特表 2024-544211 バチルス・コアギュランス（ＢＡＣＩＬＬＵＳ ＣＯＡＧＵＬＡＮＳ）株、その組成物及び使用の方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-11-28

(54)【発明の名称】バチルス・コアギュランス（ＢＡＣＩＬＬＵＳ ＣＯＡＧＵＬＡＮＳ）株、その組成物及び使用の方法

(51)【国際特許分類】

   C12N 1/20 20060101AFI20241121BHJP

   A61P 3/00 20060101ALI20241121BHJP

   A61P 9/00 20060101ALI20241121BHJP

   A61P 39/02 20060101ALI20241121BHJP

   A61P 39/06 20060101ALI20241121BHJP

   A61P 37/02 20060101ALI20241121BHJP

   A61P 1/00 20060101ALI20241121BHJP

   A61P 13/02 20060101ALI20241121BHJP

   A61P 31/00 20060101ALI20241121BHJP

   A61K 35/742 20150101ALI20241121BHJP

   A61K 35/74 20150101ALI20241121BHJP

   A23L 33/135 20160101ALI20241121BHJP

   C12N 15/11 20060101ALN20241121BHJP

   C12N 15/31 20060101ALN20241121BHJP

【ＦＩ】

C12N1/20 A

A61P3/00

A61P9/00

A61P39/02

A61P39/06

A61P37/02

A61P1/00

A61P13/02 105

A61P31/00

A61K35/742

A61K35/74 A

A23L33/135

C12N15/11 Z ZNA

C12N15/31

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024533255

(86)(22)【出願日】2022-12-08

(85)【翻訳文提出日】2024-07-31

(86)【国際出願番号】 US2022081195

(87)【国際公開番号】W WO2023108080

(87)【国際公開日】2023-06-15

(31)【優先権主張番号】2021/0210

(32)【優先日】2021-12-08

(33)【優先権主張国・地域又は機関】IE

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】524209811

【氏名又は名称】ディアランド プロバイオティクス アンド エンザイムズ，インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100114775

【弁理士】

【氏名又は名称】高岡 亮一

(74)【代理人】

【識別番号】100121511

【弁理士】

【氏名又は名称】小田 直

(74)【代理人】

【識別番号】100202751

【弁理士】

【氏名又は名称】岩堀 明代

(74)【代理人】

【識別番号】100208580

【弁理士】

【氏名又は名称】三好 玲奈

(74)【代理人】

【識別番号】100191086

【弁理士】

【氏名又は名称】高橋 香元

(72)【発明者】

【氏名】ディートン，ジョン

【テーマコード（参考）】

4B018

4B065

4C087

【Ｆターム（参考）】

4B018MD85

4B018ME09

4B018ME11

4B065AA15X

4B065AA15Y

4B065BC31

4B065CA41

4B065CA44

4C087AA01

4C087AA02

4C087BC55

4C087MA17

4C087MA22

4C087MA23

4C087MA35

4C087MA43

4C087MA52

4C087NA14

4C087ZA36

4C087ZA66

4C087ZA81

4C087ZB07

4C087ZB31

4C087ZC21

4C087ZC37

(57)【要約】

本発明は、新しいバチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）株を対象とし、それは、単独で又は他の桿菌（Ｂａｃｉｌｌｉ）株と組み合わせて、プロバイオティクスとして、又はプレバイオティクス及びシンバイオティクスと一緒に使用され得る。本発明はまた、新しいバチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）株を単独で又は他の株と組み合わせて含む、医薬組成物、乳製品、機能性食品、栄養補給食品、健康補助食品及びパーソナルケア用の製品などの組成物、並びに胃腸感染及び疾患の予防又は処置のためのこの株の使用、及び他の使用にも関する。
【選択図】図４

【特許請求の範囲】

【請求項1】

配列番号１と少なくとも９７％の同一性を共有するｇｙｒＢを有する１種以上の細菌を含む；及び／又は配列番号２と少なくとも９７％の同一性を共有する１６Ｓ ｒＲＮＡを有する１種以上の細菌を含む精製された微生物集団を含むバチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）株。

【請求項2】

配列番号３と少なくとも９７％の同一性を共有する請求項１に記載のバチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）株。

【請求項3】

前記精製された微生物集団が、配列番号２を含む１６Ｓ核酸配列を有する細菌を含む、請求項１に記載のバチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）株。

【請求項4】

前記精製された微生物集団が、配列番号１を含むｇｙｒＢ核酸配列を有する細菌を含む、請求項１に記載のバチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）株。

【請求項5】

前記精製された微生物集団が、配列番号２を含む１６Ｓ核酸配列を有する及び配列番号１を含むｇｙｒＢ核酸配列を有する細菌を含む、請求項１に記載のバチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）株。

【請求項6】

食用として許容可能な担体及び／又は希釈剤と一緒に請求項１～５の何れか１項に記載のバチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）株を含む微生物組成物。

【請求項7】

前記組成物の単位用量が、１０^６～１０^１３ＣＦＵのバチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）株を含む、請求項６に記載の微生物組成物。

【請求項8】

粘液性の粘着性賦形剤をさらに含む、請求項６又は７に記載の微生物組成物。

【請求項9】

少なくとも１つのさらなるプロバイオティクスのバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）株をさらに含む、請求項６～８の何れか１項に記載の微生物組成物。

【請求項10】

錠剤、丸剤、カプセル、粉末、溶液、懸濁液、又はエマルジョンとして処方される、請求項６～９の何れか１項に記載の微生物組成物。

【請求項11】

食品として処方される、請求項６～９の何れか１項に記載の微生物組成物。

【請求項12】

膣感染、尿路感染、胃腸感染、胃腸疾患を予防すること又は処置すること、免疫的健康を向上させること、酸化ストレスに対する防御、クレンジング及び解毒、代謝的健康及び心血管系の健康における使用のための、請求項１～５の何れか１項に記載のバチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）株。

【請求項13】

膣感染、尿路感染、胃腸感染、胃腸疾患を予防する又は処置する、免疫的健康を向上させる、酸化ストレスに対する防御、クレンジング及び解毒、代謝的健康及び心血管系の健康の方法であって、請求項１～５の何れか１項に記載のバチルス・クラウシイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｌａｕｓｉｉ）株を投与することを含む、方法。

【請求項14】

膣感染、尿路感染、胃腸感染、胃腸疾患を予防すること又は処置すること、免疫的健康を向上させること、酸化ストレスに対する防御、クレンジング及び解毒、代謝的健康及び心血管系の健康における使用のための、請求項６～１１の何れか１項に記載の微生物組成物。

【請求項15】

膣感染、尿路感染、胃腸感染、胃腸疾患を予防する又は処置する、免疫的健康を向上させる、酸化ストレスに対する防御、クレンジング及び解毒、代謝的健康及び心血管系の健康の方法であって、請求項６～１１の何れか１項に記載の微生物組成物を投与することを含む、方法。

【請求項16】

対象内のマイクロバイオームを改善する方法であって、プロバイオティクスを含む組成物を前記対象に投与することを含み、前記プロバイオティクスが、請求項１～５の何れか１項に記載のバチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）株を含む、方法。

【請求項17】

プロバイオティクスとしての使用のための請求項１～５の何れか１項に記載のバチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）株であって、任意選択的に前記菌株が、単一の組成物内で許容可能な担体又は送達ビヒクル及び任意選択的にアジュバント構成成分と会合されるか、又は別個の組成物が別々の菌株の混合物を含む、バチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）株。

【請求項18】

膣感染、尿路感染、胃腸感染、胃腸疾患の処置、免疫的健康を向上させること、酸化ストレスに対する防御、クレンジング及び解毒、代謝的健康、心血管系の健康及び／又は皮膚の健康のための薬剤の製造における請求項１～５の何れか１項に記載のバチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）株の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、単独で又は他のバチルス（Ｂａｃｉｌｌｉ）株と組み合わせてプロバイオティクスとして又はプレバイオティクス及びシンバイオティクスと一緒に使用され得る、新規バチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）株に関する。本発明はまた、単独で又は他の株と組み合わせた新規バチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）株を含む、医薬組成物、乳製品、機能性食品、栄養補給食品、健康補助食品及びパーソナルケア用の製品などの組成物、並びに胃腸の感染及び疾患の予防若しくは処置のための株の使用及び他の使用にも関する。

【背景技術】

【0002】

プロバイオティクスは、患者の微生物バランス、特に呼吸器及び消化管の環境を改善するために投与される、生きている微生物又は微生物混合物である。バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）株は、呼吸器感染の処置、下痢症の予防のため、並びに免疫関連疾患の処置のために使用されてきた（Ｅｌｓｈａｇｈａｂｅｅ ｅｔ ａｌ．，２０１７）。

【0003】

正常な腸細菌叢は、様々な細菌種により占められており、これらは、病原体の増殖を調節するのを助ける物質を産生する。ディスバイオシスは、ある種の細菌種の減少及び病原性細菌の増加された増殖を特徴とする状態である。ディスバイオシスは、歯周病、炎症性腸疾患及び慢性疲労症候群の発現と関連付けられている。いくつかの試験は、ディスバイオシスを有する患者は、代謝の及び心臓の障害を発現する上昇したリスクを有し得ることを示唆している（Ｃｈａｎ ｅｔ ａｌ．，２０１３）。

【0004】

プロバイオティックな桿菌（Ｂａｃｉｌｌｉ）を投与することにより、頻発するディスバイオシスのエピソードがある男女の腸細菌叢を再生することが可能である。ディスバイオシスは、一般的な胃腸問題である。エシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）により引き起こされるディスバイオシスもまた、一般的な問題である（Ｃｈａｎ ｅｔ ａｌ．，２０１３）。

【0005】

桿菌（Ｂａｃｉｌｌｉ）の存在は、腸微生物生態系の維持にとって重要である。桿菌（Ｂａｃｉｌｌｉ）は、リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）、エシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）ｓｐｐ．及びその他などの病原性細菌の増殖に対する阻害活性を保持することが示されている（Ｙｉｌｍａｚ ｅｔ ａｌ．，２００５）。この阻害は、有機酸、過酸化水素、バクテリオシン又はロイテリンなどの阻害化合物の産生又は上皮への競合的接着によるものであり得る（Ａｂｒｉｏｕｅｌ ｅｔ ａｌ．，２０１０）。

【0006】

桿菌（Ｂａｃｉｌｌｉ）はまた、気道感染の処置として調べられている（Ｍａｒｓｅｇｌｉａ ｅｔ ａｌ．，２００７）。例えば、桿菌（Ｂａｃｉｌｌｉ）の導入及び常在生物の刺激は、尿路感染の再発を防ぐために使用されている（Ｍａｒｓｅｇｌｉａ ｅｔ ａｌ．，２００７）。腸感染を防ぐことにおける桿菌（Ｂａｃｉｌｌｉ）の役割もまた、研究されている。

【0007】

関連技術の説明
プロバイオティクスとしての桿菌（Ｂａｃｉｌｌｉ）の重要性は、文献に記載されている。

【0008】

Ｈｙｒｏｎｉｍｕｓ ｅｔ ａｌ．，２０００は、インビトロ技術及びヒトにおける１３種類の選択された株のコロニー形成能の評価による、多数の桿菌（Ｂａｃｉｌｌｉ）株のプロバイオティクス活性のスクリーニングを開示する。株を、Ｃａｃｏ－２細胞へのｐＨ２．５及び０．３％Ｏｘｇａｌｌ接着に対する抵抗性及び腸内病原性細菌に対する抗微生物活性について調べた（Ｋｈｏｃｈａｍｉｔ ｅｔ ａｌ．，２０１５）。桿菌（Ｂａｃｉｌｌｉ）は、良好な接着及び生物治療特性を有することに加え、ＧＩＴストレス耐性の基本的要件を保持することが示されている（Ｔｈａｋｕｒ ｅｔ ａｌ．，２０１６）。

【0009】

当技術分野で公知の桿菌（Ｂａｃｉｌｌｉ）の医薬組成物は、インビボ、即ち、哺乳動物微生物生態系で再コロニー形成することにおいて十分に効率的ではなく、従って、医薬組成物、栄養補給食品、乳製品、機能性食品又は吸収性製品の形態での桿菌（Ｂａｃｉｌｌｉ）の投与時に再コロニー形成する固有の能力がある桿菌（Ｂａｃｉｌｌｉ）を発見することが必要である。土壌から単離される桿菌（Ｂａｃｉｌｌｉ）は、ヒト微生物生態系におけるそれらの固有の生存能力のため、投与時にインビボで再コロニー形成する能力を有し得る。投与時にコロニー形成する増強された能力を有する桿菌（Ｂａｃｉｌｌｉ）株を同定することは、厄介な工程であることが多く、従ってインビボでのコロニー形成能を予測するために最良の試験系を選択することは重要である。

【0010】

文献において、プロバイオティクス株の報告されたインビトロでの接着性に大きなばらつきがあると思われる。このばらつきは実際に、株と株の間の生物学的相違を反映するが、実験条件に依存することも確かである。さらにまた、接着性を測定する方法に関してばらつきがあると思われる。インビトロの実験は、上皮細胞への接着によるインビボでのコロニー形成能を推定するための手段としてしか機能しないと主張され得る。

【0011】

土壌微生物と長い間みなされていたものの、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）ｓｐｐ．は、発酵産物又は芽胞に基づくサプリメントの形態で５０年を超えて使用されてきた（Ｃｕｔｔｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１１）。天然では至るところに存在する桿菌（Ｂａｃｉｌｌｉ）は、食物、水及び空気を通じて健康な人間の消化管及び気道に常に侵入する（Ｂｅｎｎｏ ＆ Ｍｉｔｓｕｏｋａ，１９８６）。それらは、腸から単離されており、最大で１０^７ＣＦＵ／ｇに達し得るので、正常な腸細菌叢の支配的な構成成分の１つであると考えられる（Ｌａｋｓｈｍｉ ｅｔ ａｌ．，２０１７）。より最近、バチルス・クラウシイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｌａｕｓｉｉ）の株が、より特異的な機能を提供するために単離され、その安全性が評価された。バチルス・クラウシイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｌａｕｓｉｉ）は、下痢患者（Ｓｕｄｈａ ｅｔ ａｌ．，２０１３，Ｈｏｒｏｓｈｅｖａ ｅｔ ａｌ．，２０１４）及び再発性の呼吸器感染の小児（Ｍａｒｓｅｇｌｉａ ｅｔ ａｌ．，２００７）において有害事象の報告なく過去に使用されてきた。国及び株は特定されないが、バチルス・クラウシイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｌａｕｓｉｉ）は、世界５５カ国で市販されている（Ｎｉｓｔａ ｅｔ ａｌ．，２００４；Ｇａｂｒｉｅｌｌｉ ｅｔ ａｌ．，２００９）。バチルス・クラウシイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｌａｕｓｉｉ）に対する総説文献は、そのプロバイオティクスに関連する有害事象を示さず、異なる国での細菌の世界的な存在は、ヒト摂取に対するその安全性のナラティブを補う。

【0012】

バチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）は、様々な食物における使用の長い歴史を有する。数十年にわたり世界中で広く摂取されているバチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）の多くの株がある（Ｅｎｄｒｅｓ ｅｔ ａｌ．，２００９）。この細菌の存在は、ヨーグルト、ミルク、ザウアークラウト、キムチ及び他の乳製品などの食品中で見出され得、これらは全て、５ｘ１０^９ＣＦＵ／ｇ（Ｓｕｄｈａ ｅｔ ａｌ．，２０１６）～９．３８ｘ１０^１０（Ｅｎｄｒｅｓ ｅｔ ａｌ．，２０１１）のバチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）レベルを含有する。いくつかのバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）種は、ハチミツ中で一般的であることが報告されており、バチルス・メガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）、バチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）、バチルス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、バチルス・リケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）及びバチルス・プミルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｕｍｉｌｕｓ）（Ａｌｉｐｐｉ，１９９５；Ａｌｉｐｐｉ ｅｔ ａｌ．，２００４；Ｇｉｌｌｉａｍ，１９７９；Ｇｉｌｌｉａｍ ＆ Ｖａｌｅｎｔｉｎｅ，１９７６；Ｓｎｏｗｄｏｎ ＆ Ｃｌｉｖｅｒ，１９９６）を含む。プロバイオティクスにおける使用のためのこの細菌種の起源は、インドに端を発し、そこでは多くの製造者が、輸出のために食品成分としてバチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）を生産し、ヨーロッパ及びアメリカでの再ラベル付けされている（Ｃｕｔｔｉｎｇ、２０１１）。バチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）の安全性を評価するために、ゲノムが調べられ、それは、有害な遺伝子を全く含有しないと見出された（Ｓａｌｖｅｔｔｉ ｅｔ ａｌ．，２０１６）。バチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）の無害な性質のため、この細菌は、ＵＳ Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ（ＦＤＡ）及びＥｕｒｏｐｅａｎ Ｕｎｉｏｎ Ｆｏｏｄ Ｓａｆｅｔｙ Ａｕｔｈｏｒｉｔｙ（ＥＦＳＡ）によりこの細菌が安全であると報告されており、Ｇｅｎｅｒａｌｌｙ Ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ ａｓ Ｓａｆｅ （ＧＲＡＳ）及びＱｕａｌｉｆｉｅｄ Ｐｒｅｓｕｍｐｔｉｏｎ ｏｆ Ｓａｆｅｔｙ （ＱＰＳ）リスト（Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｆｏｏｄ Ｓａｆｅｔｙ Ａｕｔｈｏｒｉｔｙ，２０１７）に掲載されている。バチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）及びバチルス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）を含む、１００種類の既知のバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）ｓｐｐ．の中でいくつかの非病原性株は、全年齢に対してヒトの摂取について安全であると言明されている（Ｎｉｔｈｙａ ＆ Ｈａｌａｍｉ、２０１２）。バチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）についての総説文献は、プロバイオティクスに関連する有害事象を示さず、このことは、それはよく許容され安全であるという知見を強固にするる。従って、バチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）は、安全なプロバイオティクスであり摂取は宿主に恩恵をもたらすとみなされ得る。

