特表 2024-545074 癌の処置における使用のための相乗効果のある組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-12-05

(54)【発明の名称】癌の処置における使用のための相乗効果のある組成物

(51)【国際特許分類】

   A61K 45/06 20060101AFI20241128BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20241128BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20241128BHJP

   A61K 31/519 20060101ALI20241128BHJP

   A61K 31/5395 20060101ALI20241128BHJP

   A61K 31/5377 20060101ALI20241128BHJP

   A61K 31/4375 20060101ALI20241128BHJP

   A61K 31/50 20060101ALI20241128BHJP

   A61K 31/4725 20060101ALI20241128BHJP

   A61K 31/436 20060101ALI20241128BHJP

   A61K 31/506 20060101ALI20241128BHJP

   A61K 31/404 20060101ALI20241128BHJP

【ＦＩ】

A61K45/06

A61P35/00

A61P43/00 121

A61P43/00 111

A61K31/519

A61K31/5395

A61K31/5377

A61K31/4375

A61K31/50

A61K31/4725

A61K31/436

A61K31/506

A61K31/404

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024533796

(86)(22)【出願日】2022-12-07

(85)【翻訳文提出日】2024-07-19

(86)【国際出願番号】 FI2022050813

(87)【国際公開番号】W WO2023105119

(87)【国際公開日】2023-06-15

(31)【優先権主張番号】20216252

(32)【優先日】2021-12-07

(33)【優先権主張国・地域又は機関】FI

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】524212073

【氏名又は名称】サーター セラピューティクス オーワイ

(74)【代理人】

【識別番号】100114775

【弁理士】

【氏名又は名称】高岡 亮一

(74)【代理人】

【識別番号】100121511

【弁理士】

【氏名又は名称】小田 直

(74)【代理人】

【識別番号】100202751

【弁理士】

【氏名又は名称】岩堀 明代

(74)【代理人】

【識別番号】100208580

【弁理士】

【氏名又は名称】三好 玲奈

(74)【代理人】

【識別番号】100191086

【弁理士】

【氏名又は名称】高橋 香元

(72)【発明者】

【氏名】シト，ハリ

(72)【発明者】

【氏名】トイヴァネン，キルシ

(72)【発明者】

【氏名】ベーリング，トム

【テーマコード（参考）】

4C084

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C084AA20

4C084MA52

4C084MA55

4C084NA05

4C084ZB261

4C084ZC202

4C084ZC412

4C084ZC751

4C086AA01

4C086AA02

4C086BC13

4C086BC41

4C086BC42

4C086BC72

4C086BC73

4C086BC82

4C086CB05

4C086CB09

4C086CB22

4C086GA07

4C086GA11

4C086MA02

4C086MA04

4C086MA52

4C086MA55

4C086NA05

4C086ZB26

4C086ZC20

4C086ZC41

4C086ZC75

(57)【要約】

本発明は、癌の処置における使用のための、Ｂｃｌ－２ファミリータンパク質の阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）阻害剤、ＤＮＡ依存性タンパク質キナーゼ（ＤＮＡ－ＰＫ）阻害剤、インテグリンアルファ２タンパク質の阻害剤、ＮＥＤＤ８活性化酵素（ＮＡＥ）阻害剤およびＰＡＫ４阻害剤からなる群より選択される阻害剤化合物との相乗効果のある組み合わせでホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物を含む組成物に関する。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

癌の処置における使用のための、Ｂｃｌ－２ファミリータンパク質の阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）阻害剤、ＤＮＡ依存性タンパク質キナーゼ（ＤＮＡ－ＰＫ）阻害剤、インテグリンアルファ２タンパク質の阻害剤、ＮＥＤＤ８活性化酵素（ＮＡＥ）阻害剤、ＰＡＫ４阻害剤およびそれらの薬学的に許容される塩からなる群より選択される阻害剤化合物との相乗効果のある組み合わせにおける、ホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物またはその薬学的に許容される塩。

【請求項2】

アナグレリド、３－ヒドロキシアナグレリド、ナウクレフィン、ＢＲＤ９５００、ＤＮＭＤＰ、（Ｒ）－ＤＮＭＤＰ、およびそれらの薬学的に許容される塩からなる群より選択される、請求項１に記載の使用のためのホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物。

【請求項3】

前記ホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物が、アナグレリド、３－ヒドロキシアナグレリド、ＢＲＤ９５００、ＢＡＹ２６６６６０５、またはその薬学的に許容される塩である、請求項２に記載の使用のためのホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物。

【請求項4】

前記Ｂｃｌ－２ファミリータンパク質の阻害剤が、Ａ－１１５５４６３、ＡＢＴ－２６３（ナビトクラックス）、Ａ－１３３１８５２、ＡＴ－１０１、ＷＥＨＩ－５３９、ガンボギン酸、Ａ－１２１０４７７、（Ｓ）－ゴシポール酢酸、アポゴシポール、ＡＢＴ－７３７、およびその薬学的に許容される塩からなる群より選択される、請求項１から３のいずれか一項に記載の使用のためのホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物。

【請求項5】

前記ホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物が、アナグレリド、３－ヒドロキシアナグレリド、ＢＲＤ９５００、ＢＡＹ２６６６６０５、またはそれらの薬学的に許容される塩であり、前記Ｂｃｌ－２ファミリータンパク質の阻害剤が、Ａ－１１５５４６３、ＡＢＴ－２６３（ナビトクラックス）、またはそれらの薬学的に許容される塩である、請求項２に記載の使用のためのホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物。

【請求項6】

前記ｍＴＯＲ阻害剤が、ラパマイシン、シロリムス、エベロリムス、リダホロリムス、テムシロリムス、ＣＣ－１１５、トリン１、トリン２、およびそれらの薬学的に許容される塩からなる群より選択される、請求項１から３のいずれか一項に記載の使用のためのホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物。

【請求項7】

前記ホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物が、アナグレリド、３－ヒドロキシアナグレリド、ＢＲＤ９５００、ＢＡＹ２６６６６０５、またはそれらの薬学的に許容される塩であり、前記ｍＴＯＲ阻害剤が、リダホロリムス、テムシロリムス、シロリムス、エベロリムス、またはそれらの薬学的に許容される塩である、請求項６に記載の使用のためのホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物。

【請求項8】

前記ヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）阻害剤が、ボリノスタット、エンチノスタット、パノビノスタット、モセチノスタット、ベリノスタット、リコリノスタット、ロミデプシン、ジビノスタット、ダシノスタット、キシノスタット、プラシノスタット、レスミノスタット、ドロキシノスタット、アベキシノスタット、ＲＧＦＰ９６６、ＡＲ－４２、ＰＣＩ３４０５１、トリコスタチンＡ、ＳＢ９３９、ＣＩ９９４、ＣＵＤＣ－９０７、ツバシン、チダミド、ＲＧ２８３３、Ｍ３４４、ＭＣ１５６８、ツバスタチンＡ、スクリプタイド、バルプロ酸、フェニル酪酸ナトリウム、タスキニモド、ケベトリン、ＨＰＯＢ、４ＳＣ－２０２、ＴＭＰ２６９、ＣＡＹ１０６０３、ＢＲＤ７３９５４、ＢＧ４５、ＬＭＫ－２３５、ネクスツラスタットＡ、ＣＧ２００７４５、ＣＨＲ２８４５、ＣＨＲ３９９６、およびそれらの薬学的に許容される塩からなる群より選択される、請求項１から３のいずれか一項に記載の使用のためのホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物。

【請求項9】

前記ホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物が、アナグレリド、３－ヒドロキシアナグレリド、ＢＲＤ９５００、ＢＡＹ２６６６６０５、またはそれらの薬学的に許容される塩であり、前記ＨＤＡＣ阻害剤が、キシノスタット、またはその薬学的に許容される塩である、請求項８に記載の使用のためのホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物。

【請求項10】

前記ＤＮＡ依存性タンパク質キナーゼ（ＤＮＡ－ＰＫ）阻害剤が、ＮＵ７４４１、ＮＵ７０２６、ＫＵ－００６０６４８、ＬＴＵＲＭ３４、ＣＣ－１１５、ＰＩＫ－９０、ウォルトマンニン、ＬＹ３０２３４１４、Ｍ３８１４、ＳＦ２５２３、ｃｏｍｐｏｕｎｄ ４０１、およびそれらの薬学的に許容される塩からなる群より選択される、請求項１から３のいずれか一項に記載の使用のためのホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物。

【請求項11】

前記ホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物が、アナグレリド、３－ヒドロキシアナグレリド、ＢＡＹ２６６６６０５、またはそれらの薬学的に許容される塩であり、前記ＤＮＡ－ＰＫ阻害剤が、ＣＣ－１１５、またはその薬学的に許容される塩である、請求項１０に記載の使用のためのホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物。

