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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-12-17
(54)【発明の名称】ヒアルロン酸誘導体又はその塩、その製造方法及び使用
(51)【国際特許分類】
C08B 37/08 20060101AFI20241210BHJP
A61L 27/20 20060101ALI20241210BHJP
【ＦＩ】
C08B37/08 Z
A61L27/20
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024540851
(86)(22)【出願日】2023-01-09
(85)【翻訳文提出日】2024-07-04
(86)【国際出願番号】 CN2023071208
(87)【国際公開番号】W WO2023134613
(87)【国際公開日】2023-07-20
(31)【優先権主張番号】202210042774.5
(32)【優先日】2022-01-14
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】519230628
【氏名又は名称】天津鍵凱科技有限公司
(74)【代理人】
【識別番号】100216471
【弁理士】
【氏名又は名称】瀬戸 麻希
(72)【発明者】
【氏名】林美娜
(72)【発明者】
【氏名】陳暁萌
(72)【発明者】
【氏名】孫宇
(72)【発明者】
【氏名】趙宣
【テーマコード（参考）】
4C081
4C090
【Ｆターム（参考）】
4C081AB11
4C081CD081
4C090AA02
4C090AA05
4C090AA09
4C090BA67
4C090CA36
4C090DA22
(57)【要約】
ヒアルロン酸誘導体又はその塩、その製造方法及び使用を提供し、ヒアルロン酸をマトリ
ックス骨格として、ヒアルロン酸をメトキシポリエチレングリコールエポキシ誘導体で修
飾し、ポリエチレングリコール化されたヒアルロン酸誘導体を製造する。ポリエチレング
リコール直鎖状高分子を利用してヒアルロン酸の骨格を包み込むことで、酵素分解されや
すいグリコシド結合をマスクし、ヒアルロン酸ナトリウムの体内での循環時間を延長し、
保水作用をより発揮する。また、ポリエチレングリコールとヒアルロン酸ナトリウムは、
合成高分子材料及び天然高分子材料として優れた生体適合性と生分解性を有しており、両
者を組み合わせることで高分子材料の特性をより生かすことができるという利点がある。
【選択図】図１
ックス骨格として、ヒアルロン酸をメトキシポリエチレングリコールエポキシ誘導体で修
飾し、ポリエチレングリコール化されたヒアルロン酸誘導体を製造する。ポリエチレング
リコール直鎖状高分子を利用してヒアルロン酸の骨格を包み込むことで、酵素分解されや
すいグリコシド結合をマスクし、ヒアルロン酸ナトリウムの体内での循環時間を延長し、
保水作用をより発揮する。また、ポリエチレングリコールとヒアルロン酸ナトリウムは、
合成高分子材料及び天然高分子材料として優れた生体適合性と生分解性を有しており、両
者を組み合わせることで高分子材料の特性をより生かすことができるという利点がある。
【選択図】図１
【特許請求の範囲】
【請求項1】
式（I）で示される構造を有するヒアルロン酸誘導体又はその塩。ｍ－、－（ＣＨ２）ｍＣＯＮＨ－、及び－ＣＯ（ＣＨ２）ｍ－から選択される１種又は複
数種の組み合わせであり、ｍは、１～１０の整数であり、
Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、
アルケニル、アリール、アラルキル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルアルキル、－ＣＯ
Ｒ３、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ３、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ３Ｒ４、－ＣＨ＝ＮＲ３、－ＣＮ、－ＯＲ３、
－ＯＣ（Ｏ）Ｒ３、－Ｓ（Ｏ）ｎ－Ｒ３、－ＮＲ３Ｒ４、－ＮＲ３Ｃ（Ｏ）Ｒ４、及びハ
ロゲンから選択され、
ｎは、０、１、及び２から選択され、
Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立して、水素、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、ア
リール、ヘテロシクリル、及びハロゲンから選択され、
ｋは、ポリエチレングリコール残基の重合度であり、ｋは、４０～４６００の整数であり
、
ｔは、ヒアルロン酸残基の重合度であり、ｔは、１００～８０００の整数である。）
【請求項2】
前記ｋは、４５～４５４５の整数、好ましくは、７５～４５４５の整数、より好ましくは、１００～４５４５の整数であり、
前記ｔは、１２０～７５００の整数、好ましくは、７００～６０００の整数、より好まし
くは、１０００～４０００の整数である、ことを特徴とする請求項１に記載のヒアルロン
酸誘導体又はその塩。
【請求項3】
前記Ｘは、－（ＣＲ１Ｒ２）ｍ－であり、前記ｍは、１～５の整数、好ましくは、１である、ことを特徴とする請求項１に記載のヒアルロン酸誘導体又はその塩。
【請求項4】
前記Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６のアルキル、Ｃ３～Ｃ６のシクロアルキル、－ＯＲ３、－ＮＲ３Ｒ４、及びハロゲンから選択され、前記Ｒ３及びＲ４は、独立し
て、水素、及びＣ１～Ｃ３のアルキルから選択される、ことを特徴とする請求項１に記載
のヒアルロン酸誘導体又はその塩。
【請求項5】
前記Ｒ１及びＲ２は、いずれもＨである、ことを特徴とする請求項１に記載のヒアルロン酸誘導体又はその塩。
【請求項6】
前記塩は、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、亜鉛塩、コバルト塩、及びテトラブチルアンモニウム塩から選択される１種又は複数種であり、好ましく
は、式（ＩＩ）の構造を有するナトリウム塩である、ことを特徴とする請求項１に記載の
ヒアルロン酸誘導体又はその塩。
【請求項7】
ヒアルロン酸を秤量し、ヒアルロン酸とアルカリ性溶剤とを混合して撹拌するステップ（１）と、
ステップ（１）で得られた溶液にメトキシポリエチレングリコールエポキシ誘導体を加え
て反応させるステップ（２）と、を含み、
前記メトキシポリエチレングリコールエポキシ誘導体は、式（ＩＩＩ）の構造を有する、
ことを特徴とする請求項１に記載のヒアルロン酸誘導体又はその塩の製造方法。
【請求項8】
生成物を精製するステップをさらに含み、生成物を精製する前記ステップは、
酸性試薬を加えてステップ（２）で得られた溶液を中性に調整するステップ、及び／又は
、沈殿剤を加えて生成物を沈殿するステップ、及び／又は、洗浄剤を加えて沈殿を洗浄す
るステップを含む、ことを特徴とする請求項７に記載のヒアルロン酸誘導体又はその塩の
