特表 2024-545367 発現効率を増加させた核酸発現プラットフォーム

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-12-05

(54)【発明の名称】発現効率を増加させた核酸発現プラットフォーム

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/12 20060101AFI20241128BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20241128BHJP

   C12N 15/11 20060101ALI20241128BHJP

   C12N 15/53 20060101ALI20241128BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20241128BHJP

   A61K 31/7088 20060101ALI20241128BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20241128BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20241128BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20241128BHJP

【ＦＩ】

C12N15/12 ZNA

C12N15/63 Z

C12N15/11 Z

C12N15/53

C12N15/13

A61K31/7088

A61K48/00

A61P43/00 105

A61P37/04

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024557871

(86)(22)【出願日】2022-12-09

(85)【翻訳文提出日】2024-06-12

(86)【国際出願番号】 KR2022020062

(87)【国際公開番号】W WO2023113393

(87)【国際公開日】2023-06-22

(31)【優先権主張番号】10-2021-0177977

(32)【優先日】2021-12-13

(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】524223312

【氏名又は名称】エスエムエル バイオファーム カンパニー リミテッド

【氏名又は名称原語表記】ＳＭＬ ＢＩＯＰＨＡＲＭ ＣＯ．， ＬＴＤ．

(74)【代理人】

【識別番号】110000729

【氏名又は名称】弁理士法人ユニアス国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】ナム、ジェ ファン

(72)【発明者】

【氏名】パク、ヒョン ジュン

(72)【発明者】

【氏名】ノ、ガ ヒョン

【テーマコード（参考）】

4C084

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C084AA13

4C084NA14

4C084ZB09

4C084ZB21

4C086AA02

4C086EA16

4C086NA14

4C086ZB09

4C086ZB21

(57)【要約】

本開示は、コーディング領域の下流に複数の翻訳調節要素が挿入された核酸分子と、前記核酸分子が挿入された組換え発現ベクターのような核酸発現プラットフォームまたは核酸発現システムに関する。本開示の核酸分子を活用してコーディング領域に挿入された目的遺伝子が効率的に発現することができる。発現プラットフォームを活用して、レポーター遺伝子、抗原および／または治療用タンパク質またはペプチドの発現効率を向上させることができる。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

翻訳調節要素と、
前記翻訳調節要素と作動可能に連結されるコーディング領域と、を含み、
前記翻訳調節要素は、前記コーディング領域の上流（ｕｐｓｔｒｅａｍ）に位置する上流翻訳調節要素と、前記コーディング領域の下流（ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ）に位置する下流翻訳調節要素と、を含み、
前記下流翻訳調節要素は、複数の下流翻訳調節要素を含む核酸分子。

【請求項2】

前記下流翻訳調節要素は、前記コーディング領域の下流に位置する第１下流翻訳調節要素および第２下流翻訳調節要素を含む、請求項１に記載の核酸分子。

【請求項3】

前記複数の下流翻訳調節要素は、それぞれヒトトロポニンＴ１、スロー骨格型（ヒトＴＮＮＴ１）、ヒトアルブミン、ヒトフェリチン軽鎖（ヒトＦＴＬ）、ヒトＣ－Ｃモチーフケモカインリガンド（ヒトＣＣＬ１９）、ヒト血管関連の移動性細胞タンパク質（ヒトＡＡＭＰ）、ヒトリボソームタンパク質Ｓ２７（ヒトＲＰＳ２７）およびヒトディフェンシンアルファ５（ヒトＤＥＦＡ５）から成る群から選択されるいずれか１つの遺伝子に由来する翻訳調節要素またはその転写体配列を含む、請求項１に記載の核酸分子。

【請求項4】

前記複数の下流翻訳調節要素は、それぞれ独立して、配列識別番号：８、配列識別番号：９、配列識別番号：１０、配列識別番号：１１、配列識別番号：１２、配列識別番号：１３および配列識別番号：１４から成る群から選択される翻訳調節要素またはその転写体配列を含む、請求項１に記載の核酸分子。

【請求項5】

前記第１下流翻訳調節要素は、前記ヒトＴＮＮＴ１由来の翻訳調節要素またはその転写体配列を含み、
前記第２下流翻訳調節要素は、前記ヒトアルブミン、前記ヒトＦＴＬ、前記ヒトＣＣＬ１９、前記ヒトＡＡＭＰ、前記ヒトＲＰＳ２７および前記ヒトＤＥＦＡ５から成る群から選択されるいずれか１つに由来する翻訳調節要素またはその転写体配列を含む、請求項２に記載の核酸分子。

【請求項6】

前記第１下流翻訳調節要素は、前記ヒトアルブミン由来の翻訳調節要素またはその転写体配列を含み、
前記第２下流翻訳調節要素は、前記ヒトＤＥＦＡ５由来の翻訳調節要素またはその転写体配列を含む、請求項２に記載の核酸分子。

【請求項7】

前記第１下流翻訳調節要素は、前記ヒトＦＴＬ由来の翻訳調節要素またはその転写体配列を含み、前記第２下流翻訳調節要素は、前記ヒトＴＮＮＴ１、前記ヒトＦＴＬ、前記ヒトＲＰＳ２７および前記ヒトＤＥＦＡ５から成る群から選択されるいずれか１つに由来する翻訳調節要素またはその転写体配列を含む、請求項２に記載の核酸分子。

【請求項8】

前記第１下流翻訳調節要素は、前記ヒトＣＣＬ１９由来の翻訳調節要素またはその転写体配列を含み、前記第２下流翻訳調節要素は、前記ヒトＴＮＮＴ１、前記ヒトＦＴＬ、前記ヒトＣＣＬ１９、前記ヒトＲＰＳ２７および前記ヒトＤＥＦＡ５から成る群から選択されるいずれか１つに由来する翻訳調節要素またはその転写体配列を含む、請求項２に記載の核酸分子。

【請求項9】

前記第１下流翻訳調節要素は、前記ヒトＡＡＭＰ由来の翻訳調節要素またはその転写体配列を含み、前記第２下流翻訳調節要素は、前記ヒトアルブミン、前記ヒトＦＴＬ、前記ヒトＲＰＳ２７および前記ヒトＤＥＦＡ５から成る群から選択されるいずれか１つに由来する翻訳調節要素またはその転写体配列を含む、請求項２に記載の核酸分子。

【請求項10】

前記第１下流翻訳調節要素は、前記ヒトＲＰＳ２７由来の翻訳調節要素またはその転写体配列を含み、前記第２下流翻訳調節要素は、前記ヒトＴＮＮＴ１、前記ヒトアルブミン、前記ヒトＦＴＬ、前記ヒトＣＣＬ１９、前記ヒトＡＡＭＰ、前記ヒトＲＰＳ２７および前記ヒトＤＥＦＡ５から成る群から選択されるいずれか１つに由来する翻訳調節要素またはその転写体配列を含む、請求項２に記載の核酸分子。

【請求項11】

前記第１下流翻訳調節要素は、前記ヒトＤＥＦＡ５由来の翻訳調節要素またはその転写体配列を含み、前記第２下流翻訳調節要素は、前記ヒトＴＮＮＴ１、前記ヒトアルブミン、前記ヒトＦＴＬ、前記ヒトＣＣＬ１９、前記ヒトＡＡＭＰおよび前記ヒトＲＰＳ２７から成る群から選択されるいずれか１つに由来する翻訳調節要素またはその転写体配列を含む、請求項２に記載の核酸分子。

【請求項12】

前記下流翻訳調節要素は、前記第２下流翻訳調節要素の下流に位置する第３下流翻訳調節要素をさらに含む、請求項２に記載の核酸分子。

【請求項13】

前記第３下流翻訳調節要素は、ヒトトロポニンＴ１、スロー骨格型（ＴＮＮＴ１）、ヒトアルブミン、ヒトフェリチン軽鎖（ＦＴＬ）、ヒトＣ－Ｃモチーフケモカインリガンド（ＣＣＬ１９）、ヒト血管関連の移動性細胞タンパク質（ＡＡＭＰ）、ヒトリボソームタンパク質Ｓ２７（ＲＰＳ２７）およびヒトディフェンシンアルファ５（ＤＥＦＡ５）から成る群から選択されるいずれか１つに由来する翻訳調節要素またはその転写体配列を含む、請求項１２に記載の核酸分子。

【請求項14】

前記第１下流翻訳調節要素は、前記ヒトＴＮＮＴ１由来の翻訳調節要素またはその転写体配列を含み、前記第２下流翻訳調節要素は、前記ヒトＤＥＦＡ５由来の翻訳調節要素またはその転写体配列を含み、前記第３下流翻訳調節要素は、ヒトＦＴＬまたはヒトＲＰＳ２７由来の翻訳調節要素またはその転写体配列を含む、請求項１２に記載の核酸分子。

【請求項15】

前記第１下流翻訳調節要素は、前記ヒトアルブミン由来の翻訳調節要素またはその転写体配列を含み、前記第２下流翻訳調節要素は、前記ヒトＤＥＦＡ５由来の翻訳調節要素またはその転写体配列を含み、前記第３下流翻訳調節要素は、ヒトＲＰＳ２７由来の翻訳調節要素またはその転写体配列を含む、請求項１２に記載の核酸分子。

【請求項16】

前記第１下流翻訳調節要素は、ヒトＲＰＳ２７由来の翻訳調節要素またはその転写体配列を含み、前記第２下流翻訳調節要素は、ヒトＦＴＬ由来の翻訳調節要素またはその転写体配列を含み、前記第３下流翻訳調節要素は、ヒトＣＣＬ１９、ヒトＲＰＳ２７およびヒトＤＥＦＡ５から成る群から選択されるいずれか１つに由来する翻訳調節要素またはその転写体配列を含む、請求項１２に記載の核酸分子。

【請求項17】

前記第１下流翻訳調節要素は、ヒトＤＥＦＡ５由来の転写翻訳調節要素またはその転写体配列を含み、前記第２下流翻訳調節要素は、前記ヒトＴＮＮＴ１由来の翻訳調節要素またはその転写体配列を含み、前記第３下流翻訳調節要素は、前記ヒトＦＴＬ由来の翻訳調節要素またはその転写体配列を含む、請求項１２に記載の核酸分子。

【請求項18】

前記上流翻訳調節要素は、ヒトトロポニンＴ１、スロー骨格型（ヒトＴＮＮＴ１）、ヒトアルブミン、ヒトフェリチン軽鎖（ヒトＦＴＬ）、ヒトＣ－Ｃモチーフケモカインリガンド（ヒトＣＣＬ１９）、ヒト血管関連の移動性細胞タンパク質（ヒトＡＡＭＰ）、ヒトリボソームタンパク質Ｓ２７（ヒトＲＰＳ２７）およびヒトディフェンシンアルファ５（ヒトＤＥＦＡ５）から成る群から選択されるいずれか１つに由来する翻訳調節要素またはその転写体配列を含む、請求項１に記載の核酸分子。

【請求項19】

前記上流翻訳調節要素は、配列識別番号：１、配列識別番号：２、配列識別番号：３、配列識別番号：４、配列識別番号：５、配列識別番号：６および配列識別番号：７から成る群から選択される翻訳調節要素またはその転写体配列を含む、請求項１に記載の核酸分子。

【請求項20】

前記核酸分子は、ＲＮＡである、請求項１に記載の核酸分子。

【請求項21】

前記核酸分子は、前記コーディング領域と作動可能に連結される転写調節要素をさらに含む、請求項１に記載の核酸分子。

【請求項22】

前記核酸分子は、前記下流翻訳調節配列の下流に位置するポリアデニル化シグナル配列またはポリアデノシン配列をさらに含む、請求項１に記載の核酸分子。

【請求項23】

前記コーディング領域は、レポータータンパク質またはその断片、およびマーカー（ｍａｒｋｅｒ）または選別タンパク質またはその断片のうち少なくとも１つをコード化する、請求項１に記載の核酸分子。

【請求項24】

前記コーディング領域は、抗原またはその断片をコード化する、請求項１に記載の核酸分子。

【請求項25】

前記抗原は、病原性抗原、腫瘍抗原、またはこれらの変異体または誘導体であるペプチドを含む、請求項２４に記載の核酸分子。

【請求項26】

前記コーディング領域は、疾患の治療のためのペプチドまたはその断片をコード化する、請求項１に記載の核酸分子。

【請求項27】

請求項１に記載の核酸分子が挿入された組換え発現ベクター。

【請求項28】

請求項１に記載の核酸分子または請求項１に記載の核酸分子が挿入された組換え発現ベクターを生体内に注入し、前記注入した核酸分子からタンパク質またはペプチドを発現させて前記タンパク質またはペプチドを製造する方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本特許出願は、韓国政府科学技術情報通信部の「新種・変種感染病対応プラットフォーム核心技術開発事業」の一環として「新しいｍＲＮＡワクチン用プラットフォーム開発」課題（主管機関：韓国カトリック大学校産学協力団；課題番号：１７１１１５８９１６）および韓国政府食品医薬品安全処の「感染病対応革新技術支援研究事業」の一環として「ｍＲＮＡワクチンなどの毒性評価技術開発研究（１）」課題（主管機関：韓国カトリック大学校産学協力団；課題番号：１４７５０１３３２２）の実行結果物に関する。

【0002】

本開示は、核酸発現プラットフォームに関し、より詳細には、発現効率を増加させた核酸分子およびこれを含む組換え発現ベクターのような核酸発現プラットフォームまたは核酸発現システムに関する。

【背景技術】

【0003】

１９７０年代に遺伝子組換え技術が知られて以来、発現させようとする目的遺伝子（Ｇｅｎｅ Ｏｆ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＧＯＩ）を発現させることができる発現システムが知られている。このような発現システムの１つとして細胞ベースの発現システムは、微生物や真核細胞（ｅｕｋａｒｙｏｔｅｓ）の発現システムを用い、細胞を含有しない発現システムは、精製されたＲＮＡポリメラーゼ（ＲＮＡ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ）、リボソーム（ｒｉｂｏｓｏｍｅ）、ｔＲＮＡおよびリボヌクレオチド（ｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ）を使用することが一般的である。

【0004】

特に、真核細胞から誘導したタンパク質は、発現後にもリン酸化、メチル化、グリコシル化などの翻訳後修飾（ｐｏｓｔ－ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ）が起こるが、微生物は、このような翻訳後修飾メカニズムを有していない。したがって、真核細胞誘導のタンパク質を発現しようとする場合には、真核細胞発現システムを使用しなければならない。

【0005】

真核細胞誘導の発現システムは、遺伝子治療剤や核酸ワクチンなどに活用することができる。遺伝子治療剤の場合には、様々な疾患を治療できるペプチドまたはタンパク質をコード化するオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）からなる目的遺伝子を発現システム内に挿入する。核酸ワクチンの場合には、抗原として発現することができるペプチドまたはタンパク質をコード化するオープンリーディングフレームからなる目的遺伝子を発現システム内に挿入する。しかしながら、目的遺伝子の発現効率を向上させることができる核酸発現システムは、関連技術分野において絶えず要求されている。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0006】

本開示の目的は、目的遺伝子の発現効率を向上させることができる核酸発現プラットフォームまたは核酸発現システムを提供することにある。

【課題を解決するための手段】

【0007】

一態様によれば、翻訳調節要素と、前記翻訳調節要素と作動可能に連結されるコーディング領域と、を含み、前記翻訳調節要素は、前記コーディング領域の上流（ｕｐｓｔｒｅａｍ）に位置する上流翻訳調節要素と、前記コーディング領域の下流（ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ）に位置する下流翻訳調節要素を含み、前記下流翻訳調節要素は、複数の下流翻訳調節要素と、を含む核酸分子を開示する。

【0008】

例示的な実施形態において、前記下流翻訳調節要素は、前記コーディング領域の下流に位置する第１下流翻訳調節要素および第２下流翻訳調節要素を含んでもよい。

【0009】

一例として、前記複数の下流翻訳調節要素（例えば、第１下流翻訳調節要素および第２下流翻訳調節要素）は、それぞれ、ヒトトロポニンＴ１、スロー骨格型（ヒトＴＮＮＴ１）、ヒトアルブミン、ヒトフェリチン軽鎖（ヒトＦＴＬ）、ヒトＣ－Ｃモチーフケモカインリガンド（ヒトＣＣＬ１９）、ヒト血管関連の移動性細胞タンパク質（ヒトＡＡＭＰ）、ヒトリボソームタンパク質Ｓ２７（ヒトＲＰＳ２７）およびヒトディフェンシンアルファ５（ヒトＤＥＦＡ５）から成る群から選択されるいずれか１つの遺伝子に由来する翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。

【0010】

前記複数の下流翻訳調節要素（例えば、前記第１下流翻訳調節要素および前記第２下流翻訳調節要素）は、それぞれ独立して、配列識別番号：８、配列識別番号：９、配列識別番号：１０、配列識別番号：１１、配列識別番号：１２、配列識別番号：１３および配列識別番号：１４から成る群から選択される翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。

【0011】

例示的な実施形態において、前記第１下流翻訳調節要素は、前記ヒトＴＮＮＴ１由来の翻訳調節要素またはその転写体配列を含み、前記第２下流翻訳調節要素は、前記ヒトアルブミン、前記ヒトＦＴＬ、前記ヒトＣＣＬ１９、前記ヒトＡＡＭＰ、前記ヒトＲＰＳ２７および前記ヒトＤＥＦＡ５から成る群から選択されるいずれか１つに由来する翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。

【0012】

他の例示的な実施形態において、前記第１下流翻訳調節要素は、前記ヒトアルブミン由来の翻訳調節要素またはその転写体配列を含み、前記第２下流翻訳調節要素は、前記ヒトＤＥＦＡ５由来の翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。

【0013】

さらに他の例示的な実施形態において、前記第１下流翻訳調節要素は、前記ヒトＦＴＬ由来の翻訳調節要素またはその転写体配列を含み、前記第２下流翻訳調節要素は、前記ヒトＴＮＮＴ１、前記ヒトＦＴＬ、前記ヒトＲＰＳ２７および前記ヒトＤＥＦＡ５から成る群から選択されるいずれか１つに由来する翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。

【0014】

さらに他の例示的な実施形態において、前記第１下流翻訳調節要素は、前記ヒトＣＣＬ１９由来の翻訳調節要素またはその転写体配列を含み、前記第２下流翻訳調節要素は、前記ヒトＴＮＮＴ１、前記ヒトＦＴＬ、前記ヒトＣＣＬ１９、前記ヒトＲＰＳ２７および前記ヒトＤＥＦＡ５から成る群から選択されるいずれか１つに由来する翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。

【0015】

さらに他の例示的な実施形態において、前記第１下流翻訳調節要素は、前記ヒトＡＡＭＰ由来の翻訳調節要素またはその転写体配列を含み、前記第２下流翻訳調節要素は、前記ヒトアルブミン、前記ヒトＦＴＬ、前記ヒトＲＰＳ２７および前記ヒトＤＥＦＡ５から成る群から選択されるいずれか１つに由来する翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。

【0016】

さらに他の例示的な実施形態において、前記第１下流翻訳調節要素は、前記ヒトＲＰＳ２７由来の翻訳調節要素またはその転写体配列を含み、前記第２下流翻訳調節要素は、前記ヒトＴＮＮＴ１、前記ヒトアルブミン、前記ヒトＦＴＬ、前記ヒトＣＣＬ１９、前記ヒトＡＡＭＰ、前記ヒトＲＰＳ２７および前記ヒトＤＥＦＡ５から成る群から選択されるいずれか１つに由来する翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。

【0017】

さらに他の例示的な実施形態において、前記第１下流翻訳調節要素は、前記ヒトＤＥＦＡ５由来の翻訳調節要素またはその転写体配列を含み、前記第２下流翻訳調節要素は、前記ヒトＴＮＮＴ１、前記ヒトアルブミン、前記ヒトＦＴＬ、前記ヒトＣＣＬ１９、前記ヒトＡＡＭＰおよび前記ヒトＲＰＳ２７から成る群から選択されるいずれか１つに由来する翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。

【0018】

さらに他の例示的な実施形態において、前記下流翻訳調節要素は、前記第２下流翻訳調節要素の下流に位置する第３下流翻訳調節要素をさらに含んでもよい。

【0019】

前記第３下流翻訳調節要素は、ヒトトロポニンＴ１、スロー骨格型（ＴＮＮＴ１）、ヒトアルブミン、ヒトフェリチン軽鎖（ＦＴＬ）、ヒトＣ－Ｃモチーフケモカインリガンド（ＣＣＬ１９）、ヒト血管関連の移動性細胞タンパク質（ＡＡＭＰ）、ヒトリボソームタンパク質Ｓ２７（ＲＰＳ２７）およびヒトディフェンシンアルファ５（ＤＥＦＡ５）から成る群から選択されるいずれか１つに由来する翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。

【0020】

例えば、前記第１下流翻訳調節要素は、前記ヒトＴＮＮＴ１由来の翻訳調節要素またはその転写体配列を含み、前記第２下流翻訳調節要素は、前記ヒトＤＥＦＡ５由来の翻訳調節要素またはその転写体配列を含み、前記第３下流翻訳調節要素は、ヒトＦＴＬまたはヒトＲＰＳ２７由来の翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。

【0021】

他の例示的な実施形態において、前記第１下流翻訳調節要素は、前記ヒトアルブミン由来の翻訳調節要素またはその転写体配列を含み、前記第２下流翻訳調節要素は、前記ヒトＤＥＦＡ５由来の翻訳調節要素またはその転写体配列を含み、前記第３下流翻訳調節要素は、ヒトＲＰＳ２７由来の翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。

【0022】

さらに他の例示的な実施形態において、前記第１下流翻訳調節要素は、ヒトＲＰＳ２７由来の翻訳調節要素またはその転写体配列を含み、前記第２下流翻訳調節要素は、ヒトＦＴＬ由来の翻訳調節要素またはその転写体配列を含み、前記第３下流翻訳調節要素は、ヒトＣＣＬ１９、ヒトＲＰＳ２７およびヒトＤＥＦＡ５から成る群から選択されるいずれか１つに由来する翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。

【0023】

さらに他の例示的な実施形態において、前記第１下流翻訳調節要素は、ヒトＤＥＦＡ５由来の転写翻訳調節要素またはその転写体配列を含み、前記第２下流翻訳調節要素は、前記ヒトＴＮＮＴ１由来の翻訳調節要素またはその転写体配列を含み、前記第３下流翻訳調節要素は、前記ヒトＦＴＬ由来の翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。

【0024】

前記上流翻訳調節要素は、ヒトトロポニンＴ１、スロー骨格型（ヒトＴＮＮＴ１）、ヒトアルブミン、ヒトフェリチン軽鎖（ヒトＦＴＬ）、ヒトＣ－Ｃモチーフケモカインリガンド（ヒトＣＣＬ１９）、ヒト血管関連の移動性細胞タンパク質（ヒトＡＡＭＰ）、ヒトリボソームタンパク質Ｓ２７（ヒトＲＰＳ２７）およびヒトディフェンシンアルファ５（ヒトＤＥＦＡ５）から成る群から選択されるいずれか１つに由来する翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。

【0025】

一例として、前記上流翻訳調節要素は、配列識別番号：１、配列識別番号：２、配列識別番号：３、配列識別番号：４、配列識別番号：５、配列識別番号：６および配列識別番号：７から成る群から選択される翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。

