特表 2024-544924 トランスサイレチン（ＴＴＲ）単量体結合抗体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-12-05

(54)【発明の名称】トランスサイレチン（ＴＴＲ）単量体結合抗体

(51)【国際特許分類】

   C07K 16/18 20060101AFI20241128BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20241128BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20241128BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20241128BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20241128BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20241128BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20241128BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20241128BHJP

   A61P 9/00 20060101ALI20241128BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20241128BHJP

   A61P 27/02 20060101ALI20241128BHJP

   A61P 25/28 20060101ALI20241128BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20241128BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20241128BHJP

   G01N 33/53 20060101ALI20241128BHJP

   G01N 33/577 20060101ALI20241128BHJP

【ＦＩ】

C07K16/18 ZNA

C12N15/13

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

C12P21/08

A61P43/00 111

A61P9/00

A61P25/00

A61P27/02

A61P25/28

A61K39/395 D

A61K39/395 N

A61K9/08

G01N33/53 D

G01N33/577 B

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024527547

(86)(22)【出願日】2022-11-14

(85)【翻訳文提出日】2024-06-14

(86)【国際出願番号】 US2022079810

(87)【国際公開番号】W WO2023086989

(87)【国際公開日】2023-05-19

(31)【優先権主張番号】63/278,925

(32)【優先日】2021-11-12

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】519436585

【氏名又は名称】エーディーアールエックス， インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】レイブリー， デビット ジェイムズ

(72)【発明者】

【氏名】レイ， アンナ ローズ

(72)【発明者】

【氏名】アポストル， マーシン イジドール

(72)【発明者】

【氏名】カロウ， マーガレット リー

(72)【発明者】

【氏名】マレン， トレイシー エリザベス

(72)【発明者】

【氏名】ソーダーズ， コルビー アムスデン

【テーマコード（参考）】

4B064

4B065

4C076

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B064AG27

4B064CA10

4B064CA19

4B064CA20

4B064CC24

4B064DA01

4B064DA13

4B065AA92X

4B065AB01

4B065AB05

4B065AC14

4B065BA01

4B065BA08

4B065CA25

4B065CA44

4B065CA46

4C076AA11

4C076BB13

4C076BB16

4C076CC01

4C076CC10

4C076CC11

4C076CC29

4C076FF11

4C085AA13

4C085AA14

4C085DD62

4C085EE01

4C085GG02

4C085GG04

4H045AA11

4H045AA30

4H045DA76

4H045EA21

4H045EA24

4H045EA28

4H045EA50

4H045FA72

4H045FA74

(57)【要約】

本開示は、ヒトトランスサイレチン（ＴＴＲ）の形態に結合する抗体、単量体ＴＴＲ特異的抗体、及びそれらを使用する方法を提供する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ヒトトランスサイレチン（ＴＴＲ）に結合する単離された抗体であって、前記抗体が、
（ａ）サンドイッチＥＬＩＳＡにおいて決定された場合、約２００ｎＭ未満のＥＣ_５０でヒトＴＴＲに結合し、かつ／又は
（ｂ）バイオレイヤー干渉法アッセイにおいて決定された場合、約２０ｎＭ未満のＫ_ＤでヒトＴＴＲに結合する、抗体。

【請求項2】

前記ヒトＴＴＲが、単量体形態にある、請求項１に記載の抗体。

【請求項3】

前記抗体が、間接ＥＬＩＳＡにおいて決定された場合、約２０ｎＭ未満のＥＣ_５０で単量体ＴＴＲに結合する、請求項２に記載の抗体。

【請求項4】

前記抗体が、ＴＴＲの凝集を防止する、請求項１～３のいずれか一項に記載の抗体。

【請求項5】

前記抗体が、ＴＴＲの折り畳み中間体に結合する、請求項１～４のいずれか一項に記載の抗体。

【請求項6】

（ａ）配列番号２～８のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、
（ｂ）配列番号９～１５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び
（ｃ）配列番号１６～２２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、
（ｄ）配列番号２３～２９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、
（ｅ）配列番号３０～３６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び
（ｆ）配列番号３７～４３のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、を含む、請求項１に記載の抗体。

【請求項7】

ヒトトランスサイレチン（ＴＴＲ）に結合する抗体であって、前記抗体が、
（ａ）配列番号２～８のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、
（ｂ）配列番号９～１５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び
（ｃ）配列番号１６～２２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、
（ｄ）配列番号２３～２９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、
（ｅ）配列番号３０～３６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び
（ｆ）配列番号３７～４３のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、を含む、抗体。

【請求項8】

（ａ）配列番号２の前記アミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、
（ｂ）配列番号９の前記アミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び
（ｃ）配列番号１６の前記アミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３と、
（ｄ）配列番号２３の前記アミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、
（ｅ）配列番号３０の前記アミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び
（ｆ）配列番号３７の前記アミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）と、を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の抗体。

【請求項9】

（ａ）配列番号３の前記アミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、
（ｂ）配列番号１０の前記アミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び
（ｃ）配列番号１７の前記アミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、
（ｄ）配列番号２４の前記アミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、
（ｅ）配列番号３１の前記アミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び
（ｆ）配列番号３８の前記アミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の抗体。

【請求項10】

（ａ）配列番号４の前記アミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、
（ｂ）配列番号１１の前記アミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び
（ｃ）配列番号１８の前記アミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、
（ｄ）配列番号２５の前記アミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、
（ｅ）配列番号３２の前記アミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び
（ｆ）配列番号３９の前記アミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の抗体。

【請求項11】

（ａ）配列番号５の前記アミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、
（ｂ）配列番号１２の前記アミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び
（ｃ）配列番号１９の前記アミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、
（ｄ）配列番号２６の前記アミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、
（ｅ）配列番号３３の前記アミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び
（ｆ）配列番号４０の前記アミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の抗体。

【請求項12】

（ａ）配列番号６の前記アミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、
（ｂ）配列番号１３の前記アミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び
（ｃ）配列番号２０の前記アミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、
（ｄ）配列番号２７の前記アミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、
（ｅ）配列番号３４の前記アミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び
（ｆ）配列番号４１の前記アミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の抗体。

【請求項13】

（ａ）配列番号７の前記アミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、
（ｂ）配列番号１４の前記アミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び
（ｃ）配列番号２１の前記アミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、
（ｄ）配列番号２８の前記アミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、
（ｅ）配列番号３５の前記アミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び
（ｆ）配列番号４２の前記アミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の抗体。

【請求項14】

（ａ）配列番号８の前記アミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、
（ｂ）配列番号１５の前記アミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、
（ｃ）配列番号２２の前記アミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、
（ｄ）配列番号２９の前記アミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、
（ｅ）配列番号３６の前記アミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び
（ｆ）配列番号４３の前記アミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の抗体。

【請求項15】

モノクローナル抗体である、請求項１～１４のいずれか一項に記載の抗体。

【請求項16】

ヒト化抗体又はキメラ抗体である、請求項１～１５のいずれか一項に記載の抗体。

【請求項17】

前記ＶＨドメインが、配列番号４６～４９のうちのいずれか１つの配列と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む、請求項１６に記載の抗体。

【請求項18】

前記ＶＨドメインが、配列番号４６～４９のうちのいずれか１つの配列を含む、請求項１６に記載の抗体。

【請求項19】

前記ＶＨドメインが、配列番号５５～６０のうちのいずれか１つの配列と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む、請求項１６に記載の抗体。

【請求項20】

前記ＶＨドメインが、配列番号５５～６０のうちのいずれか１つの配列を含む、請求項１６に記載の抗体。

【請求項21】

前記ＶＬドメインが、配列番号５１～５３のうちのいずれか１つの配列と少なくとも８５％の配列同一性を含む、請求項１６に記載の抗体。

【請求項22】

前記ＶＬドメインが、配列番号５１～５３のうちのいずれか１つの配列を含む、請求項１６に記載の抗体。

【請求項23】

前記ＶＬドメインが、配列番号６２～６４のうちのいずれか１つの配列と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む、請求項１６に記載の抗体。

【請求項24】

前記ＶＬドメインが、配列番号６２～６４のうちのいずれか１つの配列を含む、請求項１６に記載の抗体。

【請求項25】

ヒトＴＴＲの単量体形態又は折り畳み中間体形態に結合する抗体断片である、請求項１～２４のいずれか一項に記載の抗体。

【請求項26】

ＧＰＴＧＴＧＥＳＫＣＰＬ（配列番号６５）、ＭＶＫＶＬＤＡＶＲＧＳＰＡ（配列番号６６）、ＰＦＨＥＨＡＥＶＶＦＴＡ（配列番号６７）、ＥＨＡＥＶＶＦＴＡ（配列番号６８）、ＹＴＩＡＡＬＬＳ（配列番号６９）、ＬＳＰＹＳＹ（配列番号７０）、ＳＹＳＴＴＡＶＶ（配列番号７１）、ＹＴＩＡＡＬＬＳＰＹＳＹＳＴＴＡＶＶ（配列番号７２）、ＬＧＩＳＰＭＨＥＨＡＥ（配列番号７３）、及びＲＲＹＴＩＡＡＭＬＳＰＹＳ（配列番号７４）のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有するペプチドに結合しない、請求項１～２５のいずれか一項に記載の抗体。

【請求項27】

立体構造エピトープに結合する、請求項２６に記載の抗体。

【請求項28】

ＩｇＧ４抗体である、請求項１～２７のいずれか一項に記載の抗体。

【請求項29】

前記抗体が、サンドイッチＥＬＩＳＡにおいて決定された場合、約１５０ｎＭ未満、又は約１００ｎＭ未満、又は約５０ｎＭ未満、又は約２０ｎＭ未満のＥＣ_５０でヒトＴＴＲに結合する、請求項１～２８のいずれか一項に記載の抗体。

【請求項30】

前記抗体が、間接ＥＬＩＳＡを使用して決定された場合、約２０ｎＭ未満、又は約５ｎＭ未満、又は約２ｎＭ未満、又は約１ｎＭ未満のＥＣ_５０でヒトＴＴＲに結合する、請求項１～２９のいずれか一項に記載の抗体。

【請求項31】

ヒトＴＴＲに特異的に結合し、かつヒトＴＴＲへの結合について、請求項１～３０のいずれか一項に記載の抗体と競合する、抗体。

【請求項32】

請求項１～３１のいずれか一項に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列を含む、単離された核酸。

【請求項33】

請求項３２に記載の核酸を含む、単離された宿主細胞。

【請求項34】

請求項１～３１のいずれか一項に記載の抗体を発現する、単離された宿主細胞。

【請求項35】

ヒトＴＴＲに結合する抗体を産生する方法であって、前記抗体の発現に好適な条件下で、請求項３３又は３４に記載の宿主細胞を培養することを含む、方法。

【請求項36】

前記宿主細胞又は宿主細胞培養物から前記抗体を回収することを更に含む、請求項３５に記載の方法。

【請求項37】

請求項３５又は３６に記載の方法によって産生された、抗体。

【請求項38】

請求項１～３１及び３７のいずれか一項に記載の抗体を含む、組成物。

【請求項39】

ＴＴＲ凝集に関連する関連する疾患を治療するか、予防するか、又は診断する際における使用のための、請求項１～３１及び３７のいずれか一項に記載の抗体、又は請求項３８に記載の組成物。

【請求項40】

ＴＴＲアミロイドーシスを治療する際における使用のための、請求項１～３１及び３７のいずれか一項に記載の抗体、又は請求項３８に記載の組成物。

【請求項41】

前記ＴＴＲアミロイドーシスが、トランスサイレチンアミロイドーシス（ＡＴＴＲ）心筋症（ＡＴＴＲ－ＣＭ）又はトランスサイレチンアミロイドーシス（ＡＴＴＲ）多発ニューロパチー（ＡＴＴＲ－ＰＮ）である、請求項４０に記載の抗体。

【請求項42】

末梢ＴＴＲアミロイドーシス、眼アミロイド血管症、又は脳アミロイド血管症を治療する際における使用のための、請求項１～３１及び３７のいずれか一項に記載の抗体、又は請求項３８に記載の組成物。

【請求項43】

家族性アミロイド多発ニューロパチー（ＡＰ）、家族性アミロイド心筋症（ＦＡＣ）、ＡＴＴＲ－ＰＮ及びＡＴＴＲ－ＣＭ、ｈＡＴＴＲ又は野生型ＡＴＴＲ（ｗｔＡＴＴＲ）、老人性全身性アミロイドーシス（ＳＳＡ）、全身性家族性アミロイドーシス、アルツハイマー病を含む軟髄膜／中枢神経系（ＣＮＳ）アミロイドーシス、ＴＴＲ関連眼アミロイドーシス、ＴＴＲ関連腎アミロイドーシス、ＴＴＲ関連高チロキシン血症、手根管症候群を含むＴＴＲ関連靱帯アミロイドーシス、肩腱板断裂及び腰部脊椎管狭窄症、並びに子癇前症から選択される疾患を治療する際における使用のための、請求項１～３１及び３７のいずれか一項に記載の抗体、又は請求項３８に記載の組成物。

【請求項44】

ＴＴＲアミロイドーシスに関連する疾患を有する対象を治療する方法であって、前記方法が、前記対象に、有効量の、請求項１～３１及び３７のいずれか一項に記載の抗体、又は請求項３８に記載の組成物を投与することを含む、方法。

【請求項45】

前記疾患が、ＴＴＲアミロイドーシスである、請求項４４に記載の方法。

【請求項46】

家族性アミロイド多発ニューロパチー（ＡＰ）、家族性アミロイド心筋症（ＦＡＣ）、ＡＴＴＲ－ＰＮ及びＡＴＴＲ－ＣＭ、ｈＡＴＴＲ又は野生型ＡＴＴＲ（ｗｔＡＴＴＲ）、老人性全身性アミロイドーシス（ＳＳＡ）、全身性家族性アミロイドーシス、アルツハイマー病を含む軟髄膜／中枢神経系（ＣＮＳ）アミロイドーシス、ＴＴＲ関連眼アミロイドーシス、ＴＴＲ関連腎アミロイドーシス、ＴＴＲ関連高チロキシン血症、手根管症候群を含むＴＴＲ関連靱帯アミロイドーシス、肩腱板断裂及び腰部脊椎管狭窄症、並びに子癇前症から選択される疾患を有する対象を治療する方法であって、前記方法が、前記対象に、有効量の、請求項１～３１及び３７のいずれか一項に記載の抗体、又は請求項３８に記載の組成物を投与することを含む、方法。

【請求項47】

検出可能な標識を更に含む、請求項１～３１及び３７のいずれか一項に記載の抗体。

【請求項48】

試料中の単量体トランスサイレチン（ＴＴＲ）を測定する方法であって、前記方法が、前記試料を、請求項１～３１、３７、及び４７のいずれか一項に記載の抗体と接触させることと、前記試料中のＴＴＲに結合した抗体の量を測定することと、を含む、方法。

【請求項49】

前記測定することが、前記試料を二次抗体と接触させ、それによって形成された複合体を測定することを含む、請求項４８に記載の方法。

【請求項50】

ＴＴＲ単量体抗体Ａｂ３及びＡｂ５を使用することを含み、前記抗体のうちの１つを捕捉抗体として使用し、前記抗体のうちの１つを検出抗体として使用する、請求項４９に記載の方法。

【請求項51】

トランスサイレチン（ＴＴＲ）アミロイドーシスに関連する疾患を診断するか、又は抗ＴＴＲ療法による前記疾患の治療を監視する方法であって、対象からの体液の試料中の単量体ＴＴＲのレベルをアッセイすることを含み、対照と比較した前記対象の前記試料中の単量体ＴＴＲの存在又は上昇したレベルが、ＴＴＲアミロイドーシスに関連する疾患の存在を示す、方法。

【請求項52】

前記単量体ＴＴＲが、請求項１～３１及び３７のいずれか一項に記載の抗体に結合する、請求項５１に記載の方法。

【請求項53】

対象からの試料を、トランスサイレチン（ＴＴＲ）アミロイドーシスを有するか、又は有すると疑われる対象からの体液の試料と接触させることと、
前記試料中の単量体ＴＴＲを検出又は測定することと、を含む、方法。

【請求項54】

接触させるステップが、ＴＴＲ単量体抗体Ａｂ３及びＡｂ５から選択される接触抗体を使用する、請求項５３に記載の方法。

【請求項55】

検出又は測定するステップが、前記接触抗体及び前記ＴＴＲによって形成された複合体を、ＴＴＲ単量体抗体Ａｂ３及びＡｂ５から選択される検出抗体と接触させることを含み、前記接触抗体が、前記検出抗体とは異なる、請求項５４に記載の方法。

【請求項56】

前記試料中の前記単量体ＴＴＲを検出又は測定することに基づいて、抗ＴＴＲ療法を開始することを更に含む、請求項５３～５５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項57】

前記試料中の前記単量体ＴＴＲの前記測定に基づいて、抗ＴＴＲ療法の用量を調整することを更に含む、請求項５３～５５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項58】

前記抗ＴＴＲ療法が、前記対象に、請求項１～３１及び３７のいずれか一項に記載の抗体、又は請求項３８に記載の組成物を投与することを含む、請求項５６又は５７に記載の方法。

【請求項59】

前記組成物が、（ｉ）薬学的組成物であり、薬学的に許容される担体、又は（ｉｉ）診断用組成物を更に含む、請求項１～３１及び３７のいずれか一項に記載の抗体を含む、組成物。

【請求項60】

前記診断用組成物が、免疫ベース又は抗体ベースの診断方法において従来使用される試薬を更に含む、請求項５９に記載の組成物。

【請求項61】

診断方法が、ＴＴＲ単量体形態を測定する、請求項５９に記載の組成物。

【請求項62】

診断方法が、Ｑｕａｎｔｅｒｉｘプラットフォームを使用する、請求項５９に記載の組成物。

【請求項63】

診断方法が、ウェスタンゲルである、請求項５９に記載の組成物。

【請求項64】

四量体ＴＴＲ及び生理学的、細胞完全長ＴＴＲ上に存在しない、Ｆ８７Ｍ Ｌ１１０Ｍ ＴＴＲから調製された単量体ＴＴＲ上の立体構造エピトープを認識する、単離された抗体。

【請求項65】

Ｖ３０Ｍ、Ｄ３８Ａ、及びＶ１２２Ｉのうちのいずれかから選択されるＴＴＲ変異を認識する、単離された抗体であって、前記抗体が、配列番号１４５～１４７のうちのいずれかに記載のアミノ酸配列を含むＴＴＲに特異的に結合する、抗体。

【請求項66】

前記ＴＴＲ変異が、Ｄ３８Ａ及び／又はＶ１２２Ｉであり、前記抗体が、配列番号１４６及び／又は１４７に記載の前記アミノ酸配列を含むＴＴＲに特異的に結合する、請求項６５に記載の抗体。

【請求項67】

前記ＶＨドメインが、図６Ａ～６Ｂ、７、１４、及び１８～２１（配列番号８１～１４２）に記載の配列のうちのいずれかと少なくとも８５％の配列同一性を含む、請求項１６に記載の抗体。

【請求項68】

前記ＶＬドメインが、図６Ａ～６Ｂ、７、１４、及び１８～２１（配列番号８１～１４２）に記載の前記配列のうちのいずれかと少なくとも８５％の配列同一性を含む、請求項１６に記載の抗体。

【請求項69】

前記抗体が、配列番号８０及び１４３～１４７及び１４９～１５２のうちのいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含むＴＴＲに特異的に結合する、請求項１～３１及び３７のいずれか一項に記載の抗体。

【請求項70】

前記抗体が、配列番号８０に記載の前記アミノ酸配列を含むＴＴＲに特異的に結合する、請求項６９に記載の抗体。

【請求項71】

ヒトトランスサイレチン（ＴＴＲ）の単量体形態に特異的に結合する抗体を産生する細胞を産生する方法であって、前記方法が、
（ａ）ＴＴＲの単量体形態で非ヒト動物を免疫化することと、
（ｂ）ヒトＴＴＲの前記単量体形態に特異的に結合するが、野生型四量体ＴＴＲ又はＴＴＲの二量体若しくは四量体形態には結合しない抗体について、前記動物からの血液又は組織をスクリーニングすることと、
（ｃ）ヒトＴＴＲの前記単量体形態に特異的に結合するが、野生型四量体ＴＴＲ又はＴＴＲの二量体若しくは四量体形態には結合しない前記抗体を産生する前記動物からの細胞を特定し、単離することと、を含む、方法。

【請求項72】

抗体を産生する細胞が、前記動物の脾臓組織、リンパ節又は骨髄の除去によって回収される、請求項７１に記載の方法。

【請求項73】

前記抗体を産生する細胞が、Ｂ細胞、Ｔ細胞、又は幹細胞である、請求項７１又は７２に記載の方法。

【請求項74】

前記動物が、マウス、ラット、モルモット、又はウサギである、請求項７１～７３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項75】

単離された細胞を不死化することを更に含む、請求項７１～７４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項76】

骨髄腫細胞への前記細胞の体細胞融合によって、ハイブリドーマ細胞を産生することを含む、請求項７５に記載の方法。

【請求項77】

前記抗体を産生する細胞を培養することを更に含む、請求項７１～７６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項78】

前記抗体が、配列番号８０、１４３、及び１４４のうちのいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含むＴＴＲに特異的に結合する、請求項７１～７７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項79】

前記抗体が、ＧＰＴＧＴＧＥＳＫＣＰＬ（配列番号６５）、ＭＶＫＶＬＤＡＶＲＧＳＰＡ（配列番号６６）、ＰＦＨＥＨＡＥＶＶＦＴＡ（配列番号６７）、ＥＨＡＥＶＶＦＴＡ（配列番号６８）、ＹＴＩＡＡＬＬＳ（配列番号６９）、ＬＳＰＹＳＹ（配列番号７０）、ＳＹＳＴＴＡＶＶ（配列番号７１）、ＹＴＩＡＡＬＬＳＰＹＳＹＳＴＴＡＶＶ（配列番号７２）、ＬＧＩＳＰＭＨＥＨＡＥ（配列番号７３）、及びＲＲＹＴＩＡＡＭＬＳＰＹＳ（配列番号７４）のうちのいずれか１つから選択される配列からなるアミノ酸配列を有するペプチドに結合しない、請求項７１～７８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項80】

前記動物を免疫化するために使用されるヒトＴＴＲの前記単量体形態が、
配列番号８０に記載の前記アミノ酸配列を含むＴＴＲ Ｆ８７Ｍ Ｌ１１０Ｍ、
配列番号１４３に記載の前記アミノ酸配列を含むＴＴＲ Ｆ８７Ｍ、及び
配列番号１４４に記載の前記アミノ酸配列を含むＴＴＲ Ｌ１１０Ｍのうちのいずれか１つである、請求項７１～７９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項81】

請求項７１～８０のいずれか一項に記載の方法によって産生された、抗体。

【請求項82】

ヒトトランスサイレチン（ＴＴＲ）の単量体形態に特異的に結合するモノクローナル抗体を産生するための方法であって、前記方法が、
（ａ）非ヒト動物内に、
配列番号８０に記載のアミノ酸配列を含むＴＴＲ Ｆ８７Ｍ Ｌ１１０Ｍ、
配列番号１４３に記載のアミノ酸配列を含むＴＴＲ Ｆ８７Ｍ、及び
配列番号１４４に記載のアミノ酸配列を含むＴＴＲ Ｌ１１０Ｍのうちのいずれか１つのうちの少なくとも１つを導入することと、
（ｂ）前記動物から抗体を産生する細胞を回収し、これらの細胞を単一細胞懸濁液にすることと、
（ｃ）前記単一細胞懸濁液から不死化細胞株を生成することと、
（ｄ）ヒトＴＴＲの単量体形態に特異的に結合することを有する抗体の存在について、前記不死化細胞株の上清をスクリーニングすることと、
（ｅ）前記モノクローナル抗体として、ヒトＴＴＲの前記単量体形態に特異的に結合する抗体を選択することと、を含む、方法。

【請求項83】

前記動物が、マウス、ラット、モルモット、又はウサギである、請求項８２に記載の方法。

【請求項84】

前記抗体を産生する細胞が、Ｂ細胞、Ｔ細胞、又は幹細胞である、請求項８２又は８３に記載の方法。

【請求項85】

前記抗体を産生する細胞が、前記動物の脾臓組織、リンパ節又は骨髄の除去によって回収される、請求項８２～８４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項86】

前記不死化細胞株が、骨髄腫細胞への前記単一細胞懸濁液中の前記細胞の体細胞融合によって産生されたハイブリドーマ細胞株である、請求項８２～８５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項87】

請求項８２～８６のいずれか一項に記載の方法によって産生された、抗体。

【請求項88】

（ａ）
（ｉ）配列番号８０及び１４３～１４７及び１４９～１５２から選択されるアミノ酸アミノ酸配列を有する１つ以上の単量体ＴＴＲペプチドに結合し、
（ｉｉ）配列番号１５３のアミノ酸配列を有する四量体ヒトＴＴＲタンパク質に対する結合親和性を実質的に示さない、分子ペプチド又はポリペプチドについての分子のライブラリーをアッセイすることと、
（ｂ）（ｉ）及び（ｉｉ）の結合特性を示す分子を特定することと、
（ｃ）（ｂ）で特定された前記分子を単離するか、又は前記分子を発現する細胞を単離することと、を含む、方法。

【請求項89】

（ｉ）及び（ｉｉ）の前記結合特性を示し、かつ（ｉｉｉ）配列番号６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、又は７４からなるアミノ酸配列を有するペプチドに結合しない、分子を特定するためにアッセイすることを更に含む、請求項８８に記載の方法。

【請求項90】

分子が、抗体又は抗体の抗原結合断片を含む、請求項８８又は８９に記載の方法。

【請求項91】

単離するステップが、（ｉ）及び（ｉｉ）並びに任意選択で（ｉｉｉ）の前記結合特性を示す抗体を産生する細胞を単離することを含む、請求項９０に記載の方法。

【請求項92】

アッセイするステップの前に、前記１つ以上の単量体ＴＴＲペプチドで非ヒト哺乳動物を免疫化するステップを含み、前記アッセイすることが、前記哺乳動物によって産生された抗体分子をスクリーニングすることを含む、請求項８８～９１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項93】

前記抗体の少なくとも相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を決定することと、
前記ＣＤＲの前記アミノ酸配列を含むヒト化抗体配列を生成することと、
前記ヒト化抗体をコードするヌクレオチド配列を含む核酸を合成することと、を更に含む、請求項８８～９２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項94】

前記ヒト化抗体配列をコードする核酸、又は前記ヒト化抗体配列の抗原結合断片をコードする核酸を細胞にトランスフェクトすることを更に含む、請求項９３に記載の方法。

【請求項95】

前記抗体又は前記抗原結合断片を発現する条件下で前記細胞を培養することを更に含む、請求項９４に記載の方法。

【請求項96】

（ｉ）及び（ｉｉ）並びに任意選択で（ｉｉｉ）の前記結合特性を有すると特定された前記分子のコピーを合成することを更に含む、請求項８８又は８９に記載の方法。

【請求項97】

請求項９５又は９６に記載のプロセスによって産生された、単離された分子。

【請求項98】

請求項９７に記載の単離された分子と、薬学的に許容される担体と、を含む、薬学的組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

配列表の参照による組み込み
本明細書と同時に提出され、以下：５７１９８Ａ＿Ｓｅｑｌｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔ；サイズ：１７０，８７１バイト：作成：２０２２年１１月７日として特定されるコンピュータで読み取り可能なヌクレオチド／アミノ酸配列表は、その全体が参照により組み込まれる。コンピュータで読み取り可能な配列と明細書若しくは図面中の配列との間に相違がある限り、明細書及び／又は図面が優先される。

【0002】

本開示は、ヒトトランスサイレチン（ＴＴＲ）単量体に結合する抗体、及びこれらの抗体を使用する方法を提供する。本開示はまた、ヒトトランスサイレチン（ＴＴＲ）単量体を隔離する抗体を提供する。本開示は、ヒトトランスサイレチン（ＴＴＲ）又はＴＴＲ折り畳み中間体の凝集を阻害する抗体を提供する。

【背景技術】

【0003】

トランスサイレチン（ＴＴＲ）は、１２７個のアミノ酸、１４ｋＤａの単量体サブユニットから構成される可溶性ホモ四量体血漿タンパク質である。ＴＴＲは、ＣＴＳ、ＨｓＴ２６５１、ＰＡＬＢ、プレアルブミン、及びＴＢＰＡとしても知られている。ＴＴＲは、原線維及び他の凝集体を形成することができるアミロイド形成タンパク質である。

【0004】

その天然の状態では、ＴＴＲ（又は「野生型」ＴＴＲ）は四量体として存在する。しかしながら、ＴＴＲは、酸媒介性解離において単量体形態に変換され得る。そのような単量体は、ＴＴＲ凝集／アミロイド形成の鍵であると考えられる。具体的には、ＴＴＲ単量体は、続いて、アミロイド形成として知られているプロセスにおいて、誤って折り畳まれた立体構造を採用し、ＴＴＲオリゴマー及びアミロイド原線維に凝集し得る。増大する証拠は、誤って折り畳まれた単量体ＴＴＲの活性凝集がＴＴＲアミロイド疾患の根本原因であることを示す。本開示は、ＴＴＲアミロイド疾患を治療する際に有用なＴＴＲ抗体を提供する。

【発明の概要】

【0005】

本開示は、ヒトトランスサイレチン（ＴＴＲ）の形態に結合する抗体、抗単量体ＴＴＲ特異的抗体、及びそれらを使用する方法を提供する。

【0006】

本開示の一実施形態は、ヒトＴＴＲに結合する単離された抗体を提供し、この抗体は、サンドイッチＥＬＩＳＡにおいて決定された場合、約２００ｎＭ未満のＥＣ５０でヒトＴＴＲに結合し、かつ／又はバイオレイヤー干渉法アッセイにおいて決定された場合、約２０ｎＭ未満のＫＤでヒトＴＴＲに結合する。

【0007】

本開示は、ＴＴＲ凝集に関連する疾患を、本開示の抗体及び本開示の抗体を含む医薬で治療する方法を提供する。本開示は、本開示の抗体を使用してＴＴＲの単量体形態を検出する方法を提供する。本開示は、トランスサイレチン（ＴＴＲ）アミロイドーシスに関連する疾患を診断するか、又は抗ＴＴＲ療法による疾患の治療を監視する方法を提供する。

【0008】

より具体的には、本開示は、ヒトトランスサイレチン（ＴＴＲ）に結合する単離された抗体を提供し、その抗体は、サンドイッチＥＬＩＳＡにおいて決定された場合、約２００ｎＭ未満のＥＣ５０でヒトＴＴＲに結合し、かつ／又はバイオレイヤー干渉法アッセイにおいて決定された場合、約２０ｎＭ未満のＫＤでヒトＴＴＲに結合する。いくつかの態様では、ヒトＴＴＲは、単量体形態にある。いくつかの態様では、抗体は、間接ＥＬＩＳＡにおいて決定された場合、２０ｎＭ未満のＥＣ５０で単量体ＴＴＲに結合する。いくつかの態様では、抗体は、ＴＴＲの凝集を防止する。いくつかの態様では、抗体は、ＴＴＲの折り畳み中間体に結合する。