製造方法。
【請求項9】
前記ヒアルロン酸とアルカリ性溶剤との質量比が、１：５～３０、好ましくは、前記ヒアルロン酸とアルカリ性溶剤との質量比が１：１０である、ことを特徴とする請求項７に記
載のヒアルロン酸誘導体又はその塩の製造方法。
【請求項10】
前記ヒアルロン酸とメトキシポリエチレングリコールエポキシ誘導体中の重合体単位のモル比が０．１～１０：１である、ことを特徴とする請求項７に記載のヒアルロン酸誘導体
又はその塩の製造方法。
【請求項11】
ステップ（２）では、前記反応時間は、１０～２４ｈ、好ましくは、１３～２１ｈ、より好ましくは、１７～１９ｈである、ことを特徴とする請求項７に記載のヒアルロン酸誘導
体又はその塩の製造方法。
【請求項12】
薬物、医療美容、及び化粧品用の製品の製造における請求項１に記載のヒアルロン酸誘導体又はその塩の使用であって、
好ましくは、前記使用は、医療美容用の製品の製造における前記ヒアルロン酸誘導体又は
その塩の使用であり、
より好ましくは、前記医療美容用の製品は、軟組織充填剤である、使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、高分子の技術分野に関し、特に、ヒアルロン酸誘導体又はその塩、その製造方
法及び使用に関する。
法及び使用に関する。
【背景技術】
【0002】
ヒアルロン酸（ＨＡ：ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ）は、動物やヒトの関節滑液、眼
球の硝子体、皮膚、細胞間隙、鶏冠などの結合組織に広く存在する、天然に存在する生体
高分子材料であり、関節滑液、硝子体、皮膚や軟骨組織を構成する重要な成分であり、独
特の物理的及び化学的特性と広範な生物学的機能を備えている。ヒアルロン酸は、優れた
生体適合性、独特の粘弾性、及び優れた保湿性と保水性を備えているため、美容分野で多
くの美容愛好家に愛されており、現在、しわを減らし、肌の外観を改善し、肌の老化を防
ぐために顔の皮膚に注射することができる。
球の硝子体、皮膚、細胞間隙、鶏冠などの結合組織に広く存在する、天然に存在する生体
高分子材料であり、関節滑液、硝子体、皮膚や軟骨組織を構成する重要な成分であり、独
特の物理的及び化学的特性と広範な生物学的機能を備えている。ヒアルロン酸は、優れた
生体適合性、独特の粘弾性、及び優れた保湿性と保水性を備えているため、美容分野で多
くの美容愛好家に愛されており、現在、しわを減らし、肌の外観を改善し、肌の老化を防
ぐために顔の皮膚に注射することができる。
【0003】
ヒアルロン酸は、生産中及び使用中にほとんどがヒアルロン酸ナトリウムの形で存在し、
天然のヒアルロン酸ナトリウムは、生分解されやすく、生体内での滞留時間が短く、硬度
や機械的強度が不十分なため、用途が限られている。そのため、ヒアルロン酸ナトリウム
をゲル化するには架橋剤を使用するのが一般的であるが、ヒアルロン酸ナトリウム本来の
生体適合性を維持し、酵素分解耐性を大幅に向上させた架橋変性ゲルが開発され、その応
用がさらに広がる。しかし、従来技術では、架橋剤の残留物を完全に除去することは不可
能であり、架橋剤はほとんどが化学試薬であり、過剰な架橋剤は生体適合性の低下につな
がり、人体に注射されると、免疫反応を引き起こしやすく、皮膚を刺激し、さらには細胞
毒性を引き起こす可能性がある。
天然のヒアルロン酸ナトリウムは、生分解されやすく、生体内での滞留時間が短く、硬度
や機械的強度が不十分なため、用途が限られている。そのため、ヒアルロン酸ナトリウム
をゲル化するには架橋剤を使用するのが一般的であるが、ヒアルロン酸ナトリウム本来の
生体適合性を維持し、酵素分解耐性を大幅に向上させた架橋変性ゲルが開発され、その応
用がさらに広がる。しかし、従来技術では、架橋剤の残留物を完全に除去することは不可
能であり、架橋剤はほとんどが化学試薬であり、過剰な架橋剤は生体適合性の低下につな
がり、人体に注射されると、免疫反応を引き起こしやすく、皮膚を刺激し、さらには細胞
毒性を引き起こす可能性がある。
【0004】
非架橋ヒアルロン酸ナトリウムの研究においては、文献Adrian Ranga,etc.Hyaluronic ac
id hydrogels formed in situ by transglutaminase-catalyzed reaction[J].Biomacromo
lecules、及びKazuteru Moriyama,etc.Hyaluronic acid grafted with poly(ethylene gl
ycol)as a novel peptide formulation.Journal of Controlled Releasｅは、ヒアルロン
酸ナトリウム分子のカルボキシルを反応させてポリエチレングリコールを結合するために
使用することが報告された。
id hydrogels formed in situ by transglutaminase-catalyzed reaction[J].Biomacromo
lecules、及びKazuteru Moriyama,etc.Hyaluronic acid grafted with poly(ethylene gl
ycol)as a novel peptide formulation.Journal of Controlled Releasｅは、ヒアルロン
酸ナトリウム分子のカルボキシルを反応させてポリエチレングリコールを結合するために
使用することが報告された。
【0005】
文献Irina M.Le-Deygen,etc.Poly(Ethylene Glycol)Interacts with Hyaluronan in Aque
ous Media.Biomacromoleculesには、ヒアルロン酸ナトリウム分子内のヒドロキシルとポ
リエチレングリコール間の水素結合を利用してポリエチレングリコールを結合することが
報告された。
ous Media.Biomacromoleculesには、ヒアルロン酸ナトリウム分子内のヒドロキシルとポ
リエチレングリコール間の水素結合を利用してポリエチレングリコールを結合することが
報告された。
【0006】
従来技術において、ヒアルロン酸ナトリウム分子のアミノ、カルボキシ、ヒドロキシをポ
リエチレングリコールと反応させて、性質の異なるポリエチレングリコール化ヒアルロン
酸ナトリウムを製造している。しかしながら、現在、ヒアルロン酸ナトリウム分子のヒド
ロキシをメトキシポリエチレングリコールエポキシ誘導体と反応させて、ヒアルロン酸ナ
トリウム分子をエーテル結合で修飾することにより、ポリエチレングリコール化ヒアルロ
ン酸ナトリウムを製造する方法は存在しない。
リエチレングリコールと反応させて、性質の異なるポリエチレングリコール化ヒアルロン
酸ナトリウムを製造している。しかしながら、現在、ヒアルロン酸ナトリウム分子のヒド
ロキシをメトキシポリエチレングリコールエポキシ誘導体と反応させて、ヒアルロン酸ナ
トリウム分子をエーテル結合で修飾することにより、ポリエチレングリコール化ヒアルロ
ン酸ナトリウムを製造する方法は存在しない。
