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特表2024-545200ＣａＶ１．２活性剤としてのピリジン－３－カルボキシレート化合物
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-12-05
(54)【発明の名称】ＣａＶ１．２活性剤としてのピリジン－３－カルボキシレート化合物
(51)【国際特許分類】
C07D 491/048 20060101AFI20241128BHJP
A61P 25/18 20060101ALI20241128BHJP
A61P 25/24 20060101ALI20241128BHJP
A61P 25/30 20060101ALI20241128BHJP
A61P 25/00 20060101ALI20241128BHJP
A61P 25/28 20060101ALI20241128BHJP
A61P 9/00 20060101ALI20241128BHJP
A61K 31/444 20060101ALI20241128BHJP
【ＦＩ】
C07D491/048 CSP
A61P25/18
A61P25/24
A61P25/30
A61P25/00
A61P25/28
A61P9/00
A61K31/444
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024535188
(86)(22)【出願日】2022-12-12
(85)【翻訳文提出日】2024-07-23
(86)【国際出願番号】 IB2022062037
(87)【国際公開番号】W WO2023111799
(87)【国際公開日】2023-06-22
(31)【優先権主張番号】63/265,302
(32)【優先日】2021-12-13
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】504389991
【氏名又は名称】ノバルティス アーゲー
(74)【代理人】
【識別番号】100092783
【弁理士】
【氏名又は名称】小林 浩
(74)【代理人】
【識別番号】100095360
【弁理士】
【氏名又は名称】片山 英二
(74)【代理人】
【識別番号】100120134
【弁理士】
【氏名又は名称】大森 規雄
(74)【代理人】
【識別番号】100227008
【弁理士】
【氏名又は名称】大賀 沙央里
(72)【発明者】
【氏名】クラウトワルド，シモン
(72)【発明者】
【氏名】ル，ジャンリャン
(72)【発明者】
【氏名】ニーフ，ジェームズ アントニー
(72)【発明者】
【氏名】パク，ヘ－ヨン
(72)【発明者】
【氏名】パタック，テジャスクマール パンカジブハイ
(72)【発明者】
【氏名】サダギアニ，アミール マソード
(72)【発明者】
【氏名】ツォウ，シーリン
【テーマコード（参考）】
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C086AA01
4C086AA02
4C086AA03
4C086CB22
4C086GA16
4C086MA01
4C086MA04
4C086NA14
4C086ZA01
4C086ZA12
4C086ZA15
4C086ZA16
4C086ZA18
4C086ZA36
4C086ZC39
(57)【要約】
本開示は、統合失調症、双極性障害、大うつ病性障害、物質使用障害、ＡＤＨＤ、フェラン－マクダーミド症候群、自閉症スペクトラム障害、多発性硬化症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、ブルガダ症候群、ＱＴ短縮症候群、又は早期再分極症候群の治療のためのＣａｖ１．２活性剤としての式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩を提供する。
【選択図】なし
【化１】
【選択図】なし
【化１】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
式（Ｉ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩であって、【化1】
式中、
Ｒ１が、Ｃ１～６アルキル及びＣ１～６ハロアルキルから選択され、
Ｒ２が、Ｈ及びハロから選択され、
Ｒ３が、Ｃ１～６アルキル、及びＣ３～８シクロアルキルから選択され、その各々が、１～３つのハロで任意選択的に置換される、化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【請求項2】
式（Ｉ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩であって、【化2】
式中、
Ｒ１が、ＣＨ３、ＣＦ３、ＣＨＦ２及びＣＨ２Ｆから選択され、
Ｒ２が、Ｈ及びＦから選択され、
Ｒ３が、Ｃ１～４アルキル、シクロプロピル及びシクロブチルから選択され、その各々が、１～３つのＦで任意選択的に置換される、化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【請求項3】
式（Ｉａ）の請求項１又は２に記載の化合物、【化3】
又はその薬学的に許容される塩。
【請求項4】
式（Ｉｂ）の請求項１又は２に記載の化合物、【化4】
又はその薬学的に許容される塩。
【請求項5】
Ｒ１がＣＨ３である、請求項１～４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項6】
Ｒ１がＣＦ３である、請求項１～４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項7】
Ｒ１がＣＨＦ２である、請求項１～４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項8】
Ｒ１がＣＨ２Ｆである、請求項１～４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項9】
Ｒ２がＨである、請求項１～８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項10】
Ｒ２がＦである、請求項１～８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項11】
Ｒ３が、１～３つのＦで任意選択的に置換されるＣ１～４アルキル、例えば、ＣＨＦＣＨ３である、請求項１～１０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項12】
Ｒ３が、１～３つのＦで任意選択的に置換されるシクロプロピルである、請求項１～１０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項13】
Ｒ３が、１～３つのＦで任意選択的に置換されるシクロブチルである、請求項１～１０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項14】
以下からなる群から選択される、請求項１又は２に記載の化合物：【表1-1】
４－（５－フルオロ－４－（１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－メチル－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル
（Ｓ）－４－（５－フルオロ－４－（（Ｒ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－（フルオロメチル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル
（Ｓ）－４－（５－フルオロ－４－（（Ｒ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－メチル－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル
（Ｓ）－４－（５－フルオロ－４－（（Ｓ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－（フルオロメチル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル
（Ｓ）－４－（５－フルオロ－４－（（Ｓ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－メチル－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル
４－（４－エチル－５－フルオロピリジン－３－イル）－２－（フルオロメチル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル
【表1-2】
（Ｒ）－４－（５－フルオロ－４－（（Ｒ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－メチル－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル
（Ｒ）－４－（４－エチル－５－フルオロピリジン－３－イル）－２－（フルオロメチル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル
（Ｒ）－４－（５－フルオロ－４－（（Ｓ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－メチル－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル
（Ｓ）－４－（４－エチル－５－フルオロピリジン－３－イル）－２－（フルオロメチル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル
４－（５－フルオロ－４－（１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－（フルオロメチル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル
４－（４－エチル－５－フルオロピリジン－３－イル）－２－メチル－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル
【表1-3】
（Ｒ）－４－（５－フルオロ－４－（（Ｒ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－（フルオロメチル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル
（Ｓ）－４－（４－エチル－５－フルオロピリジン－３－イル）－２－メチル－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル
（Ｒ）－４－（５－フルオロ－４－（（Ｓ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－（フルオロメチル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル
（Ｒ）－４－（４－エチル－５－フルオロピリジン－３－イル）－２－メチル－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル
４－（４－エチルピリジン－３－イル）－２－（フルオロメチル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル
（Ｓ）－２－（ジフルオロメチル）－４－（５－フルオロ－４－（（Ｓ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル
【表1-4】
（Ｒ）－４－（４－エチルピリジン－３－イル）－２－（フルオロメチル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル
４－（５，６－ジフルオロ－４－（１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－メチル－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル
（Ｓ）－４－（４－エチルピリジン－３－イル）－２－（フルオロメチル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル
（Ｓ）－４－（５，６－ジフルオロ－４－（（Ｒ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－メチル－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル
２－（ジフルオロメチル）－４－（５－フルオロ－４－（１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル
（Ｓ）－４－（５，６－ジフルオロ－４－（（Ｓ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－メチル－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル
【表1-5】
（Ｒ）－２－（ジフルオロメチル）－４－（５－フルオロ－４－（（Ｒ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル
（Ｒ）－４－（５，６－ジフルオロ－４－（（Ｒ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－メチル－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル
（Ｒ）－２－（ジフルオロメチル）－４－（５－フルオロ－４－（（Ｓ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル
（Ｒ）－４－（５，６－ジフルオロ－４－（（Ｓ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－メチル－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル
及び
（Ｓ）－２－（ジフルオロメチル）－４－（５－フルオロ－４－（（Ｒ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、
又はその薬学的に許容される塩。
【請求項15】
請求項１～１４のいずれか一項に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体と、を含む、薬学的組成物。
【請求項16】
療法に使用するための、請求項１～１４のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【請求項17】
精神神経系障害、例えば、統合失調症、双極性障害、大うつ病性障害、若しくは物質使用障害；神経発達障害、例えば、注意欠如多動性障害（ＡＤＨＤ）、フェラン－マクダーミド症候群、若しくは他の自閉症スペクトラム障害；神経変性障害、例えば、多発性硬化症、前頭側頭型認知症若しくはアルツハイマー病；又は心臓の状態、例えば、ブルガダ症候群、ＱＴ短縮症候群、若しくは早期再分極症候群の治療に使用するための、請求項１～１４のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【請求項18】
精神神経系障害、例えば、統合失調症、双極性障害、大うつ病性障害、若しくは物質使用障害；神経発達障害、例えば、ＡＤＨＤ、フェラン－マクダーミド症候群、若しくは自閉症スペクトラム障害；神経変性障害、例えば、多発性硬化症、前頭側頭型認知症、若しくはアルツハイマー病；又は心臓の状態、例えば、ブルガダ症候群、ＱＴ短縮症候群、若しくは早期再分極症候群の治療を必要とする対象においてそれを行う方法であって、前記方法が、前記対象に、治療有効量の請求項１～１４のいずれか一項に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法。
【請求項19】
精神神経系障害、例えば、統合失調症、双極性障害、大うつ病性障害、若しくは物質使用障害；神経発達障害、例えば、ＡＤＨＤ、フェラン－マクダーミド症候群、若しくは自閉症スペクトラム障害；神経変性障害、例えば、多発性硬化症、前頭側頭型認知症、若しくはアルツハイマー病；又は心臓の状態、例えば、ブルガダ症候群、ＱＴ短縮症候群、若しくは早期再分極症候群の治療を必要とする対象においてそれを行う方法であって、前記方法が、前記対象に、請求項１～１４のいずれか一項に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法。
【請求項20】
精神神経系障害、例えば、統合失調症、双極性障害、大うつ病性障害、若しくは物質使用障害；神経発達障害、例えば、ＡＤＨＤ、フェラン－マクダーミド症候群、若しくは自閉症スペクトラム障害；神経変性障害、例えば、多発性硬化症、前頭側頭型認知症、若しくはアルツハイマー病；又は心臓の状態、例えば、ブルガダ症候群、ＱＴ短縮症候群、若しくは早期再分極症候群の治療のための医薬の製造における請求項１～１４のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩の、使用。【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本開示は、統合失調症、双極性障害、大うつ病性障害、及び物質使用障害を含む精神神経系障害；神経発達障害、例えば、注意欠如多動性障害、フェラン－マクダーミド症候群、及び他の自閉症スペクトラム障害；神経変性障害、例えば、多発性硬化症、前頭側頭型認知症、及びアルツハイマー病；並びに心臓の状態、例えば、ブルガダ症候群、ＱＴ短縮症候群、及び早期再分極症候群におけるカルシウムシグナル伝達欠損及び／又はシナプス機能障害の治療のためのピリジン－３－カルボキシレート化合物、それらを含有する薬学的組成物、及びＣａＶ１．２活性剤としてのそのような化合物の使用に関する。
【背景技術】
【0002】
ヒトゲノミクスの進歩は、精神神経系障害の遺伝的根拠に光を当てるものである。統合失調症におけるゲノムワイド関連研究（ＧＷＡＳ）は、神経カルシウムシグナル伝達に関与するＣａＶ１．２及び他の遺伝子を含む１００を超える疾患関連遺伝子座を特定してきた。障害間（ｃｒｏｓｓ－ｄｉｓｏｒｄｅｒ）ＧＷＡＳ分析は、統合失調症、双極性障害、大うつ病性障害、ＡＤＨＤ、及び自閉症スペクトラム障害と強く関連するものとして、ＣａＶ１．２及びそのチャネル形成ベータサブユニット（ＣＡＣＮＢ２）を特定した。ＧＷＡＳからの証拠に加えて、統合失調症を有する患者におけるエクソーム配列決定は、ＣａＶ１．２、及びＣＡＣＮＡ２Ｄ、ＣＡＣＮＢ、ＣＡＭＫ２遺伝子を含む神経カルシウムシグナル伝達経路の他の遺伝子メンバーにおける破壊的変異の濃縮を示した。ＣａＶ１．２は、神経細胞の分化及び移動、神経突起の成長、シナプスシグナル伝達、遺伝子発現及び脳可塑性にとって重要であることが示されている。これは、感情、学習及び記憶、実行機能、並びに脳の報酬応答に役割を果たすことが示されている。
【0003】
ＣａＶ１．２は、体全体に広く発現し、心臓血管系を含む多臓器系において主要な役割を果たしているが、心臓血管系におけるＣａＶ１．２の生理学的機能は、脳におけるその機能とは異なる。ＣａＶ１．２は、心臓における活動電位生成の重要な寄与因子であり、一方、活動電位生成における最小限の役割を有するニューロンにおける細胞内シグナル伝達及び遺伝子発現の重要な駆動因子であることが、研究によって示されている。ティモシー症候群では、ｐ．Ｇ４０６ＲのＣａＶ１．２変異は、心筋細胞とニューロンとの間に異なる細胞表現型をもたらす。心血管特異的障害（ブルガダ症候群及びＱＴ延長症候群８型）を引き起こすＣａＶ１．２変異は、心臓及び脳におけるＣａＶ１．２の多様な機能の更なる証拠である。
【0004】
カルシウムチャネル活性剤は、以前から報告されているが、神経精神障害に対するそれらの使用に関する更なる研究は、それらが心臓血管系に及ぼす影響に起因して、限定されている。実際、これらの分子の多くは、心不全におけるそれらの潜在的な治療用途のために最初に研究され、開発された。精神神経系ＧＷＡＳ研究から関連するＣａＶ１．２ ＳＮＰの大部分は、遺伝子のイントロンに存在し、これらのリスクＳＮＰは、多くの場合、カルシウム電流振幅の全体的な減少を引き起こすｍＲＮＡ発現の低下と関連することが示されている。したがって、全体的な電流振幅を増加させることができる小分子は、患者にとって最も有益な可能性がある。
【発明の概要】
【0005】
本開示は、式（Ｉ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩であって、
式中、
Ｒ１が、Ｃ１～６アルキル及びＣ１～６ハロアルキル、例えば、Ｃ１～６フルオロアルキルから選択され、
Ｒ２が、Ｈ及びハロ、例えば、Ｆから選択され、
Ｒ３が、Ｃ１～６アルキル、例えば、Ｃ１～４アルキル、及びＣ３～８シクロアルキルから選択され、その各々が、１～３つのハロ、例えば、Ｆで任意選択的に置換される、化合物、又はその薬学的に許容される塩を提供する。
【化1】
式中、
Ｒ１が、Ｃ１～６アルキル及びＣ１～６ハロアルキル、例えば、Ｃ１～６フルオロアルキルから選択され、
Ｒ２が、Ｈ及びハロ、例えば、Ｆから選択され、
Ｒ３が、Ｃ１～６アルキル、例えば、Ｃ１～４アルキル、及びＣ３～８シクロアルキルから選択され、その各々が、１～３つのハロ、例えば、Ｆで任意選択的に置換される、化合物、又はその薬学的に許容される塩を提供する。
【0006】
第２の態様では、本開示は、式（Ｉ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩を含む、薬学的組成物を提供する。
【0007】
第３の態様では、本開示は、療法における、統合失調症、双極性障害、大うつ病性障害、若しくは物質使用障害を含む精神神経系障害；神経発達障害、例えば、注意欠如多動性障害、フェラン－マクダーミド症候群、若しくは他の自閉症スペクトラム障害；神経変性障害、例えば、多発性硬化症、前頭側頭型認知症若しくはアルツハイマー病；並びに心臓の状態、例えば、ブルガダ症候群、ＱＴ短縮症候群、若しくは早期再分極症候群の治療における使用のための式（Ｉ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩を提供する。
【0008】
第４の態様では、本開示は、精神神経系障害、例えば、統合失調症、双極性障害、大うつ病性障害、若しくは物質使用障害；神経発達障害、例えば、ＡＤＨＤ、フェラン－マクダーミド症候群、若しくは自閉症スペクトラム障害；神経変性障害、例えば、多発性硬化症、前頭側頭型認知症、若しくはアルツハイマー病；又は心臓の状態、例えば、ブルガダ症候群、ＱＴ短縮症候群、若しくは早期再分極症候群の治療を必要とする対象においてそれを行う方法であって、方法が、治療有効量の本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法を提供する。
【0009】
第５の態様では、本開示は、精神神経系障害、例えば、統合失調症、双極性障害、大うつ病性障害、若しくは物質使用障害；神経発達障害、例えば、ＡＤＨＤ、フェラン－マクダーミド症候群、若しくは自閉症スペクトラム障害；神経変性障害、例えば、多発性硬化症、前頭側頭型認知症、若しくはアルツハイマー病；又は心臓の状態、例えば、ブルガダ症候群、ＱＴ短縮症候群、若しくは早期再分極症候群の治療を必要とする対象においてそれを行う方法であって、方法が、本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法を提供する。
【0010】
第６の態様では、本開示は、精神神経系障害、例えば、統合失調症、双極性障害、大うつ病性障害、若しくは物質使用障害；神経発達障害、例えば、ＡＤＨＤ、フェラン－マクダーミド症候群、若しくは自閉症スペクトラム障害；神経変性障害、例えば、多発性硬化症、前頭側頭型認知症、若しくはアルツハイマー病；又は心臓の状態、例えば、ブルガダ症候群、ＱＴ短縮症候群、若しくは早期再分極症候群の治療のための医薬の製造における本開示の化合物、又はその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【図面の簡単な説明】
