試料は、対象から採取され、対象のＡＧＴレベルが試料において決定され得る。ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤を対象に投与し、投与後に対象から血液又は血清試料を採取し、試料を使用してＡＧＴレベルを決定し、対象の投与前（以前の）試料と、その結果を比較する。投与前レベルと比較される、その後の試料中の対象のＡＧＴレベルの減少は、対象のＡＧＴレベルの低減における、投与されたＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤の有効性を示す。非制限的な一例において、たとえ対象が、本明細書に開示の障害などＡＧＴ関連障害と診断されていないとしても、血圧は関連障害の生理学的特徴とみなされ得る。健康管理の提供者は、本発明の投与されたＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤の有効性の尺度として、対象の血圧の変化をモニターすることができる。

【0164】

本発明の方法の特定の実施形態は、対象におけるＡＧＴ関連疾患又は病状の１つ又は複数の生理学的特徴の変化の評価に少なくとも一部基づいて、本発明のｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤を対象に投与することを含む。例えば、本発明の一部の実施形態において、対象に投与される、本発明のｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤の作用を決定し、用いて、対象に続いて投与される本発明のｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤の量を調節するのを助けることができる。非制限的な一例において、本発明のｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤は対象に投与され、対象の血圧が投与後に決定され、且つその決定されたレベルに少なくとも一部基づいて、対象の血圧を下げる、又はさらに下げるなど、投与剤の生理学的作用を高めるために、より多くの量のｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤が必要か否かが決定される。別の非制限的な例において、本発明のｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤が対象に投与され、対象の血圧が投与後に決定され、且つその決定されたレベルに少なくとも一部基づいて、より少ない量のｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤を投与することが予想される。

【0165】

したがって、本発明の一部の実施形態は、対象に続いて投与される本発明のｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤の量を調節するために、対象の治療前からの１つ又は複数の生理学的特徴の変化を評価することを含む。本発明の方法の一部の実施形態は、ＡＧＴ関連疾患又は病状の生理学的特徴の１、２、３、４、５、６つ又はそれ以上の決定；本発明の投与されたＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤の有効性の評価及び／又はモニタリング；並びに任意に、対象におけるＡＧＴ関連疾患又は病状を治療するための本発明のｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤の投薬量、投与計画、及び／又は投与頻度のうちの１つ又は複数を調節するための、決定された結果の使用；を含む。本発明の一部の実施形態において、対象に本発明のｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤を有効量で投与することで望まれる結果は、対象に対して決定された以前の血圧と比較して、対象の血圧が低下すること、又は正常血圧範囲内の血圧となることである。

【0166】

本明細書で使用される、ＡＧＴ関連疾患又は病状に関して使用される場合に、「治療」、「治療的」又は「治療された」という用語は、ＡＧＴ関連疾患又は病状を発症する対象の可能性を下げる予防的治療を意味し得て、且つＡＧＴ関連疾患若しくは病状を解消するため、又はＡＧＴ関連疾患若しくは病状のレベルを下げるため、ＡＧＴ関連疾患若しくは病状がより重症となることを防ぐため、且つ／又は対象においてＡＧＴポリペプチド活性を低減する治療を受けていない対象と比較して、対象におけるＡＧＴ関連疾患若しくは病状の進行を遅くするために、対象がＡＧＴ関連疾患若しくは病状を発症した後の治療も意味し得る。

【0167】

本発明の作用剤、組成物、及び方法の特定の実施形態を、ＡＧＴ遺伝子発現を阻害するために用いることができる。ＡＧＴ遺伝子の発現に関して、本明細書で使用される、「阻害する」、「サイレンス（ｓｉｌｅｎｃｅ）」、「低減」、「ダウンレギュレート」及び「ノックダウン」という用語は、ＡＧＴ遺伝子から転写されたＲＮＡの対照レベル、発現されたＡＧＴの活性の対照レベル、又はｍＲＮＡから翻訳されたＡＧＴの対照レベルそれぞれと比較して、本発明のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤に細胞、細胞のグループ、組織、器官、又は対象を曝露した（例えばそれで処理した）場合に、例えば以下の：ＡＧＴ遺伝子が転写される細胞、細胞のグループ、組織、器官、又は対象において、遺伝子から転写されるＲＮＡのレベル、発現されたＡＧＴの活性のレベル、及びｍＲＮＡから翻訳されたＡＧＴポリペプチド、タンパク質又はタンパク質サブユニットのレベルが低減されること；のうちの１つ又は複数によってＡＧＴ遺伝子の発現を改変することを意味する。一部の実施形態において、その対照レベルは、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤に曝露されていない（例えば、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤で処置されていない）細胞、組織、器官又は対象におけるレベルである。

【0168】

投与方法
ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤の様々な投与経路が本発明の方法で使用され得る。特定の送達様式の選択は、治療される具体的な状態及び治療有効性に必要な投薬量に少なくとも一部依存する。一般に、本発明の方法は、医学的に許容可能ないずれかの投与形式を用いて実施され得て、臨床的に容認できない副作用を生じることなく、ＡＧＴ関連疾患又は病状に対して有効な治療レベルをもたらす、いずれかの様式を意味する。本発明の一部の実施形態において、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤は、経口、経腸的、経粘膜、皮下、及び／又は非経口経路によって投与され得る。「非経口」という用語は、皮下、静脈内、髄腔内、筋肉内、腹腔内及び胸骨内注射又は注入技術を含む。他の経路としては、限定されないが、経鼻（例えば、経鼻胃管による）、経皮、経腟、経直腸、舌下、及び吸入が挙げられる。本発明の送達経路としては、髄腔内、脳室内、又は頭蓋内送達が挙げられる。本発明の一部の実施形態において、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤は、緩効性マトリックス中に置かれ、対象にマトリックスを配置することによって投与することができる。本発明の一部の態様において、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤は、特異的な細胞又は細胞器官を標的化する送達剤で被覆されたナノ粒子を用いて、対象の細胞に送達され得る。様々な送達様式、方法、及び試薬が当技術分野で公知である。送達方法及び送達剤の非制限的な例が本明細書における他の箇所に提供される。本発明の一部の態様において、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤に関して「送達」という用語は、１つ又は複数の「裸の」ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤の配列を細胞又は対象に投与することを意味し得る。本発明の特定の態様において、「送達」とは、トランスフェクションによって細胞又は対象に投与すること、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤若しくはＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤を含む細胞を送達すること、或いは細胞及び／又は対象に、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤若しくはＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤をコードするベクターを送達することを意味する。トランスフェクションを用いたＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤の送達は、細胞及び／又は対象へのベクターの投与を含み得る。

【0169】

本発明の一部の方法において、１種又は複数種のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤は、薬剤として許容される濃度で塩、緩衝剤、保存剤、適合性の担体、アジュバント、及び任意に治療成分を一般に含有し得る、製剤（ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ）の形で、或いは薬剤として許容される溶液で投与され得る。本発明の一部の実施形態において、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤は、同時投与用の別の治療薬と共に製剤化することができる。本発明の方法に従って、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤は医薬組成物の形態で投与することができる。通常、医薬組成物は、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤と、任意に薬剤として許容される担体とを含む。薬剤として許容される担体は当業者によく知られている。本明細書で使用される、薬剤として許容される担体とは、有効成分の生物活性の有効性（例えば、細胞又は対象においてＡＧＴ遺伝子発現を阻害する、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤の能力）を妨げない非毒性物質を意味する。治療的用途のためのｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤を投与及び送達する種々の方法が当技術分野で公知であり、本発明の方法において使用することができる。

【0170】

薬剤として許容される担体としては、希釈剤、充填剤、塩、緩衝剤、安定剤、可溶化剤及び当技術分野で公知の他の物質が挙げられる。例示的な薬剤として許容される担体は、米国特許第５，２１１，６５７号明細書に記述されており、他の担体は当業者には公知である。かかる製剤は一般に、塩、緩衝剤、保存剤、適合性の担体、及び任意に他の治療薬を含有し得る。医薬品において使用される場合、塩は、薬剤として許容されるべきであるが、薬剤として許容されない塩は、その薬剤として許容される塩の調製のために便利に使用することができ、本発明の範囲から除外されない。かかる薬理学的な、及び薬剤として許容される塩としては、限定されないが、以下の酸：塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、マレイン酸、酢酸、サリチル酸、クエン酸、ギ酸、マロン酸、コハク酸等から調製される塩が挙げられる。さらに、薬剤として許容される塩は、ナトリウム、カリウム若しくはカルシウム塩などのアルカリ金属塩又はアルカリ土類金属塩として調製され得る。

【0171】

本発明の方法の一部の実施形態は、１種又は複数種のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤を組織に直接、投与することを含む。一部の実施形態において、化合物が投与される組織は、ＡＧＴ関連疾患若しくは病状が存在するか、又は起こる可能性がある組織であり、その非制限的な例は肝臓又は腎臓である。直接的な組織薬物送達は、直接的な注射又は他の手段によって達成することができる。経口的に送達される多くの化合物は肝臓及び腎臓に自然に入り、通過し、本発明の治療方法の一部の実施形態は、１種又は複数種のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤を対象に経口投与することを含む。単独で、又は他の治療薬と組み合わせて、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤を１回投与することができ、或いは複数回投与することができる。複数回投与する場合、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤は、異なる経路によって投与してもよい。例えば、制限することを意図しないが、最初の（又は最初数回の）投与は皮下投与され得て、１回又は複数回の追加の投与は経口及び／又は全身投与であり得る。

【0172】

ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤を全身投与することが望まれる本発明の実施形態に関して、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤は、注射による、例えば、ボーラス注入又は持続注入による非経口投与用に製剤化され得る。注射可能な製剤は、保存剤が添加された、又は添加されていない、アンプル又は複数回量容器などの単位剤形で存在し得る。ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤製剤（医薬組成物としても知られる）は、オイル若しくは水性担体中の懸濁液、溶液又はエマルジョンの形態をとり得て、懸濁剤、安定化剤及び／又は分散剤などの製剤化剤（ｆｏｒｍｕｌａｔｏｒｙ ａｇｅｎｔ）を含有し得る。
非経口投与用の剤形としては、滅菌水溶液又は非水溶液、懸濁液及びエマルジョンが挙げられる。非水溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油などの植物油、及びオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステルが挙げられる。水性担体としては、水、アルコール／水溶液、エマルジョン又は懸濁液、例えば生理食塩水及び緩衝培地が挙げられる。非経口的担体としては、塩化ナトリウム溶液、リンガーブドウ糖溶液、ブドウ糖及び塩化ナトリウム溶液、乳酸加リンガー溶液、又は固定油が挙げられる。静脈内賦形剤としては、液体及び栄養サプリメント、電解質サプリメント（リンガーブドウ糖溶液をベースとする溶液など）が挙げられる。保存剤及び抗菌剤、酸化防止剤、キレート剤、不活性ガス等の他の添加剤も存在し得る。静脈内投与などの投与の他の形態によって、用量が少なくなる。初回用量での対象の反応が不適切である場合、患者の耐性によって許容される程度に、より多い用量が投与され得る（又は異なり、より局所的な送達経路によって有効に用量が増加され得る）。１種又は複数種のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤の適切な全身若しくは局所的レベルを達成するために、且つＡＧＴタンパク質活性の適切な低減を達成するために、１日に複数回の投与を必要に応じて用いることができる。