【発明の概要】
【0007】
本発明は、従来技術の欠点を克服し、本発明の第１態様では、式（I）で示される構造を
有するヒアルロン酸の誘導体又はその塩を提供する。
有するヒアルロン酸の誘導体又はその塩を提供する。
【0008】
ｍ－、－（ＣＨ２）ｍＣＯＮＨ－、及び－ＣＯ（ＣＨ２）ｍ－から選択される１種又は複
数種の組み合わせであり、ｍは、１～１０の整数であり、
Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、
アルケニル、アリール、アラルキル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルアルキル、－ＣＯ
Ｒ３、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ３、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ３Ｒ４、－ＣＨ＝ＮＲ３、－ＣＮ、－ＯＲ３、
－ＯＣ（Ｏ）Ｒ３、－Ｓ（Ｏ）ｎ－Ｒ３、－ＮＲ３Ｒ４、－ＮＲ３Ｃ（Ｏ）Ｒ４、及びハ
ロゲンから選択され、
ｎは、０、１、及び２から選択され、
Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立して、水素、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、ア
リール、ヘテロシクリル、及びハロゲンから選択され、
ｋは、ポリエチレングリコール残基の重合度であり、ｋは、４０～４６００の整数（例え
ば、４０、４１、４２、４３、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５５、６０、６５
、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１１、１１２、１
１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１５０、２００、４
００、５００、８００、１０００、２０００、３０００、４０００、４５００）、好まし
くは、４５～４５４５の整数、より好ましくは、７５～４５４５の整数、特に好ましくは
、１００～４５４５の整数であり、
ｔは、ヒアルロン酸残基の重合度であり、ｔは、１００～８０００の整数（例えば、１０
０、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５
０、２００、３００、４００、５００、１０００、２０００、３０００、４０００、５０
００、５５００、６０００、５５００、７０００、７１００、７２００、７３００、７４
００）、好ましくは、１２０～７５００の整数、より好ましくは、７００～６０００の整
数、特に好ましくは、１０００～４０００の整数であり、
好ましくは、前記Ｘは、－（ＣＲ１Ｒ２）ｍ－であり、
好ましくは、前記ｍは、１～５の整数、例えば１、２、３、４、又は５である。）
【0009】
本発明の一実施形態では、前記ｍ＝１である。
【0010】
好ましくは、前記Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６のアルキル、Ｃ３～Ｃ６の
シクロアルキル、－ＯＲ３、－ＮＲ３Ｒ４、及びハロゲンから選択される。
シクロアルキル、－ＯＲ３、－ＮＲ３Ｒ４、及びハロゲンから選択される。
【0011】
好ましくは、前記Ｒ３及びＲ４は、独立して、水素、及びＣ１～Ｃ３のアルキルから選択
される。
される。
【0012】
本発明の一実施形態では、前記Ｒ１及びＲ２は、いずれもＨである。
【0013】
本発明の１つの好ましい実施形態では、前記Ｘは、－ＣＨ２－である。
【0014】
前記塩は、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、亜鉛塩、コバル
ト塩、及びテトラブチルアンモニウム塩から選択される１種又は複数種であり、好ましく
は、ナトリウム塩である。
ト塩、及びテトラブチルアンモニウム塩から選択される１種又は複数種であり、好ましく
は、ナトリウム塩である。
【0015】
本発明の一実施形態では、前記ヒアルロン酸誘導体は、以下の構造を有する。
【0016】
本発明の第２態様では、
ヒアルロン酸を秤量し、ヒアルロン酸とアルカリ性溶剤とを混合して撹拌するステップ（
１）と、
ステップ（１）で得られた溶液にメトキシポリエチレングリコールエポキシ誘導体を加え
て反応させるステップ（２）と、を含み、
前記メトキシポリエチレングリコールエポキシ誘導体は、式（ＩＩＩ）の構造を有する、
式（II）の前記ヒアルロン酸誘導体又はその塩の製造方法を提供する。
ヒアルロン酸を秤量し、ヒアルロン酸とアルカリ性溶剤とを混合して撹拌するステップ（
１）と、
ステップ（１）で得られた溶液にメトキシポリエチレングリコールエポキシ誘導体を加え
て反応させるステップ（２）と、を含み、
前記メトキシポリエチレングリコールエポキシ誘導体は、式（ＩＩＩ）の構造を有する、
式（II）の前記ヒアルロン酸誘導体又はその塩の製造方法を提供する。
【0017】
好ましくは、ステップ（１）の前記アルカリ性溶剤は、水素化ナトリウム、水素化カリウ
ム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、重炭酸ナトリウム、及び重炭酸カリウムのうちの１
種又は複数種である。
ム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、重炭酸ナトリウム、及び重炭酸カリウムのうちの１
種又は複数種である。
【0018】
本発明の１つの好ましい実施形態では、前記アルカリ性溶剤は、質量濃度が０．２５％～
０．８％の水素化ナトリウム溶液（例えば、０．２５％、０．３５％、０．５％、０．８
％）、好ましくは、質量濃度が０．３５％～０．５％の水素化ナトリウム溶液である。
０．８％の水素化ナトリウム溶液（例えば、０．２５％、０．３５％、０．５％、０．８
％）、好ましくは、質量濃度が０．３５％～０．５％の水素化ナトリウム溶液である。
【0019】
前記ヒアルロン酸ナトリウムの分子量は、４万～３２０万ダルトン、好ましくは、５万～
３００万ダルトン、より好ましくは、２８万～２４０万ダルトン、特に好ましくは、４０
万～１６０万ダルトンである。
３００万ダルトン、より好ましくは、２８万～２４０万ダルトン、特に好ましくは、４０
万～１６０万ダルトンである。
【0020】
前記ヒアルロン酸とアルカリ性溶剤との質量比が、１：５～３０（具体的には、例えば１
：５、１：１０、１：１５、１：２０、１：２５又は１：３０）、好ましくは、１：１０
である。
：５、１：１０、１：１５、１：２０、１：２５又は１：３０）、好ましくは、１：１０
である。
【0021】
前記ヒアルロン酸とメトキシポリエチレングリコールエポキシ誘導体中の重合体単位のモ
ル比が、０．１～１０：１（具体的には、例えば、０．１：１、０．２：１、０．３：１
、０．４：１、０．５：１、０．６：１、０．７：１、０．８：１、０．９：１、１：１