【0026】

前記核酸分子は、ＲＮＡでありうる。

【0027】

前記核酸分子は、前記コーディング領域と作動可能に連結される転写調節要素をさらに含んでもよい。

【0028】

選択的な実施形態において、前記核酸分子は、前記下流翻訳調節配列の下流に位置するポリアデニル化シグナル配列またはポリアデノシン配列をさらに含んでもよい。

【0029】

例示的な実施形態において、前記コーディング領域は、レポータータンパク質またはその断片、およびマーカー（ｍａｒｋｅｒ）または選別タンパク質またはその断片のうち少なくとも１つをコード化することができる。

【0030】

他の例示的な実施形態において、前記コーディング領域は、抗原またはその断片をコード化することができる。

【0031】

例えば、前記抗原は、病原性抗原、腫瘍抗原、またはこれらの変異体または誘導体であるペプチドを含んでもよい。

【0032】

さらに他の例示的な実施形態において、前記コーディング領域は、疾患の治療のためのペプチドまたはその断片をコード化することができる。

【0033】

他の態様において、前述した核酸分子が挿入された組換え発現ベクターを開示する。

【0034】

さらに他の態様において、前述した核酸分子、または前述した核酸分子が挿入された組換え発現ベクターを生体内に注入し、前記注入した核酸分子からタンパク質またはペプチドを発現させて前記タンパク質またはペプチドを製造する方法を開示する。

【発明の効果】

【0035】

本開示の核酸発現プラットフォームは、多数の翻訳調節配列を目的遺伝子のオープンリーディングフレームからなるコーディング領域の下流に配置するように設計される。核酸発現プラットフォームを導入して、発現する転写体を生体内で安定して維持することができる。これによって、本開示の核酸発現プラットフォームを適用して、目的遺伝子が最終的に発現する効率が向上することができる。

【0036】

発現プラットフォームを用いて、レポーター遺伝子、感染性抗原、腫瘍抗原および／または治療目的に活用するペプチドまたはタンパク質のような様々な目的遺伝子の発現効率が向上する。したがって、特定物質の存在の有無を検出または分析するための用途としてはもちろん、遺伝子治療剤、ｍＲＮＡワクチンおよび／またはタンパク質サブユニットワクチンのようなワクチンを製造するのに本開示の発現プラットフォームを活用することができる。

【図面の簡単な説明】

【0037】

図１は、本開示の例示的な実施形態により目的遺伝子を効率的に発現させることができる核酸分子またはポリヌクレオチドの構成を概略的に示した模式図である。

【0038】

図２は、本開示の他の例示的な実施形態により目的遺伝子を効率的に発現させることができる核酸分子またはポリヌクレオチドの構成を概略的に示した模式図である。

【0039】

図３および図４は、それぞれ本開示の例示的な実施例によりウミシイタケルシフェラーゼ（ｒｅｎｉｌｌａ ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ）をコード化するコーディング領域を有する核酸分子をマウス筋肉誘導細胞株であるＮｏｒ１０細胞に形質転換させた後、それぞれ６時間と２４時間経過後にウミシイタケルシフェラーゼの発現程度を測定した結果を示したグラフである。

【0040】

図５および図６は、それぞれ本開示の例示的な実施例によりウミシイタケルシフェラーゼをコード化するコーディング領域を有する核酸分子をヒト誘導細胞株であるＨｅＬａ細胞に形質転換させた後、それぞれ６時間と２４時間経過後にウミシイタケルシフェラーゼの発現程度を測定した結果を示したグラフである。

【0041】

図７および図８は、それぞれ本開示の例示的な実施例によりウミシイタケルシフェラーゼをコード化するコーディング領域を有する核酸分子をヒト誘導細胞株である２９３Ａ細胞に形質転換させた後、それぞれ６時間と２４時間経過後にウミシイタケルシフェラーゼの発現程度を測定した結果を示したグラフである。

【0042】

図９および図１０は、それぞれ本開示の例示的な実施例によりウミシイタケルシフェラーゼをコード化するコーディング領域を有する核酸分子をマウスの耳に注射した後、６時間経過後にウミシイタケルシフェラーゼの発現程度を測定した結果を示したグラフである。

【0043】

図１１および図１２は、それぞれ、本開示の例示的な実施例によりウミシイタケルシフェラーゼをコード化するコーディング領域を有する核酸分子をヒト誘導細胞株である２９３Ａ細胞に形質転換させた後、それぞれ６時間と２４時間経過後にウミシイタケルシフェラーゼの発現程度を測定した結果を示したグラフである。

【0044】

図３～図１２において、Ａ～Ｇは、それぞれ下流翻訳調節配列を示すためのものである。一番目の文字は、第１下流翻訳調節要素、二番目の文字は、第２下流翻訳調節要素、三番目の文字は、第３下流翻訳調節要素を示す。Ａは、ヒトＴＮＮＴ１由来の翻訳調節要素である配列識別番号：８、Ｂは、ヒトアルブミン由来の翻訳調節要素である配列識別番号：９、Ｃは、ヒトＦＴＬ由来の翻訳調節要素である配列識別番号：１０、Ｄは、ヒトＣＣＬ１９由来の翻訳調節要素である配列識別番号：１１、Ｅは、ヒトＡＡＭＰ由来の翻訳調節要素である配列識別番号：１２、Ｆは、ヒトＲＰＳ２７由来の翻訳調節要素である配列識別番号：１３、Ｇは、ヒトＤＥＦＡ５由来の翻訳調節要素である配列識別番号：１４をそれぞれ下流翻訳調節配列に使用したものを示す。また、比較例として使用したｐＨＪ５核酸分子から発現したペプチドまたはタンパク質の発現程度と比較した。

【発明を実施するための形態】

【0045】

用語の定義
本明細書において、用語「アミノ酸」は、最も広い意味で使用され、自然発生Ｌ－アミノ酸または残基を含むものと意図される。アミノ酸は、Ｄ－アミノ酸だけでなく、化学的に修飾されたアミノ酸、例えば、アミノ酸類似体、タンパク質に通常的に混入しない自然発生アミノ酸、例えば、ノルロイシン、およびアミノ酸の特徴と当業界に知られている特性を有する化学的に合成された化合物を含む。例えば、天然ＰｈｅまたはＰｒｏと同じペプチド化合物の立体形態の制限を許容するフェニルアラニンまたはプロリンの類似体または模倣体がアミノ酸の定義内に含まれる。このような類似体および模倣体は、本明細書においてアミノ酸の「機能的均等物」として称される。

【0046】

例えば、標準固相合成技術によって合成された合成ペプチドは、遺伝子によってコード化される（ｅｎｃｏｄｅｄ）アミノ酸に制限されず、これによって、与えられたアミノ酸に対してより広範囲に様々な置換を許容する。遺伝子コードによってコード化されていないアミノ酸は、本明細書において「アミノ酸類似体」として称される。

【0047】

一例として、アミノ酸類似体は、ＧｌｕおよびＡｓｐに対する２－アミノアジピン酸（Ａａｄ）；ＧｌｕおよびＡｓｐに対する２－アミノピメリン酸（Ａｐｍ）；Ｍｅｔ、Ｌｅｕおよび他の脂肪族アミノ酸に対する２－アミノ酪酸（Ａｂｕ）；Ｍｅｔ、Ｌｅｕおよび他の脂肪族アミノ酸に対する２－アミノヘプタン酸（Ａｈｅ）；Ｇｌｙに対する２－アミノ酪酸（Ａｉｂ）；Ｖａｌ、ＬｅｕおよびＩｌｅに対するシクロヘキシルアラニン（Ｃｈａ）；ＡｒｇおよびＬｙｓに対するホモアルギニン（Ｈａｒ）；Ｌｙｓ、ＡｒｇおよびＨｉｓに対する２，３－ジアミノプロピオン酸（Ｄａｐ）；Ｇｌｙ、ＰｒｏおよびＡｌａに対するＮ－エチルグリシン（ＥｔＧｌｙ）；Ｇｌｙ、ＰｒｏおよびＡｌａに対するＮ－エチルグリシン（ＥｔＧｌｙ）；ＡｓｎおよびＧｌｎに対するＮ－エチルアスパラギン（ＥｔＡｓｎ）；Ｌｙｓに対するヒドロキシリシン（Ｈｙｌ）；Ｌｙｓに対するアロヒドロキシリシン（ＡＨｙｌ）；Ｐｒｏ、ＳｅｒおよびＴｈｒに対する３－（および４－）ヒドロキシプロリン（３Ｈｙｐ、４Ｈｙｐ）；Ｉｌｅ、ＬｅｕおよびＶａｌに対するアロイソロイシン（ＡＩｌｅ）；Ａｒｇに対する４－アミジノフェニルアラニン；Ｇｌｙ、ＰｒｏおよびＡｌａに対するＮ－メチルグリシン（ＭｅＧｌｙ、サルコシン）；Ｉｌｅに対するＮ－メチルイソロイシン（ＭｅＩｌｅ）；Ｍｅｔおよび他の脂肪族アミノ酸に対するノルバリン（Ｎｖａ）；Ｍｅｔおよび他の脂肪族アミノ酸のためのノルロイシン（Ｎｌｅ）；Ｌｙｓ、ＡｒｇおよびＨｉｓに対するオルニチン（Ｏｒｎ）；Ｔｈｒ、ＡｓｎおよびＧｌｎに対するシトルリン（Ｃｉｔ）およびメチオニンスルホキシド（ＭＳＯ）；およびＰｈｅに対するＮ－メチルフェニルアラニン（ＭｅＰｈｅ）、トリメチルフェニルアラニン、ハロ－（Ｆ－、Ｃｌ－、Ｂｒ－またはＩ－）フェニルアラニンまたはトリフルオリルフェニルアラニンを含む。

【0048】

本明細書において用語「ペプチド」は、自然に存在するものから分離したり、組換え技術（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ）によってまたは化学的に合成されたタンパク質、タンパク質断片およびペプチドを全部含む。例えば、本開示のペプチドは、少なくとも５個、一例として、少なくとも１０個のアミノ酸で構成されている。

【0049】

特定の実施形態において、化合物の変異体、例えば、１つ以上のアミノ酸置換を有するペプチド変異体を提供する。本明細書において「ペプチド変異体（ｐｅｐｔｉｄｅ ｖａｒｉａｎｔｓ）」とは、１つまたはそれ以上のアミノ酸がペプチドのアミノ酸配列に置換（ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎｓ）、欠失（ｄｅｌｅｔｉｏｎｓ）、添加（ａｄｄｉｔｉｏｎｓ）および／または挿入（ｉｎｓｅｒｔｉｏｎｓ）されており、元のアミノ酸で構成されたペプチドとほぼ同じ生物学的機能を発揮するものをいう。ペプチド変異体は、元のペプチドと７０％以上、好ましくは、９０％以上、より好ましくは、９５％以上の同一性（ｉｄｅｎｔｉｔｙ）を有していなければならない。

【0050】

このような置換体として「保存性」と知られたアミノ酸置換体が含まれ得る。変異体は、また、非保存性（ｎｏｎｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｖｅ）の変化を含むこともできる。例示的な実施形態において、変異体ポリペプチドの配列は、５個またはそれ以下のアミノ酸が置換、欠失、付加または挿入されることによって、元の配列と異なる。変異体は、また、ペプチドの免疫原性（ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ）、二次構造（ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ）および水治療性（ｈｙｄｒｏｐａｔｈｉｃ ｎａｔｕｒｅ）に最小の影響を与えるアミノ酸の欠失または付加によって変化することができる。

【0051】

「保存性」置換とは、１つのアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたときにも、ポリペプチドの二次構造などに大きな変化がないことを意味する。アミノ酸変異は、アミノ酸側鎖置換体の相対的類似性、例えば、極性（ｐｏｌａｒｉｔｙ）、電荷（ｃｈａｒｇｅ）、水溶性（ｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙ）、疎水性（ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃｉｔｙ）、親水性（ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃｉｔｙ）および／または両親媒性（ａｍｐｈｉｐａｔｈｉｃ ｎａｔｕｒｅ）などの類似性を基礎にして得られる。

【0052】

例えば、アミノ酸は、共通の側鎖特性によって、１）疎水性（ノルロイシン、メチオニン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン）、２）中性親水性（システイン、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン）、３）酸性（アスパラギン酸、グルタミン酸）、４）塩基性（ヒスチジン、リシン、アルギニン）、５）鎖方向に影響を及ぼす残基（グリシン、プロリン）、６）芳香族（トリプトファン、チロシン、フェニルアラニン）に分類され得る。保存的置換は、これらそれぞれのクラス中の１つのメンバーを同じクラスの他のメンバーに交換することを伴う。

【0053】

アミノ酸側鎖置換体のサイズ、形態および種類に対する分析によって、アルギニン、リシンとヒスチジンは、全部正電荷を帯びた残基であり；アラニン、グリシンとセリンは、類似のサイズを有し；フェニルアラニン、トリプトファンとチロシンは、類似の形態を有することが分かる。したがって、このような考慮事項に基づいて、アルギニン、リシンとヒスチジン；アラニン、グリシンとセリン；そしてフェニルアラニン、トリプトファンとチロシンは、生物学的に機能的均等物といえる。

【0054】

変異を導入するにあたって、アミノ酸の疎水性インデックス（ｈｙｄｒｏｐａｔｈｉｃ ｉｎｄｅｘ）を考慮することができる。それぞれのアミノ酸は、疎水性と電荷によって疎水性インデックスが付与されている：イソロイシン（＋４．５）；バリン（＋４．２）；ロイシン（＋３．８）；フェニルアラニン（＋２．８）；システイン／シスチン（＋２．５）；メチオニン（＋１．９）；アラニン（＋１．８）；グリシン（－０．４）；スレオニン（－０．７）；セリン（－０．８）；トリプトファン（－０．９）；チロシン（－１．３）；プロリン（－１．６）；ヒスチジン（－３．２）；グルタミン酸（－３．５）；グルタミン（－３．５）；アスパラギン酸（－３．５）；アスパラギン（－３．５）；リシン（－３．９）；およびアルギニン（－４．５）。

【0055】

タンパク質の相互的な生物学的機能（ｉｎｔｅｒａｃｔｉｖｅ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎ）を付与するにあたって、疎水性アミノ酸インデックスは非常に重要である。類似の疎水性インデックスを有するアミノ酸で置換する場合に類似の生物学的活性を保有できることは公知の事実である。疎水性インデックスを参照して変異を導入させる場合、好ましくは、±２以内、より好ましくは、±１以内、さらに好ましくは、±０．５以内の疎水性インデックスの差異を示すアミノ酸の間に置換を行う。

【0056】

なお、類似の親水性値（ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃｉｔｙ ｖａｌｕｅ）を有するアミノ酸間の置換が均等な生物学的活性を有するタンパク質をもたらすこともよく知られている。次のような親水性値がそれぞれのアミノ酸残基に付与されている：アルギニン（＋３．０）；リシン（＋３．０）；アスパラギン酸（＋３．０±１）；グルタミン酸（＋３．０±１）；セリン（＋０．３）；アスパラギン（＋０．２）；グルタミン（＋０．２）；グリシン（０）；スレオニン（－０．４）；プロリン（－０．５± １）；アラニン（－０．５）；ヒスチジン（－０．５）；システイン（－１．０）；メチオニン（－１．３）；バリン（－１．５）；リシン（－１．８）；イソロイシン（－１．８）；チロシン（－２．３）；フェニルアラニン（－２．５）；トリプトファン（－３．４）。親水性値を参照して変異を導入させる場合、好ましくは、± ２以内、より好ましくは、±１以内、より好ましくは、±０．５以内の親水性値の差異を示すアミノ酸の間に置換を行う。

【0057】

分子の活性を全体的に変更させないタンパク質におけるアミノ酸交換は、当該分野においてよく知られている（Ｈ．Ｎｅｕｒａｔｈ，Ｒ．Ｌ．Ｈｉｌｌ，Ｔｈｅ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９７９）。最も通常的に起こる交換は、アミノ酸残基Ａｌａ／Ｓｅｒ、Ｖａｌ／Ｉｌｅ、Ａｓｐ／Ｇｌｕ、Ｔｈｒ／Ｓｅｒ、Ａｌａ／Ｇｌｙ、Ａｌａ／Ｔｈｒ、Ｓｅｒ／Ａｓｎ、Ａｌａ／Ｖａｌ、Ｓｅｒ／Ｇｌｙ、Ｔｈｙ／Ｐｈｅ、Ａｌａ／Ｐｒｏ、Ｌｙｓ／Ａｒｇ、Ａｓｐ／Ａｓｎ、Ｌｅｕ／Ｉｌｅ、Ｌｅｕ／Ｖａｌ、Ａｌａ／Ｇｌｕ、Ａｓｐ／Ｇｌｙ間の交換である。

【0058】

一般的に、本明細書において言及されているペプチド（融合タンパク質を含む）およびポリヌクレオチドは、分離した（ｉｓｏｌａｔｅｄ）ものである。「分離した（ｉｓｏｌａｔｅｄ）」ペプチドまたはポリヌクレオチドとは、元の環境から除去されたものである。例えば、自然状態で存在するタンパク質は、その状態で一緒に存在する物質の全部あるいは一部を除去することによって分離されるものである。このようなポリペプチドは、少なくとも９０％以上の純度を有しなければならず、好ましくは、９５％、より好ましくは、９９％以上の純度を有しなければならない。ポリヌクレオチドは、ベクター内でクローニングさせることによって分離される。本明細書上に言及されたヌクレオチド配列によってコード化（ｅｎｃｏｄｅ）される組換えペプチドは、知られている多くの発現ベクターのうちいずれかを用いても公知の方法で容易に製造することができる。発現は、組換えタンパク質をコード化するＤＮＡ配列を含む発現ベクターで形質転換された適切な宿主細胞（ｈｏｓｔ ｃｅｌｌ）内で行うことができる。適切な宿主細胞には、原核細胞（ｐｒｏｋａｒｙｏｔｅｓ）、酵母（ｙｅａｓｔ）および真核細胞（ｅｕｋａｒｙｏｔｅｓ）が含まれる。一例として、酵母、昆虫細胞または哺乳動物細胞株（ＣｏｓまたはＣＨＯなど）のような真核生物誘導の細胞株を宿主細胞に用いることができる。

【0059】

本明細書において「ポリヌクレオチド」または「核酸」は、交換可能に使用され、任意の長さのヌクレオチドの重合体を指し、ＤＮＡ（例えば、ｃＤＮＡ）およびＲＮＡ分子を包括的に含む。核酸分子の構成単位である「ヌクレオチド」は、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾ヌクレオチドまたは塩基、および／またはその類似体、またはＤＮＡまたはＲＮＡポリメラーゼ（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ）によって、または合成反応によって重合体内に混入しうる任意の基質でありうる。ポリヌクレオチドは、修飾ヌクレオチド、糖または塩基が修飾された類似体（ａｎａｌｏｇｕｅ）、例えば、メチル化ヌクレオチドおよびその類似体を含んでもよい。

【0060】

ヌクレオチドにおける変異は、タンパク質において変異をもたらさないものもある。このような核酸は、機能的に均等なコドンまたは同じアミノ酸をコード化するコドン（例えば、コドンの縮退性によって、アルギニンまたはセリンに対するコドンは６個である）、または生物学的に均等なアミノ酸をコード化するコドンを含む核酸分子を含む。また、ヌクレオチドにおける変異がタンパク質自体に変化をもたらすこともできる。タンパク質のアミノ酸に変化をもたらす変異である場合にも、本開示のタンパク質とほぼ同じ活性を示すものが得られる。

【0061】

本開示の核酸分子またはポリヌクレオチドが有する特徴、例えば、ワクチンおよび／または免疫増強剤としての効果を有する範囲で、本開示のペプチドおよび核酸分子は、配列リストに記載されたアミノ酸配列または塩基配列に限定されないことは、通常の技術者にとって明確である。例えば、発現調節配列に作動可能に連結されるコーディング領域および／またはこれから発現する組換えタンパク質／ペプチドに含まれ得る生物学的機能的均等物は、前述したコーディング領域および／組換えタンパク質と均等な生物学的活性を発揮する塩基配列の変異を有するポリヌクレオチドおよび／またはアミノ酸配列の変異を有するタンパク質／ペプチドでありうる。

【0062】

前述した生物学的均等活性を有する変異を考慮すると、ペプチドおよび／またはタンパク質をコード化する核酸分子は、配列リストに記載された配列と実質的同一性（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌ ｉｄｅｎｔｉｔｙ）を示す配列も含むと解される。前記の実質的同一性は、上記した本開示の配列と任意の他の配列を最大限対応するようにアラインし、当業界において通常用いられるアルゴリズムを用いてアラインした配列を分析した場合に、最小６１％の相同性、より好ましくは、７０％の相同性、さらに好ましくは、８０％の相同性、最も好ましくは、９０％の相同性を示す配列を意味する。配列比較のためのアラインメント方法は、当業界においてよく知られている。
本明細書において使用された用語「ベクター」は、宿主細胞に伝達が可能であり、好ましくは、1つ以上の目的遺伝子または配列の発現が可能に作製された構造物を意味する。例えば、ベクターには、ウイルスベクター（ｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒｓ）、ＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター（ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｖｅｃｔｏｒｓ）、プラスミド（ｐｌａｓｍｉｄ）、コスミド（ｃｏｓｍｉｄ）またはファージベクター（ｐｈａｇｅ ｖｅｃｔｏｒｓ）、ＣＣＡ（ｃａｔｉｏｎｉｃ ｃｏｎｄｅｎｓｉｎｇ ａｇｅｎｔｓ）と連結されたＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、リポソーム（ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ）で包まれたＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、プロデューサー細胞（ｐｒｏｄｕｃｅｒ ｃｅｌｌｓ）のような特定の真核細胞（ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ ｃｅｌｌｓ）などが含まれる。

【0063】

本明細書において「発現調節配列（ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｃｏｎｔｒｏｌ／ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｓｅｑｕｅｎｃｅ）」または「発現調節要素（ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｃｏｎｔｒｏｌ／ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｅｌｅｍｅｎｔ）」は、核酸分子の転写（ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ）および／または転写体（ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ）形態の核酸から翻訳（ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ）を調節する核酸配列を意味し得る。なお、「転写調節配列（ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｃｏｎｔｒｏｌ／ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｓｅｑｕｅｎｃｅ）」または「転写調節要素（ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｃｏｎｔｒｏｌ／ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｅｌｅｍｅｎｔ）」は、核酸の転写を調節する核酸配列を意味する。転写調節要素は、構成的プロモーター（ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｄ ｐｒｏｍｏｔｅｒ）または誘導性プロモーター（ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｐｒｏｍｏｔｅｒ）のようなプロモーターまたはエンハンサー（ｅｎｈａｎｃｅｒ）などがある。

【0064】

また、転写体形態の核酸からタンパク質またはペプチドへの翻訳を調節する核酸配列に対して「翻訳調節配列（ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ ｃｏｎｔｒｏｌ／ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｓｅｑｕｅｎｃｅ）」または「翻訳調節要素（ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ ｃｏｎｔｒｏｌ／ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｅｌｅｍｅｎｔ）」という用語を使用することができる。これらの発現調節配列／要素、転写調節配列／要素および／または翻訳調節配列／要素は、発現する配列、例えば、転写または翻訳される核酸配列に作動可能に連結（ｏｐｅｒａｔｉｖｅｌｙ ｌｉｎｋｅｄ）されている。

【0065】

本明細書において用語「作動可能に連結された（ｏｐｅｒａｔｉｖｅｌｙ ｌｉｎｋｅｄ）」は、核酸発現調節配列（例：プロモーター、シグナル配列、リボソーム結合部位、転写終止配列など）と他の核酸配列間の機能的結合を意味し、これによって、前記調節配列は、前記他の核酸配列の転写および／または翻訳を調節する。