【0173】

他の実施形態において、本発明の方法は、生体適合性微粒子、ナノ粒子、又は対象などのレシピエントにおける埋め込みに適したインプラントなど、送達担体の使用を含む。この方法に従って使用され得る例示的な生分解性植込錠は、国際公開第９５／２４９２９号パンフレット（参照により本明細書に組み込まれる）に記述されており、生体高分子を含ませるための生体適合性、生分解性マトリックスが説明される。

【0174】

対象に１種又は複数種のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤を送達するために、非生分解性及び生分解性ポリマーマトリックスの両方を本発明の方法において使用することができる。一部の実施形態において、マトリックスは生分解性であることができる。マトリックスポリマーは天然又は合成ポリマーであることができる。ポリマーは、放出が望まれる期間、通常、およそ数時間から１年又はそれ以上の期間に基づいて選択され得る。通常、数時間から３か月ないし１２か月の範囲の期間にわたる放出が利用可能である。ポリマーは任意に、ヒドロゲルの形態をとり、水中でその重量の約９０％までを吸収することができ、任意に多価イオン又は他のポリマーでさらに架橋される。

【0175】

通常、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤は、本発明の一部の実施形態において、生分解性植込錠を使用して、ポリマーマトリックスの拡散又は分解によって送達され得る。この目的のための例示的な合成ポリマーは当技術分野でよく知られている。生分解性ポリマー及び非生分解性ポリマーを使用して、当技術分野で公知の方法を用いてＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤を送達することができる。ＡＧＴ関連疾患又は病状の治療のため、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤を送達するために、生体崩壊性（ｂｉｏｅｒｏｄｉｂｌｅ）ヒドロゲルなどの生体接着剤ポリマー（Ｈ．Ｓ．Ｓａｗｈｎｅｙ，Ｃ．Ｐ．Ｐａｔｈａｋ ａｎｄ Ｊ．Ａ．Ｈｕｂｅｌｌｉｎ Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，１９９３，２６，５８１－５８７）も使用することができる。他の適切な送達システムとしては、持効性、遅延放出、又は徐放性送達システムが挙げられる。かかるシステムは、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤の反復投与を避け、それによって対象及び健康管理専門家に対する利便性が改善され得る。放出送達システムの多くの種類が利用可能であり、且つ当業者には知られている（例えば、米国特許第５，０７５，１０９号明細書、米国特許第４，４５２，７７５号明細書、米国特許第４，６７５，１８９号明細書、米国特許第５，７３６，１５２号明細書、米国特許第３，８５４，４８０号明細書、米国特許第５，１３３，９７４号明細書、及び米国特許第５，４０７，６８６号明細書参照）。さらに、ポンプ式ハードウェア送達システムが利用可能であり、その一部が植込みにも適している。

【0176】

長期徐放性植込錠の使用は、再発性のＡＧＴ関連疾患又は病状を発症している対象及びリスクのある対象の予防的治療に適している。本明細書で使用される、長期間放出とは、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤の治療的レベルを、少なくとも１０日間まで、２０日間、３０日間、６０日間、９０日間、６か月間、１年間、又はそれ以上の間、送達するように構成及び配置された植込錠を意味する。長期徐放性植込錠は当業者にはよく知られており、上述の放出システムの一部を含む。

【0177】

所望の純度を有する分子又は化合物を任意の薬剤として許容される担体、賦形剤又は安定剤［Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ２１ｓｔ ｅｄｉｔｉｏｎ（２００６）］と混合することによって、ＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤の治療製剤を凍結乾燥調製物又は水溶液の形態で貯蔵用に製造し、使用することができる。許容可能な担体、賦形剤又は安定剤は、用いられる用量及び濃度でレシピエントに対して非毒性であり、且つ：リン酸、クエン酸及び他の有機酸などの緩衝剤；アスコルビン酸及びメチオニンなどの酸化防止剤；保存剤（例えば、塩化ステアリルジメチルベンジルアンモニウム、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、ブタノール及びベンジルアルコール、又はメチル若しくはプロピルパラベンなどのパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３－ペンタノール、及びｍ－クレゾール）；低分子量（約１０個未満の残基）ペプチド；血清アルブミン、ゼラチン又は免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン又はリジンなどのアミノ酸；単糖、二糖及びグルコース、マンノース又はデキストリンなどの他の炭水化物、；ＥＤＴＡなどのキレート剤；ショ糖、マンニトール、トレハロース又はソルビトールなどの糖類；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えば、亜鉛－タンパク質複合体）；及び／又はＴＷＥＥＮ（登録商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（登録商標）若しくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤を含む。

【0178】

細胞、対象及び対照
本発明の方法は、細胞、組織、器官及び／又は対象と共に使用することができる。本発明の一部の態様において、対象は、ヒト又は脊椎動物哺乳動物、限定されないが、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ヤギ、マウス、ラット、及びサルなどの霊長類などである。したがって、本発明は、ヒト及び非ヒト対象におけるＡＧＴ関連疾患又は病状を治療するために使用され得る。本発明の一部の態様において、対象は家畜、動物園の動物、家畜化、又は非家畜化動物であり得て、本発明の方法は、獣医学的予防及び治療法において使用され得る。本発明の一部の実施形態において、対象はヒトであり、且つ本発明の方法は、ヒトの予防的療法及び治療法において使用することができる。

【0179】

本発明が適用され得る、対象の非制限的な例は、「高ＡＧＴ発現レベル」とも呼ばれる、望ましいＡＧＴ発現及び／又は活性レベルよりも高いレベルを伴う疾患又は病状と診断された、有する疑いがある、或いは罹患するリスクがある対象である。ＡＧＴ発現及び／又は活性の望ましいレベルよりも高いレベルを伴う疾患及び病状の非制限的な例は、本明細書における他の箇所で記載されている。本発明の方法は、治療の時点で、疾患又は病状に罹患していると診断されている対象、望ましいＡＧＴ発現及び／又は活性より高いレベルを伴う対象、又は望ましいＡＧＴ発現及び／又は活性レベルよりも高いレベルを伴う疾患若しくは病状のリスクがあるとみなされる対象に適用され得る。本発明の一部の態様において、ＡＧＴ発現及び／又は活性の望ましいレベルよりも高いレベルを伴う疾患又は病状は、急性疾患又は病状であり；本発明の特定の態様において、ＡＧＴ発現及び／又は活性の望ましいレベルよりも高いレベルを伴う疾患又は病状は、慢性疾患又は病状である。

【0180】

非制限的な例において、本発明のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤は、高血圧症、例えば本態性高血圧、二次性高血圧、高血圧緊急症（悪性高血圧症及び加速型高血圧症、急性高血圧症、妊娠関連性高血圧症、及び治療抵抗性高血圧など）と診断された患者に投与される。本発明の方法は治療の時点で、疾患若しくは病状を有すると診断されている、又は疾患若しくは病状を発症している、又は発症するリスクがあると見なされる、対象に適用され得る。

【0181】

別の非制限的な例において、レニン－アンギオテンシン－アルドステロン系（ＲＡＡＳ）の活性化によって起こる、若しくはそれと関連する疾患又は障害、或いはＲＡＡＳが不活性化される疾患又は障害に応じてその症状若しくは進行を治療するために、本発明のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤が投与される。「アンギオテンシノゲン関連疾患」という用語は、ＡＧＴの発現の低減から利益を得る、疾患、障害又は病状を含む。かかる疾患は一般に、高血圧を伴う。アンギオテンシノゲン関連疾患の非制限的な例としては、高血圧症、例えば、境界型高血圧（高血圧前症としても知られる）、本態性高血圧（本態性高血圧又は特発性高血圧症としても知られる）、二次性高血圧（非特発性高血圧症とも呼ばれる）、孤立性収縮期又は拡張期高血圧、妊娠関連性高血圧症（ｅｇｏ、子癇前症、子癇、及び分娩後子癇前症）、糖尿病性高血圧症、治療抵抗性高血圧、難治性高血圧、発作性高血圧、腎血管性高血圧症（腎臓高血圧症とも呼ばれる）、ゴールドブラット高血圧症、高眼圧、緑内障、肺高血圧症、門脈圧亢進、全身性静脈性高血圧、収縮期高血圧、不安定性高血圧症、高血圧性心疾患、高血圧性腎症、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、血管疾患（末梢血管疾患など）、糖尿病性腎症、糖尿病性網膜症、慢性心不全、心筋症、糖尿病性心筋症、糸球体硬化症、大動脈縮窄症、大動脈瘤、心室繊維化、睡眠時無呼吸、心不全（例えば、左心室収縮期機能不全）、心筋梗塞、アンギナ、脳卒中、腎疾患（例えば、任意に妊娠のセッティングでの慢性腎疾患又は糖尿病性腎症）、腎不全（例えば、慢性腎不全）、認知障害（例えば、アルツハイマー病）及び全身性硬化症（例えば、強皮症腎）が挙げられる。特定の実施形態において、ＡＧＴ関連障害としては、子宮内発育遅延（ＩＵＧＲ）又は胎児発育遅延が挙げられる。

【0182】

本発明を適用することができる細胞は、試験管内、生体内、及び生体外細胞である細胞を含む。その細胞は、対象中、培養物中及び／又は懸濁液中、或いは他の適切ないずれかの状態又は条件にあり得る。本発明の方法を適用することができる細胞は：肝臓細胞、肝細胞、心臓細胞、膵臓細胞、心血管細胞、腎臓細胞又はヒト及び非ヒト哺乳動物細胞などの他のタイプの脊椎動物細胞であり得る。本発明の特定の態様において、本発明の方法を適用することができる細胞は、患部細胞であることが分かっていない健康な正常細胞である。本発明の特定の実施形態において、本発明の方法及び組成物は、肝臓、肝細胞、心臓細胞、膵臓細胞、心血管細胞、及び／又は腎臓細胞の細胞に適用される。本発明の特定の態様において、対照細胞は正常細胞であるが、疾患又は病状を有する処置細胞の結果を、疾患又は病状を有する未処置細胞と比較した場合など、特定の環境において、疾患又は病状を有する細胞は対照細胞としても使用され得ることは理解されたい。

【0183】

本発明の方法に従って、ＡＧＴポリペプチド活性のレベルを決定し、ＡＧＴポリペプチド活性の対照レベルと比較することができる。対照は、多くの形態を取り得る所定の値であり得る。それは、中央値又は平均値などの単一のカットオフ値であることができる。例えば、ＡＧＴポリペプチド及び／又はＡＧＴポリペプチド活性の正常レベルを有する群において、且つＡＧＴポリペプチド及び／又はＡＧＴポリペプチド活性のレベルの増加を有する群において、群を比較することに基づいて確立され得る。比較群の別の非制限的な例は、疾患若しくは病状の１つ又は複数の症状又は診断のない母集団に対する、ＡＧＴ関連疾患若しくは病状の１つ又は複数の症状又は診断を有する母集団、或いは本発明のｓｉＲＮＡ治療が施されていない対象の群に対する、本発明のｓｉＲＮＡ治療が施された対象の群であり得る。通常、対照は、適切な年齢群における外見上健康な正常な個体又は外見上健康な正常な細胞に基づき得る。所定の値の他に、本発明による対照は、実験材料と並行して試験される材料の試料であり得ることは理解されよう。例としては、実験試料と並行して試験するための製造によって産生された対照集団又は対照試料からの試料が挙げられる。本発明の一部の実施形態において、対照は、本発明のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤に曝露されていない、又は本発明のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤で処置されていない細胞又は対象を含み得て、その場合には、ＡＧＴポリペプチド及び／又はＡＧＴポリペプチド活性の対照レベルは、本発明のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤に曝露された細胞又は対象におけるＡＧＴポリペプチド及び／又はＡＧＴポリペプチド活性のレベルと比較され得る。

