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▶ ターンズ・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-12-03
(54)【発明の名称】ＴＨＲ－βアゴニストによる肝障害の治療
(51)【国際特許分類】
A61K 31/53 20060101AFI20241126BHJP
A61P 1/16 20060101ALI20241126BHJP
A61K 47/20 20060101ALI20241126BHJP
A61K 9/48 20060101ALI20241126BHJP
C07D 403/12 20060101ALI20241126BHJP
【ＦＩ】
A61K31/53
A61P1/16
A61K47/20
A61K9/48
C07D403/12 CSP
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024527603
(86)(22)【出願日】2022-11-11
(85)【翻訳文提出日】2024-06-25
(86)【国際出願番号】 CN2022131297
(87)【国際公開番号】W WO2023083288
(87)【国際公開日】2023-05-19
(31)【優先権主張番号】PCT/CN2021/130083
(32)【優先日】2021-11-11
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(31)【優先権主張番号】PCT/CN2022/097426
(32)【優先日】2022-06-07
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】521083599
【氏名又は名称】ターンズ・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド
【氏名又は名称原語表記】ＴＥＲＮＳ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ， ＩＮＣ．
(74)【代理人】
【識別番号】100145403
【弁理士】
【氏名又は名称】山尾 憲人
(74)【代理人】
【識別番号】100150500
【弁理士】
【氏名又は名称】森本 靖
(74)【代理人】
【識別番号】100176474
【弁理士】
【氏名又は名称】秋山 信彦
(72)【発明者】
【氏名】ジョーンズ，クリストファー ティ
(72)【発明者】
【氏名】クルーチャー，ケビン
(72)【発明者】
【氏名】クリッテンデン，ディー バリー
(72)【発明者】
【氏名】クワーク，エリン ケイ
(72)【発明者】
【氏名】ジン，フォン
(72)【発明者】
【氏名】ドゥアン，マット
(72)【発明者】
【氏名】グオ，シェン
(72)【発明者】
【氏名】ビアン，ジャンウェイ
(72)【発明者】
【氏名】ドォン，チェンチェン
【テーマコード（参考）】
4C076
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C076AA53
4C076BB01
4C076CC16
4C076DD05
4C076DD29
4C076DD41
4C076DD61F
4C076DD67
4C076EE31
4C076EE32
4C076EE32H
4C076FF01
4C076FF21
4C086AA01
4C086AA02
4C086AA03
4C086BC64
4C086GA13
4C086GA15
4C086MA01
4C086MA02
4C086MA04
4C086MA05
4C086MA37
4C086MA52
4C086NA14
4C086ZA75
4C086ZC41
(57)【要約】
ＴＨＲ－βアゴニストによる治療を利用する、患者における非アルコール性脂肪性肝炎ならびにその症状及び兆候を含む肝障害を治療する方法が本明細書において提供される。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）の治療を必要とする患者におけるＮＡＳＨを治療する方法であって、以下の式の化合物：【化1】
【請求項2】
前記化合物またはその薬学的に許容される塩が、約１ｍｇ～約１５ｍｇの用量で１日１回投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
前記化合物またはその薬学的に許容される塩が、約２ｍｇ～約１０ｍｇの用量で１日１回投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項4】
前記化合物またはその薬学的に許容される塩が、約１ｍｇの用量で１日１回投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項5】
前記化合物またはその薬学的に許容される塩が、約３ｍｇの用量で１日１回投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項6】
前記化合物またはその薬学的に許容される塩が、約６ｍｇの用量で１日１回投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項7】
前記化合物またはその薬学的に許容される塩が、約１０ｍｇの用量で１日１回投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項8】
非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）の治療を必要とする患者におけるＮＡＳＨを治療する方法であって、約２，５００ｎｇ＊時間／ｍＬ～約５０，０００ｎｇ＊時間／ｍＬの０から無限大までの定常状態曲線下面積（ＡＵＣ０－∞）を得るように、以下の式の化合物：【化2】
【請求項9】
前記化合物またはその薬学的に許容される塩が、約５，０００ｎｇ＊時間／ｍＬ～約５０，０００ｎｇ＊時間／ｍＬの定常状態ＡＵＣ０－∞を得る用量で投与される、請求項８に記載の方法。
【請求項10】
前記化合物またはその薬学的に許容される塩が、約５，０００ｎｇ＊時間／ｍＬ～約２５，０００ｎｇ＊時間／ｍＬの定常状態ＡＵＣ０－∞を得る用量で投与される、請求項８に記載の方法。
【請求項11】
前記化合物が、１日１回経口投与される、請求項８～１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項12】
前記化合物が、カリウム塩として投与される、請求項１～１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項13】
前記化合物が、ナトリウム塩として投与される、請求項１～１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項14】
前記化合物が、イオン性界面活性剤を含む医薬組成物中で投与される、請求項１～１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項15】
前記イオン性界面活性剤が、ラウリル硫酸ナトリウムである、請求項１４に記載の方法。
【請求項16】
前記ラウリル硫酸ナトリウムが、約１重量％～約８重量％で前記組成物中に存在する、請求項１５に記載の方法。
【請求項17】
前記ラウリル硫酸ナトリウムが、約１重量％～約５重量％で前記組成物中に存在する、請求項１５に記載の方法。
【請求項18】
前記ラウリル硫酸ナトリウムが、約５重量％で前記組成物中に存在する、請求項１５に記載の方法。
【請求項19】
以下の式の化合物：【化3】
【請求項20】
実施例８の方法によって産生された、請求項１９に記載の結晶性カリウム塩。
【請求項21】
請求項１９または請求項２０に記載の化合物を含む、医薬組成物。
【請求項22】
前記医薬組成物中の前記化合物の量が、約１ｍｇ～約１５ｍｇである、請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項23】
前記医薬組成物中の前記化合物の量が、約２ｍｇ～約１０ｍｇである、請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項24】
前記医薬組成物中の前記化合物の量が、約１ｍｇである、請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項25】
前記医薬組成物中の前記化合物の量が、約３ｍｇである、請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項26】
前記医薬組成物中の前記化合物の量が、約６ｍｇである、請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項27】
前記医薬組成物中の前記化合物の量が、約１０ｍｇである、請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項28】
イオン性界面活性剤をさらに含む、請求項２１～２７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項29】
前記イオン性界面活性剤が、ラウリル硫酸ナトリウムである、請求項２８に記載の医薬組成物。
【請求項30】
以下の式の化合物：【化4】
【請求項31】
実質的に図１６中で示されるＸＲＰＤスペクトルを有する、以下の式の化合物：【化5】
【請求項32】
６．７８±０．２０、１１．３５±０．２０、及び２０．５１±０．２０度の角度２θでピークを含むＸＲＰＤスペクトルを有する、以下の式の化合物：【化6】
【請求項33】
実質的に図１８中で示されるＸＲＰＤスペクトルを有する、以下の式の化合物：【化7】
【請求項34】
５．５１±０．２０、８．４７±０．２０、及び１６．５７±０．２０度の角度２θでピークを含むＸＲＰＤスペクトルを有する、以下の式の化合物：【化8】
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年１１月１１日に出願されたＰＣＴ／ＣＮ２０２１／１３００８３及び２０２２年６月７日に出願されたＰＣＴ／ＣＮ２０２２／０９７４２６の利益及びそれらへの優先権を主張する。前述の特許出願の内容は、すべての目的のためにそれらの全体を参照することによって本明細書に援用される。
本出願は、２０２１年１１月１１日に出願されたＰＣＴ／ＣＮ２０２１／１３００８３及び２０２２年６月７日に出願されたＰＣＴ／ＣＮ２０２２／０９７４２６の利益及びそれらへの優先権を主張する。前述の特許出願の内容は、すべての目的のためにそれらの全体を参照することによって本明細書に援用される。
【0002】
本発明は、患者における肝障害を治療する方法及び組成物に関する。
【背景技術】
【0003】
脂肪性肝疾患（ＦＬＤ）は、多くの場合炎症を伴った肝臓における脂肪の過剰蓄積によって特徴付けられる様々な疾患状態を網羅する。ＦＬＤは、インシュリン抵抗性によって特徴付けられ得る非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）を導き得る。治療されないならば、ＮＡＦＬＤは、持続的な炎症応答または非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、進行性の肝線維化、及び最終的には肝硬変に進行し得る。ヨーロッパ及び米国において、ＮＡＦＬＤは、肝移植の２番目に多い理由である。したがって、治療の必要性は緊急であるが、患者の明らかな症状の欠如に起因して、患者は、治療レジメン、特に厄介な治療レジメン（注射される医薬品、１日に何回も投与される医薬物、または危険なもしくは刺激性の副作用を生じる任意のもの等）を維持する動機を欠如し得る。現在、ＮＡＳＨの認可された治療は無い。
【0004】
甲状腺ホルモン受容体－β（ＴＨＲ－β）アゴニストは、最近、ＮＡＳＨを含む肝疾患の治療において調査されている。ＴＨＲ－βは、肝臓におけるＴＨＲの主要な形態であり、エネルギーバランスならびに脂肪酸及び脂質の代謝において重要な役割を果たすが、ＴＨＲ－αは、心臓において優勢であり、甲状腺ホルモン刺激の望ましくない心血管系効果についての大部分を担う。克服するべき有意な問題は、ＴＨＲ－αアゴニズムと関連する所望されない副作用を生じない、ＮＡＳＨを治療するためのＴＨＲ－βアゴニストを開発することを包含する。
【発明の概要】
【0005】
肝障害を治療する方法及び組成物を必要とする患者における肝障害を治療する方法及び組成物が、本明細書において提供される。方法は、化合物１と本明細書において称される甲状腺ホルモン受容体β（ＴＨＲ－β）アゴニストまたはその薬学的に許容される塩を患者へ投与することを含む。
化合物１（化学名２－（３，５－ジクロロ－４－（（４－オキソ－３，４－ジヒドロフタラジン－１－イル）オキシ）フェニル）－３，５－ジオキソ－２，３，４，５－テトラヒドロ－１，２，４－トリアジン－６－ニトリルを有する）は、米国特許第１１，０８４，８０２号（参照することによってその全体が本明細書に援用される）中で記載された。
【化1】
【0006】
本発明者らは、化合物１またはその薬学的に許容されるものが、驚くほど低い用量で肝障害を患う患者へ投与されても、依然として所望される有効性のレベルを維持し得ることを見出した。その結果として、化合物１は、ＴＨＲアゴニズムと概して関連する所望されない副作用無しに、肝障害を治療するために使用され得る。
【0007】
本開示のいくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、１ｍｇほどの低用量またはそれ以下の用量で患者へ１日１回経口投与され得、依然としてアミンオキシダーゼ活性を十分に低減させ、リンパ球の接着及び遊走を低減させ得る。例えば、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、約１ｍｇ～約６０ｍｇの用量で肝障害（例えばＮＡＳＨ）の患者へ１日１回経口投与され得る。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、約０．５ｍｇ～約２５ｍｇの用量で肝障害（例えばＮＡＳＨ）の患者へ１日１回経口投与され得る。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、約１ｍｇ～約１５ｍｇの用量で肝障害（例えばＮＡＳＨ）の患者へ１日１回経口投与され得る。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、約３ｍｇ～約１０ｍｇの用量で肝障害（例えばＮＡＳＨ）の患者へ１日１回経口投与され得る。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、約１ｍｇの用量で肝障害（例えばＮＡＳＨ）の患者へ１日１回経口投与され得る。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、約３ｍｇの用量で肝障害（例えばＮＡＳＨ）の患者へ１日１回経口投与され得る。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、約４ｍｇの用量で肝障害（例えばＮＡＳＨ）の患者へ１日１回経口投与され得る。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、約５ｍｇの用量で肝障害（例えばＮＡＳＨ）の患者へ１日１回経口投与され得る。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、約６ｍｇの用量で肝障害（例えばＮＡＳＨ）の患者へ１日１回経口投与され得る。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、約１０ｍｇの用量で肝障害（例えばＮＡＳＨ）の患者へ１日１回経口投与され得る。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、約１５ｍｇの用量で肝障害（例えばＮＡＳＨ）の患者へ１日１回経口投与され得る。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、約２０ｍｇの用量で肝障害（例えばＮＡＳＨ）の患者へ１日１回経口投与され得る。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、約３０ｍｇの用量で肝障害（例えばＮＡＳＨ）の患者へ１日１回経口投与され得る。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、約５０ｍｇの用量で肝障害（例えばＮＡＳＨ）の患者へ１日１回経口投与され得る。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、約６０ｍｇの用量で肝障害（例えばＮＡＳＨ）の患者へ１日１回経口投与され得る。
【0008】
別の態様において、本開示は、ＮＡＳＨの治療または予防を必要とする患者におけるＮＡＳＨを治療または予防する方法であって、治療有効量の化合物１またはその薬学的に許容される塩を患者へ投与することを含む、前記方法を提供する。一実施形態において、治療または予防を必要とする患者は、ＮＡＦＬＤ等の脂肪性肝疾患を患う患者である。別の実施形態において、治療または予防を必要とする患者は、メタボリックシンドロームを患う患者である。
【0009】
一態様において、本開示は、肝炎症の低減を必要とする患者における肝炎症を低減させる方法であって、治療有効量の化合物１またはその薬学的に許容される塩を患者へ投与することを含む、前記方法を提供する。肝炎症の低減は、肝臓における炎症性遺伝子の発現の低減及び白血球活性化のマーカーによって特徴付けられる。いくつかの実施形態において、肝炎症は、患者の血液における低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ－Ｃ）レベルを増加させずに低減される。
【0010】
別の態様において、本開示は、肝線維化によって特徴付けられる疾患または病態を治療する方法であって、治療有効量の化合物１またはその薬学的に許容される塩を患者へ投与することを含む、前記方法を提供する。線維化の低減は、肝臓における組織学的な改善及び線維化促進遺伝子の発現の低減によって特徴付けられる。いくつかの実施形態において、肝線維化は、患者の血液における低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ－Ｃ）レベルを増加させずに低減される。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩の投与は、肝線維化及び肝炎症の低減をもたらす。
【0011】
いくつかの実施形態において、患者は、肝障害及び糖尿病を有する。いくつかの実施形態において、患者は、肝障害及び心臓血管障害を有する。いくつかの実施形態において、治療期間は、患者の残りの寿命である。いくつかの実施形態において、方法は、抗ヒスタミン物質、免疫抑制物質、ステロイド、リファンピシン、オピオイドアンタゴニスト、または選択的セロトニン再取り込み阻害剤（ＳＳＲＩ）を投与することを含まない。
【0012】
いくつかの実施形態において、化合物１は、薬学的に許容される塩として患者へ投与される。いくつかの実施形態において、薬学的に許容される塩は、カリウム塩である。いくつかの実施形態において、薬学的に許容される塩は、ナトリウム塩である。
【0013】
本開示は、化合物１またはその薬学的に許容される塩を含む新規の組成物も提供する。化合物１は、塩形態で投与された場合でさえ、非常に低い水溶解度を有する。特定のイオン性界面活性剤は、化合物の最小限の分解または分解無しに、化合物１及びその薬学的塩を効果的に可溶化し得ることが見出された。いくつかの実施形態において、イオン性界面活性剤は、ラウリル硫酸ナトリウムである。いくつかのかかる実施形態において、組成物中のＳＬＳの量は、約１重量％～約８重量％である。他のかかる実施形態において、組成物中のＳＬＳの量は、約５重量％である。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、化合物１のカリウム塩及びＳＬＳを含む。
【図面の簡単な説明】
【0014】
【図1】化合物１の単回用量の投与後の７２時間までの患者における化合物１の血漿濃度を示す。
【図2】投与された用量に対してプロットされた患者における化合物１の曲線下面積（ＡＵＣｉｎｆ）及び最大血漿濃度（Ｃｍａｘ）を示す。
【図3】化合物１の単回用量の投与の４日後の性ホルモン結合グロブリン（ＳＨＢＧ）の平均パーセント変化を示す。
【図4】化合物１の単回用量の投与の４日後のアポリポタンパク質Ｂ（Ａｐｏ Ｂ）の平均パーセント変化を示す。
【図5】ヒトにおける、化合物１またはプラセボの１４日間の毎日の投与後の１５日目の遊離Ｔ３、Ｔ４、及びＴＳＨを示す。
【図6】ヒトにおける、化合物１またはプラセボの１４日間の毎日の投与後の１５日目の遊離テストステロン、総テストステロン、及び性ホルモン結合グロブリン（ＳＨＢＧ）のベースラインからのパーセント変化を示す。
【図7】化合物１が１日１回投薬される複数用量漸増研究の１日目及び１４日目での経時的な化合物１の血漿濃度を示す。
【図8】ヒトにおける、化合物１またはプラセボの１４日間の毎日の投与後の１５日目の薬力学マーカー（性ホルモン結合グロブリン、ＡｐｏＢ、総コレステロール、ＬＤＬ－ｃ、ＨＤＬ－ｃ、及びトリグリセリド）のベースラインからのパーセント変化を示す。
【図9】マウスＮＡＳＨモデルにおける、体重及び臓器重量に対する化合物１の効果を示す。
【図10】マウスＮＡＳＨモデルにおける、肝脂肪変性、炎症、及び線維化に対する化合物１の効果を示す。
【図11】マウスＮＡＳＨモデルにおける、脂質、及び肝臓損傷の指標（ＡＬＴ）に対する化合物１の効果を示す。
【図12】コラーゲン細胞外マトリックス及び肝臓星細胞活性化と関連する遺伝子の発現に対する化合物１の効果を示す。
【図13】２つの経口製剤（ＰＯ１またはＰＯ２）のうちの１つで提供された単回の５０ｍｇの用量の投与後のビーグル犬における、化合物１の血漿濃度を示す。
【図14】経口製剤ＰＯ３で提供された単回の１０ｍｇの用量の投与後のビーグル犬の２つの群における、化合物１の血漿濃度を示す。１つの群はペンタガストリンにより前処理され、その一方で他の群はファモチジンにより前処理された。
【図15】経口製剤ＰＯ３で提供された単回の１０ｍｇの用量の投与後の絶食した及び餌有りのビーグル犬における、化合物１の血漿濃度を示す。
【図16】化合物１（カリウム塩形態、Ａ型）のＸＲＰＤスペクトルを示す。
【図17】化合物１（遊離酸形態、Ａ型）のＸＲＰＤスペクトルを示す。
【図18】化合物１（ナトリウム塩形態、Ａ型）のＸＲＰＤスペクトルを示す。
【図19】化合物１（Ｌ－アルギニン塩形態、Ａ型）のＸＲＰＤスペクトルを示す。
【図20】化合物１（マグネシウム塩形態、Ａ型）のＸＲＰＤスペクトルを示す。
【図21】化合物１についての全体的な研究デザインを示す。
【図22】化合物１についての人口層及びベースラインの特徴を示す。
【図23】化合物１についての血漿濃度－時間プロファイル（１４日目）を示す。
【図24】１４日目の化合物１のＰＫパラメーターを示す。
【図25】性ホルモン結合グロブリン（ＳＨＢＧ）を示す（ベースラインから１５日目までのパーセント変化）。
【図26】ＬＤＬ－ｃを示す（ベースラインから１５日目までのパーセント変化）。
【図27】化合物１用量あたりのＳＨＢＧ及びＬＤＬ－ｃについての治療の終了時（１５日目）でのベースラインからのパーセント変化を示す。
【図28】化合物１用量あたりの総コレステロール（ＴＣ）、Ａｐｏ Ｂ、及びトリグリセリド（ＴＧ）の減少を示す。
【図29】治療下で出現した有害事象が、軽度であり、多くはバイタルサインの有意な変化と関連しないこと示す。
【図30】生検により確認されたオスのＤＩＯ－ＮＡＳＨマウスの体重変化を示す。化合物２は、単独で及び化合物１と併用で体重を低減させた。体重を、研究の間毎日測定した。研究の間の体重変化をＡ中で示し、ドットは、ベースラインに比べた平均体重変化を表わす（１つの群あたりｎ＝１０～１６匹のマウス）。Ｂ中で、バーは、研究の１１週目に測定された平均（標準偏差）体重を表わす。低脂肪ビヒクル対照、白色；ＤＩＯ－ＧＡＮビヒクル対照、灰色；化合物２、青色；化合物１－低、薄いオレンジ色；化合物１－中、オレンジ色；化合物１－高、濃いオレンジ色；併用－低、薄い紫色；併用－中、紫色；併用－高、濃い紫色。ＤＩＯ－ＧＡＮビヒクル対照に対する統計的比較は、ＡＮＯＶＡとそれに後続する多重比較のためのＴｕｋｅｙ補正によって決定された。＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊ｐ＜０．００１；＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。
【図31】研究の間の週ごとの食物摂取量を示す。ドットは、グラムでの平均の毎週の食物摂取量を表わす（１つの群あたりｎ＝１０～１６匹のマウス）。低脂肪ビヒクル対照、白色；ＤＩＯ－ＧＡＮビヒクル対照、灰色；化合物２、青色；化合物１－低、薄いオレンジ色；化合物１－中、オレンジ色；化合物１－高、濃いオレンジ色；併用－低、薄い紫色；併用－中、紫色；併用－高、濃い紫色。
