特表 2024-546035 ヒト腫瘍壊死因子アルファ抗体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-12-17

(54)【発明の名称】ヒト腫瘍壊死因子アルファ抗体

(51)【国際特許分類】

   C07K 16/24 20060101AFI20241210BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20241210BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20241210BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20241210BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20241210BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20241210BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20241210BHJP

   A61P 1/04 20060101ALI20241210BHJP

   A61P 17/06 20060101ALI20241210BHJP

   A61P 19/02 20060101ALI20241210BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20241210BHJP

   A61P 37/00 20060101ALI20241210BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20241210BHJP

【ＦＩ】

C07K16/24 ZNA

C12N15/13

C12N15/63 Z

C12N5/10

C12P21/08

A61K39/395 N

A61K48/00

A61P1/04

A61P17/06

A61P19/02

A61P29/00

A61P29/00 101

A61P37/00

A61K47/68

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024527667

(86)(22)【出願日】2022-11-10

(85)【翻訳文提出日】2024-05-10

(86)【国際出願番号】 US2022079616

(87)【国際公開番号】W WO2023086871

(87)【国際公開日】2023-05-19

(31)【優先権主張番号】63/278,245

(32)【優先日】2021-11-11

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】594197872

【氏名又は名称】イーライ リリー アンド カンパニー

(74)【代理人】

【識別番号】100145403

【弁理士】

【氏名又は名称】山尾 憲人

(74)【代理人】

【識別番号】100126778

【弁理士】

【氏名又は名称】品川 永敏

(74)【代理人】

【識別番号】100162684

【弁理士】

【氏名又は名称】呉 英燦

(72)【発明者】

【氏名】チャオ，グレイス

(72)【発明者】

【氏名】フェン，イーチン

(72)【発明者】

【氏名】レオン，ドンミエンヌ ドエン ムン

(72)【発明者】

【氏名】ナ，ソンチン

(72)【発明者】

【氏名】ラマムルティ，バラティ

(72)【発明者】

【氏名】シュー，ジアンホワイ

【テーマコード（参考）】

4B064

4B065

4C076

4C084

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B064AG27

4B064CA19

4B064CC24

4B064DA01

4B065AA90X

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA25

4B065CA44

4C076AA95

4C076CC04

4C076CC07

4C076CC16

4C076CC18

4C076EE41

4C076EE59

4C084AA13

4C084NA14

4C084ZA661

4C084ZA662

4C084ZA891

4C084ZA892

4C084ZA961

4C084ZA962

4C084ZB071

4C084ZB072

4C084ZB111

4C084ZB112

4C084ZB151

4C084ZB152

4C085AA14

4C085BB11

4C085DD62

4C085EE01

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA09

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

本開示は、ヒトＴＮＦαの可溶性形態及び膜形態に特異的に結合する抗体、そのようなＴＮＦα抗体を含む組成物、並びにそのようなＴＮＦα抗体及び組成物を使用する方法に関する。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ヒトＴＮＦαに結合する抗体であって、前記抗体が、重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含み、前記ＶＨが、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＶＬが、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、
前記ＨＣＤＲ１が、配列番号１を含み、
前記ＨＣＤＲ２が、配列番号２を含み、
前記ＨＣＤＲ３が、配列番号３を含み、
前記ＬＣＤＲ１が、配列番号４を含み、
前記ＬＣＤＲ２が、配列番号５を含み、
前記ＬＣＤＲ３が、配列番号６を含む、抗体。

【請求項2】

前記ＶＨが、配列番号７を含み、前記ＶＬが、配列番号８を含む、請求項１に記載の抗体。

【請求項3】

前記抗体が、重鎖（ＨＣ）と、軽鎖（ＬＣ）と、を含み、前記ＨＣが、配列番号９を含み、前記ＬＣが、配列番号１０を含む、請求項１又は２に記載の抗体。

【請求項4】

ヒトＴＮＦαに結合する抗体であって、前記抗体が、重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、前記ＶＨが、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＶＬが、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、
前記ＨＣＤＲ１が、配列番号１を含み、
前記ＨＣＤＲ２が、配列番号２を含み、
前記ＨＣＤＲ３が、配列番号１３を含み、
前記ＬＣＤＲ１が、配列番号１４を含み、
前記ＬＣＤＲ２が、配列番号５を含み、
前記ＬＣＤＲ３が、配列番号１５を含む、抗体。

【請求項5】

前記ＶＨが、配列番号１６を含み、前記ＶＬが、配列番号１７を含む、請求項４に記載の抗体。

【請求項6】

前記抗体が、重鎖（ＨＣ）と、軽鎖（ＬＣ）とを含み、前記ＨＣが、配列番号１８を含み、前記ＬＣが、配列番号１９を含む、請求項４又は５に記載の抗体。

【請求項7】

ヒトＴＮＦαに結合する抗体であって、前記抗体が、重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、前記ＶＨが、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＶＬが、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、
前記ＨＣＤＲ１が、配列番号２２を含み、
前記ＨＣＤＲ２が、配列番号２３を含み、
前記ＨＣＤＲ３が、配列番号１３を含み、
前記ＬＣＤＲ１が、配列番号４を含み、
前記ＬＣＤＲ２が、配列番号５を含み、
前記ＬＣＤＲ３が、配列番号６を含む、抗体。

【請求項8】

ヒトＴＮＦαに結合する抗体であって、前記抗体が、重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、前記ＶＨが、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＶＬが、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、
前記ＨＣＤＲ１が、配列番号２２を含み、
前記ＨＣＤＲ２が、配列番号２３を含み、
前記ＨＣＤＲ３が、配列番号１３を含み、
前記ＬＣＤＲ１が、配列番号１４を含み、
前記ＬＣＤＲ２が、配列番号５を含み、
前記ＬＣＤＲ３が、配列番号１５を含む、抗体。

【請求項9】

ヒトＴＮＦαに結合する抗体であって、前記抗体が、重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、前記ＶＨが、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＶＬが、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、
前記ＨＣＤＲ１が、配列番号２２を含み、
前記ＨＣＤＲ２が、配列番号２３を含み、
前記ＨＣＤＲ３が、配列番号１３を含み、
前記ＬＣＤＲ１が、配列番号１４を含み、
前記ＬＣＤＲ２が、配列番号５を含み、
前記ＬＣＤＲ３が、配列番号６を含む、抗体。

【請求項10】

ヒトＴＮＦαに結合する抗体であって、前記抗体が、重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、前記ＶＨが、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＶＬが、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、
前記ＨＣＤＲ１が、配列番号２２を含み、
前記ＨＣＤＲ２が、配列番号２３を含み、
前記ＨＣＤＲ３が、配列番号１３を含み、
前記ＬＣＤＲ１が、配列番号４６を含み、
前記ＬＣＤＲ２が、配列番号５を含み、
前記ＬＣＤＲ３が、配列番号６を含む、抗体。

【請求項11】

ヒトＴＮＦαに結合する抗体であって、前記抗体が、重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、前記ＶＨが、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＶＬが、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、
前記ＨＣＤＲ１が、配列番号２２を含み、
前記ＨＣＤＲ２が、配列番号２３を含み、
前記ＨＣＤＲ３が、配列番号１３を含み、
前記ＬＣＤＲ１が、配列番号１４を含み、
前記ＬＣＤＲ２が、配列番号５を含み、
前記ＬＣＤＲ３が、配列番号４７を含む、抗体。

【請求項12】

前記ＶＨが、配列番号２４を含み、前記ＶＬが、配列番号８、１７、又は２７を含む、請求項７～１１のいずれか一項に記載の抗体。

【請求項13】

前記抗体が、重鎖（ＨＣ）と、軽鎖（ＬＣ）とを含み、前記ＨＣが、配列番号２５を含み、前記ＬＣが、配列番号１０、１９、又は２８を含む、請求項７～１２のいずれか一項に記載の抗体。

【請求項14】

ヒトＴＮＦαに結合する抗体であって、前記抗体が、重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、前記ＶＨが、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＶＬが、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、
前記ＨＣＤＲ１が、配列番号１を含み、
前記ＨＣＤＲ２が、配列番号２を含み、
前記ＨＣＤＲ３が、配列番号３０を含み、
前記ＬＣＤＲ１が、配列番号３１を含み、
前記ＬＣＤＲ２が、配列番号５を含み、
前記ＬＣＤＲ３が、配列番号３２を含む、抗体。

【請求項15】

前記ＶＨが、配列番号３３を含み、前記ＶＬが、配列番号３４を含む、請求項１４に記載の抗体。

【請求項16】

前記抗体が、重鎖（ＨＣ）と、軽鎖（ＬＣ）とを含み、前記ＨＣが、配列番号３５を含み、前記ＬＣが、配列番号３６を含む、請求項１４又は１５に記載の抗体。

【請求項17】

重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）を含む抗体であって、前記ＨＣが、配列番号９、１８、２５、又は３５を含み、前記ＬＣが、配列番号１０、１９、２８、又は３６を含む、抗体。

【請求項18】

前記抗体が、軽鎖と、重鎖とを含み、前記重鎖が、
アミノ酸残基１２４（ＥＵ番号付け）におけるシステイン、
アミノ酸残基３７８（ＥＵ番号付け）におけるシステイン、又は
アミノ酸残基１２４（ＥＵ番号付け）におけるシステイン及びアミノ酸残基３７８（ＥＵ番号付け）におけるシステインを含む、請求項１又は２、４又は５、７～１２、１４又は１５のいずれか一項に記載の抗体。

【請求項19】

前記抗体が、重鎖（ＨＣ）と、軽鎖（ＬＣ）とを含み、前記ＨＣが、ヒトＩｇＧ１アイソタイプである、請求項１又は２、４又は５、７～１２、１４又は１５のいずれか一項に記載の抗体。

【請求項20】

配列番号９、１０、１８、１９、２５、２８、３５、又は３６をコードする配列を含む、核酸。

【請求項21】

請求項２０に記載の核酸を含む、ベクター。

【請求項22】

前記ベクターが、配列番号９、１８、２５、又は３５をコードする第１の核酸配列と、配列番号１０、１９、２８、又は３６をコードする第２の核酸配列とを含む、請求項２１に記載のベクター。

【請求項23】

配列番号９、１８、２５、又は３５をコードする核酸配列を含む第１のベクターと、配列番号１０、１９、２８、又は３６をコードする核酸配列を含む第２のベクターとを含む、組成物。

【請求項24】

請求項２１又は２２に記載のベクターを含む、細胞。

【請求項25】

前記細胞が、哺乳動物細胞である、請求項２４に記載の細胞。

【請求項26】

抗体を生成する方法であって、前記抗体が発現される条件下において、請求項２４又は２５に記載の細胞を培養し、次いで前記発現された抗体を培養培地から回収することを含む、方法。

【請求項27】

請求項２６に記載の方法によって生成される、抗体。

【請求項28】

請求項１～１９又は２７のいずれか一項に記載される抗体を含む抗体薬物コンジュゲート。

【請求項29】

請求項１～１９又は２７のいずれか一項に記載の抗体と、医薬的に許容される賦形剤、希釈剤、又は担体とを含む、医薬組成物。

【請求項30】

ＴＮＦα関連障害の治療を必要とする対象において、ＴＮＦα関連障害を治療する方法であって、前記対象に、治療有効量の請求項１～１９若しくは２７のいずれか一項に記載の抗体又は請求項２９に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。

【請求項31】

前記ＴＮＦα関連障害が、慢性自己炎症性免疫障害である、請求項３０に記載の方法。

【請求項32】

前記慢性自己炎症性免疫障害が、リウマチ性関節炎（ＲＡ）、若年性特発性関節炎、乾癬性関節炎（ＰｓＡ）、強直性脊椎炎（ＡＳ）、クローン病（ＣＤ）、潰瘍性大腸炎、尋常性乾癬（ＰＳ）、化膿性汗腺炎、ブドウ膜炎、非感染性中間部ブドウ膜炎、後部ブドウ膜炎、汎ブドウ膜炎、又はベーチェット病から選択される、請求項３１に記載の方法。

【請求項33】

前記治療有効量の前記抗体を投与されている前記対象が、他の抗ＴＮＦα治療薬の前治療を受けており、前記対象が、前記他の抗ＴＮＦα治療薬に対する抗薬物抗体を生成している、請求項３０に記載の方法。

【請求項34】

前記他の抗ＴＮＦα治療薬が、アダリムマブ、インフリキシマブ、ゴリムマブ、セルトリズマブ、又はエタネルセプトから選択される、請求項３３に記載の方法。

【請求項35】

前記抗体が、アダリムマブに対する抗薬物抗体への結合が低いか、又は結合しない、請求項３３に記載の方法。

【請求項36】

療法に使用するための、請求項１～１９又は２７のいずれか一項に記載の抗体。

【請求項37】

ＴＮＦα関連障害の治療における使用のための、請求項１～１９若しくは２７のいずれか一項に記載の抗体、又は請求項２９に記載の医薬組成物。

【請求項38】

前記ＴＮＦα関連障害が、慢性自己炎症性免疫障害である、請求項３７に記載の使用のための抗体又は医薬組成物。

【請求項39】

前記慢性自己炎症性免疫障害が、リウマチ性関節炎（ＲＡ）、若年性特発性関節炎、乾癬性関節炎（ＰｓＡ）、強直性脊椎炎（ＡＳ）、クローン病（ＣＤ）、潰瘍性大腸炎、尋常性乾癬（ＰＳ）、化膿性汗腺炎、ブドウ膜炎、非感染性中間部ブドウ膜炎、後部ブドウ膜炎、汎ブドウ膜炎、又はベーチェット病から選択される、請求項３８に記載の使用のための抗体又は医薬組成物。

【請求項40】

ＴＮＦα関連障害の治療のための薬物の製造における、請求項１～１９又は２７のいずれか一項に記載の抗体の使用。

【請求項41】

前記ＴＮＦα関連障害が、慢性自己炎症性免疫障害である、請求項４０に記載の使用。

【請求項42】

前記慢性自己炎症性障害が、リウマチ性関節炎（ＲＡ）、若年性特発性関節炎、乾癬性関節炎（ＰｓＡ）、強直性脊椎炎（ＡＳ）、クローン病（ＣＤ）、潰瘍性大腸炎、尋常性乾癬（ＰＳ）、化膿性汗腺炎、ブドウ膜炎、非感染性中間部ブドウ膜炎、後部ブドウ膜炎、汎ブドウ膜炎、又はベーチェット病から選択される、請求項４１に記載の使用。

【請求項43】

前記抗体が、ヒトＴＮＦαを中和する、請求項１～１９又は２７のいずれか一項に記載の抗体。

【請求項44】

前記抗体が、内在化抗体である、請求項１～１９又は２７のいずれか一項に記載の抗体。

【請求項45】

前記抗体が、低い免疫原性を有する、請求項１～１９又は２７のいずれか１項に記載の抗体。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

配列表ファイル
本出願は、ＳＴ．２６ＸＭＬ形式の配列表と共に提出されている。配列表は、２０２２年９月２０日に作成された「Ｘ３０１２２＿ＳｅｑｕｅｎｃｅＬｉｓｔｉｎｇ」というタイトルのファイルとして提供され、５７キロバイトのサイズである。ＳＴ．２６ＸＭＬ形式の配列表情報は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

本開示は、医学の分野に属する。特に、本開示は、ヒト腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）の可溶性形態及び膜形態に結合する抗体、そのようなＴＮＦα抗体を含む組成物、並びにそのようなＴＮＦα抗体及び組成物を使用する方法に関する。

【背景技術】

【0003】

慢性自己炎症性免疫障害は、身体がそれ自身の組織に対する免疫応答を生成することから生じる。インターロイキン－６（ＩＬ－６）、インターロイキン－１（ＩＬ－１）、及びインターフェロンガンマ（ＩＦＮ－γ）などの他のメディエータと共に、Ｔリンパ球及びＢリンパ球などの免疫細胞の過剰かつ長期の活性化、並びに炎症促進性サイトカインＴＮＦαの過剰発現は、自己炎症性免疫応答の病因において中心的な役割を果たす。

【0004】

腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα、腫瘍壊死因子、ＴＮＦ、カケクチンとしても知られる）は、活性化マクロファージ、単球、ＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋Ｔリンパ球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｂ細胞、好中球、及び内皮細胞によって分泌されることが報告されている多面的ホモ三量体サイトカインである。ＴＮＦαは、可溶性形態及び膜形態の両方で発現される（膜結合前駆体形態は、メタロプロテイナーゼＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）によって可溶性ホモ三量体にタンパク質分解的に切断され得る）。可溶性ＴＮＦα（ｓＴＮＦα）は、１型受容体（ＴＮＦＲ１、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＣＤ１２０ａ、及びｐ５５としても知られる）及び２型受容体（ＴＮＦＲ２、ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＣＤ１２０ｂ、及びｐ７５としても知られる）を介して様々な生物学的活性を促進する。ＴＮＦαは、その受容体、主にＴＮＦＲ１及びＴＮＦＲ２に結合し、炎症及び細胞死などの生物学的機能のための分子シグナルを伝達する。ＴＮＦＲは、ｓＴＮＦα及び膜貫通ＴＮＦα（ｔｍＴＮＦα）の両方によって活性化される。ＴＮＦαは、免疫細胞の調節において役割を果たし、慢性炎症、特に急性期炎症反応に関連する。過剰量のＴＮＦαは、種々の慢性自己炎症性免疫障害に関連している。

【0005】

慢性自己炎症性免疫障害を標的とする抗ＴＮＦα治療薬は公知であり、承認されているか、又は臨床開発中のいずれかである。このような治療薬としては、アダリムマブ、インフリキシマブ、ゴリムマブ、セルトリズマブ、及びエタネルセプトが挙げられる。（Ｊａｎｇ，Ｄ－ｉ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｓｃｉ．，２０２１，２２（５）：２７１９）。しかしながら、それらの使用の主な欠点は、抗ＴＮＦα治療薬を受けている一部の患者における抗薬物抗体の生成である。このような抗薬物抗体は、ＴＮＦαと同時に抗ＴＮＦα治療薬に結合する非中和抗体であり得るか、又はそれらは、血清中の抗ＴＮＦα治療薬の有効濃度を低下させ、かつ／若しくは抗原結合部位（パラトープ）についてＴＮＦαと競合し、したがって抗ＴＮＦα治療薬の作用機序を阻害する中和抗体であり得る。（Ｓｃｈｉｅ ＫＡ，ｅｔ ａｌ，Ａｎｎａｌｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｒｈｅｕｍａｔｉｃ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，２０１５，７４：３１１－３１４）。例えば、研究により、抗ＴＮＦα薬物抗体の９０パーセント超が中和性であり、他の抗ＴＮＦα抗体治療薬と交差反応性であり得ることが示されている。（Ｓｃｈｉｅ ＫＡ，ｅｔ ａｌ，２０１５）。したがって、場合によっては、抗ＴＮＦα治療薬に対する抗薬物抗体を生成している患者は、これらの治療薬に対する臨床応答の低下、及び／又は薬物投与後の最初の日の間若しくはその日のうちの発熱、掻痒、気管支痙攣、若しくは心臓血管虚脱などの症状を特徴とする注入関連の反応などの有害事象を有することが報告されている（Ａｔｉｑｉ，Ｓ．，Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０２０，２６（１１）：３１２）。したがって、抗薬物抗体応答は、患者に限定された処置選択肢を与え得る。

