特表 2024-544632 ＧＣＮ２及びＰＥＲＫキナーゼ阻害剤としての複素環式化合物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-12-03

(54)【発明の名称】ＧＣＮ２及びＰＥＲＫキナーゼ阻害剤としての複素環式化合物

(51)【国際特許分類】

   C07D 487/04 20060101AFI20241126BHJP

   C07D 495/04 20060101ALI20241126BHJP

   A61K 31/519 20060101ALI20241126BHJP

   A61K 31/4365 20060101ALI20241126BHJP

   A61K 31/4355 20060101ALI20241126BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20241126BHJP

   A61K 31/69 20060101ALI20241126BHJP

   A61K 31/573 20060101ALI20241126BHJP

   A61K 31/454 20060101ALI20241126BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20241126BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20241126BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20241126BHJP

   C07D 491/048 20060101ALI20241126BHJP

【ＦＩ】

C07D487/04 140

C07D495/04 105A

A61K31/519 ZNA

A61K31/4365

A61K31/4355

A61K45/00

A61K31/69

A61K31/573

A61K31/454

A61P35/00

A61P35/02

A61P43/00 121

C07D491/048 CSP

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024532281

(86)(22)【出願日】2022-12-02

(85)【翻訳文提出日】2024-05-29

(86)【国際出願番号】 US2022051717

(87)【国際公開番号】W WO2023102228

(87)【国際公開日】2023-06-08

(31)【優先権主張番号】63/285,833

(32)【優先日】2021-12-03

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/348,557

(32)【優先日】2022-06-03

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＲＩＴＯＮ

２．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】519425235

【氏名又は名称】デシフェラ・ファーマシューティカルズ，エルエルシー

(74)【代理人】

【識別番号】100118902

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 修

(74)【代理人】

【識別番号】100106208

【弁理士】

【氏名又は名称】宮前 徹

(74)【代理人】

【識別番号】100196508

【弁理士】

【氏名又は名称】松尾 淳一

(74)【代理人】

【識別番号】100106080

【弁理士】

【氏名又は名称】山口 晶子

(72)【発明者】

【氏名】アン，ユ・ミ

(72)【発明者】

【氏名】アル－アニ，ガダ

(72)【発明者】

【氏名】フリン，ダニエル・エル

(72)【発明者】

【氏名】ジェーブド，サリム

(72)【発明者】

【氏名】カーニー，パトリック

(72)【発明者】

【氏名】ル・ブルドネック，ベルトラン

(72)【発明者】

【氏名】ストルツ，クリステン

(72)【発明者】

【氏名】ツヴィッカー，ジェフリー

【テーマコード（参考）】

4C084

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C084AA19

4C084MA02

4C084NA05

4C084NA14

4C084ZB261

4C084ZB262

4C084ZB271

4C084ZB272

4C084ZC201

4C084ZC202

4C084ZC751

4C084ZC752

4C086AA01

4C086AA02

4C086AA03

4C086BC21

4C086CB05

4C086CB06

4C086CB22

4C086CB26

4C086DA10

4C086DA43

4C086MA01

4C086MA04

4C086NA14

4C086ZB26

4C086ZB27

4C086ZC20

4C086ZC75

(57)【要約】

本明細書では、ＧＣＮ２キナーゼ、又はＰＥＲＫキナーゼの阻害剤である式１－Ａの化合物、及びＧＣＮ２キナーゼ又はＰＥＲＫキナーゼ関連疾患を含む疾患を、前記化合物で治療する方法が、記載されている。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

式Ｉ－Ａで表される化合物：

【化1】

又はその薬学的に許容可能な塩、エナンチオマー、立体異性体、若しくは互変異性体であって、式中、
Ｘ^１及びＸ^３は、それぞれ独立して、ＣＨ及びＮからなる群から選択され、
Ｘ^２は、ＮＲ^６、Ｏ、及びＳからなる群から選択され、
Ｒ^１、Ｒ^２及びＲ^３は、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、シアノ及びアルコキシからなる群から選択され、
Ｒ^４は、ハロゲン、アルコキシ、及びアルキルからなる群から選択され、
Ｒ^５は、Ｈ、ハロゲン及びアルキルからなる群から選択され、
Ｒ^６は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、アルキニル、アルキニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルアルキル、アリール、ヘテロアリール、及びヘテロアリールアルキルからなる群から選択され、
Ｒ^７は、Ｈ、アルキル、及びアシルからなる群から選択される、化合物、又はその薬学的に許容可能な塩、エナンチオマー、立体異性体、若しくは互変異性体。

【請求項2】

Ｒ^１、Ｒ^２及びＲ^３のうちの少なくとも１つが、ハロゲンである、請求項１に記載の化合物。

【請求項3】

Ｒ^１、Ｒ^２及びＲ^３のうちの少なくとも１つが、フルオロである、請求項１又は２に記載の化合物。

【請求項4】

Ｒ^１が、フルオロである、請求項１～３のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項5】

Ｘ^１が、Ｎである、請求項１～４のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項6】

式Ｉ－Ｂで表される化合物：

【化2】

又はその薬学的に許容可能な塩、エナンチオマー、立体異性体、若しくは互変異性体であって、式中、
Ｘ^１及びＸ^３は、それぞれ独立して、ＣＨ及びＮからなる群から選択され、
Ｘ^２は、ＮＲ^６、Ｏ、及びＳからなる群から選択され、
Ｒ^２及びＲ^３は、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、シアノ及びアルコキシからなる群から選択され、
Ｒ^４は、ハロゲン、アルコキシ、及びアルキルからなる群から選択され、
Ｒ^５は、Ｈ、ハロゲン及びアルキルからなる群から選択され、
Ｒ^６は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、アルキニル、アルキニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルアルキル、アリール、ヘテロアリール、及びヘテロアリールアルキルからなる群から選択され、
Ｒ^７は、Ｈ、アルキル、及びアシルからなる群から選択される、化合物、又はその薬学的に許容可能な塩、エナンチオマー、立体異性体、若しくは互変異性体。

【請求項7】

Ｘ^１が、Ｎである、請求項６に記載の化合物。

【請求項8】

式Ｉ－Ｃで表される化合物：

【化3】

又はその薬学的に許容可能な塩、エナンチオマー、立体異性体、若しくは互変異性体であって、式中、
Ｘ^２は、ＮＲ^６、Ｏ、及びＳからなる群から選択され、
Ｘ^３は、ＣＨ及びＮからなる群から選択され、
Ｒ^２及びＲ^３は、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、シアノ及びアルコキシからなる群から選択され、
Ｒ^４は、ハロゲン、アルコキシ、及びアルキルからなる群から選択され、
Ｒ^５は、Ｈ、ハロゲン、及びアルキルからなる群から選択され、
Ｒ^６は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、アルキニル、アルキニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルアルキル、アリール、ヘテロアリール、及びヘテロアリールアルキルからなる群から選択され、
Ｒ^７は、Ｈ、アルキル、及びアシルからなる群から選択される、化合物、又はその薬学的に許容可能な塩、エナンチオマー、立体異性体、若しくは互変異性体。

【請求項9】

Ｘ^２が、ＮＲ^６である、請求項８に記載の化合物。

【請求項10】

式Ｉ－Ｄで表される化合物：

【化4】

又はその薬学的に許容可能な塩、エナンチオマー、立体異性体、若しくは互変異性体であって、式中、
Ｒ^２及びＲ^３は、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、シアノ及びアルコキシからなる群から選択され、
Ｒ^４は、ハロゲン、アルコキシ、及びアルキルからなる群から選択され、
Ｒ^５は、Ｈ、ハロゲン及びアルキルからなる群から選択され、
Ｒ^６は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、アルキニル、アルキニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルアルキル、アリール、ヘテロアリール、及びヘテロアリールアルキルからなる群から選択され、
Ｒ^７は、Ｈ、アルキル、及びアセテートからなる群から選択される、化合物、又はその薬学的に許容可能な塩、エナンチオマー、立体異性体、若しくは互変異性体。

【請求項11】

Ｒ^２が、Ｈであり、Ｒ^３が、Ｈである、請求項６～１０のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項12】

Ｒ^２が、Ｆであり、Ｒ^３が、Ｈである、請求項６～１０のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項13】

Ｒ^２が、Ｈであり、Ｒ^３が、Ｆである、請求項６～１０のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項14】

Ｒ^６が、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルキル、（Ｃ_２－Ｃ_８）アルケニル、（Ｃ_２－Ｃ_８）アルケニル－（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキル、（Ｃ_２－Ｃ_８）アルキニル、（Ｃ_２－Ｃ_８）アルキニル－（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキル、（Ｃ_３－Ｃ_８）シクロアルキル、（Ｃ_３－Ｃ_８）シクロアルキル－（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキル、（Ｃ_３－Ｃ_８）アルコキシ－（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキル、（Ｃ_３－Ｃ_８）シクロアルケニル、（Ｃ_３－Ｃ_８）シクロアルケニル－（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリル－（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキル、アリール、ヘテロアリール、及びヘテロアリール－（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキルからなる群から選択される、請求項１～１３のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項15】

Ｒ^６が、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルキル、（Ｃ_３－Ｃ_８）シクロアルキル、（Ｃ_３－Ｃ_８）アルコキシ－（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキル、ヘテロシクリル、及びヘテロアリールからなる群から選択される、請求項１～１４のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項16】

Ｒ^６が、以下からなる群から選択される、請求項１～１４のいずれか一項に記載の化合物

【化5】

【請求項17】

Ｒ^４が、ハロゲン、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルコキシ及び（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキルからなる群から選択される、請求項１～１６のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項18】

Ｒ^４が、クロロ、フルオロ、メトキシ及びメチルからなる群から選択される、請求項１～１７のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項19】

Ｒ^５が、Ｈ、ハロゲン、及び（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキルからなる群から選択される、請求項１～１８のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項20】

Ｒ^５が、クロロ、フルオロ、及びメチルからなる群から選択される、請求項１～１９のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項21】

Ｒ^７が、Ｈである、請求項１～２０のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項22】

以下からなる群から選択される化合物：

【化6】

並びにその薬学的に許容可能な塩、エナンチオマー、立体異性体、及び互変異性体。

【請求項23】

請求項１～２２のいずれか一項に記載の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩と、薬学的に許容可能な担体、又は賦形剤とを含む、医薬組成物。

【請求項24】

統合的ストレス応答の調節不全によって引き起こされる疾患の治療を必要とする患者において、その疾患の治療をする方法であって、治療有効量の、請求項１～２２のいずれか一項に記載の化合物、若しくはその薬学的に許容可能な塩、又は請求項２３に記載の医薬組成物を、前記患者に投与することを含む、方法。

【請求項25】

前記統合的ストレス応答、及び／又は小胞体ストレス応答の調節不全が、ＰＥＲＫキナーゼ、及びＧＣＮ２キナーゼからなる群から選択されるキナーゼによって引き起こされる、請求項２４に記載の方法。

【請求項26】

前記統合的ストレス応答、及び／又は前記小胞体ストレス応答の前記調節不全が、ＧＣＮ２キナーゼによって引き起こされる、請求項２４又は２５に記載の方法。

【請求項27】

前記統合的ストレス応答、及び／又は前記小胞体ストレス応答の前記調節不全が、ＰＥＲＫキナーゼによって引き起こされる、請求項２４又は２５に記載の方法。

【請求項28】

ＣＧＮ２キナーゼの活性の調節を必要とする患者において、ＣＧＮ２キナーゼの活性を調節する方法であって、治療有効量の、請求項１～２２のいずれか一項に記載の化合物、若しくはその薬学的に許容可能な塩、又は請求項２３に記載の医薬組成物を、前記患者に投与することを含む、方法。

【請求項29】

ＧＣＮ２キナーゼの活性化を必要とする患者において、ＧＣＮ２キナーゼを活性化する方法であって、治療有効量の、請求項１～２２のいずれか一項に記載の化合物、若しくはその薬学的に許容可能な塩、又は請求項２３に記載の医薬組成物を、前記患者に投与することを含む、方法。

【請求項30】

ＰＥＲＫキナーゼの活性の調節を必要とする患者において、ＰＥＲＫキナーゼの活性を調節する方法であって、治療有効量の、請求項１～２２のいずれか一項に記載の化合物、若しくはその薬学的に許容可能な塩、又は請求項２３に記載の医薬組成物を、前記患者に投与することを含む、方法。

【請求項31】

ＰＥＲＫキナーゼの活性化を必要とする患者において、ＰＥＲＫキナーゼを活性化する方法であって、治療有効量の、請求項１～２２のいずれか一項に記載の化合物、若しくはその薬学的に許容可能な塩、又は請求項２３に記載の医薬組成物を、前記患者に投与することを含む、方法。

【請求項32】

ＧＣＮ２キナーゼ、及びＰＥＲＫキナーゼの阻害を必要とする患者において、ＧＣＮ２キナーゼ、及びＰＥＲＫキナーゼを阻害する方法であって、治療有効量の、請求項１～２２のいずれか一項に記載の化合物、若しくはその薬学的に許容可能な塩、又は請求項２３に記載の医薬組成物を、前記患者に投与することを含む、方法。

【請求項33】

ＧＣＮ２キナーゼの活性の阻害を必要とする患者において、ＧＣＮ２キナーゼの活性を阻害する方法であって、治療有効量の、請求項１～２２のいずれか一項に記載の化合物、若しくはその薬学的に許容可能な塩、又は請求項２３に記載の医薬組成物を、前記患者に投与することを含む、方法。

【請求項34】

ＰＥＲＫキナーゼの活性の阻害を必要とする患者において、ＰＥＲＫキナーゼの活性を阻害する方法であって、治療有効量の、請求項１～２２のいずれか一項に記載の化合物、若しくはその薬学的に許容可能な塩、又は請求項２３に記載の医薬組成物を、前記患者に投与することを含む、方法。

【請求項35】

がんの治療を必要とする患者において、がんを治療する方法であって、治療有効量の、請求項１～２２のいずれか一項に記載の化合物、若しくはその薬学的に許容可能な塩、又は請求項２３に記載の医薬組成物を、前記患者に投与することを含む、方法。

【請求項36】

前記がんが、結腸直腸がん、肺がん、中皮腫、膵がん、咽頭がん、喉頭がん、食道がん、胃、十二指腸がん、小腸がん、乳がん、卵巣がん、睾丸腫瘍、前立腺、肝臓がん、甲状腺がん、腎臓がん、子宮がん、妊娠性絨毛がん、脳腫瘍、網膜芽細胞腫、皮膚がん、黒色腫、肉腫、線維肉腫、悪性骨腫瘍、膀胱がん、血液がん、白血病、急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、赤白血病、組織球性リンパ腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、軽鎖アミロイドーシス、及び悪性リンパ腫からなる群から選択される、請求項３５に記載の方法。

【請求項37】

前記がんが、白血病である、請求項３６又は３７に記載の方法。

【請求項38】

前記がんが、急性骨髄性白血病である、請求項３６又は３７に記載の方法。

【請求項39】

前記がんが、急性リンパ芽球性白血病である、請求項３６又は３７に記載の方法。

【請求項40】

前記がんが、線維肉腫である、請求項３６又は３７に記載の方法。

【請求項41】

前記がんが、多発性骨髄腫である、請求項３６又は３７に記載の方法。

【請求項42】

前記がんが、リンパ腫である、請求項３６又は３７に記載の方法。

【請求項43】

前記がんが、Ｂ細胞リンパ腫である、請求項１２７又は１２８に記載の方法。

【請求項44】

前記がんが、Ｔ細胞リンパ腫である、請求項３６又は３７に記載の方法。

【請求項45】

それを必要とする患者のアミロイドーシスを治療する方法であって、治療有効量の、請求項１～２２のいずれか一項に記載の化合物、若しくはその薬学的に許容可能な塩、又は請求項２３に記載の医薬組成物を、前記患者に投与することを含む、方法。

【請求項46】

それを必要とする患者の軽鎖アミロイドーシスを治療する方法であって、治療有効量の、請求項１～２２のいずれか一項に記載の化合物、若しくはその薬学的に許容可能な塩、又は請求項２３に記載の医薬組成物を、前記患者に投与することを含む、方法。

【請求項47】

ＧＣＮ２関連疾患、及びＰＥＲＫ関連疾患から選択される疾患の治療を必要とする患者において、その疾患を治療する方法であって、治療有効量の、請求項１～２２のいずれか一項に記載の化合物、若しくはその薬学的に許容可能な塩、又は請求項２３に記載の医薬組成物を、前記患者に投与することを含む、方法。

【請求項48】

前記疾患が、ＧＣＮ２関連疾患である、請求項４７に記載の方法。

【請求項49】

前記疾患が、ＰＥＲＫ関連疾患である、請求項４７に記載の方法。

【請求項50】

前記疾患が、がんである、請求項４７～４９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項51】

前記がんが、結腸直腸がん、肺がん、中皮腫、膵がん、咽頭がん、喉頭がん、食道がん、胃、十二指腸がん、小腸がん、乳がん、卵巣がん、睾丸腫瘍、前立腺、肝臓がん、甲状腺がん、腎臓がん、子宮がん、妊娠性絨毛がん、脳腫瘍、網膜芽細胞腫、皮膚がん、黒色腫、肉腫、線維肉腫、悪性骨腫瘍、膀胱がん、血液がん、白血病、急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、赤白血病、組織球性リンパ腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、及び悪性リンパ腫からなる群から選択される、請求項５０に記載の方法。

【請求項52】

前記がんが、白血病である、請求項５０又は５１に記載の方法。

【請求項53】

前記がんが、急性骨髄性白血病である、請求項５０又は５１に記載の方法。

【請求項54】

前記がんが、急性リンパ芽球性白血病である、請求項５０又は５１に記載の方法。

【請求項55】

前記がんが、線維肉腫である、請求項５０又は５１に記載の方法。

【請求項56】

前記がんが、多発性骨髄腫である、請求項５０又は５１に記載の方法。

【請求項57】

前記がんが、リンパ腫である、請求項５０又は５１に記載の方法。

【請求項58】

前記がんが、Ｂ細胞リンパ腫である、請求項５０又は５１に記載の方法。

【請求項59】

前記がんが、Ｔ細胞リンパ腫である、請求項５０又は５１に記載の方法。

【請求項60】

前記疾患が、アミロイドーシスである、請求項４７に記載の方法。

【請求項61】

前記疾患が、軽鎖アミロイドーシスである、請求項４７に記載の方法。

【請求項62】

ＧＣＮ２関連疾患、及びＰＥＲＫ関連疾患から選択される疾患の治療を必要とする患者において、その疾患を治療する方法であって、治療有効量の、請求項１～２２のいずれか一項に記載の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩、及び治療有効量の、１つ以上の治療剤を、前記患者に投与することを含む、方法。

【請求項63】

前記疾患が、ＧＣＮ２関連疾患である、請求項６２に記載の方法。

【請求項64】

前記疾患が、ＰＥＲＫ関連疾患である、請求項６２に記載の方法。

【請求項65】

前記疾患が、がんである、請求項６２～６４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項66】

前記がんが、結腸直腸がん、肺がん、中皮腫、膵がん、咽頭がん、喉頭がん、食道がん、胃、十二指腸がん、小腸がん、乳がん、卵巣がん、睾丸腫瘍、前立腺、肝臓がん、甲状腺がん、腎臓がん、子宮がん、妊娠性絨毛がん、脳腫瘍、網膜芽細胞腫、皮膚がん、黒色腫、肉腫、線維肉腫、悪性骨腫瘍、膀胱がん、血液がん、白血病、急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、赤白血病、組織球性リンパ腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、軽鎖アミロイドーシス、及び悪性リンパ腫からなる群から選択される、請求項６５に記載の方法。

【請求項67】

前記がんが、白血病である、請求項６５又は６６に記載の方法。

【請求項68】

白血病が、急性骨髄性白血病である、請求項６５又は６６に記載の方法。

【請求項69】

白血病が、急性リンパ芽球性白血病である、請求項６５又は６６に記載の方法。

【請求項70】

前記がんが、線維肉腫である、請求項６５又は６６に記載の方法。

【請求項71】

前記がんが、多発性骨髄腫である、請求項６５又は６６に記載の方法。

【請求項72】

前記がんが、リンパ腫である、請求項６５又は６６に記載の方法。

【請求項73】

前記がんが、Ｂ細胞リンパ腫である、請求項６５又は６６に記載の方法。

【請求項74】

前記がんが、Ｔ細胞リンパ腫である、請求項６５又は６６に記載の方法。

【請求項75】

前記疾患が、アミロイドーシスである、請求項６２に記載の方法。

【請求項76】

前記疾患が、軽鎖アミロイドーシスである、請求項６２に記載の方法。

【請求項77】

前記１つ以上の治療剤が、ＩＭｉＤ剤、プロテアソーム阻害剤、ステロイド、抗ＣＤ３８剤、抗ＣＤ２０剤、Ｂｃｌ－２阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、二特異性抗体、ヌクレオシド類似体、ＢＴＫ阻害剤、ＤＮＡアルキル化剤、ＥＺＨ２阻害剤、アントラサイクリン、トポイソメラーゼ阻害剤、プラチン、チロシンキナーゼ阻害剤、ＨＤＡＣ阻害剤、核外輸送阻害剤、微小管阻害剤、Ｌ－アスパラギナーゼ、ペグ化アスパラギナーゼ、ＰＥＲＫ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、免疫調節剤、ＭＡＰＫ経路阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、ＥＲＫ阻害剤、及びＲａｓ阻害剤からなる群から選択される、請求項６２～７６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項78】

前記１つ以上の治療剤が、Ｌ－アスパラギナーゼ、ペグアスパルガーゼ、カラスパルガーゼペゴル－ｍｎｋｌ、ボルテゾミブ、カルフィルゾミブ、イキサゾミブ、サリドマイド、ポマリドミド、レナリドミド、デキサメタゾン、プレドニゾン、ダラツムマブ、ダラツムマブ／ヒアルロニダーゼ、イサツキシマブ、リツキシマブ、オビヌツズマブ、ベネトクラクス、イデラリシブ、コパンリシブ、デュベリシブ、ウムブラリシブ、ゲムシタビン、シタラビン、イブルチニブ、アカラブルチニブ、ザヌブルチニブ、ベンダムスチン、シクロホスファミド、タゼメトスタット、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エトポシド、オキサロプラチン、カルボプラチン、シスプラチン、ボスチニブ、ダサチニブ、イマチニブ、ニロチニブ、ポナチニブ、パノビノスタット、セリネクソール、ビンクリスチン、ＪＺＰ－４５８、エリアスパーゼ、ＰＦ７４５（ＪＺＰ－３４１）、アスパラギナーゼ Ｅｒｗｉｎｉａ ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉ（クリサンタスパーゼ）、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉアスパラギナーゼ（コラスパーゼ）、抗ＰＤ１剤、抗ＰＤＬ１剤、及び抗ＣＴＬＡ４剤からなる群から選択される、請求項６２～７６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項79】

統合ストレス応答、及び／又は小胞体ストレス応答の調節不全によって引き起こされる疾患の治療を必要とする患者において、その治療に使用するための、請求項１～２２のいずれか一項に記載の化合物、若しくはその薬学的に許容可能な塩、又は請求項２３に記載の医薬組成物。

【請求項80】

前記統合的ストレス応答、及び／又は前記小胞体ストレス応答の前記調節不全が、ＰＥＲＫキナーゼ、及びＧＣＮ２キナーゼからなる群から選択されるキナーゼによって引き起こされる、請求項７９に記載の使用。

【請求項81】

前記統合的ストレス応答、及び／又は前記小胞体ストレス応答の前記調節不全が、ＧＣＮ２キナーゼによって引き起こされる、請求項７９又は８０に記載の使用。

【請求項82】

前記統合的ストレス応答、及び／又は前記小胞体ストレス応答の前記調節不全が、ＰＥＲＫキナーゼによって引き起こされる、請求項７９又は８０に記載の使用。

【請求項83】

ＧＣＮ２キナーゼの活性の調節を必要とする患者において、ＧＣＮ２キナーゼの活性の調節に使用するための、請求項１～２２のいずれか一項に記載の化合物、若しくはその薬学的に許容可能な塩、又は請求項２３に記載の医薬組成物。

【請求項84】

ＧＣＮ２キナーゼの活性化を必要とする患者において、ＧＣＮ２キナーゼの活性化に使用するための、請求項１～２２のいずれか一項に記載の化合物、若しくはその薬学的に許容可能な塩、又は請求項２３に記載の医薬組成物。

【請求項85】

ＰＥＲＫキナーゼの活性の調節を必要とする患者において、ＰＥＲＫキナーゼの活性の調節に使用するための、請求項１～２２のいずれか一項に記載の化合物、若しくはその薬学的に許容可能な塩、又は請求項２３に記載の医薬組成物。

【請求項86】

ＰＥＲＫキナーゼの活性化を必要とする患者において、ＰＥＲＫキナーゼの活性化に使用するための、請求項１～２２のいずれか一項に記載の化合物、若しくはその薬学的に許容可能な塩、又は請求項２３に記載の医薬組成物。

【請求項87】

ＧＣＮ２キナーゼの阻害、及びＰＥＲＫキナーゼの阻害を必要とする患者において、ＧＣＮ２キナーゼの阻害、及びＰＥＲＫキナーゼの阻害に使用するための、請求項１～２２のいずれか一項に記載の化合物、若しくはその薬学的に許容可能な塩、又は請求項２３に記載の医薬組成物。

【請求項88】

ＧＣＮ２キナーゼの活性の調節を必要とする患者において、ＧＣＮ２キナーゼの活性の調節に使用するための、請求項１～２２のいずれか一項に記載の化合物、若しくはその薬学的に許容可能な塩、又は請求項２３に記載の医薬組成物。

【請求項89】

ＰＥＲＫキナーゼの活性の阻害を必要とする患者において、ＰＥＲＫキナーゼの活性の阻害に使用するための、請求項１～２２のいずれか一項に記載の化合物、若しくはその薬学的に許容可能な塩、又は請求項２３に記載の医薬組成物。

【請求項90】

がんの治療を必要とする患者において、がんの治療に使用するための、請求項１～２２のいずれか一項に記載の化合物、若しくはその薬学的に許容可能な塩、又は請求項２３に記載の医薬組成物。

【請求項91】

前記がんが、結腸直腸がん、肺がん、中皮腫、膵がん、咽頭がん、喉頭がん、食道がん、胃、十二指腸がん、小腸がん、乳がん、卵巣がん、睾丸腫瘍、前立腺、肝臓がん、甲状腺がん、腎臓がん、子宮がん、妊娠性絨毛がん、脳腫瘍、網膜芽細胞腫、皮膚がん、黒色腫、肉腫、線維肉腫、悪性骨腫瘍、膀胱がん、血液がん、白血病、急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、赤白血病、組織球性リンパ腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、及び悪性リンパ腫からなる群から選択される、請求項８９に記載の使用。

【請求項92】

前記がんが、白血病である、請求項８９又は９０に記載の使用。

【請求項93】

前記がんが、急性骨髄性白血病である、請求項８９又は９０に記載の使用。

【請求項94】

前記がんが、急性リンパ芽球性白血病である、請求項８９又は９０に記載の使用。

【請求項95】

前記がんが、線維肉腫である、請求項８９又は９０に記載の使用。

【請求項96】

前記がんが、多発性骨髄腫である、請求項８９又は９０に記載の使用。

【請求項97】

前記がんが、リンパ腫である、請求項８９又は９０に記載の使用。

【請求項98】

前記がんが、Ｂ細胞リンパ腫である、請求項８９又は９０に記載の使用。

【請求項99】

前記がんが、Ｔ細胞リンパ腫である、請求項８９又は９０に記載の使用。

【請求項100】

アミロイドーシスの治療を必要とする患者において、アミロイドーシスの治療に使用するための、請求項１～２２のいずれか一項に記載の化合物、若しくはその薬学的に許容可能な塩、又は請求項２３に記載の医薬組成物。

【請求項101】

軽鎖アミロイドーシスの治療を必要とする患者において、軽鎖アミロイドーシスの治療に使用するための、請求項１～２２のいずれか一項に記載の化合物、若しくはその薬学的に許容可能な塩、又は請求項２３に記載の医薬組成物。

【請求項102】

ＧＣＮ２関連疾患、及びＰＥＲＫ関連疾患から選択される疾患の治療を必要とする患者において、その疾患の治療に使用するための、請求項１～２２のいずれか一項に記載の化合物、若しくはその薬学的に許容可能な塩、又は請求項２３に記載の医薬組成物。

【請求項103】

前記疾患が、ＧＣＮ２関連疾患である、請求項１０１に記載の使用。

【請求項104】

前記疾患が、ＰＥＲＫ関連疾患である、請求項１０１に記載の使用。

【請求項105】

前記疾患が、がんである、請求項１０１～１０３のいずれか一項に記載の使用。

【請求項106】

前記がんが、結腸直腸がん、肺がん、中皮腫、膵がん、咽頭がん、喉頭がん、食道がん、胃、十二指腸がん、小腸がん、乳がん、卵巣がん、睾丸腫瘍、前立腺、肝臓がん、甲状腺がん、腎臓がん、子宮がん、妊娠性絨毛がん、脳腫瘍、網膜芽細胞腫、皮膚がん、黒色腫、肉腫、線維肉腫、悪性骨腫瘍、膀胱がん、血液がん、白血病、急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、赤白血病、組織球性リンパ腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、及び悪性リンパ腫からなる群から選択される、請求項１０４に記載の使用。

【請求項107】

前記がんが、白血病である、請求項１０３又は１０４に記載の使用。

【請求項108】

前記がんが、急性骨髄性白血病である、請求項１０３又は１０４に記載の使用。

【請求項109】

前記がんが、急性リンパ芽球性白血病である、請求項１０３又は１０４に記載の使用。

【請求項110】

前記がんが、線維肉腫である、請求項１０３又は１０４に記載の使用。

【請求項111】

前記がんが、多発性骨髄腫である、請求項１０３又は１０４に記載の方法。

【請求項112】

前記がんが、リンパ腫である、請求項１０３又は１０４に記載の方法。

【請求項113】

前記がんが、Ｂ細胞リンパ腫である、請求項１０３又は１０４に記載の方法。

【請求項114】

前記がんが、Ｔ細胞リンパ腫である、請求項１０３又は１０４に記載の方法。

【請求項115】

前記疾患が、アミロイドーシスである、請求項１０１に記載の使用。

【請求項116】

前記疾患が、軽鎖アミロイドーシスである、請求項１０１に記載の使用。

【請求項117】

ＧＣＮ２関連疾患、及びＰＥＲＫ関連疾患から選択される疾患の治療を必要とする患者において、その治療に使用するための、請求項１～２２のいずれか一項に記載の化合物、若しくはその薬学的に許容可能な塩、又は請求項２３に記載の医薬組成物。

【請求項118】

前記疾患が、ＧＣＮ２関連疾患である、請求項１１６に記載の使用。

【請求項119】

前記疾患が、ＰＥＲＫ関連疾患である、請求項１１６に記載の使用。

【請求項120】

前記疾患が、がんである、請求項１１６～１１８のいずれか一項に記載の使用。

【請求項121】

前記がんが、結腸直腸がん、肺がん、中皮腫、膵がん、咽頭がん、喉頭がん、食道がん、胃、十二指腸がん、小腸がん、乳がん、卵巣がん、睾丸腫瘍、前立腺、肝臓がん、甲状腺がん、腎臓がん、子宮がん、妊娠性絨毛がん、脳腫瘍、網膜芽細胞腫、皮膚がん、黒色腫、肉腫、線維肉腫、悪性骨腫瘍、膀胱がん、血液がん、白血病、急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、赤白血病、組織球性リンパ腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、及び悪性リンパ腫からなる群から選択される、請求項１１９に記載の使用。

【請求項122】

前記がんが、白血病である、請求項１１９又は１２０に記載の使用。

【請求項123】

白血病が、急性骨髄性白血病である、請求項１１９又は１２０に記載の使用。

【請求項124】

白血病が、急性リンパ芽球性白血病である、請求項１１９又は１２０に記載の使用。

【請求項125】

前記がんが、線維肉腫である、請求項１１９又は１２０に記載の使用。

【請求項126】

前記がんが、多発性骨髄腫である、請求項１１９又は１２０に記載の方法。

【請求項127】

前記がんが、リンパ腫である、請求項１１９又は１２０に記載の方法。

【請求項128】

前記がんが、Ｂ細胞リンパ腫である、請求項１１９又は１２０に記載の方法。

【請求項128】

前記がんが、Ｔ細胞リンパ腫である、請求項１１９又は１２０に記載の方法。

【請求項130】

前記疾患が、アミロイドーシスである、請求項１１６に記載の使用。

【請求項131】

前記疾患が、軽鎖アミロイドーシスである、請求項１１６に記載の方法。

【請求項132】

前記１つ以上の治療剤が、ＩＭｉＤ剤、プロテアソーム阻害剤、ステロイド、抗ＣＤ３８剤、抗ＣＤ２０剤、Ｂｃｌ－２阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、二特異性抗体、ヌクレオシド類似体、ＢＴＫ阻害剤、ＤＮＡアルキル化剤、ＥＺＨ２阻害剤、アントラサイクリン、トポイソメラーゼ阻害剤、プラチン、チロシンキナーゼ阻害剤、ＨＤＡＣ阻害剤、核外輸送阻害剤、微小管阻害剤、Ｌ－アスパラギナーゼ、ペグ化アスパラギナーゼ、ＰＥＲＫ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、免疫調節剤、ＭＡＰＫ経路阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、ＥＲＫ阻害剤、及びＲａｓ阻害剤からなる群から選択される、請求項１１６～１３０のいずれか一項に記載の使用。

【請求項133】

前記１つ以上の治療剤が、Ｌ－アスパラギナーゼ、ペグアスパルガーゼ、カラスパルガーゼペゴル－ｍｎｋｌ、ボルテゾミブ、カルフィルゾミブ、イキサゾミブ、サリドマイド、ポマリドミド、レナリドミド、デキサメタゾン、プレドニゾン、ダラツムマブ、ダラツムマブ／ヒアルロニダーゼ、イサツキシマブ、リツキシマブ、オビヌツズマブ、ベネトクラクス、イデラリシブ、コパンリシブ、デュベリシブ、ウムブラリシブ、ゲムシタビン、シタラビン、イブルチニブ、アカラブルチニブ、ザヌブルチニブ、ベンダムスチン、シクロホスファミド、タゼメトスタット、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エトポシド、オキサロプラチン、カルボプラチン、シスプラチン、ボスチニブ、ダサチニブ、イマチニブ、ニロチニブ、ポナチニブ、パノビノスタット、セリネクソール、ビンクリスチン、ＪＺＰ－４５８、エリアスパーゼ、ＰＦ７４５（ＪＺＰ－３４１）、アスパラギナーゼＥｒｗｉｎｉａ ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉ（クリサンタスパーゼ）、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉアスパラギナーゼ（コラスパーゼ）、抗ＰＤ１剤、抗ＰＤＬ１剤、及び抗ＣＴＬＡ４剤からなる群から選択される、請求項１１６～１３０のいずれか一項に記載の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年１２月３日に出願された米国仮特許出願第６３／２８５，８３３号及び２０２２年６月３日に出願された米国仮特許出願第６３／３４８，５５７号に対する優先権を主張するものであり、それらの各々の内容はその全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【背景技術】

【0002】

がん細胞は、異常な成長と急速な分裂を維持するために、継続的な栄養素の供給を必要とする。これらの栄養素の一部として、アミノ酸は腫瘍細胞の高い代謝要求をサポートするのに不可欠である。

