特表 2024-545462 ワクチン組成物及びそれらの使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-12-06

(54)【発明の名称】ワクチン組成物及びそれらの使用

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/215 20060101AFI20241129BHJP

   A61P 31/12 20060101ALI20241129BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20241129BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20241129BHJP

   C07K 19/00 20060101ALN20241129BHJP

   C07K 14/165 20060101ALN20241129BHJP

   C07K 14/47 20060101ALN20241129BHJP

   C12N 15/62 20060101ALN20241129BHJP

   C12N 15/12 20060101ALN20241129BHJP

   C12N 15/50 20060101ALN20241129BHJP

【ＦＩ】

A61K39/215

A61P31/12

A61P11/00

A61P37/04

C07K19/00 ZNA

C07K14/165

C07K14/47

C12N15/62 Z

C12N15/12

C12N15/50

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024537464

(86)(22)【出願日】2022-12-16

(85)【翻訳文提出日】2024-08-09

(86)【国際出願番号】 EP2022086304

(87)【国際公開番号】W WO2023117742

(87)【国際公開日】2023-06-29

(31)【優先権主張番号】21306897.6

(32)【優先日】2021-12-22

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(31)【優先権主張番号】22306103.7

(32)【優先日】2022-07-22

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】524063969

【氏名又は名称】オシバックス

【氏名又は名称原語表記】ＯＳＩＶＡＸ

(74)【代理人】

【識別番号】100107456

【弁理士】

【氏名又は名称】池田 成人

(74)【代理人】

【識別番号】100162352

【弁理士】

【氏名又は名称】酒巻 順一郎

(74)【代理人】

【識別番号】100123995

【弁理士】

【氏名又は名称】野田 雅一

(72)【発明者】

【氏名】ル ヴェール， アレクサンドル

(72)【発明者】

【氏名】ハラー， マージョリー

(72)【発明者】

【氏名】ギュイヨン‐ジェラン， デルフィーヌ

(72)【発明者】

【氏名】ニコラス， フローランス

【テーマコード（参考）】

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C085AA03

4C085BA71

4C085CC07

4C085EE03

4C085GG03

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA41

4H045CA01

4H045CA40

4H045DA86

4H045EA31

4H045FA74

(57)【要約】

本発明は、免疫原性組成物、及びヒト対象におけるコロナウイルス疾患の予防のためのワクチンとしての上記免疫原性組成物の使用に関する。より具体的には、本発明は、コロナウイルス疾患の予防を必要とするヒト対象におけるコロナウイルス疾患の予防における免疫原性組成物の使用の方法であって、前記免疫原性組成物が、（ｉ）ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２ヌクレオカプシドＮ抗原と、（ｉｉ）Ｃ４ｂｐオリゴマー化ドメインに由来する自己組織化ポリペプチド及び正に帯電した尾部を含むキャリアタンパク質とを含む融合タンパク質を含む、方法に関する。
【選択図】 なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

必要とするヒト対象における、コロナウイルス疾患、特にＣＯＶＩＤ－１９の予防のため、より詳細には重度のＣＯＶＩＤ－１９に対する防御のためのワクチンとしての使用のための免疫原性組成物であって、前記免疫原性組成物は融合タンパク質を含み、前記融合タンパク質は、
（ｉ）ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２ヌクレオカプシドＮ抗原と、それが融合している
（ｉｉ）Ｃ４ｂｐオリゴマー化ドメインに由来する自己組織化ポリペプチド及び正に帯電した尾部を含むキャリアタンパク質と
を含む、免疫原性組成物。

【請求項2】

前記融合タンパク質がグリコシル化されていない、請求項１に記載の使用のための免疫原性組成物。

【請求項3】

前記融合タンパク質が、細菌発現系、例えば大腸菌発現系から取得可能である、請求項１又は２に記載の使用のための免疫原性組成物。

【請求項4】

前記キャリアタンパク質が、Ｃ末端で前記ヌクレオカプシドＮ抗原に融合しており、任意選択でグリシン－セリンリンカーを介して融合している、請求項１～３のいずれか一項に記載の使用のための免疫原性組成物。

【請求項5】

前記融合タンパク質が、自己組織化後に七量体タンパク質を形成する、請求項１～４のいずれか一項に記載の使用のための免疫原性組成物。

【請求項6】

前記ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２ヌクレオカプシドＮ抗原が、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２株由来の少なくとも１種のヌクレオカプシドＮ抗原を含む、例えば、前記ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２ヌクレオカプシドＮ抗原が、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２武漢（Ａ）株のヌクレオカプシドＮタンパク質［Ｐ０ＤＴＣ９（ＮＣＡＰ＿ＳＡＲＳ２）、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（２０１９－ｎＣｏＶ）］から本質的になる、請求項１～５のいずれか一項に記載の使用のための免疫原性組成物。

【請求項7】

前記ヌクレオカプシドＮ抗原が、
（ｉ）配列番号１のポリペプチド、又は
（ｉｉ）配列番号１に対して少なくとも９０％の同一性を有する抗原性ポリペプチドバリアント
を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の使用のための免疫原性組成物。

【請求項8】

Ｃ４ｂｐオリゴマー化ドメインに由来する前記自己組織化ポリペプチドが、配列番号２、又は配列番号２に対して少なくとも９０％の同一性を有する機能的バリアントを含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の使用のための免疫原性組成物。

【請求項9】

前記正に帯電した尾部が、配列ＺＸＢＢＢＢＺ（配列番号３）を含み、ここで、（ｉ）Ｚは存在しないか又は任意のアミノ酸であり、（ｉｉ）Ｘは任意のアミノ酸であり、（ｉｉｉ）Ｂはアルギニン又はリジンであり、好ましくは、前記正に帯電した尾部が、配列番号４の配列を含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の使用のための免疫原性組成物。

【請求項10】

前記キャリアタンパク質が、配列番号５から本質的になるか、又は前記キャリアタンパク質が、配列番号５に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列番号５の機能的バリアントである、請求項１～９のいずれか一項に記載の使用のための免疫原性組成物。

【請求項11】

前記融合タンパク質が、配列番号６を含むか若しくは配列番号６から本質的になるか、又は配列番号６に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列番号６の機能的バリアントである、請求項１～１０のいずれか一項に記載の使用のための免疫原性組成物。

【請求項12】

前記融合タンパク質が配列番号１１によってコードされる、請求項１１に記載の使用のための免疫原性組成物。

【請求項13】

前記免疫原性組成物が筋肉内経路を介して投与される、請求項１～１２のいずれか一項に記載の使用のための免疫原性組成物。

【請求項14】

前記使用が、ヌクレオカプシドＮに特異的な総Ｔ細胞応答、ヌクレオカプシドＮに特異的なＣＤ４＋／ＣＤ８＋Ｔ細胞応答、抗ヌクレオカプシドＮ ＩｇＧ（抗体応答）、並びに／又はコロナウイルス症状のうちの１つ若しくは複数に対する防御、例えば、肺損傷、呼吸不全、敗血症性ショック、及び／若しくは多臓器機能不全等の重度のコロナウイルス症状の１つ若しくは複数に対する防御、より具体的には、武漢（Ａ）、欧州（Ｂ．１）、アルファ－ＵＫ（Ｂ．１．１．７）、ベータ南アフリカ（Ｂ．１．３５１）、ガンマブラジル（Ｐ．１）、デルタインド（Ｂ．１．６１７．２）、オミクロン、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ１、及びＭＥＲＳ－ＣｏＶからなる群から選択される、より詳細には、欧州Ｂ．１、デルタ、オミクロン及び／若しくはベータ株からなる群から選択されるコロナウイルス株に起因するコロナウイルス疾患からの防御をもたらす、請求項１～１３のいずれか一項に記載の使用のための免疫原性組成物。

【請求項15】

前記ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２ヌクレオカプシドＮ抗原が武漢（Ａ）株から選択され、前記使用が、
（ｉ）欧州（Ｂ．１）、アルファ－ＵＫ（Ｂ．１．１．７）、ベータ南アフリカ（Ｂ．１．３５１）、ガンマブラジル（Ｐ．１）、デルタインド（Ｂ．１．６１７．２）、オミクロン、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ１、及びＭＥＲＳ－ＣｏＶからなる群から選択される、より詳細には、欧州（Ｂ．１）、デルタ、オミクロン及び／若しくはベータ株からなる群から選択されるコロナウイルス感染症に対する交差反応性免疫応答、例えば、ヌクレオカプシドＮに特異的な総Ｔ細胞応答、ヌクレオカプシドＮに特異的なＣＤ４＋／ＣＤ８＋Ｔ細胞応答、抗ヌクレオカプシドＮ ＩｇＧ（抗体応答）、並びに／又は
（ｉｉ）欧州（Ｂ．１）、アルファ－ＵＫ（Ｂ．１．１．７）、ベータ南アフリカ（Ｂ．１．３５１）、ガンマブラジル（Ｐ．１）、デルタインド（Ｂ．１．６１７．２）、オミクロン、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ１、及びＭＥＲＳ－ＣｏＶからなる群から選択される、より詳細には、欧州（Ｂ．１）、デルタ、オミクロン及び／若しくはベータ株からなる群から選択されるコロナウイルス感染症に起因するコロナウイルス疾患に対する交差防御、
をもたらす、請求項１～１３のいずれか一項に記載の使用のための免疫原性組成物。

【請求項16】

タンパク質スパイク又はその抗原性断片を含む第２のコロナウイルスワクチン、例えば、好ましくはコミナティワクチン（Ｐｆｉｚｅｒ－ＢｉｏＮＴｅｃｈ；ＢＮＴ１６２ｂ２ ｍＲＮＡ）又はスパイクバックスＣＯＶＩＤ－１９ワクチン（Ｍｏｄｅｒｎａ、ｍＲＮＡ－１２７３ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）から選択される、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２タンパク質スパイク又はその抗原断片をコードするｍＲＮＡを含むｍＲＮＡワクチンと組み合わされて、同時に又は逐次に投与される、請求項１～１５のいずれか一項に記載の使用のための免疫原性組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本開示は、免疫原性組成物、及びヒト対象におけるコロナウイルス疾患（ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ ｄｉｓｅａｓｅ）の予防のためのワクチンとしての上記免疫原性組成物の使用に関する。

【0002】

［背景技術］
２０２１年末に、新興重症急性呼吸器症候群コロナウイルス－２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）によって引き起こされたコロナウイルス疾患２０１９の世界的なパンデミックは、世界中で５２０万超の死亡例を伴う２億６０００万超の症例をもたらした。一部の感染者は無症候性のままであるが、一部の感染者は治療を全く又はほとんど受けずに回復する軽度の呼吸器疾患を発症し、他の感染者（症候性の者のうち１０～２０％）は重度の疾患を経験し、重度の疾患は、最初の症状の発生から約１１日後の突然の悪化として生じる場合が多く（Ｃｈｅｎ，Ｓ．ら、２０２０．Ｆｒｏｎｔ．Ｍｅｄ．０．ｄｏｉ：１０．３３８９／ｆｍｅｄ．２０２０．５６７２９６）、場合により患者の死亡を引き起こす呼吸不全及び多臓器合併症を伴う（「Ｉｎｔｅｒｉｍ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｇｕｉｄａｎｃｅ ｆｏｒ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ Ｃｏｎｆｉｒｍｅｄ Ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ（ＣＯＶＩＤ－１９）」．Ｕ．Ｓ．Ｃｅｎｔｅｒｓ ｆｏｒ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ（ＣＤＣ）．２０２０年４月６日。２０２０年３月２日にオリジナルからアーカイブ、２０２１年２月１２日に更新）。

【0003】

今日まで、ワクチン開発の取り組みは主要抗原としてのスパイク（Ｓ）タンパク質を主に対象としているが、複数の変異は、変異したウイルス株がＳタンパク質に対する免疫から逃避することを可能にするため、「ウイルス免疫逃避」に関する懸念が存在する。ヌクレオカプシド（Ｎタンパク質）は、伝播及び進化の間、コロナウイルスの変異株間で比較的保存されている。

【0004】

２０２１年末時点で公的に入手可能なデータ、とりわけＷＨＯからの、ＣＯＶＩＤワクチンを開発するための進行中の研究開発の取り組みに関するデータに基づくと、現在およそ２５の、ヌクレオカプシドを標的とするプログラムが存在する。

【0005】

これらのプログラムのうち、大半はエピトープを標的としており、８つのプログラムのみが、以降に簡単に記載するように、全長ヌクレオカプシド抗原を含んでいる（臨床段階の２つのＤＮＡワクチン及び３つのウイルスベクターワクチン／前臨床段階の１つの細菌ベクターワクチン及び２つのウイルスベクターワクチン）。

【0006】

臨床段階のプロジェクト：
Ｇｅｎｅｘｉｎｅは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）フォルドン及びヌクレオカプシドタンパク質（ＮＰ）並びにＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質をコードするプラスミドＤＮＡをコードするＤＮＡワクチンであるＧＸ－１９Ｎを、現在第２相において開発中である（Ａｈｎら、２０２１、ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１０１／２０２１．０５．２６．２１２５７７００）。

【0007】

Ｓｃａｎｃｅｌｌは、ＳＡ．ＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質受容体結合ドメイン及び全長ヌクレオカプシドタンパク質の両方をコードする二価ＤＮＡワクチンを開発中である（Ｂｒｅｎｔｖｉｌｌｅら、２０２１、ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１０１／２０２１．０６．１８．４４８９３２）。

【0008】

Ｖａｘａｒｔは、全長Ｓ及びＮ抗原を発現する経口錠剤ベースのウイルスベクター（Ａｄ５）ワクチンを開発中である（２０２１年５月のワクチン会議において発表：ｈｔｔｐｓ：／／ｉｎｖｅｓｔｏｒｓ．ｖａｘａｒｔ．ｃｏｍ／ｓｔａｔｉｃ－ｆｉｌｅｓ／ｂ５５５ｃ１１ｃ－６８６３－４７６３－８５３９－１２７５４８４０ａ６５２）。

【0009】

Ｃｉｔｙ ｏｆ Ｈｏｐｅは、全長ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク及びヌクレオカプシドを共発現する合成改変ワクシニアアンカラ（ｓＭＶＡ）ベクターを開発中である（Ｃｈｉｕｐｐｅｓｉら、２０２０、ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０３８／ｓ４１４６７－０２０－１９８１９－１）。

【0010】

ＩｍｍｕｎｉｔｙＢｉｏは、ヒトアデノウイルス血清型５（ｈＡｄ５）プラットフォームを使用した、細胞表面発現を増加するように改変されたスパイク（Ｓ）タンパク質（Ｓ融合）と、ＭＨＣクラスＩ及びＩＩ提示並びにＴ細胞応答を増強するためのＴ細胞刺激ドメインの増強を伴うヌクレオカプシド（Ｎ）タンパク質（Ｎ－ＥＴＳＤ）との両方を発現するウイルスベクターワクチンを開発中である（Ｓｉｅｌｉｎｇら、２０２１年６月、ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１０１／２０２１．０４．０５．２１２５４９４０、Ｒｉｃｅら、２０２１年７月、ｈｔｔｐｓ：／／ｐｕｂｍｅｄ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／３４２９０３１７／）。

【0011】

前臨床段階のプロジェクト：
コロラド州立大学（Ｃｏｌｏｒａｄｏ Ｓｔａｔｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）は、ハムスターにおいて重度のＣＯＶＩＤ－１９様疾患に対する防御を実証した、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２膜及びヌクレオカプシドタンパク質を発現する複製型細菌ベクターワクチンを開発中である（Ｊｉａら、２０２１、ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０３８／ｓ４１５４１－０２１－００３２１－８）。