【0006】

したがって、所望の親和性で可溶性及び膜ＴＮＦαを中和し、持続的な作用期間を提供し、慢性自己炎症性免疫障害を治療することができる代替的な抗ＴＮＦα治療薬が依然として必要とされている。特に、抗薬物抗体応答を誘発するリスクが低減され、かつ／又は他の抗ＴＮＦα抗体治療薬に対する抗薬物抗体に有意に結合しない抗ヒトＴＮＦα抗体が依然として必要とされている。更に、慢性自己炎症性免疫障害を治療することができ、他のＴＮＦα治療薬による治療に対して抗薬物抗体応答を生じた患者における慢性自己炎症性免疫障害を治療することができる抗ヒトＴＮＦα抗体が依然として必要とされている。そのような抗ヒトＴＮＦα抗体はまた、好ましくは、低い免疫原性リスク、並びに／又は開発、製造、及び製剤化を容易にするための良好な物理化学的特性などの良好な開発性プロファイルを有する。

【発明の概要】

【0007】

本開示は、ヒトＴＮＦαに結合して中和し、ＴＮＦ受容体媒介性応答（例えば、ＮＦｋＢ活性化、サイトカイン生成）を阻害する抗ヒトＴＮＦα抗体を提供する。本開示は、そのような抗ヒトＴＮＦα抗体を含む組成物、並びにそのような抗ヒトＴＮＦα抗体及びその組成物を使用する方法を更に提供する。特に、本開示は、望ましい結合親和性を有し、可溶性及び膜ヒトＴＮＦαに結合して中和し、膜ＴＮＦαへの結合時に内在化し、及び／又は他の抗ＴＮＦα治療薬に対する抗薬物抗体への結合が低いか又は全くなく、抗ＴＮＦα治療薬、例えばアダリムマブによる以前の治療に対して抗薬物抗体を発達させた慢性自己炎症性免疫障害を有する患者の治療における使用の可能性を有する抗ヒトＴＮＦα抗体を提供する。このような慢性自己炎症性免疫障害としては、リウマチ性関節炎（ＲＡ）、若年性特発性関節炎、乾癬性関節炎（ＰｓＡ）、強直性脊椎炎（ＡＳ）、クローン病（ＣＤ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、尋常性乾癬（ＰＳ）、化膿性汗腺炎（ＨＳ）、ブドウ膜炎、非感染性中間部ブドウ膜炎、後部ブドウ膜炎若しくは汎ブドウ膜炎、又はベーチェット病が挙げられる。本明細書に開示された抗ヒトＴＮＦα抗体はまた、好ましくは、低い免疫原性リスク、並びに／又は開発、製造、及び製剤化を容易にするための良好な物理化学的特性（例えば、粘度、凝集、安定性）などの良好な開発性プロファイルを更に提示する。したがって、本明細書で提供される抗ヒトＴＮＦα抗体は、以下の特性のうちの１つ以上を有する。１）所望の結合親和性を有するヒトＴＮＦαに結合する、２）所望の結合親和性を有するアカゲザルサル及び／又はイヌＴＮＦαに結合する、３）ＴＮＦＲ媒介シグナル伝達を阻害する（例えば、ＮＦｋＢ）、４）インビボでサイトカイン生成を阻害する（例えば、ＣＸＣＬ１）、５）他の抗ＴＮＦα治療薬、例えば、アダリムマブに対する抗薬物抗体への結合が低いか又は全くない、６）膜ＴＮＦαに結合した場合に内在化する、７）免疫原性リスクが低い、並びに／又は８）開発、製造、及び製剤化を容易にするために許容される粘度及び／若しくは凝集プロファイルを有するなどの良好な開発性プロファイルを有する。

【図面の簡単な説明】

【0008】

【図1】例示的な抗ヒトＴＮＦα抗体Ａｂ６が、アダリムマブで過免疫されたカニクイザルにおいて形成されたアダリムマブに対する抗薬物抗体への結合か低いか、又は結合しないことを示す。

【図2】例示的な抗ヒトＴＮＦα抗体Ａｂ６が、アダリムマブで治療されたヒト患者において形成されたアダリムマブに対する抗薬物抗体への結合か低いか、又は結合しないことを示す。

【発明を実施するための形態】

【0009】

いくつかの実施形態では、本開示は、ヒトＴＮＦαに結合し、重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む抗体を提供し、ＶＨは重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、ＶＬは軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、ＨＣＤＲ１は配列番号１を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号２を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号３を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号４を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号５を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号６を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号７を含むＶＨと、配列番号８を含むＶＬと、を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号９を含む重鎖（ＨＣ）と、配列番号１０を含む軽鎖（ＬＣ）と、を含む。

【0010】

一部の実施形態では、本開示は、ヒトＴＮＦαに結合する抗体を提供し、抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含み、ＶＨは、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＶＬは、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、
ａ．ＨＣＤＲ１が、配列番号２２を含み、
ＨＣＤＲ２が、配列番号２３を含み、
ＨＣＤＲ３が、配列番号１３を含み、
ＬＣＤＲ１が、配列番号４、１４、又は４６を含み、
ＬＣＤＲ２が、配列番号５を含み、
ＬＣＤＲ３が、配列番号６を含み、
ｂ．ＨＣＤＲ１が、配列番号２２を含み、
ＨＣＤＲ２が、配列番号２３を含み、
ＨＣＤＲ３が、配列番号１３を含み、
ＬＣＤＲ１が、配列番号１４を含み、
ＬＣＤＲ２が、配列番号５を含み、
ＬＣＤＲ３が、配列番号１５又は４７を含み、
ｃ．ＨＣＤＲ１が、配列番号１を含み、
ＨＣＤＲ２が、配列番号２を含み、
ＨＣＤＲ３が、配列番号３０を含み、
ＬＣＤＲ１が、配列番号３１を含み、
ＬＣＤＲ２が、配列番号５を含み、
ＬＣＤＲ３が、配列番号３２を含み、又は
ｄ．ＨＣＤＲ１が、配列番号１を含み、
ＨＣＤＲ２が、配列番号２を含み、
ＨＣＤＲ３が、配列番号１３を含み、
ＬＣＤＲ１が、配列番号１４を含み、
ＬＣＤＲ２が、配列番号５を含み、
ＬＣＤＲ３が、配列番号１５を含む。

【0011】

一部の実施形態では、本開示は、ヒトＴＮＦαに結合する抗体を提供し、抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含み、ＶＨは、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＶＬは、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、ＨＣＤＲ１は、配列番号１を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号２を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号１３を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号１４を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号５を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号１５を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号１６を含むＶＨと、配列番号１７を含むＶＬと、を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号１８を含むＨＣと、配列番号１９を含むＬＣと、を含む。

【0012】

一部の実施形態では、本開示は、ヒトＴＮＦαに結合する抗体を提供し、抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含み、ＶＨは、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＶＬは、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、ＨＣＤＲ１は、配列番号２２を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号２３を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号１３を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号４を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号５を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号６を含む。一部の実施形態では、ヒトＴＮＦα抗体は、配列番号２４を含むＶＨ及び配列番号８を含むＶＬを含む。一部の実施形態では、ヒトＴＮＦαに結合する抗体は、配列番号２５を含む重鎖（ＨＣ）と、配列番号１０を含む軽鎖（ＬＣ）と、を含む。

【0013】

一部の実施形態では、本開示は、ヒトＴＮＦαに結合する抗体を提供し、抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含み、ＶＨは、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＶＬは、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、ＨＣＤＲ１は、配列番号２２を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号２３を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号１３を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号１４を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号５を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号１５を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号２４を含むＶＨと、配列番号１７を含むＶＬと、を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号２５を含む重鎖（ＨＣ）と、配列番号１９を含む軽鎖（ＬＣ）と、を含む。

【0014】

一部の実施形態では、本開示は、ヒトＴＮＦαに結合する抗体を提供し、抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含み、ＶＨは、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＶＬは、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、ＨＣＤＲ１は、配列番号２２を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号２３を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号１３を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号１４を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号５を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号６を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号２４を含むＶＨと、配列番号２７を含むＶＬと、を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号２５を含む重鎖（ＨＣ）と、配列番号２８を含む軽鎖（ＬＣ）と、を含む。

【0015】

一部の実施形態では、本開示は、ヒトＴＮＦαに結合する抗体を提供し、抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含み、ＶＨは、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＶＬは、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、ＨＣＤＲ１は、配列番号２２を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号２３を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号１３を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号４６を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号５を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号６を含む。一部の実施形態では、配列番号４６は、アミノ酸残基ＱＡＳＱＧＩＸａａ_７ＮＹＬＮを含み、配列番号４６のＸａａ_７は、セリン又はアルギニンである。一部の実施形態では、抗体は、配列番号２４を含むＶＨと、配列番号８を含むＶＬと、を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号２４を含むＶＨと、配列番号２７を含むＶＬと、を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号２５を含む重鎖（ＨＣ）と、配列番号１０を含む軽鎖（ＬＣ）と、を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号２５を含む重鎖（ＨＣ）と、配列番号２８を含む軽鎖（ＬＣ）と、を含む。

【0016】

一部の実施形態では、本開示は、ヒトＴＮＦαに結合する抗体を提供し、抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含み、ＶＨは、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＶＬは、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、ＨＣＤＲ１は、配列番号２２を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号２３を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号１３を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号１４を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号５を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号４７を含む。一部の実施形態では、配列番号４７は、アミノ酸残基ＱＱＹＤＸａａ_５ＬＰＬＴを含み、配列番号４７のＸａａ_５は、アスパラギン又はリジンである。一部の実施形態では、抗体は、配列番号２４を含むＶＨと、配列番号１７を含むＶＬと、を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号２４を含むＶＨと、配列番号２７を含むＶＬと、を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号２５を含む重鎖（ＨＣ）と、配列番号１９を含む軽鎖（ＬＣ）と、を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号２５を含む重鎖（ＨＣ）と、配列番号２８を含む軽鎖（ＬＣ）と、を含む。

【0017】

一部の実施形態では、本開示は、ヒトＴＮＦαに結合する抗体を提供し、抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含み、ＶＨは、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＶＬは、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、ＨＣＤＲ１は、配列番号１を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号２を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号３０を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号３１を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号５を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号３２を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号３３を含むＶＨと、配列番号３４を含むＶＬと、を含む。一部の実施形態では、ヒトＴＮＦαに結合する抗体は、配列番号３５を含む重鎖（ＨＣ）と、配列番号３６を含む軽鎖（ＬＣ）と、を含む。

【0018】

本開示の一部の実施形態では、抗ヒトＴＮＦα抗体は、完全ヒト抗体である。本開示の一部の実施形態では、抗ヒトＴＮＦα抗体は、ヒトＩｇＧ１アイソタイプを有する。

【0019】

本開示の一部の実施形態では、抗ヒトＴＮＦα抗体は、修飾ヒトＩｇＧ１を有する。一部の実施形態では、修飾は、重鎖可変領域（ＶＨ）にある。一部の実施形態では、修飾は、軽鎖可変領域（ＶＬ）にある。一部の実施形態では、修飾は、ＶＨ及びＶＬにある。更なる実施形態では、修飾ヒトＩｇＧ１ ＶＨ及び／又はＶＬは、本開示の抗ヒトＴＮＦα抗体に、望ましい粘度プロファイル及び／又は免疫原性リスクプロファイルを提供する。

【0020】

本開示の更なる実施形態では、抗ヒトＴＮＦα抗体は、抗体コンジュゲート化合物（バイオコンジュゲートとも称される）の生成において使用するための操作されたシステイン残基を含む修飾ヒトＩｇＧ１定常ドメインを有する（国際公開第２０１８／２３２０８８（Ａ１）号を参照されたい）。より詳細には、本開示のそのような実施形態では、抗ヒトＴＮＦα抗体は、アミノ酸残基１２４（ＥＵ番号付け）にシステイン、又はアミノ酸残基３７８（ＥＵ番号付け）にシステイン、又はアミノ酸残基１２４（ＥＵ番号付け）にシステイン及びアミノ酸残基３７８（ＥＵ番号付け）にシステインを含む。本明細書に開示される抗ヒトＴＮＦα抗体を含む抗体薬物コンジュゲートも本明細書に提供される。

【0021】

本開示の一部の実施形態では、抗ヒトＴＮＦα抗体は、可溶性及び膜ＴＮＦαに結合し、ヒトＴＮＦ受容体（ＴＮＦＲ）へのＴＮＦαの結合を阻害する。本開示の一部の実施形態では、抗ヒトＴＮＦα抗体は、可溶性及び膜ヒトＴＮＦαに結合し、ヒトＴＮＦαのヒトＴＮＦ受容体への結合を阻害し、ＴＮＦＲ媒介性応答を阻害する。一部の実施形態では、本開示の抗ヒトＴＮＦα抗体は、ヒトＴＮＦαのヒトＴＮＦＲへの結合を阻害し、したがって、ヒトＴＮＦＲ活性化、ＮＦｋＢリン酸化、サイトカイン生成、並びに／又は可溶性及び膜ＴＮＦα誘導性細胞死滅などのＴＮＦＲ媒介性応答を阻害する。一部の実施形態では、本開示の抗ヒトＴＮＦα抗体は、ヒトＴＮＦαに結合し、ＴＮＦＲ発現細胞上のＴＮＦＲ媒介性ＮＦｋＢリン酸化及びシグナル伝達を約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、又は約１００％阻害する。更なる実施形態では、本開示の抗ヒトＴＮＦα抗体は、ヒトＴＮＦαに結合し、ＴＮＦα誘導性サイトカイン生成（例えば、ＣＸＣＬ１）を約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、又は約１００％阻害する。また更なる実施形態では、本開示の抗ヒトＴＮＦα抗体は、ヒトＴＮＦαに結合し、ＴＮＦα誘導性サイトカイン生成（例えば、ＣＸＣＬ１）を約４５％～約９５％阻害する。更なる実施形態では、本開示の抗ヒトＴＮＦα抗体は、可溶性ヒトＴＮＦαに結合し、ＴＮＦα誘導性細胞死滅を約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、又は約１００％阻害する。更に他の実施形態では、本開示の抗ヒトＴＮＦα抗体は、膜ＴＮＦαに結合し、膜ＴＮＦα誘導性細胞死滅を約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、又は約１００％阻害する。

【0022】

一部の実施形態では、本開示の抗ヒトＴＮＦα抗体は、膜ヒトＴＮＦαに結合し、膜ＴＮＦα発現細胞に内在化される。そのような実施形態では、本開示の抗体は、膜ヒトＴＮＦαに結合し、膜ＴＮＦα発現細胞に約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、又は約１００％内在化される。

【0023】

一部の実施形態では、本開示の抗ヒトＴＮＦα抗体は、他の抗ＴＮＦα治療薬（例えば、アダリムマブ、インフリキシマブ、ゴリムマブ、セルトリズマブ、又はエタネルセプト）に対する抗薬物抗体への結合が低いか、又は結合しない。特定の実施形態では、本開示の抗ヒトＴＮＦα抗体は、アダリムマブに対する抗薬物抗体への結合が低いか、又は結合しない。そのような実施形態では、本開示の抗ヒトＴＮＦα抗体は、本明細書で定義されるような他の抗ＴＮＦα治療薬（例えば、アダリムマブ）による前治療に対する抗薬物抗体を生成している患者を治療するために使用し得る。更なる実施形態では、本開示の抗ヒトＴＮＦα抗体は、他の抗ＴＮＦα治療薬による前治療からそのような他の抗ＴＮＦα治療薬に対する抗薬物抗体を生成しており、ひいては他の抗ＴＮＦα治療薬に対する臨床応答又は有害反応が低下している患者を治療するために使用し得る。そのような実施形態では、本開示の抗ヒトＴＮＦα抗体は、それらが他の抗ＴＮＦα治療薬に対する抗薬物抗体に対して結合が低いか、結合しないように、十分に異なるアミノ酸配列及び核酸配列を有する。特定の実施形態では、本開示の抗ヒトＴＮＦα抗体は、それが他の抗ＴＮＦα治療薬に対する抗薬物抗体に対して結合が低いか、結合しないように、十分に異なるＣＤＲアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、他の抗ＴＮＦα治療薬は、アダリムマブ、インフリキシマブ、ゴリムマブ、セルトリズマブ、又はエタネルセプトである。

【0024】

一部の実施形態では、本開示は、ヒトＴＮＦαに結合する新規の抗体のＨＣ若しくはＬＣ、又はＶＨ若しくはＶＬをコードする核酸、又はそのような核酸を含むベクターを提供する。

【0025】

一部の実施形態では、本開示は、配列番号１１、１２、２０、２１、２６、２９、３７、又は３８の配列を含む核酸を提供する。

【0026】

一部の実施形態では、ヒトＴＮＦαに結合する抗体の重鎖又は軽鎖をコードする核酸が提供される。一部の実施形態では、配列番号９、１０、１８、１９、２５、２８、３５、又は３６をコードする配列を含む核酸が提供される。一部の実施形態では、配列番号９、１８、２５、又は３５を含む抗体重鎖をコードする配列を含む核酸が提供される。例えば、核酸は、配列番号１１、２０、２６、又は３７から選択される配列を含むことができる。一部の実施形態では、配列番号１０、１９、２８、又は３６を含む抗体軽鎖をコードする配列を含む核酸が提供される。例えば、核酸は、配列番号１２、２１、又は２９、又は３８から選択される配列を含むことができる。

【0027】

本開示の一部の実施形態では、ヒトＴＮＦαに結合する抗体のＶＨ又はＶＬをコードする核酸が提供される。一部の実施形態では、配列番号７、８、１６、１７、２４、２７、３３、又は３４をコードする配列を含む核酸が提供される。一部の実施形態では、配列番号７、１６、２４、又は３３を含む抗体ＶＨをコードする配列を含む核酸が提供される。一部の実施形態では、配列番号８、１７、２７、又は３４を含む抗体ＶＬをコードする配列を含む核酸が提供される。

【0028】

本開示のいくつかの実施形態において、抗体重鎖又は軽鎖をコードする核酸配列を含むベクターが提供される。例えば、そのようなベクターは、配列番号９、１８、２５、又は３５をコードする核酸配列を含むことができる。一部の実施形態では、ベクターは、配列番号１０、１９、２８、又は３６をコードする核酸配列を含む。

【0029】

本明細書では、抗体ＶＨ又はＶＬをコードする核酸配列を含むベクターも提供される。例えば、そのようなベクターは、配列番号７、１６、２４、又は３３をコードする核酸配列を含むことができる。一部の実施形態では、ベクターは、配列番号８、１７、２７、又は３４をコードする核酸配列を含む。