【0009】

いくつかの態様では、抗体は、
（ａ）配列番号２～８のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、
（ｂ）配列番号９～１５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び
（ｃ）配列番号１６～２２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、
（ｄ）配列番号２３～２９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、
（ｅ）配列番号３０～３６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び
（ｆ）配列番号３７～４３のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、を含む。

【0010】

本開示は、ヒトトランスサイレチン（ＴＴＲ）に結合する抗体を提供し、その抗体は、
（ａ）配列番号２～８のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、
（ｂ）配列番号９～１５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び
（ｃ）配列番号１６～２２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、
（ｄ）配列番号２３～２９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、
（ｅ）配列番号３０～３６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び
（ｆ）配列番号３７～４３のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、を含む。

【0011】

いくつかの態様では、抗体は、
（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、
（ｂ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び
（ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、
（ｄ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、
（ｅ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び
（ｆ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、を含む。

【0012】

いくつかの態様では、抗体は、
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、
（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び
（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、
（ｄ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、
（ｅ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び
（ｆ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、を含む。

【0013】

いくつかの態様では、抗体は、
（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び
（ｃ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、
（ｄ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、
（ｅ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、を含む。

【0014】

いくつかの態様では、抗体は、
（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、
（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び
（ｃ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、
（ｄ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、
（ｅ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び
（ｆ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、を含む。

【0015】

いくつかの態様では、抗体は、
（ａ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、
（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び
（ｃ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、
（ｄ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、
（ｅ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び
（ｆ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、を含む。

【0016】

いくつかの態様では、抗体は、
（ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、
（ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び
（ｃ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、
（ｄ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、
（ｅ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び
（ｆ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、を含む。

【0017】

いくつかの態様では、抗体は、
（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、
（ｂ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、
（ｃ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、
（ｄ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、
（ｅ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び
（ｆ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、を含む。

【0018】

いくつかの態様では、抗体は、モノクローナル抗体である。

【0019】

いくつかの態様では、抗体は、ヒト化抗体又はキメラ抗体である。

【0020】

いくつかの態様では、抗体は、ＶＨドメインを含み、ＶＨドメインは、配列番号４６～４９のうちのいずれか１つの配列と少なくとも８５％又は少なくとも９５％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの態様では、ＶＨドメインは、配列番号４６～４９のうちのいずれか１つの配列を含む。いくつかの態様では、抗体は、ＶＨドメインを含み、ＶＨドメインは、配列番号５５～６０のうちのいずれか１つの配列と少なくとも８５％又は少なくとも９５％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの態様では、ＶＨドメインは、配列番号５５～６０のうちのいずれか１つの配列を含む。

【0021】

いくつかの態様では、抗体は、ＶＬドメインを含み、ＶＬドメインは、配列番号５１～５３のうちのいずれか１つの配列と少なくとも８５％又は少なくとも９５％の配列同一性を含む。いくつかの態様では、ＶＬドメインは、配列番号５１～５３のうちのいずれか１つの配列を含む。いくつかの態様では、ＶＬドメインは、配列番号６２～６４のうちのいずれか１つの配列と少なくとも８５％又は少なくとも９５％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの態様では、ＶＬドメインは、配列番号６２～６４のうちのいずれか１つの配列を含む。

【0022】

いくつかの態様では、本開示は、ヒトＴＴＲの単量体形態又は折り畳み中間体形態に結合する抗体断片を提供する。

【0023】

いくつかの態様では、本開示は、ＧＰＴＧＴＧＥＳＫＣＰＬ（配列番号６５）、ＭＶＫＶＬＤＡＶＲＧＳＰＡ（配列番号６６）、ＰＦＨＥＨＡＥＶＶＦＴＡ（配列番号６７）、ＥＨＡＥＶＶＦＴＡ（配列番号６８）、ＹＴＩＡＡＬＬＳ（配列番号６９）、ＬＳＰＹＳＹ（配列番号７０）、ＳＹＳＴＴＡＶＶ（配列番号７１）、ＹＴＩＡＡＬＬＳＰＹＳＹＳＴＴＡＶＶ（配列番号７２）、ＬＧＩＳＰＭＨＥＨＡＥ（配列番号７３）、及びＲＲＹＴＩＡＡＭＬＳＰＹＳ（配列番号７４）のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有するペプチドに結合しないＴＴＲ抗体を提供する。

【0024】

いくつかの態様では、本開示は、立体構造エピトープに結合する抗体を提供する。

【0025】

いくつかの態様では、本開示の抗体は、ＩｇＧ４抗体である。

【0026】

いくつかの態様では、本開示は、サンドイッチＥＬＩＳＡにおいて決定された場合、約１５０ｎＭ未満、又は約１００ｎＭ未満、又は約５０ｎＭ未満、又は約２０ｎＭ未満のＥＣ５０でヒトＴＴＲに結合する抗体を提供する。いくつかの態様では、抗体は、間接ＥＬＩＳＡを使用して決定された場合、約２０ｎＭ未満、又は約５ｎＭ未満、又は約２ｎＭ未満、又は約１ｎＭ未満のＥＣ５０でヒトＴＴＲに結合する。

【0027】

いくつかの態様では、本開示は、ヒトＴＴＲに特異的に結合し、かつヒトＴＴＲへの結合について本開示の抗体と競合する抗体を提供する。いくつかの実施形態では、結合について競合する抗体は、単量体ＴＴＲの凝集を阻害する抗体である。

【0028】

本開示は、本明細書に記載の抗体の各々をコードする単離された核酸を提供する。本開示は、このような単離された核酸を含む単離された宿主細胞を提供する。本開示はまた、このような単離された核酸からタンパク質を発現する単離された宿主細胞を提供する。

【0029】

本開示は、抗体の発現に好適な条件下で、本明細書に記載の宿主細胞を培養することを含む、ヒトＴＴＲに結合する抗体を産生する方法を提供する。いくつかの態様では、そのような方法は、宿主細胞又は宿主細胞培養物から抗体を回収することを更に含む。更に、本開示は、そのような方法によって産生された抗体を提供する。

【0030】

本開示は、本開示の抗体を含む組成物を提供する。本開示はまた、本開示の抗体と、薬学的に許容される担体と、を含む、薬学的組成物も提供する。いくつかの態様では、組成物は、薬学的組成物である。いくつかの態様では、抗体又は組成物は、ＴＴＲ凝集に関連する関連する疾患を治療するか、予防するか、又は診断する際に使用される。

【0031】

本開示は、ＴＴＲアミロイドーシスを治療する際における使用のための抗体及び組成物を提供する。いくつかの態様では、ＴＴＲアミロイドーシスは、トランスサイレチンアミロイドーシス（ＡＴＴＲ）心筋症（ＡＴＴＲ－ＣＭ）又はトランスサイレチンアミロイドーシス（ＡＴＴＲ）多発ニューロパチー（ＡＴＴＲ－ＰＮ）である。いくつかの態様では、本開示の抗体又は組成物は、末梢ＴＴＲアミロイドーシス、眼アミロイド血管症、又は脳アミロイド血管症を治療する際に使用される。いくつかの態様では、抗体又は組成物は、家族性アミロイド多発ニューロパチー（ＡＰ）、家族性アミロイド心筋症（ＦＡＣ）、ＡＴＴＲ－ＰＮ及びＡＴＴＲ－ＣＭ、ｈＡＴＴＲ又は野生型ＡＴＴＲ（ｗｔＡＴＴＲ）、老人性全身性アミロイドーシス（ＳＳＡ）、全身性家族性アミロイドーシス、アルツハイマー病を含む軟髄膜／中枢神経系（ＣＮＳ）アミロイドーシス、ＴＴＲ関連眼アミロイドーシス、ＴＴＲ関連腎アミロイドーシス、ＴＴＲ関連高チロキシン血症、手根管症候群を含むＴＴＲ関連靱帯アミロイドーシス、肩腱板断裂及び腰部脊椎管狭窄症、並びに子癇前症から選択される疾患を治療する際に使用される。

【0032】

本開示は、ＴＴＲアミロイドーシスに関連する疾患を有する対象を、有効量の本開示の抗体又は組成物で治療する方法を提供する。いくつかの態様では、疾患は、ＴＴＲアミロイドーシスである。いくつかの態様では、疾患は、家族性アミロイド多発ニューロパチー（ＡＰ）、家族性アミロイド心筋症（ＦＡＣ）、ＡＴＴＲ－ＰＮ及びＡＴＴＲ－ＣＭ、ｈＡＴＴＲ又は野生型ＡＴＴＲ（ｗｔＡＴＴＲ）、老人性全身性アミロイドーシス（ＳＳＡ）、全身性家族性アミロイドーシス、アルツハイマー病を含む軟髄膜／中枢神経系（ＣＮＳ）アミロイドーシス、ＴＴＲ関連眼アミロイドーシス、ＴＴＲ関連腎アミロイドーシス、ＴＴＲ関連高チロキシン血症、手根管症候群を含むＴＴＲ関連靱帯アミロイドーシス、肩腱板断裂及び腰部脊椎管狭窄症、又は子癇前症である。

【0033】

本開示は、検出可能な標識を更に含む、本明細書で開示されるＴＴＲ抗体を提供する。

【0034】

本開示は、試料中の単量体トランスサイレチン（ＴＴＲ）を測定する方法を提供する。いくつかの態様では、方法は、試料を、本明細書に開示されるＴＴＲ抗体のうちのいずれかと接触させることと、試料中のＴＴＲに結合した抗体の量を測定することと、を含む。いくつかの態様では、測定することは、試料を二次抗体と接触させ、それによって形成された複合体を測定することを含む。いくつかの態様では、方法は、ＴＴＲ単量体抗体Ａｂ３及びＡｂ５を使用することを含み、当該抗体のうちの１つを捕捉抗体として使用し、当該抗体のうちの１つを検出抗体として使用する。

【0035】

本開示は、トランスサイレチン（ＴＴＲ）アミロイドーシスに関連する疾患を診断するか、又は抗ＴＴＲ療法による疾患の治療をモニタリングする方法を更に提供し、対象からの体液の試料中の単量体ＴＴＲのレベルをアッセイすることを含み、対照と比較した対象の試料中の単量体ＴＴＲの存在又は上昇したレベルが、ＴＴＲアミロイドーシスに関連する疾患の存在を示す。いくつかの態様では、単量体ＴＴＲは、本開示の抗体に結合する。

【0036】

本開示は、対象からの試料を、トランスサイレチン（ＴＴＲ）アミロイドーシスを有するか、又は有すると疑われる対象からの体液の試料と接触させることと、試料中の単量体ＴＴＲを検出又は測定することと、を含む、方法を更に提供する。いくつかの態様では、接触させるステップは、ＴＴＲ単量体抗体Ａｂ３及びＡｂ５から選択される接触抗体を使用する。いくつかの態様では、検出又は測定するステップは、接触抗体及びＴＴＲによって形成された複合体を、ＴＴＲ単量体抗体Ａｂ３及びＡｂ５から選択される検出抗体と接触させることを含み、接触抗体は、検出抗体とは異なる。いくつかの態様では、方法は、試料中の単量体ＴＴＲを検出又は測定することに基づいて、抗ＴＴＲ療法を開始することを更に含む。いくつかの態様では、方法は、試料中の単量体ＴＴＲの測定に基づいて、抗ＴＴＲ療法の用量を調整することを更に含む。いくつかの態様では、抗ＴＴＲ療法は、対象に、本開示の抗体又は本開示の組成物を投与することを含む。いくつかの態様では、体液は血液である。

【0037】

本開示はまた、本明細書に記載される抗体を含む組成物を提供し、組成物は、（ｉ）薬学的組成物であり、薬学的に許容される担体、又は（ｉｉ）診断用組成物を更に含む。いくつかの態様では、診断用組成物は、免疫ベース又は抗体ベースの診断方法において従来使用される試薬を更に含む。いくつかの態様では、診断方法は、ＴＴＲ単量体形態を測定する。いくつかの態様では、診断方法は、Ｑｕａｎｔｅｒｉｘプラットフォームを使用する。いくつかの態様では、診断方法は、ウェスタンゲルである。

【0038】

いくつかの態様では、本開示の抗体は、四量体ＴＴＲ及び生理学的、細胞完全長ＴＴＲ上に存在しない、Ｆ８７Ｍ Ｌ１１０Ｍ ＴＴＲから調製された単量体ＴＴＲ上の立体構造エピトープを認識する。いくつかの態様では、本開示の抗体は、ＴＴＲ変異体の単量体形態に結合する。したがって、いくつかの態様では、抗体は、ＴＴＲ変異を認識し、変異は、Ｖ３０Ｍ、Ｄ３８Ａ、及び／又はＶ１２２Ｉである。いくつかの態様では、抗体は、ＴＴＲ変異を認識し、変異は、Ｄ３８Ａ又はＶ１２２Ｉである。したがって、いくつかの態様では、抗体は、配列番号１４５（Ｖ３０Ｍ）、１４６（Ｄ３８Ａ）、及び１４７（Ｖ１２２Ｉ）のうちのいずれかに記載のアミノ酸配列を含むＴＴＲを認識する。いくつかの態様では、抗体は、配列番号１４６及び／又は１４７に記載のアミノ酸配列を含むＴＴＲを認識する。いくつかの態様では、抗体は、ＴＴＲ変異を認識し、変異は、Ｆ８７Ｍ又はＬ１１０Ｍである。したがって、いくつかの態様では、抗体は、配列番号１４３（Ｆ８７Ｍ）又は１４４（Ｌ１１０Ｍ）に記載のアミノ酸配列を含むＴＴＲを認識する。いくつかの態様では、本開示の抗体は、Ｓ１１２Ｉ ＴＴＲ変異体が二量体の形態で存在するため、配列番号１４８（Ｓ１１２Ｉ）には結合しない。しかしながら、それは、三重変異体が安定化された単量体形態で存在するため、Ｓ１１２Ｉ変異を含む、ＴＴＲ Ｆ８７Ｍ Ｌ１１０Ｍ Ｓ１１２Ｉ（配列番号１５２）に結合する。いくつかの態様では、抗体は、ＴＴＲにおける三重変異（又は三変異（ｔｒｉ－ｍｕｔａｔｉｏｎ））を認識し、その変異は、ＴＴＲ Ｖ３０Ｍ Ｆ８７Ｍ Ｌ１１０Ｍ（配列番号１４９）、ＴＴＲ Ｄ３８Ａ、Ｆ８７Ｍ、Ｌ１１０Ｍ（配列番号１５０）、ＴＴＲ Ｆ８７Ｍ Ｌ１１０Ｍ Ｖ１２２Ｉ（配列番号１５１）、又はＴＴＲ Ｆ８７Ｍ Ｌ１１０Ｍ Ｓ１１２Ｉ（配列番号１５２）である。

【0039】

本開示は、抗体を提供し、ＶＨドメインは、図６Ａ～６Ｂ、７、１４、及び１８～２１（配列番号８１～１４２）に記載の配列のうちのいずれかと少なくとも８５％又は少なくとも９５％の配列同一性を含む。

【0040】

本開示は、抗体を提供し、ＶＬドメインは、図６Ａ～６Ｂ、７、１４、及び１８～２１（配列番号８１～１４２）に記載の配列のうちのいずれかと少なくとも８５％又は少なくとも９５％の配列同一性を含む。

【0041】

本開示は、抗体を提供し、抗体は、配列番号８０及び１４３～１４７及び１４９～１５２のうちのいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含むＴＴＲに特異的に結合する。いくつかの態様では、抗体は、配列番号８０に記載のアミノ酸配列を含むＴＴＲに特異的に結合する。いくつかの態様では、抗体は、配列番号８０に記載のアミノ酸配列を含むＴＴＲに特異的に結合する。いくつかの態様では、抗体は、配列番号１４３に記載のアミノ酸配列を含むＴＴＲに特異的に結合する。いくつかの態様では、抗体は、配列番号１４４に記載のアミノ酸配列を含むＴＴＲに特異的に結合する。いくつかの態様では、抗体は、配列番号１４５又は配列番号１４９に記載のアミノ酸配列を含むＴＴＲに特異的に結合する。いくつかの態様では、抗体は、配列番号１４６又は配列番号１５０に記載のアミノ酸配列を含むＴＴＲに特異的に結合する。いくつかの態様では、抗体は、配列番号１４７又は配列番号１５１に記載のアミノ酸配列を含むＴＴＲに特異的に結合する。いくつかの態様では、抗体は、配列番号１５２に記載のアミノ酸配列を含むＴＴＲに特異的に結合する。

【0042】

本開示は、ＴＴＲの単量体形態に特異的に結合する抗体を産生する細胞を産生する方法を含み、その方法は、ＴＴＲの単量体形態で非ヒト動物を免疫化することと、ヒトＴＴＲの単量体形態に特異的に結合するが、野生型四量体ＴＴＲ又はＴＴＲの二量体若しくは四量体形態には結合しない抗体について、動物からの血液又は組織をスクリーニングすることと、ヒトＴＴＲの単量体形態に特異的に結合するが、野生型四量体ＴＴＲ又はＴＴＲの二量体若しくは四量体形態には結合しない抗体を産生する動物からの細胞を特定し、単離することと、を含む。いくつかの態様では、抗体を産生する細胞は、動物の脾臓組織、リンパ節又は骨髄の除去によって回収される。いくつかの態様では、抗体を産生する細胞は、Ｂ細胞、Ｔ細胞、又は幹細胞である。いくつかの態様では、動物は、マウス、ラット、モルモット、又はウサギである。いくつかの態様では、方法は、単離された細胞を不死化することを更に含む。いくつかの態様では、方法は、骨髄腫細胞への細胞の体細胞融合によって、ハイブリドーマ細胞を産生することを含む。いくつかの態様では、方法は、抗体を産生する細胞を培養することを含む。いくつかの態様では、抗体は、配列番号８０、１４３、及び１４４のうちのいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含むＴＴＲに特異的に結合する。本開示の方法のいくつかの態様では、抗体は、ＧＰＴＧＴＧＥＳＫＣＰＬ（配列番号６５）、ＭＶＫＶＬＤＡＶＲＧＳＰＡ（配列番号６６）、ＰＦＨＥＨＡＥＶＶＦＴＡ（配列番号６７）、ＥＨＡＥＶＶＦＴＡ（配列番号６８）、ＹＴＩＡＡＬＬＳ（配列番号６９）、ＬＳＰＹＳＹ（配列番号７０）、ＳＹＳＴＴＡＶＶ（配列番号７１）、ＹＴＩＡＡＬＬＳＰＹＳＹＳＴＴＡＶＶ（配列番号７２）、ＬＧＩＳＰＭＨＥＨＡＥ（配列番号７３）、及びＲＲＹＴＩＡＡＭＬＳＰＹＳ（配列番号７４）のうちのいずれか１つから選択される配列からなるアミノ酸配列を有するペプチドに結合しない。いくつかの態様では、動物を免疫化するために使用されるヒトＴＴＲの単量体形態は、配列番号８０に記載のアミノ酸配列を含むＴＴＲ Ｆ８７Ｍ Ｌ１１０Ｍ、配列番号１４３に記載のアミノ酸配列を含むＴＴＲ Ｆ８７Ｍ、配列番号１４４に記載のアミノ酸配列を含むＴＴＲ Ｌ１１０Ｍのうちのいずれか１つである。本開示はまた、そのような方法によって産生された抗体を提供する。

【0043】

本開示は、ヒトＴＴＲの単量体形態に特異的に結合するモノクローナル抗体を産生するための方法を提供し、当該方法は、非ヒト動物内に、配列番号８０に記載のアミノ酸配列を含むＴＴＲ Ｆ８７Ｍ Ｌ１１０Ｍ、配列番号１４３に記載のアミノ酸配列を含むＴＴＲ Ｆ８７Ｍ、及び配列番号１４４に記載のアミノ酸配列を含むＴＴＲ Ｌ１１０Ｍのうちのいずれか１つのうちの少なくとも１つを導入することと、動物から抗体を産生する細胞を回収し、これらの細胞を単一細胞懸濁液にすることと、単一細胞懸濁液から不死化細胞株を生成することと、ヒトＴＴＲの単量体形態に特異的に結合することを有する抗体の存在について、不死化細胞株の上清をスクリーニングすることと、モノクローナル抗体として、ヒトＴＴＲの単量体形態に特異的に結合する抗体を選択することと、を含む。いくつかの態様では、当該動物は、マウス、ラット、モルモット、又はウサギである。いくつかの態様では、抗体を産生する細胞は、Ｂ細胞、Ｔ細胞、又は幹細胞である。いくつかの態様では、抗体を産生する細胞は、動物の脾臓組織、リンパ節又は骨髄の除去によって回収される。いくつかの態様では、不死化細胞株は、骨髄腫細胞への単一細胞懸濁液中の細胞の体細胞融合によって産生されたハイブリドーマ細胞株である。本開示はまた、そのような方法によって産生された抗体を提供する。

【0044】

本開示はまた、（ｉ）配列番号８０及び１４３～１４７及び１４９～１５２から選択されるアミノ酸アミノ酸配列を有する１つ以上の単量体ＴＴＲペプチドに結合し、（ｉｉ）配列番号１５３のアミノ酸配列を有する四量体ヒトＴＴＲタンパク質に対する結合親和性を実質的に示さない、分子ペプチド又はポリペプチドについての分子のライブラリーをアッセイすることと、（ｉ）及び（ｉｉ）の結合特性を示す分子を特定することと、（ｂ）で特定された分子を単離するか、又は当該分子を発現する細胞を単離することと、を含む、方法を提供する。いくつかの態様では、方法は、（ｉ）及び（ｉｉ）の結合特性を示し、かつ（ｉｉｉ）配列番号６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、又は７４からなるアミノ酸配列を有するペプチドに結合しない、分子を特定するためにアッセイすることを更に含む。いくつかの態様では、分子は、抗体又は抗体の抗原結合断片を含む。いくつかの態様では、単離するステップは、（ｉ）及び（ｉｉ）並びに任意選択で（ｉｉｉ）の結合特性を示す抗体を産生する細胞を単離することを含む。いくつかの態様では、方法は、アッセイするステップの前に、１つ以上の単量体ＴＴＲペプチドで非ヒト哺乳動物を免疫化するステップを含み、アッセイすることが、哺乳動物によって産生された抗体分子をスクリーニングすることを含む。いくつかの態様では、そのような方法は、抗体の少なくとも相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を決定することと、当該ＣＤＲの当該アミノ酸配列を含むヒト化抗体配列を生成することと、ヒト化抗体をコードするヌクレオチド配列を含む核酸を合成することと、を更に含む。いくつかの態様では、そのような方法は、ヒト化抗体配列をコードする核酸、又はヒト化抗体配列の抗原結合断片をコードする核酸を細胞にトランスフェクトすることを更に含む。いくつかの態様では、方法は、抗体又は抗原結合断片を発現する条件下で細胞を培養することを更に含む。いくつかの態様では、方法は、（ｉ）及び（ｉｉ）並びに任意選択で（ｉｉｉ）の結合特性を有すると特定された分子のコピーを合成することをなお更に含む。本開示はまた、そのようなプロセスによって産生された、単離された分子、及び単離された分子と、薬学的に許容される担体と、を含む、薬学的組成物を提供する。

【0045】

本開示の他の特徴及び利点は、以下の図面の説明及び詳細な説明から明らかになるであろう。しかしながら、図面、詳細な説明、及び実施例は、開示された主題の実施形態を示しているが、本開示の趣旨及び範囲内の様々な変更及び修正が、図面、詳細な説明、及び実施例から明らかになるため、単に例示として与えられることを理解されたい。

【図面の簡単な説明】

【0046】

本開示の新規の特徴は、添付の特許請求の範囲に具体的に記載されている。本開示の特徴及び利点のより良い理解は、本開示の原理が利用される例示的な実施形態を記載している以下の詳細な説明、及び添付の図面を参照して得られるであろう。

【0047】

【図1】実施例５に記載されるように、抗体（Ａｂ１）との単量体ＴＴＲ［「単量体」］の凝集の阻害についての用量反応曲線を示す。

【図2】実施例３に概説されるプロセスを介して調製された７つのマウス抗ヒト単量体ＴＴＲ抗体のＣＤＲの配列を示す。

【図3A】実施例４に記載されるスクリーニングＥＬＩＳＡアッセイにおいて分析した場合の、それぞれ、マウス抗ヒト単量体ＴＴＲ抗体Ａｂ３、Ａｂ５、及びＡｂ７の選択性を示す。これらの３つの抗体は、実施例１１に示されるように、ＥＣ５０でヒトＴＴＲの単量体形態に特異的に結合する。

【図3B】同上。

【図3C】同上。

【図4A】実施例４に記載されるスクリーニングＥＬＩＳＡアッセイにおいて分析した場合の、それぞれ、マウス抗ヒト単量体ＴＴＲ抗体Ａｂ１、Ａｂ２、及びＡｂ６の選択性を示す。これらの３つの抗体は、実施例１１に示されるように、ＥＣ５０でヒトＴＴＲの単量体及び野生型（ＷＴ）形態の両方に特異的に結合する。

【図4B】同上。

【図4C】同上。

【図5】実施例１０に記載される間接ＥＬＩＳＡアッセイにおけるマウス抗ヒト単量体ＴＴＲ抗体Ａｂ１の結合を示す。抗体は、非線形立体構造エピトープへの結合を示す。この抗体は、以前に抗ヒトＴＴＲ抗体のエピトープとして特定された１０個のペプチド（Ｒ００１０－Ｒ００１７、Ｒ００２１、及びＲ００２３）のいずれにも結合せず、単量体の安定化を可能にする単量体界面又は変異に沿った線形領域のいずれにも結合しなかった。したがって、抗体は、単量体界面内の立体構造エピトープに結合するように見える。

【図6-1】実施例６に概説されるプロセスを介して調製されたキメラマウス抗体の配列を示す。

【図6-2】同上。

【図7】実施例６に記載されるプロセスを介して調製されたヒト化マウス抗体Ａｂ１のＶＨ及びＶＬ配列を示す。

【図8】実施例６に記載される間接ＥＬＩＳＡアッセイにおいて測定された場合のヒト化Ａｂ１の特異性を示す。ヒト化抗体Ａｂ１は、安定化Ｔ１１９Ｍ ＴＴＲ四量体よりもｍＴＴＲに対する特異性を保持する。

【図9】実施例６に記載される間接ＥＬＩＳＡアッセイにおいて測定された場合のヒト化Ａｂ２の特異性を示す。ヒト化抗体Ａｂ２は、安定化Ｔ１１９Ｍ ＴＴＲ四量体よりもｍＴＴＲに対する特異性を保持する。

【図10】ヒトＴＴＲの単量体形態の検出が、実施例１５に記載されるように本開示の抗体の対を使用することによって達成されることを示す。具体的には、Ａｂ３は、捕捉用に使用され、Ａｂ５は、検出用に使用される。

【図11】ヒトＴＴＲの単量体形態の検出が、実施例１５に記載されるように本開示の抗体の対を使用することによって達成されることを示す。具体的には、Ａｂ５は、捕捉用に使用され、Ａｂ３は、検出用に使用される。

【図12】ヒトＴＴＲの単量体形態の検出が、実施例１３に記載されるＴＴＲ凝集ドットブロットアッセイに記載されるように本開示の抗体で達成されることを示す。具体的には、Ａｂ１は、ヒトＴＴＲ単量体に結合するが、凝集ＴＴＲには結合しない。トリプシン凝集体のいくつかの結合は、存在する非凝集単量体形態の過剰に起因する可能性が高いことが見られる。

【図13】ヒトＴＴＲの単量体形態の検出が、実施例１３に記載されるＴＴＲ凝集ドットブロットアッセイに記載されるように本開示の抗体で達成されることを示す。具体的には、ヒト化Ａｂ１は、ヒトＴＴＲ単量体に結合する。

【図14】実施例６に記載されるプロセスを介して調製されたヒト化マウス抗体Ａｂ２のＶＨ及びＶＬ配列を示す。

【図15】ＡＴＴＲ疾患と診断され、治療中であるか、又は現在治療中でないかのいずれかの自己申告した患者からの血漿試料を使用する、実施例１４及び１５に記載されるＴＴＲ診断アッセイにおける捕捉又は検出抗体としての本開示の抗体の使用を示す。右側の群は、現在治療中でないか、又は安定剤治療（タファミジス又はジフルニサル）のいずれかの患者における単量体レベルの測定を含む。中間の群は、サイレンサー（例えば、オンパットロ）として知られる治療中である。右側の群は、健康なボランティアである。ＡＴＴＲ患者は、健康な対照よりも、総ＴＴＲに対する単量体ＴＴＲのレベルの上昇を示した。

【図16】実施例１２に記載される間接ＥＬＩＳＡアッセイにおける疾患関連変異に対するＡｂ１の結合を示す。

【図17】実施例１２に記載されるサンドイッチＥＬＩＳＡアッセイにおける疾患関連変異に対するＡｂ１の結合を示す。

【図18】実施例６に記載されるプロセスを介して調製されたマウス抗体Ａｂ３並びにマウス抗体Ａｂ３のキメラ及びヒト化型のＶＨ及びＶＬ配列を示す。

【図19】実施例６に記載されるプロセスを介して調製されたマウス抗体Ａｂ５並びにマウス抗体Ａｂ５のキメラ及びヒト化型のＶＨ及びＶＬ配列を示す。

【図20】実施例６に記載されるプロセスを介して調製されたマウス抗体Ａｂ６並びにマウス抗体Ａｂ６のキメラ及びヒト化型のＶＨ及びＶＬ配列を示す。

【図21】実施例６に記載されるプロセスを介して調製されたヒト化マウス抗体マウス抗体Ａｂ７並びにマウス抗体Ａｂ７のキメラ及びヒト化型のＶＨ及びＶＬ配列を示す。

【発明を実施するための形態】

【0048】

定義
本明細書の目的のための「アクセプターヒトフレームワーク」は、以下に定義されるように、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークに由来する、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）フレームワーク又は重鎖可変ドメイン（ＶＨ）フレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワーク「に由来する」アクセプターヒトフレームワークは、それと同じアミノ酸配列を含んでもよいか、又はそれは、アミノ酸配列変化を含有してもよい。いくつかの態様では、アミノ酸変化の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、又は２以下である。いくつかの態様では、ＶＬアクセプターヒトフレームワークは、ＶＬヒト免疫グロブリンフレームワーク配列又はヒトコンセンサスフレームワーク配列と同一の配列である。

【0049】

本明細書で使用される場合、「親和性」という用語は、単一の抗原部位における抗体と抗原との間の相互作用の強度を指す。各抗原部位内で、抗体の可変領域は、多くの部位で抗原と弱い非共有結合力を介して相互作用し、相互作用が多いほど、親和性が強い。抗体の、その抗原に対する親和性は、一般に、解離定数（ＫＤ）によって表すことができる。親和性は、本明細書に記載される方法を含む、当該技術分野において既知である一般的な方法によって測定され得る。結合親和性を測定するための具体的な説明的及び例示的な方法が、以下に記載される。本明細書で使用される場合、抗体（ＩｇＧなど）又はその断片（例えば、Ｆａｂ断片）に対する「高親和性」という用語は、標的抗原に対する約１０^－７Ｍ以下、約１０^－８Ｍ以下、約１０^－９Ｍ以下、又は約１０^－１０Ｍ以下の親和性を有する抗体を指す。しかしながら、高親和性結合は、他の抗体アイソタイプについて異なり得る。例えば、ＩｇＭアイソタイプに対する高親和性結合は、約１０－７Ｍ以下、又は約１０－８Ｍ以下の親和性を有する抗体を指す。