【0012】

ミネソタ大学（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｍｉｎｎｅｓｏｔａ）は、ヌクレオカプシド（Ｎ）タンパク質を発現するＨＡｄ５がシリアンハムスター及びｋ１８－ｈＡＣＥ２マウスの両方において体重減少の抑制及びウイルス量の減少をもたらすことを報告した（Ｍａｔｃｈｅｔｔら、ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１０１／２０２１．０４．２６．４４１５１８）。

【0013】

ノースウェスタン大学ファイバーグ医学院（Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔｅｒｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｆｅｉｎｂｅｒｇ Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク及びヌクレオカプシドタンパク質を発現するＡｄ５ベクターワクチンが肺及び脳の両方において急性の防御を付与し得ることを報告した（Ｄａｎｇｉら、２０２１、ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０１６／ｊ．ｃｅｌｒｅｐ．２０２１．１０９６６４）。

【0014】

これらの開発にもかかわらず、新規コロナウイルスワクチン、特に広域スペクトルの防御をもたらし得るワクチンをさらに開発する必要性が依然として存在する。

【0015】

ＯＶＸ８３６（ＯＳＩＶＡＸ、Ｌｙｏｎ、Ｆｒａｎｃｅ）は、インフルエンザ株に対するワクチンとして臨床開発中の組換えタンパク質である。抗原性部分は、Ａ／ＷＳＮ／１９３３（Ｈ１Ｎ１）インフルエンザウイルスのＮＰ配列に対応する。ＯＶＸ８３６タンパク質は７コピーのＮＰを含有し、それぞれがＯＶＸ３１３と融合している。ＯＶＸ３１３配列は、ヒトＣ４ｂ結合タンパク質（ｈＣ４ＢＰ）のＣ末端オリゴマー化ドメインに由来するが［Ｈｏｆｍｅｙｅｒ Ｔら、Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２０１３；４２５：１３０２～１３１７］、ヒト配列との相同性を最小化するように改変されている（ハイブリッドニワトリ配列；２０％未満の相同性）。

【0016】

本発明者らは、現在、驚くべきことに、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２株のヌクレオカプシドＮタンパク質を有する類似した融合タンパク質が、特に細菌細胞発現系において効率的に作製することができ、且つ、特にハムスター研究において明らかになったように、異なるコロナウイルス株に対する交差防御（広域スペクトル）を含む、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２疾患等のコロナウイルス疾患に対する有意な防御をもたらすことを見出した。

【0017】

［簡単な説明］
したがって、一態様では、本開示は、必要とするヒト対象における、コロナウイルス疾患、特にＣＯＶＩＤ－１９の予防のため、典型的には重度のＣＯＶＩＤ－１９からの防御のためのワクチンとしての使用のための免疫原性組成物であって、前記免疫原性組成物は融合タンパク質を含み、前記融合タンパク質は、
（ｉ）ヌクレオカプシドＮ抗原、好ましくはＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２ Ｎ抗原と、それが融合している
（ｉｉ）Ｃ４ｂｐオリゴマー化ドメインに由来する自己組織化ポリペプチド及び正に帯電した尾部を含むキャリアタンパク質と
を含む、免疫原性組成物に関する。

【0018】

本開示はまた、コロナウイルス疾患、特にＣＯＶＩＤ－１９を予防、防御、又は交差防御するための、典型的には重度のＣＯＶＩＤ－１９を防御するための方法であって、それを必要とするヒト対象に、前記方法は、免疫原性量の融合タンパク質を投与するステップを含み、前記融合タンパク質は、
（ｉ）ヌクレオカプシドＮ抗原、好ましくはＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２ Ｎ抗原と、それが融合している
（ｉｉ）Ｃ４ｂｐオリゴマー化ドメインに由来する自己組織化ポリペプチド及び正に帯電した尾部を含むキャリアタンパク質と
を含む、方法に関する。

【0019】

本開示はさらに、コロナウイルス疾患、特にＣＯＶＩＤ－１９を予防、防御、又は交差防御するための、典型的には重度のＣＯＶＩＤ－１９を防御するためのワクチンの製造における、融合タンパク質の使用に関し、前記融合タンパク質は、
（ｉ）ヌクレオカプシドＮ抗原、好ましくはＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２ Ｎ抗原と、それが融合している
（ｉｉ）Ｃ４ｂｐオリゴマー化ドメインに由来する自己組織化ポリペプチド及び正に帯電した尾部を含むキャリアタンパク質と
を含む。

【0020】

上記方法又は使用の好ましい実施形態では、前記融合体は、以降に開示されるＯＶＸ０３３である。さらに好ましい実施形態では、前記融合タンパク質は、筋肉内投与のための免疫原性組成物として製剤化され、筋肉内投与される。

【0021】

本開示の別の態様は、
（ｉ）ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２ヌクレオカプシドＮ抗原と、それが融合している
（ｉｉ）Ｃ４ｂｐオリゴマー化ドメインに由来する自己組織化ポリペプチド及び正に帯電した尾部を含むキャリアタンパク質と
を含む融合タンパク質に関する。

【0022】

具体的な実施形態では、前記融合タンパク質は、グリコシル化されていない、及び／又は細菌発現系、例えば大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）発現系から取得可能である。好ましい実施形態では、前記融合タンパク質は配列番号１１によってコードされるＯＶＸ０３３である。

【0023】

本開示の別の態様は、前記融合タンパク質をコードする核酸、特に配列番号１１の核酸、又は配列番号１１の核酸を含む発現ベクター、又は宿主細胞、典型的には配列番号１１の核酸を含む細菌宿主細胞に関する。

【図面の簡単な説明】

【0024】

【図1】ＯＶＸ０３０のＳＤＳ ＰＡＧＥ及びウェスタンブロット解析。精製されたＯＸＶ０３０を、還元及び変性条件下において４～１２％Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓ電気泳動ゲルで分画し、インスタントブルーを用いて染色したか［Ａ］、又はニトロセルロース膜にブロッティングし、ポリクローナルウサギ抗ＯＶＸ３１３［Ｂ］及び抗ヌクレオカプシド抗体（Ｇｅｎｅｔｅｘ、ＧＴＸ１３５３５７）［Ｃ］とそれに続く二次抗ウサギ／ＨＲＰ抗体（Ｓｉｇｍａ、Ａ０５４５）とを用いてプローブした。ＳＤＳ ＰＡＧＥ：０．５、１、１．５μｇ／ウェル。ウェスタンブロット：１５０、３００、６００ｎｇ／ウェル。ＭＷ：分子量マーカー。

【図2】ＳＤＳ ＰＡＧＥ（Ａ）及びウェスタンブロット（Ｂ）によるＮ－ＯＶＸ３１３タンパク質の合成ＤＮＡ構築物の過剰発現解析。総画分抽出物（正規化された試料）を、還元及び変性条件下において４～１２％Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓ電気泳動ゲルで分画し、インスタントブルーを用いて染色したか（Ａ）、又はニトロセルロース膜にブロッティングし、抗ヌクレオカプシド抗体（Ｇｅｎｅｔｅｘ、ＧＴＸ１３５３５７）とそれに続く二次抗ウサギ／ＨＲＰ抗体（Ｓｉｇｍａ、Ａ０５４５）とを用いてプローブした（Ｂ）。ＢＩ：誘導前。０３２：ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２過剰発現からのヌクレオカプシドタンパク質の総画分。０３０、０３３、０３４：オリゴドム（ＯｌｉｇｏＤＯＭ）（登録商標）と融合したＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質の合成ＤＮＡ構築物。ＭＷ：分子量マーカー。

【図3】ハムスター攻撃感染モデルにおけるＯＶ０３３の有効性。ハムスターを、５０μｇのＯＶＸ０３３を用いて筋肉内（ＩＭ）若しくは鼻腔内経路（ＩＮ）によって、又は陰性対照としてＮａＣｌを用いて、４週間空けて２回ワクチン接種した。動物に、最後のワクチン接種の４週間後に、１０^４ＴＣＩＤ_５０のＢ．１（Ｄ６１４Ｇ）ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２株を用いて攻撃感染を行った。［Ａ］感染後（ｐｉ）の体重推移、［Ｂ］感染の４日後の肺ウイルス力価、及び［Ｃ］感染の７日後の肺における肺炎の面積。統計解析：＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１

【図4】ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２のＢ．１株を用いるハムスター攻撃感染モデルにおけるＯＶ０３３の有効性。ハムスターを、５０μｇ若しくは１００μｇのＯＶＸ０３３を用いて筋肉内（ＩＭ）によって、又は陰性対照としてＮａＣｌを用いて、４週間空けて２回ワクチン接種した。動物に、最後のワクチン接種の４週間後に、１０^４ＴＣＩＤ_５０のＢ．１（Ｄ６１４Ｇ）ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２株を用いて攻撃感染を行った。［Ａ］感染後（ｐｉ）の体重推移、［Ｂ］感染の４日後の肺ウイルス力価、及び［Ｃ］感染の７日後の肺における肺炎の面積。統計解析：＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。

【図5】ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のデルタ株を用いるハムスター攻撃感染モデルにおけるＯＶ０３３の有効性。ハムスターを、５０μｇのＯＶＸ０３３又は陰性対照としてのＮａＣｌを用いて筋肉内経路（ＩＭ）によって、４週間空けて２回ワクチン接種した。動物に、最後のワクチン接種の４週間後に、１０^４ＴＣＩＤ_５０のＢ．１．６１７．２ ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２株（デルタ）を用いて攻撃感染を行った。［Ａ］感染の４日後の肺ウイルス力価、及び［Ｂ］感染の７日後の肺における肺炎の面積。統計解析：＊＊ｐ＜０．０１。

【図6】ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のオミクロン株を用いるハムスター攻撃感染モデルにおけるＯＶ０３３の有効性。ハムスターを、５０μｇのＯＶＸ０３３又は陰性対照としてのＮａＣｌを用いて筋肉内経路（ＩＭ）によって、４週間空けて２回ワクチン接種した。動物に、最後のワクチン接種の４週間後に、１０^４ＴＣＩＤ_５０のＢ．１．１．５２９ ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２株（オミクロン）を用いて攻撃感染を行った。［Ａ］感染の４日後の肺ウイルス力価、［Ｂ］感染の７日後の鼻甲介におけるウイルス力価、及び［Ｃ］感染の７日後の肺における肺炎の面積。統計解析：＊＊ｐ＜０．０１。

【図7】ハムスターにおけるＯＶ０３３の免疫原性。ハムスターを、５０μｇのＯＶＸ０３３又は陰性対照としてのＮａＣｌを用いて筋肉内経路（ＩＭ）によって、４週間空けて２回ワクチン接種した。動物を、最後のワクチン接種の４週間後に安楽死させ、免疫応答をＥＬＩＳＡ及びＩＦＮγ ＥＬＩＳｐｏｔによって特徴付けた。［Ａ］Ｄ５６の血清におけるＮ特異的血清ＩｇＧ抗体価。［Ｂ］Ｄ５６の脾臓におけるＩＦＮγ ＥＬＩＳｐｏｔ応答。［Ｃ］Ｄ５６の肺におけるＩＦＮγ ＥＬＩＳｐｏｔ応答。統計解析：＊＊ｐ＜０．０１。

【図8】２回目のワクチン接種の８日後におけるそれぞれの群（ＯＶＸ０３２、ＯＶＸ０３０、ＯＶＸ３０＋ＩＦＡ、ＯＶＸ０３０＋アダバックス（ＡｄａＶａｘ））のＮＰ特異的ＩＦＮγスポット形成Ｔ細胞（ＳＦＣ／２×１０^５ＰＢＭＣ）の数の平均。統計は、クラスカル・ウォリス統計検定とそれに続くダンの多重比較検定とを使用して実施した＊＊＊ｐ＜０．００１。

【0025】

［発明を実施するための形態］
〔詳細な説明〕
定義
本開示がより容易に理解されるようにするために、ある特定の用語を初めに定義する。追加の定義は詳細な説明全体にわたって記載される。

【0026】

「アミノ酸」という用語は、天然に存在するアミノ酸並びに非天然型アミノ酸（ｕｎｎａｔｕｒａｌ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ）（本明細書では「天然に存在しないアミノ酸」とも称される）、例えば、天然に存在するアミノ酸と同様に機能するアミノ酸アナログ及びアミノ酸ミメティックを指す。天然に存在するアミノ酸とは、遺伝暗号によってコードされるもの、並びに後に修飾されたアミノ酸、例えば、ヒドロキシプロリン、ガンマ－カルボキシグルタミン酸、及びＯ－ホスホセリンである。アミノ酸アナログとは、天然に存在するアミノ酸と同じ基本化学構造、例えば、水素に結合しているアルファ炭素、カルボキシル基、アミノ基、及びＲ基を有する化合物、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムを指す。そのようなアナログは、修飾されたＲ基（例えば、ノルロイシン）又は修飾されたペプチド骨格を有し得るが、天然に存在するアミノ酸と同じ基本化学構造を保持する。アミノ酸ミメティックとは、アミノ酸の一般的な化学構造と異なる構造を有するが、天然に存在するアミノ酸と同様に機能する化学的化合物を指す。「アミノ酸」及び「アミノ酸残基」という用語は、全体にわたって交換可能に使用される。

【0027】

置換とは、天然に存在するアミノ酸を、別の天然に存在するアミノ酸又は非天然型アミノ酸のいずれかで置き換えることを指す。

【0028】

本明細書で使用される場合、「タンパク質」という用語は、１本又は複数本の直鎖に配置されたアミノ酸（「ポリペプチド」とも称される）から作られ、球形に折り畳まれている任意の有機化合物を指す。「タンパク質」という用語には、タンパク質性物質又は融合タンパク質が含まれる。そのようなポリペプチド鎖におけるアミノ酸は、隣接するアミノ酸残基のカルボキシル基とアミノ基との間のペプチド結合によって一緒に結合し得る。「タンパク質」という用語には、限定されないが、ペプチド、一本鎖ポリペプチド、又はアミノ酸の２本以上の鎖から主になる任意の複合タンパク質がさらに含まれる。「タンパク質」という用語には、限定されないが、糖タンパク質又は他の公知の翻訳後修飾がさらに含まれる。「タンパク質」という用語には、天然タンパク質の公知の天然又は人工化学修飾、例えば、限定されないが、糖鎖改変、ＰＥＧ化、ＨＥＳ化、ＰＡＳ化等、非天然アミノ酸の組込み、化学的コンジュゲーション又は他の分子のためのアミノ酸修飾等がさらに含まれる。

【0029】

「組換えタンパク質」という用語には、本明細書で使用される場合、組換え手段によって調製、発現、作出、又は単離されたタンパク質、例えば、対応するタンパク質を発現するように形質転換された宿主細胞、例えばトランスフェクトーマから単離された融合タンパク質等が含まれる。

【0030】

本明細書で使用される場合、「融合タンパク質」という用語は、遺伝子融合によって、例えば、別個のタンパク質の別々の機能ドメインをコードする少なくとも２つの遺伝子断片の遺伝子融合によって取得されるか又は取得可能な少なくとも１本のポリペプチド鎖を含む組換えタンパク質を指す。本開示のタンパク質融合体には、例えば、少なくともコロナウイルスヌクレオカプシドＮ抗原と少なくとも１種の他の部分とが含まれ、上記他の部分は、以下に記載されるような、Ｃ４ｂｐオリゴマー化ドメインに由来する自己組織化ポリペプチド及びその正に帯電した尾部を含むキャリアタンパク質である。

【0031】

本明細書で使用される場合、「抗原性」ポリペプチドという用語には、特定のポリペプチド（例えばコロナウイルス株のヌクレオカプシドＮ）の免疫原性断片及びエピトープであって、少なくともそのような抗原性ポリペプチドが本明細書に開示されるキャリアタンパク質と融合された場合に、そのような抗原性ポリペプチドに対する免疫応答（例えばＮ特異的免疫応答）を誘導することができる、免疫原性断片及びエピトープが含まれる。