【0066】

核酸分子
本開示は、発現調節配列と作動可能に連結されたコーディング領域の発現効率を向上させた核酸分子およびこれを含むベクターのような核酸分子ベースの発現プラットフォームまたは発現システムに基づく。図１は、本開示の例示的な実施形態により、目的遺伝子を効率的に発現させることができる核酸分子またはポリヌクレオチドの構成を概略的に示した模式図である。

【0067】

図１に示されたように、核酸分子は、翻訳開始（ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ）活性を有するヌクレオチド配列を含む翻訳調節要素（Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ ｃｏｎｔｒｏｌ ｅｌｅｍｅｎｔ，ＴＬＣＥ）と、翻訳調節要素（ＴＬＣＥ）と作動可能に連結され、目的遺伝子（Ｇｅｎｅ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＧＯＩ）のオープンリーディングフレーム（ｏｐｅｎ ｒｅａｄｉｎｇ ｆｒａｍｅ；ＯＲＦ）からなるコーディング領域（ｃｏｄｉｎｇ ｒｅｇｉｏｎ，ＣＲ）と、を含んでもよい。

【0068】

選択的に、核酸分子は、コーディング領域（ＣＲ）と作動可能に連結される転写調節要素（ＴＣＣＥ）および／または翻訳調節要素（ＴＬＣＥ）の下流（ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ）に位置するポリアデニル化シグナル配列またはポリアデノシン配列（ＰＡ）のうち少なくとも１つのヌクレオチド配列を含んでもよい。

【0069】

翻訳調節要素（ＴＬＣＥ）は、オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）形態で挿入されるコーディング領域（ＣＲ）と作動可能に連結される翻訳開始活性を有するヌクレオチド配列を含んでもよい。例えば、翻訳調節要素（ＴＬＣＥ）は、コーディング領域（ＣＲ）の上流（ｕｐｓｔｒｅａｍ）に位置する上流翻訳調節要素（Ｕ－ＴＬＣＥ）および／またはコーディング領域（ＣＲ）の下流（ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ）に位置する下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ）を含んでもよい。

【0070】

言い換えれば、上流翻訳調節要素（Ｕ－ＴＬＣＥ）は、コーディング領域（ＣＲ）の上流に位置することができ、下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ）は、コーディング領域（ＣＲ）の下流に位置することができる。言い換えれば、コーディング領域（ＣＲ）は、上流翻訳調節要素（Ｕ－ＴＬＣＥ）と、下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ）の間に位置することができ、目的遺伝子のオープンリーディングフレームからなる標的配列（ｔａｒｇｅｔ ｓｅｑｕｅｎｃｅ，ＴＳ）を形成する。

【0071】

上流翻訳調節要素（Ｕ－ＴＬＣＥ）は、キャップ依存性（ｃａｐ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ）翻訳開始活性を有する５’－非翻訳領域（５’－Ｕｎｔｒａｎｓｌａｔｅｄ Ｒｅｇｉｏｎ、５’－ＵＴＲ）の全部または一部でありうる。

【0072】

ほとんどの真核細胞のｍＲＮＡは、５’末端に７－メチル－グアノシン（ｃａｐ、ｍ７Ｇ）を有するが、タンパク質翻訳開始複合体（ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ ｃｏｍｐｌｅｘ）が５’末端に位置するｃａｐを認識し、開始コドンであるＡＵＧまで進めてタンパク質合成を始める。すなわち、ｍＲＮＡの５’末端に位置するｃａｐ構造は、タンパク質合成を開始するだけでなく、ｎｕｃｌｅａｓｅの作用からｍＲＮＡの破壊を防ぐ。

【0073】

例えば、インビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）で転写の最初の過程は、ｐＤＮＡ（ｐｌａｓｍｉｄ ＤＮＡ）に制限酵素を処理して線型化させた後、適切なＲＮＡポリメラーゼを用いて製造されたｍＲＮＡにｍ７Ｇ（５’）－ｐｐｐ（５’）Ｇ（これをレギュラーキャップアナログという）を付けてキャップ化ｍＲＮＡを作成して使用することができる。選択的に、キャップアナログなしでインビトロ転写を行い、商業的に利用可能なワクシニアウイルス由来のキャップ化酵素を用いてｃａｐ反応を行う方法があり、このようなキャップの逆方向反応を防ぐ「アンチリバース」キャップアナログ（ＡＲＣＡ）を使用することができる。ＡＲＣＡを導入すると、メチル化が起こったグアノシンの３’－Ｏ－メチル化だけがメチル化が起こらないグアノシンのヌクレオチドに結合することができる。

【0074】

一例として、修飾５’－Ｃａｐ構造は、Ｃａｐ１（ｍ７Ｇの隣接ヌクレオチド内のリボースのメチル化）、Ｃａｐ２（ｍ７Ｇの２番目の下流に位置するヌクレオチドリボースのメチル化）、Ｃａｐ３（ｍ７Ｇの３番目の下流に位置するヌクレオチドリボースのメチル化）、Ｃａｐ４（ｍ７Ｇの４番目の下流に位置するヌクレオチドリボースのメチル化）、ＡＲＣＡ（アンチリバースキャップアナログ、修飾ＡＲＣＡ（例えば、ホスホロチオエート修飾ＡＲＣＡ）、イノシン、Ｎ１－メチル－グアノシン、２’－フルオロ－グアノシン、７－ジアザ－グアノシン、８－オキソ－グアノシン、２－アミノ－グアノシン、ＬＮＡ－グアノシン、および２－アジド－グアノシンである。

【0075】

例えば、上流翻訳調節要素（Ｕ－ＴＬＣＥ）および／または下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ）は、それぞれ、動物、例えば、哺乳綱、具体的には、霊長目、より具体的には、ヒトから誘導したキャップ依存性翻訳開始活性を有するヌクレオチド配列またはその転写体（ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ）配列からなることができる。上流翻訳調節要素（Ｕ－ＴＬＣＥ）は、コーディング領域（ＣＲ）から発現するペプチドおよび／またはタンパク質の翻訳過程で翻訳開始複合体（ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ ｃｏｍｐｌｅｘ）が結合する領域であり、コーディング領域（ＣＲ）の翻訳を誘導するシス作用性ヌクレオチド配列でありうる。

【0076】

上流翻訳調節要素（Ｕ－ＴＬＣＥ）がキャップ依存性翻訳開始活性を有するヌクレオチド配列の全部または一部である場合、コーディング領域（ＣＲ）の下流に位置する下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ）を含んでもよい。上流翻訳調節要素（Ｕ－ＴＬＣＥ）および下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ）を含む核酸分子は、コーディング領域（ＣＲ）を構成するオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）の発現効率をさらに向上させることができる。言い換えれば、上流翻訳調節要素（Ｕ－ＴＬＣＥ）と、下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ）は、コーディング領域（ＣＲ）を形成する目的遺伝子（ＧＯＩ）のオープンリーディングフレームまたはその転写体の翻訳効率を向上させ、転写体であるｍＲＮＡが細胞内で破壊されずに、安定して維持されるのに重要な役割をする。

【0077】

例示的な実施形態において、上流翻訳調節要素（Ｕ－ＴＬＣＥ）は、ヒトトロポニンＴ１、スロー骨格型（ヒトＴＮＮＴ１）、ヒトアルブミン（ヒトＡＬＢ）、ヒトフェリチン軽鎖（ヒトＦＴＬ）、ヒトＣ－Ｃモチーフケモカインリガンド１９（ヒトＣＣＬ１９）、ヒト血管関連の移動性細胞タンパク質（ヒトＡＡＭＰ）、ヒトリボソームタンパク質Ｓ２７（ヒトＲＰＳ２７）およびヒトディフェンシンアルファ５（ヒトＤＥＦＡ５）から成る群から選択されるいずれか１つに由来する翻訳調節要素を含んでもよいが、これに限定されない。

【0078】

例えば、ヒトＴＮＮＴ１由来の上流翻訳調節要素（Ｕ－ＴＬＣＥ）は、配列識別番号：１の翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。ヒトＡＬＢ由来の上流翻訳調節要素（Ｕ－ＴＬＣＥ）は、配列識別番号：２の翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。ヒトＦＴＬ由来の上流翻訳調節要素（Ｕ－ＴＬＣＥ）は、配列識別番号：３の翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。
ヒトＣＣＬ１９由来の上流翻訳調節要素（Ｕ－ＴＬＣＥ）は、配列識別番号：４の翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。ヒトＡＡＭＰ由来の上流翻訳調節要素（Ｕ－ＴＬＣＥ）は、配列識別番号：５の翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。ヒトＲＰＳ２７由来の上流翻訳調節要素（Ｕ－ＴＬＣＥ）は、配列識別番号：６の翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。ヒトＤＥＦＡ５由来の上流翻訳調節要素（Ｕ－ＴＬＣＥ）は、配列識別番号：７の翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。しかしながら、上流翻訳調節要素（Ｕ－ＴＬＣＥ）が特定ヌクレオチド配列またはその転写体配列に限定されない。

【0079】

下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ）は、コーディング領域（ＣＲ）の下流（ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ）に順次に挿入される第１下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ１）および第２下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ２）からなることができる。第１下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ１）および第２下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ２）は、互いに同じでも異なっていてもよい。

【0080】

一例として、第１下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ１）および第２下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ２）は、それぞれ独立して、ヒトＴＮＮＴ１、ヒトＡＬＢ、ヒトＦＴＬ、ヒトＣＣＬ１９、ヒトＡＡＭＰ、ヒトＲＰＳ２７およびヒトＤＥＦＡ５から成る群から選択されるいずれか１つに由来する下流翻訳調節要素を含んでもよい。

【0081】

例えば、ヒトＴＮＮＴ１由来の第１および第２下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ１、Ｄ－ＴＬＣＥ２）は、それぞれ配列識別番号：７の翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。ヒトＡＬＢ由来の第１および第２下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ１、Ｄ－ＴＬＣＥ２）は、配列識別番号：９の翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。ヒトＦＴＬ由来の第１および第２下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ１、Ｄ－ＴＬＣＥ２）は、配列識別番号：１０の翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。ヒトＣＣＬ１９由来の第１および第２下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ１、Ｄ－ＴＬＣＥ２）は、配列識別番号：１１の翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。ヒトＡＡＭＰ由来の第１および第２下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ１、Ｄ－ＴＬＣＥ２）は、配列識別番号：１２の翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。ヒトＲＰＳ２７由来の第１および第２下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ１、Ｄ－ＴＬＣＥ２）は、配列識別番号：１３の翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。ヒトＤＥＦＡ５由来の第１および第２下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ１、Ｄ－ＴＬＣＥ２）は、配列識別番号：１４の翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。しかしながら、第１および第２下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ１、Ｄ－ＴＬＣＥ２）が特定ヌクレオチド配列またはその転写体配列に限定されない。

【0082】

例示的な実施形態において、第１下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ１）は、ヒトＴＮＮＴ１由来の下流翻訳調節要素またはその転写体配列を含み、第２下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ２）は、ヒトＡＬＢ、ヒトＦＴＬ、ヒトＣＣＬ１９、ヒトＡＡＭＰ、ヒトＲＰＳ２７およびヒトＤＥＦＡ５から成る群から選択されるいずれか１つに由来する下流翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。例えば、第１下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ１）がヒトＴＮＮＴ１由来の下流翻訳調節要素またはその転写体配列を含む場合、第２下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ２）は、ヒトＦＴＬ、ヒトＣＣＬ１９およびヒトＤＥＦＡ５から成る群から選択されるいずれか１つに由来することができる。

【0083】

選択的な実施形態において、第１下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ１）がヒトＴＮＮＴ１由来の下流翻訳調節要素またはその転写体配列を含む場合、第２下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ２）は、ヒトＦＴＬまたはヒトＣＣＬ１９由来の翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。他の選択的な実施形態において、第１下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ１）がヒトＴＮＮＴ１由来の下流翻訳調節要素またはその転写体配列を含む場合、第２下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ２）は、ヒトＣＣＬ１９またはヒトＲＰＳ２７由来の下部翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。

【0084】

他の例示的な実施形態において、第１下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ１）は、ヒトＡＬＢ由来の下流翻訳調節要素またはその転写体配列を含み、第２下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ２）は、ヒトＤＥＦＡ５由来の下流翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。

【0085】

さらに他の例示的な実施形態において、第１下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ１）は、ヒトＦＴＬ由来の下流翻訳調節要素またはその転写体配列を含み、第２下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ２）は、ヒトＴＮＮＴ１、ヒトＦＴＬ、ヒトＲＰＳ２７およびヒトＤＥＦＡ５から成る群から選択されるいずれか１つに由来する下流翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。例えば、第１下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ１）がヒトＦＴＬ由来の下流翻訳調節要素またはその転写体配列を含む場合、第２下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ２）は、ヒトＴＮＮＴ１、ヒトＦＴＬ、前記ヒトＲＰＳ２７および前記ヒトＤＥＦＡ５から成る群から選択されるいずれか１つに由来する下流翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。

【0086】

選択的な実施形態において、第１下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ１）がヒトＦＴＬ由来の下流翻訳調節要素またはその転写体配列を含む場合、第２下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ２）は、ヒトＴＮＮＴ１、ヒトＦＴＬおよびヒトＲＰＳ２７から成る群から選択されるいずれか１つに由来する下流翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。他の選択的な実施形態において、第１下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ１）がヒトＦＴＬ由来の下流翻訳調節要素またはその転写体配列を含む場合、第２下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ２）は、ヒトＦＴＬ由来の下流翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。

【0087】

さらに他の例示的な実施形態において、第１下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ１）は、ヒトＣＣＬ１９由来の下流翻訳調節要素またはその転写体配列を含み、第２下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ２）は、ヒトＴＮＮＴ１、ヒトＦＴＬ、ヒトＣＣＬ１９、ヒトＲＰＳ２７およびヒトＤＥＦＡ５から成る群から選択されるいずれか１つに由来する下流翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。例えば、第１下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ１）がヒトＣＣＬ１９由来の下流翻訳調節要素またはその転写体配列を含む場合、第２下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ２）は、ヒトＦＴＬ、ヒトＣＣＬ１９、ヒトＲＰＳ２７および前記ヒトＤＥＦＡ５から成る群から選択されるいずれか１つに由来する翻訳調節要素を含んでもよい。

【0088】

選択的な実施形態において、第１下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ１）がヒトＣＣＬ１９由来の下流翻訳調節要素またはその転写体配列を含む場合、第２下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ２）は、ヒトＦＴＬまたはヒトＲＰＳ２７に由来する翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。他の選択的な実施形態において、第１下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ１）がヒトＣＣＬ１９由来の下流翻訳調節要素またはその転写体配列を含む場合、第２下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ２）は、ヒトＣＣＬ１９に由来する下流翻訳調節配列またはその転写体配列を含んでもよい。さらに他の選択的な実施形態において、第１下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ１）がヒトＣＣＬ１９由来の下流翻訳調節要素またはその転写体配列を含む場合、第２下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ２）は、ヒトＣＣＬ１９またはヒトＲＰＳ２７由来の下部翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。

【0089】

さらに他の選択的な実施形態において、第１下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ１）がヒトＣＣＬ１９由来の下流翻訳調節要素またはその転写体配列を含む場合、第２下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ２）は、ヒトＦＴＬまたはヒトＣＣＬ１９由来の下部翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。

【0090】

さらに他の例示的な実施形態において、第１下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ１）は、ヒトＡＡＭＰ由来の下流翻訳調節要素またはその転写体配列を含み、第２下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ２）は、ヒトＡＬＢ、ヒトＦＴＬ、ヒトＲＰＳ２７およびヒトＤＥＦＡ５から成る群から選択されるいずれか１つに由来する下流翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。

【0091】

さらに他の例示的な実施形態において、第１下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ１）は、ヒトＲＰＳ２７由来の下流翻訳調節要素またはその転写体配列を含み、第２下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ２）は、ヒトＴＮＮＴ１、ヒトＡＬＢ、ヒトＦＴＬ、ヒトＣＣＬ１９、ヒトＡＡＭＰ、ヒトＲＰＳ２７およびヒトＤＥＦＡ５から成る群から選択されるいずれか１つに由来する下流翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。例えば、第１下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ１）がヒトＲＳＰ２７由来の下流翻訳調節要素またはその転写体配列を含む場合、第２下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ２）は、ヒトＴＮＮＴ１、ヒトＦＴＬ１、ヒトＣＣＬ１９、ヒトＡＡＭＰ、ヒトＲＰＳ２７およびヒトＤＥＦＡ５から成る群から選択されるいずれか１つに由来する翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。

【0092】

選択的な実施形態において、第１下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ１）がヒトＲＳＰ２７由来の下流翻訳調節要素またはその転写体配列を含む場合、第２下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ２）は、ヒトＦＴＬ、ヒトＣＣＬ１９、ヒトＲＰＳ２７および前記ヒトＤＥＦＡ５から成る群から選択されるいずれか１つに由来する翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。他の選択的な実施形態において、第１下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ１）がヒトＲＳＰ２７由来の下流翻訳調節要素またはその転写体配列を含む場合、第２下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ２）は、ヒトＦＴＬ、ヒトＲＰＳ２７およびヒトＤＥＦＡ５から成る群から選択されるいずれか１つに由来する翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。

【0093】

他の選択的な実施形態において、第１下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ１）がヒトＲＳＰ２７由来の下流翻訳調節要素またはその転写体配列を含む場合、第２下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ２）は、ヒトＴＮＮＴ１、ヒトＦＴＬ、ヒトＲＰＳ２７およびヒトＤＥＦＡ５から成る群から選択されるいずれか１つに由来する下部翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。さらに他の選択的な実施形態において、第１下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ１）がヒトＲＳＰ２７由来の下流翻訳調節要素またはその転写体配列を含む場合、第２下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ２）は、ヒトＲＰＳ２７またはヒトＤＥＦＡ５由来の下部翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。さらに他の選択的な実施形態において、第１下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ１）がヒトＲＳＰ２７由来の下流翻訳調節要素またはその転写体配列を含む場合、第２下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ２）は、ヒトＦＴＬ由来の下部翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。

【0094】

さらに他の例示的な実施形態において、第１下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ１）は、ヒトＤＥＦＡ５由来の下流翻訳調節要素またはその転写体配列を含み、第２下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ２）は、ヒトＴＮＮＴ１、ヒトＡＬＢ、ヒトＦＴＬ、ヒトＣＣＬ１９、ヒトＡＡＭＰおよびヒトＲＰＳ２７から成る群から選択されるいずれか１つに由来する下流翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。例えば、第１下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ１）がヒトＤＥＦＡ５由来の下流翻訳調節要素またはその転写体配列を含む場合、第２下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ２）は、ヒトＴＮＮＴ１、ヒトＡＬＢ、前記ヒトＦＴＬ、ヒトＡＡＭＰおよびヒトＲＰＳ２７から成る群から選択されるいずれか１つの下部翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。

【0095】

選択的な実施形態において、第１下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ１）がヒトＤＥＦＡ５由来の下流翻訳調節要素またはその転写体配列を含む場合、第２下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ２）は、ヒトＡＬＢ、ヒトＦＴＬ、ヒトＡＡＭＰおよびヒトＲＰＳ２７から成る群から選択されるいずれか１つに由来する翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。他の選択的な実施形態において、第１下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ１）がヒトＤＥＦＡ５由来の下流翻訳調節要素またはその転写体配列を含む場合、第２下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ２）は、ヒトＡＬＢ、ヒトＦＴＬおよびヒトＲＰＳ２７から成る群から選択されるいずれか１つに由来する翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。

【0096】

さらに他の選択的な実施形態において、第１下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ１）がヒトＤＥＦＡ５由来の下流翻訳調節要素またはその転写体配列を含む場合、第２下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ２）は、ヒトＦＴＬ、ヒトＣＣＬ９、ヒトＡＡＭＰおよびヒトＲＰＳ２７から成る群から選択されるいずれか１つに由来する下流翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。さらに他の選択的な実施形態において、第１下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ１）がヒトＤＥＦＡ５由来の下流翻訳調節要素またはその転写体配列を含む場合、第２下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ２）は、ヒトＦＴＬまたはヒトＲＰＳ２７由来の下流翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。

【0097】

コーディング領域（ＣＲ）は、意図した目的遺伝子（ＧＯＩ）のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含んでいる場合、特に限定されない。例示的な態様において、コーディング領域（ＣＲ）は、レポータータンパク質またはその断片、マーカー（ｍａｒｋｅｒ）または選別タンパク質またはその断片、抗原またはその断片および疾患の治療のためのタンパク質またはその断片のうち少なくとも１つをコード化するヌクレオチド配列またはその転写体配列であるオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）からなることができる。

【0098】

一例として、コーディング領域（ＣＲ）は、ルシフェラーゼタンパク質（例えば、ウミシイタケルシフェラーゼ（ｒｅｎｉｌｌａ ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ））、緑色蛍光タンパク質（Ｇｒｅｅｎ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ Ｐｒｏｔｅｉｎ，ＧＦＰ）、高感度緑色蛍光タンパク質（Ｅｎｈａｎｃｅｄ Ｇｒｅｅｎ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ Ｐｒｏｔｅｉｎ，ＥＧＦＰ）、ベータ－グルクロニダーゼのようなグルクロニダーゼ（ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｓｅ）および／またはベータ－ガラクトシダーゼのようなガラクトシダーゼ（ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ）のようなレポータータンパク質／レポーターペプチドまたはその断片をコード化するオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）からなることができる。

【0099】

１つの例示的な態様において、コーディング領域（ＣＲ）は、アルファ－グロビンおよび／またはベータ－グロビンのようなグロビンタンパク質、ガラクトキナーゼ（ｇａｌａｃｔｏｋｉｎａｓｅ）および／またはヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼなどのようなマーカーまたは選別タンパク質／ペプチドまたはその断片をコード化するオープンリーディングフレームからなることができる。その他にも、他のレポータータンパク質／ペプチドおよび／またはマーカーまたは選別タンパク質／ペプチドをコード化するオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）をコーディング領域（ＣＲ）に挿入することができる。

【0100】

他の例示的な態様において、コーディング領域（ＣＲ）に挿入される抗原遺伝子は、病原性抗原またはその断片、腫瘍抗原、これらの変異体または誘導体を含むタンパク質／ペプチドをコード化するオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）からなることができる。

【0101】

病原性抗原は、個体、特に哺乳動物個体、より特にヒト内免疫学的反応を起こす病原性有機体、特にバクテリア、ウイルスまたは原生動物（多細胞）病原性有機体から誘導される。より具体的には、病原性抗原は、ウイルスまたはバクテリアまたは原生動物有機体の表面に位置する表面抗原、例えば、タンパク質（またはタンパク質の切片、例えば、表面抗原の外部の一部）でありうる。

