特表 2024-544676 ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-12-03

(54)【発明の名称】ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/12 20060101AFI20241126BHJP

   C07K 14/47 20060101ALI20241126BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20241126BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20241126BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20241126BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20241126BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20241126BHJP

   A61K 35/76 20150101ALI20241126BHJP

   A61P 3/06 20060101ALI20241126BHJP

   A61P 9/00 20060101ALI20241126BHJP

   A61P 9/10 20060101ALI20241126BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20241126BHJP

   A61K 38/17 20060101ALI20241126BHJP

   A61K 35/14 20150101ALI20241126BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20241126BHJP

   A61P 19/08 20060101ALI20241126BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20241126BHJP

   A61P 21/00 20060101ALI20241126BHJP

   G01N 33/53 20060101ALI20241126BHJP

   C12N 15/864 20060101ALN20241126BHJP

【ＦＩ】

C12N15/12 ZNA

C07K14/47

C12N15/63 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

A61K35/76

A61P3/06

A61P9/00

A61P9/10

A61P9/10 101

A61K48/00

A61K38/17

A61K35/14

A61P17/00

A61P19/08

A61P25/00

A61P21/00

G01N33/53 M

C12N15/864 100Z

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024533079

(86)(22)【出願日】2022-11-30

(85)【翻訳文提出日】2024-07-29

(86)【国際出願番号】 SG2022050871

(87)【国際公開番号】W WO2023101607

(87)【国際公開日】2023-06-08

(31)【優先権主張番号】10202113391P

(32)【優先日】2021-12-01

(33)【優先権主張国・地域又は機関】SG

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＲＩＴＯＮ

２．ＰＬＵＲＯＮＩＣ

(71)【出願人】

【識別番号】503231882

【氏名又は名称】エージェンシー フォー サイエンス，テクノロジー アンド リサーチ

(71)【出願人】

【識別番号】524207574

【氏名又は名称】ヌエボカール・プライベート・リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100118902

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 修

(74)【代理人】

【識別番号】100106208

【弁理士】

【氏名又は名称】宮前 徹

(74)【代理人】

【識別番号】100196508

【弁理士】

【氏名又は名称】松尾 淳一

(74)【代理人】

【識別番号】100188374

【弁理士】

【氏名又は名称】一宮 維幸

(72)【発明者】

【氏名】リー，イン・ルーン

(72)【発明者】

【氏名】バルク，ブライアン

(72)【発明者】

【氏名】ワーナー，ヘンドリケ

(72)【発明者】

【氏名】タン，ヤン・チョン

(72)【発明者】

【氏名】ラッセル，デビッド・ダブリュー

【テーマコード（参考）】

4B065

4C084

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA90X

4B065AA90Y

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065BC01

4B065CA24

4B065CA44

4C084AA02

4C084AA13

4C084BA01

4C084BA22

4C084BA23

4C084NA14

4C084ZA01

4C084ZA36

4C084ZA45

4C084ZA89

4C084ZA94

4C084ZC33

4C084ZC54

4C087AA01

4C087AA02

4C087BB65

4C087BC83

4C087CA09

4C087CA12

4C087NA14

4C087ZA01

4C087ZA36

4C087ZA45

4C087ZA89

4C087ZA94

4C087ZC33

4C087ZC54

4H045AA10

4H045AA30

4H045BA10

4H045CA40

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドをコードする核酸が開示され、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、かかる核酸およびポリペプチドを含む組成物、ならびにＬＩＮＣ複合体阻害のためおよび疾患／状態の処置予防のためのかかる核酸、ポリペプチドおよび組成物の使用も開示される。特に、ラミノパチーおよび高脂血症を特徴とする疾患の処置のためのそれらの使用が開示される。
【選択図】図２

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドをコードする核酸であって、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、（ｉ）ＳＵＮドメイン含有タンパク質のＣＣ２領域のα３ヘリックスおよびＳＵＮドメインに対応するアミノ酸配列を含む阻害領域、ならびに（ｉｉ）小胞体保持モチーフを含み；
ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、配列番号４３、４５または５８のいずれか１つのアミノ酸配列を含まない、核酸。

【請求項2】

ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドの阻害領域が、
（ｉ）配列番号６６のアミノ酸配列に少なくとも８０％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列；
（ｉｉ）配列番号９４のアミノ酸配列に少なくとも８０％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列；または
（ｉｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列に少なくとも８０％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列；または
（ｉｖ）配列番号６３のアミノ酸配列に少なくとも８０％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列；または
（ｖ）配列番号６４のアミノ酸配列に少なくとも８０％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列；または
（ｖｉ）配列番号６７のアミノ酸配列に少なくとも８０％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列
から本質的になる、請求項１に記載の核酸。

【請求項3】

ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドが、
（ｉ）配列番号７２のアミノ酸配列に少なくとも８０％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列；
（ｉｉ）配列番号９５のアミノ酸配列に少なくとも８０％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列；または
（ｉｉｉ）配列番号７１のアミノ酸配列に少なくとも８０％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列；または
（ｉｖ）配列番号６９のアミノ酸配列に少なくとも８０％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列；または
（ｖ）配列番号７０のアミノ酸配列に少なくとも８０％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列；または
（ｖｉ）配列番号７３のアミノ酸配列に少なくとも８０％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列
を含む、またはそれから本質的になる、請求項１または請求項２に記載の核酸。

【請求項4】

ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドが、シグナルペプチドを含む、請求項１から３のいずれか一項に記載の核酸。

【請求項5】

遺伝子治療として、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドをコードする核酸を送達するために好適なベクターである、請求項１から４のいずれか一項に記載の核酸。

【請求項6】

ベクターが、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターである、請求項５に記載の核酸。

【請求項7】

（ｉ）ＳＵＮドメイン含有タンパク質のＣＣ２領域のα３ヘリックスおよびＳＵＮドメインに対応するアミノ酸配列を含む阻害領域、ならびに（ｉｉ）小胞体保持モチーフを含む、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドであって、
配列番号４３または４５のアミノ酸配列を含まない、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド。

【請求項8】

ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドの阻害領域が、
（ｉ）配列番号６６のアミノ酸配列に少なくとも８０％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列；
（ｉｉ）配列番号９４のアミノ酸配列に少なくとも８０％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列；または
（ｉｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列に少なくとも８０％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列；または
（ｉｖ）配列番号６３のアミノ酸配列に少なくとも８０％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列；または
（ｖ）配列番号６４のアミノ酸配列に少なくとも８０％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列；または
（ｖｉ）配列番号６７のアミノ酸配列に少なくとも８０％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列
から本質的になる、請求項７に記載のＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド。

【請求項9】

（ｉ）配列番号７２のアミノ酸配列に少なくとも８０％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列；
（ｉｉ）配列番号９５のアミノ酸配列に少なくとも８０％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列；または
（ｉｉｉ）配列番号７１のアミノ酸配列に少なくとも８０％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列；または
（ｉｖ）配列番号６９のアミノ酸配列に少なくとも８０％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列；または
（ｖ）配列番号７０のアミノ酸配列に少なくとも８０％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列；または
（ｖｉ）配列番号７３のアミノ酸配列に少なくとも８０％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列
を含む、またはそれから本質的になる、請求項７または請求項８に記載のＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド。

【請求項10】

シグナルペプチドを含む、請求項７から９のいずれか一項に記載のＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド。

【請求項11】

ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドを同定するための方法であって、
候補ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドをコードする核酸を導入するステップであって、候補ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ＳＵＮドメイン含有タンパク質のＳＵＮドメインに対応するアミノ酸配列を含む、ステップ；および
続いて、細胞を分析して、ＳＵＮドメイン含有タンパク質に対する相互作用パートナーの細胞内局在を決定するステップ
を含み、ＳＵＮドメイン含有タンパク質に対する相互作用パートナーの細胞内局在の変化が検出される場合に、候補ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドがＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドであると決定される、方法。

【請求項12】

ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドを同定するための方法であって、
候補ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドをコードする核酸を導入するステップであって、候補ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ＫＡＳＨドメイン含有タンパク質のＫＡＳＨドメインに対応するアミノ酸配列を含む、ステップ；および
続いて、細胞を分析して、ＫＡＳＨドメイン含有タンパク質に対する相互作用パートナーの細胞内局在を決定するステップ
を含み、ＫＡＳＨドメイン含有タンパク質に対する相互作用パートナーの細胞内局在の変化が検出される場合に、候補ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドがＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドであると決定される、方法。

【請求項13】

ＳＵＮ／ＫＡＳＨドメイン含有タンパク質に対する相互作用パートナーの小胞体に局在する割合の増加が検出される場合に、候補ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドがＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドであると決定される、請求項１１または請求項１２に記載の方法。

【請求項14】

請求項１１から１３のいずれか一項に記載の方法によって同定されるＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド。

【請求項15】

請求項７から１０または請求項１４のいずれか一項に記載のＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドをコードする核酸。

【請求項16】

遺伝子治療として、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドをコードする核酸を送達するために好適なベクターである、請求項１５に記載の核酸を含むベクター。

【請求項17】

アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターである、請求項１６に記載のベクター。

【請求項18】

請求項１から６もしくは請求項１５のいずれか一項に記載の核酸、請求項７から１０もしくは請求項１４のいずれか一項に記載のＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、または請求項１６もしくは請求項１７に記載のベクターを含む細胞。

【請求項19】

請求項１から６もしくは請求項１５のいずれか一項に記載の核酸、請求項７から１０もしくは請求項１４のいずれか一項に記載のＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、請求項１６もしくは請求項１７に記載のベクター、または請求項１８に記載の細胞を含む医薬組成物。

【請求項20】

医学的処置または予防の方法における使用のための、請求項１から６もしくは請求項１５のいずれか一項に記載の核酸、請求項７から１０もしくは請求項１４のいずれか一項に記載のＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、請求項１６もしくは請求項１７に記載のベクター、請求項１８に記載の細胞または請求項１９に記載の医薬組成物。

【請求項21】

ラミノパチーを処置するまたは予防する方法における使用のための、請求項１から６もしくは請求項１５のいずれか一項に記載の核酸、請求項７から１０もしくは請求項１４のいずれか一項に記載のＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、請求項１６もしくは請求項１７に記載のベクター、請求項１８に記載の細胞または請求項１９に記載の医薬組成物。

【請求項22】

ラミノパチーを処置するまたは予防するための医薬の製造における、請求項１から６もしくは請求項１５のいずれか一項に記載の核酸、請求項７から１０もしくは請求項１４のいずれか一項に記載のＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、請求項１６もしくは請求項１７に記載のベクター、請求項１８に記載の細胞または請求項１９に記載の医薬組成物の使用。

【請求項23】

ラミノパチーを処置するまたは予防する方法であって、請求項１から６もしくは請求項１５のいずれか一項に記載の核酸、請求項７から１０もしくは請求項１４のいずれか一項に記載のＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、請求項１６もしくは請求項１７に記載のベクター、請求項１８に記載の細胞または請求項１９に記載の医薬組成物の治療または予防有効量を対象に投与するステップを含む、方法。

【請求項24】

ラミノパチーが、筋症、心筋症、拡張型心筋症、筋ジストロフィー、心筋ジストロフィー、骨格筋ジストロフィー、早老症、神経障害、脂肪萎縮症、骨格異常形成、リポジストロフィー、白質ジストロフィーまたは皮膚症のうちの１つまたは複数により特徴付けられる、請求項２１に記載の使用のための核酸、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、ベクター、細胞もしくは医薬組成物、請求項２２に記載の使用、または請求項２３に記載の方法。

【請求項25】

ラミノパチーが、ＬＭＮＡへの突然変異と関連している、請求項２１から２４のいずれか一項に記載の使用のための核酸、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、ベクター、細胞もしくは医薬組成物、使用または方法。

【請求項26】

ラミノパチーが、ハッチンソン・ギルフォード・プロジェリア症候群；拡張型心筋症；筋ジストロフィー、先天的、Ｌｍｎａ関連；エメリー・ドレフュス型筋ジストロフィー２、常染色体優性；筋ジストロフィー；ａ型リポジストロフィーを伴う下顎末端異形成症；心筋症、拡張型、１ａ；シャルコー・マリー・トゥース病；肢帯型筋ジストロフィー；心筋症、拡張型、高ゴナドトロピン性性腺機能低下症を伴う；エメリー・ドレフュス型筋ジストロフィー３、常染色体劣性；リポジストロフィー、家族性部分型、２型；エメリー・ドレフュス型筋ジストロフィー；シャルコー・マリー・トゥース病、軸索、２ｂ１型；心臓－上肢症候群、スロベニア型；老化；家族性部分型リポジストロフィー；拘束性皮膚障害、致死性；不整脈原性右室心筋症；歯科疾患；心臓病；ウェルナー症候群；肥大型心筋症；左室心筋緻密化障害；房室ブロック；石灰沈着；先端骨溶解症；常染色体優性肢帯型筋ジストロフィー；真性糖尿病、インスリン非依存性；骨粗鬆症；心房細動；心房静止１；黒色皮膚腫；心伝導障害；カテコールアミン誘発性多形性心室性頻拍；小下顎症、難聴、プロゲリア様症状、およびリポジストロフィー症候群；洞不全症候群；ペルゲル・フエット核異常；シャルコー・マリー・トゥース病、軸索、２ｅ型；先天性全身型リポジストロフィー；拘束型心筋症；先天性筋線維タイプ不均等症；リポジストロフィー、先天性全身型、１型；筋原線維ミオパチー；リポジストロフィー、家族性部分型、１型；軸索型ニューロパチー；非定型ウェルナー症候群；卵巣嚢胞腺腫；ファンコニ貧血、相補群ａ；肥満度指数量的形質遺伝子座１１；皮膚疾患；強直性脊椎筋ジストロフィー１；神経筋疾患；ハーラーマン・ストライフ症候群；ベスレムミオパチー１；後天性全身型リポジストロフィー；心筋症、拡張型、１ｅ；リポジストロフィー、先天性全身型、４型；未分化多形肉腫；リポジストロフィー、家族性部分型、３型；筋ジストロフィー、先天性メロシン欠損型、１ａ；近位脊髄性筋萎縮症；筋ジストロフィー・ジストログリカノパチー、Ｂ型、５；筋ジストロフィー、先天性、１ｂ；レイノルズ症候群；ウィダマン・ラウテンストラウフ症候群；エメリー・ドレフュス型筋ジストロフィー１、Ｘ連鎖型；リポジストロフィー、先天性全身型、２型；単一遺伝子糖尿病；心筋症、拡張型、１ｄ；ミオパチー、近位、および眼筋麻痺；筋組織病；リポジストロフィー、家族性部分型、４型；心筋症、拡張型、１ｈ；第２度房室ブロック；正中神経障害；内因性心筋症；女性生殖器の脱出；完全全身型リポジストロフィー；強直性脊椎筋ジストロフィー；エメリノパチー；尺骨神経障害；肢帯型筋ジストロフィー１ｂ型；Ｌｍｎａ関連拡張型心筋症；骨盤筋消耗；全身型リポジストロフィー関連早老症候群；筋疾患；心筋症、拡張型、１ｂ；常染色体遺伝病；家族性孤発性不整脈原性心室異形成、右優性型；家族性孤発性不整脈原性心室異形成、両室型；家族性孤発性不整脈原性心室異形成、左優性型；Ｌｍｎａ関連心臓皮膚早老症症候群；ならびに常染色体半優性重症型リポジストロフィーラミノパチーから選択される、請求項２１から２５のいずれか一項に記載の使用のための核酸、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、ベクター、細胞もしくは医薬組成物、使用または方法。

【請求項27】

高脂血症を特徴とする疾患を処置するまたは予防する方法における使用のための、請求項１から６もしくは請求項１５のいずれか一項に記載の核酸、請求項７から１０もしくは請求項１４のいずれか一項に記載のＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、請求項１６もしくは請求項１７に記載のベクター、請求項１８に記載の細胞または請求項１９に記載の医薬組成物。

【請求項28】

高脂血症を特徴とする疾患を処置するまたは予防するための医薬の製造における、請求項１から６もしくは請求項１５のいずれか一項に記載の核酸、請求項７から１０もしくは請求項１４のいずれか一項に記載のＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、請求項１６もしくは請求項１７に記載のベクター、請求項１８に記載の細胞または請求項１９に記載の医薬組成物の使用。

【請求項29】

高脂血症を特徴とする疾患を処置するまたは予防する方法であって、請求項１から６もしくは請求項１５のいずれか一項に記載の核酸、請求項７から１０もしくは請求項１４のいずれか一項に記載のＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、請求項１６もしくは請求項１７に記載のベクター、請求項１８に記載の細胞または請求項１９に記載の医薬組成物の治療または予防有効量を対象に投与するステップを含む、方法。

【請求項30】

高脂血症を特徴とする疾患が、アテローム性動脈硬化症、心血管疾患、脳卒中および家族性高脂血症から選択される、請求項２７に記載の使用のための核酸、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、ベクター、細胞もしくは医薬組成物、請求項２８に記載の使用または請求項２９に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本出願は、２０２１年１２月１日に出願されたＳＧ １０２０２１１３３９１Ｐの優先権を主張し、その内容および要素は、全ての目的に関して参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

本開示は、分子および細胞生物学の分野に関し、医学的処置および予防の方法にも関する。

【背景技術】

【0003】

ラミンＡ／Ｃは、核内膜の内側にある核ラミナの成分であり、核に機械的支持をもたらすと考えられている（ＢｕｒｋｅおよびＳｔｅｗａｒｔ、２０１３年）。ラミンＡおよびＣをコードするＬＭＮＡにおける突然変異は、ラミノパチーとして公知の多数の疾患を生じる。

【0004】

核骨格および細胞骨格のリンカー（ＬＩＮＣ）の複合体の破壊は、ラミノパチーの処置のための治療戦略として近年提唱された。ＬＩＮＣ複合体は、核内膜のＳＵＮドメインタンパク質および核外膜のＫＡＳＨドメインタンパク質からなる（ＬｅｅおよびＢｕｒｋｅ、２０１８年）。パラロガスなＳｕｎ１およびＳｕｎ２は、主要なＳＵＮドメインタンパク質であり、哺乳動物の組織において広範に発現される。ＫＡＳＨドメインタンパク質のうちで、Ｎｅｓｐｒｉｎ－１、Ｎｅｓｐｒｉｎ－２およびＮｅｓｐｒｉｎ－３は、最も広範に発現される。

【0005】

Ｃｒｉｓｐら、２００６年は、マウスＳｕｎ１（ＤＮＳｕｎ１）タンパク質のドミナントネガティブ形態の過剰発現を介するＬＩＮＣ複合体破壊を記載している。ＤＮＳｕｎ１は、Ｓｕｎ１の内腔ドメイン全体、Ｎ末端シグナル配列およびＣ末端ＫＤＥＬゴルジ体からＥＲへの回収配列を含む。これは、おそらく、ＫＡＳＨドメイン含有タンパク質への結合について内在性ＳＵＮドメイン含有タンパク質（例えば、Ｓｕｎ１およびＳｕｎ２）と競合することによって、ＬＩＮＣ複合体内のＳＵＮ－ＫＡＳＨ相互作用を破壊することによって機能すると考えられる。野生型Ｓｕｎ１とは異なって、ＤＮＳｕｎ１は、核ラミナに係留されず、それにより、ＫＡＳＨドメインタンパク質に伝達される細胞骨格からの力は、ＤＮＳｕｎ１によって核内部にさらに伝達されない。ＤＮＳｕｎ１のヒト化バージョンは、ＷＯ ２０１９／１４３３００ Ａ１に記載されている。

【0006】

ＤＮＳＵＮ１（約１．５ｋｂ）のコード配列の比較的大きなサイズは、その送達、例えば遺伝子治療として、に課題を提示する。実例として、自己相補性アデノ随伴ウイルスベクター（ｓｃＡＡＶ）系では、ウイルス末端逆位配列（ＩＴＲｓ）、プロモーターおよび他の調節配列、ならびにそれ自体のコード配列を含む導入遺伝子全体は、２．３ｋｂを超えられない。

【0007】

ＳＵＮドメイン含有タンパク質のＣ末端ＳＵＮドメインは、ＫＡＳＨドメイン含有タンパク質との相互作用のために必要であるが不十分であることが示されており、上流螺旋およびコイル領域によって媒介されるＳＵＮドメインの三量体化は、ＫＡＳＨ相互作用のために必要であると考えられている（Ｓｏｓａら、２０１２年；Ｗａｎｇら、２０１２年；Ｚｈｏｕら、２０１２年；Ｊａｈｅｄら、２０１８年ｂ；Ｎｉｅら、２０１６年；Ｘｕら、２０１８年）。

【0008】

Ｚｈｏｕら、２０１２年およびＳｏｓａら、２０１２年は、ＣＣ１ドメインの開始より前で切断された内腔ＳＵＮ構築物がＫＡＳＨドメインタンパク質と会合することができたことを実証した。Ｚｈｏｕら、２０１２年、Ｗａｎｇら、２０１２年、Ｊａｈｅｄら、２０１８年ｂおよびＮｉｅら、２０１６年は、ＣＣ１－ＣＣ２－ＳＵＮを含む構築物がゲルろ過アッセイにおいて三量体を形成できるか、またはプルダウンアッセイにおいてＫＡＳＨドメインと相互作用できたことを示した。Ｚｈｏｕら、２０１２年およびＪａｈｅｄら、２０１８年ｂは、ＣＣ１ドメインの中央で始まり、ＣＣ２およびＳＵＮを包含する切断は、プルダウンアッセイにおいてＫＡＳＨと相互作用せず、ゲルろ過アッセイにおいて単量体を形成したことをさらに示した。Ｗａｎｇら、２０１２年およびＮｉｅら、２０１６年は、ＣＣ２－ＳＵＮ構築物が、同様にｉｎ ｖｉｔｒｏでＫＡＳＨと相互作用せず、ゲルろ過アッセイにおいて単量体だけを形成したことを示した。

【0009】

この研究の大部分はＳＵＮ２に注目したが、ＳＵＮ１とＳＵＮ２との間、特にそれらの内腔ドメインにおいては高い程度の配列保存があり、Ｓｕｎ１それ自体が調査された場合、Ｓｕｎ１とＳｕｎ２との間に構造レベルで明確な保存がある（Ｘｕら、２０１８年；ＧｕｒｕｓａｒａｎおよびＤａｖｉｅｓ、２０２１年）。

【0010】

重要なことに、内腔ドメインのある特定の切断を含むＳＵＮタンパク質バリアントが三量体を形成でき、ＫＡＳＨドメインタンパク質と相互作用できるかどうかについて矛盾する報告がある（Ｊａｈｅｄら、２０１８年ａ）。

【0011】

Ｚｈｏｕら、２０１２年およびＷａｎｇら、２０１２年の研究では、Ｇ５２２からＨ７１７位からなるＳｕｎ２切断バリアントは、ＫＡＳＨドメイン含有タンパク質と相互作用することができ（共免疫沈降分析によって決定された）、Ｖ５２０からＨ７１７位からなるＳｕｎ２切断バリアントは、三量体を形成することができ、Ｘ線結晶学によってＳＵＮ三量体構造を解析するために使用された（ＳＵＮ三量体の形成は、ＫＡＳＨドメイン含有タンパク質への結合のために必要であると考えられる）。Ｎｉｅら、２０１６年は、ＣＣ２－ＳＵＮからのα１（α２－α３－ＳＵＮ）またはα１およびα２の両方（α３－ＳＵＮ）のヘリックスの除去がＣＣ２の自己阻害機能を消失させ、生じたＳｕｎ２構築物がＫＡＳＨドメインタンパク質と相互作用できたことを決定した。興味深いことに、α２－α３－ＳＵＮはゲルろ過アッセイにおいて三量体を形成したが、α３－ＳＵＮは単量体と三量体との混合物であった。

【0012】

対照的に、Ｓｏｓａら、２０１２年は、５０７から７１７位からなるＳＵＮ２切断型バリアント（α２－α３－ＳＵＮに対応する）は、ＫＡＳＨドメインに結合することができた一方で、さらなる切断は、ＫＡＳＨドメインへの弱い（ＳＵＮ２（５１４～７１７）切断型バリアントの場合）またはごくわずかな（α３－ＳＵＮに対応するＳＵＮ２（５２１～７１７）切断型バリアントの場合）結合を生じた。

【0013】

文献は、ＳＵＮタンパク質内腔ドメインの切断がＫＡＳＨ結合にどのように影響を与えるかを検討したが、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの三量体形成およびＫＡＳＨドメイン結合が、細胞レベルでのＬＩＮＣ複合体を破壊する能力の予測であるかどうかは不明である。

【0014】

したがって、ＳＵＮ内腔領域の切断がＬＩＮＣ複合体破壊のための作用因子として使用され得るかはまだ不明である。

【発明の概要】

【0015】

第一の態様では、本開示は、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドをコードする核酸であって、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、（ｉ）ＳＵＮドメイン含有タンパク質のＣＣ２領域のα３ヘリックスおよびＳＵＮドメインに対応するアミノ酸配列を含む阻害領域、ならびに（ｉｉ）小胞体保持モチーフを含み；ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、配列番号４３、４５または５８のいずれか１つのアミノ酸配列を含まない、核酸を提供する。

【0016】

一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドの阻害領域は、配列番号４４または４６のアミノ酸配列から本質的にならない。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドの阻害領域は、配列番号４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５９、６０、６１または６２のいずれか１つのアミノ酸配列から本質的にならない。

【0017】

一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドの阻害領域は、
（ｉ）配列番号６６のアミノ酸配列に少なくとも８０％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列；
（ｉｉ）配列番号９４のアミノ酸配列に少なくとも８０％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列；または
（ｉｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列に少なくとも８０％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列；または
（ｉｖ）配列番号６３のアミノ酸配列に少なくとも８０％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列；または
（ｖ）配列番号６４のアミノ酸配列に少なくとも８０％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列；または
（ｖｉ）配列番号６７のアミノ酸配列に少なくとも８０％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列
から本質的になる。

【0018】

一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、
（ｉ）配列番号７２のアミノ酸配列に少なくとも８０％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列；
（ｉｉ）配列番号９５のアミノ酸配列に少なくとも８０％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列；または
（ｉｉｉ）配列番号７１のアミノ酸配列に少なくとも８０％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列；または
（ｉｖ）配列番号６９のアミノ酸配列に少なくとも８０％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列；または
（ｖ）配列番号７０のアミノ酸配列に少なくとも８０％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列；または
（ｖｉ）配列番号７３のアミノ酸配列に少なくとも８０％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列
を含む、またはそれから本質的になる。

【0019】

一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、シグナルペプチドを含む。一部の実施形態では、核酸は、遺伝子治療として、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドをコードする核酸を送達するために好適なベクターである。一部の実施形態では、ベクターは、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターである。

【0020】

本開示は、（ｉ）ＳＵＮドメイン含有タンパク質のＣＣ２領域のα３ヘリックスおよびＳＵＮドメインに対応するアミノ酸配列を含む阻害領域、ならびに（ｉｉ）小胞体保持モチーフを含む、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドであって、
配列番号４３または４５のアミノ酸配列を含まない、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドも提供する。

【0021】

一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドの阻害領域は、配列番号４４または４６のアミノ酸配列から本質的にならない。一部の実施形態では、請求項９または請求項１０に記載のＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドの阻害領域であって、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドの阻害領域は、配列番号４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１または６２のいずれか１つのアミノ酸配列から本質的にならない。

【0022】

一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドの阻害領域は、
（ｉ）配列番号６６のアミノ酸配列に少なくとも８０％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列；
（ｉｉ）配列番号９４のアミノ酸配列に少なくとも８０％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列；または
（ｉｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列に少なくとも８０％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列；または
（ｉｖ）配列番号６３のアミノ酸配列に少なくとも８０％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列；または
（ｖ）配列番号６４のアミノ酸配列に少なくとも８０％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列；または
（ｖｉ）配列番号６７のアミノ酸配列に少なくとも８０％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列
から本質的になる。

【0023】

一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、
（ｉ）配列番号７２のアミノ酸配列に少なくとも８０％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列；
（ｉｉ）配列番号９５のアミノ酸配列に少なくとも８０％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列；または
（ｉｉｉ）配列番号７１のアミノ酸配列に少なくとも８０％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列；または
（ｉｖ）配列番号６９のアミノ酸配列に少なくとも８０％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列；または
（ｖ）配列番号７０のアミノ酸配列に少なくとも８０％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列；または
（ｖｉ）配列番号７３のアミノ酸配列に少なくとも８０％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列
を含む、またはそれから本質的になる。

【0024】

一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、シグナルペプチドを含む。

【0025】

本開示は、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドを同定するための方法であって、
候補ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドをコードする核酸を導入するステップであって、候補ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ＳＵＮドメイン含有タンパク質のＳＵＮドメインに対応するアミノ酸配列を含む、ステップ；および
続いて、細胞を分析して、ＳＵＮドメイン含有タンパク質に対する相互作用パートナーの細胞内局在を決定するステップ
を含み、ＳＵＮドメイン含有タンパク質に対する相互作用パートナーの細胞内局在の変化が検出される場合に、候補ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドがＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドであると決定される、方法も提供する。

【0026】

本開示は、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドを同定するための方法であって、
候補ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドをコードする核酸を導入するステップであって、候補ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ＫＡＳＨドメイン含有タンパク質のＫＡＳＨドメインに対応するアミノ酸配列を含む、ステップ；および
続いて、細胞を分析して、ＫＡＳＨドメイン含有タンパク質に対する相互作用パートナーの細胞内局在を決定するステップ
を含み、ＫＡＳＨドメイン含有タンパク質に対する相互作用パートナーの細胞内局在の変化が検出される場合に、候補ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドがＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドであると決定される、方法も提供する。

【0027】

一部の実施形態では、ＳＵＮ／ＫＡＳＨドメイン含有タンパク質に対する相互作用パートナーの小胞体に局在する割合の増加が検出される場合に、候補ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドはＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドであると決定される。

【0028】

本開示は、本開示に従った方法によって同定されたＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドも提供する。

【0029】

本開示は、本開示に従ったＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドをコードする核酸も提供する。

【0030】

本開示は、本開示に従った核酸を含むベクターであって、遺伝子治療として、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドをコードする核酸を送達するために好適なベクターであるベクターも提供する。

【0031】

一部の実施形態では、ベクターはアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターである。

【0032】

本開示は、本開示に従った核酸、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドまたはベクターを含む細胞も提供する。

【0033】

本開示は、本開示に従った核酸、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、ベクターまたは細胞を含む医薬組成物も提供する。

【0034】

本開示は、医学的処置または予防の方法における使用のための、本開示に従った核酸、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、ベクター、細胞または医薬組成物も提供する。

【0035】

本開示は、ラミノパチーを処置するまたは予防する方法における使用のための、本開示に従った核酸、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、ベクター、細胞または医薬組成物も提供する。

【0036】

本開示は、ラミノパチーを処置するまたは予防するための医薬の製造における、本開示に従った核酸、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、ベクター、細胞または医薬組成物の使用も提供する。

【0037】

本開示は、ラミノパチーを処置するまたは予防する方法であって、本開示に従った核酸、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、ベクター、細胞または医薬組成物の治療または予防有効量を対象に投与するステップを含む、方法も提供する。

【0038】

本開示の種々の態様に従った一部の実施形態では、ラミノパチーは、筋症、心筋症、拡張型心筋症、筋ジストロフィー、心筋ジストロフィー、骨格筋ジストロフィー、早老症、神経障害、脂肪萎縮症、骨格異常形成、リポジストロフィー、白質ジストロフィーまたは皮膚症のうちの１つまたは複数により特徴付けられる。一部の実施形態では、ラミノパチーはＬＭＮＡへの突然変異と関連している。一部の実施形態では、ラミノパチーは、ハッチンソン・ギルフォード・プロジェリア症候群；拡張型心筋症；筋ジストロフィー、先天的、Ｌｍｎａ関連；エメリー・ドレフュス型筋ジストロフィー２、常染色体優性；筋ジストロフィー；ａ型リポジストロフィーを伴う下顎末端異形成症；心筋症、拡張型、１ａ；シャルコー・マリー・トゥース病；肢帯型筋ジストロフィー；心筋症、拡張型、高ゴナドトロピン性性腺機能低下症を伴う；エメリー・ドレフュス型筋ジストロフィー３、常染色体劣性；リポジストロフィー、家族性部分型、２型；エメリー・ドレフュス型筋ジストロフィー；シャルコー・マリー・トゥース病、軸索、２ｂ１型；心臓－上肢症候群、スロベニア型；老化；家族性部分型リポジストロフィー；拘束性皮膚障害、致死性；不整脈原性右室心筋症；歯科疾患；心臓病；ウェルナー症候群；肥大型心筋症；左室心筋緻密化障害；房室ブロック；石灰沈着；先端骨溶解症；常染色体優性肢帯型筋ジストロフィー；真性糖尿病、インスリン非依存性；骨粗鬆症；心房細動；心房静止１；黒色皮膚腫；心伝導障害；カテコールアミン誘発性多形性心室性頻拍；小下顎症、難聴、プロゲリア様症状、およびリポジストロフィー症候群；洞不全症候群；ペルゲル・フエット核異常；シャルコー・マリー・トゥース病、軸索、２ｅ型；先天性全身型リポジストロフィー；拘束型心筋症；先天性筋線維タイプ不均等症；リポジストロフィー、先天性全身型、１型；筋原線維ミオパチー；リポジストロフィー、家族性部分型、１型；軸索型ニューロパチー；非定型ウェルナー症候群；卵巣嚢胞腺腫；ファンコニ貧血、相補群ａ；肥満度指数量的形質遺伝子座１１；皮膚疾患；強直性脊椎筋ジストロフィー１；神経筋疾患；ハーラーマン・ストライフ症候群；ベスレムミオパチー１；後天性全身型リポジストロフィー；心筋症、拡張型、１ｅ；リポジストロフィー、先天性全身型、４型；未分化多形肉腫；リポジストロフィー、家族性部分型、３型；筋ジストロフィー、先天性メロシン欠損型、１ａ；近位脊髄性筋萎縮症；筋ジストロフィー・ジストログリカノパチー、Ｂ型、５；筋ジストロフィー、先天性、１ｂ；レイノルズ症候群（Ｒｅｙｎｏｌｄｓ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ）；ウィダマン・ラウテンストラウフ症候群；エメリー・ドレフュス型筋ジストロフィー１、Ｘ連鎖型；リポジストロフィー、先天性全身型、２型；単一遺伝子糖尿病；心筋症、拡張型、１ｄ；ミオパチー、近位、および眼筋麻痺；筋組織病；リポジストロフィー、家族性部分型、４型；心筋症、拡張型、１ｈ；第２度房室ブロック；正中神経障害；内因性心筋症；女性生殖器の脱出；完全全身型リポジストロフィー；強直性脊椎筋ジストロフィー；エメリノパチー；尺骨神経障害；肢帯型筋ジストロフィー１ｂ型；Ｌｍｎａ関連拡張型心筋症；骨盤筋消耗；全身型リポジストロフィー関連早老症候群；筋疾患；心筋症、拡張型、１ｂ；常染色体遺伝病；家族性孤発性不整脈原性心室異形成、右優性型；家族性孤発性不整脈原性心室異形成、両室型；家族性孤発性不整脈原性心室異形成、左優性型；Ｌｍｎａ関連心臓皮膚早老症症候群；ならびに常染色体半優性重症型リポジストロフィーラミノパチーから選択される。

【0039】

本開示は、高脂血症を特徴とする疾患を処置するまたは予防する方法における使用のための、本開示に従った核酸、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、ベクター、細胞または医薬組成物も提供する。

【0040】

本開示は、高脂血症を特徴とする疾患を処置するまたは予防するための医薬の製造における、本開示に従った核酸、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、ベクター、細胞または医薬組成物の使用も提供する。

【0041】

本開示は、高脂血症を特徴とする疾患を処置するまたは予防する方法であって、本開示に従った核酸、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、ベクター、細胞または医薬組成物の治療または予防有効量を対象に投与するステップを含む、方法も提供する。

【0042】

本開示の種々の態様に従った一部の実施形態では、高脂血症を特徴とする疾患は、アテローム性動脈硬化症、心血管疾患、脳卒中および家族性高脂血症から選択される。

【図面の簡単な説明】

【0043】

【図1】マウスＳｕｎ１、マウスＳｕｎ２、ヒトＳＵＮ１およびヒトＳＵＮ２のアミノ酸配列のアラインメントを示す図。

【図2】ヒトＳＵＮ１タンパク質および実施例１で特徴付けられた種々の構築物（すなわち、構築物（Ａ）から（Ｈ））の模式図。

【図3】小胞体に局在するＮｅｓｐｒｉｎ－２の増加によって決定される、さまざまな推定ドミナントネガティブＳＵＮ１構築物が、ＬＩＮＣ複合体破壊を達成する能力の分析結果を示す模式図および顕微鏡像。

【図4】ヒトＳＵＮ１タンパク質および実施例５で特徴付けられた種々の構築物（すなわち、構築物Ａ、Ｄ、Ｄ２、ＥおよびＧ）の模式図。

【図5-1】拡張型心筋症のマウスモデルにおける、さまざまな推定ドミナントネガティブＳＵＮ１構築物の治療有効性の分析の結果を示すグラフ。

【図5-2】拡張型心筋症のマウスモデルにおける、さまざまな推定ドミナントネガティブＳＵＮ１構築物の治療有効性の分析の結果を示すグラフ。

【図5-3】拡張型心筋症のマウスモデルにおける、さまざまな推定ドミナントネガティブＳＵＮ１構築物の治療有効性の分析の結果を示すグラフ。

【図6-1】拡張型心筋症のマウスモデルにおけるさまざまな推定ドミナントネガティブＳＵＮ１構築物の治療有効性の分析の結果を示すグラフ。

【図6-2】拡張型心筋症のマウスモデルにおけるさまざまな推定ドミナントネガティブＳＵＮ１構築物の治療有効性の分析の結果を示すグラフ。

【図6-3】拡張型心筋症のマウスモデルにおけるさまざまな推定ドミナントネガティブＳＵＮ１構築物の治療有効性の分析の結果を示すグラフ。

【発明を実施するための形態】

【0044】

説明
本開示は、ＳＵＮドメイン含有タンパク質の内腔ドメインの種々の切断型バリアントがＫＡＳＨドメイン含有タンパク質と会合することができず－それによりＬＩＮＣ複合体阻害剤として機能しないと予測される－という先行技術における報告にもかかわらず、広範なそのような切断型バリアントがＬＩＮＣ複合体阻害剤として実際に機能するとの発明者らの予想外の発見に基づいている。