【0011】
【図1】時間（ｍｓ）に対する電位（ｍＶ）で、ＣａＶ１．２活性化の電圧を、より負の膜電位にシフトさせることの影響を示す、心外膜環境からの模擬心臓活動電位を示すグラフである。
【図2】実施例２のＸ線結晶構造を示す画像である。
【発明を実施するための形態】
【0012】
５．１．定義
一般に、本明細書で使用される命名法、並びに本明細書に記載される有機化学、創薬化学、及び薬理学における実験手順は、当該技術分野で周知であり、通常用いられるものである。別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、一般に、本開示が属する技術分野の当業者によって通常理解されるものと同じ意味を有する。
一般に、本明細書で使用される命名法、並びに本明細書に記載される有機化学、創薬化学、及び薬理学における実験手順は、当該技術分野で周知であり、通常用いられるものである。別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、一般に、本開示が属する技術分野の当業者によって通常理解されるものと同じ意味を有する。
【0013】
別途指定されない限り、「本開示の化合物（ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ｏｆ ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｔ ｄｉｓｃｌｏｓｕｒｅ）」、「本開示の化合物（ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ｏｆ ｔｈｅ ｄｉｓｃｌｏｓｕｒｅ）」、又は「本開示の化合物（ｃｏｍｐｏｕｎｄ ｏｆ ｔｈｅ ｄｉｓｃｌｏｓｕｒｅ）」という用語は、式（Ｉ）、（ＩＩ）、（Ｉａ）、又は（Ｉｂ）の化合物、例示される化合物、それらの塩、特に、それらの薬学的に許容されるその塩、水和物、溶媒和物、及び全ての立体異性体（ジアステレオ異性体及びエナンチオマーを含む）、回転異性体、互変異性体、及び同位体標識された化合物（重水素置換を含む）、並びに本質的に形成される部分を指す。
【0014】
「及び／又は」という用語は、別段の指示がない限り、「及び」又は「又は」のいずれかを意味する。
【0015】
「置換された」という用語は、置換基が１つ以上の位置で特定の基又は部分に接続し得る１つ以上の好適な置換基を特定の基又は部分が有することを意味する。例えば、フルオロ基（Ｆ）で置換されたシクロプロピルは、フルオロが結合によってシクロプロピルの１個の原子に結合することを示す。
【0016】
本明細書で使用される場合、「Ｃ１～６アルキル」という用語は、不飽和部を含有せず、１～６個の炭素原子を有し、単結合によって分子の残りに接続する、炭素原子及び水素原子のみからなる直鎖又は分岐鎖の炭化水素鎖基を指す。Ｃ１～６アルキルの例としては、限定されないが、メチル、エチル、ｎ－プロピル、１－メチルエチル（ｉｓｏ－プロピル）、ｎ－ブチル、１－メチルプロピル（ｓｅｃ－ブチル）、２－メチルプロピル（ｉｓｏ－ブチル）、１，１－ジメチルエチル（ｔ－ブチル）、ｎ－ペンチル、及びｎ－ヘキシルが挙げられる。Ｃ１～４アルキルという用語は、それに応じて解釈される。
【0017】
本明細書で使用される場合、「Ｃ１～６ハロアルキル」という用語は、本明細書で定義される１つ以上のハロ基によって置換された、上に定義されるＣ１～６アルキル基を指す。Ｃ１～６ハロアルキルの例としては、限定されないが、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、フルオロメチル、トリクロロメチル、１，１－ジフルオロエチル、２，２－ジフルオロエチル、２，２，２－トリフルオロエチル、２－フルオロプロピル、３，３－ジフルオロプロピル及び１－フルオロメチル－２－フルオロエチル、１，３－ジブロモプロパン－２－イル、３－ブロモ－２－フルオロプロピル、及び１，４，４－トリフルオロブタン－２－イルが挙げられる。
【0018】
本明細書で使用される場合、「ハロ」という用語は、フッ素、塩素、臭素、又はヨウ素を意味する。
【0019】
本明細書で使用される場合、「シクロアルキル」という用語は、３～１８個の炭素原子を含有し、環炭素間で共有される非局在化パイ電子（芳香族性）は存在しない、単環式又は多環式の飽和又は部分的に不飽和の炭素環を意味する。「Ｃ３～８シクロアルキル」という用語は、それに応じて解釈される。多環式という用語は、架橋（例えば、ノルボルネン）、融合（例えば、デカリン）及びスピロ環式シクロアルキルを包含する。好ましくは、シクロアルキル、例えば、「Ｃ３～８シクロアルキル」は、３～８個の炭素原子の単環式炭化水素基である。
【0020】
Ｃ３～８シクロアルキルの例としては、限定されないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、スピロ［３．３］ヘプタニル、及びシクロオクチルが挙げられる。
【0021】
本明細書で使用される場合、「投与する」は、本明細書に記載される化合物が対象に提示される方法を指す。
【0022】
本明細書で使用される場合、「任意選択的に置換される」は、言及される基が、後に列挙される基のうちのいずれか１つ又はいずれかの組み合わせによって１つ以上の位置で置換され得ることを意味する。
【0023】
本明細書で使用される場合、「対象」又は「患者」は、本明細書に記載される薬学的組成物の投与によって治療することができる、本明細書に記載される疾患又は障害（例えば、統合失調症、双極性障害、大うつ病性障害、及び物質使用障害を含む精神神経系障害；神経発達障害、例えば、注意欠如多動性障害、フェラン－マクダーミド症候群、及び他の自閉症スペクトラム障害；神経変性障害、例えば、多発性硬化症、前頭側頭型認知症、及びアルツハイマー病；並びに心臓の状態、例えば、ブルガダ症候群、ＱＴ短縮症候群、及び早期再分極症候群）のうちの１つ以上を患う生体を指す。対象の例としては、哺乳動物（例えば、ヒト、並びにイヌ、ウシ、ウマ、サル、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ネコ、マウス、ウサギ、ラット、及びトランスジェニック非ヒト動物などの動物）が挙げられる。ある特定の実施形態では、対象は、ヒト、例えば、本明細書に記載される疾患又は障害（例えば、統合失調症、双極性障害、大うつ病性障害、及び物質使用障害を含む精神神経系障害；神経発達障害、例えば、注意欠如多動性障害、フェラン－マクダーミド症候群、及び他の自閉症スペクトラム障害；神経変性障害、例えば、多発性硬化症、前頭側頭型認知症、及びアルツハイマー病；並びに心臓の状態、例えば、ブルガダ症候群、ＱＴ短縮症候群、及び早期再分極症候群）を患うか、患うリスクがあるか、又は患う可能性があるヒトである。
【0024】
文脈が別段に必要としない限り、本明細書全体で、また、以下の特許請求の範囲において、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という語、並びに「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」又は「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの変形語は、述べられた要素若しくはステップ、又は要素若しくはステップの群の包含を意味するが、任意の他の要素若しくはステップ、又は要素若しくはステップの群の除外を意味するものではないことは理解すべきである。
【0025】
示された構造とその構造に与えられた化学名との間に矛盾がある場合、示された構造の方に、より重み付けされる。加えて、構造又は構造の一部の立体化学が、例えば、太字又は破線で示されない場合、その構造又は構造の一部は、その構造の一部の構造の全ての立体異性体を包含するものと解釈されるべきである。
【0026】
５．２．化合物
式（Ｉ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩であって、
式中、
Ｒ１が、Ｃ１～６アルキル及びＣ１～６ハロアルキル、例えば、Ｃ１～６フルオロアルキルから選択され、
Ｒ２が、Ｈ及びハロ、例えば、Ｆから選択され、
Ｒ３が、Ｃ１～６アルキル、例えば、Ｃ１～４アルキル、及びＣ３～８シクロアルキルから選択され、その各々が、１～３つのハロ、例えば、Ｆで任意選択的に置換される、化合物、又はその薬学的に許容される塩。
式（Ｉ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩であって、
【化2】
式中、
Ｒ１が、Ｃ１～６アルキル及びＣ１～６ハロアルキル、例えば、Ｃ１～６フルオロアルキルから選択され、
Ｒ２が、Ｈ及びハロ、例えば、Ｆから選択され、
Ｒ３が、Ｃ１～６アルキル、例えば、Ｃ１～４アルキル、及びＣ３～８シクロアルキルから選択され、その各々が、１～３つのハロ、例えば、Ｆで任意選択的に置換される、化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【0027】
一実施形態は、式（Ｉ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩であり、
式中、
Ｒ１が、ＣＨ３、ＣＦ３、ＣＨＦ２及びＣＨ２Ｆから選択され、
Ｒ２が、Ｈ及びＦから選択され、
Ｒ３が、Ｃ１～４アルキル、シクロプロピル及びシクロブチルから選択され、その各々が、１～３つのＦで任意選択的に置換される。
【化3】
式中、
Ｒ１が、ＣＨ３、ＣＦ３、ＣＨＦ２及びＣＨ２Ｆから選択され、
Ｒ２が、Ｈ及びＦから選択され、
Ｒ３が、Ｃ１～４アルキル、シクロプロピル及びシクロブチルから選択され、その各々が、１～３つのＦで任意選択的に置換される。
【0028】
一実施形態は、式（Ｉａ）の化合物、
又はその薬学的に許容される塩である。
【化4】
又はその薬学的に許容される塩である。
【0029】
別の実施形態は、式（Ｉｂ）の化合物、
又はその薬学的に許容される塩である。
【化5】
又はその薬学的に許容される塩である。
【0030】
以下の実施形態は、式（Ｉａ）及び（Ｉｂ）を含む、式（Ｉ）の化合物に関するものである。
一実施形態では、Ｒ１は、ＣＨ３である。
一実施形態では、Ｒ１は、ＣＨ３である。
【0031】
別の実施形態では、Ｒ１は、ＣＦ３である。
【0032】
別の実施形態では、Ｒ１は、ＣＨＦ２である。
【0033】
別の実施形態では、Ｒ１は、ＣＨ２Ｆである。
【0034】
別の実施形態では、Ｒ２は、Ｈである。
【0035】
別の実施形態では、Ｒ２は、Ｆである。
【0036】
別の実施形態では、Ｒ３は、１～３つのＦで任意選択的に置換されるＣ１～４アルキルである。
【0037】
別の実施形態では、Ｒ３は、１～３つのＦで任意選択的に置換されるシクロプロピルである。
【0038】
別の実施形態では、Ｒ３は、１～３つのＦで任意選択的に置換されるシクロブチルである。
【0039】
式（Ｉ）の具体的な化合物は、以下のものが挙げられる。
４－（５－フルオロ－４－（１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－メチル－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、
（Ｓ）－４－（５－フルオロ－４－（（Ｒ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－メチル－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、
（Ｓ）－４－（５－フルオロ－４－（（Ｓ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－メチル－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、
（Ｒ）－４－（５－フルオロ－４－（（Ｒ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－メチル－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、
（Ｒ）－４－（５－フルオロ－４－（（Ｓ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－メチル－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、
４－（５－フルオロ－４－（１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－（フルオロメチル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、
（Ｒ）－４－（５－フルオロ－４－（（Ｒ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－（フルオロメチル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、
（Ｒ）－４－（５－フルオロ－４－（（Ｓ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－（フルオロメチル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、
（Ｓ）－４－（５－フルオロ－４－（（Ｒ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－（フルオロメチル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、
（Ｓ）－４－（５－フルオロ－４－（（Ｓ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－（フルオロメチル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、
４－（４－エチル－５－フルオロピリジン－３－イル）－２－（フルオロメチル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、
（Ｒ）－４－（４－エチル－５－フルオロピリジン－３－イル）－２－（フルオロメチル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、
（Ｓ）－４－（４－エチル－５－フルオロピリジン－３－イル）－２－（フルオロメチル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、
４－（４－エチル－５－フルオロピリジン－３－イル）－２－メチル－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、
（Ｓ）－４－（４－エチル－５－フルオロピリジン－３－イル）－２－メチル－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、
（Ｒ）－４－（４－エチル－５－フルオロピリジン－３－イル）－２－メチル－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、
４－（４－エチルピリジン－３－イル）－２－（フルオロメチル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、
（Ｒ）－４－（４－エチルピリジン－３－イル）－２－（フルオロメチル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、
（Ｓ）－４－（４－エチルピリジン－３－イル）－２－（フルオロメチル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、
２－（ジフルオロメチル）－４－（５－フルオロ－４－（１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、
（Ｒ）－２－（ジフルオロメチル）－４－（５－フルオロ－４－（（Ｒ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、
（Ｒ）－２－（ジフルオロメチル）－４－（５－フルオロ－４－（（Ｓ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、
（Ｓ）－２－（ジフルオロメチル）－４－（５－フルオロ－４－（（Ｒ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、
（Ｓ）－２－（ジフルオロメチル）－４－（５－フルオロ－４－（（Ｓ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、
４－（５，６－ジフルオロ－４－（１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－メチル－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、
（Ｓ）－４－（５，６－ジフルオロ－４－（（Ｒ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－メチル－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、
（Ｓ）－４－（５，６－ジフルオロ－４－（（Ｓ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－メチル－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、
（Ｒ）－４－（５，６－ジフルオロ－４－（（Ｒ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－メチル－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、及び
（Ｒ）－４－（５，６－ジフルオロ－４－（（Ｓ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－メチル－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル。
４－（５－フルオロ－４－（１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－メチル－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、
（Ｓ）－４－（５－フルオロ－４－（（Ｒ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－メチル－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、
（Ｓ）－４－（５－フルオロ－４－（（Ｓ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－メチル－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、
（Ｒ）－４－（５－フルオロ－４－（（Ｒ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－メチル－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、
（Ｒ）－４－（５－フルオロ－４－（（Ｓ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－メチル－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、
４－（５－フルオロ－４－（１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－（フルオロメチル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、
（Ｒ）－４－（５－フルオロ－４－（（Ｒ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－（フルオロメチル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、
（Ｒ）－４－（５－フルオロ－４－（（Ｓ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－（フルオロメチル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、
（Ｓ）－４－（５－フルオロ－４－（（Ｒ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－（フルオロメチル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、
（Ｓ）－４－（５－フルオロ－４－（（Ｓ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－（フルオロメチル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、
４－（４－エチル－５－フルオロピリジン－３－イル）－２－（フルオロメチル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、
（Ｒ）－４－（４－エチル－５－フルオロピリジン－３－イル）－２－（フルオロメチル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、
（Ｓ）－４－（４－エチル－５－フルオロピリジン－３－イル）－２－（フルオロメチル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、
４－（４－エチル－５－フルオロピリジン－３－イル）－２－メチル－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、
（Ｓ）－４－（４－エチル－５－フルオロピリジン－３－イル）－２－メチル－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、
（Ｒ）－４－（４－エチル－５－フルオロピリジン－３－イル）－２－メチル－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、
４－（４－エチルピリジン－３－イル）－２－（フルオロメチル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、
（Ｒ）－４－（４－エチルピリジン－３－イル）－２－（フルオロメチル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、
（Ｓ）－４－（４－エチルピリジン－３－イル）－２－（フルオロメチル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、
２－（ジフルオロメチル）－４－（５－フルオロ－４－（１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、
（Ｒ）－２－（ジフルオロメチル）－４－（５－フルオロ－４－（（Ｒ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、
（Ｒ）－２－（ジフルオロメチル）－４－（５－フルオロ－４－（（Ｓ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、
（Ｓ）－２－（ジフルオロメチル）－４－（５－フルオロ－４－（（Ｒ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、
（Ｓ）－２－（ジフルオロメチル）－４－（５－フルオロ－４－（（Ｓ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、