【0013】

バチルス・メガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）は、土壌から海水、堆積物、水田、ハチミツ、魚類、ミルク及び乾燥食品まで、多様な生息場所で見出されている（Ａｌｆｏｌｄｉ，１９５７；Ａｌｉｐｐｉ ＆ Ｒｅｙｎａｌｄｉ，２００６；Ｐａｄｇｈａｍ ａｎｄ Ｓｉｋｏｒａ，２００７；Ｐｅｌｌｅｔｉｅｒ ＆ Ｓｙｇｕｓｃｈ，１９９０；Ｖａｒｙ ｅｔ ａｌ．，２００７；Ｖｏｎ Ｔｅｒｓｃｈ ａｎｄ Ｃａｒｌｔｏｎ，１９８３；Ｓｃｈｏｌｌｅ ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｋｏｔｂ，２０１４）。ハチミツから単離された微生物のさらなる定性的分析は、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）の最も頻度の高い種の１つがバチルス・メガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）であることを明らかにした（Ａｌｉｐｐｉ，１９９５；Ａｌｉｐｐｉ ｅｔ ａｌ．，２００４；Ｓｎｏｗｄｏｎ ＆ Ｃｌｉｖｅｒ，１９９６；Ｔｙｓｓｅｔ，Ｄｕｒａｎｄ，＆ Ｔａｌｉｅｒｇｉｏ，１９７０）。魚類においてバチルス・メガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）を単離したという、補助的実験があった（Ｓｕｍａｔｈｉ ｅｔ ａｌ．，２０１７）。Ａｆｒｉｌａｓａｒｉ ｅｔ ａｌ．，２０１５はまた、ナマズの消化管からバチルス・メガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）を単離することに成功し、ＰＴＢ １．４として同定した。バチルス・メガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）の無害な性質により、この細菌はＱｕａｌｉｆｉｅｄ Ｐｒｅｓｕｍｐｔｉｏｎ ｏｆ Ｓａｆｅｔｙ（ＱＰＳ）リスト（Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｆｏｏｄ Ｓａｆｅｔｙ Ａｕｔｈｏｒｉｔｙ，２０１７）に掲載された。バチルス・メガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）株ＡＴＣＣ１４５８１は、ゲノム解析を通じて、バチルス・メガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）ＭＩＴ４１１とほぼ同一（＞９９％）であると確認された。Ｈｅａｌｔｈ Ｃａｎａｄａは、この生物はヒトの健康又は環境に対し害がなく；環境及びカナダ人に対する曝露は中程度である、と宣言した。従って、バチルス・メガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）株ＡＴＣＣ１４５８１がヒトの健康に対して又は環境に対して害がないと結論付けられる（Ｈｅａｌｔｈ Ｃａｎａｄａ，２０１８）。

【0014】

まとめると、プロバイオティクス能を有する桿菌（Ｂａｃｉｌｌｉ）株は、細胞株Ｃａｃｏ－２細胞などの他の適切な細胞に接着できるはずである。さらに、プロバイオティクス能を有する桿菌（Ｂａｃｉｌｌｉ）株が他の細菌種に対するインビトロでの阻害活性を示し、液体培養中での増殖後に酸を産生し及び／又は過酸化水素を産生することもまた望ましい。

【発明の概要】

【0015】

本発明の目的は、所望される特性を有する、適切なプロバイオティックな桿菌（Ｂａｃｉｌｌｉ）株の医薬処方物又は吸収製品などの、本願を通じて記載されるような株及び組成物を提供することである。一実施形態では、本発明は、単独での又はバチルス・メガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）株ＭＩＴ４１１（その全体において本明細書中に内容が組み込まれるアイルランド特許出願第２０２１／０２１１号明細書からの優先権を主張する対応するＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０２２／ｘｘｘｘｘにおいて開示され特許請求される）及びバチルス・クラウシイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｌａｕｓｉｉ）株ＣＳＩ０８（その全体において本明細書中に内容が組み込まれるアイルランド特許出願第２０２１／０２０９号明細書からの優先権を主張する対応するＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０２２／ｘｘｘｘｘにおいて開示され特許請求される）などの桿菌（Ｂａｃｉｌｌｉ）株などの他の株と組み合わせたバチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）株ＣＧＩ３１４に関する。一実施形態では、これらの株は、同様であるか又は基本的に同じ有利な特性、例えば粘膜に対する接着性によるコロニー形成能を有し、これは従って例えば膣、尿路、胃腸、ナソ－シナル（ｎａｓｏ－ｓｉｎａｌ）、咽頭、食道、口腔及び／又は例えば粘膜がある身体の他の領域などの感染又は疾患の処置又は予防、並びに皮膚及び／又は上皮を有する身体の他の領域の感染又は疾患の処置又は予防；免疫の健康、酸化ストレスに対する防御、クレンジング及び解毒、代謝的健康及び心血管系の健康、とりわけ例えば、乳酸、安息香酸及びコハク酸を含む抗微生物活性、抗炎症活性、炎症促進反応の抑制を提供する、例えばマクロファージを刺激することによって免疫応答を活性化及び／又は誘発する、免疫防御を提供する、例えば腸における消化及び／又は発酵を助ける、分岐状アミノ酸、必須アミノ酸及び群Ｂビタミンを産生する、健康な腸及び／又は、皮膚の健康のサポートにおける乳酸、安息香酸及びコハク酸を含み皮膚を維持する、毒性物質から粘膜及び他の上皮組織を保護する、軟便の発生を減少させる、腸脳軸を改善する、及びディスバイオシス及びその影響、例えば歯周病、炎症性腸疾患、慢性疲労症候群、代謝障害、心臓障害、気道感染、尿路感染、ＧＩ感染及び下痢などを処置及び／又は予防すること；及び正常及び／又は健康な細菌叢を回復させることなどに適切である。一実施形態では、本発明は、バチルス・クラウシイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｌａｕｓｉｉ）株ＣＳＩ０８の使用及び糞便移植での使用のための組成物を可能にする。

【0016】

胃腸疾患は、個人における胃腸の異常を処置することを含むが限定されず、個人は、Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｓｔｏｏｌ Ｓｃａｌｅで１又は２である（即ち便秘を処置する）便通の月に少なくとも１回の２４時間のエピソードを有し；又は個人は、Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｓｔｏｏｌ Ｓｃａｌｅで６～７である（下痢の傾向）便通の月に少なくとも１回の２４時間のエピソードを有し、Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｓｔｏｏｌ Ｓｃａｌｅで１又は２である（又は６～７）便通の１カ月あたりの個人の２４時間エピソードの頻度は、低下する。

【0017】

また含まれるのは、個人において胃腸の規則正しさを回復させる方法であり、個人は、Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｓｔｏｏｌ Ｓｃａｌｅで１若しくは２；又は６～７である便通の１カ月あたり少なくとも１回の２４時間エピソードを有し、Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｓｔｏｏｌ Ｓｃａｌｅで３～５である個人の便通の２４時間の期間の頻度は、増加する。

【0018】

本発明は、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）含有組成物を用いて、健康な腸の微生物叢を維持することをさらに含む。バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）含有組成物は、胃腸微生物叢のプロバイオティックな補充物として使用され得、エシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）ｓｐｐ．などの腸での病原性細菌と競合し得るか又はそうでなければそれらを妨害し得る。

【0019】

本発明の別の目的は、粘液性の接着性賦形剤を使用することによる粘膜への接着によりコロニー形成する増大した能力を有する製剤処方物を提供することである。

【0020】

本発明のさらなる目的は、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）及びグラム陰性病原性細菌の増殖を抑制する増大した能力を有する膣処方物を提供することである。

【0021】

本発明のまた別の目的は、単独で、又は、粘膜でコロニー形成する能力を有する基本的に同じ特性を有する、及び従って膣感染、尿路感染及び胃腸疾患の処置又は予防に適応される、バチルス・メガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）株及び／バチルス・クラウシイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｌａｕｓｉｉ）株などの他の桿菌（Ｂａｃｉｌｌｉ）株と組み合わせてバチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）株ＣＧＩ３１４を含む、乳製品、栄養補給食品製品及び機能性食品などの組成物を提供することである。本発明の組成物は、指定される及び／又はこれらの範囲内に入るあらゆる時間枠を含む、１用量、１日、１日～１週間、１日～１カ月、１カ月～４５日、４５日～２カ月、３カ月、６カ月、１年又はそれを超えて、投与され得る。

【0022】

本発明は、処置及び／又は予防の方法及び様々な他の方法を含み、それらは、バチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）株又は本発明の組成物を対象（例えば、哺乳動物対象、ヒト患者を含むヒトなど）に提供する段階及び対象にその株又は組成物を投与する段階を含み得る。一実施形態では、本発明は、疾患又は感染又は他の状態を処置するための、組成物、例えば組成物の使用を対象とする。一実施形態では、本発明は、膣感染、尿路感染、胃腸疾患の処置、免疫の健康を改善すること、酸化ストレスに対する防御、クレンジング及び解毒、代謝的健康、心血管系の健康及び／又は皮膚の健康、及び／又は本願を通して記載される適用のための他の処置若しくは他の理由のための医薬品の製造における、本願を通じて（特許請求の範囲を含む）記載されるような、バチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）株又はその組成物の使用を対象とする。

【図面の簡単な説明】

【0023】

図面において

【図1】図１は、クレードにおいて配置されるバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）ｓｐｐの系統樹（１６Ｓ）を例示する。

【図2】図２は、クレードにおいて配置されるバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）ｓｐｐの系統樹（ｇｙｒＢ）を例示する。

【図3】図３は、０．４％ＴＳＡ寒天が重層されたＭＲＳ寒天プレート（固形培地）上での腸、皮膚及び尿路の日和見性病原体に対するＢ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＣＧＩ３１４の抗菌活性を示す。Ａ－Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）；Ｂ－Ｓ．エンテリティディス（Ｓ．ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ）及びＣ－Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）。

【図4】図４は、腸、皮膚及び尿路の日和見性病原体に対する液体ＴＳＢ培地におけるＢ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＣＧＩ３１４の抗菌活性を示す。病原体：Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、シュードモナス・エルギノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）及びＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）。（濃度Ｌｏｇ_１０ＣＦＵ／ｍｌ）

【図5】図５は、２４時間でＥ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）に対しＢ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＣＧＩ３１４（Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅ）で観察される最強の抗菌活性を示す。Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）０．４％ＴＳＡ寒天重層プレートに対する、ＭＲＳ寒天上に接種された（ａ）Ｂ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＭＴＣＣ５８５６（Ｌａｃｔｏｓｐｏｒｅ（登録商標））（ｂ）Ｂ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＣＧ３１４（Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅ）（ｃ）Ｂ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）６０８６（ＢＣ３０（商標））。

【図6】図６は、４８時間でＳ．エンテリティディス（Ｓ．ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ）に対するＦｏｒｔｉｓｐｏｒｅで観察される最強の抗菌活性を示す。Ｓ．エンテリティディス（Ｓ．ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ）０．４％ＴＳＡ寒天重層プレートに対する、ＭＲＳ寒天上に接種された（ａ）Ｌａｃｔｏｓｐｏｒｅ（登録商標）（ｂ）Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅ（ｃ）ＢＣ３０（商標）。

【図7】図７は、抗菌活性が、Ｐ．エルギノーサ（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）に対しバチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）にわたり検出されなかったことを示す。２４時間での、Ｐ．エルギノーサ（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）０．４％ＴＳＡ寒天重層プレートに対する、ＴＳＡ寒天に接種された、（ａ）Ｂ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＭＴＣＣ５８５６（Ｌａｃｔｏｓｐｏｒｅ（登録商標））（ｂ）Ｂ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＣＧ３１４（ｃ）Ｂ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）６０８６（ＢＣ３０（商標））。

【図8】図８は、２４時間でＭＲＳ寒天を使用してＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）に対しＢ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）にわたり検出された限定的な抗菌性を示す。（ａ）Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）０．４％ＴＳＡ寒天重層プレートに対する、ＴＳＡ寒天上に接種されたＢ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）。（ｂ）Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）０．４％ＴＳＡ寒天重層プレートに対する、ＭＲＳ寒天上に接種されたＢ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）。

【図9】図９は、Ｂ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）（Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅ）及びＬ．ラムノサス（Ｌ．ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）の総抗酸化能を示す。

【図10】図１０は、ＤＥ１１１、Ｂ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）（Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅ）、Ｂ．クラウシイ（Ｂ．ｃｌａｕｓｉｉ）ＣＳＩ０８（Ｍｕｎｉｓｐｏｒｅ）、Ｂ．メガテリウム（Ｂ．ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）ＭＩＴ４１１（Ｒｅｎｕｓｐｏｒｅ）及びＬ．ラムノサス（Ｌ．ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）の総抗酸化能を示す。

【図11】図１１は、接着細菌のパーセンテージとして測定される、ＨＴ－２９細胞株へのＦｏｒｔｉｓｐｏｒｅの接着が、無視できる程度であったことを示す。

【図12】図１２は、接着細菌のパーセンテージとして測定される、ＨＴ－２９－ＭＴＸ細胞株へのＦｏｒｔｉｓｐｏｒｅの接着が、無視できる程度であることを示す。

【図13】図１３は、ＨＴ－２９細胞株へのＢ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）株の接着についての試験を示す。

【図14】図１４は、ＨＴ－２９－ＭＴＸ細胞株へのＢ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）株の接着についての試験を示す。

【図15】図１５は、２４時間又は４８時間での画線法及び終夜ＴＳＢブロス法の両方を使用した、Ｂ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＣＧＩ３１４におけるカゼイン分解活性の欠如を示す。

【図16】図１６は、カゼイン誘導体に対するＦｏｒｔｉｓｐｏｒｅのタンパク質分解活性が、３７℃で２４時間のインキュベーション後にＥｎｚＣｈｅｃｋ（登録商標）キットを使用して、陽性対照であるプロテイナーゼＫよりも低いことを示す。

【図17】図１７は、２４時間又は４８時間での画線法及び終夜ＴＳＢブロス法の両方を使用した、（左から右）Ｂ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＣＧＩ３１４、Ｂ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）６０８６（ＢＣ３０（商標））及びＢ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＭＴＣＣ５８５６（Ｌａｃｔｏｓｐｏｒｅ（登録商標））にわたるカゼイン分解活性の欠如を示す。

【図18】図１８は、カゼインに対し低プロテアーゼ活性を示すＦｏｒｔｉｓｐｏｒｅ Ｂ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）を示す。

【図19】図１９は、３７℃で２４時間のインキュベーション後にＥｎｚＣｈｅｃｋ（登録商標）キットにより決定される、Ｂ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）株にわたるカゼイン分解活性の定量分析を示す。

【図20】図２０は、Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅ ＵＴＨ発酵乳のＦＡＡプロファイルを示す。メチオニン、アラニン、プロリン、トリプトファン、リジン、シス－アコニット酸の相対濃度を示す（白色バー（左）は対照に相当）。

【図21】図２１は、Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅ ＵＴＨ発酵乳のＦＡＡプロファイルを示す。コハク酸、乳酸、安息香酸、イソクエン酸の相対濃度を示す（白色バー（左）は対照に相当）。

【図22】図２２は、乳酸、コハク酸及び安息香酸の産生においてＬａｃｔｏｓｐｏｒｅ及びＢＣ３０とＦｏｒｔｉｓｐｏｒｅを比較する（左から右へ：対照、ＢＣ３０、Ｌａｃｔｏｓｐｏｒｅ、Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅ）。

【図23】図２３は、アミノ酸の産生においてＬａｃｔｏｓｐｏｒｅ及びＢＣ３０とＦｏｒｔｉｓｐｏｒｅを比較する（左から右へ：対照、ＢＣ３０、Ｌａｃｔｏｓｐｏｒｅ、Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅ；また、メチオニン、プロリン、トリプトファン、リジンの相対濃度を示す）。

【図24】図２４は、Ｆｉｂｅｒｓｏｌ（登録商標）（Ｆ）が、対照と比較してインキュベーション２４時間後に最小培地中で、１ ｌｏｇ_１０、Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅの濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を有意に増加させたことを示す。

【図25】図２５は、Ｆｉｂｅｒｓｏｌ（登録商標）（Ｆ）が、最小培地中でＦｏｒｔｉｓｐｏｒｅの濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を有意に上昇させ、一方でＢＣ３０及びＬａｃｔｏｓｐｏｒｅの増殖における有意性は見られなかったことを示す。

【図26】図２６は、Ｆｉｂｅｒｓｏｌ（登録商標）（Ｆ）が、対照と比較して、ＴＳＢ培地中でＦｏｒｔｉｓｐｏｒｅ濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）における有意な上昇を示さなかったことを示す。

【図27】図２７は、Ｆｉｂｅｒｓｏｌ（登録商標）（Ｆ）が、対照と比較して、ＴＳＢ培地中でＤＥ１１１、Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅ、ＢＣ３０、Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）及びサルモネラ・エンテリティディス（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ）の濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）における有意な上昇を示さなかったことを示す。

【図28】図２８は、Ｆｉｂｅｒｓｏｌ（登録商標）（Ｆ）が、対照と比較して、５０％ＴＳＢ培地中でＦｏｒｔｉｓｐｏｒｅの濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を有意に上昇させなかったことを示す。

【図29】図２９は、Ｆｉｂｅｒｓｏｌ（登録商標）（Ｆ）が、５０％ＴＳＢ培地中で２４時間後にＤＥ１１１の収率（ＣＦＵ／ｍＬ）を１ ｌｏｇ_１０、有意に上昇させたことを示す。

【図30】図３０は、Ｆｉｂｅｒｓｏｌ（登録商標）（Ｆ）が、ＢＨＩ培地中で対照と比較して、Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅの濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）における有意な上昇を示さなかったことを示す。

【図31】図３１は、Ｆｉｂｅｒｓｏｌ（登録商標）（Ｆ）が、ＢＨＩ培地中で対照と比較して、ＤＥ１１１、Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅ及びＢＣ３０の濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）における有意な上昇を示さなかったことを示す。

【図32】図３２は、Ｆｉｂｅｒｓｏｌ（登録商標）（Ｆ）が、５０％ＢＨＩ培地中で対照と比較して、Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅの濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）における有意な上昇を示さなかったことを示す。

【図33】図３３は、Ｆｉｂｅｒｓｏｌ（登録商標）（Ｆ）が、５０％ＢＨＩ培地中で対照と比較して、ＤＥ１１１、Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅ及びＢＣ３０の濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）における有意な上昇を示さなかったことを示す。

【発明を実施するための形態】

【0024】

遺伝子型同定
出願者らは、ゲノムシーケンシング及び同定についてＣｏｒｎｅｌｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｉｔｈａｃａ ＮＹ，ＵＳＡ）と連携した。

【0025】

ＷＧＳ ＤＮＡ組成物
全ゲノム配列（ＷＧＳ）を、アセンブリ及びアノテーションを含み、Ｃｏｒｎｅｌｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙにより行った。バイオインフォマティクス分析は、Ｃｏｒｎｅｌｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙで、及びＤｅｅｒｌａｎｄ Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ ａｎｄ Ｅｎｚｙｍｅｓ（Ｋｅｎｎｅｓａｗ ＧＡ，ＵＳＡ）で完遂された。ｇｙｒＢ遺伝子ポイモルフィズム（ｐｏｙｍｏｒｐｈｉｓｍ）の同定を、出願者により行った。

【0026】

ｇｙｒＢ遺伝子は、ＤＮＡジャイレースサブユニットＢをコードする。ＤＮＡジャイレースは、ねじれ角が小さい（ｕｎｄｅｒｗｏｕｎｄ）状態で染色体を維持するために、ＡＴＰ依存的に閉じた環状２本鎖ＤＮＡを負に超らせんに巻く。遺伝子シーケンシング分析は、原核生物の種レベルの鑑別のためのよく確立された方法であるｇｙｒＢ遺伝子多型を使用した（Ｂａｖｙｋｉｎ ｅｔ ａｌ．，２０１４；Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２００７）。代表的なゲノムが、見直され、ＮＣＢＩにより精選され、ＵｎｉＰｒｏｔ Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ（ＮＣＢＩ，２０１６；ＵｎｉＰｒｏｔ，２０１６）によりコーディネートされた。ＵｎｉＰｒｏｔ Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ分析と併せたＲ ｐａｃｋａｇｅ ＳｅｑｕｉｎＲを使用して、本発明で特許請求されるバチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）株ＣＧＩ３１４の全ゲノム配列（ＷＧＳ）及びＧｙｒＢ配列を他の参照株と比較した（下記の表１～３）。