【0032】

本明細書で使用される場合、２つの配列間の同一性パーセントとは、２つの配列の最適なアラインメントのために導入される必要のあるギャップの数及び各ギャップの長さを考慮に入れた、配列によって共有される同一の位置の数の関数である（すなわち、同一性％＝同一の位置の数／位置の総数×１００）。配列の比較及び２つの配列間の同一性パーセントの決定は、以下に記載されるように、数学的アルゴリズムを使用して達成することができる。

【0033】

２つのアミノ酸配列間の同一性パーセントは、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ及びＷｕｎｓｃｈアルゴリズム（ＮＥＥＤＬＥＭＡＮ、及びＷｕｎｓｃｈ）を使用して決定することができる。

【0034】

２つのヌクレオチド又はアミノ酸配列間の同一性パーセントはまた、例えば、ＥＭＢＯＳＳ Ｎｅｅｄｌｅ（ペアワイズアラインメント；ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋにおいて利用可能、Ｒｉｃｅら、２０００ Ｔｒｅｎｄｓ Ｇｅｎｅｔ １６：２７６～２７７）等のアルゴリズムを使用して決定されてもよい。例えば、ＥＭＢＯＳＳ Ｎｅｅｄｌｅは、ＢＬＯＳＵＭ６２行列、１０の「ギャップオープンペナルティ」、０．５の「ギャップ伸長ペナルティ」、偽の「エンドギャップペナルティ」、１０の「エンドギャップオープンペナルティ」、及び０．５の「エンドギャップ伸長ペナルティ」で使用され得る。一般的に、「同一性パーセント」は、比較した位置の数で割られ、１００を掛けられる、一致した位置の数の関数である。例えば、アラインメント後の２つの比較された配列の間で、１０の配列位置のうち６つが同一である場合、同一性は６０％である。同一性％は、典型的には、解析が実施される問合せ配列の全長にわたって決定される。同じ一次アミノ酸配列又は核酸配列を有する２つの分子は、任意の化学的及び／又は生物学的修飾にかかわらず同一である。

【0035】

本明細書で使用される場合、「最適化された」という用語は、ヌクレオチド配列が、産生細胞又は生物、概して細菌細胞、例えば大腸菌株において好ましいコドンを使用してアミノ酸配列をコードするように変更されていることを意味する。最適化されたヌクレオチド配列は、開始ヌクレオチド配列によって本来コードされていたアミノ酸配列を完全に又は可能な限り多く保持するように操作されている。最適化されたヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列は、最適化アミノ酸配列とも称される。

【0036】

本明細書で使用される場合、「対象」という用語には、任意のヒト又は非ヒト動物が含まれる。「非ヒト動物」という用語には、好ましくは、哺乳動物、例えば、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウマ等が含まれる。

【0037】

本明細書で使用される場合、ポリペプチドの「バリアント」とは、対応する天然ポリペプチドと比較される、例えば典型的にはアミノ酸置換、欠失、又は挿入によって取得される天然又は人工変異体バリアントであり得る。ある特定の実施形態では、バリアントは、親ポリペプチドと比較して、バリアントの配列全体にわたってアミノ酸欠失、挿入、又は置換の組合せを有し得る。

【0038】

本開示の文脈では、保存的置換とは、以下：
脂肪族残基Ｉ、Ｌ、Ｖ、及びＭ
シクロアルケニル会合残基Ｆ、Ｈ、Ｗ、及びＹ
疎水性残基Ａ、Ｃ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｒ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、及びＹ
負に帯電した残基Ｄ及びＥ
極性残基Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、及びＴ
正に帯電した残基Ｈ、Ｋ、及びＲ
小さな残基Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｇ、Ｎ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、及びＶ
非常に小さな残基Ａ、Ｇ、及びＳ
回転に関与する残基Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｋ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｐ、及び形成に関与する残基Ｔ
柔軟な残基Ｑ、Ｔ、Ｋ、Ｓ、Ｇ、Ｐ、Ｄ、Ｅ、及びＲ
の通りに示されるアミノ酸のクラス内での置換によって定義することができる。

【0039】

「機能的バリアント」とは、天然ポリペプチドの目的の特性を保持するバリアントである。

【0040】

好ましい実施形態では、バリアントは、天然ポリペプチド配列に対して少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は９５％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0041】

したがって、参照配列、特に本明細書に開示されるヌクレオカプシドＮ融合タンパク質に対して置換、挿入及び／又は付加、欠失、並びに共有結合修飾を含有するポリペプチドは、本開示の範囲内に含まれる。例えば、配列タグ又はアミノ酸、例えば１つ若しくは複数のリジンは、ペプチド配列に（例えば、Ｎ末端又はＣ末端において）付加することができる。配列タグは、ペプチド検出、精製、又は局在化のために使用され得る。リジンは、ペプチド溶解性を高めるため、又はビオチン化を可能にするために使用され得る。或いは、ペプチド又はタンパク質のアミノ酸配列のカルボキシ及びアミノ末端領域に位置するアミノ酸残基は、任意選択で、切断型配列をもたらすように欠失していてもよい。或いは、ある特定のアミノ酸（例えば、Ｃ末端残基又はＮ末端残基）は、例えば、可溶性であるか又は固体支持体に連結されるより大きな配列の一部としての配列の発現などの、配列の使用に応じて欠失していてもよい。

【0042】

本明細書で使用される場合、「コロナウイルス疾患」という用語は、コロナウイルス感染症、特に、ＳＡＲＳ（重症急性呼吸器症候群）、ＭＥＲＳ（中東呼吸器症候群）、又は好ましくはＣＯＶＩＤ－１９（コロナウイルス疾患２０１９）、より具体的には重度のＣＯＶＩＤ－１９によって引き起こされる任意の疾患を指す。

【0043】

本明細書で使用される場合、疾患との関連における「予防」又は「予防すること」という用語は、（１）疾患状態若しくは障害又は疾患に関連する任意の症状を経験するか又は示すリスクを、そのようなリスクに曝露され得る個体において低下させること、及び（２）重度の疾患のリスク又は疾患の１つ若しくは複数の重度の症状を呈するリスクを低下させること、或いは（３）ウイルス排出を減少させて、それによってある対象から別の対象へのウイルスの伝播を潜在的に減少させることのうちの１つ又は複数を指す。特に、感染障害の予防に関して、「予防」という用語は、感染因子による感染の予防、感染因子の複製の阻害、疾患に関連する任意の症状の軽減若しくは消失、ウイルス排出の減少、又は感染に関連する症状のうちの１つ若しくは複数の重症度及び／若しくは持続時間の減少、又は感染因子の根絶を指す場合がある。本明細書で使用される場合、重度の疾患の発生率又は疾患の１つ若しくは複数の重度の症状を呈する頻度を低下させることに言及する場合、「防御」という用語が交換可能に使用されてもよい。

【0044】

例えば、コロナウイルス疾患との関連において、重度のコロナウイルス疾患は、（ｉ）海面レベルの室内気におけるＳｐＯ２が９４％未満、動脈血酸素分圧の吸入酸素濃度に対する比（ＰａＯ２／ＦｉＯ２）が３００ｍｍＨｇ未満、呼吸数が３０回／分超、若しくは肺浸潤が５０％超である個体、並びに／又は（ｉｉ）呼吸不全、敗血症性ショック、及び／若しくは多臓器機能不全を有する個体を指す場合がある。一部の実施形態では、コロナウイルス疾患に関する「重度の疾患」という用語は、入院を必要とする呼吸欠損症状を有する個体を指す。

【0045】

予防又は防御は、対象の群において決定され、全ての個体に当てはまらなくてもよい。典型的には、予防又は防御は、無作為化臨床試験によって対照群と比較して決定することができる。

【0046】

ヌクレオカプシドＮ抗原
本明細書で使用される場合、「ヌクレオカプシドＮ抗原」又は単に「Ｎ抗原」という用語は、任意の天然コロナウイルスヌクレオカプシドＮタンパク質又はそれらの抗原性バリアントを指す。

【0047】

天然コロナウイルスヌクレオカプシドＮタンパク質としては、限定されないが、コロナウイルス、特にＳＡＲＳ－Ｃｏｖ１、ＭＥＲＳ－Ｃｏｖ及びＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２のいずれかのヌクレオカプシドが挙げられる。

【0048】

一部の実施形態では、ヌクレオカプシド抗原（Ｎ）は、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２のウイルス株、より具体的には、武漢（Ａ）、欧州（Ｂ．１）、アルファ－ＵＫ（Ｂ．１．１．７）、ベータ南アフリカ（Ｂ．１．３５１）、ガンマブラジル（Ｐ．１）、デルタインド（Ｂ．１．６１７．２）及びオミクロン株からなる群から選択されるＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２株に由来する。

【0049】

具体的な実施形態では、ヌクレオカプシド抗原（Ｎ）は、配列番号１のポリペプチドを含む、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２株の、より具体的には、武漢（Ａ）株由来のＮ抗原である。

【0050】

具体的な実施形態では、抗原性バリアントは、好ましくは配列番号１に由来する、コロナウイルスＳＡＲＳ－Ｃｏｖ１、ＭＥＲＳ－Ｃｏｖ又はＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２の野生型コロナウイルスヌクレオカプシドの少なくとも５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、４９０の連続するアミノ酸残基を有するコロナウイルスヌクレオカプシド抗原の断片である。コロナウイルスヌクレオカプシド抗原の断片は、定義上、典型的にはＳＡＲＳ－Ｃｏｖ１、ＭＥＲＳ－Ｃｏｖ又はＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２由来の対応する全長天然コロナウイルスヌクレオカプシドよりも少なくとも１アミノ酸短い。

【0051】

具体的な実施形態では、コロナウイルスヌクレオカプシド抗原の抗原性バリアントは、典型的にはＳＡＲＳ－Ｃｏｖ１、ＭＥＲＳ－Ｃｏｖ、又は好ましくはＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２由来のコロナウイルスのヌクレオカプシドの対応する野生型配列に対して少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又は９９％の同一性を有する抗原性ポリペプチドバリアントである。好ましくは、コロナウイルスヌクレオカプシド抗原の抗原性バリアントは、配列番号１に対して少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又は９９％の同一性を有する抗原性ポリペプチドバリアントである。

【0052】

特定の実施形態では、前記バリアントは、特に配列番号１の天然ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２ヌクレオカプシド抗原と比較した場合、天然又は非天然アミノ酸（ｎｏｎ－ｎａｔｕｒａｌ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ）でのアミノ酸置換のみ、好ましくは天然アミノ酸での１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０のアミノ酸置換のみによって、対応するコロナウイルスヌクレオカプシド天然抗原と異なる。具体的な実施形態では、バリアントは、配列番号１の天然ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２ヌクレオカプシド抗原と比較して、天然アミノ酸での１、２、又は３つのアミノ酸置換を有する変異体バリアントである。より具体的な実施形態では、前記バリアントは、配列番号１のＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２ヌクレオカプシド抗原と比較した場合、配列番号１のＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２ヌクレオカプシド抗原と比較して１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０のみのアミノ酸置換を有する天然バリアント（すなわち、ヒト組換え技術に起因しない、自然界に見出されるバリアント）である。

【0053】

より具体的な実施形態では、前記変異体バリアントのアミノ酸配列は、大半が保存的アミノ酸置換によって天然コロナウイルスヌクレオカプシド抗原と異なっていてもよく、例えば、バリアントにおける置換のうちの少なくとも１０、例えば少なくとも９、８、７、６、５、４、３、２、又は１つが保存的アミノ酸残基置換えである。

【0054】

より保存的な置換の分類としては、バリン－ロイシン－イソロイシン、フェニルアラニン－チロシン、リジン－アルギニン、アラニン－バリン、及びアスパラギン－グルタミンが挙げられる。任意のコロナウイルスヌクレオカプシド抗原の、典型的には配列番号１の親ポリペプチドと比較される、疎水性親水性指標／親水性特性及び残基重量／サイズの点での保存もまた、バリアント変異体ポリペプチドに実質的に保持され得る。

【0055】

具体的な実施形態では、変異体バリアントは、上で定義された保存的アミノ酸置換によって別の天然アミノ酸と置き換えられている１、２、又は３つのアミノ酸残基を除いて、配列番号１と同一であるポリペプチドを含む。

【0056】

具体的な実施形態では、コロナウイルスヌクレオカプシド抗原のバリアントは、例えばｗｗｗ．ＩＥＤＢ．ｏｒｇでアクセス可能なＩＥＤＢデータベース（免疫エピトープデータベース）に記載されているような、ヒト免疫系によって認識されるエピトープにおいて、配列番号１の親ポリペプチドと比較していかなる変異も含まない。具体的な実施形態では、コロナウイルスヌクレオカプシドのバリアントは、配列番号１のヌクレオカプシド（武漢（Ａ）株由来）と、欧州（Ｂ．１）、アルファ－ＵＫ（Ｂ．１．１．７）、ベータ南アフリカ（Ｂ．１．３５１）、ガンマブラジル（Ｐ．１）デルタインド（Ｂ．１．６１７．２）及びオミクロンの、対応するヌクレオカプシドアミノ酸配列のヌクレオカプシドとの間で保存されているアミノ酸残基のいずれにおいても、配列番号１の親ポリペプチドと比較して変異を含まない。

【0057】

本明細書で使用される場合、「保存されているアミノ酸残基」は、ＢＬＡＳＴアルゴリズムを使用するもの等の標準的な配列タンパク質アラインメントを使用してアラインメントした場合に、武漢（Ａ）株のヌクレオカプシドと、欧州（Ｂ．１）、アルファ－ＵＫ（Ｂ．１．１．７）、ベータ南アフリカ（Ｂ．１．３５１）、ガンマブラジル（Ｐ．１）デルタインド（Ｂ．１．６１７．２）及びオミクロンヌクレオカプシドアミノ酸配列のヌクレオカプシドとの間で同一であるアミノ酸残基に対応する。

【0058】

キャリアタンパク質
本明細書で使用される場合、「キャリアタンパク質」という用語は、概して、抗原がコンジュゲート又は融合し、それによって抗原をより免疫原性にするタンパク質を示す。キャリアタンパク質の機能は、キャリアタンパク質がコンジュゲート又は融合する前記抗原の免疫原性を高めることである。

【0059】

融合タンパク質における使用のためのキャリアタンパク質は、Ｃ４ｂｐオリゴマー化ドメインに由来する自己組織化ポリペプチド及び正に帯電した尾部を含む。補体阻害因子であるＣ４結合タンパク質（Ｃ４ｂｐ）は、マウスで最初に発見された豊富な血漿タンパク質である。Ｃ４ｂｐの天然の機能は、補体活性化の古典的経路及びレクチン経路を阻害することである。Ｃ４ｂｐアルファ鎖遺伝子の最後のエクソンは、補体制御タンパク質ファミリーに属していないタンパク質における唯一のドメインをコードする。この非補体制御タンパク質ドメインは、ヒトでは５７のアミノ酸残基、マウスでは５４のアミノ酸残基を含有し、Ｃ４ｂｐのオリゴマー化に必要且つ十分である。抗原と融合した場合、前記自己組織化ポリペプチドもまた、結果として得られる融合タンパク質のオリゴマー化に必要且つ十分であることが見出されている。

【0060】

国際出願ＰＣＴ／ＩＢ２００４／００２７１７及び国際出願ＰＣＴ／ＥＰ０３／０８９２６は、哺乳動物における抗原の免疫原性を高めるための、哺乳動物Ｃ４ｂｐオリゴマー化ドメインの使用を記載している。国際公開第２００７／０６２８１９号は、ニワトリ種のＣ４ｂｐオリゴマー化ドメイン及びそのバリアントをさらに記載している。

【0061】

好ましい実施形態では、自己免疫反応を最小化するために、自己組織化ポリペプチドは、３０％未満、好ましくは２０％未満のヒトＣ４ｂｐオリゴマー化ドメインに対する同一性を有する。