【請求項12】

前記インテグリンアルファ２タンパク質の阻害剤が、Ｅ７８２０またはその薬学的に許容される塩である、請求項１から３のいずれか一項に記載の使用のためのホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物。

【請求項13】

前記ホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物が、アナグレリド、３－ヒドロキシアナグレリド、ＢＲＤ９５００、ＢＡＹ２６６６６０５、またはそれらの薬学的に許容される塩であり、前記インテグリンアルファ２タンパク質の阻害剤が、Ｅ７８２０またはその薬学的に許容される塩である、請求項１２に記載の使用のためのホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物。

【請求項14】

前記ＮＡＥ阻害剤が、ペボネディスタット（ＭＬＮ４９２４）またはその薬学的に許容される塩である、請求項１から３のいずれか一項に記載の使用のためのホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物。

【請求項15】

前記ホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物が、アナグレリド、３－ヒドロキシアナグレリド、ＢＲＤ９５００、ＢＡＹ２６６６６０５、またはそれらの薬学的に許容される塩であり、前記ＮＡＥ阻害剤が、ペボネディスタット（ＭＬＮ４９２４）またはその薬学的に許容される塩である、請求項１４に記載の使用のためのホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物。

【請求項16】

前記ＰＡＫ４阻害剤が、ＫＰＴ－９２７４、ＰＦ－０３７５８３０９、ＩＰＡ－３、ＦＲＡＸ１Ｑ３６、ＬＣＨ－７７４９９４４、グラウカンビノン（glaucambinone）、ＫＹ－０４０３１、ＫＹ－０４０４５、Ｉｎｋａ１、ＧＬ－１１９６、ＧＮＥ－２８６１、およびそれらの薬学的に許容される塩からなる群より選択される、請求項１から３のいずれか一項に記載の使用のためのホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物。

【請求項17】

前記ホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物が、アナグレリド、３－ヒドロキシアナグレリド、ＢＲＤ９５００、ＢＡＹ２６６６６０５、またはそれらの薬学的に許容される塩であり、前記ＰＡＫ４阻害剤が、ＰＦ－０３７５８３０９またはその薬学的に許容される塩である、請求項１６に記載の使用のためのホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物。

【請求項18】

前記ホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物の第１の投与量および前記阻害剤化合物の第１の投与量が、対象に同時に投与される、請求項１から１７のいずれか一項に記載の使用のためのホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物。

【請求項19】

前記ホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物の第１の投与量および前記阻害剤化合物の第１の投与量が、連続的に、好ましくは２４時間以内に投与される、請求項１から１７のいずれか一項に記載の使用のためのホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物。

【請求項20】

前記ホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物および前記阻害剤化合物が、１つの医薬組成物または別個の医薬組成物に調剤され、前記組成物が、少なくとも薬学的に許容される緩衝液、担体、防腐剤またはアジュバントを含む、請求項１から１９のいずれか一項に記載の使用のためのホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物。

【請求項21】

前記医薬組成物が、持続放出用、遅延放出用、もしくは徐放用に調剤されるか、または前記医薬組成物が、持続放出製剤と即時放出製剤とのブレンドである、請求項２０に記載の使用のためのホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物。

【請求項22】

前記ホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物が、アナグレリド、ＢＡＹ２６６６６０５、またはそれらの薬学的に許容される塩である、請求項１から２１のいずれか一項に記載の使用のためのホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物。

【請求項23】

前記薬学的に許容される塩が、アナグレリド塩酸塩である、請求項２２に記載の使用のためのホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物。

【請求項24】

前記ホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物が、３－ヒドロキシアナグレリドまたはその薬学的に許容される塩である、請求項１から２１のいずれか一項に記載の使用のためのホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物。

【請求項25】

前記ホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物が、ＤＮＭＤＰ、ＢＲＤ９５００、またはそれらの薬学的に許容される塩である、請求項１から２１のいずれか一項に記載の使用のためのホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物。

【請求項26】

前記ホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物が、ＢＡＹ２６６６６０５である、請求項１から２１のいずれか一項に記載の使用のためのホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物。

【請求項27】

前記処置される癌が、胞巣状軟部肉腫、線維肉腫、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、脂肪肉腫、平滑筋肉腫、悪性線維性組織球腫（fibro histiocytoma）、悪性末梢神経鞘腫瘍、横紋筋肉腫（rhabdomyosaroma）、粘液線維肉腫、未分化および分類不能の肉腫、ユーイング肉腫、ならびに滑膜肉腫からなる群より選択される軟部組織肉腫である、請求項１から２６のいずれか一項に記載の使用のためのホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物。

【請求項28】

前記処置される癌が、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）または脂肪肉腫である、請求項２７に記載の使用のためのホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物。

【請求項29】

前記処置される癌が、ＰＤＥ３Ａモジュレーターに応答性である癌として事前に選択された癌であり、前記事前選択が、参照と比較して少なくともＰＤＥ３Ａおよびシュラーフェン１２（ＳＬＦＮ１２）ポリペプチドバイオマーカーの発現を検出することにより実行される、請求項１から２６のいずれか一項に記載の使用のためのホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物。

【請求項30】

ＰＤＥ３Ａモジュレーターに応答性があるとして選択される前記癌が、骨癌、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、子宮内膜癌、ＧＩＳＴ、頭頸部癌、造血癌、腎臓癌、脂肪肉腫、平滑筋肉腫、肝臓癌、肺癌、リンパ腫、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、軟部組織肉腫、甲状腺癌、または尿路癌である、請求項２９に記載の使用のためのホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本開示の分野は、癌生物学に関する。本開示はさらに、癌の処置における使用のための多剤併用に関する。

【背景技術】

【0002】

２０００万近くの新規癌症例が診断され、２０２０年には世界各地で１０００万人の癌患者が死亡した。世界中の癌発生率は、２０４０年には２８４０万人まで増加すると推定されている。しかし、過去数十年の間に癌治療は改善されているが、多くの癌は、現在の治療法に対して反応しないか、耐性を持つようになっている。この課題に対処するための１つのアプローチは、癌細胞の生存、増殖または普及にとって重要な、癌を促進するメカニズムを標的とする個別化医療アプローチを開発することである。例えば、ＨＥＲ２特異性抗体または抗体薬物複合体を用いた過剰発現ＨＥＲ２受容体に対する標的化は、転移性の乳癌での結果を顕著に改善した。同様に、肺癌における突然変異型ＥＧＦＲチロシンキナーゼ受容体または慢性骨髄性白血病におけるＡＢＲ－ＡＢＬ１融合遺伝子を標的化する阻害剤などの低分子阻害剤は、有効な癌治療である。

【0003】

ホスホジエステラーゼ３（ＰＤＥ３）タンパク質は、癌において有望な新規治療標的である（国際公開第２０１５０５５８９８号，Ｐｕｌｋｋａ Ｏ，ｅｔ ａｌ．２０１９）．ＰＤＥ３は、細胞内で第２のメッセンジャーｃＡＭＰおよびｃＧＭＰのＡＭＰおよびＧＭＰへの加水分解を触媒する酵素である。健康な組織では、ＰＤＥ３Ａアイソフォームは、一般的に、心筋細胞、血管平滑筋、血小板、卵母細胞および胎盤で発現する。ＰＤＥ３Ｂ発現は、肝細胞、脂肪細胞および血管平滑筋で一般的である。アナグレリド、ミルリノンおよびシロスタゾールなどのＰＤＥ３酵素阻害剤は、末梢血管疾患において本態性血小板血症、心不全および間欠性跛行を処置するために使用される。