【0003】

ＧＣＮ２は、セリン／スレオニンタンパク質キナーゼであり、統合的ストレス応答（ＩＳＲ）の主要制御因子である真核生物翻訳開始因子２α（ｅＩＦ２α）の１つである。ＩＳＲは、広範なストレス要因下で細胞恒常性を維持するために不可欠であり、細胞が低酸素やアミノ酸欠乏などのストレス条件に適応するときに活性化される。ＩＳＲは、細胞恒常性の攪乱に対する早期応答として作用するＧＣＮ２を含む、ｅＩＦ２αキナーゼのリン酸化及び活性化によって調節される。ＧＣＮ２に加えて、ＰＫＲ様ＥＲキナーゼ（ＰＥＲＫ）、二本鎖ＲＮＡ依存性プロテインキナーゼ（ＰＫＲ）、及びヘム調節性ｅＩＦ２αキナーゼ（ＨＲＩ）を含む、３つの他のｅＩＦ２αキナーゼファミリーがある。４つのｅＩＦ２αキナーゼは全て、そのキナーゼ触媒ドメインにおいて広範な相同性を共有するが、別個の調節ドメインを有する。ＩＦ２αキナーゼの各々は、別個の環境的及び生理学的ストレスに応答し、これはそれらの固有の調節機構を反映する。ＰＥＲＫキナーゼは、ＡＴＰの枯渇や小胞体ストレス応答などのストレス条件下で活性化され、ＧＣＮ２と同様に、ＰＥＲＫキナーゼ活性化は、重要なＩＳＲ転写因子ＡＴＦ４のアップレギュレーションにつながる。

【0004】

必須アミノ酸制限又は他のストレス要因（ＵＶ照射、酸化還元ストレス、又はプロテアソーム阻害）の条件下で、ＧＣＮ２はｅＩＦ２αをリン酸化し、これは新しい三元複合体の形成を阻害し、よってｍＲＮＡ翻訳開始を阻害する。全体的なｍＲＮＡの翻訳を減少させつつ、腫瘍細胞におけるｅＩＦ２αのリン酸化はまた、ＩＳＲ転写因子ＡＴＦ４の翻訳を増加させ、これは、腫瘍細胞へのアミノ酸の供給に専用の遺伝子を含む多くのストレス応答遺伝子、すなわち、アミノ酸の腫瘍細胞への流入を媒介するアミノ酸合成酵素及びトランスポーターの発現を増加させる。ＡＴＦ４は、ヒト固形腫瘍及び液体腫瘍において過剰発現しており、腫瘍の進行における重要な機能を示唆する。

【0005】

アスパラギンは、発がん及び腫瘍生物学に著しく影響を与えるいくつかの生合成経路に関与する重要なアミノ酸である。全ての細胞は、そのタンパク質合成及び成長のためにアスパラギンを必要とする。正常細胞は、内部合成を通してアスパラギン要件のほとんどを取得する。正常な細胞と比較して、がん細胞は、成長及び増殖するために増加した量のアスパラギンが必要であり、それ自身で必要量を産生することができないため、生存するために循環アスパラギンに頼らなければならない。アスパラギン合成酵素（ＡＳＮＳ）は、アスパラギン酸及びグルタミンからのアスパラギンの合成を触媒する。Ｌ－アスパラギナーゼ（ＡＳＮａｓｅ）は循環アスパラギンを除去し、それによってがん細胞から重要な栄養素を奪い、それらを死滅させる。腫瘍特異的代謝特徴を標的とする抗がん治療の最初の例であるＬ－アスパラギナーゼの使用は、小児急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）において確立された治療であるが、毒性により、この患者集団を超えてのその使用が制限される。多数のＡＬＬ細胞株におけるＡＳＮＳの特に低レベルの発現は、正常な細胞のものと比較して、成長に必要な栄養としての循環血清アスパラギンに対する細胞の異常な依存性のために、アスパラギン枯渇を効果的な治療方法とする。アスパラギナーゼに対する応答不良は、再発リスクの増加と関連している。他の血液がん及び固形がんは、低レベルのＡＳＮＳを発現するため、アスパラギン栄養要求株及びアスパラギナーゼ感受性でもあるはずである。逆に、一部のがんタイプでは、ＡＳＮＳが過剰発現しており、細胞増殖、化学抵抗性、及び転移挙動を促進する。アスパラギナーゼ耐性がんの場合、Ｌ－アスパラギナーゼを通した血液アスパラギン枯渇の作用は、代わりに、有意なＡＳＮＳの過剰発現につながり、化学療法剤の効果を事実上無効にする。多くの研究により、ＡＳＮＳがアミノ酸欠乏及び他の形態の細胞ストレスに対する細胞応答の中心にあることが示されている。転写調節を通して、ＡＳＮＳ遺伝子は、細胞生存の確保を目的とした２つのシグナル伝達経路の標的である。最初のアミノ酸応答（Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ、ＡＡＲ）と名付けられたものは、不均衡なアミノ酸の可用性条件下でＧＣＮ２キナーゼによって活性化される。第二の経路は、小胞体ストレス応答（Ｕｎｆｏｌｄｅｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ、ＵＰＲ）と名付けられ、小胞体ストレス増加の条件下でＰＥＲＫキナーゼによって活性化される。ＡＡＲ経路及びＵＰＲ経路は、ｅＩＦ２αのリン酸化に集中し、これは、全体的なタンパク質合成の減弱と同時に、転写因子ＡＴＦ４を含む選択されたｍＲＮＡ集団の優先的翻訳を引き起こす。ＡＴＦ４は、ＡＳＮＳ誘導の主要因であり、ＡＳＮＳプロモーター内のエンハンサー要素への結合を通してトランスアクチベーターとして機能する。

【0006】

ＧＣＮ２は、ＡＳＮＳの低い基底レベルの発現を有するがん細胞を、インビトロ及びインビボにおいて、抗白血病剤Ｌ－アスパラギナーゼに増感させる。ＧＣＮ２阻害剤を用いた治療は、ＡＳＮＳの誘導を防止することによって、急性リンパ芽球性白血病細胞をＬ－アスパラギナーゼ感受性にした。ＧＣＮ２阻害剤は、ＡＳＮＳ低／欠乏がんにおいて、Ｌ－アスパラギナーゼと相乗的な抗増殖効果を示す。したがって、ＧＣＮ２阻害剤及びＬ－アスパラギナーゼの併用療法は、急性リンパ芽球性白血病及び他のタイプのがんにおける転帰改善を達成する見込みがある。急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、及び膵がん細胞は、Ｌ－アスパラギナーゼ及びＧＣＮ２阻害剤の併用療法に対して特に感受性がある。過去に報告された研究によると、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、及び膵がん細胞におけるＡＳＮａｓｅ及びＧＣＮ２阻害剤の併用療法は、Ｌ－アスパラギナーゼ又はＧＣＮ２阻害剤の単剤治療の結果と比較して力強い抗腫瘍活性を示した。よって、ＧＣＮ２阻害剤は、これらの腫瘍の治療に使用されるＬ－アスパラギナーゼに対する増感剤を示しうる。要約すると、ＧＣＮ２阻害は、基底レベルで低いＡＳＮＳ発現を有するがん細胞のＡＳＮＳ誘導を防止することにより、Ｌ－アスパラギナーゼ治療に対する感受性を高める。

【0007】

ＧＣＮ２の阻害はまた、腫瘍細胞のトリプトファン依存性免疫監視を含む免疫系を含む腫瘍微小環境を標的とするための有効な戦略でありうる。

【0008】

腫瘍微小環境［ＴＭＥ：腫瘍細胞を囲む一連の細胞外成分及び間質細胞（内皮細胞、がん関連線維芽細胞、腫瘍関連マクロファージ、腫瘍浸潤性Ｔ細胞）］は、酸素並びに、グルコース及びアミノ酸などの主要栄養素の欠乏を特徴とし、全体的な免疫抑制環境をもたらす。

【0009】

多くの腫瘍は、その代謝柔軟性を利用し、栄養素を自身の利益のために再配向することによって、免疫監視から逃れるように進化した。腫瘍内の間質細胞及び骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）は、免疫機能を阻害し、腫瘍の成長を支持する栄養欠乏環境を作り出す。

【0010】

トリプトファン代謝における重要酵素〔インドールアミン－２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）及びトリプトファン－２，３－ジオキシゲナーゼ（ＴＤＯ）］の過剰発現によって駆動される、必須アミノ酸の１つであるトリプトファンの異化上昇は、腫瘍微小環境の細胞によって駆動され、多くのタイプのがんにおいて免疫抑制性微小環境をもたらす。局所的なトリプトファンの枯渇が、極めて重要なＴ細胞免疫抑制機序であると考えられる。Ｔ細胞では、ＧＣＮ２キナーゼはトリプトファン欠乏の分子センサーとして特定されている。トリプトファンの枯渇によるＧＣＮ２の活性化は、アポトーシスを誘発し、Ｔ細胞増殖を軽減する。ＧＣＮ２は、ＩＤＯ／ＴＤＯの重要なエフェクターシグナル伝達成分であり、トリプトファン高度依存性Ｔ細胞の代謝チェックポイントと考えられている。

【0011】

ＧＣＮ２経路は、腫瘍免疫逃避に重要であるだけでなく、腫瘍微小環境の他の側面の調節にも積極的な役割を果たす。ＧＣＮ２ノックダウンは、腫瘍が血管新生の増加を介して栄養供給を増強するために使用する、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）のアミノ酸欠乏（ＡＡＤ）誘発性発現を防止することが実証されている。よって、ＧＣＮ２／ＡＴＦ４経路の活性化は、ＡＡＤ介在性ＶＥＧＦ発現を通して腫瘍の成長及び血管新生を促進する。ＡＴＦ４又はＧＣＮ２発現の抑止は、インビボでの腫瘍増殖を有意に阻害した。

【0012】

したがって、ＧＣＮ２の選択的阻害は、免疫系の活性を増加させ、かつ腫瘍微小環境の血管形成を減少させることができる。ＧＣＮ２－ｅＩＦ２α－ＡＴＦ４経路は、ストレス条件下での腫瘍細胞の代謝ホメオスタシスの維持、及び免疫抑制性免疫細胞の微小環境の維持に重要である。ＰＥＲＫ－ＡＴＦ４経路は、ストレス条件下での腫瘍細胞のホメオスタシスの維持にも重要である。ＧＣＮ２の阻害が代償機序としてＰＥＲＫを活性化し、逆もまた同様に、ＰＥＲＫの阻害が代償機序としてＧＣＮ２を活性化するように、ＧＣＮ２及びＰＥＲＫシグナル伝達経路の両方のクロストーク調節があることが報告されている。

【0013】

腫瘍細胞（腫瘍細胞自律性）及び腫瘍免疫細胞微小環境の両方において、ＧＣＮ２及び／又はＰＥＲＫの腫瘍促進側面を調節するＧＣＮ２及び／又はＰＥＲＫの阻害剤に対するニーズがある。

【発明の概要】

【0014】

本明細書では、ＧＣＮ２（ｇｅｎｅｒａｌ ｃｏｎｔｒｏｌ ｎｏｎｄｅｒｅｐｒｅｓｓｉｂｌｅ ２）キナーゼ及び／又はＰＥＲＫ（ＰＫＲ様ＥＲキナーゼ）キナーゼを調節（阻害又は活性）する化合物、並びにＧＣＮ２又はＰＥＲＫ関連疾患を含む障害の治療のためのその使用方法が記載されている。

【0015】

一実施形態では、式Ｉ－Ａによって表される化合物：

【化1】

又はその薬学的に許容可能な塩、エナンチオマー、立体異性体、若しくは互変異性体が本明細書に記載され、式中：Ｘ^１及びＸ^３は各々独立して、ＣＨ及びＮからなる群から選択され、Ｘ^２は、ＮＲ^６、Ｏ、及びＳからなる群から選択され、Ｒ^１、Ｒ^２、及びＲ^３は各々独立して、Ｈ、ハロゲン、シアノ、及びアルコキシからなる群から選択され、Ｒ^４は、ハロゲン、アルコキシ及びアルキルからなる群から選択され、Ｒ^５は、Ｈ、ハロゲン及びアルキルからなる群から選択され、Ｒ^６は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、アルキニル、アルキニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルアルキル、アリール、ヘテロアリール、及びヘテロアリールアルキルからなる群から選択され、Ｒ^７は、Ｈ、アルキル、及びアシルからなる群から選択される。

【0016】

別の実施形態では、本明細書に記載の化合物（例えば、本明細書に記載の式Ｉ－Ａ、Ｉ－Ｂ、Ｉ－Ｃ、及びＩ－Ｄの化合物）と、薬学的に許容可能な担体又は賦形剤とを含む医薬組成物が、本明細書に記載される。

【0017】

別の実施形態では、本明細書に記載の化合物、若しくはその薬学的に許容可能な塩、又は本明細書に記載の医薬組成物の治療有効量を患者に投与することを含む、統合的ストレス応答の調節不全によって引き起こされる疾患の治療を必要とする患者のその疾患を治療する方法が本明細書に記載されている。

【0018】

別の実施形態では、本明細書に記載の化合物、若しくはその薬学的に許容可能な塩、又は本明細書に記載の医薬組成物の治療有効量を患者に投与することを含む、統合的ストレス応答及び／又は小胞体ストレス応答の調節不全によって引き起こされる疾患の治療を必要とする患者において、その疾患を治療する方法が本明細書に記載されている。

【0019】

別の実施形態では、本明細書に記載の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩、又は本明細書に記載の医薬組成物の治療有効量を患者に投与することを含む、それを必要とする患者のＧＣＮ２キナーゼの活性を調節する方法が本明細書に記載されている。

【0020】

別の実施形態では、本明細書に記載される化合物、又はその薬学的に許容可能な塩、又は本明細書に記載される医薬組成物の治療有効量を患者に投与することを含む、それを必要とする患者のＧＣＮ２キナーゼを活性化する方法が本明細書に記載されている。

【0021】

別の実施形態では、本明細書に記載される化合物、又はその薬学的に許容可能な塩、又は本明細書に記載される医薬組成物の治療有効量を患者に投与することを含む、それを必要とする患者のＰＥＲＫキナーゼの活性を調節する方法が本明細書に記載されている。

【0022】

別の実施形態では、本明細書に記載される化合物、又はその薬学的に許容可能な塩、又は本明細書に記載される医薬組成物の治療有効量を患者に投与することを含む、それを必要とする患者のＰＥＲＫキナーゼを活性化する方法が本明細書に記載されている。

【0023】

別の実施形態では、本明細書に記載される化合物、又はその薬学的に許容可能な塩、又は本明細書に記載される医薬組成物の治療有効量を患者に投与することを含む、それを必要とする患者のＧＣＮ２キナーゼ及びＰＥＲＫキナーゼを阻害する方法が本明細書に記載されている。

【0024】

別の実施形態では、本明細書に記載される化合物、若しくはその薬学的に許容可能な塩、又は本明細書に記載される医薬組成物の治療有効量を患者に投与することを含む、ＧＣＮ２キナーゼの活性を調節を必要とする患者において、ＧＣＮ２キナーゼの活性を調節する方法が本明細書に記載されている。

【0025】

別の実施形態では、本明細書に記載される化合物、若しくはその薬学的に許容可能な塩、又は本明細書に記載される医薬組成物の治療有効量を患者に投与することを含む、ＰＥＲＫキナーゼの活性を阻害を必要とする患者において、ＰＥＲＫキナーゼの活性を阻害する方法が本明細書に記載されている。

【0026】

別の実施形態では、本明細書に記載される化合物、若しくはその薬学的に許容可能な塩、又は本明細書に記載される医薬組成物の治療有効量を患者に投与することを含む、ＧＣＮ２関連疾患及びＰＥＲＫ関連疾患から選択される疾患の治療を必要とする患者において、その疾患を治療する方法が本明細書に記載されている。

【0027】

別の実施形態では、本明細書に記載される化合物、又はその薬学的に許容可能な塩の治療有効量と、１つ以上の治療剤の治療有効量とを患者に投与することを含む、ＧＣＮ２関連疾患及びＰＥＲＫ関連疾患から選択される疾患の治療を必要とする患者において、その疾患を治療する方法が本明細書に記載されている。

【0028】

別の実施形態では、本明細書に記載される化合物（例えば、本明細書に記載される式Ｉ－Ａ、Ｉ－Ｂ、Ｉ－Ｃ、及びＩ－Ｄの化合物）、若しくはその薬学的に許容可能な塩、又は本明細書に記載される医薬組成物の治療有効量を患者に投与することを含む、がんの治療を必要とする患者において、がんを治療する方法が本明細書に記載されている。

【0029】

別の実施形態では、本明細書に記載される化合物（例えば、本明細書に記載される式Ｉ－Ａ、Ｉ－Ｂ、Ｉ－Ｃ、及びＩ－Ｄの化合物）又はその薬学的に許容可能な塩の治療有効量を患者に投与することを含む、治療を必要とする患者の黒色腫、線維肉腫、甲状腺がん、卵巣がん、結腸がん、膵がん、肺がん、膀胱がん、消化管間質腫瘍、固形腫瘍、血液由来のがん、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）及びＧＣＮ２シグナル伝達経路の活性化によって引き起こされる他のがんからなる群から選択される障害を治療する方法が本明細書に記載されている。

【図面の簡単な説明】

【0030】

【図1】化合物２の濃度の増加に応答したＵＰＲ／ＩＳＲマーカーＡＴＦ４（黒色の棒）の予想外の刺激を示すグラフ表示である。

【図2】ＮａｎｏＢＲＥＴアッセイにおいて、化合物２によって誘発されたＰＥＲＫオリゴマーの刺激のグラフを示す。

【図3】Ｈ９２９多発性骨髄腫細胞における、ＰＥＲＫ下流シグナル伝達タンパク質ＡＴＦ４及びＣＨＯＰ（ローディング対照としてのアクチン）の刺激を示す。

【図4】Ｈ９２９多発性骨髄腫細胞における化合物２の濃度の増加に応答したＡＴＦ４標的遺伝子の刺激を示すグラフ表示である。

【図5】Ｈ９２９多発性骨髄腫細胞におけるアポトーシス経路の読み出しに対する化合物２の効果を示す。

【図6A】図６Ａ、６Ｂ、６Ｃ及び６Ｄは、ＲＰＭＩ８２２６多発性骨髄腫細胞（図６Ａ）、Ｈ９２９多発性骨髄腫細胞（図６Ｂ）、ＧＡ－１０バーキットリンパ腫細胞（図６Ｃ）、及び濾胞性リンパ腫細胞（図６Ｄ）における標準治療と組み合わせた化合物２の細胞増殖研究を示す。

【図6B】図６Ａ、６Ｂ、６Ｃ及び６Ｄは、ＲＰＭＩ８２２６多発性骨髄腫細胞（図６Ａ）、Ｈ９２９多発性骨髄腫細胞（図６Ｂ）、ＧＡ－１０バーキットリンパ腫細胞（図６Ｃ）、及び濾胞性リンパ腫細胞（図６Ｄ）における標準治療と組み合わせた化合物２の細胞増殖研究を示す。

【図6C】図６Ａ、６Ｂ、６Ｃ及び６Ｄは、ＲＰＭＩ８２２６多発性骨髄腫細胞（図６Ａ）、Ｈ９２９多発性骨髄腫細胞（図６Ｂ）、ＧＡ－１０バーキットリンパ腫細胞（図６Ｃ）、及び濾胞性リンパ腫細胞（図６Ｄ）における標準治療と組み合わせた化合物２の細胞増殖研究を示す。

【図6D】図６Ａ、６Ｂ、６Ｃ及び６Ｄは、ＲＰＭＩ８２２６多発性骨髄腫細胞（図６Ａ）、Ｈ９２９多発性骨髄腫細胞（図６Ｂ）、ＧＡ－１０バーキットリンパ腫細胞（図６Ｃ）、及び濾胞性リンパ腫細胞（図６Ｄ）における標準治療と組み合わせた化合物２の細胞増殖研究を示す。

【図7A】図７Ａ及び７Ｂは、インビボＰＫ／ＰＤモデルにおいて、ＧＣＮ２活性を測定する、ＡＴＦ４レベルに対するアスパラギナーゼと組み合わせた化合物２の効果を示す。図７Ａは、ＰＫ／ＰＤモデル研究から得られた結果のデータプロットを示し、図７Ｂは、結果を表形式で示す。

【図7B】図７Ａ及び７Ｂは、インビボＰＫ／ＰＤモデルにおいて、ＧＣＮ２活性を測定する、ＡＴＦ４レベルに対するアスパラギナーゼと組み合わせた化合物２の効果を示す。図７Ａは、ＰＫ／ＰＤモデル研究から得られた結果のデータプロットを示し、図７Ｂは、結果を表形式で示す。

【図8】ＭＶ－４－１１異種移植モデルにおいて、腫瘍成長に対するアスパラギナーゼと組み合わせた化合物２の効果を示すプロットを示す。

【図9A】図９Ａは、インビトロで組換えＧＣＮ２酵素の活性を測定する、組換えＧＣＮ２活性アッセイにおける化合物２の効果を示す。図９Ｂは、インビトロで組換えＰＥＲＫ酵素の活性を測定する、組換えＰＥＲＫ活性アッセイにおける化合物２の効果を示す。

【図9B】図９Ａは、インビトロで組換えＧＣＮ２酵素の活性を測定する、組換えＧＣＮ２活性アッセイにおける化合物２の効果を示す。図９Ｂは、インビトロで組換えＰＥＲＫ酵素の活性を測定する、組換えＰＥＲＫ活性アッセイにおける化合物２の効果を示す。

【図10A】図１０Ａ、１０Ｂ、及び１０Ｃは、固形腫瘍がん（図１０Ａ、Ｈ２０３０；図１０Ｂ、Ｈ３５８；図１０Ｃ、ＨＴ－１０８０）細胞株におけるＩＳＲ及びアポトーシス経路に対する化合物２の効果を示す。

【図10B】図１０Ａ、１０Ｂ、及び１０Ｃは、固形腫瘍がん（図１０Ａ、Ｈ２０３０；図１０Ｂ、Ｈ３５８；図１０Ｃ、ＨＴ－１０８０）細胞株におけるＩＳＲ及びアポトーシス経路に対する化合物２の効果を示す。

【図10C】図１０Ａ、１０Ｂ、及び１０Ｃは、固形腫瘍がん（図１０Ａ、Ｈ２０３０；図１０Ｂ、Ｈ３５８；図１０Ｃ、ＨＴ－１０８０）細胞株におけるＩＳＲ及びアポトーシス経路に対する化合物２の効果を示す。

【図11A】図１１Ａ、１１Ｂ、及び１１Ｃは、スフェロイド増殖アッセイにおける化合物２の効果を示す。図１１Ａは、単剤としてのＨ２０３０固形腫瘍スフェロイドにおける、単剤としての、化合物２によるＨ２０３０固形腫瘍スフェロイドにおける細胞退縮を示す。図１１Ｂ及び１１Ｃは、単剤としての、Ｈ３５８（図１１Ｂ）及びＨＴ－１０８０（図１１Ｃ）固形腫瘍スフェロイドの細胞増殖に対する化合物２の効果を示す。

【図11B】図１１Ａ、１１Ｂ、及び１１Ｃは、スフェロイド増殖アッセイにおける化合物２の効果を示す。図１１Ａは、単剤としてのＨ２０３０固形腫瘍スフェロイドにおける、単剤としての、化合物２によるＨ２０３０固形腫瘍スフェロイドにおける細胞退縮を示す。図１１Ｂ及び１１Ｃは、単剤としての、Ｈ３５８（図１１Ｂ）及びＨＴ－１０８０（図１１Ｃ）固形腫瘍スフェロイドの細胞増殖に対する化合物２の効果を示す。

【図11C】図１１Ａ、１１Ｂ、及び１１Ｃは、スフェロイド増殖アッセイにおける化合物２の効果を示す。図１１Ａは、単剤としてのＨ２０３０固形腫瘍スフェロイドにおける、単剤としての、化合物２によるＨ２０３０固形腫瘍スフェロイドにおける細胞退縮を示す。図１１Ｂ及び１１Ｃは、単剤としての、Ｈ３５８（図１１Ｂ）及びＨＴ－１０８０（図１１Ｃ）固形腫瘍スフェロイドの細胞増殖に対する化合物２の効果を示す。

【図12A】図１２Ａ、１２Ｂ、及び１２Ｃは、スフェロイドの成長の阻害のための標準治療剤と組み合わせた化合物２の効果を示す。図１２Ａは、ソトラシブと組み合わせた、又はソトラシブなしの化合物２力価（ｔｉｔｅｒ）で処理したＨ２０３０ ＮＳＣＬＣスフェロイドの細胞増殖実験を表す。図１２Ｂは、ソトラシブと組み合わせた、又はソトラシブなしの化合物２力価で処理したＨ２０３０ ＮＳＣＬＣスフェロイドの細胞増殖実験を表す。図１２Ｃは、トラメチニブと組み合わせた、又はトラメチニブなしの化合物２力価で処理したＨ２０３０ ＮＳＣＬＣスフェロイドの細胞増殖実験を表す。

【図12B】図１２Ａ、１２Ｂ、及び１２Ｃは、スフェロイドの成長の阻害のための標準治療剤と組み合わせた化合物２の効果を示す。図１２Ａは、ソトラシブと組み合わせた、又はソトラシブなしの化合物２力価（ｔｉｔｅｒ）で処理したＨ２０３０ ＮＳＣＬＣスフェロイドの細胞増殖実験を表す。図１２Ｂは、ソトラシブと組み合わせた、又はソトラシブなしの化合物２力価で処理したＨ２０３０ ＮＳＣＬＣスフェロイドの細胞増殖実験を表す。図１２Ｃは、トラメチニブと組み合わせた、又はトラメチニブなしの化合物２力価で処理したＨ２０３０ ＮＳＣＬＣスフェロイドの細胞増殖実験を表す。

【図12C】図１２Ａ、１２Ｂ、及び１２Ｃは、スフェロイドの成長の阻害のための標準治療剤と組み合わせた化合物２の効果を示す。図１２Ａは、ソトラシブと組み合わせた、又はソトラシブなしの化合物２力価（ｔｉｔｅｒ）で処理したＨ２０３０ ＮＳＣＬＣスフェロイドの細胞増殖実験を表す。図１２Ｂは、ソトラシブと組み合わせた、又はソトラシブなしの化合物２力価で処理したＨ２０３０ ＮＳＣＬＣスフェロイドの細胞増殖実験を表す。図１２Ｃは、トラメチニブと組み合わせた、又はトラメチニブなしの化合物２力価で処理したＨ２０３０ ＮＳＣＬＣスフェロイドの細胞増殖実験を表す。

【図13A】図１３Ａ、１３Ｂ、及び１３Ｃは、ＨＴ－１０８０ ｓｈＲＮＡノックダウンアッセイにおける化合物２の効果を示す。図１３Ａは、ＨＴ－１０８０細胞株における標的化ｓｈＲＮＡを使用したＧＣＮ２及びＰＥＲＫノックダウンを示す。図１３Ｂは、ＡＴＦ４シグナルのウェスタンブロット定量を表す。図１３Ｃは、スフェロイド成長阻害に対する化合物２の効果を示す。

【図13B】図１３Ａ、１３Ｂ、及び１３Ｃは、ＨＴ－１０８０ ｓｈＲＮＡノックダウンアッセイにおける化合物２の効果を示す。図１３Ａは、ＨＴ－１０８０細胞株における標的化ｓｈＲＮＡを使用したＧＣＮ２及びＰＥＲＫノックダウンを示す。図１３Ｂは、ＡＴＦ４シグナルのウェスタンブロット定量を表す。図１３Ｃは、スフェロイド成長阻害に対する化合物２の効果を示す。

【図13C】図１３Ａ、１３Ｂ、及び１３Ｃは、ＨＴ－１０８０ ｓｈＲＮＡノックダウンアッセイにおける化合物２の効果を示す。図１３Ａは、ＨＴ－１０８０細胞株における標的化ｓｈＲＮＡを使用したＧＣＮ２及びＰＥＲＫノックダウンを示す。図１３Ｂは、ＡＴＦ４シグナルのウェスタンブロット定量を表す。図１３Ｃは、スフェロイド成長阻害に対する化合物２の効果を示す。

【図14A】図１４Ａ及び１４Ｂは、ＨＴ－１０８０線維肉腫異種移植ＰＫ／ＰＤモデルにおける化合物２の効果を示す。図１４Ａは、異なる用量での化合物２によるＡＴＦ４レベルの上方制御を示す。図１４Ｂは、投与後の様々な時点における化合物２の対応する血漿レベルを示す。

【図14B】図１４Ａ及び１４Ｂは、ＨＴ－１０８０線維肉腫異種移植ＰＫ／ＰＤモデルにおける化合物２の効果を示す。図１４Ａは、異なる用量での化合物２によるＡＴＦ４レベルの上方制御を示す。図１４Ｂは、投与後の様々な時点における化合物２の対応する血漿レベルを示す。

【図15A】図１５Ａ及び１５Ｂは、ＨＴ－１０８０異種移植有効性モデルにおける化合物２の効果を示す。図１５Ａは、ＬｏＶｏ結腸直腸異種移植モデルにおける腫瘍成長に対する化合物２の効果を示し、図１５Ｂは、ＨＴ－１０８０線維肉腫異種移植モデルの腫瘍成長に対する化合物２の効果を示す。

【図15B】図１５Ａ及び１５Ｂは、ＨＴ－１０８０異種移植有効性モデルにおける化合物２の効果を示す。図１５Ａは、ＬｏＶｏ結腸直腸異種移植モデルにおける腫瘍成長に対する化合物２の効果を示し、図１５Ｂは、ＨＴ－１０８０線維肉腫異種移植モデルの腫瘍成長に対する化合物２の効果を示す。

【発明を実施するための形態】

【0031】

以下に、本開示の特徴及び他の詳細を、より具体的に記載する。明細書、実施例及び添付の特許請求の範囲に採用される特定の用語を、ここにまとめる。これらの定義は、本開示の残りの部分に照らして、当業者によって理解されるように読み取られるべきである。別段に定義しない限り、本明細書において使用される全ての技術用語及び科学用語は、当業者によって一般的に理解される意味と同じ意味を有する。

【0032】

定義
本出願に記載される定義は、本出願全体を通して使用される用語を明確にすることを意図している。

【0033】

別段の規定がない限り、本明細書において使用される全ての技術用語及び科学用語は、本主題が属する分野の当業者によって一般的に理解される意味と同じ意味を有する。本明細書及び添付の特許請求の範囲において使用される場合、そうでないことが明記されない限り、以下の用語は、本開示の理解を容易にするために示された意味を有する。

【0034】

置換基との結合が環中の２つの原子を接続する結合を横断することが示されている場合、こうした置換基は環上の任意の原子に結合され得る。置換基が、こうした置換基が、それを介して所与の式の化合物の残りの部分に結合される原子を示すことなく列挙される場合、こうした置換基は、こうした置換基中の任意の原子を介して結合され得る。置換基の組み合わせ、置換基の位置及び／又は変数は、こうした組み合わせが安定した化合物をもたらす場合に許容される。

【0035】

本明細書で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈によってそうでないことが明確に示されない限り、複数の参照を包含する。

【0036】

本明細書で使用される場合、「本明細書に」という用語は、本出願全体を意味する。

【0037】

本明細書で使用される場合、「重水素化」は、少なくとも１つの水素原子が重水素によって置換されることを意味する。重水素化化合物の任意の試料において、化合物の一部の個別分子は、指定された位置に、重水素ではなく水素を有する可能性が高い。しかしながら、指定された位置に重水素を有する重水素化化合物の分子のパーセントは、天然に発生するものよりもはるかに大きいであろう。重水素化位置での重水素は濃縮されている。

【0038】

本明細書で使用される場合、「任意選択」又は「任意選択的に」という用語は、その後に記載される事象又は状況が発生する場合がある、又は発生しない場合があることを意味し、また、その記載は、事象又は状況が発生する場合、並びに発生しない場合を含む。例えば、「任意選択的に置換されるアルキル」は、アルキルが置換されていてもよく、アルキルが置換されていない場合も指す。

【0039】

当然のことながら、本開示の化合物上の置換基及び置換パターンは、当業者によって選択され、容易に利用可能な出発材料から、当該技術分野で公知の技術、並びに以下に記載される方法によって容易に合成され得る化学的に安定な化合物をもたらすことができる。置換基自体が複数の基で置換される場合、これらの複数の基は、安定した構造が得られる限り、同じ炭素又は異なる炭素上にあってもよいことが理解される。

【0040】

本明細書で使用される場合、「任意選択的に置換された」という用語は、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、ハロゲン、アルキル、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アミノ、アミノアルキル、シアノ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、－ＯＣ（＝Ｏ）－ＣＨ_２－Ｏアルキルを含むがこれに限定されない、特定の置換基のラジカルを有する、所与の構造中の１～６個の水素原子の置換を指す。「任意選択的に置換された」とは、所与の構造中の１～４個の水素原子を、上述の置換基で置換することを指すことが好ましい。１～３個の水素原子が、上述の置換基によって置換されることがより好ましい。置換基は更に置換され得ることが理解される。

【0041】

本明細書で使用される場合、「置換された」という用語は、骨格の１つ以上の炭素上の水素を置換する置換基を有する部分を指す。当然のことながら、「置換」又は「～で置換された」は、こうした置換が置換された原子及び置換基の許容原子価に従っていること、及び置換が、例えば、再構成、環化、除去などにより自然に形質転換を受けない、安定した化合物をもたらすという暗黙の条件を含む。本明細書で使用される場合、「置換された」という用語は、有機化合物の全ての許容される置換基を含むことが企図される。広範な態様では、許容される置換基は、有機化合物の非環状及び環状、分岐及び非分岐、炭素環式及び複素環式、芳香族及び非芳香族置換基を含む。許容される置換基は、適切な有機化合物に対して、１つ以上の同一又は異なる置換基であり得る。本出願の目的のために、窒素などのヘテロ原子は、水素置換基及び／又は、ヘテロ原子の原子価を満たす本明細書に記載の有機化合物の任意の許容可能な置換基を有してもよい。

【0042】

置換基は、本明細書に記載される任意の置換基を含むことができ、例えば、こうした置換基は、特記されない限り、例えば、ハロゲン、ヒドロキシ、カルボニル（カルボキシル、アルコキシカルボニル、ホルミル、又はアシルなど）、アルコキシ、アミノ、アミド、イミン、シアノ、スルホニル、ヘテロシクリル、アラルキル、又は芳香族若しくはヘテロ芳香族部分を含み得る。当業者であれば、適切な場合、置換基自体を置換することができることを理解するであろう。例えば、置換アルキルの置換基は、アミノ、アミド、スルホニル、並びにエーテル、カルボニル（カルボキシレート、及びエステルを含む）、－ＣＦ_３、－ＣＮなどの置換形態及び非置換形態を含み得る。「非置換」として具体的に記載されない限り、本明細書の化学的部分への言及は、置換バリアントを含むと理解される。例えば、「アリール」基又は部分への言及は、置換バリアント及び非置換バリアントの両方を暗黙的に含む。

【0043】

本明細書で使用される場合、「アルキル」という用語は、完全に飽和した直鎖又は分岐非芳香族炭化水素を指す。典型的には、直鎖又は分岐アルキル基は、１～約２０個、好ましくは１～約１０個の炭素原子を有し、例えば、別段の定義がない限り、Ｃ_１～Ｃ_１０アルキル又は例えばＣ_１～Ｃ_６アルキルであってもよい。直鎖アルキル基及び分岐アルキル基の例としては、限定されるものではないが、メチル、エチル、１－プロピル（ｎ－プロピル）、２－プロピル、ｎ－ブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔブチル、１－ペンチル、２－ペンチル、３－ペンチル、ネオ－ペンチル、１－ヘキシル、２－ヘキシル、３－ヘキシル、１－ヘプチル、２－ヘプチル、３－ヘプチル、４－ヘプチル、１－オクチル、２－オクチル、３－オクチル、又は４－オクチルなどが挙げられる。更に、本明細書、実施例、及び特許請求の範囲全体を通して使用される「アルキル」という用語は、「非置換アルキル」及び「置換アルキル」の両方を含むことが意図されており、後者は、炭化水素骨格の１つ以上の炭素上の水素を置換する置換基を有するアルキル部分を指す。「アルキル」基は、任意選択的に置換されてもよい。

