特表 2024-544885 抗インターロイキン－３３抗体及びその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-12-05

(54)【発明の名称】抗インターロイキン－３３抗体及びその使用

(51)【国際特許分類】

   C07K 16/24 20060101AFI20241128BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20241128BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20241128BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20241128BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20241128BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20241128BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20241128BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20241128BHJP

   A61P 27/02 20060101ALI20241128BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20241128BHJP

   A61P 37/02 20060101ALI20241128BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20241128BHJP

   A61P 7/00 20060101ALI20241128BHJP

   A61P 31/00 20060101ALI20241128BHJP

   A61P 25/04 20060101ALI20241128BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20241128BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20241128BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20241128BHJP

   G01N 33/53 20060101ALI20241128BHJP

【ＦＩ】

C07K16/24 ZNA

C12P21/08

C12N15/13

C12N15/63 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

A61P27/02

A61P29/00

A61P37/02

A61P43/00 105

A61P7/00

A61P31/00

A61P25/04

A61P25/00

A61P35/00

A61K45/00

G01N33/53 P

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024527289

(86)(22)【出願日】2022-11-09

(85)【翻訳文提出日】2024-06-21

(86)【国際出願番号】 US2022079523

(87)【国際公開番号】W WO2023086807

(87)【国際公開日】2023-05-19

(31)【優先権主張番号】63/277,953

(32)【優先日】2021-11-10

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/413,206

(32)【優先日】2022-10-04

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】509012625

【氏名又は名称】ジェネンテック， インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】110002077

【氏名又は名称】園田・小林弁理士法人

(72)【発明者】

【氏名】ロウ， ジョン ホク ニン

(72)【発明者】

【氏名】ロイェット， ケリー マイケル

(72)【発明者】

【氏名】マイ， エレイン

(72)【発明者】

【氏名】マイア， マウリシオ シルヴァ

(72)【発明者】

【氏名】ナカムラ， ジェラルド アール．

(72)【発明者】

【氏名】ベヴァーズ， ジャック， ザ サード

(72)【発明者】

【氏名】チャン， ヒュ ナム

(72)【発明者】

【氏名】コンプス－アグラー， レティシア ディー．

(72)【発明者】

【氏名】コルプス， ラケル

【テーマコード（参考）】

4B064

4B065

4C084

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B064AG27

4B064CA10

4B064CA20

4B064CC24

4B064CE12

4B064DA01

4B064DA13

4B065AA91X

4B065AA91Y

4B065AB01

4B065AB05

4B065AC14

4B065BA02

4B065BD14

4B065CA25

4B065CA44

4B065CA46

4C084AA17

4C084NA20

4C084ZA02

4C084ZA08

4C084ZA33

4C084ZA51

4C084ZB07

4C084ZB11

4C084ZB21

4C084ZB26

4C084ZB32

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA10

4H045CA40

4H045DA76

4H045EA20

4H045EA50

4H045FA74

4H045GA26

(57)【要約】

本発明は、インターロイキン－３３（ＩＬ－３３）抗体、並びに例えば、生物学的試料中のＩＬ－３３の検出のための、同抗体の作製方法及び使用方法を提供する。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ＩＬ－３３に特異的に結合する単離された抗体又はその抗原結合断片であって、抗体が、重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む結合ドメインを含み、結合ドメインが、以下の６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）：
（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３
を含む、抗体又はその抗原結合断片。

【請求項2】

（ａ）配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；（ｂ）配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；又は（ｃ）（ａ）のＶＨドメインと（ｂ）のＶＬドメインを含む、請求項１に記載の抗体。

【請求項3】

ＶＨドメインが、配列番号７のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが、配列番号８のアミノ酸配列を含む、請求項１又は２に記載の抗体。

【請求項4】

配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖（ＨＣ）；（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する軽鎖（ＬＣ）；又は（ｃ）（ａ）のＨＣと（ｂ）のＬＣを含む、請求項１から３のいずれか一項に記載の抗体。

【請求項5】

ＨＣが、配列番号９のアミノ酸配列を含み、ＬＣが、配列番号１０のアミノ酸配列を含む、請求項１から４のいずれか一項に記載の抗体。

【請求項6】

ＩＬ－３３に特異的に結合する単離された抗体又はその抗原結合断片であって、抗体が、以下の６つのＣＤＲ：
（ａ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３
を含む結合ドメインを含む、抗体又はその抗原結合断片。

【請求項7】

（ａ）配列番号２５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨドメイン；（ｂ）配列番号２６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬドメイン、又は（ｃ）（ａ）のＶＨドメインと（ｂ）のＶＬドメインを含む、請求項６に記載の抗体。

【請求項8】

ＶＨドメインが、配列番号２５のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが、配列番号２６のアミノ酸配列を含む、請求項６又は７に記載の抗体。

【請求項9】

配列番号２７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＨＣ；（ｂ）配列番号２８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＬＣ；又は（ｃ）（ａ）のＨＣと（ｂ）のＬＣを含む、請求項６から８のいずれか一項に記載の抗体。

【請求項10】

ＨＣが、配列番号２７のアミノ酸配列を含み、ＬＣが、配列番号２８のアミノ酸配列を含む、請求項６から９のいずれか一項に記載の抗体。

【請求項11】

酸化型又は還元型ＩＬ－３３に結合する、及び／又は可溶型インターロイキン１受容体様１（ｓＳＴ２）タンパク質とｓＳＴ２に結合していないＩＬ－３３に結合したＩＬ－３３とに２倍以内のＫ_Ｄで結合する、請求項１から１０のいずれか一項に記載の抗体。

【請求項12】

モノクローナル抗体、キメラ抗体、及び／又はラット抗体である、請求項１から１１のいずれか一項に記載の抗体。

【請求項13】

ＩｇＧ抗体、任意選択的にＩｇＧ１抗体又はＩｇＧ２ａ抗体である、請求項１から１２のいずれか一項に記載の抗体。

【請求項14】

ＩＬ－３３に特異的に結合する抗体断片である、請求項１から１２のいずれか一項に記載の抗体。

【請求項15】

請求項１から１４のいずれか一項に記載の抗体をコードする単離された核酸、又は前記抗体を一緒にコードする単離された核酸の組。

【請求項16】

請求項１５に記載の単離された核酸又は単離された核酸の組を含むベクター又はベクターの組。

【請求項17】

請求項１６に記載のベクター又はベクターの組を含む宿主細胞。

【請求項18】

請求項１７に記載の宿主細胞を培地中で培養することを含む、ＩＬ－３３に特異的に結合する抗体を生成する方法。

【請求項19】

請求項１から１４のいずれか一項に記載の抗体を含むイムノコンジュゲートであって、抗体が標識に結合していてもよい、イムノコンジュゲート。

【請求項20】

生物学的試料中のＩＬ－３３の存在又はレベルを検出する方法であって：
（ｉ）生物学的試料を、請求項１から１４のいずれか一項に記載の抗体と接触させ、結合した抗体の存在を検出すること；又は
（ｉｉ）生物学的試料を、請求項１９に記載のイムノコンジュゲートと接触させ、結合したイムノコンジュゲートの存在を検出すること
を含む方法。

【請求項21】

検出することが、ＩＨＣ、ＩＦ、フローサイトメトリー、ＥＬＩＳＡ、免疫ブロット法、又はｉＰＣＲによる、請求項２０に記載の方法。

【請求項22】

検出することが、ｉＰＣＲにより、方法が、生物学的試料を、イムノコンジュゲートと、イムノコンジュゲート中の抗ＩＬ－３３抗体が特異的に結合するエピトープとは異なるＩＬ－３３上のエピトープに特異的に結合する第２の抗ＩＬ－３３抗体の存在下で接触させることと、結合したイムノコンジュゲートの存在を検出することとを含む、請求項２０に記載の方法。

【請求項23】

生物学的試料が、血液試料、眼の試料、鼻の試料、又は細胞培養物の試料である、請求項２０から２２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項24】

生物学的試料が、ＩＬ－３３媒介性障害を有するか又はＩＬ－３３媒介性障害のリスクを有する対象に由来する、請求項２０から２３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項25】

ＩＬ－３３媒介性障害が、眼の障害、炎症状態、免疫疾患、線維性障害、好酸球性障害、感染症、疼痛、中枢神経系障害、又は固形腫瘍である、請求項２４に記載の方法。

【請求項26】

ＩＬ－３３の存在又はレベルが、総ＩＬ－３３、還元型ＩＬ－３３、又はｓＳＴ２に結合したＩＬ－３３の存在又はレベルである、請求項２０から２５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項27】

生物学的試料中のＩＬ－３３の存在又はレベルに基づいて、対象のためのＩＬ－３３軸結合アンタゴニストを含む治療を選択することをさらに含む、請求項２０から２６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項28】

治療的有効量のＩＬ－３３軸結合アンタゴニストを対象に投与することをさらに含む、請求項２０から２６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項29】

ＩＬ－３３軸結合アンタゴニストを含む治療の候補者である、ＩＬ－３３媒介性障害を有する対象を同定するためのアッセイであって、請求項１から１４のいずれか一項に記載の抗体又は請求項１９に記載のイムノコンジュゲートを使用して対象から得られた生物学的試料中のＩＬ－３３の存在又はレベルを決定することを含むアッセイ。

【請求項30】

（ａ）請求項１から１４のいずれか一項に記載の抗体又は請求項１９に記載のイムノコンジュゲート；及び
（ｂ）生物学的試料中のＩＬ－３３の存在又はレベルを検出するための抗体の使用についての説明を含む添付文書
を含むキット。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年１１月１０日に出願された米国仮出願第６３／２７７，９５３号、及び２０２２年１０月４日に出願された米国仮出願第６３／４１３，２０６号の優先権の利益を主張し、これらの各々の内容はその全体が参照により本明細書に援用される。

【0002】

配列表
本出願は、ＸＭＬ形式で電子的に提出され、その全体が参照により本明細書に援用される配列表を含む。２０２２年１１月１日に作成された前記ＸＭＬコピーの名称は、５０４７４－２６７ＷＯ３＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ＿１１＿１＿２２．ｘｍｌであり、サイズは３８，３３０バイトである。

【0003】

発明の分野
本発明は、抗インターロイキン－３３（ＩＬ－３３）抗体、並びにその作製方法及び使用方法に関し、生物学的試料中のＩＬ－３３の検出を含む。

【背景技術】

【0004】

インターロイキン－３３（ＩＬ－３３）は、ＩＬ３３遺伝子によってコードされるインターロイキン－１（ＩＬ－１）サイトカインファミリーのメンバーであり、平滑筋、上皮（例えば、網膜色素上皮（ＲＰＥ）細胞）、内皮細胞（例えば、脈絡膜内皮細胞）、ミュラー細胞、及び星状細胞といった構造細胞に発現される。ＩＬ－３３は、マクロファージ及び樹状細胞において炎症因子によって誘導されうる。過去数十年の間に、ヒトＩＬ－３３（ｈＩＬ－３３）は、多数の炎症性疾患の寄与因子への重要な寄与因子として浮上した。環境要因、例えばアレルゲン、毒素、及び病原体によって引きこされる細胞ストレスが、ＩＬ－３３放出につながりうる。例えば、ＩＬ－３３は、光毒性ストレス時にミュラー細胞から放出され、前臨床モデルにおいてＣＣＬ_２及び単球依存性網膜変質を誘導する。生体利用ｄなＩＬ－３３は、アダプタータンパク質骨髄分化一次応答８８（ＭｙＤ８８）及び場合によりＭｙＤ８８アダプター様（Ｍａｌ）タンパク質を通してＡＰ－１及びＮＦ－κＢ経路を活性化するために腫瘍形成能抑制２（ＳＴ２）タンパク質及びインターロイキン－１受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ－１ＲＡｃＰ）から構成されるヘテロ二量体ＩＬ－３３受容体複合体と結合する。ＩＬ－３３は、先天性ＩＩ型（ＩＬＣ２）細胞、マスト細胞、好塩基球、好酸球、及び樹状細胞を含む多数の細胞型を刺激して、２型免疫を促進する。

【0005】

マルチプラットフォーム技術に及ぶ複数の市販のｈＩＬ－３３アッセイが存在しているものの、種々のマトリクスにおいて精密なｈＩＬ－３３の濃度測定を提供し、活性（還元型）ｈＩＬ－３３と非活性（酸化型）ｈＩＬ－３３とを区別する能力は依然として不確かである。このことは、比較的小さな試料容積、低ｈＩＬ－３３濃度のマトリクス、及びインターロイキン１受容体様１（ｓＳＴ２）のレベルが上昇したマトリクス、ｈＩＬ－３３結合について膜結合ＳＴ２と競合する不活性型のＳＴ２について特に当てはまる。生体マトリクスにおける活性ヒトＩＬ－３３（ｈＩＬ－３３）の精密な測定は、少なくとも以下の理由のために依然として困難である：１）非病的状態から中程度の病的状態において、ｈＩＬ－３３は、検出不能レベルから低レベルで存在することが多い（＜ｐｇ／ｍＬ）、２）ｈＩＬ－３３は、異なる構造形態（還元型対酸化型）で存在する、及び３）のｈＩＬ－３３は、ヒトｓＳＴ２（ｈｓＳＴ２）に未結合であることも結合していることもあり、これはその検出を妨げる。

【0006】

ｈｓＳＴ２に未結合であるか結合しているかに関わらずすべての形態のＩＬ－３３を検出するための精密で高感度のアッセイが必要とされている。

【発明の概要】

【0007】

本発明は、特に、抗ＩＬ－３３抗体並びにその作製方法及び使用方法に関する。本開示は、未結合及び結合両方の、すべての形態のＩＬ－３３に対して高い感度（例えば、結合親和性）を有する抗体、並びに前記抗体を含みかつ使用する方法、アッセイ、キットを提供する。

【0008】

一態様において、本発明は、ＩＬ－３３に特異的に結合する単離された抗体又はその抗原結合断片を特徴とし、この抗体は、重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む結合ドメインを含み、結合ドメインは、以下の６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む：（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３。

【0009】

いくつかの態様では、ＶＨドメインは、以下のフレームワーク領域（ＦＲ）を含む：（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３；及び（ｄ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４。

【0010】

いくつかの態様では、ＶＬドメインは、以下のＦＲを含む：（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ１；（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ２；（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ３；及び（ｄ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ４。

【0011】

いくつかの態様では、本明細書に開示される抗体は、（ａ）配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％（例えば、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；（ｂ）配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％（例えば、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；又は（ｃ）（ａ）のＶＨドメインと（ｂ）のＶＬドメインを含む。

【0012】

いくつかの態様では、ＶＨドメインは、配列番号７のアミノ酸配列を含む。

【0013】

いくつかの態様では、ＶＬドメインは、配列番号８のアミノ酸配列を含む。

【0014】

一態様では、本発明は、ＩＬ－３３又はその抗原結合断片に特異的に結合する単離された抗体を提供し、この抗体は、（ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む結合ドメインを含む。

【0015】

いくつかの態様では、本明細書に開示される抗体は、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％（例えば、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）の配列同一性を有する重鎖（ＨＣ）；（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％（例えば、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）の配列同一性を有する軽鎖（ＬＣ）；又は（ｃ）（ａ）のＨＣと（ｂ）のＬＣを含む。

【0016】

いくつかの態様では、ＨＣは、配列番号９のアミノ酸配列を含む。

【0017】

いくつかの態様では、ＬＣは、配列番号１０のアミノ酸配列を含む。

【0018】

一態様では、本発明は、ＩＬ－３３に特異的に結合する単離された抗体又はその抗原結合断片を提供し、この抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＣドメイン、及び（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＬＣを含む。

【0019】

一態様では、本発明は、ＩＬ－３３又はその抗原結合断片に特異的に結合する単離された抗体を提供し、本抗体は、以下の６つのＨＶＲを含む結合ドメインを含む：（ａ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３。

【0020】

いくつかの形態では、ＶＨドメインは以下のＦＲを含む：（ａ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３；及び（ｄ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４。

【0021】

いくつかの態様では、ＶＬドメインは、以下のＦＲを含む：（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ１；（ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ２；（ｃ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ３；及び（ｄ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ４。

【0022】

いくつかの態様では、本明細書に開示される抗体は、（ａ）配列番号２５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％（例えば、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）の配列同一性を有するＶＨドメイン；（ｂ）配列番号２６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％（例えば、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）の配列同一性を有するＶＬドメイン；又は（ｃ）（ａ）のＶＨドメインと（ｂ）のＶＬドメインを含む。

【0023】

いくつかの態様では、ＶＨドメインは、配列番号２５のアミノ酸配列を含む。

【0024】

いくつかの態様では、ＶＬドメインは、配列番号２６のアミノ酸配列を含む。

【0025】

一態様では、本発明は、ＩＬ－３３又はその抗原結合断片に特異的に結合する単離された抗体を提供し、この抗体は、（ａ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む結合ドメインを含む。

【0026】

いくつかの態様では、抗体は、（ａ）配列番号２７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％（例えば、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）の配列同一性を有するＨＣ；（ｂ）配列番号２８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％（例えば、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）の配列同一性を有するＬＣ；又は（ｃ）（ａ）のＶＨと（ｂ）のＬＣ。

【0027】

いくつかの態様では、ＨＣは、配列番号２７のアミノ酸配列を含む。

【0028】

いくつかの態様では、ＬＣは、配列番号２８のアミノ酸配列を含む。

【0029】

一態様では、本発明は、ＩＬ－３３に特異的に結合する単離された抗体又はその抗原結合断片を提供し、この抗体は、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＣドメイン、及び（ｂ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＬＣを含む。

【0030】

いくつかの態様では、抗体は、酸化型又は還元型ＩＬ－３３に結合する。

【0031】

いくつかの態様では、抗体は、酸化型ＩＬ－３３及び還元型ＩＬ－３３に、２倍の（例えば、１．５倍以内又は１倍以内）Ｋ_Ｄで結合する。いくつかの態様では、抗体は、酸化型ＩＬ－３３及び還元型ＩＬ－３３に、実質的に同じＫ_Ｄで結合する。

【0032】

いくつかの態様では、抗体は、還元型ＩＬ－３３に結合する。いくつかの態様では、抗体は、還元型ＩＬ－３３に、Ｋ_Ｄ≦１ｎＭで結合する。いくつかの態様では、抗体は、還元型ＩＬ－３３に、０．０１ｎＭと１ｎＭとの間（例えば、０．０１と０．９ｎＭとの間、０．０１と０．８ｎＭとの間、０．０１と０．７ｎＭとの間、０．０１と０．６ｎＭとの間、０．０１と０．５ｎＭとの間、０．０５と０．９ｎＭとの間、０．１と０．９ｎＭとの間、０．２と０．９ｎＭとの間、０．３と０．９ｎＭとの間、０．２と０．６ｎＭとの間、０．３と０．５ｎＭとの間、０．３と０．４ｎＭ、又は０．４と０．５ｎＭとの間；例えば、約０．０５ｎＭ、約０．１ｎＭ、約０．２ｎＭ、約０．３ｎＭ、約０．３２５ｎＭ、約０．３４ｎＭ、約０．３５ｎＭ、約０．４ｎＭ、約０．４５ｎＭ、約０．４７５ｎＭ、約０．４９ｎＭ、約０．５ｎＭ、約０．６ｎＭ、約０．７ｎＭ、約０．８ｎＭ、約０．９ｎＭ、又は約１ｎＭ）のＫ_Ｄで結合する。いくつかの態様では、抗体は、還元型ＩＬ－３３に、Ｋ_Ｄ≦０．５ｎＭで結合する。いくつかの態様では、抗体は、還元型ＩＬ－３３に、０．１ｎＭと０．５ｎＭとの間（例えば、０．２と０．５ｎＭとの間、０．３ｎＭと０．５ｎＭとの間、０．３ｎＭと０．４ｎＭとの間、又は０．４ｎＭと０．５ｎＭとの間）のＫ_Ｄで結合する。いくつかの態様では、抗体は、還元型ＩＬ－３３に、約１５ｐＭのＫ_Ｄで結合する。いくつかの態様では、抗体は、還元型ＩＬ－３３に、約０．３３８ｎＭのＫ_Ｄで結合する。

【0033】

いくつかの態様では、抗体は、ヒトＩＬ－３３に結合する。

【0034】

いくつかの態様では、抗体は、可溶型インターロイキン１受容体様１（ｓＳＴ２）タンパク質に結合したＩＬ－３３及びｓＳＴ２に結合していないＩＬ－３３に、２倍以内（例えば、１．５倍以内又は１倍以内）のＫ_Ｄで結合する。いくつかの態様では、抗体は、ｓＳＴ２タンパク質に結合したＩＬ－３３に、ｓＳＴ２に結合していないＩＬ－３３と実質的に同じＫ_Ｄで結合する。いくつかの態様では、ｓＳＴ２は、ヒトｓＳＴ２（ｈｓＳＴ２）である。

【0035】

いくつかの形態では、抗体は、モノクローナル抗体である。

【0036】

いくつかの態様では、抗体は、キメラ抗体である。

【0037】

いくつかの態様では、抗体は、ラット抗体である。

【0038】

いくつかの態様では、抗体は、ＩｇＧ抗体である。

【0039】

いくつかの態様では、抗体は、ＩｇＧ１抗体であえる。いくつかの態様では、抗体は、ヒトＩｇＧ１抗体である。

【0040】

いくつかの態様では、抗体は、ＩｇＧ２ａ抗体である。いくつかの態様では、抗体は、ラットＩｇＧ２ａ抗体である。

【0041】

いくつかの態様では、抗体は、ＩＬ－３３に特異的に結合する抗体断片である。

【0042】

いくつかの態様では、抗体断片は、Ｆａｂ、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、Ｆｖ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）_２、及びダイアボディからなる群から選択される。

【0043】

一態様では、本発明は、本明細書に開示される抗体のいずれか１つをコードする単離された核酸、又は本明細書に開示される抗体のいずれか１つを一緒にコードする一組の単離された核酸である。

【0044】

一態様では、本発明は、本明細書に開示される単離された核酸又は単離された核酸の組を含むベクター又は一組のベクターである。

【0045】

一態様では、本発明は、本明細書に記載されるベクターのいずれか１つ又はベクターの組のいずれか１つを含む宿主細胞を提供する。いくつかの態様では、宿主細胞は、哺乳動物細胞である。いくつかの態様では、細胞は、ラット細胞である。いくつかの態様では、哺乳動物細胞は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である。いくつかの態様では、宿主細胞は、原核細胞である。いくつかの態様では、原核細胞は、大腸菌である。

【0046】

別の態様では、本発明は、ＩＬ－３３に特異的に結合する抗体を生成する方法を提供し、この方法は、本明細書に開示される宿主細胞のいずれか１つを培地中で培養することを含む。いくつかの態様では、方法は、宿主細胞又は培地から抗体を回収することをさらに含む。

【0047】

一態様では、本発明は、本明細書に記載される抗体のいずれか１つを含むイムノコンジュゲートを提供する。

【0048】

一態様では、本発明は、生物学的試料中のＩＬ－３３の存在又はレベルの検出における使用のための、本明細書に記載される抗体又はイムノコンジュゲートのいずれか１つを提供する。一態様では、本発明は、生物学的試料中のＩＬ－３３の存在又はレベルの検出における使用のための、本明細書に記載される抗体のいずれか１つを提供する。一態様では、本発明は、生物学的試料中のＩＬ－３３の存在又はレベルの検出における使用のための、本明細書に記載されるイムノコンジュゲートのいずれか１つを提供する。

【0049】

いくつかの態様では、検出は、免疫組織化学（ＩＨＣ）、免疫蛍光（ＩＦ）、フローサイトメトリー、酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）、免疫ブロット法、又は免疫ポリメラーゼ連鎖反応（ｉＰＣＲ）による。いくつかの態様では、検出は、ＥＬＩＳＡによる。いくつかの態様では、検出は、ｉＰＣＲによる。

【0050】

いくつかの態様では、生物学的試料は、血液試料、眼の試料、鼻の試料、又は細胞培養物の試料である。いくつかの態様では、血液試料は、血漿又は血清の試料である。いくつかの態様では、眼の試料は、硝子体液又は眼房水の試料である。いくつかの態様では、眼の試料は、組織試料である。いくつかの態様では、鼻の試料は、鼻腔吸収液の試料である。

【0051】

いくつかの態様では、生物学的試料は、ＩＬ－３３媒介性障害を有するか、又はそのリスクを有する対象に由来する。いくつかの態様では、ＩＬ－３３媒介性障害は、眼の障害、炎症状態、免疫疾患、線維性障害、好酸球性障害、感染症、疼痛、中枢神経系障害、又は固形腫瘍である。

【0052】

いくつかの態様では、眼の障害は、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、眼の網膜症、ポリープ状脈絡膜血管症（ＰＣＶ）、糖尿病性黄斑浮腫、ドライアイ疾患、ベーチェット病、網膜剥離、緑内障、ブドウ膜炎、網膜色素変性症、レーバー先天性黒内障、シュタルガルト病、外傷性眼損傷、又は結膜炎である。いくつかの態様では、ＡＭＤは、地図状萎縮（ＧＡ）、滲出型ＡＭＤ又は乾燥型ＡＭＤである。いくつかの態様では、ＡＭＤは、ＧＡである。いくつかの態様では、ＡＭＤは、中間型ＡＭＤ又は進行型ＡＭＤである。いくつかの態様では、眼の網膜症は、糖尿病性網膜症（ＤＲ）又は未熟児網膜症（ＲＯＰ）である。いくつかの態様では、眼の網膜症は、高地ＤＲである。いくつかの態様では、結膜炎は、感染性結膜炎又は非感染性結膜炎である。いくつかの態様では、結膜炎は、アレルギー性結膜炎である。

【0053】

いくつかの態様では、炎症状態は、喘息、敗血症、敗血症性ショック、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、関節リウマチ、又は慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）である。

【0054】

いくつかの態様では、免疫疾患は、喘息、関節リウマチ、アレルギー、アナフィラキシー、アナフィラキシー性ショック、アレルギー性鼻炎、乾癬、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病、糖尿病、又は肝臓疾患である。

【0055】

いくつかの態様では、線維性疾患は、特発性肺線維症（ＩＰＦ）である。

【0056】

いくつかの態様では、好酸球性障害は、好酸球関連胃腸障害（ＥＧＩＤ）である。いくつかの態様では、ＥＧＩＤは、好酸球性食道炎である。

【0057】

いくつかの態様では、対象は、ヒトである。

【0058】

いくつかの態様では、ＩＬ－３３の存在又はレベルは、総ＩＬ－３３の存在又はレベルである。いくつかの態様では、ＩＬ－３３の存在又はレベルは、還元型ＩＬ－３３の存在又はレベルである。いくつかの態様では、ＩＬ－３３の存在又はレベルは、ヒトＩＬ－３３の存在又はレベルである。いくつかの態様では、ＩＬ－３３の存在又はレベルは、結合していないＩＬ－３３の存在又はレベルである。いくつかの態様では、ＩＬ－３３の存在又はレベル、ｓＳＴ２に結合したＩＬ－３３の存在又はレベルである。いくつかの態様では、ｓＳＴ２は、ｈｓＳＴ２である。

【0059】

一態様では、本発明は、生物学的試料を本明細書に記載される抗体又はイムノコンジュゲートのいずれか１つと接触させることと、結合した抗体又はイムノコンジュゲートの存在を検出することとを含む、生物学的試料中のＩＬ－３３の存在又はレベルを検出する方法を提供する。一態様では、本発明は、生物学的試料を、本明細書に記載される抗体のいずれか１つと接触させることと、結合した抗体の存在を検出することとを含む、生物学的試料中のＩＬ－３３の存在又はレベルを検出する方法を提供する。一態様では、本発明は、生物学的試料を、本明細書に記載されるイムノコンジュゲートのいずれか１つと接触させることと、イムノコンジュゲートの存在を検出することとを含む、生物学的試料中のＩＬ－３３の存在又はレベルを検出する方法を提供する。

【0060】

一態様では、本発明は、生物学的試料を、イムノコンジュゲート中の抗ＩＬ－３３抗体が特異的に結合するエピトープとは異なるＩＬ－３３上のエピトープに特異的に結合する第２の抗ＩＬ－３３抗体の存在下で、本明細書に記載されるイムノコンジュゲートのいずれか１つと接触させることと、結合したイムノコンジュゲートの存在を検出することと、結合したイムノコンジュゲートの存在を検出することとを含む、生物学的試料中のＩＬ－３３の存在又はレベルを検出する方法を提供する。一態様では、第２の抗ＩＬ－３３抗体は、１Ｅ１ｖ８である。一態様では、生物学的試料は、前記接触させることに先立ちトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）で処理される。

【0061】

いくつかの態様では、検出することは、ＩＨＣ、ＩＦ、フローサイトメトリー、ＥＬＩＳＡ、免疫ブロット法、又はｉＰＣＲによる。いくつかの態様では、検出は、ＥＬＩＳＡによる。いくつかの態様では、検出は、ｉＰＣＲによる。

【0062】

いくつかの態様では、生物学的試料は、血液試料、眼の試料、鼻の試料、又は細胞培養物の試料である。いくつかの態様では、血液試料は、血漿又は血清の試料である。いくつかの態様では、眼の試料は、硝子体液又は眼房水の試料である。いくつかの態様では、眼の試料は、組織試料である。いくつかの態様では、鼻の試料は、鼻腔吸収液（ＮＦ）の試料である。

【0063】

いくつかの態様では、生物学的試料は、ＩＬ－３３媒介性障害を有するか、又はそのリスクを有する対象に由来する。いくつかの態様では、ＩＬ－３３媒介性障害は、眼の障害、炎症状態、免疫疾患、線維性障害、好酸球性障害、感染症、疼痛、中枢神経系障害、又は固形腫瘍である。

【0064】

いくつかの態様では、眼の障害は、ＡＭＤ、眼の網膜症、ＰＣＶ、糖尿病性黄斑浮腫、ドライアイ疾患、ベーチェット病、網膜剥離、緑内障、ブドウ膜炎、網膜色素変性症、レーバー先天性黒内障、シュタルガルト病、外傷性眼損傷、又は結膜炎である。いくつかの態様では、ＡＭＤは、ＧＡ、滲出型ＡＭＤ又は乾燥型ＡＭＤである。いくつかの態様では、ＡＭＤは、ＧＡである。いくつかの態様では、ＡＭＤは、中間型ＡＭＤ又は進行型ＡＭＤである。いくつかの態様では、眼の網膜症は、ＤＲ又はＲＯＰである。いくつかの態様では、眼の網膜症は、高地ＤＲである。いくつかの態様では、結膜炎は、感染性結膜炎又は非感染性結膜炎である。いくつかの態様では、結膜炎は、アレルギー性結膜炎である。

【0065】

いくつかの態様では、炎症状態は、喘息、敗血症、敗血症性ショック、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、関節リウマチ、又はＣＯＰＤである。

【0066】

いくつかの態様では、免疫疾患は、喘息、関節リウマチ、アレルギー、アナフィラキシー、アナフィラキシー性ショック、アレルギー性鼻炎、乾癬、ＩＢＤ、クローン病、糖尿病、又は肝臓疾患である。

【0067】

いくつかの態様では、線維性疾患は、ＩＰＦである。

【0068】

いくつかの態様では、好酸球性障害は、ＥＧＩＤである。いくつかの態様では、ＥＧＩＤは、好酸球性食道炎である。

【0069】

いくつかの態様では、対象はヒトである。

【0070】

いくつかの態様では、ＩＬ－３３の存在又はレベルは、総ＩＬ－３３の存在又はレベルである。いくつかの態様では、ＩＬ－３３の存在又はレベルは、還元型ＩＬ－３３の存在又はレベルである。いくつかの態様では、ＩＬ－３３の存在又はレベルは、ヒトＩＬ－３３の存在又はレベルである。いくつかの態様では、ＩＬ－３３の存在又はレベルは、結合していないＩＬ－３３の存在又はレベルである。いくつかの態様では、ＩＬ－３３の存在又はレベル、ｓＳＴ２に結合したＩＬ－３３の存在又はレベルである。いくつかの態様では、サイトカインは、ｈｓＳＴ２である。

【0071】

いくつかの態様では、方法は、生物学的試料中のＩＬ－３３の存在又はレベルに基づき、対象のためのＩＬ－３３軸結合アンタゴニストを含む治療を選択することをさらに含む。

【0072】

いくつかの態様では、方法は、治療的有効量のＩＬ－３３軸結合アンタゴニストを対象に投与することをさらに含む。

【0073】

いくつかの態様では、ＩＬ－３３軸結合アンタゴニストは、ＩＬ－３３結合アンタゴニストである。いくつかの態様では、ＩＬ－３３結合アンタゴニストは、抗ＩＬ－３３抗体である。

【0074】

一態様では、本発明は、ＩＬ－３３軸結合アンタゴニストを含む治療の候補である、ＩＬ－３３媒介性の障害を有する対象を同定するためのアッセイを提供し、このアッセイは、本明細書に記載される抗体又はイムノコンジュゲートのいずれか１つを使用して、対象から得られた生物学的試料中のＩＬ－３３の存在又はレベルを決定することを含む。一態様では、本発明は、ＩＬ－３３軸結合アンタゴニストを含む治療の候補である、ＩＬ－３３媒介性の障害を有する対象を同定するためのアッセイを提供し、このアッセイは、本明細書に記載される抗体のいずれか１つを使用して、対象から得られた生物学的試料中のＩＬ－３３の存在又はレベルを決定することを含む。一態様では、本発明は、ＩＬ－３３軸結合アンタゴニストを含む治療の候補である、ＩＬ－３３媒介性の障害を有する対象を同定するためのアッセイを提供し、このアッセイは、本明細書に記載されるイムノコンジュゲートのいずれか１つを使用して、対象から得られた生物学的試料中のＩＬ－３３の存在又はレベルを決定することを含む。

【0075】

一態様では、本発明は、（ａ）本明細書に記載される抗体のいずれか１つ；及び（ｂ）生物学的試料中のＩＬ－３３の存在又はレベルを検出するための抗体の使用についての説明を含む添付文書を含むキットを提供する。

【0076】

一態様では、本発明は、（ａ）本明細書に記載されるイムノコンジュゲートのいずれか１つ；及び（ｂ）生物学的試料中のＩＬ－３３の存在又はレベルを検出するためのイムノコンジュゲートの使用についての説明を含む添付文書を含むキットを提供する。

【図面の簡単な説明】

【0077】

【図1】コントロールドナー由来の硝子体液（ｎ＝２２の試料）及び血清（ｎ＝５３の試料）中で決定されたｈｓＳＴ２の濃度を示すグラフである。

【図2A】リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）（ａ）又は６０％のイスコブ変法ダルベッコ培地（ＩＭＤＭ）（ｂ）中で希釈され、３７℃でインキュベートされたｈＩＬ－３３のＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル分析の画像である。示されているのは、ｔ＝０及びｔ＝１８時間の時間間隔で採取された試料である。タンパク質試料は、非還元条件及びジチオスレイトール（ＤＴＴ）での還元条件下で実行された。分子量標準は、レーン３、６及び９に適用された。

【図2B】（ａ）ｔ＝０のＰＢＳ，（ｂ）ｔ＝１８ｈのＰＢＳ及び（ｃ）ｔ＝１８時間のＩＭＤＭ培地において３７℃でインキュベートされたｈＩＬ－３３の質量分析を示す一組のマススペクトログラムである。各スペクトルにおいて検出されたｈＩＬ－３３の分子量（ＭＷ）が示されている。完全に還元されたその４つのシステイン残基のすべてを有するｈＩＬ－３３の理論的ＭＷは，１９８５７．１９ダルトン（Ｄａ）である。完全に酸化されたｈＩＬ－３３の場合、２つのジスルフィド内結合を形成する４つすべてのシステインを有する理論的分子量（ＭＷ）は，１９８５３．１６ Ｄａである。パネル（ａ）及び（ｂ）は、完全に還元された状態にあるそのシステイン残基を有するｈＩＬ－３３を示しており、パネル（ｃ）は、酸化された状態にあるｈＩＬ－３３のシステイン残基を示している。

【図3】キット（円形）、社内の還元型ｈＩＬ－３３（三角形）、及び酸化型ｈＩＬ－３３（逆三角形）を有する、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ｈＩＬ－３３ Ｐｌａｔｉｎｕｍ ＥＬＩＳＡキット及びｈＩＬ－３３を使用して確立されたｈＩＬ－３３標準曲線の比較を示すグラフである。データは、３組の平均±ＳＤである。

【図4】Ａは、還元型ｈＩＬ－３３、酸化型ｈＩＬ－３３、還元型ｈＩＬ－３３＋２０ｎｇ／ｍＬのｈｓＳＴ２、還元型ｈＩＬ－３３＋４０ｎｇ／ｍＬのｈｓＳＴ２に得られた標準曲線の比較を示すグラフである。ボトムラインは、酸化型ｈＩＬ－３３に得られた標準曲線に対応する。Ｂは、２０ｎｇ／ｍＬのｈｓＳＴ２の存在下での還元型と酸化型ｈＩＬ－３３の標準曲線の比較を示すグラフである。データは、２つ１組で実施された３つの実験を表している。Ｃは、ｈＩＬ－３３ Ａｂにコンジュゲートしたビーズを使用してヒト硝子体液試料に希釈された還元型及び酸化型ｈＩＬ－３３の免疫除去により決定された総ｈＩＬ－３３ＥＬＩＳＡの特異性を示すグラフである。Ｐ＝０．００１９。データは、２組の平均±ＳＤである。

【図5】Ａは、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）表面プラズモン共鳴により決定された、２５℃で捕捉されたラット抗ｈＩＬ－３３ １５．２１Ｃ７ ＭＡｂに結合するｈＩＬ－３３のマルチサイクル動力学センサーグラムを示すグラフである。Ｂは、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）表面プラズモン共鳴により決定された、２５℃で捕捉されたラット／ヒトキメラ抗ｈＩＬ－３３ ３Ｆ１０ ＭＡｂに結合するｈＩＬ－３３のマルチサイクル動力学センサーグラムを示すグラフである。

【図6】Ａは、試料バッファー中のｉＰＣＲを使用して得られた還元型ｈＩＬ－３３の標準曲線を示すグラフである。データは、各々が４回実施された、６つの独立した標準曲線の平均＋ＳＤである。Ｂは、ラット抗還元型ｈＩＬ－３３ １５．２１Ｃ７ ＩｇＧ２ａにコンジュゲートしたビーズ、ラット抗ｇｐ１２０ ＩｇＧ２ａにコンジュゲートしたコントロールビーズ及び試料バッファーを使用してヒト硝子体液試料に希釈された還元型ｈＩＬ－３３の免疫除去により決定した、還元型ｈＩＬ－３３に対するｉＰＣＲアッセイの特異性を示すグラフである。Ｐ＝０．０００４（１：２の硝子体液）、Ｐ＝＜０．０００１（１：４の硝子体液）。データは、３組の平均＋ＳＤである。

【図7】Ａは、１７のコントロール及び１９のＡＭＤドナー由来の死後のヒト硝子体液試料における還元型ｈＩＬ－３３の濃度を示すグラフである。Ｐ＝０．０１５５。データは、２組の平均である。ＬＬＯＱ＝定量下限。Ｂは、１０のコントロール及び９のＡＭＤドナー由来の死後のヒトＡＨ試料における還元型ｈＩＬ－３３の濃度を示すグラフである。ｎｓ＝有意性なし。データは、２組の平均である。ＬＬＯＱ＝定量下限。

【図8】Ａは、９のコントロール及び９の喘息患者由来のヒト鼻腔吸収液（ＮＦ）における還元型ｈＩＬ－３３の濃度を示すグラフである。ｎｓ＝有意性なし。データは、２組又は４組の平均である。ＬＬＯＱ＝定量下限。Ｂは、９のコントロール及び９の喘息患者由来のヒト血清における還元型ｈＩＬ－３３の濃度を示すグラフである。ｎｓ＝有意性なし。データは、２組又は４組の平均である。ＬＬＯＱ＝定量下限。Ｃは、９のコントロール及び９の喘息患者由来のヒト血漿における還元型ｈＩＬ－３３の濃度を示すグラフである。ｎｓ＝有意性なし。データは、２組又は４組の平均である。ＬＬＯＱ＝定量下限。Ｄは、喘息ドナー（ｎ＝２３）由来の血清（円形）及びＮＦ（三角形）試料における総ｈＩＬ－３３対還元型ｈＩＬ－３３の濃度の相関を示すグラフである。Ｒ^２＝０．９５、Ｐ＜０．０００１、ＮＦの場合。データは、２組又は４組の平均である。ＬＬＯＱ＝定量下限。

【図9】Ａは、９のコントロール及び９の喘息患者由来のヒト鼻腔吸収液（ＮＦ）における総ｈＩＬ－３３の濃度を示すグラフである。ｎｓ＝有意性なし。データは、２組又は４組の平均である。ＬＬＯＱ＝定量下限。Ｂは、９のコントロール及び９の喘息患者由来のヒト血清における総ｈＩＬ－３３の濃度を示すグラフである。ｎｓ＝有意性なし。データは、２組又は４組の平均である。ＬＬＯＱ＝定量下限。Ｃは、９のコントロール及び９の喘息患者由来のヒト血漿における総ｈＩＬ－３３の濃度を示すグラフである。ｎｓ＝有意性なし。データは、２組又は４組の平均である。ＬＬＯＱ＝定量下限。

【図10】Ａは、９のコントロール及び９の喘息患者由来のヒト血清におけるｈｓＳＴ２の濃度を示すグラフである。ｎｓ＝有意性なし。データは、４組の平均である。Ｂは、９のコントロール及び９の喘息患者由来のヒト鼻腔吸収液（ＮＦ）における総ｈＩＬ－３３の濃度を示すグラフである。ｎｓ＝有意性なし。データは、２組又は４組の平均である。

【図11】例示的なＩＬ－３３ ｉＰＣＲアッセイの工程を示す模式図である。ＭＭ＝マスターミックス；ＳＥＣ＝サイズ排除クロマトグラフィー。

【図12】還元型ＩＬ－３３ ｉＰＣＲアッセイを使用した、正常及び罹患状態の、種々の体液、血清、及び血漿の試料における還元型ＩＬ－３３の検出可能性を示すグラフである。ＡＭＤ＝加齢黄斑変性；ＡＨ＝眼房水；ＨＳ＝ヒト血清；Ｈｕ＝ヒト；Ｎ＝試料の総数；ＮＨ＝正常なヒト；ＮＨＰ＝正常なヒト血漿；ＮＨＳ＝正常なヒト血清；ＮＺ＝ニュージーランド；ＲＡ＝関節リウマチ；％＝試料の数＞定量下限（ＬＬＯＱ）／Ｎ×１００。

