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特表2024-543668自然免疫活性化薬物およびその用途

書誌要約請求の範囲詳細な説明課題実施例実施するための形態図面の説明

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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-11-21

(54)【発明の名称】自然免疫活性化薬物およびその用途

(51)【国際特許分類】

A61K 31/473 20060101AFI20241114BHJP

A61P 37/04 20060101ALI20241114BHJP

A61K 45/00 20060101ALI20241114BHJP

A61K 39/39 20060101ALI20241114BHJP

A61P 31/12 20060101ALI20241114BHJP

A61P 35/00 20060101ALI20241114BHJP

【ＦＩ】

A61K31/473

A61P37/04

A61K45/00

A61K39/39

A61P31/12

A61P35/00

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024535186

(86)(22)【出願日】2022-12-02

(85)【翻訳文提出日】2024-06-11

(86)【国際出願番号】 CN2022136399

(87)【国際公開番号】W WO2023116397

(87)【国際公開日】2023-06-29

(31)【優先権主張番号】202111605896.2

(32)【優先日】2021-12-25

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】524221477

【氏名又は名称】珞達生物医薬（蘇州）有限公司

【氏名又は名称原語表記】ＬＵＯＤＡＢＩＯＰＨＡＲＭＡ（ＳＵＺＨＯＵ）ＣＯ．，ＬＴＤ．

【住所又は居所原語表記】Ｒ２０２８（ＣｌｕｓｔｅｒＲｅｇｉｓｔｒａｔｉｏｎ），Ｕｎｉｔ２０１，ＦｌｏｏｒＢ６，ＰｈａｓｅＩＰｒｏｊｅｃｔ，ＢｉｏｍｅｄｉｃａｌＩｎｄｕｓｔｒｉａｌＰａｒｋ，Ｎｏ．２１８ＸｉｎｇｈｕＳｔｒｅｅｔ，ＳｕｚｈｏｕＩｎｄｕｓｔｒｉａｌＰａｒｋ，ＦｒｅｅＴｒａｄｅＺｏｎｅ（Ｓｕｚｈｏｕ）Ｓｕｙｈｏｕ，Ｓｕｚｈｏｕ，Ｊｉａｎｇｓｕ２１５１２５，Ｃｈｉｎａ

(74)【代理人】

【識別番号】110002262

【氏名又は名称】ＴＲＹ国際弁理士法人

(72)【発明者】

【氏名】侯法建

【テーマコード（参考）】

4C084

4C085

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C084AA19

4C084MA02

4C084NA05

4C084NA14

4C084ZB09

4C084ZB26

4C084ZB33

4C085AA38

4C085FF12

4C085FF17

4C086AA01

4C086AA02

4C086BC28

4C086CB02

4C086GA02

4C086GA07

4C086MA01

4C086MA02

4C086MA04

4C086NA05

4C086NA14

4C086ZB09

4C086ZB26

4C086ZB33

(57)【要約】

本発明は自然免疫活性化薬物を開示し、当該薬物は、広域スペクトルの抗ウイルス活性、免疫アジュバント活性、免疫療法促進および抗腫瘍活性を有する。具体的には、自然免疫活性化薬物の調製における、式Ｉの化合物またはその互変異性体、メソ体、ラセミ化合物、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはその混合物形態、またはその薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグの用途を開示する。前記化合物は、自然免疫を活性化し、Ｉ型インターフェロンの産生を誘導し、ウイルス感染を有意に阻害し、免疫機能および抗腫瘍を促進することができる。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

自然免疫活性化薬物を調製するための、式Ｉの化合物またはその互変異性体、メソ体、ラセミ化合物、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはその混合物形態、またはその薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグの用途であって、

ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、アルキル基、シクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基、ヘテロシクリル基、アルケニル基、アルキニル基、アミノ基、ヒドロキシ基、メルカプト基、カルボキシ基、アルコキシ基、シクロアルコキシ基、ハロゲン化アルキル基、シアノ基、スルファニル基、スルホニル基、スルホン基、スルホキシド基、リン酸基から選択され、前記アルキル基、シクロアルキル基、アルコキシ基、シクロアルコキシ基、アミノ基、ヘテロシクリル基、アリール基またはヘテロアリール基は、一つまたは複数の置換基によって置換されていてもよく、前記置換基は、ヒドロキシ基、ハロゲン、アルキル基、アルコキシ基、シクロアルキル基、シクロアルコキシ基、ヘテロシクリル基、アリール基、ハロゲン化アリール基、ハロゲン化アルキル基、ヘテロアリール基、アルケニル基、アルキニル基、アミノ基、メルカプト基、カルボキシ基、エステル基、アルコキシカルボニル基、アシルオキシ基、アシルアミノ基、カルバミド基、アルキルスルホニル基、芳香族スルホニル基、シアノ基、ニトロ基、ニトロソ基、チオシアナト基、イソチオシアナト基、スルファニル基、スルホニル基、リン酸基、ホスホン酸基、アルキルリン酸基、アルキルホスホン酸基、アリールリン酸基、アリールホスホン酸基のうちの一つまたは複数の置換基から選択されるか、またはヌルであり、前記ヘテロシクリル基は、少なくとも一つのＮ原子を含むか、またはＮ、ＳおよびＯから任意に選択される１個もしくは２個もしくは３個のヘテロ原子を含むことを特徴とする、前記用途。

【請求項2】

前記式Ｉの化合物は、以下の化合物を含むことを特徴とする
請求項１に記載の用途。

【請求項3】

前記式Ｉの化合物の薬学的に許容される塩は、以下の塩を含むことを特徴とする
請求項１または２に記載の用途。

【請求項4】

前記自然免疫活性化薬物は、
（ａ）広域スペクトルの抗ウイルス薬物と、
（ｂ）抗腫瘍薬物と、
（ｃ）癌を予防および／または治療するための薬物と、
（ｄ）Ｉ型インターフェロン関連疾患を治療または予防するための薬物と、
（ｅ）免疫アジュバントと、
および／または（ｆ）サイトカイン誘導剤とを含むことを特徴とする
請求項１に記載の用途。

【請求項5】

前記免疫アジュバントは、抗体、ワクチン、免疫療法薬および／または免疫活性化剤を調製するために使用されることを特徴とする
請求項４に記載の用途。

【請求項6】

広域スペクトルの抗ウイルス医薬組成物であって、
前記医薬組成物は、請求項１または２に記載の式Ｉの化合物またはその互変異性体、メソ体、ラセミ化合物、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはその混合物形態、またはその薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグ、ならびに一種または複数種の薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤を含むことを特徴とする、前記広域スペクトルの抗ウイルス医薬組成物。

【請求項7】

免疫組成物であって、
前記免疫組成物は、請求項１または２に記載の式Ｉの化合物またはその互変異性体、メソ体、ラセミ化合物、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはその混合物形態、またはその薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグ、ならびに抗原を含むことを特徴とする、前記免疫組成物。

【請求項8】

抗腫瘍医薬組成物であって、
前記医薬組成物は、請求項１または２に記載の式Ｉの化合物またはその互変異性体、メソ体、ラセミ化合物、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはその混合物形態、またはその薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグ、ならびに一種または複数種の薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤を含むことを特徴とする、前記抗腫瘍医薬組成物。

【請求項9】

組成物であって、
前記組成物は、
（ａ）式Ｉで表される化合物、またはその互変異性体、メソ体、ラセミ化合物、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはその混合物形態、またはその薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグである第１有効成分；および
（ｂ）免疫療法活性化剤、Ｉ型インターフェロン調節剤、または抗ウイルス剤を含む治療有効量の第２有効成分とを含むことを特徴とする、前記組成物。

【請求項10】

キットであって、
前記キットは、
（Ａ）式Ｉで表される化合物、またはその互変異性体、メソ体、ラセミ化合物、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはその混合物形態、またはその薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグである第１有効成分を含む第１製剤；および
（Ｂ）免疫療法活性化剤、Ｉ型インターフェロン調節剤、または抗ウイルス剤を含む第２有効成分を含む第２製剤とを含むことを特徴とする、前記キット。