【0044】

アシル、アシルオキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、又はアルコキシなどの化学部分とともに使用されるとき、「Ｃ_ｘ－Ｃ_ｙ」という用語は、鎖中にｘ～ｙ個の炭素を含有する基を含むことを意味する。例えば、「Ｃ_ｘ－Ｃ_ｙ」という用語は、置換又は非置換の飽和炭化水素基を指し、これは、トリフルオロメチル及び２，２，２－トリフルオロエチルなどのハロアルキル基を含む、鎖中にｘ～ｙ個の炭素を含有する直鎖アルキル及び分岐鎖アルキル基を含む。Ｃ_０アルキルは、基が末端位置にある場合は水素を示し、内部にある場合は結合を示す。

【0045】

本明細書で使用される場合、用語「アルケニル」は、少なくとも１つの炭素－炭素二重結合を有する不飽和直鎖又は分岐炭化水素を指す。例示的なアルケニル基としては、限定されるものではないが、本明細書ではそれぞれＣ_２－Ｃ_６アルケニル、及びＣ_３－Ｃ_４アルケニルと呼ばれる、２～６個又は３～４個の炭素原子の直鎖又は分岐基が挙げられる。例示的なアルケニル基としては、ビニル、アリル、ブテニル、ペンテニルなどが挙げられるが、これらに限定されない。

【0046】

本明細書で使用される場合、用語「アルキニル」は、少なくとも１つの炭素－炭素三重結合を有する不飽和直鎖又は分岐炭化水素を指す。例示的なアルキニル基としては、限定されるものではないが、本明細書ではそれぞれＣ_２－Ｃ_６アルキニル、及びＣ_３－Ｃ_６アルキニルと呼ばれる、２～６個又は、３～６個の炭素原子の直鎖又は分岐基が含まれる。例示的なアルキニル基としては、エチニル、プロピニル、ブチニル、ペンチニル、ヘキシニル、メチルプロピニルなどが挙げられるが、これらに限定されない。

【0047】

本明細書で使用される場合、「アルコキシ」という用語は、コア構造に付着している酸素原子に結合された直鎖又は分岐状の飽和脂肪族（アルキル）炭化水素ラジカルを指す。アルコキシ基は、１～６個の炭素原子を有することが好ましい、すなわちＣ_１～Ｃ_６アルコキシであってもよい。アルコキシ基の例としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、イソブトキシ、ｔｅｒｔ－ブトキシ、ペントキシ、３－メチルブトキシなどが挙げられるが、これらに限定されない。

【0048】

本明細書で使用される場合、「アルコキシアルキル」という用語は、アルコキシ基で置換されたアルキル基（上記に定義）を指し、一般式アルキル－Ｏ－アルキルによって表され得る。アルコキシアルキル基の例としては、メチル－Ｏ－エチレン－、エチル－Ｏ－エチレン－が挙げられるが、これらに限定されない。

【0049】

本明細書で使用される場合、「ハロアルキル」という用語は、アルキル基（上記に定義）が１つ以上のハロゲンで置換されていることを指す。モノハロアルキルラジカルは、例えば、塩素、臭素、ヨウ素、又はフッ素原子を有し得る。ジハロ及びポリハロアルキルラジカルは、２つ以上の同じ又は異なるハロゲン原子を有し得る。ハロアルキルの例としては、クロロメチル、ジクロロメチル、トリクロロメチル、ジクロロエチル、ジクロロプロピル、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、ペンタフルオロエチル、ヘプタフルオロプロピル、ジフルオロクロロメチル、ジクロロフルオロメチル、ジフルオロエチル、ジフルオロプロピルなどが挙げられるが、これらに限定されない。

【0050】

本明細書で使用される場合、「ハロアルコキシ」という用語は、アルコキシ基の水素原子のうちの１つ以上が、１つ以上のハロゲンで置換されているラジカルを指す。「ハロアルコキシ」基の代表例には、限定されるものではないが、ジフルオロメトキシ（－ＯＣＨＦ_２）、トリフルオロメトキシ（－ＯＣＦ_３）、又はトリフルオロエトキシ（－ＯＣＨ_２ＣＦ_３）が含まれる。

【0051】

本明細書で使用される場合、「アリール」という用語は、環の各原子が炭素である、置換又は非置換の単環芳香族基を含む。環は、５～７員環であることが好ましく、６員環であることがより好ましい。「アリール」という用語はまた、その中の２つ以上の炭素が２つの隣接する環（融合環）に共通している、２つ以上の環式環を有する多環式環系を含み、環の少なくとも１つは芳香族である。例えば、他のサイクリック環は、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、及び／又はヘテロシクリルであり得る。「融合」という用語は、第二の環が、第一の環と共通する２つの隣接する原子を有することによって付属又は形成されることを意味する。「融合」という用語は、「縮合」という用語と同等である。アリール基の例としては、以下に限定されないが、フェニル、ナフチル、フェナントリル、フェノール、アニリン、インダニル、ジヒドロベンゾフラニル、ジヒドロイソベンゾフラニル、インドリニル、イソインドリニルなどが挙げられる。別段の指定がない限り、本明細書に記載のアリール基は、任意選択的に置換されてもよい。

【0052】

本明細書で使用される場合、「ポリシクリル」、「ポリサイクル」、及び「多環式」という用語は、１つ以上の原子が２つ以上の隣接する環に共通である２つ以上の環（例えば、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、及び／又はヘテロシクリル）を指す。例えば、環は「融合環」である。ポリサイクルの環の各々は、置換又は非置換とし得る。特定の実施形態では、ポリサイクルの各環は、環中に３～１０個の原子、好ましくは５～７個を含有する。

【0053】

本明細書で使用される場合、「アシル」という用語は、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ^ｗの基を指し、式中、Ｒ^ｗは、任意選択的に置換されたアルキルである。「アシル」の例としては、限定されるものではないが、Ｒ^ｗが、Ｃ_１－Ｃ_１０アルキル（Ｃ_１－Ｃ_１０アシル）又はＣ_１－Ｃ_６－アルキル（Ｃ_１－Ｃ_６アシル）である例が挙げられる。一部の実施形態では、任意選択的に置換される置換基の各存在は、Ｈ、ＯＨ、アルコキシ、シアノ、Ｆ、及びアミノからなる群から選択される。「アシル」の追加の例としては、－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ_３、－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ_２－ＣＨ_３、－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ_２－ＣＨ_２－ＣＨ_３、又は－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ（ＣＨ_３）_２が挙げられる。

【0054】

本明細書で使用される場合、「アミン」及び「アミノ」という用語は、両方とも非置換及び置換アミン及びその塩を指し、例えば、以下の式で表される部分であり、

【化2】

式中、各Ｒ^ｚは独立して、水素、若しくはヒドロカルビル基を表すか、又はＲ^ｚは、それらが付着しているＮ原子と一緒になって、環構造中に４～８個の原子を有する複素環を完成する。

【0055】

本明細書で使用される場合、「アミド（ａｍｉｄｅ）」及び「アミド（ａｍｉｄｏ）」という用語は、以下の式によって表され、

【化3】

式中、Ｒ^ｘ、Ｒ^ｙ、及びＲ^ｚは各々独立して、水素若しくはヒドロカルビル基を表すか、又はＲ^ｙ、及びＲ^ｚは、それらが付着しているＮ原子と一緒になって、環構造中に４～８個の原子を有するヘテロシクリルを完成する。

【0056】

本明細書で使用される場合、「アシルアミノ」という用語は、上記で定義されるアミノ基が、アシル基で置換されたものを指す。

【0057】

本明細書で使用される場合、「アミノカルボニル」は、アミノ基で置換されたカルボニル基を指す。

【0058】

本明細書で使用される場合、「アルケニルアルキル」という用語は、アルケニル基で置換されたアルキル基を指す。

【0059】

本明細書で使用される場合、「アルキニルアルキル」という用語は、アルキニル基で置換されたアルキル基を指す。

【0060】

本明細書で使用される場合、「アルキルアミノ」という用語は、上記で定義されるアミノ基が、少なくとも１つのアルキル基で置換されたものを指す。

【0061】

本明細書で使用される場合、「アミノアルキル」という用語は、アミノ基で置換されたアルキル基を指す。

【0062】

本明細書で使用される場合、「アミドアルキル」という用語は、アミド基で置換されたアルキル基を指す。

【0063】

本明細書で使用される場合、「シアノアルキル」という用語は、シアノ基で置換されたアルキル基を指す。

【0064】

本明細書で使用される場合、「シクロアルコキシアルキル」という用語は、シクロアルコキシ基で置換されたアルキル基（上記に定義）を指し、一般式シクロアルキル－Ｏ－アルキルによって表されてもよい。シクロアルコキシアルキル基の例としては、シクロプロピル－Ｏ－メチレン－、シクロプロピル－Ｏ－エチレンが挙げられるが、これに限定されない。

【0065】

本明細書で使用される場合、「シクロアルキルアルキル」という用語は、シクロアルキル基で置換されたアルキル基を指す。

【0066】

本明細書で使用される場合、「ヘテロアリールアルキル」という用語は、ヘテロアリール基で置換されたアルキル基を指す。

【0067】

本明細書で使用される場合、「ヘテロシクリルアルキル」という用語は、ヘテロシクリル基で置換されたアルキル基を指す。

【0068】

本明細書で使用される場合、「ヒドロキシアルキル」という用語は、ヒドロキシ基で置換されたアルキル基を指す。

【0069】

本明細書で使用される場合、「シクロアルキル」という用語は、単独で又は他の用語と組み合わせて、完全に飽和した環状炭化水素を指す。「シクロアルキル」は、単環式環、二環式環、及び三環式環を含む。典型的には、単環式シクロアルキル基は、別段の定義がない限り、３個～約１０個の炭素原子を有し、より典型的には、３個～８個の炭素原子（例えば、Ｃ_３－Ｃ_１０シクロアルキル、又は例えば、Ｃ_３－Ｃ_６シクロアルキル）を有する。単環式シクロアルキルの例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル等が挙げられる。二環式シクロアルキルの第二の環、又は三環式シクロアルキルの第二の環又は第三の環は、飽和環、不飽和環、及び芳香環から選択され得る。シクロアルキルは、１つ、２つ、又は３つ以上の原子が２つの環の間で共有される二環式分子及び三環式分子を含む。シクロアルキルは、アルキル、アルケニル、アルコキシ、アミノアルキル、カルボニル置換アルキル、－ＣＦ_３、－ＣＮ等で更に置換されてもよい。

【0070】

本明細書で使用される場合、「シクロアルキルアルキル」という用語は、シクロアルキル基で置換されたアルキル基を指す。

【0071】

本明細書で使用される場合、「シアノ」という用語は、－ＣＮ基を指す。

【0072】

本明細書で使用される場合、「ヒドロキシ」又は「ヒドロキシル」という用語は、－ＯＨ基を指す。

【0073】

本明細書で使用される場合、「ハロ」又は「ハロゲン」という用語は、単独で又は他の用語と組み合わせて、クロロ、フルオロ、ブロモ、及びヨードを意味する。

【0074】

本明細書で使用される場合、「ヘテロ原子」という用語は、炭素又は水素以外の任意の元素の原子を指す。例示的なヘテロ原子は、窒素（Ｎ）、酸素（Ｏ）、硫黄（Ｓ）、及びケイ素（Ｓｉ）である。

【0075】

本明細書で使用される場合、「ヘテロシクリル」、「ヘテロシクロアルキル」、「複素環」、及び「複素環式」という用語は、Ｏ、Ｎ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）_２、ＮＨ又はＣ（Ｏ）から選択される少なくとも１つのヘテロ原子又はヘテロ基を有し、残りの環原子が独立して炭素、酸素、窒素、及び硫黄からなる群から選択される、３～１５員の、単環式、多環式（例えば、二環式、三環式）の架橋された又は融合されたものを含む、非芳香族、飽和、又は部分飽和の環系を指す。「ヘテロシクロアルキル」の例としては、アゼチジニル、オキセタニル、イミダゾリジニル、ピロリジニル、オキサゾリジニル、チアゾリジニル、ピラゾリジニル、テトラヒドロフラニル、ピペリジニル、ピペラジニル、テトラヒドロピラニル、モルホリニル、チオモルホリニル、１，４－ジオキサニル、ジオキシドチオモルホリニル、オキサピペラジニル、オキサピペリジニル、テトラヒドロフリル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオフェニル、ジヒドロピラニル、インドリニル、インドリニルメチル、２－アザビシクロ［２．２．２］オクタニル、アゾシニル、クロマニル、キサンテニル、及びそのＮ－オキシドが挙げられるが、これらに限定されない。ヘテロシクロアルキル置換基の付着は、炭素原子又はヘテロ原子のいずれかを介して起こり得る。ヘテロシクロアルキル基は、１つ以上の前述の基によって、１つ以上の好適な基で任意選択的に置換されてもよい。好ましくは、「ヘテロシクロアルキル」は、アゼチジニル、オキセタニル、イミダゾリジニル、ピロリジニル、オキサゾリジニル、チアゾリジニル、ピラゾリジニル、テトラヒドロフラニル、ピペリジニル、ピペラジニル、テトラヒドロピラニル、モルホリニル、チオモルホリニル、１，４－ジオキサニル、及びそのＮ－オキシドからなる群から選択される５員又は６員の環を指す。より好ましくは、「ヘテロシクロアルキル」は、アゼチジニル、ピロリジニル、モルホリニル、及びピペリジニルを含む。ヘテロシクロアルキルは、１つ以上の前述の基によって任意選択的に置換される。

【0076】

本明細書で使用される場合、「ヘテロアリール」という用語は、置換又は非置換の芳香族の単一環構造、好ましくは５～７員環、より好ましくは５～６員環を指し、その環構造は、少なくとも１個のヘテロ原子、好ましくは１～４個のヘテロ原子、より好ましくは１個又は２個のヘテロ原子を含む。「ヘテロアリール」という用語はまた、少なくとも１つのヘテロ原子を含有し、２つ以上の環式環（二環式、三環式、又は多環式）を有し、８～２０個の環原子、好適には５～１０個の環原子を含有する、置換又は非置換の芳香環系又は一部芳香環系を指し、これらは共有結合されるか融合され、２つ以上の原子が２つの隣接する環に共通しており、環の少なくとも１つが複素芳香族であり、例えば、他の環式環はシクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、及び／又はヘテロシクリルであってもよい。環は、Ｎ又はＳ原子を含有してもよく、Ｎ又はＳ原子は任意選択的に酸化され、又はＮ原子は任意選択的に四級化される。全てのヘテロアリールは、任意選択的に置換される。ヘテロアリール部分の任意の好適な環位置は、定義された化学構造に共有結合されてもよい。ヘテロアリールの例としては、フラニル、チエニル，ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、オキサゾリル、シンノリニル、イソオキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、１Ｈ－テトラゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、トリアゾリル、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、トリアジニル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾイソキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾフラニル、ベンゾチエニル、ベンゾトリアジニル、フタラジニル、チアントレン、ジベンゾフラニル、ジベンゾチエニル、ベンゾイミダゾリル、インドリル、イソインドリル、インダゾリル、キノリニル、イソキノリニル、キナゾリニル、キノキサリニル、プリニル、プテリジニル、９Ｈ－カルバゾリル、α－カルボリン、インドリジニル、ベンゾイソチアゾリル、ベンゾオキサゾリル、ピロロピリジル、フロピリジニル、プリニル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾオキサジアゾリル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾトリアジアゾリル、カルバゾリル、ジベンゾチエニル、アクリジニル等が挙げられるが、これらに限定されない。

【0077】

本明細書で使用される場合、「ヒドロカルビル」という用語は、＝Ｏ置換基又は＝Ｓ置換基を有さず、かつ典型的には、少なくとも１つの炭素－水素結合及び主に炭素骨格を有するが、任意選択でヘテロ原子を含み得る、炭素原子を介して結合される基を指す。したがって、メチル、エトキシエチル、２－ピリジル、及びトリフルオロメチルなどの基は、本出願の目的のためにヒドロカルビルとみなされるが、アセチル（結合炭素上に＝Ｏ置換基を有する）及びエトキシ（炭素ではなく酸素を介して結合される）などの置換基はヒドロカルビルではない。ヒドロカルビル基としては、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アルキル、アルケニル、アルキニル、及びそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。

【0078】

本明細書で使用される場合、「スルホンアミド」という用語は、以下のように表され、

【化4】

式中、Ｒ^ｚは、各発生時に、独立して水素、アルキル若しくはシクロアルキル基を表し、又はＲ^ｚ基は、それらが付着しているＮ原子と一緒になって、環構造中に４～８個の原子を有する複素環を完成する。

【0079】

本明細書で使用される場合、「スルホニル」という用語は、－Ｓ（Ｏ）_２－Ｒ^６ｄの基を指し、Ｒ^６ｄはアルキル又はシクロアルキルを表す。

【0080】

「併用療法」は、２つ以上の治療剤、例えば式Ｉの化合物及び酵素アスパラギナーゼ（ＡＳＮａｓｅ）又はその誘導体の、治療を必要とする患者への投与を含む治療である。

【0081】

「疾患」、「障害」、及び「状態」は、本明細書では互換的に使用される。

【0082】

「個体」、「患者」、又は「対象」は、本明細書では互換的に使用され、哺乳動物、好ましくは、マウス、ラット、他のげっ歯類、ウサギ、イヌ、ネコ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ウマ、又は霊長類、最も好ましくはヒトを含む、任意の動物を含む。本明細書に記載の化合物は、ヒトなどの哺乳動物に投与することができるが、獣医治療を必要とする動物、例えば、愛玩動物（例えば、イヌ、ネコなど）、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ブタ、ウマなど）、及び実験動物（例えば、ラット、マウス、モルモットなど）などの他の哺乳動物に投与することもできる。

【0083】

本明細書に記載される化合物は、ＧＣＮ２駆動型の疾患（本明細書では「ＧＣＮ２関連疾患」と省略される場合もある）、例えば、がん〔例えば、結腸直腸がん（例えば、結腸直腸がん、直腸がん、肛門がん、家族性結腸直腸がん、遺伝性非ポリポーシス結腸直腸がん、消化管間質腫瘍）、肺がん（例えば、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、悪性中皮腫）、中皮腫、膵がん（例えば、膵管がん、膵内分泌腫瘍）、咽頭がん、喉頭がん、食道がん、胃がん（例えば、乳頭腺がん、粘液腺がん、腺扁平上皮がん）、十二指腸がん、小腸がん、乳がん（例えば、浸潤性腺管がん、非浸潤性乳管がん、炎症性乳がん）、卵巣がん（例えば、卵巣上皮がん、性腺外胚細胞腫瘍、卵巣胚細胞腫瘍、卵巣低悪性度腫瘍）、睾丸腫瘍、前立腺がん（例えば、ホルモン依存性前立腺がん、非ホルモン依存性前立腺がん、去勢抵抗性前立腺がん）、肝臓がん（例えば、肝細胞腫、原発性肝臓がん、肝外胆管がん）、甲状腺がん（例えば、甲状腺髄様がん）、腎臓がん（例えば、腎細胞がん（例えば、腎明細胞がん）、腎盂及び尿管の移行上皮がん）、子宮がん（例えば、子宮頸がん、子宮体がん、子宮肉腫）、妊娠性絨毛がん、脳腫瘍（例えば、髄芽腫、神経膠腫、松果体星細胞腫、毛様細胞性星細胞腫、びまん性星細胞腫、退形成性星細胞腫、下垂体腺腫）、網膜芽細胞腫、皮膚がん（例えば、基底細胞がん、悪性黒色腫（黒色腫）、肉腫（例えば、横紋筋肉腫、平滑筋肉腫、軟部組織肉腫、紡錘細胞肉腫、骨肉腫）、悪性骨腫瘍、膀胱がん、血液がん（例えば、多発性骨髄腫、白血病（例えば、急性骨髄性白血病、急性リンパ球性白血病（慢性白血病の急性転化を含む）、悪性リンパ腫、ホジキン病、慢性骨髄増殖性疾患）、原発核不明（ｕｎｋｎｏｗｎ ｐｒｉｍａｒｙ ｎｕｃｌｅｕｓ）のがん〕の治療、がん増殖阻害剤、がん転移阻害剤、アポトーシスプロモーター、前がん病変（例えば、骨髄の骨髄異形成症候群）の予防又は治療のために有用である。

【0084】

本明細書に記載される化合物、例えば、本明細書に定義される式Ｉの化合物は、本明細書に記載されるがんなどの本明細書に記載される障害を治療するために、１つ以上の追加の治療剤と組み合わせて使用されてもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の化合物は、ホルモン治療剤、化学療法剤、免疫療法剤、例えば、ＰＥＲＫ阻害剤及びオートファジー阻害剤などの細胞増殖因子及びその受容体の作用を阻害する薬剤、酵素アスパラギナーゼ（ＡＳＮａｓｅ）等と組み合わせて使用され得る。

【0085】

「薬学的又は薬理学的に許容可能な」は、動物又はヒトに適宜投与された時に有害反応、アレルギー性反応、又は他の有害な反応を生じさせない分子実体及び組成物を含む。ヒトへの投与の場合、製剤は、ＦＤＡ生物製剤局基準（ＦＤＡ Ｏｆｆｉｃｅ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ ｓｔａｎｄａｒｄｓ）で要求される無菌性、発熱性、並びに一般的な安全性及び純度の基準を満たさなければならない。

【0086】

本明細書で使用される「薬学的に許容される担体」又は「薬学的に許容される賦形剤」という用語は、薬学的投与と適合性のある、ありとあらゆる溶媒、分散媒体、コーティング、等張剤、及び吸収遅延剤などを指す。薬学的に活性な物質のためのかかる媒体及び薬剤の使用は、当該技術分野で周知である。本組成物は、補足の、追加の、又は増強された治療機能を提供する他の活性化合物を含む場合もある。

【0087】

本明細書で使用される「医薬組成物」という用語は、１つ以上の薬学的に許容される担体と一緒に製剤化された本明細書に開示される少なくとも１つの化合物を含む組成物を指す。

【0088】

本明細書で使用される「薬学的に許容される塩」という用語は、本組成物に使用される化合物中に存在し得る酸性基又は塩基性基の塩を指す。本質的に塩基性である本組成物に含まれる化合物は、様々な無機酸及び有機酸と多種多様な塩を形成することができる。かかる塩基性化合物の薬学的に許容可能な酸付加塩を調製するために使用され得る酸は、無毒性酸付加塩、すなわち、リンゴ酸塩、シュウ酸塩、塩化物塩、臭化物塩、ヨウ化物塩、硝酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、イソニコチン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、酒石酸水素塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチジン酸塩（ｇｅｎｔｉｓｉｎａｔｅ）、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルカロン酸塩、糖酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩、及びパモ酸塩（すなわち、１，１’－メチレン－ビス－（２－ヒドロキシ－３－ナフトエート））塩を含むが、これらに限定されない、薬理学的に許容可能なアニオンを含む塩を形成するものである。本質的に酸性である本組成物に含まれる化合物は、様々な薬理学的に許容可能なカチオンを有する塩基塩を形成することができる。かかる塩の例としては、アルカリ金属塩又はアルカリ土類金属塩、具体的には、カルシウム、マグネシウム、ナトリウム、リチウム、亜鉛、カリウム、及び鉄塩が挙げられる。塩基性部分又は酸性部分を含む本組成物に含まれる化合物はまた、様々なアミノ酸とともに薬学的に許容可能な塩を形成し得る。本開示の化合物は、酸性基及び塩基性基の両方、例えば、１つのアミノ基及び１つのカルボン酸基を含有してもよい。このような場合、化合物は、酸付加塩、双性イオン、又は塩基塩として存在し得る。

【0089】

本開示の化合物は、１つ以上のキラル中心を含んでもよく、それ故に、立体異性体として存在してもよい。本明細書で使用される場合、用語「立体異性体」は、全てのエナンチオマー又はジアステレオマーからなる。これらの化合物は、立体中心（ｓｔｅｒｅｏｇｅｎｉｃ）炭素原子の周りの置換基の立体配置に応じて、記号「Ｒ」又は「Ｓ」によって指定され得るが、当業者は、構造がキラル中心を暗黙的に示し得ることを認識するであろう。これらの化合物はまた、それらの旋光度に基づき、「（＋）」及び「（－）」によって指定されてもよい。本明細書に記載される化合物は、これらの化合物及びその混合物の様々な立体異性体を包含する。エナンチオマー又はジアステレオマーの混合物は、命名法で記号「（±）」と指定され得るが、当業者は、構造がキラル中心を暗黙的に示し得ることを認識するであろう。

【0090】

本明細書において、「治療有効量」という用語は、研究者、獣医師、医師、又は他の臨床医に求められている組織、系、又は動物（例えば、哺乳動物若しくはヒト）の生物学的応答又は医学的応答を誘発する主題の化合物の量を意味する。本明細書に記載の化合物は、障害を治療するための治療有効量で投与される。

【0091】

「治療すること」は、状態、疾患、障害などの改善をもたらす、任意の効果、例えば、緩和、軽減、調節、又は除去を含む。

【0092】

本開示はまた、１つ以上の原子が、通常自然界で見られる原子質量又は質量数とは異なる原子質量又は質量数を有する原子によって置換されることを除いて、本明細書に列挙したものと同一である同位元素標識化合物を包含する。本開示の化合物に組み込むことができる同位体の例としては、水素、炭素、窒素、酸素、リン、硫黄、フッ素、及び塩素の同位体、例えば、それぞれ、^２Ｈ、^３Ｈ、^１３Ｃ、^１４Ｃ、^１５Ｎ、^１８Ｏ、^１７Ｏ、^３１Ｐ、^３２Ｐ、^３５Ｓ、^１８Ｆ、及び^３６Ｃｌなどが挙げられる。例えば、本開示の化合物は、重水素で置換された１つ以上のＨ原子を有してもよい。

【0093】

開示された化合物の個々のエナンチオマー及びジアステレオマーは、非対称若しくは立体中心を含む市販の出発物質から合成的に調製されてもよく、又はラセミ混合物の調製とその後に当業者に周知の分割方法によって調製されてもよい。これらの分割方法は、（１）キラル補助基へのエナンチオマーの混合物の付着、再結晶若しくはクロマトグラフィーによるジアステレオマーの得られた混合物の分離、及び補助剤からの光学的に純粋な生成物の遊離、（２）光学活性分割剤を用いた塩形成、（３）キラル液体クロマトグラフィーカラムでの光学エナンチオマーの混合物の直接分離、又は（４）立体選択的化学若しくは酵素試薬を使用した速度論的分割によって例示される。ラセミ混合物は、キラル相液体クロマトグラフィー又はキラル溶媒中での化合物の結晶化などの周知の方法によって、それらの成分エナンチオマーに分割することもできる。新しい立体中心の作成中又は既存の立体中心の変換中に単一の反応物が立体異性体の不均等な混合物を形成する化学反応又は酵素反応である立体選択的合成は、当技術分野で周知である。立体選択的合成は、エナンチオ及びジアステレオ選択的変換の両方を包含し、キラル補助剤の使用を伴い得る。例えば、Ｃａｒｒｅｉｒａ ａｎｄ Ｋｖａｅｒｎｏ，Ｃｌａｓｓｉｃｓ ｉｎ Ｓｔｅｒｅｏｓｅｌｅｃｔｉｖｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ：Ｗｅｉｎｈｅｉｍ，２００９を参照されたい。
化合物

【0094】

一実施形態では、本明細書に記載さるのは、式Ｉ－Ａによって表される化合物：

【化5】

又はその薬学的に許容可能な塩、エナンチオマー、立体異性体、若しくは互変異性体であり、式中、Ｘ^１及びＸ^３は各々独立して、ＣＨ及びＮからなる群から選択され、Ｘ^２は、ＮＲ^６、Ｏ、及びＳからなる群から選択され、Ｒ^１、Ｒ^２、及びＲ^３は各々独立して、Ｈ、ハロゲン、シアノ、及びアルコキシからなる群から選択され、Ｒ^４は、ハロゲン、アルコキシ及びアルキルからなる群から選択され、Ｒ^５は、Ｈ、ハロゲン及びアルキルからなる群から選択され、Ｒ^６は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、アルキニル、アルキニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルアルキル、アリール、ヘテロアリール、及びヘテロアリールアルキルからなる群から選択され、Ｒ^７は、Ｈ、アルキル、及びアシルからなる群から選択される。

【0095】

いくつかの実施形態では、Ｒ^１、Ｒ^２、及びＲ^３のうちの少なくとも１つは、ハロゲンである。いくつかの実施形態では、Ｒ^１、Ｒ^２、及びＲ^３のうちの少なくとも１つは、フルオロである。いくつかの実施形態では、Ｒ^１は、フルオロである。いくつかの実施形態では、Ｘ^１は、Ｎである。

【0096】

いくつかの実施形態では、Ｒ^６は、以下ではなく、

【化6】

式中、Ｌ^７０は、メチレン又はエチレンであり、Ｘ^７０及びＸ^７１のうちの１つはＣＨ_２であり、もう１つはＮ－ＣＯ－Ｒ^１０１であり、ここでＲ^１０１は、Ｃ_１－４アルキル、Ｃ_２－４アルケニル、又はＣ_２－４アルキニルであり、その各々が、非置換であるか、又はハロゲン、シアノ、ヒドロキシ、アミノ、ＮＨ（Ｃ_１－４アルキル）、Ｎ（Ｃ_１－４アルキル）_２、Ｃ_３－１０シクロアルキル、並びに窒素及び酸素からなる群から各々独立して選択される１つ若しくは２つのヘテロ原子を含有するＣ_３－１０ヘテロシクロアルキルからなる群から各々独立して選択される１～３個の置換基によって置換されている。

【0097】

別の実施形態では、本明細書に記載さるのは、式Ｉ－Ｂによって表される化合物：

【化7】

又はその薬学的に許容可能な塩、エナンチオマー、立体異性体、若しくは互変異性体であり、式中、Ｘ^１及びＸ^３は各々独立して、ＣＨ及びＮからなる群から選択され、Ｘ^２は、ＮＲ^６、Ｏ、及びＳからなる群から選択され、Ｒ^２及びＲ^３は各々独立して、Ｈ、ハロゲン、シアノ、及びアルコキシからなる群から選択され、Ｒ^４は、ハロゲン、アルコキシ及びアルキルからなる群から選択され、Ｒ^５は、Ｈ、ハロゲン及びアルキルからなる群から選択され、Ｒ^６は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、アルキニル、アルキニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルアルキル、アリール、ヘテロアリール、及びヘテロアリールアルキルからなる群から選択され、Ｒ^７は、Ｈ、アルキル、及びアシルからなる群から選択される。

【0098】

いくつかの実施形態では、Ｘ^１は、Ｎである。

【0099】

一実施形態では、本明細書に記載さるのは、式Ｉ－Ｃによって表される化合物：

【化8】

又はその薬学的に許容可能な塩、エナンチオマー、立体異性体、若しくは互変異性体であり、式中、Ｘ^２は、ＮＲ^６、Ｏ、及びＳからなる群から選択され、Ｘ^３は、ＣＨ及びＮからなる群から選択され、Ｒ^２及びＲ^３は各々独立して、Ｈ、ハロゲン、シアノ、及びアルコキシからなる群から選択され、Ｒ^４は、ハロゲン、アルコキシ及びアルキルからなる群から選択され、Ｒ^５は、Ｈ、ハロゲン及びアルキルからなる群から選択され、Ｒ^６は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、アルキニル、アルキニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルアルキル、アリール、ヘテロアリール、及びヘテロアリールアルキルからなる群から選択され、Ｒ^７は、Ｈ、アルキル、及びアシルからなる群から選択される。

【0100】

いくつかの実施形態では、Ｘ^２は、ＮＲ^６である。

【0101】

別の実施形態では、本明細書に記載さるのは、式Ｉ－Ｄによって表される化合物：

【化9】

又はその薬学的に許容可能な塩、エナンチオマー、立体異性体、若しくは互変異性体であり、式中、Ｒ^２及びＲ^３は各々独立して、Ｈ、ハロゲン、シアノ、及びアルコキシからなる群から選択され、Ｒ^４は、ハロゲン、アルコキシ及びアルキルからなる群から選択され、Ｒ^５は、Ｈ、ハロゲン及びアルキルからなる群から選択され、Ｒ^６は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルケニルアルキル、アルキニル、アルキニルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルアルキル、アリール、ヘテロアリール、及びヘテロアリールアルキルからなる群から選択され、Ｒ^７は、Ｈ、アルキル、及びアセテートからなる群から選択される。

【0102】

一部の実施形態では、Ｒ^２は、Ｈであり、Ｒ^３は、Ｈである。いくつかの実施形態では、Ｒ^２は、Ｆであり、Ｒ^３は、Ｈである。いくつかの実施形態では、Ｒ^２は、Ｈであり、Ｒ^３は、Ｆである。いくつかの実施形態では、Ｒ^６は、（Ｃ_１－Ｃ_８）、（Ｃ_２－Ｃ_８）アルケニル、（Ｃ_２－Ｃ_８）アルケニル－（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキル、（Ｃ_２－Ｃ_８）アルキニル、（Ｃ_２－Ｃ_８）アルキニル－（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキル、（Ｃ_３－Ｃ_８）シクロアルキル、（Ｃ_３－Ｃ_８）シクロアルキル－（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキル、（Ｃ_３－Ｃ_８）アルコキシ－（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキル、（Ｃ_３－Ｃ_８）シクロアルケニル、（Ｃ_３－Ｃ_８）シクロアルケニル－（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキル、 ヘテロシクリル、ヘテロシクリル－（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキル、 アリール、ヘテロアリール、及びヘテロアリール－（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキルからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ^６は、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルキル、（Ｃ_３－Ｃ_８）シクロアルキル、（Ｃ_３－Ｃ_８）アルコキシ－（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキル、ヘテロシクリル、及びヘテロアリールからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ^６は、次の群から選択される：

【化10】

【0103】

いくつかの実施形態では、Ｒ^６は、以下ではなく、

【化11】

式中、Ｌ^７０は、メチレン又はエチレンであり、Ｘ^７０及びＸ^７１のうちの１つはＣＨ_２であり、もう１つはＮ－ＣＯ－Ｒ^１０１であり、ここでＲ^１０１は、Ｃ_１－４アルキル、Ｃ_２－４アルケニル、又はＣ_２－４アルキニルであり、その各々が、非置換であるか、又はハロゲン、シアノ、ヒドロキシ、アミノ、ＮＨ（Ｃ_１－４アルキル）、Ｎ（Ｃ_１－４アルキル）_２、Ｃ_３－１０シクロアルキル、並びに窒素及び酸素からなる群から各々独立して選択される１つ若しくは２つのヘテロ原子を含有するＣ_３－１０ヘテロシクロアルキルからなる群から各々独立して選択される１～３個の置換基によって置換されている。

【0104】

いくつかの実施形態では、Ｒ^４は、ハロゲン、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルコキシ及びＣ_１－Ｃ_６アルキルからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ^４は、クロロ、フルオロ、メトキシ及びメチルからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ^５は、Ｈ、ハロゲン、及び（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキルからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ^５は、クロロ、フルオロ、及びメチルからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ^７は、Ｈである。