【0030】

抗体重鎖をコードする第１の核酸配列と、抗体軽鎖をコードする第２の核酸配列と、を含むベクターも本明細書に提供される。一部の実施形態では、ベクターは、配列番号９、１８、２５、又は３５をコードする第１の核酸配列と、配列番号１０、１９、２８又は３６をコードする第２の核酸配列と、を含む。

【0031】

一部の実施形態では、ベクターは、配列番号９をコードする第１の核酸配列と、配列番号１０をコードする第２の核酸配列と、を含む。一部の実施形態では、ベクターは、配列番号１８をコードする第１の核酸配列と、配列番号１９をコードする第２の核酸配列と、を含む。一部の実施形態では、ベクターは、配列番号２５をコードする第１の核酸配列と、配列番号１０をコードする第２の核酸配列と、を含む。一部の実施形態では、ベクターは、配列番号２５をコードする第１の核酸配列と、配列番号１９をコードする第２の核酸配列と、を含む。一部の実施形態では、ベクターは、配列番号２５をコードする第１の核酸配列と、配列番号２８をコードする第２の核酸配列と、を含む。一部の実施形態では、ベクターは、配列番号３５をコードする第１の核酸配列と、配列番号３６をコードする第２の核酸配列と、を含む。

【0032】

また、本明細書では、抗体重鎖をコードする核酸配列を含む第１のベクターと、抗体軽鎖をコードする核酸配列を含む第２のベクターと、を含む組成物も提供される。一部の実施形態では、組成物は、配列番号９、１８、２５、又は３５をコードする核酸配列と、配列番号１０、１９、２８、又は３６をコードする第２の核酸配列と、を含む第１のベクターを含む。

【0033】

一部の実施形態では、組成物は、配列番号９をコードする核酸配列を含む第１のベクターと、配列番号１０をコードする核酸配列を含む第２のベクターと、を含む。一部の実施形態では、組成物は、配列番号１８をコードする核酸配列を含む第１のベクターと、配列番号１９をコードする核酸配列を含む第２のベクターと、を含む。一部の実施形態では、組成物は、配列番号２５をコードする核酸配列を含む第１のベクターと、配列番号１０をコードする核酸配列を含む第２のベクターと、を含む。一部の実施形態では、組成物は、配列番号２５をコードする核酸配列を含む第１のベクターと、配列番号１９をコードする核酸配列を含む第２のベクターと、を含む。一部の実施形態では、組成物は、配列番号２５をコードする核酸配列を含む第１のベクターと、配列番号２８をコードする核酸配列を含む第２のベクターと、を含む。一部の実施形態では、組成物は、配列番号３５をコードする核酸配列を含む第１のベクターと、配列番号３６をコードする核酸配列を含む第２のベクターと、を含む。

【0034】

本開示の核酸は、例えば、核酸が発現制御配列に作動可能に連結された後に、宿主細胞において発現され得る。作動可能に連結された核酸の発現が可能な発現制御配列は、当該技術分野において周知である。発現ベクターは、宿主細胞からのポリペプチドの分泌を促進する１つ以上のシグナルペプチドをコードする配列を含み得る。目的の核酸（例えば、抗体の重鎖又は軽鎖をコードする核酸）を含む発現ベクターは、周知の方法、例えば、安定的又は一過性のトランスフェクション、形質転換、形質導入又は感染によって宿主細胞に移植され得る。追加的に、発現ベクターは、所望の核酸配列で形質転換された宿主細胞の検出を助けるために、例えばテトラサイクリン、ネオマイシン、及びジヒドロ葉酸レダクターゼ等の１つ以上の選択マーカーを含み得る。

【0035】

別の態様において、本明細書に記載の核酸、ベクター、又は核酸組成物を含む細胞、例えば宿主細胞が本明細書に提供される。宿主細胞は、本明細書に記載の抗体の全部又は一部分を発現する１つ以上の発現ベクターで安定的に又は一過性にトランスフェクト、形質転換、形質導入又は感染された細胞であり得る。一部の実施形態では、宿主細胞は、本開示の抗体のＨＣ及びＬＣポリペプチドを発現する発現ベクターで、安定的に又は一過性にトランスフェクト、形質転換、形質導入又は感染され得る。一部の実施形態では、宿主細胞は、本明細書に記載の抗体のＨＣポリペプチドを発現する第１のベクター及びＬＣポリペプチドを発現する第２のベクターで安定的に又は一過性にトランスフェクト、形質転換、形質導入又は感染され得る。そのような宿主細胞、例えば哺乳動物宿主細胞は、本明細書に記載されるようなヒトＴＮＦαに結合する抗体を発現することができる。抗体を発現することができることが知られている哺乳動物宿主細胞には、ＣＨＯ細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＣＯＳ細胞、及びＮＳ０細胞が含まれる。

【0036】

一部の実施形態では、細胞、例えば宿主細胞は、配列番号９、１８、２５、又は３５をコードする第１の核酸配列と、配列番号１０、１９、２８、又は３６をコードする第２の核酸配列と、を含む、ベクターを含む。

【0037】

一部の実施形態では、細胞、例えば宿主細胞は、配列番号９、１８、２５、又は３５をコードする核酸配列を含む第１のベクターと、配列番号１０、１９、２８、又は３６をコードする核酸配列を含む第２のベクターと、を含む。

【0038】

本開示は、上記の宿主細胞、例えば哺乳動物宿主細胞を、抗体が発現する条件下において培養し、発現した抗体を培養培地から回収することによって、本明細書に記載のヒトＴＮＦαに結合する抗体を生成するための方法を更に提供する。抗体が分泌された培地は、従来の技術によって精製され得る。タンパク質精製の様々な方法が採用され得、そのような方法は、当該技術分野において既知であり、例えば、Ｄｅｕｔｓｃｈｅｒ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １８２：８３－８９（１９９０）、及びＳｃｏｐｅｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，ＮＹ（１９９４）に記載される。

【0039】

本開示は更に、本明細書に記載の方法のいずれかによって生成される抗体又はその抗原結合断片を提供する。

【0040】

別の態様において、本明細書に記載の抗体、核酸、又はベクターを含む医薬組成物が本明細書に提供される。そのような医薬組成物はまた、１つ以上の医薬的に許容される賦形剤、希釈剤、又は担体を含み得る。医薬組成物は、当技術分野で周知の方法（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２２ｎｄ ｅｄ．（２０１２），Ａ．Ｌｏｙｄ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ）によって調製することができる。

【0041】

本明細書中に記載されるヒトＴＮＦαに結合する抗体、核酸、ベクター、又は医薬組成物は、ＴＮＦα関連障害（例えば、慢性自己炎症性免疫障害、例えば、限定されないが、リウマチ性関節炎（ＲＡ）、若年性特発性関節炎、乾癬性関節炎（ＰｓＡ）、強直性脊椎炎（ＡＳ）、クローン病（ＣＤ）、潰瘍性結腸炎、尋常性乾癬（ＰＳ）、化膿性汗腺炎、ブドウ膜炎、非感染性中間部ブドウ膜炎、後部ブドウ膜炎、汎ブドウ膜炎、又はベーチェット病を含む）を治療するために使用され得る。

【0042】

一部の実施形態では、ＴＮＦα関連障害、例えば、慢性自己炎症性免疫障害を、それを必要とする対象（例えば、ヒト患者）において、ヒトＴＮＦαに結合する抗体、ヒトＴＮＦαに結合するそのような抗体をコードする核酸、そのような核酸を含むベクター、又は本明細書に記載のヒトＴＮＦαに結合するそのような抗体、核酸若しくはベクターを含む医薬組成物の治療有効量を対象に投与することを含む、治療する方法が本明細書で提供される。本明細書に記載の抗体、核酸、ベクター、又は医薬組成物は、非経口経路（例えば、皮下及び静脈内）によって投与することができる。実施形態では、ＴＮＦα関連障害は、慢性自己炎症性免疫障害である。このような慢性自己炎症性免疫障害としては、リウマチ性関節炎（ＲＡ）、若年性特発性関節炎、乾癬性関節炎（ＰｓＡ）、強直性脊椎炎（ＡＳ）、クローン病（ＣＤ）、潰瘍性結腸炎、尋常性乾癬（ＰＳ）、化膿性汗腺炎、ブドウ膜炎、非感染性中間型ブドウ膜炎、後部ブドウ膜炎、汎ブドウ膜炎又はベーチェット病が挙げられるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、治療有効量のヒトＴＮＦαに結合する抗体を投与されている対象は、他の抗ＴＮＦα治療薬による前治療を受けており、対象は、他の抗ＴＮＦα治療薬に対する抗薬物抗体を生成している。そのような実施形態では、他の抗ＴＮＦα治療薬は、アダリムマブ、インフリキシマブ、ゴリムマブ、セルトリズマブ、又はエタネルセプトから選択される。また更なる実施形態では、本明細書に開示されるような抗ヒトＴＮＦα抗体は、アダリムマブ、インフリキシマブ、ゴリムマブ、セルトリズマブ、又はエタネルセプトからなる群から選択される他の抗ＴＮＦα治療薬のうちの少なくとも４つ以上に対する抗薬物抗体への結合が低いか、又は結合しない。また更なる実施形態では、本明細書に開示されるような抗ヒトＴＮＦα抗体は、アダリムマブ、インフリキシマブ、ゴリムマブ、セルトリズマブ、又はエタネルセプトからなる群から選択される他の抗ＴＮＦα治療薬のうちの少なくとも３つ以上に対する抗薬物抗体への結合が低いか、又は結合しない。また更なる実施形態では、本明細書に開示されるような抗ヒトＴＮＦα抗体は、アダリムマブ、インフリキシマブ、ゴリムマブ、セルトリズマブ、又はエタネルセプトからなる群から選択される他の抗ＴＮＦα治療薬のうちの少なくとも２つ以上に対する抗薬物抗体への結合が低いか、又は結合しない。更に他の実施形態では、本明細書に開示される抗ヒトＴＮＦα抗体は、アダリムマブに対する抗薬物抗体への結合が低いか、又は結合しない。

【0043】

治療における使用のための、本明細書に記載されるヒトＴＮＦαに結合する抗体、核酸、ベクター、又は医薬組成物も本明細書において提供される。更に、本開示はまた、ＴＮＦα関連障害、例えば、慢性自己炎症性免疫障害の治療における使用のための、本明細書に記載されるヒトＴＮＦαに結合する抗体、核酸、ベクター、又は医薬組成物を提供する。このような慢性自己炎症性免疫障害としては、リウマチ性関節炎（ＲＡ）、若年性特発性関節炎、乾癬性関節炎（ＰｓＡ）、強直性脊椎炎（ＡＳ）、クローン病（ＣＤ）、潰瘍性結腸炎、尋常性乾癬（ＰＳ）、化膿性汗腺炎、ブドウ膜炎、非感染性中間型ブドウ膜炎、後部ブドウ膜炎、汎ブドウ膜炎又はベ及びベーチェット病が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書に記載の抗体、核酸、ベクター、又は医薬組成物は、非経口経路（例えば、皮下及び静脈内）によって投与することができる。本開示の一部の実施形態では、治療有効量のヒトＴＮＦαに結合する抗体を投与されている対象は、他の抗ＴＮＦα治療薬による前治療を受けており、対象は、他の抗ＴＮＦα治療薬に対する抗薬物抗体を生成している。そのような実施形態では、他の抗ＴＮＦα治療薬は、アダリムマブ、インフリキシマブ、ゴリムマブ、セルトリズマブ、又はエタネルセプトから選択される。また更なる実施形態では、本明細書に開示されるような抗ヒトＴＮＦα抗体は、アダリムマブ、インフリキシマブ、ゴリムマブ、セルトリズマブ、又はエタネルセプトからなる群から選択される他の抗ＴＮＦα治療薬のうちの少なくとも４つ以上に対する抗薬物抗体への結合が低いか、又は結合しない。また更なる実施形態では、本明細書に開示されるような抗ヒトＴＮＦα抗体は、アダリムマブ、インフリキシマブ、ゴリムマブ、セルトリズマブ、又はエタネルセプトからなる群から選択される他の抗ＴＮＦα治療薬のうちの少なくとも３つ以上に対する抗薬物抗体への結合が低いか、又は結合しない。また更なる実施形態では、本明細書に開示されるような抗ヒトＴＮＦα抗体は、アダリムマブ、インフリキシマブ、ゴリムマブ、セルトリズマブ、又はエタネルセプトからなる群から選択される他の抗ＴＮＦα治療薬のうちの少なくとも２つ以上に対する抗薬物抗体への結合が低いか、又は結合しない。更に他の実施形態では、本明細書に開示される抗ヒトＴＮＦα抗体は、アダリムマブに対する抗薬物抗体への結合が低いか、又は結合しない。

【0044】

ＴＮＦα関連障害、例えば、慢性自己炎症性免疫障害の治療のための薬物の製造における、本明細書に記載されるヒトＴＮＦαに結合する抗体、核酸、ベクター、又は医薬組成物の使用が本明細書において提供される。このような慢性自己炎症性免疫障害としては、リウマチ性関節炎（ＲＡ）、若年性特発性関節炎、乾癬性関節炎（ＰｓＡ）、強直性脊椎炎（ＡＳ）、クローン病（ＣＤ）、潰瘍性結腸炎、尋常性乾癬（ＰＳ）、化膿性汗腺炎、ブドウ膜炎、非感染性中間型ブドウ膜炎、後部ブドウ膜炎、汎ブドウ膜炎又はベ及びベーチェット病が挙げられるが、これらに限定されない。

【0045】

一部の実施形態では、本開示の抗体は、ヒトＴＮＦαに結合し、他の抗ＴＮＦα治療薬に対する抗薬物抗体への結合が低いか、又は結合しない。そのような実施形態では、本開示の抗ヒトＴＮＦα抗体は、ヒトＴＮＦαに結合し、可溶性及び膜ヒトＴＮＦαを中和し、ＴＮＦ受容体媒介性応答を阻害する。一部の実施形態では、他の抗ＴＮＦα治療薬は、アダリムマブ、インフリキシマブ、ゴリムマブ、セルトリズマブ、又はエタネルセプトから選択される。一部の実施形態では、本開示の抗ヒトＴＮＦα抗体は、アダリムマブ、インフリキシマブ、ゴリムマブ、セルトリズマブ、又はエタネルセプトからなる他の抗ＴＮＦα治療薬の少なくとも４つ以上に対する抗薬物抗体への結合が低いか、又は結合しない。他の実施形態では、本開示の抗ヒトＴＮＦα抗体は、アダリムマブ、インフリキシマブ、ゴリムマブ、セルトリズマブ、又はエタネルセプトからなる他の抗ＴＮＦα治療薬の少なくとも３つ以上に対する抗薬物抗体への結合が低いか、又は結合しない。他の実施形態では、本開示の抗ヒトＴＮＦα抗体は、アダリムマブ、インフリキシマブ、ゴリムマブ、セルトリズマブ、又はエタネルセプトからなる他の抗ＴＮＦα治療薬の少なくとも２つ以上に対する抗薬物抗体への結合が低いか、又は結合しない。他の実施形態では、本開示の抗ヒトＴＮＦα抗体は、アダリムマブに対する抗薬物抗体への結合が低いか、又は結合しない。そのような実施形態では、本開示の抗ヒトＴＮＦα抗体はＩｇＧ１である。更なる実施形態では、本開示の抗ヒトＴＮＦα抗体は、ヒトＴＮＦαに結合し、他の抗ＴＮＦα治療薬に対する抗薬物抗体への結合が低いか、又は結合せず、抗ヒトＴＮＦα抗体は、重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）を含み、ＨＣは、配列番号９、１８、２５、又は３５を含み、ＬＣは、配列番号１０、１９、２８、又は３６を含む。そのような実施形態では、本開示の抗ヒトＴＮＦα抗体は、ヒトＴＮＦαを中和し、ＴＮＦ受容体媒介性応答を阻害する。更なる実施形態では、本開示の抗ヒトＴＮＦα抗体は、内在化抗体である。また更なる実施形態では、本開示の抗ヒトＴＮＦα抗体は、低い免疫原性を有する。

【0046】

本明細書で使用される「ＴＮＦα」という用語は、別段の記載がない限り、可溶性及び膜ＴＮＦα、並びに細胞内のＴＮＦα前駆体タンパク質のプロセシングから生じる任意の天然の成熟ＴＮＦαを指す。この用語は、別段の指示がない限り、イヌ、霊長類（例えば、ヒト及びカニクイザル又はアカゲザル）、及び齧歯類（例えば、マウス及びラット）などの哺乳動物を含む任意の脊椎動物源からのＴＮＦαを含む。この用語には、ＴＮＦαの天然に存在するバリアント、例えばスプライスバリアント又は対立遺伝子バリアントも含まれる。ヒトＴＮＦαの一例のアミノ酸配列は、当該技術分野で知られており、例えば、ＮＣＢＩアクセッション番号ＮＰ＿０００５８５（配列番号３９）である。カニクイザルＴＮＦαの一例のアミノ酸配列も、当該技術分野で知られており、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ参照配列Ｐ７９３３７（配列番号４５）である。アカゲザルＴＮＦαの一例のアミノ酸配列も、当該技術分野で知られており、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ参照配列Ｐ４８０９４（配列番号４０）である。イヌＴＮＦα一例のアミノ酸配列も、当該技術分野で知られており、例えば、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＣＡＡ６４４０３（配列番号４４）である。ヒト「ＴＮＦα」という用語は、全ての既知のヒトＴＮＦαアイソフォーム及び多形形態を集合的に指すために本明細書で使用される。本明細書で使用される配列番号付けは、シグナルペプチドを含まない成熟タンパク質に基づく。

【0047】

本明細書で使用される「ＴＮＦＲ」又は「ＴＮＦ受容体」という用語は、別段の記載がない限り、任意の天然の成熟ＴＮＦＲ、例えば、ＴＮＦＲ１（ｐ５５若しくはｐ６０としても知られる）又はＴＮＦＲ２（ｐ７５若しくはｐ８０としても知られる）を指す。この用語は、別段の指示がない限り、イヌ、霊長類（例えば、ヒト及びカニクイザル又はアカゲザル）、及び齧歯類（例えば、マウス及びラット）などの哺乳動物を含む任意の脊椎動物源からのＴＮＦＲを含む。この用語には、ＴＮＦＲの天然に存在するバリアント、例えばスプライスバリアント又は対立遺伝子バリアントも含まれる。ヒトＴＮＦＲ１の一例のアミノ酸配列は、当該技術分野で知られており、例えば、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：ＡＡＡ６１２０１（配列番号４８）である。ヒトＴＮＦＲ２の一例のアミノ酸配列は、当該技術分野で知られており、例えば、ＮＣＢＩアクセッション番号：ＮＰ＿００１０５７（配列番号４９）である。「ＴＮＦＲ」という用語は、全ての既知のヒトＴＮＦＲアイソフォーム及び多形形態を集合的に指すために本明細書で使用される。

