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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-12-26
(54)【発明の名称】オリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト
(51)【国際特許分類】
C12N 15/113 20100101AFI20241219BHJP
A61K 31/713 20060101ALI20241219BHJP
A61P 25/28 20060101ALI20241219BHJP
A61P 25/16 20060101ALI20241219BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20241219BHJP
【ＦＩ】
C12N15/113 130Z
C12N15/113 ZNA
A61K31/713
A61P25/28
A61P25/16
A61P43/00 105
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024535639
(86)(22)【出願日】2022-12-16
(85)【翻訳文提出日】2024-07-25
(86)【国際出願番号】 EP2022086504
(87)【国際公開番号】W WO2023111336
(87)【国際公開日】2023-06-22
(31)【優先権主張番号】21215509.7
(32)【優先日】2021-12-17
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】509012625
【氏名又は名称】ジェネンテック， インコーポレイテッド
(71)【出願人】
【識別番号】591003013
【氏名又は名称】エフ． ホフマン－ラ ロシュ アーゲー
【氏名又は名称原語表記】Ｆ． ＨＯＦＦＭＡＮＮ－ＬＡ ＲＯＣＨＥ ＡＫＴＩＥＮＧＥＳＥＬＬＳＣＨＡＦＴ
(74)【代理人】
【識別番号】110001508
【氏名又は名称】弁理士法人 津国
(72)【発明者】
【氏名】ビンゴル，バリス
(72)【発明者】
【氏名】ブラウン，ヨハネス
(72)【発明者】
【氏名】コルディナー，ロス
(72)【発明者】
【氏名】ケルピンスキー，ルカス
【テーマコード（参考）】
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C086AA01
4C086AA02
4C086AA03
4C086EA16
4C086MA01
4C086MA04
4C086NA14
4C086ZA15
4C086ZB21
4C086ZC19
4C086ZC54
(57)【要約】
本発明は、細胞におけるグルコセレブロシダーゼ（ＧＢＡ）の発現を上方制御するか、又は回復させるオリゴヌクレオチド；そのコンジュゲート、塩及び医薬組成物；並びにゴーシェ病及び／又はパーキンソン病を含む、ＧＢＡの低下した発現と関連する疾患の処置のための方法に関する。
【選択図】なし
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
オリゴヌクレオチドグルコセレブロシダーゼ（ＧＢＡ）アゴニストであって、前記オリゴヌクレオチドは８～４０ヌクレオチド長であり、ヒトＧＢＡゲノム配列の１つ又は複数のプロモーターに相補的な８～４０ヌクレオチド長の連続配列を含む、オリゴヌクレオチドグルコセレブロシダーゼ（ＧＢＡ）アゴニスト。
【請求項2】
前記連続ヌクレオチド配列が、前記ヒトＧＢＡゲノム配列の１つ又は複数のプロモーターに少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％又は完全に相補的であり、前記ヒトＧＢＡゲノム配列が配列番号２２６である、請求項１に記載のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト。
【請求項3】
前記ヒトＧＢＡ遺伝子の前記プロモーターが、配列番号２２５を含むか、又は配列番号２２５からなる、請求項１～３のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト。
【請求項4】
前記プロモーターが、前記ヒトＧＢＡ遺伝子のエクソン１中のＡＴＧ開始コドンの１，１３７と１の間のヌクレオチド上流に位置する（Ｐ１）、請求項１～４のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト。
【請求項5】
前記ヒトＧＢＡ遺伝子の前記プロモーターが、配列番号２２４を含むか、又は配列番号２２４からなる、請求項４に記載のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト。
【請求項6】
前記連続ヌクレオチド配列が、配列番号３、配列番号７、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号３０、配列番号３３及び配列番号３６からなる群から選択される配列又はその断片に相補的である、請求項４又は５に記載のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト。
【請求項7】
前記オリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストが二本鎖オリゴヌクレオチドであり、前記連続ヌクレオチド配列のセンス鎖が、配列番号７７、配列番号８１、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号９０、配列番号９１、配列番号９３、配列番号９７、配列番号９９、配列番号１０１、配列番号１０４、配列番号１０７及び配列番号１１０からなる群から選択される配列又はその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む、請求項４～６のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト。
【請求項8】
前記オリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストが二本鎖オリゴヌクレオチドであり、前記連続ヌクレオチド配列のアンチセンス鎖が、配列番号１５１、配列番号１５５、配列番号１５７、配列番号１５８、配列番号１５９、配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１６７、配列番号１７１、配列番号１７３、配列番号１７５、配列番号１７８、配列番号１８１及び配列番号１８４からなる群から選択される配列又はその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む、請求項４～７のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト。
【請求項9】
前記プロモーターが前記ヒトＧＢＡ遺伝子のエクソン－２のすぐ上流に位置する（Ｐ２）、請求項１～３のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト。
【請求項10】
前記プロモーターが、前記ヒトＧＢＡ遺伝子のエクソン１中のＡＴＧ開始コドンの４，５５８と３，３９４の間のヌクレオチド上流に位置する、請求項９に記載のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト。
【請求項11】
前記ヒトＧＢＡ遺伝子の前記プロモーターが、配列番号２２３を含むか、又は配列番号２２３からなる、請求項９又は請求項１０に記載のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト。
【請求項12】
前記連続ヌクレオチド配列が、配列番号４４、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５７、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３及び配列番号６７からなる群から選択される配列又はその断片に相補的である、請求項９～１１のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト。
【請求項13】
前記オリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストが二本鎖オリゴヌクレオチドであり、前記連続ヌクレオチド配列のセンス鎖が、配列番号１１８、配列番号１２０、配列番号１２１、配列番号１２２、配列番号１２３、配列番号１２６、配列番号１２７、配列番号１２８、配列番号１２９、配列番号１３１、配列番号１３３、配列番号１３４、配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号１３７及び配列番号１４１からなる群から選択される配列又はその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む、請求項９～１２のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト。
【請求項14】