【0027】

バチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＣＧＩ３１４の遺伝子型、ｇｙｒＢ及び１６Ｓ ｒＲＮＡの同定
ＣＧＩ３１４を単離し、ゲノムを、成功であるとみなした。

【0028】

ＣＧＩ３１４のゲノムサイズ（３．０Ｍｂｐ）は、以前シーケンシングされたＢ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）株（３．４Ｍｂｐ）（Ｕｐａｄｒａｓｔａ ｅｔ ａｌ．，２０１６）よりも短かった。％ＧＣ（４７．３％）は、以前シーケンシングされたＢ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）株のもの（４６．５％）（Ｕｐａｄｒａｓｔａ ｅｔ ａｌ．，２０１６）と合致した。

【表1】

【表2】

【表3】

【0029】

１６Ｓ ｒＲＮＡ
４つの参照配列と比較して、ＣＧＩ３１４の全ゲノムシーケンシング（ＷＧＳ）及び１６ＳｒＲＮＡ分析は、Ｂ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）株ＡＴＣＣ７０５０と比較すると、９９．９％の１６ＳｒＲＮＡについての平均ヌクレオチド同一性（ＡＮＩ）スコアを示した。ＣＧＩ３１４についてのゲノムサイズ（３．０Ｍｂｐ）及びＧＣ含量（４７．３０％）は、４つの参照株と同等であった。

【0030】

さらなる預託及び受入番号
バチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）株ＣＧＩ３１４（Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅ）のゲノム配列データは、ＮＣＢＩ ＧｅｎＢａｎｋデータベースに預託され、ゲノム配列は、ＮＣＢＩ Ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃ Ｇｅｎｏｍｅ Ａｎｎｏｔａｔｉｏｎ Ｐｉｐｅｌｉｎｅ（ＰＧＡＰ）によりアノテートされた。ゲノムは、その株に対するＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＪＡＢＢＦＵ０００００００００．１で公開されており、例えばリンク：ｌｉｎｋ：ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｎｕｃｃｏｒｅ／ＪＡＢＢＦＵ０００００００００．１で利用可能である。

【0031】

バチルス・クラウシイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｌａｕｓｉｉ）株ＣＳＩ０８（Ｍｕｎｉｓｐｏｒｅ）のゲノム配列データは、ＮＣＢＩ ＧｅｎＢａｎｋデータベースに預託され、ゲノム配列は、ＮＣＢＩ Ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃ Ｇｅｎｏｍｅ Ａｎｎｏｔａｔｉｏｎ Ｐｉｐｅｌｉｎｅ（ＰＧＡＰ）によりアノテートされた。ゲノムは、その株に対するＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＪＡＢＢＮＬ０００００００００．１で公開されており、例えばリンク：Ａｌｋａｌｉｈａｌｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｌａｕｓｉｉ ｓｔｒａｉｎ ＣＳＩ０８，ｗｈｏｌｅ ｇｅｎｏｍｅ ｓｈｏｔｇｕｎ ｓｅｑｕｅｎｃｉ－Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ－ＮＣＢＩ（ｎｉｈ．ｇｏｖ）で利用可能である。

【0032】

バチルス・メガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）株ＭＩＴ４１１（Ｒｅｎｕｓｐｏｒｅ）のゲノム配列データは、ＮＣＢＩ ＧｅｎＢａｎｋデータベースに預託され、ゲノム配列は、ＮＣＢＩ Ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃ Ｇｅｎｏｍｅ Ａｎｎｏｔａｔｉｏｎ Ｐｉｐｅｌｉｎｅ（ＰＧＡＰ）によりアノテートされた。ゲノムは、その株に対するＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＪＡＢＢＮＫ０００００００００．１で公開されており、例えばリンク：Ｐｒｉｅｓｔｉａ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ ｓｔｒａｉｎ ＭＩＴ４１１，ｗｈｏｌｅ ｇｅｎｏｍｅ ｓｈｏｔｇｕｎ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ｐｒｏ －Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ－ＮＣＢＩ（ｎｉｈ．ｇｏｖ）で利用可能である。

【0033】

系統発生学的な配置は、Ｄｅｅｒｌａｎｄ Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ ａｎｄ Ｅｎｚｙｍｅｓ，Ｉｎｃ．により行われた。

【0034】

デジタルゴールドスタンダードである、ゲノム対ゲノムの距離計算（ＧＧＤＣ）は、ＤＮＡ－ＤＮＡハイブリダイゼーション（ＤＤＨ）と同程度の信頼性がある（Ａｕｃｈ ｅｔ ａｌ．，２０１０）。ＧＧＤＣは、亜種の評価のためのより高い識別力を保持し、その後、多重アライメント及び系統発生的分析の確認として使用された。ＧＧＤＣは、計算に基づくモデルをもたらし、これは、バチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＣＧＩ３１４が、ＡＴＣＣ７０５０に対して近縁種であることをさらに検証した。

【0035】

保存される１６Ｓ ｒＲＮＡ配列は、細菌における系統発生を比較し、試験するためのよく確立された方法であるが、近縁種の間の配列類似性の高い割合は、その有用性を制限する（Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２００７）。近縁の細菌種における１６Ｓ ｒＲＮＡ配列類似性の高い率は、分子進化の速度がより遅いためである。過去の研究（Ｂａｖｔｌｉｎ ｅｔ ａｌ．，２００４；Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２００７）は、それらの塩基置換の速度及びＤＮＡ－ＤＮＡハイブリダイゼーション分析との有意で信頼できる相関のため、分類学的なバイオマーカーとしてｇｙｒＢ配列を使用する妥当性を裏付ける（Ｄａｕｇａ ｅｔ ａｌ．，２００２；Ｋａｓａｉ ｅｔ ａｌ．，１９９８；Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２００７）。ｇｙｒＢは、ＤＮＡ複製において重要な役割を果たすＤＮＡジャイレースＢ及びＩＩ型トポイソメラーゼをコードする。ジャイレースＢサブユニットは、ｇｙｒＢ遺伝子によりコードされる。

【0036】

近隣結合（ＮＪ）法（Ｓａｉｔｏｕ ＆ Ｎｅｉ，１９８７）を使用する系統発生学的な分析は、バチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＡＴＣＣ ７０５０があるクレードにバチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＣＧＩ３１４を位置づけた（図２）。これは、全ての以前のゲノム同一性決定を確認する。バチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＣＧＩ３１４は、バチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）群に位置づけられている。

【0037】

定義
「賦形剤」は、最終処方物の部分を形成するために添加されるあらゆる非活性成分を意味する。

【0038】

「プロバイオティクス」は、生存可能な微生物サプリメントを意味し、これは、腸管、尿路又は膣管におけるその効果を通じて患者に対する有益な影響を有する。「プロバイオティクス」という用語は、適正な量で投与されると、宿主に健康上の利益を付与する、生きている微生物を指し得る。プロバイオティクスを含有する食品及び食品添加物は、腸の微生物叢の健康なバランスの回復を助け得る。さらに、腸内細菌叢のプロバイオティックの補充は、健康的な腸のホメオスタシスを促進し得る。

【0039】

「プレバイオティクス」は本明細書中で、基質として使用され、それは、プロバイオティクスに対する、及び従ってプロバイオティクスを摂取する個々の患者に対する有益な効果を有する。適切なプレバイオティクスは、イヌリン、オリゴ糖及び／又はビタミンから選択され得る。

【0040】

本明細書中で使用される「対象」は、微生物の不均衡に関する何れかの臨床状態に罹患している者並びに予防的に、細菌調製物を使用している者を含む。任意選択的に、対象は、ヒトである。

【0041】

「シンバイオティクス製品」は、プロバイオティクスとプレバイオティクスの組み合わせを意味し、これは相乗的であり、患者に対し有益な影響を有する。

【0042】

「頑強な増殖（ｈａｒｄｙ ｇｒｏｗｔｈ）」は、細菌が優れた増殖を示すことを意味する。

【0043】

「ＣＦＵ」という略語は、コロニー形成単位を意味する。

【0044】

対象においてインビボ細菌叢を再生できるプロバイオティクスの桿菌（Ｂａｃｉｌｌｉ）株に関する本発明は、次の詳細な説明が進むにつれて明らかになろう。

【0045】

第１の態様によれば、本発明は、単独での又は基本的に同じ特性を有する他のプロバイオティクスの桿菌（Ｂａｃｉｌｌｉ）株と組み合わせたバチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）株ＣＧＩ３１４を含む。このような他のプロバイオティクスの桿菌（Ｂａｃｉｌｌｉ）株としては、バチルス・クラウシイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｌａｕｓｉｉ）株及びバチルス・メガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）株が挙げられ得るが、限定されない。このような他の桿菌（Ｂａｃｉｌｌｉ）株としては、内容がその全体において本明細書中に組み込まれるこれらの個々の題目下で本日それぞれ提出される、バチルス・クラウシイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｌａｕｓｉｉ）株及びバチルス・メガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）株がさらに挙げられ得る。

【0046】

本明細書中に添付される特許請求の範囲で引用される通りの配列番号１は、バチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＣＧＩ３１４のｇｙｒＢを含む。

【0047】

本明細書中に添付される特許請求の範囲で引用される通りの配列番号２は、バチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＣＧＩ３１４の１６Ｓ ｒＲＮＡを含む。

【0048】

本明細書中に添付される特許請求の範囲で引用される通りの配列番号３は、バチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＣＧＩ３１４の組み立てられた全ゲノム配列を含む。

【0049】

配列番号１及び／又は２との少なくとも９７％の同一性；又は配列番号３との少なくとも９７％の同一性に関して本明細書中で特許請求されるバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）株は、次の特性を有する：

【0050】

バチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＣＧＩ３１４

【0051】

この株は、胆汁安定性を示す。

【0052】

この株は、酸安定性を示す。

【0053】

この株は、熱耐性を示す。

【0054】

この株は、バクテリオシンの形態で天然の抗生物質を産生する。

【0055】

本明細書中で開示される株の属及び種を決定するために、全ゲノムをシーケンシングした。この株の量及び組成を、同定し決定した。

【0056】

この株は、抗生物質耐性及び安全性の懸念が殆ど又は全くないと示された。

【0057】

この株は、酸及び胆汁に対し安定性を示すことが見出された。

【0058】

第２の態様によれば、本発明の桿菌（Ｂａｃｉｌｌｉ）株は、膣感染、尿路感染及び胃腸疾患（胃腸感染を含む）を予防する又は処置すること、並びに免疫的健康を向上させること、酸化ストレスに対する防御、クレンジング及び解毒、代謝的健康及び心血管系の健康における医学的使用に適切である。

【0059】

別の好ましい実施形態では、医薬組成物が、薬学的に許容可能な担体及び／又は希釈剤と一緒に、単独での又は基本的に同じ特性を有する他のプロバイオティクスの桿菌（Ｂａｃｉｌｌｉ）株と組み合わせたバチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＣＧＩ３１４を含んで提供される。このような他のプロバイオティクスの桿菌（Ｂａｃｉｌｌｉ）株としては、バチルス・クラウシイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｌａｕｓｉｉ）株及びバチルス・メガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）株が挙げられるが限定されない。これらの細菌株は、プロバイオティクス株の容易な投与を可能にするために及び当業者にとって公知の手段により、医薬処方物へと処方される。

【0060】

バチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）は、全てインビボで、過敏性腸症候群の症状を緩和し（Ｓｕｄｈａ ｅｔ ａｌ．，２０１８）、筋肉の完全性及びサイトカイン応答を改善し（Ｇｅｐｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１７；Ｊａｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１８）、腸のマイクロバイオーム及び免疫応答を調整し（Ｋｉｍｍｅｌ ｅｔ ａｌ．，２０１０）、機能性腸ガス症状を軽減し（Ｋａｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．，２００９）、下痢の実例及び期間を低減させ（Ｄｏｌｉｎ ｅｔ ａｌ．，２００９）、機能性腹痛及び膨満の症状を改善し（Ｈｕｎ ｅｔ ａｌ．，２００９）、アセトアミノフェン誘導性の急性肝臓傷害を予防し（Ｎｅａｇ ｅｔ ａｌ．，２０２０）、ブチロジェネシス（ｂｕｔｙｒｏｇｅｎｅｓｉｓ）を促進し（Ｓａｓａｋｉ ｅｔ ａｌ．，２０２０）、細菌性腟疾患の重症度を低減し（Ｓｕｄｈａ ｅｔ ａｌ．，２０１２）及びコレステロールを低下させる（Ｓｕｄｈａ ｅｔ ａｌ．，２０１２）ことができると証明されている。バチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）はまた、全てインビトロで、免疫応答及び抗炎症作用を誘導し（Ｊｅｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，２０１７）、植物タンパク質消化を改善し（Ｋｅｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１７）、Ｃａｃｏ－２細胞に接着し（Ｓｈａｒｍａ ＆ Ｋａｎｗａｒ，２０１７）、潰瘍性大腸炎がある患者におけるコロニー微小環境を改善し（Ｓａｓａｋｉ ｅｔ ａｌ．，２０２０）、ＨＴ－２９細胞においてＳ．チフィムリウム（Ｓ．ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）により引き起こされる、接着、細胞傷害性及びアポトーシスの誘導を低減し（Ｋａｗａｒｉｚａｄｅｈ ｅｔ ａｌ．，２０１９）、ホエイタンパク質からラクトースを加水分解し（Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，２０１９）、ｔ－細胞応答を増強する（Ｂａｒｏｎ，２００９）ことも示されている。

【0061】

バチルス・クラウシイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｌａｕｓｉｉ）は、インビボで、再発性の呼吸器感染を予防すること（Ｍａｒｓｅｇｌｉａ ｅｔ ａｌ．，２００７）、下痢の持続期間及び重症度を低減すること（Ｓｕｄｈａ ｅｔ ａｌ．，２０１９）において効果的であることが証明されている。バチルス・クラウシイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｌａｕｓｉｉ）はまた、インビトロで、抗菌及び抗酸化能とともにタンパク質加水分解産物を生成すること（Ｒｏｃｈｉｎ－Ｍｅｄｉｎａ ｅｔ ａｌ．，２０１７）、アセトアミノフェンにより誘導される急性肝臓損傷を予防すること（Ｎｅａｇ ｅｔ ａｌ．，２０２０）、クロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）及びバチルス・セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ）毒により誘導される細胞傷害性効果を阻害すること（Ｒｉｐｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，２０１６）ができることも証明されている。

【0062】

バチルス・メガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）は、インビトロ及びインビボの両方で、酸化ストレスに対して防御効果を発揮することが示されている（Ｍａｚｚｏｌｉ ｅｔ ａｌ．，２０１９）。バチルス・メガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）はまた、酸ストレス条件で適応する及び生存すること並びにインビトロで重金属をキレートすることができることも示されている（Ｆｅｒｒｅｉｒａ ｅｔ ａｌ．，２０１９）。

【0063】

好ましくは、本発明に従い医薬品中で使用されるプロバイオティックな細菌は、１０^６～１０^１３の細菌濃度で使用される。一実施形態では、本発明で使用されるプロバイオティックな細菌は、１０^６～１０^１３ＣＦＵ（コロニー形成単位）の細菌濃度で、例えば上記範囲に含まれる何れかの量又は範囲を含む１日用量として、使用される。一実施形態では、細菌は、１０^７～１０^１２ＣＦＵ又は１０^８～１０^１１ＣＦＵ又は１０^９～１０^１０ＣＦＵの量で、又は例えば約１０^６、約１０^７、約１０^８、約１０^９、約１０^１０、約１０^１１、約１０^１２及び／又は約１０^１３ＣＦＵの量及び上記量を含むか又はそれらの間にある何れかの量又は範囲で、使用される。一実施形態では、本発明の組成物は、約１０^６～約１０^１３ＣＦＵ、例えば約１０^９のバチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＣＧＩ３１４を含む、基本的にそれからなる、それからなる、及び／又はそれにより特徴づけられる。一実施形態では、本発明の組成物は、バチルス・メガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）ＭＩＴ４１１及び／又はバチルス・クラウシイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｃｃｌａｕｓｉｉ）ＣＳＩ０８と組み合わせて、バチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＣＧＩ３１４（例えば約１０^９ＣＦＵ）を含む。一実施形態では、本発明の組成物は、カプセル形態で経口投与される。一実施形態では、本発明の組成物及び／又は使用又は方法において、バチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＣＧＩ３１４は、芽胞形態である、又は芽胞形態ではない。

【0064】

特定の実施形態では、バチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＣＧＩ３１４を含む組成物は、トレハロース、マルトデキストリン、米粉、微結晶セルロース、ステアリン酸マグネシウム、イノシトール、フラクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、デキストロース、乾燥乳製品などからなる群から選択される１種以上の乾燥担体を含み得る。特定の実施形態では、乾燥担体が、組成物の約１％～約９５重量％の重量パーセントでバチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＣＧＩ３１４を含む組成物に添加され得る。

【0065】

特定の実施形態では、バチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＣＧＩ３１４を含む組成物は、水及び生理食塩溶液、尿素、アルコール及びその誘導体（例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール）、グリコール（例えば、エチレングリコール、プロピレングリコール）からなる群から選択される１種以上の液体又はゲルに基づく担体；全て生物と適合性がある、天然又は合成香味料及び食品品質の着色剤；コーンスターチ、グアーガム、キサンタンガムなどからなる群から選択される増粘剤；過塩性の担体、メチルパラベン、グアーガム、ポリソルベート、保存剤などからなる群から選択される１種以上の芽胞発芽阻害剤を含み得る。特定の実施形態では、１種以上の液体又はゲルに基づく担体が、組成物の約０．６％～約９５％重量／体積の重量／体積パーセンテージでバチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＣＧＩ３１４を含む組成物に添加され得る。特定の実施形態では、天然又は合成香味料が、組成物の約３．０％～約１０．０％重量／体積の重量／体積パーセンテージでバチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＣＧＩ３１４を含む組成物に添加され得る。特定の実施形態では、着色剤が、組成物の約１．０％～約１０．０％重量／体積の重量／体積パーセンテージでバチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＣＧＩ３１４を含む組成物に添加され得る。特定の実施形態では、増粘剤が、組成物の約２％重量／体積の重量／体積パーセンテージでバチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＣＧＩ３１４を含む組成物に添加され得る。特定の実施形態では、１種以上の芽胞発芽阻害剤が、組成物の約１％重量／体積の重量／体積パーセンテージでバチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＣＧＩ３１４を含む組成物に添加され得る。

【0066】

送達系
適切な剤形としては、錠剤、カプセル、溶液、懸濁液、粉末、ガム及び菓子類が挙げられる。舌下送達系としては、舌下及び舌上での溶けるタブレット、液体ドロップ及び飲料が挙げられるが、限定されない。可食性フィルム、親水性ポリマー、口腔で溶けるフィルム又は溶ける経口ストリップ（ｓｔｒｉｐ）を、使用し得る。他の有用な送達系は、経口又は鼻腔スプレー又は吸入剤などを含む。適切な剤形としては、錠剤、カプセル、溶液、懸濁液、粉末、ガム及び菓子類が挙げられる。舌下送達系としては、舌下及び舌上での溶けるタブレット、液体ドロップ及び飲料が挙げられるが、限定されない。可食性フィルム、親水性ポリマー、口腔で溶けるフィルム又は口腔で溶けるストリップを、使用し得る。他の有用な送達系は、経口又は鼻腔スプレー又は吸入剤などを含む。