【0184】

本発明の一部の実施形態において、対照レベルは、対象について決定されたＡＧＴポリペプチドレベルであり得て、同じ対象について異なる時点で決定されたＡＧＴポリペプチドレベルが比較される。非制限的な一例において、ＡＧＴのレベルは、本発明のＡＧＴ治療を受けていない対象から採取された生体試料おいて決定される。一部の実施形態において、生体試料は血清試料である。対象から採取された試料において決定されるＡＧＴポリペプチドレベルは、対象に対してベースライン又は対照値としての役割を果たし得る。本発明の治療方法においてＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤を１回又は複数回投与した後、１つ又は複数の追加の血清試料が対象から採取され得て、その後の１つ又は複数の試料におけるＡＧＴポリペプチドレベルは、対象の対照／ベースラインレベルと比較され得る。かかる比較を用いて、対象におけるＡＧＴ関連疾患若しくは病状の発症、進行、又は後退を評価することができる。例えば、対象に本発明のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤を投与した後に同じ対象から採取されたレベルよりも高い、対象から採取したベースライン試料におけるＡＧＴポリペプチドのレベルは、ＡＧＴ関連疾患又は病状の後退を表し、ＡＧＴ関連疾患又は病状の治療における、投与された本発明のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤の有効性を示す。

【0185】

本発明の特定の態様において、対象に対して決定されるＡＧＴポリペプチド及び／又はＡＧＴポリペプチド活性レベルのうちの１つ又は複数は、同じ対象におけるＡＧＴポリペプチド及び／又はＡＧＴ活性レベルの後の比較のための対照としての役割を果たし得て、それによって、対象における「ベースライン」ＡＧＴポリペプチド活性からの変化の評価が可能となる。したがって、初期値が対象に対して対照レベルとして使用される場合、初期ＡＧＴポリペプチドレベル及び／又は初期ＡＧＴポリペプチド活性レベルを用いて、その対象におけるＡＧＴポリペプチド及び／又はＡＧＴポリペプチド活性のレベルを低減する、本発明の方法及び化合物の能力が示され、且つ／或いは決定され得る。

【0186】

本発明の方法を用いて、本発明のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤及び／又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤が対象に投与され得る。かかるｄｓＲＮＡｉ剤は、例えば、表１に示す二重鎖ＡＤ０００５１～ＡＤ００１２２－１９－２、ＡＤ００１６３－３、ＡＶ０１２２７～ＡＶＡＶ０１２５７、及びＡＶ０１７１１を含む。一部の実施形態において、好ましいｄｓＲＮＡｉ剤としては、例えば、二重鎖ＡＤ００１５８、ＡＤ００１６３、ＡＤ００１６３－３、ＡＤ００１５９、ＡＤ００２９０、ＡＤ００３００又はＡＤ００１２２が挙げられる。他の実施形態において、好ましいｄｓＲＮＡｉ剤としては、例えば、ＡＤ００１５８－１、ＡＤ００１５８－２、ＡＤ００１６３－１、ＡＤ００１５９－１、又はＡＤ００３００－１が挙げられる。一部の他の実施形態において、かかるｄｓＲＮＡｉ剤としては、二重鎖バリアント、例えば、二重鎖ＡＤ００１５８、ＡＤ００１６３、ＡＤ００１６３－３、ＡＤ００１５９、ＡＤ００２９０、ＡＤ００３００又はＡＤ００１２２のバリアントが挙げられる。本発明の投与及び治療の有効性は、以前の時点で対象から採取された血清試料中のＡＧＴポリペプチドの投与前レベルと、又は非曝露対照レベル（例えば、対照血清試料中のＡＧＴポリペプチドのレベル）と比較して評価され得る。投与及び治療された場合に、対象から採取された血清試料中のＡＧＴポリペプチドのレベルは、少なくとも０．５％、１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％又はそれ以上低減される。ＡＧＴポリペプチドのレベルとＡＧＴポリペプチド活性のレベルの両方がＡＧＴ遺伝子発現のレベルに関連することが理解される。本発明の方法の特定の実施形態は、ＡＧＴ遺伝子発現の阻害に有効な量で本発明のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ及び／又はＡＧＴアンチセンス剤を対象に投与することを含み、それによって対象におけるＡＧＴポリペプチドのレベルが低減され、且つＡＧＴポリペプチド活性のレベルが低減される。

【0187】

本発明の一部の実施形態は、１つ又は複数の対象から採取された１つ又は複数の生体試料中のＡＧＴポリペプチドの有無、及び／又は量（本明細書においてレベルと呼ばれる）を決定することを含む。この決定を用いて、本発明の治療方法の有効性が評価され得る。例えば、本発明の方法及び組成物を用いて、本発明のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤及び／又はＡＧＴアンチセンス剤の投与で予め治療された対象から採取された生体試料中のＡＧＴポリペプチドのレベルが決定され得る。投与及び治療後の血清試料中のＡＧＴポリペプチドレベルの低減は、以前の時点で対象から採取された血清試料中のＡＧＴポリペプチドの予備投与レベルと比較して、又は非曝露対照レベル（例えば、対照血清試料中のＡＧＴポリペプチドレベル）と比較して、少なくとも０．５％、１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％又はそれ以上であり、対象に与えられた治療の有効性のレベルが示される。

【0188】

本発明の一部の実施形態において、対象に対して決定されるＡＧＴ関連疾患又は病状の生理学的特徴が対照結果として使用され得て、異なる時点での同じ対象の生理学的特徴の決定が、対照結果と比較される。非制限的な一例において、血圧（及び／又はＡＧＴ疾患若しくは病状の他の生理学的特徴）は、本発明のＡＧＴ治療が全く施されていない対象から測定され、それをベースライン又は対照値として対象に使用することができる。本発明の治療方法において対象にＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤を１回又は複数回投与した後、血圧が測定され、対象の対照／ベースラインレベルそれぞれと比較される。かかる比較を用いて、対象におけるＡＧＴ関連疾患若しくは病状の発症、進行、又は後退を評価することができる。例えば、対象に本発明のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤を投与した後に同じ対象から測定された血圧よりも高い、対象から得たベースライン血圧は、ＡＧＴ関連疾患又は障害の後退を表し、ＡＧＴ関連疾患又は病状の治療における、本発明のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤を投与する有効性が証明される。

【0189】

本発明の一部の態様において、ＡＧＴ関連疾患又は障害の１つ又は複数の生理学的特徴について対象に対して決定された値は、同じ対象の生理学的特徴の後の比較のための対照値としての役割を果たし得て、対象の「ベースライン」の生理学的特徴の変化を評価することが可能となる。したがって、個体において初期の生理学的プロファイルを得て、その対象の対照として測定される初期の生理学的プロファイルを測定し、且つ本発明の方法及び化合物を使用して、個体におけるＡＧＴポリペプチドのレベル及び／又はＡＧＴポリペプチドの活性を低減する効果を決定することが可能である。本発明の方法を用いて、本発明のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤及び／又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤は、ＡＧＴ疾患又は病状の治療に有効な量で対象に投与することができる。本発明の投与及び治療の有効性は、ＡＧＴ疾患又は病状の１つ又は複数の生理学的特徴の変化を決定することによって評価することができる。非制限的な一例において、対象の血圧は、以前の時点で対象から得た血圧と比較して、又は非曝露対照血圧と比較した場合に、対象の血圧が正常範囲内になるまで、少なくとも０．５ｍｍＨｇ、１ｍｍＨｇ、２ｍｍＨｇ、３ｍｍＨｇ、４ｍｍＨｇ、５ｍｍＨｇ、６ｍｍＨｇ、７ｍｍＨｇ、８ｍｍＨｇ、９ｍｍＨｇ、１０ｍｍＨｇ、１１ｍｍＨｇ、１２ｍｍＨｇ、１３ｍｍＨｇ、１４ｍｍＨｇ、１５ｍｍＨｇ、１６ｍｍＨｇ、１７ｍｍＨｇ、１８ｍｍＨｇ、１９ｍｍＨｇ、２０ｍｍＨｇ又はそれ以上低減される。

【0190】

本発明の一部の実施形態は、限定されないが：（１）対象の血圧を測定すること；（２）１つ又は複数の対象から採取された１つ又は複数の生体試料の生理学的特徴を評価すること；（３）対象の身体的検査；などの方法を用いて、ＡＧＴ関連疾患若しくは病状の生理学的特徴の有無、及び／又は変化を決定することを含む。この決定は、本発明の治療方法の有効性を評価するために使用され得る。

【0191】

キット
１種又は複数種のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤及び／又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤と、本発明の方法でのその使用のための説明書と、を収容するキットもまた本発明の範囲内である。本発明のキットは、ＡＧＴ関連疾患又は病状の治療において有用なＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤、ＡＧＴセンスポリヌクレオチド、及びＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤のうちの１つ又は複数を含み得る。１つ又は複数のＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤、ＡＧＴセンスポリヌクレオチド、及びＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチド剤を収容するキットは、本発明の治療方法において使用するために製造することができる。本発明のキットの成分は、水性媒体で、又は凍結乾燥状態でパッケージされ得る。本発明のキットは、１種又は複数種の容器手段又は一連の容器手段（試験管、バイアル、フラスコ、ボトル、シリンジ等）に密封するために分けられた担体を含み得る。第１容器手段又は一連の容器手段は、１種又は複数種の化合物、例えばＡＧＴ ｄｓＲＮＡ剤及び／又はＡＧＴセンス若しくはアンチセンスポリヌクレオチド剤を含有し得る。第２容器手段又は一連の容器手段は、本発明の治療方法の実施形態において投与されるＡＧＴ ｄｓＲＮＡ及び／又はＡＧＴアンチセンスポリヌクレオチドの一部としてその中に含まれ得る、標的化剤、標識化剤、又は送達剤等を含有し得る。

【0192】

本発明のキットは、説明書も備え得る。説明書は通常、書面形式であり、キットによって具体化される治療を実施するため、且つその治療に基づく決断をするためのガイドラインを提供する。

【0193】

以下の実施例は、本発明の実施の具体的な例を説明するために提供され、本発明の範囲を制限することを意図するものではない。本発明は様々な組成物及び方法に適用可能であることは明らかであるだろう。