【0102】

一例として、病原性抗原は、感染性疾患に関連した病原体から誘導されたペプチドまたはタンパク質抗原でありうる。より具体的には、病原性抗原は、アシネトバクター・バウマニ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉ）、アナプラズマ属（Ａｎａｐｌａｓｍａ ｇｅｎｕｓ）、アナプラズマ・ファゴサイトフイルム（Ａｎａｐｌａｓｍａ ｐｈａｇｏｃｙｔｏｐｈｉｌｕｍ）、ブラジル鉤虫（Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｂｒａｚｉｌｉｅｎｓｅ）、十二指腸鉤虫（Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｄｕｏｄｅｎａｌｅ）、溶血性アルカノバクテリア（Ａｒｃａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｍ）、回虫（Ａｓｃａｒｉｓ ｌｕｍｂｒｉｃｏｉｄｅｓ）、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｇｅｎｕｓ）、アストロウイルス科（Ａｓｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ）、バベシア属（Ｂａｂｅｓｉａ ｇｅｎｕｓ）、炭疽菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ）、バチルス・セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ）、バルトネラ・ヘンセラ菌（Ｂａｒｔｏｎｅｌｌａ ｈｅｎｓｅｌａｅ）、ＢＫウイルス、ブラストシスチス・ホミニス（Ｂｌａｓｔｏｃｙｓｔｉｓ ｈｏｍｉｎｉｓ）、ブラストミセス・デルマティティジス（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ）、百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）、ボレリア・ブルグドルフェリ（Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ）、ボレリア属（Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｇｅｎｕｓ）、ボレリア種（Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｓｐｐ）、ブルセラ属（Ｂｒｕｃｅｌｌａ ｇｅｎｕｓ）、マレー糸状虫（Ｂｒｕｇｉａ ｍａｌａｙｉ）、ブニヤウイルス科（Ｂｕｎｙａｖｉｒｉｄａｅ ｆａｍｉｌｙ）、バークホルデリア・セパシア（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｃｅｐａｃｉａ）および他のバークホルデリア種、バークホルデリア・マレイ（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｍａｌｌｅｉ）、バークホルデリア・シュードマレイ、カリシウイルス科（Ｃａｌｉｃｉｖｉｒｉｄａｅ ｆａｍｉｌｙ）、カンピロバクター属（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｇｅｎｕｓ）、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）、カンジダ種（Ｃａｎｄｉｄａ ｓｐｐ）、クラミジア・トラコマチス（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）、クラミドフィラ・ニューモニアエ（Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、クラミドフィラ・シッタシ（Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ ｐｓｉｔｔａｃｉ）、ＣＪＤプリオン、肝吸虫（Ｃｌｏｎｏｒｃｈｉｓ ｓｉｎｅｎｓｉｓ）、クロストリジウム・ボツリヌス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ）、クロストリジウム・ディフィシレ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）、クロストリジウム・ディフィシレ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）、クロストリジウム・ディフィシレ、クロストリジウム種（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｓｐｐ）、クロストリジウム・テタ二（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ）、コクシジオイデス種（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｓｐｐ）、コロナウイルス（ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓｅｓ）、ジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ）、コクシエラ・バーネティー（Ｃｏｘｉｅｌｌａ ｂｕｒｎｅｔｉｉ）、クリミア・コンゴ出血熱ウイルス（Ｃｒｉｍｅａｎ－Ｃｏｎｇｏ ｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ ｆｅｖｅｒ ｖｉｒｕｓ）、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、クリプトスポリジウム属（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｇｅｎｕｓ）、サイトメガロウイルス（Ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ，ＣＭＶ）、デングウイルス（Ｄｅｎｇｕｅ ｖｉｒｕｓｅｓ）（ＤＥＮ－１、ＤＥＮ－２、ＤＥＮ－３およびＤＥＮ－４）、二核アメーバ（Ｄｉｅｎｔａｍｏｅｂａ ｆｒａｇｉｌｉｓ）、エボラウイルス（Ｅｂｏｌａｖｉｒｕｓ，ＥＢＯＶ）、エキノコックス種（Ｅｃｈｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｎｕｓ）、エーリキア・シャフェンシス（Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ ｃｈａｆｆｅｅｎｓｉｓ）、エールリキア・エウィンギイ（Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ ｅｗｉｎｇｉｉ）、エールリヒア属（Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ ｇｅｎｕｓ）、赤痢アメーバ（Ｅｎｔａｍｏｅｂａ ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ）、エンテロコッカス属（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｎｕｓ）、エンテロウイルス属（Ｅｎｔｅｒｏｖｉｒｕｓ ｇｅｎｕｓ）、エンテロウイルス（Ｅｎｔｅｒｏｖｉｒｕｓｅｓ）、主にコクサッキーＡウイルス（Ｃｏｘｓａｃｋｉｅ Ａ ｖｉｒｕｓ）およびエンテロウイルス７１（ＥＶ７１）、表皮菌種（Ｅｐｉｄｅｒｍｏｐｈｙｔｏｎ ｓｐｐ）、エプスタイン・バールウイルス（Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ Ｖｉｒｕｓ，ＥＢＶ）、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）Ｏ１５７：Ｈ７、Ｏ１１１およびＯ１０４：Ｈ４、肝蛭（Ｆａｓｃｉｏｌａ ｈｅｐａｔｉｃａ）および巨大肝蛭（Ｆａｓｃｉｏｌａ ｇｉｇａｎｔｉｃａ）、ＦＦＩプリオン、フィラリア（Ｆｉｌａｒｉｏｉｄｅａ ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ）、フ狂犬病ウイルス（Ｆｌａｖｉｖｉｒｕｓｅｓ）、野兎病菌（Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ）、フソバクテリウム属（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｇｅｎｕｓ）、ゲオトリクム・キャンディダム（Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ ｃａｎｄｉｄｕｍ）、ランブル鞭毛虫（Ｇｉａｒｄｉａ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｉｓ）、顎口虫属種（Ｇｎａｔｈｏｓｔｏｍａ ｓｐｐ）、ＧＳＳプリオン、ガナリトウイルス（Ｇｕａｎａｒｉｔｏ ｖｉｒｕｓ）、ヘモフィルス・デュクレイ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｄｕｃｒｅｙｉ）、ヘモフィルスインフルエンザ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ）、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）、ヘニパウイルス（Ｈｅｎｉｐａｖｉｒｕｓ）（Ｈｅｎｄｒａ ｖｉｒｕｓ Ｎｉｐａｈ ｖｉｒｕｓ）、肝炎Ａウイルス、肝炎Ｂウイルス（ＨＢＶ）、肝炎Ｃウイルス（ＨＣＶ）、肝炎Ｄウイルス、肝炎Ｅウイルス、単純ヘルペスウイルス１および２（ＨＳＶ－１およびＨＳＶ－２）、ヒストプラズマ・カプスラツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）、ＨＩＶ（ヒト免疫不全ウイルス、Ｈｕｍａｎ ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｖｉｒｕｓ）、ホルタエア・ウェルネキイ（Ｈｏｒｔａｅａ ｗｅｒｎｅｃｋｉｉ）、ヒトボカウイルス（Ｈｕｍａｎ ｂｏｃａｖｉｒｕｓ）（ＨＢｏＶ）、ヒトヘルペスウイルス６（Ｈｕｍａｎ ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ ６，ＨＨＶ－６）およびヒトヘルペスウイルス７（ＨＨＶ－７）、ヒトメタニューモウイルス（Ｈｕｍａｎ ｍｅｔａｐｎｅｕｍｏｖｉｒｕｓ，ｈＭＰＶ）、ヒト乳頭腫ウイルス（Ｈｕｍａｎ ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ，ＨＰＶ）、ヒトパラインフルエンザウイルス（Ｈｕｍａｎ ｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓｅｓ，ＨＰＩＶ）、日本脳炎ウイルス（Ｊａｐａｎｅｓｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ）、ＪＣウイルス、フニン（Ｊｕｎｉｎ）ウイルス、キンゲラ・キンゲ（Ｋｉｎｇｅｌｌａ ｋｉｎｇａｅ）、クレブシエラ・グラニュロマティス（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｇｒａｎｕｌｏｍａｔｉｓ）、クーループリオン（Ｋｕｒｕ ｐｒｉｏｎ）、ラッサウイルス（Ｌａｓｓａ ｖｉｒｕｓ）、レジオネラ・ニューモフィラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ）、リーシュマニア属（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ ｇｅｎｕｓ）、レプトスピラ属（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｇｅｎｕｓ）、リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ ｃｈｏｒｉｏｍｅｎｉｎｇｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ）（ＬＣＭＶ）、マチュポウイルス（Ｍａｃｈｕｐｏ ｖｉｒｕｓ）、マラセジア種（Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ ｓｐｐ）、マールブルグ・ウイルス（Ｍａｒｂｕｒｇ ｖｉｒｕｓ）、麻疹ウイルス（Ｍｅａｓｌｅｓ ｖｉｒｕｓ）、メタゴニムス・ヨコカワイ（Ｍｅｔａｇｏｎｉｍｕｓ ｙｏｋｏｇａｗａｉ）、ミクロスポリジア門（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｉｄｉａ ｐｈｙｌｕｍ）、伝染性軟属腫ウイルス（Ｍｏｌｌｕｓｃｕｍ ｃｏｎｔａｇｉｏｓｕｍ ｖｉｒｕｓ）（ＭＣＶ）、ムンプスウイルス（Ｍｕｍｐｓ ｖｉｒｕｓ）、らい菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒａｅ）およびマイコバクテリウム・レプロマトーシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒｏｍａｔｏｓｉｓ）、マイコバクテリウム・ツベルクローシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、マイコバクテリウム・ウルセランス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｕｌｃｅｒａｎｓ）、マイコプラズマ肺炎（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、フォーラーネグレリア（Ｎａｅｇｌｅｒｉａ ｆｏｗｌｅｒｉ）、アメリカ鉤虫（Ｎｅｃａｔｏｒ ａｍｅｒｉｃａｎｕｓ）、淋菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ）、ノカルジア・アステロイドス（Ｎｏｃａｒｄｉａ ａｓｔｅｒｏｉｄｓ）、ノカルディア種（Ｎｏｃａｒｄｉａ ｓｐｐ）、オンコセルカ・ボルブルス（Ｏｎｃｈｏｃｅｒｃａ ｖｏｌｖｕｌｕｓ）、オリエンティア・ツツガムシ（Ｏｒｉｅｎｔｉａ ｔｓｕｔｓｕｇａｍｕｓｈｉ）、オルトミクソウイルス科（Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ ｆａｍｉｌｙ、インフルエンザ）、パラコクシジオイデス・ブラジリエンシス（Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）、肺吸虫種（Ｐａｒａｇｏｎｉｍｕｓ ｓｐｐ）、ウェステルマン肺吸虫（Ｐａｒａｇｏｎｉｍｕｓ ｗｅｓｔｅｒｍａｎｉ）、パルボウイルス（Ｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ）Ｂ１９、パスツレラ属（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｇｅｎｕｓ）、プラスモディウム属（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｇｅｎｕｓ）、ニューモシスチス・イロベチイ（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｊｉｒｏｖｅｃｉｉ）、ポリオウイルス（Ｐｏｌｉｏｖｉｒｕｓ）、狂犬病ウイルス（Ｒａｂｉｅｓ ｖｉｒｕｓ）、呼吸器合胞体ウイルス（Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ，ＲＳＶ）、ライノウイルス（Ｒｈｉｎｏｖｉｒｕｓ）、ライノウイルス、リケッチア・アカリ（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ ａｋａｒｉ）、リケッチア属（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ ｇｅｎｕｓ）、発疹チフスリケッチア（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ ｐｒｏｗａｚｅｋｉｉ）、リケッチア・リケッチイ（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ）、発疹熱リケッチア（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ ｔｙｐｈｉ）、リフトバレー熱ウイルス（（Ｒｉｆｔ Ｖａｌｌｅｙ ｆｅｖｅｒ ｖｉｒｕｓ）、ロタウイルス（Ｒｏｔａｖｉｒｕｓ）、風疹ウイルス（Ｒｕｂｅｌｌａ ｖｉｒｕｓ）、サビアウイルス（Ｓａｂｉａ ｖｉｒｕｓ）、サルモネラ属（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｇｅｎｕｓ）、ヒゼンダニ（Ｓａｒｃｏｐｔｅｓ ｓｃａｂｉｅｉ）、ＳＡＲＳコロナウイルス、住血吸虫属（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｇｅｎｕｓ）、重症熱性血小板減少症候群ウイルス（Ｓｅｖｅｒｅ ｆｅｖｅｒ ｗｉｔｈ ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｏｐｅｎｉａ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｖｉｒｕｓ，ＳＦＴＳＶ）、シゲラ属（Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｇｅｎｕｓ）、シンノンブルウイルス（Ｓｉｎ Ｎｏｍｂｒｅ ｖｉｒｕｓ）、ハンタウイルス（Ｈａｎｔａｖｉｒｕｓ）、スポロトリックス・シェンキイ（Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ ｓｃｈｅｎｃｋｉｉ）、スタヒロコッカス属（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｎｕｓ）、スタヒロコッカス属、ストレプトコッカス・アガラクティエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ）、肺炎レンサ球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、化膿レンサ球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、ふん線虫（Ｓｔｒｏｎｇｙｌｏｉｄｅｓ ｓｔｅｒｃｏｒａｌｉｓ）、テニア属（Ｔａｅｎｉａ ｇｅｎｕｓ）、有鉤条虫（Ｔａｅｎｉａ ｓｏｌｉｕｍ）、ダニ媒介性脳炎ウイルス（Ｔｉｃｋｂｏｒｎｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ，ＴＢＥ

Ｖ）、イヌ回虫（Ｔｏｘｏｃａｒａ ｃａｎｉｓ）またはネコ回虫（Ｔｏｘｏｃａｒａ ｃａｔｉ）、トキソプラズマ・ゴンディ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ）、梅毒トレポネーマ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐａｌｌｉｄｕｍ）、旋毛虫（Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌｌａ ｓｐｉｒａｌｉｓ）、膣トリコモナス（Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ ｖａｇｉｎａｌｉｓ）、トリコフィトン種（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｓｐｐ）、鞭虫（Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ ｔｒｉｃｈｉｕｒａ）、トリパノソーマ・ブルーセイ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｂｒｕｃｅｉ）、クルーズ・トリパノソーマ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｃｒｕｚｉ）、ウレアプラズマ・ウレアリチカム（Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ）、水痘・帯状疱疹ウイルス（Ｖａｒｉｃｅｌｌａ ｚｏｓｔｅｒ ｖｉｒｕｓ）（ＶＺＶ）、水痘・帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、天然痘ウイルス（Ｖａｒｉｏｌａ ｍａｊｏｒ）または天然痘マイナー（Ｖａｒｉｏｌａ ｍｉｎｏｒ）、ｖＣＪＤプリオン、ベネズエラ馬脳炎ウイルス（Ｖｅｎｅｚｕｅｌａｎ ｅｑｕｉｎｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ）、コレラ菌（Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａ）、ウエストナイルウイルス（Ｗｅｓｔ Ｎｉｌｅ ｖｉｒｕｓ）、西部ウマ脳炎ウイルス（Ｗｅｓｔｅｒｎ ｅｑｕｉｎｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ）、バンクロフト糸状虫（Ｗｕｃｈｅｒｅｒｉａ ｂａｎｃｒｏｆｔｉ）、黄熱ウイルス（Ｙｅｌｌｏｗ ｆｅｖｅｒ ｖｉｒｕｓ）、エルシニア・エンテロコリチカ（Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ）、ペスト菌（Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｐｅｓｔｉｓ）、およびエルシニア・シュードツベルクローシス（Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）から誘導され得るが、これに限定されない。

【0103】

選択的な観点において、コーディング領域（ＣＲ）は、腫瘍抗原またはその断片、これらの変異体または誘導体であるタンパク質またはペプチドをコード化するオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）からなることができる。腫瘍抗原は、メラニン細胞特異的抗原、睾丸がん抗原または腫瘍特異的抗原、例えば、ＣＴ－Ｘ抗原、非ＣＴ－Ｘ抗原、ＣＴ－Ｘ抗原に対する結合パートナーまたは非ＣＴ－Ｘ抗原または腫瘍特異的抗原に対する結合パートナー、または腫瘍特異的抗原、腫瘍抗原の変異体または誘導体でありうる。

【0104】

このような腫瘍抗原をコード化するオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）は、５Ｔ４、７０７－ＡＰ、９Ｄ７、ＡＦＰ、ＡｌｂＺＩＰ ＨＰＧ１、アルファ－５－ベータ－１－インテグリン、アルファ－５－ベータ－６－インテグリン、アルファ－アクチニン－４／ｍ、アルファ－メチルアシル－コエンザイムＡラセマーゼ、ＡＲＴ－４、ＡＲＴＣ１／ｍ、Ｂ７Ｈ４、ＢＡＧＥ－１、ＢＣＬ－２、ｂｃｒ／ａｂｌ、ベータ－カテニン／ｍ、ＢＩＮＧ－４、ＢＲＣＡ１／ｍ、ＢＲＣＡ２／ｍ、ＣＡ １５－３／ＣＡ ２７－２９、ＣＡ１９－９、ＣＡ７２－４、ＣＡ１２５、カルレティキュリン（ｃａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎ）、ＣＡＭＥＬ、ＣＡＳＰ－８／ｍ、カテプシンＢ（ｃａｔｈｅｐｓｉｎ Ｂ）、カテプシンＬ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤＥ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４、ＣＤ５２、ＣＤ５５、ＣＤ５６、ＣＤ８０、ＣＤＣ２７／ｍ、ＣＤＫ４／ｍ、ＣＤＫＮ２Ａ／ｍ、ＣＥＡ、ＣＬＣＡ２、ＣＭＬ２８、ＣＭＬ６６、ＣＯＡ－１／ｍ、コアクトシン様タンパク質、コラージュ（ｃｏｌｌａｇｅ） ＸＸＩＩＩ、ＣＯＸ－２、ＣＴ－９／ＢＲＤ６、Ｃｔｅｎ、サイクリンＢ１、サイクリンＤ１、ｃｙｐ－Ｂ、ＣＹＰＢ１、ＤＡＭ－１０、ＤＡＭ－６、ＤＥＫＣＡＮ、ＥＦＴＵＤ２／ｍ、ＥＧＦＲ、ＥＬＦ２／ｍ、ＥＭＭＰＲＩＮ、ＥｐＣａｍ、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、ＥｒｂＢ３、ＥＴＶ６－ＡＭＬ１、ＥＺＨ２、ＦＧＦ－５、ＦＮ、Ｆｒａｕ－１、Ｇ２５０、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ＧＡＧＥ－３、ＧＡＧＥ－４、ＧＡＧＥ－５、ＧＡＧＥ－６、ＧＡＧＥ７ｂ、ＧＡＧＥ－８、ＧＤＥＰ、ＧｎＴ－Ｖ、ｇｐ１００、ＧＰＣ３、ＧＰＮＭＢ／ｍ、ＨＡＧＥ、ＨＡＳＴ－２、ヘプシン、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＨＥＲＶ－Ｋ－ＭＥＬ、ＨＬＡ－Ａ＊０２０１－Ｒ１７Ｉ、ＨＬＡ－Ａ１１／ｍ、ＨＬＡ－Ａ２／ｍ、ＨＮＥ、ホメオボックスＮＫＸ３．１、ＨＯＭ－ＴＥＳ－１４／ＳＣＰ－１、ＨＯＭ－ＴＥＳ－８５、ＨＰＶ－Ｅ６、ＨＰＶ－Ｅ７、ＨＳＰ７０－２Ｍ、ＨＳＴ－２、ｈＴＥＲＴ、ｉＣＥ、ＩＧＦ－１Ｒ、ＩＬ－１３Ｒａ２、ＩＬ－２Ｒ、ＩＬ－５、未成熟ラミニン受容体、カリクレイン（ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ）－２、クレイン－４、Ｋｉ６７、ＫＩＡＡ０２０５、ＫＩＡＡ０２０５／ｍ、ＫＫ－ＬＣ－１、Ｋ－Ｒａｓ／ｍ、ＬＡＧＥ－Ａ１、ＬＤＬＲ－ＦＵＴ、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＭＡＧＥ－Ａ２、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ４、ＭＡＧＥ－Ａ６、ＭＡＧＥ－Ａ９、ＭＡＧＥ－Ａ１０、ＭＡＧＥ－Ａ１２、ＭＡＧＥ－Ｂ１、ＭＡＧＥ－Ｂ２、ＭＡＧＥ－Ｂ３、ＭＡＧＥ－Ｂ４、ＭＡＧＥ－Ｂ５、ＭＡＧＥ－Ｂ６、ＭＡＧＥ－Ｂ１０、ＭＡＧＥ－Ｂ１６、ＭＡＧＥ－Ｂ１７、ＭＡＧＥ－Ｃ１、ＭＡＧＥ－Ｃ２、ＭＡＧＥ－Ｃ３、ＭＡＧＥ－Ｄ１、ＭＡＧＥ－Ｄ２、ＭＡＧＥ－Ｄ４、ＭＡＧＥ－Ｅ１、ＭＡＧＥ－Ｅ２、ＭＡＧＥ－Ｆ１、ＭＡＧＥ－Ｈ１、ＭＡＧＥＬ２、マンマグロビン（ｍａｍｍａｇｌｏｂｉｎ）Ａ、ＭＡＲＴ－１／メラン－Ａ、ＭＡＲＴ－２、ＭＡＲＴ－２／ｍ、基質タンパク質（ｍａｔｒｉｘ ｐｒｏｔｅｉｎ）２２、ＭＣ１Ｒ、Ｍ－ＣＳＦ、ＭＥ１／ｍ、メソテリン（ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｎ）、ＭＧ５０／ＰＸＤＮ、ＭＭＰ１１、ＭＮ／ＣＡ ＩＸ－抗原、ＭＲＰ－３、ＭＵＣ－１、ＭＵＣ－２、ＭＵＭ－１／ｍ、ＭＵＭ－２／ｍ、ＭＵＭ－３／ｍ、ミオシンクラスＩ／ｍ、ＮＡ８８－Ａ、Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ－Ｖ、ネオ－ＰＡＰ、ネオ－ＰＡＰ／ｍ、ＮＦＹＣ／ｍ、ＮＧＥＰ、ＮＭＰ２２、ＮＰＭ／ＡＬＫ、Ｎ－Ｒａｓ／ｍ、ＮＳＥ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＮＹ－ＥＳＯ－Ｂ、ＯＡ１、ＯＦＡ－ｉＬＲＰ、ＯＧＴ、ＯＧＴ／ｍ、ＯＳ－９、ＯＳ－９／ｍ、オステオカルシン、オステオポンチン、ｐ１５、ｐ１９０マイナーｂｃｒ－ａｂｌ、ｐ５３、ｐ５３／ｍ、ＰＡＧＥ－４、ＰＡＩ－１、ＰＡＩ－２、ＰＡＰ、ＰＡＲＴ－１、ＰＡＴＥ、ＰＤＥＦ、Ｐｉｍ－１－キナーゼ、Ｐｉｎ－１、Ｐｍｌ／ＰＡＲアルファ、ＰＯＴＥ、ＰＲＡＭＥ、ＰＲＤＸ５／ｍ、プロステイン、プロテイナーゼ－３、ＰＳＡ、ＰＳＣＡ、ＰＳＧＲ、ＰＳＭ、ＰＳＭＡ、ＰＴＰＲＫ／ｍ、ＲＡＧＥ－１、ＲＢＡＦ６００／ｍ、ＲＨＡＭＭ／ＣＤ１６８、ＲＵ１、ＲＵ２、Ｓ－１００、ＳＡＧＥ、ＳＡＲＴ－１、ＳＡＲＴ－２、ＳＡＲＴ－３、ＳＣＣ、ＳＩＲＴ２／ｍ、Ｓｐ１７、ＳＳＸ－１、ＳＳＸ－２／ＨＯＭ－ＭＥＬ－４０、ＳＳＸ－４、ＳＴＡＭＰ－１、ＳＴＥＡＰ－１、サバイビン、サバイビン－２Ｂ、ＳＹＴ－ＳＳＸ－１、ＳＹＴ－ＳＳＸ－２、ＴＡ－９０、ＴＡＧ－７２、ＴＡＲＰ、ＴＥＬ－ＡＭＬ１、ＴＧＦベータ、ＴＧＦベータＲＩＩ、ＴＧＭ－４、ＴＰＩ／ｍ、ＴＲＡＧ－３、ＴＲＧ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２／６ｂ、ＴＲＰ／ＩＮＴ２、ＴＲＰ－ｐ８、チロシナーゼ、ＵＰＡ、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ－２／ＦＬＫ－１、ＷＴ１およびリンパ球血球の免疫グロブリンの遺伝子型またはリンパ球血球のＴ細胞受容体の遺伝子型、またはこれらの断片、変異体または誘導体をコード化するヌクレオチド配列またはこれらの転写体配列からなることができるが、これに限定されない。