【図32】肝臓及び脾臓の重量を示す。化合物２及び化合物１は、単独で及び併用で脾臓重量の変化無しに肝腫大を有意に低減させた。バーは、研究の終了時で決定された平均（標準偏差）の肝臓（Ａ）及び脾臓（Ｂ）の臓器重量を表わす（１つの群あたりｎ＝１０～１６匹のマウス）。ＤＩＯ－ＧＡＮビヒクル対照に対する統計的比較は、ＡＮＯＶＡとそれに後続する多重比較のためのＴｕｋｅｙ補正によって決定された。＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊ｐ＜０．００１；＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。
【図33】ベースラインでの体重組成を示す。体重組成は、ベースライン（－１週目）で処理群にわたって良好にバランスがとれていた。バーは、研究の－１週目での全身ＥｃｈｏＭＲＩによって決定した体重のパーセンテージ（％ＢＷ、１つの群あたりｎ＝１０～１６匹のマウス）としての平均（標準偏差）脂肪組織（Ａ）及び除脂肪組織（Ｂ）の質量を表わす。ＤＩＯ－ＧＡＮビヒクル対照に対する統計的比較は、ＡＮＯＶＡとそれに後続する多重比較のためのＴｕｋｅｙ補正によって決定された。＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊ｐ＜０．００１；＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。
【図34】１１週目での体重組成を示す。化合物２は、単独で及び化合物１と併用で脂肪組織質量を有意に低減させた。バーは、研究の１１週目での全身ＥｃｈｏＭＲＩによって決定した体重のパーセンテージ（％ＢＷ、１つの群あたりｎ＝１０～１６匹のマウス）としての平均（標準偏差）脂肪組織（Ａ）及び除脂肪組織（Ｂ）の質量を表わす。ＤＩＯ－ＧＡＮビヒクル対照に対する統計的比較は、ＡＮＯＶＡとそれに後続する多重比較のためのＴｕｋｅｙ補正によって決定された。＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊ｐ＜０．００１；＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。
【図35】血漿及び肝臓の総コレステロールを示す。化合物２及び化合物１は、単独で及び併用で総コレステロールを有意に低減させた。バーは、血漿（Ａ）及び肝臓（Ｂ）の研究の終了時で測定された平均（標準偏差）総コレステロールレベルを表わす（１つの群あたりｎ＝１０～１６匹のマウス）。ＤＩＯ－ＧＡＮビヒクル対照に対する統計的比較は、ＡＮＯＶＡとそれに後続する多重比較のためのＴｕｋｅｙ補正によって決定された。＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊ｐ＜０．００１；＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。
【図36】血漿及び肝臓のトリグリセリドを示す。化合物２は、単独で及び化合物１と併用で血漿トリグリセリドを有意に低減させた。バーは、血漿（Ａ）及び肝臓（Ｂ）の研究の終了時で測定された平均（標準偏差）トリグリセリドレベルを表わす（１つの群あたりｎ＝１０～１６匹のマウス）。ＤＩＯ－ＧＡＮビヒクル対照に対する統計的比較は、ＡＮＯＶＡとそれに後続する多重比較のためのＴｕｋｅｙ補正によって決定された。＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊ｐ＜０．００１；＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。
【図37】アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）レベルを示す。化合物１単独は、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）レベルを有意に低減させた。バーは、研究の終了時で決定された平均（標準偏差）の肝臓（Ａ）及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）（Ｂ）のレベルを表わす（１つの群あたりｎ＝１０～１６匹のマウス）。ＤＩＯ－ＧＡＮビヒクル対照に対する統計的比較は、ＡＮＯＶＡとそれに後続する多重比較のためのＴｕｋｅｙ補正によって決定された。＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊ｐ＜０．００１；＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。
【図38】アルカリホスファターゼレベルを示す。アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）レベルは、処理によって有意に変化しなかった。バーは、研究の終了時で決定された平均（標準偏差）のＡＬＰレベルを表わす（１つの群あたりｎ＝１０～１６匹のマウス）。ＤＩＯ－ＧＡＮビヒクル対照に対する統計的比較は、ＡＮＯＶＡとそれに後続する多重比較のためのＴｕｋｅｙ補正によって決定された。＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊ｐ＜０．００１；＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。
【図39】ベースライン及び処理の終了時でのＮＡＦＬＤ活動性スコア（ＮＡＳ）を示す。ＮＡＦＬＤ活動性スコア（ＮＡＳ）は、ベースラインで良好にバランスがとれており、併用処理群において有意に改善された。ＮＡＳ（風船化、脂肪変性、及び小葉炎症の組織学的スコアの複合的な非加重和として定義される）は、ベースライン（Ａ）で及び１２週間の処理後（Ｂ）に決定された。ドットは、各々の処理群中の個別のマウスを表わす（ｎ＝１４～１６匹）。ＤＩＯ－ＧＡＮビヒクル対照に対する統計的比較は、ＡＮＯＶＡとそれに後続する多重比較のためのＴｕｋｅｙ補正によって決定された。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。
【図40】組織学的形態測定分析による肝脂肪変性を示す。化合物２及び化合物１の併用は、組織学的形態測定分析によって決定されるように肝脂肪変性のより大きい低減をもたらした。脂質滴を備えた肝細胞のパーセンテージ及びパーセント分画面積（ＦＡ）としての肝臓脂質含有量を包含する肝細胞脂肪変性は、研究の終了時での肝臓の組織学的サンプルの形態測定分析によって決定された。ＤＩＯ－ＧＡＮビヒクル対照に対する統計的比較は、ＡＮＯＶＡとそれに後続する多重比較のためのＴｕｋｅｙ補正によって決定された。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。
【図41】肝細胞の脂質滴サイズを示す。併用処理により、肝細胞脂質滴サイズは有意に低減される。脂質滴サイズは、研究の終了時での肝臓の組織学的サンプルの形態測定分析によって決定された。ＤＩＯ－ＧＡＮビヒクル対照に対する統計的比較は、ＡＮＯＶＡとそれに後続する多重比較のためのＴｕｋｅｙ補正によって決定された。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。
【図42】血漿ＣＫ１８ Ｍ３０を示す。アポトーシスバイオマーカーのサイトケラチン１８ Ｍ３０（ＣＫ１８ Ｍ３０）レベルは、処理によって有意に変化しなかった。ＣＫ１８ Ｍ３０（アポトーシスのバイオマーカー）は、研究の終了時での血漿サンプルで測定された。ＤＩＯ－ＧＡＮビヒクル対照に対する統計的比較は、ＡＮＯＶＡとそれに後続する多重比較のためのＴｕｋｅｙ補正によって決定された。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。
【図43】ガレクチン－３タンパク質及び平滑筋アクチンタンパク質の肝臓のタンパク質発現を示す。化合物２処理は、ガレクチン－３（Ｇａｌ－３）の発現を低減させる。Ｇａｌ－３（Ａ）及びα－平滑筋アクチン（α－ＳＭＡ）（Ｂ）の発現は、研究の終了時での処理マウスの肝臓の免疫組織化学の（ＩＨＣ）染色によって査定された。ＤＩＯ－ＧＡＮビヒクル対照に対する統計的比較は、ＡＮＯＶＡとそれに後続する多重比較のためのＴｕｋｅｙ補正によって決定された。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。
【図44】肝臓におけるエネルギー及び脂質の代謝関連遺伝子の発現を示す。エネルギー及び脂質の代謝に関与する選択遺伝子についての、化合物１－高処理群と併用－高処理群との間の遺伝子発現値の比較である。肝臓サンプルは、終了時でＲＮＡｓｅｑによるトランスクリプトミクス分析のためにプロセシングされた。ドットは、ＤＩＯ－ＧＡＮビヒクル対照に比べた平均倍変化の発現値を表わす（１つの群あたりｎ＝１０匹のマウス）。赤色及び青色の着色は、ＤＩＯ－ＧＡＮビヒクル群と低脂肪対照群との間の変化の傾向（赤色＝発現の増加；青色＝発現の減少）を示す。点線は、同一である線を示す。実線は、化合物１－高処理群及び併用－高処理群中の選択遺伝子についての倍変化発現値の線形回帰分析によって生成された。選択遺伝子は、エネルギー及び脂質の代謝に関与する。スクアレンエポキシダーゼ（Ｓｑｌｅ）、７－デヒドロコレステロール（Ｄｈｃｒ７）、ヒドロキシメチルグルタラリル（ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌｇｌｕｔｅｒａｒｙｌ）－ＣｏＡ合成酵素（Ｈｍｇｃｓ１）、及びステアロイル－ＣｏＡデサチュラーゼ（Ｓｃｄ１）。
【図45】エネルギー及び脂質の代謝に関与する選択遺伝子の発現を示す。エネルギー及び脂質の代謝に関与する遺伝子の肝臓発現である。肝臓サンプルは、終了時でＲＮＡｓｅｑによるトランスクリプトミクス分析のためにプロセシングされた。バーは、示されたエネルギー及び脂質の代謝に関与する選択遺伝子についての平均（標準偏差）発現（ＦＰＫＭ）値を表わす。スクアレンエポキシダーゼ（Ｓｑｌｅ、Ａ）、７－デヒドロコレステロール（Ｄｈｃｒ７、Ｂ）、ヒドロキシメチルグルタラリル－ＣｏＡ合成酵素（Ｈｍｇｃｓ１、Ｃ）、及びステアロイル－ＣｏＡデサチュラーゼ（Ｓｃｄ１、Ｄ）。低脂肪、白色（最も左側のバー）；ＤＩＯ－ＧＡＮビヒクル対照、灰色（左側から２番目）；化合物２、青色（左側から３番目）；化合物１－低、薄いオレンジ色（左側から４番目）；化合物１－中、オレンジ色（左側から５番目）；化合物１－高、濃いオレンジ色（右側から４番目）；併用－低、薄い紫色（右側から３番目）；併用－中、紫色（右側から２番目）；併用－高、濃い紫色（最も右側のバー）。個別の処理群についての統計的比較を、ＤＩＯ－ＧＡＮビヒクル対照に対して示す。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。併用処理群は、化合物２処理群（＋ｐ＜０．０５、＋＋ｐ＜０．０１、＋＋＋ｐ＜０．０００１、＋＋＋＋ｐ＜０．００００１）または化合物１のそれぞれの単剤処理群（すなわち、化合物１－低ｖｓ併用－低）；＃ｐ＜０．０５、＃＃ｐ＜０．０１、＃＃＃ｐ＜０．０００１、＃＃＃＃ｐ＜０．００００１へ、追加で比較された。
【図46】線維化及び炎症に関与する遺伝子の発現を示す。線維化及び炎症に関与する遺伝子の肝臓発現である。肝臓サンプルは、終了時でＲＮＡｓｅｑによるトランスクリプトミクス分析のためにプロセシングされた。バーは、線維化及び炎症に関与する選択遺伝子についての平均（標準偏差）発現（ＦＰＫＭ）値を表わす。Ｉ型コラーゲンα１（Ｃｏｌ１ａ１）、アクチンα２、平滑アクチン（Ａｃｔａ２）、ガレクチン３（Ｌｇａｌｓ３）、及びメラノーマ細胞接着分子（ＣＤ１４６）。低脂肪、白色（最も左側のバー）；ＤＩＯ－ＧＡＮビヒクル対照、灰色（左側から２番目）；化合物２、青色（左側から３番目）；化合物１－低、薄いオレンジ色（左側から４番目）；化合物１－中、オレンジ色（左側から５番目）；化合物１－高、濃いオレンジ色（右側から４番目）；併用－低、薄い紫色（右側から３番目）；併用－中、紫色（右側から２番目）；併用－高、濃い紫色（最も右側のバー）。個別の処理群についての統計的比較を、ＤＩＯ－ＧＡＮビヒクル対照に対して示す。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。
【発明を実施するための形態】
【0015】
定義
本明細書において使用される時、別段の指示のない限り、以下の定義が適用されるものとする。さらに、本明細書において使用される任意の用語または記号が、以下で説明されるように定義されないならば、当技術分野における通常の意味を有するものとする。
本明細書において使用される時、別段の指示のない限り、以下の定義が適用されるものとする。さらに、本明細書において使用される任意の用語または記号が、以下で説明されるように定義されないならば、当技術分野における通常の意味を有するものとする。
【0016】
「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、組成物及び方法が列挙された要素を包含するが、他のものを除外しないことを意味することを意図する。「～から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」は、組成物及び方法を定義するために使用される場合に、組み合わせにとって任意の本質的な重要性のある他の要素を除外することを意味するものとする。例えば、本明細書において定義される要素から本質的になる組成物は、特許請求される発明の基本的及び新規の特徴（複数可）に物質的に影響しない他の要素を除外しない。「～からなること（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」は、微量を超える例えば他の成分及び列挙される実質的な方法ステップを超えるものを除外すること意味するものとする。これらの移行用語の各々によって定義される実施形態は、本発明の範囲内である。
【0017】
「併用療法」または「併用治療」は、治療における２つ以上の薬物または薬剤の使用（例えば肝障害（ＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨ等）を治療するのに有用な別の薬剤と一緒に本明細書において利用される化合物１の使用）を指し、その各々の症状及び兆候は、併用療法される。「併用」での投与は、２つの薬剤（例えば本明細書において利用される化合物１、及び別の薬剤）の、両方の薬理学的効果が患者において同時に現われる任意の様式での投与を指す。したがって、併用での投与は、単一の医薬組成物、同じ投薬形態、もしくはさらに同じ投与経路が、両方の薬剤の投与のために使用されること、または２つの薬剤が、正確に同じ時間で投与されることを要求しない。両方の薬剤は、単一の薬学的に許容される組成物でも製剤化され得る。かかる単一の組成物の非限定例は、経口組成物または経口投薬形態である。例えば、及び限定されずに、化合物１は、本発明に従って、別の薬剤との併用療法で投与され得ることが企図される。
【0018】
「賦形剤」という用語は、本明細書において使用される時、薬物または医薬品（活性成分として本発明の化合物を含有する錠剤等）の産生において使用され得る不活性（ｉｎｅｒｔ）物質または不活性（ｉｎａｃｔｉｖｅ）物質を意味する。様々な物質は、賦形剤という用語によって包含され得、結合物質、崩壊物質、コーティング、圧縮補助物質／カプセル化補助物質、クリームもしくはローション、潤滑物質、非経口投与のための溶液、咀嚼錠のための材料、甘味物質もしくは香味物質、懸濁剤／ゲル化剤、または湿式造粒剤として使用される任意の物質が限定されずに挙げられる。結合物質としては、例えばカルボマー、ポビドン、キサンタンガムなどが挙げられ；コーティングとしては、例えば酢酸フタル酸セルロース、エチルセルロース、ゲランガム、マルトデキストリン、腸溶コーティングなどが挙げられ；圧縮補助物質／カプセル化補助物質としては、例えば炭酸カルシウム、デキストロース、フルクトースｄｃ（ｄｃ＝「直接圧縮可能」）、蜂蜜ｄｃ、ラクトース（無水物または一水和物；任意選択で、アスパルテーム、セルロース、または微結晶性セルロースと併用して）、デンプンｄｃ、スクロースなどが挙げられ；崩壊物質としては、例えばクロスカルメロースナトリウム、ゲランガム、デンプングリコール酸ナトリウムなどが挙げられ；クリームまたはローションとしては、例えばマルトデキストリン、カラギーナンなどが挙げられ；潤滑物質としては、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、フマル酸ステアリルナトリウムなどが挙げられ；咀嚼錠のための材料としては、例えばデキストロース、フルクトースｄｃ、ラクトース（一水和物、任意選択で、アスパルテームまたはセルロースと併用して）などが挙げられ；懸濁剤／ゲル化剤としては、例えばカラギーナン、デンプングリコール酸ナトリウム、キサンタンガムなどが挙げられ；甘味物質としては、例えばアスパルテーム、デキストロース、フルクトースｄｃ、ソルビトール、スクロースｄｃなどが挙げられ；湿式造粒剤としては、例えば炭酸カルシウム、マルトデキストリン、微結晶性セルロースなどが挙げられる。
【0019】
「患者」は、哺乳動物を指し、ヒト及び非ヒト哺乳動物を包含する。患者の例としては、マウス、ラット、ハムスター、モルモット、ブタ、ウサギ、ネコ、イヌ、ヤギ、ヒツジ、ウシ、及びヒトが挙げられるがこれらに限定されない。いくつかの実施形態において、患者は、ヒトを指す。
【0020】
「薬学的に許容される」は、好ましくはインビボのために、より好ましくはヒト投与のために、安全且つ非毒性であることを指す。
【0021】
「薬学的に許容される塩」は、薬学的に許容される塩を指す。本明細書において記載される化合物は、薬学的に許容される塩として投与され得る。
【0022】
「塩」は、酸と塩基との間に形成されるイオン化合物を指す。本明細書において提供される化合物が、酸性官能基を含有する場合に、かかる塩としては、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、及びアンモニウム塩が限定されずに挙げられる。本明細書において使用される時、アンモニウム塩としては、プロトン化窒素塩基及びアルキル化窒素塩基を含有する塩が挙げられる。薬学的に許容される塩における有用な例示的且つ非限定的なカチオンとしては、Ｎａ、Ｋ、Ｒｂ、Ｃｓ、ＮＨ４、Ｃａ、Ｂａ、イミダゾリウム、及び天然に存在するアミノ酸に基づくアンモニウムカチオンが挙げられる。本明細書において利用される化合物が、塩基性官能基を含有する場合に、かかる塩としては、有機酸（カルボン酸及びスルホン酸等）及び鉱酸（ハロゲン化水素、硫酸、リン酸、及び同種のもの等）の塩が限定されずに挙げられる。薬学的に許容される塩における有用な例示的且つ非限定的なアニオンとしては、シュウ酸塩、マレイン酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、塩化物、硫酸塩、重硫酸塩、一塩基性リン酸塩、二塩基性リン酸塩、及び三塩基性リン酸塩、メシル酸、トシル酸塩、ならびに同種のものが挙げられる。
【0023】
化合物または組成物の「治療有効量」または用量は、患者における症状の低減もしくは阻害または生存延長をもたらす化合物または組成物の量を指す。結果から、複数回用量の化合物または組成物が要求され得る。
【0024】
「治療」または「治療すること」は、臨床結果を包含する有益なまたは所望される結果を得るためのアプローチを指す。本発明の目的のために、有益なまたは所望される結果としては、以下の：疾患もしくは障害からもたらされる１つもしくは複数の症状の減少、疾患もしくは障害の程度の減退、疾患もしくは障害の安定化（例えば疾患または障害の悪化の予防または遅延）、疾患もしくは障害の出現もしくは再発の遅延、疾患もしくは障害の進行の遅延もしく減速、疾患もしくは障害状態の軽快、疾患もしくは障害の寛解（部分的または完全かどうかにかかわらず）の提供、疾患もしくは障害の治療に要求される１つもしくは複数の他の医薬物の用量の減少、疾患もしくは障害の治療に使用される別の医薬物の効果の促進、疾患もしくは障害の進行の遅延、生活の質の増加、及び／または患者の長期生存のうちの１つまたは複数が挙げられるがこれらに限定されない。疾患または障害の病理的帰結の低減も「治療」によって網羅される。本発明の方法は、治療のこれらの態様のうちの任意の１つまたは複数を企図する。
【0025】
本明細書において使用される時、疾患の発症を「遅延すること」は、疾患の発症を、猶予、妨害、減速、遅滞、安定化、及び／または延期すること、及び／または進行を減速すること、または一旦発症したならば、基礎疾患のプロセス及び／または過程を変更することを意味する。この遅延は、疾患の履歴及び／または治療されている個体に依存して変動する時間長であり得る。当業者に明白であるように、十分なまたは有意な遅延は、個体が疾患と関連する臨床症状を生じないという点で、事実上、予防を網羅し得る。疾患の発症を「遅延させる」方法は、方法を使用しないことに比較した場合に、所与の時間枠における疾患の発症の確率を低減させる、及び／または所与の時間枠における疾患の程度を低減させる方法であり、疾患からもたらされる１つまたは複数の症状を安定化することを包含する。
【0026】
疾患の発症の「リスクがある」個体は、検出可能な疾患を有していても有していなくてもよく、本明細書において記載される治療方法の前に検出可能な疾患を提示しても提示しなくてもよい。「リスクがある」は、個体が、１つまたは複数のいわゆるリスク因子（それは疾患の発症と相関する測定可能なパラメーターである）を有することを示す。これらのリスク因子のうちの１つまたは複数を有する個体は、これらのリスク因子（複数可）無しの個体よりも疾患を発症するより高い確率を有する。これらのリスク因子としては、年齢、性別、人種、食餌、既往疾患歴、前駆疾患の存在、及び遺伝学的な（すなわち遺伝性の）考慮が挙げられ得るがこれらに限定されない。化合物は、いくつかの実施形態において、疾患または病態のリスクがあるかまたは家族歴を有する対象（ヒトが挙げられる）へ投与され得る。
【0027】
「任意選択の」または「任意選択で」という用語は、本明細書を通して使用される時、後続して記載される事象または状況が起こり得るが起こる必要がないこと、ならびに当該記載が、当該事象または状況が起こる実例及びそれが起こらない実例を包含することを意味する。例えば、「窒素原子が、任意選択で酸化されて、Ｎ－オキシド（Ｎ→Ｏ）部分を提供する」は、窒素原子が酸化され得るが酸化される必要がないこと、ならびに当該記載が、窒素原子が酸化されない状況及び窒素原子が酸化される状況を包含することを意味する。
【0028】
本明細書において使用される時、「～中で実質的に示されるように」という用語は、例えばＸＲＰＤパターンを指す場合に、本明細書において図示されたものに必ずしも同一でないが、当業者によって判断された場合に、実験の誤差または偏差の限界内に収まるパターンまたはグラフを包含する。
【0029】
薬学的に許容される組成物及び製剤
化合物１（甲状腺ホルモン受容体β（ＴＨＲ－β）アゴニスト）
の薬学的に許容される組成物または単純に「医薬組成物」は、本発明によって包含される。したがって、本発明は、化合物１またはその薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される担体または賦形剤を含む医薬組成物を包含する。いくつかの実施形態において、薬学的に許容される塩は、塩基付加塩（無機塩基または有機塩基により形成された塩等）である。いくつかの実施形態において、薬学的に許容される塩は、化合物１のカリウム塩である。いくつかの実施形態において、薬学的に許容される塩は、化合物１のナトリウム塩である。本発明に記載の医薬組成物は、経口投与、バッカル投与、非経口投与、経鼻投与、局所投与、もしくは直腸投与に好適な形態、または吸入による投与に好適な形態をとり得る。
化合物１（甲状腺ホルモン受容体β（ＴＨＲ－β）アゴニスト）
【化2】
【0030】
本明細書において詳述される化合物１は、一態様において、精製形態であり得、精製形態の化合物１を含む組成物は、本明細書において詳述される。本明細書において詳述される化合物１またはその塩を含む組成物（実質的に純粋な化合物の組成物等）が、提供される。いくつかの実施形態において、化合物１を含有する本明細書において詳述される組成物またはその塩は、実質的に純粋な形態である。１つのバリエーションにおいて、「実質的に純粋な」は、３５％以下の不純物を含有する組成物を意図し、不純物は、組成物の大部分を構成する化合物またはその塩以外の化合物を表わす。例えば、実質的に純粋な化合物の組成物は、３５％以下の不純物を含有する組成物を意図し、不純物は、化合物またはその塩以外の化合物を示す。１つのバリエーションにおいて、組成物が２５％以下の不純物を含有する実質的に純粋な化合物の組成物またはその塩が提供される。別のバリエーションにおいて、組成物が２０％以下の不純物を含有する実質的に純粋な化合物の組成物またはその塩が提供される。さらに別のバリエーションにおいて、組成物が１０％以下の不純物を含有する実質的に純粋な化合物の組成物またはその塩が提供される。さらなる変動において、組成物が５％以下の不純物を含有する実質的に純粋な化合物の組成物またはその塩が提供される。別のバリエーションにおいて、組成物が３％以下の不純物を含有する実質的に純粋な化合物の組成物またはその塩が提供される。さらに別のバリエーションにおいて、組成物が１％以下の不純物を含有する実質的に純粋な化合物の組成物またはその塩が提供される。さらなる変動において、組成物が０．５％以下の不純物を含有する実質的に純粋な化合物の組成物またはその塩が提供される。さらに他の変動において、実質的に純粋な化合物の組成物は、組成物が１５％以下、または好ましくは１０％以下、またはより好ましくは５％以下、またはさらにより好ましくは３％以下、及び最も好ましくは１％以下の不純物を含有することを意味する。