【0050】

「親和性成熟」抗体とは、改変を有しない親抗体と比較して、１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）内で１つ以上の改変を有し、そのような改変によって抗体の抗原に対する親和性が改善される、抗体を指す。

【0051】

「抗ｍＴＴＲ抗体」及び「ＴＴＲ単量体に結合する抗体」という用語は、抗体が単量体ＴＴＲを標的とする際に（タンパク質の凝集形態に対する中間体として）、診断剤及び／又は治療剤として有用になるように十分な親和性でＴＴＲの単量体形態、例えば、ヒトＴＴＲに結合することができる抗体を指す。一態様では、抗ｍＴＴＲ抗体の非関連非ＴＴＲタンパク質への結合の程度は、例えば、ＥＬＩＳＡアッセイによって測定された場合、抗体のｍＴＴＲへの結合の約１０％未満である。特定の態様では、ｍＴＴＲに結合する抗体は、バイオレイヤー干渉法又は間接ＥＬＩＳＡによって測定された場合、約１μＭ、約１００ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、約１ｎＭ未満、約０．１ｎＭ未満、約０．０１ｎＭ未満、又は約０．００１ｎＭ未満（例えば、約１０^－８Ｍ以下、例えば、約１０^－８Ｍ～約１０^－１１Ｍ、例えば、約１０^－９Ｍ～約１０^－１０Ｍ）の解離定数（ＫＤ）を有する。抗体が約１μＭ以下のＫＤを有する場合、抗体はＴＴＲに「特異的に結合する」と言われる。特定の態様では、抗ＴＴＲ抗体は、異なる種由来のＴＴＲ間で保存されるＴＴＲのエピトープに結合する。特定の態様では、抗ＴＴＲ抗体は、ＴＴＲの非線形エピトープに結合する。特定の態様では、ＴＴＲの天然又は四量体形態に結合する抗体は、バイオレイヤー干渉法又は間接ＥＬＩＳＡによって測定された場合、約１０μＭ未満、約１０μＭ未満、約１００ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、又は約１ｎＭ未満（例えば、約１０^５Ｍ以下）の解離定数（ＫＤ）を有する。

【0052】

本明細書における「抗体」という用語は、最も広義に使用され、それらが所望の抗原結合活性を示す限り、限定されないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、及び抗体断片、又は抗原結合断片を含む、様々な抗体構造を包含する。

【0053】

「抗体断片」又は「抗原結合断片」とは、インタクトな抗体が結合する抗原に結合するインタクトな抗体の一部を含むインタクトな抗体以外の分子を指す。抗体断片の例としては、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、ダイアボディ、線状抗体、一本鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ、及びｓｃＦａｂ）、単一ドメイン抗体（ｄＡｂ）、及び抗体断片から形成された多重特異性抗体が挙げられるが、これらに限定されない。特定の抗体断片の概説については、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ ａｎｄ Ｈｕｄｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２３：１１２６－１１３６（２００５）を参照されたい。

【0054】

本明細書で使用される場合、抗体の「結合ドメイン」とは、抗原に結合するのに十分な可変ドメインの一部を指す。いくつかの実施形態では、結合ドメインは、重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３並びに軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、結合ドメインは、重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、及びＣＤＲ３、並びに軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、及びＣＤＲ３を含む。

【0055】

「エピトープ」という用語は、抗体が結合するタンパク質性又は非タンパク質性のいずれかの抗原上の部位を示す。エピトープは、連続的なアミノ酸ストレッチ（線形エピトープ）から形成され得るか、又は非連続的なアミノ酸（立体構造エピトープ）を含むことができ、例えば、抗原のフォールディング、すなわち、タンパク質性抗原の三次フォールディングに起因して空間的に近接して生じる。線形エピトープは、典型的には、変性タンパク質中にインタクトのままであるのに対して、立体構造エピトープは、典型的には、変性剤による処理時に破壊される。エピトープは、固有の空間的立体構造中に、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、又は少なくとも８～１０個のアミノ酸を含む。「と同じエピトープに結合する」とは、抗体を比較するために同じエピトープマッピング技術を使用するときに、抗体、抗体断片又は他の抗原結合部分が特定の抗原に結合し、例示された抗体と同じエピトープに結合する能力を意味する。例示された抗体及び他の抗体のエピトープは、エピトープマッピング技術を使用して決定することができる。エピトープマッピング技術は、当該技術分野において周知である。例えば、線形エピトープは、ドットブロット、ペプチドマイクロアレイ、又はＥＬＩＳＡによる形態で膜上に沈着した抗原に由来する合成ペプチド断片の結合を示すことによって特定することができる。立体構造エピトープは、例えば、水素／重水素交換質量分析又は核磁気共鳴、Ｘ線結晶構造解析、及び二次元核磁気共鳴などによって、アミノ酸の空間的立体構造を決定することによって容易に特定することができる。特定の実施形態では、「エピトープ」という用語は、ｍＴＴＲ上の部位を示す。

【0056】

特定のエピトープに結合する抗体（すなわち、同じエピトープに結合する抗体）のスクリーニングは、例えば、限定されないが、アラニンスキャニング、ペプチドブロット（Ｍｅｔｈ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４８（２００４）４４３－４６３を参照されたい）、ペプチド切断分析、エピトープ切除、エピトープ抽出、抗原の化学修飾（Ｐｒｏｔ．Ｓｃｉ．９（２０００）４８７－４９６を参照されたい）、及び交差遮断（“Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ”，Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹを参照されたい）などの当該技術分野における日常的な方法を使用して行うことができる。加えて、エピトープを認識する抗体は、ＥＬＩＳＡを介して特定することができる。

【0057】

抗体が、抗ＴＴＲ抗体と同じＴＴＲのエピトープに結合するか、又は結合について抗ＴＴＲ抗体と競合するかどうかを容易に決定するために、競合結合を使用することができる。例えば、参照抗ＴＴＲ抗体と「同じエピトープに結合する抗体」とは、競合アッセイにおいて、参照抗ＴＴＲ抗体がその抗原にそれぞれ５０％以上結合するのを遮断する抗体を指し、逆に、参照抗体は、競合アッセイにおいて、抗体がその抗原に結合するのを５０％以上遮断する。また、抗体が参照抗ＴＴＲ抗体と同じエピトープに結合するかどうかを決定するために、参照抗体は飽和条件下でＴＴＲに結合することが可能である。過剰の参照抗ＴＴＲ抗体を除去した後、問題の抗ＴＴＲ抗体がＴＴＲに結合する能力を評価する。抗ＴＴＲ抗体が参照抗ＴＴＲ抗体の飽和結合後にＴＴＲに結合することができる場合、問題の抗ＴＴＲ抗体は参照抗ＴＴＲ抗体とは異なるエピトープに結合すると結論付けることができる。しかし、問題の抗ＴＴＲ抗体が、参照抗ＴＴＲ抗体の飽和結合後にＴＴＲに結合することができない場合、問題の抗ＴＴＲ抗体は、参照抗ＴＴＲ抗体によって結合したエピトープと同じエピトープに結合し得る。問題の抗体が同じエピトープに結合するかどうかを確認するために、又は立体的な理由によって結合を妨げるだけであるかどうかを確認するために、日常的な実験を使用することができる（例えば、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、表面プラズモン共鳴、フローサイトメトリー、又は当該技術分野で利用可能な任意の他の定量的若しくは定性的な抗体結合アッセイを使用するペプチド変異及び結合分析）。このアッセイは、２つの設定、すなわち、抗体の両方が飽和抗体である状態で実行されるべきである。両方の設定で、第１の（飽和）抗体のみがＴＴＲに結合することができる場合、問題の抗ＴＴＲ抗体及び参照抗ＴＴＲ抗体は、ＴＴＲへの結合について競合すると結論付けることができる。いくつかの態様では、１倍、５倍、１０倍、２０倍、又は１００倍過剰量の一方の抗体が、競合結合アッセイにおいて測定された場合、他方の抗体の結合を少なくとも５０％、少なくとも７５％、少なくとも９０％、又は更に９９％、又はそれ以上阻害する場合、２つの抗体は、同一又は重複エピトープに結合するとみなされる（例えば、Ｊｕｎｇｈａｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５０（１９９０）１４９５－１５０２を参照されたい）。いくつかの態様では、一方の抗体の結合を低減又は排除する抗原における本質的に全てのアミノ酸変異が、他方の結合も低減又は排除する場合、２つの抗体は同じエピトープに結合するとみなされる。一方の抗体の結合を低減又は排除するアミノ酸変異のサブセットのみが、他方の抗体の結合を低減又は排除する場合、２つの抗体は「重複エピトープ」を有するとみなされる。

【0058】

「キメラ」抗体という用語は、重鎖及び／又は軽鎖の一部分が特定の供給源又は種に由来する一方で、重鎖及び／又は軽鎖の残りの部分が異なる供給源又は種に由来する抗体を指す。

【0059】

抗体の「クラス」とは、その重鎖が有する定常ドメイン又は定常領域の種類を指す。抗体の５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭが存在し、これらのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２に更に分けられ得る。特定の態様では、抗体は、ＩｇＧ２又はＩｇＧ４アイソタイプのものである。異なるクラスの免疫グロブリンに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ、ａ、ｄ、ｅ、ｇ、及びｍと呼ばれる。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（Ｋ）及びラムダ（ｌ）と呼ばれる２つの種類のうちの１つに割り当てられ得る。

【0060】

本明細書で使用される場合、「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ」という用語は、抗原特異性及び結合親和性を付与する抗体可変領域内のアミノ酸の配列を指す。例えば、一般に、各重鎖可変領域（例えば、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３）に３つのＣＤＲがあり、各軽鎖可変領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３）に３つのＣＤＲがある。所与のＣＤＲの正確なアミノ酸配列境界は、Ｒａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（１９９１），“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，” ５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（「Ｒａｂａｔ」番号付けスキーム）、Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）ＪＭＢ ２７３，９２７－９４８（「Ｃｈｏｔｈｉａ」番号付けスキーム）、又はそれらの組み合わせ、及びＩｍＭｕｎｏＧｅｎＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）番号付け（Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｓｔ，７，１３２－１３６（１９９９）、Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２７，５５－７７（２００３）、Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，（２０１５）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．４３，Ｄ４１３－４２２）（「ＩＭＧＴ」番号付けスキーム）に記載されているスキームを含む、多数の周知のスキームのうちのいずれかを使用して決定することができる。所与のＣＤＲ領域（例えば、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２又はＬＣＤＲ３）の組み合わされたＲａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａの番号付けスキームにおいて、いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲの一部として定義されるアミノ酸残基とともに、Ｒａｂａｔ ＣＤＲの一部として定義されるアミノ酸残基に対応する。本明細書で使用される場合、「Ｃｈｏｔｈｉａ」番号スキームに従って定義されるＣＤＲは、時々、「超可変ループ」とも称される。ＩＭＧＴ下では、抗体のＣＤＲ領域は、プログラムＩＭＧＴ／ドメインギャップアラインを使用して決定され得る。一般に、具体的に示されない限り、抗体分子は、１つ以上のＡｈｏ ＣＤＲ、Ｒａｂａｔ ＣＤＲ、及び／又はＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲの任意の組み合わせを含み得る。

【0061】

「保存的配列修飾」という用語は、アミノ酸配列を含有する抗体又は抗体断片の結合特徴に著しく影響しないか、又はその結合特徴を著しく変化させないアミノ酸修飾を指す。このような保存的修飾は、アミノ酸置換、付加、及び欠失を含む。修飾は、部位特異的変異誘発及びＰＣＲによって媒介される変異誘発などの当該技術分野で既知の標準的な技術によって、本開示の抗体又は抗体断片に導入することができる。保存的アミノ酸置換は、アミノ酸残基が類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置換されているものである。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該技術分野で定義されている。これらのファミリーには、塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、ベータ分枝状側鎖を有するアミノ酸（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）、及び芳香族側鎖を有するアミノ酸（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が含まれる。したがって、本開示の抗体又はその抗原結合断片内の１つ以上のアミノ酸残基を、同じ側鎖ファミリーからの他のアミノ酸残基と置き換えることができ、変化した抗体又は抗原結合断片を、本明細書に記載の機能的アッセイを使用して試験することができる。

【0062】

薬剤、例えば、抗体、組成物、又は薬学的組成物の「有効量」とは、所望される治療的又は予防的結果を達成するために必要な投薬量及び期間で有効な量を指す。

【0063】

「エフェクター機能」とは、抗体のアイソタイプにより異なる抗体のＦｃ領域に起因する生物学的活性を指す。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、食作用、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御、並びにＢ細胞活性化が挙げられる。

【0064】

本明細書で使用される場合、「Ｆｃ領域」という用語は、ＣＨ３、ＣＨ２、及び抗体の定常ドメインのヒンジ領域の少なくとも一部を含むポリペプチドを指す。任意選択で、Ｆｃ領域は、いくつかの抗体クラスに存在するＣＨ４ドメインを含み得る。Ｆｃ領域は、抗体の定常ドメインのヒンジ領域全体を含み得る。一実施形態では、本開示は、抗体のＦｃ領域及びＣＨ１領域を含む。一実施形態では、本開示は、抗体のＦｃ領域ＣＨ３領域を含む。別の実施形態では、本開示は、抗体の定常ドメインからのＦｃ領域、ＣＨ１領域、及びＣカッパ／ラムダ領域を含む。一実施形態では、本開示の結合分子は、定常領域、例えば、重鎖定常領域を含む。一実施形態では、そのような定常領域は、野生型定常領域と比較して修飾される。すなわち、本明細書に開示される本開示のポリペプチドは、３つの重鎖定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、又はＣＨ３）のうちの１つ以上、及び／又は軽鎖定常領域ドメイン（ＣＬ）に対する改変又は修飾を含み得る。例示的な修飾としては、１つ以上のドメインにおける１つ以上のアミノ酸の付加、欠失、又は置換が挙げられる。このような変化は、エフェクター機能、半減期などを最適化するために含まれ得る。この用語は、天然配列Ｆｃ領域及びバリアントＦｃ領域を含む。一態様では、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、Ｃｙｓ２２６又はＰｒｏ２３０から、重鎖のカルボキシル末端に及ぶ。しかしながら、宿主細胞によって産生された抗体は、重鎖のＣ末端からの１つ以上、特に１つ又は２つのアミノ酸の翻訳後切断を受け得る。したがって、完全長重鎖をコードする特定の核酸分子の発現によって宿主細胞によって産生された抗体は、完全長重鎖を含み得るか、又は完全長重鎖の切断バリアントを含み得る。これは、重鎖の最後の２つのＣ末端アミノ酸が、グリシン（Ｇ４４６）及びリシン（Ｋ４４７、ＥＵインデックスによる番号付け）である場合であり得る。したがって、Ｆｃ領域のＣ末端リシン（Ｌｙｓ４４７）、又はＣ末端グリシン（Ｇｌｙ４４６）及びリシン（Ｌｙｓ４４７）は、存在してもよいか、又は存在しなくてもよい。したがって、「完全長ＩｇＧ１」は、例えば、Ｇｌｙ４４６及びＬｙｓ４４７を有するか、又はＬｙｓ４４７を有しないか、又はＧｌｙ４４６及びＬｙｓ４４７の両方を有しないＩｇＧ１を含む。別段の指示がない場合、Ｆｃ領域を含む重鎖のアミノ酸配列は、Ｃ末端グリシン－リシンジペプチドなしで本明細書に記載される。一態様では、本開示による抗体に含まれる、本明細書に指定されるＦｃ領域を含む重鎖は、Ｇｌｙ４４６及びＬｙｓ４４７（ＥＵインデックスによる番号付け）を含み得る。一態様では、本開示による抗体に含まれる、本明細書に指定されるＦｃ領域を含む重鎖は、Ｇｌｙ４４６（ＥＵインデックスによる番号付け）を含み得る。別段本明細書で指定されない限り、Ｆｃ領域又は定常領域中のアミノ酸残基の番号付けは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１に記載されるように、ＥＵインデックスとも呼ばれるＥＵ番号付けシステムに従う。

【0065】

「フレームワーク」又は「ＦＲ」とは、相補性決定領域（ＣＤＲ）以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは、一般に、４つのＦＲドメイン：ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４からなる。したがって、ＣＤＲ及びＦＲ配列は、一般に、ＶＨ（又はＶＬ）において以下の配列で出現する：ＦＲ１－ＣＤＲ－Ｈ１（ＣＤＲ－Ｌ１）－ＦＲ２－ ＣＤＲ－Ｈ２（ＣＤＲ－Ｌ２）－ＦＲ３ － ＣＤＲ－Ｈ３（ＣＤＲ－Ｌ３）－ＦＲ４。

【0066】

「完全長抗体」、「インタクトな抗体」、及び「全抗体」という用語は、本明細書において、天然抗体構造と実質的に同様の構造を有するか、又は本明細書で定義されるＦｃ領域を含有する重鎖を有する抗体を指すように互換的に使用される。

【0067】

「宿主細胞」、「宿主細胞株」、及び「宿主細胞培養物」という用語は、互換的に使用され、外因性核酸が中に導入されている細胞を指し、そのような細胞の子孫を含む。宿主細胞は、「形質転換体」及び「形質転換細胞」を含み、これらは、初代形質転換細胞及び継代の数に関わらずそれに由来する子孫を含む。子孫は、親細胞と核酸含有量の点で完全に同一ではなくてもよいが、変異を含み得る。元来形質転換された細胞についてスクリーニング又は選択されたものと同一の機能又は生物学的活性を有する変異子孫が、本明細書に含まれる。

【0068】

「ヒト抗体」は、ヒト若しくはヒト細胞によって産生されたか、又はヒト抗体レパートリーを利用する非ヒト源に由来する抗体のアミノ酸配列、あるいは他のヒト抗体コード配列に対応するアミノ酸配列を有するものである。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を具体的に除外する。

【0069】

「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨフレームワーク配列の選択において最も一般的に生じるアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般に、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループからである。一般に、配列のサブグループは、Ｒａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ９１－３２４２，Ｂｅｔｈｅｓｄａ ＭＤ（１９９１），ｖｏｌｓ．１－３のようなサブグループである。一態様では、ＶＬについて、サブグループは、Ｒａｂａｔら（上記）のようなサブグループカッパＩである。一態様では、ＶＨについて、サブグループは、Ｒａｂａｔら（上記）のようなサブグループＩＩＩである。

【0070】

「ヒト化」抗体とは、非ヒトＣＤＲ由来のアミノ酸残基及びヒトＦＲ由来のアミノ酸残基を含む、キメラ抗体を指す。特定の態様では、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、及び典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ＣＤＲの全て又は実質的に全てが非ヒト抗体のものに対応し、ＦＲの全て又は実質的に全てがヒト抗体のものに対応する。ヒト化抗体は任意選択で、ヒト抗体に由来する抗体定常領域の少なくとも一部分を含み得る。抗体、例えば、非ヒト抗体の「ヒト化形態」とは、ヒト化を受けた抗体を指す。

【0071】

「個体」又は「対象」は、哺乳動物である。哺乳動物としては、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、及びウマ）、霊長類（例えば、ヒト、及びサルなどの非ヒト霊長類）、ウサギ、及び齧歯類（例えば、マウス及びラット）が挙げられるが、これらに限定されない。特定の態様では、個体又は対象はヒトである。

【0072】

「単離された」抗体は、その天然環境の成分から分離されているものである。いくつかの態様では、抗体は、例えば、電気泳動法（例えば、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）又はクロマトグラフ（例えば、イオン交換又は逆相ＨＰＬＣ）法によって決定された場合、９５％又は９９％を超える純度まで精製される。抗体純度の評価のための方法の概説については、例えば、Ｆｌａｔｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ ８４８：７９－８７（２００７）を参照されたい。

【0073】

２つのポリペプチドの文脈で使用される場合、「連結された」という用語は、ポリペプチドがアミノ酸の同じ配列の一部であることを意味する。連結されている２つのポリペプチドは、追加のアミノ酸配列によって分離されてもよい。すなわち、それらは、互いに連続しているか、又は直接的に連結されている必要はない。

【0074】

「単離された」核酸とは、その天然環境の成分から分離されている核酸分子を指す。単離された核酸は、通常はその核酸分子を含有する細胞内に含有される核酸分子を含むが、その核酸分子が染色体外に、又はその天然染色体位置とは異なる染色体位置に存在する。

【0075】

「抗ＴＴＲ抗体をコードする単離された核酸」とは、抗ＴＴＲ抗体の重鎖及び軽鎖（又はそれらの断片）をコードする１つ以上の核酸分子を指し、単一のベクター又は別個のベクター内のそのような核酸分子を含み、そのような核酸分子は、宿主細胞内の１つ以上の位置に存在する。

【0076】

本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に同種の抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、その集団を構成する個々の抗体は、同一である、かつ／又は同じエピトープに結合するが、例えば、天然に存在する変異を含有するか、又はモノクローナル抗体調製物の産生中に生じる、想定されるバリアント抗体を除き、そのようなバリアントは一般に少量で存在する。異なる決定基（エピトープ）に対して指向される異なる抗体を典型的に含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して指向される。したがって、「モノクローナル」という修飾語は、実質的に同種の抗体の集団から得られる抗体の特徴を示しており、いかなる特定の方法による抗体の産生も必要とするものとして解釈されるものではない。例えば、本開示によるモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座の全て又は一部を含有するトランスジェニック動物を利用する方法を含むが、これらに限定されない、様々な技術によって作製することができ、モノクローナル抗体を作製するためのそのような方法及び他の例示的な方法が、本明細書に記載されている。

【0077】

「裸の抗体」とは、異種性部分（例えば、細胞傷害性部分）又は放射標識にコンジュゲートされていない抗体を指す。裸の抗体は、薬学的組成物中に存在してもよい。

【0078】

「天然抗体」とは、様々な構造を有する、天然に存在する免役グロブリン分子を指す。例えば、天然ＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合されている２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖から構成される、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端まで、各重鎖は、可変重ドメイン又は重鎖可変領域とも呼ばれる可変ドメイン（ＶＨ）と、その後に３つの定常重ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）とを有する。同様に、Ｎ末端からＣ末端まで、各軽鎖は、可変軽ドメイン又は軽鎖可変領域とも呼ばれる可変ドメイン（ＶＬ）と、その後に定常軽（ＣＬ）ドメインとを有する。

【0079】

「核酸」又は「核酸分子」又は「ポリヌクレオチド」という用語は、ヌクレオチドのポリマーを含む任意の化合物及び／又は物質を含む。各ヌクレオチドは、塩基、具体的には、プリン又はピリミジン塩基（すなわち、シトシン（Ｃ）、グアニン（Ｇ）、アデニン（Ａ）、チミン（Ｔ）又はウラシル（Ｕ））、糖（すなわち、デオキシリボース又はリボース）、及びリン酸基から構成される。多くの場合、核酸分子は、塩基の配列によって記載され、それによって、当該塩基は、核酸分子の一次構造（線形構造）を表す。塩基の配列は、典型的には５’から３’まで表される。本明細書において、核酸分子という用語は、例えば、相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）及びゲノムＤＮＡ、リボ核酸（ＲＮＡ）、特に、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、ＤＮＡ又はＲＮＡの合成形態、並びにこれらの分子のうちの２つ以上を含む混合ポリマーを含む、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）を包含する。核酸分子は、線状又は環状であり得る。加えて、核酸分子という用語には、センス鎖及びアンチセンス鎖の両方、並びに一本鎖及び二本鎖形態が含まれる。更に、本明細書に記載の核酸分子は、天然に存在するか、又は天然に存在しないヌクレオチドを含有し得る。天然に存在しないヌクレオチドの例としては、誘導体化糖、又はリン酸骨格結合、又は化学的に修飾された残基を有する修飾ヌクレオチド塩基が挙げられる。核酸分子はまた、インビトロ及び／又はインビボ、例えば、宿主又は患者において、本開示の抗体を直接発現するためのベクターとして好適であるＤＮＡ及びＲＮＡ分子を包含する。このようなＤＮＡ（例えば、ｃＤＮＡ）又はＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ベクターは、非修飾又は修飾であり得る。例えば、ｍＲＮＡを、インビボで抗体を生成するために対象に注入することができるように、ＲＮＡベクターの安定性及び／又はコードされた分子の発現を増強するように、ｍＲＮＡを化学的に修飾することができる（例えば、２０１７年６月１２日にオンラインで公開された、Ｓｔａｄｌｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２０１７、ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｍ．４３５６又はＥＰ２１０１８２３Ｂ１を参照されたい）。

【0080】

「添付文書」という用語は、そのような治療製品の適応症、使用法、投薬量、投与、併用療法、禁忌症についての情報、及び／又はその使用に関する警告を含む、治療製品の商用パッケージに通例含まれる指示書を指すように使用される。

【0081】

「ペプチド」、「ポリペプチド」、及び「タンパク質」という用語は、互換的に使用され、ペプチド結合によって共有結合したアミノ酸残基から構成される化合物を指す。タンパク質又はペプチドは、少なくとも２つのアミノ酸を含有しなければならず、タンパク質又はペプチドの配列を含むことができるアミノ酸の最大数に制限はない。ポリペプチドは、ペプチド結合によって互いに結合された２つ以上のアミノ酸を含む任意のペプチド又はタンパク質を含む。本明細書で使用される場合、この用語は、当該技術分野では一般的に、例えば、ペプチド、オリゴペプチド、及びオリゴマーとも称される短鎖、並びに当該技術分野では一般的にタンパク質と称される、より長い鎖の両方を指し、それらの多くの種類が存在する。「ポリペプチド」としては、とりわけ、例えば、生物学的に活性な断片、実質的に相同なポリペプチド、オリゴペプチド、ホモ二量体、ヘテロ二量体、ポリペプチドのバリアント、修飾ポリペプチド、誘導体、類似体、融合タンパク質が挙げられる。ポリペプチドは、天然ペプチド、組換えペプチド、又はそれらの組み合わせを含む。

【0082】

参照ポリペプチド配列に関する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、配列を整列させ、必要に応じてギャップを導入して、最大の配列同一性パーセントを達成した後の、かつ整列の目的のための配列同一性の一部としていかなる保存的置換も考慮しない、参照ポリペプチド配列内のアミノ酸残基と同一の候補配列内のアミノ酸残基のパーセンテージと定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定する目的のための整列は、当該技術分野の技術範囲内の様々な方法で、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、Ｃｌｕｓｔａｌ Ｗ、Ｍｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に入手可能なコンピュータソフトウェア、又はＦＡＳＴＡプログラムパッケージを使用して達成することができる。別段の指示がない限り、本明細書における目的のために、アミノ酸配列同一性パーセント値は、ＢＬＯＳＵＭ５０比較マトリックスを使用して、ＦＡＳＴＡパッケージバージョン３６．３．８ｃ又はそれ以降のｇｇｓｅａｒｃｈプログラムを使用して生成される。ＦＡＳＴＡプログラムパッケージには、Ｗ．Ｒ．Ｐｅａｒｓｏｎ ａｎｄ Ｄ．Ｊ．Ｌｉｐｍａｎ（１９８８），“Ｉｍｐｒｏｖｅｄ Ｔｏｏｌｓ ｆｏｒ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ”，ＰＮＡＳ ８５：２４４４－２４４８、Ｗ．Ｒ．Ｐｅａｒｓｏｎ（１９９６）“Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ” Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ． ２６６： ２２７－２５８、及びＰｅａｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ４６：２４－３６の著作物があり、ｗｗｗ．ｆａｓｔａ．ｂｉｏｃｈ．ｖｉｒｇｉｎｉａ．ｅｄｕ／ｆａｓｔａ＿ｗｗｗ２／ｆａｓｔａ＿ｄｏｗｎ．ｓｈｔｍｌ又はｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｓｓｓ／ｆａｓｔａから公的に入手可能である。あるいは、ｆａｓｔａ．ｂｉｏｃｈ．ｖｉｒｇｉｎｉａ．ｅｄｕ／ｆａｓｔａ＿ｗｗｗ２／ｉｎｄｅｘ．ｃｇｉでアクセス可能な公開サーバーを使用し、ｇｇｓｅａｒｃｈ（全体的なタンパク質：タンパク質）プログラム及びデフォルトオプション（ＢＬＯＳＵＭ５０；オープン：－１０；ｅｘｔ：－２；Ｋｔｕｐ＝２）を使用して配列を比較して、局所的ではなく、全体的なアライメントを実行することを確実にする。アミノ酸同一性パーセントが、出力アラインメントヘッダーに与えられる。

【0083】

「薬学的組成物」又は「薬学的製剤」という用語は、調製物中に含まれる活性成分の生物学的活性が有効になるような形態であり、組成物又は薬学的組成物が投与される対象にとって許容できないほど有毒である追加の成分を何ら含有しない調製物を指す。

【0084】

「薬学的に許容される担体」とは、対象にとって無毒である、活性成分以外の組成物又は薬学的組成物若しくは製剤中の成分を指す。薬学的に許容される担体としては、緩衝液、賦形剤、安定剤、又は保存剤が挙げられるが、これらに限定されない。

【0085】

本明細書で使用される場合、「特異的に結合する」又は「結合特異性」という用語は、個々の抗体の組み合わせ部位が、異なる抗原決定基ではなく、１つの抗原決定基と反応する能力を指す。抗体の組み合わせ部位は、分子のＦａｂ部分に位置し、重鎖及び軽鎖の超可変領域から構築される。抗体の結合親和性は、単一の抗原決定基と抗体上の単一の組み合わせ部位との間の反応の強度である。これは、抗原決定基と抗体の組み合わせ部位との間で作用する引力及び反発力の合計である。

【0086】

本明細書で使用される場合、「ＴＴＲ」という用語は、別段示されない限り、霊長類（例えば、ヒト）及び齧歯類（例えば、マウス及びラット）などの哺乳動物を含む任意の脊椎動物源由来の任意の天然トランスサイレチン（例えば、配列番号１）を指す。この用語は、「完全長」非プロセシングＴＴＲ、及び細胞内のプロセシングから生じる任意の翻訳後形態を包含する。このような切断ＴＴＲ形態は、プロテアーゼ切断からもたらされ得る。この用語はまた、ＴＴＲの天然に存在するバリアント、例えば、スプライスバリアント又は対立遺伝子バリアントも包含する。例示的なヒト成熟ＴＴＲタンパク質のアミノ酸配列は、配列番号１に示される。本明細書に記載の変異は、配列番号１に記載の成熟ヒトＴＴＲ配列に従って番号付けされる。

【0087】

本明細書で使用される場合、「ＴＴＲ形態」又は「ＴＴＲの形態」という用語は、ＴＴＲの単量体形態（「ｍＴＴＲ」）と呼ばれる異なる四次構造などのタンパク質の構造形態、並びにＴＴＲの四量体形態を指す。ＡＷ Ｙｅｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，ｖｏｌｕｍｅ １０，Ａｒｔｉｃｌｅ ｎｕｍｂｅｒ：９２５（２０１９）、及びＱｕｉｎｔａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．ＢＩＯＬＯＧＩＣＡＬ ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ，Ｖｏｌ．２７４，Ｎｏ．４６，ｐｐ．３２９４３－３２９４９，１９９９を参照されたい。これはまた、折り畳み中間体も含む。