【0048】

本明細書で使用される「ＴＮＦα関連障害」という用語は、ＴＮＦα誘導性ＴＮＦＲ１及び／又はＴＮＦＲ２シグナル伝達の調節不全に関連する障害などの、ＴＮＦα誘導性ＴＮＦ受容体媒介シグナル伝達の調節不全に関連する障害を指す。このようなＴＮＦα媒介障害としては、例えば、本明細書中に開示されるような慢性自己炎症性免疫障害が挙げられ得る。

【0049】

本明細書で使用される「抗薬物抗体」又は「ａｎｔｉ－ｄｒｕｇ ａｎｔｉｂｏｄｙ、ＡＤＡ」という用語は、哺乳動物に投与された治療薬に対する免疫応答から、哺乳動物において形成された抗体を指す。本開示の一部の実施形態では、治療薬に対して形成された抗薬物抗体は、その治療薬の効果を中和し得、したがって、治療薬の薬物動態（pharmacokinetic、ＰＫ）及び／又は薬力学的（pharmacodynamic、ＰＤ）特性を変化させ、治療薬の効果に干渉し、並びに／又は有効性を低減し、並びに／又は治療薬に対する臨床応答を低下させる。治療薬に対する抗薬物抗体はまた、患者において有害な免疫反応を導き得、その結果、患者は、その治療薬での更なる治療のための候補でなくなる可能性がある。有害な免疫反応の例としては、これらに限定されないが、薬物投与後１日目の発熱、掻痒、気管支痙攣、又は心臓血管虚脱などの症状を特徴とする注入関連の反応が挙げられる（Ａｔｉｑｉ，Ｓ．，Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０２０，２６（１１）：３１２）。

【0050】

本明細書で使用される、抗薬物抗体への「結合が低いか、又は結合しない」という用語は、他の抗ＴＮＦα治療薬に対する抗薬物抗体への、本開示の抗ヒトＴＮＦα抗体の結合を指し、そのような結合は、結合を測定するために使用されるアッセイのカットオフ点未満であると決定されるか、又はアッセイの所定の変動範囲内である。そのような方法において、カットオフ点は、抗薬物抗体への陽性結合を識別するために使用される所定の閾値である。一部の実施形態では、アッセイの所定の変動性は、アッセイのカットオフ点を約２０％未満上回る。そのような実施形態では、本開示の抗ヒトＴＮＦα抗体の、他の治療薬（例えば、アダリムマブ）に対する抗薬物抗体への結合であって、アッセイのカットオフ点を約２０％未満上回る結合は、低結合とみなされる。一部の実施形態では、本開示の抗ヒトＴＮＦα抗体の、他の治療薬（例えば、アダリムマブ）に対する抗薬物抗体への結合であって、アッセイのカットオフ点以下である結合は、結合なしとみなされる。

【0051】

「他の抗ＴＮＦα治療薬」という用語は、ＴＮＦαに結合し、ＴＮＦ受容体媒介性応答を阻害する薬剤を指し、本明細書に記載の抗ヒトＴＮＦα抗体を含まない。そのような薬剤は、これらに限定されないが、例えばＦｃ領域又はＩｇＧ重鎖定常領域に融合し得る、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂ、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、Ｆｄ断片、又は線状抗体などの、抗原と相互作用する能力を保持する抗体の少なくとも一部分を含む、抗体、抗体断片又は抗原結合断片を含む。一部の実施形態では、他の抗ＴＮＦα治療薬は、例えば、アダリムマブ、インフリキシマブ、ゴリムマブ、及びセルトリズマブ、及び／又はエタネルセプトであってもよい。

【0052】

本明細書で使用される「抗体」という用語は、抗原に結合する免疫グロブリン分子を指す。抗体の実施形態には、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、二重特異性若しくは多重特異性抗体、又はコンジュゲート抗体が含まれる。抗体は、任意のクラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ）、及び任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）であってもよい。本開示の実施形態はまた、抗体断片又は抗原結合断片を含み、「抗体断片又は抗原結合断片」という用語は、例えばＦｃ領域又はＩｇＧ重鎖定常領域に融合してもよい、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂ、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、Ｆｄ断片及び線状抗体などの、抗原と相互作用する能力を保持する抗体の少なくとも一部分を含む。

【0053】

例示的な抗体は、４つのポリペプチド鎖：鎖間ジスルフィド結合を介して架橋される２つの重鎖（ＨＣ）及び２つの軽鎖（ＬＣ）から構成された免疫グロブリンＧ（immunoglobulin G、ＩｇＧ）型抗体である。４つのポリペプチド鎖の各々のアミノ末端部分は、抗原認識に主に関与する約１００～１２５個以上のアミノ酸の可変領域を含む。４つのポリペプチド鎖の各々のカルボキシ末端部分は、エフェクター機能に主に関与する定常領域を含有する。各重鎖は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び重鎖定常領域から構成される。重鎖定常領域は、抗体重鎖のＦｃ領域及びＣＨ１ドメインを含む、抗体の領域を指す。各軽鎖は、軽鎖可変領域（ＶＬ）及び軽鎖定常領域から構成される。ＩｇＧアイソタイプは、サブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４）に更に分割され得る。定常領域中のアミノ酸残基の番号付けは、ＫａｂａｔにおけるようなＥＵインデックスに基づく。Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ：Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ（１９９１）．ＥＵインデックス番号付け又はＥＵ番号付けという用語は、本明細書では交換可能に使用される。

【0054】

ＶＨ及びＶＬ領域は、フレームワーク領域（framework region、ＦＲ）と呼ばれる、より保存されている領域が散在する、相補性決定領域（complementarity determining region、ＣＤＲ）と呼ばれる、超可変領域に更に細分され得る。ＣＤＲはタンパク質の表面上に露出しており、抗原結合特異性のための抗体の重要な領域である。各ＶＨ及びＶＬは、３つのＣＤＲ及び４つのＦＲから構成されており、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順序でアミノ末端からカルボキシ末端へと配置される。本明細書では、重鎖の３つのＣＤＲを「ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３」と称し、軽鎖の３つのＣＤＲを「ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３」と称する。ＣＤＲは、抗原との特異的相互作用を形成する残基の大部分を含有する。アミノ酸残基のＣＤＲへの割り当ては、Ｋａｂａｔ（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，」Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１））、Ｃｈｏｔｈｉａ（Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，「Ｃａｎｏｎｉｃａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ ｒｅｇｉｏｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ」，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，１９６，９０１－９１７（１９８７）、Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，「Ｓｔａｎｄａｒｄ ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｃａｎｏｎｉｃａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ」，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２７３，９２７－９４８（１９９７））、Ｎｏｒｔｈ（Ｎｏｒｔｈ ｅｔ ａｌ．，「Ａ Ｎｅｗ Ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ＣＤＲ Ｌｏｏｐ Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ」，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，４０６，２２８－２５６（２０１１））、又はＩＭＧＴ（ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ ｄａｔａｂａｓｅ、ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇで利用可能、Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１９９９；２７：２０９－２１２）に記載されるものを含む、周知のスキームに従って行うことができる。ＩＭＧＴとＮｏｒｔｈ ＣＤＲ定義との組み合わせを、本明細書に記載されるような例示的な抗ヒトＴＮＦα抗体に使用した。

【0055】

本明細書で使用される「Ｆｃ領域」という用語は、抗体重鎖のＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む抗体の領域を指す。任意選択で、Ｆｃ領域は、抗体重鎖のヒンジ領域の一部分又はヒンジ領域全体を含み得る。エフェクター機能などの生物活性は、抗体のアイソタイプによって異なるＦｃ領域に起因する。抗体エフェクター機能の例としては、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞介在性食作用（ＡＤＣＰ）、Ｃ１ｑ結合、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）、食作用、細胞表面受容体の下方制御（例えばＢ細胞受容体）、及びＢ細胞の活性化が挙げられる。及びＢ細胞活性化が挙げられる。

【0056】

本明細書で使用される「エピトープ」という用語は、抗体によって結合される抗原のアミノ酸残基を指す。エピトープは、直鎖状エピトープ、立体構造エピトープ、又はハイブリッドエピトープであり得る。「エピトープ」という用語は、構造的エピトープに関して使用され得る。構造的エピトープは、一部の実施形態によれば、抗体によってカバーされる抗原の領域（例えば、抗原に結合したときの抗体のフットプリント）を説明するために使用され得る。一部の実施形態では、構造的エピトープは、抗体のアミノ酸残基の特定の近接内（例えば、特定のオングストローム数内）にある抗原のアミノ酸残基を説明し得る。「エピトープ」という用語はまた、機能的エピトープに関して使用され得る。機能的エピトープは、一部の実施形態によれば、抗原と抗体との間の結合エネルギーに寄与する様式で抗体のアミノ酸残基と相互作用する抗原のアミノ酸残基を説明するために使用され得る。エピトープは、「エピトープマッピング技術」とも呼ばれる異なる実験技術に従って決定することができる。エピトープの決定は、使用される異なるエピトープマッピング技術に基づいて変動し得、例えば、特定の実験条件によって誘導される抗原の立体構造変化又は切断に起因して、使用される異なる実験条件によっても変動し得ることが理解される。エピトープマッピング技術は、当該技術分野において公知であり（例えば、Ｒｏｃｋｂｅｒｇ ａｎｄ Ｎｉｌｖｅｂｒａｎｔ，Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，３^ｒｄ ｅｄ．２０１８；Ｈｏｌｓｔ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ １９９８，５３（１）：１６６－１７５）、例えば、Ｘ線結晶学、核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法、部位特異的突然変異誘発、種交換突然変異誘発、アラニン走査突然変異誘発、立体障害突然変異誘発、水素－重水素交換（ＨＤＸ）、及び交差ブロッキングアッセイが挙げられるが、これらに限定されない。

【0057】

本明細書で使用される「結合する」という用語は、別段の定めがない限り、化学結合又は別のタンパク質若しくは分子との引力相互作用を形成するタンパク質又は分子の能力を意味することを意図しており、当該分野において既知である一般的な方法によって決定されるように、２つのタンパク質又は分子の近接をもたらす。

【0058】

本明細書で使用される「核酸」という用語は、天然ヌクレオチド、改変ヌクレオチド、及び／又はヌクレオチドの類似体を組み込んだＤＮＡ、ｃＤＮＡ、並びにＲＮＡ分子などの一本鎖及び／又は二本鎖ヌクレオチド含有分子を含むヌクレオチドのポリマーを指す。本開示のポリヌクレオチドはまた、例えば、ＤＮＡ若しくはＲＮＡポリメラーゼ又は合成反応によってその中に組み込まれた基質を含んでもよい。

【0059】

本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、限定されるものではないが、ヒト、チンパンジー、類人猿、サル、ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、ウサギ、イヌ、ネコ、ラット、マウス、モルモットなどを含む哺乳動物を指す。好ましくは、対象はヒトである。

【0060】

本明細書で使用される「治療有効量」という用語は、対象の所望の生物学的又は医学的応答、例えば、タンパク質の活性の低下又は阻害を誘発する、あるいは症状を改善する、状態を緩和する、疾患の進行を減速若しくは遅延する、又は疾患などを予防する、タンパク質あるいは核酸あるいはベクターあるいは組成物の量を指す。１つの非限定的な実施形態では、「治療有効量」という用語は、対象に投与されたときに、所望の治療結果を達成するために、状態、又は障害又は疾病を少なくとも部分的に緩和、阻害、予防及び／又は改善するために有効である、タンパク質又は核酸又はベクター又は組成物の必要な量（投与量及び期間及び投与の手段）を指す。タンパク質又は核酸又はベクター又は組成物の治療有効量は、個体の病状、年齢、性別、及び体重、並びに個体における所望の応答を誘発するタンパク質又は核酸又はベクター又は組成物の能力などの因子に応じて変動し得る。治療有効量はまた、本開示のタンパク質又は核酸又はベクター又は組成物の任意の毒性効果又は有害効果よりも治療的に有益な効果が上回る量である。

【0061】

本明細書で使用される「阻害する」という用語は、例えば、生物学的応答又は活性の低下、低下、減速、減少、停止、破壊、排除、拮抗、又は遮断を指すが、必ずしも生物学的反応の完全な排除を示すわけではない。

【0062】

本明細書で使用される場合、「治療」又は「治療すること」は、本明細書に開示の障害又は疾患症状の進行を減速、制御、遅延、又は停止し得る全てのプロセスを指すが、必ずしも全ての障害又は疾患症状の完全な消失を示すわけではない。治療は、患者、特に、ヒトにおける疾患又は状態の治療のためのタンパク質又は核酸又はベクター又は組成物の投与を含む。

【0063】

用語「中和する」は、本明細書で使用される場合、抗体、抗体断片、又は結合分子が、抗原の少なくとも１つの活性又は機能に対抗する、又は不活性化又は無効化させる能力を指す。

【0064】

本明細書で使用される「約」という用語は、１０％以内を意味する。

【0065】

本明細書で使用される場合、本開示の文脈で（特に特許請求の範囲の文脈で）使用される「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」という用語及び同様の用語は、本明細書で別段の定めがない限り、又は文脈によって明らかに矛盾していない限り、単数形及び複数形の両方を包含すると解釈されるべきである。

【0066】

図面の簡単な説明
図１は、例示的な抗ヒトＴＮＦα抗体Ａｂ６が、アダリムマブで過免疫されたカニクイザルにおいて形成されたアダリムマブに対する抗薬物抗体への結合か低いか、又は結合しないことを示す。
図２は、例示的な抗ヒトＴＮＦα抗体Ａｂ６が、アダリムマブで治療されたヒト患者において形成されたアダリムマブに対する抗薬物抗体への結合か低いか、又は結合しないことを示す。

【実施例】

【0067】

以下の実施例は、特許請求された本発明を説明するために提供され、これを限定するものではない。

【0068】

実施例１：抗ヒトＴＮＦα抗体の生成及び操作
抗体生成：ヒトＴＮＦαに特異的な抗体を生成させるために、ヒト免疫グロブリン可変領域を有するトランスジェニックマウスを、組換えヒトＴＮＦαで免疫化した。ヒトＴＮＦαを用いてスクリーニングを行い、他のＴＮＦα種による交差反応性を試験した。カニクイザルＴＮＦαに交差反応性である抗体をクローニングし、発現させ、標準的な手順によって精製し、ＴＮＦα誘導性細胞傷害性アッセイにおいて中和について試験した。抗体を選択し、そのＣＤＲ、可変ドメインフレームワーク領域、及びＩｇＧアイソタイプを操作して、結合親和性、並びに安定性、溶解性、粘度、疎水性、及び凝集などの開発性特性を改善した。

【0069】

ヒトＴＮＦαのアミノ酸配列は、配列番号３９として提供され、カニクイザルＴＮＦαのアミノ酸配列は、配列番号４５として提供される。

【0070】

ＴＮＦα抗体は、周知の方法によって合成及び精製することができる。適切な宿主細胞、例えば、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）は、２つのベクターが使用される場合、所定のＨＣ：ＬＣベクター比を用いる抗体、又は重鎖及び軽鎖の両方をコードする単一ベクター系を用いる抗体を分泌するための、発現系で一時的に又は安定的にトランスフェクトされることができる。抗体が分泌された清澄化培地は、一般的に使用される技術を用いて精製することができる。

【0071】

粘度を改善するための抗体操作：親ＴＮＦα抗体系統は、濃縮時に高い粘度を有することが見出された。粘度は、自己注射器による治療用抗体の送達の実現可能性を評価するための重要な開発性基準である。抗体の変異誘発分析は、免疫原性リスクを増加させることなく、生物物理学的特性を改善することと、望ましい親和性及び効力を保持することとの微妙なバランスをとることを必要とした。親抗体のインシリコモデリングを使用して、６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）からなる表面における電荷不均衡の領域を識別した。変異誘発から生成された抗体をＴＮＦα結合についてスクリーニングし、親ｍＡｂと比較して標的結合を保持又は改善し（ＥＬＩＳＡによって決定される）、かつ望ましい粘度及び他の開発性特性を有するそれらの抗体を、更なる開発のために選択した。

【0072】

免疫原性のリスクを低下させるための抗体操作：例示的な抗ヒトＴＮＦα抗体を、ＭＨＣ関連ペプチドプロテオミクス（MHC-associated peptide proteomics、ＭＡＰＰＳ）アッセイにおいて更に試験して、免疫原性リスクを決定した。簡潔には、主要組織適合性複合体（major histocompatibility complex、ＭＨＣ）結合ペプチドを、特異的ＣＤＲ配列を有する抗体について識別した。免疫原性を低下させる可能性があると識別された変異を有するＣＤＲライブラリを構築し、ＴＮＦα結合についてスクリーニングした。抗体をスクリーニング及び選択して、ＴＮＦαに対する望ましい結合親和性と、他の望ましい開発性特性を維持することとのバランスをとりながら、低い免疫原性リスクについて操作によって最適化した。

【0073】

表１及び２は、ヒトＴＮＦαへの望ましい結合親和性を保持しながら、低粘度、低免疫原性リスク、及び他の望ましい開発性特性についてバランスをとるために操作された例示的な抗ヒトＴＮＦα抗体配列を示す。

【0074】

【表1】

【0075】

【表2】

【0076】

実施例２．例示的な抗ヒトＴＮＦα抗体の結合親和性
結合親和性、方法１：ヒト、アカゲザル、マウス、ラット、ウサギ、及びイヌＴＮＦαタンパクに対する抗体の結合親和性を、ａｎｔｉｇｅｎ－ｄｏｗｎ ＥＬＩＳＡフォーマットで試験した。簡単に説明すると、３８４ウェル高結合プレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ－ｏｎｅ＃７８１０６１）を、炭酸塩緩衝液ｐＨ９．３（０．０１５ＭのＮａ_２ＣＯ_３及び０．０３５ＭのＮａＨＣＯ_３）で希釈した１μｇ／ｍＬのヒトＴＮＦα（Ｓｙｎｇｅｎｅ）、２μｇ／ｍＬのアカゲザルＴＮＦα（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号１０７０－ＲＭ）、２μｇ／ｍＬのマウスＴＮＦα（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号４１０－ＭＴ／ＣＦ）、又は２μｇ／ｍＬのラットＴＮＦα（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号５１０－ＲＴ－ＣＦ）、２μｇ／ｍＬのウサギＴＮＦα（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号５６７０－ＴＧ／ＣＦ）、又は２μｇ／ｍＬのイヌＴＮＦα（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号１５０７－ＣＴ／ＣＦ）２０μＬ／ウェルでコーティングし、４℃で一晩保存した。翌日、プレートを８０μＬのカゼイン（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｐｉｅｒｃｅ、カタログ番号３７５２８）で、室温で１時間ブロッキングし、ブロッキング緩衝液を除去し、ＣＨＯ細胞で発現させた２０μＬの滴定精製抗体（２０μｇ／ｍＬでの開始濃度をカゼインで希釈し、３倍に滴定、８ポイントダウン）をプレートに添加した。プレートを３７℃で９０分間インキュベートし、次いでＰＢＳ／０．１％Ｔｗｅｅｎ中で３回洗浄した。１：１５００希釈の二次抗体試薬ヤギ抗ヒトカッパ－ＡＰ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ、カタログ番号２０６０－０４）２０μＬをプレートに添加し、３７℃で４５分間インキュベートした。プレートをＰＢＳ／０．１％Ｔｗｅｅｎ中で３回洗浄し、分子グレードの水で１：３５に希釈した２０μＬのアルカリホスファターゼ基質溶液を各ウェルに添加した。発色したら（約１５～３０分）、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅ Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘプレートリーダーで、５６０ｎＭ ＯＤでプレートを読み取り、Ｓｏｆｔｍａｘ Ｐｒｏ ４．７ソフトウェアを使用してデータを取得した。データ分析をＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍで行った。