【0031】
１つのバリエーションにおいて、化合物１は、ヒト等の個体への投与のために調製された合成化合物である。別のバリエーションにおいて、実質的に純粋な形態で化合物１を含有する組成物が提供される。別のバリエーションにおいて、本発明は、化合物１及び薬学的に許容される担体または賦形剤を含む医薬組成物を包含する。別のバリエーションにおいて、化合物１を投与する方法が提供される。精製形態、医薬組成物、及び化合物を投与する方法は、本明細書において詳述される任意の化合物またはその形態に好適である。
【0032】
化合物１は、経口送達形態、粘膜（例えば鼻、舌下、経腟、バッカル、直腸）送達形態、非経か（例えば筋肉内、皮下、静脈内）送達形態、局所送達形態、または経皮送達形態を包含する、任意の利用可能な送達経路のために製剤化され得る。化合物１は、好適な担体と共に製剤化されて、錠剤、カプレット、カプセル（ハードゼラチンカプセルまたはソフト弾性ゼラチンカプセル等）、カシェー、トローチ、ロゼンジ、ガム、分散物、坐薬、軟膏、パップ（湿布）、ペースト、粉末、ドレッシング材、クリーム、溶液、パッチ、エアロゾル（例えば鼻用スプレーまたは吸入器）、ゲル、懸濁物（例えば水性液体懸濁物または非水性液体懸濁物、水中油型エマルションまたは油中水型液体エマルション）、溶液、及びエリキシルが挙げられるがこれらに限定されない送達形態を提供し得る。
【0033】
化合物１は、活性成分として化合物１を薬学的に許容される担体（上で言及されるもの等）と共に併用することによって、製剤（医薬品製剤等）の調製において使用され得る。系の治療法の形態（例えば経皮パッチｖｓ経口錠剤）に依存して、担体は様々な形態であり得る。加えて、医薬製剤は、防腐物質、可溶化物質、安定化物質、再湿潤剤、乳化物質（ｅｍｕｌｇａｔｏｒ）、甘味物質、色素、調整物質、及び浸透圧の調整のための塩、バッファー、コーティング剤、または抗酸化物質を含有し得る。化合物１を含む製剤は、有益な治療特性を有する他の物質も含有し得る。医薬品製剤は、公知の医薬品方法によって調製され得る。好適な製剤は、例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，２１ｓｔ ｅｄ．（２００５）（参照することによって本明細書に援用される）中で見出され得る。
【0034】
本明細書において記載される化合物は、一般的に許容される経口組成物（錠剤、コーティングされた錠剤、及びハードシェルまたはソフトシェルのゲルカプセル等）、エマルション、または懸濁物の形態で、個体（例えばヒト）へ投与され得る。かかる組成物の調製に使用され得る担体の例は、微結晶性セルロース、マンニトール、ラクトース、トウモロコシデンプンもしくはその誘導体、タルク、ステアレートまたはその塩などである。ソフトシェルによるゲルカプセルのための許容される担体は、例えば植物油、ワックス、脂肪、半固体及び液体のポリオールなどである。加えて、医薬製剤は、防腐物質、可溶化物質、安定化物質、再湿潤剤、乳化物質、甘味物質、色素、調整物質、及び浸透圧の調整のための塩、バッファー、コーティング剤、または抗酸化物質を含有し得る。
【0035】
化合物１は、塩形態で投与された場合でさえ、非常に低い水溶解度を有する。化合物１のカリウム塩は、ｐＨ６．０のバッファー中でおよそ２．２μｇ／ｍＬの溶解度、及びｐＨ８．０のバッファー中でおよそ８．０μｇ／ｍＬの溶解度を有する。ポロキサマー１８８等の可溶化物質は、化合物１の有意な分解をもたらす。特定のイオン性界面活性剤（ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）等）が、化合物１と適合性あり、化合物の最小限の分解または分解無しに、化合物１及び薬学的に許容されるその塩と共に共製剤化され得ることが見出された。化合物１薬学的なその塩のイオン性界面活性剤（例えばＳＬＳ）との共製剤は、すべてのｐＨレベルで溶解度の劇的な促進をもたらす。
【0036】
いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩及び重量で約１重量％～約１０重量％のＳＬＳを含む製剤が提供される。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩及び重量で約１重量％～約８重量％のＳＬＳを含む製剤が提供される。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩及び重量で約１．５重量％～約８重量％のＳＬＳを含む製剤が提供される。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩及び重量で約１．５重量％～約５重量％のＳＬＳを含む製剤が提供される。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩及び重量で約５重量％のＳＬＳを含む製剤が提供される。いくつかの実施形態において、化合物１のカリウム塩及び約１．５重量％のラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）を含む製剤が提供される。
【0037】
化合物１またはその薬学的に許容される塩と併用して使用され得る他の可能性のある可溶化物質としては、ドキュセートナトリウム、ポリソルベート、リン脂質、またはコハク酸Ｄ－α－トコフェリルポリエチレングリコール（ビタミンＥ ＴＰＧＳ）が挙げられる。
【0038】
いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩及びラウリル硫酸ナトリウムを含む製剤が提供される。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩、ラウリル硫酸ナトリウム、及びクロスカルメロースナトリウムを含む製剤が提供される。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩、ラウリル硫酸ナトリウム、クロスカルメロースナトリウム、コロイド状二酸化シリカオン（ｓｉｌｉｃａｏｎ）、及びステアリン酸マグネシウムを含む製剤が提供される。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩、ラウリル硫酸ナトリウム、クロスカルメロースナトリウム、コロイド状二酸化シリカオン、ステアリン酸マグネシウム、ヒプロメロース（ＨＰＭＣ）カプセル、マンニトール、及び微結晶性セルロースを含む製剤が提供される。
【0039】
いくつかの実施形態において、本明細書において記載される任意の投薬形態のカプセルで製剤化された化合物１が提供される。いくつかの実施形態において、約０．５ｍｇ～約５０ｍｇの化合物１またはその薬学的に許容される塩を含有するカプセル製剤が提供される。いくつかの実施形態において、約０．５ｍｇ、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約１０ｍｇ、約１５ｍｇ、約２５ｍｇ、または約５０ｍｇの化合物１またはその薬学的に許容される塩を含有するカプセル製剤が提供される。
【0040】
いくつかの実施形態において、表Ａ中で以下にリストされるような様々な他の構成要素のうちの１つまたは複数と共に、カプセル中で製剤化された化合物１が提供される。いくつかの実施形態において、表Ａ中で以下に記載されるような量で様々な他の構成要素のうちの１つまたは複数と共に、カプセル中で製剤化された化合物１が提供される。
【表1】
【0041】
いくつかの実施形態において、本明細書において記載される任意の投薬形態のカプセルで製剤化された化合物１が提供される。いくつかの実施形態において、約０．５ｍｇ～約５０ｍｇの化合物１を含有する錠剤製剤が提供される。すべての実施形態において、化合物１の重量が分子の活性部分（遊離酸）を指すことが理解されるだろう。化合物１の塩形態が使用される複数の実施形態において、塩の重量は、適切な量の活性化合物が組成物中にあることを確実にするように調整されるだろう。いくつかの実施形態において、約０．５ｍｇ、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約１０ｍｇ、約１５ｍｇ、約２５ｍｇ、または約５０ｍｇの化合物１を含有する錠剤製剤が提供される。
【0042】
本開示はキット（例えば医薬品パッケージ）をさらに網羅する。提供されるキットは、本明細書において記載される医薬組成物または化合物及び容器（例えば薬物ボトル、アンプル、ボトル、シリンジ、及び／またはサブパッケージ、あるいは他の好適な容器）を含み得る。
【0043】
使用方法及び使用
本明細書において記載される化合物及び組成物は、いくつかの態様において、肝障害の治療または予防において使用され得る。いくつかの実施形態において、肝障害の治療または予防を必要とする患者における肝障害を治療するまたは予防する方法は、化合物１またはその薬学的に許容される塩を患者へ投与することを含む。
本明細書において記載される化合物及び組成物は、いくつかの態様において、肝障害の治療または予防において使用され得る。いくつかの実施形態において、肝障害の治療または予防を必要とする患者における肝障害を治療するまたは予防する方法は、化合物１またはその薬学的に許容される塩を患者へ投与することを含む。
【0044】
肝障害としては、肝炎症、線維化、及び脂肪性肝炎が限定されずに挙げられる。いくつかの実施形態において、肝障害は、肝炎症、肝線維化、アルコール誘導性線維化、脂肪変性、アルコール性脂肪変性、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、及び非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）から選択される。ある特定の実施形態において、肝障害は、肝線維化、アルコール誘導性線維化、脂肪変性、アルコール性脂肪変性、ＮＡＦＬＤ、及びＮＡＳＨから選択される。一実施形態において、肝障害は、ＮＡＳＨである。別の実施形態において、肝障害は、肝炎症である。別の実施形態において、肝障害は、肝線維化である。別の実施形態において、肝障害は、アルコール誘導性線維化である。別の実施形態において、肝障害は、脂肪変性である。別の実施形態において、肝障害は、アルコール性脂肪変性である。別の実施形態において、肝障害は、ＮＡＦＬＤである。一実施形態において、本明細書において提供される治療方法は、ＮＡＦＬＤのＮＡＳＨへの進行を阻止または減速する。一実施形態において、本明細書において提供される治療方法は、ＮＡＳＨの進行を阻止または減速する。ＮＡＳＨは、例えば肝硬変、肝癌などのうちの１つまたは複数へ進行し得る。いくつかの実施形態において、肝障害は、ＮＡＳＨである。いくつかの実施形態において、患者は、肝生検を行っている。いくつかの実施形態において、方法は、肝生検の結果を得ることをさらに含む。
【0045】
いくつかの実施形態において、肝障害の治療を必要とする患者における肝障害を治療する方法であって、肝障害が、肝炎症、肝線維化、アルコール誘導性線維化、脂肪変性、アルコール性脂肪変性、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、及び非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）からなる群から選択される、前記方法が提供される。
【0046】
化合物１またはその薬学的に許容される塩により、肝障害の治療または予防を必要とする患者（例えばヒト患者）における肝障害を治療または予防する方法であって、治療有効量の化合物１またはその薬学的に許容される塩を投与することを含み、肝障害が、肝炎症、肝線維化、アルコール誘導性線維化、脂肪変性、アルコール性脂肪変性、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、及び非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）から選択される、前記方法が本明細書において提供される。
【0047】
非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）の非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）への進行の阻止または減速を必要とする患者（例えばヒト患者）におけるＮＡＦＬＤのＮＡＳＨへの進行を阻止または減速する方法であって、化合物１またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、前記方法も本明細書において提供される。いくつかの実施形態において、方法は、治療有効量の化合物１またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む。ＮＡＳＨの進行の阻止または減速を必要とする患者（例えばヒト患者）におけるＮＡＳＨの進行を阻止または減速する方法であって、化合物１またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、前記方法も本明細書において提供される。いくつかの実施形態において、方法は、治療有効量の化合物１またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む。
【0048】
いくつかの実施形態において、肝損傷を低減させる方法であって、化合物１またはその薬学的に許容される塩を肝損傷の低減を必要とする個体へ投与することを含み、線維化が低減される、前記方法が本明細書において提供される。いくつかの実施形態において、線維化についての１つまたは複数のマーカーの発現のレベルは、低減される。いくつかの実施形態において、Ｃｃｒ２、Ｃｏｌ１ａ１、Ｃｏｌ１ａ２、Ｃｏｌ１ａ３、Ｃｘｃｒ３、Ｄｃｎ、Ｈｇｆ、Ｉｌ１ａ、Ｉｎｈｂｅ、Ｌｏｘ、Ｌｏｘｌ１、Ｌｏｘｌ２、Ｌｏｘｌ３、Ｍｍｐ２、Ｐｄｇｆｂ、Ｐｌａｕ、Ｓｅｒｐｉｎｅ１、Ｐｅｒｐｉｎｈ１、Ｓｎａｉ、Ｔｇｆｂ１、Ｔｇｆｂ３、Ｔｈｂｓ１、Ｔｈｂｓ２、Ｔｉｍｐ２、及び／またはＴｉｍｐ３の発現のレベルは低減される。いくつかの実施形態において、コラーゲンのレベルは、低減される。いくつかの実施形態において、コラーゲン断片のレベルは、低減される。いくつかの実施形態において、線維化マーカーの発現のレベルは、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、または少なくとも５倍低減される。いくつかの実施形態において、線維化マーカーの発現のレベルは、約２倍、約３倍、約４倍、または約５倍低減される。
【0049】
いくつかの実施形態において、肝損傷を低減させる方法であって、化合物１またはその薬学的に許容される塩を肝損傷の低減を必要とする個体へ投与することを含み、炎症が低減される、前記方法が本明細書において提供される。いくつかの実施形態において、１つまたは複数の炎症のマーカーは、低減される。いくつかの実施形態において、Ａｄｇｒｅ１、Ｃｃｒ２、Ｃｃｒ５、Ｉｌ１Ａ、及び／またはＴｌｒ４の発現のレベルは、低減される。いくつかの実施形態において、炎症マーカーの発現のレベルは、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、または少なくとも５倍低減される。いくつかの実施形態において、線維化マーカーの発現のレベルは、約２倍、約３倍、約４倍、または約５倍低減される。
【0050】
患者において、アルカリホスファターゼ、γ－グルタミルトランスフェラーゼ（ＧＧＴ）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、及び／またはアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）のレベルは、上昇し得る。いくつかの実施形態において、肝損傷を低減させる方法であって、化合物１またはその薬学的に許容される塩を投与することを含み、ＧＧＴ、ＡＬＴ、及び／またはＡＳＴのレベルは治療の前に上昇している、前記方法が本明細書において提供される。いくつかの実施形態において、患者のＡＬＴレベルは、正常レベルの上限より約２～４倍大きい。いくつかの実施形態において、患者のＡＳＴレベルは、正常レベルの上限より約２～４倍大きい。いくつかの実施形態において、患者のＧＧＴレベルは、正常レベルの上限より約１．５～３倍大きい。いくつかの実施形態において、患者のアルカリホスファターゼレベルは、正常レベルの上限より約１．５～３倍大きい。これらの分子のレベルを決定する方法は、周知である。血液中のＡＬＴの正常レベルは、約７～５６単位／リットルの範囲である。血液中のＡＳＴの正常レベルは、約１０～４０単位／リットルの範囲である。血液中のＧＧＴの正常レベルは、約９～４８単位／リットルの範囲である。血液中のアルカリホスファターゼの正常レベルは、２０～５０歳の男性について約５３～１２８単位／リットル及び２０～５０歳の女性について約４２～９８単位／リットルの範囲である。
【0051】
甲状腺ホルモン欠乏は、ＮＡＦＬＤ及びＮＡＳＨの患者においてよりよくみられる（Ｐａｇａｄａｌａ ＭＲ，Ｚｅｉｎ ＣＯ，Ｄａｓａｒａｔｈｙ Ｓ，Ｙｅｒｉａｎ ＬＭ，Ｌｏｐｅｚ Ｒ，ＭｃＣｕｌｌｏｕｇｈ ＡＪ．Ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ ｏｆ ｈｙｐｏｔｈｙｒｏｉｄｉｓｍ ｉｎ ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｆａｔｔｙ ｌｉｖｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｄｉｇ Ｄｉｓ Ｓｃｉ．２０１２；５７：５２８－３４．）。甲状腺は、視床下部からの甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン（ＴＲＨ）に応答した下垂体前葉からのチロトロピン（甲状腺刺激ホルモン［ＴＳＨ］）の制御下で、トリヨードチロニン（Ｔ３）及びチロキシン（Ｔ４）を産生する。任意の特定の理論により束縛されるものではないが、肝臓におけるＴＨＲ－βアゴニズムは、Ｔ３またはＴＳＨの変化無しに遊離Ｔ４を低下させることに関与し、これは末梢の甲状腺ホルモン調節に起因し得る（Ｔａｕｂ Ｒ，Ｃｈｉａｎｇ Ｅ，Ｃｈａｂｏｔ－Ｂｌａｎｃｈｅｔ Ｍ，Ｋｅｌｌｙ ＭＪ，Ｒｅｅｖｅｓ ＲＡ，Ｇｕｅｒｔｉｎ ＭＣ，ｅｔ ａｌ．Ｌｉｐｉｄ ｌｏｗｅｒｉｎｇ ｉｎ ｈｅａｌｔｈｙ ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｄｏｓｅｓ ｏｆ ＭＧＬ－３１９６，ａ ｌｉｖｅｒ－ｔａｒｇｅｔｅｄ ｔｈｙｒｏｉｄ ｈｏｒｍｏｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－β ａｇｏｎｉｓｔ．Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．２０１３；２３０：３７３－８０．；Ｂｅｒｒｙ ＭＪ，Ｋａｔｅｓ ＡＬ，Ｌａｒｓｅｎ ＰＲ．Ｔｈｙｒｏｉｄ ｈｏｒｍｏｎｅ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｔｙｐｅ Ｉ ｄｅｉｏｄｉｎａｓｅ ｍｅｓｓｅｎｇｅｒ ＲＮＡ ｉｎ ｒａｔ ｌｉｖｅｒ．Ｍｏｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ １９９０；４：７４３－７４８．）。中枢性甲状腺軸への影響の証拠は、所望されない効果を示し得る。したがっていくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩の投与は、患者の血清ＴＳＨ、遊離Ｔ３、またはＴ４の、正常範囲の外側のレベルへの変化をもたらさない。
【0052】
いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩の投与は、患者の心臓バイオマーカー（ＣＫ、ＣＫ－ＭＢ、及びトロポニンＩが挙げられる）の、正常範囲の外側のレベルへの変化をもたらさない。
【0053】
性ホルモン結合グロブリン（ＳＨＢＧ）は、肝臓において産生され、性ホルモン（アンドロゲン及びエストロゲンが挙げられる）へ結合し、安定化し、循環ホルモンの総画分及び遊離画分に影響を与える（Ｈａｍｍｏｎｄ ２０１６）。ＴＨＲ－βアゴニズムは、ＳＨＢＧ発現をアップレギュレートし、ＳＨＢＧを有用なＰＤマーカーにする。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩の投与は、患者の血清ＳＨＢＧの増加をもたらす。いくつかの実施形態において、患者の血清ＳＨＢＧの増加が、化合物１またはその薬学的に許容される塩の４日間の投与内で起こる。いくつかの実施形態において、患者の血清ＳＨＢＧは、化合物１またはその薬学的に許容される塩の投与後に、ベースラインに比べて少なくとも５％まで増加する。いくつかの実施形態において、患者の血清ＳＨＢＧは、化合物１またはその薬学的に許容される塩の投与後に、ベースラインに比べて少なくとも１０％まで増加する。いくつかの実施形態において、患者の血清ＳＨＢＧは、化合物１またはその薬学的に許容される塩の投与後に、ベースラインに比べて少なくとも２５％まで増加する。
【0054】
いくつかの実施形態において、患者は、ヒトである。肥満は、ＮＡＦＬＤ及びＮＡＳＨと高度に相関するが、痩せた人々もＮＡＦＬＤ及びＮＡＳＨによって影響を受け得る。したがっていくつかの実施形態において、患者は、肥満である。いくつかの実施形態において、患者は、肥満ではない。肥満は、糖尿病もしくは心臓血管障害等の他の疾患と相関し得るか、または同様にそれらを引き起こし得る。したがっていくつかの実施形態において、患者は、糖尿病及び／または心臓血管障害も有する。理論に束縛されるものではないが、併存症（肥満、糖尿病、及び心臓血管障害等）は、ＮＡＦＬＤ及びＮＡＳＨをより治療しにくくし得ると考えられている。逆に、ＮＡＦＬＤ及びＮＡＳＨを対処するための現在認識された唯一の方法は、体重減少であり、それは、おそらく痩せた患者に対する効果は、ほとんど無いか全く無いいだろう。
【0055】
ＮＡＦＬＤ及びＮＡＳＨについてのリスクは年齢とともに増加するが、２歳ほどの小児の文献報告があり、小児もＮＡＦＬＤ及びＮＡＳＨを患い得る（Ｓｃｈｗｉｍｍｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ，２００６，１１８：１３８８－１３９３）。いくつかの実施形態において、患者は、２～１７歳（２～１０、２～６、２～４、４～１５、４～８、６～１５、６～１０、８～１７、８～１５、８～１２、１０～１７、または１３～１７歳等）である。いくつかの実施形態において、患者は、１８～６４歳（１８～５５、１８～４０、１８～３０、１８～２６、１８～２１、２１～６４、２１～５５、２１～４０、２１～３０、２１～２６、２６～６４、２６～５５、２６～４０、２６～３０、３０～６４、３０～５５、３０～４０、４０～６４、４０～５５、または５５～６４歳等）である。いくつかの実施形態において、患者は、６５歳以上（７０以上、８０以上、または９０以上等）である。
【0056】
ＮＡＦＬＤ及びＮＡＳＨは、肝移植の一般的な原因であるが、既に１回の肝臓移植を受けた患者は、多くの場合ＮＡＦＬＤ及び／またはＮＡＳＨを再び発症する。したがっていくつかの実施形態において、患者は、肝臓移植を行っている。
【0057】
いくつかの実施形態において、本明細書において提供される方法に従う治療は、患者においてＮＡＦＬＤ活性（ＮＡＳ）スコアの低減をもたらす。例えばいくつかの実施形態において、脂肪変性、炎症、及び／または風船化は、治療に際して低減される。いくつかの実施形態において、本明細書において提供される治療の方法は、肝線維化を低減させる。いくつかの実施形態において、方法は、血清トリグリセリドを低減させる。いくつかの実施形態において、方法は、肝臓トリグリセリドを低減させる。
【0058】