【0088】

「ｍＴＴＲ」という用語は、ＴＴＲの単量体形態を指す。単量体形態は、「安定化単量体」形態にあり得る。この安定化単量体形態は、原線維又は凝集体への変換を防止することができる。安定化ｍＴＴＲは、Ｐｈｅ８７Ｍｅｔ変異（配列番号１４３）又はＬｅｕ１１０Ｍｅｔ ＴＴＲ変異（配列番号１４４）又はＰｈｅ８７Ｍｅｔ Ｌｅｕ１１０Ｍｅｔ（Ｆ８７Ｍ Ｌ１１０Ｍ）ＴＴＲ二重変異（配列番号８０）を含む。

【0089】

「ｄＴＴＲ」という用語は、ＴＴＲの二量体形態を指し、これは、「安定化された二量体」形態の形態にあり得る。この安定化二量体は、四量体を容易に形成することができず、Ｓｅｒ１１２Ｉｌｅ（Ｓ１１２Ｉ）ＴＴＲ変異を含む。

【0090】

本明細書で使用される場合、ＴＴＲの「ＴＴＲ折り畳み中間体」、「折り畳み中間体」、又は「中間体」という用語は、ＴＴＲ四量体解離又は単量体の再折り畳みなどの部分的に折り畳まれたＴＴＲ形態を指す。Ｆｅｉｇｅ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ，Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ ９，２００８，１０５（３６），１３３７３－１３３７８、又はＪｅｓｕｓ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ Ｊ Ｍｏｌ Ｓｃｉ．，２０１６ Ｓｅｐ；１７（９）：１４２８を参照されたい。

【0091】

「ＴＴＲ凝集」という用語は、凝集体構造のスペクトルへの細胞外ミスフォールディング及び／又はミスアセンブリを指す。これらのうちの１つは、凝集又はアミロイド形成のプロセスから形成される構造の１つであるアミロイド原線維と呼ばれる特徴的なクロスβシートアセンブリによって定義される順序付けられた凝集体であり得る。この凝集は、アミロイド疾患と呼ばれる変性疾患を引き起こすと考えられている。Ｓｃｈｍｉｄｔ，Ｍ．，Ｗｉｅｓｅ，Ｓ．，Ａｄａｋ，Ｖ．ｅｔ ａｌ．Ｃｒｙｏ－ＥＭ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ａ ｔｒａｎｓｔｈｙｒｅｔｉｎ－ｄｅｒｉｖｅｄ ａｍｙｌｏｉｄ ｆｉｂｒｉｌ ｆｒｏｍ ａ ｐａｔｉｅｎｔ ｗｉｔｈ ｈｅｒｅｄｉｔａｒｙ ＡＴＴＲ ａｍｙｌｏｉｄｏｓｉｓ．Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ １０，５００８（２０１９）を参照されたい。このような凝集体は、順序付けられた凝集体又はアミロイドであり得る。アミロイドはまた、非晶質であってもよい。

【0092】

本明細書で使用される場合、「治療」（及び「治療する」又は「治療すること」などのその文法上の変化形）とは、治療されている個体における疾患の自然経過を変化させることを目的とした臨床介入を指し、予防のために、又は臨床病理学の経過中（「疾患の治療又は改善」）に実行され得る。治療の望ましい効果としては、疾患の発生又は再発の予防、症状の緩和、疾患の任意の直接的又は間接的病理学的帰結の縮小、転移の予防、疾患進行速度の減少、疾患状態の回復又は寛解、及び緩解又は予後の改善が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの態様では、本開示の抗体は、疾患の発症を遅らせるために、又は疾患の進行を遅延させるために使用される。

【0093】

したがって、いくつかの態様では、本開示は、ＴＴＲ凝集に関連する疾患を治療するための、又はＴＴＲ凝集に関連する疾患を治療するための医薬の開発のための抗体を提供する。いくつかの態様では、ＴＴＲ凝集に関連する疾患は、ＴＴＲアミロイドーシスである。いくつかの態様では、ＴＴＲアミロイドーシスは、トランスサイレチンアミロイドーシス（ＡＴＴＲ）心筋症（ＡＴＴＲ－ＣＭ）又はトランスサイレチンアミロイドーシス（ＡＴＴＲ）多発ニューロパチー（ＡＴＴＲ－ＰＮ）である。いくつかの態様では、ＴＴＲ凝集に関連する疾患は、末梢ＴＴＲアミロイドーシス、眼アミロイド血管症、又は脳アミロイド血管症である。いくつかの態様では、ＴＴＲ凝集に関連する疾患は、家族性アミロイド多発ニューロパチー（ＡＰ）、家族性アミロイド心筋症（ＦＡＣ）、ＡＴＴＲ－ＰＮ及びＡＴＴＲ－ＣＭ、ｈＡＴＴＲ又は野生型ＡＴＴＲ（ｗｔＡＴＴＲ）、老人性全身性アミロイドーシス（ＳＳＡ）、全身性家族性アミロイドーシス、アルツハイマー病を含む軟髄膜／中枢神経系（ＣＮＳ）アミロイドーシス、ＴＴＲ関連眼アミロイドーシス、ＴＴＲ関連腎アミロイドーシス、ＴＴＲ関連高チロキシン血症、手根管症候群を含むＴＴＲ関連靱帯アミロイドーシス、肩腱板断裂及び腰部脊椎管狭窄症、又は子癇前症である。

【0094】

「可変領域」又は「可変ドメイン」という用語は、抗体の抗原への結合に関与する抗体の重鎖又は軽鎖のドメインを指す。天然抗体の重鎖及び軽鎖（それぞれ、ＶＨ及びＶＬ）の可変ドメインは一般に、各ドメインが４つの保存フレームワーク領域（ＦＲ）及び３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む同様の構造を有する。例えば、Ｋｉｎｄｔ ｅｔ ａｌ．Ｋｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６ｔｈ ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．，ｐａｇｅ ９１（２００７）を参照されたい。可変ドメインは、ＦＲ１及び／又はＦＲ４の全て又は一部を含むか、又は含まない、重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３、並びにＦＲ１及び／又はＦＲ４の全て又は一部を含むか、又は含まない、軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３を含み得る。すなわち、可変ドメインは、抗原結合活性を保持する限り、ＦＲ１及び／又はＦＲ４の一部を欠いていてもよい。単一のＶＨドメイン又はＶＬドメインは、抗原結合特異性を付与するのに十分であり得る。更に、抗原に結合する抗体からのＶＨドメイン又はＶＬドメインを使用して、特定の抗原に結合する抗体を単離して、それぞれ、相補的ＶＬドメイン又はＶＨドメインのライブラリーをスクリーニングすることができる。例えば、Ｐｏｒｔｏｌａｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：８８０－８８７（１９９３）、Ｃｌａｒｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－６２８（１９９１）を参照されたい。

【0095】

本明細書で使用される場合、「ベクター」という用語は、それが結合している別の核酸を増殖させることができる核酸分子を指す。この用語は、自己複製核酸構造としてのベクター、及びそれが導入されている宿主細胞のゲノム内に組み込まれたベクターを含む。特定のベクターは、それらが作動可能に連結している核酸の発現を指向することができる。そのようなベクターは、本明細書で「発現ベクター」と称される。

【0096】

組成物及び方法
一態様では、本開示は、部分的に、抗体がＴＴＲの単量体形態に結合することができるという発見に基づいている。特定の態様では、ＴＴＲの単量体形態に特異的に結合する抗体が提供される。本開示の抗体は、ＴＴＲ関連疾患の治療及び診断試験などに有用である。

【0097】

一態様では、抗体は、ＴＴＲ中間体又は折り畳み中間体に結合し得る。

【0098】

特定の態様では、抗ｍＴＴＲ抗体は、インビトロ又はインビボでのＴＴＲ凝集を阻害する。いくつかの実施形態では、ＴＴＲ凝集は、約２００ｎＭ未満の抗体濃度で阻害される。

【0099】

いくつかの実施形態では、抗ＴＴＲ抗体は、バイオレイヤー干渉法によって測定された場合、約２０ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、約５ｎＭ未満、又は約２ｎＭ未満、又は約１ｎＭ未満のＫＤでヒトＴＴＲに結合する。

【0100】

いくつかの実施形態では、抗ＴＴＲ抗体は、間接ＥＬＩＳＡによって測定された場合、約２０ｎＭ以下、又は約１０ｎＭ以下、又は約５ｎＭ以下、又は約１ｎＭ以下のＥＣ_５０で四量体ヒトＴＴＲに結合する。

【0101】

一態様では、本開示は、（ａ）配列番号２～８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号９～１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号１６～２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、並びに（ｄ）配列番号２３～２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号３０～３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３７～４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、又は６つ全てのＣＤＲを含む、抗ＴＴＲ抗体を提供する。

【0102】

一態様では、本開示は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、又は６つ全てのＣＤＲを含む、抗ＴＴＲ抗体を提供する。

【0103】

一態様では、本開示は、（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、又は６つ全てのＣＤＲを含む、抗ＴＴＲ抗体を提供する。

【0104】

一態様では、本開示は、（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、又は６つ全てのＣＤＲを含む、抗ＴＴＲ抗体を提供する。

【0105】

一態様では、本開示は、（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、又は６つ全てのＣＤＲを含む、抗ＴＴＲ抗体を提供する。

【0106】

一態様では、本開示は、（ａ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、又は６つ全てのＣＤＲを含む、抗ＴＴＲ抗体を提供する。

【0107】

一態様では、本開示は、（ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、又は６つ全てのＣＤＲを含む、抗ＴＴＲ抗体を提供する。

【0108】

一態様では、本開示は、（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、又は６つ全てのＣＤＲを含む、抗ＴＴＲ抗体を提供する。

【0109】

一態様では、本開示は、（ａ）配列番号２～８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号９～１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１６～２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＨ ＣＤＲ配列を含む、抗体を提供する。

【0110】

一態様では、抗体は、配列番号１６～２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。別の態様では、抗体は、配列番号１６～２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、及び配列番号３７～４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。更なる態様では、抗体は、配列番号１６～２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３７～４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、及び配列番号９～１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２を含む。

【0111】

一態様では、抗体は、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。別の態様では、抗体は、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、及び配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。更なる態様では、抗体は、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、及び配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２を含む。

【0112】

一態様では、抗体は、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。別の態様では、抗体は、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、及び配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。更なる態様では、抗体は、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２を含む。

【0113】

一態様では、抗体は、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。別の態様では、抗体は、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、及び配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。更なる態様では、抗体は、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２を含む。

【0114】

一態様では、抗体は、配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。別の態様では、抗体は、配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、及び配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。更なる態様では、抗体は、配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、及び配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２を含む。

【0115】

一態様では、抗体は、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。別の態様では、抗体は、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、及び配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。更なる態様では、抗体は、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、及び配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２を含む。

【0116】

一態様では、抗体は、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。別の態様では、抗体は、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、及び配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。更なる態様では、抗体は、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２を含む。

【0117】

一態様では、抗体は、配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。別の態様では、抗体は、配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、及び配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。更なる態様では、抗体は、配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、及び配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２を含む。

【0118】

更なる態様では、抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。

【0119】

更なる態様では、抗体は、（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。

【0120】

更なる態様では、抗体は、（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。

【0121】

更なる態様では、抗体は、（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。

【0122】

更なる態様では、抗体は、（ａ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。

【0123】

更なる態様では、抗体は、（ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。

【0124】

更なる態様では、抗体は、（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。

【0125】

別の態様では、本開示は、（ａ）配列番号２３～２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号３０～３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号３７～４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＬ ＣＤＲ配列を含む、抗体を提供する。

【0126】

一態様では、抗体は、（ａ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。

【0127】

一態様では、抗体は、（ａ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。

【0128】

一態様では、抗体は、（ａ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。

【0129】

一態様では、抗体は、（ａ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。

【0130】

一態様では、抗体は、（ａ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。

【0131】

一態様では、抗体は、（ａ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。

【0132】

一態様では、抗体は、（ａ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。

【0133】

別の態様では、本開示の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号２～８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９～１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号１６～２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＨ ＣＤＲ配列を含む、ＶＨドメイン、並びに（ｂ）（ｉ）配列番号２３～２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号３０～３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＬ ＣＤＲ配列を含む、ＶＬドメイン、並びに（ｃ）配列番号３７～４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。

【0134】

別の態様では、本開示は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、抗体を提供する。

【0135】

別の態様では、本開示は、（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、抗体を提供する。

【0136】

別の態様では、本開示は、（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、抗体を提供する。

【0137】

別の態様では、本開示は、（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、抗体を提供する。

【0138】

別の態様では、本開示は、（ａ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、抗体を提供する。

【0139】

別の態様では、本開示は、（ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、抗体を提供する。

【0140】

別の態様では、本開示は、（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、抗体を提供する。

【0141】

別の態様では、本開示は、表１に見られるＣＤＲ－Ｈ１を含む抗体を提供する。

【表1】

【0142】

別の態様では、本開示は、表２に見られるＣＤＲ－Ｈ２を含む抗体を提供する。

【表2】

【0143】

別の態様では、本開示は、表３に見られるＣＤＲ－Ｈ３を含む抗体を提供する。

【表3】

【0144】

別の態様では、本開示は、表４に見られるＣＤＲ－Ｌ１を含む抗体を提供する。

【表4】

【0145】

別の態様では、本開示は、表５に見られるＣＤＲ－Ｌ２を含む抗体を提供する。

【表5】

【0146】

別の態様では、本開示は、表６に見られるＣＤＲ－Ｈ３を含む抗体を提供する。

【表6】

【0147】

別の態様では、本開示は、式Ｉのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１を含む抗体：
Ｇｌｙ－Ｘ^１－Ｘ^２－Ｘ^３－Ｘ^４－Ｘ^５－Ｔｙｒ－Ｘ^６（配列番号４４）を提供し、
式中、Ｘ^１は、Ｔｙｒ又はＰｈｅであり、
Ｘ^２は、Ｔｈｒ又はＡｓｎであり、
Ｘ^３は、Ｐｈｅ又はＩｌｅであり、
Ｘ^４は、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、又はＬｙｓであり、
Ｘ^５は、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、及びＧｌｙから選択され、
Ｘ^６は、Ｔｒｐ Ｔｙｒ又はＧｌｙである。

【0148】

別の態様では、本開示は、以下の配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む抗ｍＴＴＲ抗体Ａｂ１を提供する。
ＱＶＱＬＱＱＰＧＡＥＬＶＲＰＧＳＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＷＭＨＷＶＫＱＲＰＩＱＧＬＥＷＩＧＮＩＤＰＳＤＳＥＴＨＹＮＱＫＦＫＤＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＧＲＮＹＷＹＦＤＶＷＧＴＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号４５）。

【0149】

別の態様では、本開示は、以下から選択される配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む抗ｍＴＴＲ抗体を提供する。
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＷＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＮＩＤＰＳＤＳＥＴＨＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＲＮＹＷＹＦＤＶＷＧＴＧＴＭＶＴＶＳＳ（配列番号４６）、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＷＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＮＩＤＰＳＤＳＥＴＨＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＶＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＲＮＹＷＹＦＤＶＷＧＴＧＴＭＶＴＶＳＳ（配列番号４７）、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＷＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＮＩＤＰＳＤＳＥＴＨＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＶＤＫＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＲＮＹＷＹＦＤＶＷＧＴＧＴＭＶＴＶＳＳ（配列番号４８）、及び
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＷＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＮＩＤＰＳＤＳＥＴＨＹＡＱＫＦＱＧＲＡＴＬＴＶＤＫＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＲＮＹＷＹＦＤＶＷＧＴＧＴＭＶＴＶＳＳ（配列番号４９）。

【0150】

別の態様では、本開示は、以下の配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗ｍＴＴＲ抗体Ａｂ１を提供する。
ＤＩＶＬＴＱＳＰＡＳＬＡＶＳＬＧＱＲＡＴＩＳＣＲＡＳＥＳＶＤＮＹＧＩＳＦＭＮＷＦＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＮＱＧＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＳＬＮＩＨＰＭＥＥＤＤＴＡＭＹＦＣＱＱＳＫＥＶＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号５０）。

【0151】

別の態様では、本開示は、以下から選択される配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含むヒト化抗ｍＴＴＲ抗体を提供する。
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＥＳＶＤＮＹＧＩＳＦＭＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＮＱＧＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＫＥＶＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号５１）、
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＥＳＶＤＮＹＧＩＳＦＭＮＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＮＱＧＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＦＣＱＱＳＫＥＶＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号５２）、及び
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＥＳＶＤＮＹＧＩＳＦＭＮＷＦＱＱＫＰＧＫＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＮＱＧＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＫＥＶＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号５３）。

【0152】

別の態様では、本開示は、以下の配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む抗ｍＴＴＲ抗体Ａｂ２を提供する。

【0153】

ＥＶＫＬＥＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＭＫＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳＮＹＷＭＮＷＶＲＱＳＰＥＫＧＬＥＷＶＡＱＩＲＬＫＳＤＮＹＡＴＨＹＡＥＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＳＳＶＹＬＱＭＮＮＬＲＡＥＤＴＧＩＹＹＣＴＧＶＦＴＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ（配列番号５４）。

【0154】

別の態様では、本開示は、以下から選択される配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む抗ｍＴＴＲ抗体を提供する。
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＹＷＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＱＩＲＬＫＳＤＮＹＡＴＨＹＡＡＰＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＴＴＶＦＴＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号５５）、
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＹＷＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＱＩＲＬＫＳＤＮＹＡＴＨＹＡＡＰＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＴＧＶＦＴＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号５６）、
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＹＷＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＱＩＲＬＫＳＤＮＹＡＴＨＹＡＡＰＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＴＧＶＦＴＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号５７）、
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＹＷＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＱＩＲＬＫＳＤＮＹＡＴＨＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＶＦＴＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号５８）、
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＹＷＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＱＩＲＬＫＳＤＮＹＡＴＨＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＴＧＶＦＴＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号５９）、及び
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＹＷＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＱＩＲＬＫＳＤＮＹＡＴＨＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＴＧＶＦＴＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号６０）。

【0155】

別の態様では、本開示は、以下の配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗ｍＴＴＲ抗体Ａｂ２を提供する。
ＮＩＶＬＴＱＳＰＡＳＬＡＶＳＬＧＱＲＡＴＩＳＣＲＴＳＥＳＶＤＳＹＧＮＳＦＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＬＡＳＮＬＥＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＲＴＤＦＴＬＴＩＤＰＶＥＡＤＤＡＡＴＹＹＣＱＱＮＮＥＤＰＭＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号６１）。

【0156】

別の態様では、本開示は、以下から選択される配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含むヒト化抗ｍＴＴＲ抗体を提供する。
ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＴＳＥＳＶＤＳＹＧＮＳＦＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＬＡＳＮＬＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＮＮＥＤＰＭＹＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号６２）、
ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＴＳＥＳＶＤＳＹＧＮＳＦＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＬＡＳＮＬＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＲＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＮＮＥＤＰＭＹＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号６３）、及び
ＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＴＳＥＳＶＤＳＹＧＮＳＦＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＬＡＳＮＬＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＲＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＮＮＥＤＰＭＹＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号６４）。

【0157】

別の態様では、本開示は、図１８～２１に開示される配列から選択される配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、ヒト化抗ｍＴＴＲ抗体を提供する。別の態様では、本開示は、図１８～２１に開示される配列から選択される配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む、ヒト化抗ｍＴＴＲ抗体を提供する。

【0158】

本明細書に提供される態様のいずれかでは、抗ＴＴＲ抗体は、ヒト化されている。本明細書に提供される態様のいずれかでは、抗ＴＴＲ抗体は、キメラである。一態様では、抗ＴＴＲ抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークを更に含む。

【0159】

別の態様では、抗ＴＴＲ抗体は、配列番号５１～５３のうちのいずれか１つに対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を含むＶＬドメインを含む。一態様では、ＶＬドメインは、配列番号５１～５３と少なくとも８５％の配列同一性を含む。一態様では、ＶＬドメインは、配列番号５１～５３と少なくとも９５％の配列同一性を含む。別の態様では、ＶＬドメインは、配列番号５１～５３のうちのいずれか１つと少なくとも９８％の配列同一性を含む。

【0160】

別の態様では、抗ＴＴＲ抗体は、配列番号６２～６４のうちのいずれか１つに対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を含むＶＬドメインを含む。一態様では、ＶＬドメインは、配列番号６２～６４と少なくとも８５％の配列同一性を含む。一態様では、ＶＬドメインは、配列番号６２～６４と少なくとも９５％の配列同一性を含む。別の態様では、ＶＬドメインは、配列番号６２～６４のうちのいずれか１つと少なくとも９８％の配列同一性を含む。

【0161】

別の態様では、抗ＴＴＲ抗体は、配列番号４６～４９のうちのいずれか１つに対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を含むＶＨドメインを含む。一態様では、ＶＨドメインは、配列番号４６～４９と少なくとも８５％の配列同一性を含む。一態様では、ＶＨドメインは、配列番号４６～４９と少なくとも９５％の配列同一性を含む。別の態様では、ＶＨドメインは、配列番号４６～４９のうちのいずれか１つと少なくとも９８％の配列同一性を含む。

【0162】

別の態様では、抗ＴＴＲ抗体は、配列番号５５～６０のうちのいずれか１つに対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を含むＶＨドメインを含む。一態様では、ＶＨドメインは、配列番号５５～６０と少なくとも８５％の配列同一性を含む。一態様では、ＶＨドメインは、配列番号５５～６０と少なくとも９５％の配列同一性を含む。別の態様では、ＶＨドメインは、配列番号５５～６０のうちのいずれか１つと少なくとも９８％の配列同一性を含む。

【0163】

別の態様では、抗ＴＴＲ抗体は、配列番号４６～４９から選択されるＶＨのＣＤＲ配列のうちの１つ以上を含む。別の実施形態では、抗ＴＴＲ抗体は、配列番号５１～５３から選択されるＶＬのＣＤＲ配列のうちの１つ以上を含む。別の実施形態では、抗ＴＴＲ抗体は、配列番号４６～４９から選択されるＶＨのＣＤＲ配列、及び配列番号５１～５３から選択されるＶＬのＣＤＲ配列を含む。

【0164】

一態様では、抗ＴＴＲ抗体は、配列番号４６～４９から選択されるＶＨの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列のうちの１つ以上、及び配列番号４６～４９から選択されるＶＨのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークを含む。一態様では、抗ＴＴＲ抗体は、配列番号４６～４９から選択されるＶＨの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列、及び配列番号４６～４９から選択されるＶＨのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークを含む。一態様では、抗ＴＴＲ抗体は、配列番号４６～４９から選択されるＶＨ配列の３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列、及び配列番号４６～４９から選択されるＶＨのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性のフレームワークを含む。一態様では、抗ＴＴＲ抗体は、配列番号４６～４９から選択されるＶＨの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列、及び配列番号４６～４９から選択されるＶＨのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％又は少なくとも９５％の配列同一性のフレームワークを含む。別の態様では、抗ＴＴＲ抗体は、配列番号４６～４９から選択されるＶＨの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列、及び配列番号４６～４９から選択されるＶＨのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９８％の配列同一性のうちの少なくとものフレームワークを含む。

【0165】

一態様では、抗ＴＴＲ抗体は、配列番号５１～５３から選択されるＶＬの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列のうちの１つ以上、及び配列番号５１～５３から選択されるＶＬのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークを含む。一態様では、抗ＴＴＲ抗体は、配列番号５１～５３から選択されるＶＬの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列、及び配列番号５１～５３から選択されるＶＬのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークを含む。一態様では、抗ＴＴＲ抗体は、配列番号５１～５３から選択されるＶＬ配列の３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列、及び配列番号５１～５３から選択されるＶＬのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性のフレームワークを含む。一態様では、抗ＴＴＲ抗体は、配列番号５１～５３から選択されるＶＬの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列、及び配列番号５１～５３から選択されるＶＬのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％又は少なくとも９５％の配列同一性のフレームワークを含む。別の態様では、抗ＴＴＲ抗体は、配列番号５１～５３から選択されるＶＬの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列、及び配列番号５１～５３から選択されるＶＬのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９８％の配列同一性のうちの少なくとも特にフレームワークを含む。

【0166】

一態様では、抗ＴＴＲ抗体は、（ａ）配列番号２～８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号９～１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号１６～２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号２３～２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号３０～３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３７～４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、並びに配列番号４６～４９から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン、並びに配列番号５１～５３から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメインを含む。一態様では、ＶＨドメインは、配列番号４６～４９から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する。一態様では、ＶＨドメインは、配列番号４６～４９から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。一態様では、ＶＬドメインは、配列番号５１～５３から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する。一態様では、ＶＬドメインは、配列番号５１～５３から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。

【0167】

一態様では、抗ＴＴＲ抗体は、（ａ）配列番号２～８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号９～１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号１６～２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号２３～２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号３０～３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３７～４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、並びに配列番号４６～４９から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン、並びに配列番号５１～５３から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメインを含み、抗体は、ＴＴＲ単量体に特異的に結合する。一態様では、ＶＨドメインは、配列番号４６～４９から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する。一態様では、ＶＨドメインは、配列番号４６～４９から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。一態様では、ＶＬドメインは、配列番号５１～５３から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する。一態様では、ＶＬドメインは、配列番号５１～５３から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。

【0168】

別の態様では、抗ＴＴＲ抗体が提供され、抗体は、上記に提供される態様のいずれかにあるようなＶＨ配列、及び上記に提供される態様のいずれかにあるようなＶＬ配列を含む。一態様では、抗体は、それぞれ、配列番号４６及び配列番号５１内のＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて含む。一態様では、抗体は、それぞれ、配列番号４９及び配列番号５３内のＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて含む。

【0169】

別の態様では、抗ＴＴＲ抗体は、配列番号５５～６０から選択されるＶＨのＣＤＲ配列のうちの１つ以上を含む。別の実施形態では、抗ＴＴＲ抗体は、配列番号６２～６４から選択されるＶＬのＣＤＲ配列のうちの１つ以上を含む。別の実施形態では、抗ＴＴＲ抗体は、配列番号５５～６０から選択されるＶＨのＣＤＲ配列、及び配列番号６２～６４から選択されるＶＬのＣＤＲ配列を含む。

【0170】

一態様では、抗ＴＴＲ抗体は、配列番号５５～６０から選択されるＶＨの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列のうちの１つ以上、及び配列番号５５～６０から選択されるＶＨのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークを含む。一態様では、抗ＴＴＲ抗体は、配列番号５５～６０から選択されるＶＨの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列、及び配列番号５５～６０から選択されるＶＨのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークを含む。一態様では、抗ＴＴＲ抗体は、配列番号５５～６０から選択されるＶＨの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列、及び配列番号５５～６０から選択されるＶＨのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％又は少なくとも９５％の配列同一性のフレームワークを含む。別の態様では、抗ＴＴＲ抗体は、配列番号５５～６０から選択されるＶＨの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列、及び配列番号５５～６０から選択されるＶＨのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９８％の配列同一性のうちの少なくとものフレームワークを含む。

【0171】

一態様では、抗ＴＴＲ抗体は、配列番号６２～６４から選択されるＶＬの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列のうちの１つ以上、及び配列番号６２～６４から選択されるＶＬのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークを含む。一態様では、抗ＴＴＲ抗体は、配列番号６２～６４から選択されるＶＬの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列、及び配列番号６２～６４から選択されるＶＬのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークを含む。一態様では、抗ＴＴＲ抗体は、配列番号６２～６４から選択されるＶＬの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列、及び配列番号６２～６４から選択されるＶＬのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％又は少なくとも９５％の配列同一性のフレームワークを含む。別の態様では、抗ＴＴＲ抗体は、配列番号６２～６４から選択されるＶＬの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列、及び配列番号６２～６４から選択されるＶＬのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９８％の配列同一性のうちの少なくとも特にフレームワークを含む。

【0172】

一態様では、抗ＴＴＲ抗体は、（ａ）配列番号２～８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号９～１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号１６～２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号２３～２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号３０～３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３７～４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、並びに配列番号４６～４９から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン、並びに配列番号６２～６４から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメインを含む。一態様では、ＶＨドメインは、配列番号５５～６０から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％又は少なくとも９５％の配列同一性を有する。一態様では、ＶＬドメインは、配列番号６２～６４から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％又は少なくとも９５％の配列同一性を有する。

【0173】

一態様では、抗ＴＴＲ抗体は、（ａ）配列番号２～８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号９～１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号１６～２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号２３～２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号３０～３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３７～４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、並びに配列番号５５～６０から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン、並びに配列番号６２～６４から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメインを含み、抗体は、ＴＴＲ単量体に特異的に結合する。一態様では、ＶＨドメインは、配列番号５５～６０から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％又は少なくとも９５％の配列同一性を有する。一態様では、ＶＬドメインは、配列番号６２～６４から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％又は少なくとも９５％の配列同一性を有する。

【0174】

別の態様では、抗ＴＴＲ抗体が提供され、抗体は、上記に提供される態様のいずれかにあるようなＶＨ配列、及び上記に提供される態様のいずれかにあるようなＶＬ配列を含む。一態様では、抗体は、それぞれ、配列番号６０及び配列番号６４内のＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて含む。一態様では、抗体は、それぞれ、配列番号５５及び配列番号６２内のＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて含む。

【0175】

更なる態様では、本開示は、本明細書に提供される抗ＴＴＲ抗体と同じエピトープに結合する抗体を提供する。例えば、特定の態様では、配列番号４５～４９のうちのいずれかのＶＨ配列及び配列番号５０～５３のうちのいずれかのＶＬ配列を含む抗ＴＴＲ抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。