【0062】

特に、具体的な実施形態では、Ｃ４ｂｐオリゴマー化ドメインに由来する前記自己組織化ポリペプチドは、配列番号２を含むか又は配列番号２から本質的になる。

【0063】

具体的な実施形態では、自己組織化ポリペプチドの機能的バリアントは、配列番号２に対して少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又は９９％の同一性を有する。

【0064】

機能的バリアントには、配列番号２と比較して１つ又は複数のアミノ酸付加、欠失、及び／又は置換を有する、配列番号２のポリペプチドの自己組織化特性を保持する任意のバリアントが含まれ得る。

【0065】

特定の実施形態では、前記バリアントは、天然又は非天然アミノ酸でのアミノ酸置換のみ、好ましくは天然アミノ酸での１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０のアミノ酸置換のみによって、配列番号２と異なる。具体的な実施形態では、バリアントは、配列番号２と比較して、天然アミノ酸での１、２、又は３つのアミノ酸置換を有する変異体バリアントである。

【0066】

より具体的な実施形態では、前記変異体バリアントのアミノ酸配列は、大半が保存的アミノ酸置換によって配列番号２の自己組織化ポリペプチドと異なっていてもよく、例えば、バリアントにおける置換のうちの少なくとも１０、例えば少なくとも９、８、７、６、５、４、３、２、又は１つが保存的アミノ酸残基置換えである。

【0067】

キャリアタンパク質は、正に帯電したペプチドからなるＣ末端尾部をさらに含む。Ｃ末端尾部は、好ましくは、少なくとも５０％が正に帯電したアミノ酸である６～１０アミノ酸からなるペプチドである。正電荷を有するアミノ酸としては、アルギニン又はリジンが挙げられる。そのような正に帯電したペプチドの例は、国際公開第２０１４／０９０９０５号及び同第２０１４／１４７０８７号に開示されている。

【0068】

好ましい実施形態では、前記正に帯電した尾部は、配列ＺＸＢＢＢＢＺ（配列番号３）を含み、ここで、（ｉ）Ｚは存在しないか又は任意のアミノ酸であり、（ｉｉ）Ｘは任意のアミノ酸であり、（ｉｉｉ）Ｂはアルギニン又はリジンであり、好ましくは、前記正に帯電した尾部は、配列番号４の配列を含むか又は配列番号４の配列から本質的になる。

【0069】

より好ましい実施形態では、前記キャリアタンパク質は、配列番号５のポリペプチドに対応するＯＶＸ３１３ポリペプチドから本質的になる。

【0070】

具体的な実施形態では、前記キャリアタンパク質は、配列番号５に対して少なくとも７０％、８０％、又はより好ましくは少なくとも９０％の同一性を有する、配列番号５のＯＶＸ３１３ポリペプチドの機能的バリアントである。

【0071】

他の実施形態では、前記キャリアタンパク質は、アミノ酸置換によって１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０のアミノ酸のみが配列番号５と異なる、配列番号５のＯＶＸ３１３ポリペプチドの機能的バリアントである。他の実施形態では、前記キャリアタンパク質は、保存的アミノ酸置換によって１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０のアミノ酸のみが配列番号５と異なる、配列番号５のＯＶＸ３１３ポリペプチドの機能的バリアントである。

【0072】

Ｎ融合タンパク質
本開示に記載の使用のための融合タンパク質は、
（ｉ）上で定義されたコロナウイルスヌクレオカプシド抗原と、
（ｉｉ）Ｃ４ｂｐオリゴマー化ドメインに由来する自己組織化ポリペプチド及び正に帯電した尾部を含む、上で定義されたキャリアタンパク質と
を含む。

【0073】

結果として得られる、核タンパク質抗原を有する融合タンパク質は、読みやすさのために、以降では「Ｎ融合タンパク質」と称す。

【0074】

具体的な実施形態では、キャリアタンパク質は、Ｃ末端でヌクレオカプシド抗原と、任意選択でペプチドリンカーを介して融合している。ペプチドリンカーは、融合タンパク質に対して一般的に使用される任意の短いペプチドリンカーであり得る。好ましいペプチドリンカーとしては、グリシン－セリンリンカー、例えばジペプチドｇｌｙ－ｓｅｒ、又はｇｌｙ－ｓｅｒ－ｓｅｒ－ｓｅｒ、又は（ｇｌｙ－ｓｅｒ－ｓｅｒ－ｓｅｒ）ｎ（ここで、ｎは１～４の間の整数である）が挙げられる。

【0075】

具体的な実施形態では、前記Ｎ融合タンパク質は、自己組織化後に七量体粒子を形成する。

【0076】

具体的な実施形態では、前記Ｎ融合タンパク質は、自己組織化後に、１００ｎｍ未満、例えば５～１００ｎｍの間、より具体的には１０～１００ｎｍの間の直径を有する粒子を形成する。前記粒子の直径は、例えば動的光散乱法（ＤＬＳ）によって測定され得る。ＤＬＳは、おおよそ０．３ｎｍ～１０μｍのサイズ範囲の粒子の流体力学的直径を測定する。ＤＬＳ測定は、温度及び分散媒粘度に非常に感受性である。したがって、温度は２５℃で一定に保つ必要があり、分散媒の粘度も把握している必要がある。

【0077】

具体的な実施形態では、前記Ｎ融合タンパク質は、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２株から選択される、好ましくは、武漢（Ａ）、欧州（Ｂ．１）、アルファ－ＵＫ（Ｂ．１．１．７）、ベータ南アフリカ（Ｂ．１．３５１）、ガンマブラジル（Ｐ．１）、デルタインド（Ｂ．１．６１７．２）及びオミクロンからなる群から選択されるヌクレオカプシドＮを含む。好ましい実施形態では、前記Ｎ融合タンパク質は、武漢（Ａ）株から選択されるヌクレオカプシドＮを含む。

【0078】

より好ましい実施形態では、前記Ｎ融合タンパク質は、配列番号６のポリペプチドに対応する、より好ましくは配列番号１１によってコードされるＯＶＸ０３３ポリペプチドから本質的になる。

【0079】

具体的な実施形態では、前記Ｎ融合タンパク質は、配列番号６に対して少なくとも７０％、８０％、又はより好ましくは少なくとも９０％の同一性を有するＯＶＸ０３３ポリペプチドの機能的バリアントである。

【0080】

他の実施形態では、前記Ｎ融合タンパク質は、アミノ酸置換によって１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０のアミノ酸のみが配列番号６と異なる、配列番号６のＯＶＸ０３３ポリペプチドの機能的バリアントである。他の実施形態では、前記Ｎ融合タンパク質は、保存的アミノ酸置換によって１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０のアミノ酸のみが配列番号６と異なる、ＯＶＸ０３３ポリペプチドの機能的バリアントである。

【0081】

本発明者らは、驚くべきことに、そのようなＮ融合タンパク質が、特に細菌発現系、例えば大腸菌発現系において作製した場合、特にコロナウイルス疾患を防御することに関する優れた免疫原性特性を有することを見出した。

【0082】

具体的な実施形態では、本開示のＮ融合タンパク質は、哺乳動物細胞（例えばＣＨＯ又はヒト細胞株）において産生される糖タンパク質に典型的なＮ－グリコシル化を呈さなかった。より具体的な実施形態では、Ｎ融合タンパク質はグリコシル化されていない。他の具体的な実施形態では、本開示のＮ融合タンパク質は、細菌発現系、例えば大腸菌発現系から取得可能であるか又は取得される。

【0083】

Ｎ融合タンパク質を調製するための方法
本開示に記載の使用のためのＮ融合タンパク質は、遺伝暗号を使用して、及び任意選択で宿主細胞種に応じたコドンバイアスを考慮してヌクレオチド配列が容易に得られる前記Ｎ融合タンパク質をコードする核酸分子を使用する、組換えタンパク質を調製するための任意の従来の方法によって調製することができる。

【0084】

Ｎ融合タンパク質を調製するために使用することができるヌクレオチド配列の好ましい例は、典型的には表２及び３に記載されている配列番号１～６のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列である。

【0085】

核酸分子は、アミノ酸配列から得られ、原核細胞、例えば大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞におけるタンパク質発現について最適化され得る。

【0086】

より好ましい実施形態では、前記Ｎ融合タンパク質は、配列番号１１の最適化されたコード核酸配列を使用して、細菌細胞発現系において調製される。本発明者らは、驚くべきことに、結果として得られるＮ融合タンパク質が、そのような最適化された配列を用いて、他のヌクレオチド配列と比較して好適な品質及び収率で作製されることを見出した。

【0087】

核酸は、細胞溶解液中の全細胞に存在し得るか、又は部分的に精製されたか若しくは実質的に純粋な形態の核酸であり得る。核酸は、アルカリ／ＳＤＳ処理、ＣｓＣｌバンド形成、カラムクロマトグラフィー、アガロースゲル電気泳動、及び当技術分野で周知の他の技法を含む標準的な技法によって他の細胞成分又は他の汚染物質、例えば、他の細胞核酸又はタンパク質から精製された場合、「単離される」か又は「実質的に純粋になる」。本開示の核酸は、例えばＤＮＡ又はＲＮＡであり得、イントロン配列を含有していてもしていなくてもよい。一実施形態では、核酸は、ベクター、例えば組換えプラスミドベクターに存在してもよい。

【0088】

核酸は、標準的な分子生物学的技法を使用して取得することができる。核タンパク質抗原をコードするＤＮＡ断片が取得された後、これらのＤＮＡ断片は、標準的な組換えＤＮＡ技法によってさらに操作することができる。これらの操作において、例えばヌクレオカプシド抗原をコードするＤＮＡ断片は、別のＤＮＡ分子、例えばキャリアタンパク質をコードする断片及び任意選択でリンカーに作動的に連結され得る。

【0089】

「作動的に連結」という用語は、上記文脈で使用される場合、例えば、２つのＤＮＡ断片によってコードされているアミノ酸配列がインフレームのままとなるように、又はタンパク質が所望のプロモーターの制御下で発現するように、２つのＤＮＡ断片が機能的に結合されることを意味することが意図される。

【0090】

次いで、本開示のＮ融合タンパク質（特にＯＶＸ０３３）は、例えば、当技術分野で周知の組換えＤＮＡ技法と遺伝子トランスフェクション法との組合せを使用して、宿主細胞トランスフェクトーマにおいて作製することができる。

【0091】

例えば、Ｎ融合タンパク質（典型的にはＯＶＸ０３３）、その対応する断片を発現させるために、部分又は全長組換えタンパク質をコードするＤＮＡが、標準的な分子生物学的又は生化学的技法（例えば、ＤＮＡ化学合成、ＰＣＲ増幅、又はｃＤＮＡクローニング）によって取得され得、上記ＤＮＡは、遺伝子が転写及び翻訳制御配列に作動的に連結されるように発現ベクターに挿入され得る。

【0092】

上記文脈において、「作動的に連結」という用語は、ベクター内の転写及び翻訳制御配列が、組換えＮ融合タンパク質の転写及び翻訳を調節するという所期の機能を果たすように、コードポリペプチド配列がベクターにライゲーションされることを意味することが意図される。発現ベクター及び発現制御配列は、使用される発現宿主細胞と適合性となるように選択される。タンパク質コード遺伝子は、標準技法によって発現ベクターに挿入される。

【0093】

組換え発現ベクターは、宿主細胞からの組換え融合タンパク質の分泌を促進するシグナルペプチドをコードすることができる。Ｎ融合タンパク質コード遺伝子は、シグナルペプチドが組換えタンパク質のアミノ末端にインフレームで連結されるようにベクターにクローニングすることができる。シグナルペプチドは、Ｃ４ｂｐの天然シグナルペプチド又は異種シグナルペプチド（すなわち、非Ｃ４ｂｐタンパク質由来のシグナルペプチド）であり得る。具体的な実施形態では、シグナルペプチドはメチオニンアミノ酸である。

【0094】

Ｎ融合タンパク質コード配列に加えて、本明細書に開示される組換え発現ベクターは、宿主細胞における組換え融合タンパク質の発現を制御する調節配列を保有してもよい。「調節配列」という用語には、プロモーター、エンハンサー、及びタンパク質コード遺伝子の転写又は翻訳を制御する他の発現制御エレメント（例えば、ポリアデニル化シグナル）が含まれることが意図される。調節配列の選択を含む発現ベクターの設計が、形質転換される宿主細胞の選択、所望されるタンパク質の発現のレベル等のような因子に依存し得ることは、当業者によって理解されるだろう。

【0095】

具体的な実施形態では、発現ベクターは、細菌宿主細胞における発現のための細菌プロモーターに作動的に連結されている配列番号１１のコード配列を含む。

【0096】

哺乳動物宿主細胞発現のための調節配列としては、哺乳動物細胞における高レベルのタンパク質発現を導くウイルスエレメント、例えば、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）、アデノウイルス（例えば、アデノウイルス主要後期プロモーター（ＡｄＭＬＰ））、及びポリオーマに由来するプロモーター及び／又はエンハンサーが挙げられる。或いは、ユビキチンプロモーター又はＰ－グロビンプロモーター等の非ウイルス調節配列が使用されてもよい。さらに、異なる供給源由来の配列から構成された調節エレメント、例えばＳＶ４０初期プロモーター由来の配列とヒトＴ細胞白血病ウイルス１型の長鎖末端反復配列とを含有するＳＲａプロモーターシステムが使用されてもよい。

【0097】

Ｎ融合タンパク質コード配列及び調節配列に加えて、本開示の組換え発現ベクターは、追加の配列、例えば、宿主細胞におけるベクターの複製を調節する配列（例えば複製起点）及び選択マーカー遺伝子を保有してもよい。選択マーカー遺伝子は、ベクターが導入された宿主細胞の選択を容易にする。例えば、選択マーカー遺伝子は、抗生物質（細菌発現系における）又は薬物（例えばＧ４１８）に対する耐性を付与する。

【0098】

Ｎ融合タンパク質の発現のために、組換えタンパク質をコードする発現ベクター（複数可）は、標準的な技法によって宿主細胞にトランスフェクトされる。「トランスフェクション」という用語の様々な形は、外来ＤＮＡの原核又は真核宿主細胞への導入のために一般的に使用される多種多様な技法、例えば、電気穿孔、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥデキストラントランスフェクション等を包含することが意図される。本開示のタンパク質を原核宿主細胞又は真核宿主細胞のいずれかにおいて発現させることは理論的に可能である。

【0099】

Ｎタンパク質の発現は、原核細胞、例えば大腸菌宿主細胞において実行され得る。次いで、Ｎ融合タンパク質は、細菌細胞の溶解、及び標準的な精製手順を使用したさらなる精製によって回収され得る。具体的な実施形態では、Ｎ融合タンパク質は、ＤｅｌＣａｍｐｏ ２０２１（Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、ｄｏｉ：１０／３３８９／ｆｉｍｍ．２０２１．６７８４８３）に開示されている方法に類似した方法に従って作製される。

【0100】

具体的な実施形態では、本開示は、配列番号１１のコード配列又は配列番号１１のコード配列を含む発現ベクターを含む、Ｎ融合タンパク質の作製のための細菌宿主細胞、典型的には大腸菌宿主細胞に関する。

【0101】

免疫原性組成物
別の態様では、本開示は、組成物、例えば、先の節に記載されているＮ融合タンパク質と、１種又は複数種の薬学的に許容される賦形剤とを含有する免疫原性組成物を提供する。

【0102】

免疫原性組成物は、非経口、鼻腔内、筋肉内、又は皮下投与（例えば、筋肉内注射による）に好適な任意の水性ビヒクルを含む。これらの水性ビヒクルは、特に等張滅菌生理食塩水溶液（リン酸一ナトリウム若しくは二ナトリウム、ナトリウム、カリウム、塩化カルシウム若しくはマグネシウム等、又はそのような塩の混合物）であり得る。