低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）、コレステロール、及びトリグリセリドの上昇によって特徴付けられる脂質異常症は、心血管性疾患についての重要なリスク因子であり（Ｎｅｌｓｏｎ ＲＨ．Ｈｙｐｅｒｌｉｐｉｄｅｍｉａ ａｓ ａ ｒｉｓｋ ｆａｃｔｏｒ ｆｏｒ ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｐｒｉｍ Ｃａｒｅ．２０１３ Ｍａｒｃｈ；４０（１）：１９５－２１１．）、ＮＡＳＨ患者において一般的に観察される（Ｌｏｏｍｂａ Ｒ．Ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｆａｔｔｙ ｌｉｖｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｒａｔｅｓ ｔｏ ｃｉｒｒｈｏｓｉｓ ａｎｄ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｃｉｒｒｈｏｓｉｓ ｔｏ ｄｅｃｏｍｐｅｎｓａｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｏｒｔａｌｉｔｙ：ａ ｒｅａｌ ｗｏｒｌｄ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｒｅ ｄａｔａ．Ａｌｉｍｅｎｔ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｈｅｒ．２０２０；５１：１１４９－５９．）。さらに、脂質異常症は、ＮＡＳＨの根底にある肝炎症の可能性のある病因のドライバーである（Ｗａｌｅｎｂｅｒｇｈ Ｓ．Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｉｓ ａ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｒｉｓｋ ｆａｃｔｏｒ ｆｏｒ ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ．Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ ＆ Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ．２０１５；９：１１：１３４３－４６．）。アポリポタンパク質Ｂ（Ａｐｏ Ｂ）は、血液中のＬＤＬコレステロールと関連し、患者の脂質プロファイルの査定に有用であり得る。したがっていくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩の投与は、患者の血清Ａｐｏ Ｂを減少させる。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩の投与は、４日間の投与内で患者の血清Ａｐｏ Ｂの減少をもたらす。いくつかのかかる実施形態において、患者の血清Ａｐｏ Ｂの減少は、ベースラインに比べて少なくとも５％である。いくつかのかかる実施形態において、患者の血清Ａｐｏ Ｂの減少は、ベースラインに比べて少なくとも１０％である。いくつかのかかる実施形態において、患者の血清Ａｐｏ Ｂの減少は、ベースラインに比べて少なくとも１５％である。
【0059】
いくつかの実施形態において、患者は、本明細書において提供される方法に従う投与の前に、副作用を発症するリスクがある。いくつかの実施形態において、副作用は、腎臓、肺、心臓、及び／または皮膚に影響する副作用である。いくつかの実施形態において、副作用は、痒みである。
【0060】
いくつかの実施形態において、患者は、１つまたは複数の前治療を受けている。いくつかの実施形態において、肝障害は、治療の間に進行した。いくつかの実施形態において、患者は、１つまたは複数の前治療のうちの少なくとも１つの間に痒みを患った。
【0061】
化合物１による前臨床動物モデルから、以下の実施例中で記載されるように、およそ３，３２０ｎｇ＊ｈｇ／ｍＬの時間０から無限大までの定常状態の血漿曲線下面積（ＡＵＣ０－∞）が、様々な薬力学マーカーに基づいて有効性を確実にするには、十分な曝露であることが確立された。３，３２０ｎｇ＊ｈｇ／ｍＬ以上の化合物１の曝露は、多くの場合ＴＨＲアゴニズムと関連する、所望されない甲状腺ホルモン効果をもたらさない。例えば、実施例中で記載される単回用量漸増研究において、およそ５０，０００ｎｇ＊ｈｇ／ｍＬまでの化合物１の定常状態の血漿ＡＵＣ０－∞は、任意の有意な副作用をもたらさなかった。
【0062】
いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、約２，５００ｎｇ＊時間／ｍＬ～約５０，０００ｎｇ＊時間／ｍＬの時間０から無限大までの定常状態の血漿曲線下面積（ＡＵＣ０－∞）を得るような用量で、化合物１またはその薬学的に許容される塩を必要とする個体（例えばＮＡＳＨの患者）へ毎日投与される。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、約３，０００ｎｇ＊時間／ｍＬ～約５０，０００ｎｇ＊時間／ｍＬの時間０から無限大までの定常状態の血漿曲線下面積（ＡＵＣ０－∞）を得るような用量で、化合物１またはその薬学的に許容される塩を必要とする個体（例えばＮＡＳＨの患者）へ毎日投与される。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、約５，０００ｎｇ＊時間／ｍＬ～約５０，０００ｎｇ＊時間／ｍＬの時間０から無限大までの定常状態の血漿曲線下面積（ＡＵＣ０－∞）を得るような用量で、化合物１またはその薬学的に許容される塩を必要とする個体（例えばＮＡＳＨの患者）へ毎日投与される。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、約５，０００ｎｇ＊時間／ｍＬ～約３０，０００ｎｇ＊時間／ｍＬの時間０から無限大までの定常状態の血漿曲線下面積（ＡＵＣ０－∞）を得るような用量で、化合物１またはその薬学的に許容される塩を必要とする個体（例えばＮＡＳＨの患者）へ毎日投与される。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、約５，０００ｎｇ＊時間／ｍＬ～約２５，０００ｎｇ＊時間／ｍＬの時間０から無限大までの定常状態の血漿曲線下面積（ＡＵＣ０－∞）を得るような用量で、化合物１またはその薬学的に許容される塩を必要とする個体（例えばＮＡＳＨの患者）へ毎日投与される。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、約５，０００ｎｇ＊時間／ｍＬ～約２０，０００ｎｇ＊時間／ｍＬの時間０から無限大までの定常状態の血漿曲線下面積（ＡＵＣ０－∞）を得るような用量で、化合物１またはその薬学的に許容される塩を必要とする個体（例えばＮＡＳＨの患者）へ毎日投与される。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、約３，０００ｎｇ＊時間／ｍＬ～約１０，０００ｎｇ＊時間／ｍＬの時間０から無限大までの定常状態の血漿曲線下面積（ＡＵＣ０－∞）を得るような用量で、化合物１またはその薬学的に許容される塩を必要とする個体（例えばＮＡＳＨの患者）へ毎日投与される。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、約５，０００ｎｇ＊時間／ｍＬ～約１０，０００ｎｇ＊時間／ｍＬの時間０から無限大までの定常状態の血漿曲線下面積（ＡＵＣ０－∞）を得るような用量で、化合物１またはその薬学的に許容される塩を必要とする個体（例えばＮＡＳＨの患者）へ毎日投与される。
【0063】
驚くべきことに、化合物１またはその薬学的に許容される塩が、非常に低い用量で所望される曝露を達成し得ることが見出されている。本開示のいくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、１ｍｇほどの低用量またはそれ以下の用量で患者へ１日１回経口投与され得、依然としてアミンオキシダーゼ活性を十分に低減させ、リンパ球の接着及び遊走を低減させ得る。例えば、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、約１ｍｇ～約６０ｍｇの用量で肝障害（例えばＮＡＳＨ）の患者へ１日１回経口投与され得る。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、約０．５ｍｇ～約２５ｍｇの用量で肝障害（例えばＮＡＳＨ）の患者へ１日１回経口投与され得る。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、約１ｍｇ～約１５ｍｇの用量で肝障害（例えばＮＡＳＨ）の患者へ１日１回経口投与され得る。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、約２ｍｇ～約１０ｍｇの用量で肝障害（例えばＮＡＳＨ）の患者へ１日１回経口投与され得る。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、約１ｍｇの用量で肝障害（例えばＮＡＳＨ）の患者へ１日１回経口投与され得る。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、約３ｍｇの用量で肝障害（例えばＮＡＳＨ）の患者へ１日１回経口投与され得る。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、約４ｍｇの用量で肝障害（例えばＮＡＳＨ）の患者へ１日１回経口投与され得る。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、約５ｍｇの用量で肝障害（例えばＮＡＳＨ）の患者へ１日１回経口投与され得る。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、約６ｍｇの用量で肝障害（例えばＮＡＳＨ）の患者へ１日１回経口投与され得る。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、約１０ｍｇの用量で肝障害（例えばＮＡＳＨ）の患者へ１日１回経口投与され得る。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、約１５ｍｇの用量で肝障害（例えばＮＡＳＨ）の患者へ１日１回経口投与され得る。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、約２０ｍｇの用量で肝障害（例えばＮＡＳＨ）の患者へ１日１回経口投与され得る。すべての実施形態において、化合物１の重量が分子の活性部分（遊離酸）を指すことが理解されるだろう。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、約３０ｍｇの用量で肝障害（例えばＮＡＳＨ）の患者へ１日１回経口投与され得る。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、約５０ｍｇの用量で肝障害（例えばＮＡＳＨ）の患者へ１日１回経口投与され得る。いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、約６０ｍｇの用量で肝障害（例えばＮＡＳＨ）の患者へ１日１回経口投与され得る。化合物の塩形態が使用される複数の実施形態において、塩の重量は、適切な量の活性化合物が組成物中にあることを確実にするように調整されるだろう。
【0064】
治療期間は、概して１週間以上であり得る。いくつかの実施形態において、治療期間は、少なくとも１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、１か月、２か月、３か月、４か月、５か月、６か月、７か月、８か月、９か月、１０か月、１１か月、１２か月、１年、２年、３年、４年、またはそれ以上である。いくつかの実施形態において、治療期間は、約１週間～約１か月、約１か月～約１年、約１年～約数年である。いくつかの実施形態において、治療期間は、少なくとも約１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、１か月、２か月、３か月、４か月、５か月、６か月、７か月、８か月、９か月、１０か月、１１か月、１２か月、１年、２年、３年、４年、またはそれ以上のうちの任意のものである。いくつかの実施形態において、治療期間は、患者の残りの寿命である。
【0065】
化合物１またはその薬学的に許容される塩の投与は、１週間以上の治療期間の間、１日１回、１日２回、または１日おきであり得る。いくつかの実施形態において、投与は、１週間以上の治療期間の間、化合物を毎日投与することを含む。いくつかの実施形態において、投与は、１週間以上の治療期間の間、化合物を毎日２回投与することを含む。いくつかの実施形態において、投与は、１週間以上の治療期間の間、化合物を１日おきに投与することを含む。
【0066】
いくつかの実施形態において、治療期間の１日目に投与される化合物１またはその薬学的に許容される塩の量は、治療期間のすべての後続する日に投与される量以上である。いくつかの実施形態において、治療期間の１日目に投与される量は、治療期間のすべての後続する日に投与される量に等しい。
【0067】
いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩の投与は、個体における脂肪変性を減少させる。脂肪変性を査定する方法は、当業者に公知であり、組織学的分析及び組織学的スコアの割り当てが挙げられ得る。したがって、本明細書において詳述される治療の方法が、いくつかの実施形態において、治療を必要とする個体の肝障害（肝炎症、肝線維化、アルコール誘導性線維化、脂肪変性、アルコール性脂肪変性、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、及び非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）等）を治療することを含み、治療は、脂肪変性と関連する組織学的マーカーを低減させることを含むことが理解される。
【0068】
いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩の投与は、個体における肝炎症を減少させる。肝炎症を査定する方法は、当業者に公知であり、小葉炎症の組織学的分析及び組織学的スコアの割り当てが挙げられ得る。したがって、本明細書において詳述される治療の方法が、いくつかの実施形態において、治療を必要とする個体の肝障害（肝炎症、肝線維化、アルコール誘導性線維化、脂肪変性、アルコール性脂肪変性、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、及び非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）等）を治療することを含み、治療は、小葉炎症、または小葉炎症と関連する組織学的マーカーを低減させることを含むことが理解される。
【0069】
いくつかの実施形態において、化合物１の投与またはその薬学的に許容される塩は、個体における肝線維化を減少させる。肝線維化を査定する方法は、当業者に公知であり、組織学的分析が挙げられ得る。したがって、本明細書において詳述される治療の方法が、いくつかの実施形態において、治療を必要とする個体の肝障害（肝炎症、肝線維化、アルコール誘導性線維化、脂肪変性、アルコール性脂肪変性、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、及び非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）等）を治療することを含み、治療は、線維化、または線維化と関連する組織学的マーカーを低減させることを含むことが理解される。
【0070】
いくつかの実施形態において、化合物１の投与またはその薬学的に許容される塩は、個体における肝脂肪変性、炎症、及び線維化のうちの少なくとも１つまたは少なくとも２つを減少させる。したがって、本明細書において詳述される治療の方法が、いくつかの実施形態において、治療を必要とする個体の肝障害（肝炎症、肝線維化、アルコール誘導性線維化、脂肪変性、アルコール性脂肪変性、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、及び非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）等）を治療することを含み、治療は、脂肪変性、小葉炎症、線維化、または上記のものの任意の組織学的マーカーのうちの少なくとも１つまたは少なくとも２つを低減させることを含むことが理解される。
【0071】
いくつかの実施形態において、化合物１の投与またはその薬学的に許容される塩は、個体における血清トリグリセリドを減少させる。したがって、本明細書において詳述される治療の方法が、いくつかの実施形態において、治療を必要とする個体の肝障害（肝炎症、肝線維化、アルコール誘導性線維化、脂肪変性、アルコール性脂肪変性、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、及び非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）等）を治療することを含み、治療は、血清トリグリセリドを低減させることを含むことが理解される。
【0072】
いくつかの実施形態において、化合物１の投与またはその薬学的に許容される塩は、個体における血清総コレステロール値を減少させる。したがって、本明細書において詳述される治療の方法が、いくつかの実施形態において、治療を必要とする個体の肝障害（肝炎症、肝線維化、アルコール誘導性線維化、脂肪変性、アルコール性脂肪変性、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、及び非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）等）を治療することを含み、治療は、血清コレステロールを低減させることを含むことが理解される。
【0073】
いくつかの実施形態において、化合物１の投与またはその薬学的に許容される塩は、個体における血清アラニンアミノトランスフェラーゼを減少させる。したがって、本明細書において詳述される治療の方法が、いくつかの実施形態において、治療を必要とする個体の肝障害（肝炎症、肝線維化、アルコール誘導性線維化、脂肪変性、アルコール性脂肪変性、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、及び非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）等）を治療することを含み、治療は、血清アラニンアミノトランスフェラーゼを低減させることを含むことが理解される。
【0074】
いくつかの実施形態において、化合物１の投与またはその薬学的に許容される塩は、個体における血清トリグリセリド、総コレステロール、及びアラニンアミノトランスフェラーゼのうちの少なくとも１つまたは少なくとも２つを減少させる。いくつかの実施形態において、化合物１の投与またはその薬学的に許容される塩は、個体における血清トリグリセリド、総コレステロール、及びアラニンアミノトランスフェラーゼを減少させる。したがって、本明細書において詳述される治療の方法が、いくつかの実施形態において、治療を必要とする個体の肝障害（肝炎症、肝線維化、アルコール誘導性線維化、脂肪変性、アルコール性脂肪変性、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、及び非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）等）を治療することを含み、治療は、血清トリグリセリド、総コレステロール、及びアラニンアミノトランスフェラーゼのうちの少なくとも１つまたは少なくとも２つを低減させることを含むことが理解される。
【0075】
上記のもののうちのいくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、投薬の前に少なくとも１０時間、食事をしていない患者へ投与される。いくつかの実施形態において、化合物１の化合物またはその薬学的に許容される塩は、投薬の３０分間未満前に、高脂肪の高カロリーの食事を摂取した患者へ投与される。
【0076】
多形体
一態様において、化合物１の多形体またはその薬学的に許容される塩が本明細書において提供される。多形体は、医学的使用または薬学的使用に好適なある特定の条件下の生物学的利用能及び安定性等の特性を有し得る。
一態様において、化合物１の多形体またはその薬学的に許容される塩が本明細書において提供される。多形体は、医学的使用または薬学的使用に好適なある特定の条件下の生物学的利用能及び安定性等の特性を有し得る。
【0077】
いくつかの実施形態において、化合物１のカリウム塩の多形体Ａ型が本明細書において提供される。いくつかの実施形態において、化合物１のカリウム塩のＡ型は、図１６中で示されるようなＸＲＰＤパターンを実質的に有する。ＸＲＰＤを使用して化合物１のカリウム塩のＡ型について観察され得る角度２θ及び相対ピーク強度は、以下の表Ｂ中で示される。
【表2】
【0078】
いくつかの実施形態において、化合物１のカリウム塩の多形体Ａ型は、図１６中で示されるようなまたは表Ｂ中で提供されるようなＸＲＰＤパターンにおいて、最大強度を有する角度２θで、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、または少なくとも１０のピークを示すＸＲＰＤパターンを有する。
【0079】
いくつかの実施形態において、化合物１のカリウム塩の多形体Ａ型は、６．７８±０．２０、１１．３５±０．２０、及び２０．５１±０．２０度の角度２θでピークを含むＸＲＰＤパターンを有する。いくつかの実施形態において、化合物１のカリウム塩の多形体Ａ型は、６．７８±０．２０、１１．３５±０．２０、１４．４４±０．２０、２０．５１±０．２０、及び２９．１３±０．２０度の角度２θでピークを含むＸＲＰＤパターンを有する。いくつかの実施形態において、化合物１のカリウム塩の多形体Ａ型は、６．１６±０．２０、６．７８±０．２０、１１．３５±０．２０、１３．５１±０．２０、１４．４４±０．２０、１５．７６±０．２０、２０．５１±０．２０、２４．６３±０．２０、２５．９７±０．２０、及び２９．１３±０．２０度の角度２θでピークを含むＸＲＰＤパターンを有する。
【0080】
いくつかの実施形態において、化合物１のナトリウム塩の多形体Ａ型が本明細書において提供される。いくつかの実施形態において、化合物１のナトリウム塩のＡ型は、図１８中で示されるようなＸＲＰＤパターンを実質的に有する。ＸＲＰＤを使用して化合物１のナトリウム塩のＡ型について観察され得る角度２θ及び相対ピーク強度は、以下の表Ｃ中で示される。
【表3】
【0081】
いくつかの実施形態において、化合物１のナトリウム塩の多形体Ａ型は、図１８中で示されるようなまたは表Ｃ中で提供されるようなＸＲＰＤパターンにおいて、最大強度を有する角度２θで、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、または少なくとも１０のピークを示すＸＲＰＤパターンを有する。
【0082】
いくつかの実施形態において、化合物１のナトリウム塩の多形体Ａ型は、５．５１±０．２０、８．４７±０．２０、及び１６．５７±０．２０度の角度２θでピークを含むＸＲＰＤパターンを有する。いくつかの実施形態において、化合物１のナトリウム塩の多形体Ａ型は、５．５１±０．２０、６．９９±０．２０、８．４７±０．２０、１５．２４±０．２０、及び１６．５７±０．２０度の角度２θでピークを含むＸＲＰＤパターンを有する。いくつかの実施形態において、化合物１のナトリウム塩の多形体Ａ型は、５．５１±０．２０、６．９９±０．２０、８．４７±０．２０、１３．１２±０．２０、かつ１５．２４±０．２０、１６．５７±０．２０、２０．４２±０．２０、２１．０２±０．２０、２８．５５±０．２０、及び３１．３３±０．２０度の角度２θでピークを含むＸＲＰＤパターンを有する。
【0083】
相対強度は、多くの因子（サンプル調製、マウンティング、ならびにスペクトルを得るために使用される装置及び分析手順及び設定が挙げられる）に依存して変動し得ることが理解されるべきである。相対ピーク強度及びピーク割り当ては、実験誤差内で変動し得る。いくつかの実施形態において、本明細書においてリストされるＸＲＰＤピーク割り当て（化合物１のカリウム塩の多形体Ａ型または化合物１のナトリウム塩の多形体Ａ型についてが挙げられる）は、±０．６度、±０．４度、±０．２度、または±０．１度２θで変動し得る。いくつかの実施形態において、本明細書においてリストされるピーク割り当ては、±０．６度２θで変動し得る。いくつかの実施形態において、本明細書においてリストされるピーク割り当ては、±０．４度２θで変動し得る。いくつかの実施形態において、本明細書においてリストされるピーク割り当ては、±０．２度２θで変動し得る。いくつかの実施形態において、本明細書においてリストされるピーク割り当ては、±０．１度２θで変動し得る。
【0084】
併用
本開示は、化合物１またはその薬学的に許容される塩と肝疾患を治療するために使用される他の治療剤との併用をさらに提供する。特に、本開示は、化合物１またはその薬学的に許容される塩及びＮＡＳＨの治療において使用される他の治療剤との併用を提供する。本明細書において開示されるように、その低い臨床用量に起因して、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、ＮＡＳＨの治療のための固定用量の併用で使用に魅力的な候補である。