【0067】

経口投与の場合、プロバイオティクスは、錠剤、カプセル、丸剤、粉末、顆粒剤又は他の適切な剤形の調製のために１つ以上の固体の不活性成分とさらに組み合わされ得る。例えば、活性物質は、充填剤、結合剤、保水剤、崩壊剤、溶解遅延剤、吸収促進剤、湿潤剤、吸収剤及び滑沢剤からなる群から選択される少なくとも１つの賦形剤と組み合わされ得る。他の有用な賦形剤としては、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、マンニトール、キシリトール、甘味料、デンプン、カルボキシメチルセルロース、微結晶セルロース、シリカ、ゼラチン、二酸化ケイ素などが挙げられるが、限定されない。

【0068】

特定の実施形態では、１つ以上の従来のアジュバント、担体又は希釈剤と一緒に本開示の方法に従い投与される組成物の構成成分は従って、医薬組成物及びその単位投与量の形態中に置かれ得る。このような形態としては、固体及び特に、全て経口での使用のための、錠剤、充填カプセル、粉末及びペレット形態；液体及び特に、水性又は非水性溶液、懸濁液、エマルジョン、エリキシル；及びそれらが充填されたカプセル；直腸投与用の座薬及び非経口使用のための滅菌注射用溶液が挙げられる。このような医薬組成物及びその単位剤形は、さらなる活性化合物又は有効成分あり又はなしで、従来の割合で従来の成分を含み得、このような単位剤形は、使用される意図された１日投与量の範囲と釣り合う、有効成分のあらゆる適切な有効量を含有し得る。

【0069】

本開示の方法に従い投与される組成物の構成成分は、多岐にわたる経口及び非経口剤形で投与され得る。次の剤形が、特定の実施形態では、活性成分として、本開示の化学的な化合物又は本開示の化学的な化合物の薬学的に許容可能な塩の何れかを含み得ることは、当業者にとって明らかであろう。

【0070】

本開示の方法に従い投与される医薬組成物を調製するための、薬学的に許容可能な担体は、固体又は液体の何れかであり得る。固体形態の調製物としては、粉末、錠剤、丸剤、カプセル、カシェー、坐薬及び分散性顆粒剤が挙げられる。固体担体は、希釈剤、香味剤、可溶化剤、滑沢剤、懸濁剤、結合剤、保存剤、錠剤崩壊剤又は封入材料としても作用し得る、１つ以上の物質であり得る。

【0071】

粉末において、担体は、微粉化された固体であり、それは、微粉化された活性成分との混合物中にある。錠剤において、活性成分は、適切な割合で必要な結合能を有する担体と混合され、所望の形状及びサイズに成形される。

【0072】

特定の実施形態では、本開示の方法に従い投与される粉末及び錠剤は好ましくは、５又は１０～約７０パーセントの活性化合物を含有し得る。適切な担体は、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、糖、ラクトース、ペクチン、デキストリン、デンプン、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、低融点ワックス、カカオバターなどである。「調製」という用語は、さらなる担体あり又はなしで活性成分が担体により取り囲まれる、従ってそれと合わせられる、カプセルを提供する担体としての封入材料を用いる活性化合物の処方を含むと意図される。同様に、カシェー及び薬用キャンディーが、含まれる。錠剤、粉末、カプセル、丸剤、カシェー及び薬用キャンディーが、含まれる。錠剤、粉末、カプセル、丸剤、カシェー及び薬用キャンディーは、経口投与に適切な固体形態として使用され得る。

【0073】

液体調製物としては、溶液、懸濁液及びエマルジョン、例えば水又は水－プロピレングリコール溶液が挙げられるが、限定されない。例えば、非経口注射液体調製物は、水性ポリエチレングリコール溶液中で溶液として処方され得る。特定の実施形態では、本開示の方法に従い投与される化学的化合物は従って、非経口投与（例えば注射、例えばボーラス注射又は連続点滴による）のために処方され得、アンプル、プレフィルドシリンジ、低体積注入での投与のための単位用量で、又は保存剤が添加された複数回投与容器で与えられ得る。本組成物は、油性又は水性ビヒクル中で懸濁液、溶液又はエマルジョンとしてこのような形態をとり得、懸濁剤、安定化剤及び／又は分散剤などの処方剤を含有し得る。或いは、有効成分は、使用前に、適切なビヒクル、例えば滅菌、発熱物質不含水との構成のために滅菌固体の無菌的な単離によるか又は溶液からの凍結乾燥により得られる、粉末形態であり得る。

【0074】

経口使用に適切な水溶液は、水中で有効成分を溶解すること、および必要に応じて適切な着色剤、香味料、安定化剤及び増粘剤を添加することにより調製され得る。経口使用に適切な水性懸濁液は、天然又は合成ゴム、樹脂、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム又は他の周知の懸濁剤などの粘性物質とともに水中で微粉化した活性成分を分散させることにより作製され得る。

【0075】

口腔中の局所投与に適切な組成物としては、風味付きの基剤、通常はスクロース及びアカシア又はトラガカント中で活性物質を含む薬用キャンディー；ゼラチン及びグリセリン又はスクロース及びアカシアなどの不活性基剤中に有効成分を含むトローチ；及び適切な液体担体中に有効成分を含む洗口液が挙げられるが、限定されない。

【0076】

溶液又は懸濁液は、従来の手段により、例えば、点滴器、ピペット又はスプレーを用いて、鼻腔に直接適用される。本組成物は、単回又は複数回の投与形態で提供され得る。鼻腔内組成物を含む気道への投与が意図される組成物において、本化合物は一般に、例えば５ミクロン以下のオーダーの小さい粒径を有する。このような粒径は、当技術分野で公知の手段により、例えば、微粒子化により得られ得る。

【0077】

医薬調製物は好ましくは、単位剤形である。このような形態において、調製物は、適切な量の活性成分を含有する単位用量にさらに分割される。単位剤形は、パッケージされた調製物であってよく、パッケージは、バイアル又はアンプル中のパッケージされた錠剤、カプセル及び粉末などの調製物の個別の量を含有する。また、単位剤形は、カプセル、錠剤、カシェー又は薬用キャンディーそのものであり得る；又はそれは、パッケージされた形態のこれらの何れかの適切な数であり得る。

【0078】

経口投与のための錠剤、カプセル及び薬用キャンディー及び経口使用のための液体は、好ましい組成物である。鼻腔への又は気道への適用のための溶液又は懸濁液は、好ましい組成物である。表皮への局所投与のための経皮パッチは、好ましい。

【0079】

処方及び投与のための技術についてのさらなる詳細は、ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥＳ（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ）の最新版で見出され得る。

【0080】

特定の実施形態では、本開示の方法に従い投与される組成物を含む本発明の組成物はまた、１つ以上の賦形剤、最も好ましくは１つ以上の栄養補助剤用の賦形剤又は医薬賦形剤も含み得る。１つ以上の賦形剤を含有しかつ１つ以上のプロバイオティクスを組み込む組成物は、当技術分野で公知の手順により調製され得る。任意選択的に、組成物は、１つ以上のアジュバント、賦形剤、担体、緩衝液、希釈剤及び／又は他の通例の医薬補助剤を含み得る。例えば、プロバイオティクスは、錠剤、カプセル、粉末、懸濁液、経口投与用の溶液、静脈内、皮内、筋肉内及び皮下投与を含む非経口投与用の溶液及び一般的及び従来のバリア、結合剤、希釈剤及び賦形剤との経皮適用用のパッチ上への適用のための溶液へと処方され得る。

【0081】

特定の実施形態では、本開示の方法に従い投与される栄養補給食品組成物を含む栄養補給食品組成物は、薬学的に許容可能な担体を含み得、かつそれと組み合わせて投与され得る。特定の実施形態では、このような処方物中の有効成分は、約１重量％～約９９重量％を含み得る。他の実施形態では、このような処方物中の有効成分は、約０．１重量％～約９９．９重量％を含み得る。「薬学的に許容可能な担体」は、処方物の他の成分と適合しかつ使用者に対し有害でない何れかの担体、希釈剤又は賦形剤を意味する。有用な賦形剤としては、微結晶セルロース、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、何れかの許容可能な糖（例えばマンニトール、キシリトール）などが挙げられるが限定されず、化粧品としての使用の場合、水又は油性基剤が使用されてよく、又はエマルジョンなどを含むその混合物が使用されてよい。

【0082】

投与の経路
株バチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＣＧＩ３１４又は本発明の株を含む組成物は、経口、舌下、頬側、眼、肺、直腸、膣、尿道、尿管及び非経口投与を含むが限定されない何れかの経路により、又は経口若しくは鼻腔スプレー（例えば噴霧蒸気、液滴又は固体粒子の吸入）として投与され得る。非経口投与としては、例えば、静脈内、筋肉内、動脈内、腹腔内、鼻腔内、膣内、膀胱内（例えば膀胱へ）、皮内、経皮、局所又は皮下投与が挙げられる。また本発明の範囲内で企図されるのは、薬物の全身又は局所の放出が後の時間に起こる、制御された処方物での患者の身体における医薬組成物の滴下注入である。例えば、薬物は、循環への制御された放出のための、又は局所部位への放出のためのデポーに局在され得る。

【0083】

本発明の医薬組成物は、例えば経口、直腸、気管支、鼻腔、プルモナル（ｐｕｌｍｏｎａｌ）、局所（頬側及び舌下を含む）、経皮、膣、尿道、尿管又は非経口（皮膚、皮下、筋肉内、腹腔内、静脈内、動脈内、脳内、眼内注射又は点滴を含む）投与を含む、上で特定される経路の何れかに適切なもの及びそのために処方されるものであり得るか、又は粉末及び液体エアロゾル投与を含む、吸入若しくは吹送による又は持続放出系による投与に適切な形態のものであり得る。持続放出系の適切な例は、本発明の化合物を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリクスを含み、このマトリクスは、造形品、例えばフィルム又はマイクロカプセルの形態であり得る。

【0084】

上記の実施形態は、次の実施例と関連してさらに理解され得る。さらに、次の非限定例は、本発明を例示するために提供される。しかし、当技術分野の熟練者は、本発明のあらゆる与えられる実施形態に対する手順を変更する、例えば順序又は段階を変更することが必要であり得ることを認めるであろう。

【0085】

実施例１
バチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＣＧＩ３１４（本明細書中で以後、Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅと呼ばれる）の特徴評価
Ｂ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＣＧＩ３１４（Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅ）は、０．４％ＴＳＡ寒天が重層された固形ＭＲＳ寒天上でＥ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）及びＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）に対し有意な抗微生物活性を有した。

【0086】

しかし、抗微生物活性は、固形培地において、Ｐ．エルギノーサ（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）に対し観察されなかった。Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅは、固体環境において、腸、尿及び皮膚の病原体に対し抗微生物活性を有する。

【表4】

【0087】

抗微生物活性は、阻害ゾーン（ｍｍ）±標準偏差として示される。

【0088】

図３は、０．４％ＴＳＡ寒天が重層されたＭＲＳ寒天プレート（固形培地）上での腸、皮膚及び尿路の日和見性病原体に対するＢ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＣＧＩ３１４の抗微生物活性を示す。Ａ－Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）；Ｂ－Ｓ．エンテリティディス（Ｓ．ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ）及びＣ－Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）。

【0089】

Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅは、液体ＴＳＢ培地中でＥ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）及びＰ．エルギノーサ（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）に対し有意な抗微生物活性を有した。しかし、抗微生物活性は、液体ＴＳＢ培地中でＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）に対し観察されなかった。

【表5】

【0090】

図４は、腸、皮膚及び尿路の日和見性病原体に対する液体ＴＳＢ培地中でのＢ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＣＧＩ３１４抗微生物活性を示す。病原体：Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、シュードモナス・エルギノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）及びＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）。対照は、個々に病原体の増殖を表し；処置は、Ｂ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＣＧＩ３１４の存在下での病原体の増殖を表す。^＊＊ｐ＜０．０１、^＊＊＊ｐ＜０．００１、^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。

【0091】

Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅは、半液体～液体状態が一般的であろう腸及び尿路において日和見性病原体の存在を制御する可能性を有する。さらに、Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅは、ヒトの皮膚などのより乾いた環境において日和見性病原体の広がりを防ぐ可能性を有する。

【0092】

Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅは、競合者Ｂ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）プロバイオティクスよりも高い抗微生物活性を有する。Ｂ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＣＧＩ１３１４（Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅ）の抗微生物活性を、次のヒト皮膚及び腸での日和見性及び動物由来感染症の病原体に対し寒天拡散法を使用して、Ｂ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＭＴＣＣ５８５６（Ｌａｃｔｏｓｐｏｒｅ（登録商標））及びＢ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）６０８６（ＢＣ３０（商標））のものと比較した：
エシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）２５９２２、
サルモネラ・エンテリティディス（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ）１３０７６、
スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）ＲＦ１２２及び
シュードモナス・エルギノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＤＳＭ３２２７。

【0093】

Ｂ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＣＧＩ３１４（Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅ）は、ＢＣ３０（商標）及びＬａｃｔｏｓｐｏｒｅ（登録商標）よりも、２４時間でＥ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）に対し、及び４８時間でＳ．エンテリティディス（Ｓ．ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ）に対し、強い抗微生物活性を示した。Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅは、ヒトの腸に又は皮膚上に存在し得る日和見性及び動物由来感染症の病原体の存在を制御する、より高い可能性を有し得る：
Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）に対するＦｏｒｔｉｓｐｏｒｅの高い抗微生物活性。
４８時間でのＳ．エンテリティディス（Ｓ．ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ）に対するＦｏｒｔｉｓｐｏｒｅの高い抗微生物活性。
抗微生物活性は、Ｐ．エルギノーサ（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）に対しバチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）にわたり検出されない。
ＴＳＡ寒天を用いる、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）に対する、バチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）の限定された抗微生物活性。

【0094】

抗微生物活性－Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）に対する高い抗微生物活性：
Ｂ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＣＧＩ３１４（Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅ）は、ＭＲＳ寒天を使用して試験したＥ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）に対しもっとも強い抗微生物活性を有した。Ｂ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＭＴＣＣ５８５６（Ｌａｃｔｏｓｐｏｒｅ（登録商標））及びＢ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）６０８６（ＢＣ３０（商標））は、限定的な抗微生物活性を有した。

【表6】

【0095】

図５は、２４時間でＥ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）対しＢ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＣＧＩ３１４（Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅ）で観察された最強の抗微生物活性を示す。Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）０．４％ＴＳＡ寒天重層プレートに対し、ＭＲＳ寒天上に接種された（ａ）Ｂ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＭＴＣＣ５８５６（Ｌａｃｔｏｓｐｏｒｅ（登録商標））（ｂ）Ｂ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＣＧ３１４（Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅ）（ｃ）Ｂ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）６０８６（ＢＣ３０（商標））。

【0096】

Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅは、日和見性の腸及び尿路病原体Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）の増殖を阻害した。

【0097】

抗微生物活性－４８時間でのＳ．エンテリティディス（Ｓ．ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ）に対する高い抗微生物活性：
２４時間で、Ｂ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）６０８６（ＢＣ３０（商標））は、Ｓ．エンテリティディス（Ｓ．ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ）に対し最強の抗微生物活性を有した。しかし、４８時間で、Ｂ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＣＧＩ３１４（Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅ）は、この病原体に対する最強の抗微生物活性を有した。

【表7】

【0098】

図６は、４８時間でＳ．エンテリティディス（Ｓ．ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ）に対しＦｏｒｔｉｓｐｏｒｅで観察された最強の抗微生物活性を示す。Ｓ．エンテリティディス（Ｓ．ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ）０．４％ＴＳＡ寒天重層プレートに対し、ＭＲＳ寒天上に接種された（ａ）Ｌａｃｔｏｓｐｏｒｅ（登録商標）（ｂ）Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅ（ｃ）ＢＣ３０（商標）。

【0099】

Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅは、腸管に影響を及ぼすことが知られている動物由来感染症の病原体サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）の増殖を阻害した。

【0100】

抗微生物活性－抗微生物活性は、Ｐ．エルギノーサ（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）に対しバチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）にわたり検出されなかった：

【0101】

寒天拡散法を使用して、抗微生物活性は、Ｐ．エルギノーサ（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）に対しＢ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）にわたり観察されなかった。

【0102】

図７は、抗微生物活性が、Ｐ．エルギノーサ（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）に対しバチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）にわたり検出されなかったことを示す。２４時間でのＰ．エルギノーサ（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）０．４％ＴＳＡ寒天重層プレートに対し、ＴＳＡ寒天上に接種された（ａ）Ｂ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＭＴＣＣ５８５６（Ｌａｃｔｏｓｐｏｒｅ（登録商標））（ｂ）Ｂ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＣＧ３１４（ｃ）Ｂ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）６０８６（ＢＣ３０（商標））。

【0103】

Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅは、皮膚病原体Ｐ．エルギノーサ（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）に対し抗微生物剤を放出しない。しかし、Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅは、液体培地中でＰ．エルギノーサ（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）に対し潜在的な活性を示す（表５及び図７参照）。

【0104】

抗微生物活性－ＭＲＳ寒天を用いるＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）に対するバチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）の限定的な抗微生物活性：

【0105】

ＴＳＡ寒天を使用して、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）に対するＢ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）株による抗微生物活性の証拠はなかった。しかし、Ｂ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）６０８６（ＢＣ３０（商標））及びＢ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＣＧＩ１３１４（Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅ）は、ＭＲＳ寒天を使用してこの病原体に対し僅かな活性を示した。

【表8】

【0106】

図８は、２４時間でＭＲＳ寒天を使用してＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）に対しＢ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）にわたり検出された限定的な抗微生物剤を示す。（ａ）Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）０．４％ＴＳＡ寒天重層プレートに対し、ＴＳＡ寒天上に接種されたＢ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）（左から右に：ＢＣ３０、ＣＧＩ３１４、Ｌａｃｔｏｓｐｏｒｅ）。（ｂ）Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）０．４％ＴＳＡ寒天重層プレートに対し、ＭＲＳ寒天上に接種されたＢ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）（左から右に：ＣＧＩ３１４、ＢＣ３０、Ｌａｃｔｏｓｐｏｒｅ）。

【0107】

Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅは、皮膚病原体Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）に対し皮膚などの乾燥表面上で限定量の抗微生物剤を放出し得る。

【0108】

Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅは、潜在的な抗酸化剤プロバイオティクスである：
ＦｏｒｔｉｓｐｏｒｅＢ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）の総酸化活性を、Ｌ．ラムノサス（Ｌ．ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）と比較した。Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅは、Ｌ．ラムノサス（Ｌ．ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）よりも高い抗酸化活性を有する。

【0109】

図９は、Ｂ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）及びＬ．ラムノサス（Ｌ．ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）の総抗酸化能を示す。結果は、ｎｍｏｌｅ／ｍｌでのトロロックス同等物の平均濃度（ｎ＝３）±標準誤差を示す。^＊＊ｐ－値＝０．００１４。

【0110】

Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅにおけるトロロックス同等物濃度の上昇されたレベルは、フリーラジカルを中和でき除去でき、かつ細胞への酸化損傷を防ぎ得る。