、１．５：１、２：１、２．５：１、３：１、３．５：１、４：１、４．５：１、５：１
、５．５：１、６：１、６．５：１、７：１、７．５：１、８：１、８．５：１、９：１
、９．５：１、１０：１）である。
ル比が、０．１～１０：１（具体的には、例えば、０．１：１、０．２：１、０．３：１
、０．４：１、０．５：１、０．６：１、０．７：１、０．８：１、０．９：１、１：１
、１．５：１、２：１、２．５：１、３：１、３．５：１、４：１、４．５：１、５：１
、５．５：１、６：１、６．５：１、７：１、７．５：１、８：１、８．５：１、９：１
、９．５：１、１０：１）である。
【0022】
ステップ（１）では、前記撹拌の時間は、５～５０ｍｉｎ、好ましくは、１０～３０ｍｉ
ｎ（例えば、１５ｍｉｎ、１６ｍｉｎ、１７ｍｉｎ、１８ｍｉｎ、１９ｍｉｎ、２０ｍｉ
ｎ）、より好ましくは、１０～２０ｍｉｎである。
ｎ（例えば、１５ｍｉｎ、１６ｍｉｎ、１７ｍｉｎ、１８ｍｉｎ、１９ｍｉｎ、２０ｍｉ
ｎ）、より好ましくは、１０～２０ｍｉｎである。
【0023】
ステップ（２）では、前記ポリエチレングリコールエポキシ誘導体は、モノメトキシポリ
エチレングリコールエチレンオキシドであり、好ましくは、前記モノメトキシポリエチレ
ングリコールエチレンオキシドの分子量は、２０００～２０００００、例えば、２０００
、３０００、４０００、５０００、１００００、２００００、３００００、５００００、
１０００００である。
エチレングリコールエチレンオキシドであり、好ましくは、前記モノメトキシポリエチレ
ングリコールエチレンオキシドの分子量は、２０００～２０００００、例えば、２０００
、３０００、４０００、５０００、１００００、２００００、３００００、５００００、
１０００００である。
【0024】
ステップ（２）では、前記反応は、撹拌混合後に放置することを含む。
【0025】
好ましくは、ステップ（２）では、前記反応時間は、１０～２４ｈ、好ましくは、１３～
２１ｈ、より好ましくは、１７～１９ｈである。
２１ｈ、より好ましくは、１７～１９ｈである。
【0026】
好ましくは、前記ヒアルロン酸誘導体又はその塩の製造方法は、生成物を精製するステッ
プをさらに含み、生成物を精製する前記ステップは、酸性試薬を加えてステップ（２）で
得られた溶液を中性に調整するステップ、及び／又は、沈殿剤を加えて生成物を沈殿する
ステップ、及び／又は、洗浄剤を加えて沈殿を洗浄するステップをさらに含む。
プをさらに含み、生成物を精製する前記ステップは、酸性試薬を加えてステップ（２）で
得られた溶液を中性に調整するステップ、及び／又は、沈殿剤を加えて生成物を沈殿する
ステップ、及び／又は、洗浄剤を加えて沈殿を洗浄するステップをさらに含む。
【0027】
前記酸性試薬は、希塩酸溶液、希硫酸溶液、希酢酸溶液、希次亜塩素酸溶液から選択され
る１種又は複数種である。
る１種又は複数種である。
【0028】
本発明の一実施形態では、前記酸性試薬は、希塩酸溶液である。
【0029】
前記沈殿剤は、アセトニトリル又はエタノールである。
【0030】
本発明の一実施形態では、前記沈殿剤は、アセトニトリルである。
【0031】
前記洗浄剤は、エタノール又は水である。
【0032】
本発明の一実施形態では、前記洗浄剤は、エタノールである。
【0033】
本発明の一実施形態では、前記ヒアルロン酸誘導体又はその塩の製造方法は、ヒアルロン
酸を秤量し、アルカリ性溶剤で溶解し、均一になるまで１０～３０ｍｉｎ撹拌し、その後
、メトキシポリエチレングリコールエポキシ誘導体を加え、さらに材料が均一に混合する
まで１０～２４ｈ撹拌し、室温で１５～１８時間放置し、酸性試薬を加えて系のＰＨを中
性に調整し、次いで、沈殿剤を加えて沈殿し、激しく撹拌して生成物の粒子を均一にし、
遠心分離して静置し、上清液を除去し、沈殿剤を用いて沈殿を２～５回持続し、さらに得
られた沈殿を洗浄剤で１～３回洗浄し、最後に得られた沈殿生成物を真空乾燥オーブンに
入れて乾燥する。
酸を秤量し、アルカリ性溶剤で溶解し、均一になるまで１０～３０ｍｉｎ撹拌し、その後
、メトキシポリエチレングリコールエポキシ誘導体を加え、さらに材料が均一に混合する
まで１０～２４ｈ撹拌し、室温で１５～１８時間放置し、酸性試薬を加えて系のＰＨを中
性に調整し、次いで、沈殿剤を加えて沈殿し、激しく撹拌して生成物の粒子を均一にし、
遠心分離して静置し、上清液を除去し、沈殿剤を用いて沈殿を２～５回持続し、さらに得
られた沈殿を洗浄剤で１～３回洗浄し、最後に得られた沈殿生成物を真空乾燥オーブンに
入れて乾燥する。
【0034】
本発明の第３態様では、薬物、医療美容、及び化粧品用の製品の製造における式（I）又
は（IＩ）前記ヒアルロン酸誘導体、又はその塩の使用を提供する。
は（IＩ）前記ヒアルロン酸誘導体、又はその塩の使用を提供する。
【0035】
好ましくは、前記使用は、医療美容用の製品の製造における式（I）又は（II）前記ヒア
ルロン酸誘導体又はその塩の使用である。
ルロン酸誘導体又はその塩の使用である。
【0036】
好ましくは、前記医療美容用の製品は、軟組織充填剤である。
【0037】
本発明は、本発明の式（I）又は（II）前記ヒアルロン酸誘導体又はその塩を含む、軟組
織充填剤をさらに提供する。
織充填剤をさらに提供する。
【0038】
本発明では、ポリエチレングリコール誘導体とヒアルロン酸又はその塩とをエーテル結合
で修飾し、反応生成物は架橋ゲル状態ではなく、水溶液に可溶な複合型高分子材料であり
、製造されたヒアルロン酸誘導体又はその塩は、ヒアルロン酸の保水性と保湿性を維持す
るだけでなく、生体内でのヒアルロニダーゼ分解に対する耐性を高め、顔や首の小じわの
修復に使用すると、注射の頻度を減少させ、体験者の快適さを向上させ、コストを低減す
る。
で修飾し、反応生成物は架橋ゲル状態ではなく、水溶液に可溶な複合型高分子材料であり
、製造されたヒアルロン酸誘導体又はその塩は、ヒアルロン酸の保水性と保湿性を維持す
るだけでなく、生体内でのヒアルロニダーゼ分解に対する耐性を高め、顔や首の小じわの
修復に使用すると、注射の頻度を減少させ、体験者の快適さを向上させ、コストを低減す
る。
【図面の簡単な説明】
【0039】
【発明を実施するための形態】
【0040】
別段の定義がない限り、本発明に使用されるすべての科学用語及び技術用語は、本発明に
関する技術分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。例えば、「ア
ルキル」とは、不飽和結合を含まない直鎖又は分岐鎖の炭化水素鎖ラジカルを指し、本発
明において、Ｃ１～Ｃ６のアルキルは、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、
ｎ－ブチル、イソブチル、ｔ－ブチル、ｎ－ペンチル、ｎ－ヘキシルなどのような１～６
個の炭素原子を含むアルキル、好ましくは、Ｃ１～Ｃ３のアルキル（メチル、エチル、ｎ
－プロピル、イソプロピル等）を指す。「シクロアルキル」とは、脂環式炭化水素を指し
、代表的なシクロアルキルは、１～４個の単環及び／又は縮合環を含み、３～約１８個の