【0045】

ＬＩＮＣ複合体破壊が、内在性ＫＡＳＨドメイン含有タンパク質の正常な細胞内局在の破壊（具体的には、ＫＡＳＨドメイン含有タンパク質は、ＬＩＮＣ複合体破壊後に核エンベロープより小胞体に局在する）の観察を通じて決定される細胞ベースのアッセイを使用して、本発明者らは、ＳＵＮドメイン含有タンパク質の内腔ドメインのさまざまな異なる切断に対応し、それらのさまざまな構造モチーフ（すなわち、コイルドコイル領域、それらのαヘリックス）を含むポリペプチドが、ＬＩＮＣ複合体破壊に影響を与えることができることを実証する。本発明者らは、ＡＡＶを経て遺伝子治療として送達された種々の異なるドミナントネガティブＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドが、Ｌｍｎａの心筋細胞－特異的欠失によって確立されたＤＣＭのマウスモデルにおいてｉｎ ｖｉｖｏで拡張型心筋症（ＤＣＭ）の病態を低減することをさらに確認する。

【0046】

本開示は、既存のおよび将来の遺伝子治療技術と関連する適用のために好適である多数のＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドを利用可能にする。特に、ＷＯ ２０１９／１４３３００ Ａ１に記載されるドミナントネガティブＳＵＮドメイン含有タンパク質構築物よりもサイズが小さいＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、約２．３ｋｂのパッケージング限界を有するｓｃＡＡＶベクター等の中程度のパッケージング限界を有するベクター系において使用されることにさらに好適である。

【0047】

ＬＩＮＣ複合体構造および機能
核骨格－細胞骨格リンカー（ＬＩＮＣ）複合体は、ＳＵＮドメイン含有タンパク質およびＫＡＳＨドメイン含有タンパク質を含むポリペプチド複合体である。ＬＩＮＣ複合体構造は、例えば、Ｓｏｓａら、Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｓｔｒｕｃｔ Ｂｉｏｌ．（２０１３）２３（２）：２８５～９１およびＨｉｅｄａ、Ｃｅｌｌｓ（２０１７）６（１）：３に概説されており、両方が参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0048】

ＬＩＮＣ複合体は、核エンベロープの核内膜（ＩＮＭ）と核外膜（ＯＮＭ）とを接続する。ＳＵＮドメイン含有タンパク質は、ＩＮＭに広がり、ＩＮＭの核質側の核ラミンおよびクロマチン結合タンパク質と、ならびにＩＮＭの核周囲側のＫＡＳＨドメイン含有タンパク質と会合する。ＫＡＳＨドメイン含有タンパク質は、ＯＮＭに広がり、ＯＮＭの細胞質側の細胞骨格構造成分、例えば、アクチンフィラメント、微小管モーターおよび中間径フィラメントと、ならびにＯＮＭの核周囲側のＳＵＮドメイン含有タンパク質と会合する。ＳＵＮドメインタンパク質は、ＯＮＭにおいてＫＡＳＨドメインタンパク質の経管的繋がりとして機能する。

【0049】

本明細書では、「ＳＵＮドメイン含有タンパク質」は、ＳＵＮドメインを含む任意のポリペプチドを指す。ＳＵＮ（Ｓａｄ１およびＵＮＣ－８４）ドメインタンパク質は、核膜槽に局在する保存されたカルボキシ末端ＳＵＮドメインを含む重要なＩＮＭ成分である。ＳＵＮドメインは、約１７５個の残基を含み、螺旋ストーク領域の末端に提示される。ＳＵＮタンパク質の核質ドメインは、核骨格の構造成分と相互作用する。

【0050】

ＳＵＮドメインは、配列番号５、１４、２７、２８、２９もしくは３０に示すアミノ酸配列、または配列番号５、１４、２７、２８、２９もしくは３０に示すアミノ酸配列に少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のうちの１つのアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれからなることができる。

【0051】

一部の実施形態では、ＳＵＮドメイン含有タンパク質は、ＳＵＮ１、ＳＵＮ２、ＳＵＮ３、ＳＵＮ５、ＳＰＡＧ４およびＳＵＣＯから選択される。一部の実施形態では、ＳＵＮドメイン含有タンパク質は、ＳＵＮ１またはＳＵＮ２である。

【0052】

一部の実施形態では、ＳＵＮドメイン含有タンパク質は、ＬＩＮＣ複合体を形成することができる。一部の実施形態では、ＳＵＮドメイン含有タンパク質は、ＫＡＳＨドメインおよび／またはＫＡＳＨドメイン含有タンパク質と相互作用することができる。

【0053】

ヒトＳＵＮ１は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｏ９４９０１によって同定されるポリペプチドであり、そのアミノ酸配列は、配列番号１に示される。ヒトＳＵＮ２は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｑ９ＵＨ９９によって同定されるポリペプチドであり、そのアミノ酸配列は、配列番号１３に示される。ヒトＳＵＮ３は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｑ８ＴＡＱ９によって同定されるポリペプチドであり、そのアミノ酸配列は、配列番号２３に示される。ヒトＳＵＮ５は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ａ９Ｚ１Ｗ８によって同定されるポリペプチドであり、そのアミノ酸配列は、配列番号２４に示される。ヒトＳＰＡＧ４は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｑ９ＮＰＥ６によって同定されるポリペプチドであり、そのアミノ酸配列は、配列番号２５に示される。ヒトＳＵＣＯは、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｑ９ＵＢＳ９によって同定されるポリペプチドであり、そのアミノ酸配列は、配列番号２６に示される。

【0054】

本明細書では、「ＳＵＮ１」、「ＳＵＮ２」、「ＳＵＮ３」、「ＳＵＮ５」「ＳＰＡＧ４」および「ＳＵＣＯ」は、それぞれ任意の種に由来するＳＵＮ１、ＳＵＮ２、ＳＵＮ３、ＳＵＮ５、ＳＰＡＧ４およびＳＵＣＯを指し、それらのアイソフォーム、断片、バリアントまたはホモログを含む。

【0055】

本明細書で使用される場合、タンパク質の「断片」、「バリアント」または「ホモログ」は、参照タンパク質のアミノ酸配列と少なくとも６０％、好ましくは７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のうちの１つのアミノ酸配列同一性を有するとして任意選択で特徴付けられ得る（例えば、参照タンパク質の参照アイソフォーム）。一部の実施形態では、断片／バリアント／アイソフォーム／ホモログは、参照タンパク質によって実施される機能を実施する能力によって特徴付けられ得る。

【0056】

「断片」は、参照タンパク質の一部を一般に指す。「バリアント」は、参照タンパク質のアミノ酸配列と比較して１つまたは複数のアミノ酸置換、挿入、欠失または他の改変を含むが、参照タンパク質のアミノ酸配列と相当程度の配列同一性（例えば、少なくとも６０％）を保持するアミノ酸配列を有するタンパク質を一般に指す。「アイソフォーム」は、参照タンパク質の種と同じ種によって発現される参照タンパク質のバリアントを一般に指す。「ホモログ」は、参照タンパク質の種と比較して異なる種によって産生される参照タンパク質のバリアントを一般に指す。ホモログは、オルソログを含む。

【0057】

「断片」は、任意の長さ（アミノ酸の数による）であってよいが、任意選択で、参照タンパク質（すなわち、断片が由来するタンパク質）の長さの少なくとも２０％であってよく、参照タンパク質の長さの５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％のうちの１つの最大長を有し得る。

【0058】

アイソフォーム、断片、バリアントまたはホモログは、任意選択で、機能的特性／活性についての好適なアッセイによる分析によって決定されるような、例えば参照タンパク質の機能的特性／活性を有する、機能的アイソフォーム、断片、バリアントまたはホモログであり得る。

【0059】

本明細書では、「ＳＵＮ１」に言及することは、配列番号１に示されるアミノ酸配列を有するタンパク質、およびその断片、バリアントまたはホモログを指す。一部の実施形態では、ＳＵＮ１は、配列番号１に少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のうちの１つのアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれからなる。

【0060】

本明細書では、「ＳＵＮ２」に言及することは、配列番号１３に示されるアミノ酸配列を有するタンパク質、およびその断片、バリアントまたはホモログを指す。一部の実施形態では、ＳＵＮ２は、配列番号１３と少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％のうちの１つのアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれからなる。

【0061】

本明細書では、「ＳＵＮ３」に言及することは、配列番号２３に示されるアミノ酸配列を有するタンパク質、およびその断片、バリアントまたはホモログを指す。一部の実施形態では、ＳＵＮ３は、配列番号２３と少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％のうちの１つのアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれからなる。

【0062】

本明細書では、「ＳＵＮ５」に言及することは、配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有するタンパク質、およびその断片、バリアントまたはホモログを指す。一部の実施形態では、ＳＵＮ５は、配列番号２４と少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％のうちの１つのアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれからなる。

【0063】

本明細書では、「ＳＰＡＧ４」に言及することは、配列番号２５に示されるアミノ酸配列を有するタンパク質、およびその断片、バリアントまたはホモログを指す。一部の実施形態では、ＳＰＡＧ４は、配列番号２５と少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％のうちの１つのアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれからなる。

【0064】

本明細書では、「ＳＵＣＯ」に言及することは、配列番号２６に示されるアミノ酸配列を有するタンパク質、およびその断片、バリアントまたはホモログを指す。一部の実施形態では、ＳＵＣＯは、配列番号２６と少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％のうちの１つのアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれからなる。

【0065】

本明細書では、「ＫＡＳＨドメイン含有タンパク質」は、ＫＡＳＨドメインを含む任意のポリペプチドを指す。ＫＡＳＨ（Ｋｌａｒｓｉｃｈｔ、ＡＮＣ－１、Ｓｙｎｅ ｈｏｍｏｌｏｇｙ）ドメインタンパク質は、核エンベロープにターゲティングされるカルボキシ末端係留膜タンパク質である。５０～６０個のアミノ酸ＫＡＳＨドメインは、Ｃ末端に見出される。ＫＡＳＨドメインは、疎水性であり、ＯＮＭに広がる単一膜貫通ヘリックスおよび核膜槽に伸長する約３０個のアミノ酸領域を含む。

【0066】

ＫＡＳＨドメインは、配列番号３７、３８、３９、４０、４１もしくは４２に示されるアミノ酸配列、または配列番号３７、３８、３９、４０、４１もしくは４２に示されるアミノ酸配列と少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％のうちの１つのアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る、またはそれからなり得る。

【0067】

一部の実施形態では、ＫＡＳＨドメイン含有タンパク質は、Ｎｅｓｐｒｉｎ－１、Ｎｅｓｐｒｉｎ－２、Ｎｅｓｐｒｉｎ－３、Ｎｅｓｐｒｉｎ－４（それぞれＳＹＮＥ１、ＳＹＮＥ２、ＳＹＮＥ３およびＳＹＮＥ４としても公知）、ＫＡＳＨ５およびＬＲＭＰから選択される。一部の実施形態では、ＫＡＳＨドメイン含有タンパク質は、Ｎｅｓｐｒｉｎ－１、Ｎｅｓｐｒｉｎ－２またはＮｅｓｐｒｉｎ－３である。

【0068】

一部の実施形態では、ＫＡＳＨドメイン含有タンパク質は、ＬＩＮＣ複合体を形成することができる。一部の実施形態では、ＫＡＳＨドメイン含有タンパク質は、ＳＵＮドメインおよび／またはＳＵＮドメイン含有タンパク質と相互作用することができる。

【0069】

ヒトＮｅｓｐｒｉｎ－１は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｑ８ＮＦ９１によって同定されるポリペプチドであり、そのアミノ酸配列が配列番号３１に示される。ヒトＮｅｓｐｒｉｎ－２は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｑ８ＷＸＨ０によって同定されるポリペプチドであり、そのアミノ酸配列が配列番号３２に示される。ヒトＮｅｓｐｒｉｎ－３は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｑ６ＺＭＺ３によって同定されるポリペプチドであり、そのアミノ酸配列が配列番号３３に示される。ヒトＮｅｓｐｒｉｎ－４は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｑ８Ｎ２０５によって同定されるポリペプチドであり、そのアミノ酸配列が配列番号３４に示される。ヒトＫＡＳＨ５は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｑ８Ｎ６Ｌ０によって同定されるポリペプチドであり、そのアミノ酸配列が配列番号３５に示される。ヒトＬＲＭＰは、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｑ１２９１２によって同定されるポリペプチドであり、そのアミノ酸配列が配列番号３６に示される。

【0070】

本明細書では、「Ｎｅｓｐｒｉｎ－１」、「Ｎｅｓｐｒｉｎ－２」、「Ｎｅｓｐｒｉｎ－３」、「Ｎｅｓｐｒｉｎ－４」、「ＫＡＳＨ５」および「ＬＲＭＰ」は、それぞれ任意の種に由来するＮｅｓｐｒｉｎ－１、Ｎｅｓｐｒｉｎ－２、Ｎｅｓｐｒｉｎ－３、Ｎｅｓｐｒｉｎ－４、ＫＡＳＨ５およびＬＲＭＰを指し、そのアイソフォーム、断片、バリアントまたはホモログを含む。

【0071】

本明細書では、「Ｎｅｓｐｒｉｎ－１」に言及することは、配列番号３１に示されるアミノ酸配列を有するタンパク質、およびその断片、バリアントまたはホモログを指す。一部の実施形態では、Ｎｅｓｐｒｉｎ－１は、配列番号３１と少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％のうちの１つのアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれからなる。

【0072】

本明細書では、「Ｎｅｓｐｒｉｎ－２」に言及することは、配列番号３２に示されるアミノ酸配列を有するタンパク質、およびその断片、バリアントまたはホモログを指す。一部の実施形態では、Ｎｅｓｐｒｉｎ－２は、配列番号３２と少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％のうちの１つのアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれからなる。

【0073】

本明細書では、「Ｎｅｓｐｒｉｎ－３」に言及することは、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を有するタンパク質、およびその断片、バリアントまたはホモログを指す。一部の実施形態では、Ｎｅｓｐｒｉｎ－３は、配列番号３３と少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％のうちの１つのアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれからなる。

【0074】

本明細書では、「Ｎｅｓｐｒｉｎ－４」に言及することは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を有するタンパク質、およびその断片、バリアントまたはホモログを指す。一部の実施形態では、Ｎｅｓｐｒｉｎ－４は、配列番号３４と少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％のうちの１つのアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれからなる。

【0075】

本明細書では、「ＫＡＳＨ５」に言及することは、配列番号３５に示されるアミノ酸配列を有するタンパク質、およびその断片、バリアントまたはホモログを指す。一部の実施形態では、ＫＡＳＨ５は、配列番号３５と少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％のうちの１つのアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれからなる。

【0076】

本明細書では、「ＬＲＭＰ」に言及することは、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を有するタンパク質、およびその断片、バリアントまたはホモログを指す。一部の実施形態では、ＬＭＲＰは、配列番号３６と少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％のうちの１つのアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれからなる。

【0077】

本明細書で使用される場合、「ＬＩＮＣ複合体」は、ＳＵＮドメイン含有タンパク質およびＫＡＳＨドメイン含有タンパク質を含むポリペプチド複合体を指す。

【0078】

ＬＩＮＣ複合体は、ＳＵＮドメイン含有タンパク質とＫＡＳＨドメイン含有タンパク質との間のタンパク質－タンパク質相互作用によって形成される。ＬＩＮＣ複合体は、ＳＵＮドメインとＫＡＳＨドメインとの間の非共有結合性および／または共有結合性相互作用を含み得る。非共有結合性相互作用としては、例えば水素結合、イオン性相互作用、ファンデルワールス力および疎水性結合が挙げられる。共有結合性相互作用としては、例えばジスルフィド結合が挙げられる。

【0079】

ＳＵＮドメインタンパク質は、コイルドコイル三重螺旋を形成するためのそれらのストーク領域間の相互作用を介してオリゴマー形成し三量体を形成すると考えられている（Ｚｈｏｕら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（２０１２）２８７：５３１７～５３２６）。ＳＵＮドメインタンパク質ストーク領域の欠失は、ＬＩＮＣ複合体形成を破壊することが示されている。ＳＵＮドメインは、βサンドイッチ構造を想定し、三量体のＳＵＮドメインは、ＫＡＳＨ蓋として公知の突出しているβシートを部分的に通じて相互に広範に相互作用しており；１つのＳＵＮドメインのＫＡＳＨ蓋は、隣接ＳＵＮドメインのβサンドイッチと一部重複している（Ｓｏｓａら、Ｃｅｌｌ（２０１２）１４９：１０３５～１０４７）。

【0080】

ＫＡＳＨドメインタンパク質もオリゴマー形成でき、膜貫通ヘリックス間のタンパク質－タンパク質相互作用を含み得る。単一のＫＡＳＨドメインは、１つのＳＵＮドメインのＫＡＳＨ蓋と隣接ＳＵＮドメインのβサンドイッチの上部領域との間に形成された溝に沿って２つの隣接ＳＵＮドメインと相互作用する。このように、ＳＵＮおよびＫＡＳＨドメインは、相互作用して３：３六量体ヘテロ複合体を形成すると考えられている。ＫＡＳＨドメインのＣ末端の直前の２～３個のプロリン残基は、ＳＵＮドメインの表面内のディープポケットに収容されると考えられている。ＫＡＳＨのこの領域は、ＳＵＮ－ＫＡＳＨ相互作用のために重要であり；アミノ酸１個だけによるＣ末端の伸長は、ＬＩＮＣ複合体形成を破壊する。ＳＵＮおよびＫＡＳＨドメインの保存されたシステイン残基は、ジスルフィド結合を形成し、ＳＵＮ－ＫＡＳＨ複合体をさらに安定化する。ジスルフィド結合は、ＬＩＮＣ複合体を通じた力の伝達のために重要である可能性がある（Ｊａｈｅｄら、Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｊ．（２０１５）１０９：５０１～５０９）。

【0081】

本明細書の上記で説明した通り、ＬＩＮＣ複合体は、３個のＳＵＮドメイン含有タンパク質のＳＵＮドメインと３個のＫＡＳＨドメイン含有タンパク質のＫＡＳＨドメインとの相互作用を通じて形成されると考えられる。ＳＵＮドメインタンパク質とＫＡＳＨドメインタンパク質との間の相互作用は、無差別であると考えられ；ＳＵＮ１およびＳＵＮ２は、Ｎｅｓｐｒｉｎ－１、Ｎｅｓｐｒｉｎ－２およびＮｅｓｐｒｉｎ－３と相互作用することが示されている。

【0082】

本開示によるＬＩＮＣ複合体は、任意のＳＵＮドメイン含有タンパク質および任意のＫＡＳＨドメイン含有タンパク質を含み得る。ＬＩＮＣ複合体のＳＵＮドメイン含有タンパク質は、同一でも同一でなくてもよい。ＬＩＮＣ複合体のＫＡＳＨドメイン含有タンパク質は、同一でも同一でなくてもよい。

【0083】

ＬＩＮＣ複合体機能は、例えば、Ｈｉｅｄａ、Ｃｅｌｌｓ（２０１７）６（１）：３（本明細書の上記に参照により組み込まれる）および、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＳｔｒｏｕｄ、Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｖ．（２０１８）１０（４）：１０３３～１０５１に概説されている。

【0084】

ＬＩＮＣ複合体は、核に構造的支持を提供すること、核を形作り、位置を決めること、セントロソームと核との間の接続および核膜の間隔を維持すること、ＤＮＡ修復、細胞遊走、ならびに減数分裂中に核内に染色体を移動することを含む多様な機能を実施する。

【0085】

ＬＩＮＣ複合体は、機械的刺激および細胞外基質における変化を、細胞骨格構成、遺伝子発現、核構成および構造の調節によって細胞がその環境に適合するようにするシグナルに翻訳する機械感覚性の役割を有する。

【0086】

インテグリンは、外部の微小環境から細胞内細胞骨格への力の伝達を媒介し、核－細胞骨格分子接続は、核における染色体構成に力を伝達する。核ラミナは、核構造の変形を引き起こし、遺伝子制御における変化を開始する。

【0087】

核エンベロープは、そのようなプロセスにおける重要な構造である。ＩＮＭの核質側では、核ラミナ（Ａ型およびＢ型ラミンからなる）は、核の機械的ストレスへの抵抗性に寄与し、核エンベロープの構造的完全性に不可欠である格子構造を形成する。核ラミンは、核完全性の維持、細胞周期の制御、機械的シグナル伝達、細胞シグナル伝達ならびにＤＮＡ修復を含む細胞機能および生存に極めて重要であるプロセスに関与する。

【0088】

核エンベロープタンパク質の正常な発現および／または機能からの逸脱、ならびに核エンベロープと直接もしくは間接的に関連する因子の正常な発現および／または機能からの逸脱は、筋ジストロフィー、心筋症、リポジストロフィー、プロジェリア、がんおよび神経疾患を含む種々の疾患と関連付けられる。

【0089】

ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド
本開示は、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドに関する。本明細書では、「ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド」は、ＬＩＮＣ複合体形成および／または機能を阻害するポリペプチドを指す。

【0090】

本開示に従ったＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、
ＬＩＮＣ複合体の構成要素タンパク質（例えば、ＫＡＳＨドメイン含有タンパク質、例えば、Ｎｅｓｐｒｉｎ－１、Ｎｅｓｐｒｉｎ－２、Ｎｅｓｐｒｉｎ－３、Ｎｅｓｐｒｉｎ－４、ＫＡＳＨ５およびＬＲＭＰの１つまたは複数）に結合し得る；
ＬＩＮＣ複合体の構成要素タンパク質の間の相互作用（例えば、ＳＵＮドメイン含有タンパク質とＫＡＳＨドメイン含有タンパク質との間の相互作用）を阻害し得る；
ＬＩＮＣ複合体の形成を阻害し得る（すなわち、ＬＩＮＣ複合体；例えば、ＳＵＮドメイン含有タンパク質およびＫＡＳＨドメイン含有タンパク質を含むＬＩＮＣ複合体の組立てを阻害し得る）；
ＬＩＮＣ複合体を破壊し得る（例えば、ＬＩＮＣ複合体の解体を生じるか、または促進する、例えば、ＬＩＮＣ複合体；例えば、ＳＵＮドメイン含有タンパク質およびＫＡＳＨドメイン含有タンパク質を含むＬＩＮＣ複合体の構成要素タンパク質の１つまたは複数の置換を経て）；
ＬＩＮＣ複合体（例えば、ＳＵＮドメイン含有タンパク質およびＫＡＳＨドメイン含有タンパク質を含むＬＩＮＣ複合体）の構成要素タンパク質の正常な細胞内局在を破壊し得る；
ＬＩＮＣ複合体（例えば、ＳＵＮドメイン含有タンパク質およびＫＡＳＨドメイン含有タンパク質を含むＬＩＮＣ複合体）の構成要素タンパク質の小胞体への局在を増やし得る；
ＬＩＮＣ複合体（例えば、ＳＵＮドメイン含有タンパク質およびＫＡＳＨドメイン含有タンパク質を含むＬＩＮＣ複合体）のレベルを低減し得る；
ＬＩＮＣ複合体（例えば、ＳＵＮドメイン含有タンパク質およびＫＡＳＨドメイン含有タンパク質を含むＬＩＮＣ複合体）の機能／活性を阻害し得る；
ラミノパチーを有する対象の生存を増やし得る；
ラミノパチーを有する対象の生存期間を増やし得る；
ラミノパチーを有する対象の心機能を増やし得る、またはその減退を阻害し得る；
ラミノパチーを有する対象の心筋収縮力を増やし得る、またはその低減を阻害し得る；
ラミノパチーを有する対象の駆出率および／もしくは短縮率を増やし得る、またはその低減を阻害し得る；
ラミノパチーを有する対象において左心室内径を低減し得る、またはその増加を阻害し得る；および／あるいは
ラミノパチーを有する対象において左心室後壁厚を増やし得る、またはその低減を阻害し得る。

【0091】

本開示に従ったＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドが、前段に列挙されている特性のうちの１つよりも多くを示す場合があることは認識される。所与のポリペプチドは、適切なアッセイを使用して前段に列挙されている特性について評価しされ得る。アッセイは、例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ、必要に応じて、細胞ベースのアッセイまたは無細胞アッセイでもよい。アッセイは、例えば、ｉｎ ｖｉｖｏアッセイ、すなわち非ヒト動物において実施されてもよい。

【0092】

アッセイが細胞ベースのアッセイである場合、アッセイは、ポリペプチドが列挙された特性の１つまたは複数を示すかどうかを判定するために、推定ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドを発現するように細胞を（例えば、トランスフェクション／形質導入を経て）操作することを含み得る。アッセイは、検出可能な構成体（ｅｎｔｉｔｙ）で標識された分子種をそれらの検出を促進するために使用し得る。細胞が、好ましくはＬＩＮＣ複合体の構成要素タンパク質を発現する細胞であることは認識される。

【0093】

ＬＩＮＣ複合体の構成要素タンパク質は、ＳＵＮドメイン含有タンパク質およびＫＡＳＨドメイン含有タンパク質を含む。簡潔さのために本明細書では、「ＬＩＮＣ複合体の構成要素タンパク質」は、単に「ＬＩＮＣ複合体タンパク質」と称される場合がある。

【0094】

好ましい実施形態では、ＬＩＮＣ複合体は、ＳＵＮドメイン含有タンパク質およびＫＡＳＨドメイン含有タンパク質を含む。一部の実施形態では、ＳＵＮドメイン含有タンパク質は、ＳＵＮ１、ＳＵＮ２、ＳＵＮ３、ＳＵＮ５、ＳＰＡＧ４およびＳＵＣＯから選択され得る（より好ましくは、ＳＵＮ１およびＳＵＮ２から選択される）。一部の実施形態では、ＫＡＳＨドメイン含有タンパク質は、Ｎｅｓｐｒｉｎ－１、Ｎｅｓｐｒｉｎ－２、Ｎｅｓｐｒｉｎ－３、Ｎｅｓｐｒｉｎ－４、ＫＡＳＨ５およびＬＲＭＰから選択される（より好ましくは、Ｎｅｓｐｒｉｎ－１、Ｎｅｓｐｒｉｎ－２およびＮｅｓｐｒｉｎ－３から選択される）。

【0095】

本開示に従ったＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ＬＩＮＣ複合体タンパク質に好ましくは結合する。結合は、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドとＬＩＮＣ複合体タンパク質との間の非共有結合性、タンパク質間相互作用により特徴付けられ得る。相互作用は、静電気的相互作用（例えば、イオン結合、水素結合）および／またはファンデルワールス力を含み得る。

【0096】

本開示は、ＳＵＮドメイン含有タンパク質（例えば、本明細書に記載されるＳＵＮドメイン含有タンパク質）に対する相互作用パートナーであるＬＩＮＣ複合体タンパク質に結合するＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドに特に関する。一部の実施形態では、ＳＵＮドメイン含有タンパク質に対する相互作用パートナーは、ＫＡＳＨドメイン含有タンパク質（例えば、本明細書に記載されるＫＡＳＨドメイン含有タンパク質、例えば、Ｎｅｓｐｒｉｎ－１、Ｎｅｓｐｒｉｎ－２、Ｎｅｓｐｒｉｎ－３、Ｎｅｓｐｒｉｎ－４、ＫＡＳＨ５およびＬＲＭＰから選択される）である。一部の実施形態では、ＳＵＮドメイン含有タンパク質に対する相互作用パートナーは、ＳＵＮドメイン含有タンパク質（例えば、ＳＵＮ１、ＳＵＮ２、ＳＵＮ３、ＳＵＮ５、ＳＰＡＧ４およびＳＵＣＯから選択されるＳＵＮドメイン含有タンパク質）であり；ＳＵＮドメイン含有タンパク質は、多量体（例えば、三量体）を形成するように会合することが公知である。

【0097】

本開示に従ったＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ＳＵＮドメイン含有タンパク質に対する相互作用パートナー（例えば、ＫＡＳＨドメイン含有タンパク質、例えば、Ｎｅｓｐｒｉｎ－１、Ｎｅｓｐｒｉｎ－２、Ｎｅｓｐｒｉｎ－３、Ｎｅｓｐｒｉｎ－４、ＫＡＳＨ５およびＬＲＭＰから選択される）に特異的結合を示し得る。本明細書で使用される場合、「特異的結合」とは、選択的であり、非標的分子への非特異的結合と区別することができる結合のことである。ＳＵＮドメイン含有タンパク質に対する相互作用パートナーに特異的に結合するＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、関連タンパク質に他の非標的分子への結合の親和性／持続期間よりも大きな親和性で、および／またはそれより長い持続期間、関連する因子に好ましくは結合する。

【0098】

所与の標的分子に特異的に結合する所与のポリペプチドの能力は、ＥＬＩＳＡ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ；例えば、Ｈｅａｒｔｙら、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ（２０１２）９０７：４１１～４４２頁を参照されたい）、生体層干渉法（例えば、Ｌａｄら、（２０１５）Ｊ Ｂｉｏｍｏｌ Ｓｃｒｅｅｎ ２０（４）：４９８～５０７頁を参照されたい）、フローサイトメトリーによって、または放射標識された抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）酵素結合免疫吸着アッセイによって等の、当技術分野において公知の方法に従った分析によって決定され得る。

【0099】

一部の実施形態では、本開示に従ったＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ＳＵＮドメイン含有タンパク質に対する相互作用パートナー（例えば、ＫＡＳＨドメイン含有タンパク質、例えば、Ｎｅｓｐｒｉｎ－１、Ｎｅｓｐｒｉｎ－２、Ｎｅｓｐｒｉｎ－３、Ｎｅｓｐｒｉｎ－４、ＫＡＳＨ５およびＬＲＭＰから選択される）にマイクロモル範囲、すなわちＫ_Ｄ＝９．９×１０^－４から１×１０^－６Ｍの親和性で結合する。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ＳＵＮドメイン含有タンパク質に対する相互作用パートナー（例えば、ＫＡＳＨドメイン含有タンパク質、例えば、Ｎｅｓｐｒｉｎ－１、Ｎｅｓｐｒｉｎ－２、Ｎｅｓｐｒｉｎ－３、Ｎｅｓｐｒｉｎ－４、ＫＡＳＨ５およびＬＲＭＰから選択される）にマイクロモル未満の親和性、すなわち、Ｋ_Ｄ＜１×１０^－６Ｍで結合する。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ＳＵＮドメイン含有タンパク質に対する相互作用パートナー（例えば、ＫＡＳＨドメイン含有タンパク質、例えば、Ｎｅｓｐｒｉｎ－１、Ｎｅｓｐｒｉｎ－２、Ｎｅｓｐｒｉｎ－３、Ｎｅｓｐｒｉｎ－４、ＫＡＳＨ５およびＬＲＭＰから選択される）にナノモル範囲の親和性、すなわち、Ｋ_Ｄ＝９．９×１０^－７から１×１０^－９Ｍで結合する。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ＳＵＮドメイン含有タンパク質に対する相互作用パートナー（例えば、ＫＡＳＨドメイン含有タンパク質、例えば、Ｎｅｓｐｒｉｎ－１、Ｎｅｓｐｒｉｎ－２、Ｎｅｓｐｒｉｎ－３、Ｎｅｓｐｒｉｎ－４、ＫＡＳＨ５およびＬＲＭＰから選択される）にナノモル未満の親和性、すなわちＫ_Ｄ＜１×１０^－９Ｍで結合する。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ＳＵＮドメイン含有タンパク質に対する相互作用パートナー（例えば、ＫＡＳＨドメイン含有タンパク質、例えば、Ｎｅｓｐｒｉｎ－１、Ｎｅｓｐｒｉｎ－２、Ｎｅｓｐｒｉｎ－３、Ｎｅｓｐｒｉｎ－４、ＫＡＳＨ５およびＬＲＭＰから選択される）にピコモル範囲の親和性、すなわちＫ_Ｄ＝９．９×１０^－１０から１×１０^－１２Ｍで結合する。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ＳＵＮドメイン含有タンパク質に対する相互作用パートナー（例えば、ＫＡＳＨドメイン含有タンパク質、例えば、Ｎｅｓｐｒｉｎ－１、Ｎｅｓｐｒｉｎ－２、Ｎｅｓｐｒｉｎ－３、Ｎｅｓｐｒｉｎ－４、ＫＡＳＨ５およびＬＲＭＰから選択される）にピコモル未満の親和性、すなわちＫ_Ｄ＜１×１０^－１２Ｍで結合する。

【0100】

本開示に従ったＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ＳＵＮドメイン含有タンパク質に対する相互作用パートナー（例えば、ＫＡＳＨドメイン含有タンパク質、例えば、Ｎｅｓｐｒｉｎ－１、Ｎｅｓｐｒｉｎ－２、Ｎｅｓｐｒｉｎ－３、Ｎｅｓｐｒｉｎ－４、ＫＡＳＨ５およびＬＲＭＰから選択される）に、ＳＵＮドメイン含有タンパク質（例えば、ＳＵＮ１、ＳＵＮ２、ＳＵＮ３、ＳＵＮ５、ＳＰＡＧ４およびＳＵＣＯから選択されるＳＵＮドメイン含有タンパク質）の様式で結合し得る。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ＳＵＮドメイン含有タンパク質によって結合される領域と同じ、ＳＵＮドメイン含有タンパク質に対する相互作用パートナーの領域、または重複する領域に結合し得る。

【0101】

ポリペプチドが結合する所与の標的分子の領域は、抗体抗原複合体のＸ線共結晶解析、ペプチドスキャニング、突然変異誘発マッピング、質量分析による水素重水素交換分析、ファージディスプレイ、競合ＥＬＩＳＡおよびタンパク質分解に基づく「保護」法を含む当技術分野において周知の種々の方法を使用して当業者によって決定され得る。そのような方法は、例えば、Ｇｅｒｓｈｏｎｉら、ＢｉｏＤｒｕｇｓ、２００７年、２１（３）：１４５～１５６頁に記載されている、前記文献はこれにより参照により本明細書にその全体が組み込まれる。

【0102】

一部の実施形態では、本開示に従ったＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ＳＵＮドメイン含有タンパク質（例えば、ＳＵＮ１、ＳＵＮ２、ＳＵＮ３、ＳＵＮ５、ＳＰＡＧ４およびＳＵＣＯから選択されるＳＵＮドメイン含有タンパク質）とＳＵＮドメイン含有タンパク質に対する相互作用パートナー（例えば、ＫＡＳＨドメイン含有タンパク質、例えば、Ｎｅｓｐｒｉｎ－１、Ｎｅｓｐｒｉｎ－２、Ｎｅｓｐｒｉｎ－３、Ｎｅｓｐｒｉｎ－４、ＫＡＳＨ５およびＬＲＭＰから選択される）との間の相互作用を阻害する。本明細書におけるＳＵＮドメイン含有タンパク質とＳＵＮドメイン含有タンパク質に対する相互作用パートナーとの間の相互作用の阻害は、ＳＵＮドメイン含有タンパク質とＳＵＮドメイン含有タンパク質に対する相互作用パートナーとの間の結合の阻害（それにより、そのようなタンパク質を含む複合体の形成を阻害する）、ならびにＳＵＮドメイン含有タンパク質およびＳＵＮドメイン含有タンパク質に対する相互作用パートナーを含む複合体の破壊（例えば、そのような複合体の構成要素タンパク質の置換、および結果としてのそのような複合体の解体を経て）を包含する。

【0103】

一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ＳＵＮドメイン含有タンパク質（例えば、ＳＵＮ１、ＳＵＮ２、ＳＵＮ３、ＳＵＮ５、ＳＰＡＧ４およびＳＵＣＯから選択されるＳＵＮドメイン含有タンパク質）のＳＵＮドメイン含有タンパク質に対する相互作用パートナー（例えば、ＫＡＳＨドメイン含有タンパク質、例えば、Ｎｅｓｐｒｉｎ－１、Ｎｅｓｐｒｉｎ－２、Ｎｅｓｐｒｉｎ－３、Ｎｅｓｐｒｉｎ－４、ＫＡＳＨ５およびＬＲＭＰから選択される）への結合を阻害する。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ＳＵＮドメイン含有タンパク質に対する相互作用パートナーへのＳＵＮドメイン含有タンパク質の結合の競合的阻害剤である。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ＳＵＮドメイン含有タンパク質に対する相互作用パートナーへの結合からＳＵＮドメイン含有タンパク質を遮断する。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ＳＵＮドメイン含有タンパク質が結合するＳＵＮドメイン含有タンパク質に対する相互作用パートナーの領域を占め、それにより、ＳＵＮドメイン含有タンパク質とそれに対する相互作用パートナーとの間の相互作用を阻害する。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ＳＵＮドメイン含有タンパク質およびＳＵＮドメイン含有タンパク質に対する相互作用パートナーを含む複合体からＳＵＮドメイン含有タンパク質を置き換える。

【0104】

２つの因子間の相互作用を阻害する所与のポリペプチドの能力は、例えば、相互作用パートナーの一方または両方とポリペプチドとの存在下で、またはインキュベーション後のそのような相互作用の相関の分析によって決定され得る。

【0105】

分析は、ＳＵＮドメイン含有タンパク質／ＳＵＮドメイン含有タンパク質に対する相互作用パートナー／ＳＵＮドメイン含有タンパク質およびＳＵＮドメイン含有タンパク質に対する相互作用パートナーを含む複合体を検出することを含み得る。そのような技術は、当業者に周知であり、例えば、抗体／リポーターベースの方法（ウエスタンブロット、ＥＬＩＳＡ、免疫組織／細胞化学、等）を含む。

【0106】

所与の相互作用（例えば、ＳＵＮドメイン含有タンパク質とそれに対する相互作用パートナー、例えば、ＫＡＳＨドメイン含有タンパク質、との間）を阻害するポリペプチドは、ポリペプチドの非存在下（または、相互作用パートナー間の相互作用を阻害しないことが公知である適切な対照ポリペプチドの存在下）で観察されたレベルと比較して、ポリペプチドの存在下で、または相互作用パートナーの一方もしくは両方とポリペプチドとのインキュベーション後で、相互作用パートナー間の相互作用の相関物のレベルにおける低減／減少の観察によって同定される。好適な分析は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで、例えば、組換え相互作用パートナーを使用して、または相互作用パートナーを発現する細胞を使用して実施され得る。相互作用パートナーを発現する細胞は、内因的であり得るか、または細胞に導入された核酸由来であり得る。そのようなアッセイの目的のために、相互作用パートナーの一方または両方、および／またはポリペプチドは、相互作用のレベルを検出する、および／または測定する目的のために標識され得るか、または検出可能な構成体と共に使用され得る。

【0107】

２つの相互作用パートナー間の相互作用の相関物は、例えば、相互作用パートナー間の会合によって形成される複合体、相互作用パートナー間の会合によって形成される複合体の機能的特性、または相互作用パートナー間の会合によって形成される複合体によって媒介される下流活性の相関物であり得る。