【図13】還元型又は総ＩＬ－３３ ｉＰＣＲアッセイを使用した、正常及び罹患状態の種々のヒト体液、血清、及び血漿の試料における還元型及び総ＩＬ－３３の検出可能性を示すグラフである。ＡＭＤ＝加齢黄斑変性；ＡＨ＝眼房水；ＨＳ＝ヒト血清；Ｈｕ＝ヒト；Ｎ＝試料の総数；ＮＨ＝正常なヒト；ＮＨＰ＝正常なヒト血漿；ＮＨＳ＝正常なヒト血清；ＲＡ＝関節リウマチ；％＝試料の数＞定量下限（ＬＬＯＱ）／Ｎ×１００。

【発明を実施するための形態】

【0078】

Ｉ．定義
本明細書で使用される「約」という用語は、この技術分野の当業者であれば容易に理解する、それぞれの値の通常の誤差範囲を指す。本明細書における「約」が付された値又はパラメーターへの言及は、その値又はパラメーター自体に関する実施形態を含む（記載する）。いくつかの実施形態では、用語「約」は、記述される値の±１０％を指す。

【0079】

本明細書の目的のための「アクセプターヒトフレームワーク」とは、下記に定義されるように、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークから得られる軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）フレームワーク又は重鎖可変ドメイン（ＶＨ）フレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワーク「から得られる」アクセプターヒトフレームワークは、その同じアミノ酸配列を含むことができるか、又はアミノ酸配列の変化を含んでもよい。いくつかの実施形態では、アミノ酸変化の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、又は２以下である。いくつかの実施形態では、ＶＬアクセプターヒトフレームワークは、ＶＬヒト免疫グロブリンフレームワーク配列又はヒトコンセンサスフレームワーク配列と配列が同一である。

【0080】

「親和性」は、分子（例えば、抗体）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有結合相互作用の総和の強度を指す。本明細書で使用する場合、別途指示がない限り、「結合親和性」は、結合対（例えば、抗体と抗原）のメンバー間の１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。通常、分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は、解離定数（Ｋ_Ｄ）によって表される。親和性は、本明細書に記載されるものを含む、当技術分野で既知の一般的な方法により測定することができる。結合親和性を測定するための特定の例示的な実施形態は、以下で説明される。

【0081】

「親和性成熟」抗体は、１つ又は複数のＨＶＲ及び／又はフレームワーク領域に１つ又は複数の変更を有する抗体であり、それら１つ以上の変更を保持しない親抗体と比較して、抗原に対する抗体の親和性に改善をもたらす。好ましい親和性成熟抗体は、標的抗原に対して、ナノモル単位の、場合によってはピコモル単位の親和性を有するであろう。親和性成熟抗体は、当技術分野において既知の手順により生成される。例えば、Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：７７９－７８３，１９９２には、ＶＨ及びＶＬドメインのシャフリングによる親和性成熟が記載されている。ＨＶＲ及び／又はフレームワーク残基のランダム突然変異誘発は、Ｂａｒｂａｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：３８０９－３８１３，１９９４；Ｓｃｈｉｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｇｅｎｅ １６９：１４７－１５５，１９９５；Ｙｅｌｔｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５：１９９４－２００４，１９９５；Ｊａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４（７）：３３１０－３３１９，１９９５；及びＨａｗｋｉｎｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２６：８８９－８９６，１９９２に記載されている。

【0082】

本明細書の用語「抗体」は、最も広い意味で使用され、種々の抗体構造を包含し、限定しないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び所望の抗原結合活性を呈する限りにおいて抗体断片を含む。

【0083】

本明細書で使用される「インターロイキン－３３（ＩＬ－３３）」という用語は、別途指示がない限り、霊長類（例えば、ヒト及びカニクイザル）及びげっ歯類（例えば、マウス及びラット）等の哺乳動物を含む、任意の脊椎動物源由来の任意の天然ＩＬ－３３を指す。ＩＬ－３３は、当技術分野では高内皮細静脈の核因子（ＮＦ－ＨＥＶ；例えば、Ｂａｅｋｋｅｖｏｌｄ ｅｔ ａｌ．Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１６３（１）：６９－７９，２００３を参照）、ＤＶＳ２７、Ｃ９ｏｒｆ２６、及びインターロイキン－１ファミリーメンバー１１（ＩＬ－１Ｆ１１）とも呼ばれている。この用語は、「完全長」の、プロセシングされていないＩＬ３３だけでなく、細胞内でのプロセシングから生じる任意の形態のＩＬ－３３を包含する。ヒトの完全長のプロセシングされていないＩＬ－３３は、２７０のアミノ酸（ａ．ａ．）を含み、ＩＬ－３３_{１－２７０}と呼ばれることもある。ヒトＩＬ－３３のプロセシングされた形態には、例えば、ＩＬ－３３_{９５－２７０}、ＩＬ－３３_{９９－２７０}、ＩＬ－３３_{１０９－２７０}、ＩＬ－３３_{１１２－２７０}、ＩＬ－３３_{１－１７８}、及びＩＬ－３３_{１７９－２７０}が含まれる（Ｌｅｆｒａｎｃａｉｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１０９（５）：１６７３－１６７８，２０１２及びＭａｒｔｉｎ，Ｓｅｍｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５：４４９－４５７，２０１３）。いくつかの実施形態では、ヒトＩＬ－３３のプロセシングされた形態、例えば、ＩＬ－３３_{９５－２７０}、ＩＬ－３３_{９９－２７０}、ＩＬ－３３_{１０９－２７０}、又はカルパイン、プロテイナーゼ３、好中球エラスターゼ、及びカテプシンＧ等のプロテアーゼによってプロセシングされた他の形態は、完全長ＩＬ－３３と比較して生物活性が増加している可能性がある。本用語は、ＩＬ－３３の天然に存在するバリアント、例えばスプライスバリアント（例えば、エクソン３を欠く構成的に活性なスプライスバリアントｓｐＩＬ－３３、Ｈｏｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８６（２２）：２００７８－２００８６，２０１１）又は対立遺伝子バリアントも包含する。ＩＬ－３３は、細胞内（例えば、核内部）に、又は分泌サイトカイン形態として存在しうる。完全長ＩＬ－３３タンパク質は、クロマチン結合モチーフ（ヒトＩＬ－３３のａ．ａ．４０－５８）を含む核局在配列（ヒトＩＬ－３３のａ．ａ．１－７５）を含むヘリックス－ターン－ヘリックスＤＮＡ結合モチーフを含有する。プロセシングされ分泌されたＩＬ－３３の形態は、これらＮ末端モチーフを欠いている。例示的なヒトＩＬ－３３のアミノ酸配列は、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ寄託番号Ｏ９５７６０として見出すことができる。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのＩＬ－３３は、酸化型及び／又は還元型形態でありうる。一部の実施形態では、還元型ＩＬ－３３は、ＩＬ－３３（例えば、ヒトＩＬ－３３（ｈＩＬ－３３））を一定の期間にわたって還元剤と共にインキュベートすることにより調製することができる。いくつかの実施形態では、ＩＬ－３３（例えば、ｈＩＬ－３３）を還元するため又は還元型ＩＬ－３３（例えば、ｈＩＬ－３３）を安定させるために使用することのできる還元剤には、限定されないが、ジチオスレイトール（ＤＴＴ；ＣＡＳ＃：３４８３－１２－３）及びトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ；ＣＡＳ＃：５１８０５－４５－９）が含まれる。一部の実施形態では、還元型ＩＬ－３３は、ＳＴ２に結合する。いくつかの実施形態では、還元型ＩＬ－３３は、酸化型ＩＬ－３３よりも高い親和性でＳＴ２に結合する。いくつかの実施形態では、還元型ＩＬ－３３は、その二次構造及びジスルフィド結合の非存在において酸化型ＩＬ－３３とは異なる。一部の実施形態では、還元型ＩＬ－３３は、示されるシステイン間にＣ２０８－Ｃ２５９及びＣ２２７－Ｃ２３２ジスルフィド結合を含まない。特定の実施形態では、酸化型ＩＬ－３３中のジスルフィド結合（例えば、Ｃ２０８－Ｃ２５９及びＣ２２７－Ｃ２３２における）は、ＳＴ２に対するその結合を妨げる。いくつかの実施形態では、「結合していないＩＬ－３３」は、ＳＴ２に結合していないＩＬ－３３を指す。

【0084】

「ＩＬ－３３軸」は、核酸（例えば、遺伝子又は遺伝子から転写されたｍＲＮＡ）、又はＩＬ－３３シグナル伝達に関与するポリペプチドを意味する。例えば、ＩＬ－３３軸は、リガンドＩＬ－３３、受容体（例えば、ＳＴ２及び／又はＩＬ－１ＲＡｃＰ）、アダプター分子（例えば、ＭｙＤ８８）、又は受容体分子及び／又はアダプター分子と会合するタンパク質（例えば、インターロイキン１受容体関連キナーゼ１（ＩＲＡＫ１）及びインターロイキン１受容体関連キナーゼ４（ＩＲＡＫ４）等のキナーゼ、又はＴＮＦ受容体関連因子６（ＴＲＡＦ６）等のＥ３ユビキチンリガーゼ）を含みうる。

【0085】

本明細書で交換可能に使用される「インターロイキン１受容体様１（ＩＬ１ＲＬ１）」及び「ＳＴ２」という用語は、別途指示がない限り、霊長類（例えば、ヒト）及びげっ歯類（例えば、マウス及びラット）等の哺乳動物を含む、任意の脊椎動物源由来の任意の天然ＳＴ２を指す。ＳＴ２は、当技術分野では、ＤＥＲ４、Ｔ１、及びＦＩＴ－１とも呼ばれる。この用語は、「完全長」のプロセシングされていないＳＴ２、ならびに細胞内でのプロセシングから生じる任意の形態のＳＴ２を包含する。ＳＴ２の少なくとも４つのアイソフォームが当技術分野で既知であり、これらには、以下に記載されるように、デュアルプロモーター系からの差次的ｍＲＮＡ発現から生じる可溶性（ＩＬ１ＲＬ１－ａとしても知られるｓＳＴ２）及び膜貫通（ＩＬ１ＲＬ１－ｂとしても知られるＳＴ２Ｌ）と、選択的スプライシングから生じるＳＴ２Ｖ及びＳＴ２ＬＶが含まれる。いくつかの例では、ｓＳＴ２を含むＳＴ２は、それぞれヒトＳＴ２又はヒトｓＳＴ２（ｈｓＳＴ２）でありうる。ＳＴ２Ｌのドメイン構造には、３つの細胞外免疫グロブリン様Ｃ２ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞質Ｔｏｌｌ／インターロイキン１受容体（ＴＩＲ）ドメインが含まれる。ｓＳＴ２は、ＳＴ２Ｌ内部に含まれる膜貫通及び細胞質を欠き、特有の９つのアミノ酸（ａ．ａ．）Ｃ末端配列を含む（例えば、Ｋａｋｋａｒ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃ．７：８２７－８４０，２００８参照）。ｓＳＴ２は、可溶性ＩＬ－３３を阻害するデコイレセプターとして機能することができる。この用語は、ＳＴ２の天然に存在するバリアント、例えばスプライスバリアント（例えば、第３の免疫グロブリンモチーフを欠き、特有の疎水性尾部を有するＳＴ２Ｖ、及びＳＴ２Ｌの膜貫通ドメインを欠くＳＴ２ＬＶ）又は対立遺伝子バリアント（例えば、喘息リスクに対して保護的であるか又は本明細書に記載されるように喘息リスクを付与するバリアント）も包含する。例示的なヒトＳＴ２のアミノ酸配列は、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ寄託番号Ｑ０１６３８として見出すことができる。ＳＴ２は、共受容体タンパク質ＩＬ－１ＲＡｃＰと共にＩＬ－３３受容体の一部である。ＩＬ－３３のＳＴ２及び共受容体インターロイキン１受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ－１ＲＡｃＰ）への結合は、図１Ａに示されるように、１：１：１の三元シグナル伝達複合体を形成して下流のシグナル伝達を促進する（例えば、Ｌｉｎｇｅｌ ｅｔ ａｌ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ １７（１０）：１３９８－１４１０，２００９、及びＬｉｕ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１１０（３７）：１４９１８－１４９２４，２０１３を参照）。いくつかの実施形態では、「ＩＬ－１受容体アクセサリータンパク質」又は「ＩＬ－１ＲＡｃＰ」は、ＳＴ２の共受容体である。

【0086】

「ＩＬ－３３軸結合アンタゴニスト」は、ＩＬ－３３軸結合パートナーとその結合パートナーとの相互作用を阻害する分子を指す。本明細書で使用される場合、ＩＬ－３３軸結合アンタゴニストは、ＩＬ－３３結合アンタゴニスト、ＳＴ２結合アンタゴニスト、及びＩＬ１ＲＡｃＰ結合アンタゴニストを含む。例示的なＩＬ－３３軸結合アンタゴニストには、抗ＩＬ－３３抗体及びその抗原結合断片（例えば、ＡＮＢ－０２０（ＡｎａｐｔｙｓＢｉｏ，Ｉｎｃ．）等の抗ＩＬ－３３抗体、又は各々が参照によりその全体が本明細書に援用される米国特許出願公開第２０２１－０２８４７２５号、米国特許第１００９３７３０号、ＥＰ１７２５２６１、米国特許第８１８７５９６号、国際公開第２０１１０３１６００号、国際公開第２０１４１６４９５９号、国際公開第２０１５０９９１７５号、国際公開第２０１５１０６０８０号、国際公開第２０１６０７７３８１号、又は国際公開第２０２１１８３８４９号に記載される抗体のいずれか）；ＩＬ－３３及び／又はその受容体（ＳＴ２及び／又はＩＬ－１ＲＡＣＰ）に結合し、リガンド－受容体相互作用をブロックするポリペプチド（例えば、参照によりその全体が本明細書に援用される国際公開第２０１４／１５２１９５号に記載されるもの等のＳＴ２－Ｆｃタンパク質；イムノアドヘシン、ペプチボディ、及び可溶性ＳＴ２、又はそれらの誘導体）；抗ＩＬ－３３受容体抗体（例えば、抗ＳＴ２抗体、例えば、アステゴリマブ（ＭＳＴＴ１０４１Ａとしても知られる）、ＡＭＧ－２８２（Ａｍｇｅｎ）若しくはＳＴＬＭ１５（Ｊａｎｓｓｅｎ）、又は各々が参照によりその全体が本明細書に援用される国際公開第２０１３／１７３７６１号及び国際公開第２０１３／１６５８９４号に記載される抗ＳＴ２抗体のいずれか；又はＳＴ２－Ｆｃタンパク質、例えば各々が参照によりその全体が本明細書に援用される国際公開第２０１３／１７３７６１号；国際公開第２０１３／１６５８９４号；又は国際公開第２０１４／１５２１９５号に記載されるもの）；並びにＩＬ－３３受容体アンタゴニスト、例えば小分子阻害剤、ＩＬ－３３に結合するアプタマー、及びＩＬ－３３軸核酸配列にストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸（例えば、短干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）又は、Ｍａｌｉ ｅｔ ａｌ．（Ｓｃｉｅｎｃｅ．３３９：８２３－２６，２０１３）（参照によりその全体が本明細書に援用される）に記載されるｃｒＲＮＡ及びｔｒａｃｒＲＮＡ配列を有するシングルガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）を含む、クラスター化して規則的に配置される短い回文リピートＲＮＡ（ＣＲＩＳＰＲ－ＲＮＡ又はｃｒＲＮＡ）が含まれる。

【0087】

「抗ＩＬ－３３抗体」、「ＩＬ－３３に結合する抗体」、及び「ＩＬ－３３に特異的に結合する抗体」という用語は、抗体がＩＬ－３３の標的化において診断剤及び／又は治療剤として有用であるように、十分な親和性でＩＬ－３３に結合することのできる抗体を指す。一実施形態では、無関係な非ＩＬ－３３タンパク質に対する抗ＩＬ－３３抗体の結合の程度は、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定した場合に、ＩＬ－３３に対する抗体の結合の約１０％未満である。一部の実施形態では、ＩＬ－３３に結合する抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭ（例えば、１０^－８Ｍ以下、例えば１０^－８Ｍから１０^－１３Ｍ、例えば、１０^－９Ｍから１０^－１３Ｍ）の解離定数（Ｋ_Ｄ）を有する。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ－３３抗体は、０．０１ｎＭと１ｎＭとの間のＫ_ＤでＩＬ－３３に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ－３３抗体は、０．１ｎＭと０．５ｎＭとの間のＫ_ＤでＩＬ－３３に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ－３３抗体は、酸化型及び還元型形態のＩＬ－３３に結合する。一部の実施形態では、抗ＩＬ－３３抗体は、還元型ＩＬ－３３に結合する。一部の実施形態では、抗ＩＬ－３３抗体は、２倍の Ｋ_Ｄ（例えば、１．５倍以内又は１倍以内のＫ_Ｄ）で酸化型ＩＬ－３３及び還元型ＩＬ－３３に結合する。一部の実施形態では、抗ＩＬ－３３抗体は、実質的に同じＫ_Ｄで酸化型ＩＬ－３３及び還元型ＩＬ－３３に結合する。一部の実施形態では、抗ＩＬ－３３抗体は、異なる種由来のＩＬ－３３間で保存されているＩＬ－３３のエピトープに結合する。一部の実施形態では、抗ＩＬ－３３抗体は、哺乳動物のＩＬ－３３に結合する。特定の実施形態では、抗ＩＬ－３３抗体は、ヒトＩＬ－３３（ｈＩＬ－３３）に結合する。一部の実施形態では、抗ＩＬ－３３抗体は、可溶型インターロイキン１受容体様１（ｓＳＴ２）タンパク質に結合したＩＬ－３３及びｓＳＴ２に結合していないＩＬ－３３（例えば、結合していないＩＬ－３３）に、２倍以内のＫ_Ｄ（例えば、１．５倍以内又は１倍以内のＫ_Ｄ）で結合する。一部の実施形態では、抗ＩＬ－３３抗体は、ｓＳＴ２タンパク質に結合したＩＬ－３３に、ｓＳＴ２に結合していないＩＬ－３３と実質的に同じＫ_Ｄで結合する。

【0088】

参照抗体と「同じエピトープに結合する抗体」は、競合アッセイにおいて、参照抗体のその抗原に対する結合を５０％以上ブロックする抗体を指し、逆に、参照抗体は、競合アッセイにおいて、抗体のその抗原に対する結合を５０％以上ブロックする。例示的な競合アッセイが、本明細書で提供される。

【0089】

「抗体断片」は、インタクトな抗体の一部分、好ましくはインタクトな抗体の抗原結合領域又は可変領域を含む。抗体断片の例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２及びＦｖ断片；ダイアボディ；直鎖状抗体（米国特許第Ｎｏ．５，６４１，８７０号の実施例２；Ｚａｐａｔａ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．８（１０）：１０５７－１０６２，１９９５を参照のこと）；単鎖抗体分子；及び抗体断片から形成される多重特異性抗体が含まれる。

【0090】

抗体のパパイン消化により、「Ｆａｂ」断片と呼ばれる２つの同一の抗原結合断片と、残りの「Ｆｃ」断片が生じ、消化は容易に結晶化する能力を反映している。Ｆａｂ断片は、Ｌ鎖全体並びにＨ鎖の可変領域ドメイン（ＶＨ）、及び１つの重鎖の第１の定常ドメイン（Ｃ_Ｈ１）からなる。抗体のペプシン処理により単一の大きなＦ（ａｂ’）_２断片が生じ、これは二価の抗原結合活性を有するジスルフィドで連結された２つのＦａｂ断片にほぼ対応し、依然として抗原に架橋することができる。Ｆａｂ’断片は、抗体のヒンジ領域由来の１つ又は複数のシステインを含め、Ｃ_Ｈ１ドメインのカルボキシ末端に追加の数個の残基を有することにより、Ｆａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ’－ＳＨは、定常ドメインの１つ以上のシステイン残基が遊離チオール基を持つＦａｂ’の本明細書での呼称である。Ｆ（ａｂ’）_２抗体断片は、間にヒンジシステインを有するＦａｂ’断片の対として生成された。抗体断片の他の化学的カップリングも既知である。

【0091】

本明細書の用語「Ｆｃ領域」は、定常領域の少なくとも一部分を含む免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。この用語は、天然配列Ｆｃ領域と変異Ｆｃ領域とを含む。一実施形態において、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、Ｃｙｓ２２６又はＰｒｏ２３０から重鎖のカルボキシル末端に及ぶ。しかしながら、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は、存在してもしなくてもよい。本明細書において別途指定のない限り、Ｆｃ領域又は定常領域内のアミノ酸残基の番号付けは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１に記載されている、ＥＵインデックスとも呼ばれるＥＵ番号付けに従う。

【0092】

「Ｆｖ」は、１つの重鎖及び１つの軽鎖可変領域ドメインの、密に非共有結合した二量体からなる。これら２つのドメインの折り畳みから、抗原結合のためのアミノ酸残基に寄与し、抗原結合特異性を抗体に付与する６つの超可変ループ（Ｈ鎖及びＬ鎖から各３つのループ）が生じる。しかしながら、単一の可変ドメイン（又は抗原に特異的な３つのＨｓのみを含むＦｖの半分）でさえ、結合部位全体よりも低い親和性であることが多いものの、抗原を認識して結合する能力を有する。

【0093】

「ｓＦｖ」又は「ｓｃＦｖ」とも略される「単鎖Ｆｖ」は、単一ポリペプチド鎖中に接続するＶＨ及びＶＬ抗体ドメインを含む抗体断片である。好ましくは、ｓＦｖポリペプチドはＶＨドメインとＶＬドメインとの間に、ｓＦｖが抗原結合のために所望の構造を形成することを可能にするポリペプチドリンカーをさらに含む。ｓＦｖの概説については、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３、Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９－３１５，１９９４を参照のこと。

【0094】

用語「ダイアボディ」は、ｓＦｖ断片（前段落参照）を、ＶＨドメインとＶＬドメインの間に短いリンカー（約５～１０の残基）を用いて構築することにより調製された小さな抗体断片を指し、Ｖドメインの鎖内ペアリングではなく鎖間ペアリングが達成されることにより、二価の断片、すなわち２つの抗原結合部位を有する断片が得られる。二重特異性ダイアボディは、２つの抗体のＶＨドメインとＶＬドメインが異なるポリペプチド鎖上に存在する２つの「クロスオーバー」Ｆｖ断片のヘテロ二量体である。ダイアボディは、例えば、ＥＰ４０４，０９７；国際公開第第９３／１１１６１号；及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４－６４４８，１９９３にさらに詳細に記載されている。

【0095】

「結合ドメイン」は、標的エピトープ、抗原、リガンド、又は受容体に特異的に結合する化合物又は分子の一部を意味する。結合ドメインには、限定されないが、抗体（例えば、モノクローナル、ポリクローナル、組み換え、ヒト化、及びキメラ抗体）、抗体断片又はその部分（例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’_２、ｓｃＦｖ抗体、ＳＭＩＰ、ドメイン抗体、ダイアボディ、ミニボディ、ｓｃＦｖ－Ｆｃ、アフィボディ、ナノボディ、並びに抗体のＶＨ及び／又はＶＬドメイン）、受容体、リガンド、アプタマー、及び同定された結合パートナーを有する他の分子が含まれる。

【0096】

「遮断」抗体又は「アンタゴニスト」抗体は、結合する抗原の生物活性を阻害又は低減する抗体である。特定の遮断抗体又はアンタゴニスト抗体は、実質的に又は完全に抗原の生物活性を阻害する。

【0097】

「細胞ベースのブロッキングアッセイ」は、結合する抗原の生物活性を阻害又は低減する抗体の能力を測定することのできるアッセイを指す。例えば、細胞ベースのアッセイは、特定の生物学的又は生化学的機能を阻害するために必要な抗体の濃度を測定するために使用することができる。いくつかの実施形態では、抗体（例えば、本明細書に開示される抗ＩＬ－３３抗体）の最大阻害濃度の半分（ＩＣ５０）及び／又は９０％阻害濃度（ＩＣ９０）は、細胞ベースのブロッキングアッセイを使用して測定される。いくつかの実施形態では、細胞ベースのブロッキングアッセイは、抗体がリガンド（例えば、ＩＬ－３３）とその受容体（例えば、ＳＴ２及び／又は共受容体ＩＬ－１ＲＡｃＰ）との間の相互作用をブロックするかどうかを決定するために使用される。ＩＬ－３３の例示的な細胞ベースのブロッキングアッセイは、例えば、米国特許第１０，０９３，７３０号の実施例２Ｂに提供されている。ＩＬ－３３のさらなる例示的な細胞ベースのブロッキングアッセイは、例えば、米国特許第１０，０９３，７３０号の実施例８に提供されており、一次ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞アッセイ及び一次好塩基球アッセイが含まれる。

【0098】

「免疫ポリメラーゼ連鎖反応」又は「ｉＰＣＲ」アッセイは、標的分子（例えば、標的生体分子、例えば、タンパク質）の存在又はレベルが抗体－ＤＮＡコンジュゲートによって検出されるアッセイを指す。いくつかの実施形態では、ｉＰＣＲアッセイは、ビオチンにコンジュゲートした第１の抗体と核酸部分にコンジュゲートした第２の抗体とを使用し、第１及び第２の抗体は、同じ標的抗原に結合する。第１の抗体及び第２の抗体の両方は、標的抗原を含む溶液と混合され、得られた混合物は、例えば、ＰＣＲウェル内部で、一緒にインキュベートされる。次いでＰＣＲ増幅を使用して核酸部分の存在が検出され、それにより標的抗原の検出が示される。いくつかの実施形態では、ｉＰＣＲアッセイを使用してＩＬ－３３（例えば、ヒトＩＬ－３３、例えば、還元型ＩＬ－３３）を検出する。いくつかの実施形態では、第１の抗体と第２の抗体は抗ＩＬ３３抗体である。いくつかの実施形態では、第１の抗体と第２の抗体とは、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を共有する。いくつかの実施形態では、第１の抗体と第２の抗体は、同じアミノ酸配列を共有しない（例えば、第１の抗体と第２の抗体のアミノ酸配列は、１％以下、２％以下、３％以下、４％以下、５％以下、１０％以下、１５％以下、又は２０％以下のアミノ酸配列同一性を共有する）。ｉＰＣＲアッセイの例は、Ｓａｎｏ Ｔ ｅｔ．ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ １９９２，２５８：１２０－１２２及びＮｉｅｍｅｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２０１７，８：６５に記載されている。

【0099】

抗体の「クラス」は、その重鎖によって保有される定常ドメイン又は定常領域の種類を指す。抗体には５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭが存在し、これらのいくつかはさらに、サブクラス（アイソタイプ）、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２（例えば、ＩｇＧ２ａ又はＩｇＧ２ｂ）、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２に分けられる。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれα、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。

【0100】

抗体の「エフェクター機能」は、抗体のＦｃ領域（天然配列Ｆｃ領域又はアミノ酸配列変異Ｆｃ領域）に起因しうる生物活性を指し、抗体のアイソタイプにより変化する。抗体のエフェクター機能の例には、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）；食作用；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御；及びＢ細胞活性化が含まれる。

【0101】

「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」又は「ＡＤＣＣ」は、特定の細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、及びマクロファージ）上に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）上に結合した分泌されたＩｇが、これら細胞傷害性のエフェクター細胞を、抗原を保持する標的細胞に特異的に結合させ、続いて細胞毒により標的細胞を殺すことができる、細胞傷害性の一形態を指す。抗体は、細胞傷害性細胞を「有効化」するもので、そのような死滅に絶対的に必要とされる。ＡＤＣＣを媒介する主要な細胞であるＮＫ細胞がＦｃγＲＩＩＩのみを発現するのに対し、単球はＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞でのＦｃＲの発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ ｅｔ ａｌ．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７－４９２，１９９１の４６４頁の表３に要約されている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、米国特許第５，５００，３６２号又は同第５，８２１，３３７号に記載されているようなｉｎ ｖｉｔｒｏ ＡＤＣＣアッセイを実施することができる。このようなアッセイに有用なエフェクター細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む。代替的に、又は追加的に、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９５：６５２－６５６，１９９８に開示されるような動物モデルにおいて、ｉｎ ｖｉｖｏで評価することができる。

【0102】

「Ｆｃ受容体」又は「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を意味する。好ましいＦｃＲは、天然配列ヒトＦｃＲである。さらに、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体（ガンマ受容体）と結合するものであり、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体を含み、これら受容体の対立遺伝子バリアント及び代替的にスプライスされた形態が含まれる。ＦｃγＲＩＩ受容体は、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）及びＦｃγＲＩＩＢ（「阻害受容体」）を含み、これらは細胞質ドメインが主に異なる類似のアミノ酸配列を有する。活性化受容体ＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質ドメイン中に免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）を含む。阻害受容体ＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質ドメインに免疫受容体チロシンベースの阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）を含む（Ｍ．ｉｎ Ｄａｅｒｏｎ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：２０３－２３４，１９９７を参照されたい）。ＦｃＲは、例えば、Ｒａｖｅｔｃｈ ｅｔ ａｌ．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７－４９２，１９９１；Ｃａｐｅｌ ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ ４：２５－３４，１９９４；及びｄｅ Ｈａａｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１２６：３３０－４１，１９９５に総説がある。将来に同定されるものを含め、他のＦｃＲは、本明細書では用語「ＦｃＲ」に包含される。この用語には、胎児への母親のＩｇＧの移行を担う新生児の受容体ＦｃＲｎも含まれる（例えば、Ｇｕｙｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７，１９７６；及びＫｉｍ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９，１９９４を参照のこと）。

【0103】

「ヒトエフェクター細胞」は、１つ又は複数のＦｃＲを発現し、エフェクター機能を実行する白血球である。好ましくは、細胞は、少なくともＦｃγＲＩＩＩを発現し、ＡＤＣＣエフェクター機能を実行する。ＡＤＣＣを媒介するヒト白血球の例には、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、細胞、細胞傷害性Ｔ細胞及び好中球が含まれ、ＰＢＭＣとＮＫ細胞が好ましい。エフェクター細胞は、天然の供給源、例えば血液から単離することができる。

【0104】

「補体依存性細胞傷害」又は「ＣＤＣ」は、補体の存在下での標的細胞の溶解を指す。古典的補体経路の活性化は、補体系の第１の成分（Ｃ１ｑ）の、それらの同種抗原に結合した（適切なサブクラスの）抗体への結合により開始される。補体活性化を評価するため、例えばＧａｚｚａｎｏ－Ｓａｎｔｏｒｏ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２：１６３，１９９６に記載されるＣＤＣアッセイを実行することができる。
「エピトープ」は、抗体が選択的に結合する抗原の部分である。ポリペプチド抗原の場合、エピトープは、一般に約４～１５アミノ酸残基のペプチド部分である。

【0105】

用語「完全長抗体」、「インタクトな抗体」、及び「全抗体」は、本明細書で交換可能に使用され、天然抗体構造と実質的に同様の構造を有するか、又は本明細書で定義されるＦｃ領域を含む重鎖を有する抗体を指す。

【0106】

「ヒト抗体」は、ヒトによって生成される、及び／又はヒト抗体を作製するための技術のいずれかを使用して作製された抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有する抗体である。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を特に除外する。

【0107】

「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨフレームワーク配列の選択において最も一般的に生じるアミノ酸残基を表すフレームワークである。通常、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループから行われる。一般的に、配列のサブグループは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ９１－３２４２，Ｂｅｔｈｅｓｄａ ＭＤ，ｖｏｌｓ．１－３，１９９１にあるようなサブグループである。一実施形態では、ＶＬの場合、サブグループは上掲のＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．にあるようなサブグループカッパＩＩＩ又はカッパＩＶである。一実施形態では、ＶＨの場合、サブグループは上掲のＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．にあるようなサブグループＩＩＩである。

【0108】

非ヒト（例えば、げっ歯類）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト抗体から得られる最小配列を含むキメラ抗体である。大抵の場合、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域由来の残基が、非ヒト種、例えば、所望の抗体特異性、親和性、及び能力を有するマウス、ラット、ウサギ、又は非ヒト霊長類の超可変領域（ドナー抗体）由来の残基により置き換えられているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。いくつかの例では、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）の残基は、対応する非ヒト残基によって置き換えられている。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体又はドナー抗体に見られない残基を含むことができる。これら修飾は、抗体性能をさらに洗練させるために行われる。概して、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的にすべてを含み、超可変ループのすべて又は実質的にすべてが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲのすべて又は実質的にすべてがヒト免疫グロブリン配列のものである。また、ヒト化抗体は、任意選択的に、免疫グロブリンの定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部を含む。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ ３２１ ：５２２－５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２９（１９８８）；及びＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３－５９６（１９９２）を参照のこと。

【0109】

「イムノコンジュゲート」は、細胞傷害剤を含むがこれに限定されない、１つ又は複数の異種分子にコンジュゲートした抗体である。

【0110】

「単離された」という用語は、本明細書に開示される種々の抗体を説明するために使用されるとき、抗体が発現された細胞又は細胞培養物から同定、分離及び／又は回収された抗体を意味する。その自然環境の夾雑物成分は、典型的にはポリペプチドの診断的又は治療的使用を妨害するであろう物質であり、酵素、ホルモン、及びその他のタンパク質様又は非タンパク質様溶質を含みうる。いくつかの実施形態では、抗体は、例えば、電気泳動（例えば、ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、又はキャピラリー電気泳動）又はクロマトグラフィー（例えば、イオン交換又は逆相ＨＰＬＣ）法によって決定した場合、９５％又は９９％より大きな純度に精製される。抗体純度の評価のための方法の総説については、例えば、Ｆｌａｔｍａｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ ８４８：７９－８７，２００７を参照のこと。好ましい実施形態では、抗体は、（１）スピニングカップシークエネーターの使用により、少なくとも１５残基のＮ末端又は内部アミノ酸配列を得るのに充分な程度まで、又は（２）クーマシーブルー又は好ましくは銀染色を使用した非還元又は還元条件下でのＳＤＳ－ＰＡＧＥにより均一になるまで精製される。単離された抗体には、ポリペプチドの自然環境の少なくとも１つの成分が存在しないため、組み換え細胞内部のｉｎ ｓｉｔｕの抗体が含まれる。しかしながら、通常、単離されたポリペプチドは、少なくとも１つの精製工程により調製される。

【0111】

本明細書で使用される用語「モノクローナル抗体」は、実質的に均質な抗体の集団、すなわち、集団を構成する個々の抗体が、例えば、天然に存在する変異を含んでいるか、又はモノクローナル抗体調製物の生成中に発生する存在しうるバリアント抗体、例えば通常少量で存在するバリアントを除いて、同一である及び／又は同じエピトープに結合する集団から得られる抗体を意味する。典型的に異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を含むポリクローナル抗体製剤とは対照的に、モノクローナル抗体製剤の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基を指向している。したがって、修飾語「モノクローナル」は、抗体の実質的に均一な集合から得られているという抗体の特徴を示し、いずれか特定の方法による抗体の生成が必要であると解釈すべきではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法、組み換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座の全部又は一部を含有するトランスジェニック動物を利用する方法を含むが、これらに限定されない様々な技術によって作製することができ、モノクローナル抗体を作製するためのそのような方法及び他の例示的な方法が本明細書に記載されている。

【0112】

用語「多重特異性抗体」は、最も広い意味で使用され、特に、ＶＨ－ＶＬ単位がポリエピトープ特異性を有する（すなわち、１つの生体分子上の２つの異なるエピトープ又は異なる生体分子上の各エピトープに結合することができる）重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗体を含む。このような多重特異性抗体には、限定されないが、完全長抗体、２つ以上のＶＬ及びＶＨドメインを有する抗体、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｄｓＦｖ、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、二重特異性ダイアボディ及びトリアボディといった抗体断片、共有結合的に又は非共有結合的に結合した抗体断片が含まれる。「ポリエピトープ特異性」は、１つ以上の同じ又は異なる標的上で２つ以上の異なるエピトープへの特異的結合能を指す。「二重特異性（ｄｕａｌ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）」又は「二重特異性（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）」は、１つ以上の同じ又は異なる標的上の２つの異なるエピトープへの特異的結合能を指す。しかしながら、二重特異性（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）抗体とは対照的に、二重特異性（ｄｕａｌ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ）抗体は、アミノ酸配列が同一である２つの抗原結合アームを有し、各Ｆａｂアームは２つの抗原を認識することができる。二重特異性（ｄｕａｌ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）は、抗体が、単一のＦａｂ又はＩｇＧ分子として２つの異なる抗原と高い親和性で相互作用することを可能にする。一実施形態によれば、ＩｇＧ１形態の多特異性抗体は、５μＭから０．００１ｐＭ、３μＭから０．００１ｐＭ、１μＭから０．００１ｐＭ、０．５μＭから０．００１ｐＭ、又は０．１μＭから０．００１ｐＭの親和性で各エピトープと結合する。「単一特異性」は、唯１つのエピトープに結合する能力を指す。

【0113】

「ネイキッド抗体」は、異種部分（例えば、細胞傷害性部分）又は放射標識にコンジュゲートしていない抗体を指す。ネイキッド抗体は、薬学的組成物中に存在していてもよい。

【0114】

標的分子への抗体と結合に関して、特定のポリペプチド、又は特定のポリペプチド標的上のエピトープについての、「特異的結合」、又は「特異的に結合する」、又は「特異的である」という表現は、非特異的相互作用とは測定可能な程度に異なる結合を意味する。特異的結合は、例えば、コントロール分子の結合と比較した分子の結合を決定することにより測定することができる。例えば、特異的結合は、標的に類似のコントロール分子、例えば過剰な非標識標的との競合により決定することができる。この場合、特異的結合は、プローブへの標識標的の結合が、過剰な非標識標的により競合的に阻害される場合に示される。本明細書で使用される、特定のポリペプチド又は特定のポリペプチド標的上のエピトープについての、「特異的結合」、又は「特異的に結合する」、又は「特異的」という表現は、例えば、１０^－４Ｍ以下、代替的に１０^－５Ｍ以下、代替的に１０^－６Ｍ以下、代替的に１０^－７Ｍ以下、代替的に１０^－８Ｍ以下、代替的に１０^－９Ｍ以下、代替的に１０^－１０Ｍ以下、代替的に１０^－１１Ｍ以下、代替的に１０^－１２Ｍ以下の標的に対するＫ_Ｄ、又は１０^－４Ｍから１０^－６Ｍ若しくは１０^－６Ｍから１０^－１０Ｍ若しくは１０^－７Ｍ～１０^－９Ｍの範囲のＫ_Ｄを有する分子によって示されうる。当業者には理解されるように、親和性及びＫ_Ｄ値は逆相関する。抗原に対する高い親和性は、低いＫ_Ｄ値により測定される。一実施形態では、用語「特異的結合」は、分子が特定のポリペプチド若しくは特定のポリペプチド上のエピトープに、実質的に他のいずれのポリペプチド又はポリペプチドエピトープにも結合することなく結合することを指す。

【0115】

用語「可変」は、可変ドメインの特定のセグメントは抗体間で配列が広範囲に異なるという事実を指す。可変又は「Ｖ」ドメインは、抗原結合を媒介し、その特定の抗原に対する特定の抗体の特異性を定義する。しかしながら、可変性は、可変ドメインの１１０個のアミノ酸範囲にわたって一様に分布してはいない。代わりに、Ｖ領域は、各々が９～１２アミノ酸長である「超可変領域」と呼ばれる極端な可変性の短い領域によって分離された、１５～３０アミノ酸のフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる比較的不変の伸長部からなる。天然の重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、各々が４つのＦＲを含み、大部分がベータシート構成をとり、３つの超可変領域により接続されており、これら３つの超可変領域は、ベータシート構造を接続し、場合によってはベータシート構造の一部を形成するループを形成する。各鎖における超可変領域は、ＦＲにより極めて近接して一緒に保持され、他の鎖由来の超可変領域と共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（上掲のＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．を参照のこと）。したがって、ＨＶＲ及びＦＲ配列は、一般に、ＶＨ（又はＶＬ）中に以下の配列で現れる：ＦＲ１－Ｈ１（Ｌ１）－ＦＲ２－Ｈ２（Ｌ２）－ＦＲ３－Ｈ３（Ｌ３）－ＦＲ４。定常ドメインは、抗体の抗原への結合に直接関与しているものではないが、例えば抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）における抗体の参画といった、種々のエフェクター機能を呈する。

【0116】

本明細書で使用される用語「超可変領域」又は「ＨＶＲ」は、配列が超可変である（「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ」）、及び／又は構造的に定義されたループを形成する（「超可変ループ」）及び／又は抗原接触残基（「抗原接触」）を含む抗体可変ドメインの領域の各々を指す。通常、抗体は、６つのＨＶＲ；ＶＨに３つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）、及びＶＬに３つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）のＨＶＲを含む。本明細書の例示的なＨＶＲには：
（ａ）アミノ酸残基２６－３２（Ｌ１）、５０－５２（Ｌ２）、９１－９６（Ｌ３）、２６－３２（Ｈ１）、５３－５５（Ｈ２）、及び９６－１０１（Ｈ３）に生じる超可変ループ（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１９１７（１９８７））；
（ｂ）アミノ酸残基２４－３４（Ｌ１）、５０－５６（Ｌ２）、８９－９７（Ｌ３）、３１－３５ｂ（Ｈ１）、５０－６５（Ｈ２）、及び９５－１０２（Ｈ３）に生じるＣＤＲ（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ（１９９１））；
（ｃ）アミノ酸残基２７ｃ－３６（Ｌ１）、４６－５５（Ｌ２）、８９－９６（Ｌ３）、３０－３５ｂ（Ｈ１）、４７－５８（Ｈ２）、及び９３－１０１（Ｈ３）に生じる抗原接触（ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２７４５（１９９６））；及び
（ｄ）ＨＶＲアミノ酸残基４６－５６（Ｌ２）、４７－５６（Ｌ２）、４８－５６（Ｌ２）、４９－５６（Ｌ２）、２６－３５（Ｈ１）、２６－３５ｂ（Ｈ１）、４９－６５（Ｈ２）、９３－１０２（Ｈ３）、及び９４－１０２（Ｈ３）を含む、（ａ）、（ｂ）、及び／又は（ｃ）の組み合わせ
が含まれる。

