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特表2024-546183抗Ｃ３抗体及びその抗原結合性断片並びに眼科疾患又は眼疾患を処置するためのそれらの使用
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-12-17
(54)【発明の名称】抗Ｃ３抗体及びその抗原結合性断片並びに眼科疾患又は眼疾患を処置するためのそれらの使用
(51)【国際特許分類】
C07K 16/18 20060101AFI20241210BHJP
C12N 15/13 20060101ALI20241210BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20241210BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20241210BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20241210BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20241210BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20241210BHJP
C12P 21/08 20060101ALI20241210BHJP
A61P 27/02 20060101ALI20241210BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20241210BHJP
【ＦＩ】
C07K16/18 ZNA
C12N15/13
C12N15/63 Z
C12N1/15
C12N1/19
C12N1/21
C12N5/10
C12P21/08
A61P27/02
A61K39/395 N
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024538430
(86)(22)【出願日】2022-12-21
(85)【翻訳文提出日】2024-06-21
(86)【国際出願番号】 EP2022087260
(87)【国際公開番号】W WO2023118312
(87)【国際公開日】2023-06-29
(31)【優先権主張番号】63/292,513
(32)【優先日】2021-12-22
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】524237571
【氏名又は名称】ツェーデーエァ－ライフ アクチェンゲゼルシャフト
(71)【出願人】
【識別番号】503385923
【氏名又は名称】ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング
(74)【代理人】
【識別番号】100103610
【弁理士】
【氏名又は名称】▲吉▼田 和彦
(74)【代理人】
【識別番号】100109070
【弁理士】
【氏名又は名称】須田 洋之
(74)【代理人】
【識別番号】100119013
【弁理士】
【氏名又は名称】山崎 一夫
(74)【代理人】
【識別番号】100111796
【弁理士】
【氏名又は名称】服部 博信
(74)【代理人】
【識別番号】100123766
【弁理士】
【氏名又は名称】松田 七重
(74)【代理人】
【識別番号】100136249
【弁理士】
【氏名又は名称】星野 貴光
(72)【発明者】
【氏名】ボラス レオナルド
(72)【発明者】
【氏名】グプタ パンカジ
(72)【発明者】
【氏名】ヘーラー シュテファン
(72)【発明者】
【氏名】ユングミヒェル シュテファニ
(72)【発明者】
【氏名】ライズナー クリスティアン
(72)【発明者】
【氏名】ラインドル ソフィーア
(72)【発明者】
【氏名】リヒレ フィリップ ローベルト
(72)【発明者】
【氏名】シャイフェレ ファビアン
(72)【発明者】
【氏名】ソビエライ アンナ
【テーマコード（参考）】
4B064
4B065
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B064AG26
4B064AG27
4B064CA19
4B064CC24
4B064CE10
4B064CE12
4B064DA01
4B065AA01X
4B065AA57X
4B065AA83X
4B065AA87X
4B065AA90X
4B065AA90Y
4B065AB01
4B065AC14
4B065BA02
4B065CA25
4B065CA44
4C085AA14
4C085BB31
4C085DD61
4C085EE01
4H045AA10
4H045AA11
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA10
4H045CA40
4H045DA75
4H045DA76
4H045EA20
4H045FA74
4H045GA21
4H045GA26
(57)【要約】
本発明は、補体Ｃ３を標的にする抗体及びその断片に関する。より具体的には、抗Ｃ３抗体及び種々の疾患又は障害の処置のための使用方法が開示される。
【選択図】なし
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
可変重鎖（ＶＨ）及び可変軽鎖（ＶＬ）を含む抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片であって、－ ＶＨが、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号２及び１５からなる群から選択されるＣＤＲ－Ｈ２配列、配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びに
－ ＶＬが、配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号５及び１８からなる群から選択されるＣＤＲ－Ｌ２配列、並びに配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、
抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
【請求項2】
－ ＶＨが、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＣＤＲ－Ｈ２配列及び配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにＶＬが配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＣＤＲ－Ｌ２配列及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、又は－ ＶＨが、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号１５のＣＤＲ－Ｈ２配列及び配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにＶＬが配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＣＤＲ－Ｌ２配列及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、又は
－ ＶＨが、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号１５のＣＤＲ－Ｈ２配列及び配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにＶＬが配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号１８のＣＤＲ－Ｌ２配列及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、又は
－ ＶＨが、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＣＤＲ－Ｈ２配列及び配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにＶＬが配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号１８のＣＤＲ－Ｌ２配列及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、
請求項１に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
【請求項3】
－ 配列番号２０、２２又は２４のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；及び－ 配列番号２１、２３又は２５のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、請求項１～２のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
【請求項4】
－ 配列番号２０、２２又は２４のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；及び－ 配列番号２１、２３又は２５のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含み、
－ ＶＨが、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号２及び１５からなる群から選択されるＣＤＲ－Ｈ２配列、配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びに
－ ＶＬが、配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号５及び１８からなる群から選択されるＣＤＲ－Ｌ２配列、並びに配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、
請求項１～２のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
【請求項5】
－ 配列番号２０、２２又は２４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；及び－ 配列番号２１、２３又は２５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、請求項１～４のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
【請求項6】
ａ．それぞれ配列番号２０及び配列番号２１のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び可変軽鎖；ｂ．それぞれ配列番号２２及び配列番号２３のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び可変軽鎖；又は
ｃ．それぞれ配列番号２４及び配列番号２５のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び可変軽鎖
を含む、請求項１～５のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
【請求項7】
抗原結合性断片が、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆｖ断片、ダイアボディ及び低分子抗体模倣物からなる群から選択される、請求項１～６のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
【請求項8】
前記抗原結合性断片が一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である、請求項１～７のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
【請求項9】
抗原結合性断片が、配列番号２６、２７、２８、２９、３０及び３１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む一本鎖断片である、請求項８に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
【請求項10】
配列番号４７に記載のヒト補体Ｃ３の残基３６６、３９２～３９６、４１３～４２１、４２５、４２７、４４２、４５３及び４７８からなる群から選択される少なくとも１個のアミノ酸残基に結合する抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
【請求項11】
配列番号４７に記載のヒト補体Ｃ３のアミノ酸残基３６６、３９２～３９６、４１３～４２１、４２５、４２７、４４２、４５３及び４７８の全てに結合する抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
【請求項12】
請求項１～９のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又は抗原結合性断片である、請求項１０又は１１に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
【請求項13】
古典経路（ＣＰ）、レクチン経路（ＬＰ）及び代替経路（ＡＰ）を含む補体活性化の経路を阻害し得る、請求項１～１２のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
【請求項14】
補体Ｃ３及びＣ３ｂに結合し得る、請求項１～１３のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
【請求項15】
Ｃ３転換酵素の形成を妨げ得る、請求項１～１４のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
【請求項16】
ブルッフ膜に浸透し得る、請求項１～１５のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
【請求項17】
ヒトＣ３に、ＫD＜５０ｎＭで、好ましくはＫD＜１５ｎＭで、好ましくはＫD＜１０ｎＭで、好ましくはＫD＜７ｎＭで、好ましくはＫD＜１ｎＭで、好ましくはＫD＜０．５ｎＭで、好ましくはＫD＜０．２ｎＭで、好ましくはＫD＜０．１５ｎＭで、好ましくはＫD＜０．１０ｎＭで、好ましくはＫD＜０．０５ｎＭで、好ましくはＫD＜０．０４ｎＭで、又はより好ましくはＫD＜０．０３ｎＭで結合する、請求項１～１６のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
【請求項18】
ヒトＣ３ｂに、ＫD＜５０ｎＭで、好ましくはＫD＜１５ｎＭで、好ましくはＫD＜１０ｎＭで、好ましくはＫD＜７ｎＭで、好ましくはＫD＜１ｎＭで、好ましくはＫD＜０．５ｎＭで、好ましくはＫD＜０．２ｎＭで、好ましくはＫD＜０．１５ｎＭで、好ましくはＫD＜０．１０ｎＭで、又はより好ましくはＫD＜０．０５ｎＭで結合する、請求項１～１７のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
【請求項19】
Ｃ３及びＣ３ｂに対するおよそ同等の結合親和性を有する、請求項１～１８のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
【請求項20】
Ｃ３ａ、ｉＣ３ｂ、Ｃ４、Ｃ４ｂ、Ｃ５及び／又はＣ５ｂに対する約１０-4Ｍ又はこれより弱い結合親和性を有する、請求項１～１９のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
【請求項21】
Ｃ３及びＣ３ｂに対する結合親和性と比較して、Ｃ３ａ、ｉＣ３ｂ、Ｃ４、Ｃ４ｂ、Ｃ５及び／又はＣ５ｂに対する弱い結合親和性を有する、請求項１～１９のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
【請求項22】
Ｃ３ａ、ｉＣ３ｂ、Ｃ４、Ｃ４ｂ、Ｃ５及び／又はＣ５ｂに対する結合親和性を有さない、請求項１～１９のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
【請求項23】
Ｃ３転換酵素増幅ループを阻害し得る、請求項１～１９のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
【請求項24】
脈絡膜Ｃ３活性を阻害し得る、請求項１～１９のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
【請求項25】
医薬として使用するための、請求項１～２４のいずれか１項に記載の抗体又は抗原結合性断片。
【請求項26】
医薬の製造に使用するための、請求項１～２４のいずれか１項に記載の抗体又は抗原結合性断片。
【請求項27】
眼科疾患又は眼疾患を処置するため、又は予防するために使用するための、請求項１～２４のいずれか１項に記載の抗体又は抗原結合性断片。
【請求項28】
眼科疾患又は眼疾患を処置するため、又は予防するための医薬の製造に使用するための、請求項１～２４のいずれか１項に記載の抗体又は抗原結合性断片。
【請求項29】
前記疾患が、網膜症、未熟児網膜症などの増殖性網膜症（ＰＲ）、虚血性網膜症、増殖性糖尿病性網膜症（ＰＤＲ）及び非増殖性糖尿病性網膜症を含む糖尿病性網膜症（ＤＲ）、糖尿病黄斑浮腫（ＤＭＥ）、糖尿病黄斑虚血（ＤＭＩ）、萎縮型ＡＭＤ及び滲出型ＡＭＤを含む加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）、地図状萎縮（ＧＡ）、網膜色素変性症、遺伝性網膜ジストロフィー、近視性変性、網膜静脈閉塞症、網膜動脈閉塞症、眼内炎、ブドウ膜炎、嚢胞様黄斑浮腫、任意の網膜疾患に続発する脈絡膜新生血管膜、視神経症、緑内障、網膜剥離、中毒性網膜症、放射線網膜症、外傷性網膜症、薬剤性網膜脈管障害、網膜血管新生、ポリープ状脈絡膜脈管障害、網膜血管炎、網膜毛細血管瘤、後水晶体線維増殖症、脈絡網膜炎、フックスジストロフィー、黄斑部毛細血管拡張症、アッシャー症候群、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）並びにシュタルガルト疾患からなる群から選択される、請求項２７又は２８に記載の使用のための抗体又は抗原結合性断片。
【請求項30】
前記眼科疾患又は眼疾患が、加齢性黄斑変性、地図状萎縮、血管新生緑内障及び糖尿病性網膜症からなる群から選択される、請求項２７～２９のいずれか１項に記載の使用のための抗体又は抗原結合性断片。
【請求項31】
前記眼科疾患又は眼疾患が地図状萎縮である、請求項２７～３０のいずれか１項に記載の使用のための抗体又は抗原結合性断片。
【請求項32】
補体古典経路（ＣＰ）、レクチン経路（ＬＰ）及び代替経路（ＡＰ）の活性を阻害することによって、又は脈絡膜局在化補体Ｃ３の活性を阻害することによって眼科疾患又は眼疾患を処置するために使用するための、請求項２７～３１のいずれか１項に記載の使用のための抗体又は抗原結合性断片。
【請求項33】
請求項１～２４のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を使用して、生物学的試料において補体Ｃ３と関連する障害を診断する方法。
【請求項34】
請求項１～２４のいずれか１項に記載の抗体又は抗原結合性断片及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項35】
請求項請求項１～２４のいずれか１項に記載の抗体又は抗原結合性断片をコードする１種又は複数種のポリヌクレオチド及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項36】
前記抗体又はその抗原結合性断片が、投与の非経口経路、静脈内経路、硝子体内経路又は皮下経路によって投与される、請求項１～２４のいずれかに記載の抗体若しくはその抗原結合性断片又は請求項３４に記載の医薬組成物。
【請求項37】
前記抗体又はその抗原結合性断片が硝子体内経路によって投与される、請求項１～２４のいずれかに記載の抗体若しくはその抗原結合性断片又は請求項３４に記載の医薬組成物。
【請求項38】
請求項１～２４のいずれか１項に記載の抗体又は抗原結合性断片をコードする、単離されたポリヌクレオチド又は複数のポリヌクレオチド。
【請求項39】
－ 配列番号２０、配列番号２２又は配列番号２４に記載の重鎖可変領域をコードする配列、及び－ 配列番号２１、配列番号２３又は配列番号２５に記載の軽鎖可変領域をコードする配列
を含む、請求項３８に記載の単離されたポリヌクレオチド又は複数のポリヌクレオチド。
【請求項40】
請求項３８又は３９に記載の単離されたポリヌクレオチド又は複数のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
【請求項41】
請求項３８若しくは３９に記載の単離されたポリヌクレオチド若しくは複数のポリヌクレオチド又は請求項４０に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
【請求項42】
ａ．請求項４１に記載の宿主細胞を得ること、及びｂ．宿主細胞を培養すること
を含む、抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を産生するための方法。
【請求項43】
抗体又はその抗原結合性断片を回収すること及び精製することをさらに含む、請求項４２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、補体Ｃ３を標的にする抗体及びその断片に一般に関する。より具体的には、抗Ｃ３抗体及びその抗原結合性断片並びに種々の疾患又は障害の処置のための使用方法が開示される。抗Ｃ３抗体を含む医薬組成物も開示される。
【背景技術】
【0002】
加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）は、２種の主なクラス、萎縮型ＡＭＤ及び滲出型ＡＭＤに一般に分類される。萎縮型ＡＭＤは、非滲出性ＡＭＤとしても公知であり、黄斑領域におけるドルーゼン（黄色沈着物）の存在によって特徴付けられる。滲出型ＡＭＤは、滲出性ＡＭＤ又は新生血管ＡＭＤとしても公知であり、黄斑の下の脈絡膜からの異常な血管の成長によって特徴付けられる。この過程は、脈絡膜血管新生とも呼ばれ、新たな血管は、網膜内及び周辺に血液などの体液を漏出する場合がある。
地図状萎縮（ＧＡ）は、萎縮性ＡＭＤ又は進行型萎縮型ＡＭＤとしても公知であり、黄斑における網膜色素上皮（ＲＰＥ）及び光受容体の減少によって特徴付けられるＡＭＤの進行型である。ＧＡが網膜中心窩に作用すると、不可逆的な視力低下が生じる。初期ステージのＧＡを有する患者は、視力が影響を受ける前に視覚機能の欠損を典型的には経験する。
地図状萎縮の根底にある病態生理は、完全には理解されていない；しかし、補体活性の調節不全が寄与要因であると考えられている。Ｃ３ａ、Ｃ５ａ、Ｃ５ｂ－９及び補体因子Ｈ（ＣＦＨ）が挙げられるいくつかの補体活性化産物は、対照と比較してＧＡ患者の硝子体試料、ブルッフ膜及び脈絡膜の他の部分におけるレベルの上昇を示した。加えて、ＣＤ５９などの補体インヒビター（膜侵襲複合体（ＭＡＣ）形成の膜結合インヒビター）及び膜補助因子タンパク質（ＭＣＰ）（補体Ｉ因子（ＣＦＩ）に対する補助因子活性を有する膜結合補体制御因子）は、ＧＡにおいてレベルの低下が報告された。
ＧＡの処置における１つの大きな課題は、補体活性の観察された調節不全が網膜の深い層において生じることである。現在、許容される有効性並びに患者の受容性及びコンプライアンスを伴うＧＡに対する適切な処置はない。
地図状萎縮などの眼科疾患又は眼疾患を効率的に処置する、及びかかる疾患を罹患している患者において視覚を回復させるか、又は視覚の低下を予防するための新規で改善された治療アプローチに対する満たされていないニーズがまだある。
地図状萎縮（ＧＡ）は、萎縮性ＡＭＤ又は進行型萎縮型ＡＭＤとしても公知であり、黄斑における網膜色素上皮（ＲＰＥ）及び光受容体の減少によって特徴付けられるＡＭＤの進行型である。ＧＡが網膜中心窩に作用すると、不可逆的な視力低下が生じる。初期ステージのＧＡを有する患者は、視力が影響を受ける前に視覚機能の欠損を典型的には経験する。
地図状萎縮の根底にある病態生理は、完全には理解されていない；しかし、補体活性の調節不全が寄与要因であると考えられている。Ｃ３ａ、Ｃ５ａ、Ｃ５ｂ－９及び補体因子Ｈ（ＣＦＨ）が挙げられるいくつかの補体活性化産物は、対照と比較してＧＡ患者の硝子体試料、ブルッフ膜及び脈絡膜の他の部分におけるレベルの上昇を示した。加えて、ＣＤ５９などの補体インヒビター（膜侵襲複合体（ＭＡＣ）形成の膜結合インヒビター）及び膜補助因子タンパク質（ＭＣＰ）（補体Ｉ因子（ＣＦＩ）に対する補助因子活性を有する膜結合補体制御因子）は、ＧＡにおいてレベルの低下が報告された。
ＧＡの処置における１つの大きな課題は、補体活性の観察された調節不全が網膜の深い層において生じることである。現在、許容される有効性並びに患者の受容性及びコンプライアンスを伴うＧＡに対する適切な処置はない。
地図状萎縮などの眼科疾患又は眼疾患を効率的に処置する、及びかかる疾患を罹患している患者において視覚を回復させるか、又は視覚の低下を予防するための新規で改善された治療アプローチに対する満たされていないニーズがまだある。
【発明の概要】
【0003】
生得的なヒトの系は、補体経路から構成される。補体経路は、自然免疫と獲得免疫とを橋渡しし；免疫複合体及び炎症性傷害の産生物を処分する、化膿性の細菌感染に対する防御として作用する。補体は、血漿及び細胞表面におけるカスケード反応に３０個を超えるタンパク質が関与する系である。補体系及びその補体成分は、種々の免疫過程に関与する。例えば、終末複合体又は膜侵襲複合体（ＭＡＣ）とも呼ばれる補体Ｃ５ｂ－９複合体は、膜透過性損傷を誘導することによって細胞死において重要な役割を果たす。
３種の公知の活性化経路：古典、レクチン及び代替経路がある。３種全ての経路は、Ｃ３転換酵素によるＣ３の切断及びＣ５転換酵素によるＣ５の続く切断をもたらし、Ｃ３ａ、Ｃ３ｂ、Ｃ５ａ及びＣ５ｂを放出する。
補体Ｃ３は、１３個の異なるドメインから構成され、分子サイズ１８５キロダルトンの大きなタンパク質である。補体活性化の際に、Ｃ３は、様々な部位でのタンパク質分解性切断及び構造的修飾を受ける。Ｃ３由来断片は、様々なエフェクター機能を発揮し、３種の補体経路への増幅ループを刺激する転換酵素を形成する。誤解をさけるために、他に示されない限り、本明細書で使用される場合、Ｃ３は、ＵｎｉＰｒｏｔ Ｐ０１０２４のヒトの補体成分３及びそのタンパク質をコードする核酸配列を指す。ヒト補体Ｃ３の配列は、配列番号４７に示され、ＵｎｉＰｒｏｔ Ｐ０１０２４においてオンラインで入手可能である。
３種の公知の活性化経路：古典、レクチン及び代替経路がある。３種全ての経路は、Ｃ３転換酵素によるＣ３の切断及びＣ５転換酵素によるＣ５の続く切断をもたらし、Ｃ３ａ、Ｃ３ｂ、Ｃ５ａ及びＣ５ｂを放出する。
補体Ｃ３は、１３個の異なるドメインから構成され、分子サイズ１８５キロダルトンの大きなタンパク質である。補体活性化の際に、Ｃ３は、様々な部位でのタンパク質分解性切断及び構造的修飾を受ける。Ｃ３由来断片は、様々なエフェクター機能を発揮し、３種の補体経路への増幅ループを刺激する転換酵素を形成する。誤解をさけるために、他に示されない限り、本明細書で使用される場合、Ｃ３は、ＵｎｉＰｒｏｔ Ｐ０１０２４のヒトの補体成分３及びそのタンパク質をコードする核酸配列を指す。ヒト補体Ｃ３の配列は、配列番号４７に示され、ＵｎｉＰｒｏｔ Ｐ０１０２４においてオンラインで入手可能である。
【0004】
Ｃ３ｂは、天然Ｃ３に由来し、Ｃ３の切断によって形成される２個の要素の大きい方である。
古典経路及びレクチン経路Ｃ３転換酵素、Ｃ４ｂＣ２ａは、完全長Ｃ３をＣ３ｂとアナフィラトキシンＣ３ａとに切断する。代替経路もＣ３ｂ及びＣ３ａを生成するが、代替経路Ｃ３転換酵素、Ｃ３ｂＢｂを利用する。さらに、追加的なＣ３分解産生物は、補体経路において生成され得る。補体Ｉ因子（ＣＦＩ）は、Ｃ３ｂをｉＣ３ｂに持続的に不活性化し得る血漿セリンプロテアーゼである。次いでｉＣ３ｂは、ＣＦＩによってさらなる断片（Ｃ３ｄｇ及びＣ３ｃ）に切断される。追加的Ｃ３タンパク質分解性産生物、Ｃ３ｄは、補体受容体２（ＣＲ２）に結合し、Ｂ細胞の細胞周期管理において重要な役割を果たし得る。Ｃ３由来タンパク質産生物と共に、補体経路としては、限定はしないが、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ４、Ｃ４ｂ、Ｃ４ａ、Ｃ５、Ｃ５ｂ、Ｃ５ａ、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９、Ｃ１ｑ、Ｃ１ｒ、Ｃ１ｓ、Ｂ因子、Ｄ因子、Ｐ因子、Ｈ因子、Ｉ因子、ＣＤ４６（ＭＣＰ）、ＣＤ５５（ＤＡＦ）、ＣＤ５９（ＭＡＣ－ＩＰ）、ＣＲ１（ＣＤ３５）、ＣＲ２（ＣＤ２１）、ＣＲ３、ＣＲ４、Ｃ３ａＲ、Ｃ５ａＲ１、Ｃ５ａＲ２、ＣＲＩｇ、Ｃ４ＢＰα鎖、Ｃ４ＢＰβ鎖、フィコリン－１、マンノース結合レクチン（ＭＢＬ）、ＭＢＬ関連セリンプロテアーゼ－１（ＭＡＳＰ－１）及びＭＢＬ関連セリンプロテアーゼ－２（ＭＡＳＰ－２）が挙げられる。補体経路及び種々の補体経路成分は、Noris et al. Semin Nephrol. 2013; 33(6): 479-492にさらに詳細に記載されている。
古典経路及びレクチン経路Ｃ３転換酵素、Ｃ４ｂＣ２ａは、完全長Ｃ３をＣ３ｂとアナフィラトキシンＣ３ａとに切断する。代替経路もＣ３ｂ及びＣ３ａを生成するが、代替経路Ｃ３転換酵素、Ｃ３ｂＢｂを利用する。さらに、追加的なＣ３分解産生物は、補体経路において生成され得る。補体Ｉ因子（ＣＦＩ）は、Ｃ３ｂをｉＣ３ｂに持続的に不活性化し得る血漿セリンプロテアーゼである。次いでｉＣ３ｂは、ＣＦＩによってさらなる断片（Ｃ３ｄｇ及びＣ３ｃ）に切断される。追加的Ｃ３タンパク質分解性産生物、Ｃ３ｄは、補体受容体２（ＣＲ２）に結合し、Ｂ細胞の細胞周期管理において重要な役割を果たし得る。Ｃ３由来タンパク質産生物と共に、補体経路としては、限定はしないが、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ４、Ｃ４ｂ、Ｃ４ａ、Ｃ５、Ｃ５ｂ、Ｃ５ａ、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９、Ｃ１ｑ、Ｃ１ｒ、Ｃ１ｓ、Ｂ因子、Ｄ因子、Ｐ因子、Ｈ因子、Ｉ因子、ＣＤ４６（ＭＣＰ）、ＣＤ５５（ＤＡＦ）、ＣＤ５９（ＭＡＣ－ＩＰ）、ＣＲ１（ＣＤ３５）、ＣＲ２（ＣＤ２１）、ＣＲ３、ＣＲ４、Ｃ３ａＲ、Ｃ５ａＲ１、Ｃ５ａＲ２、ＣＲＩｇ、Ｃ４ＢＰα鎖、Ｃ４ＢＰβ鎖、フィコリン－１、マンノース結合レクチン（ＭＢＬ）、ＭＢＬ関連セリンプロテアーゼ－１（ＭＡＳＰ－１）及びＭＢＬ関連セリンプロテアーゼ－２（ＭＡＳＰ－２）が挙げられる。補体経路及び種々の補体経路成分は、Noris et al. Semin Nephrol. 2013; 33(6): 479-492にさらに詳細に記載されている。
【0005】
近年の研究は、補体成分Ｃ３及びＣ５がＡＭＤを有する患者におけるドルーゼンの主な構成物であることを実証した。ドルーゼンを覆うＲＰＥ細胞におけるそれらの存在、並びに膜侵襲複合体（ＭＡＣ）Ｃ５ｂ－９及び他の急性期反応物タンパク質の存在は、補体活性化及びＭＡＣの形成を引き起こし得る過程に関与すると推測される。
ＧＡを罹患している患者において、脈絡膜及び網膜における補体系の増大し、制御されていない活性化が、脈絡毛細管の破壊、ＲＰＥ細胞及び光受容体の両方の損傷及び減少を生じることが示された。本発明者らは、網膜におけるＣ３の中和が代替補体経路の増幅ループを遮断し、それにより細胞毒性の膜侵襲複合体の生成及び炎症誘発性補体成分（Ｃ３ａ、Ｃ３ｂ、ｉＣ３ｂ、Ｃ５ａ）の生成を低減し、ＧＡを罹患している患者の臨床転帰を改善すると仮定し、例示する。
しかし、限定はしないが、ＲＰＥなどの血液網膜バリアーが挙げられるいくつかのバリアーのために眼への治療剤の送達が制限されていることから、眼科疾患又は眼疾患を処置することは特に困難である。ＲＰＥに浸透し、眼の脈絡膜に進入する能力は、薬物の治療可能性を増強する。
この臨床的状況に対処するために、本発明者らは、眼の脈絡膜領域のＲＰＥ及びブルッフ膜に浸透し得、それにより脈絡膜領域において補体Ｃ３を標的にし得る新規抗体及びその断片を開発した。本発明の抗体及びその断片は、眼科疾患又は眼疾患を罹患している患者の臨床転帰を改善する特性の増強を示す。
ＧＡを罹患している患者において、脈絡膜及び網膜における補体系の増大し、制御されていない活性化が、脈絡毛細管の破壊、ＲＰＥ細胞及び光受容体の両方の損傷及び減少を生じることが示された。本発明者らは、網膜におけるＣ３の中和が代替補体経路の増幅ループを遮断し、それにより細胞毒性の膜侵襲複合体の生成及び炎症誘発性補体成分（Ｃ３ａ、Ｃ３ｂ、ｉＣ３ｂ、Ｃ５ａ）の生成を低減し、ＧＡを罹患している患者の臨床転帰を改善すると仮定し、例示する。
しかし、限定はしないが、ＲＰＥなどの血液網膜バリアーが挙げられるいくつかのバリアーのために眼への治療剤の送達が制限されていることから、眼科疾患又は眼疾患を処置することは特に困難である。ＲＰＥに浸透し、眼の脈絡膜に進入する能力は、薬物の治療可能性を増強する。
この臨床的状況に対処するために、本発明者らは、眼の脈絡膜領域のＲＰＥ及びブルッフ膜に浸透し得、それにより脈絡膜領域において補体Ｃ３を標的にし得る新規抗体及びその断片を開発した。本発明の抗体及びその断片は、眼科疾患又は眼疾患を罹患している患者の臨床転帰を改善する特性の増強を示す。
【0006】
一態様では、本発明は、可変重鎖（ＶＨ）及び可変軽鎖（ＶＬ）を含む抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片であって、
－ ＶＨが、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号２及び１５からなる群から選択されるＣＤＲ－Ｈ２配列、配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びに
－ ＶＬが、配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号５及び１８からなる群から選択されるＣＤＲ－Ｌ２配列、並びに配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、
抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
一実施形態では、本発明は、
－ 配列番号２０、２２又は２４のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；及び
－ 配列番号２１、２３又は２５のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
－ ＶＨが、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号２及び１５からなる群から選択されるＣＤＲ－Ｈ２配列、配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びに
－ ＶＬが、配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号５及び１８からなる群から選択されるＣＤＲ－Ｌ２配列、並びに配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、
抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
一実施形態では、本発明は、
－ 配列番号２０、２２又は２４のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；及び
－ 配列番号２１、２３又は２５のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
【0007】
別の実施形態では、本発明は、
－ 配列番号２０、２２又は２４のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；及び
－ 配列番号２１、２３又は２５のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片であって、
－ ＶＨが、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号２及び１５からなる群から選択されるＣＤＲ－Ｈ２配列、配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びに
－ ＶＬが、配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号５及び１８からなる群から選択されるＣＤＲ－Ｌ２配列、並びに配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、
抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
－ 配列番号２０、２２又は２４のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；及び
－ 配列番号２１、２３又は２５のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片であって、
－ ＶＨが、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号２及び１５からなる群から選択されるＣＤＲ－Ｈ２配列、配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びに
－ ＶＬが、配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号５及び１８からなる群から選択されるＣＤＲ－Ｌ２配列、並びに配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、
抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
【0008】
別の実施形態では、本発明は、
－ 配列番号２０のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；及び
－ 配列番号２１のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片であって、
－ ＶＨが、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＣＤＲ－Ｈ２配列及び配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びに
－ ＶＬが、配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＣＤＲ－Ｌ２配列及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、
抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
－ 配列番号２０のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；及び
－ 配列番号２１のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片であって、
－ ＶＨが、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＣＤＲ－Ｈ２配列及び配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びに
－ ＶＬが、配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＣＤＲ－Ｌ２配列及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、
抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
【0009】
別の実施形態では、本発明は、
－ 配列番号２２のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；及び
－ 配列番号２３のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片であって、
－ ＶＨが、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号１５のＣＤＲ－Ｈ２配列及び配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにＶＬが、配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＣＤＲ－Ｌ２配列及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、
抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
別の実施形態では、本発明は、
－ 配列番号２４のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；及び
－ 配列番号２５のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片であって、
－ ＶＨが、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号１５のＣＤＲ－Ｈ２配列及び配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにＶＬが、配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号１８のＣＤＲ－Ｌ２配列及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、
抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
－ 配列番号２２のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；及び
－ 配列番号２３のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片であって、
－ ＶＨが、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号１５のＣＤＲ－Ｈ２配列及び配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにＶＬが、配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＣＤＲ－Ｌ２配列及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、
抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
別の実施形態では、本発明は、
－ 配列番号２４のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；及び
－ 配列番号２５のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片であって、
－ ＶＨが、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号１５のＣＤＲ－Ｈ２配列及び配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにＶＬが、配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号１８のＣＤＲ－Ｌ２配列及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、
抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
【0010】
一実施形態では、本発明は、配列番号２０、２２又は２４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；及び配列番号２１、２３又は２５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
さらなる実施形態では、本発明は、
ａ．それぞれ配列番号２０及び配列番号２１のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び可変軽鎖；
ｂ．それぞれ配列番号２２及び配列番号２３のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び可変軽鎖；又は
ｃ．それぞれ配列番号２４及び配列番号２５のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び可変軽鎖
を含む、抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
一実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆｖ断片、ダイアボディ、低分子抗体模倣物（small antibody mimetic）からなる群から選択される。
一実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、ポリペプチドリンカーによって連結されている可変重鎖及び可変軽鎖を含むか、又はそれからなる一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に、可変軽鎖、リンカー及び可変重鎖を含み得るか、又はそれからなり得る。ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に、可変重鎖、リンカー及び可変軽鎖を含み得るか、又はそれからなり得る。リンカーは、配列番号４３～４６及び５６～６５から選択された、好ましくは配列番号４６のポリペプチドを含み得る。
さらなる実施形態では、本発明は、
ａ．それぞれ配列番号２０及び配列番号２１のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び可変軽鎖；
ｂ．それぞれ配列番号２２及び配列番号２３のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び可変軽鎖；又は
ｃ．それぞれ配列番号２４及び配列番号２５のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び可変軽鎖
を含む、抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
一実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆｖ断片、ダイアボディ、低分子抗体模倣物（small antibody mimetic）からなる群から選択される。
一実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、ポリペプチドリンカーによって連結されている可変重鎖及び可変軽鎖を含むか、又はそれからなる一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に、可変軽鎖、リンカー及び可変重鎖を含み得るか、又はそれからなり得る。ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に、可変重鎖、リンカー及び可変軽鎖を含み得るか、又はそれからなり得る。リンカーは、配列番号４３～４６及び５６～６５から選択された、好ましくは配列番号４６のポリペプチドを含み得る。
【0011】
代替的実施形態では、抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、単一ドメイン抗体、例えばｓｄＡｂ、ｓｄＦｖ、ナノボディ、Ｖ－Ｎａｒ及びＶＨＨからなる群から選択される。この特定の実施形態では、前記抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は可変重鎖を含む。一実施形態では、前記可変重鎖は、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号２及び１５からなる群から選択されるＣＤＲ－Ｈ２配列、配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含む。別の実施形態では、前記可変重鎖は、配列番号２０、２２又は２４のアミノ酸配列を含む。
一実施形態では、前記抗原結合性断片は、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、より好ましくはヒト化ｓｃＦｖである。
さらなる実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号２６、２７、２８、２９、３０及び３１からなる群から選択される配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一性を有するポリペプチドを含む一本鎖可変断片である。
さらなる実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号２６、２７、２８、２９、３０及び３１からなる群から選択される１種の配列を含む一本鎖可変断片である。
一実施形態では、前記抗原結合性断片は、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、より好ましくはヒト化ｓｃＦｖである。
さらなる実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号２６、２７、２８、２９、３０及び３１からなる群から選択される配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一性を有するポリペプチドを含む一本鎖可変断片である。
さらなる実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号２６、２７、２８、２９、３０及び３１からなる群から選択される１種の配列を含む一本鎖可変断片である。
【0012】
さらなる実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号２６、２７、２８、２９、３０及び３１からなる群から選択される１種の配列からなる一本鎖可変断片である。
一実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、古典経路（ＣＰ）、レクチン経路（ＬＰ）及び代替経路（ＡＰ）を含む補体活性化の経路を阻害し得る。ある特定の実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、ＣＰ、ＬＰ及びＡＰ補体経路の活性をおよそ同等に阻害し得る。例えば、非限定的に、抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、ＣＰ経路の活性を少なくとも８０％阻害し得、ＬＰの活性を少なくとも８０％阻害し得、及びＡＰの活性を少なくとも８０％阻害し得る。ある特定の実施形態では、ＣＰ、ＬＰ及びＡＰ補体経路の活性の阻害は、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも約９０％又は少なくとも約９５％である。
一実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、補体Ｃ３及びＣ３ｂに結合し得る。
一実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、古典経路（ＣＰ）、レクチン経路（ＬＰ）及び代替経路（ＡＰ）を含む補体活性化の経路を阻害し得る。ある特定の実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、ＣＰ、ＬＰ及びＡＰ補体経路の活性をおよそ同等に阻害し得る。例えば、非限定的に、抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、ＣＰ経路の活性を少なくとも８０％阻害し得、ＬＰの活性を少なくとも８０％阻害し得、及びＡＰの活性を少なくとも８０％阻害し得る。ある特定の実施形態では、ＣＰ、ＬＰ及びＡＰ補体経路の活性の阻害は、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも約９０％又は少なくとも約９５％である。
一実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、補体Ｃ３及びＣ３ｂに結合し得る。
【0013】
一実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、Ｃ３転換酵素転換酵素の形成を妨げ得る。
一実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、ブルッフ膜に浸透し得る。
特定の実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、ヒトＣ３に、ＫD＜５０ｎＭで、好ましくはＫD＜１５ｎＭで、好ましくはＫD＜１０ｎＭで、好ましくはＫD＜７ｎＭで、好ましくはＫD＜１ｎＭで、好ましくはＫD＜０．５ｎＭで、好ましくはＫD＜０．２ｎＭで、好ましくはＫD＜０．１５ｎＭで、好ましくはＫD＜０．１０ｎＭで、好ましくはＫD＜０．０５ｎＭで、好ましくはＫD＜０．０４ｎＭで、より好ましくはＫD＜０．０３ｎＭで結合する。