【0105】

さらに他の例示的な態様において、コーディング領域（ＣＲ）は、治療的タンパク質／ペプチドまたはその断片、変異体または誘導体であるタンパク質／ペプチドをコード化するオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）からなることができる。

【0106】

治療用タンパク質は、遺伝的欠陥の修飾および治療、がん細胞または病原体感染細胞の破壊、免疫系疾患の治療、代謝性または内分泌疾患の治療ができる、治療剤の生成において重要な役割を行うことができる。一例として、治療用タンパク質は、遺伝的または後天的なものと独立して、例えば、感染性疾患、腫瘍（ｎｅｏｐｌａｓｍ）（例えば、がんまたは腫瘍疾患）、血液および血液形成器官の疾患、内分泌、栄養および代謝性疾患、神経系疾患、循環系疾患、呼吸系疾患、消化器系疾患、皮膚および皮下組織疾患、筋骨格系疾患および結合組織、および泌尿生殖器系疾患のような様々な疾患の治療を含む様々な目的に使用することができる。

【0107】

例えば、代謝性または内分泌疾患の治療に使用することができるタンパク質（タンパク質治療に使用する特定の疾患）は、酸性スフィンゴミエリナーゼ（Ａｃｉｄ ｓｐｈｉｎｇｏｍｙｅｌｉｎａｓｅ）（ニーマンピック病、Ｎｉｅｍａｎｎ－Ｐｉｃｋ ｄｉｓｅａｓｅ）、アディポタイド（Ａｄｉｐｏｔｉｄｅ）（肥満）、アガルシダーゼベータ（Ａｇａｌｓｉｄａｓｅ－ｂｅｔａ）（ヒトガラクトシダーゼＡ）（ファブリー病（Ｆａｂｒｙ ｄｉｓｅａｓｅ）；腎臓および心血管合併症を誘導する脂質の蓄積を防止）、アルグルコシダーゼ（Ａｌｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ）（ポンペ病（Ｐｏｍｐｅ ｄｉｓｅａｓｅ；グリコーゲン蓄積症タイプII）、アルファ－ガラクトシダーゼＡ（アルファ－ＧＡＬ Ａ、アガルシダーゼアルファ）（ファブリー病）、アルファ－グルコシダーゼ（グリコーゲン蓄積症（ＧＳＤ）、ポンペ病（Ｍｏｒｂｕｓ Ｐｏｍｐｅ））、アルファ－Ｌ－イズロニダーゼ（ａｌｐｈａ－Ｌ－ｉｄｕｒｏｎｉｄａｓｅ）（ムコ多糖症（ＭＰＳ）、ハーラー症候群（Ｈｕｒｌｅｒ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、シャイエ症候群（Ｓｃｈｅｉｅ ｓｙｎｄｒｏｍｅ））、アルファ－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼ（ａｌｐｈａ－Ｎ－ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｉｄａｓｅ）（サンフィリポ症候群、Ｓａｎｆｉｌｉｐｐｏ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、アンフィレグリン（Ａｍｐｈｉｒｅｇｕｌｉｎ）（がん、代謝性疾患）、アンジオポイエチン（Ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ）（（Ａｎｇ１、Ａｎｇ２、Ａｎｇ３、Ａｎｇ４、ＡＮＧＰＴＬ２、ＡＮＧＰＴＬ３、ＡＮＧＰＴＬ４、ＡＮＧＰＴＬ５、ＡＮＧＰＴＬ６、ＡＮＧＰＴＬ７）（血管形成、血管安定）、ベータセルリン（Ｂｅｔａｃｅｌｌｕｌｉｎ）（代謝性疾患）、ベータ－グルクロニダーゼ（Ｂｅｔａ－ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｓｅ）（スライ症候群（Ｓｌｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ））、骨形成タンパク質（Ｂｏｎｅ ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ）ＢＭＰｓ（ＢＭＰ１、ＢＭＰ２、ＢＭＰ３、ＢＭＰ４、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ８ａ、ＢＭＰ８ｂ、ＢＭＰ１０、ＢＭＰ１５）（再生的影響、骨関連症状、慢性腎疾患（ＣＫＤ））、ＣＬＮ６タンパク質（ＣＬＮ６疾患－非定型後期小児性（Ａｔｙｐｉｃａｌ Ｌａｔｅ Ｉｎｆａｎｔｉｌｅ）、遅発性バリアント（Ｌａｔｅ Ｏｎｓｅｔ ｖａｒｉａｎｔ）、早期若年（Ｅａｒｌｙ Ｊｕｖｅｎｉｌｅ）、神経セロイドリポフスチン症（Ｎｅｕｒｏｎａｌ Ｃｅｒｏｉｄ Ｌｉｐｏｆｕｓｃｉｎｏｓｉｓ，ＮＣＬ））、表皮成長因子（ＥＧＦ）（創傷治癒、細胞成長、増殖および分化の調節）、エピゲン（Ｅｐｉｇｅｎ）（代謝性疾患）、エピレグリン（Ｅｐｉｒｅｇｕｌｉｎ）（代謝性疾患）、線維芽細胞成長因子（Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）（ＦＧＦ、ＦＧＦ－１、ＦＧＦ－２、ＦＧＦ－３、ＦＧＦ－４、ＦＧＦ－５、ＦＧＦ－６、ＦＧＦ－７、ＦＧＦ－８、ＦＧＦ－９、ＦＧＦ－１０、ＦＧＦ－１１、ＦＧＦ－１２、ＦＧＦ－１３、ＦＧＦ－１４、ＦＧＦ－１６、ＦＧＦ－１７、ＦＧＦ－１７、ＦＧＦ－１８、ＦＧＦ－１９、ＦＧＦ－２０、ＦＧＦ－２１、ＦＧＦ－２２、ＦＧＦ－２３）（創傷治癒、血管新生、内分泌疾患、組織再生）、ガルスルファーゼ（Ｇａｌｓｕｌｐｈａｓｅ）（ムコ多糖症（Ｍｕｃｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｏｓｉｓ）ＶＩ型）、グレリン（Ｇｈｒｅｌｉｎ）（過敏性大腸症候群（ｉｒｒｉｔａｂｌｅ ｂｏｗｅｌ ｓｙｎｄｒｏｍｅ，ＩＢＳ）、肥満、プラダー・ウィリ症候群（Ｐｒａｄｅｒ－Ｗｉｌｌｉ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、２型真性糖尿病（ｄｉａｂｅｔｅｓ ｍｅｌｌｉｔｕｓ）、グルコセレブロシダーゼ（Ｇｌｕｃｏｃｅｒｅｂｒｏｓｉｄａｓｅ）（ゴーシェ病（Ｇａｕｃｈｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ））、ＧＭ－ＣＳＦ（再生効果、白血球生産、がん）、ヘパリン結合性ＥＧＦ様成長因子（ＨＢ－ＥＧＦ）（創傷治癒、心臓肥大および心臓発達および機能）、肝細胞成長因子（Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ，ＨＧＦ）（再生効果、創傷治癒）、ヘプシジン（Ｈｅｐｃｉｄｉｎ）（鉄代謝障害、ベータ地中海貧血（Ｂｅｔａ－ｔｈａｌａｓｓｅｍｉａ））、ヒトアルブミン（アルブミンの減少した生産（低タンパク血症）、増加したアルブミンの減少（腎症候群）、ヒポボレミア（ｈｙｐｏｖｏｌａｅｍｉａ）、高ビリルビン血症（ｈｙｐｅｒｂｉｌｉｒｕｂｉｎｅｍｉａ））、イデュルスルファーゼ（Ｉｄｕｒｓｕｌｆａｓｅ）（イズロン酸－２－スルファターゼ、Ｉｄｕｒｏｎａｔｅ－２－ｓｕｌｆａｔａｓｅ）（ムコ多糖症（Ｍｕｃｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｏｓｉｓ）II型（ハンター症候群、Ｈｕｎｔｅｒ ｓｙｎｄｒｏｍｅ））、インテグリンαＶβ３、αＶβ５およびα５β１（結合基質高分子およびタンパク質分解酵素（Ｂｉｎｄ ｍａｔｒｉｘ ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ）、血管新生）、イズロン酸スルファターゼ（Ｉｄｕｒｏｎａｔｅ ｓｕｌｆａｔａｓｅ）（ハンター症候群（Ｈｕｎｔｅｒ ｓｙｎｄｒｏｍｅ））、ラロニダーゼ（Ｌａｒｏｎｉｄａｓｅ）（ムコ多糖症Ｉ型のハーラーおよびハーラー－シャイエ形態）、Ｎ－アセチルガラクトサミン－４－スルファターゼ（ｒｈＡＳＢ；ガルスルファーゼ（ｇａｌｓｕｌｆａｓｅ）、アリールスルファターゼＡ（Ａｒｙｌｓｕｌｆａｔａｓｅ Ａ）（ＡＲＳＡ）、アリールスルファターゼＢ（ＡＲＳＢ））（アリルスルファターゼＢ欠損、マロトー・ラミー症候群（Ｍａｒｏｔｅａｕｘ－Ｌａｍｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、ムコ多糖症ＶＩ型）、Ｎ－アセチルグルコサミン－６－スルファターゼ（Ｎ－ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｅ－６－ｓｕｌｆａｔａｓｅ）（サンフィリポ症候群（Ｓａｎｆｉｌｉｐｐｏ ｓｙｎｄｒｏｍｅ））、神経成長因子（Ｎｅｒｖｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ）（ＮＧＦ、脳由来神経栄養因子（Ｂｒａｉｎ－Ｄｅｒｉｖｅｄ Ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ Ｆａｃｔｏｒ，ＢＤＮＦ）、ニューロトロフィン－３（Ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｎ－３，ＮＴ－３）、およびニューロトロフィン４／５（ＮＴ－４／５）（再生効果、心血管疾患、冠動脈形成術アテローム性動脈硬化症（ｃｏｒｏｎａｒｙ ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）、肥満、２型真性糖尿病、代謝性症候群、急性冠動脈症候群、認知症、うつ病、統合失調症（ｓｃｈｉｚｏｐｈｒｅｎｉａ）、自閉症、レット症候群（Ｒｅｔｔ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、神経性無食欲症（ａｎｏｒｅｘｉａ ｎｅｒｖｏｓａ）、神経性過食症（ｂｕｌｉｍｉａ ｎｅｒｖｏｓａ）、創傷治癒、皮膚潰瘍、角膜潰瘍、アルツハイマー病）、ニューレグリン（Ｎｅｕｒｅｇｕｌｉｎ）（ＮＲＧ１、ＮＲＧ２、ＮＲＧ３、ＮＲＧ４）（代謝性疾患、統合失調症）、ニューロピリン（Ｎｅｕｒｏｐｉｌｉｎ）（ＮＲＰ－１、ＮＲＰ－２）（血管新生、軸索誘導（ａｘｏｎ ｇｕｉｄａｎｃｅ）、細胞生存、移動）、オベスタチン（Ｏｂｅｓｔａｔｉｎ）（過敏性大腸症候群（ｉｒｒｉｔａｂｌｅ ｂｏｗｅｌ ｓｙｎｄｒｏｍｅ，ＩＢＳ）、肥満、プラダー・ウィリ症候群（Ｐｒａｄｅｒ－Ｗｉｌｌｉ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、２型真性糖尿病）、血小板由来増殖因子（Ｐｌａｔｅｌｅｔ Ｄｅｒｉｖｅｄ Ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ）（ＰＤＧＦ（ＰＤＦＦ－Ａ、ＰＤＧＦ－Ｂ、ＰＤＧＦ－Ｃ、ＰＤＧＦ－Ｄ）（再生効果、創傷治癒、血管新生疾患、動脈硬化症、線維症、がん）、ＴＧＦベータ受容体（エンドグリン（ｅｎｄｏｇｌｉｎ）、ＴＧＦ－ベータ１受容体、ＴＧＦ－ベータ２受容体、ＴＧＦ－ベータ３受容体）（腎線維症（ｒｅｎａｌ ｆｉｂｒｏｓｉｓ）、腎臓疾患、糖尿病、末期腎不全腎臓疾患（ＥＳＲＤ）、血管新生）、トロンボポエチン（ＴＨＰＯ）（巨核球（Ｍｅｇａｋａｒｙｏｃｙｔｅ）成長および発達因子（ＭＧＤＦ））（血小板障害、寄贈（ｄｏｎａｔｉｏｎ）に対する血小板、骨髄抑制抗がん化学療法（ｍｙｅｌｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ）後の血小板数の回復、形質転換成長因子（Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ Ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ）（ＴＧＦ（ＴＧＦ－アルファ、ＴＧＦ－ベータ（ＴＧＦベータ１、ＴＧＦベータ２、およびＴＧＦベータ３）））（再生効果、創傷治癒、免疫力、がん、心臓疾患、糖尿病、マルファン症候群（Ｍａｒｆａｎ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、ロイス・ディーツ症候群（Ｌｏｅｙｓ－Ｄｉｅｔｚ ｓｙｎｄｒｏｍｅ））、ＶＥＧＦ（ＶＥＧＦ－Ａ、ＶＥＧＦ－Ｂ、ＶＥＧＦ－Ｃ、ＶＥＧＦ－Ｄ、ＶＥＧＦ－Ｅ、ＶＥＧＦ－ＦおよびＰＩＧＦ）（再生効果、血管新生、創傷治癒、がん、浸透性）、ネシリチド（Ｎｅｓｉｒｉｔｉｄｅ）（急性非代償性鬱血性心不全（Ａｃｕｔｅ ｄｅｃｏｍｐｅｎｓａｔｅｄ ｃｏｎｇｅｓｔｉｖｅ ｈｅａｒｔ ｆａｉｌｕｒｅ）、トリプシン（褥瘡（Ｄｅｃｕｂｉｔｕｓ ｕｌｃｅｒ）、静脈瘤性潰瘍（ｖａｒｉｃｏｓｅ ｕｌｃｅｒ）、痂皮（ｅｓｃｈａｒ）の創傷清拭（ｄｅｂｒｉｄｅｍｅｎｔ）、裂開性創傷（ｄｅｈｉｓｃｅｎｔ ｗｏｕｎｄ）、火傷（ｓｕｎｂｕｒｎ）、胎便性イレウス（ｍｅｃｏｎｉｕｍ ｉｌｅｕｓ））、副腎皮質刺激ホルモン（ａｄｒｅｎｏｃｏｒｔｉｃｏｔｒｏｐｈｉｃ ｈｏｒｍｏｎｅ，ＡＣＴＨ）（アジソン病、小細胞がん、副腎白質ジストロフィー（Ａｄｒｅｎｏｌｅｕｋｏｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）、先天性副腎過形成症（Ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌ ａｄｒｅｎａｌ ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ）、クッシング症候群（Ｃｕｓｈｉｎｇ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、ネルソン症候群（Ｎｅｌｓｏｎ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、点頭てんかん（Ｉｎｆａｎｔｉｌｅ ｓｐａｓｍｓ））、心房性ナトリウム利尿ペプチド（Ａｔｒｉａｌ－ｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃ ｐｅｐｔｉｄｅ，ＡＮＰ）（内分泌疾患）、コレシストキニン（Ｃｈｏｌｅｃｙｓｔｏｋｉｎｉｎ）（様々な）、ガストリン（Ｇａｓｔｒｉｎ）（低ガストリン血症、ｈｙｐｏｇａｓｔｒｉｎｅｍｉａ）、レプチン（Ｌｅｐｔｉｎ）（糖尿病（Ｄｉａｂｅｔｅｓ）、高トリグリセリド血症（ｈｙｐｅｒｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅｍｉａ）、糖尿病）、オキシトシン（Ｏｘｙｔｏｃｉｎ）（授乳（ｂｒｅａｓｔｆｅｅｄｉｎｇ）刺激、分娩の非進行）、ソマトスタチン（Ｓｏｍａｔｏｓｔａｔｉｎ）（カルチノイド症候群（ｃａｒｃｉｎｏｉｄ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）の対症療法、急性静脈瘤出血（ａｃｕｔｅ ｖａｒｉｃｅａｌ ｂｌｅｅｄｉｎｇ）、および先端巨大症（ａｃｒｏｍｅｇａｌｙ）、肝および腎臓の多嚢性疾患、神経内分泌腫瘍による先端巨大症および症状）、バソプレシン（抗利尿ホルモン）（尿崩症（ｄｉａｂｅｔｅｓ ｉｎｓｉｐｉｄｕｓ））、カルシトニン（閉経後骨粗しょう症（Ｐｏｓｔｍｅｎｏｐａｕｓａｌ ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ）、高カルシウム血症（Ｈｙｐｅｒｃａｌｃａｅｍｉａ）、パジェット病（Ｐａｇｅｔ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、骨転移、幻肢痛（Ｐｈａｎｔｏｍ ｌｉｍｂ ｐａｉｎ）、脊髄狭窄症（Ｓｐｉｎａｌ Ｓｔｅｎｏｓｉｓ））、エキセナチド（Ｅｘｅｎａｔｉｄｅ）（メトホルミン（ｍｅｔｆｏｒｍｉｎ）およびスルホニルウレア（ｓｕｌｐｈｏｎｙｌｕｒｅａ）による治療に耐性のある２型糖尿病）、成長ホルモン（ＧＨ）、ソマトトロピン（ＧＨ欠損または慢性腎不全（ｃｈｒｏｎｉｃ ｒｅｎａｌ ｉｎｓｕｆｆｉｃｉｅｎｃｙ）による成長不全）、プラダー・ウィリ症候群（Ｐｒａｄｅｒ－Ｗｉｌｌｉ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、ターナー症候群、エイズ消耗（ＡＩＤＳ ｗａｓｔｉｎｇ）または抗ウイルス治療とともに悪液質（ｃａｃｈｅｘｉａ））、インスリン（真性糖尿病、糖尿病性ケトアシドーシス（ｄｉａｂｅｔｉｃ ｋｅｔｏａｃｉｄｏｓｉｓ）、高カリウム血症（ｈｙｐｅｒｋａｌａｅｍｉａ））、インスリン様成長因子１、ＩＧＦ－１（ＧＨ遺伝子欠損または重症先天性ＩＧＦ１欠損（ｓｅｖｅｒｅ ｐｒｉｍａｒｙ ＩＧＦ１ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ）による子供成長不全、神経変性疾患（ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ ｄｉｓｅａｓｅ）、心血管疾患、心不全）、メカセルミンリンファバート（Ｍｅｃａｓｅｒｍｉｎ ｒｉｎｆａｂａｔｅ）、ＩＧＦ－１アナログ（ａｎａｌｏｇ）（ＧＨ遺伝子欠損または

重症先天性ＩＧＦ１欠損による子供成長不全、神経変性疾患、心血管疾患、心不全）、メカセルミン（Ｍｅｃａｓｅｒｍｉｎ）、ＩＧＦ－１アナログ（ＧＨ遺伝子欠損または重症先天性ＩＧＦ１欠損による子供成長不全、神経変性疾患、心血管疾患、心不全）、ペグビソマント（Ｐｅｇｖｉｓｏｍａｎｔ）（先端巨大症（Ａｃｒｏｍｅｇａｌｙ））、プラムリンタイド（Ｐｒａｍｌｉｎｔｉｄｅ）（真性糖尿病、インスリンと組み合わせ）、テリパラチド（Ｔｅｒｉｐａｒａｔｉｄｅ）（ヒトパラチロイドホルモン残基１－３４）（重度の骨粗しょう症、Ｓｅｖｅｒｅ ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ）、ベカプレルミン（Ｂｅｃａｐｌｅｒｍｉｎ）（糖尿病性潰瘍に対する創傷清拭付加（Ｄｅｂｒｉｄｅｍｅｎｔ ａｄｊｕｎｃｔ））、ジボテルミン－アルファ（Ｄｉｂｏｔｅｒｍｉｎ－ａｌｐｈａ）（骨形成タンパク質２（Ｂｏｎｅ ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ ２））（脊椎固定術（Ｓｐｉｎａｌ ｆｕｓｉｏｎ ｓｕｒｇｅｒｙ）、骨創傷回復）、酢酸ヒストレリン（Ｈｉｓｔｒｅｌｉｎ ａｃｅｔａｔｅ）（ゴナドトロピン放出ホルモン（ｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｉｎ ｒｅｌｅａｓｉｎｇ ｈｏｒｍｏｎｅ）；ＧｎＲＨ）（性的早熟（Ｐｒｅｃｏｃｉｏｕｓ ｐｕｂｅｒｔｙ））、オクトレオチド（Ｏｃｔｒｅｏｔｉｄｅ）（先端巨大症、ＶＩＰ分泌アデノーマおよび転移性カルチノイド腫瘍（ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｃａｒｃｉｎｏｉｄ ｔｕｍｏｕｒｓ）の症状緩和）およびパリフェルミン（Ｐａｌｉｆｅｒｍｉｎ）（ケラチノサイト成長因子（ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ；ＫＧＦ））（化学療法を受けている患者内の深刻な口腔粘膜炎、創傷回復）を含んでもよいが、これに限定されない。