【0117】

別途指示がない限り、可変ドメイン内のＨＶＲ残基及び他の残基（例えば、ＦＲ残基）は、本明細書では上掲のＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．に従って番号付けされている。

【0118】

「フレームワーク」又は「ＦＲ」は、相補性決定領域（ＣＤＲ）以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは、一般に、以下４つのＦＲドメインからなる：ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４。したがって、ＣＤＲ及びＦＲ配列は、一般に、ＶＨ（又はＶＬ）中に以下の配列で現れる：ＦＲ１－ＣＤＲ－Ｈ１（ＣＤＲ－Ｌ１）－ＦＲ２－ＣＤＲ－Ｈ２（ＣＤＲ－Ｌ２）－ＦＲ３－ＣＤＲ－Ｈ３（ＣＤＲ－Ｌ３）－ＦＲ４。

【0119】

用語「Ｋａｂａｔの可変ドメイン残基番号付け」又は「Ｋａｂａｔのアミノ酸位の番号付け」及びそれらの変形は、上掲のＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．の抗体の編集の軽鎖可変ドメイン又は重鎖可変ドメインに用いられる番号付けシステムを指す。この番号付けシステムを使用して、実際の線形アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲ若しくはＨＶＲの短縮又はＦＲ又はＨＶＲへの挿入に相当する、より少ないアミノ酸又は追加のアミノ酸を含みうる。例えば、重鎖可変ドメインは、Ｈ２の残基５２の後の単一のアミノ酸挿入（カバットによれば残基５２ａ）、及び重鎖ＦＲ残基８２の後の挿入された残基（例えば、カバットによれば残基８２ａ、８２ｂ、及び８２ｃ等）を含みうる。残基のカバット番号付けは、「標準の」カバット番号付けされた配列と抗体の配列が相同である領域におけるアラインメントにより、所与の抗体について決定されうる。

【0120】

カバット番号付けシステムは一般に、可変ドメイン（概ね軽鎖の残基１～１０７及び重鎖の残基１～１１３）内の残基に言及するときに使用される（例えば、上掲のＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．）。「ＥＵ番号付けシステム」又は「ＥＵインデックス」は、一般的に、免疫グロブリン重鎖定常領域における残基に言及するときに使用される（例えば、上掲のＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．に報告されるＥＵインデックス）。「カバットのＥＵインデックス」は、ヒトＩｇＧ１ ＥＵ抗体の残基番号付けに言及する。本明細書で特に明記しない限り、抗体の可変ドメイン内の残基番号の参照は、カバット番号付けシステムによる残基の番号付けを意味する。本明細書で特に明記しない限り、抗体の定常ドメイン内の残基番号の参照は、ＥＵ番号付けシステムによる残基の番号付けを意味する（例えば、米国仮出願第６０／６４０３２３号、ＥＵ番号付けに関する図面を参照のこと）。

【0121】

本明細書で使用される「投与する」とは、ある投薬量の化合物（例えば、本明細書で提供される抗ＩＬ－３３軸結合アンタゴニスト（例えば、抗ＩＬ－３３抗体）又は本明細書で提供される抗ＩＬ－３３抗体をコードする核酸）又は組成物（例えば、薬学的組成物、例えば、本明細書で提供される抗ＩＬ－３３抗体を含む薬学的組成物）を対象に与える方法を意味する。本明細書に記載される方法で利用される組成物は、例えば、硝子体内に、筋肉内に、静脈内に、皮内に、経皮的に、動脈内に、腹腔内に、病変内に、頭蓋内に、関節内に、前立腺内に、胸膜内に、気管内に、髄腔内に、鼻腔内に、膣内に、直腸内に、局所的に、腫瘍内に、腹膜に、皮下に、結膜下に、膀胱内に、粘膜に、心膜内に、臍下に、眼内に、眼窩内に、経口的に、局所的に、経皮的に、眼周囲に、結膜に、テノン嚢下に、前房内に、網膜下に、眼球後に、小管内に、吸入によって、注射によって、埋め込みによって、注入によって、持続注入によって、標的細胞を直接浸す局所灌流によって、カテーテルによって、灌流によって、クリーム中で、又は脂質組成物中で投与することができる。本明細書に記載される方法において利用される組成物はまた、全身的に又は局所的に投与することができる。投与の方法は、種々の因子（例えば、投与される化合物又は組成物、及び治療される状態、疾患、又は障害の重症度）に応じて変化しうる。

【0122】

「喘息」という用語は、本明細書では、原因となる炎症と関連しているか又はしていない、不定かつ再発性の症状、可逆性の気道閉塞（例えば、気管支拡張剤によって）、及び気管支過感受性を特徴とする障害を指す。したがって、喘息は、炎症性／炎症を起こした喘息又は非炎症性／炎症を起こしていない喘息でありうる。喘息の例には、アレルギー性喘息、運動誘発性喘息、アスピリン感受性／悪化した喘息、アトピー性喘息、重度喘息、軽度喘息、中等度から重度の喘息、コルチコステロイドナイーブ喘息、慢性喘息、コルチコステロイド抵抗性喘息、コルチコステロイド難治性喘息、新たに診断された未治療の喘息、喫煙に起因する喘息、コルチコステロイドで制御されない喘息、及びＢｏｕｓｑｕｅｔ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２６（５）：９２６－９３８，２０１０で言及されている他の喘息が含まれる。

【0123】

「障害」又は「疾患」は、（本明細書で提供されるＩＬ－３３軸結合アンタゴニストでの）治療から恩恵を受けるであろういずれかの状態である。例えば、障害は、ＩＬ－３３媒介性障害でありうる。これには、哺乳動物を問題の障害に罹患しやすくするような病的状態を含む、慢性及び急性の障害又は疾患が含まれる。本明細書で治療される障害の例には、ＩＬ－３３媒介性障害（例えば、喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、及び線維症（例えば、肺線維症、例えば、特発性肺線維症））が含まれる。

【0124】

「ＩＬ－３３媒介性障害」という用語は、本明細書で使用される場合、ＩＬ－３３軸によって媒介されるか、又はＩＬ－３３軸と関連するいずれかの障害又は状態を指す。いくつかの実施形態では、ＩＬ－３３媒介性障害は、身体における局所的及び／又は全身的なＩＬ－３３のレベル又は活性に起因して非定型症状が現れうる過剰なＩＬ－３３レベル又は活性に関連付けられる。例示的なＩＬ－３３媒介性障害には、眼の障害、炎症状態、免疫疾患、線維性障害、好酸球性障害、感染症、疼痛、中枢神経系障害、及び固形腫瘍が含まれる。ＩＬ－３３媒介性障害は、例えば、Ｌｉｅｗ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １０：１０３－１１０，２０１０に記載されており、これは参照によりその全体が本明細書に援用される。

【0125】

本明細書で使用される「眼の障害」という用語は、病理学的血管新生及び／又は萎縮に関連付けられるいずれかの眼の障害（本明細書では交換可能に「眼の状態」とも呼ばれる）を含む。眼の障害は、変化した若しくは制御されていない増殖及び／又は網膜若しくは角膜といった眼組織の構造内への新規血管の侵入を特徴としうる。眼の障害は、網膜組織（光受容体並びにその下の網膜色素上皮（ＲＰＥ）及び脈絡毛細管板）の萎縮を特徴付としうる。非限定的な眼の障害には、例えば、ＡＭＤ（例えば、滲出型ＡＭＤ、乾燥型ＡＭＤ、中間型ＡＭＤ、進行型ＡＭＤ、及び地図状萎縮（ＧＡ））、黄斑変性、黄斑浮腫、糖尿病黄斑浮腫（ＤＭＥ）（例えば、焦点、非中心ＤＭＥ、及びびまん性の中心関与ＤＭＥ）、網膜症、糖尿病性網膜症（ＤＲ）（例えば、増殖性ＤＲ（ＰＤＲ）、非増殖性ＤＲ（ＮＰＤＲ）、及び高所ＤＲ）、他の虚血関連網膜症、ＲＯＰ、網膜静脈閉塞（ＲＶＯ）（例えば、中心（ＣＲＶＯ）及び分岐（ＢＲＶＯ）形態）、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）（例えば、近視性ＣＮＶ）、角膜血管新生、角膜血管新生に関連する疾患、網膜血管新生、網膜／脈絡膜血管新生に関連する疾患、中心性漿液性網膜症（ＣＳＲ）、病的近視、フォンヒッペル・リンダウ病、眼のヒストプラズマ症、家族性滲出性硝子体網膜症（ＦＥＶＲ）、コーツ病、ノーリー病、骨粗鬆症性偽神経膠腫症候群（ＯＰＰＧ）に関連する網膜異常、結膜下出血、皮膚潮紅、眼血管新生疾患、血管新生緑内障、網膜色素変性症（ＲＰ）、高血圧性網膜症、網膜血管腫状増殖、黄斑血管拡張症、虹彩血管新生、眼内血管新生、網膜変質、類嚢胞黄斑浮腫（ＣＭＥ）、脈管炎、乳頭浮腫、ＣＭＶ網膜炎を含むがこれに限定されない網膜炎、眼黒色腫、網膜芽細胞腫、結膜炎（例えば、感染性結膜炎及び非感染性（例えば、アレルギー性）結膜炎）、レーバー先天性黒内障（レーバー先天性黒内障又はＬＣＡとしても知られる）、ブドウ膜炎（感染性及び非感染性ブドウ膜炎を含む）、脈絡膜炎（例えば、多巣性脈絡膜炎）、眼ヒストプラズマ症、眼瞼炎、ドライアイ、外傷性眼損傷、シェーグレン病、並びに疾患又は障害が眼血管新生、血管漏出、及び／又は網膜浮腫若しくは網膜萎縮に関連する他の眼疾患が含まれる。さらなる例示的な眼の障害には、網膜分離症（網膜神経感覚層の異常な分裂）、皮膚潮紅（隅角の血管新生）に関連する疾患、及び線維血管組織又は線維組織の異常な増殖によって引き起こされる疾患（増殖性硝子体網膜症のすべての形態を含む）が含まれる。

【0126】

角膜血管新生を伴う例示的疾患には、限定されないが、流行性角結膜炎、ビタミンＡ欠乏、コンタクトレンズの付け過ぎ、アトピー性角膜炎、上輪部角膜炎、乾癬性角膜炎、シェーグレン症候群、酒土性挫創、糸球体炎、梅毒、マイコバクテリア感染、脂肪変性、化学火傷、細菌性潰瘍、真菌性潰瘍、単純ヘルペス感染，帯状疱疹感染、原虫症、カポジ肉腫、モーレン潰瘍、テリエン周辺角膜変性症、辺縁角膜炎、関節リウマチ、全身性狼瘡、多発性動脈炎、トラウマ、ウェゲナーのサルコイドーシス、強膜炎、スティーブンス－ジョンソン症候群、類天疱瘡放射状角膜切開術、及び角膜グラフ（ｇｒａｐｈ）拒絶が含まれる。

【0127】

血管漏出の増加、動脈瘤及び毛細血管脱落を含む、脈絡膜血管新生及び網膜血管系の欠陥に関連する例示的な眼疾患には、限定されないが、糖尿病性網膜症、黄斑変性、鎌状赤血球貧血、サルコイド、梅毒、弾力線維性仮性黄色腫、パジェット病、静脈閉塞、動脈閉塞、頸動脈閉塞性疾患、慢性ブドウ膜炎／硝子体炎、マイコバクテリア感染症、ライム病、全身性エリテマトーデス、未熟児網膜症、網膜浮腫（黄斑浮腫を含む）、イールズ病、ベーチェット病、網膜炎又は脈絡膜炎を引き起こす感染症（例えば、多焦点脈絡膜）、推定眼ヒストプラズマ症、ベスト病（硝子体黄斑変性）、近視、視神経乳頭、扁平部炎、網膜剥離（例えば、慢性網膜剥離）、過粘度症候群、トキソプラスマ症、外傷、及びレーザー後合併症が含まれる。

【0128】

網膜組織の萎縮に関連する例示的な疾患（光受容体及びその下のＲＰＥ）には、限定されないが、萎縮性又は非滲出性ＡＭＤ（例えば、地図状萎縮又は進行性乾燥型ＡＭＤ）、黄斑萎縮（例えば、新生血管形成及び／又は地図状萎縮に関連する萎縮）、糖尿病性網膜症、シュタルガルト病、ソースビー眼底ジストロフィー、網膜分離症及び網膜色素変性症が含まれる。

【0129】

例示的な炎症状態には、喘息（例えば、アレルギー性喘息、運動誘発性喘息、アスピリン感受性／増悪喘息、アトピー性喘息、重度喘息、軽度喘息、中等度から重度喘息、コルチコステロイド未使用喘息、慢性喘息、コルチコステロイド抵抗性喘息、コルチコステロイド難治性喘息、新たに診断された未治療の喘息、喫煙による喘息、コルチコステロイドで制御されない喘息等）、気道炎症、気道反応性亢進、気道過敏性、鼻副鼻腔炎、ポリープを伴う鼻副鼻腔炎、鼻ポリポーシス、関節炎（例えば、変形性関節症、関節リウマチ、コラーゲン誘発性関節炎、外傷による関節炎等）、好酸球性炎症、マスト細胞媒介性炎症性疾患、敗血症、敗血症性ショック、血清反応陰性の腱鞘炎及び関節症（ＳＥＡ）症候群、骨粗鬆症、好酸球性食道炎、強皮症、皮膚炎、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、水疱性類天疱瘡、慢性じん麻疹、軟骨炎、リウマチ性多発筋痛症、結節性多発動脈炎、ウェゲナー肉芽腫症、ベーチェット病、筋炎（ｍｙｏｌｉｔｉｓ）、多発性筋炎（ｐｏｌｙｍｙｏｌｉｔｉｓ）、皮膚筋炎（ｄｅｒｍａｔｏｍｙｏｌｉｔｉｓ）、皮膚筋炎、脈管炎、動脈炎、糖尿病性腎症、間質性膀胱炎、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、胃腸の炎症状態（例えば、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、クローン病（ＣＤ）、大腸炎（例えば、外界からの刺激によって引き起こされる大腸炎（例えば、化学療法、放射線療法等の治療レジメンに起因又は関連する）、感染性大腸炎、虚血性大腸炎、膠原性又はリンパ球性大腸炎、壊死性腸炎、慢性肉芽腫症やセリアック病等の状態の大腸炎、食物アレルギー、胃炎、感染性胃炎又は腸炎（例えば、ヘリコバクター・ピロリに感染した慢性活動性胃炎）、及び感染因子によって引き起こされるその他の形態の胃腸炎）、及び炎症性肺疾患（例えば、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、好酸球性肺炎症、感染誘発性肺疾患（ウイルス（インフルエンザ、パラインフルエンザ、ロタウイルス、ヒトメタニューモウイルス、及び呼吸器合胞体ウイルス等）、細菌、真菌（アスペルギルス等）、寄生虫、又はプリオン感染、アレルゲン誘発性肺疾患、汚染物質誘発性肺疾患（例えば、石綿肺症、珪肺症、又はベリリウム肺症）、胃吸引誘発性肺疾患、免疫調節不全、嚢胞性線維症等の遺伝的素因を伴う炎症状態、物理的外傷による肺疾患（人工呼吸器による損傷等）、肺気腫、気管支炎、サルコイドーシス、組織球症、リンパ管筋腫症、急性肺損傷、急性呼吸窮迫症候群、慢性肺疾患、気管支肺異形成、肺炎（例えば、市中肺炎、院内肺炎、人工呼吸器関連肺炎、ウイルス性肺炎、細菌性肺炎、重症肺炎）、気道増悪、及び急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）に関連するものを含む）が含まれる。

【0130】

例示的な免疫疾患には、マスト細胞によって少なくとも部分的に媒介されるもの、例えば、喘息（アレルギー性喘息等）、湿疹、かゆみ、アレルギー、アトピー性アレルギー、アナフィラキシー、アナフィラキシー性ショック、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、並びに関節リウマチ、若年性関節リウマチ、乾癬性関節炎、膵炎、乾癬、尋常性乾癬、滴状乾癬、逆性乾癬、膿疱性乾癬、紅皮症性乾癬、腫瘍随伴性自己免疫疾患、自己免疫性肝炎、水疱性類天疱瘡、重症筋無力症、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、セリアック病、甲状腺炎（バセドウ病等）、シェーグレン症候群、ギラン・バレー病、レイノー現象、アジソン病、肝疾患（例えば、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、非アルコール性脂肪肝疾患、及び非アルコール性脂肪性肝炎）、及び糖尿病（例えば、Ｉ型糖尿病）を含む自己免疫疾患が含まれる。
本明細書で使用される「線維性障害」及び「線維症」という用語は、臓器又は組織における過剰な線維性結合組織の形成を伴う状態を指す。例示的な線維性障害には、肺線維症、肝線維症（例えば、肝硬変（例えば、アルコール誘導性肝硬変、ウイルス誘導性肝硬変、Ｃ型肝炎後肝硬変、肝硬変、及び原発性胆汁性肝硬変）と関連する線維症、住血吸虫症、胆管炎（例えば、硬化性胆管炎）、及び自己免疫誘導性肝炎）、腎臓線維症（例えば、尿細管間質線維症、強皮症、糖尿病性腎炎、及び糸球体腎炎）、皮膚線維症（例えば、強皮症、肥厚性及びケロイド瘢痕、腎性線維化性皮膚症、並びに熱傷）、骨髄線維症、神経線維腫症、線維腫、腸管線維症、及び外科処置に起因する線維性癒着）、心臓線維症（例えば、心筋梗塞と関連する線維症）、血管線維症（例えば、血管形成術後動脈再狭窄及びアテローム性動脈硬化症と関連する線維症）、眼線維症（例えば、白内障手術後の増殖性硝子体網膜症と関連する線維症、及び後眼窩線維症）、並びに骨髄線維症（例えば、特発性骨髄線維症及び薬物誘発性骨髄線維症）が含まれる。線維症は、臓器特異性又は全身性（例えば、全身性硬化症、及びＧＶＨＤと関連する線維症）でありうる。

【0131】

肺線維症の例には、例えば、特発性肺線維症と関連する肺（ｌｕｎｇ）又は肺（ｐｕｌｍｏｎａｒｙ）線維症、膠原血管病を伴う線維症、ヘルマンスキー・パドラック症候群、成人性呼吸窮迫症候群、非特異性間質性肺炎、呼吸器細気管支炎、サルコイドーシス、ヒスチオサイトーシスＸ、閉塞性細気管支炎、及び原因不明の器質化肺炎が含まれる。一実施形態では、肺線維症は、特発性肺線維症である。

【0132】

本明細書で使用される「好酸球障害」は、身体における局所的又は全身的な好酸球のレベル又は活性に起因して非定型症状が現れうる過剰な好酸球数に関連付けられる障害である。好酸球性障害には、限定されないが、喘息（アスピリン感受性喘息、アトピー性喘息、重度喘息を含む）、好酸球性炎症、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎（季節性アレルギー性鼻炎を含む）、非アレルギー性鼻炎、慢性好酸球性肺炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、セリアック病、チャーグ・ストラウス症候群（結節性動脈周囲炎＋アトピー）、好酸球性筋肉痛症候群、好酸球増多症候群、エピソード性血管浮腫を含む浮腫反応、好酸球が保護的な役割を果たしている可能性がある蠕虫感染症、オンコセルカ皮膚炎；好酸球性食道炎、好酸球性胃炎、好酸球性胃腸炎、好酸球性腸炎及び好酸球性大腸炎を含むがこれらに限定されない好酸球関連胃腸障害（ＥＧＩＤ）、鼻微小ポリポーシス及びポリポーシス、アスピリン不耐性、及び閉塞性睡眠時無呼吸が含まれる。好酸球由来の分泌物は、腫瘍における血管新生と結合組織形成の促進、及び慢性喘息、クローン病、強皮症、心内膜線維症などの状態で見られる線維化反応にも関連している（Ｍｕｎｉｔｚ ｅｔ ａｌ．Ａｌｌｅｒｇｙ ５９：２６８－２７５，２００４；Ａｄａｍｋｏ ｅｔ ａｌ．Ａｌｌｅｒｇｙ ６０：１３－２２，２００５；Ｏｌｄｈｏｆｆ ｅｔ ａｌ．Ａｌｌｅｒｇｙ ６０：６９３－６９６，２００５）。他の例には、がん（例えば、膠芽細胞腫（多形神経膠芽腫等）及び非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ））、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、炎症性腸疾患、線維症（例えば、肺線維症（例えば、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、及び硬化症に二次的な肺線維症）及び肝線維症）、及びＣＯＰＤが含まれる。

【0133】

上記リストは包括的なものではなく、当業者であれば、疾患又は障害が種々のカテゴリーに入りうることを理解するであろう。例えば、喘息は、一部の事例では炎症障害及び免疫疾患の両方に分類されることがあり、一部の臨床医によっては自己免疫疾患であると見なされうる。

【0134】

「ＳＴ２結合アンタゴニスト」という用語は、ＳＴ２と、ＩＬ－３３、ＩＬ１ＲＡｃＰ、及び／又は第２のＳＴ２分子との相互作用を阻害する分子を指す。ＳＴ２結合アンタゴニストは、リンカー（例えば、セリン－グリセリン（ＳＧ）リンカー、グリシン－グリシン（ＧＧ）リンカー、又はこれらのバリアント（例えば、ＳＧＧ、ＧＧＳ、ＳＧＳ、又はＧＳＧリンカー））を通して直接的に又は間接的に互いに結合する、ＩＬ－３３結合ドメイン（例えば、ＳＴ２又はＩＬ１ＲＡｃＰタンパク質の全部又は一部）及び多量化ドメイン（例えば、免疫グロブリンのＦｃ部分、例えば、アイソタイプｌｇＧ１、ｌｇＧ２、ｌｇＧ３、及びｌｇＧ４、並びに各アイソタイプ群内の任意のアロタイプから選択されるＩｇＧのＦｃドメイン）を含む「ＳＴ２－Ｆｃタンパク質」等のタンパク質であってよく、これには、限定されないが、各々が参照によりその全体が本明細書に援用される国際公開第２０１３／１７３７６１号、国際公開第２０１３／１６５８９４号、及び国際公開第２０１４／１５２１９５号に記載されるＳＴ２－Ｆｃタンパク質及びこれらのバリアントが含まれる。いくつかの実施形態では、ＳＴ２結合アンタゴニストは、抗ＳＴ２抗体、例えば、アステゴリマブ、ＡＭＧ－２８２（Ａｍｇｅｎ）若しくはＳＴＬＭ１５（Ｊａｎｓｓｅｎ）、又は国際公開第２０１３／１７３７６１号及び国際公開第２０１３／１６５８９４号に記載される抗ＳＴ２抗体のいずれかでありうる。

【0135】

「単離された核酸」は、その自然環境の成分から分離された核酸分子を指す。単離された核酸は、核酸分子を通常含む細胞に含まれる核酸分子を含むが、その核酸分子は、染色体外に、又はその自然の染色体上の位置とは異なる染色体位置に存在している。

【0136】

用語「制御配列」は、特定の宿主生物中において動作可能に連結されたコード配列の発現に必要なＤＮＡ配列を指す。原核生物に適した制御配列には、例えば、プロモーター、任意選択的にオペレーター配列、及びリボソーム結合部位が含まれる。真核細胞は、プロモーター、ポリアデニル化シグナル、及びエンハンサーを利用することが知られている。

【0137】

用語「宿主細胞」、「宿主細胞株」および「宿主細胞培養物」は交換可能に使用され、外因性の核酸が導入された細胞を指し、そのような細胞の子孫を含む。宿主細胞は、「形質転換体」及び「形質転換された細胞」を含み、それには初代形質転換細胞と、継代の数に関係なくそれに由来する子孫とが含まれる。子孫は、親細胞と核酸含量が完全に同一でなくてもよく、突異を含んでいてもよい。元の形質転換細胞においてスクリーニング又は選択されたものと同じ機能又は生物活性を有する変異子孫が、本明細書に含まれる。宿主細胞は、その自然環境の成分から分離された宿主細胞を指す「単離された宿主細胞」でありうる。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、ヒト又はレート（ｒａｔｅ）由来でありうる。

【0138】

核酸は、別の核酸配列と機能的関係に置かれるとき、「作用可能に連結され」る。例えば、プレ配列又は分泌リーダーのＤＮＡは、ポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現される場合、ポリペプチドのＤＮＡに動作可能に連結されているか；プロモーター又はエンハンサーは、配列の転写に影響を与える場合、コード配列に動作可能に連結されているか；又はリボソーム結合部位は、翻訳を容易にするように配置されている場合、コード配列に動作可能に連結されている。通常、「動作可能に連結」とは、連結されるＤＮＡ配列が近接しており、分泌リーダーの場合には、近接しており且つ読み取りフェーズにあることを意味する。しかしながら、エンハンサーは必ずしも近接している必要はない。連結は、都合のよい制限部位におけるライゲーションによって達成される。そのような部位が存在しない場合、慣行に従って、合成オリゴヌクレオチドアダプター又はリンカーが使用される。

【0139】

参照ポリペプチド配列に対する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、配列をアライメントし、最大の配列同一性パーセントを達成するために必要であればギャップを導入した後、アライメントのためにいかなる保存的置換も配列同一性の一部として考慮せずに、参照ポリペプチド配列内のアミノ酸残基と同一である候補配列内のアミノ酸残基のパーセンテージと定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定するためのアライメントは、当分野の技術範囲内にある種々の方法、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、Ｃｌｕｓｔａｌ Ｗ、Ｍｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェア又はＦＡＳＴＡプログラムパッケージ等の公的に入受可能なコンピュータソフトウェアを使用して達成することができる。当業者であれば、比較される配列の完全長に対して最大の整列を達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、配列を整列させるための適切なパラメーターを決定することができる。代替的に、同一性パーセント値は、配列比較コンピュータープログラムＡＬＩＧＮ－２を使用して生成することができる。ＡＬＩＧＮ－２配列比較コンピュータープログラムはジェネンテック社によって作成されたもので、そのソースコードは、ユーザー向け文書と共に米国著作権庁（Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．，２０５５９）に提出されて、米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７の下に登録されており、国際公開第２００１／００７６１１号に記載されている。

【0140】

別途指示がない限り、本明細書における目的のために、アミノ酸配列同一性パーセントの値は、ＦＡＳＴＡパッケージバージョン３６．３．８ｃのｇｇｓｅａｒｃｈプログラムを使用して、又はその後ＢＬＯＳＵＭ５０比較行列を用いて生成される。ＦＡＳＴＡプログラムパッケージは、Ｗ．Ｒ．Ｐｅａｒｓｏｎ ａｎｄ Ｄ．Ｊ．Ｌｉｐｍａｎ（１９８８），“Ｉｍｐｒｏｖｅｄ Ｔｏｏｌｓ ｆｏｒ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ”，ＰＮＡＳ ８５：２４４４２４４８；Ｗ．Ｒ．Ｐｅａｒｓｏｎ（１９９６）“Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ”Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２６６：２２７－２５８；及びＰｅａｒｓｏｎ ｅｔ．ａｌ．（１９９７）Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ４６：２４３６によって作成され、ｗｗｗ．ｆａｓｔａ．ｂｉｏｃｈ．ｖｉｒｇｉｎｉａ．ｅｄｕ／ｆａｓｔａ＿ｗｗｗ２／ｆａｓｔａ＿ｄｏｗｎ．ｓｈｔｍｌ又はｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｓｓｓ／ｆａｓｔａ．から公的に入手可能である。代替的に、ｆａｓｔａ．ｂｉｏｃｈ．ｖｉｒｇｉｎｉａ．ｅｄｕ／ｆａｓｔａ＿ｗｗｗ２／ｉｎｄｅｘ．ｃｇｉからアクセスできるパブリックサーバーを使用し、ｇｇｓｅａｒｃｈ（ｇｌｏｂａｌｐｒｏｔｅｉｎ：ｐｒｏｔｅｉｎ）プログラム及びデフォルトオプション（ＢＬＯＳＵＭ５０；ｏｐｅｎ：－１０；ｅｘｔ：－２；Ｋｔｕｐ＝２）を使用して、ローカルではなくグローバルのアライメントを確実に実施することで、これら配列を比較することができる。アミノ酸同一性パーセントは、出力アラインメントヘッダ中に与えられる。本明細書に記載されるアミノ酸配列は、別途指定のない限り、近接したアミノ酸配列である。

【0141】

「添付文書」という用語は、診断用又は治療用製品の市販のパッケージに慣例的に含まれている説明書を指すために使用され、そのような製品の使用に関する適応症、使用法、用量、投与、併用療法、禁忌及び／又は警告に関する情報を含む。
用語「薬学的組成物」は、中に含まれる有効成分の生物活性を有効にするような形態であり、その製剤が投与されるであろう対象にとって許容できないほど毒性である追加の成分を何も含有しない調製物を指す。

【0142】

「薬学的に許容される担体」は、有効成分以外の薬学的製剤の成分であって、対象に対して非毒性である成分を指す。薬学的に許容される担体には、限定されないが、バッファー、賦形剤、安定剤又は防腐剤を含む。

【0143】

「低減する又は阻害する」とは、好ましくは２０％以上、より好ましくは５０％以上、最も好ましくは７５％、８５％、９０％、９５％、又はそれ以上の全体的な減少を引き起こす能力を意味する。低減する又は阻害するとは、治療されている障害の症状、転移の存在若しくはサイズ、及び／又は原発腫瘍のサイズに言及しうる。

【0144】

「対象」は、脊椎動物、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトである。哺乳動物には、限定されないが、家畜（例えばウシ、及びヒツジ）、競技用動物、ペット（例えばネコ、イヌ、及びウマ）、霊長類（例えば、ヒト及びサル等の非ヒト霊長類）、及びげっ歯類（例えば、マウス及びラット）が含まれる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ＩＬ－３３抗体は、対象におけるＩＬ－３３の存在又はレベル、特に、ヒト対象におけるヒトＩＬ－３３の存在又はレベルを決定するために使用される。

【0145】

「治療的有効量」という用語は、対象の疾患又は障害を治療するための、化合物（例えば、本明細書で提供される抗ＩＬ－３３軸結合アンタゴニスト、例えば、抗ＩＬ－３３抗体（抗体断片、例えばＦａｂ断片を含む）又は本明細書で提供される抗ＩＬ－３３抗体をコードする核酸）又は組成物（例えば、本明細書で提供される薬学的組成物、例えば、ＩＬ－３３軸結合アンタゴニスト、例えば抗ＩＬ－３３抗体を含む薬学的組成物）の量を指す。ＩＬ－３３媒介性障害の場合、治療的有効量のＩＬ－３３軸結合アンタゴニスト、例えば、抗体又は抗体断片（例えば、ＩＬ－３３と第２の生体分子に結合する二重特異性抗ＩＬ－３３抗体、例えば、ＩＬ－１３、例えば、二重特異性抗ＩＬ－３３抗体／抗ＩＬ－１３抗体を含む、抗ＩＬ－３３抗体）は、疾患を改善若しくは治療するか、又は疾患に関連する症状を予防、軽減、改善、若しくは治療する可能性がある。増殖性疾患（例えば、固形腫瘍）の場合、治療的有効量の抗体又は抗体断片は、細胞の数を低減する；原発腫瘍サイズを低減する；末梢臓器へのがん細胞浸潤を阻害する（すなわち、ある程度遅らせ、好ましくは停止する）；腫瘍転移を阻害する（すなわち、ある程度遅らせ、好ましくは停止する）；腫瘍増殖をある程度阻害する；及び／又は障害に関連する症状のうちの１つ又は複数をある程度軽減しうる。抗体又は抗体断片が増殖を防ぐ及び／又は既存のがん細胞を死滅させることのできる範囲で、この量は細胞分裂停止性及び／又は細胞傷害性でありうる。がん治療法の場合、ｉｎ ｖｉｖｏでの有効性は、例えば、生存期間、無増悪期間（ＴＴＰ）、無病生存期間（ＤＦＳ）、無増悪生存期間（ＰＦＳ）、奏功率（ＲＲ）、奏功期間、及び／又は生活の質を評価することにより測定することができる。

【0146】

本明細書で使用される「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」（及び「治療する（ｔｒｅａｔ）」又は「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）といったその文法的変形」）は、治療される個体の自然な経過を変える試みにおける臨床的介入を指し、予防のために、又は臨床病理の経過の間に実施することができる。治療の望ましい効果には、限定されないが、疾患の発症若しくは再発を予防すること、症状の緩和、疾患の直接的又は間接的な病理学的帰結の縮小、転移を予防すること、疾患進行の速度を低下させること、病状の改善若しくは緩和、及び寛解又は予後の改善が含まれる。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される抗体は、疾患の発症を遅延させるため又は疾患の進行を遅らせるために使用される。例えば、喘息の治療を受けた後、患者が以下の１つ又は複数の観察可能な及び／又は測定可能な低減を示すか、又はそれらの１つ若しくは複数が存在しない場合、患者は喘息の「治療」に成功しているといえる：再発性の喘鳴、咳、呼吸困難、胸の圧迫感、夜間に発生又は悪化する症状、冷たい空気、運動、又はアレルゲンへの曝露によって引き起こされる症状。

【0147】

本明細書において使用される「腫瘍」は、悪性又は良性を問わず、すべての腫瘍性細胞成長及び増殖、並びにすべての前がん性及びがん性の細胞及び組織を指す。

【0148】

本明細書で使用される用語「ベクター」は、結合している別の核酸を運搬することのできる核酸分子を指すことが意図される。ベクターの１つの種類は「プラスミド」であり、これは、さらなるＤＮＡセグメントがライゲーションされうる環状二本鎖ＤＮＡループを指す。別の種類のベクターは、ファージベクターである。別のタイプのベクターは、さらなるＤＮＡセグメントがウイルスゲノム中にライゲートされうるウイルスベクターである。一部のベクターは、それらが導入される宿主細胞内で自己複製することができる（例えば、細菌複製起点を有する細菌ベクター及びエピソーム哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞への導入時に宿主細胞のゲノムに組み込まれ、それにより、宿主ゲノムとともに複製される。さらに、一部のベクターは、それらが動作可能に連結されている遺伝子の発現を指示することができる。そのようなベクターは、本明細書では「組み換え発現ベクター」（又は単に「組み換えベクター」若しくは「発現ベクター」）と呼ばれる。一般に、組み換えＤＮＡ技術において有用な発現ベクターは、多くの場合プラスミドの形態である。本明細書において、「プラスミド」及び「ベクター」は、交換可能に使用されうる。

【0149】

用語「検出」は、直接的及び間接的な検出を含む検出する任意の手段を含む。

【0150】

「診断」という用語は、本明細書では、分子的又は病理学的状態、疾患、又は状態（例えば、ＩＬ－３３媒介性障害）の同定又は分類を指すために使用される。例えば、「診断」は、特定の種類のＩＬ－３３媒介性障害の同定を指す場合がある。「診断」は、例えば、病理組織学的基準によるか、又は分子的特徴（例えば、バイオマーカー（例えば、特定の遺伝子又は前記遺伝子によってコードされるタンパク質）の１つ又は組み合わせの発現によって特徴付けられるサブタイプ）による、特定のサブタイプのＩＬ－３３媒介性障害の分類を指す場合もある。

【0151】

「発現のレベル」、又は「発現レベル」という用語は、一般に、交換可能に使用され、概して、生物学的試料中のポリヌクレオチド、ｍＲＮＡ、又はアミノ酸生成物又はタンパク質の量を指す。「発現」は、概して、遺伝子コード情報を、細胞内に存在して動作する構造体へと転換するプロセスを指す。したがって、本発明によれば、遺伝子（ＩＬ－３３遺伝子）の「発現」は、ポリヌクレオチドへの転写、タンパク質への翻訳、又は場合によってはタンパク質の翻訳後修飾を指すことがある。転写されたポリヌクレオチド、翻訳されたタンパク質、又は翻訳後修飾されたタンパク質の断片も、選択的スプライシングにより生成された転写物、又は分解された転写物に由来するか、又は例えばタンパク質分解によるタンパク質の翻訳後プロセシングに由来するかを問わず、発現したとみなされるべきである。いくつかの実施形態では、「発現レベル」は、免疫組織化学（ＩＨＣ）、免疫ブロット法（例えば、ウエスタンブロット法）、免疫蛍光（ＩＦ）、フローサイトメトリー、例えば蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ^ＴＭ）、酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）、又は免疫ポリメラーゼ連鎖反応（ｉＰＣＲ）を含むがこれらに限定されない当技術で既知の方法又は本明細書に記載される方法を使用して決定した場合の、生物学的試料中のタンパク質（例えば、ＩＬ－３３）の量を指す。

【0152】

「発現の増加」、「発現レベルの増加」、「レベルの上昇」、「発現の増加」、「発現レベルの上昇」、又は「レベルの上昇」は、疾患若しくは障害（例えば、がん）に罹患していない１つ又は複数の個体又は内部標準（例えば、ハウスキーピングバイオマーカー）等のコントロールに対する、個体におけるバイオマーカーの発現の増加又はレベルの上昇を指す。

【0153】

「発現の減少」、「発現レベルの低下」、「レベルの低下」、「発現の低減」、「発現レベルの低減」、又は「レベルの低下」は、疾患若しくは障害（例えば、がん）に罹患していない１つ又は複数の個体又は内部標準（例えば、ハウスキーピングバイオマーカー）等のコントロールに対する、比較した個体におけるバイオマーカーの発現の減少又はレベルの低下を指す。いくつかの実施形態では、発現の減少は、発現がほとんど又はまったくないことである。

【0154】

本明細書で使用される「標識」という語は、ポリヌクレオチドプローブ等の試薬又は抗体に直接的又は間接的にコンジュゲート又は融合され、コンジュゲート又は融合される試薬の検出を容易にする化合物又は組成物を指す。標識は、それ自体が検出可能（例えば、放射性同位体標識又は蛍光標識）であってよいか、又は酵素的標識の場合、検出可能な基質化合物若しくは組成物の化学変性を触媒しうる。この用語は、検出可能な物質をプローブ又は抗体にカップリングする（すなわち、物理的に連結する）ことによるプローブ又は抗体の直接標識、並びに直接標識される別の試薬との反応性によるプローブ又は抗体の間接標識を包含することを意図している。間接標識化の例には、蛍光標識された二次抗体を使用した一次抗体の検出、及び蛍光標識されたストレプトアビジンで検出できるようにビオチンでＤＮＡプローブを末端標識することが含まれる。

【0155】

本明細書で使用される「基準試料」、「基準細胞」、「基準組織」、「基準レベル」、「コントロール試料」、「コントロール細胞」、又は「コントロール組織」は、比較目的のために使用される試料、細胞、組織、標準物、又はレベルを指す。一実施形態では、基準試料、基準細胞、基準組織、コントロール試料、コントロール細胞、又はコントロール組織は、同じ対象又は個体の身体（例えば、組織又は細胞）の健常な及び／又は非疾患性の部分から得られる。例えば、基準試料、基準細胞、基準組織、コントロール試料、コントロール細胞、又はコントロール組織は、疾患細胞又は組織に隣接する健常な及び／又は非疾患性の細胞若しくは組織（例えば、腫瘍に隣接する細胞又は組織）でありうる。別の実施形態では、基準試料は、同じ対象又は個体の身体の未処理組織及び／又は細胞から得られる。また別の実施形態では、基準試料、基準細胞、基準組織、コントロール試料、コントロール細胞、又はコントロール組織は、対象又は個体ではない個体の身体（例えば、組織又は細胞）の、健常な及び／又は非疾患性の部分から得られる。さらに別の実施形態では、基準試料、基準細胞、基準組織、コントロール試料、コントロール細胞、又はコントロール組織は、対象又は個体ではない個体の身体の未処理組織及び／又は細胞から得られる。

【0156】

ＩＩ．組成物及び方法
一態様では、本発明は、少なくとも部分的に、ＩＬ－３３に結合する改良された抗体に基づく。本明細書で提供される抗体は、特に還元された状態のＩＬ－３３（例えば、還元型ＩＬ－３３；例えば、還元型ヒトＩＬ－３３（ｈＩＬ－３３））又はインターロイキン１受容体様１に関連付けられるＩＬ－３３（ＳＴ２；例えば、可溶型ＳＴ２（ｓＳＴ２）；例えば、ヒトｓＳＴ２（ｈｓＳＴ２））への高い親和性を含め、予想外に有利な特性を有する。例えば、本明細書に開示される抗体は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、ＥＬＩＳＡ、又は免疫ポリメラーゼ連鎖反応（ｉＰＣＲ）を使用して評価した場合に、酸化型ＩＬ－３３（例えば、ｈＩＬ－３３）と実質的に同じ結合親和性（例えば、Ｋ_Ｄ）で、還元型ＩＬ－３３（例えば、ｈＩＬ－３３）に特異的に結合しうる。さらに、本明細書に開示される抗体は、ＳＰＲ、ＥＬＩＳＡ、又はｉＰＣＲを使用して評価した場合に、結合していないＩＬ－３３（例えば、ｈＩＬ－３３）と実質的に同じ結合親和性で、ＳＴ２（例えば、ｓＳＴ２又はｈｓＳＴ２）に結合したＩＬ－３３（例えば、ｈＩＬ－３３）に特異的に結合しうる。さらに、本明細書で提供される抗体は、例えば、ＳＰＲ、ＥＬＩＳＡ、又はｉＰＣＲを使用して評価した場合に、ヒト及びカニクイザル（ｃｙｎｏ）のＩＬ－３３にも高い親和性で結合する。上述の予想外に好ましい特性（還元型及び酸化型両方のＩＬ－３３とＳＴ２に結合していないＩＬ－３３及び結合したＩＬ－３３の両方への結合能を含む）は、生化学的アッセイ（例えば、高感度の生理状態におけるＩＬ－３３の存在を検出するための；例えば、ＥＬＩＳＡ又はｉＰＣＲを使用する）において、特に有利である。例えば、いずれの理論にも束縛されることを望まないが、本明細書に開示される抗体は、ナノモル未満のＫ_Ｄで生理学的に関連する形態のｈＩＬ－３３に結合しうる。

