特表 2024-546169 抗ＣＣＲ８抗体およびその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-12-17

(54)【発明の名称】抗ＣＣＲ８抗体およびその使用

(51)【国際特許分類】

   C07K 16/28 20060101AFI20241210BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20241210BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20241210BHJP

   C12N 15/62 20060101ALI20241210BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20241210BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20241210BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20241210BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20241210BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20241210BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20241210BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20241210BHJP

   A61P 11/06 20060101ALI20241210BHJP

   A61P 37/08 20060101ALI20241210BHJP

【ＦＩ】

C07K16/28 ZNA

C07K19/00

C12N15/13

C12N15/62 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

A61K39/395 N

A61P35/00

A61P29/00

A61P11/06

A61P37/08

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024537428

(86)(22)【出願日】2022-12-23

(85)【翻訳文提出日】2024-08-16

(86)【国際出願番号】 CN2022141410

(87)【国際公開番号】W WO2023116880

(87)【国際公開日】2023-06-29

(31)【優先権主張番号】PCT/CN2021/140992

(32)【優先日】2021-12-23

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(31)【優先権主張番号】PCT/CN2022/126704

(32)【優先日】2022-10-21

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】524069695

【氏名又は名称】コンセプト トゥー メディシン バイオテック カンパニー， リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】ヤン， ユアンユアン

(72)【発明者】

【氏名】チェン， ユエフア

(72)【発明者】

【氏名】ジアン， ウェンチン

(72)【発明者】

【氏名】ツイ， フェイフェイ

(72)【発明者】

【氏名】ファン， レイ

【テーマコード（参考）】

4B065

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA01X

4B065AA01Y

4B065AA57X

4B065AA57Y

4B065AA72X

4B065AA72Y

4B065AA83X

4B065AA83Y

4B065AA90X

4B065AA90Y

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA44

4B065CA46

4C085AA14

4C085BB11

4C085CC02

4C085DD62

4C085EE01

4H045AA10

4H045AA30

4H045BA09

4H045BA41

4H045CA40

4H045DA76

4H045EA20

4H045EA50

(57)【要約】

マウス抗体、ヒト化抗体、およびさらに最適化されたＣＤＲ配列を有するそれらを含む、抗ＣＣＲ８抗体が提供される。抗体は、高アンタゴニストおよびＡＤＣＣ活性を示したものであり、がんおよび炎症状態を処置するために使用され得る。本開示の一実施形態によれば、ヒトＣ－Ｃモチーフケモカイン受容体８（ＣＣＲ８）タンパク質に対して特異性を有する抗体またはその抗原結合性断片であって、ＶＨ ＣＤＲ１とＶＨ ＣＤＲ２とＶＨ ＣＤＲ３とを含む重鎖可変領域（ＶＨ）、およびＶＬ ＣＤＲ１とＶＬ ＣＤＲ２とＶＬ ＣＤＲ３とを含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、抗体またはその抗原結合性断片が提供される。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ヒトＣ－Ｃモチーフケモカイン受容体８（ＣＣＲ８）タンパク質に対して特異性を有する抗体またはその抗原結合性断片であって、ＶＨ ＣＤＲ１とＶＨ ＣＤＲ２とＶＨ ＣＤＲ３とを含む重鎖可変領域（ＶＨ）、およびＶＬ ＣＤＲ１とＶＬ ＣＤＲ２とＶＬ ＣＤＲ３とを含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、
（ａ）前記ＶＨ ＣＤＲ１が、配列番号６１のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＨ ＣＤＲ２が、配列番号６２のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＨ ＣＤＲ３が、配列番号６３もしくは３９のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＬ ＣＤＲ１が、配列番号６４のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＬ ＣＤＲ２が、配列番号５２のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＬ ＣＤＲ３が、配列番号５７のアミノ酸配列を含むか、
（ｂ）前記ＶＨ ＣＤＲ１が、配列番号２２のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＨ ＣＤＲ２が、配列番号５８のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＨ ＣＤＲ３が、配列番号３５、３６、３７もしくは３８のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＬ ＣＤＲ１が、配列番号５９のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＬ ＣＤＲ２が、配列番号４９、５０もしくは５１のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＬ ＣＤＲ３が、配列番号６０のアミノ酸配列を含むか、または
（ｃ）前記ＶＨ ＣＤＲ１が、配列番号２１のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＨ ＣＤＲ２が、配列番号２５、６５もしくは６６のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＨ ＣＤＲ３が、配列番号３４のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＬ ＣＤＲ１が、配列番号４３のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＬ ＣＤＲ２が、配列番号４８のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＬ ＣＤＲ３が、配列番号５３のアミノ酸配列を含む、
抗体またはその抗原結合性断片。

【請求項2】

（ａ）前記ＶＨ ＣＤＲ１が、配列番号６１のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＨ ＣＤＲ２が、配列番号６２のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＨ ＣＤＲ３が、配列番号６３または３９のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＬ ＣＤＲ１が、配列番号６４のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＬ ＣＤＲ２が、配列番号５２のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＬ ＣＤＲ３が、配列番号５７のアミノ酸配列を含む、
請求項１に記載の抗体またはその抗原結合性断片。

【請求項3】

前記ＶＨ ＣＤＲ１が、配列番号６１のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＨ ＣＤＲ２が、配列番号６２のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＨ ＣＤＲ３が、配列番号６３のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＬ ＣＤＲ１が、配列番号６４のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＬ ＣＤＲ２が、配列番号５２のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＬ ＣＤＲ３が、配列番号５７のアミノ酸配列を含む、
請求項２に記載の抗体またはその抗原結合性断片。

【請求項4】

前記ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、およびＶＬ ＣＤＲ３が、それぞれ、
配列番号２３、３１、３９、４６、５２および５７；
配列番号２３、３１、３９、７２、５２および５７；
配列番号２３、３１、３９、７３、５２および５７；
配列番号２４、３２、４０、４７、５２および５７；
配列番号２４、３２、４０、７４、５２および５７；
配列番号２４、３２、４０、７５、５２および５７；
配列番号２４、３２、４１、４７、５２および５７；
配列番号２４、３２、４１、７４、５２および５７；
配列番号２４、３２、４１、７５、５２および５７；
配列番号２４、３３、４２、４６、５２および５７；
配列番号２４、３３、４２、７２、５２および５７；または
配列番号２４、３３、４２、７３、５２および５７
のアミノ酸配列を含む、請求項２に記載の抗体またはその抗原結合性断片。

【請求項5】

前記ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、およびＶＬ ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号２４、３２、４１、７４、５２および５７のアミノ酸配列を含む、請求項２に記載の抗体またはその抗原結合性断片。

【請求項6】

前記ＶＨが、配列番号７６～７９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号９２～９５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の抗体またはその抗原結合性断片。

【請求項7】

前記ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、およびＶＬ ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号２４、３２、４１、４７、５２および５７のアミノ酸配列を含む、請求項２に記載の抗体またはその抗原結合性断片。

【請求項8】

前記ＶＨが、配列番号１７および７６～７９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号１８および８０～８３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項７に記載の抗体またはその抗原結合性断片。

【請求項9】

前記ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、およびＶＬ ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号２４、３３、４２、７２、５２および５７のアミノ酸配列を含む、請求項２に記載の抗体またはその抗原結合性断片。

【請求項10】

前記ＶＨが、配列番号８４～８７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号９６～９９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項９に記載の抗体またはその抗原結合性断片。

【請求項11】

前記ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、およびＶＬ ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号２４、３３、４２、４６、５２および５７のアミノ酸配列を含む、請求項２に記載の抗体またはその抗原結合性断片。

【請求項12】

前記ＶＨが、配列番号１９および８４～８７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号２０および８８～９１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、好ましくは、前記ＶＨが、配列番号８５のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが配列番号９８のアミノ酸配列を含む、請求項１１に記載の抗体またはその抗原結合性断片。

【請求項13】

前記ＶＨが、配列番号１３のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号１４のアミノ酸配列を含む、請求項４に記載の抗体またはその抗原結合性断片。

【請求項14】

前記ＶＨが、配列番号１５のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号１６のアミノ酸配列を含む、請求項４に記載の抗体またはその抗原結合性断片。

【請求項15】

（ｂ）前記ＶＨ ＣＤＲ１が、配列番号２２のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＨ ＣＤＲ２が、配列番号５８のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＨ ＣＤＲ３が、配列番号３５、３６、３７または３８のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＬ ＣＤＲ１が、配列番号５９のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＬ ＣＤＲ２が、配列番号４９、５０または５１のアミノ酸配列を含み；
前記ＶＬ ＣＤＲ３が、配列番号６０のアミノ酸配列を含む、
請求項１に記載の抗体またはその抗原結合性断片。

【請求項16】

前記ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、およびＶＬ ＣＤＲ３が、それぞれ、
配列番号２２、２６、３５、４４、４９および５４；
配列番号２２、６７、３５、４４、４９および５４；
配列番号２２、２７、３６、４５、５０および５５；
配列番号２２、６８、３６、４５、５０および５５；
配列番号２２、２８、３７、４４、４９および５４；
配列番号２２、６９、３７、４４、４９および５４；
配列番号２２、２９、３６、４５、５０および５５；
配列番号２２、７０、３６、４５、５０および５５；
配列番号２２、３０、３８、４４、５１および５６；または
配列番号２２、７１、３８、４４、５１および５６
のアミノ酸配列を含む、請求項１５に記載の抗体またはその抗原結合性断片。

【請求項17】

前記ＶＨおよびＶＬが、それぞれ、
配列番号３および４；
配列番号５および６；
配列番号７および８；
配列番号９および１０；または
配列番号１１および１２
のアミノ酸配列を含む、請求項１６に記載の抗体またはその抗原結合性断片。

【請求項18】

前記ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、およびＶＬ ＣＤＲ３が、それぞれ、
配列番号２１、２５、３４、４３、４８および５３；
配列番号２１、６５、３４、４３、４８および５３；または
配列番号２１、６６、３４、４３、４８および５３
のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合性断片。

【請求項19】

前記ＶＨが、配列番号１のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項１８に記載の抗体またはその抗原結合性断片。

【請求項20】

二価Ｆａｂ抗体であるか、またはＦ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、ＦｖおよびｓｃＦｖからなる群から選択される断片である、請求項１から１９のいずれか一項に記載の抗体またはその断片。

【請求項21】

ヒト化されている、請求項１から２０のいずれか一項に記載の抗体またはその断片。

【請求項22】

増強された抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を有するＦｃ断片を含む、請求項１から２１のいずれか一項に記載の抗体またはその断片。

【請求項23】

前記Ｆｃ断片が、ＥＵ番号付けに準拠して、Ｌ２３４Ｙ、Ｌ２３５Ｑ、Ｇ２３６Ｗ、Ｓ２３９Ｄ／Ｍ、Ｆ２４３Ｌ、Ｈ２６８Ｄ、Ｄ２７０Ｅ、Ｒ２９２Ｐ、Ｓ２９８Ａ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｉ、Ｋ３２６Ｄ、Ａ３３０Ｌ／Ｍ、Ｉ３３２Ｅ、Ｋ３３４Ａ／Ｅ、Ｐ３９６Ｌからなる群から選択される１つまたは複数の置換を有するヒトＩｇＧ１ Ｆｃ断片である、請求項２２に記載の抗体またはその断片。

【請求項24】

前記ＩｇＧ１ Ｆｃ断片が、
（ａ）置換Ｓ２３９Ｄ、Ａ３３０ＬおよびＩ３３２Ｅを含むか；
（ｂ）置換Ｓ２３９ＤおよびＩ３３２Ｅを含むか；
（ｃ）無フコシル化されているか；または
（ｄ）置換Ｌ２３４Ｙ、Ｌ２３５Ｑ、Ｇ２３６Ｗ、Ｓ２３９Ｍ、Ｈ２６８Ｄ、Ｄ２７０ＥおよびＳ２９８Ａの１つまたは複数を１つのＦｃ鎖に含み、置換Ｄ２７０Ｅ、Ｋ３２６Ｄ、Ａ３３０ＭおよびＫ３３４Ｅの１つまたは複数を第２のＦｃ鎖に含む、
請求項２３に記載の抗体またはその断片。

【請求項25】

前記ＩｇＧ１ Ｆｃ断片が、
（ａ）置換Ｓ２３９Ｄ、Ａ３３０ＬおよびＩ３３２Ｅを含むか；
（ｂ）無フコシル化されているか；または
（ｃ）置換Ｌ２３４Ｙ、Ｌ２３５Ｑ、Ｇ２３６Ｗ、Ｓ２３９Ｍ、Ｈ２６８Ｄ、Ｄ２７０ＥおよびＳ２９８Ａの１つまたは複数を１つのＦｃ鎖に含み、置換Ｄ２７０Ｅ、Ｋ３２６Ｄ、Ａ３３０ＭおよびＫ３３４Ｅの１つまたは複数を第２のＦｃ鎖に含む、
請求項２３に記載の抗体またはその断片。

【請求項26】

請求項１から２５のいずれか一項に記載の抗原結合性断片と、ＣＣＲ８ではない標的抗原に対して結合特異性を有する１つまたは複数の抗体または抗原結合性断片とを含む、多重特異性抗体。

【請求項27】

請求項１から２５のいずれか一項に記載の抗原結合性断片と、膜貫通ドメインと、共刺激ドメインと、ＣＤ３ζ細胞内ドメインとを含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。

【請求項28】

請求項１から２６のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片または請求項２７に記載のＣＡＲをコードする、１つまたは複数のポリヌクレオチド。

【請求項29】

１つまたは複数のｍＲＮＡである、請求項２８に記載のポリヌクレオチド。

【請求項30】

前記ｍＲＮＡが、化学的に改変されている、請求項２９に記載のポリヌクレオチド。

【請求項31】

請求項２８に記載のポリヌクレオチドを含む、細胞。

【請求項32】

請求項１から２６のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片または請求項２７に記載のＣＡＲと、薬学的に許容される担体とを含む、組成物。

【請求項33】

がんを処置することを必要とする患者におけるがんを処置する方法であって、請求項１から２６のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片または請求項２７に記載のＣＡＲの有効量を前記患者に投与するステップを含む方法。

【請求項34】

がんを処置するための医薬の調製のための、請求項１から２６のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片または請求項２７に記載のＣＡＲの使用。

【請求項35】

炎症状態を処置することを必要とする患者における炎症状態を処置する方法であって、請求項１から２６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片の有効量を前記患者に投与するステップを含む方法。

【請求項36】

炎症状態を処置するための医薬の調製のための、請求項１から２６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片の使用。

【請求項37】

前記炎症状態が、喘息、アトピー性皮膚炎、およびアレルギー性鼻炎からなる群から選択される、請求項３５に記載の方法、または請求項３６に記載の使用。

【発明の詳細な説明】

【背景技術】

【0001】

背景
Ｃ－Ｃモチーフケモカイン受容体８（ＣＣＲ８）は、７回膜貫通型Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）である。ＣＣＲ８は、胸腺に優先的に発現される。ＣＣＲ８およびそのリガンドは、単球走化性および胸腺細胞アポトーシスを制御する上で重要な役割を果たす。より具体的には、ＣＣＲ８は、抗原チャレンジ部位内およびリンパ系組織の特定エリア内への活性化Ｔ細胞の適切な配置に寄与し得る。

【0002】

ＣＣＲ８は、２型ヘルパーＴ（Ｔｈ２）細胞上に選択的に発現されるが、１型ヘルパーＴ（Ｔｈ１）細胞上にはされない。Ｔｈ２細胞は、アレルゲン曝露部位で起こるアレルギー性炎症反応において重要な役割を果たす。ＣＣＲ８のリガンドは、ＣＣケモカインＣＣＬ１であり、これは、Ｔｈ２細胞の化学誘引物質である。したがって、ＣＣＲ８／ＣＣＬ１受容体／リガンド対は、喘息、アトピー性皮膚炎およびアレルギー性鼻炎などのアレルギー性炎症状態を発症させる役割を果たし得る。この役割には、アレルギー性炎症部位へのＴｈ２細胞の動員、それらの部位でのＴｈ２サイトカインの産生、ならびに好酸球および好塩基球のその後の移行が含まれる。

【0003】

ＣＣＲ８ノックアウトマウスは、アレルギー性炎症モデルにおいてＴｈ２免疫応答障害を示した。オボアルブミン誘発性およびゴキブリ抗原誘発性のアレルギー性肺炎症では、ＣＣＲ８ノックアウトマウスの肺においてＴｈ２サイトカイン（ＩＬ－４、ＩＬ－５、およびＩＬ－１３）のレベルが有意に低下し、動員される好酸球の数が有意に低減された。それ故、ＣＣＲ８の阻害は、喘息、アトピー性皮膚炎およびアレルギー性鼻炎などのアレルギー性炎症状態の症状を改善するのに有用であり得る。