【0111】

Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅ抗酸化活性は、全てのＤｅｅｒｌａｎｄ芽胞の中で２番目に高い量の抗酸化活性である。

【0112】

Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅ Ｂ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）の総抗酸化活性を、Ｂ．メガテリウム（Ｂ．ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）ＭＩＴ４１１、Ｂ．クラウシイ（Ｂ．ｃｌａｕｓｉｉ）ＣＳＩ０８、ＤＥ１１１Ｂ．サブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）及びＬ．ラムノサス（Ｌ．ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）と比較した。Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅは、高い抗酸化活性を有し、Ｌ．ラムノサス（Ｌ．ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）よりも高い。

【0113】

図１０は、ＤＥ１１１、本発明のＢ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）、Ｂ．クラウシイ（Ｂ．ｃｌａｕｓｉｉ）ＣＳＩ０８、Ｂ．メガテリウム（Ｂ．ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）ＭＩＴ４１１及びＬ．ラムノサス（Ｌ．ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）の総抗酸化能を示す。結果は、ｎｍｏｌｅ／ｍｌでのトロロックス同等物の平均濃度（ｎ＝３）±標準誤差を示す。

【0114】

Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅにおけるトロロックス同等物濃度の上昇されたレベルは、フリーラジカルを中和でき、除去でき、かつ細胞に対する酸化損傷を防ぎ得る。

【0115】

Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅ（栄養型、非芽胞型）は、腸上皮細胞株に接着しなかった。

【0116】

腸上皮のインビトロモデルへのバチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）株（ＣＧＩ３１４）の接着能を、評価した。ＨＴ－２９細胞株へのＢ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）株ＣＧＩ３１４の接着は、３７℃で無視できる程度であった。粘液産生細胞株ＨＴ－２９－ＭＴＸへのＢ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＣＧＩ３１４の接着能は、３７℃で無視できる程度であった。

【0117】

図１１は、ＨＴ－２９細胞株へのＦｏｒｔｉｓｐｏｒｅの接着が無視できる程度であったことを示す。

【0118】

図１２は、ＨＴ－２９－ＭＴＸ細胞株へのＦｏｒｔｉｓｐｏｒｅの接着が無視できる程度であることを示す。

【0119】

Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅ株は、腸粘液又は上皮細胞に接着しない。

【0120】

腸上皮のインビトロモデルへの様々なバチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）株（ＣＧＩ３１４、ＢＣ３０（商標）、Ｌａｃｔｏｓｐｏｒｅ（登録商標））の接着能を、評価した。ＨＴ－２９細胞株へのＢ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）株ＣＧＩ３１４、ＢＣ３０（商標）、Ｌａｃｔｏｓｐｏｒｅ（登録商標）の接着は、３７℃で無視できる程度である。粘液産生細胞株ＨＴ－２９－ＭＴＸへのＢ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＢＣ３０（商標）の接着能は、３７℃でＢ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＣＧＩ３１４及びＬａｃｔｏｓｐｏｒｅ（登録商標）よりも高い。

【0121】

図１３は、ＨＴ－２９細胞株へのＢ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）株の接着についての試験を示す。

【0122】

図１４は、ＨＴ－２９－ＭＴＸ細胞株へのＢ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）株の接着性についての試験を示す。

【0123】

Ｂ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）株（液体培養、非芽胞形態）は、腸粘液又は上皮細胞に接着しない。

【0124】

Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅは、低いカゼイン分解活性を示す。

【0125】

Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅは、スキムミルク寒天プレート上でカゼイン分解活性について陰性であった。Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅカゼイン分解活性の定量分析を、蛍光タグを付加されたカゼイン誘導体を用いて市販のキットを使用することにより、評価した。Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅは、低い細胞外プロテアーゼ活性を示した。

【0126】

図１５は、２４時間又は４８時間で画線法及び終夜ＴＳＢブロス法の両方を使用する、Ｂ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＣＧＩ１３１４におけるカゼイン分解活性の非存在についての試験を示す。

【0127】

図１６は、カゼイン誘導体に対するＦｏｒｔｉｓｐｏｒｅのタンパク質分解活性が、３７℃で２４時間のインキュベーション後にＥｎｚＣｈｅｃｋ（登録商標）キットを使用して、陽性対照プロテイナーゼＫよりも低いことを示す。エラーバーは、標準誤差を示す（ｎ＝３）。

【0128】

Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅは、カゼインに対する低いプロテアーゼ活性を示す。

【0129】

Ｄｅｅｒｌａｎｄ株の中でも、Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅは、カゼイン誘導体に対する低い細胞外プロテアーゼ活性を示す。

【0130】

図１７は、２４時間又は４８時間で画線法及び終夜ＴＳＢブロス法の両方を使用して、Ｂ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＣＧＩ１３１４、Ｂ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）６０８６（ＢＣ３０（商標））及びＢ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＭＴＣＣ５８５６（Ｌａｃｔｏｓｐｏｒｅ（登録商標））にわたるカゼイン分解活性の欠如を示す。

【0131】

図１８は、Ｄｅｅｒｌａｎｄ株の中で、Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅ Ｂ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）がカゼインに対し最低のプロテアーゼ活性を示すことを示す。

【0132】

図１９は、３７℃で２４時間のインキュベーション後のＥｎｚＣｈｅｃｋ（登録商標）キットにより決定された、Ｂ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）株にわたるカゼイン分解活性の定量分析を示す。有意性は、ａ、ｂ及び／又はｃにより示され、複数文字は、結果が１を超える群と有意に異ならないことを示す（Ｐ＜０．０５）。エラーバーは標準偏差を示す。

【0133】

比較物（Ｌａｃｔｏｓｐｏｒｅ（登録商標）及びＢＣ３０（商標））に対する比較において、Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅは、カゼインに対する優れたプロテアーゼ活性を示す。

【0134】

Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅの多様な炭水化物プロファイル
Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅは、一連の単糖、二糖類、糖アルコール、アミン糖及び多糖類を代謝し得る。

【0135】

Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅは、市販のＡＰＩ ５０ ＣＨストリップを用いて試験した４９種類のうち２２種類の炭水化物の代謝について陽性であった。これらの炭水化物の殆どは、Ｄ－リボース、Ｄ－グルコース、Ｄ－ガラクトース、Ｄ－フルクトース、Ｄ－マンノースなどの単糖類及びトレハロース、マルトース及びセロビオースなどの二糖類であった。さらに、Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅが代謝し得る、グリコシル化されたヒドロキノン（アルブチン）、シアン形成グリコシド（アミグラジン）及びアルコール性β－グルコシド（Ｓａｌｉｃｉｎ）に属する化合物があった。

【表9】

【0136】

これらのデータは、Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅが腸においてこれらの化合物を消化するのを助け得ることを示唆する。

【0137】

Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅは、Ｄ－ソルビトール及びデンプンアミドンに対し強い陽性であり、他の２つの競合者の株（ＢＣ３０（商標）及びＬａｃｔｏｓｐｏｒｅ（登録商標））は、これらに対し陰性か又は弱い陽性であった。

【表10】

【0138】

これらのデータは、Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅが腸においてこれらの化合物を消化するのを助け得ることを示唆する。

【0139】

Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅは、エステラーゼ、ペプチダーゼ、ホスファターゼ及びグルコシダーゼ活性を有する：

【0140】

Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅは、ＡＰＩ ＺＹＭキットを使用して、エステラーゼ、ペプチダーゼ、ホスファターゼ及びグルコシダーゼ活性に対し陽性であり、これは、次のことを意味する：
適切な脂質供給源の存在下でエステラーゼの作用から遊離脂肪酸を生成させるＦｏｒｔｉｓｐｏｒｅの高い可能性。
ガルクトシダーゼ（Ｇａｌｃｔｏｓｉｄａｓｅ）は、様々なオリゴ糖、ラクトシルセラミド、ラクトース及び多数の糖タンパク質に対する活性があるので、Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅの炭水化物異化反応の可能性を高める。
ロイシン、バリン及びシステイン基質の加水分解を触媒するアミノペプチダーゼ。

【0141】

実際に、インシリコ分析は、エステラーゼ、ペプチダーゼ及びガラクトシダーゼをコードする遺伝子を同定した。

【表11】

【0142】

この試験は、オリゴ糖に対するＦｏｒｔｉｓｐｏｒｅの加水分解能を裏付け、脂肪及びペプチドを分解して遊離アミノ酸を放出させる可能性を示す。

【0143】

これらのデータは、Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅが、腸においてこれらの分子を消化するのを助け得ることを示唆する。

【0144】

Ｂ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）酵素プロファイルは、ペプチダーゼ及びエステル分解能を示し、オリゴ糖分解能を確認する：

【0145】

全てのＢ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）は、ＡＰＩ ＺＹＭキットを用いて、エステラーゼ、ペプチダーゼ、ホスファターゼ及びガラクトシダーゼ活性に対し陽性であり、これは、次のことを意味する：
Ｂ．適切な脂質供給源の存在下でエステラーゼの作用から遊離脂肪酸を生成させるコアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）の高い可能性。
ガラクトシダーゼは、これらが様々なオリゴ糖、ラクトシルセラミド、ラクトース及び多数の糖タンパク質に対する活性があるので、Ｂ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）の炭水化物異化反応の可能性を高める。
ロイシン、バリン及びシステイン基質の加水分解を触媒するアミノペプチダーゼ。

【表12】

【0146】

この試験は、市販のＡＰＩ ＺＹＭキットを使用して、いくつかの酵素に対しＢ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）株の加水分解能における差がないことを示す。

【0147】

Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅは、解糖及びプロテアーゼ代謝から遊離アミノ酸を放出させる。

【0148】

メタボロミックな分析は、ミルクの炭水化物及び様々なアミノ酸を生成するタンパク質に対するＦｏｒｔｉｓｐｏｒｅの発酵及びタンパク質分解の能力を明らかにする。

【0149】

ＵＨＴミルクモデルを使用して、Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅの炭水化物発酵及びタンパク質分解能を分析した。ＧＣ－ＭＳ分析は、全部で３８種類の遊離アミノ酸（ＦＡＡ）化合物を同定し、このうち１０種類が、Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅにおいて統計学的に有意であることが分かった。同定されたカルボン酸のうち数個は、炭水化物代謝経路に関連しており、このことは、ラクトース／ガラクトース／グルコース取り込み及び酵素代謝系の存在がＦｏｒｔｉｓｐｏｒｅにおいて活性であることを裏付ける。さらに、ペプチダーゼ活性と関連する数個のアミノ酸及びフェニルアラニンのさらなる異化反応と関連する安息香酸の放出があるので、Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅにおける活性なタンパク質分解系の証拠もある。

【表13】

【0150】

全体的に、酵素の及びメタボロミックなデータは、生成される化合物の殆どが解糖経路（乳中の炭水化物の変換）からのものであるので、Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅが活性な炭水化物代謝酵素を有することを示唆する。さらに、カルボン酸を生成しかつＦｏｒｔｉｓｐｏｒｅが発酵させたＵＨＴ乳からアミノ酸を放出する潜在的に活性なアミノペプチダーゼ、リアーゼ及びデカルボキシラーゼの証拠がある。

【0151】

Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅは、解糖及びプロテアーゼ代謝から遊離アミノ酸を放出させる。
棒グラフで示す遊離アミノ酸分析（平均＋ＳＥＭ）
図２０は、Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅ ＵＴＨ発酵乳のＦＡＡプロファイルを示す。Ｐ－値≦０．００５＝^＊＊及びＰ－値≦０．０１＝^＊。白いバーは対照を表す。

【0152】

図２１は、Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅ ＵＴＨ発酵乳のＦＡＡプロファイルを示す。Ｐ－値≦０．００５＝^＊＊及びＰ－値≦０．０１＝^＊。白いバーは対照を表す。

【0153】

Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅは、競合者Ｂ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）株との比較で皮膚の健康に有益な化合物を生成することにおいて僅かにより有効である。

【0154】

Ｇａｎｅｄｅｎ Ｂｉｏｔｅｃｈは、それが最大量の天然由来Ｌ＋乳酸、バクテリオシン、過酸化水素、酵素及び他の代謝産物を生成するので、Ｂ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）６０８６（ＢＣ３０（商標））をアンチエイジングプロバイオティクスとして市販している。乳酸は、その抗微生物活性及び水和のためアンチエイジング、ざ瘡との闘いと関連する。コハク酸もまた、抗炎症性、抗微生物性及び水和と関連する。安息香酸は、抗微生物活性と関連する。

【0155】

図２２は、乳酸、コハク酸及び安息香酸の産生においてＦｏｒｔｉｓｐｏｒｅをＬａｃｔｏｓｐｏｒｅ及びＢＣ３０と比較する。有意性は、ａ、ｂ及び／又はｃにより示され、複数文字は、結果が複数の群と有意に異ならないことを示す（Ｐ＜０．０５）。エラーバーは、標準偏差を示す。

【0156】

発明者らの結果は、Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅが、乳酸産生に関してＢＣ３０（商標）よりも僅かに効率的であり、コハク酸及び安息香酸産生に優れていることを示す。

【0157】

Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅは、競合者Ｂ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）株との比較において皮膚の健康に有益なアミノ酸を産生し得る。

【0158】

Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅを、Ｌａｃｔｏｓｐｏｒｅ（登録商標）及びＢＣ３０と比較する。発明者らの結果は、Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅが、メチオニン、プロリン、リジン及びトリプトファンの産生においてＢＣ３０（商標）及びＬａｃｔｏｓｐｏｒｅ（登録商標）よりも優れていることを示す。

【0159】

メチオニンは、皮膚の色調及び弾力を向上させ、健康な毛髪を促進し、かつ爪を強化する硫黄含有アミノ酸である。プロリンは、炎症を低下させることを助け、これは、健康な免疫系を増強する。それはまた、回復に役立つ抗炎症性化合物及び遺伝子のカスケードの惹起も助ける。リジンは、口唇ヘルペスを予防すること～不安を軽減することおよび創傷治癒を促進することにわたる、多くの有益性を有する必須アミノ酸である。トリプトファンは、うつ及び不安の緩和と関連する。

【0160】

図２３は、アミノ酸の産生においてＦｏｒｔｉｓｐｏｒｅをＬａｃｔｏｓｐｏｒｅ及びＢＣ３０と比較する。有意性は、ａ、ｂ及び／又はｃにより示され、複数文字は、結果が複数の群と有意に異ならないことを示す（Ｐ＜０．０５）。エラーバーは、標準偏差を示す。

【0161】

Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅプロテオミクス分析は、潜在的なプロバイオティクスの有益性があるタンパク質を同定する。

【0162】

Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅの細胞外分泌物を、質量分析に送って、プロバイオティクス株により放出されるタンパク質を同定した。全部で２８種類のタンパク質が検出され、そのうち６種類は、潜在的なプロバイオティクスの有益性を有した。

【表14】

【0163】

これらのデータは、Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅがタンパク質及び炭水化物の消化をどのように助け得るのか及び病原体に対する抗微生物特性をどのように有するのかを示す、以前のインビトロの結果を裏付ける。

【0164】

Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅ増殖は、最小培地中でＦｉｂｅｒｓｏｌ（登録商標）の存在下で増大した。

【0165】

図２４は、Ｆｉｂｅｒｓｏｌ（登録商標）が、対照と比較してインキュベーション２４時間後に最小培地中でＦｏｒｔｉｓｐｏｒｅの濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を１ ｌｏｇ１０、有意に上昇させたことを示す。^＊ｐ＜０．０５

【0166】

競合者Ｂ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎ）株と比較して、最小培地中Ｆｉｂｅｒｓｏｌ（登録商標）の存在下でＦｏｒｔｉｓｐｏｒｅの増殖の有意な上昇がある。

【0167】

図２５は、Ｆｉｂｅｒｓｏｌ（登録商標）が、最小培地中のＦｏｒｔｉｓｐｏｒｅの濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を有意に上昇させ、一方でＢＣ３０及びＬａｃｔｏｓｐｏｒｅの増殖の有意性は見られなかったことを示す。統計学的分析は、テューキー法を使用して一元配置ＡＮＯＶＡを用いて行った。^＊＊ｐ－値＝＜０．０１。

【0168】

ＴＳＢ培地中のＦｉｂｅｒｓｏｌ（登録商標）の存在下でＦｏｒｔｉｓｐｏｒｅの増殖における増加はなかった。

【0169】

図２６は、Ｆｉｂｅｒｓｏｌ（登録商標）が、対照と比較してＴＳＢ培地中のＦｏｒｔｉｓｐｏｒｅの濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）における有意な上昇を示さなかったことを示す。最小培地とは異なり、Ｆｉｂｅｒｓｏｌ（登録商標）は、富栄養培地中でＦｏｒｔｉｓｐｏｒｅの増殖を増加させず、それはおそらく、ＦｏｒｔｉｓｐｏｒｅがＴＳＢ培地中に存在する栄養により最大増殖に到達するからである。

【0170】

Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅ、ＢＣ３０、ＤＥ１１１及び病原体の増殖を、ＴＳＢ培地中Ｆｉｂｅｒｓｏｌ（登録商標）の存在下で比較した。

【0171】

図２７は、Ｆｉｂｅｒｓｏｌ（登録商標）が、対照と比較してＴＳＢ培地中のＤＥ１１１、Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅ、ＢＣ３０、Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）及びサルモネラ・エンテリティディス（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ）の濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）における有意な上昇を示さなかったことを示す。最小培地とは異なり、Ｆｉｂｅｒｓｏｌ（登録商標）は、富栄養培地中でＤＥ１１１、Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅ、ＢＣ３０、Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）及びＳ．エンテリティディス（Ｓ．ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ）の増殖を向上させず、それはおそらく、エンテリティディスがＴＳＢ培地中に存在する栄養により最大増殖に到達するからである。

【0172】

５０％ＴＳＢ培地中でのＦｉｂｅｒｓｏｌ（登録商標）の存在下でＦｏｒｔｉｓｐｏｒｅの増殖における増加はなかった。

【0173】

図２８は、Ｆｉｂｅｒｓｏｌ（登録商標）が、対照と比較して５０％ＴＳＢ培地中のＦｏｒｔｉｓｐｏｒｅの濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を有意に上昇させなかったことを示す。

【0174】

Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅ、ＢＣ ３０及びＤＥ１１１の増殖を、５０％ＴＳＢ培地中のＦｉｂｅｒｓｏｌ（登録商標）の存在下で比較した。

【0175】

図２９は、Ｆｉｂｅｒｓｏｌ（登録商標）が、５０％ＴＳＢ培地中で２４時間後に１ ｌｏｇ１０、ＤＥ１１１の収率（ＣＦＵ／ｍＬ）を有意に上昇させたことを示す。^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。Ｆｉｂｅｒｓｏｌ（登録商標）は、対照と比較して５０％ＴＳＢ培地中でＦｏｒｔｉｓｐｏｒｅ及びＢＣ３０の濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）における有意な上昇を示さなかった。

【0176】

Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅの有意な増殖は、Ｆｉｂｅｒｓｏｌ（登録商標）が補充されたＢＨＩ培地の存在下で観察されなかった。

【0177】

図３０は、Ｆｉｂｅｒｓｏｌ（登録商標）が、ＢＨＩ培地中で対照と比較して、Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅの濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）における有意な上昇を示さなかったことを示す。最小培地とは異なり、Ｆｉｂｅｒｓｏｌ（登録商標）は、富栄養培地中でＦｏｒｔｉｓｐｏｒｅの増殖を増加させず、それはおそらく、ＦｏｒｔｉｓｐｏｒｅがＢＨＩ培地中に存在する栄養により最大増殖に達するからである。