【実施例】

【0194】

実施例１．ＲＮＡｉ剤の合成
以下の基本手順に従って、上記の表２～４に示すＡＧＴ ＲＮＡｉ剤二重鎖を合成した：
ホスホルアミダイト化学に基づく確立した固相合成を用いて、ｓｉＲＮＡセンス及びアンチセンス鎖配列をオリゴヌクレオチドシンセサイザーで合成した。オリゴヌクレオチド鎖の増殖（ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ）は、４段階サイクル：脱保護、縮合、キャップ化、及び各ヌクレオチドの付加のための酸化又は硫化工程を用いて達成された。多孔性ガラス（ＣＰＧ，１０００Å）製の固体担体で合成を実施した。モノマーホスホルアミダイトを供給元から購入した。ＧａｌＮＡｃリガンドクラスター（非制限的な例としてＧＬＰＡ１及びＧＬＰＡ２）を有するホスホルアミダイトを本明細書の実施例２～３の手順に従って合成した。生体外（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）スクリーニングに使用されるｓｉＲＮＡ（表２）については、２μｍｏｌスケールで合成を実施し；生体内（ｉｎ ｖｉｖｏ）試験用のｓｉＲＮＡ（表３、４）については、５μｍｏｌ以上のスケールで合成を行った。ＧａｌＮＡｃリガンド（制限的な例としてＧＬＯ－０）がセンス鎖の３’末端に結合される場合には、ＧａｌＮＡｃリガンドがそれに結合されるＣＰＧ固体担体が使用された。ＧａｌＮＡｃリガンド（非制限的な例としてＧＬＳ－１又はＧＬＳ－２）がセンス鎖の５’末端に結合される場合には、ＧａｌＮＡｃホスホルアミダイト（非制限的な例としてＧＬＰＡ１又はＧＬＰＡ２）が、最終的なカップリング反応に使用された。３％ジクロロメタン中のトリクロロ酢酸（ＴＣＡ）が、４，４’－ジメトキシトリチル保護基（ＤＭＴ）の脱保護に使用された。５－エチルチオ－１Ｈ－テトラゾールが活性化剤として使用された。ＴＨＦ／Ｐｙ／Ｈ_２Ｏ中のＩ_２及びピリジン／ＭｅＣＮ中のフェニルアセチルジスルフィド（ＰＡＤＳ）がそれぞれ、酸化反応及び硫化反応に使用された。最終的な固相合成工程後、固体担体に結合したオリゴマーが切断され、体積１：１の４０重量％メチルアミン水溶液及び２８％水酸化アンモニウム溶液で処理することによって、保護基が除去された。生体外スクリーニング用のｓｉＲＮＡを合成するために、粗混合物を濃縮した。残存する固体を１．０Ｍ ＮａＯＡｃに溶解し、氷冷ＥｔＯＨを添加して、ナトリウム塩として一本鎖生成物を沈殿させ、さらに精製することなくアニーリングに使用した。生体内試験のためのｓｉＲＮＡを合成するために、粗製一本鎖生成物をイオンペア逆相ＨＰＬＣ（ＩＰ－ＲＰ－ＨＰＬＣ）によってさらに精製した。１．０Ｍ ＮａＯＡｃに溶解し、氷冷ＥｔＯＨを添加して沈殿させることによって、ＩＰ－ＲＰ－ＨＰＬＣからの精製一本鎖オリゴヌクレオチド生成物をナトリウム塩に変換した。センス及びアンチセンス鎖オリゴヌクレオチドを水中の等モルの補完（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ）によってアニーリングし、二本鎖ｓｉＲＮＡ生成物を形成し、それを凍結乾燥させて、綿毛状の白色固体を得た。

【0195】

実施例２．中間体Ａ及び中間体Ｂの製造
以下のスキーム１に示すように、ジクロロメタン（ＤＣＭ）中で市販の五酢酸ガラクトサミンをトリメチルシリルトリフルオロメタンスルホネート（ＴＭＳＯＴｆ）で処理することによって、中間体Ａを合成した。これに続いて、Ｃｂｚ保護２－（２－アミノエトキシ）エタン－１－オールでグリコシル化して、化合物ＩＩを得た。水素化によってＣｂｚ保護基を除去し、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）塩として中間体Ａを得た。Ｃｂｚ保護２－（２－（２－アミノエトキシ）エトキシ）エタン－１－オールが出発原料としての役割をしたことを除いて、同じスキームで中間体Ｂを合成した。

【化28】

【0196】

スキーム１
１，２－ジクロロエタン（ＤＣＥ）１００ｍＬ中の化合物Ｉ（２０．０ｇ，５１．４ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＭＳＯＴｆ（１７．１ｇ，７７．２ｍｍｏｌ）を添加した。得られた反応溶液を６０℃で２時間攪拌し、次いで２５℃で１時間攪拌した。Ｃｂｚ保護２－（２－アミノエトキシ）エタン－１－オール（１３．５ｇ，５６．５ｍｍｏｌ）をＤＣＥ（１００ｍＬ）に溶解し、４Å粉末分子ふるい（１０ｇ）上で乾燥させ、Ｎ_２雰囲気下にて０℃で上記の反応溶液に一滴ずつ添加した。得られた反応混合物を２５℃で１６時間、Ｎ_２雰囲気下にて攪拌した。反応混合物を濾過し、飽和ＮａＨＣＯ_３（２００ｍＬ）、水（２００ｍＬ）及び飽和ブライン（２００ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、減圧下にて濾過及び濃縮して、粗生成物を得て、それを２－メチルテトラヒドロフラン／ヘプタン（５／３，ｖ／ｖ，１．８０Ｌ）で２時間粉砕した。得られた混合物を濾過し、乾燥させて、白色の固体として化合物ＩＩ（１５．０ｇ，収率５０．３％）を得た。

【0197】

乾燥及びアルゴンパージされた水素化フラスコに、１０％Ｐｄ／Ｃ（１．５０ｇ）を注意深く添加し、続いてテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）１０ｍＬ、次いでＴＨＦ（３００ｍｌ）中の化合物ＩＩ（１５．０ｇ，２６．４ｍｍｏｌ）の溶液及びＴＦＡ（トリフルオロ酢酸，３．００ｇ，２６．４ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を脱気し、Ｈ_２で３回パージし、Ｈ_２（４５ｐｓｉ）雰囲気下にて２５℃で３時間攪拌した。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ，溶媒：ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１）によって、化合物ＩＩの完全な消費が示された。反応混合物を減圧下にて濾過し、濃縮した。残留物を無水ＤＣＭ（５００ｍＬ）に溶解し、濃縮した。プロセスを３回繰り返して、中間体Ａを泡沫状白色固体（１４．０ｇ，収率９６．５％）として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ ｐｐｍ ７．９０（ｄ，Ｊ＝９．２９Ｈｚ，１Ｈ），７．７８（ｂｒ ｓ，３Ｈ），５．２３（ｄ，Ｊ＝３．２６Ｈｚ，１Ｈ），４．９８（ｄｄ，Ｊ＝１１．２９，３．２６Ｈｚ，１Ｈ），４．５６（ｄ，Ｊ＝８．５３Ｈｚ，１Ｈ），３．９８－４．０７（ｍ，３Ｈ），３．７９－３．９３（ｍ，２Ｈ），３．５５－３．６６（ｍ，５Ｈ），２．９８（ｂｒ ｄ，Ｊ＝４．７７Ｈｚ，２Ｈ），２．１１（ｓ，３Ｈ），２．００（ｓ，３Ｈ），１．９０（ｓ，３Ｈ），１．７６（ｓ，３Ｈ）．

【0198】

中間体Ａの合成と同様な手順を用いて、中間体Ｂを合成した。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ ｐｐｍ ７．９０（ｂｒ ｄ，Ｊ＝９．０３Ｈｚ，４Ｈ），５．２１（ｄ，Ｊ＝３．５１Ｈｚ，１Ｈ），４．９７（ｄｄ，Ｊ＝１１．１Ｈｚ，１Ｈ），４．５４（ｄ，Ｊ＝８．５３Ｈｚ，１Ｈ），３．９８ －４．０６（ｍ，３Ｈ），３．８８（ｄｔ，Ｊ＝１０．９Ｈｚ，１Ｈ），３．７６－３．８３（ｍ，１Ｈ），３．４９－３．６１（ｍ，９Ｈ），２．９７（ｂｒ ｓ，２Ｈ），２．１０（ｓ，３Ｈ），１．９９（ｓ，３Ｈ），１．８８（ｓ，３Ｈ），１．７８（ｓ，３Ｈ）．Ｃ_２０Ｈ_３４Ｎ_２Ｏ_１１の質量計算値：４７８．２２；実測値：４７９．３（Ｍ＋Ｈ^＋）．

【0199】

実施例３．ＧａｌＮＡｃリガンドクラスターホスホルアミダイトＧＬＰＡ１、ＧＬＰＡ２及びＧＬＰＡ１５の合成
以下のスキーム２に従って、ＧＬＰＡｌ及びＧＬＰＡ２を調製した。ベンジル保護プロパン－１，３－ジアミンから開始して、２－ブロモ酢酸ｔ－ブチルでのアルキル化によって、トリエステル化合物Ｉを得た。ベンジル保護基の水素化による除去によって、第２級アミン化合物ＩＩを得た。６－ヒドロキシカプロン酸でのアミドのカップリングによって、化合物ＩＩＩを得た。次いで、ジオキサン中のＨＣｌでの処理で、ｔ－ブチル保護基を除去し、三酸化合物ＩＶを得た。三酸化合物ＩＶと中間体Ａ又は中間体Ｂとのアミドカップリングが実施され、化合物Ｖａ又はＶｂが得られた。２－シアノエチルＮ，Ｎ－ジイソプロピルクロリドホスホロアミダイト及び触媒量の１Ｈ－テトラゾールを用いて、化合物Ｖａ又はＶｂをリン酸化することによって、ホスホルアミダイトＧＬＰＡ１又はＧＬＰＡ２を合成した。

【化29】

【0200】

スキーム２
ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ，１００ｍＬ）中のＮ－ベンジル－１，３－プロパンジアミン（５．００ｇ，３０．４ｍｍｏｌ）を添加し、２－ブロモ酢酸ｔ－ブチル（２３．７ｇ，１２１ｍｍｏｌ）に添加し、続いて、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ，２３．６１ｇ，１８２ｍｍｏｌ）を一滴ずつ添加した。得られた反応混合物を２５～３０℃で１６時間攪拌した。ＬＣＭＳから、Ｎ－ベンジル－１，３－プロパンジアミンの完全な消費が示された。反応混合物をＨ_２Ｏ（５００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機成分（ｏｒｇａｎｉｃｓ）を飽和ブライン（１Ｌ）で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濃縮し、減圧下にて濃縮して、粗生成物を得て、それをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（勾配：石油エーテル：酢酸エチル２０：１～５：１）によって精製した。化合物Ｉを無色のオイルとして得た（１２．１ｇ，収率７８．４％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ｐｐｍ ７．２６－７．４０（ｍ，５Ｈ），３．７９（ｓ，２Ｈ），３．４３（ｓ，４Ｈ），３．２１（ｓ，２Ｈ），２．７２（ｄｔ，Ｊ＝１６．９，７．３４Ｈｚ，４Ｈ），１．７０（ｑｕｉｎ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），１．４４－１．５０（ｍ，２７Ｈ）．

【0201】

乾燥した水素化ボトルをアルゴンで３回パージした。Ｐｄ／Ｃ（２００ｍｇ，１０％）を添加し、続いてＭｅＯＨ（５ｍＬ）、次いでＭｅＯＨ（５ｍＬ）中の化合物Ｉ（１．００ｇ，１．９７ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を真空下で脱気し、Ｈ_２で再充填した。このプロセスを３回繰り返した。２５℃でＨ_２（１５ｐｓｉ）雰囲気下にて、混合物を１２時間攪拌した。ＬＣＭＳから、化合物Ｉが完全に消費されたことが示された。反応混合物を減圧下にてＮ_２雰囲気下にて濾過した。濾液を減圧下で濃縮して、黄色のオイルとして化合物ＩＩ（６５５ｍｇ，収率７９．７％）を得て、それをさらに精製することなく、次の工程に使用した。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ｐｐｍ ３．４４（ｓ，４Ｈ），３．３１（ｓ，２Ｈ），２．７８（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），２．６８（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），１．８８（ｂｒ ｓ，１Ｈ），１．６９（ｑｕｉｎ，Ｊ＝７．０３Ｈｚ，２Ｈ），１．４４－１．５０（ｓ，２７Ｈ）．