【0108】

なお、血液疾患、循環系疾患、呼吸系疾患、がんまたは腫瘍疾患、感染性疾患または免疫不全症と関連したタンパク質（タンパク質治療に使用される特定の疾患）は、アルテプラーゼ（Ａｌｔｅｐｌａｓｅ）（組織プラスミノゲン活性化因子（ｔｉｓｓｕｅ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ）；ｔＰＡ）（肺塞栓（Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｅｍｂｏｌｉｓｍ）、心筋梗塞（ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ）、急性虚血性脳卒中（ａｃｕｔｅ ｉｓｃｈａｅｍｉｃ ｓｔｒｏｋｅ）、中心静脈アクセスデバイスの閉塞（ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ ｏｆ ｃｅｎｔｒａｌ ｖｅｎｏｕｓ ａｃｃｅｓｓ ｄｅｖｉｃｅｓ））、アニストレプラーゼ（Ａｎｉｓｔｒｅｐｌａｓｅ）（血栓溶解）、アンチトロンビンＩＩＩ（ＡＴ－ＩＩＩ）（遺伝的ＡＴ－ＩＩＩ欠損、血栓塞栓症）、ビバリルジン（Ｂｉｖａｌｉｒｕｄｉｎ）（冠動脈形成術およびヘパリン起因性血小板減少症における血液凝固危険の減少）、ダーベポエチン－アルファ（Ｄａｒｂｅｐｏｅｔｉｎ－ａｌｐｈａ）（慢性腎機能障害（ｒｅｎａｌ ｉｎｓｕｆｆｉｃｉｅｎｃｙ）および慢性腎不全（ｒｅｎａｌ ｆａｉｌｕｒｅ）（＋／－透析）を有する患者における貧血の治療）、ドロトレコギン－アルファ（Ｄｒｏｔｒｅｃｏｇｉｎ－ａｌｐｈａ）（活性化タンパク質Ｃ）（死亡率の高い重症敗血症（ｓｅｖｅｒｅ ｓｅｐｓｉｓ））、エリスロポエチン（Ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ）、エポエチン－アルファ（Ｅｐｏｅｔｉｎ－ａｌｐｈａ）、エリスロポエチン（ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ）（慢性疾患の貧血、骨髄異形成（ｍｙｅｌｏｄｙｓｐｌａｓｉａ）、腎不全または化学療法による貧血、手術前の準備）、因子ＩＸ（血友病（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｉａ）Ｂ）、因子ＶＩＩａ（血友病ＡまたはＢおよび因子ＶＩＩＩまたは因子ＩＸに阻害者を有する患者の出血）、因子ＶＩＩＩ（血友病Ａ）、レピルジン（Ｌｅｐｉｒｕｄｉｎ）（ヘパリン起因性低血小板症）、タンパク質Ｃ濃縮（ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ）（静脈血栓症（Ｖｅｎｏｕｓ ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ）、電撃性紫斑病（Ｐｕｒｐｕｒａ ｆｕｌｍｉｎａｎｓ））、レテプラーゼ（Ｒｅｔｅｐｌａｓｅ）（ｔＰＡの削除突然変異）（急性心筋梗塞の調節、左心室機能の増進）、ストレプトキナーゼ（Ｓｔｒｅｐｔｏｋｉｎａｓｅ）（急性進行性貫壁性心筋梗塞（Ａｃｕｔｅ ｅｖｏｌｖｉｎｇ ｔｒａｎｓｍｕｒａｌ ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ）、肺塞栓（ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｅｍｂｏｌｉｓｍ）、深部静脈血栓症（ｄｅｅｐ ｖｅｉｎ ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ）、動脈血栓症または塞栓症、動静脈カニューレの閉塞）、テネクテプラーゼ（Ｔｅｎｅｃｔｅｐｌａｓｅ）（急性心筋梗塞）、ウロキナーゼ（Ｕｒｏｋｉｎａｓｅ）（肺塞栓）、アンギオスタチン（Ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ）（がん）、抗－ＣＤ２２免疫毒素（再発性（ｒｅｌａｐｓｅｄ）ＣＤ３３＋急性骨髄性白血病）、デニロイキン ジフチトクス（Ｄｅｎｉｌｅｕｋｉｎ ｄｉｆｔｉｔｏｘ）（皮膚Ｔ細胞性リンパ腫（Ｃｕｔａｎｅｏｕｓ Ｔ－ｃｅｌｌ ｌｙｍｐｈｏｍａ，ＣＴＣＬ））、イムノシアニン（Ｉｍｍｕｎｏｃｙａｎｉｎ）（膀胱および前立腺がん）、ＭＰＳ（メタロパンチスチムリン、Ｍｅｔａｌｌｏｐａｎｓｔｉｍｕｌｉｎ）（がん）、アフリベルセプト（Ａｆｌｉｂｅｒｃｅｐｔ）（非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、転移性大腸がん（ｍＣＲＣ）、ホルモン抵抗性転移性前立腺がん、湿性黄斑変性）、エンドスタチン（Ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ）（がん、関節リウマチだけでなく、クローン病、糖尿病性網膜症、乾癬、および子宮内膜症のような炎症性疾患）、コラゲナーゼ（慢性皮膚潰瘍の創傷清拭および重症火傷部位、デュピュイトラン拘縮（Ｄｕｐｕｙｔｒｅｎ’ｓ ｃｏｎｔｒａｃｔｕｒｅ）、ペイロニー病（Ｐｅｙｒｏｎｉｅ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ））、ヒトデオキシリボヌクレアーゼＩ、ドルナーゼ（ｄｏｒｎａｓｅ）（嚢胞性線維症（Ｃｙｓｔｉｃ ｆｉｂｒｏｓｉｓ）；予想された４０％より大きいＦＶＣを有する選択された患者における呼吸器感染の減少）、ヒアルロニダーゼ（Ｈｙａｌｕｒｏｎｉｄａｓｅ）（注射された薬物、特に眼科手術および特定の造影剤の吸収および分散を向上させるアジュバントとして使用される）、パパイン（Ｐａｐａｉｎ）（褥瘡、静脈瘤（ｖａｒｉｃｏｓｅ）および糖尿性潰瘍、火傷、術後の創部、毛巣嚢胞の創傷 、皮下組織の炎症（ｃａｒｂｕｎｃｌｅｓ）、および他の創傷のような急性および慢性病変における壊死組織の創傷清拭または苦痛（ｓｌｏｕｇｈ）の液化（ｌｉｑｕｅｆｉｃａｔｉｏｎ））、Ｌ－アスパラギナーゼ（Ｌ－Ａｓｐａｒａｇｉｎａｓｅ）（増殖のための外因性アスパラギンを必要とする、急性リンパ性白血病）、ペグアスパラガーゼ（Ｐｅｇ－ａｓｐａｒａｇｉｎａｓｅ）（増殖のための外因性アスパラギンを必要とする急性リンパ性白血病）、ラスブリカーゼ（Ｒａｓｂｕｒｉｃａｓｅ）（抗がん治療中の白血病、リンパ腫、および固形腫瘍を有する小児患者は腫瘍溶解症候群を起こすことができる）、ヒト慢性ゴナドトロピン（Ｈｕｍａｎ ｃｈｏｒｉｏｎｉｃ ｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｉｎ，ＨＣＧ）（生殖補助（Ａｓｓｉｓｔｅｄ ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ））、ヒト卵胞刺激ホルモン（Ｈｕｍａｎ ｆｏｌｌｉｃｌｅ－ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｈｏｒｍｏｎｅ，ＦＳＨ）（生殖補助）、ルトロピン－アルファ（Ｌｕｔｒｏｐｉｎ－ａｌｐｈａ）（黄体形成ホルモン欠損と共に不妊）、プロラクチン（Ｐｒｏｌａｃｔｉｎ）（低プロラクチン血症（Ｈｙｐｏｐｒｏｌａｃｔｉｎｅｍｉａ）、血清プロラクチン欠損、女性の卵巣機能障害、不安、男性の動脈性勃起不全（ａｒｔｅｒｉｏｇｅｎｉｃ ｅｒｅｃｔｉｌｅ ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ）、早漏（ｐｒｅｍａｔｕｒｅ ｅｊａｃｕｌａｔｉｏｎ）、精子減少症（ｏｌｉｇｏｚｏｏｓｐｅｒｍｉａ）、精子無力症（ａｓｔｈｅｎｏｓｐｅｒｍｉａ）、精嚢（ｓｅｍｉｎａｌ ｖｅｓｉｃｌｅｓ）の機能不全、男性ホルモン減少症（ｈｙｐｏａｎｄｒｏｇｅｎｉｓｍ））、アルファ－１－プロティナーゼ阻害剤（先天性トリプシン欠損症（Ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌ ａｎｔｉｔｒｙｐｓｉｎ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ））、ラクターゼ（Ｌａｃｔａｓｅ）（ラクトース消化不能によるガス、膨張感（ｂｌｏａｔｉｎｇ）、けいれんおよび下痢）、膵酵素（Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｅｎｚｙｍｅｓ）（リパーゼ（ｌｉｐａｓｅ）、アミラーゼ（ａｍｙｌａｓｅ）、プロテアーゼ（ｐｒｏｔｅａｓｅ））（嚢胞性線維症（Ｃｙｓｔｉｃ ｆｉｂｒｏｓｉｓ）、慢性膵炎（ｃｈｒｏｎｉｃ ｐａｎｃｒｅａｔｉｔｉｓ）、膵機能不全（ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｉｎｓｕｆｆｉｃｉｅｎｃｙ）、ポスト－ビルロートＩＩ胃バイパス手術（ｐｏｓｔ－Ｂｉｌｌｒｏｔｈ ＩＩ ｇａｓｔｒｉｃ ｂｙｐａｓｓ ｓｕｒｇｅｒｙ）、膵管閉塞（ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｄｕｃｔ ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｏｎ）、脂肪便（ｓｔｅａｔｏｒｒｈｏｅａ）、消化不良（ｐｏｏｒ ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ）、ガス、膨張感）、アデノシン・デアミナーゼ（Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ ｄｅａｍｉｎａｓｅ）（ペガデマーゼボビン（ｐｅｇａｄｅｍａｓｅ ｂｏｖｉｎｅ）、ＰＥＧ－ＡＤＡ）（アデノシン・デアミナーゼ欠損による重症複合免疫不全疾患）、アバタセプト（Ａｂａｔａｃｅｐｔ）（関節リウマチ（特にＴＮＦアルファ阻害に対して耐性（ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ）のとき））、アレファセプト（Ａｌｅｆａｃｅｐｔ）（尋常性乾癬（Ｐｌａｑｕｅ Ｐｓｏｒｉａｓｉｓ））、アナキンラ（Ａｎａｋｉｎｒａ）（関節リウマチ）、エタネルセプト（Ｅｔａｎｅｒｃｅｐｔ）（関節リウマチ、多関節型若年性関節リウマチ（ｐｏｌｙａｒｔｉｃｕｌａｒ－ｃｏｕｒｓｅ ｊｕｖｅｎｉｌｅ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ）、乾癬性関節炎、強直性脊髄炎（ａｎｋｙｌｏｓｉｎｇ ｓｐｏｎｄｙｌｉｔｉｓ）、尋常性乾癬、強直性脊髄炎）、インターロイキン－１（ＩＬ－１）受容体拮抗剤、アナキンラ（Ａｎａｋｉｎｒａ）（関節リウマチに関連した炎症および軟骨退行）、チムリン（Ｔｈｙｍｕｌｉｎ）（神経変性疾患、リウマチ、神経性無食欲症）、ＴＮＦ－アルファ拮抗薬（関節リウマチ、強直性脊髄炎、クローン病、乾癬、化膿性汗腺炎、難治性喘息のような自己免疫疾患）、エンフュービルタイド（Ｅｎｆｕｖｉｒｔｉｄｅ）（ＨＩＶ－１感染）、およびサイモシン（Ｔｈｙｍｏｓｉｎ）α１（肝炎ＢおよびＣ）を含んでもよいが、これに限定されない。

【0109】

コーディング領域（ＣＲ）を構成するオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）の長さは、制限がなく、オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）の長さによる発現効率は、本開示による核酸分子、これを用いた組換え発現ベクターおよび治療または予防のための核酸ワクチンなどの開発において大きな考慮対象でない。コドン使用頻度(Ｃｏｄｏｎ ｕｓａｇｅ)は、通常、様々な種においてタンパク質／ペプチド発現に影響を及ぼすことができるが、ヒトのコドン使用頻度の偏り(Ｃｏｄｏｎ ｕｓａｇｅ ｂｉａｓ)は、通常、タンパク質／ペプチド発現に大きな影響を及ぼさないと知られているので、ヒトを対象とする核酸ワクチンや遺伝子治療剤を開発するときに考慮対象でない。ただし、開始コドン（ｉｎｉｔｉａｌ ｃｏｄｏｎ）は、Ｋｏｚａｋ配列（例えば、ＧＣＣＡＣＣ）を持っておくべきであり、終止コドン近くのヌクレオチド配列も最適化する必要がある。必要な場合、コーディング領域（ＣＲ）で発現しようとする遺伝子またはその転写体であるｍＲＮＡのコドン配列のうち三番目の部分をＧＣに変えてアミノ酸の変化なしで標的遺伝子のＧＣ％を増加させてｍＲＮＡの安定性を高めることができる。

【0110】

選択的な実施形態において、核酸分子は、オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）形態で連結されるコーディング領域（ＣＲ）の発現効率を増加させることができるヌクレオチド配列をさらに挿入することができる。一例として、核酸分子は、翻訳調節要素、例えば、上流翻訳調節要素（Ｕ－ＴＬＣＥ）に隣接して核酸分子の転写を促進する転写調節要素（Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｃｏｎｔｒｏｌ ｅｌｅｍｅｎｔ，ＴＣＣＥ）を有することができる。例えば、転写調節要素（ＴＣＣＥ）は、上流翻訳調節要素（Ｕ－ＴＬＣＥ）の上流に位置することができる。このような転写調節要素（ＴＣＣＥ）は、特に制限されるものではなく、説明の重複を避けるために、後述する組換え発現ベクターの部分において詳細に説明する。

【0111】

その他にも、核酸分子は、前述した翻訳調節要素（ＴＬＣＥ）、コーディング領域（ＣＲ）および転写調節要素（ＴＣＣＥ）以外にもコーディング領域（ＣＲ）を構成する遺伝子またはその転写体配列からなるオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）の発現を誘導できるヌクレオチド配列を挿入することができる。１つの例示的な実施形態において、上流翻訳調節要素（Ｕ－ＴＬＣＥ）とコーディング領域（ＣＲ）の開始コドンの間にＫｏｚａｋ配列を挿入することができる。

【0112】

また、コーディング領域（ＣＲ）の下流、より具体的には、第２下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ２）の下流に戦死した核酸分子を安定化させながら、コーディング領域（ＣＲ）に存在する遺伝子またはその転写体配列からなるオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）の翻訳効率をさらに向上させることができるポリアデニル化シグナル配列および／またはポリアデノシン配列（ＰＡ）をさらに挿入することができる。

【0113】

例えば、本開示の核酸分子がＲＮＡ形態の転写体配列からなる場合、ポリアデノシン配列（ＰＡ）は、略２５個～略４００個、例えば、３０個～４００個、５０～２５０個、または６０～２５０個のアデノシンからなるヌクレオチド配列でありうる。

【0114】

他の例示的な実施形態において、本開示の核酸分子がＤＮＡ形態のヌクレオチド配列からなる場合、ポリアデニル化シグナル配列（ＰＡ）が第２下流翻訳調節配列（Ｄ－ＴＬＣＥ２）の下流に位置することができる。一例として、ポリアデニル化シグナル配列（ＰＡ）は、ＳＶ４０、ヒト成長ホルモン（ｈｕｍａｎ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ，ｈＧＨ）、ウシ成長ホルモン（Ｂｏｖｉｎｅ Ｇｒｏｗｔｈ ｈｏｒｍｏｎｅ，ＢＧＨ）またはウサギのベータ－グロビン（ｒａｂｂｉｔ ｂｅｔａ－ｇｌｏｂｉｎ，ｒｂＧｌｏｂ）などから誘導したものを使用することができるが、本開示がこれに限定されない。

【0115】

選択的に、ポリアデニル化シグナル配列またはポリアデノシン配列（ＰＡ）は、多数のアデノシン、例えば、２５個～略４００個、３０個～４００個、５０個～２５０個、または６０個～２５０個のアデノシンまたはその転写配列からなる２個のヌクレオチドの間に５’－ＧＡＴＣＡＴＣＡＧＴ－３’のようなシグナル配列が挿入された配列からなることもできる。

【0116】

核酸分子にコーディング領域（ＣＲ）を挿入するために、核酸分子は、１つ以上のクローニングサイト、好ましくは、マルチプルクローニングサイト（Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｓｉｔｅ；ＭＣＳ）を含んでもよい。１つ以上のクローニングサイトは、１つ以上の制限酵素（ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ ｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｓｅ）認識配列（ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｓｉｔｅ）および／または制限酵素によって切断される配列を含んでもよい。制限酵素は、バクテリアや古細菌などで発見される自然な制限酵素はもちろん、人工的に製造された制限酵素（例えば、ジンクフィンガーヌクレアーゼやＴＡＬエフェクターのＤＮＡ結合部位に基づく制限酵素またはＤＮＡベースのＤＮＡｚｎｙｍｅｓなど）を含んでもよい。

【0117】

例えば、自然に発生する制限酵素は、１）ＴｙｐｅI制限酵素（認識部位から離れた部位を切断し、ＡＴＰ、Ｓ－アデノシル－Ｌ－メチオニンおよびマグネシウムイオンを必要とする）、２）ＴｙｐｅII制限酵素（認識部位の内部または認識部位から若干離れた特定の部位を切断し、ほとんどがマグネシウムイオンを必要とする）、３）ＴｙｐｅIII制限酵素（認識部位から若干離れた部位を切断し、ＡＴＰは、必要であるが、ＡＴＰの加水分解は、必要をとしない）、４）ＴｙｐｅIV制限酵素（メチル化、ヒドロキシメチル化またはグルコシル－ヒドロキシメチル化など修飾部位を標的とする）、５）ＴｙｐｅV制限酵素（ＣＲＩＳＰＲｓのｃａｓ９－ｇＲＮＡ ｃｏｍｐｌｅｘ）などに区分され得る。

【0118】

例えば、次のような制限酵素認識部位および／または制限酵素切断部位（制限酵素）を使用することができる。５’－ＡＴＣＧＡＴ－３’（ＡｎｇI）、５’－ＡＧＧＣＣＴ－３’（ＡａｔI）、５’－ＴＧＡＴＣＡ－３’（ＡｂａI）、５’－ＧＧＡＴＣＣ－３’（ＢａｍＨI）、５’－ＧＣＡＧＣ（Ｎ）_８－３’（ＢｂｖI）、５’－（Ｎ）_１０ＣＧＡ（Ｎ）_６ＴＧＣ（Ｎ）_１２－３’（ＢｃｇI）、５’－（Ｎ）_８ＧＡＧ（Ｎ）_５ＣＴＣ（Ｎ）_１３－３’（ＢｐｌI）、５’－ＧＴＣＴＣ（Ｎ）－３’（ＢｓｍＡI；Ａｌｗ２６I）、５’－ＡＣＴＧＧＮ－３’（ＢｓｒI）、５’－ＡＴＣＧＡＴ－３’（ＣｌａI）、５’－ＣＴＣＴＴＣＮ－３’（ＥａｒI）、５’－ＣＴＧＡＡＧ（Ｎ）１６－３’（Ｅｃｏ５７I）、５’－ＧＡＡＴＴＣ－３’（ＥｃｏＲI）、５’－ＣＣＷＧＧ－３’（ＥｃｏＲII；ＷはＡまたはＴ）、５’－ＧＡＴＡＴＣ－３’（ＥｃｏＲV）、５’－ＧＧＡＴＧ（Ｎ）_９－３’（ＦｏｋI）、５’－ＧＧＣＣ－３’（ＨａｅIII）、５’－ＡＡＧＣＴＴ－３’（ＨｉｎｄIII）、５’－ＣＣＧＧ－３’（ＨｐａIII）、５’－ＧＧＴＧＡ（Ｎ）_８－３’（ＨｐｈI）、５’－ＧＧＴＡＣＣ－３’（ＫｐｎI）、５’－ＧＡＴＣ－３’（ＭｂｏI）、５’－ＡＣＧＣＧＴ－３’（ＭｌｕI）、５’－ＧＣＣＧＧＣ－３’（ＮａｅI）、５’－ＧＡＴＡＴＧ－３’（ＮｄｅII）、５’－ＧＣＣＧＧＣ－３’（ＮｇｏＭIV）、５’－ＣＡＴＧ－３’（ＮｌａIII）、５’－ＧＣＧＧＣＣＧＣ－３’（ＮｏｔI）、５’－ＴＴＡＡＴＴＡＡ－３’（ＰａｃI）、５’－ＣＴＧＣＡＧ－３’（ＰｓｔI）、５’－ＧＡＧＣＴＣ－３’（ＳａｃI）、５’－ＣＣＧＣＧＧ－３’（ＳａｃII）、５’－ＧＴＣＧＡＣ－３’（ＳａｌI）、５’－ＧＣＡＴＣ（Ｎ）５－３’（ＳｆａＮI）、５’－ＣＣＣＧＧＧ－３’（ＳｍａI）、５’－ＴＣＧＡ－３’（ＴａｑI）、５’－ＴＣＴＡＧＡ－３’（ＸｂａI）、５’－ＣＴＣＧＡＧ－３’（ＸｈｏI）、５’－ＣＧＡＴＣＧ－３’（ＰｖｕI）およびこれらの組み合わせ。

【0119】

他の例示的な実施形態において、クローニングサイトは、配列識別番号：１９からなることもできる。

【0120】

核酸分子は、ＤＮＡまたはＲＮＡでありうる。例示的な実施形態によれば、本開示による核酸分子は、ＲＮＡ形態を有することができる。コーディング領域（ＣＲ）が前述したタンパク質またはペプチドをコード化するオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）の転写体配列からなるなど核酸分子がＲＮＡ形態からなる場合、ＤＮＡ形態の核酸分子に比べて有利である。

【0121】

第一に、ＲＮＡ形態の核酸分子は、その特性上、ＤＮＡ形態の核酸分子とは異なって、ｍＲＮＡへの転写のために、宿主細胞の核内に進入する必要がない。したがって、突然変異誘発の潜在的な危険が少なく、生体内で速く分解されるので安全である。ＲＮＡ形態の核酸分子は、核内で宿主の染色体内に入り込む可能性がなく、宿主細胞で選別生産するために使用する選別マーカーである抗生剤抵抗遺伝子がＲＮＡ核酸分子の製作に不要であり、ＲＮＡは、ＤＮＡに比べて半減期が短いので、持続性遺伝子組換え（ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｃｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ）を誘導しない。すなわち、一般的な形態の核酸分子は、細胞内に伝達され、短期間だけ活性化して、標的ペプチド／タンパク質を発現し、数日内に酵素学的反応で破壊されるが、最初発現した標的ペプチド／タンパク質に対する特異的な免疫反応は残っている。

【0122】

第二に、ＲＮＡ形態の核酸分子は、相対的にＤＮＡ形態の核酸分子に比べて少ない量を使用しても、所望の生体内免疫反応を誘導することができる。前述したように、ＲＮＡ形態の核酸分子は、ＤＮＡ形態の核酸分子とは異なって、核に入る必要がなく、細胞膜だけを通過すれば良い。したがって、ＲＮＡ形態の核酸分子を使用すると、ＤＮＡ形態の核酸分子より少ない量を使用しても、同じ程度の標的ペプチドを発現することができる。

【0123】

第三に、すべての製作工程を人工的に制御できるので、生物学的汚染に対する危険なしで小規模ＧＭＰ（ｇｏｏｄ ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ ｐｒａｃｔｉｃｅ）生産施設で安全にワクチンを生産することができる。ＲＮＡ形態の核酸分子は、小規模ＧＭＰ実験室レベルの施設だけが必要であり、直接感染源（ウイルスあるいは病原性微生物）を扱わなくても良いので、迅速に様々なワクチンを製造、生産することができる。

【0124】

第四に、ＲＮＡ形態の核酸分子は、裸のＤＮＡ核酸分子に比べてさらに強い免疫反応を誘導することができる。これは、ＲＮＡ核酸分子のステム－ループ（ｓｔｅｍ－ｌｏｏｐ）構造およびＲＮＡ自らの特性により誘導された先天性免疫反応と、免疫した宿主細胞で発現した標的ペプチド／タンパク質によって誘導された後天性免疫反応が相互協力して示すと考えられる。また、ＲＮＡ核酸分子自体が細胞内で複雑な抗原複合体（ｃｏｍｐｌｅｘ ａｎｔｉｇｅｎ）を生産し、これが抗原提示細胞のＭＨＣ（ｍａｊｏｒ Ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ ｃｏｍｐｌｅｘ；主要組織適合性複合体）ｃｌａｓｓIIに接近して理想的なワクチンとして作用することができる。

【0125】

第五に、ＲＮＡ核酸分子は、既存のＤＮＡ核酸分子に比べて生産が容易である。前述したように、ＲＮＡ核酸分子を生産するとき、感染源を直接扱う必要がなく、その代わりに、発現しようとする感染源の中和抗体誘導関連部分（中和エピトープ）の核酸配列だけを人工的に合成し、インビトロ転写（ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ，ＩＶＴ）だけで大量のＲＮＡ核酸分子を生産することができる。最近では、ＩＶＴ反応に関連した試薬、特にＤＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼが改善され、少量のＤＮＡ鋳型（ｔｅｍｐｌａｔｅ）を用いて大量のＲＮＡを１～２週内に迅速に生産することができる。また、免疫反応を誘導しようとする多数の抗原を同時に製作して混合した後、免疫することができ、発現しようとする抗原の遺伝子長さに特別な制約がないので、ＮＡ核酸分子製作の応用性および簡便性が増加することができる。