【0157】

Ａ．例示的抗ＩＬ－３３抗体
いくつかの態様では、本発明は、ＩＬ－３３に結合する単離された抗体又はその抗原結合断片を提供する。いくつかの実施形態では、本発明の抗原結合分子は、表１に示す少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、又は６つすべてのＣＤＲを含む。いくつかの事例では、抗体又はその抗原結合断片は、表１のＶＨ及び／又はＶＬを含む。いくつかの事例では、抗体は、表１に示されるＨＣ及び／又はＬＣを含む。

【0158】

表１．ＩＬ－３３に対する抗原結合分子の配列番号のリスト

【0159】

一例において、本明細書で提供されるのは、（ａ）ＳＱＮＶＨ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）ＲＭＲＦＮＧＤＴＳＹＮＳＴＬＫＳ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）ＱＲＤＮＹＧＳＹＹＦＤＤ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）ＲＡＳＥＳＶＬＴＬＬＮ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）ＬＡＳＨＬＥＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）ＱＱＳＷＩＤＰＷＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、又は上記ＣＤＲの１つ若しくは複数の組み合わせから選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、若しくは６つのＣＤＲ、及び／又は配列番号１～６のいずれか１つに対して少なくとも約８０％の配列同一性（例えば、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性）を有するそれらの１つ若しくは複数のバリアントを含む抗ＩＬ－３３抗体又はその抗原結合断片である。例えば、いくつかの事例では、抗ＩＬ－３３抗体は、（ａ）ＳＱＮＶＨ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）ＲＭＲＦＮＧＤＴＳＹＮＳＴＬＫＳ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）ＱＲＤＮＹＧＳＹＹＦＤＤ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）ＲＡＳＥＳＶＬＴＬＬＮ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）ＬＡＳＨＬＥＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）ＱＱＳＷＩＤＰＷＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又は６つのＣＤＲを含む。

【0160】

別の例において、本明細書で提供されるのは、（ａ）ＱＶＱＬＥＥＳＧＰＧＬＶＱＰＳＱＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＦＳＬＴＳＱＮＶＨＷＶＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＭＧＲＭＲＦＮＧＤＴＳＹＮＳＴＬＫＳＲＬＳＩＳＲＤＴＳＫＮＱＶＦＬＲＬＮＳＬＱＴＤＤＴＧＴＹＹＣＡＲＱＲＤＮＹＧＳＹＹＦＤＤＷＧＱＧＩＭＶＴＶＳＳ（配列番号７）のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列若しくは配列番号７の配列を有するＶＨドメイン、又は；（ｂ）ＤＴＶＬＴＱＳＰＡＬＡＶＳＰＧＥＲＶＴＩＳＣＲＡＳＥＳＶＬＴＬＬＮＷＹＱＱＫＰＧＱＨＰＫＬＬＩＹＬＡＳＨＬＥＳＧＶＰＡＲＦＳＧＲＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＤＰＶＥＡＤＤＴＡＳＹＹＣＱＱＳＷＩＤＰＷＴＦＧＧＧＴＴＬＥＬＫ（配列番号８）のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列若しくは配列番号８の配列を有するＶＬドメイン；又は（ｃ）（ａ）のＶＨドメインと（ｂ）のＶＬドメインを含む抗ＩＬ－３３抗体若しくはその抗原結合断片である。

【0161】

本明細書で提供される抗ＩＬ－３３抗体又はその抗原結合断片はいずれも、以下の重鎖フレームワーク領域：ＱＶＱＬＥＥＳＧＰＧＬＶＱＰＳＱＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＦＳＬＴ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１；ＷＶＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＭＧ（配列番号１２）アミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２；ＲＬＳＩＳＲＤＴＳＫＮＱＶＦＬＲＬＮＳＬＱＴＤＤＴＧＴＹＹＣＡＲ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３；及びＷＧＱＧＩＭＶＴＶＳＳ（配列番号１４）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４のうちの１つ、２つ、３つ、若しくは４つ、又は上記ＦＲの１つ若しくは複数の組み合わせ、及び／又は配列番号１１～１４のいずれか１つに対して少なくとも約８０％の配列同一性（例えば、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性）を有するそれらの１つ若しくは複数のバリアントを含みうる。いくつかの事例では、抗ＩＬ－３３抗体は、以下の重鎖フレームワーク領域：ＱＶＱＬＥＥＳＧＰＧＬＶＱＰＳＱＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＦＳＬＴ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１；ＷＶＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＭＧ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２；ＲＬＳＩＳＲＤＴＳＫＮＱＶＦＬＲＬＮＳＬＱＴＤＤＴＧＴＹＹＣＡＲ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３；及びＷＧＱＧＩＭＶＴＶＳＳ（配列番号１４）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４のうちの１つ、２つ、３つ、又は４つを含みうる。いくつかの実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号７のアミノ酸配列を含む。

【0162】

本明細書で提供される抗ＩＬ－３３抗体又はその抗原結合断片はいずれも、以下の軽鎖フレームワーク領域：ＤＴＶＬＴＱＳＰＡＬＡＶＳＰＧＥＲＶＴＩＳＣ（配列番号１５）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ１；ＷＹＱＱＫＰＧＱＨＰＫＬＬＩＹ（配列番号１６）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ２；ＧＶＰＡＲＦＳＧＲＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＤＰＶＥＡＤＤＴＡＳＹＹＣ（配列番号１７）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ３；及びＦＧＧＧＴＴＬＥＬＫ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ４のうちの１つ、２つ、３つ、若しくは４つ、又は上記ＦＲの１つ若しくは複数の組み合わせ、及び／又は配列番号１５～１８のいずれか１つに対して少なくとも約８０％の配列同一性（例えば、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性）を有するそれらの１つ若しくは複数のバリアントを含みうる。いくつかの事例では、抗ＩＬ－３３抗体は、以下の軽鎖フレームワーク領域：ＤＴＶＬＴＱＳＰＡＬＡＶＳＰＧＥＲＶＴＩＳＣ（配列番号１５）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ１；ＷＹＱＱＫＰＧＱＨＰＫＬＬＩＹ（配列番号１６）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ２；ＧＶＰＡＲＦＳＧＲＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＤＰＶＥＡＤＤＴＡＳＹＹＣ（配列番号１７）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ３；及びＦＧＧＧＴＴＬＥＬＫ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ４のうちの１つ、２つ、３つ、又は４つを含みうる。いくつかの事例では、ＶＬドメインは、配列番号８のアミノ酸配列を含む。

【0163】

別の例において、本明細書で提供されるのは、（ａ）ＱＶＱＬＥＥＳＧＰＧＬＶＱＰＳＱＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＦＳＬＴＳＱＮＶＨＷＶＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＭＧＲＭＲＦＮＧＤＴＳＹＮＳＴＬＫＳＲＬＳＩＳＲＤＴＳＫＮＱＶＦＬＲＬＮＳＬＱＴＤＤＴＧＴＹＹＣＡＲＱＲＤＮＹＧＳＹＹＦＤＤＷＧＱＧＩＭＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号９）のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、若しくは配列番号９の配列を含む重鎖（ＨＣ）；（ｂ）ＤＴＶＬＴＱＳＰＡＬＡＶＳＰＧＥＲＶＴＩＳＣＲＡＳＥＳＶＬＴＬＬＮＷＹＱＱＫＰＧＱＨＰＫＬＬＩＹＬＡＳＨＬＥＳＧＶＰＡＲＦＳＧＲＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＤＰＶＥＡＤＤＴＡＳＹＹＣＱＱＳＷＩＤＰＷＴＦＧＧＧＴＴＬＥＬＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１０）のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、若しくは配列番号１０の配列を含む軽鎖（ＬＣ）；又は（ｃ）（ａ）のＨＣと（ｂ）のＬＣを含む抗ＩＬ－３３抗体である。

【0164】

例えば、抗ＩＬ－３３抗体は、（ａ）ＳＱＮＶＨ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）ＲＭＲＦＮＧＤＴＳＹＮＳＴＬＫＳ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）ＱＲＤＮＹＧＳＹＹＦＤＤ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）ＲＡＳＥＳＶＬＴＬＬＮ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）ＬＡＳＨＬＥＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）ＱＱＳＷＩＤＰＷＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含みうる。いくつかの事例では、抗ＩＬ－３３抗体は、（ａ）配列番号７に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、若しくは配列番号７の配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；（ｂ）配列番号８に対して少なくとも９０％の配列（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、若しくは配列番号８の配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン；又は（ｃ）（ａ）のＶＨドメインと（ｂ）のＶＬドメインを含む。いくつかの事例では、抗ＩＬ－３３抗体は、以下の重鎖フレームワーク領域：ＱＶＱＬＥＥＳＧＰＧＬＶＱＰＳＱＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＦＳＬＴ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１；ＷＶＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＭＧ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２；ＲＬＳＩＳＲＤＴＳＫＮＱＶＦＬＲＬＮＳＬＱＴＤＤＴＧＴＹＹＣＡＲ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３；及びＷＧＱＧＩＭＶＴＶＳＳ（配列番号１４）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４を含む。いくつかの事例では、抗ＩＬ－３３抗体は、以下の軽鎖フレームワーク：ＤＴＶＬＴＱＳＰＡＬＡＶＳＰＧＥＲＶＴＩＳＣ（配列番号１５）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ１；ＷＹＱＱＫＰＧＱＨＰＫＬＬＩＹ（配列番号１６）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ２；ＧＶＰＡＲＦＳＧＲＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＤＰＶＥＡＤＤＴＡＳＹＹＣ（配列番号１７）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ３；及びＦＧＧＧＴＴＬＥＬＫ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ４領域を含む。いくつかの事例では、抗ＩＬ－３３抗体は、（ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む結合ドメインを含む。いくつかの事例では、例示的な抗ＩＬ－３３抗体は、３Ｆ１０である。

【0165】

例えば、本明細書で提供されるのは、ＩＬ－３３に特異的に結合する単離された抗体、又はその抗原結合断片であり、この抗体は、（ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの事例では、例示的な抗ＩＬ－３３抗体は、３Ｆ１０である。

【0166】

別の例において、本明細書で提供されるのは、ＩＬ－３３に特異的に結合する単離された抗体、又はその抗原結合断片であり、この抗体は、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）及び（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖（ＬＣ）を含む。いくつかの事例では、例示的な抗ＩＬ－３３抗体は、３Ｆ１０である。

【0167】

一例において、本明細書で提供されるのは、（ａ）ＤＦＷＭＳ（配列番号１９）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）ＤＩＫＮＤＧＳＨＴＫＹＡＰＳＬＱＮ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）ＶＧＧＴＹＴＡＹＹ（配列番号２１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）ＲＴＳＱＧＩＮＴＹＬＮ（配列番号２２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）ＹＴＳＮＬＥＳ（配列番号２３）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）ＱＱＹＡＳＳＰＷＴ（配列番号２４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、若しくは６つのＣＤＲ、又は上記ＣＤＲの１つ若しくは複数の組み合わせ及び／又は配列番号１９～２４のいずれか１つに対して少なくとも約８０％の配列同一性（例えば、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性）を有するそれらの１つ若しくは複数のバリアントを含む抗ＩＬ－３３抗体又はその抗原結合断片である。例えば、いくつかの事例では、抗ＩＬ－３３抗体は、（ａ）ＤＦＷＭＳ（配列番号１９）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）ＤＩＫＮＤＧＳＨＴＫＹＡＰＳＬＱＮ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）ＶＧＧＴＹＴＡＹＹ（配列番号２１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）ＲＴＳＱＧＩＮＴＹＬＮ（配列番号２２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）ＹＴＳＮＬＥＳ（配列番号２３）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）ＱＱＹＡＳＳＰＷＴ（配列番号２４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又は６つのＣＤＲを含む。

【0168】

別の例において、本明細書で提供されるのは、（ａ）ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＴＳＬＫＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳＤＦＷＭＳＷＶＲＱＴＰＧＫＴＭＥＷＩＡＤＩＫＮＤＧＳＨＴＫＹＡＰＳＬＱＮＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＥＶＴＤＶＲＳＥＤＴＡＴＹＹＣＴＲＶＧＧＴＹＴＡＹＹＷＧＨＧＶＭＶＴＶＳＳ（配列番号２５）のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列若しくは配列番号２５の配列を有するＶＨドメイン、又は；（ｂ）ＤＩＱＭＴＱＴＰＳＳＭＰＡＳＬＧＥＲＶＴＬＳＣＲＴＳＱＧＩＮＴＹＬＮＷＹＱＱＫＰＤＧＴＩＴＰＬＩＨＹＴＳＮＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＦＧＴＤＹＦＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＭＹＦＣＱＱＹＡＳＳＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＬＫ（配列番号２６）のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列若しくは配列番号２６の配列を有するＶＬドメイン；又は（ｃ）（ａ）のＶＨドメインと（ｂ）のＶＬドメインを含む抗ＩＬ－３３抗体又はその抗原結合断片である。

【0169】

本明細書で提供される抗ＩＬ－３３抗体又はその抗原結合断片はいずれも、以下の重鎖フレームワーク領域：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＴＳＬＫＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号２９）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１；ＷＶＲＱＴＰＧＫＴＭＥＷＩ（配列番号３０）アミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２；ＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＥＶＴＤＶＲＳＥＤＴＡＴＹＹＣＴＲ（配列番号３１）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３；及びＷＧＨＧＶＭＶＴＶＳＳ（配列番号３２）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４のうちの１つ、２つ、３つ、若しくは４つ、又は上記ＦＲの１つ若しくは複数の組み合わせ、及び／又は配列番号２９～３２のいずれか１つに対して少なくとも約８０％の配列同一性（例えば、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性）を有するそれらの１つ若しくは複数のバリアントを含みうる。いくつかの事例では、抗ＩＬ－３３抗体は、以下の重鎖フレームワーク領域：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＴＳＬＫＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号２９）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１；ＷＶＲＱＴＰＧＫＴＭＥＷＩ（配列番号３０）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２；ＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＥＶＴＤＶＲＳＥＤＴＡＴＹＹＣＴＲ（配列番号３１）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３；及びＷＧＨＧＶＭＶＴＶＳＳ（配列番号３２）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４のうちの１つ、２つ、３つ、又は４つを含みうる。いくつかの実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号２５のアミノ酸配列を含む。

【0170】

本明細書で提供される抗ＩＬ－３３抗体又はその抗原結合断片はいずれも、以下の軽鎖フレームワーク領域：ＤＩＱＭＴＱＴＰＳＳＭＰＡＳＬＧＥＲＶＴＬＳＣ（配列番号３３）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ１；ＷＹＱＱＫＰＤＧＴＩＴＰＬＩＨ（配列番号３４）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ２；ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＦＧＴＤＹＦＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＭＹＦＣ（配列番号３５）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ３；及びＦＧＧＧＴＫＬＥＬＫ（配列番号３６）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ４のうちの１つ、２つ、３つ、若しくは４つ、又は上記ＦＲの１つ若しくは複数の組み合わせ、及び／又は配列番号３３～３６のいずれか１つに対して少なくとも約８０％の配列同一性（例えば、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性）を有するそれらの１つ若しくは複数のバリアントを含みうる。いくつかの事例では、抗ＩＬ－３３抗体は、以下の軽鎖フレームワーク領域：ＤＩＱＭＴＱＴＰＳＳＭＰＡＳＬＧＥＲＶＴＬＳＣ（配列番号３３）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ１；ＷＹＱＱＫＰＤＧＴＩＴＰＬＩＨ（配列番号３４）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ２；ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＦＧＴＤＹＦＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＭＹＦＣ（配列番号３５）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ３；及びＦＧＧＧＴＫＬＥＬＫ（配列番号３６）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ４のうちの１つ、２つ、３つ、又は４つを含みうる。いくつかの事例では、ＶＬドメインは、配列番号２６のアミノ酸配列を含む。

【0171】

別の例において、本明細書で提供されるのは、（ａ）ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＴＳＬＫＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳＤＦＷＭＳＷＶＲＱＴＰＧＫＴＭＥＷＩＡＤＩＫＮＤＧＳＨＴＫＹＡＰＳＬＱＮＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＥＶＴＤＶＲＳＥＤＴＡＴＹＹＣＴＲＶＧＧＴＹＴＡＹＹＷＧＨＧＶＭＶＴＶＳＳＡＥＴＴＡＰＳＶＹＰＬＡＰＧＴＡＬＫＳＮＳＭＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹＦＰＥＰＶＴＶＴＷＮＳＧＡＬＳＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＧＬＹＴＬＴＳＳＶＴＶＰＳＳＴＷＳＳＱＡＶＴＣＮＶＡＨＰＡＳＳＴＫＶＤＫＫＩＶＰＲＥＣＮＰＣＧＣＴＧＳＥＶＳＳＶＦＩＦＰＰＫＴＫＤＶＬＴＩＴＬＴＰＫＶＴＣＶＶＶＤＩＳＱＮＤＰＥＶＲＦＳＷＦＩＤＤＶＥＶＨＴＡＱＴＨＡＰＥＫＱＳＮＳＴＬＲＳＶＳＥＬＰＩＶＨＲＤＷＬＮＧＫＴＦＫＣＫＶＮＳＧＡＦＰＡＰＩＥＫＳＩＳＫＰＥＧＴＰＲＧＰＱＶＹＴＭＡＰＰＫＥＥＭＴＱＳＱＶＳＩＴＣＭＶＫＧＦＹＰＰＤＩＹＴＥＷＫＭＮＧＱＰＱＥＮＹＫＮＴＰＰＴＭＤＴＤＧＳＹＦＬＹＳＫＬＮＶＫＫＥＴＷＱＱＧＮＴＦＴＣＳＶＬＨＥＧＬＨＮＨＨＴＥＫＳＬＳＨＳＰＧＫ（配列番号２７）のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、若しくは配列番号２７の配列を含む重鎖（ＨＣ）；（ｂ）ＤＩＱＭＴＱＴＰＳＳＭＰＡＳＬＧＥＲＶＴＬＳＣＲＴＳＱＧＩＮＴＹＬＮＷＹＱＱＫＰＤＧＴＩＴＰＬＩＨＹＴＳＮＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＦＧＴＤＹＦＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＭＹＦＣＱＱＹＡＳＳＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＬＫＫＲＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰＳＭＥＱＬＴＳＧＧＡＴＶＶＣＦＶＮＮＦＹＰＲＤＩＳＶＫＷＫＩＤＧＳＥＱＲＤＧＶＬＤＳＶＴＤＱＤＳＫＤＳＴＹＳＭＳＳＴＬＳＬＴＫＶＥＹＥＲＨＮＬＹＴＣＥＶＶＨＫＴＳＳＳＰＶＶＫＳＦＮＲＮＥＣ（配列番号２８）のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、若しくは配列番号２８の配列を含む軽鎖（ＬＣ）；又は（ｃ）（ａ）のＨＣと（ｂ）のＬＣを含む抗ＩＬ－３３抗体である。

【0172】

例えば、抗ＩＬ－３３抗体は、（ａ）ＤＦＷＭＳ（配列番号１９）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）ＤＩＫＮＤＧＳＨＴＫＹＡＰＳＬＱＮ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）ＶＧＧＴＹＴＡＹＹ（配列番号２１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）ＲＴＳＱＧＩＮＴＹＬＮ（配列番号２２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）ＹＴＳＮＬＥＳ（配列番号２３）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）ＱＱＹＡＳＳＰＷＴ（配列番号２４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含みうる。いくつかの事例では、抗ＩＬ－３３抗体は、（ａ）配列番号２５に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、若しくは配列番号２５の配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；（ｂ）配列番号２６に対して少なくとも９０％の配列（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、若しくは配列番号２６の配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン；又は（ｃ）（ａ）のＶＨドメインと（ｂ）のＶＬドメインを含む。いくつかの事例では、抗ＩＬ－３３抗体は、以下の重鎖フレームワーク領域：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＴＳＬＫＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号２９）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１；ＷＶＲＱＴＰＧＫＴＭＥＷＩ（配列番号３０）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２；ＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＥＶＴＤＶＲＳＥＤＴＡＴＹＹＣＴＲ（配列番号３１）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３；及びＷＧＨＧＶＭＶＴＶＳＳ（配列番号３２）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４を含む。いくつかの事例では、抗ＩＬ－３３抗体は、以下の軽鎖フレームワーク領域：ＤＩＱＭＴＱＴＰＳＳＭＰＡＳＬＧＥＲＶＴＬＳＣ（配列番号３３）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ１；ＷＹＱＱＫＰＤＧＴＩＴＰＬＩＨ（配列番号３４）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ２；ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＦＧＴＤＹＦＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＭＹＦＣ（配列番号３５）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ３；及びＦＧＧＧＴＫＬＥＬＫ（配列番号３６）のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ４を含む。いくつかの事例では、抗ＩＬ－３３抗体は、（ａ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む結合ドメインを含む。いくつかの事例では、例示的な抗ＩＬ－３３抗体は、１５．２１Ｃ７である。

【0173】

例えば、本明細書で提供されるのは、ＩＬ－３３に特異的に結合する単離された抗体、又はその抗原結合断片であり、この抗体は、（ａ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの事例では、例示的な抗ＩＬ－３３抗体は、１５．２１Ｃ７である。

【0174】

別の例において、本明細書で提供されるのは、ＩＬ－３３に特異的に結合する単離された抗体、又はその抗原結合断片であり、この抗体は、（ａ）配列番号２７のアミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）及び（ｂ）配列番号２８のアミノ酸配列を含む軽鎖（ＬＣ）を含む。いくつかの事例では、例示的な抗ＩＬ－３３抗体は、１５．２１Ｃ７である。

【0175】

本明細書で提供される抗体はいずれも、酸化された状態にあるＩＬ－３３（例えば、酸化型ＩＬ－３３）又は還元された状態にあるＩＬ－３３（例えば、還元型ＩＬ－３３）に特異的に結合しうる。いくつかの事例では、抗体は、還元型Ｌ－３３に特異的に結合する。一部の事例では、本明細書で提供される抗ＩＬ－３３抗体は、酸化型ＩＬ－３３及び還元型ＩＬ－３３に、２倍以内（例えば、１．５倍以内又は１倍以内）のＫ_Ｄで結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、酸化型ＩＬ－３３及び還元型ＩＬ－３３に、実質的に同じＫ_Ｄで結合する。いくつかの事例では、抗体は、還元型ＩＬ－３３に結合する。いくつかの事例では、抗体は、還元型ＩＬ－３３に、≦１ｎＭのＫ_Ｄで結合する。いくつかの事例では、抗体は、還元型ＩＬ－３３に、０．０１ｎＭと１ｎＭとの間（例えば、０．０１と０．９ｎＭとの間、０．０１と０．８ｎＭとの間、０．０１と０．７ｎＭとの間、０．０１と０．６ｎＭとの間、０．０１と０．５ｎＭとの間、０．０５と０．９ｎＭとの間、０．１と０．９ｎＭとの間、０．２と０．９ｎＭとの間、０．３と０．９ｎＭとの間、０．２と０．６ｎＭとの間、０．３と０．５ｎＭとの間、０．３と０．４ｎＭ、又は０．４と０．５ｎＭとの間；例えば、約０．０５ｎＭ、約０．１ｎＭ、約０．２ｎＭ、約０．３ｎＭ、約０．３２５ｎＭ、約０．３４ｎＭ、約０．３５ｎＭ、約０．４ｎＭ、約０．４５ｎＭ、約０．４７５ｎＭ、約０．４９ｎＭ、約０．５ｎＭ、約０．６ｎＭ、約０．７ｎＭ、約０．８ｎＭ、約０．９ｎＭ、又は約１ｎＭ）のＫ_Ｄで結合する。いくつかの事例では、抗体は、還元型ＩＬ－３３に、Ｋ_Ｄ≦０．５ｎＭで結合する。一部の事例では、抗体は、還元型ＩＬ－３３に、０．１ｎＭと０．５ｎＭとの間（例えば、０．２と０．５ｎＭとの間、０．３ｎＭと０．５ｎＭとの間、０．３ｎＭと０．４ｎＭとの間、又は０．４ｎＭと０．５ｎＭとの間）のＫ_Ｄで結合する。一部の事例では、抗体は、還元型ＩＬ－３３に、約０．４８７ｎＭのＫ_Ｄで結合する。一部の事例では、抗体は、還元型ＩＬ－３３に、約０．３３８ｎＭのＫ_Ｄで結合する。前述のＫ_Ｄ値はいずれも、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定されうる（例えば、実施例１及び２を参照）。

【0176】

本明細書で提供される抗体はいずれも、ヒト又はカニクイザル（ｃｙｎｏ）ＩＬ－３３に特異的に結合しうる。いくつかの事例では、抗体は、ヒトＩＬ－３３に特異的に結合する。いくつかの事例では、抗体は、ヒトＩＬ－３３に、Ｋ_Ｄ≦１ｎＭで結合する。いくつかの事例では、抗体は、ヒトＩＬ－３３に、０．０１ｎＭと１ｎＭとの間（例えば、０．０１と０．９ｎＭとの間、０．０１と０．８ｎＭとの間、０．０１と０．７ｎＭとの間、０．０１と０．６ｎＭとの間、０．０１と０．５ｎＭとの間、０．０５と０．９ｎＭとの間、０．１と０．９ｎＭとの間、０．２と０．９ｎＭとの間、０．３と０．９ｎＭとの間、０．２と０．６ｎＭとの間、０．３と０．５ｎＭとの間、０．３と０．４ｎＭ、又は０．４と０．５ｎＭとの間；例えば、約０．０５ｎＭ、約０．１ｎＭ、約０．２ｎＭ、約０．３ｎＭ、約０．３２５ｎＭ、約０．３４ｎＭ、約０．３５ｎＭ、約０．４ｎＭ、約０．４５ｎＭ、約０．４７５ｎＭ、約０．４９ｎＭ、約０．５ｎＭ、約０．６ｎＭ、約０．７ｎＭ、約０．８ｎＭ、約０．９ｎＭ、又は約１ｎＭ）のＫ_Ｄで結合する。いくつかの事例では、抗体は、ヒトＩＬ－３３に、Ｋ_Ｄ≦０．５ｎＭで結合する。一部の事例では、抗体は、ヒトＩＬ－３３に、０．１ｎＭと０．５ｎＭとの間（例えば、０．２と０．５ｎＭとの間、０．３ｎＭと０．５ｎＭとの間、０．３ｎＭと０．４ｎＭとの間、又は０．４ｎＭと０．５ｎＭとの間）のＫ_Ｄで結合する。一部の事例では、抗体は、ヒトＩＬ－３３に、約０．４８７ｎＭのＫ_Ｄで結合する。一部の事例では、抗体は、ヒトＩＬ－３３に、約０．３３８ｎＭのＫ_Ｄで結合する。前述のＫ_Ｄ値はいずれも、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定されうる（例えば、実施例１及び２を参照）。

【0177】

いくつかの実施形態では、抗体は、可溶型インターロイキン１受容体様１（ｓＳＴ２）タンパク質に結合したＩＬ－３３及びｓＳＴ２に結合していないＩＬ－３３に、２倍以内（例えば、１．５倍以内又は１倍以内）のＫ_Ｄで結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、ｓＳＴ２タンパク質に結合したＩＬ－３３に、ｓＳＴ２に結合していないＩＬ－３３と実質的に同じＫ_Ｄで結合する。いくつかの実施形態では、ｓＳＴ２は、ヒトｓＳＴ２（ｈｓＳＴ２）である。いくつかの事例では、抗体は、ｓＳＴ２タンパク質（例えば、ｈｓＳＴ２）に結合したＩＬ－３３に、Ｋ_Ｄ≦１ｎＭで結合する。いくつかの事例では、抗体は、ｓＳＴ２（例えば、ｈｓＳＴ２）タンパク質に結合したＩＬ－３３に、０．０１ｎＭと１ｎＭとの間（例えば、０．０１と０．９ｎＭとの間、０．０１と０．８ｎＭとの間、０．０１と０．７ｎＭとの間、０．０１と０．６ｎＭとの間、０．０１と０．５ｎＭとの間、０．０５と０．９ｎＭとの間、０．１と０．９ｎＭとの間、０．２と０．９ｎＭとの間、０．３と０．９ｎＭとの間、０．２と０．６ｎＭとの間、０．３と０．５ｎＭとの間、０．３と０．４ｎＭ、又は０．４と０．５ｎＭとの間；例えば、約０．０５ｎＭ、約０．１ｎＭ、約０．２ｎＭ、約０．３ｎＭ、約０．３２５ｎＭ、約０．３４ｎＭ、約０．３５ｎＭ、約０．４ｎＭ、約０．４５ｎＭ、約０．４７５ｎＭ、約０．４９ｎＭ、約０．５ｎＭ、約０．６ｎＭ、約０．７ｎＭ、約０．８ｎＭ、約０．９ｎＭ、又は約１ｎＭ）のＫ_Ｄで結合する。いくつかの事例では、抗体は、ｓＳＴ２タンパク質（例えば、ｈｓＳＴ２）に結合したＩＬ－３３に、Ｋ_Ｄ≦０．５ｎＭで結合する。一部の事例では、抗体は、ｓＳＴ２（例えば、ｈｓＳＴ２）タンパク質に結合したＩＬ－３３に、０．１ｎＭと０．５ｎＭとの間（例えば、０．２と０．５ｎＭとの間、０．３ｎＭと０．５ｎＭとの間、０．３ｎＭと０．４ｎＭ、又は０．４ｎＭと０．５ｎＭとの間）のＫ_Ｄで結合する。一部の事例では、抗体は、ｓＳＴ２（例えば、ｈｓＳＴ２）タンパク質に結合したＩＬ－３３に、約０．４８７ｎＭのＫ_Ｄで結合する。一部の事例では、抗体は、ｓＳＴ２（例えば、ｈｓＳＴ２）タンパク質に結合したＩＬ－３３に、約０．３３８ｎＭのＫ_Ｄで結合する。

【0178】

いくつかの事例では、本明細書に記載される（例えば、上述又は後述の）抗ＩＬ－３３抗体はいずれも、以下の特徴の１つ又は複数（例えば、１つ、２つ、又は３つ）を有しうる：（ｉ）抗体は、ヒトＩＬ－３３に、約０．１ｎＭと０．５ｎＭとの間のＫ_Ｄで特異的に結合する；（ｉｉ）抗体は、還元型ＩＬ－３３に、約０．１ｎＭと約０．５ｎＭとの間のＫ_Ｄで特異的に結合する；及び／又は（ｉｉｉ）抗体は、ｓＳＴ２（例えば、ｈｓＳＴ２）タンパク質に結合したＩＬ－３３に、約０．１ｎＭと０．５ｎＭとの間のＫ_Ｄで特異的に結合する。いくつかの事例では、本明細書に記載される抗ＩＬ－３３抗体はいずれも、前述の特徴のうちの１つを有しうる。いくつかの事例では、本明細書に記載される抗ＩＬ－３３抗体はいずれも、前述の特徴のうちの２つを有しうる。いくつかの事例では、本明細書に記載される抗ＩＬ－３３抗体はいずれも、前述の特徴のうちの３つすべてを有しうる。

【0179】

本明細書で提供される抗ＩＬ－３３抗体はいずれも、キメラ、ヒト化、又はヒト抗体を含むモノクローナル抗体でありうる。いくつかの事例では、抗ＩＬ－３３抗体は、モノクローナル抗体である。いくつかの実例では、抗ＩＬ－３３抗体は、キメラ抗体である。いくつかの事例では、抗ＩＬ－３３抗体は、ヒト化抗体である。いくつかの実例では、抗ＩＬ－３３抗体は、ラット抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ－３３抗体は、ＩｇＧ抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ１である。いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ２ａ抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、ラットＩｇＧ２ａ抗体である。

【0180】

本明細書で提供される抗ＩＬ－３３抗体はいずれも、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、又はＦ（ａｂ’）_２断片でありうる。特定の事例では、抗体断片は、Ｆａｂ断片である。いくつかの事例では、抗体断片は、ＩＬ－３３（例えば、ｈＩＬ－３３；例えば、還元型ＩＬ－３３；例えば、ＳＴ２に結合したＩＬ－３３）に特異的に結合する。

【0181】

他の事例では、本明細書で提供される抗ＩＬ－３３抗体はいずれも、完全長抗体、例えば、インタクトなＩｇＧ１抗体、インタクトなＩｇＧ４抗体、又は本明細書で定義される他の抗体クラス若しくはアイソタイプでありうる。いくつかの事例では、抗体は、ヒンジ領域に変異を含むＩｇＧ４抗体である。いくつかの事例では、変異は、置換変異である。いくつかの事例では、置換変異は、アミノ酸残基Ｓ２２８（ＥＵ番号付け）におけるものである。いくつかの事例では、置換変異は、Ｓ２２８Ｐ変異である。

【0182】

本明細書で提供される抗ＩＬ－３３抗体はいずれも、単一特異性抗体でありうる。他の事例では、本明細書で提供される抗ＩＬ－３３抗体はいずれも、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）でありうる。

【0183】

別の形態では、本発明は、前述の抗体のうちのいずれか１つと同じＩＬ－３３のエピトープに結合する抗体である。

【0184】

別の態様では、本明細書で提供されるのは、ＩＬ－３３（例えば、ヒトＩＬ－３３）への結合について前述の抗体のうちのいずれか１つと競合するか、又は前述の抗体のうちのいずれか１つをクロスブロックするか、又は前述の抗体のうちのいずれか１つによってクロスブロックされる抗体である。

【0185】

さらなる態様では、本明細書に開示される抗ＩＬ－３３抗体はいずれも、以下のセクション１～７に記載の特徴のいずれかを、単独で又は組み合わせて組み込むことができる：

【0186】

１．抗体親和性
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、≦１ｐＭ、又は≦０．１ｐＭ（例えば、１０^－６Ｍ以下、例えば、１０^－６Ｍから１０^－９Ｍ以下、例えば、１０^－９Ｍから１０^－１３Ｍ以下）の解離定数（Ｋ_Ｄ）を有する。いくつかの事例では、抗体は、ＩＬ－３３に、１ｎＭのＫ_Ｄで特異的に結合する。いくつかの事例では、抗体は、ＩＬ－３３に、０．０１ｎＭと１ｎＭとの間（例えば、０．０１と０．９ｎＭとの間、０．０１と０．９ｎＭとの間、０．０１と０．８ｎＭとの間、０．０１と０．７ｎＭとの間、０．０１と０．６ｎＭとの間、０．０１と０．５ｎＭとの間、０．０５と０．９ｎＭとの間、０．１と０．９ｎＭとの間、０．２と０．９ｎＭとの間、０．３と０．９ｎＭとの間、０．２と０．６ｎＭとの間、０．３と０．５ｎＭとの間、０．３と０．４ｎＭ、又は０．４と０．５ｎＭとの間；例えば、約０．０５ｎＭ、約０．１ｎＭ、約０．２ｎＭ、約０．３ｎＭ、約０．３２５ｎＭ、約０．３４ｎＭ、約０．３５ｎＭ、約０．４ｎＭ、約０．４５ｎＭ、約０．４７５ｎＭ、約０．４９ｎＭ、約０．５ｎＭ、約０．６ｎＭ、約０．７ｎＭ、約０．８ｎＭ、約０．９ｎＭ、又は約１ｎＭ）のＫ_Ｄで結合する。いくつかの事例では、抗体は、ＩＬ－３３に、≦０．５ｎＭのＫ_Ｄで特異的に結合する。一部の事例では、抗体は、ＩＬ－３３に、０．１ｎＭと０．５ｎＭとの間（例えば、０．２と０．５ｎＭとの間、０．３ｎＭと０．５ｎＭとの間、０．３ｎＭと０．４ｎＭとの間、又は０．４ｎＭと０．５ｎＭとの間）のＫ_Ｄで結合する。一部の事例では、抗体は、ＩＬ－３３に、約０．４８７ｎＭのＫ_Ｄで結合する。一部の事例では、抗体は、ＩＬ－３３に、約０．３３８ｎＭのＫ_Ｄで結合する。

【0187】

一実施形態では、Ｋ_Ｄは、放射標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって測定される。一実施形態では、ＲＩＡは、目的の抗体のＦａｂバージョン及びその抗原を用いて実施される。例えば、抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性は、非標識抗原の滴定系列の存在下で、最小濃度の（^１２５Ｉ）標識抗原によりＦａｂを平衡化し、次いで、結合した抗原を抗Ｆａｂ抗体でコーティングしたプレートで捕捉することにより測定される（例えば、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５－８８１，１９９９を参照されたい）。アッセイのための条件を確立するために、ＭＩＣＲＯＴＩＴＥＲ（登録商標）マルチウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、５０ｍＭの炭酸ナトリウム（ｐＨ９．６）中５μｇ／ｍＬの捕捉用抗Ｆａｂ抗体（Ｃａｐｐｅｌ Ｌａｂｓ）で一晩コーティングし、その後室温（およそ２３℃）で２から５時間ＰＢＳ中２％（ｗ／ｖ）のウシ血清アルブミンでブロックする。非吸着性プレート（ＮＵＮＣ^ＴＭ＃２６９６２０）中で、１００ｐＭ又は２６ｐＭの［^１２５Ｉ］－抗原を、目的のＦａｂの段階希釈物と混合する（例えば、Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５７：４５９３－４５９９，１９９７における抗ＶＥＧＦ抗体Ｆａｂ－１２の評価と一致する）。次いで目的のＦａｂを一晩インキュベートするが、平衡に達することを確実にするために、インキュベーションはより長い期間（例えば、約６５時間）継続してもよい。その後、混合物を捕捉プレートに移し、室温で（例えば１時間）インキュベートする。次いで、溶液を除去し、プレートを、ＰＢＳ中０．１％のポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）－２０）で８回洗浄する。プレートが乾燥したら、１５０μＬ／ウェルの閃光物質（ＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ－２０^ＴＭ、Ｐａｃｋａｒｄ）を加え、ＴＯＰＣＯＵＮＴ^ＴＭガンマ計数器（Ｐａｃｋａｒｄ）でプレートを１０分間計数する。最大結合の２０％以下をもたらす各Ｆａｂの濃度を、競合結合アッセイにおける使用のために選択する。

【0188】

別の実施形態によれば、Ｋ_Ｄは、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）表面プラズモン共鳴アッセイを使用して測定される。特定の実施形態では、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）８Ｋ装置（Ｃｙｔｉｖａ，Ｍａｒｌｂｏｒｏｕｇｈ，ＭＡ，ＵＳＡ）を使用して抗ｈＩＬ－３３ Ａｂｓの組み換えキメラヒトＩｇＧバージョンを捕捉するために、Ｓｅｒｉｅｓ ＳプロテインＡセンサーチップ（Ｃｙｔｉｖａ、Ｍａｒｌｂｏｒｏｕｇｈ，ＭＡ，ＵＳＡ）を使用した。ヒトヒスチジンタグｈＩＬ－３３（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）に結合する抗体は、マルチサイクルカイネティクスを使用して測定した。センサーグラムは、２５℃又は３７℃において３０μＬ／分の流量で２分間の注入時間を使用し、１０ｍＭのＮ－２－ヒドロキシエチルピペラジン－Ｎ’－２－エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）（ｐＨ７．４）、１５０ｍＭの塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、３ｍＭのエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、及び０．００５％のＴＷＥＥＮ（登録商標）２０のランニングバッファーを用いて記録した。注入後、抗体からのＩＬ－３３の解離を、ランニングバッファー中で１０分間モニタリングした。表面は、結合サイクルの間に、１０ｍＭのグリシン塩酸（ＨＣｌ）ｐＨ１．５を３０μ注入して再生した。ランニングバッファーのみを含むブランクの減算後、会合センサーグラムと解離センサーグラムを同時にフィッティングすることによる単純一対一ラングミュア結合モデル（ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅバージョン３．２）を使用して、会合速度（ｋ_ｏｎ）及び解離速度（ｋ_ｏｆｆ）を計算する。平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）は、ｋ_ｏｆｆ／ｋ_ｏｎ比として計算される。例えば、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５－８８１，１９９９）を参照のこと。

【0189】

２．抗体断片
本明細書で提供される抗体はいずれも、抗体断片（例えば、抗原結合（例えば、ＩＬ－３３結合）抗体断片）でありうる。抗体断片には、限定されないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ、及びｓｃＦｖ断片、並びに後述の他の断片が含まれる。一部の事例では、抗体断片は、Ｆａｂである。一部の抗体断片の総説については、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４（２００３）を参照のこと。ｓｃＦｖ断片の総説については、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３、Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．，（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ），ｐｐ．２６９－３１５（１９９４）を参照されたい。国際公開第９３／１６１８５号、及び米国特許第５５７１８９４号及び同第５５８７４５８号も参照のこと。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、延長されたｉｎ ｖｉｖｏ半減期を有するＦａｂ及びＦ（ａｂ’）_２断片の説明については、米国特許第５，８６９，０４６号を参照のこと。

【0190】

ダイアボディは、二価又は二重特異性でありうる２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、ＥＰ４０４０９７；国際公開第１９９３／０１１６１号；Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４，２００３；及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４－６４４８，１９９３を参照のこと。トリアボディ及びテトラボディは、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４，２００３にも記載されている。

【0191】

単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全部若しくは一部又は抗体の軽鎖可変ドメインの全部若しくは一部を含む抗体断片である。一部の実施形態では、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（例えば、米国特許第６，２４８，５１６号を参照のこと）。

【0192】

抗体断片は、本明細書に記載の組み換え宿主細胞（例えば、大腸菌又はファージ）による生成だけでなく、インタクトな抗体のタンパク質消化を含むがこれらに限定されない種々の技術により作製することができる。

【0193】

３．キメラ及びヒト化抗体
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、キメラ抗体である。一部のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号、及びＭｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１－６８５５，１９８４）に記載されている。一例では、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、又はサル等の非ヒト霊長類から得られる可変領域）と、ヒト定常領域とを含む。さらなる例では、キメラ抗体は、クラス又はサブクラスが親抗体のそれらから変更されている「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体には、その抗原結合断片が含まれる。

【0194】

一部の実施形態では、キメラ抗体は、ヒト化抗体である。典型的には、非ヒト抗体は、ヒトに対する免疫原性を低減するために、親の非ヒト抗体の特異性と親和性を保持したままヒト化される。一般的に、ヒト化抗体は、ＨＶＲ（又はその一部分）が非ヒト抗体から得られ、ＦＲ（又はその一部分）がヒト抗体配列から得られた１つ又は複数の可変ドメインを含む。ヒト化抗体は、場合によってはヒト定常領域の少なくとも一部分も含むであろう。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体中のＦＲ残基は、例えば、抗体特異性又は親和性を回復又は向上させるために、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基を得た抗体）に由来する対応する残基で置換される。