【0176】

いくつかの実施形態では、抗ＴＴＲ抗体は、ＧＰＴＧＴＧＥＳＫＣＰＬ（配列番号６５）、ＭＶＫＶＬＤＡＶＲＧＳＰＡ（配列番号６６）、ＰＦＨＥＨＡＥＶＶＦＴＡ（配列番号６７）、ＥＨＡＥＶＶＦＴＡ（配列番号６８）、ＹＴＩＡＡＬＬＳ（配列番号６９）、ＬＳＰＹＳＹ（配列番号７０）、ＳＹＳＴＴＡＶＶ（配列番号７１）、ＹＴＩＡＡＬＬＳＰＹＳＹＳＴＴＡＶＶ（配列番号７２）、ＬＧＩＳＰＭＨＥＨＡＥ（配列番号７３）、及びＲＲＹＴＩＡＡＭＬＳＰＹＳ（配列番号７４）から選択されるペプチドに結合しない。いくつかの実施形態では、抗ＴＴＲ抗体は、ＧＰＴＧＴＧＥＳＫＣＰＬ（配列番号６５）に結合しない。いくつかの実施形態では、抗ＴＴＲ抗体は、ＭＶＫＶＬＤＡＶＲＧＳＰＡ（配列番号６６）に結合しない。いくつかの実施形態では、抗ＴＴＲ抗体は、ＰＦＨＥＨＡＥＶＶＦＴＡ（配列番号６７）に結合しない。いくつかの実施形態では、抗ＴＴＲ抗体は、ＥＨＡＥＶＶＦＴＡ（配列番号６８）に結合しない。いくつかの実施形態では、抗ＴＴＲ抗体は、ＹＴＩＡＡＬＬＳ（配列番号６９）に結合しない。いくつかの実施形態では、抗ＴＴＲ抗体は、ＬＳＰＹＳＹ（配列番号７０）に結合しない。いくつかの実施形態では、抗ＴＴＲ抗体は、ＳＹＳＴＴＡＶＶ（配列番号７１）に結合しない。いくつかの実施形態では、抗ＴＴＲ抗体は、ＹＴＩＡＡＬＬＳＰＹＳＹＳＴＴＡＶＶ（配列番号７２）に結合しない。いくつかの実施形態では、抗ＴＴＲ抗体は、ＬＧＩＳＰＭＨＥＨＡＥ（配列番号７３）に結合しない。いくつかの実施形態では、抗ＴＴＲ抗体は、ＲＲＹＴＩＡＡＭＬＳＰＹＳ（配列番号７４）に結合しない。

【0177】

更なる態様では、本開示は、立体構造エピトープに結合する抗体を提供する。

【0178】

更なる態様では、本開示は、本明細書に提供される抗ＴＴＲ抗体とＴＴＲ単量体への結合について競合する抗体を提供する。

【0179】

更なる態様では、本開示は、間接ＥＬＩＳＡにおいて、本明細書に提供される抗ＴＴＲ抗体とＴＴＲ単量体への結合について競合する抗体を提供する。

【0180】

本開示の更なる態様では、上記の態様のいずれかに従う抗ＴＴＲ抗体は、キメラ、ヒト化又はヒト抗体を含む、モノクローナル抗体である。一態様では、抗ＴＴＲ抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、又はＦ（ａｂ’）２断片である。別の態様では、抗体は、完全長抗体、例えば、インタクトなＩｇＧ４抗体、又は本明細書において定義される他の抗体クラス若しくはアイソタイプである。

【0181】

更なる態様では、上記の態様のいずれかに従う抗ＴＴＲ抗体は、以下に記載される特徴のいずれかを、単独又は組み合わせで組み込むことができる。

【0182】

本開示はまた、特定のヒト化抗体可変ドメイン、及び以下の配列と相同性を有する単離されたポリペプチドを包含する。
ｉ）Ａｂ１のヒト化バージョンの軽鎖可変ドメインである、配列番号５３、
ｉｉ）Ａｂ１のヒト化バージョンの重鎖可変ドメインである、配列番号４９、
ｉｉｉ）Ａｂ２のヒト化バージョンの軽鎖可変ドメインである、配列番号６４、及び
ｉｖ）Ａｂ２のヒト化バージョンの重鎖可変ドメインである、配列番号６０。

【0183】

代替方法では、ＫＤは、バイオレイヤー干渉法によって測定される。

【0184】

別の態様では、抗ＴＴＲ抗体が提供され、抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）又は表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイによって決定された場合、約１０ｎＭ（ＫＤ）未満のＴＴＲ単量体に対する親和性を有する。

【0185】

別の態様では、抗ＴＴＲ抗体が提供され、抗体は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）又は表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイによって測定された、ＴＴＲ四量体（ＷＴ又は安定化バージョン）よりもＴＴＲ単量体に対する少なくとも５：１の特異性（ＫＤ比による）を有する。

【0186】

別の態様では、抗ＴＴＲ抗体が提供され、抗体は、マウスＩｇＧ２ａである。

【0187】

別の態様では、抗ＴＴＲ抗体が提供され、抗体は、２０％のヒト血清中のＴＴＲ単量体結合を伴うマウスＩｇＧ２ａ ｍＡｂである。

【0188】

別の態様では、抗ＴＴＲ抗体が提供され、抗体は、ＩｇＧ４である。

【0189】

別の態様では、抗ＴＴＲ単量体抗体が提供され、抗体は、ＴＴＲアミロイド原線維形成又はアミロイド形成を治療するために使用される、抗体が提供される。ＴＴＲアミロイド原線維形成又はアミロイド形成は、ヒトの健康に大きな負担をかける多くの疾患に関連している。例えば、野生型ＴＴＲアミロイド形成は、８０歳超の人口の最大２５％に影響を与える心筋症である老人性全身性アミロイドーシス（ＳＳＡ）に関連している。ＴＴＲ関連アミロイド疾患の別の例は、常染色体優性遺伝性障害家族性アミロイド多発ニューロパチー（ＦＡＰ）である。

【0190】

別の態様では、抗ＴＴＲ単量体抗体が提供され、抗体は、家族性アミロイド心筋症を治療するために使用される。別の遺伝性ＴＴＲ凝集関連疾患である家族性アミロイド心筋症（ＦＡＣ）は、うっ血性心不全及び死亡を引き起こす可能性がある。別の態様では、抗ＴＴＲ単量体抗体が提供され、抗体は、ＴＴＲ点変異に関連する遺伝性アミロイド疾患を治療するために使用される。

【0191】

別の態様では、抗ＴＴＲ単量体抗体は、ｈＡＴＴＲ又はｗｔＡＴＴＲを含む、ＡＴＴＲ－ＰＮ及びＡＴＴＲ－ＣＭを治療するために使用される。

【0192】

別の実施形態では、本開示は、図３に記載の抗体と交差競合する抗体又は抗体断片を指す。

【0193】

一実施形態では、本開示は、抗体又は抗体断片を指し、当該抗体又は抗体断片は、図３の抗体の１つ以上のＫａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＩＭＧＴ、又はＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａを組み合わせた方法のうちのいずれかによって定義される６つのＣＤＲを含む抗体又は抗体断片と交差競合する。

【0194】

別の実施形態では、本開示は、図３の抗体のうちの１つと同じエピトープに結合する（例えば、結合及び／又は安定化することによって）抗体又は抗体断片を指す。

【0195】

更なる実施形態では、当該抗体又はその抗原結合断片は、図３の抗体のうちのいずれか１つのＫａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＩＭＧＴ、又はＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａを組み合わせた方法のうちのいずれか１つによって定義される６つのＣＤＲを含む抗体又は抗体断片のエピトープと重複する（例えば、結合及び／又は安定化することによって）エピトープに結合する。

【0196】

抗体断片
特定の態様では、本明細書に提供される抗体は、抗体断片である。

【0197】

一態様では、抗体断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、又はＦ（ａｂ’）２断片、特にＦａｂ断片である。インタクトな抗体のパパイン消化は、重鎖及び軽鎖可変ドメインの各々（それぞれ、ＶＨ及びＶＬ）、並びにまた、軽鎖の定常ドメイン（ＣＬ）及び重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）を含有する「Ｆａｂ」断片と呼ばれる２つの同一の抗原結合断片を産生する。したがって、「Ｆａｂ断片」という用語は、ＶＬドメイン及びＣＬドメインを含む軽鎖と、ＶＨドメイン及びＣＨ１ドメインを含む重鎖断片と、を含む、抗体断片を指す。「Ｆａｂ’断片」は、抗体ヒンジ領域からの１つ以上のシステインを含むＣＨ１ドメインのカルボキシ末端における残基の付加により、Ｆａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ’－ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基が遊離チオール基を有するＦａｂ’断片である。ペプシン処理は、２つの抗原結合部位（２つのＦａｂ断片）及びＦｃ領域の一部を有するＦ（ａｂ’）２断片をもたらす。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、かつ増加したインビボ半減期を有するＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片の考察については、米国特許第５，８６９，０４６号を参照されたい。

【0198】

別の態様では、抗体断片は、ダイアボディ、トリアボディ、又はテトラボディである。「ダイアボディ」は、２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、ＥＰ４０４，０９７、ＷＯ１９９３／０１１６１、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４（２００３）、及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４－６４４８（１９９３）を参照されたい。トリアボディ及びテトラボディはまた、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４（２００３）に記載されている。

【0199】

更なる態様では、抗体断片は、一本鎖Ｆａｂ断片である。

【0200】

「一本鎖Ｆａｂ断片」又は「ｓｃＦａｂ」は、抗体重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、抗体重鎖定常ドメイン１（ＣＨＩ）、抗体軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、抗体軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）及びリンカーからなるポリペプチドであり、当該抗体ドメイン及び当該リンカーは、Ｎ末端からＣ末端方向に以下の順で、ａ）ＶＨ－ＣＨｌ－リンカー－ＶＬ－ＣＬ、ｂ）ＶＬ－ＣＬ－リンカー－ＶＨ－ＣＨｌ、ｃ）ＶＨ－ＣＬ－リンカー－ＶＬ－ＣＨ１、又はｄ）ＶＬ－ＣＨｌ－リンカー－ＶＨ－ＣＬのうちの１つを有する。特に、当該リンカーは、少なくとも３０個のアミノ酸、好ましくは３２～５０個のアミノ酸のポリペプチドである。当該一本鎖Ｆａｂ断片は、ＣＬドメインとＣＨＩドメインとの間の天然のジスルフィド結合を介して安定化される。加えて、これらの一本鎖Ｆａｂ断片は、システイン残基の挿入（例えば、Ｋａｂａｔ番号付けに従う可変重鎖の４４位及び可変軽鎖の１００位）を介した鎖間ジスルフィド結合の生成によって更に安定化され得る。

【0201】

別の態様では、抗体断片は、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。「一本鎖可変断片」又は「ｓｃＦｖ」は、リンカーによって接続された、抗体の重鎖（ＶＨ）及び軽鎖（ＶＬ）の可変ドメインの融合タンパク質である。特に、リンカーは、１０～２５個のアミノ酸の短いポリペプチドであり、通常、柔軟性のためにグリシンが豊富であり、また、溶解性のためにセリン又はスレオニンが豊富であり、ＶＨのＮ末端とＶＬのＣ末端とを連結させることができ、その逆も可能である。このタンパク質は、定常領域の除去及びリンカーの導入にもかかわらず、元の抗体の特異性を保持している。ＳｃＦｖ断片の概説については、例えば、Ｐｌｉｉｃｋｔｈｕｎ，Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．，（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ），ｐｐ．２６９－３１５（１９９４）を参照されたく、また、ＷＯ９３／１６１８５、並びに米国特許第５，５７１，８９４号及び同第５，５８７，４５８号も参照されたい。

【0202】

別の態様では、抗体断片は、単一ドメイン抗体である。「単一ドメイン抗体」は、抗体の重鎖可変ドメインの全て若しくは一部分、又は軽鎖可変ドメインの全て若しくは一部分を含む抗体断片である。特定の態様では、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ、例えば、米国特許第６，２４８，５１６Ｂ１を参照されたい）。

【0203】

抗体断片は、本明細書に記載されるように、インタクトな抗体のタンパク質消化及び組換え宿主細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）による組換え産生を含むが、これらに限定されない、様々な技術によって作製することができる。

【0204】

キメラ及びヒト化抗体
特定の態様では、本明細書に提供される抗体は、キメラ抗体である。特定のキメラ抗体が、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号、及びＭｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１－６８５５ （１９８４））に記載されている。一例では、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、又は非ヒト霊長類、例えば、サルに由来する可変領域）、及びヒト定常領域を含む。更なる例では、キメラ抗体は、クラス又はサブクラスが親抗体のクラス又はサブクラスから変化した「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体は、その抗原結合断片を含む。

【0205】

特定の態様では、キメラ抗体は、ヒト化抗体である。

【0206】

典型的には、非ヒト抗体は、ヒトに対する免疫原性を低減させながら、親非ヒト抗体の特異性及び親和性を保持するようにヒト化される。一般に、ヒト化抗体は、１つ以上の可変ドメインを含み、ＣＤＲ（又はその部分）は非ヒト抗体に由来し、ＦＲ（又はその部分）はヒト抗体配列に由来する。任意選択で、ヒト化抗体はまた、ヒト定常領域の少なくとも一部分も含むであろう。いくつかの態様では、ヒト化抗体内のいくつかのＦＲ残基は、例えば、抗体特異性又は親和性を復元又は改善するように、非ヒト抗体（例えば、ＣＤＲ残基が由来する抗体）由来の対応する残基で置換される。

【0207】

ヒト化抗体及びそれらを作製する方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９－１６３３（２００８）に概説されており、例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２９（１９８８）、Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：１００２９－１００３３（１９８９）、米国特許第５，８２１，３３７号、同第７，５２７，７９１号、同第６，９８２，３２１号、及び同第７，０８７，４０９号、Ｋａｓｈｍｉｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：２５－３４（２００５）（特異性決定領域（ＳＤＲ）グラフトを記載している）、Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９－４９８（１９９１）（「再表面化」を記載している）、ＤａｌＦＡｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：４３－６０（２００５）（「ＦＲシャフリング」を記載している）、並びにＯｓｂｏｕｒｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：６１－６８（２００５）及びＫｌｉｍｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ， ８３：２５２－２６０（２０００）（ＦＲシャフリングに対する「誘導選択」アプローチを記載している）に更に記載されている。

【0208】

ヒト化に使用され得るヒトフレームワーク領域としては、「ベストフィット」法を使用して選択されたフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）を参照されたい）、軽鎖又は重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）、及びＰｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３（１９９３）を参照されたい）、ヒト成熟（体細胞変異）フレームワーク領域又はヒト生殖細胞系フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９－１６３３（２００８）を参照されたい）、並びにＦＲライブラリーのスクリーニングに由来するフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８－１０６８４（１９９７）及びＲｏｓｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１－２２６１８（１９９６）を参照されたい）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0209】

ヒト抗体
特定の態様では、本明細書に提供される抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当該技術分野において既知である様々な技術を使用して産生することができる。ヒト抗体は一般に、ｖａｎ Ｄｉｊｋ ａｎｄ ｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８－７４（２００１）及びＬｏｎｂｅｒｇ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０－４５９（２００８）に記載されている。

【0210】

ヒト抗体は、抗原投与に応答して、インタクトなヒト抗体又はヒト可変領域を有するインタクトな抗体を産生するように修飾されているトランスジェニック動物に免疫原を投与することによって調製することができる。そのような動物は、典型的には、内因性免疫グロブリン遺伝子座を置換するか、又は染色体外に存在するか、又は動物の染色体にランダムに統合されるヒト免疫グロブリン遺伝子座の全て又は一部分を含有する。そのようなトランスジェニックマウスにおいて、内因性免疫グロブリン遺伝子座は一般に、不活性化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の概説については、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３：１１１７－１１２５（２００５）を参照されたい。また、例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術を記載している米国特許第６，０７５，１８１号及び同第６，１５０，５８４号、ＨＵＭＡＢ（登録商標）技術を記載しているＥｉ．Ｓ．特許第５，７７０，４２９号、Ｋ－Ｍ ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載しているＥＩ．Ｓ．特許第７，０４１，８７０号、及びＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載している米国特許出願公開第ＵＳ２００７／００６１９００号も参照されたい）。そのような動物によって生成されたインタクトな抗体由来のヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることによって更に修飾され得る。

【0211】

ヒト抗体はまた、ハイブリドーマに基づく方法によって作製することもできる。

【0212】

ヒトモノクローナル抗体を産生するためのヒト骨髄腫及びマウス－ヒトヘテロ骨髄腫細胞株が、記載されている。（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）、Ｂｒｏｄｅｕｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１－６３（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７）、及びＢｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：８６（１９９１）を参照されたい。）ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術により生成されたヒト抗体はまた、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：３５５７－３５６２（２００６）に記載されている。追加の方法としては、例えば、米国特許第７，１８９，８２６号（ハイブリドーマ細胞株からのモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生を記載している）、及びＮｉ，Ｘｉａｎｄａｉ Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ，２６（４）：２６５－２６８（２００６）（ヒト－ヒトハイブリドーマを記載している）に記載されているものが挙げられる。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）はまた、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ ａｎｄ Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２０（３）：９２７－９３７（２００５）及びＶｏｌｌｍｅｒｓ ａｎｄ Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２７（３）：１８５－９１（２００５）に記載されている。

【0213】

ヒト抗体はまた、ヒト由来のファージディスプレイライブラリーから選択される可変ドメイン配列を単離することによって生成することもできる。次いで、そのような可変ドメイン配列は、所望されるヒト定常ドメインと組み合わされ得る。抗体ライブラリーからヒト抗体を選択するための技術は、以下に記載される。

【0214】

Ｂ細胞選別
ヒト抗体は、Ｂｅｒｋｅｌｅｙ Ｌｉｇｈｔｓ又はＡｂＣｅｌｌｅｒａによって提供された独自のＢｅａｃｏｎプラットフォームのような技術を使用して、マウスなどの動物からの脾臓細胞の単一細胞解離によって生成され得る。

【0215】

ライブラリー由来抗体
特定の態様では、本明細書に提供される抗体は、ライブラリーに由来する。様々な態様では、本開示の抗体は、所望される活性を有する抗体についてコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることによって単離される。コンビナトリアルライブラリーをスクリーニングするための方法は、例えば、Ｌｅｍｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ １６：４９８－５０８（２０１６）に概説されている。例えば、ファージディスプレイライブラリーを生成し、所望される結合特性を有する抗体についてそのようなライブラリーをスクリーニングするための様々な方法が、当該技術分野において既知である。そのような方法は、例えば、Ｆｒｅｎｚｅｌ ｅｔ ａｌ．ｍＡｂｓ ８：１１７７－１１９４（２０１６）、Ｂａｚａｎ ｅｔ ａｌ．Ｈｕｍａｎ Ｖａｃｃｉｎｅｓ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ８：１８１７－１８２８（２０１２）及びＺｈａｏ ｅｔ ａｌ．Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ３６：２７６－２８９（２０１６）、並びにＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１－３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００１）、及びＭａｒｋｓ ａｎｄ Ｂｒａｄｂｕｒｙ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２４８：１６１－１７５（Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３）に概説されている。

【0216】

特定のファージディスプレイ法において、ＶＨ及びＶＬ遺伝子のレパートリーは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって別個にクローニングされ、ファージライブラリー内でランダムに組換えられ、これは次いで、Ｗｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １２：４３３－４５５（１９９４）に記載されているように、抗原結合ファージについてスクリーニングされ得る。ファージは、典型的には、抗体断片を一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片又はＦａｂ断片のいずれかとして提示する。免疫化源由来のライブラリーは、ハイブリドーマの構築を必要とすることなく、免疫原に高親和性抗体を提供する。あるいは、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ ｅｔ ａｌ．ＥＭＢＯ Ｊｏｕｒｎａｌ １２：７２５－７３４（１９９３）に記載されるように、ナイーブレパートリーは、（例えば、ヒトから）クローニングされて、いかなる免疫化もなく、広範囲の非自己抗原及びまた自己抗原に対する抗体の単一源を提供することができる。更に、ナイーブライブラリーはまた、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２２７：３８１－３８８（１９９２）に記載されているように、幹細胞から再配列されていないＶ遺伝子セグメントをクローニングし、ランダム配列を含有するＰＣＲプライマーを使用して高度に可変のＣＤＲ３領域をコードし、インビトロで再配列を達成することによって、合成的に作製することができる。ヒト抗体ファージライブラリーを記載している特許公報としては、例えば、米国特許第５，７５０，３７３号、同第７，９８５，８４０号、同第７，７８５，９０３号、及び同第８，６７９，４９０号、並びに米国特許公開第２００５／００７９５７４号、同第２００７／０１１７１２６号、同第２００７／０２３７７６４号、及び同第２００７／０２９２９３６号が挙げられる。

【0217】

所望される活性（複数可）を有する抗体についてコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングするための当該技術分野において既知の方法の更なる例としては、リボソーム及びｍＲＮＡディスプレイ、並びに細菌、哺乳動物細胞、昆虫細胞又は酵母細胞に対する抗体ディスプレイ及び選択のための方法が挙げられる。酵母表面ディスプレイのための方法は、例えば、Ｓｃｈｏｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ５０３：１３５－５６（２０１２）、及びＣｈｅｒｆ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂｉｏｌｏｇｙ １３１９：１５５－１７５（２０１５）、並びにＺｈａｏ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ８８９：７３－８４（２０１２）に概説されている。リボソームディスプレイのための方法は、例えば、Ｈｅ ｅｔ ａｌ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２５：５１３２－５１３４（１９９７）、及びＨａｎｅｓ ｅｔ ａｌ．ＰＮＡＳ ９４：４９３７－４９４２（１９９７）に記載されている。

【0218】

ヒト抗体ライブラリーから単離された抗体又は抗体断片は、本明細書においてヒト抗体又はヒト抗体断片とみなされる。

【0219】

抗体バリアント
特定の態様では、本明細書に提供される抗体のアミノ酸配列バリアントが企図される。例えば、いくつかの態様では、抗体の結合親和性及び／又は他の生物学的特性を変更することが望ましい。抗体のアミノ酸配列バリアントは、抗体をコードするヌクレオチド配列中に適切な修飾を導入することによって、又はペプチド合成によって調製することができる。そのような修飾としては、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基からの欠失、及び／又はそこへの挿入、及び／又はその置換が挙げられる。欠失、挿入、及び置換の任意の組み合わせを行って、最終構築物に到達することができるが、但し、最終構築物が所望される特性、例えば、抗原結合を有することを条件とする。ａ）置換。挿入、及び欠失バリアント

【0220】

特定の態様では、１つ以上のアミノ酸置換を有する抗体バリアントが提供される。置換型変異誘発のための目的の部位としては、ＣＤＲ及びＦＲが挙げられる。保存的置換は、表７において、「好ましい置換」の見出しの下に示される。より実質的な変化は、表７において、「例示的な置換」の見出しの下に提供され、アミノ酸側鎖クラスに関連して以下に更に記載される通りである。アミノ酸置換が目的の抗体に導入され、産生物が、所望される活性、例えば、抗原結合の保持／改善、免疫原性の減少についてスクリーニングされ得る。

【表7】

【0221】

アミノ酸は、様々な態様では、一般的な側鎖特性に従って分類される。
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、ｌｉｅ、
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｉｎ、
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ、
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、
（５）鎖配向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、及び
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。

【0222】

非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーと別のクラスのメンバーとの交換を伴う。

【0223】

ある種類の置換型バリアントは、親抗体（例えば、ヒト化抗体又はヒト抗体）の１つ以上の超可変領域残基を置換することを伴う。一般に、更なる研究のために選択される結果として生じるバリアントは、親抗体と比較して特定の生物学的特性（例えば、親和性の増加、免疫原性の低減）の修飾（例えば、改善）を有し、かつ／又は実質的に保持された親抗体の特定の生物学的特性を有する。例示的な置換型バリアントは、例えば、本明細書に記載されるものなどのファージディスプレイに基づく親和性成熟技術を使用して好都合に生成され得る、親和性成熟抗体である。簡潔には、１つ以上である。ＣＤＲ残基が変異され、バリアント抗体がファージ上に提示され、特定の生物学的活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。改変（例えば、置換）がＣＤＲ内で行われて、例えば、抗体親和性を改善することができる。そのような改変は、ＣＤＲ「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟プロセス中に高頻度で変異を受けるコドンによってコードされる残基（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０７：１７９－１９６（２００８）を参照されたい）、及び／又は抗原と接触する残基に対して行われ得、得られたバリアントＶＨ又はＶＬは、結合親和性について試験される。二次ライブラリーを構築し、それから再選択することによる親和性成熟が、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１－３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，（２００１））に記載されている。親和性成熟のいくつかの態様では、多様な方法（例えば、エラープローンＰＣＲ、鎖シャフリング、又はオリゴヌクレオチド指向性変異誘発）のいずれかによって、成熟のために選択される可変遺伝子に多様性が導入される。次いで、二次ライブラリーが作製される。次いで、このライブラリーをスクリーニングして、所望の親和性を有する任意の抗体バリアントを特定する。多様性を導入するための別の方法は、いくつかのＣＤＲ残基（例えば、一度に４～６残基）をランダム化する、ＣＤＲ指向性アプローチを含む。抗原結合に関与するＣＤＲ残基は、例えば、アラニンスキャニング変異誘発又はモデリングを使用して、特異的に特定され得る。特にＣＤＲ－Ｈ３及びＣＤＲ－Ｌ３が標的とされることが多い。

【0224】

特定の態様では、置換、挿入、又は欠失は、そのような改変が抗体の抗原に結合する能力を実質的に低減させない限り、１つ以上のＣＤＲ内で生じ得る。例えば、結合親和性を実質的に低減させない保存的改変（例えば、本明細書で提供されるような保存的置換）は、ＣＤＲで行われ得る。そのような改変は、例えば、ＣＤＲ内の抗原接触残基の外側であってもよい。上記に提供される特定のバリアントＶＨ及びＶＬ配列において、各ＣＤＲは、改変されていないか、又は１つ、２つ若しくは３つ以下のアミノ酸置換を含むかのいずれかである。

【0225】

変異誘発のために標的とすることができる抗体の残基又は領域を特定するための有用な方法は、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ａｎｄ Ｗｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１－１０８５に記載されているように「アラニンスキャニング変異誘発」と呼ばれる。この方法では、残基又は標的残基（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、及びｇｌｕなどの荷電残基）のグループを特定し、中性又は負に荷電したアミノ酸（例えば、アラニン又はポリアラニン）で置換して、抗体と抗原との相互作用が影響を受けるかどうかを決定する。更なる置換が、初期置換に対する機能的感受性を示すアミノ酸位置に導入されてもよい。代替的に、又は追加的に、抗原－抗体複合体の結晶構造を使用して、抗体と抗原との間の接触点を特定することができる。そのような接触残基及び隣接残基は、置換の候補として標的とされ得るか、又は除去され得る。バリアントは、所望の特性を有するか否かを判定するためにスクリーニングされ得る。アミノ酸配列挿入物には、１個の残基から１００個以上の残基を含むポリペプチドまでの長さの範囲のアミノ末端及び／又はカルボキシル末端融合体、並びに単一又は多数のアミノ酸残基の配列内挿入物が含まれる。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入バリアントとしては、酵素（例えば、ＡＤＥＰＴ（抗体指向性酵素プロドラッグ療法）のための）又は抗体の血清半減期を増大させるポリペプチドに対する抗体のＮ末端又はＣ末端への融合が挙げられる。

【0226】

特定の態様では、本明細書に提供される抗体を改変して、抗体のグリコシル化の程度を増加又は減少させる。抗体へのグリコシル化部位の付加又は欠失は、１つ以上のグリコシル化部位が作製されるか、又は除去されるようにアミノ酸配列を改変させることにより好都合に達成され得る。

【0227】

抗体がＦｃ領域を含む場合、Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖を改変することができる。哺乳動物細胞によって産生される天然抗体は、典型的には、Ｎ結合によってＦｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７に一般に結合される分岐状の二分岐オリゴ糖を含む。例えば、Ｗｒｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ．ＴＩＢＴＥＣＨ １５：２６－３２ （１９９７）を参照されたい。オリゴ糖は、様々な炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、及びシアル酸、並びに二分岐オリゴ糖構造の「ステム」のＧｌｃＮＡｃに結合したフコースを含み得る。いくつかの態様では、特定の改善された特性を有する抗体バリアントを作製するために、本開示の抗体中のオリゴ糖に修飾を加える。

【0228】

一態様では、非フコシル化オリゴ糖、すなわち、Ｆｃ領域に付着した（直接又は間接的に）フコースを欠くオリゴ糖構造を有する抗体バリアントが提供される。このような非フコシル化オリゴ糖（「アフコシル化」オリゴ糖とも呼ばれる）は特に、二分岐オリゴ糖構造のステムの第１のＧｌｃＮＡｃに結合したフコース残基を欠く、Ｎ結合オリゴ糖である。一態様では、天然抗体又は親抗体と比較して、Ｆｃ領域における非フコシル化オリゴ糖の割合が増加した抗体バリアントが提供される。例えば、非フコシル化オリゴ糖の割合は、少なくとも約２０％、少なくとも約４０％、少なくとも約６０％、少なくとも約８０％、又は更に約１００％（すなわち、フコシル化オリゴ糖が存在しない）であってもよい。非フコシル化オリゴ糖の割合は、例えば、ＷＯ２００６／０８２５１５に記載されているように、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ質量分析法により測定された、Ａｓｎ２９７に結合した全てのオリゴ糖の合計（例えば、複合体、ハイブリッド、及びハイマンノース構造）に対する、フコース残基を欠くオリゴ糖の（平均）量である。Ａｓｎ２９７とは、Ｆｃ領域の約２９７位に位置するアスパラギン残基を指す（Ｆｃ領域残基のＥＵ番号付け）が、Ａｓｎ２９７は、抗体のマイナーな配列変化のために、２９７位の上流又は下流、すなわち、２９４位と３００位との間の約±３個のアミノ酸にも位置し得る。Ｆｃ領域における非フコシル化オリゴ糖の割合が増加した、このような抗体は、改善されたＦｃγＲＩＩＩａ受容体結合、及び／又は改善されたエフェクター機能を有することができる。例えば、ＵＳ２００３／０１５７１０８、ＵＳ２００４／００９３６２１を参照されたい。

【0229】

フコシル化が低減した抗体を産生することができる細胞株の例としては、タンパク質フコシル化が欠損したＬｅｃｌ３ ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ ｅｔ ａｌ．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３－５４５（１９８６）、ＵＳ２００３／０１５７１０８、及びＷＯ２００４／０５６３１２、特に実施例１１）、及びノックアウト細胞株、例えば、アルファ－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４－６２２（２００４）、Ｋａｎｄａ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，９４（４）：６８０－６８８（２００６）、及びＷＯ２００３／０８５１０７を参照されたい）、又はＧＤＰ－フコース合成若しくは輸送体タンパク質の活性が低減若しくは消失した細胞（例えば、ＵＳ２００４２５９１５０、ＵＳ２００５０３１６１３、ＵＳ２００４１３２１４０、ＵＳ２００４１１０２８２を参照されたい）が挙げられる。

【0230】

更なる態様では、抗体バリアントには、例えば、抗体のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃにより二分されているバイセクト型（ｂｉｓｅｃｔｅｄ）オリゴ糖が提供される。そのような抗体バリアントは、上記の通り、低減したフコシル化及び／又は改善されたＡＤＣＣ機能を有することができる。そのような抗体バリアントの例は、例えば、Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １７，１７６－１８０（１９９９）、Ｆｅｒｒａｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎ Ｂｉｏｅｎｇ ９３，８５１－８６１（２００６）、ＷＯ９９／５４３４２、ＷＯ２００４／０６５５４０、ＷＯ２００３／０１１８７８に記載されている。

【0231】

Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖中に少なくとも１つのガラクトース残基を有する抗体バリアントも提供される。そのような抗体バリアントは、改善されたＣＤＣ機能を有することができる。そのような抗体バリアントは、例えば、ＷＯ１９９７／３００８７、ＷＯ１９９８／５８９６４、及びＷＯ１９９９／２２７６４に記載されている。

【0232】

特定の態様では、１つ以上のアミノ酸修飾は、本明細書に提供される抗体のＦｃ領域に導入され、それにより、Ｆｃ領域バリアントを生成する。Ｆｃ領域バリアントは、１つ以上のアミノ酸位置にアミノ酸修飾（例えば、置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧｉ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４ Ｆｃ領域）を含み得る。