【0004】

ＣＣＲ８は、腫瘍浸潤Ｔｒｅｇのマーカーとしても同定されている。これらのＴｒｅｇにおけるＣＣＲ８発現が、乳がん、結腸直腸がんおよび肺がんをはじめとする複数のがんにおいて選択的に上方制御されるからである。これらのＣＣＲ８＋Ｔｒｅｇは、Ｔｒｅｇの非常に活性化されたかつ抑制性の亜集団の代表であり、これらの腫瘍型におけるＣＣＲ８＋Ｔｒｅｇの高度な存在量は、予後不良に関連する。それ故、ＣＣＲ８は、腫瘍常在性Ｔｒｅｇを枯渇させて抗腫瘍免疫を増強させるための有望な治療標的である。

【0005】

しかし、ケモカイン受容体は、旧来、抗体を生じさせることが非常に難しい抗原であった。それらは、細胞表面における発現が少なく、抗体結合への利用が非常に困難である。また、ケモカイン受容体の細胞外ドメインに対応するペプチドに対して生成される抗体は、多くの場合、細胞上の無傷の受容体を、おそらく二次構造の違いのため、認識することができない。

【0006】

ＣＣＲ８は、抗体を生じさせることが極めて困難なＧＰＣＲであり、過去の種間交差反応性抗体（カニクイザルおよびヒト）の生成における成功は、わずかである。さらに、ＣＣＲ８をはじめとするＧＰＣＲに対する機能的抗体を見つけることは、よりいっそう困難である。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0007】

概要
本開示は、様々な実施形態で、ヒトＣＣＲ８タンパク質に特異的な抗体および抗原結合性断片を提供する。実験的試験は、これらの新たに同定された抗体がヒトＣＣＲ８タンパク質に強力にかつ特異的に結合することができること、および大部分がカニクイザルＣＣＲ８タンパク質と交差反応することができることを示し、これらのことはベンチマークの抗体の大部分と異なり、これらのことによって非ヒト霊長類において前臨床安全性を実証することが実現可能になる。さらに、ｉｎ ｖｉｔｒｏ研究は、これらの抗体の大部分が、そのリガンドＣＣＬ１により誘導されるＣＣＲ８シグナル伝達を特異的に遮断することができることを実証した。さらに、完全なまたは増強されたＦｃ機能を有する定常領域を伴って使用されたとき、これらの抗体は、ＣＣＲ８を発現する標的細胞の抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導することができた。ｉｎ ｖｉｖｏ実験は、これらの抗体が、特に、増強されたＦｃ機能を有する定常領域を伴って使用されたとき、腫瘍成長を有効に阻害したことを示した。

【0008】

本開示の一実施形態によれば、ヒトＣ－Ｃモチーフケモカイン受容体８（ＣＣＲ８）タンパク質に対して特異性を有する抗体またはその抗原結合性断片であって、ＶＨ ＣＤＲ１とＶＨ ＣＤＲ２とＶＨ ＣＤＲ３とを含む重鎖可変領域（ＶＨ）、およびＶＬ ＣＤＲ１とＶＬ ＣＤＲ２とＶＬ ＣＤＲ３とを含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、抗体またはその抗原結合性断片が提供される。

【0009】

一実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１は、配列番号６１のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は、配列番号６２のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は、配列番号６３または３９のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は、配列番号６４のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は、配列番号５２のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、配列番号５７のアミノ酸配列を含む。

【0010】

別の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１は、配列番号２２のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は、配列番号５８のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は、配列番号３５、３６、３７または３８のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は、配列番号５９のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は、配列番号４９、５０または５１のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、配列番号６０のアミノ酸配列を含む。

【0011】

別の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１は、配列番号２１のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は、配列番号２５、６５または６６のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は、配列番号３４のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は、配列番号４３のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は、配列番号４８のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、配列番号５３のアミノ酸配列を含む。

【0012】

一部の実施形態では、抗体または断片は、ヒト化されている。一部の実施形態では、抗体または断片は、増強された抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を有するＦｃ断片を含む。Ｆｃ断片の一例は、ＥＵ番号付けに準拠して、Ｌ２３４Ｙ、Ｌ２３５Ｑ、Ｇ２３６Ｗ、Ｓ２３９Ｄ／Ｍ、Ｆ２４３Ｌ、Ｈ２６８Ｄ、Ｄ２７０Ｅ、Ｒ２９２Ｐ、Ｓ２９８Ａ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｉ、Ｋ３２６Ｄ、Ａ３３０Ｌ／Ｍ、Ｉ３３２Ｅ、Ｋ３３４Ａ／Ｅ、Ｐ３９６Ｌからなる群から選択される１つまたは複数の置換を有するヒトＩｇＧ１断片である。

【0013】

本開示の抗原結合性断片と、ＣＣＲ８ではない標的抗原に対して結合特異性を有する１つまたは複数の抗体または抗原結合性断片とを含む、多重特異性抗体も提供される。

【0014】

別の実施形態では、本開示の抗原結合性断片と、膜貫通ドメインと、共刺激ドメインと、ＣＤ３ζ細胞内ドメインとを含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）も提供される。

【0015】

本開示の抗体もしくはその抗原結合性断片またはＣＡＲをコードするポリヌクレオチドも提供される。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、必要に応じて化学的に改変されている、ｍＲＮＡである。

【0016】

本開示の抗体またはその抗原結合性断片を用いる、がんおよび炎症状態を処置するための方法および使用も提供される。

【図面の簡単な説明】

【0017】

【図1】図１は、ヒトＣＣＲ８、ｃｙｎｏ ＣＣＲ８およびヒトＣＣＲ４に対する同定された抗体の結合親和性を示す。

【0018】

【図2-1】図２は、試験したキメラ抗体の遮断活性を示す。

【図2-2】同上。

【0019】

【図3】図３は、試験したキメラ抗体のＡＤＣＣシグナル伝達活性を示す。

【0020】

【図4】図４は、試験した抗体により誘導されたナチュラルキラー細胞媒介性ＡＤＣＣ殺傷効果を示す。

【0021】

【図5-1】図５は、試験した抗体のｉｎ ｖｉｖｏ腫瘍阻害活性を示す。

【図5-2】同上。

【0022】

【図6-1】図６は、ヒトＣＣＲ８、ｃｙｎｏ ＣＣＲ８へのヒト化抗体の結合を示す。

【図6-2】同上。

【0023】

【図7】図７は、試験したヒト化ＣＣＲ８抗体のＡＤＣＣ活性を示す。

【0024】

【図8】図８は、試験したヒト化ＣＣＲ８抗体の遮断活性を示す。

【0025】

【図9】図９は、潜在的なＰＴＭ部位の除去後の抗ＣＣＲ８キメラ抗体の結合および機能特性を示す。

【0026】

【図10】図１０は、潜在的なＰＴＭ部位の除去後のヒト化ＣＣＲ８抗体の結合および機能特性を示す。

【0027】

【図11】図１１は、潜在的なＰＴＭ部位の除去後のヒト化ＣＣＲ８抗体のｉｎ ｖｉｖｏ腫瘍阻害活性を示す。

【0028】

【図12】図１２は、Ｈｕ２００Ｃ９Ｂ９－７ ＮＧ－ＮＡ抗体とベンチマーク抗体のｉｎ ｖｉｔｒｏ比較を示す。

【0029】

【図13-1】図１３は、Ｈｕ２００Ｃ９Ｂ９－７ ＮＧ－ＮＡ抗体とベンチマーク抗体のｉｎ ｖｉｖｏおよびｅｘ ｖｉｖｏ比較を示す。

【図13-2】同上。

【0030】

【図14】図１４は、異なるＦｃ操作を施したＨｕ２００Ｃ９Ｂ９－７ ＮＧ－ＮＡのＡＤＣＣ活性を示す。

【発明を実施するための形態】

【0031】

詳細な説明
定義
用語「１つの（ａ）」または「１つの（ａｎ）」実体は、その実体の１つまたは複数を指し、例えば、「１つの抗体（ａｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ）」は、１つまたは複数の抗体を表すと理解されることに留意されたい。したがって、用語「１つの（ａ）」（または「１つの（ａｎ）」）、「１つまたは複数（ｏｎｅ ｏｒ ｍｏｒｅ）」および「少なくとも１つ（ａｔ ｌｅａｓｔ ｏｎｅ）」は、本明細書では同義で使用され得る。

【0032】

本明細書で使用される場合、「抗体」または「抗原結合性断片」は、抗原を特異的に認識し、それに結合する、ポリペプチドまたはポリペプチド複合体を指す。抗体は、全抗体およびその任意の抗原結合性断片または一本鎖であり得る。したがって、用語「抗体」は、抗原に結合する生物活性を有する免疫グロブリン分子の少なくとも一部分を含む分子を含有する、任意のタンパク質またはペプチドを含む。そのようなものの例としては、重鎖もしくは軽鎖またはそのリガンド結合部分の相補性決定領域（ＣＤＲ）、重鎖または軽鎖可変領域、重鎖または軽鎖定常領域、フレームワーク（ＦＲ）領域、あるいはその任意の部分、あるいは結合タンパク質の少なくとも一部分が挙げられるが、これらに限定されない。

【0033】

用語「抗体断片」または「抗原結合性断片」は、本明細書で使用される場合、抗体の一部分、例えば、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖなどである。構造に関係なく、抗体断片は、無傷抗体により認識される同じ抗原と結合する。用語「抗体断片」は、アプタマー、スピーゲルアイゼン、およびダイアボディを含む。用語「抗体断片」は、特定の抗原に結合して複合体を形成することにより抗体のように動作する、任意の合成のまたは遺伝子操作されたタンパク質も含む。

【0034】

抗体という用語は、生化学的に区別され得るポリペプチドの様々な広範なクラスを包含する。重鎖が、ガンマ、ミュー、アルファ、デルタまたはイプシロン（γ、μ、α、δ、ε）として、一部はこれらの中のサブクラス（例えば、γ１～γ４）として、分類されることは、当業者には理解されるであろう。それは、それぞれＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＧまたはＩｇＥのような抗体の「クラス」を決定するこの鎖の性質である。

【0035】

免疫グロブリンサブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＧ５などは、十分に特徴付けられており、機能の特化をもたらすことが公知である。これらのクラスおよびアイソタイプの各々についての改変バージョンは、本開示に鑑みて当業者には容易に識別可能であり、したがって、本開示の範囲内である。全ての免疫グロブリンクラスは、明らかに本開示の範囲内であり、以下の論述は、一般に、免疫グロブリン分子のＩｇＧクラスに関することになる。ＩｇＧに関して、標準的な免疫グロブリン分子は、分子量おおよそ２３，０００ダルトンの２つの同一の軽鎖ポリペプチド、および分子量５３，０００～７０，０００ダルトンの２つの同一の重鎖ポリペプチドを含む。４本の鎖は、典型的に、ジスルフィド結合により「Ｙ」形状に連結されており、軽鎖が、「Ｙ」の口で始まって可変領域まで続いて重鎖を両側から挟んでいる。

【0036】

本開示の抗体、その抗原結合ポリペプチド、バリアントまたは誘導体は、ポリクローナル、モノクローナル、多重特異性、ヒト、ヒト化、霊長類化またはキメラ抗体、一本鎖抗体、エピトープ結合性断片、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、一本鎖抗体、ジスルフィド連結Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、ＶＫまたはＶＨドメインを含む断片、Ｆａｂ発現ライブラリーにより生成される断片、ならびに抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、本明細書で開示される抗体に対する抗Ｉｄ抗体を含む）を含むが、これらに限定されない。本開示の免疫グロブリンまたは抗体分子は、免疫グロブリン分子の任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）またはサブクラスのものであり得る。

【0037】

本明細書で使用される場合、用語「キメラ抗体」は、免疫反応性領域または部位が第１の種から得られまたはそれに由来し、定常領域（本開示によれば、無傷であることがあり、部分的であることがあり、または改変されていることがある）が第２の種から得られる、任意の抗体を意味すると考えられたい。ある特定の実施形態では、標的結合領域または部位は、非ヒト源（例えば、マウスまたは霊長類）からのものとなり、定常領域は、ヒトのものである。

【0038】

本明細書で開示される抗体は、鳥類および哺乳動物を含む任意の動物起源のものであり得る。好ましくは、抗体は、ヒト、マウス、ロバ、ウサギ、ヤギ、モルモット、ラクダ、ラマ、ウマ、またはニワトリ抗体である。一部の実施形態では、可変領域は、起源が軟骨魚網様のもの（例えば、サメからのもの）であり得る。

【0039】

本明細書で使用される場合、用語「組換え（の）」は、それがポリペプチドまたはポリヌクレオチドに付随する場合、天然に存在しないポリペプチドまたはポリヌクレオチドの形態を意図しており、その非限定的な例は、通常は一緒に存在しないポリヌクレオチドを組み合わせることにより作出され得る。

【0040】

ハイブリドーマ技術は、異なる「ストリンジェンシー」の条件下で行われ得る。一般に、低ストリンジェンシーハイブリダイゼーション反応は、約１０×ＳＳＣ、または等価のイオン強度／温度の溶液中、約４０℃で実行される。中ストリンジェンシーハイブリダイゼーションは、典型的に、約６×ＳＳＣ中、約５０℃で行われ、高ストリンジェンシーハイブリダイゼーション反応は、一般に、約１×ＳＳＣ中、約６０℃で行われる。ハイブリダイゼーション反応はまた、当業者には周知である「生理条件」下で行われ得る。生理条件の非限定的な例は、細胞に通常見られる温度、イオン強度、ｐＨおよびＭｇ２＋濃度である。
抗ＣＣＲ８抗体

【0041】

別記実験例で実証されるように、本発明者らは、全てがヒトＣＣＲ８タンパク質に対して高い結合親和性を有するものである、抗ＣＣＲ８抗体８４Ｄ１－２Ｈ３、８６Ｄ４Ｅ１２Ａ５、９６Ｇ３－１Ｆ１０、９９Ｄ１－１Ｅ１１、１０１Ｄ５Ｇ１０Ｇ４、１１５Ｃ５Ｅ３Ｂ８、１６３Ｈ９Ｄ５、１８７Ｂ５Ｆ１０、１９５Ｈ８Ｄ１０および２００Ｃ９Ｂ９（表１）を生成することができた。それらはＣＣＲ４に結合しなかったので、結合は特異的である。１６３Ｈ９Ｄ５を除いて、これらの抗体の全ては、ｃｙｎｏ ＣＣＲ８タンパク質と交差反応することもでき、したがって、これらの抗体の前臨床開発が容易になった。

【0042】

さらに、８４Ｄ１－２Ｈ３を除いて、これらの抗体の全ては、強いアンタゴニスト活性を示した。しかし、それらのアンタゴニスト活性に関係なく、全ての抗体は、動物モデルにおいてＡＤＣＣを誘導することができ、腫瘍成長を阻害することもできた。

【0043】

配列に基づいて、これらの抗体を３群に分類することができる。表１Ａ～Ｂに示されているように、Ｂ群は、１６３Ｈ９Ｄ５、１８７Ｂ５Ｆ１０、１９５Ｈ８Ｄ１０および２００Ｃ９Ｂ９を含み、Ａ群は、８６Ｄ４Ｅ１２Ａ５、９６Ｇ３－１Ｆ１０、９９Ｄ１－１Ｅ１１、１０１Ｄ５Ｇ１０Ｇ４および１１５Ｃ５Ｅ３Ｂ８を含み、Ｃ群は、８４Ｄ１－２Ｈ３を含む。抗体の各群は、各ＣＤＲ間で高い相同性を共有し、それ故、これらは交換可能である。

【0044】

本開示の一実施形態によれば、抗体またはその抗原結合性断片が提供される。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトＣＣＲ８タンパク質に対して結合特性を有する。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＶＨ ＣＤＲ１と、ＶＨ ＣＤＲ２と、ＶＨ ＣＤＲ３とを含む重鎖可変領域（ＶＨ）、およびＶＬ ＣＤＲ１と、ＶＬ ＣＤＲ２と、ＶＬ ＣＤＲ３とを含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。

【0045】

一部の実施形態では、抗体Ｂ群に関して、ＶＨ ＣＤＲ１は、配列番号６１のアミノ酸配列を含み、ＶＨ ＣＤＲ２は、配列番号６２のアミノ酸配列を含み、ＶＨ ＣＤＲ３は、配列番号６３または３９のアミノ酸配列を含み、ＶＬ ＣＤＲ１は、配列番号６４のアミノ酸配列を含み、ＶＬ ＣＤＲ２は、配列番号５２のアミノ酸配列を含み、ＶＬ ＣＤＲ３は、配列番号５７のアミノ酸配列を含む。