本開示は、化合物１またはその薬学的に許容される塩と肝疾患を治療するために使用される他の治療剤との併用をさらに提供する。特に、本開示は、化合物１またはその薬学的に許容される塩及びＮＡＳＨの治療において使用される他の治療剤との併用を提供する。本明細書において開示されるように、その低い臨床用量に起因して、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、ＮＡＳＨの治療のための固定用量の併用で使用に魅力的な候補である。
【0085】
いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、ファルネソイドＸ受容体（ＦＸＲ）アゴニストと併用して投与される。いくつかの実施形態において、ＦＸＲアゴニストは、オベチコール酸である。いくつかの実施形態において、ＦＸＲアゴニストは、シロフェキソールである。いくつかの実施形態において、ＦＸＲアゴニストは、トロピフェキソールである。いくつかの実施形態において、ＦＸＲアゴニストは、ＥＹＰ００１（ボナフェキソール、ＩＮＮ提案）である。いくつかの実施形態において、ＦＸＲアゴニストは、ＭＥＴ４０９（Ｍｅｔａｃｒｉｎｅ）である。いくつかの実施形態において、ＦＸＲアゴニストは、ＥＤＰ－３０５（Ｅｎａｎｔａによる）である。いくつかの実施形態において、ＦＸＲアゴニストは、
（「または化合物２」）またはその薬学的に許容される塩である。
【化3】
【0086】
いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体（ＰＰＡＲ）アゴニストと併用して投与される。いくつかの実施形態において、ＰＰＡＲアゴニストは、ピオグリタゾンである。いくつかの実施形態において、ＰＰＡＲアゴニストは、ロシグリタゾンである。いくつかの実施形態において、ＰＰＡＲアゴニストは、エララフィブラノール（ｅｌａｌａｆｉｂｒａｎｏｒ）である。いくつかの実施形態において、ＰＰＡＲアゴニストは、サログリタザールである。いくつかの実施形態において、ＰＰＡＲアゴニストは、ラニフィブラノールである。いくつかの実施形態において、ＰＰＡＲアゴニストは、エラフィブラノールである。いくつかの実施形態において、ＰＰＡＲアゴニストは、セラデルファル（ｓｅｌａｄｅｌｐｈａｒ）である。
【0087】
いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、汎カスパーゼ阻害物質と併用して投与される。いくつかの実施形態において、汎カスパーゼ阻害物質は、エムリカサンである。
【0088】
いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、ガレクチン－３阻害物質と併用して投与される。いくつかの実施形態において、ガレクチン－３阻害物質は、ベラペクチンである。
【0089】
いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、ステアロイルＣｏ－Ａデサチュラーゼ１阻害物質と併用して投与される。いくつかの実施形態において、ステアロイルＣｏ－Ａデサチュラーゼ１阻害物質は、アルムコール（ａｒｍａｃｈｏｌ）である。
【0090】
いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、ケモカイン受容体２型及びケモカイン受容体５型（ＣＣＲ２／ＣＣＲ５ケモカイン）アンタゴニストと併用して投与される。いくつかの実施形態において、ＣＣＲ２／ＣＣＲ５ケモカインアゴニストは、セニクリビロックである。
【0091】
いくつかの実施形態において、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、抗酸化物質と併用して投与される。いくつかの実施形態において、抗酸化物質は、ビタミンＥである。
【0092】
いくつかの実施形態において、化合物１は、コレステロール低下薬と共投与される。いくつかの実施形態において、コレステロール低下薬は、スタチンである。いくつかの実施形態におけるいくつかのかかる実施形態において、スタチンは、アトルバスタチン、シンバスタチン、またはロスバスタチンである。
【0093】
製造品及びキット
本開示は、本明細書において記載される化合物もしくはその塩、本明細書において記載される組成物、または本明細書において記載される１つもしくは複数の単位投薬量を好適なパッケージング中で含む製造品をさらに提供する。ある特定の実施形態において、製造品は、本明細書において記載される方法のうちの任意のものにおける使用のためのものである。好適なパッケージング（例えば容器）は、当技術分野において公知であり、例えばバイアル、容器、アンプル、ボトル、ジャー、可撓性のパッケージング、及び同種のものが挙げられる。製造品は、さらに滅菌及び／または密閉され得る。
本開示は、本明細書において記載される化合物もしくはその塩、本明細書において記載される組成物、または本明細書において記載される１つもしくは複数の単位投薬量を好適なパッケージング中で含む製造品をさらに提供する。ある特定の実施形態において、製造品は、本明細書において記載される方法のうちの任意のものにおける使用のためのものである。好適なパッケージング（例えば容器）は、当技術分野において公知であり、例えばバイアル、容器、アンプル、ボトル、ジャー、可撓性のパッケージング、及び同種のものが挙げられる。製造品は、さらに滅菌及び／または密閉され得る。
【0094】
本開示は、本開示の方法の実行のためのキットをさらに提供し、当該キットは、化合物１もしくはその薬学的に許容される塩または化合物１もしくはその薬学的に許容される塩を含む組成物を含む。キットは、本明細書において記載される使用のうちの任意の１つまたは複数のために使用され得、したがって、本明細書において記載される治療のための指示書を含有し得る。
【0095】
キットは、概して、好適なパッケージングを含む。キットは、化合物１またはその薬学的に許容される塩を含む１つまたは複数の容器を含み得る。
【0096】
キットは、単位投薬形態、バルクパッケージ（例えば複数回用量パッケージ）、またはサブ単位用量であり得る。例えば、十分な投薬量の式（Ｉ）の化合物もしくはその薬学的に許容される塩、及び／または本明細書において詳述される疾患のために有用な追加の薬学的に活性のある化合物を含有するキットが提供されて、延長された期間（１週間、２週間、３週間、４週間、６週間、８週間、３か月、４か月、５か月、７か月、８か月、９か月、またはそれ以上等のうちの任意のもの）の間、個体に有効な治療を提供し得る。キットは、複数回の単位用量の化合物及び使用のための指示書も含み、薬局（例えば病院薬局及び調剤薬局）における貯蔵及び使用のために十分な量でパッケージングされ得る。
【0097】
キットは、指示書のセット（概して書面による指示書）を任意選択で含み得るが、本開示の方法の構成要素（複数可）の使用に関連する、電子記憶媒体（例えば磁気ディスケットまたは光ディスク）を含有する指示書も許容される。キットに含まれる指示書は、概して、構成要素及びそれらを個体へ投与することに関する情報を含む。
【実施例】
【0098】
実施例１：健康なヒト対象における化合物１の単回用量漸増試験
方法
化合物１（カリウム塩）の単回用量漸増臨床試験を遂行した。化合物１（３ｍｇ、１０ｍｇ、３０ｍｇ、または６０ｍｇのカプセル）または一致するプラセボを服用させるために、８名の健康な参加者の４つの群を、３：１の比（ｎ＝６活性物質及びｎ＝２プラセボ）で無作為化し、研究の１日目の絶食状態の間に投与した。化合物１及びＰＤバイオマーカーの血漿レベルを、用量前及び用量後の様々な時間点で決定した。
方法
化合物１（カリウム塩）の単回用量漸増臨床試験を遂行した。化合物１（３ｍｇ、１０ｍｇ、３０ｍｇ、または６０ｍｇのカプセル）または一致するプラセボを服用させるために、８名の健康な参加者の４つの群を、３：１の比（ｎ＝６活性物質及びｎ＝２プラセボ）で無作為化し、研究の１日目の絶食状態の間に投与した。化合物１及びＰＤバイオマーカーの血漿レベルを、用量前及び用量後の様々な時間点で決定した。
【0099】
有害事象（ＡＥ）モニタリング、ルーチンの臨床検査試験（甲状腺軸試験［遊離及び総甲状腺ホルモントリヨードチロニン（Ｔ３）、遊離及び総甲状腺ホルモンチロキシン（Ｔ４）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）］、心臓バイオマーカー［ＣＫ－ＭＢ、トロポニンＩ］、及び肝臓生化学が挙げられる）、集約的なバイタルサイン、心電図遠隔測定、及び心電図を、研究の全体にわたって査定した。化合物１の血漿及び尿の濃度を、検証された液体クロマトグラフィー－タンデム質量分析アッセイを使用して決定した。
【0100】
化合物１の濃度及びＰＫサンプリングのための血漿サンプルを、試験医薬物（プラセボまたは化合物）の用量前ならびに単回用量の投与の０．５、１、２、３、４、６、８、１２、２４、４８、及び７２時間後に収集した。化合物１の濃度及びＰＫサンプリングのための尿サンプルを、用量前ならびに以下の時間点：０～６時間、６～１２時間、１２～２４時間、及び２４～４８時間で収集した。ＰＫパラメーターを、Ｐｈｏｅｎｉｘ（登録商標）ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ（登録商標）（Ｃｅｒｔａｒａ、ＬＰ、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、ＮＪ）を使用してノンコンパートメント方法によって推定した。血清の薬力学的（ＰＤ）バイオマーカーであるアポリポタンパク質Ｂ（Ａｐｏ Ｂ）及び性ホルモン結合グロブリン（ＳＨＢＧ）の濃度を、免疫アッセイを使用して測定し、血清脂質を、分光測光を使用して決定した。
【0101】
ＰＤサンプリングを、用量前ならびに用量の４８時間及び７２時間後に遂行した。ＰＤマーカーについてのベースラインからのパーセント変化を、従属変数としてのベースラインからのパーセント変化、固定効果としての治療群、及び共変量としてのベースラインにより、ＡＮＣＯＶＡモデルを使用して計算した。分析は、欠測データについての補完無しに観察データのみを使用した。
【0102】
結果
治療下で出現した有害事象のモニタリング
すべての有害事象は軽度または中等度であり、大部分は試験薬に関連しなかった。心臓関連ＡＥ（例えば頻脈、不整脈）は報告されず、バイタルサインまたはＥＣＧパラメーターにおける注目すべき変化は観察されなかった（表１を参照）。
治療下で出現した有害事象のモニタリング
すべての有害事象は軽度または中等度であり、大部分は試験薬に関連しなかった。心臓関連ＡＥ（例えば頻脈、不整脈）は報告されず、バイタルサインまたはＥＣＧパラメーターにおける注目すべき変化は観察されなかった（表１を参照）。
【表4】
【0103】
安全性及び甲状腺軸のモニタリング
心拍数は、化合物１の投薬後２４時間、安定的且つ正常範囲内のままであり、プラセボ群において観察されるものと類似のパターンになった。ＴＳＨ、遊離Ｔ３、及び遊離Ｔ４のレベルは、正常範囲内のままであった。正常上限値（ＵＬＮ）の２倍を超えるＡＬＴの増加を経験した対象はおらず；正常範囲を超えるビリルビンレベルを示した対象もいなかった。加えて、心臓バイオマーカー（トロポニンＩ、ＣＫ－ＭＢ）または他の臨床安全性試験の顕著な変化は、観察されなかった。
心拍数は、化合物１の投薬後２４時間、安定的且つ正常範囲内のままであり、プラセボ群において観察されるものと類似のパターンになった。ＴＳＨ、遊離Ｔ３、及び遊離Ｔ４のレベルは、正常範囲内のままであった。正常上限値（ＵＬＮ）の２倍を超えるＡＬＴの増加を経験した対象はおらず；正常範囲を超えるビリルビンレベルを示した対象もいなかった。加えて、心臓バイオマーカー（トロポニンＩ、ＣＫ－ＭＢ）または他の臨床安全性試験の顕著な変化は、観察されなかった。
【0104】
薬物動態学
化合物１は、絶食条件下で低い変動（％ＣＶ≦３３％）で吸収された。曝露（ＡＵＣ、Ｃｍａｘ）は、近似的に用量に比例した。化合物１の中央値半減期は、１３．８～１７．３時間の範囲であり、１日１回の投薬を支持する。最小の腎排泄を、すべての用量で決定した。表２、図１、図２を参照されたい。
化合物１は、絶食条件下で低い変動（％ＣＶ≦３３％）で吸収された。曝露（ＡＵＣ、Ｃｍａｘ）は、近似的に用量に比例した。化合物１の中央値半減期は、１３．８～１７．３時間の範囲であり、１日１回の投薬を支持する。最小の腎排泄を、すべての用量で決定した。表２、図１、図２を参照されたい。
【表5】
【0105】
薬力学
研究の１日目の化合物１の単回用量後の３日目に、性ホルモン結合グロブリン（ＳＨＢＧ）及びアポリポタンパク質Ｂ（Ａｐｏ Ｂ）の平均パーセント変化を、それぞれ図３及び図４中で示す。平均パーセント変化は、ＡＮＣＯＶＡモデルからの最小二乗平均（ＬＳＭ）及び標準誤差（ＳＥ）を参照する。プラセボに対するＰ値：＊＜０．０５；＊＊＜０．０１；＊＊＊＜０．００１；＊＊＊＊＜０．０００１。ＳＨＢＧの有意な増加は、プラセボに比べて≧１０ｍｇ化合物１の単回用量を後に観察された。化合物１の単回用量投与後の３日目に、ＬＤＬ－ｃ、総コレステロール、及びＡｐｏ Ｂにおける用量依存的減少が観察され、４日目に類似の結果があった。トリグリセリドレベルの有意な変化は、化合物１の単回用量後に観察されなかった（表３を参照）。
研究の１日目の化合物１の単回用量後の３日目に、性ホルモン結合グロブリン（ＳＨＢＧ）及びアポリポタンパク質Ｂ（Ａｐｏ Ｂ）の平均パーセント変化を、それぞれ図３及び図４中で示す。平均パーセント変化は、ＡＮＣＯＶＡモデルからの最小二乗平均（ＬＳＭ）及び標準誤差（ＳＥ）を参照する。プラセボに対するＰ値：＊＜０．０５；＊＊＜０．０１；＊＊＊＜０．００１；＊＊＊＊＜０．０００１。ＳＨＢＧの有意な増加は、プラセボに比べて≧１０ｍｇ化合物１の単回用量を後に観察された。化合物１の単回用量投与後の３日目に、ＬＤＬ－ｃ、総コレステロール、及びＡｐｏ Ｂにおける用量依存的減少が観察され、４日目に類似の結果があった。トリグリセリドレベルの有意な変化は、化合物１の単回用量後に観察されなかった（表３を参照）。
【表6】
【0106】
結論
６０ｍｇまでの化合物１の単回用量漸増は、全体として安全且つ良好な忍容性を示し、低い変動で、直線状の用量比例する血漿曝露を呈した。半減期はすべての単回用量レベルで＞１３時間であり、１日１回の経口投薬を支持する。変化しない化合物１の腎排泄は最小限であり、腎排出がマイナーな経路であることを指摘する。
６０ｍｇまでの化合物１の単回用量漸増は、全体として安全且つ良好な忍容性を示し、低い変動で、直線状の用量比例する血漿曝露を呈した。半減期はすべての単回用量レベルで＞１３時間であり、１日１回の経口投薬を支持する。変化しない化合物１の腎排泄は最小限であり、腎排出がマイナーな経路であることを指摘する。
【0107】
ＳＨＢＧ、Ａｐｏ Ｂ、及びＬＤＬ－ｃに対する有意な用量依存的効果は、化合物１の単回用量後に観察され、有効性について可能性のあることを指摘する。前臨床モデルにおける化合物１の有効な用量（３，３２０ｎｇ＊時間／ｍＬの閾値ＡＵＣは、ＮＡＳＨのマウスモデルにおいて有意な組織学的改善を達成した）に比べて、十分な曝露レベルは、すべての化合物１用量にわたってヒト対象において達成された。
【0108】
安全性、ＰＫ、及びＰＤの結果から、化合物１の継続的な開発が支持され、化合物１が、経口の１日１回の固定用量の併用として、他の経口小分子ＮＡＳＨ薬剤との共製剤に良く適することを示す。
【0109】
実施例２：健康なヒト対象における化合物１の複数用量漸増試験
化合物１の複数用量漸増臨床試験を遂行した。化合物１（１ｍｇ、３ｍｇ、６ｍｇ、または１０ｍｇのカプセル）または一致するプラセボを服用させるために、８名の健康な参加者の４つの群を、３：１の比（ｎ＝６活性物質及びｎ＝２プラセボ）で無作為化し、１４日間の絶食状態の間に１日１回投与した。化合物１及びＰＤバイオマーカーの血漿レベルを、用量前及び用量後の様々な時間点で決定した。
化合物１の複数用量漸増臨床試験を遂行した。化合物１（１ｍｇ、３ｍｇ、６ｍｇ、または１０ｍｇのカプセル）または一致するプラセボを服用させるために、８名の健康な参加者の４つの群を、３：１の比（ｎ＝６活性物質及びｎ＝２プラセボ）で無作為化し、１４日間の絶食状態の間に１日１回投与した。化合物１及びＰＤバイオマーカーの血漿レベルを、用量前及び用量後の様々な時間点で決定した。
【0110】
有害事象（ＡＥ）モニタリング（表４）、ルーチンの臨床検査試験（甲状腺軸試験［遊離及び総甲状腺ホルモントリヨードチロニン（Ｔ３）、遊離及び総甲状腺ホルモンチロキシン（Ｔ４）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）］、心臓バイオマーカー［ＣＫ－ＭＢ、トロポニンＩ］、及び肝臓生化学が挙げられる）（図５、図６）、集約的なバイタルサイン、心電図遠隔測定、及び心電図を、研究の全体にわたって査定した。化合物１の濃度を、検証された液体クロマトグラフィー－タンデム質量分析アッセイを使用して決定した。
【0111】
化合物１の濃度及びＰＫサンプリングのための血漿サンプルを、試験医薬物（プラセボまたは化合物）の、第１の用量の用量前ならびに０．５、１、２、３、４、６、８、１２、及び２４時間後に、３、４、５、８、１１、及び１３日目の投薬の用量前に、ならびに１４日間の１日１回の投与の用量前ならびに０．５、１、２、３、４、６、８、１２、２４、４８、及び７２時間後に収集した（表５、図７を参照）。ＰＫパラメーターを、Ｐｈｏｅｎｉｘ（登録商標）ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ（登録商標）（Ｃｅｒｔａｒａ、ＬＰ、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、ＮＪ）を使用してノンコンパートメント方法によって推定した。血清の薬力学的（ＰＤ）バイオマーカーであるアポリポタンパク質Ｂ（Ａｐｏ Ｂ）及び性ホルモン結合グロブリン（ＳＨＢＧ）の濃度を、免疫アッセイを使用して測定し、血清脂質を、分光測光を使用して決定した。
【0112】
ＰＤサンプリングも遂行した。ＰＤマーカーについてのベースラインからのパーセント変化を、従属変数としてのベースラインからのパーセント変化、固定効果としての治療群、及び共変量としてのベースラインにより、ＡＮＣＯＶＡモデルを使用して計算した。分析は、欠測データについての補完無しに観察データのみを使用した。研究の１５日目のＰＤデータを図８中で示す。
【0113】
結果及び結論
安全性
安全性
【表7】
【0114】
１０ｍｇまでのプラセボまたは化合物１の１４日間の毎日の投薬は、全体的に良好な忍容性を示した。研究中止基準または用量漸増中止基準を満たすことはなかった。すべてのＡＥはグレード１であり、大部分は試験薬に関連しないと判断された。化合物１へ無作為化されたすべての対象は、試験薬を中断せずに研究を完了した。心拍数及び血圧は、研究を通して安定的なままであった。遊離Ｔ４は、ＴＳＨまたは遊離Ｔ３の明らかな変化無しに、用量依存的様式で下落した。Ｔ４変化は無症候性であり、臨床的に重要であると判断されなかったので、Ｔ３またはＴＳＨの変化無しに、遊離Ｔ４の低下を導く末梢の甲状腺ホルモン調節があることを示唆する。
【0115】
平均ＡＬＴ値は群にわたって類似し、プラセボとは有意に異ならなかった。ＡＬＴが≧２×ＵＬＮへ増加した治療対象は、いなかった。用量依存的なＧＧＴの増加が認められ、治療患者については、値はＵＬＮ未満のままであった。用量依存的な総テストステロンの増加が観察されたが、遊離レベルの有意な変化は同定されなかった。
【0116】
ＥＣＧ、心臓バイオマーカー、または他の臨床検査試験の注目すべき変化は同定されなかった。
【0117】
薬物動態学及び薬力学
【表8】
【0118】
薬物動態学的なデータは、低いＰＫ変動による良好な経口の生物学的利用能を示した。化合物１の複数回用量は、３ｍｇの１日１回の低用量でさえＳＨＢＧの有意且つ用量依存的な増加を導いた。化合物１のすべて用量レベルで総コレステロール、ＬＤＬ－ｃ、Ａｐｏ Ｂ、及びトリグリセリドの低減が観察され、１０ｍｇの用量のコホートで１５日目に有意な低減が観察された。ＨＤＬ－ｃは、１５日目までに有意に変化しなかった。これらの結果から、化合物１の１日１回の低用量が有効であることが支持される。
【0119】
実施例３：健康なヒトにおける化合物１との薬物間相互作用の研究
インビトロの研究から、化合物１が、有機アニオン輸送ポリペプチド（ＯＡＴＰ）１Ｂ１／１Ｂ３の初回通過阻害及び乳癌耐性タンパク質（ＢＣＲＰ）輸送体の腸管阻害の可能性があることを示された（ＯＡＴＰ１Ｂ１ ＩＣ５０＝２．０１マイクロモル；ＯＡＴＰ１Ｂ３ ＩＣ５０＝０．７１マイクロモル；ＢＣＲＰ ＩＣ５０＝９．３７マイクロモル）。健康な参加者における、共投与されたロスバスタチン（ＲＯＳ）（抗高脂血症薬であり、ＯＡＴＰ及びＢＣＲＰの基質）の薬物動態学に対する化合物１の効果は、ＰＫサンプリングと併用して、表６中で記載されるように化合物１及びＲＯＳの投与によって決定される。
インビトロの研究から、化合物１が、有機アニオン輸送ポリペプチド（ＯＡＴＰ）１Ｂ１／１Ｂ３の初回通過阻害及び乳癌耐性タンパク質（ＢＣＲＰ）輸送体の腸管阻害の可能性があることを示された（ＯＡＴＰ１Ｂ１ ＩＣ５０＝２．０１マイクロモル；ＯＡＴＰ１Ｂ３ ＩＣ５０＝０．７１マイクロモル；ＢＣＲＰ ＩＣ５０＝９．３７マイクロモル）。健康な参加者における、共投与されたロスバスタチン（ＲＯＳ）（抗高脂血症薬であり、ＯＡＴＰ及びＢＣＲＰの基質）の薬物動態学に対する化合物１の効果は、ＰＫサンプリングと併用して、表６中で記載されるように化合物１及びＲＯＳの投与によって決定される。
【表9】
【0120】
加えて、化合物２は、腸で発現される輸送体Ｐ－糖タンパク質（Ｐ－ｇｐ）及びＢＣＲＰの阻害物質である（Ｐ－ｇｐ ＩＣ５０＝３．９２マイクロモル；ＢＣＲＰ ＩＣ５０＝４．３９マイクロモル）。インビトロの研究に基づいて、化合物２によるこれらの輸送体の阻害は、共投与された化合物１の吸収を増加させる可能性を有する。したがって、表７中で記載されるように、化合物２が、腸管のＰ－ｇｐ及びＢＣＲＰの阻害を介して化合物１の吸収を促進する可能性を査定するために、薬物間相互作用（ＤＤＩ）研究を遂行する。
【表10】
【0121】
実施例４：健康なヒトにおける化合物１に対する食物の効果
健康な参加者における化合物１の取り込み及び薬物動態学に対する食物の効果は、ＰＫサンプリングと併用して、表８中で記載されるように餌有りの状態及び絶食状態の間に化合物１を投与することによって決定される。
健康な参加者における化合物１の取り込み及び薬物動態学に対する食物の効果は、ＰＫサンプリングと併用して、表８中で記載されるように餌有りの状態及び絶食状態の間に化合物１を投与することによって決定される。
【表11】
【0122】
参加者は、一晩の絶食（投薬前の少なくとも１０時間は水以外の食物または液体は無し）を行う。順序Ａの９日目及び順序Ｂの１日目に、約１０００ｋｃａｌ及び４５％～５５％の脂肪を含有する高脂肪／高カロリー朝食を、試験薬の投与の３０分前に提供する。参加者が朝食を完了した（１００％の消費）時にまたは完了後５分以内に、試験薬を投与する。
【0123】
甲状腺軸安全性のモニタリング及び心血管の安全性のモニタリングを、先行する実施例中で記載されるように遂行する。
【0124】
実施例５：マウスＮＡＳＨモデルに対する化合物１の効果
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスに１０週間高脂肪食餌を与えて、肥満（＞３８ｇの体重）を誘導した。肥満マウスに、０．５μｌ／ｇの２５％のＣＣｌ４（オリーブ油中で製剤化）を１週間２回で４週間腹腔内（ｉ．ｐ．）注射して、線維化を誘導し、正常体重のマウスの１つの群に、オリーブ油を１週間２回で４週間ｉ．ｐ．注射して、健康な対照として供した。同じ投与期間の間に、肥満マウスに、ビヒクルまたは変動用量の化合物１を１日１回で２８日間経口的に与えた。ＣＣｌ４の投薬日に、ＣＣｌ４を、化合物またはビヒクルの投薬の４時間後に投与した。２７日目に、すべての動物を約１６時間絶食させてから、最終的に安楽死させた。２８日目に、すべての動物を屠殺し、様々な生物学的なパラメーターを分析した。全身重量、肝臓重量、心臓重量、及び脳重量を測定し、肝臓重量及び心臓重量の変化を、脳重量を使用して正規化した。
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスに１０週間高脂肪食餌を与えて、肥満（＞３８ｇの体重）を誘導した。肥満マウスに、０．５μｌ／ｇの２５％のＣＣｌ４（オリーブ油中で製剤化）を１週間２回で４週間腹腔内（ｉ．ｐ．）注射して、線維化を誘導し、正常体重のマウスの１つの群に、オリーブ油を１週間２回で４週間ｉ．ｐ．注射して、健康な対照として供した。同じ投与期間の間に、肥満マウスに、ビヒクルまたは変動用量の化合物１を１日１回で２８日間経口的に与えた。ＣＣｌ４の投薬日に、ＣＣｌ４を、化合物またはビヒクルの投薬の４時間後に投与した。２７日目に、すべての動物を約１６時間絶食させてから、最終的に安楽死させた。２８日目に、すべての動物を屠殺し、様々な生物学的なパラメーターを分析した。全身重量、肝臓重量、心臓重量、及び脳重量を測定し、肝臓重量及び心臓重量の変化を、脳重量を使用して正規化した。
【0125】