別の実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、ヒトＣ３ｂに、ＫD＜５０ｎＭで、好ましくはＫD＜１５ｎＭで、好ましくはＫD＜１０ｎＭで、好ましくはＫD＜７ｎＭで、好ましくはＫD＜１ｎＭで、好ましくはＫD＜０．５ｎＭで、好ましくはＫD＜０．２ｎＭで、好ましくはＫD＜０．１５ｎＭで、好ましくはＫD＜０．１０ｎＭで、より好ましくはＫD＜０．０５ｎＭで結合する。
一実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、ブルッフ膜に浸透し得る。
特定の実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、ヒトＣ３に、ＫD＜５０ｎＭで、好ましくはＫD＜１５ｎＭで、好ましくはＫD＜１０ｎＭで、好ましくはＫD＜７ｎＭで、好ましくはＫD＜１ｎＭで、好ましくはＫD＜０．５ｎＭで、好ましくはＫD＜０．２ｎＭで、好ましくはＫD＜０．１５ｎＭで、好ましくはＫD＜０．１０ｎＭで、好ましくはＫD＜０．０５ｎＭで、好ましくはＫD＜０．０４ｎＭで、より好ましくはＫD＜０．０３ｎＭで結合する。
別の実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、ヒトＣ３ｂに、ＫD＜５０ｎＭで、好ましくはＫD＜１５ｎＭで、好ましくはＫD＜１０ｎＭで、好ましくはＫD＜７ｎＭで、好ましくはＫD＜１ｎＭで、好ましくはＫD＜０．５ｎＭで、好ましくはＫD＜０．２ｎＭで、好ましくはＫD＜０．１５ｎＭで、好ましくはＫD＜０．１０ｎＭで、より好ましくはＫD＜０．０５ｎＭで結合する。
【0014】
一実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、Ｃ３及びＣ３ｂに対するおよそ同等の結合親和性を有する。
一実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、Ｃ３ａ、ｉＣ３ｂ、Ｃ４、Ｃ４ｂ、Ｃ５及び／又はＣ５ｂに対する約１０-4Ｍ以下の（すなわち、弱い）結合親和性を有する。
さらなる実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、Ｃ３及びＣ３ｂに対する結合親和性と比較して、Ｃ３ａ、ｉＣ３ｂ、Ｃ４、Ｃ４ｂ、Ｃ５及び／又はＣ５ｂに対する弱い結合親和性を有する。
特定の実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、Ｃ３ａ、ｉＣ３ｂ、Ｃ４、Ｃ４ｂ、Ｃ５及び／又はＣ５ｂに対する結合親和性を有さない。本明細書で使用される場合、「結合親和性を有さない」は、限定はしないが、ＥＬＩＳＡアッセイなどの当技術分野において公知の１種又は複数種の結合親和性アッセイを用いて、バックグラウンドと比較して検出可能な結合親和性がないことを指す。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、Ｃ３転換酵素の形成を妨げる様式で補体Ｃ３に結合し得る。特定の実施形態では、本発明の抗体は、Ｃ３転換酵素の活性を阻害する。特定の実施形態では、本発明の抗体は、Ｃ３転換酵素増幅ループを阻害し得る。
一実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、Ｃ３ａ、ｉＣ３ｂ、Ｃ４、Ｃ４ｂ、Ｃ５及び／又はＣ５ｂに対する約１０-4Ｍ以下の（すなわち、弱い）結合親和性を有する。
さらなる実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、Ｃ３及びＣ３ｂに対する結合親和性と比較して、Ｃ３ａ、ｉＣ３ｂ、Ｃ４、Ｃ４ｂ、Ｃ５及び／又はＣ５ｂに対する弱い結合親和性を有する。
特定の実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、Ｃ３ａ、ｉＣ３ｂ、Ｃ４、Ｃ４ｂ、Ｃ５及び／又はＣ５ｂに対する結合親和性を有さない。本明細書で使用される場合、「結合親和性を有さない」は、限定はしないが、ＥＬＩＳＡアッセイなどの当技術分野において公知の１種又は複数種の結合親和性アッセイを用いて、バックグラウンドと比較して検出可能な結合親和性がないことを指す。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、Ｃ３転換酵素の形成を妨げる様式で補体Ｃ３に結合し得る。特定の実施形態では、本発明の抗体は、Ｃ３転換酵素の活性を阻害する。特定の実施形態では、本発明の抗体は、Ｃ３転換酵素増幅ループを阻害し得る。
【0015】
一実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、脈絡膜Ｃ３活性を阻害し得る。
ある特定の実施形態では、本発明の抗Ｃ３抗体は、以下に列挙する特性のために、他の治療と比較してＧＡ又は他の眼科疾患若しくは眼疾患を処置することにおいてさらに良好な有効性及び安全性を有すると期待される。
好ましい実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、補体Ｃ３上のエピトープに結合し得、かかる結合はＣ３転換酵素の形成を妨げる。
一実施形態では、本発明は、配列番号４７に記載のアミノ酸領域内の少なくとも１個のアミノ酸残基に結合する抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。好ましい実施形態では、本発明は、配列番号４８に記載のアミノ酸領域に結合する抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
一態様では、本発明は、配列番号４７に記載のヒト補体Ｃ３のアミノ酸３６６～アミノ酸４７８の残基内の少なくとも１個のアミノ酸残基に結合する抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
ある特定の実施形態では、本発明の抗Ｃ３抗体は、以下に列挙する特性のために、他の治療と比較してＧＡ又は他の眼科疾患若しくは眼疾患を処置することにおいてさらに良好な有効性及び安全性を有すると期待される。
好ましい実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、補体Ｃ３上のエピトープに結合し得、かかる結合はＣ３転換酵素の形成を妨げる。
一実施形態では、本発明は、配列番号４７に記載のアミノ酸領域内の少なくとも１個のアミノ酸残基に結合する抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。好ましい実施形態では、本発明は、配列番号４８に記載のアミノ酸領域に結合する抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
一態様では、本発明は、配列番号４７に記載のヒト補体Ｃ３のアミノ酸３６６～アミノ酸４７８の残基内の少なくとも１個のアミノ酸残基に結合する抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
【0016】
一実施形態では、本発明は、配列番号４７に記載のヒト補体Ｃ３の残基３６６、３９２～３９６、４１３～４２１、４２５、４２７、４４２、４５３及び４７８からなる群から選択される少なくとも１個のアミノ酸残基に結合する抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
一実施形態では、本発明は、配列番号４７に記載のヒト補体Ｃ３のアミノ酸残基３６６、３９２～３９６、４１３～４２１、４２５、４２７、４４２、４５３及び４７８の全てに結合する抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
一態様では本発明は、医薬として使用するための抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
一実施形態では、本発明は、網膜疾患又は眼科疾患の処置又は予防に使用するための抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。好ましくは、前記網膜疾患又は眼科疾患は、補体Ｃ３媒介疾患又は障害である。より好ましくは、前記疾患は、症状又は疾患の発症、進行又は持続がＣ３の関与を必要とするあらゆる障害を指す。
別の実施形態では、本発明は、それを必要とする患者に応じて抗体又は抗原結合性断片の薬学的有効量を投与することを含む、１種又は複数種の網膜疾患又は眼科疾患を処置するための方法に関する。
一実施形態では、本発明は、配列番号４７に記載のヒト補体Ｃ３のアミノ酸残基３６６、３９２～３９６、４１３～４２１、４２５、４２７、４４２、４５３及び４７８の全てに結合する抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
一態様では本発明は、医薬として使用するための抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
一実施形態では、本発明は、網膜疾患又は眼科疾患の処置又は予防に使用するための抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。好ましくは、前記網膜疾患又は眼科疾患は、補体Ｃ３媒介疾患又は障害である。より好ましくは、前記疾患は、症状又は疾患の発症、進行又は持続がＣ３の関与を必要とするあらゆる障害を指す。
別の実施形態では、本発明は、それを必要とする患者に応じて抗体又は抗原結合性断片の薬学的有効量を投与することを含む、１種又は複数種の網膜疾患又は眼科疾患を処置するための方法に関する。
【0017】
一態様では、本発明は、眼科疾患又は眼疾患を処置するため、又は予防するための医薬の製造のための前記抗Ｃ３抗体又は前記その抗原結合性断片の使用を提供する。
一態様では、本発明は、網膜症、未熟児網膜症などの増殖性網膜症（ＰＲ）、虚血性網膜症、増殖性糖尿病性網膜症（ＰＤＲ）及び非増殖性糖尿病性網膜症を含む糖尿病性網膜症（ＤＲ）、糖尿病黄斑浮腫（ＤＭＥ）、糖尿病黄斑虚血（ＤＭＩ）、萎縮型ＡＭＤ及び滲出型ＡＭＤを含む加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）、地図状萎縮（ＧＡ）、網膜色素変性症、遺伝性網膜ジストロフィー、近視性変性、網膜静脈閉塞症、網膜動脈閉塞症、眼内炎、ブドウ膜炎、嚢胞様黄斑浮腫、任意の網膜疾患に続発する脈絡膜新生血管膜、視神経症、緑内障、網膜剥離、中毒性網膜症、放射線網膜症、外傷性網膜症、薬剤性網膜脈管障害、網膜血管新生、ポリープ状脈絡膜脈管障害、網膜血管炎、網膜毛細血管瘤、後水晶体線維増殖症、脈絡網膜炎、フックスジストロフィー、黄斑部毛細血管拡張症、アッシャー症候群、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）並びにシュタルガルト疾患からなる群から選択される疾患の処置又は予防に使用するための抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
一態様では、本発明は、網膜症、未熟児網膜症などの増殖性網膜症（ＰＲ）、虚血性網膜症、増殖性糖尿病性網膜症（ＰＤＲ）及び非増殖性糖尿病性網膜症を含む糖尿病性網膜症（ＤＲ）、糖尿病黄斑浮腫（ＤＭＥ）、糖尿病黄斑虚血（ＤＭＩ）、萎縮型ＡＭＤ及び滲出型ＡＭＤを含む加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）、地図状萎縮（ＧＡ）、網膜色素変性症、遺伝性網膜ジストロフィー、近視性変性、網膜静脈閉塞症、網膜動脈閉塞症、眼内炎、ブドウ膜炎、嚢胞様黄斑浮腫、任意の網膜疾患に続発する脈絡膜新生血管膜、視神経症、緑内障、網膜剥離、中毒性網膜症、放射線網膜症、外傷性網膜症、薬剤性網膜脈管障害、網膜血管新生、ポリープ状脈絡膜脈管障害、網膜血管炎、網膜毛細血管瘤、後水晶体線維増殖症、脈絡網膜炎、フックスジストロフィー、黄斑部毛細血管拡張症、アッシャー症候群、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）並びにシュタルガルト疾患からなる群から選択される疾患の処置又は予防に使用するための抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
【0018】
別の実施形態では、本発明は、加齢性黄斑変性、地図状萎縮、血管新生緑内障及び糖尿病性網膜症からなる群から選択される疾患の処置又は予防に使用するための抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。さらに好ましい実施形態では、本発明は、地図状萎縮の処置又は予防に使用するための抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
一態様では、本発明の抗体は、補体古典経路（ＣＰ）、レクチン経路（ＬＰ）及び代替経路（ＡＰ）の活性を阻害する。それにより、本発明は、補体古典経路（ＣＰ）、レクチン経路（ＬＰ）及び代替経路（ＡＰ）の活性を阻害することによって眼科疾患又は眼疾患を処置する方法に使用するための抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。本発明は、脈絡膜局在性補体Ｃ３の活性を阻害することによって補体Ｃ３媒介疾患又は障害を処置する方法に使用するための、上に記載の抗原結合性タンパク質又はその断片も提供する。
一実施形態では、本発明は、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を使用して生物学的試料において補体Ｃ３と関連する障害を診断する方法を提供する。
一態様では、本発明は、抗Ｃ３抗体又は抗原結合性断片及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。
一態様では、本発明の抗体は、補体古典経路（ＣＰ）、レクチン経路（ＬＰ）及び代替経路（ＡＰ）の活性を阻害する。それにより、本発明は、補体古典経路（ＣＰ）、レクチン経路（ＬＰ）及び代替経路（ＡＰ）の活性を阻害することによって眼科疾患又は眼疾患を処置する方法に使用するための抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。本発明は、脈絡膜局在性補体Ｃ３の活性を阻害することによって補体Ｃ３媒介疾患又は障害を処置する方法に使用するための、上に記載の抗原結合性タンパク質又はその断片も提供する。
一実施形態では、本発明は、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を使用して生物学的試料において補体Ｃ３と関連する障害を診断する方法を提供する。
一態様では、本発明は、抗Ｃ３抗体又は抗原結合性断片及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。
【0019】
一実施形態では、本発明は、抗Ｃ３抗体若しくはその抗原結合性断片又は抗Ｃ３抗体若しくはその抗原結合性断片を含む医薬組成物であって、前記抗体又はその抗原結合性断片が、投与の非経口経路、静脈内経路、硝子体内経路（ＩＶＴ）又は皮下経路によって、好ましくは硝子体内経路によって投与される、抗Ｃ３抗体若しくはその抗原結合性断片又は抗Ｃ３抗体若しくはその抗原結合性断片を含む医薬組成物を提供する。
一実施形態では、本発明は、本発明による抗体又は抗原結合性断片をコードする１種又は複数種のポリヌクレオチド及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。
一実施形態では、本発明は、本発明による抗体又は抗原結合性断片をコードする単離されたポリヌクレオチド又は複数のポリヌクレオチドを提供する。
一態様では、本発明は、
－ 配列番号２０、配列番号２２若しくは配列番号２４に記載の重鎖可変領域をコードする配列、及び／又は
－ 配列番号２１、配列番号２３若しくは配列番号２５に記載の軽鎖可変領域をコードする配列
を含む、単離されたポリヌクレオチド又は複数のポリヌクレオチドを提供する。
一実施形態では、本発明は、本発明による抗体又は抗原結合性断片をコードする１種又は複数種のポリヌクレオチド及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。
一実施形態では、本発明は、本発明による抗体又は抗原結合性断片をコードする単離されたポリヌクレオチド又は複数のポリヌクレオチドを提供する。
一態様では、本発明は、
－ 配列番号２０、配列番号２２若しくは配列番号２４に記載の重鎖可変領域をコードする配列、及び／又は
－ 配列番号２１、配列番号２３若しくは配列番号２５に記載の軽鎖可変領域をコードする配列
を含む、単離されたポリヌクレオチド又は複数のポリヌクレオチドを提供する。
【0020】
一態様では、本発明は、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０又は配列番号３１に記載のｓｃＦｖをコードする配列を含む単離されたポリヌクレオチドを提供する。
一実施形態では、本発明は、配列番号２０、配列番号２２若しくは配列番号２４に記載の重鎖可変領域をコードする配列、及び／又は配列番号２１、配列番号２３若しくは配列番号２５に記載の軽鎖可変領域をコードする配列を含む単離されたポリヌクレオチド又は複数のポリヌクレオチドを含む発現ベクターを提供する。
一実施形態では、本発明は、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０又は配列番号３１に記載のｓｃＦｖをコードする配列を含む単離されたポリヌクレオチドを含む発現ベクターを提供する。
一実施形態では、本発明は、配列番号２０、配列番号２２若しくは配列番号２４に記載の重鎖可変領域をコードする配列、及び／又は配列番号２１、配列番号２３若しくは配列番号２５に記載の軽鎖可変領域をコードする配列を含む単離されたポリヌクレオチド又は複数のポリヌクレオチドを含むウイルスベクターを提供する。
一実施形態では、本発明は、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０又は配列番号３１に記載のｓｃＦｖをコードする配列を含む単離されたポリヌクレオチドを含むウイルスベクターを提供する。
一実施形態では、本発明は、配列番号２０、配列番号２２若しくは配列番号２４に記載の重鎖可変領域をコードする配列、及び／又は配列番号２１、配列番号２３若しくは配列番号２５に記載の軽鎖可変領域をコードする配列を含む単離されたポリヌクレオチド又は複数のポリヌクレオチドを含む発現ベクターを提供する。
一実施形態では、本発明は、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０又は配列番号３１に記載のｓｃＦｖをコードする配列を含む単離されたポリヌクレオチドを含む発現ベクターを提供する。
一実施形態では、本発明は、配列番号２０、配列番号２２若しくは配列番号２４に記載の重鎖可変領域をコードする配列、及び／又は配列番号２１、配列番号２３若しくは配列番号２５に記載の軽鎖可変領域をコードする配列を含む単離されたポリヌクレオチド又は複数のポリヌクレオチドを含むウイルスベクターを提供する。
一実施形態では、本発明は、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０又は配列番号３１に記載のｓｃＦｖをコードする配列を含む単離されたポリヌクレオチドを含むウイルスベクターを提供する。
【0021】
一実施形態では、本発明は、配列番号２０、配列番号２２若しくは配列番号２４に記載の重鎖可変領域をコードする配列、及び／又は配列番号２１、配列番号２３若しくは配列番号２５に記載の軽鎖可変領域をコードする配列を含む発現ベクター又は単離されたポリヌクレオチド若しくは複数のポリヌクレオチドを含む宿主細胞を提供する。
一実施形態では、本発明は、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０又は配列番号３１に記載のｓｃＦｖをコードする配列を含む発現ベクター又は単離されたポリヌクレオチドを含む宿主細胞を提供する。
一実施形態では、本発明は、配列番号２０、配列番号２２若しくは配列番号２４に記載の重鎖可変領域をコードする配列、及び／又は配列番号２１、配列番号２３若しくは配列番号２５に記載の軽鎖可変領域をコードする配列を含む発現ベクター又は単離されたポリヌクレオチド若しくは複数のポリヌクレオチドを含む宿主細胞を得ること；並びに宿主細胞を培養することを含む、抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を産生するための方法を提供する。
一実施形態では、本発明は、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０又は配列番号３１に記載のｓｃＦｖをコードする配列を含む発現ベクター又は単離されたポリヌクレオチドを含む宿主細胞を提供する。
一実施形態では、本発明は、配列番号２０、配列番号２２若しくは配列番号２４に記載の重鎖可変領域をコードする配列、及び／又は配列番号２１、配列番号２３若しくは配列番号２５に記載の軽鎖可変領域をコードする配列を含む発現ベクター又は単離されたポリヌクレオチド若しくは複数のポリヌクレオチドを含む宿主細胞を得ること；並びに宿主細胞を培養することを含む、抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を産生するための方法を提供する。
【0022】
一実施形態では、本発明は、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０又は配列番号３１に記載のｓｃＦｖをコードする配列を含む発現ベクター又は単離されたポリヌクレオチドを含む宿主細胞を得ることを含む抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片産生するための方法を提供する。
一実施形態では、抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片産生するための方法は、抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を回収すること及び精製することをさらに含む。
一実施形態では、抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片産生するための方法は、抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を回収すること及び精製することをさらに含む。
【図面の簡単な説明】
【0023】
【図1】カニクイザルにおいてｓｃＦｖを用いた等モルのＩＶＴ注射後の良好な網膜浸透を示す図である。図１Ａは、ｓｃＦｖ硝子体内注射（４０ｎｍｏｌ ｓｃＦｖ、ブロルシズマブ、１ｍｇ）の網膜曝露レベルを示す。データ出典、ブロルシズマブＢＬＡ。図１Ｂは、Ｆａｂ硝子体内注射（４０ｎＭｏｌ Ｆａｂ、ラニビズマブ、２ｍｇ）の網膜曝露レベルを示す。データ出典：Invest Ophthalmol Vis Sci. 2005 Feb;46(2):726-33。
【図2】クローンＩのヒト補体Ｃ３への結合を例示する図である。図２Ａは、配列番号４７に記載のＣ３配列の一部である配列番号５５を示し、エピトープ残基は太字、下線付きである。図２Ｂは、Ｃ３ｃ：クローンＩ複合体のＥＭ構造を示し、Ｃ３ｃ構造は灰色で、ｓｃＦｖ構造は黒色リボン表示でそれぞれ示されている。最終的なＥＭマップは、０．２１４のコンターレベル（ｃｏｎｔｏｕｒ ｌｅｖｅｌ）で半透明の表面として示される。
【図3】ブタブルッフ膜を通じたクローンＩ及び比較化合物Ａ２のｉｎ ｖｉｔｒｏ拡散を示す図である。拡散は、ウッシングチャンバーにおいて７２時間にわたって測定され、ブルッフ膜を通じて拡散した化合物量は、化合物総量（試料チャンバー及び拡散チャンバー）と比較した拡散チャンバー中で測定された化合物として示される。化合物総量は、１００％に設定された。
【図4】ブタブルッフ膜を通じた比較化合物Ａ３及び比較化合物Ａ２のｉｎ ｖｉｔｒｏ拡散を示す図である。拡散は、ウッシングチャンバーにおいて７２時間にわたって測定され、ブルッフ膜を通じて拡散した化合物量は、化合物総量（試料チャンバー及び拡散チャンバー）と比較した拡散チャンバー中で測定された化合物として示される。化合物総量は、１００％に設定された。
【発明を実施するための形態】
【0024】
定義
抗体又は免疫グロブリンの一般的な構造は当業者に周知であり、これらの分子は、２つの同一の軽（Ｌ）鎖及び２つの同一の重（Ｈ）鎖からなる、典型的には約１５万ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。各軽鎖は、１つのジスルフィド結合によって重鎖に共有結合してヘテロ二量体を形成しており、このヘテロ二量体の２つの同一の重鎖の間の共有結合によるジスルフィド結合を介して、ヘテロ三量体分子が形成されている。軽鎖及び重鎖は１つのジスルフィド結合によって共に連結されているが、２つの重鎖の間のジスルフィド結合の数は、免疫グロブリンのアイソタイプによって変化する。各重鎖及び軽鎖はまた、一定間隔の鎖内ジスルフィド架橋を有する。各重鎖はアミノ末端に、可変ドメイン（ＶH＝重鎖可変領域）と、それに続く３つ又は４つの定常ドメイン（ＣH1、ＣH2、ＣH3、及びＣH4）、並びにＣH1とＣH2との間のヒンジ領域を有する。各軽鎖は、２つのドメイン、すなわち、アミノ末端の可変ドメイン（ＶL＝軽鎖可変領域）及びカルボキシ末端の定常ドメイン（ＣL）を有する。ＶLドメインはＶHドメインと非共有結合によって結びついており、一方、ＣLドメインは通常、ジスルフィド結合を介してＣH1ドメインに共有結合している。特定のアミノ酸残基が軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインとの間の境界面を形成していると考えられている（Chothia et al., 1985, J. Mol. Biol. 186：651-663）
抗体又は免疫グロブリンの一般的な構造は当業者に周知であり、これらの分子は、２つの同一の軽（Ｌ）鎖及び２つの同一の重（Ｈ）鎖からなる、典型的には約１５万ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。各軽鎖は、１つのジスルフィド結合によって重鎖に共有結合してヘテロ二量体を形成しており、このヘテロ二量体の２つの同一の重鎖の間の共有結合によるジスルフィド結合を介して、ヘテロ三量体分子が形成されている。軽鎖及び重鎖は１つのジスルフィド結合によって共に連結されているが、２つの重鎖の間のジスルフィド結合の数は、免疫グロブリンのアイソタイプによって変化する。各重鎖及び軽鎖はまた、一定間隔の鎖内ジスルフィド架橋を有する。各重鎖はアミノ末端に、可変ドメイン（ＶH＝重鎖可変領域）と、それに続く３つ又は４つの定常ドメイン（ＣH1、ＣH2、ＣH3、及びＣH4）、並びにＣH1とＣH2との間のヒンジ領域を有する。各軽鎖は、２つのドメイン、すなわち、アミノ末端の可変ドメイン（ＶL＝軽鎖可変領域）及びカルボキシ末端の定常ドメイン（ＣL）を有する。ＶLドメインはＶHドメインと非共有結合によって結びついており、一方、ＣLドメインは通常、ジスルフィド結合を介してＣH1ドメインに共有結合している。特定のアミノ酸残基が軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインとの間の境界面を形成していると考えられている（Chothia et al., 1985, J. Mol. Biol. 186：651-663）
【0025】
可変ドメイン内のある特定のドメインは、異なる抗体の間で大きく異なり、すなわち「超可変」である。これら超可変ドメインは、それぞれの特定の抗体の、その特異的抗原決定基に対する結合及び特異性に直接関与する残基を有している。軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインの両方における超可変性は、相補性決定領域（ＣＤＲ）又は超可変ループ（ＨＶＬ）として知られている３つのセグメントに集中している。ＣＤＲは、Kabat et al., 1991, In： Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.における配列の比較によって定義され、一方、ＨＶＬは、Chothia and Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196： 901-917によって記載されている可変ドメインの三次元構造に従って、構造的に定義される。
所与のＣＤＲ又はＦＲの正確なアミノ酸配列境界は、追加的命名法、例えば、Honegger A and Pluckthun A, “Yet another numbering scheme for immunoglobulin variable domains: an automatic modeling and analysis tool,” J Mol Biol, 2001 Jun. 8; 309(3):657-70に記載のＡｈｏ番号付けスキーム又はLefranc M P et al., “IMGT unique numbering for immunoglobulin and T cell receptor variable domains and Ig superfamily V-like domains,” Dev Comp Immunol, 2003 January; 27(1):55-77に記載の「ＩＭＧＴ」番号付けスキーム）を使用してさらに決定され得る。
所与のＣＤＲ又はＦＲの正確なアミノ酸配列境界は、追加的命名法、例えば、Honegger A and Pluckthun A, “Yet another numbering scheme for immunoglobulin variable domains: an automatic modeling and analysis tool,” J Mol Biol, 2001 Jun. 8; 309(3):657-70に記載のＡｈｏ番号付けスキーム又はLefranc M P et al., “IMGT unique numbering for immunoglobulin and T cell receptor variable domains and Ig superfamily V-like domains,” Dev Comp Immunol, 2003 January; 27(1):55-77に記載の「ＩＭＧＴ」番号付けスキーム）を使用してさらに決定され得る。
【0026】
重鎖及び軽鎖のそれぞれにおける３つのＣＤＲは、フレームワーク領域（ＦＲ）によって隔てられており、このフレームワーク領域が有する配列は、あまり可変的でない傾向にある。重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインのアミノ末端からカルボキシ末端まで、ＦＲ及びＣＤＲは、以下の順序で並んでいる：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４。ＦＲの、大部分がβ－シートの立体構造は、鎖のそれぞれにおけるＣＤＲを、互いに、また他の鎖のＣＤＲに接近させる。それによって得られた立体構造は抗原結合部位に関与するが（Kabat et al., 1991, NIH Publ. No. 91-3242, Vol. I, pages 647-669を参照されたい）、全てのＣＤＲ残基が必ずしも抗原の結合に直接関与するわけではない。
ＦＲ残基及びＩｇ定常ドメインは、抗原の結合に寄与し得、及び／又は抗体のエフェクター機能を媒介し得る。一部のＦＲ残基は、エピトープに直接的に非共有結合すること、１つ又は複数のＣＤＲ残基と相互作用すること、及び重鎖と軽鎖との間の境界面に影響することの、少なくとも３つの方法によって、抗原の結合に大きな影響を与えると考えられている。定常ドメインは、抗原の結合に直接は関与しないが、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）及び抗体依存性細胞ファゴサイトーシス（ＡＤＣＰ）における抗体の関与などの、様々なＩｇエフェクター機能を媒介する。
ＦＲ残基及びＩｇ定常ドメインは、抗原の結合に寄与し得、及び／又は抗体のエフェクター機能を媒介し得る。一部のＦＲ残基は、エピトープに直接的に非共有結合すること、１つ又は複数のＣＤＲ残基と相互作用すること、及び重鎖と軽鎖との間の境界面に影響することの、少なくとも３つの方法によって、抗原の結合に大きな影響を与えると考えられている。定常ドメインは、抗原の結合に直接は関与しないが、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）及び抗体依存性細胞ファゴサイトーシス（ＡＤＣＰ）における抗体の関与などの、様々なＩｇエフェクター機能を媒介する。
【0027】
脊椎動物の免疫グロブリンの軽鎖は、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、２つの明らかに区別されるクラス、すなわちカッパ（κ）及びラムダ（λ）のうちの１種に割り当てられる。比較することによって、哺乳動物の免疫グロブリンの重鎖は、定常ドメインの配列に従って、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭという５つの主要なクラスのうちの１種に割り当てられる。ＩｇＧ及びＩｇＡは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ1、ＩｇＧ2、ＩｇＧ3、ＩｇＧ4、ＩｇＡ1、及びＩｇＡ2に、それぞれさらに分けられる。異なるクラスの免疫グロブリンに対応する重鎖定常ドメインは、α、δ、ε、γ、及びμとそれぞれ呼ばれる。ネイティブな免疫グロブリンのクラスのサブユニット構造及び三次元立体配置は周知である。
用語「抗体」、「抗Ｃ３抗体」、「ヒト化抗Ｃ３抗体」及び「バリアントヒト化抗Ｃ３抗体」は、本明細書において最も広い意味で使用され、具体的には、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、多重特異的抗体（例えば二重特異的抗体）、並びに、所望の生物活性、例えばＣ３への結合を示す、可変ドメイン及び他の抗体部分などの抗体断片を包含する。
用語「抗体」、「抗Ｃ３抗体」、「ヒト化抗Ｃ３抗体」及び「バリアントヒト化抗Ｃ３抗体」は、本明細書において最も広い意味で使用され、具体的には、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、多重特異的抗体（例えば二重特異的抗体）、並びに、所望の生物活性、例えばＣ３への結合を示す、可変ドメイン及び他の抗体部分などの抗体断片を包含する。
【0028】
用語「モノクローナル抗体」（ｍＡｂ）は、実質的に均質な抗体の集団の抗体を指す。すなわち、その集団における個々の抗体は、わずかな量で存在し得る天然に存在する突然変異を除いて、同一である。モノクローナル抗体は非常に特異的であり、単一の抗原決定基「エピトープ」に対して向けられている。したがって、修飾語「モノクローナル」は、同一のエピトープに対して向けられている抗体の実質的に均質な集団を示しており、任意の特定の方法による抗体の産生を要すると解釈されるものではない。モノクローナル抗体が、例えば、ハイブリドーマ法（Kohler et al., 1975, Nature 256:495）、又は当技術分野において公知の組換えＤＮＡ法（例えば米国特許第４，８１６，５６７号を参照されたい）、又はClackson et al., 1991, Nature 352: 624-628、及びMarks et al., 1991, J. Mol. Biol. 222: 581-597において記載されている技術を使用するファージ抗体ライブラリーを使用して組換えによって産生されたモノクローナルの単離方法を含む、当技術分野において公知の任意の技術又は方法論によって作製され得ることが理解されるべきである。
【0029】
キメラ抗体は、１つの種（例えば、マウスなどの非ヒト哺乳動物）に由来する抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域、並びに別の種（例えばヒト）の抗体の重鎖定常領域及び軽鎖定常領域からなり、また、第１の種（例えばマウス）に由来する抗体の可変領域をコードするＤＮＡ配列を、第２の種（例えばヒト）に由来する抗体の定常領域のＤＮＡ配列に連結し、連結した配列を有する発現ベクターで宿主を形質転換して、宿主がキメラ抗体を産生できるようにすることによって得ることができる。或いは、キメラ抗体はまた、重鎖及び／又は軽鎖の１つ又は複数の領域又はドメインが、別の免疫グロブリンクラス若しくはアイソタイプ由来の又はコンセンサス配列若しくは生殖細胞配列由来のモノクローナル抗体における対応する配列と同一である、前記配列に相同である、又は前記配列のバリアントである、抗体であり得る。キメラ抗体には、このような抗体の断片がその親抗体の所望の生物活性、例えば、同一のエピトープへの結合を示す場合に限り、当該抗体断片が含まれ得る（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号、及びMorrison et al., 1984, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 6851-6855を参照されたい）。
【0030】
用語「抗体断片」、「抗原結合性断片」、「抗Ｃ３抗体断片」、「ヒト化抗Ｃ３抗体断片」、「バリアントヒト化抗Ｃ３抗体断片」は、可変領域又は機能的能力、例えば特異的なＣ３エピトープ結合が保持されている、完全長抗Ｃ３抗体の一部分を指す。抗体断片又は抗原結合性断片の例としては、限定はしないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）2、Ｆｄ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ及びｓｃＦｖ－Ｆｃ断片、ダイアボディ、直鎖状抗体、一本鎖抗体、ミニボディ、抗体断片から形成されたダイアボディ、単一ドメイン抗体（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｄＦｖ、ナノボディ、ＶＨＨ）断片並びに抗体断片から形成された多重特異的抗体が含まれる。
完全長抗体は、パパイン又はペプシンなどの酵素で処理して、有用な抗体断片を生成させることができる。パパイン消化を使用すると、それぞれが単一の抗原結合部位を有する「Ｆａｂ」断片と呼ばれる２つの同一の抗原結合抗体断片、及び残りの「Ｆｃ」断片が生じる。Ｆａｂ断片はまた、軽鎖の定常ドメイン及び重鎖のＣH1ドメインを有する。ペプシン処理では、２つの抗原結合部位を有し、かつ依然として抗原を架橋し得る、Ｆ（ａｂ’）2断片が得られる。
完全長抗体は、パパイン又はペプシンなどの酵素で処理して、有用な抗体断片を生成させることができる。パパイン消化を使用すると、それぞれが単一の抗原結合部位を有する「Ｆａｂ」断片と呼ばれる２つの同一の抗原結合抗体断片、及び残りの「Ｆｃ」断片が生じる。Ｆａｂ断片はまた、軽鎖の定常ドメイン及び重鎖のＣH1ドメインを有する。ペプシン処理では、２つの抗原結合部位を有し、かつ依然として抗原を架橋し得る、Ｆ（ａｂ’）2断片が得られる。
【0031】
Ｆａｂ’断片は、ＣH1ドメインのＣ末端にある抗体ヒンジ領域の１つ又は複数のシステインを含むさらなる残基の存在によって、Ｆａｂ断片と異なる。Ｆ（ａｂ’）2抗体断片は、ヒンジ領域内のシステイン残基によって連結されているＦａｂ’断片の対である。抗体断片の他の化学結合もまた公知である。
「Ｆｖ」断片は、固い非共有結合で結びついた１つの重鎖可変ドメイン及び１つの軽鎖可変ドメインの二量体からなる、完全な抗原認識及び結合部位を有する。この立体構造において、各可変ドメインの３つのＣＤＲは相互作用して、ＶH－ＶL二量体の表面上に抗原結合部位を規定する。集合的に、６つのＣＤＲは、抗原結合特異性を抗体に付与する。
「一本鎖Ｆｖ」又は「ｓｃＦｖ」抗体断片は、抗体のＶHドメイン及びＶLドメインを含む一本鎖Ｆｖバリアントであり、ここでこれらドメインは、単一のポリペプチド鎖に存在する。一本鎖Ｆｖは抗原を認識し得、これを結合し得る。ｓｃＦｖポリペプチドは、ｓｃＦｖによる抗原結合のための所望の三次元構造の形成を容易にするための、ＶHドメインとＶLドメインとの間に位置するポリペプチドリンカーも必要に応じて有し得る（例えば、Pluckthun, 1994, In The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, Vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315を参照されたい）。かかるリンカーとしては、限定はしないが、反復ＧＧＧＧＳアミノ酸配列（配列番号４３）又はそのバリアントが含まれる。かかるｓｃＦｖ分子は、一般構造：ＮＨ２－ＶＬ－リンカー－ＶＨ－ＣＯＯＨ又はＮＨ２－ＶＨ－リンカー－ＶＬ－ＣＯＯＨを有し得る。ｓｃＦｖは、抗体定常ドメイン領域を一般に含まないが、本発明のｓｃＦｖは、限定はしないが、血清又は組織半減期の増大が挙げられるｓｃＦｖの種々の特性を変更するために抗体定常ドメイン領域（例えば、抗体Ｆｃドメイン）に連結又は付着され得る。ｓｃＦｖは、約２５ｋＤａの分子量及び約２．５ｎＭの流体力学的半径（ｈｙｄｒｏｄｙｎａｍｉｃ ｒａｄｉｕｓ）を一般に有する。
「Ｆｖ」断片は、固い非共有結合で結びついた１つの重鎖可変ドメイン及び１つの軽鎖可変ドメインの二量体からなる、完全な抗原認識及び結合部位を有する。この立体構造において、各可変ドメインの３つのＣＤＲは相互作用して、ＶH－ＶL二量体の表面上に抗原結合部位を規定する。集合的に、６つのＣＤＲは、抗原結合特異性を抗体に付与する。
「一本鎖Ｆｖ」又は「ｓｃＦｖ」抗体断片は、抗体のＶHドメイン及びＶLドメインを含む一本鎖Ｆｖバリアントであり、ここでこれらドメインは、単一のポリペプチド鎖に存在する。一本鎖Ｆｖは抗原を認識し得、これを結合し得る。ｓｃＦｖポリペプチドは、ｓｃＦｖによる抗原結合のための所望の三次元構造の形成を容易にするための、ＶHドメインとＶLドメインとの間に位置するポリペプチドリンカーも必要に応じて有し得る（例えば、Pluckthun, 1994, In The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, Vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315を参照されたい）。かかるリンカーとしては、限定はしないが、反復ＧＧＧＧＳアミノ酸配列（配列番号４３）又はそのバリアントが含まれる。かかるｓｃＦｖ分子は、一般構造：ＮＨ２－ＶＬ－リンカー－ＶＨ－ＣＯＯＨ又はＮＨ２－ＶＨ－リンカー－ＶＬ－ＣＯＯＨを有し得る。ｓｃＦｖは、抗体定常ドメイン領域を一般に含まないが、本発明のｓｃＦｖは、限定はしないが、血清又は組織半減期の増大が挙げられるｓｃＦｖの種々の特性を変更するために抗体定常ドメイン領域（例えば、抗体Ｆｃドメイン）に連結又は付着され得る。ｓｃＦｖは、約２５ｋＤａの分子量及び約２．５ｎＭの流体力学的半径（ｈｙｄｒｏｄｙｎａｍｉｃ ｒａｄｉｕｓ）を一般に有する。
【0032】
一実施形態では、本発明の抗体及び抗体断片は、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）又はＦａｂ断片である。ｓｃＦｖ抗体のケースでは、選択されたＶＬドメインは、選択されたＶＨドメインに可動性リンカーによっていずれかの方向で連結され得る。本明細書において想定される可動性リンカーは、長さ少なくとも１アミノ酸のペプチド又はポリペプチドリンカーである。好ましくはリンカーは、長さ１～１００アミノ酸である。より好ましくはリンカーは、長さ５～５０アミノ酸、より好ましくは長さ１０～４０アミノ酸であり、さらにより好ましくはリンカーは、長さ１５～３０アミノ酸である。しばしば使用される低分子リンカーの非限定的例としては、ＧＳミニリンカーと呼ばれるグリシン及びセリンアミノ酸の配列が挙げられる。リンカー配列の好ましい例は、（ｇｌｙ4ｓｅｒ）3（配列番号４５）、（ｇｌｙ4ｓｅｒ）4（配列番号４６）、（ｇｌｙ4ｓｅｒ）（配列番号４４）、（ｇｌｙ3ｓｅｒ）（配列番号５６）、ｇｌｙ3及び（ｇｌｙ3ｓｅｒ2）3（配列番号６５）が挙げられる（ｇｌｙxｓｅｒy）zリンカーなどの様々な長さのＧｌｙ／Ｓｅｒリンカーである。これらのリンカー中のアミノ酸の数は、変動する場合があり、例えば、それらは、４（例えば、ＧＧＧＳ）（配列番号５６）、６（例えば、ＧＧＳＧＧＳ）（配列番号５７）、７（例えば、ＧＧＧＳＧＧＳ）（配列番号５８）又はこれらの倍数、例えば、これら４、６若しくは７アミノ酸の２回又は３回以上の反復などであり得る。一実施形態では、本発明の抗体は、配列番号４３（ＧＧＧＧＳ）、配列番号４４（ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ）、配列番号４５（ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ）及び配列番号４６（ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ）に記載の配列からなる群から選択されるリンカーを含む。特定の実施形態では、前記リンカーは、配列番号４６である。前記リンカーは、Holliger et al. (1993), Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448に記載のバリアントでもあり得る。本発明のために使用され得る他のリンカーは、Alfthan et al. (1995)、Protein Eng. 8:725-731、Choi et al. (2001), Eur. J. Immunol. 31:94-106、Hu et al. (1996), Cancer Res. 56:3055-3061、Kipriyanov et al. (1999), J. Mol. Biol. 293:41-56及びRoovers et al. (2001), Cancer Immunol. Immunother. 50:51-59によって記載されている。リンカーのさらなる例としては、以下の：７ＧＳリンカー：ＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号５９）；８ＧＳリンカー：９ＧＳリンカー：ＧＧＧＧＳＧＧＧＳ（配列番号６０）；１８ＧＳリンカー：ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＧＧＧＳ（配列番号６１）；２５ＧＳリンカー：ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号６２）；３０ＧＳリンカー：ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号６３）；及び３５ＧＳリンカー：ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号６４）が挙げられる。
【0033】
本開示によるｓｃＦｖにおいて、ＶＬ及びＶＨの配置は、ＶＬ－リンカー－ＶＨ又はＶＨ－リンカー－ＶＬのいずれであってもよく、前者の方向が好ましいものである。しかし、単一ＶＨ又はＶＬドメイン抗体も検討される。Ｆａｂ断片のケースでは、選択された軽鎖可変ドメインＶＬは、ヒトＩｇカッパ鎖の定常領域に融合され、一方、好適な重鎖可変ドメインＶＨは、ヒトＩｇＧの第１の（Ｎ末端）定常ドメインＣＨ１に融合される。定常ドメインのＣ末端で、又は可変ドメイン若しくは定常ドメインの他の部位で、鎖間ジスルフィド架橋が形成されてもよい。
本明細書で使用される場合、「ＶＨＨ」、「ナノボディ」又は「重鎖抗体」は、ラクダ、ラマ、アルパカを含むラクダ科の種由来の単一の重鎖可変ドメインを含む抗原結合性タンパク質である。ＶＨＨは、約１５ｋＤａの分子量を一般に有する。
他の認識される抗体断片としては、抗原結合領域対を形成するためのタンデムＦｄセグメント（ＶH－ＣH1－ＶH－ＣH1）の対を含むものが含まれる。これら「直鎖状抗体」は、例えばZapata et al. 1995, Protein Eng. 8(10):1057-1062において記載されているように、二重特異的又は単一特異的であり得る。
ヒト化抗体又はヒト化抗体断片は、特定のタイプのキメラ抗体であるが、これには、所定の抗原に結合し得、かつ、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を実質的に有している１つ又は複数のＦＲ、及び非ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を実質的に有している１つ又は複数のＣＤＲを含む免疫グロブリンアミノ酸配列バリアント又はこの断片が含まれる。「移入」配列としばしば呼ばれるこの非ヒトアミノ酸配列は、典型的には、「移入」抗体ドメイン、特に可変ドメインに由来する。通常、ヒト化抗体は、ヒト重鎖又は軽鎖の可変ドメインのＦＲの間に挿入されている、非ヒト抗体の少なくともＣＤＲ又はＨＶＬを含む。
本明細書で使用される場合、「ＶＨＨ」、「ナノボディ」又は「重鎖抗体」は、ラクダ、ラマ、アルパカを含むラクダ科の種由来の単一の重鎖可変ドメインを含む抗原結合性タンパク質である。ＶＨＨは、約１５ｋＤａの分子量を一般に有する。
他の認識される抗体断片としては、抗原結合領域対を形成するためのタンデムＦｄセグメント（ＶH－ＣH1－ＶH－ＣH1）の対を含むものが含まれる。これら「直鎖状抗体」は、例えばZapata et al. 1995, Protein Eng. 8(10):1057-1062において記載されているように、二重特異的又は単一特異的であり得る。
ヒト化抗体又はヒト化抗体断片は、特定のタイプのキメラ抗体であるが、これには、所定の抗原に結合し得、かつ、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を実質的に有している１つ又は複数のＦＲ、及び非ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を実質的に有している１つ又は複数のＣＤＲを含む免疫グロブリンアミノ酸配列バリアント又はこの断片が含まれる。「移入」配列としばしば呼ばれるこの非ヒトアミノ酸配列は、典型的には、「移入」抗体ドメイン、特に可変ドメインに由来する。通常、ヒト化抗体は、ヒト重鎖又は軽鎖の可変ドメインのＦＲの間に挿入されている、非ヒト抗体の少なくともＣＤＲ又はＨＶＬを含む。
【0034】
本発明は、マウス、ウサギ、ラマ又はキメラ抗体に由来し、ヒト生殖細胞系配列重鎖及び軽鎖可変ドメインのＦＲの間に挿入されたＣＤＲを含有する特定のヒト化抗Ｃ３抗体を記載する。ある特定の非ヒトＦＲ残基（例えば、マウス、ウサギ、ラマ又はキメラ抗体など由来）が、ヒト化抗体の機能に重要である場合があり、それによりある特定のヒト生殖細胞系配列重鎖及び軽鎖可変ドメイン残基が、対応する非ヒト配列のものと同じであるように改変されることは理解される。
本明細書で使用される場合、「本発明の抗体」及び「本発明の抗Ｃ３抗体」という表現は、本明細書において記載されるＣ３に対して向けられた抗体又はその抗原結合性断片を指す。一実施形態では、本発明の前記抗体はｓｃＦｖである。具体的な実施形態では、本発明の抗体は、可変重鎖（ＶＨ）及び可変軽鎖（ＶＬ）を含み、ここでＶＨは、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号２及び１５からなる群から選択されるＣＤＲ－Ｈ２配列、配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにここでＶＬは、配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号５及び１８からなる群から選択されるＣＤＲ－Ｌ２配列、並びに配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む。
本明細書で使用される場合、「本発明の抗体」及び「本発明の抗Ｃ３抗体」という表現は、本明細書において記載されるＣ３に対して向けられた抗体又はその抗原結合性断片を指す。一実施形態では、本発明の前記抗体はｓｃＦｖである。具体的な実施形態では、本発明の抗体は、可変重鎖（ＶＨ）及び可変軽鎖（ＶＬ）を含み、ここでＶＨは、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号２及び１５からなる群から選択されるＣＤＲ－Ｈ２配列、配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにここでＶＬは、配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号５及び１８からなる群から選択されるＣＤＲ－Ｌ２配列、並びに配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む。
【0035】
一実施形態では、本発明は、ヒト化抗Ｃ３抗体又はその断片に関する。ヒト化抗体は、ＣＤＲの全て又はほぼ全てが非ヒト免疫グロブリンのＣＤＲに対応する、少なくとも１つ、及び典型的には２つの可変ドメイン（例えばＦａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆａｂｃ断片、及びＦｖ断片に含まれている）のほぼ全てを含み、また、本明細書において具体的には、ＣＤＲは、ウサギ由来のものであり、ＦＲは、ヒト免疫グロブリンのコンセンサス配列又は生殖細胞系配列のＦＲである。別の態様では、ヒト化抗Ｃ３抗体はまた、免疫グロブリンＦｃ領域の、典型的にはヒト免疫グロブリンのＦｃ領域の、少なくとも一部分を含む。通常、抗体は、軽鎖と、重鎖の少なくとも可変ドメインとの両方を有する。抗体はまた、必要に応じて、重鎖のＣH1領域、ヒンジ領域、ＣH2領域、ＣH3領域、及び／又はＣH4領域の１つ又は複数を含み得る。