【0046】

表１Ｂに示されているように、配列番号６１は、ＴＹＸＭＮの配列を有し、この配列中のＸは、ＡまたはＶである。配列番号６２は、ＲＩＲＴＫＳＮＮＹＡＴＸ_１ＹＸ_２Ｘ_３Ｘ_４ＶＫＤの配列を有し、この配列中、Ｘ_１は、Ｆ、ＨまたはＹであり、Ｘ_２は、ＡまたはＶであり、Ｘ_３Ｘ_４は、ＤＳ、ＤＡまたはＥＳである。配列番号６３は、ＧＴＩＴＲＬＧＸ_１ＧＸ_２ＤＹの配列を有し、この配列中、Ｘ_１は、ＡまたはＧであり、Ｘ_２は、ＬまたはＭである。配列番号６４は、ＲＳＳＫＸ_１ＬＬＨＳＸ_２Ｘ_３ＮＴＹＬＹの配列を有し、この配列中、Ｘ_１は、ＲまたはＳであり、Ｘ_２は、ＮまたはＱであり、Ｘ_３は、ＧまたはＡである。

【0047】

一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１は、配列番号６１のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は、配列番号６２のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は、配列番号６３のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は、配列番号６４のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は、配列番号５２のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、配列番号５７のアミノ酸配列を含む。

【0048】

一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１は、配列番号６１のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は、配列番号６２のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は、配列番号３９のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は、配列番号６４のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は、配列番号５２のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、配列番号５７のアミノ酸配列を含む。

【0049】

一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１は、配列番号２３または２４のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は、配列番号３１、３２、３３、１００、１０１、１０２または１０３のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は、配列番号３９、４０、４１または４２のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は、配列番号４６または４７のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は、配列番号５２のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、配列番号５７のアミノ酸配列を含む。

【0050】

配列解析によって、ＶＬ ＣＤＲ１配列（配列番号４６および４７）が、潜在的に、翻訳後に改変され得る残基を含むことが明らかになった。翻訳後改変（ＰＴＭ）リスクを回避するために、ひいては製造を単純にするために、本開示は、配列番号７２、７３、７４および７５を含む、ＶＬ ＣＤＲ１のある特定のリスク回避バージョン（de-risked version）を設計し、試験した。したがって、一部の実施形態では、ＣＤＲ配列を有する抗体および断片であって、ＶＨ ＣＤＲ１が配列番号２３または２４のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２が配列番号３１、３２、３３、１００、１０１、１０２および１０３のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３が配列番号３９、４０、４１または４２のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１が配列番号４６、４７，７２、７３、７４または７５のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２が配列番号５２のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３が配列番号５７のアミノ酸配列を含む、抗体および断片が提供される。

【0051】

一部の実施形態では、Ａ群の抗体に関して、ＶＨ ＣＤＲ１は、配列番号２２のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は、配列番号５８のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は、配列番号３５、３６、３７または３８のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は、配列番号５９のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は、配列番号４９、５０または５１のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、配列番号６０のアミノ酸配列を含む。

【0052】

表１Ｂに示されているように、配列番号５８は、Ｘ_１ＩＳＸ_２ＤＸ_３Ｘ_４ＮＸ_５ＹＮＰＳＬＫＸ_６の配列を有し、この配列中、Ｘ_１は、ＦまたはＹであり、Ｘ_２は、ＦまたはＹであり、Ｘ_３は、ＧまたはＡであり、Ｘ_４は、Ｓ、ＮまたはＹであり、Ｘ_５は、ＤまたはＮであり、Ｘ_６は、ＮまたはＴである。配列番号５９は、ＫＡＳＤＨＩＮＮＸＬＡの配列を有し、この配列中のＸは、ＲまたはＷである。配列番号６０は、ＱＱＹＷＸ_１Ｘ_２Ｘ_３ＹＴの配列を有し、この配列中、Ｘ_１は、ＧまたはＳであり、Ｘ_２は、ＴまたはＹであり、Ｘ_３は、ＰまたはＳである。

【0053】

一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１は、配列番号２２のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は、配列番号２６、２７、２８、２９または３０のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は、配列番号３５、３６、３７または３８のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は、配列番号４４または４５のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は、配列番号４９、５０または５１のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、配列番号５４、５５または５６のアミノ酸配列を含む。

【0054】

一部の実施形態では、配列番号６７～７１で提供されるＶＨ ＣＤＲ２などのＶＨ ＣＤＲ２は、ＰＴＭリスク回避され得る。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１は、配列番号２２のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は、配列番号２６、２７、２８、２９、３０、６７、６８、６９、７０または７１のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は、配列番号３５、３６、３７または３８のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は、配列番号４４または４５のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は、配列番号４９、５０または５１のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、配列番号５４、５５または５６のアミノ酸配列を含む。

【0055】

一部の実施形態では、抗体８４Ｄ１－２Ｈ３に由来する、抗体または抗原結合性断片が提供される。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１は、配列番号２１のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は、配列番号２５のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は、配列番号３４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は、配列番号４３のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は、配列番号４８のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、配列番号５３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0056】

一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ２は、ＰＴＭリスク回避されている。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１は、配列番号２１のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は、配列番号２５、６５または６６のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は、配列番号３４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は、配列番号４３のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は、配列番号４８のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、配列番号５３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0057】

一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号１に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有し、さらに配列番号１のＶＨ ＣＤＲもしくはそれのＰＴＭ再リスク化バージョン（re-risked version）を保持する、配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号２に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有し、さらに配列番号２のＶＬ ＣＤＲまたはそれのＰＴＭ再リスク化バージョンを保持する、配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号２のアミノ酸配列を含む。

【0058】

したがって、一部の実施形態では、８４Ｄ１－２Ｈ３と同様、ＣＣＲ８上の同じエピトープに結合する抗体および抗原結合性断片も提供される。したがって、一部の実施形態では、ＣＣＲ８への結合に関して８４Ｄ１－２Ｈ３と競合する、抗体および抗原結合性断片も提供される。

【0059】

一部の実施形態では、抗体８６Ｄ４Ｅ１２Ａ５に由来する、抗体または抗原結合性断片が提供される。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１は、配列番号２２のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は、配列番号２６のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は、配列番号３５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は、配列番号４４のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は、配列番号４９のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、配列番号５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0060】

一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ２は、ＰＴＭリスク回避されている。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１は、配列番号２２のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は、配列番号２６または６７のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は、配列番号３５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は、配列番号４４のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は、配列番号４９のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、配列番号５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0061】

一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号３に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有し、さらに配列番号３のＶＨ ＣＤＲもしくはそれのＰＴＭ再リスク化バージョン（re-risked version）を保持する、配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号４に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有し、さらに配列番号４のＶＬ ＣＤＲまたはそれのＰＴＭ再リスク化バージョンを保持する、配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号４のアミノ酸配列を含む。

【0062】

したがって、一部の実施形態では、８６Ｄ４Ｅ１２Ａ５と同じ、ＣＣＲ８上のエピトープに結合する抗体および抗原結合性断片も提供される。したがって、一部の実施形態では、ＣＣＲ８への結合に関して８６Ｄ４Ｅ１２Ａ５と競合する、抗体および抗原結合性断片も提供される。

【0063】

一部の実施形態では、抗体９６Ｇ３－１Ｆ１０に由来する、抗体または抗原結合性断片が提供される。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１は、配列番号２２のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は、配列番号２７のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は、配列番号３６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は、配列番号４５のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は、配列番号５０のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、配列番号５５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0064】

一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ２は、ＰＴＭリスク回避されている。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１は、配列番号２２のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は、配列番号２７または６８のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は、配列番号３６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は、配列番号４５のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は、配列番号５０のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、配列番号５５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0065】

一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号５に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有し、さらに配列番号５のＶＨ ＣＤＲもしくはそれのＰＴＭ再リスク化バージョン（re-risked version）を保持する、配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号６に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有し、さらに配列番号６のＶＬ ＣＤＲまたはそれのＰＴＭ再リスク化バージョンを保持する、配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号５のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号６のアミノ酸配列を含む。

【0066】

したがって、一部の実施形態では、９６Ｇ３－１Ｆ１０と同じ、ＣＣＲ８上のエピトープに結合する抗体および抗原結合性断片も提供される。したがって、一部の実施形態では、ＣＣＲ８への結合に関して９６Ｇ３－１Ｆ１０と競合する、抗体および抗原結合性断片も提供される。

【0067】

一部の実施形態では、抗体９９Ｄ１－１Ｅ１１に由来する、抗体または抗原結合性断片が提供される。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１は、配列番号２２のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は、配列番号２８のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は、配列番号３７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は、配列番号４４のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は、配列番号４９のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、配列番号５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0068】

一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ２は、ＰＴＭリスク回避されている。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１は、配列番号２２のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は、配列番号２８または６９のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は、配列番号３７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は、配列番号４４のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は、配列番号４９のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、配列番号５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0069】

一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号７に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有し、さらに配列番号７のＶＨ ＣＤＲもしくはそれのＰＴＭ再リスク化バージョン（re-risked version）を保持する、配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号８に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有し、さらに配列番号８のＶＬ ＣＤＲまたはそれのＰＴＭ再リスク化バージョンを保持する、配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号７のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号８のアミノ酸配列を含む。

【0070】

したがって、一部の実施形態では、９９Ｄ１－１Ｅ１１と同じ、ＣＣＲ８上のエピトープに結合する抗体および抗原結合性断片も提供される。したがって、一部の実施形態では、ＣＣＲ８への結合に関して９９Ｄ１－１Ｅ１１と競合する、抗体および抗原結合性断片も提供される。

【0071】

一部の実施形態では、抗体１０１Ｄ５Ｇ１０Ｇ４に由来する、抗体または抗原結合性断片が提供される。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１は、配列番号２２のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は、配列番号２９のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は、配列番号３６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は、配列番号４５のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は、配列番号５０のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、配列番号５５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0072】

一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ２は、ＰＴＭリスク回避されている。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１は、配列番号２２のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は、配列番号２９または７０のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は、配列番号３６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は、配列番号４５のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は、配列番号５０のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、配列番号５５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0073】

一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号９に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有し、さらに配列番号９のＶＨ ＣＤＲもしくはそれのＰＴＭ再リスク化バージョン（re-risked version）を保持する、配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号１０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号１０に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有し、さらに配列番号１０のＶＬ ＣＤＲまたはそれのＰＴＭ再リスク化バージョンを保持する、配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号９のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号１０のアミノ酸配列を含む。

【0074】

したがって、一部の実施形態では、１０１Ｄ５Ｇ１０Ｇ４と同じ、ＣＣＲ８上のエピトープに結合する抗体および抗原結合性断片も提供される。したがって、一部の実施形態では、ＣＣＲ８への結合に関して１０１Ｄ５Ｇ１０Ｇ４と競合する、抗体および抗原結合性断片も提供される。

【0075】

一部の実施形態では、抗体１１５Ｃ５Ｅ３Ｂ８に由来する、抗体または抗原結合性断片が提供される。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１は、配列番号２２のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は、配列番号３０のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は、配列番号３８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は、配列番号４４のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は、配列番号５１のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、配列番号５６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0076】

一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ２は、ＰＴＭリスク回避されている。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１は、配列番号２２のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は、配列番号３０または７１のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は、配列番号３８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は、配列番号４４のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は、配列番号５１のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、配列番号５６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0077】

一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号１１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号１１に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有し、さらに配列番号１１のＶＨ ＣＤＲもしくはそれのＰＴＭ再リスク化バージョン（re-risked version）を保持する、配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号１２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号１２に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有し、さらに配列番号１２のＶＬ ＣＤＲまたはそれのＰＴＭ再リスク化バージョンを保持する、配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号１２のアミノ酸配列を含む。

【0078】

したがって、一部の実施形態では、１１５Ｃ５Ｅ３Ｂ８と同じ、ＣＣＲ８上のエピトープに結合する抗体および抗原結合性断片も提供される。したがって、一部の実施形態では、ＣＣＲ８への結合に関して１１５Ｃ５Ｅ３Ｂ８と競合する、抗体および抗原結合性断片も提供される。

【0079】

一部の実施形態では、抗体１６３Ｈ９Ｄ５に由来する、抗体または抗原結合性断片が提供される。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１は、配列番号２３のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は、配列番号３１のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は、配列番号３９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は、配列番号４６のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は、配列番号５２のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、配列番号５７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0080】

一部の実施形態では、ＶＬ ＣＤＲ１は、ＰＴＭリスク回避されている。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１は、配列番号２３のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は、配列番号３１のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は、配列番号３９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は、配列番号４６、７２または７３のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は、配列番号５２のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、配列番号５７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0081】

一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号１３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号１３に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有し、さらに配列番号１３のＶＨ ＣＤＲもしくはそれのＰＴＭ再リスク化バージョン（re-risked version）を保持する、配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号１４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号１４に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有し、さらに配列番号１４のＶＬ ＣＤＲまたはそれのＰＴＭ再リスク化バージョンを保持する、配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号１３のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号１４のアミノ酸配列を含む。

【0082】

したがって、一部の実施形態では、１６３Ｈ９Ｄ５と同じ、ＣＣＲ８上のエピトープに結合する抗体および抗原結合性断片も提供される。したがって、一部の実施形態では、ＣＣＲ８への結合に関して１６３Ｈ９Ｄ５と競合する、抗体および抗原結合性断片も提供される。

【0083】

一部の実施形態では、抗体１８７Ｂ５Ｆ１０に由来する、抗体または抗原結合性断片が提供される。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１は、配列番号２４のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は、配列番号３２のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は、配列番号４０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は、配列番号４７のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は、配列番号５２のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、配列番号５７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0084】

一部の実施形態では、ＶＬ ＣＤＲ１は、ＰＴＭリスク回避されている。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１は、配列番号２４のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は、配列番号３２、１００または１０１のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は、配列番号４０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は、配列番号４７、７４または７５のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は、配列番号５２のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、配列番号５７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0085】

一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号１５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号１５に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有し、さらに配列番号１５のＶＨ ＣＤＲもしくはそれのＰＴＭ再リスク化バージョン（re-risked version）を保持する、配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号１６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号１６に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有し、さらに配列番号１６のＶＬ ＣＤＲまたはそれのＰＴＭ再リスク化バージョンを保持する、配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号１５のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。

【0086】

したがって、一部の実施形態では、１８７Ｂ５Ｆ１０と同じ、ＣＣＲ８上のエピトープに結合する抗体および抗原結合性断片も提供される。したがって、一部の実施形態では、ＣＣＲ８への結合に関して１８７Ｂ５Ｆ１０と競合する、抗体および抗原結合性断片も提供される。

【0087】

一部の実施形態では、抗体１９５Ｈ８Ｄ１０に由来する、抗体または抗原結合性断片が提供される。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１は、配列番号２４のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は、配列番号３２のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は、配列番号４１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は、配列番号４７のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は、配列番号５２のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、配列番号５７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0088】

一部の実施形態では、ＶＬ ＣＤＲ１は、ＰＴＭリスク回避されている。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１は、配列番号２４のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は、配列番号３２、１００または１０１のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は、配列番号４１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は、配列番号４７、７４または７５のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は、配列番号５２のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、配列番号５７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0089】

一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号１７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号１７に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有し、さらに配列番号１７のＶＨ ＣＤＲもしくはそれのＰＴＭ再リスク化バージョン（re-risked version）を保持する、配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号１８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号１８に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有し、さらに配列番号１８のＶＬ ＣＤＲまたはそれのＰＴＭ再リスク化バージョンを保持する、配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号１７のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号１８のアミノ酸配列を含む。

【0090】

１９５Ｈ８Ｄ１０のヒト化バージョンも提供される。ヒト化ＶＨ配列の例としては、配列番号７６～７９が挙げられ、ヒト化ＶＬ配列の例としては、配列番号８０～８３が挙げられる。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号７６、７７、７８もしくは７９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号７６、７７、７８もしくは７９に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有し、さらにＶＨ ＣＤＲを保持する、配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号８０、８１、８２もしくは８３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号８０、８１、８２もしくは８３に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有し、さらにＶＬ ＣＤＲを保持する、配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号７６、７７、７８または７９のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号８０、８１、８２もしくは８３のアミノ酸配列を含む。

【0091】

１９５Ｈ８Ｄ１０のＰＴＭ再リスク化ヒト化バージョンも提供される。ヒト化ＶＨ配列の例としては、配列番号７６～７９が挙げられ、ヒト化ＶＬ配列の例としては、配列番号９２～９５が挙げられる。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号７６、７７、７８もしくは７９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号７６、７７、７８もしくは７９に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有し、さらにＶＨ ＣＤＲを保持する、配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号９２、９３、９４もしくは９５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号９２、９３、９４もしくは９５に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有し、さらにＶＬ ＣＤＲを保持する、配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号７６、７７、７８または７９のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号９２、９３、９４または９５のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号７６のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号９２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号７７のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号９４のアミノ酸配列を含む。

【0092】

したがって、一部の実施形態では、１９５Ｈ８Ｄ１０と同じ、ＣＣＲ８上のエピトープに結合する抗体および抗原結合性断片も提供される。したがって、一部の実施形態では、ＣＣＲ８への結合に関して１９５Ｈ８Ｄ１０と競合する、抗体および抗原結合性断片も提供される。

【0093】

一部の実施形態では、抗体２００Ｃ９Ｂ９に由来する、抗体または抗原結合性断片が提供される。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１は、配列番号２４のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は、配列番号３３のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は、配列番号４２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は、配列番号４６のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は、配列番号５２のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、配列番号５７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0094】