化合物１は、肝臓／脳重量を有意に低減させ、全身重量または心臓／脳重量に対する効果は無かった（図９）。肝臓組織の組織学を、脂肪変性、炎症、及び線維化に対する化合物１の効果について分析した。化合物１は、試験したすべて用量で脂肪変性を有意に低減させ、炎症低減の傾向を示し、３及び１０ｍｐｋで肝線維化を有意に低減させた（図１０）。化合物１は、試験したすべての用量で血清総コレステロール、トリグリセリド、及びＡＬＴも有意に低減させた（図１１）。
【0126】
肝臓サンプルを、ＲＮＡシーケンシング（ＲＮＡｓｅｑ）による全トランスクリプトーム解析のために収集した。ＲＮＡｓｅｑライブラリー（１つの群あたりｎ＝５）の調製及びシーケンシングを、Ｉｌｌｕｍｉｎａの標準的なプロトコルを使用して遂行した。シーケンシングリードのアライメントをＳＴＡＲアライナーソフトウェアを使用して遂行し、リードカウントをＲＳＥＭを使用して推定した。差次的に発現された遺伝子（ビヒクル処理されたＮＡＳＨ対照マウスへ比較して）を、ＥｄｇｅＲソフトウェアを使用して決定した。遺伝子オントロジー分析を、それぞれ＞１．５及び＜０．０５の倍変化及び調整ｐ値カットオフにより、Ａｄｖａｉｔａソフトウェアを使用して遂行した。遺伝子オントロジーは、遺伝子オントロジーコンソーシアムデータベース（２０１９年４月２６日）に由来した（Ａｓｈｂｕｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ ｏｎｔｏｌｏｇｙ：Ｔｏｏｌ ｆｏｒ ｔｈｅ ｕｎｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｂｉｏｌｏｇｙ．Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ２５（１）：２５－９（２０００）；Ｇｅｎｅ Ｏｎｔｏｌｏｇｙ Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ，Ｃｒｅａｔｉｎｇ ｔｈｅ Ｇｅｎｅ Ｏｎｔｏｌｏｇｙ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ：Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｉｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ．Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １１：１４２５－１４３３（２００１））。化合物１は、コラーゲン細胞外マトリックス及び肝臓の星細胞活性化と関連する遺伝子の発現に対する有意な効果を有し、それは、主としてＮＡＳＨ対照マウスに比べてそれらの発現レベルを低減させることによるものであった（図１２）。
【0127】
実施例６：化合物１の溶解度に対するｐＨ及び可溶化物質の効果
化合物１（カリウム塩）の溶解度を様々なｐＨレベルで評価した。水溶液中の化合物１の溶解度は、表９中で示されるように、ｐＨ依存的であり、ｐＨにより増加した。可溶化物質（ラウリル硫酸ナトリウム、ＳＬＳ）の存在下において、化合物１の溶解度は、２５℃で２４時間後に、ｐＨ１０．０のバッファー＋２重量％のＳＬＳ中で３０８μｇ／ｍＬへさらに改善した。
化合物１（カリウム塩）の溶解度を様々なｐＨレベルで評価した。水溶液中の化合物１の溶解度は、表９中で示されるように、ｐＨ依存的であり、ｐＨにより増加した。可溶化物質（ラウリル硫酸ナトリウム、ＳＬＳ）の存在下において、化合物１の溶解度は、２５℃で２４時間後に、ｐＨ１０．０のバッファー＋２重量％のＳＬＳ中で３０８μｇ／ｍＬへさらに改善した。
【表12】
【0128】
実施例７：ビーグル犬における、化合物１の製剤、薬物動態学、食物の効果
化合物１の取り込みに対する可溶化物質（ＳＬＳ）の効果を決定するために、５０ｍｇ（遊離酸に基づいて）の化合物１を、５重量％のＳＬＳ（表１０を参照）有りまたは無しでカプセル中で製剤化し、ペンタガストリン（６μｇ／ｋｇ、化合物１の投与の３０±２分前に筋肉内注射によって投与した）により前処理した絶食ビーグル犬へ投与した。化合物１の血漿濃度を、２４時間にわたって測定した（図１３を参照）。５重量％のＳＬＳを含む製剤は、化合物１の曝露（Ｃｍａｘ、ＡＵＣ）を７０％超増加させた（表１１を参照）。
化合物１の取り込みに対する可溶化物質（ＳＬＳ）の効果を決定するために、５０ｍｇ（遊離酸に基づいて）の化合物１を、５重量％のＳＬＳ（表１０を参照）有りまたは無しでカプセル中で製剤化し、ペンタガストリン（６μｇ／ｋｇ、化合物１の投与の３０±２分前に筋肉内注射によって投与した）により前処理した絶食ビーグル犬へ投与した。化合物１の血漿濃度を、２４時間にわたって測定した（図１３を参照）。５重量％のＳＬＳを含む製剤は、化合物１の曝露（Ｃｍａｘ、ＡＵＣ）を７０％超増加させた（表１１を参照）。
【表13】
【表14】
【0129】
ＰＫパフォーマンスに対するｐＨ効果を決定するために、ビーグル犬を、２つの群（１つの群あたりｎ＝３）へと分けた。群１については、イヌを、ペンタガストリン（６μｇ／ｋｇ、化合物１の投与の３０±２分前に筋肉内注射）により前処理した。群２については、イヌを、ファモチジン（２つの錠剤、２０ｍｇ／錠剤、化合物１の投与の１８０±１０分前に経口投与）により前処理した。化合物１（１０ｍｇのカプセル、５％のＳＬＳ）を投与し、化合物１の血漿濃度を２４時間モニタリングし、図１４中で図示する。最小限のｐＨ効果が、研究条件下のイヌで起こった。
【0130】
ＰＫパフォーマンスに対する食物の効果を決定するために、ビーグル犬を、２つの群（１つの群あたりｎ＝３）へと分けた。絶食群については、イヌを投薬後４時間を通して一晩絶食させた。餌有りの群については、イヌに投与の３０分前に高脂肪食物を与えた。化合物１の血漿濃度を２４時間モニタリングした。化合物１（１０ｍｇのカプセル、５％のＳＬＳ）を投与し、化合物１の血漿濃度を２４時間モニタリングし、図１５中で図示する。食物摂取は、化合物１ ｔｍａｘを遅延させたが、血漿曝露に対する影響を有しなかった。
【0131】
実施例８。化合物１のカリウム塩の生成
エチル（Ｅ）－（２－シアノ－２－（２－（３，５－ジクロロ－４－（（４－オキソ－３，４－ジヒドロフタラジン－１－イル）オキシ）フェニル）ヒドラジンイリデン）アセチル）カルバメート（７．４ｋｇ、０．９９～１．０１×）、酢酸カリウム（７．４ｋｇ、０．９５～１．００×）、及びＤＭＡｃ（４１ｋｇ、５．６～６．０×）を、５００ＬのＧＬ反応器の中へチャージした。もたらされる混合物を、８０～９０ ℃で１２～１６時間維持した。混合物を２０～３０℃へ調整した。プロセス水（８ｋｇ、１．０～１．５×）中のＫＯＨ（０．８５ｋｇ、０．１１～０．１７×）の溶液を、２０～３０℃で１～２時間添加した。混合物を２０～３０℃で１～２時間撹拌した。プロセス水（３９ｋｇ、５．０～５．５×）を、２０～３０℃で４～６時間添加した。混合物を２０～３０℃で２～３時間撹拌した。もたらされる混合物を、ステンレス鋼遠心分離機によって遠心分離した。湿潤ケーキを、プロセス水により２回（１８＋２０ｋｇ、２～３×）リンスした。湿潤ケーキ及びプロセス水（３８ｋｇ、５．０～６．０×）を５００ＬのＧＬ反応器の中へチャージした。混合物を２０～３０℃で２～３時間撹拌した。もたらされる混合物を、ステンレス鋼遠心分離機によって遠心分離した。湿潤ケーキを、プロセス水により２回（１８＋２２ｋｇ、２～３×）リンスし、５５～６５℃の減圧下のステンレス鋼ドライヤーによって乾燥して、化合物１の粗製カリウム塩（５．４５ｋｇ、純度：９８．４％；アッセイ：９５．９％；収率：７２％）を得た。
エチル（Ｅ）－（２－シアノ－２－（２－（３，５－ジクロロ－４－（（４－オキソ－３，４－ジヒドロフタラジン－１－イル）オキシ）フェニル）ヒドラジンイリデン）アセチル）カルバメート（７．４ｋｇ、０．９９～１．０１×）、酢酸カリウム（７．４ｋｇ、０．９５～１．００×）、及びＤＭＡｃ（４１ｋｇ、５．６～６．０×）を、５００ＬのＧＬ反応器の中へチャージした。もたらされる混合物を、８０～９０ ℃で１２～１６時間維持した。混合物を２０～３０℃へ調整した。プロセス水（８ｋｇ、１．０～１．５×）中のＫＯＨ（０．８５ｋｇ、０．１１～０．１７×）の溶液を、２０～３０℃で１～２時間添加した。混合物を２０～３０℃で１～２時間撹拌した。プロセス水（３９ｋｇ、５．０～５．５×）を、２０～３０℃で４～６時間添加した。混合物を２０～３０℃で２～３時間撹拌した。もたらされる混合物を、ステンレス鋼遠心分離機によって遠心分離した。湿潤ケーキを、プロセス水により２回（１８＋２０ｋｇ、２～３×）リンスした。湿潤ケーキ及びプロセス水（３８ｋｇ、５．０～６．０×）を５００ＬのＧＬ反応器の中へチャージした。混合物を２０～３０℃で２～３時間撹拌した。もたらされる混合物を、ステンレス鋼遠心分離機によって遠心分離した。湿潤ケーキを、プロセス水により２回（１８＋２２ｋｇ、２～３×）リンスし、５５～６５℃の減圧下のステンレス鋼ドライヤーによって乾燥して、化合物１の粗製カリウム塩（５．４５ｋｇ、純度：９８．４％；アッセイ：９５．９％；収率：７２％）を得た。
【0132】
化合物１の粗製カリウム塩（５．３ｋｇ、０．９９～１．０１×）及びＤＭＳＯ（４３ｋｇ、６．０～８．０×）を、２５０ ＧＬ反応器（Ｒ１）の中へチャージした。もたらされる混合物を４０～５０℃で０．５～１時間維持して、透明な溶液を得た。酢酸エチル（ＥＡ）（２２ｋｇ、４．０～４．５×）を４０～５０℃で１～２時間にわたって添加した。もたらされる混合物をインラインフィルターを介して濾過し、２５０ ＧＬ反応器（Ｒ２）の中へ移した。Ｒ１をＤＭＳＯ（１．８ｋｇ、０．２～０．５×）によりリンスし、材料をインラインフィルターを介して濾過し、Ｒ２の中へ移した。４０～５０℃へ調整し、ＥＡ（２２ｋｇ、４．０～４．５×）を４０～５０℃で１～２時間にわたってＲ２の中へチャージした。化合物１シード（０．０１０ｋｇ、０．００１～０．００２×）をＲ２の中へチャージした。もたらされる混合物を、４０～５０℃で１～２時間間撹拌した。ＥＡ（６７ｋｇ、１２．０～１３．０×）を４０～５０℃で１２～１５時間にわたってＲ２の中へチャージし、４０～５０℃で２～３時間撹拌した。分析のためにサンプリングした（スペック：湿潤ケーキのＸＲＰＤ：参照形態Ａに一致）。ＥＡ（２７ｋｇ、１．０～５．０×）を４０～５０℃で２時間にわたってＲ２の中へチャージし、４０～５０℃で２～３時間撹拌した。Ｒ２を２時間にわたって２０～３０℃へ調整し、２０～３０℃で４～６時間撹拌した。もたらされる混合物を、ステンレス鋼フィルタードライヤーにおいて濾過した。湿潤ケーキを、ＥＡにより２回（１６＋１４ｋｇ、２～３×）リンスした。ＥＡ（３６ｋｇ、６～７×）を、ステンレス鋼フィルタードライヤーの中へチャージした。２０～３０℃へ調整し、２０～３０℃で２～３時間撹拌した。もたらされる混合物を、ステンレス鋼フィルタードライヤーにおいて濾過した。湿潤ケーキをＥＡにより（１６ｋｇ、２～３×）リンスし、６０～７０℃で減圧下でステンレス鋼フィルタードライヤーによって乾燥させた。材料をふるいにかけ、化合物１の精製カリウム塩（４．１６ｋｇ、純度：９９．８１％；アッセイ：９７．６％；収率：８０％）を得た。図１６を参照を参照されたい。
【0133】
実施例９。化合物１についての塩スクリーニング研究
化合物１の複数の塩形態を、実施例８において調製されたカリウム塩形態に比べた、それらの特性（溶解度、安定性、及び吸湿性が挙げられる）に基づいて評価した（図１６、表１２を参照）。
化合物１の複数の塩形態を、実施例８において調製されたカリウム塩形態に比べた、それらの特性（溶解度、安定性、及び吸湿性が挙げられる）に基づいて評価した（図１６、表１２を参照）。
【表15】
【0134】
出発材料として遊離酸形態Ａ（図１７）を使用して、合計で５０の塩スクリーニング実験を、１０種類の塩形成物質及び５種類の溶媒により遂行した。特徴評価の結果から、合計で１４の塩が塩スクリーニング及び再調製実験において得られ、それらとしては、アンモニウム塩Ｂ／Ｃ型、Ｌ－リジン塩Ａ／Ｂ／Ｃ型、マグネシウム塩Ａ型、コリン塩Ａ型、カルシウム塩Ａ型、Ｌ－アルギニン塩Ａ／Ｂ型、ナトリウム塩Ａ型、トリス塩Ａ／Ｂ型、ジエルチアミン塩Ａ型、及び遊離酸の４つの形態（遊離酸Ａ／Ｂ／Ｃ／Ｄ型を包含する）が挙げられることが示された。ＸＲＰＤ比較によれば、アンモニウム塩Ａ型の名称のサンプルは、遊離形態Ｄ型及びアンモニウム塩の混合物と推測された。
【0135】
特徴評価データ（良好な結晶性、きれいなＤＳＣ信号、整数モル比、高安全性クラス、及び単純な多型性を基準として使用）に基づいて、ナトリウム塩Ａ型（図１８、表１３）、Ｌ－アルギニン塩Ａ型（図１９）、及びマグネシウム塩Ａ型（図２０）を、比較の参照としてのカリウム塩と共に、再調製及び動態学的溶解度評価のために選択した。溶解度評価の結果から、ナトリウム塩は、室温での２４時間で水中で最も高い溶解度を実証したことが示された（約０．４ｍｇ／ｍＬ、３７℃での水中でカリウム塩の溶解度に類似する）。３７℃での人工胃液（ＳＧＦ）中で、カリウム塩が最も高い溶解度（０．１１ｍｇ／ｍＬ）を示し、次にナトリウム塩が続いた。３７℃での絶食時人工腸液（ＦａＳＳＩＦ）中で、マグネシウム塩が最も高い溶解度（約０．０４ｍｇ／ｍＬ）を示し、次に遊離酸が続いた。３７℃での摂食時人工腸液（ＦｅＳＳＩＦ）中で、４つの塩及び遊離酸で類似の溶解度（約０．０２ｍｇ／ｍＬ）が観察された。ＸＲＰＤ結果から、形態変化が、遊離酸を除いて、すべての塩で異なる試験培地中で観察されたことが示された。
【表16】
【0136】
より高い溶解度（遊離酸と比較して）及び基準としての単純な多型性による、動態学的溶解度評価の結果に従って、無水ナトリウム塩Ａ型を、物理化学的安定性評価、吸湿性、及びＰＬＭ試験についての候補として選択し、カリウム塩Ａ型と比較した（表１４）。これらの試験の結果から、以下のことが示された。
１）物理化学的安定性評価：６０℃／密閉及び６０℃／７５％相対湿度下での１及び２週間の貯蔵後に、ナトリウム塩Ａ型について、ＨＰＬＣ純度のマイナーな減少（＜０．１面積％）が観察され、形態変化は無かった。
２）吸湿性：動的水蒸気吸着（ＤＶＳ）の結果から、ナトリウム塩Ａ型がＤＶＳ試験後に形態変化無しでわずかに吸湿性だったことが示された。
３）ＰＬＭ：ナトリウム塩Ａ型サンプルは、＜２０μｍの粒子サイズを備えた不規則雪結晶から構成された。ナトリウム塩及びカリウム塩の特徴評価及び評価データの比較を、表１４中で示す。
１）物理化学的安定性評価：６０℃／密閉及び６０℃／７５％相対湿度下での１及び２週間の貯蔵後に、ナトリウム塩Ａ型について、ＨＰＬＣ純度のマイナーな減少（＜０．１面積％）が観察され、形態変化は無かった。
２）吸湿性：動的水蒸気吸着（ＤＶＳ）の結果から、ナトリウム塩Ａ型がＤＶＳ試験後に形態変化無しでわずかに吸湿性だったことが示された。
３）ＰＬＭ：ナトリウム塩Ａ型サンプルは、＜２０μｍの粒子サイズを備えた不規則雪結晶から構成された。ナトリウム塩及びカリウム塩の特徴評価及び評価データの比較を、表１４中で示す。
【表17】
【0137】
実施例１０。臨床試験において使用される化合物１の製剤化
化合物は、中等度から重度の非肝硬変性非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）の成人の治療のために、経口的に生体利用可能な甲状腺ホルモン受容体β（ＴＨＲ－β）選択的アゴニストである。化合物１は、ＢＣＳクラスＩＶ化合物として分類され、即時放出カプセルとして製剤化された。活性物質の固有溶解度を促進するために、化合物１は薬物物質のカリウム塩形態として単離され、ラウリル硫酸ナトリウムは即時放出製剤において可溶化剤として使用される。製剤化製品は、サイズ０のＨＰＭＣ（ヒドロキシプロピルメチルセルロース）カプセル中で０．５～５０ｍｇの化合物１（遊離酸均等物）を含有するドライブレンドである。可溶化物質に加えて、希釈物質（微結晶性セルロース（ＭＣＣ）、マンニトールなど）、崩壊物質（クロスカルメロースナトリウムなど）、流動化物質（コロイド状二酸化ケイ素など）、及び潤滑物質（ステアリン酸マグネシウムなど）等の他のクラスの賦形剤も調査され、化合物１製剤中で使用された。活性カプセルの定量的単位用量製剤組成を、表１５中で以下で記載される。
化合物は、中等度から重度の非肝硬変性非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）の成人の治療のために、経口的に生体利用可能な甲状腺ホルモン受容体β（ＴＨＲ－β）選択的アゴニストである。化合物１は、ＢＣＳクラスＩＶ化合物として分類され、即時放出カプセルとして製剤化された。活性物質の固有溶解度を促進するために、化合物１は薬物物質のカリウム塩形態として単離され、ラウリル硫酸ナトリウムは即時放出製剤において可溶化剤として使用される。製剤化製品は、サイズ０のＨＰＭＣ（ヒドロキシプロピルメチルセルロース）カプセル中で０．５～５０ｍｇの化合物１（遊離酸均等物）を含有するドライブレンドである。可溶化物質に加えて、希釈物質（微結晶性セルロース（ＭＣＣ）、マンニトールなど）、崩壊物質（クロスカルメロースナトリウムなど）、流動化物質（コロイド状二酸化ケイ素など）、及び潤滑物質（ステアリン酸マグネシウムなど）等の他のクラスの賦形剤も調査され、化合物１製剤中で使用された。活性カプセルの定量的単位用量製剤組成を、表１５中で以下で記載される。
【表18】
【0138】
実施例１１。化合物１の直接的カプセル化製剤の研究
化合物１の直接的カプセル化（ＤＥ）製剤の研究を実行した。この作業は、半自動式または自動式のカプセル充填マシンによる、１ｍｇ、３ｍｇ、１０ｍｇ、５０ｍｇ、及びプラセボのカプセルの調製のためのＤＥプロセスの開発を包含した。製剤の成分、比、充填重量、流動性、及び均一性を、すべて評価した。開発されたプロセスは、将来の臨床試験のための化合物１の薬物製品の製造に好適である。プロトタイプ確認バッチの調製、短期安定性の研究、ＧＭＰ認証、及びデモンストレーション安定性バッチの製造を遂行して、ＧＭＰバッチの製造の成功及び意図される臨床使用のための品質を確実にする。
化合物１の直接的カプセル化（ＤＥ）製剤の研究を実行した。この作業は、半自動式または自動式のカプセル充填マシンによる、１ｍｇ、３ｍｇ、１０ｍｇ、５０ｍｇ、及びプラセボのカプセルの調製のためのＤＥプロセスの開発を包含した。製剤の成分、比、充填重量、流動性、及び均一性を、すべて評価した。開発されたプロセスは、将来の臨床試験のための化合物１の薬物製品の製造に好適である。プロトタイプ確認バッチの調製、短期安定性の研究、ＧＭＰ認証、及びデモンストレーション安定性バッチの製造を遂行して、ＧＭＰバッチの製造の成功及び意図される臨床使用のための品質を確実にする。
【0139】
化合物１の最初の製剤研究の間に、ポロキサマー１８８及び陰イオン性界面活性物質ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）等の可溶化物質を包含する、可溶化物質の型を調査した。ＳＬＳは、化合物１との良好な適合性を示し、化合物１の水溶解度を増加させた。１．５％～５．０％の重量／重量のＳＬＳのレベルを調査した。薬物動態学的なデータから、製剤中の特定の量のＳＬＳを使用することがインビボの生物学的利用能を有意に改善することが示された。したがって、１．５％～５．０％のＳＬＳは、化合物１によるさらなる製剤開発に好適であった。
【0140】
効率的なブレンディングプロセスを、異なる用量レベルで用量均一性の課題に対応するために開発した。０．５ｍｇ～１０ｍｇの用量レベルのために、等量のブレンディングプロセスを開発した。化合物１を、ＳＬＳの全体の量及びＭＣＣの一部の量と等量で最初にブレンドした。次いで、混合物を残りの賦形剤とブレンドし、ふるいを介して通過させ、次いで、再び混合した（ブレンド－ふるい－ブレンドプロセス）。化合物１を、単独での代わりに、賦形剤と一緒に併用することによって、ブレンディングプロセスの間の化合物１の収率損失は、効率的に低減された。ブレンド－ふるい－ブレンドプロセスは、低用量の化合物１を、賦形剤と共に製剤中により高い収率で効果的に均一に取り込み、下流の直接的なカプセル充填または直接的な錠剤化を可能にした。１０ｍｇ～５０ｍｇの製剤のために、上で開発及び記載された等量ブレンドプロセスに加えて、類似のブレンド及びふるいの手順を使用した。各々の用量強度のデモンストレーションバッチ及びＧＭＰバッチは、このブレンドプロセスを使用する最終ブレンドのブレンド均一性結果が、所望される製品仕様を満たすことを示した。
【0141】
異なる用量の化合物１及びプラセボを含有する製剤のカプセル充填重量を、３００ｍｇであるようにデザインしたが、これは、この材料の体積が、最終ブレンドのかさ密度に基づいて、番号０カプセルの半自動式充填の必要性を満たし得るからである。半自動式充填は、臨床用薬物製品の小バッチサイズのみが必要な初期臨床ステージにおいて使用され得る。加えて、完全自動式カプセル充填プロセスも、後期ステージの臨床試験の大スケール必要性を満たすために開発されている。
【0142】
６０℃／７５％の相対湿度のストレス条件下での短期安定性研究から、２週間後に３ｍｇの力価で分解不純物が形成されることが明らかにされた。シリカゲル乾燥剤がパッケージングのために後続して提案され、不純物の形成を減ずることに有効であることが証明された。
【0143】
ＧＭＰ化合物１を使用する、１ｍｇ、３ｍｇ、１０ｍｇ、及び５０ｍｇの力価のデモンストレーション安定性及びＧＭＰバッチの後続する製造を、最終製剤及びプロセスに従って遂行した。分解を最小限にすることにおけるシリカゲル乾燥剤の有効性を、一次的なパッケージング中に含まれる乾燥剤有りまたは無しで、比較安定性研究を介して評価した。安定性データから、乾燥剤有りのパッケージングが４０℃／７５％の相対湿度の条件で、分解不純物の形成を有意に遅滞させることが明瞭に実証された。したがって、１ｇの乾燥剤有りのパッケージングが、製品の質を改善し、製品のシェルフライフを増加させると決定された。
【0144】
実施例１２。ＬＤＬ－ｃの上昇の有る健康な対象における化合物１の臨床評価
【0145】
目的：ＬＤＬ－ｃの上昇の有る健康な対象における化合物１の複数用量漸増の全体的な安全性及び忍容性を査定する。
【0146】
副次目的：化合物１の複数用量漸増後にＬＤＬ－ｃの上昇の有る健康な対象における化合物１のＰＫ及びＰＤを評価する。
【0147】
主要評価項目：治療下で出現した有害事象（ＴＥＡＥ）、バイタルサイン、臨床検査パラメーター、及び心電図（ＥＣＧ）モニタリング。
【0148】
副次評価項目：化合物１についての血漿ＰＫパラメーター、ＬＤＬ－ｃ及び他の脂質パラメーターを包含するＴＨＲ－βアゴニスト標的エンゲージメントのＰＤマーカー、ならびに性ホルモン結合グロブリン（ＳＨＢＧ）。
【0149】
ＬＤＬ－ｃの軽度の上昇の有る健康なボランティアは、化合物１（ｎ＝６）またはプラセボ（ｎ＝２）に対して３：１で無作為化した。化合物１へ無作為化されたボランティアに、研究のＭＡＤコホートにおいて１、３、６、または１０ｍｇの化合物１の複数回用量を１４日間１日１回投与した。
【0150】
結果
化合物１は、概して、すべての化合物１治療群及びプラセボにわたって、類似のＡＥの発生率で安全且つ良好な忍容性を示した。すべてのＡＥは、軽度から中等度であり、明らかな用量関係性は無かった。１名のプラセボ対象（１ｍｇのコホート）は、同意の撤回に起因して研究を初期で中止し、すべて化合物１対象は、早期中断無しに研究を完了した。研究中止基準または用量漸増中止基準は満たされなかった。
化合物１は、概して、すべての化合物１治療群及びプラセボにわたって、類似のＡＥの発生率で安全且つ良好な忍容性を示した。すべてのＡＥは、軽度から中等度であり、明らかな用量関係性は無かった。１名のプラセボ対象（１ｍｇのコホート）は、同意の撤回に起因して研究を初期で中止し、すべて化合物１対象は、早期中断無しに研究を完了した。研究中止基準または用量漸増中止基準は満たされなかった。
【0151】
肝臓生化学：ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＡＬＰ、及び総ビリルビン値は、治療群にわたって全体的に類似していた。化合物１を投与された対象は、ＡＬＴが≧２×ＵＬＮへ増加しなかった。ＤＩＬＩの証拠は無い。甲状腺ホルモン：甲状腺機能亢進症／甲状腺機能低下症の症状は無い。平均ＴＳＨ及び遊離Ｔ３値は、高度に変動したが、概して群にわたって類似していた。遊離Ｔ４の用量依存的な下落は、他のＴＨＲ－アゴニストにより観察された末梢の甲状腺ホルモン調節と一致して、化合物１群の中で観察された。他の検査査定（例えば臨床化学、血液学）は、明らかな傾向を示さなかった。
【0152】
１、３、６、及び１０ｍｇの化合物１の１４日間の１日１回の投薬は、全体的に安全且つ良好な忍容性を示し、甲状腺機能低下症／甲状腺機能亢進症またはＴＨＲ－αアゴニズムの臨床的徴候または症状は無かった。化合物１は、用量比例するＰＫを呈し、低い変動性及び１日１回の投薬に好適な半減期であった。化合物１は、用量依存的な様式で、ＳＨＢＧ（肝臓のＴＨＲ－βエンゲージメントの重要なマーカー）を増加させた。化合物１は、アテローム発生性の脂質レベル（ＬＤＬ－ｃ、Ａｐｏ Ｂ、総コレステロール、及びトリグリセリドを包含する）の血中循環の有意な減少を導いた。総合すると、ＰＤデータから、化合物１の投与が、肝臓中の着実なＴＨＲ－β標的エンゲージメントを導いたことが示される。
【0153】