前記オリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストが二本鎖オリゴヌクレオチドであり、前記連続ヌクレオチド配列のアンチセンス鎖が、配列番号１９２、配列番号１９４、配列番号１９５、配列番号１９６、配列番号１９７、配列番号２００、配列番号２０１、配列番号２０２、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号２０７、配列番号２０８、配列番号２０９、配列番号２１０、配列番号２１１及び配列番号２１５からなる群から選択される配列又はその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む、請求項９～１３のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト。
【請求項15】
前記オリゴヌクレオチドが、対照と比較して、ＧＢＡの発現を少なくとも１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％又は５０％を超えて増加させることができる、請求項１～１４のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト。
【請求項16】
前記オリゴヌクレオチドがｓａＲＮＡである、請求項１～１５のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト。
【請求項17】
対象における疾患の処置又は予防のための医薬として使用するための、請求項１～１６のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項18】
前記疾患がＧＢＡの低下した発現と関連する、請求項１７に記載の使用のためのオリゴヌクレオチド。
【請求項19】
前記疾患が、ゴーシェ病、パーキンソン病、認知症、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）及び急速眼球運動（ＲＥＭ）睡眠行動障害からなる群から選択される、請求項１７又は１８に記載の使用のためのオリゴヌクレオチド。
【請求項20】
前記疾患がパーキンソン病である、請求項１７～１９のいずれか一項に記載の使用のためのオリゴヌクレオチド。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、細胞におけるグルコセレブロシダーゼ（ＧＢＡ）の発現を上方制御するか、又は回復させるオリゴヌクレオチド；そのコンジュゲート、塩及び医薬組成物；並びにゴーシェ病及び／又はパーキンソン病を含む、ＧＢＡの低下した発現と関連する疾患の処置のための方法に関する。
【背景技術】
【0002】
グルコセレブロシダーゼ（ＧＢＡ）は、グルコセレブロシド（グルコシルセラミドとしても知られる）の加水分解を触媒するリソソーム酵素である。グルコセレブロシドは、細胞膜、特に赤血球及び白血球の正常な成分である。
【0003】
ＧＢＡをコードする遺伝子におけるホモ接合変異は、ゴーシェ病を引き起こす。日常的な細胞代謝回転の間、マクロファージは細胞残屑を貪食して分解する。不十分なＧＢＡ活性は、マクロファージのリソソームにグルコセレブロシドの蓄積をもたらす。「ゴーシェ細胞」として知られる冒されたマクロファージが、脾臓、肝臓及び骨髄などの領域に蓄積する。
【0004】
ゴーシェ病は、皮下出血、疲労、貧血、低血小板数並びに肝臓及び脾臓の腫大を特徴とする。表現型は様々であるが、３つの臨床形態が同定されている：１型は最も一般的であり、典型的には神経学的損傷を引き起こさないのに対して、２型及び３型は神経学的障害を特徴とする。
【0005】
この症状は、常染色体潜性パターンで遺伝する。ＧＢＡ遺伝子の３００を超えるバリアントがこの疾患に関連している。遺伝学のみが疾患の重症度を決定しないが、特定の変異はより重度の症候を引き起こすことが知られている。例えば、２コピーのＬ４４４Ｐ変異を有する患者は、通常、この疾患のニューロン障害型を示すのに対して、１コピー又は２コピーのＮ３７０Ｓ対立遺伝子を有する患者は、典型的には１型として分類される（Ｓｃｏｔｔ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｇｅｎｅｔ．Ｍｅｄ．，２，６５）。
【0006】
ＧＢＡ遺伝子の変異はまた、パーキンソン病及びレビー小体型認知症に関連している（Ｒｉｂｏｌｄｉ ａｎｄ Ｄｉ Ｆｏｎｚｏ，２０１９，Ｃｅｌｌｓ，８，３６４）。パーキンソン病は、広範囲の運動症候及び非運動症候を特徴とする中枢神経系の神経変性障害である。運動症候には、運動緩慢（運動の緩慢さ）、硬直及び姿勢不安定性が含まれる。運動症候に何年も先行し得る非運動症候には、嗅覚喪失、急速眼球運動睡眠行動障害、自律神経障害及びうつ病が含まれる。
【0007】
ＧＢＡ遺伝子のヘテロ接合変異は、パーキンソン病患者の約８～１２％に発生する。ゴーシェ病と同様に、変異の重症度は疾患表現型に影響を及ぼし得る。例えば、「重度の」変異（Ｌ４４４Ｐなど）を保有する患者の認知症のリスクは、「軽度の」変異（Ｎ３７０Ｓなど）を保有する患者よりも２～３倍高い。Ｅ３２６Ｋはパーキンソン病において最も多く見られるＧＢＡ変異であり、この変異を持つ患者は運動症候のより速い進行を示す（Ａｖｅｎａｌｉ ｅｔ ａｌ．，２０２０，Ｆｒｏｎｔ．Ａｇｉｎｇ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．）。低下したＧＢＡ発現に関連する疾患の現在の処置には、酵素補充療法（ＥＲＴ）及び基質合成抑制療法（ＳＲＴ）が含まれる。ＥＲＴは、組換えＧＢＡの静脈内投与を伴う。ほとんどの患者は処置によく反応するが、免疫応答を生じるリスクが存在する。さらに、ＧＢＡは血液脳関門を通過することができず、したがって、ＥＲＴはパーキンソン病又はニューロン障害型のゴーシェ病を有する患者には無効であると考えられている。ＳＲＴは、ＥＲＴを耐容できない患者、又は静脈内投与が問題となる患者に代替（又は補助）処置を提供する。ＳＲＴは、グルコセレブロシド合成経路の酵素を阻害することによって、リソソーム中のグルコセレブロシドの蓄積を低下させるように働く。この療法は、ＥＲＴより有害作用の発生率が高く、グルコセレブロシドの長期的な低下は、いくつかの異なる細胞機能に影響を及ぼし得る。ＥＲＴ及びＳＲＴはいずれも高価であり、生涯にわたって継続しなければならない。
【0008】
したがって、ＧＢＡの発現を増加又は回復させることができる治療剤が緊急に必要とされている。
【発明の概要】
【0009】
本発明は、グルコセレブロシダーゼ（ＧＢＡ）のオリゴヌクレオチドアゴニスト又はオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト、すなわちＧＢＡ核酸配列に相補的なオリゴヌクレオチドを提供する。具体的には、本発明は、ＧＢＡプロモーターの１つ又は複数を標的とするオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストを提供する。これらのオリゴヌクレオチドは、ＧＢＡの発現を上方制御することができる。代替的に述べると、本発明は、ＧＢＡのオリゴヌクレオチド正のモジュレーター（すなわち、アゴニスト）を提供する。
【0010】
本発明のオリゴヌクレオチドは、細胞におけるＧＢＡ発現を回復させるために、又は細胞におけるＧＢＡの発現を増強するために使用され得る。
【0011】
本発明は、オリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストであって、前記オリゴヌクレオチドは８～４０ヌクレオチド長であり、ヒトＧＢＡゲノム配列の１つ又は複数のプロモーターに相補的な、例えば完全に相補的な８～４０ヌクレオチド長の連続配列を含む、オリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストを提供する。
【0012】
ヒトＧＢＡゲノム配列は、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＧ＿００９７８３．１であり得る。
【0013】
ヒトＧＢＡゲノム配列は、配列番号２２６であり得る。
【0014】
ヒトＧＢＡ遺伝子のプロモーターは、配列番号２２５を含み得るか、又は配列番号２２５からなり得る。
【0015】
ヒトＧＢＡゲノム配列のプロモーターは、ヒトＧＢＡ遺伝子のエクソン１のすぐ上流に位置し得る。例えば、ヒトＧＢＡ遺伝子のエクソン１中のＡＴＧ開始コドンの１，１３７と１の間のヌクレオチド上流に。
【0016】
ヒトＧＢＡゲノム配列のプロモーターは、配列番号２２４を含み得るか、又は配列番号２２４からなり得る。
【0017】
ヒトＧＢＡゲノム配列のプロモーターは、ヒトＧＢＡ遺伝子のエクソン－２のすぐ上流に位置し得る。例えば、ヒトＧＢＡ遺伝子のエクソン１中のＡＴＧ開始コドンの４，５５８と３，３９４の間のヌクレオチド上流に。
【0018】
ヒトＧＢＡゲノム配列のプロモーターは、配列番号２２３を含み得るか、又は配列番号２２３からなり得る。
【0019】
いくつかの実施形態において、本発明は、二本鎖オリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストであって、前記オリゴヌクレオチドは８～４０ヌクレオチド長であり、ヒトＧＢＡゲノム配列の１つ又は複数のプロモーターに相補的な、例えば完全に相補的な８～４０ヌクレオチド長の連続配列を含む、二本鎖オリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストを提供する。
【0020】
二本鎖オリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、低分子活性化ＲＮＡ（ｓａＲＮＡ）であり得る。