【請求項11】

自然免疫活性化薬物を調製するために使用され、前記薬物は、
（ａ）広域スペクトルの抗ウイルス薬物と、
（ｂ）抗腫瘍薬物と、
（ｃ）癌を予防および／または治療するための薬物と、
（ｄ）Ｉ型インターフェロン関連疾患を治療または予防するための薬物と、
（ｅ）免疫アジュバントと、
および／または（ｆ）サイトカイン誘導剤とを含むことを特徴とする
請求項９に記載の組成物または請求項１０に記載のキットの用途。

【請求項12】

式Ｉの化合物、またはその互変異性体、メソ体、ラセミ化合物、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはその混合物形態、またはその薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグであって、

【請求項13】

前記式Ｉの化合物は、以下の化合物を含むことを特徴とする。

【請求項14】

前記式Ｉの化合物の薬学的に許容される塩は、以下の塩を含むことを特徴とする
請求項１２に記載の化合物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、医学の分野に関し、具体的には、本発明は、広域スペクトルの抗ウイルス活性を有し、免疫療法、抗腫瘍および免疫アジュバントのための自然免疫活性化薬物およびその用途に関する。

【背景技術】

【0002】

ウイルス感染は、様々な疾患を引き起こす可能性があり、自然免疫は、病原微生物に対する宿主の免疫系の最初の自然防御である。抗ウイルスの自然免疫応答は、宿主細胞にインターフェロンを産生することによりウイルスの増殖および増幅を阻害し、ウイルスは、進化過程で自然免疫応答から逃れる。従って、自然免疫応答を誘導することによるインターフェロンの産生は、抗ウイルス治療の新しいアイデアを提供する。

【0003】

現在、組換え発現されたインターフェロンは、ウイルス性感染、炎症、免疫機能不全等の治療に広範囲に応用されているが、これらは、タンパク質ポリペプチドであり、翻訳後修飾がなく、構造が不安定であり、経口摂取できず、保存条件の要件が高い。注射でしか投与できず、投与方法が、単一である。さらに、その半減期は、短く、且つ高濃度では、重篤な毒性副作用を引き起こす可能性がある。大腸菌で組換え発現されたインターフェロンの顕著な欠点は、グリコシル化修飾が欠如しており、活力が制限されることであり、真核系を使用してグリコシル化を含むインターフェロンを発現および精製するコストが高く、創薬の価格も高価である。

【0004】

要約すると、当技術分野では、インターフェロン産生を誘導する能力を有する新薬の開発が緊急に必要とされている。

【0005】

さらに、体の免疫系は、免疫監視機能を発揮して腫瘍と戦うことができ、一方、免疫系は、免疫メカニズムを通じて悪性細胞を識別し且つ特異的に排除して、腫瘍の発生および進行に抵抗することができ、もう一方、悪性細胞は、様々なメカニズムを通じて体の免疫監視を回避し、体内で迅速に増殖して腫瘍を形成する可能性がある。腫瘍の発生および転帰は、これら二つの側面の作用結果に依存する。抗体は、腫瘍治療薬として、その強い特性により、より優れた治療効果を有する。さらに、動物に抗体が産生される過程において、抗原に対する体の免疫応答が遅く貧弱である等の要因により、抗体の産生は、少なく、そのためその用途が制限され、免疫アジュバントの作用が必要になる。アジュバントと略される免疫アジュバントは、抗原の前または抗原と同時に体内に注入される補助物質を指し、抗原に対する体の免疫応答を増強するか、または免疫応答の種類を変更することができる。アジュバントの免疫生物学的効果は、体内での抗原の保持時間の延長、抗原のプロセシングおよび提示の増強、免疫応答の増強および強化等を含む。免疫アジュバントは、免疫応答を増強する効果があるため、広範囲に応用される。免疫アジュバントは、特定の動物に対して、軽度の副作用があることと、アジュバント効果が長期間持続し、且つ安定することと、生産コストが可能な限り低く抑えることと、産生される免疫応答が適切なものでなければならず、できれば体内の細胞性免疫または体液性免疫を誘導でき、その強度が保護要件を満たすことができること、の特性を有する必要がある。従って、体の免疫レベル、サイトカイン分泌および免疫記憶を向上させることができる、高効率且つ低毒性の新規免疫アジュバントの開発は、現在注目されている研究分野の一つである。

【0006】

従って、当技術分野では、腫瘍免疫療法を促進し、免疫アジュバントとして機能する薬物を開発する必要がある。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0007】

本発明は、人体の自然免疫を効果的に向上させることができる新薬が不足しているという技術的課題を解決し、ウイルス感染と戦うインターフェロンの産生を誘導するだけでなく、腫瘍免疫療法を促進し、免疫アジュバントとしても使用することもできる自然免疫活性化薬物を提供することを目的とする。

【課題を解決するための手段】

【0008】

本発明の一態様は、自然免疫活性化薬物を調製するための、式Ｉの化合物またはその互変異性体、メソ体、ラセミ化合物、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはその混合物形態、またはその薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグの用途を提供する。

【0009】

ここで、前記「置換」とは、環上または基上の一つまたは複数（好ましくは、１、２、３、４、５、６、７または８個である）の水素原子が、ヒドロキシ基、ハロゲン、アルキル基、アルコキシ基、シクロアルキル基、シクロアルコキシ基、ヘテロシクリル基、アリール基、ハロゲン化アリール基、ハロゲン化アルキル基、ヘテロアリール基、アルケニル基、アルキニル基、アミノ基、メルカプト基、カルボキシ基、エステル基、アルコキシカルボニル基、アシルオキシ基、アシルアミノ基、カルバミド基、アルキルスルホニル基、芳香族スルホニル基、シアノ基、ニトロ基、ニトロソ基、チオシアナト基、イソチオシアナト基、スルファニル基、スルホニル基、リン酸基、ホスホン酸基、アルキルリン酸基、アルキルホスホン酸基、アリールリン酸基、アリールホスホン酸基からなる群から選択される置換基によって置換されることを指す。

【0010】

前記ヘテロアリール基は、複素環上に、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１～４個（好ましくは、１、２、３個または４個である）のヘテロ原子を有する。

【0011】

別の好ましい例では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ７、Ｒ１０は、それぞれ独立して、水素、置換または非置換のＣ１－Ｃ１０アルキル基、置換または非置換のＣ３－Ｃ１２シクロアルキル基である。

【0012】

別の好ましい例では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ７、Ｒ１０は、それぞれ独立して、水素、置換または非置換のＣ１－Ｃ８アルキル基、置換または非置換のＣ３－Ｃ８シクロアルキル基である。

【0013】

別の好ましい例では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ７、Ｒ１０は、それぞれ独立して、水素、置換または非置換のＣ１－Ｃ６アルキル基、置換または非置換のＣ３－Ｃ８シクロアルキル基である。

【0014】

別の好ましい例では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ７、Ｒ１０は、それぞれ独立して、水素、置換または非置換のＣ１－Ｃ４アルキル基、置換または非置換のＣ３－Ｃ８シクロアルキル基である。

【0015】

別の好ましい例では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ７、Ｒ１０は、それぞれ独立して、水素、メチル基、エチル基、プロピル基またはブチル基である。