【0126】

他の例示的な態様において、核酸分子は、３個以上の下流翻訳調節要素を含んでもよい。図２は、本開示の他の例示的な実施形態により目的遺伝子を効率的に発現させることができる核酸分子またはポリヌクレオチドの構成を概略的に示した模式図である。

【0127】

図２に示されたように、核酸分子は、翻訳開始（ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ）活性を有するヌクレオチド配列を含む翻訳調節要素（ＴＬＣＥ）と、翻訳調節要素（ＴＬＣＥ）と作動可能に連結され、目的遺伝子（ＧＯＩ）のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）からなるコーディング領域（ｃｏｄｉｎｇ ｒｅｇｉｏｎ，ＣＲ）と、を含み、選択的に翻訳調節要素（ＴＬＣＥ）の上流に位置する転写調節要素（ＴＣＣＥ）および／またはポリアデニル化シグナル配列（ＰＡ）を含んでもよい。翻訳調節要素（ＴＬＣＥ）は、コーディング領域（ＣＲ）の上流に位置する上流翻訳調節要素（Ｕ－ＴＬＣＥ）と、コーディング領域（ＣＲ）の下流に位置する下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ）と、を含む。本実施形態において、下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ）は、コーディング領域（ＣＲ）と、ポリアデニル化シグナル配列（ＰＡ）の間に順次に位置する第１下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ１）、第２下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ２）および第３下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ３）を含む。下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ）が第３下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ３）を含む点を除いて、図１を参照して説明した第１実施形態の核酸分子と同一であってもよい。

【0128】

一例として、第１下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ１）、第２下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ２）および第３下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ３）は、それぞれ独立して、ヒトトロポニンＴ１、スロー骨格型（ＴＮＮＴ１）、ヒトアルブミン、ヒトフェリチン軽鎖（ＦＴＬ）、ヒトＣ－Ｃモチーフケモカインリガンド（ＣＣＬ１９）、ヒト血管関連の移動性細胞タンパク質（ＡＡＭＰ）、ヒトリボソームタンパク質Ｓ２７（ＲＰＳ２７）およびヒトディフェンシンアルファ５（ＤＥＦＡ５）から成る群から選択されるいずれか１つに由来する翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。

【0129】

例えば、第１下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ１）、第２下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ２）および第３下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ３）は、それぞれ独立して、配列識別番号：８、配列識別番号：９、配列識別番号：１０、配列識別番号：１１、配列識別番号：１２、配列識別番号：１３および配列識別番号：１４から成る群から選択される翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。

【0130】

例示的な実施形態において、第１下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ１）は、ヒトＴＮＮＴ１由来の翻訳調節要素またはその転写体配列を含み、第２下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ２）は、ヒトＤＥＦＡ５由来の翻訳調節要素またはその転写体配列を含み、第３下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ３）は、ヒトＦＴＬまたはヒトＲＰＳ２７由来の翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。

【0131】

他の例示的な実施形態において、第１下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ１）は、ヒトアルブミン由来の翻訳調節要素またはその転写体配列を含み、第２下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ２）は、ヒトＤＥＦＡ５由来の翻訳調節要素またはその転写体配列を含み、第３下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ３）は、ヒトＲＰＳ２７由来の翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。

【0132】

さらに他の例示的な実施形態において、第１下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ１）は、ヒトＲＰＳ２７由来の翻訳調節要素またはその転写体配列を含み、第２下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ２）は、ヒトＦＴＬ由来の翻訳調節要素またはその転写体配列を含み、第３下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ３）は、ヒトＣＣＬ１９、ヒトＲＰＳ２７およびヒトＤＥＦＡ５から成る群から選択されるいずれか１つに由来する翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。

【0133】

さらに他の例示的な実施形態において、第１下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ１）は、ヒトＤＥＦＡ５由来の転写翻訳調節要素またはその転写体配列を含み、第２下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ２）は、ヒトＴＮＮＴ１由来の翻訳調節要素またはその転写体配列を含み、第３下流翻訳調節要素（Ｄ－ＴＬＣＥ３）は、前記ヒトＦＴＬ由来の翻訳調節要素またはその転写体配列を含んでもよい。

【0134】

組換え発現ベクター、発現コンストラクト
図１および図２にそれぞれ示された核酸分子は、組換え発現ベクター内に挿入することができる。組換え発現ベクターは、翻訳開始活性を有する翻訳調節要素（ＴＬＣＥ；例えばＵ－ＴＬＣＥおよびＤ－ＴＬＣＥ）と、コーディング領域（ＣＲ）を含み、転写調節要素（ＴＣＣＥ）およびまたはポリアデニル化シグナル配列（ＰＡ）を含んでもよい。すなわち、組換え発現ベクターは、図１および図２を参照して説明した核酸分子を含んでもよいが、この核酸分子は、他の核酸と結合して融合タンパク質または融合ペプチドをコード化することもできる。

【0135】

例えば、ベクターには、ウイルスベクター（ｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒｓ）、ＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター（ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｖｅｃｔｏｒｓ）、プラスミド（ｐｌａｓｍｉｄ）、コスミド（ｃｏｓｍｉｄ）またはファージベクター（ｐｈａｇｅ ｖｅｃｔｏｒｓ）、ＣＣＡ（ｃａｔｉｏｎｉｃ ｃｏｎｄｅｎｓｉｎｇ ａｇｅｎｔｓ）と連結されたＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、リポソーム（ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ）で包まれたＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、プロデューサー細胞（ｐｒｏｄｕｃｅｒ ｃｅｌｌｓ）のような特定の真核細胞（ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ ｃｅｌｌｓ）などが含まれる。

【0136】

例示的に、本開示の核酸分子は、哺乳動物細胞内に入って発現するように構成されてもよい。このような構成は、感染性疾患の治療および／または予防目的に使用するのに特に有用である。核酸分子を宿主細胞内で発現させるのに多くの方法があり、適切ないずれの方法も使用可能である。例えば、本開示による核酸分子は、アデノウイルス（ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ）、アデノ随伴ウイルス（ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ）、レトロウイルス（ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓ）、ワクシニア（ｖａｃｃｉｎｉａ）または他のポックスウイルス（ｅ．ｑ．，ａｖｉａｎ ｐｏｘ ｖｉｒｕｓ）などのウイルス ベクターに挿入が可能である。１つの例示的な実施形態によれば、前述した核酸分子を適切なベクターに挿入した後にインビトロ転写（ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ，ＩＶＴ）を通じてＲＮＡ形態の核酸分子に修飾することができる。

【0137】

核酸分子、例えば、ＤＮＡをこのようなベクターに挿入させる技術に関しては、すでに良く知られている。レトロウイルスベクターには、形質導入された細胞の確認または選択を容易にする選択マーカー（ｓｅｌｅｃｔａｂｌｅ ｍａｒｋｅｒ）に対する遺伝子および／または特定の標的細胞に対する受容体の役割をするリガンド（ｌｉｇａｎｄ）をコード化する遺伝子のような標的部位（ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｍｏｉｅｔｙ）を付加的に挿入させることができる。標的（ｔａｒｇｅｔｉｎｇ）は、また、抗体を用いた公知の方法によっても行われ得る。

【0138】

入手可能であり、本開示の属する技術分野において一般に知られた多数のベクターを本開示の目的に使用することができる。適切なベクターの選択は、主にベクターに挿入される核酸分子の大きさおよびベクターで形質転換される特定の宿主細胞によって変わる。それぞれのベクターは、その機能（異種ポリヌクレオチドの増幅または発現、または二つとも）およびベクターが存在する特定の宿主細胞との相溶性によって様々な成分を含有する。ベクター成分は、一般的に複製起点（特にベクターが原核細胞に挿入される場合）、選別マーカー遺伝子、プロモーター、リボソーム結合部位（ＲＢＳ）、シグナル配列、異種核酸挿入物および／または転写終止配列を含むが、これに制限されない。

【0139】

例えば、本開示による発現ベクターは、コーディング領域（ＣＲ）内にコード化されたタンパク質および／またはペプチド（一例として、レポータータンパク質／ペプチド、抗原、治療用タンパク質／ペプチド）の発現に影響を及ぼすことができる発現調節要素、例えば、開始コドン、終止コドン、ポリアデニル化シグナル配列、エンハンサー、膜標的化または分泌のためのシグナル配列などを含んでもよい。ポリアデニル化シグナル配列（ＰＡ）は、転写体の安定性を増加させたり細胞質輸送を容易にする。エンハンサー配列は、プロモーターにおいて様々な部位に位置し、エンハンサー配列がないときのプロモーターによる転写活性と比較して、転写活性を増加させる核酸塩基配列である。

【0140】

宿主がエスケリキア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）属菌である場合には、シグナル配列は、ＰｈｏＡシグナル配列、ＯｍｐＡシグナル配列などが、宿主がバシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属菌である場合には、α－アミラーゼシグナル配列、サブチリシンシグナル配列などを用いることができる。宿主が酵母である場合には、シグナル配列は、ＭＦ－αシグナル配列、ＳＵＣ２シグナル配列などが、宿主が動物細胞である場合には、インスリンシグナル配列、ａ－インターフェロンシグナル配列、抗体分子シグナル配列などを用いることができるが、本開示がこれに制限されない。

【0141】

ベクターの一つの類型は、さらなるＤＮＡ切片がその内部にライゲーション（ｌｉｇａｔｉｏｎ）され得る環状二本鎖ＤＮＡループを指す「プラスミド」である。他の類型のベクターは、ファージベクターである。さらに他の類型のベクターは、さらなるＤＮＡ切片がウイルスゲノム内にライゲーションされ得るウイルスベクターである。或るベクター（例えば、バクテリア複製起点を有するバクテリアベクターおよびエピゾーム哺乳動物ベクター）は、それが導入された宿主細胞内で自律複製が可能である。他のベクター（例えば、非エピゾーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞内に導入時に宿主細胞のゲノム内に統合されてもよく、これによって、宿主のゲノムと共に複製される。また、或るベクターは、ベクターが作動可能に連結されたオープンリーディングフレーム形態の遺伝子の発現を指示することができる。このようなベクターが本明細書において「組換え発現ベクター」（または、簡単に「組換えベクター」）として称される。一般的に、組換えＤＮＡ技術に有用な発現ベクターは、たびたびプラスミドの形態で存在する。

【0142】

本開示の具体的な実施形態において、核酸分子は、ウイルス発現システム（ワクシニアまたは他のポックスウイルス、レトロウイルスまたはアデノウイルス）を用いて宿主細胞に挿入することができる。例示的に、ウイルスベクターには、ＨＩＶ、ＳＩＶ、マウスレトロウイルス（ｍｕｒｉｎｅ ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ）、テナガザル白血病ウイルス（ｇｉｂｂｏｎ ａｐｅ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｖｉｒｕｓ）、ＡＡＶｓ（ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓｅｓ）およびアデノウイルス（ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓｅｓ）などから誘導されたレトロウイルスベクターを含んでもよいが、これに限定されない（Ｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１０：４２３９；Ｊ．Ｋｏｌｂｅｒｇ １９９２，ＮＩＨ Ｒｅｓ．４：４３；Ｃｏｒｎｅｔｔａ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．２：２１５）。マウス白血病ウイルス（ｍｕｒｉｎｅ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｖｉｒｕｓ，ＭｕＬＶ）、テナガザル白血病ウイルス（ｇｉｂｂｏｎ ａｐｅ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｖｉｒｕｓ，ＧａＬＶ）、エコトロピック・レトロウイルス（ｅｃｏｔｒｏｐｉｃ ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ）、ＳＩＶ（ｓｉｍｉａｎ ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｖｉｒｕｓ）、ＨＩＶ（ｈｕｍａｎ ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｖｉｒｕｓ）などから誘導されたレトロウイルスベクターが広く使用されている（Ｂｕｃｈｓｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ，６６（５）：２７３１－２７３９；Ｊｏｈａｎｎ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６６（５）：１６３５－１６４０；Ｓｏｍｍｅｒｆｅｌｔ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｖｉｒｏｌ．１７６：５８－５９；Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６３：２３７４－２３７８；Ｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６５：２２２０－２２２４；Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ ａｎｄ Ｆａｕｃｉ １９９３ ｉｎ Ｆｕｎｄｅｒｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｗ．Ｅ．Ｐａｕｌ（ｅｄ．）Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｌｔｄ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ ｔｈｅｒｅｉｎ；Ｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０：４２３９；Ｒ．Ｋｏｌｂｅｒｇ １９９２，Ｊ．ＮＩＨ Ｒｅｓ．４：４３；Ｃｏｒｎｅｔｔａ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．２：２１５）。

【0143】

本開示によるベクターシステムは、本開示の属する技術分野において一般的に知られた様々な方法を通じて構築することができ、これに対する具体的な方法は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ（２００１）に開示されており、この文献は、本明細書に参照として併合される。

【0144】

例えば、本開示のベクターは、典型的にクローニング（ｃｌｏｎｉｎｇ）のためのベクターまたは発現のためのベクターとして構築することができる。また、本開示のベクターは、原核細胞または真核細胞を宿主として構築することができる。例えば、本開示に用いられ得るベクターは、本開示の属する技術分野においてたびたび使用されるプラスミド（例：ｐＳＣ１０１、ＣｏｌＥ１、ｐＢＲ３２２、ｐＵＣ８／９、ｐＨＣ７９、ｐＵＣ１９、ｐＥＴなど）、ファージ（例：λｇｔ４λＢ、λ－Ｃｈａｒｏｎ、λΔｚ１、λＧＥＭ．ＴＭ．－１１およびＭ１３など）またはウイルス（例：ＳＶ４０など）を操作して製作することができる。

【0145】

構成的または誘導性プロモーター（例えば、転写調節要素）は、通常の技術者によって確認できる特定の状況の必要に応じて本開示に使用することができる。様々な可能な宿主細胞によって認識される多数のプロモーターが広く公知されている。選択されたプロモーターは、制限酵素の消化を通じて供給源核酸分子からプロモーターを除去し、単離したプロモーター配列を選択ベクター内に挿入することによって、ペプチドおよび／またはタンパク質をコード化する遺伝子または転写体のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）からなるコーディング領域（ＣＲ）を有する核酸分子に作動可能に連結することができる。天然プロモーター配列および多数の異種プロモーターを二つとも使用してコーディング領域（ＣＲ）を構成する遺伝子または転写体の増幅および／または発現を指示することができる。しかしながら、異種プロモーターは、一般的に天然プロモーターと比較して発現した目的遺伝子のより大きい転写およびより高い収率を得ることができるので好ましい。

【0146】

例えば、本開示のベクターが発現ベクターであり、原核細胞を宿主とする場合には、転写を進行させることができる強力なプロモーター（例えば、ｔａｃプロモーター、ｌａｃプロモーター、ｌａｃＵＶ５プロモーター、ｌｐｐプロモーター、ｐＬλプロモーター、ｐＲλプロモーター、ｒａｃ５プロモーター、ａｍｐプロモーター、ｒｅｃＡプロモーター、ＳＰ６プロモーター、ｔｒｐプロモーターおよびＴ７プロモーターなど）のような転写調節要素（ＴＣＣＥ）、翻訳を開始するための翻訳調節配列（ＴＬＣＥ）、および転写／翻訳終止配列を含むことが一般的である。宿主細胞としてＥ．ｃｏｌｉが用いられる場合、Ｅ．ｃｏｌｉトリプトファン生合成経路のプロモーターおよびオペレーター部位（Ｙａｎｏｆｓｋｙ，Ｃ．，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．，１５８：１０１８－１０２４（１９８４））、そしてファージλの左向プロモーター（ｐＬλプロモーター，Ｈｅｒｓｋｏｗｉｔｚ，Ｉ．ａｎｄ Ｈａｇｅｎ，Ｄ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｇｅｎｅｔ．，１４：３９９－４４５（１９８０））を調節部位として用いることができる。

【0147】

なお、本開示のベクターが発現ベクターであり、真核細胞を宿主とする場合には、哺乳動物細胞のゲノムから誘導されたプロモーター（例：メタロチオニンプロモーター）または哺乳動物ウイルスから誘導されたプロモーター（例：アデノウイルス後期プロモーター、ワクシニアウイルス７．５Ｋプロモーター、ＳＶ４０プロモーター、サイトメガロウイルスプロモーターおよびＨＳＶのｔｋプロモーター）またはバクテリオファージから誘導したプロモーター（例：Ｔ７プロモーター、Ｔ３プロモーター、ＳＭ６プロモーター）を用いることができ、転写終止配列としてポリアデニル化シグナル配列（ＰＡ）を一般的に有する。

【0148】

また、本開示の組換えベクターが複製可能な発現ベクターである場合、複製が開始される特定の核酸配列である複製起点（ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｒｉｇｉｎ）を含んでもよい。また、組換えベクターは、選別マーカー（ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｍａｒｋｅｒ）を含んでもよい。選別マーカーは、ベクターで形質転換された細胞を選別するためのものであり、薬物耐性、栄養要求性、細胞毒性剤に対する耐性または表面タンパク質の発現のような選択可能な表現型を付与するマーカーを使用することができる。本開示のベクターは、選別標識として、当該技術分野において通常用いられる抗生剤耐性遺伝子を含み、例えば、アンピシリン、ゲンタマイシン、カルベニシリン、クロラムフェニコール、ストレプトマイシン、カナマイシン、ゲネチシン、ネオマイシンおよびテトラサイクリンに対する耐性遺伝子がある。選別剤（ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ａｇｅｎｔ）で処理された環境で選別マーカーを発現する細胞だけが生存するので、形質転換された細胞を選別することができる。選別マーカーの代表的な例として、栄養要求性マーカー（ａｕｘｏｔｒｏｐｈｉｃ ｍａｒｋｅｒ）としてのｕｒａ４、ｌｅｕ１、ｈｉｓ３などが挙げられるが、前記例によって本開示において使用できる選別マーカーの種類が制限されるものではない。

【0149】

発現ベクターにサブクローンされた配列を増幅させる様々なインビトロ増幅技法（ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ）が知られている。このような技法には、ＰＣＲ（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ）、ＬＣＲ（ｌｉｇａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ）、Ｑβ－レプリカーゼ増幅（ｒｅｐｌｉｃａｓｅ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ）および他のＲＮＡポリメラーゼを用いた技法がある（Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ－Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（２ｎｄ Ｅｄ）１－３；Ｕ．Ｓ．Ｐａｔｅｎｔ Ｎｏ．４，６８３，２０２；ＰＣＲ ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ Ａ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｉｎｎｉｓ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ Ｉｎｃ．Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ １９９０．Ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ ｃｌｏｎｉｎｇ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄｓ ａｒｅ ｄｅｓｃｒｉｂｅｄ ｉｎ Ｕ．Ｓ．Ｐａｔｅｎｔ Ｎｏ．５，４２６，０３９）。

【0150】

本開示のベクターは、それから発現する組換えタンパク質またはペプチドの精製を容易にするために、他の配列と融合することもできる。融合する配列は、例えば、グルタチオンＳ－トランスフェラーゼ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，ＵＳＡ）、マルトース結合タンパク質（ＮＥＢ，ＵＳＡ）、ＦＬＡＧ（ＩＢＩ，ＵＳＡ）および６ｘ Ｈｉｓ（ｈｅｘａｈｉｓｔｉｄｉｎｅ；Ｑｕｉａｇｅｎ，ＵＳＡ）などがあり、最も好ましくは、６ｘ Ｈｉｓである。前記精製のためのさらなる配列のため、宿主で発現したタンパク質は、親和性クロマトグラフィーを通じて迅速かつ容易に精製される。必要に応じて、これらの組換えタンパク質の細胞外分泌を促進することができるように、Ｆｃ切片をコード化する配列が融合することもできる。

【0151】

本開示の例示的な実施形態によれば、前記融合配列が含まれているベクターによって発現した融合タンパク質は、親和性クロマトグラフィーによって精製される。例えば、グルタチオン－Ｓ－トランスフェラーゼが融合した場合には、この酵素の基質であるグルタチオンを用いることができ、６ｘ Ｈｉｓが用いられた場合には、Ｎｉ－ＮＴＡ Ｈｉｓ－結合レジンカラム（Ｎｏｖａｇｅｎ，ＵＳＡ）を用いて所望の組換えタンパク質を迅速かつ容易に得ることができる。

【0152】

前述したベクターを安定的かつ連続的にクローニングおよび発現させることができる宿主細胞は、本開示の属する技術分野においてよく知られているいずれの宿主細胞も用いることができ、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ ＪＭ１０９、Ｅ．ｃｏｌｉ ＢＬ２１（ＤＥ３）、Ｅ．ｃｏｌｉ ＲＲ１、Ｅ．ｃｏｌｉ ＬＥ３９２、Ｅ．ｃｏｌｉ Ｂ、Ｅ．ｃｏｌｉ Ｘ １７７６、Ｅ．ｃｏｌｉ Ｗ３１１０、バチルス・サブティリス、バチルス・チューリンゲンシスのようなバシラス属菌株、そしてサルモネラ・チフィムリウム、セラチア・マルセッセンスおよび様々なシュードモナス種のような腸内菌と菌株などがある。また、本開示のベクターを真核細胞に形質転換させる場合には、宿主細胞として、イースト（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、昆虫細胞（例えば、ＳＦ９細胞）およびヒト細胞（例えば、ＣＨＯ細胞株（Ｃｈｉｎｅｓｅ ｈａｍｓｔｅｒ ｏｖａｒｙ）、Ｗ１３８、ＢＨＫ、ＣＯＳ－７、２９３、ＨｅｐＧ２、３Ｔ３、ＲＩＮおよびＭＤＣＫ細胞株）などが用られ得る。

【0153】

本開示のベクターは、細胞を細胞内外（ｉｎ ｖｉｖｏ、ｅｘ ｖｉｖｏ）またはインビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）で遺伝的に修飾させるのに用られ得る。細胞を遺伝的に修飾させる方法としては、細胞をウイルスベクターで感染または形質導入させる方法、リン酸カルシウム沈殿（ｃａｌｃｉｕｍ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ）、受容細胞（ｒｅｃｉｐｉｅｎｔ ｃｅｌｌｓ）をＤＮＡを含む細菌プロトプラスト（ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｐｒｏｔｏｐｌａｓｔｓ）と融合させる方法、受容体細胞にＤＮＡを含んでいるリポソーム（ｌｉｐｏｓｏｍｅ）または微小球（ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ）を処理する方法、エンドサイトーシス（ＤＥＡＥ ｄｅｘｔｒａｎ、ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｅｎｄｏｃｙｔｏｓｉｓ）、エレクトロポレーション（ｅｌｅｃｔｒｏｐｏｒａｔｉｏｎ）、マイクロインジェクション（ｍｉｃｒｏ－ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）などを含む様々な方法が知られている。

【0154】

例えば、宿主細胞が原核細胞である場合、ＣａＣｌ_２方法（Ｃｏｈｅｎ，Ｓ．Ｎ．ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｃ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９：２１１０－２１１４，１９７３）、ハナハン方法（Ｈａｎａｈａｎ，Ｄ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１６６：５５７－５８０，１９８３）および／または電気穿孔方法（Ｄｏｗｅｒ，Ｗ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１６：６１２７－６１４５，１９８８）などによって実施することができる。また、宿主細胞が真核細胞である場合には、微細注入法（Ｃａｐｅｃｃｈｉ，Ｍ．Ｒ．，Ｃｅｌｌ，２２：４７９，１９８０））、リン酸カルシウム沈殿法（Ｇｒａｈａｍ，Ｆ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，５２：４５６，１１９７３）、電気穿孔法（Ｎｅｕｍａｎｎ，Ｅ．ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．，１：８４１，１９８２）、リポソーム媒介形質転換法（Ｗｏｎｇ，Ｔ．Ｋ．ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ，１０：８７，１９８０）、ＤＥＡＥ－デキストラン処理法（Ｇｏｐａｌ，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．，５：１１８８－１１９０，１９８５）、および／または遺伝子ボンバードメント（Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、８７：９５６８－９５７２，１９９０）などによってベクターを宿主細胞内に注入することができる。宿主細胞内に注入されたベクターは、宿主細胞内で発現することができ、このような場合には、多量の組換えタンパク質または組換えペプチドを得ることになる。例えば、前記発現ベクターがｌａｃプロモーターを含む場合には、宿主細胞にＩＰＴＧを処理して遺伝子発現を誘導することができる。