一部の実施形態では、ＶＬ ＣＤＲ１は、ＰＴＭリスク回避されている。一部の実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１は、配列番号２４のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２は、配列番号３３、１０２または１０３のアミノ酸配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３は、配列番号４２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１は、配列番号４６、７２または７３のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２は、配列番号５２のアミノ酸配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ３は、配列番号５７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0095】

一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号１９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号１９に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有し、さらに配列番号１９のＶＨ ＣＤＲもしくはそれのＰＴＭ再リスク化バージョン（re-risked version）を保持する、配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号２０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号２０に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有し、さらに配列番号２０のＶＬ ＣＤＲまたはそれのＰＴＭ再リスク化バージョンを保持する、配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号１９のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号２０のアミノ酸配列を含む。

【0096】

２００Ｃ９Ｂ９のヒト化バージョンも提供される。ヒト化ＶＨ配列の例としては、配列番号８４～８７が挙げられ、ヒト化ＶＬ配列の例としては、配列番号８８～９１が挙げられる。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号８４、８５、８６もしくは８７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号８４、８５、８６もしくは８７に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有し、さらにＶＨ ＣＤＲを保持する、配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号８８、８９、９０もしくは９１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号８８、８９、９０もしくは９１に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有し、さらにＶＬ ＣＤＲを保持する、配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号８４、８５、８６もしくは８７のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号８８、８９、９０もしくは９１のアミノ酸配列を含む。

【0097】

２００Ｃ９Ｂ９のＰＴＭ再リスク化ヒト化バージョンも提供される。ヒト化ＶＨ配列の例としては、配列番号８４～８７が挙げられ、ヒト化ＶＬ配列の例としては、配列番号９６～９９が挙げられる。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号８４、８５、８６もしくは８７のアミノ酸配列を含むか、または配列番号８４、８５、８６もしくは８７に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有し、さらにＶＨ ＣＤＲを保持する、配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号９６、９６、９８もしくは９９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号９６、９６、９８もしくは９９に対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有し、さらにＶＬ ＣＤＲを保持する、配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号８４、８５、８６もしくは８７のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号９６、９６、９８もしくは９９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号８５のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号９８のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号８４のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号９８のアミノ酸配列を含む。

【0098】

したがって、一部の実施形態では、２００Ｃ９Ｂ９と同じ、ＣＣＲ８上のエピトープに結合する抗体および抗原結合性断片も提供される。したがって、一部の実施形態では、ＣＣＲ８への結合に関して２００Ｃ９Ｂ９と競合する、抗体および抗原結合性断片も提供される。

【0099】

一部の実施形態では、１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換、欠失および／または付加を有する、本開示のＣＤＲ配列に由来するＣＤＲ配列を含む、抗体および抗原結合性断片も提供される。

【0100】

一部の実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体は、未改変ｍＡｂと比較して増強されたＡＤＣＣを媒介した活性化Ｆｃγ受容体に高い親和性で結合する、無フコシル化重鎖などの、改変された重鎖定常領域を含む、改変ｍＡｂである。一部の実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体は、ＡＤＣＣ機能を増強するＬ２３４Ｙ、Ｌ２３５Ｑ、Ｇ２３６Ｗ、Ｓ２３９Ｄ／Ｍ、Ｆ２４３Ｌ、Ｈ２６８Ｄ、Ｄ２７０Ｅ、Ｒ２９２Ｐ、Ｓ２９８Ａ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｉ、Ｋ３２６Ｄ、Ａ３３０Ｌ／Ｍ、Ｉ３３２Ｅ、Ｋ３３４Ａ／Ｅ、Ｐ３９６Ｌ（全てＥＵ番号付け）のうちのただ１つまたはこれらの組合せを含むヒトＩｇＧ１バリアントのものである重鎖を含む。

【0101】

一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃは、好ましくは対称である、Ｆｃ－ＤＬＥ（Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ ＥＵ番号付け）である。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃは、好ましくは対称である、Ｆｃ－ＤＥ（Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ ＥＵ番号付け）である。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ１は、無フコシル化されている。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃは、非対称である。例えば、Ｆｃ鎖の一方は、置換Ｌ２３４Ｙ／Ｌ２３５Ｑ／Ｇ２３６Ｗ／Ｓ２３９Ｍ／Ｈ２６８Ｄ／Ｄ２７０Ｅ／Ｓ２９８Ａの１つまたは複数（または全て）を含み、反対側のＦｃ鎖は、Ｄ２７０Ｅ／Ｋ３２６Ｄ／Ａ３３０Ｍ／Ｋ３３４Ｅの１つまたは複数（または全て）を含む（ＥＵ番号付け）。ある特定の好ましい実施形態では、ＩｇＧ１ Ｆｃは、無フコシル化されているまたは非対称のＦｃ－ＤＬＥである。
多機能性分子

【0102】

ＣＣＲ８に特異的な抗体または抗原結合性断片、例えば、本明細書で開示されるものと、第２の抗原に対して特異性を有する１つまたは複数の抗体または抗原結合性断片とを含む、多機能性分子。

【0103】

一部の実施形態では、第２の抗原は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、単球、マクロファージ、好中球、樹状細胞、食細胞、ナチュラルキラー細胞、好酸球、好塩基球およびマスト細胞などの、免疫細胞上に発現されるタンパク質である。

【0104】

一部の実施形態では、第２の抗原は、ＣＤ３、ＣＤ４７、ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＣＴＬＡ４、ＶＩＳＴＡ、ＣＳＦＲ１、Ａ２ＡＲ、ＣＤ７３、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＥＡ、ＨＥＲ２、ＣＭＥＴ、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＳＩＲＰＡ、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、ＣＴＬＡ４、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＨＶＥＭ、ＣＤ２７、ＶＥＧＦＲ、またはＶＥＧＦに対するものである。

【0105】

異なる形式の二重特異性抗体も提供される。一部の実施形態では、抗ＣＣＲ８断片および第２の断片の各々は、各々独立して、Ｆａｂ断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、または単一ドメイン抗体から選択される。一部の実施形態では、二重特異性抗体は、Ｆｃ断片をさらに含む。

【0106】

単に抗体を含むものでも抗原結合性断片を含むものでもない、二機能性分子も提供される。腫瘍抗原標的化分子として、ＣＣＲ８に特異的な抗体または抗原結合性断片、例えば、本明細書に記載されるものなどを、免疫サイトカインまたはリガンドと、必要に応じてペプチドリンカーを介して、化合させることができる。連結される免疫サイトカインまたはリガンドとしては、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＧＭ－ＣＳＦ、ＴＮＦ－α、ＣＤ４０Ｌ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０Ｌ、４－１ＢＢＬ、ＬＩＧＨＴおよびＧＩＴＲＬが挙げられるが、これらに限定されない。そのような二機能性分子は、免役チェックポイント遮断効果と腫瘍部位局所免疫調節を併せ持つことができる。
キメラ抗原受容体

【0107】

一実施形態では、本開示の抗体またはその断片を標的化ユニットとして含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）も提供される。一部の実施形態では、ＣＡＲは、本開示の抗体またはその断片と、膜貫通ドメインと、共刺激ドメインと、ＣＤ３ε細胞内ドメインとを含む。

【0108】

膜貫通ドメインは、抗体または断片を含む細胞外ドメインに、必要に応じてヒンジドメインを介して、融合されるように設計され得る。それは、同様に、共刺激ドメインなどの細胞内ドメインに融合され得る。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、共刺激ドメインの天然の膜貫通領域（例えば、共刺激ドメインとして利用されるＣＤ２８もしくは４－ＩＢＢのＴＭ領域）またはヒンジ領域の天然の膜貫通ドメイン（例えば、ヒンジドメインとして利用されるＣＤ８アルファまたはＣＤ２８のＴＭ領域）を含み得る。

【0109】

一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、細胞膜を貫通する、しかし細胞の細胞質へとおよび／または細胞外空間へと伸びる、配列を含み得る。例えば、膜貫通のものは、細胞の細胞質および／または細胞外空間へ伸びる１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれより多くのアミノ酸をそれ自体がさらに含み得る、膜を貫通する配列を含み得る。したがって、膜貫通ドメインは、膜を貫通する領域を含み、その上、膜自体の内または外面を超えて伸びるアミノ酸をさらに含むことができ、それでもやはり、このような配列は、「膜貫通ドメイン」であると見なされ得る。

【0110】

一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、短いリンカーを介して細胞質ドメインに融合している。必要に応じて、短いペプチドまたはポリペプチドリンカー、好ましくは、長さ２アミノ酸～１０アミノ酸の間のものは、膜貫通ドメインとキメラ受容体の近位細胞質シグナル伝達ドメインとの連結を形成し得る。グリシン－セリンダブレット（ＧＳ）、グリシン－セリン－グリシントリプレット（ＧＳＧ）、またはアラニン－アラニン－アラニントリプレット（ＡＡＡ）は、好適なリンカーになる。

【0111】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、さらに、共刺激ドメインを含む。一部の実施形態では、共刺激ドメインは、膜貫通ドメインと活性化ドメインの間に位置する。共刺激ドメインの例としては、ＣＤ２、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ８ａ、ＣＤ８、ＣＤ１１ａ（ＩＴＧＡＬ）、ＣＤ１１ｂ（ＩＴＧＡＭ）、ＣＤ１１ｃ（ＩＴＧＡＸ）、ＣＤ１１ｄ（ＩＴＧＡＤ）、ＣＤ１８（ＩＴＧＢ２）、ＣＤ１９（Ｂ４）、ＣＤ２７（Ｔ ＦＲＳＦ７）、ＣＤ２８、ＣＤ２８Ｔ、ＣＤ２９（ＩＴＧＢ１）、ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ４０（ＴＮＦＲＳＦ５）、ＣＤ４８（ＳＬＡＭＦ２）、ＣＤ４９ａ（ＩＴＧＡ１）、ＣＤ４９ｄ（ＩＴＧＡ４）、ＣＤ４９ｆ（ＩＴＧＡ６）、ＣＤ６６ａ（ＣＥＡＣＡＭ１）、ＣＤ６６ｂ（ＣＥＡＣＡＭ８）、ＣＤ６６ｃ（ＣＥＡＣＡＭ６）、ＣＤ６６ｄ（ＣＥＡＣＡＭ３）、ＣＤ６６ｅ（ＣＥＡＣＡＭ５）、ＣＤ６９（ＣＬＥＣ２）、ＣＤ７９Ａ（Ｂ細胞抗原受容体複合体関連アルファ鎖）、ＣＤ７９Ｂ（Ｂ細胞抗原受容体複合体関連ベータ鎖）、ＣＤ８４（ＳＬＡＭＦ５）、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３（ＩＴＧＡＥ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５８Ａ（ＫＩＲ２ＤＬ１）、ＣＤ１５８Ｂ１（ＫＩＲ２ＤＬ２）、ＣＤ１５８Ｂ２（ＫＩＲ２ＤＬ３）、ＣＤ１５８Ｃ（ＫＩＲ３ＤＰ１）、ＣＤ１５８Ｄ（ＫＩＲＤＬ４）、ＣＤ１５８Ｆ１（ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ）、ＣＤ１５８Ｆ２（ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ）、ＣＤ１５８Ｋ（ＫＴＲ３ＤＬ２）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１６２（ＳＥＬＰＬＧ）、ＣＤ２２６（ＤＮＡＭ１）、ＣＤ２２９（ＳＬＡＭＦ３）、ＣＤ２４４（ＳＬＡＭＦ４）、ＣＤ２４７（ＣＤ３－ゼータ）、ＣＤ２５８（ＬＩＧＨＴ）、ＣＤ２６８（ＢＡＦＦＲ）、ＣＤ２７０（Ｔ
ＦＳＦ１４）、ＣＤ２７２（ＢＴＬＡ）、ＣＤ２７６（Ｂ７－Ｈ３）、ＣＤ２７９（ＰＤ－１）、ＣＤ３１４（ＫＧ２Ｄ）、ＣＤ３１９（ＳＬＡＭＦ７）、ＣＤ３３５（Ｋ－ｐ４６）、ＣＤ３３６（Ｋ－ｐ４４）、ＣＤ３３７（Ｋ－ｐ３０）、ＣＤ３５２（ＳＬＡＭＦ６）、ＣＤ３５３（ＳＬＡＭＦ８）、ＣＤ３５５（ＣＲＴＡＭ）、ＣＤ３５７（ＴＮＦＲＳＦ １８）、誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ）、ＬＦＡ－１（ＣＤ １ １ａ／ＣＤ １８）、ＫＧ２Ｃ、ＤＡＰ－１０、ＩＣＡＭ－１、Ｋｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＩＬ－２Ｒベータ、ＩＬ－２Ｒガンマ、ＩＬ－７Ｒアルファ、ＬＦＡ－１、ＳＬＡＭＦ９、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ（ＧｒｐＬ）、ＳＬＰ－７６（ＬＣＰ２）、ＰＡＧ１／ＣＢＰ、ＣＤ８３リガンド、Ｆｃガンマ受容体、ＭＨＣクラス１分子、ＭＨＣクラス２分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリンタンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、活性化ＮＫ細胞受容体、Ｔｏｌｌリガンド受容体、およびこれらの断片または組合せが挙げられるが、それらに限定されない。

【0112】

一部の実施形態では、ＣＡＲの細胞質部分は、シグナル伝達／活性化ドメインも含む。一実施形態では、シグナル伝達／活性化ドメインは、ＣＤ３εドメインであるか、またはＣＤ３εドメインに対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９８％もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列である。
ポリヌクレオチド、ｍＲＮＡ、および抗体を発現させるまたは調製する方法

【0113】

本開示は、本開示の抗体、そのバリアントもしくは誘導体、またはＣＡＲをコードする、ポリヌクレオチドまたは核酸分子も提供する。本開示のポリヌクレオチドは、抗原結合ポリペプチド、そのバリアントまたは誘導体の重鎖および軽鎖可変領域全体を同じポリヌクレオチド分子上にまたは別々のポリヌクレオチド分子上にコードし得る。加えて、本開示のポリヌクレオチドは、抗原結合ポリペプチド、そのバリアントまたは誘導体の重鎖および軽鎖可変領域の部分を同じポリヌクレオチド分子上にまたは別々のポリヌクレオチド分子上にコードし得る。

【0114】

一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、ｍＲＮＡ分子である。一部の実施形態では、ｍＲＮＡを、抗体またはその断片を発現させるための標的細胞に導入することができる。

【0115】

ｍＲＮＡを様々な公知の方法のいずれに従って合成してもよい。例えば、ｍＲＮＡをｉｎ ｖｉｔｒｏ転写（ＩＶＴ）によって合成することができる。手短に述べると、典型的にはＩＶＴは、プロモーター、リボヌクレオチド三リン酸のプール、ＤＴＴとマグネシウムイオンとを含み得るバッファー系、および適切なＲＮＡポリメラーゼ（例えば、Ｔ３、Ｔ７またはＳＰ６ ＲＮＡポリメラーゼ）、ＤＮＡｓｅ Ｉ、ピロホスファターゼ、および／またはＲＮＡｓｅ阻害剤を含有する、直鎖状または環状の鋳型ＤＮＡを用いて行われる。厳密な条件は、具体的な応用に応じて変わる。

【0116】

一部の実施形態では、抗体をコードするｍＲＮＡの調製のために、鋳型ＤＮＡは、ｉｎ ｖｉｔｒｏで転写される。好適な鋳型ＤＮＡは、典型的には、ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写のためのプロモーター、例えば、Ｔ３、Ｔ７またはＳＰ６プロモーター、続いて、所望の抗体をコードする（例えば、重鎖または軽鎖をコードする）ｍＲＮＡについての所望のヌクレオチド配列、および終結シグナルを有する。

【0117】

標準的な方法を使用して、所望の抗体をコードする（例えば、重鎖または軽鎖をコードする）ｍＲＮＡ配列を決定し、鋳型ＤＮＡに組み込むことができる。例えば、所望のアミノ酸配列（例えば、所望の重鎖または軽鎖配列）から出発して、仮想逆翻訳が縮重遺伝子コードに基づいて行われる。次いで、最適化アルゴリズムを好適なコドンの選択に使用することができる。典型的には、Ｇ／Ｃ含有量を、一方ではできる限り高いＧ／Ｃ含有量を達成するように、他方ではコドン使用頻度に従ってｔＲＮＡの頻度をできる限りよく考慮して、最適化することができる。最適化されたＲＮＡ配列を確立し、例えば適切な表示デバイスを活用して、表示し、元の（野生型）配列と比較することができる。二次構造を解析して、安定化および不安定化特性または、それぞれ、ＲＮＡの領域を算出することもできる。