ヒト化抗Ｃ３抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＥを含む免疫グロブリンのあらゆるクラス、並びにＩｇＧ1、ＩｇＧ2、ＩｇＧ3、ＩｇＧ4、ＩｇＡ1、及びＩｇＡ2を含むあらゆるアイソタイプから選択され得る。例えば、定常ドメインは、ヒト化抗体が細胞傷害活性を示すことが望ましい場合には補体固定定常ドメインであり得、アイソタイプは典型的にはＩｇＧ1である。このような細胞傷害活性が望ましくない場合には、定常ドメインは、別のアイソタイプ、例えばＩｇＧ2のもの又は細胞傷害活性を欠いている、例えば、突然変異Ｎ２９７Ａ又はＬ２３４ＡをＬ２３５Ａと共に含有する改変ＩｇＧ１配列であり得る。代替的なヒト化抗Ｃ３抗体は、２つ以上の免疫グロブリンクラス又はアイソタイプに由来する配列を含み得、所望のエフェクター機能を最適化するための特定の定常ドメインの選択は、当技術分野における通常の技術の範囲内である。具体的な実施形態では、本発明は、ＩｇＧ１抗体、より詳細にはエフェクター機能の低減によって特徴付けられるＩｇＧ１抗体である抗体を提供する。
ヒト化抗Ｃ３抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＥを含む免疫グロブリンのあらゆるクラス、並びにＩｇＧ1、ＩｇＧ2、ＩｇＧ3、ＩｇＧ4、ＩｇＡ1、及びＩｇＡ2を含むあらゆるアイソタイプから選択され得る。例えば、定常ドメインは、ヒト化抗体が細胞傷害活性を示すことが望ましい場合には補体固定定常ドメインであり得、アイソタイプは典型的にはＩｇＧ1である。このような細胞傷害活性が望ましくない場合には、定常ドメインは、別のアイソタイプ、例えばＩｇＧ2のもの又は細胞傷害活性を欠いている、例えば、突然変異Ｎ２９７Ａ又はＬ２３４ＡをＬ２３５Ａと共に含有する改変ＩｇＧ１配列であり得る。代替的なヒト化抗Ｃ３抗体は、２つ以上の免疫グロブリンクラス又はアイソタイプに由来する配列を含み得、所望のエフェクター機能を最適化するための特定の定常ドメインの選択は、当技術分野における通常の技術の範囲内である。具体的な実施形態では、本発明は、ＩｇＧ１抗体、より詳細にはエフェクター機能の低減によって特徴付けられるＩｇＧ１抗体である抗体を提供する。
【0036】
ヒト化抗Ｃ３抗体又はｓｃＦｖを含むその断片のＦＲ及びＣＤＲ、又はＨＶＬは、親配列に正確に対応する必要はない。例えば、移入ＣＤＲ若しくはＨＶＬ、又はコンセンサス若しくは生殖細胞系ＦＲ配列における１つ又は複数の残基は、その結果生じるアミノ酸残基がいずれかの親配列における対応する位置にあるオリジナルの残基ともはや同一ではないが、それでも抗体がＣ３への結合機能を保持しているような、置換、挿入、又は欠失によって、改変されていてよい（例えば、突然変異生成されていてよい）。このような改変は、典型的には、大きいものではなく、保存的な改変である。通常、ヒト化抗体残基の少なくとも７５％が、より頻繁には少なくとも９０％、及び最も頻繁には９５％超、又は９８％超、又は９９％超が、親コンセンサス又は生殖細胞系ＦＲ及び移入ＣＤＲ配列の残基に対応する。
【0037】
用語「コンセンサス配列」及び「コンセンサス抗体」は、あらゆる特定のクラス、アイソタイプ、又はサブユニット構造の全ての免疫グロブリンにおける各位置の、例えばヒト免疫グロブリン可変ドメインの、最も頻繁に生じているアミノ酸残基を含むアミノ酸配列を指す。コンセンサス配列は、特定の種又は多くの種の免疫グロブリンに基づき得る。「コンセンサス」配列、構造、又は抗体は、ある特定の実施形態で記載されているようなコンセンサスヒト配列を包含すること、及び、あらゆる特定のクラス、アイソタイプ、又はサブユニット構造の全てのヒト免疫グロブリンにおける各位置の最も頻繁に生じているアミノ酸残基を含むアミノ酸配列を指すことが理解される。したがって、コンセンサス配列は、各位置で、１つ又は複数の既知の免疫グロブリンに存在するアミノ酸を有するアミノ酸配列を有するが、任意の単一の免疫グロブリンのアミノ酸配列全体を正確に複製したものでなくてもよい。可変領域のコンセンサス配列は、いかなる天然に産生される抗体又は免疫グロブリンからも得られない。Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.。重鎖及び軽鎖のコンセンサス配列のＦＲ、並びにこれらのバリアントは、ヒト化抗Ｃ３抗体の調製に有用な配列を提供する。例えば、米国特許第６，０３７，４５４号及び米国特許第６，０５４，２９７号を参照されたい。
【0038】
ヒト生殖細胞系配列は、ヒト集団において天然に見られる。ヒト生殖細胞系配列は、可変（Ｖ）、多様性（Ｄ）及び連結（Ｊ）遺伝子セグメントによってコードされる抗体タンパク質分子に対応し、これらは再編成され、組換え遺伝子を形成する。ＶＤＪ組換えは、生殖細胞系レパートリーとして公知の、多いが究極的には有限の数の未変異抗体タンパク質の生成をもたらす。これら生殖細胞系遺伝子の組合せによって、抗体の多様性が生じる。抗体の軽鎖のための生殖細胞系抗体配列は、保存されたヒト生殖細胞系カッパ又はラムダｖ遺伝子及びｊ遺伝子に由来する。同様に、重鎖配列は、生殖細胞系ｖ遺伝子、ｄ遺伝子、及びｊ遺伝子に由来する（LeFranc, M-P, and LeFranc, G, “The Immunoglobulin Facts Book” Academic Press, 2001）。
「単離された」抗体は、その天然の環境の成分から同定され、分離され、かつ／又は回収されている抗体である。抗体の天然環境の夾雑成分は、抗体の診断的使用又は治療的使用に干渉し得る夾雑物質であり、酵素、ホルモン、又は他のタンパク質性若しくは非タンパク質性の溶質であり得る。一態様では、抗体は、抗体重量あたり少なくとも９５％を超える単離まで精製される。
「単離された」抗体は、その天然の環境の成分から同定され、分離され、かつ／又は回収されている抗体である。抗体の天然環境の夾雑成分は、抗体の診断的使用又は治療的使用に干渉し得る夾雑物質であり、酵素、ホルモン、又は他のタンパク質性若しくは非タンパク質性の溶質であり得る。一態様では、抗体は、抗体重量あたり少なくとも９５％を超える単離まで精製される。
【0039】
用語「抗体の性能」は、ｉｎ ｖｉｖｏでの抗体の抗原認識又は抗体の有効性に寄与する因子／特性を指す。好ましい実施形態では、それは、網膜細胞において細胞骨格の崩壊を妨げる抗体の能力を指す。抗体のアミノ酸配列における変化は、フォールディングなどの抗体の特性に影響し得、また、抗原への最初の抗体結合率（ｋa）、抗原からの抗体の解離定数（ｋd）、抗原に対する抗体の親和定数（Ｋd）、抗体の立体構造、タンパク質の安定性、及び抗体の半減期などの物理的因子に影響し得る。本明細書で使用される場合、用語「親和性」は、抗体の抗原結合部位とそれが結合するエピトープとの間の相互作用の強度を指す。当業者によって容易に理解される通り、抗体又は抗原結合性タンパク質親和性は、モル濃度（Ｍ）での解離定数（ＫD）として報告され得る。特定の抗原決定基に結合する抗原結合ドメインの能力は、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）又は当業者によく知られている他の技術、例えば２５℃で実施される表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術（ＢＩＡｃｏｒｅ装置で分析される）（Liljeblad et al., Glyco J 17, 323-329 (2000)）及び伝統的結合アッセイ（Heeley, Endocr Res 28, 217-229 (2002)）などを通じて測定され得る。
【0040】
本明細書で使用される場合、２つの以上の核酸又はポリペプチド配列の文脈における用語「同一」又は「パーセント同一性」は、最大の対応となるように比較及びアラインした場合に同一の、又は特定のパーセンテージの同一ヌクレオチド若しくは同一アミノ酸残基を有する、２つの以上の配列又は部分配列を指す。パーセント同一性を決定するために、配列は、最適な比較を目的としてアラインされる（例えば、第２のアミノ酸配列又は核酸配列との最適なアラインメントのために、ギャップを、第１のアミノ酸配列又は核酸配列の配列に導入することができる）。対応するアミノ酸位置又はヌクレオチド位置にあるアミノ酸残基又はヌクレオチドが次いで比較される。第１の配列内の位置に、第２の配列における対応する位置と同一のアミノ酸残基又はヌクレオチドが存在する場合は、分子はその位置で同一である。２つの配列間のパーセント同一性は、配列が共有する同一の位置の数の関数である（すなわち、同一性％＝同一の位置の数／位置の総数（例えば、オーバーラップしている位置）×１００）。一部の実施形態では、比較される２つの配列は、任意に必要に応じてギャップを配列内に導入した後に、同一の長さである（例えば、比較対象の配列を超えて延びている追加の配列は排除する）。例えば、可変領域配列を比較する場合、リーダー配列及び／又は定常ドメイン配列は考慮されない。２つの配列間での配列比較では、「対応する」ＣＤＲは、両配列における同一の位置にあるＣＤＲ（例えば、各配列のＣＤＲ－Ｈ１）を指す。
【0041】
２つの配列間の同一性パーセント又は類似性パーセントの決定は、数学的アルゴリズムを使用して行うことができる。２つの配列の比較に利用される数学的アルゴリズムの好ましい非限定的な例は、Karlin and Altschul, 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5877におけるように修正された、Karlin and Altschul, 1990, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2264-2268のアルゴリズムである。このようなアルゴリズムは、Altschul et al., 1990, J. Mol. Biol. 215:403-410のＮＢＬＡＳＴプログラム及びＸＢＬＡＳＴプログラムに組み込まれている。目的のタンパク質をコードする核酸に相同なヌクレオチド配列を得るために、ｓｃｏｒｅ＝１００、ｗｏｒｄｌｅｎｇｔｈ＝１２でＮＢＬＡＳＴプログラムを用いて、ＢＬＡＳＴヌクレオチドサーチを行うことができる。目的のタンパク質に相同なアミノ酸配列を得るために、ｓｃｏｒｅ＝５０、ｗｏｒｄｌｅｎｇｔｈ＝３でＸＢＬＡＳＴプログラムを用いて、ＢＬＡＳＴタンパク質サーチを行うことができる。比較目的のためにギャップ化されたアラインメントを得るために、Altschul et al., 1997, Nucleic Acids Res. 25:3389-3402において記載されているように、Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴを利用することができる。或いは、ＰＳＩ－Ｂｌａｓｔを使用して、分子間の遠位の関係を検出する反復サーチを行うことができる（Ｉｄ．）。ＢＬＡＳＴプログラム、Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴプログラム、及びＰＳＩ－Ｂｌａｓｔプログラムを利用する場合、それぞれのプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴ及びＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトパラメーターを使用することができる。配列の比較に利用される数学的アルゴリズムの別の好ましい非限定的な例は、Myers and Miller, CABIOS (1989)のアルゴリズムである。このようなアルゴリズムは、ＧＣＧ配列アラインメントソフトウェアパッケージの一部であるＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれている。アミノ酸配列の比較のためにＡＬＩＧＮプログラムを利用する場合、ＰＡＭ１２０重み付け残基表、ギャップ長ペナルティ１２、及びギャップペナルティ４を使用することができる。配列分析のためのさらなるアルゴリズムが当技術分野において公知であり、これとしては、Torellis and Robotti, 1994, Comput. Appl. Biosci. 10:3-5において記載されているＡＤＶＡＮＣＥ及びＡＤＡＭ、並びにPearson and Lipman, 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:2444-8において記載されているＦＡＳＴＡが含まれる。ＦＡＳＴＡ内で、ｋｔｕｐは、サーチの感度及び速度を設定する制御オプションである。ｋｔｕｐ＝２であれば、比較対象の２つの配列における類似の領域が、アラインされた残基の対を見ることによって発見され、ｋｔｕｐ＝１であれば、１回アラインされたアミノ酸が調べられる。ｋｔｕｐは、タンパク質配列では２若しくは１に、又はＤＮＡ配列では１～６に設定することができる。ｋｔｕｐが特定されていない場合のデフォルトは、タンパク質では２であり、ＤＮＡでは６である。或いは、タンパク質配列のアラインメントは、Higgins et al., 1996, Methods Enzymol. 266:383-402によって記載されているような、ＣＬＵＳＴＡＬ Ｗアルゴリズムを使用して行ってよい。
【0042】
本明細書で使用される場合、「細胞」、「細胞系」、及び「細胞培養物」という表現は区別せずに使用され、全てのこのような指定はこれらの子孫を含む。したがって、「形質転換体」及び「形質転換細胞」は、初代対象細胞、及び移入の数に関わらずこれらに由来する培養物を含む。
処置目的での用語「哺乳動物」は、ヒト、飼育された動物及び家畜、並びに動物園、スポーツ、又はペットのための動物、例えば、イヌ、ウマ、ネコ、ウシ、及びそれに類するものを含む、哺乳動物として分類される任意の動物を指す。好ましくは、哺乳動物はヒトである。
処置目的での用語「哺乳動物」は、ヒト、飼育された動物及び家畜、並びに動物園、スポーツ、又はペットのための動物、例えば、イヌ、ウマ、ネコ、ウシ、及びそれに類するものを含む、哺乳動物として分類される任意の動物を指す。好ましくは、哺乳動物はヒトである。
【0043】
「疾患」又は「障害」は、本明細書で使用される場合、本明細書において記載されるヒト化抗Ｃ３抗体での処置の利益を受けるあらゆる状態である。これには、哺乳動物を問題の障害にさせる病理学的状態を含む、慢性及び急性の障害又は疾患が含まれる。
用語「硝子体内注射」は、当技術分野におけるその通常の意味を有し、抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を患者の硝子体に導入することを指す。
用語「皮下投与」は、薬物容器からの比較的ゆっくりとした、持続した送達によって、動物又はヒト患者の皮膚の下に、好ましくは皮膚と下層組織との間のポケット内に、抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を導入することを指す。皮膚をつまみ上げるか又は引っ張り上げ、下層組織から離すことによって、ポケットを作ることができる。
用語「硝子体内注射」は、当技術分野におけるその通常の意味を有し、抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を患者の硝子体に導入することを指す。
用語「皮下投与」は、薬物容器からの比較的ゆっくりとした、持続した送達によって、動物又はヒト患者の皮膚の下に、好ましくは皮膚と下層組織との間のポケット内に、抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を導入することを指す。皮膚をつまみ上げるか又は引っ張り上げ、下層組織から離すことによって、ポケットを作ることができる。
【0044】
用語「皮下注入」は、薬物容器からの比較的ゆっくりとした、持続した送達によって、限定はしないが３０分以下又は９０分以下を含む一定期間にわたり、動物又はヒト患者の皮膚の下に、好ましくは皮膚と下層組織との間のポケット内に、薬物を導入することを指す。必要に応じて、注入は、動物又はヒト患者の皮膚の下に移植された薬物送達ポンプの皮下移植によって行ってもよく、ここでポンプは、所定の量の薬物を所定の時間にわたり、例えば３０分間、９０分間、又は処置レジメンの長さにわたる時間にわたり、送達する。
用語「皮下ボーラス」は、動物又はヒト患者の皮膚の下への薬物投与を指し、ここで、ボーラス薬物送達はおよそ１５分間未満であり、別の態様では５分未満、さらに別の態様では６０秒未満である。またさらに別の態様では、投与は皮膚と下層組織との間のポケット内で行われ、ここで、ポケットは、皮膚をつまみ上げるか又は引っ張り上げ、下層組織から離すことによって作ることができる。
用語「皮下ボーラス」は、動物又はヒト患者の皮膚の下への薬物投与を指し、ここで、ボーラス薬物送達はおよそ１５分間未満であり、別の態様では５分未満、さらに別の態様では６０秒未満である。またさらに別の態様では、投与は皮膚と下層組織との間のポケット内で行われ、ここで、ポケットは、皮膚をつまみ上げるか又は引っ張り上げ、下層組織から離すことによって作ることができる。
【0045】
用語「治療有効量」は、処置対象の障害の症候の１つ又は複数を緩和又は改善する抗Ｃ３抗体又はこの抗原結合性断片の量を指すために使用される。緩和又は改善を行うに当たり、治療有効量は、患者の有利な転帰をもたらす量である。有効性は、処置対象の状態に応じて、従来の方法で測定することができる。例えば、Ｃ３を発現する細胞によって特徴付けられる眼科疾患又は眼疾患では、有効性は、奏功率、例えば視覚の回復を決定することによって、又は疾患進行までの遅延時間を評価することによって、測定することができる。
用語「処置」及び「治療」及びそれに類するものは、本明細書で使用される場合、限定はしないが１つ又は複数の症候の軽減又は緩和、逆行、疾患又は障害の進行の遅延又は停止を含む、あらゆる臨床的に望ましい又は有益な効果をもたらす、疾患又は障害のための治療的及び予防的又は抑制的対策を含むことを意味する。したがって、例えば、処置という用語は、疾患又は障害の症候が始まる前又は始まった後に抗Ｃ３抗体又はこの抗原結合性断片を投与し、これによって、疾患又は障害の１つ又は複数の徴候を予防又は除去することを含む。別の例として、この用語は、疾患の臨床的兆候の後に抗Ｃ３抗体又はこの抗原結合性断片を投与して、疾患の症候と戦うことを含む。さらに、発症後及び臨床的症候が現れた後の、抗Ｃ３抗体又はこの抗原結合性断片の投与は、この投与が疾患又は障害の臨床的パラメーターに影響する場合、処置が疾患の改善をもたらしてももたらさなくても、本明細書で使用される「処置」又は「治療」を含む。さらに、単独の又は別の治療剤と組み合わせた本発明の組成物が、処置対象の障害の少なくとも１種の症候を、抗Ｃ３抗体組成物又はこの抗原結合性断片の使用の非存在下でのその症候と比較して軽減する又は改善する限りにおいて、結果は、障害の全ての症候が軽減されてもされなくても、根底にある障害の効果的な処置であると見なされるべきである。
用語「処置」及び「治療」及びそれに類するものは、本明細書で使用される場合、限定はしないが１つ又は複数の症候の軽減又は緩和、逆行、疾患又は障害の進行の遅延又は停止を含む、あらゆる臨床的に望ましい又は有益な効果をもたらす、疾患又は障害のための治療的及び予防的又は抑制的対策を含むことを意味する。したがって、例えば、処置という用語は、疾患又は障害の症候が始まる前又は始まった後に抗Ｃ３抗体又はこの抗原結合性断片を投与し、これによって、疾患又は障害の１つ又は複数の徴候を予防又は除去することを含む。別の例として、この用語は、疾患の臨床的兆候の後に抗Ｃ３抗体又はこの抗原結合性断片を投与して、疾患の症候と戦うことを含む。さらに、発症後及び臨床的症候が現れた後の、抗Ｃ３抗体又はこの抗原結合性断片の投与は、この投与が疾患又は障害の臨床的パラメーターに影響する場合、処置が疾患の改善をもたらしてももたらさなくても、本明細書で使用される「処置」又は「治療」を含む。さらに、単独の又は別の治療剤と組み合わせた本発明の組成物が、処置対象の障害の少なくとも１種の症候を、抗Ｃ３抗体組成物又はこの抗原結合性断片の使用の非存在下でのその症候と比較して軽減する又は改善する限りにおいて、結果は、障害の全ての症候が軽減されてもされなくても、根底にある障害の効果的な処置であると見なされるべきである。
【0046】
用語「包装挿入物」は、適応症、使用方法、投与方法、禁忌、及び／又はこのような治療薬の使用に関する警告についての情報を有する、治療薬のコマーシャルパッケージに慣例的に含まれる使用説明書を指すために使用される。
本発明の抗体
一実施形態では、本発明は、抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片に関する。特定の実施形態では、本発明は、ヒト化抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。さらなる実施形態では、本発明は、ヒト化モノクローナル抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
本発明の抗体
一実施形態では、本発明は、抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片に関する。特定の実施形態では、本発明は、ヒト化抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。さらなる実施形態では、本発明は、ヒト化モノクローナル抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
【0047】
最初の特徴付けにおいて、Ｃ３を標的にする抗体、特にＣ３を標的にするｓｃＦｖのライブラリーが、生成された。本発明者らは、実施例４に例示される通り、これらのｓｃＦｖをヒト化及び最適化した。本発明者らは、親和性を改善し、ヒト抗体において稀にしか存在しないアミノ酸を最適化するために、様々な変更を用いるＣＤＲ及びＦＲのさらなる操作にさらに進んだ。多様で徹底的な最適化ステップを通じて、本発明者らは、非常に有望な治療用分子、特に、本明細書で開示されるように特性が増強されたＣ３に対して向けられたヒト化ｓｃＦｖを開発した。
【0048】
本発明の抗体のＣＤＲの配列は、下の表１に示される。表１は、Ｋａｂａｔ命名法によるＣＤＲを示す。
一実施形態では、本発明は、可変重鎖（ＶＨ）及び可変軽鎖（ＶＬ）を含む抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片であって、
－ ＶＨが、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号２及び１５からなる群から選択されるＣＤＲ－Ｈ２配列、配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びに
－ ＶＬが、配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号５及び１８からなる群から選択されるＣＤＲ－Ｌ２配列、並びに配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、
抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
【表1】
一実施形態では、本発明は、可変重鎖（ＶＨ）及び可変軽鎖（ＶＬ）を含む抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片であって、
－ ＶＨが、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号２及び１５からなる群から選択されるＣＤＲ－Ｈ２配列、配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びに
－ ＶＬが、配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号５及び１８からなる群から選択されるＣＤＲ－Ｌ２配列、並びに配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、
抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
【0049】
特定の実施形態では、本発明は、可変重鎖（ＶＨ）及び可変軽鎖（ＶＬ）を含む抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片であって、ＶＨが、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列又は配列番号１のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％若しくは少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列、配列番号２若しくは１５のＣＤＲ－Ｈ２配列又はアミノ酸配列である配列番号２若しくは１５に少なくとも８０％、少なくとも９０％若しくは少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列、及び／或いは配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列又は配列番号３のアミノ酸配列に少なくとも８０％若しくは少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み；並びに／或いは、ＶＬが、配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列又は配列番号４のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％若しくは少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列、配列番号５若しくは１８のＣＤＲ－Ｌ２配列又は配列番号５若しくは１８のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％若しくは少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列、及び／或いは配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列又は配列番号６のアミノ酸配列に少なくとも８０％若しくは少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む、抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
【0050】
特定の実施形態では、本発明は、抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片であって、
－ ＶＨが、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＣＤＲ－Ｈ２配列及び配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにＶＬが配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＣＤＲ－Ｌ２配列及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、又は
－ ＶＨが、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号１５のＣＤＲ－Ｈ２配列及び配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにＶＬが配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＣＤＲ－Ｌ２配列及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、
－ ＶＨが、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号１５のＣＤＲ－Ｈ２配列及び配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにＶＬが配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号１８のＣＤＲ－Ｌ２配列及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、又は
－ ＶＨが、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＣＤＲ－Ｈ２配列及び配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにＶＬが配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号１８のＣＤＲ－Ｌ２配列及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む
、抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
－ ＶＨが、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＣＤＲ－Ｈ２配列及び配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにＶＬが配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＣＤＲ－Ｌ２配列及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、又は
－ ＶＨが、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号１５のＣＤＲ－Ｈ２配列及び配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにＶＬが配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＣＤＲ－Ｌ２配列及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、
－ ＶＨが、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号１５のＣＤＲ－Ｈ２配列及び配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにＶＬが配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号１８のＣＤＲ－Ｌ２配列及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、又は
－ ＶＨが、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＣＤＲ－Ｈ２配列及び配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにＶＬが配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号１８のＣＤＲ－Ｌ２配列及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む
、抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
【0051】
別の実施形態では、本発明は、
－ 配列番号２０、２２若しくは２４のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；及び／又は
－ 配列番号２１、２３若しくは２５のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
－
－ 配列番号２０、２２若しくは２４のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；及び／又は
－ 配列番号２１、２３若しくは２５のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
－
【0052】
さらに別の実施形態では、本発明は、
－ 配列番号２０、２２又は２４のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；及び
－ 配列番号２１、２３又は２５のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片であって、
－ ＶＨが、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号２及び１５からなる群から選択されるＣＤＲ－Ｈ２配列、配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びに
－ ＶＬが、配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号５及び１８からなる群から選択されるＣＤＲ－Ｌ２配列、並びに配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、
抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
別の実施形態では、本発明は、
－ 配列番号２０のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；及び
－ 配列番号２１のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片であって、
－ ＶＨが、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＣＤＲ－Ｈ２配列及び配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにＶＬが、配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＣＤＲ－Ｌ２配列及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、
抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
－ 配列番号２０、２２又は２４のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；及び
－ 配列番号２１、２３又は２５のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片であって、
－ ＶＨが、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号２及び１５からなる群から選択されるＣＤＲ－Ｈ２配列、配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びに
－ ＶＬが、配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号５及び１８からなる群から選択されるＣＤＲ－Ｌ２配列、並びに配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、
抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
別の実施形態では、本発明は、
－ 配列番号２０のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；及び
－ 配列番号２１のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片であって、
－ ＶＨが、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＣＤＲ－Ｈ２配列及び配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにＶＬが、配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＣＤＲ－Ｌ２配列及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、
抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
【0053】
別の実施形態では、本発明は、
－ 配列番号２２のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；及び
－ 配列番号２３のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片であって、
－ ＶＨが、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号１５のＣＤＲ－Ｈ２配列及び配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにＶＬが、配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＣＤＲ－Ｌ２配列及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、
抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
別の実施形態では、本発明は、
－ 配列番号２４のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；及び
－ 配列番号２５のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片であって、
－ ＶＨが、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号１５のＣＤＲ－Ｈ２配列及び配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにＶＬが、配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号１８のＣＤＲ－Ｌ２配列及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、
抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
－ 配列番号２２のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；及び
－ 配列番号２３のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片であって、
－ ＶＨが、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号１５のＣＤＲ－Ｈ２配列及び配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにＶＬが、配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＣＤＲ－Ｌ２配列及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、
抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
別の実施形態では、本発明は、
－ 配列番号２４のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；及び
－ 配列番号２５のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片であって、
－ ＶＨが、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号１５のＣＤＲ－Ｈ２配列及び配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにＶＬが、配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号１８のＣＤＲ－Ｌ２配列及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、
抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
【0054】
一実施形態では、本発明は、配列番号２０、２２又は２４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；及び配列番号２１、２３又は２５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
別の実施形態では、本発明は、
ａ．それぞれ配列番号２０及び配列番号２１のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び可変軽鎖；
ｂ．それぞれ配列番号２２及び配列番号２３のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び可変軽鎖；又は
ｃ．それぞれ配列番号２４及び配列番号２５のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び可変軽鎖
を含む、抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
別の実施形態では、本発明は、
ａ．それぞれ配列番号２０及び配列番号２１のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び可変軽鎖；
ｂ．それぞれ配列番号２２及び配列番号２３のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び可変軽鎖；又は
ｃ．それぞれ配列番号２４及び配列番号２５のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び可変軽鎖
を含む、抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
【0055】
さらに別の実施形態では、本発明は、抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片であって、
ａ．抗体が「クローンＩ」と称される、配列番号２０のアミノ酸配列を含む、好ましくはそれからなる可変重鎖及び配列番号２１のアミノ酸配列を含む、好ましくはそれからなる可変軽鎖、
ｂ．抗体が「クローンＩＩ」と称される、配列番号２２のアミノ酸配列を含む、好ましくはそれからなる可変重鎖及び配列番号２３のアミノ酸配列を含む、好ましくはそれからなる可変軽鎖、
ｃ．抗体が「クローンＩＩＩ」と称される、配列番号２４のアミノ酸配列を含む、好ましくはそれからなる可変重鎖及び配列番号２５のアミノ酸配列を含む、好ましくはそれからなる可変軽鎖
を含む抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
ａ．抗体が「クローンＩ」と称される、配列番号２０のアミノ酸配列を含む、好ましくはそれからなる可変重鎖及び配列番号２１のアミノ酸配列を含む、好ましくはそれからなる可変軽鎖、
ｂ．抗体が「クローンＩＩ」と称される、配列番号２２のアミノ酸配列を含む、好ましくはそれからなる可変重鎖及び配列番号２３のアミノ酸配列を含む、好ましくはそれからなる可変軽鎖、
ｃ．抗体が「クローンＩＩＩ」と称される、配列番号２４のアミノ酸配列を含む、好ましくはそれからなる可変重鎖及び配列番号２５のアミノ酸配列を含む、好ましくはそれからなる可変軽鎖
を含む抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
【0056】
以下の表は、本発明による抗体のＣＤＲを、様々な公知の命名法によって、例えば、Ｋａｂａｔによって；ＣＣＧ（Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ、Almagro et al., Proteins 2011; 79:3050-3066及びMaier et al, Proteins 2014; 82:1599-1610に例示される）によって；Ｃｈｏｔｈｉａによって；及び／又はＡｈｏによって示す。
表２は、本発明による抗体のＣＤＲのアミノ酸配列をさらにまとめる。
表２は、本発明による抗体のＣＤＲのアミノ酸配列をさらにまとめる。
【表2】
【0057】
したがって、特定の態様では、本発明は、可変重鎖（ＶＨ）及び可変軽鎖（ＶＬ）を含む抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片であって、
－ ＶＨが、配列番号１、７、８及び１０からなる群から選択されるＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号２、９、１１、１５、１６及び１７からなる群から選択されるＣＤＲ－Ｈ２配列、配列番号３及び１２からなる群から選択されるＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びに
－ ＶＬが、配列番号４及び１３からなる群から選択されるＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号５、１４、１８及び１９からなる群から選択されるＣＤＲ－Ｌ２配列、並びに配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、
抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片に関する。
－ ＶＨが、配列番号１、７、８及び１０からなる群から選択されるＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号２、９、１１、１５、１６及び１７からなる群から選択されるＣＤＲ－Ｈ２配列、配列番号３及び１２からなる群から選択されるＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びに
－ ＶＬが、配列番号４及び１３からなる群から選択されるＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号５、１４、１８及び１９からなる群から選択されるＣＤＲ－Ｌ２配列、並びに配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、
抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片に関する。
【0058】
具体的な態様では、本発明は、可変重鎖（ＶＨ）及び可変軽鎖（ＶＬ）を含む抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片であって、
－ ＶＨが、配列番号７のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＣＤＲ－Ｈ２配列及び配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにＶＬが配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＣＤＲ－Ｌ２配列及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、又は
－ ＶＨが、配列番号８のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号９のＣＤＲ－Ｈ２配列及び配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにＶＬが配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＣＤＲ－Ｌ２配列及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、又は
－ ＶＨが、配列番号１０のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号１１のＣＤＲ－Ｈ２配列及び配列番号１２のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにＶＬが配列番号１３のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号１４のＣＤＲ－Ｌ２配列及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、又は
－ ＶＨが、配列番号７のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号１５のＣＤＲ－Ｈ２配列及び配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにＶＬが配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＣＤＲ－Ｌ２配列及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、又は
－ ＶＨが、配列番号８のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号１６のＣＤＲ－Ｈ２配列及び配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにＶＬが配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＣＤＲ－Ｌ２配列及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、又は
－ ＶＨが、配列番号１０のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号１７のＣＤＲ－Ｈ２配列及び配列番号１２のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにＶＬが配列番号１３のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号１４のＣＤＲ－Ｌ２配列及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、又は
－ ＶＨが、配列番号７のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号１５のＣＤＲ－Ｈ２配列及び配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにＶＬが配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号１８のＣＤＲ－Ｌ２配列及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、又は
－ ＶＨが、配列番号８のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号１６のＣＤＲ－Ｈ２配列及び配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにＶＬが配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号１８のＣＤＲ－Ｌ２配列及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、又は
－ ＶＨが、配列番号１０のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号１７のＣＤＲ－Ｈ２配列及び配列番号１２のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにＶＬが配列番号１３のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号１９のＣＤＲ－Ｌ２配列及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、
抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片に関する。
－ ＶＨが、配列番号７のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＣＤＲ－Ｈ２配列及び配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにＶＬが配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＣＤＲ－Ｌ２配列及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、又は
－ ＶＨが、配列番号８のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号９のＣＤＲ－Ｈ２配列及び配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにＶＬが配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＣＤＲ－Ｌ２配列及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、又は
－ ＶＨが、配列番号１０のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号１１のＣＤＲ－Ｈ２配列及び配列番号１２のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにＶＬが配列番号１３のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号１４のＣＤＲ－Ｌ２配列及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、又は