【0016】

別の好ましい例では、Ｒ３、Ｒ４は、それぞれ独立して、水素、置換または非置換のＣ１－Ｃ８アルコキシ基、置換または非置換のＣ１－Ｃ８アルキルチオ基である。

【0017】

別の好ましい例では、Ｒ３、Ｒ４は、それぞれ独立して、水素、置換または非置換のＣ１－Ｃ６アルコキシ基、置換または非置換のＣ１－Ｃ６アルキルチオ基である。

【0018】

別の好ましい例では、Ｒ３、Ｒ４は、それぞれ独立して、水素、置換または非置換のＣ１－Ｃ４アルコキシ基、置換または非置換のＣ１－Ｃ４アルキルチオ基である。

【0019】

別の好ましい例では、Ｒ３、Ｒ４は、それぞれ独立して、水素、置換または非置換のＣ１－Ｃ２アルコキシ基、置換または非置換のＣ１－Ｃ２アルキルチオ基である。

【0020】

別の好ましい例では、Ｒ６は、置換または非置換のアミノ基、置換または非置換のヘテロシクリル基、ヘテロシクリル基アルキル基またはアルキル基ヘテロシクリル基である。

【0021】

別の好ましい例では、Ｒ８は、ハロゲン化アルキル基である。

【0022】

別の好ましい例では、Ｒ９は、水素、ハロゲン、アミノ基である。

【0023】

別の好ましい例では、前記式Ｉの化合物は、以下の化合物を含む。

【0024】

好ましくは、前記式Ｉの化合物の薬学的に許容される塩は、以下の塩を含む。

【0025】

好ましくは、前記自然免疫活性化薬物は、
（ａ）広域スペクトルの抗ウイルス薬物と、
（ｂ）抗腫瘍薬物と、
（ｃ）癌を予防および／または治療するための薬物と、
（ｄ）Ｉ型インターフェロン関連疾患を治療または予防するための薬物と、
（ｅ）免疫アジュバントと、
および／または（ｆ）サイトカイン誘導剤とを含む。
別の好ましい例では、前記サイトカインは、インターフェロン、腫瘍壊死因子、インターロイキン、またはその組み合わせからなる群から選択される。

【0026】

別の好ましい例では、前記インターフェロンは、Ｉ型インターフェロン、ＩＩ型インターフェロン、ＩＩＩ型インターフェロン、またはその組み合わせからなる群から選択される。

【0027】

別の好ましい例では、前記インターフェロンは、ＩＦＮβ（インターフェロン－β）、ＩＦＮλ（インターフェロン－λ）、ＴＮＦα（腫瘍壊死因子－α）、またはその組み合わせからなる群から選択される。

【0028】

別の好ましい例では、前記インターロイキンは、ＩＬ６（インターロイキン－６）、ＩＬ１α（インターロイキン－１α）、またはその組み合わせからなる群から選択される。

【0029】

別の好ましい例では、前記サイトカインは、血液、血清または血漿中のサイトカインを含む。

【0030】

別の好ましい例では、前記サイトカインの誘導剤は、サイトカインのレベルまたは含有量を増加させる。

【0031】

別の好ましい例では、前記血は、末梢血を含む。

【0032】

別の好ましい例では、前記誘導剤は、
（Ｉ）サイトカインの発現の誘導と、および／または
（Ｉ）サイトカイン含有量の増加の誘導とを含む。

【0033】

別の好ましい例では、前記誘導剤は、末梢血中のサイトカインの増加の誘導を含む。

【0034】

別の好ましい例では、前記アジュバントは、抗体アジュバントを含む。

【0035】

別の好ましい例では、前記免疫アジュバントは、抗体の免疫力価を増強するために使用される。

【0036】

別の好ましい例では、前記免疫アジュバントは、抗体の産生を促進するために、または抗体生成促進剤として使用される。

【0037】

別の好ましい例では、前記抗体は、血清抗体を含む。

【0038】

別の好ましい例では、前記抗体が向けられる抗原は、タンパク質抗原を含む。

【0039】

別の好ましい例では、前記タンパク質抗原は、アルブミン抗原を含む。

【0040】

別の好ましい例では、前記アルブミン抗原は、オボアルブミン抗原を含む。

【0041】

別の好ましい例では、前記免疫アジュバントは、抗体、ワクチン、免疫療法薬および／または免疫活性化剤を調製するために使用される。

【0042】

別の好ましい例では、前記抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、またはその組み合わせからなる群から選択される。

【0043】

別の好ましい例では、前記ＩｇＧは、ＩｇＧ１を含む。

【0044】

別の好ましい例では、前記ワクチンは、腫瘍ワクチンを含む。

【0045】

別の好ましい例では、前記Ｉ型インターフェロン関連疾患とは、体内のＩ型インターフェロンのレベルを増加させることによって改善、治療または予防される疾患を指す。

【0046】

別の好ましい例では、前記Ｉ型インターフェロン（ＩＦＮ）関連疾患は、ウイルス感染、および多発性硬化症および／または慢性骨髄性白血病を含む。

【0047】

別の好ましい例では、前記ウイルスは、ＤＮＡウイルスおよびＲＮＡウイルスを含む。

【0048】

別の好ましい例では、前記ＤＮＡウイルスは、ＨＳＶ（単純ヘルペスウイルス）、ＨＢＶ（Ｂ型肝炎ウイルス）、ＨＡＶ（Ａ型肝炎ウイルス）、ＨＰＶ（ヒトパピローマウイルス）および／またはＥＢＶ（ＥＢウイルス）を含む。

【0049】

別の好ましい例では、前記ＲＮＡウイルスは、ＶＳＶ（水疱性口内炎ウイルス）、ＨＣＶ（Ｃ型肝炎ウイルス）、ＥＭＣＶ（脳心筋炎ウイルス）、Ｅｂｏｌａ（エボラウイルス）、ＨＩＶ（エイズウイルス）および／またはジカウイルス（Ｚｉｋａｖｉｒｕｓ）を含む。

【0050】

本発明別の態様は、対象にＩ型インターフェロンの産生を誘導する方法をさらに提供し、前記方法は、対象を式Ｉの化合物と接触させ、それによって前記対象におけるＩ型インターフェロンの産生を誘導するステップを含む。

【0051】

別の好ましい例では、前記対象は、細胞である。

【0052】

別の好ましい例では、前記細胞は、Ｖｅｒｏ細胞、ＴＨＰ－１細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞、および／またはＡ５４９細胞を含む。

【0053】

別の好ましい例では、前記方法は、インビトロで非治療的である。

【0054】

別の好ましい例では、前記方法は、式Ｉの化合物を含む系で前記対象をインキュベートし、それによって前記対象におけるインターフェロンの産生を誘導するステップを含む。

【0055】

別の好ましい例では、前記式Ｉの化合物を含む系では、式Ｉの化合物の濃度は、≧１μＭ、好ましくは、≧３μＭである。

【0056】

別の好ましい例では、インキュベート時間は、１０分間～４８時間である。

【0057】

別の好ましい例では、前記Ｉ型インターフェロンは、ＩＦＮβを含む。

【0058】

本発明の別の態様は、ウイルス感染を阻害する方法をさらに提供し、ここで、
対象を式Ｉの化合物と接触させ、それによって前記対象に対するウイルスの感染を阻害するステップを含む。

【0059】

別の好ましい例では、前記対象は、細胞である。

【0060】

【0061】

別の好ましい例では、前記ウイルスは、ＤＮＡウイルスおよびＲＮＡウイルスを含む。

【0062】

別の好ましい例では、前記ＤＮＡウイルスは、ＨＳＶ（単純ヘルペスウイルス）、ＨＢＶ（Ｂ型肝炎ウイルス）、ＨＡＶ（Ａ型肝炎ウイルス）、ＨＰＶ（ヒトパピローマウイルス）および／またはＥＢＶ（ＥＢウイルス）等を含む。

【0063】

別の好ましい例では、前記ＲＮＡウイルスは、ＶＳＶ（水疱性口内炎ウイルス）、ＨＣＶ（Ｃ型肝炎ウイルス）、ＥＭＣＶ（脳心筋炎ウイルス）、Ｅｂｏｌａ（エボラウイルス）、ＨＩＶ（エイズウイルス）および／またはＺｉｋａｖｉｒｕｓ（ジカウイルス）等を含む。

【0064】

別の好ましい例では、前記方法は、インビトロで非治療的である。

【0065】

【0066】

本発明の別の態様は、体内のＩ型インターフェロンのレベルを増加させる方法をさらに提供し、前記方法は、必要とする対象に式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与するステップを含む。

【0067】

別の好ましい例では、前記対象は、哺乳動物であり、好ましくは、ヒト、マウス、およびラットからなる群から選択される。

【0068】

本発明の別の態様は、広域スペクトルの抗ウイルス医薬組成物をさらに提供し、前記医薬組成物は、式Ｉの化合物またはその互変異性体、メソ体、ラセミ化合物、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはその混合物形態、またはその薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグ、ならびに一種または複数種の薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤を含む。