【0103】

具体的な実施形態では、前記Ｎ融合タンパク質は、少なくとも４００のアミノ酸残基、例えば４００～６００の間のアミノ酸残基、例えば５４０～５６０の間のアミノ酸残基を含み、任意選択で、前記Ｎ融合タンパク質は、本明細書に開示されるように、前記免疫原性組成物において、５～１００ｎｍの間、例えば１０～１００ｎｍの間の直径を有する粒子を形成する。

【0104】

例えば、前記免疫原性組成物は、１種又は複数種の薬学的に許容される賦形剤と一緒に製剤化された、配列番号６のポリペプチド（ＯＶＸ０３３）又は配列番号６に対して少なくとも７０％、８０％、好ましくは少なくとも９０％、若しくは少なくとも９５％の同一性を有するバリアントを含む水性組成物である。

【0105】

具体的な実施形態では、前記免疫原性組成物は、配列番号６のポリペプチド（ＯＶＸ０３３）を含む水性組成物であって、上記ポリペプチドが、配列番号１１のコード配列から取得され、グリコシル化されていない、水性組成物である。

【0106】

好ましい実施形態では、前記免疫原性組成物は、配列番号６のポリペプチド（ＯＶＸ０３３）を含む水性組成物であって、上記ポリペプチドが、配列番号１１のコード配列から取得され、細菌発現系、典型的には大腸菌宿主細胞から取得される、水性組成物である。

【0107】

具体的な実施形態では、前記免疫原性組成物は、武漢（Ａ）、欧州（Ｂ．１）、アルファ－ＵＫ（Ｂ．１．１．７）、ベータ南アフリカ（Ｂ．１．３５１）、ガンマブラジル（Ｐ．１）、デルタインド（Ｂ．１．６１７．２）及びオミクロンからなる群から選択されるＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２株から選択されるヌクレオカプシドＮを含む融合タンパク質を提供する。

【0108】

具体的な実施形態では、前記免疫原性組成物は、特に、必ずしもというわけではないが、武漢（Ａ）、欧州（Ｂ．１）、アルファ－ＵＫ（Ｂ．１．１．７）、ベータ南アフリカ（Ｂ．１．３５１）、ガンマブラジル（Ｐ．１）、デルタインド（Ｂ．１．６１７．２）及びオミクロンからなる群から選択される異なるＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２株由来の複数の融合タンパク質を提供する。

【0109】

具体的な実施形態では、前記免疫原性組成物は、以下の賦形剤、例えば、緩衝液、塩、浸透圧調節物質、抗酸化剤、並びにバイアル表面におけるタンパク質喪失及び／又はタンパク質凝集を予防するための界面活性剤又は他の薬剤のうちの１つ又は複数をさらに含み得る。

【0110】

医薬組成物の形態、投与経路、投薬量、及びレジメンは、処置される状態、疾病の重症度、患者の年齢、体重、及び性別等に当然依存する。

【0111】

好ましい実施形態では、組成物は、筋肉内投与のために製剤化されている。

【0112】

一部の実施形態では、免疫原性組成物は、好ましくは筋肉内経路を介してヒト対象に投与される１又は２用量によって対象において抗原Ｎ特異的免疫応答を生じさせる、有効量のＮ融合タンパク質（典型的にはＯＶＸ０３３）において製剤化される。

【0113】

筋肉内投与の場合、例えば、組成物は、必要に応じて好適に緩衝され得る水性溶液、及び初めに十分な塩又は糖を用いて少なくとも等張にされる液体希釈剤である。これに関連して、用いられ得る滅菌水性媒体は、本開示を考慮することで当業者に知られるだろう。注射溶液の製剤の例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２３版、２０２０年に提供されている。投薬量のある程度の変更は、処置されている対象の状態に応じて行ってもよい。製剤のさらなる具体例は、特にＯＶＸ０３３に関する使用についての実施例において示される。

【0114】

具体的な実施形態では、前記免疫原性組成物は、典型的にはスパイクＳタンパク質又は膜Ｍタンパク質から選択される追加のコロナウイルス抗原をさらに含む。

【0115】

具体的な実施形態では、前記免疫原性組成物は、ヌクレオカプシドＮ抗原を唯一のコロナウイルス抗原としてさらに含む。特に、前記免疫原性組成物は、スパイクＳタンパク質又は膜Ｍタンパク質から選択される追加のコロナウイルス抗原を含まない。

【0116】

具体的な実施形態では、前記免疫原性組成物は、例えば、任意選択でＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト又はサポニンと組み合わされる、アルミニウム塩（例えば酸化アルミニウム、水酸化アルミニウム又はリン酸アルミニウム）、スクアレン又はリポソーム系アジュバントからなる群から選択される１種又は複数種のアジュバントをさらに含む。

【0117】

他の具体的な実施形態では、前記免疫原性組成物は、いかなるアジュバントも含まない。

【0118】

具体的な実施形態では、免疫原性組成物は、直ちに使用できる滅菌注射溶液として製剤化されている。

【0119】

滅菌注射溶液は、必要とされる量の活性化合物、すなわちＮ融合タンパク質を、様々な他の成分を含有する適切な溶媒に必要に応じて組み込み、続いて濾過滅菌することによって調製される。

【0120】

Ｎ融合タンパク質及びＮＰ融合タンパク質の免疫原性組成物の使用の方法
先の節に記載されているＮ融合タンパク質（特にＯＶＸ０３３、より具体的には細菌宿主細胞において配列番号１１から取得されるＮ融合タンパク質）及びそれらの免疫原性組成物は、必要とするヒト対象における、コロナウイルス疾患、特にＣＯＶＩＤ－１９の予防における、典型的には重度のＣＯＶＩＤ－１９からの防御のためのワクチンとして有用である。

【0121】

したがって、本開示は、ヒト及び他の哺乳動物におけるコロナウイルス疾患の予防のための、組成物（例えば、先の節に記載されている免疫原性組成物）、方法、キット、及び試薬を提供する。本明細書に開示されるＮ融合タンパク質又は免疫原性組成物は、予防剤として使用することができる。本明細書に開示されるＮ融合タンパク質又は免疫原性組成物は、コロナウイルス疾患、特にＣＯＶＩＤ－１９を予防及び／又は防御するための、より具体的には重度のＣＯＶＩＤ－１９を防御するための医薬に使用されてもよい。

【0122】

例示的な態様では、本開示のＮ融合タンパク質又は免疫原性組成物は、コロナウイルス疾患、特にＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２疾患、例えばＣＯＶＩＤ－１９からの予防的防御を実現するため、典型的には重度のＣＯＶＩＤ－１９を防御するために使用される。コロナウイルスからの予防的防御は、典型的には１又は複数の免疫原性用量のＯＶＸ０３３を有する、免疫原性量の本開示の組成物の投与後に達成することができる。免疫原性組成物は、１回、２回、３回、又は４回以上投与され得る。

【0123】

一部の実施形態では、本開示のＮ融合タンパク質又は免疫原性組成物は、対象におけるコロナウイルス感染症を予防する方法であって、前記対象に、少なくとも１免疫原性用量の本明細書において提供されるＮ融合タンパク質又は組成物、典型的には抗原決定基としてＯＶＸ０３３を含む組成物を投与するステップを含む方法において使用することができる。

【0124】

一部の実施形態では、本開示のＮ融合タンパク質又は免疫原性組成物は、対象における一次コロナウイルス感染症を阻害する方法であって、前記対象に、少なくとも１免疫原性用量の本明細書において提供されるＮ融合タンパク質又は組成物、典型的には抗原決定基としてＯＶＸ０３３を含む組成物を投与するステップを含む方法として使用することができる。

【0125】

一部の実施形態では、本開示のＮ融合タンパク質又は免疫原性組成物は、対象におけるコロナウイルス疾患、典型的には重度のコロナウイルス疾患の発生率を低下させる方法であって、前記対象に、免疫原性用量の本明細書において提供されるＮ融合タンパク質又は組成物、典型的には抗原決定基としてＯＶＸ０３３を含む組成物を少なくとも投与するステップを含む方法として使用することができる。一部の実施形態では、本開示のＮ融合タンパク質又は免疫原性組成物は、対象におけるコロナウイルス疾患、典型的には重度のコロナウイルス疾患、例えば重度のＣＯＶＩＤ－１９を防御する方法であって、前記対象に、免疫原性用量の本明細書において提供されるＮ融合タンパク質又は組成物、典型的には抗原決定基としてＯＶＸ０３３を含む組成物を少なくとも投与するステップを含む方法として使用することができる。

【0126】

本明細書で使用される場合、「重度のＣＯＶＩＤ－１９」という用語は、
中等度の疾病：臨床評価又はイメージング中に下気道疾患の証拠を示し、且つ、海面レベルの室内気における酸素飽和度（ＳｐＯ２）が９４％以上である個体。
重度の疾病：海面レベルの室内気におけるＳｐＯ２が９４％未満、動脈血酸素分圧の吸入酸素濃度に対する比（ＰａＯ２／ＦｉＯ２）が３００ｍｍＨｇ未満、呼吸数が３０回／分超、又は肺浸潤が５０％超である個体。
重篤な疾病：呼吸不全、敗血症性ショック、及び／又は多臓器機能不全を有する個体
のいずれかを指す。

【0127】

一部の実施形態では、「重度のＣＯＶＩＤ－１９」という用語は、入院を必要とする呼吸欠損症状を伴うＣＯＶＩＤ－１９を指す。

【0128】

一部の実施形態では、本開示のＮ融合タンパク質又は免疫原性組成物は、対象におけるＣＯＶＩＤ－１９の重度の症状のうちの１つ又は複数を防御する方法であって、前記対象に、免疫原性用量の本明細書において提供されるＮ融合タンパク質又は組成物、典型的には抗原決定基としてＯＶＸ０３３を含む組成物を少なくとも投与するステップを含む方法として使用することができる。一部の実施形態では、本開示のＮ融合タンパク質又は免疫原性組成物は、コロナウイルスに感染した第１の対象からコロナウイルスに感染していない第２の対象へのコロナウイルスの伝播を阻害する方法であって、前記第１の対象及び前記第２の対象に、少なくとも１免疫原性用量の本明細書において提供されるＮ融合タンパク質又は組成物、典型的には抗原決定基としてＯＶＸ０３３を含む組成物を投与するステップを含む方法として使用することができる。

【0129】

本明細書で使用される場合、「免疫原性用量」という用語は、必要とする対象にそのような量を１回又は複数回投与した場合に対象において抗原Ｎ特異的免疫応答を誘導することが明確な量を指す。

【0130】

本開示の一部の実施形態は、対象において抗原Ｎ特異的免疫応答を誘導する方法であって、対象に、Ｎ特異的免疫応答を生じさせるのに有効な量の本明細書において提供される免疫原性組成物のいずれか（好ましくはＯＶＸ０３３を有する免疫原性組成物）を投与するステップを含む方法を提供する。一部の実施形態では、抗原Ｎ特異的免疫応答は、総Ｔ細胞応答（特にＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｎ特異的Ｔ細胞応答）及び／又はＢ細胞応答（特異的抗Ｎ免疫グロブリン応答）を含む。

【0131】

本開示の一部の実施形態は、対象において抗原Ｎ特異的交差反応性免疫応答を誘導する方法であって、対象に、本明細書において提供される免疫原性組成物のいずれか（好ましくは武漢Ａ ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２株を有する免疫原性組成物、より好ましくはＯＶＸ０３３）を、特に他のコロナウイルス株、例えば、欧州（Ｂ．１）、アルファ－ＵＫ（Ｂ．１．１．７）、ベータ南アフリカ（Ｂ．１．３５１）、ガンマブラジル（Ｐ．１）、デルタインド（Ｂ．１．６１７．２）、オミクロン、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ１、及びＭＥＲＳ－ＣｏＶに対する交差反応性Ｎ特異的免疫応答を生じさせるのに有効な量で投与するステップを含む方法を提供する。

【0132】

本開示の一部の実施形態は、対象において抗原Ｎ特異的交差反応性免疫応答を誘導する方法であって、対象に、本明細書において提供される免疫原性組成物のいずれか（好ましくは武漢Ａ ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２株を有する免疫原性組成物、より好ましくはＯＶＸ０３３）を、特に他のＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２株、例えば、欧州（Ｂ．１）、アルファ－ＵＫ（Ｂ．１．１．７）、ベータ南アフリカ（Ｂ．１．３５１）、ガンマブラジル（Ｐ．１）、デルタインド（Ｂ．１．６１７．２）、及びオミクロンに対する交差反応性Ｎ特異的免疫応答を生じさせるのに有効な量で投与するステップを含む方法を提供する。

【0133】

一部の実施形態では、抗原Ｎ特異的免疫応答は、総Ｔ細胞応答（特にＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｎ特異的Ｔ細胞応答）及び／又はＢ細胞応答（特異的抗Ｎ免疫グロブリン応答）を含む。

【0134】

一部の実施形態では、抗原Ｎ特異的免疫応答を生じさせる方法は、対象に、単回用量の本開示の免疫原性組成物（典型的には、例えば配列番号１１及び／又は細菌発現系、例えば大腸菌宿主細胞から取得されるＯＶＸ０３３を有する）を投与するステップを含む。

【0135】

一部の実施形態では、免疫原性組成物（典型的にはＯＶＸ０３３を有する）は、対象に、皮内注射、筋肉内注射、又は鼻腔内投与によって投与される。好ましい実施形態では、免疫原性組成物（典型的にはＯＶＸ０３３を有する）は、対象に、筋肉内注射によって投与される。

【0136】

実施例に示されるデータは、ハムスターにおいて特にＯＶＸ０３３を有する免疫原性組成物を使用する、コロナウイルス疾患に対する有意な強化された防御、及び他のコロナウイルス感染症、例えば他のＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２株に対する交差反応性免疫応答を実証する。

【0137】

一部の実施形態では、Ｎ融合タンパク質（典型的にはＯＶＸ０３３）の有効量は、１０μｇ～１０００μｇ、５０μｇ～１０００μｇ、又はそれよりも多い１又は複数用量である。

【0138】

一部の実施形態では、ワクチンとしての使用のための免疫原性組成物（典型的にはＯＶＸ０３３を含む）は、対象を重度のＣＯＶＩＤ－１９に対して防御する。

【0139】

一部の実施形態では、ワクチンとしての使用のための免疫原性組成物（典型的にはＯＶＸ０３３を含む）は、対象を、肺損傷、呼吸不全、敗血症性ショック、及び／又は多臓器機能不全等のコロナウイルス疾患のうちの１つ又は複数の重度の症状に対して防御する。

【0140】

一部の実施形態では、ワクチンとしての使用のためのＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２ヌクレオカプシドＮ抗原のＮ融合タンパク質を有する免疫原性組成物（典型的にはＯＶＸ０３３を含む）は、欧州（Ｂ．１）、アルファ－ＵＫ（Ｂ．１．１．７）、ベータ南アフリカ（Ｂ．１．３５１）、ガンマブラジル（Ｐ．１）、デルタインド（Ｂ．１．６１７．２）、オミクロン、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ１、及びＭＥＲＳ－ＣｏＶからなる群から選択される他のコロナウイルスに対する交差反応性免疫応答（例えばヌクレオカプシドＮに特異的なＣＤ４＋及び／又はＣＤ８＋Ｔ細胞応答、抗ヌクレオカプシドＮ ＩｇＧ（抗体応答））をもたらす。