【0021】
オリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、オリゴヌクレオチドミックスマー若しくはトータルマーであり得るか、又はオリゴヌクレオチドミックスマー若しくはトータルマーを含み得る。
【0022】
オリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、対照と比較して、ＧＢＡの発現を少なくとも１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％又は５０％を超えて増加させ得る。ここで、ＧＢＡの発現の増加は、ＧＢＡ ｍＲＮＡの増加、ＧＢＡタンパク質の発現の増加、又はＧＢＡ ｍＲＮＡ及びＧＢＡタンパク質の両方の発現の増加として測定され得る。
【0023】
対照は、前記オリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストに曝露されたことがない細胞であり得る。
【0024】
オリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、少なくとも１つのコンジュゲート部分に共有結合され得る。
【0025】
オリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、医薬的に許容され得る塩の形態であり得る。
【0026】
オリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、脂質ベースの送達ビヒクル中に封入され得るか、デンドリマーに共有結合され得る若しくはデンドリマー中に封入され得るか、又はアプタマーにコンジュゲートされ得る。
【0027】
本発明は、オリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストと、医薬的に許容され得る希釈剤、溶媒、担体、塩及び／又はアジュバントとを含む、医薬組成物を提供する。
【0028】
本発明は、標的細胞におけるＧＢＡ発現を上方制御又は回復させるためのインビボ又はインビトロ方法であって、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト又は医薬組成物を有効量で前記細胞に投与することを含む方法を提供する。
【0029】
細胞は、ヒト又は哺乳動物細胞であり得る。
【0030】
本発明は、治療的又は予防的有効量の、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト又は医薬組成物を、疾患に罹患しているか又は罹患しやすい対象に投与することを含む、疾患を処置又は予防するための方法を提供する。
【0031】
本発明は、対象における疾患の処置又は予防における医薬として使用するための、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト又は医薬組成物を提供する。
【0032】
本発明は、対象における疾患の処置又は予防のための医薬の調製のための、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト又は医薬組成物の使用を提供する。
【0033】
疾患は、ＧＢＡの低下した発現に関連し得る。
【0034】
疾患は、ゴーシェ病、パーキンソン病、認知症、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）及び急速眼球運動（ＲＥＭ）睡眠行動障害であり得る。
【0035】
本発明のこれら及び他の態様及び実施形態を以下でさらに詳細に説明する。
【図面の簡単な説明】
【0036】
【発明を実施するための形態】
【0037】
本発明者らは、オリゴヌクレオチド、特に低分子活性化ＲＮＡ（ｓａＲＮＡ）などの二本鎖オリゴヌクレオチドを使用してＧＢＡ遺伝子のプロモーター（ｐｒｏｍｏｔｏｒ）領域の１つ又は複数を標的とすることによって、ＧＢＡ ｍＲＮＡ転写物の発現レベル及び／又はコードされるタンパク質産物の発現レベルを効果的に増強することができることを同定した。
【0038】
本明細書には、本発明のオリゴヌクレオチドによって標的とされ得る、ヒトＧＢＡ遺伝子上、特にプロモーター領域内に存在する標的部位が記載される。本発明のオリゴヌクレオチドは、ＧＢＡのアゴニストである、すなわち、ＧＢＡ ｍＲＮＡ及び／又はタンパク質の産生を増加させる。
【0039】
本発明は、オリゴヌクレオチドグルコセレブロシダーゼ（ＧＢＡ）アゴニストであって、オリゴヌクレオチドが８～４０ヌクレオチド長であり、ヒトＧＢＡゲノム配列、ＮＣＢＩ参照配列ＮＧ＿００９７８３．１（配列番号２２６）の１つ又は複数のプロモーターに相補的な８～４０ヌクレオチド長の連続配列を含む、オリゴヌクレオチドグルコセレブロシダーゼ（ＧＢＡ）アゴニストを提供する。
【0040】
ＧＢＡアゴニスト
本発明は、オリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストに関する。
本発明は、オリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストに関する。
【0041】
本発明のオリゴヌクレオチドはＧＢＡアゴニストである、すなわちＧＢＡの発現を増強する。これは、ＧＢＡ ｍＲＮＡなどのＧＢＡ核酸の発現の増加、及び／又はＧＢＡタンパク質の発現の増加を意味し得る。増強されたＧＢＡ発現は、例えばゴーシェ病及び／又はパーキンソン病を処置するために望ましい。
【0042】
本明細書で使用される「ＧＢＡアゴニスト」という用語は、ＧＢＡを発現している細胞などの細胞におけるＧＢＡ ｍＲＮＡ転写物及び／又はＧＢＡタンパク質の発現を増強することができる化合物、この事例ではオリゴヌクレオチドを指す。
【0043】
ある実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、ＧＢＡ ｍＲＮＡの産生を少なくとも約１０％増強し得る。他の実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、ＧＢＡ ｍＲＮＡの産生を少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、少なくとも約２００％、少なくとも約３００％、少なくとも約４００％、少なくとも約５００％、少なくとも約６００％、又はそれを超えて増強し得る。
【0044】
ある実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、ＧＢＡタンパク質の産生を少なくとも約１０％増強し得る。他の実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、ＧＢＡタンパク質の産生を少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、少なくとも約２００％、少なくとも約３００％、少なくとも約４００％、少なくとも約５００％、少なくとも約６００％、又はそれを超えて増強し得る。
【0045】
ある実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、ＧＢＡ ｍＲＮＡ及びタンパク質の産生を少なくとも約１０％増強し得る。他の実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、ＧＢＡ ｍＲＮＡ及びタンパク質の産生を少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、少なくとも約２００％、少なくとも約３００％、少なくとも約４００％、少なくとも約５００％、少なくとも約６００％、又はそれを超えて増強し得る。
【0046】
オリゴヌクレオチド
本明細書で使用される場合、「オリゴヌクレオチド」という用語は、当業者によって一般的に理解されているように、２つ以上の共有結合されたヌクレオシドを含む分子として定義される。このような共有結合されたヌクレオシドはまた、核酸分子又はオリゴマーとも称され得る。
本明細書で使用される場合、「オリゴヌクレオチド」という用語は、当業者によって一般的に理解されているように、２つ以上の共有結合されたヌクレオシドを含む分子として定義される。このような共有結合されたヌクレオシドはまた、核酸分子又はオリゴマーとも称され得る。
【0047】
オリゴヌクレオチドは、通常、固相化学合成と、その後の精製及び単離によって研究室内で作製される。オリゴヌクレオチドの配列に言及する場合には、共有結合されたヌクレオチド又はヌクレオシドの核酸塩基部分の配列若しくは順序、又はその修飾が言及される。本発明のオリゴヌクレオチドは、人工であり、化学的に合成され、典型的には精製又は単離される。本発明のオリゴヌクレオチドは、２’糖修飾ヌクレオシドなどの１つ又は複数の修飾ヌクレオシドを含み得る。本発明のオリゴヌクレオチドは、１つ又は複数のホスホロチオアートヌクレオシド間結合などの、１つ又は複数の修飾ヌクレオシド間結合を含み得る。
【0048】
いくつかの実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、二本鎖オリゴヌクレオチドである。
【0049】
いくつかの実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、８～４０ヌクレオチド長である。
【0050】