【0105】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるのは、以下の群から選択される化合物、

【化12】

並びにその薬学的に許容可能な塩、エナンチオマー、立体異性体、及び互変異性体である。

【0106】

治療方法
本明細書に記載される化合物、例えば、本明細書に定義される式Ｉの化合物は、ＧＣＮ２又はＰＥＲＫキナーゼによって駆動される疾患に対する治療薬として作用することができ、がんなど、それを必要とする患者における疾患及び障害の治療に有用である。例示的ながんには、結腸直腸がん、直腸がん、肛門がん、家族性結腸直腸がん、遺伝性非ポリポーシス大腸がん、消化管間質腫瘍、肺がん（例えば、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、悪性中皮腫）、中皮腫、膵がん（例えば、膵管がん、膵内分泌腫瘍）、咽頭がん、喉頭がん、食道がん、胃がん（例えば、乳頭状腺がん、粘液腺がん、腺扁平上皮がん）、十二指腸がん、小腸がん、乳がん（例えば、浸潤性腺管がん、非浸潤性乳管がん、炎症性乳がん）、卵巣がん（例えば、卵巣上皮がん、性腺外胚細胞腫瘍、卵巣胚細胞腫瘍、卵巣低悪性度腫瘍）、睾丸腫瘍、前立腺がん（例えば、ホルモン依存性前立腺がん、非ホルモン依存性前立腺がん、去勢抵抗性前立腺がん）、肝臓がん（例えば、肝細胞腫、原発性肝がん、肝外胆管がん）、甲状腺がん（例えば、甲状腺髄様がん）、腎臓がん（例えば、腎細胞がん（例えば、腎明細胞がん）、腎盂及び尿管の移行上皮がん）、子宮がん（例えば、子宮頸がん、子宮体がん、子宮肉腫）、妊娠性絨毛がん、脳腫瘍（例えば、髄芽腫、神経膠腫、松果体星細胞腫、毛様細胞性星細胞腫、びまん性星細胞腫、退形成性星細胞腫、下垂体腺腫）、網膜芽細胞腫、皮膚がん（例えば、基底細胞がん、悪性黒色腫、黒色腫）、肉腫（例えば、横紋筋肉腫、平滑筋肉腫、軟部組織肉腫、紡錘細胞肉腫、骨肉腫）、線維肉腫、悪性骨腫瘍、膀胱がん、血液がん（例えば、多発性骨髄腫、白血病（例えば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性白血病の急性転化を含む）、悪性リンパ腫、ホジキン病、慢性骨髄増殖性疾患）、原発核不明のがん］、がん増殖阻害剤、がん転移阻害剤、アポトーシスプロモーター、前がん病変（例えば、骨髄の骨髄異形成症候群）の予防又は治療用、が含まれるが、これらに限定されない。

【0107】

また、一実施形態では、本明細書に記載の化合物（例えば、本明細書に記載される式Ｉ－Ａ、Ｉ－Ｂ、Ｉ－Ｃ、及び Ｉ－Ｄの化合物）、又はその薬学的に許容可能な塩、又は本明細書に記載の医薬組成物の治療有効量を、患者に投与することを含む、統合的ストレス応答の調節不全によって引き起こされる疾患の治療を必要とする患者において、その疾患を治療する方法も、本明細書に記載されている。いくつかの実施形態では、統合的ストレス応答及び／又は小胞体ストレス応答の調節不全は、ＧＣＮ２キナーゼによって引き起こされる。いくつかの実施形態では、統合的ストレス応答及び／又は小胞体ストレス応答の調節不全は、ＰＥＲＫキナーゼによって引き起こされる。いくつかの実施形態では、統合的ストレス応答の調節不全は、ＧＣＮ２キナーゼによって引き起こされる。いくつかの実施形態では、小胞体ストレス応答の調節不全は、ＰＥＲＫキナーゼによって引き起こされる。いくつかの実施形態では、統合的ストレス応答の調節不全は、ＰＥＲＫキナーゼ及びＧＣＮ２キナーゼからなる群から選択されるキナーゼの活性化によって引き起こされる。いくつかの実施形態では、統合的ストレス応答の調節不全は、ＧＣＮ２キナーゼの活性化によって引き起こされる。いくつかの実施形態では、統合的ストレス応答の調節不全は、ＰＥＲＫキナーゼの活性化によって引き起こされる。

【0108】

また、一実施形態では、本明細書に記載の化合物（例えば、本明細書に記載される式Ｉ－Ａ、Ｉ－Ｂ、Ｉ－Ｃ、及びＩ－Ｄの化合物）、若しくはその薬学的に許容可能な塩、又は本明細書に記載の医薬組成物の治療有効量を、患者に投与することを含む、統合的ストレス応答及び／又は小胞体ストレス応答の調節不全によって引き起こされる疾患の治療を必要とする患者において、その疾患を治療する方法も、本明細書に記載されている。いくつかの実施形態では、統合的ストレス応答及び／又は小胞体ストレス応答の調節不全は、ＰＥＲＫキナーゼ及びＧＣＮ２キナーゼからなる群から選択されるキナーゼの活性化によって引き起こされる。いくつかの実施形態では、統合的ストレス応答の調節不全は、ＧＣＮ２キナーゼの活性化によって引き起こされる。いくつかの実施形態では、小胞体ストレス応答の調節不全は、ＰＥＲＫキナーゼの活性化によって引き起こされる。

【0109】

別の実施形態では、本明細書に記載される化合物、又はその薬学的に許容可能な塩、又は本明細書に記載される医薬組成物の治療有効量を患者に投与することを含む、それを必要とする患者のＧＣＮ２キナーゼの活性を調節する方法が本明細書に記載されている。

【0110】

別の実施形態では、本明細書に記載される化合物、又はその薬学的に許容可能な塩、又は本明細書に記載される医薬組成物の治療有効量を患者に投与することを含む、それを必要とする患者のＧＣＮ２キナーゼを活性化する方法が本明細書に記載されている。

【0111】

別の実施形態では、本明細書に記載される化合物、又はその薬学的に許容可能な塩、又は本明細書に記載される医薬組成物の治療有効量を患者に投与することを含む、それを必要とする患者のＰＥＲＫキナーゼの活性を調節する方法が本明細書に記載されている。

【0112】

別の実施形態では、本明細書に記載される化合物、又はその薬学的に許容可能な塩、又は本明細書に記載される医薬組成物の治療有効量を患者に投与することを含む、それを必要とする患者のＰＥＲＫキナーゼを活性化する方法が本明細書に記載されている。

【0113】

別の実施形態では、本明細書に記載される化合物、又はその薬学的に許容可能な塩、又は本明細書に記載される医薬組成物の治療有効量を患者に投与することを含む、それを必要とする患者のＧＣＮ２キナーゼ及びＰＥＲＫキナーゼを阻害する方法が本明細書に記載されている。

【0114】

別の実施形態では、本明細書に記載される化合物、若しくはその薬学的に許容可能な塩、又は本明細書に記載される医薬組成物の治療有効量を患者に投与することを含む、それを必要とする患者のＧＣＮ２キナーゼの活性を調節する方法が本明細書に記載されている。

【0115】

別の実施形態では、本明細書に記載される化合物、若しくはその薬学的に許容可能な塩、又は本明細書に記載される医薬組成物の治療有効量を患者に投与することを含む、ＰＥＲＫキナーゼの活性の阻害を必要とする患者において、ＰＥＲＫキナーゼの活性を阻害する方法が本明細書に記載されている。

【0116】

別の実施形態では、本明細書に記載される化合物（例えば、本明細書に記載される式Ｉ－Ａ、Ｉ－Ｂ、Ｉ－Ｃ、及びＩ－Ｄの化合物）、若しくはその薬学的に許容可能な塩、又は本明細書に記載される医薬組成物の治療有効量を患者に投与することを含む、がんの治療を必要とする患者において、がんを治療する方法が本明細書に記載されている。いくつかの実施形態では、がんは、結腸直腸がん、肺がん、中皮腫、膵がん、咽頭がん、喉頭がん、食道がん、胃、十二指腸がん、小腸がん、乳がん、卵巣がん、睾丸腫瘍、前立腺、肝臓がん、甲状腺がん、腎臓がん、子宮がん、妊娠性絨毛がん、脳腫瘍、網膜芽細胞腫、皮膚がん、黒色腫、肉腫、線維肉腫、悪性骨腫瘍、膀胱がん、血液がん、白血病、急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、及び悪性リンパ腫からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、がんは、結腸直腸がん、肺がん、中皮腫、膵がん、咽頭がん、喉頭がん、食道がん、胃、十二指腸がん、小腸がん、乳がん、卵巣がん、睾丸腫瘍、前立腺、肝臓がん、甲状腺がん、腎臓がん、子宮がん、妊娠性絨毛がん、脳腫瘍、網膜芽細胞腫、皮膚がん、黒色腫、肉腫、線維肉腫、悪性骨腫瘍、膀胱がん、血液がん、白血病、急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、赤白血病、組織球性リンパ腫（ｈｉｓｔｏｃｙｃｔｉｃ ｌｙｍｐｈｏｍａ）、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、及び悪性リンパ腫からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、がんは、白血病である。いくつかの実施形態では、がんは、急性骨髄性白血病である。いくつかの実施形態では、がんは、急性リンパ芽球性白血病である。いくつかの実施形態では、がんは、線維肉腫である。いくつかの実施形態では、がんは、多発性骨髄腫である。いくつかの実施形態では、がんは、リンパ腫である。いくつかの実施形態では、がんは、Ｂ細胞リンパ腫である。いくつかの実施形態では、がんは、Ｔ細胞リンパ腫である。

【0117】

一実施形態では、本明細書に記載される化合物、又はその薬学的に許容可能な塩、又は本明細書に記載される医薬組成物の治療有効量を患者に投与することを含む、それを必要とする患者のアミロイド症を治療する方法が本明細書に記載されている。一実施形態では、本明細書に記載される化合物、又はその薬学的に許容可能な塩、又は本明細書に記載される医薬組成物の治療有効量を患者に投与することを含む、軽鎖アミロイドーシスの治療を必要とする患者において、軽鎖アミロイドーシスを治療する方法が本明細書に記載されている。

【0118】

別の実施形態では、本明細書に記載される化合物（例えば、本明細書に記載される式Ｉ－Ａ、Ｉ－Ｂ、Ｉ－Ｃ、及びＩ－Ｄの化合物）、又はその薬学的に許容可能な塩、又は本明細書に記載される医薬組成物の治療有効量を患者に投与することを含む、ＧＣＮ２関連疾患及びＰＥＲＫ関連疾患から選択される疾患の治療を必要とする患者において、その疾患を治療する方法が本明細書に記載されている。いくつかの実施形態では、疾患は、ＧＣＮ２関連疾患である。いくつかの実施形態では、疾患は、ＰＥＲＫ関連疾患である。いくつかの実施形態では、疾患は、がんである。いくつかの実施形態では、がんは、結腸直腸がん、肺がん、中皮腫、膵がん、咽頭がん、喉頭がん、食道がん、胃、十二指腸がん、小腸がん、乳がん、卵巣がん、睾丸腫瘍、前立腺、肝臓がん、甲状腺がん、腎臓がん、子宮がん、妊娠性絨毛がん、脳腫瘍、網膜芽細胞腫、皮膚がん、黒色腫、肉腫、線維肉腫、悪性骨腫瘍、膀胱がん、血液がん、白血病、急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、及び悪性リンパ腫からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、がんは、結腸直腸がん、肺がん、中皮腫、膵がん、咽頭がん、喉頭がん、食道がん、胃、十二指腸がん、小腸がん、乳がん、卵巣がん、睾丸腫瘍、前立腺、肝がん、甲状腺がん、腎臓がん、子宮がん、妊娠性絨毛がん、脳腫瘍、網膜芽細胞腫、皮膚がん、黒色腫、肉腫、線維肉腫、悪性骨腫瘍、膀胱がん、血液がん、白血病、急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、赤白血病、組織球性リンパ腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、及び悪性リンパ腫からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、がんは、白血病である。いくつかの実施形態では、がんは、急性骨髄性白血病である。いくつかの実施形態では、がんは、急性リンパ芽球性白血病である。いくつかの実施形態では、がんは、線維肉腫である。いくつかの実施形態では、がんは、多発性骨髄腫である。いくつかの実施形態では、がんは、リンパ腫である。いくつかの実施形態では、がんは、Ｂ細胞リンパ腫である。いくつかの実施形態では、がんは、Ｔ細胞リンパ腫である。いくつかの実施形態では、疾患は、アミロイド症である。いくつかの実施形態では、疾患は、軽鎖アミロイドーシスである。

【0119】

別の実施形態では、治療有効量の本明細書に記載される化合物（例えば、本明細書に記載される式Ｉ－Ａ、Ｉ－Ｂ、Ｉ－Ｃ、及びＩ－Ｄの化合物）、又はその薬学的に許容可能な塩と、治療有効量の１つ以上の治療剤とを患者に投与することを含む、ＧＣＮ２関連疾患及びＰＥＲＫ関連疾患から選択される疾患の治療を必要とする患者において、その疾患を治療する方法が本明細書に記載されている。いくつかの実施形態では、疾患は、ＧＣＮ２関連疾患である。いくつかの実施形態では、疾患は、ＰＥＲＫ関連疾患である。いくつかの実施形態では、疾患は、がんである。いくつかの実施形態では、がんは、結腸直腸がん、肺がん、中皮腫、膵がん、咽頭がん、喉頭がん、食道がん、胃、十二指腸がん、小腸がん、乳がん、卵巣がん、睾丸腫瘍、前立腺、肝がん、甲状腺がん、腎臓がん、子宮がん、妊娠性絨毛がん、脳腫瘍、網膜芽細胞腫、皮膚がん、黒色腫、肉腫、線維肉腫、悪性骨腫瘍、膀胱がん、血液がん、白血病、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、及び悪性リンパ腫からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、がんは、結腸直腸がん、肺がん、中皮腫、膵がん、咽頭がん、喉頭がん、食道がん、胃、十二指腸がん、小腸がん、乳がん、卵巣がん、睾丸腫瘍、前立腺、肝がん、甲状腺がん、腎臓がん、子宮がん、妊娠性絨毛がん、脳腫瘍、網膜芽細胞腫、皮膚がん、黒色腫、肉腫、線維肉腫、悪性骨腫瘍、膀胱がん、血液がん、白血病、急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、赤白血病、組織球性リンパ腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、及び悪性リンパ腫からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、がんは、白血病である。いくつかの実施形態では、白血病は急性骨髄性白血病である。いくつかの実施形態では、白血病は急性リンパ性白血病である。いくつかの実施形態では、がんは、線維肉腫である。いくつかの実施形態では、がんは、多発性骨髄腫である。いくつかの実施形態では、がんは、リンパ腫である。いくつかの実施形態では、がんは、Ｂ細胞リンパ腫である。いくつかの実施形態では、がんは、Ｔ細胞リンパ腫である。いくつかの実施形態では、疾患は、アミロイド症である。いくつかの実施形態では、疾患は軽鎖アミロイド症である。いくつかの実施形態では、１つ以上の治療剤は、Ｌ－アスパラギナーゼ、ペグ化アスパラギナーゼ、ＰＥＲＫ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、免疫調節剤、ＭＡＰＫ経路阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、ＥＲＫ阻害剤、及びＲａｓ阻害剤からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、１つ以上の治療剤は、ＩＭｉＤ剤、プロテアソーム阻害剤、ステロイド、抗ＣＤ３８剤、抗ＣＤ２０剤、Ｂｃｌ－２阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、二特異性抗体、ヌクレオシド類似体、ＢＴＫ阻害剤、ＤＮＡアルキル化剤、ＥＺＨ２阻害剤、アントラサイクリン、トポイソメラーゼ阻害剤、プラチン（ｐｌａｔｉｎ）、チロシンキナーゼ阻害剤、ＨＤＡＣ阻害剤、核外輸送阻害剤、微小管阻害剤 Ｌ－アスパラギナーゼ、ペグ化アスパラギナーゼ、ＰＥＲＫ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、免疫調節剤、ＭＡＰＫ経路阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、ＥＲＫ阻害剤、及びＲａｓ阻害剤からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、１つ以上の治療剤は、Ｌ－アスパラギナーゼ、ペグアスパルガーゼ、カラスパルガーゼペゴル－ｍｎｋｌ、ボルテゾミブ、カルフィルゾミブ、イキサゾミブ、サリドマイド、ポマリドミド、レナリドミド、デキサメタゾン、プレドニゾン、ダラツムマブ、ダラツムマブ／ヒアルロニダーゼ、イサツキシマブ、リツキシマブ、オビヌツズマブ、ベネトクラクス、イデラリシブ、コパンリシブ、デュベリシブ、ウムブラリシブ、ゲムシタビン、シタラビン、イブルチニブ、アカラブルチニブ、ザヌブルチニブ、ベンダムスチン、シクロホスファミド、タゼメトスタット、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エトポシド、オキサロプラチン、カルボプラチン、シスプラチンボスチニブ、ダサチニブ、イマチニブ、ニロチニブ、ポナチニブ、パノビノスタット、セリネクソール、ビンクリスチン、ＪＺＰ－４５８、エリアスパーゼ、ＰＦ７４５（ＪＺＰ－３４１）、アスパラギナーゼ Ｅｒｗｉｎｉａ ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉ（クリサンタスパーゼ）、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉアスパラギナーゼ（コラスパーゼ）、抗ＰＤ１剤、抗ＰＤＬ１剤、及び抗ＣＴＬＡ４剤からなる群から選択される。

【0120】

一実施形態では、統合的ストレス応答及び／又は小胞体ストレス応答の調節不全によって引き起こされる疾患の治療を必要とする患者において、その疾患の治療に使用するための、本明細書に記載される化合物、若しくはその薬学的に許容可能な塩、又は本明細書に記載される医薬組成物が、本明細書に記載されている。いくつかの実施形態では、統合的ストレス応答及び／又は小胞体ストレス応答の調節不全は、ＰＥＲＫキナーゼ及びＧＣＮ２キナーゼからなる群から選択されるキナーゼによって引き起こされる。いくつかの実施形態では、統合的ストレス応答及び／又は小胞体ストレス応答の調節不全は、ＧＣＮ２キナーゼによって引き起こされる。いくつかの実施形態では、統合的ストレス応答及び／又は小胞体ストレス応答の調節不全は、ＰＥＲＫキナーゼによって引き起こされる。いくつかの実施形態では、統合的ストレス応答の調節不全は、ＧＣＮ２キナーゼによって引き起こされる。いくつかの実施形態では、小胞体ストレス応答の調節不全は、ＰＥＲＫキナーゼによって引き起こされる。いくつかの実施形態では、統合的ストレス応答の調節不全は、ＰＥＲＫキナーゼ及びＧＣＮ２キナーゼからなる群から選択されるキナーゼの活性化によって引き起こされる。いくつかの実施形態では、統合的ストレス応答の調節不全は、ＧＣＮ２キナーゼの活性化によって引き起こされる。いくつかの実施形態では、統合的ストレス応答の調節不全は、ＰＥＲＫキナーゼの活性化によって引き起こされる。一実施形態では、ＧＣＮ２キナーゼの活性の調節を必要とする患者において、ＧＣＮ２キナーゼの活性の調節に使用するための、本明細書に記載される化合物、若しくはその薬学的に許容可能な塩、又は本明細書に記載される医薬組成物が、本明細書に記載されている。一実施形態では、ＧＣＮ２キナーゼの活性化を必要とする患者において、ＧＣＮ２キナーゼの活性化に使用するための、本明細書に記載される化合物、若しくはその薬学的に許容可能な塩、又は本明細書に記載される医薬組成物が、本明細書に記載されている。一実施形態では、ＰＥＲＫキナーゼの活性の調節を必要とする患者において、ＰＥＲＫキナーゼの活性の調節に使用するための、本明細書に記載される化合物、若しくはその薬学的に許容可能な塩、又は本明細書に記載される医薬組成物が、本明細書に記載されている。一実施形態では、ＰＥＲＫキナーゼの活性化を必要とする患者において、ＰＥＲＫキナーゼの活性化に使用するための、本明細書に記載される化合物、若しくはその薬学的に許容可能な塩、又は本明細書に記載される医薬組成物が、本明細書に記載されている。

【0121】

一実施形態では、ＧＣＮ２キナーゼの阻害及びＰＥＲＫキナーゼの阻害を必要とする患者において、ＧＣＮ２キナーゼの阻害及びＰＥＲＫキナーゼの阻害に使用するための、本明細書に記載される化合物、若しくはその薬学的に許容可能な塩、又は本明細書に記載される医薬組成物が、本明細書に記載されている。一実施形態では、ＧＣＮ２キナーゼの活性の調節を必要とする患者において、ＧＣＮ２キナーゼの活性の調節に使用するための、本明細書に記載される化合物、若しくはその薬学的に許容可能な塩、又は本明細書に記載される医薬組成物が、本明細書に記載されている。別の実施形態では、ＰＥＲＫキナーゼの活性の阻害を必要とする患者において、ＰＥＲＫキナーゼの活性を阻害するために使用される、本明細書に記載される化合物、若しくはその薬学的に許容可能な塩、又は本明細書に記載される医薬組成物が、本明細書に記載されている。

【0122】

一実施形態では、がんの治療を必要とする患者において、がんの治療に使用するための、本明細書に記載される化合物、若しくはその薬学的に許容可能な塩、又は本明細書に記載される医薬組成物が、本明細書に記載されている。いくつかの実施形態では、がんは、結腸直腸がん、肺がん、中皮腫、膵がん、咽頭がん、喉頭がん、食道がん、胃、十二指腸がん、小腸がん、乳がん、卵巣がん、睾丸腫瘍、前立腺、肝臓がん、甲状腺がん、腎臓がん、子宮がん、妊娠性絨毛がん、脳腫瘍、網膜芽細胞腫、皮膚がん、黒色腫、肉腫、線維肉腫、悪性骨腫瘍、膀胱がん、血液がん、白血病、急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、赤白血病、組織球性リンパ腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、及び悪性リンパ腫からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、がんは、白血病である。いくつかの実施形態では、がんは、急性骨髄性白血病である。いくつかの実施形態では、がんは、急性リンパ芽球性白血病である。いくつかの実施形態では、がんは、線維肉腫である。いくつかの実施形態では、がんは、多発性骨髄腫である。いくつかの実施形態では、がんは、リンパ腫である。いくつかの実施形態では、がんは、Ｂ細胞リンパ腫である。いくつかの実施形態では、がんは、Ｔ細胞リンパ腫である。

【0123】

一実施形態では、アミロイドーシスの治療を必要とする患者において、アミロイドーシスの治療に使用するための、本明細書に記載される化合物、若しくはその薬学的に許容可能な塩、又は本明細書に記載される医薬組成物が、本明細書に記載されている。一実施形態では、軽鎖アミロイドーシスの治療を必要とする患者において、軽鎖アミロイドーシスの治療に使用するための、本明細書に記載される化合物、若しくはその薬学的に許容可能な塩、又は本明細書に記載される医薬組成物が、本明細書に記載されている。

【0124】

一実施形態では、ＧＣＮ２関連疾患及びＰＥＲＫ関連疾患から選択される疾患の治療を必要とする患者において、その治療に使用するための、本明細書に記載される化合物、若しくはその薬学的に許容可能な塩、又は本明細書に記載される医薬組成物が、本明細書に記載されている。いくつかの実施形態では、疾患は、ＧＣＮ２関連疾患である。いくつかの実施形態では、疾患は、ＰＥＲＫ関連疾患である。いくつかの実施形態では、疾患は、がんである。いくつかの実施形態では、がんは、結腸直腸がん、肺がん、中皮腫、膵がん、咽頭がん、喉頭がん、食道がん、胃、十二指腸がん、小腸がん、乳がん、卵巣がん、睾丸腫瘍、前立腺、肝がん、甲状腺がん、腎臓がん、子宮がん、妊娠性絨毛がん、脳腫瘍、網膜芽細胞腫、皮膚がん、黒色腫、肉腫、線維肉腫、悪性骨腫瘍、膀胱がん、血液がん、白血病、急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、赤白血病、組織球性リンパ腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、及び悪性リンパ腫からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、がんは、白血病である。いくつかの実施形態では、がんは、急性骨髄性白血病である。いくつかの実施形態では、がんは、急性リンパ芽球性白血病である。いくつかの実施形態では、がんは、線維肉腫である。いくつかの実施形態では、がんは、多発性骨髄腫である。いくつかの実施形態では、がんは、リンパ腫である。いくつかの実施形態では、がんは、Ｂ細胞リンパ腫である。いくつかの実施形態では、がんは、Ｔ細胞リンパ腫である。いくつかの実施形態では、疾患は、アミロイド症である。いくつかの実施形態では、疾患は、軽鎖アミロイドーシスである。

【0125】

一実施形態では、ＧＣＮ２関連疾患及びＰＥＲＫ関連疾患から選択される疾患の治療を必要とする患者において、その治療に使用するための、本明細書に記載される化合物、若しくはその薬学的に許容可能な塩、又は本明細書に記載される医薬組成物が、本明細書に記載されている。いくつかの実施形態では、疾患は、ＧＣＮ２関連疾患である。いくつかの実施形態では、疾患は、ＰＥＲＫ関連疾患である。いくつかの実施形態では、疾患は、がんである。いくつかの実施形態では、がんは、結腸直腸がん、肺がん、中皮腫、膵がん、咽頭がん、喉頭がん、食道がん、胃、十二指腸がん、小腸がん、乳がん、卵巣がん、睾丸腫瘍、前立腺、肝がん、甲状腺がん、腎臓がん、子宮がん、妊娠性絨毛がん、脳腫瘍、網膜芽細胞腫、皮膚がん、黒色腫、肉腫、線維肉腫、悪性骨腫瘍、膀胱がん、血液がん、白血病、急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、赤白血病、組織球性リンパ腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、及び悪性リンパ腫からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、がんは、白血病である。いくつかの実施形態では、白血病は急性骨髄性白血病である。いくつかの実施形態では、白血病は、急性リンパ芽球性白血病である。いくつかの実施形態では、がんは、線維肉腫である。いくつかの実施形態では、がんは、多発性骨髄腫である。いくつかの実施形態では、がんは、リンパ腫である。いくつかの実施形態では、がんは、Ｂ細胞リンパ腫である。いくつかの実施形態では、がんは、Ｔ細胞リンパ腫である。いくつかの実施形態では、疾患は、アミロイド症である。いくつかの実施形態では、疾患は、軽鎖アミロイドーシスである。いくつかの実施形態では、１つ以上の治療剤は、ＩＭｉＤ剤、プロテアソーム阻害剤、ステロイド、抗ＣＤ３８剤、抗ＣＤ２０剤、Ｂｃｌ－２阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、二特異性抗体、ヌクレオシド類似体、ＢＴＫ阻害剤、ＤＮＡアルキル化剤、ＥＺＨ２阻害剤、アントラサイクリン、トポイソメラーゼ阻害剤、プラチン（ｐｌａｔｉｎ）、チロシンキナーゼ阻害剤、ＨＤＡＣ阻害剤、核外輸送阻害剤、微小管阻害剤、Ｌ－アスパラギナーゼ、ペグ化アスパラギナーゼ、ＰＥＲＫ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、免疫調節剤、ＭＡＰＫ経路阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、ＥＲＫ阻害剤、及びＲａｓ阻害剤からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、１つ以上の治療剤は、ボルテゾミブ、カルフィルゾミブ、イキサゾミブ、サリドマイド、ポマリドミド、レナリドミド、デキサメタゾン、プレドニゾン、ダラツムマブ、ダラツムマブ／ヒアルロニダーゼ、イサツキシマブ、リツキシマブ、オビヌツズマブ、ベネトクラクス、イデラリシブ、コパンリシブ、デュベリシブ、ウムブラリシブ、ゲムシタビン、シタラビン、イブルチニブ、アカラブルチニブ、ザヌブルチニブ、ベンダムスチン、シクロホスファミド、タゼメトスタット、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エトポシド、オキサロプラチン、カルボプラチン、シスプラチンボスチニブ、ダサチニブ、イマチニブ、ニロチニブ、ポナチニブ、パノビノスタット、セリネクソール、ビンクリスチン、Ｌ－アスパラギナーゼ、ペグアスパルガーゼ、カラスパルガーゼペゴル－ｍｎｋｌ、ＪＺＰ－４５８、エリアスパーゼ、ＰＦ７４５（ＪＺＰ－３４１）、アスパラギナーゼ Ｅｒｗｉｎｉａ ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉ（クリサンタスパーゼ）、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉアスパラギナーゼ（コラスパーゼ）、抗ＰＤ１剤、抗ＰＤＬ１剤、及び抗ＣＴＬＡ４剤からなる群から選択される。

【0126】

本明細書に提供される化合物は、そのような治療を必要とする患者（動物及びヒト）に、最適な医薬有効性を提供するであろう用量で投与することができる。任意の特定の用途での使用に必要な用量は、選択される特定の化合物又は組成物だけでなく、投与経路、治療される状態の性質、患者の年齢と状態、その後患者が従う併用投薬又は特別食、及び当業者が認識するであろう他の要因によっても、患者ごとに異なり、適切な用量は、最終的に担当医師の裁量に委ねられることが理解されよう。上述の臨床状態及び疾患を治療するために、本明細書に提供される化合物は、従来の非毒性の薬学的に許容可能な担体、アジュバント、及びビヒクルを含有する投与単位製剤で、経口的に、皮下に、局所的に、非経口的に、吸入スプレーによって、又は直腸に投与され得る。非経口投与には、皮下注射、静脈内若しくは筋肉内注射、又は注入技術が含まれ得る。

【0127】

治療は、望ましい限り長時間、又は短期間継続することができる。組成物は、例えば、１日１～４回以上のレジメンで投与されてもよい。好適な治療期間は、例えば、少なくとも約１週間、少なくとも約２週間、少なくとも約１ヶ月、少なくとも約６ヶ月、少なくとも約１年、又は無期限とすることができる。治療期間は、所望の結果が達成された時に終了することができる。

【0128】

併用療法
本明細書に記載される化合物、例えば、本明細書に定義される式Ｉの化合物は、本明細書に記載されるがんなどの、本明細書に記載される障害を治療するために、１つ以上の追加の治療剤と組み合わせて投与することができる。例えば、本明細書に記載の化合物、例えば、本明細書に定義される式Ｉの化合物、１つ以上の追加の治療剤、及び薬学的に許容可能な賦形剤を含む医薬組成物が、本開示に提供される。一部の実施形態では、本明細書に定義される式Ｉの化合物、及び１つの追加の治療剤が投与される。一部の実施形態では、本明細書に定義される式Ｉの化合物、及び２つの追加の治療剤が投与される。一部の実施形態では、本明細書に定義される式Ｉの化合物、及び３つの追加の治療剤が投与される。併用療法は、二つ以上の治療剤を投与することにより達成することができ、その各々は、別々に製剤化され、投与される。例えば、本明細書に定義される式Ｉの化合物、及び追加の治療剤は、別々に製剤化及び投与することができる。併用療法はまた、単一の製剤、例えば、１つの治療剤としての式Ｉの化合物及び化学療法剤などの１つ以上の追加の治療剤を含む医薬組成物で、２つ以上の治療剤を投与することにより、達成することができる。例えば、本明細書に定義される式Ｉの化合物、及び追加の治療剤は、単一の製剤で投与することができる。他の併用もまた、併用療法に包含される。併用療法で２つ以上の薬剤を同時に投与することができるが、それらが同時に投与される必要はない。例えば、第１の薬剤（又は薬剤の組み合わせ）の投与は、数分間、数時間、数日間、又は数週間、第２の薬剤（又は薬剤の組み合わせ）の投与に先行することができる。ゆえに、２つ以上の薬剤は、互いに数分以内に投与されるか、又は互いに、１、２、３、６、９、１２、１５、１８、又は２４時間以内に投与されるか、又は互いに１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１４日以内に投与されるか、又は互いに２、３、４、５、６、７、８、９週間以内に、投与することができる。一部の場合においては、更に長い間隔も、可能である。多くの場合において、併用療法で使用される２つ以上の薬剤は、同時に患者の身体内に存在することが望ましいが、必須ではない。

【0129】

併用療法はまた、成分薬剤の異なる順序を使用して、併用される薬剤のうちの１つ以上の、２回以上の投与を含むこともできる。例えば薬剤Ｘと薬剤Ｙとを併用で使用する場合には、それらを任意の組み合せで１回以上、連続的に投与することができ、例えばＸ－Ｙ－Ｘ、Ｘ－Ｘ－Ｙ、Ｙ－Ｘ－Ｙ、Ｙ－Ｙ－Ｘ、Ｘ－Ｘ－Ｙ－Ｙなどの順序である。

【0130】

併用療法は、異なる投与経路を使用した併用で使用される１つ以上の薬剤の２回以上の投与を含むこともできる。１つ以上の薬剤のそれぞれは、従来の非毒性の薬学的に許容可能な担体、アジュバント、及びビヒクルを含有する投与単位製剤で、経口的に、皮下に、局所的に、非経口的に、吸入スプレーによって、又は直腸に、独立して投与され得る。非経口投与には、皮下注射、静脈内若しくは筋肉内注射、又は注入技術が含まれ得る。

【0131】

一部の実施形態では、本明細書に記載の式Ｉの化合物は、アスパラギナーゼ（ＡＳＮａｓｅ、Ｌ－アスパラギナーゼ）又はその誘導体と合わせられる。一部の実施形態では、アスパラギナーゼは、Ｅｒｗｉｎｉａ ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉから取得され、クリサンタスパーゼ又はアスパラギナーゼＥｒｗｉｎｉａ ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉとして知られる。アスパラギナーゼＥｒｗｉｎｉａ ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉは、Ｅｒｗｉｎａｚｅ（登録商標）又はＥｒｗｉｎａｓｅ（登録商標）の商標の下で販売される。一部の実施形態では、アスパラギナーゼはＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉから取得され、コラスパーゼとして知られる。コラスパーゼは、Ｅｌｓｐａｒ（登録商標）、Ｌｅｕｎａｓｅ（登録商標）、Ｋｉｄｒｏｌａｓｅ（登録商標）、又はＳｐｅｃｔｒｉｌａ（登録商標）（組換えＥ．ｃｏｌｉアパラギナーゼ）の商標の下に販売される。コラスパーゼのペグ化誘導体は、商標Ｏｎｃａｓｐａｒ（登録商標）の下で販売されるペグアスパルガーゼ、及び商標Ａｓｐａｒｌａｓ（登録商標）の下で販売されるカラスパルガーゼペゴル－ｍｎｋｌである。現在前臨床又は臨床開発中の他のアスパラギナーゼ製品には、ＪＺＰ－４５８（組換えＥｒｗｉｎｉａアスパラギナーゼ）、ＰＦ７４５（ＪＺＰ－３４１）、エリアスパーゼ（ＧＲＡＳＰＡ（登録商標））、及びＸｏｎｃａｎｅが含まれる。

【0132】

一部の実施形態では、本明細書に定義される式Ｉの化合物は、免疫調節剤と組み合わされる。一部の実施形態では、免疫調節性は、適応免疫応答を強化する。一部の実施形態では、免疫調節性は、抗原提示細胞の活性を強化する。一部の実施形態では、免疫調節剤は、マクロファージを含む骨髄細胞の抗腫瘍活性を強化する。一部の実施形態では、免疫調節性は、ナチュラルキラー細胞の抗腫瘍活性を強化する。一部の実施形態では、免疫調節剤は、細胞傷害性Ｔ細胞を含むエフェクターＴ細胞の活性を強化する。

【0133】

一部の実施形態では、本明細書に提供される化合物と組み合わせて投与され得る１つ以上の追加の治療剤は、ＭＡＰＫ経路阻害剤であってもよい。このようなＭＡＰＫ経路阻害剤としては、例えば、ＭＥＫ阻害剤、ＥＲＫ阻害剤、及びＲａｓ阻害剤が挙げられる。

【0134】

例示的なＭＥＫ阻害剤としては、限定されるものではないが、トラメチニブ、セルメチニブ、コビメチニブ、ビニメチニブ、及びそれらの薬学的に許容可能な塩が挙げられる。例示的なＥＲＫ阻害剤としては、限定されるものではないが、ウリキセルチニブ、ＳＣＨ７７２９８４、ＬＹ３２１４９９６、ラボキセルチニブ（ｒａｖｏｘｅｒｔｉｎｉｂ）、ＶＸ－１１ｅ、ＡＳＮ－００７、ＧＤＣ－０９９４、ＭＫ－８３５３、ＡＳＴＸ－０２９、ＬＴＴ４６２、ＫＯ－９４７、及びそれらの薬学的に許容可能な塩が挙げられる。例示的なＲａｓ阻害剤としては、限定されるものではないが、ＡＭＧ－５１０、ＭＲＴＸ８４９、ＡＲＳ－１６２０、ＡＲＳ－３２４８、ＬＹ３４９９４４６、及びそれらの薬学的に許容可能な塩が挙げられる。