【0004】

ＰＤＥ３Ａの発現は、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）や他の癌の種類で頻繁に検出される。アナグレリド、ナウクレフィン、１７－ベータ－エストラジオール関連ホルモン、ＢＡＹ２６６６６０５としても既知の（６Ｓ）－５－［４’－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）ビフェニル－４－イル］－６－メチル－３，６－ジヒドロ－２Ｈ－１，３，４－オキサジアジン－２－オン、およびＤＮＭＤＰとしても既知の６－（４－（ジエチルアミノ）－３－ニトロフェニル）－５－メチル－４，５－ジヒドロピリダジン－３（２Ｈ）－オンなどの標的特異的化合物を用いるＰＤＥ３発現癌細胞の処置は、インビトロおよびインビボで、腫瘍細胞を死滅させ、その成長および増殖を低減する（国際公開第２０１５０５５８９８号，Ｐｕｌｋｋａ Ｏ，ｅｔ ａｌ．２０１９，Ｎａｚｉｒ Ｍ，ｅｔ ａｌ．２０１７，ｄｅ Ｗａａｌ Ｌ，ｅｔ ａｌ．２０１６）。これらの分子のＰＤＥ３Ａへの結合は、ＰＤＥ３Ａとシュラーフェン１２（ＳＬＦＮ１２）タンパク質との間の相互作用を誘導し、細胞成長の抑制または細胞死をもたらす。ＳＬＦＮ１２のＰＤＥ３Ａとの相互作用は、通常、細胞内のターンオーバーが速いＳＬＦＮ１２を安定化し、ＳＬＦＮ１２のリボソームへの結合が高まり、抗アポトーシスタンパク質であるＢＣＬ２およびＭＣＬ１のタンパク質翻訳の中断につながる。さらに、ＴＮＦ－アルファ、ＤＲ４、ＤＲ５、Ｂｃｌ－２、Ｂｃｌ－Ｘｌ、サイクリンＤ１およびｐ２１などの他の細胞周期またはアポトーシス制御遺伝子の発現は、アナグレリド処置後に変化する。さらに、ＰＤＥ３ＡとのＳＬＦＮ１２相互作用により、細胞におけるＤＮＭＤＰ応答に必要なＳＬＦＮ１２のＲＮａｓｅ活性が高まる。癌細胞におけるＰＤＥ３Ｂの発現は、薬物標的としてのＰＤＥ３Ａを補完する（Ｐｕｌｋｋａ Ｏ，ｅｔ ａｌ．２０１９，Ｗｕ Ｘ，ｅｔ ａｌ．２０２０）。

【0005】

癌細胞におけるＰＤＥ３Ａの遺伝子およびタンパク質発現量は、ＰＤＥ３Ａ調節薬の抗癌効果と正に相関する（Ｗｕ Ｘ，ｅｔ ａｌ．２０２０）。欧州特許第３４１１０３７号明細書は、癌の処置および癌の診断におけるＰＤＥ３Ａモジュレーターの使用を開示する。しかし、ＰＤＥ３Ａ発現が低いと、ＰＤＥ３Ａ特異的抗癌治療の有効性が低下し、そのため、新規戦略は依然として必要である。

【0006】

ＰＤＥ３Ａ発現癌細胞株は、インターフェロン処置によりアナグレリドに感作される可能性がある。ＩＦＮ－αおよびＩＦＮ－γは、細胞でＳＬＦＮ１２発現を誘導し、そのため、ＰＤＥ３Ａ発現細胞でＰＤＥ３Ａ－ＳＬＦＮ１２複合体を通じてアナグレリド誘導細胞死を可能にする。さらに、アナグレリド処置は、細胞で、細胞死シグナル伝達経路遺伝子であるＴＮＦ－α、ならびに細胞死受容体であるＤＲ４およびＤＲ５の発現を高める。ＤＲ４およびＤＲ５リガンドＴＮＦ－αおよびＴＲＡＩＬを用いるＢｅｌ７４０４細胞の処置は、アナグレリドとの相乗効果を示す（Ａｎ Ｒ，ｅｔ ａｌ．２０１９）。したがって、併用療法は、癌治療を改善するための道を提示するかもしれない。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0007】

【特許文献1】欧州特許第３４１１０３７号明細書

【特許文献2】国際公開第２０１５０５５８９８号

【非特許文献】

【0008】

【非特許文献1】An R, Liu J, He J, Wang F, Zhang Q, Yu Q. PDE3A inhibitor anagrelide activates death signaling pathway genes and synergizes with cell death-inducing cytokines to selectively inhibit cancer cell growth. Am J Cancer Res 2019, 9; 1905-1921.

【非特許文献2】de Waal L, Lewis TA, Rees MG, Tsherniak A, Wu X, Choi PS, Gechijian L, Hartigan C, Faloon PW, Hickey MJ, Tolliday N, Carr SA, Clemons PA, Munoz B, Wagner BK, Shamji AF, Koehler AN, Schenone M, Burgin AB, Schreiber SL, Greulich H, Meyerson M. Identification of cancer-cytotoxic modulators of PDE3A by predictive chemogenomics. Nat Chem Biol 2016, 12; 102-8.

【非特許文献3】Garvie CW, Wu X, Papanastasiou M, Lee S, Fuller J, Schnitzler GR, Horner SW, Baker A, Zhang T, Mullahoo JP, Westlake L, Hoyt SH, Toetzl M, Ranaghan MJ, de Waal L, McGaunn J, Kaplan B, Piccioni F, Yang X, Lange M, Tersteegen A, Raymond D, Lewis TA, Carr SA, Cherniack AD, Lemke CT, Meyerson M, Greulich H. Structure of PDE3A-SLFN12 complex reveals requirements for activation of SLFN12 RNase. Nat Commun 2021, 12; 4375.

【非特許文献4】Ianevski A, Giri AK, Aittokallio T. SynergyFinder 2.0: visual analytics of multi-drug combination synergies. Nucleic Acids Res 2020, 48(W1); W488-W493.

【非特許文献5】Lewis TA, de Waal L, Wu X, Youngsaye W, Wengner A, Kopitz C, Lange M, Gradl S, Ellermann M, Lienau P, Schreiber SL, Greulich H, and Meyerson M, Optimization of PDE3A Modulators for SLFN12-Dependent Cancer Cell Killing, ACS Med. Chem. Lett. 2019, 10, 1537-1542.

【非特許文献6】Nazir M, Senkowski W, Nyberg F, Blom K, Edqvist PH, Jarvius M, Andersson C, Gustafsson MG, Nygren P, Larsson R, Fryknas M. Targeting tumor cells based on Phosphodiesterase 3A expression. Exp Cell Res 2017, 36; 308-315.

【非特許文献7】Pulkka OP, Gebreyohannes YK, Wozniak A, Mpindi JP, Tynninen O, Icay K, Cervera A, Keskitalo S, Murumagi A, Kulesskiy E, Laaksonen M, Wennerberg K, Varjosalo M, Laakkonen P, Lehtonen R, Hautaniemi S, Kallioniemi O, Scoffs P, Sihto H, Joensuu H. Anagrelide for Gastrointestinal Stromal Tumor. Clin Cancer Res 2019, 25; 1676-1687.

【非特許文献8】Wu X, Schnitzler GR, Gao GF, Diamond B, Baker AR, Kaplan B, Williamson K, Westlake L, Lorrey S, Lewis TA, Garvie CW, Lange M, Hayat S, Seidel H, Doench J, Cherniack AD, Kopitz C, Meyerson M, Greulich H. Mechanistic insights into cancer cell killing through interaction of phosphodiesterase 3A and schlafen family member 12. J Biol Chem 2020, 295; 3431-3446.

【発明の概要】

【0009】

本発明は、独立請求項の特徴により定義される。いくらかの特定の実施形態は、従属請求項において定義される。

【0010】

以下で説明するように、本発明は、癌の処置における使用のための、ホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーターと特異的タンパク質阻害剤との相乗効果のある組み合わせを開示する。

【0011】

したがって、本発明は、癌の処置における使用のための、Ｂｃｌ－２ファミリータンパク質の阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）阻害剤、ＤＮＡ依存性タンパク質キナーゼ（ＤＮＡ－ＰＫ）阻害剤、インテグリンアルファ２タンパク質の阻害剤、ＮＥＤＤ８活性化酵素（ＮＡＥ）阻害剤、ＰＡＫ４阻害剤およびそれらの薬学的に許容される塩からなる群より選択される阻害剤化合物との相乗効果のある組み合わせにおける、ホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。

【図面の簡単な説明】

【0012】

【図1】図１は、細胞株の特性評価を示す。Ａ）細胞株でのＰＤＥ３Ａ、ＳＬＦＮ１２およびアクチンの発現を、ウェスタンブロットにより分析した。Ｂ）細胞株でのＰＤＥ３Ａの免疫組織化学染色により、ＧＩＳＴ８８２、ＳＡ４およびＧＯＴ３におけるＰＤＥ３Ａの発現を確認した。Ｃ）アナグレリドについてのＩＣ_５０値を、３種のアナグレリド感受性細胞株において定義した。

【図2】ＰＤＥ３特異的酵素阻害剤であるシロスタゾールは、Ｂｃｌ－ファミリー阻害剤Ａ１１５５４６３との相乗効果を示さない。

【図3】Ａ）ＧＩＳＴ８８２、Ｂ）ＳＡ４およびＣ）ＧＯＴ３細胞株における、アナグレリド単独およびＢｃｌ－ファミリー阻害剤Ａ１１５５４６３との組み合わせの有効性。ＤＭＳＯ処置細胞のアッセイは、処置の陰性対照群を表す。