炭素原子を含み、本発明において、Ｃ３～Ｃ６のシクロアルキルとは、シクロプロピル、
シクロペンチル、シクロヘキシルなどの３～６個の炭素原子を含むシクロアルキルを指す
。
関する技術分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。例えば、「ア
ルキル」とは、不飽和結合を含まない直鎖又は分岐鎖の炭化水素鎖ラジカルを指し、本発
明において、Ｃ１～Ｃ６のアルキルは、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、
ｎ－ブチル、イソブチル、ｔ－ブチル、ｎ－ペンチル、ｎ－ヘキシルなどのような１～６
個の炭素原子を含むアルキル、好ましくは、Ｃ１～Ｃ３のアルキル（メチル、エチル、ｎ
－プロピル、イソプロピル等）を指す。「シクロアルキル」とは、脂環式炭化水素を指し
、代表的なシクロアルキルは、１～４個の単環及び／又は縮合環を含み、３～約１８個の
炭素原子を含み、本発明において、Ｃ３～Ｃ６のシクロアルキルとは、シクロプロピル、
シクロペンチル、シクロヘキシルなどの３～６個の炭素原子を含むシクロアルキルを指す
。
【0041】
以下、本発明の実施例における技術的手段を明確かつ完全に説明するが、説明される実施
例は本発明の一部の実施例にすぎず、全ての実施例ではないことは明らかである。本発明
の実施例に基づいて、当業者が創造的な努力を払うことなく取得した他のすべての実施例
は、本発明の保護範囲に属する。
実施例１
例は本発明の一部の実施例にすぎず、全ての実施例ではないことは明らかである。本発明
の実施例に基づいて、当業者が創造的な努力を払うことなく取得した他のすべての実施例
は、本発明の保護範囲に属する。
実施例１
【0042】
ＨＡ（６０万）３８０ｍｇを秤量し、０．２５％水素化ナトリウム水溶液３．８ｍｌで溶
解し、均一になるまで１０～３０ｍｉｎ激しく撹拌し、Ｍ－ＰＥＧ２０００－ＥＰＯＸ（
、北京鍵凱科技股フェン有限公司より、下同）１ｇを加え、さらに材料が均一に混合する
まで激しく撹拌し、室温で１８時間放置した。翌日、０．２５Ｎ ＨＣｌ １ｍｌを加え
て系のＰＨを約７に調整し、その後、アセトニトリル２０ｍｌを加えて沈殿し、激しく撹
拌して生成物の粒子を均一にし、遠心分離して静置し、上清液を除去した。アセトニトリ
ル２０ｍｌを用いて沈殿を４回持続し、さらに無水エタノール２０ｍｌで２回洗浄し、生
成物を真空乾燥オーブンに入れて乾燥し、サンプル１（０．２５％ＮａＯＨ）を得た。サ
ンプリングして多角度光－示差検出及び核磁気検出を行った。
実施例２
解し、均一になるまで１０～３０ｍｉｎ激しく撹拌し、Ｍ－ＰＥＧ２０００－ＥＰＯＸ（
まで激しく撹拌し、室温で１８時間放置した。翌日、０．２５Ｎ ＨＣｌ １ｍｌを加え
て系のＰＨを約７に調整し、その後、アセトニトリル２０ｍｌを加えて沈殿し、激しく撹
拌して生成物の粒子を均一にし、遠心分離して静置し、上清液を除去した。アセトニトリ
ル２０ｍｌを用いて沈殿を４回持続し、さらに無水エタノール２０ｍｌで２回洗浄し、生
成物を真空乾燥オーブンに入れて乾燥し、サンプル１（０．２５％ＮａＯＨ）を得た。サ
ンプリングして多角度光－示差検出及び核磁気検出を行った。
実施例２
【0043】
ＨＡ（６０万）５７０ｍｇを秤量し、０．３５％水素化ナトリウム水溶液５．７ｍｌで溶
解し、均一になるまで１０～３０ｍｉｎ激しく撹拌し、Ｍ－ＰＥＧ２０００－ＥＰＯＸ
１．５ｇを加え、さらに材料が均一に混合するまで激しく撹拌し、室温で１８時間放置し
た。翌日、０．３５Ｎ ＨＣｌ １．５ｍｌを加えて系のＰＨを約７に調整し、その後、
アセトニトリル３０ｍｌを加えて沈殿し、激しく撹拌して生成物の粒子を均一にし、遠心
分離して静置し、上清液を除去した。アセトニトリル３０ｍｌを用いて沈殿を４回持続し
、さらに無水エタノール３０ｍｌで２回洗浄し、生成物を真空乾燥オーブンに入れて乾燥
し、サンプル２（０．３５％ＮａＯＨ）を得た。サンプリングして多角度光－示差検出及
び核磁気検出を行った。
実施例３
解し、均一になるまで１０～３０ｍｉｎ激しく撹拌し、Ｍ－ＰＥＧ２０００－ＥＰＯＸ
１．５ｇを加え、さらに材料が均一に混合するまで激しく撹拌し、室温で１８時間放置し
た。翌日、０．３５Ｎ ＨＣｌ １．５ｍｌを加えて系のＰＨを約７に調整し、その後、
アセトニトリル３０ｍｌを加えて沈殿し、激しく撹拌して生成物の粒子を均一にし、遠心
分離して静置し、上清液を除去した。アセトニトリル３０ｍｌを用いて沈殿を４回持続し
、さらに無水エタノール３０ｍｌで２回洗浄し、生成物を真空乾燥オーブンに入れて乾燥
し、サンプル２（０．３５％ＮａＯＨ）を得た。サンプリングして多角度光－示差検出及
び核磁気検出を行った。
実施例３
【0044】
ＨＡ（６０万）３８０ｍｇを秤量し、０．５％水素化ナトリウム水溶液３．８ｍｌで溶解
し、均一になるまで１０～３０ｍｉｎ激しく撹拌し、Ｍ－ＰＥＧ２０００－ＥＰＯＸ １
ｇを加え、さらに材料が均一に混合するまで激しく撹拌し、室温で１８時間放置した。翌
日、０．５Ｎ ＨＣｌ １ｍｌを加えて系のＰＨを約７に調整し、その後、アセトニトリ
ル２０ｍｌを加えて沈殿し、激しく撹拌して生成物の粒子を均一にし、遠心分離して静置
し、上清液を除去した。アセトニトリル２０ｍｌを用いて沈殿を４回持続し、さらに無水
エタノール２０ｍｌで２回洗浄し、生成物を真空乾燥オーブンに入れて乾燥し、サンプル
３（０．５％ＮａＯＨ）を得た。サンプリングして多角度光－示差検出及び核磁気検出を
行った。
実施例４
し、均一になるまで１０～３０ｍｉｎ激しく撹拌し、Ｍ－ＰＥＧ２０００－ＥＰＯＸ １
ｇを加え、さらに材料が均一に混合するまで激しく撹拌し、室温で１８時間放置した。翌
日、０．５Ｎ ＨＣｌ １ｍｌを加えて系のＰＨを約７に調整し、その後、アセトニトリ
ル２０ｍｌを加えて沈殿し、激しく撹拌して生成物の粒子を均一にし、遠心分離して静置
し、上清液を除去した。アセトニトリル２０ｍｌを用いて沈殿を４回持続し、さらに無水
エタノール２０ｍｌで２回洗浄し、生成物を真空乾燥オーブンに入れて乾燥し、サンプル
３（０．５％ＮａＯＨ）を得た。サンプリングして多角度光－示差検出及び核磁気検出を
行った。
実施例４
【0045】
ＨＡ（６０万）３８０ｍｇを秤量し、０．８％水素化ナトリウム水溶液３．８ｍｌで溶解
し、均一になるまで１０～３０ｍｉｎ激しく撹拌し、Ｍ－ＰＥＧ２０００－ＥＰＯＸ １
ｇを加え、さらに材料が均一に混合するまで激しく撹拌し、室温で１８時間放置した。翌
日、０．８Ｎ ＨＣｌ １ｍｌを加えて系のＰＨを約７に調整し、その後、アセトニトリ
ル２０ｍｌを加えて沈殿し、激しく撹拌して生成物の粒子を均一にし、遠心分離して静置
し、上清液を除去した。アセトニトリル２０ｍｌを用いて沈殿を４回持続し、さらに無水
エタノール２０ｍｌで２回洗浄し、生成物を真空乾燥オーブンに入れて乾燥し、サンプル
４（０．８％ＮａＯＨ）を得た。サンプリングして多角度光－示差検出及び核磁気検出を
行った。
実施例５
し、均一になるまで１０～３０ｍｉｎ激しく撹拌し、Ｍ－ＰＥＧ２０００－ＥＰＯＸ １
ｇを加え、さらに材料が均一に混合するまで激しく撹拌し、室温で１８時間放置した。翌