【0118】

ｍＲＮＡを未改変または改変ｍＲＮＡとして合成することができる。典型的には、ｍＲＮＡは、安定性を向上させるように改変される。ｍＲＮＡの改変は、例えば、ＲＮＡのヌクレオチドの改変を含み得る。したがって、改変ｍＲＮＡは、例えば、骨格改変、糖改変または塩基改変を含み得る。一部の実施形態では、抗体をコードするｍＲＮＡ（例えば、重鎖および軽鎖をコードするｍＲＮＡ）を天然に存在するヌクレオチドおよび／またはヌクレオチド類似体（改変ヌクレオチド）から合成することができ、天然に存在するヌクレオチドおよび／またはヌクレオチド類似体（改変ヌクレオチド）には、プリン（アデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ））またはピリミジン（チミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）、ウラシル））、ならびに改変ヌクレオチドとして、プリンおよびピリミジンの類似体または誘導体、例えば、１－メチル－アデニン、２－メチル－アデニン、２－メチルチオ－Ｎ－６－イソペンテニル－アデニン、Ｎ６－メチル－アデニン、Ｎ６－イソペンテニル－アデニン、２－チオ－シトシン、３－メチル－シトシン、４－アセチル－シトシン、５－メチル－シトシン、２，６－ジアミノプリン、１－メチル－グアニン、２－メチル－グアニン、２，２－ジメチル－グアニン、７－メチル－グアニン、イノシン、１－メチル－イノシン、シュードウラシル（５－ウラシル）、ジヒドロ－ウラシル、２－チオ－ウラシル、４－チオ－ウラシル、５－カルボキシメチルアミノメチル－２－チオ－ウラシル、５－（カルボキシヒドロキシメチル）－ウラシル、５－フルオロ－ウラシル、５－ブロモ－ウラシル、５－カルボキシメチルアミノメチル－ウラシル、５－メチル－２－チオ－ウラシル、５－メチル－ウラシル、Ｎ－ウラシル－５－オキシ酢酸メチルエステル、５－メチルアミノメチル－ウラシル、５－メトキシアミノメチル－２－チオ－ウラシル、５’－メトキシカルボニルメチル－ウラシル、５－メトキシ－ウラシル、ウラシル－５－オキシ酢酸メチルエステル、ウラシル－５－オキシ酢酸（ｖ）、１－メチル－シュードウラシル、キューオシン（queosine）、１３－Ｄ－マンノシル－キューオシン、ワイブトキソシン、ならびにホスホロアミデート、ホスホロチオエート、ペプチドヌクレオチド、メチルホスホネート、７－デアザグアノシン、５－メチルシトシンおよびイノシンなどが含まれるが、これらに限定されない。このような類似体の調製は、当業者には、例えば、米国特許第４，３７３，０７１号、同第４，４０１，７９６号、同第４，４１５，７３２号、同第４，４５８，０６６号、同第４，５００，７０７号、同第４，６６８，７７７号、同第４，９７３，６７９号、同第５，０４７，５２４号、同第５，１３２，４１８号、同第５，１５３，３１９号、同第５，２６２，５３０号および同第５，７００，６４２号から公知であり、これらの開示は、その全範囲が参照によりここに含まれる。

【0119】

一部の実施形態では、ｍＲＮＡ（例えば、重鎖および軽鎖をコードするｍＲＮＡ）は、ＲＮＡ骨格改変を含有し得る。典型的には、骨格改変は、ＲＮＡに含有されるヌクレオチドの骨格のリン酸が化学的に改変される、改変である。例示的な骨格改変は、典型的には、メチルホスホン酸基、メチルホスホロアミド酸基、ホスホロアミド酸基、ホスホロチオ酸（例えば、シチジン５’－Ｏ－（１－チオリン酸））基、ボラノリン酸基、正荷電グアニジニウム基などからなる群からの改変を含むがこれらに限定されず、これは、ホスホジエステル結合が他のアニオン性基、カチオン性基または中性基により置き換えられることを意味する。

【0120】

一部の実施形態では、ｍＲＮＡ（例えば、重鎖および軽鎖をコードするｍＲＮＡ）は、糖改変を含有し得る。典型的な糖改変は、それが含有するヌクレオチドの糖の化学的改変であり、２’－デオキシ－２’－フルオロ－オリゴリボヌクレオチド（２’－フルオロ－２’－デオキシシチジン５’－三リン酸、２’－フルオロ－２’－デオキシウリジン５’－三リン酸）、２’－デオキシ－２’－デアミン－オリゴリボヌクレオチド（２’－アミノ－２’－デオキシシチジン５’－三リン酸、２’－アミノ－２’－デオキシウリジン５’－三リン酸）、２’－Ｏ－アルキルオリゴリボヌクレオチド、２’－デオキシ－２’－Ｃ－アルキルオリゴリボヌクレオチド（２’－Ｏ－メチルシチジン５’－三リン酸、２’－メチルウリジン５’－三リン酸）、２’－Ｃ－アルキルオリゴリボヌクレオチド、およびこれらの異性体（２’－アラシチジン５’－三リン酸、２’－アラウリジン５’－三リン酸）、またはアジド三リン酸（２’－アジド－２’－デオキシシチジン５’－三リン酸、２’－アジド－２’－デオキシウリジン５’－三リン酸）からなる群から選択される糖改変を含むが、これらに限定されない。

【0121】

一部の実施形態では、ｍＲＮＡ（例えば、重鎖および軽鎖をコードするｍＲＮＡ）は、ヌクレオチドの塩基の改変（塩基改変）を含有し得る。塩基改変を含有する改変ヌクレオチドは、塩基改変ヌクレオチドとも呼ばれる。そのような塩基改変ヌクレオチドの例としては、２－アミノ－６－クロロプリンリボシド５’－三リン酸、２－アミノアデノシン５’－三リン酸、２－チオシチジン５’－三リン酸、２－チオウリジン５’－三リン酸、４－チオウリジン５’－三リン酸、５－アミノアリルシチジン５’－三リン酸、５－アミノアリルウリジン５’－三リン酸、５－ブロモシチジン５’－三リン酸、５－ブロモウリジン５’－三リン酸、５－ヨードシチジン５’－三リン酸、５－ヨードウリジン５’－三リン酸、５－メチルシチジン５’－三リン酸、５－メチルウリジン５’－三リン酸、６－アザシチジン５’－三リン酸、６－アザウリジン５’－三リン酸、６－クロロプリンリボシド５’－三リン酸、７－デアザアデノシン５’－三リン酸、７－デアザグアノシン５’－三リン酸、８－アザアデノシン５’－三リン酸、８－アジドアデノシン５’－三リン酸、ベンゾイミダゾールリボシド５’－三リン酸、Ｎ１－メチルアデノシン５’－三リン酸、Ｎ１－メチルグアノシン５’－三リン酸、Ｎ６－メチルアデノシン５’－三リン酸、Ｏ６－メチルグアノシン５’－三リン酸、シュードウリジン５’－三リン酸、ピューロマイシン５’－三リン酸またはキサントシン５’－三リン酸が挙げられるが、これらに限定されない。

【0122】

典型的には、ｍＲＮＡ合成は、Ｎ末端（５’）側終端への「キャップ」、およびＣ末端（３’）側終端への「尾部」の付加を含む。キャップの存在は、大部分の真核細胞に見られるヌクレアーゼに対する耐性を持たせる上で重要である。「尾部」の存在は、ｍＲＮＡをエキソヌクレアーゼ分解から保護するのに役立つ。

【0123】

それ故、一部の実施形態では、ｍＲＮＡ（例えば、重鎖および軽鎖をコードするｍＲＮＡ）は、５’キャップ構造を含む。５’キャップは、典型的には次のように付加される：先ず、ＲＮＡ末端ホスファターゼが、５’ヌクレオチドから末端リン酸基の１つを除去し、２つの末端リン酸を残す；次いで、グアノシン三リン酸（ＧＴＰ）がグアニリルトランスフェラーゼによって末端リン酸に付加され、その結果、５’５’５三リン酸結合が生じる；次いで、グアニンの７－窒素が、メチルトランスフェラーゼによってメチル化される。キャップ構造の例としては、ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’（Ａ，Ｇ（５’）ｐｐｐ（５）ＡおよびＧ（５）ｐｐｐ（５’）Ｇが挙げられるが、これらに限定されない。

【0124】

一部の実施形態では、ｍＲＮＡ（例えば、重鎖および軽鎖をコードするｍＲＮＡ）は、３’ポリ（Ａ）尾部構造を含む。ｍＲＮＡの３’末端のポリＡ尾部は、典型的には、約１０～３００アデノシンヌクレオチド（例えば、約１０～２００アデノシンヌクレオチド、約１０～１７５アデノシンヌクレオチド、約１０～１５０アデノシンヌクレオチド、約１０～１２５アデノシンヌクレオチド、１０～１００アデノシンヌクレオチド、約１０～７５アデノシンヌクレオチド、約２０～７０アデノシンヌクレオチド、または約２０～６０アデノシンヌクレオチド）を含む。一部の実施形態では、抗体をコードするｍＲＮＡ（例えば、重鎖および軽鎖をコードするｍＲＮＡ）は、３’ポリ（Ｃ）尾部構造を含む。ｍＲＮＡの３’末端の好適なポリＣ尾部は、典型的には、約１０～２００シトシンヌクレオチド（例えば、約１０～１５０シトシンヌクレオチド、約１０～１００シトシンヌクレオチド、約２０～７０シトシンヌクレオチド、約２０～６０シトシンヌクレオチド、または約１０～４０シトシンヌクレオチド）を含む。ポリＣ尾部は、ポリＡ尾部に付加され得るか、またはポリＡ尾部を置換し得る。

【0125】

一部の実施形態では、ｍＲＮＡ（例えば、重鎖および軽鎖をコードするｍＲＮＡ）は、５’および／または３’非翻訳領域を含む。一部の実施形態では、５’非翻訳領域は、ｍＲＮＡの安定性または翻訳に影響を与える１つまたは複数のエレメント、例えば、鉄応答エレメントを含む。一部の実施形態では、５’非翻訳領域は、長さ約５０ヌクレオチド～５００ヌクレオチドの間（例えば、長さ約５０ヌクレオチド～４００ヌクレオチドの間、長さ約５０ヌクレオチド～３００ヌクレオチドの間、長さ約５０ヌクレオチド～２００ヌクレオチドの間、または長さ約５０ヌクレオチド～１００ヌクレオチドの間）であり得る。

【0126】

一部の実施形態では、ｍＲＮＡ（例えば、重鎖および軽鎖をコードするｍＲＮＡ）の５’領域は、本明細書に記載されるものなどの、シグナルペプチドをコードする配列を含む。特定の実施形態では、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）に由来するシグナルペプチドが５’領域に組み込まれる。典型的には、シグナルペプチドをコードする配列は、Ｎ末端の重鎖または軽鎖をコードする配列に直接または間接的に連結される。

【0127】

本技術を使用して、当技術分野で公知の任意の抗体、および標準的な方法を使用して所望の抗原に対して産生され得る抗体を、送達することができる。本発明を使用して、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体混合物もしくはカクテル、ヒトもしくはヒト化抗体、キメラ抗体、または二重特異性抗体を送達することができる。

【0128】

抗体を作製する方法は、当技術分野において周知であり、本明細書に記載される。ある特定の実施形態では、本開示の抗原結合ポリペプチドの可変領域と定常領域の両方が、完全にヒトのものである。完全ヒト抗体は、当技術分野において記載されている技法を使用して、および本明細書に記載されているように作製することができる。例えば、特定の抗原に対する完全ヒト抗体を、抗原投与に応答してそのような抗体を産生するように改変されているが内在性遺伝子座が無効にされているトランスジェニック動物に抗原を投与することによって、調製することができる。そのような抗体を作製するために使用され得る例示的な技法は、米国特許第６，１５０，５８４号、同第６，４５８，５９２号、同第６，４２０，１４０号に記載されており、これらの参考特許文献は、それら全体が参照により本明細書に組み込まれる。
処置および使用

【0129】

本明細書に記載されるように、本開示の抗体、バリアント、誘導体、または抗体－薬物コンジュゲートを、ある特定の処置および診断方法において使用することができる。

【0130】

本開示は、本開示の抗体、断片、または抗体－薬物コンジュゲートを、本明細書に記載される障害または状態の１つまたは複数を処置するために患者、例えば、動物、哺乳動物およびヒトに投与することを含む、抗体に基づく治療に、さらに関する。本開示の治療化合物は、本開示の抗体（本明細書に記載のそのバリアントおよび誘導体を含む）、および本開示の抗体（本明細書に記載のそのバリアントおよび誘導体を含む）をコードする核酸またはポリヌクレオチドを含むが、これらに限定されない。

【0131】

本開示の抗体を使用してがんを処置または阻害することもできる。上で提供されたように、ＣＣＲ８は、腫瘍細胞において、特に、肝臓、胃、膵臓、食道、卵巣および肺腫瘍において、過剰発現され得る。ＣＣＲ８の阻害は、腫瘍の処置に有用であることが示されている。

【0132】

したがって、一部の実施形態では、それを必要とする患者におけるがんを処置するための方法が提供される。方法は、一実施形態では、本開示の抗体、断片、または抗体－薬物コンジュゲートの有効量を患者に投与するするステップを必然的に伴う。一部の実施形態では、患者におけるがん細胞（例えば、間質細胞）の少なくとも１つは、ＣＣＲ８を過剰発現する。

【0133】

細胞療法、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法も、本開示で提供される。本開示の抗ＣＣＲ８抗体を含む（または代替的に、本開示の抗ＣＣＲ８抗体を発現するように操作された）ＣＡＲをコードするまたはそれと接触させるベクターによって形質導入される、好適な細胞を使用することができる。したがって、そのような接触または操作によって、細胞を、処置を必要とするがん患者に導入することができる。がん患者は、本明細書で開示されるようなタイプのいずれかのがんを有し得る。細胞（例えば、Ｔ細胞）は、例えば、腫瘍浸潤Ｔリンパ球、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、またはこれらの組合せであり得るが、それらに限定されない。

【0134】

一部の実施形態では、細胞は、がん患者彼または彼女自身から単離された。一部の実施形態では、細胞は、ドナーによりまたは細胞バンクから提供された。細胞が、がん患者から単離された場合、望ましくない免疫反応を最小限に抑えることができる。

【0135】

がんの非限定的な例としては、膀胱がん、乳がん、大腸がん、子宮内膜がん、食道がん、頭頸部がん、腎臓がん、白血病、肝臓がん、肺がん、リンパ腫、黒色腫、膵臓がん、前立腺がん、および甲状腺がんが挙げられる。一部の実施形態では、がんは、胃がん、膵臓がん、食道がん、卵巣がんおよび肺がんならびに皮膚Ｔ細胞リンパ腫のうちの１つまたは複数である。

【0136】

本開示の抗体もしくはバリアント、またはそれらの誘導体によって処置、予防、診断および／または予後判定され得る、細胞生存期間の増加に関連するさらなる疾患または状態としては、悪性病変および関連障害、例えば、白血病（急性白血病（例えば、急性リンパ球性白血病、急性骨髄球性白血病（骨髄芽球性、前骨髄球性、骨髄単球性、単球性、および赤白血病を含む））および慢性白血病（例えば、慢性骨髄球性（顆粒球性）白血病および慢性リンパ球性白血病）を含む）、真性赤血球増加症、リンパ腫（例えば、ホジキン病および非ホジキン病）、多発性骨髄腫、ワルデンストレーム高ガンマグロブリン血症、重鎖病、および固形腫瘍の、進行および／または転移が挙げられるがこれらに限定されず、固形腫瘍には、肉腫および癌腫、例えば、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵臓がん、乳がん、卵巣がん、前立腺がん、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性癌、腎細胞癌、ヘパトーマ、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胎児性癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸がん、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞種、聴神経腫瘍、乏突起神経膠腫、髄膜腫（menangioma）、黒色腫、神経芽細胞腫および網膜芽細胞腫が含まれるが、これらに限定されない。

【0137】

ＣＣＲ８は、単球およびＴｈ２リンパ球上にならびに脳、脾臓および胸腺に発現される。それは、Ｔｈ２細胞に対して走化性である、ケモカインＣＣＬ１の受容体である。ＣＣＬ１は、好酸球動員に関与することも示されている。本明細書で開示される抗体を使用して、ＣＣＲ８活性を阻害すること；ＣＣＬ１活性を阻害すること；ならびに炎症性障害およびアレルギー状態を含むがこれらに限定されないＣＣＲ８および／またはＣＣＬ１により媒介される状態を（治療的にもしくは予防的に）阻害または処置することができる。有利なことに、本開示される抗体を使用して、好酸球により、ならびにＣＣＲ８を発現する単球、Ｔリンパ球および他の免疫系細胞により媒介される状態を阻害することもでき、この状態には、これらの細胞により媒介される炎症性障害およびアレルギー状態（例えば、喘息、アトピー性皮膚炎およびアレルギー性鼻炎）、ならびにＴ細胞白血病およびリンパ腫が含まれる。

【0138】

加えて、ＣＣＲ８は、一部のＨＩＶ－１株については、主要な共受容体ＣＣＲ５およびＣＸＣＲ４のどちらも発現しない細胞にトランスフェクトされたとき、ＣＤ４とともにＨＩＶ感染のための共受容体として働く。それ故、本発明の一実施形態では、ＣＣＲ８モノクローナル抗体を使用して、ＣＣＲ８とＨＩＶ表面タンパク質の相互作用を遮断し、それによってＣＣＲ８発現細胞のＨＩＶ感染を防止する。