【0135】

一部の実施形態では、追加の治療剤は、限定されないが、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、ピジリズマブ、セミプリマブ、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、ＢＭＳ－９３６５５９、又はアベルマブを含む抗ＰＤ－１又は抗ＰＤＬ－１治療薬を含む免疫調節剤であり得る。一部の実施形態では、追加の治療剤は、ＴＳＲ－０２２若しくはＭＢＧ４５３を含むがこれらに限定されない抗ＴＩＭ３（抗ＨＡＶｃｒ２）治療薬、レラトリマブ、ＬＡＧ５２５、若しくはＴＳＲ－０３３を含むがこれらに限定されない抗ＬＡＧ３治療薬、抗４－１ＢＢ（抗ＣＤ３７、抗ＴＮＦＲＳＦ９）、ＳＧＮ－４０、ＣＰ－８７０，８９３若しくはＲＯ７００９７８９を含むがこれらに限定されないＣＤ４０アゴニスト治療薬、Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４を含むがこれに限定されない抗ＣＤ４７治療薬、抗ＣＤ２０治療薬、抗ＣＤ３８治療薬、ＡＤＵ－Ｓ１００を含むがこれに限定されないＳＴＩＮＧアゴニスト、ＭＫ－１４５４、ＡＳＡ４０４、又はアミドベンズイミダゾールであってよい。一部の実施形態では、追加の治療剤は、イピリムマブ、トレメリムマブを含む、抗ＣＴＬＡ４薬剤であってもよい。一部の実施形態では、追加の治療剤は、アザシチジン又はデシタビン、上皮成長因子阻害剤、スタチン、メトホルミン、アンジオテンシン受容体ブロッカー、サリドマイド、レナリドミド、ポマリドミド、プレドニゾン、又はデキサメタゾンを含むがこれらに限定されない他の免疫調節治療薬を含むがこれに限定されない、低メチル化剤であってもよい。一部の実施形態では、追加の治療剤は、標的治療剤、がんワクチン、及びＣＡＲ－Ｔ細胞療法を含む、免疫療法剤であってもよい。

【0136】

本明細書に記載される式Ｉの化合物は、がんを治療することが知られている他の治療剤と組み合わせて投与されてもよい。このような他の治療剤には、放射線療法、抗チューブリン剤、ＤＮＡアルキル化剤、ＤＮＡ合成阻害剤、ＤＮＡ挿入剤、抗エストロゲン剤、抗アンドロゲン、ステロイド、抗ＥＧＦＲ薬、キナーゼ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ＰＩ３キナーゼ阻害剤、サイクリン依存性キナーゼ阻害因子、ＣＤ４／ＣＤ６キナーゼ阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤、ＤＮＡメチル化阻害剤、抗ＨＥＲ２剤、抗血管新生薬、プロテアソーム阻害剤、ＰＡＲＰ（ポリＡＤＰリボースポリメラーゼ）阻害剤、細胞周期調節キナーゼ阻害剤、サリドマイド、レナリドミド、ポマリドミド、ボルテゾミブ、カルフィルゾミブ、イキサゾミブ、ダラツムマブ、ダラツムマブ／ヒアルロニダーゼ、イソツキシマブ、デキサメタゾン、及び抗体－薬剤－共役体（ＡＤＣ）が含まれる。

【0137】

一実施形態では、追加の治療剤は、限定されるものではないが、抗チューブリン剤（例えば、パクリタキセル、ｎａｂ－パクリタキセルを含む注射用懸濁液用のパクリタキセルタンパク質結合粒子、エリブリン、ドセタキセル、イキサベピロン、ビンクリスチン、アウリスタチン、又はメイタンシノイド）、ビノレルビン、ＤＮＡアルキル化剤（シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、シクロホスファミド、イホスファミド、テモゾロミドを含む）、ＤＮＡ挿入剤又はＤＮＡトポイソメラーゼ阻害剤（例えば、ドキソルビシン、ペグ化リポソームドキソルビシン、ダウノルビシン、イダルビシン、ミトキサントロン、又はエピルビシンなどのアントラサイクリン；トポテカン、イリノテカン、又はエキサテカンなどのカンプトテシンを含む）、５－フルオロウラシル、カペシタビン、シタラビン、デシタビン、５－アザシタジン（５－ａｚａ ｃｙｔａｄｉｎｅ）、ゲムシタビン及びメトトレキサートを含む化学療法剤であってよい。

【0138】

一部の実施形態では、追加の治療剤は、エルロチニブ、ゲフィチニブ、ネラチニブ、アファチニブ、オシメルチニブ、ラパタニブ（ｌａｐａｔａｎｉｂ）、クリゾチニブ、ブリガチニブ、セリチニブ、アレクチニブ、ロルラチニブ、エベロリムス、テムシロリムス、アベマシクリブ、ＬＥＥ０１１、パルボシクリブ、カボザンチニブ、リプレチニブ、スニチニブ、パゾパニブ、ソラフェニブ、レゴラフェニブ、スニチニブ、アキシチニブ、ダサチニブ、イマチニブ、ニロチニブ、イデラリシブ、イブルチニブ、ＢＬＵ－６６７、ロキソ２９２、ラロトレクチニブ、及びキザルチニブを含むがこれらに限定されないキナーゼ阻害剤であってもよい。

【0139】

一部の実施形態では、追加の治療剤は、タモキシフェン、フルベストラント、アナストロゾール、レトロゾール、及びエキセメスタンを含むがこれらに限定されない抗エストロゲン剤、アビラテロンアセテート、エンザルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、フルタミド、酢酸シプロテロンを含むがこれらに限定されない抗アンドロゲン剤、プレドニゾン及びデキサメタゾンを含むがこれらに限定されないステロイド剤、ネラパリブ（ｎｅｒａｐａｒｉｂ）、オラパリブ、タラゾパリブ、及びルカパリブを含むがこれらに限定されないＰＡＲＰ阻害剤、イリノテカン、カンプトテシン、エキサテカン、及びトポテカンを含むがこれらに限定されないトポイソメラーゼＩ阻害剤、アントラサイクリン、エトポシド、リン酸エトポシド、及びミトキサントロンを含むがこれらに限定されないトポイソメラーゼＩＩ阻害剤、ボリノスタット、ロミデプシン、パノビノスタット、バルプロ酸、及びベリノスタットを含むがこれらに限定されないヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤、ＤＺＮｅｐ及び５－アザ－２’－デオキシシチジンを含むがこれらに限定されないＤＮＡメチル化阻害剤、ボルテゾミブ及びカルフィルゾミブを含むがこれらに限定されないプロテアソーム阻害剤、トラスツズマブ、アドトラスツズマブ、ペルツズマブ、セツキシマブ、及びパニツムマブを含むがこれらに限定されない生物学的薬剤であってもよい。

【0140】

一部の実施形態では、追加の治療剤は、ベバシズマブ、アフリベルセプト、及びＡＭＧ３８６を含む、抗血管新生薬であり得る。

【0141】

一部の実施形態では、追加の治療剤は、ＤＭ１、ＤＭ４、ＭＭＡＥ、ＭＭＡＦ、又はカンプトテシンのペイロードを含む抗体－薬剤－共役体（ＡＤＣ）、ブレンツキシマブベドチン及びトラスツズマブエムタンシン、放射線療法、シプリューセル－Ｔを含むがこれに限定されない治療用ワクチンであり得る。

【0142】

一部の実施形態では、追加の治療剤は、ＵＬＫ阻害剤、ＶＰＳ３４阻害剤、ＰＩＫｆｙｖｅ阻害剤、ＰＰＴ１阻害剤、又はリソソーム遮断剤を含む、オートファジー阻害剤であってもよい。一部の実施形態では、追加の治療剤は、ＤＣＣ－３１１６、ＳＡＲ４０５、ＳＢ０２０２４、ヒドロキシクロロキニーネ、クロロキニーネ、アピリモド、ＭＲＴ４０３、及びＬＹＳ０５であり得る。

【0143】

一部の実施形態では、追加の治療剤は、ゴセレリン及びロイプロリドを含む黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）類似体から選択される。

【0144】

一部の実施形態では、追加の治療剤は、エベロリムス、トラベクテジン、アブラキサン、ＴＬＫ ２８６、ＡＶ－２９９、ＤＮ－１０１、パゾパニブ、ＧＳＫ６９０６９３、ＲＴＡ ７４４、ＯＮ ０９１０．Ｎａ、ＡＺＤ ６２４４（ＡＲＲＹ－１４２８８６）、ＡＭＮ－１０７、ＴＫＩ－２５８、ＧＳＫ４６１３６４、ＡＺＤ １１５２、エンザスタウリン、バンデタニブ、ＡＲＱ－１９７、ＭＫ－０４５７、ＭＬＮ８０５４、ＰＨＡ－７３９３５８、Ｒ－７６３、ＡＴ－９２６３、ペメトレキセド、エルロチニブ、ダサタニブ、ニロチニブ、デカタニブ、パニツムマブ、アムルビシン、オレゴボマブ、Ｌｅｐ－ｅｔｕ、ノラトレキセド、ＡＺＤ ２１７１、バタブリン、オファツムツナブ（ｏｆ ａｔｕｍｔｕｎａｂ）、ザノリムマブ、エドテカリン、テトランドリン、ルビテカン、テスミフェン、オブリメルセン、チシリムマブ、イピリムマブ、ゴシポール、Ｂｉｏ １１１、１３１－Ｉ－ＴＭ－６０１、ＡＬＴ－１１０、ＢＩＯ １４０、ＣＣ ８４９０、シレンギチド、ジャイマテカン、ＩＬ１３－ＰＥ３８ＱＱＲ、ＩＮＯ １００１、ＩＰｄＲ_１ ＫＲＸ－０４０２、ルカントン、ＬＹ ３１７６１５、ニューラジアブ、ビテスパン、Ｒｔａ ７４４、アラノシン（Ｓｄｘ １０２）、タランパネル、アトラセンタン、ＸＲ ３１１、ロミデプシン、ＡＤＳ－１００３８０、スニチニブ、５－フルオロウラシル、ボリノスタット、エトポシド、ゲムシタビン、ドキソルビシン、イリノテカン、リポソーマルドキソルビシン、５’－デオキシ－５－フルオロウリジン、ビンクリスチン、テモゾロミド、ＺＫ－３０４７０９、セリシクリブ；ＰＤ０３２５９０１、ＡＺＤ－６２４４、カペシタビン、Ｌ－グルタミン酸、Ｎ－［４－［２－（２－アミノ－４，７－ジヒドロ－４－オキソ－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－イル）－ エチル］ベンゾイル］－、二ナトリウム塩、七水和物、カンプトテシン、ＰＥＧ標識イリノテカン、タモキシフェン、トレミフェンシトレート、アナストロゾール、エキセメスタン、レトロゾール、ＤＥＳ（ジエチルスチルベストロール）、エストラジオール、エストロゲン、コンジュゲートしたエストロゲン、ベバシズマブ、ＩＭＣ－１Ｃ１１、ＣＨＩＲ－２５８、３－［５－（メチルスルホニルピペラジンメチル）－インドリル］－キノロン、バタラニブ、ＡＧ－０１３７３６、ＡＶＥ－０００５、［Ｄ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）６、Ａｚｇｌｙ １０］の酢酸塩（パイロ－Ｇｌｕ－Ｈｉｓ－Ｔｒｐ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｐｒｏ－Ａｚｇｌｙ－ＮＨ_２アセテート［Ｃ_５９Ｈ_８４Ｎ_１８Ｏ_１４－（Ｃ_２Ｈ_４Ｏ_２）_ｘ（式中、ｘ＝１～２．４）］、酢酸ゴセレリン、酢酸ロイプロリド、トリプトレリンパモ酸塩、酢酸メドロキシプロゲステロン、カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、酢酸メゲストロール、ラロキシフェン、ビカルタミド、フルタニド、ニルタミド、酢酸メゲストロール、ＣＰ－７２４７１４；ＴＡＫ－１６５、ＨＫＩ－２７２、エルロチニブ、ラパタニブ、カネルチニブ、ＡＢＸ－ＥＧＦ抗体、アービタックス、ＥＫＢ－５６９、ＰＫＩ－１６６、ＧＷ－５７２０１６、イオナファルニブ、ＢＭＳ－２１４６６２、ティピファルニブ；アミホスチン、ＮＶＰ－ＬＡＱ８２４、スベロイルアニリドヒドロキサム酸、バルプロ酸、トリコスタチンＡ、ＦＫ－２２８、ＳＵ１１２４８、ソラフェニブ、ＫＲＮ９５１、アミノグルテチミド、アムサクリン、アナグレリド、Ｌ－アスパラギナーゼ、Ｃａｌｍｅｔｔｅ－Ｇｕｅｒｉｎ桿菌（ＢＣＧ）ワクチン、ブレオマイシン、ブセレリン、ブスルファン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、クロドロネート、シプロテロン、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ジエチルスチルベストロール、エピルビシン、フルダラビン、フルドロコルチゾン、フルオキシメステロン、フルタミド、ゲムシタビン、グリベック、ヒドロキシウレア、イダルビシン、イホスファミド、イマチニブ、ロイプロリド、レバミソール、ロムスチン、メクロレタミン、メルファラン、６－メルカプトプリン、メスナ、メトトレキサート、マイトマイシン、ミトタン、ミトキサントロン、ニルタミド、オクトレオチド、オキサリプラチン、パミドロネート、ペントスタチン、プリカマイシン、ポルフィマー、プロカルバジン、ラルチトレキセド、リツキシマブ、ストレプトゾシン、テニポシド、テストステロン、サリドマイド、チオグアニン、チオテパ、トレチノイン、ビンデシン、１３－シス－レチノイン酸、フェニルアラニンマスタード、ウラシルマスタード、エストラムスチン、アルトレタミン、フロクスウリジン、５－デオキシウリジン、シトシンアラビノシド、６－メカプトプリン、デオキシコホルマイシン、カルシトリオール、バルルビシン、ミスラマイシン、ビンブラスチン、ビノレルビン、トポテカン、ラゾキシン、マリマスタット、ＣＯＬ－３、ネオバスタット、ＢＭＳ－２７５２９１、スクアラミン、エンドスタチン、ＳＵ５４１６、ＳＵ６６６８、ＥＭＤ１２１９７４、インターロイキン－１２、ＩＭ８６２、アンジオスタチン、ビタキシン、ドロロキシフェン、イドキシフェン、スピロノラクトン、フィナステリド、シミチジン、トラスツズマブ、デニロイキンジフチトクス、ゲフィチニブ、ボルテジミブ、イリノテカン、トポテカン、ドキソルビシン、ドセタキセル、ビノレルビン、ベバシズマブ（モノクローナル抗体）及びアービタックス、クレモフォールフリーのパクリタキセル、エピチロンＢ、ＢＭＳ－２４７５５０、ＢＭＳ－３１０７０５、ドロロキシフェン、４－ヒドロキシタモキシフェン、ピペンドキシフェン、ＥＲＡ－９２３、アルゾキシフェン、フルベストラント、アコルビフェン、ラソフォキシフェン、イドキシフェン、ＴＳＥ－４２４、ＨＭＲ－３３３９、ＺＫ１８６６１９、ＰＴＫ７８７／ＺＫ ２２２５８４、ＶＸ－７４５、ＰＤ １８４３５２、ラパマイシン、４０－Ｏ－（２－ヒドロキシエチル）－ラパマイシン、テムシロリムス、ＡＰ－２３５７３、ＲＡＤ００１、ＡＢＴ－５７８、ＢＣ－２１０、ＬＹ２９４００２、ＬＹ２９２２２３、ＬＹ２９２６９６、ＬＹ２９３６８４、ＬＹ２９３６４６、ウォルトマンニン、ＺＭ３３６３７２、Ｌ－７７９４５０、ＰＥＧ－フィルグラスチム、ダルベポエチン、エリトロポエチン、顆粒球コロニー刺激因子、ゾレンドロネート、プレドニゾン、セツキシマブ、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、ヒストレリン、ペグ化インターフェロンアルファ－２ａ、インターフェロンアルファ－２ａ、ペグ化インターフェロンアルファ－２ｂ、インターフェロンアルファ－２ｂ、アザシチジン、ＰＥＧ－Ｌ－アスパラギナーゼ、レナリドミド、ゲムツズマブ、ヒドロコルチゾン、インターロイキン－１１、デクスラゾキサン、アレムツズマブ、全トランス型レチノイン酸、ケトコナゾール、インターロイキン－２、メゲストロール、免疫グロブリン、ナイトロジェンマスタード、メチルプレドニゾロン、イブリツモマブチウキセタン、アンドロゲン、デシタビン、ヘキサメチルメラミン、ベキサロテン、トシツモマブ、三酸化ヒ素、コルチゾン、エジトロネート、ミトタン、シクロスポリン、リポソーマルダウノルビシン、エドウィーナ－アスパラギナーゼ、ストロンチウム８９、カソピタント、ネツピタント、ＮＫ１受容体遮断薬、パロノセトロン、アプレピタント、ジフェンヒドラミン、ヒドロキシジン、メトクロプラミド、ロラゼパム、アルプラゾラム、ハロペリドール、ドロペリドール、ドロナビノール、デキサメタゾン、メチルプレドニゾロン、プロクロルペラジン、グラニセトロン、オンダンセトロン、ドラセトロン、トロピセトロン、ペグフィルグラスチム、エリトロポエチン、エポエチンアルファ及びダルベポエチンアルファ、イピルムマブ、並びにこれらの混合物からなる群から選択される。

【0145】

医薬組成物及びキット
本開示の別の態様は、薬学的に許容される担体と一緒に製剤化された本明細書に開示される化合物を含む医薬組成物を提供する。具体的には、本開示は、１つ以上の薬学的に許容される担体と一緒に製剤化された本明細書に開示される化合物を含む医薬組成物を提供する。これらの製剤には、経口、直腸、局所、バッカル、非経口（例えば、皮下、筋肉内、皮内、又は静脈内）直腸、膣、又はエアロゾル投与に好適なものが含まれるが、あらゆる所与の事例における最も好適な投与形態は、治療される状態の程度及び重症度、並びに使用される特定の化合物の性質に依存する。例えば、開示される組成物は、単位用量として製剤化されてもよく、かつ／又は経口投与若しくは皮下投与用に製剤化されてもよい。

【0146】

例示的な医薬組成物は、医薬調製物の形態で、例えば、有効成分として本明細書に記載の化合物のうちの１つ以上を、外用、経腸、若しくは非経口適用に好適な有機若しくは無機担体若しくは賦形剤と混合して含む固体、半固体、又は液体形態で使用され得る。有効成分は、例えば、錠剤、ペレット剤、カプセル剤、座剤、溶剤、エマルション、懸濁剤、及び使用に好適な任意の他の形態用の通常の非毒性の薬学的に許容される担体と配合されてもよい。主題の活性化合物は、疾患のプロセス又は状態に対する所望の効果を生じさせるのに十分な量で医薬組成物中に含まれる。

【0147】

錠剤などの固体組成物を調製するために、主要有効成分を、医薬担体、例えば、トウモロコシデンプン、ラクトース、スクロース、ソルビトール、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、リン酸二カルシウム、若しくはガムなどの従来の錠剤化成分、及び他の医薬希釈剤、例えば水と混合して、本明細書に提供される化合物、又はその非毒性の薬学的に許容される塩の均質な混合物を含む固体予備製剤組成物を形成することができる。これらの予備製剤組成物を均質物と呼ぶ場合、組成物が錠剤、ピル、及びカプセルなどの同等に有効な単位剤形に容易に細分され得るように、有効成分が組成物全体にわたって均一に分散されることを意味する。

【0148】

経口投与のための固形剤形（カプセル、錠剤、ピル、糖剤、粉末、顆粒等）では、対象組成物が、１つ以上の薬学的に許容可能な担体、例えばクエン酸ナトリウム又はリン酸二カルシウムなど、及び／又は以下のうちのいずれかと混合される：（１）充填剤又は増量剤、例えばデンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、及び／又はケイ酸、（２）結合剤、例えばカルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース及び／又はアカシアなど、（３）湿潤剤、例えばグリセロール、（４）崩壊剤、例えば寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモ又はタピオカデンプン、アルギン酸、特定のケイ酸塩、及び炭酸ナトリウム、（５）溶解遅延剤、例えばパラフィン、（６）吸収促進剤、例えば第四級アンモニウム化合物、（７）湿潤剤、例えばアセチルアルコール及びグリセロールモノステアレートなど、（８）吸収剤、例えばカオリン及びベントナイト粘土、（９）潤滑剤、例えばタルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、及びそれらの混合物、及び（１０）着色剤。カプセル、錠剤、及びピルの場合、組成物は緩衝剤も含み得る。同様のタイプの固体組成物は、ラクトース又は乳糖などの賦形剤、並びに高分子量ポリエチレングリコールなどを使用して、軟質及び硬質充填ゼラチンカプセル剤中の充填剤としても用いられ得る。

【0149】

錠剤は、任意選択的に１つ以上の付属成分とともに圧縮又は成形によって作製され得る。圧縮錠剤は、結合剤（例えば、ゼラチン若しくはヒドロキシプロピルメチルセルロース）、滑沢剤、不活性希釈剤、保存剤、崩壊剤（例えば、デンプングリコール酸ナトリウム若しくは架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム）、表面活性剤、又は分散剤を使用して調製され得る。成形錠剤は、不活性液体希釈剤で湿らせた主題の組成物の混合物を好適な機械で成形することによって作製され得る。錠剤、並びに他の固体剤形、例えば、糖衣剤、カプセル剤、丸剤、及び顆粒剤は、任意選択的に、コーティング及びシェル、例えば、腸溶性コーティング及び医薬製剤技術分野で周知の他のコーティングを用いてスコアリング又は調製され得る。

【0150】

吸入又は吹送用の組成物としては、薬学的に許容される水性若しくは有機の溶媒又はそれらの混合物中の溶剤及び懸濁剤、並びに散剤が挙げられる。経口投与用の液体剤形としては、薬学的に許容されるエマルション、マイクロエマルション、溶剤、懸濁剤、シロップ剤、及びエリキシル剤が挙げられる。主題の組成物に加えて、液体剤形は、当該技術分野で一般に使用されている不活性希釈剤、例えば、水又は他の溶媒、可溶化剤及び乳化剤、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３－ブチレングリコール、油（特に、綿実油、ピーナツ油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、及びゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフリルアルコール、ポリエチレングリコール、及びソルビタン脂肪酸エステル、シクロデキストリン、並びにそれらの混合物を含み得る。

【0151】

懸濁剤は、主題の組成物に加えて、例えば、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトール及びソルビタンエステル、微結晶セルロース、メタヒドロキシドアルミニウム、ベントナイト、寒天、及びトラガカント、並びにそれらの混合物などの懸濁剤を含み得る。

【0152】

直腸投与又は膣投与用の製剤は、主題の組成物を、例えば、ココアバター、ポリエチレングリコール、座剤ワックス、又はサリチル酸塩を含む１つ以上の好適な非刺激性賦形剤又は担体と混合することによって調製されてもよく、かつ室温で固体であるが、体温で液体になり、それ故に、体腔内で溶けて活性薬剤を放出する、座剤として提示され得る。

【0153】

主題の組成物の経皮投与用の剤形としては、散剤、スプレー剤、軟膏剤、ペースト剤、クリーム剤、ローション剤、ゲル剤、溶剤、パッチ、及び吸入剤が挙げられる。活性成分は、滅菌条件下で、薬学的に許容される担体、及び必要とされ得る任意の防腐剤、緩衝液、又は噴射剤と混合され得る。

【0154】

軟膏剤、ペースト剤、クリーム剤、及びゲル剤は、主題の組成物に加えて、動物性及び植物性脂肪、油、ワックス、パラフィン、デンプン、トラガカント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコーン、ベントナイト、ケイ酸、タルク、及び酸化亜鉛、又はそれらの混合物などの賦形剤を含み得る。

【0155】

散剤及びスプレー剤は、主題の組成物に加えて、ラクトース、タルク、ケイ酸、水酸化アルミニウム、ケイ酸カルシウム、及びポリアミド粉末、又はこれらの物質の混合物などの賦形剤を含み得る。スプレー剤は、更に、クロロフルオロ炭化水素などの通例の噴射剤、並びにブタン及びプロパンなどの揮発性非置換炭化水素を含み得る。

【0156】

あるいは、本開示の組成物及び化合物は、エアロゾルによって投与され得る。これは、本化合物を含む水性エアロゾル、リポソーム調製物、又は固体粒子を調製することによって達成される。非水性（例えば、フルオロカーボン噴射剤）懸濁剤が使用され得る。超音波ネブライザーが薬剤のせん断への曝露を最小限に抑え、これにより、主題の組成物中に含まれる本化合物の分解がもたらされ得るため、超音波ネブライザーが使用され得る。通常、水性エアロゾルは、従来の薬学的に許容される担体及び安定剤と一緒に主題の組成物の水溶液又は懸濁液を製剤化することによって作製される。担体及び安定剤は、特定の主題の組成物の要件に応じて変化するが、典型的には、非イオン性界面活性剤（Ｔｗｅｅｎ、プルロニック（登録商標）、又はポリエチレングリコール）、血清アルブミンなどの無害タンパク質、ソルビタンエステル、オレイン酸、レシチン、グリシンなどのアミノ酸、緩衝剤、塩、糖、又は糖アルコールを含む。エアロゾルは、一般に、等張性溶液から調製される。

【0157】

非経口投与に好適な本開示の医薬組成物は、１つ以上の薬学的に許容される滅菌等張性水溶液若しくは非水溶液、分散液、懸濁液、若しくはエマルション、又は使用直前に滅菌注射用溶液又は分散液に再構成され得る滅菌粉末と組み合わせて、主題の組成物を含み、抗酸化剤、緩衝剤、静菌薬、製剤を対象とするレシピエントの血液と等張にする溶質、又は懸濁剤若しくは増粘剤を含み得る。

【0158】

本明細書に提供される医薬組成物に用いられ得る好適な水性担体及び非水性担体の例としては、水、エタノール、ポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、及びそれらの好適な混合物、オリーブ油などの植物油、並びにオレイン酸エチル及びシクロデキストリンなどの注射用有機エステルが挙げられる。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング材料の使用によって、分散液の場合には必要な粒子サイズの維持によって、かつ界面活性剤の使用によって維持され得る。

【0159】

別の実施形態では、開示された化合物及び腸溶性材料、並びにそれらの薬学的に許容可能な担体又は賦形剤を含む腸内医薬製剤が提供される。腸溶性材料は、胃の酸性環境内で実質的に不溶性であり、かつ特定のｐＨで腸液中で主に可溶性であるポリマーを指す。小腸は、胃と大腸の間の消化管（腸）の一部であり、十二指腸、空腸、及び回腸を含む。十二指腸のｐＨは約５．５であり、空腸のｐＨは約６．５であり、遠位回腸のｐＨは約７．５である。

【0160】

したがって、腸溶性材料は、例えば、ｐＨが約５．０、約５．２、約５．４、約５．６、約５．８、約６．０、約６．２、約６．４、約６．６、約６．８、約７．０、約７．２、約７．４、約７．６、約７．８、約８．０、約８．２、約８．４、約８．６、約８．８、約９．０、約９．２、約９．４、約９．６、約９．８、又は約１０．０になるまで溶解しない。例示的な腸溶性材料としては、酢酸フタル酸セルロース（ＣＡＰ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート（ＨＰＭＣＰ）、ポリ酢酸フタル酸ビニル（ＰＶＡＰ）、酢酸コハク酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣＡＳ）、酢酸トリメリット酸セルロース、コハク酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、酢酸コハク酸セルロース、酢酸ヘキサヒドロフタル酸セルロース、プロピオン酸フタル酸セルロース、酢酸マレイン酸セルロース、酢酸酪酸セルロース、酢酸プロピオン酸セルロース、メチルメタクリル酸及びメチルメタクリレートのコポリマー、アクリル酸メチルのコポリマー、メチルメタクリレート及びメタクリル酸、メチルビニルエーテル及び無水マレイン酸のコポリマー（Ｇａｎｔｒｅｚ ＥＳシリーズ）、エチルメタクリレート－メチルメタクリレート－クロロトリメチルアンモニウムエチルアクリレートコポリマー、天然樹脂、例えば、ゼイン、シェラック、及びコーパルコロフォリウム、並びにいくつかの市販の腸溶性分散系（例えば、Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ３０Ｄ５５、Ｅｕｄｒａｇｉｔ ＦＳ３０Ｄ、Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ１００、Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｓ１００、Ｋｏｌｌｉｃｏａｔ ＥＭＭ３０Ｄ、Ｅｓｔａｃｒｙｌ ３０Ｄ、Ｃｏａｔｅｒｉｃ、及びＡｑｕａｔｅｒｉｃ）が挙げられる。上記の材料の各々の溶解性は、既知であるか、又はインビトロで容易に決定可能であるかのいずれかである。前述は、可能性のある材料のリストであるが、本開示の利益を有する当業者であれば、それが包括的ではなく、本明細書に記載される目的を満たす他の腸溶性材料があることを認識するであろう。

【0161】

有利なことに、本明細書では、例えば、がんの治療を必要とする購入者が使用するためのキットが提供される。そのようなキットには、上述のものなどの適切な剤形、及び炎症を媒介、軽減、又は防止するためにかかる剤形を使用する方法を説明する説明書が含まれる。説明書は、当業者に既知の投与様式に従って剤形を投与するように消費者又は医療従事者に指示するものである。かかるキットは、有利には、単一又は複数のキット単位で包装され、販売され得る。かかるキットの一例は、いわゆるブリスターパックである。ブリスターパックは、包装業界で周知であり、医薬単位剤形（錠剤、カプセル剤など）の包装に広く使用されている。ブリスターパックは、一般に、好ましくは透明なプラスチック材料のホイルで覆われた比較的硬い材料のシートからなる。包装プロセス中に、プラスチックホイルにくぼみが形成される。これらのくぼみは、包装される錠剤又はカプセル剤のサイズ及び形状を有する。次に、錠剤又はカプセル剤がくぼみに配置され、比較的硬い材料のシートが、くぼみが形成された方向とは反対のホイルの面でプラスチックホイルに対して密封される。結果として、錠剤又はカプセル剤がプラスチックホイルとシートとの間のくぼみ内に密封される。好ましくは、シートの強度は、くぼみに手動で圧力を加えることによってブリスターパックから錠剤又はカプセル剤を取り出すことができ、それにより、くぼみの場所でシート内に開口部が形成されるような強度である。その後、当該開口部を介して錠剤又はカプセル剤を取り出すことができる。

【0162】

錠剤又はカプセル剤の横に例えば番号の形態でキット上に記憶補助を提供することが望ましい場合があり、それらの番号は、そのように指定された錠剤又はカプセル剤が服用されるべきレジメンの日に対応する。かかる記憶補助の別の例は、カード上に印刷されたカレンダーであり、例えば、「１週目、月曜日、火曜日、．．．など．．．２週目、月曜日、火曜日、．．．」 などである。他の記憶補助のバリエーションも容易に明らかになるであろう。「１日用量」は、所与の日に服用される単一の錠剤若しくはカプセル剤又は複数の錠剤若しくはカプセル剤とすることができる。また、第１の化合物の１日用量は、１つの錠剤又はカプセル剤からなることができ、第２の化合物の１日用量は、複数の錠剤又はカプセル剤からなることができ、その逆も同様である。記憶補助はこれを反映すべきである。

【実施例】

【0163】

本明細書に記載の化合物は、本明細書に含まれる教示及び当該技術分野における合成手順の開示に基づくいくつかの方法で調製することができる。以下に記載される
合成方法の説明において、
溶媒の選択、反応雰囲気、反応温度、
実験の期間及びワークアップ手順を含む提案された全て反応条件が、特に明記しない限り、
その反応のための基準の条件となるように選択され得る。有機合成の当業者は、
分子の様々な部分に存在する官能性が、
提案された試薬及び反応と適合性でなければならないことを理解している。反応条件と適合しない置換基は
当業者には明らかであり、従って、代替の方法が
示される。実施例の出発材料は、市販されているか、又は既知の材料から
標準的な方法によって容易に調製される。

【0164】

以下の略語は、本開示において使用され、以下の定義を有する：「ＡｃＯＨ」は酢酸であり、「ＡＤＰ」はアデノシン二リン酸であり、「Ａｒ」はアルゴンガスであり、「ＡＳＮａｓｅ」はアスパラギナーゼであり、「Ｂｏｃ」はｔ－ブチルカルボネートであり、「ｃｏｎｃ」は 濃縮されたものであり、「Ｃｓ_２ＣＯ_３」は炭酸セシウムであり、「ＤＣＭ」はジクロロメタンであり、「ＤＩＡＤ」はアゾジカルボン酸ジイソプロピルであり、「ＤＩＥＡ」はＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンであり、「ＤＭＦ」はＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドであり、「ｄｐｐｆ」は１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンであり、「ＤＭＳＯ」はジメチルスルホキシドであり、「ＥＤＴＡ」はエチレンジアミン四酢酸であり、「ＥＳＩ」はエレクトロスプレーイオン化であり、「ＥｔＯＡｃ」は酢酸エチルであり、「ＥｔＯＨ」はエタノールであり、「ＧＳＴ」はグルタチオンＳ－トランスフェラーゼであり、「ｈ」は時間（ｈｏｕｒ又はｈｏｕｒｓ）であり、「ＨＣｌ」は塩酸であり、「Ｈｅｘ」はヘキサンであり、「Ｈ_２Ｏ」は水であり、「ＩＣ_５０」は５０％阻害濃度であり、「Ｋ_２ＣＯ_３」は炭酸カリウムであり、「ＫＯＡｃ」は酢酸カリウムであり、「ＮａＢＨ_４」は水素化ホウ素ナトリウムであり、「ＬＡＨ」は水素化アルミニウムリチウムであり、「ＣＨ_３ＣＮ」はアセトニトリルであり、「ｍＣＰＢＡ」は４－クロロペル安息香酸であり、「ＭｅＯＨ」はメタノールであり、「ＭＨｚ」はメガヘルツであり、「ｍｉｎ」は分（ｍｉｎｕｔｅ又はｍｉｎｕｔｅｓ）であり、「ＭＳ」は質量分析であり、「ＮＡＤＨ」はニコチンアミドアデニンジヌクレオチドであり、「ＮａＨ」は水素化ナトリウムであり、「ＮａＨＣＯ_３」は重炭酸ナトリウムであり、「ＮａＮＯ_２」は亜硝酸ナトリウムであり、「ＮａＯＭｅ」はナトリウムメトキシドであり、「Ｎａ_２ＳＯ_４」は硫酸ナトリウムであり、「ＮＢＳ」はＮ－ブロモスクシンイミドであり、「ＮＣＳ」はＮ－クロロスクシンイミドであり、「ＮＨ_４Ｃｌ」は塩化アンモニウムであり、「ＮＩＳ」はＮ－ヨードスクシンイミドであり、「ＮＭＲ」は核磁気共鳴であり、「ＰＢＳ」はリン酸緩衝生理食塩水であり、「Ｐｄ_２（ｄｂａ）_３」はトリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）であり、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ_２」は１，１－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン－パラジウム（ＩＩ）ジクロリドであり、「Ｐｈ_３Ｐ」はトリフェニルホスフィンであり、「ＰＭＢ」はパラメトキシベンジルであり、「ＰＯＣｌ_３」はオキシ塩化リンであり、「ｒｔ」は室温であり、周囲温度とも呼ばれ、１５～２５℃の範囲の標準実験室温度の範囲からなると理解され、「ｓａｔ’ｄ」は 飽和であり、「ＳＤＳ」はドデシル硫酸ナトリウムであり、「ＳＯＣｌ_２」は塩化チオニルであり、「ＴＥＡ」はトリエチルアミンであり、「ＴＦＡ」はトリフルオロ酢酸であり、「ＴＨＦ」はテトラヒドロフランであり、「ＸａｎｔＰｈｏｓ」は４，５－ビス（ジフェニルホスフィノ）－９，９－ジメチルキサンテンである。
一般化学