いくつかの実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、８～４０ヌクレオチド長であり、８～４０ヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列を含む。
【0051】
いくつかの実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９又は４０ヌクレオチド長である。
【0052】
いくつかの実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、少なくとも１２ヌクレオチド長である。
【0053】
いくつかの実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、少なくとも１４ヌクレオチド長である。
【0054】
いくつかの実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、少なくとも１６ヌクレオチド長である。
【0055】
いくつかの実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、少なくとも１８ヌクレオチド長である。
【0056】
いくつかの実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、２１ヌクレオチド長である。
【0057】
二本鎖オリゴヌクレオチドを含む実施形態を議論する場合、長さ測定値は鎖の一方の長さを指すことが理解されよう。２本の鎖が同じ長さでなくてもよい実施形態では、長さは最長鎖の長さとみなされる。
【0058】
連続ヌクレオチド配列
「連続ヌクレオチド配列」という用語は、オリゴヌクレオチドモチーフ配列であり得るか、又はオリゴヌクレオチドモチーフ配列を含み得る標的核酸に相補的なオリゴヌクレオチドの領域を指す。この用語は、本明細書では「連続核酸塩基配列」という用語と互換的に使用される。
「連続ヌクレオチド配列」という用語は、オリゴヌクレオチドモチーフ配列であり得るか、又はオリゴヌクレオチドモチーフ配列を含み得る標的核酸に相補的なオリゴヌクレオチドの領域を指す。この用語は、本明細書では「連続核酸塩基配列」という用語と互換的に使用される。
【0059】
いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドは、連続ヌクレオチド配列を含み、更なるヌクレオチド、例えば、官能基（例えばコンジュゲート基）を連続ヌクレオチド配列に結合するために使用され得るヌクレオチドリンカー領域を任意に含んでもよい。ヌクレオチドリンカー領域は、標的核酸に相補的であってもよく、又は相補的でなくてもよい。
【0060】
オリゴヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列はそれ自体としてオリゴヌクレオチドより長くなることはできないこと、及びオリゴヌクレオチドは連続ヌクレオチド配列より短くなることはできないことが理解される。
【0061】
いくつかの実施形態においては、オリゴヌクレオチドの全てのヌクレオシドが連続ヌクレオチド配列を構成する。
【0062】
連続ヌクレオチド配列は、標的核酸、標的配列、又は標的部位配列に相補的であり、場合によっては完全に相補的である本発明のオリゴヌクレオチド中のヌクレオチドの配列である。
【0063】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、８～４０ヌクレオチド長である。
【0064】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９又は４０ヌクレオチド長である。
【0065】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、少なくとも１２ヌクレオチド長である。
【0066】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、少なくとも１４ヌクレオチド長である。
【0067】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、少なくとも１６ヌクレオチド長である。
【0068】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、少なくとも１８ヌクレオチド長である。
【0069】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、１９ヌクレオチド長である。
【0070】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、オリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストと同じ長さである。
【0071】
いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドは、連続ヌクレオチド配列からなる。
【0072】
いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドは、連続ヌクレオチド配列である。
【0073】
ヌクレオチド及びヌクレオシド
ヌクレオチド及びヌクレオシドは、オリゴヌクレオチド及びポリヌクレオチドの構成単位であり、本発明においては、天然に存在するヌクレオチド及びヌクレオシドと、天然に存在しないヌクレオチド及びヌクレオシドとの両方を含む。本来、ＤＮＡ及びＲＮＡヌクレオチドなどのヌクレオチドは、リボース糖部分、核酸塩基部分及び１つ又は複数のリン酸基（ヌクレオシドには存在しない）を含む。ヌクレオシド及びヌクレオチドはまた、「単位」又は「モノマー」と互換的に称され得る。
ヌクレオチド及びヌクレオシドは、オリゴヌクレオチド及びポリヌクレオチドの構成単位であり、本発明においては、天然に存在するヌクレオチド及びヌクレオシドと、天然に存在しないヌクレオチド及びヌクレオシドとの両方を含む。本来、ＤＮＡ及びＲＮＡヌクレオチドなどのヌクレオチドは、リボース糖部分、核酸塩基部分及び１つ又は複数のリン酸基（ヌクレオシドには存在しない）を含む。ヌクレオシド及びヌクレオチドはまた、「単位」又は「モノマー」と互換的に称され得る。
【0074】
修飾ヌクレオシド
好都合には、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、１つ又は複数の修飾ヌクレオシドを含み得る。
好都合には、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、１つ又は複数の修飾ヌクレオシドを含み得る。
【0075】
本明細書で使用される場合、「修飾ヌクレオシド」又は「ヌクレオシド修飾」という用語は、糖部分又は（核酸）塩基部分の１つ又は複数の修飾の導入によって、同等のＤＮＡ又はＲＮＡヌクレオシドと比較して修飾されたヌクレオシドを指す。
【0076】
好都合には、本発明のオリゴヌクレオチドの修飾ヌクレオシドの１つ又は複数は、修飾された糖部分を含み得る。修飾ヌクレオシドという用語はまた、本明細書においては、「ヌクレオシド類縁体」又は修飾「単位」又は修飾「モノマー」という用語と互換的に使用され得る。非修飾ＤＮＡ又はＲＮＡ糖部分を有するヌクレオシドは、本明細書ではＤＮＡ又はＲＮＡヌクレオシドと称される。ＤＮＡ又はＲＮＡヌクレオシドの塩基領域に修飾を有するヌクレオシドは、それらがワトソン・クリック塩基対合可能な場合には、依然として一般的にＤＮＡ又はＲＮＡと称される。本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストにおいて使用され得る例示的な修飾ヌクレオシドとしては、ＬＮＡ、２’－Ｏ－ＭＯＥ、２’ｏＭｅ及びモルホリノヌクレオシド類縁体が挙げられる。
【0077】
修飾ヌクレオシド間結合
好都合には、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、１つ又は複数の修飾ヌクレオシド間結合を含む。
好都合には、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、１つ又は複数の修飾ヌクレオシド間結合を含む。
【0078】
「修飾ヌクレオシド間結合」という用語は、２つのヌクレオシドを互いに共有結合する、ホスホジエステル（ＰＯ）結合以外の結合として当業者に一般的に理解されるように定義される。本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、従って、１つ又は複数の修飾ヌクレオシド間結合、例えば、１つ又は複数のホスホロチオアートヌクレオシド間結合を含み得る。
【0079】
いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト又はその連続ヌクレオチド配列中のヌクレオシド間結合の少なくとも５０％がホスホロチオアートであり、オリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト又はその連続ヌクレオチド配列中のヌクレオシド間結合の例えば少なくとも６０％、例えば少なくとも７０％、例えば少なくとも７５％、例えば少なくとも８０％、例えば少なくとも９０％又はそれより多くが、ホスホロチオアートである。いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト又はその連続ヌクレオチド配列の全てのヌクレオシド間結合が、ホスホロチオアートである。