【0108】

ＳＵＮドメイン含有タンパク質（例えば、ＳＵＮ１、ＳＵＮ２、ＳＵＮ３、ＳＵＮ５、ＳＰＡＧ４およびＳＵＣＯから選択されるＳＵＮドメイン含有タンパク質）とＳＵＮドメイン含有タンパク質に対する相互作用パートナー（例えば、ＫＡＳＨドメイン含有タンパク質、例えば、Ｎｅｓｐｒｉｎ－１、Ｎｅｓｐｒｉｎ－２、Ｎｅｓｐｒｉｎ－３、Ｎｅｓｐｒｉｎ－４、ＫＡＳＨ５およびＬＲＭＰから選択される）との間の相互作用を阻害するポリペプチド－例えば、ＳＵＮドメイン含有タンパク質およびＳＵＮドメイン含有タンパク質に対する相互作用パートナーを含有する複合体の形成を阻害するポリペプチド、ならびに／またはＳＵＮドメイン含有タンパク質およびＳＵＮドメイン含有タンパク質に対する相互作用パートナーを含有する複合体を破壊するポリペプチド－は、ポリペプチドの非存在下（または、相互作用パートナー間の相互作用を阻害しないことが公知である適切な対照ポリペプチドの存在下）で観察されたレベルと比較して、ポリペプチドの存在下で、または相互作用パートナーの一方もしくは両方とポリペプチドとのインキュベーション後で、（ｉ）ＳＵＮドメイン含有タンパク質およびＳＵＮドメイン含有タンパク質に対する相互作用パートナーを含む複合体のレベルの減少、（ｉｉ）ＳＵＮドメイン含有タンパク質およびＳＵＮドメイン含有タンパク質に対する相互作用パートナーを含む複合体の機能的特性のレベルの減少、（ｉｉｉ）ＳＵＮドメイン含有タンパク質およびＳＵＮドメイン含有タンパク質に対する相互作用パートナーを含む複合体によって媒介される下流活性の相関物のレベルの減少、（ｉｖ）遊離の（すなわち、複合体化していない）ＳＵＮドメイン含有タンパク質のレベルの増加、および／または（ｖ）遊離の（すなわち、複合体化していない）ＳＵＮドメイン含有タンパク質に対する相互作用パートナーのレベルの増加のうちの１つまたは複数の観察によって同定され得る。

【0109】

本開示に従ったＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ＬＩＮＣ複合体タンパク質（例えば、ＳＵＮドメイン含有タンパク質またはＳＵＮドメイン含有タンパク質に対する相互作用パートナー）の正常な細胞内局在を破壊し得る。

【0110】

一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、核エンベロープに局在するＬＩＮＣ複合体タンパク質のレベル／割合を低下させる。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、核エンベロープに局在するＬＩＮＣ複合体タンパク質に対する相互作用パートナーレベル／割合を低下させる。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、核外膜と会合するＫＡＳＨドメイン含有タンパク質のレベル／割合を低下させる。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、核内膜と会合するＳＵＮドメイン含有タンパク質のレベル／割合を低下させる。

【0111】

一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、核エンベロープに局在しないＬＩＮＣ複合体タンパク質のレベル／割合を増加させる。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、核外膜と会合しないＫＡＳＨドメイン含有タンパク質（例えば、Ｎｅｓｐｒｉｎ－１、Ｎｅｓｐｒｉｎ－２、Ｎｅｓｐｒｉｎ－３、Ｎｅｓｐｒｉｎ－４、ＫＡＳＨ５およびＬＲＭＰから選択される）のレベル／割合を増加させる。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、核内膜と会合しないＳＵＮドメイン含有タンパク質（例えば、ＳＵＮ１、ＳＵＮ２、ＳＵＮ３、ＳＵＮ５、ＳＰＡＧ４およびＳＵＣＯから選択される）のレベル／割合を増加させる。

【0112】

一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、小胞体に局在するＬＩＮＣ複合体タンパク質のレベル／割合を増加させる。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、小胞体に局在するＫＡＳＨドメイン含有タンパク質（例えば、Ｎｅｓｐｒｉｎ－１、Ｎｅｓｐｒｉｎ－２、Ｎｅｓｐｒｉｎ－３、Ｎｅｓｐｒｉｎ－４、ＫＡＳＨ５およびＬＲＭＰから選択される）のレベル／割合を増加させる。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、核内膜と会合しないＳＵＮドメイン含有タンパク質（例えば、ＳＵＮ１、ＳＵＮ２、ＳＵＮ３、ＳＵＮ５、ＳＰＡＧ４およびＳＵＣＯから選択される）のレベル／割合を増加させる。

【0113】

細胞内でのＬＩＮＣ複合体の構成要素タンパク質の細胞内局在は、当業者に公知の技術を使用して分析され得る。そのような技術として、例えば、免疫組織染色およびレポーターに基づく方法による分析が挙げられる。例えば、Ｂｏｎｉら、Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ（２０１５）２０９（５）：７０５－７２０およびＳｍｏｙｅｒら、Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ（２０１６）２１５（４）：５７５～５９０は、ＥＲ、ＩＮＭおよびＯＮＭにおけるタンパク質のイメージングを可能にするレポーターシステムを記載している。そのような方法は、核エンベロープ、核内膜および核外膜におけるＬＩＮＣ複合体の構成要素タンパク質のレベル／割合を分析するために使用され得る。

【0114】

ＬＩＮＣ複合体タンパク質の正常な細胞内局在を破壊するＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、所与の細胞内位置で関連するタンパク質（複数可）の存在を検出するまたは割合を決定するステップを含むアッセイを使用して、例えば、抗体／リポーターベースの方法（ウエスタンブロット、ＥＬＩＳＡ、免疫組織／細胞化学、等）を使用して、同定し得る。細胞内局在は、例えば、異なる細胞画分から調製される抽出物の免疫細胞化学、またはウエスタンブロットにより分析し得る、および小器官マーカーおよび／または既知の細胞内局在の標識されたタンパク質を用い得る。

【0115】

アッセイは、細胞において（例えば、細胞に（例えば、トランスフェクション／形質導入によって）導入された、ポリペプチドをコードする核酸から）推定ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドを発現すること、および続いて、そのような細胞における関連ＬＩＮＣ複合体タンパク質（複数可）の細胞内局在を適切な対照状態の細胞（例えば、非トランスフェクト細胞、空ベクターを用いてトランスフェクト／形質導入された細胞、または関連ＬＩＮＣ複合体タンパク質（複数可）の細胞内局在に影響を与えないことが公知であるポリペプチドをコードする核酸を用いてトランスフェクト／形質導入された細胞）において観察された細胞内局在と比較することを含み得る。

【0116】

一部の実施形態では、ポリペプチドは、本明細書の実施例１において本質的に記載された通りＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドとして挙動するそれらの能力について評価され得る。

【0117】

推定ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドを発現するための核酸は（例えば、トランスフェクションによって）細胞に導入されてよく、続いて細胞は、ＬＩＮＣ複合体タンパク質（例えば、ＳＵＮドメイン含有タンパク質（例えば、ＳＵＮ１、ＳＵＮ２、ＳＵＮ３、ＳＵＮ５、ＳＰＡＧ４およびＳＵＣＯから選択される）ならびに／またはＳＵＮドメイン含有タンパク質に対する相互作用パートナー（例えば、ＫＡＳＨドメイン含有タンパク質、例えば、Ｎｅｓｐｒｉｎ－１、Ｎｅｓｐｒｉｎ－２、Ｎｅｓｐｒｉｎ－３、Ｎｅｓｐｒｉｎ－４、ＫＡＳＨ５およびＬＲＭＰから選択される））の１つまたは複数の細胞内局在を判定するために評価され得る。ポリペプチドは、適切な対照状態の細胞（例えば、非トランスフェクト細胞、空ベクターを用いてトランスフェクト／形質導入された細胞、または関連ＬＩＮＣ複合体タンパク質（複数可）の細胞内局在に影響を与えないことが公知であるポリペプチドをコードする核酸を用いてトランスフェクト／形質導入された細胞）において観察されたレベル／割合と比較して、その発現が、かかるアッセイにおいて、核エンベロープに局在するＬＩＮＣ複合体タンパク質のレベル／割合を低下させるか、または核エンベロープに局在しないＬＩＮＣ複合体タンパク質のレベル／割合を増加させると決定された場合（例えば、その発現が、核外膜と会合するＫＡＳＨドメイン含有タンパク質のレベル／割合を低下させるか、または核外膜と会合しないＫＡＳＨドメイン含有タンパク質のレベル／割合を増加させるか、または小胞体に局在するＫＡＳＨドメイン含有タンパク質のレベル／割合を増加させると決定された場合）に、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドとして同定され得る。

【0118】

一部の実施形態では、本開示に従ったＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドの細胞での発現は、所与のアッセイにおいてＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドの非存在下で、または適切な対照状態で観察されたレベルの１倍未満／１００％未満、例えば、≦０．９９倍／≦９９％、≦０．９５倍／≦９５％、≦０．９倍／≦９０％、≦０．８５倍／≦８５％、≦０．８倍／≦８０％、≦０．７５倍／≦７５％、≦０．７倍／≦７０％、≦０．６５倍／≦６５％、≦０．６倍／≦６０％、≦０．５５倍／≦５５％、≦０．５倍／≦５０％、≦０．４５倍／≦４５％、≦０．４倍／≦４０％、≦０．３５倍／≦３５％、≦０．３倍／≦３０％、≦０．２５倍／≦２５％、≦０．２倍／≦２０％、≦０．１５倍／≦１５％、≦０．１倍／≦１０％倍、≦０．０５倍／≦５％または≦０．０１倍／≦１％のうちの１つに、（ｉ）ＬＩＮＣ複合体の構成要素タンパク質の間（例えば、ＳＵＮドメイン含有タンパク質とＫＡＳＨドメイン含有タンパク質との間）の相互作用のレベルを低下させる、（ｉｉ）ＬＩＮＣ複合体（例えば、ＳＵＮドメイン含有タンパク質およびＫＡＳＨドメイン含有タンパク質を含むＬＩＮＣ複合体）のレベルを低下させる、（ｉｉｉ）ＬＩＮＣ複合体（例えば、ＳＵＮドメイン含有タンパク質およびＫＡＳＨドメイン含有タンパク質を含むＬＩＮＣ複合体）の機能／活性の相関物のレベルを低下させる、（ｉｖ）核エンベロープに局在するＬＩＮＣ複合体タンパク質（例えば、ＳＵＮドメイン含有タンパク質もしくはＫＡＳＨドメイン含有タンパク質）のレベル／割合を低下させる、ならびに／または（ｖ）核エンベロープ／核外膜に局在するＫＡＳＨドメイン含有タンパク質（例えば、Ｎｅｓｐｒｉｎ－１、Ｎｅｓｐｒｉｎ－２、Ｎｅｓｐｒｉｎ－３、Ｎｅｓｐｒｉｎ－４、ＫＡＳＨ５およびＬＲＭＰから選択される）のレベル／割合を低下させる。

【0119】

前段に従った低減の好ましいレベルは、０．５倍以下／≦５０％、例えば、≦０．４倍／≦４０％、≦０．３倍／≦３０％、≦０．２倍／≦２０％、≦０．１５倍／≦１５％、または≦０．１倍／≦１０％のうちの１つへの低減である。

【0120】

一部の実施形態では、本開示に従ったＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドの細胞での発現は、所与のアッセイにおいてＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドの非存在下で、または適切な対照状態で観察されたレベルの１倍を超えて、例えば、≧１．０１倍、≧１．０２倍、≧１．０３倍、≧１．０４倍、≧１．０５倍、≧１．１倍、≧１．２倍、≧１．３倍、≧１．４倍、≧１．５倍、≧１．６倍、≧１．７倍、≧１．８倍、≧１．９倍、≧２倍、≧３倍、≧４倍、≧５倍、≧６倍、≧７倍、≧８倍、≧９倍、≧１０倍、≧５０倍または≧１００倍のうちの１つに、（ｉ）核エンベロープに局在しないＬＩＮＣ複合体タンパク質（例えば、ＳＵＮドメイン含有タンパク質もしくはＫＡＳＨドメイン含有タンパク質）のレベル／割合を増加させる、および／または（ｉｉ）小胞体に局在するＬＩＮＣ複合体タンパク質（例えば、ＳＵＮドメイン含有タンパク質もしくはＫＡＳＨドメイン含有タンパク質）のレベル／割合を増加させる。

【0121】

ポリペプチドは、適切なｉｎ ｖｉｖｏモデルにおいてある特定の機能的特性について評価され得る。例えば、ポリペプチドは、本明細書に記載される疾患／状態の非ヒト動物モデルにおいてｉｎ ｖｉｖｏでの治療／予防効果について評価され得る。そのようなアッセイでは、ポリペプチドは、例えば、ＬＩＮＣ複合体阻害が治療／予防利益を付与する細胞／組織に対する適切なトロピズムを有するウイルスベクターを使用して、タンパク質をコードする核酸の形態で送達され得る。実例として、本開示の実験的実施例では、推定ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、Ｌｍｎａの誘導性心筋細胞特異的欠失によって確立された拡張型心筋症のマウスモデルにおいて評価される－実施例５を参照されたい。推定ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、心筋細胞特異的プロモーターの制御下でポリペプチドを発現するＡＡＶ９ベクターの形態で、遺伝子治療として送達される。

【0122】

対象の生存期間および生存は、そのようなモデルにおいて経時的に生存をモニタリングすることによって評価され得る。心機能および心筋収縮力は、これらの相関物を測定するステップによって評価することができ、駆出率、短縮率、左心室後壁厚および／または左心室内径は、心エコー／超音波によって測定され得る。

【0123】

対象が、特定の時点で、例えば、関連モデルにおいてポリペプチドの投与の効果が観察されるために十分な期間後に、前段に列挙されている１つまたは複数の特性について好ましくは評価されることは理解される。例えば、対象は、推定ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドをコードするウイルスベクターの投与後７日間以後に評価され得る。

【0124】

一部の実施形態では、ラミノパチーを有する対象への本開示に従ったＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドの投与（例えば、ＬＭＮＡへの突然変異に関連する心筋症；例えば、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドをコードするウイルスベクターを介して）は、そのような処置の非存在下で、または適切な対照ポリペプチド（例えば、ＬＩＮＣ複合体を阻害しないことが公知のポリペプチド、例えば、同じウイルスベクターを使用して送達される）の投与後に観察されるレベルの、１倍を超えて、例えば、≧１．０１倍、≧１．０２倍、≧１．０３倍、≧１．０４倍、≧１．０５倍、≧１．１倍、≧１．２倍、≧１．３倍、≧１．４倍、≧１．５倍、≧１．６倍、≧１．７倍、≧１．８倍、≧１．９倍、≧２倍、≧３倍、≧４倍、≧５倍、≧６倍、≧７倍、≧８倍、≧９倍、≧１０倍、≧５０倍または≧１００倍のうちの１つに、対象の生存もしくは生存期間を増やす、ならびに／または対象における心機能、心筋収縮力、駆出率、短縮率および／もしくは左心室後壁厚を増加させる。

【0125】

一部の実施形態では、ラミノパチーを有する対象への本開示に従ったＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドの投与（例えば、ＬＭＮＡへの突然変異に関連する心筋症；例えば、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドをコードするウイルスベクターを介して）は、そのような処置の非存在下で、または適切な対照ポリペプチド（例えば、ＬＩＮＣ複合体を阻害しないことが公知のポリペプチド、例えば、同じウイルスベクターを使用して送達される）の投与後に観察されるレベルの、１倍未満／１００％未満、例えば、≦０．９９倍／≦９９％、≦０．９５倍／≦９５％、≦０．９倍／≦９０％、≦０．８５倍／≦８５％、≦０．８倍／≦８０％、≦０．７５倍／≦７５％、≦０．７倍／≦７０％、≦０．６５倍／≦６５％、≦０．６倍／≦６０％、≦０．５５倍／≦５５％、≦０．５倍／≦５０％、≦０．４５倍／≦４５％、≦０．４倍／≦４０％、≦０．３５倍／≦３５％、≦０．３倍／≦３０％、≦０．２５倍／≦２５％、≦０．２倍／≦２０％、≦０．１５倍／≦１５％、≦０．１倍／≦１０％倍、≦０．０５倍／≦５％または≦０．０１倍／≦１％のうちの１つに、対象において左心室内径を低下させる。

【0126】

一部の実施形態では、本開示に従ったＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、配列番号９９のアミノ酸配列からなるＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドと比較して、１つまたは複数の新規の、または改善された機能的特性を有し得る。

【0127】

一部の実施形態では、本開示に従ったＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドの細胞での発現は、配列番号９９のアミノ酸配列からなるポリペプチドの細胞での（例えば、同じ種類の細胞による）発現において観察されるレベルの１倍未満／１００％未満、例えば、≦０．９９倍／≦９９％、≦０．９５倍／≦９５％、≦０．９倍／≦９０％、≦０．８５倍／≦８５％、≦０．８倍／≦８０％、≦０．７５倍／≦７５％、≦０．７倍／≦７０％、≦０．６５倍／≦６５％、≦０．６倍／≦６０％、≦０．５５倍／≦５５％、≦０．５倍／≦５０％、≦０．４５倍／≦４５％、≦０．４倍／≦４０％、≦０．３５倍／≦３５％、≦０．３倍／≦３０％、≦０．２５倍／≦２５％、≦０．２倍／≦２０％、≦０．１５倍／≦１５％、≦０．１倍／≦１０％倍、≦０．０５倍／≦５％または≦０．０１倍／≦１％のうちの１つに、（ｉ）ＬＩＮＣ複合体の構成要素タンパク質の間（例えば、ＳＵＮドメイン含有タンパク質とＫＡＳＨドメイン含有タンパク質との間）の相互作用のレベルを低下させる、（ｉｉ）ＬＩＮＣ複合体（例えば、ＳＵＮドメイン含有タンパク質およびＫＡＳＨドメイン含有タンパク質を含むＬＩＮＣ複合体）のレベルを低下させる、（ｉｉｉ）ＬＩＮＣ複合体（例えば、ＳＵＮドメイン含有タンパク質およびＫＡＳＨドメイン含有タンパク質を含むＬＩＮＣ複合体）の機能／活性の相関物のレベルを低下させる、（ｉｖ）核エンベロープに局在するＬＩＮＣ複合体タンパク質（例えば、ＳＵＮドメイン含有タンパク質もしくはＫＡＳＨドメイン含有タンパク質）のレベル／割合を低下させる、ならびに／または（ｖ）核エンベロープ／核外膜に局在するＫＡＳＨドメイン含有タンパク質（例えば、Ｎｅｓｐｒｉｎ－１、Ｎｅｓｐｒｉｎ－２、Ｎｅｓｐｒｉｎ－３、Ｎｅｓｐｒｉｎ－４、ＫＡＳＨ５およびＬＲＭＰから選択される）のレベル／割合を低下させる。

【0128】

一部の実施形態では、本開示に従ったＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドの細胞での発現は、配列番号９９のアミノ酸配列からなるポリペプチドの細胞での（例えば、同じ種類の細胞による）発現において観察されるレベルの１倍を超えて、例えば、≧１．０１倍、≧１．０２倍、≧１．０３倍、≧１．０４倍、≧１．０５倍、≧１．１倍、≧１．２倍、≧１．３倍、≧１．４倍、≧１．５倍、≧１．６倍、≧１．７倍、≧１．８倍、≧１．９倍、≧２倍、≧３倍、≧４倍、≧５倍、≧６倍、≧７倍、≧８倍、≧９倍、≧１０倍、≧５０倍または≧１００倍のうちの１つに、（ｉ）核エンベロープに局在しないＬＩＮＣ複合体タンパク質（例えば、ＳＵＮドメイン含有タンパク質もしくはＫＡＳＨドメイン含有タンパク質）のレベル／割合を増加させる、および／または（ｉｉ）小胞体に局在するＬＩＮＣ複合体タンパク質（例えば、ＳＵＮドメイン含有タンパク質もしくはＫＡＳＨドメイン含有タンパク質）のレベル／割合を、増加させる。

【0129】

一部の実施形態では、ラミノパチーを有する対象への本開示に従ったＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドの投与（例えば、ＬＭＮＡへの突然変異に関連する心筋症；例えば、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドをコードするウイルスベクターを介して）は、配列番号９９のアミノ酸配列からなるポリペプチドの投与（例えば、同じウイルスベクターを使用する送達）後に観察されるレベルの１倍を超えて、例えば、≧１．０１倍、≧１．０２倍、≧１．０３倍、≧１．０４倍、≧１．０５倍、≧１．１倍、≧１．２倍、≧１．３倍、≧１．４倍、≧１．５倍、≧１．６倍、≧１．７倍、≧１．８倍、≧１．９倍、≧２倍、≧３倍、≧４倍、≧５倍、≧６倍、≧７倍、≧８倍、≧９倍、≧１０倍、≧５０倍または≧１００倍のうちの１つに、対象の生存もしくは生存期間を増やす、ならびに／または対象における心機能、心筋収縮力、駆出率、短縮率および／もしくは左心室後壁厚を増加させる。

【0130】

一部の実施形態では、ラミノパチーを有する対象への本開示に従ったＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドの投与（例えば、ＬＭＮＡへの突然変異に関連する心筋症；例えば、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドをコードするウイルスベクターを介して）は、配列番号９９のアミノ酸配列からなるポリペプチドの投与（例えば、同じウイルスベクターを使用する送達）後に観察されるレベルの、１倍未満／１００％未満、例えば、≦０．９９倍／≦９９％、≦０．９５倍／≦９５％、≦０．９倍／≦９０％、≦０．８５倍／≦８５％、≦０．８倍／≦８０％、≦０．７５倍／≦７５％、≦０．７倍／≦７０％、≦０．６５倍／≦６５％、≦０．６倍／≦６０％、≦０．５５倍／≦５５％、≦０．５倍／≦５０％、≦０．４５倍／≦４５％、≦０．４倍／≦４０％、≦０．３５倍／≦３５％、≦０．３倍／≦３０％、≦０．２５倍／≦２５％、≦０．２倍／≦２０％、≦０．１５倍／≦１５％、≦０．１倍／≦１０％倍、≦０．０５倍／≦５％または≦０．０１倍／≦１％のうちの１つに、対象において左心室内径を低下させる。

【0131】

本開示に従ったＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、例えば、ＳＵＮ１、ＳＵＮ２、ＳＵＮ３、ＳＵＮ５、ＳＰＡＧ４およびＳＵＣＯから選択されるＳＵＮドメイン含有タンパク質に基づいてよい。一部の実施形態では、本開示に従ったＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、例えば、ＳＵＮ１、ＳＵＮ２、ＳＵＮ３、ＳＵＮ５、ＳＰＡＧ４およびＳＵＣＯから選択されるＳＵＮドメイン含有タンパク質に基づく阻害領域を含む。

【0132】

本明細書において使用される場合、参照タンパク質「に基づいて」いるペプチド／ポリペプチド／アミノ酸配列は、参照タンパク質のアミノ酸の全てまたは一部に高配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、またはそれからなる。

【0133】

ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドの「阻害領域」は、それを通じてＬＩＮＣ複合体阻害が達成されるポリペプチドの領域を指す。本開示に従った阻害領域は、ＳＵＮドメイン含有タンパク質のアミノ酸配列の一部に高い程度の配列同一性を典型的には有する。本開示に従ったＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドの阻害領域は、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドがＳＵＮドメイン含有タンパク質に対する相互作用パートナー（例えば、ＫＡＳＨドメイン含有タンパク質、例えば、Ｎｅｓｐｒｉｎ－１、Ｎｅｓｐｒｉｎ－２、Ｎｅｓｐｒｉｎ－３、Ｎｅｓｐｒｉｎ－４、ＫＡＳＨ５およびＬＲＭＰの１つまたは複数）に結合する際に用いる領域であり得る。本開示の態様および実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドの阻害領域は、ＳＵＮドメイン含有タンパク質のＣＣ２領域のα３ヘリックスおよびＳＵＮドメインに対応するアミノ酸配列を含む。

【0134】

本開示に従ったＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、例えば、ＳＵＮ１、ＳＵＮ２、ＳＵＮ３、ＳＵＮ５、ＳＰＡＧ４およびＳＵＣＯから選択されるＳＵＮドメイン含有タンパク質の全てまたは一部のアミノ酸配列に、高い程度の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％ ８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むまたはから本質的になることができる。本開示に従ったＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、例えば、ＳＵＮ１、ＳＵＮ２、ＳＵＮ３、ＳＵＮ５、ＳＰＡＧ４およびＳＵＣＯから選択されるＳＵＮドメイン含有タンパク質の全てまたは一部のアミノ酸配列に、高い程度の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％ ８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、またはそれからなる阻害領域を含むことができる。

【0135】

そのようなＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、好ましくは（ｉ）ＫＡＳＨドメイン含有タンパク質（例えば、Ｎｅｓｐｒｉｎ－１、Ｎｅｓｐｒｉｎ－２、Ｎｅｓｐｒｉｎ－３、Ｎｅｓｐｒｉｎ－４、ＫＡＳＨ５およびＬＲＭＰの１つまたは複数）に結合するための基となるＳＵＮドメイン含有タンパク質の能力を保持している、しかし（ｉｉ）それらの基となる、ＳＵＮドメイン含有タンパク質の１つもしくは複数の他の特性を欠失している、またはそのレベルの低下を示す。好ましい実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、核ラミンおよび／もしくはクロマチン結合タンパク質に結合する能力を欠失している、もしくは能力の低下を示す、ならびに／またはそれらの基となるＳＵＮドメイン含有タンパク質と比較して、核内膜に会合する（例えば、局在する）能力を欠失している、もしくは能力の低下を示す。

【0136】

例えば、本開示に従ったＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド／その阻害領域は、ＫＡＳＨドメイン含有タンパク質（例えば、Ｎｅｓｐｒｉｎ－１、Ｎｅｓｐｒｉｎ－２、Ｎｅｓｐｒｉｎ－３、Ｎｅｓｐｒｉｎ－４、ＫＡＳＨ５およびＬＲＭＰの１つまたは複数）に結合するために必要なアミノ酸配列（複数可）を含む場合があり、それらの基となるＳＵＮドメイン含有タンパク質の１つまたは複数の他の特性のために必要なアミノ酸配列（複数可）（例えば、核ラミンおよび／もしくはクロマチン結合タンパク質への結合のために必要なアミノ酸配列（複数可）、ならびに／または核内膜との会合のために必要なアミノ酸配列（複数可））を欠失している場合がある。

【0137】

一部の実施形態では、本開示に従ったＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドが、ＳＵＮドメイン含有タンパク質のＫＡＳＨドメイン含有タンパク質結合断片から本質的になることは理解される。同様に、一部の実施形態では、本開示に従ったＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドの阻害領域が、ＳＵＮドメイン含有タンパク質のＫＡＳＨドメイン含有タンパク質結合断片からなることは理解される。

【0138】

そのようなＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、それらの基となるＳＵＮドメイン含有タンパク質の「デコイ」、「ドミナントネガティブ」または「模倣」バージョンと呼ばれる場合がある。すなわち、本開示の態様および実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ドミナントネガティブＳＵＮドメイン含有ポリペプチドであり得る。

【0139】

本開示に従ったＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ＳＵＮドメイン含有タンパク質（例えば、ＳＵＮ１、ＳＵＮ２、ＳＵＮ３、ＳＵＮ５、ＳＰＡＧ４およびＳＵＣＯから選択される）とＫＡＳＨドメイン含有タンパク質（例えば、Ｎｅｓｐｒｉｎ－１、Ｎｅｓｐｒｉｎ－２、Ｎｅｓｐｒｉｎ－３、Ｎｅｓｐｒｉｎ－４、ＫＡＳＨ５およびＬＲＭＰから選択される）との間の相互作用の競合的阻害を好ましくは示す。デコイ／ドミナントネガティブ／模倣ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ＫＡＳＨドメイン含有タンパク質（例えば、Ｎｅｓｐｒｉｎ－１、Ｎｅｓｐｒｉｎ－２、Ｎｅｓｐｒｉｎ－３、Ｎｅｓｐｒｉｎ－４、ＫＡＳＨ５およびＬＲＭＰから選択される）に好ましくは結合し、相互作用のために必要な部位を占め、それにより、これらの種が内在性ＳＵＮドメイン含有タンパク質に結合できなくする。

【0140】

そのようなＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ＬＩＮＣ複合体の形成を阻害し得る、ならびに／または内在性相互作用パートナーの組立ての阻害を経ておよび／もしくは内在性相互作用パートナーの置換を経て既存のＬＩＮＣ複合体を破壊し得る。デコイ／ドミナントネガティブ／模倣ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、非機能性ＬＩＮＣ複合体、または野生型内在性ＳＵＮドメイン含有タンパク質およびＫＡＳＨドメイン含有タンパク質によって形成されるＬＩＮＣ複合体と比較して機能のレベルが低下したＬＩＮＣ複合体を形成する。

【0141】

本明細書上記の通り、ＳＵＮドメイン含有タンパク質のドミナントネガティブバージョンは、以前記載された。例えば、Ｃｒｉｓｐら、Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．（２００６）１７２（１）：４１～５３頁はマウスＳｕｎ１タンパク質のドミナントネガティブバージョンを記載し、ＷＯ２０１９／１４３３００Ａ１はそのヒト化バージョンを記載した。

【0142】

本開示に従った態様および実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ＳＵＮドメイン含有タンパク質のＣＣ２領域のα３ヘリックスおよびＳＵＮドメインに対応するアミノ酸配列を含む。ＳＵＮドメイン含有タンパク質の１つまたは複数の領域に対応する、本明細書に記載されるＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドのアミノ酸配列（複数可）が、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドの阻害領域に含まれ得ることは理解される。

【0143】

本明細書において使用される場合、参照ポリペプチドまたはアミノ酸配列の特定の領域に「対応する」アミノ酸配列は、ポリペプチド／アミノ酸配列のアミノ酸配列に少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のうちの１つの配列同一性を有する。参照ポリペプチドまたはアミノ酸配列の特定の領域に「対応する」アミノ酸配列は、例えば、ＣｌｕｓｔａｌＯｍｅｇａ（Ｓｏｄｉｎｇ，Ｊ．２００５年、Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ２１、９５１～９６０頁）等の配列アラインメントソフトウェアを使用する、参照配列への対象配列の配列アラインメントによって同定され得る。実例として、ヒトＳＵＮ２の５２２から７１７位のアミノ酸配列は、ヒトＳＵＮ１の６１６から８１２位のアミノ酸配列に対応する。

【0144】

一部の実施形態では、本開示に従ったＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ヒトアミノ酸配列から本質的になる。一部の実施形態では、本開示に従ったＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドの阻害領域は、ヒトアミノ酸配列から本質的になる。本明細書において使用される場合、「ヒトアミノ酸配列」は、ヒトのゲノムの核酸によってコードされるアミノ酸配列を指す。すなわち、一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドまたはＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドの阻害領域は、ヒト対象のゲノムによってコードされるアミノ酸配列に１００％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列から本質的になる。一部の実施形態では、ヒト対象のゲノムによってコードされるアミノ酸配列が、ヒトＳＵＮドメイン含有タンパク質（例えば、ＳＵＮ１、ＳＵＮ２、ＳＵＮ３、ＳＵＮ５、ＳＰＡＧ４およびＳＵＣＯから選択される；例えば、ＳＵＮ１またはＳＵＮ２）のアミノ酸配列であることは理解される。ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドのそのような実施形態は、例えば、本開示に従った治療／予防介入の状況で、ヒト対象への投与が意図される場合に特に企図される。

【0145】

一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ＳＵＮドメイン含有タンパク質のＣＣ２領域のα３ヘリックスに対応するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ヒトＳＵＮ１のＣＣ２領域のα３ヘリックスに対応するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ヒトＳＵＮ２のＣＣ２領域のα３ヘリックスに対応するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、配列番号１２のアミノ酸配列に少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のうちの１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、配列番号２２のアミノ酸配列に少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のうちの１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0146】

一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ＳＵＮドメイン含有タンパク質のＳＵＮドメインに対応するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ヒトＳＵＮ１のＳＵＮドメインに対応するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ヒトＳＵＮ２のＳＵＮドメインに対応するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、配列番号８のアミノ酸配列に少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のうちの１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、配列番号１８のアミノ酸配列に少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のうちの１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0147】

一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ＳＵＮドメイン含有タンパク質のＣＣ２領域のα３ヘリックスおよびＳＵＮドメインに対応するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ヒトＳＵＮ１のＣＣ２領域のα３ヘリックスおよびＳＵＮドメインに対応するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ヒトＳＵＮ２のＣＣ２領域のα３ヘリックスおよびＳＵＮドメインに対応するアミノ酸配列を含む阻害領域を含む。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、配列番号４４のアミノ酸配列に少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のうちの１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、配列番号４６のアミノ酸配列に少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のうちの１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0148】

一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ＳＵＮドメイン含有タンパク質のＣＣ２領域のα２ヘリックスに対応するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ヒトＳＵＮ１のＣＣ２領域のα２ヘリックスに対応するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ヒトＳＵＮ２のＣＣ２領域のα２ヘリックスに対応するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、配列番号１１のアミノ酸配列に少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のうちの１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、配列番号２１のアミノ酸配列に少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のうちの１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0149】

一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ＳＵＮドメイン含有タンパク質のＣＣ２領域のα１ヘリックスに対応するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ヒトＳＵＮ１のＣＣ２領域のα１ヘリックスに対応するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ヒトＳＵＮ２のＣＣ２領域のα１ヘリックスに対応するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、配列番号１０のアミノ酸配列に少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のうちの１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、配列番号２０のアミノ酸配列に少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のうちの１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0150】

一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ＳＵＮドメイン含有タンパク質のＣＣ１領域に対応するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ヒトＳＵＮ１のＣＣ１領域に対応するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ヒトＳＵＮ２のＣＣ１領域に対応するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、配列番号９のアミノ酸配列に少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のうちの１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、配列番号１９のアミノ酸配列に少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のうちの１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0151】

一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ＳＵＮドメイン含有タンパク質のＣＣ１領域およびＣＣ２領域に対応するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ヒトＳＵＮ１のＣＣ１領域およびＣＣ２領域に対応するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ヒトＳＵＮ２のＣＣ１領域およびＣＣ２領域に対応するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、配列番号８８のアミノ酸配列に少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のうちの１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、配列番号９１のアミノ酸配列に少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のうちの１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0152】

一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ＳＵＮドメイン含有タンパク質のＣＣ２領域に対応するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ヒトＳＵＮ１のＣＣ２領域に対応するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ヒトＳＵＮ２のＣＣ２領域に対応するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、配列番号８９のアミノ酸配列に少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のうちの１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、配列番号９２のアミノ酸配列に少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のうちの１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0153】

一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ＳＵＮドメイン含有タンパク質のＣＣ２領域のα２およびα３ヘリックスに対応するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ヒトＳＵＮ１のＣＣ２領域のα２およびα３ヘリックスに対応するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ヒトＳＵＮ２のＣＣ２領域のα２およびα３ヘリックスに対応するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、配列番号９０のアミノ酸配列に少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のうちの１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、配列番号９３のアミノ酸配列に少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のうちの１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0154】

一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ＳＵＮドメイン含有タンパク質のＳＭＡＲＴコイル－コイルド２領域の一部、ＣＣ１領域およびＣＣ２領域に対応するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ヒトＳＵＮ１の４８３から６３２位（配列番号１に従った番号付け）に対応するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ヒトＳＵＮ２の３８８から５３８位（配列番号１３に従った番号付け）に対応するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、配列番号９７のアミノ酸配列に少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のうちの１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、配列番号９８のアミノ酸配列に少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のうちの１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0155】

一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、先行技術において開示されたＳＵＮドメイン含有タンパク質のドミナントネガティブバージョンのアミノ酸配列から本質的にならない。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、先行技術において開示されたＳＵＮドメイン含有タンパク質の切断型バリアントのアミノ酸配列から本質的にならない。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、先行技術において開示されたＳＵＮドメイン含有タンパク質のドミナントネガティブバージョンのアミノ酸配列からなる阻害領域を含まない。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、先行技術において開示されたＳＵＮドメイン含有タンパク質の切断型バリアントのアミノ酸配列からなる阻害領域を含まない。

【0156】

本明細書において使用される場合、参照アミノ酸配列「から本質的になる」ポリペプチドまたはアミノ酸配列は、（ｉ）参照アミノ酸配列からなるか、または（ｉｉ）参照アミノ酸配列を含むかのいずれかであり、参照アミノ酸配列は、ポリペプチド／アミノ酸配列の少なくとも８０％（例えば、≧８５％ ≧８６％、≧８７％、≧８８％、≧８９％、≧９０％、≧９１％、≧９２％、≧９３％、≧９４％、≧９５％、≧９６％、≧９７％、≧９８％、≧９９％のうちの１つ）を構成する。参照アミノ酸配列「から本質的になる」ポリペプチドまたはアミノ酸配列が、参照アミノ酸配列ならびに、追加のアミノ酸（複数可）を追加のアミノ酸（複数可）がポリペプチド／アミノ酸配列の≦２０％を構成する条件で、参照アミノ酸配列のＮ末端およびＣ末端の一方または両方に含み得ることは理解される。

【0157】

実例として、配列番号７４のアミノ酸配列からなるポリペプチドは、配列番号４４のアミノ酸配列から本質的になる。配列番号７４は、配列番号４４（すなわち、配列番号７４の１から１９７位）のアミノ酸配列を含み、配列番号４４のアミノ酸配列は、ポリペプチドの約９８％（すなわち、１９７／２０１残基）を構成する。配列番号７４は、配列番号４４のアミノ酸配列のＣ末端にＫＤＥＬ保持モチーフ（配列番号７７）を含む。

【0158】

一部の実施形態では、参照アミノ酸配列から本質的になるアミノ酸配列は、参照アミノ酸配列からなる。すなわち、一部の実施形態では、参照アミノ酸配列から本質的になるアミノ酸配列は、参照アミノ酸配列と同一である。一部の実施形態では、参照アミノ酸配列から本質的になるアミノ酸配列は、参照アミノ酸配列と同一であるアミノ酸配列を含み、参照配列の一末端または両末端に１つまたは複数の追加のアミノ酸（複数可）（例えば１～５、１～１０または１～２０アミノ酸）をさらに含む。

【0159】

一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、配列番号４３または４５のアミノ酸配列から本質的にならない。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、配列番号４３または４５のいずれか１つのアミノ酸配列からなる阻害領域を含まない。

【0160】

一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、配列番号４４または４６のアミノ酸配列から本質的にならない。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、配列番号４４または４６のいずれか１つのアミノ酸配列からなる阻害領域を含まない。

【0161】

一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、配列番号４３、４４、４５または４６のアミノ酸配列から本質的にならない。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、配列番号４３、４４、４５または４６のいずれか１つのアミノ酸配列からなる阻害領域を含まない。