４－（５，６－ジフルオロ－４－（１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－メチル－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、
（Ｓ）－４－（５，６－ジフルオロ－４－（（Ｒ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－メチル－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、
（Ｓ）－４－（５，６－ジフルオロ－４－（（Ｓ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－メチル－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、
（Ｒ）－４－（５，６－ジフルオロ－４－（（Ｒ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－メチル－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル、及び
（Ｒ）－４－（５，６－ジフルオロ－４－（（Ｓ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－メチル－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル。
【0040】
出発物質及び手順の選択に応じて、化合物は、可能な立体異性体のうちの１つの形態で、又はそれらの混合物として、例えば、純粋な光学異性体として、又はラセミ体及びジアステレオ異性体混合物などの立体異性体混合物として、不斉炭素原子の数に応じて存在することができる。本開示は、ラセミ混合物、ジアステリオマー混合物、及び光学的に純粋な形態を含む、全てのそのような可能な立体異性体を含むことを意味する。光学的に活性な（Ｒ）－立体異性体及び（Ｓ）－立体異性体は、キラルシントン若しくはキラル試薬を使用して調製され得るか、又は従来の技術を使用して分割され得る。化合物が二重結合を含有する場合、置換基は、Ｅ配置又はＺ配置であり得る。化合物が、二置換シクロアルキルを含有する場合、シクロアルキル置換基は、シス配置又はトランス配置を有し得る。全ての互変異性体形態も含まれることが意図される。
【0041】
本明細書で使用される場合、「塩（ｓａｌｔ）」又は「塩（ｓａｌｔｓ）」という用語は、本開示の化合物の酸付加塩又は塩基付加塩を指す。「塩」には、特に「薬学的に許容される塩」が含まれる。「薬学的に許容される塩」という用語は、本開示の化合物の生物学的有効性及び特性を保持し、かつ典型的には生物学的に又は別様に不適切でない塩を指す。多くの場合、本開示の化合物は、アミノ及び／又はカルボキシル基又はそれに類似する基の存在により、酸塩及び／又は塩基塩を形成することができる。
【0042】
薬学的に許容される酸付加塩は、無機酸及び有機酸により形成することができる。
【0043】
塩の由来となり得る無機酸としては、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などが挙げられる。
【0044】
塩の由来となり得る有機酸としては、例えば、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、サリチル酸などが挙げられる。
【0045】
薬学的に許容される塩基付加塩は、無機塩基及び有機塩基により形成することができる。
【0046】
塩の由来となり得る無機塩基としては、例えば、アンモニウム塩及び周期表の列Ｉ～ＸＩＩの金属が挙げられる。ある特定の実施形態では、塩は、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、銀、亜鉛、及び銅に由来し、特に好適な塩としては、アンモニウム、カリウム、ナトリウム、カルシウム、及びマグネシウムの塩が挙げられる。
【0047】
塩の由来となり得る有機塩基としては、例えば、一級、二級、及び三級アミン、天然に存在する置換アミンを含む置換アミン、環状アミン、塩基性イオン交換樹脂などが挙げられる。ある特定の有機アミンとしては、イソプロピルアミン、ベンザチン、コリネート、ジエタノールアミン、ジエチルアミン、リジン、メグルミン、ピペラジン、及びトロメタミンが挙げられる。
【0048】
別の態様では、本開示は、酢酸塩、アスコルビン酸塩、アジピン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベシル酸塩、臭化物／臭化水素酸塩、重炭酸塩／炭酸塩、重硫酸塩／硫酸塩、カンファースルホン酸塩、カプリン酸塩、塩化物／塩酸塩、クロルテオフィロン酸塩、クエン酸塩、エタンジスルホン酸塩、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、グルタミン酸塩、グルタル酸塩、グリコール酸塩、馬尿酸塩、ヨウ化水素塩／ヨウ化物、イセチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、メチル硫酸塩、ムチン酸塩、ナフトエ酸塩、ナプシル酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オクタデカン酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、リン酸塩／リン酸水素／リン酸二水素、ポリガラクツロン酸塩、プロピオン酸塩、セバシン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、スルホサリチル酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、トシル酸塩 トリフェニル酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩又はキシナホ酸塩の形態の本開示の化合物を提供する。
【0049】
本開示の化合物、すなわち、水素結合の供与体及び／又は受容体として作用することができる基を含有する式（Ｉ）の化合物は、好適な共結晶形成剤とともに共結晶を形成することができ得る。これらの共結晶は、既知の共結晶形成手順によって、式（Ｉ）の化合物から調製され得る。かかる手順は、溶液中で式（Ｉ）の化合物と共結晶形成剤とを結晶化条件下で粉砕するか、加熱するか、共昇華させるか、共融解させるか、又は接触させることと、それにより形成される共結晶を単離することと、を含む。好適な共結晶形成剤としては、ＷＯ２００４／０７８１６３に記載のものが挙げられる。したがって、本開示は更に、式（Ｉ）の化合物を含む共結晶を提供する。
【0050】
更に、それらの塩を含む本開示の化合物はまた、それらの水和物の形態で得られ得るか、又はそれらの結晶化に使用される他の溶媒を含み得る。本開示の化合物は、本質的に、又は設計によって、薬学的に許容される溶媒（水を含む）とともに溶媒和物を形成してもよく、したがって、本開示は、溶媒和形態及び非溶媒和形態の両方を包含することが意図される。「溶媒和物」という用語は、本開示の化合物（その薬学的に許容される塩を含む）と１つ以上の溶媒分子との分子複合体を指す。そのような溶媒分子は、医薬品の技術分野に一般的に使用されるものであり、レシピエントに無害であることが知られている、例えば、水、エタノールなどである。「水和物」という用語は、溶媒分子が水である複合体を指す。
【0051】
本開示は、式（Ｉ）の化合物の標識されていない形態及び同位体標識された形態を含む。同位体標識された化合物は、選択された原子質量又は質量数を有する原子によって１個以上の原子が置換されていることを除いて、本明細書で与えられる式によって示される構造を有する。本開示の化合物に組み込まれ得る同位体としては、例えば、水素の同位体が挙げられる。
【0052】
更に、ある特定の同位体、特に重水素（すなわち、２Ｈ又はＤ）の組み込みは、より大きな代謝安定性に起因するある特定の治療上の利点、例えば、インビボでの半減期の増加又は必要な投与量の低減、又は治療指数若しくは忍容性の改善をもたらし得る。この文脈における重水素は、本開示の化合物の置換基とみなされることを理解されたい。重水素の濃度は、同位体濃縮係数によって定義され得る。本明細書で使用される「同位体濃縮係数」という用語は、指定された同位体の同位体存在量と天然存在量との比を意味する。この開示の化合物中の置換基が重水素であると示されている場合、かかる化合物は、各指定された重水素原子について、少なくとも３５００（各指定された重水素原子での５２．５％重水素組み込み）、少なくとも４０００（６０％重水素組み込み）、少なくとも４５００（６７．５％重水素組み込み）、少なくとも５０００（７５％重水素組み込み）、少なくとも５５００（８２．５％重水素組み込み）、少なくとも６０００（９０％重水素組み込み）、少なくとも６３３３．３（９５％重水素組み込み）、少なくとも６４６６．７（９７％重水素組み込み）、少なくとも６６００（９９％重水素組み込み）、又は少なくとも６６３３．３（９９．５％重水素組み込み）の同位体濃縮係数を有する。「同位体濃縮係数」という用語は、重水素について記載されているのと同じ方法で任意の同位体に適用することができることを理解されたい。
【0053】
本開示の任意の態様の一実施形態では、式（Ｉ）の化合物中の水素は、それらの通常の同位体存在量で存在する。別の実施形態では、水素は、重水素（Ｄ）で同位体的に濃縮され、本開示の特定の実施形態では、式（Ｉ）は、式（ＩＩ）に示されるように、重水素化されるか、
又はその薬学的に許容される塩であり、式中、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３が、本開示のいずれかの態様又は実施形態に従って式（Ｉ）で定義される通りであり、ＲＤ１～ＲＤ７が、各々独立して、Ｈ又はＤである。式（ＩＩ）の化合物は、非重水素化態様の代わりに適切に重水素化された基質を使用することによって、一般スキーム１～２のうちのいずれか１つに従って合成することができる。
【化6】
又はその薬学的に許容される塩であり、式中、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３が、本開示のいずれかの態様又は実施形態に従って式（Ｉ）で定義される通りであり、ＲＤ１～ＲＤ７が、各々独立して、Ｈ又はＤである。式（ＩＩ）の化合物は、非重水素化態様の代わりに適切に重水素化された基質を使用することによって、一般スキーム１～２のうちのいずれか１つに従って合成することができる。
【0054】
本開示の化合物に組み込まれ得る同位体の他の例としては、水素、炭素、窒素、酸素、及びフッ素の同位体、例えば、それぞれ３Ｈ、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｆ、及び１８Ｏが挙げられる。したがって、本開示は、例えば、３Ｈ及び１４Ｃなどの放射性同位体、又は２Ｈ及び１３Ｃなどの非放射性同位体が存在するものを含む、前述の同位体のうちのいずれかの１つ以上を組み込む化合物を含むことが理解されるべきである。そのような同位体標識化合物は、代謝研究（１４Ｃを用いる）、反応速度研究（例えば、２Ｈ又は３Ｈを用いる）、薬物若しくは基質組織分布アッセイを含む検出又は画像化技術［陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）又は単光子放射型コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）など］、又は患者の放射性治療において有用である。特に、１８Ｆ又は標識された化合物は、ＰＥＴ研究又はＳＰＥＣＴ研究に特に望ましい場合がある。本開示の同位体標識された化合物は、概して、当業者に公知の従来の技術によって、又は、前に用いられた非標識された試薬の代わりに適切な同位体標識された試薬を使用して、付随する実施例及び調製例に記載されるものに類似したプロセスによって調製され得る。
【0055】
本開示の化合物（複数可）の任意の不斉原子（例えば、炭素など）は、ラセミ体又は鏡像異性体的に濃縮された状態で、例えば、（Ｒ）－配置、（Ｓ）－配置、又は（Ｒ，Ｓ）－配置で存在することができる。ある特定の実施形態では、各不斉原子は、（Ｒ）－配置又は（Ｓ）－配置において、少なくとも５０％のエナンチオマー過剰、少なくとも６０％のエナンチオマー過剰、少なくとも７０％のエナンチオマー過剰、少なくとも８０％のエナンチオマー過剰、少なくとも９０％のエナンチオマー過剰、少なくとも９５％のエナンチオマー過剰、又は少なくとも９９％のエナンチオマー過剰を有する。
【0056】
したがって、本明細書で使用される場合、本開示の化合物は、例えば、実質的に純粋なジアステレオマー、光学異性体（鏡像体）、ラセミ体、又はそれらの混合物として、可能な立体異性体、回転異性体、アトロプ異性体、互変異性体、又はそれらの混合物のうちの１つの形態であり得る。
【0057】
したがって、本開示の化合物は、ラセミ混合物又はエナンチオマー的に濃縮された形態で、又はエナンチオマー的に純粋な形態で、又はジアステレオ異性体の混合物として存在し得る。
【0058】
本出願の態様、実施形態又は特許請求の範囲のうちのいずれか１つにおける化合物式では、Ｃ－ｓｐ３上の
という用語は、（Ｒ）又は（Ｓ）のいずれかの絶対立体化学を示す。本出願の態様、実施形態又は特許請求の範囲のうちのいずれか１つにおける化合物式では、Ｃ－ｓｐ３上の
という用語は、（Ｒ）又は（Ｓ）のいずれかの絶対立体化学を示す。本出願の態様、実施形態又は特許請求の範囲のうちのいずれか１つにおける化合物式では、Ｃ－ｓｐ３上の
という用語は、結合の絶対立体化学が定義されていない共有結合を表す。このことは、Ｃ－ｓｐ３上の
という用語が、それぞれのキラル中心又はそれらの混合物の（Ｓ）配置又は（Ｒ）配置を含むことを意味する。したがって、立体異性体の混合物、例えば、ラセミ体などのエナンチオマーの混合物、及び／又はジアステレオ異性体の混合物は、本開示に包含される。
【0059】
任意の得られた立体異性体の混合物は、構成要素の物理化学的差異に基づいて、純粋な又は実質的に純粋な光学異性体、ジアステレオマー、ラセミ体へと、例えば、クロマトグラフィー及び／又は分別晶析によって分離することができる。
【0060】
本開示の化合物又は中間体の任意の得られるラセミ体は、既知の方法、例えば、光学的に活性な酸又は塩基で得られたそのジアステレオマー塩の分離によって、光学的に活性な酸性化合物又は塩基性化合物を遊離させることによって、光学的鏡像体に分割することができる。特に、したがって、塩基性部分は、例えば、光学的に活性な酸、例えば、酒石酸、ジベンゾイル酒石酸、ジアセチル酒石酸、ジ－Ｏ、Ｏ’－ｐ－トルオイル酒石酸、マンデル酸、リンゴ酸、又はカンファー－１０－スルホン酸により形成された塩の分別晶析によって、本開示の化合物をそれらの光学異性体に分割するために使用され得る。本開示のラセミ化合物又はラセミ中間体はまた、キラルクロマトグラフィー、例えば、キラル吸着剤を使用した高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって分割することもできる。
【0061】
５．３．作製する方法
本開示の化合物は、有機合成の当業者に周知のいくつかの方法で調製され得る。一例として、本開示の化合物は、合成有機化学の分野において既知の合成方法と一緒に、以下に記載の方法を使用して、又は当業者によって理解されるようなその変形形態によって合成され得る。
本開示の化合物は、有機合成の当業者に周知のいくつかの方法で調製され得る。一例として、本開示の化合物は、合成有機化学の分野において既知の合成方法と一緒に、以下に記載の方法を使用して、又は当業者によって理解されるようなその変形形態によって合成され得る。
【0062】
一般に、式（Ｉ）の化合物は、以下に提供されるスキームに従って調製され得る。
【化7】
【0063】
上記反応スキームの出発物質は、市販されているか、又は当業者に既知の方法に従って、又は本明細書に開示される方法によって調製することができる。一般に、本開示の化合物は、以下のように、上記一般スキーム１で調製される。
化合物（Ｙ）を中間体Ａ及びＢと縮合反応条件下で反応させて、化合物Ｅを得る。炭酸カリウム及びメタノールによる分子内ラクトン化により、式（Ｉ）の化合物（Ｒ１＝ＣＨ２Ｆ）を得る。一般スキーム１について、Ｒ２及びＲ３は、本明細書に定義される通りである。
化合物（Ｙ）を中間体Ａ及びＢと縮合反応条件下で反応させて、化合物Ｅを得る。炭酸カリウム及びメタノールによる分子内ラクトン化により、式（Ｉ）の化合物（Ｒ１＝ＣＨ２Ｆ）を得る。一般スキーム１について、Ｒ２及びＲ３は、本明細書に定義される通りである。
【化8】
【0064】
化合物（Ｙ）を中間体Ａ及び（Ｚ）－３－アミノブタ－２－エン酸メチルと縮合反応条件下で反応させて、化合物Ｆを得る。炭酸カリウム及びメタノールによる分子内ラクトン化により、式（Ｉ）の化合物（Ｒ１＝ＣＨ３）を得る。一般スキーム２について、Ｒ２及びＲ３は、本明細書に定義される通りである。
【0065】
一実施形態では、式（Ｘ）の化合物又はその塩であって、
Ｒ１が、ＣＨ３、ＣＦ３、ＣＨＦ２及びＣＨ２Ｆから選択され、
Ｒ２が、Ｈ及びＦから選択され、
Ｒ３が、Ｃ１～４アルキル、シクロプロピル及びシクロブチルから選択され、その各々が、１～３つのＦで任意選択的に置換され、
Ｒｘ及びＲｙが、各々独立して、Ｃ１～６アルキルであり、例えば、Ｒｘがエチルであり、Ｒｙがメチルである、化合物、又はその塩が提供される。
【化9】
Ｒ２が、Ｈ及びＦから選択され、
Ｒ３が、Ｃ１～４アルキル、シクロプロピル及びシクロブチルから選択され、その各々が、１～３つのＦで任意選択的に置換され、
Ｒｘ及びＲｙが、各々独立して、Ｃ１～６アルキルであり、例えば、Ｒｘがエチルであり、Ｒｙがメチルである、化合物、又はその塩が提供される。
【0066】
ある実施形態では、式（Ｉ）の化合物の調製における式（Ｘ）の化合物の使用が提供される。
【0067】
更なる実施形態では、式（Ｙ）の化合物又はその塩であって、
Ｒ２が、Ｈ及びＦから選択され、
Ｒ３が、Ｃ１～４アルキル、シクロプロピル及びシクロブチルから選択され、その各々が、１～３つのＦで任意選択的に置換される、化合物、又はその塩が提供される。
【化10】
Ｒ２が、Ｈ及びＦから選択され、
Ｒ３が、Ｃ１～４アルキル、シクロプロピル及びシクロブチルから選択され、その各々が、１～３つのＦで任意選択的に置換される、化合物、又はその塩が提供される。
【0068】
ある実施形態では、式（Ｉ）の化合物の調製における式（Ｙ）の化合物の使用が提供される。
【0069】
更なる態様では、本開示は、以下のステップを含む、遊離形態又は薬学的に許容される塩形態の式（Ｉ）の化合物を調製するためのプロセスを提供する。
１）本明細書に定義される式（Ｙ）の化合物を、
及び
（式中、Ｒ１が、ＣＨ３、ＣＦ３、ＣＨＦ２、及びＣＨ２Ｆから選択され、Ｒｘ及びＲｙが、各々独立してＣ１～６アルキルであり、例えば、Ｒｘがエチルであり、Ｒｙがメチルである）と縮合反応条件（例えば、熱）下で反応させて、本明細書に定義される式（Ｘ）の化合物を生成するステップ。
１）本明細書に定義される式（Ｙ）の化合物を、
【化11】
【0070】
式（Ｉ）の化合物を調製するためのプロセスの更なる実施形態では、このプロセスは、
２）本明細書で定義される式（Ｘ）の化合物（例えば、ステップ１に従って調製される）をラクトン化条件（例えば、塩基及び溶媒、例えば、Ｋ２ＣＯ３及びメタノール）下で反応させて、本明細書に定義される式（Ｉ）の化合物を生成するステップを含む。
２）本明細書で定義される式（Ｘ）の化合物（例えば、ステップ１に従って調製される）をラクトン化条件（例えば、塩基及び溶媒、例えば、Ｋ２ＣＯ３及びメタノール）下で反応させて、本明細書に定義される式（Ｉ）の化合物を生成するステップを含む。
【0071】
更なる施形態では、ステップ２のプロセスは、更に、
３）本明細書で定義される式（Ｉ）の化合物を精製する任意選択的なステップと、（任意選択的に）
４）例えば、クロマトグラフィーによって、例えば、キラルクロマトグラフィーによって、得られる立体異性体を分離する任意選択的なステップと、を含む。
３）本明細書で定義される式（Ｉ）の化合物を精製する任意選択的なステップと、（任意選択的に）
４）例えば、クロマトグラフィーによって、例えば、キラルクロマトグラフィーによって、得られる立体異性体を分離する任意選択的なステップと、を含む。
【0072】
前述のプロセスステップのいずれかのための、又は以下での縮合反応条件は、溶媒、例えば、アルコール、例えば、メタノール、エタノールなどのプロトン溶媒の使用、及び基質混合物の加熱を伴う。ある特定の反応は、塩基、例えば、ＮａＯＨ、アミンの添加（Ｋｎｏｅｖｅｎａｇｅｌ縮合）を必要とし得る。反応混合物を、反応が進行するのに必要な適切な温度、例えば、室温～１００℃、例えば、７０～８０℃まで加熱することができる。
【0073】
更なる実施形態では、一般スキーム１～２のうちのいずれか１つに従って、遊離形態又は薬学的に許容される塩形態の式（Ｉ）の化合物を調製するためのプロセスが提供される。
【0074】
前述のプロセスステップのいずれか、又は以下のラクトン化反応条件には、ラクトン基を生成するための適切な試薬の使用を伴う。例えば、ラクトン化条件は、塩基、例えば、Ｋ２ＣＯ３、及びプロトン溶媒、例えば、メタノール、エタノールなどの溶媒の使用を伴い得る。反応は、室温で、又は例えば室温から８０℃まで加熱することによって行われ得る。
【0075】
本明細書で定義される式（Ｘ）及び（Ｙ）の化合物は、本開示の化合物、例えば（Ｉ）の化合物の調製に有用である。したがって、ある態様では、本開示は、式（Ｘ）若しくは（Ｙ）の化合物、又はそれらの塩に関する。別の態様では、本開示は、式（Ｉ）の化合物の製造における式（Ｘ）若しくは（Ｙ）の化合物、又はそれらの塩の使用に関する。本開示は、その任意の段階で得ることができる中間体生成物が出発物質として使用され、残りのステップが実行される変形例、又は出発物質が反応条件下で系中で形成される変形例、又は反応成分がその塩若しくは光学的に純粋な物質の形態で使用される変形例など、本発明のプロセスの任意の変形例を更に含む。
【0076】
５．４．使用方法
遊離形態又は薬学的に許容される塩形態の本開示の化合物は、例えば、次のセクションで提供されるインビトロ試験及びインビボ試験で示されるような、貴重な薬理学的特性、例えば、ＣａＶ１．２活性化特性を示し、したがって、療法のため、又は研究化学物質として、例えば、ツール化合物として使用するために示される。
遊離形態又は薬学的に許容される塩形態の本開示の化合物は、例えば、次のセクションで提供されるインビトロ試験及びインビボ試験で示されるような、貴重な薬理学的特性、例えば、ＣａＶ１．２活性化特性を示し、したがって、療法のため、又は研究化学物質として、例えば、ツール化合物として使用するために示される。
【0077】
本開示の化合物、例えば、式（Ｉ）の化合物（（ＩＩ）、（Ｉａ）及び（Ｉｂ）を含む）は、以下のリストから選択される適応症の治療に有用であり得る。
精神神経系障害、例えば、統合失調症、双極性障害、大うつ病性障害、及び物質使用障害；
神経発達障害、例えば、注意欠如多動性障害、フェラン－マクダーミド症候群、及び他の自閉症スペクトラム障害；
神経変性障害、例えば、多発性硬化症、前頭側頭型認知症及びアルツハイマー病；並びに
心臓の状態、例えば、ブルガダ症候群、ＱＴ短縮症候群、及び早期再分極症候群。一実施形態では、適応症は、統合失調症、双極性障害、大うつ病性障害、又は物質使用障害などの精神神経系障害である。別の実施形態では、適応症は、統合失調症又は双極性障害である。
精神神経系障害、例えば、統合失調症、双極性障害、大うつ病性障害、及び物質使用障害；
神経発達障害、例えば、注意欠如多動性障害、フェラン－マクダーミド症候群、及び他の自閉症スペクトラム障害；
神経変性障害、例えば、多発性硬化症、前頭側頭型認知症及びアルツハイマー病；並びに
心臓の状態、例えば、ブルガダ症候群、ＱＴ短縮症候群、及び早期再分極症候群。一実施形態では、適応症は、統合失調症、双極性障害、大うつ病性障害、又は物質使用障害などの精神神経系障害である。別の実施形態では、適応症は、統合失調症又は双極性障害である。
【0078】