－ ＶＨが、配列番号７のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号１５のＣＤＲ－Ｈ２配列及び配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにＶＬが配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＣＤＲ－Ｌ２配列及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、又は
－ ＶＨが、配列番号８のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号１６のＣＤＲ－Ｈ２配列及び配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにＶＬが配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＣＤＲ－Ｌ２配列及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、又は
－ ＶＨが、配列番号１０のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号１７のＣＤＲ－Ｈ２配列及び配列番号１２のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにＶＬが配列番号１３のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号１４のＣＤＲ－Ｌ２配列及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、又は
－ ＶＨが、配列番号７のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号１５のＣＤＲ－Ｈ２配列及び配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにＶＬが配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号１８のＣＤＲ－Ｌ２配列及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、又は
－ ＶＨが、配列番号８のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号１６のＣＤＲ－Ｈ２配列及び配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにＶＬが配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号１８のＣＤＲ－Ｌ２配列及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、又は
－ ＶＨが、配列番号１０のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号１７のＣＤＲ－Ｈ２配列及び配列番号１２のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにＶＬが配列番号１３のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号１９のＣＤＲ－Ｌ２配列及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、
抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片に関する。
【0059】
本発明による例示的可変重鎖及び可変軽鎖の配列は、表３に示される。
【表3】
【0060】
本発明の例示的ｓｃＦｖの配列は、表４に示される。
【表4】
【0061】
一実施形態では、本発明の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆｖ断片、ダイアボディ、低分子抗体模倣物からなる群から選択される。代替的実施形態では、抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、単一ドメイン抗体、例えば、ｓｄＡｂ、ｓｄＦｖ、ナノボディ、Ｖ－Ｎａｒ及びＶＨＨからなる群から選択される。この特定の実施形態では、前記抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、可変重鎖を含む。さらなる実施形態では、前記可変重鎖は、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号２及び１５からなる群から選択されるＣＤＲ－Ｈ２配列、配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含む。具体的な実施形態では、前記可変重鎖は、配列番号２０、２２又は２４のアミノ酸配列を含む。
一実施形態では、本発明の抗体は、リンカーを含む、好ましくは配列番号４６に記載のリンカー（ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ）を含む、一本鎖断片である。
一実施形態では、本発明の抗体は、配列番号２６、２７、２８、２９、３０及び３１からなる群から選択される１種の配列を含む一本鎖断片である。
一実施形態では、本発明の抗体は、リンカーを含む、好ましくは配列番号４６に記載のリンカー（ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ）を含む、一本鎖断片である。
一実施形態では、本発明の抗体は、配列番号２６、２７、２８、２９、３０及び３１からなる群から選択される１種の配列を含む一本鎖断片である。
【0062】
一実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、古典経路（ＣＰ）、レクチン経路（ＬＰ）及び代替経路（ＡＰ）を含む補体活性化の経路を阻害し得る。
一実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、補体Ｃ３及びＣ３ｂに結合し得る。
一実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、Ｃ３転換酵素の形成を妨げ得る。
一実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、ブルッフ膜に浸透し得る。
一実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、Ｃ３及びＣ３ｂに対するおよそ同等の結合親和性を有する。
一実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、補体Ｃ３及びＣ３ｂに結合し得る。
一実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、Ｃ３転換酵素の形成を妨げ得る。
一実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、ブルッフ膜に浸透し得る。
一実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、Ｃ３及びＣ３ｂに対するおよそ同等の結合親和性を有する。
【0063】
一実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、Ｃ３ａ、ｉＣ３ｂ、Ｃ４、Ｃ４ｂ、Ｃ５及び／又はＣ５ｂに対する約１０-4Ｍ以下の（すなわち、弱い）結合親和性を有する。
一実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、Ｃ３及びＣ３ｂに対する結合親和性と比較して、Ｃ３ａ、ｉＣ３ｂ、Ｃ４、Ｃ４ｂ、Ｃ５及び／又はＣ５ｂに対する弱い結合親和性を有する。
一実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、Ｃ３ａ、ｉＣ３ｂ、Ｃ４、Ｃ４ｂ、Ｃ５及び／又はＣ５ｂに対する結合親和性を有さない。
一実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、Ｃ３及びＣ３ｂに対する結合親和性と比較して、Ｃ３ａ、ｉＣ３ｂ、Ｃ４、Ｃ４ｂ、Ｃ５及び／又はＣ５ｂに対する弱い結合親和性を有する。
一実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、Ｃ３ａ、ｉＣ３ｂ、Ｃ４、Ｃ４ｂ、Ｃ５及び／又はＣ５ｂに対する結合親和性を有さない。
【0064】
一実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、Ｃ３転換酵素増幅ループを阻害し得る。
一実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、脈絡膜Ｃ３活性を阻害し得る。
本発明の抗Ｃ３抗体又は本発明によるその抗原結合性断片は、高親和性でヒトＣ３に結合する。本態様に関連する一実施形態では、本発明の抗Ｃ３抗体は、ヒトＣ３に、例えば、ＳＰＲによって決定すると、ＫD＜５０ｎＭで、好ましくはＫD＜１５ｎＭで、好ましくはＫD＜１０ｎＭで、好ましくはＫD＜７ｎＭで、好ましくはＫD＜１ｎＭで、好ましくはＫD＜０．５ｎＭで、好ましくはＫD＜０．２ｎＭで、好ましくはＫD＜０．１５ｎＭで、好ましくはＫD＜０．１０ｎＭで、好ましくはＫD＜０．０５ｎＭで、好ましくはＫD＜０．０４ｎＭで、より好ましくはＫD＜０．０３ｎＭで結合する。一実施形態では、本発明の抗Ｃ３抗体は、実施例８において例示の通り、ヒトＣ３に、０．１６～０．０２３ｎＭの間に含まれるＫDで結合する。
一実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、脈絡膜Ｃ３活性を阻害し得る。
本発明の抗Ｃ３抗体又は本発明によるその抗原結合性断片は、高親和性でヒトＣ３に結合する。本態様に関連する一実施形態では、本発明の抗Ｃ３抗体は、ヒトＣ３に、例えば、ＳＰＲによって決定すると、ＫD＜５０ｎＭで、好ましくはＫD＜１５ｎＭで、好ましくはＫD＜１０ｎＭで、好ましくはＫD＜７ｎＭで、好ましくはＫD＜１ｎＭで、好ましくはＫD＜０．５ｎＭで、好ましくはＫD＜０．２ｎＭで、好ましくはＫD＜０．１５ｎＭで、好ましくはＫD＜０．１０ｎＭで、好ましくはＫD＜０．０５ｎＭで、好ましくはＫD＜０．０４ｎＭで、より好ましくはＫD＜０．０３ｎＭで結合する。一実施形態では、本発明の抗Ｃ３抗体は、実施例８において例示の通り、ヒトＣ３に、０．１６～０．０２３ｎＭの間に含まれるＫDで結合する。
【0065】
一実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、ヒトＣ３ｂに、例えば、ＳＰＲによって決定すると、ＫD＜５０ｎＭで、好ましくはＫD＜１５ｎＭで、好ましくはＫD＜１０ｎＭで、好ましくはＫD＜７ｎＭで、好ましくはＫD＜１ｎＭで、好ましくはＫD＜０．５ｎＭで、好ましくはＫD＜０．２ｎＭで、好ましくはＫD＜０．１５ｎＭで、好ましくはＫD＜０．１０ｎＭで、より好ましくはＫD＜０．０５ｎＭで結合する。さらなる実施形態では、本発明の抗Ｃ３抗体は、実施例８において例示の通り、ヒトＣ３に、０．１５ｎＭ～０．０５ｎＭの間に含まれるＫDで結合する。
一実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、Ｃ３及びＣ３ｂに対する約１０-8Ｍ～約１０-14Ｍの結合親和性を有する。ある特定の実施形態では、本発明による抗体は、Ｃ３及びＣ３ｂに対する約１０-10Ｍ～約１０-12Ｍの結合親和性を有する。ある特定の実施形態では、本発明の抗Ｃ３抗体は、Ｃ３及びＣ３ｂに対する少なくとも約１０-8Ｍ（より強い）、少なくとも約１０-9Ｍ（より強い）、少なくとも約１０-10Ｍ（より強い）、少なくとも約１０-11Ｍ（より強い）又は少なくとも約１０-12Ｍ（より強い）結合親和性を有する。一実施形態では、本発明による抗体は、Ｃ３及びＣ３ｂに対するおよそ同等の結合親和性を有する。例えば、非限定的に、本発明による抗体は、Ｃ３に対する約１０-10Ｍの結合親和性、及びＣ３ｂに対する約１０-10Ｍの結合親和性を有し得る。特定の実施形態では、本発明による抗体は、Ｃ３に対する約１０-11Ｍの結合親和性、及びＣ３ｂに対する約１０-11Ｍの結合親和性を有する。別の実施形態では、本発明による抗体は、Ｃ３に対する約１０-12Ｍの結合親和性、及びＣ３ｂに対する約１０-12Ｍの結合親和性を有する。
一実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、Ｃ３及びＣ３ｂに対する約１０-8Ｍ～約１０-14Ｍの結合親和性を有する。ある特定の実施形態では、本発明による抗体は、Ｃ３及びＣ３ｂに対する約１０-10Ｍ～約１０-12Ｍの結合親和性を有する。ある特定の実施形態では、本発明の抗Ｃ３抗体は、Ｃ３及びＣ３ｂに対する少なくとも約１０-8Ｍ（より強い）、少なくとも約１０-9Ｍ（より強い）、少なくとも約１０-10Ｍ（より強い）、少なくとも約１０-11Ｍ（より強い）又は少なくとも約１０-12Ｍ（より強い）結合親和性を有する。一実施形態では、本発明による抗体は、Ｃ３及びＣ３ｂに対するおよそ同等の結合親和性を有する。例えば、非限定的に、本発明による抗体は、Ｃ３に対する約１０-10Ｍの結合親和性、及びＣ３ｂに対する約１０-10Ｍの結合親和性を有し得る。特定の実施形態では、本発明による抗体は、Ｃ３に対する約１０-11Ｍの結合親和性、及びＣ３ｂに対する約１０-11Ｍの結合親和性を有する。別の実施形態では、本発明による抗体は、Ｃ３に対する約１０-12Ｍの結合親和性、及びＣ３ｂに対する約１０-12Ｍの結合親和性を有する。
【0066】
代替的一実施形態では、Ｃ３に対する結合親和性は、Ｃ３ｂに対する結合親和性の１０倍以内である。
一実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、カニクイザルＣ３との交差反応性を示す。本発明者らは、本発明の抗体がカニクイザルＣ３にも結合することを実施例８において示した。カニクイザル（マカカ・ファシクラリス（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ））Ｃ３は、ヒトＣ３と９５．１％同一であり、交差反応性は関連動物モデルにおける本発明の抗Ｃ３抗体の前臨床及び毒性学試験を可能にする。
一実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、Ｃ３疾患関連単一ヌクレオチド多型（ＳＮＰ）、より正確にはＣ３ ＳＮＰ Ｐ３１４Ｌ及びＣ３ ＳＮＰ Ｒ１０２Ｇに対する結合親和性を有する。本発明者らは、本発明の抗体がヒトＣ３の疾患関連ＳＮＰに結合し、本発明の抗体が眼科疾患又は眼疾患を罹患している広範囲の患者を処置できることも実施例８において示した。
本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片の高い結合親和性は、硝子体内注射後のＣ３の中和時間の延長に寄与し、注射頻度の低減をさらに可能にする。さらに高い結合親和性は、より低い用量での投与をさらに可能にし、副作用の可能性を限定する。有利な結合親和性及び注射頻度の低減は、それを必要とする患者の処置の有効性を相当に改善する。
一実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、カニクイザルＣ３との交差反応性を示す。本発明者らは、本発明の抗体がカニクイザルＣ３にも結合することを実施例８において示した。カニクイザル（マカカ・ファシクラリス（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ））Ｃ３は、ヒトＣ３と９５．１％同一であり、交差反応性は関連動物モデルにおける本発明の抗Ｃ３抗体の前臨床及び毒性学試験を可能にする。
一実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、Ｃ３疾患関連単一ヌクレオチド多型（ＳＮＰ）、より正確にはＣ３ ＳＮＰ Ｐ３１４Ｌ及びＣ３ ＳＮＰ Ｒ１０２Ｇに対する結合親和性を有する。本発明者らは、本発明の抗体がヒトＣ３の疾患関連ＳＮＰに結合し、本発明の抗体が眼科疾患又は眼疾患を罹患している広範囲の患者を処置できることも実施例８において示した。
本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片の高い結合親和性は、硝子体内注射後のＣ３の中和時間の延長に寄与し、注射頻度の低減をさらに可能にする。さらに高い結合親和性は、より低い用量での投与をさらに可能にし、副作用の可能性を限定する。有利な結合親和性及び注射頻度の低減は、それを必要とする患者の処置の有効性を相当に改善する。
【0067】
その高い結合親和性、その有利な半減期及びその高度に濃縮されるその能力によって、本発明の抗Ｃ３抗体は、投薬間の間隔の延長を可能にする。患者に貴重な利益、特に、薬物の順守（ｄｒｕｇ ｏｂｓｅｒｖａｎｃｅ）及びコンプライアンスの改善も提供する。
本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、他の治療剤と比較して長い持続期間であり得る１カ月より長い治療的に有効な持続期間を有し得る。治療的に有効な持続期間の延長は、本発明の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片のモル濃度のためである可能性があり、７ｍＭの高濃度に達する場合がある。
本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、他の治療剤と比較して眼にさらに容易に注射され得る。一実施形態では、本発明の抗Ｃ３抗体は、ＰＥＧを含有せず、そのため実施例１３において例示される通り、それらの粘度は低減している。したがって、本発明の抗Ｃ３抗体の粘度は、他の治療剤の粘度よりも低いと予測される。２０センチポイズ（ｃＰ）以下である溶液などの粘度が低い溶液は、背圧の低減が理由でさらに容易に眼に注射される。
本発明者らは、安定性の改善によって例示される通り、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片が、優れた医薬特性を示すことを示した。本発明者らは、実施例１１において、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片が熱安定性の改善を実際に示した。これらの結果は、本発明の抗体が生理学的温度でその天然の、かつ活性な立体構造を維持していることを例示する。より高い熱的転移中点（ｔｈｅｒｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ｍｉｄｐｏｉｎｔ）（Ｔm）が、低い温度でのタンパク質の安定性の改善を反映することは注目すべきである。それにより、本発明者らは、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片が熱安定性特性の改善を示し、治療有効性の改善に寄与する一方で、患者への注射用量及び頻度の低減を可能にすることを示した。加えて、Ｔmは、治療用産生物の有効期間の延長及び安定性の改善を示す。
本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、他の治療剤と比較して長い持続期間であり得る１カ月より長い治療的に有効な持続期間を有し得る。治療的に有効な持続期間の延長は、本発明の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片のモル濃度のためである可能性があり、７ｍＭの高濃度に達する場合がある。
本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、他の治療剤と比較して眼にさらに容易に注射され得る。一実施形態では、本発明の抗Ｃ３抗体は、ＰＥＧを含有せず、そのため実施例１３において例示される通り、それらの粘度は低減している。したがって、本発明の抗Ｃ３抗体の粘度は、他の治療剤の粘度よりも低いと予測される。２０センチポイズ（ｃＰ）以下である溶液などの粘度が低い溶液は、背圧の低減が理由でさらに容易に眼に注射される。
本発明者らは、安定性の改善によって例示される通り、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片が、優れた医薬特性を示すことを示した。本発明者らは、実施例１１において、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片が熱安定性の改善を実際に示した。これらの結果は、本発明の抗体が生理学的温度でその天然の、かつ活性な立体構造を維持していることを例示する。より高い熱的転移中点（ｔｈｅｒｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ｍｉｄｐｏｉｎｔ）（Ｔm）が、低い温度でのタンパク質の安定性の改善を反映することは注目すべきである。それにより、本発明者らは、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片が熱安定性特性の改善を示し、治療有効性の改善に寄与する一方で、患者への注射用量及び頻度の低減を可能にすることを示した。加えて、Ｔmは、治療用産生物の有効期間の延長及び安定性の改善を示す。
【0068】
さらなる態様では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、実施例４及び１２に記載される通り低い免疫原性リスクを有すると証明された。これらの結果は、本発明の抗体が、低い免疫原性リスク及び／又は抗薬物抗体（ＡＤＡ）を生じる低いリスクを示すことから眼科疾患又は眼疾患の処置のために非常に好適で、有望であることを確認する。
補体系は、多数の炎症性疾患及び自己免疫疾患における組織傷害に関与する自然免疫系の重要な部分である。補体系は、３０を超える細胞関連及び循環タンパク質（例えば、Ｃ１、Ｃ１ｑ、Ｃ１ｒ、Ｃ１ｓ、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ３ａ、Ｃ３ｂ、Ｃ４、因子Ｂ、因子Ｄ、因子Ｈ、因子Ｉ）を含む。
補体を活性化する３種の主な経路、古典経路（ＣＰ）、レクチン経路（ＬＰ）及び代替経路（ＡＰ）がある。
補体系は、多数の炎症性疾患及び自己免疫疾患における組織傷害に関与する自然免疫系の重要な部分である。補体系は、３０を超える細胞関連及び循環タンパク質（例えば、Ｃ１、Ｃ１ｑ、Ｃ１ｒ、Ｃ１ｓ、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ３ａ、Ｃ３ｂ、Ｃ４、因子Ｂ、因子Ｄ、因子Ｈ、因子Ｉ）を含む。
補体を活性化する３種の主な経路、古典経路（ＣＰ）、レクチン経路（ＬＰ）及び代替経路（ＡＰ）がある。
【0069】
３種の補体経路は、異なる因子によって開始され、補体成分Ｃ３の切断をそれぞれ生じる。
古典経路は、抗原と正しいアイソタイプ又はサブクラスの特異的抗体との相互作用によって通常引き起こされ；免疫グロブリンＭ（ＩｇＭ）、ＩｇＧ３及びＩｇＧ１は、古典経路の最も効率的な活性化因子である。これは、Ｃ１複合体において立体構造の変化を誘導し、Ｃ４ｂＣ２ｂ複合体を生成するＣ４及びＣ２の切断を可能にする。Ｃ４ｂＣ２ｂは、古典経路のＣ３転換酵素として作用する。
レクチン補体経路は、Ｃ型レクチン、マンナン結合レクチン（ＭＢＬ；マンノース結合レクチンとしても公知）又はフィコリンと呼ばれる関連する一連のタンパク質（Ｌ－フィコリン、Ｈ－フィコリン及びＭ－フィコリン）の、微生物の表面に見出される糖タンパク質又はエンベロープ多糖に発現される末端糖への結合によって引き起こされる。
古典経路は、抗原と正しいアイソタイプ又はサブクラスの特異的抗体との相互作用によって通常引き起こされ；免疫グロブリンＭ（ＩｇＭ）、ＩｇＧ３及びＩｇＧ１は、古典経路の最も効率的な活性化因子である。これは、Ｃ１複合体において立体構造の変化を誘導し、Ｃ４ｂＣ２ｂ複合体を生成するＣ４及びＣ２の切断を可能にする。Ｃ４ｂＣ２ｂは、古典経路のＣ３転換酵素として作用する。
レクチン補体経路は、Ｃ型レクチン、マンナン結合レクチン（ＭＢＬ；マンノース結合レクチンとしても公知）又はフィコリンと呼ばれる関連する一連のタンパク質（Ｌ－フィコリン、Ｈ－フィコリン及びＭ－フィコリン）の、微生物の表面に見出される糖タンパク質又はエンベロープ多糖に発現される末端糖への結合によって引き起こされる。
【0070】
代替経路は、内部のチオエステル基を露出させる循環Ｃ３のゆっくりとした加水分解、「Ｃ３ティックオーバー（ｔｉｃｋｏｖｅｒ）」と称される現象によって開始される。代替経路特異的タンパク質因子Ｂ、因子Ｄ及びプロパージンの、加水分解されたＣ３への、又は補体切断断片Ｃ３ｂへの結合は、Ｃ３のさらなる活性化をもたらす。Ｃ３ｂの形態に切断されたＣ３は、次に、微生物の表面の多糖又はタンパク質と、又は内毒素（細菌性リポ多糖類）と相互作用でき、代替経路活性化を開始し、古典経路活性化の際に生じたのと同様にＭＡＣを生成する。
ある特定の実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、１個又は複数個の補体経路、古典経路、代替経路及びレクチン経路を阻害するそれらの能力について選択される。ある特定の実施形態では、本発明の抗Ｃ３抗体は、３種全ての補体経路、古典経路、代替経路及びレクチン経路を阻害するそれらの能力について選択される。ある特定の実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、眼において３種全ての補体経路を阻害し得る。
ある特定の実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、１個又は複数個の補体経路、古典経路、代替経路及びレクチン経路を阻害するそれらの能力について選択される。ある特定の実施形態では、本発明の抗Ｃ３抗体は、３種全ての補体経路、古典経路、代替経路及びレクチン経路を阻害するそれらの能力について選択される。ある特定の実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、眼において３種全ての補体経路を阻害し得る。
【0071】
典型的には、古典経路、代替経路及びレクチン経路を阻害することにおける本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片の機能的な作用強度は、実施例７に記載の通り補体阻害アッセイ又は溶血アッセイによって決定され得る。作用強度は、ＩＣ５０（最大半量阻害濃度）で表され得る。したがって、一実施形態では、本発明による抗体又はその断片は、
－ 補体阻害アッセイによって測定されて７０～８０ｎＭの間に含まれる作用強度で古典経路（ＣＰ）を阻害し、
－ 補体阻害アッセイによって測定されて３４０～３６０ｎＭの間に含まれる作用強度でレクチン経路（ＬＰ）を阻害し、及び
－ 補体阻害アッセイによって測定されて６０～７０ｎＭの間に含まれる作用強度で代替経路（ＡＰ）を阻害する。
３種全ての補体経路を阻害する本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片の能力は、眼科疾患又は眼疾患の処置におけるそれらの治療潜在力をさらに改善する。一実施形態では、３種全ての補体経路を阻害する本発明の抗体の能力は、眼科疾患又は眼疾患、特にＡＭＤ又はＧＡの処置におけるそれらの治療潜在力をさらに改善する。理論に束縛されることなく、３種全ての補体経路を阻害することは、１種の活性経路の疾患促進効果が、他の不活化された経路を代償することを妨げることによって、本発明の抗Ｃ３抗体の治療潜在力を改善し得る。
－ 補体阻害アッセイによって測定されて７０～８０ｎＭの間に含まれる作用強度で古典経路（ＣＰ）を阻害し、
－ 補体阻害アッセイによって測定されて３４０～３６０ｎＭの間に含まれる作用強度でレクチン経路（ＬＰ）を阻害し、及び
－ 補体阻害アッセイによって測定されて６０～７０ｎＭの間に含まれる作用強度で代替経路（ＡＰ）を阻害する。
３種全ての補体経路を阻害する本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片の能力は、眼科疾患又は眼疾患の処置におけるそれらの治療潜在力をさらに改善する。一実施形態では、３種全ての補体経路を阻害する本発明の抗体の能力は、眼科疾患又は眼疾患、特にＡＭＤ又はＧＡの処置におけるそれらの治療潜在力をさらに改善する。理論に束縛されることなく、３種全ての補体経路を阻害することは、１種の活性経路の疾患促進効果が、他の不活化された経路を代償することを妨げることによって、本発明の抗Ｃ３抗体の治療潜在力を改善し得る。
【0072】
したがって、特定の実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、眼の脈絡膜領域における３種全ての補体経路を阻害し得る。脈絡膜領域は、眼の後方を覆う血管を含有する層であり、網膜と強膜との間に位置する。脈絡膜領域は、４つの層、ハーラー層、サトラー層、脈絡毛細管及びブルッフ膜に分けられる。ブルッフ膜は、硝子体薄膜（ｖｉｔｒｅｏｕｓ ｌａｍｉｎａ）としても公知であり、脈絡膜の最も内側の層であり、網膜色素上皮（ＲＰＥ）に隣接する。ある特定の実施形態では、本発明の抗Ｃ３抗体は、ブルッフ膜に浸透できるか、又はそれにわたって拡散でき、限定はしないが、脈絡毛細管などの脈絡膜の他の層に進入できる。
網膜は、完全長免疫グロブリンなどの大きな分子が、より深い層に浸透することを妨げ得る実質的な物理的バリアーを有し、治療効果の低減を生じる場合がある（Jackson et al. Invest Ophthalmol Vis Sci. 2003;44(5): 2141-6）。対照的に、さらに小さな抗体誘導体は、網膜に深く浸透できる。約６０ｋＤａ以下の分子量を有する例示的抗体誘導体は、限定はしないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’断片、ｓｃＦａｂ、ｓｃＦｖ、Ｆｖ断片、ナノボディ、ＶＨＨ、ｄＡｂ、Ｖ－Ｎａｒ、ｓｄＡｂ、ｓｄＦｖ並びに、一本鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）又はＤＡＲＴなどの二特異性抗体及び二価抗体が挙げられる抗体断片である。ある特定の実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、約６０ｋＤａ以下、例えば、約５５ｋＤａ、約５０ｋＤａ、約４５ｋＤａ、約４０ｋＤａ、約３５ｋＤａ、約３０ｋＤａ、約２５ｋＤａ、約２０ｋＤａ、約１５ｋＤａ以下の分子量を有する。
一実施形態では、ｓｃＦｖフォーマットは、３カ月の投薬頻度を可能にする。このことは、さらに頻繁な投与を必要とする眼科疾患又は眼疾患を処置するための既存の治療アプローチと比較して著しい改善を示す。したがって本発明のｓｃＦｖは、患者のコンプライアンスをかなり改善する。
網膜は、完全長免疫グロブリンなどの大きな分子が、より深い層に浸透することを妨げ得る実質的な物理的バリアーを有し、治療効果の低減を生じる場合がある（Jackson et al. Invest Ophthalmol Vis Sci. 2003;44(5): 2141-6）。対照的に、さらに小さな抗体誘導体は、網膜に深く浸透できる。約６０ｋＤａ以下の分子量を有する例示的抗体誘導体は、限定はしないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’断片、ｓｃＦａｂ、ｓｃＦｖ、Ｆｖ断片、ナノボディ、ＶＨＨ、ｄＡｂ、Ｖ－Ｎａｒ、ｓｄＡｂ、ｓｄＦｖ並びに、一本鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）又はＤＡＲＴなどの二特異性抗体及び二価抗体が挙げられる抗体断片である。ある特定の実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、約６０ｋＤａ以下、例えば、約５５ｋＤａ、約５０ｋＤａ、約４５ｋＤａ、約４０ｋＤａ、約３５ｋＤａ、約３０ｋＤａ、約２５ｋＤａ、約２０ｋＤａ、約１５ｋＤａ以下の分子量を有する。
一実施形態では、ｓｃＦｖフォーマットは、３カ月の投薬頻度を可能にする。このことは、さらに頻繁な投与を必要とする眼科疾患又は眼疾患を処置するための既存の治療アプローチと比較して著しい改善を示す。したがって本発明のｓｃＦｖは、患者のコンプライアンスをかなり改善する。
【0073】
本発明者らは、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片（クローンＩ）が、特に、実施例２において記載の通り、比較化合物Ａ２及び比較化合物Ａ３と比較した場合に、ブルッフ膜を通じた高い拡散能力を示すことを実施例１０において示した。したがって、一実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、浸透を促進するのに十分低いそれらのサイズに部分的によってブルッフ膜に浸透できるか、又はそれにわたって拡散し得る。ある特定の実施形態では、本発明の抗体のサイズは、分子量によって測定される。ある特定の実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、約６０ｋＤａ未満である分子量を有する。ある特定の実施形態では、本発明の抗Ｃ３抗体は、約２０ｋＤａ～約３０ｋＤａ又は約１０ｋＤａ～約２０ｋＤａである。ある特定の実施形態では、本発明の抗Ｃ３抗体は約２５ｋＤａである。ある特定の実施形態では、本発明の抗Ｃ３抗体は、約１５ｋＤａである。ある特定の実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片のサイズは、それらの流体力学的半径によって測定される。ある特定の実施形態では、本発明の抗Ｃ３抗体は、約３．０ｎｍ以下の流体力学的半径を有する。ある特定の実施形態では、本発明の抗Ｃ３抗体は、約２．５ｎｍ以下の流体力学的半径を有する。ある特定の実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、約２．０ｎｍ以下の流体力学的半径を有する。
【0074】
ヒト化及びアミノ酸配列バリアント
さらに、バリアント抗Ｃ３抗体及び抗体断片は、配列番号１～６、１５及び１８に示される配列において同定された一連のＣＤＲに基づいて操作され得る。一部の実施形態では、抗Ｃ３抗体及び抗体断片の前記バリアントにおいて、ＣＤＲのアミノ酸配列は未変化のままあるが、周囲の領域、例えばＦＲ領域が操作され得ることは理解される。抗Ｃ３抗体又はその断片のアミノ酸配列バリアントは、抗Ｃ３抗体ＤＮＡに適切なヌクレオチド変化を導入することによって、又はペプチド合成によって調製され得る。そのようなバリアントは、例えば、本明細書の実施例の抗Ｃ３抗体又はその断片のアミノ酸配列内の残基からの欠失、及び／又はそれへの挿入及び／又はその置換を含む。欠失、挿入及び置換のあらゆる組合せは、最終構築物が所望の特徴を保有する限り、最終構築物に達するように作製される。アミノ酸変化は、グリコシル化部位の数又は位置を変更することなど、ヒト化若しくはバリアント抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片の翻訳後過程も変更する場合がある。
さらに、バリアント抗Ｃ３抗体及び抗体断片は、配列番号１～６、１５及び１８に示される配列において同定された一連のＣＤＲに基づいて操作され得る。一部の実施形態では、抗Ｃ３抗体及び抗体断片の前記バリアントにおいて、ＣＤＲのアミノ酸配列は未変化のままあるが、周囲の領域、例えばＦＲ領域が操作され得ることは理解される。抗Ｃ３抗体又はその断片のアミノ酸配列バリアントは、抗Ｃ３抗体ＤＮＡに適切なヌクレオチド変化を導入することによって、又はペプチド合成によって調製され得る。そのようなバリアントは、例えば、本明細書の実施例の抗Ｃ３抗体又はその断片のアミノ酸配列内の残基からの欠失、及び／又はそれへの挿入及び／又はその置換を含む。欠失、挿入及び置換のあらゆる組合せは、最終構築物が所望の特徴を保有する限り、最終構築物に達するように作製される。アミノ酸変化は、グリコシル化部位の数又は位置を変更することなど、ヒト化若しくはバリアント抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片の翻訳後過程も変更する場合がある。
【0075】
抗体の別のタイプのアミノ酸バリアントは、抗体のオリジナルのグリコシル化パターンの改変を伴う。この文脈における用語「改変」は、抗体内で見られる１つ又は複数の糖質部分を欠失させること、及び／又は抗体内にそれまで存在していなかった１つ又は複数のグリコシル化部位を付加することを意味する。
一部の態様では、本発明は、本明細書において記載される抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片のアミノ酸配列バリアントをコードする核酸分子を含む。抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片のアミノ酸配列バリアントをコードする核酸分子は、当技術分野において公知の様々な方法によって調製される。これらの方法としては、限定はしないが、天然由来源（天然に存在するアミノ酸配列バリアントのケースで）からの単離、又は、事前に調製されたバリアントバージョンの若しくは非バリアントバージョンの抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片のオリゴヌクレオチド媒介性の（若しくは部位特異的な）突然変異生成、ＰＣＲ突然変異生成、及びカセット突然変異生成による調製が含まれる。
一部の態様では、本発明は、本明細書において記載される抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片のアミノ酸配列バリアントをコードする核酸分子を含む。抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片のアミノ酸配列バリアントをコードする核酸分子は、当技術分野において公知の様々な方法によって調製される。これらの方法としては、限定はしないが、天然由来源（天然に存在するアミノ酸配列バリアントのケースで）からの単離、又は、事前に調製されたバリアントバージョンの若しくは非バリアントバージョンの抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片のオリゴヌクレオチド媒介性の（若しくは部位特異的な）突然変異生成、ＰＣＲ突然変異生成、及びカセット突然変異生成による調製が含まれる。
【0076】
ある特定の実施形態では、本発明の抗Ｃ３抗体は抗体断片である。抗体断片の産生のために開発された技術が存在する。断片は、インタクトな抗体のタンパク質分解性の消化を介して派生し得る（例えば、Morimoto et al., 1992, Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24:107-117、及びBrennan et al., 1985, Science 229:81を参照されたい）。或いは、断片は、組換え宿主細胞において直接産生することができる。例えば、Ｆａｂ’－ＳＨ断片は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）から直接回収することができ、また化学的に結合させてＦ（ａｂ’）2断片を形成させることができる（例えば、Carter et al., 1992, Bio/Technology 10:163-167を参照されたい）。別のアプローチによって、Ｆ（ａｂ’）2断片は、組換え宿主細胞の培養物から直接単離することができる。抗体断片を産生するための他の技術は、当業者に自明であろう。
抗Ｃ３抗体及びその抗原結合性断片は、改変を含み得る。本明細書において提供される抗体のバリアントは、フレームワークに、及び／又はＣＤＲに欠失、置換、付加及び／又は改変を導入することによって生成され得る。次いで、抗体バリアントは、本明細書において記載される方法を使用して所望の機能について試験され得る。欠失、置換、付加、改変及び挿入のあらゆる組合せは、生成されたバリアントが適切な方法を使用してスクリーニングされ得る所望の特徴を有する限り、抗原結合性タンパク質又はその断片に作製され得る。
抗Ｃ３抗体及びその抗原結合性断片は、改変を含み得る。本明細書において提供される抗体のバリアントは、フレームワークに、及び／又はＣＤＲに欠失、置換、付加及び／又は改変を導入することによって生成され得る。次いで、抗体バリアントは、本明細書において記載される方法を使用して所望の機能について試験され得る。欠失、置換、付加、改変及び挿入のあらゆる組合せは、生成されたバリアントが適切な方法を使用してスクリーニングされ得る所望の特徴を有する限り、抗原結合性タンパク質又はその断片に作製され得る。
【0077】
本明細書で使用される場合、「保存的な置換」は、親抗体の機能的な特性を維持する改変を指す。例えば、保存的なアミノ酸置換としては、アミノ酸残基が類似の特性を有するアミノ酸残基を用いて置き換えられているものが挙げられる。例えば、アラニン（Ａ）をバリン（Ｖ）によって置き換えること；アルギニン（Ｒ）をリシン（Ｋ）によって置き換えること；アスパラギン（Ｎ）をグルタミン（Ｑ）によって置き換えること；アスパラギン酸（Ｄ）をグルタミン酸（Ｅ）によって置き換えること；システイン（Ｃ）をセリン（Ｓ）によって置き換えること；グルタミン酸（Ｅ）をアスパラギン酸（Ｄ）によって置き換えること；グリシン（Ｇ）をアラニン（Ａ）によって置き換えること；ヒスチジン（Ｈ）をアルギニン（Ｒ）若しくはリシン（Ｋ）によって置き換えること；イソロイシン（Ｉ）をロイシン（Ｌ）によって置き換えること；メチオニン（Ｍ）をロイシン（Ｌ）によって置き換えること；フェニルアラニン（Ｆ）をチロシン（Ｙ）によって置き換えること；セリン（Ｓ）をスレオニン（Ｔ）によって置き換えること；トリプトファン（Ｗ）をチロシン（Ｙ）によって置き換えること；フェニルアラニン（Ｆ）をトリプトファン（Ｗ）によって置き換えること；及び／又はバリン（Ｖ）をロイシン（Ｌ）によって置き換えること並びに、逆もまた同じ。
【0078】
ある特定の実施形態では、インタクトな抗体よりも抗Ｃ３抗体断片を使用することが望ましい場合がある。その血清中半減期を増大させるために、抗体断片を修飾することが望ましい場合がある。これは、例えばサルベージ受容体結合エピトープを抗体断片に組み込むことによって、行うことができる。一方法では、抗体断片の適切な領域を改変する（例えば突然変異させる）ことができるか、又はエピトープをペプチドタグに組み込み、このタグを次いで、例えばＤＮＡ合成若しくはペプチド合成によって、抗体断片のいずれかの末端若しくは中央に融合することができる。例えば、国際公開第９６／３２４７８号を参照されたい。
他の実施形態では、本発明は、抗Ｃ３抗体又は抗原結合性断片の共有結合修飾を含む。共有結合修飾としては、システイニル残基、ヒスチジル残基、リジニル残基及びアミノ末端残基、アルギニル残基、チロシル残基、カルボキシル側基（アスパルチル若しくはグルタミル）、グルタミニル残基及びアスパラギニル残基、又はセリル残基、又はスレオニル残基の修飾が含まれる。別のタイプの共有結合修飾は、グリコシドを抗体に化学的又は酵素的に結合させることを伴う。このような修飾は、化学合成によって、又は適切な場合には、抗体又はその断片の酵素的若しくは化学的切断によって、行うことができる。抗体の他のタイプの共有結合修飾は、抗体又はその断片の標的アミノ酸残基を、選択された側鎖又はアミノ末端残基若しくはカルボキシ末端残基と反応し得る有機誘導体化剤と反応させることによって、分子に導入することができる。
他の実施形態では、本発明は、抗Ｃ３抗体又は抗原結合性断片の共有結合修飾を含む。共有結合修飾としては、システイニル残基、ヒスチジル残基、リジニル残基及びアミノ末端残基、アルギニル残基、チロシル残基、カルボキシル側基（アスパルチル若しくはグルタミル）、グルタミニル残基及びアスパラギニル残基、又はセリル残基、又はスレオニル残基の修飾が含まれる。別のタイプの共有結合修飾は、グリコシドを抗体に化学的又は酵素的に結合させることを伴う。このような修飾は、化学合成によって、又は適切な場合には、抗体又はその断片の酵素的若しくは化学的切断によって、行うことができる。抗体の他のタイプの共有結合修飾は、抗体又はその断片の標的アミノ酸残基を、選択された側鎖又はアミノ末端残基若しくはカルボキシ末端残基と反応し得る有機誘導体化剤と反応させることによって、分子に導入することができる。
【0079】
抗体又はその断片上に存在するあらゆる糖質部分の除去は、化学的又は酵素的に行うことができる。化学的な脱グリコシル化は、Hakimuddin et al., 1987, Arch. Biochem. Biophys. 259:52、及びEdge et al., 1981, Anal. Biochem., 118:131によって記載されている。抗体上の糖質部分の酵素切断は、Thotakura et al., 1987, Meth. Enzymol 138:350によって記載されているような様々なエンドグリコシダーゼ及びエキソグリコシダーゼの使用によって行うことができる。
別のタイプの有用な共有結合修飾は、米国特許第４，６４０，８３５号、米国特許第４，４９６，６８９号、米国特許第４，３０１，１４４号、米国特許第４，６７０，４１７号、米国特許第４，７９１，１９２号、及び米国特許第４，１７９，３３７号の１つ又は複数で示される様式での、様々な非タンパク質性ポリマー、例えば、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、又はポリオキシアルキレンの１種への、抗体の連結を含む。
本明細書において開示される配列にある一定のレベルの％同一性を有する配列を含むバリアントなどの、本明細書において記載されるバリアント抗体又はその抗原結合性断片は、上に記載される抗体又はその抗原結合性断片の機能的能力、例えば、古典経路（ＣＰ）、レクチン経路（ＬＰ）及び代替経路（ＡＰ）を含む補体活性化の経路を阻害し得る、補体Ｃ３及びＣ３ｂに結合し得る、Ｃ３転換酵素の形成を妨げ得る、並びに／又はブルッフ膜に浸透し得る特異的Ｃ３エピトープ結合を好ましくは保持する。
別のタイプの有用な共有結合修飾は、米国特許第４，６４０，８３５号、米国特許第４，４９６，６８９号、米国特許第４，３０１，１４４号、米国特許第４，６７０，４１７号、米国特許第４，７９１，１９２号、及び米国特許第４，１７９，３３７号の１つ又は複数で示される様式での、様々な非タンパク質性ポリマー、例えば、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、又はポリオキシアルキレンの１種への、抗体の連結を含む。
本明細書において開示される配列にある一定のレベルの％同一性を有する配列を含むバリアントなどの、本明細書において記載されるバリアント抗体又はその抗原結合性断片は、上に記載される抗体又はその抗原結合性断片の機能的能力、例えば、古典経路（ＣＰ）、レクチン経路（ＬＰ）及び代替経路（ＡＰ）を含む補体活性化の経路を阻害し得る、補体Ｃ３及びＣ３ｂに結合し得る、Ｃ３転換酵素の形成を妨げ得る、並びに／又はブルッフ膜に浸透し得る特異的Ｃ３エピトープ結合を好ましくは保持する。
【0080】
エピトープ結合
一態様では、本発明は、特異的「Ｃ３エピトープ」を認識する抗体又はその抗原結合性断片を提供する。本明細書で使用される場合、用語「Ｃ３エピトープ」は、抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片に結合し得る分子（例えばペプチド）又は分子の断片を指す。これらの用語としてはさらに、例えば、本発明の抗体又は抗体断片のいずれかによって認識されるＣ３抗原決定基が含まれる。
Ｃ３抗原エピトープは、タンパク質、タンパク質断片、ペプチド、又はそれに類するものに含まれ得る。エピトープは、最も一般的には、タンパク質、短鎖オリゴペプチド、オリゴペプチド模倣体（すなわち、Ｃ３抗原の抗体結合特性を模倣する有機化合物）、又はこれらの組合せである。
エピトープ結合の文脈において、表現「アミノ酸領域Ｘ～Ｙ内の結合・・・」は、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片が、配列において特定されているアミノ酸領域内の少なくとも１個のアミノ酸残基に結合することを意味する。
一態様では、本発明は、特異的「Ｃ３エピトープ」を認識する抗体又はその抗原結合性断片を提供する。本明細書で使用される場合、用語「Ｃ３エピトープ」は、抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片に結合し得る分子（例えばペプチド）又は分子の断片を指す。これらの用語としてはさらに、例えば、本発明の抗体又は抗体断片のいずれかによって認識されるＣ３抗原決定基が含まれる。
Ｃ３抗原エピトープは、タンパク質、タンパク質断片、ペプチド、又はそれに類するものに含まれ得る。エピトープは、最も一般的には、タンパク質、短鎖オリゴペプチド、オリゴペプチド模倣体（すなわち、Ｃ３抗原の抗体結合特性を模倣する有機化合物）、又はこれらの組合せである。
エピトープ結合の文脈において、表現「アミノ酸領域Ｘ～Ｙ内の結合・・・」は、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片が、配列において特定されているアミノ酸領域内の少なくとも１個のアミノ酸残基に結合することを意味する。
【0081】
本発明の抗体又は抗原結合性断片は、配列番号４７に記載のヒト補体Ｃ３のエピトープに結合する。一実施形態では、本発明の抗体は、配列番号４８に記載のヒト補体Ｃ３ｃのＤ鎖のエピトープに結合する。配列番号４８は、ＰＤＢ：２Ａ７４＿Ｄを参照してオンラインで入手可能である。
本発明の抗体又は抗原結合性断片は、配列番号４７に記載のヒト補体Ｃ３のエピトープに結合する。別の実施形態では、本発明の抗体は、配列番号４８に記載のヒト補体Ｃ３ｃのＤ鎖のエピトープに結合する。配列番号４８は、ＰＤＢ：２Ａ７４＿Ｄを参照してオンラインで入手可能である。
本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片が、ヒト補体Ｃ３の固有のエピトープに結合することが見出された。一実施形態では、本発明の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号４７に記載のヒト補体Ｃ３のアミノ酸３６６～アミノ酸４７８の残基内の少なくとも１個のアミノ酸残基に結合する。
本発明の抗体又は抗原結合性断片は、配列番号４７に記載のヒト補体Ｃ３のエピトープに結合する。別の実施形態では、本発明の抗体は、配列番号４８に記載のヒト補体Ｃ３ｃのＤ鎖のエピトープに結合する。配列番号４８は、ＰＤＢ：２Ａ７４＿Ｄを参照してオンラインで入手可能である。
本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片が、ヒト補体Ｃ３の固有のエピトープに結合することが見出された。一実施形態では、本発明の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号４７に記載のヒト補体Ｃ３のアミノ酸３６６～アミノ酸４７８の残基内の少なくとも１個のアミノ酸残基に結合する。
【0082】
一実施形態では、本発明は、配列番号４７に記載のヒト補体Ｃ３の残基３６６、３９２～３９６、４１３～４２１、４２５、４２７、４４２、４５３及び４７８からなる群から選択される少なくとも１個のアミノ酸残基に結合する抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
一実施形態では、本発明は、配列番号４７に記載のヒト補体Ｃ３の残基３６６、３９２～３９６、４１３～４２１、４２５、４２７、４４２、４５３及び４７８の全てに結合する抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。一実施形態では、本発明は、配列番号４８に記載のヒト補体Ｃ３ｃのＤ鎖のアミノ酸３４４～アミノ酸４５６の残基内の少なくとも１個のアミノ酸残基に結合する抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片に関する。
一実施形態では、本発明は、配列番号４８に記載のヒト補体Ｃ３ｃのＤ鎖の残基３４４、３７０～３７４、３９１～３９９、４０３、４０５、４２０、４３１及び４５６からなる群から選択される少なくとも１個の残基に結合する抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片に関する。
一実施形態では、本発明は、配列番号４７に記載のヒト補体Ｃ３の残基３６６、３９２～３９６、４１３～４２１、４２５、４２７、４４２、４５３及び４７８の全てに結合する抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。一実施形態では、本発明は、配列番号４８に記載のヒト補体Ｃ３ｃのＤ鎖のアミノ酸３４４～アミノ酸４５６の残基内の少なくとも１個のアミノ酸残基に結合する抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片に関する。
一実施形態では、本発明は、配列番号４８に記載のヒト補体Ｃ３ｃのＤ鎖の残基３４４、３７０～３７４、３９１～３９９、４０３、４０５、４２０、４３１及び４５６からなる群から選択される少なくとも１個の残基に結合する抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片に関する。
【0083】
一実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号４８に記載のヒト補体Ｃ３ｃのＤ鎖の残基３４４、３７０～３７４、３９１～３９９、４０３、４０５、４２０、４３１及び４５６の全てに結合する。