【0069】

本発明の別の態様は、免疫組成物をさらに提供し、前記免疫組成物は、式Ｉの化合物またはその互変異性体、メソ体、ラセミ化合物、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはその混合物形態、またはその薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグ、ならびに抗原を含む。

【0070】

別の好ましい例では、前記抗原は、タンパク質抗原を含む。

【0071】

別の好ましい例では、前記タンパク質抗原は、アルブミン抗原を含む。

【0072】

別の好ましい例では、前記アルブミン抗原は、オボアルブミン抗原を含む。

【0073】

本発明の別の態様は、抗腫瘍医薬組成物を提供し、前記医薬組成物は、式Ｉの化合物またはその互変異性体、メソ体、ラセミ化合物、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはその混合物形態、またはその薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグ、ならびに一種または複数種の薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤を含む。

【0074】

本発明の別の態様は、組成物をさらに提供し、前記組成物は、
（ａ）式Ｉで表される化合物、またはその互変異性体、メソ体、ラセミ化合物、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはその混合物形態、またはその薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグである第１有効成分；および
（ｂ）免疫療法活性化剤、Ｉ型インターフェロン調節剤、または抗ウイルス剤を含む治療有効量の第２有効成分とを含む。

【0075】

本発明の別の態様は、キットをさらに提供し、前記キットは、
（Ａ）式Ｉで表される化合物、またはその互変異性体、メソ体、ラセミ化合物、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはその混合物形態、またはその薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグである第１有効成分を含む第１製剤；および
（Ｂ）免疫療法活性化剤、Ｉ型インターフェロン調節剤、または抗ウイルス剤を含む第２有効成分を含む第２製剤とを含む。

【0076】

別の好ましい例では、前記免疫療法活性化剤は、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１抗体を含み、本発明式Ｉで表される化合物およびＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１抗体の併用は、相乗効果を発揮し、腫瘍増殖に対する阻害効果を顕著に増大し、生存期間を大幅に改善することができる。

【0077】

本発明の別の態様は、自然免疫活性化薬物を調製するための上記組成物または上記キットの用途をさらに提供し、前記薬物は、
（ａ）広域スペクトルの抗ウイルス薬物と、
（ｂ）抗腫瘍薬物と、
（ｃ）癌を予防および／または治療するための薬物と、
（ｄ）Ｉ型インターフェロン関連疾患を治療または予防するための薬物と、
（ｅ）免疫アジュバントと、
および／または（ｆ）サイトカイン誘導剤とを含む。

【発明の効果】

【0078】

本発明の自然免疫活性化薬物の主な利点は、次のとおりである。
（ａ）本発明は、式Ｉの化合物がインターフェロン（例えば、ＩＦＮβ）の発現を誘導する強力な能力を示すことを見出した。
（ｂ）本発明は、式Ｉの化合物がウイルス感染を阻害する優れた能力および抗ウイルス活性を有することを見出した。
（ｃ）本発明は、式Ｉの化合物が効率的かつ安全にサイトカインの産生を誘導し、それによって腫瘍等のサイトカイン関連疾患の治療に使用できることを見出した。
（ｄ）本発明は、式Ｉの化合物が免疫アジュバントとして使用可能であり、抗体の免疫力価を顕著に上昇させ、抗体の産生を促進し、それによって抗体、ワクチン、免疫療法薬および免疫活性化剤の調製に使用し、抗体の応用価値を高めることができることを見出した。
（ｅ）本発明に記載の化合物は、薬効が高く、創薬可能性が高く、副作用が少ない。

【0079】

本発明の範囲内で、本発明の上記の各技術的特徴と以下に具体的に説明される各技術的特徴（例えば、実施例）とを互いに組み合わせることにより、新しいまたは好ましい技術的解決策を構成することができることを理解されたい。スペースに限りがあるため、ここでは繰り返さない。

【図面の簡単な説明】

【0080】

以下、添付の図面および具体的な実施形態と併せて、本発明をさらに詳細に説明する。

【図1】本発明の実施例１において、それぞれ最終濃度１０μＭの化合物ＬＤ００１～ＬＤ００４で１２時間処理した後のＨＥＫ２９３Ｔ細胞におけるＩ型インターフェロンおよびインターロイキン－６の転写活性化の結果を示す図である。

【図2】本発明の実施例１において、それぞれ最終濃度１０μＭの化合物ＬＤ００１～ＬＤ００４で１２時間処理した後のＨｅＬａ細胞におけるＩ型インターフェロンおよびインターロイキン－６の転写活性化の結果を示す図である。

【図3】本発明の実施例１において、それぞれ最終濃度１０μＭの化合物ＬＤ００１～ＬＤ００４で１２時間処理した後のＡ５４９細胞におけるＩ型インターフェロンおよびインターロイキン－６の転写活性化の結果を示す図である。

【図4】本発明の実施例１において、それぞれ最終濃度１０μＭの化合物ＬＤ００５～ＬＤ０１１で１２時間処理した後のＨＥＫ２９３Ｔ細胞におけるＩ型インターフェロンおよびインターロイキン－６の転写活性化の結果を示す図である。

【図5】本発明の実施例１において、それぞれ最終濃度１０μＭの化合物ＬＤ００５～ＬＤ０１１で１２時間処理した後のＰＥＭ細胞におけるＩ型インターフェロンおよびインターロイキン－６の転写活性化の結果を示す図である。

【図6】本発明の実施例２において、ＶＳＶ－ＧＦＰに対するＬＤ００２の阻害曲線図である。

【図7】本発明の実施例２において、Ｈ１Ｎ１－ＩＡＶに対するＬＤ００２の阻害曲線図である。

【図8】本発明の実施例３において、ＨＳＶに対するＬＤ００２の阻害曲線図である。

【図9】本発明の実施例４において、マウス体内でインターフェロンの産生を誘導する化合物ＬＤ００２のＥＬＩＳＡ試験結果を示す図である。

【図10】本発明の実施例５において、黒色腫の増殖を阻害するために化合物ＬＤ００２を単独で投与した実験結果を示す図である。

【図11】本発明の実施例５において、化合物ＬＤ００２と別の免疫療法活性化剤抗－ＰＤ－Ｌ１とを併用投与して黒色腫の増殖を阻害した実験結果図である。

【図12】本発明の実施例６において、本発明の化合物が免疫アジュバント活性を有することをテストするためのＥＬＩＳＡ法の結果を示す図である。

【発明を実施するための形態】

【0081】

本発明者らは、広範囲かつ詳細な研究の結果、あるクラスの３員複素環式化合物が宿主の自然免疫を活性化し、様々な細胞がＩ型インターフェロンＩＦＮβ等のサイトカインを発現または産生するように誘導できることを見出した。さらに、このクラスの化合物は、ＲＮＡウイルス（例えば、ＶＳＶ）およびＤＮＡウイルス（例えば、ＨＳＶ）感染に対して広域スペクトルの阻害効果（用量依存性）を有する。それにより、細胞によるＩＦＮβの産生を誘導し、臨床治療において広域スペクトルの抗ウイルス効果が期待できる新薬が提供される。本発明に記載の式Ｉの化合物がサイトカインに対して優れた誘導効果を有し、腫瘍等の疾患の治療に使用されることを予想外に見出した。同時に、本発明に記載の式Ｉの化合物は、抗体の免疫力価を顕著に増加させ、抗体の産生を促進するための免疫アジュバントとしても使用され、それにより、抗体、ワクチン、免疫療法薬および免疫活性化剤の調製に使用し、抗体の応用価値を高めることができる。