別の態様では、本開示は、ＣａＶ１．２の活性化によって治療される疾患又は障害を治療する方法であって、治療有効量の本開示の化合物又はその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法を提供する。更なる実施形態では、疾患は、前述の適応症のリストから選択される。
【0079】
別の態様では、本開示は、ＣａＶ１．２の活性化によって治療される疾患又は障害を治療する方法であって、本開示の化合物又はその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法を提供する。更なる実施形態では、疾患は、前述の適応症のリストから選択される。
【0080】
別の態様では、本開示は、統合失調症、双極性障害、大うつ病性障害、物質使用障害、ＡＤＨＤ、フェラン－マクダーミド症候群、自閉症スペクトラム障害、多発性硬化症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、ブルガダ症候群、ＱＴ短縮症候群、又は早期再分極症候群の治療を必要とする対象においてそれを行う方法であって、方法が、治療有効量の本開示の化合物、例えば、式（Ｉ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法を提供する。
【0081】
別の態様では、本開示は、統合失調症、双極性障害、大うつ病性障害、物質使用障害、ＡＤＨＤ、フェラン－マクダーミド症候群、自閉症スペクトラム障害、多発性硬化症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、ブルガダ症候群、ＱＴ短縮症候群、又は早期再分極症候群の治療を必要とする対象においてそれを行う方法であって、方法が、本開示の化合物、例えば、式（Ｉ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法を提供する。
【0082】
更なる態様では、本開示は、療法に使用するための、本開示の化合物、例えば、式（Ｉ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩を提供する。更なる実施形態では、療法は、ＣａＶ１．２の活性化によって治療され得る疾患又は障害から選択される。別の実施形態では、疾患は、前述の適応症のリストから選択される。
【0083】
更なる態様では、本開示は、統合失調症、双極性障害、大うつ病性障害、物質使用障害、ＡＤＨＤ、フェラン－マクダーミド症候群、自閉症スペクトラム障害、多発性硬化症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、ブルガダ症候群、ＱＴ短縮症候群、又は早期再分極症候群の治療に使用するための、本開示の化合物、例えば、式（Ｉ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩を提供する。
【0084】
したがって、更なる態様では、本開示は、療法における本開示の化合物、例えば、式（Ｉ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩の使用を提供する。更なる実施形態では、療法は、ＣａＶ１．２の活性化によって治療され得る疾患から選択される。別の実施形態では、疾患は、前述の適応症のリストから選択される。
【0085】
更なる態様では、本開示は、医薬の製造のための、本開示の化合物、例えば、式（Ｉ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩の使用を提供する。更なる実施形態では、医薬は、ＣａＶ１．２の活性化によって治療され得る疾患の治療のためのものである。別の実施形態では、疾患は、前述の適応症のリストから選択される。
【0086】
更なる態様では、本開示は、統合失調症、双極性障害、大うつ病性障害、物質使用障害、ＡＤＨＤ、フェラン－マクダーミド症候群、自閉症スペクトラム障害、多発性硬化症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、ブルガダ症候群、ＱＴ短縮症候群、又は早期再分極症候群の治療のための医薬の製造のための、本開示の化合物、例えば、式（Ｉ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【0087】
したがって、更なる態様では、本開示は、統合失調症、双極性障害、大うつ病性障害、物質使用障害、ＡＤＨＤ、フェラン－マクダーミド症候群、自閉症スペクトラム障害、多発性硬化症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、ブルガダ症候群、ＱＴ短縮症候群、又は早期再分極症候群を治療するための、本開示の化合物、例えば、式（Ｉ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【0088】
使用、治療方法、及び使用のための化合物に関する全ての前述の実施形態及び以下の実施形態は、本開示の化合物、例えば、式（Ｉ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩を含む薬学的組成物に等しく適用可能である。
【0089】
５．５．薬学的組成物
別の態様では、本開示は、本開示の化合物又はその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体と、を含む、薬学的組成物を提供する。更なる実施形態では、組成物は、本明細書に記載されるものなどの少なくとも２つの薬学的に許容される担体を含む。薬学的組成物は、経口投与、非経口投与（例えば、注射、注入、経皮又は局所投与による）、及び直腸投与などの特定の投与経路のために製剤化することができる。局所投与は、吸入又は鼻腔内適用にも関係し得る。本開示の薬学的組成物は、固体形態（限定されないが、カプセル、錠剤、丸剤、顆粒、粉末、又は坐剤を含む）、又は液体形態（限定されないが、溶液、懸濁液、又はエマルションを含む）で構成され得る。錠剤は、当該技術分野で既知の方法に従って、フィルムコーティング又は腸溶性コーティングされ得る。典型的には、薬学的組成物は、活性成分を、
ａ）希釈剤、例えば、ラクトース、デキストロース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、セルロース、及び／又はグリシン、
ｂ）滑沢剤、例えば、シリカ、タルカム、ステアリン酸、そのマグネシウム若しくはカルシウム塩、及び／又はポリエチレングリコールのうちの１つ以上とともに含む錠剤又はゼラチンカプセルであり、また、錠剤の場合には、
ｃ）結合剤、例えば、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、デンプンペースト、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、及び／又はポリビニルピロリドンも含み、必要に応じて、
ｄ）崩壊剤、例えば、デンプン、寒天、アルギン酸若しくはそのナトリウム塩、若しくは発泡性混合物；及び
ｅ）吸収剤、着色剤、香料及び甘味料も含む。
別の態様では、本開示は、本開示の化合物又はその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体と、を含む、薬学的組成物を提供する。更なる実施形態では、組成物は、本明細書に記載されるものなどの少なくとも２つの薬学的に許容される担体を含む。薬学的組成物は、経口投与、非経口投与（例えば、注射、注入、経皮又は局所投与による）、及び直腸投与などの特定の投与経路のために製剤化することができる。局所投与は、吸入又は鼻腔内適用にも関係し得る。本開示の薬学的組成物は、固体形態（限定されないが、カプセル、錠剤、丸剤、顆粒、粉末、又は坐剤を含む）、又は液体形態（限定されないが、溶液、懸濁液、又はエマルションを含む）で構成され得る。錠剤は、当該技術分野で既知の方法に従って、フィルムコーティング又は腸溶性コーティングされ得る。典型的には、薬学的組成物は、活性成分を、
ａ）希釈剤、例えば、ラクトース、デキストロース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、セルロース、及び／又はグリシン、
ｂ）滑沢剤、例えば、シリカ、タルカム、ステアリン酸、そのマグネシウム若しくはカルシウム塩、及び／又はポリエチレングリコールのうちの１つ以上とともに含む錠剤又はゼラチンカプセルであり、また、錠剤の場合には、
ｃ）結合剤、例えば、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、デンプンペースト、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、及び／又はポリビニルピロリドンも含み、必要に応じて、
ｄ）崩壊剤、例えば、デンプン、寒天、アルギン酸若しくはそのナトリウム塩、若しくは発泡性混合物；及び
ｅ）吸収剤、着色剤、香料及び甘味料も含む。
【0090】
本開示の薬学的組成物は、約５０～７０ｋｇの対象に対して約１～１０００ｍｇの活性成分（複数可）、又は約１～５００ｍｇ、又は約１～２５０ｍｇ、又は約１～１５０ｍｇ、又は約０．５～１００ｍｇ、又は約１～５０ｍｇの活性成分の単位投薬量であり得る。化合物、薬学的組成物、又はそれらの組み合わせの治療有効投薬量は、対象の種、体重、年齢、及び個々の状態、治療される障害又は疾患、又はその重症度に依存する。当業者の医師、臨床医、又は獣医は、障害又は疾患の進行を予防、治療、又は阻害するために必要な活性成分の各々の有効量を容易に決定することができる。
【0091】
上に引用した投薬量特性は、有利には、哺乳動物、例えば、マウス、ラット、イヌ、サル、又は単離された臓器、組織、及びその調製物を使用したインビトロ試験及びインビボ試験で実証可能である。本開示の化合物は、インビトロで、溶液、例えば、水溶液の形態で、及びインビボで、腸内、非経口のいずれかで、有利には、静脈内で、例えば、懸濁液として、又は水溶液で、適用することができる。インビトロでの投薬量は、約１０－３モル濃度～１０－９モル濃度の範囲であり得る。インビボでの治療有効量は、投与経路に応じて、約０．１～５００ｍｇ／ｋｇ、又は約１～１００ｍｇ／ｋｇの範囲であり得る。
【0092】
６．化合物の調製
以下の実施例は、本開示を例示することを意図しており、その限定として解釈されるべきではない。
以下の実施例は、本開示を例示することを意図しており、その限定として解釈されるべきではない。
【0093】
実施例を全てそれらの単一のエナンチオマーに分離し、以下の生物学的データ（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｄａｔａ）のセクションに記載されるＳｏｐｈｉｏｎ ＱＰａｔｃｈアッセイで試験した。実施例２の（Ｒ）－４－（５－フルオロ－４－（（Ｒ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－（フルオロメチル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチルの絶対的な立体化学を、単結晶ｘ線結晶分析によって決定した（図２）。（Ｒ）－４－（５－フルオロ－４－（（Ｒ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－（フルオロメチル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチルの立体異性体は、その対応するエナンチオマーよりも高い活性を有することが見出された。したがって、ジヒドロピリジン環上のＣ１０位置は、各実施例で最も活性の高い立体異性体に対して同じ空間配置を採用すると仮定される。
（Ｒ）－４－（５－フルオロ－４－（（Ｒ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－（フルオロメチル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル
【化12】
【0094】
実施例番号（実施例１、２、３など）は、全てジヒドロピリジン環上のＣ１０位置の周りに同じ配置を有すると仮定される活性エナンチオマーについて与えられる（実施例は、環系の置換に応じてＲ又はＳのいずれかを指定することができる）。合成から単離した他の全ての異性体に、文字を有する実施例番号を与えた（実施例１ｂ、２ｂ、３ｂなど）。示されるＣ１０位置が所望の立体化学であることを示唆する強力な証拠が存在するが、実施例のいくつかにおいて、他の配置が活性エナンチオマーであり得る可能性が依然として存在する。
【0095】
温度は、摂氏温度で与えられる。別段に記載されていない場合、全ての蒸発は、減圧下、典型的には約１５ｍｍＨｇ～１００ｍｍＨｇ（＝２０～１３３ｍｂａｒ）で行われる。最終生成物、中間体、及び出発物質の構造は、標準的な分析方法、例えば、マイクロ分析及び分光特性、例えば、ＭＳ、ＩＲ、ＮＭＲによって確認される。
【0096】
本開示の化合物を合成するために利用される全ての出発物質、ビルディングブロック、試薬、酸、塩基、脱水剤、溶媒及び触媒は、市販されているか、又は当業者に公知の有機合成方法によって製造することができる。更に、本開示の化合物は、以下の実施例に示されるように、当業者に既知の有機合成方法によって製造することができる。使用される略語は、当該技術分野での従来のものであるか、又は以下である。
【表1-1】
【表1-2】
【0097】
小分子Ｘ線結晶構造解析
データ収集
強度データは、ＡＰＥＸ ３ソフトウェア（Ｂｒｕｋｅｒ ＡＸＳ（２０１６））を使用して、単色Ｃｕ（Ｋα）放射、マイクロソース発生器、及びＰｈｏｔｏｎ ＩＩＩ検出器を有するＢｒｕｋｅｒ ＡＸＳ三円回折計で、１００Ｋで収集された。適切なデータ冗長性を確保するために、異なる２θ及びφ位置で２１回のωスキャンを実施した（１４．９、Ｆｒｉｅｄｅｌペアはマージされていない）。Ｓａｉｎｔ（Ｂｒｕｋｅｒ ＡＸＳ（２０１２））を用いて、データ処理及びグローバルセル微調整を行った。異なる角度設定で測定された対称性関連反射の強度に基づく半経験的吸収補正をＳＡＤＡＢＳ－２０１６／２（Ｋｒａｕｓｅ ｅｔ ａｌ（２０１５））を使用して適用した。
データ収集
強度データは、ＡＰＥＸ ３ソフトウェア（Ｂｒｕｋｅｒ ＡＸＳ（２０１６））を使用して、単色Ｃｕ（Ｋα）放射、マイクロソース発生器、及びＰｈｏｔｏｎ ＩＩＩ検出器を有するＢｒｕｋｅｒ ＡＸＳ三円回折計で、１００Ｋで収集された。適切なデータ冗長性を確保するために、異なる２θ及びφ位置で２１回のωスキャンを実施した（１４．９、Ｆｒｉｅｄｅｌペアはマージされていない）。Ｓａｉｎｔ（Ｂｒｕｋｅｒ ＡＸＳ（２０１２））を用いて、データ処理及びグローバルセル微調整を行った。異なる角度設定で測定された対称性関連反射の強度に基づく半経験的吸収補正をＳＡＤＡＢＳ－２０１６／２（Ｋｒａｕｓｅ ｅｔ ａｌ（２０１５））を使用して適用した。
【0098】
構造の解明及び微調整
構造は、二重空間リサイクル法及びその後のＤＦ合成によって解明され、ＳＨＥＬＸＴＬプログラムスイート（Ｓｈｅｌｄｒｉｃｋ ＧＭ （２００１））を使用して、Ｆ２上の全行列最小二乗に基づいて微調整された。
異方性変位パラメータを全ての非水素原子に使用した。水素原子は、ＤＦマップ内に配置され、ライディングモデルを使用して理想化された位置で微調整された。
参考文献：
Ａｌｌｅｎ ＦＨ，Ｋｅｎｎａｒｄ Ｏ，Ｗａｔｓｏｎ Ｄ ｅｔ ａｌ（１９８７）Ｔａｂｌｅｓ ｏｆ Ｂｏｎｄ Ｌｅｎｇｔｈｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ Ｘ－Ｒａｙ
ａｎｄ Ｎｅｕｔｒｏｎ Ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ．Ｐａｒｔ １，Ｂｏｎｄ Ｌｅｎｇｔｈｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ
Ｔｒａｎｓ ＩＩ；Ｓ１－Ｓ１９。
Ｂｒｕｋｅｒ ＡＸＳ（２００５）ＳＭＡＲＴ Ｖ５．６３２．Ｂｒｕｋｅｒ ＡＸＳ Ｉｎｃ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ，ＵＳＡ。
Ｂｒｕｋｅｒ ＡＸＳ（２０１２）ＳＡＩＮＴ Ｖ７．３６Ａ．Ｂｒｕｋｅｒ ＡＸＳ Ｉｎｃ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ，ＵＳＡ。
Ｋｒａｕｓｅ Ｌ，Ｈｅｒｂｓｔ－Ｉｒｍｅｒ Ｒ，Ｓｈｅｌｄｒｉｃｋ ＧＭ ｅｔ ａｌ（２０１５）Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｓｉｌｖｅｒ ａｎｄ ｍｏｌｙｂｄｅｎｕｍ
ｍｉｃｒｏｆｏｃｕｓ Ｘ－ｒａｙ ｓｏｕｒｃｅｓ ｆｏｒ ｓｉｎｇｌｅ－ｃｒｙｓｔａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ．Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｃｒｙｓｔ．；４８：３－１０。
Ｓｐｅｋ ＡＬ（２００３）Ｓｉｎｇｌｅ－ｃｒｙｓｔａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｐｒｏｇｒａｍ ＰＬＡＴＯＮ．Ｊ．Ａｐｐｌ．
Ｃｒｙｓｔ．；３６：７－１３。
Ｓｈｅｌｄｒｉｃｋ ＧＭ（２００１）ＳＨＥＬＸＴＬ Ｖ６．１２．Ｂｒｕｋｅｒ ＡＸＳ Ｉｎｃ．Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ，ＵＳＡ。
構造は、二重空間リサイクル法及びその後のＤＦ合成によって解明され、ＳＨＥＬＸＴＬプログラムスイート（Ｓｈｅｌｄｒｉｃｋ ＧＭ （２００１））を使用して、Ｆ２上の全行列最小二乗に基づいて微調整された。
異方性変位パラメータを全ての非水素原子に使用した。水素原子は、ＤＦマップ内に配置され、ライディングモデルを使用して理想化された位置で微調整された。
参考文献：
Ａｌｌｅｎ ＦＨ，Ｋｅｎｎａｒｄ Ｏ，Ｗａｔｓｏｎ Ｄ ｅｔ ａｌ（１９８７）Ｔａｂｌｅｓ ｏｆ Ｂｏｎｄ Ｌｅｎｇｔｈｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ Ｘ－Ｒａｙ
ａｎｄ Ｎｅｕｔｒｏｎ Ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ．Ｐａｒｔ １，Ｂｏｎｄ Ｌｅｎｇｔｈｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ
Ｔｒａｎｓ ＩＩ；Ｓ１－Ｓ１９。
Ｂｒｕｋｅｒ ＡＸＳ（２００５）ＳＭＡＲＴ Ｖ５．６３２．Ｂｒｕｋｅｒ ＡＸＳ Ｉｎｃ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ，ＵＳＡ。
Ｂｒｕｋｅｒ ＡＸＳ（２０１２）ＳＡＩＮＴ Ｖ７．３６Ａ．Ｂｒｕｋｅｒ ＡＸＳ Ｉｎｃ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ，ＵＳＡ。
Ｋｒａｕｓｅ Ｌ，Ｈｅｒｂｓｔ－Ｉｒｍｅｒ Ｒ，Ｓｈｅｌｄｒｉｃｋ ＧＭ ｅｔ ａｌ（２０１５）Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｓｉｌｖｅｒ ａｎｄ ｍｏｌｙｂｄｅｎｕｍ
ｍｉｃｒｏｆｏｃｕｓ Ｘ－ｒａｙ ｓｏｕｒｃｅｓ ｆｏｒ ｓｉｎｇｌｅ－ｃｒｙｓｔａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ．Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｃｒｙｓｔ．；４８：３－１０。
Ｓｐｅｋ ＡＬ（２００３）Ｓｉｎｇｌｅ－ｃｒｙｓｔａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｐｒｏｇｒａｍ ＰＬＡＴＯＮ．Ｊ．Ａｐｐｌ．
Ｃｒｙｓｔ．；３６：７－１３。
Ｓｈｅｌｄｒｉｃｋ ＧＭ（２００１）ＳＨＥＬＸＴＬ Ｖ６．１２．Ｂｒｕｋｅｒ ＡＸＳ Ｉｎｃ．Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ，ＵＳＡ。
【0099】
分析ＬＣＭＳ方法：
方法１：カラム：Ｓｙｎｅｒｇｉ ２．５μ ＭＡＸ－ＲＰ １００Ａ Ｍｅｒｃｕｒｙ；移動相：水中の０．１％ギ酸（Ａ）／ＡＣＮ（Ｂ）；勾配／（時間／％Ｂ）：０．１／５、０．５／５、１．０／９５、１．５／９５、２．０／５、３．０／５；流量：２．０ｍＬ／分、温度：４０℃
方法２：方法：ＡＰＩ ２０００；勾配：時間／％Ｂ：０／３０、０．５／３０、１．５／９５、２．４／９５、２．５／３０、３．０／３０；移動相：水中の０．１％ＦＡ（Ａ）、ＡＣＮ（Ｂ）
方法３：カラム：ＺＯＲＢＡＸ ＥＣＬＩＰＳＥ ＸＤＢ Ｃ１８ １．８μｍ、５０＊４．６ｍｍ；移動相：水中の０．１％ギ酸（Ａ）／ＡＣＮ（Ｂ） ％Ｂに対する勾配時間：０．０／２０、０．２５／２０、０１．０／９５．０、２．５／９５、３．０／２０、４／２０
方法４：カラム：Ｋｉｎｅｔｅｘ ２．６μｍ、１００Ａ ３０ｘ３ｍｍ；移動相：水中の０．１％ギ酸（Ａ）／ＡＣＮ（Ｂ）；勾配／（時間／％Ｂ）：０．１／２０、０．２５／２０、０．７５／９５、１．７５／９５、２．０／２０、２．５／２０；流量：１．０ｍＬ／分、温度：４０℃
方法１：カラム：Ｓｙｎｅｒｇｉ ２．５μ ＭＡＸ－ＲＰ １００Ａ Ｍｅｒｃｕｒｙ；移動相：水中の０．１％ギ酸（Ａ）／ＡＣＮ（Ｂ）；勾配／（時間／％Ｂ）：０．１／５、０．５／５、１．０／９５、１．５／９５、２．０／５、３．０／５；流量：２．０ｍＬ／分、温度：４０℃
方法２：方法：ＡＰＩ ２０００；勾配：時間／％Ｂ：０／３０、０．５／３０、１．５／９５、２．４／９５、２．５／３０、３．０／３０；移動相：水中の０．１％ＦＡ（Ａ）、ＡＣＮ（Ｂ）
方法３：カラム：ＺＯＲＢＡＸ ＥＣＬＩＰＳＥ ＸＤＢ Ｃ１８ １．８μｍ、５０＊４．６ｍｍ；移動相：水中の０．１％ギ酸（Ａ）／ＡＣＮ（Ｂ） ％Ｂに対する勾配時間：０．０／２０、０．２５／２０、０１．０／９５．０、２．５／９５、３．０／２０、４／２０
方法４：カラム：Ｋｉｎｅｔｅｘ ２．６μｍ、１００Ａ ３０ｘ３ｍｍ；移動相：水中の０．１％ギ酸（Ａ）／ＡＣＮ（Ｂ）；勾配／（時間／％Ｂ）：０．１／２０、０．２５／２０、０．７５／９５、１．７５／９５、２．０／２０、２．５／２０；流量：１．０ｍＬ／分、温度：４０℃
【0100】
精製のための分取ＨＰＬＣ方法：
方法１：ＨＰＬＣカラム：ＸＢＲＩＤＧＥ－Ｃ１８（１９．０×１５０ｍｍ、５ミクロン）、移動相－Ａ：Ｈ２Ｏ中の０．１％ＴＦＡ、Ｂ：ＣＨ３ＣＮ、勾配（時間／％Ｂ）：０／２０、２／２０、８／５０） 流速：［１９ｍＬ／分］。
方法２：ＨＰＬＣカラム：ＺＯＲＢＡＸ ＥＣＬＩＰＳＥ ＸＤＢ Ｃ１８（２１．２×１５０ｍｍ、５ミクロン）、移動相－Ａ：Ｈ２Ｏ中の０．１％ＴＦＡ、Ｂ：ＣＨ３ＣＮ、勾配（時間／％Ｂ）：０／１０、２／２０、１０／４０及び流速：［２０ｍＬ／分］。
方法３：ＨＰＬＣカラム：ＸＢＲＩＤＧＥ Ｃ１８（２１．２×１５０ｍｍ、５ミクロン）、移動相－Ａ：水中の１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３、Ｂ：ＣＨ３ＣＮ、勾配（時間／％Ｂ）：０／１０、２／２０、８／５０及び流速：［１８ｍＬ／分］。
方法４：ＨＰＬＣカラム：Ｇｅｍｉｎｉ ＮＸ Ｃ１８（２１．２×１５０．００ｍｍ、５ミクロン）；移動相－（Ａ）：水中の０．１％ＴＦＡ （Ｂ）：アセトニトリル／メタノール；流量：１５ｍｌ／分；（時間／％Ｂ ０／２０、２／２０、８／２０）
方法５：ＨＰＬＣカラム：ＫＩＮＥＴＥＸ ＥＶＯ ５μ Ｃ１８（２１．２×１５０ｍｍ）、移動相：水（Ａ） ＣＨ３ＣＮ（Ｂ）、勾配（時間／％Ｂ）：０／２０、２／３０、７／７０及び流速：［１８ｍＬ／分］。
方法６：ＨＰＬＣカラム：ＫＩＮＥＴＥＸ Ｃ１８、（２１．２×１５０ｍｍ）、移動相：Ａ：水、Ｂ：ＣＨ３ＣＮ：ＭｅＯＨ、勾配（時間／％Ｂ）：０／２０、２／３０、７／７０、流速：１８ｍＬ／分］。
方法７：ＨＰＬＣカラム：ＫＩＮＥＴＥＸ（２１．２×１５０ｍｍ、５ミクロン）、移動相：Ａ＝水中の０．０５％ＴＦＡ、Ｂ＝ＣＨ３ＣＮ、勾配（時間／％Ｂ）：０／２０、２／３０、１０／６０、流速：２０ｍＬ／分］。