【図4】Ａ）ＧＩＳＴ８８２、Ｂ）ＳＡ４、およびＣ）ＧＯＴ３細胞株における、アナグレリド単独およびＢｃｌ－ファミリー阻害剤ナビトクラックスとの組み合わせの有効性。ＤＭＳＯ処置細胞のアッセイは、処置の陰性対照群を表す。

【図5】Ａ）ＧＩＳＴ８８２、Ｂ）ＳＡ４、およびＣ）ＧＯＴ３細胞株における、３－ヒドロキシアナグレリド単独およびＢｃｌ－ファミリー阻害剤Ａ１１５５４６３との組み合わせの有効性。ＤＭＳＯ処置細胞のアッセイは、処置の陰性対照群を表す。

【図6】Ａ）ＧＩＳＴ８８２、Ｂ）ＳＡ４、およびＣ）ＧＯＴ３細胞株における、３－ヒドロキシアナグレリド単独およびＢｃｌ－ファミリー阻害剤ナビトクラックスとの組み合わせの有効性。ＤＭＳＯ処置細胞のアッセイは、処置の陰性対照群を表す。

【図7】Ａ）ＧＩＳＴ８８２、Ｂ）ＳＡ４、およびＣ）ＧＯＴ３細胞株における、ＤＭＮＤＰ単独およびＢｃｌ－ファミリー阻害剤Ａ１１５５４６３との組み合わせの有効性。ＤＭＳＯ処置細胞のアッセイは、処置の陰性対照群を表す。

【図8】Ａ）ＧＩＳＴ８８２、Ｂ）ＳＡ４、およびＣ）ＧＯＴ３細胞株における、ＤＮＭＤＰ単独およびＢｃｌ－ファミリー阻害剤ナビトクラックスとの組み合わせの有効性。ＤＭＳＯ処置細胞のアッセイは、処置の陰性対照群を表す。

【発明を実施するための形態】

【0013】

本明細書で使用されるように、用語「対象」、「個体」、「宿主」、および「患者」は、本明細書では交換可能に使用され、類人猿、ヒト、鳥類、ネコ科、イヌ科、ウマ科、げっ歯類、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ類、哺乳類の農耕動物、哺乳類の変種動物、および哺乳類のペットを含むがこれらに限定されない、本明細書で教示されるような１つまたは複数の代表的な化合物で処置される動物を指す。種々の実施形態のための適切な対象は、本明細書に記載の１つまたは複数の代表的な化合物の投与によって好転することができる、処置することができる、または予防することができる疾患があると疑われる、そのような疾患があると診断されている、またはそのような疾患を発症するリスクがある、ヒトを含む任意の動物であり得る。

【0014】

本明細書で使用されるように、用語「処置」または「処置すること」は、完全な治癒だけでなく、障害または病理学的状態に関連する症状の予防、改善、または軽減も含む目的のための、対象、例えば、哺乳動物またはヒト対象への本発明の化合物の投与を指す。治療効果は、患者の症状、血液中のバイオマーカー、病変もしくは固形腫瘍のサイズ、転移腫瘍の数および／または患者の生存の長さをモニターすることにより評価することができる。

【0015】

本明細書で使用されるように、本明細書に記載の治療薬、組成物または化合物を対象に「投与すること」または「投与」という用語は、その目的とする機能を実行するために、対象に組成物または化合物を導入する、または送達する任意の経路を含む。投与することまたは投与は、経口、鼻腔内、非経口（静脈内、筋肉内、腹腔内、もしくは皮下）、直腸、または局所を含む、任意の適切な経路により実行することができる。投与することまたは投与には、自己投与および他人による投与が含まれる。

【0016】

「薬剤」とは、任意の低分子化合物、抗体、核酸、もしくはポリペプチド、またはそれらの断片を意味する。

【0017】

「ホスホジエステラーゼ３Ａ」および「ＰＤＥ３Ａ」とは、国際公開第２０１５０５５８９８号で定義されたタンパク質またはその断片を意味する。

【0018】

「シュラーフェン１２」および「ＳＬＦＮ１２」とは、欧州特許第３４１１０３７号明細書で定義されたタンパク質またはその断片を意味する。

【0019】

本明細書で使用されるように、用語「モジュレーター」は、ポリペプチドに結合し、ポリペプチドの生物学的機能または活性を変更する任意の薬剤を指す。モジュレーターには、ポリペプチドの生物学的機能または活性を低下させるか、除去する薬剤が含まれるがこれらに限定されない。モジュレーターにはさらに、ポリペプチドの他の薬剤への結合を増加または低下する薬剤が含まれるがこれらに限定されない。例えばモジュレーターは、ポリペプチドのポリペプチドへの結合を促進することができる。

【0020】

本発明は、ホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーターが、癌細胞に対してある特定のタンパク質阻害剤との相乗効果を有しているという知見に基づく。本開示は、これらの活性物質の新規の組み合わせを提供する。

【0021】

したがって、本発明は、癌の処置における使用のための、阻害剤化合物との相乗効果のある組み合わせでホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物を含む組成物を提供する。阻害剤は、Ｂｃｌ－２ファミリータンパク質の阻害剤、哺乳類ラパマイシン標的タンパク質（ｍＴＯＲ）阻害剤、ヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）阻害剤、ＤＮＡ依存性タンパク質キナーゼ（ＤＮＡ－ＰＫ）阻害剤、インテグリンアルファ２タンパク質の阻害剤、ＮＥＤＤ８活性化酵素（ＮＡＥ）阻害剤およびｐ２１活性化キナーゼ４（ＰＡＫ４）阻害剤からなる群より選択される。

【0022】

いくらかの実施形態において、前記ホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物は、アナグレリド（ＣＡＳ番号：６８４７５－４２－３）、３－ヒドロキシアナグレリド（ＣＡＳ番号：７３３０４３－４１－９）、ナウクレフィン（ＣＡＳ番号：５７１０３－５１－２）、ＢＲＤ９５００（Ｃａｓ番号：１６３０７６０－７５－６）、ＤＮＭＤＰ（ＣＡＳ番号：３２８１０４－７９－６）、（Ｒ）－ＤＮＭＤＰ、ＢＡＹ２６６６６０５（ＣＡＳ番号：２２７５７７４－６０－０）、およびそれらの薬学的に許容される塩からなる群より選択される。他のホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーターは、欧州特許第３４１１０３７号明細書から、特に欧州特許第３４１１０３７号明細書の化合物１～６として既知である。好ましくは、前記ホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物は、アナグレリド、３－ヒドロキシアナグレリド、ＢＲＤ９５００、ＢＡＹ２６６６６０５、またはその薬学的に許容される塩である。理論により束縛されることを望むことなく、本発明の好ましいホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーターは、癌細胞でＰＤＥ３Ａ－シュラーフェン１２相互作用の形成を誘導する（Ｇａｒｖｉｅ ＧＷ，ｅｔ ａｌ．２０２１；Ｌｅｗｉｓ ＴＡ，ｅｔ ａｌ．，２０１９）。

【0023】

いくらかの実施形態において、相乗効果のある組み合わせは、Ｂｃｌ－２ファミリータンパク質の阻害剤を含む。Ｂｃｌ－２ファミリータンパク質は、ミトコンドリア外膜透過性を決定することにより、アポトーシス促進するか、阻害し、アポトーシスを制御するタンパク質を含む。好ましくは、前記Ｂｃｌ－２ファミリータンパク質は、Ａ－１１５５４６３（ＣＡＳ番号：１２３５０３４－５５－５）、ＡＢＴ－２６３（ナビトクラックス、ＣＡＳ番号：９２３５６４－５１－６）、Ａ－１３３１８５２（ＣＡＳ番号：１４３０８４４－８０－６）、ＡＴ－１０１（ＣＡＳ番号：９０１４１－２２－３）、ＷＥＨＩ－５３９（ＣＡＳ番号：１４３１８６６－３３－９）、ガンボギン酸（ＣＡＳ番号：２７５２－６５－０）、Ａ－１２１０４７７（ＣＡＳ番号：１６６８５５３－２６－１）、（Ｓ）－ゴシポール酢酸（ＣＡＳ番号：１１８９５６１－６６－７）、アポゴシポール（ＣＡＳ番号：４７５－５６－９）およびＡＢＴ－７３７（ＣＡＳ ８５２８０８－０４－９）からなる群より選択される。したがって、一部の相乗効果のある組み合わせでは、前記ホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物は、アナグレリド、３－ヒドロキシアナグレリド、もしくはＢＲＤ９５００、ＢＡＹ２６６６６０５、またはそれらの薬学的に許容される塩であり、Ｂｃｌ－２ファミリータンパク質の阻害剤は、Ａ－１１５５４６３、ＡＢＴ－２６３（ナビトクラックス）、またはそれらの薬学的に許容される塩である。