【0082】

自然免疫
宿主の自然免疫は、病原微生物に対する免疫系の防御の最初の防御線である。自然界のウイルスは、様々な病気を引き起こす可能性がある病原体であり、ウイルスに対する宿主細胞の自然免疫応答は、インターフェロンの産生を誘導して、ウイルスの増殖および増幅を阻害する。抗ウイルス自然免疫応答は、シグナル伝達経路によって媒介される。これまでの研究では、自然免疫系がウイルスの侵入を識別し、ウイルス感染を効果的に除去するために免疫防御機能を迅速に起動する仕組みが明らかにされている。これは、生命科学および医学の分野における重要な研究であり、関連薬物の設計に理論的基礎を提供し、ウイルス感染症の予防治療に新たな希望をもたらす。病原微生物を検出した後、宿主細胞は、自然免疫シグナル伝達経路を通じてインターフェロン、炎症促進因子およびケモカインの産生を誘導するが、一方でこれらのエフェクターは、病原体の複製を阻害し、それにより、病原体の増殖を迅速に制御することができる。一方、これらのサイトカインは、適応性免疫系の抗原提示細胞およびＴ、Ｂリンパ球等の宿主の他の免疫細胞を動員して、適応免疫を活性化する。さらに、自然免疫応答の誘導および活性化には、抗腫瘍効果がさらにあり、放射線療法および化学療法の効果を高めることができる。

【0083】

自然免疫シグナル伝達経路は、宿主細胞のパターン識別受容体による病原微生物の関連分子パターンの識別から始まる。これまでに発見されたウイルス感染関連自然免疫シグナル伝達経路は、主に細胞質内のＲＮＡウイルスを識別するＲＬＲ－ＭＡＶＳシグナル伝達経路およびＤＮＡウイルスを識別するｃＧＡＳ－ＳＴＩＮＧシグナル伝達経路、ならびにＴＬＲｓシグナル伝達経路を含む。ＲＬＲｓおよびｃＧＡＳの両方のシグナル伝達経路が活性化された後、下流の伝達タンパク質を介してＴＢＫ１を動員し且つ活性化し、ＴＢＫ１は、転写因子ＩＲＦ３をリン酸化して核に入り、Ｉ型インターフェロンの産生を誘導し、最終的にウイルスを阻害する効果を達成する。長期的な進化の過程で、一部のウイルスは、自然免疫応答から逃れるメカニズムも獲得した。

【0084】

自然免疫が体の生命活動のあらゆる側面で重要な役割を果たしているため、自然免疫は、ワクチンの研究と調製、および薬物の開発において重要な指針となる。

【0085】

用語
有効成分
本明細書で使用する場合、「本発明の化合物」という用語は、式Ｉで表される化合物を指す。当該用語は、式Ｉの化合物の様々な結晶形、薬学的に許容される塩、異性体、水和物、溶媒和物またはプロドラッグをさらに含む。

【0086】

ここで、「薬用可能な塩」または「薬学的に許容される塩」という用語は、本発明の化合物と酸または塩基とで形成される薬物として使用するのに適した塩を指す。薬学的に許容される塩は、無機塩および有機塩を含む。塩の好ましいクラスは、本発明の化合物と酸とで形成された塩である。塩の形成に適合する酸は、塩酸、臭化水素酸、フッ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等の無機酸、ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、ピクリン酸、安息香酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸等の有機酸、ならびにプロリン、フェニルアラニン、アスパラギン酸、グルタミン酸等のアミノ酸を含むが、これらに限定されない。別の好ましい塩は、本発明の化合物と塩基とで形成される塩、例えば、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウム塩またはカリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えば、マグネシウム塩またはカルシウム塩）、アンモニウム塩（例えば、低級アルカノールアンモニウム塩および他の薬学的に許容されるアミン塩）、例えば、メチルアミン塩、エチルアミン塩、プロピルアミン塩、ジメチルアミン塩、トリメチルアミン塩、ジエチルアミン塩、トリエチルアミン塩、ｔ－ブチルアミン塩、エチレンジアミン塩、ヒドロキシエチルアミン塩、ジヒドロキシエチルアミン塩、トリヒドロキシエチルアミン塩、およびモルホリン、ピペラジン、リジンからそれぞれ形成されるアミン塩である。

【0087】

本発明に記載の式Ｉの化合物は、従来方法によりその薬学的に許容される塩に変換することができる。例えば、対応する酸溶液を上記化合物の溶液に添加し、塩の形成が完了した後、溶媒を除去して、本発明に記載の化合物の対応する塩を得ることができる。

【0088】

本明細書で使用する場合、「プロドラッグ」という用語は、それ自体が生物学的に活性であっても不活性であってもよいプロドラッグを含み、適切な方法で摂取した後、人体内で代謝または化学反応を受けて式Ｉの化合物、または式Ｉの化合物からなる塩または溶液に変換される。前記プロドラッグは、前記化合物のカルボン酸エステル、炭酸エステル、リン酸エステル、硝酸エステル、硫酸エステル、スルホン酸エステル、スルホキシドエステル、アミノ化合物、カルバメート、アゾ化合物、ホスホルアミド、グルコシド、エーテル、アセタール等の形態を含む（これらに限定されない）。

【0089】

第１有効成分
本発明の第１有効成分は、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩、またはその光学異性体、またはそのラセミ化合物、またはその溶媒和物、またはそのプロドラッグである。

【0090】

本明細書で使用する場合、「本発明の化合物」、「本発明の式Ｉの化合物」、または「式Ｉの化合物」は、交換可能に使用され、式Ｉの化合物、またはその互変異性体、メソ体、ラセミ化合物、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはその混合物形態、またはその薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグを指す。当該用語は、上記成分の混合物をさらに含むことを理解されたい。

式Ｉでは、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、アルキル基、シクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基、ヘテロシクリル基、アルケニル基、アルキニル基、アミノ基、ヒドロキシ基、メルカプト基、カルボキシ基、アルコキシ基、シクロアルコキシ基、ハロゲン化アルキル基、シアノ基、スルファニル基、スルホニル基、スルホン基、スルホキシド基、リン酸基から選択され、前記アルキル基、シクロアルキル基、アルコキシ基、シクロアルコキシ基、アミノ基、ヘテロシクリル基、アリール基またはヘテロアリール基は、一つまたは複数の置換基によって置換されていてもよく、前記置換基は、ヒドロキシ基、ハロゲン、アルキル基、アルコキシ基、シクロアルキル基、シクロアルコキシ基、ヘテロシクリル基、アリール基、ハロゲン化アリール基、ハロゲン化アルキル基、ヘテロアリール基、アルケニル基、アルキニル基、アミノ基、メルカプト基、カルボキシ基、エステル基、アルコキシカルボニル基、アシルオキシ基、アシルアミノ基、カルバミド基、アルキルスルホニル基、芳香族スルホニル基、シアノ基、ニトロ基、ニトロソ基、チオシアナト基、イソチオシアナト基、スルファニル基、スルホニル基、リン酸基、ホスホン酸基、アルキルリン酸基、アルキルホスホン酸基、アリールリン酸基、アリールホスホン酸基のうちの一つまたは複数の置換基から選択されるか、またはヌルであり、前記ヘテロシクリル基は、少なくとも一つのＮ原子を含むか、またはＮ、ＳおよびＯから任意に選択される１個もしくは２個もしくは３個のヘテロ原子を含む。

【0091】

本発明の好ましい化合物は、以下の化合物を含む。

【0092】

本発明の好ましい化合物の薬学的に許容される塩は、以下の塩を含む。

【0093】

第２有効成分
本発明の第２有効成分は、抗ウイルス、抗腫瘍、免疫調節および免疫アジュバントの薬物であり、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１抗体と併用して免疫療法することができる。

【0094】

本明細書で使用する場合、「ＰＤ－Ｌ１」という用語は、プログラム細胞死リガンド１（ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄｃｅｌｌｄｅａｔｈ－ｌＩｇａｎｄ１）と呼ばれ、重要な免疫阻害分子であり、ＰＤ－Ｌ１は、腫瘍の表面で発現し、Ｔ細胞の表面でＰＤ－１に結合し、Ｔ細胞の増殖およびサイトカインの分泌を阻害し、リンパ球の活性化を負に制御し、腫瘍の免疫回避に関与する。