【0165】

本明細書に記載される例示的化合物は、以下のスキーム、中間調製物、及び付随する実施例に示される一般的な合成方法によって入手可能である。

【化13】

【0166】

スキーム１は、スルホニルクロリド１．５の例示的調製を示す。臭化物１．１ａ（市販品又は当業者によって合成されたもの）を、Ｐｄ触媒カップリング反応（例えば、Ｐｄ_２（ｄｂａ）_３、ＸａｎｔＰｈｏｓ、フェニルメタンチオールを、トルエンなどの溶媒中、ＤＩＥＡなどの塩基の存在下で高温で使用する）によってチオエーテル１．２ａに変換する。あるいは、化合物１．２は、高温でＣＨ_３ＣＮ中のジベンジルジスルフィド及び亜硝酸アミルを使用したジアゾ化によって、アニリン１．１ｂ（市販品又は当業者によって合成されたもの）から調製することができる。還元剤（ＬＡＨ又はＮａＢＨ_４）を用いたエステル１．２（Ｒ＝Ｍｅ、Ｅｔ）の還元は、一級アルコール１．３をもたらす。アルコール１．３は、ＤＩＥＡなどの塩基の存在下での無水酢酸との反応によって１．４に変換することができる。最後に、Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２００６，２４，４１３１－４１３４及びＢｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２０１７，２５，３４４７－３４６０で報告されている一般的な反応条件に従って、ＮＣＳ及びＡｃＯＨの組み合わせによるチオエーテル１．４のスムーズな酸化により、対応するスルホニルクロリド１．５が得られる。

【化14】

【0167】

スキーム２は、ボロネート２．４の例示的調製を示す。化合物２．１（市販品、ＷＯ２０１３／１３４２９８に記載されているように合成されたもの、又は当業者によって合成されたもの）を、当業者に公知のホウ素化反応（Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ_２などのパラジウム触媒、ＫＯＡｃなどの好適な塩基を用いて１，４－ジオキサンなどの好適な溶媒中で高温で行われるパラジウム媒介反応）によりビス（ピナコラート）ジボロンと反応させて化合物２．２を得、これをスルホニルクロリド１．５（スキーム１を参照）と反応させて化合物２．４を得る。あるいは、化合物２．１をスルホニルクロリド１．５と反応させてスルホンアミド２．３を得、これを当業者に公知のホウ素化反応条件下で、ボロネート２．４に変換する。

【化15】

【0168】

スキーム３は、ボロネート３．３の例示的な調製を示す。化合物３．２は、アニリン３．１（市販品又は当業者によって合成されたもの）からジアゾ化し、続いて得られた中間体のＣｕ媒介性塩素化によって調製される（Ｏｒｇ．Ｐｒｏｃ．Ｒｅｓ．Ｄｅｖ．，２００９，５，８７５－８７９で報告された一般的な反応条件による）。塩化スルホニル３．２は、スルホンアミドカップリング下でアミン２．２と反応させて、スルホンアミド３．３を得る。

【化16】

【0169】

スキーム４は、中間体４．４の例示的調製を示す。ＮａＨなどの塩基の存在下、アルキル化試薬（Ｒ^５Ｏ）_２ＳＯ_２を用いて３－ヨード－１Ｈ－ピロロ［３，２－ｃ］ピリジン４．１をＮ－アルキル化すると、４．２が得られる。化合物４．２は、ＤＣＭ中のｍＣＰＢＡなどの当該技術分野で既知の酸化によって活性化されて、Ｎ－オキシド４．３を得ることができる。ピロロピリジンＮ－オキシド４．３は、ＰＭＢＮＨ_２及びｐ－トルエンスルホニルクロリドの混合物を使用してアミノピロロピリジン４．４に変換され、その後、ＴＦＡでインサイチュで脱保護される。

【化17】

【0170】

スキーム５は、中間体５．８の例示的調製を示す。高温で、ＥｔＯＨなどのプロトン性溶媒中、ＴＥＡなどの塩基の存在下で、様々なアミン（Ｒ^５－ＮＨ_２）による２－（４，６－ジクロロピリミジン－５－イル）アセトアルデヒド５．１の環化により、化合物５．２が得られる。ＮＢＳ（又はＮＩＳ）での５．２の臭素化（又はヨウ素化）により、化合物５．４（Ｘ＝ＣＨ）が得られる。化合物５．５をＮＢＳ（又はＮＩＳ）と反応させて、５．６を得る。化合物５．３、５．５、及び５．６をアルキル化試薬（Ｒ^５－Ｉ）でアルキル化すると、それぞれ５．４、５．７、及び５．８が得られる。あるいは、化合物５．３、５．５、及び５．６は、標準的な光延条件下でアルコール（Ｒ^５－ＯＨ）と反応して（例えば、Ｐｈ_３Ｐ及びＤＩＡＤの存在下で実施される）、それぞれ５．４、５．７、及び５．８を生成する。別の実施形態では、中間体５．８はまた、水酸化アンモニウムとの置換反応によって５．４から、及びＮＢＳ（又はＮＩＳ）による臭素化（又はヨウ素化）によって５．７から調製することもできる。

【化18】

【0171】

スキーム６は、式Ｉの例示的な調製を示す。臭化物（又はヨウ化物）４．４及び５．８を、パラジウム触媒の存在下でボロネート２．２と反応させて（鈴木条件）、アニリン６．１が得られる。アニリン６．１とスルホニルクロリド１．５とのスルホンアミドカップリング反応により、スルホンアミド６．３が得られる。あるいは、６．３は、鈴木条件下で、臭化物（又はヨウ化物）４．４及び５．８とボロネート２．４から調製することができる。室温でＭｅＯＨなどのプロトン性溶媒中、Ｋ_２ＣＯ_３でのスルホンアミド６．３の脱保護により式Ｉが得られる。別の実施形態では、臭化物（又はヨウ化物）４．４及び５．８をパラジウム触媒の存在下でボロネート３．３と反応させて（鈴木条件）、６．２を得る。ＬｉＡｌＨ_４下で６．２を還元すると、一級アルコール、式Ｉが得られる。
中間体及び最終化合物の調製。

【0172】

本明細書に記載される合成手順及び方法、並びに当業者に公知の方法を使用して、以下の化合物を作製した：
一般的方法Ａ：ホウ素化
実施例Ａ１：２－フルオロ－３－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）アニリン

【化19】

【0173】

１，４－ジオキサン（３０ｍＬ）中のＫＯＡｃ（４．６ｇ、４７．４ｍｍｏｌ）、３－ブロモ－２－フルオロアニリン（３．０ｇ、１５．８ｍｍｏｌ）、及び４，４，４’，４’，５，５，５’，５’－オクタメチル－２，２’－ビ（１，３，２－ジオキサボロラン）（４．８ｇ、１８．９ｍｍｏｌ）の混合物をＡｒで１０分間脱気した。ＰｄＣｌ_２（ｄｐｐｆ）（１．３ｇ、１．６ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１１０℃で６時間加熱した。反応物を室温まで冷却し、セライトのパッドを通して濾過した。濾液を減圧下で除去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（０～５０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して、２－フルオロ－３－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）アニリン（２．７ｇ、収率７２％）を黄褐色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ ６．８６（ｍ，２Ｈ），６．７６（ｄ，Ｊ＝６．８ Ｈｚ，１Ｈ），５．０２（ｓ，２Ｈ），１．２８（ｓ，１２Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：２３８．２（Ｍ＋Ｈ^＋）．

【0174】

上記の一般的方法Ａを使用して、下記の表Ａの中間体を調製した。

【表A】

【0175】

一般的方法Ｂ：アルキル化：
実施例Ｂ１：４－クロロ－５－ヨード－７－イソプロピル－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン

【化20】

ＤＭＦ（１８ｍＬ）中の４－クロロ－５－ヨード－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン（２．０ｇ、７．２ｍｍｏｌ）の溶液を、Ｃｓ_２ＣＯ_３（４．７ｇ、１４ｍｍｏｌ）で処理した。２－ヨードプロパン（１．２ｇ、７．２ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で１２時間撹拌した。反応物を水（１００ｍＬ）中に注いで、固体を真空濾過を介して収集して、黄色のふわふわした固体として４－クロロ－５－ヨード－７－イソプロピル－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン（１．８ｇ、７８％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ ８．６３（ｓ，１Ｈ），８．１８（ｄ，Ｊ＝１．４ Ｈｚ，１Ｈ），５．０４（ｍ，１Ｈ），１．４７（ｄ，Ｊ＝６．８ Ｈｚ，６Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：３２２．０（Ｍ＋Ｈ^＋）．

【0176】

上記の一般的方法Ｂを使用して、下記の表Ｂの中間体を調製した。

【表B】

【0177】

Ｂ６の調製：（Ｅ）－Ｎ’－（５－ヨード－７－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムイミドアミド

【化21】

【0178】

ＤＭＦ（５０ｍＬ）中の５－ヨード－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－アミン（５．０ｇ、１９ｍｍｏｌ）の溶液を、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミドジメチルアセタール（３．４３ｇ、２８ｍｍｏｌ）で処理した。反応混合物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、残渣をＤＣＭ（１５０ｍＬ）で希釈し、ブライン（２×）溶液で洗浄した。有機層を、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物質をジエチルエーテル（１００ｍＬ）で粉砕し、固体を濾過して、所望の（Ｅ）－Ｎ’－（５－ヨード－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムイミドアミド（５．０ｇ、８５％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ １１．９（ｓ，１Ｈ），８．８０（ｓ，１Ｈ），８．２７（ｓ，１Ｈ），７．４１（ｄ，Ｊ＝２．０，１Ｈ），３．２１（ｓ，３Ｈ），３．１７（ｓ，３Ｈ）； ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：３１５．８（Ｍ＋Ｈ^＋）．

【0179】

酸素雰囲気下、ＤＭＦ（３０ｍＬ）中の（Ｅ）－Ｎ’－（５－ヨード－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムイミドアミド（２．０ｇ、６．３ｍｍｏｌ）及び１－メチル－４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾール（１．６ｇ、７．６ｍｏｌ）の溶液を、ＮａＨＣＯ_３（１．３ｇ、１２．６ｍｍｏｌ）、２，２－ビピリジル（１．１ｇ、６．９ｍｍｏｌ）及びＣｕ（ＯＡｃ）_２（１．３ｇ、６．９ｍｏｌ）で室温で処理した。反応混合物を室温で４日間撹拌し、減圧下で濃縮した。粗物質をジエチルエーテル（６０ｍＬ）で粉砕し、固体を濾過して、所望の（Ｅ）－Ｎ’－（５－ヨード－７－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムイミドアミド（３．０ｇ、粗製物）を得て、これを更にに精製することなく次の反応に使用した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：３９５．８（Ｍ＋Ｈ^＋）。
実施例Ｂ７：（Ｅ）－Ｎ’－（５－ヨード－７－（１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムイミドアミド

【化22】

【0180】

（Ｅ）－Ｎ’－（５－ヨード－７－（１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムイミドアミドを、実施例Ｂ６と同様に、（Ｅ）－Ｎ’－（５－ヨード－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムイミドアミド（０．６９ｇ、２．２ｍｍｏｌ）及び４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾールピラゾール（０．５ｇ、２．６ｍｏｌ）から調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：３８１．８（Ｍ＋Ｈ^＋）。

【0181】

一般的方法Ｃ：環化
実施例Ｃ１：４－クロロ－７－シクロプロピル－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン

【化23】

ＥｔＯＨ（１８ｍＬ）中の２－（４，６－ジクロロピリミジン－５－イル）アセトアルデヒド（２．０ｇ、１０．５ｍｍｏｌ）の溶液を、Ｅｔ_３Ｎ（２．９ｍＬ、２１ｍｍｏｌ）で処理した。反応混合物を、室温で１０分間撹拌し、次いでシクロプロパンアミン（０．６ｍＬ、９．４ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、１４０℃で一晩撹拌した。反応混合物を室温まで冷却し、次いで減圧下で濃縮した。粗製物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（０－１００％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して、４－クロロ－７－シクロプロピル－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン（１．６ｇ、７９％）を淡黄色の固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ ８．５９（ｓ，１Ｈ），７．６５（ｄ，Ｊ＝３．７ Ｈｚ，１Ｈ），６．５４（ｄ，Ｊ＝３．５ Ｈｚ，１Ｈ），３．５９（ｍ，１Ｈ），１．０１－１．０３（ｍ，４Ｈ）； ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：１９４．０（Ｍ＋Ｈ^＋）．

【0182】

上記の一般的方法Ｃを使用して、下記の表Ｃの中間体を調製した。

【表C】

【0183】

一般的方法Ｄ：臭素化又はヨウ素化
実施例Ｄ１：５－ブロモ－４－クロロ－７－シクロプロピル－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン

【化24】

ＤＣＭ（１５ｍＬ）中の４－クロロ－７－シクロプロピル－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン（Ｃ１、０．６７ｇ、３．５ｍｍｏｌ）の溶液を、ＮＢＳ（０．７４ｇ、４．２ｍｍｏｌ）で処理し、反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、残渣を水（５ｍＬ）に懸濁した。固体を濾過し、水（２ｍＬ）で洗浄し、真空下で乾燥させて、５－ブロモ－４－クロロ－７－シクロプロピル－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン（０．６ｇ、６４％）を白色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ８．６９（ｓ，１Ｈ），８．００（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），３．６６（ｍ，１Ｈ），１．１０（ｍ，４Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：２７２．０（Ｍ＋Ｈ^＋）及び２７４。

【0184】

上記の一般方法Ｄを使用して、下記の表Ｄの中間体を調製した。

【表D】

【0185】

一般的方法Ｅ：置換
実施例Ｅ１：５－ヨード－７－イソプロピル－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－アミン

【化25】

１，４－ジオキサン（５．５ ｍＬ）中の４－クロロ－５－ヨード－７－イソプロピル－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン（Ｂ１、１．７８ｇ、５．５ｍｍｏｌ）の懸濁液を、ＮＨ_４ＯＨ（水中３０％、１．７ｍＬ、１３ｍｍｏｌ）で処理し、反応物を９５℃まで一晩加熱した。混合物を室温に冷却し、冷水で希釈した。混合物を０℃で３０分間撹拌し、次いで、固体を真空濾過を介して収集して、白色の固体として所望の生成物５－ヨード－７－イソプロピル－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－アミン（０．８０ｇ、４８％）を得た。 ^１Ｈ ＮＭＲ（５００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ ８．０９（ｓ，１Ｈ），７．５９（ｓ，１Ｈ），６．５９（ｓ，２Ｈ），４．８９（ｍ，１Ｈ），１．４０（ｄ，Ｊ＝６．８ Ｈｚ，６Ｈ）； ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：３０３．０（Ｍ＋Ｈ^＋）．

【0186】

上記の一般的方法Ｅを使用して、下記の表Ｅの中間体を調製した。

【表E-1】

【表E-2】

【0187】

実施例Ｅ１２：３－ヨード－１－メチル－１Ｈ－ピロロ［３，２－ｃ］ピリジン－４－アミンの調製

【化26】

ＤＣＭ（２０ｍＬ）中の３－ヨード－１－メチル－１Ｈ－ピロロ［３，２－ｃ］ピリジン（０．９０ｇ、３．５ｍｍｏｌ）の撹拌懸濁液を、室温で３－クロロペルオキシ安息香酸（０．９０ｇ、５．２ｍｍｏｌ）で処理した。反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を、飽和ＮａＨＣＯ_３でクエンチしてから、溶液をＤＣＭ（２×）で抽出した。合わせた有機層を無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、粗製３－ヨード－１－メチル－１Ｈ－ピロロ［３，２－ｃ］ピリジン５－オキシド（０．６ｇ、６５％）をオフホワイトの固体として得た。 ^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ ８．１２（ｓ，１Ｈ），８．００（ｄ，Ｊ＝７．２ Ｈｚ，１Ｈ），７．３４（ｓ，１Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝７．２ Ｈｚ，１Ｈ），３．８２（ｓ，３Ｈ）； ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：２７５．０（Ｍ＋Ｈ^＋）．

【0188】

クロロホルム（２０ｍＬ）中の３－ヨード－１－メチル－１Ｈ－ピロロ［３，２－ｃ］ピリジン５－オキシド（０．６ｇ、２．１ｍｍｏｌ）の溶液を、（４－メトキシフェニル）メタンアミン（１．３ｇ、９．８ｍｍｏｌ）で処理し、室温で約３０分間撹拌した。混合物を０℃に冷却し、続いてｐ－トルエンスルホニルクロリド（０．９２ｇ、４．８ｍｍｏｌ）を少量ずつに分けて添加し、反応混合物を室温で２．５時間撹拌した。混合物をＤＣＭ（５０ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で洗浄した。有機層を、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。粗製物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（７０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して、３－ヨード－Ｎ－（４－メトキシベンジル）－１－メチル－１Ｈ－ピロロ［３，２－ｃ］ピリジン－４－アミン（０．２ｇ、２３％）を淡黄色の固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ ７．６８（ｄ，Ｊ＝６．４ Ｈｚ，１Ｈ），７．３６（ｓ，１Ｈ），７．３１（ｄ，Ｊ＝７．６ Ｈｚ，２Ｈ），６．８９（ｄ，Ｊ＝７．６ Ｈｚ，２Ｈ），６．８１（ｄ，Ｊ＝６．０ Ｈｚ，１Ｈ），６．１４（ｂｒ ｍ，１Ｈ），４．６４（ｄ，Ｊ＝５．２ Ｈｚ，２Ｈ），３．７３（ｓ，３Ｈ），３．６９（ｓ，３Ｈ）； ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：３９４．２（Ｍ＋Ｈ^＋）．

【0189】

ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の３－ヨード－Ｎ－（４－メトキシベンジル）－１－メチル－１Ｈ－ピロロ［３，２－ｃ］ピリジン－４－アミン（０．２ｇ、０．５０８ｍｍｏｌ）の懸濁液を、氷水浴下で撹拌した。次いで、ＴＦＡ（１ ｍＬ）を滴下して加え、反応混合物を室温で４時間攪拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、残渣をＮａＨＣＯ_３の飽和溶液で処理した。混合物を１０分間撹拌し、水層を１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（２×）で更に抽出した。合わせた有機抽出物を、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。粗製物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（３～５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）により精製して、３－ヨード－１－メチル－１Ｈ－ピロロ［３，２－ｃ］ピリジン－４－アミン（０．０５ｇ、３６％）をオフホワイトの固体として得た。 ^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ ７．６３，ｄ，Ｊ＝６．４ Ｈｚ，１Ｈ），７．４８（ｓ，１Ｈ），６．９４（ｄ，Ｊ＝６．４ Ｈｚ，１Ｈ），６．３５（ｂｒ ｓ，２Ｈ），３．７２（ｓ，３Ｈ）； ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：２７３．９（Ｍ＋Ｈ^＋）．

【0190】

一般的方法Ｆ：アミンからのチオエーテルの調製
実施例Ｆ１：３－（ベンジルチオ）－２，５－ジクロロ安息香酸エチル

【化27】

【0191】

ＣＨ_３ＣＮ（２５０ｍＬ）中の３－アミノ－２，５－ジクロロ安息香酸エチル（１２．０ｇ、５１．０ｍｍｏｌ）の溶液を、亜硝酸アミル（９．６４ｍＬ、８１．０ｍｍｏｌ）で処理した。ジベンジルジスルフィド（１２．６ｇ、５１．０ｍｍｏｌ）を室温で添加し、反応混合物を７０℃で３時間加熱した。反応混合物を、氷水（１００ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（３×）で抽出した。合わせた有機物を、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。粗製物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１０～２０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製し、３－（ベンジルチオ）－２，５－ジクロロ安息香酸エチル（１０．０ｇ、収率５８％）をオフホワイト固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ ７．６３（ｄ，Ｊ＝２．８ Ｈｚ，１Ｈ），７．５６（ｄ，Ｊ＝２．４ Ｈｚ，１Ｈ），７．４４（ｄ，Ｊ＝７．２ Ｈｚ，２Ｈ），７．３５（ｔ，Ｊ＝７．６ Ｈｚ，２Ｈ）７．２８（ｄ，Ｊ＝７．２ Ｈｚ，１Ｈ），４．４２（ｓ，２Ｈ），４．３３（ｑ，Ｊ＝７．２ Ｈｚ，２Ｈ），１．２９（ｔ，Ｊ＝６．８ Ｈｚ，３Ｈ）．

【0192】

一般的方法Ｇ：臭素からのチオエーテルの調製
実施例Ｆ２：３－（ベンジルチオ）－２－クロロ安息香酸エチル

【化28】

【0193】

トルエン（３０ｍＬ）中の３－ブロモ－２－クロロ安息香酸メチル（３．０ｇ、１２ｍｍｏｌ）、フェニルメタンチオール（１．６ｇ、１３ｍｍｏｌ）の溶液を、ＤＩＥＡ（４．２ｍＬ、２４ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を、Ａｒで５分間パージし、次いでＸａｎｔＰｈｏｓ（０．６７ｇ、１．２ｍｍｏｌ）及びＰｄ_２（ｄｂａ）_３（０．５５ｇ、０．６０ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を、Ａｒで５分間パージし、９０℃まで一晩加熱した。反応物を室温に冷却し、シリカゲルを通して濾過し、ＥｔＯＡｃ：ヘキサン（１：１）で洗浄した。濾液を減圧下で濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（０～１００％ＥｔＯＡｃ：ヘキサン）により精製して、３－（ベンジルチオ）－２－クロロ安息香酸メチル（２．８ｇ、８０％）をオレンジ色の油状物として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ ７．６０（ｄｄ，Ｊ＝８．０，１．５ Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｄｄ，Ｊ＝７．６，１．５ Ｈｚ，１Ｈ），７．３７－７．４６（ｍ，２Ｈ），７．３１－７．３７（ｍ，２Ｈ），７．２３－７．３１（ｍ，２Ｈ），４．３４（ｓ，２Ｈ），３．８５（ｓ，３Ｈ）．

【0194】

上記の一般的方法Ｆ及びＧを使用して、下記の表Ｆの中間体を調製した。

【表F】

【0195】

一般的方法Ｈ：還元
実施例Ｇ１：（３－（ベンジルチオ）－２，５－ジクロロフェニル）メタノール

【化29】

【0196】

ＥｔＯＨ（２００ｍＬ）中のＣａＣｌ_２（０．４５ｇ、０．９２ｍｍｏｌ）及びＮａＢＨ_４（６．２０ｇ、３７ｍｍｏｌ）の混合物を、０℃で撹拌した。ＴＨＦ（２００ｍＬ）中の３－（ベンジルチオ）－２，５－ジクロロ安息香酸エチル（Ｆ１、１４．０ｇ、９．２ｍｍｏｌ）の冷溶液を、０℃で滴加した。反応混合物を０℃で撹拌し、ゆっくりと室温まで温め、次いで６０℃で５時間加熱した。反応混合物を、室温に冷却し、飽和ＮＨ_４Ｃｌ溶液（５０ｍＬ）でクエンチし、次いでＥｔＯＡｃ（３×）で抽出した。合わせた有機抽出物を、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。粗製物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（１～１０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製し、（３－（ベンジルチオ）－２，５－ジクロロフェニル）メタノール（８．０ｇ、６６％）を褐色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ ７．４４（ｍ，２Ｈ），７．３５（ｍ，３Ｈ），７．２５－７．３２（ｍ，２Ｈ），５．５７（ｔ，Ｊ＝５．６ Ｈｚ，１Ｈ），４．５１（ｄ，Ｊ＝６．０ Ｈｚ，２Ｈ），４．３６（ｓ，２Ｈ）．

【0197】

上記の一般的方法Ｈを使用して、下記の表Ｇの中間体を調製した。

【表G】

【0198】

一般的方法Ｉ：アセチル化
実施例Ｈ１：３－（ベンジルチオ）－２，５－ジクロロベンジルアセテート

【化30】

【0199】

ＴＨＦ（１０ｍＬ）中（３－（ベンジルチオ）－２，５－ジクロロフェニル）メタノール（Ｇ１、０．８２ｇ、２．７ｍｍｏｌ）の溶液を無水酢酸（０．３１ｍＬ、３．３ｍｍｏｌ）で室温で処理した。混合物をＡｒ下、５０℃で２時間撹拌した後、水で希釈した。溶液をＥｔＯＡｃ（３×）で抽出し、合わせた有機層を無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、３－（ベンジルチオ）－２，５－ジクロロベンジルアセテート（０．９２ｇ、９８％）を白色の固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ ７．５１（ｍ，３Ｈ），７．４１（ｍ，３Ｈ），７．３５（ｍ，１Ｈ），５．１６（ｓ，２Ｈ），４．４５（ｓ，２Ｈ），２．１６（ｓ，３Ｈ）．

【0200】

上記の一般的方法Ｉを使用して、下記の表Ｈの中間体を調製した。

【表H-1】

【表H-2】

【0201】

一般的方法Ｊ：スルホニルクロリドの調製
実施例Ｉ１：２，５－ジクロロ－３－（クロロスルホニル）ベンジルアセテート

【化31】

【0202】

０℃のＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ（１：１、３ｍＬ）中の３－（ベンジルチオ）－２，５－ジクロロベンジルアセテート（Ｈ１、０．９２ｇ、２．７ｍｍｏｌ）及び１－クロロピロリジン－２，５－ジオン（１．８ｇ、１３ｍｍｏｌ）の溶液を、酢酸（７ｍＬ）で処理した。反応混合物を、室温にゆっくりと室温まで加温し、次いで室温で６時間撹拌した。反応混合物を、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液（１００ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（３×）で抽出した。合わせた有機物を、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。粗製物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（０～１００％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製し、２，５－ジクロロ－３－（クロロスルホニル）ベンジルアセテート（０．４５ｇ、５３％）を白色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ ７．８４（ｄ，Ｊ＝２．８ Ｈｚ，１Ｈ），７．５２（ｄ，Ｊ＝２．８ Ｈｚ，１Ｈ），５．１３（ｓ，２Ｈ），２．１１（ｓ，３Ｈ）．

【0203】

上記の一般的方法Ｊを使用して、下記の表Ｉの中間体を調製した。

【表I-1】

【表I-2】

【0204】

一般的方法Ｋ：スルホンアミドカップリング
実施例Ｊ１：２，５－ジクロロ－３－（Ｎ－（２－フルオロ－３－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）フェニル）スルファモイル）安息香酸メチル

【化32】

【0205】

ＤＣＭ（３０ｍＬ）中の２－フルオロ－３－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）アニリン（Ａ１２．２ｇ、９．３ｍｍｏｌ）の溶液を、ピリジン（２．２ｍＬ、２８ｍｍｏｌ）で処理した。反応混合物を０℃に冷却し、ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の２，５－ジクロロ－３－（クロロスルホニル）安息香酸メチル（Ｉ２２．８ｇ、９．３ｍｍｏｌ）の溶液を滴加した。反応混合物を、２時間かけてゆっくりと室温まで加温した。反応混合物を減圧下で濃縮し、粗製物をＤＣＭ（５０ｍＬ）中に溶解した。溶液を１．０Ｍ ＨＣｌ（２×）、ＮａＨＣＯ_３水溶液（３×）、及びブライン（１×）で洗浄した。有機層を、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をヘキサンに懸濁させ、固体を真空濾過により収集して、２，５－ジクロロ－３－（Ｎ－（２－フルオロ－３－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）フェニル）スルファモイル）安息香酸メチル（４．２ｇ、９０％）を褐色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ １０．７１（ｓ，１Ｈ），８．１３（ｄ，Ｊ＝２．６ Ｈｚ，１Ｈ），８．０２（ｄ，Ｊ＝２．６ Ｈｚ，１Ｈ），７．４６（ｍ，１Ｈ），７．３８（ｔｄ，Ｊ＝７．９，１．８ Ｈｚ，１Ｈ），７．１６（ｔ，Ｊ＝７．７ Ｈｚ，１Ｈ），３．９１（ｓ，３Ｈ），１．２８（ｓ，１２Ｈ）； ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ５２６．０（Ｍ＋Ｎａ＋Ｈ^＋）．

【0206】

一般的方法Ｌ：還元
実施例Ｊ２：２，５－ジクロロ－Ｎ－（２－フルオロ－３－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）フェニル）－３－（ヒドロキシメチル）ベンゼンスルホンアミドの調製

【化33】

【0207】

ＴＨＦ（５ｍＬ）中の２，５－ジクロロ－３－（Ｎ－（２－フルオロ－３－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）フェニル）スルファモイル）安息香酸メチル（Ｊ１，０．５ｇ、０．９９ｍｍｏｌ）の溶液をＬＡＨ（０．１１ｇ、３０ｍｍｏｌ）で０℃で少量ずつ処理し、次いで０℃で１時間撹拌した。反応混合物をジエチルエーテルで希釈し、次いで水（０．２ｍＬ）、１５％ＮａＯＨ水溶液（０．２ｍＬ）、及び水（０．４ｍＬ）でクエンチした。混合物を４時間撹拌し、次いで、セライトのパッドを通して濾過した。濾液を無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、２，５－ジクロロ－Ｎ－（２－フルオロ－３－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）フェニル）－３－（ヒドロキシメチル）ベンゼンスルホンアミド（０．２６ｇ、５５％）を無色の固体として得て、これを更に精製することなく次の反応に使用した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ４９８．０（Ｍ＋Ｎａ＋Ｈ^＋）。

【0208】

上記の一般的方法Ｋ及びＬを使用して、下記の表Ｊの中間体を調製した。

【表J-1】

【表J-2】

【0209】

一般的方法Ｍ：鈴木反応
実施例１：３－（Ｎ－（３－（４－アミノ－７－メチル－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－イル）－２－フルオロフェニル）スルファモイル）－２，５－ジクロロベンジルアセテート

【化34】

【0210】

１，４－ジオキサン及び水の混合物（４：１、１００ ｍＬ）中の５－ヨード－７－メチル－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－アミン（１．７ｇ、６．３ｍｍｏｌ）の溶液を、Ａｒ下で撹拌した。２，５－ジクロロ－３－（Ｎ－（２－フルオロ－３－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）フェニル）スルファモイル）ベンジルアセテート（３．６ｇ、６．９ｍｍｏｌ）及びＣｓ_２ＣＯ_３（５．１ｇ、１５．７ｍｍｏｌ）を室温で添加し、反応混合物をＡｒで５分間脱気した。 Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ_２．ＤＣＭ（０．２５ｇ、０．３１ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を９０℃で１．５時間加熱した。反応物を室温まで冷却し、セライトのパッドを通して濾過し、ＥｔＯＡｃで洗浄した。濾液を、飽和ＮａＨＣＯ_３（２×）、続いて水（２×）で洗浄した。有機層を、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して粗製物質を得た。粗製物質を、室温で２時間、ＣＨ３ＣＮ（３００ｍＬ）中で更に撹拌した。固体を濾過し、真空下で乾燥させて、３－（Ｎ－（３－（４－アミノ－７－メチル－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－イル）－２－フルオロフェニル）スルファモイル）－２，５－ジクロロベンジルアセテート（２．５ｇ、９１％）を淡褐色の固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ １０．７６（ｂｒ ｓ，１Ｈ），８．１４（ｓ，１Ｈ），７．９３（ｄ，Ｊ＝２．４ Ｈｚ，１Ｈ），７．８４（ｍ，１Ｈ），７．２６（ｓ，１Ｈ），７．１９（ｍ，３Ｈ），６．０２（ｂｒ ｓ，２Ｈ），５．２０（ｓ，２Ｈ），３．７３（ｓ，３Ｈ），３．５６（ｓ，３Ｈ）； ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ５３８．０（Ｍ＋Ｈ^＋）．

【0211】

一般的方法Ｎ：脱保護
実施例２：Ｎ－（３－（４－アミノ－７－メチル－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－イル）－２－フルオロフェニル）－２，５－ジクロロ－３－（ヒドロキシメチル）ベンゼンスルホンアミド

【化35】

【0212】

ＭｅＯＨ（４０ｍＬ）中の３－（Ｎ－（３－（４－アミノ－７－メチル－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－イル）－２－フルオロフェニル）スルファモイル）－２，５－ジクロロベンジルアセテート（１、２．３ｇ、４．２ｍｍｏｌ）の溶液を、室温でＫ_２ＣＯ_３（２．３ｇ、１７ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を室温で３時間撹拌し、次いで溶媒を減圧下で蒸発させた。粗製物質を１０％クエン酸溶液（ｐＨ約５）で酸性化し、次いで固体を濾過し、水で十分に洗浄した。固体を、室温で２時間、ＣＨ_３ＣＮ（５ｍＬ）及びＤＣＭ（５ｍＬ）の混合物で処理した。沈殿物を濾過し、乾燥させて、Ｎ－（３－（４－アミノ－７－メチル－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－イル）－２－フルオロフェニル）－２，５－ジクロロ－３－（ヒドロキシメチル）ベンゼンスルホンアミド（１．６ｇ、７６％）をオフホワイトの固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ １０．６９（ｂｒ ｓ，１Ｈ），８．１４（ｓ，１Ｈ），７．８４（ｄ，Ｊ＝２．４ Ｈｚ，１Ｈ），７．７８（ｂｒ ｍ，１Ｈ），７．２７（ｓ，１Ｈ），７．１５－７．２５（ｂｒ ｍ，３Ｈ），５．９９（ｂｒ ｓ，２Ｈ），５．７２（ｔ，Ｊ＝５．６ Ｈｚ，１Ｈ），４．６０（ｄ，Ｊ＝５．６ Ｈｚ，２Ｈ），３．７３（ｓ，３Ｈ）． ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ ４９６．２７（Ｍ＋Ｈ^＋）．

【0213】

上記の一般的方法Ｌ、Ｍ及びＮを使用して、下記の表Ｋの中間体を調製した。

【表K-1】

【表K-2】

【表K-3】

【表K-4】

【表K-5】

【表K-6】

【0214】

実施例３０．ＧＣＮ２の生化学的アッセイ
ＧＣＮ２キナーゼの活性は、ＴＲ－ＦＲＥＴキナーゼ活性アッセイ（例えば、Ｒｉｄｄｌｅ ｅｔ ａｌ．Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２００６）３５６（１）１０８－１１６）を使用して決定した。アッセイは、２ｎＭ ＧＣＮ２（Ｃａｒｎａ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）、１３０ｎＭ ＧＦＰ－ＥＩｆ２ａ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）、０．２ｍｇ／ｍＬのＥ．ｃｏｌｉ ｔＲＮＡ（ｓｉｇｍａ社）、及びキナーゼ緩衝液中の１ｍＭ ＡＴＰ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）を使用して、３８４ウェルプレート（１３ｕＬのアッセイ体積）で実施された。ＧＣＮ２の阻害を、段階希釈した試験化合物（最終アッセイ濃度０．５％ＤＭＳＯ）を加えた後、３時間のインキュベーションすることによって測定した。ＥＴＤＡを含有するキナーゼ緩衝液中（最終アッセイ濃度２０ｍＭ）中のＴｂ－ｐｅＩＦ２ａ（ｐＳｅｒ５２）抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）（最終アッセイ濃度２ｎＭ）を加えた。室温で６０分のインキュベーション後、３４０ｎｍの励起波長と４９０ｎｍ及び５２０ｎｍの発光波長を使用して、ＴＲ－ＦＲＥＴをモニタリングした。各化合物濃度での発光比（５２０／４９０）を、対照（すなわち、試験化合物を用いない反応及び既知の阻害剤を用いた反応）を使用して、阻害パーセントに変換し、ＩＣ_５０値を、Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ ｓｏｆｔｗａｒｅ）を使用して、４つのパラメータのシグモイド曲線をデータに適合させることによって、算出した。