【0080】
さらなる実施形態において、オリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、少なくとも１つの修飾ヌクレオシド間結合を含む。連続ヌクレオチド配列内のヌクレオシド間結合の少なくとも７５％、例えば全てがホスホロチオアート又はボラノホスファートヌクレオシド間結合であれば有利である。
【0081】
好都合には、オリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストの連続ヌクレオチド配列のすべてのヌクレオシド間結合がホスホロチオアートであり得るか、又はオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストの全てのヌクレオシド間結合がホスホロチオアート結合であり得る。
【0082】
核酸塩基
核酸塩基という用語は、ヌクレオシド及びヌクレオチドに存在するプリン（例えばアデニン及びグアニン）及びピリミジン（例えばウラシル、チミン及びシトシン）部分を含み、これらは核酸ハイブリダイゼーションにおいて水素結合を形成する。本発明の文脈において、核酸塩基という用語は、天然に存在する核酸塩基とは異なり得るが、核酸ハイブリダイゼーションの際に機能的である修飾核酸塩基も包含する。この文脈において、「核酸塩基」とは、アデニン、グアニン、シトシン、チミジン、ウラシル、キサンチン及びヒポキサンチンなどの天然に存在する核酸塩基と、天然に存在しないバリアントとの両方を指す。このようなバリアントは、例えば、Ｈｉｒａｏ ｅｔ ａｌ．，２０１２，Ａｃｃｏｕｎｔｓ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，４５，２０５５－２０６５及びＢｅｒｇｓｔｒｏｍ，２００９，Ｃｕｒｒ．Ｐｒｏｔｏｃ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｃｈｅｍ．，３７，１．４．１－１．４．３２に記載されている。
核酸塩基という用語は、ヌクレオシド及びヌクレオチドに存在するプリン（例えばアデニン及びグアニン）及びピリミジン（例えばウラシル、チミン及びシトシン）部分を含み、これらは核酸ハイブリダイゼーションにおいて水素結合を形成する。本発明の文脈において、核酸塩基という用語は、天然に存在する核酸塩基とは異なり得るが、核酸ハイブリダイゼーションの際に機能的である修飾核酸塩基も包含する。この文脈において、「核酸塩基」とは、アデニン、グアニン、シトシン、チミジン、ウラシル、キサンチン及びヒポキサンチンなどの天然に存在する核酸塩基と、天然に存在しないバリアントとの両方を指す。このようなバリアントは、例えば、Ｈｉｒａｏ ｅｔ ａｌ．，２０１２，Ａｃｃｏｕｎｔｓ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，４５，２０５５－２０６５及びＢｅｒｇｓｔｒｏｍ，２００９，Ｃｕｒｒ．Ｐｒｏｔｏｃ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｃｈｅｍ．，３７，１．４．１－１．４．３２に記載されている。
【0083】
いくつかの実施形態において、核酸塩基部分は、プリン又はピリミジンを修飾されたプリン又はピリミジン、例えば、置換されたプリン又は置換されたピリミジン、例えば、イソシトシン、シュードイソシトシン、５－メチルシトシン、５－チオゾロ－シトシン、５－プロピニル－シトシン、５－プロピニル－ウラシル、５－ブロモウラシル５－チアゾロ－ウラシル、２－チオ－ウラシル、２’チオ－チミン、イノシン、ジアミノプリン、６－アミノプリン、２－アミノプリン、２，６－ジアミノプリン及び２－クロロ－６－アミノプリンから選択される核酸塩基に変えることにより修飾される。
【0084】
核酸塩基部分は、対応する各核酸塩基についての文字コード、例えば、Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｃ又はＵにより示されてもよく、各文字は、任意に等価な機能の修飾核酸塩基を含んでもよい。例えば、例示したオリゴヌクレオチドにおいて、核酸塩基部分は、Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｃ及び５－メチルシトシンから選択される。任意に、ＬＮＡギャップマーに対しては、５－メチルシトシンＬＮＡヌクレオシドが使用され得る。
【0085】
修飾オリゴヌクレオチド
本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、修飾オリゴヌクレオチドであり得る。
本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、修飾オリゴヌクレオチドであり得る。
【0086】
修飾オリゴヌクレオチドという用語は、１つ又は複数の糖修飾ヌクレオシド及び／又は修飾ヌクレオシド間結合を含むオリゴヌクレオチドを表す。「キメラオリゴヌクレオチド」という用語は、糖修飾ヌクレオシド及びＤＮＡヌクレオシドを含むオリゴヌクレオチドを記述するために文献で使用されている用語である。いくつかの実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストはキメラオリゴヌクレオチドであることが好都合であり得る。
【0087】
いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト又はその連続ヌクレオチド配列は、塩基対合において示された核酸塩基として機能する修飾核酸塩基を含んでもよく、例えば、メチルシトシンの代わりに５－メチルシトシンが使用され得る。イノシンは、ユニバーサル塩基として使用され得る。
【0088】
連続核酸塩基配列（モチーフ配列）は、例えばヌクレアーゼ耐性及び／又は標的核酸に対する結合親和性を増大させるために修飾され得ることが理解される。
【0089】
修飾ヌクレオシド（高親和性修飾ヌクレオシドなど）がオリゴヌクレオチド配列に組み込まれるパターンは、一般にオリゴヌクレオチド設計と称される。
【0090】
本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、修飾ヌクレオシド及びＤＮＡヌクレオシドを用いて設計される。好都合には、高親和性修飾ヌクレオシドが使用される。
【0091】
一実施形態において、オリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、少なくとも１個の修飾ヌクレオシド、例えば少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個又は少なくとも１９個の修飾ヌクレオシドを含む。
【0092】
適切な修飾は、「修飾ヌクレオシド」、「高親和性修飾ヌクレオシド」、「糖修飾」、「２’糖修飾」及び「ロックド核酸（ＬＮＡ）」という見出しの下で本明細書に記載されている。
【0093】
高親和性修飾ヌクレオシド
高親和性修飾ヌクレオシドは、オリゴヌクレオチド中に組み込まれた場合に、例えば、融解温度（Ｔｍ）によって測定された、その相補的標的に対するオリゴヌクレオチドの親和性を高める修飾ヌクレオシドである。本発明の高親和性修飾ヌクレオシドは、好ましくは、修飾ヌクレオシドあたり＋０．５～＋１２℃、より好ましくは＋１．５～＋１０℃、最も好ましくは＋３～＋８℃の融解温度の上昇をもたらす。数多くの高親和性修飾ヌクレオシドが当技術分野において公知であり、例えば、多くの２’置換ヌクレオシド及びロックド核酸（ＬＮＡ）が挙げられる（例えば、Ｆｒｅｉｅｒ＆Ａｌｔｍａｎｎ；Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．，１９９７，２５，４４２９－４４４３及びＵｈｌｍａｎｎ；Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，２０００，３（２），２９３－２１３を参照されたい）。
高親和性修飾ヌクレオシドは、オリゴヌクレオチド中に組み込まれた場合に、例えば、融解温度（Ｔｍ）によって測定された、その相補的標的に対するオリゴヌクレオチドの親和性を高める修飾ヌクレオシドである。本発明の高親和性修飾ヌクレオシドは、好ましくは、修飾ヌクレオシドあたり＋０．５～＋１２℃、より好ましくは＋１．５～＋１０℃、最も好ましくは＋３～＋８℃の融解温度の上昇をもたらす。数多くの高親和性修飾ヌクレオシドが当技術分野において公知であり、例えば、多くの２’置換ヌクレオシド及びロックド核酸（ＬＮＡ）が挙げられる（例えば、Ｆｒｅｉｅｒ＆Ａｌｔｍａｎｎ；Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．，１９９７，２５，４４２９－４４４３及びＵｈｌｍａｎｎ；Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，２０００，３（２），２９３－２１３を参照されたい）。
【0094】
糖修飾
本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、修飾された糖部分、すなわち、ＤＮＡ及びＲＮＡに見られるリボース糖部分と比較した場合に糖部分の修飾を有する１つ又は複数のヌクレオシドを含み得る。
本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、修飾された糖部分、すなわち、ＤＮＡ及びＲＮＡに見られるリボース糖部分と比較した場合に糖部分の修飾を有する１つ又は複数のヌクレオシドを含み得る。