日、０．８Ｎ ＨＣｌ １ｍｌを加えて系のＰＨを約７に調整し、その後、アセトニトリ
ル２０ｍｌを加えて沈殿し、激しく撹拌して生成物の粒子を均一にし、遠心分離して静置
し、上清液を除去した。アセトニトリル２０ｍｌを用いて沈殿を４回持続し、さらに無水
エタノール２０ｍｌで２回洗浄し、生成物を真空乾燥オーブンに入れて乾燥し、サンプル
４（０．８％ＮａＯＨ）を得た。サンプリングして多角度光－示差検出及び核磁気検出を
行った。
実施例５
【0046】
ＨＡ（６０万）１９０ｍｇを秤量し、０．３５％水素化ナトリウム水溶液５．７ｍｌで溶
解し、均一になるまで１０～３０ｍｉｎ激しく撹拌し、Ｍ－ＰＥＧ２０００－ＥＰＯＸ
５００ｍｇを加え、さらに材料が均一に混合するまで激しく撹拌し、室温で１８時間放置
した。翌日、０．３５Ｎ ＨＣｌ １ｍｌを加えて系のＰＨを約７に調整し、その後、ア
セトニトリル１０ｍｌを加えて沈殿し、激しく撹拌して生成物の粒子を均一にし、遠心分
離して静置し、上清液を除去した。アセトニトリル１０ｍｌを用いて沈殿を４回持続し、
さらに無水エタノール１０ｍｌで２回洗浄し、生成物を真空乾燥オーブンに入れて乾燥し
、サンプル５（０．３５％ＮａＯＨ）を得た。サンプリングして多角度光－示差検出及び
核磁気検出を行った。
実施例６
解し、均一になるまで１０～３０ｍｉｎ激しく撹拌し、Ｍ－ＰＥＧ２０００－ＥＰＯＸ
５００ｍｇを加え、さらに材料が均一に混合するまで激しく撹拌し、室温で１８時間放置
した。翌日、０．３５Ｎ ＨＣｌ １ｍｌを加えて系のＰＨを約７に調整し、その後、ア
セトニトリル１０ｍｌを加えて沈殿し、激しく撹拌して生成物の粒子を均一にし、遠心分
離して静置し、上清液を除去した。アセトニトリル１０ｍｌを用いて沈殿を４回持続し、
さらに無水エタノール１０ｍｌで２回洗浄し、生成物を真空乾燥オーブンに入れて乾燥し
、サンプル５（０．３５％ＮａＯＨ）を得た。サンプリングして多角度光－示差検出及び
核磁気検出を行った。
実施例６
【0047】
ＨＡ（６０万）７６０ｍｇを秤量し、０．３５％水素化ナトリウム水溶液７．６ｍｌで溶
解し、均一になるまで１０～３０ｍｉｎ激しく撹拌し、Ｍ－ＰＥＧ２０００－ＥＰＯＸ
２ｇを加え、さらに材料が均一に混合するまで激しく撹拌し、室温で１５時間放置した。
翌日、０．３５Ｎ ＨＣｌ ２ｍｌを加えて系のＰＨを約７に調整し、その後、アセトニ
トリル４０ｍｌを加えて沈殿し、激しく撹拌して生成物の粒子を均一にし、遠心分離して
静置し、上清液を除去した。アセトニトリル４０ｍｌを用いて沈殿を４回持続し、さらに
無水エタノール４０ｍｌで２回洗浄し、生成物を真空乾燥オーブンに入れて乾燥し、サン
プル６（０．３５％ＮａＯＨ）を得た。サンプリングして多角度光－示差検出及び核磁気
検出を行った。
実施例７
解し、均一になるまで１０～３０ｍｉｎ激しく撹拌し、Ｍ－ＰＥＧ２０００－ＥＰＯＸ
２ｇを加え、さらに材料が均一に混合するまで激しく撹拌し、室温で１５時間放置した。
翌日、０．３５Ｎ ＨＣｌ ２ｍｌを加えて系のＰＨを約７に調整し、その後、アセトニ
トリル４０ｍｌを加えて沈殿し、激しく撹拌して生成物の粒子を均一にし、遠心分離して
静置し、上清液を除去した。アセトニトリル４０ｍｌを用いて沈殿を４回持続し、さらに
無水エタノール４０ｍｌで２回洗浄し、生成物を真空乾燥オーブンに入れて乾燥し、サン
プル６（０．３５％ＮａＯＨ）を得た。サンプリングして多角度光－示差検出及び核磁気
検出を行った。
実施例７
【0048】
ＨＡ（６０万）７６０ｍｇを秤量し、０．３５％水素化ナトリウム水溶液７．６ｍｌで溶
解し、均一になるまで１０～３０ｍｉｎ激しく撹拌し、Ｍ－ＰＥＧ２０００－ＥＰＯＸ
２ｇを加え、さらに材料が均一に混合するまで激しく撹拌し、室温で２１時間放置した。
翌日、０．３５Ｎ ＨＣｌ ２ｍｌを加えて系のＰＨを約７に調整し、その後、アセトニ
トリル４０ｍｌを加えて沈殿し、激しく撹拌して生成物の粒子を均一にし、遠心分離して
静置し、上清液を除去した。アセトニトリル４０ｍｌを用いて沈殿を４回持続し、さらに
無水エタノール４０ｍｌで２回洗浄し、生成物を真空乾燥オーブンに入れて乾燥し、サン
プル６（０．３５％ＮａＯＨ）を得た。サンプリングして多角度光－示差検出及び核磁気
検出を行った。
実施例８
解し、均一になるまで１０～３０ｍｉｎ激しく撹拌し、Ｍ－ＰＥＧ２０００－ＥＰＯＸ
２ｇを加え、さらに材料が均一に混合するまで激しく撹拌し、室温で２１時間放置した。
翌日、０．３５Ｎ ＨＣｌ ２ｍｌを加えて系のＰＨを約７に調整し、その後、アセトニ
トリル４０ｍｌを加えて沈殿し、激しく撹拌して生成物の粒子を均一にし、遠心分離して
静置し、上清液を除去した。アセトニトリル４０ｍｌを用いて沈殿を４回持続し、さらに
無水エタノール４０ｍｌで２回洗浄し、生成物を真空乾燥オーブンに入れて乾燥し、サン
プル６（０．３５％ＮａＯＨ）を得た。サンプリングして多角度光－示差検出及び核磁気
検出を行った。
実施例８
【0049】
ＨＡ（６０万）５７０ｍｇを秤量し、０．３５％水素化ナトリウム水溶液５．７ｍｌで溶
解し、均一になるまで１０～３０ｍｉｎ激しく撹拌し、Ｍ－ＰＥＧ５０００－ＥＰＯＸ
２７５０ｍｇを加え、さらに材料が均一に混合するまで激しく撹拌し、室温で１８時間放
置した。翌日、０．３５Ｎ ＨＣｌ ２ｍｌを加えて系のＰＨを約７に調整し、その後、
アセトニトリル３０ｍｌを加えて沈殿し、激しく撹拌して生成物の粒子を均一にし、遠心
分離して静置し、上清液を除去した。アセトニトリル３０ｍｌを用いて沈殿を４回持続し
、さらに無水エタノール３０ｍｌで２回洗浄し、生成物を真空乾燥オーブンに入れて乾燥
し、サンプル8（０．３５％ＮａＯＨ）を得た。サンプリングして多角度光－示差検出及
び核磁気検出を行った。
実施例９
解し、均一になるまで１０～３０ｍｉｎ激しく撹拌し、Ｍ－ＰＥＧ５０００－ＥＰＯＸ
２７５０ｍｇを加え、さらに材料が均一に混合するまで激しく撹拌し、室温で１８時間放
置した。翌日、０．３５Ｎ ＨＣｌ ２ｍｌを加えて系のＰＨを約７に調整し、その後、
アセトニトリル３０ｍｌを加えて沈殿し、激しく撹拌して生成物の粒子を均一にし、遠心
分離して静置し、上清液を除去した。アセトニトリル３０ｍｌを用いて沈殿を４回持続し
、さらに無水エタノール３０ｍｌで２回洗浄し、生成物を真空乾燥オーブンに入れて乾燥
し、サンプル8（０．３５％ＮａＯＨ）を得た。サンプリングして多角度光－示差検出及
び核磁気検出を行った。
実施例９
【0050】
ＨＡ（６０万）５７０ｍｇを秤量し、０．３５％水素化ナトリウム水溶液５．７ｍｌで溶
解し、均一になるまで１０～３０ｍｉｎ激しく撹拌し、Ｍ－ＰＥＧ５０００－ＥＰＯＸ
１８７５ｍｇを加え、さらに材料が均一に混合するまで激しく撹拌し、室温で１８時間放
置した。翌日、０．３５Ｎ ＨＣｌ ２ｍｌを加えて系のＰＨを約７に調整し、その後、
アセトニトリル３０ｍｌを加えて沈殿し、激しく撹拌して生成物の粒子を均一にし、遠心
分離して静置し、上清液を除去した。アセトニトリル３０ｍｌを用いて沈殿を４回持続し
、さらに無水エタノール３０ｍｌで２回洗浄し、生成物を真空乾燥オーブンに入れて乾燥