【0162】

一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、配列番号４３、４４、４５、４６、４７または４８のいずれか１つのアミノ酸配列から本質的にならない。

【0163】

一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、配列番号４３、４４、４５、４６、４７、４８、７４または７５のいずれか１つのアミノ酸配列から本質的にならない。

【0164】

一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、配列番号４３、４４、４５、４６、４７、４８、５８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、７４または７５のいずれか１つのアミノ酸配列から本質的にならない。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、配列番号４３、４４、４５、４６、４７、４８、５８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、７４または７５のいずれか１つのアミノ酸配列からなる阻害領域を含まない。

【0165】

一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、配列番号４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、７４または７５のいずれか１つのアミノ酸配列から本質的にならない。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、配列番号４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、７４または７５のいずれか１つのアミノ酸配列からなる阻害領域を含まない。

【0166】

本開示は、配列番号４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、９４または９５のいずれか１つの個別の、または１つもしくは複数の他の特定の配列と併せたアミノ酸配列から本質的になるＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドを放棄することを具体的に企図する。本開示は、配列番号４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、９４または９５のいずれか１つの個別の、または１つもしくは複数の他の特定の配列と併せてのいずれかのアミノ酸配列からなる阻害領域を含むＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドを放棄することも具体的に企図する。

【0167】

しかし、本開示のある特定の態様および実施形態に関連して、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、配列番号４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、９４または９５のいずれか１つのアミノ酸配列を含むまたはから本質的になることができる。同様に、本開示のある特定の態様および実施形態に関連して、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、配列番号４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、９４または９５のいずれか１つのアミノ酸配列からなる阻害領域を含むことができる。

【0168】

一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、またはその阻害領域は、配列番号６３のアミノ酸配列に少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のうちの１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれから本質的になる。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、またはその阻害領域は、配列番号６４のアミノ酸配列に少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のうちの１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれから本質的になる。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、またはその阻害領域は、配列番号６５のアミノ酸配列に少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のうちの１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれから本質的になる。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、またはその阻害領域は、配列番号６６のアミノ酸配列に少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のうちの１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれから本質的になる。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、またはその阻害領域は、配列番号６７のアミノ酸配列に少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のうちの１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれから本質的になる。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、またはその阻害領域は、配列番号６８のアミノ酸配列に少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のうちの１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれから本質的になる。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、またはその阻害領域は、配列番号６９のアミノ酸配列に少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のうちの１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれから本質的になる。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、またはその阻害領域は、配列番号７０のアミノ酸配列に少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のうちの１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれから本質的になる。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、またはその阻害領域は、配列番号７１のアミノ酸配列に少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のうちの１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれから本質的になる。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、またはその阻害領域は、配列番号７２のアミノ酸配列に少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のうちの１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれから本質的になる。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、またはその阻害領域は、配列番号７３のアミノ酸配列に少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のうちの１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれから本質的になる。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、またはその阻害領域は、配列番号７４のアミノ酸配列に少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のうちの１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれから本質的になる。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、またはその阻害領域は、配列番号９４のアミノ酸配列に少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のうちの１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれから本質的になる。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、またはその阻害領域は、配列番号９５のアミノ酸配列に少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のうちの１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれから本質的になる。

【0169】

一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、またはその阻害領域は、配列番号１０１のアミノ酸配列に少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のうちの１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれから本質的になる。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、またはその阻害領域は、配列番号１０２のアミノ酸配列に少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のうちの１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれから本質的になる。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、またはその阻害領域は、配列番号１０３のアミノ酸配列に少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のうちの１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれから本質的になる。

【0170】

一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、またはその阻害領域は、配列番号１０４のアミノ酸配列に少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のうちの１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれから本質的になる。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、またはその阻害領域は、配列番号１０５のアミノ酸配列に少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のうちの１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれから本質的になる。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、またはその阻害領域は、配列番号１０６のアミノ酸配列に少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のうちの１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれから本質的になる。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、またはその阻害領域は、配列番号１０７のアミノ酸配列に少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のうちの１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれから本質的になる。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、またはその阻害領域は、配列番号１０８のアミノ酸配列に少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のうちの１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれから本質的になる。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、またはその阻害領域は、配列番号１０９のアミノ酸配列に少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のうちの１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれから本質的になる。

【0171】

一部の実施形態では、本開示に従ったＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、またはその阻害領域は、配列番号１の３６０～８１２位；配列番号１の３６１～８１２位；配列番号１の３６２～８１２位；配列番号１の３６３～８１２位；配列番号１の３６４～８１２位；配列番号１の３６５～８１２位；配列番号１の３６６～８１２位；配列番号１の３６７～８１２位；配列番号１の３６８～８１２位；配列番号１の３６９～８１２位；配列番号１の３７０～８１２位；配列番号１の３７１～８１２位；配列番号１の３７２～８１２位；配列番号１の３７３～８１２位；配列番号１の３７４～８１２位；配列番号１の３７５～８１２位；配列番号１の３７６～８１２位；配列番号１の３７７～８１２位；配列番号１の３７８～８１２位；配列番号１の３７９～８１２位；配列番号１の３８０～８１２位；配列番号１の３８１～８１２位；配列番号１の３８２～８１２位；配列番号１の３８３～８１２位；配列番号１の３８４～８１２位；配列番号１の３８５～８１２位；配列番号１の３８６～８１２位；配列番号１の３８７～８１２位；配列番号１の３８８～８１２位；配列番号１の３８９～８１２位；配列番号１の３９０～８１２位；配列番号１の３９１～８１２位；配列番号１の３９２～８１２位；配列番号１の３９３～８１２位；配列番号１の３９４～８１２位；配列番号１の３９５～８１２位；配列番号１の３９６～８１２位；配列番号１の３９７～８１２位；配列番号１の３９８～８１２位；配列番号１の３９９～８１２位；配列番号１の４００～８１２位；配列番号１の４０１～８１２位；配列番号１の４０２～８１２位；配列番号１の４０３～８１２位；配列番号１の４０４～８１２位；配列番号１の４０５～８１２位；配列番号１の４０６～８１２位；配列番号１の４０７～８１２位；配列番号１の４０８～８１２位；配列番号１の４０９～８１２位；配列番号１の４１０～８１２位；配列番号１の４１１～８１２位；配列番号１の４１２～８１２位；配列番号１の４１３～８１２位；配列番号１の４１４～８１２位；配列番号１の４１５～８１２位；配列番号１の４１６～８１２位；配列番号１の４１７～８１２位；配列番号１の４１８～８１２位；配列番号１の４１９～８１２位；配列番号１の４２０～８１２位；配列番号１の４２１～８１２位；配列番号１の４２２～８１２位；配列番号１の４２３～８１２位；配列番号１の４２４～８１２位；配列番号１の４２５～８１２位；配列番号１の４２６～８１２位；配列番号１の４２７～８１２位；配列番号１の４２８～８１２位；配列番号１の４２９～８１２位；配列番号１の４３０～８１２位；配列番号１の４３１～８１２位；配列番号１の４３２～８１２位；配列番号１の４３３～８１２位；配列番号１の４３４～８１２位；配列番号１の４３５～８１２位；配列番号１の４３６～８１２位；配列番号１の４３７～８１２位；配列番号１の４３８～８１２位；配列番号１の４３９～８１２位；配列番号１の４４０～８１２位；配列番号１の４４１～８１２位；配列番号１の４４２～８１２位；配列番号１の４４３～８１２位；配列番号１の４４４～８１２位；配列番号１の４４５～８１２位；配列番号１の４４６～８１２位；配列番号１の４４７～８１２位；配列番号１の４４８～８１２位；配列番号１の４４９～８１２位；配列番号１の４５０～８１２位；配列番号１の４５１～８１２位；配列番号１の４５２～８１２位；配列番号１の４５３～８１２位；配列番号１の４５４～８１２位；配列番号１の４５５～８１２位；配列番号１の４５６～８１２位；配列番号１の４５７～８１２位；配列番号１の４５８～８１２位；配列番号１の４５９～８１２位；配列番号１の４６０～８１２位；配列番号１の４６１～８１２位；配列番号１の４６２～８１２位；配列番号１の４６３～８１２位；配列番号１の４６４～８１２位；配列番号１の４６５～８１２位；配列番号１の４６６～８１２位；配列番号１の４６７～８１２位；配列番号１の４６８～８１２位；配列番号１の４６９～８１２位；配列番号１の４７０～８１２位；配列番号１の４７１～８１２位；配列番号１の４７２～８１２位；配列番号１の４７３～８１２位；配列番号１の４７４～８１２位；配列番号１の４７５～８１２位；配列番号１の４７６～８１２位；配列番号１の４７７～８１２位；配列番号１の４７８～８１２位；配列番号１の４７９～８１２位；配列番号１の４８０～８１２位；配列番号１の４８１～８１２位；配列番号１の４８２～８１２位；配列番号１の４８３～８１２位；配列番号１の４８４～８１２位；配列番号１の４８５～８１２位；配列番号１の４８６～８１２位；配列番号１の４８７～８１２位；配列番号１の４８８～８１２位；配列番号１の４８９～８１２位；配列番号１の４９０～８１２位；配列番号１の４９１～８１２位；配列番号１の４９２～８１２位；配列番号１の４９３～８１２位；配列番号１の４９４～８１２位；配列番号１の４９５～８１２位；配列番号１の４９６～８１２位；配列番号１の４９７～８１２位；配列番号１の４９８～８１２位；配列番号１の４９９～８１２位；配列番号１の５００～８１２位；配列番号１の５０１～８１２位；配列番号１の５０２～８１２位；配列番号１の５０３～８１２位；配列番号１の５０４～８１２位；配列番号１の５０５～８１２位；配列番号１の５０６～８１２位；配列番号１の５０７～８１２位；配列番号１の５０８～８１２位；配列番号１の５０９～８１２位；配列番号１の５１０～８１２位；配列番号１の５１１～８１２位；配列番号１の５１２～８１２位；配列番号１の５１３～８１２位；配列番号１の５１４～８１２位；配列番号１の５１５～８１２位；配列番号１の５１６～８１２位；配列番号１の５１７～８１２位；配列番号１の５１８～８１２位；配列番号１の５１９～８１２位；配列番号１の５２０～８１２位；配列番号１の５２１～８１２位；配列番号１の５２２～８１２位；配列番号１の５２３～８１２位；配列番号１の５２４～８１２位；配列番号１の５２５～８１２位；配列番号１の５２６～８１２位；配列番号１の５２７～８１２位；配列番号１の５２８～８１２位；配列番号１の５２９～８１２位；配列番号１の５３０～８１２位；配列番号１の５３１～８１２位；配列番号１の５３２～８１２位；配列番号１の５３３～８１２位；配列番号１の５３４～８１２位；配列番号１の５３５～８１２位；配列番号１の５３６～８１２位；配列番号１の５３７～８１２位；配列番号１の５３８～８１２位；配列番号１の５３９～８１２位；配列番号１の５４０～８１２位；配列番号１の５４１～８１２位；配列番号１の５４２～８１２位；配列番号１の５４３～８１２位；配列番号１の５４４～８１２位；配列番号１の５４５～８１２位；配列番号１の５４６～８１２位；配列番号１の５４７～８１２位；配列番号１の５４８～８１２位；配列番号１の５４９～８１２位；配列番号１の５５０～８１２位；配列番号１の５５１～８１２位；配列番号１の５５２～８１２位；配列番号１の５５３～８１２位；配列番号１の５５４～８１２位；配列番号１の５５５～８１２位；配列番号１の５５６～８１２位；配列番号１の５５７～８１２位；配列番号１の５５８～８１２位；配列番号１の５５９～８１２位；配列番号１の５６０～８１２位；配列番号１の５６１～８１２位；配列番号１の５６２～８１２位；配列番号１の５６３～８１２位；配列番号１の５６４～８１２位；配列番号１の５６５～８１２位；配列番号１の５６６～８１２位；配列番号１の５６７～８１２位；配列番号１の５６８～８１２位；配列番号１の５６９～８１２位；配列番号１の５７０～８１２位；配列番号１の５７１～８１２位；配列番号１の５７２～８１２位；配列番号１の５７３～８１２位；配列番号１の５７４～８１２位；配列番号１の５７５～８１２位；配列番号１の５７６～８１２位；配列番号１の５７７～８１２位；配列番号１の５７８～８１２位；配列番号１の５７９～８１２位；配列番号１の５８０～８１２位；配列番号１の５８１～８１２位；配列番号１の５８２～８１２位；配列番号１の５８３～８１２位；配列番号１の５８４～８１２位；配列番号１の５８５～８１２位；配列番号１の５８６～８１２位；配列番号１の５８７～８１２位；配列番号１の５８８～８１２位；配列番号１の５８９～８１２位；配列番号１の５９０～８１２位；配列番号１の５９１～８１２位；配列番号１の５９２～８１２位；配列番号１の５９３～８１２位；配列番号１の５９４～８１２位；配列番号１の５９５～８１２位；配列番号１の５９６～８１２位；配列番号１の５９７～８１２位；配列番号１の５９８～８１２位；配列番号１の５９９～８１２位；配列番号１の６００～８１２位；配列番号１の６０１～８１２位；配列番号１の６０２～８１２位；配列番号１の６０３～８１２位；配列番号１の６０４～８１２位；配列番号１の６０５～８１２位；配列番号１の６０６～８１２位；配列番号１の６０７～８１２位；配列番号１の６０８～８１２位；配列番号１の６０９～８１２位；配列番号１の６１０～８１２位；配列番号１の６１１～８１２位；配列番号１の６１２～８１２位；配列番号１の６１３～８１２位；配列番号１の６１４～８１２位；配列番号１の６１５～８１２位；および配列番号１の６１６～８１２位のうちの１つに対応するアミノ酸配列を含む、またはそれから本質的になる。

【0172】

一部の実施形態では、本開示に従ったＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、またはその阻害領域は、配列番号１３の２５８～７１７位；配列番号１３の２５９～７１７位；配列番号１３の２６０～７１７位；配列番号１３の２６１～７１７位；配列番号１３の２６２～７１７位；配列番号１３の２６３～７１７位；配列番号１３の２６４～７１７位；配列番号１３の２６５～７１７位；配列番号１３の２６６～７１７位；配列番号１３の２６７～７１７位；配列番号１３の２６８～７１７位；配列番号１３の２６９～７１７位；配列番号１３の２７０～７１７位；配列番号１３の２７１～７１７位；配列番号１３の２７２～７１７位；配列番号１３の２７３～７１７位；配列番号１３の２７４～７１７位；配列番号１３の２７５～７１７位；配列番号１３の２７６～７１７位；配列番号１３の２７７～７１７位；配列番号１３の２７８～７１７位；配列番号１３の２７９～７１７位；配列番号１３の２８０～７１７位；配列番号１３の２８１～７１７位；配列番号１３の２８２～７１７位；配列番号１３の２８３～７１７位；配列番号１３の２８４～７１７位；配列番号１３の２８５～７１７位；配列番号１３の２８６～７１７位；配列番号１３の２８７～７１７位；配列番号１３の２８８～７１７位；配列番号１３の２８９～７１７位；配列番号１３の２９０～７１７位；配列番号１３の２９１～７１７位；配列番号１３の２９２～７１７位；配列番号１３の２９３～７１７位；配列番号１３の２９４～７１７位；配列番号１３の２９５～７１７位；配列番号１３の２９６～７１７位；配列番号１３の２９７～７１７位；配列番号１３の２９８～７１７位；配列番号１３の２９９～７１７位；配列番号１３の３００～７１７位；配列番号１３の３０１～７１７位；配列番号１３の３０２～７１７位；配列番号１３の３０３～７１７位；配列番号１３の３０４～７１７位；配列番号１３の３０５～７１７位；配列番号１３の３０６～７１７位；配列番号１３の３０７～７１７位；配列番号１３の３０８～７１７位；配列番号１３の３０９～７１７位；配列番号１３の３１０～７１７位；配列番号１３の３１１～７１７位；配列番号１３の３１２～７１７位；配列番号１３の３１３～７１７位；配列番号１３の３１４～７１７位；配列番号１３の３１５～７１７位；配列番号１３の３１６～７１７位；配列番号１３の３１７～７１７位；配列番号１３の３１８～７１７位；配列番号１３の３１９～７１７位；配列番号１３の３２０～７１７位；配列番号１３の３２１～７１７位；配列番号１３の３２２～７１７位；配列番号１３の３２３～７１７位；配列番号１３の３２４～７１７位；配列番号１３の３２５～７１７位；配列番号１３の３２６～７１７位；配列番号１３の３２７～７１７位；配列番号１３の３２８～７１７位；配列番号１３の３２９～７１７位；配列番号１３の３３０～７１７位；配列番号１３の３３１～７１７位；配列番号１３の３３２～７１７位；配列番号１３の３３３～７１７位；配列番号１３の３３４～７１７位；配列番号１３の３３５～７１７位；配列番号１３の３３６～７１７位；配列番号１３の３３７～７１７位；配列番号１３の３３８～７１７位；配列番号１３の３３９～７１７位；配列番号１３の３４０～７１７位；配列番号１３の３４１～７１７位；配列番号１３の３４２～７１７位；配列番号１３の３４３～７１７位；配列番号１３の３４４～７１７位；配列番号１３の３４５～７１７位；配列番号１３の３４６～７１７位；配列番号１３の３４７～７１７位；配列番号１３の３４８～７１７位；配列番号１３の３４９～７１７位；配列番号１３の３５０～７１７位；配列番号１３の３５１～７１７位；配列番号１３の３５２～７１７位；配列番号１３の３５３～７１７位；配列番号１３の３５４～７１７位；配列番号１３の３５５～７１７位；配列番号１３の３５６～７１７位；配列番号１３の３５７～７１７位；配列番号１３の３５８～７１７位；配列番号１３の３５９～７１７位；配列番号１３の３６０～７１７位；配列番号１３の３６１～７１７位；配列番号１３の３６２～７１７位；配列番号１３の３６３～７１７位；配列番号１３の３６４～７１７位；配列番号１３の３６５～７１７位；配列番号１３の３６６～７１７位；配列番号１３の３６７～７１７位；配列番号１３の３６８～７１７位；配列番号１３の３６９～７１７位；配列番号１３の３７０～７１７位；配列番号１３の３７１～７１７位；配列番号１３の３７２～７１７位；配列番号１３の３７３～７１７位；配列番号１３の３７４～７１７位；配列番号１３の３７５～７１７位；配列番号１３の３７６～７１７位；配列番号１３の３７７～７１７位；配列番号１３の３７８～７１７位；配列番号１３の３７９～７１７位；配列番号１３の３８０～７１７位；配列番号１３の３８１～７１７位；配列番号１３の３８２～７１７位；配列番号１３の３８３～７１７位；配列番号１３の３８４～７１７位；配列番号１３の３８５～７１７位；配列番号１３の３８６～７１７位；配列番号１３の３８７～７１７位；配列番号１３の３８８～７１７位；配列番号１３の３８９～７１７位；配列番号１３の３９０～７１７位；配列番号１３の３９１～７１７位；配列番号１３の３９２～７１７位；配列番号１３の３９３～７１７位；配列番号１３の３９４～７１７位；配列番号１３の３９５～７１７位；配列番号１３の３９６～７１７位；配列番号１３の３９７～７１７位；配列番号１３の３９８～７１７位；配列番号１３の３９９～７１７位；配列番号１３の４００～７１７位；配列番号１３の４０１～７１７位；配列番号１３の４０２～７１７位；配列番号１３の４０３～７１７位；配列番号１３の４０４～７１７位；配列番号１３の４０５～７１７位；配列番号１３の４０６～７１７位；配列番号１３の４０７～７１７位；配列番号１３の４０８～７１７位；配列番号１３の４０９～７１７位；配列番号１３の４１０～７１７位；配列番号１３の４１１～７１７位；配列番号１３の４１２～７１７位；配列番号１３の４１３～７１７位；配列番号１３の４１４～７１７位；配列番号１３の４１５～７１７位；配列番号１３の４１６～７１７位；配列番号１３の４１７～７１７位；配列番号１３の４１８～７１７位；配列番号１３の４１９～７１７位；配列番号１３の４２０～７１７位；配列番号１３の４２１～７１７位；配列番号１３の４２２～７１７位；配列番号１３の４２３～７１７位；配列番号１３の４２４～７１７位；配列番号１３の４２５～７１７位；配列番号１３の４２６～７１７位；配列番号１３の４２７～７１７位；配列番号１３の４２８～７１７位；配列番号１３の４２９～７１７位；配列番号１３の４３０～７１７位；配列番号１３の４３１～７１７位；配列番号１３の４３２～７１７位；配列番号１３の４３３～７１７位；配列番号１３の４３４～７１７位；配列番号１３の４３５～７１７位；配列番号１３の４３６～７１７位；配列番号１３の４３７～７１７位；配列番号１３の４３８～７１７位；配列番号１３の４３９～７１７位；配列番号１３の４４０～７１７位；配列番号１３の４４１～７１７位；配列番号１３の４４２～７１７位；配列番号１３の４４３～７１７位；配列番号１３の４４４～７１７位；配列番号１３の４４５～７１７位；配列番号１３の４４６～７１７位；配列番号１３の４４７～７１７位；配列番号１３の４４８～７１７位；配列番号１３の４４９～７１７位；配列番号１３の４５０～７１７位；配列番号１３の４５１～７１７位；配列番号１３の４５２～７１７位；配列番号１３の４５３～７１７位；配列番号１３の４５４～７１７位；配列番号１３の４５５～７１７位；配列番号１３の４５６～７１７位；配列番号１３の４５７～７１７位；配列番号１３の４５８～７１７位；配列番号１３の４５９～７１７位；配列番号１３の４６０～７１７位；配列番号１３の４６１～７１７位；配列番号１３の４６２～７１７位；配列番号１３の４６３～７１７位；配列番号１３の４６４～７１７位；配列番号１３の４６５～７１７位；配列番号１３の４６６～７１７位；配列番号１３の４６７～７１７位；配列番号１３の４６８～７１７位；配列番号１３の４６９～７１７位；配列番号１３の４７０～７１７位；配列番号１３の４７１～７１７位；配列番号１３の４７２～７１７位；配列番号１３の４７３～７１７位；配列番号１３の４７４～７１７位；配列番号１３の４７５～７１７位；配列番号１３の４７６～７１７位；配列番号１３の４７７～７１７位；配列番号１３の４７８～７１７位；配列番号１３の４７９～７１７位；配列番号１３の４８０～７１７位；配列番号１３の４８１～７１７位；配列番号１３の４８２～７１７位；配列番号１３の４８３～７１７位；配列番号１３の４８４～７１７位；配列番号１３の４８５～７１７位；配列番号１３の４８６～７１７位；配列番号１３の４８７～７１７位；配列番号１３の４８８～７１７位；配列番号１３の４８９～７１７位；配列番号１３の４９０～７１７位；配列番号１３の４９１～７１７位；配列番号１３の４９２～７１７位；配列番号１３の４９３～７１７位；配列番号１３の４９４～７１７位；配列番号１３の４９５～７１７位；配列番号１３の４９６～７１７位；配列番号１３の４９７～７１７位；配列番号１３の４９８～７１７位；配列番号１３の４９９～７１７位；配列番号１３の５００～７１７位；配列番号１３の５０１～７１７位；配列番号１３の５０２～７１７位；配列番号１３の５０３～７１７位；配列番号１３の５０４～７１７位；配列番号１３の５０５～７１７位；配列番号１３の５０６～７１７位；配列番号１３の５０７～７１７位；配列番号１３の５０８～７１７位；配列番号１３の５０９～７１７位；配列番号１３の５１０～７１７位；配列番号１３の５１１～７１７位；配列番号１３の５１２～７１７位；配列番号１３の５１３～７１７位；配列番号１３の５１４～７１７位；配列番号１３の５１５～７１７位；配列番号１３の５１６～７１７位；配列番号１３の５１７～７１７位；配列番号１３の５１８～７１７位；配列番号１３の５１９～７１７位；配列番号１３の５２０～７１７位；配列番号１３の５２１～７１７位；および配列番号１３の５２２～７１７位のうちの１つに対応するアミノ酸配列を含む、またはそれから本質的になる。

【0173】

一部の実施形態では、本開示に従ったＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、またはその阻害領域は、配列番号１の３６０～８１２位；配列番号１の３６１～８１２位；配列番号１の３６２～８１２位；配列番号１の３６３～８１２位；配列番号１の３６４～８１２位；配列番号１の３６５～８１２位；配列番号１の３６６～８１２位；配列番号１の３６７～８１２位；配列番号１の３６８～８１２位；配列番号１の３６９～８１２位；配列番号１の３７０～８１２位；配列番号１の３７１～８１２位；配列番号１の３７２～８１２位；配列番号１の３７３～８１２位；配列番号１の３７４～８１２位；配列番号１の３７５～８１２位；配列番号１の３７６～８１２位；配列番号１の３７７～８１２位；配列番号１の３７８～８１２位；配列番号１の３７９～８１２位；配列番号１の３８０～８１２位；配列番号１の３８１～８１２位；配列番号１の３８２～８１２位；配列番号１の３８３～８１２位；配列番号１の３８４～８１２位；配列番号１の３８５～８１２位；配列番号１の３８６～８１２位；配列番号１の３８７～８１２位；配列番号１の３８８～８１２位；配列番号１の３８９～８１２位；配列番号１の３９０～８１２位；配列番号１の３９１～８１２位；配列番号１の３９２～８１２位；配列番号１の３９３～８１２位；配列番号１の３９４～８１２位；配列番号１の３９５～８１２位；配列番号１の３９６～８１２位；配列番号１の３９７～８１２位；配列番号１の３９８～８１２位；配列番号１の３９９～８１２位；配列番号１の４００～８１２位；配列番号１の４０１～８１２位；配列番号１の４０２～８１２位；配列番号１の４０３～８１２位；配列番号１の４０４～８１２位；配列番号１の４０５～８１２位；配列番号１の４０６～８１２位；配列番号１の４０７～８１２位；配列番号１の４０８～８１２位；配列番号１の４０９～８１２位；配列番号１の４１０～８１２位；配列番号１の４１１～８１２位；配列番号１の４１２～８１２位；配列番号１の４１３～８１２位；配列番号１の４１４～８１２位；配列番号１の４１５～８１２位；配列番号１の４１６～８１２位；配列番号１の４１７～８１２位；配列番号１の４１８～８１２位；配列番号１の４１９～８１２位；配列番号１の４２０～８１２位；配列番号１の４２１～８１２位；配列番号１の４２２～８１２位；配列番号１の４２３～８１２位；配列番号１の４２４～８１２位；配列番号１の４２５～８１２位；配列番号１の４２６～８１２位；配列番号１の４２７～８１２位；配列番号１の４２８～８１２位；配列番号１の４２９～８１２位；配列番号１の４３０～８１２位；配列番号１の４３１～８１２位；配列番号１の４３２～８１２位；配列番号１の４３３～８１２位；配列番号１の４３４～８１２位；配列番号１の４３５～８１２位；配列番号１の４３６～８１２位；配列番号１の４３７～８１２位；配列番号１の４３８～８１２位；配列番号１の４３９～８１２位；配列番号１の４４０～８１２位；配列番号１の４４１～８１２位；配列番号１の４４２～８１２位；配列番号１の４４３～８１２位；配列番号１の４４４～８１２位；配列番号１の４４５～８１２位；配列番号１の４４６～８１２位；配列番号１の４４７～８１２位；配列番号１の４４８～８１２位；配列番号１の４４９～８１２位；配列番号１の４５０～８１２位；配列番号１の４５１～８１２位；配列番号１の４５２～８１２位；配列番号１の４５３～８１２位；配列番号１の４５４～８１２位；配列番号１の４５５～８１２位；配列番号１の４５６～８１２位；配列番号１の４５７～８１２位；配列番号１の４５８～８１２位；配列番号１の４５９～８１２位；配列番号１の４６０～８１２位；配列番号１の４６１～８１２位；配列番号１の４６２～８１２位；配列番号１の４６３～８１２位；配列番号１の４６４～８１２位；配列番号１の４６５～８１２位；配列番号１の４６６～８１２位；配列番号１の４６７～８１２位；配列番号１の４６８～８１２位；配列番号１の４６９～８１２位；配列番号１の４７０～８１２位；配列番号１の４７１～８１２位；配列番号１の４７２～８１２位；配列番号１の４７３～８１２位；配列番号１の４７４～８１２位；配列番号１の４７５～８１２位；配列番号１の４７６～８１２位；配列番号１の４７７～８１２位；配列番号１の４７８～８１２位；配列番号１の４７９～８１２位；配列番号１の４８０～８１２位；配列番号１の４８１～８１２位；配列番号１の４８２～８１２位；配列番号１の４８３～８１２位；配列番号１の４８４～８１２位；配列番号１の４８５～８１２位；配列番号１の４８６～８１２位；配列番号１の４８７～８１２位；配列番号１の４８８～８１２位；配列番号１の４８９～８１２位；配列番号１の４９０～８１２位；配列番号１の４９１～８１２位；配列番号１の４９２～８１２位；配列番号１の４９３～８１２位；配列番号１の４９４～８１２位；配列番号１の４９５～８１２位；配列番号１の４９６～８１２位；配列番号１の４９７～８１２位；配列番号１の４９８～８１２位；配列番号１の４９９～８１２位；配列番号１の５００～８１２位；配列番号１の５０１～８１２位；配列番号１の５０２～８１２位；配列番号１の５０３～８１２位；配列番号１の５０４～８１２位；配列番号１の５０５～８１２位；配列番号１の５０６～８１２位；配列番号１の５０７～８１２位；配列番号１の５０８～８１２位；配列番号１の５０９～８１２位；配列番号１の５１０～８１２位；配列番号１の５１１～８１２位；配列番号１の５１２～８１２位；配列番号１の５１３～８１２位；配列番号１の５１４～８１２位；配列番号１の５１５～８１２位；配列番号１の５１６～８１２位；配列番号１の５１７～８１２位；配列番号１の５１８～８１２位；配列番号１の５１９～８１２位；配列番号１の５２０～８１２位；配列番号１の５２１～８１２位；配列番号１の５２２～８１２位；配列番号１の５２３～８１２位；配列番号１の５２４～８１２位；配列番号１の５２５～８１２位；配列番号１の５２６～８１２位；配列番号１の５２７～８１２位；配列番号１の５２８～８１２位；配列番号１の５２９～８１２位；配列番号１の５３０～８１２位；配列番号１の５３１～８１２位；配列番号１の５３２～８１２位；配列番号１の５３３～８１２位；配列番号１の５３４～８１２位；配列番号１の５３５～８１２位；配列番号１の５３６～８１２位；配列番号１の５３７～８１２位；配列番号１の５３８～８１２位；配列番号１の５３９～８１２位；配列番号１の５４０～８１２位；配列番号１の５４１～８１２位；配列番号１の５４２～８１２位；配列番号１の５４３～８１２位；配列番号１の５４４～８１２位；配列番号１の５４５～８１２位；配列番号１の５４６～８１２位；配列番号１の５４７～８１２位；配列番号１の５４８～８１２位；配列番号１の５４９～８１２位；配列番号１の５５０～８１２位；配列番号１の５５１～８１２位；配列番号１の５５２～８１２位；配列番号１の５５３～８１２位；配列番号１の５５４～８１２位；配列番号１の５５５～８１２位；配列番号１の５５６～８１２位；配列番号１の５５７～８１２位；配列番号１の５５８～８１２位；配列番号１の５５９～８１２位；配列番号１の５６０～８１２位；配列番号１の５６１～８１２位；配列番号１の５６２～８１２位；配列番号１の５６３～８１２位；配列番号１の５６４～８１２位；配列番号１の５６５～８１２位；配列番号１の５６６～８１２位；配列番号１の５６７～８１２位；配列番号１の５６８～８１２位；配列番号１の５６９～８１２位；配列番号１の５７０～８１２位；配列番号１の５７１～８１２位；配列番号１の５７２～８１２位；配列番号１の５７３～８１２位；配列番号１の５７４～８１２位；配列番号１の５７５～８１２位；配列番号１の５７６～８１２位；配列番号１の５７７～８１２位；配列番号１の５７８～８１２位；配列番号１の５７９～８１２位；配列番号１の５８０～８１２位；配列番号１の５８１～８１２位；配列番号１の５８２～８１２位；配列番号１の５８３～８１２位；配列番号１の５８４～８１２位；配列番号１の５８５～８１２位；配列番号１の５８６～８１２位；配列番号１の５８７～８１２位；配列番号１の５８８～８１２位；配列番号１の５８９～８１２位；配列番号１の５９０～８１２位；配列番号１の５９１～８１２位；配列番号１の５９２～８１２位；配列番号１の５９３～８１２位；配列番号１の５９４～８１２位；配列番号１の５９５～８１２位；配列番号１の５９６～８１２位；配列番号１の５９７～８１２位；配列番号１の５９８～８１２位；配列番号１の５９９～８１２位；配列番号１の６００～８１２位；配列番号１の６０１～８１２位；配列番号１の６０２～８１２位；配列番号１の６０３～８１２位；配列番号１の６０４～８１２位；配列番号１の６０５～８１２位；配列番号１の６０６～８１２位；配列番号１の６０７～８１２位；配列番号１の６０８～８１２位；配列番号１の６０９～８１２位；配列番号１の６１０～８１２位；配列番号１の６１１～８１２位；配列番号１の６１２～８１２位；配列番号１の６１３～８１２位；配列番号１の６１４～８１２位；配列番号１の６１５～８１２位；および配列番号１の６１６～８１２位のうちの１つに対応するアミノ酸配列を含まない、またはから本質的にならない。