【0095】

医薬組成物および投与方法
本発明の化合物は、優れたＩ型インターフェロンの産生を誘導する能力を有するため、本発明の化合物およびその様々な結晶形、薬学的に許容される無機または有機塩、水和物または溶媒和物、ならびに本発明の化合物を主な有効成分として含む医薬組成物は、Ｉ型インターフェロン関連疾患（特に、インターフェロンレベルの増加等の体内のインターフェロンレベルを調節することによって改善、治療または予防できる疾患）を治療、予防および緩和するために使用することができる。従来技術によれば、本発明の化合物は、ウイルス感染症、多発性硬化症、全身性エリテマトーデスおよび慢性骨髄性白血病等の疾患を治療するために使用することができる。

【0096】

本明細書で使用する場合、「インターフェロンの産生を誘導する」、「Ｉ型インターフェロンの産生を誘導する」、「Ｉ型インターフェロンの産生の誘導」または「インターフェロンの産生の誘導」という用語は、交換可能に使用され、Ｉ型インターフェロンまたはＩ型インターフェロン関連タンパク質、サイトカイン等の発現、転写またはタンパク質含有量レベル等を増加させることを含むものとする。

【0097】

本発明の医薬組成物は、安全かつ有効量の範囲内の本発明の化合物またはその薬理学的に許容される塩および薬理学的に許容される賦形剤または担体を含む。ここで、「安全かつ有効量」とは、深刻な副作用を引き起こさずに状態を大幅に改善するのに十分な化合物の量を指す。通常、医薬組成物は、１～２０００ｍｇの本発明の化合物／剤、より好ましくは、１０～５００ｍｇの本発明の化合物／剤を含む。好ましくは、前記「１剤」は、一つのカプセルまたは錠剤である。

【0098】

「薬学的に許容される担体」とは、ヒトへの使用に適し、十分な純度および十分に低い毒性を有していなければならない、一つまたは複数の適合性固体または液体の充填剤またはゲル物質を指す。「適合性」とは、組成物の各成分が、本発明の化合物およびそれらの間で、化合物の効力を大幅に低下させることなく、互いにブレンドすることができることを指す。薬学的に許容される担体の一部の例としては、セルロースおよびその誘導体（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースナトリウム、酢酸セルロース等）、ゼラチン、タルク、固体潤滑剤（例えば、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム）、硫酸カルシウム、植物油（例えば、大豆油、ごま油、落花生油、オリーブ油等）、ポリオール（例えば、プロピレングリコール、グリセリン、マンニトール、ソルビトール等）、乳化剤（例えば、トゥイーンR）、湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）、着色剤、香味剤、安定剤、抗酸化剤、防腐剤、パイロジェンフリー水等を含む。

【0099】

本発明の化合物または医薬組成物の投与方式は、特に限定されず、代表的な投与方式は、経口、腫瘍内、直腸、非経口（静脈内、筋肉内、または皮下）、および局所投与を含む（これらに限定されない）。

【0100】

経口投与用の固形剤形は、カプセル剤、錠剤、丸剤、粉末剤および顆粒剤を含む。これらの固形剤形において、活性化合物は、例えば、クエン酸ナトリウムまたはリン酸二カルシウム等の少なくとも一つの従来の不活性賦形剤（または担体）と混合されるか、または（ａ）テンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトールおよびケイ酸等の充填剤または相溶化剤、（ｂ）ヒドロキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロースおよびアラビアゴム等の結合剤、（ｃ）グリセリン等の保湿剤、（ｄ）寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモデンプンまたはタピオカデンプン、アルギン酸、特定の複合ケイ酸塩、および炭酸ナトリウム等の崩壊剤、（ｅ）パラフィン等の遅延剤、（ｆ）第四級アミン化合物等の吸収促進剤、（ｇ）セチルアルコールおよびモノステアリン酸グリセリル等の湿潤剤、（ｈ）カオリン（ｋａｏｌｉｎ）等の吸着剤、ならびに（ｉ）タルク、ステアリン酸カルシウム）、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム等の潤滑剤、またはその混合物等の成分と混合される。カプセル剤、錠剤および丸剤では、剤形は、緩衝剤も含むことができる。

【0101】

錠剤、糖衣錠、カプセル剤、丸剤および顆粒剤等の固形剤形は、腸溶性コーティングおよび当技術分野で公知の他の材料等の、コーティングおよびシェル材料を用いて調製することができる。それらは、乳白剤を含むことができ、また、このような組成物の活性化合物または化合物の放出は、消化管の特定の部分で遅延させて放出することができる。使用可能な埋め込み成分の例としては、高分子物質およびワックスである。必要に応じて、活性化合物は、一つまたは複数の上記賦形剤とマイクロカプセルを形成することができる。

【0102】

経口投与用の液体剤形は、薬学的に許容される乳濁液、溶液、懸濁液、シロップまたはチンキ剤を含む。活性化合物に加えて、液体剤形は、水または他の溶媒等の当技術分野で従来から使用される不活性希釈剤、および、例えば、エタノール、イソプロパノール、炭酸エチル、酢酸エチル、プロピレングリコール、１，３―ブタンジオール、ジメチルホルムアミドおよび油、特に、綿実油、落花生油、トウモロコシ胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油およびゴマ油またはこれらの物質の混合物等の可溶化剤および乳化剤を含むことができる。

【0103】

これらの不活性希釈剤に加えて、組成物は、例えば、湿潤剤、乳化剤および懸濁剤、甘味剤、香味剤および香料等の補助剤も含むことができる。

【0104】

活性化合物に加えて、懸濁液は、例えば、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよび脱水ソルビタンエステル、微結晶性セルロース、アルミニウムメトキシドおよび寒天またはこれらの物質の混合物等の懸濁剤を含むことができる。

【0105】

非経口注射用の組成物は、生理学的に許容される滅菌の水溶液または無水溶液、分散液、懸濁液または乳濁液、および滅菌注射可能な溶液または分散液に再構成するための滅菌粉末を含むことができる。適切な水性および非水性担体、希釈剤、溶媒または賦形剤は、水、エタノール、ポリオールおよびそれらの適切な混合物を含む。

【0106】

局所投与に使用される本発明の化合物の剤形は、軟膏剤、粉末剤、パッチ剤、スプレー剤および吸入剤を含む。有効成分は、無菌条件下で、生理学的に許容される担体および任意の防腐剤、緩衝剤、または必要に応じて必要となる可能性のある噴射剤と一緒に混合される。

【0107】

本発明の化合物は、単独で、または他の薬学的に許容される化合物と併用して投与することができる。

【0108】

医薬組成物が使用される場合、安全かつ有効量の本発明の化合物が、治療を必要とする哺乳動物（例えば、ヒト）に適用され、ここで、投与時の投与量は、考慮される有効用量であり、体重６０ｋｇの人の場合、一日量は、通常１～２０００ｍｇ、好ましくは、２０～５００ｍｇである。もちろん、具体的な投与量は、投与経路、患者の健康状況等の要因も考慮に入れる必要があり、これらは、すべて熟練した医師のスキルの範囲内である。

【0109】

組成物または製剤、有効成分の組み合わせおよびキットおよび投与方法
本発明は、組成物または製剤、有効成分の組み合わせおよびキットをさらに提供し、前記組成物または製剤、有効成分の組み合わせおよびキットは、自然免疫活性化薬物を調製するために使用することができ、前記薬物は、（ａ）広域スペクトルの抗ウイルス薬物と、（ｂ）抗腫瘍薬物と、（ｃ）癌を予防および／または治療するための薬物と、（ｄ）Ｉ型インターフェロン関連疾患を治療または予防するための薬物と、（ｅ）免疫アジュバントと、および／または（ｆ）サイトカイン誘導剤とを含む。

【0110】

本発明に記載の組成物は、好ましくは、医薬組成物である。本発明に記載の組成物は、薬学的に許容される担体を含むことができる。

【0111】

薬物製剤は、投与方法に適合する必要があり、好ましい投与方法は、経口投与、注射投薬（例えば、腫瘍内注射）であり、使用する場合、治療有効量の薬物を必要とする対象（例えば、ヒトまたは非ヒト哺乳動物）に投与することである。本明細書で使用する場合、「治療有効量」という用語は、ヒトおよび／または動物において機能または活性を生じ、且つヒトおよび／または動物に許容される量を指す。当業者であれば、前記「治療有効量」は、医薬組成物の形態、投与経路、使用される薬物の賦形剤、疾患の重症度、および他の薬物との併用投与等の状況に応じて変化し得ることを理解すべきである。