【0024】

他の実施形態において、相乗効果のある組み合わせは、哺乳類ラパマイシン標的タンパク質（ｍＴＯＲ）阻害剤を含む。ｍＴＯＲは、ラパマイシンの力学的標的またはＦＫ５０６結合タンパク質１２－ラパマイシン関連タンパク質１とも呼ばれる。ｍＴＯＲは、細胞成長、細胞増殖、細胞運動、細胞生存、タンパク質合成、オートファジー、および転写を調節するセリン／トレオニンタンパク質キナーゼとして機能する。好ましくは、ｍＴＯＲ阻害剤は、ラパマイシン（ＣＡＳ番号：５３１２３－８８－９）、シロリムス、エベロリムス（ＣＡＳ番号：１５９３５１－６９－６）、リダホロリムス（ＣＡＳ番号：５７２９２４－５４－０）、テムシロリムス（ＣＡＳ番号：１６２６３５－０４－３）、ＣＣ－１１５（ＣＡＳ番号：１２２８０１３－１５－７）、トリン１（ＣＡＳ番号：１２２２９９８－３６－８）およびトリン２（ＣＡＳ番号：１２２３００１－５１－１）からなる群より選択される。したがって、一部の相乗効果のある組み合わせでは、前記ホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物は、アナグレリド、３－ヒドロキシアナグレリド、ＢＲＤ９５００、ＢＡＹ２６６６６０５、またはそれらの薬学的に許容される塩であり、ｍＴＯＲ阻害剤は、リダホロリムス、テムシロリムス、シロリムス、エベロリムス、またはそれらの薬学的に許容される塩である。

【0025】

他の実施形態において、ヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）阻害剤は、相乗効果のある組み合わせに含まれる。ＨＤＡＣは、ヒストンのε－Ｎ－アセチルリジンアミノ酸からアセチル基を除去する酵素の類である。好ましくは、ＨＤＡＣ阻害剤は、ボリノスタット（ＣＡＳ番号：１４９６４７－７８－９）、エンチノスタット（ＣＡＳ番号：２０９７８３－８０－２）、パノビノスタット（ＣＡＳ番号：４０４９５０－８０－７）、モセチノスタット（ＣＡＳ番号：７２６１６９－７３－９）、ベリノスタット（ＣＡＳ番号：４１４８６４－００－９）、リコリノスタット（ＣＡＳ番号：１３１６２１４－５２－４）、ロミデプシン（ＣＡＳ番号：１２８５１７－０７－７）、ジビノスタット（ＣＡＳ番号：４９７８３３－２７－９）、ダシノスタット（ＣＡＳ番号：４０４９５１－５３－７）、キシノスタット（ＣＡＳ番号：８７５３２０－２９－９）、プラシノスタット（ＣＡＳ番号：９２９０１６－９６－６）、レスミノスタット（ＣＡＳ番号：８６４８１４－８８－０）、ドロキシノスタット（ＣＡＳ番号：９９８７３－４３－５）、アベキシノスタット（ＣＡＳ番号：７８３３５５－６０－２）、ＲＧＦＰ９６６（ＣＡＳ番号：１３９６８４１－５７－８）、ＡＲ－４２（ＣＡＳ番号：９３５８８１－３７－１）、ＰＣＩ３４０５１（ＣＡＳ番号：９５０７６２－９５－５）、トリコスタチンＡ（ＣＡＳ番号：５８８８０－１９－６）、ＳＢ９３９（ＣＡＳ番号：９２９０１６－９６－６）、ＣＩ９９４（ＣＡＳ番号：１１２５２２－６４－２）、ＣＵＤＣ－９０７（ＣＡＳ番号：１３３９９２８－２５－４）、ツバシン（ＣＡＳ番号：５３７０４９－４０－４）、チダミド（ＣＡＳ番号：７４３４２０－０２－２）、ＲＧ２８３３（ＣＡＳ番号：１２１５４９３－５６－３）、Ｍ３４４（ＣＡＳ番号：２５１４５６－６０－７）、ＭＣ１５６８（ＣＡＳ番号：８５２４７５－２６－４）、ツバスタチンＡ（ＣＡＳ番号：１２５２００３－１５－８）、スクリプタイド（ＣＡＳ番号：２８７３８３－５９－９）、バルプロ酸（ＣＡＳ番号：９９－６６－１）、フェニル酪酸ナトリウム（ＣＡＳ番号：１７１６－１２－７）、タスキニモド（２５４９６４－６０－８）、ケベトリン（ＣＡＳ番号：５００８６３－５０－３）、ＨＰＯＢ（ＣＡＳ番号：１４２９６５１－５０－２）、４ＳＣ－２０２（ＣＡＳ番号：１１８６２２２－８９－８）、ＴＭＰ２６９（ＣＡＳ番号：１３１４８９０－２９－３）、ＣＡＹ１０６０３（ＣＡＳ番号：１０４５７９２－６６－２）、ＢＲＤ７３９５４（ＣＡＳ番号：１４４０２０９－９６－０）、ＢＧ４５（ＣＡＳ番号：９２６２５９－９９－６）、ＬＭＫ－２３５（ＣＡＳ番号：１４１８０３３－２５－６）、ネクスツラスタットＡ（ＣＡＳ番号：１４０３７８３－３１－２）、ＣＧ２００７４５（ＣＡＳ番号：９３６２２１－３３－９）、ＣＨＲ２８４５（ＣＡＳ番号：９１４３８２－６０－８）およびＣＨＲ３９９６（ＣＡＳ番号：１２５６４４８－４７－１）からなる群より選択される。したがって、一部の相乗効果のある組み合わせでは、前記ホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物は、アナグレリド、３－ヒドロキシアナグレリド、ＢＲＤ９５００、ＢＡＹ２６６６６０５、またはそれらの薬学的に許容される塩であり、ＨＤＡＣ阻害剤は、キシノスタットまたはその薬学的に許容される塩である。

【0026】

いくらかの実施形態において、ＤＮＡ依存性タンパク質キナーゼ（ＤＮＡ－ＰＫ）阻害剤は、相乗効果のある組み合わせに含まれる。好ましくは、ＤＮＡ－ＰＫ阻害剤は、ＮＵ７４４１（ＣＡＳ番号：５０３４６８－９５－９）、ＮＵ７０２６（ＣＡＳ番号：１５４４４７－３５－５）、ＫＵ－００６０６４８（ＣＡＳ番号：８８１３７５－００－４）、ＬＴＵＲＭ３４（ＣＡＳ番号：１８７９８８７－９６－３）、ＣＣ－１１５（ＣＡＳ番号：１２２８０１３－１５－７）、ＰＩＫ－９０（ＣＡＳ番号：６７７３３８－１２－４）、ウォルトマンニン（ＣＡＳ番号：１９５４５－２６－７）、ＬＹ３０２３４１４（ＣＡＳ番号：１３８６８７４－０６－１）、Ｍ３８１４（ＣＡＳ番号：１６３７５４２－３３－６）、ＳＦ２５２３（ＣＡＳ番号：１１７４４２８－４７－７）およびｃｏｍｐｏｕｎｄ ４０１（ＣＡＳ番号：１６８４２５－６４－７）からなる群より選択される。したがって、一部の相乗効果のある組み合わせでは、前記ホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物は、アナグレリド、３－ヒドロキシアナグレリド、ＢＲＤ９５００、ＢＡＹ２６６６６０５、またはそれらの薬学的に許容される塩であり、ＤＮＡ－ＰＫ阻害剤は、ＣＣ－１１５またはその薬学的に許容される塩である。

【0027】

一部の相乗効果のある組み合わせは、インテグリンアルファ２タンパク質阻害剤を含む。好ましくは、インテグリンアルファ２タンパク質阻害剤は、Ｅ７８２０（ＣＡＳ番号：２８９４８３－６９－８）、ＢＴＴ－３０３３（ＣＡＳ番号：１２５９０２８－９９－３）、ＢＴＴ－３０１４、ＢＴＴ－３０１６およびバテリズマブ（ＣＡＳ番号１２３８２１７－５５－４）からなる群より選択されるがこれらに限定されない。したがって、いくらかの実施形態において、前記ホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物は、アナグレリド、３－ヒドロキシアナグレリド、ＢＲＤ９５００、ＢＡＹ２６６６６０５、またはそれらの薬学的に許容される塩であり、インテグリンアルファ２タンパク質の阻害剤は、Ｅ７８２０またはその薬学的に許容される塩である。