一実施形態では、本発明は、配列番号４８に記載のヒト補体Ｃ３ｃのＤ鎖のアミノ酸３６９～アミノ酸残基４１８内の少なくとも１個のアミノ酸残基に結合する抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片に関する。
別の実施形態では、本発明は、配列番号４８に記載のヒト補体Ｃ３ｃのＤ鎖の残基３６９～３７９、３８９、３９１～４０１、４０３及び４１８からなる群から選択される少なくとも１個の残基に結合する抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片に関する。
別の実施形態では、本発明の抗体は、配列番号４８に記載のヒト補体Ｃ３ｃのＤ鎖の残基３６９～３７９、３８９、３９１～４０１、４０３及び４１８の全てに結合する。
一実施形態では、本発明は、配列番号４８に記載のヒト補体Ｃ３ｃのＤ鎖のアミノ酸３６９～アミノ酸残基４１８内の少なくとも１個のアミノ酸残基に結合する抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片に関する。
別の実施形態では、本発明は、配列番号４８に記載のヒト補体Ｃ３ｃのＤ鎖の残基３６９～３７９、３８９、３９１～４０１、４０３及び４１８からなる群から選択される少なくとも１個の残基に結合する抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片に関する。
別の実施形態では、本発明の抗体は、配列番号４８に記載のヒト補体Ｃ３ｃのＤ鎖の残基３６９～３７９、３８９、３９１～４０１、４０３及び４１８の全てに結合する。
【0084】
配列番号４７及び４８の配列は、下の表５に示される。
【表5】
【0085】
特異的Ｃ３エピトープ結合が、本発明の抗体又はその抗原結合性断片の予想外の機能的な特性、例えば、Ｃ３及びＣ３ｂの両方への高い結合親和性、並びに古典経路（ＣＰ）、レクチン経路（ＬＰ）、及び代替経路（ＡＰ）を含む補体活性化の３種全ての経路での強力な阻害を生じる可能性は非常に高い。
治療用使用
一態様では、本発明は、医薬として使用するための抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片に関する。
治療用使用
一態様では、本発明は、医薬として使用するための抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片に関する。
【0086】
既に述べた通り、したがって本発明者らは、網膜におけるＣ３の中和が、全ての補体経路の増幅ループを遮断し、それにより細胞毒性の膜侵襲複合体の生成及び炎症誘発性補体成分（Ｃ３ａ、Ｃ３ｂ、ｉＣ３ｂ、Ｃ５ａ）の生成を低減し、地図状萎縮を罹患している患者の臨床転帰を改善することをここに示す。
結果として、本発明は、網膜疾患又は眼科疾患の処置又は予防に使用するための抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
結果として、本発明は、網膜疾患又は眼科疾患の処置又は予防に使用するための抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
【0087】
一態様では、本発明は、眼科疾患又は眼疾患の処置又は予防に使用するための抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。一態様では、本発明は、網膜症、未熟児網膜症などの増殖性網膜症（ＰＲ）、虚血性網膜症、増殖性糖尿病性網膜症（ＰＤＲ）及び非増殖性糖尿病性網膜症を含む糖尿病性網膜症（ＤＲ）、糖尿病黄斑浮腫（ＤＭＥ）、糖尿病黄斑虚血（ＤＭＩ）、萎縮型ＡＭＤ及び滲出型ＡＭＤを含む加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）、地図状萎縮（ＧＡ）、網膜色素変性症、遺伝性網膜ジストロフィー、近視性変性、網膜静脈閉塞症、網膜動脈閉塞症、眼内炎、ブドウ膜炎、嚢胞様黄斑浮腫、任意の網膜疾患に続発する脈絡膜新生血管膜、視神経症、緑内障、網膜剥離、中毒性網膜症、放射線網膜症、外傷性網膜症、薬剤性網膜脈管障害、網膜血管新生、ポリープ状脈絡膜脈管障害、網膜血管炎、網膜毛細血管瘤、後水晶体線維増殖症、脈絡網膜炎、フックスジストロフィー、黄斑部毛細血管拡張症、アッシャー症候群、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）並びにシュタルガルト疾患からなる群から選択される疾患の処置又は予防に使用するための抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
【0088】
別の実施形態では、本発明は、加齢性黄斑変性、地図状萎縮、血管新生緑内障及び糖尿病性網膜症からなる群から選択される疾患の処置又は予防に使用するための抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。さらに好ましい実施形態では、本発明は、地図状萎縮の処置又は予防に使用するための抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
好ましい実施形態では、本発明は、地図状萎縮の処置に使用するための抗Ｃ３ ｓｃＦｖであって、可変重鎖（ＶＨ）及び可変軽鎖（ＶＬ）を含み、ＶＨが、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号２及び１５からなる群から選択されるＣＤＲ－Ｈ２配列、配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにＶＬが、配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号５及び１８からなる群から選択されるＣＤＲ－Ｌ２配列、並びに配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、抗Ｃ３ ｓｃＦｖを提供する。特定の実施形態では、前記抗Ｃ３ ｓｃＦｖは、それぞれ配列番号２０及び配列番号２１のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び可変軽鎖を含む。別の特定の実施形態では、前記抗Ｃ３ ｓｃＦｖは、それぞれ配列番号２２及び配列番号２３のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び可変軽鎖を含む。さらなる特定の実施形態では、前記抗Ｃ３ ｓｃＦｖは、それぞれ配列番号２４及び配列番号２５のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び可変軽鎖を含む。
好ましい実施形態では、本発明は、地図状萎縮の処置に使用するための抗Ｃ３ ｓｃＦｖであって、可変重鎖（ＶＨ）及び可変軽鎖（ＶＬ）を含み、ＶＨが、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号２及び１５からなる群から選択されるＣＤＲ－Ｈ２配列、配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにＶＬが、配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号５及び１８からなる群から選択されるＣＤＲ－Ｌ２配列、並びに配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、抗Ｃ３ ｓｃＦｖを提供する。特定の実施形態では、前記抗Ｃ３ ｓｃＦｖは、それぞれ配列番号２０及び配列番号２１のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び可変軽鎖を含む。別の特定の実施形態では、前記抗Ｃ３ ｓｃＦｖは、それぞれ配列番号２２及び配列番号２３のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び可変軽鎖を含む。さらなる特定の実施形態では、前記抗Ｃ３ ｓｃＦｖは、それぞれ配列番号２４及び配列番号２５のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び可変軽鎖を含む。
【0089】
本発明者らは、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片が、先行技術において述べられ、実施例５に記載されるＣ３を標的にする他の「比較化合物」よりもさらに有利な特性を示すことを例示した。
本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、ＡＰＬ２、ＮＧＭ６２１及びＺＩＭＵＲＡ（登録商標）に基づく治療アプローチとは異なる。
ＡＰＬ－２又はペグセタコプランは、環状トリデカペプチドコンプスタチン（補体成分Ｃ３の阻害剤）のペグ化誘導体である。ＡＰＬ－２の活性成分は、ＡＰＬ－１である。本発明者らは、実施例５Ａにおいて例示される比較目的のために代替化合物（比較化合物Ａ１及び比較化合物Ａ２）を開発した。
ＡＰＬ－２は、網膜に深く浸透することを困難にする３５０ｋＤａに相当する大きな分子量及び約７．８ｎｍの流体力学的半径を有する。ＡＰＬ－２は、おそらく３．５ｍＭの低濃度が原因で１カ月だけの有効持続期間を有する。ＡＰＬ－２は、その粘度を増加させ、その眼への注射を困難にするＰＥＧ化分子である。したがって、さらに効率的にＧＡの進行を低減する必要がある。
本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、ＡＰＬ２、ＮＧＭ６２１及びＺＩＭＵＲＡ（登録商標）に基づく治療アプローチとは異なる。
ＡＰＬ－２又はペグセタコプランは、環状トリデカペプチドコンプスタチン（補体成分Ｃ３の阻害剤）のペグ化誘導体である。ＡＰＬ－２の活性成分は、ＡＰＬ－１である。本発明者らは、実施例５Ａにおいて例示される比較目的のために代替化合物（比較化合物Ａ１及び比較化合物Ａ２）を開発した。
ＡＰＬ－２は、網膜に深く浸透することを困難にする３５０ｋＤａに相当する大きな分子量及び約７．８ｎｍの流体力学的半径を有する。ＡＰＬ－２は、おそらく３．５ｍＭの低濃度が原因で１カ月だけの有効持続期間を有する。ＡＰＬ－２は、その粘度を増加させ、その眼への注射を困難にするＰＥＧ化分子である。したがって、さらに効率的にＧＡの進行を低減する必要がある。
【0090】
ＮＧＭ６２１は、補体Ｃ３（Ｃ３）に強く結合し、補体活性化を阻害するヒト化ＩｇＧ１モノクローナル抗体である。本発明者らは、実施例５Ｂに例示の通り、比較目的でこの化合物を開発した。ＮＧＭ６２１は、古典経路及び代替経路を阻害し得るとして記載された。
ＺＩＭＵＲＡ（登録商標）（又はアバシンカプタドペゴル（ａｖａｃｉｎｃａｐｔａｄ ｐｅｇｏｌ））は、Ｃ５ａ及びＣ５ｂへの補体因子Ｃ５切断を阻害するように設計される。ＺＩＭＵＲＡ（登録商標）は、Ｃ３に結合しない。
本発明者らは、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片のフォーマットが、硝子体内注射あたりの眼に送達される薬物分子の量を改善することを実施例６Ｂに例示した。実際に、他の化合物と比較してｓｃＦｖフォーマットがＩＶＴ注射あたりにより多い量の薬物を送達できることが例示される。このことは、ｓｃＦｖフォーマットがより大きな補体阻害を達成でき、治療効果を支えることを確認する。加えて、本発明者らは、Ｆａｂ又はＩｇＧと比較してｓｃＦｖフォーマットがＩＶＴ注射後に良好な網膜浸透を可能にすることを示した。
ＺＩＭＵＲＡ（登録商標）（又はアバシンカプタドペゴル（ａｖａｃｉｎｃａｐｔａｄ ｐｅｇｏｌ））は、Ｃ５ａ及びＣ５ｂへの補体因子Ｃ５切断を阻害するように設計される。ＺＩＭＵＲＡ（登録商標）は、Ｃ３に結合しない。
本発明者らは、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片のフォーマットが、硝子体内注射あたりの眼に送達される薬物分子の量を改善することを実施例６Ｂに例示した。実際に、他の化合物と比較してｓｃＦｖフォーマットがＩＶＴ注射あたりにより多い量の薬物を送達できることが例示される。このことは、ｓｃＦｖフォーマットがより大きな補体阻害を達成でき、治療効果を支えることを確認する。加えて、本発明者らは、Ｆａｂ又はＩｇＧと比較してｓｃＦｖフォーマットがＩＶＴ注射後に良好な網膜浸透を可能にすることを示した。
【0091】
本発明者らは、実施例７に例示する通り、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片の作用強度を、とりわけ、比較化合物Ａ１などのコンプスタチン誘導体、及び比較化合物Ａ３などのＣ３に対して向けられたＩｇＧとの比較で比較した。本発明者らは、本発明の抗体が、比較化合物Ａ１及び比較化合物Ａ３と比較してさらに強力に古典、代替及びレクチン経路を阻害することを示した。本発明者らは、比較化合物Ａ１と比較した場合に、本発明の例示的抗体又はその断片がＣＰ及びＬＰを阻害することにさらに強力であることをさらに評価した。本発明者らは、阻害の作用強度において比較化合物Ａ１と比較してＡＰが溶血アッセイにおいて改善されていることも示した。
本発明者らは、実施例８において、既存の化合物、比較化合物Ａ１などのコンプスタチン誘導体及び比較化合物Ａ３などのＣ３に対して向けられたＩｇＧと比較して、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片の結合親和性も例示した。例示的抗体の高い結合親和性は、硝子体内注射後のＣ３の中和時間の延長に寄与し、注射頻度の低減をさらに可能にする。改善された結合親和性及び注射頻度の低減は、患者の処置の有効性を相当に改善する。それは、患者に貴重な利益、特に、薬物の順守及びコンプライアンスの改善も提供する。
本発明者らは、実施例８において、既存の化合物、比較化合物Ａ１などのコンプスタチン誘導体及び比較化合物Ａ３などのＣ３に対して向けられたＩｇＧと比較して、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片の結合親和性も例示した。例示的抗体の高い結合親和性は、硝子体内注射後のＣ３の中和時間の延長に寄与し、注射頻度の低減をさらに可能にする。改善された結合親和性及び注射頻度の低減は、患者の処置の有効性を相当に改善する。それは、患者に貴重な利益、特に、薬物の順守及びコンプライアンスの改善も提供する。
【0092】
加えて、本発明者らは、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片が、比較化合物Ａ１などのコンプスタチン誘導体及び比較化合物Ａ３などのＣ３に対して向けられたＩｇＧと比較して、さらに高い親和性を有してヒトＣ３及びＣ３ｂに結合し、Ｃ３のさらに強力な阻害を可能にすることを示した。比較化合物Ａ３と比較して、本発明の抗体は、さらに高い親和性でＣ３ｂに結合し、それにより、Ｃ３増幅ループにおけるＣ３ｂの生成、及び代替活性化経路によって生成され、既に沈着したＣ３ｂ及びＣ３ｂの活性を遮断する。
本発明者らは、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片が、ヒトＣ３の疾患関連単一ヌクレオチド多型（ＳＮＰ）に結合し、本発明の抗体が眼科疾患又は眼疾患を罹患している広範な患者を処置できることを確実にすることも実施例８に示した。本発明者らは、比較化合物Ａ１のヒトＣ３の前記ＳＮＰへの結合親和性と比較して、前記結合親和性が改善されることをさらに示した。
本発明者らは、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片が、ヒトＣ３の疾患関連単一ヌクレオチド多型（ＳＮＰ）に結合し、本発明の抗体が眼科疾患又は眼疾患を罹患している広範な患者を処置できることを確実にすることも実施例８に示した。本発明者らは、比較化合物Ａ１のヒトＣ３の前記ＳＮＰへの結合親和性と比較して、前記結合親和性が改善されることをさらに示した。
【0093】
本発明者らは、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片がブルッフ膜を超える透過を改善できる一方で、比較化合物Ａ２及びＺＩＭＵＲＡ（登録商標）は浸透を示さず、比較化合物Ａ３は低減した浸透を示すだけだったことを実施例１０に例示する。大部分の補体活性は、ＲＰＥ／ブルッフ膜／ＣＣ領域においてであることから、ブルッフ膜を通じた優れた組織浸透及び拡散は、Ｃ３経路を阻害する治療アプローチに不可欠である。
最終的に本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、実施例７に例示の通り高い親和性及び作用強度を有して全ての補体エフェクターを阻害する。これは、全ての経路におけるＣ３増幅ループ並びに既に形成されたＣ３ｂの活性及びＣ３「ティックオーバー」活性化によって生成されたＣ３ｂの活性の阻害をもたらす。結果は、全ての補体活性化経路及び全ての補体エフェクター機能の完全な阻害である。
最終的に本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、実施例７に例示の通り高い親和性及び作用強度を有して全ての補体エフェクターを阻害する。これは、全ての経路におけるＣ３増幅ループ並びに既に形成されたＣ３ｂの活性及びＣ３「ティックオーバー」活性化によって生成されたＣ３ｂの活性の阻害をもたらす。結果は、全ての補体活性化経路及び全ての補体エフェクター機能の完全な阻害である。
【0094】
結論として、本発明者らは、ＧＡを罹患している患者を処置するための非常に有望な治療戦略を開発し、比較化合物Ａ２及び比較化合物Ａ３に対する本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片の優位性を示した。本発明者らは、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片が、
・ 硝子体内注射あたりの薬物の送達の改善を可能にし（実施例６Ｂ）、とりわけそのフォーマットに起因して等モルの硝子体内注射後の良好な網膜浸透を示す；
・ とりわけそのフォーマットに起因して改善された治療有効性持続期間を有し、投薬頻度の改善及び患者の順守の増強を確実にする；
・ 標的組織への良好な浸透を有し（実施例１０）、ＲＰＥ及びブルッフ膜に浸透する能力を有し、それにより眼科疾患又は眼疾患の処置におけるその治療潜在力を改善する；
・ 改善された作用強度及びさらに有効な補体遮断を有し、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片が、高い親和性及び作用強度で全ての補体エフェクター機能を阻害することを確認する（実施例７及び８）；
・ Ｃ３に対する改善された結合親和性を有し、硝子体内注射後のＣ３の中和の期間の延長に寄与し、注射頻度の低減をさらに可能にする（実施例８）；
・ Ｃ３ｂに対する改善された結合親和性を有し、特に、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、Ｃ３及びＣ３ｂに同様の親和性で結合し、それによりＣ３増幅ループにおけるＣ３ｂの生成の阻害を確実にする（実施例８）；並びに
・ ヒトＣ３の疾患関連ＳＮＰに対する改善された結合親和性を有し、本発明の抗体が眼科疾患又は眼疾患を罹患している多様な患者を処置できることを確実にする（実施例８）；
・ 安定性の改善を示す（実施例１１及び１３）；並びに
・ 低い免疫原性リスクを有する（実施例４及び１２）
ことを実際に示した。
・ 硝子体内注射あたりの薬物の送達の改善を可能にし（実施例６Ｂ）、とりわけそのフォーマットに起因して等モルの硝子体内注射後の良好な網膜浸透を示す；
・ とりわけそのフォーマットに起因して改善された治療有効性持続期間を有し、投薬頻度の改善及び患者の順守の増強を確実にする；
・ 標的組織への良好な浸透を有し（実施例１０）、ＲＰＥ及びブルッフ膜に浸透する能力を有し、それにより眼科疾患又は眼疾患の処置におけるその治療潜在力を改善する；
・ 改善された作用強度及びさらに有効な補体遮断を有し、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片が、高い親和性及び作用強度で全ての補体エフェクター機能を阻害することを確認する（実施例７及び８）；
・ Ｃ３に対する改善された結合親和性を有し、硝子体内注射後のＣ３の中和の期間の延長に寄与し、注射頻度の低減をさらに可能にする（実施例８）；
・ Ｃ３ｂに対する改善された結合親和性を有し、特に、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、Ｃ３及びＣ３ｂに同様の親和性で結合し、それによりＣ３増幅ループにおけるＣ３ｂの生成の阻害を確実にする（実施例８）；並びに
・ ヒトＣ３の疾患関連ＳＮＰに対する改善された結合親和性を有し、本発明の抗体が眼科疾患又は眼疾患を罹患している多様な患者を処置できることを確実にする（実施例８）；
・ 安定性の改善を示す（実施例１１及び１３）；並びに
・ 低い免疫原性リスクを有する（実施例４及び１２）
ことを実際に示した。
【0095】
加えて、本発明の特定の一実施形態では、抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、ＰＥＧ化されない。本実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、ＺＩＭＵＲＡ（登録商標）又はＡＰＬ－２などの比較化合物に関して開示された臨床試験において観察された通り、血管新生を誘導するリスクの低減を示した。
全体として、本発明の抗体は、滲出型ＡＭＤ、特にＧＡにおける最長の効果持続期間、モルあたりの薬物の患者による最良の順守の改善及び最良の網膜有効性を有する非常に有効な処置であると証明された。
一態様では、本発明は、抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。
抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、硝子体内、経口、非経口、皮下、腹腔内、肺内及び鼻腔内を含むあらゆる好適な手段によって投与される。非経口注入は、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内又は皮下投与を含む。加えて、抗Ｃ３抗体は、パルス注入によって、特に抗体の用量を減少させて、好適に投与される。一態様では、投薬は、投与が短期であるか、又は長期であるかに一部応じて、注射、最も好ましくは静脈内注射又は皮下注射によって与えられる。一実施形態では、抗Ｃ３抗体は、眼に硝子体内注射を通じて投与される。
全体として、本発明の抗体は、滲出型ＡＭＤ、特にＧＡにおける最長の効果持続期間、モルあたりの薬物の患者による最良の順守の改善及び最良の網膜有効性を有する非常に有効な処置であると証明された。
一態様では、本発明は、抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。
抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、硝子体内、経口、非経口、皮下、腹腔内、肺内及び鼻腔内を含むあらゆる好適な手段によって投与される。非経口注入は、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内又は皮下投与を含む。加えて、抗Ｃ３抗体は、パルス注入によって、特に抗体の用量を減少させて、好適に投与される。一態様では、投薬は、投与が短期であるか、又は長期であるかに一部応じて、注射、最も好ましくは静脈内注射又は皮下注射によって与えられる。一実施形態では、抗Ｃ３抗体は、眼に硝子体内注射を通じて投与される。
【0096】
疾患の予防又は処置のために、抗体の適切な投薬量は、上に定義される通り、処置される疾患の種類、疾患の重症度及び経過、抗体が予防目的で、又は治療目的で投与されるかどうか、先行する治療、患者の病歴及び抗体への応答並びに主治医の判断などの種々の要因に依存する。抗体は、患者に１回で、又は一連の処置にわたって適切に投与される。
一部の実施形態では、注射あたりで適用可能な本発明の抗体の用量範囲は、１ｍｇ／眼～２０ｍｇ／眼、又は５ｍｇ／眼～２０ｍｇ／眼の間又は１０ｍｇ／眼～１５ｍｇ／眼の間又は約１５ｍｇ／眼である。
用語「抑制」は、本明細書において疾患の１個又は複数個の特徴を和らげること又は減少させることを意味して「改善」及び「緩和」と同じ文脈で使用される。
抗体組成物は、適正な医療行為に合致する様式で製剤化、投薬及び投与される。この文脈において考慮すべき要素としては、処置される特定の障害、処置される特定の哺乳動物、個々の患者の臨床状態、障害の原因、薬剤の送達部位、投与の方法、投与のスケジュール及び医師に公知の他の要素が挙げられる。投与される抗体の「治療有効量」は、このような考慮すべき事柄によって決定され、本発明の抗体によって対処される眼科疾患又は眼疾患を予防するか、改善するか、又は処置するために必要な最小量である。
一部の実施形態では、注射あたりで適用可能な本発明の抗体の用量範囲は、１ｍｇ／眼～２０ｍｇ／眼、又は５ｍｇ／眼～２０ｍｇ／眼の間又は１０ｍｇ／眼～１５ｍｇ／眼の間又は約１５ｍｇ／眼である。
用語「抑制」は、本明細書において疾患の１個又は複数個の特徴を和らげること又は減少させることを意味して「改善」及び「緩和」と同じ文脈で使用される。
抗体組成物は、適正な医療行為に合致する様式で製剤化、投薬及び投与される。この文脈において考慮すべき要素としては、処置される特定の障害、処置される特定の哺乳動物、個々の患者の臨床状態、障害の原因、薬剤の送達部位、投与の方法、投与のスケジュール及び医師に公知の他の要素が挙げられる。投与される抗体の「治療有効量」は、このような考慮すべき事柄によって決定され、本発明の抗体によって対処される眼科疾患又は眼疾患を予防するか、改善するか、又は処置するために必要な最小量である。
【0097】
抗体は、問題の障害を予防するか、又は処置するために現在使用される１種又は複数種の薬剤と共に製剤化される必要はないが、製剤化されてもよい。そのような他の薬剤の有効量は、製剤中に存在する抗Ｃ３抗体の量、障害又は処置の種類及び上で考察された他の要素に依存する。これらは、本明細書の前記で使用されたのと同じ投薬量及び投与経路で、又はこれまでに使用された投薬量の約１～９９％で一般に使用される。
具体的な態様では、本発明は、抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片及び薬学的に許容される担体及び少なくとも１種の追加的治療剤を含む医薬組成物も提供する。
処置の方法
別の態様では、本発明は、それを必要とする患者における眼科疾患又は眼疾患を処置するか、又は予防するためのあらゆる方法も包含し、前記方法は、本発明の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片の投与を含む。
具体的な態様では、本発明は、抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片及び薬学的に許容される担体及び少なくとも１種の追加的治療剤を含む医薬組成物も提供する。
処置の方法
別の態様では、本発明は、それを必要とする患者における眼科疾患又は眼疾患を処置するか、又は予防するためのあらゆる方法も包含し、前記方法は、本発明の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片の投与を含む。
【0098】
一部の実施形態では、本発明は、本発明による抗体又はその断片の薬学的有効量をそれを必要とする患者に投与することを含む、眼科疾患又は眼疾患を処置する又は予防するための方法に関する。一実施形態では、前記疾患は、網膜症、未熟児網膜症などの増殖性網膜症（ＰＲ）、虚血性網膜症、増殖性糖尿病性網膜症（ＰＤＲ）及び非増殖性糖尿病性網膜症を含む糖尿病性網膜症（ＤＲ）、糖尿病黄斑浮腫（ＤＭＥ）、糖尿病黄斑虚血（ＤＭＩ）、萎縮型ＡＭＤ及び滲出型ＡＭＤを含む加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）、地図状萎縮（ＧＡ）、網膜色素変性症、遺伝性網膜ジストロフィー、近視性変性、網膜静脈閉塞症、網膜動脈閉塞症、眼内炎、ブドウ膜炎、嚢胞様黄斑浮腫、任意の網膜疾患に続発する脈絡膜新生血管膜、視神経症、緑内障、網膜剥離、中毒性網膜症、放射線網膜症、外傷性網膜症、薬剤性網膜脈管障害、網膜血管新生、ポリープ状脈絡膜脈管障害、網膜血管炎、網膜毛細血管瘤、後水晶体線維増殖症、脈絡網膜炎、フックスジストロフィー、黄斑部毛細血管拡張症、アッシャー症候群、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）並びにシュタルガルト疾患からなる群から選択される。
本明細書において記載される全ての開示された技術的特性は、処置の前記方法に適用可能である。
本明細書において記載される全ての開示された技術的特性は、処置の前記方法に適用可能である。
【0099】
医薬組成物及びその投与
抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を含む組成物は、眼科疾患又は眼疾患を有するか、又はそのリスクを有する対象に投与され得る。本発明は、Ｃ３関連疾患の予防又は処置のための医薬の製造における抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片の使用をさらに提供する。本明細書で使用される場合、用語「対象」は、抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片が投与され得る、例えば、ヒト並びに、霊長類、げっ歯類及びイヌなどの非ヒト哺乳動物が挙げられるあらゆる哺乳動物患者を意味する。本明細書に記載される方法を使用する処置について具体的に意図される対象は、ヒトを含む。抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、単独又は他の組成物との組合せのいずれかで投与され得る。
種々の送達システムが公知であり、抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を投与するために使用され得る。導入の方法として、これだけに限らないが、硝子体内、点眼剤、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外及び経口経路が挙げられる。抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、例えば、注入、ボーラス又は注射によって投与されてよく、他の生物学的に活性な薬剤と共に投与されてよい。投与は、全身性又は局所であってよい。好ましい実施形態では、投与は、硝子体内注射によってである。かかる注射のための製剤は、例えば、予め充填されたシリンジ中に調製され得る。
抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を含む組成物は、眼科疾患又は眼疾患を有するか、又はそのリスクを有する対象に投与され得る。本発明は、Ｃ３関連疾患の予防又は処置のための医薬の製造における抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片の使用をさらに提供する。本明細書で使用される場合、用語「対象」は、抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片が投与され得る、例えば、ヒト並びに、霊長類、げっ歯類及びイヌなどの非ヒト哺乳動物が挙げられるあらゆる哺乳動物患者を意味する。本明細書に記載される方法を使用する処置について具体的に意図される対象は、ヒトを含む。抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、単独又は他の組成物との組合せのいずれかで投与され得る。
種々の送達システムが公知であり、抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を投与するために使用され得る。導入の方法として、これだけに限らないが、硝子体内、点眼剤、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外及び経口経路が挙げられる。抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、例えば、注入、ボーラス又は注射によって投与されてよく、他の生物学的に活性な薬剤と共に投与されてよい。投与は、全身性又は局所であってよい。好ましい実施形態では、投与は、硝子体内注射によってである。かかる注射のための製剤は、例えば、予め充填されたシリンジ中に調製され得る。
【0100】
ある特定の実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、眼内に投与される。網膜などの眼の様々な構造への治療化合物の送達は、課題である。課題としては、限定はしないが、いくつかの制限的な眼のバリアー、まばたき及び送達された化合物の洗い流しが挙げられる涙の仕組み、限定的な局所注射体積、限定的な局所生物学的利用率並びに、不純物及び夾雑物への低い許容度が挙げられる（例えば、Patel et al. World J Pharmacol. 2013; 2(2): 47-64；Morrison et al. Ther. Deliv. 2014; 5(12): 1297-1315を参照されたい）。本発明の抗体は、これらの課題を克服し得る。本発明の抗体は、約６０ｋＤａ以下、好ましくは約２５ｋＤａの分子量を好ましくは有する。約６０ｋＤａ以下の抗原結合性タンパク質の例としては、限定はしないが、ｓｃＦｖ、ＶＨＨ及びＦａｂ断片が挙げられる。約２５ｋＤａ以下の抗原結合性タンパク質の例としては、限定はしないがｓｃＦｖ及びＶＨＨが挙げられる。さらに小さいサイズのｓｃＦｖは、注射あたりのさらなる治療化合物の送達を可能にする。これは、眼への高濃度の抗体を可能にする。本発明の抗体のさらに小さいサイズ、特にｓｃＦｖは、疾患関連組織、すなわち眼の脈絡膜領域へのそれらの浸透も改善できる。本発明の抗体は、ハーラー層、サトラー層、脈絡毛細管及びブルッフ膜が挙げられる脈絡膜領域の１個又は複数個の層に浸透し得、それにより、脈絡膜領域のこれらの層内の補体Ｃ３及びＣ３ｂを標的にする。
【0101】
ある特定の実施形態では、眼内投与は、上脈絡膜薬物送達デバイス又は網膜下薬物送達デバイスなどの薬物送達デバイスを用いて達成される。上脈絡膜投与手順は、眼の上脈絡膜腔への薬物の投与を含み、マイクロニードルを備える微量注入器などの上脈絡膜薬物送達デバイスを使用して通常実施される（それぞれその全体が本明細書に参照により組み込まれる、例えば、Hariprasad, Retinal Physician; 2016; 13: 20-23；Goldstein, 2014, Retina Today 9(5): 82-87を参照されたい）。
ある特定の実施形態では、眼内投与は、硝子体内経路を介して達成される。硝子体内投与は、シリンジ及び２７ゲージ～３０ゲージ針を用いてしばしば実施される（例えば、Jiang et al.上記を参照されたい）。
投与のこれら全ての形態が、本発明の範囲内であるとして明らかに検討される一方で、投与の形態は、注射用、特に硝子体内注射用の溶液である。通常、注射用の好適な医薬組成物は、緩衝液（例えば、酢酸緩衝液、リン酸緩衝液又はクエン酸緩衝液）、界面活性剤（例えば、ポリソルベート）、任意に安定剤（例えば、ヒトアルブミン）などを含んでよい。しかし、本明細書の教示に適合する他の方法では、本発明の抗体は、有害な細胞集団の部位に直接送達されてよく、それにより疾患組織の治療剤への曝露は増大する。
ある特定の実施形態では、眼内投与は、硝子体内経路を介して達成される。硝子体内投与は、シリンジ及び２７ゲージ～３０ゲージ針を用いてしばしば実施される（例えば、Jiang et al.上記を参照されたい）。
投与のこれら全ての形態が、本発明の範囲内であるとして明らかに検討される一方で、投与の形態は、注射用、特に硝子体内注射用の溶液である。通常、注射用の好適な医薬組成物は、緩衝液（例えば、酢酸緩衝液、リン酸緩衝液又はクエン酸緩衝液）、界面活性剤（例えば、ポリソルベート）、任意に安定剤（例えば、ヒトアルブミン）などを含んでよい。しかし、本明細書の教示に適合する他の方法では、本発明の抗体は、有害な細胞集団の部位に直接送達されてよく、それにより疾患組織の治療剤への曝露は増大する。
【0102】
代替的実施形態では、医薬組成物は、ヒトへの静脈内又は皮下投与のために適合された医薬組成物として、日常的手順に従って製剤化され得る。典型的には、注射による投与のための組成物は、滅菌等張水性緩衝液中の溶液である。必要に応じて、医薬品は、可溶化剤及び、注射部位の痛みを和らげるためのリグノカインなどの局所麻酔も含む場合がある。一般に、成分は、別々に、又は単位剤形中に合わせて混合されて、例えば、乾燥凍結乾燥粉剤又は水不含有濃縮物として、活性剤の量を表示しているアンプル又はサシェ（ｓａｃｈｅｔｔｅ）などの密閉シールされている容器中で供給される。医薬品が注入によって投与される場合、滅菌医薬品グレード水又は生理食塩水を含有する注入用ボトルに分注されてよい。医薬品が注射によって投与される場合、注射用滅菌水又は生理食塩水のアンプルは、成分が投与前に混合され得るように提供されてよい。
さらに、医薬組成物は、（ａ）本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を凍結乾燥形態で含む容器、及び（ｂ）注射用の薬学的に許容される希釈剤（例えば、滅菌水）を含む第２の容器を含む医薬品キットとして提供され得る。薬学的に許容される希釈剤は、凍結乾燥抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片の復元又は希釈のために使用され得る。任意にかかる容器に伴うものは、医薬品又は生物学的産物の製造、使用及び販売を規制する行政機関によって規定された形態での表示であってよく、その表示はヒト投与のための製造、使用又は販売の機関による承認を反映する。
さらに、医薬組成物は、（ａ）本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を凍結乾燥形態で含む容器、及び（ｂ）注射用の薬学的に許容される希釈剤（例えば、滅菌水）を含む第２の容器を含む医薬品キットとして提供され得る。薬学的に許容される希釈剤は、凍結乾燥抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片の復元又は希釈のために使用され得る。任意にかかる容器に伴うものは、医薬品又は生物学的産物の製造、使用及び販売を規制する行政機関によって規定された形態での表示であってよく、その表示はヒト投与のための製造、使用又は販売の機関による承認を反映する。
【0103】
眼科疾患又は眼疾患の処置又は予防に有効である本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片の量は、標準的臨床技術によって決定され得る。加えて、ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイは、最適な投薬量範囲の同定を補助するために使用されてもよい。製剤において使用され得る正確な用量は、投与の経路及び障害のステージにも依存し、開業医の判断及び各患者の状況によって決定されるべきである。有効量は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ又は動物モデル試験系に由来する用量応答曲線から推定され得る。
例えば、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片の毒性及び治療有効性は、ＥＤ50（集団の５０％において治療的に有効な用量）を決定するための標準的な医薬品手順によって細胞培養又は実験動物において決定され得る。より大きな治療指数を示す抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、好ましい。
細胞培養アッセイ及び動物試験から得られたデータは、ヒトにおける使用のための投薬量の範囲を明確にするために使用され得る。抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片の投薬量は、毒性がわずかである又は毒性がないＥＤ50を含む循環濃度の範囲内に典型的にはある。投薬量は、使用される剤形及び利用される投与の経路に応じてこの範囲内で変動する場合がある。方法において使用される任意の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片について、治療有効用量は、細胞培養アッセイから最初に概算され得る。用量は、細胞培養において決定されたＩＣ50（すなわち、症状の最大半量の阻害を達成する検査化合物の濃度）を含む循環血漿濃度範囲を達成するように動物モデルにおいて処方され得る。かかる情報は、ヒトにおける有用な用量をさらに正確に決定するために使用され得る。血漿中のレベルは、例えば、高速液体クロマトグラフィー、ＥＬＩＳＡなどによって測定され得る。
例えば、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片の毒性及び治療有効性は、ＥＤ50（集団の５０％において治療的に有効な用量）を決定するための標準的な医薬品手順によって細胞培養又は実験動物において決定され得る。より大きな治療指数を示す抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、好ましい。
細胞培養アッセイ及び動物試験から得られたデータは、ヒトにおける使用のための投薬量の範囲を明確にするために使用され得る。抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片の投薬量は、毒性がわずかである又は毒性がないＥＤ50を含む循環濃度の範囲内に典型的にはある。投薬量は、使用される剤形及び利用される投与の経路に応じてこの範囲内で変動する場合がある。方法において使用される任意の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片について、治療有効用量は、細胞培養アッセイから最初に概算され得る。用量は、細胞培養において決定されたＩＣ50（すなわち、症状の最大半量の阻害を達成する検査化合物の濃度）を含む循環血漿濃度範囲を達成するように動物モデルにおいて処方され得る。かかる情報は、ヒトにおける有用な用量をさらに正確に決定するために使用され得る。血漿中のレベルは、例えば、高速液体クロマトグラフィー、ＥＬＩＳＡなどによって測定され得る。
【0104】
本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片の硝子体内注射について、処置間のより長い間隔は一般に好ましい。その作用強度の改善により、本発明の抗Ｃ３抗体は、より長い間隔で投与され得る。
一実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、６週間ごと、好ましくは７週間ごと、好ましくは８週間ごと、好ましくは９週間ごと、好ましくは１０週間ごと、好ましくは１１週間ごと、より好ましくは１２週間ごとに投与される。さらに好ましい実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、３カ月ごとに１回投与される。
眼に投与され得る体積が厳密に制限されることから、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片が高濃度に製剤化され得ることは非常に重要である。さらに、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片の作用強度は、強力な抗体がその効果を低用量でさえ発揮でき、それにより活性及び処置間の間隔も延長することから非常に重要である。
一実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、６週間ごと、好ましくは７週間ごと、好ましくは８週間ごと、好ましくは９週間ごと、好ましくは１０週間ごと、好ましくは１１週間ごと、より好ましくは１２週間ごとに投与される。さらに好ましい実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、３カ月ごとに１回投与される。
眼に投与され得る体積が厳密に制限されることから、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片が高濃度に製剤化され得ることは非常に重要である。さらに、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片の作用強度は、強力な抗体がその効果を低用量でさえ発揮でき、それにより活性及び処置間の間隔も延長することから非常に重要である。
【0105】
本発明の抗体は、これだけに限らないが、２０ｍｇ／ｍｌ、３０ｍｇ／ｍｌ、４０ｍｇ／ｍｌ、５０ｍｇ／ｍｌ、６０ｍｇ／ｍｌ、７０ｍｇ／ｍｌ、８０ｍｇ／ｍｌ、９０ｍｇ／ｍｌ、１００ｍｇ／ｍｌ、１１０ｍｇ／ｍｌ、１２０ｍｇ／ｍｌ、１３０ｍｇ／ｍ、１４０ｍｇ／ｍｌ、１５０ｍｇ／ｍｌ、１６０ｍｇ／ｍｌ、１７０ｍｇ／ｍｌ、１８０ｍｇ／ｍｌ、１９０ｍｇ／ｍｌ、２００ｍｇ／ｍｌを含む非常に高い用量に製剤化され得る。好ましくは、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、製剤を約９０ｍｇ／ｍｌ～１８０ｍｇ／ｍｌの間、より好ましくは１３０ｍｇ／ｍｌ～１６０ｍｇ／ｍｌの間に含まれる濃度で液体製剤中に製剤化され得る。好ましくは、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、約１５０ｍｇ／ｍｌの液体製剤中に製剤化され得る。
患者に投与され得る典型的投薬量は、約２．５ｍｇ／眼～２０ｍｇ／眼の間、又は７．５ｍｇ／眼～１５ｍｇ／眼の間である。特定の実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、１眼あたり７．５ｍｇの濃度で患者に投与され得る。別の特定の実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、１眼あたり１５ｍｇの濃度で患者に投与され得る。このような製剤のために使用され得る典型的緩衝成分は、例えば、酢酸ナトリウム、ＰＳ２０及びトレハロース二水和物を含む。
患者に投与され得る典型的投薬量は、約２．５ｍｇ／眼～２０ｍｇ／眼の間、又は７．５ｍｇ／眼～１５ｍｇ／眼の間である。特定の実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、１眼あたり７．５ｍｇの濃度で患者に投与され得る。別の特定の実施形態では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、１眼あたり１５ｍｇの濃度で患者に投与され得る。このような製剤のために使用され得る典型的緩衝成分は、例えば、酢酸ナトリウム、ＰＳ２０及びトレハロース二水和物を含む。
【0106】
一部の実施形態では、抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を含む医薬組成物は、結合剤にコンジュゲートされた又はコンジュゲートされていないかのいずれかの治療剤をさらに含み得る。
コンビナトリアル投与のための治療レジメンに関して、具体的な実施形態では、抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、治療剤と同時に投与される。別の具体的な実施形態では、治療剤は、抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片の投与に少なくとも１時間～数カ月に至って先立って又は続いて、例えば、抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片の投与に少なくとも１時間、５時間、１２時間、１日、１週間、１カ月又は３カ月先立って又は続いて投与される。
ポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞及び組換え方法
一態様では、本発明は、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片をコードする配列を含む単離されたポリヌクレオチド、ポリヌクレオチドを含むベクター及び宿主細胞並びに抗体の産生ための組換え技術を包含する。単離されたポリヌクレオチドは、例えば、全長モノクローナル抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）2及びＦｖ断片、ダイアボディ、直鎖状抗体、一本鎖抗体分子並びに抗体断片から形成された多重特異的抗体を含む、抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片のあらゆる望ましい形態をコードし得る。
コンビナトリアル投与のための治療レジメンに関して、具体的な実施形態では、抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、治療剤と同時に投与される。別の具体的な実施形態では、治療剤は、抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片の投与に少なくとも１時間～数カ月に至って先立って又は続いて、例えば、抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片の投与に少なくとも１時間、５時間、１２時間、１日、１週間、１カ月又は３カ月先立って又は続いて投与される。
ポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞及び組換え方法
一態様では、本発明は、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片をコードする配列を含む単離されたポリヌクレオチド、ポリヌクレオチドを含むベクター及び宿主細胞並びに抗体の産生ための組換え技術を包含する。単離されたポリヌクレオチドは、例えば、全長モノクローナル抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）2及びＦｖ断片、ダイアボディ、直鎖状抗体、一本鎖抗体分子並びに抗体断片から形成された多重特異的抗体を含む、抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片のあらゆる望ましい形態をコードし得る。
【0107】
本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片をコードする配列を含むポリヌクレオチドは、当技術分野において公知の１種又は複数種の制御又は調節配列に融合されてよく、当技術分野において公知の好適な発現ベクター又は宿主細胞に含有されてよい。重鎖又は軽鎖可変ドメインをコードするそれぞれのポリヌクレオチド分子は、インタクトな抗体の産生を可能にするように、ヒト定常ドメインなどの定常ドメインをコードするポリヌクレオチド配列に独立して融合され得る。代替的に、ポリヌクレオチド又はその一部は、合わせて融合されてよく、一本鎖抗体の産生のための鋳型を提供する。
組換え産生のために、抗体又はその抗原結合性断片をコードするポリヌクレオチドは、クローニング（ＤＮＡの増幅）のために又は発現のために複製可能なベクターに挿入される。組換え抗体を発現するための多数の好適なベクターは、利用可能である。ベクター構成成分はこれだけに限らないが、以下：シグナル配列、複製開始点、１種若しくは複数種のマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーター並びに転写終結配列の１種又は複数種を一般に含む。
組換え産生のために、抗体又はその抗原結合性断片をコードするポリヌクレオチドは、クローニング（ＤＮＡの増幅）のために又は発現のために複製可能なベクターに挿入される。組換え抗体を発現するための多数の好適なベクターは、利用可能である。ベクター構成成分はこれだけに限らないが、以下：シグナル配列、複製開始点、１種若しくは複数種のマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーター並びに転写終結配列の１種又は複数種を一般に含む。
【0108】
本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、前記抗体又はその断片が、シグナル配列、又は成熟タンパク質若しくはポリペプチドのアミノ末端に特異的切断部位を有する他のポリペプチドなどの異種性ポリペプチドに融合されている、融合ポリペプチドとしても産生され得る。選択される異種性シグナル配列は、典型的には宿主細胞によって認識及びプロセスされる（すなわち、シグナルペプチダーゼによって切断される）ものである。抗Ｃ３抗体シグナル配列を認識及びプロセスしない原核宿主細胞について、シグナル配列は、原核シグナル配列によって置換され得る。シグナル配列は、例えば、アルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼ、リポタンパク質、熱安定性エンテロトキシンＩＩリーダーなどであってよい。酵母分泌のために、天然シグナル配列は、例えば、酵母インベルターゼアルファ因子（サッカロマイセス及びクルイベロマイセスα因子リーダーを含む）、酸性ホスファターゼ、Ｃ．アルビカンス（Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ）グルコアミラーゼ又はＷＯ９０／１３６４６に記載されているシグナルから得られるリーダー配列を用いて置換され得る。哺乳動物細胞では、哺乳動物シグナル配列及びウイルス分泌リーダー、例えば、単純ヘルペスｇＤシグナルは、使用され得る。かかる前駆体領域についてのＤＮＡは、ヒト化抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片をコードするＤＮＡにリーディングフレームでライゲーションされる。