【0215】

配列番号 １－ＧＣＮ２タンパク質配列（残基１～１６４９、Ｎ末端のＧＳＴタグを有するＧ５５６Ｅ）
ＭＡＰＩＬＧＹＷＫＩＫＧＬＶＱＰＴＲＬＬＬＥＹＬＥＥＫＹＥＥＨＬＹＥＲＤＥＧＤＫＷＲＮＫＫＦＥＬＧＬＥＦＰＮＬＰＹＹＩＤＧＤＶＫＬＴＱＳＭＡＩＩＲＹＩＡＤＫＨＮＭＬＧＧＣＰＫＥＲＡＥＩＳＭＬＥＧＡＶＬＤＩＲＹＧＶＳＲＩＡＹＳＫＤＦＥＴＬＫＶＤＦＬＳＫＬＰＥＭＬＫＭＦＥＤＲＬＣＨＫＴＹＬＮＧＤＨＶＴＨＰＤＦＭＬＹＤＡＬＤＶＶＬＹＭＤＰＭＣＬＤＡＦＰＫＬＶＣＦＫＫＲＩＥＡＩＰＱＩＤＫＹＬＫＳＳＫＹＩＡＷＰＬＱＧＷＱＡＴＦＧＧＧＤＨＰＰＫＳＤＬＥＶＬＦＱＧＰＬＧＡＭＧＳＧＩＱＲＰＴＳＴＳＳＬＶＭＡＧＧＲＧＡＰＧＲＧＲＤＥＰＰＥＳＹＰＱＲＱＤＨＥＬＱＡＬＥＡＩＹＧＡＤＦＱＤＬＲＰＤＡＣＧＰＶＫＥＰＰＥＩＮＬＶＬＹＰＱＧＬＴＧＥＥＶＹＶＫＶＤＬＲＶＫＣＰＰＴＹＰＤＶＶＰＥＩＥＬＫＮＡＫＧＬＳＮＥＳＶＮＬＬＫＳＲＬＥＥＬＡＫＫＨＣＧＥＶＭＩＦＥＬＡＹＨＶＱＳＦＬＳＥＨＮＫＰＰＰＫＳＦＨＥＥＭＬＥＲＲＡＱＥＥＱＱＲＬＬＥＡＫＲＫＥＥＱＥＱＲＥＩＬＨＥＩＱＲＲＫＥＥＩＫＥＥＫＫＲＫＥＭＡＫＱＥＲＬＥＩＡＳＬＳＮＱＤＨＴＳＫＫＤＰＧＧＨＲＴＡＡＩＬＨＧＧＳＰＤＦＶＧＮＧＫＨＲＡＮＳＳＧＲＳＲＲＥＲＱＹＳＶＣＮＳＥＤＳＰＧＳＣＥＩＬＹＦＮＭＧＳＰＤＱＬＭＶＨＫＧＫＣＩＧＤＥＱＬＧＫＬＶＹＮＡＬＥＴＡＴＧＧＦＶＬＬＹＥＷＶＬＱＷＱＫＫＭＧＰＦＬＴＳＱＥＫＥＫＩＤＫＣＫＫＱＩＱＧＴＥＴＥＦＮＳＬＶＫＬＳＨＰＮＶＶＲＹＬＡＭＮＬＫＥＱＤＤＳＩＶＶＤＩＬＶＥＨＩＳＧＶＳＬＡＡＨＬＳＨＳＧＰＩＰＶＨＱＬＲＲＹＴＡＱＬＬＳＧＬＤＹＬＨＳＮＳＶＶＨＫＶＬＳＡＳＮＶＬＶＤＡＥＧＴＶＫＩＴＤＹＳＩＳＫＲＬＡＤＩＣＫＥＤＶＦＥＱＴＲＶＲＦＳＤＮＡＬＰＹＫＴＧＫＫＧＤＶＷＲＬＧＬＬＬＬＳＬＳＱＧＱＥＣＧＥＹＰＶＴＩＰＳＤＬＰＡＤＦＱＤＦＬＫＫＣＶＣＬＤＤＫＥＲＷＳＰＱＱＬＬＫＨＳＦＩＮＰＱＰＫＭＰＬＶＥＱＳＰＥＤＳＧＧＱＤＹＶＥＴＶＩＰＳＮＲＬＰＳＡＡＦＦＳＥＴＱＲＱＦＳＲＹＦＩＥＦＥＥＬＱＬＬＧＫＧＡＦＧＡＶＩＫＶＱＮＫＬＤＧＣＣＹＡＶＫＲＩＰＩＮＰＡＳＲＱＦＲＲＩＫＧＥＶＴＬＬＳＲＬＨＨＥＮＩＶＲＹＹＮＡＷＩＥＲＨＥＲＰＡＧＰＧＴＰＰＰＤＳＧＰＬＡＫＤＤＲＡＡＲＧＱＰＡＳＤＴＤＧＬＤＳＶＥＡＡＡＰＰＰＩＬＳＳＳＶＥＷＳＴＳＧＥＲＳＡＳＡＲＦＰＡＴＧＰＧＳＳＤＤＥＤＤＤＥＤＥＨＧＧＶＦＳＱＳＦＬＰＡＳＤＳＥＳＤＩＩＦＤＮＥＤＥＮＳＫＳＱＮＱＤＥＤＣＮＥＫＮＧＣＨＥＳＥＰＳＶＴＴＥＡＶＨＹＬＹＩＱＭＥＹＣＥＫＳＴＬＲＤＴＩＤＱＧＬＹＲＤＴＶＲＬＷＲＬＦＲＥＩＬＤＧＬＡＹＩＨＥＫＧＭＩＨＲＤＬＫＰＶＮＩＦＬＤＳＤＤＨＶＫＩＧＤＦＧＬＡＴＤＨＬＡＦＳＡＤＳＫＱＤＤＱＴＧＤＬＩＫＳＤＰＳＧＨＬＴＧＭＶＧＴＡＬＹＶＳＰＥＶＱＧＳＴＫＳＡＹＮＱＫＶＤＬＦＳＬＧＩＩＦＦＥＭＳＹＨＰＭＶＴＡＳＥＲＩＦＶＬＮＱＬＲＤＰＴＳＰＫＦＰＥＤＦＤＤＧＥＨＡＫＱＫＳＶＩＳＷＬＬＮＨＤＰＡＫＲＰＴＡＴＥＬＬＫＳＥＬＬＰＰＰＱＭＥＥＳＥＬＨＥＶＬＨＨＴＬＴＮＶＤＧＫＡＹＲＴＭＭＡＱＩＦＳＱＲＩＳＰＡＩＤＹＴＹＤＳＤＩＬＫＧＮＦＳＩＲＴＡＫＭＱＱＨＶＣＥＴＩＩＲＩＦＫＲＨＧＡＶＱＬＣＴＰＬＬＬＰＲＮＲＱＩＹＥＨＮＥＡＡＬＦＭＤＨＳＧＭＬＶＭＬＰＦＤＬＲＩＰＦＡＲＹＶＡＲＮＮＩＬＮＬＫＲＹＣＩＥＲＶＦＲＰＲＫＬＤＲＦＨＰＫＥＬＬＥＣＡＦＤＩＶＴＳＴＴＮＳＦＬＰＴＡＥＩＩＹＴＩＹＥＩＩＱＥＦＰＡＬＱＥＲＮＹＳＩＹＬＮＨＴＭＬＬＫＡＩＬＬＨＣＧＩＰＥＤＫＬＳＱＶＹＩＩＬＹＤＡＶＴＥＫＬＴＲＲＥＶＥＡＫＦＣＮＬＳＬＳＳＮＳＬＣＲＬＹＫＦＩＥＱＫＧＤＬＱＤＬＭＰＴＩＮＳＬＩＫＱＫＴＧＩＡＱＬＶＫＹＧＬＫＤＬＥＥＶＶＧＬＬＫＫＬＧＩＫＬＱＶＬＩＮＬＧＬＶＹＫＶＱＱＨＮＧＩＩＦＱＦＶＡＦＩＫＲＲＱＲＡＶＰＥＩＬＡＡＧＧＲＹＤＬＬＩＰＱＦＲＧＰＱＡＬＧＰＶＰＴＡＩＧＶＳＩＡＩＤＫＩＳＡＡＶＬＮＭＥＥＳＶＴＩＳＳＣＤＬＬＶＶＳＶＧＱＭＳＭＳＲＡＩＮＬＴＱＫＬＷＴＡＧＩＴＡＥＩＭＹＤＷＳＱＳＱＥＥＬＱＥＹＣＲＨＨＥＩＴＹＶＡＬＶＳＤＫＥＧＳＨＶＫＶＫＳＦＥＫＥＲＱＴＥＫＲＶＬＥＴＥＬＶＤＨＶＬＱＫＬＲＴＫＶＴＤＥＲＮＧＲＥＡＳＤＮＬＡＶＱＮＬＫＧＳＦＳＮＡＳＧＬＦＥＩＨＧＡＴＶＶＰＩＶＳＶＬＡＰＥＫＬＳＡＳＴＲＲＲＹＥＴＱＶＱＴＲＬＱＴＳＬＡＮＬＨＱＫＳＳＥＩＥＩＬＡＶＤＬＰＫＥＴＩＬＱＦＬＳＬＥＷＤＡＤＥＱＡＦＮＴＴＶＫＱＬＬＳＲＬＰＫＱＲＹＬＫＬＶＣＤＥＩＹＮＩＫＶＥＫＫＶＳＶＬＦＬＹＳＹＲＤＤＹＹＲＩＬＦ

【0216】

実施例３１． ＰＥＲＫの生化学的アッセイ
ＰＥＲＫキナーゼの活性を、ＮＡＤＨのＡＴＰ加水分解依存性酸化を継続的にモニターする共役ピルビン酸キナーゼ／乳酸デヒドロゲナーゼアッセイ（例えば、Ｓｃｈｉｎｄｌｅｒ 他Ｓｃｉｅｎｃｅ（２０００）２８９：１９３８－１９４２）を使用して、分光学的に決定した。アッセイを、３８４ウェルプレート（最終体積１００μＬ）において、アッセイ緩衝液（１００ｍＭ Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．５、１５ｍＭ ＭｇＣｌ_２、０．５ｍＭ ＤＴＴ、０．００４％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ、及び０．００４％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００）中の１０ ｎＭ ＰＥＲＫ（Ｂｅｒｙｌｌｉｕｍ社）、０．２５ｍｇ／ｍＬのミエリン塩基性タンパク質、１．５単位のピルビン酸キナーゼ、２．１単位の乳酸デヒドロゲナーゼ、１ｍＭのホスホエノールピルビン酸、０．２８ｍＭのＮＡＤＨ、及び１ｍＭのＡＴＰを使用して実施した。ＰＥＲＫの阻害を、段階希釈した試験化合物（最終アッセイ濃度１％ＤＭＳＯ）を加えることによって測定した。３４０ｎｍでの吸収の減少を、６時間、３０℃で、マルチモードマイクロプレートリーダー（ＢｉｏＴｅｋ）上で連続的にモニターした。反応速度を、２～３時間の時間枠を使用して算出した。化合物の各濃度での反応速度を、対照（すなわち、試験化合物を用いない反応及び既知の阻害剤を用いた反応）を使用して、阻害パーセントに変換し、ＩＣ_５０値を、Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ ｓｏｆｔｗａｒｅ）のソフトウェアルーチンを使用して算出した。

【0217】

配列番号 ２－ＰＥＲＫタンパク質配列（残基５６３～１１１５、配列ＩＤ：ＮＭ ００４８３６）
ＭＳＰＩＬＧＹＷＫＩＫＧＬＶＱＰＴＲＬＬＬＥＹＬＥＥＫＹＥＥＨＬＹＥＲＤＥＧＤＫＷＲＮＫＫＦＥＬＧＬＥＦＰＮＬＰＹＹＩＤＧＤＶＫＬＴＱＳＭＡＩＩＲＹＩＡＤＫＨＮＭＬＧＧＣＰＫＥＲＡＥＩＳＭＬＥＧＡＶＬＤＩＲＹＧＶＳＲＩＡＹＳＫＤＦＥＴＬＫＶＤＦＬＳＫＬＰＥＭＬＫＭＦＥＤＲＬＣＨＫＴＹＬＮＧＤＨＶＴＨＰＤＦＭＬＹＤＡＬＤＶＶＬＹＭＤＰＭＣＬＤＡＦＰＫＬＶＣＦＫＫＲＩＥＡＩＰＱＩＤＫＹＬＫＳＳＫＹＩＡＷＰＬＱＧＷＱＡＴＦＧＧＧＤＨＰＰＫＳＤＬＶＰＲＧＳＫＹＤＳＶＳＧＥＡＮＤＳＳＷＮＤＩＫＮＳＧＹＩＳＲＹＬＴＤＦＥＰＩＱＣＬＧＲＧＧＦＧＶＶＦＥＡＫＮＫＶＤＤＣＮＹＡＩＫＲＩＲＬＰＮＲＥＬＡＲＥＫＶＭＲＥＶＫＡＬＡＫＬＥＨＰＧＩＶＲＹＦＮＡＷＬＥＡＰＰＥＫＷＱＥＫＭＤＥＩＷＬＫＤＥＳＴＤＷＰＬＳＳＰＳＰＭＤＡＰＳＶＫＩＲＲＭＤＰＦＳＴＫＥＨＩＥＩＩＡＰＳＰＱＲＳＲＳＦＳＶＧＩＳＣＤＱＴＳＳＳＥＳＱＦＳＰＬＥＦＳＧＭＤＨＥＤＩＳＥＳＶＤＡＡＹＮＬＱＤＳＣＬＴＤＣＤＶＥＤＧＴＭＤＧＮＤＥＧＨＳＦＥＬＣＰＳＥＡＳＰＹＶＲＳＲＥＲＴＳＳＳＩＶＦＥＤＳＧＣＤＮＡＳＳＫＥＥＰＫＴＮＲＬＨＩＧＮＨＣＡＮＫＬＴＡＦＫＰＴＳＳＫＳＳＳＥＡＴＬＳＩＳＰＰＲＰＴＴＬＳＬＤＬＴＫＮＴＴＥＫＬＱＰＳＳＰＫＶＹＬＹＩＱＭＱＬＣＲＫＥＮＬＫＤＷＭＮＧＲＣＴＩＥＥＲＥＲＳＶＣＬＨＩＦＬＱＩＡＥＡＶＥＦＬＨＳＫＧＬＭＨＲＤＬＫＰＳＮＩＦＦＴＭＤＤＶＶＫＶＧＤＦＧＬＶＴＡＭＤＱＤＥＥＥＱＴＶＬＴＰＭＰＡＹＡＲＨＴＧＱＶＧＴＫＬＹＭＳＰＥＱＩＨＧＮＳＹＳＨＫＶＤＩＦＳＬＧＬＩＬＦＥＬＬＹＰＦＳＴＱＭＥＲＶＲＴＬＴＤＶＲＮＬＫＦＰＰＬＦＴＱＫＹＰＣＥＹＶＭＶＱＤＭＬＳＰＳＰＭＥＲＰＥＡＩＮＩＩＥＮＡＶＦＥＤＬＤＦＰＧＫＴＶＬＲＱＲＳＲＳＬＳＳＳＧＴＫＨＳＲＱＳＮＮＳＨＳＰＬＰＳＮ

【表1】

【0218】

表１では、「＋」は、１００ｎＭ以下のＩＣ_５０を指し、「＋＋」は、１００ｎＭ超かつ５００ｎＭ以下のＩＣ_５０を指し、「＋＋＋」は、５００ｎＭ超かつ１０００ｎＭ以下のＩＣ_５０を指し、「＋＋＋＋」は、１０００ｎＭ超かつ１００００ｎＭ以下のＩＣ_５０を指す。

【0219】

本明細書に提供される以下の実施例及び図面では、「化合物２」は、上記の実施例２の化合物を指す。
実施例３２．ＧＣＮ２の細胞阻害に関する表現型アッセイである、ＣＣＲＦ－ＣＥＭ ＡＳＮａｓｅ細胞増殖アッセイ。

【0220】

ＣＣＲＦ－ＣＥＭ白血病細胞（カタログ番号ＣＣＬ－１１６）を、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ、バージニア州マナッサス）から取得した。細胞を、３７℃、５％のＣＯ_２及び９５％の湿度で、１０％の熱不活化ウシ胎児血清（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールスバッド）及び１％のペニシリン／ストレプトマイシン／Ｌ－グルタミンで補充したＲＰＭＩ－１６４０培地中で増殖させた。細胞を、１ｍＬ当たり１００万細胞に達するまで増殖させ、その時点で、アッセイ使用のために継代培養又は採取した。１０％の熱不活化ウシ胎児血清及び１％のペニシリン／ストレプトマイシンで補充した２００ μμＬのＲＰＭＩ－１６４０のウェル当たり１万個の細胞を、９６ウェルの黒色の透明底部プレートに分注した。試験化合物及び１ｍＵ／ｍＬのＡＳＮａｓｅの段階希釈を３連で加え、プレートを３７℃、５％のＣＯ_２、及び９５％の湿度で７２時間インキュベートした。インキュベーションの終了時に、ＰＢＳ中の４４０ｍＭレザズリン（Ｓｉｇｍａ、ミズーリ州セントルイス）溶液４０μＬを、プレートの各ウェルに加え、プレートを３７℃、５％ＣＯ_２、９５％の湿度で更に６時間インキュベートした。プレートは、５４０ｎｍの励起と６００ｎｍの放射を使用して、Ｓｙｎｅｒｇｙ２（Ｂｉｏｔｅｋ社、バーモント州ウィヌースキ）又は同等のリーダーで読み取った。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ、カリフォルニア州サンディエゴ）を使用して、データを分析して、ＩＣ_５０値を算出した。
実施例３３．ＨＣＴ１１６ アミノ酸欠乏（－ＡＡ）ホスホＧＣＮ２及びＡＴＦ４アッセイ

【0221】

ＨＣＴ１１６結腸直腸がん細胞（カタログ番号ＣＣＬ－２４７）を、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔ（ＡＴＴＣ、バージニア州マナッサス）から取得した。簡潔に述べると、細胞を、３７℃、５％のＣＯ_２、及び９５％の湿度で、１０％の熱不活化ウシ胎児血清（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールスバッド）及び１％のペニシリン／ストレプトマイシン／Ｌ－グルタミンで補充したＲＰＭＩ１６４０中で増殖させた。細胞を、７０～９５％の密集度に達するまで拡大させ、その時点で、アッセイ使用のために継代培養又は採取した。細胞を、１ｍＬの完全増殖培地中でウェル当たり５０万個の細胞で１２ウェル培養プレートに播種し、３７℃、５％のＣＯ_２、及び９５％の湿度で一晩インキュベートした。翌日、各ウェルを、１０％の透析ウシ胎児血清、５．５ｍＭのグルコース、１％のペニシリン／ストレプトマイシン、及び１％のビタミン溶液（ｔｈｅｒｍｏ社カタログ番号１１１２００５２）で補充した１ｍＬのアール平衡塩溶液（ＥＢＳＳ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、カリフォルニア州カールスバッド）で置換した。試験化合物の段階希釈をウェルに分注した。プレートを、３７℃、５％のＣＯ_２、及び９５％の湿度で４時間インキュベートした。インキュベーションの終了時に、細胞を、１Ｘ Ｈａｌｔプロテアーゼ阻害剤、１Ｘ Ｈａｌｔホスファターゼ阻害剤、１Ｘ Ｓｉｇｍａホスファターゼ阻害剤カクテル２及び１Ｘ ＥＤＴＡで補充したＰＢＳで洗浄し、次いで上述のように３Ｘの阻害剤混合物で補充したＭ－ＰＥＲ哺乳類タンパク質抽出試薬で溶解した。細胞溶解物を水浴ソニケーター（Ｑｓｏｎｉｃａ社、コネチカット州ニュータウン）で超音波処理し、上清をＳＤＳ緩衝液及び還元剤で煮沸した。ウェスタンブロットを各溶解物に行い、リン酸化ＧＣＮ２（Ｔｈｒ８９９）、総ＧＣＮ２、ＡＴＦ４、及びβアクチンを定量化した。膜を、ＬＩ－ＣＯＲ Ｏｄｙｓｓｅｙ ＣＬｘイメージングシステム（ＬＩ－ＣＯＲ社、リンカーンネブラスカ州リンカーン）を使用して撮像した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ社、カリフォルニア州サンディエゴ）を使用してデータを分析して、ＩＣ_５０値を算出した。
実施例３４．タプシガルギン（ＴＧ）によって事前に活性化されたＰＥＲＫの細胞阻害に関する表現型アッセイである、ＣＣＲＦ－ＣＥＭ ＴＧ ＡＴＦ４ ＥＬＩＳＡ

【0222】

ＣＣＲＦ－ＣＥＭ白血病細胞（カタログ番号ＣＣＬ－１１６）を、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ、バージニア州マナッサス）から取得した。簡潔に述べると、細胞を、３７℃、５％のＣＯ_２、及び９５％の湿度で、１０％の熱不活化ウシ胎児血清（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールスバッド）及び１％のペニシリン／ストレプトマイシン／Ｌ－グルタミンで補充したＲＰＭＩ－１６４０培地中で増殖させた。細胞を、１ｍＬ当たり１００万細胞に達するまで増殖させ、その時点で、アッセイ使用のために継代培養又は採取した。１ｍＬの完全増殖培地中のウェル当たり１５０万個の細胞を１２ウェルプレートに分注し、一晩インキュベートした。試験化合物の段階希釈を加え、細胞を３７℃、５％のＣＯ_２、及び９５％で３時間インキュベートし、次いで１ μμＭのタプシガルギンを加え、細胞を３７℃、５％のＣＯ_２、及び９５％で更に１時間インキュベートした。細胞を溶解し、その後、ＡＴＦ４レベルをＥＬＩＳＡアッセイ（Ｐｒｏｔｅｉｎｔｅｃｈ、イリノイ州ローズモント）を使用して測定した。吸光度を、Ｓｙｎｅｒｇｙ２又は同等のリーダー（Ｂｉｏｔｅｋ、バーモント州ウィヌースキ）を使用して、４５０ｎＭ及び５４４ｎＭで測定した。Ｐｒｉｓｍソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ、カリフォルニア州サンディエゴ）を使用してデータを分析して、ＩＣ_５０値を算出した。

【表2】

【0223】

表２では、「＋」は、１００ｎＭ以下のＩＣ_５０を指し、「＋＋」は、１００ｎＭ超かつ５００ｎＭ以下のＩＣ_５０を指し、「＋＋＋」は、５００ｎＭ超かつ１０００ｎＭ以下のＩＣ_５０を指し、「＋＋＋＋」は、１０００ｎＭ超かつ１００００ｎＭ以下のＩＣ_５０を指す。
実施例３５． Ｈ９２９ ＡＴＦ４ ＥＬＩＳＡアッセイ

【0224】

Ｈ９２９多発性骨髄腫細胞（カタログ番号ＣＲＬ－９０６８）を、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ、バージニア州マナッサス）から取得した。簡潔に述べると、細胞を、３７℃、５％のＣＯ_２及び９５％の湿度で、２０％の熱不活化ウシ胎児血清（カタログ番号Ａ３８４０００２、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、マサチューセッツ州ウォルサム）、１％のペニシリン／ストレプトマイシン／Ｌ－グルタミン（カタログ番号１０３７８０１６、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、マサチューセッツ州ウォルサム）、及び０．０５ｍＭの２－メルカプトエタノール（カタログ番号２１９８５－０２３、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、マサチューセッツ州ウォルサム）で補充したＲＰＭＩ－１６４０培地中で増殖させた。細胞を、１ｍＬ当たり１５０万細胞に達するまで増殖させ、その時点で、継代培養又はアッセイ使用のために採取した。１ｍＬの完全増殖培地中の１ウェル当たり１５０万個の細胞を１２ウェルプレートに分注し、一晩インキュベートした。試験化合物の段階希釈を加え、細胞を３７℃、５％のＣＯ_２、及び９５％で４時間インキュベートした。細胞を溶解し、その後、ＡＴＦ４レベルをＥＬＩＳＡアッセイ（Ｐｒｏｔｅｉｎｔｅｃｈ、イリノイ州ローズモント）を使用して測定した。吸光度を、Ｓｙｎｅｒｇｙ２又は同等のリーダー（Ｂｉｏｔｅｋ、バーモント州ウィヌースキ）を使用して、４５０ｎＭ及び５４４ｎＭで測定する。ＰＲＩＳＭソフトウェア（Ｇｒａｐｈｐａｄ、カリフォルニア州サンディエゴ）を使用してデータを分析し、ビヒクル処理した対照に対する細胞ＡＴＦ４の刺激倍数を算出した。

【表3】

【0225】

表３では、「＋」は、５倍数以下のＡＴＦ４の刺激を指し、「＋＋」は、５倍数超かつ１０倍数以下のＡＴＦ４の刺激を指し、「＋＋＋」は、１０倍数超かつ２０倍数以下のＡＴＦ４の刺激を指す。

【0226】

図１は、化合物２の濃度の増加に応答したＵＰＲ／ＩＳＲマーカーＡＴＦ４（黒色の棒）の予想外の刺激を示すグラフ表示である。刺激は、釣鐘形様式で発生し、ＡＴＦ４レベルが４～１２３ｎＭの範囲の濃度でピークに達することが見出され、５０％以下のＰＥＲＫ分子が化合物２によって占有された濃度範囲、その後、化合物２の３７０ｎＭ以上の濃度でＡＴＦ４発現が基底レベルに戻った阻害期が続く。ＡＴＦ４シグナルにおける最大刺激は、１３倍であり、約４１ｎＭの化合物２で生じた。
実施例３６．ＮａｎｏＢＲＥＴを使用したＰＥＲＫオリゴマー化の検出

【0227】

ＢＲＥＴ用の構築物は、ＮａｎｏＢＲＥＴ（商標）Ｆｌｅｘｉ（登録商標）ＰＰＩ Ｓｔａｒｔｅｒ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ、ウィスコンシン州マディソン）を使用して構築された。全長ＰＥＲＫ ＯＲＦは、Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ社（ニュージャージー州ピスカタウェイ）から取得した。ＨＥＫ－２９３細胞（カタログ番号 ＣＲＬ－１５７３）を、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ、バージニア州マナッサス）から取得した。細胞を、３７℃、５％のＣＯ_２、及び９５％の湿度で、１０％の熱不活化ウシ胎児血清（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールスバッド）及び１％のペニシリン／ストレプトマイシン／Ｌ－グルタミンで補充したＭＥＭ培地中で増殖させた。ＢＲＥＴアッセイについては、６ウェルプレート中の培養培地中で、細胞を４０，０００細胞／ｍＬの密度で播種し、付着及び回収させた。細胞を、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ＬＴＸ（Ｔｈｅｒｍｏ社、マサチューセッツ州ウォルサム）を使用して、Ｃ末端にタグ付けされたＰＥＲＫ－ＮＬｕｃ及びＣ末端にタグ付けされたＰＥＲＫ－Ｈａｌｏでトランスフェクトし、３７℃、５％のＣＯ_２、及び９５％の湿度で一晩タンパク質を発現させた。次いで、０．０５％のトリプシンＥＤＴＡを使用して培養ディッシュから細胞を切り離し、収集し、４％のＦＢＳ（Ｔｈｅｒｍｏ社）で補充されたＯｐｔｉ－ＭＥＭ（登録商標）Ｉ低血清培地からなるアッセイ培地中で２２，０００細胞／ｍＬまで希釈した。細胞を９６ウェル細胞培養プレートに分注し、ＨａｌｏＴａｇ（登録商標）ＮａｎｏＢＲＥＴ（商標）６１８ Ｌｉｇａｎｄ（Ｐｒｏｍｅｇａ社）を１００ｎＭの最終濃度まで加えた。化合物又はＤＭＳＯを細胞に加え、プレートを３７℃、５％のＣＯ_２、及び９５％の湿度で４時間インキュベートした。ＮａｎｏＢＲＥＴ（商標）Ｎａｎｏ－Ｇｌｏ（登録商標）Ｓｕｂｓｔｒａｔｅを細胞に加え、細胞を３０秒間振とうした。ドナー（４６０ ｎＭ）及びアクセプター（６１８）の放射を、Ｓｙｎｅｒｇｙ Ｎｅｏ２マルチモードリーダー（ＢｉｏＴｅｋ社、バーモント州ウィヌースキ）上で、基質添加から１０分以内に測定した。データは、ＢＲＥＴ比（アクセプター／ドナー）として報告された。

【0228】

化合物２は、１．６ｎＭのＥＣ_５０を有し、予想外に、ＰＥＲＫオリゴマーの形成の刺激を呈示した。化合物２によって誘導された刺激ＰＥＲＫオリゴマーのグラフが、図２に示される。
実施例３７．多発性骨髄腫のＵＰＲ／ＩＳＲシグナル伝達経路タンパク質ＡＴＦ４及びＣＨＯＰの刺激

【0229】

Ｈ９２９多発性骨髄腫細胞（カタログ番号ＣＲＬ－９０６８）を、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＴＣ、バージニア州マナッサス）から入手し、３７℃、５％のＣＯ_２、及び９５％の湿度で、２０％の熱不活性化ウシ胎児血清（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールスバッド）、１％のペニシリン／ストレプトマイシン／Ｌ－グルタミン、及び０．０５ｍＭの２－メルカプトエタノールを補充したＲＰＭＩ １６４０中で増殖させ、１ｍＬ当たり１００～２００万細胞に維持した。細胞を、６ウェルプレートに、２ｍＬの完全増殖培地中１ウェル当たり４００万細胞で播種し、３７℃、５％のＣＯ_２、及び９５％の湿度で４時間、試験化合物の段階希釈で処理した。インキュベーションの終了時に、細胞を、１Ｘ Ｈａｌｔプロテアーゼ阻害剤、１Ｘ Ｈａｌｔホスファターゼ阻害剤、１Ｘ Ｓｉｇｍａホスファターゼ阻害剤カクテル２、及び１Ｘ ＥＤＴＡを補充したＰＢＳで洗浄し、次いで上述のように、３Ｘの阻害剤混合物を補充したＭ－ＰＥＲ哺乳類タンパク質抽出試薬で溶解させた。細胞溶解物を、水浴ソニケーター（Ｑｓｏｎｉｃａ、ニュータウン、コネチカット州）で超音波処理し、上清を、ＳＤＳ緩衝液及び還元剤とともに煮沸した。ウェスタンブロットを実施して、ＡＴＦ４、ＣＨＯＰ、及びベータアクチン（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、ダンバース、マサチューセッツ州）を定量した。膜を、ＬＩ－ＣＯＲ Ｏｄｙｓｓｅｙ ＣＬｘ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍ（ＬＩ－ＣＯＲ、ネブラスカ州リンカーン）で撮像した。

【0230】

化合物２は、予想外に、Ｈ９２９多発性骨髄腫細胞におけるＰＥＲＫ経路の刺激を呈示した。刺激ＰＥＲＫ下流シグナル伝達タンパク質ＡＴＦ４及びＣＨＯＰ（ローディング対照としてのアクチン）の図を、図３に示す。ＡＴＦ４は、４．５ｎＭ～１２３ｎＭの濃度範囲にわたって刺激される。ＣＨＯＰは、４．５ｎＭ～４１ｎＭの濃度範囲にわたって刺激される。
実施例３８． 定量的ＲＴ－ＰＣＲを使用した、多発性骨髄腫のＵＰＲ／ＩＳＲ標的遺伝子の刺激

【0231】

Ｈ９２９多発性骨髄腫細胞（カタログ番号ＣＲＬ－９０６８）を、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＴＣ、マナサス、バージニア州）から入手した。細胞を、３７℃、５％のＣＯ_２、及び９５％の湿度で、２０％の熱不活化ウシ胎児血清（カタログ番号Ａ３８４０００２、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ウォルサム、マサチューセッツ州）、１％のペニシリン／ストレプトマイシン／Ｌ－グルタミン（カタログ番号１０３７８０１６、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ウォルサム、マサチューセッツ州）、及び０．０５ｍＭの２－メルカプトエタノール（カタログ番号２１９８５－０２３、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ウォルサム、マサチューセッツ州）を補充した、ＲＰＭＩ－１６４０培地中で増殖させた。細胞を、７０～９５％のコンフルエントに達するまで増殖させ、その時点で、継代培養又はアッセイ使用のために採取した。細胞を、６ウェル培養プレートに２ｍＬの完全増殖培地中１ウエル当たり３．０×１０^６細胞で播種し、３７℃、５％のＣＯ_２、及び９５％の湿度で４時間、指定された濃度の化合物２とともにインキュベートした。インキュベーションの終了時に、細胞をＰＢＳ（Ｓｉｇｍａ）で洗浄し、ＲＮｅａｓｙ（登録商標）Ｐｌｕｓキット（Ｑｉａｇｅｎ、メリーランド州ジャーマンタウン）を使用してＲＮＡを抽出した。Ｈｉｇｈ－Ｃａｐａｃｉｔｙ ｃＤＮＡ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カリフォルニア州ビバリーヒルズ）を使用してｃＤＮＡを合成し、ＴａｑＭａｎ Ａｓｓａｙｓ（表１、Ｔｈｅｒｍｏ）及びＴａｑＭａｎ Ｆａｓｔ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ｔｈｅｒｍｏ）を使用して、製造業者の仕様に従って、ＱｕａｎｔＳｔｕｄｉｏ ３（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で、定量的ＰＣＲを行った。

【表4】

【0232】

化合物２は、Ｈ９２９多発性骨髄腫細胞において、予想外に、ＵＰＲ／ＩＳＲ標的遺伝子の発現を誘導した。データは、ビヒクル対照（ＤＭＳＯ）処理試料に対する倍率変化として報告された。図４は、化合物２の濃度の増加に応答して、ＡＴＦ４標的遺伝子の刺激を示すグラフ表示である（ＤＭＳＯ黒色バー、１．５ｎＭ濃灰色のバー、１４ｎＭ市松模様バー、４１ｎＭ縞模様バー、１２３ｎＭ淡灰色バー、及び３７０ｎＭ点線のバー）。ＡＴＦ４標的遺伝子の転写活性化は、釣鐘形様式で発生した。４時間時点でのＡＴＦ４の最大刺激は約３倍であり、４時間でのＣＨＯＰの最大刺激は約１０倍であり、４時間でのＧＡＤＤ３４の最大刺激は約３倍であり、４時間でのＧＰＴ２の最大刺激は約３倍であり、４時間でのＶＥＧＦＡの最大刺激は約２倍であった。ＡＴＦ４標的遺伝子の刺激は、釣鐘形様式で発生し、レベルが１４～１２３ｎＭの範囲の濃度でピークに達することが見出され、５０％以下のＰＥＲＫ分子が化合物２によって占有された濃度範囲、その後、化合物２の３７０ｎＭ以上の濃度で発現が基底レベルに戻った阻害期が続く。
実施例３９． 多発性骨髄腫アポトーシスシグナル伝達経路の刺激

【0233】

Ｈ９２９多発性骨髄腫細胞（カタログ番号ＣＲＬ－９０６８）を、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＴＣ、バージニア州マナッサス）から入手し、３７℃、５％のＣＯ_２、及び９５％の湿度で、２０％の熱不活性化ウシ胎児血清（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールスバッド）、１％のペニシリン／ストレプトマイシン／Ｌ－グルタミン、及び０．０５ｍＭの２－メルカプトエタノールを補充したＲＰＭＩ １６４０中で増殖させ、１ｍＬ当たり１００～２００万細胞に維持した。細胞を、６ウェルプレートに、２ｍＬの完全増殖培地中１ウェル当たり４００万細胞で播種し、３７℃、５％のＣＯ_２、及び９５％の湿度で２４時間、試験化合物の段階希釈で処理した。インキュベーションの終了時に、細胞を、１Ｘ Ｈａｌｔプロテアーゼ阻害剤、１Ｘ Ｈａｌｔホスファターゼ阻害剤、１Ｘ Ｓｉｇｍａホスファターゼ阻害剤カクテル２、及び１Ｘ ＥＤＴＡを補充したＰＢＳで洗浄し、次いで上述のように、３Ｘの阻害剤混合物を補充したＭ－ＰＥＲ哺乳類タンパク質抽出試薬で溶解した。細胞溶解物を、水浴ソニケーター（Ｑｓｏｎｉｃａ、ニュータウン、コネチカット州）で超音波処理し、上清を、ＳＤＳ緩衝液及び還元剤とともに煮沸した。ウェスタンブロットを実行して、切断－カスパーゼ３、切断－カスパーゼ７、ＰＡＲＰ、及びベータ－アクチン（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、マサチューセッツ州ダンバース）を定量化した。膜を、ＬＩ－ＣＯＲ Ｏｄｙｓｓｅｙ ＣＬｘ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍ（ＬＩ－ＣＯＲ、ネブラスカ州リンカーン）で撮像した。