【0202】

ＤＭＦ（６ｍＬ）中の化合物ＩＩ（６５５ｍｇ，１．５７ｍｍｏｌ）、６－ヒドロキシカプロン酸（２４９ｍｇ，１．８９ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（１．０２ｇ，７．８６ｍｍｏｌ）、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣＩ，９０４ｍｇ，４．７２ｍｍｏｌ）及び１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ，６３７ｍｇ，４．７２ｍｍｏｌ）の混合物を脱気し、Ｎ_２で３回パージし、次いでＮ_２雰囲気下にて２５℃で３時間攪拌した。ＬＣＭＳから、目的の生成物が示された。反応混合物をＨ_２Ｏ（１０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ２０ｍＬ（１０ｍＬ×２）で抽出した。有機成分を合わせ、飽和ブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、粗生成物を得て、それをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（勾配：石油エーテル：酢酸エチル５：１～１：１）によって精製し、化合物ＩＩＩ（６５０ｍｇ，収率７７．８％）を黄色のオイルとして得た^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ｐｐｍ ３．９０－３．９５（ｓ，２Ｈ），３．６３（ｔ，Ｊ＝６．４０Ｈｚ，２Ｈ），３．３８－３．４５（ｍ，６Ｈ），２．７２（ｔ，Ｊ＝６．６５Ｈｚ，２Ｈ），２．４０（ｔ，Ｊ＝７．２８Ｈｚ，２Ｈ），１．５５－１．７５（ｍ，８Ｈ），１．４４（ｓ，２７Ｈ）．Ｃ_２７Ｈ_５０Ｎ_２Ｏ_８の質量計算値：５３０．３６；実測値：５３１．３（Ｍ＋Ｈ^＋）．

【0203】

ＨＣｌ／ジオキサン（２Ｍ，５５ｍＬ）中の化合物ＩＩＩ（５．５ｇ，１０．３ｍｍｏｌ）の混合物を２５℃で３時間攪拌した。ＬＣＭＳから、化合物ＩＩＩの完全な消費が示された。反応混合物を濾過し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で洗浄し、減圧下で乾燥させて、粗生成物を得た。これをＣＨ_３ＣＮ（５０ｍＬ）に溶解し、揮発性成分を真空下にて除去した。このプロセスを３回繰り返して、化合物ＩＶを白色の固体として得た（２．０５ｇ，収率５４．５％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）：δ ｐｐｍ ４．２１（ｓ，１Ｈ），４．０７（ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，４Ｈ），３．９９（ｓ，１Ｈ），３．４５－３．５２（ｍ，３Ｈ），３．４２（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，１Ｈ），３．３２－３．３８（ｍ，１Ｈ），３．２４－３．３１（ｍ，１Ｈ），２．３７（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），２．２４（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），１．９９（ｄｔ，Ｊ＝１５．５，７．５３Ｈｚ，１Ｈ），１．８５－１．９４（ｍ，１Ｈ），１．８５－１．９４（ｍ，１Ｈ），１．３９－１．５６（ｍ，４Ｈ），１．１９－１．３１（ｍ，２Ｈ）．

【0204】

混合物を２５℃でＮ_２雰囲気下にて３時間攪拌する前に、ＤＭＦ（１０ｍＬ）（４９６ｍｇ，３．６７ｍｍｏｌ）中の化合物ＩＶ（５００ｍｇ，１．０５ｍｍｏｌ）、中間体Ａ（２．０２ｇ，３．６７ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（８１３ｍｇ，６．３０ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ（７０４ｍｇ，３．６７ｍｍｏｌ）及びＨＯＢｔの混合物を脱気し、Ｎ_２で３回パージした。ＬＣＭＳから、目的の生成物が示された。Ｈ_２Ｏ（１０ｍＬ）を添加することによって、反応混合物をクエンチし、ＤＣＭ（１０ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機成分を１０％クエン酸（２０ｍＬ）で抽出した。水相を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で中和し、ＤＣＭ（１０ｍＬ×２）で再抽出した。有機成分を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下にて濾過し、濃縮して化合物Ｖａを白色の固体として得た（５７０ｍｇ，０．２８１ｍｍｏｌ，２６．８％収率）。^１Ｈ ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）ｐｐｍ δ ７．８４－８．１２（ｍ，３Ｈ），６．８５－７．１５（ｍ，２Ｈ），６．６６－６．８１（ｍ，１Ｈ），５．３６（ｂｒ ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，３Ｈ），５．１１－５．２７（ｍ，３Ｈ），４．６３－４．８５（ｍ，３Ｈ），３．９０－４．２５（ｍ，１８Ｈ），３．３７－３．７５（ｍ，２８Ｈ），３．１５－３．２８（ｍ，４Ｈ），２．６４（ｂｒ ｄ，Ｊ＝６．５３Ｈｚ，２Ｈ），２．３０－２．４６（ｍ，２Ｈ），２．１３－２．１８（ｍ，９Ｈ），２．０５（ｓ，９Ｈ），１．９４－２．０３（ｍ，１８Ｈ），１．６８（ｂｒ ｓ，２Ｈ），１．４５（ｂｒ ｓ，２Ｈ），１．１２（ｂｒ ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ）．

【0205】

無水ＤＣＭ（５ｍＬ）中の化合物Ｖａ（２６０ｍｇ，０．１６１ｍｍｏｌ）の溶液に、ジイソプロピルアンモニウムテトラゾリド（３０．３ｍｇ，０．１７７ｍｍｏｌ）に続いて、３－ビス（ジイソプロピルアミノ）ホスファニルオキシプロパンニトリル（１９４ｍｇ，０．６４５ｍｍｏｌ）をＮ_２下にて周囲温度で一滴ずつ添加した。反応混合物を２０～２５℃で２時間攪拌した。ＬＣＭＳから、化合物Ｖａが完全に消費されたことが示された。－２０℃に冷却した後、０℃のブライン／飽和ＮａＨＣＯ_３（１：１，５ｍＬ）の攪拌溶液に反応混合物を添加した。１分間攪拌した後、ＤＣＭ（５ｍＬ）を添加し、層形成が起こった。有機層をブライン／飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（１：１，５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、約１ｍＬの体積に濃縮した。攪拌しながら、メチルｔ－ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）２０ｍＬに、残存する溶液を一滴ずつ添加した。この結果、白色の固体が沈殿した。混合物を遠心し、固体を収集した。固体をＤＣＭ１ｍＬに再溶解し、ＭＴＢＥ（２０ｍＬ）を添加することによって沈殿させた。遠心によって、固体を再び単離した。回収された固体を無水ＣＨ_３ＣＮに溶解し、揮発性成分を除去した。このプロセスをあと２回繰り返して、ＧａｌＮＡｃリガンドホスホルアミダイト化合物ＧＬＰＡ１（１５３ｍｇ，８４．４μｍｏｌ）を白色の固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：ｐｐｍ δ ７．７１－８．０６（ｍ，２Ｈ），６．６０－７．０６（ｍ，３Ｈ），５．３７（ｂｒ ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，３Ｈ），５．１８－５．３２（ｍ，３Ｈ），４．７０－４．８６（ｍ，３Ｈ），３．９２－４．２５（ｍ，１８Ｈ），３．４２－３．８５（ｍ，３０Ｈ），３．２５（ｍ，４Ｈ），２．５９－２．７５（ｍ，４Ｈ），２．２７－２．４４（ｍ，２Ｈ），２．１５－２．２０（ｓ，９Ｈ）２．０７（ｓ，９Ｈ），１．９６－２．０３（ｍ，１８Ｈ），１．６５（ｂｒ ｓ，４Ｈ），１．４４（ｂｒ ｄ，Ｊ＝７．２８Ｈｚ，２Ｈ），１．１４－１．２４（ｍ，１２Ｈ）．^３１Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：ｐｐｍ δ １４７．１５．

【0206】

中間体－Ｂが使用されたことを除いては、同じ手順を用いて、ＧａｌＮＡｃリガンドホスホルアミダイト化合物ＧＬＰＡ２を合成した。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：ｐｐｍ δ ７．９４－８．１８（ｍ，１Ｈ），７．６９（ｂｒ ｓ，１Ｈ），６．６６－７．１０（ｍ，３Ｈ），５．３５（ｄ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，３Ｈ），５．０７－５．２５（ｍ，３Ｈ），４．７６－４．８６（ｍ，３Ｈ），４．０１－４．３１（ｍ，１０Ｈ），３．９１－４．０１（ｍ，８Ｈ），３．７４－３．８６（ｍ，４Ｈ），３．５２－３．７１（ｍ，３０Ｈ），３．４２－３．５０（ｍ，６Ｈ），３．１５－３．２５（ｍ，４Ｈ），２．５２－２．７０（ｍ，４Ｈ），２．２２－２．４５（ｍ，２Ｈ），２．１５－２．２２（ｓ，９Ｈ），２．０６（ｓ，９Ｈ），１．９５－２．０３（ｍ，１８Ｈ），１．７７（ｂｒ ｓ，２Ｈ），１．５８－１．６６（ｍ，４Ｈ），１．４０（ｍ，２Ｈ），１．０８－１．２４（ｍ，１２Ｈ）．^３１Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：ｐｐｍ δ １４７．１２．

【0207】

ＧＬＰＡ１５を製造するために、以下のスキーム３に従った。

【化30】

ジクロロメタン（２．７５Ｌ）中の中間体化合物ＩＩ（２７５ｇ，６６０ｍｍｏｌ，１．００当量）の溶液に、トリエチルアミン（１３３ｇ，１．３２ｍｏｌ，２．００当量）を添加し、続いてＣｂｚ－Ｃｌ（１６９ｇ，９９０ｍｍｏｌ，１．５０当量）を一滴ずつ添加した。反応溶液を２５℃で２時間攪拌し、その結果、ＬＣＭＳから、化合物ＩＩが完全に変換されたことが示された。反応溶液を飽和ＮａＨＣＯ_３（８００ｍＬ）溶液及び飽和ブライン（５００ｍＬ）で順に洗浄し、有機相を無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させた。濾過して乾燥剤を除去した後、濾液を乾燥状態まで濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２，ＰＥ／ＥＡ＝１００／１～５／１）にかけて、無色のオイルとして化合物５（２９０ｇ，５２７ｍｍｏｌ，収率７５．７％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ ｉｎ ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ ｐｐｍ ７．２３－７．４０（ｍ，５Ｈ），５．００－５．１２（ｍ，２Ｈ），３．８６－３．９５（ｍ，２Ｈ），３．２３－３．３９（ｍ，６Ｈ），２．５５－２．６７（ｍ，２Ｈ），１．５６－１．６４（ｍ，２Ｈ），１．３１－１．４６（ｍ，２７Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）［Ｍ＋Ｈ］^＋ ｍ／ｚ：５５１．６．