【0178】

Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅ、ＢＣ３０及びＤＥ１１１の増殖を、ＢＨＩ培地中Ｆｉｂｅｒｓｏｌ（登録商標）の存在下で比較した。

【0179】

図３１は、Ｆｉｂｅｒｓｏｌ（登録商標）が、ＢＨＩ培地中で対照と比較して、ＤＥ１１１、Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅ及びＢＣ３０の濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）における顕著な上昇を示さなかったことを示す。最小培地とは異なり、Ｆｉｂｅｒｓｏｌ（登録商標）は、富栄養培地中でＤＥ１１１、Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅ及びＢＣ３０の増殖を増加させず、それはおそらく、それらがＢＨＩ培地中に存在する栄養を用いて最大増殖を達成するからである。

【0180】

Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅの増殖の増加は、５０％ＢＨＩ培地中のＦｉｂｅｒｓｏｌ（登録商標）の存在下で観察されなかった。

【0181】

図３２は、Ｆｉｂｅｒｓｏｌ（登録商標）が、５０％ＢＨＩ培地中で対照と比較して、Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅの濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）の有意な上昇を示さなかったことを示す。最小培地とは異なり、Ｆｉｂｅｒｓｏｌ（登録商標）は、富栄養培地中でのＦｏｒｔｉｓｐｏｒｅの増殖を向上させず、それはおそらく、ＦｏｒｔｉｓｐｏｒｅがＢＨＩ培地中に存在する栄養を用いて最大増殖を達成するからである。

【0182】

Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅ、ＢＣ３０及びＤＥ１１１の増殖の増加は、５０％ＢＨＩ培地中のＦｉｂｅｒｓｏｌ（登録商標）の存在下で観察されなかった。

【0183】

図３３は、Ｆｉｂｅｒｓｏｌ（登録商標）が、５０％ＢＨＩ培地中で対照と比較して、ＤＥ１１１、Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅ及びＢＣ３０の濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）における有意な上昇を示さなかったことを示す。最小培地とは異なり、Ｆｉｂｅｒｓｏｌ（登録商標）は、富栄養培地中でＤＥ１１１、Ｆｏｒｔｉｓｐｏｒｅ及びＢＣ３０の増殖を向上させず、それはおそらく、それらがＢＨＩ培地中に存在する栄養を用いて最大増殖を達成するからである。

【0184】

実施例２
腸上皮のインビトロモデルに対する接着能の評価
細胞株：ヒト結直腸腺癌細胞株ＨＴ－２９及び粘液分泌性細胞株ＨＴ－２９－ＭＴＸを、５％ＣＯ_２雰囲気で３７℃にて１０％ウシ胎児血清、２ｍＭグルタミン、１００Ｕ／ｍｌペニシリン、１００μｇ／ｍｌストレプトマイシン及び２μｇ／ｍｌアンホテリシンＢを補充した低グルコースＤＭＥＭ培地を使用して増殖させた。

【0185】

細胞を、細胞５ｘ１０^５個の細胞／ウェルの密度で２４ウェルプレート上に播種し、完全成熟まで２１～２８日間培養した。培地を２～３日ごとに交換した。

【0186】

実験前に、細胞を、０．５ｍｌ ＤＰＢＳで２回洗浄した。ＤＰＢＳを、第２回目の洗浄後にウェルから完全に吸引した。

【0187】

芽胞の調製：１０ミリグラムのＢ．クラウシイ（Ｂ．ｃｌａｕｓｉｉ）ＣＳＩ０８、Ｂ．メガテリウム（Ｂ．ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）ＭＩＴ４１１及びＢ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＣＧＩ３１４芽胞粉末の重量を、１５ｍｌファルコンチューブ中で測定し、１０ｍｌの抗生物質不含の完全培養培地中で再懸濁した。懸濁液を分注し、使用まで－２０℃で保管した。懸濁液を、調製２週間以内に使用した。

【0188】

接着アッセイ：５００μｌの芽胞懸濁液（１．３ｘ１０^７～９．２ｘ１０^７ＣＦＵ／ｍｌ）を、ＨＴ－２９及びＨＴ－２９－ＭＴＸ細胞に添加し、穏やかにかき回すことにより混合し、ＣＯ_２インキュベーター中で３７℃にて２．５時間インキュベートした。哺乳動物細胞を含有しない対照ウェルを、調製し、同じように並行してインキュベートした（０．５ｍｌの芽胞の懸濁液）。

【0189】

インキュベーション時に、ＨＴ－２９及びＨＴ－２９－ＭＴＸ細胞を、０．５ｍｌ ＰＢＳで４回洗浄した。その後、５０μＬのトリプシン／ＥＤＴＡ溶液及び５０μＬのＰＢＳを、ウェルに添加し、穏やかに振盪しながら（～１００ｒｐｍ）３７℃で１０分間インキュベートした。５０マイクロリットルのトリプシン／ＥＤＴＡ溶液を、対照ウェルに添加した。

【0190】

結果的に、４５０μＬのＰＢＳを、芽胞を含むウェルに添加し、ウェルの内容物を、剥離しながらエッペンドルフチューブに移し、各３０秒間、３回の激しい振盪に供した。対照ウェルの内容物を、エッペンドルフチューブに移し、振盪１回に供した。

【0191】

連続希釈物（プラス対照ウェルの希釈）を、ＰＢＳ中で調製し、ＢＣ寒天（Ｂ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＣＧＩ３１４）又はＰｅｔｒｉＦｉｌｍ（商標）（Ｂ．クラウシイ（Ｂ．ｃｌａｕｓｉｉ）ＣＳＩ０８、Ｂ．メガテリウム（Ｂ．ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）ＭＩＴ４１１）上に播種した。プレートを、計数前に３７℃にて４８時間インキュベートし、ＰｅｔｒｉＦｉｌｍを、計数前に３７℃で２４時間インキュベートした。

【0192】

実験を、１つの実験あたり３回技術的反復して２又は３回行った。結果は平均±ＳＥＭとして表される。

【表15】

【表16】

【0193】

結論：
１．上で示される結果は、おそらく芽胞の物理的特性のため、非粘液分泌性細胞と比較して粘液分泌性細胞株ＨＴ－２９－ＭＴＸに接着する芽胞のより高い能力を示す。
２．Ｂ．メガテリウム（Ｂ．ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）ＭＩＴ４１１及びＢ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＣＧＩ３１４芽胞は、Ｂ．クラウシイ（Ｂ．ｃｌａｕｓｉｉ）ＣＳＩ０８芽胞と比較して、非粘液産生細胞株ＨＴ－２９に接着するより高い（しかし全体的に低い）能力を有する。

【0194】

実施例３
安全性、忍容性及び胃腸の健康についてのバチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＣＧＩ３１４の評価：健康な成人における、ランダム化、二重盲検、プラセボ対照試験。

【0195】

試験介入
毎日投与される１ｘ１０^９ＣＦＵのバチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＣＧＩ３１４及びバチルス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＤＥ１１１（登録商標）を含有するプロバイオティクス１、
約０．５ｘ１０^９ＣＦＵ（及び０．５ｘ１０^９ＣＦＵ超）のバチルス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＤＥ１１１（登録商標）、約０．５ｘ１０^９ＣＦＵのバチルス・メガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）ＭＩＴ４１１、約０．５ｘ１０^９ＣＦＵ（及び０．５ｘ１０^９ＣＦＵ未満）のバチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＣＧＩ３１４、約０．５ｘ１０^９ＣＦＵのバチルス・クラウシイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｌａｕｓｉｉ）ＣＳＩ０８を含有するプロバイオティクスの組み合わせ；毎日投与される全部で２ｘ１０^９のバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）芽胞、
プラセボ：毎日投与されるコメのマルトデキストリン。

【0196】

試験した適応症
胃腸ホメオスタシス及び免疫系

【0197】

試験の説明
１８～６５歳の健康な成人を、動員し、この試験における参加についてスクリーニングした。適格な参加者を、２つの実験群又は対照群の何れか１つに１：１：１でランダムに群分けし、４５日間の処置及び２週間のフォローアップを行って、健康な成人における新しいプロバイオティクス株の安全性及び有効性を評価した。

【0198】

このために、治験製品を、１日用量に対応する個々のカプセルに充填した。各カプセルは、３００ｍｇの成分を含有した：
プロバイオティクス処方物１：バチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＣＧＩ３１４及びバチルス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＤＥ１１１（登録商標）（全部で１ｘ１０^９ＣＦＵ）、～４．１７ｍｇ；低水分コメマルトデキストリン、２９２．２３ｍｇ；中鎖トリグリセリド、３．６ｍｇ。
プロバイオティクスカクテル：バチルス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＤＥ１１１（登録商標）（約０．５ｘ１０^９ＣＦＵ（及び０．５ｘ１０^９ＣＦＵ超））、２．１ｍｇ；バチルス・メガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）ＭＩＴ４１１（約０．５ｘ１０^９ＣＦＵ）、２．１ｍｇ；バチルス・クラウシイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｌａｕｓｉｉ）ＣＳＩ０８（約０．５ｘ１０^９ＣＦＵ）、２．１ｍｇ；バチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＣＧＩ３１４（約０．５ｘ１０^９ＣＦＵ（及び０．５ｘ１０^９ＣＦＵ未満））、２．１ｍｇ；低水分コメマルトデキストリン、２８８ｍｇ；中鎖トリグリセリド、３．６ｍｇを含む、２ｘ１０^９ＣＦＵのバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）芽胞。
プラセボは、プロバイオティクス生物のみ除き、治験製品と全て同じ成分からなった。プラセボは、１日の用量に対応した個々のカプセル中であった。各カプセルは、３００ｍｇの成分：プラセボ：低水分コメマルトデキストリン、２９６．４ｍｇ；中鎖トリグリセリド、３．６ｍｇ、を含有した。

【0199】

表１７は、４つのプロバイオティクス群及びプラセボ群について、ベースライン～処置期間終了時の腸－脳軸質問票のスコアにおける変化をまとめる。９５％信頼区間の平均の変化が、示される。ＡＮＯＶＡオムニバス検定（ｐ^＊－値）及び１試料Ｔ検定（ｐ－値）の結果も、示される。腸脳軸のスコアの変化に対する正規性の検定は、データが正規分布に従わないことを示し、これは、境界有意である（ｐ－値が０．０５～０．１０）結果に影響を及ぼし得る。これは、２つの項目：活力の喪失及び食欲における変化に影響する。代替的ノンパラメトリッククルスカル・ワリス検定を、これらの項目に適用し；０．１１１（活力の喪失）及び０．１２３（食欲における変化）のｐ－値が観察された。

【0200】

概して、腸－脳軸質問票のスコア変化の平均値は、試験した全ての症状について負であり、症状が処置期間の終了時にそれほど強くなかった（参加者は、これらの症状によりそれほど悩まされなかった）ことを意味する。１試料Ｔ検定の結果は、試験の３分の１において（７０回行ったうち）、統計学的に有意な変化の腸脳軸質問票スコアが観察されたことを示す。しかし、これは、プラセボ群を含む全ての処置群について観察され得る。結果として、ＡＮＯＶＡ検定の結果は、処置群の間で腸脳軸スコア変化における有意差は検出されなかったが活力の喪失及び食欲における変化の項目について境界有意性が観察されたことを示す。バチルス・メガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）群における参加者は、これらの２項目について最大の変化を経験した。

【表17】

【0201】

個々のプロバイオティクス群とプラセボ群の間のペアワイズ比較の９５％信頼区間及びｐ－値での平均差を、表１７で示す。プラセボと比較して、プロバイオティクスを含有する試験製品のいずれも、ベースライン～処置期間終了の腸－脳軸スコア変化における統計学的に有意な差を示さなかった。

【0202】

個々のプロバイオティクス群とプラセボ群の間のペアワイズ比較の９５％信頼区間及びｐ－値での平均差を、表１８で示す。プラセボと比較して、プロバイオティクスを含有する試験製品のいずれも、ベースライン又は処置期間終了時の腸－脳軸項目スコアの合計における統計学的に有意な差を示さなかった。

【表18】

【0203】

個々のプロバイオティクス群とプラセボ群の間のペアワイズ比較の９５％信頼区間及びｐ－値での平均差を、表１９で示す。プラセボと比較して、プロバイオティクスを含有する試験製品のいずれも、ベースライン～処置期間終了のＨＤＬ、ＬＤＬ、ＴＣ又はＴＧ変化における統計学的に有意な差を示さなかった。

【表19】

【0204】

個々のプロバイオティクス群とプラセボ群の間のペアワイズ比較の９５％信頼区間及びｐ－値の平均差を、表２０で示す。プラセボと比較して、プロバイオティクスを含有する試験製品のいずれも、ベースライン～処置期間終了のＨＤＬ、ＬＤＬ、ＴＣ又はＴＧの相対変化における統計学的に有意な差を示さなかった。

【表20】

【0205】

表２１は、参加者の日記１において少なくとも１日、臨床的に意義のある感染があったことを報告した者の割合を表す。表２２において、臨床的に意義がある感染があった日数の記述統計学及びクラスカル－ワリス検定（ｐ^＊－値）及びホルム補正を用いたマン－ホイットニーＵ検定（ｐ－値）の結果が、示される。

【表21】

【表22】

【0206】

クラスカル・ワリス検定は、処置群の間で臨床的に意義がある感染があった日数における有意差を示さなかった。しかし、境界の統計学的に有意な結果が、臨床的に意義がある胃腸感染について観察された。これはおそらく、４つのプロバイオティクス処置群で臨床的に意義がある胃腸感染を経験した者がなかったという事実のためであり、一方プロバイオティクス群において、全部で２日間のこのような感染が観察され、これは偶然起きたものであり得る。

【0207】

それにもかかわらず、プラセボと比較して、プロバイオティクスを含有する試験製品のいずれも、統計学的に有意な差を示さなかった。

【0208】

表２３は、参加者の日記２において胃腸感染の個々の症状がある少なくとも１日を報告した者の割合を表す。表２４において、胃腸感染の症状があった日数の記述統計学及びクラスカル－ワリス検定（ｐ^＊－値）及びホルム補正を用いたマン－ホイットニーＵ検定（ｐ－値）の結果を示す。

【表23】

【表24】

【0209】

群の間での有意差は、便秘があった日数でのみ検出され（ｐ^＊＝０．０１３）、これはおそらく、プラセボ群で３名の参加者のみが参加者の日記２においてこの症状を報告し、一方で他の４つの処置群において、どの参加者もこの症状を報告しなかったという事実による。しかし、便秘があった日数を個々のプロバイオティクス群とプラセボ群の間で比較したさらなる分析（ホルム補正を用いたマン－ホイットニーＵ検定）は、おそらく試料サイズが小さいために、有意な差を示さなかった。

【0210】

有効性アウトカム：処置期間
処置群の間のベースライン時の参加者の胃腸の健康における有意差は、検出されなかった。参加者は、５つの処置群にランダムに群分けされ、そのためこのような結果は、予想された。

【0211】

腸－脳軸質問票における項目のスコアは、ベースラインスコアと比較して、処置期間終了時により低く、これは、参加者が処置期間終了時にこれらの症状にそれほど悩まされなかったことを意味する。これは、プラセボ群を含む全ての処置群について観察され得る。

【0212】

処置群間の腸－脳軸項目スコアの変化（処置期間の終了時－ベースライン）における有意差は、検出されなかった。プラセボ群と比較して、プロバイオティクスを含有する試験製品のいずれも、腸－脳軸スコアの変化における統計学的に有意な差を示さなかった。

【0213】

処置群間の腸－脳軸項目スコアの変化の改善における有意差は、検出されなかった。プラセボ群と比較して、プロバイオティクスを含有する試験製品のいずれも、腸－脳軸スコアの改善における統計学的に有意な差を示さなかった。

【0214】

処置群間の腸脳軸質問票における全項目のスコアの合計での有意差は、検出されなかった。プラセボと比較して、プロバイオティクスを含有する試験製品のいずれも、ベースライン時又は処置期間終了時の腸－脳軸項目スコアの合計における統計学的に有意な差を示さなかった。

【0215】

処置群の間でのコレステロール及びトリグリセリド変化（ベースライン～処置期間終了時の絶対的及び相対的変化）の有意差は、検出されなかった。プラセボと比較して、プロバイオティクスを含有する試験製品のいずれも、ベースライン～処置期間終了時のＨＤＬ、ＬＤＬ、ＴＣ又はＴＧの変化（絶対的又は相対的）における統計学的に有意な差を示さなかった。同じ知見が、ＰＰ集団において観察された。

【0216】

処置期間終了時のサイトカイン（ＴＮＦα、ＩＦＮα、ＩＦＮβ、ＩＦＮγ及びＩＬ６）レベルは、全処置群において定量限界（ＬＯＱ）を下回った。サイトカインＩＬ１３について、ＬＯＱを上回るいくつかの値が報告されたが、処置群間での統計学的に有意な差は観察されなかった。

【0217】

ベースライン値と比較した、処置期間終了時の重金属（カドミウム、鉛、水銀、銅、ニッケル、亜鉛及びヒ素）レベルにおける有意な変化は、バチルス・メガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）群において検出されなかった。同じ知見が、ＰＰ集団において観察された。

【0218】

プラセボと比較して、プロバイオティクスを含有する試験製品のいずれも、胃腸感染の症状があった日数における統計学的に有意な差を示さなかった。しかし、統計学的な境界有意性の結果が、臨床的に意義のある胃腸感染について観察された。これはおそらく、４つのプロバイオティクス処置群の参加者で臨床的に意義がある胃腸感染を経験した者がなかったという事実のためであり、一方プロバイオティクス群において、全部で２日間のこのような感染が観察され、これは偶然起きたものであり得る。

【0219】

プラセボと比較して、プロバイオティクスを含有する試験製品のいずれも、気道感染の症状があった日数における統計学的に有意な差を示さなかった。しかし、処置群間の統計学的に有意な差が、鼻汁－濃厚があった日数において検出され（ｐ＝０．０１８）、これはおそらく、プロバイオティクスカクテル群の３名の参加者のみがこの症状を報告し、一方で他の４つの処置群では、どの参加者もこの症状を報告しなかったという事実による。

【0220】

しかし、さらなる事後分析（ペアワイズ比較 対プラセボ）は、何らかの有意差を示さなかった。

【0221】

プラセボと比較して、プロバイオティクスを含有する試験製品のいずれも、尿路感染の症状があった日数における統計学的に有意な差を示さなかった。

【0222】

統計学的に有意な差は、便通の規則性において処置群間で検出されなかった。

【0223】

群間の有意差が、便の硬さについて、即ち総処置期間並びに処置期間の第６及び７週における軟便の割合において検出された。しかし、さらなる事後分析（ペアワイズ比較 対プラセボ）は、おそらく試料サイズが小さいため、何らかの有意差を示さなかった。プロバイオティクスカクテル群の参加者は、全便通あたりの軟便の最も小さい割合を有した。

【0224】

有効性アウトカム：フォローアップ期間
群間の有意差が、便秘があった日数においてのみ検出された（ｐ＝０．０１３）。しかし、さらなる事後分析（ペアワイズ比較 対プラセボ）は、おそらくサンプルサイズが小さいため、有意差を示さなかった。