実施例１３：オスの生検で確認されたＤＩＯ－ＮＡＳＨマウスにおける、代謝パラメーター、肝臓病理、及び線維化ステージを包含するＮＡＦＬＤ活動性スコアに対する、化合物２及び化合物１による１２週間の単剤治療及び併用治療の効果
【表19-1】
【表19-2】
【0154】
導入
非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）は、肝脂肪変性の情況で肝炎症及び損傷が現われる疾患であり、おそらく、高レベルの疾患治癒を達成するために、疾患の複数の態様を標的とする併用療法を要求するだろう。代謝経路の恒常性を維持する核ホルモン受容体であるファルネソイドＸ受容体（ＦＸＲ）及びＦＸＲに相補的な代謝経路を調節する核ホルモン受容体である甲状腺ホルモン受容体β（ＴＨＲ－β）の小分子アゴニストは、ＮＡＳＨの治療のために開発中である。化合物２（ＦＸＲの非ステロイド性アゴニスト）及び化合物１（肝臓に分布する、ＴＨＲ－βの選択的アゴニスト）を、ＮＡＳＨの食餌誘導性マウスモデルにおいて単独及び併用で評価した。
非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）は、肝脂肪変性の情況で肝炎症及び損傷が現われる疾患であり、おそらく、高レベルの疾患治癒を達成するために、疾患の複数の態様を標的とする併用療法を要求するだろう。代謝経路の恒常性を維持する核ホルモン受容体であるファルネソイドＸ受容体（ＦＸＲ）及びＦＸＲに相補的な代謝経路を調節する核ホルモン受容体である甲状腺ホルモン受容体β（ＴＨＲ－β）の小分子アゴニストは、ＮＡＳＨの治療のために開発中である。化合物２（ＦＸＲの非ステロイド性アゴニスト）及び化合物１（肝臓に分布する、ＴＨＲ－βの選択的アゴニスト）を、ＮＡＳＨの食餌誘導性マウスモデルにおいて単独及び併用で評価した。
【0155】
材料及び方法
動物取り扱い及び研究デザイン
Ｃ５７ＢＬ／６ＪＲｊオスマウス（ｎ＝１３８）に、処理開始前の３５週間、Ｇｕｂｒａ Ａｍｙｌｉｎ ＮＡＳＨ（ＧＡＮ）食餌（４０％の脂肪、２２％のフルクトース、２％のコレステロール［Ｄ０９１００３１０、Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｄｉｅｔｓ］）または低脂肪固形食餌を与えた。処理の前に、すべての動物に、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）活動性スコアリング（ＮＡＳ）及び線維化ステージングシステムを使用する、組織学的確認（脂肪変性スコア≧２及び線維化ステージ≧１）及び階層化のために、肝生検を行った。ＧＡＮ食餌（ＤＩＯ－ＧＡＮ）の食餌誘導性肥満マウスを、ピクロシリウスレッド（ＰＳＲ）染色のパーセント面積に基づいて、８つの処理群（表１６）へ無作為化した。ＤＩＯ－ＧＡＮマウス（１つの群あたりｎ＝１６）に、ビヒクル（トリスバッファー中の０．５％のＨＰＭＣ＋０．２％のＴｗｅｅｎ ８０［５０ｍＭ、ｐＨ８］）、化合物２（１０ｍｇ／ｋｇ）、化合物１（０．３ｍｇ／ｋｇ［低］、２ｍｇ／ｋｇ［中］、または１０ｍｇ／ｋｇ［高］）、または化合物２の化合物１（併用－低、併用－中、または併用－高）との併用処理による処理（ＰＯ、ＱＤ）を１２週間与えた。ビヒクル投薬で低脂肪固形飼料を与えた対照を、健康な対照（ｎ＝１０）として供した。マウスを、それぞれの食餌（ＧＡＮまたは低脂肪固形飼料）で研究の継続期間の間維持した。対象内の比較（処理前ｖｓ処理後）を、肝生検組織病理学スコアのために遂行した。最終的な定量的評価項目は、血漿／肝臓生化学、肝臓組織形態計測、及びＲＮＡｓｅｑによる肝臓トランスクリプトーム分析を含んでいた。
動物取り扱い及び研究デザイン
Ｃ５７ＢＬ／６ＪＲｊオスマウス（ｎ＝１３８）に、処理開始前の３５週間、Ｇｕｂｒａ Ａｍｙｌｉｎ ＮＡＳＨ（ＧＡＮ）食餌（４０％の脂肪、２２％のフルクトース、２％のコレステロール［Ｄ０９１００３１０、Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｄｉｅｔｓ］）または低脂肪固形食餌を与えた。処理の前に、すべての動物に、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）活動性スコアリング（ＮＡＳ）及び線維化ステージングシステムを使用する、組織学的確認（脂肪変性スコア≧２及び線維化ステージ≧１）及び階層化のために、肝生検を行った。ＧＡＮ食餌（ＤＩＯ－ＧＡＮ）の食餌誘導性肥満マウスを、ピクロシリウスレッド（ＰＳＲ）染色のパーセント面積に基づいて、８つの処理群（表１６）へ無作為化した。ＤＩＯ－ＧＡＮマウス（１つの群あたりｎ＝１６）に、ビヒクル（トリスバッファー中の０．５％のＨＰＭＣ＋０．２％のＴｗｅｅｎ ８０［５０ｍＭ、ｐＨ８］）、化合物２（１０ｍｇ／ｋｇ）、化合物１（０．３ｍｇ／ｋｇ［低］、２ｍｇ／ｋｇ［中］、または１０ｍｇ／ｋｇ［高］）、または化合物２の化合物１（併用－低、併用－中、または併用－高）との併用処理による処理（ＰＯ、ＱＤ）を１２週間与えた。ビヒクル投薬で低脂肪固形飼料を与えた対照を、健康な対照（ｎ＝１０）として供した。マウスを、それぞれの食餌（ＧＡＮまたは低脂肪固形飼料）で研究の継続期間の間維持した。対象内の比較（処理前ｖｓ処理後）を、肝生検組織病理学スコアのために遂行した。最終的な定量的評価項目は、血漿／肝臓生化学、肝臓組織形態計測、及びＲＮＡｓｅｑによる肝臓トランスクリプトーム分析を含んでいた。
【表20】
【0156】
肝生検のプロセシング及びスコアリング
ホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）肝生検を、１０％の中性緩衝ホルマリンの中へ肝臓サンプルを約２４時間置き、次いで７０％のエタノールへ移し、その後４Ｃで貯蔵することによって調製した。ＦＦＰＥを、Ｈｉｓｔｏｋｉｎｅｔｔｅ中に置いて浸透させ、その後ブロック中に包埋した。次いで生検組織をミクロトームを使用して３μｍで切断し、切片をスライド上にマウントした。肝切片を、ヘマトキシリン・エオシン（Ｈ＆Ｅ）により染色して脂肪変性、炎症、及び風船化を査定し、ＰＳＲにより染色して線維化を査定した。追加で、スライドをプロセシングして、免疫組織化学（ＩＨＣ）によるＩ型コラーゲン（Ｃｏｌ１ａ１）、ガレクチン－３（Ｇａｌ－３）、及び平滑筋肉アクチン（α－ＳＭＡ）タンパク質の発現を検出した。Ｈ＆Ｅ染色のために、スライドを、マイヤーヘマトキシリン（Ｄａｋｏ）中でインキュベーションし、水道水により洗浄し、エオシンＹ溶液（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）中で染色し、脱水し、カバーグラスをかけた。ＰＳＲのために、スライドを、ワイゲルト鉄ヘマトキシリン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）中でインキュベーションし、水道水中で洗浄し、ピクロ・シリウスレッド（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）中で染色し、酸性水中で２回洗浄した。過剰な水分をスライドを振って除去し、次いでスライドをエタノールにより脱水し、キシレン中で透明化し、カバースリップをかけた。以前に記載されるように（Ｋｌｅｉｎｅｒ ｅｔ ａｌ．２００５）、ＮＡＳ及び線維化ステージをスコアリングした。ＮＡＳは、脂肪変性、炎症、及び風船化のスコアの非加重和を表わし、０～８の範囲であり（表１７）；線維化ステージは、０（線維化無し）から４（肝硬変）の範囲である。Ｃｏｌ１ａ１、Ｇａｌ－３、及びα－ＳＭＡの検出のために、ＩＨＣを標準的な手順によって遂行した。簡潔には、抗原性回復及び内因性ペルオキシダーゼ活性のブロック後に、スライドを、一次抗体（Ｃｏｌ１ａ１：Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｃａｔ．１３１０－０１；Ｇａｌ－３：Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、Ｃａｔ．１２５４０２；α－ＳＭＡ：Ａｂｃａｍ、Ｃａｔ．Ａｂ１２４９６４）によりインキュベーションした。一次抗体を、ポリマー性ＨＲＰ－リンカー抗体コンジュゲートを使用して検出した。一次抗体を、クロモゲンとしてのＤＡＢにより可視化した。最終的に、切片をヘマトキシリン中で対比染色し、カバースリップをかけた。
ホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）肝生検を、１０％の中性緩衝ホルマリンの中へ肝臓サンプルを約２４時間置き、次いで７０％のエタノールへ移し、その後４Ｃで貯蔵することによって調製した。ＦＦＰＥを、Ｈｉｓｔｏｋｉｎｅｔｔｅ中に置いて浸透させ、その後ブロック中に包埋した。次いで生検組織をミクロトームを使用して３μｍで切断し、切片をスライド上にマウントした。肝切片を、ヘマトキシリン・エオシン（Ｈ＆Ｅ）により染色して脂肪変性、炎症、及び風船化を査定し、ＰＳＲにより染色して線維化を査定した。追加で、スライドをプロセシングして、免疫組織化学（ＩＨＣ）によるＩ型コラーゲン（Ｃｏｌ１ａ１）、ガレクチン－３（Ｇａｌ－３）、及び平滑筋肉アクチン（α－ＳＭＡ）タンパク質の発現を検出した。Ｈ＆Ｅ染色のために、スライドを、マイヤーヘマトキシリン（Ｄａｋｏ）中でインキュベーションし、水道水により洗浄し、エオシンＹ溶液（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）中で染色し、脱水し、カバーグラスをかけた。ＰＳＲのために、スライドを、ワイゲルト鉄ヘマトキシリン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）中でインキュベーションし、水道水中で洗浄し、ピクロ・シリウスレッド（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）中で染色し、酸性水中で２回洗浄した。過剰な水分をスライドを振って除去し、次いでスライドをエタノールにより脱水し、キシレン中で透明化し、カバースリップをかけた。以前に記載されるように（Ｋｌｅｉｎｅｒ ｅｔ ａｌ．２００５）、ＮＡＳ及び線維化ステージをスコアリングした。ＮＡＳは、脂肪変性、炎症、及び風船化のスコアの非加重和を表わし、０～８の範囲であり（表１７）；線維化ステージは、０（線維化無し）から４（肝硬変）の範囲である。Ｃｏｌ１ａ１、Ｇａｌ－３、及びα－ＳＭＡの検出のために、ＩＨＣを標準的な手順によって遂行した。簡潔には、抗原性回復及び内因性ペルオキシダーゼ活性のブロック後に、スライドを、一次抗体（Ｃｏｌ１ａ１：Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｃａｔ．１３１０－０１；Ｇａｌ－３：Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、Ｃａｔ．１２５４０２；α－ＳＭＡ：Ａｂｃａｍ、Ｃａｔ．Ａｂ１２４９６４）によりインキュベーションした。一次抗体を、ポリマー性ＨＲＰ－リンカー抗体コンジュゲートを使用して検出した。一次抗体を、クロモゲンとしてのＤＡＢにより可視化した。最終的に、切片をヘマトキシリン中で対比染色し、カバースリップをかけた。
【表21】
【0157】
肝酵素、血漿脂質、及びＣＫ１８ Ｍ３０の分析
最終的な血液を、イソフルラン（２～３％）により麻酔したマウスからの心臓穿刺によって収集し、抗凝固物質と混合し、４Ｃに置き、その後３０００×ｇで１０分間遠心分離した。血漿上清を新しいチューブへ移し、直ちにドライアイス上で凍結し、－８０Ｃで保存した。アラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）、アスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）、トリグリセリド（ＴＧ）、総コレステロール（ＴＣ）、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ－ｃ）、及び低密度リポタンパク質（ＬＤＬ－ｃ）を、製造者の指示に従って、Ｃｏｂａｓ ｃ ５０１自動分析器上で市販キット（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を使用して測定した。サイトケラチン１８ Ｍ３０（ＣＫ１８ Ｍ３０）を、製造者の指示に従って、商業用ＥＬＩＳＡキット（Ｃｕｓａｂｉｏ）を使用して、血漿から測定した。
最終的な血液を、イソフルラン（２～３％）により麻酔したマウスからの心臓穿刺によって収集し、抗凝固物質と混合し、４Ｃに置き、その後３０００×ｇで１０分間遠心分離した。血漿上清を新しいチューブへ移し、直ちにドライアイス上で凍結し、－８０Ｃで保存した。アラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）、アスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）、トリグリセリド（ＴＧ）、総コレステロール（ＴＣ）、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ－ｃ）、及び低密度リポタンパク質（ＬＤＬ－ｃ）を、製造者の指示に従って、Ｃｏｂａｓ ｃ ５０１自動分析器上で市販キット（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を使用して測定した。サイトケラチン１８ Ｍ３０（ＣＫ１８ Ｍ３０）を、製造者の指示に従って、商業用ＥＬＩＳＡキット（Ｃｕｓａｂｉｏ）を使用して、血漿から測定した。
【0158】
肝臓脂質の分析
肝臓サンプルをホモジナイズし、ＴＧ及びＴＣを５％のＮＰ－４０中で９０Ｃの加熱（２×）によって抽出した。サンプルを遠心分離し、上清中のＴＧ及びＴＣの含有量を、製造者の指示に従って、Ｃｏｂａｓ ｃ ５０１自動分析器で市販キット（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を使用して測定した。
肝臓サンプルをホモジナイズし、ＴＧ及びＴＣを５％のＮＰ－４０中で９０Ｃの加熱（２×）によって抽出した。サンプルを遠心分離し、上清中のＴＧ及びＴＣの含有量を、製造者の指示に従って、Ｃｏｂａｓ ｃ ５０１自動分析器で市販キット（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を使用して測定した。
【0159】
ＲＮＡｓｅｑによる肝臓トランスクリプトーム分析
組織を収集し、液体窒素中で急冷凍結し、プロセシングまで－８０Ｃで保存した。ＲＮＡを、ＮｕｃｌｅｏＳｐｉｎキット（ＭＡＣＨＥＲＥＹ－ＮＡＧＥＬ）を使用して単離した。各々のサンプルから精製された合計で１０ｎｇ～１μｇのＲＮＡを使用して、ＮＥＢＮｅｘｔ Ｕｔｒａ ＩＩ Ｄｉｒｅｃｔｉｏｎａｌ ＲＮＡ Ｌｉｂｒａｒｙ Ｐｒｅｐ Ｋｉｔ ｆｏｒ Ｉｌｌｕｍｉｎａ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ）を使用して、ｃＤＮＡライブラリーを生成した。次いでｃＤＮＡライブラリーを、ＮｅｘｔＳｅｑ ５００／５５０ Ｈｉｇｈ Ｏｕｔｐｕｔ Ｋｉｔ Ｖ２（Ｉｌｌｕｍｉｎａ）を使用して、ＮｅｘｔＳｅｑ ５００でシーケンスした。シーケンシングデータを、Ｓｐｌｉｃｅｄ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｓ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｔｏ ａ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（ＳＴＡＲ）ソフトウェアを使用して、マウスゲノムへアライメントさせた。差次的に発現された遺伝子を、ＲパッケージＤＥＳｅｑ２を使用して同定した。
組織を収集し、液体窒素中で急冷凍結し、プロセシングまで－８０Ｃで保存した。ＲＮＡを、ＮｕｃｌｅｏＳｐｉｎキット（ＭＡＣＨＥＲＥＹ－ＮＡＧＥＬ）を使用して単離した。各々のサンプルから精製された合計で１０ｎｇ～１μｇのＲＮＡを使用して、ＮＥＢＮｅｘｔ Ｕｔｒａ ＩＩ Ｄｉｒｅｃｔｉｏｎａｌ ＲＮＡ Ｌｉｂｒａｒｙ Ｐｒｅｐ Ｋｉｔ ｆｏｒ Ｉｌｌｕｍｉｎａ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ）を使用して、ｃＤＮＡライブラリーを生成した。次いでｃＤＮＡライブラリーを、ＮｅｘｔＳｅｑ ５００／５５０ Ｈｉｇｈ Ｏｕｔｐｕｔ Ｋｉｔ Ｖ２（Ｉｌｌｕｍｉｎａ）を使用して、ＮｅｘｔＳｅｑ ５００でシーケンスした。シーケンシングデータを、Ｓｐｌｉｃｅｄ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｓ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｔｏ ａ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（ＳＴＡＲ）ソフトウェアを使用して、マウスゲノムへアライメントさせた。差次的に発現された遺伝子を、ＲパッケージＤＥＳｅｑ２を使用して同定した。
【0160】
トラフ血漿化合物レベルの分析
最終的な血漿サンプルを、化合物（複数可）の最後の投与のおよそ２１～２４時間後に心臓穿刺によって収集した。最終的な血漿サンプルを、Ｔｒｉｐｌｅ Ｑｕａｄ ６５００＋装置を使用して、高分解能ＬＣ－ＭＳ／ＭＳによって分析した。２０μＬの血漿サンプルを、２００μＬの内部標準液（アセトニトリル中の１００ｎｇ／ｍＬのラベタロール＋１００ｎｇ／ｍＬのトルブタミド）と混合し、ボルテックスで撹拌し、４，０００ｒｐｍで４℃で１５分間遠心分離した。上清（１００μＬ）をサンプルプレートへ移し、水（１００μＬ）と混合し、１０分間振盪し（８００ｒｐｍ）、その後１．７μｍ、２．１×５０ｍｍのＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ１８カラム（Ｗａｔｅｒｓ）上へ注入（２μＬ）し、０．６ ｍＬ／分間の流速で、水中の０．１％のギ酸（移動相Ａ）及びアセトニトリル中の０．１％のギ酸（移動相Ｂ）の勾配（表１８）移動相を使用した。２つの内部スタンダード（スタンダード１（保持時間：０．８７分間）及びスタンダード２（保持時間：０．９６分間））を、それぞれ化合物２（保持時間：０．８７分間）及び化合物１（保持時間：０．９７分間）の定量のために使用した。内部スタンダード（保持時間：０．７６分間）を、化合物２のグルクロニド代謝物質（保持時間：０．７７分間）の定量のために使用した。較正曲線（１～３０００ｎｇ／ｍＬ）を、各々の分析物のためにマウス血漿（ビヒクル対照をプールした）のマトリックスにおいて生成した。
最終的な血漿サンプルを、化合物（複数可）の最後の投与のおよそ２１～２４時間後に心臓穿刺によって収集した。最終的な血漿サンプルを、Ｔｒｉｐｌｅ Ｑｕａｄ ６５００＋装置を使用して、高分解能ＬＣ－ＭＳ／ＭＳによって分析した。２０μＬの血漿サンプルを、２００μＬの内部標準液（アセトニトリル中の１００ｎｇ／ｍＬのラベタロール＋１００ｎｇ／ｍＬのトルブタミド）と混合し、ボルテックスで撹拌し、４，０００ｒｐｍで４℃で１５分間遠心分離した。上清（１００μＬ）をサンプルプレートへ移し、水（１００μＬ）と混合し、１０分間振盪し（８００ｒｐｍ）、その後１．７μｍ、２．１×５０ｍｍのＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ１８カラム（Ｗａｔｅｒｓ）上へ注入（２μＬ）し、０．６ ｍＬ／分間の流速で、水中の０．１％のギ酸（移動相Ａ）及びアセトニトリル中の０．１％のギ酸（移動相Ｂ）の勾配（表１８）移動相を使用した。２つの内部スタンダード（スタンダード１（保持時間：０．８７分間）及びスタンダード２（保持時間：０．９６分間））を、それぞれ化合物２（保持時間：０．８７分間）及び化合物１（保持時間：０．９７分間）の定量のために使用した。内部スタンダード（保持時間：０．７６分間）を、化合物２のグルクロニド代謝物質（保持時間：０．７７分間）の定量のために使用した。較正曲線（１～３０００ｎｇ／ｍＬ）を、各々の分析物のためにマウス血漿（ビヒクル対照をプールした）のマトリックスにおいて生成した。
【表22】
【0161】
結果
研究デザインの概要
食餌誘導性肥満であるＧｕｂｒａ Ａｍｙｌｉｎ ＮＡＳＨモデル（ＤＩＯ－ＧＡＮ）は、ヒトＮＡＳＨの組織病理学特色の多くを再現する（Ｈａｎｓｅｎ ２０２０）。ＤＩＯ－ＧＡＮモデルを使用して、ＦＸＲアゴニスト（化合物２）及びＴＨＲ－βアゴニスト（化合物１）の有効性を、単一の薬剤として及び併用で査定した。ＮＡＳＨ疾患を誘導するために、Ｃ５７ＢＬ／６ＪＲｊマウスを、脂肪、コレステロール、及びフルクトースの高い食餌（ＧＡＮ食餌）で、３５週間を超えて維持した。治療介入の前に、マウスを生検して、ＮＡＳＨ疾患及び線維化重症度を査定し、脂肪変性スコア＜２及び線維化ステージ＜１のマウスを研究から除外した。次いでＤＩＯ－ＧＡＮマウスを、処理前生検のピクロシリウスレッド（ＰＳＲ）染色のパーセント分画面積、そして全身エコー－磁気共鳴イメージング（ＥｃｈｏＭＲＩ）によって決定された体脂肪組織質量に基づいて、８つの処理群（１つの群あたりｎ＝１６）へと無作為化した。単剤治療群において、化合物２を、１０ｍｇ／ｋｇの用量で１日１回の経口強制投与によって投与し、その一方で、化合物１を、０．３（化合物１－低）、２（化合物１－中）または１０（化合物１－高）ｍｇ／ｋｇの用量レベルで１日１回の経口強制投与によって投与した。併用処理群において、化合物２（１０ｍｇ／ｋｇ）の一定用量レベルを、低用量、中用量、及び高用量の化合物１と組み合わせた（すなわち、それぞれ併用－低、併用－中、併用－高）。経口強制投与によってビヒクルを１日１回投与したＤＩＯ－ＧＡＮマウスを対照として供した。マウスを合計で１２週間処理し、研究を通してＧＡＮ食餌で維持した。研究を通して正常な食餌で維持した痩せたマウス（ｎ＝１０）を健康な対照として供した。
研究デザインの概要
食餌誘導性肥満であるＧｕｂｒａ Ａｍｙｌｉｎ ＮＡＳＨモデル（ＤＩＯ－ＧＡＮ）は、ヒトＮＡＳＨの組織病理学特色の多くを再現する（Ｈａｎｓｅｎ ２０２０）。ＤＩＯ－ＧＡＮモデルを使用して、ＦＸＲアゴニスト（化合物２）及びＴＨＲ－βアゴニスト（化合物１）の有効性を、単一の薬剤として及び併用で査定した。ＮＡＳＨ疾患を誘導するために、Ｃ５７ＢＬ／６ＪＲｊマウスを、脂肪、コレステロール、及びフルクトースの高い食餌（ＧＡＮ食餌）で、３５週間を超えて維持した。治療介入の前に、マウスを生検して、ＮＡＳＨ疾患及び線維化重症度を査定し、脂肪変性スコア＜２及び線維化ステージ＜１のマウスを研究から除外した。次いでＤＩＯ－ＧＡＮマウスを、処理前生検のピクロシリウスレッド（ＰＳＲ）染色のパーセント分画面積、そして全身エコー－磁気共鳴イメージング（ＥｃｈｏＭＲＩ）によって決定された体脂肪組織質量に基づいて、８つの処理群（１つの群あたりｎ＝１６）へと無作為化した。単剤治療群において、化合物２を、１０ｍｇ／ｋｇの用量で１日１回の経口強制投与によって投与し、その一方で、化合物１を、０．３（化合物１－低）、２（化合物１－中）または１０（化合物１－高）ｍｇ／ｋｇの用量レベルで１日１回の経口強制投与によって投与した。併用処理群において、化合物２（１０ｍｇ／ｋｇ）の一定用量レベルを、低用量、中用量、及び高用量の化合物１と組み合わせた（すなわち、それぞれ併用－低、併用－中、併用－高）。経口強制投与によってビヒクルを１日１回投与したＤＩＯ－ＧＡＮマウスを対照として供した。マウスを合計で１２週間処理し、研究を通してＧＡＮ食餌で維持した。研究を通して正常な食餌で維持した痩せたマウス（ｎ＝１０）を健康な対照として供した。
【0162】
体重、食物摂取、及び肝重量に対する処理の効果
化合物２単独による処理及び化合物１と併用する処理（併用－低用量、併用－中用量、及び併用－高用量）は、研究の間の体重を減少させた（図３０Ａ）。研究の終了時で、化合物２、併用－中、及び併用－高の処理群は、ＤＩＯ－ＧＡＮビヒクル対照よりも有意に低下させた（図３０Ｂ）。体重の減少は、食物摂取の減少と関連するように思われなかった（図３１）。すべての処理群は肝腫大を有意に改善し（図３２Ａ）、肝重量で最も大きい低減は、併用処理群（併用－中及び併用－高）において観察され、脾臓重量の変化は有意ではなかった（図３２Ｂ）。
化合物２単独による処理及び化合物１と併用する処理（併用－低用量、併用－中用量、及び併用－高用量）は、研究の間の体重を減少させた（図３０Ａ）。研究の終了時で、化合物２、併用－中、及び併用－高の処理群は、ＤＩＯ－ＧＡＮビヒクル対照よりも有意に低下させた（図３０Ｂ）。体重の減少は、食物摂取の減少と関連するように思われなかった（図３１）。すべての処理群は肝腫大を有意に改善し（図３２Ａ）、肝重量で最も大きい低減は、併用処理群（併用－中及び併用－高）において観察され、脾臓重量の変化は有意ではなかった（図３２Ｂ）。
【0163】
体重組成に対する処理の効果
身体組成を、全身ＥｃｈｏＭＲＩによって研究のベースライン（－１週目）及び１１週目で決定して、除脂肪組織及び脂肪組織の相対レベルを、体重のパーセンテージとして決定した。除脂肪組織及び脂肪組織のベースラインレベルは、処理群にわたって良好にバランスがとれていた（図３３Ａ及び３３Ｂ）。化合物２による処理及び化合物１との併用による処理は、１１週目で脂肪組織のレベルを低減させた（図３４Ａ）。相対除脂肪組織質量の有意な増加は、化合物２及び併用処理群において観察された（図３４Ｂ）。