【0195】

ヒト化抗体及びその作製方法については、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ｅｔ ａｌ．Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９－１６３３，２００８に総説があり、さらに例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２９，１９８８；Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：１００２９－１００３３，１９８９；米国特許第５，８２１，３３７号、同第７，５２７，７９１号、同第６，９８２，３２１号、及び同第７，０８７，４０９号；Ｋａｓｈｍｉｒｉ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：２５－３４，２００５（特異性決定領域（ＳＤＲ）移植について記載）；Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９－４９８，１９９１（リサーフェシングについて記載）；Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：４３－６０，２００５（「ＦＲシャッフリング」について記載）；並びにＯｓｂｏｕｒｎ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：６１－６８，２００５及びＫｌｉｍｋａ ｅｔ ａｌ．Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，８３：２５２－２６０，２０００（ＦＲシャッフリングの「ガイド付き選択」アプローチについて記載）に記載されている。

【0196】

ヒト化のために使用されうるヒトフレームワーク領域には、限定されないが：「ベストフィット」法を使用して選択されたフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６，１９９３参照）；軽鎖又は重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列から得られたフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５，１９９２；及びＰｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３，１９９３）参照）；ヒト成熟（体細胞変異）フレームワーク領域又はヒト生殖細胞フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ｅｔ ａｌ．Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９－１６３３，２００８参照）；並びにＦＲライブラリーのスクリーニングから得られたフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８－１０６８４，１９９７及びＲｏｓｏｋ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１－２２６１８，１９９６参照）が含まれる。

【0197】

４．ヒト抗体
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当技術分野において既知の様々な技術を用いて生産することができる。ヒト抗体は、一般的に、ｖａｎ Ｄｉｊｋ ｅｔ ａｌ．Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８－７４，２００１ ａｎｄ Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０－４５９，２００８に記載されている。

【0198】

ヒト抗体は、抗原曝露に応答してヒト可変領域を有するインタクトな抗体又はインタクトなヒト抗体を生成するように修飾されたトランスジェニック動物に、免疫原を投与することによって調製されうる。このような動物は、典型的には、内因性免疫グロブリン遺伝子座を置き換えるか、又は染色体外に存在するか若しくは動物の染色体にランダムに統合されるヒト免疫グロブリン遺伝子座の全部又は一部を含む。このようなトランスジェニックマウスでは、内因性免疫グロブリン遺伝子座は、通常不活性化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の総説については、Ｌｏｎｂｅｒｇ、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３：１１１７－１１２５，２００５を参照のこと。例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ^ＴＭ技術を記載する米国特許第６，０７５，１８１号及び同第６，１５０，５８４号；ＨＵＭＡＢ（登録商標）技術を記載する米国特許第５，７７０，４２９号；Ｋ－Ｍ ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載する米国特許第７，０４１，８７０号；及び、ＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ^ＴＭ技術を記載する米国特許出願公開第２００７／００６１９００号も参照のこと。このような動物によって生成されたインタクトな抗体由来のヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることによって、さらに修飾されてもよい。

【0199】

ヒト抗体は、ハイブリドーマに基づく方法によって作製することもできる。ヒトモノクローナル抗体の生成のためのヒト骨髄腫細胞株及びマウス－ヒト異種骨髄腫細胞株が記載されている。（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３３：３００１，１９８４；Ｂｒｏｄｅｕｒ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１－６３（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７）；及びＢｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：８６，１９９１を参照のこと）。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して生成されたヒト抗体も、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：３５５７－３５６２，２００６に記載されている。さらなる方法には、例えば、米国特許第７，１８９，８２６号（ハイブリドーマ細胞株由来のモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の生産について記載）及びＮｉ、Ｘｉａｎｄａｉ Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ、２６（４）：２６５－２６８，２００６（ヒト－ヒトハイブリドーマについて記載）に記載されるものが含まれる。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）はまた、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ ｅｔ ａｌ．Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ ２０（３）：９２７－９３７，２００５及びＶｏｌｌｍｅｒｓ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ２７（３）：１８５－９１，２００５にも記載されている。

【0200】

ヒト抗体は、ヒトから得られたファージディスプレイライブラリーから選択されるＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することによっても作製されうる。そのような可変ドメイン配列は次いで、所望のヒト定常ドメインと組み合わせられうる。抗体ライブラリーからヒト抗体を選択するための技術は以下に記載される。

【0201】

５．ライブラリー由来の抗体
本明細書中に開示される抗体は、所望の１つ以上の活性を有する抗体についてコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることによって単離されうる。例えば、ファージディスプレイライブラリーを生成し、所望の結合特性を有する抗体についてこのようなライブラリーをスクリーニングするための様々な方法が当技術分野で知られている。そのような方法については、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１－３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００１）に概説があり、例えばＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２－５５４，１９９０；Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－６２８，１９９１；Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１－５９７，１９９２；Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２４８：１６１－１７５（Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３）；Ｓｉｄｈｕ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９－３１０，２００４；Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３－１０９３，２００４；Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０１（３４）：１２４６７－１２４７２，２００４；及びＬｅｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８４（１－２）：１１９－１３２，２００４にさらに記載されている。

【0202】

一部のファージディスプレイ法では、ＶＨ及びＶＬ遺伝子のレパートリーが、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって別々にクローニングされ、ファージライブラリー中でランダムに組み合わせ直され、それらは次いでＷｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２：４３３－４５５，１９９４に記載されているように抗原結合ファージについてスクリーニングすることができる。ファージは、典型的には、抗体断片を、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片又はＦａｂ断片として表示する。免疫化された供給源からのライブラリーは、ハイブリドーマを構築する必要なしに、免疫原に対して高親和性の抗体を提供する。代替的に、ナイーブレパートリーを、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ ｅｔ ａｌ．ＥＭＢＯ Ｊ．１２：７２５－７３４，１９９３によって記載されているように、免疫化を行わずに、広範囲の非自己抗原及びさらには自己抗原に対する抗体の単一の供給源を提供するために、（例えば、ヒトから）クローン化することができる。最後に、ナイーブライブラリーは、幹細胞から再配列されていないＶ遺伝子セグメントをクローニングすることにより、ランダムな配列を含むＰＣＲプライマーを使用して、高度に可変性のＨＶＲ３領域をコードし、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１－３８８，１９９２に記載されているように、インビトロで再配列を達成することによって、合成的に作製することもできる。ヒト抗体ファージライブラリーについて記載する特許公報には、例えば：米国特許第５，７５０，３７３号、並びに米国特許出願公開第２００５／００７９５７４号、同第２００５／０１１９４５５号、同第２００５／０２６６０００号、同第２００７／０１１７１２６号、同第２００７／０１６０５９８号、同第２００７／０２３７７６４号、同第２００７／０２９２９３６号、及び同第２００９／０００２３６０号が含まれる。

【0203】

ヒト抗体ライブラリーから単離された抗体又は抗体断片は、本明細書ではヒト抗体又はヒト抗体断片とみなされる。

【0204】

６．多重特異性抗体
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体である。多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる部位に対して結合特異性を有するモノクローナル抗体である。一部の実施形態では、二重特異性抗体は、ＩＬ－３３の２つの異なるエピトープに結合することができる。一部の実施形態では、結合特異性の１つはＩＬ－３３に対してであり、他は他のいずれかの抗原に対してである。二重特異性抗体は、完全長抗体又は抗体断片として調製することができる。

【0205】

多重特異性抗体を作製するための技術には、限定されないが、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖－軽鎖対の組み換え共発現（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ３０５：５３７，１９８３；国際公開第９３／０８８２９号、及びＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ．ＥＭＢＯ Ｊ．１０：３６５５，１９９１を参照されたい）、及び「ノブ・イン・ホール」操作（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号を参照されたい）が含まれる。多重特異性抗体は、抗体Ｆｃヘテロ二量体分子を作製するための静電ステアリング効果の操作（国際公開第２００９／０８９００４号）；２つ以上の抗体又は断片の架橋（例えば、米国特許第４，６７６，９８０号、及びＢｒｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１，１９８５を参照）；二重特異性抗体を生成するためのロイシンジッパーの使用（例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）：１５４７－１５５３，１９９２を参照）；二重特異性抗体断片を作製するための「ダイアボディ」技術の使用（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４－６４４８，１９９３を参照）；及び一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体の使用（例えば、Ｇｒｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：５３６８，１９９４を参照）；及び例えば、Ｔｕｔｔ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０，１９９１に記載される三重特異性抗体の調製によっても作製されうる。

【0206】

「オクトパス抗体」を含む、３つ以上の機能性抗原結合部位を持つ操作された抗体も、本明細書に含まれる（例えば、米国特許出願公開第２００６／００２５５７６号を参照）。

【0207】

本明細書の抗体又は断片はまた、ＩＬ－３３並びに別の異なる抗原（例えば、米国特許出願公開第２００８／００６９８２０号参照）に結合する抗原結合部位を含む、「二重作用性 ＦＡｂ」又は「ＤＡＦ」を含む。

【0208】

多重特異性抗体を生成する方法としてのノブ・イントゥー・ホールの使用は、例えば、米国特許第５，７３１，１６８号、国際公開第２００９／０８９００４号、米国特許出願公開第２００９／０１８２１２７号、米国特許出願公開第２０１１／０２８７００９号、Ｍａｒｖｉｎ ａｎｄ Ｚｈｕ，Ａｃｔａ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｉｎ．（２００５）２６（６）：６４９－６５８、及びＫｏｎｔｅｒｍａｎｎ（２００５）Ａｃｔａ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｉｎ．，２６：１－９に記載されている。

【0209】

７．抗体バリアント
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体のアミノ酸配列バリアントが企図される。例えば、抗体の結合親和性及び／又は他の生物学的特性を改善することが望まれる。抗体のアミノ酸配列バリアントは、抗体をコードするヌクレオチド配列に適切な修飾を導入することにより、又はペプチド合成により、調製することができる。このような修飾には、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基からの欠失、並びに／又は同残基への挿入及び／若しくは同残基の置換が含まれる。最終コンストラクトが所望の特性、例えば、抗原結合を有していることを条件として、欠失、挿入、及び置換の任意の組み合わせを、最終構築物に到達させるために作製することができる。

【0210】

ａ）置換、挿入、及び欠失バリアント
一部の実施形態では、１つ又は複数のアミノ酸置換を有する抗体バリアントが提供される。置換変異誘発の対象部位には、ＨＶＲ及びＦＲが含まれる。保存的置換は、「好ましい置換」と題して表２に示す。より実質的な変更は、「例示的置換」と題して表２に示し、アミノ酸側鎖のクラスを参照して下記にさらに説明される。アミノ酸置換は、目的の抗体に導入することができ、所望の活性、例えば、抗原結合の保持／改善、免疫原性の低下、又はＡＤＣＣ若しくはＣＤＣの改善についてスクリーニングされうる。

【0211】

表２．例示的なアミノ酸置換

【0212】

アミノ酸は、以下の共通の側鎖特性に従ってグループ化することができる。
（１）疎水性：Ｎｏｒｌｅｕｃｉｎｅ、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性の親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響する残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ
非保存的置換は、これらのクラスの１つのメンバーを別のクラスに交換することを必要とするであろう。

【0213】

ある種類の置換バリアントは、親抗体（例えば、ヒト化抗体又はヒト抗体）の１つ又は複数のＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）残基を置換することを伴う。一般的に、結果として得られ、さらなる研究のために選択された１つ以上のバリアントは、親抗体と比較して、特定の生物学的特性の改変（例えば改善）（例えば、親和性の向上、免疫原性の低下）を有する、及び／又は親抗体の特定の生物学的特性を実質的に保持するであろう。例示的な置換型変異体は、親和性成熟抗体であり、例えば、本明細書に記載されるようなファージディスプレイに基づく親和性成熟技術を用いて、簡便に生成される。簡潔に言えば、１つ又は複数のＨＶＲ残基が変異し、変異体抗体は、ファージ上に表示され、特定の生物活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。

【0214】

抗体親和性を向上させるために、ＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）において変更（例えば、置換）が行われてもよい。そのような変更は、ＨＶＲ「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟プロセス中に高頻度で変異を受けるコドンによってコードされる残基（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０７：１７９－１９６，２００８を参照）、及び／又は抗原と接触する残基内で行うことができ、結果として得られるバリアントＶＨ又はＶＬが結合親和性について試験される。二次ライブラリーから構築して選択し直すことによる親和性成熟が、例えばＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１－３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００１）に記載されている。親和性成熟のいくつかの実施形態では、多様性が、様々な方法（例えばエラープローンＰＣＲ、鎖シャッフリング、又はオリゴヌクレオチド指定突然変異誘発）のいずれかにより、成熟のために選択された可変遺伝子に導入される。次いで、二次ライブラリーが生成される。次いで、このライブラリーは、所望の親和性を持つ任意の抗体バリアントを同定するためにスクリーニングされる。多様性を導入する別の方法は、複数のＨＶＲ残基（例えば、一度に４～６個の残基）がランダム化されるＨＶＲ指向性の手法（ＨＶＲ－ｄｉｒｅｃｔｅｄ ａｐｐｒｏａｃｈ）を伴う。抗原結合に関与するＨＶＲ残基は、例えばアラニンスキャニング変異誘発又はモデリングを使用して、特異的に同定することができる。特に、ＨＶＲ－Ｈ３及びＨＶＲ－Ｌ３が多くの場合標的とされる。

【0215】

一部の実施形態では、置換、挿入、又は欠失は、そのような変更が抗原への抗体の結合能力を実質的に低下させない限り、１つ又は複数のＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）内で生じうる。例えば、実質的に結合親和性を低下させない保存的変更（例えば、本明細書で提供される保存的置換）をＨＶＲ内で行うことができる。このような変更は、例えば、ＨＶＲ内の残基に接触する抗原の外側で生じうる。上記に提供される変異ＶＨ及びＶＬ配列の一部の実施形態では、各ＨＶＲは変化しないか、又は１つ、２つ若しくは３つ以下のアミノ酸置換を含む。

【0216】

突然変異誘発の標的となりうる抗体の残基又は領域を同定するための有用な方法は、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：１０８１－１０８５，１９８９に記載されるように、「アラニンスキャニング突然変異誘発」と呼ばれる。この方法では、抗体と抗原との相互作用が影響を受けるかどうかを決定するために、残基又は標的残基群（例えば、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ及びＧｌｕ等の荷電残基）が同定され、中性の又は負に荷電したアミノ酸（例えば、Ａｌａ又はポリアラニン）によって置き換えられる。さらなる置換が、最初の置換に対する機能的感受性を示すアミノ酸の位置に導入されてもよい。代替的に又は追加的には、抗体と抗原との接点を特定するための抗原－抗体複合体の結晶構造。そのような接触残基及び隣接残基は、置換の候補として標的とされうるか又は排除されうる。バリアントは、所望の特性を含むかどうかを判定するためにスクリーニングされうる。

【0217】

アミノ酸配列挿入には、１個の残基から１００個以上の残基を含むポリペプチドまでの長さの範囲のアミノ末端及び／又はカルボキシル末端融合、並びに単一又は複数のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。末端挿入物の例には、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が含まれる。抗体分子の他の挿入バリアントは、抗体の血清半減期を延ばす酵素（例えば、ＡＤＥＰＴのための）又はポリペプチドに対する抗体のＮ末端又はＣ末端への融合物を含む。

【0218】

ｂ）グリコシル化バリアント
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、抗体がグリコシル化される程度を増加又は減少させるように変更される。抗体へのグリコシル化部位の付加又は削除は、１又は複数のグリコシル化部位が生成又は除去されるようにアミノ酸配列を変更することにより、簡便に達成することができる。

【0219】

抗体がＦｃ領域を含む場合、それに付着する糖質を変更することができる。哺乳動物細胞によって生成される天然抗体は、通常Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７へのＮ結合により付着した分岐状の二分岐オリゴ糖を典型的に含む。例えば、Ｗｒｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ．ＴＩＢＴＥＣＨ １５：２６－３２，１９９７を参照のこと。オリゴ糖には、種々の糖質、例えば、マンノース、Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、及びシアル酸、並びに二分岐オリゴ糖構造の「幹」のＧｌｃＮＡｃに付着したフコースが含まれうる。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される抗体におけるオリゴ糖の修飾は、特定の改善された特性を有する抗体バリアントを生成するために行われうる。

【0220】

一実施形態では、抗体バリアントは、Ｆｃ領域に（直接的に又は間接的に）付着するフコースを欠く糖鎖構造を有して提供される。例えば、このような抗体中のフコースの量は、１％から８０％、１％から６５％、５％から６５％、又は２０％から４０％であってもよい。フコースの量は、例えば国際公開第２００８／０７７５４６号に記載されているように、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ質量分析によって測定されるＡｓｎ２９７に付着するすべての糖構造体（例えば複合体、ハイブリッド、及び高マンノース構造）の合計に対するＡｓｎ２９７の糖鎖内のフコースの平均量を計算することによって決定される。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域内のおよそ２９７位（Ｆｃ領域残基のＥｕ番号付け）に位置するアスパラギン残基を指すが、Ａｓｎ２９７は、抗体のわずかな配列差異に起因して、２９７位から約±３アミノ酸上流又は下流に、すなわち２９４位から３００位に位置する場合もある。このようなフコシル化バリアントは、改善されたＡＤＣＣ機能を有しうる。例えば、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号及び同第２００４／００９３６２１号を参照されたい。「脱フコシル化」又は「フコース欠損」抗体バリアントに関する刊行物の例には：米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号；国際公開第２０００／６１７３９号；同第２００１／２９２４６号；米国特許出願公開第２００３／０１１５６１４号；同第２００２／０１６４３２８号；同第２００４／００９３６２１号；同第２００４／０１３２１４０号；同第２００４／０１１０７０４号；同第２００４／０１１０２８２号；同第２００４／０１０９８６５号；国際公開第２００３／０８５１１９号；同第２００３／０８４５７０号；同第２００５／０３５５８６号；同第２００５／０３５７７８号；同第２００５／０５３７４２号；同第２００２／０３１１４０号；Ｏｋａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９－１２４９，２００４；Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４，２００４が含まれる。脱フコシル化抗体を生成することのできる細胞株の例には、タンパク質フコシル化が欠損しているＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ ｅｔ ａｌ．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３－５４５，１９８６；米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号；及び国際公開第２００４／０５６３１２号、特に実施例１１）及びノックアウト細胞株、例えばアルファ－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子ＦＵＴ８ノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４，２００４；Ｋａｎｄａ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．９４（４）：６８０－６８８，２００６；及び国際公開第２００３／０８５１０７号を参照）が含まれる。

【0221】

例えば、抗体のＦｃ領域に付着した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃによって二分されている、二分されたオリゴ糖を有する抗体バリアントがさらに提供さ与される。そのような抗体バリアントは、低下したフコシル化及び／又は改善されたＡＤＣＣ機能を有しうる。そのような抗体バリアントの例は、例えば、国際公開第２００３／０１１８７８号；米国特許第６，６０２，６８４号；及び米国特許出願公開第２００５／０１２３５４６号に記載されている。Ｆｃ領域に付着したオリゴ糖中に少なくとも１つのガラクトース残基を持つ抗体バリアントも提供される。このような抗体バリアントは、改善されたＣＤＣの機能を有しうる。このような抗体バリアントは、例えば、国際公開第１９９７／３００８７号；同第１９９８／５８９６４号；及び同第１９９９／２２７６４号に記載されている。

【0222】

ｃ）Ｆｃ領域バリアント
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体のＦｃ領域に１つ又は複数のアミノ酸修飾を導入し、それによりＦｃ領域バリアントを生成することができる。Ｆｃ領域バリアントは、１つ又は複数のアミノ酸位置におけるアミノ酸修飾（例えば、置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４ Ｆｃ領域）を含みうる。

【0223】

一部の実施形態では、本発明は、ｉｎ ｖｉｖｏにおける抗体の半減期が重要であるが、ある種のエフェクター機能（例えば補体及びＡＤＣＣ）が不要又は有害である用途のための望ましい候補とならしめるエフェクター機能を、全部ではないがいくつかの有する抗体バリアントを意図している。ｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏ細胞傷害性アッセイを実施して、ＣＤＣ及び／又はＡＤＣＣの活性の低下／枯渇を確認することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを実施して、抗体がＦｃγＲ結合を欠く（したがって恐らくはＡＤＣＣ活性を欠く）が、ＦｃＲｎ結合能を保持していることを確認することができる。ＡＤＣＣを媒介する主要な細胞であるＮＫ細胞がＦｃγＲＩＩＩのみを発現するのに対し、単球はＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞上のＦｃＲの発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ ｅｔ ａｌ．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７－４９２，１９９１の４６４頁の表３に要約されている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５，５００，３６２号（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８３：７０５９－７０６３，１９８６及びＨｅｌｌｓｔｒｏｍ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：１４９９－１５０２，１９８５を参照）；米国特許第５，８２１，３３７号（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：１３５１－１３６１、１９８７を参照）に記載されている。あるいは、非放射性アッセイ法が用いられてもよい（例えば、フローサイトメトリーのためのＡＣＴＩ^ＴＭ非放射性細胞傷害性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ）；及びＣｙｔｏＴｏｘ ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ））。このようなアッセイに有用なエフェクター細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む。代替的に又は追加的に、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９５：６５２－６５６，１９９８に開示されているように、動物モデルにおいて ｉｎ ｖｉｖｏで評価することができる。Ｃ１ｑ結合アッセイは、抗体がＣ１ｑに結合できないこと、したがってＣＤＣ活性を欠くことを確認するために行うこともできる。例えば、国際公開第２００６／０２９８７９号及び同第２００５／１００４０２号のＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照されたい。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを実施することができる（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ－Ｓａｎｔｏｒｏ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２：１６３，１９９６；Ｃｒａｇｇ ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ １０１：１０４５－１０５２，２００３；及びＣｒａｇｇ ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ １０３：２７３８－２７４３，２００４を参照のこと）。ＦｃＲｎ結合及びｉｎ ｖｉｖｏでのクリアランス／半減期の決定はまた、当技術分野で知られている方法を使用して実施することができる（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ ｅｔ ａｌ．Ｉｎｔｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（１２）：１７５９－１７６９，２００６を参照のこと）。

【0224】

エフェクター機能が低下した抗体には、Ｆｃ領域残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７及び３２９の１つ又は複数の置換を伴うものが含まれる（米国特許第６７３７０５６号）。そのようなＦｃ変異体は、残基２６５及び２９７のアラニンへの置換を有するいわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ変異体を含め、アミノ酸位置２６５、２６９、２７０、２９７及び３２７のうちの２つ以上に置換を有するＦｃ変異体を含む（米国特許第７，３３２，５８１号）。

【0225】

ＦｃＲへの結合が改善又は減少した特定の抗体バリアントが記載されている。（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号；国際公開第２００４／０５６３１２号，及びＳｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１－６６０４，２００１を参照のこと）。

【0226】

一部の実施形態では、抗体バリアントは、ＡＤＣＣを改善する１つ又は複数のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の２９８位、３３３位，及び／又は３３４位（残基のＥＵ番号付け）における置換を有するＦｃ領域を含む。

【0227】

いくつかの実施形態では、例えば、米国特許第６，１９４，５５１号、国際公開第９９／５１６４２号、及びＩｄｕｓｏｇｉｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８－４１８４，２０００に記載されるように、変更された（すなわち、改善されたか又は減少した）Ｃ１ｑ結合及び／又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）をもたらす変更が、Ｆｃ領域において行われる。

【0228】

半減期が増加し、母体ＩｇＧの胎児への移行を担う新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合が改善された抗体（Ｇｕｙｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７，１９７６及びＫｉｍ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９，１９９４）は、米国特許出願公開第２００５／００１４９３４号に記載されている。これら抗体は、ＦｃＲｎへのＦｃ領域の結合を改善する１つ又は複数の置換を有するＦｃ領域を含む。このようなＦｃバリアントには、２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４又は４３４の１つ又は複数における置換、例えば、Ｆｃ領域残基４３４の置換が含まれる（米国特許第７，３７１，８２６号）。

【0229】

Ｆｃ領域バリアントの他の例に関しては、Ｄｕｎｃａｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ３２２：７３８－４０，１９８８；米国特許第５，６４８，２６０号、米国特許第５，６２４，８２１号、及び国際公開第９４／２９３５１号も参照のこと。

【0230】

ｄ）システイン操作抗体バリアント
一部の実施形態では、抗体の１つ又は複数の残基がシステイン残基で置換されているシステイン操作抗体、例えば、「ｔｈｉｏＭＡｂ」を生成することが望ましい場合がある。特定の実施形態では、置換される残基が抗体のアクセス可能な部位で生じる。これら残基をシステインで置換することにより、反応性チオール基は、それによって抗体のアクセス可能な部位に配置され、本明細書でさらに記載するように、薬物部分又はリンカー－薬物部分等の他の部分に抗体をコンジュゲートして、イムノコンジュゲートを生成するために使用されうる。一部の実施形態では、以下の残基の１つ又は複数がシステインで置換されうる：軽鎖のＶ２０５（Ｋａｂａｔ番号付け）；重鎖のＡ１１８（ＥＵ番号付け）；及び重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵ番号付け）。システイン操作抗体は、例えば、米国特許第７５２１５４１号に記載されるように生成されうる。

【0231】

ｅ）抗体誘導体
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、当技術分野で知られ、容易に入手可能な追加の非タンパク質部分を含むようにさらに修飾されうる。抗体の誘導体化に適した部分には、限定されないが、水溶性ポリマーが含まれる。水溶性ポリマーの非限定的な例には、限定されないが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ－１，３－ジオキソラン、ポリ－１，３，６－トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマー又はランダムコポリマー）、及びデキストラン又はポリ（ｎ－ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、及びこれらの混合物が含まれる。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中のその安定性に起因して、製造時に有利でありうる。ポリマーは、任意の分子量であってよく、分岐でも、非分岐でもよい。抗体に結合するポリマーの数は変化してもよく、複数のポリマーが結合する場合、それらは同じ分子でも異なる分子でもよい。一般に、誘導体化のために使用されるポリマーの数及び／又は種類は、改善されるべき抗体の特定の特性又は機能、その抗体誘導体が限定条件下での治療に使用されるかどうかを含むがそれらに限定されない考慮事項に基づいて決定することができる。

【0232】

別の実施形態では、放射線への曝露によって選択的に加熱されうる非タンパク質部分と抗体とのコンジュゲートが提供される。一実施形態では、非タンパク質部分はカーボンナノチューブである（Ｋａｍ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０２：１１６００－１１６０５，２００５）。放射線は、任意の波長であってよく、通常の細胞に害を与えないが抗体－非タンパク質部分の近位細胞が死滅する温度に非タンパク質部分を加熱する波長を含むがこれに限定されない。

【0233】

Ｂ．組み換え方法及び組成物
本明細書に記載される抗体のうちのいずれか（例えば、抗ＩＬ－３３抗体）は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に記載されている組み換え方法及び組成物を使用して生成されうる。一実施形態では、本明細書に記載される抗ＩＬ－３３抗体をコードする単離された核酸、又は一緒に同抗体をコードする一組の核酸が提供される。このような核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列、及び／又は抗体のＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖及び／又は重鎖）をコードしうる。さらなる実施形態では、このような核酸を含む１つ又は複数のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。さらなる実施形態では、１つ以上のこのような核酸を含む宿主細胞が提供される。一実施形態では、宿主細胞は、（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、又は（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクターと抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２のベクターを含む（例えば、同ベクターで形質転換されている）。一実施形態では、宿主細胞は、真核細胞、例えば、ラット細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、２９３細胞、又はリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。一実施形態では、抗ＩＬ－３３抗体を作製する方法が提供され、この方法は、上述のように、抗体の発現に適した条件下で、抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を培養することと、任意選択的に、宿主細胞（又は宿主細胞培地）から抗体を回収することとを含む。

【0234】

抗ＩＬ－３３抗体の組み換え生成のために、抗体をコードする核酸、又は一緒に抗体をコードする一組の核酸が、例えば上述のように単離され、宿主細胞内でのさらなるクローニング及び／又は発現のために、１つ又は複数のベクターに挿入される。このような核酸は、容易に単離することができ、一般的な手順を使用して（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することのできるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）配列決定することができる。

【0235】

抗体コード化ベクターのクローニング又は発現のために適した宿主細胞には、本明細書に記載される原核細胞又は真核細胞が含まれる。例えば、抗体は、特にグリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要でない場合、細菌内で生成されうる。細菌中の抗体断片及びポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号、同第５，７８９，１９９号、及び同第５，８４０，５２３号を参照のこと。（また、大腸菌中の抗体断片の発現について記載するＣｈａｒｌｔｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３），ｐｐ．２４５－２５４も参照されたい）。発現の後、抗体を、可溶性画分中の細菌細胞ペーストから単離し、さらに精製することができる。

【0236】

原核生物に加えて、糸状菌又は酵母等の真核微生物は、抗体をコードするベクターの適切なクローニング又は発現宿主であり、それには、グリコシル化経路が「ヒト化」された真菌及び酵母株が含まれ、その結果、部分的又は完全にヒトのグリコシル化パターンを有する抗体が生成される。Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９－１４１４，２００４及びＬｉ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０－２１５，２００６を参照のこと。

【0237】

グリコシル化抗体の発現に適した宿主細胞は、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）からも得られる。無脊椎動物細胞の例には、植物細胞及び昆虫細胞が含まれる。昆虫細胞と組み合わせて、特にスポドプテラ・フルギペルダヨトウガ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）細胞のトランスフェクションに使用されうる多数のバキュロウイルス株が同定された。

【0238】

植物細胞培養物も、宿主として利用することができる。例えば、米国特許第５９５９１７７号、第６０４０４９８号、第６４２０５４８号、第７１２５９７８号、及び第６４１７４２９号（トランスジェニック植物において抗体を生成するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ^ＴＭ技術について記載）を参照のこと。

【0239】

脊椎動物細胞も、宿主として使用されうる。例えば、懸濁液中で成長するように適合された哺乳動物細胞株は有用でありうる。有用な哺乳動物宿主細胞株の他の例は、ＳＶ４０（ＣＯＳ－７）により形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株；ヒト胚腎臓株（例えば、Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６：５９，１９７７）に記載された２９３細胞又は２９３細胞）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）；マウスのセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３－２５１，１９８０に記載されるＴＭ４細胞）；サル腎細胞（ＣＶ１）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６）；ヒト子宮頚癌細胞（ＨＥＬＡ）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ）；バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ ３Ａ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝細胞（ＨｅｐＧ２）；マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ０６０５６２）；例えばＭａｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４－６８，１９８２に記載されるＴＲＩ細胞；ＭＲＣ５細胞；及びＦＳ４細胞である。エラー! ブックマークが定義されていません。エラー! ブックマークが定義されていません。 他の有用な哺乳動物宿主細胞株には、ＤＨＦＲ^－ＣＨＯ細胞を含むチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（Ｕｒｌａｕｂ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６，１９８０）；及びＹ０、ＮＳ０及びＳｐ２／０などの骨髄腫細胞株が含まれる。抗体生成に適した特定の哺乳動物宿主細胞株の総説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ），ｐｐ．２５５－２６８，２００３を参照のこと。

【0240】

Ｃ．アッセイ
本明細書で提供される抗ＩＬ－３３抗体は、当技術分野で既知の種々のアッセイによってその物理的／化学的性質及び／又は生物活性について同定、スクリーニング又は特徴付けされうる。

【0241】

１．結合アッセイ及びその他のアッセイ
一態様では、本明細書に開示される抗ＩＬ－３３抗体は、例えば、ＥＬＩＳＡ、及びウェスタンブロット等の既知の方法によって、その抗原結合活性について試験される。

【0242】

例示的なＥＬＩＳＡアッセイでは、第１の固定化された抗ＩＬ－３３抗体又はイムノコンジュゲートが、ＩＬ－３３（例えば、還元型ＩＬ－３３又はＳＴ２に結合したＩＬ－３３）を含む溶液中でインキュベートされる。第１の抗体又はイムノコンジュゲートのＩＬ－３３（例えば、還元型ＩＬ－３３又はＳＴ２に結合したＩＬ－３３）に対する結合を可能にする条件下でのインキュベーション後、余分な結合していないＩＬ－３３が除去される。第２の、ビオチン化された抗ｈＩＬ－３３抗体又はイムノコンジュゲートを含有する溶液が加えられ、第１の固定化された抗ＩＬ－３３抗体又はイムノコンジュゲート及び結合したＩＬ－３３（例えば、還元型ＩＬ－３３又はＳＴ２に結合したＩＬ－３３）と共にインキュベートされる。次いで結合した還元型ｈＩＬ－３３が、読み出しを使用して検出される（例えば、ホースラディッシュペルオキシダーゼにコンジュゲートしたストレプトアビジン（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，ＰＡ，ＵＳＡ）及びその基質３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジン（Ｍｏｓｓ Ｉｎｃ．，Ｐａｓａｄｅｎａ，ＭＤ，ＵＳＡ）で）。

【0243】

別の態様では、結合アッセイは、標的分子（例えば、標的生体分子、例えば、タンパク質）の存在又はレベルが抗体－ＤＮＡコンジュゲートによって検出されるアッセイであるｉＰＣＲを含む。いくつかの実施形態では、ｉＰＣＲアッセイは、ビオチンにコンジュゲートした第１の抗体及び核酸部分にコンジュゲートした第２の抗体を使用し、第１及び第２の抗体は、同じ標的抗原に結合する。第１の抗体及び第２の抗体の両方は、標的抗原を含む溶液と混合され、得られた混合物は、例えば、ＰＣＲウェル内部で、一緒にインキュベートされる。次いでＰＣＲ増幅を使用して核酸部分の存在が検出され、それにより標的抗原の検出が示される。いくつかの実施形態では、ｉＰＣＲアッセイは、ＩＬ－３３（例えば、ヒトＩＬ－３３；例えば、還元型ＩＬ－３３）を検出するために使用される。いくつかの実施形態では、第１及び第２の抗体、抗ＩＬ－３３抗体である。いくつかの実施形態では、第１の抗体と第２の抗体とは、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を共有する。いくつかの実施形態では、第１の抗体と第２の抗体は、同じアミノ酸配列を共有しない（例えば、第１の抗体と第２の抗体のアミノ酸配列は、１％以下、２％以下、３％以下、４％以下、５％以下、１０％以下、１５％以下、又は２０％以下のアミノ酸配列同一性を共有する）。ｉＰＣＲアッセイの例は、Ｓａｎｏ Ｔ ｅｔ．ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ １９９２，２５８：１２０－１２２及びＮｉｅｍｅｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２０１７，８：６５に記載されている。

【0244】

別の態様では、例えば、免疫組織化学（ＩＨＣ）、免疫蛍光（ＩＦ）、免疫ブロット法（例えば、ウエスタンブロット法）、フローサイトメトリー（例えば、ＦＡＣＳ^ＴＭ）、又は酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）アッセイにおいて、生物学的試料中のＩＬ－３３（例えば、ヒトＩＬ－３３、還元型ＩＬ－３３、酸化型ＩＬ－３３、総ＩＬ－３３、結合していないＩＬ－３３、及びＳＴ２に結合したＩＬ－３３）の存在又はレベルを検出するために、抗ＩＬ－３３抗体又はイムノコンジュゲート、例えば、本明細書に開示される抗ＩＬ－３３抗体又はイムノコンジュゲートを使用するためのアッセイが提供される。一部の実施形態では、本発明の抗体は、そのような活性について試験される。

【0245】

別の態様では、競合アッセイは、ＩＬ－３３に対する結合について、本明細書に開示される抗ＩＬ－３３抗体と競合する抗体を同定するために使用されうる。一部の実施形態では、そのような競合抗体は、本明細書に開示される抗ＩＬ－３３抗体によって結合される同じエピトープ（例えば、線状又は立体構造エピトープ）に結合する。抗体が結合するエピトープをマッピングするための詳細な例示的方法が、Ｍｏｒｒｉｓ “Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，” ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ．６６（Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ），１９９６に提供されている。

【0246】

例示的な競合アッセイでは、固定化されたＩＬ－３３は、ＩＬ－３３に結合する第１の標識抗体と、ＩＬ－３３に対する結合について第１の抗体と競合する能力について試験されている第２の非標識抗体とを含む溶液中でインキュベートされる。第２の抗体は、ハイブリドーマ上清中に存在しうる。コントロールとして、固定化されたＩＬ－３３が、第１の標識化抗体を含むが第２の非標識化抗体は含まない溶液中でインキュベートされる。ＩＬ－３３に対する第１の抗体の結合を可能にする条件下でのインキュベーション後、余分な未結合抗体を除去し、固定化されたＩＬ－３３に関連付けられる標識の量を測定する。固定化されたＩＬ－３３に関連付けられる標識の量がコントロール試料と比べて試験試料中で実質的に低減している場合、それは、第２の抗体がＩＬ－３３への結合について第１の抗体と競合していることを示す。Ｈａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ Ｃｈ．１４（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ），１９８８を参照のこと。

【0247】

別の実施形態では、同じエピトープに対する結合についての２つの抗体の競合は、エピトープビニングによって決定される。例えば、標識化抗原を、固体表面上に固定化し、飽和量の第１の抗体と反応させる。次いで、第２の競合抗体を加える。例えば、ＯＣＴＥＴ（登録商標）（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）又はその他のバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）技術により検出された第２の抗体による追加の結合が少しでもある場合、２つの抗体が遠隔の重複していないエピトープに結合することを示す。追加の結合がないことは、２つの抗体が同じ又は重複するエピトープに結合することを示す。ＥＬＩＳＡ、サイズ排除クロマトグラフィー、結晶学、ＨＤＸ－ＭＳ、突然変異誘発、及びその他のＳＰＲ法を含む複数の他の方法も、２つの抗体が同じ又は重複するエピトープにー結合することを実証するために利用することができる。同様の技術を、抗体が本発明の抗体をクロスブロックするか、又は本発明の抗体によってクロスブロックされるかどうかを決定するために使用することができる。

【0248】

２．活性アッセイ
一態様では、本発明は、生物活性を検出又は測定するための抗ＩＬ－３３抗体又はイムノコンジュゲートを提供する。生物活性には、例えば、ＩＬ－３３（例えば、血流中のＩＬ－３３）又はそのペプチド断片に対するｉｎ ｖｉｖｏ、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、又はｅｘ ｖｉｖｏでの結合が含まれうる。他の実施形態では、生物活性は、ＩＬ－３３をブロック若しくは中和すること、又はＩＬ－３３がリガンド、例えば受容体（例えば、ＩＬ－３３受容体ＳＴ２及び／又はＩＬ－１ＲＡｃＰ）に結合することを防止することを含みうる。いくつかの実施形態では、生物活性は、ＩＬ－３３上の部位１に対する結合、及びＩＬ－３３受容体（すなわち、ＳＴ２及び／又はＩＬ－１ＲＡｃＰ）に対する結合の遮断を含みうる。ｉｎ ｖｉｖｏ及び／又はｉｎ ｖｉｔｒｏでそのような生体活性を検出又は測定するための抗体も提供される。一部の実施形態では、本明細書に開示される抗体は、そのような生物活性について試験するために使用される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される抗ＩＬ－３３抗体は、細胞ベースのＩＬ－３３ブロッキングアッセイにおいて阻害の試験に使用される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される抗ＩＬ－３３抗体は、細胞ベースのブロッキングアッセイにおいて、ＩＬ－３３誘発性レポーター活性の阻害を試験するために使用される。

【0249】

Ｄ．イムノコンジュゲート
本発明はまた、１つ又は複数の標識にコンジュゲートした本明細書で提供される抗ＩＬ－３３抗体を含むイムノコンジュゲートを提供する。標識には、限定されないが、直接検出される標識又は部分（例えば、蛍光標識、発色性標識、電子密度標識、化学発光標識、及び放射性標識）、並びに例えば酵素反応又は分子間相互作用を介して間接的に検出される部分、例えば、酵素又はリガンドが含まれる。例示的な標識には、限定されないが、放射性同位体^３２Ｐ、^１４Ｃ、^１２５Ｉ、^１３Ｈ、及び^１３１Ｉ、希土類キレート又はフルオレセイン及びその誘導体などのフルオロフォア、ローダミン及びその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロン、ホタルルシフェラーゼ及び細菌ルシフェラーゼ（米国特許第４７３７４５６号）等のルセリフェラーゼ類（ｌｕｃｅｒｉｆｅｒａｓｅｓ）、ルシフェリン、２，３－ジヒドロフタラジンジオン類、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、例えばグルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、及びグルコース－６－リン酸デヒドロゲナーゼなどの糖オキシダーゼ、例えばＨＲＰ、ラクトペルオキシダーゼ、又はマイクロペルオキシダーゼなどの色素前駆体を酸化するために過酸化水素を利用する酵素と結合した、例えばウリカーゼ及びキサンチンオキシダーゼなどの複素環式オキシダーゼ、ビオチン／アビジン、スピン標識、バクテリオファージ標識、及び安定フリーラジカルなどが含まれる。別の実施形態では、標識は、陽電子放射体である。陽電子放射体には、限定されないが、^６８Ｇａ、^１８Ｆ、^６４Ｃｕ、^８６Ｙ、^７６Ｂｒ、^８９Ｚｒ、及び^１２４Ｉが含まれる。特定の実施形態では、陽電子放射体は、Ｚｒである。いくつかの実施形態では、標識は、核酸、例えば一本鎖ＤＮＡである。

【0250】

いくつかの実施形態では、イムノコンジュゲートは、核酸、例えばＤＮＡにコンジュゲートした本明細書で提供される抗ＩＬ－３３抗体を含む。いくつかの実施形態では、イムノコンジュゲートは、５５－ｍｅｒ ＤＮＡにコンジュゲートした抗ＩＬ－３３抗体を含む。いくつかの実施形態では、イムノコンジュゲートは、配列番号３８の配列を有するＤＮＡにコンジュゲートした１５．２１Ｃ７抗体を含む。いくつかの実施形態では、イムノコンジュゲートは、サイズ排除カラムにより精製される。

【0251】

いくつかの実施形態では、イムノコンジュゲートは、化学療法剤若しくは薬物、増殖阻害剤、毒素（例えば、タンパク質毒素、細菌、真菌、植物、若しくは動物起源の酵素的に活性な毒素、又はそれらの断片）又は放射性同位体等の１つ又は複数の細胞傷害性剤にコンジュゲートした、本明細書で提供される抗ＩＬ－３３抗体を含む。