【0174】

一部の実施形態では、本開示に従ったＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、またはその阻害領域は、配列番号１３の２５８～７１７位；配列番号１３の２５９～７１７位；配列番号１３の２６０～７１７位；配列番号１３の２６１～７１７位；配列番号１３の２６２～７１７位；配列番号１３の２６３～７１７位；配列番号１３の２６４～７１７位；配列番号１３の２６５～７１７位；配列番号１３の２６６～７１７位；配列番号１３の２６７～７１７位；配列番号１３の２６８～７１７位；配列番号１３の２６９～７１７位；配列番号１３の２７０～７１７位；配列番号１３の２７１～７１７位；配列番号１３の２７２～７１７位；配列番号１３の２７３～７１７位；配列番号１３の２７４～７１７位；配列番号１３の２７５～７１７位；配列番号１３の２７６～７１７位；配列番号１３の２７７～７１７位；配列番号１３の２７８～７１７位；配列番号１３の２７９～７１７位；配列番号１３の２８０～７１７位；配列番号１３の２８１～７１７位；配列番号１３の２８２～７１７位；配列番号１３の２８３～７１７位；配列番号１３の２８４～７１７位；配列番号１３の２８５～７１７位；配列番号１３の２８６～７１７位；配列番号１３の２８７～７１７位；配列番号１３の２８８～７１７位；配列番号１３の２８９～７１７位；配列番号１３の２９０～７１７位；配列番号１３の２９１～７１７位；配列番号１３の２９２～７１７位；配列番号１３の２９３～７１７位；配列番号１３の２９４～７１７位；配列番号１３の２９５～７１７位；配列番号１３の２９６～７１７位；配列番号１３の２９７～７１７位；配列番号１３の２９８～７１７位；配列番号１３の２９９～７１７位；配列番号１３の３００～７１７位；配列番号１３の３０１～７１７位；配列番号１３の３０２～７１７位；配列番号１３の３０３～７１７位；配列番号１３の３０４～７１７位；配列番号１３の３０５～７１７位；配列番号１３の３０６～７１７位；配列番号１３の３０７～７１７位；配列番号１３の３０８～７１７位；配列番号１３の３０９～７１７位；配列番号１３の３１０～７１７位；配列番号１３の３１１～７１７位；配列番号１３の３１２～７１７位；配列番号１３の３１３～７１７位；配列番号１３の３１４～７１７位；配列番号１３の３１５～７１７位；配列番号１３の３１６～７１７位；配列番号１３の３１７～７１７位；配列番号１３の３１８～７１７位；配列番号１３の３１９～７１７位；配列番号１３の３２０～７１７位；配列番号１３の３２１～７１７位；配列番号１３の３２２～７１７位；配列番号１３の３２３～７１７位；配列番号１３の３２４～７１７位；配列番号１３の３２５～７１７位；配列番号１３の３２６～７１７位；配列番号１３の３２７～７１７位；配列番号１３の３２８～７１７位；配列番号１３の３２９～７１７位；配列番号１３の３３０～７１７位；配列番号１３の３３１～７１７位；配列番号１３の３３２～７１７位；配列番号１３の３３３～７１７位；配列番号１３の３３４～７１７位；配列番号１３の３３５～７１７位；配列番号１３の３３６～７１７位；配列番号１３の３３７～７１７位；配列番号１３の３３８～７１７位；配列番号１３の３３９～７１７位；配列番号１３の３４０～７１７位；配列番号１３の３４１～７１７位；配列番号１３の３４２～７１７位；配列番号１３の３４３～７１７位；配列番号１３の３４４～７１７位；配列番号１３の３４５～７１７位；配列番号１３の３４６～７１７位；配列番号１３の３４７～７１７位；配列番号１３の３４８～７１７位；配列番号１３の３４９～７１７位；配列番号１３の３５０～７１７位；配列番号１３の３５１～７１７位；配列番号１３の３５２～７１７位；配列番号１３の３５３～７１７位；配列番号１３の３５４～７１７位；配列番号１３の３５５～７１７位；配列番号１３の３５６～７１７位；配列番号１３の３５７～７１７位；配列番号１３の３５８～７１７位；配列番号１３の３５９～７１７位；配列番号１３の３６０～７１７位；配列番号１３の３６１～７１７位；配列番号１３の３６２～７１７位；配列番号１３の３６３～７１７位；配列番号１３の３６４～７１７位；配列番号１３の３６５～７１７位；配列番号１３の３６６～７１７位；配列番号１３の３６７～７１７位；配列番号１３の３６８～７１７位；配列番号１３の３６９～７１７位；配列番号１３の３７０～７１７位；配列番号１３の３７１～７１７位；配列番号１３の３７２～７１７位；配列番号１３の３７３～７１７位；配列番号１３の３７４～７１７位；配列番号１３の３７５～７１７位；配列番号１３の３７６～７１７位；配列番号１３の３７７～７１７位；配列番号１３の３７８～７１７位；配列番号１３の３７９～７１７位；配列番号１３の３８０～７１７位；配列番号１３の３８１～７１７位；配列番号１３の３８２～７１７位；配列番号１３の３８３～７１７位；配列番号１３の３８４～７１７位；配列番号１３の３８５～７１７位；配列番号１３の３８６～７１７位；配列番号１３の３８７～７１７位；配列番号１３の３８８～７１７位；配列番号１３の３８９～７１７位；配列番号１３の３９０～７１７位；配列番号１３の３９１～７１７位；配列番号１３の３９２～７１７位；配列番号１３の３９３～７１７位；配列番号１３の３９４～７１７位；配列番号１３の３９５～７１７位；配列番号１３の３９６～７１７位；配列番号１３の３９７～７１７位；配列番号１３の３９８～７１７位；配列番号１３の３９９～７１７位；配列番号１３の４００～７１７位；配列番号１３の４０１～７１７位；配列番号１３の４０２～７１７位；配列番号１３の４０３～７１７位；配列番号１３の４０４～７１７位；配列番号１３の４０５～７１７位；配列番号１３の４０６～７１７位；配列番号１３の４０７～７１７位；配列番号１３の４０８～７１７位；配列番号１３の４０９～７１７位；配列番号１３の４１０～７１７位；配列番号１３の４１１～７１７位；配列番号１３の４１２～７１７位；配列番号１３の４１３～７１７位；配列番号１３の４１４～７１７位；配列番号１３の４１５～７１７位；配列番号１３の４１６～７１７位；配列番号１３の４１７～７１７位；配列番号１３の４１８～７１７位；配列番号１３の４１９～７１７位；配列番号１３の４２０～７１７位；配列番号１３の４２１～７１７位；配列番号１３の４２２～７１７位；配列番号１３の４２３～７１７位；配列番号１３の４２４～７１７位；配列番号１３の４２５～７１７位；配列番号１３の４２６～７１７位；配列番号１３の４２７～７１７位；配列番号１３の４２８～７１７位；配列番号１３の４２９～７１７位；配列番号１３の４３０～７１７位；配列番号１３の４３１～７１７位；配列番号１３の４３２～７１７位；配列番号１３の４３３～７１７位；配列番号１３の４３４～７１７位；配列番号１３の４３５～７１７位；配列番号１３の４３６～７１７位；配列番号１３の４３７～７１７位；配列番号１３の４３８～７１７位；配列番号１３の４３９～７１７位；配列番号１３の４４０～７１７位；配列番号１３の４４１～７１７位；配列番号１３の４４２～７１７位；配列番号１３の４４３～７１７位；配列番号１３の４４４～７１７位；配列番号１３の４４５～７１７位；配列番号１３の４４６～７１７位；配列番号１３の４４７～７１７位；配列番号１３の４４８～７１７位；配列番号１３の４４９～７１７位；配列番号１３の４５０～７１７位；配列番号１３の４５１～７１７位；配列番号１３の４５２～７１７位；配列番号１３の４５３～７１７位；配列番号１３の４５４～７１７位；配列番号１３の４５５～７１７位；配列番号１３の４５６～７１７位；配列番号１３の４５７～７１７位；配列番号１３の４５８～７１７位；配列番号１３の４５９～７１７位；配列番号１３の４６０～７１７位；配列番号１３の４６１～７１７位；配列番号１３の４６２～７１７位；配列番号１３の４６３～７１７位；配列番号１３の４６４～７１７位；配列番号１３の４６５～７１７位；配列番号１３の４６６～７１７位；配列番号１３の４６７～７１７位；配列番号１３の４６８～７１７位；配列番号１３の４６９～７１７位；配列番号１３の４７０～７１７位；配列番号１３の４７１～７１７位；配列番号１３の４７２～７１７位；配列番号１３の４７３～７１７位；配列番号１３の４７４～７１７位；配列番号１３の４７５～７１７位；配列番号１３の４７６～７１７位；配列番号１３の４７７～７１７位；配列番号１３の４７８～７１７位；配列番号１３の４７９～７１７位；配列番号１３の４８０～７１７位；配列番号１３の４８１～７１７位；配列番号１３の４８２～７１７位；配列番号１３の４８３～７１７位；配列番号１３の４８４～７１７位；配列番号１３の４８５～７１７位；配列番号１３の４８６～７１７位；配列番号１３の４８７～７１７位；配列番号１３の４８８～７１７位；配列番号１３の４８９～７１７位；配列番号１３の４９０～７１７位；配列番号１３の４９１～７１７位；配列番号１３の４９２～７１７位；配列番号１３の４９３～７１７位；配列番号１３の４９４～７１７位；配列番号１３の４９５～７１７位；配列番号１３の４９６～７１７位；配列番号１３の４９７～７１７位；配列番号１３の４９８～７１７位；配列番号１３の４９９～７１７位；配列番号１３の５００～７１７位；配列番号１３の５０１～７１７位；配列番号１３の５０２～７１７位；配列番号１３の５０３～７１７位；配列番号１３の５０４～７１７位；配列番号１３の５０５～７１７位；配列番号１３の５０６～７１７位；配列番号１３の５０７～７１７位；配列番号１３の５０８～７１７位；配列番号１３の５０９～７１７位；配列番号１３の５１０～７１７位；配列番号１３の５１１～７１７位；配列番号１３の５１２～７１７位；配列番号１３の５１３～７１７位；配列番号１３の５１４～７１７位；配列番号１３の５１５～７１７位；配列番号１３の５１６～７１７位；配列番号１３の５１７～７１７位；配列番号１３の５１８～７１７位；配列番号１３の５１９～７１７位；配列番号１３の５２０～７１７位；配列番号１３の５２１～７１７位；および配列番号１３の５２２～７１７位のうちの１つに対応するアミノ酸配列を含まない、またはから本質的にならない。

【0175】

本開示に従ったＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、１つまたは複数の追加のアミノ酸またはアミノ酸の配列を含み得る。すなわち、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ポリペプチドの阻害領域（すなわち、ＳＵＮドメイン含有タンパク質のＣＣ２領域のα３ヘリックスおよびＳＵＮドメインに対応するアミノ酸配列を含む領域）に加えて１つまたは複数のアミノ酸またはアミノ酸の配列を含み得る。

【0176】

例えば、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、発現、フォールディング、輸送、プロセシング、精製または検出を促進するためのアミノ酸配列（複数可）を含み得る。

【0177】

本開示に従った種々の態様および実施形態により、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ポリペプチドを発現する細胞からのポリペプチドの分泌を妨げる配列を含み得る。一部の実施形態では、ポリペプチドは、小胞体（ＥＲ）保持モチーフを含む。そのような配列は、本開示に従ったＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドの阻害領域のＣ末端に与えられ得る。一部の実施形態では、ポリペプチドを発現する細胞からのポリペプチドの分泌を妨げるための配列（例えば、ＥＲ保持モチーフ）は、ポリペプチドのアミノ酸配列のＣ末端に与えられる。一部の実施形態では、ポリペプチドを発現する細胞からのポリペプチドの分泌を妨げるための配列（例えば、ＥＲ保持モチーフ）には、ポリペプチドのＣ末端でいかなる他のアミノ酸も続かない。

【0178】

小胞体保持配列は当技術分野では公知である。一部の実施形態では、ＥＲ保持モチーフはＫＤＥＬ配列である。一部の実施形態では、ＥＲ保持モチーフは、ＫＤＥＬモチーフまたは、Ｃ末端にモチーフを含むタンパク質を小胞体に保持するために有効なそのバリアントである。ＫＤＥＬバリアントは、プロサイト（ｐｒｏｓｉｔｅ）モチーフ：［Ｋ／Ｒ／Ｈ／Ｑ／Ｓ／Ａ］－［Ｄ／Ｅ／Ｎ／Ｑ］－Ｅ－Ｌ（Ｈｕｌｏら、２００６年、Ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄｓ ｒｅｓｅａｒｃｈ ３４：Ｄ２２７－Ｄ２３０に報告されている）、または拡張されたプロサイトモチーフ定義を提唱したＲａｙｋｈｅｌら、２００７年（Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１７９（６）：１１９３～１２０４頁）により報告されたバリアントに従うアミノ酸配列を含むまたはからなることができる。Ｒａｙｋｈｅｌらは、４位（すなわち、Ｋ位）はＫＲＨＱＳＡの代替物としてＦ、Ｗ Ｙ、ＤＥＮＱをはるかに超えて伸びる３位（すなわち、Ｄ位）残基の範囲、１位（Ｌ位）におけるＦまたはＭ、および２位（すなわち、Ｅ位）におけるＤを含むバリアントを有する内質保持を実証した。

【0179】

例えば、ＫＤＥＬモチーフのバリアントは、Ｒａｙｋｈｅｌらによって提唱された、例えば、ＣＤＥＬ、ＫＣＥＬまたはＨＶＥＬのうちの１つであってよい。したがって、本明細書で開示される一部の態様では、小胞体（ＥＲ）保持モチーフはＫＤＥＬまたはＥＲ保持活性を示すそのバリアントである。

【0180】

一部の実施形態では、ＥＲ保持モチーフは、配列番号７７のアミノ酸配列、または配列番号７７のアミノ酸配列に１つまたは複数（例えば、１個または２個）の置換を含むバリアントを含む、またはそれからなる。

【0181】

一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、シグナルペプチドを含み得る。シグナルペプチドは、本開示に従ったＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドの阻害領域のＮ末端に与えられる。一部の実施形態では、シグナルペプチドは、ポリペプチドのアミノ酸配列のＮ末端に与えられる。一部の実施形態では、シグナルペプチドは、ポリペプチドのＮ末端でいかなる他のアミノ酸によっても先行されない。シグナルペプチドは通常、５～３０の疎水性アミノ酸の配列からなり、このアミノ酸は単一アルファヘリックスを形成する。分泌されたタンパク質および細胞表面で発現されるタンパク質は、多くの場合、シグナルペプチドを含む。シグナルペプチドはペプチド／ポリペプチドのＮ－末端に存在してもよく、新たに合成されたペプチド／ポリペプチドに存在してもよい。シグナルペプチドは多くの場合、切断により取り除かれ、したがって、成熟ペプチド／ポリペプチドには含まれない。

【0182】

シグナルペプチドは、多数のタンパク質について公知であり、ＧｅｎＢａｎｋ、ＵｎｉＰｒｏｔ、Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ、ＴｒＥＭＢＬ、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄａｔａ Ｂａｎｋ、ＥｎｓｅｍｂｌおよびＩｎｔｅｒＰｒｏ等のデータベースにおいて記録されている、ならびに／または、例えば、ＳｉｇｎａｌＰ（Ｐｅｔｅｒｓｅｎら、２０１１年 Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｔｈｏｄｓ ８：７８５～７８６頁）もしくはＳｉｇｎａｌ－ＢＬＡＳＴ（ＦｒａｎｋおよびＳｉｐｐｌ、２００８年 Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ２４：２１７２～２１７６頁）等のアミノ酸配列分析ツールを使用して同定／予測され得る。一部の実施形態では、Ｎ末端シグナル配列は、分泌タンパク質またはＩ型膜貫通タンパク質由来である。一部の実施形態では、分泌タンパク質またはＩ型膜貫通タンパク質は、ヒト血清アルブミン、プロインスリン、トランスフェリン受容体、ＥＧＦ受容体、プレプロオピオメラノコルチン、カルボキシペプチダーゼ、補体タンパク質、フィブリノーゲン、サイトカイン、ケモカイン、フィブリノーゲン、膵消化酵素（例えば、プロテアーゼ、アミラーゼもしくはリパーゼ）、または小胞体内腔タンパク質（例えば、タンパク質ジスルフィドイソメラーゼもしくはＧＲＰ９４）から選択される。一部の実施形態では、Ｎ末端シグナルペプチドは、ヒト血清アルブミン由来である。

【0183】

一部の実施形態では、シグナルペプチドは、シグナルペプチダーゼ切断部位を含む。シグナルペプチダーゼ切断部位は、成熟ポリペプチドからのシグナルペプチドの除去をもたらす。一部の実施形態では、本開示に従ったＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、分泌タンパク質またはＩ型膜貫通タンパク質、例えば、先述の分泌タンパク質またはＩ型膜貫通タンパク質に由来するシグナルペプチダーゼ切断部位を含む。

【0184】

一部の実施形態では、シグナルペプチドは、配列番号７６のアミノ酸配列に少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のうちの１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれからなる。一部の実施形態では、シグナルペプチドは、配列番号１００のアミノ酸配列に少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のうちの１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれからなる。

【0185】

一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、検出可能な部分、例えば、蛍光標識、リン光標識、発光標識、免疫検出可能な標識（例えば、エピトープタグ）、放射標識、化学的、核酸のまたは酵素的標識を含み得る。ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、検出可能な部分を用いて共有結合で、または非共有結合で標識され得る。

【0186】

一部の実施形態では、検出可能な部分は（任意のシグナルペプチドを除去するシグナルペプチダーゼによるポリペプチドのプロセシングの前または後のいずれかで）ポリペプチドのＮ末端に提供される。一部の実施形態では、検出可能な部分は、ポリペプチドのＣ末端、例えば、ポリペプチドを発現する細胞からのポリペプチドの分泌を妨げるための配列の下流（後ろ）（例えば、ＥＲ保持モチーフの下流）に提供される。

【0187】

一部の実施形態では、検出可能な部分は、エピトープタグであるか、またはこれを含む。一部の実施形態では、エピトープタグは、ヘマグルチニンＡ（ＨＡ）、ＡＬＦＡ、ヒスチジン（Ｈｉｓ；例えば、６ＸＨｉｓ）、ｃ－Ｍｙｃ、グルタチオンＳ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）、ＦＬＡＧ、Ｅ、ビオチン、プロテインＡ、プロテインＧ、ストレプトアビジン、Ｔ７、チオレドキシン、Ｖ５または水疱性口内炎ウイルス糖タンパク質（ＶＳＶ－Ｇ）タグから選択される。一部の実施形態では、検出可能な部分は、検出可能な活性、例えば、所与の基質での酵素活性を有する部分であるか、またはこれを含む。そのような部分の例は、例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）およびルシフェラーゼ部分を含む。

【0188】

一部の実施形態では、検出可能な部分は、ＨＡタグであるか、またはこれを含む。一部の実施形態では、検出可能な部分は、ＡＬＦＡタグであるか、またはこれを含む。

【0189】

一部の実施形態では、検出可能な部分は、配列番号７８のアミノ酸配列、または配列番号７８のアミノ酸配列に１つまたは複数（例えば、１、２、３または４個）の置換を含むバリアントを含む、またはそれからなる。一部の実施形態では、検出可能な部分は、配列番号７９のアミノ酸配列、または配列番号７９のアミノ酸配列に１つまたは複数（例えば、１、２、３または４個）の置換を含むバリアントを含む、またはそれからなる。

【0190】

一部の実施形態では、本開示に従ったＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、以下の構造：
Ｎ末端－［シグナルペプチド］－［検出可能な構成体］－［ＳＵＮドメイン含有タンパク質のＣＣ２領域のα３ヘリックスおよびＳＵＮドメインに対応するアミノ酸配列を含む阻害領域］－［ポリペプチドを発現する細胞からのポリペプチドの分泌を妨げる配列］－Ｃ末端
Ｎ末端－［検出可能な構成体］－［シグナルペプチド］－［ＳＵＮドメイン含有タンパク質のＣＣ２領域のα３ヘリックスおよびＳＵＮドメインに対応するアミノ酸配列を含む阻害領域］－［ポリペプチドを発現する細胞からのポリペプチドの分泌を妨げる配列］－Ｃ末端
Ｎ末端－［検出可能な構成体］－［ＳＵＮドメイン含有タンパク質のＣＣ２領域のα３ヘリックスおよびＳＵＮドメインに対応するアミノ酸配列を含む阻害領域］－［ポリペプチドを発現する細胞からのポリペプチドの分泌を妨げる配列］－Ｃ末端
Ｎ末端－［ＳＵＮドメイン含有タンパク質のＣＣ２領域のα３ヘリックスおよびＳＵＮドメインに対応するアミノ酸配列を含む阻害領域］－［ポリペプチドを発現する細胞からのポリペプチドの分泌を妨げる配列］－Ｃ末端
のうちの１つを備える。

【0191】

一部の実施形態では、本開示に従ったＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、アミノ酸配列の間に１つまたは複数のリンカー配列を含む。一部の実施形態では、リンカー配列は、１～２、１～３、１～４、１～５または１～１０アミノ酸の長さを有する。一部の実施形態では、リンカー配列は、ＳＵＮドメイン含有タンパク質のＣＣ２領域のα３ヘリックスおよびＳＵＮドメインに対応するアミノ酸配列を含む阻害領域；シグナルペプチド；ポリペプチドを発現する細胞からのポリペプチドの分泌を妨げる配列；ならびに／またはＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドの検出可能な構成体、のうちの１つまたは複数の一末端または両末端に提供され得る。

【0192】

リンカー配列は、当業者に公知であり、例えば、Ｃｈｅｎら、Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ（２０１３）６５（１０）：１３５７～１３６９頁に記載されている、前記文献はこれにより参照により本明細書にその全体が組み込まれる。一部の実施形態では、リンカー配列は、可動性リンカー配列であってよい。可動性リンカー配列は、リンカー配列によって連結されるアミノ酸配列の相対的移動を可能にする。可動性リンカーは、当業者に公知であり、いくつかは、Ｃｈｅｎら、Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ（２０１３）６５（１０）：１３５７～１３６９頁に同定されている。可動性リンカー配列は、高い割合のグリシンおよび／またはセリン残基をしばしば含む。一部の実施形態では、リンカー配列は、少なくとも１つのグリシン残基および／または少なくとも１つのセリン残基を含む。一部の実施形態では、リンカー配列は、グリシンおよびセリン残基からなる。

【0193】

好ましい実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、遺伝子治療として、すなわち、ポリペプチドをコードする核酸の形態においてＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドの送達を可能にするサイズ（すなわち、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドを作り上げるアミノ酸の数に関して）である。

【0194】

一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが、ポリヌクレオチドを送達するためのベクターのパッケージング限界内のサイズ（すなわち、ポリヌクレオチドを作り上げるヌクレオチドの数に関して）を有するようなサイズを有する。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが、本明細書に記載されるベクターのパッケージング限界内のサイズを有するようなサイズを有する。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、例えば、本明細書に記載されるＡＡＶベクターのパッケージング限界内のサイズを有するようなサイズを有する。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが、ｓｃＡＡＶベクターのパッケージング限界内のサイズを有するようなサイズを有する。

【0195】

一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、５１０個未満のアミノ酸を含むアミノ酸配列からなる。一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、４５７個未満のアミノ酸を含むアミノ酸配列からなる。

【0196】

一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、６００アミノ酸未満、例えば、≦５５０、≦５００、≦４５０、≦４００、≦３５０、≦３４０、≦３３０、≦３２０、≦３１０、≦３００、≦２９０、≦２８０、≦２７０、≦２６０、≦２５０、≦２４０、≦２３０、≦２２０または≦２１０アミノ酸のうちの１つを含むアミノ酸配列からなる。

【0197】

本開示に従ったＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、当業者に公知のポリペプチドの産生のための方法に従って調製され得る。

【0198】

ポリペプチドは、化学合成、例えば、液相または固相合成によって調製され得る。例えば、ペプチド／ポリペプチドは、例えば、Ｃｈａｎｄｒｕｄｕら、Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ（２０１３）、１８：４３７３～４３８８頁に記載される方法を使用して合成され得る、前記文献はこれにより参照により本明細書にその全体が組み込まれる。代替的に、抗原結合分子およびポリペプチドは、組換え発現によって産生され得る。ポリペプチドの組換え産生のために好適な分子生物学技術は、ＧｒｅｅｎおよびＳａｍｂｒｏｏｋ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（第４版）、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ、２０１２年において、ならびにＮａｔ Ｍｅｔｈｏｄｓ．（２００８）；５（２）：１３５～１４６頁において記載されているもの等、当技術分野において周知である、前記文献は両方ともこれにより参照により本明細書にその全体が組み込まれる。抗原結合分子の組換え産生のための方法も、Ｆｒｅｎｚｅｌら、Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０１３）；４：２１７ならびにＫｕｎｅｒｔおよびＲｅｉｎｈａｒｔ、Ａｐｐｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．（２０１６）１００：３４５１～３４６１頁に記載されている、前記文献は両方ともこれにより参照により本明細書にその全体が組み込まれる。

【0199】

ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドをコードする核酸およびベクター
本開示は、本開示に従ったＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドをコードする核酸を提供する。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡおよび／またはＲＮＡを含む、またはそれからなる。一部の実施形態では、核酸は、ポリヌクレオチドであるか、またはこれを含む。核酸は、本開示に従ったポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを含む、またはそれからなることができる。

【0200】

本開示に従ったＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ポリペプチドをコードするＲＮＡの翻訳によって細胞内で産生され得る。本開示に従ったＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ポリペプチドをコードする核酸からの転写に続いて転写されたＲＮＡの翻訳によって細胞内で産生され得る。

【0201】

好ましい実施形態では、核酸は、遺伝子治療として、すなわち、好適なベクターにおけるその送達を可能にするサイズを有する。

【0202】

一部の実施形態では、本開示の核酸は、ポリヌクレオチドを送達するためのベクターのパッケージング限界内のサイズを有するヌクレオチド配列からなる。一部の実施形態では、核酸は、本明細書に記載されるベクターのパッケージング限界内のサイズを有するヌクレオチド配列からなる。一部の実施形態では、核酸は、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、例えば、本明細書に記載されるＡＡＶベクターのパッケージング限界内のサイズを有するヌクレオチド配列からなる。一部の実施形態では、核酸は、ｓｃＡＡＶベクターのパッケージング限界内のサイズを有するヌクレオチド配列からなる。

【0203】

本開示に従った核酸は、ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む場合があり、１つまたは複数のポリペプチドをコードしないヌクレオチド配列（複数可）を追加で含む場合がある。ポリペプチドをコードしないヌクレオチド配列（複数可）は、例えば、５’キャップ、５’ ＵＴＲ、３’ ＵＴＲおよび／またはポリＡテール配列であり得る。

【0204】

一部の実施形態では、核酸のヌクレオチド配列は、６，０００ヌクレオチド未満、例えば、≦５，０００、≦４，５００、≦４，０００、≦３，５００、≦３，０００、≦２，５００、≦２，４００または≦２，３００ヌクレオチドのうちの１つからなる。

【0205】

一部の実施形態では、本開示の核酸のタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、１，５３０ヌクレオチド未満からなる。一部の実施形態では、本開示の核酸のタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、１，３７１ヌクレオチド未満からなる。

【0206】

一部の実施形態では、核酸のタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、１，８００ヌクレオチド未満、例えば、≦１，６５０、≦１，５００、≦１，３５０、≦１，２００、≦１，０５０、≦１，０２０、≦９９０、≦９６０、≦９３０、≦９００、≦８７０、≦８４０、≦８１０、≦７８０、≦７５０、≦７２０、≦６９０、≦６６０または≦６３０ヌクレオチドのうちの１つからなる。

【0207】

一部の実施形態では、核酸は、ベクターであるか、またはこれに含まれる。したがって、本開示は、本開示に従ったＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドをコードする核酸を含むベクターも提供する。

【0208】

本開示に従った核酸およびベクターは、精製された、または単離された形態で、すなわち、他の核酸または天然に存在する生物学的材料由来で提供され得る。

【0209】

本明細書で使用される「ベクター」は、外来性核酸を細胞中に移行させる媒体として使用される核酸を指す。ベクターは、細胞中における核酸の発現用のベクターでもよい（すなわち、ベクターは発現ベクターであってよい）。そのようなベクターは、発現される配列をコードするヌクレオチド配列に作動可能に連結されたプロモーター配列を含み得る。ベクターは、終結コドンおよび発現エンハンサーも含み得る。当技術分野で公知であるいかなる好適なベクター、プロモーター、エンハンサーおよび終結コドンでも、本開示に従ったベクターからペプチドまたはポリペプチドを発現するために使用され得る。

【0210】

用語「作動可能に連結される」は、選択された核酸配列および調節核酸配列（例えば、プロモーターおよび／またはエンハンサー）が、ヌクレオチド配列の発現を調節配列の影響または制御下に置く（それによって発現カセットを形成する）ように共有結合されている状況を含み得る。したがって、調節配列が核酸配列の転写を引き起こすことができる場合は、調節配列は選択された核酸配列に作動可能に連結されている。次に、得られた転写物（複数可）は、ポリペプチド、例えば、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドに翻訳され得る。

【0211】

好適なベクターは、プラスミド、バイナリーベクター、ＤＮＡベクター、ｍＲＮＡベクター、ウイルスベクター（例えば、ガンマレトロウイルスベクター（例えば、マウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）由来ベクター）、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、ワクチニアウイルスベクターおよびヘルペスウイルスベクター）、トランスポゾンベースのベクターならびに人工染色体（例えば、酵母人工染色体）を含み、例えば、Ｍａｕｓら、Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ（２０１４）３２：１８９～２２５頁またはＭｏｒｇａｎおよびＢｏｙｅｒｉｎａｓ、Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅｓ ２０１６年 ４、９に記載される通りであり、前記文献は両方ともこれにより参照により本明細書にその全体が組み込まれる。好ましい実施形態では、ベクターは、アデノ随伴ウイルスベクターまたはレンチウイルスベクターである。

【0212】

一部の実施形態では、ベクターは、核酸を送達するのが望まれる細胞型／組織／器官に対するトロピズムに基づいて選択される。一部の実施形態では、ベクターは、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドを発現することが望まれる細胞型／組織／器官に対するトロピズムに基づいて選択される。例えば、本開示に従って処置される／予防される疾患に冒されている細胞型／組織／器官（例えば、疾患の症状が現れる細胞／組織／器官）に核酸を送達する／ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドを発現することは望まれ得る。

【0213】

一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドをコードする核酸を筋肉細胞／組織（例えば、心臓および／または骨格筋細胞／組織）に送達するのが望ましく、そのような実施形態では、そのような細胞／組織に対するトロピズムを有するベクターを用いるのがよい。一部の実施形態では、ベクターは心臓作用性であり得る。一部の実施形態では、ベクターはミオトロピックであり得る。

【0214】

好ましい実施形態では、ベクターは、アデノ随伴ウイルスベクターである。遺伝子治療を誘導するアデノ随伴ウイルスベクターおよびそれらの使用は、例えば、Ｗａｎｇら、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ．（２０１９）１８：３５８～３７８頁ならびにＬｉおよびＳａｍｕｌｓｋｉ、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｇｅｎｅｔ．（２０２０）１２：２５５～２７２頁に概説されており、その両方とも参照によりそれら全体が本明細書に組み込まれる。一部の実施形態では、ベクターは、Ｗａｎｇら、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ．（２０１９）１８：３５８～３７８頁に記載されているアデノ随伴ウイルスベクターであってよい。一部の実施形態では、ベクターは、ＬｉおよびＳａｍｕｌｓｋｉ、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｇｅｎｅｔ．（２０２０）１２：２５５～２７２頁に記載されているアデノ随伴ウイルスベクターであってよい。

【0215】

一部の実施形態では、ベクターは、自己相補性アデノ随伴ウイルス（ｓｃＡＡＶ）ベクターである。自己相補性アデノ随伴ウイルスベクターは、例えば、ＭｃＣａｒｔｙ，Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．（２００８）１６（１０）：１６４８～５６頁に記載されている、前記文献はこれにより参照により本明細書にその全体が組み込まれる。従来のＡＡＶは、１本鎖ＤＮＡゲノムを有し、相補鎖を合成するために形質導入された細胞のＤＮＡ複製機構に依存し、導入遺伝子発現が遅れる。対照的に、ｓｃＡＡＶは、感染の際に自発的にアニールする相補性配列を含有し、形質導入された宿主細胞におけるＤＮＡ合成のための必要要件を省く。古典的なものと比較して、１本鎖ＡＡＶベクター、ｓｃＡＡＶベクターは、導入遺伝子発現の開始の加速、および導入遺伝子発現のレベルの増加をもたらすことが示された。

【0216】

一部の実施形態では、ベクターは、以下の血清型：ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ２ｉ８、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ９．４５、ＡＡＶ１０またはＡＡＶｒｈ７４のうちの１つのアデノ随伴ウイルスベクターであってよい。一部の実施形態では、ベクターはＡＡＶ９ベクターである。

【0217】

一部の実施形態では、ベクターは、心臓作用性アデノ随伴ウイルスベクターであってよい。一部の実施形態では、ベクターは、以下の血清型：ＡＡＶ１、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ９．４５のうちの１つのアデノ随伴ウイルスベクターであってよい。

【0218】

一部の実施形態では、ベクターは、骨格筋トロピックアデノ随伴ウイルスベクターであってよい。一部の実施形態では、ベクターは、以下の血清型：ＡＡＶ１、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ９．４５のうちの１つのアデノ随伴ウイルスベクターであってよい。

【0219】

一部の実施形態では、ベクターは、目的の細胞型への結合および／または形質導入を増やす（すなわち、非改変ベクターによる結合／形質導入のレベルと比べて）改変を含む。一部の実施形態では、改変はカプシドタンパク質に対してである。

【0220】

一部の実施形態では、ベクターは、細胞ターゲティングペプチドを含むカプシドタンパク質を含む。一部の実施形態では、細胞ターゲティングペプチドは、Ｂｕｎｉｎｇ ａｎｄ Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ＆Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ（２０１９）１２：２４８～２６５頁に記載される細胞ターゲティングペプチド、例えば、その表１、２、３または４に示される細胞ターゲティングペプチドであり、前記文献はこれにより参照により本明細書にその全体が組み込まれる。

【0221】

一部の実施形態では、ベクターは、１つまたは複数のチロシン残基、例えば、１つまたは複数の表面露出チロシン残基への置換を含むカプシドタンパク質を含む。一部の実施形態では、カプシドタンパク質の１つまたは複数のチロシン残基はフェニルアラニンに置換される。一部の実施形態では、ベクターは、Ｉｉｄａら、Ｂｉｏｍｅｄ Ｒｅｓ Ｉｎｔ．（２０１３）２０１３年：９７４８１９頁に記載される通りに１つまたは複数のチロシン残基が別のアミノ酸を用いて置換されているカプシドタンパク質を含み、前記文献はこれにより参照により本明細書にその全体が組み込まれる。

【0222】

一部の実施形態では、ベクターは、Ｂｕｎｉｎｇ ａｎｄ Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ、上記、に記載されるアデノ随伴ウイルスベクターでもよい。一部の実施形態では、ベクターは、Ｉｉｄａら、上記、に記載されるアデノ随伴ウイルスベクターでもよい。

【0223】

一部の実施形態では、核酸／ベクターは、核酸の発現を制御するための１つまたは複数の配列を含む。したがって、一部の実施形態では、核酸／ベクターは、核酸の誘導性発現のための制御エレメントを含む。

【0224】

核酸の発現を制御するための配列は、特定の型の細胞または組織による核酸の発現を提供し得る。例えば、発現は、細胞型－または組織特異的プロモーターの制御下にあってよい。

【0225】

本発明に従った核酸の細胞型－または組織特異的発現のためのプロモーターは、処置される／予防される疾患に従って選択することができる。例えば、プロモーターは、疾患に冒された細胞型／組織／器官（例えば、疾患の症状が現れる細胞型／組織／器官）における発現を駆動し得る。

【0226】

一部の実施形態では、プロモーターは、筋肉細胞／組織（例えば、心臓および／または骨格筋細胞／組織）における発現を提供し得る。一部の実施形態では、プロモーターは、心臓または心筋細胞特異的プロモーター（例えば、ｃＴＮＴ、α－ＭＨＣまたはＭＬＣ２ｖプロモーター）でもよい。一部の実施形態では、プロモーターは、骨格筋／横紋筋細胞特異的プロモーター（例えば、ＭＣＫ、ＭＨＣＫ７またはデスミンプロモーター）でもよい。一部の実施形態では、プロモーターはｃＴＮＴである。

【0227】

一部の実施形態では、プロモーターは、血管内皮細胞特異的プロモーター（例えば、Ｔｉｅ２プロモーター）でもよい。一部の実施形態では、プロモーターは、血管平滑筋細胞特異的プロモーター（例えば、ＳＭ２２ａプロモーター）でもよい。一部の実施形態では、プロモーターは、単球／マクロファージ特異的プロモーター（例えば、ＬｙｓＭプロモーター）でもよい。

【0228】

核酸の発現を制御するための配列は、例えば、所与の薬剤／シグナルへの応答で核酸の発現を提供し得る。例えば、発現は誘導性プロモーターの制御下であり得る。薬剤は、本開示に従って改変された細胞を投与されている対象への薬剤の投与によりｉｎ ｖｉｖｏで、またはｅｘ ｖｉｖｏもしくはｉｎ ｖｉｔｒｏにおける培養細胞への薬剤の投与によりｅｘ ｖｉｖｏ／ｉｎ ｖｉｔｒｏで核酸の誘導性発現を提供し得る。

【0229】

一部の実施形態では、本開示に従った核酸またはベクターは、核酸／ベクターを含む細胞による、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドをコードする核酸の発現を制御するために条件的発現系を用い得る。「条件的発現」は、本明細書では「誘導性発現」とも呼ばれる場合があり、ある特定の条件、例えば、特定の薬剤の存在を条件とする発現のことである。条件的発現系は当技術分野では周知であり、Ｒｙｄｉｎｇら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ（２００１）１７１、１～１４頁で概説されており、前記文献はこれにより参照により本明細書にその全体が組み込まれる。

【0230】

ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドをコードする／含む／発現する細胞
本開示は、本開示に従ったＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドを含むまたは発現する細胞も提供する。本開示に従った核酸またはベクターを含む、または発現する細胞も同様に提供される。

【0231】

細胞は、真核細胞、例えば、哺乳動物細胞であり得る。哺乳動物は、霊長類（アカゲザル、カニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｏｕｓ）、非ヒト霊長類もしくはヒト）または非ヒト哺乳動物（例えば、ウサギ、モルモット、ラット、マウスもしくは他のげっ歯類（げっ歯類目の任意の動物を含む）、ネコ、イヌ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウシ（ウシ、例えば、乳牛もしくはウシ（Ｂｏｓ）目の任意の動物を含む）、ウマ（ウマ（Ｅｑｕｉｄａｅ）目の任意の動物を含む）、ロバおよび非ヒト霊長類）であり得る。好ましい実施形態では、細胞は、ヒト細胞であり得る。

【0232】

本開示は、本開示に従った核酸もしくはベクターを含む細胞または本開示に従ったＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドを含む／発現する細胞を産生するための方法であって、本開示に従った核酸またはベクターを細胞に導入するステップを含む方法も提供する。一部の実施形態では、本開示に従った核酸／ベクターを細胞に導入するステップは、形質転換、トランスフェクション、電気穿孔法または形質導入（例えば、アデノ随伴ウイルス形質導入）を含む。一部の実施形態では、核酸／ベクターは、例えば、本開示に従ったベクター（例えば、ウイルスベクター、例えば、アデノ随伴ウイルスベクター）の対象への投与後に、ｉｎ ｖｉｖｏで細胞に導入される。一部の実施形態では、核酸／ベクターは、ｅｘ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで培養物中の細胞に導入される。

【0233】

一部の実施形態では、方法は、細胞による核酸またはベクターの発現のために好適な条件下で細胞を培養するステップを追加で含む。

【0234】

本開示は、本開示に従った方法によって得られた、または得ることができる細胞も提供する。

【0235】

組成物
本開示は、本明細書に記載されるＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、核酸、ベクターおよび細胞を含む組成物も提供する。特に、本開示は、本開示のＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、核酸、ベクターおよび細胞を含む医薬組成物および医薬を提供する。

【0236】

そのような組成物は、臨床使用のために好適な製剤中に関連物品（すなわち、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド／核酸／ベクター／細胞）を含み得る。本開示は、本開示に従った核酸およびベクターを含む医薬組成物／医薬に特に関連する。

【0237】

本開示の組成物は、１つまたは複数の薬学的に許容される担体（例えば、リポソーム、ミセル、ミクロスフェア、ナノ粒子）、希釈剤／賦形剤（例えば、デンプン、セルロース、セルロース誘導体、ポリオール、ブドウ糖、マルトデキストリン、ステアリン酸マグネシウム）、アジュバント、充填剤、緩衝剤、保存剤（例えば、ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビタミンＣ、レチニルパルミテート、セレニウム、システイン、メチオニン、クエン酸、クエン酸ナトリウム、メチルパラベン、プロピルパラベン）、抗酸化剤（例えば、ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビタミンＣ、レチニルパルミテート、セレニウム）、潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、シリカ、ステアリン酸、植物性ステアリン、結合剤（例えば、ショ糖、乳糖、デンプン、セルロース、ゼラチン、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、キシリトール、ソルビトール、マンニトール）、安定化剤、可溶化剤、界面活性剤（例えば、湿潤剤）、マスキング剤、着色剤（例えば、酸化チタン）を含み得る。

【0238】

本明細書で使用される用語「薬学的に許容される」とは、堅実な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー応答、または他の問題もしくは困難な事態なしで、穏当な利益／リスク比に見合って、問題の対象（例えば、ヒト対象）の組織に接触して使用するのに適している化合物、成分、材料、組成物、剤形、等に関する。本開示に従った組成物のそれぞれの担体、希釈剤、賦形剤、アジュバント、充填剤、緩衝剤、保存剤、抗酸化剤、潤滑剤、結合剤、安定化剤、可溶化剤、界面活性剤、マスキング剤、着色剤、香味剤、または甘味剤は、製剤のその他の成分と適合するという意味でも「許容可能で」なければならない。好適な担体、希釈剤、賦形剤、アジュバント、充填剤、緩衝剤、保存剤、抗酸化剤、潤滑剤、結合剤、安定化剤、可溶化剤、界面活性剤、マスキング剤、着色剤、香味剤、または甘味剤は、標準製薬テキスト、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ ‘Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ’（Ｅｄ．Ａ．Ａｄｅｊａｒｅ）、第２３版（２０２０）、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓに見出せる。

【0239】

本開示に従った医薬組成物／医薬は、対象への投与、例えば、治療剤および処置／予防される疾患の性質に対して適切な投与の経路を通じた投与のために製剤化され得る。一部の実施形態では、医薬組成物／医薬は、非経口、全身性、局所、腔内、血管内、静脈内、動脈内、筋肉内、くも膜下腔内、眼内、結膜内（ｉｎｔｒａｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖａｌ）、腫瘍内、皮下、皮内、経口または経皮的投与のために製剤化され得る。一部の実施形態では、医薬組成物／医薬は、注射もしくは注入による投与、または経口摂取による投与のために製剤化され得る。

【0240】

医薬および医薬組成物は、血管への、または目的の組織／器官（例えば、状態に冒されている疾患／状態に冒されている組織／器官（例えば、疾患／状態の症状が現れる組織／器官）への投与のために製剤化され得る。