【0028】

他の相乗効果のある組み合わせは、ＮＥＤＤ８活性化酵素（ＮＡＥ）阻害剤を含む。好ましくは、前記ＮＡＥ阻害剤は、ペボネディスタット（ＭＬＮ４９２４、ＣＡＳ番号：９０５５７９－５１－３）である。したがって、いくらかの実施形態において、前記ホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物は、アナグレリド、３－ヒドロキシアナグレリド、ＢＲＤ９５００、ＢＡＹ２６６６６０５、またはそれらの薬学的に許容される塩であり、ＮＡＥ阻害剤は、ペボネディスタット（ＭＬＮ４９２４）またはその薬学的に許容される塩である。

【0029】

いくらかの実施形態において、相乗効果のある組み合わせは、ＰＡＫ４阻害剤を含む。好ましくは、ＰＡＫ４阻害剤は、ＫＰＴ－９２７４（ＣＡＳ番号：１６４３９１３－９３－２）、ＰＦ－０３７５８３０９（ＣＡＳ番号：８９８０４４－１５－０）、ＩＰＡ－３（ＣＡＳ番号：４２５２１－８２－４）、ＦＲＡＸ１Ｑ３６、ＬＣＨ－７７４９９４４（ＣＡＳ番号：７９６８８８－１２－５）、グラウカンビノン（glaucambinone）、ＫＹ－０４０３１（ＣＡＳ番号：４６８０５６－２９－３）、ＫＹ－０４０４５（ＣＡＳ番号：１２２３２８４－７５－０）、Ｉｎｋａ１（ジェンバンクＩＤ：３８９１１９）、ＧＬ－１１９６（ＣＡＳ番号：５９１２４２－７０－５）およびＧＮＥ－２８６１（ＣＡＳ番号：１３９４１２１－０５－１）からなる群より選択される。したがって、一部の相乗効果のある組み合わせでは、前記ホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物は、アナグレリド、３－ヒドロキシアナグレリド、ＢＲＤ９５００、ＢＡＹ２６６６６０５、またはそれらの薬学的に許容される塩であり、ＰＡＫ４阻害剤は、ＰＦ－０３７５８３０９またはその薬学的に許容される塩である。

【0030】

本発明はさらに、前記相乗効果のある組み合わせを対象に投与することに関する。本発明のいくらかの実施形態によれば、ホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物の第１の投与量および阻害剤化合物の第１の投与量は、対象に同時に投与される。他の実施形態において、ホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物の第１の投与量および阻害剤化合物の第１の投与量は、連続的に、好ましくは２４時間以内に投与される。いくらかの実施形態において、ホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物および阻害剤化合物は、１つの医薬組成物に調剤される。他の実施形態において、ホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーターおよび阻害剤化合物は、別個の医薬組成物に調剤される。

【0031】

前記組成物は、薬学的に許容される緩衝液、担体、防腐剤またはアジュバントを含有する場合がある。成句「薬学的に許容される」は、本明細書において、生理学的に許容され、患者に投与された場合、典型的にアレルギー反応または同様の反応を生じない組成物を指す。そのような組成物は、保管用に、適切な任意の剤形で、望ましい純度を有する活性剤を任意選択の生理学的に許容可能な担体、防腐剤、賦形剤、または安定剤と混合することにより調製することができる（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２２ｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａｌｌｅｎ，Ｌｏｙｄ Ｖ．，Ｊｒ，Ｅｄ．，（２０１２））。前記医薬組成物はまた、持続放出用、遅延放出用、または徐放用に調剤される場合もあり、前記医薬組成物は、持続放出製剤と即時放出製剤とのブレンドである。

【0032】

いくらかの実施形態において、前記ホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物は、アナグレリドまたはその薬学的に許容される塩である。好ましくは、前記薬学的に許容される塩は、アナグレリド塩酸塩である。他の実施形態において、前記ホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物は、３－ヒドロキシアナグレリドまたはその薬学的に許容される塩である。さらなる実施形態において、前記ホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物は、ＤＮＭＤＰ、ＢＲＤ９５００、ＢＡＹ２６６６６０５、またはそれらの薬学的に許容される塩である。

【0033】

本発明はさらに、対象において癌を処置するためのアプローチに関する。このアプローチは、このアプローチの標的であり得る悪性および良性の腫瘍の両方、原発性腫瘍および転移腫瘍の両方を含む、あらゆる癌または腫瘍を処置するために使用することができる。いくらかの実施形態において、処置される癌は、胞巣状軟部肉腫、線維肉腫、粘液線維肉腫、悪性の線維性組織球腫（fibro histiocytoma）、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、脂肪肉腫、平滑筋肉腫、悪性の末梢神経鞘腫瘍、横紋筋肉腫、未分化および分類不能の肉腫、ユーイング肉腫、ならびに滑膜肉腫などの軟部肉腫からなる群より選択される。いくらかの実施形態において、処置される癌は、神経鞘腫、膠芽腫、髄芽腫、および髄膜腫からなる群より選択される。好ましくは、処置される癌は、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）または脂肪肉腫である。

【0034】

他の実施形態において、処置される癌は、脳、口腔、鼻咽頭（nasopharanygeal）領域を含む頭頸部の癌、甲状腺癌、食道癌もしくは胃癌を含む消化器癌、膵臓癌、肝細胞癌もしくは結腸直腸癌、ならびに肺や気管支の癌、および卵巣、子宮内膜、頸部、乳房、前立腺、腎臓、皮膚の癌、中皮腫、黒色腫、メルケル細胞癌、胆嚢または多発性骨髄腫からなる群より選択される。

【0035】

他の実施形態において、処置される癌は、ＰＤＥ３Ａモジュレーターに応答性であるように事前に選択することができる。事前選択は、参照と比較して少なくともＰＤＥ３Ａおよびシュラーフェン１２（ＳＬＦＮ１２）ポリペプチドバイオマーカーの発現を検出することにより実行され得る。好ましくは、前記ＰＤＥ３Ａモジュレーターに応答性があるとして選択される癌は、骨癌、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、子宮内膜癌、ＧＩＳＴ、頭頸部癌、造血癌、腎臓癌、脂肪肉腫、平滑筋肉腫、肝臓癌、肺癌、リンパ腫、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、軟部組織肉腫、甲状腺癌、または尿路癌である。

【0036】

さらなる実施形態において、本開示はまた、対象に、有効量の（ａ）ホスホジエステラーゼ３Ａモジュレーター化合物またはその薬学的に許容される塩ならびに（ｂ）Ｂｃｌ－２ファミリータンパク質の阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）阻害剤、ＤＮＡ依存性タンパク質キナーゼ（ＤＮＡ－ＰＫ）阻害剤、インテグリンアルファ２タンパク質の阻害剤、ＮＥＤＤ８活性化酵素（ＮＡＥ）阻害剤、ＰＡＫ４阻害剤およびそれらの薬学的に許容される塩からなる群より選択される１つまたは複数の阻害剤を投与することを含む、そのような処置を必要とする対象における癌を処置する方法に向けられる。好ましい実施形態において、（ａ）の第１の投与量および（ｂ）の第１の投与量は、対象に同時に投与される。別の好ましい実施形態において、（ａ）の第１の投与量および（ｂ）の第１の投与量は、連続的に２４時間、２～５日間または１週間以内に投与される。

【0037】

本発明の背景を説明するため、特にその実施に関する追加的な詳細を提供するために、本明細書において使用される刊行物および他の資料は、参照により本明細書に組み込まれる。本発明は、以下の実験の項でさらに説明されるが、本発明の範囲を限定することを意図したものではない。

【0038】

開示される本発明の実施形態が、本明細書で開示される特定の構造、工程段階、または材料に限定されるものでなく、関連分野における通常の当業者によって認識されると思われるその等価物まで拡張されることは理解されるべきである。本明細書において使用される専門用語が、特定の実施形態のみを説明する目的で使用され、限定することを意図するものではないこともまた理解されるべきである。

【0039】

本明細書の全体にわたって「一実施形態（ｏｎｅ ｅｍｂｏｄｉｍｅｎｔ）」または「一実施形態（an ｅｍｂｏｄｉｍｅｎｔ）」という言及は、実施形態に関連して記載される特定の特徴、構造、または特性が、本発明の少なくとも１つの実施形態に含まれることを意味する。したがって、本明細書の全体にわたる各所において、成句「一実施形態において（ｉｎ ｏｎｅ ｅｍｂｏｄｉｍｅｎｔ）」または「一実施形態において（ｉｎ an ｅｍｂｏｄｉｍｅｎｔ）」の出現は、必ずしもすべてが同じ実施形態を指すわけではない。