【0208】

化合物５（１４５ｇ，２６３ｍｍｏｌ，１．００当量）に、ＨＣＯＯＨ（２．９Ｌ）を添加し、溶液を６０℃で１２時間攪拌し、その結果、ＬＣＭＳから、化合物５の完全な変換が示された。トルエン１．５Ｌ及びアセトニトリルトルエンを反応溶液に添加し、それを減圧下で約５００ｍＬに濃縮した。次いで、約５００ｍＬに濃縮する前に、トルエン／アセトニトリル（１：１，約７５０ｍＬ）を添加した。これに続いて、乾燥状態まで濃縮する前に、アセトニトリル（約１０００ｍＬ）を添加した。粗生成物を６０℃のアセトニトリル７００ｍＬで２時間微粉砕し、次いで濾過した。固体を回収し、乾燥させて、白色の固体、化合物６（１０５ｇ，定量的）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ ｉｎ ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ ｐｐｍ ７．２６－７．４０（ｍ，５Ｈ），５．０２－５．１０（ｍ，２Ｈ），３．８９－４．００（ｍ，２Ｈ），３．３６－３．４５（ｍ，４Ｈ），３．２４－３．３４（ｍ，２Ｈ），２．５９－２．７２（ｍ，２Ｈ），１．４０（ｓ，２Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）［Ｍ＋Ｈ］^＋ ｍ／ｚ：３８３．０．

【0209】

化合物６（１００ｇ，２６１ｍｍｏｌ．）及び中間体Ａ（５０２ｇ，９１５．ｍｍｏｌ，３．５０当量）のＤＭＦ（１．０Ｌ）溶液に、ＴＢＴＵ（３２７ｇ，１．０２ｍｏｌ，３．９０当量）及びトリエチルアミン（２１２ｇ，２．０９ｍｏｌ，８．００当量）を添加した。反応を２５℃で１時間行い、その結果、ＬＣＭＳから、化合物６の完全な変換が示された。反応溶液を水４０００ｍＬに添加し、メチルｔ－ブチルエーテル（２０００ｍＬ２回）で抽出して、不純物を除去した。残存する水相をジクロロメタン（３０００ｍＬ２回）で抽出した。ジクロロメタン相を１０％クエン酸水溶液（２０００ｍＬ，２回洗浄で分割された）飽和ＮａＨＣＯ_３（２．０Ｌ，２回洗浄で分割された）、及び飽和ブライン（２．０Ｌ）で連続的に洗浄し、次いで無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させた。濾液を減圧下で濾過及び濃縮して、白色の固体、化合物８（２６０ｇ，１５９ｍｍｏｌ，収率６０．９％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ ｉｎ ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ ｐｐｍ ７．９９－８．０８（ｍ，２Ｈ），７．９３（ｂｒ ｄ，Ｊ＝５．５０Ｈｚ，１Ｈ），７．７９－７．８６（ｍ，３Ｈ），７．２６－７．３９（ｍ，５Ｈ），５．２２（ｄ，Ｊ＝３．１３Ｈｚ，３Ｈ），４．９５－５．０８（ｍ，５Ｈ），４．５４（ｂｒ ｄ，Ｊ＝８．３８Ｈｚ，３Ｈ），４．０３（ｓ，９Ｈ），３．８１－３．９３（ｍ，５Ｈ），３．７６（ｂｒ ｄ，Ｊ＝４．８８Ｈｚ，３Ｈ），３．４４－３．６２（ｍ，１０Ｈ），３．３４－３．４３（ｍ，６Ｈ），３．２４（ｂｒ ｄ，Ｊ＝６．１３Ｈｚ，７Ｈ），３．０２－３．０９（ｍ，４Ｈ），２．４０－２．４７（ｍ，２Ｈ），２．１０（ｓ，９Ｈ），１．９９（ｓ，９Ｈ），１．８９（ｓ，９Ｈ），１．７７（ｓ，９Ｈ），１．５７－１．６８（ｍ，２Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）［Ｍ＋Ｈ］^＋ ｍ／ｚ：８１６．４．

【0210】

乾燥Ｐｄ／Ｃ（９ｇ）、続いてＭｅＯＨ（５０ｍＬ）を注意深く添加してＰｄ／Ｃを湿らせる前に、２Ｌ水素化ケトルをアルゴンで不活性化した。次に、化合物８の溶液（９０ｇ，５５．１ｍｍｏｌ，１．００当量）及びＭｅＯＨ（８５０ｍＬ）中のトリフルオロ酢酸（６．２９ｇ，５５．１ｍｍｏｌ，１．００当量）をアルゴン雰囲気下にてゆっくりと添加した。混合物を脱気し／Ｈ_２を３回添加することによって置換して、水素雰囲気を得て、２５℃で１０時間攪拌した。ＬＣＭＳから、化合物８の完全な変換が示された。Ｐｄ／Ｃを濾過によって除去し、減圧下にて濾液を濃縮して、化合物９（８０ｇ，収率９０．２％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ ｉｎ ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ ｐｐｍ ９．１２（ｂｒ ｓ，２Ｈ），８．５０（ｂｒ ｔ，Ｊ＝５．１９Ｈｚ，１Ｈ），８．１０（ｂｒ ｔ，Ｊ＝５．５０Ｈｚ，２Ｈ），７．８５－７．９１（ｍ，３Ｈ），５．２２（ｄ，Ｊ＝３．２５Ｈｚ，３Ｈ），４．９５－５．０１（ｍ，３Ｈ），４．５２－４．５８（ｍ，３Ｈ），４．０３（ｓ，９Ｈ），３．８４－３．９３（ｍ，３Ｈ），３．７５－３．８３（ｍ，３Ｈ），３．３９－３．６１（ｍ，１６Ｈ），３．２３－３．３２（ｍ，６Ｈ），３．１５－３．１８（ｍ，３Ｈ），２．９７－３．０５（ｍ，２Ｈ），２．５４－２．６１（ｍ，２Ｈ），２．１０（ｓ，９Ｈ），２．００（ｓ，９Ｈ），１．８９（ｓ，９Ｈ），１．７７－１．８０（ｍ，９Ｈ），１．７０－１．７６（ｍ，２Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）［Ｍ＋Ｈ］^＋ ｍ／ｚ：７４９．３．

【0211】

化合物９（２７０ｇ，１６８ｍｍｏｌ，１．００当量）のジクロロメタン（２．７Ｌ）溶液及びグルタル酸無水物（２８．６ｇ，２５２ｍｍｏｌ，１．５０当量）に、トリエチルアミン（６７．８ｇ，６７２ｍｍｏｌ，４．００当量）を添加し、溶液を２５℃で１時間攪拌した。ＬＣＭＳによって、化合物９が化合物１１に完全に変換されたことが分かった。４－ヒドロキシピペリジン（４２．４ｇ，４２０ｍｍｏｌ，２．５０当量）及びＴＢＴＵ（１０７ｇ，３３５ｍｍｏｌ，２．００当量）を反応溶液に添加し、２５℃で攪拌を１時間続けた。ＬＣＭＳから、化合物１１の完全な変換が示された。飽和ＮＨ_４Ｃｌ（３．０Ｌ）をゆっくりと添加することによって、反応をクエンチし、層を分離し、水相をジクロロメタン（２×１０００ｍＬ）で抽出し、前の有機相と合わせた。合わせた有機相を飽和ＮａＨＣＯ_３（水溶液）及び飽和ブライン（３．０Ｌ）の１：１混合物で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、減圧下にて濾過し、濃縮した。ジクロロメタン１．５Ｌに粗生成物を溶解し、メチルｔ－ブチルエーテル（７．５Ｌ）に一滴ずつ添加した。一滴ずつ添加する間、半透明の白色沈殿物が徐々に形成した。沈殿物を真空下にて濾過し、固体を回収し、真空下で乾燥させて、化合物１３を白色の固体として得た（２０７ｇ，収率７２．８％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ ｉｎ ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ ｐｐｍ ８．０５（ｂｒ ｄ，Ｊ＝２．００Ｈｚ，２Ｈ），７．８２（ｂｒ ｄ，Ｊ＝７．３８Ｈｚ，３Ｈ），５．２１（ｂｒ ｓ，３Ｈ），４．９８（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１０．２６Ｈｚ，３Ｈ），４．７２（ｂｒ ｓ，１Ｈ），４．５４（ｂｒ ｄ，Ｊ＝７．８８Ｈｚ，３Ｈ），４．０３（ｂｒ ｓ，９Ｈ），３．７４－３．９４（ｍ，９Ｈ），３．４５－３．７１（ｍ，１２Ｈ），３．４０（ｂｒ ｓ，６Ｈ），３．２４（ｂｒ ｓ，７Ｈ），３．０７（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１４．１３Ｈｚ，５Ｈ），２．９１－３．０１（ｍ，１Ｈ），２．２４－２．４４（ｍ，５Ｈ），２．２０（ｂｒ ｓ，１Ｈ），２．１０（ｓ，９Ｈ），１．９６－２．０４（ｍ，９Ｈ），１．８９（ｂｒ ｓ，９Ｈ），１．７４－１．８１（ｍ，９Ｈ），１．５１－１．７３（ｍ，６Ｈ），１．０７－１．３６（ｍ，３Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）［Ｍ＋Ｈ］^＋ ｍ／ｚ：８４８．０．

【0212】

ジクロロメタン（２．０Ｌ）中の化合物１３（２００ｇ，１１８ｍｍｏｌ，１．００当量）及びテトラゾールジイソプロピルアンモニウム（８．０８ｇ，４７．２ｍｍｏｌ，０．４０当量）の溶液に、３－ビス（ジイソプロピルアミノ）ホスファニルオキシプロパンニトリル（５３．３ｇ，１７７ｍｍｏｌ，１．５０当量）を添加した。反応溶液を４０℃で２時間攪拌し、その結果、ＬＣＭＳによって、化合物１３の完全な変換が示された。飽和ＮａＨＣＯ_３及び飽和ブライン（２．０Ｌ）の１：１混合物で反応溶液を洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させた。濾液を濃縮した後に得られた粗生成物をジクロロメタン（１．２Ｌ）に溶解し、攪拌されたメチルｔ－ブチルエーテル（６．０Ｌ）に一滴ずつ添加した。懸濁液を濾過し、濾過ケークをｔ－ブチルエーテルですすいだ。固体を回収し、真空下で乾燥させた。生成物をジクロロメタン（１．０Ｌ）に溶解し、乾燥状態まで濃縮した。この作業を４回繰り返して、残存するｔ－ブチルエーテルを除去し、ＧＬＰＡ１５（１６４ｇ，収率７３．３％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ ｉｎ ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ ｐｐｍ ８．０５（ｂｒ ｄ，Ｊ＝６．５０Ｈｚ，２Ｈ），７．８１（ｂｒ ｄ，Ｊ＝９．０１Ｈｚ，３Ｈ），５．２２（ｄ，Ｊ＝３．２５Ｈｚ，３Ｈ），４．９８（ｄｄ，Ｊ＝１１．２６，３．２５Ｈｚ，３Ｈ），４．５５（ｂｒ ｄ，Ｊ＝８．５０Ｈｚ，３Ｈ），４．０３（ｓ，９Ｈ），３．６４－３．９７（ｍ，１２Ｈ），３．５５－３．６３（ｍ，６Ｈ），３．５０（ｂｒ ｓ，５Ｈ），３．４０（ｂｒ ｄ，Ｊ＝６．１３Ｈｚ，６Ｈ），３．１７－３．３０（ｍ，９Ｈ），３．０７（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１４．２６Ｈｚ，４Ｈ），２．７６（ｔ，Ｊ＝５．８２Ｈｚ，２Ｈ），２．１８－２．４７（ｍ，６Ｈ），２．１０（ｓ，９Ｈ），１．９９（ｓ，９Ｈ），１．８９（ｓ，９Ｈ），１．７８（ｓ，９Ｈ），１．５２－１．７４（ｍ，６Ｈ），１．１２－１．１９（ｍ，１２Ｈ）．^３１Ｐ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ_６）：ｐｐｍ δ １４５．２５．ＭＳ（ＥＳＩ）［Ｍ＋Ｈ］^＋ ｍ／ｚ：１８９５．７．