【0077】

表３に示されている結果は、例示的な抗ヒトＴＮＦα抗体Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、及びＡｂ６が、所望の親和性でヒト、アカゲザル、及びイヌＴＮＦαと結合することを示す。

【0078】

【表3】

【0079】

結合親和性、方法２：ＭＳＤ Ｓｅｃｔｏｒ Ｓ ６００機器（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）を、ＭＳＤプレートを読み取るために使用した。ヒト及びカニクイザルＴＮＦαを、Ｔｈｅｒｍｏ－Ｆｉｓｈｅｒビオチン化キットを使用してビオチン化した。ＭＳＤアッセイプレートを以下のように調製した：マルチアレイストレプトアビジンコーティング９６ウェルプレート（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、カタログ番号Ｌ１５ＳＡ－１）を、ＰＢＳ中のビオチン化ヒトＴＮＦα又はビオチン化カニクイザルＴＮＦαのいずれかの１μｇ／ｍＬ溶液４０μＬ／ウェルで、室温（約２５℃）で１時間コーティングした。コーティング後、プレートをＰＢＳ＋０．１％Ｔｗｅｅｎ（ＰＢＳＴ）中で３回洗浄し、次いで、ＰＢＳ中の１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を用いて室温で１時間ブロッキングした。次いで、サンプル溶液を添加する前に、プレートをＰＢＳで３回洗浄した。溶液平衡滴定（ＳＥＴ）試料を１％ＢＳＡ中で調製した。抗ヒトＴＮＦα抗体Ａｂ１を１０ｐＭに希釈し、ＴＮＦαを連続希釈して合計１２回希釈した。ＴＮＦα滴定及び固定抗体溶液を、１：１で合わせて、ＳＥＴ溶液を調製した。ＳＥＴ溶液を、３７℃で約７２時間インキュベートして、結合を平衡に到達させた。４０μｌのＳＥＴ溶液を、調製したＭＳＤプレートの三連の列に移し、室温で２．５分間インキュベートして、プレートを手動で軽くタッピングすることにより撹拌して遊離抗体を捕捉する。インキュベートの後、プレートをＰＢＳＴで３回洗浄した。次いで、１％ＢＳＡ中の４０μＬの、１μｇ／ｍＬのＳＵＬＦＯ－Ｔａｇ抗ヒト／ＮＨＰカッパ抗体（Ｍｅｓｏ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｓｃａｌｅ、カタログ番号Ｄ２０ＴＦ－６）を全てのウェルに添加した。これを静的に室温で１時間インキュベートした。次いで、プレートをＰＢＳＴで３回洗浄し、次いで、１５０μＬのＭＳＤ ＧＯＬＤ Ｒｅａｄ Ｂｕｆｆｅｒ Ａ（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、カタログ番号Ｒ９２ＴＧ－２）を添加した後、プレートを読み取った。希釈系列を各個々の実験において三連で調製し、３つの独立した反復実験を行った。Ｋ_Ｄは、ＭＳＤ－ＳＥＴデータからＸＬｆｉｔにおける二次反応速度モデルを使用して決定した。複製Ｋ_Ｄ値を、ヒト及びカニクイザルＴＮＦαの両方についてＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍに入力して、標準偏差統計を決定した。

【0080】

このアッセイの結果は、例示的な抗ヒトＴＮＦα抗体Ａｂ１が、８．５±１．６ｐＭのＫ_ＤでヒトＴＮＦαに結合し、２１．２±７．４ｐＭのＫ_ＤでカニクイザルＴＮＦαに結合することを示す。

【0081】

実施例３：抗ヒトＴＮＦα抗体の機能的活性
膜結合の内在化ＴＮＦα抗体：膜発現ＴＮＦαへの結合時の例示的な抗ヒトＴＮＦα抗体の内在化を、膜ヒトＴＮＦα（非切断性ＴＮＦα）を発現するように安定にトランスフェクトされたＣＨＯ細胞株でインビトロで試験した。簡潔には、Ｆ（ａｂ’）２断片ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ＃１０９－００６－０９８）を、製造業者のプロトコルを使用してｐＨｒｏｄｏ ｐＨ感受性色素（Ｆｉｓｈｅｒ Ｐ３６０１４）にコンジュゲートした。例示的な抗ヒトＴＮＦα抗体を、等モル量のＦ（ａｂ’）２ヤギ抗ｈＩｇＧ－ｐＨｒｏｄｏと共に、ＣＨＯ増殖培地中、室温で３０分間インキュベートした。抗体－色素混合物を、ＣＨＯヒトＴＮＦαトランスフェクト細胞に添加し、次いで、５％ＣＯ_２シェーカーインキュベーター中、３７℃で３、６及び２４時間の時点でインキュベートした。例示的なＴＮＦα抗体の最終濃度は、１０μｇ／ｍＬ及び３．３μｇ／ｍＬであった。細胞を示された時点で洗浄し、ＢＤ Ｆｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーターで分析した。

【0082】

表４に示される結果は、試験された抗ヒトＴＮＦα抗体が、３．３３μｇ／ｍＬ及び１０μｇ／ｍＬでＣＨＯ細胞上に発現された膜ヒトＴＮＦαに結合すると、ＣＨＯ細胞内に内在化されたことを示す。結果は更に、抗ヒトＴＮＦα抗体が、リソソーム上に発現された膜ＴＮＦαに結合すると、リソソーム内に内在化されることを示した（データは示さず）。

【0083】

【表4】

【0084】

可溶性及び膜ＴＮＦα誘導性細胞死滅の阻害：例示的な抗ヒトＴＮＦα抗体による可溶性及び膜ＴＮＦα誘導性細胞死滅の阻害を、ＴＮＦ受容体を天然に発現するＬ９２９マウス線維肉腫細胞を使用して、インビトロ細胞ベースのアッセイにおいて評価した。アクチノマイシン－Ｄと組み合わせた場合、ＴＮＦαは、これらの細胞において古典的なアポトーシスを誘導し、ＴＮＦα中和によってレスキューされ得る反応性酸素中間体の過剰な形成に起因する迅速な細胞死をもたらす。生存細胞の量は、ＭＴＳ－テトラゾリウム細胞毒性アッセイを使用して測定することができ、このアッセイでは、代謝的に活性な細胞中のミトコンドリアデヒドロゲナーゼ酵素が、ＭＴＳ－テトラゾリウムを、マイクロプレートリーダー（Ｂｉｏｔｅｋ Ｃｙｔａｔｉｏｎ ５ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｍｕｌｔｉ－Ｍｏｄｅ Ｒｅａｄｅｒ）で検出することができる着色ホルマザン生成物に還元する。

【0085】

可溶性ＴＮＦα誘導性細胞死滅の阻害：可溶性ＴＮＦα誘導性細胞死滅を阻害する例示的な抗ヒトＴＮＦα抗体の能力を評価するために、Ｌ９２９細胞をヒトＴＮＦα又はカニクイザルＴＮＦαのいずれかで別々に処理した。アッセイ培地（１×ＤＭＥＭ培地、１０％ＦＢＳ、１％Ｐｅｎ－Ｓｔｒｅｐ、１％ＭＥＭ必須アミノ酸、１％Ｌ－グルタミン、１％ピルビン酸ナトリウム）中に１０，０００細胞／１００μＬで再懸濁したＬ９２９細胞を９６ウェルプレートに添加し、組織培養インキュベーターに一晩置いた。翌日、例示的な抗体を１５μｇ／ｍＬ～０．０００５μｇ／ｍＬの範囲の濃度で希釈し（３倍希釈）、１００μＬの各濃度の例示的な抗ヒトＴＮＦα抗体を、以下の２つの条件：２００ｐｇ／ｍＬ組換えヒトＴＮＦα又は７５０ｐｇ／ｍＬ組換えカニクイザルＴＮＦαのうちの１つを含有するウェルに２連で添加し、プレートを室温で３０分間インキュベートした。ヒトＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体を陰性対照として使用した。次いで、抗体／ＴＮＦα／アクチノマイシン－Ｄ混合物を、Ｌ９２９接着細胞を含む９６ウェルプレートに移し、組織培養インキュベーター中で１８時間インキュベートした。アッセイ培地を除去し、１００μＬのＭＴＳ－テトラゾリウム基質混合物をウェルに添加し、プレートを組織培養インキュベーター中で２時間インキュベートした。細胞死を決定するために、プレートをマイクロプレートリーダー（Ｂｉｏｔｅｋ Ｃｙｔａｔｉｏｎ ５ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｍｕｌｔｉ－Ｍｏｄｅ Ｒｅａｄｅｒ）で４９０ｎｍで読み取った。結果は、例示的な抗ヒトＴＮＦα抗体によってＴＮＦα誘導性細胞傷害性の５０％が阻害される濃度（ＩＣ_５０、２つの独立した実験の平均±ＳＥＭ）として表され、データの３パラメータシグモイドフィット（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ９）を使用して計算した。ＩＣ_５０値を表５ａに示す。

【0086】

膜ＴＮＦα誘導性細胞死滅の阻害：例示的な抗ヒトＴＮＦα抗体が膜ＴＮＦα誘導性細胞死滅を阻害する能力を評価するために、切断不可能なＴＮＦα構築物を、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞に安定にトランスフェクトして、ＣＨＯ細胞を発現する細胞表面（膜）ＴＮＦαを生成した。切断不可能なＴＮＦα構築物は、ＴＮＦα切断の非存在下で、細胞表面上の生物活性ＴＮＦαの発現を可能にするＴＮＦαの切断部位における既知の変異を用いて生成した（Ｍｕｅｌｌｅｒ ｅｔ．ａｌ．１９９９）。切断不可能なヒトＴＮＦαを発現するＣＨＯ細胞とのＬ９２９細胞のインキュベーションは、迅速なＬ９２９細胞死をもたらした。例示的な抗ヒトＴＮＦα抗体が観察された細胞死滅を中和することができるかどうかを決定するために、１５μｇ／ｍＬ～０．０００５μｇ／ｍＬ（３倍希釈）の用量範囲を、例示的な抗体のそれぞれについて評価した。各濃度の例示的な抗ヒトＴＮＦα抗体（１００μＬ／ウェル）を、５００個のＣＨＯ ＴＮＦαトランスフェクタント細胞／ウェル＋６．２５μｇ／ｍＬのアクチノマイシンＤを含有するプレートに、２連で添加した。抗体＋ＣＨＯ細胞混合物を室温で３０分間インキュベートし、次いでＬ９２９細胞プレートに添加した。ヒトＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体を陰性対照として使用し、抗ヒトＴＮＦα抗体と同様の用量範囲で試験した。Ｌ９２９細胞死は、本質的に可溶性ＴＮＦα誘導性細胞死滅アッセイについて記載したように決定した。ＩＣ_５０値を表５ｂに示す。

【0087】

結果は、表５ａ及び５ｂに示されるように、例示的な抗ヒトＴＮＦα抗体が、可溶性ヒトＴＮＦα又は可溶性カニクイザルＴＮＦα誘導性Ｌ９２９細胞死滅、及びヒト膜ＴＮＦα誘導性Ｌ９２９細胞死滅を阻害することを示した。細胞死滅応答の用量依存的阻害が観察された。具体的には、試験した例示的な抗ヒトＴＮＦα抗体による可溶性ヒトＴＮＦα誘導性細胞死滅の阻害についてのＩＣ_５０（図５ａ）は、約０．１３μｇ／ｍＬ～約０．２２μｇ／ｍＬの範囲であり、可溶性カニクイザルＴＮＦα誘導性細胞死滅の阻害については約０．０２μｇ／ｍＬ～約０．３μｇ／ｍＬの範囲であった。試験した例示的な抗ヒトＴＮＦα抗体によるヒト膜ＴＮＦα誘導性細胞死滅の阻害についてのＩＣ_５０（図５ｂ）は、約０．１３μｇ／ｍＬ～約０．１２μｇ／ｍＬの範囲であった。陰性対照ｈＩｇＧ１アイソタイプは、予想どおり、ＴＮＦα誘導性細胞死滅を阻害しなかった。

【0088】

【表5】

【0089】

【表6】

【0090】

実施例４：アダリムマブに対する抗薬物抗体に結合する例示的な抗ヒトＴＮＦα抗体の特徴付け
アダリムマブに対するカニクイザル抗薬物抗体への結合：アダリムマブで高度免疫したカニクイザルからのアフィニティ精製高度免疫サル血清（affinity purified hyperimmune monkey serum、ＡＰ－ＨＩＭＳ）から得たアダリムマブに対する抗薬物抗体（抗アダリムマブ抗体）への、例示的な抗ヒトＴＮＦα抗体の結合を評価した。アダリムマブ－ＡｆｆｉＧｅｌ１０を使用して、アダリムマブ高度免疫カニクイザルからの抗アダリムマブ抗体を精製した。抗アダリムマブ抗体は、ＡＣＥ－ＢｒｉｄｇｅアッセイにおいてＡＰ－ＨＩＭＳの滴定を使用して検出した。アッセイは、免疫原性試験に関するＦＤＡガイダンスに従って開発された。簡単に説明すると、ストレプトアビジン被覆９６ウェルプレート（Ｐｉｅｒｃｅ、１５５００）を１×ＴＢＳＴ（Ｂｏｓｔｏｎ ＢｉｏＰｒｏｄｕｃｔｓ、ＩＢＢ－１８１Ｘ）で洗浄し、室温で１時間、ＴＢＳＴ／０．１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ；Ｓｉｇｍａ、Ａ７８８８）中１００μＬ／ウェルで、３０ｎＭのビオチン化アダリムマブで被覆した。プレートをＴＢＳＴで３回洗浄し、アフィニティ精製抗アダリムマブ抗体をＴＢＳ（Ｆｉｓｈｅｒ、ＢＰ２４７１－１）で１：１０に希釈し、被覆したプレートに１００μＬ／ウェルで添加し、４℃で一晩インキュベートした。翌日、プレートをＴＢＳＴで３回洗浄し、捕捉された抗アダリムマブ抗体を、６５μＬ／ウェルの３００ｍＭ酢酸（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ａ３８－５００）を使用して室温で５分間酸溶出した。次いで、ポリプロピレン９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、３３５９）に、中和緩衝液（０．３７５ＭのＴｒｉｓ、３００ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ９）中の各１μｇ／ｍＬのビオチン化アダリムマブ及びルテニウム標識アダリムマブ５０μＬを装填した。次に、５０μＬの酸溶出試料を、中和緩衝液中の混合物及びＡＤＡを含有するポリプロピレンプレートに添加し、室温で１時間、標識抗体に架橋させた。ＭＳＤ Ｇｏｌｄ９６ウェルストレプトアビジンプレート（Ｍｅｓｏｓｃａｌｅ、Ｌ１５ＳＡ－１）を洗浄し、ＴＢＳ＋１％ＢＳＡを用いて室温で１時間ブロッキングし、次いで洗浄し、８０μＬの架橋試料をプレートに１時間添加した。プレートをＴＢＳＴで３回洗浄し、１５０μＬ／ウェルの２×ＭＳＤ緩衝液（Ｍｅｓｏｓｃａｌｅ、Ｒ９２ＴＣ－２）をプレートに添加した。プレートをＭＳＤ ＳＱ１２０リーダーで読み取って、電気化学発光単位（electro chemiluminescent unit、ＥＣＬＵ）として表されるＴｉｅｒ１シグナルを得た。

【0091】

同じＡＰ－ＨＩＭＳをＡＣＥ－Ｂｒｉｄｇｅアッセイにおいても試験して、アダリムマブについて上で概説したのと本質的に同じ方法に従って、ただしビオチン及びルテニウム標識Ａｂ６を使用して、例示的な抗ヒトＴＮＦα抗体Ａｂ６に対する抗体を検出した。次いで、得られたＥＣＬＵシグナルを、試験したＡＰ－ＨＩＭＳの濃度の関数としてプロットした。

【0092】

図１に示されている結果は、アダリムマブ自体の抗薬物抗体（最大ＥＣＬＵシグナル４００００）へのアダリムマブの結合と比較した場合、例示的な抗ヒトＴＮＦα抗体Ａｂ６が、アダリムマブで高度免疫されたカニクイザルからの血清から精製されたアダリムマブに対する抗薬物抗体（最大ＥＣＬＵシグナル４０００）への結合が低いか、結合しなかったことを示す。具体的には、結果は、例示的な抗ヒトＴＮＦα抗体Ａｂ６がカニクイザルによって生成されたアダリムマブに対する抗薬物抗体の約１０％のみを認識することを示し、この結合が、抗体定常領域などのＣＤＲ領域から離れて位置する共有配列に起因する可能性が高いことを示唆した。

【0093】

アダリムマブに対するヒト患者抗薬物抗体への結合：試験ＲＡ－ＢＥＡＭに登録されたアダリムマブ治療患者から得られた２１個の患者血清試料中のアダリムマブに対する抗薬物抗体（抗アダリムマブ抗体）への、例示的な抗ヒトＴＮＦα抗体の結合を評価した。２１個の血清試料をベースライン後に収集し、本質的にカニクイザルＡＤＡ評価について記載したような方法を使用することによって、アダリムマブに対して高いＡＤＡ力価を有することを確認した。次いで、２１個の血清試料を、本質的にカニクイザルＡＤＡ評価について記載したような方法を使用して、例示的な抗ヒトＴＮＦα抗体Ａｂ６への結合について評価した。

【0094】

図２に示されている結果は、例示的な抗ヒトＴＮＦα抗体Ａｂ６が、試験した２１個の患者試料のうち１６個においてアダリムマブに対する抗薬物抗体への結合が低いか、結合しなかったことを示す（ＥＣＬＵシグナルは、アッセイのカットオフ点（１０２ＥＣＬＵ）未満であった）。免疫原性の決定において、カットオフ点は、「推定陽性」又は抗薬物抗体含有試料を識別するために使用される閾値である。図２に示されるように、２１個の試料のうち５個が、カットオフ点を超えるＥＣＬＵシグナルを有したが、全てがカットオフ点を２０％未満超えており、したがって、アッセイの変動性の範囲内であると決定された。アダリムマブで治療されたヒト患者におけるアダリムマブに対する抗薬物抗体への抗ヒトＴＮＦα抗体Ａｂ６の有意に低い結合、又は結合がないことは、Ａｂ６及びアダリムマブ抗体配列が十分に異なり、その結果、アダリムマブ中に存在するエピトープに特異的である、試験されたヒト対象によってアダリムマブに対して生成されたＡＤＡが、Ａｂ６によって共有されず、したがってＡｂ６によってあまり認識されないことを示した。これらの結果は、アダリムマブなどの他のＴＮＦα治療薬に対する抗薬物抗体に対する臨床応答又は有害反応の低下を生じている患者の治療のための、例示的な抗ヒトＴＮＦα抗体の潜在的な使用を示す。