【0040】

本明細書で使用されるように、多数の項目、構造上の要素、組成要素、および／または材料は、便宜上、共通のリストに表す場合がある。しかし、これらのリストは、リストの各要素が、別個の特有の要素として個々に識別されるかのように解釈されるべきである。したがって、そのようなリストの個々の要素は、反対の指示がない場合、共通の群でのそれらの表現のみに基づいて、同じリストの任意の他の要素の事実上の等価物として解釈されるべきではない。さらに、本発明の種々の実施形態および例は、その種々の成分のための代替物とともに本明細書で参照される場合がある。そのような実施形態、例、および代替物は、互いの事実上の等価物と解釈されるべきではなく、本発明の別個の自律的な表現とみなされるべきであると理解される。

【0041】

前述の例は、１つまたは複数の特定の用途における本発明の原理を説明するが、当業者であれば、本発明の機能を発揮することなく、また本発明の原理および概念から逸脱することなく、実施の形態、使用および詳細における多数の変更がなされ得ることは明らかであろう。したがって、以下で説明される特許請求の範囲による場合を除いて、本発明が限定されることを意図するものではない。

【0042】

動詞「含む（ｔｏ ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」および「含む（ｔｏ ｉｎｃｌｕｄｅ）」は、本文書において、引用されていない特徴の存在を排除するものでも必要とするものでもない、開かれた制限として使用される。従属請求項に引用された特徴は、特に明示的に述べられない限り、相互に自由に組み合わせることができる。さらに、本文書の全体にわたって、「ａ」または「ａｎ」、すなわち単数形の使用が、複数形を排除するものではないことが理解されるべきである。

【0043】

実験の項
材料および方法
別段の指示がない限り、本明細書で実験的に測定または決定された特性は、室温で測定または決定されている。特に指示がない限り、室温は２５℃である。別段の指示がない限り、本明細書で実験的に測定または決定された特性は、大気圧で測定または決定されている。

【0044】

細胞株。ＰＤＥ３Ａ陽性細胞株（ＧＩＳＴ８８２、ＳＡ４、およびＧＯＴ３）ならびにＰＤＥ３Ａ陰性細胞株（９３ＴＴ４４９、９４Ｔ７７８、ＬＰＳ１４１、ＭＬＳ１７６５６－９２、ＭＬＳ４０２－９１、およびＳＷ８７２）を、５％、１０％または２０％のウシ胎児血清（ＦＢＳ、ｇｉｂｃｏ）、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン、１００Ｕ／ｍＬのストレプトマイシンおよび０．０３ｍｇ／ｍＬのＬ－グルタミン（Ｐｅｎ Ｓｔｒｅｐ Ｇｌｕｔ、ｇｉｂｃｏ、１０３７８－０１６）を加えたＲＰＭＩ培地１６４０（ｇｉｂｃｏ）中、加湿、５％ＣＯ２雰囲気下、３７℃で培養した。

【0045】

高スループットの薬物感受性および耐性の試験。５２８種の化合物に対する癌細胞株の感受性および耐性を、９種の細胞株（ＧＩＳＴ８８２、ＳＡ４、ＧＯＴ３、９３ＴＴ４４９、９４Ｔ７７８、ＬＰＳ１４１、ＭＬＳ１７６５６－９２、ＭＬＳ４０２－９１、およびＳＷ８７２）で調査した。さらに、ＰＤＥ３Ａ低発現細胞株ＳＡ４およびＧＯＴ３ではアナグレリド塩酸塩（１００ｎＭ）処置とともに、また全ＰＤＥ３Ａ陽性細胞株ＧＩＳＴ８８２、ＳＡ４およびＧＯＴ３ではＢＡＹ２６６６６０５（４０ｎＭ）とともに同じ化合物を調査した。化合物を１００％ジメチルスルホキシドまたは水に溶解し、以前詳細に説明されたように（Ｐｕｌｋｋａ ＯＰ，ｅｔ ａｌ ２０１９）、１０，０００倍の濃度範囲をカバーする１０倍希釈で透明平底３８４ウェルマイクロプレートに播種した。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ細胞生存率アッセイ（プロメガ社）およびＰＨＥＲＡｓｔａｒ ＦＳプレートリーダー（ＢＭＧ Ｌａｂｔｅｃｈ）を使用して、７２時間後に細胞生存率を測定した。データを、陰性（０．０１％ジメチルスルホキシドのみ）対照および陽性（１００μｍｏｌ／Ｌの塩化ベンゼトニウム）対照に対して標準化した。

【0046】

マルカート－レーベンバーグアルゴリズムおよびＢｒｅｅｚｅ分析プラットフォームを使用して、４パラメータロジスティック用量反応曲線を推定した。薬物感受性スコア（ＤＳＳ）を使用して、試験化合物に対する薬物応答を測定した。調査した細胞株で共通する薬物相乗効果パートナーを、以下のように同定した：単剤のＤＳＳ値を、単一細胞株におけるアナグレリド－薬物組み合わせのＤＳＳ値から差し引いた。その後、獲得したＤＳＳ値（ＤＳＳ組み合わせ－ＤＳＳアナグレリド－薬物組み合わせ）の平均薬物感受性スコア（ａＤＳＳ）を算出した。ａＤＳＳ値＞３．０は、細胞株において観察された薬物相乗効果を示すとみなされた。ＰＤＥ３ＡモジュレーターとしてＢＡＹ２６６６６０５を使用して、この分析を繰り返した。

【0047】

これらの分析で相乗効果を示した１２種の薬物を、ＧＩＳＴ８８２、ＳＡ４、およびＧＯＴ３細胞株で、より詳細に調査した。アナグレリドおよび１２種の選択された薬物の薬物組み合わせ試験を、上述した通りであるが、選択された薬物を用いて各組み合わせの３つの複製試料を用いて７種の異なる濃度をカバーする薬物濃度マトリックスを使用して、２回の反復アッセイで実行した。ＲパッケージのシナジーＦｉｎｄｅｒ２．０を使用して、相乗効果を評価した（Ｉａｎｅｖｓｋｉ Ａ，ｅｔ ａｌ．２０２０）。このツールは、４つの主要な参照モデル：ＨＳＡ、Ｌｏｅｗｅ、ＢｌｉｓｓおよびＺＩＰモデルを用いる相乗効果スコアリングを実装している。薬物組み合わせ効果の程度は、用量マトリックスおよびＺＩＰ相乗効果スコア上で相乗効果ランドスケープマップとして容易に可視化することができる。

【0048】

ウェスタンブロット。ウェスタンブロッティングを使用して、それぞれ、ポリクローナルウサギ抗ＰＤＥ３Ａ抗体（希釈１：１０００；ＨＰＡ０１４４９２、シグマアルドリッチ）およびポリクローナルウサギ抗ＳＬＦＮ１２（希釈１：５００、ａｂ２３４４１８、アブカム）を使用することにより、細胞株におけるＰＤＥ３Ａおよびシュラーフェン１２の発現を検出した。細胞を冷ＰＢＳで２回洗浄してから、ＨＡＬＴ（商標）プロテアーゼ阻害剤カクテル（サーモ、７８４２９）およびＨＡＬＴ（商標）ホスファターゼ阻害剤カクテル（サーモ、７８４２０）を含有するＭ－ＰＥＲ（商標）哺乳動物タンパク質抽出試薬（サーモサイエンティフィック（商標）、７８５０１）中、氷上で溶解した。ゲル電気泳動を使用してタンパク質溶解物６～１０μｇを分離し、ＰＶＤＦ膜上にブロットし、その後、抗体で染色した。メーカーの説明書にしたがって、ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ Ｗｅｓｔ Ｐｉｃｏ ＰＬＵＳ化学発光基質（サーモフィッシャーサイエンティフィック社）により、免疫染色を検出した。

【0049】

細胞生存率アッセイ。薬物での培地交換の２４時間前に、９６ウェルの白色／透明組織培養用処理済みプレート（ＦＡＬＣＯＮ、３５３３７７）に細胞を播種した。メーカーの説明書にしたがって、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）発光細胞生存率アッセイ（Ｇ７５７２、プロメガ）での処理インキュベーションの７２時間後に、様々な処置における細胞の生存率を評価した。試薬および細胞を、室温で安定させた。試薬を１００μｌ／ウェルで添加し、室温で２分間振盪し、室温で１０分間インキュベートしてから、Ｈｉｄｅｘ Ｓｅｎｃｅマイクロプレートリーダー（Ｈｉｄｅｘ ｏｙ）を使用することにより発光を測定した。結果からバックグラウンドシグナルを排除するために、増殖培地を使用した。