【0141】

一部の実施形態では、ワクチンとしての使用のためのＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２ヌクレオカプシドＮ抗原のＮ融合タンパク質を有する免疫原性組成物（典型的にはＯＶＸ０３３を含む）は、欧州（Ｂ．１）、アルファ－ＵＫ（Ｂ．１．１．７）、ベータ南アフリカ（Ｂ．１．３５１）、ガンマブラジル（Ｐ．１）、デルタインド（Ｂ．１．６１７．２）、及びオミクロンからなる群から選択される他のＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２株に対する交差反応性免疫応答（例えばヌクレオカプシドＮに特異的なＣＤ４＋及び／又はＣＤ８＋Ｔ細胞応答、抗ヌクレオカプシドＮ ＩｇＧ（抗体応答））をもたらす。

【0142】

一部の実施形態では、ワクチンとしての使用のための免疫原性組成物（典型的にはＯＶＸ０３３を含む）は、対象を、武漢（Ａ）、欧州（Ｂ．１）、アルファ－ＵＫ（Ｂ．１．１．７）、ベータ南アフリカ（Ｂ．１．３５１）、ガンマブラジル（Ｐ．１）、デルタインド（Ｂ．１．６１７．２）及びオミクロン株からなる群から選択されるＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２株のうちの１つ又は複数からのコロナウイルス疾患に対して免疫化する。

【0143】

一部の実施形態では、ワクチンとしての使用のための免疫原性組成物（典型的にはＯＶＸ０３３を含む）は、他のコロナウイルス疾患からのコロナウイルス症状のうちの１つ又は複数に対する交差防御、例えば、肺損傷、呼吸不全、敗血症性ショック、及び／又は多臓器機能不全等の重度のコロナウイルス症状のうちの１つ又は複数に対する防御、より具体的には、欧州（Ｂ．１）、アルファ－ＵＫ（Ｂ．１．１．７）、ベータ南アフリカ（Ｂ．１．３５１）、ガンマブラジル（Ｐ．１）、デルタインド（Ｂ．１．６１７．２）、オミクロン、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ１、及びＭＥＲＳ－ＣｏＶからなる群から選択される、より詳細には、欧州Ｂ．１、デルタ、オミクロン及び／又はベータからなる群から選択されるコロナウイルス感染症に起因するコロナウイルス疾患からの交差防御をもたらす。

【0144】

一部の実施形態では、対象はコロナウイルス（例えば、武漢（Ａ）、欧州（Ｂ．１）、アルファ－ＵＫ（Ｂ．１．１．７）、ベータ南アフリカ（Ｂ．１．３５１）、ガンマブラジル（Ｐ．１）、デルタインド（Ｂ．１．６１７．２）及びオミクロン株からなる群から選択されるＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２株のうちの１つ又は複数）に曝露されたことがあるか、対象はコロナウイルスに感染しているか、又は対象はコロナウイルスによる感染のリスクがある。

【0145】

他の実施形態では、対象は、重度のＣｏｖｉｄ－１９を発症するリスクがある。リスク因子としては、限定されないが、（アルファベット順に列挙して）年齢（リスクは、５０歳以降、１０年ごとに増加する）、癌、心血管疾患、慢性腎疾患、慢性肺疾患、糖尿病、免疫不全状態又は免疫抑制薬の服用、肥満（ボディマス指数≧３０）、妊娠、及び鎌状赤血球疾患が挙げられる。

【0146】

一部の実施形態では、対象は、（ｉ）高齢の対象（例えば６５歳、７０歳、又は８０歳超）、（ｉｉ）妊娠している対象、（ｉｉｉ）免疫不全対象、又は（ｉｖ）小児（例えば１８歳未満、１６、１４、１２、１０、８、６、４、２歳、又は２歳未満の者）のいずれかである。

【0147】

他の実施形態では、免疫原性組成物は、好ましくはタンパク質スパイク又はその抗原性断片を含むコロナウイルスワクチンから選択される第２のコロナウイルスワクチンと組み合わされて、同時に又は逐次に投与される。

【0148】

具体的な実施形態では、免疫原性組成物は、ｍＲＮＡコロナウイルスワクチン、典型的には、例えばコミナティ（ＣＯＭＩＲＮＡＴＹ）ワクチン（Ｐｆｉｚｅｒ－ＢｉｏＮＴｅｃｈ；ＢＮＴ１６２ｂ２ ｍＲＮＡ）又はスパイクバックス（ＳＰＩＫＥＶＡＸ）ＣＯＶＩＤ－１９ワクチン（Ｍｏｄｅｒｎａ、ｍＲＮＡ－１２７３ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）からなる群から選択される、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２スパイクタンパク質又はその抗原性断片をコードするｍＲＮＡを含むｍＲＮＡコロナウイルスと組み合わされて、同時に又は逐次に投与される。

【0149】

本明細書で使用される場合、「組合せ」、「併用投与」、又は「同時投与」という用語は、少なくとも２種の有効成分（例えば免疫原性組成物の併用投与を指し、ここで、本明細書に開示されるＮ融合タンパク質を含む第１の免疫原性組成物は、第２のワクチン又は免疫原性組成物と同時に又は時間間隔内に別個に、それらを必要とする同じ対象に投与され、上記時間間隔は、組み合わされた有効成分がコロナウイルス、典型的にはＣｏｖｉｄ－１９に対する免疫応答又は防御に関する協同又は相乗効果を示すことを可能にする。同時の又は時間間隔内の別個の送達方法は本明細書に記載される範囲に含まれるが、免疫原性組成物が同時に投与されなければならない、及び／又は送達のために一緒に製剤化されなければならない、ということを含意することは意図されていない。「組合せ」、「併用投与」、又は「同時投与」という用語が、活性（免疫原性）剤が必ずしも同じ投与経路によって投与されるわけではないレジメンを包含することもまた意図される。

【0150】

具体的な実施形態では、他のコロナウイルスワクチン（例えば、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２スパイクタンパク質又は抗原性断片をコードするｍＲＮＡを含むｍＲＮＡワクチン）は、本開示の前記免疫原性組成物の前に、典型的には、前記免疫原性組成物の投与の１カ月前～３カ月前の間に含まれる時間間隔内で初めに投与される。具体的な実施形態では、実施者は、他のワクチン（例えばｍＲＮＡワクチン）とＮ融合タンパク質ワクチンとの同時免疫応答を理想的にもたらして、免疫又は防御応答に対する相乗効果を生じさせるように、ワクチンの投与の順序を調整することができる。

【0151】

本開示を、以下の実施形態、実施例及び図面によってさらに示す。しかしながら、これらの実施例及び図面は、いかなる点においても本開示の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。

【0152】

具体的な実施形態
Ｅ１．必要とするヒト対象における、コロナウイルス疾患、特にＣＯＶＩＤ－１９の予防のため、典型的には重度のＣＯＶＩＤ－１９からの防御のためのワクチンとしての使用のための免疫原性組成物であって、前記免疫原性組成物は融合タンパク質を含み、前記融合タンパク質は、
（ｉ）コロナウイルスヌクレオカプシドＮ抗原、好ましくはＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２ヌクレオカプシドＮ抗原と、それが融合している
（ｉｉ）Ｃ４ｂｐオリゴマー化ドメインに由来する自己組織化ポリペプチド及び正に帯電した尾部を含むキャリアタンパク質と
を含む、免疫原性組成物。

【0153】

Ｅ２．前記融合タンパク質がグリコシル化されていない、Ｅ１に記載の使用のための免疫原性組成物。

【0154】

Ｅ３．前記融合タンパク質が、細菌発現系、例えば大腸菌発現系から取得可能である、Ｅ１又はＥ２に記載の使用のための免疫原性組成物。

【0155】

Ｅ４．キャリアタンパク質が、Ｃ末端でヌクレオカプシドＮ抗原に融合しており、任意選択でグリシン－セリンリンカーを介して融合している、Ｅ１～Ｅ３のいずれか１つに記載の使用のための免疫原性組成物。

【0156】

Ｅ５．前記融合タンパク質が、自己組織化後に七量体タンパク質を形成する、Ｅ１～Ｅ４のいずれか１つに記載の使用のための免疫原性組成物。

【0157】

Ｅ６．前記ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２ヌクレオカプシドＮ抗原が、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２株由来の少なくとも１種のヌクレオカプシドＮ抗原を含む、例えば、前記ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２ヌクレオカプシドＮ抗原が、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２武漢（Ａ）株のヌクレオカプシドＮタンパク質［Ｐ０ＤＴＣ９（ＮＣＡＰ＿ＳＡＲＳ２）、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（２０１９－ｎＣｏＶ）］から本質的になる、Ｅ１～Ｅ５のいずれか１つに記載の使用のための免疫原性組成物。

【0158】

Ｅ７．前記ヌクレオカプシドＮ抗原が、
（ｉ）配列番号１のポリペプチド、又は
（ｉｉ）配列番号１に対して少なくとも９０％の同一性を有する抗原性ポリペプチドバリアント
を含む、Ｅ１～Ｅ６のいずれか１つに記載の使用のための免疫原性組成物。

【0159】

Ｅ８．Ｃ４ｂｐオリゴマー化ドメインに由来する前記自己組織化ポリペプチドが、配列番号２、又は配列番号２に対して少なくとも９０％の同一性を有する機能的バリアントを含む、Ｅ１～Ｅ７のいずれか１つに記載の使用のための免疫原性組成物。

【0160】

Ｅ９．前記正に帯電した尾部が、配列ＺＸＢＢＢＢＺ（配列番号３）を含み、ここで、（ｉ）Ｚは存在しないか又は任意のアミノ酸であり、（ｉｉ）Ｘは任意のアミノ酸であり、（ｉｉｉ）Ｂはアルギニン又はリジンであり、好ましくは、前記正に帯電した尾部が、配列番号４の配列を含む、Ｅ１～Ｅ８のいずれか１つに記載の使用のための免疫原性組成物。

【0161】

Ｅ１０．前記キャリアタンパク質が、配列番号５から本質的になるか、又は前記キャリアタンパク質が、配列番号５に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列番号５の機能的バリアントである、Ｅ１～Ｅ９のいずれか１つに記載の使用のための免疫原性組成物。

【0162】

Ｅ１１．前記融合タンパク質が、配列番号６を含むか若しくは配列番号６から本質的になるか、又は配列番号６に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列番号６の機能的バリアントである、Ｅ１～Ｅ１０のいずれか１つに記載の使用のための免疫原性組成物。

【0163】

Ｅ１２．前記融合タンパク質が配列番号１１によってコードされる、Ｅ１１に記載の使用のための免疫原性組成物。

【0164】

Ｅ１３．前記免疫原性組成物が筋肉内経路を介して投与される、Ｅ１～Ｅ１２のいずれか１つに記載の使用のための免疫原性組成物。

【0165】

Ｅ１４．前記免疫原性組成物がＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２スパイクＳ抗原を含まない、好ましくは、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２ヌクレオカプシドＮ抗原が組成物における唯一のＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２抗原決定基である、Ｅ１～Ｅ１４のいずれか１つに記載の使用のための免疫原性組成物。

【0166】

Ｅ１５．前記使用が、ヌクレオカプシドＮに特異的な総Ｔ細胞応答、ヌクレオカプシドＮに特異的なＣＤ４＋及び／若しくはＣＤ８＋Ｔ細胞応答、抗ヌクレオカプシドＮ ＩｇＧ（抗体応答）、並びに／又はコロナウイルス症状のうちの１つ若しくは複数に対する防御、例えば、肺損傷、呼吸不全、敗血症性ショック、及び／若しくは多臓器機能不全等の重度のコロナウイルス症状のうちの１つ若しくは複数に対する防御、より具体的には、武漢（Ａ）、欧州（Ｂ．１）、アルファ－ＵＫ（Ｂ．１．１．７）、ベータ南アフリカ（Ｂ．１．３５１）、ガンマブラジル（Ｐ．１）、デルタインド（Ｂ．１．６１７．２）、オミクロン、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ１、及びＭＥＲＳ－ＣｏＶからなる群から選択される、より詳細には、欧州Ｂ．１、デルタ、オミクロン及び／若しくはベータからなる群から選択されるコロナウイルス株への感染に起因するコロナウイルス疾患からの防御をもたらす、Ｅ１～Ｅ１４のいずれか１つに記載の使用のための免疫原性組成物。

【0167】

Ｅ１６．前記ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２ヌクレオカプシドＮ抗原が武漢（Ａ）株から選択され、前記使用が、ヌクレオカプシドＮに特異的な総Ｔ細胞応答、ヌクレオカプシドＮに特異的なＣＤ４＋／ＣＤ８＋Ｔ細胞応答、抗ヌクレオカプシドＮ ＩｇＧ（抗体応答）、並びに／又は欧州（Ｂ．１）、アルファ－ＵＫ（Ｂ．１．１．７）、ベータ南アフリカ（Ｂ．１．３５１）、ガンマブラジル（Ｐ．１）、デルタインド（Ｂ．１．６１７．２）、オミクロン、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ１、及びＭＥＲＳ－ＣｏＶからなる群から選択される、より詳細には、欧州（Ｂ．１）、デルタ、オミクロン及び／若しくはベータ株からなる群から選択されるコロナウイルス株への感染に起因するコロナウイルス疾患からの交差防御をもたらす、請求項Ｅ１～Ｅ１５のいずれか１つに記載の使用のための免疫原性組成物。

【0168】

Ｅ１７．
（ｉ）ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２ヌクレオカプシドＮ抗原と、それが融合している
（ｉｉ）Ｃ４ｂｐオリゴマー化ドメインに由来する自己組織化ポリペプチド及び正に帯電した尾部を含むキャリアタンパク質と
を含む融合タンパク質。

【0169】

Ｅ１８．グリコシル化されていない、Ｅ１７に記載の融合タンパク質。

【0170】

Ｅ１９．細菌発現系、例えば大腸菌発現系から取得可能である、Ｅ１７又はＥ１８に記載の融合タンパク質。

【0171】

Ｅ２０．キャリアタンパク質が、Ｃ末端でヌクレオカプシドＮ抗原と、任意選択でグリシン－セリンリンカーを介して融合している、Ｅ１７～Ｅ１９のいずれか１つに記載の融合タンパク質。

【0172】

Ｅ２１．自己組織化後に七量体タンパク質を形成する、Ｅ１７～Ｅ２０のいずれか１つに記載の融合タンパク質。

【0173】

Ｅ２２．前記ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２ヌクレオカプシドＮ抗原が、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２武漢（Ａ）株、典型的には株［Ｐ０ＤＴＣ９（ＮＣＡＰ＿ＳＡＲＳ２）、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（２０１９－ｎＣｏＶ）］由来の少なくとも１種のヌクレオカプシドＮ抗原を含む、Ｅ１７～Ｅ２１のいずれか１つに記載の融合タンパク質。

【0174】

Ｅ２３．前記ヌクレオカプシドＮ抗原が、
（ｉ）配列番号１のポリペプチド、又は
（ｉｉ）配列番号１に対して少なくとも９０％の同一性を有する抗原性ポリペプチドバリアント
を含む、Ｅ１７～Ｅ２２のいずれか１つに記載の融合タンパク質。

【0175】

Ｅ２４．Ｃ４ｂｐオリゴマー化ドメインに由来する前記自己組織化ポリペプチドが、配列番号２、又は配列番号２に対して少なくとも９０％の同一性を有する機能的バリアントを含む、Ｅ１７～Ｅ２３のいずれか１つに記載の融合タンパク質。

【0176】

Ｅ２５．前記正に帯電した尾部が、配列ＺＸＢＢＢＢＺ（配列番号３）を含み、ここで、（ｉ）Ｚは存在しないか又は任意のアミノ酸であり、（ｉｉ）Ｘは任意のアミノ酸であり、（ｉｉｉ）Ｂはアルギニン又はリジンであり、好ましくは、前記正に帯電した尾部が、配列番号４の配列を含む、Ｅ１７～Ｅ２４のいずれか１つに記載の融合タンパク質。