【0095】

実施例５：免疫原性評価
ＬＣＤＲ１及びＨＣＤＲ３ペプチドクラスターに対するＤＣ内在化アッセイ、ＭＡＰＰＳアッセイ、及びＴ細胞増殖アッセイを実施して、例示的なＴＮＦα抗体の免疫原性リスクを評価した。

【0096】

樹状細胞内在化アッセイ：樹状細胞（ＤＣ）に由来するヒトＣＤ１４＋単球が、例示的な抗ヒトＴＮＦα抗体を内在化する能力を評価した。ＣＤ１４＋単球を末梢血単核細胞（periphery blood mononuclear cell、ＰＢＭＣ）から単離し、培養し、未成熟樹状細胞に分化させ（ＩＬ－４及びＧＭ－ＣＳＦを用いて）、全て標準的なプロトコルを使用した。成熟ＤＣを得るために、細胞を１μｇ／ｍＬのＬＰＳで４時間処理した。

【0097】

例示的な抗ヒトＴＮＦα抗体を、完全ＲＰＭＩ培地中で、８μｇ／ｍＬで希釈し、完全ＲＰＭＩ培地中で５．３３μｇ／ｍＬに希釈した検出プローブＦａｂ－ＴＡＭＲＡ－ＱＳＹ７と等体積で混合し、更に、複合体形成のために暗所で、４℃で３０分間インキュベートし、次いで未成熟及び成熟ＤＣ培養物に添加し、ＣＯ_２インキュベーター中で、３７℃で２４時間インキュベートした。細胞を２％ＦＢＳ ＰＢＳで洗浄し、Ｃｙｔｏｘ Ｇｒｅｅｎの生／死色素を含む１００μＬの２％ＦＢＳ ＰＢＳに再懸濁した。ＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａ Ｘ－２０でデータを収集し、ＦｌｏｗＪｏで分析した。生単一細胞をゲーティングし、ＴＡＭＲＡ蛍光陽性細胞の割合を読み出しとして記録した。異なるドナーから生成されたデータを有する分子の比較を可能にするために、正規化された内在化指数を使用した。内在化シグナルは、式１を使用して、ＩｇＧ１アイソタイプ（正規化された内在化指数＝０）及び内部陽性対照ＰＣ（正規化された内在化指数＝１００）に対して正規化し、

【0098】

【数1】

式中、Ｘ_{ＴＡＭＲＡ}、ＩｇＧ１アイソタイプ_{ＴＡＭＲＡ}、及びＰＣ_{ＴＡＭＲＡ}は、それぞれ、試験分子Ｘ、ＩｇＧ１アイソタイプ、及びＰＣのＴＡＭＲＡ陽性集団の割合であった。

【0099】

表６に示される結果は、試験された抗ヒトＴＮＦα抗体が、未成熟樹状細胞及び成熟樹状細胞上のＴＮＦαに結合すると細胞内に内在化されたことを示す。

【0100】

【表7】

【0101】

ＭＨＣ関連ペプチドプロテオミクス（ＭＡＰＰ）アッセイ：ＭＡＰＰは、例示的な抗ヒトＴＮＦα抗体で予め処理したヒト樹状細胞上のＭＨＣ－ＩＩ提示ペプチドをプロファイリングする。ＣＤ１４＋単球を末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）から単離し、培養し、標準的なプロトコルを使用して未成熟樹状細胞（ＩＬ－４及びＧＭ－ＣＳＦを含む）に分化させた。４日目に例示的な抗体を未成熟樹状細胞に添加し、細胞を成熟樹状細胞に形質転換するための、ＬＰＳを含有する新鮮な培地を５時間のインキュベーション後に交換した。翌日、成熟樹状細胞をプロテアーゼ阻害剤及びＤＮＡｓｅを含むＲＩＰＡ中で溶解した。ＭＨＣ－ＩＩ複合体の免疫沈降を、ストレプトアビジンビーズに結合したビオチン化抗ＭＨＣ－ＩＩ抗体を使用して行った。結合した複合体を溶出させ、濾過した。単離されたＭＨＣ－ＩＩペプチドを、質量分析計によって分析した。ペプチド識別は、データベースに付加された試験配列を含むウシ／ヒトデータベースに対する、酵素検索パラメータを伴わない検索アルゴリズムを使用して、内部プロテオミクスパイプラインによって生成した。例示的な抗体から識別されたペプチドを、親配列に対して整列させた。

【0102】

表７に示されている結果は、例示的な抗ヒトＴＮＦα抗体が、ＭＡＰＰによる様々な程度の提示を有したことを示した。Ａｂ１は、試験した１０人のドナーのうち３人において、１つの非生殖系列クラスターを有する最も低いＭＡＰＰ提示を実証した。

【0103】

【表8】

【0104】

Ｔ細胞増殖アッセイ：例示的な抗ヒトＴＮＦα抗体ＭＡＰＰ由来ペプチドクラスターが細胞増殖を誘導することによってＣＤ４＋Ｔ細胞を活性化する能力を評価した。ＣＤ８＋Ｔ細胞を、１０人の健常ドナーからの凍結保存ＰＢＭＣから枯渇させ、１μＭのカルボキシフルオレセインジアセテートスクシンイミジルエステル（Carboxyfluorescein Diacetate Succinimidyl Ester、ＣＦＳＥ）で標識した。ＣＤ８＋Ｔ細胞枯渇ＰＢＭＣを、５％ＣＴＳ（商標）Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｅｌｌ ＳＲ（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号Ａ２５９６１０１）を含むＡＩＭ－Ｖ培地（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号１２０５５－０８３）に４×１０^６個の細胞／ｍＬ／ウェルで播種し、以下の異なる分子を含有する２．０ｍＬで、３連で試験した：ＤＭＳＯ対照、培地対照、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ；陽性対照）、ＰＡＤＲＥ－Ｘペプチド（合成ワクチンヘルパーペプチド、陽性ペプチド対照）、又はそれぞれの抗ヒトＴＮＦα抗体ＭＡＰＰ由来ペプチドクラスター（各ペプチド１０μＭ）。細胞を培養し、５％ＣＯ_２と共に３７℃で７日間インキュベートした。７日目に、ハイスループットサンプラー（Ｈｉｇｈ Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ Ｓａｍｐｌｅｒ、ＨＴＳ）を装備したＢＤ ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ（商標）を使用したフローサイトメトリによる生存率検出のために、試料を以下の細胞表面マーカーで染色した：抗ＣＤ３、抗ＣＤ４、抗ＣＤ１４、抗ＣＤ１９、及びＤＡＰＩ。ＦｌｏｗＪｏ（登録商標）ソフトウェア（ＦｌｏｗＪｏ、ＬＬＣ、ＴｒｅｅＳｔａｒ）を使用してデータを分析し、細胞分裂指数（Cellular Division Index、ＣＤＩ）を計算した。簡潔に述べると、各ＭＡＰＰ由来ペプチドクラスターについてのＣＤＩは、ペプチド刺激されたウェルからの増殖しているＣＦＳＥ^ｄｉｍＣＤ４＋Ｔ細胞の割合を、刺激されていないウェルにおける増殖しているＣＦＳＥ^ｄｉｍＣＤ４＋Ｔ細胞の割合で割ることによって計算した。２．５以上のＣＤＩは、陽性応答を表すとみなした。全てのドナーにわたるドナー頻度の割合を評価した。

【0105】

表８ａ及び８ｂに示されている結果は、Ａｂ２についてのＬＣＤＲ１（表８ａ）及びＨＣＤＲ３（表８ｂ）ペプチドが、それぞれ、約２２．０％及び２５％のドナーにおいてＴ細胞応答頻度を誘導したことを示し、陽性対照と比較した場合、Ａｂ２についての有意に低減された免疫原性リスクを示す。ＫＬＨ陽性対照は、ドナーの１００％においてＴ細胞応答を誘導し、ＰＡＤＲＥ－Ｘ（合成ワクチンヘルパーペプチド）陽性対照は、２つの研究においてそれぞれ、ドナーの６７％及び６２．５％においてＴ細胞応答を誘導した。これは、このアッセイの予想範囲内である（４８．１％＋２４．４の陽性ドナー頻度）。

【0106】

【表9】

【0107】

【表10】

【0108】

実施例６．例示的な抗ヒトＴＮＦα抗体の生物物理学的特性
例示的な抗ヒトＴＮＦα抗体の生物物理学的特性を、開発性について評価した。

【0109】

粘度：例示的な抗ヒトＴＮＦα抗体試料を、ｐＨ６の一般的な製剤緩衝液マトリックス中で約１２５ｍｇ／ｍＬに濃縮した。各抗体の粘度を、９回の反復測定の平均を使用して１５℃でＶＲＯＣ（登録商標）ｉｎｉｔｉｕｍ（ＲｈｅｏＳｅｎｓｅ）を使用して測定した。表９に示されるように、結果は、例示的な抗ヒトＴＮＦα抗体Ａｂ１（９．７ｃＰ）、Ａｂ２（９．２ｃＰ）、Ａｂ３（１１．４ｃＰ）、及びＡｂ４（１０．６ｃＰ）が、開発性について良好な粘度プロファイルを有することを示した。

【0110】

熱安定性：示差走査熱量測定（ＤＳＣ）を使用して、例示的な抗体の熱変性に対する安定性を評価した。未分解時のデータフィッティングによって得られた、ＰＢＳ、ｐＨ７．２緩衝液中の抗体の熱融解温度を表９に列挙する（Ｔｏｎｓｅｔ、ＴＭ１、ＴＭ２、及びＴＭ３）。各ドメインについての熱転移は、全て十分に分解されたわけではなかったが、表９に示されるデータは、例示的な抗ヒトＴＮＦα抗体Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、及びＡｂ４が、開発性について良好な熱安定性プロファイルを有したことを示す。

【0111】

温度ストレスによる凝集：例示的な抗体の経時的な溶液安定性を、約１００ｍｇ／ｍＬで評価した。試料を５℃及び３５℃で２８週間の期間にわたってインキュベートした。インキュベーション後、サイズ排除クロマトグラフィ（ＳＥＣ）を用いて高分子量（％ＨＭＷ）種の割合について試料を分析した。表９に示される結果は、例示的な抗ヒトＴＮＦα抗体Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、及びＡｂ４が、開発性について良好な凝集プロファイルを有したことを示す。

【0112】

【表11】

【0113】

実施例７：抗ヒトＴＮＦα抗体のインビボ特徴付け
インビボでのヒトＴＮＦα誘導性ＣＸＣＬ１サイトカイン生成の阻害：例示的な抗ヒトＴＮＦα抗体によるＴＮＦα誘導性ＣＸＣＬ１の中和をインビボで評価した。Ｃ５７／Ｂ６マウスへのヒトＴＮＦαの投与は、マウス血漿ＣＸＣＬ１レベルの急速かつ一過性の増加を誘導する。これにより、例示的な抗ヒトＴＮＦα抗体のインビボでの中和能力の調査が可能となる。

【0114】

簡潔に述べると、Ｃ５７／Ｂ６マウス（Ｎ＝８／群）に、０．３ｍｇ／ｋｇ若しくは３ｍｇ／ｋｇの例示的な抗体又は３ｍｇ／ｋｇの非結合アイソタイプ対照を皮下投与した。抗体投与の２４時間後、マウスを、３μｇ／マウスの用量での、ヒトＴＮＦαの腹腔内注射によってチャレンジした。ヒトＴＮＦαチャレンジの２時間後、マウスを屠殺し、血液を収集し、遠心分離によって血漿に清澄化した。マウスＣＸＣＬ１濃度について、血漿を、市販のＭＳＤアッセイ（ＭｅｓｏＳｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、Ｐ／Ｎ．番号Ｋ１５２ＱＴＧ－１）を使用して、製造者の使用説明書に従って分析した。

【0115】

表１０に示される結果は、例示的な抗ヒトＴＮＦα抗体が、アイソタイプ対照処置マウス（ｐ＜０．０５、ＡＮＯＶＡ、続いてＴｕｒｋｅｙの多重比較検定）と比較して、用量依存的様式でヒトＴＮＦα誘導性血漿ＣＸＣＬ１生成をインビボで有意に阻害したことを示す。詳細には、例示的な抗ヒトＴＮＦα抗体は、ＴＮＦα誘導性インビボ血漿ＣＸＣＬ１生成を、３ｍｇ／ｋｇで約８２％～約９３％、及び０．３ｍｇ／ｋｇで約４６．５％～約６４．５％阻害した。したがって、例示的な抗ヒトＴＮＦα抗体が、ヒトＴＮＦαによって誘導される生物学的効果をインビボで中和したことを示している。