【0252】

Ｅ．診断及び検出のための方法及び組成物
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＩＬ－３３抗体（例えば、３Ｆ１０又は１５．２１Ｃ７）又はイムノコンジュゲート（例えば、抗ＩＬ－３３抗体を含む；例えば、３Ｆ１０又は１５．２１Ｃ７を含む）のいずれか１つは、生物学的試料中のＩＬ－３３（例えば、ヒトＩＬ－３３、還元型ＩＬ－３３、酸化型ＩＬ－３３、総ＩＬ－３３、結合していないＩＬ－３３、及び／又はＳＴ２に結合したＩＬ－３３）の存在を検出するために有用である。本明細書で使用される「検出」という用語は、定量的又は定性的な検出を包含する。

【0253】

一実施形態では、診断又は検出の方法における使用のための抗ＩＬ－３３抗体（例えば、３Ｆ１０又は１５．２１Ｃ７）又はイムノコンジュゲートが提供される。別の事例では、本発明は、診断又は検出の方法における使用のための試薬の製造における抗ＩＬ－３３抗体（例えば、３Ｆ１０又は１５．２１Ｃ７）又はイムノコンジュゲートの使用を提供する。

【0254】

一事例では、例えば、後述する、生物学的試料中のＩＬ－３３（例えば、ヒトＩＬ－３３、還元型ＩＬ－３３、酸化型ＩＬ－３３、総ＩＬ－３３、結合していないＩＬ－３３、及び／又はＳＴ２に結合したＩＬ－３３）の存在又はレベルの検出方法が提供される。一部の実施形態では、方法は、生物学的試料を、本明細書に記載される抗ＩＬ－３３抗体（例えば、３Ｆ１０又は１５．２１Ｃ７）又はイムノコンジュゲートと、ＩＬ－３３（例えば、ヒトＩＬ－３３、還元型ＩＬ－３３、酸化型ＩＬ－３３、総ＩＬ－３３、結合していないＩＬ－３３、及び／又はＳＴ２に結合したＩＬ－３３）に対する抗ＩＬ－３３抗体の結合を可能にする条件下で接触させることと、抗ＩＬ－３３抗体とＩＬ－３３（例えば、ヒトＩＬ－３３、還元型ＩＬ－３３、酸化型ＩＬ－３３、総ＩＬ－３３、結合していないＩＬ－３３、及び／又はＳＴ２に結合したＩＬ－３３）との間に複合体が形成されるかどうかを検出することとを含む。このような方法は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ法又はｉｎ ｖｉｖｏ法とすることができる。本発明の抗ＩＬ－３３抗体（例えば、３Ｆ１０及び１５．２１Ｃ７）又は本発明のイムノコンジュゲートは例えば、例えば免疫組織化学（ＩＨＣ）、免疫蛍光（ＩＦ）、免疫ブロット法（例えば、ウエスタンブロット法）、フローサイトメトリー（例えば、ＦＡＣＳ^ＴＭ）、酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）、及びｉＰＣＲを含むイムノアッセイに使用することができる。

【0255】

一部の実施形態では、方法は、生物学的試料を、本明細書に記載されるイムノコンジュゲートと、イムノコンジュゲート中の抗ＩＬ－３３抗体が特異的に結合するエピトープとは異なるＩＬ－３３上のエピトープに特異的に結合する第２の抗ＩＬ－３３抗体（例えば、１Ｅ１ｖ８）の存在下で接触させることと、結合したイムノコンジュゲートの存在を、ＩＬ－３３（例えば、ヒトＩＬ－３３、還元型ＩＬ－３３、酸化型ＩＬ－３３、総ＩＬ－３３、結合していないＩＬ－３３、及び／又はＳＴ２に結合したＩＬ－３３）に対する抗ＩＬ－３３抗体の結合を可能にする条件下で、検出することと、抗ＩＬ－３３抗体とＩＬ－３３（例えば、ヒトＩＬ－３３、還元型ＩＬ－３３、酸化型ＩＬ－３３、総ＩＬ－３３、結合していないＩＬ－３３、及び／又はＳＴ２に結合したＩＬ－３３）との間に複合体が形成されるかどうかを検出することとを含む。一部の実施形態では、生物学的試料は、前記接触させることに先立ちＴＣＥＰで処理される。いくつかの実施形態では、イムノコンジュゲートは、核酸（例えば、一本鎖ＤＮＡ）にコンジュゲートした本明細書に記載される抗ＩＬ－３３抗体のいずれか１つ（例えば、１５．２１Ｃ７）である。いくつかの実施形態では、イムノコンジュゲートは、前記接触させることに先立ちサイズ排除クロマトグラフィーにより精製される。いくつかの実施形態では、前記検出することは、ｉＰＣＲによる。

【0256】

本発明は、障害（例えば、ＩＬ－３３媒介性障害）に罹患した対象を診断する方法における抗ＩＬ－３３抗体の使用をさらに提供し、この方法は、対象から得られた試料中のＩＬ－３３（例えば、ヒトＩＬ－３３、還元型ＩＬ－３３、酸化型ＩＬ－３３、総ＩＬ－３３、結合していないＩＬ－３３、及び／又はＳＴ２に結合したＩＬ－３３）の存在又はレベルを、試料を本明細書に開示される抗ＩＬ－３３抗体（例えば、３Ｆ１０又は１５．２１Ｃ７）と接触させて、結合した抗体の存在を検出することにより決定することを含む。本発明は、障害（例えば、ＩＬ－３３媒介性障害）に罹患した対象を診断する方法におけるイムノコンジュゲートの使用をさらに提供し、この方法は、対象から得られた試料中のＩＬ－３３（例えば、ヒトＩＬ－３３、還元型ＩＬ－３３、酸化型ＩＬ－３３、総ＩＬ－３３、結合していないＩＬ－３３、及び／又はＳＴ２に結合したＩＬ－３３）の存在又はレベルを、試料を本明細書に開示されるイムノコンジュゲート（例えば、抗ＩＬ－３３抗体を含む；例えば、３Ｆ１０又は１５．２１Ｃ７を含む）と接触させて、結合した抗体の存在を検出することにより、決定することを含む。

【0257】

本発明はまた、障害（例えば、ＩＬ－３３媒介性障害）に罹患した対象を診断する方法における使用のための試薬の製造における抗ＩＬ－３３抗体の使用をさらに提供し、この方法は、対象から得られた試料中のＩＬ－３３の存在又はレベルを、試料を本明細書に開示される抗ＩＬ－３３抗体（例えば、３Ｆ１０又は１５．２１Ｃ７）と接触させて、結合した抗体の存在を検出することにより決定することを含む。本発明はまた、障害（例えば、ＩＬ－３３媒介性障害）に罹患した対象を診断する方法における使用のための試薬の製造におけるイムノコンジュゲートの使用をさらに提供し、この方法は、対象から得られた試料中のＩＬ－３３の存在又はレベルを、試料を本明細書に記載されるイムノコンジュゲート（例えば、抗ＩＬ－３３抗体を含む；例えば、３Ｆ１０又は１５．２１Ｃ７を含む）と接触させて、結合した抗体の存在を検出することにより決定することを含む。

【0258】

任意の適切な試料を使用することができる。いくつかの実施形態では、試料は、生物学的試料である。いくつかの実施形態では、生物学的試料は、血液試料、眼の試料、鼻の試料、又は細胞培養物の試料である。いくつかの実施形態では、血液試料は、血漿又は血清の試料である。いくつかの実施形態では、眼の試料は、硝子体液又は眼房水の試料である。いくつかの実施形態では、試料は、組織試料である。いくつかの実施形態では、試料は、鼻腔吸収液試料である。

【0259】

一態様では、本明細書に開示される抗ＩＬ－３３抗体又はイムノコンジュゲートは、例えば、ＩＬ－３３が患者の選択のためのバイオマーカーである場合に、ＩＬ－３３軸結合アンタゴニスト（例えば、抗ＩＬ－３３抗体又は抗ＳＴ２抗体）を用いた治療法に適格な対象を選択するために使用されうる。

【0260】

例えば、本発明は、障害（例えば、ＩＬ－３３媒介性障害）に罹患した対象のための治療法を選択するための方法を提供し、この方法は、対象から得られた試料中のＩＬ－３３（例えば、ヒトＩＬ－３３、還元型ＩＬ－３３、酸化型ＩＬ－３３、総ＩＬ－３３、結合していないＩＬ－３３、及び／又はＳＴ２に結合したＩＬ－３３）の存在又はレベルを、試料を本明細書に開示される抗ＩＬ－３３抗体（例えば、３Ｆ１０又は１５．２１Ｃ７）と接触させて、結合した抗体の存在を検出することにより決定することと；試料中のＩＬ－３３（例えば、ヒトＩＬ－３３、還元型ＩＬ－３３、酸化型ＩＬ－３３、総ＩＬ－３３、結合していないＩＬ－３３、及び／又はＳＴ２に結合したＩＬ－３３）の存在又はレベルに基づいて、対象のためのＩＬ－３３軸結合アンタゴニスト（例えば、抗ＩＬ－３３抗体又は抗ＳＴ２抗体）を選択することとを含む。別の実施例では、本発明は、障害（例えば、ＩＬ－３３媒介性障害）に罹患した対象のための治療法を選択するための方法を提供し、この方法は、対象から得られた試料中のＩＬ－３３（例えば、ヒトＩＬ－３３、還元型ＩＬ－３３、酸化型ＩＬ－３３、総ＩＬ－３３、結合していないＩＬ－３３、及び／又はＳＴ２に結合したＩＬ－３３）の存在又はレベルを、試料を本明細書に開示されるイムノコンジュゲート（例えば、抗ＩＬ－３３抗体を含む；例えば、３Ｆ１０又は１５．２１Ｃ７を含む）と接触させて、結合した抗体の存在を検出することにより決定することと；試料中のＩＬ－３３（例えば、ヒトＩＬ－３３、還元型ＩＬ－３３、酸化型ＩＬ－３３、総ＩＬ－３３、結合していないＩＬ－３３、及び／又はＳＴ２に結合したＩＬ－３３）の存在又はレベルに基づいて、対象のためのＩＬ－３３軸結合アンタゴニスト（例えば、抗ＩＬ－３３抗体又は抗ＳＴ２抗体）を選択することとを含む。

【0261】

本明細書に記載される態様のいずれにおいても、ＩＬ－３３軸結合アンタゴニストは、ＩＬ－３３結合アンタゴニスト、ＳＴ２結合アンタゴニスト、及びＩＬ１ＲＡｃＰ結合アンタゴニストを含む。例示的なＩＬ－３３軸結合アンタゴニストには、抗ＩＬ－３３抗体及びその抗原結合断片（例えば、ＡＮＢ－０２０（ＡｎａｐｔｙｓＢｉｏ，Ｉｎｃ．）等の抗ＩＬ－３３抗体、又は各々が参照によりその全体が本明細書に援用される米国特許出願公開第２０２１－０２８４７２５号、米国特許第１００９３７３０号、ＥＰ１７２５２６１、米国特許第８１８７５９６号、国際公開第２０１１０３１６００号、国際公開第２０１４１６４９５９号、国際公開第２０１５０９９１７５号、国際公開第２０１５１０６０８０号、国際公開第２０１６０７７３８１号、又は国際公開第２０２１１８３８４９号に記載される抗体のいずれか）；ＩＬ－３３及び／又はその受容体（ＳＴ２及び／又はＩＬ－１ＲＡＣＰ）に結合し、リガンド－受容体相互作用をブロックするポリペプチド（例えば、参照によりその全体が本明細書に援用される国際公開第２０１４／１５２１９５号に記載されるもの等のＳＴ２－Ｆｃタンパク質；イムノアドヘシン、ペプチボディ、及び可溶性ＳＴ２、又はそれらの誘導体）；抗ＩＬ－３３受容体抗体（例えば、抗ＳＴ２抗体、例えば、アステゴリマブ（ＭＳＴＴ１０４１Ａとしても知られる）、ＡＭＧ－２８２（Ａｍｇｅｎ）若しくはＳＴＬＭ１５（Ｊａｎｓｓｅｎ）、又は各々が参照によりその全体が本明細書に援用される国際公開第２０１３／１７３７６１号及び国際公開第２０１３／１６５８９４号に記載される抗ＳＴ２抗体のいずれか；又はＳＴ２－Ｆｃタンパク質、例えば各々が参照によりその全体が本明細書に援用される国際公開第２０１３／１７３７６１号；国際公開第２０１３／１６５８９４号；又は国際公開第２０１４／１５２１９５号に記載されるもの；及びＩＬ－３３受容体アンタゴニスト、例えば小分子阻害剤、ＩＬ－３３に結合するアプタマー、ＩＬ－３３軸核酸配列にストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸（例えば、短干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）又はクラスター化して規則的に配置される短い回文リピートＲＮＡ（ＣＲＩＳＰＲ－ＲＮＡ又はｃｒＲＮＡ）が含まれ、これにはＭａｌｉ ｅｔ ａｌ．（Ｓｃｉｅｎｃｅ．３３９：８２３－２６，２０１３）（参照によりその全体が本明細書に援用される）に記載されるｃｒＲＮＡ及びｔｒａｃｒＲＮＡ配列を有するシングルガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）が含まれる。

【0262】

いくつかの実施形態では、試料は、生物学的試料である。いくつかの実施形態では、生物学的試料は、血液試料、眼の試料、鼻の試料、又は細胞培養物の試料である。いくつかの実施形態では、血液試料は、血漿又は血清の試料である。いくつかの実施形態では、眼の試料は、硝子体液又は眼房水の試料である。いくつかの実施形態では、試料は組織試料である。いくつかの実施形態では、試料は、脳脊髄液試料である。

【0263】

前述の方法のいずれにおいても、生物学的試料は、ＩＬ－３３（例えば、ヒトＩＬ－３３、還元型ＩＬ－３３、酸化型ＩＬ－３３、総ＩＬ－３３、結合していないＩＬ－３３、及び／又はＳＴ２に結合したＩＬ－３３）の検出可能なレベルを有しうる。

【0264】

いくつかの実施形態では、ＩＬ－３３の存在又はレベルは、総ＩＬ－３３の存在又はレベルである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－３３の存在又はレベルは、還元型ＩＬ－３３の存在又はレベルである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－３３の存在又はレベルは、酸化型ＩＬ－３３の存在又はレベルである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－３３の存在又はレベルは、ヒトＩＬ－３３の存在又はレベルである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－３３の存在又はレベルは、結合していないＩＬ－３３の存在又はレベルである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－３３の存在又はレベルは、ｓＳＴ２に結合したＩＬ－３３の存在又はレベルである。いくつかの実施形態では、ｓＳＴ２は、ｈｓＳＴ２である。

【0265】

上述の方法のいずれもが、抗ＩＬ－３３抗体（例えば、本明細書に開示されるいずれかの抗ＩＬ－３３抗体）の代わりに又はそれに加えて、本明細書に開示されるイムノコンジュゲートを含みうることが理解される。

【0266】

Ｆ．生物学的試料
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＩＬ－３３抗体のいずれもが、当技術分野で既知の又は本明細書に記載される方法を使用して、生物学的試料中のＩＬ－３３の存在を検出するために有用である。いくつかの実施形態では、生物学的試料は、組織又は細胞の試料を含む。例えば、生物学的試料は、正常な対象又はＩＬ－３３媒介性の障害を有するか、ＩＬ－３３媒介性の障害にかかりやすいか、又はＩＬ－３３媒介性の障害について試験されている対象由来の細胞又は組織を含みうる。

【0267】

一部の事例では、組織又は細胞試料の供給源は、新鮮な、凍結された、及び／又は保存された臓器若しくは組織試料、又は生検若しくは吸引物；血液又は任意の血液成分（例えば、全血、血漿、又は血清）；鼻腔吸収液（ＮＦ）、羊膜液、腹腔液、又は間質液；対象の妊娠期間又は発育における任意の時期の細胞由来の固形組織でありうる。本明細書における組織試料の例には、限定されないが、硝子体液及び眼房水試料を含むがこれらに限定されない眼の試料が含まれる。いくつかの実施形態では、生物学的試料は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ組織又は細胞培養物からから得られる。本明細書における生物学的試料の例には、限定されないが、腫瘍生検、循環性腫瘍細胞、血清又は血漿、循環性血漿タンパク質、腹水、腫瘍から得られた又は腫瘍様な特性を呈する初代細胞培養物又は細胞株、並びに保存された腫瘍試料、例えばホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）腫瘍試料又は凍結腫瘍試料が含まれる。

【0268】

いくつかの実施形態では、生物学的試料は、防腐剤、抗凝固剤、バッファー、栄養剤、又は抗生物質等の、天然の組織と天然では混合しない化合物を含有する。一部の実施形態では、生物学的試料は、１つ又は複数の固定液に曝露されている及び／又は１つ又は複数の定液を含有する。本発明の方法及び組成物に使用することのできる固定液には、ホルマリン、グルタルアルデヒド、四酸化オスミウム、酢酸、エタノール、アセトン、ピクリン酸、クロロホルム、重クロム酸カリウム及び塩化第二水銀が含まれる、並びに／又はマイクロ波加熱若しくは凍結による安定化が含まれる。

【0269】

いくつかの実施形態では、生物学的試料は、ＩＬ－３３媒介性の障害を有するか、ＩＬ－３３媒介性の障害にかかりやすいか、又はＩＬ－３３媒介性の障害について試験されている対象に由来する。前述の実施形態のいずれにおいても、ＩＬ－３３媒介性障害は、眼の障害、炎症状態、免疫疾患、線維性障害、又は好酸球性障害でありうる。例えば、いくつかの事例では、炎症状態は、喘息、気道過敏性、気道炎症、敗血症、敗血症性ショック、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、関節リウマチ、又は慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）でありうる。いくつかの事例では、免疫疾患は、喘息、関節リウマチ、アレルギー、アトピー性アレルギー、アナフィラキシー、アナフィラキシー性ショック、アレルギー性鼻炎、乾癬、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病、糖尿病、又は肝臓疾患でありうる。いくつかの事例では、線維性疾患は、特発性肺線維症（ＩＰＦ）でありうる。いくつかの事例では、好酸球性障害は、好酸球関連胃腸障害（ＥＧＩＤ）でありうる。いくつかの事例では、ＥＧＩＤは、好酸球性食道炎でありうる。特定の事例では、ＩＬ－３３媒介性障害は、喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、ＣＯＰＤ、好酸球性食道炎、又は肺線維症（例えば、ＩＰＦ）でありうる。例えば、いくつかの事例では、ＩＬ－３３媒介性障害は、喘息である。他の事例では、ＩＬ－３３媒介性障害は、肺線維症（例えば、ＩＰＦ）である。

【0270】

前述の実施形態のいずれかのいくつかの事例では、ＩＬ－３３媒介性障害は、眼の障害（例えば、本明細書に開示されるいずれかの眼の障害）でありうる。非限定的な眼の障害には、例えば、ＡＭＤ（例えば、滲出型ＡＭＤ、乾燥型ＡＭＤ、中間型ＡＭＤ、進行型ＡＭＤ、及び地図状萎縮（ＧＡ））、黄斑変性、黄斑浮腫、ＤＭＥ（例えば、焦点、非中心ＤＭＥ、及びびまん性、中心関与ＤＭＥ）、網膜症、糖尿病性網膜症（ＤＲ）（例えば、増殖性ＤＲ（ＰＤＲ）、非増殖性ＤＲ（ＮＰＤＲ）、及び高所ＤＲ）、他の虚血関連網膜症、ＲＯＰ、網膜静脈閉塞（ＲＶＯ）（例えば、中心（ＣＲＶＯ）及び分岐（ＢＲＶＯ）形態）、ＣＮＶ（例えば、近視性ＣＮＶ）、角膜血管新生、角膜血管新生に関連する疾患、網膜血管新生、網膜／脈絡膜血管新生に関連する疾患、中心性漿液性網膜症（ＣＳＲ）、病的近視、フォンヒッペル・リンダウ病、眼のヒストプラズマ症、ＦＥＶＲ、コーツ病、ノーリー病、骨粗鬆症性偽神経膠腫症候群（ＯＰＰＧ）に関連する網膜異常、結膜下出血、皮膚潮紅、眼血管新生疾患、血管新生緑内障、網膜色素変性症（ＲＰ）、高血圧性網膜症、網膜血管腫状増殖、黄斑血管拡張症、虹彩血管新生、眼内血管新生、網膜変質、類嚢胞黄斑浮腫（ＣＭＥ）、脈管炎、乳頭浮腫、ＣＭＶ網膜炎を含むがこれに限定されない網膜炎、眼黒色腫、網膜芽細胞腫、結膜炎（例えば、感染性結膜炎及び非感染性（例えば、アレルギー性）結膜炎）、レーバー先天性黒内障（レーバー先天性黒内障又はＬＣＡとしても知られる）、ブドウ膜炎（感染性及び非感染性ブドウ膜炎を含む）、脈絡膜炎（例えば、多巣性脈絡膜炎）、眼ヒストプラズマ症、眼瞼炎、ドライアイ、外傷性眼損傷、シェーグレン病、並びに、疾患又は障害が眼血管新生、血管漏出、及び／又は網膜浮腫若しくは網膜萎縮に関連する他の眼疾患が含まれる。さらなる例示的な眼の障害には、網膜分離症（網膜神経感覚層の異常な分裂）、皮膚潮紅（隅角の血管新生）に関連する疾患、及び線維血管組織又は線維組織の異常な増殖によって引き起こされる疾患（増殖性硝子体網膜症のすべての形態を含む）が含まれる。

【0271】

角膜血管新生に関連する例示的疾患には、限定されないが、流行性角結膜炎、ビタミンＡ欠乏、コンタクトレンズの付け過ぎ、アトピー性角膜炎、上輪部角膜炎、乾癬性角膜炎、シェーグレン症候群、酒土性挫創、糸球体炎、梅毒、マイコバクテリア感染、脂肪変性、化学火傷、細菌性潰瘍、真菌性潰瘍、単純ヘルペス感染，帯状疱疹感染、原虫症、カポジ肉腫、モーレン潰瘍、テリエン周辺角膜変性症、辺縁角膜炎、関節リウマチ、全身性狼瘡、多発性動脈炎、トラウマ、ウェゲナーのサルコイドーシス、強膜炎、スティーブンス－ジョンソン症候群、類天疱瘡放射状角膜切開術、及び角膜グラフ（ｇｒａｐｈ）拒絶が含まれる。

【0272】

血管漏出の増加、動脈瘤及び毛細血管脱落を含む、脈絡膜新生血管形成及び網膜血管系の欠陥に関連する例示的な疾患には、限定されないが、糖尿病性網膜症、黄斑変性、鎌状赤血球貧血、サルコイド、梅毒、弾力線維性仮性黄色腫、パジェット病、静脈閉塞、動脈閉塞、頸動脈閉塞性疾患、慢性ブドウ膜炎／硝子体炎、マイコバクテリア感染症、ライム病、全身性エリテマトーデス、未熟児網膜症、網膜浮腫（黄斑浮腫を含む）、イールズ病、ベーチェット病、網膜炎又は脈絡膜炎を引き起こす感染症（例えば、多焦点脈絡膜）、推定眼ヒストプラズマ症、ベスト病（硝子体黄斑変性）、近視、視神経乳頭、扁平部炎、網膜剥離（例えば、慢性網膜剥離）、過粘度症候群、トキソプラスマ症、外傷及びレーザー後合併症が含まれる。

【0273】

網膜組織の萎縮に関連する例示的な疾患（光受容体及びその下のＲＰＥ）には、限定されないが、萎縮性又は非滲出性ＡＭＤ（例えば、地図状萎縮又は進行性乾燥型ＡＭＤ）、黄斑萎縮（例えば、新生血管形成及び／又は地図状萎縮に関連する萎縮）、糖尿病性網膜症、シュタルガルト病、ソースビー眼底ジストロフィー、網膜分離症及び網膜色素変性症が含まれる。

【0274】

いくつかの実施形態では、眼の障害には、ＡＭＤ（滲出型ＡＭＤ、乾燥型ＡＭＤ、及びＧＡを含む）、網膜症（例えば、ＤＲ及びＲＯＰ）、ＰＣＶ、糖尿病黄斑浮腫、ドライアイ疾患、ベーチェット病、アレルギー性結膜炎、及び網膜剥離が含まれる。

【0275】

他の実施形態では、眼の障害には、中間型ＡＭＤ、進行型ＡＭＤ、緑内障、ブドウ膜炎（例えば、感染性及び非感染性ブドウ膜炎）、網膜色素変性症、レーバー先天性黒内障、シュタルガルト病、高地糖尿病性網膜症、外傷性眼損傷、及び結膜炎（例えば、感染性結膜炎及び非感染性結膜炎）が含まれる。

【0276】

例えば、本明細書で提供されるのは、眼の障害を有するか、眼の障害にかかりやすいか、又は眼の障害について試験されている対象におけるＩＬ－３３の存在又はレベルを検出する方法である。一例では、本発明は、眼の障害を有するか、眼の障害にかかりやすいか、又は眼の障害について試験されている対象におけるＩＬ－３３の存在又はレベルを検出する方法を提供し、この検出は、ＩＬ－３３軸結合アンタゴニスト（例えば、本明細書に開示される抗ＩＬ－３３抗体又は抗ＳＴ２抗体）の対象への投与に先立ち行われる。別の例では、本発明は、眼の障害を有するか、眼の障害にかかりやすいか、又は眼の障害について試験されている、ＩＬ－３３の検出を必要とする対象においてＩＬ－３３を検出する方法を提供し、この対象は、治療的有効量の、本明細書に開示されるＩＬ－３３軸結合アンタゴニスト、例えば、抗ＩＬ－３３抗体又は抗ＳＴ２抗体を投与されている。いくつかの事例では、眼の障害は、滲出型ＡＭＤ、乾燥型ＡＭＤ、中間型ＡＭＤ、進行型ＡＭＤ、及び地図状萎縮（ＧＡ）を含む加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）、網膜症（例えば、糖尿病性網膜症（ＤＲ）、未熟児網膜症（ＲＯＰ）、及び高地ＤＲ）、ポリープ状脈絡膜血管症（ＰＣＶ）、糖尿病性黄斑浮腫、ドライアイ疾患、ベーチェット病、網膜剥離、緑内障、ブドウ膜炎（例えば、感染性及び非感染性ブドウ膜炎）、網膜色素変性症、レーバー先天性黒内障（レーバー先天性黒内障としても知られる）、シュタルガルト病、外傷性眼損傷、及び結膜炎（例えば、感染性結膜炎、非感染性結膜炎、及びアレルギー性結膜炎）からなる群から選択されうる。いくつかの事例では、眼科的障害には、ＡＭＤ（滲出型ＡＭＤ、乾燥型ＡＭＤ、及びＧＡを含む）、網膜症（例えば、ＤＲ及びＲＯＰ）、ＰＣＶ、糖尿病黄斑浮腫、ドライアイ疾患、ベーチェット病、アレルギー性結膜炎、及び網膜剥離が含まれる。他の事例では、眼の障害には、中間型ＡＭＤ、進行型ＡＭＤ、緑内障、ブドウ膜炎（例えば、感染性及び非感染性ブドウ膜炎）、網膜色素変性症、レーバー先天性黒内障、シュタルガルト病、高地糖尿病性網膜症、外傷性眼損傷、及び結膜炎（例えば、感染性結膜炎及び非感染性結膜炎）が含まれる。

【0277】

Ｇ．薬学的製剤
本明細書に開示される抗ＩＬ－３３軸結合アンタゴニスト（例えば、ＩＬ－３３結合アンタゴニスト又はＳＴ２結合アンタゴニスト、例えば、抗ＩＬ－３３抗体又は抗ＳＴ２抗体）の薬学的製剤は、所望の程度の純度を有するそのようなＩＬ－３３結合アンタゴニストを１つ又は複数の任意選択的な薬学的に許容される担体と混合することによって（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．，１９８０を参照）、凍結乾燥製剤又は水溶液の形態に調製される。薬学的に許容される担体は、通常、用いられる投薬量及び濃度でレシピエントに対して非毒性であり、限定されないが、リン酸、クエン酸、及び他の有機酸等のバッファー；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（例えばオクタデシルジメチオルベンジルアンモニウムクロリド；ヘキサメトニウムクロリド；ベンザルコニウムクロリド；ベンゼトニウムクロリド；フェノール、ブチル又はベンジルアルコール；メチル又はプロピルパラベン等のアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；及びｍ－クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン又は免疫グロブリン等のタンパク質；ポリビニルピロリドン等の親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン又はリジン等のアミノ酸；グルコース、マンノース又はデキストリンを含む単糖類、二糖類、及びその他の糖質；ＥＤＴＡ等のキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース又はソルビトール等の糖；ナトリウム等の塩形成対イオン；金属錯体（例えばＺｎ－タンパク質錯体）；及び／又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非イオン性界面活性剤が含まれる。本明細書における例示的な薬学的に許容される担体は、可溶性中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）等の間質性薬物分散剤、例えばｒｈｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｂａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）等のヒト可溶性ＰＨ－２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質をさらに含む。ｒＨｕＰＨ２０を含む、一部の例示的なｓＨＡＳＥＧＰ及び使用方法は、米国特許出願公開第２００５／０２６０１８６号及び同第２００６／０１０４９６８号に記載されている。一態様では、ｓＨＡＳＥＧＰは、１つ又は複数の追加のグリコサミノグリカナーゼ、例えば、コンドロイチナーゼと組み合わせられる。

【0278】

例示的な凍結乾燥抗体製剤は、米国特許第６２６７９５８号に記載されている。水性抗体製剤には、米国特許第６，１７１，５８６号及び国際公開第２００６／０４４９０８号に記載されるものが含まれ、後者の製剤は、酢酸ヒスチジンバッファーを含む。

【0279】

本明細書における製剤は、治療される特定の適応症に必要な２つ以上の有効成分、好ましくは互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を有するものも含有してよい。

【0280】

有効成分は、コロイド状薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子及びナノカプセル）又はマクロエマルジョンの、例えば、コアセルベーション技術によって、又は界面重合によって調製されたマイクロカプセル、例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロース、又はゼラチンマイクロカプセル及びポリ－（メチルメタクリレート）マイクロカプセル中に封入されうる。そのような技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．，１９８０に開示されている。

【0281】

徐放性調製物が調製されてもよい。徐放性調製物の適切な例には、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが含まれ、このマトリックスは成形品、例えばフィルム又はマイクロカプセルの形態である。

【0282】

眼への送達（眼部送達）のために、本明細書に開示される抗体は、例えば、眼科学的に許容される防腐剤、共溶媒、界面活性剤、粘度エンハンサー、浸透エンハンサー、バッファー、塩化ナトリウム、及び／又は水と組み合わせることができる。防腐剤は、例えば、使用中の微生物汚染を抑制するために含まれていてもよい。適切な防腐剤には、エデト酸二ナトリウム、メチルパラベン、プロピルパラベン、ソルビン酸、フェニルエチルアルコール、クロロブタノール、ポリクオタニウム－１、又は当技術分野で知られている他の薬剤が含まれる。これらの防腐剤は、典型的には、０．００１から１．０％ｗ／ｖのレベルで用いられる。いくつかの事例では、本明細書に開示される薬学的製剤は、防腐剤を含まない。いくつかの事例では、眼に局所投与されることを意図した組成物が、点眼薬又は眼軟膏として調製されうる。いくつかの事例では、抗体の総量は、そのような製剤の約０．００１から１．０％（ｗ／ｗ）、例えば約０．０１から約１．０％（ｗ／ｗ）である。

【0283】

ｉｎ ｖｉｖｏ投与に使用される製剤は、通常滅菌である。滅菌性は、例えば、滅菌濾過膜を通した濾過によって容易に達成されうる。

【0284】

ＩＬ－３３軸結合アンタゴニストは、ポリマー製剤に製剤化することができる。

【0285】

Ｈ．キット及び製造品
別の態様では、上述の抗体（例えば、抗ＩＬ－３３抗体）又はイムノコンジュゲートのいずれかを使用したＩＬ－３３の検出に有用な物質を含有するキット又は製造品が提供される。キット又は製造品は、抗ＩＬ－３３抗体（例えば、本明細書に開示されるいずれかの抗ＩＬ－３３抗体）を含みうる。キット又は製造品は、本明細書に記載されるイムノコンジュゲート（例えば、抗ＩＬ－３３抗体を含む；例えば、３Ｆ１０又は１５．２１Ｃ７を含む）を含みうる。キット又は製造品は、容器と、容器上の又は容器に関連付けられたラベル又は添付文書を含みうる。適切な容器には、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、ＩＶ輸液バッグ等を含む。容器は、ガラス又はプラスチック等の様々な材料から形成されうる。容器は、それ自体で又は別の組成物との組み合わせで、試料（例えば、生物学的試料）中のＩＬ－３３の存在又はレベル（例えば、発現レベル）のアッセイ、検出、及び／又は測定に有効な組成物を保持しうる。組成物中の少なくとも１つの活性剤は、本明細書に開示される抗体である。ラベル又は添付文書は、組成物が、選択された状態（例えば、ＩＬ－３３媒介性障害）の診断又は検出のために使用されることを示すことができる。さらに、キット又は製造品は、（ａ）本明細書に開示される抗体又はイムノコンジュゲートを含む組成物を中に収容する第１の容器、及び（ｂ）１つ又は複数の試薬を含む組成物を中に収容する第２の容器を含みうる。本明細書に開示されるこの実施形態のキット又は製造品は、ＩＬ－３３を検出するために組成物を使用することができることを示す添付文書をさらに含む。代替的に、又は追加的に、キット又は製造品は、許容されるバッファー、例えば、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル液、及びデキストロース溶液を含む第２の（又は第３の）容器をさらに含みうる。キット又は製造品は、他のバッファー、希釈剤、フィルター、針、及びシリンジを含む、商業的観点及びユーザーの観点から望ましい他の材料をさらに含みうる。

【0286】

例えば、本明細書に提供されるのは、（ａ）本明細書に開示される抗体のいずれか；及び（ｂ）生物学的試料中のＩＬ－３３の存在又はレベルを検出するための抗体の使用についての説明を含む添付文書を含むキットである。別の例では、本明細書で提供されるのは、（ａ）本明細書に開示されるイムノコンジュゲートのいずれか；及び（ｂ）生物学的試料中のＩＬ－３３の存在又はレベルを検出するためのイムノコンジュゲートの使用についての説明を含む添付文書を含むキットである。

【0287】

上記製造品のいずれもが、抗ＩＬ－３３抗体（例えば、本明細書に開示されるいずれかの抗ＩＬ－３３抗体）の代わりに、又は同抗体に加えて、本明細書に開示されるイムノコンジュゲートを含みうることが理解される。

【0288】

ＩＩＩ．例示的な実施形態
以下の例示的実施形態は、純粋に本出願の例示であることを意図しており、したがって、いかなる意味でも本発明を限定するものと考慮されるべきではない。

【0289】

本明細書で提供される実施形態は以下の通りである。

【0290】

実施形態１．ＩＬ－３３に特異的に結合する単離された抗体、又はその抗原結合断片であって、抗体が、重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む結合ドメインを含み、結合ドメインが、以下の６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）：
（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３
を含む、抗体又はその抗原結合断片。

【0291】

実施形態２．ＶＨドメインが、以下のフレームワーク領域（ＦＲ）：
（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３；及び
（ｄ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４
を含む、実施形態１に記載の抗体。

【0292】

実施形態３．ＶＬドメインが、以下のＦＲ：
（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ１；
（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ２；
（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ３；及び
（ｄ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ４
を含む、実施形態１又は２の抗体。

【0293】

実施形態４．（ａ）配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；（ｂ）配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；又は（ｃ）（ａ）のＶＨドメインと（ｂ）のＶＬドメインを含む、実施形態１から３のいずれか１つの抗体。

【0294】

実施形態５．ＶＨドメインが、配列番号７のアミノ酸配列を含む、実施形態１から４のいずれか１つの抗体。

【0295】

実施形態６．ＶＬドメインが、配列番号８のアミノ酸配列を含む、実施形態１から５のいずれか１つの抗体。

【0296】

実施形態７．ＩＬ－３３に特異的に結合する単離された抗体、又はその抗原結合断片であって、抗体が、（ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む結合ドメインを含む、抗体又はその抗原結合断片。

【0297】

実施形態８．配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖（ＨＣ）；（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する軽鎖（ＬＣ）；又は（ｃ）（ａ）のＨＣと（ｂ）のＬＣを含む、実施形態１から７のいずれか１つの抗体。

【0298】

実施形態９．ＨＣが、配列番号９のアミノ酸配列を含む、実施形態１から８のいずれか１つの抗体。

【0299】

実施形態１０．ＬＣが、配列番号１０のアミノ酸配列を含む、実施形態１から９のいずれか１つの抗体。

【0300】

実施形態１１．ＩＬ－３３に特異的に結合する単離された抗体、又はその抗原結合断片であって、抗体が、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＣ及び（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＬＣを含む、抗体、又はその抗原結合断片。

【0301】

実施形態１２．ＩＬ－３３に特異的に結合する単離された抗体、又はその抗原結合断片であって、抗体が、以下の６つのＣＤＲ：
（ａ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３
を含む、抗体、又はその抗原結合断片。

【0302】

実施形態１３．ＶＨドメインが、以下のＦＲ：
（ａ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３；及び
（ｄ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４
を含む、実施形態１２の抗体。

【0303】

実施形態１４．ＶＨドメインが、以下のＦＲ：
（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ１；
（ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ２；
（ｃ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ３；及び
（ｄ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ４
を含む、請求項１２又は１３の抗体。

【0304】

実施形態１５．（ａ）配列番号２５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨドメイン；（ｂ）配列番号２６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬドメイン、又は（ｃ）（ａ）のＶＨドメインと（ｂ）のＶＬドメインを含む、実施形態１２から１４のいずれか１つの抗体。

【0305】

実施形態１６．ＶＨドメインが、配列番号２５のアミノ酸配列を含む、実施形態１２から１５のいずれか１つの抗体。

【0306】

実施形態１７．ＶＬドメインが、配列番号２６のアミノ酸配列を含む、実施形態１２から１６のいずれか１つの抗体。

【0307】

実施形態１８．ＩＬ－３３に特異的に結合する単離された抗体、又はその抗原結合断片であって、抗体が、（ａ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む結合ドメインを含む、抗体又はその抗原結合断片。

【0308】

実施形態１９．配列番号２７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＨＣ；（ｂ）配列番号２８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＬＣ；又は（ｃ）（ａ）のＨＣと（ｂ）のＬＣを含む、実施形態１２から１８のいずれか１つの抗体。

【0309】

実施形態２０．ＨＣが、配列番号２７のアミノ酸配列を含む、実施形態１２から１９のいずれか１つの抗体。

【0310】

実施形態２１．ＬＣが、配列番号２８のアミノ酸配列を含む、実施形態１２から２０のいずれか１つの抗体。

【0311】

実施形態２２．ＩＬ－３３に特異的に結合する単離された抗体、又はその抗原結合断片であって、抗体が、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＣ及び（ｂ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＬＣを含む、抗体、又はその抗原結合断片。

【0312】

実施形態２３．酸化型又は還元型ＩＬ－３３に結合する、実施形態１から２２のいずれか１つの抗体。

【0313】

実施形態２４．酸化型ＩＬ－３３及び還元型ＩＬ－３３に、２倍以内のＫ_Ｄで結合する、実施形態２３の抗体。

【0314】

実施形態２５．酸化型ＩＬ－３３及び還元型ＩＬ－３３に、実質的に同じＫ_Ｄで結合する、実施形態２４の抗体。

【0315】

実施形態２６．還元型ＩＬ－３３に結合する、実施形態１から２５のいずれか１つの抗体。

【0316】

実施形態２７．還元型ＩＬ－３３に、≦１ｎＭのＫ_Ｄで結合する、実施形態２６の抗体。

【0317】

実施形態２８．還元型ＩＬ－３３に、０．０１ｎＭと１ｎＭとの間のＫ_Ｄで結合する、実施形態２７に記載の抗体。

【0318】

実施形態２９．還元型ＩＬ－３３に、≦０．５ｎＭのＫ_Ｄで結合する、実施形態２７の抗体。

【0319】

実施形態３０．還元型ＩＬ－３３に、０．１ｎＭと０．５ｎＭとの間のＫ_Ｄで結合する、実施形態２９に記載の抗体。

【0320】

実施形態３１．還元型ＩＬ－３３に、約０．４８７ｎＭのＫ_Ｄで結合する、実施形態２９又は３０の抗体。

【0321】

実施形態３２．還元型ＩＬ－３３に、約０．３３８ｎＭのＫ_Ｄで結合する、実施形態２９又は３０の抗体。

【0322】

実施形態３３．ヒトＩＬ－３３に結合する、実施形態１から３２のいずれか１つの抗体。

【0323】

実施形態３４．可溶型インターロイキン１受容体様１（ｓＳＴ２）タンパク質及びｓＳＴ２に結合していないＩＬ－３３に、２倍以内のＫ_Ｄで結合する、実施形態１から３３のいずれか１つの抗体。

【0324】

実施形態３５．ｓＳＴ２タンパク質に結合したＩＬ－３３に、ｓＳＴ２に結合していないＩＬ－３３と実質的に同じＫ_Ｄで結合する、実施形態１から３４のいずれか１つの抗体。

【0325】

実施形態３６．ｓＳＴ２が、がヒトｓＳＴ２（ｈｓＳＴ２）である、実施形態３４又は３５の抗体。

【0326】

実施形態３７．モノクローナル抗体である、実施形態１から３６のいずれか１つの抗体。

【0327】

実施形態３８．キメラ抗体である、実施形態１から１８及び２３から３７のいずれか１つの抗体。

【0328】

実施形態３９．ラット抗体である、実施形態１２から３８のいずれか１つの抗体。

【0329】

実施形態４０．ＩｇＧ抗体である、実施形態１から３６のいずれか１つの抗体。

【0330】

実施形態４１．ＩｇＧ１抗体である、実施形態１から１８、２１及び２３から３７のいずれか１つの抗体。

【0331】

実施形態４２．ＩｇＧ２ａ抗体である、実施形態１から７、１０及び１２から２０のいずれか１つの抗体。

【0332】

実施形態４３．ＩＬ－３３に特異的に結合する抗体断片である、実施形態１から３６のいずれか１つの抗体。

【0333】

実施形態４４．抗体断片が、Ｆａｂ、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、Ｆｖ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）_２、及びダイアボディからなる群から選択される、実施形態４３の抗体。