【0139】

いずれの特定の患者についても具体的な投薬量および処置レジメンは、使用される特定の抗体、そのバリアントまたは誘導体、患者の年齢、体重、総体的な健康、性別および食事、ならびに投与の回数、排泄率、薬物の組合せ、ならびに処置される特定の疾患の重症度をはじめとする、様々な因子に依存することになる。医療介護者によるそのような因子の判断は、当技術分野における通常技能の範囲内である。量は、処置すべき個々の患者、投与経路、製剤のタイプ、使用される化合物の特徴、疾患の重症度、および所望される効果にも依存することになる。使用される量を当技術分野において周知の薬理学および薬物動態の原則によって決定することができる。

【0140】

抗体、断片、または抗体－薬物コンジュゲートの投与方法は、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外および経口経路を含むが、これらに限定されない。抗原結合ポリペプチドまたは組成物を、任意の適便な経路により、例えば、注入またはボーラス注射により、上皮または粘膜皮膚内層（例えば、口腔粘膜、直腸および腸粘膜など）からの吸収により、投与することができ、他の生物活性薬剤とともに投与することができる。したがって、本開示の抗原結合ポリペプチドを含有する医薬組成物を、経口投与、直腸投与、非経口投与、大槽内（intracistemally）投与、膣内投与、腹腔内投与、局所的に（粉末、軟膏、滴剤もしくは経皮パッチとして）投与、頬側投与、または口腔噴霧剤もしく
は点鼻薬として投与することができる。

【0141】

用語「非経口」は、本明細書で使用される場合、静脈内、筋肉内、腹腔内、胸骨内、皮下および関節内注射および注入を含む、投与方法を指す。

【0142】

投与は、全身または局所のものであり得る。加えて、本開示の抗体を、脳室内および髄腔内注射を含む任意の好適な経路により、中枢神経系に導入することが望ましいことがあり、脳室内注射を、例えば、オマヤ貯留槽などの貯留槽に取り付けられた、脳室内カテーテルによって容易にすることができる。経肺投与も、例えば、吸入器またはネブライザー、およびエアロゾル化剤を含有する製剤を使用することにより、利用することができる。

【0143】

本開示の抗原結合ポリペプチドまたは組成物を、処置を必要とするエリアに局所投与することが望ましいことがあり、これは、例として、限定としてではなく、外科手術中の局所注入、外科手術後の創傷包帯法の、例えばそれと併せての、局所的適用により、注射により、カテーテルによって、坐薬によって、または留置剤によって達成することができ、前記留置剤は、膜、例えばシラスティック（sialastic）膜、または繊維を含む、多孔質、無孔質またはゼラチン質材料のものである。好ましくは、本開示の、抗体を含む、タンパク質を投与する場合、タンパク質が吸収されない材料を使用するように心掛けなければならない。

【0144】

炎症性、免疫または悪性疾患、障害または状態の処置、阻害および予防において有効であろう、本開示の抗体、断片、または抗体－薬物コンジュゲートの量を、標準的な臨床技法により決定することができる。加えて、ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイを、最適な投薬量範囲の同定を助けるために、必要に応じて利用することができる。製剤に利用されることになる正確な用量は、投与経路、および疾患、障害または状態の重篤性にも依存することになり、実施者の判断および各患者の状況に応じて決定されるべきである。有効用量をｉｎ
ｖｉｔｒｏまたは動物モデル試験系から導出された用量応答曲線から外挿することができる。

【0145】

一般的な提案として、本開示の抗体、断片、または抗体－薬物コンジュゲートの患者に投与される投薬量は、典型的に、患者の体重のｋｇ当たり０．００１ｍｇ～１００ｍｇ、患者の体重のｋｇ当たり０．０１ｍｇ～２０ｍｇの間、または患者の体重のｋｇ当たり０．５ｍｇ～１０ｍｇである。一般に、ヒト抗体は、外来ポリペプチドへの免疫応答に起因してヒトの体内で他の動物種からの抗体より長い半減期を有する。したがって、ヒト抗体のより少ない投薬量、およびより低頻度の投与が、多くの場合、可能である。さらに、本開示の抗体の投薬量および投薬頻度を、例えば脂質化などの改変により抗体の取込みおよび組織透過性（例えば、脳への）を増強することによって、低減させることができる。

【0146】

追加の実施形態では、本開示の組成物は、サイトカインと組み合わせて投与される。本開示の組成物とともに投与され得るサイトカインとしては、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、抗ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、およびＴＮＦ－αが挙げられるが、これらに限定されない。

【0147】

追加の実施形態では、本開示の組成物は、例えば放射線療法などの、他の治療または予防レジメンと組み合わせて投与される。
組成物

【0148】

本開示は、医薬組成物も提供する。そのような組成物は、抗体、断片、または抗体－薬物コンジュゲートの有効量と、許容される担体とを含む。一部の実施形態では、組成物は、第２の抗がん剤（例えば、免疫チェックポイント阻害剤）をさらに含む。

【0149】

具体的な実施形態では、用語「薬学的に許容される」とは、動物における、さらに特にヒトにおける使用について、連邦もしくは州政府の監督機関により承認された、または米国薬局方もしくは他の一般に認知されている薬局方に収載されている、という意味である。さらに、「薬学的に許容される担体」は、一般に、任意のタイプの、非毒性固体、半固体もしくは液体フィラー、希釈剤、カプセル化材または製剤助剤であろう。

【0150】

用語「担体」は、それを用いて治療薬が投与される、希釈剤、アジュバント、賦形剤、またはビヒクルを指す。そのような医薬担体は、滅菌液、例えば、水および油であり得、この油には、石油、動物、植物または合成起源のもの、例えば、落花生油、大豆油、鉱物油、ゴマ油などが含まれる。水は、医薬組成物が静脈内投与されるときに好ましい担体である。生理食塩水、ならびにデキストロースおよびグリセロール水溶液も、液体担体として、特に、注射可能溶液に、利用することができる。好適な医薬賦形剤としては、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、脱脂粉乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどが挙げられる。組成物は、所望される場合には、少量の湿潤もしくは乳化剤、またはｐＨ緩衝剤、例えば、酢酸塩、クエン酸塩もしくはリン酸塩も含有し得る。抗菌剤、例えば、ベンジルアルコールまたはメチルパラベン；抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウム；キレート剤、例えば、エチレンジアミン四酢酸；および浸透張力の調整のための薬剤、例えば、塩化ナトリウムまたはデキストロースも、想定される。これらの組成物は、溶液、懸濁液、エマルジョン、錠剤、ピル、カプセル、粉末、徐放性製剤などの形態をとり得る。旧来の結合剤および担体、例えば、トリグリセリドを用いて、組成物を坐薬として製剤化することができる。経口製剤は、標準的な担体、例えば、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどを含み得る。好適な医薬品担体の例は、参照により本明細書に組み込まれる、Ｅ．Ｗ．ＭａｒｔｉｎによるRemington’s Pharmaceutical Sciencesに記載されている。そのような組成物は、好ましくは精製された形態での、抗原結合ポリペプチドの治療有効量を、患者への適正投与のための形態を提供するために好適な量の担体とともに、含有することになる。製剤は、投与方法に適していなければならない。非経口調製物は、ガラスまたはプラスチック製のアンプル、使い捨て注射器または複数回投与用バイアルに封入され得る。

【0151】

ある実施形態では、組成物は、人間への静脈内投与に適応する医薬組成物として常套的手順に従って製剤化される。典型的には、静脈内投与用の組成物は、滅菌等張性水性緩衝液中の溶液である。必要に応じ、組成物は、可溶化剤、および注射部位の痛みを和らげるためのリグノカインなどの局所麻酔薬も含み得る。一般に、これらの成分は、別々にまたは混合されて単位剤形で、のどちらかで、例えば、活性薬剤の量を示すアンプルまたはサッシェなどの密閉シールされている容器の中の乾いた凍結粉末または無水濃縮物として供給される。組成物を注入により投与すべき場合、それは、医薬品グレードの滅菌水または食塩水が入っている注入ボトルを用いて分注され得る。組成物が注射により投与される場合、投与の前に成分を混合することができるように、注射用滅菌水または食塩水のアンプルが提供され得る。

【0152】

本開示の化合物を中性または塩形態として製剤化することができる。薬学的に許容される塩は、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸などに由来するものなどのアニオンとで形成されるもの、およびナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化第二鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２－エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどに由来するものなどのカチオンとで形成されるものを含む。

【実施例】

【0153】

（実施例１）
マウス抗ヒトＣＣＲ８抗体の生成および試験
この実施例は、ハイブリドーマ技術を使用するマウス抗ヒトＣＣＲ８モノクローナル抗体の生成を説明する。

【0154】

抗原：ヒトＣＣＲ８をコードするプラスミドＤＮＡまたはヒトＣＣＲ８を発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞系（ＣＨＯ－Ｋ１ ｈＣＣＲ８細胞）。プラスミドＤＮＡ免疫は、流体力学的尾静脈注射により行った。細胞免疫は、ＣＨＯ－Ｋ１ ｈＣＣＲ８細胞系の腹腔内（ｉ．ｐ．）注射により行った。

【0155】

免疫：ヒトＣＣＲ８に対するモノクローナル抗体を生成するために、Ｂａｌｂ／ｃマウス、Ｃ５７ＢＬ／６マウスおよびＳＪＬマウスを完全長ＣＣＲ８ ＤＮＡまたはＣＨＯ－Ｋ１ ｈＣＣＲ８細胞系によって免疫した。免疫応答をモニターするために、マウスからの滴定血清を、典型的には４～６週間免疫してから、下に記載するようにフローサイトメトリーによりスクリーニングした。複数のＣＣＲ８細胞系、およびＣＣＲ８を発現しない対応する陰性対照細胞系への抗体結合について、血清をスクリーニングした。ＣＣＲ８特異的および非特異的Ａｂ応答を各動物において測定し、抗ｈＣＣＲ８ Ｉｇの十分な力価を有する動物を、ハイブリドーマ融合の３～６日前にＨＥＫ２９３ ｈＣＣＲ８細胞系による最終追加免疫のために選択した。

【0156】

細胞融合およびハイブリドーマスクリーニング：上に記載したように最終追加免疫したマウスから脾臓を単離した。電場に基づく電気融合による不死化マウス骨髄腫細胞との細胞融合によりハイブリドーマを生成した。融合細胞をハイブリドーマの選択のために９６平底マイクロタイタープレートに蒔いた。ＨＥＫ２９３ ｈＣＣＲ８細胞系、ＣＨＯ－Ｋ１ ｃｙｎｏ ＣＣＲ８細胞系および陰性対照細胞系を使用してＦＡＣＳにより上清をスクリーニングした。

【0157】

サブクローニングおよびスクリーニング：各融合物からの陽性初代クローンを、サブクローンが単一の親細胞に由来することを確実にするために限界希釈によってサブクローニングした。サブクローニングを初代クローンと同じアプローチでスクリーニングし、加えて、遮断抗体を同定するために、陽性クローンの培養上清に、β－アレスチンｈＣＣＲ８ ＣＨＯ－Ｋ１細胞系を使用するシグナル伝達アッセイによる再度の確認的スクリーニングを行った。

【0158】

ハイブリドーマクローン８４Ｄ１－２Ｈ３、８６Ｄ４Ｅ１２Ａ５、９６Ｇ３－１Ｆ１０、９９Ｄ１－１Ｅ１１、１０１Ｄ５Ｇ１０Ｇ４、１１５Ｃ５Ｅ３Ｂ８、１６３Ｈ９Ｄ５、１８７Ｂ５Ｆ１０、１９５Ｈ８Ｄ１０および２００Ｃ９Ｂ９をさらなる解析のために選択した。可変領域のアミノ酸配列を下の表１で提供し、ＣＤＲ配列を表１Ａに要約する。
表1. 抗体可変領域配列

【表1-1】

【表1-2】

表1A. CDR配列(PTMを回避するための必要に応じた変異を有する、Kabat番号付け)

【表1A-1】

【表1A-1】

【0159】

配列の再調査により、抗体８６Ｄ４Ｅ１２Ａ５、９６Ｇ３－１Ｆ１０、９９Ｄ１－１Ｅ１１、１０１Ｄ５Ｇ１０Ｇ４および１１５Ｃ５Ｅ３Ｂ８が互いに相同であること、ならびに１６３Ｈ９Ｄ５、１８７Ｂ５Ｆ１０、１９５Ｈ８Ｄ１０および２００Ｃ９Ｂ９も互いに相同であることが明らかになった。それらをそれぞれＡ群およびＢ群と呼び、これらの群は、それらのＣＤＲについて以下のコンセンサス配列を共有する。
表1B. 抗体群のコンセンサスCDR配列

【表1B-1】

【表1B-2】

【表1B-3】

【0160】

（実施例２）
抗ｈＣＣＲ８キメラ抗体の結合活性
ハイブリドーマクローン８４Ｄ１－２Ｈ３、８６Ｄ４Ｅ１２Ａ５、９６Ｇ３－１Ｆ１０、９９Ｄ１－１Ｅ１１、１０１Ｄ５Ｇ１０Ｇ４、１１５Ｃ５Ｅ３Ｂ８、１６３Ｈ９Ｄ５、１８７Ｂ５Ｆ１０、１９５Ｈ８Ｄ１０および２００Ｃ９Ｂ９の結合活性を評価するために、ＨＥＫ２９３ ｈＣＣＲ８細胞系、ＣＨＯ－Ｋ１ ｃｙｎｏ ＣＣＲ８細胞系およびＣＨＯ－Ｋ１ ｈＣＣＲ４細胞系を使用してこれらのクローンからのキメラｍＡｂをＦＡＣＳ試験に付した。

【0161】

手短に述べると、ＨＥＫ２９３ ｈＣＣＲ８細胞系、ＣＨＯ－Ｋ１ ｃｙｎｏ ＣＣＲ８細胞系またはＣＨＯ－Ｋ１ ｈＣＣＲ４細胞系を、先ず、５倍段階希釈し、８用量を、１００ｎＭで出発する上記１０のキメラＡｂおよびｈＩｇＧ１対照とともに、４℃で３０分間、インキュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液により洗浄した後、ＰＥヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ二次抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（商標）、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を各ウェルに添加し、４℃で３０分間インキュベートした。試料をＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した。ＰＥの平均蛍光強度（ＭＦＩ）をＭＡＣＳＱｕａｎｔ Ａｎａｌｙｚｅｒ １６により評価した。

【0162】

図１Ａに示すように、抗ｈＣＣＲ８抗体は全て、ヒトＣＣＲ８に、用量依存的に、特異的に結合した。図１Ｂに示すように、１６３Ｈ９Ｄ５を除いて、全ての抗ｈＣＣＲ８抗体は、程度は異なるがｃｙｎｏ ＣＣＲ８にも結合した。図１Ｃに示すように、これらの抗体はいずれも、最も近縁のファミリーメンバーＣＣＲ４に結合しなかった。これは、これらの抗体がＣＣＲ８に特異的であることをさらに示唆する。

【0163】

（実施例３）
抗ＣＣＲ８キメラ抗体によるｈＣＣＬ１誘導シグナル伝達の遮断
ＣＣＲ８リガンドＣＣＬ１は、腫瘍関連マクロファージ、がん関連線維芽細胞または他の細胞型により過剰発現され、がん微小環境に分泌されることが報告された。その受容体ＣＣＲ８を活性化することにより、それは、免疫抑制性制御性Ｔ細胞の、増殖、アポトーシス耐性、および遊走を引き起こし、ひいては抗腫瘍免疫をさらに阻害する。それ故、キメラ形式での抗ｈＣＣＲ８抗体を、ＣＣＬ１媒介下流シグナル伝達を阻害するその能力について細胞ベースのアッセイにおいて試験した。

【0164】

β－アレスチンアッセイにおいて、ＣＣＲ８を、プロテアーゼ部位により連結させた転写因子Ｇａｌ４とインフレームで融合させる。ＣＣＬ１が結合すると、プロテアーゼと融合したβ－アレスチンが細胞内の末端に動員され、次いで、タグ付きプロテアーゼが転写因子を切断し、それが核に転位し、Ｇａｌ４依存性ルシフェラーゼ発現である発現を活性化する。手短に述べると、β－アレスチンｈＣＣＲ８ ＣＨＯ－Ｋ１細胞を、９６ウェルアッセイプレートの各ウェルに、ウェル当たり２００００の密度で播き、３７℃、５％ＣＯ_２で培養した。２４時間のインキュベーション後、各キメラ抗体を段階希釈し、アッセイプレートの指定列に添加した。次いで、最終濃度１０ｎｇ／ｍｌのヒトＣＣＬ１（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍ）を次いで添加し、さらに１２～１６時間インキュベートした。作業用検出溶液（ＰｒｏｍｅｇａからのＯＮＥ－Ｇｌｏ（商標）ルシフェラーゼアッセイシステム）をアッセイプレートの全てのウェルに添加し、アッセイプレートを、３分間、室温で暗所においてインキュベートした。発光をマルチモードプレートリーダー（Ｅｎｖｉｓｉｏｎ（登録商標）２１０５）で読み取った。