方法１：ＨＰＬＣカラム：ＸＢＲＩＤＧＥ－Ｃ１８（１９．０×１５０ｍｍ、５ミクロン）、移動相－Ａ：Ｈ２Ｏ中の０．１％ＴＦＡ、Ｂ：ＣＨ３ＣＮ、勾配（時間／％Ｂ）：０／２０、２／２０、８／５０） 流速：［１９ｍＬ／分］。
方法２：ＨＰＬＣカラム：ＺＯＲＢＡＸ ＥＣＬＩＰＳＥ ＸＤＢ Ｃ１８（２１．２×１５０ｍｍ、５ミクロン）、移動相－Ａ：Ｈ２Ｏ中の０．１％ＴＦＡ、Ｂ：ＣＨ３ＣＮ、勾配（時間／％Ｂ）：０／１０、２／２０、１０／４０及び流速：［２０ｍＬ／分］。
方法３：ＨＰＬＣカラム：ＸＢＲＩＤＧＥ Ｃ１８（２１．２×１５０ｍｍ、５ミクロン）、移動相－Ａ：水中の１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３、Ｂ：ＣＨ３ＣＮ、勾配（時間／％Ｂ）：０／１０、２／２０、８／５０及び流速：［１８ｍＬ／分］。
方法４：ＨＰＬＣカラム：Ｇｅｍｉｎｉ ＮＸ Ｃ１８（２１．２×１５０．００ｍｍ、５ミクロン）；移動相－（Ａ）：水中の０．１％ＴＦＡ （Ｂ）：アセトニトリル／メタノール；流量：１５ｍｌ／分；（時間／％Ｂ ０／２０、２／２０、８／２０）
方法５：ＨＰＬＣカラム：ＫＩＮＥＴＥＸ ＥＶＯ ５μ Ｃ１８（２１．２×１５０ｍｍ）、移動相：水（Ａ） ＣＨ３ＣＮ（Ｂ）、勾配（時間／％Ｂ）：０／２０、２／３０、７／７０及び流速：［１８ｍＬ／分］。
方法６：ＨＰＬＣカラム：ＫＩＮＥＴＥＸ Ｃ１８、（２１．２×１５０ｍｍ）、移動相：Ａ：水、Ｂ：ＣＨ３ＣＮ：ＭｅＯＨ、勾配（時間／％Ｂ）：０／２０、２／３０、７／７０、流速：１８ｍＬ／分］。
方法７：ＨＰＬＣカラム：ＫＩＮＥＴＥＸ（２１．２×１５０ｍｍ、５ミクロン）、移動相：Ａ＝水中の０．０５％ＴＦＡ、Ｂ＝ＣＨ３ＣＮ、勾配（時間／％Ｂ）：０／２０、２／３０、１０／６０、流速：２０ｍＬ／分］。
【0101】
異性体の分離のためのキラル分取ＨＰＬＣ方法：
方法１：カラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ ＩＣ（１０×２５０ｍｍ、５ミクロン）、移動相：ヘキサン（Ａ）ＩＰＡ：ＭｅＯＨ、１：１（Ｂ）；流速：８ｍＬ／分；イソクラティック：９６：０４（Ａ：Ｂ）。
方法２：カラム：ＲＥＧＩＳ ＷＥＬＫＯ（２５０×１０ｍｍ、５ミクロン）、移動相：ヘキサン（Ａ）：ＥｔＯＨ、１：１（Ｂ）；流速：９ｍＬ／分；イソクラティック：８５：１５（Ａ：Ｂ）。
方法３：カラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＣ ＩＧ（２５０×１０ｍｍ、５ミクロン）、移動相：ＩＰＡ（Ａ）：ＭｅＯＨ、１：１（Ｂ）；流速：６ｍＬ／分；イソクラティック：９８：２（Ａ：Ｂ）。
方法４：カラム：ＬＵＸ ＣＥＬＬＵＬＯＳＥ－４（１０×２５０ｍｍ、５ミクロン）、移動相：ヘキサン（Ａ）ＥｔＯＨ：ＩＰＡ １：１（Ｂ）；流速：８ｍＬ／分；イソクラティック：９０：１０（Ａ：Ｂ）。
方法１：カラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ ＩＣ（１０×２５０ｍｍ、５ミクロン）、移動相：ヘキサン（Ａ）ＩＰＡ：ＭｅＯＨ、１：１（Ｂ）；流速：８ｍＬ／分；イソクラティック：９６：０４（Ａ：Ｂ）。
方法２：カラム：ＲＥＧＩＳ ＷＥＬＫＯ（２５０×１０ｍｍ、５ミクロン）、移動相：ヘキサン（Ａ）：ＥｔＯＨ、１：１（Ｂ）；流速：９ｍＬ／分；イソクラティック：８５：１５（Ａ：Ｂ）。
方法３：カラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＣ ＩＧ（２５０×１０ｍｍ、５ミクロン）、移動相：ＩＰＡ（Ａ）：ＭｅＯＨ、１：１（Ｂ）；流速：６ｍＬ／分；イソクラティック：９８：２（Ａ：Ｂ）。
方法４：カラム：ＬＵＸ ＣＥＬＬＵＬＯＳＥ－４（１０×２５０ｍｍ、５ミクロン）、移動相：ヘキサン（Ａ）ＥｔＯＨ：ＩＰＡ １：１（Ｂ）；流速：８ｍＬ／分；イソクラティック：９０：１０（Ａ：Ｂ）。
【0102】
中間体の調製及び一般手順：
中間体Ａ：４－アセトキシ－３－オキソブタン酸エチルの形成
４－クロロ－３－オキソブタン酸エチル（２００ｇ、１２１５．１ｍｍｏｌ）の酢酸（１５００ｍＬ）溶液に、酢酸カリウム（３５７ｇ、３６４５．４ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を、９０℃で１８時間撹拌した。溶媒を室温まで冷却し、水（２Ｌ）に添加し、酢酸エチル（１Ｌ×４回）内で抽出した。ＥｔＯＡｃ相を合わせ、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（２Ｌ）、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。溶媒を減圧下で除去し、粗生成物を、シリカフラッシュクロマトグラフィーの石油エーテル中の酢酸エチル（０→１５％）により精製して、表題化合物を淡褐色の液体の４－アセトキシ－３－オキソブタン酸エチルとして得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ４．７８（ｓ，２Ｈ），４．２０（ｑ，Ｊ＝１４．１，７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．４９（ｓ，２Ｈ），２．１６（ｓ，３Ｈ），１．２８（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）。
中間体Ａ：４－アセトキシ－３－オキソブタン酸エチルの形成
【化13】
【0103】
中間体Ｂ（Ｚ）－３－アミノ－４－フルオロブタ－２－エン酸メチルの形成
方法１：
窒素雰囲気下、酢酸メチル（３６．５ｇ、４９２．７１ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（２００ｍＬ）溶液を－７８℃まで冷却し、ＴＨＦ中のリチウムジイソプロピルアミド（２４６．４４ｍＬ、２．０Ｍ、４９２．７１ｍｍｏｌ）を２０分間にわたってゆっくりと反応物に添加し、得られた混合物を－７８℃で１時間撹拌し、続いて２－フルオロアセトニトリル（１９．４ｇ、３２８．９ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１５０ｍＬ）溶液で滴下して添加した。反応混合物を－７８℃で更に１時間撹拌し、その後、飽和塩化アンモニウム溶液（２００ｍＬ）を添加し、生成物を酢酸エチル（５Ｌ）内で抽出した。ＥｔＯＡｃを飽和ブライン溶液（５００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。溶媒を減圧下で除去し、粗生成物をシリカフラッシュクロマトグラフィーの石油エーテル中の酢酸エチル（０→１０％）により精製して、表題化合物を白色結晶性固体の（Ｚ）－３－アミノ－４－フルオロブタ－２－エン酸メチルとして得た。
方法１：
【化14】
【0104】
方法２：
ステップ１：窒素雰囲気下、酢酸メチル（８３．７８ｇ、１１３１．０ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（８００ｍＬ）溶液を－７８℃まで冷却し、次いで、ＴＨＦ中のリチウムジイソプロピルアミド（５６５．５ｍＬ、２．０Ｍ、１１３１．０ｍｍｏｌ）を、２０分間にわたってゆっくりと反応物に添加した。得られた混合物を－７８℃で１時間撹拌し、次いで、２－フルオロ酢酸エチル（１００ｇ、９４２．５ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（２００ｍＬ）の溶液で滴下して添加し、反応混合物を－７８℃で更に１時間撹拌した。飽和塩化アンモニウム溶液（２００ｍＬ）を反応混合物に添加し、生成物を酢酸エチル（５Ｌ）内で抽出した。ＥｔＯＡｃを飽和ブライン溶液（５００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。溶媒を減圧下で除去し、粗生成物を、シリカフラッシュクロマトグラフィーの石油エーテル中の酢酸エチル（０→１０％）により精製して、４－フルオロ－３－オキソブタン酸メチルの黄色結晶を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ４．９７（ｓ，１Ｈ），４．８５（ｓ，１Ｈ），３．７６（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，３Ｈ），３．６２（ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ，２Ｈ）。
【化15】
【0105】
ステップ２：密封チューブ中の４－フルオロ－３－オキソブタン酸メチル（ステップ１から、６０ｇ）に、飽和アンモニアのメタノール溶液（３００ｍＬ）を室温で添加した。得られた混合物を室温で１６時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、表題化合物を白色固体の（Ｚ）－３－アミノ－４－フルオロブタ－２－エン酸メチルとして得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ４．９８（ｔ，Ｊ＝０．７，０．７Ｈｚ，１Ｈ），４．８２（ｔ，Ｊ＝０．７，０．７Ｈｚ，１Ｈ），４．５３（ｑ，１Ｈ），３．５３（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，３Ｈ）。
【0106】
中間体Ｃ：（Ｚ）－３－アミノ－４，４－ジメトキシブタ－２－エン酸メチル
４，４－ジメトキシ－３－オキソブタン酸メチル（２．００ｇ、１１．３５ｍｍｏｌ）の撹拌したＭｅＯＨ（２０．００ｍＬ）溶液に、ＮＨ４ＯＡｃ（４．３７ｇ、５６．７６ｍｍｏｌ）を室温で添加し、反応混合物を１６時間かけて８０℃まで加熱した。溶媒を減圧下で除去し、残渣をＤＣＭ（１５ｍＬ）で希釈し、セライト上で濾過し、セライトケーキをＤＣＭ（３×１５ｍＬ）で洗浄した。濾液を減圧下で濃縮して、表題化合物を濃いワイン赤色のシロップ状物である（Ｚ）－３－アミノ－４，４－ジメトキシブタ－２－エン酸メチルを得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）４．８０－４．７９（ｍ，２Ｈ），３．６６（ｓ，３Ｈ），３．３４（ｓ，６Ｈ）。
【化16】
【0107】
一般手順Ｉ
ステップ１：アルデヒド（１当量）のＥｔＯＨ（０．２Ｍ）溶液に、（Ｚ）－３－アミノ－４－フルオロブタ－２－エン酸メチル（中間体Ｂ、１又は１．２当量）及び４－アセトキシ－３－オキソブタン酸エチル（中間体Ａ、１又は１．２当量）を添加した。得られた溶液を８０℃で１６時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、表題化合物（粗物質）を得た。
【化17】
【0108】
ステップ２：メタノール（１０ｍＬ）中のステップ１からの粗中間体に、炭酸カリウム（５ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を、室温で２時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、水に添加した。生成物を酢酸エチル内で抽出し、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。溶媒を減圧下で除去し、粗生成物の精製をシリカフラッシュクロマトグラフィーによって行った。
【0109】
一般手順ＩＩ：２－メチル－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボキシレート化合物の形成
ステップ１：アルデヒド（１当量）及び（Ｚ）－３－アミノブト－２－エン酸メチル（１当量）のＥｔＯＨ又はＭｅＯＨ中の溶液（０．３Ｍ）に、４－アセトキシ－３－オキソブタン酸エチル（中間体Ａ、１当量）を添加した。得られた溶液を８０℃で１４時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去して粗化合物を得て、これを一般に更に精製することなくステップ２に移した。
【化18】
【0110】
ステップ２：メタノール中のステップ２からの粗中間体（０．３Ｍ）に、炭酸カリウム（３当量）を添加した。得られた溶液を、室温で２時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、水（５００ｍＬ）に添加し、酢酸エチル内で抽出し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。溶媒を減圧下で除去し、シリカフラッシュクロマトグラフィーによって粗生成物を精製して、生成物を得た。
【0111】
実施例１：（Ｓ）－４－（５－フルオロ－４－（（Ｒ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－メチル－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル又は（Ｓ）－４－（５－フルオロ－４－（（Ｓ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－メチル－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル
ステップ１：１－（３－ブロモ－５－フルオロピリジン－４－イル）エタン－１－オール
－７８℃で、３－ブロモ－５－フルオロピリジン（１０ｇ、５６．８２ｍｍｏｌ）の冷却した撹拌ＴＨＦ（１００ｍＬ）溶液に、ＬＤＡ（ＴＨＦ中２Ｍ）（３４．０９ｍＬ、６８．１８ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を１時間撹拌し、次いで、ＣＨ３ＣＨＯ（９．５６ｍＬ、１７０．４６ｍｍｏｌ）を－７８℃で行い、反応混合物を同じ温度で１時間撹拌した。反応混合物を１０％塩化アンモニウム溶液中に注ぎ、生成物をＥｔＯＡｃ内で抽出した。合わせた有機層を、ブラインを用いて洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、溶媒を減圧下で除去した。粗生成物を、シリカフラッシュクロマトグラフィーのヘキサン中の酢酸エチル（２０％）によって精製して、表題化合物を淡橙色液体として得た。１－（３－ブロモ－５－フルオロピリジン－４－イル）エタン－１－オール。ＬＣＭＳ：Ｒｔ＝０．２４８分；ＭＳ ｍ／ｚ ２１９．８［Ｍ＋Ｈ］＋；［方法１］。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ８．５０（ｓ，１Ｈ），８．３６（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），５．３２－５．２８（ｍ，１Ｈ），２．６１－２．５９（ｍ，１Ｈ），１．６２（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ）。
【化19】
【化20】
【0112】
ステップ２：３－ブロモ－５－フルオロ－４－（１－フルオロエチル）ピリジン
－７８℃で、１－（３－ブロモ－５－フルオロピリジン－４－イル）エタン－１－オール（ステップ１から、１１．５ｇ、５２．２６ｍｍｏｌ）の冷却した撹拌ＤＣＭ（１００ｍＬ）溶液に、ＤＡＳＴ（８．３ｍＬ、６２．７１ｍｍｏｌ）を滴下して添加した。反応混合物を、室温まで加温し、５時間撹拌した。反応混合物を氷水でクエンチし、生成物をＤＣＭ内で抽出した。合わせた有機層を１０％ＮａＨＣＯ３溶液、ブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、３０℃で減圧下、溶媒を除去した。粗生成物をシリカフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中７％酢酸エチル）によって精製し、表題化合物を淡黄色液体として得た。３－ブロモ－５－フルオロ－４－（１－フルオロエチル）ピリジン。ＬＣＭＳ：Ｒｔ＝１．１５４分；ＭＳ ｍ／ｚ ２２３．８［Ｍ＋Ｈ］＋；［方法２］。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ８．５５（ｓ，１Ｈ），８．４２（ｓ，１Ｈ），６．１０－５．９２（ｍ，１Ｈ），１．７４（ｄｄ，Ｊ＝２２．８，６．４Ｈｚ，３Ｈ）。
【化21】
【0113】
ステップ３：３－フルオロ－４－（１－フルオロエチル）－５－ビニルピリジン
３－ブロモ－５－フルオロ－４－（１－フルオロエチル）ピリジン（ステップ２から、８．３ｇ、３７．３８ｍｍｏｌ）の撹拌したＩＰＡ（８０．００ｍＬ）溶液に、カリウムビニルトリフルオロボレート（１０．０１ｇ、７４．７６ｍｍｏｌ）を添加し、続いてＥｔ３Ｎ（２０．８ｍＬ、１４９．５ｍｍｏｌ）を室温で添加し、反応物にアルゴンガスを１０分間パージした。Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２・ＤＣＭ（１．５３ｇ、１．８６９ｍｍｏｌ）を室温で添加し、反応物にアルゴンガスを更に５分間パージした。反応混合物を１０時間かけて８０℃まで加熱した。減圧下で溶媒を除去した。粗生成物を、シリカフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中７％酢酸エチル）によって精製して、表題化合物を淡黄色液体として得た。３－フルオロ－４－（１－フルオロエチル）－５－ビニルピリジン。ＬＣＭＳ：Ｒｔ＝０．９３５分；ＭＳ ｍ／ｚ １７０．１［Ｍ＋Ｈ］＋；［方法２］。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ８．５２（ｓ，１Ｈ），８．３６（ｓ，１Ｈ），７．０７（ｄｄ，Ｊ＝１７．６，１１．６Ｈｚ，１Ｈ），６．１２－５．９２（ｍ，１Ｈ），５．７１（ｄ，Ｊ＝１７．６Ｈｚ，１Ｈ），５．４９（ｄ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ，１Ｈ），１．７０（ｄｄ，Ｊ＝２３．２，６．８Ｈｚ，３Ｈ）。
【化22】
【0114】
ステップ４：５－フルオロ－４－（１－フルオロエチル）ニコチンアルデヒド
－７８℃で、３－フルオロ－４－（１－フルオロエチル）－５－ビニルピリジン（ステップ３から、３．８ｇ、２２．４６ｍｍｏｌ）の冷却した撹拌ＤＣＭ（２５０ｍＬ）溶液に、Ｏ３を６時間ゆっくりとパージした。反応完了後、ＤＭＳ（２．４９ｍｌ、３３．６９ｍｍｏｌ）でクエンチし、反応混合物を２０分間撹拌した。氷冷水を加え、生成物をＤＣＭ内で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、溶媒を３０℃で減圧下、除去して、表題化合物を淡橙色液体として得た。５－フルオロ－４－（１－フルオロエチル）ニコチンアルデヒド。ＬＣＭＳ：Ｒｔ＝１．４０６分；ＭＳ ｍ／ｚ １７２．２［Ｍ＋Ｈ］＋；［方法１］。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ １０．４３（ｓ，１Ｈ），８．８４（ｓ，１Ｈ），８．６３（ｓ，１Ｈ），６．４８－６．３０（ｍ，１Ｈ），１．８０（ｄｄ，Ｊ＝２３．２，６．６Ｈｚ，３Ｈ）。
【化23】
【0115】
ステップ５及び６：４－（５－フルオロ－４－（１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－メチル－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル
表題化合物を、一般方法ＩＩを使用して（ステップ４からのアルデヒド、２ｇ、１１．６８ｍｍｏｌを使用して）合成した。粗生成物を、シリカフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中６０％酢酸エチル）によって精製して、表題化合物を褐色固体（１．７ｇ）として得た。ジアステレオマーを分取ＨＰＬＣ（カラム：ＷＡＴＥＲＳ Ｘ ＢＲＩＤＧＥ（１５０ｍｍ×２０．０ｍｍ）、５．０μ；移動相：Ａ＝水、Ｂ＝ＡＣＮ；流量：１５ｍｌ／分）により分離して、ｒａｃ－ジアステレオマー１及びｒａｃ－ジアステレオマー２を得た。４つの生成物ピークに対応する４つの立体異性体の絶対的な立体化学は決定されなかった。
【化24】
【0116】
第１に溶出する異性体ｒａｃ－ジアステレオマー１を、キラルＨＰＬＣ（カラム：ＲＥＧＩＳ ＷＨＥＬＫ、２５０ＭＭ×２１．２ＭＭ×５ミクロン；移動相：ヘキサン（Ａ）、ＥｔＯＨ：ＭｅＯＨ，１：１（Ｂ）、流量：１５ｍＬ／分）によって、そのエナンチオマーに分離した。
【0117】
第２に溶出する異性体ｒａｃ－ジアステレオマー２を、キラルＨＰＬＣ（カラム：ＬＵＸ ＡＭＹＬＯＳＥ－２、２５０ＭＭ×２１．２ＭＭ×５ミクロン；移動相：ヘキサン（Ａ）、ＥｔＯＨ：ＭｅＯＨ，１：１（Ｂ）；流量：１５ｍＬ／分）によって、そのエナンチオマーに分離した。
【0118】
実施例１は、ｒａｃ－ジアステレオマー２の第２に溶出するエナンチオマーである。
キラルＨＰＬＣ Ｒｔ＝６．１９分（カラム：Ｉ ＣＥＬＬＵＹＬＯＳＥ－Ｃ（２５０×４．６ｍｍ、５ミクロン）；移動相：Ａ：ｎ－ヘキサン、Ｂ＝ＩＰＡ：ＭＥＯＨ（５０：５０）；流量：１．０ｍｌ／分）。
ＬＣＭＳ：Ｒｔ＝０．６５３分；ＭＳ ｍ／ｚ ３５１．０［Ｍ＋Ｈ］＋；［方法２］
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １０．０１（ｓ，１Ｈ），８．３８（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），８．３０（ｓ，１Ｈ），６．４３－６．２６（ｍ，１Ｈ），５．００（ｓ，１Ｈ），４．８８（ｄ，Ｊ＝２５．６，１６．４Ｈｚ，２Ｈ），３．４４（ｓ，３Ｈ），２．３３（ｓ，３Ｈ），１．８０（ｄｄ，Ｊ＝２３．６，６．４Ｈｚ，３Ｈ）。
キラルＨＰＬＣ Ｒｔ＝６．１９分（カラム：Ｉ ＣＥＬＬＵＹＬＯＳＥ－Ｃ（２５０×４．６ｍｍ、５ミクロン）；移動相：Ａ：ｎ－ヘキサン、Ｂ＝ＩＰＡ：ＭＥＯＨ（５０：５０）；流量：１．０ｍｌ／分）。
ＬＣＭＳ：Ｒｔ＝０．６５３分；ＭＳ ｍ／ｚ ３５１．０［Ｍ＋Ｈ］＋；［方法２］
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １０．０１（ｓ，１Ｈ），８．３８（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），８．３０（ｓ，１Ｈ），６．４３－６．２６（ｍ，１Ｈ），５．００（ｓ，１Ｈ），４．８８（ｄ，Ｊ＝２５．６，１６．４Ｈｚ，２Ｈ），３．４４（ｓ，３Ｈ），２．３３（ｓ，３Ｈ），１．８０（ｄｄ，Ｊ＝２３．６，６．４Ｈｚ，３Ｈ）。
【0119】
実施例１ａ：ｒａｃ－ジアステレオマー２の第１に溶出するエナンチオマー
キラルＨＰＬＣ Ｒｔ＝５．７７５分（カラム：Ｉ ＣＥＬＬＵＹＬＯＳＥ－Ｃ（２５０×４．６ｍｍ、５ミクロン）；移動相：Ａ：ｎ－ヘキサン、Ｂ＝ＩＰＡ：ＭＥＯＨ（５０：５０）；流量：１．０ｍｌ／分）。
ＬＣＭＳ：Ｒｔ＝０．６１５分；ＭＳ ｍ／ｚ ３５１．０［Ｍ＋Ｈ］＋；［方法２］。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １０．０１（ｓ，１Ｈ），８．３８（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），８．３０（ｓ，１Ｈ），６．４３－６．２６（ｍ，１Ｈ），５．００（ｓ，１Ｈ），４．８８（ｄ，Ｊ＝２５．６，１６．４Ｈｚ，２Ｈ），３．４４（ｓ，３Ｈ），２．３３（ｓ，３Ｈ），１．８０（ｄｄ，Ｊ＝２３．６，６．４Ｈｚ，３Ｈ）。
キラルＨＰＬＣ Ｒｔ＝５．７７５分（カラム：Ｉ ＣＥＬＬＵＹＬＯＳＥ－Ｃ（２５０×４．６ｍｍ、５ミクロン）；移動相：Ａ：ｎ－ヘキサン、Ｂ＝ＩＰＡ：ＭＥＯＨ（５０：５０）；流量：１．０ｍｌ／分）。
ＬＣＭＳ：Ｒｔ＝０．６１５分；ＭＳ ｍ／ｚ ３５１．０［Ｍ＋Ｈ］＋；［方法２］。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １０．０１（ｓ，１Ｈ），８．３８（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），８．３０（ｓ，１Ｈ），６．４３－６．２６（ｍ，１Ｈ），５．００（ｓ，１Ｈ），４．８８（ｄ，Ｊ＝２５．６，１６．４Ｈｚ，２Ｈ），３．４４（ｓ，３Ｈ），２．３３（ｓ，３Ｈ），１．８０（ｄｄ，Ｊ＝２３．６，６．４Ｈｚ，３Ｈ）。