【0334】

実施形態４５．実施形態１から４４のいずれか１つの抗体をコードする単離された核酸、又は前記抗体を一緒にコードする単離された核酸の組。

【0335】

実施形態４６．実施形態４５の単離された核酸又は単離された核酸の組を含むベクター又はベクターの組。

【0336】

実施形態４７．実施形態４６のベクター又はベクターの組を含む宿主細胞。

【0337】

実施形態４８．哺乳動物細胞である、実施形態４７の宿主細胞。

【0338】

実施形態４９．哺乳動物細胞が、ラット細胞である、実施形態４８の宿主細胞。

【0339】

実施形態５０．哺乳動物細胞が、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である、実施形態４８の宿主細胞。

【0340】

実施形態５１．原核細胞である、実施形態４７の宿主細胞。

【0341】

実施形態５２．原核細胞が、大腸菌である、実施形態５１の宿主細胞。

【0342】

実施形態５３．実施形態４７から５２のいずれか１つの宿主細胞を培地中で培養することを含む、ＩＬ－３３に特異的に結合する抗体を生成する方法。

【0343】

実施形態５４．宿主細胞又は培地から抗体を回収することをさらに含む、実施形態５３の方法。

【0344】

実施形態５５．実施形態１から４４のいずれか１つの抗体を含むイムノコンジュゲート。

【0345】

実施形態５６．標識に連結される、実施形態５５のイムノコンジュゲート。

【0346】

実施形態５７．生物学的試料中のＩＬ－３３の存在又はレベルの検出における使用のための、実施形態１から４４のいずれか１つの抗体又は実施形態５５若しくは５６のイムノコンジュゲート。

【0347】

実施形態５８．検出が、免疫組織化学（ＩＨＣ）、免疫蛍光（ＩＦ）、フローサイトメトリー、酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）、免疫ブロット法、又は免疫ポリメラーゼ連鎖反応（ｉＰＣＲ）による、実施形態５７の使用のための抗体又は使用のためのイムノコンジュゲート。

【0348】

実施形態５９．検出が、ＥＬＩＳＡによる、実施形態５８の使用のための抗体又は使用のためのイムノコンジュゲート。

【0349】

実施形態６０．検出が、ｉＰＣＲによる、実施形態５８の使用のための抗体又は使用のためのイムノコンジュゲート。

【0350】

実施形態６１．生物学的試料が、血液試料、眼の試料、鼻の試料、又は細胞培養物の試料である、実施形態５７から６０のいずれか１つの使用のための抗体又は使用のためのイムノコンジュゲート。

【0351】

実施形態６２．血液試料が、血漿又は血清の試料である、実施形態６１の使用のための抗体又は使用のためのイムノコンジュゲート。

【0352】

実施形態６３．眼の試料が、硝子体液又は眼房水の試料である、実施形態６１の使用のための抗体又は使用のためのイムノコンジュゲート。

【0353】

実施形態６４．眼の試料が、組織試料である、実施形態６１の使用のための抗体又は使用のためのイムノコンジュゲート。

【0354】

実施形態６５．鼻の試料が、鼻腔吸収液試料である、実施形態６１の使用のための抗体又は使用のためのイムノコンジュゲート。

【0355】

実施形態６６．生物学的試料が、ＩＬ－３３媒介性障害を有するか又はＩＬ－３３媒介性障害のリスクを有する対象に由来する、実施形態５７から６５のいずれか１つの使用のための抗体又は使用のためのイムノコンジュゲート。

【0356】

実施形態６７．ＩＬ－３３媒介性障害が、眼の障害、炎症状態、免疫疾患、線維性障害、好酸球性障害、感染症、疼痛、中枢神経系障害、又は固形腫瘍である、実施形態６６の使用のための抗体又は使用のためのイムノコンジュゲート。

【0357】

実施形態６８．眼の障害が、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、眼の網膜症、ポリープ状脈絡膜血管症（ＰＣＶ）、糖尿病性黄斑浮腫、ドライアイ疾患、ベーチェット病、網膜剥離、緑内障、ブドウ膜炎、網膜色素変性症、レーバー先天性黒内障、シュタルガルト病、外傷性眼損傷、又は結膜炎である、実施形態６７の使用のための抗体又は使用のためのイムノコンジュゲート。

【0358】

実施形態６９．ＡＭＤが、地図状萎縮（ＧＡ）、滲出型ＡＭＤ、又は乾燥型ＡＭＤである、実施形態６８の使用のための抗体又は使用のためのイムノコンジュゲート。

【0359】

実施形態７０．ＡＭＤが、ＧＡである、実施形態６８の使用のための抗体又は使用のためのイムノコンジュゲート。

【0360】

実施形態７１．ＡＭＤが、中間型ＡＭＤ又は進行型ＡＭＤである、実施形態６８の使用のための抗体又は使用のためのイムノコンジュゲート。

【0361】

実施形態７２．眼の網膜症が、糖尿病性網膜症（ＤＲ）又は未熟児網膜症（ＲＯＰ）である、実施形態６８の使用のための抗体又は使用のためのイムノコンジュゲート。

【0362】

実施形態７３．眼の網膜症が、高地ＤＲである、実施形態６８の使用のための抗体又は使用のためのイムノコンジュゲート。

【0363】

実施形態７４．結膜炎が、感染性結膜炎又は非感染性結膜炎である、実施形態６８の使用のための抗体又は使用のためのイムノコンジュゲート。

【0364】

実施形態７５．結膜炎が、アレルギー性結膜炎である、実施形態６８の使用のための抗体又は使用のためのイムノコンジュゲート。

【0365】

実施形態７６．炎症状態が、喘息、敗血症、敗血症性ショック、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、関節リウマチ、又は慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）である、実施形態６７の使用のための抗体又は使用のためのイムノコンジュゲート。

【0366】

実施形態７７．免疫疾患が、喘息、関節リウマチ、アレルギー、アナフィラキシー、アナフィラキシー性ショック、アレルギー性鼻炎、乾癬、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病、糖尿病、又は肝臓疾患である、実施形態６７の使用のための抗体又は使用のためのイムノコンジュゲート。

【0367】

実施形態７８．線維性疾患が、特発性肺線維症（ＩＰＦ）である、実施形態６７の使用のための抗体又は使用のためのイムノコンジュゲート。

【0368】

実施形態７９．好酸球性障害が、好酸球関連胃腸障害（ＥＧＩＤ）である、実施形態６７の使用のための抗体又は使用のためのイムノコンジュゲート。

【0369】

実施形態８０．ＥＧＩＤが、好酸球性食道炎である、実施形態７９の使用のための抗体又は使用のためのイムノコンジュゲート。

【0370】

実施形態８１．対象が、ヒトである、実施形態６６から８０のいずれか１つの使用のための抗体又は使用のためのイムノコンジュゲート。

【0371】

実施形態８２．ＩＬ－３３の存在又はレベルが、総ＩＬ－３３の存在又はレベルである、実施形態５７から８１のいずれか１つの使用のための抗体又は使用のためのイムノコンジュゲート。

【0372】

実施形態８３．ＩＬ－３３の存在又はレベルが、還元型ＩＬ－３３の存在又はレベルである、実施形態５７から８１のいずれか１つの使用のための抗体又は使用のためのイムノコンジュゲート。

【0373】

実施形態８４．ＩＬ－３３の存在又はレベルが、ヒトＩＬ－３３の存在又はレベルである、実施形態５７から８３のいずれか１つの使用のための抗体又は使用のためのイムノコンジュゲート。

【0374】

実施形態８５．ＩＬ－３３の存在又はレベルが、結合していないＩＬ－３３の存在又はレベルである、実施形態５７から８４のいずれか１つの使用のための抗体又は使用のためのイムノコンジュゲート。

【0375】

実施形態８６．ＩＬ－３３の存在又はレベルが、ｓＳＴ２に結合したＩＬ－３３の存在又はレベルである、実施形態５７から８４のいずれか１つの使用のための抗体又は使用のためのイムノコンジュゲート。

【0376】

実施形態８７．ｓＳＴ２が、ｈｓＳＴ２である、実施形態８６の使用のための抗体又は使用のためのイムノコンジュゲート。

【0377】

実施形態８８．生物学的試料中のＩＬ－３３の存在又はレベルを検出する方法であって：
（ｉ）生物学的試料を、実施形態１から４４のいずれか１つの抗体と接触させ、結合した抗体の存在を検出すること；又は
（ｉｉ）生物学的試料を、実施形態５５又は５６のイムノコンジュゲートと接触させ、結合したイムノコンジュゲートの存在を検出すること
を含む方法。

【0378】

実施形態８９．検出することが、ＩＨＣ、ＩＦ、フローサイトメトリー、ＥＬＩＳＡ、免疫ブロット法、又はｉＰＣＲによる、実施形態８８の方法。

【0379】

実施形態９０．検出することが、ＥＬＩＳＡによる、実施形態８９の方法。

【0380】

実施形態９１．検出することが、ｉＰＣＲによる、実施形態８９の方法。

【0381】

実施形態９２．生物学的試料を、実施形態５５又は５６のイムノコンジュゲートと、イムノコンジュゲート中の抗ＩＬ－３３抗体が特異的に結合するエピトープとは異なるＩＬ－３３上のエピトープに特異的に結合する第２の抗ＩＬ－３３抗体の存在下で接触させることと、結合したイムノコンジュゲートの存在を検出することとを含む、実施形態９１の方法。

【0382】

実施形態９３．抗ＩＬ－３３抗体が、１Ｅ１ｖ８である、実施形態９２の方法。

【0383】

実施形態９４．生物学的試料が、前記接触させることに先立ちトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）で処理される、実施形態９２又は９３の方法。

【0384】

実施形態９５．生物学的試料が、血液試料、眼の試料、鼻の試料、又は細胞培養物の試料である、実施形態８８から９４のいずれか１つの方法。

【0385】

実施形態９６．血液試料が、血漿又は血清の試料である、実施形態９５の方法。

【0386】

実施形態９７．眼の試料が、硝子体液又は眼房水の試料である、実施形態９５の方法。

【0387】

実施形態９８．眼の試料が、組織試料である、実施形態９５の方法。

【0388】

実施形態９９．鼻の試料が、鼻腔吸収液試料である、実施形態９５の方法。

【0389】

実施形態１００．生物学的試料が、ＩＬ－３３媒介性障害を有するか又はＩＬ－３３媒介性障害のリスクを有する対象に由来する、実施形態８８から９９のいずれか１つの方法。

【0390】

実施形態１０１．ＩＬ－３３媒介性障害が、眼の障害、炎症状態、免疫疾患、線維性障害、好酸球性障害、感染症、疼痛、中枢神経系障害、又は固形腫瘍である、実施形態１００の方法。

【0391】

実施形態１０２．眼の障害が、ＡＭＤ、眼の網膜症、ＰＣＶ、糖尿病性黄斑浮腫、ドライアイ疾患、ベーチェット病、網膜剥離、緑内障、ブドウ膜炎、網膜色素変性症、レーバー先天性黒内障、シュタルガルト病、外傷性眼損傷、又は結膜炎である、実施形態１０１の方法。

【0392】

実施形態１０３．ＡＭＤが、ＧＡ、滲出型ＡＭＤ、又は乾燥型ＡＭＤである、実施形態１０２の方法。

【0393】

実施形態１０４．ＡＭＤが、ＧＡである、実施形態１０２の方法。

【0394】

実施形態１０５．ＡＭＤが、中間型ＡＭＤ又は進行型ＡＭＤである、実施形態１０２の方法。

【0395】

実施形態１０６．眼の網膜症が、ＤＲ又はＲＯＰである、実施形態１０２の方法。

【0396】

実施形態１０７．眼の網膜症が、高地ＤＲである、実施形態１０２の方法。

【0397】

実施形態１０８．結膜炎が、感染性結膜炎又は非感染性結膜炎である、実施形態１０２の方法。

【0398】

実施形態１０９．結膜炎が、アレルギー性結膜炎である、実施形態１０２の方法。

【0399】

実施形態１１０．炎症状態が、喘息、敗血症、敗血症性ショック、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、関節リウマチ、又はＣＯＰＤである、実施形態１０１の方法。

【0400】

実施形態１１１．免疫疾患が、喘息、関節リウマチ、アレルギー、アナフィラキシー、アナフィラキシー性ショック、アレルギー性鼻炎、乾癬、ＩＢＤ、クローン病、糖尿病、又は肝臓疾患である、実施形態１０１の方法。

【0401】

実施形態１１２．線維性疾患が、ＩＰＦである、実施形態１０１の方法。

【0402】

実施形態１１３．好酸球性障害が、ＥＧＩＤである、実施形態１０１の方法。

【0403】

実施形態１１４．ＥＧＩＤが、好酸球性食道炎である、実施形態１１３の方法。

【0404】

実施形態１１５．対象が、ヒトである、実施形態１００から１１４のいずれか１つの方法。

【0405】

実施形態１１６．ＩＬ－３３の存在又はレベルが、総ＩＬ－３３の存在又はレベルである、実施形態８８から１１５のいずれか１つの方法。

【0406】

実施形態１１７．ＩＬ－３３の存在又はレベルが、還元型ＩＬ－３３の存在又はレベルである、実施形態８８から１１５のいずれか１つの方法。

【0407】

実施形態１１８．ＩＬ－３３の存在又はレベルが、ヒトＩＬ－３３の存在又はレベルである、実施形態８８から１１７のいずれか１つの方法。

【0408】

実施形態１１９．ＩＬ－３３の存在又はレベルが、結合していないＩＬ－３３の存在又はレベルである、実施形態８８から１１８のいずれか１つの方法。

【0409】

実施形態１２０．ＩＬ－３３の存在又はレベルが、ｓＳＴ２に結合したＩＬ－３３の存在又はレベルである、実施形態８８から１１８のいずれか１つの方法。

【0410】

実施形態１２１．ｓＳＴ２が、ｈｓＳＴ２である、実施形態１２０の方法。

【0411】

実施形態１２２．生物学的試料中のＩＬ－３３の存在又はレベルに基づいて、対象のためのＩＬ－３３軸結合アンタゴニストを含む治療を選択することをさらに含む、実施形態８８から１２１のいずれか１つの方法。

【0412】

実施形態１２３．治療的有効量のＩＬ－３３軸結合アンタゴニストを対象に投与することをさらに含む、実施形態８８から１２１のいずれか１つの方法。

【0413】

実施形態１２４．ＩＬ－３３軸結合アンタゴニストが、ＩＬ－３３結合アンタゴニストである、実施形態１２２又は１２３の方法。

【0414】

実施形態１２５．ＩＬ－３３結合アンタゴニストが、抗ＩＬ－３３抗体である、実施形態１２４の方法。

【0415】

実施形態１２６．ＩＬ－３３軸結合アンタゴニストを含む治療の候補者である、ＩＬ－３３媒介性の障害を有する対象を同定するためのアッセイであって、実施形態１から４４のいずれか１つの抗体又は実施形態５５若しくは５６のイムノコンジュゲートを使用して対象から得られた生物学的試料中のＩＬ－３３の存在又はレベルを決定することを含むアッセイ。

【0416】

実施形態１２７．
（ａ）実施形態１から４４のいずれか１つの抗体；及び
（ｂ）生物学的試料中のＩＬ－３３の存在又はレベルを検出するための抗体の使用についての説明を含む添付文書
を含むキット。

【0417】

実施形態１２８．
（ａ）実施形態５５又は５６のイムノコンジュゲート；及び
（ｂ）生物学的試料中のＩＬ－３３の存在又はレベルを検出するためのイムノコンジュゲートの使用についての説明を含む添付文書
を含むキット。

【実施例】

【0418】

ＩＶ．実施例
以下は、本発明の方法及び組成物の実施例である。上記に提供された一般的な記載を前提として、他の種々の実施形態が実施されうることを理解されたい。

【0419】

実施例１：材料及び方法
ヒトｓＳＴ２レベルの測定
ｈｓＳＴ２のレベルを、製造業者の説明書（＃ＤＳＴ２００、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ，ＵＳＡ）に従ってヒトＳＴ２／ｈＩＬ－３３Ｒ ＱＵＡＮＴＩＫＩＮＥ（登録商標）キットＥＬＩＳＡを使用して決定した。ｈｓＳＴ２の標準レンジは７．８１ｐｇ／ｍＬから１０００ｐｇ／ｍＬであり、感度はバッファー中１５．６ｐｇ／ｍＬであり、検出可能な濃度の下限は、眼房水中１５６３ｐｇ／ｍＬ（最低希釈倍率（ＭＲＤ）は１：１００）、硝子体液中６２５ｐｇ／ｍＬ（ＭＲＤは１：４０）、血清中２５００ｐｇ／ｍＬ（ＭＲＤは１：１６０）、及びＮＦ中１２５０ｐｇ／ｍＬ（ＭＲＤは１：８０）である。

【0420】

市販のキットを使用した硝子体液中のｈＩＬ－３３レベルの測定
以下のキットを、製造業者の説明書に従って使用した：ヒトＩＬ－３３ ＱＵＡＮＴＩＫＩＮＥ（登録商標）キットＥＬＩＳＡ（＃Ｄ３３００Ｂ、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ，ＵＳＡ）、ＬＥＧＥＮＤ ＭＡＸ^ＴＭ ｈＩＬ－３３キットＥＬＩＳＡ（＃４３５９０７、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＩＬ－３３ ヒトＥＬＩＳＡキット（＃ＢＭＳ２０４８、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ，ＵＳＡ）、Ｕ－ＰＬＥＸ（登録商標）ｈＩＬ－３３アッセイ（＃Ｋ１５１ＷＦＫ、ＭＳＤ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ，ＵＳＡ）、Ｂｉｏ－Ｐｌｅｘ Ｐｒｏ^ＴＭヒトＴｈ１７サイトカイン１５－Ｐｌｅｘ ＬＵＭＩＮＥＸ（登録商標）アッセイ（＃１７１ＡＡ００１Ｍ、Ｂｉｏ－Ｒａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ，ＵＳＡ）。

【0421】

加えて、２つのＥＬＩＳＡが、市販の抗体（Ａｂ）を使用して開発された。１つ目のアッセイのために、０．０５Ｍの炭酸ナトリウムバッファー（ｐＨ９．６）（＃ＡＬＸ－８０４－８４０ＰＦ－Ｃ１００、Ｅｎｚｏ，Ｆａｒｍｉｎｇｄａｌｅ，ＮＹ，ＵＳＡ）に希釈した２μｇ／ｍＬのマウス抗ｈＩＬ－３３を使用して、ＭａｘｉＳｏｒｐ（登録商標）プレート（３８４ウェル、Ｎｕｎｃ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，ＮＹ，ＵＳＡ）を４℃で一晩コーティングした。ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中０．０５％のＴＷＥＥＮ（登録商標）２０で３回洗浄した後、プレートを、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中０．５％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、１５ｐｐｍのＰＲＯＣＬＩＮ（登録商標）３００を使用して１時間（ｈ）室温（ＲＴ）でブロックした。３回の洗浄後、滴定したｈＩＬ－３３をプレートに加え、２時間ＲＴでインキュベートした。プレートを、６回洗浄し、１：１０００に希釈したビオチン化ヤギ抗ｈＩＬ－３３（＃ＢＡＦ３６２５、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ，ＵＳＡ）を１時間ＲＴでインキュベートした。結合したＡｂを、ストレプトアビジンポリ－ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）８０（ポリ－ＨＲＰ８０）（＃６５Ｒ－５１１９、Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ，Ａｃｔｏｎ，ＭＡ，ＵＳＡ）及びその基質３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジン（Ｍｏｓｓ Ｉｎｃ．，Ｐａｓａｄｅｎａ，ＭＤ，ＵＳＡ）を使用して検出した。反応を１Ｍのリン酸で停止させ、吸収度を４５０ｎｍで読み取った。

【0422】

２つ目のＥＬＩＳＡのために、同様のプロトコールを続けたが、ただし、プレートのコーティングには２μｇ／ｍＬのウサギ抗ｈＩＬ－３３（＃５００－Ｐ２６１、Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ，ＵＳＡ）を使用し、検出のために５０ｎｇ／ｍＬのビオチン化マウス抗ｈＩＬ－３３クローン６Ｈ６１７（＃ＮＢＰ２－２７３３３８、Ｎｏｖｕｓ，Ｃｅｎｔｅｎｎｉａｌ，ＣＯ，ＵＳＡ）をストレプトアビジンＨＲＰ（＃ＲＰＮ１２３１、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ，ＵＳＡ）と組み合わせて使用した。

【0423】

感度
定量下限及び上限（ＬＬＯＱ及びＵＬＯＱ）は、正確に定量化することのできる最も低い及び最も高いｈＩＬ－３３濃度と定義づけられた。これら値は、６つの独立したアッセイにおいて４回実行した標準曲線から決定された。ＣＶ及び相対誤差（ＲＥ）を、標準曲線の各点について計算し、２０％を下回るＲＥ及びＣＶを有するものを、報告範囲に含めた。

【0424】

正確性（添加回収）
還元型ｈＩＬ－３３を、異なる個体由来の血清、血漿、及びＮＦ試料中と、２個体由来のプールされた硝子体液及び眼房水試料中とに添加し（３から４の複製物）、高（４．５ｐｇ／ｍＬ）、中（１．５ｐｇ／ｍＬ）、及び低（０．５ｐｇ／ｍＬ）濃度を標的化した。同じ高、中、及び低濃度を、コントロールとしてのアッセイバッファー中に添加した（添加濃度）。還元型ｈＩＬ－３３の内因性レベルを、非添加のマトリックスから決定した。添加回収は、以下の式を使用して算した：％回収率＝［測定濃度／期待濃度（内因性＋添加］×１００。

【0425】

希釈直線性
添加回収実験からの血清、血漿及びＮＦ試料を、アッセイバッファー中で１：２、１：４、１：１０、及び１：２０の濃度に希釈し、硝子体液及び眼房水は、利用可能な試料容積が限定されていたために、１：２、１：４及び１：８（硝子体液のみ）に希釈した。測定された濃度対期待される補正濃度からのパーセント回収率を計算した。

【0426】

ＭＲＤは、還元型ｈＩＬ－３３の濃度が期待される試料回収率の８０～１２０％となるのに必要な最低希釈倍率と定義された。マトリックスの定量下限（ＬＬＯＱ）を、バッファー中に得られたＬＬＯＱにＭＲＤを乗じることにより計算した。

【0427】

ｈｓＳＴ２耐性の決定
ｈｓＳＴ２耐性を、種々の濃度のｈｓＳＴ２（０．０１６ｎｇ／ｍＬ～４０ｎｇ／ｍＬ）をｈＩＬ－３３標準曲線に添加することにより決定した。報告された値は、ｈＩＬ－３３濃度の許容可能な回収率が得られたｈｓＳＴ２の最高濃度である。許容可能な回収は、ｈｓＳＴ２の非存在下で測定された対応するｈＩＬ－３３濃度の１００％±２０％と定義された。

【0428】

ｈＩＬ－３３の免疫除去
免疫除去を、バッファー、ビオチン化抗ｈＩＬ－３３にコンジュゲートしたビーズ、又は抗ｇｐ１２０にコンジュゲートしたビーズ（アイソタイプ コントロール）をヒト硝子体液試料に１時間室温（ＲＴ）で加えることにより、実施した。インキュベーションの後、コンジュゲートしたビーズを、マトリックスから除去した。これら２つの工程を繰り返し、マトリックスから免疫除去されたｈＩＬ－３３の量を計算した。免疫除去は、試料中のｈＩＬ－３３の量が、コントロール（免疫除去されていない）マトリックス試料の値と比較して１００％±２０％ ＳＤだけ減少する場合に許容可能と考慮された。

【0429】

還元型及び酸化型ｈＩＬ－３３の生成及びクオリティコントロール（ＱＣ）
Ｎ末端配列ＭＨＨＨＨＨＨＧＥＮＬＹＦＱＧ（Ｈｉｓタグ及びＴＥＶ切断部位；配列番号３７）と、それに続くアミノ酸１１２～２７０のコード配列（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ寄託番号０９５７６０）からなる組み換えｈＩＬ－３３が、大腸菌中に発現された。タンパク質を、Ｎｉ－Ｅｘｃｅｌクロマトグラフィーで精製し、続いてＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）で事前に平衡化したＳＵＰＥＲＤＥＸ（登録商標）Ｓ７５サイズ排除カラムで精製した。質量分析は、精製されたｈＩＬ－３３が、期待される分子量及びアミノ酸配列を有することを示した。ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミド（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）ゲルの試験から、物質の純度は９５％を上回ると予想された。精製されたｈＩＬ－３３のアリコートをＰＢＳバッファー中でさらに希釈し、０．３ｍｇ／ｍＬの最終濃度を得た。同様に、精製されたＩＬ－３３の別のアリコートを６０％イスコブ変法ダルベッコ培地（ＩＭＤＭ）（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）中に希釈し、同じタンパク質最終濃度を得た。次いで希釈されたタンパク質を３７℃でおよそ１８時間インキュベートした。両方の希釈タンパク質を、次いでＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルで質量分析を使用して分析し、ジスルフィド結合形成の程度を決定した。ＩＭＤＭ培地中に希釈した酸化型ｈＩＬ－３３を、その後最終的なＰＢＳバッファーへとバッファー交換し、培地成分を除去した。ＰＢＳ中の還元型ｈＩＬ－３３に、０．１ｍＭのトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）還元剤を補充した。

【0430】

抗体生成
９匹のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラット（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ，Ｈｏｌｌｉｓｔｅｒ，ＣＡ，ＵＳＡ）を、第１の用量については１００μｇ／動物の、残りのブーストについては５０μｇ／動物のｈＩＬ－３３（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）で免疫化し、各々を部位間で分けた：尾の根本での腹腔内、ｓ．ｃ．（皮下）、首筋でのｓ．ｃ．，及び両後肢関節のｓ．ｃ．。モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ）、Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）、Ｒ８４８、及びシトシンホスホジエステル結合グアニン（ＣｐＧ）（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）を含むＴｏｌｌ様受容体カクテルを、第１の用量のアジュバントとして使用した。抗原特異的ハイブリドーマを、記載されているように（Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｏｍｍｕｎ Ｂｉｏｌ，２０１９，２：３０４）、生成し、ソートし、スクリーニングした。簡潔に言えば、免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）^＋ｈＩＬ－３３^＋ハイブリドーマは、フィコエリトリン（ＰＥ）（Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ、Ｌｉｔｔｌｅｔｏｎ、ＣＯ，ＵＳＡ）にコンジュゲートしたｈＩＬ－３３を使用して、９６ウェルプレート中にソートし、７日間培養した単一細胞であった。上清を、ロボティクスプラットフォームを使用するハイスループット（ＨＴＰ）ＥＬＩＳＡによりスクリーニングし、ＥＬＩＳＡによりｈＩＬ－３３に対する結合を示すハイブリドーマを、１ｍＬの培養物中でスケールアップした。上清を、収穫し、プロテインＧアフィニティークロマトグラフィー樹脂（ＧａｍｍａＢｉｎｄ Ｐｌｕｓ，ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，ＰＡ，ＵＳＡ）を使用して精製した。抗ｈＩＬ－３３Ａｂが、配列決定のために提出され、組み換え生成のためにクローン化された。

【0431】

アレイベースのＳＰＲイメージングシステムによる抗ｈＩＬ－３３Ａｂの特徴づけ
アレイベースのＳＰＲイメージングシステム（ＣＦＭ／ＩＢＩＳ，ＣＡＲＴＥＲＲＡ（登録商標）ＵＳＡ）を使用して、結合反応速度を分析し、抗ＩＬ－３３ＭＡｂのパネルをエピトープビンした。精製したハイブリドーマＡｂを、１０ｍＭ酢酸ナトリウムバッファー（ｐＨ４．５）で１０μｇ／ｍｌに希釈した。アミンカップリングを使用して、Ａｂｓを、Ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ Ｆｌｏｗ Ｍｉｃｒｏｓｐｏｔｔｅｒ^ＴＭ（Ｃａｒｔｅｒｒａ、Ｄｕｂｌｉｎ，ＣＡ，ＵＳＡ）を使用してＳＰＲセンサープリズムＣＭＤ ２００Ｍチップ（ＸａｎＴｅｃ Ｂｉｏａｎａｌｙｔｉｃｓ，Ｇｅｒｍａｎｙ）上に直接固定化し、Ａｂのアレイを生成した。動力学及びビニング実験を、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ及び０．００５％のＴＷＥＥＮ（登録商標）２０（ＨＢＳ－ＴＥ）から構成されるランニングバッファー中２５℃で行った。ＩＢＩＳ ＭＸ９６ ＳＰＲｉ（Ｃａｒｔｅｒｒａ，Ｄｕｂｌｉｎ，ＣＡ，ＵＳＡ）を使用して、固定化されたＡｂに対するｈＩＬ－３３の結合を評価した。動力学分析については、３００ｎＭから開始する段階濃度の還元型及び酸化型ｈＩＬ－３３を、３分（ｍｉｎ）間注入し、１０分間解離させた。表面を、サイクル間に１０ｍＭのグリシン（ｐＨ１．７）を用いて再生した。結合データは、Ｓｃｒｕｂｂｅｒ（ＢｉｏＬｏｇｉｃ Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を使用して処理された。Ａｂビニングについては、まず還元型及び酸化型ｈＩＬ－３３を４分間１００ｎＭで注入し、続いて２回目の４分間注入を、精製されたＡｂを用いてＨＢＳ－ＴＥランニングバッファー中１０ｍｇ／ｍＬで行った。表面を、サイクル間に１０ｍＭのグリシン（ｐＨ１．７）を用いて再生した。結合データは、エピトープビニングソフトウェアツール（Ｃａｒｔｅｒｒａ，Ｄｕｂｌｉｎ，ＣＡ，ＵＳＡ）を使用して処理された。

【0432】

表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）による抗ｈＩＬ－３３Ａｂの特徴づけ
ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）８Ｋ装置（Ｃｙｔｉｖａ，Ｍａｒｌｂｏｒｏｕｇｈ，ＭＡ，ＵＳＡ）を使用して抗ｈＩＬ－３３ Ａｂの組み換えキメラヒトＩｇＧバージョンを捕捉するために、Ｓｅｒｉｅｓ ＳプロテインＡセンサーチップ（Ｃｙｔｉｖａ、Ｍａｒｌｂｏｒｏｕｇｈ，ＭＡ，ＵＳＡ）を使用した。ヒトヒスチジンタグｈＩＬ－３３（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）に結合する抗体は、マルチサイクルカイネティクスを使用して測定した。センサーグラムは、３０μＬ／分の流量で、２５℃又は３７℃、及び１０ｍＭのＮ－２－ヒドロキシエチルピペラジン－Ｎ’－２－エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、ｐＨ７．４、１５０ｍＭの塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、３ｍＭのエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、及び０．００５％ ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０のランニングバッファーで、２分の注入時間を使用して記録した。注入後、抗体からのＩＬ－３３の解離を、ランニングバッファー中で１０分間モニタリングした。表面は、結合サイクルの間に、１０ｍＭグリシンＨＣｌ（ｐＨ１．５）を３０μ注入して再生された。ランニングバッファーのみを含むブランクを差し引いた後、センサーグラムを、製造業者によって提供されたソフトウェアを備えた１：１ラングミュア結合モデルを使用して分析し、速度定数及び結合定数を計算した。

【0433】

還元型ｈＩＬ－３３ＥＬＩＳＡ
ＭＡＸＩＳＯＲＰ（登録商標）プレート（３８４ウェル、Ｎｕｎｃ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，ＮＹ，ＵＳＡ）を、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中１μｇ／ｍＬのラットＩｇＧ２ａ抗ヒトｈＩＬ－３３ １５．２１Ｃ７ Ａｂ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）で一晩４℃でコーティングした。次いでプレートを、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中０．０５％のＴＷＥＥＮ（登録商標）２０で洗浄し、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中０．５％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、１５ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ^ＴＭ３００で１時間（ｈ）ＲＴでブロックした。還元型ｈＩＬ－３３標準物質を、１ｍＭのＴＣＥＰ中に保存して、タンパク質をその還元された形態に維持し、試料を、氷冷アッセイバッファー（ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中０．５％のＢＳＡ、０．０５％のＴＷＥＥＮ（登録商標）２０、１５ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ^ＴＭ、０．２５％のＣＨＡＰＳ、５ｍＭのＥＤＴＡ、及び０．３５ＮのＮａＣｌ）中２段階半希釈を使用して希釈し、プレート内で２時間ＲＴでインキュベートした。６回の洗浄後、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中０．５％のＢＳＡ、０．０５％のＴＷＥＥＮ（登録商標）２０、１５ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ^ＴＭに希釈した２００ｎｇ／ｍＬのビオチン化されたラット／ヒトキメラ抗ｈＩＬ－３３ ３Ｆ１０ ＭＡｂ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）を、１時間ＲＴでインキュベートした。結合した還元型ｈＩＬ－３３を、ホースラディッシュペルオキシダーゼにコンジュゲートしたストレプトアビジン（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，ＰＡ，ＵＳＡ）及びその基質３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジン（Ｍｏｓｓ Ｉｎｃ．，Ｐａｓａｄｅｎａ，ＭＤ，ＵＳＡ）の１：１０，０００希釈を使用して検出した。反応を１Ｍのリン酸で停止させ、吸収度を４５０ｎｍで読み取った。滴定曲線を、社内の４パラメーター回帰プログラムを使用してフィッティングした。

【0434】

総ｈＩＬ－３３ ＥＬＩＳＡ
総ｈＩＬ－３３ ＥＬＩＳＡは、コーティングについては、０．５μｇ／ｍＬのラットＩｇＧ２ａ抗ｈＩＬ－３３ １５．２１Ｃ７（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）と、２μｇ／ｍＬのヤギ抗ｈＩＬ－３３ Ａｂｓ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ，ＵＳＡ）との１：１の容積対容積比（ｖｏｌ／ｖｏｌ）の混合物を、及び検出については、１００ｎｇ／ｍＬのビオチン化ヤギ抗ｈｕＳＴ２（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ，ＵＳＡ）と、５０ｎｇ／ｍＬのビオチン化ヤギ抗ｈＩＬ－３３（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ，ＵＳＡ）Ａｂとの１：１（ｖｏｌ／ｖｏｌ）の混合物を使用して、同様に実行した。標準物質は、２０ｎｇ／ｍＬのｈｓＳＴ２を含有する氷冷アッセイバッファー中で調製された酸化型ｈＩＬ－３３と還元型ｈＩＬ－３３との１：１（ｖｏｌ／ｖｏｌ）混合物からなっていた。

【0435】

抗体－ＤＮＡコンジュゲーション
５５－ｍｅｒ ＤＮＡ（配列番号３８）５’－ＮＨ２－／５ＡｍＭＣ６／ＴＧＡＡＧＧＴＣＣＴＴＧＧＣＧＡＴＣＡＴＴＴＣＧＧＣＧＧＴＧＡＴＣＧＧＡＴＧＣＡＴＴＴＧＧＣＴＡＣＧＴＣＣＣＴ－３’（Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ＤＮＡ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃｏｒａｌｖｉｌｌｅ，ＩＡ）を、Ｎ－スクシンイミジル－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ，ＵＳＡ）で活性化した。ラットＩｇＧ２ａ抗ヒトＩＬ－３３クローン１５．２１Ｃ７（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）を、Ｎ－スクシンイミジル－Ｓ－アセチルチオアセテート（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ，ＵＳＡ）で活性化し、製造業者の説明書に従って、活性化したデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）にコンジュゲートさせた。遊離した（例えば、結合していない）ＤＮＡを、Ｓｕｐｅｒｏｓｅ（登録商標）１２ゲル濾過カラムを使用して除去した。遊離した（例えば、結合していない）抗体を、Ｖｉｖａｐｕｒｅ（登録商標）Ｑミニカラム（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ Ｓｔｅｄｉｍ Ｂｉｏｔｅｃｈ ＧｍｂＨ，Ｇｏｅｔｔｉｎｇｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して除去した。

【0436】

還元型ｈＩＬ－３３を検出するための３８４ウェルｉＰＣＲ法
０．２μｇ／ｍＬのビオチン化ラット／ヒトキメラ抗ｈＩＬ－３３ ３Ｆ１０捕捉抗体、標準物質又は試料、及び２５ｎｇ／ｍＬのＤＮＡ標識したラットＩｇＧ２ａ抗ｈＩＬ－３３ １５．２１Ｃ７検出抗体を、試料バッファー（ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中、０．５％のＢＳＡ、０．０５％のＴＷＥＥＮ（登録商標）２０、１５ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ^ＴＭ、０．２５％の３－（（３－コラミドプロピル）ジメチルアンモニオ）－１－プロパンスルホネート（ＣＨＡＰＳ）、５ｍＭのＥＤＴＡ、０．３５ＮのＮａＣｌ及び２５０μｇ／ｍＬの子牛胸腺ＤＮＡ）中で２時間室温でプレインキュベートした。２５０μｇ／ｍＬの子牛胸腺ＤＮＡ（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ）を、９５℃に１０分間加熱し、次いでアッセイバッファーへの付加に先立ち氷上に少なくとも５分間保った。１ｍＭのＴＣＥＰ中の還元型ｈＩＬ－３３（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）を標準物質として使用し、酸化を減少させるためにて氷上で調製した。ヒト硝子体液、眼房水、血清、及びＮＦの試料中での還元型ｈＩＬ－３３の濃度を、試料バッファーを使用して氷上で調製した。ストレプトアビジン被覆３８４ウェルリアルタイムＰＣＲプレート（Ｒｏｃｈｅ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ－Ｃｕｓｔｏｍ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｐｅｎｚｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を、ＳｕｐｅｒＢｌｏｃｋ^ＴＭバッファー（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ，ＵＳＡ）で２時間ブロックし、３８４ウェルプレートウォッシャー（ＢｉｏＴｅｋ，Ｗｉｎｏｏｓｋｉ，ＶＴ，ＵＳＡ）を使用して、ｉＰＣＲ洗浄バッファー（ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中、０．５％のＢＳＡ，０．０５％のＴＷＥＥＮ（登録商標）２０、１５ｐｐｍのＰｒｏｃｌｉｎ^ＴＭ）で３回洗浄した。次いで抗体－抗原混合物を、プレートに加え、ｉＰＣＲ洗浄バッファーで１３回洗浄することに先立って２０分間インキュベートした。フルオレセイン色素及びクエンチャーで標識した、プライマー（５’‐ＴＧＡＡＧＧＴＣＣＴＴＧＧＣＧＡＴＣＡ（配列番号３９）及び５’‐ＡＧＧＧＡＣＧＴＡＧＣＣＡＡＡＴＧＣＡＴ（配列番号４０））と、プローブ（５’－ＴＴＣＧＧＣＧＧＴＧＡＴＣＧｐ－３’（配列番号４１））とを含有する６０Ｘ ＰＣＲ混合物を、プレートに加える前に、Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ＴａｑＭａｎ（登録商標）Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ ＩＩ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ，ＵＳＡ）及びＰＣＲグレード水中で１Ｘに希釈した。リアルタイムＰＣＲを、ＶｉｉＡ^ＴＭ７リアルタイムＰＣＲシステム（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ，ＵＳＡ）を使用して実行した。熱循環条件は、９５℃で１０分間、続いて９５℃で１５秒を４０サイクル、及び６０℃で１分間であった。標準曲線を、４パラメーター回帰カーブフィッティングプログラム（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）を使用して生成した。

【0437】

ヒト生物学的試料
コントロール及び急性ＡＭＤ死後ドナー由来の硝子体液及び眼房水試料は、Ｌｉｏｎｓ Ｅｙｅ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（Ｔａｍｐａ，ＦＬ，ＵＳＡ）又はＢｉｏＩＶＴ（Ｗｅｓｔｂｕｒｙ，ＮＹ，ＵＳＡ）から購入した。疾患のステージ（早期、中期、進行）又は種類（滲出型対乾燥型ＡＭＤ）は、ベンダーにより提供された試料シートに開示されていなかった。コントロール及び「自己申告による」喘息患者由来の血清、ＮＦ、及び血漿の試料は、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ Ｈｅａｌｔｈｙ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ（Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）から取得した。

【0438】

統計分析
統計学的試験を、独立両側Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定又はマン・ホイットニー試験を使用して実行した。エラーバーは、標準偏差を示す。＜０．０５のＰ値は、統計的に有意であると見なした。

【0439】

実施例２：加齢黄斑変性及び喘息の薬物開発用超高感度ヒトＩＬ－３３バイオマーカーアッセイの開発
過去数十年間に、ヒトインターロイキン３３（ｈＩＬ－３３）は、多数の炎症性疾患の病因に対する重要な寄与因子として浮上した。マルチプラットフォーム技術に及ぶ複数の市販のｈＩＬ－３３アッセイが存在しているものの、種々のマトリクスにおいて精密なｈＩＬ－３３の濃度測定を提供し、活性（還元型）ｈＩＬ－３３と非活性（酸化型）ｈＩＬ－３３とを区別するそれらの能力は依然として不明確である。このことは、比較的小さな試料容積、低ｈＩＬ－３３濃度のマトリクス、及びインターロイキン１受容体様１（ｓＳＴ２）のレベルが上昇したマトリクス、ｈＩＬ－３３結合について膜結合ＳＴ２と競合する不活性型のＳＴ２について特に当てはまる。

【0440】

複数の市販のｈＩＬ－３３検出アッセイの性能を、種々のヒトマトリックスにおいて試験した。試験済みの市販のアッセイのほとんどは、特にヒトｓＳＴ２（ｈｓＳＴ２）（例えば、ｈｓＳＴ２に結合したｈＩＬ－３３）の存在下において、生物学的に関連するレベルで還元型ｈＩＬ－３３を正確に検出する感度を欠く（それを下回るｐｇ／ｍＬから低ｐｇ／ｍＬ）、及び／又は十分な標的特異性を欠くことが判明した。これに対処するために、たとえ高濃度のｓＳＴ２（例えば、ｈｓＳＴ２に結合したｈＩＬ－３３）の存在下においても、還元型及び総ｈＩＬ－３３のレベルを検出することのできる高感度で特異的な酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）を開発し、検証した。免疫－ポリメラーゼ連鎖反応（ｉＰＣＲ）プラットフォームを組み込むことにより、このアッセイの感度は、ｈＩＬ－３３還元形態について約５２倍まで上昇した。このｈＩＬ－３３ ｉＰＣＲアッセイを使用して、ｈＩＬ－３３が、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）を有するドナー由来の死後のヒト硝子体液試料中で検出され、ｈＩＬ－３３レベルは、コントロール個体と比較したとき有意に上昇していることが認められた。ＡＭＤドナー由来の眼房水と喘息患者由来の血漿及び鼻腔吸収液（ＮＦ）には、コントロール個体と比較して統計的に有意な差異は観察されなかった。