【0213】

一部の研究において、センス鎖の５’末端に、ＧａｌＮＡｃ（本明細書においてＧａｌＮＡｃ送達化合物とも呼ばれる）を含む標的化基を結合する方法であって、センス鎖の５’末端にそれを結合するための、オリゴヌクレオチド鎖伸長（つまり、センス鎖の５’末端へのヌクレオチドの付加）に使用されるプロセスなどの合成プロセスを用いた固相合成の最終カップリング工程におけるＧａｌＮＡｃホスホルアミダイト（ＧＬＰＡ１）の使用を含む方法が提供される。

【0214】

一部の研究において、センス鎖の３’末端にＧａｌＮＡｃ含有標的化基を結合する方法は、ＧＬＯ－ｎ含有固体担体（ＣＰＧ）の使用を含む。一部の研究において、センス鎖の３’末端にＧａｌＮＡｃ含有標的化基を結合する方法は、エステル結合を介してＣＰＧ固体担体にＧａｌＮＡｃ標的化基を連結すること、センス鎖の合成中に、ＧａｌＮＡｃ標的化基が結合された、得られたＣＰＧを使用することを含み、その結果、センス鎖の３’末端に結合されたＧａｌＮＡｃ標的化基が得られる。他のＧａｌＮＡｃホスホルアミダイト化合物（ＧＬＰＡｎ）は同様に、本明細書における方法と類似の、又は当技術分野でよく知られている方法を用いて、合理的に相当する中間体の使用後に得ることができ、且つ標的化基としてｓｉＲＮＡ二重鎖の適切な位置に連結され得る。

【0215】

実施例４．ＡＧＴ ｓｉＲＮＡ二重鎖の生体外スクリーニング
Ｈｅｐ３Ｂ細胞をトリプシン処理し、適切な密度に調整し、次いで９６ウェルプレートにシーディングした。シーディングと同時に、製造元の推奨に従って、リポフェクタミンＲＮＡｉＭａｘ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ－１３７７８－１５０）を用いて試験ｓｉＲＮＡ又は対照ｓｉＲＮＡを細胞にトランスフェクトした。ｓｉＲＮＡを２通りの濃度（０．２ｎＭないし１．０ｎＭ）にて三つ組（ｔｒｉｐｌｉｃａｔｅ）で試験し、４．６ｐＭ～１０ｎＭの連続３倍希釈で８通りの濃度で対照ｓｉＲＮＡを三つ組で試験した。

【0216】

トランスフェクションから２４時間後に、培地を除去し、ＲＮＡ抽出のために細胞を収集した。マニュアルに従ってＴＲＩｚｏｌ（商標）試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ－１５５９６０１８）を使用して、全ＲＮＡを抽出した。

【0217】

マニュアルに従ってＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ（商標）ＲＴ試薬キット及びｇＤＮＡ Ｅｒａｓｅｒ（Ｐｅｒｆｅｃｔ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ）（ＴａＫａＲａ－ＲＲ０４７Ａ）を使用して、ｃＤＮＡを合成した。ＡＧＴ ｃＤＮＡをｑＰＣＲによって検出した。ＧＡＰＤＨ ｃＤＮＡは、内部対照と平行して検出された。ＰＣＲは以下の通りに実施された：９５℃で３０秒、続いて９５℃で１０秒と６０℃で３０秒の間の４０サイクル。

【0218】

データ解析
各試料における発現が、比較Ｃｔ（ΔΔＣｔ）法；を用いて相対的定量化（ＲＱ）によって決定された；この方法では、標的遺伝子とハウスキーピング遺伝子（ＧＡＰＤＨ）とのＣｔ差（ΔＣｔ）が測定される。

【0219】

等式を以下に示す。
ΔＣＴ＝標的遺伝子平均Ｃｔ－ＧＡＰＤＨ平均Ｃｔ
ΔΔＣＴ＝ΔＣＴ（試料）－ΔＣＴ（ランダムな対照又はリポフェクタミンＲＮＡｉＭａｘ対照）
標的遺伝子ｍＲＮＡの相対的定量化＝２（^{－ΔΔＣＴ}）
阻害パーセント＝（対照の相対的定量化－試料の相対的定量化）／対照の相対的定量化×１００％

【0220】

【表30】

【0221】

【表31】

【0222】

実施例５．ＡＧＴ ｓｉＲＮＡ二重鎖の生体内（Ｉｎ ｖｉｖｏ）試験
ＡＧＴ ｓｉＲＮＡの生体内活性を評価するために、ヒトＡＧＴ遺伝子をコードするＡＡＶに感染したマウスを使用した（マウス４匹／群）。ｓｉＲＮＡの投与から１４日後に、ヒトＡＧＴ遺伝子をコードするアデノ随伴ウイルス８（ＡＡＶ８）ベクターの１×１０^１１ウイルス粒子を静脈内注射することによって、メスＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスを感染させた。０日目に、ＡＧＴ ｓｉＲＮＡ剤又はＰＢＳ２．５ｍｇ／ｋｇ又は３ｍｇ／ｋｇを単回用量で皮下注射した。０日目、ｓｉＲＮＡの投与前及び７日目の最後に、血液試料を採取した。製造元の推奨プロトコル（ＩＢＬ Ａｍｅｒｉｃａ，ヒトアンギオテンシノゲンＥＬＩＳＡキット）に従って、ＥＬＩＳＡアッセイによってヒトＡＧＴタンパク質濃度を測定した。ｓｉＲＮ処置群及びＰＢＳ処置群の間で、７日目にマウス肝臓におけるヒトＡＧＴ ｍＲＮＡレベル（ｑＰＣＲによって決定される）又は血漿試料中のヒトＡＧＴタンパク質レベルを比較することによって、ノックダウンパーセンテージを算出した。その結果を表６～９に示す。

【0223】

【表32】

【0224】

【表33】

【0225】

【表34】

【0226】

【表35】

【0227】

【表36】

【0228】

実施例６．ＡＧＴ ｓｉＲＮＡ二重鎖の生体内試験
ＡＧＴ ｓｉＲＮＡの生体内活性を評価するために、合計１５匹のカニクイザル（１３～２２歳，体重７～９ｋｇ）をこの研究にリクルートした。動物３匹それぞれの５群に動物をランダムに分割し、各動物に試験物質２ｍｇ／ｋｇを皮下注射し、使用された試験物質は、表４における化合物（ＡＤ００１５８－１、ＡＤ００１５８－２、ＡＤ００１６３－１、ＡＤ００１５９－１、ＡＤ００３００－１）に相当する。

【0229】

一晩絶食した後、－１４日目（投与前）日目、－７日目（投与前）、１日目（投与前）及び投与後８日目、１５日目、２２日目、２９日目、４３日目、５７日目、６４日目、７１日目、７８日目、８５日目及び９２日目に血液を採取した。次いで、採取された血液試料を室温で少なくとも３０分間放置し、凝固させ、次いで３５０ｒｐｍにて４℃で１０分間遠心分離した。回収された血清（およそ１．０ｍＬ）を予めラベル付けされた２本のポリプロピレンねじ蓋バイアル（０．５ｍｌ／バイアル、１本はＥＬＩＳＡアッセイ用、もう一本は後に使用される）に移し、試験するまで、－８０℃のフリーザー内で保管した。

【0230】

血清中のＡＧＴタンパク質レベルが、ＥＬＩＳＡによって決定された。１日目のサルの血漿中のＡＧＴレベルと比較して残存するパーセンテージを図１に示す。

【0231】

実施例７．ＡＧＴ ｓｉＲＮＡ二重鎖の生体外（Ｉｎ ｖｉｔｒｏ）スクリーニング
生体外での研究を実施例４の方法に従って行い、実験結果を表１０に示す。

【0232】

【表37】

【0233】

実施例８．ＡＡＶマウスモデルにおけるＡＤ００１６３－３の生体内（Ｉｎ ｖｉｖｏ）試験：
順応期間後、メスＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス１２匹を体重による２つの群：モデル（溶媒）群及びＡＤ００１６３－３（１ｍｇ／ｋｇ）群にランダムに分けた。１日目に各マウスの尾静脈にＡＡＶ－ＡＧＴウイルス１×１０^１１ｖｇを注入し、１００μＬ／動物の体積を注入することによって、動物モデルを確立した。１５日目に、表４におけるＰＢＳ又はＡＤ００１６３－３を各群におけるマウスに皮下注射によって、体積５ｍＬ／ｋｇで投与することによって与えた。１５日目の投与前に、各マウスの顎下静脈から血液を採取し、血清試料を遠心分離後に収集した。２２日目に、すべてのマウスをＣＯ_２で屠殺し、心臓穿刺によって全血を採取し、血清試料を遠心分離後に収集した。製造元の推奨プロトコル（ＩＢＬ Ａｍｅｒｉｃａ，ヒトアンギオテンシノゲンＥＬＩＳＡキット）に従って、ＥＬＩＳＡアッセイによってヒトＡＧＴタンパク質濃度を測定した。ｓｉＲＮ処置群及びＰＢＳ処置群の間で、７日目にマウス血漿試料中のヒト由来ＡＧＴタンパク質レベルを比較することによって、ノックダウンパーセンテージを算出した。そのデータから、ＡＤ００１６３－３（１ｍｇ／ｋｇ）治療によって、マウス血清中のヒトＡＧＴタンパク質の発現が有意に９１％低減され得ることが分かった。

【0234】

実施例９．カニクイザルの自然発症高血圧モデルにおけるＡＤ００１６３－３の試験
高血圧を有するカニクイザル１０匹を２つの群（各群において５匹のサル）にランダムに分割し、表４における生理食塩水又はＡＤ００１６３－３を１０ｍｇ／ｋｇで投与した。－６日目及び－２日目（投与前）、並びに投与後２、７、１４、２１、２８及び３５日目に血液試料を採取した。血清ＡＧＴ濃度を製造元の推奨プロトコルに従ってＥＬＩＳＡによって測定し、テールカフ（ｔａｉｌｃｕｆｆ）デバイスを使用して血圧を測定した。図２及び３に示すように、血清ＡＧＴの低減（投与後３５日目に９８％低減）と同時に、ＡＤ００１６３－３ １０ｍｇ／ｋｇを単回皮下投与した結果、投与後３５日目に２８ｍｍＨｇのＳＢＰが有意に低下し（ＳＢＰは、１４７～１１９ｍｍＨｇのベースラインに変化した）、同じ期間中の対照群におけるＳＢＰの有意な変化はなかった（ＳＢＰは、１４４～１４５ｍｍＨｇのベースラインに変化した）。平均血圧及び拡張期圧（ＭＢＰ及びＤＢＰ）の有意な低下もまた、図４及び５それぞれに示すように確認された。