【0233】

特定の態様では、本開示は、全てではないがいくつかのエフェクター機能を有し、これにより、インビボでの抗体の半減期が重要でありながら、特定のエフェクター機能（補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）及び抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）など）が不必要又は有害である用途に対して望ましい候補となる抗体バリアントを企図する。インビトロ及び／又はインビボ細胞傷害性アッセイを行って、ＣＤＣ及び／又はＡＤＣＣ活性の低減／欠乏を確認することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを行って、抗体がＦｃγＲ結合を欠く（そのため、ＡＤＣＣ活性を欠く可能性が高い）が、ＦｃＲｎ結合能力を保持することを確認することができる。ＡＤＣＣを媒介するための主要な細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するのに対して、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＦを発現し、造血細胞上のＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７－４９２（１９９１）の４６４頁の表３に要約されている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５，５００，３６２号（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ．ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８３：７０５９－７０６３（１９８６）を参照されたい）、及びＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：１４９９－１５０２（１９８５）；５，８２１，３３７（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：１３５１－１３６１（１９８７）を参照されたい）に記載されている。あるいは、非放射性アッセイ法が用いられ得る（例えば、フローサイトメトリーのためのＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ、及びＣｙｔｏＴｏｘ ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を参照されたい。このようなアッセイに有用なエフェクター細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む。代替的又は追加的に、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、インビボで、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９５：６５２－６５６（１９９８）に開示されているような動物モデルにおいて評価され得る。また、Ｃｌｑ結合アッセイを実行して、抗体がＣｌｑに結合することができず、したがってＣＤＣ活性を欠くことを確認することができる。例えば、ＷＯ２００６／０２９８７９及びＷＯ２００５／１００４０２における、Ｃｌｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照されたい。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを行うことができる（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ－Ｓａｎｔｏｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２：１６３（１９９６）、Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０１：１０４５－１０５２（２００３）、及びＣｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ａｎｄ Ｍ．Ｊ．Ｇｌｅｎｎｉｅ，Ｂｌｏｏｄ １０３：２７３８－２７４３（２００４）を参照されたい）。ＦｃＲｎ結合及びインビボクリアランス／半減期の決定は、様々な態様では、当該技術分野で既知の方法を使用して行うことができる（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ，Ｓ．Ｂ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ’ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（１２）：１７５９－１７６９（２００６）、ＷＯ２０１３／１２０９２９ Ａ１を参照されたい）。

【0234】

エフェクター機能が低減した抗体としては、Ｆｃ領域の残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７及び３２９のうちの１つ以上の置換を含むものが挙げられる（米国特許第６，７３７，０５６号）。このようなＦｃ変異体としては、残基２６５及び２９７のアラニンへの置換を有するいわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ変異体（米国特許第７，３３２，５８１号）を含む、アミノ酸２６５位、２６９位、２７０位、２９７位及び３２７位のうちの２つ以上に置換を有するＦｃ変異体が挙げられる。

【0235】

ＦｃＲに対する結合が改善又は減少した特定の抗体バリアントが記載されている。（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号、ＷＯ２００４／０５６３１２、及びＳｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１－６６０４（２００１）を参照されたい。）特定の態様では、抗体バリアントは、ＡＤＣＣを改善する１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の２９８位、３３３位、及び／又は３３４位（残基のＥＵ番号付け）での置換を有するＦｃ領域を含む。

【0236】

特定の態様では、抗体バリアントは、ＦｃγＲ結合を減少させる１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の２３４位及び２３５位（残基のＥＵ番号付け）での置換を有するＦｃ領域を含む。一態様では、置換は、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ（ＬＡＬＡ）である。特定の態様では、抗体バリアントは、ヒトＩｇＧｉ Ｆｃ領域に由来するＦｃ領域に、Ｄ２６５Ａ及び／又はＰ３２９Ｇを更に含む。一態様では、置換は、ヒトＩｇＧｉ Ｆｃ領域に由来するＦｃ領域における、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ（ＬＡＬＡ－ＰＧ）である。（例えば、ＷＯ２０１２／１３０８３１を参照されたい）。別の態様では、置換は、ヒトＩｇＧｉ Ｆｃ領域に由来するＦｃ領域における、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＤ２６５Ａ（ＬＡＬＡ－ＤＡ）である。

【0237】

いくつかの態様では、例えば、米国特許第６，１９４，５５１号、ＷＯ９９／５１６４２、及びＩｄｕｓｏｇｉｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８－４１８４（２０００）に記載されているように、Ｃｌｑ結合及び／又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）の変化（すなわち、改善又は減少のいずれか）をもたらす改変がＦｃ領域において行われる。

【0238】

半減期が増加し、胎児への母体ＩｇＧの移行を担う新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合が改善された抗体（Ｇｕｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）及びＫｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））は、ＵＳ２００５／００１４９３４（Ｈｉｎｔｏｎ ｅｔ ａｌ．）に記載されている。それらの抗体は、Ｆｃ領域とＦｃＲｎとの結合を改善する１つ以上の置換をその中に有するＦｃ領域を含む。そのようなＦｃバリアントには、Ｆｃ領域残基：２３８、２５２、２５４、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４、４２８又は４３４のうちの１つ以上に置換、例えば、Ｆｃ領域残基４３４の置換を有するものが含まれる（例えば、米国特許第７，３７１，８２６号、ＤａｌｆＡｃｑｕａ，Ｗ．Ｆ．，ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８１（２００６）２３５１４－２３５２４を参照されたい）。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、Ｍ４２８Ｌ及びＮ４３４Ｓ（「ＬＳ」）などの置換Ｍ４２８Ｌ及び／又はＮ４３４Ｓを含む。

【0239】

マウスＦｃ－マウスＦｃＲｎ相互作用にとって重要なＦｃ領域残基は、部位特異的変異誘発によって特定されている（例えば、ＤａｌＦＡｃｑｕａ，Ｗ．Ｆ．，ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ １６９（２００２）５１７１－５１８０を参照されたい）。残基１２５３、Ｈ３１０、Ｈ４３３、Ｎ４３４、及びＨ４３５（ＥＵインデックス番号付け）が相互作用に関与する（Ｍｅｄｅｓａｎ，Ｃ．，ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２６（１９９６）２５３３、Ｆｉｒａｎ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３（２００１）９９３、Ｋｉｍ，Ｊ．Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４（１９９４）５４２）。残基１２５３、Ｈ３１０、及びＨ４３５が、ヒトＦｃとマウスＦｃＲｎとの相互作用に重要であることが見出された（Ｋｉｍ，Ｊ．Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９（１９９９）２８１９）。ヒトＦｃ－ヒトＦｃＲｎ複合体の研究では、残基１２５３、Ｓ２５４、Ｈ４３５、及びＹ４３６が相互作用に重要であることが示されている（Ｆｉｒａｎ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３（２００１）９９３、Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６（２００１）６５９１－６６０４）。Ｙｅｕｎｇ，Ｙ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８２（２００９）７６６７－７６７１）では、残基２４８～２５９、及び３０１～３１７、及び３７６～３８２、及び４２４～４３７の様々な変異型が報告され、調査されている。

【0240】

特定の態様では、抗体バリアントは、ＦｃＲｎ結合を低減させる１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の２５３位及び／若しくは３１０位、並びに／又は４３５位（残基のＥＵ番号付け）に置換を有するＦｃ領域を含む。特定の態様では、抗体バリアントは、２５３位、３１０位及び４３５位にアミノ酸置換を有するＦｃ領域を含む。一態様では、置換は、ヒトＩｇＧｌ Ｆｃ領域に由来するＦｃ領域内の１２５３Ａ、Ｈ３１０Ａ及びＨ４３５Ａである。例えば、Ｇｒｅｖｙｓ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９４（２０１５）５４９７－５５０８を参照されたい。

【0241】

特定の態様では、抗体バリアントは、ＦｃＲｎ結合を低減させる１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の３１０位及び／若しくは４３３位、並びに／又は４３６位（残基のＥＵ番号付け）に置換を有するＦｃ領域を含む。特定の態様では、抗体バリアントは、３１０位、４３３位及び４３６位にアミノ酸置換を有するＦｃ領域を含む。一態様では、置換は、ヒトＩｇＧｌ Ｆｃ領域に由来するＦｃ領域における、Ｈ３１０Ａ、Ｈ４３３Ａ及びＹ４３６Ａである。（例えば、ＷＯ２０１４／１７７４６０Ａ１を参照されたい）。

【0242】

特定の態様では、抗体バリアントは、ＦｃＲｎ結合を増加させる１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の２５２位及び／若しくは２５４位、並びに／又は２５６位（残基のＥＵ番号付け）に置換を有するＦｃ領域を含む。特定の態様では、抗体バリアントは、２５２位、２５４位及び２５６位にアミノ酸置換を有するＦｃ領域を含む。一態様では、置換は、ヒトＩｇＧｉ Ｆｃ領域に由来するＦｃ領域内のＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ及びＴ２５６Ｅである。Ｆｃ領域バリアントの他の例に関しては、Ｄｕｎｃａｎ ＆ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ ３２２：７３８－４０（１９８８）、米国特許第５，６４８，２６０号、米国特許第５，６２４，８２１号、及びＷＯ９４／２９３５１も参照されたい。

【0243】

本明細書で報告されるような抗体の重鎖のＣ末端は、アミノ酸残基ＰＧＫで終わる完全なＣ末端であり得る。重鎖のＣ末端は、Ｃ末端アミノ酸残基のうちの１つ又は２つが除去された、短縮されたＣ末端であり得る。１つの好ましい態様では、重鎖のＣ末端は、短縮されたＣ末端で終わるＰＧである。本明細書に報告されるような全ての態様のうちの一態様では、本明細書に明記されるようなＣ末端のＣＨ３ドメインを含む重鎖を含む抗体は、Ｃ末端グリシン－リシンジペプチドを含む（Ｇ４４６及びＫ４４７、アミノ酸位置のＥＵインデックス番号付け）。本明細書に報告されるような全ての態様のうちの一態様では、本明細書に明記されるようなＣ末端のＣＨ３ドメインを含む重鎖を含む抗体は、Ｃ末端グリシン残基（Ｇ４４６、アミノ酸位置のＥＵインデックス番号付け）を含む。ｄ）システイン操作抗体バリアント

【0244】

特定の態様では、抗体の１つ以上の残基がシステイン残基によって置換されている、システイン操作抗体、例えば、ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体を作製することが望ましい。特定の態様では、置換された残基は、抗体の接近可能部位で生じる。これらの残基をシステインで置換することによって、反応性チオール基が抗体の接近可能部位に配置され、本明細書で更に説明されるように、薬物部分又はリンカー－薬物部分などの他の部分に抗体をコンジュゲートさせて免疫コンジュゲートを作製するために使用することができる。様々な態様では、システイン操作抗体は、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号、同第８，３０９，３００号、同第７，８５５，２７５号、若しくは同第９，０００，１３０号、又はＷＯ２０１６０４０８５６に記載されているように生成される。

【0245】

抗体誘導体
特定の態様では、本明細書に提供される抗体は、当該技術分野で既知であり、容易に入手可能な追加の非タンパク質性部分を含有するように更に修飾することができる。

【0246】

抗体の誘導体化に好適な部分としては、水溶性ポリマーが挙げられるが、これに限定されない。水溶性ポリマーの非限定的な例としては、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ－１，３－ジオキソラン、ポリ－１，３，６－トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマー又はランダムコポリマーのいずれか）、及びデキストラン又はポリ（ｎ－ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロピレングリコールホモポリマー、プロリプロピレン（ｐｒｏｌｙ ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ）オキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、並びにそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性のため、製造時に有利であり得る。ポリマーは、様々な態様では、任意の分子量のものであり、様々な態様では、分岐状又は非分岐状である。抗体に結合したポリマーの数は異なり得、２つ以上のポリマーが結合している場合、それらは、同じ分子又は異なる分子であり得る。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数及び／又は種類は、改善される抗体の特定の特性又は機能、抗体誘導体が定義される条件下で療法において使用されるかどうかなどを含むが、これらに限定されない考慮事項に基づいて決定することができる。

【0247】

組換え方法及び組成物
抗体は、例えば、ＵＳ４，８１６，５６７に記載される組換え方法及び組成物を使用して産生され得る。これらの方法では、抗体をコードする１つ以上の単離された核酸が提供される。

【0248】

天然抗体又は天然抗体断片の場合、２つの核酸が必要であり、１つは軽鎖又はその断片のためのものであり、１つは重鎖又はその断片のためのものである。そのような核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び／又は抗体のＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖及び／又は重鎖）をコードする。これらの核酸は、同じ発現ベクター上又は異なる発現ベクター上にあることができる。

【0249】

そのような核酸は、抗体の第１のヘテロ単量体Ｆｃ領域を含む、第１のＶＬを含むアミノ酸配列及び／若しくは第１のＶＨを含むアミノ酸配列、並びに／又は第２のヘテロ単量体Ｆｃ領域を含む、第２のＶＬを含むアミノ酸配列及び／若しくは第２のＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の第１の軽鎖及び／若しくは第２の軽鎖、並びに／又は第１の重鎖及び／若しくは第２の重鎖）をコードする。これらの核酸は、同じ発現ベクター上又は異なる発現ベクター上にあることができ、通常、これらの核酸は、２つ又は３つの発現ベクター上に位置し、すなわち、１つのベクターは、これらの核酸のうちの１つより多くを含むことができる。例えば、ヘテロ単量体重鎖の１つは、ＥＵインデックス番号付けに従って、いわゆる「ノブ変異」（Ｔ３６６Ｗ、及び任意選択で、Ｓ３５４Ｃ又はＹ３４９Ｃのうち１つ）を含み、他方は、いわゆる「ホール変異」（Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖ、並びに任意選択で、Ｙ３４９Ｃ又はＳ３５４Ｃ）を含む（例えば、Ｃａｒｔｅｒ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌ．２（１９９６）７３を参照されたい）。

【0250】

一態様では、本明細書に報告されるような方法で使用される抗体をコードする単離された核酸が提供される。

【0251】

一態様では、抗体を作製する方法が提供され、その方法は、上記に提供されるように、抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を、抗体の発現に好適な条件下で培養することと、任意選択で、抗体を宿主細胞（又は宿主細胞培養培地）から回収することと、を含む。

【0252】

抗体の組換え産生の場合、例えば、上記のように、抗体をコードする核酸が単離され、更なるクローニング及び／又は宿主細胞内での発現のために１つ以上のベクターに挿入される。様々な態様では、このような核酸は、従来の手順を使用して（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合できるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）、容易に単離及び配列決定されるか、又は組換え法によって産生されるか、又は化学合成によって得られる。

【0253】

抗体をコードするベクターのクローニング又は発現のための好適な宿主細胞には、本明細書に記載される原核細胞又は真核細胞が含まれる。例えば、様々な態様では、抗体は、特に、グリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要とされていない場合には、細菌中で産生される。細菌中の抗体断片及びポリペプチドの発現については、例えば、ＵＳ５，６４８，２３７、ＵＳ５，７８９，１９９、及びＵＳ５，８４０，５２３を参照されたい。（また、Ｅ．ｃｏｌｉにおける抗体断片の発現を記載している、Ｃｈａｒｌｔｏｎ，Ｋ．Ａ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８，Ｌｏ，Ｂ．Ｋ．Ｃ．．（ｅｄ．），Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ（２００３），ｐｐ．２４５－２５４も参照されたい。）発現後、抗体は、様々な態様では、可溶性画分中の細菌細胞ペーストから単離され、更に精製され得る。

【0254】

原核生物に加えて、糸状菌又は酵母などの真核微生物は、抗体をコードするベクターに好適なクローニング又は発現宿主であり、グリコシル化経路が「ヒト化」された真菌及び酵母株を含み、部分的又は完全にヒトのグリコシル化パターンを有する抗体の産生をもたらす。Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，Ｔ．Ｕ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２（２００４）１４０９－１４１４、及びＬｉ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４（２００６）２１０－２１５を参照されたい。

【0255】

（グリコシル化）抗体の発現に好適な宿主細胞は、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）にも由来する。無脊椎動物細胞の例としては、植物及び昆虫細胞が挙げられる。様々な態様では、多くのバキュロウイルス株が特定されており、特に、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞のトランスフェクションのために、昆虫細胞と組み合わせて使用される。

【0256】

植物細胞培養物も、宿主として利用することができる。例えば、ＵＳ５，９５９，１７７、ＵＳ６，０４０，４９８、ＵＳ６，４２０，５４８、ＵＳ７，１２５，９７８、及びＵＳ６，４１７，４２９（トランスジェニック植物において抗体を産生するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳＴＭ技術を記載している）を参照されたい。

【0257】

脊椎動物細胞もまた、宿主として使用することができる。例えば、懸濁液中で増殖するように適合されている哺乳動物細胞株は、有用であり得る。有用な哺乳動物宿主細胞株の他の例は、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ－７）、ヒト胚腎臓株（例えば、Ｇｒａｈａｍ，Ｆ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６（１９７７）５９－７４に記載されているような２９３又は２９３Ｔ細胞）、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）、マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｊ．Ｐ．，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３（１９８０）２４３－２５２に記載されているようなＴＭ４細胞）、サル腎臓細胞（ＣＶ１）、アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６）、ヒト子宮頸がん細胞（ＨＥＬＡ）、イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ ３Ａ）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８）、ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）、マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２）、ＴＲＩ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｊ．Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３（１９８２）４４－６８に記載されている）、ＭＲＣ５細胞、及びＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳動物宿主細胞株としては、ＤＨＦＲ－ＣＨＯ細胞を含む、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（Ｕｒｌａｕｂ，Ｇ．ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７（１９８０）４２１６－４２２０）、並びに骨髄腫細胞株、例えば、Ｙ０、ＮＳ０及びＳｐ２／０が挙げられる。抗体産生に好適な特定の哺乳動物宿主細胞の概説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ，Ｐ．ａｎｄ Ｗｕ，Ａ．Ｍ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８，Ｌｏ，Ｂ．Ｋ．Ｃ．（ｅｄ．），Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ（２００４），ｐｐ．２５５－２６８を参照されたい。

【0258】

一態様では、宿主細胞は、真核生物、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞又はリンパ球細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。

【0259】

アッセイ
様々な態様では、本明細書に提供される抗ＴＴＲ抗体は、それらの物理的／化学的特性及び／又は生物活性について、当該技術分野で既知の様々なアッセイによって、特定されるか、スクリーニングされるか、又は特徴付けられる。

【0260】

１． 結合アッセイ及び他のアッセイ
一態様では、本発明の抗体は、例えば、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロットなどの既知の方法によって、その抗原結合活性について試験される。

【0261】

別の態様では、競合アッセイを使用して、ＴＴＲへの結合に関して、Ａｂ１などの本明細書に提供される抗体と競合する抗体を特定する。特定の態様では、このような競合抗体は、Ａｂ１により結合されるのと同じエピトープ（例えば、線形又は立体構造エピトープ）に結合する。特定の態様では、このような競合抗体は、Ａｂ１により結合されるのと同じエピトープ（例えば、線形又は立体構造エピトープ）に結合する。抗体が結合するエピトープをマッピングするための詳細な例示の方法が、Ｍｏｒｒｉｓ（１９９６）“Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ”，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｖｏｌ．６６（Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ）に提供されている。

【0262】

例示的な競合アッセイにおいて、固定化抗原（例えば、ＴＴＲ単量体）は、抗原に結合する第１の標識抗体（例えば、Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６又はＡｂ７）と、抗原への結合について第１の抗体と競合する能力について試験される第２の非標識抗体と、を含む、溶液中でインキュベートされる。第２の抗体は、ハイブリドーマ上清中に存在し得る。対照として、固定化抗原が、第１の標識抗体を含むが、第２の非標識抗体は含まない溶液中でインキュベートされる。第１の抗体の抗原への結合を許容する条件下でのインキュベーション後、過剰な非結合抗体を除去し、固定化された抗原に関連する標識の量を測定する。固定化された抗原に関連する標識の量が、対照試料と比較して試験試料中で実質的に低減している場合、それは、第２の抗体が抗原への結合について第１の抗体と競合していることを示す。Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ｃｈ．１４（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ）を参照されたい。

【0263】

２． 活性アッセイ
ＴＴＲは、凝集体、並びに単量体、四量体、及び中間折り畳み状態を形成する。ＴＴＲの生物学的活性としては、例えば、ビタミンＡ（レチノール）及び全身のチロキシン輸送が挙げられ得る。ＴＴＲの有害な活性は、体内の組織内のその凝集及び沈着の形成であり、したがって、結合抗体の活性は、ＴＴＲ凝集阻害である。インビボ及び／又はインビトロでそのような生物学的活性を有する抗体もまた、提供される。

【0264】

特定の態様では、本開示の抗体は、そのような生物学的活性について試験される。ＴＴＲ凝集活性を決定するためのアッセイは、当該技術分野で既知であり、典型的には、蛍光インジケータ及び抗ＴＴＲ抗体の存在下でＴＴＲをインキュベートすることを含む。抗ＴＴＲ抗体がＴＴＲ凝集活性を阻害するかどうかを試験するための非限定的なアッセイは、以下の通りである。ＴＴＲ凝集アッセイは、染料チオフラビンＴｈＴの蛍光のシフトを監視する蛍光計において、室温で実行され得る。溶液のｐＨを４未満に低下させること、又はトリプシン処理を使用することを含む、ＴＴＲの凝集を開始するいくつかの方法が知られている。実施例５では、１０μＭの濃度のｍＴＴＲを、９６ウェル蛍光プレートリーダー中のトリプシンで処理し、その凝集を経時的にＴｈＴで監視した。

【0265】

診断及び検出のための方法及び組成物
特定の態様では、本明細書に提供される抗体のうちのいずれかの１つ以上は、生体試料中の抗原の存在の検出に有用である。本明細書で使用される場合、「検出すること」という用語は、定量的又は定性的検出を包含する。特定の態様では、生体試料は、血液試料などの細胞又は組織を含む。

【0266】

一態様では、診断又は検出方法に使用するための抗体が提供される。更なる態様では、生体試料中のＴＴＲ単量体の存在を検出する方法が提供される。特定の態様では、方法は、抗体のその抗原への結合を許容する条件下で、生体試料を本明細書に記載される抗ＴＴＲ抗体と接触させることと、複合体が抗体と抗原との間で形成されるかどうかを検出することと、を含む。そのような方法は、インビトロであり得るか、又はインビボで血液若しくは組織試料を使用することであり得る。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体での治療のための患者を選択する方法は、患者からの試料中のＴＴＲ種（単量体、四量体、又は凝集体など）のレベルを決定することを含む。

【0267】

特定の態様では、標識された抗ＴＴＲ抗体は、任意の形態のイムノアッセイで提供される。標識としては、直接検出される標識又は部分（蛍光標識、発色団標識、電子密度の高い標識、化学発光標識、及び放射性標識など）、並びに間接的に、例えば、酵素反応又は分子相互作用により検出される酵素又はリガンドなどの部分が挙げられるが、これらに限定されない。例示的な標識としては、放射性同位体３２Ｐ、１４Ｃ、１２５１、３Ｈ、及び１３１Ｉ、希土類キレート又はフルオレセイン及びその誘導体などのフルオロフォア、ローダミン及びその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロン、ルセリフェラーゼ、例えば、ホタルルシフェラーゼ及び細菌ルシフェラーゼ（米国特許第４，７３７，４５６号）、ルシフェリン、２，３－ジヒドロフタラジンジオン、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ、ｂ－ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、糖オキシダーゼ、例えば、グルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、及びグルコース－６－リン酸デヒドロゲナーゼ、ウリカーゼ及びキサンチンオキシダーゼなどの複素環式オキシダーゼを、ＨＲＰ、ラクトペルオキシダーゼ、又はミクロペルオキシダーゼ、ビオチン／アビジン、スピン標識、バクテリオファージ標識、安定したフリーラジカルなどの色素前駆体を酸化するために過酸化水素を利用する酵素と結合したものなどが挙げられるが、これらに限定されない。

【0268】

捕捉のためのもの、及び検出のための別のものなどの、抗ＴＴＲ単量体抗体の組み合わせでの使用は、効果的な診断であり得る。Ｑｕａｎｔｅｒｉｘは、結合の超高感度検出のために、何千もの単一タンパク質分子を同時に検出するためのアプローチを開発した。従来のＥＬＩＳＡと同じ試薬を利用して、この方法を使用して、様々な異なるマトリックス（血清、血清／血漿、脳脊髄液、尿、細胞抽出物など）中のタンパク質をフェムトモル（ｆｇ／ｍｌ）濃度で測定し、感度を約１０００倍向上させた。このアプローチは、単一酵素分子を単離及び検出することができる単一分子アレイ（Ｓｉｍｏａ（商標））と呼ばれるフェムトリットルサイズの反応チャンバのアレイを利用する。アレイの体積は、従来のＥＬＩＳＡよりも約２０億倍小さいため、標識されたタンパク質が存在する場合、蛍光生成物の急速な蓄積が生成される。拡散が阻害されると、この高い局所濃度の生成物を容易に観察することができる。検出限界に達するために必要なものは単一の分子だけである。

【0269】

この単一分子イムノアッセイの第１のステップでは、抗体捕捉剤を、分子の希釈溶液を濃縮するために使用される常磁性ビーズ（直径２．７□ｍ）の表面に結合させる。ビーズは、典型的には、約２５０，０００個の結合部位を含有するため、各ビーズは、捕捉分子の「ローン（ｌａｗｎ）」を有すると考えることができる。ビーズは、標的分子よりも多くのビーズが存在するように、試料溶液に添加される。典型的には、５００，０００個のビーズを１００μＬの試料に添加する。非常に多くのビーズを添加するには、２つの利点がある。第１に、およそ１０：１のビーズ対分子比で、標識された免疫複合体を含むビーズのパーセンテージは、ポアソン分布に従う。低濃度のタンパク質では、ポアソン分布は、各ビーズが単一の免疫複合体又はなしのいずれかを捕捉することを示す。例えば、０．１ｍｌ（６０，０００個の分子）中の１ｆＭのタンパク質を捕捉し、５００，０００個のビーズ上で標識すると、ビーズの１２％が１つのタンパク質分子を担持し、８８％がタンパク質分子を１つも担持しない。第２に、非常に多くのビーズが溶液中にある場合、ビーズからビーズまでの距離は小さいので、全ての分子が１分未満でビーズに遭遇する。標的分析物分子、更には大きなタンパク質の拡散は、理論上全ての分子が複数のビーズとすぐに複数の衝突を有するべきであるような、時間スケールで発生する。このように、固定された捕捉表面への遅い結合が回避され、結合の効率が劇的に増加する。次いで、ビーズを洗浄して非特異的に結合したタンパク質を除去し、ビオチン化検出抗体とインキュベートし、次いで、β－ガラクトシダーゼ標識ストレプトアビジンとインキュベートする。このように、単一のタンパク質分子を捕捉した各ビーズを酵素で標識する。分子を捕捉しないビーズは、標識がないままである。

【0270】

アンサンブル読み出しの代わりに、ビーズは、ウェル当たり１つ以下のビーズ（４．２５μｍの幅、３．２５□ｍの深さ）を保持するようにサイズ設定された２１６，０００フェムトリットルサイズのウェルのアレイに負荷される。ビーズは、基質の存在下で添加され、その後、ウェルは、油で密封され、画像化される。Ｓｉｍｏａは、個々の酵素によって生成されるフルオロフォアを非常に小さい体積（約４０ｆＬ）に制限することによって、非常に低い濃度の酵素標識の検出を可能にし、蛍光生成物分子の高い局所濃度を確実にする。標的分析物が捕捉された場合（免疫複合体が形成された場合）、基質は捕捉された酵素標識によって蛍光生成物に変換される。ビーズを含むウェルの総数に対する、酵素標識を有するビーズを含むウェルの数の比は、試料中の分析物濃度に対応する。アレイの２つの蛍光画像を取得することによって、シグナルの増加を実証し、それによって真の免疫複合体の存在を確認することが可能であり、単一の酵素分子に関連するビーズ（「オン」ウェル）は、酵素に関連しないビーズ（「オフ」ウェル）と区別することができる。試験試料中のタンパク質濃度は、ビーズ及び蛍光生成物の両方を含有するウェルの数を、ビーズを含有するウェルの総数と比較してカウントすることによって決定される。Ｓｉｍｏａは、全アナログシグナルを使用するのではなく、濃度をデジタルで決定することを可能にするため、単一の免疫複合体を検出するこのアプローチは、デジタルＥＬＩＳＡと呼ばれている。従来のＥＬＩＳＡよりもはるかに低い濃度のタンパク質を測定するデジタルＥＬＩＳＡの能力は、２つの効果に由来する：（ｉ）Ｓｉｍｏａの酵素標識に対する高感度、及び（ｉｉ）タンパク質の検出をデジタル化することによって達成することができる低バックグラウンドシグナル。所与の親和性の抗体については、イムノアッセイの感度は、アッセイのバックグラウンドによって決定される。高い標識感度及び低下した標識濃度は、捕捉表面への非特異的結合を低減するのに役立ち、はるかに低いバックグラウンドシグナルをもたらす。

【0271】

薬学的組成物
更なる態様では、本開示は、例えば、本明細書に記載の治療方法に使用するため、又は医薬に使用するための、本明細書に提供される抗体のいずれかを含む、組成物を提供する。一態様では、組成物は、本明細書に提供される抗体のいずれかと、薬学的に許容される担体と、を含む。したがって、いくつかの態様では、本開示の組成物は、薬学的組成物である。別の態様では、薬学的組成物は、本明細書に提供される抗体のいずれかと、例えば、本明細書以下に記載される少なくとも１つの追加の治療剤と、を含む。

【0272】

本明細書に記載される抗ＴＴＲ抗体を含む組成物又は薬学的組成物は、所望の程度の純度を有するそのような抗体（複数可）を１つ以上の任意選択の薬学的に許容される担体｛Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０））と混合することによって、凍結乾燥組成物又は水溶液の形態で調製される。薬学的に許容される担体は、一般的に、用いられる投薬量及び濃度でレシピエントに対して非毒性であり、ヒスチジン、ホスファート、シトラート、アセタート及び他の有機酸などの緩衝液；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル若しくはベンジルアルコール；メチル若しくはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；及びｍ－クレゾールなど）；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン若しくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン若しくはリシンなどのアミノ酸；単糖類、二糖類、及びグルコース、マンノース若しくはデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース若しくはソルビトールなどの糖類；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）、並びに／又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤を含むが、これらに限定されない。本明細書における例示的な薬学的に許容される担体には、可溶性の中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えば、ｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｈａｌｏｚｙｍｅ，Ｉｎｃ．）などのヒト可溶性ＰＨ－２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質などの間質性薬物分散剤が更に含まれる。ｒＨｕＰＨ２０を含む、特定の例示的なｓＨＡＳＥＧＰ及び使用方法は、米国特許公開第２００５／０２６０１８６号及び同第２００６／０１０４９６８号に記載されている。一態様では、ｓＨＡＳＥＧＰは、１つ以上の更なるグリコサミノグリカナーゼ、例えば、コンドロイチナーゼと組み合わされる。