【0441】

既存の市販のｈＩＬ－３３アッセイとは異なり、現在開示されているｈＩＬ－３３バイオアッセイは、極めて高感度かつ特異性であり、高レベルのｈｓＳＴ２を有するものを含め、種々のヒト臨床マトリックス中でｈＩＬ－３３を正確に定量化することができる。本発明の結果は、ｈＩＬ－３３／ｈＳＴ２経路を標的とする臨床治験においてこれらアッセイの有用性を実証するものである。

【0442】

結果
市販のアッセイは高い感度で還元型ｈＩＬ－３３を検出することができなかった
生物学的マトリックス中で１０ｐｇ／ｍＬ未満の濃度の還元型ｈＩＬ－３３を検出することのできる高感度のアッセイを同定するために、ｈＩＬ－３３ 濃度（表３）を報告するために文献中で使用された種々の市販のアッセイ試薬及びプラットフォームを比較した。一連の抗ｈＩＬ－３３抗体をプレスクリーニングし、バッファー中で感度が最も高いものだけを、ＥＬＩＳＡフォーマットにおける試験のために選択した。ヒトマトリックスのための適切なバイオマーカーアッセイとして認定するために、４つの選択基準が確立された：１）非病理学条件下から中程度の病理学条件下でｈＩＬ－３３は存在しないか又は低レベルで存在すると予想されるため、ＶＨにおけるアッセイの定量限界は＜４ｐｇ／ｍＬでなければならない；２）ＶＨ及び血清試料中のｈｓＳＴ２の平均濃度がそれぞれ２．０５及び１９．８ｎｇ／ｍＬであるため、アッセイは少なくとも１０ｎｇ／ｍＬのｈｓＳＴ２を許容しなければならない（図１）；３）抗ｈＩＬ－３３ Ａｂと共にインキュベートしたとき、ｈＩＬ－３３含有ヒト硝子体液試料からｈＩＬ－３３の１００％±２０％を免疫除去する能力を特徴としていたアッセイは、特異性でなければならない；及び４）一部のヒトの眼のマトリックスは取得困難であり、高い希釈はアッセイの感度を損なうであろうから、最大試料容量は５０μＬでなければならない。

【0443】

試験された市販のキット／試薬アッセイのうち、４つすべての基準を満たすものはなかった（表３）。ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎのヒトＩＬ－３３ ＥＬＩＳＡキット、ウサギ（Ｒｂ）ｘｈＩＬ－３３（Ｐｅｐｒｏ）／ビオチンヤギｘｈＩＬ－３３（Ｒ＆Ｄ）、Ｕ－ＰＬＥＸ ヒトＩＬ－３３ ＭＳＤキット及びＢｉｏ－Ｐｌｅｘ ＰｒｏヒトＴヘルパー（Ｔｈ１７）サイトカイン１５－Ｐｌｅｘキットは、硝子体液中で検出下限を有していた（表３）。しかしながら、それらのいずれもが、ヒトマトリックス中に予想される平均ｈｓＳＴ２濃度を許容することはできなかった（図１）。Ｑｕａｎｔｅｒｉｘ Ｓｉｍｏａ（登録商標）プラットフォームは、バッファー中のミュー抗ｈＩＬ－３３（Ｅｎｚｏ）／ビオチン－ミュー抗ｈＩＬ－３３（Ｎｏｖｕｓ）対の定量限界を向上させることはできず、必要とされる試料容積は、眼の試料のアッセイと適合しなかった（表３）。

【0444】

ｈｓＳＴ２耐性が許容されないことを別にすれば、ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎのヒトＩＬ－３３ ＥＬＩＳＡキットは、高感度かつ特異性であり（表３）、４つの基準のうちの３つを満たした。いずれの形態のｈＩＬ－３３がこのキットで特に認められたかを調査するために、キット内に提供されるｈＩＬ－３３と社内で生成された又は酸化型及び還元型ｈＩＬ－３３とを使用して生成された標準曲線（図２）を比較した。これら結果は、このＥＬＩＳＡキットが大部分の酸化型ｈＩＬ－３３を検出しており、還元型ｈＩＬ－３３に対しては低い感度を有することを示すものであった（図３）。まとめると、この比較試験は、試験済みの市販の試薬／キットが、高感度の還元型ｈＩＬ－３３検出アッセイとして認定されるために必要な基準を満たすことを示唆するものであった。

【0445】

表３：ｈＩＬ－３３を検出するための市販の試薬及びプラットフォームの性能

アッセイ基準選択を満たさなかったパラメーターは太字で強調されている；ｎ／ａは、パラメーターが試験されなかったことを表す。ＬＬＯＱ＝定量下限。

【0446】

還元型及び総ｈＩＬ－３３ ＥＬＩＳＡの開発
硝子体液中の１）還元型ｈＩＬ－３３及び２）総ｈＩＬ－３３（還元型及び酸化型）を定量化することのできる２つのＥＬＩＳＡの開発の成功が、大規模な抗体生成及びスクリーニングキャンペーンと、それに続く特徴づけ及び検証実験を通して達成された。ラット免疫化キャンペーンの結果、３０２６の抗体が生成された。アレイベースの表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して、還元型ｈＩＬ－３３に高い親和性で特異的に結合し、Ａｂビニングを通してｈｓＳＴ２と競合しない異なるエピトープ群を表示した精製ハイブリドーマＡｂが同定された。選択された社内のモノクローナルＡｂと市販のポリクローナルＡｂ（ＭＡｂ又はＰＡｂ）との対の８８の組み合わせを、ＥＬＩＳＡにより、総ｈＩＬ－３３、酸化型ｈＩＬ－３３、又は還元型ｈＩＬ－３３に対するそれらの結合能についてスクリーニングした。８８の抗体対のうち、２つの対のみが、バッファー中で１０ｐｇ／ｍＬ未満の感度で還元型ｈＩＬ－３３を検出し、１対のみ（抗体クローン３Ｆ１０と１５．２１Ｃ７）が、ｈｓＳＴ２耐性であった（最大４０ｎｇ／ｍＬ）（図４Ａ）。クローン３Ｆ１０及び１５．２１Ｃ７は、それぞれ一定の解離（Ｋ_Ｄ）値０．４８７及び０．３３８ｎＭで還元型ｈＩＬ－３３に結合した（図５及び表４）。還元型ｈＩＬ－３３ ＥＬＩＳＡの定量下限（ＬＬＯＱ）及び定量上限（ＵＬＯＱ）は、それぞれ４．１ｐｇ／ｍＬ及び１０００ｐｇ／ｍＬであり、アッセイ間変動係数（ＣＶ）は９．１％及び１．６％であった（表４）。アッセイは、２５μＬのアッセイ容積を有する３８４ウェルプレートフォーマットにおいて実施された。

【0447】

表４：２５℃で還元型ｈＩＬ－３３に結合する抗ｈＩＬ－３３ Ａｂ １５．２１Ｃ７及び３Ｆ１０の速度定数

【0448】

還元型（１５．２１Ｃ７）ｈＩＬ－３３特異性抗体と総ｈＩＬ－３３特異性抗体との組み合わせがコーティングとして使用される総ｈＩＬ－３３ ＥＬＩＳＡが実装された。飽和濃度のｈｓＳＴ２の付加時に、抗ｈＩＬ－３３モノクローナル抗体及び抗ＳＴ２モノクローナル抗体からなる抗体カクテルを使用して、混合物中に存在する還元型及び酸化型ｈＩＬ－３３の総量を検出した。各抗体の比率は、還元型及び酸化型ｈＩＬ－３３を確実に均等に検出するために徹底的に最適化された（図４Ｂ）。ＥＬＩＳＡ全体のＬＬＯＱ及びＵＬＯＱは、それぞれ４．１ｐｇ／ｍＬ及び１０００ｐｇ／ｍＬであり、アッセイ間ＣＶは１０．５％及び０．７％であった（表５）。

【0449】

表５：還元型及び総ｈＩＬ－３３ ＥＬＩＳＡの標準曲線の性能

ｎ＝６回の独立したアッセイの実行 ＬＬＯＱ＝４．１ｐｇ／ｍＬ、ＵＬＯＱ＝１０００ｐｇ／ｍＬ

【0450】

免疫除去実験により、アッセイがコントロール硝子体液試料中で総ｈＩＬ－３３に特異性であり、抗ｈＩＬ－３３抗体にコンジュゲートしたビーズの存在下で８９．１％±０．３１％のシグナルが除去されることが確認された（図４Ｃ）。また、血清、血漿、及びＮＦの最低希釈倍率は、総ｈＩＬ－３３の直線性希釈を試験することにより、１：２であることが確立された（表６）。アッセイのＬＬＯＱが４．１ｐｇ／ｍＬである場合、血清、血漿、及びＮＦの検出下限は８．２ｐｇ／ｍＬである。

【0451】

要約すると、ｈｓＳＴ２（例えば、ｈｓＳＴ２に結合したｈＩＬ－３３）の存在下で１０ｐｇ／ｍＬ未満のｈＩＬ－３３を検出することのできる還元型及び総ｈＩＬ－３３ ＥＬＩＳＡが、成功裏に実装及び開発された。

【0452】

表６：ヒトマトリックス中に内因的に発現される総ｈＩＬ－３３の希釈直線性

【0453】

還元型ｈＩＬ－３３ ｉＰＣＲアッセイの開発及び特徴づけ
上述のｈＩＬ－３３ ＥＬＩＳＡの感度は上昇したとはいえ、ヒトの眼の試料及び血清試料の大部分において、依然としてｈＩＬ－３３の検出可能なレベルを測定することはできなかった。したがって、検出アッセイの感度を上昇させるうえで以前大きな期待を抱かせたｉＰＣＲプラットフォームを調査した。還元型ｈＩＬ－３３ ＥＬＩＳＡと同様に、クローン３Ｆ１０及び１５．２１Ｃ７が利用されたが、ｉＰＣＲ反応の間に増幅された５５－ｍｅｒ ＤＮＡにコンジュゲートし、シグナルの強化を可能にしたのは後者であった。ｉＰＣＲプラットフォームは、０．０７８ｐｇ／ｍＬ（±１．１％）のＬＬＯＱで感度を劇的に上昇させ、このことはＥＬＩＳＡからの５２．６倍の向上を表していた（表７）（図６Ａ）。免疫除去実験により、アッセイがコントロール硝子体液試料中で還元型ｈＩＬ－３３に特異性であり、クローン１５．２１Ｃ７ Ａｂにコンジュゲートしたビーズの存在下で９９．６％±０．０７％のシグナルが除去されることが確認された（図６Ｂ）。

【0454】

表７：還元型ｈＩＬ－３３ ｉＰＣＲの標準曲線の性能

【0455】

ｎ＝６回の独立したアッセイの実行ＬＬＯＱ＝０．０７８ｐｇ／ｍＬ、ＵＬＯＱ＝２０ｐｇ／ｍＬ
アッセイの精度は、独立して実行された合計１２回について、４つの複製物における、アッセイバッファーに希釈した還元型ｈＩＬ－３３の３種類の濃度（０．６、１．８及び６．５ｐｇ／ｍＬ）を測定することにより評価された。３つのコントロールはすべて、２０％を下回るアッセイ内及びアッセイ間ＣＶ（表８）を有し、このことは、生じた結果が再現可能かつ精密であることを示していた。

【0456】

表８：還元型ｈＩＬ－３３ ｉＰＣＲアッセイの精度

^ａｎ＝１２回の実行；^ｂｎ＝４つの複製物

【0457】

次いで最低希釈倍率を決定するために、アッセイの直線性を、一組のプールされた個体コントロール及び死後のマトリックス試料を使用して評価した。複数の適応症に使用することのできるバイオマーカーアッセイを実装するために、２つの眼のマトリックス、血清、血漿、及びＮＦを試験した。内因性の還元型ｈＩＬ－３３の濃度が低いこと（低ｐｇ／ｍＬ）及びヒトマトリックスの利用可能性が限定されていることに起因して、試験した希釈の範囲は狭まった。これら結果は、希釈により調整した濃度の眼、血清、血漿及びＮＦマトリックスにおける回収率が、１：２の血清を除き、試験したすべての希釈物で直線性の受容基準の±２０％以内であることを示していた（％回収率＝６６．３％）（表９）。したがって、硝子体液、眼房水、血漿及びＮＦの最低希釈倍率（ＭＲＤ）は１：２であり、血清については１：４であった。アッセイのＬＬＯＱが０．０７８ｐｇ／ｍＬである場合、定量化することのできる最低濃度は、硝子体液、眼房水、血漿及びＮＦについては０．１５６ｐｇ／ｍＬであり、血清については０．３１２ｐｇ／ｍＬであった。

【0458】

表９：ヒトマトリックス中に内因的に発現される還元型ｈＩＬ－３３の希釈直線性

【0459】

追加的に、添加回収実験を実施して正確性を評価した。低、中、及び高濃度の還元型ｈＩＬ－３３を、それらそれぞれのＭＲＤに従って希釈したこれらマトリックスに加え、パーセント回収率を、予想濃度を上回る測定濃度の比率として決定した（内因性＋添加還元型ｈＩＬ－３３）。すべての試料回収率は、予想された８０～１２０％の範囲内であり、このことは、ｉＰＣＲアッセイが眼、血清、血漿及びＮＦマトリックス中の還元型ｈＩＬ－３３を正確に測定できることを実証した（表１０）。

【0460】

表１０：マトリックス中の還元型ｈＩＬ－３３の添加回収により測定した正確性試験

【0461】

還元型ｈＩＬ－３３のレベルは、コントロールと比較して、ヒト乾燥型ＡＭＤ由来の硝子体液試料中で有意により高かった。

【0462】

ｉＰＣＲアッセイを使用して、還元型ｈＩＬ－３３のレベルを、死後の正常なドナー及びＡＭＤドナー由来のヒト硝子体液及び眼房水試料において測定した。これらドナー由来のＡＭＤの重症度（早期か進行しているか）又は種類（滲出型か乾燥型か）に関する情報が入手できなかったことに注意されたい。合計で硝子体液の８８．７％と眼房水試料の５７．７％がＬＬＯＱを上回っていた。還元型ｈＩＬ－３３の有意な増加が、コントロール試料と比べてＡＭＤに観察され、これは、ＧＡに関連付けられるｈＩＬ－３３陽性細胞の存在の増加と一致していた（Ｘｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ，２０１６，２１３：１８９－２０７）（図７Ａ）。また、コントロール眼房水試料と比較して平均３．３倍の量の還元型ｈＩＬ－３３が死後のＡＭＤ眼房水試料に検出されたが、その差は有意でなかった（Ｐ＝０．２７７３）（図７Ｂ）。まとめると、これら結果は、還元型ｉＰＣＲアッセイが、予測的かつ薬力学的バイオマーカーアッセイとして使用できることを示唆するものである。

【0463】

還元型ｈＩＬ－３３は、自己申告による喘息患者由来の血漿及びＮＦにおいて有意に上方制御されない
複数の文献中レポートにおいて、ｈＩＬ－３３タンパク質レベルが喘息患者において上方制御されることが示されている（Ｍｏｍｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ Ｊ Ｐｒｅｖ Ｍｅｄ，２０１７，８：６５；Ｂａｈｒａｍｉ Ｍａｈｎｅｈ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ Ａｒｃｈ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２０１５，１６８：１９３－１９６；Ｖｏｌｏｓｈｙｎａ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ａｌｌｅｒｇｙ，２０１５，４５：１５５４－１５６５；Ｒａｅｉｓｚａｄｅｈ Ｊａｈｒｏｍｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ａｓｔｈｍａ，２０１４，５１：１００４－１０１３）。しかしながら、ｈＩＬ－３３の濃度を測定するために利用可能な市販のアッセイの包括的な評価は、それらのすべてではなくともほとんどが、情報に基づいた解釈を得るために必要な感度で活性の還元型ｈＩＬ－３３を測定することができないことを明らかにした。本明細書では、還元型ｈＩＬ－３３ ｉＰＣＲアッセイを使用して、年齢及び性別が一致する９名のコントロール及び喘息患者由来のＮＦ及び血清中の還元型ｈＩＬ－３３のレベルを決定し、比較した。両方のマトリックスが同じドナーから抽出されたことに注意されたい。これら結果は、ＮＦと血清との間で還元型ｈＩＬ－３３濃度に有意な差がないことを示した（図８Ａ及び８Ｂ）。加えて、血清中の還元型ｈＩＬ－３３の平均レベルは、６．４ｐｇ／ｍＬであった（図８Ｂ）。このような比較的高いレベルは、血清調製中に血小板から細胞内ｈＩＬ－３３が放出されたことによるものである可能性がある。この仮説を排除するために、一致する血漿試料において同様の測定を実施した。平均の還元型ｈＩＬ－３３濃度は血清と同様であり（６．９ｐｇ／ｍＬ）、このことは、還元型ｈＩＬ－３３の濃度が試料調製のアーチファクトではないことを確認するものであった（図８Ｃ）。また、同じ試料中の総ｈＩＬ－３３の濃度（還元型及び酸化型）が試験され、正常試料と喘息試料との間に有意な差は観察されなかった（図９）。

【0464】

喘息患者（ｎ＝２３の試料）由来のヒト血清中の平均の還元型ｈＩＬ－３３濃度は６．７ｐｇ／ｍＬであり、それに対して総ｈＩＬ－３３は１．０６ｎｇ／ｍＬであり、ほとんどのｈＩＬ－３３が酸化型で不活性であることが実証された（図８Ｄ）。ＮＦ試料において還元型ｈＩＬ－３３と総ｈＩＬ－３３との間には有意な相関が存在しており、このマトリックスにおいてはｈＩＬ－３３の大部分が還元型で活性であることが実証された（図８Ｄ）。

【0465】

まとめると、これら結果は、喘息患者の血清及びＮＦにおいて活性ｈＩＬ－３３の上方制御をサポートしない。

【0466】

考察
この試験では、生物学的マトリックス中のｈＩＬ－３３を測定するための市販のアッセイの徹底的な評価が提供された。Ｃｏｈｅｎ ｅｔ ａｌ．ａｎｄ Ｋｅｔｅｌａａｒ ｅｔ ａｌ．によって行われた観察と同様に、市販のアッセイのすべてではなくともほとんどが、分泌される活性ｈＩＬ－３３の高感度で特異性の測定の基準を満たさなかった（Ｃｏｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ，２０１５，６：８３２７；Ｋｅｔｅｌａａｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ａｌｌｅｒｇｙ，２０１６，４６：８８４－８８７）。このような発見は、文献に報告されている細胞外マトリックス中の生理活性ｈＩＬ－３３レベルが、慎重に解釈されなければならないことを示唆し、健常者及び罹患したヒト患者の還元型ｈＩＬ－３３の利用可能性を測定するためのアッセイを実装する必要性をサポートするものであった。

【0467】

本明細書に報告されるのは、それぞれ検出限界０．１５６、０．３１２、０．１５６及び０．１５６ｐｇ／ｍＬで、眼のマトリックス、血清、血漿、及びＮＦにおける還元型ｈＩＬ－３３を正確に測定する、３８４ウェルプレートフォーマットと適合性の超高感度ｉＰＣＲアッセイの開発である。ｉＰＣＲプラットフォームは、抗原の検出感度を、標準ＥＬＩＳＡと比較して最大２ ｌｏｇまで高めるために成功裏に利用できたために選ばれた。．３８４ウェルプレートフォーマットは、ヒトの眼の試料が極端に取得困難で、典型的にはドナー１人当たり１００μＬの眼房水試料しか取得できないため、特に魅力的であった。完全に特徴づけされたアッセイは、予測的又は薬力学的バイオマーカーアッセイとして利用される可能性を有している。

【0468】

まず、健常者及びＡＭＤ患者由来のヒト硝子体液及び眼房水試料中のｈＩＬ－３３のレベルを測定した。ｎｇ／ｍＬのｈＩＬ－３３を含有するげっ歯類の眼の試料とは対照的に（データは示さない）、Ｔａｋｅｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ．（Ｔａｋｅｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ，２０１５，１０：ｅ０１３７３５８）によって出版された研究に基づき、ヒトの眼の試料中のｈＩＬ－３３は約１，０００分の１と予想された。この試験において、著者は、増殖性糖尿病性網膜症患者由来の硝子体液試料中のｈＩＬ－３３が平均で１７．１ｐｇ／ｍＬであり、検出限界を上回る試料が２５％のみであったことを報告した。これら結果は、試験に使用されたアッセイが最適以下であり、ｎｇ／ｍＬ濃度のｈｓＳＴ２を許容できないことを示すものであった（図３）。ｉＰＣＲアッセイを使用したとき、試験した硝子体液試料（コントロール及びＡＭＤ試料）の８８．７％においてｈＩＬ－３３を検出することはできなかった。コントロール硝子体液試料と比較して死後のＡＭＤ中のｈＩＬ－３３濃度に有意な上昇が観察され、このことはｈＩＬ－３３がＡＭＤ中で上方制御されることを示唆し、過去の所見と一致していた。ＡＭＤを有するドナー由来の死後の眼房水試料中のｈＩＬ－３３にも、コントロールドナーと比較して上昇したレベルが測定されたが、差は有意でなかった（Ｐ＝０．２７７３）。統計的有意性に到達できるかどうかを確認するためには、より多くの眼房水試料が必要と思われる。全体として、硝子体液試料に得られるｈＩＬ－３３の濃度は、眼房水試料におけるものよりも高かった。これは、水性区画より硝子体区画に近い眼の後区画内の細胞によるｈＩＬ－３３の生成が優勢であることと一致している（Ｘｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ，２０１６，２１３：１８９－２０７）。

【0469】

また、健常者と喘息患者由来の血清、血漿、及びＮＦを分析した。還元型ｈＩＬ－３３と総ｈＩＬ－３３との間の強い相関が喘息患者のＮＦに観察され、総ｈＩＬ－３３のほとんどが還元されることを示した。このことは、高レベルのｈＩＬ－３３を発現する組織の近接性により説明されうる。

【0470】

対照的に、血清及び血漿中のｈＩＬ－３３のほとんどは酸化され、したがってｈｓＳＴ２に結合することができないと思われる。このような観察により、血漿に到達するすべての遊離（例えば、結合していない）ｈＩＬ－３３は数時間以内に酸化される可能性が高いという仮説を立てたＣｏｈｅｎ ｅｔ ａｌ．による予測が確認された（Ｃｏｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ，２０１５，６：８３２７）。血清中のＩＬ－３３の持続的な上昇が、ＩＬ－３３核局在化シグナルが削除されたマウスモデルに致死的な炎症をトリガーすることが示されたため、このような制御機構は必須である（Ｂｅｓｓａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ，２０１４，５５：３３－４１）。

【0471】

重要なのは、還元型ｈＩＬ－３３ ｉＰＣＲアッセイが高度にｈｓＳＴ２耐性であることであり、このことは、遊離した（例えば、、結合していない）還元型ｈＩＬ－３３とｈｓＳＴ２に結合したｈＩＬ－３３とが区別できないことを意味している。このことは、血漿中で測定された６．９ｐｇ／ｍＬ（０．３８ｐＭ）のｈＩＬ－３３は、一部分がそのデコイレセプターｈｓＳＴ２に結合されうるため、完全に活性でない可能性を暗示している。コントロール及び喘息患者の試料群両方におけるｈｓＳＴ２の平均濃度は、１４．７ｎｇ／ｍＬ（０．４ｎＭ）であると決定された（図１０Ａ）。したがって、還元型ｈＩＬ－３３の大部分又は全体がｈｓＳＴ２と複合体を形成しており、その受容体を通してシグナル伝達できなかった可能性が高い。ｈｓＳＴ２レベルは試料の約６０％においてＬＬＯＱを下回ったため、同様の仮定をおＮＦ試料について行うことはできなかった（図１０Ｂ）。

【0472】

これは、ヒト血清及び血漿中の還元型及び総ｈＩＬ－３３を正確に報告する初の試験である。他の群では、疾患の重症度が様々である喘息患者の血清ｈＩＬ－３３のレベルが報告された（Ｍｏｍｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ Ｊ Ｐｒｅｖ Ｍｅｄ，２０１７，８：６５；Ｂａｈｒａｍｉ Ｍａｈｎｅｈ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ Ａｒｃｈ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２０１５，１６８：１９３－１９６；Ｖｏｌｏｓｈｙｎａ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ａｌｌｅｒｇｙ，２０１５，４５：１５５４－１５６５；Ｒａｅｉｓｚａｄｅｈ Ｊａｈｒｏｍｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ａｓｔｈｍａ，２０１４，５１：１００４－１０１３）。ｈＩＬ－３３レベルを生成するために使用されたすべての市販のキットは、徹底的な特徴づけによれば、以下の理由で還元型ｈＩＬ－３３を正確に検出するには適していなかった：１）これらアッセイは、血清（～２０ｎｇ／ｍＬ）中に存在するｈｓＳＴ２のレベルを許容することがでなかった、２）それらの検出限界は十分に低くなかった、及び／又は３）それらはｈＩＬ－３３の酸化形態のみを特異的に検出した。したがって、これらアッセイを用いて生成したデータを比較するときには注意が必要である。

【0473】

これら結果は、健常者由来の還元型ｈＩＬ－３３レベルと喘息患者由来の還元型ｈＩＬ－３３レベルとの間に有意な差を示さない。考慮すべき１つの重要な点は、分析された試料が、一定の範囲の重度にわたる異種集団を表している可能性が高い「自己申告した」喘息患者から収集されたことである。これらドナーが試料収集の時点で喘息を悪化させていたかどうかに関する情報は存在せず、したがって還元型ｈＩＬ－３３が実際にこのような事例において有意により高いという可能性を排除することはできない。また、ヒト肺試料は高レベルのｈＩＬ－３３を含有していたため、Ｃｏｈｅｎ ｅｔ ａｌと同様に、中程度から重度の喘息患者に由来する痰の試料を試験することも興味深いと思われた（Ｃｏｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ，２０１５，６：８３２７）。

【0474】

結論
結論として、複数のヒトマトリックス中の還元型ｈＩＬ－３３の濃度を測定するための市販の方法は、感度及び特異性の許容可能な基準を満たさなかった。これに対処するために、広範囲のマトリックスにわたって特異的にかつ正確に還元型ｈＩＬ－３３を検出することのできる改善された抗体及び高感度のｉＰＣＲアッセイが開発された。この新規のバイオマーカーアッセイは、複数の適応症に関するｈＩＬ－３３／ｈＳＴ２ シグナル伝達経路を標的とする進行中の及び未来の臨床治験のために広範な影響を有する可能性がある。臨床的状況において、このアッセイは、基礎となるｈＩＬ－３３濃度に基づいて候補となるレスポンダーを同定し、抗ｈＩＬ－３３抗体治療を受けている患者に対する標的の関与を決定することを助けると思われる。

【0475】

実施例３：還元型ＩＬ－３３ ｉＰＣＲアッセイ
ＤＮＡにコンジュゲートした抗ＩＬ－３３抗体を使用するｉＰＣＲアッセイを、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）（乾燥型ＡＭＤ）に二次的な地図状萎縮（ＧＡ）を有する患者由来の眼房水試料中の還元型ｈＩＬ－３３を定量化するために最適化した。

【0476】

図１１は、例示的なＩＬ－３３ ｉＰＣＲアッセイの工程を示している。簡潔に言えば、ストレプトアビジンでコーティングした３８４ウェルＰＣＲプレート（ＭｉｃｒｏＣｏａｔ、Ｃａｔ．８４０００３）を、ブロッキングバッファー（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＳｕｐｅｒＢｌｏｃｋ^ＴＭ Ｂｌｏｃｋｉｎｇ Ｂｕｆｆｅｒ Ｃａｔ．３７５１５）を加えることによりブロックし、２～３時間室温でシェーカーでインキュベートした。ブロックしたＰＣＲプレートを２５μＬ／ウェルの洗浄バッファー（１ｘリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、０．５％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、１５ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ^ＴＭ）で洗浄した。抗体混合物を、５０ｎｇ／ｍＬのビオチン化抗ｈＩＬ－３３（３Ｆ１０）ラット／ヒトキメラ抗体及び５０ｎｇ／ｍＬの５５ｍｅｒ－ＤＮＡにコンジュゲートしたラット抗ｈＩＬ－３３抗体（２１Ｃ７）を加えることにより調製した。Ｓａｍｐｌｅ Ｄｉｌｕｅｎｔ（１ｘＰＢＳ、０．５％のＢＳＡ、０．０５％のポリソルベート２０、１５ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ^ＴＭ３００、ｐＨ７．４±０．１、１００μｇ／ｍＬの抗ＩＬ－３３抗体（１Ｅ１ｖ８、参照によりその全体が本明細書に援用される国際公開第２０２１／１８３８４９号及び米国特許出願公開第２０２１／０２８４７２５号参照）及び２５０μｇ／ｍＬの加熱した子牛胸腺のＤＮＡ）に１：４で希釈した標準物質、試料、及びＱＣコントロールの各々（４０μＬ）を、９６ウェルミニチューブ内で４０μｌの抗体混合物と混合したものを４つ作製し、４００ｒｐｍに設定したシェーカーで室温で２時間インキュベートした。抗ＩＬ－３３抗体１Ｅ１ｖ８の付加は、試料中のＩＬ－３３の酸化を低減する。ｈＩＬ－３３－抗体混合物を、ブロックしたＰＣＲプレートのウェル中に加え、４００ｒｐｍに設定したシェーカーで室温でインキュベートした。インキュベーションの後、プレートを洗浄し、フォワードプライマー（５’－ＴＧＡＡＧＧＴＣＣＴＴＧＧＣＧＡＴＣＡ、配列番号３９）、リバースプライマー（５’－ＡＧＧＧＡＣＧＴＡＧＣＣＡＡＡＴＧＣＡＴ、配列番号４０）、及びカルボキシフルオレセイン（ＦＡＭ）／分又は溝バインダー（ＭＧＢ）－非蛍光クエンチャー（ＮＦＱ）タグプローブ（５’－ＴＴＣＧＧＣＧＧＴＧＡＴＣＧ、配列番号４１））を含有する１０μＬ／ウェルのＰＣＲマスターミックス（１ｘＡＢＩ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ＴａｑＭａｎ^ＴＭマスターミックスＩＩ、１ｘのカスタムＴａｑＭａｎ^ＴＭ遺伝子発現アッセイミックス（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、アッセイＩＤ ＡＩＴ９６ＰＴ）を加えた。リアルタイム定量的ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）増幅を、以下のサイクル条件を使用してＶｉｉＡ^ＴＭ７機器で行った：９５℃で１０分間、４０回繰り返す（９５℃で１５秒間及び６０℃で１分間）。データを、ＳｏｆｔＭａｘ Ｐｒｏ、バージョン６．５．１．を使用して分析した。

【0477】

試料希釈物中の最小希釈率における標準曲線及びコントロール正確性，精度、ＬＬＯＱ、及びＵＬＯＱ

【0478】

標準曲線報告範囲を決定し、確立された報告範囲内でのアッセイの正確性及び精度を評価した。

【0479】

正確性とは、分析方法が、ｈＩＬ－３３の真の値に近い試験結果を得る能力である。精度とは、試料の複数回の分析のために分析方法が繰り返されるときの、個々の試験結果間の一致度である。正確性及び精度は、アッセイの定量限界を決定するためにも用いられる。定量下限（ＬＬＯＱ）とは、示される実験条件下において適用可能な精度及び正確性で定量化することのできる最も低いｈＩＬ－３３の濃度である。定量上限（ＵＬＯＱ）とは、適用可能な精度及び正確性で試料について定量化することのできる最も高いｈＩＬ－３３の濃度である。アッセイの報告範囲は、補間結果が許容可能なレベルの正確性及び精度を有するＬＬＯＱからＵＬＯＱまでの濃度の範囲である。

【0480】

アッセイの正確性、精度、ＬＬＯＱ、及びＵＬＯＱを決定するために、試料をまず、種々の濃度の試料希釈物に外部性の被分析物を加えることにより調製した。ＬＬＯＱを決定するために使用される試料は、６１、２４４及び９７７ｆｇ／ｍＬのウェル内濃度で調製された。ＵＬＯＱを決定するために使用される試料は、１５，６２５、６２，５００及び２５０，０００ｆｇ／ｍＬのウェル内濃度で調製された。加えて、標準曲線の範囲にまたがる低、中、及び高コントロールが、それぞれ１，０００ｆｇ／ｍＬ、８，０００ｆｇ／ｍＬ、及び８００，０００ｆｇ／ｍＬの濃度で調製された。内因性のコントロールは、検出可能なレベルのｈＩＬ－３３を有する血清試料をプールすることにより取得され、４，０００ｆｇ／ｍＬに定量化された。次いで、ＬＬＯＱ及びＵＬＯＱを除くすべての試料が、６日間にわたる連続する７回のアッセイにおいて最小希釈率でアッセイされた。

【0481】

試料希釈物中の最小希釈率での正確性，精度、ＬＬＯＱ、及びＵＬＯＱの結果を表１１に示す。

【0482】

表１１：標準曲線、正確性及び精度

【0483】

プールされた試料中に存在する内因性ｈＩＬ－３３の存在の結果を表１２に示す。

【0484】

表１２：還元型ｈＩＬ－３３の内因性レベル

【0485】

高、中、低、及び内因性コントロールの正確性，精度の結果を表１３に示す。

【0486】

表１３：コントロールの正確性及び精度

【0487】

この結果に基づくと、正確性、アッセイ内精度、及び全誤差は、内因性、低、中、及び高コントロール、並びに選択されたＬＬＯＱ及びＵＬＯＱについて許容可能なものであった。ＬＬＯＱ及びＵＬＯＱは、それぞれ２４４及び２５０，０００ｆｇ／ｍＬに選択された（希釈により補正された濃度：９７７及び１，０００，０００ｆｇ／ｍＬ）。このアッセイの最小希釈率（ＭＲＤ）は１／４であり、これは、試料希釈物を用いた最小希釈率で個体の血清試料をアッセイすることによる正確性試験の間に確認された。

【0488】

最小定量可能濃度は、試料マトリックス中のｈＩＬ－３３の正確な定量化に必要な最小希釈率を乗じたＬＬＯＱに等しい。したがって、このアッセイの最小定量可能濃度は９７７ｆｇ／ｍＬである。

【0489】

最大定量可能濃度は、正確に測定することのできる最大試料希釈率を乗じたＵＬＯＱに等しい。このアッセイの最大定量可能濃度は１，０００，０００ｆｇ／ｍＬであった。

【0490】

平行性（内因性の希釈直線性）
平行性は、マトリックス中の内因性ｈＩＬ－３３の用量応答が代理マトリックス中の組み換え標準物質の用量応答に十分に類似しているかどうかを実証する重要な実験である。これは、組み換え材料、並びに代理マトリックスの使用と、選択されたＭＲＤの安定性を検証する。

【0491】

測定可能な量のｈＩＬ－３３を含む１０名の個別の患者（ＡＭＤ患者１名、喘息患者４名、及び関節リウマチ患者５名）の血清試料を、ＭＲＤ（１／４）で試験し、続いて試料希釈物中の１／２段階希釈を１回行った。平行性は、ＭＲＤ＜３０％という許容基準に対して、各希釈物について、％ＣＶ≦３０％の基準をパスする９／１０（９０％）の試料、及び％ＲＥをパスする９／１０（９０％）の試料に基づき、許容可能であった。結果を表１４に示す。

【0492】

表１４：還元型ｈＩＬ－３３の平行性（内因性の希釈直線性）

【0493】

ヒト血清及び血漿における内因性レベルの検出可能性
正常及び罹患状態の種々の眼房水、血清、及び血漿の試料を、試料希釈物中で最小希釈率１／４に希釈し、内因性レベルについて試験した。ＩＬ－３３の検出可能性は、許容可能であり、ヒト血清及び血漿試料の濃度の９７％～１００％がＬＬＯＱを上回った；しかしながら、ＬＬＯＱを上回っていたヒト眼房水試料１／２０（５％）はのみであった。検出可能性の結果を図１２に示す。

【0494】

特異性
特異性とは、標的とされるｈＩＬ－３３に選択的に結合する捕捉抗体の能力である。

【0495】

罹患状態の個体の試料を、１０μｇ／ｍＬの捕捉抗体と共に１時間室温で振盪しながらインキュベートした。捕捉抗体の特異性は許容可能であり、１０個の血清試料のすべてで被分析物濃度が１００％阻害された。結果を表１５に示す。

【0496】

表１５：特異性

【0497】

再現性
再現性とは、試料の複数回の分析のために同一の様式で経時的に分析方法が繰り返されるときの、個々の試験結果間の一致度である。

【0498】

検出可能なレベルのｈＩＬ－３３を有する２０の血清及び血漿を、最低２日かけて２回にわたり評価した。この実験では、８／２０（４０％）の血清及び血漿の試料が、許容可能な再現性を示した。低い再現性は、おそらくは、血清及び血漿試料中のＩＬ－３３の予想された酸化によるものであった。

【0499】

結果を表１６に示す。

【0500】

表１６：再現性

【0501】

干渉／交差反応性
干渉は、試料収集の時点で体循環中にあることが既知である化合物の存在下で、被分析物を正確に定量化するアッセイの能力を実証する。干渉は、分子に干渉する可能性のある既知の濃度の存在下で被分析物の回収率が被分析物の名目濃度の＜７０％又は＞１３０％である場合に観察される。

【0502】

交差反応性は、被分析物のみを定量化し、試料収集の時点で体循環中にありうる無関係の化合物は定量化しないアッセイの特異性を示す。

【0503】

高、中、低、内因性、及び陰性の（試料希釈物）コントロールの各々を、０、１０、２０、４０、及び８０ｎｇ／ｍＬのｒｈＳＴ２（ｒｈＳＴ２／ＩＬ－３３Ｒ Ｆｃ Ｃｈｉｍｅｒａ）（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｃａｔ．＃５２３－ＳＴ－１００）あり又はなしでアッセイした。内因性コントロールに対する干渉は、８０ｎｇ／ｍＬ以下のｒｈＳＴ２には観察されなかった；しかしながら、高、中、及び低コントロールに対する干渉は、１０ｎｇ／ｍＬのｒｈＳＴ２では中コントロールについて、２０ｎｇ／ｍＬのｒｈＳＴ２では高、中、及び低コントロールについて、４０ｎｇ／ｍＬ ｒｈＳＴ２では高及び中コントロールについて、及び８０ｎｇ／ｍＬのｒｈＳＴ２では中コントロールについて回収率に偏りが混在しており；１０ｎｇ／ｍＬのｒｈＳＴ２では高及び低コントロールについて、４０ｎｇ／ｍＬのｒｈＳＴ２では低コントロールについて、及び８０ｎｇ／ｍＬのｒｈＳＴ２では高コントロールについては干渉は観察されなかった。いくつかの高、中、及び低コントロールに観察される干渉は、おそらくはアッセイのばらつきによって引き起こされたものであった。８０ｎｇ／ｍＬ以下のｒｈＳＴ２に交差反応性は観察されなかった。結果を表１７に示す。

【0504】

表１７：干渉／交差反応性

【0505】

まとめ
以下の表１８は、還元型ＩＬ－３３ ｉＰＣＲアッセイのまとめである。

【0506】

表１８：還元型ＩＬ－３３ ｉＰＣＲアッセイのまとめ

【0507】

実施例４：総ＩＬ－３３ ｉＰＣＲアッセイ
ＤＮＡにコンジュゲートした抗ＩＬ－３３抗体を使用するｉＰＣＲアッセイを、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）（乾燥型ＡＭＤ）に二次的な地図状萎縮（ＧＡ）を有する患者由来の眼房水試料中の総ｈＩＬ－３３を定量化するために最適化した。総ＩＬ－３３ ｉＰＣＲアッセイは、試料を抗体混合物と混合することに先立って試料を１ｍＭのＴＣＥＰで２から４日間４℃で処理する以外、実施例３に記載した還元型ＩＬ－３３ ｉＰＣＲアッセイと同じ工程及び条件を有していた。総ＩＬ－３３ ｉＰＣＲアッセイに使用したポジティブコントロールは、イスコブ変法ダルベッコ培地（ＩＭＤＭ）中で５０ｍＭのトリス、３００ｍＭのＮａＣｌ（ｐＨ８．０）にＩＬ－３３を希釈し、１日間３７℃でインキュベートすることにより調製した酸化型ＩＬ－３３であった。

【0508】

総ＩＬ－３３ ｉＰＣＲアッセイの標準曲線及びコントロールの性能を、以下の表１９に示す。最小希釈率は１：４であり、ＬＬＯＱは９７７ ｆｇ／ｍＬであり、ＵＬＯＱは２５０，０００ｆｇ／ｍＬであった。

【0509】

表１９：標準曲線及びコントロールの性能（Ｎ＝７）

【0510】

図１３は、還元型又は総ＩＬ－３３ ｉＰＣＲアッセイを使用した、正常及び罹患状態のヒト体液、血清、及び血漿試料中の還元型ＩＬ－３３の検出可能性を示している。還元型ＩＬ－３３は、ＡＭＤ、喘息、及びＲＡ患者の血清試料、並びに正常なヒト血清及び正常なヒト血漿のプールにおいてのみ検出可能であった。

【0511】

以下の表２０は、総ＩＬ－３３ ｉＰＣＲアッセイの再現性を示す。試験した１１のうち８（７３％）のヒト血清及び血漿の試料が、許容可能な再現性（すなわち、３０％以内の差）を示した。

【0512】

表２０：再現性

【0513】

その他の実施形態
前述の発明は、理解を明確にするために例示及び実施例によってある程度詳細に記載されたが、記載及び実施例は、本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。本明細書に引用されるすべての特許及び科学文献の開示内容は、参照によりその全体が本明細書に明示的に援用される。

【0514】

配列

【図1】

【図2A】

【図2B】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【配列表】

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【国際調査報告】