【0109】
発現及びクローニングベクターは、ベクターが１種又は複数種の選択された宿主細胞中で複製できるようにする核酸配列を含む。一般にクローニングベクターでは、この配列は、ベクターが宿主染色体ＤＮＡと無関係に複製できるようにするものであり、複製開始点又は自己複製配列を含む。かかる配列は、種々の細菌、酵母及びウイルスについて周知である。プラスミドｐＢＲ３２２由来の複製開始点は、大部分のグラム陰性細菌について好適であり、２－νプラスミド開始点は、酵母に好適であり、種々のウイルス開始点（ＳＶ４０、ポリオーマ、アデノウイルス、ＶＳＶ及びＢＰＶ）は、哺乳動物細胞におけるクローニングベクターのために有用である。一般に複製開始点構成成分は、哺乳動物発現ベクターのためには必要でない（ＳＶ４０開始点は、それが初期プロモーターを含有していることだけで、典型的に使用され得る）。
発現及びクローニングベクターは、発現の同定を促進する選択可能マーカーをコードする遺伝子を含有する場合がある。典型的な選択可能マーカー遺伝子は、抗生物質又は他の毒素、例えば、アンピシリン、ネオマイシン、メトトレキサート若しくはテトラサイクリンに対する抵抗性を付与する、又は代替的に栄養要求性欠損補完物である、又は他の代替手段では複合培地に存在しない特定の栄養素を供給するタンパク質をコードする、例えば、桿菌についてのＤ－アラニンラセマーゼをコードする遺伝子。
発現及びクローニングベクターは、発現の同定を促進する選択可能マーカーをコードする遺伝子を含有する場合がある。典型的な選択可能マーカー遺伝子は、抗生物質又は他の毒素、例えば、アンピシリン、ネオマイシン、メトトレキサート若しくはテトラサイクリンに対する抵抗性を付与する、又は代替的に栄養要求性欠損補完物である、又は他の代替手段では複合培地に存在しない特定の栄養素を供給するタンパク質をコードする、例えば、桿菌についてのＤ－アラニンラセマーゼをコードする遺伝子。
【0110】
選択スキームの一例は、宿主細胞の増殖を停止するための薬物を利用する。異種性遺伝子を用いて良好に形質転換されるこれらの細胞は、薬物耐性を付与するタンパク質を産生し、それにより選択レジメンを生き残る。かかる優性選択の例は、薬物ネオマイシン、ミコフェノール酸及びハイグロマイシンを使用する。哺乳動物細胞のための一般的な選択可能マーカーは、ヒト化抗Ｃ３抗体をコードする核酸を取り込む能力がある細胞の同定を可能にするものであり、例えば、ＤＨＦＲ（ジヒドロ葉酸還元酵素）、チミジンキナーゼ、メタロチオネイン－Ｉ及びＩＩ（霊長類メタロチオネイン遺伝子など）、アデノシンデアミナーゼ、オルニチンデカルボキシラーゼなど。ＤＨＦＲ選択遺伝子を用いて形質転換された細胞は、メトトレキサート（Ｍｔｘ）、ＤＨＦＲの競合的アンタゴニストを含有する培養培地中で全ての形質転換体を培養することによって最初に同定される。野生型ＤＨＦＲが使用される場合適切な宿主細胞は、ＤＨＦＲ活性を欠損しているチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞系である（例えば、ＤＧ４４）。
代替的に、抗Ｃ３抗体、野生型ＤＨＦＲタンパク質及び、アミノグリコシド３’－ホスホトランスフェラーゼ（ＡＰＨ）などの別の選択可能マーカーをコードするＤＮＡ配列を用いて形質転換された又は同時形質転換された宿主細胞（特に、内在性ＤＨＦＲを含有する野生型宿主）は、アミノグリコシド抗菌薬、例えば、カナマイシン、ネオマイシン又はＧ４１８などの選択可能マーカーに対する選択剤を含有する培地での細胞増殖によって選択され得る。例えば、米国特許第４，９６５，１９９号を参照されたい。
代替的に、抗Ｃ３抗体、野生型ＤＨＦＲタンパク質及び、アミノグリコシド３’－ホスホトランスフェラーゼ（ＡＰＨ）などの別の選択可能マーカーをコードするＤＮＡ配列を用いて形質転換された又は同時形質転換された宿主細胞（特に、内在性ＤＨＦＲを含有する野生型宿主）は、アミノグリコシド抗菌薬、例えば、カナマイシン、ネオマイシン又はＧ４１８などの選択可能マーカーに対する選択剤を含有する培地での細胞増殖によって選択され得る。例えば、米国特許第４，９６５，１９９号を参照されたい。
【0111】
組換え産生が宿主細胞としての酵母細胞において実施される場合、酵母プラスミドＹＲｐ７に存在するＴＲＰ１遺伝子（Stinchcomb et al., 1979, Nature 282: 39）は、選択可能マーカーとして使用され得る。ＴＲＰ１遺伝子は、トリプトファン中で増殖する能力を欠いている酵母の変異体株、例えばＡＴＣＣ番号４４０７６又はＰＥＰ４－１のための選択マーカーを提供する（Jones, 1977、Genetics 85:12）。酵母宿主細胞ゲノム中のｔｒｐ１損傷の存在は、次に、トリプトファンの非存在下での増殖によって、形質転換を検出するための有効な環境を提供する。同様に、Ｌｅｕ２ｐ欠損酵母株、ＡＴＣＣ２０，６２２及び３８，６２６などは、ＬＥＵ２遺伝子を保有する公知のプラスミドによって補完される。
加えて、１．６μｍ環状プラスミドｐＫＤ１由来のベクターは、クリベロマイセス酵母の形質転換のために使用され得る。代替的に、組換え仔ウシキモシンの大規模産生のための発現システムは、Ｋ．ラクチス（Ｋ．ｌａｃｔｉｓ）について報告された（Van den Berg, 1990, Bio/Technology 8:135）。クリベロマイセスの工業用株による成熟組換えヒト血清アルブミンの分泌のための安定なマルチコピー発現ベクターも開示されている（Fleer et al., 1991, Bio/Technology 9:968-975）。
加えて、１．６μｍ環状プラスミドｐＫＤ１由来のベクターは、クリベロマイセス酵母の形質転換のために使用され得る。代替的に、組換え仔ウシキモシンの大規模産生のための発現システムは、Ｋ．ラクチス（Ｋ．ｌａｃｔｉｓ）について報告された（Van den Berg, 1990, Bio/Technology 8:135）。クリベロマイセスの工業用株による成熟組換えヒト血清アルブミンの分泌のための安定なマルチコピー発現ベクターも開示されている（Fleer et al., 1991, Bio/Technology 9:968-975）。
【0112】
発現及びクローニングベクターは、宿主生物によって認識され、抗Ｃ３抗体又はそのポリペプチド鎖をコードする核酸分子に作動可能に連結されているプロモーターを通常含有する。原核宿主を用いた使用のために好適なプロモーターとして、ｐｈｏＡプロモーター、β－ラクタマーゼ及びラクトースプロモーターシステム、アルカリホスファターゼ、トリプトファン（ｔｒｐ）プロモーターシステム及びｔａｃプロモーターなどのハイブリッドプロモーターが挙げられる。他の公知の細菌性プロモーターも好適である。細菌のシステムにおける使用のためのプロモーターは、ヒト化抗Ｃ３抗体をコードするＤＮＡに作動可能に連結されたシャイン・ダルガーノ（Ｓｈｉｎｅ－Ｄａｌｇａｍｏ）（Ｓ．Ｄ．）配列も含有する。
多数の真核プロモーター配列が公知である。実質的に全ての真核遺伝子は、転写が開始される部位からおよそ２５～３０塩基上流に位置するＡＴリッチ領域を有する。多数の遺伝子の転写の開始から７０～８０塩基上流に見出される別の配列は、ＣＮＣＡＡＴ領域であり、式中Ｎは、任意のヌクレオチドであってよい。大部分の真核遺伝子の３’末端は、ＡＡＴＡＡＡ配列であり、コード配列の３’末端へのポリＡテールの付加のためのシグナルである可能性がある。これらの配列の全ては、真核発現ベクターに好適に挿入される。
多数の真核プロモーター配列が公知である。実質的に全ての真核遺伝子は、転写が開始される部位からおよそ２５～３０塩基上流に位置するＡＴリッチ領域を有する。多数の遺伝子の転写の開始から７０～８０塩基上流に見出される別の配列は、ＣＮＣＡＡＴ領域であり、式中Ｎは、任意のヌクレオチドであってよい。大部分の真核遺伝子の３’末端は、ＡＡＴＡＡＡ配列であり、コード配列の３’末端へのポリＡテールの付加のためのシグナルである可能性がある。これらの配列の全ては、真核発現ベクターに好適に挿入される。
【0113】
酵母宿主を用いた使用のために好適な促進配列の例は、３－ホスホグリセレートキナーゼ又は他の解糖酵素、例えば、エノラーゼ、グリセルアルデヒド－３－リン酸デヒドロゲナーゼ、ヘキソキナーゼ、ピルビン酸デカルボキシラーゼ、ホスホフルクトキナーゼ、グルコース－６－リン酸イソメラーゼ、３－ホスホグリセレートムターゼ、ピルビン酸キナーゼ、トリオースリン酸イソメラーゼ、ホスホグルコースイソメラーゼ及びグルコキナーゼについてのプロモーターを含む。
誘導性プロモーターは、増殖条件によって調節される転写の追加的有利点を有する。これらとして、アルコールデヒドロゲナーゼ２、イソチトクロムＣ、酸性ホスファターゼ、窒素代謝に関連する酵素誘導体、メタロチオネイン、グリセルアルデヒド－３－リン酸デヒドロゲナーゼ並びにマルトース及びガラクトース利用に関与する酵素のための酵母プロモーター領域を含む。酵母エンハンサーも酵母プロモーターと共に有利に使用される。
哺乳動物宿主細胞におけるベクターからの本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片転写は、例えば、ポリオーマウイルス、鶏痘ウイルス、アデノウイルス（アデノウイルス２など）、ウシパピローマウイルス、鳥類肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス、レトロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス及びサルウイルス４０（ＳＶ４０）などのウイルスのゲノムから、例えば、アクチンプロモーター若しくは免疫グロブリンプロモーターの異種性哺乳動物プロモーターから、又はヒートショックプロモーターから得られたプロモーターによって、かかるプロモーターが宿主細胞システムと適合性である条件で調節される。
誘導性プロモーターは、増殖条件によって調節される転写の追加的有利点を有する。これらとして、アルコールデヒドロゲナーゼ２、イソチトクロムＣ、酸性ホスファターゼ、窒素代謝に関連する酵素誘導体、メタロチオネイン、グリセルアルデヒド－３－リン酸デヒドロゲナーゼ並びにマルトース及びガラクトース利用に関与する酵素のための酵母プロモーター領域を含む。酵母エンハンサーも酵母プロモーターと共に有利に使用される。
哺乳動物宿主細胞におけるベクターからの本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片転写は、例えば、ポリオーマウイルス、鶏痘ウイルス、アデノウイルス（アデノウイルス２など）、ウシパピローマウイルス、鳥類肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス、レトロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス及びサルウイルス４０（ＳＶ４０）などのウイルスのゲノムから、例えば、アクチンプロモーター若しくは免疫グロブリンプロモーターの異種性哺乳動物プロモーターから、又はヒートショックプロモーターから得られたプロモーターによって、かかるプロモーターが宿主細胞システムと適合性である条件で調節される。
【0114】
ＳＶ４０ウイルスの初期及び後期プロモーターは、ＳＶ４０ウイルス複製開始点も含有するＳＶ４０制限断片として好都合に得られる。ヒトサイトメガロウイルスの最初期プロモーターは、ＨｉｎｄＩＩＩ Ｅ制限断片として好都合に得られる。ウシパピローマウイルスをベクターとして使用して哺乳動物宿主においてＤＮＡを発現するためのシステムは、米国特許第４，４１９，４４６号に開示されている。このシステムの変法は、米国特許第４，６０１，９７８号に記載されている。単純ヘルペスウイルス由来のチミジンキナーゼプロモーターの調節下でのマウス細胞におけるヒトｐ－インターフェロンｃＤＮＡの発現を開示しているReyes et al., 1982, Nature 297:598-601も参照されたい。代替的に、ラウス肉腫ウイルス末端反復配列もプロモーターとして使用され得る。
【0115】
組換え発現ベクターにおいて使用され得る別の有用なエレメントは、エンハンサー配列であり、高等真核生物による本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片をコードするＤＮＡの転写を増加させるために使用される。多数のエンハンサー配列が哺乳動物の遺伝子から現在公知である（例えば、グロビン、エラスターゼ、アルブミン、α－フェトプロテイン及びインスリン）。しかし典型的には、真核細胞ウイルス由来のエンハンサーが使用される。例として、複製起点（ｂｐ１００～２７０）の後ろにあるＳＶ４０エンハンサー、サイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、複製起点の後ろにあるポリオーマエンハンサー及びアデノウイルスエンハンサーが挙げられる。真核プロモーターの活性化のための増強エレメントの記載についてYaniv, 1982, Nature 297:17-18も参照されたい。エンハンサーは、抗Ｃ３抗体コード配列の５’又は３’位でベクターにスプライスされ得るが、プロモーターから５’の部位に好ましくは位置する。
真核宿主細胞（酵母、真菌、昆虫、植物、動物、ヒト又は他の多細胞生物由来の有核細胞）において使用される発現ベクターは、転写の終結のため、及びｍＲＮＡの安定化のために必要な配列も含み得る。そのような配列は、真核又はウイルスＤＮＡ又はｃＤＮＡの５’及び、時に３’非翻訳領域から一般に利用可能である。これらの領域は、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片をコードするｍＲＮＡの非翻訳部分中のポリアデニル化断片として転写されるヌクレオチドセグメントを含有する。１種の有用な転写終結構成成分は、ウシ成長ホルモンポリアデニル化領域である。ＷＯ９４／１１０２６及びこれに開示される発現ベクターを参照されたい。一部の実施形態では、抗Ｃ３抗体は、ＣＨＥＦシステムを使用して発現され得る（例えば、米国特許第５，８８８，８０９号を参照されたい）。
真核宿主細胞（酵母、真菌、昆虫、植物、動物、ヒト又は他の多細胞生物由来の有核細胞）において使用される発現ベクターは、転写の終結のため、及びｍＲＮＡの安定化のために必要な配列も含み得る。そのような配列は、真核又はウイルスＤＮＡ又はｃＤＮＡの５’及び、時に３’非翻訳領域から一般に利用可能である。これらの領域は、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片をコードするｍＲＮＡの非翻訳部分中のポリアデニル化断片として転写されるヌクレオチドセグメントを含有する。１種の有用な転写終結構成成分は、ウシ成長ホルモンポリアデニル化領域である。ＷＯ９４／１１０２６及びこれに開示される発現ベクターを参照されたい。一部の実施形態では、抗Ｃ３抗体は、ＣＨＥＦシステムを使用して発現され得る（例えば、米国特許第５，８８８，８０９号を参照されたい）。
【0116】
本明細書のベクターにおいてＤＮＡをクローニング又は発現するために好適な宿主細胞は、上に記載される原核生物、酵母又は高等真核生物細胞である。この目的のために好適な原核生物として、グラム陰性又はグラム陽性菌などの真正細菌、例えば、大腸菌類、例えば大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、エンテロバクター、エルウィニア、クレブシレア、プロテウスなどの腸内細菌、サルモネラ、例えばサルモネラ・チフィリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、セラチア、例えばセラチア・マルセセンス（Ｓｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃａｎｓ）及び赤痢菌並びに桿菌、例えば枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）及びＢ．リケニフォルミス（Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）（例えば、１９８９年４月１２日公開ＤＤ２６６，７１０に開示されているＢ．リケニフォルミス４１Ｐ）、シュードモナス、例えば緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）及びストレプトマイセスが挙げられる。大腸菌Ｂ、大腸菌Ｘ１７７６（ＡＴＣＣ３１，５３７）及び大腸菌Ｗ３１１０（ＡＴＣＣ２７，３２５）などの他の株も好適であるが、１種の好ましい大腸菌クローニング宿主は、大腸菌２９４（ＡＴＣＣ３１，４４６）である。これらの例は、限定ではなく例示である。
【0117】
原核生物に加えて、糸状性真菌又は酵母などの真核微生物は、抗Ｃ３抗体コードベクターのための好適なクローニング又は発現宿主である。出芽酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）又は一般的なパン酵母は、下等真核宿主微生物の内で最も一般的に使用されている。しかし、シゾサッカロミセス・ポンベ（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ）；クリベロミセス宿主、例えば、Ｋ．ラクチス、Ｋ．フラジリス（Ｋ．ｆｒａｇｉｌｉｓ）（ＡＴＣＣ１２，４２４）、Ｋ．ブルガリクス（Ｋ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）（ＡＴＣＣ１６，０４５）、Ｋ．ウィケラミ（Ｋ．ｗｉｃｋｅｒａｍｉｉ）（ＡＴＣＣ２４，１７８）、Ｋ．ワルチイ（Ｋ．ｗａｌｔｉｉ）（ＡＴＣＣ５６，５００）、Ｋ．ドロソフィラルム（Ｋ．ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａｒｕｍ）（ＡＴＣＣ３６，９０６）、Ｋ．サーモトレランス（Ｋ．ｔｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｎｓ）及びＫ．マルキシアヌス（Ｋ．ｍａｒｘｉａｎｕｓ）；ヤロウイア（ＥＰ４０２，２２６）；ピキア・パルトリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｓ）（ＥＰ１８３，０７０）；カンジダ；トリコデルマ・レーシア（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｉａ）（ＥＰ２４４，２３４）；アカパンカビ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ ｃｒａｓｓａ）；シュワンニオマイセス例えば、シュワンニオマイセス・オクシデンタリス（Ｓｃｈｗａｎｎｉｏｍｙｃｅｓ ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓ）；並びに糸状性真菌、例えば、ニューロスポラ、ペニシリウム、トリポクラジウム及び、アスペルギルス宿主、例えばＡ．ニデュランス（Ａ．ｎｉｄｕｌａｎｓ）及びクロコウジカビ（Ａ．ｎｉｇｅｒ）などの多数の他の属、種及び株は、一般的に利用可能であり、本明細書において有用である。
【0118】
グリコシル化された抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片の発現のために好適な宿主細胞は、多細胞生物由来である。無脊椎動物細胞の例は、植物及び昆虫細胞を含み、例えば、多数のバキュロウイルス株及びバリアント並びに、スポドプテラ・フルギペルダ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）（イモムシ）、ネッタイシマカ（Ａｅｄｅｓ ａｅｇｙｐｔｉ）（カ）、ヒトスジシマカ（Ａｅｄｅｓ ａｌｂｏｐｉｃｔｕｓ）（カ）、キイロショウジョウバエ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ）（ショウジョウバエ）及びボンビックス・モリ（Ｂｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉ）（カイコ）などの宿主由来の対応する許容昆虫宿主細胞が挙げられる。トランスフェクションのための種々のウイルス株は、公的に入手可能である、例えば、オートグラファ・カリフォルニカ（Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ）ＮＰＶのＬ－１バリアント及びボンビックス・モリＮＰＶのＢｍ－５株、かかるウイルスは、特にスポドプテラ・フルギペルダ細胞のトランスフェクションのために使用可能である。
ワタ、トウモロコシ、ジャガイモ、ダイズ、ペチュニア、トマト及びタバコの植物細胞培養物も宿主として利用され得る。
本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、ウイルスベクターに組み込まれていてもよい、すなわち抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片をコードするポリヌクレオチドは、ウイルスベクターに導入され、次いでウイルスを用いた感染後に患者の身体で発現される。
ワタ、トウモロコシ、ジャガイモ、ダイズ、ペチュニア、トマト及びタバコの植物細胞培養物も宿主として利用され得る。
本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片は、ウイルスベクターに組み込まれていてもよい、すなわち抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片をコードするポリヌクレオチドは、ウイルスベクターに導入され、次いでウイルスを用いた感染後に患者の身体で発現される。
【0119】
別の態様では、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片の発現は、脊椎動物細胞において実行される。培養物（組織培養）における脊椎動物細胞の増殖（ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ）は、日常的手順になっており、技術は広範に利用可能である。有用な哺乳動物宿主細胞系の例は、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１系（ＣＯＳ－７、ＡＴＣＣ ＣＲＬ１６５１）、ヒト胚性腎臓系（懸濁培養における増殖のためにサブクローニングされた２９３又は２９３細胞、（Graham et al., 1977, J. Gen Virol. 36: 59）、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ１０）、チャイニーズハムスター卵巣細胞／－ＤＨＦＲ１（ＣＨＯ、Urlaub et al., 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77: 4216；例えば、ＤＧ４４）、マウスセルトリ細胞（ＴＭ４、Mather、1980、Biol. Reprod. 23:243-251）、サル腎臓細胞（ＣＶ１ ＡＴＣＣ ＣＣＬ７０）、アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６、ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５８７）、ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ２）、イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ３４）、バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ ３Ａ、ＡＴＣＣ ＣＲＬ１４４２）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ ＣＣＬ７５）、ヒト肝細胞（Ｈｅｐ Ｇ２、ＨＢ８０６５）、マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ０６０５６２、ＡＴＣＣ ＣＣＬ５１）、ＴＲ１細胞（Mather et al., 1982, Annals N.Y. Acad. Sci. 383: 44-68）、ＭＲＣ５細胞、ＦＳ４細胞及びヒト肝細胞腫系（ＨｅｐＧ２）である。
【0120】
宿主細胞は、抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片産生のための上に記載される発現又はクローニングベクターを用いて形質転換され、プロモーターを誘導し、形質転換体を選択する又は所望の配列をコードする遺伝子を増幅するために好適なように改変された通常の栄養培地中で培養される。
【0121】
本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を産生するために使用される宿主細胞は、種々の培地中で培養され得る。Ｈａｍ’ｓ Ｆ１０（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏ．、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、Ｍｏ．）、基礎培地（（ＭＥＭ）、（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏ．）、ＲＰＭＩ－１６４０（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏ．）及びダルベッコ変法イーグル培地（（ＤＭＥＭ）、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏ．）などの商業的に入手できる培地は、宿主細胞を培養するために好適である。加えて、Ham et al., 1979, Meth. Enz. 58: 44、Barnes et al., 1980, Anal. Biochem. 102: 255、米国特許第４，７６７，７０４号、米国特許第４，６５７，８６６号、米国特許第４，９２７，７６２号、米国特許第４，５６０，６５５号、米国特許第５，１２２，４６９号、ＷＯ９０／１０３４３０及びＷＯ８７／００１９５の１つ又は複数に記載されるいずれの培地も宿主細胞のための培養培地として使用され得る。これらの培地のいずれも必要に応じて、ホルモン及び／又は他の増殖因子（インスリン、トランスフェリン又は上皮性増殖因子など）、塩（塩化ナトリウム、カルシウム、マグネシウム及びリン酸など）、緩衝剤（ＨＥＰＥＳなど）、ヌクレオチド（アデノシン及びチミジンなど）、抗生物質（ゲンタマイシンなど）、微量元素（マイクロモル範囲の最終濃度で通常存在する無機化合物と定義される）並びにグルコース又は同等のエネルギー供給源を補充され得る。他の補充物も当業者に公知である適切な濃度で含まれてもよい。温度、ｐＨなどの培養条件は、発現のために選択された宿主細胞で以前使用されたものであり、当業者に明らかである。
【0122】
組換え技術を使用する場合、抗体又はその断片は、細胞内で、細胞膜周辺腔で産生される、又は培地に直接分泌される場合がある。抗体が細胞内で産生される場合、最初のステップとして細胞はタンパク質を放出するために破壊される場合がある。粒状のデブリ、宿主細胞又は溶解された断片は、例えば、遠心分離又は限外濾過によって除去され得る。Carter et al., 1992, Bio/Technology 10:163-167は、大腸菌の細胞膜周辺腔に分泌される抗体を単離するための手順を記載している。簡潔には、細胞ペーストは、酢酸ナトリウム（ｐＨ３．５）、ＥＤＴＡ及びフェニルメチルスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）の存在下で約３０分間で解凍される。細胞デブリは、遠心分離によって除去され得る。抗体が培地に分泌される場合、かかる発現システムからの上清は、一般に、商業的に入手できるタンパク質濃縮フィルター例えば、Ａｍｉｃｏｎ又はＭｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｐｅｌｌｉｃｏｎ限外濾過装置を使用して最初に濃縮される。ＰＭＳＦなどのプロテアーゼ阻害剤は、タンパク質分解を阻害するために前述のステップのいずれにおいても含まれてよく、抗生物質は、外来性の夾雑物の増殖を予防するために含まれてよい。宿主細胞から抗体を単離するために種々の方法が使用され得る。
【0123】
細胞から調製される抗体組成物は、例えば、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析及び親和性クロマトグラフィーを、親和性クロマトグラフィーが典型的な精製技術として使用して精製され得る。親和性リガンドとしてのプロテインＡの適合性は、抗体中に存在する任意の免疫グロブリンＦｃドメインの種及びアイソタイプに依存する。プロテインＡは、ヒトガンマ１、ガンマ２又はガンマ４重鎖に基づく抗体を精製するために使用され得る（例えば、Lindmark et al., 1983 J. Immunol. Meth. 62:1-13を参照されたい）。プロテインＧは、全てのマウスアイソタイプのために、及びヒトガンマ３のために推奨されている（例えば、Guss et al., 1986 EMBO J. 5:1567-1575を参照されたい）。親和性リガンドが付着するマトリクスは、ほとんどの場合アガロースであるが、他のマトリクスも利用可能である。多孔質ガラス（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｐｏｒｅ ｇｌａｓｓ）又はポリ（スチレンジビニル）ベンゼンなどの機械的に安定なマトリクスは、アガロースを用いて達成され得るよりも速い流速及び短い処理時間を可能にする。抗体がＣH3ドメインを含む場合、Ｂａｋｅｒｂｏｎｄ ＡＢＸ（商標）レジン（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ、Ｐｈｉｌｌｉｐｓｂｕｒｇ、Ｎ．Ｊ．）は精製のために有用である。イオン交換カラム、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、シリカ上でのクロマトグラフィー、ヘパリンＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（商標）でのクロマトグラフィー、アニオン又はカチオン交換レジン（ポリアスパラギン酸カラムなど）でのクロマトグラフィー、クロマトフォーカシング、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及び硫酸アンモニウム沈殿での分画などのタンパク質精製のための他の技術も回収される抗体に応じて利用可能である。
【0124】
任意の予備的精製ステップに続いて、目的の抗体又はその断片及び夾雑物を含む混合物は、約２．５～４．５の間のｐＨで溶出緩衝液を使用して典型的には低塩濃度（例えば、約０～０．２５Ｍ塩）で実施される低ｐＨ疎水性相互作用クロマトグラフィーに供されてよい。
本明細書において定義される低、中程度及び高ストリンジェンシー条件下で、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片をコードする単離されたポリヌクレオチド配列によって表されるヌクレオチド配列の全て又は一部（例えば、可変領域をコードする部分）にハイブリダイズする核酸も同様に含まれる。ハイブリダイズする核酸のハイブリダイズする部分は、典型的には長さ少なくとも１５（例えば、２０、２５、３０又は５０）ヌクレオチドである。ハイブリダイズする核酸のハイブリダイズする部分は、抗Ｃ３ポリペプチド（例えば、重鎖若しくは軽鎖可変領域）又はその相補体をコードする核酸の一部又は全ての配列と少なくとも８０％、例えば、少なくとも９０％、少なくとも９５％又は少なくとも９８％同一である。本明細書に記載される種類のハイブリダイズする核酸は、例えばクローニングプローブ、プライマー、例えばＰＣＲプライマー又は診断プローブとして使用され得る。
本明細書において定義される低、中程度及び高ストリンジェンシー条件下で、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片をコードする単離されたポリヌクレオチド配列によって表されるヌクレオチド配列の全て又は一部（例えば、可変領域をコードする部分）にハイブリダイズする核酸も同様に含まれる。ハイブリダイズする核酸のハイブリダイズする部分は、典型的には長さ少なくとも１５（例えば、２０、２５、３０又は５０）ヌクレオチドである。ハイブリダイズする核酸のハイブリダイズする部分は、抗Ｃ３ポリペプチド（例えば、重鎖若しくは軽鎖可変領域）又はその相補体をコードする核酸の一部又は全ての配列と少なくとも８０％、例えば、少なくとも９０％、少なくとも９５％又は少なくとも９８％同一である。本明細書に記載される種類のハイブリダイズする核酸は、例えばクローニングプローブ、プライマー、例えばＰＣＲプライマー又は診断プローブとして使用され得る。
【0125】
一実施形態では、本発明は、配列番号２０、配列番号２２又は配列番号２４に記載の重鎖可変領域をコードする配列、並びに配列番号２１、配列番号２３及び又は配列番号２５に記載の軽鎖可変領域をコードする配列を含む、単離されたポリヌクレオチド又は複数のポリヌクレオチドに関する。
前記抗Ｃ３抗体及び抗体断片において、ＣＤＲをコードする核酸配列は未変化のままである（それらがコードするアミノ酸に関して未変化、コドンの縮重によるＤＮＡ配列の等価物は可能である）が、周辺領域、例えばＦＲ領域は、操作され得ることは理解される。
製造品
別の態様では、上に記載される障害の処置のために有用な材料を含有する製造品が含まれる。製造品は、容器及び標識を含む。好適な容器として、例えば、ビン、バイアル、シリンジ及び試験管が挙げられる。容器は、ガラス又はプラスチックなどの種々の材料から形成され得る。容器は、状態を処置するために有効である組成物を保持し、滅菌アクセスポートを有していてよい。例えば容器は、皮下注射針によって貫通することができるストッパーを有する静脈注射用溶液バッグ又はバイアルであってよい。組成物中の活性剤は、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片である。容器上の又はそれに付随する標識は、組成物が選択された状態の処置のために使用されることを示す。製造品は、リン酸緩衝食塩水などの薬学的に許容される緩衝剤、リンゲル液及びブドウ糖溶液を含む第２の容器をさらに含んでよい。他の緩衝剤、希釈剤、フィルター、針、シリンジ及び使用説明書を含む添付文書が挙げられる、商業的な及び使用者の観点から望ましい他の材料をさらに含んでよい。
本発明は、本発明の範囲を限定することを意図しない続く実施例においてさらに記載される。
前記抗Ｃ３抗体及び抗体断片において、ＣＤＲをコードする核酸配列は未変化のままである（それらがコードするアミノ酸に関して未変化、コドンの縮重によるＤＮＡ配列の等価物は可能である）が、周辺領域、例えばＦＲ領域は、操作され得ることは理解される。
製造品
別の態様では、上に記載される障害の処置のために有用な材料を含有する製造品が含まれる。製造品は、容器及び標識を含む。好適な容器として、例えば、ビン、バイアル、シリンジ及び試験管が挙げられる。容器は、ガラス又はプラスチックなどの種々の材料から形成され得る。容器は、状態を処置するために有効である組成物を保持し、滅菌アクセスポートを有していてよい。例えば容器は、皮下注射針によって貫通することができるストッパーを有する静脈注射用溶液バッグ又はバイアルであってよい。組成物中の活性剤は、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片である。容器上の又はそれに付随する標識は、組成物が選択された状態の処置のために使用されることを示す。製造品は、リン酸緩衝食塩水などの薬学的に許容される緩衝剤、リンゲル液及びブドウ糖溶液を含む第２の容器をさらに含んでよい。他の緩衝剤、希釈剤、フィルター、針、シリンジ及び使用説明書を含む添付文書が挙げられる、商業的な及び使用者の観点から望ましい他の材料をさらに含んでよい。
本発明は、本発明の範囲を限定することを意図しない続く実施例においてさらに記載される。
【実施例】
【0126】
（実施例１）
Ｃ３機序及び地図状萎縮の病因学
ＧＡを有する患者において、補体系の増大した、制御されない活性化は、脈絡毛細管の破壊、ＲＰＥ細胞の損傷及び最終的に光受容体の喪失を生じる。
疾患の病態生理学に関する補体活性化の関連性は、以下の点に基づく：
Ａ．ＡＭＤ患者の網膜における補体タンパク質の発現及び補体系の活性化
補体カスケードの全てのタンパク質が、網膜において局所的に様々な細胞型において発現されることを見出した。患者では、いくつかの補体因子（例えば、Ｃ３、ＣＦＢ及びＣ５）のタンパク質レベルは、ドルーゼン及びＧＡ病変において増加している。加えて、補体活性化産生物Ｃ３ａ、Ｃ４ａ、Ｃ３ｄ、ＣＢｂのレベルの増加が、ＡＭＤ患者の眼房水及び血漿において増加していることを見出した。膜侵襲複合体（ＭＡＣ）についての免疫組織化学染色は、患者においてＧＡ病変近くのブルッフ膜、ＲＰＥ層及び脈絡毛細管における沈着の増加を示す。
Ｃ３機序及び地図状萎縮の病因学
ＧＡを有する患者において、補体系の増大した、制御されない活性化は、脈絡毛細管の破壊、ＲＰＥ細胞の損傷及び最終的に光受容体の喪失を生じる。
疾患の病態生理学に関する補体活性化の関連性は、以下の点に基づく：
Ａ．ＡＭＤ患者の網膜における補体タンパク質の発現及び補体系の活性化
補体カスケードの全てのタンパク質が、網膜において局所的に様々な細胞型において発現されることを見出した。患者では、いくつかの補体因子（例えば、Ｃ３、ＣＦＢ及びＣ５）のタンパク質レベルは、ドルーゼン及びＧＡ病変において増加している。加えて、補体活性化産生物Ｃ３ａ、Ｃ４ａ、Ｃ３ｄ、ＣＢｂのレベルの増加が、ＡＭＤ患者の眼房水及び血漿において増加していることを見出した。膜侵襲複合体（ＭＡＣ）についての免疫組織化学染色は、患者においてＧＡ病変近くのブルッフ膜、ＲＰＥ層及び脈絡毛細管における沈着の増加を示す。
【0127】
Ｂ．ＡＭＤの遺伝学
ＧＷＡＳ研究は、補体因子Ｈ（ＣＦＨ）におけるＹ４０２Ｈ多型をＡＭＤを発症する主なリスク因子として同定した。７倍に至るリスクの増加を、この突然変異についてホモ接合の個体において見出した。ＣＦＨは、補体系の主要な負の制御因子である。それは、Ｃ３転換酵素Ｃ３ｂＢｂの減衰を増強し、既に沈着したＣ３ｂのタンパク質分解性分解を制御する。Ｙ４０２多型は、他のタンパク質へのＣＦＨの結合の減少、及び補体活性化産生物のレベルの増加を生じ、並びにＭＡＣの沈着の増加がホモ接合性患者において見出された。加えて、他の補体遺伝子（例えば、ＣＦＢ、Ｃ３、Ｃ７、Ｃ９）における多型はＡＭＤの発症と関連した。
Ｃ．補体阻害剤を用いる臨床研究 Ｃ３阻害剤（ＡＰＬ－２）及びＣ５阻害剤（ＺＩＭＵＲＡ（登録商標））を用いる処置を含む既存の治療戦略は、第２相臨床試験においてＧＡ病変の成長を低減させた。Ｃ３の阻害は、Ｃ３増幅ループを阻害し、それにより補体系の代替、古典及びレクチン経路を阻害する。
ＧＷＡＳ研究は、補体因子Ｈ（ＣＦＨ）におけるＹ４０２Ｈ多型をＡＭＤを発症する主なリスク因子として同定した。７倍に至るリスクの増加を、この突然変異についてホモ接合の個体において見出した。ＣＦＨは、補体系の主要な負の制御因子である。それは、Ｃ３転換酵素Ｃ３ｂＢｂの減衰を増強し、既に沈着したＣ３ｂのタンパク質分解性分解を制御する。Ｙ４０２多型は、他のタンパク質へのＣＦＨの結合の減少、及び補体活性化産生物のレベルの増加を生じ、並びにＭＡＣの沈着の増加がホモ接合性患者において見出された。加えて、他の補体遺伝子（例えば、ＣＦＢ、Ｃ３、Ｃ７、Ｃ９）における多型はＡＭＤの発症と関連した。
Ｃ．補体阻害剤を用いる臨床研究 Ｃ３阻害剤（ＡＰＬ－２）及びＣ５阻害剤（ＺＩＭＵＲＡ（登録商標））を用いる処置を含む既存の治療戦略は、第２相臨床試験においてＧＡ病変の成長を低減させた。Ｃ３の阻害は、Ｃ３増幅ループを阻害し、それにより補体系の代替、古典及びレクチン経路を阻害する。
【0128】
（実施例２）
抗Ｃ３抗体ライブラリーの生成及び特徴付け
抗Ｃ３抗体を生成するために、３匹のニュージーランドホワイトウサギを天然ヒトＣ３タンパク質を用いて免疫化する。各動物は、フロイント完全アジュバント又は不完全アジュバントと共に様々な時点でＣ３タンパク質の４回の注射を受ける。各動物の免疫応答をＥＬＩＳＡを用いて試験し、血清中の特異的抗体力価は優れた免疫応答を示す。
ｓｃＦｖ抗体ｃＤＮＡライブラリーを単離されたウサギＰＢＭＣ及び脾臓リンパ球から抽出したＲＮＡからＰＣＲ増幅を介して構築する。可変軽ドメイン及び重ドメインについてのコード配列を別々に増幅し、最終ｓｃＦｖ産生物をもたらすように一連の重複ＰＣＲステップを通じて連結する。
ウサギ由来のｓｃＦｖをコードする増幅したＤＮＡ配列を適切な制限酵素を使用して消化し、ファージミドベクターにライゲーションする。ファージミドベクターを、抗体ファージディスプレイライブラリー生成のために十分適する大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＴＧ１エレクトロコンピテント細胞に形質転換する。
抗Ｃ３抗体ライブラリーの生成及び特徴付け
抗Ｃ３抗体を生成するために、３匹のニュージーランドホワイトウサギを天然ヒトＣ３タンパク質を用いて免疫化する。各動物は、フロイント完全アジュバント又は不完全アジュバントと共に様々な時点でＣ３タンパク質の４回の注射を受ける。各動物の免疫応答をＥＬＩＳＡを用いて試験し、血清中の特異的抗体力価は優れた免疫応答を示す。
ｓｃＦｖ抗体ｃＤＮＡライブラリーを単離されたウサギＰＢＭＣ及び脾臓リンパ球から抽出したＲＮＡからＰＣＲ増幅を介して構築する。可変軽ドメイン及び重ドメインについてのコード配列を別々に増幅し、最終ｓｃＦｖ産生物をもたらすように一連の重複ＰＣＲステップを通じて連結する。
ウサギ由来のｓｃＦｖをコードする増幅したＤＮＡ配列を適切な制限酵素を使用して消化し、ファージミドベクターにライゲーションする。ファージミドベクターを、抗体ファージディスプレイライブラリー生成のために十分適する大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＴＧ１エレクトロコンピテント細胞に形質転換する。
【0129】
（実施例３）
３種全ての補体経路を阻害する抗Ｃ３抗体のスクリーニング
高い親和性を有する抗Ｃ３抗体をスクリーニングするために、ファージ上に提示されたｓｃＦｖを天然ヒトＣ３に対する数ラウンドのバイオパニング（選択）にかけた。選択のストリンジェンシーを、バイオパニングにおいて使用するＣ３タンパク質の濃度を減少させるか、又は洗浄のストリンジェンシーを増加させるかのいずれかによって各ラウンドで増加させる。およそ３８０個のモノクローナルファージを選択し、ＥＬＩＳＡアッセイにおいてＣ３に結合するそれらの能力についてスクリーニングする。
ファージＥＬＩＳＡデータ及びＤＮＡフィンガープリントに基づいて、提示されたｓｃＦｖの選択を、Ｆａｂフォーマットの抗体タンパク質として組換え的に産生する。得られたタンパク質をヒトＣ３及びＣ３ｂに結合するそれらの能力について評価する。
３種全ての補体経路を阻害する抗Ｃ３抗体のスクリーニング
高い親和性を有する抗Ｃ３抗体をスクリーニングするために、ファージ上に提示されたｓｃＦｖを天然ヒトＣ３に対する数ラウンドのバイオパニング（選択）にかけた。選択のストリンジェンシーを、バイオパニングにおいて使用するＣ３タンパク質の濃度を減少させるか、又は洗浄のストリンジェンシーを増加させるかのいずれかによって各ラウンドで増加させる。およそ３８０個のモノクローナルファージを選択し、ＥＬＩＳＡアッセイにおいてＣ３に結合するそれらの能力についてスクリーニングする。
ファージＥＬＩＳＡデータ及びＤＮＡフィンガープリントに基づいて、提示されたｓｃＦｖの選択を、Ｆａｂフォーマットの抗体タンパク質として組換え的に産生する。得られたタンパク質をヒトＣ３及びＣ３ｂに結合するそれらの能力について評価する。
【0130】
３種全ての補体経路を遮断する抗体を同定するために、抗体をＷＥＩＳＬＡＢ（登録商標）Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ｓｙｓｔｅｍ Ｓｃｒｅｅｎ（Ｓｖａｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＡＢ、Ｍａｌｍｏ、スウェーデン）を使用してヒト血清における機能的な古典、レクチン及び代替補体経路の定性的決定のための酵素イムノアッセイを使用してスクリーニングする。表６に示す通り、クローンＩＶ（配列番号３２）を３種全ての補体経路を阻害し得るとして同定した。
【表6】
【0131】
クローンＩＶ配列を続く表７に示す。
【表7】
【0132】
（実施例４）
再フォーマット、ヒト化及び最適化作戦
再フォーマット及びヒト化：抗体のヒト化及びｓｃＦｖ抗体断片フォーマットへの再フォーマットのために、ウサギ由来クローンＩＶ ＣＤＲ配列をヒト生殖細胞系配列の軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン及び重鎖可変（ＶＨ）ドメインに移植する。ＶＨのヒト化ために、ＣＤＲをＩＭＧＴ＿ｈＶＨ＿３＿３０フレームワークに移植する。ＶＬのヒト化のために、ＣＤＲをＩＭＧＴ＿ｈＶＬ＿４－６９フレームワークに移植する。可変ドメインを（ＧＧＧＧＳ）4リンカー（配列番号４６）を使用して、ＶＬ－リンカー－ＶＨ様式で接続する。フレームワーク４のために、ＩＧＬＪ２*０１接合部（Ｊ）遺伝子を使用する。
再フォーマット及びヒト化したバリアントクローンＶ（配列番号３３）は、古典及び代替補体経路を阻害するその能力を保持しているが、親分子クローンＩＶよりも低い結合親和性をＣ３及びＣ３ｂに示す。
追加的なウサギ由来アミノ酸を生殖細胞系配列を用いて置き換えることによってバリアントをさらに改変し、それによりクローンＶＩ（配列番号３４）を作る。ヒトＣ３及びＣ３ｂに対するその親和性は、親分子に匹敵し、構築物の熱安定性は１１．７℃上昇した。
再フォーマット、ヒト化及び最適化作戦
再フォーマット及びヒト化：抗体のヒト化及びｓｃＦｖ抗体断片フォーマットへの再フォーマットのために、ウサギ由来クローンＩＶ ＣＤＲ配列をヒト生殖細胞系配列の軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン及び重鎖可変（ＶＨ）ドメインに移植する。ＶＨのヒト化ために、ＣＤＲをＩＭＧＴ＿ｈＶＨ＿３＿３０フレームワークに移植する。ＶＬのヒト化のために、ＣＤＲをＩＭＧＴ＿ｈＶＬ＿４－６９フレームワークに移植する。可変ドメインを（ＧＧＧＧＳ）4リンカー（配列番号４６）を使用して、ＶＬ－リンカー－ＶＨ様式で接続する。フレームワーク４のために、ＩＧＬＪ２*０１接合部（Ｊ）遺伝子を使用する。
再フォーマット及びヒト化したバリアントクローンＶ（配列番号３３）は、古典及び代替補体経路を阻害するその能力を保持しているが、親分子クローンＩＶよりも低い結合親和性をＣ３及びＣ３ｂに示す。
追加的なウサギ由来アミノ酸を生殖細胞系配列を用いて置き換えることによってバリアントをさらに改変し、それによりクローンＶＩ（配列番号３４）を作る。ヒトＣ３及びＣ３ｂに対するその親和性は、親分子に匹敵し、構築物の熱安定性は１１．７℃上昇した。
【0133】
クローンＶ及びクローンＶＩ配列を続く表８にまとめる。
【表8】
【0134】
親和性成熟
ライブラリー構築：分子の親和性を改善するために、部位飽和ライブラリーをクローンＶＩ（配列番号３４）を鋳型として使用して構築する。ランダム化をＣＤＲ Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３及びＨ３について実施する。
バイオパニング：軽鎖ランダム化を含むライブラリーを１つのライブラリーに統合する。同様に、重鎖ランダム化を含むライブラリーを別のライブラリーに統合する。軽鎖及び重鎖ライブラリーをヒトＣ３に対するバイオパニングに供する。ラウンド２、３及び４のバイオパニング（ＲＯＰ２～４）において、クローンＩＶに対する５０μｇ／ｍＬでの競合作用を選択のストリンジェンシーを増加させるために導入し、親分子より高い親和性を有する結合剤の同定を可能にする。ＲＯＰ２～４におけるファージＥＬＩＳＡを介して同定されたヒットを配列決定に供する。ＲＯＰ４からの最も有望な候補をｓｃＦｖフォーマットで発現させ、精製する。
ライブラリー構築：分子の親和性を改善するために、部位飽和ライブラリーをクローンＶＩ（配列番号３４）を鋳型として使用して構築する。ランダム化をＣＤＲ Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３及びＨ３について実施する。
バイオパニング：軽鎖ランダム化を含むライブラリーを１つのライブラリーに統合する。同様に、重鎖ランダム化を含むライブラリーを別のライブラリーに統合する。軽鎖及び重鎖ライブラリーをヒトＣ３に対するバイオパニングに供する。ラウンド２、３及び４のバイオパニング（ＲＯＰ２～４）において、クローンＩＶに対する５０μｇ／ｍＬでの競合作用を選択のストリンジェンシーを増加させるために導入し、親分子より高い親和性を有する結合剤の同定を可能にする。ＲＯＰ２～４におけるファージＥＬＩＳＡを介して同定されたヒットを配列決定に供する。ＲＯＰ４からの最も有望な候補をｓｃＦｖフォーマットで発現させ、精製する。
【0135】
ヒット特徴付け：ＲＯＰ４において同定された全てのヒットは、ＣＤＲ Ｌ３又はＣＤＲ Ｈ３中にアミノ酸置換を含む。
全てのヒットは、良好に発現され、精製された。ヒトＣ３及びＣ３ｂに対する最良の結合親和性を、それぞれ１．１ｎＭ、１８４ｐＭ及び１．３ｎＭのＣ３親和性を有するクローンＶＩＩ（配列番号３５）、クローンＶＩＩＩ（配列番号３６）及びクローンＩＸ（配列番号３７）について観察した。
全てのヒットは、良好に発現され、精製された。ヒトＣ３及びＣ３ｂに対する最良の結合親和性を、それぞれ１．１ｎＭ、１８４ｐＭ及び１．３ｎＭのＣ３親和性を有するクローンＶＩＩ（配列番号３５）、クローンＶＩＩＩ（配列番号３６）及びクローンＩＸ（配列番号３７）について観察した。
【0136】
クローンＶＩＩ及びクローンＩＸは、親分子クローンＩＶと同等の結合親和性及び補体阻害活性を示した。クローンＶＩＩＩは、クローンＩＶと比較してＣ３及びＣ３ｂへの結合親和性においておよそ１０倍の増加、並びに補体阻害アッセイにおいて優れた性能を示した。
【0137】
クローンＶＩＩ、ＶＩＩＩ及びＩＸの配列を続く表９にまとめる。
【表9】
【0138】
ｓｃＦｖの安定化
ｓｃＦｖの安定化をジスルフィド架橋（ＶＬ ４３Ｃ、ＶＨ １０５Ｃ）の導入によって実施した。天然抗体は、定常軽鎖と定常重鎖ＣＨ１ドメインとの間に、軽鎖と重鎖との間の相互作用を強く安定化する保存された鎖間ジスルフィド架橋を有する。ｓｃＦｖにおけるこの鎖間ジスルフィド結合の欠如は、特に、高濃度で製剤化された場合には、可変ドメイン不安定化並びに二量体、三量体及びさらに高いオリゴマー種の形成をもたらし得る。したがって、ジスルフィド結合の存在は、ｓｃＦｖのＶＨ／ＶＬ境界面を安定化できる。
ｓｃＦｖの安定化をジスルフィド架橋（ＶＬ ４３Ｃ、ＶＨ １０５Ｃ）の導入によって実施した。天然抗体は、定常軽鎖と定常重鎖ＣＨ１ドメインとの間に、軽鎖と重鎖との間の相互作用を強く安定化する保存された鎖間ジスルフィド架橋を有する。ｓｃＦｖにおけるこの鎖間ジスルフィド結合の欠如は、特に、高濃度で製剤化された場合には、可変ドメイン不安定化並びに二量体、三量体及びさらに高いオリゴマー種の形成をもたらし得る。したがって、ジスルフィド結合の存在は、ｓｃＦｖのＶＨ／ＶＬ境界面を安定化できる。
【0139】
クローンＶＩの重鎖フレームワークの安定性を、フレームワーク置換を導入し、それにより、とりわけクローンＸ（配列番号３８）を作ることによって調査した。クローンＸ及びそのジスルフィド結合安定化バリアントクローンＸＩ（配列番号３９）を３７℃、タンパク質濃度＞１００ｍｇ／ｍＬでの安定性研究において比較した。クローンＸＩの３７℃での２週間のインキュベーションは、モノマーの純度の３．３％だけの低下を生じた一方で、親分子クローンＸは、モノマー含有量が６０．４％低下した（表１０）。
【表10】
【0140】
クローンＸ及びＸＩの配列を続く表１１にまとめる。
【表11】
【0141】
最終最適化
最も有望な親和性成熟置換及びジスルフィド結合安定化を、クローンＸＩＩ（配列番号４０）、クローンＸＩＩＩ（配列番号４１）及びクローンＸＩＶ（配列番号４２）において組み合わせた。
ヒトＣ３及びＣ３ｂに対する熱安定性及び親和性をＤＳＦ及びＳＰＲアッセイによって決定する。クローンＸＩＩ、クローンＸＩＩＩ及びクローンＸＩＶは、それぞれ７０．４℃、６７．７℃及び６７．２℃の融解温度を示した。ヒトＣ３及びＣ３ｂに対する結合親和性は、それぞれ、クローンＸＩＩについて４．７ｎＭ及び４．８ｎＭ、クローンＸＩＩＩについて１１６ｐＭ及び１１０ｐＭ、クローンＸＩＶについて１２９ｐＭ及び１１６ｐＭであった。
最も有望な親和性成熟置換及びジスルフィド結合安定化を、クローンＸＩＩ（配列番号４０）、クローンＸＩＩＩ（配列番号４１）及びクローンＸＩＶ（配列番号４２）において組み合わせた。
ヒトＣ３及びＣ３ｂに対する熱安定性及び親和性をＤＳＦ及びＳＰＲアッセイによって決定する。クローンＸＩＩ、クローンＸＩＩＩ及びクローンＸＩＶは、それぞれ７０．４℃、６７．７℃及び６７．２℃の融解温度を示した。ヒトＣ３及びＣ３ｂに対する結合親和性は、それぞれ、クローンＸＩＩについて４．７ｎＭ及び４．８ｎＭ、クローンＸＩＩＩについて１１６ｐＭ及び１１０ｐＭ、クローンＸＩＶについて１２９ｐＭ及び１１６ｐＭであった。
【0142】
クローンＸＩＩ、クローンＸＩＩＩ及びクローンＸＩＶを補体阻害アッセイにおけるそれらの活性についても試験する。古典経路における補体阻害についてのＩＣ５０値は、クローンＸＩＩ、クローンＸＩＩＩ及びクローンＸＩＶについてそれぞれ０．０９８μＭ、０．０６μＭ及び０．０５μＭであった一方で、親クローンＩＶは０．０８μＭのＩＣ５０を示した。代替経路における補体阻害についてのＩＣ５０値は、クローンＸＩＩ、クローンＸＩＩＩ及びクローンＸＩＶについてそれぞれ０．２１μＭ、０．２６μＭ及び０．２５μＭであった一方で、クローンＩＶは、０．２８μＭのＩＣ５０を示した。まとめると、クローンＸＩＩＩ及びクローンＸＩＶは、クローンＩＶよりも優れた機能的な特性を示した。追加的に、クローンＸＩＩＩ及びクローンＸＩＶを濃度依存性安定性研究において比較した。クローンＸＩＩＩは、モノマー含有量における低下を伴わずに１５０ｍｇ／ｍＬまで濃縮でき、３７℃での２週間のインキュベーション後に２．２％だけ低下した一方で、クローンＸＩＶは、５０ｍｇ／ｍＬへの濃度で既に１．６％モノマー含有量が低下し、３７℃での２週間のインキュベーション後にさらに２．３％低下した。