【0225】

プロバイオティクスを含有する試験製品のいずれも、気道感染の症状があった日数における統計学的に有意な差を示さなかった。

【0226】

プロバイオティクスを含有する試験製品のいずれも、尿路感染の症状があった日数における統計学的に有意な差を示さなかった。

【0227】

処置群間で有意な差は、便通の規則性及び便通の硬さにおいて検出されなかった。

【0228】

安全性のアウトカム
全部で１７例のＡＥが報告された。１～５例のＡＤＥが、各試験製品について報告され、最も多かったのは胃食道逆流（３例のＡＥ）、発疹（２例のＡＥ）及び眩暈（２例のＡＥ）であった。ＳＡＥは報告されなかった。

【0229】

因果関係評価は、報告されたＡＥと試験製品の間に関係がないことを明らかにした。

【0230】

まとめると、この試験は、新規プロバイオティクス、即ちバチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）、バチルス・クラウシイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｌａｕｓｉｉ）、バチルス・メガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）及び、バチルス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、バチルス・メガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）、バチルス・クラウシイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｌａｕｓｉｉ）及びバチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）を含有するプロバイオティクスカクテルの安全性及び有効性に取り組んだ。

【0231】

処置群間のベースラインでの参加者の胃腸の健康は、試験群の間で差がなく、これはランダム化のためと予想された。

【0232】

全部で１７例のＡＥが報告され、ＳＡＥがなかったので、この試験の主要アウトカム（安全性）が達成された。因果関係評価は、報告されたＡＥと試験製品の間の関係を示さなかった。

【0233】

有効性に関連するアウトカムのいずれも、何らかの統計学的に有意な差を示さなかったが、これは、試験群あたりの試料サイズが小さいので、驚くに当たらない。さらに、活性生成物を支持するいくつかの傾向が、特に腸脳軸スコア及び軟便の割合において、観察された。

【0234】

結論として、プロバイオティクス生成物は、成人での使用に対して安全であることが示され、腸脳軸及び便の硬さに関していくつかの有益な傾向が示されたが、より大きい試料サイズ、各参加者についてベースラインの便の硬さを決定するための導入期間及び腸－脳軸ドメインを決定するための検証された質問票の使用を伴うさらなる試験が、試験された製品の有効性を科学的に証明するために必要とされる。

【0235】

参考文献
Ａｂｒｉｏｕｅｌ，Ｈ．，Ｆｒａｎｚ，Ｃ．，Ｏｍａｒ，Ｎ．，＆Ｇａｌｖｅｚ，Ａ．（２０１１）．Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｎｄ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｂａｃｔｅｒｉｏｃｉｎｓ．ＦＥＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ，３５（１），２０１－２３２．ｄｏｉ：ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１１１／ｊ．１５７４－６９７６．２０１０．００２４４．ｘ
Ａｆｒｉｌａｓａｒｉ Ｗ，Ｗｉｄａｎａｒｎｉ，Ｍｅｒｙａｄｉｎｉ Ａ（２０１６）“Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ ＰＴＢ １．４ ｏｎ ｔｈｅ Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ Ｍｉｃｒｏｆｌｏｒａ，Ｄｉｇｅｓｔｉｖｅ Ｅｎｚｙｍｅ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｔｈｅ Ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ Ｃａｔｆｉｓｈ（Ｃｌａｒｉａｓ Ｓｐ．）．”ＨＡＹＡＴＩ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ｖｏｌ．２３，ｎｏ．４，ｐｐ．１６８‐１７２．，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｈｊｂ．２０１６．１２．００５．
Ａｌｉｐｐｉ，Ａ．（１９９５）．Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌａｒｖａｅ ｓｐｏｒｅｓ ｉｎ Ａｒｇｅｎｔｉｎｉａｎ ｈｏｎｅｙｓ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ａ ｓｅｍｉ－ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｍｅｄｉｕｍ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ＳＥＭ，１１，３４３－３５０．
Ａｌｉｐｐｉ Ａ，Ｒｅｙｎａｌｄｉ Ｆ，Ｌｏｐｅｚ Ａ，Ｄｅ Ｇｉｕｓｔｉ Ｍ，Ａｇｕｉｌａｒ Ｏ（２００４）“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ Ｌａｒｖａｅ Ｌａｒｖａｅ ａｎｄ Ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｆｏｕｌｂｒｏｏｄ ｉｎ Ａｒｇｅｎｔｉｎｅａｎ Ｈｏｎｅｙｓ ｆｒｏｍ Ｂｕｅｎｏｓ Ａｉｒｅｓ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ．”Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｐｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，ｖｏｌ．４３，ｎｏ．３ ｐｐ．１３５‐１４３．，ｄｏｉ：１０．１０８０／００２１８８３９．２００４．１１１０１１２４．
Ｂａｒｏｎ，Ｍ．（２００９）．Ｏｒｉｇｉｎａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ：Ａ Ｐａｔｅｎｔｅｄ Ｓｔｒａｉｎ ｏｆ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ Ｉｍｍｕｎｅ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ Ｖｉｒａｌ Ｃｈａｌｌｅｎｇｅ．Ｐｏｓｔｇｒａｄｕａｔｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１２１（２），１１４‐１１８．ｄｏｉ：１０．３８１０／ｐｇｍ．２００９．０３．１９７１
Ｂｅｎｎｏ，Ｙ．，Ｓｕｚｕｋｉ，Ｋ．，Ｓｕｚｕｋｉ，Ｋ．，Ｎａｒｉｓａｗａ，Ｋ．，Ｂｒｕｃｅ，Ｗ．Ｒ．，＆ Ｍｉｔｓｕｏｋａ，Ｔ．（１９８６）．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｆｅｃａｌ Ｍｉｃｒｏｆｌｏｒａ ｉｎ Ｒｕｒａｌ Ｊａｐａｎｅｓｅ ａｎｄ Ｕｒｂａｎ Ｃａｎａｄｉａｎｓ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，３０（６），５２１－５３２．ｄｏｉ：１０．１１１１／ｊ．１３４８－０４２１．１９８６．ｔｂ０２９７８．ｘ
Ｃｈａｎ，Ｙ．Ｋ．，Ｅｓｔａｋｉ，Ｍ．，＆ Ｇｉｂｓｏｎ，Ｄ．Ｌ．（２０１３）．Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｄｉｅｔ－Ｉｎｄｕｃｅｄ Ｄｙｓｂｉｏｓｉｓ．Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ ａｎｄ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，６３（ｓ２），２８－４０．ｄｏｉ：１０．１１５９／０００３５４９０２
Ｃｕｔｔｉｎｇ，Ｓ．Ｍ．（２０１１）．Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ．Ｆｏｏｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２８（２），２１４－２２０．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｆｍ．２０１０．０３．００７
Ｄｏｌｉｎ，Ｂ．（２００９）．Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ａ ｐｒｏｐｉｅｔａｒｙ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｎ ｓｙｍｐｔｏｍｓ ｏｆ ｄｉａｒｒｈｅａ－ｐｒｅｄｏｍｉｎａｎｔ ｉｒｒｉｔａｂｌｅ ｂｏｗｅｌ ｓｙｎｄｒｏｍｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，３１（１０），６５５．ｄｏｉ：１０．１３５８／ｍｆ．２００９．３１．１０．１４４１０７８
Ｅｌｓｈａｇｈａｂｅｅ，Ｆ．Ｍ．Ｆ．，Ｒｏｋａｎａ，Ｎ．，Ｇｕｌｈａｎｅ，Ｒ．Ｄ．，Ｓｈａｒｍａ，Ｃ．，＆ Ｐａｎｗａｒ，Ｈ．（２０１７）．Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ａｓ Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ：Ｓｔａｔｕｓ，Ｃｏｎｃｅｒｎｓ，ａｎｄ Ｆｕｔｕｒｅ Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ．Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，８．ｄｏｉ：１０．３３８９／ｆｍｉｃｂ．２０１７．０１４９０
Ｅｎｄｒｅｓ，Ｊ．，Ｃｌｅｗｅｌｌ，Ａ．，Ｊａｄｅ，Ｋ．，Ｆａｒｂｅｒ，Ｔ．，Ｈａｕｓｗｉｒｔｈ，Ｊ．，＆ Ｓｃｈａｕｓｓ，Ａ．（２００９）．Ｓａｆｅｔｙ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ ａ ｐｒｏｐｒｉｅｔａｒｙ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｎｏｖｅｌ Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ，Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ，ａｓ ａ ｆｏｏｄ ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ．Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，４７（６），１２３１－１２３８．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｆｃｔ．２００９．０２．０１８
Ｆｅｒｒｅｉｒａ，Ｃ．Ｍ．Ｈ．，Ｖｉｌａｓ－Ｂｏａｓ，Ａ．，Ｓｏｕｓａ，Ｃ．Ａ．，Ｓｏａｒｅｓ，Ｈ．Ｍ．Ｖ．Ｍ．，＆ Ｓｏａｒｅｓ，Ｅ．Ｖ．（２０１９）．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｆｉｖｅ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｓｔｒａｉｎｓ ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｓｉｄｅｒｏｐｈｏｒｅｓ ｗｉｔｈ ａｂｉｌｉｔｙ ｔｏ ｃｈｅｌａｔｅ ｉｒｏｎ ｕｎｄｅｒ ａｌｋａｌｉｎｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ．ＡＭＢ Ｅｘｐｒｅｓｓ，９（１）．ｄｏｉ：１０．１１８６／ｓ１３５６８－０１９－０７９６－３
Ｇａｂｒｉｅｌｌｉ，Ｍ．，Ｌａｕｒｉｔａｎｏ，Ｅ．Ｃ．，Ｓｃａｒｐｅｌｌｉｎｉ，Ｅ．，Ｌｕｐａｓｃｕ，Ａ．，Ｏｊｅｔｔｉ，Ｖ．，Ｇａｓｂａｒｒｉｎｉ，Ｇ．，...Ｇａｓｂａｒｒｉｎｉ，Ａ．（２００９）．Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｌａｕｓｉｉ ａｓ ａ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｓｍａｌｌ Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ Ｂａｃｔｅｒｉａｌ Ｏｖｅｒｇｒｏｗｔｈ．Ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，１０４（５），１３２７－１３２８．ｄｏｉ：１０．１０３８／ａｊｇ．２００９．９１
Ｇｅｐｎｅｒ，Ｙ．，Ｈｏｆｆｍａｎ，Ｊ．Ｒ．，Ｓｈｅｍｅｓｈ，Ｅ．，Ｓｔｏｕｔ，Ｊ．Ｒ．，Ｃｈｕｒｃｈ，Ｄ．Ｄ．，Ｖａｒａｎｏｓｋｅ，Ａ．Ｎ．，...Ｏｓｔｆｅｌｄ，Ｉ．（２０１７）．Ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ ＧＢＩ－３０，６０８６ ａｎｄ ＨＭＢ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｏｎ ｍｕｓｃｌｅ ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ ａｎｄ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｄｕｒｉｎｇ ｉｎｔｅｎｓｅ ｍｉｌｉｔａｒｙ ｔｒａｉｎｉｎｇ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，１２３（１），１１‐１８．ｄｏｉ：１０．１１５２／ｊａｐｐｌｐｈｙｓｉｏｌ．０１１１６．２０１６
Ｇｉｌｌｉａｍ，Ｍａｒｔｈａ．（１９７９）“Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ Ｏｆ Ｐｏｌｌｅｎ Ａｎｄ Ｂｅｅ Ｂｒｅａｄ：Ｔｈｅ Ｇｅｎｕｓ Ｂａｃｉｌｌｕｓ．”Ａｐｉｄｏｌｏｇｉｅ，ｖｏｌ．１０，ｎｏ．３，ｐｐ．２６９‐２７４．，ｄｏｉ：１０．１０５１／ａｐｉｄｏ：１９７９０３０４．
Ｇｉｌｌｉａｍ，Ｍａｒｔｈａ，ａｎｄ Ｄｉａｎｅ Ｋ．Ｖａｌｅｎｔｉｎｅ．（１９７６）“Ｂａｃｔｅｒｉａ Ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ Ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ Ｆｏｒａｇｉｎｇ Ｗｏｒｋｅｒ Ｈｏｎｅｙ Ｂｅｅｓ，Ａｐｉｓ Ｍｅｌｌｉｆｅｒａ：Ｔｈｅ Ｇｅｎｕｓ Ｂａｃｉｌｌｕｓ．”Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｖｅｒｔｅｂｒａｔｅ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．２８，ｎｏ．２，ｐｐ．２７５－２７６．，ｄｏｉ：１０．１０１６／００２２－２０１１（７６）９０１３７－３．
Ｈｏｒｏｓｈｅｖａ，Ｔ．Ｖ．，Ｖｏｄｙａｎｏｙ，Ｖ．，＆ Ｓｏｒｏｋｕｌｏｖａ，Ｉ．（２０１４）．Ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ ｉｎ ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ‐ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｄｉａｒｒｈｏｅａ：ａ ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ，ｄｏｕｂｌｅ‐ｂｌｉｎｄ，ｐｌａｃｅｂｏ‐ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒｉａｌ．ＪＭＭ Ｃａｓｅ Ｒｅｐｏｒｔｓ，１（３）．ｄｏｉ：１０．１０９９／ｊｍｍｃｒ．０．００４０３６
Ｈｕｎ，Ｌ．（２００９）．Ｏｒｉｇｉｎａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ：Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ Ｉｍｐｒｏｖｅｄ Ａｂｄｏｍｉｎａｌ Ｐａｉｎ ａｎｄ Ｂｌｏａｔｉｎｇ ｉｎ Ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ＩＢＳ．Ｐｏｓｔｇｒａｄｕａｔｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１２１（２），１１９－１２４．ｄｏｉ：１０．３８１０／ｐｇｍ．２００９．０３．１９８４
Ｈｙｒｏｎｉｍｕｓ，Ｂ．，Ｍａｒｒｅｃ，Ｃ．Ｌ．，Ｓａｓｓｉ，Ａ．Ｈ．，＆ Ｄｅｓｃｈａｍｐｓ，Ａ．（２０００）．Ａｃｉｄ ａｎｄ ｂｉｌｅ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｏｆ ｓｐｏｒｅ－ｆｏｒｍｉｎｇ ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ ｂａｃｔｅｒｉａ．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，６１（２－３），１９３‐１９７．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｓ０１６８－１６０５（００）００３６６－４
Ｉｖａｎｏｖｉｃｓ，Ｇ．＆ Ａｌｆｏｌｄｉ，Ｌ．（１９５７）．Ｂａｃｔｅｒｉｏｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ．Ｊ．ｇｅｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１６，５２２
Ｊｅｎｓｅｎ，Ｇ．，Ｃａｓｈ，Ｈ．，Ｆａｒｍｅｒ，Ｓ．，＆ Ｋｅｌｌｅｒ，Ｄ．（２０１７）．Ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ ＧＢＩ－３０ ｉｎｄｕｃｅｓ ｃｏｍｐｌｅｘ ｉｍｍｕｎｅ ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ，ａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ，ａｎｄ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ ｍａｒｋｅｒｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｖｏｌｕｍｅ １０，１０７‐１１７．ｄｏｉ：１０．２１４７／ｊｉｒ．ｓ１４１６６０
Ｋａｌｍａｎ，Ｄ．Ｓ．，Ｓｃｈｗａｒｔｚ，Ｈ．Ｉ．，Ａｌｖａｒｅｚ，Ｐ．，Ｆｅｌｄｍａｎ，Ｓ．，Ｐｅｚｚｕｌｌｏ，Ｊ．Ｃ．，＆ Ｋｒｉｅｇｅｒ，Ｄ．Ｒ．（２００９）．Ａ ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ，ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ，ｄｏｕｂｌｅ－ｂｌｉｎｄ，ｐｌａｃｅｂｏ－ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｐａｒａｌｌｅｌ－ｇｒｏｕｐ ｄｕａｌ ｓｉｔｅ ｔｒｉａｌ ｔｏ ｅｖａｌｕａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ａ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ－ｂａｓｅｄ ｐｒｏｄｕｃｔ ｏｎ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｇａｓ ｓｙｍｐｔｏｍｓ．ＢＭＣ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，９（１）．ｄｏｉ：１０．１１８６／１４７１－２３０ｘ－９－８５
Ｋａｗａｒｉｚａｄｅｈ，Ａ．，Ｎｏｊｏｏｍｉ，Ｆ．，Ｔａｂａｔａｂａｅｉ，Ｍ．，Ｈｏｓｓｅｉｎｚａｄｅｈ，Ｓ．，＆ Ｆａｒｚａｎｅｈ，Ｍ．（２０１９）．Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ ｏｎ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｎｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ ｉｎ ＨＴ－２９ ｃｅｌｌ ｃｕｌｔｕｒｅ．Ｉｒａｎｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ．ｄｏｉ：１０．１８５０２／ｉｊｍ．ｖ１１ｉ４．１４６８
Ｋｅｌｌｅｒ，Ｄ．，Ｄｉｎｔｅｒ，Ｒ．Ｖ．，Ｃａｓｈ，Ｈ．，Ｆａｒｍｅｒ，Ｓ．，＆ Ｖｅｎｅｍａ，Ｋ．（２０１７）．Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ ＧＢＩ－３０，６０８６ ｉｎｃｒｅａｓｅｓ ｐｌａｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ ｉｎ ａ ｄｙｎａｍｉｃ，ｃｏｍｐｕｔｅｒ－ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｔｈｅ ｓｍａｌｌ ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ（ＴＩＭ－１）．Ｂｅｎｅｆｉｃｉａｌ Ｍｉｃｒｏｂｅｓ，８（３），４９１‐４９６．ｄｏｉ：１０．３９２０／ｂｍ２０１６．０１９６
Ｋｈｏｃｈａｍｉｔ，Ｎ．，Ｓｉｒｉｐｏｒｎａｄｕｌｓｉｌ，Ｓ．，Ｓｕｋｏｎ，Ｐ．，＆ Ｓｉｒｉｐｏｒｎａｄｕｌｓｉｌ，Ｗ．（２０１５）．Ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｇｅｎｏｔｙｐｉｃ－ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉｏｃｉｎ－ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ ＫＫＵ２１３：Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ａｓ ａ ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ ｓｔｒａｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１７０，３６－５０．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｍｉｃｒｅｓ．２０１４．０９．００４
Ｋｉｍｍｅｌ，Ｍ．，Ｋｅｌｌｅｒ，Ｄ．，Ｆａｒｍｅｒ，Ｓ．，＆ Ｗａｒｒｉｎｏ，Ｄ．（２０１０）．Ａ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒｉａｌ ｔｏ ｅｖａｌｕａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ＧａｎｅｄｅｎＢＣ３０ ｏｎ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｍａｒｋｅｒｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，３２（２），１２９．ｄｏｉ：１０．１３５８／ｍｆ．２０１０．３２．２．１４２３８８１
Ｋｏｔｂ，Ｅ．（２０１４）．Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐａｒｔｉａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｅｒｉｎｅ ｆｉｂｒｉｎｏｌｙｔｉｃ ｅｎｚｙｍｅ ｆｒｏｍ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ ＫＳＫ－０７ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｋｉｓｈｋ，ａ ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｅｇｙｐｔｉａｎ ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ ｆｏｏｄ．Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，５１（１），３４－４３．ｄｏｉ：１０．１１３４／ｓ０００３６８３８１５０１００７ｘ
Ｌａｋｓｈｍｉ，Ｓ．Ｇ．，Ｊａｙａｎｔｈｉ，Ｎ．，Ｓａｒａｖａｎａｎ，Ｍ．，＆ Ｒａｔｎａ，Ｍ．Ｓ．（２０１７）．Ｓａｆｅｔｙ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｌａｕｓｉｉ ＵＢＢＣ０７，ａ ｓｐｏｒｅ ｆｏｒｍｉｎｇ ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ．Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ Ｒｅｐｏｒｔｓ，４，６２－７１．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｔｏｘｒｅｐ．２０１６．１２．００４
Ｌｉｕ，Ｐ．，Ｘｉｅ，Ｊ．，Ｌｉｕ，Ｊ．，＆ Ｏｕｙａｎｇ，Ｊ．（２０１９）．Ａ ｎｏｖｅｌ ｔｈｅｒｍｏｓｔａｂｌｅ β－ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ ｆｒｏｍ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ ｗｉｔｈ ｅｘｃｅｌｌｅｎｔ ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ ａｂｉｌｉｔｙ ｆｏｒ ｌａｃｔｏｓｅ ｉｎ ｗｈｅｙ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｄａｉｒｙ Ｓｃｉｅｎｃｅ，１０２（１１），９７４０－９７４８．ｄｏｉ：１０．３１６８／ｊｄｓ．２０１９－１６６５４
Ｍａｒｓｅｇｌｉａ，Ｇ．Ｌ．，Ｔｏｓｃａ，Ｍ．，Ｃｉｒｉｌｌｏ，Ｉ．，Ｌｉｃａｒｉ，Ａ．，Ｌｅｏｎｅ，Ｍ．，Ｍａｒｓｅｇｌｉａ，Ａ．，...Ｃｉｐｒａｎｄｉ，Ｇ．（２００７）．Ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｌａｕｓｉｉ ｓｐｏｒｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ ｉｎ ｃｈｉｌｄｒｅｎ：ａ ｐｉｌｏｔ ｓｔｕｄｙ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｒｉｓｋ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ，３（１），１３－１７．ｄｏｉ：１０．２１４７／ｔｃｒｍ．２００７．３．１．１３
Ｍａｚｚｏｌｉ，Ａ．，Ｄｏｎａｄｉｏ，Ｇ．，Ｌａｎｚｉｌｌｉ，Ｍ．，Ｓａｇｇｅｓｅ，Ａ．，Ｇｕａｒｉｎｏ，Ａ．Ｍ．，Ｒｉｖｅｔｔｉ，Ｍ．，...Ｉｓｔｉｃａｔｏ，Ｒ．（２０１９）．Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ ＳＦ１８５ ｓｐｏｒｅｓ ｅｘｅｒｔ ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ａｇａｉｎｓｔ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ ｉｎ ｖｉｖｏ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ．Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ，９（１）．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｓ４１５９８－０１９－４８５３１－４
Ｎｅａｇ，Ｍ．Ａ．，Ｃａｔｉｎｅａｎ，Ａ．，Ｍｕｎｔｅａｎ，Ｄ．Ｍ．，Ｐｏｐ，Ｍ．Ｒ．，Ｂｏｃｓａｎ，Ｃ．Ｉ．，Ｂｏｔａｎ，Ｅ．Ｃ．，＆ Ｂｕｚｏｉａｎｕ，Ａ．Ｄ．（２０２０）．Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｓｐｏｒｅｓ Ｐｒｏｔｅｃｔ Ａｇａｉｎｓｔ Ａｃｅｔａｍｉｎｏｐｈｅｎ Ｉｎｄｕｃｅｄ Ａｃｕｔｅ Ｌｉｖｅｒ Ｉｎｊｕｒｙ ｉｎ Ｒａｔｓ．Ｎｕｔｒｉｅｎｔｓ，１２（３），６３２．ｄｏｉ：１０．３３９０／ｎｕ１２０３０６３２
Ｎｉｓｔａ，Ｅ．Ｃ．，Ｃａｎｄｅｌｌｉ，Ｍ．，Ｃｒｅｍｏｎｉｎｉ，Ｆ．，Ｃａｚｚａｔｏ，Ｉ．Ａ．，Ｚｏｃｃｏ，Ｍ．Ａ．，Ｆｒａｎｃｅｓｃｈｉ，Ｆ．，...Ｇａｓｂａｒｒｉｎｉ，Ａ．（２００４）．Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｌａｕｓｉｉ ｔｈｅｒａｐｙ ｔｏ ｒｅｄｕｃｅ ｓｉｄｅ－ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ａｎｔｉ－Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ：ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ，ｄｏｕｂｌｅ－ｂｌｉｎｄ，ｐｌａｃｅｂｏ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｔｒｉａｌ．Ａｌｉｍｅｎｔａｒｙ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，２０（１０），１１８１－１１８８．ｄｏｉ：１０．１１１１／ｊ．１３６５－２０３６．２００４．０２２７４．ｘ
Ｎｉｔｈｙａ，Ｖ．，＆ Ｈａｌａｍｉ，Ｐ．Ｍ．（２０１２）．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｅｃｉｅｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｆｏｏｄ ｓｏｕｒｃｅｓ．Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，６３（１），１２９－１３７．ｄｏｉ：１０．１００７／ｓ１３２１３－０１２－０４５３－４
Ｐａｄｇｈａｍ，Ｊ．，ａｎｄ Ｒ．Ｓｉｋｏｒａ．（２００７）“Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ａｎｄ Ｍｏｄｅｓ ｏｆ Ａｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ ａｇａｉｎｓｔ Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ Ｇｒａｍｉｎｉｃｏｌａ ｏｎ Ｒｉｃｅ．” Ｃｒｏｐ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，ｖｏｌ．２６，ｎｏ．７，ｐｐ．９７１－９７７．，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｃｒｏｐｒｏ．２００６．０９．００４．
Ｐｅｌｌｅｔｉｅｒ，Ａ．＆ Ｓｙｇｕｓｈ，Ｊ（１９９０）．Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｒｅｅ ｃｈｉｔｏｓａｎａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｆｒｏｍ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ Ｐ１．Ａｐｐｌ Ｅｎｖｉｒｏｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ ５６，８４４－８４８
Ｒｉｐｅｒｔ，Ｇ．，Ｒａｃｅｄｏ，Ｓ．Ｍ．，Ｅｌｉｅ，Ａ．－Ｍ．，Ｊａｃｑｕｏｔ，Ｃ．，Ｂｒｅｓｓｏｌｌｉｅｒ，Ｐ．，＆ Ｕｒｄａｃｉ，Ｍ．Ｃ．（２０１６）．Ｓｅｃｒｅｔｅｄ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｌａｕｓｉｉ Ｓｔｒａｉｎ Ｏ／Ｃ Ｉｎｈｉｂｉｔ ｔｈｅ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｅｆｆｅｃｔｓ Ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ ａｎｄ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ Ｔｏｘｉｎｓ．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ａｇｅｎｔｓ ａｎｄ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，６０（６），３４４５－３４５４．ｄｏｉ：１０．１１２８／ａａｃ．０２８１５－１５
Ｒｏｃｈｉｎ－Ｍｅｄｉｎａ，Ｊ．Ｊ．，Ｒａｍｉｒｅｚ－Ｍｅｄｉｎａ，Ｈ．Ｋ．，Ｒａｎｇｅｌ－Ｐｅｒａｚａ，Ｊ．Ｇ．，Ｐｉｎｅｄａ－Ｈｉｄａｌｇｏ，Ｋ．Ｖ．，＆ Ｉｒｉｂｅ－Ａｒｅｌｌａｎｏ，Ｐ．（２０１７）．Ｕｓｅ ｏｆ ｗｈｅｙ ａｓ ａ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｄｉｕｍ ｆｏｒ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｌａｕｓｉｉ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓ ｗｉｔｈ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ａｎｄ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，２４（１），３５－４２．ｄｏｉ：１０．１１７７／１０８２０１３２１７７２４７０５
Ｓａｌｖｅｔｔｉ，Ｅ．，Ｏｒｒｕ，Ｌ．，Ｃａｐｏｚｚｉ，Ｖ，Ｍａｒｔｉｎａ Ａｍ Ｌａｍｏｎｔａｎａｒａ Ａ，Ｋｅｌｌｅｒ Ｄ，Ｃａｓｈ Ｈ，Ｆｅｌｉｓ Ｇ，Ｃａｔｔｉｖｅｌｌｉ Ｌ，Ｔｏｒｒｉａｎｉ Ｓ，Ｓｐａｎｏ Ｇ．（２０１６）Ｉｎｔｅｇｒａｔｅ ｇｅｎｏｍｅ－ｂａｓｅｄ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ ｓａｆｅｔｙ ｆｏｒ ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ ｓｔｒａｉｎｓ：Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ ＧＢＩ－３０，６０８６ ａｓ ａ ｃａｓｅ ｓｔｕｄｙ．Ａｐｐｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １００：４５９５．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１００７／ｓ００２５３－０１６－７４１６－９
Ｓｃｈｏｌｌｅ ＭＤ，Ｗｈｉｔｅ ＣＡ，Ｋｕｎｎｉｍａｌａｉｙａａｎ Ｍ，Ｖａｒｙ ＰＳ（２００３）“Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｐＢＭ４００ ｆｒｏｍ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ ＱＭ Ｂ１５５１．” Ａｐｐｌｉｅｄ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．６９，ｎｏ．１１，ｐｐ．６８８８－６８９８．，ｄｏｉ：１０．１１２８／ａｅｍ．６９．１１．６８８８－６８９８．２００３．
Ｓｈａｒｍａ，Ｓ．，＆ Ｋａｎｗａｒ，Ｓ．Ｓ．（２０１７）．Ａｄｈｅｒｅｎｃｅ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｏｆ ｉｎｄｉｇｅｎｏｕｓ ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｆｒｏｍ ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ ｆｏｏｄｓ ｏｆ Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｈｉｍａｌａｙａｓ ｔｏ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ Ｃａｃｏ－２ ａｎｄ ＨＴ－２９ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，５４（１１），３５０４－３５１１．ｄｏｉ：１０．１００７／ｓ１３１９７－０１７－２８０７－１
Ｓｎｏｗｄｏｎ，Ｊｉｌｌ Ａ，ａｎｄ Ｄｅａｎ Ｏ Ｃｌｉｖｅｒ．（１９９６）“Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ｗｉｔｈ Ｈｏｎｅｙ．” Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ．
Ｓｕｄｈａ，Ｍ．，Ｒａｄｋａｒ，Ｎ．，＆ Ｍａｕｒｙａ，Ａ．（２０１２）．Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ Ｕｎｉｑｕｅ ＩＳ－２ ｏｎ Ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉａ Ｓｕｂｊｅｃｔｓ：Ａ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｓｔｕｄｙ．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ ａｎｄ Ｐｒｅｂｉｏｔｉｃｓ，６（２）．
Ｓｕｄｈａ，Ｍ．Ｒ．，Ｙｅｌｉｋａｒ，Ｋ．Ａ．，＆ Ｄｅｓｈｐａｎｄｅ，Ｓ．（２０１２）．Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｓｔｕｄｙ ｏｆ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ Ｕｎｉｑｕｅ ＩＳ－２（ＡＴＣＣ ＰＴＡ－１１７４８）ｉｎ ｔｈｅ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ Ｂａｃｔｅｒｉａｌ Ｖａｇｉｎｏｓｉｓ．Ｉｎｄｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，５２（３），３９６－３９９．ｄｏｉ：１０．１００７／ｓ１２０８８－０１１－０２３３－ｚ
Ｓｕｄｈａ，Ｍ．Ｒ．，Ｂｈｏｎａｇｉｒｉ，Ｓ．，＆ Ｋｕｍａｒ，Ｍ．Ａ．（２０１３）．Ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｌａｕｓｉｉ ｓｔｒａｉｎ ＵＢＢＣ－０７ ｉｎ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｓｕｆｆｅｒｉｎｇ ｆｒｏｍ ａｃｕｔｅ ｄｉａｒｒｈｏｅａ．Ｂｅｎｅｆｉｃｉａｌ Ｍｉｃｒｏｂｅｓ，４（２），２１１－２１６．ｄｏｉ：１０．３９２０／ｂｍ２０１２．００３４
Ｓｕｄｈａ，Ｍ．Ｒ．，Ｊａｙａｎｔｈｉ，Ｎ．，Ａａｓｉｎ，Ｍ．，Ｄｈａｎａｓｈｒｉ，Ｒ．，＆ Ａｎｉｒｕｄｈ，Ｔ．（２０１８）．Ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ Ｕｎｉｑｕｅ ＩＳ２ ｉｎ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｉｒｒｉｔａｂｌｅ ｂｏｗｅｌ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｉｎ ｃｈｉｌｄｒｅｎ：ａ ｄｏｕｂｌｅ ｂｌｉｎｄ，ｒａｎｄｏｍｉｓｅｄ ｐｌａｃｅｂｏ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｓｔｕｄｙ．Ｂｅｎｅｆｉｃｉａｌ Ｍｉｃｒｏｂｅｓ，９（４），５６３‐５７２．ｄｏｉ：１０．３９２０／ｂｍ２０１７．０１２９
Ｓｕｄｈａ，Ｍ．Ｒ．，Ｊａｙａｎｔｈｉ，Ｎ．，Ｐａｎｄｅｙ，Ｄ．，＆ Ｖｅｒｍａ，Ａ．（２０１９）．Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｌａｕｓｉｉ ＵＢＢＣ－０７ ｒｅｄｕｃｅｓ ｓｅｖｅｒｉｔｙ ｏｆ ｄｉａｒｒｈｏｅａ ｉｎ ｃｈｉｌｄｒｅｎ ｕｎｄｅｒ ５ ｙｅａｒｓ ｏｆ ａｇｅ：ａ ｄｏｕｂｌｅ ｂｌｉｎｄ ｐｌａｃｅｂｏ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｓｔｕｄｙ．Ｂｅｎｅｆｉｃｉａｌ Ｍｉｃｒｏｂｅｓ，１０（２），１４９－１５４．ｄｏｉ：１０．３９２０／ｂｍ２０１８．００９４
Ｓｕｍａｔｈｉ Ｃ，Ｎａｎｄｈｉｎｉ Ａ，Ｐａｄｍａｎａｂａｎ Ｊ（２０１７）“Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ ａｇａｉｎｓｔ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓ．”Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａ ａｎｄ Ｂｉｏ Ｓｃｉｅｎｃｅ，ｖｏｌ．８，ｎｏ．１，ｄｏｉ：１０．２２３７６／ｉｊｐｂｓ．２０１７．８．１．ｐ２７０－２７４．
Ｔｈａｋｕｒ，Ｋ．，Ｔｏｍａｒ，Ｓ．Ｋ．，＆ Ｄｅ，Ｓ．（２０１６）．Ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ ｂａｃｔｅｒｉａ ａｓ ａ ｃｅｌｌ ｆａｃｔｏｒｙ ｆｏｒ ｒｉｂｏｆｌａｖｉｎ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，９（４），４４１－４５１．ｄｏｉ：１０．１１１１／１７５１－７９１５．１２３３５
Ｔｙｓｓｅｔ，Ｃ．，Ｄｕｒａｎｄ，Ｃ．，ａｎｄ Ｔａｌｉｅｒｇｉｏ，Ｙ．Ｐ．（１９７０）Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｔｏ ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｔｈｅ ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅ ｈｙｇｉｅｎｅ ｏｆ ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ ｈｏｎｅｙ．Ｒｅｃ．Ｍｅｄ．Ｖｅｔ．１４６，１４７１－１４９２．
Ｖａｒｙ，Ｐ．Ｓ．，Ｂｉｅｄｅｎｄｉｅｃｋ，Ｒ．，Ｆｕｅｒｃｈ，Ｔ．，Ｍｅｉｎｈａｒｄｔ，Ｆ．，Ｒｏｈｄｅ，Ｍ．，Ｄｅｃｋｗｅｒ，Ｗ．，＆ Ｊａｈｎ，Ｄ．（２００７）．Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ－ｆｒｏｍ ｓｉｍｐｌｅ ｓｏｉｌ ｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｏ ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｈｏｓｔ．Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，７６（５），９５７－９６７．ｄｏｉ：１０．１００７／ｓ００２５３－００７－１０８９－３
ｖｏｎ Ｔｅｒｓｃｈ，Ｍ．Ａ．ａｎｄ Ｃａｒｌｔｏｎ，Ｂ．Ｃ．（１９８３）Ｂａｃｔｅｒｉｏｃｉｎ ｆｒｏｍ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ ＡＴＣＣ １９２１３：ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ｓｔｕｄｉｅｓ ｗｉｔｈ ｍｅｇａｃｉｎ Ａ－２１６．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ １５５，８６６－８７１．