【0155】

前述した核酸分子および／または遺伝子伝達体として前述した核酸分子が挿入された発現システムである発現コンストラクト（ｃｏｎｓｔｒｕｃｔ）は、或る物質の存在の有無を検出するための検出システム、免疫反応を誘導するためのワクチンおよび／または疾患の治療のための治療剤として活用することができる。

【0156】

一例として、核酸分子または核酸分子を含む発現コンストラクトの薬学的有効量を含むワクチンまたは治療剤のような薬学組成物は、薬学的に許容される担体（ｃａｒｒｉｅｒ）、希釈剤および／または賦形剤を含んでもよい。本明細書において「薬学的有効量」とは、本開示による核酸分子の効能または活性を達成するのに十分な量を意味する。

【0157】

また、このような薬学組成物は、前述した核酸分子または発現コンストラクトを安定化させることができるカチオン性ポリマー、カチオン性ペプチドまたはカチオン性ポリペプチドのような安定化剤；免疫反応を強化させることができる少なくとも１つの免疫増強剤；持続放出製剤；および／または有効成分である核酸分子を保護し、生体注入活性を向上させることができる脂質ナノ粒子（ｌｉｐｉｄ ｎａｎｏ ｐａｒｔｉｃｌｅ，ＬＮＰ）を含んでもよい。

【0158】

本開示の核酸分子または発現コンストラクトは、任意の適切な手段、例えば、経口、局所（頬側および舌下を含む）、直腸、膣、経皮、非経口、皮下、腹腔内、肺内、皮内、硬膜内および硬膜外および鼻腔内、および所望の場合に、局部治療、病変内投与のための手段によって投与することができる。非経口注入は、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内または皮下投与を含む。

【0159】

本開示の核酸分子または発現コンストラクトは、任意の便利な投与形態、例えば、錠剤、粉末、カプセル、溶液、分散液、懸濁液、シロップ、噴霧剤、坐剤、ゲル、エマルジョン、パッチなどで投与することができる。このような組成物は、製薬製剤に通常の成分、例えば、希釈剤、担体、ｐＨ調整剤、甘味剤、バルク剤およびさらなる活性剤を含有することができる。

【0160】

以下、例示的な実施例に基づいて本開示を説明するが、本開示が下記実施例に記載された技術思想に限定されない。

【0161】

比較例１：ウミシイタケルシフェラーゼ（Ｒ／Ｌ）コード化配列が挿入された核酸分子の製作
インフルエンザウイルスのヘマグルチニン（ＨＡ）コード化配列が挿入された核酸分子を製作した。鋳型ＤＮＡ配列は、次のように設計した。

【0162】

５’－ＫｐｎI認識配列（ＧＧＴＡＣＣ）－Ｔ７プロモーター（配列識別番号：１６）－ヒトトロポニンＴ１（ＴＮＮＴ１）由来の上流翻訳調節要素（配列識別番号：１）－ＰａｃI認識配列（ＴＴＡＡＴＴＡＡ）－Ｋｏｚａｋ配列（ＧＣＣＡＣＣ）－ウミシイタケルシフェラーゼコード化配列（Ｒ／Ｌ、配列識別番号：１５）－ＣｌａI認識配列（ＡＴＣＧＡＴ）－ヒトトロポニンＴ１（ヒトＴＮＮＴ１）由来の下流翻訳調節要素（配列識別番号：８）－ＥｃｏＲI認識配列（ＧＡＡＴＣＣ）－ポリアデニル化シグナル（配列識別番号：１７）－制限酵素認識配列（配列識別番号：１９）。

【0163】

鋳型ＤＮＡをｐＧＨベクター（配列識別番号：１８）の下流に挿入、クローニング（ｃｌｏｎｉｎｇ）し、制限酵素で線型化させ、インビトロ転写（ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ，ＩＶＴ）を通じてＲＮＡプラットフォーム形態の核酸分子（以下、「ｐＨＪ５Ｌ」という）を製作した。

【0164】

実施例１：ウミシイタケルシフェラーゼ（Ｒ／Ｌ）コード化配列が挿入された核酸分子の製作
ウミシイタケルシフェラーゼをコード化するコーディング領域の下流に単一ＴＮＮＴ１由来の翻訳調節要素の代わりに、２個の下流翻訳調節要素を挿入したことを除いて、比較例の手続きを繰り返した。２個の下流翻訳調節要素は、それぞれ独立して、配列識別番号：８（ヒトＴＮＮＴ１由来）、配列識別番号：９（ヒトアルブミン由来）、配列識別番号：１０（ヒトＦＴＬ由来）、配列識別番号：１１（ヒトＣＣＬ１９由来）、配列識別番号：１２（ヒトＡＡＭＰ由来）、配列識別番号：１３（ヒトＲＰＳ２７由来）および配列識別番号：１４（ヒトＤＥＦＡ５由来）から成る群から選択された。以下、配列識別番号：８の下流翻訳調節要素を「Ａ」、配列識別番号：９の下流翻訳調節要素を「Ｂ」、配列識別番号：１０の下流翻訳調節要素を「Ｃ」、配列識別番号：１１の下流翻訳調節要素を「Ｄ」、配列識別番号：１２の下流翻訳調節要素を「Ｅ」、配列識別番号：１３の下流翻訳調節要素を「Ｆ」、配列識別番号：１４の下流翻訳調節要素を「Ｇ」とそれぞれ略称して表示する。

【0165】

実験例１：生体外発現
マウス筋肉細胞株であるＮｏｒ１０、ヒト由来増殖細胞株ＨｅＬａおよびヒト胚芽腎臓細胞株である２９３Ａ細胞株をそれぞれ４８ウェルプレートに８ｘ１０^４ ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの濃度で接種させた。その後、プレートを３７℃インキュベーターに入れ、２４時間細胞が付着し、成長できるようにした。比較例および実施例で製造された各ｍＲＮＡは、５００ｎｇ／ｗｅｌｌの濃度で形質転換させた。リポフェクション^ＴＭ２０００は、それぞれのｍＲＮＡ １μｇ当たり１μｌを使用してＯＰＴＩ－ＭＥＭ培地で十分に混合され得るように３０分以上処理した。ｍＲＮＡとリポフェクション^ＴＭ２０００が混合されると、細胞が付着した４８ウェルプレートを取り出して上清を除去し、ＰＢＳで洗浄した後、さらに除去した。その上に培地を１００μｌ入れ、ｍＲＮＡとリポフェクション^ＴＭ２０００の混合物を１００μｌ入れた。

【0166】

この際、陰性対照群は、２００μｌの培地のみを入れた。プレートをさらに３７℃インキュベーターに入れ、６時間と２４時間となる時間に取り出して、発現を確認した。６時間と２４時間が経過したとき、プレートを取り出して上清を全部除去し、ＰＢＳで１回洗浄し、その上にウミシイタケルシフェラーゼアッセイシステムキット（Ｐｒｏｍｅｇａ）にあるウミシイタケル溶解バッファー（ｒｅｎｉｌｌａ ｌｙｓｉｓ ｂｕｆｆｅｒ）を８０μｌずつ入れて細胞を十分に破壊した後、キットの説明のとおり、ウミシイタケルシフェラーゼ（ｒｅｎｉｌｌａ ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ）の発現程度を分光光度計で発光を測定した。比較例で製作されたｐＨＪ５Ｌ核酸分子を適用したＮｏｒ１０細胞株で６時間経過後のウミシイタケルシフェラーゼの発現量は、２Ｘ１０^７、２４時間経過後のウミシイタケルシフェラーゼの発現量は、２Ｘ１０^６であった。

【0167】

比較例で製作されたｐＨＪ５Ｌ核酸分子を適用したＨｅＬａ細胞株で６時間経過後のウミシイタケルシフェラーゼの発現量は、７Ｘ１０^７、２４時間経過後のウミシイタケルシフェラーゼの発現量は、５．５Ｘ１０^６であった。比較例で製作されたｐＨＪ５Ｌ核酸分子を適用した２９３Ａ細胞株で６時間経過後のウミシイタケルシフェラーゼの発現量は、４．３Ｘ１０^７、２４時間経過後のウミシイタケルシフェラーゼの発現量は、２．２Ｘ１０^６であった。

【0168】

基本鋳型となる核酸発現プラットフォームは、比較例で製造されたｐＨＪ５Ｌであり、このプラットフォームでウミシイタケルシフェラーゼの発現量を１に設定し、実施例１でそれぞれ製作されたＲＮＡ発現プラットフォームでウミシイタケルシフェラーゼの発現量をｐＨＪ５Ｌでの発現量と比較した。測定結果を図３～図８に示す。図３～図８に示されたように、２個の下流翻訳調節要素がコーディング領域と３’末端の間に挿入された実施例で製造された核酸分子は、Ｎｏｒ１０細胞株、ＨｅＬａ細胞株、２９３Ａ細胞株において全部コーディング領域に挿入されたウミシイタケルシフェラーゼの発現を効率的に向上させた。

【0169】

実験例２：生体内発現
比較例および実施例１でそれぞれ製作されたｍＲＮＡをＬＮＰ（モデルナのワクチンで使用されたのと同一）と剤形化（ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）して、生体注入用組成物を製造した。マウスは、呼吸麻酔を通じて麻酔した後、耳を固定させた。それぞれのマウスの耳に比較例および実施例で製造されたｍＲＮＡが剤形化された組成物を５μｇ／２０μｌの濃度で注射した。注射後６時間と２４時間にそれぞれマウスを犠牲にして耳を切って３００μｌのウミシイタケル溶解バッファーに入れ、はさみで細かく切断した。切断したマウスの耳は、ホモジナイザーを用いてさらに細かく破砕して上清を白色９６ウェルプレートに２０μｌずつ入れた。その後、ウミシイタケルシフェラーゼアッセイキットにあるウミシイタケル基質を用いて分光光度計で発光を測定した。基本鋳型となる核酸発現プラットフォームは、比較例で製造されたｐＨＪ５Ｌであり、このプラットフォームでウミシイタケルシフェラーゼの発現量を１に設定し、実施例でそれぞれ製作されたＲＮＡ発現プラットフォームでウミシイタケルシフェラーゼの発現量をｐＨＪ５Ｌでの発現量と比較した。測定結果を図９と図１０に示す。図９および図１０に示されたように、コーディング領域と３’末端の間に２個の下流翻訳調節要素が挿入された核酸分子からウミシイタケルシフェラーゼの発現量が増加した。

【0170】

実施例２：ウミシイタケルシフェラーゼ（Ｒ／Ｌ）コード化配列が挿入された核酸分子の製作
ウミシイタケルシフェラーゼをコード化するコーディング領域の下流に２個の下流翻訳調節要素を挿入したことに代わりに、３個の下流翻訳調節要素を挿入したことを除いて、実施例１の手続きを繰り返した。３個の下流翻訳調節要素は、それぞれ独立して、実施例１で使用したのと同じ下流翻訳調節要素を使用した。

【0171】

実験例３：生体外発現
実施例２で製作した核酸分子を実験例１と同じ方法でヒト胚腎臓細胞株である２９３Ａ細胞株に形質転換させ、ウミシイタケルシフェラーゼの発現程度を分光光度計で発光を測定した。基本鋳型となる核酸発現プラットフォームは、比較例で製造されたｐＨＪ５Ｌであり、このプラットフォームでウミシイタケルシフェラーゼの発現量を１に設定し、実施例２でそれぞれ製作されたＲＮＡ発現プラットフォームでウミシイタケルシフェラーゼの発現量をｐＨＪ５Ｌでの発現量と比較した。測定結果を図１１および図１２に示す。図１１および図１２に示されたように、３個の下流翻訳調節要素がコーディング領域と３’末端の間に挿入された実施例で製造された核酸分子は、２９３Ａ細胞株において全部コーディング領域に挿入されたウミシイタケルシフェラーゼの発現を効率的に向上させた。

【0172】

前記では、本開示の例示的な実施形態および実施例に基づいて本開示を説明したが、本開示が前記実施形態および実施例に記載された技術思想に限定されるものではない。かえって本開示の属する技術分野における通常の知識を有する者なら、前述した実施形態および実施例に基づいて様々な修飾と変更を容易に考慮することができる。しかしながら、このような修飾と変更は、全て、本開示の権利範囲に属するという点は、添付の請求範囲において明らかである。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【配列表】

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【手続補正書】

【提出日】2024-06-12

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

コーディング領域と、
前記コーディング領域と作動可能に連結される翻訳調節要素と、を含み、
前記翻訳調節要素は、前記コーディング領域の上流（ｕｐｓｔｒｅａｍ）に位置する上流翻訳調節要素と、前記コーディング領域の下流（ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ）に位置する下流翻訳調節要素と、を含み、
前記下流翻訳調節要素は、複数の下流翻訳調節要素を含む核酸分子。

【請求項2】

前記下流翻訳調節要素は、前記コーディング領域の下流に位置する第１下流翻訳調節要素および第２下流翻訳調節要素を含む、請求項１に記載の核酸分子。

【請求項3】

前記複数の下流翻訳調節要素は、それぞれヒトトロポニンＴ１、スロー骨格型（ヒトＴＮＮＴ１）、ヒトアルブミン、ヒトフェリチン軽鎖（ヒトＦＴＬ）、ヒトＣ－Ｃモチーフケモカインリガンド（ヒトＣＣＬ１９）、ヒト血管関連の移動性細胞タンパク質（ヒトＡＡＭＰ）、ヒトリボソームタンパク質Ｓ２７（ヒトＲＰＳ２７）およびヒトディフェンシンアルファ５（ヒトＤＥＦＡ５）から成る群から選択されるいずれか１つの遺伝子に由来する翻訳調節要素またはその転写体配列を含む、請求項１に記載の核酸分子。

【請求項4】

前記複数の下流翻訳調節要素は、それぞれ独立して、配列識別番号：８、配列識別番号：９、配列識別番号：１０、配列識別番号：１１、配列識別番号：１２、配列識別番号：１３および配列識別番号：１４から成る群から選択される翻訳調節要素またはその転写体配列を含む、請求項１に記載の核酸分子。

【請求項5】

前記第１下流翻訳調節要素は、前記ヒトＴＮＮＴ１由来の翻訳調節要素若しくはその転写体配列を含み、
前記第２下流翻訳調節要素は、前記ヒトアルブミン、前記ヒトＦＴＬ、前記ヒトＣＣＬ１９、前記ヒトＡＡＭＰ、前記ヒトＲＰＳ２７および前記ヒトＤＥＦＡ５から成る群から選択されるいずれか１つに由来する翻訳調節要素若しくはその転写体配列を含み、または、
前記第１下流翻訳調節要素は、前記ヒトアルブミン由来の翻訳調節要素若しくはその転写体配列を含み、前記第２下流翻訳調節要素は、前記ヒトＤＥＦＡ５由来の翻訳調節要素若しくはその転写体配列を含み、または、
前記第１下流翻訳調節要素は、前記ヒトＦＴＬ由来の翻訳調節要素若しくはその転写体配列を含み、前記第２下流翻訳調節要素は、前記ヒトＴＮＮＴ１、前記ヒトＦＴＬ、前記ヒトＲＰＳ２７および前記ヒトＤＥＦＡ５から成る群から選択されるいずれか１つに由来する翻訳調節要素若しくはその転写体配列を含み、または、
前記第１下流翻訳調節要素は、前記ヒトＣＣＬ１９由来の翻訳調節要素若しくはその転写体配列を含み、前記第２下流翻訳調節要素は、前記ヒトＴＮＮＴ１、前記ヒトＦＴＬ、前記ヒトＣＣＬ１９、前記ヒトＲＰＳ２７および前記ヒトＤＥＦＡ５から成る群から選択されるいずれか１つに由来する翻訳調節要素若しくはその転写体配列を含み、または、
前記第１下流翻訳調節要素は、前記ヒトＡＡＭＰ由来の翻訳調節要素若しくはその転写体配列を含み、前記第２下流翻訳調節要素は、前記ヒトアルブミン、前記ヒトＦＴＬ、前記ヒトＲＰＳ２７および前記ヒトＤＥＦＡ５から成る群から選択されるいずれか１つに由来する翻訳調節要素若しくはその転写体配列を含み、または、
前記第１下流翻訳調節要素は、前記ヒトＲＰＳ２７由来の翻訳調節要素若しくはその転写体配列を含み、前記第２下流翻訳調節要素は、前記ヒトＴＮＮＴ１、前記ヒトアルブミン、前記ヒトＦＴＬ、前記ヒトＣＣＬ１９、前記ヒトＡＡＭＰ、前記ヒトＲＰＳ２７および前記ヒトＤＥＦＡ５から成る群から選択されるいずれか１つに由来する翻訳調節要素若しくはその転写体配列を含み、または、
前記第１下流翻訳調節要素は、前記ヒトＤＥＦＡ５由来の翻訳調節要素若しくはその転写体配列を含み、前記第２下流翻訳調節要素は、前記ヒトＴＮＮＴ１、前記ヒトアルブミン、前記ヒトＦＴＬ、前記ヒトＣＣＬ１９、前記ヒトＡＡＭＰおよび前記ヒトＲＰＳ２７から成る群から選択されるいずれか１つに由来する翻訳調節要素若しくはその転写体配列を含む、請求項３に記載の核酸分子。

【請求項6】

前記下流翻訳調節要素は、前記第２下流翻訳調節要素の下流に位置する第３下流翻訳調節要素をさらに含む、請求項３に記載の核酸分子。

【請求項7】

前記第３下流翻訳調節要素は、ヒトトロポニンＴ１、スロー骨格型（ＴＮＮＴ１）、ヒトアルブミン、ヒトフェリチン軽鎖（ＦＴＬ）、ヒトＣ－Ｃモチーフケモカインリガンド（ＣＣＬ１９）、ヒト血管関連の移動性細胞タンパク質（ＡＡＭＰ）、ヒトリボソームタンパク質Ｓ２７（ＲＰＳ２７）およびヒトディフェンシンアルファ５（ＤＥＦＡ５）から成る群から選択されるいずれか１つに由来する翻訳調節要素またはその転写体配列を含む、請求項６に記載の核酸分子。

【請求項8】

前記第１下流翻訳調節要素は、前記ヒトＴＮＮＴ１由来の翻訳調節要素若しくはその転写体配列を含み、前記第２下流翻訳調節要素は、前記ヒトＤＥＦＡ５由来の翻訳調節要素若しくはその転写体配列を含み、前記第３下流翻訳調節要素は、ヒトＦＴＬまたはヒトＲＰＳ２７由来の翻訳調節要素若しくはその転写体配列を含み、または、
前記第１下流翻訳調節要素は、前記ヒトアルブミン由来の翻訳調節要素若しくはその転写体配列を含み、前記第２下流翻訳調節要素は、前記ヒトＤＥＦＡ５由来の翻訳調節要素若しくはその転写体配列を含み、前記第３下流翻訳調節要素は、ヒトＲＰＳ２７由来の翻訳調節要素若しくはその転写体配列を含み、または、
前記第１下流翻訳調節要素は、ヒトＲＰＳ２７由来の翻訳調節要素若しくはその転写体配列を含み、前記第２下流翻訳調節要素は、ヒトＦＴＬ由来の翻訳調節要素若しくはその転写体配列を含み、前記第３下流翻訳調節要素は、ヒトＣＣＬ１９、ヒトＲＰＳ２７およびヒトＤＥＦＡ５から成る群から選択されるいずれか１つに由来する翻訳調節要素若しくはその転写体配列を含み、または、
前記第１下流翻訳調節要素は、ヒトＤＥＦＡ５由来の転写翻訳調節要素若しくはその転写体配列を含み、前記第２下流翻訳調節要素は、前記ヒトＴＮＮＴ１由来の翻訳調節要素若しくはその転写体配列を含み、前記第３下流翻訳調節要素は、前記ヒトＦＴＬ由来の翻訳調節要素若しくはその転写体配列を含む、請求項７に記載の核酸分子。

【請求項9】

前記上流翻訳調節要素は、ヒトトロポニンＴ１、スロー骨格型（ヒトＴＮＮＴ１）、ヒトアルブミン、ヒトフェリチン軽鎖（ヒトＦＴＬ）、ヒトＣ－Ｃモチーフケモカインリガンド（ヒトＣＣＬ１９）、ヒト血管関連の移動性細胞タンパク質（ヒトＡＡＭＰ）、ヒトリボソームタンパク質Ｓ２７（ヒトＲＰＳ２７）およびヒトディフェンシンアルファ５（ヒトＤＥＦＡ５）から成る群から選択されるいずれか１つに由来する翻訳調節要素またはその転写体配列を含む、請求項１に記載の核酸分子。

【請求項10】

前記上流翻訳調節要素は、配列識別番号：１、配列識別番号：２、配列識別番号：３、配列識別番号：４、配列識別番号：５、配列識別番号：６および配列識別番号：７から成る群から選択される翻訳調節要素またはその転写体配列を含む、請求項１に記載の核酸分子。

【請求項11】

前記核酸分子は、ＲＮＡである、請求項１に記載の核酸分子。

【請求項12】

前記核酸分子は、前記コーディング領域と作動可能に連結される転写調節要素、および
前記下流翻訳調節配列の下流に位置するポリアデニル化シグナル配列またはポリアデノシン配列のうち、少なくとも１つをさらに含む、請求項１に記載の核酸分子。

【請求項13】

前記コーディング領域は、レポータータンパク質、若しくはその断片、若しくはマーカー（ｍａｒｋｅｒ）、または選別タンパク質、若しくはその断片、または抗原、若しくはその断片、または疾患の治療のためのペプチド、若しくはその断片のうち、少なくとも１つをコード化する、請求項１に記載の核酸分子。

【請求項14】

請求項１に記載の核酸分子が挿入された組換え発現ベクター。

【請求項15】

請求項１に記載の核酸分子または請求項１に記載の核酸分子が挿入された組換え発現ベクターを生体内に注入し、前記注入した核酸分子からタンパク質またはペプチドを発現させて前記タンパク質またはペプチドを製造する方法。

【手続補正2】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０００７

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0007】

一態様によれば、コーディング領域と、前記コーディング領域と作動可能に連結される翻訳調節要素と、を含み、前記翻訳調節要素は、前記コーディング領域の上流（ｕｐｓｔｒｅａｍ）に位置する上流翻訳調節要素と、前記コーディング領域の下流（ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ）に位置する下流翻訳調節要素を含み、前記下流翻訳調節要素は、複数の下流翻訳調節要素と、を含む核酸分子を開示する。

【手続補正3】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０１６１

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0161】

比較例１：ウミシイタケルシフェラーゼ（Ｒ／Ｌ）コード化配列が挿入された核酸分子の製作
ウミシイタケルシフェラーゼコード化配列が挿入された核酸分子を製作した。鋳型ＤＮＡ配列は、次のように設計した。

【国際調査報告】