【0112】

一つの投与方法において、第１有効成分の安全かつ有効な１日用量は、通常、少なくとも約０．１ｍｇであり、ほとんどの場合、約２５００ｍｇを超えない。好ましくは、当該用量は、１ｍｇ～５００ｍｇであり、第２有効成分の安全かつ有効量は、通常、少なくとも約０．０１ｍｇであり、ほとんどの場合、２５００ｍｇを超えない。好ましくは、当該用量の範囲は、０．１ｍｇ～２５００ｍｇである。もちろん、具体的な用量は、投与経路、患者の健康状態等の要因も考慮すべきであり、これらは、すべて熟練した医師の技術の範囲内である。

【0113】

実施例１．細胞のインターフェロンの分泌を誘導する本発明の化合物
まず、新たに合成した以下の１１種の低分子化合物（ＬＤ００１～ＬＤ０１１）について、ＨＥＫ２９３Ｔ、ＨｅＬａ、Ａ５４９およびＰＥＭ等の様々な種類の細胞におけるＩ型インターフェロンの産生を誘導する活性を測定した。

【0114】

使用した２９３Ｔ細胞株、ＨｅＬａ細胞株およびＡ５４９細胞株は、すべて中国科学院上海生物科学研究所の細胞バンクから購入した。単細胞層を３７℃、５％ＣＯ_２インキュベーターで培養し、細胞を１０％ＦＢＳおよび１００Ｕ／ｍｌペニシリンおよび１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンを含むＤＭＥＭ培地で増殖させた。ＰＥＭ細胞は、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの腹腔から単離したマクロファージである。

【0115】

対数増殖期のＨＥＫ２９３Ｔ、ＨｅＬａ、Ａ５４９およびＰＥＭ等の様々な細胞を８０～９０％の接種密度でそれぞれ１２ウェル細胞培養プレートに播種し、細胞を壁に6時間付着させた後、細胞培養上清を、上記ＬＤ００１～ＬＤ０１１の様々な低分子化合物を最終濃度１０μＭで含む培地に置換し、引き続き１２時間培養し、最後に細胞を収集し、全細胞ＲＮＡを抽出した。

【0116】

次に、ｑＰＣＲを使用して、薬物処理中の様々な細胞によって誘導されるＩ型インターフェロンおよびインターロイキン－６の転写活性化を測定した。その結果、ＬＤ００２はＨＥＫ２９３Ｔ、ＨｅＬａ、Ａ５４９等の三種の細胞内でＩ型インターフェロンの転写を顕著に促進することができ、同時にインターロイキン－６の転写レベルもある程度増加することが示された（図１、図２および図３）。さらに、結果によると、ＬＤ００７およびＬＤ０１０は、ＨＥＫ２９３ＴおよびＰＥＭ細胞内でＩ型インターフェロンの発現を有意に誘導することができ、ＬＤ００５は、ＰＥＭ細胞内でＩ型インターフェロンの発現を有意に誘導することができることが示された（図４および図５）。要約すると、図１～５から、化合物ＬＤ００１－ＬＤ０１１は、ＨＥＫ２９３Ｔ、ＨｅＬａ、Ａ５４９またはＰＥＭ細胞内で、Ｉ型インターフェロンまたはインターロイキン－６の発現を誘導する活性を有することがわかった。ＬＤ００７およびＬＤ０１０は、細胞増殖に対する阻害効果を有し、強力な細胞毒性を示し、ＬＤ００５は、ＰＢＳに対する溶解度が低いことを考慮して、本発明は、化合物ＬＤ００２を代表的な化合物として選択して、後続の実施例の研究を実施した。

【0117】

実施例２．ＲＮＡウイルス（ＶＳＶおよびＨ１Ｎ１－ＩＡＶ）に対する本発明の化合物ＬＤ００２の阻害
先の実施例１の結果は、ＬＤ００２が細胞内でＩ型インターフェロンの発現を有意に誘導できることを証明した。次に、ウイルス細胞感染モデルを使用して、ウイルス増幅に対するＬＤ００２の阻害効果を測定した。水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）およびインフルエンザウイルス（ＩＡＶ）をＲＮＡウイルスの代表として選択した。具体的には、ＶＳＶ－ＧＦＰおよびＨ１Ｎ１ウイルス株を使用した。ＶＳＶ－ＧＦＰ自体は、ウイルスの増殖および負荷を示すのに有益な緑色蛍光タンパク質ＧＦＰを発現することができる。

【0118】

対数増殖期のＡ５４９細胞を８０～９０％の接種密度で１２ウェル細胞培養プレートに播種し、細胞を壁に6時間付着させた後、感染多重度（ＭＯＩ）０．５のＶＳＶウイルスの希釈液を加えた。ウイルス感染の１時間後、様々な濃度の本発明の化合物ＬＤ００２で処理し、１２時間後に全細胞ＲＮＡを抽出し且つウイルスの増幅状況を測定した。様々な濃度のＬＤ００２でＡ５４９細胞を処理した後のＶＳＶ－ＧＦＰ感染の阻害の程度に基づいて、ＶＳＶ－ＧＦＰ感染に対するＬＤ００２の阻害効果のＥＣ_５０（半有効濃度）は、１．７８９と計算され、ＳＩ（選択インデックス）は、１３５．１であった（図６）。結果は、本発明の化合物が、優れた抗ＶＳＶウイルス活性および安全性を有することを示している。

【0119】

同様に、対数増殖期のＡ５４９細胞を８０～９０％の接種密度で１２ウェル細胞培養プレートに播種し、細胞を壁に6時間付着させた後、感染多重度（ＭＯＩ）０．５のＨ１Ｎ１－ＩＡＶウイルスの希釈液を加えた。ウイルス感染の１時間後、様々な濃度の本発明の化合物ＬＤ００２で処理し、１２時間後に全細胞ＲＮＡを抽出し且つウイルスの増幅状況を測定した。様々な濃度のＬＤ００２でＡ５４９細胞を処理した後のＨ１Ｎ１－ＩＡＶ感染の阻害の程度に基づいて、Ｈ１Ｎ１－ＩＡＶ感染に対するＬＤ００２の阻害効果ＥＣ_５０（半有効濃度）は、４．７３５と計算され、ＳＩ（選択インデックス）は、５２．７９であった（図７）。結果は、本発明の化合物が、良好な抗ＩＡＶウイルス活性および安全性を有することを示している。

【0120】

実施例３．ＤＮＡウイルス（例えば、ＨＳＶ）感染に対する本発明の化合物ＬＤ００２の阻害効果
ＤＮＡウイルスの代表として単純ヘルペスウイルスＨＳＶを選択した。具体的には、ウイルスの増殖および負荷を示すことができる緑色蛍光タンパク質ＧＦＰを発現できるＨＳＶ－１－ＧＦＰウイルス株を使用した。

【0121】

対数増殖期のＡ５４９細胞を８０～９０％の接種密度で１２ウェル細胞培養プレートに播種し、細胞を壁に6時間付着させた後、感染多重度（ＭＯＩ）０．５のＨＳＶウイルスの希釈液を加えた。ウイルス感染の１時間後、様々な濃度の本発明の化合物ＬＤ００２で処理し、１２時間後に全細胞ＲＮＡを抽出し且つウイルスの増幅状況を測定した。様々な濃度のＬＤ００２でＡ５４９細胞を処理した後のＨＳＶ－ＧＦＰ感染の阻害の程度に基づいて、ＨＳＶ－ＧＦＰ感染に対するＬＤ００２の阻害効果のＥＣ_５０（半有効濃度）は、１．９４８と計算され、ＳＩ（選択インデックス）は、１２３．９２であった（図８）。結果は、本発明の化合物が、優れた抗ＨＳＶウイルス活性および安全性を有することを示している。