【0177】

Ｅ２６．前記キャリアタンパク質が、配列番号５から本質的になるか、又は前記キャリアタンパク質が、配列番号５に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列番号５の機能的バリアントである、Ｅ１７～Ｅ２５のいずれか１つに記載の融合タンパク質。

【0178】

Ｅ２７．配列番号６を含むか若しくは配列番号６から本質的になるか、又は配列番号６に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列番号６の機能的バリアントである、Ｅ１７～Ｅ２６のいずれか１つに記載の融合タンパク質。

【0179】

Ｅ２８．配列番号１１によってコードされる、Ｅ２７に記載の融合タンパク質。

【0180】

Ｅ２９．Ｅ１７～Ｅ２８のいずれかに規定の融合タンパク質をコードする核酸。

【0181】

Ｅ３０．Ｅ２９に記載の核酸を含む、Ｅ１７～Ｅ２８のいずれかに規定の融合タンパク質の作製のための発現ベクター。

【0182】

Ｅ３１．Ｅ３０に記載の発現ベクターを含む、Ｅ１７～Ｅ２８のいずれかに規定の融合タンパク質の作製のための宿主細胞。

【0183】

Ｅ３２．細菌、好ましくは大腸菌宿主細胞である、Ｅ３１に記載の宿主細胞。

【0184】

Ｅ３３．Ｅ１７～Ｅ２８のいずれかに記載の融合タンパク質と、１種又は複数種の薬学的に許容される賦形剤とを含む免疫原性組成物。

【0185】

Ｅ３４．筋肉内投与のために製剤化されている、Ｅ３３に記載の免疫原性組成物。

【0186】

Ｅ３５．Ｅ１７～Ｅ２８のいずれか１つに記載の融合タンパク質を作製するための方法であって、
（ｉ）Ｅ３１又はＥ３２に記載の宿主細胞を、前記宿主細胞による前記融合タンパク質の合成のための条件下で培養するステップと、
（ｉｉ）前記融合タンパク質を回収するステップと、
（ｉｉｉ）任意選択で、前記融合タンパク質を精製するステップと
を含む方法。

【0187】

Ｅ３６．必要とするヒト対象において、コロナウイルス、典型的にはＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２に対する免疫応答を誘導するか、又はコロナウイルス疾患、特にＣＯＶＩＤ－１９若しくは重度のＣＯＶＩＤ－１９を予防するための方法であって、
（ｉ）ヌクレオカプシドＮ抗原、好ましくはＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２ Ｎ抗原と、それが融合している
（ｉｉ）Ｃ４ｂｐオリゴマー化ドメインに由来する自己組織化ポリペプチド及び正に帯電した尾部を含むキャリアタンパク質と
を含む融合タンパク質を含む免疫原性量の組成物を投与するステップを含む方法。

【0188】

Ｅ３７．前記融合タンパク質がグリコシル化されていない、Ｅ３６に記載の方法。

【0189】

Ｅ３８．前記融合タンパク質が、細菌発現系、例えば大腸菌発現系から取得可能である、Ｅ３６又はＥ３７に記載の方法。

【0190】

Ｅ３９．キャリアタンパク質が、Ｃ末端でヌクレオカプシドＮ抗原と、任意選択でグリシン－セリンリンカーを介して融合している、Ｅ３６～Ｅ３８のいずれか１つに記載の方法。

【0191】

Ｅ４０．前記融合タンパク質が、自己組織化後に七量体粒子を形成する、Ｅ３６～Ｅ３９のいずれか１つに記載の方法。

【0192】

Ｅ４１．前記ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２ヌクレオカプシドＮ抗原が、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２株由来の少なくとも１種のヌクレオカプシドＮ抗原を含む、例えば、前記ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２ヌクレオカプシドＮ抗原が、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２武漢（Ａ）株のヌクレオカプシドＮタンパク質［Ｐ０ＤＴＣ９（ＮＣＡＰ＿ＳＡＲＳ２）、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（２０１９－ｎＣｏＶ）］から本質的になる、Ｅ３６～Ｅ４０のいずれか１つに記載の方法。

【0193】

Ｅ４２．前記ヌクレオカプシドＮ抗原が、
（ｉ）配列番号１のポリペプチド、又は
（ｉｉ）配列番号１に対して少なくとも９０％の同一性を有する抗原性ポリペプチドバリアント
を含む、Ｅ３６～Ｅ４１のいずれか１つに記載の方法。

【0194】

Ｅ４３．Ｃ４ｂｐオリゴマー化ドメインに由来する前記自己組織化ポリペプチドが、配列番号２、又は配列番号２に対して少なくとも９０％の同一性を有する機能的バリアントを含む、Ｅ３６～Ｅ４２のいずれか１つに記載の方法。

【0195】

Ｅ４４．前記正に帯電した尾部が、配列ＺＸＢＢＢＢＺ（配列番号３）を含み、ここで、（ｉ）Ｚは存在しないか又は任意のアミノ酸であり、（ｉｉ）Ｘは任意のアミノ酸であり、（ｉｉｉ）Ｂはアルギニン又はリジンであり、好ましくは、前記正に帯電した尾部が、配列番号４の配列を含む、Ｅ３６～Ｅ４３のいずれか１つに記載の方法。

【0196】

Ｅ４５．前記キャリアタンパク質が、配列番号５から本質的になるか、又は前記キャリアタンパク質が、配列番号５に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列番号５の機能的バリアントである、Ｅ３６～Ｅ４４のいずれか１つに記載の方法。

【0197】

Ｅ４６．前記融合タンパク質が、配列番号６を含むか若しくは配列番号６から本質的になるか、又は配列番号６に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列番号６の機能的バリアントである、Ｅ３６～Ｅ４５のいずれか１つに記載の方法。

【0198】

Ｅ４７．前記融合タンパク質が配列番号１１によってコードされる、Ｅ４６に記載の方法。

【0199】

Ｅ４８．前記免疫原性組成物が筋肉内注射によって投与される、Ｅ３６～Ｅ４７のいずれか１つに記載の方法。

【0200】

Ｅ４９．前記免疫原性組成物がＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２スパイク抗原を含まない、好ましくは、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２ヌクレオカプシドＮ抗原が組成物における唯一のＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２抗原決定基である、Ｅ３６～Ｅ４８のいずれか１つに記載の方法。

【0201】

Ｅ５０．ヌクレオカプシドＮに特異的な総Ｔ細胞応答、ヌクレオカプシドＮに特異的なＣＤ４ Ｔ細胞若しくはＣＤ８＋Ｔ細胞応答、抗ヌクレオカプシドＮ ＩｇＧ（抗体応答）、並びに／又はコロナウイルス症状のうちの１つ若しくは複数に対する防御、例えば、肺損傷、呼吸不全、敗血症性ショック、及び／若しくは多臓器機能不全等の重度のコロナウイルス症状のうちの１つ若しくは複数に対する防御、より具体的には、武漢（Ａ）、欧州（Ｂ．１）、アルファ－ＵＫ（Ｂ．１．１．７）、ベータ南アフリカ（Ｂ．１．３５１）、ガンマブラジル（Ｐ．１）、デルタインド（Ｂ．１．６１７．２）、オミクロン、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ１、及びＭＥＲＳ－ＣｏＶからなる群から選択される、より詳細には、欧州Ｂ．１、デルタ、オミクロン及び／若しくはベータからなる群から選択されるコロナウイルス株への感染に起因するコロナウイルス疾患からの防御若しくは交差防御をもたらす、Ｅ３６～Ｅ４９のいずれか１つに記載の方法。

【0202】

Ｅ５１．前記ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２ヌクレオカプシドＮ抗原が武漢（Ａ）株由来であり、前記方法が、欧州（Ｂ．１）、アルファ－ＵＫ（Ｂ．１．１．７）、ベータ南アフリカ（Ｂ．１．３５１）、ガンマブラジル（Ｐ．１）、デルタインド（Ｂ．１．６１７．２）、オミクロン、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ１、及びＭＥＲＳ－ＣｏＶからなる群から選択される、より詳細には、欧州Ｂ．１、デルタ、オミクロン及び／又はベータからなる群から選択されるコロナウイルス感染症に対する交差反応性免疫応答をもたらす、Ｅ３６～Ｅ４９のいずれか１つに記載の方法。

【0203】

Ｅ５２．前記ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２ヌクレオカプシドＮ抗原が武漢Ａ株由来であり、前記方法が、他のコロナウイルス疾患からのコロナウイルス症状のうちの１つ又は複数に対する交差防御、例えば、肺損傷、呼吸不全、敗血症性ショック、及び／又は多臓器機能不全等の重度のコロナウイルス症状のうちの１つ又は複数に対する防御、より具体的には、欧州（Ｂ．１）、アルファ－ＵＫ（Ｂ．１．１．７）、ベータ南アフリカ（Ｂ．１．３５１）、ガンマブラジル（Ｐ．１）、デルタインド（Ｂ．１．６１７．２）、オミクロン、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ１、及びＭＥＲＳ－ＣｏＶからなる群から選択される、より詳細には、欧州Ｂ．１、デルタ、オミクロン及び／又はベータからなる群から選択されるコロナウイルス感染症に起因するコロナウイルス疾患からの交差防御をもたらす、Ｅ３６～Ｅ４９のいずれか１つに記載の方法。

【0204】

［実施例］
実施例１：ＯＶＸ０３０はワクチン開発に好適ではない切断された形態を呈する
本開示のワクチンを作製するために、ＤＮＡ構築物を、大腸菌コドン最適化遺伝子のＤＮＡ合成によって取得した。初めに、２つの構築物を合成し、一方の構築物（配列番号１２）はＯＶＸ０３０をコードし、別の構築物（配列番号１３）はＯＶＸ０３１をコードし、両者はそれぞれ、ＯＶＸ３１３と融合されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ２のＮ［Ｐ０ＤＴＣ９（ＮＣＡＰ＿ＳＡＲＳ２）、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（２０１９－ｎＣｏＶ）（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）］及びＳＡＲＳ－ＣｏＶのＮ［Ｐ５９５９５（ＮＣＡＰ＿ＳＡＲＳ）、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ）］からなった。両方の構築物を、ＩＰＴＧ誘導性Ｔ５プロモーターを有する大腸菌発現ベクターにおいてクローニングした。

【0205】

大腸菌ＢＬ２１（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ ＢｉｏＬａｂｓ、＃Ｃ２５３０Ｈ）を使用する、ＯＶＸ０３０及びＯＶＸ０３１をコードする構築物のタンパク質発現は、作製が２５℃及び３０μｇ／ｍＬのカナマイシンの存在下において実施されたにもかかわらず、高い発現レベルに達することが可能であった。ＯＶＸ０３０をコードする構築物の発現レベルはＯＶＸ０３１よりもわずかに高く、また、ＯＶＸ０３０をコードする構築物はＳＡＲＳ－ＣｏＶ２由来のＮからなるため、ＯＶＸ０３０をコードする構築物を初めに選択した。

【0206】

ＯＶＸ０３０の小規模バッチを作製し、最初に、イオン交換クロマトグラフィー精製ステップとそれに続くサイズ排除クロマトグラフィーとによって精製した。これらのバッチを小規模の解析セット（濃度（Ａ２８０）、ＳＤＳ ＰＡＧＥにおけるタンパク質純度、ウェスタンブロッティングによる同一性、ＬＣ－ＭＳによる単量体の完全質量）に供した。バッチのＬＣ－ＭＳ分析は、予想に従う５１９５９．８Ｄａの見かけの質量（理論ＭＷからΔ０．３Ｄａ）を示した。

【0207】

対照的に、ＳＤＳ ＰＡＧＥ及びウェスタンブロット解析（抗ヌクレオカプシド抗体を使用）は、精製ステップ中に除去することができない切断された形態のＯＶＸ０３０を強調した（赤色の狭い部分、図１）。この知見は、候補ワクチンに期待される特徴に明らかに一致しなかった。

【0208】

実施例２：ＯＶＸ０３３をコードする、ワクチン開発に好適なコドン最適化配列の選択
その後、他の３つの構築物を合成した。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２のＮをコードする第１の構築物（配列番号１４）を合成した。ＯＶＸ０３２は、ＯＶＸ３１３ Ｃ末端ドメインを有さない対照タンパク質として使用するために作製した。残りの２つの構築物（それぞれＯＶＸ０３３及びＯＶＸ０３４をコードする）は、ＯＶＸ３１３と融合されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ２由来のＮをコードする構築物の２つのコドン最適化バリアント配列である。ＯＶＸ０３３をコードする第１の構築物（配列番号１１）は、ＤＮＡ合成によって取得された完全に新規な大腸菌最適化遺伝子であった。ＯＶＸ０３４をコードする第２の遺伝子構築物（配列番号１５）は、ヌクレオカプシドに対応するＤＮＡ配列について、ＯＶＸ０３２をコードする遺伝子構築物と相同であった。

【0209】

ＯＶＸ０３０及びＯＶＸ０３１について先に定義されたパラメータに従って大腸菌において発現されたＯＶＸ０３３構築物は、切断された形態の発現（ＯＶＸ０３０をコードする構築物において検出された）の実質的な低下を伴う高いタンパク質発現レベルを呈する。図２は、ＯＶＸ０３０と比較したＯＶＸ０３３及びＯＶＸ０３４のタンパク質発現レベルを示す。

【0210】

したがって、ＯＶＸ０３３ワクチン候補は、大腸菌細胞において発現される、配列番号１１によってコードされる組換えタンパク質であり、ＯＶＸ０３３ワクチン候補のサブユニットは、ＯＶＸ３１３（オリゴドム（登録商標））と融合したＳＡＲＳ－ＣｏＶ２のヌクレオカプシド（Ｎ）［Ｐ０ＤＴＣ９（ＮＣＡＰ＿ＳＡＲＳ２）、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（２０１９－ｎＣｏＶ）（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）］からなる。ＯＶＸ０３３ワクチン候補は４７５アミノ酸から構成される。

【0211】

ジスルフィド結合、水素結合、塩架橋、及び多数の疎水性相互作用の組合せによって、ＯＶＸ３１３ Ｃ末端ドメインは、融合したタンパク質が自然に七量体化することを可能にし、したがって、ＯＶ０３３は、各サブユニットを７コピー含有し、３６３．７ｋＤａ（すなわち、５１．９６ｋＤａ×７）の分子量（ＭＷ）と１０．０３の等電点（ｐＩ）とを有する七量体組換えタンパク質を形成する。

【0212】

実施例３：ハムスター防御研究におけるＯＶＸ０３３を使用した前臨床データ
３．１研究＃１
第１のハムスター防御研究に使用されたＯＶＸ０３３の特徴を以下に示す：

【0213】

【表1】

【0214】

ＯＶＸ０３３を１ｍｇ／ｍＬにおいて製剤化し、研究群を以下の通りとした：

【0215】

【表2】

【0216】

１群当たり１０匹のハムスターを、Ｄ０及びＤ２８に（４週間空けて）、上に記載したようにＯＶＸ０３３を用いて鼻腔内（ＩＮ）又は筋肉内（ＩＭ）にワクチン接種した。Ｄ５６、すなわち最後のワクチン接種の２８日後に、１０^４ＴＣＩＤ_５０のＳａｒｓ－ＣｏＶ－２株（欧州（Ｂ．１））を使用して動物を鼻腔内感染させた。５匹のハムスターを感染後Ｄ＋４（Ｄ６０）に屠殺し、残りのハムスター（１群当たり５匹）を感染後Ｄ＋７（Ｄ６３）に屠殺した。ハムスターの体重を、感染させた日から毎日モニタリングした。Ｄ６０及びＤ６３に、全ての屠殺したハムスターの肺、咽頭スワブ及び鼻甲介においてウイルス量を解析した。組織病理学的解析を、全ての屠殺したハムスターから採取した肺に対して実行した。