【0273】

いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体（複数可）は、皮下投与のために製剤化される。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体（複数可）は、静脈内投与のために製剤化される。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体（複数可）は、局所投与のために製剤化される。

【0274】

例示的な凍結乾燥抗体組成物は、米国特許第６，２６７，９５８号に記載されている。水性抗体組成物としては、米国特許第６，１７１，５８６号及びＷＯ２００６／０４４９０８に記載のものが挙げられ、後者の組成物はヒスチジン－酢酸緩衝液を含む。

【0275】

本明細書の薬学的組成物は、治療されている特定の適応症に必要な２つ以上の有効成分、好ましくは互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を有する有効成分も含み得る。そのような有効成分は、好適には、意図される目的に有効な量で、組み合わせで存在する。

【0276】

有効成分は、例えば、コアセルベーション技術によって、又は界面重合によって調製されたマイクロカプセル、例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロース若しくはゼラチン－マイクロカプセル及びポリ－（メチルメタクリレート）マイクロカプセルにより、コロイド薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロ乳濁液、ナノ粒子、及びナノカプセル）内、又はマクロ乳濁液中に取り込まれ得る。このような技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）に開示されている。

【0277】

徐放性の薬学的組成物を調製することができる。徐放性製剤の好適な例としては、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが挙げられ、これらのマトリックスは、成形物品、例えば、フィルム又はマイクロカプセルの形態にある。

【0278】

インビボ投与に使用される薬学的組成物は、一般に無菌である。無菌は、例えば、無菌濾過膜による濾過によって容易に達成され得る。

【0279】

治療方法及び投与経路
本明細書で提供される抗体のいずれも、単独又は組み合わせて治療方法に使用することができる。

【0280】

一態様では、医薬として使用するための抗ＴＴＲ抗体が提供される。更なる態様では、ニューロパチー又は心筋症を引き起こすＴＴＲアミロイドーシスの治療に使用するためのこのような抗体が提供される。特定の態様では、治療方法に使用するための抗ＴＴＲ抗体が提供される。特定の態様では、本開示は、有効量の抗体（複数可）を個体に投与することを含む、心筋症又はニューロパチーを有する個体を治療する方法に使用するためのこのような抗体を提供する。１つのこのような態様では、方法は、例えば、以下に記載されるような、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又は６つの追加の治療剤）を個体に投与することを更に含む。

【0281】

更なる態様では、本開示は、血液又は組織内のＴＴＲ折り畳み中間体のレベルの低減に使用するための抗ＴＴＲ抗体を提供する。特定の態様では、本開示は、有効量の抗体（複数可）を個体に投与して、組織内のＴＴＲの凝集を低減させることを含む、個体におけるＴＴＲ折り畳み中間体を低減させる方法に使用するための抗ＴＴＲ抗体を提供する。上記の態様のいずれかに従う「個体」は、好ましくはヒトである。

【0282】

更なる態様では、本開示は、医薬の製造又は調製における抗ＴＴＲ抗体の使用を提供する。一態様では、医薬は、ＴＴＲアミロイドーシスの状態を有する個体に有効量の医薬を投与することを含む、治療用である。１つのこのような態様では、方法は、例えば、以下に記載されるような、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を個体に投与することを更に含む。更なる態様では、医薬は、組織内の凝集ＴＴＲを低減させるためのものである。更なる態様では、医薬は、有効量の医薬を個体に投与して、ＴＴＲ折り畳み中間体を低減させることを含む、個体の組織内の凝集ＴＴＲを低減させる方法に使用するためのものである。上記の態様のいずれかに従う「個体」は、ヒトであり得る。

【0283】

更なる態様では、本開示は、ＴＴＲアミロイドーシスを治療するための方法を提供する。一態様では、方法は、有効量の抗ＴＴＲ抗体を、心臓又は末梢神経にＴＴＲの凝集体を有する個体に投与することを含む。１つのこのような態様では、方法は、以下に記載されるような、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を個体に投与することを更に含む。

【0284】

更なる態様では、本開示は、例えば、上記の治療方法のいずれかに使用するための、本明細書に提供される抗体のいずれかを含む、薬学的組成物を提供する。一態様では、薬学的組成物は、本明細書に提供される抗体のいずれかと、薬学的に許容される担体と、を含む。別の態様では、薬学的組成物は、本明細書に提供される抗体のいずれかと、例えば、以下に記載される少なくとも１つの追加の治療剤と、を含む。

【0285】

本開示の抗体は、単独で投与され得るか、又は併用療法で使用され得る。例えば、併用療法は、本開示の抗体を投与することと、少なくとも１つの追加の治療剤（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又は６つの追加の治療剤）を投与することと、を含む。特定の態様では、併用療法は、本開示の抗体を投与することと、少なくとも１つの追加の治療剤、例えば、ＴＴＲ治療空間で知られている薬剤、「サイレンサー」又は「安定剤」を投与することと、を含む。いくつかの実施形態では、薬剤は、経口投与される。そのような薬剤としては、安定剤であるタファマディス（ＶＹＮＤＡＭＡＸ（商標）、Ｐｆｉｚｅｒ Ｉｎｃ．）若しくはタファミディスメグルミン（ＶＹＮＤＡＱＥＬ（登録商標）、Ｐｆｉｚｅｒ Ｉｎｃ．）、又はサイレンサーであるパティシラン（Ｏｎｐａｔｔｒｏ（登録商標）、Ａｌｎｙｌａｍ）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0286】

上記に述べられるこのような併用療法は、併用投与（２つ以上の治療剤が同じ又は別個の薬学的組成物中に含まれる）、及び別個の投与を包含し、別個の投与の場合、本開示の抗体の投与は、追加の治療剤（複数可）の投与の前、それと同時、及び／又はその後に行われ得る。一態様では、本開示の抗体（複数可）の投与及び追加の治療剤の投与は、互いの約１ヶ月以内、又は約１週間、２週間、若しくは３週間以内、又は約１、２、３、４、５、若しくは６日以内に行われる。一態様では、抗体及び追加の治療剤は、治療の１日目に患者に投与される。

【0287】

本開示の抗体（及び任意の追加の治療剤）は、非経口投与、肺内投与、及び鼻腔内投与、並びに局所治療で所望される場合、病変内投与を含む、任意の好適な手段によって投与することができる。非経口注入は、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、又は皮下投与を含む。投薬は、任意の好適な経路によるもの、例えば、一部には、投与が短時間であるか、又は慢性的であるかに応じて、静脈内注射又は皮下注射などの注射によるものであり得る。単回投与又は様々な時点にわたる複数回投与、ボーラス投与、及びパルス注入を含むが、これらに限定されない、様々な投薬スケジュールが本明細書で企図される。

【0288】

いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、皮下投与される。いくつかの実施形態では、抗体は、４週間毎又は毎月投与される。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、静脈内投与される。いくつかの実施形態では、抗体は、４週間毎又は毎月投与される。いくつかの実施形態では、例えば、抗体が、Ｍ４２８Ｌ（ＥＵ番号付け）及びＮ４３４Ｓ（ＥＵ番号付け）などの半減期延長置換を含む場合、抗体は、８週間毎に投与される。

【0289】

本開示の抗体は、良好な医療行為と一致する様式で製剤化され、投薬され、投与されるだろう。この文脈において考慮する要因としては、治療されている特定の障害、治療されている特定の哺乳動物、個々の患者の臨床状態、障害の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与のスケジューリング、及び医師に既知である他の要因が挙げられる。抗体は必然的にではなく任意選択で、問題の障害を予防又は治療するために現在使用される１つ以上の薬剤とともに製剤化される。そのような他の薬剤の有効量は、薬学的組成物中に存在する抗体の量、障害又は治療の種類、及び上記で考察される他の要因に依存する。これらは一般に、本明細書に記載されるものと同じ投薬量及び投与経路で、又は本明細書に記載される投薬量の約１～９９％で、又は適切であると経験的／臨床的に決定される任意の投薬量及び任意の経路で使用される。

【0290】

疾患の予防又は治療について、本開示の抗体の適切な投薬量は（単独で、又は１つ以上の他の追加の治療剤と組み合わせて使用される場合）、治療される疾患の種類、抗体の種類、疾患の重症度及び経過、抗体が予防目的又は治療目的で投与されるか、以前の療法、患者の病歴及び抗体への応答、並びに主治医の裁量に依存するだろう。抗体は、１回で、又は一連の治療にわたって患者に好適に投与される。疾患の種類及び重症度に応じて、例えば、１回以上の別個の投与によるものであれ、連続注入によるものであれ、約１ｐｇ／ｋｇ～１５ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇ）の抗体が、患者への投与のための初回候補投薬量であり得る。１つの典型的な１日用量は、上記に言及される要因に応じて、約１ｐｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇ以上の範囲であり得る。状態に応じて、数日間以上にわたる反復投与について、治療は一般に、疾患症状の所望される抑制が生じるまで持続されるだろう。抗体の１つの例示的な投薬量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの範囲内であるだろう。したがって、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、又は１０ｍｇ／ｋｇ（又はこれらの任意の組み合わせ）の１回以上の用量が、患者に投与され得る。そのような用量は、断続的に、例えば、毎週又は３週間毎（例えば、患者が約２～約２０回、又は例えば、約６回の用量の抗体を受容するように）投与されてもよい。より高い初回負荷用量、続いて１回以上のより低い用量が、投与されてもよい。しかしながら、他の投薬量レジメンも有用であり得る。この療法の進行は、従来の技術及びアッセイによって容易に監視される。

【0291】

製造品
本開示の別の態様では、上記の障害の治療、予防、及び／又は診断に有用な材料を含有する製造品が提供される。製造品は、容器、及び容器上の又は容器に関連するラベル又は添付文書を含む。好適な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、ＩＶ溶液バッグなどが挙げられる。容器は、ガラス又はプラスチックなどの様々な材料から形成され得る。容器は、それ自体によって、又は別の組成物と組み合わせて、状態の治療、予防及び／又は診断に有効である組成物を保持し、無菌アクセス口を有してもよい（例えば、容器は、静脈注射溶液バッグ又は皮下注射針によって貫通可能な栓を有するバイアルであり得る）。組成物中の少なくとも１つの活性薬剤は、本開示の抗体である。ラベル又は添付文書は、組成物が、選択した状態を治療するために使用されることを示す。更に、製造品は、（ａ）本開示の抗体を含む組成物を中に収容した第１の容器、及び（ｂ）更なる細胞傷害性薬剤、又は別の治療剤を含む組成物を中に収容した第２の容器を含み得る。本開示のこの態様の製造品は、組成物を使用して、特定の状態を治療することができることを示す添付文書を更に含み得る。代替的に、又は追加的に、製造品は、薬学的に許容される緩衝液、例えば、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル液及びデキストロース溶液を含む第２（又は第３）の容器を更に含み得る。それは、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針及びシリンジを含む、商業的観点及び使用者の観点から望ましい他の材料を更に含み得る。

【実施例】

【0292】

本開示は以下の実施例に更に記載され、これは特許請求の範囲に記載された主題の範囲を限定するものではない。

【0293】

実施例１：Ｈｉｓタグ付きヒトＴＴＲ形態の調製
以下に記載される配列に示され、Ｊｉａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００１，４０，１１４４２－５２に記載される、２つの点変異、Ｐｈｅ８７Ｍｅｔ及びＬｅｕ１１０Ｍｅｔを含有するヒトトランスサイレチンの単量体形態を、抗体発見及びその後のインビトロ特性評価に使用した。Ｅ．ｃｏｌｉでの最適な発現のために、天然ヒト遺伝子に対してコドン最適化を行った。２つの構築物を作製した。第１は、Ｎ末端プロテアーゼ切断可能な６つのヒスチジン親和性タグＭＧＳＳＨＨＨＨＨＨＳＳＧＬＶＰＡＧＳＨＭＧＰＴＧＴＧＥＳＫＣＰＬＭＶＫＶＬＤＡＶＲＧＳＰＡＩＮＶＡＶＨＶＦＲＫＡＡＤＤＴＷＥＰＦＡＳＧＫＴＳＥＳＧＥＬＨＧＬＴＴＥＥＥＦＶＥＧＩＹＫＶＥＩＤＴＫＳＹＷＫＡＬＧＩＳＰＭＨＥＨＡＥＶＶＦＴＡＮＤＳＧＰＲＲＹＴＩＡＡＭＬＳＰＹＳＹＳＴＴＡＶＶＴＮＰＫＥ（（配列番号７６）；Ｈｉｓ＿Ｆ８７Ｍ Ｌ１１０Ｍ ＴＴＲ）を付加した変異配列からなった。第２の構築物は、ヒスチジンタグとプロテアーゼ切断部位との間に挿入されたアミノ酸配列－ＧＬＮＤＩＦＥＡＱＫＩＥＷＨＥ－（配列番号７７）を付加した同じ遺伝子配列からなった。この配列、すなわち、（ＭＨＨＨＨＨＨＳＧＭＳＧＬＮＤＩＦＥＡＱＫＩＥＷＨＥＧＥＮＬＹＦＱＧＭＧＰＴＧＴＧＥＳＫＣＰＬＭＶＫＶＬＤＡＶＲＧＳＰＡＩＮＶＡＶＨＶＦＲＫＡＡＤＤＴＷＥＰＦＡＳＧＫＴＳＥＳＧＥＬＨＧＬＴＴＥＥＥＦＶＥＧＩＹＫＶＥＩＤＴＫＳＹＷＫＡＬＧＩＳＰＭＨＥＨＡＥＶＶＦＴＡＮＤＳＧＰＲＲＹＴＩＡＡＭＬＳＰＹＳＹＳＴＴＡＶＶＴＮＰＫＥ（配列番号７８）；Ａｖｉ＿ｍＴＴＲ－インビボビオチン化構築物）は、ビオチンリガーゼＢｉｒＡの過剰発現によるインビボビオチン化を可能にした。これらの構築物を、ｐＥＴ－２８ａ発現プラスミドにライゲーションし、次いで、ＢＬ２１（ＤＥ３）発現細胞に形質転換した。ＢｉｒＡ発現のための第２のプラスミドを、細胞内ビオチン化に適切な場合に、細胞に共形質転換した。形質転換した細胞を、ＯＤ６００が０．８～１．０に達する密度まで、３７℃でフラスコで増殖させた。組換えタンパク質の発現は、イソプロピルチオ－β－ガラクトシドで誘導した。培養物を約１６時間インキュベートした。次に、細胞をペレット化し、精製のために保存した。

【0294】

ビオチン化は、Ｆａｉｒｆｉｅｌｄ ａｎｄ Ｈｏｗａｒｔｈ［Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２０１５；１２６６：１７１－１８４．］の方法と同様に達成した。インビボビオチン化のために、ビオチンを誘導時に培養物に添加し、培養物を３０℃で約１６時間インキュベートした。収集した細胞を、トリス（ｐＨ８．０）、１００ｍＭのＮａＣｌ及びプロテアーゼ阻害剤からなる緩衝液中で溶解した。細胞を超音波処理によって溶解し、遠心分離して、全ての不溶性物質を除去した。細胞溶解物の可溶性画分を、固定化金属親和性クロマトグラフィーによって最初に精製した。結合したタンパク質を、３０～５００ｍＭのイミダゾールの勾配で溶出した。組換えタンパク質を含有する溶出画分を濃縮し、最終精製のためにサイズ排除クロマトグラフィーカラムに適用し、２５ｍＭのトリス及び１００ｍＭのＮａＣｌの緩衝液に緩衝液交換した。組換えタンパク質を含む画分をプールし、濃縮し、液体窒素中で凍結させ、後で使用するために－８０℃で保管した。

【0295】

加えて、以下の形態を、この方法によって発現させた：
ＴＴＲ Ｆ８７Ｍ Ｌ１１０Ｍ（単量体ＴＴＲ、ｍＴＴＲ）（配列番号８０）、
ＴＴＲ Ｓ１１２Ｉ（二量体ＴＴＲ、ｄＴＴＲ）（配列番号１４８）、
ＴＴＲ Ｔ１１９Ｍ（安定化四量体ＴＴＲ）（配列番号１５３）、
野生型ＴＴＲ（ｗｔＴＴＲ）、
ＴＴＲ Ｄ３８Ａ、Ｆ８７Ｍ、Ｌ１１０Ｍ（配列番号１５０）、
ＴＴＲ Ｆ８７Ｍ Ｌ１１０Ｍ Ｖ１２２Ｉ（配列番号１５１）、
ＴＴＲ Ｆ８７Ｍ Ｌ１１０Ｍ Ｓ１１２Ｉ（配列番号１５２）、
ＴＴＲ Ｖ３０Ｍ Ｆ８７Ｍ Ｌ１１０Ｍ（配列番号１４９）、
及び上記のビオチン化形態。

【0296】

実施例２：タグ付けされていない抗ヒトＴＴＲ単量体の調製
ＴＴＲ単量体を、Ｈｉｓ－ＡｃＴＥＶプロテアーゼを使用して、実施例１で調製したＨｉｓ－ビオチン－ＴＴＲ単量体からＨｉｓ－ビオチンタグを切断することによって調製した。切断された単量体をフロースルーから収集し、クマシーで染色したＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル、並びにＮＡＶＩｎｄｉｒｅｃｔ及びサンドイッチＥＬＩＳＡの両方で純度を試験した。

【0297】

１５ｍＬの円錐フラスコに、実施例１（３８３μＭでのストック）からのＨｉｓ－ビオチン－ＴＴＲ単量体の３×６２５μＬアリコートを合計１２．８８ｍｇ添加した。ＡｃＴＥＶプロテアーゼ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ１２５７５－０１５）（１００μＬ、１，０００単位）を添加し、フラスコを３４℃で一晩３００ＲＰＭで振盪した。約１ｍＬ／分（１滴／２秒）の流量で、ＨｉｓＴｒａｐ（ニッケルカラム）を使用して、切断されたＨｉｓ－ビオチンタグ、あらゆる未切断のビオチン化単量体ＴＴＲ、及びＨｉｓ－ＡｃＴＥＶプロテアーゼを除去した。５ＣＶ（５ｍＬ）の結合緩衝液（２５ｍＭのトリス（ｐＨ８．０）、５０μＭのＮａＣｌ）でカラムを平衡化した後、切断された単量体ＴＴＲ（約２ｍＬ）を添加した。カラムを５ＣＶ（５ｍＬ）溶出緩衝液（２０ｍＭのＭＥＳ（ｐＨ６．８）、１００ｍＭのＮａＣｌ、０．５Ｍのイミダゾール）で溶出した。画分をＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル上で分析し、クマシーで染色した。切断された単量体ＴＴＲの画分を、４℃で保管した。画分を組み合わせ、濾過し（０．２２ｍｍ）、ＵＶ［Ｎａｎｏｄｒｏｐ］を介して分析した。最終単量体（７．５４ｍｇ）を液体窒素中で急速凍結し、－８０℃で保管した。

【0298】

加えて、以下の形態のＴＴＲを、この方法によって精製した：
ＴＴＲ Ｆ８７Ｍ Ｌ１１０Ｍ（単量体ＴＴＲ、ｍＴＴＲ）（配列番号８０）、
ＴＴＲ Ｓ１１２Ｉ（二量体ＴＴＲ、ｄＴＴＲ）（配列番号１４８）、
ＴＴＲ Ｔ１１９Ｍ（安定化四量体ＴＴＲ）（配列番号１５３）、
野生型ＴＴＲ（ｗｔＴＴＲ）、
ＴＴＲ Ｄ３８Ａ， Ｆ８７Ｍ， Ｌ１１０Ｍ（配列番号１５０）、
ＴＴＲ Ｆ８７Ｍ Ｌ１１０Ｍ Ｖ１２２Ｉ（配列番号１５１）、
ＴＴＲ Ｆ８７Ｍ Ｌ１１０Ｍ Ｓ１１２Ｉ（配列番号１５２）、
ＴＴＲ Ｖ３０Ｍ Ｆ８７Ｍ Ｌ１１０Ｍ（配列番号１４９）、
及び上記のビオチン化形態。

【0299】

実施例３：ヒトＴＴＲの単量体形態に結合するための抗体の生成
Ａｂｖｅｒｉｓでの単一Ｂ細胞スクリーニングプロセスからのトランスサイレチン（ＴＴＲ）の単量体形態に対する特異性を有するマウスモノクローナル抗体が発見された。ヒトＴＴＲの単量体形態に対する抗体を、Ｂｅｒｋｅｌｅｙ Ｌｉｇｈｔｓ Ｂｅａｃｏｎ（登録商標）プラットフォームを使用して、高い結合親和性を有するクローンの選択によって生成した。抗ＴＴＲ単量体抗体の単離のために、標準的な成熟パンニング戦略を、固相パンニングアプローチを使用して実行した。特に、８匹のＡｂｖｅｒｉｓ ＤｉｖｅｒｓｉｍＡｂ（商標）マウスを、２００μＬの最終体積で、アジュバントで腹腔内に希釈された、実施例２からの１０μｇのＴＴＲ単量体を注射することによって、ヒトＴＴＲの単量体形態で免疫化した。２～３日後に毎回、２００μＬの最終体積で、アジュバントで希釈された１０μｇの抗原を注入する新しい免疫増強を行った。２週間後、ＥＬＩＳＡアッセイにおいて反応性のレベルを検出した。

【0300】

形質Ｂ細胞を、ＴＴＲ単量体結合抗体を産生した２匹のマウスから単離した。動物を屠殺し、血液を採取し、脾臓を除去して融合を行った。Ｂ細胞をＢｅａｃｏｎ（登録商標）プラットフォーム上でスクリーニングした。Ｂ細胞を、Ｂｅｒｋｅｌｅｙ Ｌｉｇｈｔｓ Ｂｅａｃｏｎ（登録商標）プラットフォームを介して４個の１４Ｋ ＯＰＴＯＳｅｌｅｃｔチップ上に負荷した。単一細胞配列決定により、対合したＶＨ／ＶＬを得た。力価陽性マウスを選択し、リンパ節及び／又は脾臓を採取した。更に、末端出血により、ポリクローナル血清を得た。４１個の固有の抗体を配列決定したが、これらは、単量体結合剤であり、四量体ＴＴＲには結合しなかった。小規模抗体組換え産生により、特異性及び親和性の確認のためのクローンを得た。粗抗体上清に対するバイオレイヤー干渉法（単量体又は四量体固定化）及びＥＬＩＳＡ（単量体、ヒト血清バックグラウンドにおける単量体、四量体、ヒト血清バックグラウンドにおける四量体、単量体変異に対するペプチド）による分析により、単量体ＴＴＲに特異的な抗体を特定した。７つの抗体を精製し、バイオレイヤー干渉法及びＥＬＩＳＡによって分析した。モノクローナルＡｂ抗体のＣＤＲ配列を図２に提供する。

【0301】

実施例４：間接ＥＬＩＳＡスクリーニングアッセイによる単量体ＴＴＲ ｍＡｂ分析
透明な３８４ウェルの高結合ＥＬＩＳＡプレートをニュートラアビジンでコーティングし、一晩遮断した。ＥＬＩＳＡの日に、プレートをロボット液体ハンドラを使用してＰＢＳ－Ｔ［ＰＢＳ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０］で洗浄した。実施例１からのビオチン化ＴＴＲ形態（単量体、二量体、安定化四量体、又は野生型ＴＴＲ）を添加し、インキュベートした。プレートを再びＰＢＳ－Ｔで洗浄し、抗体を添加し、インキュベートした。プレートを再びＰＢＳ－Ｔで洗浄し、ＨＲＰコンジュゲート抗種抗体（抗マウス－ＨＲＰ）を添加し、インキュベートした。プレートを最後に洗浄し、ＴＭＢ基質（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を添加した。反応を停止するために、リン酸溶液（１Ｍ）を添加した。プレートを、２つの吸光度波長（４５０ｎｍ及び５７０ｎｍ）で読み取った。ＥＣ_５０を計算し、表８に提供する。全てのｍＡｂは、抗原のＮＡＶでコーティングされたプレート捕捉を使用する間接ＥＬＩＳＡにおいて単量体特異的に出現した。図３Ａ～Ｃ及び４Ａ～Ｃを参照されたい。

【表8】

【0302】

実施例５：ｍＡｂ用量反応を伴う単量体ＴＴＲ凝集アッセイ
実験の前に、抗単量体ＴＴＲ ｍＡｂ（Ａｂ１）をＰＢＳ中に透析した。次いで、抗ｍＴＴＲ ｍＡｂを９６ウェルプレート中のＰＢＳ中で連続的に希釈した。チオフラビンＴ（ＴｈＴ）を５０μＭの最終濃度まで添加し、アジ化ナトリウムを０．０１％の最終濃度まで添加した。組換えｍＴＴＲタンパク質を、ＰＢＳ中の非常に短いトリプシン消化によって調製した。フェニルメチルスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）の添加によってトリプシン消化を停止させた。トリプシン処理したｍＴＴＲを、１０μＭの最終濃度で２００μＬの最終体積まで９６ウェルプレートに添加した。９６ウェルプレートを密封し、ＴｈＴ蛍光シグナル（４４２ｎｍ ｅｘ．、４８５ｎｍ ｅｍ．）をＴｅｃａｎ ＧＥＮｉｏｓ蛍光リーダーにおいて３７℃で５日間監視し、測定間に連続的に振盪した。図１を参照されたい。ｍＴＴＲ凝集の阻害を、０．１９μＭを超える濃度で観察した。

【0303】

実施例６：ｍＡＢ ＴＴＲ抗体のヒト化
様々なヒト化技術により、ｍＡｂ １及び２を最適化した。例えば、マウス可変／ｈＩｇＧ４キメラ配列を最初に調製した。その後、ヒト化ＣＤＲ＋ＬＶ（ＨＣ）、ＣＤＲＸ＋ＬＶ、Ｓ（ＬＣ）を調製した。ヒト化ｍＡｂ抗体の配列を図６～９、１４、及び１８～２１に提供する。ヒト化抗体は自己凝集せず、細胞系によって大量に産生される。

【0304】

実施例７：ヒト化ｍＡｂ ＴＴＲ抗体は、結合効力を保持する
実施例６からの様々な抗体キメラ及び構築物を、実施例４に記載されるように、間接ＥＬＩＳＡアッセイによって分析し、ビオチニル－ｍＴＴＲをアビジンプレートに結合させた。ＥＣ_５０を計算し、表９に提供する。Ａｂ１についてのヒト化構築物は、Ａｂ１のキメラ形態と同様の親和性を示したが、ＩｇＧ２形態よりも約１０倍弱かった。Ａｂ２のヒト化バージョンは、ＩｇＧ２形態と同様の親和性を示した。

【表9】

【0305】

実施例８：ヒト化ｍＡｂ ＴＴＲ抗体は、結合特異性を保持する
実施例６に記載の様々な抗体キメラ及び構築物を、実施例４に記載の間接ＥＬＩＳＡアッセイによって分析した。ヒト化抗体は、安定化四量体ＴＴＲよりもｍＴＴＲに対して特異性を保持した。ヒト化Ａｂ１及びＡｂ２の特異性は、それぞれ、図９及び１０に提供される。

【0306】

実施例９：バイオレイヤー干渉法による解離定数（Ｋ_ｄ）の測定
実施例２からのｍＡｂを、独自のバイオレイヤー干渉法アッセイ［Ｏｃｔｅｔ ＲＥＤ、Ｆｏｒｔｅ Ｂｉｏ］によって、Ａｂｖｅｒｉｓで分析した。簡潔に述べると、個々の抗マウス抗体バイオセンサーに、上清からのｍＩｇＧを負荷した。各バイオセンサーについてベースラインを測定した。次いで、抗体を負荷したバイオセンサーを、実施例２からのビオチン化単量体に結合させて、会合速度を測定した。バイオセンサーを緩衝液ウェルに移動させて、単量体解離速度を測定し、会合速度とともに解離定数（Ｋｄ）を決定した。ＥＣ_５０などの追加の測定のためにバイオセンサーを再生した。各バイオセンサーについてベースラインを測定した。次いで、抗体を負荷したバイオセンサーをビオチン化された安定化四量体ＴＴＲ（実施例１に記載される方法と同様に作製された）に結合させて、四量体会合速度を測定した。バイオセンサーを緩衝液ウェルに移動させて、四量体解離速度を測定し、会合速度とともに解離定数（Ｋｄ）を決定した。

【0307】

バイオレイヤー干渉法により計算されたＫｄを表１０に提供する。

【表10】

【0308】

実施例１０：線形ペプチドを使用する間接ＥＬＩＳＡによる単量体ＴＴＲ ｍＡｂ分析によるエピトープ結合
間接フォーマットＥＬＩＳＡを、本開示のＡｂによるビオチン化ペプチドの検出に使用した。透明な３８４ウェルの高結合ＥＬＩＳＡプレートをニュートラアビジンでコーティングし、一晩遮断した。プレートをロボット液体ハンドラを使用してＰＢＳ－Ｔ［ＰＢＳ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０］で洗浄した。ビオチン化線形ペプチド［ＧＰＴＧＴＧＥＳＫＣＰＬ（Ｒ００１７）（配列番号６５）、ＭＶＫＶＬＤＡＶＲＧＳＰＡ（Ｒ００１０、配列番号６６）、ＰＦＨＥＨＡＥＶＶＦＴＡ（Ｒ００１１、配列番号６７）、ＥＨＡＥＶＶＦＴＡ（Ｒ００１６、配列番号６８）、ＹＴＩＡＡＬＬＳ（Ｒ００１２、配列番号６９）、ＬＳＰＹＳＹ（Ｒ００１４、配列番号７０）、ＳＹＳＴＴＡＶＶ（Ｒ００１３、配列番号７１）、ＹＴＩＡＡＬＬＳＰＹＳＹＳＴＴＡＶＶ（Ｒ００１５、配列番号７２） ＬＧＩＳＰＭＨＥＨＡＥ（Ｒ００２３、配列番号７３）、及びＲＲＹＴＩＡＡＭＬＳＰＹＳ（Ｒ００２１、配列番号７４）］を添加し、インキュベートした。プレートを、［ＰＢＳ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０］で洗浄し、抗体［Ａｂ１］を添加し、インキュベートした。プレートを洗浄し［ＰＢＳ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０］、抗マウス－ＨＲＰ抗体［Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ］を添加し、インキュベートした。プレートを最後に洗浄し［ＰＢＳ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０］、ＴＭＢ基質（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を添加した。リン酸［１Ｍ］を上部に添加して、反応を停止させた。プレートを、２つの吸光度波長（４５０ｎｍ及び５７０ｎｍ）で読み取った。いずれのペプチドへの結合も、ｍＴＴＲ安定化変異［Ｐｈｅ８７Ｍｅｔ及びＬｅｕ１１０Ｍｅｔ］を含む線形ペプチドへのいずれの結合も観察されなかった。図５を参照されたい。