【0241】

医薬組成物／医薬は、無菌または等張媒体中にＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド／核酸／ベクター／細胞を含んでいてよい。医薬組成物／医薬は、ゲル形態を含む液体で提供されてよい。液体製剤は、血管への、またはヒトもしくは動物の身体の選択された領域への注射または注入（例えば、カニューレを通じて）による投与のために製剤化され得る。医薬組成物／医薬は、固体形態、例えば、凍結乾燥形態で提供されてよい。

【0242】

本開示は、本開示に従った医薬組成物／医薬を産生するための方法も提供する。そのような方法は、本明細書に記載されるＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド／核酸／ベクター／細胞と薬学的に許容される担体、希釈剤、賦形剤、アジュバント、充填剤、緩衝剤、保存剤、抗酸化剤、潤滑剤、結合剤、安定化剤、可溶化剤、界面活性剤、マスキング剤、着色剤、香味剤、または甘味剤とを混合するステップを含み得る。そのような方法は、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド／核酸／ベクター／細胞を１つまたは複数の補助成分を構成する担体と会合させるステップを一般に含む。一般には、組成物は、活性化合物を担体（例えば、液体担体、微細化した固体担体、等）と均等に密接に会合させ、次に必要であれば製品を成形することにより調製される。

【0243】

本開示に従ったＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、核酸、ベクター、細胞および組成物は、目的の細胞／組織（例えば、心臓および／または骨格筋細胞／組織）への送達および／または、それによる取り込みを促進するように修飾および／または製剤化され得る。

【0244】

そのような種の標的化送達のための戦略は、例えば、Ｌｉら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｓｃｉ．（２０１５）１６：１９５１８～１９５３６頁およびＦｕら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ．（２０１４）２５（９）：１６０２～１６０８頁に概説されている、前記文献はこれにより参照により本明細書にその全体が組み込まれる。

【0245】

一部の実施形態では、本開示の物品は、ナノ粒子またはリポソーム中に被包され得る。一部の実施形態では、本開示の物品は、細胞透過性ペプチド（例えば、タンパク質形質導入ドメイン、トロイペプチド（ｔｒｏｊａｎ ｐｅｐｔｉｄｅ）、アルギニンリッチペプチド、ベクトセル（ｖｅｃｔｏｃｅｌｌ）ペプチド）、カチオンポリマー、カチオン性脂質またはウイルスキャリアー（ｖｉｒａｌ ｃａｒｒｉｅｒ）と（共有結合的にまたは非共有結合的に）会合し得る。

【0246】

ナノ粒子は、有機物、例えば、ミセル、リポソーム、タンパク質、固体脂質粒子、固体ポリマー粒子、デンドリマーおよびポリマー治療剤であり得る。ナノ粒子は、無機物、例えば、付加された有機分子を任意選択で有する、ナノチューブまたは金属粒子等であってよい。一部の実施形態では、ナノ粒子は、Ｃｈｅｎら、Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｃｌｉｎ Ｄｅｖ．（２０１６）３：１６０２３頁に記載されるナノ粒子であり、前記文献はこれにより参照により本明細書にその全体が組み込まれる。一部の実施形態では、ナノ粒子は、ＰＬＧＡ、ポリペプチド、ポリ（β－アミノエステル）、ＤＯＰＥ、β－シクロデキストリン含有ポリカチオン、線状ＰＥＩ、ＰＡＭＡＭデンドリマー、分岐ＰＥＩ、キトサンまたはポリリン酸エステルナノ粒子である。

【0247】

一部の実施形態では、本開示に従ったＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、核酸およびベクターは、目的の細胞型または組織（例えば、心臓および／または骨格筋細胞／組織）への送達、および／またはそれによる取り込みを促進する１つまたは複数の部分を組み込むための改変を含む。一部の実施形態では、本開示に従ったＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、核酸およびベクターは、目的の細胞型または組織への送達、および／またはそれによる取り込みを促進する１つまたは複数の部分に連結（例えば、化学的にコンジュゲート）される。

【0248】

目的の細胞型または組織への送達、および／またはそれによる取り込みを促進する部分は、例えば、Ｂｅｎｉｚｒｉら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ．（２０１９）３０（２）：３６６～３８３頁に記載される、前記文献はこれにより参照により本明細書にその全体が組み込まれる。そのような部分は、例えば、Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、α－トコフェロール、細胞透過性ペプチド、核酸アプタマー、抗体およびその抗原結合断片／誘導体、コレステロール、スクアレン、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、脂肪酸（例えば、パルミチン酸）およびヌクレオ脂質部分を含む。

【0249】

本開示の物品は、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、核酸、ベクター、細胞または組成物を所定の速度で放出するために徐放送達システムで製剤化され得る。徐放送達システムは、一定の薬物／治療用／予防濃度を指定の期間維持できる。一部の実施形態では、本開示の物品は、リポソーム、ゲル、インプラント、デバイスまたは薬物ポリマーコンジュゲート、例えば、ハイドロゲルに製剤化される。

【0250】

ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドを同定するための方法
本開示は、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドを同定するための方法も提供する。

【0251】

該方法は、候補ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドが、関連相互作用パートナーの正常な細胞内局在を変更／破壊するかどうかを判定するために、ＳＵＮドメイン含有タンパク質のＳＵＮドメインに対応する、またはＫＡＳＨドメイン含有タンパク質のＫＡＳＨドメインに対応するアミノ酸配列を含む候補ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドをコードする核酸を導入するステップ、およびＳＵＮドメイン含有タンパク質に対する相互作用パートナーの細胞内局在を分析するステップ（候補ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドが、ＳＵＮドメイン含有タンパク質のＳＵＮドメインに対応するアミノ酸配列を含む場合）、またはＫＡＳＨドメイン含有タンパク質に対する相互作用パートナーの細胞内局在を分析するステップ（候補ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドがＫＡＳＨドメイン含有タンパク質のＫＡＳＨドメインに対応するアミノ酸配列を含む場合）を一般に含む。

【0252】

さらに詳細には、本開示は、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドを同定するための方法であって、
候補ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドをコードする核酸を導入するステップであって、候補ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ＳＵＮドメイン含有タンパク質（例えば、ＳＵＮ１、ＳＵＮ２、ＳＵＮ３、ＳＵＮ５、ＳＰＡＧ４またはＳＵＣＯ）のＳＵＮドメインに対応するアミノ酸配列を含む、ステップ；および
続いて、細胞を分析して、ＳＵＮドメイン含有タンパク質に対する相互作用パートナー（例えば、ＫＡＳＨドメイン含有タンパク質、例えば、Ｎｅｓｐｒｉｎ－１、Ｎｅｓｐｒｉｎ－２、Ｎｅｓｐｒｉｎ－３、Ｎｅｓｐｒｉｎ－４、ＫＡＳＨ５またはＬＲＭＰ）の細胞内局在を決定するステップ
を含み、ＳＵＮドメイン含有タンパク質に対する相互作用パートナーの細胞内局在の変化が検出される場合に、候補ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドがＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドであると決定される、方法を提供する。

【0253】

ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドを同定するための方法であって、
候補ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドをコードする核酸を導入するステップであって、候補ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ＫＡＳＨドメイン含有タンパク質（例えば、Ｎｅｓｐｒｉｎ－１、Ｎｅｓｐｒｉｎ－２、Ｎｅｓｐｒｉｎ－３、Ｎｅｓｐｒｉｎ－４、ＫＡＳＨ５またはＬＲＭＰ）のＫＡＳＨドメインに対応するアミノ酸配列を含む、ステップ；および
続いて、細胞を分析して、ＫＡＳＨドメイン含有タンパク質に対する相互作用パートナー（例えば、ＳＵＮドメイン含有タンパク質、例えばＳＵＮ１、ＳＵＮ２、ＳＵＮ３、ＳＵＮ５、ＳＰＡＧ４またはＳＵＣＯ）の細胞内局在を決定するステップ
を含み、ＫＡＳＨドメイン含有タンパク質に対する相互作用パートナーの細胞内局在の変化が検出される場合に、候補ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドがＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドであると決定される、方法も同様に提供される。

【0254】

先の２段落において参照される関連相互作用パートナーの細胞内局在の変化が、候補ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドをコードする核酸が導入されていない対照細胞における、または関連相互作用パートナーの細胞内局在に影響を与えないことが公知の対照ポリペプチドをコードする核酸が導入された対照細胞における相互作用パートナーの細胞内局在と比較した変化を指すことは理解される。

【0255】

そのような方法は、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの培養物中の細胞を使用して好ましくは実施される。

【0256】

一部の実施形態では、細胞に核酸を導入することは、形質転換、トランスフェクション、電気穿孔法または形質導入（例えば、アデノ随伴ウイルス形質導入）を含み得る。

【0257】

一部の実施形態では、候補ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドをコードする核酸は、ベクター中に、例えば、本明細書に記載される実施形態に従ったベクター中に提供され得る。

【0258】

候補ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドをコードする核酸は、核酸が導入された細胞において、候補ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドの発現をもたらす調節エレメントを好ましくは含む。細胞への核酸の導入に続いて、細胞は、細胞中の核酸からの候補ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドの発現のために好適な状態に好ましくは維持される。

【0259】

細胞への核酸の導入に続いて、関連相互作用パートナーの細胞内局在の変化のために十分な期間は、関連相互作用パートナーの細胞内局在を評価するために細胞が分析される前に好ましくは経過されることも理解される。

【0260】

所与のポリペプチド（例えば、ＳＵＮドメイン含有タンパク質またはＫＡＳＨドメイン含有タンパク質に対する所与の相互作用パートナー）の細胞内局在は、当業者に周知である方法によって分析され得る。そのような方法は、抗体／リポーターベースの方法（ウエスタンブロット、ＥＬＩＳＡ、免疫組織／細胞化学、等）を含む。例えば、細胞内局在は、異なる細胞画分から調製される抽出物の免疫細胞化学、またはウエスタンブロットにより分析し得る。そのような分析は、小器官マーカーおよび／または既知の細胞内局在の標識されたタンパク質を用い得る。

【0261】

そのような方法は、ＳＵＮドメイン含有タンパク質またはＫＡＳＨドメイン含有タンパク質に対する、蛍光標識にコンジュゲートされた相互作用パートナーを用いることができ、および蛍光顕微鏡によるそのような種の細胞内局在の分析を含むことができる。そのような方法は、ＳＵＮドメイン含有タンパク質またはＫＡＳＨドメイン含有タンパク質に対する相互作用パートナーの抗体に基づく検出を用い得る、および免疫蛍光顕微鏡によるそのような種の細胞内局在の分析を含み得る。

【0262】

一部の実施形態では、核エンベロープに局在する関連相互作用パートナーの割合の減少が検出される場合に（候補ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドをコードする核酸が導入されていない対照細胞における、または関連相互作用パートナーの細胞内局在に影響を与えないことが公知の対照ポリペプチドをコードする核酸が導入された対照細胞における核エンベロープに局在する割合と比較して）、候補ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドであると決定される。

【0263】

一部の実施形態では、核エンベロープに局在しない関連相互作用パートナーの割合の増加、または小胞体に局在する関連相互作用パートナーの割合の増加が検出された場合に（候補ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドをコードする核酸が導入されていない対照細胞における、または関連相互作用パートナーの細胞内局在に影響を与えないことが公知の対照ポリペプチドをコードする核酸が導入された対照細胞における核エンベロープに局在する割合と比較して）、候補ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドであると決定される。

【0264】

一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドを同定するための方法は、本明細書実施例１に本質的に記載される通り、候補ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドの分析を含み得る。

【0265】

一部の実施形態では、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドを同定するための方法は、
ＳＵＮドメイン含有タンパク質のＳＵＮドメインに対応するアミノ酸配列を含む候補ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドをコードする核酸を細胞に導入するステップ；および
続いて、細胞を分析して、Ｎｅｓｐｒｉｎ－２の細胞内局在を決定するステップ
を含み、小胞体に局在するＮｅｓｐｒｉｎ－２の割合の増加が検出される場合に、候補ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドはＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドであると決定される。

【0266】

本開示は、本開示の方法によって同定されたＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドも提供する。

【0267】

治療および予防応用
本明細書に記載されるＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、核酸、ベクター、細胞および組成物は、治療および予防方法において有用である。

【0268】

本開示は、医学的処置および予防の方法における使用のための、本明細書に記載されるＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、核酸、ベクター、細胞および組成物を提供する。疾患／状態を処置するまたは予防するための医薬の製造における、本明細書に記載されるＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、核酸、ベクター、細胞および組成物の使用も同様に提供される。疾患／状態を処置するまたは予防する方法であって、本明細書に記載されるＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、核酸、ベクター、細胞および組成物の治療または予防有効量を対象に投与するステップを含む、方法も同様に提供される。

【0269】

用語「障害」、「疾患」および「状態」は、互換的に使用されてよく、徴候または症状の同定可能な群により特徴付けられ得る身体の一部、器官または系の病理学的課題を指す。

【0270】

本開示に従った治療または予防介入は、疾患／状態の発症または進行を低下させる、疾患／状態の症状を軽減するまたは疾患／状態の病態を低減するために有効であり得る。介入は、疾患／状態の進行を予防するため、例えば、疾患／状態の悪化を予防するため、または発症の速度を遅くするために有効であり得る。一部の実施形態では、介入は、疾患／状態の改善、例えば、疾患／状態の症状の低減、または疾患／状態の重症度／活動度のいくつかの他の相関物の低減をもたらし得る。一部の実施形態では、介入は、後の段階（例えば、さらに重度の段階、または慢性段階）への疾患／状態の発症を予防できる。

【0271】

用語、例えば、障害を「発症する」、「発症すること」および「発症」は、本明細書において使用される場合、疾患の発病および疾患状態／その相関物の進行、増悪または悪化の両方を指す。

【0272】

本開示の態様は、ＬＩＮＣ複合体機能障害が病理学的に関係している疾患の処置／予防に関する。そのような疾患は、例えば、核膜病（例えば、ラミノパチー）を含む。本開示の薬剤および方法の治療上および予防上の有用性は、ＬＩＮＣ複合体阻害から治療／予防利益を導き出すと考えられる任意の疾患の処置および／または予防にまで広がる。

【0273】

本開示の態様は、所与の遺伝子または複数の遺伝子への突然変異に関連する疾患の処置に関する。本明細書では、所与の遺伝子（単数／複数）への突然変異「に関連する」疾患は、そのような突然変異により引き起こされるもしくは悪化する疾患、またはそのような突然変異が疾患の発症もしくは進行のリスク因子である疾患である。一部の実施形態では、突然変異は、遺伝子の非突然変異（野生型）参照対立遺伝子の２コピー（すなわち、ホモ接合の）を含む細胞と比べて、遺伝子の突然変異対立遺伝子の１つまたは複数のコピーを含む細胞において以下の：野生型対立遺伝子の遺伝子産物（例えば、ＲＮＡおよび／またはタンパク質（またはその特定のアイソフォーム）の減少したレベル；非野生型対立遺伝子の遺伝子産物の増加したレベル；野生型対立遺伝子の遺伝子産物の増加したレベルのうちの１つまたは複数を生じる。

【0274】

本開示の態様は、核膜病の処置／予防に関する。核膜病は、核膜タンパク質（すなわち、ＯＮＭ、核周囲腔またはＩＮＭに含有される、または直接的に／間接的に関連しているタンパク質）をコードする遺伝子への突然変異に関連する疾患／病態である。核膜病は、例えば、Ｃｈｉら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ（２００９）１６：９６頁に概説されており、前記文献はこれにより参照により本明細書にその全体が組み込まれる。核膜病は、ＬＭＮＡ、ＬＭＮＢ１、ＬＭＮＢ２、ＥＭＤ、ＬＡＰ２、ＬＢＲ、ＺＭＰＳＴＥ２４、ＳＹＮＥ－１およびＮＵＰ６２における突然変異に関連している疾患／病態を含む。

【0275】

したがって、一部の実施形態では、本開示により処置される／予防される疾患／状態は、ＬＭＮＡ、ＬＭＮＢ１、ＬＭＮＢ２、ＥＭＤ、ＬＡＰ２、ＬＢＲ、ＺＭＰＳＴＥ２４、ＳＹＮＥ－１およびＮＵＰ６２の１つまたは複数への突然変異によって特徴付けられる。

【0276】

特に、本開示の態様は、ラミノパチーの処置／予防に関する。

【0277】

ラミノパチーは、例えば、Ｂｕｒｋｅ ａｎｄ Ｓｔｅｗａｒｔ、Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．（２０１３）１４（１）：１３～２４頁、およびＨａｈ ａｎｄ Ｋｉｍ、Ｃｅｌｌｓ（２０１９）８（３）：２３１頁に概説されており、前記文献は両方ともこれにより参照により本明細書にその全体が組み込まれる。ラミノパチーは、一般的には核レベルにおける荷重負荷の組織特異的欠損に関連しており、これにより物理力に対する細胞の耐久力が減少することがある。本明細書の実験例では、発明者らは、ＬＩＮＣ複合体阻害が一定範囲のラミノパチーの症状を軽減することを実証している。

【0278】

本明細書で使用される場合、「ラミノパチー」とは、ラミンをコードする遺伝子への突然変異に関連した疾患／病態である。

【0279】

ラミンをコードする遺伝子はＬＭＮＡ（ラミンＡおよびＣをコードする）、ならびにラミンＢ１およびＢ２をコードするＬＭＮＢ１、ＬＭＮＢ２を含む。したがって、本開示の態様は、ＬＭＮＡ、ＬＭＮＢ１および／またはＬＭＮＢ２への突然変異に関連する疾患の処置／予防に関する。

【0280】

一部の実施形態では、突然変異は、ラミンをコードする遺伝子（例えば、ＬＭＮＡ、ＬＭＮＢ１またはＬＭＮＢ２）の野生型対立遺伝子によりコードされるラミンアイソフォームのレベルを減少させることが知られているまたは予想される。一部の実施形態では、突然変異はミスセンス突然変異である。一部の実施形態では、突然変異は、ラミンをコードする遺伝子の野生型対立遺伝子によりコードされるラミンの切断型バージョンを生成することが知られているまたは予想される。一部の実施形態では、突然変異は、ミスフォールドしているおよび／または分解されているラミンを生成することが知られているまたは予想される。

【0281】

一部の実施形態では、突然変異は、ラミンをコードする遺伝子（例えば、ＬＭＮＡ、ＬＭＮＢ１またはＬＭＮＢ２）の野生型対立遺伝子によりコードされるラミンアイソフォームのレベルを増やすことが知られているまたは予想される。

【0282】

一部の実施形態では、突然変異は、疾患関連ラミンバリアント（例えば、プロジェリン）のレベルを増やすことが知られているまたは予想される。一部の実施形態では、突然変異は、ラミンをコードする遺伝子の疾患関連対立遺伝子によりコードされるラミンのレベルを増やすことが知られているまたは予想される。

【0283】

一部の実施形態では、ラミノパチーは骨格筋ラミノパチーである。一部の実施形態では、ラミノパチーはミオパチーである。一部の実施形態では、ラミノパチーはＬＭＮＡ突然変異関連ミオパチーである。

【0284】

一部の実施形態では、本開示に従って処置される／予防される疾患は、ミオパチー、心筋症、拡張型心筋症、筋ジストロフィー、心筋ジストロフィー、骨格筋ジストロフィー、早老症、ニューロパチー、脂肪萎縮症、骨格異形成症、リポジストロフィー、白質ジストロフィーまたは皮膚症のうちの１つまたは複数を特徴とする。

【0285】

一部の実施形態では、本開示に従って処置される／予防される疾患は、筋ジストロフィー、心筋ジストロフィーまたは骨格筋ジストロフィーのうちの１つまたは複数を特徴とする。

【0286】

一部の実施形態では、ラミノパチーは、ＬＭＮＡ、ＬＭＮＢ１および／またはＬＭＮＢ２への突然変異に関連している。一部の実施形態では、ラミノパチーは、ハッチンソン・ギルフォード・プロジェリア症候群；エメリー・ドレフュス型筋ジストロフィー；エメリー・ドレフュス型筋ジストロフィー２、常染色体優性；リポジストロフィー、部分型、後天性；てんかん、進行性筋クローヌス性、９；シャルコー・マリー・トゥース病、軸索、２ｅ型；筋ジストロフィー；リポジストロフィー、家族性部分型、２型；心筋症、拡張型、１ｈ；ペルゲル・フエット核異常；レイノルズ症候群；筋疾患；白質ジストロフィー；拡張型心筋症；筋ジストロフィー、先天的、Ｌｍｎａ関連；ａ型リポジストロフィーを伴う下顎末端異形成症；心筋症、拡張型、１ａ；拘束性皮膚障害、致死性；家族性部分型リポジストロフィー；てんかん；糖尿病を伴う脂肪萎縮症、白斑黒皮症丘疹、脂肪肝、および肥大型心筋症；白質ジストロフィー、脱髄性、成人発症型、常染色体優性；後天性全身型リポジストロフィー；エメリー・ドレフュス型筋ジストロフィー３、常染色体劣性；シャルコー・マリー・トゥース病；シャルコー・マリー・トゥース病、軸索、２ｂ１型；心筋症、拡張型、１ｂ；心房静止１；肢帯型筋ジストロフィー；心筋症、拡張型、高ゴナドトロピン性性腺機能低下症を伴う；心臓－上肢症候群、スロベニア型；単一遺伝子糖尿病；不整脈原性右室心筋症；心筋症、拡張型、１ｅ；老化；小下顎症、難聴、プロゲリア様症状、およびリポジストロフィー症候群；副腎筋ジストロフィー；非定型ウェルナー症候群；子宮内膜症；脊髄小脳失調症３１；進行性筋萎縮症；神経因性大腸；自律神経疾患を伴う常染色体優性白質ジストロフィー；ウェルナー症候群；ミオパチー；Ｌｍｎａ関連拡張型心筋症；筋ジストロフィー、先天性、１ｂ；肥大型心筋症；左室心筋緻密化障害；真性糖尿病、インスリン非依存性；不整脈原性右室異形成、家族性、９；心臓病；心房細動；心伝導障害；ミオクローヌス；進行性ミオクローヌスてんかん；ミオクローヌスてんかん；末梢神経系疾患；歯科疾患；房室ブロック；筋原線維ミオパチー；常染色体優性肢帯型筋ジストロフィー；Ｌｍｎａ関連心臓皮膚早老症症候群；筋委縮性側索硬化症１；神経管欠損；子宮頸がん；神経管欠損、葉酸感受性；脳変性；黒色皮膚腫；３－ヒドロキシアシル－Ｃｏａデヒドロゲナーゼ欠損症；先天性筋線維タイプ不均等症；先端骨溶解症；ウォルフ・パーキンソン・ホワイト症候群；洞不全症候群；石灰沈着；未分化多形肉腫；心室頻拍、カテコールアミン誘発性多形性、１、心房性機能障害および／または拡張性心筋症を伴うまたはこれなしで；リポジストロフィー、家族性部分型、１型；軸索型ニューロパチー；発作性心室細動；ブルガダ症候群５；強直性脊椎筋ジストロフィー；肢帯型筋ジストロフィー１ｂ型；インスリン耐性黒色表皮肥厚症、ａ型；全身型リポジストロフィー関連早老症候群；骨粗鬆症；強直性脊椎筋ジストロフィー１；ニューロパチー；カテコールアミン誘発性多形性心室性頻拍；白内障；ベスレムミオパチー１；先天性全身型リポジストロフィー；拘束型心筋症；筋ジストロフィー、先天性メロシン欠損型、１ａ；近位脊髄性筋萎縮症；筋ジストロフィー・ジストログリカノパチー、Ｂ型、５；リポジストロフィー、先天性全身型、１型；エメリー・ドレフュス型筋ジストロフィー１、Ｘ連鎖型；心筋症、拡張型、１ｄ；ミオパチー、近位、および眼筋麻痺；筋組織病；卵巣嚢胞腺腫；エメリノパチー；ファンコニ貧血、相補群ａ；肥満度指数量的形質遺伝子座１１；骨髄異形成症候群；皮膚疾患；神経性無食欲症；脊髄性筋萎縮症；封入体筋炎；無虹彩症１；筋炎；毛髪肝腸症候群１；神経筋疾患；栄養欠乏症；胸郭出口症候群；筋障害；筋委縮症；ハーラーマン・ストライフ症候群；Ｒｅｒｅ関連障害（Ｒｅｒｅ－Ｒｅｌａｔｅｄ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ）；ミラー・ディカー脳回欠損症候群（Ｍｉｌｌｅｒ－Ｄｉｅｋｅｒ Ｌｉｓｓｅｎｃｅｐｈａｌｙ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ）；リポジストロフィー、先天性全身型、４型；リポジストロフィー、家族性部分型、３型；ウィダマン・ラウテンストラウフ症候群；リポジストロフィー、先天性全身型、２型；運動失調ニューロパチースペクトル（Ａｔａｘｉａ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ Ｓｐｅｃｔｒｕｍ）；脱毛、神経性欠損、および内分泌疾患症候群；リポジストロフィー、家族性部分型、４型；第２度房室ブロック；急性壊死性脳炎；正中神経障害；内因性心筋症；家族性孤発性不整脈原性心室異形成、右優性型；女性生殖器の脱出；家族性孤発性不整脈原性心室異形成、両室型；家族性孤発性不整脈原性心室異形成、左優性型；完全全身型リポジストロフィー；血液型－アホネン；常染色体半優性重症型リポジストロフィーラミノパチー；尺骨神経障害；骨盤筋消耗；アルツハイマー病；脳卒中、虚血性；毛細血管拡張性運動失調症；脊椎関節症１；ヒト免疫不全ウイルス１型；神経芽細胞腫；血管疾患；神経系疾患；呼吸不全；ターナー症候群；手根管症候群；バレット食道；睡眠時無呼吸；脳血管疾患；プロテアソーム関連自己炎症性症候群１；ジュベール症候群１；ウイルス感染症；痴呆；パーソナリティ障害；ニューロパチー、遺伝性感覚性および自律性、ＩＩＩ型；ロウ眼脳腎症候群（Ｌｏｗｅ Ｏｃｕｌｏｃｅｒｅｂｒｏｒｅｎａｌ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ）；真性糖尿病；脂肪性肝疾患；リー症候群；筋ジストロフィーデュシェンヌ型；水頭症；皮膚筋炎；ヒルシュスプルング病１；Ｑｔ延長症候群；アンジェルマン症候群；中枢神経系疾患；グリコシル化の先天性障害、ｉｎ型；無涙症、アカラシア、および精神遅滞症候群；多嚢胞性卵巣症候群；低血糖症；筋肥大；カーンズ・セイヤー症候群；錐体杆体ジストロフィー２；アイカルディ・グティエール症候群；アンダーセン心臓律動的周期性麻痺（Ａｎｄｅｒｓｅｎ Ｃａｒｄｉｏｄｙｓｒｈｙｔｈｍｉｃ Ｐｅｒｉｏｄｉｃ Ｐａｒａｌｙｓｉｓ）；筋ジストロフィー、ベッカー型；レッグ・カルベ・ペルテス病；アンドロゲン不応症；エーラース・ダンロス症候群；アクセンフェルト・リーガー症候群；筋ジストロフィー・ジストログリカノパチー、Ｃ型、５；糸球体腎炎；発作性疾患；チクングニア熱；ウェスト症候群；ウルリッヒ型先天性筋ジストロフィー１；巣状分節性糸球体硬化症；ウォーカー・ワールブルク症候群；腎異形成／形成不全１（Ｒｅｎａｌ Ｈｙｐｏｄｙｓｐｌａｓｉａ／ａｐｌａｓｉａ１）；膝窩部贅皮症候群；小頭症；小児期型皮膚筋炎；遠位関節拘縮症；心筋炎；動脈蛇行症候群；脊柱側弯症；膜性腎症；３型糖尿病の微小血管性合併症；表皮水疱症；ショート症候群；過剰驚愕症；非アルコール性脂肪性肝疾患；筋ジストロフィー・ジストログリカノパチー、ａ型、４；先天性水頭症；運動失調、複合小脳および末梢性、難聴および糖尿病を伴う；心不整脈；筋ジストロフィー・ジストログリカノパチー、ａ型、１；下垂症；喉頭炎；無眼瞼巨口症症候群（Ａｂｌｅｐｈａｒｏｎ－Ｍａｃｒｏｓｔｏｍｉａ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ）；大動脈弁上狭窄；ミオパチー、先天性；代謝性脳症クライシス、再発、横紋筋融解症、心不整脈および神経変性を伴う；脳回欠損１；腎嚢胞を伴うまたは伴わない多発性肝嚢胞症１；特発性炎症性筋疾患；単純性表皮水疱症；巣状分節性糸球体硬化症１；性器発育不全；脳回転状脈絡網膜萎縮；脊髄空洞症；尋常性魚鱗癬；関節拘縮症、末梢、１ａ型；急性インシュリン応答；短指症；小脳形成不全症；頭蓋骨骨幹端異形成症、常染色体優性；アルポート症候群１、Ｘ連鎖型；脳回欠損；筋ジストロフィー・ジストログリカノパチー、Ｂ型、６；下痢５、タフティング腸疾患（Ｔｕｆｔｉｎｇ Ｅｎｔｅｒｏｐａｔｈｙ）を伴う、先天性；接合部型表皮水疱症；アイカルディ・グティエール症候群１；三好型筋ジストロフィー；網膜炎；マーデン・ウォーカー症候群；視神経網膜症；免疫不全を伴うまたは伴わないポリグルコサン小体ミオパチー１；表皮水疱症、接合部、ヘルリッツ型；巨舌症；パーキンソン病１５、常染色体劣性早期発症型；ミオパチー、筋原線維、３；７型糖尿病の微小血管性合併症；筋・眼・脳病；メルカーソン・ローゼンタール症候群；ミオパチー、Ｘ連鎖型、過剰自己貪食を伴う；脈絡膜炎；筋ジストロフィー、肢帯型、常染色体劣性８；黒色表皮腫を伴うクルーゾン症候群；筋ジストロフィー、肢帯型、常染色体劣性６；多小脳回；ジストロフィン異常症；６型糖尿病の微小血管性合併症；４型糖尿病の微小血管性合併症；筋緊張低下；橋小脳形成不全；先天性線維肉腫；子宮内胎児発育遅延、骨幹端異形成、先天性副腎低形成、および性器奇形；筋ジストロフィー、肢帯型、常染色体劣性７；ミオパチー、先天性、線維型不均衡を伴う；遺伝性エナメル質形成不全症、Ｉｇ型；不応性貧血；外眼筋の線維症、先天性、１；運動失調および多発ニューロパチー、成人発症性；アルラカド症候群；老人性白内障；筋ジストロフィー・ジストログリカノパチー、Ｃ型、１；神経細胞移動障害；エイメ・グリプ症候群（Ａｙｍｅ－Ｇｒｉｐｐ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ）；原発性無ガンマグロブリン血症；常染色体劣性肢帯型筋ジストロフィー２ａ型；脳炎；筋ジストロフィー、先天的、巨大円錐状型；常染色体劣性肢帯型筋ジストロフィー；Ａｌｋｕｒａｙａ－Ｋｕｃｉｎｓｋａｓ症候群；筋ジストロフィー・ジストログリカノパチー、Ｃ型、４；先天性筋ジストロフィー１ａ型；ベール症候群；ダンディー・ウォーカーコンプレックス；筋ジストロフィー・ジストログリカノパチー、Ｃ型、２；エメリー・ドレフュス型筋ジストロフィー、Ｘ連鎖型；筋ジストロフィー、肢帯型、常染色体劣性３；常染色体劣性肢帯型筋ジストロフィー２ｄ型；眼球異常を伴うまたは伴わない脳小血管病１；家族性孤発性拡張型心筋症；表皮反復性びらんジストロフィー（Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ Ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ Ｅｒｏｓｉｏｎ Ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）；筋ジストロフィー・ジストログリカノパチー；マイコバクテリウム・アビウムコンプレックス感染症；常染色体劣性肢帯型筋ジストロフィー２ｌ型；視覚てんかん；バルサルバ洞動脈瘤；常染色体劣性肢帯型筋ジストロフィー２ｂ型；クレアチンホスホキナーゼ、上昇血清；痙性対麻痺、運動失調、および精神遅滞；多核ニューロン、無羊水症、腎異形成、小脳形成不全、および水無脳症；耳管開放症；常染色体遺伝病；Ｃｋ症候群；ニューロン炎；過剰驚愕症１；還元体筋障害；多小脳回、両側側頭後頭（Ｂｉｌａｔｅｒａｌ Ｔｅｍｐｏｒｏｏｃｃｉｐｉｔａｌ）；孤立性ハイパーケミア（Ｉｓｏｌａｔｅｄ Ｈｙｐｅｒｃｋｅｍｉａ）；シャルコー・マリー・トゥース病、軸索、２ｂ２型；ヒアリン塊およびネマリン小体を伴う心臓神経筋疾患；知的障害を伴わない先天性筋ジストロフィー；血液型、Ｉシステム（Ｉ Ｓｙｓｔｅｍ）；サリーヒミオパチー（Ｓａｌｉｈ Ｍｙｏｐａｔｈｙ）；内転母指症候群（Ａｄｄｕｃｔｅｄ Ｔｈｕｍｂｓ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ）；硬膜副鼻腔奇形（Ｄｕｒａｌ Ｓｉｎｕｓ Ｍａｌｆｏｒｍａｔｉｏｎ）；血液型、ドンブロックシステム；血液型、コルトンシステム；関節弛緩型エーラス・ダンロス症候群（Ａｒｔｈｒｏｃｈａｌａｓｉａ Ｅｈｌｅｒｓ－Ｄａｎｌｏｓ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ）；Ｌａｍａ２関連筋ジストロフィー；筋ジストロフィー、先天性、小児白内障および性腺機能低下症を伴う；子宮内感染症；筋ジストロフィー、先天性、メロシン陽性；小脳障害を伴う先天性筋ジストロフィー；福山型筋ジストロフィー；ナチュラルキラー細胞の慢性リンパ増殖性障害；知的障害を伴う先天性筋ジストロフィー；エナメル形質不全症低形成型、Ｉｇ；アンドロゲン不応症候群、軽症型；筋ジストロフィー、先天性、関節拘縮症を生じる；脳および眼異常を伴う先天性筋アルファジストログリカノパチー；ＶＩ型コラーゲン関連ミオパチー；エメリー・ドレフュス型筋ジストロフィー、優性型；ジストログリカノパチーによる先天性筋ジストロフィー；巣状ミトコンドリア欠乏を伴う近位筋ミオパチー；小児脊椎側弯症から選択される。

【0287】

一部の実施形態では、ラミノパチーは、ＬＭＮＡへの突然変異に関連するラミノパチーである。一部の実施形態では、ラミノパチーは、ハッチンソン・ギルフォード・プロジェリア症候群；拡張型心筋症；筋ジストロフィー、先天的、Ｌｍｎａ関連；エメリー・ドレフュス型筋ジストロフィー２、常染色体優性；筋ジストロフィー；ａ型リポジストロフィーを伴う下顎末端異形成症；心筋症、拡張型、１ａ；シャルコー・マリー・トゥース病；肢帯型筋ジストロフィー；心筋症、拡張型、高ゴナドトロピン性性腺機能低下症を伴う；エメリー・ドレフュス型筋ジストロフィー３、常染色体劣性；リポジストロフィー、家族性部分型、２型；エメリー・ドレフュス型筋ジストロフィー；シャルコー・マリー・トゥース病、軸索、２ｂ１型；心臓－上肢症候群、スロベニア型；老化；家族性部分型リポジストロフィー；拘束性皮膚障害、致死性；不整脈原性右室心筋症；歯科疾患；心臓病；ウェルナー症候群；肥大型心筋症；左室心筋緻密化障害；房室ブロック；石灰沈着；先端骨溶解症；常染色体優性肢帯型筋ジストロフィー；真性糖尿病、インスリン非依存性；骨粗鬆症；心房細動；心房静止１；黒色皮膚腫；心伝導障害；カテコールアミン誘発性多形性心室性頻拍；小下顎症、難聴、プロゲリア様症状、およびリポジストロフィー症候群；洞不全症候群；ペルゲル・フエット核異常；シャルコー・マリー・トゥース病、軸索、２ｅ型；先天性全身型リポジストロフィー；拘束型心筋症；先天性筋線維タイプ不均等症；リポジストロフィー、先天性全身型、１型；筋原線維ミオパチー；リポジストロフィー、家族性部分型、１型；軸索型ニューロパチー；非定型ウェルナー症候群；卵巣嚢胞腺腫；ファンコニ貧血、相補群ａ；肥満度指数量的形質遺伝子座１１；皮膚疾患；強直性脊椎筋ジストロフィー１；神経筋疾患；ハーラーマン・ストライフ症候群；ベスレムミオパチー１；後天性全身型リポジストロフィー；心筋症、拡張型、１ｅ；リポジストロフィー、先天性全身型、４型；未分化多形肉腫；リポジストロフィー、家族性部分型、３型；筋ジストロフィー、先天性メロシン欠損型、１ａ；近位脊髄性筋萎縮症；筋ジストロフィー・ジストログリカノパチー、Ｂ型、５；筋ジストロフィー、先天性、１ｂ；レイノルズ症候群；ウィダマン・ラウテンストラウフ症候群；エメリー・ドレフュス型筋ジストロフィー１、Ｘ連鎖型；リポジストロフィー、先天性全身型、２型；単一遺伝子糖尿病；心筋症、拡張型、１ｄ；ミオパチー、近位、および眼筋麻痺；筋組織病；リポジストロフィー、家族性部分型、４型；心筋症、拡張型、１ｈ；第２度房室ブロック；正中神経障害；内因性心筋症；女性生殖器の脱出；完全全身型リポジストロフィー；強直性脊椎筋ジストロフィー；エメリノパチー；尺骨神経障害；肢帯型筋ジストロフィー１ｂ型；Ｌｍｎａ関連拡張型心筋症；骨盤筋消耗；全身型リポジストロフィー関連早老症候群；筋疾患；心筋症、拡張型、１ｂ；常染色体遺伝病；家族性孤発性不整脈原性心室異形成、右優性型；家族性孤発性不整脈原性心室異形成、両室型；家族性孤発性不整脈原性心室異形成、左優性型；Ｌｍｎａ関連心臓皮膚早老症症候群；常染色体半優性重症型リポジストロフィーラミノパチーから選択される。

【0288】

一部の実施形態では、本開示に従って処置される／予防される疾患は、表１（次ページに記載する）に示されるｃＤＮＡまたはタンパク質バリアントに関連する疾患から選択される。