【0143】
クローンＸＩＩ、クローンＸＩＩＩ及びクローンＸＩＶの配列を続く表１２にまとめる。
【表12】
【0144】
最終的ヒト化：ＥｐｉＶａｘを使用する免疫原性リスク予測は、クローンＸ（クローンＸＩＩＩの親構築物）について中程度のリスクを明らかにする。－３９．３６及び１４．８６のＥｐｉＶａｘスコアをＶＨ及びＶＬそれぞれについて決定した。加えて、クローンＸＩは、ＶＨについて７７％の、及びＶＬについて８７％のヒト生殖細胞系配列同一性を示した。
クローンＸＩＩＩへのクローンＩＸの進展は、ＣＤＲループ改変を排他的に含み、それによりクローンＸＩのＦＲにおいて同定された傾向は、クローンＸＩＩＩにおいて未変化のままであった。したがって、フレームワーク領域において追加的な生殖細胞系化を実施する。
追加的に、コンピューターでの分析は、ヒト抗体レパートリーにおいて稀にしか存在せず、それにより、免疫原性リスクの増加を有する残基の同定を可能にする。これにより、免疫原性のリスクをさらに低減させるために、続く突然変異ＶＨ Ｓ６１Ｄ、Ｗ６２Ｓ、Ａ６３Ｖ及びＹ３０Ｓ並びにＶＬ Ｔ５６Ｓを候補に含めた。
クローンＸＩＩＩへのクローンＩＸの進展は、ＣＤＲループ改変を排他的に含み、それによりクローンＸＩのＦＲにおいて同定された傾向は、クローンＸＩＩＩにおいて未変化のままであった。したがって、フレームワーク領域において追加的な生殖細胞系化を実施する。
追加的に、コンピューターでの分析は、ヒト抗体レパートリーにおいて稀にしか存在せず、それにより、免疫原性リスクの増加を有する残基の同定を可能にする。これにより、免疫原性のリスクをさらに低減させるために、続く突然変異ＶＨ Ｓ６１Ｄ、Ｗ６２Ｓ、Ａ６３Ｖ及びＹ３０Ｓ並びにＶＬ Ｔ５６Ｓを候補に含めた。
【0145】
本発明者らは、最終的なヒト化及び最適化作戦において、重要な翻訳後修飾（ＰＴＭ）モチーフを欠いており、さらにヒト化（ＶＬ及びＶＨそれぞれについて８６％及び８９％のヒト配列同一性）及び親和性成熟させたクローンＩＩＩを作った。
加えて、ＣＤＲ Ｌ２での異性化モチーフ（ＤＧ）を、それが再フォールディング収率及び親和性に大きな影響を有したことから調査した。したがって、クローンＩＩＩを突然変異Ｅ５０Ｄを導入することによって改変し、クローンＩＩを生じた。クローンＩＩは、ＶＬ及びＶＨについてそれぞれ８７％及び８９％のヒト配列同一性を示した。
クローンＩＩの追加的バリアントをＣＤＲ Ｈ２全体の完全ヒト生殖細胞系配列への交換によって生成し（ヒト生殖細胞系に対するヒト配列同一性をＶＨにおいて追加的に７％増加させた）、それによりクローンＩを作る。
それにより、本発明者らは、本発明の抗Ｃ３が、潜在的に異性化、脱アミド及び酸化を生じる傾向を有さないことを確実にした。本発明者らは、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片が、許容可能な粘度、強い保存安定性、Ｃ３、Ｃ３ｂに対する高い親和性を有し、古典、代替及びレクチン経路において同様の作用強度を示し、ブタブルッフ膜を通じた拡散を示し、顕著なＴ細胞活性化を示さないことをさらに確証した。
加えて、ＣＤＲ Ｌ２での異性化モチーフ（ＤＧ）を、それが再フォールディング収率及び親和性に大きな影響を有したことから調査した。したがって、クローンＩＩＩを突然変異Ｅ５０Ｄを導入することによって改変し、クローンＩＩを生じた。クローンＩＩは、ＶＬ及びＶＨについてそれぞれ８７％及び８９％のヒト配列同一性を示した。
クローンＩＩの追加的バリアントをＣＤＲ Ｈ２全体の完全ヒト生殖細胞系配列への交換によって生成し（ヒト生殖細胞系に対するヒト配列同一性をＶＨにおいて追加的に７％増加させた）、それによりクローンＩを作る。
それにより、本発明者らは、本発明の抗Ｃ３が、潜在的に異性化、脱アミド及び酸化を生じる傾向を有さないことを確実にした。本発明者らは、本発明による抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片が、許容可能な粘度、強い保存安定性、Ｃ３、Ｃ３ｂに対する高い親和性を有し、古典、代替及びレクチン経路において同様の作用強度を示し、ブタブルッフ膜を通じた拡散を示し、顕著なＴ細胞活性化を示さないことをさらに確証した。
【0146】
本発明の例示的抗体は以下を含む：
－ クローンＩ：配列番号２０の可変重鎖及び配列番号２１の可変軽鎖を含む；
－ クローンＩＩ：配列番号２２の可変重鎖及び配列番号２３の可変軽鎖を含む；並びに
－ クローンＩＩＩ：配列番号２４の可変重鎖及び配列番号２５の可変軽鎖を含む。
免疫原性
本発明者らは、本発明のｓｃＦｖの免疫原性をさらに評価した。本発明者らは、本発明による例示的抗体の予測される免疫原性を評価した：クローンＩ、クローンＩＩ及びクローンＩＩＩ。
－ クローンＩ：配列番号２０の可変重鎖及び配列番号２１の可変軽鎖を含む；
－ クローンＩＩ：配列番号２２の可変重鎖及び配列番号２３の可変軽鎖を含む；並びに
－ クローンＩＩＩ：配列番号２４の可変重鎖及び配列番号２５の可変軽鎖を含む。
免疫原性
本発明者らは、本発明のｓｃＦｖの免疫原性をさらに評価した。本発明者らは、本発明による例示的抗体の予測される免疫原性を評価した：クローンＩ、クローンＩＩ及びクローンＩＩＩ。
【0147】
この目的のために、本発明者らは、そのようなＴ細胞エピトープを予測するためにコンピューターツールを使用した（ＥｐｉＶａｘによって開発されたＥｐｉＭａｔｒｉｘ）。
多数のヒト抗体単離物の配列をスクリーニングすることによって、ＥｐｉＶａｘは、制御潜在力を有すると考えられるいくつかの高度に保存されたＨＬＡリガンドを同定した。実験的証拠は、これらのペプチドの多くが大部分の対象において積極的に免疫寛容原性であることを示唆する。これらの高度に保存された、制御性かつ無差別の（ｐｒｏｍｉｓｃｕｏｕｓ）Ｔ細胞エピトープは、Ｔレギトープ（Ｔｒｅｇｉｔｏｐｅ）として公知である（De Groot et al. Blood. 2008 Oct 15;112(8):3303-11）。ヒト化抗体に含有されるネオエピトープの免疫原性の可能性は、顕著な数のＴレギトープの存在下で効果的に調節され得る。
抗体免疫原性分析の目的のために、ＥｐｉＶａｘは、Ｔレギトープ調整ＥｐｉＭａｔｒｉｘスコア及び抗治療抗体応答の対応する予測を含む。Ｔレギトープ調整ＥｐｉＭａｔｒｉｘスコアを算出するために、ＴレギトープのスコアをＥｐｉＭａｔｒｉｘタンパク質スコアから差し引く。Ｔレギトープ調整スコアは、２３種の市販の抗体のセットについて観察された臨床免疫応答とよく相関したことが示された（De Groot et al. Clin Immunol. 2009 May;131(2):189-201）。
多数のヒト抗体単離物の配列をスクリーニングすることによって、ＥｐｉＶａｘは、制御潜在力を有すると考えられるいくつかの高度に保存されたＨＬＡリガンドを同定した。実験的証拠は、これらのペプチドの多くが大部分の対象において積極的に免疫寛容原性であることを示唆する。これらの高度に保存された、制御性かつ無差別の（ｐｒｏｍｉｓｃｕｏｕｓ）Ｔ細胞エピトープは、Ｔレギトープ（Ｔｒｅｇｉｔｏｐｅ）として公知である（De Groot et al. Blood. 2008 Oct 15;112(8):3303-11）。ヒト化抗体に含有されるネオエピトープの免疫原性の可能性は、顕著な数のＴレギトープの存在下で効果的に調節され得る。
抗体免疫原性分析の目的のために、ＥｐｉＶａｘは、Ｔレギトープ調整ＥｐｉＭａｔｒｉｘスコア及び抗治療抗体応答の対応する予測を含む。Ｔレギトープ調整ＥｐｉＭａｔｒｉｘスコアを算出するために、ＴレギトープのスコアをＥｐｉＭａｔｒｉｘタンパク質スコアから差し引く。Ｔレギトープ調整スコアは、２３種の市販の抗体のセットについて観察された臨床免疫応答とよく相関したことが示された（De Groot et al. Clin Immunol. 2009 May;131(2):189-201）。
【0148】
ＥｐｉＭａｔｒｉｘスケールでの結果を、続く表１３にまとめる。
本発明抗体の配列は、ＥｐｉＭａｔｒｉｘスケールで最も低くスコア化され、本発明のｓｃＦｖが免疫原性について非常に限られた可能性を有することを示す。前記ＥｐｉＭａｔｒｉｘスケールは、当業者に周知であり、とりわけ公表文献、Mufarrege et al. Clin Immunol., 2017 Mar;176:31-41の図２において見出すことができる。
【表13】
本発明抗体の配列は、ＥｐｉＭａｔｒｉｘスケールで最も低くスコア化され、本発明のｓｃＦｖが免疫原性について非常に限られた可能性を有することを示す。前記ＥｐｉＭａｔｒｉｘスケールは、当業者に周知であり、とりわけ公表文献、Mufarrege et al. Clin Immunol., 2017 Mar;176:31-41の図２において見出すことができる。
【0149】
（実施例５）
比較化合物の生成
Ａ．ＡＰＬ－１サロゲート及びＡＰＬ－２サロゲート
比較目的のために、本発明者らは、以下の通りコンプスタチンのいくつかの誘導体を開発した：
・ ＡＰＬ－１サロゲート：ＰＥＧ化モノコンプスタチン誘導体（本明細書以下で「比較化合物１」又は「化合物Ａ１」として設計する）
・ ＡＰＬ－２サロゲート：ＰＥＧ化二量体化コンプスタチン誘導体（本明細書以下で「比較化合物Ａ２」又は「化合物Ａ２」として設計する）。
比較化合物の生成
Ａ．ＡＰＬ－１サロゲート及びＡＰＬ－２サロゲート
比較目的のために、本発明者らは、以下の通りコンプスタチンのいくつかの誘導体を開発した：
・ ＡＰＬ－１サロゲート：ＰＥＧ化モノコンプスタチン誘導体（本明細書以下で「比較化合物１」又は「化合物Ａ１」として設計する）
・ ＡＰＬ－２サロゲート：ＰＥＧ化二量体化コンプスタチン誘導体（本明細書以下で「比較化合物Ａ２」又は「化合物Ａ２」として設計する）。
【0150】
これらの化合物は、米国特許出願公開第２０２００２８２０１２号においてＡＰＬ－１及びＡＰＬ－２として開示されている。それらは、
・ Ricklin D, Lambris JD. Compstatin: a complement inhibitor on its way to clinical application. Adv Exp Med Biol. 2008;632:273-292. doi:10.1007/978-0-387-78952-1_20、及び
・ Mastellos DC, Ricklin D, Lambris JD. Clinical promise of next-generation complement therapeutics. Nat Rev Drug Discov. 2019;18(9):707-729. doi:10.1038/s41573-019-0031-6
においてさらに開示されている。
化合物Ａ１は、コンプスタチン由来の抗Ｃ３環状ペプチドである。化合物Ａ２は、化合物Ａ１に基づいて、その循環半減期を延長し、血清におけるその溶解度を改善するようにさらに開発された。化合物Ａ２は、直鎖状４０ｋＤａ ＰＥＧリンカーを介して連結された２つのペプチド部分を含む。
・ Ricklin D, Lambris JD. Compstatin: a complement inhibitor on its way to clinical application. Adv Exp Med Biol. 2008;632:273-292. doi:10.1007/978-0-387-78952-1_20、及び
・ Mastellos DC, Ricklin D, Lambris JD. Clinical promise of next-generation complement therapeutics. Nat Rev Drug Discov. 2019;18(9):707-729. doi:10.1038/s41573-019-0031-6
においてさらに開示されている。
化合物Ａ１は、コンプスタチン由来の抗Ｃ３環状ペプチドである。化合物Ａ２は、化合物Ａ１に基づいて、その循環半減期を延長し、血清におけるその溶解度を改善するようにさらに開発された。化合物Ａ２は、直鎖状４０ｋＤａ ＰＥＧリンカーを介して連結された２つのペプチド部分を含む。
【0151】
化合物Ａ１及び化合物Ａ２の配列を続く表１４にまとめる。
化合物Ａ１及び化合物Ａ２の構造及び配列に関する追加的データは、Adv Exp Med Biol. 2008; 632: 273-292において入手可能である。
【表14】
化合物Ａ１及び化合物Ａ２の構造及び配列に関する追加的データは、Adv Exp Med Biol. 2008; 632: 273-292において入手可能である。
【0152】
Ｂ．ＮＧＭ６２１サロゲート
比較目的のために、本発明者らは、ＷＯ２０１９１９５１３６に開示されているＮＧＭ化合物を開発した。このＮＧＭ化合物は、好ましくはＮＧＭ６２１サロゲートとしてであり、本明細書以下で「比較化合物Ａ３」又は「化合物Ａ３」と称される。前記化合物Ａ３は、続く特性を有する抗Ｃ３ ＩｇＧである。
比較目的のために、本発明者らは、ＷＯ２０１９１９５１３６に開示されているＮＧＭ化合物を開発した。このＮＧＭ化合物は、好ましくはＮＧＭ６２１サロゲートとしてであり、本明細書以下で「比較化合物Ａ３」又は「化合物Ａ３」と称される。前記化合物Ａ３は、続く特性を有する抗Ｃ３ ＩｇＧである。
【0153】
関連配列を続く表１５に以下の通りまとめる。
【表15】
【0154】
本発明者らは上に述べた配列に基づいて、ＦａｂフォーマットでＮＧＭ６２１サロゲートをさらに開発した。前記化合物は、「化合物Ａ３ Ｆａｂ」と称される。
【0155】
（実施例６）
比較データ
Ａ．様々な作用機序
本発明の例示的抗体及び比較化合物は、以下に要約する通り異なる作用機序及び異なる特性を有する：
－ 本発明の抗体はＣ３及びＣ３ｂを阻害する、
－ ＡＰＬ－２はＣ３及びＣ３ｂを阻害する、
－ ＮＧＭ６２１はＣ３を阻害する、並びに
－ ＺＩＭＵＲＡ（登録商標）はＣ５を阻害する。
比較データ
Ａ．様々な作用機序
本発明の例示的抗体及び比較化合物は、以下に要約する通り異なる作用機序及び異なる特性を有する：
－ 本発明の抗体はＣ３及びＣ３ｂを阻害する、
－ ＡＰＬ－２はＣ３及びＣ３ｂを阻害する、
－ ＮＧＭ６２１はＣ３を阻害する、並びに
－ ＺＩＭＵＲＡ（登録商標）はＣ５を阻害する。
【0156】
本発明者らは、ＮＧＭ６２１とは対照的に、本発明の例示的抗体、クローンＩが、続く表１６に例示する通り、同様の親和性でＣ３及びＣ３ｂに結合することを示した。
【表16】
【0157】
Ｂ．ＳｃＦｖフォーマットは、ＩＶＴ注射あたりでより多い薬物分子を送達できる
本発明者らは、続く表１７に例示される通り、本発明による例示的抗体及び比較化合物Ａ２、比較化合物Ａ３及びＺＩＭＵＲＡ（登録商標）（データは文献において入手可能）の分子量（ｍａｓｓ ｗｅｉｇｈｔ）、注射体積及び可能な用量を確立した。
本発明者らは、続く表１７に例示される通り、本発明による例示的抗体及び比較化合物Ａ２、比較化合物Ａ３及びＺＩＭＵＲＡ（登録商標）（データは文献において入手可能）の分子量（ｍａｓｓ ｗｅｉｇｈｔ）、注射体積及び可能な用量を確立した。
【表17】
【0158】
本発明の抗体は、眼へのＩＶＴ投与あたりでより多い薬物量を提供することを証明し、眼においてより大きな補体阻害を達成することに寄与する。
Ｃ．ＳｃＦｖフォーマットは、等モルの硝子体内注射後にＦａｂ又はＩｇＧと比較してさらに良好な網膜浸透を可能にする。
本発明者らは、カニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｏｇｕｓ）での等モルの硝子体内注射後にｓｃＦｖ（ブロルシズマブ）及びＦａｂ（ラニビズマブ）の網膜浸透を比較した。データは、ｓｃＦｖフォーマットが、Ｆａｂ又はＩｇＧと比較して網膜浸透の改善を可能にすることを示す。したがって、ｓｃＦｖフォーマットでの本発明の抗体は、硝子体内投与では、Ｆａｂと比較して優れた網膜曝露レベルを達成すると期待される（図１Ａ及び１Ｂ）。
Ｃ．ＳｃＦｖフォーマットは、等モルの硝子体内注射後にＦａｂ又はＩｇＧと比較してさらに良好な網膜浸透を可能にする。
本発明者らは、カニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｏｇｕｓ）での等モルの硝子体内注射後にｓｃＦｖ（ブロルシズマブ）及びＦａｂ（ラニビズマブ）の網膜浸透を比較した。データは、ｓｃＦｖフォーマットが、Ｆａｂ又はＩｇＧと比較して網膜浸透の改善を可能にすることを示す。したがって、ｓｃＦｖフォーマットでの本発明の抗体は、硝子体内投与では、Ｆａｂと比較して優れた網膜曝露レベルを達成すると期待される（図１Ａ及び１Ｂ）。
【0159】
（実施例７）
本発明のｓｃＦｖの作用強度及びｉｎ ｖｉｔｒｏ活性並びに比較化合物Ａ１及び比較化合物Ａ３との比較
本発明の例示的ｓｃＦｖの機能の作用強度及びそれらの間の比較を決定するために、以下のアッセイを実行する：膜侵襲複合体の生成を測定する補体阻害アッセイ及び溶血アッセイ
Ａ．材料及び方法
ａ．補体阻害アッセイ
ヒト血清における補体系の阻害をモニターするために、本発明のｓｃＦｖ又は比較分子を、ヒト血清における機能的な古典、レクチン及び代替補体経路の定性的決定のためにＷＥＩＳＬＡＢ（登録商標）Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ｓｙｓｔｅｍ Ｓｃｒｅｅｎ（Ｓｖａｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＡＢ、Ｍａｌｍｏ、スウェーデン）を供給者の説明書に従って使用する酵素イムノアッセイを使用して試験する。生成されたＣ５ｂ－Ｃ９新抗原の量は、補体経路の機能活性に比例する。本発明のｓｃＦｖ及び比較分子を濃度応答曲線において試験し、阻害についてのＩＣ５０をＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍソフトウェア及び非線形４パラメーター曲線回帰を使用して算出する。
本発明のｓｃＦｖの作用強度及びｉｎ ｖｉｔｒｏ活性並びに比較化合物Ａ１及び比較化合物Ａ３との比較
本発明の例示的ｓｃＦｖの機能の作用強度及びそれらの間の比較を決定するために、以下のアッセイを実行する：膜侵襲複合体の生成を測定する補体阻害アッセイ及び溶血アッセイ
Ａ．材料及び方法
ａ．補体阻害アッセイ
ヒト血清における補体系の阻害をモニターするために、本発明のｓｃＦｖ又は比較分子を、ヒト血清における機能的な古典、レクチン及び代替補体経路の定性的決定のためにＷＥＩＳＬＡＢ（登録商標）Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ｓｙｓｔｅｍ Ｓｃｒｅｅｎ（Ｓｖａｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＡＢ、Ｍａｌｍｏ、スウェーデン）を供給者の説明書に従って使用する酵素イムノアッセイを使用して試験する。生成されたＣ５ｂ－Ｃ９新抗原の量は、補体経路の機能活性に比例する。本発明のｓｃＦｖ及び比較分子を濃度応答曲線において試験し、阻害についてのＩＣ５０をＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍソフトウェア及び非線形４パラメーター曲線回帰を使用して算出する。
【0160】
ｂ．溶血アッセイ
抗Ｃ３抗体断片を、ヒト血清において、古典経路（ＣＰ）又は代替経路（ＡＰ）活性化によって媒介される抗体感作ヒツジ赤血球の溶血を阻害するそれらの能力について評価する。このために、ヒト血清における補体系を活性化し、Ｃ３活性化及び続く膜侵襲複合体（ＭＡＣ）の形成を生じるように、ヒツジ赤血球表面を溶血素（ウサギ抗ヒツジ抗体）を用いてコートする。ＭＡＣは、ヒツジ赤血球の膜でアセンブルし、細胞溶解を生じる。溶解した赤血球から放出されるヘモグロビンのレベルをＯＤ４１４ｎｍで測定し、それは血清試料中に存在する補体活性に比例する。ＣＰ活性を阻害する抗Ｃ３分子の能力を決定するために、ヒト血清を古典経路（カルシウム及びマグネシウムイオンを必要とする）の最適な活性化のためにＧＶＢ＋＋緩衝液（Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）中に希釈した。抗Ｃ３試験試料の系列希釈物を各データ点（赤血球への添加前）について１％ヒト血清の最終濃度でこの溶液から調製する。試料を抗体感作ヒツジ赤血球と共に１時間、３７℃でインキュベートし、放出されたヘモグロビンを遠心分離ステップ後に上清中で測定する。
ヒト血清試料において代替経路（ＡＰ）は、ウサギ赤血球によって自然に活性化される。ＡＰ活性化が高濃度の血清を必要とすることから、古典経路は、Ｃａ２＋イオンをキレートするために（ＡＰはＭｇ２＋イオンだけを必要とする）ＭｇＥＧＴＡを用いて遮断される必要がある。ＡＰ活性化は、Ｃ３活性化及び続く膜侵襲複合体（ＭＡＣ）の形成を生じる。ＭＡＣは、ウサギ赤血球の膜上でアセンブルし、細胞溶解を生じる。溶解した赤血球から放出されるヘモグロビンのレベルをＯＤ４１４ｎｍで測定し、それは血清試料中に存在する補体活性に比例する。
抗Ｃ３抗体断片を、ヒト血清において、古典経路（ＣＰ）又は代替経路（ＡＰ）活性化によって媒介される抗体感作ヒツジ赤血球の溶血を阻害するそれらの能力について評価する。このために、ヒト血清における補体系を活性化し、Ｃ３活性化及び続く膜侵襲複合体（ＭＡＣ）の形成を生じるように、ヒツジ赤血球表面を溶血素（ウサギ抗ヒツジ抗体）を用いてコートする。ＭＡＣは、ヒツジ赤血球の膜でアセンブルし、細胞溶解を生じる。溶解した赤血球から放出されるヘモグロビンのレベルをＯＤ４１４ｎｍで測定し、それは血清試料中に存在する補体活性に比例する。ＣＰ活性を阻害する抗Ｃ３分子の能力を決定するために、ヒト血清を古典経路（カルシウム及びマグネシウムイオンを必要とする）の最適な活性化のためにＧＶＢ＋＋緩衝液（Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）中に希釈した。抗Ｃ３試験試料の系列希釈物を各データ点（赤血球への添加前）について１％ヒト血清の最終濃度でこの溶液から調製する。試料を抗体感作ヒツジ赤血球と共に１時間、３７℃でインキュベートし、放出されたヘモグロビンを遠心分離ステップ後に上清中で測定する。
ヒト血清試料において代替経路（ＡＰ）は、ウサギ赤血球によって自然に活性化される。ＡＰ活性化が高濃度の血清を必要とすることから、古典経路は、Ｃａ２＋イオンをキレートするために（ＡＰはＭｇ２＋イオンだけを必要とする）ＭｇＥＧＴＡを用いて遮断される必要がある。ＡＰ活性化は、Ｃ３活性化及び続く膜侵襲複合体（ＭＡＣ）の形成を生じる。ＭＡＣは、ウサギ赤血球の膜上でアセンブルし、細胞溶解を生じる。溶解した赤血球から放出されるヘモグロビンのレベルをＯＤ４１４ｎｍで測定し、それは血清試料中に存在する補体活性に比例する。
【0161】
Ｂ．結果
結果を続く表１８にまとめる。
結果を続く表１８にまとめる。
【表18】
【0162】
本発明の例示的抗体（クローンＩ、クローンＩＩ及びクローンＩＩＩ）は、化合物Ａ１（化合物Ａ２の活性成分）より強力である。重要なことに、本発明者らは、本発明の例示的抗体が、化合物Ａ１と比較してさらに強力に古典及びレクチン経路を阻害することを示した。
クローンＩは、化合物Ａ１と同様の活性を代替経路に示す。
クローンＩは、化合物Ａ１と比較して、古典経路のさらに強力な阻害を示す。
クローンＩは、化合物Ａ１と比較して、レクチン経路のさらに強力な阻害を示す。
クローンＩ：本発明者らは、本発明の例示的抗体（クローンＩ）が、高い親和性及び作用強度を有して全ての補体エフェクター機能を阻害することを示した。
化合物Ａ１：本発明者らは、本発明の抗体と比較した場合に、比較化合物Ａ１が全ての補体エフェクター機能を低い親和性及び作用強度で阻害することを例示した。
ＮＧＭ６２１：本発明者らは、ＮＧＭ６２１サロゲート、比較化合物Ａ３がＣ３ｂ阻害を示さないことを示した。
ＺＩＭＵＲＡ（登録商標）：ＺＩＭＵＲＡ（登録商標）化合物は、Ｃ５だけを標的にする。
クローンＩは、化合物Ａ１と同様の活性を代替経路に示す。
クローンＩは、化合物Ａ１と比較して、古典経路のさらに強力な阻害を示す。
クローンＩは、化合物Ａ１と比較して、レクチン経路のさらに強力な阻害を示す。
クローンＩ：本発明者らは、本発明の例示的抗体（クローンＩ）が、高い親和性及び作用強度を有して全ての補体エフェクター機能を阻害することを示した。
化合物Ａ１：本発明者らは、本発明の抗体と比較した場合に、比較化合物Ａ１が全ての補体エフェクター機能を低い親和性及び作用強度で阻害することを例示した。
ＮＧＭ６２１：本発明者らは、ＮＧＭ６２１サロゲート、比較化合物Ａ３がＣ３ｂ阻害を示さないことを示した。
ＺＩＭＵＲＡ（登録商標）：ＺＩＭＵＲＡ（登録商標）化合物は、Ｃ５だけを標的にする。
【0163】
（実施例８）
ヒトＣ３及びＣ３ｂへの結合親和性並びに本発明の抗体、比較化合物Ａ１及び比較化合物Ａ３の結合親和性の比較
本発明者らは、本発明の例示的ｓｃＦｖのヒトＣ３への結合親和性、並びに化合物Ａ１及び化合物Ａ３のヒトＣ３及びＣ３ｂへの結合親和性を評価した。
Ａ．材料及び方法
候補物の動力学的パラメーターを表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）及びＢｉａｃｏｒｅ Ｔ１００デバイスを使用して決定する。Ｃ３及びその様々なバリアント（表１９）をＨＣ３０Ｍ ＳＰＲセンサーチップ（ＸａｎＴｅｃ ｂｉｏｎａｎａｌｙｔｉｃｓ、ドイツ）上にＥＤＣ／スルホ－ＮＨＣ連結化学を使用してリガンドとして固定する。動力学的パラメーターを決定するために５つの増加濃度の各分子（分析物）を、単一サイクル速度論（ＳＣＫ）モードを使用して連続的に注射する。候補物の間の再生は、１０ｍＭグリシン*ＨＣｌ、２Ｍ ＮａＣｌ、ｐＨ３．５を用いて行う。データは、１：１ラングミュア結合モデルにフィットさせ、オン速度（ｋａ）、オフ速度（ｋｄ）及び親和性（ＫD）の動力学的パラメーターを決定した。
ヒトＣ３及びＣ３ｂへの結合親和性並びに本発明の抗体、比較化合物Ａ１及び比較化合物Ａ３の結合親和性の比較
本発明者らは、本発明の例示的ｓｃＦｖのヒトＣ３への結合親和性、並びに化合物Ａ１及び化合物Ａ３のヒトＣ３及びＣ３ｂへの結合親和性を評価した。
Ａ．材料及び方法
候補物の動力学的パラメーターを表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）及びＢｉａｃｏｒｅ Ｔ１００デバイスを使用して決定する。Ｃ３及びその様々なバリアント（表１９）をＨＣ３０Ｍ ＳＰＲセンサーチップ（ＸａｎＴｅｃ ｂｉｏｎａｎａｌｙｔｉｃｓ、ドイツ）上にＥＤＣ／スルホ－ＮＨＣ連結化学を使用してリガンドとして固定する。動力学的パラメーターを決定するために５つの増加濃度の各分子（分析物）を、単一サイクル速度論（ＳＣＫ）モードを使用して連続的に注射する。候補物の間の再生は、１０ｍＭグリシン*ＨＣｌ、２Ｍ ＮａＣｌ、ｐＨ３．５を用いて行う。データは、１：１ラングミュア結合モデルにフィットさせ、オン速度（ｋａ）、オフ速度（ｋｄ）及び親和性（ＫD）の動力学的パラメーターを決定した。
【0164】
Ｃ３における単一ヌクレオチド多型（ＳＮＰ）は、集団にわたって観察され、ある特定のＳＮＰを、ＡＭＤを発症するリスクの増加と関連させてゲノムワイド関連解析（ＧＷＡＳ）において同定した。共通ＳＮＰバリアントとしては、集団のおよそ２３．３％に存在するＰ３１４Ｌ、及び集団のおよそ２６～２９％に存在すると報告されたＲ１０２Ｇが挙げられる。より少なく集団の２．５％で存在する非常に稀なバリアントとしては、Ｋ１５５Ｑ、Ｒ７３５Ｗ、Ｓ１６１９Ｗ、Ｋ６５Ｑ及びＲ１６１Ｗが挙げられる。
したがって、本発明者らは、本発明のｓｃＦｖの最も一般的に存在するＣ３形態、すなわち、Ｒ１０２Ｇ及びＰ３１４Ｌへの結合親和性を測定した。野生型ヒトＣ３、ヒトＣ３ Ｐ３１４Ｌ及びヒトＣ３ Ｒ１０２ＧをＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ ＣＨＯ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用してＣＨＯ細胞株において発現させる。タンパク質は、Ｎ末端に６ｘＨｉｓタグを含むように発現させ、ＨｉｓＴｒａｐ Ｅｘｃｅｌ ＨＰカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して精製し、サイズ排除クロマトグラフィーステップ（ＳＵＰＥＲＤＥＸ（登録商標）２００１０／３００ＧＬ；ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）が続く。
したがって、本発明者らは、本発明のｓｃＦｖの最も一般的に存在するＣ３形態、すなわち、Ｒ１０２Ｇ及びＰ３１４Ｌへの結合親和性を測定した。野生型ヒトＣ３、ヒトＣ３ Ｐ３１４Ｌ及びヒトＣ３ Ｒ１０２ＧをＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ ＣＨＯ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用してＣＨＯ細胞株において発現させる。タンパク質は、Ｎ末端に６ｘＨｉｓタグを含むように発現させ、ＨｉｓＴｒａｐ Ｅｘｃｅｌ ＨＰカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して精製し、サイズ排除クロマトグラフィーステップ（ＳＵＰＥＲＤＥＸ（登録商標）２００１０／３００ＧＬ；ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）が続く。
【0165】
Ｂ．結果
ヒトＣ３及びＣ３ｂにそれぞれ結合する本発明のｓｃＦｖ、化合物Ａ１（化合物Ａ２の活性成分）及び化合物Ａ３の動力学的データ及び親和性データを続く表１９に列挙する。
ヒトＣ３及びＣ３ｂにそれぞれ結合する本発明のｓｃＦｖ、化合物Ａ１（化合物Ａ２の活性成分）及び化合物Ａ３の動力学的データ及び親和性データを続く表１９に列挙する。
【表19】
【0166】
化合物Ａ３は、インタクトなヒトＣ３への高い親和性（ＫＤ＝０．３４ｎＭ）を有してＣ３に結合するが、Ｃ３切断断片Ｃ３ｂへの顕著に低い親和性（１００分の１未満）を示す。
反対に、本発明の例示的抗体は、化合物Ａ３よりも高い親和性でＣ３に結合する。加えて、本発明の例示的抗体は、Ｃ３及びＣ３ｂに対するおよそ同等の結合親和性を有する。
本発明の抗体が、化合物Ａ１及び化合物Ａ３と比較して高い親和性でヒトＣ３及びＣ３ｂに結合し、Ｃ３のさらに強力な阻害を可能にすることは注目に値する。化合物Ａ３と比較して、本発明の抗体は、高い親和性でＣ３ｂに結合し、それによりＣ３増幅ループにおけるＣ３ｂの生成並びに代替活性化経路によって生成された既に沈着したＣ３ｂ及びＣ３ｂの活性を遮断する。
反対に、本発明の例示的抗体は、化合物Ａ３よりも高い親和性でＣ３に結合する。加えて、本発明の例示的抗体は、Ｃ３及びＣ３ｂに対するおよそ同等の結合親和性を有する。
本発明の抗体が、化合物Ａ１及び化合物Ａ３と比較して高い親和性でヒトＣ３及びＣ３ｂに結合し、Ｃ３のさらに強力な阻害を可能にすることは注目に値する。化合物Ａ３と比較して、本発明の抗体は、高い親和性でＣ３ｂに結合し、それによりＣ３増幅ループにおけるＣ３ｂの生成並びに代替活性化経路によって生成された既に沈着したＣ３ｂ及びＣ３ｂの活性を遮断する。
【0167】
追加的な結果を続く表２０にまとめる。
【表20】
【0168】
したがって、本発明者らは、クローンＩ、クローンＩＩ及びクローンＩＩＩを含む本発明の抗体が、化合物Ａ１よりも高い親和性をＣ３及びＣ３ｂに有し、２／３の補体活性化をさらに強力に阻害することを確認した。
例示的抗体の高い結合親和性は、硝子体内注射後のＣ３の中和の時間の延長に寄与し、注射頻度の低減をさらに可能にする。結合親和性の改善及び注射頻度の低減は、患者の処置の有効性をかなり改善する。これは、患者に貴重な利益、特に、薬物の順守及びコンプライアンスの改善も提供する。
本発明のｓｃＦｖが、化合物Ａ１よりも高い親和性で野生型Ｃ３並びに疾患関連ＳＮＰ Ｃ３ Ｐ３１４Ｌに結合することはさらに注目に値する。
例示的抗体の高い結合親和性は、硝子体内注射後のＣ３の中和の時間の延長に寄与し、注射頻度の低減をさらに可能にする。結合親和性の改善及び注射頻度の低減は、患者の処置の有効性をかなり改善する。これは、患者に貴重な利益、特に、薬物の順守及びコンプライアンスの改善も提供する。
本発明のｓｃＦｖが、化合物Ａ１よりも高い親和性で野生型Ｃ３並びに疾患関連ＳＮＰ Ｃ３ Ｐ３１４Ｌに結合することはさらに注目に値する。
【0169】
（実施例９）
ヒト補体Ｃ３上の抗体結合エピトープの同定
タンパク質調製：補体成分Ｃ３ｃは、Ｃ３転換酵素及びＩ因子によるＣ３切断から生じる主な断片である。ヒト血漿から単離されたＣ３ｃを、Ａｔｈｅｎｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ＆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（製品番号１６－１６－０３０３０３）から購入し、ＰＮＧａｓｅ Ｆを用いて脱グリコシルし、ＳＵＰＥＲＤＥＸ（登録商標）２００カラムでのサイズ排除クロマトグラフィーによって精製する。ピーク画分をプールし、Ａｍｉｃｏｎフィルターデバイスを５０ｋＤａカットオフで使用して濃縮し、－８０℃で保存する。
ｓｃＦｖの結晶化：０．１μｌのタンパク質を、０．１Ｍ酢酸アンモニウム、０．１Ｍ塩化亜鉛、０．１Ｍ ＢＩＳ－ＴＲＩＳ ｐＨ６．０及び１５％ｗ／ｖ ＰＥＧ Ｓｍｅａｒ Ｈｉｇｈを含有する０．１μＬのリザーバー溶液と混合することによってハンギングドロップ蒸気拡散法を使用して結晶を得る。板状の結晶が１日以内に現れる。結晶を３０％ｖ／ｖグリセリンを補充したリザーバー溶液を用いて凍結保護し、液体窒素において急速凍結する。
ヒト補体Ｃ３上の抗体結合エピトープの同定
タンパク質調製：補体成分Ｃ３ｃは、Ｃ３転換酵素及びＩ因子によるＣ３切断から生じる主な断片である。ヒト血漿から単離されたＣ３ｃを、Ａｔｈｅｎｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ＆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（製品番号１６－１６－０３０３０３）から購入し、ＰＮＧａｓｅ Ｆを用いて脱グリコシルし、ＳＵＰＥＲＤＥＸ（登録商標）２００カラムでのサイズ排除クロマトグラフィーによって精製する。ピーク画分をプールし、Ａｍｉｃｏｎフィルターデバイスを５０ｋＤａカットオフで使用して濃縮し、－８０℃で保存する。
ｓｃＦｖの結晶化：０．１μｌのタンパク質を、０．１Ｍ酢酸アンモニウム、０．１Ｍ塩化亜鉛、０．１Ｍ ＢＩＳ－ＴＲＩＳ ｐＨ６．０及び１５％ｗ／ｖ ＰＥＧ Ｓｍｅａｒ Ｈｉｇｈを含有する０．１μＬのリザーバー溶液と混合することによってハンギングドロップ蒸気拡散法を使用して結晶を得る。板状の結晶が１日以内に現れる。結晶を３０％ｖ／ｖグリセリンを補充したリザーバー溶液を用いて凍結保護し、液体窒素において急速凍結する。
【0170】
データ回収及び構造決定：データをスイスのフィリゲンのＳＬＳのｂｅａｍｌｉｎｅ Ｘ１０ＳＡで１００Ｋで回収する。フレームあたり０．１°で３６００フレームをＥＩＧＥＲ Ｘ １６Ｍ検出器で回収する。データをａｕｔｏＰＲＯＣを用いて処理する。分子置き換えのモデルを、類似のｓｃＦｖの予め決定されたＸ線構造を鋳型として使用してＰＨＥＮＩＸソフトウェアスイート内のＳＣＵＬＰＴＯＲを用いて作成する。分子置き換えは、鋳型としてＳＣＵＬＰＴＯＲを用いて作成したｓｃＦｖモデルを使用してＰＨＡＳＥＲを用いて実施する。構造をＢｕｓｔｅｒ、モデル構築を用いて精密化し、最小二乗法分析をＣＯＯＴを用いて行う。
Ｃｒｙｏ－ＥＭ試料調製及びデータ回収：Ｃ３ｃをＳｃＦｖと１：１．２の比で混合し、１６時間、２７７Ｋでインキュベートし、ＳＵＰＥＲＤＥＸ（登録商標）２００ ｉｎｃｒｅａｓｅカラムを用いて精製する。ピーク画分を３６μＭに濃縮し、ＥＭ－グリッド（Ｑｕａｎｔｉｆｏｉｌ－１．２／１．３ Ａｕ ３００）にアプライする。ｃｒｙｏ－ＥＭグリッドをＬｅｉｃａ ＧＰ（Ｌｅｉｃａ Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して作成する。グリッドを２秒、４℃、湿度８５％でブロットし、液体窒素によって冷却した液体エタンに入れる。Ｃｒｙｏ－グリッドをＦａｌｃｏｎ ＩＩＩ検出器を用いて電圧２００ｋＶで操作するＧｌａｃｉｏｓ顕微鏡上でスクリーニングし、良好な品質のグリッドを３００ｋＶで操作するＴｉｔａｎ Ｋｒｉｏｓ顕微鏡に移す。画像をピクセルあたり０．７４５Åの較正されたピクセルサイズを用いるエネルギーフィルターの後ろに備え付けたＦａｌｃｏｎ ＩＶ検出器（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して超解像度モードで回収する。顕微鏡像を６０ｅ-／Å2の合計線量で曝露し、ＣｒｙｏＳＰＡＲＣ ｖ３．１．１を使用して処理する。スタックを運動補正し、２倍ビニングし、ピクセルあたり１．４９Åのピクセルサイズを得る。
Ｃｒｙｏ－ＥＭ試料調製及びデータ回収：Ｃ３ｃをＳｃＦｖと１：１．２の比で混合し、１６時間、２７７Ｋでインキュベートし、ＳＵＰＥＲＤＥＸ（登録商標）２００ ｉｎｃｒｅａｓｅカラムを用いて精製する。ピーク画分を３６μＭに濃縮し、ＥＭ－グリッド（Ｑｕａｎｔｉｆｏｉｌ－１．２／１．３ Ａｕ ３００）にアプライする。ｃｒｙｏ－ＥＭグリッドをＬｅｉｃａ ＧＰ（Ｌｅｉｃａ Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して作成する。グリッドを２秒、４℃、湿度８５％でブロットし、液体窒素によって冷却した液体エタンに入れる。Ｃｒｙｏ－グリッドをＦａｌｃｏｎ ＩＩＩ検出器を用いて電圧２００ｋＶで操作するＧｌａｃｉｏｓ顕微鏡上でスクリーニングし、良好な品質のグリッドを３００ｋＶで操作するＴｉｔａｎ Ｋｒｉｏｓ顕微鏡に移す。画像をピクセルあたり０．７４５Åの較正されたピクセルサイズを用いるエネルギーフィルターの後ろに備え付けたＦａｌｃｏｎ ＩＶ検出器（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して超解像度モードで回収する。顕微鏡像を６０ｅ-／Å2の合計線量で曝露し、ＣｒｙｏＳＰＡＲＣ ｖ３．１．１を使用して処理する。スタックを運動補正し、２倍ビニングし、ピクセルあたり１．４９Åのピクセルサイズを得る。
【0171】
Ｃｒｙｏ－ＥＭ画像分析：合計１，９１４，１２０個の粒子を３６２２個の顕微鏡像からＣｒｙｏＳＰＡＲＣ鋳型ピッカーを使用して取る。取った粒子を３４８ピクセルのボックスサイズを用いて抽出し、ＣｒｙｏＳＰＡＲＣにおいて１７４ピクセルでビニングした。次に抽出した粒子を氷、夾雑物及び凝集物を除去するために、ｃｒｙｏＳＰＡＲＣ－３．１．１．での３つのラウンドの２Ｄ分類に供し、４２１，６２８個の粒子を得る。明確に定義されたＣ３ｃ－ｓｃＦｖ密度を有するクラスをｃｒｙｏＳＰＡＲＣ－３．１．０におけるアブイニシオ再構築のために使用する。２４５，９９３個の粒子を２Ｄクラス０．９の閾値に基づいて選択し、１つのラウンドの均一の及び不均一の精密化に供する。粒子を３４８ピクセルのボックスサイズを用いて再抽出し、２つの１つのさらなるラウンド（ｔｗｏ ｏｎｅ ｆｕｒｔｈｅｒ ｒｏｕｎｄ）の均一の及び不均一の精密化を実施する。これは、２．５５Åのフーリエシェル解像度（ｆｏｕｒｉｅｒ ｓｈｅｌｌ ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ）をもたらした。
モデル構築：Ｃ３ｃ（ｐｄｂ ５ＦＯＢ）及びｓｃＦｖのＸ線構造をＣＨＩＭＥＲＡを活用してＥＭ密度に組み入れ、ＰＨＥＮＩＸを用いて実空間精密化し、ＣＯＯＴで調査する。境界面分析をＰＹＭＯＬを用いて行う。
モデル構築：Ｃ３ｃ（ｐｄｂ ５ＦＯＢ）及びｓｃＦｖのＸ線構造をＣＨＩＭＥＲＡを活用してＥＭ密度に組み入れ、ＰＨＥＮＩＸを用いて実空間精密化し、ＣＯＯＴで調査する。境界面分析をＰＹＭＯＬを用いて行う。
【0172】
クローンＩの構造をＸ線結晶学によって１．４Åの解像度で決定する。構造物は、非対称のユニットごとに分子２個を含有する。Ａ鎖及びＢ鎖の２個のＮ末端残基、Ａ鎖のリンカー残基１１５～１３２及びＢ鎖のリンカー残基１１４～１３３並びにＢ鎖のＣ末端残基２５３の残基を除いて、全ての残基を電子密度マップ内で良好に決定した。
ＥＭ－グリッドでの複合体分子の優先される方向が理由で、解像度は、Ｃ３ｃとｓｃＦｖとの境界面では４～５Åに制限され、これはＸ線由来モデルのＥＭマップへの置き換えをまだ可能にする。ｓｃＦｖに６Å以内で近接する残基は、結合部位残基として決定され、ヒト補体Ｃ３（配列番号４７）でのアミノ酸３６６、３９２～３９６、４１３～４２１、４２５、４２７、４４２、４５３、４７８に対応する。結果は、クローンＩが、限定はしないが、コンプスタチン結合部位に部分的に重複するエピトープに結合することを示した。コンプスタチン誘導体と比較して本発明の分子によって示されたＣ３への結合親和性の増強は、この結合境界面の延長から生じると考えられる。これらの結果は、先行技術Ｃ３阻害剤と比較して異なるモードで本発明の分子がＣ３に結合することを示し、これは、古典経路（ＣＰ）、レクチン経路（ＬＰ）及び代替経路（ＡＰ）を含む３種全ての補体経路を阻害するその固有の能力に寄与すると考えられる。
ＥＭ－グリッドでの複合体分子の優先される方向が理由で、解像度は、Ｃ３ｃとｓｃＦｖとの境界面では４～５Åに制限され、これはＸ線由来モデルのＥＭマップへの置き換えをまだ可能にする。ｓｃＦｖに６Å以内で近接する残基は、結合部位残基として決定され、ヒト補体Ｃ３（配列番号４７）でのアミノ酸３６６、３９２～３９６、４１３～４２１、４２５、４２７、４４２、４５３、４７８に対応する。結果は、クローンＩが、限定はしないが、コンプスタチン結合部位に部分的に重複するエピトープに結合することを示した。コンプスタチン誘導体と比較して本発明の分子によって示されたＣ３への結合親和性の増強は、この結合境界面の延長から生じると考えられる。これらの結果は、先行技術Ｃ３阻害剤と比較して異なるモードで本発明の分子がＣ３に結合することを示し、これは、古典経路（ＣＰ）、レクチン経路（ＬＰ）及び代替経路（ＡＰ）を含む３種全ての補体経路を阻害するその固有の能力に寄与すると考えられる。
【0173】
（実施例１０）
ｉｎ ｖｉｔｒｏでのＢｒＭ透過アッセイ及びＢｒＭ透過性
ブルッフ膜は、脈絡膜の最も内側の層を形成し、構造変化は、ＧＡ患者において補体活性化を引き起こすと考えられる。脈絡毛細管の補体駆動破壊がＧＡの病態生理学において主要な役割を果たすことから、ブルッフ膜を通じた優れた拡散は、この疾患を処置するための補体阻害剤の重要な特性である。
したがって、本発明者らは、ｉｎ ｖｉｔｒｏでブルッフ膜を通じて拡散する本発明のｓｃＦｖの能力を評価し、それを化合物Ａ２及び化合物Ａ３と比較した。
Ａ．材料及び方法
ブタブルッフ膜試料をこの測定のために使用する。ブタの眼を動物の屠殺後６時間以内に屠殺場）から回収し、使用（同日）まで４℃で保存した。
ｉｎ ｖｉｔｒｏでのＢｒＭ透過アッセイ及びＢｒＭ透過性
ブルッフ膜は、脈絡膜の最も内側の層を形成し、構造変化は、ＧＡ患者において補体活性化を引き起こすと考えられる。脈絡毛細管の補体駆動破壊がＧＡの病態生理学において主要な役割を果たすことから、ブルッフ膜を通じた優れた拡散は、この疾患を処置するための補体阻害剤の重要な特性である。
したがって、本発明者らは、ｉｎ ｖｉｔｒｏでブルッフ膜を通じて拡散する本発明のｓｃＦｖの能力を評価し、それを化合物Ａ２及び化合物Ａ３と比較した。
Ａ．材料及び方法
ブタブルッフ膜試料をこの測定のために使用する。ブタの眼を動物の屠殺後６時間以内に屠殺場）から回収し、使用（同日）まで４℃で保存した。
【0174】
富化されたブルッフ膜（ＢｒＭ）の調製：眼を使い捨てのペトリ皿に置き、眼球の周囲のあらゆる残存組織を除去する。メスを用いて眼球を虹彩に接して切開し、眼の前部並びに水晶体、硝子体及び網膜組織を眼杯から除く。覆っているＲＰＥ単層を含む富化されたブルッフ膜を眼杯の内側表面全体から穏やかに取り除き、ＰＢＳで満たしたペトリ皿に置き、液中に慎重に平らにする。その後、ブルッフ膜をウッシングチャンバーに移し、ウッシングチャンバーを閉じ、１個のコンパートメントを漏れ試験のために１ｍｌ ＰＢＳで満たす。５分後に、第２のコンパートメントにおいて顕著な液体の貯留が観察されなければ、膜はインタクトであると考えられる。４個の異なる眼からのブルッフの調製を各ウッシングチャンバーについて使用する。
試験試料を用いた富化されたブルッフ膜のインキュベーション：４個のウッシングチャンバー（ウッシングチャンバーあたり１ｍｌ）のために十分な、ＡＰＬ－２サロゲート（化合物Ａ２など）及び抗Ｃ３ ｓｃＦｖ又はＡＰＬ－２サロゲート（化合物Ａ２など）及びＮＧＭ６２１サロゲート（化合物Ａ３など）のＰＢＳ（＋０．０２％ ＮａＮ３＋プロテアーゼ阻害剤混合物（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ Ｔａｂｌｅｔｓ、Ｍｉｎｉ ＥＤＴＡ－ｆｒｅｅ、ＥＡＳＹｐａｃｋ；Ｒｏｃｈｅ））中のマスターミックスを、各化合物について最終濃度０．１ｍｇ／ｍｌで調製する。ウッシングチャンバーあたり１ｍｌのマスターミックスを１個のコンパートメント（試料チャンバーと呼ぶ）に加える。ウッシングチャンバーあたり１ｍｌのＰＢＳ（＋０．０２％ＮａＮ３＋プロテアーゼ阻害剤）を第２のコンパートメント（拡散チャンバーと呼ぶ）に加える。ウッシングチャンバーをパラフィルムでシールし、室温で、拡散を促進するように穏やかに振とうしながらインキュベートした。
試験試料を用いた富化されたブルッフ膜のインキュベーション：４個のウッシングチャンバー（ウッシングチャンバーあたり１ｍｌ）のために十分な、ＡＰＬ－２サロゲート（化合物Ａ２など）及び抗Ｃ３ ｓｃＦｖ又はＡＰＬ－２サロゲート（化合物Ａ２など）及びＮＧＭ６２１サロゲート（化合物Ａ３など）のＰＢＳ（＋０．０２％ ＮａＮ３＋プロテアーゼ阻害剤混合物（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ Ｔａｂｌｅｔｓ、Ｍｉｎｉ ＥＤＴＡ－ｆｒｅｅ、ＥＡＳＹｐａｃｋ；Ｒｏｃｈｅ））中のマスターミックスを、各化合物について最終濃度０．１ｍｇ／ｍｌで調製する。ウッシングチャンバーあたり１ｍｌのマスターミックスを１個のコンパートメント（試料チャンバーと呼ぶ）に加える。ウッシングチャンバーあたり１ｍｌのＰＢＳ（＋０．０２％ＮａＮ３＋プロテアーゼ阻害剤）を第２のコンパートメント（拡散チャンバーと呼ぶ）に加える。ウッシングチャンバーをパラフィルムでシールし、室温で、拡散を促進するように穏やかに振とうしながらインキュベートした。
【0175】
試料採取及び膜完全性分析：様々な時点（４時間、２４時間、４８時間及び７２時間）での試料採取のために、単一のコンパートメント中の溶液を慎重に上下にピペット操作することによって混合し、９０μｌを各試料チャンバー及び拡散チャンバーから別々に回収チューブに移した。インキュベーション期間の最後に膜完全性試験をＳｐｈｅｒｏ Ｃａｒｂｏｘｙｌ Ｐｏｌｙｓｔｙｒｅｎｅ Ｂｌｕｅ Ｐａｒｔｉｃｌｅｓを使用して実施する：懸濁液をＰＢＳ中で１：１０に希釈し、ウッシングチャンバーあたり２００ｕｌを１個のコンパートメント（試料チャンバーと呼ぶ）に加え、３０分間インキュベートした。第２のコンパートメント中の青色粒子の蓄積を観察し、全体的な膜完全性を管理するためにカメラ画像を記録する。
試料分析：試料チャンバー及び拡散チャンバーから各溶液１５μｌを、ローディング対照としての同様の量の保存したマスターミックスと共に２個のプレキャストポリアクリルアミドゲル（ＮｕＰＡＧＥ Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓゲル）に有効にロードする。第１のゲルを、標準的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及びタンパク質検出のためのクーマシーに基づく染色法によって分析する（抗Ｃ３ ｓｃＦｖ）。第２のゲルをＳＤＳ－ＰＡＧＥ及びＰＥＧ検出のためのヨウ化バリウム染色によって分析する（化合物Ａ２）。
試料分析：試料チャンバー及び拡散チャンバーから各溶液１５μｌを、ローディング対照としての同様の量の保存したマスターミックスと共に２個のプレキャストポリアクリルアミドゲル（ＮｕＰＡＧＥ Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓゲル）に有効にロードする。第１のゲルを、標準的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及びタンパク質検出のためのクーマシーに基づく染色法によって分析する（抗Ｃ３ ｓｃＦｖ）。第２のゲルをＳＤＳ－ＰＡＧＥ及びＰＥＧ検出のためのヨウ化バリウム染色によって分析する（化合物Ａ２）。
【0176】
評価：ＳＤＳゲルの写真をＩｍａｇｅＪ２ソフトウェア（Ｆｉｊｉ）を使用して分析する。バンドを定量し、それぞれのチャンバーにおいて試験化合物の％として表し、ここで１００％は、同じウッシングデバイスの試料チャンバーの及び拡散チャンバーの合計バンド強度を指す。
Ｂ．結果
ブタＢｒＭを通過する能力を、４個の異なるブタの眼由来のＢｒＭ調製物上で同時にインキュベートした本発明のｓｃＦｖ及び化合物Ａ２などのコンプスタチン誘導体について比較した。ＡＰＬ－２サロゲートと比較して、顕著に多い量のｓｃＦｖが、４個全ての膜調製物においてＢｒＭを通過した。同様に、ブタＢｒＭを通過する能力を、４個の異なるブタの眼由来のＢｒＭ調製物で同時にインキュベートしたＮＧＭ６２１サロゲート（化合物Ａ３）及びＡＰＬ－２サロゲート（化合物Ａ２）について比較した。
Ｂ．結果
ブタＢｒＭを通過する能力を、４個の異なるブタの眼由来のＢｒＭ調製物上で同時にインキュベートした本発明のｓｃＦｖ及び化合物Ａ２などのコンプスタチン誘導体について比較した。ＡＰＬ－２サロゲートと比較して、顕著に多い量のｓｃＦｖが、４個全ての膜調製物においてＢｒＭを通過した。同様に、ブタＢｒＭを通過する能力を、４個の異なるブタの眼由来のＢｒＭ調製物で同時にインキュベートしたＮＧＭ６２１サロゲート（化合物Ａ３）及びＡＰＬ－２サロゲート（化合物Ａ２）について比較した。
【0177】
本発明の例示的抗体（クローンＩ）は、化合物Ａ２及び化合物Ａ３と比較してブルッフ膜を通る優れた拡散能力を示した（図３及び４）。
化合物Ａ２：浸透しない
化合物Ａ３：本発明による本発明者らの例示的抗体と比較して低減した浸透
ＺＩＭＵＲＡ（登録商標）：分子は試験しなかった。ＡＰＬ－２と同じ大きな４０ｋＤａ ＰＥＧ部分を含有することから、同様の挙動が予測される。
化合物Ａ２：浸透しない
化合物Ａ３：本発明による本発明者らの例示的抗体と比較して低減した浸透
ＺＩＭＵＲＡ（登録商標）：分子は試験しなかった。ＡＰＬ－２と同じ大きな４０ｋＤａ ＰＥＧ部分を含有することから、同様の挙動が予測される。
【0178】
（実施例１１）
本発明のｓｃＦｖのタンパク質熱安定性
Ａ．材料及び方法
使用する技術：ＤＳＦ
示差走査蛍光定量法（ＤＳＦ）は、温度の関数としての蛍光におけるモニター変化によってタンパク質アンフォールディングを測定する。
タンパク質アンフォールディングの温度（Ｔm）は、抗体の安定性、特に治療製品の保存中の凝集及び長期安定性に関係する。モノクローナル抗体ＣＨ２及びＣＨ３ドメインの熱転移は、ＣＨ２ドメインアンフォールディングがＣＨ３ドメインに先行して、アイソタイプ内の異なる抗体について典型的には不変である。
本発明のｓｃＦｖのタンパク質熱安定性
Ａ．材料及び方法
使用する技術：ＤＳＦ
示差走査蛍光定量法（ＤＳＦ）は、温度の関数としての蛍光におけるモニター変化によってタンパク質アンフォールディングを測定する。
タンパク質アンフォールディングの温度（Ｔm）は、抗体の安定性、特に治療製品の保存中の凝集及び長期安定性に関係する。モノクローナル抗体ＣＨ２及びＣＨ３ドメインの熱転移は、ＣＨ２ドメインアンフォールディングがＣＨ３ドメインに先行して、アイソタイプ内の異なる抗体について典型的には不変である。
【0179】
Ｂ．結果
結果を続く表２１にまとめる。
高いＴm値は、所与の温度でわずかな分子がアンフォールド状態で存在することを意味する。それにより、高いＴm値は生理学的温度で活性立体構造を維持することから、高いＴm値は治療用タンパク質薬に関して有益である。
これらの結果は、本発明の例示的抗体の優れた医薬特性を確認する。特に、熱安定性特性の改善は、治療有効性の改善に寄与する一方で、患者への注射用量及び頻度の低減を可能にする。加えて、結果は、治療用製品での長い有効期間及び安定性の改善を示す。安定性の改善及び活性の延長は、硝子体内投与に高度に適する本発明の抗体の作製に寄与する。
結果を続く表２１にまとめる。
【表21】
高いＴm値は、所与の温度でわずかな分子がアンフォールド状態で存在することを意味する。それにより、高いＴm値は生理学的温度で活性立体構造を維持することから、高いＴm値は治療用タンパク質薬に関して有益である。
これらの結果は、本発明の例示的抗体の優れた医薬特性を確認する。特に、熱安定性特性の改善は、治療有効性の改善に寄与する一方で、患者への注射用量及び頻度の低減を可能にする。加えて、結果は、治療用製品での長い有効期間及び安定性の改善を示す。安定性の改善及び活性の延長は、硝子体内投与に高度に適する本発明の抗体の作製に寄与する。
【0180】
（実施例１２）
免疫原性リスク：既存ＡＤＡについてのスクリーニング
本発明者らは、ブリッジングＥＬＩＳＡを使用してクローンＩに対する既存ＡＤＡに関して健康なヒトドナーの血清をスクリーニングする。健康なヒトドナー由来の血清に存在する既存ＡＤＡは、固定した抗Ｃ３ ｓｃＦｖの結合を受ける。次のステップでは、ＡＤＡは、ビオチンを用いて標識した同じ抗Ｃ３ ｓｃＦｖの結合を受け、ＨＲＰコンジュゲートストレプトアビジンによって検出される。
免疫原性リスク：既存ＡＤＡについてのスクリーニング