【0095】
リボース糖部分の修飾を有する数多くのヌクレオシドが、親和性及び／又はヌクレアーゼ耐性などのオリゴヌクレオチドのある特定の性質を改善することを主な目的として作製されてきた。
【0096】
そのような修飾には、例えば、ヘキソース環（ＨＮＡ）、又は典型的には、リボース環上のＣ２とＣ４炭素の間にバイラジカル（ｂｉｒａｄｉｃｌｅ）架橋を有する（ＬＮＡ）二環式環、又は典型的にはＣ２とＣ３炭素の間の結合を欠く非結合リボース環（例えば、ＵＮＡ）で置き換えることにより、リボース環構造が修飾されているものが含まれる。他の糖修飾ヌクレオシドには、例えば、ビシクロヘキソース核酸（国際公開第２０１１／０１７５２１号）又は三環式核酸（国際公開第２０１３／１５４７９８号）が含まれる。修飾ヌクレオシドにはまた、例えばペプチド核酸（ＰＮＡ）又はモルホリノ核酸の場合に、糖部分が非糖部分で置き換えられているヌクレオシドが含まれる。
【0097】
糖修飾にはまた、リボース環上の置換基を水素以外の基に変更するか、又はＤＮＡ及びＲＮＡヌクレオシド中に天然に存在する２’－ＯＨ基を変更することによってなされる修飾も含まれる。置換基は、例えば２’、３’、４’、又は５’位に導入され得る。
【0098】
２’糖修飾ヌクレオシド
２’糖修飾ヌクレオシドは、２’位にＨ若しくは－ＯＨ以外の置換基を有するヌクレオシド（２’置換ヌクレオシド）、又はＬＮＡ（２’－４’バイラジカル（ｂｉｒａｄｉｃｌｅ）架橋された）ヌクレオシドなどの、リボース環の２’炭素と第２の炭素との間に架橋を形成することができる２’結合バイラジカル（ｂｉｒａｄｉｃｌｅ）を含むヌクレオシドである。
２’糖修飾ヌクレオシドは、２’位にＨ若しくは－ＯＨ以外の置換基を有するヌクレオシド（２’置換ヌクレオシド）、又はＬＮＡ（２’－４’バイラジカル（ｂｉｒａｄｉｃｌｅ）架橋された）ヌクレオシドなどの、リボース環の２’炭素と第２の炭素との間に架橋を形成することができる２’結合バイラジカル（ｂｉｒａｄｉｃｌｅ）を含むヌクレオシドである。
【0099】
実際、２’糖置換ヌクレオシドの開発には多くの注目が集まっており、数多くの２’置換ヌクレオシドが、オリゴヌクレオチドに組み込まれた際に有益な特性を有することが見出されている。例えば、２’修飾された糖は、結合親和性の向上及び／又はヌクレアーゼ耐性の増大をオリゴヌクレオチドに付与し得る。２’置換修飾ヌクレオシドの例は、２’－Ｏ－アルキル－ＲＮＡ、２’－Ｏ－メチル－ＲＮＡ（２’ｏＭｅ）、２’－アルコキシ－ＲＮＡ、２’－Ｏ－メトキシエチル－ＲＮＡ（ＭＯＥ）、２’－アミノ－ＤＮＡ、２’－フルオロ－ＲＮＡ及び２’－Ｆ－ＡＮＡヌクレオシドである。さらなる例については、例えば、Ｆｒｅｉｅｒ＆Ａｌｔｍａｎｎ；Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．，１９９７，２５，４４２９－４４４３及びＵｈｌｍａｎｎ；Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ２０００，３（２），２９３－２１３及びＤｅｌｅａｖｅｙ ａｎｄ Ｄａｍｈａ，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２０１２，１９，９３７を参照されたい。以下は、いくつかの２’置換修飾ヌクレオシドの例示である。
【化1】
【0100】
本発明に関して、２’置換糖修飾ヌクレオシドは、ＬＮＡのような２’架橋ヌクレオシドを含まない。
【0101】
一実施形態において、オリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、１つ又は複数の糖修飾ヌクレオシド、例えば２’糖修飾ヌクレオシドを含む。好ましくは、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、２’－Ｏ－アルキル－ＲＮＡ、２’－Ｏ－メチル－ＲＮＡ（２’ｏＭｅ）、２’－アルコキシ－ＲＮＡ、２’－Ｏ－メトキシエチル－ＲＮＡ（２’ＭＯＥ）、２’－アミノ－ＤＮＡ、２’－フルオロ－ＤＮＡ、アラビノ核酸（ＡＮＡ）、２’－フルオロ－ＡＮＡ及びＬＮＡヌクレオシドからなる群から独立して選択される１つ又は複数の２’糖修飾ヌクレオシドを含む。修飾ヌクレオシドの１つ又は複数がロックド核酸（ＬＮＡ）であれば、有利である。
【0102】
ロックド核酸ヌクレオシド（ＬＮＡヌクレオシド）
「ＬＮＡヌクレオシド」は、リボース環の立体構造を制限又は固定する、前記ヌクレオシドのリボース糖環のＣ２’とＣ４’とを結合するバイラジカル（「２’－４’架橋」とも称される）を含む２’修飾ヌクレオシドである。これらのヌクレオシドはまた、文献において、架橋核酸又は二環式核酸（ＢＮＡ）とも称されている。リボースの立体構造の固定は、ＬＮＡが相補的ＲＮＡ又はＤＮＡ分子に対するオリゴヌクレオチド中に組み込まれている場合の、ハイブリダイゼーションの親和性の向上（二重鎖の安定化）に関連している。これは、オリゴヌクレオチド／相補二重鎖の融解温度を測定することによって、日常的に決定され得る。
「ＬＮＡヌクレオシド」は、リボース環の立体構造を制限又は固定する、前記ヌクレオシドのリボース糖環のＣ２’とＣ４’とを結合するバイラジカル（「２’－４’架橋」とも称される）を含む２’修飾ヌクレオシドである。これらのヌクレオシドはまた、文献において、架橋核酸又は二環式核酸（ＢＮＡ）とも称されている。リボースの立体構造の固定は、ＬＮＡが相補的ＲＮＡ又はＤＮＡ分子に対するオリゴヌクレオチド中に組み込まれている場合の、ハイブリダイゼーションの親和性の向上（二重鎖の安定化）に関連している。これは、オリゴヌクレオチド／相補二重鎖の融解温度を測定することによって、日常的に決定され得る。
【0103】
非限定的な、例示的なＬＮＡヌクレオシドは、国際公開第９９／０１４２２６号、国際公開第００／６６６０４号、国際公開第９８／０３９３５２号、国際公開第２００４／０４６１６０号、国際公開第００／０４７５９９号、国際公開第２００７／１３４１８１号、国際公開第２０１０／０７７５７８号、国際公開第２０１０／０３６６９８号、国際公開第２００７／０９００７１号、国際公開第２００９／００６４７８号、国際公開第２０１１／１５６２０２号、国際公開第２００８／１５４４０１号、国際公開第２００９／０６７６４７号、国際公開第２００８／１５０７２９号、Ｍｏｒｉｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１２，７３－７６、Ｓｅｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２０１０，Ｖｏｌ ７５（５）ｐｐ．１５６９－８１、Ｍｉｔｓｕｏｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２００９，３７（４），１２２５－１２３８、及びＷａｎ ａｎｄ Ｓｅｔｈ，Ｊ．Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１６，５９，９６４５－９６６７に開示されている。
【0104】
さらなる非限定的な例示的ＬＮＡヌクレオシドを、スキーム１に開示する。
スキーム１：
スキーム１：
【化2】
【0105】
特定のＬＮＡヌクレオシドは、ベータ－Ｄ－オキシ－ＬＮＡ、６’－メチル－ベータ－Ｄ－オキシＬＮＡ、例えば（Ｓ）－６’－メチル－ベータ－Ｄ－オキシ－ＬＮＡ（ＳｃＥＴ）及びＥＮＡである。
【0106】
特に有利なＬＮＡは、ベータ－Ｄ－オキシ－ＬＮＡである。
【0107】
モルホリノオリゴヌクレオチド
いくつかの実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、モルホリノヌクレオシドを含むか、又はモルホリノヌクレオシドからなる（すなわち、モルホリノオリゴマーであり、ホスホロジアミダートモルホリノオリゴマー（ＰＭＯ）として）。スプライス調節モルホリノオリゴヌクレオチドは、臨床使用が承認されており、例えば、デュシェンヌ型筋ジストロフィーを処置するために使用される、ＤＭＤ中のフレームシフト変異を標的とする３０ｎｔモルホリノオリゴヌクレオチドである、エテプリルセンを参照のこと。モルホリノオリゴヌクレオチドは、例えば、４つの連続するモルホリノヌクレオチドの以下の図解に示されるように、ホスホロジアミダート基を介して連結されたメチレンモルホリン環など、リボースではなく６員のモルホリン環に結合したヌクレアーゼ（ｎｕｃｌｅａｓｅｓ）を有する。
いくつかの実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、モルホリノヌクレオシドを含むか、又はモルホリノヌクレオシドからなる（すなわち、モルホリノオリゴマーであり、ホスホロジアミダートモルホリノオリゴマー（ＰＭＯ）として）。スプライス調節モルホリノオリゴヌクレオチドは、臨床使用が承認されており、例えば、デュシェンヌ型筋ジストロフィーを処置するために使用される、ＤＭＤ中のフレームシフト変異を標的とする３０ｎｔモルホリノオリゴヌクレオチドである、エテプリルセンを参照のこと。モルホリノオリゴヌクレオチドは、例えば、４つの連続するモルホリノヌクレオチドの以下の図解に示されるように、ホスホロジアミダート基を介して連結されたメチレンモルホリン環など、リボースではなく６員のモルホリン環に結合したヌクレアーゼ（ｎｕｃｌｅａｓｅｓ）を有する。
【化3】
【0108】
いくつかの実施形態において、本発明のモルホリノオリゴヌクレオチドは、例えば、８～４０モルホリノヌクレオチド長、例えば、モルホリノ１８～２２ヌクレオチド長であり得る。