【0050】

免疫組織化学。７０％コンフルエンスまで細胞株を増殖させ、剥がして、計数し（約８００万個の細胞／チューブ）、ＰＢＳ（コーニング、ＲＥＦ２１－０４０－ＣＶ）で２回洗浄してから、細胞を２つのエッペンドルフチューブに分割し、遠心分離して（１００００ｒｐｍ／約９６００ｇ）、密な細胞ペレットを形成した。上清を除去し、細胞ペレットをヒト血漿６０μｌ（＋４℃）に再懸濁した。その後、１００ＮＩＨ－Ｕ／ｍｌのトロンビン（メルク、ＲＥＦ１．１２３７４．０００１）６０μｌを＋４℃で細胞懸濁液に添加して、細胞を凝固させた。次に、５％ホルマリン１ｍｌを添加して、エッペンドルフチューブから塊を剥がし、その後、５％ホルマリン約６ｍｌを含有する、より大きいチューブに塊を移した。５％ホルマリン中、室温で２時間、細胞塊を固定した。固定の後、細胞塊を上昇アルコール／キシレン系列に供して、試料を乾燥した。その後、細胞塊をパラフィンに一晩浸漬し、ＦＦＰＥ様の組織学的試料を形成した。

【0051】

免疫組織化学染色の前に、組織スライドを脱パラフィンした。抗ＰＤＥ３Ａ抗体（希釈１：１００；ＨＰＡ０１４４９２、シグマアルドリッチ）をＤｒａｃｏ抗体希釈液（ＡＤ５００、ＷｅｌｌＭｅｄ）で希釈し、スライド上で１時間、室温でインキュベートした。１ステップ検出システム、ウサギＨＲＰ（Ｒ５００ＨＲＰ、ＷｅｌｌＭｅｄ）およびＩｍｍＰａｃｔ ＤＡＢ基質キット（ＳＫ－４１０５、ベクター）を使用して、一次抗体結合を検出した。マイヤーのヘマトキシリンを用いて、スライドを対比染色した。細胞株試料の免疫染色を、染色の強度に基づいて、陰性、低、中または強と評価した。

【0052】

結果
ＰＤＥ３Ａ、ＳＬＦＮ１２およびアクチンの発現を８種の細胞株で研究し、これらのタンパク質の存在を確認した（図１Ａ）。これらの８種の細胞株における５２８種の化合物の高スループット薬物スクリーニングにより、アナグレリド処置に高感受性であった２種の細胞株、ＳＡ４（ＩＣ５０＝７３．５ｎＭ；ＤＳＳ＝１５．４）およびＧＯＴ３（ＩＣ５０＝８４．３ｎＭ；ＤＳＳ＝９．２）を同定した（図１Ｃ）。免疫ブロッティングの結果により、両細胞株が、ＰＤＥ３ＡおよびＳＬＦＮ１２を発現することが検証された（図１Ｂ）。しかし、ＳＡ４およびＧＯＴ３細胞株におけるＰＤＥ３Ａ発現は、ＧＩＳＴ８８２細胞株よりも顕著に低かった。これらの３種の細胞株を以下の実験で使用した。

【0053】

次に、アナグレリドまたはＢＡＹ２６６６６０５を用いて全化合物について高スループットスクリーニングを繰り返すことにより、どの薬物がアナグレリド感受性細胞株においてアナグレリドおよびＢＡＹ２６６６６０５との相乗効果を有するかを研究した。アナグレリドとの相乗効果は、ＧＯＴ３細胞株およびＳＡ４細胞株において４４種の化合物で認められた（表１）。ＢＡＹ２６６６６０５との相乗効果は、ＧＩＳＴ８８２、ＧＯＴ３およびＳＡ４細胞株において３８種の化合物で認められた（表２）。以下の相乗効果のある化合物を明らかにした：Ｂｃｌ－ファミリー阻害剤のナビトクラックス、Ａ－１１５５４６３、Ａ－１３３１８５２、ＷＥＨＩ－５３９、ベネトクラクス；ＰＡＫ４阻害剤のＰＦ－０３７５８３０９；ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ経路阻害剤のセラベリシブ、ＧＤＣ－００８４、ＣＣ－２２３、ＣＣ－１１５（ＤＮＡ依存性タンパク質キナーゼ阻害剤でもある）、ＡＺＤ８０５５、ＣＵＤＣ－９０７（ＨＤＡＣファミリー阻害剤でもある）、テムシロリムス、エベロリムス、シロリムス、リダホロリムス、ウプロセルチブ、ダクトリシブ、コパンリシブ、オミパリシブ、ＬＹ３０２３４１４（ＤＮＡ依存性タンパク質キナーゼ阻害剤でもある）、ＮＶＰ－ＢＧＴ２２６；ＨＤＡＣファミリー阻害剤のキシノスタット、プラシノスタット、ＡＲ－４２、パノビノスタット、ベリノスタット、ジビノスタット、ロミデプシン、ボリノスタット、レスミノスタット、アベキシノスタット、ロシリノスタット、ツバスタチンＡ；ＮＡＥ阻害剤のペボネディスタット；インテグリンアルファ２阻害剤のＥ７８２０；ＭＥＬＫ阻害剤のＯＴＳ１６３；Ｐ５３－ＭＤＭ２経路阻害剤のＳＡＲ４０５８５３、ＡＭＧ－２３２、イダサヌトリン；ＰＩＭキナーゼ阻害剤のＰＩＭ－４４７、ＡＤＺ１２０８；ＸＰＯ１／ＣＲＭ１阻害剤のエルタネクソル、セリネクソル；アミノペプチダーゼ阻害剤のトセドスタット；オーロラＢ阻害剤のＡＺＤ１１５２；ＩＧＦ１Ｒ阻害剤のＢＭＳ－７５４８０７；ＦＡＫ阻害剤のＶＳ－４７１８；ＡＴＭ阻害剤のＡＺＤ０１５６；ＣＤＫ２阻害剤のミルシクリブ；ＣＨＥＫ１阻害剤のＭＫ－８７７６；ＣＥＮＰ－Ｅ阻害剤のＧＳＫ９２３２９５；カゼインキナーゼ阻害剤のＰＦ－６７０４２６；プロテアソーム阻害剤のボルテゾミブ；ＤＯＴＬ１阻害剤のピノメトスタット；ならびにミドスタウリン、テモゾロミド、ベキサロテン、ルボキシスタウリン（ruboxitaurin）およびＯＮＸ－０９１４の化合物。

【0054】

【表1】

【0055】

【表2】

【0056】

分析においてアナグレリドおよび／またはＢＡＹ２６６６６０５との相乗効果を示した１２種の化合物を、アナグレリドおよび目的の薬剤の７つの異なる濃度をカバーする薬物濃度マトリックスを使用することにより、さらにＧＯＴ３、ＳＡ４およびＧＩＳＴ８８２細胞株で調査した。相乗効果結果は、３種の細胞株すべてにおいて調査された全薬物について検証された（表３）。

【0057】

【表3】

【0058】

Ｂｃｌ－ファミリー阻害剤のナビトクラックス、Ａ－１１５５４６３およびＡ－１３３１８５２は、薬物濃度マトリックスおよびシナジーＦｉｎｄｅｒ２．０により分析されたとき、アナグレリドと投与された場合にのみ細胞株において顕著な有効性を示した。細胞生存率アッセイにより、細胞が、ナビトクラックスもしくはＡ－１１５５４６３およびアナグレリド（図３および図４）または３－ヒドロキシ－アナグレリド（図５および図６）で処置された場合の結果を検証した。しかし、ＰＤＥ３ＡモジュレーターであるアナグレリドとＡ－１１５５４６３との間で観察された相乗効果は、ＰＤＥ３Ａ阻害剤であるシロスタゾールでは得られず、ＰＤＥ３Ａ－ＳＬＦＮ１２相互作用の形成が、細胞上でのＰＤＥ３Ａ関連抗癌作用を誘導するのに必要であることが示唆された（図２）。

【0059】

最後に、観察された相乗効果がアナグレリド特異的であるかどうか、または他のＰＤＥ３Ａモジュレーターが同じ効果を有しているかどうかを調査した。Ａ１１５５４６３およびナビトクラックスは両方とも、細胞株においてＤＮＭＤＰとの相乗効果を示し、明らかになった相乗効果が、アナグレリドに対して特異的ではないことが示唆された（図７～図８）。これらの結果に基づいて、ＰＤＥ３Ａ－シュラーフェン１２相互作用の形成を誘導する他のＰＤＥ３Ａ特異的薬剤は、癌併用療法で使用することができる。

【0060】

結論
我々は、ＰＤＥ３Ａ特異的薬剤と、Ｂｃｌ－ファミリー、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ、ＤＮＡ依存性タンパク質キナーゼ、インテグリンアルファ２、ＨＤＡＣ－ファミリー、ＮＥＤＤ８活性化酵素およびＰＡＫ４阻害剤との間の相乗効果を明らかにした。ＰＤＥ３Ａ特異的薬剤と上述の阻害剤との併用療法は、ＰＤＥ３Ａ陽性癌を処置するための新規治療を提供する。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【国際調査報告】