身体組成を、全身ＥｃｈｏＭＲＩによって研究のベースライン（－１週目）及び１１週目で決定して、除脂肪組織及び脂肪組織の相対レベルを、体重のパーセンテージとして決定した。除脂肪組織及び脂肪組織のベースラインレベルは、処理群にわたって良好にバランスがとれていた（図３３Ａ及び３３Ｂ）。化合物２による処理及び化合物１との併用による処理は、１１週目で脂肪組織のレベルを低減させた（図３４Ａ）。相対除脂肪組織質量の有意な増加は、化合物２及び併用処理群において観察された（図３４Ｂ）。
【0164】
血漿及び肝臓の脂質のレベルに対する処理の効果
すべての処理群は、血漿総コレステロール（ＴＣ）を有意に低減させ（図３５ＡＡ）、最も大きい低減は、併用処理群（併用－中及び併用－高）において観察され、類似の傾向は、肝臓におけるＴＣについて観察された（図３５Ｂ）。血漿の低密度リポタンパク質コレステロール及び高密度リポタンパク質コレステロール（それぞれＨＤＬ－ｃ及びＬＤＬ－ｃ）の低減は、ＴＣに対して観察された効果と一致していた。化合物２及び化合物１－高は、併用処理と同様に、血漿トリグリセリド（ＴＧ）を有意に低減させた（図３６Ａ）。肝臓のＴＧレベルは、併用－高群のみにおいて有意に低減された（図３６Ｂ）。
すべての処理群は、血漿総コレステロール（ＴＣ）を有意に低減させ（図３５ＡＡ）、最も大きい低減は、併用処理群（併用－中及び併用－高）において観察され、類似の傾向は、肝臓におけるＴＣについて観察された（図３５Ｂ）。血漿の低密度リポタンパク質コレステロール及び高密度リポタンパク質コレステロール（それぞれＨＤＬ－ｃ及びＬＤＬ－ｃ）の低減は、ＴＣに対して観察された効果と一致していた。化合物２及び化合物１－高は、併用処理と同様に、血漿トリグリセリド（ＴＧ）を有意に低減させた（図３６Ａ）。肝臓のＴＧレベルは、併用－高群のみにおいて有意に低減された（図３６Ｂ）。
【0165】
肝酵素に対する処理の効果
化合物１による単剤処理（低、中、及び高）は、ＤＩＯ－ＧＡＮビヒクル対照に比べて、ＡＬＴレベルを有意に低下させた（図３７Ａ）。ＡＬＴレベルは、併用処理によって有意に低減されなかった。ＡＳＴレベルはＡＬＴに類似の傾向を示したが、処理群のどれもＤＩＯ－ＧＡＮビヒクル対照とは有意に異なっていなかった（図３７Ｂ）。ＡＬＰレベルは、処理群のうちのどれもＤＩＯ－ＧＡＮビヒクル対照とは有意に異なっていなかったが、ＡＬＰは、ＤＩＯ－ＧＡＮビヒクル対照に比べて、単剤治療群（化合物２、化合物１－低、及び化合物１－中）において数値的により低く、併用－中処理群及び併用－高処理群においてより高かった（図３８）。
化合物１による単剤処理（低、中、及び高）は、ＤＩＯ－ＧＡＮビヒクル対照に比べて、ＡＬＴレベルを有意に低下させた（図３７Ａ）。ＡＬＴレベルは、併用処理によって有意に低減されなかった。ＡＳＴレベルはＡＬＴに類似の傾向を示したが、処理群のどれもＤＩＯ－ＧＡＮビヒクル対照とは有意に異なっていなかった（図３７Ｂ）。ＡＬＰレベルは、処理群のうちのどれもＤＩＯ－ＧＡＮビヒクル対照とは有意に異なっていなかったが、ＡＬＰは、ＤＩＯ－ＧＡＮビヒクル対照に比べて、単剤治療群（化合物２、化合物１－低、及び化合物１－中）において数値的により低く、併用－中処理群及び併用－高処理群においてより高かった（図３８）。
【0166】
肝臓組織学
ＮＡＦＬＤ活動性スコア（ＮＡＳ）
ＮＡＦＬＤ活動性スコア（ＮＡＳ）を使用して、処理の組織学的効果を査定した。ＮＡＳは、脂肪変性、炎症、及び風船化の組織学的スコアの非加重和として定義され、０～８の範囲であり得る。ＮＡＳを、各々の動物について、処理の前（ベースライン）及び処理の１２週間後の研究の終了時に決定した。ＮＡＳは処理群にわたって良好にバランスがとれており、大部分のマウスにおいてベースラインで５～６のＮＡＳ範囲であった（図３９Ａ）。１２週間の処理後に、ＮＡＳは大部分の処理群において有意に改善され、最も顕著な改善が併用処理により観察された（図３９Ｂ）。化合物２処理群において、動物の５６％が、比較して、化合物１－低処理群、化合物１－中処理群、及び化合物１－高処理群において、それぞれ３１％、２７％、及び６２％が、≧１ポイントのＮＡＳ改善を示した（表１９）。併用処理はより有効であり、マウスの６９％、８１％、及び１００％は、それぞれ併用－低、併用－中、及び併用－高の併用処理群において≧１ポイントのＮＡＳ改善を示した。加えて、ＮＡＳ改善の大きさは、併用処理群においてより大きかった。化合物２処理群におけるマウスの０％に、＞１ポイントのＮＡＳ改善があったが、併用－低、併用－中、及び併用－高の併用群におけるマウスのそれぞれ１９％、２５％、及び４３％で、≧２ポイントのＮＡＳ改善が達成された。これらの結果は化合物１単剤治療群より優れており、化合物１－低用量群、化合物１－中用量群、及び化合物１－高用量群において、それぞれ０％、７％、及び２５％のマウスは、≧２ポイントのＮＡＳ改善を達成した。
ＮＡＦＬＤ活動性スコア（ＮＡＳ）
ＮＡＦＬＤ活動性スコア（ＮＡＳ）を使用して、処理の組織学的効果を査定した。ＮＡＳは、脂肪変性、炎症、及び風船化の組織学的スコアの非加重和として定義され、０～８の範囲であり得る。ＮＡＳを、各々の動物について、処理の前（ベースライン）及び処理の１２週間後の研究の終了時に決定した。ＮＡＳは処理群にわたって良好にバランスがとれており、大部分のマウスにおいてベースラインで５～６のＮＡＳ範囲であった（図３９Ａ）。１２週間の処理後に、ＮＡＳは大部分の処理群において有意に改善され、最も顕著な改善が併用処理により観察された（図３９Ｂ）。化合物２処理群において、動物の５６％が、比較して、化合物１－低処理群、化合物１－中処理群、及び化合物１－高処理群において、それぞれ３１％、２７％、及び６２％が、≧１ポイントのＮＡＳ改善を示した（表１９）。併用処理はより有効であり、マウスの６９％、８１％、及び１００％は、それぞれ併用－低、併用－中、及び併用－高の併用処理群において≧１ポイントのＮＡＳ改善を示した。加えて、ＮＡＳ改善の大きさは、併用処理群においてより大きかった。化合物２処理群におけるマウスの０％に、＞１ポイントのＮＡＳ改善があったが、併用－低、併用－中、及び併用－高の併用群におけるマウスのそれぞれ１９％、２５％、及び４３％で、≧２ポイントのＮＡＳ改善が達成された。これらの結果は化合物１単剤治療群より優れており、化合物１－低用量群、化合物１－中用量群、及び化合物１－高用量群において、それぞれ０％、７％、及び２５％のマウスは、≧２ポイントのＮＡＳ改善を達成した。
【表23】
【0167】
脂肪変性
ＮＡＳ改善は、脂肪変性のより大きい低減によって、大部分は行われた（表２０）。化合物２群において、８１％は、治療終了時に脂肪変性の改善を示したが、最大の改善は１ポイントであった。化合物１単剤処理群において、脂肪変性の改善を示すマウスのパーセンテージの用量依存的増加は、化合物１－低用量群、化合物１－中用量群、及び化合物１－高用量群において、それぞれ３１％、４７％、及び８１％のマウスに対応して観察された。各々の化合物１単剤処理群において、１匹のマウス（すなわち約６％）は、≧２ポイントの脂肪変性の改善を示した。これとは対照的に、併用－低処理群、併用－中処理群、及び併用－高処理群において、それぞれ２５％、３１％、及び７１％のマウスは、≧２ポイントの脂肪変性の改善を示した。これらの効果は、定量的な肝臓組織形態計測によって支持され、当該計測から、脂質滴を含有する肝細胞のパーセンテージの低減（図４０Ａ）及び肝臓脂質のより低いレベル（図４０Ｂ）、そしてより小さな脂質滴サイズ（図４１）が示された。
ＮＡＳ改善は、脂肪変性のより大きい低減によって、大部分は行われた（表２０）。化合物２群において、８１％は、治療終了時に脂肪変性の改善を示したが、最大の改善は１ポイントであった。化合物１単剤処理群において、脂肪変性の改善を示すマウスのパーセンテージの用量依存的増加は、化合物１－低用量群、化合物１－中用量群、及び化合物１－高用量群において、それぞれ３１％、４７％、及び８１％のマウスに対応して観察された。各々の化合物１単剤処理群において、１匹のマウス（すなわち約６％）は、≧２ポイントの脂肪変性の改善を示した。これとは対照的に、併用－低処理群、併用－中処理群、及び併用－高処理群において、それぞれ２５％、３１％、及び７１％のマウスは、≧２ポイントの脂肪変性の改善を示した。これらの効果は、定量的な肝臓組織形態計測によって支持され、当該計測から、脂質滴を含有する肝細胞のパーセンテージの低減（図４０Ａ）及び肝臓脂質のより低いレベル（図４０Ｂ）、そしてより小さな脂質滴サイズ（図４１）が示された。
【表24】
【0168】
化合物２及び化合物１の併用は、結果的に肝脂肪変性においてより大きい改善をもたらした。肝脂肪変性を、各々の個体マウスについて、ベースライン及び治療終了時の組織学によって決定した。表２９は、脂肪変性スコアの変化無しまたは改善（ベースラインからの１ポイント及び≧２ポイントの減少）の有る、各々の処理群内のマウスのパーセンテージを示す。合計は、ベースラインからの少なくとも１ポイントの脂肪変性の改善を示す、各々の処理群におけるマウスのパーセンテージを表わす。
【0169】
風船化、炎症、及び線維化
肝細胞風船化（アポトーシスの指標）はたまに観察され、処理のいずれかによっても有意に変化しなかった。ＣＫ１８ Ｍ３０（アポトーシスと関連する血漿バイオマーカー）も、処理群とＤＩＯ－ＧＡＮビヒクル対照との間で有意に異ならなかった（図４２）。小葉炎症は処理によって有意に改善されなかったが、炎症スコアの改善は、稀にではあるが、化合物１－低処理群、化合物１－中処理群、及び化合物１－高処理群そして併用－中の併用群において観察された（表２１）。炎症をさらに査定するために、ガレクチン－３（Ｇａｌ－３）（炎症性リンパ球浸潤のマーカー）のタンパク質発現を、肝臓の免疫組織化学（ＩＨＣ）染色によって決定した。化合物２単独による処理及び化合物１と併用する処理（併用－低）は、ＤＩＯ－ＧＡＮビヒクル対照に比べて、肝臓においてより低いレベルのＧａｌ－３発現をもたらした（図４３Ａ）。
肝細胞風船化（アポトーシスの指標）はたまに観察され、処理のいずれかによっても有意に変化しなかった。ＣＫ１８ Ｍ３０（アポトーシスと関連する血漿バイオマーカー）も、処理群とＤＩＯ－ＧＡＮビヒクル対照との間で有意に異ならなかった（図４２）。小葉炎症は処理によって有意に改善されなかったが、炎症スコアの改善は、稀にではあるが、化合物１－低処理群、化合物１－中処理群、及び化合物１－高処理群そして併用－中の併用群において観察された（表２１）。炎症をさらに査定するために、ガレクチン－３（Ｇａｌ－３）（炎症性リンパ球浸潤のマーカー）のタンパク質発現を、肝臓の免疫組織化学（ＩＨＣ）染色によって決定した。化合物２単独による処理及び化合物１と併用する処理（併用－低）は、ＤＩＯ－ＧＡＮビヒクル対照に比べて、肝臓においてより低いレベルのＧａｌ－３発現をもたらした（図４３Ａ）。
【表25】
【0170】
炎症は、処理によって有意に改善されなかった。小葉炎症を、ベースライン及び治療終了時の組織学によって決定した。表３０は、小葉炎症スコアの悪化（ベースラインからの≧１ポイントの増加）、変化無し、または改善（ベースラインからの≧１ポイントの減少）の有る各々の処理群内のマウスのパーセンテージを示す。
【0171】
線維化ステージの改善は、単剤群と比較して、併用薬剤処理群においてより頻繁に観察されたが、差は有意性に達しなかった（表２２）。Ｃｏｌ１ａ１タンパク質発現の変化は、肝臓のＩＨＣ染色によって決定されるように、処理群間で有意に異ならなかった。α－ＳＭＡ（肝臓の星細胞活性化のマーカー）の数値の低減は、化合物２処理群、化合物１－低処理群、及び化合物１－中処理群において観察された。有意な低減は、併用－低処理群においてのみ観察された（図４３Ｂ）。
【表26】
【0172】
線維化の改善は、併用処理でより頻繁に観察された。肝線維化ステージを、ベースライン及び治療終了時の組織学によって決定した。表３１は、線維化の悪化（ベースラインからの≧１ステージの増加）、変化無し、または改善（ベースラインからの≧１ステージの減少）の有る各々の処理群内のマウスのパーセンテージを示す。
【0173】
ＲＮＡｓｅｑによる肝臓トランスクリプトミクス分析
処理群からの最終的な肝臓サンプル（ｎ＝１０）を、ＲＮＡｓｅｑによってトランスクリプトミクス分析のためにプロセシングした。差次的に発現される遺伝子（ＤＥＧ）を、ＤＩＯ－ＧＡＮビヒクル対照に比較して同定した。ＤＥＧを、すべての処理群において同定した。化合物１－低（９８７）で最も少数であり、併用－高（３５３３）処理群で最大数のＤＥＧであった。化合物１－高を併用－高に対して比較することから、エネルギー及び脂質代謝に関与する遺伝子が、併用処理によってより大きい程度で差次的に発現することが示された（図４４）。これは、倍変化値の識別線についての傾き（点線、傾き＝１）を線形回帰直線（実線、傾き＝０．５５）に対して比較することによって示される。スクアレンエポキシダーゼ（Ｓｑｌｅ）及び７－デヒドロコレステロール還元酵素（Ｄｈｃｒ７）（コレステロール代謝に関与する酵素）は、単剤処理に比べて、併用群において有意により高いレベルに発現された（図４５Ａ及び４５Ｂ）。ヒドロキシメチルグルタリルＣｏＡ合成酵素（Ｈｍｇｃｓ１）（エネルギー代謝における鍵酵素）は、類似のパターンの発現を示した（図４５Ｃ）。ステアロイルＣｏＡデサチュラーゼ（Ｓｃｄ１）（脂肪酸代謝に関与する酵素）は、化合物２処理によって低減され、併用処理によってさらに低減された（図４５Ｄ）。
処理群からの最終的な肝臓サンプル（ｎ＝１０）を、ＲＮＡｓｅｑによってトランスクリプトミクス分析のためにプロセシングした。差次的に発現される遺伝子（ＤＥＧ）を、ＤＩＯ－ＧＡＮビヒクル対照に比較して同定した。ＤＥＧを、すべての処理群において同定した。化合物１－低（９８７）で最も少数であり、併用－高（３５３３）処理群で最大数のＤＥＧであった。化合物１－高を併用－高に対して比較することから、エネルギー及び脂質代謝に関与する遺伝子が、併用処理によってより大きい程度で差次的に発現することが示された（図４４）。これは、倍変化値の識別線についての傾き（点線、傾き＝１）を線形回帰直線（実線、傾き＝０．５５）に対して比較することによって示される。スクアレンエポキシダーゼ（Ｓｑｌｅ）及び７－デヒドロコレステロール還元酵素（Ｄｈｃｒ７）（コレステロール代謝に関与する酵素）は、単剤処理に比べて、併用群において有意により高いレベルに発現された（図４５Ａ及び４５Ｂ）。ヒドロキシメチルグルタリルＣｏＡ合成酵素（Ｈｍｇｃｓ１）（エネルギー代謝における鍵酵素）は、類似のパターンの発現を示した（図４５Ｃ）。ステアロイルＣｏＡデサチュラーゼ（Ｓｃｄ１）（脂肪酸代謝に関与する酵素）は、化合物２処理によって低減され、併用処理によってさらに低減された（図４５Ｄ）。
【0174】
最後に、Ｉ型コラーゲンα１（Ｃｏｌ１ａ１）、アクチンα２平滑アクチン（Ａｃｔａ２）、ガレクチン３（Ｌｇａｌｓ３）、及びメラノーマ細胞接着分子（ＣＤ１４６）を包含する、線維化及び炎症と関連する選択遺伝子の発現を検討した。概して、化合物２は、単独で及び化合物１と併用して、ＤＩＯ－ＧＡＮビヒクル対照に比べて、これらの遺伝子の発現を有意に低減させた（図４６）。併用処理群は、化合物２処理単独とは有意に異なっていなかった。
【0175】
要約
マウス食餌誘導性肥満Ｇｕｂｒａ－Ａｍｙｌｉｎ ＮＡＳＨ（ＤＩＯ－ＧＡＮ）モデルを使用して、ＮＡＳＨ及び線維化の代謝的及び組織病理学的な指標に対する、化合物２及び化合物１の単剤として及び併用での有効性を評価した。このモデルは広範囲に特徴付けられており、疾患を誘導するために肝毒性薬剤の使用無しに、ヒトＮＡＳＨの多数の態様（Ｈａｎｓｅｎ ２０２０）を再現する。このモデルにおいて、マウスを、脂肪、コレステロール、及びフルクトースの高い食餌（ＧＡＮ食餌）で、３５週間を超えて維持した。治療介入の前に、マウスを生検して、ＮＡＦＬＤ活動性スコア（ＮＡＳ）及び線維化重症度を組織学によって査定し、ベースラインの脂肪変性スコア＞２及び線維化ステージ＞１のマウスを研究において使用した。重要なことには、この前選択ステップは、有意なＮＡＦＬＤ活動性の有るマウスのみが研究において使用されたことを確実にする。加えて、ベースラインのＮＡＳの情報は、評価される治療応答を、ＤＩＯ－ＧＡＮビヒクル対照に比べるだけでなく、個別のベースライン値に比べることも可能にする。ＤＩＯ ＧＡＮマウスを、化合物２及び化合物１を単独で及び併用で１２週間処理し、研究を通してＧＡＮ食餌で維持した。可能性のある相加的な治療的効果を識別する能力を最大化するために、単一用量レベルの化合物２を、単独でまたは化合物１の３つの用量レベル（低［０．３ｍｇ／ｋｇ］、中［２ｍｇ／ｋｇ］、及び高［１０ｍｇ／ｋｇ］）と併用して、マウスを処理した。
マウス食餌誘導性肥満Ｇｕｂｒａ－Ａｍｙｌｉｎ ＮＡＳＨ（ＤＩＯ－ＧＡＮ）モデルを使用して、ＮＡＳＨ及び線維化の代謝的及び組織病理学的な指標に対する、化合物２及び化合物１の単剤として及び併用での有効性を評価した。このモデルは広範囲に特徴付けられており、疾患を誘導するために肝毒性薬剤の使用無しに、ヒトＮＡＳＨの多数の態様（Ｈａｎｓｅｎ ２０２０）を再現する。このモデルにおいて、マウスを、脂肪、コレステロール、及びフルクトースの高い食餌（ＧＡＮ食餌）で、３５週間を超えて維持した。治療介入の前に、マウスを生検して、ＮＡＦＬＤ活動性スコア（ＮＡＳ）及び線維化重症度を組織学によって査定し、ベースラインの脂肪変性スコア＞２及び線維化ステージ＞１のマウスを研究において使用した。重要なことには、この前選択ステップは、有意なＮＡＦＬＤ活動性の有るマウスのみが研究において使用されたことを確実にする。加えて、ベースラインのＮＡＳの情報は、評価される治療応答を、ＤＩＯ－ＧＡＮビヒクル対照に比べるだけでなく、個別のベースライン値に比べることも可能にする。ＤＩＯ ＧＡＮマウスを、化合物２及び化合物１を単独で及び併用で１２週間処理し、研究を通してＧＡＮ食餌で維持した。可能性のある相加的な治療的効果を識別する能力を最大化するために、単一用量レベルの化合物２を、単独でまたは化合物１の３つの用量レベル（低［０．３ｍｇ／ｋｇ］、中［２ｍｇ／ｋｇ］、及び高［１０ｍｇ／ｋｇ］）と併用して、マウスを処理した。
【0176】
化合物２及び化合物１の併用は、単剤処理に比べて、ＮＡＳの低減を示すマウスのパーセンテージ及びＮＡＳ改善の大きさの両方に関して、ＮＡＳのより大きい低減を示した。ＮＡＳの改善は、脂肪変性のより大きい低減によって大部分は駆動され、それは、血漿及び肝臓の総コレステロール及びトリグリセリドのより大きな低減と関連した。併用処理により観察されたより大きい全体的な効果は、併用処理群における個別の薬物のより高い曝露によって駆動されるようには思われなかった（表２３）。加えて、体重の変化はＮＡＳ改善に寄与し得るが、体重低減は、化合物２処理群と併用処理群（併用－低及び併用－中）との間で類似し、体重減少だけでは、併用処理のより高い抗脂肪変性（ａｎｔｉ－ｓｔｅａｔｏｔｉｃ）活性について完全に説明しないことが示唆される。その代りに、併用処理は、エネルギー及び脂質代謝に関連する遺伝子の発現に対してより大きい効果を有していた。これらの結果から、化合物２及び化合物１の併用がこれらの経路に対して少なくとも相加的な効果を有し、おそらく観察されたより高い抗抗脂肪変性活性を担うように思われることが示唆される。
【0177】
炎症及び線維化の組織学的改善は、処理によって有意に改善されなかった。しかしながら、線維化改善の証拠が認められ、併用による線維化改善を示すマウスの数が多くなることが挙げられる。加えて、トランスクリプトミクス分析により、併用処理によって低減された線維化及び炎症の重要なマーカーが同定された。これらの遺伝子の発現は化合物２処理によっても低減され、ＦＸＲアゴニズムは、遺伝子発現レベルでの線維化及び炎症に対する効果についての主要なドライバーであり得ることが示唆される。この事例において、ＦＸＲアゴニズムは、ＴＨＲ－βアゴニズムのより抗脂肪変性のメカニズムに相補的であると判断され得る。化合物２及び化合物１の併用によって観察されたより高い抗脂肪変性の効果と合わせて、これらの結果から、この併用がＮＡＳＨ疾患の複数の態様に対処し得ることを示唆される。
【0178】
参照文献
Ｋｌｅｉｎｅｒ ＤＥ，Ｂｒｕｎｔ ＥＭ，Ｖａｎ Ｎａｔｔａ Ｍ，Ｂｅｈｌｉｎｇ Ｃ，Ｃｏｎｔｏｓ ＭＪ，Ｃｕｍｍｉｎｇｓ ＯＷ，Ｆｅｒｒｅｌｌ ＬＤ，Ｌｉｕ ＹＣ，Ｔｏｒｂｅｎｓｏｎ ＭＳ，Ｕｎａｌｐ－Ａｒｉｄａ Ａ，Ｙｅｈ Ｍ，ＭｃＣｕｌｌｏｕｇｈ ＡＪ，Ｓａｎｙａｌ ＡＪ；Ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ Ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｎｅｔｗｏｒｋ．Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｃｏｒｉｎｇ ｓｙｓｔｅｍ ｆｏｒ ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｆａｔｔｙ ｌｉｖｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ．２００５ Ｊｕｎ；４１（６）：１３１３－２１．
Ｈａｎｓｅｎ，Ｈ．Ｈ．，Ａｇｉｄｉｕｓ，Ｈ．Ｍ．，Ｏｒｏ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．Ｈｕｍａｎ ｔｒａｎｓｌａｔａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ＧＡＮ ｄｉｅｔ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｏｂｅｓｅ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｎｏｎ－ａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ．ＢＭＣ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ ２０，２１０（２０２０）．
Ｋｌｅｉｎｅｒ ＤＥ，Ｂｒｕｎｔ ＥＭ，Ｖａｎ Ｎａｔｔａ Ｍ，Ｂｅｈｌｉｎｇ Ｃ，Ｃｏｎｔｏｓ ＭＪ，Ｃｕｍｍｉｎｇｓ ＯＷ，Ｆｅｒｒｅｌｌ ＬＤ，Ｌｉｕ ＹＣ，Ｔｏｒｂｅｎｓｏｎ ＭＳ，Ｕｎａｌｐ－Ａｒｉｄａ Ａ，Ｙｅｈ Ｍ，ＭｃＣｕｌｌｏｕｇｈ ＡＪ，Ｓａｎｙａｌ ＡＪ；Ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ Ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｎｅｔｗｏｒｋ．Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｃｏｒｉｎｇ ｓｙｓｔｅｍ ｆｏｒ ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｆａｔｔｙ ｌｉｖｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ．２００５ Ｊｕｎ；４１（６）：１３１３－２１．
Ｈａｎｓｅｎ，Ｈ．Ｈ．，Ａｇｉｄｉｕｓ，Ｈ．Ｍ．，Ｏｒｏ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．Ｈｕｍａｎ ｔｒａｎｓｌａｔａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ＧＡＮ ｄｉｅｔ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｏｂｅｓｅ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｎｏｎ－ａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ．ＢＭＣ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ ２０，２１０（２０２０）．
【0179】
補足
【表27】
【0180】
本明細書において言及される特許、特許出願、及び科学論文を包含するすべての出版物は、あたかも特許、特許出願、または科学論文を包含する各々の個別の出版物が、参照することによって援用されることが具体的且つ個別に指示されたかのように、それと同程度にすべての目的のためにそれらの全体を参照することによって本明細書に援用される。
【0181】
前述の発明は、理解の明瞭性の目的のために、例証及び実施例によってある程度詳細に記載されてきたが、特定の小さな変化及び修飾が上の教示に照らして実践されるであろうことは当業者に明らかである。したがって、記載及び実施例は、本発明の範囲の限定として解釈されるべきでない。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【図19】
【図20】
【図21】
【図22】
【図23】
【図24】
【図25】
【図26】
【図27】
【図28】
【図29】
【図30】
【図31】
【図32】
【図33】
【図34】
【図35】
【図36】
【図37】
【図38】
【図39】
【図40】
【図41】
【図42】
【図43】
【図44】
【図45】
【図46】
【国際調査報告】