し、サンプル9（０．３５％ＮａＯＨ）を得た。サンプリングして多角度光－示差検出及
び核磁気検出を行った。
実施例１０
解し、均一になるまで１０～３０ｍｉｎ激しく撹拌し、Ｍ－ＰＥＧ５０００－ＥＰＯＸ
１８７５ｍｇを加え、さらに材料が均一に混合するまで激しく撹拌し、室温で１８時間放
置した。翌日、０．３５Ｎ ＨＣｌ ２ｍｌを加えて系のＰＨを約７に調整し、その後、
アセトニトリル３０ｍｌを加えて沈殿し、激しく撹拌して生成物の粒子を均一にし、遠心
分離して静置し、上清液を除去した。アセトニトリル３０ｍｌを用いて沈殿を４回持続し
、さらに無水エタノール３０ｍｌで２回洗浄し、生成物を真空乾燥オーブンに入れて乾燥
し、サンプル9（０．３５％ＮａＯＨ）を得た。サンプリングして多角度光－示差検出及
び核磁気検出を行った。
実施例１０
【0051】
ＨＡ（６０万）５７０ｍｇを秤量し、０．３５％水素化ナトリウム水溶液５．７ｍｌで溶
解し、均一になるまで１０～３０ｍｉｎ激しく撹拌し、Ｍ－ＰＥＧ５０００－ＥＰＯＸ
７５００ｍｇを加え、さらに材料が均一に混合するまで激しく撹拌し、室温で１８時間放
置した。翌日、０．３５Ｎ ＨＣｌ ２ｍｌを加えて系のＰＨを約７に調整し、その後、
アセトニトリル３０ｍｌを加えて沈殿し、激しく撹拌して生成物の粒子を均一にし、遠心
分離して静置し、上清液を除去した。アセトニトリル３０ｍｌを用いて沈殿を４回持続し
、さらに無水エタノール３０ｍｌで２回洗浄し、生成物を真空乾燥オーブンに入れて乾燥
し、サンプル10（０．３５％ＮａＯＨ）を得た。サンプリングして多角度光－示差検出及
び核磁気検出を行った。
実施例１１
解し、均一になるまで１０～３０ｍｉｎ激しく撹拌し、Ｍ－ＰＥＧ５０００－ＥＰＯＸ
７５００ｍｇを加え、さらに材料が均一に混合するまで激しく撹拌し、室温で１８時間放
置した。翌日、０．３５Ｎ ＨＣｌ ２ｍｌを加えて系のＰＨを約７に調整し、その後、
アセトニトリル３０ｍｌを加えて沈殿し、激しく撹拌して生成物の粒子を均一にし、遠心
分離して静置し、上清液を除去した。アセトニトリル３０ｍｌを用いて沈殿を４回持続し
、さらに無水エタノール３０ｍｌで２回洗浄し、生成物を真空乾燥オーブンに入れて乾燥
し、サンプル10（０．３５％ＮａＯＨ）を得た。サンプリングして多角度光－示差検出及
び核磁気検出を行った。
実施例１１
【0052】
ＨＡ（６０万）５７０ｍｇを秤量し、０．３５％水素化ナトリウム水溶液５．７ｍｌで溶
解し、均一になるまで１０～３０ｍｉｎ激しく撹拌し、室温で１８時間放置した。翌日、
０．３５Ｎ ＨＣｌ ２ｍｌを加えて系のＰＨを約７に調整し、その後、アセトニトリル
３０ｍｌを加えて沈殿し、激しく撹拌して生成物の粒子を均一にし、遠心分離して静置し
、上清液を除去した。アセトニトリル３０ｍｌを用いて沈殿を４回持続し、さらに無水エ
タノール３０ｍｌで２回洗浄し、生成物を真空乾燥オーブンに入れて乾燥し、サンプル１
１（０．３５％ＮａＯＨ）を得た。サンプリングして多角度光－示差検出及び核磁気検出
を行った。多角光検出では、分子量は６．３６６×１０５Ｄａであり、サンプル１１は、
ヒアルロン酸ナトリウム骨格上に結合されるポリエチレングリコールの数を計算するため
の比較サンプルとした。
実施例１２
解し、均一になるまで１０～３０ｍｉｎ激しく撹拌し、室温で１８時間放置した。翌日、
０．３５Ｎ ＨＣｌ ２ｍｌを加えて系のＰＨを約７に調整し、その後、アセトニトリル
３０ｍｌを加えて沈殿し、激しく撹拌して生成物の粒子を均一にし、遠心分離して静置し
、上清液を除去した。アセトニトリル３０ｍｌを用いて沈殿を４回持続し、さらに無水エ
タノール３０ｍｌで２回洗浄し、生成物を真空乾燥オーブンに入れて乾燥し、サンプル１
１（０．３５％ＮａＯＨ）を得た。サンプリングして多角度光－示差検出及び核磁気検出
を行った。多角光検出では、分子量は６．３６６×１０５Ｄａであり、サンプル１１は、
ヒアルロン酸ナトリウム骨格上に結合されるポリエチレングリコールの数を計算するため
の比較サンプルとした。
実施例１２
【0053】
実施例１～４における生成物について多角光－示差検出を行って得られた分子量の情報を
表１に示す。
表１に示す。
【0054】
【表1】
【0055】
表１の分子量データから分かるように、反応溶液のアルカリ濃度は低すぎても高すぎても
いけない。アルカリ溶液の濃度が低すぎると、原料の反応性が高くなくなり、アルカリ溶
液の濃度が高すぎると、原料のヒアルロン酸ナトリウムがアルカリ分解してしまうことが
多くなった。
いけない。アルカリ溶液の濃度が低すぎると、原料の反応性が高くなくなり、アルカリ溶
液の濃度が高すぎると、原料のヒアルロン酸ナトリウムがアルカリ分解してしまうことが
多くなった。
【0056】
実施例２及び実施例５における生成物について多角光－示差検出を行って得られた分子量
の情報を表２に示す。
の情報を表２に示す。
【0057】
【表2】
【0058】
表２の分子量データから分かるように、溶剤が多すぎると系の濃度が薄すぎ、また原料の
ヒアルロン酸ナトリウムのアルカリ加水分解が促進される。
ヒアルロン酸ナトリウムのアルカリ加水分解が促進される。
【0059】
実施例２、実施例６、及び実施例７における生成物について多角光－示差検出を行って得
られた分子量の情報を表３に示す。
られた分子量の情報を表３に示す。
【0060】
【表3】
【0061】
表３の分子量データからわかるように、反応時間も製品の性能を制限する要因であり、反
応時間が長すぎると、原料のヒアルロン酸ナトリウムが劣化するリスクが高くなる。
応時間が長すぎると、原料のヒアルロン酸ナトリウムが劣化するリスクが高くなる。
【0062】
実施例８、実施例９、及び実施例１０における生成物について多角光－示差検出を行って
得られた分子量の情報を表４に示す。
得られた分子量の情報を表４に示す。
【0063】
【表4】
【0064】
表４の分子量データから分かるように、ＨＡとメトキシポリエチレングリコールエポキシ
誘導体の供給比も製品の性能に一定の影響を与える。
実施例１３
誘導体の供給比も製品の性能に一定の影響を与える。
実施例１３
【0065】
サンプル２及びサンプル１１を例にして、ポリエチレングリコール化ヒアルロン酸ナトリ
ウム製品中のヒアルロン酸ナトリウム二糖の数とＰＥＧの数との比の計算方法を以下に示
す（１つの二糖単位の分子量は３８０）。
ウム製品中のヒアルロン酸ナトリウム二糖の数とＰＥＧの数との比の計算方法を以下に示
す（１つの二糖単位の分子量は３８０）。
【0066】
サンプル１１の二糖単位の平均数は、６．３６６×１０５／３８０＝１６７５である。
【0067】
サンプル２に含まれるＰＥＧ２０００の数は、（１２．０２－６．３６６）１０５／２０
００＝２８３である。
００＝２８３である。
【0068】
サンプル２中の二糖数とＰＥＧ２０００の数との比は、１６７５／２８３＝６：１である
。
。
【0069】
ｉｎ ｖｉｔｒｏ 酵素加水分解実験
【0070】
酵素加水分解の実験操作のステップ
サンプル８を例にすると、サンプル８を３．４ｍｇ秤量し、注射用滅菌水２４２μｌを加
え、２０ｍｉｎボルテックス振とうさせ、１０Ｕ／ｍｌヒアルロニダーゼを含有する注射