【0217】

研究中に取得された重要な結果を以降に要約する：
Ｓａｒｓ－ＣｏＶ－２感染の７日後に測定された体重減少について、ＯＶＸ０３３ ＩＭは、ＯＶＸ０３３ ＩＮと異なり、ハムスターをＳａｒｓ－ＣｏＶ－２感染後の体重減少から防御し、感染後Ｄ４、Ｄ５、Ｄ６及びＤ７においてＮａＣｌ陰性対照群との有意差が観察された（図３Ａを参照されたい。統計解析は、二元配置分散分析とそれに続くダネットの多重比較検定とを使用して実施した）；
肺において測定されたウイルス量の有意な減少は、ＯＶＸ０３３ ＩＭにおいてのみ観察された（図３Ｂを参照されたい；統計解析：ＯＶＸ０３３処置群とＮａＣｌ群との間におけるマン・ホイットニー検定）；
肺において、肺損傷の有意な軽減は、ＯＶＸ０３３ ＩＭにおいて感染後Ｄ７に観察された（図３Ｃ、組織病理学結果を参照されたい。統計解析：ＯＶＸ０３３処置群とＮａＣｌ群との間におけるｔ検定）。

【0218】

３．２研究＃２
第２のハムスター防御研究に使用されたＯＶＸ０３３の特徴を以下に示す：

【0219】

【表3】

【0220】

【表4】

【0221】

１群当たり１０匹のハムスターを、Ｄ０及びＤ２８に（４週間空けて）、上に記載した製剤を用いてワクチン接種した。Ｄ５６、すなわち最後のワクチン接種の２８日後に、１０^４ＴＣＩＤ_５０のＳａｒｓ－ＣｏＶ－２株（欧州（Ｂ．１））を使用して動物を鼻腔内感染させた。５匹のハムスターを感染後Ｄ＋４（Ｄ６０）に屠殺し、残りのハムスター（１群当たり５匹）を感染後Ｄ＋７（Ｄ６３）に屠殺した。ハムスターの体重を、感染させた日から毎日モニタリングした。Ｄ６０及びＤ６３に、全ての屠殺したハムスターの肺、咽頭スワブ及び鼻甲介においてウイルス量を解析した。組織病理学的解析を、全ての屠殺したハムスターから採取した肺に対して実行した。

【0222】

研究中に取得された重要な結果：
この場合もまた、肺において測定されたウイルス量の有意な減少が、処置群（ＯＶＸ０３３ ５０μｇ及び１００μｇ）において観察された（図４Ｂ、統計解析：ＯＶＸ０３３処置群とＮａＣｌ群との間におけるマン・ホイットニー検定）、
肺において、肺損傷の有意な軽減は、ＯＶＸ０３３ ５０μｇ及び１００μｇにおいて感染後Ｄ７に観察された（図４Ｃ、組織病理学結果、統計解析：ＯＶＸ０３３処置群とＮａＣｌ群との間におけるｔ検定）。

【0223】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染の７日後に測定された体重減少について、５０μｇ又は１００μｇにおけるＯＶＸ０３３は、ハムスターをＳａｒｓ－ＣｏＶ－２感染後の体重減少から防御し、感染後Ｄ４、Ｄ５、Ｄ６及びＤ７においてＮａＣｌ陰性対照群との有意差が観察された（図４Ａ、統計解析は、二元配置分散分析とそれに続くダネットの多重比較検定とを使用して実施した）。

【0224】

３．３研究＃３
第３のハムスター防御研究に使用されたＯＶＸ０３３の特徴を以下に示す：

【0225】

【表5】

ＯＶＸ０３３を０．５ｍｇ／ｍＬにおいて製剤化した：

【0226】

【表6】

【0227】

１群当たり１２匹のハムスターを、Ｄ０及びＤ２８に（４週間空けて）、上に記載したようにＯＶＸ０３３を用いて筋肉内（ＩＭ）にワクチン接種した。Ｄ５６、すなわち最後のワクチン接種の２８日後に、１０^４ＴＣＩＤ_５０のＳａｒｓ－ＣｏＶ－２株（デルタ、Ｂ．１．６１７．２）を使用して動物を鼻腔内感染させた。６匹のハムスターを感染後Ｄ＋４（Ｄ６０）に屠殺し、残りのハムスター（１群当たり６匹）を感染後Ｄ＋７（Ｄ６３）に屠殺した。ハムスターの体重を、感染させた日から毎日モニタリングした。Ｄ６０及びＤ６３に、全ての屠殺したハムスターの肺、咽頭スワブ及び鼻甲介においてウイルス量を解析した。組織病理学的解析を、全ての屠殺したハムスターから採取した肺に対して実行した。

【0228】

研究中に取得された重要な結果を以降に要約する：
肺においてＲＴ－ｑＰＣＲによって測定されたウイルス量の有意な減少は、ＯＶＸ０３３を用いたワクチン接種後に観察された（図５Ａを参照されたい；統計解析：ＯＶＸ０３３処置群とＮａＣｌ群との間におけるマン・ホイットニー検定）；
肺において、肺損傷の有意な軽減は、ＯＶＸ０３３において感染後Ｄ７に観察された（図５Ｂを参照されたい、組織病理学結果、統計解析：ＯＶＸ０３３処置群とＮａＣｌ群との間におけるマン・ホイットニー検定）。

【0229】

３．４研究＃４
第４のハムスター防御研究に使用されたＯＶＸ０３３の特徴を以下に示す：

【0230】

【表7】

ＯＶＸ０３３を０．５ｍｇ／ｍＬにおいて製剤化した：

【0231】

【表8】

【0232】

１群当たり１２匹のハムスターを、Ｄ０及びＤ２８に（４週間空けて）、上に記載したようにＯＶＸ０３３を用いて筋肉内（ＩＭ）にワクチン接種した。Ｄ５６、すなわち最後のワクチン接種の２８日後に、１０^４ＴＣＩＤ_５０のＳａｒｓ－ＣｏＶ－２株（オミクロン、Ｂ．１．１．５２９）を使用して動物を鼻腔内感染させた。６匹のハムスターを感染後Ｄ＋４（Ｄ６０）に屠殺し、残りのハムスター（１群当たり６匹）を感染後Ｄ＋７（Ｄ６３）に屠殺した。ハムスターの体重を、感染させた日から毎日モニタリングした。Ｄ６０及びＤ６３に、全ての屠殺したハムスターの肺、咽頭スワブ及び鼻甲介においてウイルス量を解析した。組織病理学的解析を、全ての屠殺したハムスターから採取した肺に対して実行した。

【0233】

研究中に取得された重要な結果を以降に要約する：
肺においてＲＴ－ｑＰＣＲによって測定されたウイルス量の有意な減少は、ＯＶＸ０３３を用いたワクチン接種後に観察された（図６Ａを参照されたい；統計解析：ＯＶＸ０３３処置群とＮａＣｌ群との間におけるマン・ホイットニー検定）；
鼻甲介においてＲＴ－ｑＰＣＲによって測定されたウイルス量の有意な減少は、ＯＶＸ０３３を用いたワクチン接種の７日後に観察された（図６Ｂを参照されたい；統計解析：ＯＶＸ０３３処置群とＮａＣｌ群との間におけるマン・ホイットニー検定）；
肺において、肺損傷の有意な軽減は、ＯＶＸ０３３ ＩＭにおいて感染後Ｄ７に観察された（図６Ｃを参照されたい、組織病理学結果、統計解析：ＯＶＸ０３３処置群とＮａＣｌ群との間におけるマン・ホイットニー検定）。

【0234】

実施例４：ハムスターにおけるＯＶＸ０３３の免疫原性
このハムスター免疫原性研究に使用されたＯＶＸ０３３の特徴を以下に示す：

【0235】

【表9】

ＯＶＸ０３３を０．５ｍｇ／ｍＬにおいて製剤化した：

【0236】

【表10】

【0237】

１群当たり５匹のハムスターを、Ｄ０及びＤ２８に（４週間空けて）、上に記載したようにＯＶＸ０３３を用いて筋肉内（ＩＭ）にワクチン接種した。血清を、ＥＬＩＳＡによる抗Ｎ ＩｇＧ解析のために、Ｄ０及びＤ５６（屠殺）に後眼窩血の採血から採取した。Ｄ５６、すなわち最後のワクチン接種の２８日後に、動物を安楽死させ、肺及び脾臓を採取し、細胞を単離し、１１ａａが重複する１５マーの核タンパク質ペプチドプール（武漢ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株、Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ ＩＤ：Ｐ０ＤＴＣ９のもの）を用いた刺激の１８時間後にＩＦＮγ ＥＬＩＳｐｏｔによって解析した。

【0238】

研究中に取得された重要な結果を以降に要約する：
高レベルの抗Ｎ特異的血清ＩｇＧ抗体が、ＯＶＸ０３３を用いた２回のワクチン接種後の血清において検出された（図７Ａ、個々の値及び平均±９５％ＣＩを参照されたい）。
有意なＩＦＮγ Ｔ細胞特異的応答が、脾臓及び肺において検出された（図７Ｂ及び図７Ｃを参照されたい；統計解析：ＯＶＸ０３３処置群とＮａＣｌ群との間におけるマン・ホイットニー検定）。

【0239】

実施例５：肺細胞においてＩＦＮγ Ｔ細胞特異的応答を示すＯＶＸ０３０（融合Ｎ－ＯＶＸ３１３）対ＯＶＸ０３２（融合していないＮ抗原）のマウスにおける比較研究
材料及び方法：
ＯＶＸ０３０は、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２のＮ抗原とＯＶＸ３１３との融合体であり、実施例１に記載されている（配列番号１２によってコードされる）。ＯＶＸ０３２は、実施例２に開示されているＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２のＮ抗原である（配列番号１４によってコードされる）。

【0240】

５匹のＣ５７ＢＬ６マウスの５つの群を、０日目及び２８日目に以下の５つのレジメン：（ｉ）ＯＶＸ０３２（Ｎ）、（ｉｉ）ＯＶＸ０３０（Ｎ－ＯＶＸ３１３）、（ｉｉｉ）ＯＶＸ０３０（Ｎ－ＯＶＸ３１３）＋不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）、（ｉｖ）ＯＶＸ０３０（Ｎ－ＯＶＸ３１３）＋ＭＦ５９アジュバント（アッダバックス（ＡｄｄａＶａｘ））、又は（ｖ）緩衝液のいずれかを用いて免疫化した。マウスを、免疫応答の評価のためにワクチン接種の８日後に屠殺した。

【0241】

結果：
肺細胞において、図８に示すように、ＯＶＸ０３０は細胞応答を誘導する。抗原ＮのみであるＯＶＸ０３２は、ＯＶＸ０３０（Ｎ－ＯＶＸ３１３）よりも有意に低いＩＦＮγ細胞応答をもたらし、アジュバントは応答を低下させる傾向があるが、統計的な差は認められなかった。

【0242】

実施例６：本発明を実施するのに有用な配列

【0243】

【表11】

【0244】

【表12】

【図1A)】

【図1B)】

【図1C)】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【配列表】

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【手続補正書】

【提出日】2024-08-21

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

必要とするヒト対象における、コロナウイルス疾患の予防のためのワクチンとしての使用のための免疫原性組成物であって、前記免疫原性組成物は融合タンパク質を含み、前記融合タンパク質は、
（ｉ）ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２ヌクレオカプシドＮ抗原と、それが融合している
（ｉｉ）Ｃ４ｂｐオリゴマー化ドメインに由来する自己組織化ポリペプチド及び正に帯電した尾部を含むキャリアタンパク質と
を含む、免疫原性組成物。

【請求項2】

前記ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２ヌクレオカプシドＮ抗原が武漢（Ａ）ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２株由来であり、前記免疫原性組成物は、他のコロナウイルス株に対する交差反応性のＮ特異的免疫応答を生成するのに有効な量で投与するためのものである、請求項１に記載の免疫原性組成物。

【請求項3】

前記ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２ヌクレオカプシドＮ抗原が武漢（Ａ）ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２株由来であり、前記ワクチンが、武漢（Ａ）ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２株の感染に起因しないコロナウイルス疾患のコロナウイルス症状の１つ以上に対する交差防御を提供する、請求項１に記載の免疫原性組成物。

【請求項4】

前記他のコロナウイルス株がＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ及び／又はＭＥＲＳ－Ｃｏｖ株から選択される、請求項２に記載の免疫原性組成物。

【請求項5】

前記コロナウイルス疾患がＳＡＲＳ（重症急性呼吸器症候群）、ＭＥＲＳ（中東呼吸器症候群）、及び／又はＣＯＶＩＤ－１９（コロナウイルス疾患２０１９）から選択される、請求項１に記載の免疫原性組成物。

【請求項6】

前記融合タンパク質がグリコシル化されていない、請求項１～５のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【請求項7】

前記キャリアタンパク質が、Ｃ末端で前記ヌクレオカプシドＮ抗原に融合しており、任意選択でグリシン－セリンリンカーを介して融合している、請求項１～５のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【請求項8】

前記ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２ヌクレオカプシドＮ抗原が、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２武漢（Ａ）株のヌクレオカプシドＮタンパク質［Ｐ０ＤＴＣ９（ＮＣＡＰ＿ＳＡＲＳ２）、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（２０１９－ｎＣｏＶ）］から本質的になる、請求項１～５のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【請求項9】

前記ヌクレオカプシドＮ抗原が、
（ｉ）配列番号１のポリペプチド、又は
（ｉｉ）配列番号１に対して少なくとも９０％の同一性を有する抗原性ポリペプチドバリアント
を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【請求項10】

前記キャリアタンパク質が、配列番号５から本質的になるか、又は前記キャリアタンパク質が、配列番号５に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列番号５の機能的バリアントである、請求項１～５のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【請求項11】

前記融合タンパク質が、配列番号６を含むか若しくは配列番号６から本質的になるか、又は配列番号６に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列番号６の機能的バリアントである、請求項１～５のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【請求項12】

前記融合タンパク質が配列番号１１によってコードされる、請求項１１に記載の免疫原性組成物。

【請求項13】

前記免疫原性組成物は筋肉内経路を介して投与するためのものである、請求項１～５のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【請求項14】

他のＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２株による感染に起因するＣＯＶＩＤ－１９に対する交差防御を提供する、請求項１～５のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【請求項15】

前記使用が、ヌクレオカプシドＮに特異的な総Ｔ細胞応答、ヌクレオカプシドＮに特異的なＣＤ４＋／ＣＤ８＋Ｔ細胞応答、抗ヌクレオカプシドＮ ＩｇＧ（抗体応答）、並びに／又は重度のコロナウイルス症状の１つ若しくは複数に対する防御をもたらす、請求項１～５のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【請求項16】

前記使用が、欧州（Ｂ．１）、アルファ－ＵＫ（Ｂ．１．１．７）、ベータ南アフリカ（Ｂ．１．３５１）、ガンマブラジル（Ｐ．１）、デルタインド（Ｂ．１．６１７．２）、オミクロン、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ１、及びＭＥＲＳ－ＣｏＶからなる群から選択される、コロナウイルス感染症に対する交差反応性免疫応答をもたらす、請求項１～５のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【請求項17】

欧州（Ｂ．１）、デルタ、オミクロン、及び／又はベータ株からなる群から選択されるＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２感染に起因するコロナウイルス疾患に対する交差防御をもたらす、請求項１～５のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【請求項18】

タンパク質スパイク又はその抗原性断片を含む第２のコロナウイルスワクチンと組み合わされて、同時に又は逐次に投与するためのものである、請求項１～５のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。

【請求項19】

前記第２のコロナウイルスワクチンが、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２タンパク質スパイク又はその抗原性断片をコードするｍＲＮＡを含む、ｍＲＮＡワクチンである、請求項１８に記載の免疫原性組成物。

【請求項20】

配列番号６の融合タンパク質を含む、ワクチン組成物。

【国際調査報告】