【0236】

本発明は、本明細書中に記載される実施形態に限定されず、本発明の範囲から逸脱することなく、修正又は変更され得る。

【0237】

本発明を記載する文脈における（特に特許請求の範囲の文脈における）「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」及び同様の指示対称の語の使用は、本明細書中で別段の指示がない限り、又は文脈により明らかに否定されない限り、単数及び複数の両方を包含すると解釈されるべきである。本明細書中での値の範囲の列挙は、単に、本明細書中で別段の指示がない限り、範囲内に入る各個別の値に個々に言及する省略法として機能すると意図され、各個別の値は、それが個々に本明細書中で列挙されるかのように本明細書に組み込まれる。「約」という用語の使用は、およそ±１０％の範囲の述べられる値の上又は下の何れかの値を記載すると意図され；他の実施形態では、値は、およそ±５％の範囲の述べられる値の上又は下の何れかの値の範囲であり得；他の実施形態では、値は、およそ±２％の範囲の述べられる値の上又は下の値の範囲であり得；他の実施形態では、値は、およそ±１％の範囲の述べられる値の上又は下の値の範囲であり得る。前述の範囲は、文脈により明らかにされると意図され、さらなる制限は示唆されない。本明細書中に記載の全ての方法は、本明細書中で別段指示されない限り、又は文脈により明らかに否定されない限り、あらゆるの適切な順序で行われ得る。本明細書中で提供されるありとあらゆる例又は代表的な語（例えば「など」）の使用は、本発明をより良好に明らかにするものに過ぎず、別段の断りがない限り、本発明の範囲に対する制限を課さない。明細書中の如何なる語も、請求されていない何れかの要素が本発明の実施に必須ものとして示されるものとして解釈されるべきではない。

【0238】

前述の明細書においてその特定の実施形態に関連して本発明を説明し、例示を目的として多くの詳細を提示してきたが、本発明がさらなる実施形態の影響を受け易いこと及び本明細書中に記載の特定の詳細が本発明の基本的な原理から逸脱することなく、大幅に変更され得ることは当業者にとり明らかであろう。

【0239】

本明細書中で引用される全ての参考文献は、その全体において参照により組み込まれる。本発明は、本発明の精神又は必須の特質から逸脱することなく、他の具体的な形態で具現化され得、従って、本発明の範囲を示すものとして、前述の明細書ではなく添付の特許請求の範囲を参照すべきである。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8(a)】

【図8(b)】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23】

【図24】

【図25】

【図26】

【図27】

【図28】

【図29】

【図30】

【図31】

【図32】

【図33】

【配列表】

2024544211000001.xml

【国際調査報告】