【0120】
実施例１ｂ：ｒａｃ－ジアステレオマー１の第１に溶出するエナンチオマー
キラルＨＰＬＣ Ｒｔ＝２．３６７分（カラム：ＬＵＸ，ＡＭＹＬＯＳＥ－１（１５０×４．６ｍｍ、５ミクロン）；移動相：Ａ：ｎ－ヘキサン、Ｂ＝エタノール：メタノール（７０：３０）中の０．１％ ＤＥＡ；流量：１．０ｍｌ／分）。
ＬＣＭＳ：Ｒｔ＝０．５０分；ＭＳ ｍ／ｚ ３５１．０［Ｍ＋Ｈ］＋；［方法２］。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １０．０３（ｓ，１Ｈ），８．３９（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），８．２４（ｓ，１Ｈ），６．５８－６．４２（ｍ，１Ｈ），４．９６（ｓ，１Ｈ），４．８６（ｄ，Ｊ＝２５．６，１６．４Ｈｚ，２Ｈ），３．４５（ｓ，３Ｈ），２．３６（ｓ，３Ｈ），１．７２（ｄｄ，Ｊ＝２３．６，６．８Ｈｚ，３Ｈ）。
キラルＨＰＬＣ Ｒｔ＝２．３６７分（カラム：ＬＵＸ，ＡＭＹＬＯＳＥ－１（１５０×４．６ｍｍ、５ミクロン）；移動相：Ａ：ｎ－ヘキサン、Ｂ＝エタノール：メタノール（７０：３０）中の０．１％ ＤＥＡ；流量：１．０ｍｌ／分）。
ＬＣＭＳ：Ｒｔ＝０．５０分；ＭＳ ｍ／ｚ ３５１．０［Ｍ＋Ｈ］＋；［方法２］。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １０．０３（ｓ，１Ｈ），８．３９（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），８．２４（ｓ，１Ｈ），６．５８－６．４２（ｍ，１Ｈ），４．９６（ｓ，１Ｈ），４．８６（ｄ，Ｊ＝２５．６，１６．４Ｈｚ，２Ｈ），３．４５（ｓ，３Ｈ），２．３６（ｓ，３Ｈ），１．７２（ｄｄ，Ｊ＝２３．６，６．８Ｈｚ，３Ｈ）。
【0121】
実施例１ｃ：ｒａｃ－ジアステレオマー１の第２に溶出するエナンチオマー
キラルＨＰＬＣ Ｒｔ＝２．７６５分（カラム：ＬＵＸ，ＡＭＹＬＯＳＥ－１（１５０×４．６ｍｍ、５ミクロン）；移動相：Ａ：ｎ－ヘキサン、Ｂ＝エタノール：メタノール（７０：３０）中の０．１％ ＤＥＡ；流量：１．０ｍｌ／分）。
ＬＣＭＳ：Ｒｔ＝０．４９８分；ＭＳ ｍ／ｚ ３５１．２［Ｍ＋Ｈ］＋；［方法２］。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １０．０３（ｓ，１Ｈ），８．３９（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），８．２４（ｓ，１Ｈ），６．５８－６．４２（ｍ，１Ｈ），４．９６（ｓ，１Ｈ），４．８６（ｄ，Ｊ＝２５．６，１６．４Ｈｚ，２Ｈ），３．４５（ｓ，３Ｈ），２．３６（ｓ，３Ｈ），１．７２（ｄｄ，Ｊ＝２３．６，６．８Ｈｚ，３Ｈ）。
キラルＨＰＬＣ Ｒｔ＝２．７６５分（カラム：ＬＵＸ，ＡＭＹＬＯＳＥ－１（１５０×４．６ｍｍ、５ミクロン）；移動相：Ａ：ｎ－ヘキサン、Ｂ＝エタノール：メタノール（７０：３０）中の０．１％ ＤＥＡ；流量：１．０ｍｌ／分）。
ＬＣＭＳ：Ｒｔ＝０．４９８分；ＭＳ ｍ／ｚ ３５１．２［Ｍ＋Ｈ］＋；［方法２］。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １０．０３（ｓ，１Ｈ），８．３９（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），８．２４（ｓ，１Ｈ），６．５８－６．４２（ｍ，１Ｈ），４．９６（ｓ，１Ｈ），４．８６（ｄ，Ｊ＝２５．６，１６．４Ｈｚ，２Ｈ），３．４５（ｓ，３Ｈ），２．３６（ｓ，３Ｈ），１．７２（ｄｄ，Ｊ＝２３．６，６．８Ｈｚ，３Ｈ）。
【0122】
実施例２：（Ｒ）－４－（５－フルオロ－４－（（Ｒ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－（フルオロメチル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル
ステップ１及び２：４－（５－フルオロ－４－（１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－（フルオロメチル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル
表題化合物を、一般方法Ｉを使用して（実施例１のステップ４からのアルデヒド、１．８ｇ、１０．５２ｍｍｏｌを使用して）合成した。粗生成物を、シリカフラッシュクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３中の５％ＭｅＯＨ）で精製して、表題化合物を得た。ジアステレオマーを分取ＨＰＬＣ（カラム：ＬＵＮＡ Ｃ１８（２５０ｍｍ×２１．２ｍｍ）、５．０μ；移動相：Ａ：０．１％ ＨＣＯＯＨ：Ｂ：アセトニトリル；流量イソクラティック：２０ｍＬ／分）により分離して、ｒａｃ－ジアステレオマー１及びｒａｃ－ジアステレオマー２を得た。
ｒａｃ－ジアステレオマー１を、キラルＨＰＬＣ（カラム：ＲＥＧＩＳ ＷＨＥＬＫ、２５０ＭＭ×２１．２ＭＭ×５ミクロン；移動相：Ａ：ヘキサン：Ｂ：ＥｔＯＨ：ＭｅＯＨ：１：１、流量：１５ｍＬ／分）によって、そのエナンチオマーに分離した。
ｒａｃ－ジアステレオマー２を、キラルＨＰＬＣ（カラム：ＲＥＧＩＳ ＷＨＥＬＫ、２５０ＭＭ×２１．２ＭＭ×５ミクロン；移動相：Ａ：ヘキサン：Ｂ：ＥｔＯＨ：ＭｅＯＨ：１：１、流量：１５ｍＬ／分）によって、そのエナンチオマーに分離した。
【化25】
【化26】
ｒａｃ－ジアステレオマー１を、キラルＨＰＬＣ（カラム：ＲＥＧＩＳ ＷＨＥＬＫ、２５０ＭＭ×２１．２ＭＭ×５ミクロン；移動相：Ａ：ヘキサン：Ｂ：ＥｔＯＨ：ＭｅＯＨ：１：１、流量：１５ｍＬ／分）によって、そのエナンチオマーに分離した。
ｒａｃ－ジアステレオマー２を、キラルＨＰＬＣ（カラム：ＲＥＧＩＳ ＷＨＥＬＫ、２５０ＭＭ×２１．２ＭＭ×５ミクロン；移動相：Ａ：ヘキサン：Ｂ：ＥｔＯＨ：ＭｅＯＨ：１：１、流量：１５ｍＬ／分）によって、そのエナンチオマーに分離した。
【0123】
実施例２は、ｒａｃ－ジアステレオ異性体２の第１に溶出するエナンチオマーである。
キラルＨＰＬＣ Ｒｔ＝５．０８６分（Ｒｅｇｉｓ，（Ｓ，Ｓ）Ｗｈｅｌｋ－０１－（１５０×４．６０ｍｍ、５ミクロン）；移動相：Ａ＝ｎ－ヘキサン、Ｂ＝エタノール：メタノール（７０：３０）中の０．１％ＤＥＡ）。
実施例２の（Ｒ）－４－（５－フルオロ－４－（（Ｒ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－（フルオロメチル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチルの絶対的な立体化学を、単結晶ｘ線結晶分析によって決定した（図２）。
ＬＣＭＳ：Ｒｔ＝０．７２３分；ＭＳ ｍ／ｚ ３６９．１［Ｍ＋Ｈ］＋；［方法２］。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １０．２５（ｓ，１Ｈ），８．３９（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），８．３４（ｓ，１Ｈ），６．４７－６．２３（ｍ，１Ｈ），５．６８（ｓ，１Ｈ），５．５６（ｓ，１Ｈ），５．０６（ｓ，１Ｈ），４．８４（ｄｄ，Ｊ＝３０．０，１６．８Ｈｚ，２Ｈ），３．４３（ｓ，３Ｈ），１．８０（ｄｄ，Ｊ＝２３．６，６．８Ｈｚ，３Ｈ）。
キラルＨＰＬＣ Ｒｔ＝５．０８６分（Ｒｅｇｉｓ，（Ｓ，Ｓ）Ｗｈｅｌｋ－０１－（１５０×４．６０ｍｍ、５ミクロン）；移動相：Ａ＝ｎ－ヘキサン、Ｂ＝エタノール：メタノール（７０：３０）中の０．１％ＤＥＡ）。
実施例２の（Ｒ）－４－（５－フルオロ－４－（（Ｒ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－（フルオロメチル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチルの絶対的な立体化学を、単結晶ｘ線結晶分析によって決定した（図２）。
ＬＣＭＳ：Ｒｔ＝０．７２３分；ＭＳ ｍ／ｚ ３６９．１［Ｍ＋Ｈ］＋；［方法２］。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １０．２５（ｓ，１Ｈ），８．３９（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），８．３４（ｓ，１Ｈ），６．４７－６．２３（ｍ，１Ｈ），５．６８（ｓ，１Ｈ），５．５６（ｓ，１Ｈ），５．０６（ｓ，１Ｈ），４．８４（ｄｄ，Ｊ＝３０．０，１６．８Ｈｚ，２Ｈ），３．４３（ｓ，３Ｈ），１．８０（ｄｄ，Ｊ＝２３．６，６．８Ｈｚ，３Ｈ）。
【0124】
実施例２ａ：ｒａｃ－ジアステレオ異性体２の第２に溶出するエナンチオマー
キラルＨＰＬＣ Ｒｔ＝５．７０２分（Ｒｅｇｉｓ，（Ｓ，Ｓ）Ｗｈｅｌｋ－０１－（１５０×４．６０ｍｍ、５ミクロン）；移動相：Ａ＝ｎ－ヘキサン、Ｂ＝エタノール：メタノール（７０：３０）中の０．１％ＤＥＡ）。
ＬＣＭＳ：Ｒｔ＝０．７４２分；ＭＳ ｍ／ｚ ３６９．１［Ｍ＋Ｈ］＋；［方法２］。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １０．２３（ｂｒｓ，１Ｈ），８．３８（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），８．３４（ｓ，１Ｈ），６．４８－６．２６（ｍ，１Ｈ），５．６７（ｓ，１Ｈ），５．５５（ｓ，１Ｈ），５．０５（ｓ，１Ｈ），４．９５－４．７４（ｍ，２Ｈ），３．４３（ｓ，３Ｈ），１．８０（ｄｄ，Ｊ＝２３．２，６．０Ｈｚ，３Ｈ）。
キラルＨＰＬＣ Ｒｔ＝５．７０２分（Ｒｅｇｉｓ，（Ｓ，Ｓ）Ｗｈｅｌｋ－０１－（１５０×４．６０ｍｍ、５ミクロン）；移動相：Ａ＝ｎ－ヘキサン、Ｂ＝エタノール：メタノール（７０：３０）中の０．１％ＤＥＡ）。
ＬＣＭＳ：Ｒｔ＝０．７４２分；ＭＳ ｍ／ｚ ３６９．１［Ｍ＋Ｈ］＋；［方法２］。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １０．２３（ｂｒｓ，１Ｈ），８．３８（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），８．３４（ｓ，１Ｈ），６．４８－６．２６（ｍ，１Ｈ），５．６７（ｓ，１Ｈ），５．５５（ｓ，１Ｈ），５．０５（ｓ，１Ｈ），４．９５－４．７４（ｍ，２Ｈ），３．４３（ｓ，３Ｈ），１．８０（ｄｄ，Ｊ＝２３．２，６．０Ｈｚ，３Ｈ）。
【0125】
実施例２ｂ：ｒａｃ－ジアステレオ異性体１の第１に溶出するエナンチオマー
キラルＨＰＬＣ Ｒｔ＝５．９４９分（Ｒｅｇｉｓ，（Ｓ，Ｓ）Ｗｈｅｌｋ－０１－（１５０×４．６０ｍｍ、５ミクロン）；移動相：Ａ＝ｎ－ヘキサン、Ｂ＝エタノール：メタノール（７０：３０）中の０．１％ＤＥＡ）。
ＬＣＭＳ：Ｒｔ＝０．５７６分；ＭＳ ｍ／ｚ ３６９．１［Ｍ＋Ｈ］＋；［方法２］。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １０．２３（ｓ，１Ｈ），８．３９（ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，１Ｈ），８．２９（ｓ，１Ｈ），６．６４－６．３２（ｍ，１Ｈ），５．７５（ｓ，１Ｈ），４．６０（ｓ，１Ｈ），５．００（ｓ，１Ｈ），４．９２－４．７５（ｍ，２Ｈ），３．４３（ｓ，３Ｈ），１．６９（ｄｄ，Ｊ＝２３．７，６．６Ｈｚ，３Ｈ）。
キラルＨＰＬＣ Ｒｔ＝５．９４９分（Ｒｅｇｉｓ，（Ｓ，Ｓ）Ｗｈｅｌｋ－０１－（１５０×４．６０ｍｍ、５ミクロン）；移動相：Ａ＝ｎ－ヘキサン、Ｂ＝エタノール：メタノール（７０：３０）中の０．１％ＤＥＡ）。
ＬＣＭＳ：Ｒｔ＝０．５７６分；ＭＳ ｍ／ｚ ３６９．１［Ｍ＋Ｈ］＋；［方法２］。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １０．２３（ｓ，１Ｈ），８．３９（ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，１Ｈ），８．２９（ｓ，１Ｈ），６．６４－６．３２（ｍ，１Ｈ），５．７５（ｓ，１Ｈ），４．６０（ｓ，１Ｈ），５．００（ｓ，１Ｈ），４．９２－４．７５（ｍ，２Ｈ），３．４３（ｓ，３Ｈ），１．６９（ｄｄ，Ｊ＝２３．７，６．６Ｈｚ，３Ｈ）。
【0126】
実施例２ｃ：ｒａｃ－ジアステレオ異性体１の第２に溶出するエナンチオマー
キラルＨＰＬＣ Ｒｔ＝８．４７０分（Ｒｅｇｉｓ，（Ｓ，Ｓ）Ｗｈｅｌｋ－０１－（１５０×４．６０ｍｍ、 ５ミクロン）；移動相：Ａ＝ｎ－ヘキサン、Ｂ＝エタノール：メタノール（７０：３０）中の０．１％ＤＥＡ）。
ＬＣＭＳ：Ｒｔ＝０．５８４分；ＭＳ ｍ／ｚ ３６９．２［Ｍ＋Ｈ］＋；［方法２］。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １０．２６（ｓ，１Ｈ），８．４１（ｓ，１Ｈ），８．３１（ｓ，１Ｈ），６．６１－６．４１（ｍ，１Ｈ），５．７５（ｓ，１Ｈ），４．６３（ｓ，１Ｈ），５．０２（ｓ，１Ｈ），４．９４－４．７９（ｓ，２Ｈ），３．４４（ｓ，３Ｈ），１．７２（ｄｄ，Ｊ＝２３．２，６．６Ｈｚ，３Ｈ）。
キラルＨＰＬＣ Ｒｔ＝８．４７０分（Ｒｅｇｉｓ，（Ｓ，Ｓ）Ｗｈｅｌｋ－０１－（１５０×４．６０ｍｍ、 ５ミクロン）；移動相：Ａ＝ｎ－ヘキサン、Ｂ＝エタノール：メタノール（７０：３０）中の０．１％ＤＥＡ）。
ＬＣＭＳ：Ｒｔ＝０．５８４分；ＭＳ ｍ／ｚ ３６９．２［Ｍ＋Ｈ］＋；［方法２］。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １０．２６（ｓ，１Ｈ），８．４１（ｓ，１Ｈ），８．３１（ｓ，１Ｈ），６．６１－６．４１（ｍ，１Ｈ），５．７５（ｓ，１Ｈ），４．６３（ｓ，１Ｈ），５．０２（ｓ，１Ｈ），４．９４－４．７９（ｓ，２Ｈ），３．４４（ｓ，３Ｈ），１．７２（ｄｄ，Ｊ＝２３．２，６．６Ｈｚ，３Ｈ）。
【0127】
実施例３：（Ｒ）－４－（４－エチル－５－フルオロピリジン－３－イル）－２－（フルオロメチル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル
ステップ１：３－ブロモ－４－エチル－５－フルオロピリジン
３－ブロモ－５－フルオロピリジン（５．０ｇ、２８．４１ｍｍｏｌ）の撹拌ＴＨＦ（６０．０ｍＬ）溶液を－７８℃まで冷却し、１０分間撹拌した。リチウムジイソプロピルアミド（ＴＨＦ中２Ｍ）（２１．３０ｍＬ、４２．６１ｍｍｏｌ）を－７８℃で滴下して加え、反応混合物を同じ温度で０．５時間撹拌した。ヨードエタン（２．５１ｍＬ、３１．２５ｍｍｍｏｌ）を－７８℃で添加し、反応混合物を室温で２時間撹拌して室温まで加温した。反応混合物を塩化アンモニウムの飽和溶液でクエンチし、水で希釈し、生成物を酢酸エチル内で抽出した。合わせた有機層を飽和ブライン溶液を用いて洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、溶媒を減圧下で除去した。粗化合物をシリカフラッシュクロマトグラフィーのヘキサン中酢酸エチル（５→６％）により精製し、表題化合物を黄色液体として得た。３－ブロモ－４－エチル－５－フルオロピリジン。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ８．４８（ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，１Ｈ），８．３０（ｓ，１Ｈ），２．８３（ｄｑ，Ｊ＝７．８，１．８Ｈｚ，２Ｈ），１．２０（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，３Ｈ）。
【化27】
【化28】
【0128】
ステップ２：４－エチル－５－フルオロニコチンアルデヒド
３－ブロモ－４－エチル－５－フルオロピリジン（ステップ１から、１．７５ｇ、８．５７６ｍｍｏｌ）の撹拌ＴＨＦ（２０．０ｍＬ）溶液を－７８℃まで冷却し、次いでｎ－ブチルリチウム（ＴＨＦ中１．６Ｍ）（８．０４ｍＬ、１２．８６ｍｍｏｌ）を－７８℃で滴下して加え、１０分間撹拌した。Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（０．６６ｍＬ、８．５７６ｍｍｏｌ）を－７８℃で添加し、反応混合物を同じ温度で２０分間撹拌した。反応混合物を、－７８℃で塩化アンモニウムの飽和溶液でクエンチし、水で希釈し、生成物を酢酸エチル内で抽出した。合わせた有機層を飽和ブライン溶液を用いて洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、溶媒を減圧下で除去した。粗化合物をシリカフラッシュクロマトグラフィーのヘキサン中酢酸エチル（８→１０％）により精製し、表題化合物を黄色液体として得た。４－エチル－５－フルオロニコチンアルデヒド。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １０．２８（ｓ，１Ｈ）８．８５（ｓ，１Ｈ），８．７７（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），３．０４（ｑ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），１．１７（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）。
【化29】
【0129】
ステップ３及び４：４－（４－エチル－５－フルオロピリジン－３－イル）－２－（フルオロメチル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル
表題化合物を、一般方法Ｉを使用して（ステップ２からのアルデヒド、０．２ｇ、１．３１ｍｍｏｌを使用して）合成した。粗生成物を分取ＨＰＬＣにより精製し、表題化合物４－（４－エチル－５－フルオロピリジン－３－イル）－２－（フルオロメチル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチルを得た。ＬＣＭＳ Ｒｔ＝１．４０３分；ＭＳ ｍ／ｚ ３５０．７５［Ｍ＋Ｈ］＋；［方法１０］。
【化30】
【0130】
ラセミ体試料を、キラルＨＰＬＣ（カラム：ＲＥＧＩＳ ＷＨＥＬＫ－０１，（２５０ＭＭ×２１．１ＭＭ×５ミクロン）；移動相：Ｎ－ヘキサン（Ａ）ＥｔＯＨ：ＭｅＯＨ，１：１（Ｂ）、流量：１５ＭＬ）によって、そのエナンチオマーに分離した。２つの生成物ピークに対応する２つのエナンチオマーの絶対的な立体化学は決定されなかった。
【0131】
ピーク１：キラルＨＰＬＣ Ｒｔ＝４．９６３分（カラム：ＣＨＩＲＡＬ ＰＡＫ－ＩＧ（１５０×４．６ｍｍ×５μ）；移動相：Ａ：ｎ－ヘキサン、Ｂ＝エタノール：メタノール（７０：３０）中の０．１％ ＤＥＡ；流量：１．０ｍｌ／分）。
ＬＣＭＳ：Ｒｔ＝１．３８８分；ＭＳ ｍ／ｚ ３５１．０［Ｍ＋Ｈ］＋；［方法１］。
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．２０（ｓ，２Ｈ），７．２８（ｂｒｓ，１Ｈ），５．８１（ｓ，１Ｈ），５．６５（ｓ，１Ｈ），５．１１（ｓ，１Ｈ），４．８０（ｓ，２Ｈ），３．５６（ｓ，３Ｈ），３．１４－２．９６（ｍ，２Ｈ），１．３３（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３Ｈ）。
ＬＣＭＳ：Ｒｔ＝１．３８８分；ＭＳ ｍ／ｚ ３５１．０［Ｍ＋Ｈ］＋；［方法１］。
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．２０（ｓ，２Ｈ），７．２８（ｂｒｓ，１Ｈ），５．８１（ｓ，１Ｈ），５．６５（ｓ，１Ｈ），５．１１（ｓ，１Ｈ），４．８０（ｓ，２Ｈ），３．５６（ｓ，３Ｈ），３．１４－２．９６（ｍ，２Ｈ），１．３３（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３Ｈ）。
【0132】
ピーク２：キラルＨＰＬＣ Ｒｔ＝８．８８１分（カラム：ＣＨＩＲＡＬ ＰＡＫ－ＩＧ（１５０×４．６ｍｍ×５μ）；移動相：Ａ：ｎ－ヘキサン、Ｂ＝エタノール：メタノール（７０：３０）中の０．１％ ＤＥＡ；流量：１．０ｍｌ／分）。
ＬＣＭＳ：Ｒｔ＝１．３８６分；ＭＳ ｍ／ｚ ３５１．１［Ｍ＋Ｈ］＋；［方法１］。
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ８．２０（ｓ，２Ｈ），７．２８（ｂｒｓ，１Ｈ），５．８１（ｓ，１Ｈ），５．６５（ｓ，１Ｈ），５．１１（ｓ，１Ｈ），４．８０（ｓ，２Ｈ），３．５６（ｓ，３Ｈ），３．１４－２．９６（ｍ，２Ｈ），１．３３（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，３Ｈ）。
ＬＣＭＳ：Ｒｔ＝１．３８６分；ＭＳ ｍ／ｚ ３５１．１［Ｍ＋Ｈ］＋；［方法１］。
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ８．２０（ｓ，２Ｈ），７．２８（ｂｒｓ，１Ｈ），５．８１（ｓ，１Ｈ），５．６５（ｓ，１Ｈ），５．１１（ｓ，１Ｈ），４．８０（ｓ，２Ｈ），３．５６（ｓ，３Ｈ），３．１４－２．９６（ｍ，２Ｈ），１．３３（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，３Ｈ）。
【0133】
実施例４：（Ｓ）－４－（４－エチル－５－フルオロピリジン－３－イル）－２－メチル－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル
ステップ１及び２：４－（４－エチル－５－フルオロピリジン－３－イル）－２－メチル－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル
表題化合物を、一般方法ＩＩを使用して（実施例３のステップ２からのアルデヒド、０．２ｇ、１．３１ｍｍｏｌを使用して）合成した。粗生成物を分取ＨＰＬＣにより精製し、表題化合物を得た。ＬＣＭＳ：Ｒｔ＝１．３７５分；ＭＳ ｍ／ｚ ３３２．７５［Ｍ＋Ｈ］＋；［方法１］。
【化31】
【化32】
【0134】
ラセミ体試料を、キラルＨＰＬＣ（カラム：ＲＥＧＩＳ ＷＨＥＬＫ－０１，（２５０ＭＭ×２１．１ＭＭ×５ミクロン）；移動相：Ｎ－ヘキサン（Ａ）ＥｔＯＨ：ＭｅＯＨ，１：１（Ｂ）、流量：１５ＭＬ／分）によって、そのエナンチオマーに分離した。２つの生成物ピークに対応する２つのエナンチオマーの絶対的な立体化学は決定されなかった。
【0135】
ピーク１：キラルＨＰＬＣ Ｒｔ＝３．６３９分（カラム：ＬＵＸ－ＡＭＹＬＯＳＥ－２（１５０×４．６ｍｍ×５μ））；移動相：Ａ＝ｎ－ヘキサン、Ｂ＝エタノール：メタノール（８０：２０）中の０．１％ＴＦＡ；流量：１．０ｍｌ／分）。
ＬＣＭＳ Ｒｔ＝１．３７５分；ＭＳ ｍ／ｚ ３３２．７５［Ｍ＋Ｈ］＋；［方法１］。
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １０．０（ｂｒｓ，１Ｈ），８．２４（ｓ，１Ｈ），８．１６（ｓ，１Ｈ），４．９６（ｓ，１Ｈ），４．７９－４．７６（ｍ，２Ｈ），３．４３（ｓ，３Ｈ），３．０８－２．８１（ｍ，２Ｈ），２．３１（ｓ，３Ｈ），１．２２（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ）。
ＬＣＭＳ Ｒｔ＝１．３７５分；ＭＳ ｍ／ｚ ３３２．７５［Ｍ＋Ｈ］＋；［方法１］。
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １０．０（ｂｒｓ，１Ｈ），８．２４（ｓ，１Ｈ），８．１６（ｓ，１Ｈ），４．９６（ｓ，１Ｈ），４．７９－４．７６（ｍ，２Ｈ），３．４３（ｓ，３Ｈ），３．０８－２．８１（ｍ，２Ｈ），２．３１（ｓ，３Ｈ），１．２２（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ）。
【0136】
ピーク２：キラルＨＰＬＣ Ｒｔ＝４．７８分（カラム：ＬＵＸ－ＡＭＹＬＯＳＥ－２（１５０×４．６ｍｍ×５μ））；移動相：Ａ＝ｎ－ヘキサン、Ｂ＝エタノール：メタノール（８０：２０）中の０．１％ＴＦＡ；流量：１．０ｍｌ／分）。