【0289】

一部の実施形態では、本開示に従って処置される／予防される疾患は、表１に示される疾患から選択される。

【0290】

一部の実施形態では、本開示に従って処置される／予防される疾患は、表１に通常フォントで示される疾患から選択される。

【0291】

一部の実施形態では、本開示に従って処置される／予防される疾患は、表１にボールドフォントで示される疾患から選択される。

【0292】

【表1-1】

【0293】

【表1-2】

【0294】

【表1-3】

【0295】

【表1-4】

【0296】

【表1-5】

【0297】

【表1-6】

【0298】

【表1-7】

【0299】

【表1-8】

【0300】

【表1-9】

【0301】

【表1-10】

【0302】

【表1-11】

【0303】

【表1-12】

【0304】

【表1-13】

【0305】

【表1-14】

【0306】

【表1-15】

【0307】

【表1-16】

【0308】

【表1-17】

【0309】

【表1-18】

【0310】

【表1-19】

【0311】

【表1-20】

【0312】

【表1-21】

【0313】

【表1-22】

【0314】

【表1-23】

【0315】

【表1-24】

【0316】

【表1-25】

【0317】

【表1-26】

【0318】

【表1-27】

【0319】

【表1-28】

【0320】

【表1-29】

【0321】

【表1-30】

【0322】

【表1-31】

【0323】

【表1-32】

【0324】

【表1-33】

【0325】

【表1-34】

【0326】

【表1-35】

【0327】

【表1-36】

【0328】

【表1-37】

【0329】

【表1-38】

【0330】

【表1-39】

【0331】

【表1-40】

【0332】

【表1-41】

【0333】

【表1-42】

【0334】

【表1-43】

【0335】

【表1-44】

【0336】

本開示のさらなる態様は、脂質異常症を特徴とする疾患、例えば高脂血症を特徴とする疾患の処置／予防に関する。ＬＩＮＣ複合体阻害は、脂質異常症、特に、高コレステロール血症等の高脂血症のための適切な治療／予防介入であると近年示された、例えば、実施例１８の例えばＷＯ ２０２１／０１０８９８ Ａ１を参照されたい。

【0337】

本開示のさらなる態様は、ＬＤＬ受容体欠損に関連する疾患（すなわち、ＬＤＬ受容体タンパク質および／または機能の減少したレベル）の処置／予防に関する。

【0338】

一部の実施形態では、本開示により処置／予防される疾患／状態は、脂質異常症および／または高コレステロール血症である。一部の実施形態では、疾患／状態は、脂質異常症および／または高コレステロール血症を特徴とする疾患／状態である。一部の実施形態では、疾患／状態は、脂質異常症および／または高コレステロール血症に関連する疾患／状態である（例えば、脂質異常症および／または高コレステロール血症が、疾患／状態の発病、発症または進行についてのリスク因子である疾患／状態）。

【0339】

脂質異常症は、高すぎるまたは低すぎる血液中脂質レベルを有するとして定義される。本開示は、血液中の脂質またはリポタンパク質のレベルが上昇している場合の高脂血症の処置に特に関連する。高脂血症は、高トリグリセリド血症、高コレステロール血症および複合型高脂血症（高トリグリセリド血症と高コレステロール血症の組合せ）を含む。高脂血症は、例えば、アテローム性動脈硬化症、高血圧および心血管疾患に関連している。

【0340】

高脂血症とは、血液中の脂質またはリポタンパク質の上昇したレベルのことである。高脂血症は、高トリグリセリド血症、高コレステロール血症および複合型高脂血症（高トリグリセリド血症と高コレステロール血症の組合せ）を含む。高脂血症は、例えば、アテローム性動脈硬化症、高血圧および心血管疾患に関連している。

【0341】

高コレステロール血症は、血液中のコレステロールの高いレベルを指す。多くの場合、高コレステロール血症は、遺伝的リスク因子との組合せでの高脂肪食および不活発な生活様式の結果として生じる。高コレステロール血症は、遺伝的突然変異（例えば、家族性高コレステロール血症の場合）、２型糖尿病、甲状腺機能低下症、腎疾患の結果として、またはある種の薬物、例えば、副腎皮質ステロイドでの処置の副作用としても生じる場合がある。

【0342】

高コレステロール血症は、例えば、Ｂｈａｔｎａｇａｒら、ＢＭＪ（２００８）３３７：ａ９９３に記載されている。ＵＫ ＮＨＳは、高コレステロール血症を、≧５ｍｍｏｌ／Ｌの血中総コレステロールレベルまたは≧３ｍｍｏｌ／Ｌの血中低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）レベルと定義している。ＵＳ ＮＩＨは、高コレステロール血症を、≧２４０ｍｇ／ｄＬの血中総コレステロールレベルと定義している。高トリグリセリド血症は、例えば、Ｂｅｒｇｌｕｎｄら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．（２０１２）９７（９）：２９６９～８９頁に記載されており、≧１５０ｍｇ／ｄＬ（≧１．７ｍｍｏｌ／Ｌ）の血中トリグリセリドレベルにより定義される。高コレステロール血症は、心血管疾患、特に、アテローム性動脈硬化症の結果として生じる心血管疾患についての十分に認識されたリスク因子である－例えば、Ｎｅｌｓｏｎ Ｐｒｉｍ Ｃａｒｅ．（２０１３）Ｍａｒ；４０（１）：１９５～２１１頁を参照されたい。高コレステロール血症は、脂肪症および非アルコール性肝疾患を生じるとも報告された－例えば、Ａｒｇｕｅｌｌｏら、Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ（２０１５）１８５２（９）：１７６５～７８頁を参照されたい。

【0343】

一部の実施形態では、高脂血症を特徴とする疾患は、家族性高脂血症または後天性（二次性）高脂血症でもよい。

【0344】

一部の実施形態では、家族性高脂血症は、バーガー・グリッツ症候群、家族性アポタンパク質ＣＩＩ欠乏症、Ｉｃ型高リポタンパク血症、家族性高コレステロール血症、家族性複合型高脂血症、家族性異常βリポタンパク血症、家族性高トリグリセリド血症およびＶ型高リポタンパク血症から選択される。一部の実施形態では、家族性高脂血症は家族性高コレステロール血症である。

【0345】

ＬＤＬ受容体欠損症は、例えば、ＬＤＬＲへの突然変異の結果として生じ得る。したがって、本開示の態様は、ＬＤＬＲへの突然変異に関連する疾患の処置／予防に関する。一部の実施形態では、突然変異は、野生型ＬＤＬＲ対立遺伝子によりコードされる１つもしくは複数のＬＤＬ受容体アイソフォームのレベルを減少させるおよび／または１つもしくは複数の疾患関連ＬＤＬ受容体バリアントのレベルを増加させることが知られているまたは予想される。一部の実施形態では、ＬＤＬＲへの突然変異に関連する疾患は家族性高コレステロール血症である。

【0346】

一部の実施形態では、本開示に従って処置される／予防される疾患は、高脂血症、高コレステロール血症、アテローム性動脈硬化症、狭窄症または高血圧のうちの１つまたは複数を特徴とする。一部の実施形態では、本開示に従って処置される／予防される疾患はアテローム性動脈硬化症を特徴とする。

【0347】

一部の実施形態では、処置される／予防される疾患は、アテローム性動脈硬化症、心血管疾患、脳卒中および家族性高脂血症から選択される。

【0348】

本開示の種々の態様に従って、本開示に従った疾患／状態を処置するおよび／または予防する方法は、
疾患を有する対象の生存を増やすステップ；
疾患を有する対象の生存期間を増やすステップ；
心機能を増やすもしくは減退を阻害するステップ；
心機能の減退の開始を遅らせるステップ；
心筋収縮力を増やすもしくは減少を阻害するステップ；
駆出率および／または短縮率を増やすまたは低下を阻害するステップ；
左心室内径を減少させるもしくは増加を阻害するステップ；
左心室後壁厚を増加させるもしくは減少を阻害するステップ；および／または
アテローム性動脈硬化症を減少させるもしくは発症を阻害するステップ
のうちの１つまたは複数を含み得る。

【0349】

本開示の種々の態様によれば、ＳＵＮドメイン含有タンパク質とＫＡＳＨドメイン含有タンパク質との間の相互作用を阻害すること；ＳＵＮドメイン含有タンパク質およびＫＡＳＨドメイン含有タンパク質を含むＬＩＮＣ複合体の形成を阻害すること；ＳＵＮドメイン含有タンパク質およびＫＡＳＨドメイン含有タンパク質を含むＬＩＮＣ複合体を破壊すること；ＳＵＮドメイン含有タンパク質またはＫＡＳＨドメイン含有タンパク質の正常な細胞内局在を破壊すること；ＬＩＮＣ複合体の構成要素タンパク質（例えば、ＫＡＳＨドメイン含有タンパク質）の小胞体への局在を増やすこと；ＳＵＮドメイン含有タンパク質およびＫＡＳＨドメイン含有タンパク質を含むＬＩＮＣ複合体のレベルを減少させること；ならびに／またはＳＵＮドメイン含有タンパク質およびＫＡＳＨドメイン含有タンパク質を含むＬＩＮＣ複合体の機能／活性を阻害すること、のうちの１つまたは複数のための、またはそれを（例えば、本明細書に記載される疾患／状態の処置／予防の文脈では）含む方法が提供される。そのような方法における使用のための本開示に従った薬剤、そのような方法における使用のための医薬組成物または医薬の製造における本開示に従った薬剤の使用も同様に提供される。方法が、本明細書に記載されるＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、核酸、ベクター、細胞または組成物を対象に投与することを典型的には含むことは理解される。

【0350】

同様に、本開示に従った治療または予防介入に続いて（例えば、介入前のレベルと比較して）、ＳＵＮドメイン含有タンパク質とＫＡＳＨドメイン含有タンパク質との間の相互作用の阻害；ＳＵＮドメイン含有タンパク質およびＫＡＳＨドメイン含有タンパク質を含むＬＩＮＣ複合体の形成の阻害；ＳＵＮドメイン含有タンパク質およびＫＡＳＨドメイン含有タンパク質を含むＬＩＮＣ複合体の破壊；ＳＵＮドメイン含有タンパク質またはＫＡＳＨドメイン含有タンパク質の正常な細胞内局在の破壊；ＬＩＮＣ複合体の構成要素タンパク質（例えば、ＫＡＳＨドメイン含有タンパク質）の小胞体への局在の増加；ＳＵＮドメイン含有タンパク質およびＫＡＳＨドメイン含有タンパク質を含むＬＩＮＣ複合体のレベルの低減；ならびに／またはＳＵＮドメイン含有タンパク質およびＡＳＨドメイン含有タンパク質を含むＬＩＮＣ複合体の機能／活性の阻害のうちの１つまたは複数が対象において観察される。

【0351】

一部の実施形態では、本開示に従った治療／予防介入は、前段に記載の１つまたは複数の効果と「関連して」記載され得る。当業者は、当分野で日常的に実行される技法を使用してそのような特性を容易に評価することができる。

【0352】

本開示のＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、核酸、ベクター、細胞および組成物の投与は、好ましくは、「治療有効」量または「予防有効」量においてであり、これは対象への治療または予防効果を示すのに十分である。投与される実際量、ならびに投与の速度および時間経過は、疾患／状態の性質および重症度、ならびに投与される具体的な物品に依存することになる。処置の処方、例えば、投与量の決定等は、一般医および他の医師の責任範囲内であり、典型的には、処置される疾患／障害、個々の対象の状態、送達部位、投与方法および開業医には公知の他の要因を考慮に入れる。上述の技法およびプロトコールの例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ ‘Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ’（Ｅｄ．Ａ．Ａｄｅｊａｒｅ）、第２３版（２０２０）、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓに見出せる。

【0353】

好ましい実施形態では、投与は、本開示に従った核酸／ベクターの、または核酸／ベクターを含む組成物の投与である。好ましい実施形態では、投与は、本開示に従った核酸／ベクターを含む／発現する、および／またはＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドを含む／発現する１つまたは複数の細胞の改変をもたらす。

【0354】

本開示の物品の投与は、例えば、非経口、全身性、局所、腔内、血管内、静脈内、動脈内、筋肉内、くも膜下腔内、眼内、結膜内、腫瘍内、皮下、皮内、経口または経皮的であり得る。投与は、注射、注入または経口摂取によってであり得る。

【0355】

一部の態様および実施形態では、本開示の物品は、目的の組織／器官（例えば、状態に冒されている疾患／状態に冒されている組織／器官（例えば、疾患／状態の症状が現れる組織／器官）に投与され得る。一部の態様および実施形態では、本開示の物品は、注射もしくは注入によって（例えば、カニューレを通じて）血中に投与（すなわち、静脈内／動脈内投与）され得る、または皮下にもしくは経口で投与され得る。

【0356】

本開示に従った一部の態様および実施形態では、本開示の物品標的化送達があり得る、すなわち、対象における関連薬剤の濃度は、身体の他の部分と比較して所与の組織（複数可）／器官（複数可）において増加している。一部の実施形態では、方法は、血管内（例えば、静脈内もしくは動脈内）、筋肉内または皮下投与を含み、関連物品は、標的化薬剤送達系（例えば、先述の通り）に製剤化される。

【0357】

投与の特定の様式および／または部位は、ＬＩＮＣ複合体阻害が必要である場所、例えば、心臓および／または骨格筋細胞／組織に従って選択され得る。

【0358】

一部の実施形態では、本開示に従った治療または予防介入は、関連疾患／状態の処置／予防のための別の薬剤を投与することをさらに含み得る。

【0359】

本明細書に記載されるＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、核酸、ベクター、細胞および組成物の投与は、単独または他の処置との組合せで、処置される状態に応じて同時にまたは逐次的に、のいずれであってもよい。同時投与は、例えば、両方の薬剤を含有する医薬組成物（組合せ調製）としての、または互いの直後におよび任意選択で同じ投与の経路を通じて（例えば、同じ組織、動脈、静脈または他の血管へ）での、別の治療剤と合わせた投与を指す。逐次投与は、１つの薬剤の投与の所与の時間間隔後に続く別の薬剤の別の投与を指す。一部の実施形態ではこの通りであるが、２つの薬剤が同じ経路によって投与される必要はない。時間間隔は、任意の時間間隔であってよい。

【0360】

本開示のＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、核酸、ベクター、細胞および組成物の複数用量は、提供され得る。用量のうちの１つもしくは複数、またはそれぞれは、別の治療剤の同時または逐次投与を伴ってもよい。

【0361】

複数用量は、所定の時間間隔で離してもよく、この間隔は１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、もしくは３１日または１、２、３、４、５、もしくは６か月のうちの１つであることを選択してもよい。例として、用量は、７、１４、２１または２８日（プラスまたはマイナス３、２、または１日）ごとに１回与えてもよい。

【0362】

一部の実施形態では、本開示に従った方法は、対象が本明細書に記載される疾患を有するかどうかを決定するステップを含み得る。一部の実施形態では、方法は、本明細書に記載される疾患を診断するステップを含む。対象が本明細書に記載される疾患を有するかどうかを判定するステップは、疾患の１つまたは複数の症状／相関物について対象を分析するステップを含んでもよい。

【0363】

一部の実施形態では、例えば、対象におけるまたは対象の細胞／組織／器官における疾患を示す他の症状の存在に基づいて、対象は疾患を有するまたは罹っていると疑われ得る。一部の実施形態では、例えば、疾患に対する遺伝的素因または他のリスク因子のせいで、対象は疾患を発症するリスクがあると見なされ得る。

【0364】

一部の実施形態では、方法は、対象が本明細書に記載される遺伝子への突然変異を有するかどうかを判定するステップを含む。一部の実施形態では、方法は、本明細書に記載される遺伝子への突然変異を検出するステップを含む。

【0365】

本明細書に記載される遺伝子への突然変異の判定は、診断もしくは疑わしい診断を確かめてもよく、または対象が疾患を発症するリスクがあることを確かめてもよい。決定は、本明細書に記載されるＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、核酸、ベクター、細胞または組成物を用いた処置／予防のために疾患、または疾患の素因を診断できる。

【0366】

遺伝的要因は、ＰＣＲベースのおよび配列決定アッセイを含む、当業者に公知の方法によりアッセイしてもよい。例えば、対象から得られた試料中で、遺伝的要因の存在を判定することにより、診断を確かめてもよく、および／または対象は本明細書に記載される疾患を発症するリスクがあると分類されてもよく、および／または対象は、本明細書に記載されるＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、核酸、ベクター、細胞または組成物を用いた処置に適していると見極められてもよい。

【0367】

アッセイは、対象から得られた試料上ｉｎ ｖｉｔｒｏで、または対象から得られた試料の処理に続いて実施してもよい。対象から得られた試料は、いかなる種類でもよい。生体試料は、任意の組織または体液、例えば、血液試料、血液由来試料、血清試料、リンパ試料、精液試料、唾液試料、骨液試料から採取し得る。血液由来試料は、患者血液の選択された画分、例えば、選択された細胞含有画分または血漿もしくは血清画分でもよい。試料は、対象から単離された組織試料もしくは生検；または細胞を含み得る。

【0368】

一部の実施形態では、方法は、対象が、ＬＭＮＡ、ＬＭＮＢ１、ＬＭＮＢ２、ＥＭＤ、ＬＡＰ２、ＬＢＲ、ＺＭＰＳＴＥ２４、ＳＹＮＥ－１およびＮＵＰ６２のうちの１つまたは複数の対立遺伝子への突然変異を含むかどうかを判定するステップを含む。一部の実施形態では、方法は、対象が、ＬＭＮＡ、ＬＭＮＢ１およびＬＭＮＢ２のうちの１つまたは複数の対立遺伝子への突然変異を含むかどうかを判定するステップを含む。一部の実施形態では、方法は、対象が、ＬＭＮＡの対立遺伝子への突然変異を含むかどうかを判定するステップを含む。一部の実施形態では、方法は、対象が、ＬＤＬＲの対立遺伝子への突然変異を含むかどうかを判定するステップを含む。

【0369】

そのような実施形態では、突然変異が検出されれば、対象を、本明細書に記載されるＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、核酸、ベクター、細胞または組成物を投与される対象であると見極め得る。したがって、一部の実施形態では、方法は、本明細書に記載されるＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、核酸、ベクター、細胞または組成物の投与のために、ＬＭＮＡ、ＬＭＮＢ１、ＬＭＮＢ２、ＥＭＤ、ＬＡＰ２、ＬＢＲ、ＺＭＰＳＴＥ２４、ＳＹＮＥ－１およびＮＵＰ６２のうちの１つまたは複数への突然変異を含むと判定された対象を選択するステップを含む。一部の実施形態では、方法は、本明細書に記載されるＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、核酸、ベクター、細胞または組成物の投与のために、ＬＭＮＡ、ＬＭＮＢ１およびＬＭＮＢ２のうちの１つまたは複数への突然変異を含むと判定された対象を選択するステップを含む。一部の実施形態では、方法は、本明細書に記載されるＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、核酸、ベクター、細胞または組成物の投与のために、ＬＭＮＡへの突然変異を含むと判定された対象を選択するステップを含む。一部の実施形態では、方法は、本明細書に記載されるＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、核酸、ベクター、細胞または組成物の投与のために、ＬＤＬＲへの突然変異を含むと判定された対象を選択するステップを含む。

【0370】

一部の実施形態では、方法は、少なくとも１つのＬＭＮＡ突然変異の存在または非存在について疾患を有すると疑われる対象から得られた試料を試験するステップを含み、少なくとも１つのＬＭＮＡ突然変異の存在は、対象が、本明細書に記載されるＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、核酸、ベクター、細胞または組成物を投与されるべきであることを示している。

【0371】

対象
本開示の種々の態様に従った対象は、任意の動物またはヒトであり得る。治療および予防適用は、ヒトまたは動物（獣医学使用）においてであり得る。本明細書に記載されるＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、核酸、ベクター、細胞または組成物を用いて処置される対象は、それを必要とする対象であり得る。対象は、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトである。対象は、非ヒト哺乳動物であり得るが、より好ましくはヒトである。対象は、オスまたはメスであり得る。対象は、患者であり得る。

【0372】

対象は、本明細書に記載される疾患または状態を有すると診断された場合があり、そのような疾患／状態を有すると疑われている場合があり、そのような疾患／状態を発症する／罹患するリスクがある場合がある。本開示に従った実施形態では、対象は、そのような疾患／状態のある特定のマーカーについての特徴に基づく方法に従った処置のために選択され得る。

【0373】

一部の実施形態では、対象は、先述のいずれかの実施形態に従った突然変異を含む。一部の実施形態では、対象は、本明細書に記載される疾患／状態（例えば、ラミノパチー）を生じる突然変異を含む。

【0374】

キット
本開示の一部の態様では、部品のキットが提供される。一部の実施形態では、キットは、所定の量の本明細書に記載されるＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、核酸、ベクター、細胞または組成物を含む少なくとも１つの容器を含み得る。

【0375】

一部の実施形態では、キットは、本明細書に記載されるＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、核酸、ベクター、細胞または組成物を産生するための材料を含み得る。

【0376】

キットは、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、核酸、ベクター、細胞または組成物を特定の疾患／状態を処置するために患者に投与するための説明書と共に提供し得る。

【0377】

一部の実施形態では、キットは、所定の量の別の治療剤を含む少なくとも１つの容器をさらに含み得る。そのような実施形態では、特定の疾患または状態に対する併用処置を提供するように２つの医薬または医薬組成物が同時にまたは別々に投与され得るように、キットは第２の医薬または医薬組成物も含み得る。

【0378】

本開示に従ったキットは、使用のための説明書を、例えば、取り扱い説明書または小冊子の形態で含む場合がある。説明書は、本明細書に記載される方法の任意の１つまたは複数を実施するためのプロトコールを含み得る。

【0379】

配列同一性
２つもしくはそれよりも多いアミノ酸または核酸配列間のパーセント同一性を決定する目的でのペアワイズおよび多重配列アラインメントは、当業者に既知の各種方法で、例えば、ＣｌｕｓｔａｌＯｍｅｇａ（Ｓｏｄｉｎｇ、Ｊ．２００５、Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ２１、９５１～９６０）、Ｔ－ｃｏｆｆｅｅ（Ｎｏｔｒｅｄａｍｅら ２０００、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（２０００）３０２、２０５～２１７）、Ｋａｌｉｇｎ（ＬａｓｓｍａｎｎおよびＳｏｎｎｈａｍｍｅｒ ２００５、ＢＭＣ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ、６（２９８））およびＭＡＦＦＴ（ＫａｔｏｈおよびＳｔａｎｄｌｅｙ ２０１３、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ、３０（４）７７２～７８０）ソフトウェア等の公的に利用可能なコンピューターソフトウェアを使用して達成することができる。そのようなソフトウェアを使用する場合、例えば、ギャップペナルティおよび伸長ペナルティのデフォルトパラメータが好ましくは使用される。

【0380】

【表2-1】

【0381】

【表2-2】

【0382】

【表2-3】

【0383】

【表2-4】

【0384】

【表2-5】

【0385】

【表2-6】

【0386】

【表2-7】

【0387】

【表2-8】

【0388】

【表2-9】

【0389】

【表2-10】

【0390】

【表2-11】

【0391】

【表2-12】

【0392】

【表2-13】

【0393】

【表2-14】

【0394】

番号付き段落
以下の番号付き段落（段落（ｐａｒａ））は、本発明に関連して検討される特性および特性の組合せのさらなる記載を提供する：
１．ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドをコードする核酸であって、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、（ｉ）ＳＵＮドメイン含有タンパク質のＣＣ２領域のα３ヘリックスおよびＳＵＮドメインに対応するアミノ酸配列を含む阻害領域、ならびに（ｉｉ）小胞体保持モチーフを含み；
ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、配列番号４３、４５または５８のいずれか１つのアミノ酸配列を含まない、核酸。

【0395】

２．ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドの阻害領域が、配列番号４４または４６のアミノ酸配列から本質的にならない、段落１の核酸。

【0396】

３．ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドの阻害領域が、配列番号４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５９、６０、６１または６２のいずれか１つのアミノ酸配列から本質的にならない、段落１または段落２の核酸。

【0397】

４．ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドの阻害領域が、配列番号６３、６４、６５、６６、６７、６８または９４のいずれか１つのアミノ酸配列に少なくとも８０％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列から本質的になる、段落１から３のいずれか１つの核酸。

【0398】

５．ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドが、配列番号６９、７０、７１、７２、７３、７４または９５のいずれか１つのアミノ酸配列に少なくとも８０％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれから本質的になる、段落１から４のいずれか１つの核酸。

【0399】

６．ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドが、シグナルペプチドを含む、段落１から５のいずれか１つの核酸。

【0400】

７．核酸が、遺伝子治療として、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドをコードする核酸を送達するために好適なベクターである、段落１から６のいずれか１つの核酸。

【0401】

８．ベクターが、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターである、段落７の核酸。

【0402】

９．（ｉ）ＳＵＮドメイン含有タンパク質のＣＣ２領域のα３ヘリックスおよびＳＵＮドメインに対応するアミノ酸配列を含む阻害領域、ならびに（ｉｉ）小胞体保持モチーフを含む、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドであって、
配列番号４３または４５のアミノ酸配列を含まない、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド。

【0403】

１０．ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドの阻害領域が、配列番号４４または４６のアミノ酸配列から本質的にならない、段落９のＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド。

【0404】

１１．ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドの阻害領域が、配列番号４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１または６２のいずれか１つのアミノ酸配列から本質的にならない、段落９または段落１０のＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド。

【0405】

１２．ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドの阻害領域が、配列番号６３、６４、６５、６６、６７、６８または９４のいずれか１つのアミノ酸配列に少なくとも８０％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列から本質的になる、段落９から１１のいずれか１つのＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド。

【0406】

１３．ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドが、配列番号６９、７０、７１、７２、７３、７４または９５のいずれか１つのアミノ酸配列に少なくとも８０％アミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれから本質的になる、段落９から１２のいずれか１つのＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド。

【0407】

１４．ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドが、シグナルペプチドを含む、段落９から１３のいずれか１つのＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド。

【0408】

１５．ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドを同定するための方法であって、
候補ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドをコードする核酸を導入するステップであって、候補ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ＳＵＮドメイン含有タンパク質のＳＵＮドメインに対応するアミノ酸配列を含む、ステップ；および
続いて、細胞を分析して、ＳＵＮドメイン含有タンパク質に対する相互作用パートナーの細胞内局在を決定するステップ
を含み、ＳＵＮドメイン含有タンパク質に対する相互作用パートナーの細胞内局在の変化が検出される場合に、候補ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドがＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドであると決定される、方法。

【0409】

１６．ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドを同定するための方法であって、
候補ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドをコードする核酸を導入するステップであって、候補ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、ＫＡＳＨドメイン含有タンパク質のＫＡＳＨドメインに対応するアミノ酸配列を含む、ステップ；および
続いて、細胞を分析して、ＫＡＳＨドメイン含有タンパク質に対する相互作用パートナーの細胞内局在を決定するステップ
を含み、ＫＡＳＨドメイン含有タンパク質に対する相互作用パートナーの細胞内局在の変化が検出される場合に、候補ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドがＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドであると決定される、方法。

【0410】

１７．ＳＵＮ／ＫＡＳＨドメイン含有タンパク質に対する相互作用パートナーの小胞体に局在する割合の増加が検出される場合に、候補ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドがＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドであると決定される、段落１５または段落１６の方法。

【0411】

１８．段落１５から１７のいずれか１つの方法によって同定されるＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド。

【0412】

１９．段落９から１４または段落１８のいずれか１つのＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドをコードする核酸。

【0413】

２０．遺伝子治療として、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドをコードする核酸を送達するために好適なベクターである、段落１９の核酸を含むベクター。

【0414】

２１．アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターである、段落２０のベクター。

【0415】

２２．段落１から８もしくは段落１９のいずれか１つの核酸、段落９から１４もしくは段落１８のいずれか１つのＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、または段落２０もしくは段落２１のベクターを含む細胞。

【0416】

２３．段落１から８もしくは段落１９のいずれか１つの核酸、段落９から１４もしくは段落１８のいずれか１つのＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、段落２０もしくは段落２１のベクター、または段落２２の細胞を含む医薬組成物。

【0417】

２４．医学的処置および予防の方法における使用のための、段落１から８もしくは段落１９のいずれか１つの核酸、段落９から１４もしくは段落１８のいずれか１つのＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、段落２０もしくは段落２１のベクター、段落２２の細胞または段落２３の医薬組成物。

【0418】

２５．ラミノパチーを処置するまたは予防する方法における使用のための、段落１から８もしくは段落１９のいずれか１つの核酸、段落９から１４もしくは段落１８のいずれか１つのＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、段落２０もしくは段落２１のベクター、段落２２の細胞または段落２３の医薬組成物。

【0419】

２６．ラミノパチーを処置するまたは予防する医薬の製造における、段落１から８もしくは段落１９のいずれか１つの核酸、段落９から１４もしくは段落１８のいずれか１つのＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、段落２０もしくは段落２１のベクター、段落２２の細胞または段落２３の医薬組成物の使用。

【0420】

２７．ラミノパチーを処置するまたは予防する方法であって、段落１から８もしくは段落１９のいずれか１つの核酸、段落９から１４もしくは段落１８のいずれか１つのＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、段落２０もしくは段落２１のベクター、段落２２の細胞または段落２３の医薬組成物の治療または予防有効量を対象に投与することを含む、方法。

【0421】

２８．ラミノパチーが、筋症、心筋症、拡張型心筋症、筋ジストロフィー、心筋ジストロフィー、骨格筋ジストロフィー、早老症、神経障害、脂肪萎縮症、骨格異常形成、リポジストロフィー、白質ジストロフィーまたは皮膚症のうちの１つまたは複数により特徴付けられる、段落２５の使用のための核酸、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、ベクター、細胞もしくは医薬組成物、段落２６の使用、または段落２７の方法。

【0422】

２９．ラミノパチーが、ＬＭＮＡへの突然変異と関連している、段落２５から２８のいずれか１つに記載の使用のための核酸、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、ベクター、細胞もしくは医薬組成物、使用または方法。

【0423】

３０．ラミノパチーが、ハッチンソン・ギルフォード・プロジェリア症候群；拡張型心筋症；筋ジストロフィー、先天的、Ｌｍｎａ関連；エメリー・ドレフュス型筋ジストロフィー２、常染色体優性；筋ジストロフィー；ａ型リポジストロフィーを伴う下顎末端異形成症；心筋症、拡張型、１ａ；シャルコー・マリー・トゥース病；肢帯型筋ジストロフィー；心筋症、拡張型、高ゴナドトロピン性性腺機能低下症を伴う；エメリー・ドレフュス型筋ジストロフィー３、常染色体劣性；リポジストロフィー、家族性部分型、２型；エメリー・ドレフュス型筋ジストロフィー；シャルコー・マリー・トゥース病、軸索、２ｂ１型；心臓－上肢症候群、スロベニア型；老化；家族性部分型リポジストロフィー；拘束性皮膚障害、致死性；不整脈原性右室心筋症；歯科疾患；心臓病；ウェルナー症候群；肥大型心筋症；左室心筋緻密化障害；房室ブロック；石灰沈着；先端骨溶解症；常染色体優性肢帯型筋ジストロフィー；真性糖尿病、インスリン非依存性；骨粗鬆症；心房細動；心房静止１；黒色皮膚腫；心伝導障害；カテコールアミン誘発性多形性心室性頻拍；小下顎症、難聴、プロゲリア様症状、およびリポジストロフィー症候群；洞不全症候群；ペルゲル・フエット核異常；シャルコー・マリー・トゥース病、軸索、２ｅ型；先天性全身型リポジストロフィー；拘束型心筋症；先天性筋線維タイプ不均等症；リポジストロフィー、先天性全身型、１型；筋原線維ミオパチー；リポジストロフィー、家族性部分型、１型；軸索型ニューロパチー；非定型ウェルナー症候群；卵巣嚢胞腺腫；ファンコニ貧血、相補群ａ；肥満度指数量的形質遺伝子座１１；皮膚疾患；強直性脊椎筋ジストロフィー１；神経筋疾患；ハーラーマン・ストライフ症候群；ベスレムミオパチー１；後天性全身型リポジストロフィー；心筋症、拡張型、１ｅ；リポジストロフィー、先天性全身型、４型；未分化多形肉腫；リポジストロフィー、家族性部分型、３型；筋ジストロフィー、先天性メロシン欠損型、１ａ；近位脊髄性筋萎縮症；筋ジストロフィー・ジストログリカノパチー、Ｂ型、５；筋ジストロフィー、先天性、１ｂ；レイノルズ症候群；ウィダマン・ラウテンストラウフ症候群；エメリー・ドレフュス型筋ジストロフィー１、Ｘ連鎖型；リポジストロフィー、先天性全身型、２型；単一遺伝子糖尿病；心筋症、拡張型、１ｄ；ミオパチー、近位、および眼筋麻痺；筋組織病；リポジストロフィー、家族性部分型、４型；心筋症、拡張型、１ｈ；第２度房室ブロック；正中神経障害；内因性心筋症；女性生殖器の脱出；完全全身型リポジストロフィー；強直性脊椎筋ジストロフィー；エメリノパチー；尺骨神経障害；肢帯型筋ジストロフィー１ｂ型；Ｌｍｎａ関連拡張型心筋症；骨盤筋消耗；全身型リポジストロフィー関連早老症候群；筋疾患；心筋症、拡張型、１ｂ；常染色体遺伝病；家族性孤発性不整脈原性心室異形成、右優性型；家族性孤発性不整脈原性心室異形成、両室型；家族性孤発性不整脈原性心室異形成、左優性型；Ｌｍｎａ関連心臓皮膚早老症症候群；ならびに常染色体半優性重症型リポジストロフィーラミノパチーから選択される、段落２５から２９のいずれか１つに記載の使用のための核酸、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、ベクター、細胞もしくは医薬組成物、使用または方法。

【0424】

３１．高脂血症を特徴とする疾患を処置するまたは予防する方法における使用のための、段落１から８もしくは段落１９のいずれか１つの核酸、段落９から１４もしくは段落１８のいずれか１つのＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、段落２０もしくは段落２１のベクター、段落２２の細胞または段落２３の医薬組成物。

【0425】

３２．高脂血症を特徴とする疾患を処置するまたは予防するための医薬の製造における、段落１から８もしくは段落１９のいずれか１つの核酸、段落９から１４もしくは段落１８のいずれか１つのＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、段落２０もしくは段落２１のベクター、段落２２の細胞または段落２３の医薬組成物の使用。

【0426】

３３．高脂血症を特徴とする疾患を処置するまたは予防する方法であって、段落１から８もしくは段落１９のいずれか１つの核酸、段落９から１４もしくは段落１８のいずれか１つのＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、段落２０もしくは段落２１のベクター、段落２２の細胞または段落２３の医薬組成物の治療または予防有効量を対象に投与することを含む、方法。

【0427】

３４．高脂血症を特徴とする疾患が、アテローム性動脈硬化症、心血管疾患、脳卒中および家族性高脂血症から選択される、段落３１に記載の使用のための核酸、ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチド、ベクター、細胞もしくは医薬組成物、段落３２に記載の使用、または段落３３に記載の方法。

【0428】

本発明は、記載される態様および好ましい特色の組合せを包含するが、但し、かかる組合せが、明らかに容認されないか、または明白に回避される場合を除く。

【0429】

本明細書中で使用される項目の表題は、構成上の目的のためのみのものであり、記載される主題を限定するものと解釈されない。

【0430】

これより、本開示の態様および実施形態は、添付の図面を参照して例示の方法によって、例示される。さらなる態様および実施形態は、当業者に明らかである。この文章で言及される文書は全て、参照により本明細書に組み込まれる。

【0431】

併記の特許請求の範囲を包含する、本明細書全体にわたって、文脈が他の状況を求めない限り、「含む」という語句、ならびに「含む（単数形）」、「含んでいる」等の変形は、記述した整数もしくはステップまたは整数もしくはステップの群の包含を含蓄するが、任意の他の整数もしくはステップまたは整数もしくはステップの群の排除を含蓄しないと理解されよう。

【0432】

本明細書および併記の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈が明らかに他の状況を指示しない限り、複数形の指示対象を包含することに留意しなくてはならない。範囲は、「約」ある特定の値から、および／または「約」別の特定の値までとして、本明細書中で表され得る。かかる範囲が表される場合、別の実施形態は、ある特定の値から、および／または他の特定の値までを包含する。同様に、値が、先行詞「約」を用いて、近似値として表される場合、特定の値は、別の実施形態を形成することが理解されよう。

【0433】

核酸配列が、本明細書中で開示される場合、その逆向きの補体もまた、明らかに意図される。

【0434】

ｉｎ ｖｉｔｒｏで、またはｉｎ ｖｉｖｏで、本明細書中に記載される方法は実施され得る。一部の実施形態では、本明細書に記載される方法はｉｎ ｖｉｔｒｏで実施され得る。「ｉｎ ｖｉｔｒｏ」という用語は、培養物中の細胞を用いた実験を包含すると意図されるのに対して、「ｉｎ ｖｉｖｏ」という用語は、無傷の多細胞生物を用いた実験を包含すると意図される。

【0435】

図面の簡単な説明
本発明の原理を例示する実施形態および実験は、添付の図を参照してここに考察される。

【0436】

図１。マウスＳｕｎ１、マウスＳｕｎ２、ヒトＳＵＮ１およびヒトＳＵＮ２のアミノ酸配列のアラインメント。内腔ドメインの始まりの６アミノ酸上流から開始するアミノ酸配列は、ＣｌｕｓｔａｌＯｍｅｇａソフトウェアを使用してアラインされた。目的の残基およびドメインは示される。

【0437】

図２。ヒトＳＵＮ１タンパク質および実施例１で特徴付けられた種々の構築物（すなわち、構築物（Ａ）から（Ｈ））の模式図。構築物に含まれるヒトＳＵＮ１の内腔ドメインのドメインが示されている。

【0438】

図３。小胞体に局在するＮｅｓｐｒｉｎ－２の増加によって決定される、さまざまな推定ドミナントネガティブＳＵＮ１構築物が、ＬＩＮＣ複合体破壊を達成する能力の分析結果を示す模式図および顕微鏡像。顕微鏡像中の矢印は、関連構築物を高レベルで発現する細胞を示す。構築物がＮｅｓｐｒｉｎ－２局在を生じると決定されたかどうかが示されている。

【0439】

図４。ヒトＳＵＮ１タンパク質および実施例５で特徴付けられた種々の構築物（すなわち、構築物Ａ、Ｄ、Ｄ２、ＥおよびＧ）の模式図。構築物に含まれるヒトＳＵＮ１の内腔ドメインのドメインが示されている。ＳＵＮ１由来配列＋ＫＤＥＬの長さが示されている。