【0122】

実施例４．マウス体内においてインターフェロン産生を誘導する本発明の化合物ＬＤ００２
すべての実験で使用したマウスは、すべて分子細胞科学卓越創新センター動物実験技術プラットフォームから提供された６～８週齢のオスＣ５７ＢＬ／６マウスである。マウスに様々な用量（１００μｇまたは３００μｇ）の本発明の化合物ＬＤ００２を腹腔内注射し、６時間後、ＥＬＩＳＡを用いて血清中の様々なサイトカインの含有量の変化を測定した。結果は、本発明の化合物ＬＤ００２の実験グループが、血清中のＩ型インターフェロンＩＦＮβ（インターフェロン－β）およびＩＬ１β（インターロイキン－１β）のレベルを有意に増加させることができ、ＩＬ－６（インターロイキン－６）、ＴＮＦα（腫瘍壊死因子－α）およびＩＩＩ型インターフェロンＩＦＮλ（インターフェロン－λ）の発現レベルをわずかに増加させることができることを示している（図９）。図９において、Ｃｔｒｌは、ＰＢＳを腹腔内注射した対照グループであり、注射量は、１００μＬ／匹である。

【0123】

実施例５．抗腫瘍効果および腫瘍免疫療法を促進する機能を有する本発明の化合物ＬＤ００２
１．方法
この実験で使用したＢ１６－Ｆ１０黒色腫細胞株は、中国科学院上海細胞バンクから購入し、１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ培地で日常的に培養し、３７℃の５％ＣＯ_２インキュベーターで培養した。指数増殖期の細胞を０．２５％トリプシンで消化し、遠心分離後にＰＢＳで再懸濁し且つ計数し、生細胞率９５％以上であることを検出し、計数後、細胞懸濁液の濃度を２×１０^６ｍＬ－１に調節した。再懸濁した腫瘍細胞を滅菌ＥＰチューブに分注し、使用するまで氷上に置いた。

【0124】

電気シェーバーを使用してマウスの背中を脱毛した。脱毛面積は約９ｃｍ^２である。上記で準備したＢ１６－Ｆ１０細胞を採取し、各マウスの背中に１００μＬの腫瘍細胞懸濁液を皮下注射した。マウスの腫瘍の増殖状況を毎日観察し、４日目に黒色腫の形成を肉眼で観察し、腫瘍のないマウスを除外し、残りのマウスを各実験グループに５匹ずつ、ランダムに七つのグループに分けた。

【0125】

実験の第１グループは、それぞれ対照グループ、１００μｇの本発明の化合物ＬＤ００２のグループ、３００μｇの本発明の化合物ＬＤ００２のグループに分けられ、実験の第２グループは、それぞれ対照グループ、１００μｇの本発明の化合物ＬＤ００２のグループ、２００μｇの抗ＰＤ－Ｌ１抗体（Ｂ７－Ｈ１）（クローン：１０Ｆ．９Ｇ２）のグループ、１００μｇの本発明の化合物ＬＤ００２＋２００μｇ抗ＰＤ－Ｌ１抗体（Ｂ７－Ｈ１）（クローン：１０Ｆ．９Ｇ２）のグループに分けられ、１グループあたり６～８匹である。実験方法は、腫瘍細胞注射後５日目に、グループ分けに従って腫瘍担持マウスに投与し、ＬＤ００２を腹腔内注射し、二つの用量グループの１００μｇ／匹および３００μｇ／匹を設定した。抗－ＰＤ－Ｌ１抗体は、腹腔内注射により投与し、一つの用量グループの２００μｇ／匹を設定した。投与した溶媒緩衝系は、ＰＢＳ緩衝溶液である。対照グループには、同体積のＰＢＳ緩衝溶液を強制経口投与した。本発明の化合物薬物については、各マウスに２日ごとに１回、計３回投与した。投与体積は、すべて１００μＬである。抗－ＰＤ－Ｌ１抗体については、各マウスに２日ごとに１回投与し、計３回投与した。投与体積は、５０μＬである。具体的には、それぞれ５日目、７日目、９日目に投与し、２日間隔で形回投与した。１日おきに腫瘍の大きさを測定し、マウスの生存期間を記録し且つ関連データを記録し、電子ノギスを使用して腫瘍の体積を測定した。体積の計算式は、π／６×長さ×幅×高さである。腫瘍体積が２０００ｍｍ^３を超えた場合、腫瘍担持マウスを屠殺した。

【0126】

２．実験結果
本発明の化合物ＬＤ００２は、マウスの皮下黒色腫の増殖を阻害し、腫瘍担持マウスの生存期間を改善する。

【0127】

皮下黒色腫の腫瘍担持マウスモデルを確立することにより、本発明の化合物ＬＤ００２およびＬＤ００２＋抗－ＰＤ－Ｌ１の腫瘍増殖に対する阻害効果、ならびに腫瘍担持マウスの生存期間の改善が認められた。その結果、対照グループと比較して、本発明の化合物の単独投与が黒色腫の増殖に対して顕著な用量依存性阻害効果を有し、腫瘍担持マウスの生存期間を改善することが示された（図１０）。

【0128】

対照グループおよび本発明の化合物ＬＤ００２の単独投与と比較して、抗－ＰＤ－Ｌ１は、黒色腫増殖に対する本発明の化合物の阻害効果を顕著に増強し、マウスの生存期間を改善することができる。結果データから、本発明の化合物ＬＤ００２および抗－ＰＤ－Ｌ１は、共同して相乗効果を発揮することができ、黒色腫の増殖阻害効果およびマウスの生存期間の改善がより顕著であることがわかった（図１１）。

【0129】

実施例４および５から、本発明の化合物ＬＤ００２は、末梢血中のインターフェロン等の様々なサイトカインの増加を誘導し、黒色腫等の腫瘍に対して優れた阻害効果を有し、生存期間を改善することができることがわかった。本発明の化合物ＬＤ００２と抗－ＰＤ－Ｌ１との併用は、腫瘍増殖の阻害効果および生存期間の改善において相乗効果を有する。従って、本発明の化合物は、インターフェロン等の様々なサイトカインを誘導する薬物として、抗腫瘍効果および腫瘍免疫療法を促進する機能を有することができる。

【0130】

実施例６．免疫アジュバント活性を有する本発明の化合物ＬＤ００２
実験は、各グループ５匹のマウスを用いて、ブランクグループ（同量のＰＢＳを注射した）、抗原グループおよび抗原／本発明の化合物グループ（様々な濃度勾配を含む）に分けた。抗原オボアルブミンＯＶＡおよび本発明の化合物ＬＤ００２をそれぞれＰＢＳに溶解して、抗原溶液および本発明の化合物溶液を得、且つ濃度の必要に応じて、抗原、および様々な濃度勾配を有する本発明の化合物を含む溶液に調製した。実験グループの各マウスを、毎回１００μｌの抗原溶液または抗原溶液とＬＤ００２溶液とでマウスを免疫した。免疫方法は、筋肉内注射である。ブランクグループのマウスには、実験グループと同量のＰＢＳ溶液を注射した。初回の免疫を０日目と設定し、それぞれ７日目および１４日目に追加免疫をそれぞれ１回実施し、２１日目の免疫終了後、マウス眼窩から採血し、マウス血清を収集し、希釈後、ＥＬＩＳＡによりマウス血清中の抗体含有量を検出した。結果は、抗原グループと比較して、ＯＶＡ単独での免疫では、防御的な体液性免疫反応を生じさせることができないことが示され、ＯＶＡを本発明の化合物と併用してマウスを免疫すると、ＯＶＡ特異的ＩｇＧ、ＩｇＧ１およびＩｇＧ２ｂ抗体の総量を顕著に増加させることができる。これは、本発明の化合物が有意な免疫アジュバント活性を有することを示している（図１２）。

【0131】

以下、具体的な実施例と併せて、本発明をさらに説明する。これらの実施例は、本発明を説明するためにのみ使用され、本発明の範囲を限定するものではないことを理解されたい。以下の実施例では、具体的条件を示さない実験方法は、通常、従来の条件または製造業者が推奨する条件に従う。特に明記しない限り、パーセンテージと部数とは、重量で計算される。

【図1】