【0165】

ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用してデータをプロットして半最大阻害濃度（ＩＣ_５０）値を得、図２Ａにまとめた。図２Ａに示すように、８４Ｄ１－２Ｈ３を除いて全ての抗体が、ＣＨＯ－Ｋ１細胞におけるｈＣＣＲ８へのｈＣＣＬ１誘導β－アレスチン動員において様々なレベルの拮抗作用を示した。

【0166】

加えて、Ｃｈｅｍ１細胞上のＣＣＲ８のｈＣＣＬ１結合がカルシウムフラックスを誘導したのでＣｈｅｍｉＳｃｒｅｅｎ（商標）ＣＣＲ８ケモカイン受容体安定細胞系（Ｃｈｅｍ１－ｈＣＣＲ８、Ｄｉｓｃｏｖｅｒ Ｘ）におけるカルシウム（Ｃａ^２＋）フラックスアッセイを行うことにより抗ｈＣＣＲ８ ｍＡｂによるｈＣＣＬ１媒介経路の遮断を試験した。Ｃｈｅｍ－１ ｈＣＣＲ８細胞を３８４ウェルアッセイプレートにウェル当たり５０００の密度で播種し、３７℃、５％ＣＯ_２で少なくとも１８時間、培養した。色素作業用緩衝液（Ｓｃｒｅｅｎ Ｑｕｅｓｔ（商標）Ｆｌｕｏ－８ Ｎｏ ｗａｓｈカルシウムアッセイキット、ＡＡＴ Ｂｉｏｑｕｅｓｔ）および異なる抗ｈＣＣＲ８ ｍＡｂを細胞に添加し、３７℃、５％ＣＯ_２で１時間インキュベートした後、１９ｎＭ ｈＣＣＬ１（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍ）を添加した。Ｃａ^２＋フラックス蛍光シグナルを、ＦＬＩＰＲ（商標）ＴＥＴＲＡ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅ）を使用してＭａｘ－Ｍｉｎにより測定した。Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍを使用してＩＣ_５０を算出した。

【0167】

図２Ｂに示すように、８４Ｄ１－２Ｈ３を除いて全ての抗体は、Ｃｈｅｍ１細胞におけるｈＣＣＲ８へのｈＣＣＬ１誘導Ｃａ^２＋フラックスにおいて様々なレベルの拮抗作用を示した。これは、β－アレスチンアッセイと一致する。

【0168】

さらに、走化性アッセイを行って、８６Ｄ４Ｅ１２Ａ５、９６Ｇ３－１Ｆ１０、１８７Ｂ５Ｆ１０、１９５Ｈ８Ｄ１０および２００Ｃ９Ｂ９の阻害活性を、ＣＣＲ８発現細胞のＣＣＬ１誘導遊走を遮断するそれらの能力について評価した。ＢａＦ３ ｈＣＣＲ８細胞懸濁物および希釈抗体試料を９６ウェルプレートに添加し、１時間、３７℃、５％ＣＯ_２でインキュベートした。孔径５μｍの走化性フィルターを使用して４０ｎｇ／ｍｌの濃度のｈＣＣＬ１（８０μｌ）溶液を走化性チャンバーおよび集合チャンバー（assemble chamber）の対応するウェルの下部区画に移した。次いで、細胞／抗体混合物（１００μｌ）をチャンバーの上部区画に移し、３７℃で３時間インキュベートした。最後に、走化性チャンバーの下方区画から内容物を新しい９６ウェルプレートに移し、１０μｌのレサズリンをプレートに添加した。２４時間、３７℃でのインキュベーション後、プレートを蛍光プレートリーダーにおいて５４４／５９０ｎＭで読み取った。

【0169】

図２Ｃは、８６Ｄ４Ｅ１２Ａ５、９６Ｇ３－１Ｆ１０、１８７Ｂ５Ｆ１０、１９５Ｈ８Ｄ１０および２００Ｃ９Ｂ９全てが、ｈＣＣＬ１により誘導されるＢａＦ３ ｈＣＣＲ８の遊走を阻害したことを示した。

【0170】

（実施例４）
抗体はＡＤＣＣレポーターバイオアッセイにおいてＡＤＣＣシグナル伝達を誘導する
この実施例は、ｉｎ ｖｉｔｒｏでＣＣＲ８抗体のＡＤＣＣシグナル伝達を比較した。

【0171】

この実験では、ＨＥＫ２９３ ｈＣＣＲ８細胞を標的細胞として使用し、高親和性ＦｃγＲＩＩＩａ［ＣＤ１６ａ（１７６Ｖ）］とＮＦＡＴ応答エレメントにより駆動されるルシフェラーゼレポーターとを安定的に発現するＪｕｒｋａｔ細胞をエフェクター細胞として使用し、試験した抗体は、ＷＴ ｈＩｇＧ１ ＦｃまたはｈＩｇＧ１ Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ Ｆｃを有する抗ｈＣＣＲ８抗体であった。標的細胞とエフェクター細胞の両方に同時に結合すると、エフェクター細胞は、細胞内シグナルを伝達し、その結果、ＮＦＡＴ媒介ルシフェラーゼが生じ、それを発光リーダーにより定量化することができる。この実験では、標的細胞およびエフェクター細胞を１対１のＥ：Ｔ比で混合し、漸増濃度の抗体を添加して、９６ウェルアッセイプレートにおいて６時間、３７℃、５％ＣＯ_２でインキュベートした。ＡＤＣＣ活性を生物発光読み出しにより決定した。

【0172】

結果（図３Ａ）は、野生型ｈＩｇＧ１を有するキメラ抗ｈＣＣＲ８抗体がＡＤＣＣシグナル伝達を用量依存的に誘導したことを示した。

【0173】

図３Ｂに示すように、増強されたＦｃ骨格（ｈＩｇＧ１ Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ）を有するキメラ抗ｈＣＣＲ８抗体は、同じ実験環境で、より強いＡＤＣＣシグナル伝達を誘導した。

【0174】

（実施例５）
抗体は、エフェクター細胞としてＮＫ９２ ＣＤ１６ａを使用してＨＥＫ２９３ ｈＣＣＲ８細胞でＡＤＣＣを誘導する
レポーターアッセイにおいてより強いＡＤＣＣレポーター活性を示した、増強されたＦｃ（ｈＩｇＧ１ Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ）を有する抗ｈＣＣＲ８抗体を、ＣＤ１６ａ（１７６Ｖ）を過剰発現するナチュラルキラー細胞傷害性細胞系ＮＫ－９２による標的細胞（ＨＥＫ２９３ ｈＣＣＲ８細胞系）の殺傷を媒介するそれらの能力について試験した。

【0175】

この実験では、ＤＥＬＦＩＡ（登録商標）ＥｕＴＤＡ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙキット（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を利用してＡＤＣＣを測定した。標的細胞（ＨＥＫ２９３ ｈＣＣＲ８細胞）を培養培地で１，０００，０００細胞／ｍｌの密度に希釈し、蛍光増強リガンドで２５分間、３７℃で標識した。３～５回、大々的に洗浄した後、ＮＫ９２ ＣＤ１６ａ（１７６Ｖ）細胞と１：１０の比で混合した標識された標的細胞と一連の濃度での抗ｈＣＣＲ８抗体とを共培養のためにマイクロプレートに添加した。２時間のインキュベーション後、２０μＬの上清を新たなプレートに移した、そして２００μＬのユーロピウム溶液を添加し、ＤＥＬＦＩＡ Ｐｌａｔｅｓｈａｋｅを使用して１５分間、室温でインキュベートする。シグナルは、溶解細胞の数と相関する。

【0176】

図４に示すように、増強されたＦｃ機能（ｈＩｇＧ１ Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ）を有するキメラ抗ｈＣＣＲ８抗体は、ナチュラルキラー細胞系によるＣＣＲ８陽性細胞に対するＡＤＣＣ効果を誘導することができた。

【0177】

（実施例６）
ＭＣ３８腫瘍モデルにおける有効性
この実施例は、同系マウスモデルを使用して、機能性分子のｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍有効性を試験した。ヒトＩｇＧ１のより強いＡＤＣＣ効果を模倣するために抗ＣＣＲ８抗体のＦｃをｍＩｇＧ２ａへと操作した。

【0178】

ＰＢＳに再懸濁させたＭＣ３８細胞を０．１ｍｌの体積中５×１０^５細胞の濃度でＢ－ｈＣＣＲ８ヒト化Ｃ５７ＢＬ／６マウスの右側腹部に皮下（ｓ．ｃ．）投与した。平均腫瘍体積がおおよそ８２ｍｍ^３に達したら、動物を、各群に動物７匹を有する実験群に、腫瘍体積に従って無作為に割り当てた。抗ＣＣＲ８抗体は、８４Ｄ１－２Ｈ３－ｍＩｇＧ２ａ（６ｍｇ／ｋｇおよび３ｍｇ／ｋｇ）、１９５Ｈ８Ｄ１０－ｍＩｇＧ２ａ（６ｍｇ／ｋｇおよび３ｍｇ／ｋｇ）および２００Ｃ９Ｂ９－ｍＩｇＧ２ａ（６ｍｇ／ｋｇおよび３ｍｇ／ｋｇ）を含む、試験した抗体であった。試験した抗体を腹腔内注射により毎週２回投与した。マウスの体重および腫瘍体積を、週２回、測定した。

【0179】

図５に示すように、増強されたＡＤＣＣ活性を有する全ての抗ヒトＣＣＲ８抗体は、３ｍｇ／ｋｇと６ｍｇ／ｋｇの用量レベルで両方とも有意な腫瘍成長阻害を示した。これらの抗体の中で、１９５Ｈ８Ｄ１０および２００Ｃ９Ｂ９は、より強い抗腫瘍活性を示した。

【0180】

（実施例７）
ｈＣＣＲ８抗体のヒト化
抗体１９５Ｈ８Ｄ１０および２００Ｃ９Ｂ９の可変領域遺伝子を利用して、ヒト化ｍＡｂを作出した。１９５Ｈ８Ｄ１０／２００Ｃ９Ｂ９のＶＨおよびＶＫのアミノ酸配列を、ヒトＩｇ遺伝子配列の利用可能なデータベースと比較して、全体として最もよくマッチするヒト生殖細胞系列Ｉｇ配列を見つけた。

【0181】

１９５Ｈ８Ｄ１０の軽鎖については、ＩＧＫＶ２－２８^＊０１が最良適合生殖細胞系列であり、１９５Ｈ８Ｄ１０の重鎖については、ＩＧＨＶ３－７２^＊０１をヒト化骨格として選択した。次いで、ヒト化１９５Ｈ８Ｄ１０ ＣＤＲグラフト抗体を設計し、ＣＤＲ－Ｌ１、Ｌ２およびＬ３をＩＧＫＶ２－２８^＊０１のフレームワーク配列にグラフトし、ＣＤＲ－Ｈ１、Ｈ２およびＨ３をＩＧＨＶ３－７２^＊０１のフレームワーク配列にグラフトした。次いで、３Ｄモデルを生成して、抗体結合および立体構造に不可欠である、元のマウスフレームワーク領域内のアミノ酸を決定した。解析に基づいて、復帰変異をグラフト抗体に対して行い、その結果、４本の追加のヒト化重鎖および４本の追加の軽鎖を生成した。

【0182】

２００Ｃ９Ｂ９の軽鎖については、ＩＧＫＶ２－２８^＊０１が最良適合生殖細胞系列であり、２００Ｃ９Ｂ９の重鎖については、ＩＧＨＶ３－７２^＊０１をヒト化骨格として選択した。次いで、ヒト化２００Ｃ９Ｂ９ ＣＤＲグラフト抗体を設計し、ＣＤＲＬ１、Ｌ２およびＬ３をＩＧＫＶ２－２８^＊０１のフレームワーク配列にグラフトし、ＣＤＲＨ１、Ｈ２およびＨ３をＩＧＨＶ３－７２^＊０１のフレームワーク配列にグラフトした。次いで、３Ｄモデルを生成して、抗体結合および立体構造に不可欠である、元のマウスＦＲ領域配列内のアミノ酸を決定した。解析に基づいて、復帰変異を２００Ｃ９Ｂ９ ＣＤＲグラフト抗体に対して行い、その結果、４本の追加のヒト化重鎖および４本の追加の軽鎖を生成した。

【0183】

得られたヒト化配列である配列を表２～３に収載する。
表2. 195H8D10のヒト化

【表2】

表2A. 195H8D10からのヒト化抗体

【表2A-1】

【表2A-2】

表3. 200C9B9のヒト化

【表3】

表3A. 200C9B9からのヒト化抗体

【表3A】

【0184】

（実施例８）
ヒト化抗体の結合活性
フローサイトメトリーを使用して、ＣＨＯ－Ｋ１ ｈＣＣＲ８細胞系およびＣＨＯ－Ｋ１ ｃｙｎｏ ＣＣＲ８細胞系を使用してヒト化抗体の結合活性を確認した。

【0185】

手短に述べると、初めに、ＣＨＯ－Ｋ１ ｈＣＣＲ８細胞およびＣＨＯ－Ｋ１ ｃｙｎｏ ＣＣＲ８細胞を、異なる濃度のヒト化１９５Ｈ８Ｄ１０および２００Ｃ９Ｂ９抗体とともに４℃で３０分間、インキュベートした。ＰＥヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ二次抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（商標）、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を各ウェルに添加し、４℃で３０分間インキュベートした。試料をＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した。ＰＥの平均蛍光強度（ＭＦＩ）をＭＡＣＳＱｕａｎｔ Ａｎａｌｙｚｅｒ １６により評価した。

【0186】

図６Ａおよび６Ｂに示すように、ヒト化１９５Ｈ８Ｄ１０／２００Ｃ９Ｂ９抗体は、ヒトＣＣＲ８結合に関して対応するキメラ抗体と同等であった。

【0187】

さらに、図６Ｃおよび６Ｄは、ヒト化１９５Ｈ８Ｄ１０／２００Ｃ９Ｂ９抗体が、Ｈｕ１９５Ｈ８Ｄ１０－２、Ｈｕ１９５Ｈ８Ｄ１０－４、Ｈｕ２００Ｃ９Ｂ９－２、およびＨｕ２００Ｃ９Ｂ９－４を除いて、ｃｙｎｏ ＣＣＲ８結合に関して対応するキメラ抗体と同等であったことを示した。

【0188】

（実施例９）
ヒト化抗体はＡＤＣＣレポーターバイオアッセイにおいてＡＤＣＣシグナル伝達を誘導する
この実施例は、ｉｎ ｖｉｔｒｏでヒト化ＣＣＲ８抗体のＡＤＣＣシグナル伝達を比較した。

【0189】

この実験では、前の実施例で述べたように、ＣＨＯ－Ｋ１ ｈＣＣＲ８細胞を標的細胞として使用し、Ｊｕｒｋａｔ ＣＤ１６ａ（１７６Ｖ）ＮＦＡＴルシフェラーゼレポーター細胞をエフェクター細胞として使用し、試験した抗体は、ヒト化１９５Ｈ８Ｄ１０および２００Ｃ９Ｂ９抗体であった。実験は、製造業者の指示に従って６時間、３７℃、５％ＣＯ_２で９６ウェルアッセイプレートにおいて標的細胞とエフェクター細胞と試験抗体の共インキュベーション下で行った。ＡＤＣＣシグナル伝達を生物発光読み出しにより決定した。

【0190】

図７Ａおよび７Ｂに示すように、ヒト化１９５Ｈ８Ｄ１０／２００Ｃ９Ｂ９抗体は、ＡＤＣＣレポーターアッセイにおいて対応するキメラ抗体と同等のＡＤＣＣシグナル伝達を誘導した。

【0191】

（実施例１０）
ヒト化抗体によるｈＣＣＬ１誘導β－アレスチン動員の阻害
ヒト化１９５Ｈ８Ｄ１０／２００Ｃ９Ｂ９抗体を、ＣＨＯ－Ｋ１ ｈＣＣＲ８細胞におけるＣＣＬ１媒介下流シグナル伝達の拮抗作用を確認するために再び試験した。

【0192】

本実験は、前の実施例で記載したように行った。手短に述べると、β－アレスチンｈＣＣＲ８ ＣＨＯ－Ｋ１細胞を蒔き、希釈した試験抗体と混合した。次いで、ヒトＣＣＬ１（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍ）を培養物に添加し、１２～１６時間インキュベートした。検出用緩衝液をアッセイプレートの全てのウェルに添加し、発光をマイクロプレートリーダーで読み取った。

【0193】

図８Ａおよび８Ｂに示すように、全てのヒト化１９５Ｈ８Ｄ１０／２００Ｃ９Ｂ９抗体は、ｈＣＣＬ１誘導β－アレスチンアッセイにおいて対応するキメラ抗体と同等のレベルの拮抗作用を示した。