【0109】
ＲＮａｓｅＨの活性及び動員
オリゴヌクレオチドのＲＮａｓｅＨ活性とは、相補的ＲＮＡ分子との二重鎖にあるときにＲＮａｓｅＨを動員する能力を指す。国際公開第０１／２３６１３号は、ＲＮａｓｅＨを動員する能力を決定するために使用され得る、ＲＮａｓｅＨ活性を決定するためのインビトロ方法を提供する。典型的には、オリゴヌクレオチドが、相補的標的核酸配列が提供された場合に、試験されている修飾オリゴヌクレオチドと同じ塩基配列を有するが、オリゴヌクレオチド中の全てのモノマー間にホスホロチオアート結合を有するＤＮＡモノマーのみを含有するオリゴヌクレオチドを使用し、国際公開第０１／２３６１３号（参照により本明細書に組み込まれる）の実施例９１～９５により提供される方法論を使用したときに決定された初期速度の少なくとも５％、例えば、少なくとも１０％、少なくとも２０％又は２０％超のｐｍｏｌ／ｌ／分で測定された初期速度を有する場合に、このオリゴヌクレオチドはＲＮａｓｅＨを動員することができるとみなされる。ＲＨａｓｅＨ活性を決定する上での使用のために、組換えＲＮａｓｅＨ１が、Ｌｕｂｉｏ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＧｍｂＨ、Ｌｕｃｅｒｎｅ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄから入手可能である。
オリゴヌクレオチドのＲＮａｓｅＨ活性とは、相補的ＲＮＡ分子との二重鎖にあるときにＲＮａｓｅＨを動員する能力を指す。国際公開第０１／２３６１３号は、ＲＮａｓｅＨを動員する能力を決定するために使用され得る、ＲＮａｓｅＨ活性を決定するためのインビトロ方法を提供する。典型的には、オリゴヌクレオチドが、相補的標的核酸配列が提供された場合に、試験されている修飾オリゴヌクレオチドと同じ塩基配列を有するが、オリゴヌクレオチド中の全てのモノマー間にホスホロチオアート結合を有するＤＮＡモノマーのみを含有するオリゴヌクレオチドを使用し、国際公開第０１／２３６１３号（参照により本明細書に組み込まれる）の実施例９１～９５により提供される方法論を使用したときに決定された初期速度の少なくとも５％、例えば、少なくとも１０％、少なくとも２０％又は２０％超のｐｍｏｌ／ｌ／分で測定された初期速度を有する場合に、このオリゴヌクレオチドはＲＮａｓｅＨを動員することができるとみなされる。ＲＨａｓｅＨ活性を決定する上での使用のために、組換えＲＮａｓｅＨ１が、Ｌｕｂｉｏ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＧｍｂＨ、Ｌｕｃｅｒｎｅ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄから入手可能である。
【0110】
ＤＮＡオリゴヌクレオチドは、２’糖修飾ヌクレオシド、典型的には高親和性２’糖修飾ヌクレオシド、例えば２－Ｏ－ＭＯＥ及び／又はＬＮＡを含む領域が５’及び３’に隣接するＤＮＡヌクレオシド（典型的には少なくとも５又は６個の連続するＤＮＡヌクレオシド）の領域を含むギャップマーオリゴヌクレオチドのように、ＲＮａｓｅＨを効果的に動員することが公知である。スプライシングの効果的な調節のために、プレｍＲＮＡの分解は望ましくなく、したがって、標的のＲＮａｓｅＨ分解を回避することが好ましい。したがって、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、ＲＮａｓｅＨを動員するギャップマーオリゴヌクレオチドではない。
【0111】
ＲＮａｓｅＨ動員は、オリゴヌクレオチド中の連続ＤＮＡヌクレオチドの数を制限することによって回避され得るので、ミックスマー及びトータルマー設計が使用され得る。好都合には、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト又はその連続ヌクレオチド配列は、３個を超える連続ＤＮＡヌクレオシドを含まない。さらに好都合には、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト又はその連続ヌクレオチド配列は、４個を超える連続ＤＮＡヌクレオシドを含まない。さらに好都合には、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト又はその連続ヌクレオチド配列は、２個を超える連続ＤＮＡヌクレオシドを含まない。
【0112】
ミックスマー及びトータルマー
スプライス調節のために、ＲＮＡａｓｅＨを動員しないオリゴヌクレオチドを使用することがしばしば有利である。ＲＮａｓｅＨ活性はＤＮＡヌクレオチドの連続配列を必要とするので、オリゴヌクレオチドのＲＮａｓｅＨ活性は、３個を超えるか、又は４個を超える連続ＤＮＡヌクレオシドの領域を含まないオリゴヌクレオチドを設計することによって達成され得る。これは、２’糖修飾ヌクレオシドなどの糖修飾ヌクレオシドと、１、２若しくは３個のＤＮＡヌクレオシドなどのＤＮＡヌクレオシドの短い領域とを含むオリゴヌクレオチド又はその連続ヌクレオシド領域をミックスマー設計で使用することによって達成され得る。ミックスマー（ｍｉｘｍｅｒ）は、本明細書において、５’及び３’末端ＬＮＡヌクレオシドを有し、ヌクレオシドが１つのＬＮＡヌクレオシドと１つのＤＮＡヌクレオシドとを交互に繰り返す２つおきの設計、例えばＬＤＬＤＬＤＬＤＬＤＬＤＬＤＬＬ、並びにヌクレオシドが３つおきにＬＮＡヌクレオシドであるＬＤＤＬＤＤＬＤＤＬＤＤＬＤＤＬなどの３つおきの設計によって例示される。
スプライス調節のために、ＲＮＡａｓｅＨを動員しないオリゴヌクレオチドを使用することがしばしば有利である。ＲＮａｓｅＨ活性はＤＮＡヌクレオチドの連続配列を必要とするので、オリゴヌクレオチドのＲＮａｓｅＨ活性は、３個を超えるか、又は４個を超える連続ＤＮＡヌクレオシドの領域を含まないオリゴヌクレオチドを設計することによって達成され得る。これは、２’糖修飾ヌクレオシドなどの糖修飾ヌクレオシドと、１、２若しくは３個のＤＮＡヌクレオシドなどのＤＮＡヌクレオシドの短い領域とを含むオリゴヌクレオチド又はその連続ヌクレオシド領域をミックスマー設計で使用することによって達成され得る。ミックスマー（ｍｉｘｍｅｒ）は、本明細書において、５’及び３’末端ＬＮＡヌクレオシドを有し、ヌクレオシドが１つのＬＮＡヌクレオシドと１つのＤＮＡヌクレオシドとを交互に繰り返す２つおきの設計、例えばＬＤＬＤＬＤＬＤＬＤＬＤＬＤＬＬ、並びにヌクレオシドが３つおきにＬＮＡヌクレオシドであるＬＤＤＬＤＤＬＤＤＬＤＤＬＤＤＬなどの３つおきの設計によって例示される。
【0113】
トータルマー（ｔｏｔａｌｍｅｒ）は、ＤＮＡ又はＲＮＡヌクレオシドを含まないオリゴヌクレオチド又はその連続ヌクレオチド配列であり、例えば、完全ＭＯＥホスホロチオアート、例えばＭＭＭＭＭＭＭＭＭＭＭＭＭＭＭＭＭＭＭＭのように、２’－Ｏ－ＭＯＥヌクレオシドのみを含んでもよく、ここで、Ｍ＝２’－Ｏ－ＭＯＥであり、又は、例えば、治療的使用のための効果的なスプライスモジュレーターであると報告されている２’ｏＭｅヌクレオシドのみを含んでもよい。
【0114】
あるいは、ミックスマーは、ＭＬＭＬＭＬＭＬＭＬＭＬＭＬＭＬＭＬＭＬなどの修飾ヌクレオシドの混合物を含んでもよく、Ｌ＝ＬＮＡ及びＭ＝２’－Ｏ－ＭＯＥヌクレオシドである。
【0115】
好都合には、ミックスマー及びトータルマー中のヌクレオシド間ヌクレオシドはホスホロチオアートであってもよく、又はミックスマー中のヌクレオシド結合の大部分はホスホロチオアートであってもよい。ミックスマー及びトータルマーは、例として、ホスホジエステル又はホスホロジチオアートなどの他のヌクレオシド間結合を含み得る。
【0116】
いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、オリゴヌクレオチドミックスマー若しくはトータルマーであるか、又はオリゴヌクレオチドミックスマー若しくはトータルマーを含む。いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、ミックスマー又はトータルマーである。
【0117】
標的配列
本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、ヒトＧＢＡゲノム配列のプロモーターの１つ又は複数を標的とする。これは、本明細書ではＧＢＡ遺伝子とも称され得る。
本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、ヒトＧＢＡゲノム配列のプロモーターの１つ又は複数を標的とする。これは、本明細書ではＧＢＡ遺伝子とも称され得る。
【0118】
ＧＮＡゲノム配列は、標的配列と称され得る。
【0119】
標的配列は、標的核酸又は標的部位配列とも称され得る。
【0120】
特にＧＢＡゲノム配列に関して本明細書で使用される「ゲノム配列」という用語は、タンパク質コード配列と非タンパク質コード配列の両方を包含する。そのような配列には、転写配列及び非転写配列、並びに翻訳配列及び非翻訳配列が含まれることが理解される。非タンパク質コード配列は、エンハンサー、サイレンサー、プロモーター、並びに／又は３’及び５’非翻訳領域（ＵＴＲ）などの調節配列を含み得る。
【0121】
本明細書で使用される「ＧＢＡ核酸配列」という用語はまた、本明細書で概説される定義の意味におけるＧＢＡ遺伝子の核酸配列を指し得る。ＧＢＡ遺伝子の標的核酸配列は、ゲノムＤＮＡ内に存在する配列、又はｍＲＮＡなどの任意の他の形態で細胞内に存在する同じ若しくはアンチセンス配列、又はｍｉＲＮＡ若しくはｓｉＲＮＡなどの他の一本鎖若しくは二本鎖ＲＮＡを指し得る。