【0309】

実施例１１：ＴＴＲサンドイッチＥＬＩＳＡ
透明な３８４ウェル高結合ＥＬＩＳＡプレートを、実施例３からの７つのマウス抗体でコーティングし、一晩インキュベートした。プレートを、ロボット液体ハンドラを使用してＰＢＳ－Ｔ［ＰＢＳ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０］で洗浄し、次いで遮断した。タグ付けされていないＴＴＲ（単量体、二量体、安定化四量体、又は野生型ＴＴＲ）を添加し、インキュベートした。プレートをＰＢＳ－Ｔで洗浄し、ＨＲＰコンジュゲート汎ＴＴＲポリクローナル抗体（ＩｍｍｕｎｏＲｅａｇｅｎｔｓ－ＨＲＰ）を添加し、インキュベートした。プレートをＰＢＳ－Ｔで最後に洗浄し、ＴＭＢ基質（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を添加した。リン酸［１Ｍ］を上部に添加して、反応を停止させた。プレートを、２つの吸光度波長（４５０ｎｍ及び５７０ｎｍ）で読み取った。ＥＣ_５０を決定し、表１１に含まれる。全てのｍＡｂは、それらが単量体特異的であることを示した。図３Ａ～Ｃ及び４Ａ～Ｃを参照されたい。

【表11】

【0310】

実施例１２：抗ＴＴＲ単量体抗体を使用するＴＴＲ変異体の検出
本開示の抗体Ａｂ１の様々な疾患関連変異体への結合は、実施例１１及び４にそれぞれ記載されるように、サンドイッチＥＬＩＳＡ又は間接ＥＬＩＳＡのいずれかを使用して決定した。ＥＣ_５０を決定し、表１２～１３に含まれる。図１６及び１７を参照されたい。

【表12】

【表13】

【0311】

実施例１３：ドットブロットアッセイは、マウス及びヒト化抗ＴＴＲ単量体抗体がＴＴＲ単量体に結合するが、ＴＴＲ凝集体には結合しないことを示す
異なる形態のＴＴＲ（単量体及び野生型四量体ＴＴＲ）及びＴＴＲ凝集体（単量体酸、ＷＴ－酸、及び単量体－トリプシン）をニトロセルロース膜に結合させた。膜を洗浄して、あらゆる非結合ＴＴＲを除去し、次いで膜を遮断した。その後、抗ＴＴＲ単量体抗体を添加し、一晩インキュベートした。翌日、膜を洗浄し、抗マウス－ＨＲＰコンジュゲート抗体又は抗ヒト－ＨＲＰコンジュゲート抗体を添加し、［４℃で］インキュベートした。膜を再度洗浄し、検出のために化学発光基質［ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ Ｗｅｓｔ Ｐｉｃｏ ＰＬＵＳ Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ］を添加した。総ＴＴＲの負荷対照について、同じ膜を洗浄し、抗体を剥離し、洗浄し、遮断し、汎ＴＴＲ抗体（ＤＡＫＯ Ａ０００２）でインキュベートした（一晩）。膜を再度洗浄し、抗ウサギ－ＨＲＰコンジュゲート抗体［Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ］を添加し、室温でインキュベートした。膜を再度洗浄し、検出のために化学発光基質［ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ Ｗｅｓｔ Ｐｉｃｏ ＰＬＵＳ Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ］を添加した。Ａｂ１及びヒト化Ａｂ１をドットブロットアッセイにより分析して、ＷＴ－ＴＴＲを上回る単量体に対する特異性を測定した。結果は、Ａｂ１が凝集ＴＴＲに結合しないことを示す。しかしながら、ヒト化Ａｂ１は、弱酸性条件下でＷＴ－ＴＴＲをインキュベートすることによって生成された凝集体への最小限の結合を有する。図１２～１３を参照されたい。

【0312】

実施例１４：抗ＴＴＲ単量体抗体を使用するＡＴＴＲ患者血漿中のＴＴＲ単量体の検出
Ｓｉｍｏａ（商標）アッセイプラットフォーム（Ｑｕａｎｔｅｒｉｘ）を、本開示のＡｂによるＴＴＲの検出に使用した。Ｓｉｍｏａ（商標）プラットフォームは、ＨＤ－Ｘ用Ｈｅｌｐｅｒ Ｐｌｅｘ／５０ｕＬ ＲＧＰ（ＨＤ－１用２５ｕＬ ＲＧＰ）を備えた３ステッププロトコルを使用する。タグ付けされていない単量体Ｐｈｅ７８Ｍｅｔ Ｌｅｕ１１０Ｍｅｔ ＴＴＲ形態（実施例２を参照されたい）を較正剤として使用し、Ａｂ１を捕捉試薬として使用した。Ａｂ１（０．２ｍｇ／ｍＬ）を、ＥＤＣ（０．３ｍｇ／ｍＬ、４℃）を使用して標準的なプロトコルを使用してビーズにコンジュゲートした。Ａｂビーズを、Ｈｏｍｅｂｒｅｗ Ｂｅａｄ Ｄｉｌｕｅｎｔ中で５×１０^６ビーズ／ｍＬに希釈した。ヘルパービーズ（１５×１０^６ビーズ／ｍＬ）を試薬に添加した。ウサギ汎ＴＴＲ ｐＡｂ抗体（ＤＡＫＯ、Ａ０００２）を検出器試薬として使用した。検出器試薬を、最終希釈前にＳｉｍｏａ希釈剤１中で１０倍希釈した４０倍のビオチン化比でビーズにコンジュゲートした。使用した検出器試薬の最終濃度は、Ｓｕｒｍｏｄｉｃｓ ＳＭ０１希釈剤中で０．４ｕｇ／ｍＬであった。ストレプトアビジンベータ－ガラクトシダーゼ（ＳＢＧ）を、Ｓｉｍｏａ（商標）ＳＢＧ希釈液中で３００ｐＭに希釈した。較正剤を使用した較正後、試料を、Ｓｕｒｍｏｄｉｃｓ ＳＭ０１希釈液中のＭＲＤを使用して分析した。希釈した試料の最終体積を２連で実行し、１つのウェルで２５０μＬである。緩衝液中のＴＴＲ単量体の推定検出限界は、１６３ｐｇ／ｍＬ（１１．７ｎＭ）であった。

【0313】

血液試料は、ＡＴＴＲを有する及び有しない患者の２つのコホートから採取した。単量体ＴＴＲ試料を、上記のプロトコルを使用して定量化した。試料中の単量体の量を測定し、図１５に示す。

【0314】

実施例１５：抗ＴＴＲ単量体抗体の対を使用するＴＴＲ単量体の検出
様々な態様では、捕捉のためのもの、及び検出のための別のものなどの、抗ＴＴＲ単量体抗体の組み合わせでの使用は、診断として有効である。そのような使用は、実施例１４に記載されるものと同様のプロトコルを使用して行われるが、捕捉抗体及び検出抗体として抗ＴＴＲ単量体抗体Ａｂ３及びＡｂ５の組み合わせを使用する。ｍＡｂ５で捕捉し、ｍＡｂ３で検出すると、緩衝液単独試料中にスパイクされた単量体と、高濃度の四量体（２０μＭの組換えＴ１１９Ｍ ＴＴＲ又は１００％ヒト血清）を含有するそれらの試料との間でほぼ完全な重複が示された。図１０～１１を参照されたい。

【0315】

別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本開示が関連する技術分野の当業者に一般に理解される意味と同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと類似又は同等の方法及び材料が本発明を実施するために使用され得るが、好適な方法及び材料が以下に記載される。本明細書で言及される全ての刊行物、特許出願、特許、及び他の参考文献は、参照によりそれらの全体が組み込まれる。矛盾する場合、定義を含む本明細書が優先する。加えて、材料、方法、及び実施例は、例示のみであり、限定することを意図しない。

【0316】

本開示の１つ以上の実施形態の詳細はまた、添付の図面に記載される。本開示の他の特徴、目的、及び利点は、説明及び図面、並びに特許請求の範囲から明らかであろう。

【0317】

当業者は、本開示の実施に使用され得る、本明細書に記載されるものと類似又は同等の多くの方法及び材料を認識するであろう。実際、本開示は、記載された方法及び材料に決して限定されない。

【0318】

本開示を、特定の実施形態の観点から説明したが、当業者であればその変形及び修飾をし得ることが理解される。したがって、特許請求の範囲内に見られるようなこのような制限のみが本開示に課せられるべきである。

【0319】

本出願で参照される全ての文書は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本明細書で企図される例示的な実施形態は、以下を含む。
１． ヒトトランスサイレチン（ＴＴＲ）に結合する単離された抗体であって、抗体が、
（ａ）サンドイッチＥＬＩＳＡにおいて決定された場合、約２００ｎＭ未満のＥＣ_５０でヒトＴＴＲに結合し、かつ／又は
（ｂ）バイオレイヤー干渉法アッセイにおいて決定された場合、約２０ｎＭ未満のＫ_ＤでヒトＴＴＲに結合する、抗体。
２． ヒトＴＴＲが、単量体形態にある、実施形態１に記載の抗体。
３． 抗体が、間接ＥＬＩＳＡにおいて決定された場合、約２０ｎＭ未満のＥＣ_５０で単量体ＴＴＲに結合する、実施形態２に記載の抗体。
４． 抗体が、ＴＴＲの凝集を防止する、実施形態１～３のいずれか１つに記載の抗体。
５． 抗体が、ＴＴＲの折り畳み中間体に結合する、実施形態１～４のいずれか１つに記載の抗体。
６．
（ａ）配列番号２～８のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、
（ｂ）配列番号９～１５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び
（ｃ）配列番号１６～２２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、
（ｄ）配列番号２３～２９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、
（ｅ）配列番号３０～３６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び
（ｆ）配列番号３７～４３のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、を含む、実施形態１に記載の抗体。
７． ヒトトランスサイレチン（ＴＴＲ）に結合する抗体であって、抗体が、
（ａ）配列番号２～８のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、
（ｂ）配列番号９～１５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び
（ｃ）配列番号１６～２２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、
（ｄ）配列番号２３～２９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、
（ｅ）配列番号３０～３６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び
（ｆ）配列番号３７～４３のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、を含む、抗体。
８．
（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、
（ｂ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び
（ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３と、
（ｄ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、
（ｅ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び
（ｆ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）と、を含む、実施形態１～４のいずれか１つに記載の抗体。
９．
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、
（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び
（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、
（ｄ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、
（ｅ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び
（ｆ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、を含む、実施形態１～４のいずれか１つに記載の抗体。
１０．
（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び
（ｃ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、
（ｄ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、
（ｅ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、を含む、実施形態１～４のいずれか１つに記載の抗体。
１１．
（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、
（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び
（ｃ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、
（ｄ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、
（ｅ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び
（ｆ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、を含む、実施形態１～４のいずれか１つに記載の抗体。
１２．
（ａ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、
（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び
（ｃ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、
（ｄ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、
（ｅ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び
（ｆ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、を含む、実施形態１～４のいずれか１つに記載の抗体。
１３．
（ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、
（ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び
（ｃ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、
（ｄ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、
（ｅ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び
（ｆ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、を含む、実施形態１～４のいずれか１つに記載の抗体。
１４．
（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、
（ｂ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、
（ｃ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、
（ｄ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、
（ｅ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び
（ｆ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、を含む、実施形態１～４のいずれか１つに記載の抗体。
１５． モノクローナル抗体である、実施形態１～１４のいずれか１つに記載の抗体。
１６． ヒト化抗体又はキメラ抗体である、実施形態１～１５のいずれか１つに記載の抗体。
１７． ＶＨドメインが、配列番号４６～４９のうちのいずれか１つの配列と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む、実施形態１６に記載の抗体。
１８． ＶＨドメインが、配列番号４６～４９のうちのいずれか１つの配列を含む、実施形態１６に記載の抗体。
１９． ＶＨドメインが、配列番号５５～６０のうちのいずれか１つの配列と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む、実施形態１６に記載の抗体。
２０． ＶＨドメインが、配列番号５５～６０のうちのいずれか１つの配列を含む、実施形態１６に記載の抗体。
２１． ＶＬドメインが、配列番号５１～５３のうちのいずれか１つの配列と少なくとも８５％の配列同一性を含む、実施形態１６に記載の抗体。
２２． ＶＬドメインが、配列番号５１～５３のうちのいずれか１つの配列を含む、実施形態１６に記載の抗体。
２３． ＶＬドメインが、配列番号６２～６４のうちのいずれか１つの配列と少なくとも８５％の配列同一性を含む配列を含む、実施形態１６に記載の抗体。
２４． ＶＬドメインが、配列番号６２～６４のうちのいずれか１つの配列を含む、実施形態１６に記載の抗体。
２５． ヒトＴＴＲの単量体形態又は折り畳み中間体形態に結合する抗体断片である、実施形態１～２４のいずれか１つに記載の抗体。
２６． ＧＰＴＧＴＧＥＳＫＣＰＬ（配列番号６５）、ＭＶＫＶＬＤＡＶＲＧＳＰＡ（配列番号６６）、ＰＦＨＥＨＡＥＶＶＦＴＡ（配列番号６７）、ＥＨＡＥＶＶＦＴＡ（配列番号６８）、ＹＴＩＡＡＬＬＳ（配列番号６９）、ＬＳＰＹＳＹ（配列番号７０）、ＳＹＳＴＴＡＶＶ（配列番号７１）、ＹＴＩＡＡＬＬＳＰＹＳＹＳＴＴＡＶＶ（配列番号７２）、ＬＧＩＳＰＭＨＥＨＡＥ（配列番号７３）、及びＲＲＹＴＩＡＡＭＬＳＰＹＳ（配列番号７４）のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有するペプチドに結合しない、実施形態１～２５のいずれか１つに記載の抗体。
２７． 立体構造エピトープに結合する、実施形態２６に記載の抗体。
２８． ＩｇＧ４抗体である、実施形態１～２７のいずれかに記載の抗体。
２９． 抗体が、サンドイッチＥＬＩＳＡにおいて決定された場合、約１５０ｎＭ未満、又は約１００ｎＭ未満、又は約５０ｎＭ未満、又は約２０ｎＭ未満のＥＣ_５０でヒトＴＴＲに結合する、実施形態１～２８のいずれか１つに記載の抗体。
３０． 抗体が、間接ＥＬＩＳＡを使用して決定された場合、約２０ｎＭ未満、又は約５ｎＭ未満、又は約２ｎＭ未満、又は約１ｎＭ未満のＥＣ_５０でヒトＴＴＲに結合する、実施形態１～２９のいずれか１つに記載の抗体。
３１． ヒトＴＴＲに特異的に結合し、かつヒトＴＴＲへの結合について、実施形態１～３０のいずれか１つに記載の抗体と競合する、抗体。
３２． 実施形態１～３１のいずれかに記載の抗体をコードするヌクレオチド配列を含む、単離された核酸。
３３． 実施形態３２に記載の核酸を含む、単離された宿主細胞。
３４． 実施形態１～３１のいずれか１つに記載の抗体を発現する、単離された宿主細胞。
３５． ヒトＴＴＲに結合する抗体を産生する方法であって、抗体の発現に好適な条件下で、実施形態３３又は実施形態３４に記載の宿主細胞を培養することを含む、方法。
３６． 宿主細胞又は宿主細胞培養物から抗体を回収することを更に含む、実施形態３５に記載の方法。
３７． 実施形態３５又は３６に記載の方法によって産生された、抗体。
３８． 実施形態１～３１及び３７のいずれかに記載の抗体を含む、組成物。
３９． ＴＴＲ凝集に関連する関連する疾患を治療するか、予防するか、又は診断する際における使用のための、実施形態１～３１及び３７のいずれか１つに記載の抗体、又は実施形態３８に記載の組成物。
４０． ＴＴＲアミロイドーシスを治療する際における使用のための、実施形態１～３１及び３７のいずれか１つに記載の抗体、又は実施形態３８に記載の組成物。
４１． ＴＴＲアミロイドーシスが、トランスサイレチンアミロイドーシス（ＡＴＴＲ）心筋症（ＡＴＴＲ－ＣＭ）又はトランスサイレチンアミロイドーシス（ＡＴＴＲ）多発ニューロパチー（ＡＴＴＲ－ＰＮ）である、実施形態４０に記載の抗体。
４２． 末梢ＴＴＲアミロイドーシス、眼アミロイド血管症、又は脳アミロイド血管症を治療する際における使用のための、実施形態１～３１及び３７のいずれか１つに記載の抗体、又は実施形態３８に記載の組成物。
４３． 家族性アミロイド多発ニューロパチー（ＡＰ）、家族性アミロイド心筋症（ＦＡＣ）、ＡＴＴＲ－ＰＮ及びＡＴＴＲ－ＣＭ、ｈＡＴＴＲ又は野生型ＡＴＴＲ（ｗｔＡＴＴＲ）、老人性全身性アミロイドーシス（ＳＳＡ）、全身性家族性アミロイドーシス、アルツハイマー病を含む軟髄膜／中枢神経系（ＣＮＳ）アミロイドーシス、ＴＴＲ関連眼アミロイドーシス、ＴＴＲ関連腎アミロイドーシス、ＴＴＲ関連高チロキシン血症、手根管症候群を含むＴＴＲ関連靱帯アミロイドーシス、肩腱板断裂及び腰部脊椎管狭窄症、並びに子癇前症から選択される疾患を治療する際における使用のための、実施形態１～３１及び３７のいずれか１つに記載の抗体、又は実施形態３８に記載の組成物。
４４． ＴＴＲアミロイドーシスに関連する疾患を有する対象を治療する方法であって、方法が、対象に、有効量の、実施形態１～３１及び３７のいずれか１つに記載の抗体、又は実施形態３８に記載の組成物を投与することを含む、方法。
４５． 疾患が、ＴＴＲアミロイドーシスである、実施形態４４に記載の方法。
４６． 家族性アミロイド多発ニューロパチー（ＡＰ）、家族性アミロイド心筋症（ＦＡＣ）、ＡＴＴＲ－ＰＮ及びＡＴＴＲ－ＣＭ、ｈＡＴＴＲ又は野生型ＡＴＴＲ（ｗｔＡＴＴＲ）、老人性全身性アミロイドーシス（ＳＳＡ）、全身性家族性アミロイドーシス、アルツハイマー病を含む軟髄膜／中枢神経系（ＣＮＳ）アミロイドーシス、ＴＴＲ関連眼アミロイドーシス、ＴＴＲ関連腎アミロイドーシス、ＴＴＲ関連高チロキシン血症、手根管症候群を含むＴＴＲ関連靱帯アミロイドーシス、肩腱板断裂及び腰部脊椎管狭窄症、並びに子癇前症から選択される疾患を有する対象を治療する方法であって、方法が、対象に、有効量の、実施形態１～３１及び３７のいずれか１つに記載の抗体、又は実施形態３８に記載の組成物を投与することを含む、方法。
４７． 検出可能な標識を更に含む、実施形態１～３１及び３７のいずれか１つに記載の抗体。
４８． 試料中の単量体トランスサイレチン（ＴＴＲ）を測定する方法であって、方法が、試料を、実施形態１～３１、３７、及び４７のいずれか１つに記載の抗体と接触させることと、試料中のＴＴＲに結合した抗体の量を測定することと、を含む、方法。
４９． 測定することが、試料を二次抗体と接触させ、それによって形成された複合体を測定することを含む、実施形態４８に記載の方法。
５０． ＴＴＲ単量体抗体Ａｂ３及びＡｂ５を使用することを含み、当該抗体のうちの１つを捕捉抗体として使用し、当該抗体のうちの１つを検出抗体として使用する、実施形態４９に記載の方法。
５１． トランスサイレチン（ＴＴＲ）アミロイドーシスに関連する疾患を診断するか、又は抗ＴＴＲ療法による疾患の治療を監視する方法であって、対象からの体液の試料中の単量体ＴＴＲのレベルをアッセイすることを含み、対照と比較した対象の試料中の単量体ＴＴＲの存在又は上昇したレベルが、ＴＴＲアミロイドーシスに関連する疾患の存在を示す、方法。
５２． 単量体ＴＴＲが、実施形態１～３１及び３７のいずれか１つに記載の抗体に結合する、実施形態５１に記載の方法。
５３．
対象からの試料を、トランスサイレチン（ＴＴＲ）アミロイドーシスを有するか、又は有すると疑われる対象からの体液の試料と接触させることと、
試料中の単量体ＴＴＲを検出又は測定することと、を含む、方法。
５４． 接触させるステップが、ＴＴＲ単量体抗体Ａｂ３及びＡｂ５から選択される接触抗体を使用する、実施形態５３に記載の方法。
５５． 検出又は測定するステップが、接触抗体及びＴＴＲによって形成された複合体を、ＴＴＲ単量体抗体Ａｂ３及びＡｂ５から選択される検出抗体と接触させることを含み、接触抗体が、検出抗体とは異なる、実施形態５４に記載の方法。
５６． 試料中の単量体ＴＴＲを検出又は測定することに基づいて、抗ＴＴＲ療法を開始することを更に含む、実施形態５３～５５のいずれか１つに記載の方法。
５７． 試料中の単量体ＴＴＲの測定に基づいて、抗ＴＴＲ療法の用量を調整することを更に含む、実施形態５３～５５のいずれか１つに記載の方法。
５８． 抗ＴＴＲ療法が、対象に、実施形態１～３１及び３７のいずれか１つに記載の抗体、又は実施形態３８に記載の組成物を投与することを含む、実施形態５６又は５７に記載の方法。
５９． 組成物が、（ｉ）薬学的組成物であり、薬学的に許容される担体、又は（ｉｉ）診断用組成物を更に含む、実施形態１～３１及び３７のいずれか１つに記載の抗体を含む、組成物。
６０． 診断用組成物が、免疫ベース又は抗体ベースの診断方法において従来使用される試薬を更に含む、実施形態５９に記載の組成物。
６１． 診断方法が、ＴＴＲ単量体形態を測定する、実施形態５９に記載の組成物。
６２． 診断方法が、Ｑｕａｎｔｅｒｉｘプラットフォームを使用する、実施形態５９に記載の組成物。
６３． 診断方法が、ウェスタンゲルである、実施形態５９に記載の組成物。
６４． 四量体ＴＴＲ及び生理学的、細胞完全長ＴＴＲ上に存在しない、Ｆ８７Ｍ Ｌ１１０Ｍ ＴＴＲから調製された単量体ＴＴＲ上の立体構造エピトープを認識する、単離された抗体。
６５． Ｖ３０Ｍ、Ｄ３８Ａ、及びＶ１２２Ｉのうちのいずれかから選択されるＴＴＲ変異を認識する、単離された抗体であって、抗体が、配列番号１４５～１４７のうちのいずれかに記載のアミノ酸配列を含むＴＴＲに特異的に結合する、抗体。
６６． ＴＴＲ変異が、Ｄ３８Ａ及び／又はＶ１２２Ｉであり、抗体が、配列番号１４６及び／又は１４７に記載のアミノ酸配列を含むＴＴＲに特異的に結合する、実施形態６５に記載の抗体。
６７． ＶＨドメインが、図６Ａ～６Ｂ、７、１４、及び１８～２１（配列番号８１～１４２）に記載の配列のうちのいずれかと少なくとも８５％の配列同一性を含む、実施形態１６に記載の抗体。
６８． ＶＬドメインが、図６Ａ～６Ｂ、７、１４、及び１８～２１（配列番号８１～１４２）に記載の配列のうちのいずれかと少なくとも８５％の配列同一性を含む、実施形態１６に記載の抗体。
６９． 抗体が、配列番号８０及び１４３～１４７及び１４９～１５２のうちのいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含むＴＴＲに特異的に結合する、実施形態１～３１及び３７のいずれか１つに記載の抗体。
７０． 抗体が、配列番号８０に記載のアミノ酸配列を含むＴＴＲに特異的に結合する、実施形態６９に記載の抗体。
７１． ヒトトランスサイレチン（ＴＴＲ）の単量体形態に特異的に結合する抗体を産生する細胞を産生する方法であって、方法が、
（ａ）ＴＴＲの単量体形態で非ヒト動物を免疫化することと、
（ｂ）ヒトＴＴＲの単量体形態に特異的に結合するが、野生型四量体ＴＴＲ又はＴＴＲの二量体若しくは四量体形態には結合しない抗体について、動物からの血液又は組織をスクリーニングすることと、
（ｃ）ヒトＴＴＲの単量体形態に特異的に結合するが、野生型四量体ＴＴＲ又はＴＴＲの二量体若しくは四量体形態には結合しない抗体を産生する動物からの細胞を特定し、単離することと、を含む、方法。
７２． 抗体を産生する細胞が、動物の脾臓組織、リンパ節又は骨髄の除去によって回収される、実施形態７１に記載の方法。
７３． 抗体を産生する細胞が、Ｂ細胞、Ｔ細胞、又は幹細胞である、実施形態７１又は７２に記載の方法。
７４． 動物が、マウス、ラット、モルモット、又はウサギである、実施形態７１～７３のいずれか１つに記載の方法。
７５． 単離された細胞を不死化することを更に含む、実施形態７１～７４のいずれか１つに記載の方法。
７６． 骨髄腫細胞への細胞の体細胞融合によって、ハイブリドーマ細胞を産生することを含む、実施形態７５に記載の方法。
７７． 抗体を産生する細胞を培養することを更に含む、実施形態７１～７６のいずれか１つに記載の方法。
７８． 抗体が、配列番号８０、１４３、及び１４４のうちのいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含むＴＴＲに特異的に結合する、実施形態７１～７７のいずれか１つに記載の方法。
７９． 抗体が、ＧＰＴＧＴＧＥＳＫＣＰＬ（配列番号６５）、ＭＶＫＶＬＤＡＶＲＧＳＰＡ（配列番号６６）、ＰＦＨＥＨＡＥＶＶＦＴＡ（配列番号６７）、ＥＨＡＥＶＶＦＴＡ（配列番号６８）、ＹＴＩＡＡＬＬＳ（配列番号６９）、ＬＳＰＹＳＹ（配列番号７０）、ＳＹＳＴＴＡＶＶ（配列番号７１）、ＹＴＩＡＡＬＬＳＰＹＳＹＳＴＴＡＶＶ（配列番号７２）、ＬＧＩＳＰＭＨＥＨＡＥ（配列番号７３）、及びＲＲＹＴＩＡＡＭＬＳＰＹＳ（配列番号７４）のうちのいずれか１つから選択される配列からなるアミノ酸配列を有するペプチドに結合しない、実施形態７１～７８のいずれか１つに記載の方法。
８０． 動物を免疫化するために使用されるヒトＴＴＲの単量体形態が、
配列番号８０に記載のアミノ酸配列を含むＴＴＲ Ｆ８７Ｍ Ｌ１１０Ｍ、
配列番号１４３に記載のアミノ酸配列を含むＴＴＲ Ｆ８７Ｍ、及び
配列番号１４４に記載のアミノ酸配列を含むＴＴＲ Ｌ１１０Ｍのうちのいずれか１つである、実施形態７１～７９のいずれか１つに記載の方法。
８１． 実施形態７１～８０のいずれか１つに記載の方法によって産生された、抗体。
８２． ヒトトランスサイレチン（ＴＴＲ）の単量体形態に特異的に結合するモノクローナル抗体を産生するための方法であって、当該方法が、
（ａ）非ヒト動物内に、
配列番号８０に記載のアミノ酸配列を含むＴＴＲ Ｆ８７Ｍ Ｌ１１０Ｍ、
配列番号１４３に記載のアミノ酸配列を含むＴＴＲ Ｆ８７Ｍ、及び
配列番号１４４に記載のアミノ酸配列を含むＴＴＲ Ｌ１１０Ｍのうちのいずれか１つのうちの少なくとも１つを導入することと、
（ｂ）動物から抗体を産生する細胞を回収し、これらの細胞を単一細胞懸濁液にすることと、
（ｃ）単一細胞懸濁液から不死化細胞株を生成することと、
（ｄ）ヒトＴＴＲの単量体形態に特異的に結合することを有する抗体の存在について、不死化細胞株の上清をスクリーニングすることと、
（ｅ）モノクローナル抗体として、ヒトＴＴＲの単量体形態に特異的に結合する抗体を選択することと、を含む、方法。
８３． 当該動物が、マウス、ラット、モルモット、又はウサギである、実施形態８２に記載の方法。
８４． 抗体を産生する細胞が、Ｂ細胞、Ｔ細胞、又は幹細胞である、実施形態８２又は８３に記載の方法。
８５． 抗体を産生する細胞が、動物の脾臓組織、リンパ節又は骨髄の除去によって回収される、実施形態８２～８４のいずれか１つに記載の方法。
８６． 不死化細胞株が、骨髄腫細胞への単一細胞懸濁液中の細胞の体細胞融合によって産生されたハイブリドーマ細胞株である、実施形態８２～８５のいずれか１つに記載の方法。
８７． 実施形態８２～８６のいずれか１つに記載の方法によって産生された、抗体。
８８．
（ａ）
（ｉ）配列番号８０及び１４３～１４７及び１４９～１５２から選択されるアミノ酸アミノ酸配列を有する１つ以上の単量体ＴＴＲペプチドに結合し、
（ｉｉ）配列番号１５３のアミノ酸配列を有する四量体ヒトＴＴＲタンパク質に対する結合親和性を実質的に示さない、分子ペプチド又はポリペプチドについての分子のライブラリーをアッセイすることと、
（ｂ）（ｉ）及び（ｉｉ）の結合特性を示す分子を特定することと、
（ｃ）（ｂ）で特定された分子を単離するか、又は当該分子を発現する細胞を単離することと、を含む、方法。
８９． （ｉ）及び（ｉｉ）の結合特性を示し、かつ（ｉｉｉ）配列番号６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、又は７４からなるアミノ酸配列を有するペプチドに結合しない、分子を特定するためにアッセイすることを更に含む、実施形態８８に記載の方法。
９０． 分子が、抗体又は抗体の抗原結合断片を含む、実施形態８８又は８９に記載の方法。
９１． 単離するステップが、（ｉ）及び（ｉｉ）並びに任意選択で（ｉｉｉ）の結合特性を示す抗体を産生する細胞を単離することを含む、実施形態９０に記載の方法。
９２． アッセイするステップの前に、１つ以上の単量体ＴＴＲペプチドで非ヒト哺乳動物を免疫化するステップを含み、アッセイすることが、哺乳動物によって産生された抗体分子をスクリーニングすることを含む、実施形態８８～９１のいずれか１つに記載の方法。
９３．
抗体の少なくとも相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を決定することと、
当該ＣＤＲの当該アミノ酸配列を含むヒト化抗体配列を生成することと、
ヒト化抗体をコードするヌクレオチド配列を含む核酸を合成することと、を更に含む、実施形態８８～９２のいずれか１つに記載の方法。
９４． ヒト化抗体配列をコードする核酸、又はヒト化抗体配列の抗原結合断片をコードする核酸を細胞にトランスフェクトすることを更に含む、実施形態９３に記載の方法。
９５． 抗体又は抗原結合断片を発現する条件下で細胞を培養することを更に含む、実施形態９４に記載の方法。
９６． （ｉ）及び（ｉｉ）並びに任意選択で（ｉｉｉ）の結合特性を有すると特定された分子のコピーを合成することを更に含む、実施形態８８又は８９に記載の方法。
９７． 実施形態９５又は９６に記載のプロセスによって産生された、単離された分子。
９８． 実施形態９７に記載の単離された分子と、薬学的に許容される担体と、を含む、薬学的組成物。

【0320】

【表14-1】

【表14-2】

【表14-3】

【表14-4】

【表14-5】

【表14-6】

【表14-7】

【表14-8】

【表14-9】

【表14-10】

【表14-11】

【表14-12】

【図1】

【図2】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図4A】

【図4B】

【図4C】

【図5】

【図6-1】

【図6-2】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【配列表】

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【国際調査報告】