用滅菌水溶液２４２μｌを加え、サンプルを均一に混合し、３７℃の恒温水浴環境に置き
、１時間おきにサンプリングして、多角光－示差検出方法によって分子量の変化をテスト
した。
サンプル８を例にすると、サンプル８を３．４ｍｇ秤量し、注射用滅菌水２４２μｌを加
え、２０ｍｉｎボルテックス振とうさせ、１０Ｕ／ｍｌヒアルロニダーゼを含有する注射
用滅菌水溶液２４２μｌを加え、サンプルを均一に混合し、３７℃の恒温水浴環境に置き
、１時間おきにサンプリングして、多角光－示差検出方法によって分子量の変化をテスト
した。
【0071】
酵素加水分解実験をテストするためのサンプル情報は次のとおりである。
【0072】
対照サンプル：ＨＡ １２０万Ｄａ、酵素分解分子量－時間関係図を図１に示す。
【0073】
サンプル２：ＨＡ二糖の数とＰＥＧ２０００の数との比は６：１である。
【0074】
サンプル１２：ＨＡ二糖の数とＰＥＧ２０００の数との比は１７：１である。
【0075】
サンプル８：ＨＡ二糖の数とＰＥＧ５０００の数との比は１３：１であり、酵素分解分子
量－時間関係図は図２に示される。
量－時間関係図は図２に示される。
【0076】
サンプル９：ＨＡ二糖の数とＰＥＧ５０００の数との比は２２：１である。
【0077】
サンプル１３：ＨＡ二糖の数とＰＥＧ５０００の数との比は４２：１である。
【0078】
ＰＥＧ５０００－ＨＡサンプルの酵素分解データ
【0079】
【表5】
【0080】
［表６］
ＰＥＧ２０００－ＨＡサンプルの酵素分解データ
ＰＥＧ２０００－ＨＡサンプルの酵素分解データ
【0081】
表５及び表６のデータから分かるように、ＰＥＧの分子量が５０００で、ＨＡとＰＥＧと
の比が１３：１～４２：１である場合、ＰＥＧは、ＨＡの酵素分解に対する耐性に影響を
与え、比が大きいほど効果が顕著であり、ＰＥＧの分子量が２０００の場合、ＰＥＧは、
ＨＡの酵素分解に対する耐性に大きな影響を与える。
の比が１３：１～４２：１である場合、ＰＥＧは、ＨＡの酵素分解に対する耐性に影響を
与え、比が大きいほど効果が顕著であり、ＰＥＧの分子量が２０００の場合、ＰＥＧは、
ＨＡの酵素分解に対する耐性に大きな影響を与える。
【図1】
【図2】
【手続補正書】
【提出日】2024-07-04
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
式（I）で示される構造を有するヒアルロン酸誘導体又はその塩。ｍ－、－（ＣＨ２）ｍＣＯＮＨ－、及び－ＣＯ（ＣＨ２）ｍ－から選択される１種又は複
数種の組み合わせであり、ｍは、１～１０の整数であり、
Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、
アルケニル、アリール、アラルキル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルアルキル、－ＣＯ
Ｒ３、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ３、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ３Ｒ４、－ＣＨ＝ＮＲ３、－ＣＮ、－ＯＲ３、
－ＯＣ（Ｏ）Ｒ３、－Ｓ（Ｏ）ｎ－Ｒ３、－ＮＲ３Ｒ４、－ＮＲ３Ｃ（Ｏ）Ｒ４、及びハ
ロゲンから選択され、
ｎは、０、１、及び２から選択され、
Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立して、水素、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、ア
リール、ヘテロシクリル、及びハロゲンから選択され、
ｋは、ポリエチレングリコール残基の重合度であり、ｋは、４０～４６００の整数であり
、
ｔは、ヒアルロン酸残基の重合度であり、ｔは、１００～８０００の整数である。）
【請求項2】
前記ｋは、４５～４５４５の整数であり、前記ｔは、１２０～７５００の整数である、ことを特徴とする請求項１に記載のヒアルロ
ン酸誘導体又はその塩。
【請求項3】
前記Ｘは、－（ＣＲ１Ｒ２）ｍ－であり、前記ｍは、１～５の整数である、ことを特徴とする請求項１に記載のヒアルロン酸誘導体又はその塩。
【請求項4】
前記Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６のアルキル、Ｃ３～Ｃ６のシクロアルキル、－ＯＲ３、－ＮＲ３Ｒ４、及びハロゲンから選択され、前記Ｒ３及びＲ４は、独立し
て、水素、及びＣ１～Ｃ３のアルキルから選択される、ことを特徴とする請求項１に記載
のヒアルロン酸誘導体又はその塩。
【請求項5】
前記Ｒ１及びＲ２は、いずれもＨである、ことを特徴とする請求項１に記載のヒアルロン酸誘導体又はその塩。
【請求項6】
前記塩は、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、亜鉛塩、コバルト塩、及びテトラブチルアンモニウム塩から選択される１種又は複数種である、ことを特
徴とする請求項１に記載のヒアルロン酸誘導体又はその塩。
【請求項7】
前記塩は、式（ＩＩ）の構造を有するナトリウム塩である、請求項１～６のいずれか１項
に記載のヒアルロン酸誘導物又はその塩。
【請求項8】
ヒアルロン酸を秤量し、ヒアルロン酸とアルカリ性溶剤とを混合して撹拌するステップ（１）と、
ステップ（１）で得られた溶液にメトキシポリエチレングリコールエポキシ誘導体を加え
て反応させるステップ（２）と、を含み、
前記メトキシポリエチレングリコールエポキシ誘導体は、式（ＩＩＩ）の構造を有する、
ことを特徴とする請求項１に記載のヒアルロン酸誘導体又はその塩の製造方法。
【請求項9】
生成物を精製するステップをさらに含み、生成物を精製する前記ステップは、
酸性試薬を加えてステップ（２）で得られた溶液を中性に調整するステップ、及び／又は
、沈殿剤を加えて生成物を沈殿するステップ、及び／又は、洗浄剤を加えて沈殿を洗浄す
るステップを含む、ことを特徴とする請求項８に記載のヒアルロン酸誘導体又はその塩の
製造方法。
【請求項10】
前記ヒアルロン酸とアルカリ性溶剤との質量比が、１：５～３０である、ことを特徴とする請求項８に記載のヒアルロン酸誘導体又はその塩の製造方法。
【請求項11】
前記ヒアルロン酸とメトキシポリエチレングリコールエポキシ誘導体中の重合体単位のモル比が０．１～１０：１である、ことを特徴とする請求項８に記載のヒアルロン酸誘導体
又はその塩の製造方法。
【請求項12】
ステップ（２）では、前記反応時間は、１０～２４ｈである、ことを特徴とする請求項８に記載のヒアルロン酸誘導体又はその塩の製造方法。
【請求項13】
薬物、医療美容、及び化粧品用の製品の製造における請求項１に記載のヒアルロン酸誘導体又はその塩の使用であって、
好ましくは、前記使用は、医療美容用の製品の製造における前記ヒアルロン酸誘導体又は
その塩の使用であり、
より好ましくは、前記医療美容用の製品は、軟組織充填剤である、使用。
【請求項14】
前記製品は軟組織充填剤である、請求項１３に記載の使用。
【国際調査報告】