【0234】

化合物２は、Ｈ９２９多発性骨髄腫細胞において、予想外に、アポトーシス促進性タンパク質の発現を誘導した。細胞を化合物２で処理すると、切断ＰＡＲＰ、切断Ｃａｓｐａｓｅ－７、及び切断Ｃａｓｐａｓｅ－３のレベルの増加が生じた。これらのアポトーシス読み出しの刺激は、釣鐘形様式で発生し、４．５ｎＭ～４１ｎＭの範囲の濃度でピークに達した。
実施例４０． 多発性骨髄腫及びＢ細胞リンパ腫の細胞増殖の阻害

【0235】

Ｈ９２９、ＲＰＭＩ８２２６、ＧＡ－１０、及びＤｏＨＨ－２細胞（カタログ番号ＣＲＬ－９０６８）を、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＴＣ、バージニア州マナッサス）から入手した。Ｈ９２９細胞は、２０％の熱不活性化ウシ胎児血清（カタログ番号Ａ３８４０００２、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、マサチューセッツ州ウォルトハム）、１％のペニシリン／ストレプトマイシン／Ｌ－グルタミン（カタログ番号１０３７８０１６、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、マサチューセッツ州ウォルトハム）、及び０．０５ｍＭの２－メルカプトエタノール（カタログ番号２１９８５－０２３、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、マサチューセッツ州ウォルトハム）を補充した、ＲＰＭＩ－１６４０培地中で維持した。ＲＰＭＩ８２２６、ＧＡ－１０、ＤｏＨＨ－２を、１０％の熱不活性化ウシ胎児血清（カタログ番号Ａ３８４０００２、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、マサチューセッツ州ウォルトハム）、及び１％のペニシリン／ストレプトマイシン／Ｌ－グルタミン（カタログ番号１０３７８０１６、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、マサチューセッツ州ウォルトハム）を補充したＲＰＭＩ－１６４０培地中で維持した。全ての細胞を３７℃、５％のＣＯ_２、及び９５％の湿度で増殖させた。細胞を、１ｍＬ当たり１５０万細胞に達するまで増殖させ、その時点で、継代培養又はアッセイ使用のために採取した。

【0236】

細胞増殖アッセイについて、適切な数の細胞（Ｈ９２９については４万個の細胞；ＲＰＭＩ８２２６及びＧＡ－１０については２万個の細胞；ＤｏＨＨ－２については８千個の細胞）を、ウェル当たり２００μＬで各培地に播種し、９６ウェルの黒色透明底プレートに分注した。試験化合物の段階希釈を３連で加え、プレートを、３７℃、５％のＣＯ_２、及び９５％の湿度で、７２時間、又は１２０時間インキュベートした。いくつかの標準治療剤を、併用試験に使用した（レナリドミド（カタログ番号Ｓ１０２９、Ｓｅｌｌｅｃｋｃｈｅｍ、テキサス州ヒューストン）、ボルテゾミブ（カタログ番号Ｓ１０１３、Ｓｅｌｌｅｃｋｃｈｅｍ、テキサス州ヒューストン）、デキサメタゾン（カタログ番号Ｓ１３２２、Ｓｅｌｌｅｃｋｃｈｅｍ、テキサス州ヒューストン）、イブルチニブ（Ｐｈａｒｍａｃｙｃｌｉｃｓ、カリフォルニア州サニーベール）。Ｈ９２９、ＲＰＭＩ８２２６、及びＧＡ－１０のインキュベーションの終了時に、ＰＢＳ中の４４０ｍＭレザズリン（Ｓｉｇｍａ、ミズーリ州セントルイス）溶液４０μＬを、プレートの各ウェルに加え、プレートを３７℃、５％ＣＯ_２、湿度９５％で更に７時間インキュベートした。プレートを、５４０ｎｍの励起と６００ｎｍの発光を使用して、Ｓｙｎｅｒｇｙ２又は同等のリーダー（Ｂｉｏｔｅｋ、バーモント州ウィヌースキー）で読み取った。ＤｏＨＨ－２のインキュベーションの終了時に、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、マディソン、ウィスコンシン州）を使用して、細胞生存率を決定した。ＥｎＶｉｓｉｏｎ ＭｕｌｔｉＬａｂｅｌ Ｒｅａｄｅｒ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、ウォルサム、マサチューセッツ州）を使用して、発光を測定した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ、カリフォルニア州サンディエゴ）を使用して、データを分析して、ＩＣ_５０値を算出した。

【0237】

化合物２は、多発性骨髄腫又はＢ細胞リンパ腫を治療する標準治療（ＳＯＣ）剤と組み合わせると、細胞増殖の阻害に対して、相加性又は相乗効果を示す。代表的なグラフを図６Ａ、６Ｂ、６Ｃ、及び６Ｄに示す。図６Ａは、３３３ｎＭデキサメタゾンあり（灰色の菱形）又はなし（黒丸）の化合物２力価で９６時間処理したＲＰＭＩ８２２６多発性骨髄腫細胞の細胞増殖実験を表す。併用処理は、７ｎＭのＩＣ５０で細胞増殖の阻害をもたらした。図６Ｂは、３ｎＭボルテゾミブあり（灰色の四角）、又はなし（黒丸）の化合物２力価で９６時間処理したＨ９２９多発性骨髄腫細胞の細胞増殖実験を表す。併用処理は、６ｎＭのＩＣ５０で細胞増殖の阻害をもたらした。図６Ｃは、５０ｎＭデキサメタゾンあり（灰色の三角）又はなし（黒丸）の化合物２力価で９６時間処理したＧＡ－１０バーキットリンパ腫細胞の細胞増殖実験を表す。併用処理は、４ｎＭのＩＣ５０で細胞増殖の阻害をもたらした。図６Ｄは、４１ｎＭのイブルチニブあり（灰色の星）又はなし（黒丸）の化合物２力価で９６時間処理した濾胞性リンパ腫細胞の細胞増殖実験を表す。併用処理は、４ｎＭのＩＣ_５０で細胞増殖の阻害をもたらした。
実施例４１． ＣＣＲＦ－ＣＥＭ異種移植薬物動態／薬力学（ＰＫ／ＰＤ）モデル

【0238】

ＣＣＲＦ－ＣＥＭ異種移植モデルは、全ての法律、規制及び米国国立衛生研究所（ＮＩＨ）のガイドラインに従い、並びにＬａｂｃｏｒｐ（ミシガン州アナーバー）の動物実験委員会の承認を得て、ＡＡＡＬＡＣ認証施設で実行された。食物及び水は、自由摂取で与えられた。全てのマウスは、少なくとも１日１回臨床徴候について観察された。雌のＥｎｖｉｇｏ Ｃ．Ｂ－１７ ＳＣＩＤ（６～７週齢）は、２７ゲージの針及びシリンジを使用して、ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水中の細胞１，０００万個を、右の上腋窩のすぐ下に皮下接種した。腫瘍量が２２日目に平均２００ｍｍ^３に達したとき、マウスを、全ての群の平均腫瘍量が研究集団の全体の平均腫瘍量の１０％以内となるように各群に無作為に割り当てた。群は、２３～２４日目に以下のように処理された：２３日目に、ビヒクル対照（併用群を模倣するために経口及びＩＰ投与）（ｎ＝９）；ＡＳＮａｓｅ（Ａｂｃａｍ、英国、ケンブリッジ）を１０００Ｕ／ｋｇ／日でＩＰ投与（ｎ＝９）。２４日目に、ビヒクル対照（併用群を模倣するために経口及びＩＰ投与）（ｎ＝９）；化合物２を５０ｍｇ／ｋｇ／日の化合物２で経口投与（ｎ＝９）及びＡＳＮａｓｅ（Ａｂｃａｍ、英国、ケンブリッジ）を試料採取の２時間前に １０００Ｕ／ｋｇ／日でＩＰ投与（ｎ＝９）；化合物２を２５ｍｇ／ｋｇ／日の化合物２で経口投与（ｎ＝９）及びＡＳＮａｓｅ（Ａｂｃａｍ、英国、ケンブリッジ）を化合物２投与の２、６及び１０時間後試料採取の２時間前に １０００Ｕ／ｋｇ／日でＩＰ投与（ｎ＝９）。血液サンプルをＫ２ＥＤＴＡチューブに収集し、血漿に処理し、液体窒素中で急速凍結し、次いで－８０℃で保存した。血漿試料を、タンデム質量分析（Ｃａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ、ミシガン州アナーバー）と組み合わせた液体クロマトグラフィーを使用した、薬物動態分析に供した。腫瘍及び膵組織を採取し、コバリスバッグ中で液体窒素上で粉末化し、－８０℃で保存した。組織試料処理のために、約３０ｍｇの腫瘍又は膵組織を、３Ｘ Ｈａｌｔプロテアーゼ阻害剤、３Ｘ Ｈａｌｔホスファターゼ阻害剤、３Ｘ Ｓｉｇｍａホスファターゼ阻害剤カクテル２、及び３Ｘ ＥＤＴＡを補充した、ｍＰＥＲ溶解緩衝液（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、マサチューセッツ州ウォルサム）中で氷上で溶解し、次いで、Ｂｅａｄ Ｒｕｐｔｏｒ ９６（Ｏｍｎｉ、ジョージア州ケネソー）を使用して、均質化した。次いで、試料を、２１，０００ｇで、４℃で、１０分間遠心分離した。次いで、清澄化された溶解物を、氷冷した円錐底９６ウェルプレートに移し、密封し、次いで－８０℃で保存した。翌日、試料を氷上で解凍し、その後、３７３９ｇで、４℃で、１０分間遠心分離した。次いで、清澄化した溶解物を、氷冷した丸底９６ウェルプレートに移した。タンパク質濃度は、ＢＣＡタンパク質アッセイキット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、マサチューセッツ州ウォルサム）を使用して、決定した。溶解物は、４Ｘ ＳＤＳ－試料緩衝液及び還元剤中で煮沸する前に、１０μｇ／μｌに正規化された。試料をＳＤＳ－ＰＡＧＥを使用して分離し、次いで、ウェスタンブロットを使用して分析して、ホスホＧＣＮ２（Ｔｈｒ８９９）（Ａｂｃａｍ、ケンブリッジ、英国）、総ＧＣＮ２、ＡＴＦ４、及びベータ－アクチン（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、マサチューセッツ州ダンバース）を定量化した。膜を、ＬＩ－ＣＯＲ Ｏｄｙｓｓｅｙ ＣＬｘ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍ（ＬＩ－ＣＯＲ、ネブラスカ州リンカーン）で撮像する。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ、カリフォルニア州サンディエゴ）を使用してデータを分析して、阻害％を算出する。

【0239】

化合物２は、ＡＳＮａｓｅと組み合わせると、ＣＣＲＦ－ＣＥＭ白血病異種移植モデルにおいて、ＧＣＮ２－媒介ＡＴＦ４レベルを阻害する。図７に示されるように、化合物２は、５０ｍｇ／ｋｇの経口投与で、ビヒクル対照と比較して、ＡＴＦ４レベルを８７～９１％阻害し、２５ｍｇ／ｋｇの経口投与で、ビヒクル対照と比較して、ＡＴＦ４レベルを５７～９３％阻害した。化合物２の対応する血漿レベルを、投与後２、６、及び１０時間のＰＤ時点で決定した。
実施例４２．ＭＶ－４－１１異種移植有効性モデル

【0240】

ＭＶ－４－１１異種移植モデルは、全ての法律、規制及び米国国立衛生研究所（ＮＩＨ）のガイドラインに従い、並びにＣｒｏｗｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（中国、太倉）の動物実験委員会の承認を得て、ＡＡＡＬＡＣ認証施設で実行された。食物及び水は、自由摂取で与えられた。全てのマウスは、少なくとも１日１回臨床徴候について観察された。雌のＮＯＤ／ＳＣＩＤ（６～９週齢、Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｍｏｄｅｌｓ ａｎｄ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ（中国、北京））に、ダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水：マトリゲル（１：１）中の５００万個の細胞を、２７ゲージの針及び注射器を使用して右脇腹部の皮下に接種した。腫瘍量が７日目に平均で１５０ｍｍ^３に達したとき、マウスを、全ての群の平均腫瘍量が研究集団の全体の平均腫瘍量の１０％以内となるように各群に無作為に割り当てた。群は、７～２１日目に以下のように処理された：ビヒクル対照（併用群を模倣するために経口及びＩＰ投与）（ｎ＝１０）；化合物２を５０ｍｇ／ｋｇ／日の化合物２で経口投与（ｎ＝１０）；ロイナーゼ（協和キリン、日本）を１０００Ｕ／ｋｇ／日でＩＰ投与（ｎ＝１０）；ロイナーゼ（協和キリン、日本）を１０００Ｕ／ｋｇ／日でＩＰ投与（ｎ＝１０）及び化合物２を５０ｍｇ／ｋｇ／日の化合物２で経口投与（ｎ＝１０）。腫瘍体積及び体重を、週に３回測定した。腫瘍量（ｍｇ）は、式：腫瘍量（ｍｇ＝ｍｍ^３）＝（長さ×幅^２）／２によるキャリパー測定値から推定した。

【0241】

化合物２は、ＡＳＮａｓｅと組み合わせて経口投与された場合、ＭＶ－４－１１腫瘍の成長を阻害する。図８に示されるように、単剤として５０ｍｇ／ｋｇ／日の化合物２を１４日間投与した後、腫瘍成長に対する有意な効果は観察されなかった。ロイナーゼと組み合わせた５０ｍｇ／ｋｇ／日の化合物２では、投与の１４日後に平均腫瘍成長阻害は５４％であった。
実施例４３． 組換えＧＣＮ２活性化アッセイ

【0242】

組換えＧＣＮ２（ＥＩＦ２ＡＫ４）（Ｃａｒｎａ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、日本）を、１Ｘホスファターゼ反応緩衝液中、３０℃で３時間、１６，０００単位のラムダホスファターゼ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ、マサチューセッツ州イプソウィック）とインキュベートすることによって脱リン酸化した。化合物２媒介性ＧＣＮ２調節を測定するために、キナーゼ緩衝液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールスバッド）中で希釈された１２．５ｎＭの脱リン酸化ＧＣＮ２を、化合物２力価とともに室温で３０分間インキュベートした。インキュベーション後、１３０ｎＭの基質（ＧＦＰ－ｅＩＦ２ａ）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、マサチューセッツ州ウォルサム）及び０．０５ｍＭのＡＴＰを混合物に加え、室温で６０分間インキュベートした。１０ｍＭのＥＤＴＡの添加によって反応を停止し、２ｎＭのＬａｎｔｈａＳｃｒｅｅｎ Ｔｂ－ａｎｔｉ－ｐｅＩＦ２ａ（ｐＳｅｒ５２）抗体（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、マサチューセッツ州ウォルサム）を使用してリン酸化ｅｉＦ２ａ基質を検出し、次いで暗所でインキュベートした。室温で６０分のインキュベーション後、３４０ｎｍの励起波長と４９０ｎｍ及び５２０ｎｍの発光波長を使用して、ＴＲ－ＦＲＥＴをモニタリングした。

【0243】

図９Ａでは、化合物２は０．０５～３ｎＭの範囲の濃度で、予想外に、対照の最大２５０％までＧＣＮ２酵素を活性化した。１０ｎＭを超える濃度では、化合物２は、インビトロでの組換えＧＣＮ２酵素の活性を阻害した。
実施例４４． 組換えＰＥＲＫ活性化アッセイ

【0244】

化合物２媒介性ＰＥＲＫ調節を測定するために、２００ｎＭのＰＥＲＫ酵素（Ｅｎｚｏ、ニューヨーク州ファーミンデール）を、化合物２力価とともに室温で３０分間インキュベートした。インキュベーション後、２００ｎＭの基質（ＧＦＰ－ｅＩＦ２ａ）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、マサチューセッツ州ウォルサム）及び１ｍＭのＡＴＰを混合物に加え、室温で６０分間インキュベートした。１０ｍＭのＥＤＴＡの添加によって反応を停止し、２ｎＭのＬａｎｔｈａＳｃｒｅｅｎ Ｔｂ－ａｎｔｉ－ｐｅＩＦ２ａ（ｐＳｅｒ５２）抗体（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、マサチューセッツ州ウォルサム）を使用してリン酸化ｅｉＦ２ａ基質を検出し、次いで暗所でインキュベートした。室温で６０分のインキュベーション後、３４０ｎｍの励起波長と４９０ｎｍ及び５２０ｎｍの発光波長を使用して、ＴＲ－ＦＲＥＴをモニタリングした。

【0245】

図９Ｂでは、０．０５～６ｎＭの化合物２の範囲の濃度で、予想外に、対照の最大２５０％までＰＥＲＫ酵素を活性化した。３ｎＭを超える濃度では、化合物２は、インビトロでの組換えＰＥＲＫ酵素の活性を阻害した。
実施例４５． スフェロイドウェスタンブロットアッセイ

【0246】

ＮＳＣＬＣ細胞株Ｈ３５８（カタログ番号ＣＲＬ－５８０７）及びＨ２０３０（カタログ番号ＣＲＬ－５９１４）、並びに線維肉腫細胞株ＨＴ－１０８０（カタログ番号ＣＲＬ－５８０７）を、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔ（ＡＴＴＣ、バージニア州マナッサス）から取得した。細胞を、３７℃、５％のＣＯ_２、及び９５％の湿度で、１０％の熱不活化ウシ胎児血清（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールスバッド）及び１％のペニシリン／ストレプトマイシン／Ｌ－グルタミンで補充したＲＰＭＩ－１６４０培地中で増殖させ、使用するまで５０～８０％のコンフルエントを維持した。細胞を、１ｍＬ／ウェルの完全増殖培地を含む２４ウェルＥｌｐｌａｓｉａプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、アリゾナ州グレンデール）に５００，０００細胞／ウェルで播種し、３７℃、５％ＣＯ_２、及び９５％湿度で一晩インキュベートしてスフェロイドを形成した。翌日、試験化合物の段階希釈物を完全増殖培地中で調製し、５００μＬの既存の培地を各ウェルから除去し、化合物力価を含有する新鮮な培地と交換した。次いで、スフェロイドを試験化合物とともに同じ条件下で４時間又は２４時間インキュベートした。インキュベーションの終了時に、スフェロイドを、１Ｘ Ｈａｌｔプロテアーゼ阻害剤、１Ｘ Ｈａｌｔホスファターゼ阻害剤（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールスバッド）、１Ｘ Ｓｉｇｍａホスファターゼ阻害剤カクテル２（Ｓｉｇｍａ、ミズーリ－州セントルイス）及び１Ｘ ＥＤＴＡ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールスバッド）で補充したＰＢＳで洗浄し、次いで上述のように３Ｘの阻害剤混合物で補充したＭ－ＰＥＲ哺乳類タンパク質抽出試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールスバッド）で溶解した。細胞溶解物を、水浴ソニケーター（Ｑｓｏｎｉｃａ、ニュータウン、コネチカット州）で超音波処理し、上清を、ＳＤＳ緩衝液及び還元剤とともに煮沸した。ウェスタンブロットを実行して、ホスホＧＣＮ２（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、ミネソタ州ミネアポリス）、ＡＴＦ４、ＣＨＯＰ、切断ＰＡＲＰ、切断カスパーゼ３及び７、並びにベータ－アクチン（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、マサチューセッツ州ダンバース）を定量化した。膜を、ＬＩ－ＣＯＲ Ｏｄｙｓｓｅｙ ＣＬｘ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍ（ＬＩ－ＣＯＲ、リンカーン、ネブラスカ州）で撮像した。

【0247】

図１０Ａ、１０Ｂ、及び１０Ｃでは、化合物２は、固形腫瘍がん細胞株（図１０Ａ、Ｈ２０３０；図１０Ｂ、Ｈ３５８；図１０Ｃ、ＨＴ－１０８０）におけるＩＳＲ及びアポトーシス経路の刺激を予想外に示した。上方制御されたＧＣＮ２リン酸化（ｐＧＣＮ２）、並びに下流シグナル伝達タンパク質ＡＴＦ４及びアポトーシス促進経路マーカー（切断－ＰＡＲＰ１、切断－カスパーゼ３／７）（ローディング対照としてのアクチン）のウェスタンブロット画像を、図１０Ａ、１０Ｂ、及び１０Ｃに示す。ｐＧＣＮ２のレベルは、Ｈ２０３０細胞株及びＨ３５８細胞株で上方制御され、ＡＴＦ４、ｃ－ＰＡＲＰ、及びｃ－Ｃａｓｐａｓｅ７は、４．６ｎＭ～最大３００ｎＭの濃度範囲にわたって上方制御された。ＡＴＦ４シグナルのウェスタンブロット定量化は、棒グラフ形式で表される。化合物２は、Ｈ２０３０スフェロイドにおいて最大２０倍、Ｈ３５８スフェロイドにおいて１２倍、ＨＴ－１０８０スフェロイドにおいて１５倍までＡＴＦ４を上方制御した。
実施例４６． スフェロイド増殖アッセイ

【0248】

非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）細胞株Ｈ３５８（カタログ番号ＣＲＬ－５８０７）及びＨ２０３０（カタログ番号ＣＲＬ－５９１４）、並びに線維肉腫株ＨＴ－１０８０（カタログ番号ＣＲＬ－５８０７）を、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔ（ＡＴＴＣ、バージニア州マナッサス）から取得した。細胞を、１０％熱不活化ウシ胎児血清及び１％ペニシリン／ストレプトマイシン／Ｌ－グルタミン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールスバッド）を補充したＲＰＭＩ－１６４０培地中で、３７℃、５％ＣＯ_２、及び９５％湿度で増殖させ、使用まで５０～８０％のコンフルエンシーで維持した。５００～１０００個の細胞を、８０μＬ／ウェルで完全増殖培地を含む９６ウェル超低付着プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、ノースカロライナ州グレンデール）に播種し、３７℃、５％ＣＯ_２、及び９５％湿度で一晩インキュベートして、スフェロイドを形成させた。翌日、試験化合物の段階希釈物を完全増殖培地中で調製し、化合物力価を含有する２０μＬ／ウェル培地をスフェロイドに三連で添加した。次いで、スフェロイドを試験化合物とともに同じ条件下で５日間インキュベートした。インキュベーションの終了時に、スフェロイドを１００μＬ／ウェルのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ ３Ｄ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ、ウィスコンシン州マディソン）で溶解し、発光をＳｙｎｅｒｇｙ２又は同等のリーダー（Ｂｉｏｔｅｋ、バーモント州ウィヌースキ）を使用して検出した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ、カリフォルニア州サンディエゴ）を使用して、データを分析して、ＩＣ_５０値を算出した。

【0249】

図１１Ａ、１１Ｂ、及び１１Ｃでは、化合物２は、単剤としてＨ２０３０固形腫瘍スフェロイドにおいて５０％の細胞退縮を誘導した（図１１Ａ）。化合物２は、単剤としてＨ３５８（ＩＣ_５０ １０ｎＭ、図１１Ｂ）及びＨＴ－１０８０（ＩＣ_５０ １２ｎＭ、図１１Ｃ）固形腫瘍スフェロイドを阻害した。

【0250】

図１２Ａ、１２Ｂ、及び１２Ｃでは、化合物２は、標準治療（ＳＯＣ）剤と組み合わせると、スフェロイド成長の阻害に対して、相加性又は相乗効果を示した。代表的なグラフを図１２Ａ、１２Ｂ、及び１２Ｃに示す。図１２Ａは、３．３ｎＭのソトラシブ（菱形）と組み合わせた、又はソトラシブなし（丸）の化合物２力価で９６時間処理したＨ２０３０ ＮＳＣＬＣスフェロイドの細胞増殖実験を表す。図１２Ｂは、３．３ｎＭのソトラシブ（菱形）と組み合わせた、又はソトラシブなし（丸）の化合物２力価で９６時間の処理したＨ３５８ ＮＳＣＬＣスフェロイドの細胞増殖実験を表す。図１２Ｃは、３．７ｎＭのトラメチニブ（三角）と組み合わせた、又はトラメチニブなし（丸）の化合物２力価でで９６時間処理したＨ２０３０ ＮＳＣＬＣスフェロイドの細胞増殖実験を表す。３つの実験全てにおいて、併用処理は、いずれかの単剤と比較して、より大きなスフェロイド退縮をもたらした。
実施例４７． ＨＴ－１０８０ ｓｈＲＮＡノックダウンアッセイ

【0251】

線維肉腫細胞株 ＨＴ－１０８０（カタログ番号ＣＲＬ－５８０７）を、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔ（ＡＴＣＣ、バージニア州マナッサス）から取得した。細胞を、３７℃、５％のＣＯ_２、及び９５％の湿度で、１０％の熱不活化ウシ胎児血清及び１％のペニシリン／ストレプトマイシン／Ｌ－グルタミン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールスバッド）を補充したＲＰＭＩ－１６４０培地中で増殖させ、使用まで５０～８０％のコンフルエントを維持した。ＰＥＲＫ、ＧＣＮ２、又はスクランブル対照を標的とするｓｈＲＮＡを発現する構築物を、ＭＩＳＳＩＯＮ（Ｓｉｇｍａ、ミズーリ州セントルイス）から入手し、各構築物を含むレンチウイルスを社内で製造した。細胞を、完全増殖培地を含む６ウェル組織培養プレート（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、マサチューセッツ州ウォルサム）に４００，０００細胞／ウェルで播種し、３７℃、５％ＣＯ_２、及び湿度９５％で一晩インキュベートして付着させた。翌日、既存の培地を各ウェルから除去し、５μｇ／ｍＬのポリブレン（ＶｅｃｔｏｒＢｕｉｌｄｅｒ、イリノイ州ボストン）を含有する１ｍＬ／ウェルの新鮮な培地を補充した。細胞を、２００μＬ／ウェルの対応するレンチウイルスで２４時間形質導入した後、ウェスタンブロット及び細胞増殖アッセイのために処理した。

【0252】

図１３Ａでは、 ＨＴ－１０８０細胞株における標的化ｓｈＲＮＡを使用して、総ＧＣＮ２を５７％ノックダウンした。ＨＴ－１０８０細胞株における標的化ｓｈＲＮＡを使用して、ＰＥＲＫを６５％ノックダウンした。ＩＳＲマーカー（ＡＴＦ４、ｐＥＩＦ２ａ、及びＣＨＯＰ）の化合物２媒介性上方制御は、ＧＣＮ２又はＰＥＲＫのノックダウンによって下方制御された。図１３Ｂは、ＡＴＦ４シグナルのウェスタンブロット定量を表す。ＡＴＦ４の化合物２媒介性上方制御は、ＧＣＮ２のノックダウンにより７５％低減した。ＡＴＦ４の化合物２媒介性上方制御は、ＰＥＲＫのノックダウンにより５０％低減した。図１３Ｃでは、この固形腫瘍細胞株では、化合物２媒介性スフェロイド成長阻害は、ＧＣＮ２のノックダウンによりに減弱されたが、ＰＥＲＫでは減弱されなかった。
実施例４８． ＨＴ－１０８０線維肉腫異種移植薬物動態／薬力学（ＰＫ／ＰＤ）モデル

【0253】

ＨＴ－１０８０異種移植モデルは、全ての法律、規制及び米国国立衛生研究所（ＮＩＨ）のガイドラインに従い、並びにＬａｂｃｏｒｐ（ミシガン州アナーバー）の動物実験委員会の承認を得て、ＡＡＡＬＡＣ認証施設で実行された。食物及び水は、自由摂取で与えられた。全てのマウスは、少なくとも１日１回臨床徴候について観察された。メスのヌードマウス（６～７週齢）に、２７ゲージの針及びシリンジを使用して、ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水中の２００万個の細胞を、右の上腋窩の真下において皮下接種した。腫瘍量が６日目に平均１５０ｍｍ^３に達したとき、マウスを、全ての群の平均腫瘍量が研究集団の全体の平均腫瘍量の１０％以内となるように各群に無作為に割り当てた。群は、６～１１日目に以下のように処理された：ビヒクル対照（経口投与）（ｎ＝９）；化合物２を１０ｍｇ／ｋｇ ＢＩＤで経口投与（ｎ＝９）；化合物２を５ｍｇ／ｋｇ ＢＩＤで経口投与；化合物２を１１日目の投与の２、６、及び１０時間後、試料採取前に１ｍｇ／ｋｇ ＢＩＤで経口投与（ｎ＝９）。血液サンプルをＫ２ＥＤＴＡチューブに収集し、血漿に処理し、液体窒素中で急速凍結し、次いで－８０℃で保存した。血漿試料を、タンデム質量分析（Ｃａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ、ミシガン州アナーバー）と組み合わせた液体クロマトグラフィーを使用した、薬物動態分析に供した。腫瘍を採取し、コバリスバッグ中で液体窒素上で粉末化し、－８０℃で保存した。組織試料処理のために、約３０ｍｇの腫瘍組織を、３Ｘ Ｈａｌｔプロテアーゼ阻害剤、３Ｘ Ｈａｌｔホスファターゼ阻害剤、３Ｘ Ｓｉｇｍａホスファターゼ阻害剤カクテル２、及び３Ｘ ＥＤＴＡを補充した、ｍＰＥＲ溶解緩衝液（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、マサチューセッツ州ウォルサム）中で氷上で溶解し、次いで、Ｂｅａｄ Ｒｕｐｔｏｒ ９６（Ｏｍｎｉ、ジョージア州ケネソー）を使用して、均質化した。次いで、試料を、２１，０００ｇで、４℃で、１０分間遠心分離した。次いで、清澄化された溶解物を、氷冷した円錐底９６ウェルプレートに移し、密封し、次いで－８０℃で保存した。翌日、試料を氷上で解凍し、その後、３７３９ｇで、４℃で、１０分間遠心分離した。次いで、清澄化した溶解物を、氷冷した丸底９６ウェルプレートに移した。タンパク質濃度は、ＢＣＡタンパク質アッセイキット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、マサチューセッツ州ウォルサム）を使用して、決定した。溶解物は、４Ｘ ＳＤＳ－試料緩衝液及び還元剤中で煮沸する前に、１０μｇ／μｌに正規化された。試料をＳＤＳ－ＰＡＧＥを使用して分離し、次いで、ウェスタンブロットを使用して分析して、ＡＴＦ４、及びベータ－アクチン（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、マサチューセッツ州ダンバース）を定量化した。膜を、ＬＩ－ＣＯＲ Ｏｄｙｓｓｅｙ ＣＬｘ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍ（ＬＩ－ＣＯＲ、リンカーン、ネブラスカ州）で撮像した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ、カリフォルニア州サンディエゴ）を使用してデータを分析して、阻害％を算出した。

【0254】

図１４及び１４Ｂでは、化合物２は、ＨＴ－１０８０線維肉腫ＰＫ／ＰＤ異種移植モデルにおいてＡＴＦ４レベルを上方制御した。図１４Ａに示したように、化合物２は、１０ｍｇ／ｋｇ ＢＩＤで経口投与した場合、ビヒクル対照と比較して４．５倍ＡＴＦ４レベルを上方制御し、５ｍｇ／ｋｇ ＢＩＤで経口投与した場合、ビヒクル対照と比較して３．５倍ＡＴＦ４レベルを上方制御し、１ｍｇ／ｋｇ ＢＩＤで経口投与した場合、ビヒクル対照と比較して３倍ＡＴＦ４レベルを上方制御した。化合物２の対応する血漿レベルを、投与後２、６、及び１０時間のＰＤ時点で決定した（図１４Ｂ）。
実施例４９． ＬｏＶｏ異種移植有効性モデル

【0255】

ＬｏＶｏ異種移植モデルは、全ての法律、規制及び米国国立衛生研究所（ＮＩＨ）のガイドラインに従い、並びにＣｒｏｗｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（中国、太倉）の動物実験委員会の承認を得て、ＡＡＡＬＡＣ認証施設で実行された。食物及び水は、自由摂取で与えられた。全てのマウスは、少なくとも１日１回臨床徴候について観察された。メスのＢａｌｂ／ｃヌードマウス（５～９週齢）に、２７ゲージの針及びシリンジを使用して、ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水中の１０００万個の細胞を、右の上腋窩の真下において皮下接種した。腫瘍量が６日目に平均１００ｍｍ^３に達したとき、マウスを、全ての群の平均腫瘍量が研究集団の全体の平均腫瘍量の１０％以内となるように各群に無作為に割り当てた。群は、６～２７日目に以下のように処理された：ビヒクル対照（経口投与）（ｎ＝９）、化合物２を５ｍｇ／ｋｇ ＢＩＤで経口投与（ｎ＝９）、化合物２を１ｍｇ／ｋｇ ＢＩＤで経口投与。腫瘍体積及び体重は、週に３回測定した。腫瘍量（ｍｇ）は、式：腫瘍量（ｍｇ＝ｍｍ^３）＝（長さ×幅^２）／２によるキャリパー測定値から推定した。
実施例５０． ＨＴ－１０８０異種移植有効性モデル

【0256】

ＨＴ－１０８０異種移植モデルは、全ての法律、規制及び米国国立衛生研究所（ＮＩＨ）のガイドラインに従い、並びにＬａｂｃｏｒｐ（ミシガン州アナーバー）の動物実験委員会の承認を得て、ＡＡＡＬＡＣ認証施設で実行された。食物及び水は、自由摂取で与えられた。全てのマウスは、少なくとも１日１回臨床徴候について観察された。メスのヌードマウス（６～７週齢）に、２７ゲージの針及びシリンジを使用して、ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水中の２００万個の細胞を、右の上腋窩の真下において皮下接種した。腫瘍量が６日目に平均１００ｍｍ^３に達したとき、マウスを、全ての群の平均腫瘍量が研究集団の全体の平均腫瘍量の１０％以内となるように各群に無作為に割り当てた。群は、６～１４日目に以下のように処理された：ビヒクル対照（経口投与）（ｎ＝９）、化合物２を１０ｍｇ／ｋｇ ＢＩＤで経口投与（ｎ＝９）、化合物２を５ｍｇ／ｋｇ ＢＩＤで経口投与。腫瘍体積及び体重は、週に３回測定した。腫瘍量（ｍｇ）は、式：腫瘍量（ｍｇ＝ｍｍ^３）＝（長さ×幅^２）／２によるキャリパー測定値から推定した。

【0257】

図１５Ａに示されるように、化合物２は、ＬｏＶｏ結腸直腸異種移植モデルにおいて腫瘍成長を阻害した。平均腫瘍成長阻害は、化合物２を５ｍｇ／ｋｇ ＢＩＤで２２日間投与した後、６９％であった。図１５Ｂで、化合物２は、ＨＴ－１０８０線維肉腫異種移植モデルの腫瘍成長を阻害した。平均腫瘍成長阻害は、化合物２を１０ｍｇ／ｋｇ ＢＩＤで１４日間投与した後、５０％であった。

【0258】

均等物
具体的な実施形態について論じてきたが、上記の明細書は例示であり、限定するものではない。実施形態の多くの変形が本明細書を検討する際に当業者に明らかになるであろう。開示されるものの全範囲は、特許請求の範囲に加えてそれらの等価物の全範囲、かつ本明細書に加えてかかる変形を参照することにより決定されるはずである。

【0259】

別段の指示がない限り、本明細書及び特許請求の範囲で使用される成分及び反応条件などの量を表す全ての数は、全ての事例において「約」という用語によって修飾されるものとして理解されるべきである。したがって、反対に示されない限り、本明細書及び添付の特許請求の範囲に記載される数値パラメータは、取得されることが求められている所望の特性に応じて変動し得る近似値である。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6A】

【図6B】

【図6C】

【図6D】

【図7A】

【図7B】

【図8】

【図9A】

【図9B】

【図10A】

【図10B】

【図10C】

【図11A】

【図11B】

【図11C】

【図12A】

【図12B】

【図12C】

【図13A】

【図13B】

【図13C】

【図14A】

【図14B】

【図15A】

【図15B】

【配列表】

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【国際調査報告】