ＬＣＭＳ：Ｒｔ＝１．３７４分；ＭＳ ｍ／ｚ ３３０．８［Ｍ－Ｈ］－；［方法１］。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １０．０（ｂｒｓ，１Ｈ），８．２３（ｓ，１Ｈ），８．１５（ｓ，１Ｈ），４．９５（ｓ，１Ｈ），４．７８（ｄｄ，Ｊ＝２８．０，１６．４Ｈｚ，２Ｈ），３．４２（ｓ，３Ｈ），３．０８－２．８１（ｍ，２Ｈ），２．３１（ｓ，３Ｈ），１．２２（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ）。
ＬＣＭＳ：Ｒｔ＝１．３７４分；ＭＳ ｍ／ｚ ３３０．８［Ｍ－Ｈ］－；［方法１］。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １０．０（ｂｒｓ，１Ｈ），８．２３（ｓ，１Ｈ），８．１５（ｓ，１Ｈ），４．９５（ｓ，１Ｈ），４．７８（ｄｄ，Ｊ＝２８．０，１６．４Ｈｚ，２Ｈ），３．４２（ｓ，３Ｈ），３．０８－２．８１（ｍ，２Ｈ），２．３１（ｓ，３Ｈ），１．２２（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ）。
【0137】
実施例５：（Ｒ）－４－（４－エチルピリジン－３－イル）－２－（フルオロメチル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル
ステップ１：３－ブロモ－４－エチルピリジン
－７８℃まで冷却した３－ブロモ－４－メチルピリジン（２．０ｇ、１１．６２ｍｍｏｌ）の撹拌ＴＨＦ（２０ｍＬ）溶液に、ＴＨＦ中のリチウムイソプロピルアミド（２Ｍ）（６．９７ｍＬ、１３．９５ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を同じ温度で１時間撹拌した。次いで、ヨードメタン（１．９８ｇ、１３．９５ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を、塩化アンモニウム溶液を使用することによってクエンチし、酢酸エチル（２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を、ブラインを用いて洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、溶媒を減圧下で除去した。粗生成物を、シリカフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中４～６％酢酸エチル）によって精製して、所望の生成物を淡黄色液体として得た。３－ブロモ－４－エチルピリジン。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ８．６４（ｓ，１Ｈ），８．４１（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ），７．１７（ｄ，Ｊ＝４．７Ｈｚ，１Ｈ），２．７５（ｑ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），１．２５（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３Ｈ）。
【化33】
【化34】
【0138】
ステップ２：４－エチルニコチンアルデヒド
－７８℃での３－ブロモ－４－エチルピリジン（ステップ１から、１．０ｇ、５．３７ｍｍｏｌ）の冷却したＴＨＦ（１０ｍＬ）撹拌溶液に、ヘキサン中のｎ－ブチルリチウム溶液（１．６Ｍ）（４．０３ｍＬ、６．４５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を同じ温度で２５分間撹拌した。次いで、ジメチルホルムアミド（０．５ｍＬ、６．４５ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で１５分間撹拌した。反応を、塩化アンモニウム溶液を使用することによってクエンチし、酢酸エチル（２×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を、ブラインを用いて洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、溶媒を減圧下で除去した。粗生成物を、シリカフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中４～６％酢酸エチル）によって精製して、所望の生成物４－エチルニコチンアルデヒドを淡黄色液体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ １０．２９（ｓ，１Ｈ），８．９４（ｓ，１Ｈ），８．６７（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２７－７．２６（ｍ，１Ｈ，ＣＤＣｌ３とマージされた），３．０９（ｑ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．２８（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，３Ｈ）。
【化35】
【0139】
ステップ３及び４：４－（４－エチルピリジン－３－イル）－２－（フルオロメチル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル
表題化合物を、一般方法Ｉを使用して（ステップ２からのアルデヒド、０．１ｇ、０．７４ｍｍｏｌを使用して）合成した。粗生成物を、シリカフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中５８～６０％ＥｔＯＡｃ）で精製して、表題化合物をオフホワイト色固体として得た。ＬＣＭＳ：Ｒｔ＝０．２６８分；ＭＳ ｍ／ｚ ３３３．０［Ｍ＋Ｈ］＋；［方法４］。
【化36】
【0140】
ラセミ体化合物を、キラルＨＰＬＣ（カラム：ＲＥＧＩＳ（Ｓ，Ｓ）ＷＨＥＬＫ－０１，２５０ＭＭ×２１．１ＭＭ×５ミクロン）；移動相：Ｎ－ヘキサン（Ａ）ＥｔＯＨ：ＭｅＯＨ，１：１（Ｂ）、流量：１５ＭＬ／分）によって、そのエナンチオマーに分離した。２つの生成物ピークに対応する２つのエナンチオマーの絶対的な立体化学は決定されなかった。
【0141】
ピーク１：キラルＨＰＬＣ Ｒｔ＝１４．９６０分（カラム：ＲＥＧＩＳ（Ｓ，Ｓ）ＷＨＥＬＫ－０１（２５０×４．６ｍｍ×５μ））；移動相：Ａ：ｎ－ヘキサン、Ｂ：エタノール：メタノール（８０：２０）中の０．１％ＨＣＯＯＨ；流量：１．０ｍｌ／分）。ＬＣＭＳ：Ｒｔ＝１．２５３分；ＭＳ ｍ／ｚ ３３２．８０［Ｍ＋Ｈ］＋；［方法１］。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １０．１６（ｂｒｓ，１Ｈ），８．３３（ｓ，１Ｈ），８．２８（ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，１Ｈ），７．２０（ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，１Ｈ），５．７５（ｓ，１Ｈ），５．６０（ｓ，１Ｈ），５．０２（ｓ，１Ｈ），４．９０－４．７９（ｍ，２Ｈ），３．４４（ｓ，３Ｈ），２．９６（ｑ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），１．２６（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３Ｈ）。
【0142】
ピーク２：キラルＨＰＬＣ Ｒｔ＝１８．５６５分（カラム：ＲＥＧＩＳ（Ｓ，Ｓ）ＷＨＥＬＫ－０１（２５０×４．６ｍｍ×５μ））；移動相：Ａ：ｎ－ヘキサン、Ｂ：エタノール：メタノール（８０：２０）中の０．１％ＨＣＯＯＨ；流量：１．０ｍｌ／分）。ＬＣＭＳ：Ｒｔ＝１．２５８分；ＭＳ ｍ／ｚ ３３２．８［Ｍ＋Ｈ］＋；［方法１］。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １０．１６（ｂｒｓ，１Ｈ），８．３５（ｓ，１Ｈ），８．３０（ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，１Ｈ），７．２３（ｄ，Ｊ＝４．６Ｈｚ，１Ｈ），５．７６（ｓ，１Ｈ），５．６０（ｓ，１Ｈ），５．０３（ｓ，１Ｈ），４．９３－４．７５（ｍ，２Ｈ），３．４４（ｓ，３Ｈ），２．９７（ｑ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），１．２６（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３Ｈ）。
【0143】
実施例６：（Ｒ）－４－（５－フルオロ－４－（（Ｒ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－（フルオロメチル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル又は（Ｒ）－４－（５－フルオロ－４－（（Ｓ）－１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－（フルオロメチル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル
ステップ１：（Ｅ）－４－アセトキシ－２－（（５－フルオロ－４－（１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）メチレン）－３－オキソブタン酸エチル
４－アセトキシ－３－オキサブタン酸エチル（１．４９ｇ、９．３４ｍｍｏｌ）の撹拌ベンゼン（５０．００ｍＬ）溶液に、５－フルオロ－４－（１－フルオロエチル）ニコチンアルデヒド（実施例１のステップ４から、１．６０ｇ、９．３４ｍｍｏｌ）、酢酸ピペリジニウム（０．１３５ｇ、０．９３４ｍｍｏｌ）を室温で添加し、反応混合物を１２時間かけて９０℃まで加熱した。溶媒を減圧下で除去して、粗化合物を得た。粗生成物をシリカフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中２５％酢酸エチル）によって精製して、表題化合物を淡橙色シロップ状物として得た。（Ｅ）－４－アセトキシ－２－（（５－フルオロ－４－（１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）メチレン）－３－オキソブタン酸エチル。ＬＣＭＳ：Ｒｔ＝１．０３分及び１．３５分（シス／トランス混合物）；ＭＳ ｍ／ｚ ３４２．１［Ｍ＋Ｈ］＋；［方法２］。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）（シス／トランス混合物、１：１）δ ８．４６（ｓ，２Ｈ），８．２６（ｓ，１Ｈ），８．２１（ｓ，１Ｈ），８．１１－８．０６（ｍ，２Ｈ），６．１３－５．８９（ｍ，２Ｈ），５．０６（ｓ，２Ｈ），４．８３（ｓ，２Ｈ），４．３５（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），４．１３（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），２．１８（ｓ，３Ｈ），２．１０（ｓ，３Ｈ），１．７６－１．６１（ｍ，６Ｈ），１．３７（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．０４（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）。
【化37】
【化38】
【0144】
ステップ２及び３：２’－（アセトキシメチル）－６’－（ジメトキシメチル）－５－フルオロ－４－（１－フルオロエチル）－１’，４’－ジヒドロ－［３，４’－ビピリジン］－３’，５’－ジカルボン酸３’－エチル５’－メチル
（Ｅ）－４－アセトキシ－２－（（５－フルオロ－４－（１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）メチレン）－３－オキソブタン酸エチル（６１０．０ｍｇ、１．７９ｍｍｏｌ）の撹拌ＥｔＯＨ（８．００ｍＬ）溶液に、（Ｚ）－３－アミノ－４，４－ジメトキシブタ－２－エン酸メチル（３１３．０ｍｇ、１．７９ｍｍｏｌ）を室温で添加し、反応混合物を９０℃で１６時間加熱した。溶媒を減圧下で除去して、褐色シロップ状物（０．９６ｇ）として粗化合物を得て、これを次のステップにそのまま使用した。
【化39】
【0145】
２’－（アセトキシメチル）－６’－（ジメトキシメチル）－５－フルオロ－４－（１－フルオロエチル）－１’，４’－ジヒドロ－［３，４’－ビピリジン］－３’，５’－ジカルボン酸３’－エチル５’－メチル（０．９６ｇ、１．９２ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１０．００ｍＬ）溶液に、Ｋ２ＣＯ３（０．５３ｇ、３．８５ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で２時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、残渣を水に添加し、生成物をＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を、ブラインを用いて洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、溶媒を減圧下で除去した。粗生成物を、シリカフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中の４０～８０％酢酸エチル）によって精製して、所望の生成物である２－（ジメトキシメチル）－４－（５－フルオロ－４－（１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチルを褐色固体として得た。ＬＣＭＳ：Ｒｔ＝１．１０５分及び１．１１６分（ジアステレオマー混合物）；ＭＳ ｍ／ｚ ４１１．１［Ｍ＋Ｈ］＋；［方法１］。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）（ジアステレオマー混合物、１：１）δ ８．３９－８．２２（ｍ，４Ｈ），７．４４（ｂｒｓ，２Ｈ），６．５８－６．１９（ｍ，２Ｈ），６．１４（ｓ，１Ｈ），６．０５（ｓ，１Ｈ），５．１７（ｓ，１Ｈ），５．１２（ｓ，１Ｈ），４．８５－４．７３（ｍ，４Ｈ），３．６１（ｓ，３Ｈ），３．５８（ｓ，３Ｈ），３．５４（ｓ，３Ｈ），３．５２（ｓ，３Ｈ），３．５１（ｓ，３Ｈ），３．５０（ｓ，３Ｈ），１．９９－１．７７（ｍ，６Ｈ）。
【0146】
ステップ４：４－（５－フルオロ－４－（１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－ホルミル－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル
２－（ジメトキシメチル）－４－（５－フルオロ－４－（１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル（ステップ６から、４１０．０ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）のジオキサン（８．００ｍＬ）溶液に、６ＮジオキサンＨＣｌ（２．００ｍＬ）を５℃で添加し、反応混合物を室温で３時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、ＥｔＯＡｃで希釈した。ＥｔＯＡｃをＮａＨＣＯ３溶液、ブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、溶媒を減圧下で除去して、表題化合物である４－（５－フルオロ－４－（１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－ホルミル－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチルを得た。ＬＣＭＳ：Ｒｔ＝１．０８９分及び１．０９７分（ジアステレオマー混合物）；ＭＳ ｍ／ｚ ３６５．１［Ｍ＋Ｈ］＋；［方法１］。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）（ジアステレオマー混合物、約１：１）δ １０．５８（ｓ，１Ｈ），１０．４２（ｓ，１Ｈ），８．３４－８．２５（ｍ，４Ｈ），７．８７（ｓ，１Ｈ），７．８４（ｓ，１Ｈ），６．５１－６．１７（ｍ，２Ｈ），５．３５（ｓ，１Ｈ），５．２５（ｓ，１Ｈ），４．９１－４．７７（ｍ，４Ｈ），３．７０（ｓ，６Ｈ），２．０４－１．８１（ｍ，６Ｈ）。
【化40】
【0147】
ステップ５：２－（ジフルオロメチル）－４－（５－フルオロ－４－（１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル
４－（５－フルオロ－４－（１－フルオロエチル）ピリジン－３－イル）－２－ホルミル－５－オキソ－１，４，５，７－テトラヒドロフロ［３，４－ｂ］ピリジン－３－カルボン酸メチル（ステップ４から、９０．０ｍｇ、０．２４７ｍｍｏｌ）の撹拌ＤＣＭ（３．００ｍＬ）溶液に、ＤＡＳＴ（０．０６５ｍＬ、０．４９ｍｍｏｌ）を－７８℃で添加し、反応物を室温で５時間撹拌した。反応物を－３０℃の水でクエンチし、生成物をＤＣＭ（３×１０ｍＬ）内で抽出した。合わせた有機層をＮａＨＣＯ３溶液、ブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、溶媒を減圧下で除去して、粗化合物を得た。
ｒａｃ－ジアステレオマーを分取ＨＰＬＣ（カラム：ＷＡＴＥＲＳ Ｘ ＢＲＩＤＧＥ（１９×１５０ｍｍ）、５．０μ；移動相：Ａ＝水、Ｂ＝ＡＣＮ；流量：１５ｍｌ／分）により分離して、ｒａｃ－ジアステレオマー１及びｒａｃ－ジアステレオマー２を得た。４つの生成物ピークに対応する４つの立体異性体の絶対的な立体化学は決定されなかった。
ｒａｃ－ジアステレオマー１を、キラルＨＰＬＣ（カラム：ＬＵＸ ＣＥＬＬＵＬＯＳＥ－４、２５０ＭＭ×２１．２ＭＭ×５ミクロン；移動相：Ａ：ヘキサン：Ｂ：ＥｔＯＨ；流量アイソクラティック：１５ｍＬ／分）によって、そのエナンチオマーに分離した。
ｒａｃ－ジアステレオマー２を、キラルＨＰＬＣ（カラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ ＩＪ、２５０ＭＭ×２０ＭＭ×５ミクロン；移動相：Ａ：ヘキサン：Ｂ：ＥｔＯＨ：ＭｅＯＨ：１：１；流量アイソクラティック：１５ｍＬ／分）によって、そのエナンチオマーに分離した。
【化41】
ｒａｃ－ジアステレオマーを分取ＨＰＬＣ（カラム：ＷＡＴＥＲＳ Ｘ ＢＲＩＤＧＥ（１９×１５０ｍｍ）、５．０μ；移動相：Ａ＝水、Ｂ＝ＡＣＮ；流量：１５ｍｌ／分）により分離して、ｒａｃ－ジアステレオマー１及びｒａｃ－ジアステレオマー２を得た。４つの生成物ピークに対応する４つの立体異性体の絶対的な立体化学は決定されなかった。
ｒａｃ－ジアステレオマー１を、キラルＨＰＬＣ（カラム：ＬＵＸ ＣＥＬＬＵＬＯＳＥ－４、２５０ＭＭ×２１．２ＭＭ×５ミクロン；移動相：Ａ：ヘキサン：Ｂ：ＥｔＯＨ；流量アイソクラティック：１５ｍＬ／分）によって、そのエナンチオマーに分離した。
ｒａｃ－ジアステレオマー２を、キラルＨＰＬＣ（カラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ ＩＪ、２５０ＭＭ×２０ＭＭ×５ミクロン；移動相：Ａ：ヘキサン：Ｂ：ＥｔＯＨ：ＭｅＯＨ：１：１；流量アイソクラティック：１５ｍＬ／分）によって、そのエナンチオマーに分離した。
【0148】
実施例６は、ｒａｃ－ジアステレオ異性体２からの第１に溶出するピークである。
キラルＨＰＬＣ Ｒｔ＝４．４８６分（カラム：ＣＨＩＲＡＬ ＰＡＫ－ＩＪ（１５０×４．６ｍｍ×５μ））；移動相：Ａ：ｎ－ヘキサン、Ｂ：エタノール：メタノール（５０：５０）；流量：１．０ｍｌ／分）。
ＬＣＭＳ：Ｒｔ＝０．４２３１分；ＭＳ ｍ／ｚ ３８７．１［Ｍ＋Ｈ］＋；［方法２］。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ ８．３１－８．３０（ｍ，２Ｈ），７．５０（ｔ，Ｊ＝５３．７Ｈｚ，１Ｈ），６．４３－６．２６（ｍ，１Ｈ），５．２６（ｓ，１Ｈ），４．８９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），３．５９（ｓ，３Ｈ），１．８７（ｄｄ，Ｊ＝２３．０，６．３Ｈｚ，３Ｈ）マイナス１Ｈ。
キラルＨＰＬＣ Ｒｔ＝４．４８６分（カラム：ＣＨＩＲＡＬ ＰＡＫ－ＩＪ（１５０×４．６ｍｍ×５μ））；移動相：Ａ：ｎ－ヘキサン、Ｂ：エタノール：メタノール（５０：５０）；流量：１．０ｍｌ／分）。
ＬＣＭＳ：Ｒｔ＝０．４２３１分；ＭＳ ｍ／ｚ ３８７．１［Ｍ＋Ｈ］＋；［方法２］。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ ８．３１－８．３０（ｍ，２Ｈ），７．５０（ｔ，Ｊ＝５３．７Ｈｚ，１Ｈ），６．４３－６．２６（ｍ，１Ｈ），５．２６（ｓ，１Ｈ），４．８９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），３．５９（ｓ，３Ｈ），１．８７（ｄｄ，Ｊ＝２３．０，６．３Ｈｚ，３Ｈ）マイナス１Ｈ。
【0149】
実施例６ａ：ｒａｃ－ジアステレオ異性体２からの第２に溶出するピーク
キラルＨＰＬＣ Ｒｔ＝５．０６４分（カラム：ＣＨＩＲＡＬ ＰＡＫ－ＩＪ（１５０×４．６ｍｍ×５μ））；移動相：Ａ：ｎ－ヘキサン、Ｂ：エタノール：メタノール（５０：５０）；流量：１．０ｍｌ／分）。
ＬＣＭＳ：Ｒｔ＝１．４３８分；ＭＳ ｍ／ｚ ３８６．８５［Ｍ＋Ｈ］＋；［方法１］。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ ８．３１（ｄ，Ｊ＝１．０Ｈｚ，１Ｈ），８．２５（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），７．４６（ｔ，Ｊ＝５４．４Ｈｚ，１Ｈ），６．４２－６．２６（ｍ，１Ｈ），５．２３（ｓ，１Ｈ），４．７９－４．７３（ｍ，２Ｈ），３．５５（ｓ，３Ｈ），１．８５（ｄｄ，Ｊ＝２３．３，６．６Ｈｚ，３Ｈ）マイナス１Ｈ。
キラルＨＰＬＣ Ｒｔ＝５．０６４分（カラム：ＣＨＩＲＡＬ ＰＡＫ－ＩＪ（１５０×４．６ｍｍ×５μ））；移動相：Ａ：ｎ－ヘキサン、Ｂ：エタノール：メタノール（５０：５０）；流量：１．０ｍｌ／分）。
ＬＣＭＳ：Ｒｔ＝１．４３８分；ＭＳ ｍ／ｚ ３８６．８５［Ｍ＋Ｈ］＋；［方法１］。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ ８．３１（ｄ，Ｊ＝１．０Ｈｚ，１Ｈ），８．２５（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），７．４６（ｔ，Ｊ＝５４．４Ｈｚ，１Ｈ），６．４２－６．２６（ｍ，１Ｈ），５．２３（ｓ，１Ｈ），４．７９－４．７３（ｍ，２Ｈ），３．５５（ｓ，３Ｈ），１．８５（ｄｄ，Ｊ＝２３．３，６．６Ｈｚ，３Ｈ）マイナス１Ｈ。
【0150】
実施例６ｂ：ｒａｃ－ジアステレオ異性体１からの第１に溶出するピーク
キラルＨＰＬＣ Ｒｔ＝５．８３０分（カラム：ＬＵＸ ＣＥＬＬＵＬＯＳＥ－４（１５０×４．６ｍｍ×５μ））；移動相：Ａ：ｎ－ヘキサン、Ｂ：エタノール：メタノール（５０：５０）；流量：１．０ｍｌ／分）。
ＬＣＭＳ：Ｒｔ＝１．１２５分；ＭＳ ｍ／ｚ ３８７．１［Ｍ＋Ｈ］＋；［方法１］。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ ８．３１（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），８．２４（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），７．４６（ｔ，Ｊ＝５３．４８Ｈｚ，１Ｈ），６．５６－６．４０（ｍ，１Ｈ），５．２４（ｓ，１Ｈ），４．８７（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，２Ｈ），３．５９（ｓ，３Ｈ），１．７９（ｄｄ，Ｊ＝２３．２，６．６Ｈｚ，３Ｈ）マイナス１Ｈ。