【0194】

（実施例１１）
１９５Ｈ８Ｄ１０および２００Ｃ９Ｂ９のＰＴＭ除去の確認
１９５Ｈ８Ｄ１０および２００Ｃ９Ｂ９ ＶＬ ＣＤＲ１は、翻訳後改変（ＰＴＭ）のリスクがあり、将来の製造に困難な課題もたらすＮＧ残基（Ｋａｂａｔ番号付け）を含むことが観察されている。それ故、この実施例は、ＰＴＭを防止するためにＶＬ上のＮＧをＱＧまたはＮＡに変異させた。潜在的なＰＴＭ除去部位の配列を表４に収載する。
表4. 195H8D10および200C9B9のPTM除去

【表4】

【0195】

図９Ａに示すように、１９５Ｈ８Ｄ１０－Ｃ１／Ｃ２および２００Ｃ９Ｂ９－Ｃ１／Ｃ２は、ヒトＣＣＲ８結合に関して対応する親抗体と同等であった。

【0196】

図９Ｂに示すように、対応する抗体と比較して１９５Ｈ８Ｄ１０－Ｃ２および２００Ｃ９Ｂ９－Ｃ２は、ｃｙｎｏ結合能を維持する。

【0197】

図９Ｃに示すように、１９５Ｈ８Ｄ１０－Ｃ１／Ｃ２および２００Ｃ９Ｂ９－Ｃ１／Ｃ２は、ＡＤＣＣレポーターアッセイにおいて対応する親抗体と同等のＡＤＣＣシグナル伝達を誘導した。

【0198】

図９Ｄに示すように、１９５Ｈ８Ｄ１０－Ｃ１／Ｃ２および２００Ｃ９Ｂ９－Ｃ１／Ｃ２は、ＣＨＯ－Ｋ１細胞におけるｈＣＣＲ８へのｈＣＣＬ１誘導β－アレスチン動員において対応する親抗体と同等のレベルの拮抗作用を示した。

【0199】

それ故、この実施例は、潜在的なＰＴＭ部位が除去されたヒト化１９５Ｈ８Ｄ１０および２００Ｃ９Ｂ９の配列（ＶＬ ＣＤＲ１ ＮＧ－ＮＡ）を確認し、配列を表５に収載する。
表5. 潜在的なPTM部位が除去された195H8D10のヒト化

【表5-1】

【表5-2】

表5A. 潜在的なPTM部位が除去された195H8D10ヒト化抗体

【表5A】

表6. 潜在的なPTM部位が除去された200C9B9のヒト化

【表6-1】

【表6-2】

表6A. PTMが除去された200C9B9からのヒト化抗体

【表6A】

【0200】

（実施例１２）
ヒト化１９５Ｈ８Ｄ１０および２００Ｃ９Ｂ９のＰＴＭ除去の確認
ＰＴＭ除去後のヒト化１９５Ｈ８Ｄ１０／２００Ｃ９Ｂ９抗体の性能をさらに確認するために、本発明者らは、Ｈｕ１９５Ｈ８Ｄ１０－１／７ ＮＧ－ＮＡおよびＨｕ２００Ｃ９Ｂ９－３／７ ＮＧ－ＮＡ抗体の結合、ＡＤＣＣ活性、機能的遮断活性、および腫瘍成長阻害有効性を試験した。

【0201】

図１０Ａに示すように、Ｈｕ１９５Ｈ８Ｄ１０－１／７ ＮＧ－ＮＡおよびＨｕ２００Ｃ９Ｂ９－３／７ ＮＧ－ＮＡ抗体は、ヒトＣＣＲ８結合に関して対応する親抗体と同等であった。

【0202】

図１０Ｂに示すように、Ｈｕ１９５Ｈ８Ｄ１０－１／７ ＮＧ－ＮＡおよびＨｕ２００Ｃ９Ｂ９－３／７ ＮＧ－ＮＡ抗体は、ＡＤＣＣレポーターアッセイにおいて対応する親抗体と同等のＡＤＣＣシグナル伝達を誘導した。

【0203】

図１０Ｃに示すように、Ｈｕ１９５Ｈ８Ｄ１０－１／７ ＮＧ－ＮＡおよびＨｕ２００Ｃ９Ｂ９－３／７ ＮＧ－ＮＡ抗体は、ＣＨＯ－Ｋ１細胞におけるｈＣＣＲ８へのｈＣＣＬ１誘導β－アレスチン動員において対応する親抗体と同等のレベルの拮抗作用を示した。

【0204】

図１０Ｄに示すように、Ｈｕ１９５Ｈ８Ｄ１０－７ ＮＧ－ＮＡおよびＨｕ２００Ｃ９Ｂ９－３／７ ＮＧ－ＮＡ抗体は、Ｃｈｅｍ１細胞におけるｈＣＣＲ８へのｈＣＣＬ１誘導Ｃａ^２＋フラックスにおいて同等のレベルの拮抗作用を示し、これは、β－アレスチンアッセイと一致する。

【0205】

さらに、本発明者らは、同系マウスモデルを使用して、Ｈｕ１９５Ｈ８Ｄ１０－１／７ ＮＧ－ＮＡおよびＨｕ２００Ｃ９Ｂ９－３／７ ＮＧ－ＮＡ抗体のｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍有効性を試験した。同じマウスＦｃをＢ－ｈＣＣＲ８マウスにおいてＡＤＣＣ媒介Ｔｒｅｇ殺傷に関して使用した。手短に述べると、ＰＢＳに再懸濁させたＭＣ３８細胞を０．１ｍｌの体積中５×１０^５細胞の濃度でＢ－ｈＣＣＲ８ヒト化Ｃ５７ＢＬ／６マウスの右側腹部に皮下（ｓ．ｃ．）投与した。平均腫瘍体積がおおよそ８５ｍｍ^３に達したら、動物を、各群に動物７匹を有する実験群に、腫瘍体積に従って無作為に割り当てた。抗ＣＣＲ８抗体（６ｍｇ／ｋｇ）が試験した抗体であり、それらを毎週２回、腹腔内注射により投与した。マウスの体重および腫瘍体積を、週２回、測定した。

【0206】

図１１に示すように、増強されたＡＤＣＣ活性を有するＨｕ１９５Ｈ８Ｄ１０－１／７ ＮＧ－ＮＡおよびＨｕ２００Ｃ９Ｂ９－３／７ ＮＧ－ＮＡ抗体は、有意な腫瘍成長阻害（ＴＧＩ）を示した。これらの抗体の中で、Ｈｕ２００Ｃ９Ｂ９－７ ＮＧ－ＮＡ単一処置は、より強い腫瘍成長阻害を示し、研究終了時の阻害率はおよそ７０％であった。

【0207】

（実施例１３）
Ｈｕ２００Ｃ９Ｂ９－７ ＮＧ－ＮＡとベンチマーク抗体の比較
最後に、本発明者らは、Ｈｕ２００Ｃ９Ｂ９－７ ＮＧ－ＮＡ抗体をＧｉｌｅａｄ Ｓｃｉｅｎｃｅｓからのベンチマーク抗体（１－Ｋ１７．０４４）およびＢｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂからのベンチマーク抗体（４Ａ１９）とｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏで比較した。ＧｉｌｅａｄおよびＢＭＳにより開発された抗ＣＣＲ８抗体は、現在、それぞれ第Ｉ相および第Ｉ／ＩＩ相臨床試験中である。

【0208】

全てのＣＣＲ８抗体を同じＦｃ（ヒトＩｇＧ１カッパ）と融合させた。結合活性、ＡＤＣＣ活性、および機能的遮断活性を、ｉｎ ｖｉｔｒｏで比較した。図１２Ａに示すように、Ｈｕ２００Ｃ９Ｂ９－７ ＮＧ－ＮＡは、ｈＣＣＲ８の強い結合剤であり、ＦＡＣＳにより判定してそのベンチマークのものに匹敵する結合能力を有した。特異性を決定するために、本発明者らは、標的を伴わない親ＨＥＫ２９３に基づく結合アッセイを行った。結果（図１２Ｂ）は、Ｈｕ２００Ｃ９Ｂ９－７ ＮＧ－ＮＡが、親ＨＥＫ２９３に全く結合しなかった一方でＧｉｌｅａｄおよびＢＭＳから開発されたベンチマーク抗体が親ＨＥＫ２９３細胞へのある程度の非特異的結合を有したことを示した。

【0209】

前の実施例で述べたように、本発明者らは、Ｈｕ２００Ｃ９Ｂ９－７ ＮＧ－ＮＡおよびベンチマークのＡＤＣＣシグナル伝達も比較した。図１２Ｃは、野生型ｈＩｇＧ１を有する全ての抗ｈＣＣＲ８抗体が、ＨＥＫ２９３ ｈＣＣＲ８およびＪｕｒｋａｔ ＣＤ１６ａ（１７６Ｖ）ＮＦＡＴルシフェラーゼ細胞共培養アッセイにおいて用量依存的にＡＤＣＣシグナル伝達を誘導したことを示した。

【0210】

加えて、Ｈｕ２００Ｃ９Ｂ９－７ ＮＧ－ＮＡおよびベンチマーク抗体によるｈＣＣＬ１媒介経路の遮断を、β－アレスチン動員アッセイおよびカルシウム（Ｃａ^２＋）フラックスアッセイを行うことにより試験した。Ｈｕ２００Ｃ９Ｂ９－７ ＮＧ－ＮＡは、ＣＨＯ－Ｋ１細胞におけるｈＣＣＲ８へのｈＣＣＬ１誘導β－アレスチン動員においてベンチマークと同等のレベルの拮抗作用を示し（図１２Ｄ）、さらに、Ｈｕ２００Ｃ９Ｂ９－７ ＮＧ－ＮＡは、Ｃｈｅｍ－１ ｈＣＣＲ８細胞におけるｈＣＣＬ１媒介Ｃａ^２＋フラックスを両方のベンチマーク抗体より良好に阻害することができた（図１２Ｅ）。

【0211】

Ｈｕ２００Ｃ９Ｂ９－７ ＮＧ－ＮＡおよびベンチマークの前臨床有効性を、前の実施例で記載したように、マウスＣＣＲ８遺伝子をそのヒト対応物に置き換え、ＭＣ３８を接種した、同系マウスモデルにおいて評価した。同じマウスＦｃを使用して、Ｈｕ２００Ｃ９Ｂ９－７ ＮＧ－ＮＡ、１－Ｋ１７．０４４および４Ａ１９単一処置は全て、腫瘍成長の有意な阻害を示し、阻害率は、それぞれ、６１．２％、５３．２％および５９．１％であった（図１３Ａ）。ｅｘ ｖｉｖｏ解析は、これらの抗体の全てが、腫瘍部位においてＣＣＲ８＋Ｔｒｅｇを効率的に枯渇させ、ｍＣＤ４５＋リンパ球を増加させる（図１３Ｂ）が末梢ＴｒｅｇサブセットおよびｍＣＤ４５＋リンパ球を温存する（図１３Ｃ）ことを示唆した。

【0212】

（実施例１４）
Ｈｕ２００Ｃ９Ｂ９－７ ＮＧ－ＮＡのＦｃ選択
Ｆｃ操作は、ＡＤＣＣ効果を増強してモノクローナル抗体（ｍＡｂ）の抗腫瘍有効性を向上させるための有望なアプローチである。

【0213】

治療用抗体についての最良のＡＤＣＣ増強アプローチを見つけるために、本発明者らは、Ｆｃ－ＤＬＥ（三重変異Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅを両方のＦｃ鎖に導入する）、Ｆｃ－ＤＥ（二重変異Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅを両方のＦｃ鎖に導入する）、ＩｇＧ Ｆｃ領域におけるＮ－グリカン残基がコアフコース糖単位を欠いているＦｃ－無フコシル化型、Ｆｃ－非対称（すなわち、重鎖の各Ｆｃ領域に異なる置換を導入する：一方の重鎖：Ｌ２３４Ｙ／Ｌ２３５Ｑ／Ｇ２３６Ｗ／Ｓ２３９Ｍ／Ｈ２６８Ｄ／Ｄ２７０Ｅ／Ｓ２９８Ａおよび反対側の重鎖：Ｄ２７０Ｅ／Ｋ３２６Ｄ／Ａ３３０Ｍ／Ｋ３３４Ｅ）およびＦｃ－ＷＴ ｈＩｇＧ１を有する、抗体を産生した。本発明者らは、ＦｃγＲＩＩＩａアロタイプおよび阻害性ＦｃγＲＩＩｂに対するこれらのＦｃバリアントまたは糖変異体Ｆｃの結合親和性を評価し、活性化ＦｃγＲ結合の阻害性ＦｃγＲ結合に対する比（Ａ／Ｉ）を算出した。

【0214】

異なるＦｃを有する抗体の、組換えｈＣＤ１６ａ－１７６Ｖ、ｈＣＤ１６ａ－１７６ＦおよびｈＣＤ３２ｂタンパク質への結合を、捕捉法を使用してＢｉａｃｏｒｅで試験した。ＣＭ５－抗Ｈｉｓチップを使用してタンパク質を捕捉した。抗体の段階希釈物を、捕捉されたタンパク質に注入した。全ての実験をＢｉａｃｏｒｅ Ｔ２００で行った。データ解析は、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００評価ソフトウェアを使用して行った。結果を表７に示す。ＤＬＥ変異を有するＦｃバリアントは、両方のＣＤ１６ａアロタイプに対して高い親和性を有し、ＣＤ３２ｂに対して最低の親和性を有することが判明した。したがって、ＤＬＥ変異を有するＦｃバリアントは、最高のＡ／Ｉ比に達した。
表7. Biacoreにより測定した親和性、およびA/I比

【表7-1】

【表7-2】

【0215】

ＡＤＣＣシグナル伝達におけるＣＣＲ８抗体の能力をさらに評価するために、本発明者らは、抗ＣＣＲ８抗体をＦｃ－ＤＬＥ、Ｆｃ－ＤＥ、Ｆｃ－無フコシル化型、Ｆｃ－非対称およびＦｃ－ＷＴと比較した（同じＦａｂ部を使用した）。ＡＤＣＣ活性は、ＣＨＯ－Ｋ１ ｈＣＣＲ８細胞とともにインキュベートした、Ｊｕｒｋａｔ ｈＣＤ１６ａ ＮＦＡＴまたはＪｕｒｋａｔ ｈＣＤ１６ａ ｈＣＤ３２ｂ ＮＦＡＴエフェクター細胞（effecter cell）により決定した。結果（図１４Ａ）は、Ｆｃ－ＤＬＥ、Ｆｃ－ＤＥ、Ｆｃ－無フコシル化型、Ｆｃ－非対称を有する抗ｈＣＣＲ８抗体が、ＷＴ型ｈＩｇＧ１と比較して強力なＡＤＣＣ活性を誘導したことを示した。さらに、阻害性受容体を発現したＪｕｒｋａｔ ｈＣＤ１６ａ ｈＣＤ３２ｂ細胞培養系では、Ｆｃ－ＤＬＥ、Ｆｃ－無フコシル化型およびＦｃ－非対称を有する抗ｈＣＣＲ８抗体は、Ｆｃ－ＤＥおよびＷＴ型ｈＩｇＧ１と比較して強いＡＤＣＣ活性を示した。この結果は、Ａ／Ｉ比と一致していた（図１４Ｂ）。

【0216】

加えて、ＣＣＲ８発現ＨＥＫ２９３細胞に対する抗体媒介殺傷を試験した。ＨＥＫ２９３ ｈＣＣＲ８細胞と共インキュベートした健康なドナーからのＰＢＭＣ（ＰＢＭＣの標的細胞に対する比は５０：１である）を、Ｆｃ－ＤＬＥ、Ｆｃ－ＤＥ、Ｆｃ－無フコシル化型、Ｆｃ－ＷＴおよびｈＩｇＧ１ ＤＬＥ対照を有する抗ＣＣＲ８抗体の段階希釈物を用いて３７℃で一晩、処理した。細胞溶解を共培養後の上清中の放出されたＬＤＨレベルにより決定した。結果は、操作されたＦｃを有する、特にＤＬＥ変異を有する、抗ｈＣＣＲ８抗体が、ＣＣＲ８発現標的細胞の最も強力な殺傷を媒介したことを示した（図１４Ｃ）。
＊ ＊ ＊

【0217】

本開示は、記載した特定の実施形態によって範囲が限定されることはなく、これらの実施形態は、本開示の個々の態様の単一の実例として意図したものであり、機能的に等価であるあらゆる組成物または方法が本開示の範囲内である。本開示の主旨および範囲を逸脱することなく、本開示の方法および組成物に様々な改変および変形を加えることができることは、当業者には明らかであろう。したがって、本開示は、本開示の改変形態および変形形態を、それらが添付の請求項およびそれらの均等物の範囲内に入ることを条件に、包含する。

【0218】

本明細書で言及した全ての公表文献および特許出願は、個々の公表文献または特許出願各々が参照により組み込まれると具体的かつ個別に示された場合と同程度に、参照により本明細書に組み込まれる。

【図1】

【図2-1】

【図2-2】

【図3】

【図4】

【図5-1】

【図5-2】

【図6-1】

【図6-2】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13-1】

【図13-2】

【図14】

【配列表】

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【国際調査報告】