【0235】

等価物
本発明のいくつかの実施形態は本明細書において記述及び例証されているが、本明細書に記載の機能を果たし、且つ／或いはその結果及び／又は１つ若しくは複数の利点を得るために、種々の他の手段及び／又は構造を使用してもよいこと、並びにこれらの変更及び／又は修飾それぞれが、本発明の範囲内にあるとみなされることは、当業者には容易に理解されよう。より一般的には、本明細書に記載のすべてのパラメーター、寸法、材料、及び構成は例示的であること、並びに実際のパラメーター、寸法、材料、及び／又は立体配置が本発明の教示が用いられる具体的な用途に応じて異なることは、当業者には容易に理解されよう。通常の実験だけでなく、本明細書に記載の本発明の具体的な実施形態の多くの等価物を用いることは、当業者は認識されよう、又は理解することができるだろう。したがって、上述の実施形態は単なる一例として示されており、且つ添付の特許請求の範囲及びその均等物の範囲内で、具体的に記載及び請求される以外に実施され得ることを理解されたい。本発明は、本明細書に記載の個々の各特徴、システム、物品、材料及び／又は方法に関する。さらに、２つ以上のかかる特徴、システム、物品、材料及び／又は方法のいずれかの組合せも、かかる特徴、システム、物品、材料及び／又は方法が互いに矛盾していないことを条件として、本発明の範囲内に含まれる。

【0236】

本明細書において定義及び使用されるすべての定義は、対照辞書定義、参照によって組み込まれる文書における定義、及び／又は定義される用語の通常の意味として理解されるべきである。

【0237】

定量的制限が本明細書及び特許請求の範囲において用いられない場合、これは、それと反対に明確に指定さていない限り「少なくとも１つ」と理解されるべきである。

【0238】

本明細書及び特許請求の範囲において使用される、「及び／又は」のフレーズは、要素の「一方又は両方」がこのように組み合わされたこと、つまり、かかる要素が特定の場合において、及び他の場合において別々に組み合わされたらしいことを意味すると理解すべきである。「及び／又は」によって具体的に同定される要素に加えて、具体的に同定された要素に関連するか無関係かにかかわらず、それと反対に明確に指定されていない限り、他の要素が任意に存在し得る。

【0239】

本出願に記載又は参照されるすべての参考文献、特許及び特許出願及び出版物は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【配列表】

2024543496000001.xml

【手続補正書】

【提出日】2024-09-04

【手続補正1】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０００８

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0008】

一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、式（Ａ）：５’－Ｚ_１ＡＧＣＵＵＧＵＵＵＧＵＧＡＡＡＣＺ_２－３’（配列番号６５６）と０、１、２、又は３ヌクレオチドが異なるセンス鎖を含み、式中、Ｚ１は、０～１５個のヌクレオチドモチーフを含むヌクレオチド配列であり、且つＺ_２は、Ａ、Ｕ、Ｃ、Ｇの１つから選択されるか、又は存在しない。特定の実施形態において、Ｚ_１は、１～４個のヌクレオチドモチーフを含むヌクレオチド配列である。特定の実施形態において、Ｚ_１は、１、２、３、又は４個のヌクレオチドモチーフを含むヌクレオチド配列である。特定の実施形態において、Ｚ_２はＡである。特定の実施形態において、Ｚ_１は、ＣＡＣＣ又はＧＡＣＣモチーフを含むヌクレオチド配列である。特定の実施形態において、Ｚ_１ヌクレオチド配列は、以下のモチーフ：Ｃ、ＡＣ、ＵＣ、ＧＣ、ＣＣ、ＡＣＣ、ＵＣＣ、ＧＣＣ、ＣＣＣ、ＧＡＣＣ、ＡＡＣＣ、ＵＡＣＣ、ＣＡＣＣ、ＣＧＡＣＣ、ＣＣＧＡＣＣ、ＡＣＣＧＡＣＣ、ＡＡＣＣＧＡＣＣ、ＣＡＡＣＣＧＡＣＣ、ＣＣＡＡＣＣＧＡＣＣ（配列番号６５７）、ＵＣＣＡＡＣＣＧＡＣＣ（配列番号６５８）、ＵＵＣＣＡＡＣＣＧＡＣＣ（配列番号６５９）、ＡＵＵＣＣＡＡＣＣＧＡＣＣ（配列番号６６０）、ＡＡＵＵＣＣＡＡＣＣＧＡＣＣ（配列番号６６１）又はＧＡＡＵＵＣＣＡＡＣＣＧＡＣＣ（配列番号６６２）のうちの１つから選択される。一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、式（Ｂ）：５’－Ｚ_３ＧＵＵＵＣＡＣＡＡＡＣＡＡＧＣＵＺ_４－３’（配列番号６６３）と、０、１、２、又は３ヌクレオチドが異なるアンチセンス鎖を含み、上記式中、Ｚ_３は、Ａ、Ｕ、Ｃ、Ｇのうちの１つから選択されるか、又は存在せず、且つＺ_４は、０～１５個のヌクレオチドモチーフを含むヌクレオチド配列である。特定の実施形態において、Ｚ_４は、１～４個のヌクレオチドモチーフを含むヌクレオチド配列である。特定の実施形態において、Ｚ_４は、１、２、３、又は４個のヌクレオチドモチーフを含むヌクレオチド配列である。特定の実施形態において、Ｚ_３はＵである。特定の実施形態において、Ｚ_４ヌクレオチド配列は、ＧＧＵＣ又はＧＧＵＧモチーフを含むヌクレオチド配列から選択される。特定の実施形態において、Ｚ_４ヌクレオチド配列は、以下のモチーフ：Ｇ、ＧＵ、ＧＣ、ＧＡ、ＧＧ、ＧＧＵ、ＧＧＡ、ＧＧＣ、ＧＧＧ、ＧＧＵＧ、ＧＧＵＣ、ＧＧＵＵ、ＧＧＵＡ、ＧＧＵＣＧ、ＧＧＵＣＧＧ、ＧＧＵＣＧＧＵ、ＧＧＵＣＧＧＵＵ、ＧＧＵＣＧＧＵＵＧ、ＧＧＵＣＧＧＵＵＧＧ（配列番号６６４）、ＧＧＵＣＧＧＵＵＧＧＡ（配列番号６６５）、ＧＧＵＣＧＧＵＵＧＧＡＡ（配列番号６６６）、ＧＧＵＣＧＧＵＵＧＧＡＡＵ（配列番号６６７）、ＧＧＵＣＧＧＵＵＧＧＡＡＵＵ（配列番号６６８）又はＧＧＵＣＧＧＵＵＧＧＡＡＵＵＣ（配列番号６６９）のうちの１つから選択される。一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤はセンス鎖及びアンチセンス鎖を含み、そのセンス鎖及びアンチセンス鎖はそれぞれ、本明細書に記載の式（Ａ）及び式（Ｂ）と、０、１、２、又は３ヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列を含み、任意に標的化リガンドを含む。特定の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤のセンス鎖（Ａ）及びアンチセンス鎖（Ｂ）はそれぞれ、３５個以下のヌクレオチドの長さである。特定の実施形態において、Ｚ_１及びＺ_４ヌクレオチドモチーフは完全に、又は部分的に相補的である。一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤は、式（Ａ’）：５’－Ｚ_１’ＣＡＧＣＵＵＧＵＵＵＧＵＧＡＡＡＣＡ－３’（配列番号６７０）と０、１、２、又は３ヌクレオチドが異なるセンス鎖を含み、且つ式（Ｂ’）：５’－ＵＧＵＵＵＣＡＣＡＡＡＣＡＡＧＣＵＧＺ_４’－３’（配列番号６７１）と０、１、２又は３ヌクレオチドが異なるアンチセンス鎖を含み、式中、Ｚ_１’及びＺ_４’はそれぞれ独立して、ヌクレオチドモチーフ０～１３ヌクレオチド配列を含む。特定の実施形態において、Ｚ_１’及びＺ_４’はそれぞれ独立して、ヌクレオチドモチーフ１、２、又は３ヌクレオチド配列を含む。特定の実施形態において、Ｚ_１’ヌクレオチド配列は、以下のモチーフ：Ａ、Ｕ、Ｇ、Ｃ、ＡＣ、ＵＣ、ＧＣ、ＣＣ、ＧＡＣ、ＡＡＣ、ＵＡＣ、ＣＡＣ、ＣＧＡＣ、ＣＣＧＡＣ、ＡＣＣＧＡＣ、ＡＡＣＣＧＡＣ、ＣＡＡＣＣＧＡＣ又はＧＡＡＵＵＣＣＡＡＣＣＧＡＣ（配列番号６７２）のうちの１つから選択される。Ｚ_４’ヌクレオチド配列は、以下のモチーフ：Ｕ、Ｃ、Ａ、Ｇ、ＧＵ、ＧＡ、ＧＣ、ＧＧ、ＧＵＧ、ＧＵＣ、ＧＵＵ、ＧＵＡ、ＧＵＣＧ、ＧＵＣＧＧ、ＧＵＣＧＧＵ、ＧＵＣＧＧＵＵ、ＧＵＣＧＧＵＵＧ又はＧＵＣＧＧＵＵＧＧＡＡＵＵＣ（配列番号６７３）のうちの１つから選択される。

【手続補正2】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００１３

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0013】

一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤はセンス鎖及びアンチセンス鎖を含み、そのそれぞれが以下に示すヌクレオチド配列：
センス鎖：５’－ＣＡＣＣＡＧＣＵＵＧＵＵＵＧＵＧＡＡＡＣＡ－３’（配列番号：５２２）
アンチセンス鎖：５’－ＵＧＵＵＵＣＡＣＡＡＣＡＡＧＣＵＧＧＵＧ－３’（番号：５２３）；
のうちの１つと、０、１、２、又は３ヌクレオチドが異なる、少なくとも１５個の隣接ヌクレオチドを含む。
一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ剤はセンス鎖及びアンチセンス鎖を含み、そのそれぞれが以下に示すヌクレオチド配列：
センス鎖：５’－ＧＣＡＡＡＡＡＧＡＡＵＵＣＣＡＡＣＣＧＡＡ－３’（配列番号８７）、
アンチセンス鎖：５’－ＵＵＣＧＧＵＵＧＧＡＡＵＵＣＵＵＵＵＵＧＣ－３’（配列番号１８４）
のうちの１つと、０、１、２、又は３ヌクレオチドが異なる、少なくとも１５個の隣接ヌクレオチドを含む。

【手続補正3】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】配列表

【補正方法】変更

【補正の内容】

【配列表】

2024543496000001.xml

【手続補正4】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】請求項７３

【補正方法】変更

【補正の内容】

【請求項73】

式（Ａ）：５’－Ｚ_１ＡＧＣＵＵＧＵＵＵＧＵＧＡＡＡＣＺ_２－３’（配列番号６５６）と０、１、２、又は３ヌクレオチドが異なるセンス鎖を含み、式中、Ｚ_１が、０～１５ヌクレオチドモチーフを含むヌクレオチド配列であり、且つＺ_２が、Ａ、Ｕ、Ｃ、Ｇの１つから選択されるか、又は存在しない、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。

【手続補正5】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】請求項７４

【補正方法】変更

【補正の内容】

【請求項74】

式（Ｂ）：５’－Ｚ_３ＧＵＵＵＣＡＣＡＡＡＣＡＡＧＣＵＺ_４－３’（配列番号６６３）と、０、１、２、又は３ヌクレオチドが異なるアンチセンス鎖を含み、式中、Ｚ_３が、Ａ、Ｕ、Ｃ、Ｇの１つから選択されるか、又は存在せず、且つＺ_４が、０～１５ヌクレオチドモチーフを含むヌクレオチド配列である、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ剤。

【国際調査報告】