キラルＨＰＬＣ Ｒｔ＝５．８３０分（カラム：ＬＵＸ ＣＥＬＬＵＬＯＳＥ－４（１５０×４．６ｍｍ×５μ））；移動相：Ａ：ｎ－ヘキサン、Ｂ：エタノール：メタノール（５０：５０）；流量：１．０ｍｌ／分）。
ＬＣＭＳ：Ｒｔ＝１．１２５分；ＭＳ ｍ／ｚ ３８７．１［Ｍ＋Ｈ］＋；［方法１］。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ ８．３１（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），８．２４（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），７．４６（ｔ，Ｊ＝５３．４８Ｈｚ，１Ｈ），６．５６－６．４０（ｍ，１Ｈ），５．２４（ｓ，１Ｈ），４．８７（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，２Ｈ），３．５９（ｓ，３Ｈ），１．７９（ｄｄ，Ｊ＝２３．２，６．６Ｈｚ，３Ｈ）マイナス１Ｈ。
【0151】
実施例６ｃ：ｒａｃ－ジアステレオ異性体１からの第２に溶出するピーク
キラルＨＰＬＣ Ｒｔ＝６．７６１分（カラム：ＬＵＸ ＣＥＬＬＵＬＯＳＥ－４（１５０×４．６ｍｍ×５μ））；移動相：Ａ：ｎ－ヘキサン、Ｂ：エタノール：メタノール（５０：５０）；流量：１．０ｍｌ／分）。
ＬＣＭＳ：Ｒｔ＝１．４３５分；ＭＳ ｍ／ｚ ３８６．８５［Ｍ＋Ｈ］＋；［方法１］。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ ８．３１（ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，１Ｈ），８．２４（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），７．４６（ｔ，Ｊ＝５３．６Ｈｚ，１Ｈ），６．５６－６．４０（ｍ，１Ｈ），５．２４（ｓ，１Ｈ），４．８７（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，２Ｈ），３．５９（ｓ，３Ｈ），１．７９（ｄｄ，Ｊ＝２３．０，６．６Ｈｚ，３Ｈ）マイナス１Ｈ。
キラルＨＰＬＣ Ｒｔ＝６．７６１分（カラム：ＬＵＸ ＣＥＬＬＵＬＯＳＥ－４（１５０×４．６ｍｍ×５μ））；移動相：Ａ：ｎ－ヘキサン、Ｂ：エタノール：メタノール（５０：５０）；流量：１．０ｍｌ／分）。
ＬＣＭＳ：Ｒｔ＝１．４３５分；ＭＳ ｍ／ｚ ３８６．８５［Ｍ＋Ｈ］＋；［方法１］。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ ８．３１（ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，１Ｈ），８．２４（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），７．４６（ｔ，Ｊ＝５３．６Ｈｚ，１Ｈ），６．５６－６．４０（ｍ，１Ｈ），５．２４（ｓ，１Ｈ），４．８７（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，２Ｈ），３．５９（ｓ，３Ｈ），１．７９（ｄｄ，Ｊ＝２３．０，６．６Ｈｚ，３Ｈ）マイナス１Ｈ。
【0152】
生物学的データ
多くの既知のカルシウムチャネル活性剤は、ＣａＶ１．２を活性化する複雑な機構を示している。これらの分子は、ピーク電流を増加させるだけでなく、例えば、チャネルの電圧感度をより負の膜電位にシフトさせることによって、細胞内カルシウム濃度を増加させる追加の機構も有する。図１は、心外膜環境からの模擬心臓活動電位を示し、時間（ｍｓ）に対する電位（ｍＶ）で、ＣａＶ１．２活性化の電圧を、より負の膜電位にシフトさせることの影響を示すことによって、これらの追加の機構を示す。これらの追加の機構は、血圧の上昇、心拍数又は収縮性の変化、及び／又はＱＴ延長に起因する不整脈などの心血管効果を駆動又は促進し得る。例えば、Ｏ’Ｈａｒａ－Ｒｕｄｙモデルを使用して、活動電位の持続時間及び不整脈の負担に対するＣａＶ１．２調整の影響を調べた。活性化曲線における１２ｍＶを超える過分極シフトは、１５％を超えるＱＴ延長及び不整脈のリスク増加を潜在的に引き起こす可能性があることが特定された。したがって、電圧感度のシフトを最小限に抑えることは、ＱＴ延長及び心不整脈のリスクを低下させる化合物につながる可能性がある。
多くの既知のカルシウムチャネル活性剤は、ＣａＶ１．２を活性化する複雑な機構を示している。これらの分子は、ピーク電流を増加させるだけでなく、例えば、チャネルの電圧感度をより負の膜電位にシフトさせることによって、細胞内カルシウム濃度を増加させる追加の機構も有する。図１は、心外膜環境からの模擬心臓活動電位を示し、時間（ｍｓ）に対する電位（ｍＶ）で、ＣａＶ１．２活性化の電圧を、より負の膜電位にシフトさせることの影響を示すことによって、これらの追加の機構を示す。これらの追加の機構は、血圧の上昇、心拍数又は収縮性の変化、及び／又はＱＴ延長に起因する不整脈などの心血管効果を駆動又は促進し得る。例えば、Ｏ’Ｈａｒａ－Ｒｕｄｙモデルを使用して、活動電位の持続時間及び不整脈の負担に対するＣａＶ１．２調整の影響を調べた。活性化曲線における１２ｍＶを超える過分極シフトは、１５％を超えるＱＴ延長及び不整脈のリスク増加を潜在的に引き起こす可能性があることが特定された。したがって、電圧感度のシフトを最小限に抑えることは、ＱＴ延長及び心不整脈のリスクを低下させる化合物につながる可能性がある。
【0153】
式（Ｉ）の化合物は、上に概説した心血管リスクを最小限に抑える生物物理学的プロファイルを有する、非常に強力なＣａＶ１．２活性剤である。第一に、式（Ｉ）の化合物は、不整脈電位を緩和するために、過分極シフトを９ｍＶ未満に最小限に抑えることによって、電圧感度に対するそれらの影響を制限する。第二に、式（Ｉ）の化合物は、ＣａＶ１．２のピーク電流を２．５倍以下増加させ、それによって、チャネルの過剰活性化を制限する。第三に、式（Ｉ）の化合物は、ティモシー症候群の心臓症状の根底にある病態生理学的機構であるＣａＶ１．２チャネル不活性化を遅延させない。更に、式（Ｉ）の化合物は、脳内の有意な流出を示さないことによって、脳曝露を最大化するように設計される。
【0154】
ＣａＶ１．２－ＨＥＫ２９３（ＡＵＸ）細胞株の生成及び維持
モノクローナルＣａＶ１．２－ＨＥＫ２９３（ＡＵＸ）細胞株は、ヒトＣａＶ１．２アルファ１（α１）サブユニット（ＣＡＣＮＡ１Ｃ）を構成的に発現し、アルファ２デルタ（α２Δ２）補助サブユニット（ＣＡＣＮＡ２Ｄ２）及びベータ２（β２）補助サブユニット（ＣＡＣＮＢ２）のドキシサイクリン誘導性発現を有する。細胞株を生成するために、遺伝子合成及びクローニングを介して、発現ベクターｐｃＤＮＡ５．０／ＦＲＴ－ＴＯ－ＣＡＣＮＡ２Ｄ２－ＦＣＳ－Ｐ２Ａ－ＣＡＣＮＢ２及びｐＣＭＶ６－エントリー－ＣＡＣＮＡ１Ｃを確立した。ここで、ｐｃＤＮＡ５．０／ＦＲＴ－ＴＯプラスミドは、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ製であり、ｐＣＭＶ６－エントリーは、Ｏｒｉｇｅｎｅ製であり、ＦＣＳは、フリン切断部位（Ｆｕｒｉｎ Ｃｌｅａｖａｇｅ Ｓｉｔｅ）を表し、Ｐ２Ａは、ブタテシオウイルス－１に由来するペプチド自己切断配列であり、ＦＲＴは、フリッパーゼ認識標的部位（Ｆｌｉｐｐａｓｅ ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｔａｒｇｅｔ ｓｉｔｅ）である。次に、親株Ｆｌｐ－Ｉｎ（商標）２９３ Ｔ－Ｒｅｘ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を、ｐｃＤＮＡ５．０／ＦＲＴ－ＴＯ－ＣＡＣＮＡ２Ｄ２－ＦＣＳ－Ｐ２Ａ－ＣＡＣＮＢ２及びフリッパーゼベクターｐＯＧ４４（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）でトランスフェクトして、Ｆｌｐ－Ｉｎ（商標）２９３ Ｔ－Ｒｅｘにおける事前に操作されたＦＲＴ部位へのＣＡＣＮＡ２Ｄ２－ＦＣＳ－Ｐ２Ａ－ＣＡＣＮＢ２発現カセットの標的化された組み込みを確立した。次いで、この中間細胞株を、ｐＣＭＶ６－エントリー－ＣＡＣＮＡ１Ｃでトランスフェクトして、安定したＣＡＣＮＡ１Ｃ発現を確立した。ネオマイシン選択下でクローン単離を達成した。良好な電圧依存性バリウム電流を有する細胞クローン（２－１９Ｂ）（以下の電気生理学的方法を参照）を、ＣａＶ１．２活性剤の特性決定のために選択した。
モノクローナルＣａＶ１．２－ＨＥＫ２９３（ＡＵＸ）細胞株は、ヒトＣａＶ１．２アルファ１（α１）サブユニット（ＣＡＣＮＡ１Ｃ）を構成的に発現し、アルファ２デルタ（α２Δ２）補助サブユニット（ＣＡＣＮＡ２Ｄ２）及びベータ２（β２）補助サブユニット（ＣＡＣＮＢ２）のドキシサイクリン誘導性発現を有する。細胞株を生成するために、遺伝子合成及びクローニングを介して、発現ベクターｐｃＤＮＡ５．０／ＦＲＴ－ＴＯ－ＣＡＣＮＡ２Ｄ２－ＦＣＳ－Ｐ２Ａ－ＣＡＣＮＢ２及びｐＣＭＶ６－エントリー－ＣＡＣＮＡ１Ｃを確立した。ここで、ｐｃＤＮＡ５．０／ＦＲＴ－ＴＯプラスミドは、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ製であり、ｐＣＭＶ６－エントリーは、Ｏｒｉｇｅｎｅ製であり、ＦＣＳは、フリン切断部位（Ｆｕｒｉｎ Ｃｌｅａｖａｇｅ Ｓｉｔｅ）を表し、Ｐ２Ａは、ブタテシオウイルス－１に由来するペプチド自己切断配列であり、ＦＲＴは、フリッパーゼ認識標的部位（Ｆｌｉｐｐａｓｅ ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｔａｒｇｅｔ ｓｉｔｅ）である。次に、親株Ｆｌｐ－Ｉｎ（商標）２９３ Ｔ－Ｒｅｘ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を、ｐｃＤＮＡ５．０／ＦＲＴ－ＴＯ－ＣＡＣＮＡ２Ｄ２－ＦＣＳ－Ｐ２Ａ－ＣＡＣＮＢ２及びフリッパーゼベクターｐＯＧ４４（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）でトランスフェクトして、Ｆｌｐ－Ｉｎ（商標）２９３ Ｔ－Ｒｅｘにおける事前に操作されたＦＲＴ部位へのＣＡＣＮＡ２Ｄ２－ＦＣＳ－Ｐ２Ａ－ＣＡＣＮＢ２発現カセットの標的化された組み込みを確立した。次いで、この中間細胞株を、ｐＣＭＶ６－エントリー－ＣＡＣＮＡ１Ｃでトランスフェクトして、安定したＣＡＣＮＡ１Ｃ発現を確立した。ネオマイシン選択下でクローン単離を達成した。良好な電圧依存性バリウム電流を有する細胞クローン（２－１９Ｂ）（以下の電気生理学的方法を参照）を、ＣａＶ１．２活性剤の特性決定のために選択した。
【0155】
細胞株を維持するために、細胞を週に２回継代させた。各継代で、成長培地（表１）を完全に除去し、細胞を、１０ｍＬのＤ－ＰＢＳ及び５ｍＬの加温したＴｒｙｐＬＥ（商標）Ｅｘｐｒｅｓｓ Ｅｎｚｙｍｅ（Ｇｉｂｃｏ）で連続してすすいだ。Ｄ－ＰＢＳ及びＴｒｙｐＬＥ（商標）Ｅｘｐｒｅｓｓ Ｅｎｚｙｍｅの両方を、すすいだ後直ちに除去した。次いで、プレートを、室温で３～５分間配置した。次に、１０ｍＬの加温した３７℃の完全培地を添加して、細胞成長表面を洗い流し、解離した細胞を集めた。細胞をカウントし、Ｔ１７５ｃｍ２フラスコ当たり２～３×１０６個の細胞密度を標的にして、新しいフラスコに播種した。
【表2】
【0156】
ＣａＶ１．２－ＨＥＫ２９３（ＡＵＸ）細胞株及びＱＰａｔｃｈを使用したＣａＶ１．２活性剤の電気生理学的特性決定
電気生理学実験の２４時間前に、ドキシサイクリン（１μｇ／ｍｌ）を成長培地（表１）に添加し、カルシウム流入が細胞死を引き起こすのを防止するために、２５μＭのベラパミルを同時に適用した。細胞のコンフルエンシーは、実験直前に７０％～８０％に達するはずである。
電気生理学実験の２４時間前に、ドキシサイクリン（１μｇ／ｍｌ）を成長培地（表１）に添加し、カルシウム流入が細胞死を引き起こすのを防止するために、２５μＭのベラパミルを同時に適用した。細胞のコンフルエンシーは、実験直前に７０％～８０％に達するはずである。
【0157】
細胞を回収するために（一例として、Ｔ１７５ｃｍ２フラスコから）、成長培地を完全に除去し、細胞を１０ｍＬのＤ－ＰＢＳですすいだ。Ｄ－ＰＢＳを吸引し、１０ｍＬのデタチン（Ｇｅｎｌａｎｔｉｓ）を加え、プレートを３７℃のインキュベーターに１０分間配置した。分離した細胞を１５ｍＬのコニカルチューブに入れ、１０００ｒｐｍで２分間回転させた。上清を除去し、細胞をＱＰａｔｃｈ完全培地（表２）に再懸濁させ、ＱＰａｔｃｈ試行当たり１．５～３００万個の細胞の所望の細胞密度を得た。各実験試行は、１．５ｍＬの細胞を使用する。
【0158】
細胞懸濁液を、単孔ＱＰｌａｔｅ上でＣａＶ１．２を通して伝導されるバリウム電流を測定するために全細胞電圧クランプを使用するＳｏｐｈｉｏｎ ＱＰａｔｃｈプラットフォームに取り込んだ。細胞外及び細胞内パッチクランプ溶液は、それぞれ表３及び表４に記載されている。用量応答アッセイプロトコルを使用して、各化合物のピーク内向き電流（Ｅｍａｘ）及び力価（ＥＣ５０）の最大倍率変化を決定した。プロトコルは、８つの液体期間を有していた。第１の液体期間は、電流振幅を安定させることであり、これは、－８０ｍＶから０ｍＶに段階的に変化する繰り返し２００ｍｓの電圧パルスを使用して監視された。第２の液体期間は、－８０ｍＶから０ｍＶへの単一の２０ｍｓ電圧パルスの段階的な変化を使用して、ビヒクル制御の存在下でベースライン電流振幅を決定することであった。第３～第８の液体期間を使用して、化合物処理に対する６用量応答を確認し、また、－８０ｍＶから０ｍＶへ段階的に変化する単一の２０ｍｓ電圧パルスを使用した。ＥＣ５０は、以下の式を使用して生成された。Ｉ濃度＝Ｉベース＋（Ｉフル－Ｉベース）＊ｃｎ／（ＸＣ５０
ｎ＋ｃｎ）、式中、ｃは、濃度であり、ｎは、ヒル係数定数である。Ｉフルは、達成可能な最大電流であり、Ｉベースは、０である。チャネル生物物理学アッセイプロトコルを使用して、電流－電圧関係（ＩＶ曲線）、中間チャネル活性化電圧（ｈａｌｆ－ｗａｙ ｃｈａｎｎｅｌ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｖｏｌｔａｇｅ）（Ｖ１／２）、チャネル不活性化速度（ｔａｕ）、及びテール電流の振幅を含むチャネルゲーティング特性を決定した。これらのうち、Ｖ１／２は、フィッティング式Ｇ（Ｖ）＝ＧＶ最小＋（ＧＶ最大－ＧＶ最小）／（１＋ｅｘｐ（－（Ｖ－Ｖ１／２）／Ｖ勾配））から導出され、式中、Ｇは、コンダクタンスを表し、ＧＶ最小は０に等しく、ＧＶ最大は最大コンダクタンスであり、Ｖ勾配は勾配係数である。Ｇ（Ｖ）は、各実験的に適用された脱分極電位（Ｖ）及び対応する電流振幅（Ｉ（Ｖ））について、式Ｇ（Ｖ）＝Ｉ（Ｖ）／（Ｖ－０．０６）から予め計算され、式中の０．０６は、ボルト単位で実験的に決定された反転電位であった。プロトコルは、４つの液体期間を有していた。第１の液体期間は、電流振幅を安定させることであり、これは、－８０ｍＶから０ｍＶに段階的に変化する繰り返し２００ｍｓの電圧パルスを使用して監視された。電流振幅を安定化すると、電流トレースの不活性化段階の単一指数フィッティングを介して、不活性化のｔａｕのベースライン値を決定した。第２の液体期間は、ビヒクル制御の存在下で電流－電圧関係を構成するベースライン値を測定することであり、第３の液体期間は、電流－電圧関係に対する化合物効果を測定することであった。これらの２つの液体期間の各々の間に、細胞に、各々－８０ｍＶから、－５５ｍＶ～＋３５ｍＶまでの範囲のインクリメンタル値（インクリメントサイズ１０ｍＶ）まで段階的に変化する１０個の２０ｍｓ電圧パルスを与えた。第４の液体期間中、－８０ｍＶ～０ｍＶまでの２００ｍｓの電圧パルスを再び送達して、不活性化のｔａｕに対する化合物効果を測定した。
【表3】
【表4】
【表5】
【0159】
野生型マウスにおける化合物曝露－ｃＦｏｓ誘導（ＰＫ－ＰＤ）関係の評価
動物の管理及び倫理。全ての動物を、調節された温度及び光サイクル（２２℃、１２時間の明／１２時間の暗サイクル）で飼育し、餌及び水へのアクセスを制限しなかった。全ての動物実験は、Ｎｏｖａｒｔｉｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｆｏｒ ＢｉｏＭｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｉｎｃ．（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ，ＵＳＡ）のＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＡＣＵＣ）によって承認された実験動物のケア及び使用に関する機関ガイドラインに従って行われた。
動物の管理及び倫理。全ての動物を、調節された温度及び光サイクル（２２℃、１２時間の明／１２時間の暗サイクル）で飼育し、餌及び水へのアクセスを制限しなかった。全ての動物実験は、Ｎｏｖａｒｔｉｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｆｏｒ ＢｉｏＭｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｉｎｃ．（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ，ＵＳＡ）のＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＡＣＵＣ）によって承認された実験動物のケア及び使用に関する機関ガイドラインに従って行われた。
【0160】
化合物投与及び脳組織収集。野生型Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雄マウスを、Ｊａｃｋｓｏｎ ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）から得た。本開示のＣａＶ１．２活性剤の急性単回投与の効果を、雄の８週齢マウス（化合物当たりｎ＝６匹のマウス）で評価した。各化合物を、１０％のＰＥＧ３００、１０％のＳｏｌｕｔｏｌ、１０％のＣｒｅｍｏｐｈｏｒｅ ＥＬ、及び７０％のリン酸緩衝生理食塩水に溶解し、化合物に応じて１ｍｇ／ｋｇ～最大３０ｍｇ／ｋｇの濃度で腹腔内（ｉ．ｐ．）投与した。化合物投与の１時間後、動物を、深い麻酔下での瀉血によって安楽死させた。血液を、下流の薬物レベルの分析のためにＥＤＴＡチューブに回収した。脳を頭蓋骨から迅速に取り除き、大脳皮質及び小脳を局所的に解剖した。小脳試料を液体窒素中で急速凍結させて、化合物曝露を評価した。ｃＦｏｓ評価のための皮質試料を、試料中のＲＮＡの完全性を保持するために、５００μＬのＲＮＡｌａｔｅｒ溶液（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）中に配置した。試料を、ＲＮＡｌａｔｅｒ中に４℃で少なくとも２４時間保持した後、処理の前の保管のために－８０℃に移動した。
【0161】
ｃＦｏｓ ｍＲＮＡ誘導の定量化。９６ウェルプレート（Ｑｉａｇｅｎ）に対してＴｉｓｓｕｅＬｙｓｅｒシステムを使用して、組織均質化を行った。まず、凍結した皮質試料を解凍し、ＲＮＡｌａｔｅｒから取り出し、０．５％のＲｅａｇｅｎｔ ＤＸを含有するＢｕｆｆｅｒ ＲＬＴ及び１つの５ｍｍのＴｉｓｓｕｅＬｙｓｅｒ金属ビーズとともにＴｉｓｓｕｅＬｙｓｅｒチューブに入れた。ＴｉｓｓｕｅＬｙｓｅｒチューブを、３ラウンドの均質化のためにＴｉｓｓｕｅＬｙｓｅｒ ＩＩ組織ホモジナイザーにロードし、各ラウンドは、３０Ｈｚのビーズビーティング周波数で５分間続いた。全ＲＮＡを、ＲＮｅａｓｙ ９６ Ｐｌｕｓキット（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して、ホモジネートから精製し、ＲＮＡ濃度及びＡ２６０／Ａ２８０比を、Ｎａｎｏｄｒｏｐ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）によって定量化し、全ての試料を１００ｎｇ／μｌ濃度に対して正規化した。ＲＮＡを、Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ ＩＩＩ Ｆｉｒｓｔ－ｓｔｒａｎｄ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ＳｕｐｅｒＭｉｘ Ｋｉｔ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を使用して、ｃＤＮＡに逆転写した。各試料について、６μｌのＲＮＡ（合計６００ｎｇ）を、１μＬのＯｌｉｇｏ ｄＴ及び１μＬのアニーリング緩衝液と混合し、５分間かけて６５℃まで加熱した。次に、１０μＬの２Ｘ Ｆｉｒｓｔ－Ｓｔｒａｎｄ Ｒｅａｃｔｉｏｎ Ｍｉｘ及び２μＬのＥｎｚｙｍｅ ｍｉｘを添加して、２０μＬの合計反応体積を達成した。試料を５０分間かけて５０℃まで、次いで５分間かけて８５℃まで加熱して、ｃＤＮＡ合成を完了した。
【0162】
３８４ウェルアッセイフォーマットで、Ｑｕａｎｔｉｔｅｃｔ Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ ＲＴ－ＰＣＲキット（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して、ｃＤＮＡ試料に対して定量的ＰＣＲを行った。各ＰＣＲウェルは、２μＬのｃＤＮＡ（合計６０ｎｇ）、１０μＬのＲＴ－ＰＣＲマスターミックス、１μＬのｃＦｏｓ ＦＡＭ Ｔａｑｍａｎプローブ（Ｍｍ００４８７４２５＿ｍ１（ＦＡＭ） ＃４３５１３６８）、１μＬのＧＡＰＤＨ ＶＩＣ Ｔａｑｍａｎプローブ（Ｍｍ９９９９９９１５－ｇ１（ＶＩＣ） ＃４４４８４８６）、０．２μＬのＭｕｌｔｉｐｌｅｘ ＲＴミックス及び５．８μｌの無ＲＮａｓｅ水を含有していた。ＶｉｉＡ７ Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ ＰＣＲシステム（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）で、試料を１５分間かけて９５℃まで加熱し、次いで、９４℃で４５秒間及び６０℃で４５秒間の４５サイクルを行った。ｃＦｏｓ Ｃｔ値をエクスポートし、ＧＡＰＤＨ Ｃｔ値に対して正規化し、デルタ－デルタＣｔ相対定量法を使用して、発現の相対倍率変化に変換した。化合物治療とビヒクルとの間のｃＦｏｓ倍率変化を、一方向ＡＮＯＶＡによって分析し、続いて、テューキーの事後比較を行った。
【0163】
化合物曝露の定量化。小脳組織試料を、１ｇの組織ごとに、４ｍＬの２０％のアセトニトリル及び８０％のリン酸緩衝生理食塩水中で均質化した（５倍希釈）。組織を、以下の３つの方法のいずれかを使用して均質化した。携帯型プローブシステム、４分間の周波数３０ｓ－１の５ｍｍスチールビーズを用いるＴｉｓｓｕｅＬｙｓｅｒシステム、又は組織型に応じて３０秒～１分間のＯＭＮＩ Ｂｅａｄ Ｒｕｐｔｏｒ Ｅｌｉｔｅホモジナイザー。組織試料を９６ウェルプレート（１２．５μＬの試料）に添加し、質量分析によって定量化するために処理した。
結果
ＱＰａｔｃｈは、各濃度で１０回の個別決定を伴う６点用量応答として実施した。記載されていない限り、１つの実験的反復（ｎ＝１）のみ
＊ｎ＝２
ｎｄ＝未決定
結果
【表6】
ＱＰａｔｃｈは、各濃度で１０回の個別決定を伴う６点用量応答として実施した。記載されていない限り、１つの実験的反復（ｎ＝１）のみ
＊ｎ＝２
ｎｄ＝未決定
【0164】
比較例
他のＣａＶ１．２活性剤が知られているが、これらの化合物は、それほど強力ではなく、かつ／又はチャネルを活性化し、血圧の上昇、心拍数若しくは収縮性の変化、及び／又はＱＴ延長に起因する不整脈などの心血管リスクを最小限に抑えつつ、十分な脳曝露を有するのに必要な所望の生物物理学的特性を有していない。
他のＣａＶ１．２活性剤が知られているが、これらの化合物は、それほど強力ではなく、かつ／又はチャネルを活性化し、血圧の上昇、心拍数若しくは収縮性の変化、及び／又はＱＴ延長に起因する不整脈などの心血管リスクを最小限に抑えつつ、十分な脳曝露を有するのに必要な所望の生物物理学的特性を有していない。
【表7-1】
【表7-2】
【図1】
【図2】
【国際調査報告】