【0116】

【表12】

【0117】

配列表
Ａｂ１
配列番号１ Ａｂ１、Ａｂ２、及びＡｂ６に対するＨＣＤＲ１
ＧＹＴＦＴＧＹＹＩＨ
配列番号２ Ａｂ１、Ａｂ２、及びＡｂ６に対するＨＣＤＲ２
ＷＩＮＰＹＴＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧ
配列番号３ Ａｂ１に対するＨＣＤＲ３
ＤＬＹＧＳＳＮＹＧＧＤＶ
配列番号４ Ａｂ１及びＡｂ３に対するＬＣＤＲ１
ＱＡＳＱＧＩＳＮＹＬＮ
配列番号５ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、及びＡｂ６に対するＬＣＤＲ２
ＤＡＳＮＬＥＴ
配列番号６ Ａｂ１、Ａｂ３、及びＡｂ５に対するＬＣＤＲ３
ＱＱＹＤＫＬＰＬＴ
配列番号７ Ａｂ１に対するＶＨ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＹＴＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＬＹＧＳＳＮＹＧＧＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号８ Ａｂ１及びＡｂ３に対するＶＬ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＧＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＡＳＮＬＥＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＹＤＫＬＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号９ Ａｂ１に対するＨＣ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＹＴＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＬＹＧＳＳＮＹＧＧＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＣＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＣＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号１０ Ａｂ１及びＡｂ３に対するＬＣ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＧＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＡＳＮＬＥＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＹＤＫＬＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号１１ Ａｂ１に対するＨＣ ＤＮＡ
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＧＧＣＴＧＡＧＧＴＧＡＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＡＧＧＴＣＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＡＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＣＧＧＣＴＡＣＴＡＴＡＴＡＣＡＣＴＧＧＧＴＧＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＡＣＡＡＧＧＧＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＧＧＧＡＴＧＧＡＴＣＡＡＣＣＣＴＴＡＣＡＣＣＧＧＴＧＧＣＡＣＡＡＡＣＴＡＴＧＣＡＣＡＧＡＡＧＴＴＴＣＡＧＧＧＣＡＧＧＧＴＣＡＣＣＡＴＧＡＣＣＡＧＧＧＡＣＡＣＧＴＣＣＡＴＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＣＴＧＡＧＣＡＧＧＣＴＧＡＧＡＴＣＴＧＡＣＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＧＡＴＣＴＣＴＡＴＧＧＴＴＣＧＡＧＴＡＡＴＴＡＣＧＧＴＧＧＣＧＡＣＧＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＡＣＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＴＡＧＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＧＴＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＴＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＡＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＡＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＴＧＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＴＴＣＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＣＡＡＡ
配列番号１２ Ａｂ１及びＡｂ３に対するＬＣ ＤＮＡ
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＣＣＡＧＧＣＧＡＧＴＣＡＧＧＧＣＡＴＴＡＧＣＡＡＣＴＡＴＴＴＡＡＡＴＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＣＣＣＣＴＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＣＧＡＴＧＣＡＴＣＣＡＡＴＴＴＧＧＡＡＡＣＡＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＡＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＴＡＣＴＴＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＡＴＴＧＣＡＡＣＡＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＡＣＡＧＴＡＴＧＡＴＡＡＧＣＴＣＣＣＧＣＴＣＡＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡＣＧＧＡＣＣＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＣ
Ａｂ２
配列番号１ Ａｂ１、Ａｂ２、及びＡｂ６に対するＨＣＤＲ１
ＧＹＴＦＴＧＹＹＩＨ
配列番号２ Ａｂ１、Ａｂ２、及びＡｂ６に対するＨＣＤＲ２
ＷＩＮＰＹＴＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧ
配列番号１３ Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、及びＡｂ５に対するＨＣＤＲ３
ＤＬＹＧＳＳＮＹＧＭＤＶ
配列番号１４ Ａｂ２、Ａｂ４、及びＡｂ５に対するＬＣＤＲ１
ＱＡＳＱＧＩＲＮＹＬＮ
配列番号５ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、及びＡｂ６に対するＬＣＤＲ２
ＤＡＳＮＬＥＴ
配列番号１５ Ａｂ２及びＡｂ４に対するＬＣＤＲ３
ＱＱＹＤＮＬＰＬＴ
配列番号１６ Ａｂ２に対するＶＨ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＹＴＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＬＹＧＳＳＮＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号１７ Ａｂ２及びＡｂ４に対するＶＬ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＧＩＲＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＡＳＮＬＥＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＹＤＮＬＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号１８ Ａｂ２に対するＨＣ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＹＴＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＬＹＧＳＳＮＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＣＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＣＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号１９ Ａｂ２及びＡｂ４に対するＬＣ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＧＩＲＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＡＳＮＬＥＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＹＤＮＬＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号２０ Ａｂ２に対するＨＣ ＤＮＡ
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＧＧＣＴＧＡＧＧＴＧＡＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＡＧＧＴＣＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＡＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＣＧＧＣＴＡＣＴＡＴＡＴＡＣＡＣＴＧＧＧＴＧＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＡＣＡＡＧＧＧＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＧＧＧＡＴＧＧＡＴＣＡＡＣＣＣＴＴＡＣＡＣＣＧＧＴＧＧＣＡＣＡＡＡＣＴＡＴＧＣＡＣＡＧＡＡＧＴＴＴＣＡＧＧＧＣＡＧＧＧＴＣＡＣＣＡＴＧＡＣＣＡＧＧＧＡＣＡＣＧＴＣＣＡＴＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＣＴＧＡＧＣＡＧＧＣＴＧＡＧＡＴＣＴＧＡＣＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＧＡＴＣＴＣＴＡＴＧＧＴＴＣＧＡＧＴＡＡＴＴＡＣＧＧＴＡＴＧＧＡＣＧＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＡＣＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＴＡＧＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＧＣＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＴＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＡＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＡＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＴＧＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＴＴＣＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＣＡＡＡ
配列番号２１ Ａｂ２及びＡｂ４に対するＬＣ ＤＮＡ
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＣＣＡＧＧＣＧＡＧＴＣＡＧＧＧＣＡＴＴＣＧＣＡＡＣＴＡＴＴＴＡＡＡＴＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＣＣＣＣＴＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＣＧＡＴＧＣＡＴＣＣＡＡＴＴＴＧＧＡＡＡＣＡＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＡＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＴＡＣＴＴＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＡＴＴＧＣＡＡＣＡＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＡＣＡＧＴＡＴＧＡＴＡＡＣＣＴＣＣＣＧＣＴＣＡＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡＣＧＧＡＣＣＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＣ
Ａｂ３
配列番号２２ Ａｂ３、Ａｂ４、及びＡｂ５に対するＨＣＤＲ１
ＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨ
配列番号２３ Ａｂ３、Ａｂ４、及びＡｂ５に対するＨＣＤＲ２
ＷＩＮＰＹＴＧＧＴＫＹＡＱＫＦＱＧ
配列番号１３ Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、及びＡｂ５に対するＨＣＤＲ３
ＤＬＹＧＳＳＮＹＧＭＤＶ
配列番号４ Ａｂ２、Ａｂ４、及びＡｂ５に対するＬＣＤＲ１
ＱＡＳＱＧＩＳＮＹＬＮ
配列番号５ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、及びＡｂ６に対するＬＣＤＲ２
ＤＡＳＮＬＥＴ
配列番号６ Ａｂ１、Ａｂ３、及びＡｂ５に対するＬＣＤＲ３
ＱＱＹＤＫＬＰＬＴ
配列番号２４ Ａｂ３、Ａｂ４及びＡｂ５に対するＶＨ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＹＴＧＧＴＫＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＬＹＧＳＳＮＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号８ Ａｂ１及びＡｂ３に対するＶＬ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＧＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＡＳＮＬＥＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＹＤＫＬＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号２５ Ａｂ３、Ａｂ４及びＡｂ５に対するＨＣ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＹＴＧＧＴＫＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＬＹＧＳＳＮＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＣＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＣＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号１０ Ａｂ１及びＡｂ３に対するＬＣ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＧＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＡＳＮＬＥＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＹＤＫＬＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号２６ Ａｂ３、Ａｂ４、及びＡｂ５に対するＨＣ ＤＮＡ
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＧＧＣＴＧＡＧＧＴＧＡＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＡＧＧＴＣＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＡＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＣＧＧＣＴＡＣＴＡＴＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＧＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＡＣＡＡＧＧＧＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＧＧＧＡＴＧＧＡＴＣＡＡＣＣＣＴＴＡＣＡＣＣＧＧＴＧＧＣＡＣＡＡＡＧＴＡＴＧＣＡＣＡＧＡＡＧＴＴＴＣＡＧＧＧＣＡＧＧＧＴＣＡＣＣＡＴＧＡＣＣＡＧＧＧＡＣＡＣＧＴＣＣＡＴＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＣＴＧＡＧＣＡＧＧＣＴＧＡＧＡＴＣＴＧＡＣＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＧＡＴＣＴＣＴＡＴＧＧＴＴＣＧＡＧＴＡＡＴＴＡＣＧＧＴＡＴＧＧＡＣＧＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＡＣＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＴＡＧＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＧＣＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＴＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＡＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＡＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＴＧＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＴＴＣＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＣＡＡＡ
配列番号１２ Ａｂ１及びＡｂ３に対するＬＣ ＤＮＡ
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＣＣＡＧＧＣＧＡＧＴＣＡＧＧＧＣＡＴＴＡＧＣＡＡＣＴＡＴＴＴＡＡＡＴＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＣＣＣＣＴＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＣＧＡＴＧＣＡＴＣＣＡＡＴＴＴＧＧＡＡＡＣＡＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＡＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＴＡＣＴＴＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＡＴＴＧＣＡＡＣＡＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＡＣＡＧＴＡＴＧＡＴＡＡＧＣＴＣＣＣＧＣＴＣＡＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡＣＧＧＡＣＣＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＣ
Ａｂ４
配列番号２２ Ａｂ３、Ａｂ４、及びＡｂ５に対するＨＣＤＲ１
ＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨ
配列番号２３ Ａｂ３、Ａｂ４、及びＡｂ５に対するＨＣＤＲ２
ＷＩＮＰＹＴＧＧＴＫＹＡＱＫＦＱＧ
配列番号１３ Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、及びＡｂ５に対するＨＣＤＲ３
ＤＬＹＧＳＳＮＹＧＭＤＶ
配列番号１４ Ａｂ２、Ａｂ４、及びＡｂ５に対するＬＣＤＲ１
ＱＡＳＱＧＩＲＮＹＬＮ
配列番号５ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、及びＡｂ６に対するＬＣＤＲ２
ＤＡＳＮＬＥＴ
配列番号１５ Ａｂ２及びＡｂ４に対するＬＣＤＲ３
ＱＱＹＤＮＬＰＬＴ
配列番号２４ Ａｂ３、Ａｂ４及びＡｂ５に対するＶＨ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＹＴＧＧＴＫＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＬＹＧＳＳＮＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号１７ Ａｂ２及びＡｂ４に対するＶＬ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＧＩＲＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＡＳＮＬＥＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＹＤＮＬＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号２５ Ａｂ３、Ａｂ４及びＡｂ５に対するＨＣ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＹＴＧＧＴＫＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＬＹＧＳＳＮＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＣＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＣＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号１９ Ａｂ２及びＡｂ４に対するＬＣ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＧＩＲＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＡＳＮＬＥＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＹＤＮＬＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号２６ Ａｂ３、Ａｂ４、及びＡｂ５に対するＨＣ ＤＮＡ
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＧＧＣＴＧＡＧＧＴＧＡＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＡＧＧＴＣＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＡＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＣＧＧＣＴＡＣＴＡＴＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＧＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＡＣＡＡＧＧＧＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＧＧＧＡＴＧＧＡＴＣＡＡＣＣＣＴＴＡＣＡＣＣＧＧＴＧＧＣＡＣＡＡＡＧＴＡＴＧＣＡＣＡＧＡＡＧＴＴＴＣＡＧＧＧＣＡＧＧＧＴＣＡＣＣＡＴＧＡＣＣＡＧＧＧＡＣＡＣＧＴＣＣＡＴＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＣＴＧＡＧＣＡＧＧＣＴＧＡＧＡＴＣＴＧＡＣＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＧＡＴＣＴＣＴＡＴＧＧＴＴＣＧＡＧＴＡＡＴＴＡＣＧＧＴＡＴＧＧＡＣＧＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＡＣＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＴＡＧＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＧＣＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＴＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＡＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＡＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＴＧＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＴＴＣＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＣＡＡＡ
配列番号２１ Ａｂ２及びＡｂ４に対するＬＣ ＤＮＡ
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＣＣＡＧＧＣＧＡＧＴＣＡＧＧＧＣＡＴＴＣＧＣＡＡＣＴＡＴＴＴＡＡＡＴＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＣＣＣＣＴＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＣＧＡＴＧＣＡＴＣＣＡＡＴＴＴＧＧＡＡＡＣＡＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＡＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＴＡＣＴＴＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＡＴＴＧＣＡＡＣＡＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＡＣＡＧＴＡＴＧＡＴＡＡＣＣＴＣＣＣＧＣＴＣＡＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡＣＧＧＡＣＣＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＣ
Ａｂ５
配列番号２２ Ａｂ３、Ａｂ４、及びＡｂ５に対するＨＣＤＲ１
ＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨ
配列番号２３ Ａｂ３、Ａｂ４、及びＡｂ５に対するＨＣＤＲ２
ＷＩＮＰＹＴＧＧＴＫＹＡＱＫＦＱＧ
配列番号１３ Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、及びＡｂ５に対するＨＣＤＲ３
ＤＬＹＧＳＳＮＹＧＭＤＶ
配列番号１４ Ａｂ２、Ａｂ４、及びＡｂ５に対するＬＣＤＲ１
ＱＡＳＱＧＩＲＮＹＬＮ
配列番号５ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、及びＡｂ６に対するＬＣＤＲ２
ＤＡＳＮＬＥＴ
配列番号６ Ａｂ１、Ａｂ３、及びＡｂ５に対するＬＣＤＲ３
ＱＱＹＤＫＬＰＬＴ
配列番号２４ Ａｂ３、Ａｂ４及びＡｂ５に対するＶＨ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＹＴＧＧＴＫＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＬＹＧＳＳＮＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号２７ Ａｂ５に対するＶＬ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＧＩＲＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＡＳＮＬＥＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＹＤＫＬＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号２５ Ａｂ３、Ａｂ４及びＡｂ５に対するＨＣ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＹＴＧＧＴＫＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＬＹＧＳＳＮＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＣＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＣＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号２８ Ａｂ５に対するＬＣ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＧＩＲＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＡＳＮＬＥＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＹＤＫＬＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号２６ Ａｂ３、Ａｂ４、及びＡｂ５に対するＨＣ ＤＮＡ
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＧＧＣＴＧＡＧＧＴＧＡＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＡＧＧＴＣＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＡＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＣＧＧＣＴＡＣＴＡＴＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＧＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＡＣＡＡＧＧＧＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＧＧＧＡＴＧＧＡＴＣＡＡＣＣＣＴＴＡＣＡＣＣＧＧＴＧＧＣＡＣＡＡＡＧＴＡＴＧＣＡＣＡＧＡＡＧＴＴＴＣＡＧＧＧＣＡＧＧＧＴＣＡＣＣＡＴＧＡＣＣＡＧＧＧＡＣＡＣＧＴＣＣＡＴＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＣＴＧＡＧＣＡＧＧＣＴＧＡＧＡＴＣＴＧＡＣＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＧＡＴＣＴＣＴＡＴＧＧＴＴＣＧＡＧＴＡＡＴＴＡＣＧＧＴＡＴＧＧＡＣＧＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＡＣＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＴＡＧＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＧＣＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＴＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＡＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＡＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＴＧＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＴＴＣＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＣＡＡＡ
配列番号２９ Ａｂ５に対するＬＣ ＤＮＡ
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＣＣＡＧＧＣＧＡＧＴＣＡＧＧＧＣＡＴＴＣＧＣＡＡＣＴＡＴＴＴＡＡＡＴＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＣＣＣＣＴＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＣＧＡＴＧＣＡＴＣＣＡＡＴＴＴＧＧＡＡＡＣＡＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＡＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＴＡＣＴＴＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＡＴＴＧＣＡＡＣＡＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＡＣＡＧＴＡＴＧＡＴＡＡＧＣＴＣＣＣＧＣＴＣＡＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡＣＧＧＡＣＣＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＣ
Ａｂ６
配列番号１ Ａｂ１、Ａｂ２、及びＡｂ６に対するＨＣＤＲ１
ＧＹＴＦＴＧＹＹＩＨ
配列番号２ Ａｂ１、Ａｂ２、及びＡｂ６に対するＨＣＤＲ２
ＷＩＮＰＹＴＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧ
配列番号３０ Ａｂ６に対するＨＣＤＲ３
ＤＩＹＧＳＳＮＹＧＧＤＶ
配列番号３１ Ａｂ６に対するＬＣＤＲ１
ＱＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮ
配列番号５ Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、及びＡｂ６に対するＬＣＤＲ２
ＤＡＳＮＬＥＴ
配列番号３２ Ａｂ６に対するＬＣＤＲ３
ＱＱＹＤＴＬＰＬＴ
配列番号３３ Ａｂ６に対するＶＨ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＹＴＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＩＹＧＳＳＮＹＧＧＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号３４ Ａｂ６に対するＶＬ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＡＳＮＬＥＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＹＤＴＬＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号３５ Ａｂ６に対するＨＣ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＹＴＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＩＹＧＳＳＮＹＧＧＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号３６ Ａｂ６に対するＬＣ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＡＳＮＬＥＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＹＤＴＬＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号３７ Ａｂ６に対するＨＣ ＤＮＡ
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＧＧＣＴＧＡＧＧＴＧＡＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＡＧＧＴＣＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＡＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＣＧＧＣＴＡＣＴＡＴＡＴＡＣＡＣＴＧＧＧＴＧＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＡＣＡＡＧＧＧＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＧＧＧＡＴＧＧＡＴＣＡＡＣＣＣＴＴＡＣＡＣＣＧＧＴＧＧＣＡＣＡＡＡＣＴＡＴＧＣＡＣＡＧＡＡＧＴＴＴＣＡＧＧＧＣＡＧＧＧＴＣＡＣＣＡＴＧＡＣＣＡＧＧＧＡＣＡＣＧＴＣＣＡＴＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＣＴＧＡＧＣＡＧＧＣＴＧＡＧＡＴＣＴＧＡＣＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＧＡＴＡＴＣＴＡＴＧＧＴＴＣＧＡＧＴＡＡＴＴＡＣＧＧＴＧＧＣＧＡＣＧＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＡＣＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＴＡＧＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＴＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＡＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＡＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＴＴＣＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＣＡＡＡ
配列番号３８ Ａｂ６に対するＬＣ ＤＮＡ
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＣＣＡＧＧＣＧＡＧＴＣＡＧＧＡＣＡＴＴＡＧＣＡＡＣＴＡＴＴＴＡＡＡＴＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＣＣＣＣＴＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＣＧＡＴＧＣＡＴＣＣＡＡＴＴＴＧＧＡＡＡＣＡＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＡＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＴＡＣＴＴＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＡＴＴＧＣＡＡＣＡＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＡＣＡＧＴＡＴＧＡＴＡＣＣＣＴＣＣＣＧＣＴＣＡＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡＣＧＧＡＣＣＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＣ
配列番号３９ ヒトＴＮＦαタンパク質
ＭＳＴＥＳＭＩＲＤＶＥＬＡＥＥＡＬＰＫＫＴＧＧＰＱＧＳＲＲＣＬＦＬＳＬＦＳＦＬＩＶＡＧＡＴＴＬＦＣＬＬＨＦＧＶＩＧＰＱＲＥＥＦＰＲＤＬＳＬＩＳＰＬＡＱＡＶＲＳＳＳＲＴＰＳＤＫＰＶＡＨＶＶＡＮＰＱＡＥＧＱＬＱＷＬＮＲＲＡＮＡＬＬＡＮＧＶＥＬＲＤＮＱＬＶＶＰＳＥＧＬＹＬＩＹＳＱＶＬＦＫＧＱＧＣＰＳＴＨＶＬＬＴＨＴＩＳＲＩＡＶＳＹＱＴＫＶＮＬＬＳＡＩＫＳＰＣＱＲＥＴＰＥＧＡＥＡＫＰＷＹＥＰＩＹＬＧＧＶＦＱＬＥＫＧＤＲＬＳＡＥＩＮＲＰＤＹＬＤＦＡＥＳＧＱＶＹＦＧＩＩＡＬ
配列番号：４０ アカゲザルＴＮＦαタンパク質
ＭＳＴＥＳＭＩＲＤＶＥＬＡＥＥＡＬＰＲＫＴＡＧＰＱＧＳＲＲＣＷＦＬＳＬＦＳＦＬＬＶＡＧＡＴＴＬＦＣＬＬＨＦＧＶＩＧＰＱＲＥＥＦＰＫＤＰＳＬＩＳＰＬＡＱＡＶＲＳＳＳＲＴＰＳＤＫＰＶＡＨＶＶＡＮＰＱＡＥＧＱＬＱＷＬＮＲＲＡＮＡＬＬＡＮＧＶＥＬＴＤＮＱＬＶＶＰＳＥＧＬＹＬＩＹＳＱＶＬＦＫＧＱＧＣＰＳＮＨＶＬＬＴＨＴＩＳＲＩＡＶＳＹＱＴＫＶＮＬＬＳＡＩＫＳＰＣＱＲＥＴＰＥＧＡＥＡＫＰＷＹＥＰＩＹＬＧＧＶＦＱＬＥＫＧＤＲＬＳＡＥＩＮＬＰＤＹＬＤＦＡＥＳＧＱＶＹＦＧＩＩＡＬ
配列番号４１ マウスＴＮＦαタンパク質
ＭＳＴＥＳＭＩＲＤＶＥＬＡＥＥＡＬＰＱＫＭＧＧＦＱＮＳＲＲＣＬＣＬＳＬＦＳＦＬＬＶＡＧＡＴＴＬＦＣＬＬＮＦＧＶＩＧＰＱＲＤＥＫＦＰＮＧＬＰＬＩＳＳＭＡＱＴＬＴＬＲＳＳＳＱＮＳＳＤＫＰＶＡＨＶＶＡＮＨＱＶＥＥＱＬＥＷＬＳＱＲＡＮＡＬＬＡＮＧＭＤＬＫＤＮＱＬＶＶＰＡＤＧＬＹＬＶＹＳＱＶＬＦＫＧＱＧＣＰＤＹＶＬＬＴＨＴＶＳＲＦＡＩＳＹＱＥＫＶＮＬＬＳＡＶＫＳＰＣＰＫＤＴＰＥＧＡＥＬＫＰＷＹＥＰＩＹＬＧＧＶＦＱＬＥＫＧＤＱＬＳＡＥＶＮＬＰＫＹＬＤＦＡＥＳＧＱＶＹＦＧＶＩＡＬ
配列番号４２ ラットＴＮＦαタンパク質
ＭＳＴＥＳＭＩＲＤＶＥＬＡＥＥＡＬＰＫＫＭＧＧＬＱＮＳＲＲＣＬＣＬＳＬＦＳＦＬＬＶＡＧＡＴＴＬＦＣＬＬＮＦＧＶＩＧＰＮＫＥＥＫＦＰＮＧＬＰＬＩＳＳＭＡＱＴＬＴＬＲＳＳＳＱＮＳＳＤＫＰＶＡＨＶＶＡＮＨＱＡＥＥＱＬＥＷＬＳＱＲＡＮＡＬＬＡＮＧＭＤＬＫＤＮＱＬＶＶＰＡＤＧＬＹＬＩＹＳＱＶＬＦＫＧＱＧＣＰＤＹＶＬＬＴＨＴＶＳＲＦＡＩＳＹＱＥＫＶＳＬＬＳＡＩＫＳＰＣＰＫＤＴＰＥＧＡＥＬＫＰＷＹＥＰＭＹＬＧＧＶＦＱＬＥＫＧＤＬＬＳＡＥＶＮＬＰＫＹＬＤＩＴＥＳＧＱＶＹＦＧＶＩＡＬ
配列番号４３ ウサギＴＮＦαタンパク質
ＭＳＴＥＳＭＩＲＤＶＥＬＡＥＧＰＬＰＫＫＡＧＧＰＱＧＳＫＲＣＬＣＬＳＬＦＳＦＬＬＶＡＧＡＴＴＬＦＣＬＬＨＦＲＶＩＧＰＱＥＥＥＳＰＮＮＬＨＬＶＮＰＶＡＱＭＶＴＬＲＳＡＳＲＡＬＳＤＫＰＬＡＨＶＶＡＮＰＱＶＥＧＱＬＱＷＬＳＱＲＡＮＡＬＬＡＮＧＭＫＬＴＤＮＱＬＶＶＰＡＤＧＬＹＬＩＹＳＱＶＬＦＳＧＱＧＣＲＳＹＶＬＬＴＨＴＶＳＲＦＡＶＳＹＰＮＫＶＮＬＬＳＡＩＫＳＰＣＨＲＥＴＰＥＥＡＥＰＭＡＷＹＥＰＩＹＬＧＧＶＦＱＬＥＫＧＤＲＬＳＴＥＶＮＱＰＥＹＬＤＬＡＥＳＧＱＶＹＦＧＩＩＡＬ
配列番号４４ イヌＴＮＦαタンパク質
ＭＳＴＥＳＭＩＲＤＶＥＬＡＥＥＰＬＰＫＫＡＧＧＰＰＧＳＲＲＣＦＣＬＳＬＦＳＦＬＬＶＡＧＡＴＴＬＦＣＬＬＨＦＧＶＩＧＰＱＲＥＥＬＰＮＧＬＱＬＩＳＰＬＡＱＴＶＫＳＳＳＲＴＰＳＤＫＰＶＡＨＶＶＡＮＰＥＡＥＧＱＬＱＷＬＳＲＲＡＮＡＬＬＡＮＧＶＥＬＴＤＮＱＬＩＶＰＳＤＧＬＹＬＩＹＳＱＶＬＦＫＧＱＧＣＰＳＴＨＶＬＬＴＨＴＩＳＲＦＡＶＳＹＱＴＫＶＮＬＬＳＡＩＫＳＰＣＱＲＥＴＰＥＧＴＥＡＫＰＷＹＥＰＩＹＬＧＧＶＦＱＬＥＫＧＤＲＬＳＡＥＩＮＬＰＮＹＬＤＦＡＥＳＧＱＶＹＦＧＩＩＡＬ
配列番号４５ カニクイザルＴＮＦαタンパク質
ＭＳＴＥＳＭＩＱＤＶＥＬＡＥＥＡＬＰＲＫＴＡＧＰＱＧＳＲＲＣＷＦＬＳＬＦＳＦＬＬＶＡＧＡＡＴＬＦＣＬＬＨＦＧＶＩＧＰＱＲＥＥＦＰＫＤＰＳＬＩＳＰＬＡＱＡＶＲＳＳＳＲＴＰＳＤＫＰＶＡＨＶＶＡＮＰＱＡＥＧＱＬＱＷＬＮＲＲＡＮＡＬＶＡＮＧＶＥＬＴＤＮＱＬＶＶＰＳＥＧＬＹＬＩＹＳＱＶＬＦＫＧＱＧＣＰＳＮＨＶＬＬＴＨＴＩＳＲＩＡＶＳＹＱＴＫＶＮＬＬＳＡＩＫＳＰＣＱＲＥＴＰＥＧＡＥＡＫＰＷＹＥＰＩＹＬＧＧＶＦＱＬＥＫＧＤＲＬＳＡＥＩＮＬＰＤＹＬＤＦＡＥＳＧＱＶＹＦＧＩＩＡＬ
配列番号４６ ＬＣＤＲ１コンセンサス配列
ＱＡＳＱＧＩＸａａ_７ＮＹＬＮ
式中、Ｘａａ_７は、セリン又はアルギニンである
配列番号４７ ＬＣＤＲ３コンセンサス配列
ＱＱＹＤＸａａ_５ＬＰＬＴ
式中、Ｘａａ５は、アスパラギン又はリジンである
配列番号４８ ヒトＴＮＦＲ１
ＭＧＬＳＴＶＰＤＬＬＬＰＬＶＬＬＥＬＬＶＧＩＹＰＳＧＶＩＧＬＶＰＨＬＧＤＲＥＫＲＤＳＶＣＰＱＧＫＹＩＨＰＱＮＮＳＩＣＣＴＫＣＨＫＧＴＹＬＹＮＤＣＰＧＰＧＱＤＴＤＣＲＥＣＥＳＧＳＦＴＡＳＥＮＨＬＲＨＣＬＳＣＳＫＣＲＫＥＭＧＱＶＥＩＳＳＣＴＶＤＲＤＴＶＣＧＣＲＫＮＱＹＲＨＹＷＳＥＮＬＦＱＣＦＮＣＳＬＣＬＮＧＴＶＨＬＳＣＱＥＫＱＮＴＶＣＴＣＨＡＧＦＦＬＲＥＮＥＣＶＳＣＳＮＣＫＫＳＬＥＣＴＫＬＣＬＰＱＩＥＮＶＫＧＴＥＤＳＧＴＴＶＬＬＰＬＶＩＦＦＧＬＣＬＬＳＬＬＦＩＧＬＭＹＲＹＱＲＷＫＳＫＬＹＳＩＶＣＧＫＳＴＰＥＫＥＧＥＬＥＧＴＴＴＫＰＬＡＰＮＰＳＦＳＰＴＰＧＦＴＰＴＬＧＦＳＰＶＰＳＳＴＦＴＳＳＳＴＹＴＰＧＤＣＰＮＦＡＡＰＲＲＥＶＡＰＰＹＱＧＡＤＰＩＬＡＴＡＬＡＳＤＰＩＰＮＰＬＱＫＷＥＤＳＡＨＫＰＱＳＬＤＴＤＤＰＡＴＬＹＡＶＶＥＮＶＰＰＬＲＷＫＥＦＶＲＲＬＧＬＳＤＨＥＩＤＲＬＥＬＱＮＧＲＣＬＲＥＡＱＹＳＭＬＡＴＷＲＲＲＴＰＲＲＥＡＴＬＥＬＬＧＲＶＬＲＤＭＤＬＬＧＣＬＥＤＩＥＥＡＬＣＧＰＡＡＬＰＰＡＰＳＬＬＲ
配列番号４９ ヒトＴＮＦＲ２
ＭＡＰＶＡＶＷＡＡＬＡＶＧＬＥＬＷＡＡＡＨＡＬＰＡＱＶＡＦＴＰＹＡＰＥＰＧＳＴＣＲＬＲＥＹＹＤＱＴＡＱＭＣＣＳＫＣＳＰＧＱＨＡＫＶＦＣＴＫＴＳＤＴＶＣＤＳＣＥＤＳＴＹＴＱＬＷＮＷＶＰＥＣＬＳＣＧＳＲＣＳＳＤＱＶＥＴＱＡＣＴＲＥＱＮＲＩＣＴＣＲＰＧＷＹＣＡＬＳＫＱＥＧＣＲＬＣＡＰＬＲＫＣＲＰＧＦＧＶＡＲＰＧＴＥＴＳＤＶＶＣＫＰＣＡＰＧＴＦＳＮＴＴＳＳＴＤＩＣＲＰＨＱＩＣＮＶＶＡＩＰＧＮＡＳＭＤＡＶＣＴＳＴＳＰＴＲＳＭＡＰＧＡＶＨＬＰＱＰＶＳＴＲＳＱＨＴＱＰＴＰＥＰＳＴＡＰＳＴＳＦＬＬＰＭＧＰＳＰＰＡＥＧＳＴＧＤＦＡＬＰＶＧＬＩＶＧＶＴＡＬＧＬＬＩＩＧＶＶＮＣＶＩＭＴＱＶＫＫＫＰＬＣＬＱＲＥＡＫＶＰＨＬＰＡＤＫＡＲＧＴＱＧＰＥＱＱＨＬＬＩＴＡＰＳＳＳＳＳＳＬＥＳＳＡＳＡＬＤＲＲＡＰＴＲＮＱＰＱＡＰＧＶＥＡＳＧＡＧＥＡＲＡＳＴＧＳＳＤＳＳＰＧＧＨＧＴＱＶＮＶＴＣＩＶＮＶＣＳＳＳＤＨＳＳＱＣＳＳＱＡＳＳＴＭＧＤＴＤＳＳＰＳＥＳＰＫＤＥＱＶＰＦＳＫＥＥＣＡＦＲＳＱＬＥＴＰＥＴＬＬＧＳＴＥＥＫＰＬＰＬＧＶＰＤＡＧＭＫＰＳ