本発明者らは、ブリッジングＥＬＩＳＡを使用してクローンＩに対する既存ＡＤＡに関して健康なヒトドナーの血清をスクリーニングする。健康なヒトドナー由来の血清に存在する既存ＡＤＡは、固定した抗Ｃ３ ｓｃＦｖの結合を受ける。次のステップでは、ＡＤＡは、ビオチンを用いて標識した同じ抗Ｃ３ ｓｃＦｖの結合を受け、ＨＲＰコンジュゲートストレプトアビジンによって検出される。
【0181】
Ａ．材料及び方法
ｓｃＦｖを「Ｂｉｏｔｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ Ｋｉｔ （Ｆａｓｔ、Ｔｙｐｅ Ａ）－Ｌｉｇｈｔｎｉｎｇ－Ｌｉｎｋ」キット（Ｅｘｐｅｄｅｏｎ／Ａｂｃａｍ）を供給者の説明書に従って使用してビオチン標識する。未標識ｓｃＦｖをＰＢＳ中で０．５μｇ／ｍｌに希釈し、１ウエルあたり５０μｌを９６ウエルプレートに移し、一晩、４℃でインキュベートした。翌日、９６ウエルプレートを洗浄緩衝液（３×３２０μｌ、ＰＢＳ中０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、ｐＨ７．４）を用いて洗浄し、非特異的結合部位を３００μｌ／ウエルのブロッキング緩衝液（ＳｕｐｅｒＢｌｏｃｋ Ｂｌｏｃｋｉｎｇ Ｂｕｆｆｅｒ；Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて３０分間、室温でブロックする。次いでウエルを洗浄緩衝液（３×３２０μｌ／ウエル）を用いて洗浄する。
ｓｃＦｖを「Ｂｉｏｔｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ Ｋｉｔ （Ｆａｓｔ、Ｔｙｐｅ Ａ）－Ｌｉｇｈｔｎｉｎｇ－Ｌｉｎｋ」キット（Ｅｘｐｅｄｅｏｎ／Ａｂｃａｍ）を供給者の説明書に従って使用してビオチン標識する。未標識ｓｃＦｖをＰＢＳ中で０．５μｇ／ｍｌに希釈し、１ウエルあたり５０μｌを９６ウエルプレートに移し、一晩、４℃でインキュベートした。翌日、９６ウエルプレートを洗浄緩衝液（３×３２０μｌ、ＰＢＳ中０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、ｐＨ７．４）を用いて洗浄し、非特異的結合部位を３００μｌ／ウエルのブロッキング緩衝液（ＳｕｐｅｒＢｌｏｃｋ Ｂｌｏｃｋｉｎｇ Ｂｕｆｆｅｒ；Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて３０分間、室温でブロックする。次いでウエルを洗浄緩衝液（３×３２０μｌ／ウエル）を用いて洗浄する。
【0182】
健常者由来のヒト血清をＰＢＳ中、１０％に希釈し、５０μｌ／ウエルを９６ウエルプレートに加え、プレートを１時間、室温でインキュベートする。次いで、プレートを洗浄緩衝液（３×３２０μｌ／ウエル）を用いて洗浄し、１ウエルあたり５０μｌ／ウエルのビオチン化ｓｃＦｖ（ＰＢＳ中０．０５μｇ／ｍｌ）を加え、１時間、室温でインキュベートする。
プレートを洗浄し（３×３２０μｌ／ウエルは緩衝液であった）、５０μｌ／ウエルのストレプトアビジンＰｏｌｙＨＲＰ４０（ＳＤＴ Ｒｅａｇｅｎｓｔ；ＰＢＳ中１：５０００）を加え、３０分間、室温でインキュベートする。
プレートを洗浄し（３×３２０μｌ／ウエルの洗浄緩衝液）、５０μｌ／ウエルのＴＭＢ基質（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を加え、５分間、室温でインキュベートする。次いで、反応を５０μｌ／ウエルの１Ｎ Ｈ２ＳＯ４の添加によって停止させる。吸収を４５０ｎｍで測定する。既存ＡＤＡは、吸収の増加をもたらす。
Ｂ．結果
クローンＩについて、既存ＡＤＡは、５０個の血清試料のうちの９個において見出され、免疫原性の全般的に低いリスクを示した。これらの結果は、本発明の抗体が非常に好適であり、低い免疫原性リスクだけを有して眼科疾患又は眼疾患の処置のために有望であることを確認する。
プレートを洗浄し（３×３２０μｌ／ウエルは緩衝液であった）、５０μｌ／ウエルのストレプトアビジンＰｏｌｙＨＲＰ４０（ＳＤＴ Ｒｅａｇｅｎｓｔ；ＰＢＳ中１：５０００）を加え、３０分間、室温でインキュベートする。
プレートを洗浄し（３×３２０μｌ／ウエルの洗浄緩衝液）、５０μｌ／ウエルのＴＭＢ基質（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を加え、５分間、室温でインキュベートする。次いで、反応を５０μｌ／ウエルの１Ｎ Ｈ２ＳＯ４の添加によって停止させる。吸収を４５０ｎｍで測定する。既存ＡＤＡは、吸収の増加をもたらす。
Ｂ．結果
クローンＩについて、既存ＡＤＡは、５０個の血清試料のうちの９個において見出され、免疫原性の全般的に低いリスクを示した。これらの結果は、本発明の抗体が非常に好適であり、低い免疫原性リスクだけを有して眼科疾患又は眼疾患の処置のために有望であることを確認する。
【0183】
（実施例１３）
高度に濃縮された製剤での本発明の抗体の生物物理学的特徴付け
保存安定性
クローンＩ、クローンＩＩ及びクローンＩＩＩを保存安定性について試験する。試料を１５０ｍｇ／ｍｌに濃縮し（Ｖｉｖａｓｐｉｎ２０遠心デバイス、３８００×ｇでの５ｋＤａ ＭＷＣＯ）、２５℃及び４０℃で最大４週間保存する。試料をオリゴマー化（ＳＥ－ＨＰＬＣ）及び化学的分解（ＩＥＸ－ＨＰＬＣ）について分析する。開始値と比較するモノマー含有量におけるそれぞれの減少を表２２に報告する。ＳＥ－ＨＰＬＣによって決定した開始モノマー純度は、各クローンについて９９．９６％であった。ＩＥＸ－ＨＰＬＣによって決定した開始電荷純度は、クローンＩ、ＩＩ及びＩＩＩのそれぞれについて９８．０７％、９７．１６％及び９６．７６％であった。
クローンＩ、クローンＩＩ及びクローンＩＩＩは、２５℃及び４０℃で優れたモノマー性及び電荷安定性を４週間のインキュベーション期間にわたって示した。
高度に濃縮された製剤での本発明の抗体の生物物理学的特徴付け
保存安定性
クローンＩ、クローンＩＩ及びクローンＩＩＩを保存安定性について試験する。試料を１５０ｍｇ／ｍｌに濃縮し（Ｖｉｖａｓｐｉｎ２０遠心デバイス、３８００×ｇでの５ｋＤａ ＭＷＣＯ）、２５℃及び４０℃で最大４週間保存する。試料をオリゴマー化（ＳＥ－ＨＰＬＣ）及び化学的分解（ＩＥＸ－ＨＰＬＣ）について分析する。開始値と比較するモノマー含有量におけるそれぞれの減少を表２２に報告する。ＳＥ－ＨＰＬＣによって決定した開始モノマー純度は、各クローンについて９９．９６％であった。ＩＥＸ－ＨＰＬＣによって決定した開始電荷純度は、クローンＩ、ＩＩ及びＩＩＩのそれぞれについて９８．０７％、９７．１６％及び９６．７６％であった。
クローンＩ、クローンＩＩ及びクローンＩＩＩは、２５℃及び４０℃で優れたモノマー性及び電荷安定性を４週間のインキュベーション期間にわたって示した。
【0184】
高濃度での粘度
標準的な硝子体内針を介して薬物を送達するために必要な射出力（ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｆｏｒｃｅ）は、製品の粘度に依存し、医師による製品の安全な注射を可能にするように十分低い必要がある。したがって、完全に製剤化された製品において低い粘度、典型的には２０℃で１５ｍＰａ*秒未満が必要である。
粘度測定を保存安定性研究のために調製した試料を用いて実施する。完全に製剤化された試料（１０ｍＭ Ｈｉｓ ｐＨ５．５、２７５ｍＭショ糖、０．０２％ ｗ／ｖポリソルベート２０）に加えて、各候補物の粘度も最小限の製剤（１０ｍＭヒスチジンｐＨ５．５）において測定する。これは、１５０ｍｇ／ｍｌの最終薬物製品濃度の１２５％までの候補の薬物の加工性（例えば、濾過、ポンピング、ダイアフィルトレーションなど）を評価するために実施する。
標準的な硝子体内針を介して薬物を送達するために必要な射出力（ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｆｏｒｃｅ）は、製品の粘度に依存し、医師による製品の安全な注射を可能にするように十分低い必要がある。したがって、完全に製剤化された製品において低い粘度、典型的には２０℃で１５ｍＰａ*秒未満が必要である。
粘度測定を保存安定性研究のために調製した試料を用いて実施する。完全に製剤化された試料（１０ｍＭ Ｈｉｓ ｐＨ５．５、２７５ｍＭショ糖、０．０２％ ｗ／ｖポリソルベート２０）に加えて、各候補物の粘度も最小限の製剤（１０ｍＭヒスチジンｐＨ５．５）において測定する。これは、１５０ｍｇ／ｍｌの最終薬物製品濃度の１２５％までの候補の薬物の加工性（例えば、濾過、ポンピング、ダイアフィルトレーションなど）を評価するために実施する。
【0185】
粘度は、２０℃で１０００秒-1のずり速度でコーンプレートレオメーターを使用して測定する。簡潔には、１，０００秒-1までのずり速度の段階的な上昇を１００個のデータ点を回収しながら行い、２０００秒-1までのずり速度のさらなる上昇をさらに１０個のデータ点を回収しながら続ける。最後に、開始速度へのずり速度の段階的な降下を行う。得られた粘度データを表２２に示す。充填及びシリンジ通過性（ｓｙｒｉｎｇｅａｂｉｌｉｔｙ）についての良好な薬物製品の取扱特性が全ての候補について観察された。
【0186】
＞１５０ｍｇ／ｍＬで製剤化されたクローンＩ、ＩＩ及びＩＩＩの粘度及び安定性特性を表２２にまとめる。
本発明者らは、本発明の例示的抗体が、高度に濃縮された製剤で並外れた安定性を示すことを示した。
【表22】
本発明者らは、本発明の例示的抗体が、高度に濃縮された製剤で並外れた安定性を示すことを示した。
【図1A】
【図1B】
【図2A】
【図2B】
【図3】
【図4】
【配列表】
【手続補正書】
【提出日】2024-08-21
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
可変重鎖（ＶＨ）及び可変軽鎖（ＶＬ）を含む抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片であって、－ ＶＨが、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号２及び１５からなる群から選択されるＣＤＲ－Ｈ２配列、配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びに
－ ＶＬが、配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号５及び１８からなる群から選択されるＣＤＲ－Ｌ２配列、並びに配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、
抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
【請求項2】
－ ＶＨが、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＣＤＲ－Ｈ２配列及び配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにＶＬが配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＣＤＲ－Ｌ２配列及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、又は－ ＶＨが、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号１５のＣＤＲ－Ｈ２配列及び配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにＶＬが配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＣＤＲ－Ｌ２配列及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、又は
－ ＶＨが、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号１５のＣＤＲ－Ｈ２配列及び配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにＶＬが配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号１８のＣＤＲ－Ｌ２配列及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、又は
－ ＶＨが、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＣＤＲ－Ｈ２配列及び配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにＶＬが配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号１８のＣＤＲ－Ｌ２配列及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、
請求項１に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
【請求項3】
－ 配列番号２０、２２又は２４のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；及び－ 配列番号２１、２３又は２５のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、請求項１に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
【請求項4】
－ 配列番号２０、２２又は２４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；及び－ 配列番号２１、２３又は２５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、請求項１に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
【請求項5】
ａ．それぞれ配列番号２０及び配列番号２１のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び可変軽鎖；ｂ．それぞれ配列番号２２及び配列番号２３のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び可変軽鎖；又は
ｃ．それぞれ配列番号２４及び配列番号２５のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び可変軽鎖
を含む、請求項１に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
【請求項6】
抗原結合性断片が、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆｖ断片、ダイアボディ及び低分子抗体模倣物からなる群から選択される、請求項１に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
【請求項7】
前記抗原結合性断片が一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である、請求項１に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
【請求項8】
抗原結合性断片が、配列番号２６、２７、２８、２９、３０及び３１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む一本鎖断片である、請求項７に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
【請求項9】
配列番号４７に記載のヒト補体Ｃ３の残基３６６、３９２～３９６、４１３～４２１、４２５、４２７、４４２、４５３及び４７８からなる群から選択される少なくとも１個のアミノ酸残基に結合する抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
【請求項10】
配列番号４７に記載のヒト補体Ｃ３のアミノ酸残基３６６、３９２～３９６、４１３～４２１、４２５、４２７、４４２、４５３及び４７８の全てに結合する抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
【請求項11】
医薬の製造のための、請求項１、９及び１０のいずれか１項に記載の抗体又は抗原結合性断片の使用。
【請求項12】
眼科疾患又は眼疾患を処置するため、又は予防するための医薬の製造のための、請求項１、９及び１０のいずれか１項に記載の抗体又は抗原結合性断片の使用。
【請求項13】
前記疾患が、網膜症、未熟児網膜症などの増殖性網膜症（ＰＲ）、虚血性網膜症、増殖性糖尿病性網膜症（ＰＤＲ）及び非増殖性糖尿病性網膜症を含む糖尿病性網膜症（ＤＲ）、糖尿病黄斑浮腫（ＤＭＥ）、糖尿病黄斑虚血（ＤＭＩ）、萎縮型ＡＭＤ及び滲出型ＡＭＤを含む加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）、地図状萎縮（ＧＡ）、網膜色素変性症、遺伝性網膜ジストロフィー、近視性変性、網膜静脈閉塞症、網膜動脈閉塞症、眼内炎、ブドウ膜炎、嚢胞様黄斑浮腫、任意の網膜疾患に続発する脈絡膜新生血管膜、視神経症、緑内障、網膜剥離、中毒性網膜症、放射線網膜症、外傷性網膜症、薬剤性網膜脈管障害、網膜血管新生、ポリープ状脈絡膜脈管障害、網膜血管炎、網膜毛細血管瘤、後水晶体線維増殖症、脈絡網膜炎、フックスジストロフィー、黄斑部毛細血管拡張症、アッシャー症候群、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）並びにシュタルガルト疾患からなる群から選択される、請求項１２に記載の使用。
【請求項14】
前記眼科疾患又は眼疾患が、加齢性黄斑変性、地図状萎縮、血管新生緑内障及び糖尿病性網膜症からなる群から選択される、請求項１２に記載の使用。
【請求項15】
前記眼科疾患又は眼疾患が地図状萎縮である、請求項１２に記載の使用。
【請求項16】
請求項１、９及び１０のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を使用して、生物学的試料において補体Ｃ３と関連する障害を診断する方法。
【請求項17】
請求項１、９及び１０のいずれか１項に記載の抗体又は抗原結合性断片及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項18】
請求項１、９及び１０のいずれか１項に記載の抗体又は抗原結合性断片をコードする１種又は複数種のポリヌクレオチド及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項19】
前記抗体又はその抗原結合性断片が、投与の非経口経路、静脈内経路、硝子体内経路又は皮下経路によって投与される、請求項１１に記載の使用。
【請求項20】
前記抗体又はその抗原結合性断片が、投与の非経口経路、静脈内経路、硝子体内経路又は皮下経路によって投与される、請求項１２に記載の使用。
【請求項21】
前記抗体又はその抗原結合性断片が硝子体内経路によって投与される、請求項１２に記載の使用。
【請求項22】
請求項１、９及び１０のいずれか１項に記載の抗体又は抗原結合性断片をコードする、単離されたポリヌクレオチド又は複数のポリヌクレオチド。
【請求項23】
－ 配列番号２０、配列番号２２又は配列番号２４に記載の重鎖可変領域をコードする配列、及び－ 配列番号２１、配列番号２３又は配列番号２５に記載の軽鎖可変領域をコードする配列
を含む、請求項２２に記載の単離されたポリヌクレオチド又は複数のポリヌクレオチド。
【請求項24】
請求項２２に記載の単離されたポリヌクレオチド又は複数のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
【請求項25】
請求項２２に記載の単離されたポリヌクレオチド若しくは複数のポリヌクレオチドを含む宿主細胞。
【請求項26】
請求項２４に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
【請求項27】
ａ．請求項２５に記載の宿主細胞を得ること、及びｂ．宿主細胞を培養することを含み、
更に、任意に
ｃ．抗体又はその抗原結合性断片を回収すること及び精製することを含む、抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を産生するための方法。
【請求項28】
ａ．請求項２６に記載の宿主細胞を得ること、及び
ｂ．宿主細胞を培養することを含み、
更に、任意に
ｃ．抗体又はその抗原結合性断片を回収すること及び精製することを含む、抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を産生するための方法。
【手続補正2】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１８６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【0186】
＞１５０ｍｇ／ｍＬで製剤化されたクローンＩ、ＩＩ及びＩＩＩの粘度及び安定性特性を表２２にまとめる。
本発明者らは、本発明の例示的抗体が、高度に濃縮された製剤で並外れた安定性を示すことを示した。
本発明のまた別の態様は、以下のとおりであってもよい。
〔１〕可変重鎖（ＶＨ）及び可変軽鎖（ＶＬ）を含む抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片であって、
－ ＶＨが、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号２及び１５からなる群から選択されるＣＤＲ－Ｈ２配列、配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びに
－ ＶＬが、配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号５及び１８からなる群から選択されるＣＤＲ－Ｌ２配列、並びに配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、
抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
〔２〕－ ＶＨが、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＣＤＲ－Ｈ２配列及び配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにＶＬが配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＣＤＲ－Ｌ２配列及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、又は
－ ＶＨが、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号１５のＣＤＲ－Ｈ２配列及び配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにＶＬが配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＣＤＲ－Ｌ２配列及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、又は
－ ＶＨが、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号１５のＣＤＲ－Ｈ２配列及び配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにＶＬが配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号１８のＣＤＲ－Ｌ２配列及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、又は
－ ＶＨが、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＣＤＲ－Ｈ２配列及び配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにＶＬが配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号１８のＣＤＲ－Ｌ２配列及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、
前記〔１〕に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
〔３〕－ 配列番号２０、２２又は２４のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；及び
－ 配列番号２１、２３又は２５のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、前記〔１〕～〔２〕のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
〔４〕－ 配列番号２０、２２又は２４のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；及び
－ 配列番号２１、２３又は２５のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含み、
－ ＶＨが、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号２及び１５からなる群から選択されるＣＤＲ－Ｈ２配列、配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びに
－ ＶＬが、配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号５及び１８からなる群から選択されるＣＤＲ－Ｌ２配列、並びに配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、
前記〔１〕～〔２〕のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
〔５〕－ 配列番号２０、２２又は２４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；及び
－ 配列番号２１、２３又は２５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、前記〔１〕～〔４〕のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
〔６〕ａ．それぞれ配列番号２０及び配列番号２１のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び可変軽鎖；
ｂ．それぞれ配列番号２２及び配列番号２３のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び可変軽鎖；又は
ｃ．それぞれ配列番号２４及び配列番号２５のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び可変軽鎖
を含む、前記〔１〕～〔５〕のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
〔７〕抗原結合性断片が、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆｖ断片、ダイアボディ及び低分子抗体模倣物からなる群から選択される、前記〔１〕～〔６〕のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
〔８〕前記抗原結合性断片が一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である、前記〔１〕～〔７〕のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
〔９〕抗原結合性断片が、配列番号２６、２７、２８、２９、３０及び３１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む一本鎖断片である、前記〔８〕に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
〔１０〕配列番号４７に記載のヒト補体Ｃ３の残基３６６、３９２～３９６、４１３～４２１、４２５、４２７、４４２、４５３及び４７８からなる群から選択される少なくとも１個のアミノ酸残基に結合する抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
〔１１〕配列番号４７に記載のヒト補体Ｃ３のアミノ酸残基３６６、３９２～３９６、４１３～４２１、４２５、４２７、４４２、４５３及び４７８の全てに結合する抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
〔１２〕前記〔１〕～〔９〕のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又は抗原結合性断片である、前記〔１０〕又は〔１１〕に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
〔１３〕古典経路（ＣＰ）、レクチン経路（ＬＰ）及び代替経路（ＡＰ）を含む補体活性化の経路を阻害し得る、前記〔１〕～〔１２〕のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
〔１４〕補体Ｃ３及びＣ３ｂに結合し得る、前記〔１〕～〔１３〕のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
〔１５〕Ｃ３転換酵素の形成を妨げ得る、前記〔１〕～〔１４〕のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
〔１６〕ブルッフ膜に浸透し得る、前記〔１〕～〔１５〕のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
〔１７〕ヒトＣ３に、Ｋ D ＜５０ｎＭで、好ましくはＫ D ＜１５ｎＭで、好ましくはＫ D ＜１０ｎＭで、好ましくはＫ D ＜７ｎＭで、好ましくはＫ D ＜１ｎＭで、好ましくはＫ D ＜０．５ｎＭで、好ましくはＫ D ＜０．２ｎＭで、好ましくはＫ D ＜０．１５ｎＭで、好ましくはＫ D ＜０．１０ｎＭで、好ましくはＫ D ＜０．０５ｎＭで、好ましくはＫ D ＜０．０４ｎＭで、又はより好ましくはＫ D ＜０．０３ｎＭで結合する、前記〔１〕～〔１６〕のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
〔１８〕ヒトＣ３ｂに、Ｋ D ＜５０ｎＭで、好ましくはＫ D ＜１５ｎＭで、好ましくはＫ D ＜１０ｎＭで、好ましくはＫ D ＜７ｎＭで、好ましくはＫ D ＜１ｎＭで、好ましくはＫ D ＜０．５ｎＭで、好ましくはＫ D ＜０．２ｎＭで、好ましくはＫ D ＜０．１５ｎＭで、好ましくはＫ D ＜０．１０ｎＭで、又はより好ましくはＫ D ＜０．０５ｎＭで結合する、前記〔１〕～〔１７〕のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
〔１９〕Ｃ３及びＣ３ｂに対するおよそ同等の結合親和性を有する、前記〔１〕～〔１８〕のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
〔２０〕Ｃ３ａ、ｉＣ３ｂ、Ｃ４、Ｃ４ｂ、Ｃ５及び／又はＣ５ｂに対する約１０ -4 Ｍ又はこれより弱い結合親和性を有する、前記〔１〕～〔１９〕のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
〔２１〕Ｃ３及びＣ３ｂに対する結合親和性と比較して、Ｃ３ａ、ｉＣ３ｂ、Ｃ４、Ｃ４ｂ、Ｃ５及び／又はＣ５ｂに対する弱い結合親和性を有する、前記〔１〕～〔１９〕のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
〔２２〕Ｃ３ａ、ｉＣ３ｂ、Ｃ４、Ｃ４ｂ、Ｃ５及び／又はＣ５ｂに対する結合親和性を有さない、前記〔１〕～〔１９〕のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
〔２３〕Ｃ３転換酵素増幅ループを阻害し得る、前記〔１〕～〔１９〕のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
〔２４〕脈絡膜Ｃ３活性を阻害し得る、前記〔１〕～〔１９〕のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
〔２５〕医薬として使用するための、前記〔１〕～〔２４〕のいずれか１項に記載の抗体又は抗原結合性断片。
〔２６〕医薬の製造に使用するための、前記〔１〕～〔２４〕のいずれか１項に記載の抗体又は抗原結合性断片。
〔２７〕眼科疾患又は眼疾患を処置するため、又は予防するために使用するための、前記〔１〕～〔２４〕のいずれか１項に記載の抗体又は抗原結合性断片。
〔２８〕眼科疾患又は眼疾患を処置するため、又は予防するための医薬の製造に使用するための、前記〔１〕～〔２４〕のいずれか１項に記載の抗体又は抗原結合性断片。
〔２９〕前記疾患が、網膜症、未熟児網膜症などの増殖性網膜症（ＰＲ）、虚血性網膜症、増殖性糖尿病性網膜症（ＰＤＲ）及び非増殖性糖尿病性網膜症を含む糖尿病性網膜症（ＤＲ）、糖尿病黄斑浮腫（ＤＭＥ）、糖尿病黄斑虚血（ＤＭＩ）、萎縮型ＡＭＤ及び滲出型ＡＭＤを含む加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）、地図状萎縮（ＧＡ）、網膜色素変性症、遺伝性網膜ジストロフィー、近視性変性、網膜静脈閉塞症、網膜動脈閉塞症、眼内炎、ブドウ膜炎、嚢胞様黄斑浮腫、任意の網膜疾患に続発する脈絡膜新生血管膜、視神経症、緑内障、網膜剥離、中毒性網膜症、放射線網膜症、外傷性網膜症、薬剤性網膜脈管障害、網膜血管新生、ポリープ状脈絡膜脈管障害、網膜血管炎、網膜毛細血管瘤、後水晶体線維増殖症、脈絡網膜炎、フックスジストロフィー、黄斑部毛細血管拡張症、アッシャー症候群、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）並びにシュタルガルト疾患からなる群から選択される、前記〔２７〕又は〔２８〕に記載の使用のための抗体又は抗原結合性断片。
〔３０〕前記眼科疾患又は眼疾患が、加齢性黄斑変性、地図状萎縮、血管新生緑内障及び糖尿病性網膜症からなる群から選択される、前記〔２７〕～〔２９〕のいずれか１項に記載の使用のための抗体又は抗原結合性断片。
〔３１〕前記眼科疾患又は眼疾患が地図状萎縮である、前記〔２７〕～〔３０〕のいずれか１項に記載の使用のための抗体又は抗原結合性断片。
〔３２〕補体古典経路（ＣＰ）、レクチン経路（ＬＰ）及び代替経路（ＡＰ）の活性を阻害することによって、又は脈絡膜局在化補体Ｃ３の活性を阻害することによって眼科疾患又は眼疾患を処置するために使用するための、前記〔２７〕～〔３１〕のいずれか１項に記載の使用のための抗体又は抗原結合性断片。
〔３３〕前記〔１〕～〔２４〕のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を使用して、生物学的試料において補体Ｃ３と関連する障害を診断する方法。
〔３４〕前記〔１〕～〔２４〕のいずれか１項に記載の抗体又は抗原結合性断片及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
〔３５〕態様前記〔１〕～〔２４〕のいずれか１項に記載の抗体又は抗原結合性断片をコードする１種又は複数種のポリヌクレオチド及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
〔３６〕前記抗体又はその抗原結合性断片が、投与の非経口経路、静脈内経路、硝子体内経路又は皮下経路によって投与される、前記〔１〕～〔２４〕のいずれかに記載の抗体若しくはその抗原結合性断片又は前記〔３４〕に記載の医薬組成物。
〔３７〕前記抗体又はその抗原結合性断片が硝子体内経路によって投与される、前記〔１〕～〔２４〕のいずれかに記載の抗体若しくはその抗原結合性断片又は前記〔３４〕に記載の医薬組成物。
〔３８〕前記〔１〕～〔２４〕のいずれか１項に記載の抗体又は抗原結合性断片をコードする、単離されたポリヌクレオチド又は複数のポリヌクレオチド。
〔３９〕－ 配列番号２０、配列番号２２又は配列番号２４に記載の重鎖可変領域をコードする配列、及び
－ 配列番号２１、配列番号２３又は配列番号２５に記載の軽鎖可変領域をコードする配列
を含む、前記〔３８〕に記載の単離されたポリヌクレオチド又は複数のポリヌクレオチド。
〔４０〕前記〔３８〕又は〔３９〕に記載の単離されたポリヌクレオチド又は複数のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
〔４１〕前記〔３８〕若しくは〔３９〕に記載の単離されたポリヌクレオチド若しくは複数のポリヌクレオチド又は前記〔４０〕に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
〔４２〕ａ．前記〔４１〕に記載の宿主細胞を得ること、及び
ｂ．宿主細胞を培養すること
を含む、抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を産生するための方法。
〔４３〕抗体又はその抗原結合性断片を回収すること及び精製することをさらに含む、前記〔４２〕に記載の方法。
【表22】
本発明者らは、本発明の例示的抗体が、高度に濃縮された製剤で並外れた安定性を示すことを示した。
本発明のまた別の態様は、以下のとおりであってもよい。
〔１〕可変重鎖（ＶＨ）及び可変軽鎖（ＶＬ）を含む抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片であって、
－ ＶＨが、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号２及び１５からなる群から選択されるＣＤＲ－Ｈ２配列、配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びに
－ ＶＬが、配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号５及び１８からなる群から選択されるＣＤＲ－Ｌ２配列、並びに配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、
抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
〔２〕－ ＶＨが、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＣＤＲ－Ｈ２配列及び配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにＶＬが配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＣＤＲ－Ｌ２配列及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、又は
－ ＶＨが、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号１５のＣＤＲ－Ｈ２配列及び配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにＶＬが配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号５のＣＤＲ－Ｌ２配列及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、又は
－ ＶＨが、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号１５のＣＤＲ－Ｈ２配列及び配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにＶＬが配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号１８のＣＤＲ－Ｌ２配列及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、又は
－ ＶＨが、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号２のＣＤＲ－Ｈ２配列及び配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びにＶＬが配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号１８のＣＤＲ－Ｌ２配列及び配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、
前記〔１〕に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
〔３〕－ 配列番号２０、２２又は２４のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；及び
－ 配列番号２１、２３又は２５のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、前記〔１〕～〔２〕のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
〔４〕－ 配列番号２０、２２又は２４のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；及び
－ 配列番号２１、２３又は２５のアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含み、
－ ＶＨが、配列番号１のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号２及び１５からなる群から選択されるＣＤＲ－Ｈ２配列、配列番号３のＣＤＲ－Ｈ３配列を含み；並びに
－ ＶＬが、配列番号４のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号５及び１８からなる群から選択されるＣＤＲ－Ｌ２配列、並びに配列番号６のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、
前記〔１〕～〔２〕のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
〔５〕－ 配列番号２０、２２又は２４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；及び
－ 配列番号２１、２３又は２５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、前記〔１〕～〔４〕のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
〔６〕ａ．それぞれ配列番号２０及び配列番号２１のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び可変軽鎖；
ｂ．それぞれ配列番号２２及び配列番号２３のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び可変軽鎖；又は
ｃ．それぞれ配列番号２４及び配列番号２５のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び可変軽鎖
を含む、前記〔１〕～〔５〕のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
〔７〕抗原結合性断片が、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆｖ断片、ダイアボディ及び低分子抗体模倣物からなる群から選択される、前記〔１〕～〔６〕のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
〔８〕前記抗原結合性断片が一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である、前記〔１〕～〔７〕のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
〔９〕抗原結合性断片が、配列番号２６、２７、２８、２９、３０及び３１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む一本鎖断片である、前記〔８〕に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
〔１０〕配列番号４７に記載のヒト補体Ｃ３の残基３６６、３９２～３９６、４１３～４２１、４２５、４２７、４４２、４５３及び４７８からなる群から選択される少なくとも１個のアミノ酸残基に結合する抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
〔１１〕配列番号４７に記載のヒト補体Ｃ３のアミノ酸残基３６６、３９２～３９６、４１３～４２１、４２５、４２７、４４２、４５３及び４７８の全てに結合する抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
〔１２〕前記〔１〕～〔９〕のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又は抗原結合性断片である、前記〔１０〕又は〔１１〕に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
〔１３〕古典経路（ＣＰ）、レクチン経路（ＬＰ）及び代替経路（ＡＰ）を含む補体活性化の経路を阻害し得る、前記〔１〕～〔１２〕のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
〔１４〕補体Ｃ３及びＣ３ｂに結合し得る、前記〔１〕～〔１３〕のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
〔１５〕Ｃ３転換酵素の形成を妨げ得る、前記〔１〕～〔１４〕のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
〔１６〕ブルッフ膜に浸透し得る、前記〔１〕～〔１５〕のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
〔１７〕ヒトＣ３に、Ｋ D ＜５０ｎＭで、好ましくはＫ D ＜１５ｎＭで、好ましくはＫ D ＜１０ｎＭで、好ましくはＫ D ＜７ｎＭで、好ましくはＫ D ＜１ｎＭで、好ましくはＫ D ＜０．５ｎＭで、好ましくはＫ D ＜０．２ｎＭで、好ましくはＫ D ＜０．１５ｎＭで、好ましくはＫ D ＜０．１０ｎＭで、好ましくはＫ D ＜０．０５ｎＭで、好ましくはＫ D ＜０．０４ｎＭで、又はより好ましくはＫ D ＜０．０３ｎＭで結合する、前記〔１〕～〔１６〕のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
〔１８〕ヒトＣ３ｂに、Ｋ D ＜５０ｎＭで、好ましくはＫ D ＜１５ｎＭで、好ましくはＫ D ＜１０ｎＭで、好ましくはＫ D ＜７ｎＭで、好ましくはＫ D ＜１ｎＭで、好ましくはＫ D ＜０．５ｎＭで、好ましくはＫ D ＜０．２ｎＭで、好ましくはＫ D ＜０．１５ｎＭで、好ましくはＫ D ＜０．１０ｎＭで、又はより好ましくはＫ D ＜０．０５ｎＭで結合する、前記〔１〕～〔１７〕のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
〔１９〕Ｃ３及びＣ３ｂに対するおよそ同等の結合親和性を有する、前記〔１〕～〔１８〕のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
〔２０〕Ｃ３ａ、ｉＣ３ｂ、Ｃ４、Ｃ４ｂ、Ｃ５及び／又はＣ５ｂに対する約１０ -4 Ｍ又はこれより弱い結合親和性を有する、前記〔１〕～〔１９〕のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
〔２１〕Ｃ３及びＣ３ｂに対する結合親和性と比較して、Ｃ３ａ、ｉＣ３ｂ、Ｃ４、Ｃ４ｂ、Ｃ５及び／又はＣ５ｂに対する弱い結合親和性を有する、前記〔１〕～〔１９〕のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
〔２２〕Ｃ３ａ、ｉＣ３ｂ、Ｃ４、Ｃ４ｂ、Ｃ５及び／又はＣ５ｂに対する結合親和性を有さない、前記〔１〕～〔１９〕のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
〔２３〕Ｃ３転換酵素増幅ループを阻害し得る、前記〔１〕～〔１９〕のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
〔２４〕脈絡膜Ｃ３活性を阻害し得る、前記〔１〕～〔１９〕のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片。
〔２５〕医薬として使用するための、前記〔１〕～〔２４〕のいずれか１項に記載の抗体又は抗原結合性断片。
〔２６〕医薬の製造に使用するための、前記〔１〕～〔２４〕のいずれか１項に記載の抗体又は抗原結合性断片。
〔２７〕眼科疾患又は眼疾患を処置するため、又は予防するために使用するための、前記〔１〕～〔２４〕のいずれか１項に記載の抗体又は抗原結合性断片。
〔２８〕眼科疾患又は眼疾患を処置するため、又は予防するための医薬の製造に使用するための、前記〔１〕～〔２４〕のいずれか１項に記載の抗体又は抗原結合性断片。
〔２９〕前記疾患が、網膜症、未熟児網膜症などの増殖性網膜症（ＰＲ）、虚血性網膜症、増殖性糖尿病性網膜症（ＰＤＲ）及び非増殖性糖尿病性網膜症を含む糖尿病性網膜症（ＤＲ）、糖尿病黄斑浮腫（ＤＭＥ）、糖尿病黄斑虚血（ＤＭＩ）、萎縮型ＡＭＤ及び滲出型ＡＭＤを含む加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）、地図状萎縮（ＧＡ）、網膜色素変性症、遺伝性網膜ジストロフィー、近視性変性、網膜静脈閉塞症、網膜動脈閉塞症、眼内炎、ブドウ膜炎、嚢胞様黄斑浮腫、任意の網膜疾患に続発する脈絡膜新生血管膜、視神経症、緑内障、網膜剥離、中毒性網膜症、放射線網膜症、外傷性網膜症、薬剤性網膜脈管障害、網膜血管新生、ポリープ状脈絡膜脈管障害、網膜血管炎、網膜毛細血管瘤、後水晶体線維増殖症、脈絡網膜炎、フックスジストロフィー、黄斑部毛細血管拡張症、アッシャー症候群、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）並びにシュタルガルト疾患からなる群から選択される、前記〔２７〕又は〔２８〕に記載の使用のための抗体又は抗原結合性断片。
〔３０〕前記眼科疾患又は眼疾患が、加齢性黄斑変性、地図状萎縮、血管新生緑内障及び糖尿病性網膜症からなる群から選択される、前記〔２７〕～〔２９〕のいずれか１項に記載の使用のための抗体又は抗原結合性断片。
〔３１〕前記眼科疾患又は眼疾患が地図状萎縮である、前記〔２７〕～〔３０〕のいずれか１項に記載の使用のための抗体又は抗原結合性断片。
〔３２〕補体古典経路（ＣＰ）、レクチン経路（ＬＰ）及び代替経路（ＡＰ）の活性を阻害することによって、又は脈絡膜局在化補体Ｃ３の活性を阻害することによって眼科疾患又は眼疾患を処置するために使用するための、前記〔２７〕～〔３１〕のいずれか１項に記載の使用のための抗体又は抗原結合性断片。
〔３３〕前記〔１〕～〔２４〕のいずれか１項に記載の抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を使用して、生物学的試料において補体Ｃ３と関連する障害を診断する方法。
〔３４〕前記〔１〕～〔２４〕のいずれか１項に記載の抗体又は抗原結合性断片及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
〔３５〕態様前記〔１〕～〔２４〕のいずれか１項に記載の抗体又は抗原結合性断片をコードする１種又は複数種のポリヌクレオチド及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
〔３６〕前記抗体又はその抗原結合性断片が、投与の非経口経路、静脈内経路、硝子体内経路又は皮下経路によって投与される、前記〔１〕～〔２４〕のいずれかに記載の抗体若しくはその抗原結合性断片又は前記〔３４〕に記載の医薬組成物。
〔３７〕前記抗体又はその抗原結合性断片が硝子体内経路によって投与される、前記〔１〕～〔２４〕のいずれかに記載の抗体若しくはその抗原結合性断片又は前記〔３４〕に記載の医薬組成物。
〔３８〕前記〔１〕～〔２４〕のいずれか１項に記載の抗体又は抗原結合性断片をコードする、単離されたポリヌクレオチド又は複数のポリヌクレオチド。
〔３９〕－ 配列番号２０、配列番号２２又は配列番号２４に記載の重鎖可変領域をコードする配列、及び
－ 配列番号２１、配列番号２３又は配列番号２５に記載の軽鎖可変領域をコードする配列
を含む、前記〔３８〕に記載の単離されたポリヌクレオチド又は複数のポリヌクレオチド。
〔４０〕前記〔３８〕又は〔３９〕に記載の単離されたポリヌクレオチド又は複数のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
〔４１〕前記〔３８〕若しくは〔３９〕に記載の単離されたポリヌクレオチド若しくは複数のポリヌクレオチド又は前記〔４０〕に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
〔４２〕ａ．前記〔４１〕に記載の宿主細胞を得ること、及び
ｂ．宿主細胞を培養すること
を含む、抗Ｃ３抗体又はその抗原結合性断片を産生するための方法。
〔４３〕抗体又はその抗原結合性断片を回収すること及び精製することをさらに含む、前記〔４２〕に記載の方法。
【国際調査報告】