【0440】

図５Ａから５Ｄ。拡張型心筋症のマウスモデルにおける、さまざまな推定ドミナントネガティブＳＵＮ１構築物の治療有効性の分析の結果を示すグラフ。簡潔には、心臓特異的Ｃｒｅを包含するＬｍｎａ^{ＦＦ：ｍｃｍ}マウスにＬｍｎａの欠失を誘導するためのタモキシフェン（ＴＭＸ）を注射した。ＴＭＸを用いた処置の１７日後、ｃＴＮＴプロモーターの制御下にＤＮｈＳＵＮ１＿２０１ａａ（「２０１ａａ」；図４の構築物Ｇ）、ＤＮｈＳＵＮ１＿２５５ａａ（「２５５ａａ」；図４の構築物Ｅ）、ＤＮｈＳＵＮ１＿３３４ａａ（「３３４ａａ」；図４の構築物Ｄ２）またはＤＮｈＳＵＮ１＿４５７ａａ（「４５７ａａ」；図４の構築物Ａ）をコードするＡＡＶ９の単回用量（１^＊１０^１４ｖｇ／ｋｇ）をマウスに投与した。対照条件として、ＴＭＸを投与した野生型マウス（ＷＴ）またはＬｍｎａ^{ＦＦ：ｍｃｍ}マウス（ＤＣＭ）に１７日目から、ｃＴＮＴプロモーターの制御下にＧＦＰをコードするＡＡＶ９の単回用量（１^＊１０^１４ｖｇ／ｋｇ）を投与した。生存をモニターし、心機能を心エコーによって評価し、拡張期（ｄ）および収縮期（ｓ）における左心室内径（ＬＶＩＤ）および左心室後壁（ＬＶＰＷ）厚を超音波によって評価した。（５Ａ）さまざまな処置群のマウスについての経時的な生存百分率を示す。各群について、Ｎ＝６ ^＊＊＊ログランク（Ｌｏｎｇ－ｒａｎｋ）（マンテル－コックス）Ｐ＝０．０００５、ＤＣＭ対照に対するペアワイズ比較。（５Ｂ）さまざまな処置群のマウスについて経時的な短縮率（ＦＳ）および駆出率（ＥＦ）を示す。^＊＊マン－ホイットニー Ｐ＜０．００８７、ＤＣＭ対照に対するペアワイズ比較。データは、平均±ＳＤとして示す。（５Ｃおよび５Ｄ）それぞれ、拡張期（ｄ）および収縮期（ｓ）における経時的な左心室内径（ＬＶＩＤ；５Ｃ）および左心室後壁（ＬＶＰＷ）厚（５Ｄ）を示す。データは、平均±ＳＤとして示す。

【0441】

図６Ａから６Ｄ。拡張型心筋症のマウスモデルにおけるさまざまな推定ドミナントネガティブＳＵＮ１構築物の治療有効性の分析の結果を示すグラフ。簡潔には、心臓特異的Ｃｒｅを包含するＬｍｎａ^{ＦＦ：ｍｃｍ}マウスにＬｍｎａの欠失を誘導するためにタモキシフェン（ＴＭＸ）を注射した。ＴＭＸを用いた処置の１７日後、ｃＴＮＴプロモーターの制御下にＤＮｈＳＵＮ１＿３２２ａａ（「３２２ａａ」；図４の構築物Ｄ）またはＤＮｈＳＵＮ１＿４５７ａａ（「４５７ａａ」；図４の構築物Ａ）をコードするＡＡＶ９の単回用量（１^＊１０^１４ｖｇ／ｋｇ）をマウスに投与した。対照条件として、ＴＭＸを投与した野生型マウス（ＷＴ）またはＬｍｎａ^{ＦＦ：ｍｃｍ}マウス（ＤＣＭ）に１７日目から、ｃＴＮＴプロモーターの制御下にＧＦＰをコードするＡＡＶ９の単回用量（１^＊１０^１４ｖｇ／ｋｇ）を投与した。生存をモニターし、心機能を心エコーによって評価し、拡張期（ｄ）および収縮期（ｓ）における左心室内径（ＬＶＩＤ）および左心室後壁（ＬＶＰＷ）厚を超音波によって評価した。（６Ａ）さまざまな処置群におけるマウスについての経時的な生存百分率を示す。３２２ａａ群 Ｎ＝６、４５７ａａ群 Ｎ＝６、ＤＣＭ群 Ｎ＝５、ＷＴ群 Ｎ＝７。ログランク（マンテル－コックス）Ｐ＜０．０００７、ＤＣＭ対照に対するペアワイズ比較。データは、平均±ＳＤとして示す。（６Ｂ）さまざまな処置群のマウスの経時的な短縮率（ＦＳ）および駆出率（ＥＦ）を示す。^＊＊マン－ホイットニー Ｐ＜０．００９５、ＤＣＭ対照に対するペアワイズ比較。データは、平均±ＳＤとして示す。（６Ｃおよび６Ｄ）それぞれ、拡張期（ｄ）および収縮期（ｓ）における経時的な左心室内径（ＬＶＩＤ；６Ｃ）および左心室後壁（ＬＶＰＷ）厚（６Ｄ）を示す。データは、平均±ＳＤとして示す。

【実施例】

【0442】

実施例１：さまざまなドミナントネガティブＳＵＮ１構築物によるＬＩＮＣ複合体阻害のｉｎ ｖｉｔｒｏ分析
１．１ 材料および方法
１．１．１ バイオインフォマティクス
ＳＵＮドメイン含有タンパク質およびそれらのオルソログのアミノ酸配列をＮＣＢＩおよびＵｎｉｐｒｏｔから得た。配列アラインメントをＣｌｕｓｔａｌＯｍｅｇａ（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｍｓａ／ｃｌｕｓｔａｌｏ）を使用して実施した。ドメイン分析をＳＭＡＲＴ（ｈｔｔｐ：／／ｓｍａｒｔ．ｅｍｂｌ－ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ．ｄｅ／）を使用して実施した。

【0443】

１．１．２ 分子生物学
全長ＤＮＳＵＮ１コード配列およびその切断型バリアントをコードするＤＮＡ配列を合成し、ｐＴｗｉｓｔ ＥＦ１アルファプラスミドにクローニングした。ＤＮＳＵＮ１構築物をコードする核酸は、Ｎ末端のヒト血清アルブミンシグナル配列に続くＨＡタグおよびＡＬＦＡタグ、次いで、種々の異なる切断型内腔ＳＵＮ１ドメイン配列のうちの１つに続くＣ末端のＫＤＥＬ配列から構成された。本開示の実施例において特徴付けられるドミナントネガティブヒトＳＵＮ１（ＤＮｈＳＵＮ１）構築物のアミノ酸配列は、配列番号８０から８７および９６に示され、それらの配列特性は、図１、２および４に模式的に示される。

【0444】

【表3】

【0445】

１．１．３ 細胞培養およびトランスフェクション
ＨｅＬａ細胞を３７℃、５％ＣＯ_２で、４．５ｇ／Ｌ Ｄ－グルコース、４ｍＭ Ｌ－グルタミン、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、１０％ウシ胎仔血清および１００Ｕ／ｍｌペニシリン；１００ｍｇ／ｍｌストレプトマイシンを含有するダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中で培養した。免疫蛍光研究のために、細胞をカバーガラスまたは８ウエルスライド（ｉｂｉｄｉ、カタログ番号８０８２６）上に播種した。８ウエルスライドの各ウエルに、推定ドミナントネガティブＳＵＮ１構築物をコードするプラスミドＤＮＡ ２００ｎｇを、Ｏｐｔｉ－ＭＥＭ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中にプラスミドＤＮＡ １００ｎｇあたり０．３ｍｌリポフェクタミン３０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）および０．２ｍｌ Ｐ３０００試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含有する予め形成させたトランスフェクション複合体の添加によって１５分間トランスフェクトした。

【0446】

１．１．４ 免疫蛍光顕微鏡
トランスフェクション翌日、ＨｅＬａ細胞を－２０℃の冷メタノール中で１０分間固定し、透過処理し、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中に３％ウシ血清アルブミンおよび０．５％Ｔｒｉｘｏｎ Ｘ－１００を含むブロッキング緩衝液中で３０分間ブロッキングした。

【0447】

関連ＤＮＳＵＮ１構築物を検出するために、細胞を抗Ｎｅｓｐｒｉｎ－２マウスモノクローナル抗体、抗ＡＬＦＡ抗体（Ａｂｂｅｒｉｏｒ Ｓｔａｒ５８０にコンジュゲートしたＦｌｕｏＴａｇ（登録商標）－Ｘ２抗ＡＬＦＡ、ＮａｎｏＴａｇ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｎ１５０２－Ａｂ５８０－Ｌ）を使用して、および核エンベロープについてマウスモノクローナル抗ラミンＢ２抗体を使用して染色した。細胞をブロッキング緩衝液中の一次抗体と１～２時間、室温でインキュベートした。一次抗体インキュベーションに続いて、細胞を、ＰＢＳ中０．５％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００を用いて３回洗浄し、次に、ＤＮＡを染色するためにフルオロフォア－コンジュゲートマウス抗体アイソタイプ特異的二次抗体（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ａ－２１１２１、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８およびＡ－２１２４２にコンジュゲートしたヤギ抗マウスＩｇＧ１、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７にコンジュゲートしたヤギ抗マウスＩｇＧ２ｂ）およびＨｏｅｃｈｓｔを用いて３０分間～１時間、室温でインキュベーションした。細胞をＰｒｏｌｏｎｇ Ｄｉａｍｏｎｄまたは１％ＤＡＢＣＯ（１，４－ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン）中にマウントする前に、１０％ＰＢＳ／９０％グリセリン中で再び洗浄した。広視野落射蛍光顕微鏡イメージングを２０ｘ０．４５ ＮＡ ＬＵＣＰｌａｎ ＦＬ Ｎまたは４０ｘ０．６ ＮＡ Ｐｈ２ ＬＵＣＰｌａｎ ＦＬ Ｎ対物レンズを備えたモーター駆動ステージを有するＯｌｙｍｐｕｓ ＩＸ－８３で実施した。デジタル画像をＣｅｌｌＳｅｎｓソフトウェアを使用して捕捉し、Ｆｉｊｉソフトウェアを使用して処理した。

【0448】

１．２ 結果
タンパク質が、ＬＩＮＣ複合体阻害を達成するようにドミナントネガティブＳＵＮ１タンパク質として機能するために、ＳＵＮ１のどの領域が必要であるかを判定するために、本発明者らは、Ｃ末端ＫＤＥＬ配列を含むＳＵＮ１のさまざまな切断型バリアントの能力を評価した。具体的には、本発明者らは、ＳＭＡＲＴドメイン分析によって同定された２つのコイルドコイル領域、例えば、Ｘｕら、２０１８年に記載されたＣＣ１およびＣＣ２ドメインの寄与、ならびにＣＣ２ドメインの３つのアルファヘリックスの関与を調査した。

【0449】

ヒトＳＵＮ１、ヒトＳＵＮ１、マウスＳｕｎ１およびマウスＳｕｎ２の内腔領域のアラインメントを、図１に示す。

【0450】

本実施例において調査したさまざまな切断型バリアントを図２に模式的に示す。

【0451】

ドミナントネガティブＬＩＮＣ複合体阻害剤として機能するさまざまな切断型ＳＵＮ１構築物の能力を、細胞においてそれらを一過的に発現させ、続いてＫＡＳＨドメイン含有タンパク質Ｎｅｓｐｒｉｎ－２の細胞内局在を評価することによって評価した。低レベルの発現では、ＤＮＳＵＮ１は、核膜槽において核エンベロープに局在する。高レベルで発現される場合、ＤＮＳＵＮ１は、核膜槽と同じ膜コンパートメントである小胞体内腔全体に局在する。Ｃｒｉｓｐら、２００６年を参照されたい。

【0452】

高レベルのドミナントネガティブＳＵＮドメイン含有ＬＩＮＣ複合体阻害タンパク質を発現する細胞では、ＫＡＳＨドメイン含有タンパク質の正常な核エンベロープ局在は、破壊されており、大過剰のドミナントネガティブタンパク質として小胞体に局在したＫＡＳＨドメイン含有タンパク質は、ＫＡＳＨドメイン含有タンパク質との相互作用について内在性ＳＵＮドメイン含有タンパク質より勝る。このことは、ＫＡＳＨドメイン含有タンパク質に特異的な抗体を使用する免疫蛍光顕微鏡を使用して容易に可視化できる。

【0453】

本研究では、さまざまな切断型ＳＵＮ１構築物をコードするプラスミドを一過性のトランスフェクションによってＨｅＬａ細胞において発現させ、続いて細胞をＤＮＳＵＮ１およびＮｅｓｐｒｉｎ－２（ＨｅＬａ細胞において高度に発現されるＫＡＳＨドメイン含有タンパク質）に対する免疫蛍光染色によって分析した。

【0454】

結果を図３に示す。予測された通り、全長ＤＮＳＵＮ１（すなわち、配列番号８０のアミノ酸配列を有するタンパク質；ＤＮｈＳＵＮ１＿４５７ａａ）－ＨｅＬａ細胞においてＬＩＮＣ複合体を破壊すること、およびラミノパチーのマウスモデルにおいてＬＭＮＡ関連突然変異の病態を抑制することが実証された－は、核エンベロープからＮｅｓｐｒｉｎ－２を置き換えることが見出された。同様に予測された通り、ＳＵＮドメインだけを含有し（すなわち、配列番号８７のアミノ酸配列を有するタンパク質をコードする；ＤＮｈＳＵＮ１＿１８１ａａ）、多量体化を促進するそのアルファヘリックスの全ての先行するコイルドコイルドメインを欠いているＤＮＳＵＮ１構築物は、Ｎｅｓｐｒｉｎ－２を置き換えられなかった。

【0455】

予想外に、試験した他の全てのＤＮｈＳＵＮ１構築物（ＤＮｈＳＵＮ１＿４１３ａａ、ＤＮｈＳＵＮ１＿３６２ａａ、ＤＮｈＳＵＮ１＿３２２ａａ、ＤＮｈＳＵＮ１＿２５５ａａ、ＤＮｈＳＵＮ１＿２１６ａａおよびＤＮｈＳＵＮ１＿２０１ａａ）は、ある特定の構築物は、ＫＡＳＨドメイン含有タンパク質と相互作用することができないであろうことが以前の研究から予測されたにもかかわらず、Ｎｅｓｐｒｉｎ－２を核エンベロープからＥＲに置き換えることができた。

【0456】

Ｎｉｅら、２０１６年およびＪａｈｅｄら、２０１８年ｂは、完全なＣＣ２ドメインおよびＳＵＮドメインを含むＳｕｎ２の切断型バリアントが、Ｎｅｓｐｒｉｎ－２のＫＡＳＨドメインとの相互作用のために必要な三量体複合体形成についてＣＣ２ドメインによって阻害されることを開示した。同様に、Ｓｏｓａら、２０１２年は、ＣＣ２ドメインのα３ヘリックスおよびＳＵＮドメインを含むＳｕｎ２の切断型バリアントがＫＡＳＨ結合欠損であることを報告した。

【0457】

しかし、本研究では、ＳＵＮ１に基づくパラロガスな構築物が、Ｎｅｓｐｒｉｎ－２の正常な局在を破壊し、それによりＬＩＮＣ複合体阻害剤として挙動することを見出した。

【0458】

１．３ 考察
本実施例では、本発明者らは、種々の長さの一連のＳＵＮ１内腔ドメイン配列（配列番号４３、４４、６３～６７および９４に示す）が、ＬＩＮＣ複合体破壊に影響を与えることができることを実証した。驚くべきことに、ＳＵＮタンパク質の内腔ドメインについての以前の構造的および生化学研究は、本ＤＮＳＵＮ１構築物中のＳＵＮ１の内腔ドメインを切断する効果を予測しなかった。

【0459】

特徴付けたドミナントネガティブＳＵＮ１タンパク質は、ＫＡＳＨドメイン含有タンパク質への結合について内在性ＳＵＮドメイン含有タンパク質の競合的阻害剤として挙動する多量体（例えば、三量体）の形成を通じてＬＩＮＣ複合体破壊を達成できる。低レベルのドミナントネガティブＳＵＮ１タンパク質だけが核エンベロープに局在するという事実は、ドミナントネガティブＳＵＮ１タンパク質も、内在性ＳＵＮドメイン含有タンパク質を含むヘテロオリゴマーを形成し、それにより、インタクトなＬＩＮＣ複合体によって媒介される細胞骨格と核ラミナとの間の連結を弱めることによってＬＩＮＣ複合体破壊を達成し得ることを示唆する。

【0460】

ドミナントネガティブＳＵＮ１構築物が、ホモ三量体形成することができないとしても、内在性ＳＵＮタンパク質を含むヘテロオリゴマーを形成することは可能である。このことは、単量体であることが報告されており、ｉｎ ｖｉｔｒｏでＫＡＳＨに結合できない切断型内腔ＳＵＮタンパク質が、本実施例において実証された通りＬＩＮＣ複合体を破壊する能力をいまだ有し得る理由を説明できる。代替的に、結合およびゲルろ過実験を実行したｉｎ ｖｉｔｒｏの状況は、細胞性環境とは単純に生化学的に異なり、それにより、細胞中でどのようにして切断型内腔ＳＵＮタンパク質が機能するかを予測しない。

【0461】

実施例２：さまざまなドミナントネガティブＳＵＮ構築物のＬＩＮＣ複合体阻害のさらなるｉｎ ｖｉｔｒｏ分析
さらなる実験では、本発明者らは、ヒトＳＵＮ１およびヒトＳＵＮ２内腔ドメインの全ての可能な切断型変異体をＬＩＮＣ複合体阻害剤として機能するそれらの能力について特徴付ける。

【0462】

簡潔には、構築物を実施例１．１．２に記載の通り調製する（すなわち、Ｎ末端シグナルペプチド、ＨＡ／ＡＬＦＡタグおよびＳＵＮドメイン含有タンパク質由来領域およびＣ末端ＫＤＥＬモチーフを含む）、ただし、ＳＵＮ１（３６１～８１２）からＳＵＮ１（６３６～８１２）のＳＵＮ１内腔ドメインの全ての可能な切断型変異体を調製する（すなわち、ＳＵＮ１（３６１～８１２）、ＳＵＮ１（３６３～８１２）、ＳＵＮ１（３６３～８１２）、ＳＵＮ１（３６４～８１２）以下参照）。

【0463】

同様に、ＳＵＮ２（２５８～７１７）からＳＵＮ２（５２２～７１７）由来のＳＵＮ２内腔ドメインの全ての可能な切断型変異体を調製する（すなわち、ＳＵＮ２（２５９～７１７）、ＳＵＮ２（２６０～７１７）、ＳＵＮ２（２６１～７１７）、ＳＵＮ２（２６２～７１７）以下参照）。

【0464】

実施例１．１に記載の通り、さまざまな構築物をＨｅＬａ細胞でのＮｅｓｐｒｉｎ－２の正常な細胞内局在を破壊するそれらの能力について評価する。

【0465】

ＣＣ２領域のα３ヘリックスおよびＳＵＮドメインを少なくとも含むと評価された全ての構築物（すなわち、ヒトＳＵＮ１の少なくとも６１６～８１２位を含む構築物、およびヒトＳＵＮ２の少なくとも５２２～７１７位を含む構築物）は、Ｎｅｓｐｒｉｎ－２を核エンベロープから小胞体に置き換え、したがって、ＬＩＮＣ複合体阻害剤として挙動すると決定される。

【0466】

実施例３：Ｌｍｎａへの突然変異に関連するラミノパチーの処置のための実施例１および２において特徴付けたＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドの有用性のｉｎ ｖｉｖｏでの確認
Ｌｍｎａ突然変異関連心筋症、筋ジストロフィーおよび早老症のマウスモデルであるマウスに、実施例１および２に記載のＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドをコードする核酸をコードするＡＡＶもしくはレンチウイルスベクターまたはそのような核酸を含むナノ粒子を投与する。

【0467】

Ｌｍｎａ突然変異関連筋ジストロフィーのマウスモデルは、条件的Ｌｍｎａノックアウトマウスを含む。Ｌｍｎａ^{Ｆｌｘ／Ｆｌｘ}マウスおよびＭＬＣ－Ｃｒｅマウスの生成は、Ｗａｎｇら、Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ．（２０１５）８９（１－２）：１１～２１頁およびＭｏｕｒｋｉｏｔｉら、Ｇｅｎｅｓｉｓ．（２００８）４６（８）：４２４～３０頁にそれぞれ記載されている。Ｌｍｎａ^{Ｆｌｘ／＋}；ＭＬＣ－Ｃｒｅマウスを得るために、Ｌｍｎａ^{Ｆｌｘ／Ｆｌｘ}マウスをＭＬＣ－Ｃｒｅマウスと交雑させ、次にＬｍｎａ^{Ｆｌｘ／Ｆｌｘ}；ＭＬＣ－Ｃｒｅを生成するために、Ｌｍｎａ^{Ｆｌｘ／＋}マウスと交雑させ、筋肉細胞においてＬｍｎａの条件的ノックアウトをもたらした。

【0468】

Ｌｍｎａ突然変異関連心筋症および筋ジストロフィーのマウスモデルは、例えば、Ａｒｉｍｕｒａら、Ｈｕｍ Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ．（２００５）１４（１）：１５５～６９頁に記載されるＬｍｎａ－Ｈ２２２Ｐマウス、例えば、Ｍｏｕｎｋｅｓら、Ｈｕｍ Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ．（２００５）１４（１５）：２１６７～８０頁に記載されるＬｍｎａ－Ｎ１９５Ｋマウス、および例えば、Ｃｈａｉら、Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ（２０２１）１２（１）：４７２２に記載される拡張型心筋症の条件的Ｌｍｎａ欠失関連マウスモデル（下記実施例５．１を参照されたい）を含む。

【0469】

Ｌｍｎａ突然変異関連早老症のマウスモデルは、Ｏｓｏｒｉら、Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ．（２０１１）３（１０６）：１０６ｒａ１０７に記載されるＬｍｎａ－Ｇ６０９Ｇマウスを含む。

【0470】

実施例１または２に記載されるＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドをコードする核酸を投与した、Ｌｍｎａ突然変異関連心筋症を有するマウスは、未処置マウス、またはビヒクルのみ（例えば、空ベクター）を用いて処置したマウスと比較して、心機能が改善した（例えば、心筋収縮力の増加、駆出率の増加および／または短縮率の増加）。

【0471】

実施例１または２に記載されるＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドをコードする核酸を投与した、Ｌｍｎａ突然変異関連筋ジストロフィーまたはＬｍｎａ突然変異関連早老症を有するマウスは、未処置マウス、またはビヒクルのみ（例えば、空ベクター）を用いて処置したマウスと比較して、生存期間が延びていた。

【0472】

実施例４：高脂血症の処置のための実施例１および２において特徴付けたＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドの有用性のｉｎ ｖｉｖｏでの確認
アテローム性動脈硬化症および家族性高コレステロール血症のマウスモデルであるマウスに、実施例１および２に記載のＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドをコードする核酸をコードするＡＡＶもしくはレンチウイルスベクターまたはそのような核酸を含むナノ粒子を投与する。

【0473】

アテローム性動脈硬化症および家族性高コレステロール血症のマウスモデルをＬｄｌｒノックアウトマウス（Ｃ５７ＢＬ／６ＪＩｎｖ、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）に西洋型食餌（ＷＴＤ；Ｄ１２０７９Ｂ、Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｄｉｅｔｓ、ＮＪ）を１５週間給餌することによって確立する。

【0474】

アテローム性動脈硬化症および家族性高コレステロール血症を有し、実施例１または２に記載のＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドをコードする核酸を投与したＬｄｌｒ^－／－マウスは、未処置マウス、またはビヒクルのみ（例えば、空ベクター）を用いて処置したマウスと比較して、小さく、あまり進行しておらず、あまり複合化していないアテローム硬化性病変を有する。

【0475】

実施例５：種々の異なるＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドの治療有効性のｉｎ ｖｉｖｏでの評価
本発明者らは、マウスモデルでのｉｎ ｖｉｖｏでＬＮＭＡ突然変異関連拡張型心筋症の有害性の効果を救済するさまざまなＤＮｈＳＵＮ１ ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドの能力を次に調査した。

【0476】

５．１ 材料および方法
ＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドをコードするＡＡＶの調製
ＤＮｈＳＵＮ１構築物に対するコード配列を合成遺伝子からＰＣＲ増幅し、制限消化し、ｃＴｎＴ心臓プロモーター、キメライントロン、ＷＰＲＥ（マーモット肝炎ウイルス転写後調節エレメント）およびウシ増殖ホルモンポリＡテールを含有するＡＡＶトランスファープラスミドにライゲーションした。実験対象としての使用のためのＡＡＶベクター化ＧＦＰの調製のために、ＧＦＰのコード配列を代わりに含むＡＡＶトランスファープラスミドも調製した。本実施例の実験において使用したＬＩＮＣ複合体阻害ポリペプチドは、最小限のヒト血清アルブミンシグナルペプチド（配列番号１００）を使用し、ＨＡおよびＡＬＦＡタグを欠いている実施例１におけるものとは異なる：

【0477】

【表4】

【0478】

アデノ随伴ウイルスをアデノウイルスヘルパープラスミド、ＡＡＶ２ ＲｅｐおよびＡＡＶ９ ｃａｐをコードするｒｅｐ／ｃａｐプラスミドならびに導入遺伝子特異的プラスミドを用いたＨＥＫ２９３Ｔ細胞の一過的なトリプルトランスフェクションによって産生した。トランスフェクションの４日後、細胞ペレットおよび上清を収集した。上清をろ過によって清澄化して、重力流によってＰＯＲＯＳ（商標）ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ（商標）ＡＡＶ９ Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｒｅｓｉｎ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ、ＵＳＡ）に適用した。細胞を溶解緩衝液（リン酸緩衝食塩水、２００ｍＭ ＮａＣｌ、０．００１％ Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ－６８）中に再懸濁させて、４～５回の凍結／融解によって溶解させて、超音波処理して、ベンゾナーゼで処置して、ＤＮＡを剪断および消化した。細胞デブリを、遠心分離によってペレット化して、細胞溶解液を収集して、０．４５μｍのシリンジフィルターに通してろ過した。次いで、ろ過した溶解液を、重力流によってＡＡＶ９親和性樹脂に適用した。洗浄緩衝液（リン酸緩衝食塩水、５００ｍＭ ＮａＣｌ）中での洗浄後、ＡＡＶ９ビリオンを、１００ｍＭグリシン、ｐＨ２．５を使用して溶出させて、１／１０の体積の１Ｍトリス、ｐＨ８を含有するマイクロチューブへ収集した。０．０１％Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ－６８を含有するＰＢＳへの２回の緩衝液交換およびＡｍｉｃｏｎ（登録商標）Ｕｌｔｒａ １００ｋＤＡ濃縮器（Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ、Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、ドイツ）を介した濃縮後に、ＡＡＶビリオンを含有する溶液を、０．２２μｍ４ｍｍＭｉｌｌｅｘシリンジフィルターユニット（Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ、Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、ドイツ）に通してろ過して、４℃または－８０℃で保存した。ウイルス力価を、プラスミドＤＮＡ標準物を用いたアルカリゲル電気泳動（ＫｏｈｌｂｒｅｎｎｅｒおよびＷｅｂｅｒ、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（２０１７）１５２１：９１～１０７頁）、ＣｈｅｍｉＤｏｃイメージングシステム（Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ、ＵＳＡ）でのゲル画像化、およびＩｍａｇｅ Ｌａｂソフトウェア（Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を用いた画像定量化を使用して決定した。

【0479】

Ｌｍｎａ欠失拡張型心筋症（ＤＣＭ）マウスモデル
マウス系統を、全ての倫理規制に従い、温度を２１±１℃、湿度を５５～７０％に設定し、食物および水を自由に提供し、換気している動物用バリア施設（ａｎｉｍａｌ ｂａｒｒｉｅｒ ｆａｃｉｌｉｔｙ）において１２時間明／暗サイクルで維持した。

【0480】

拡張型心筋症のＬｍｎａ欠失関連マウスモデルを生成するために、条件的「ノックアウト」のマウスまたは、Ｗａｎｇら、Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ．（２０１５）８９（１－２）：１１～２１頁に記載の「ｌｏｘＰ配列が導入された」Ｌｍｎａ^{Ｆｌｘ／Ｆｌｘ}マウス系統を、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから購入した心筋細胞特異的アルファミオシン重鎖プロモーターの制御下にタモキシフェン誘導性Ｃｒｅリコンビナーゼを包含するマウス（αＭＨＣ－ＭｅｒＣｒｅＭｅｒ、ｍｃｍと略記）（ＪＡＸ ｓｔｏｃｋ ｎｕｍｂｅｒ ００５６５７；Ｃｈａｉら、Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ（２０２１）１２（１）：４７２２頁も参照されたい）と交雑させた。これらのＬｍｎａ^{ＦＦ：ｍｃｍ}マウスにおいて拡張型心筋症を誘導するために、４０ｍｇ／ｋｇタモキシフェンを生後１４日目（Ｐ１４）に腹腔内注射し、心筋細胞特異的なＬｍｎａの欠失を生じさせた。タモキシフェン（Ｍｅｒｃｋ）溶液（１６ｇ／Ｌ）はコーン油（Ｓｉｇｍａ）中に調製した。

【0481】

アデノ随伴ウイルスのｉｎ ｖｉｖｏ送達
タモキシフェン処置１７日後、マウスにさまざまなＡＡＶ９を１×１０^１４ｖｇ／ｋｇの用量で後眼窩注射した。動物は、無作為に選択した。ＴＭＸおよびＡＡＶ９注射は、酸素と混合した１．５％イソフルランを使用した麻酔下で実施した。ＡＡＶ９希釈物は、０．００１％Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ－６８を含有するＰＢＳを用いて投与前に新たに調製した。

【0482】

心エコー
心機能をＰｒｏｓｐｅｃｔ－Ｔ１（Ｓｈａｒｐ－Ｓ）を使用して超音波記録によって評価した。マウスを超音波検査の１日前に剪毛した。動物を酸素と混合した１．５％イソフルランを用いて麻酔した。ＢモードおよびＭモードの読み取り値を４５０ｂｐｍから３５０ｂｐｍの心拍数で得た。短縮率（ＦＳ）および駆出率（ＥＦ）を装置のソフトウェア分析ツールを使用して傍胸骨長軸から算出した。左心室内径（ＬＶＩＤ）および左心室後壁（ＬＶＰＷ）の心臓測定値を拡張期（ｄ）および収縮期（ｓ）状態についての傍胸骨短軸から得た。

【0483】

５．２ 結果および考察
第１の実験では、心臓特異的Ｃｒｅリコンビナーゼを包含するＰ１４ Ｌｍｎａ^{ＦＦ：ｍｃｍ}マウスに、タモキシフェン（ＴＭＸ）をＬｍｎ遺伝子の欠失を誘導するために注射した。ＴＭＸを用いた処置の１７日後、マウスに、ｃＴＮＴプロモーターの制御下にＤＮｈＳＵＮ１＿２０１ａａ（図４の構築物Ｇ）、ＤＮｈＳＵＮ１＿２５５ａａ（図４の構築物Ｅ）、ＤＮｈＳＵＮ１＿３３４ａａ（図４の構築物Ｄ２）またはＤＮｈＳＵＮ１＿４５７ａａ（図４の構築物Ａ）をコードするＡＡＶ９の単回用量（１×１０^１４ｖｇ／ｋｇ）を投与した。対照条件として、野生型マウス（ＷＴ）または１７日目からＴＭＸを投与されたＬｍｎａ^{ＦＦ：ｍｃｍ}マウス（ＤＣＭ）に、ｃＴＮＴプロモーターの制御下にＧＦＰをコードするＡＡＶ９の単回用量（１×１０^１４ｖｇ／ｋｇ）を投与した。生存をモニターし、心機能を心エコーによって評価し、拡張期（ｄ）および収縮期（ｓ）における左心室内径（ＬＶＩＤ）および左心室後壁（ＬＶＰＷ）厚を超音波によって評価した。

【0484】

結果を図５Ａから５Ｄに示す。

【0485】

図５Ａは、全てのＤＮｈＳＵＮ１バリアントを用いた処置がＤＣＭ対照動物（３９日間）と比較して生存期間中央値の延長を生じたことを示す。最も短い構築物ＤＮｈＳＵＮ１＿２０１ａａ（構築物Ｇ）は、６６．５日間で最短の生存期間延長を生じた。ＤＮｈＳＵＮ１＿３３４ａａ（構築物Ｄ２）を用いて処置したマウスは、中央値２１４．５日間生存し、１６２．５日間生存した全長、ＤＮｈＳＵＮ１＿４５７ａａ（構築物Ａ）を上回った。ＤＮｈＳＵＮ１＿２５５ａａ（構築物Ｅ）を用いて処置した動物は、最長の生存期間延長を示し；動物２匹だけが死に、２７５日後にマウス４匹はまだ生存していた。

【0486】

図５Ｂは、ＤＮｈＳＵＮ１＿２０１ａａ、ＤＮｈＳＵＮ１＿２５５ａａ、ＤＮｈＳＵＮ１＿３３４ａａまたはＤＮｈＳＵＮ１＿４５７ａａをコードするＡＡＶを用いた処置が、Ｌｍｎａ ＤＣＭマウスにおいて心機能を改善したことを示す。心エコー分析は、全てのＡＡＶ９－ｃＴｎＴ－ＤＮｈＳＵＮ１切断型バリアントを用いて処置したＬｍｎａ^{ＦＦ：ｍｃｍ}においてＡＡＶ９－ｃＴＮＴ－ＧＦＰ処置マウス（ＤＣＭ）と比較して、ＡＡＶ９の投与の１７日後（すなわち、ＴＭＸの投与の３１日目）に短縮率（ＦＳ）および駆出率（ＥＦ）の顕著な改善を明らかにした。

【0487】

図５Ｃおよび５Ｄは、Ｌｍｎａ ＤＣＭマウスにおいてＬＶＩＤが増加し、ＬＶＰＷが減少し；このことが収縮期においてさらに明らかであることを示す。左心室の拡張および心臓壁の菲薄化は、ＤＮｈＳＵＮ１＿２０１ａａ（構築物Ｇ）を用いて処置したマウスでは他のＤＮｈＳＵＮ１バリアント（ＤＮｈＳＵＮ１＿２５５ａａ／構築物Ｅ、ＤＮｈＳＵＮ１＿３３４ａａ／構築物Ｄ２、ＤＮｈＳＵＮ１＿４５７ａａ／構築物Ａ）においてよりも早期に生じ、これは、ＤＮｈＳＵＮ１＿２０１ａａを送達するＡＡＶを用いて処置したマウスにおける心機能の減退およびＤＣＭの早期の発病と相関する。

【0488】

これにより、ＤＮｈＳＵＮ１＿２０１ａａ、ＤＮｈＳＵＮ１＿２５５ａａ、ＤＮｈＳＵＮ１＿３３４ａａまたはＤＮｈＳＵＮ１＿４５７ａａをコードするＡＡＶは、Ｌｍｎａ欠失関連ＤＣＭを処置することが見出された。ＤＮｈＳＵＮ１＿２０１ａａは、ＤＮｈＳＵＮ１＿４５７ａａよりも少ない程度に生存期間を延長することが見出され、一方、ＤＮｈＳＵＮ１＿３３４ａａおよびＤＮｈＳＵＮ１＿２５５ａａは、ＤＮｈＳＵＮ１＿４５７ａａよりも多い程度に生存期間を延長した。

【0489】

第２の実験では、ＤＮｈＳＵＮ１＿３２２ａａの有効性をＤＮｈＳＵＮ１＿４５７ａａと比較した。簡潔には、心臓特異的Ｃｒｅリコンビナーゼを包含するＰ１４ Ｌｍｎａ^{ＦＦ：ｍｃｍ}マウスにタモキシフェン（ＴＭＸ）をＬｍｎ遺伝子の欠失を誘導するために注射した。ＴＭＸを用いた処置の１７日後、マウスに、ｃＴＮＴプロモーターの制御下にＤＮｈＳＵＮ１＿３２２ａａ（図４の構築物Ｄ）またはＤＮｈＳＵＮ１＿４５７ａａ（図４の構築物Ａ）をコードするＡＡＶ９Ａの単回用量（１×１０^１４ｖｇ／ｋｇ）を投与した。対照条件として、野生型マウス（ＷＴ）または１７日目からＴＭＸを投与されたＬｍｎａ^{ＦＦ：ｍｃｍ}マウス（ＤＣＭ）に、ｃＴＮＴプロモーターの制御下にＧＦＰをコードするＡＡＶ９の単回用量（１×１０^１４ｖｇ／ｋｇ）を投与した。生存をモニターし、心機能を心エコーによって評価し、拡張期（ｄ）および収縮期（ｓ）における左心室内径（ＬＶＩＤ）および左心室後壁（ＬＶＰＷ）厚を超音波によって評価した。

【0490】

結果を図６Ａから６Ｄに示す。

【0491】

図６Ａは、ＤＮｈＳＵＮ１＿３２２ａａまたはＤＮｈＳＵＮ１＿４５７ａａをコードするＡＡＶを用いた処置が、３９日間の平均生存を有するＤＣＭ対照動物と比較して生存期間中央値を延長したことを示す。ＤＮｈＳＵＮ１＿３２２ａａまたはＤＮｈＳＵＮ１＿４５７ａａをコードするＡＡＶを投与された群の全てのマウスは、１７０日目にまだ生存していた。

【0492】

図６Ｂは、ＤＮｈＳＵＮ１＿３２２ａａまたはＤＮｈＳＵＮ１＿４５７ａａをコードするＡＡＶを用いた処置がＬｍｎａ ＤＣマウスにおいて心機能を改善したことを示す。心エコー分析は、３２２ａａまたはＤＮｈＳＵＮ１＿４５７ａａバリアントを送達するＡＡＶ９を用いて処置したＬｍｎａ^{ＦＦ：ｍｃｍ}において、ＡＡＶ９－ｃＴＮＴ－ＧＦＰ処置マウス（ＤＣＭ）と比較して、ＡＡＶの投与の１７日後（すなわち、ＴＭＸの投与後３１日目）に短縮率（ＦＳ）および駆出率（ＥＦ）の顕著な改善を明らかにした。

【0493】

図６Ｃおよび６Ｄは、Ｌｍｎａ ＤＣＭマウスにおいてＬＶＩＤが増加し、ＬＶＰＷが減少することを示し；このことは、収縮期においてさらに明らかである。ＤＣＭ対照動物より長く生存するＡＡＶ９－ｃＴｎＴ－ＤＮｈＳＵＮ１処置動物について、ＬＶＩＤは増加した一方で、ＬＶＰＷは安定し、減少しない。

【0494】

これにより、ＤＮｈＳＵＮ１＿３２２ａａまたはＤＮｈＳＵＮ１＿４５７ａａをコードするＡＡＶがＬｍｎａ欠失関連ＤＣＭを処置することが見出された。

【0495】

参考文献

【0496】

【表5-1】

【0497】

【表5-2】

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5-1】

【図5-2】

【図5-3】

【図6-1】

【図6-2】

【図6-3】

【国際調査報告】