【図1】

【図2】

【配列表】

2024546035000001.xml

【手続補正書】

【提出日】2024-05-10

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ヒトＴＮＦαに結合する抗体であって、前記抗体が、重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、前記ＶＨが、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＶＬが、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、
前記ＨＣＤＲ１が、配列番号１を含み、
前記ＨＣＤＲ２が、配列番号２を含み、
前記ＨＣＤＲ３が、配列番号３を含み、
前記ＬＣＤＲ１が、配列番号４を含み、
前記ＬＣＤＲ２が配列番号５を含み、前記ＬＣＤＲ３が配列番号６を含む、抗体。

【請求項2】

前記ＶＨが、配列番号７を含み、前記ＶＬが、配列番号８を含む、請求項１に記載の抗体。

【請求項3】

前記抗体が、重鎖（ＨＣ）と、軽鎖（ＬＣ）とを含み、前記ＨＣが、配列番号９を含み、前記ＬＣが、配列番号１０を含む、請求項１に記載の抗体。

【請求項4】

ヒトＴＮＦαに結合する抗体であって、前記抗体が、重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、前記ＶＨが、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＶＬが、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、
前記ＨＣＤＲ１が、配列番号１を含み、
前記ＨＣＤＲ２が、配列番号２を含み、
前記ＨＣＤＲ３が、配列番号１３を含み、
前記ＬＣＤＲ１が、配列番号１４を含み、
前記ＬＣＤＲ２が、配列番号５を含み、
前記ＬＣＤＲ３が、配列番号１５を含む、抗体。

【請求項5】

前記ＶＨが、配列番号１６を含み、前記ＶＬが、配列番号１７を含む、請求項４に記載の抗体。

【請求項6】

前記抗体が、重鎖（ＨＣ）と、軽鎖（ＬＣ）とを含み、前記ＨＣが、配列番号１８を含み、前記ＬＣが、配列番号１９を含む、請求項４に記載の抗体。

【請求項7】

ヒトＴＮＦαに結合する抗体であって、前記抗体が、重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、前記ＶＨが、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＶＬが、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、
前記ＨＣＤＲ１が、配列番号２２を含み、
前記ＨＣＤＲ２が、配列番号２３を含み、
前記ＨＣＤＲ３が、配列番号１３を含み、
前記ＬＣＤＲ１が、配列番号４を含み、
前記ＬＣＤＲ２が、配列番号５を含み、
前記ＬＣＤＲ３が、配列番号６を含む、抗体。

【請求項8】

ヒトＴＮＦαに結合する抗体であって、前記抗体が、重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、前記ＶＨが、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＶＬが、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、
前記ＨＣＤＲ１が、配列番号２２を含み、
前記ＨＣＤＲ２が、配列番号２３を含み、
前記ＨＣＤＲ３が、配列番号１３を含み、
前記ＬＣＤＲ１が、配列番号１４を含み、
前記ＬＣＤＲ２が、配列番号５を含み、
前記ＬＣＤＲ３が、配列番号１５を含む、抗体。

【請求項9】

ヒトＴＮＦαに結合する抗体であって、前記抗体が、重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、前記ＶＨが、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＶＬが、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、
前記ＨＣＤＲ１が、配列番号２２を含み、
前記ＨＣＤＲ２が、配列番号２３を含み、
前記ＨＣＤＲ３が、配列番号１３を含み、
前記ＬＣＤＲ１が、配列番号１４を含み、
前記ＬＣＤＲ２が、配列番号５を含み、
前記ＬＣＤＲ３が、配列番号６を含む、抗体。

【請求項10】

ヒトＴＮＦαに結合する抗体であって、前記抗体が、重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、前記ＶＨが、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＶＬが、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、
前記ＨＣＤＲ１が、配列番号２２を含み、
前記ＨＣＤＲ２が、配列番号２３を含み、
前記ＨＣＤＲ３が、配列番号１３を含み、
前記ＬＣＤＲ１が、配列番号４６を含み、
前記ＬＣＤＲ２が、配列番号５を含み、
前記ＬＣＤＲ３が、配列番号６を含む、抗体。

【請求項11】

ヒトＴＮＦαに結合する抗体であって、前記抗体が、重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、前記ＶＨが、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＶＬが、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、
前記ＨＣＤＲ１が、配列番号２２を含み、
前記ＨＣＤＲ２が、配列番号２３を含み、
前記ＨＣＤＲ３が、配列番号１３を含み、
前記ＬＣＤＲ１が、配列番号１４を含み、
前記ＬＣＤＲ２が、配列番号５を含み、
前記ＬＣＤＲ３が、配列番号４７を含む、抗体。

【請求項12】

前記ＶＨが、配列番号２４を含み、前記ＶＬが、配列番号８、１７、又は２７を含む、請求項７に記載の抗体。

【請求項13】

前記抗体が、重鎖（ＨＣ）と、軽鎖（ＬＣ）とを含み、前記ＨＣが、配列番号２５を含み、前記ＬＣが、配列番号１０、１９、又は２８を含む、請求項７に記載の抗体。

【請求項14】

ヒトＴＮＦαに結合する抗体であって、前記抗体が、重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、前記ＶＨが、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＶＬが、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、
前記ＨＣＤＲ１が、配列番号１を含み、
前記ＨＣＤＲ２が、配列番号２を含み、
前記ＨＣＤＲ３が、配列番号３０を含み、
前記ＬＣＤＲ１が、配列番号３１を含み、
前記ＬＣＤＲ２が、配列番号５を含み、
前記ＬＣＤＲ３が、配列番号３２を含む、抗体。

【請求項15】

前記ＶＨが、配列番号３３を含み、前記ＶＬが、配列番号３４を含む、請求項１４に記載の抗体。

【請求項16】

前記抗体が、重鎖（ＨＣ）と、軽鎖（ＬＣ）とを含み、前記ＨＣが、配列番号３５を含み、前記ＬＣが、配列番号３６を含む、請求項１４に記載の抗体。

【請求項17】

重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）を含む抗体であって、前記ＨＣが、配列番号９、１８、２５、又は３５を含み、前記ＬＣが、配列番号１０、１９、２８、又は３６を含む、抗体。

【請求項18】

前記抗体が、軽鎖と、重鎖とを含み、前記重鎖が、
アミノ酸残基１２４（ＥＵ番号付け）におけるシステイン、
アミノ酸残基３７８（ＥＵ番号付け）におけるシステイン、又は
アミノ酸残基１２４（ＥＵ番号付け）におけるシステイン及びアミノ酸残基３７８（ＥＵ番号付け）におけるシステインを含む、請求項１又は２、４又は５、７～１２、１４又は１５のいずれか一項に記載の抗体。

【請求項19】

前記抗体が、重鎖（ＨＣ）と、軽鎖（ＬＣ）とを含み、前記ＨＣが、ヒトＩｇＧ１アイソタイプである、請求項１又は２、４又は５、７～１２、１４又は１５のいずれか一項に記載の抗体。

【請求項20】

配列番号９、１０、１８、１９、２５、２８、３５、又は３６をコードする配列を含む、核酸。

【請求項21】

請求項２０に記載の核酸を含む、ベクター。

【請求項22】

前記ベクターが、配列番号９、１８、２５、又は３５をコードする第１の核酸配列と、配列番号１０、１９、２８、又は３６をコードする第２の核酸配列とを含む、請求項２１に記載のベクター。

【請求項23】

配列番号９、１８、２５、又は３５をコードする核酸配列を含む第１のベクターと、配列番号１０、１９、２８、又は３６をコードする核酸配列を含む第２のベクターとを含む、組成物。

【請求項24】

請求項２１に記載のベクターを含む、細胞。

【請求項25】

前記細胞が、哺乳動物細胞である、請求項２４に記載の細胞。

【請求項26】

抗体を生成する方法であって、前記抗体が発現される条件下において、請求項２４に記載の細胞を培養し、次いで前記発現された抗体を培養培地から回収することを含む、方法。

【請求項27】

請求項２６に記載の方法によって生成される、抗体。

【請求項28】

請求項１～１７又は２７のいずれか一項に記載される抗体を含む、抗体薬物コンジュゲート。

【請求項29】

請求項１～１７又は２７のいずれか一項に記載の抗体と、医薬的に許容される賦形剤、希釈剤、又は担体とを含む、医薬組成物。

【請求項30】

療法に使用するための、請求項１～１７又は２７のいずれか一項に記載の抗体を含む医薬組成物。

【請求項31】

ＴＮＦα関連障害の治療における使用のための、請求項３０に記載の医薬組成物。

【請求項32】

前記ＴＮＦα関連障害が、慢性自己炎症性免疫障害である、請求項３１に記載の医薬組成物。

【請求項33】

前記慢性自己炎症性免疫障害が、リウマチ性関節炎（ＲＡ）、若年性特発性関節炎、乾癬性関節炎（ＰｓＡ）、強直性脊椎炎（ＡＳ）、クローン病（ＣＤ）、潰瘍性大腸炎、尋常性乾癬（ＰＳ）、化膿性汗腺炎、ブドウ膜炎、非感染性中間部ブドウ膜炎、後部ブドウ膜炎、汎ブドウ膜炎、又はベーチェット病から選択される、請求項３２に記載の医薬組成物。

【請求項34】

ＴＮＦα関連障害の治療のための薬物の製造における、請求項１～１７又は２７のいずれか一項に記載の抗体の使用。

【請求項35】

前記ＴＮＦα関連障害が、慢性自己炎症性免疫障害である、請求項３４に記載の使用。

【請求項36】

前記慢性自己炎症性障害が、リウマチ性関節炎（ＲＡ）、若年性特発性関節炎、乾癬性関節炎（ＰｓＡ）、強直性脊椎炎（ＡＳ）、クローン病（ＣＤ）、潰瘍性大腸炎、尋常性乾癬（ＰＳ）、化膿性汗腺炎、ブドウ膜炎、非感染性中間部ブドウ膜炎、後部ブドウ膜炎、汎ブドウ膜炎、又はベーチェット病から選択される、請求項３５に記載の使用。

【国際調査報告】