【0122】
本明細書で使用される遺伝子及びそれらの対応するヌクレオチド配列への言及は、そのセンス鎖又はアンチセンス鎖のいずれか１つに必ずしも限定されることを意図するものではない。したがって、センス配列及びアンチセンス配列の両方又は一方が包含され得る。
【0123】
いくつかの実施形態において、ヒトＧＢＡ遺伝子は、ＮＣＢＩ参照ＮＧ＿００９７８３．１の配列を有する。
【0124】
いくつかの実施形態において、ヒトＧＢＡ遺伝子は、配列番号２２６によって定義される配列を含む。配列番号２２６は参照配列として本明細書に提供され、標的核酸は、配列番号２２６の対立遺伝子バリアント、例えばヒトＧＢＡゲノム配列中に１つ又は複数の多型を含む対立遺伝子バリアントであり得ることが理解されよう。
【0125】
いくつかの実施形態において、ヒトＧＢＡゲノム配列は、配列番号２２６からなる。
【0126】
本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、ＧＢＡゲノム配列の１つ又は複数のプロモーター領域を標的とする。
【0127】
いくつかの実施形態において、ヒトＧＢＡ遺伝子のプロモーターは、ＦＡＭ１８９ＢからＧＢＡ翻訳開始コドンまでの遺伝子間領域（配列番号２２５）を含む。配列番号２２５は参照配列として本明細書に提供され、標的核酸は、配列番号２２５の対立遺伝子バリアント、例えばヒトＧＢＡゲノム配列中に１つ又は複数の多型を含む対立遺伝子バリアントであり得ることが理解されよう。
【0128】
いくつかの実施形態において、ヒトＧＢＡ遺伝子のプロモーターは、配列番号２２５を含むか、又は配列番号２２５からなる。
【0129】
配列番号２２５は、以下で論じられるように、プロモーター１（配列番号２２４）及び２（配列番号２２３）を包含する。
【0130】
いくつかの実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、ＧＢＡ遺伝子のエクソン１のすぐ上流に位置するプロモーター（プロモーター１、Ｐ１）を標的とする。例えば、ヒトＧＢＡ遺伝子のエクソン１中のＡＴＧ開始コドンの１，１３７と１の間のヌクレオチド上流に。
【0131】
いくつかの実施形態において、ＡＴＧ開始コドンは、ＮＣＢＩ参照配列ＮＧ＿００９７８３．１及び／又は配列番号２２６の位置８５８６～８５８８に対応する。
【0132】
いくつかの実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、ＮＣＢＩ参照配列ＮＧ＿００９７８３．１の位置７４４９～８５８５内のヒトＧＢＡ遺伝子のプロモーター（配列番号２２４）を標的とする。言い換えると、いくつかの実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、配列番号２２６の位置７４４９～８５８５内のヒトＧＢＡ遺伝子のプロモーター（配列番号２２４）を標的とする。
【0133】
いくつかの実施形態において、ヒトＧＢＡ遺伝子のプロモーターは配列番号２２４を含む。
【0134】
いくつかの実施形態において、ヒトＧＢＡ遺伝子のプロモーターは配列番号２２４からなる。
【0135】
いくつかの実施形態において、標的配列は配列番号２２４内のヌクレオチドの配列である。
【0136】
配列番号２２４は参照配列として本明細書に提供され、標的核酸は、配列番号２２４の対立遺伝子バリアント、例えばヒトＧＢＡゲノム配列中に１つ又は複数の多型を含む対立遺伝子バリアントであり得ることが理解されよう。
【0137】
いくつかの実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストの連続ヌクレオチド配列は、配列番号２２４のヌクレオチド３５～５５、３６～５６、３９～５９、４６～６６、６８～８８、１０６～１２６、１４８～１６８、１５２～１７２、１５３～１７３、３０２～３２２、３１３～３３３、３１４～３３４、３７１～３９１、３７２～３９２、４７５～４９５、５１７～５３７、５３２～５５２、５９８～６１８、６５６～６７６、６５７～６７７、７４６～７６６、７４７～７６７、７４８～７６８、７４９～７６９、７５０～７７０、７５３～７７３、８１５～８３５、８１６～８３６、８３９～８５９、８４０～８６０、８８４～９０４、８９１～９１１、９０４～９２４、９２２～９４２、９２３～９４３、９９６～１０１６、１００３～１０２３、１０１９～１０３９、１０３７～１０５７及び１０９８～１１１８からなる群から選択される配列に相補的である。
【0138】
特に明記しない限り、全ての範囲は開始値及び終了値を含み、例えば、位置４１３７～４１５７に対応する標的配列は２１個のヌクレオチドを含む。
【0139】
いくつかの実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストの連続ヌクレオチド配列は、配列番号２２４のヌクレオチド３９～５９、１４８～１６８、１５３～１７３、３０２～３２２、３１３～３３３、５１７～５３７、５３２～５５２、６５６～６７６、７４８～７６８、７５０～７７０、８１５～８３５、８４０～８６０、９０４～９２４及び９９６～１０１６からなる群から選択される配列に相補的である。
【0140】
いくつかの実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストの連続ヌクレオチド配列は、配列番号２２４のヌクレオチド７４８～７６８、７５０～７７０、８１５～８３５、９０４～９２４及び９９６～１０１６からなる群から選択される配列に相補的である。
【0141】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９及び配列番号４０からなる群から選択される配列又はその断片に相補的である。
【0142】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号３、配列番号７、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号３０、配列番号３３及び配列番号３６からなる群から選択される配列又はそれらの断片に相補的である。
【0143】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号３３及び配列番号３６からなる群から選択される配列、又はそれらの断片に相補的である。
【0144】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号３又はその断片に相補的である。
【0145】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号７又はその断片に相補的である。
【0146】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号９又はその断片に相補的である。
【0147】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号１０又はその断片に相補的である。
【0148】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号１１又はその断片に相補的である。
【0149】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号１６又はその断片に相補的である。
【0150】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号１７又はその断片に相補的である。
【0151】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号１９又はその断片に相補的である。
【0152】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号２３又はその断片に相補的である。
【0153】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号２５又はその断片に相補的である。
【0154】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号２７又はその断片に相補的である。
【0155】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号３０又はその断片に相補的である。
【0156】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号３３又はその断片に相補的である。
【0157】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号３６又はその断片に相補的である。
【0158】
いくつかの実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、ＧＢＡ遺伝子のエクソン－２のすぐ上流に位置するプロモーター（プロモーター２、Ｐ２）を標的とする。例えば、ヒトＧＢＡ遺伝子のエクソン１中のＡＴＧ開始コドンの４，５５８と３，３９４の間のヌクレオチド上流に。
【0159】
いくつかの実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、ＮＣＢＩ参照配列ＮＧ＿００９７８３．１の位置４０２８～５１９２内のヒトＧＢＡ遺伝子のプロモーター（配列番号２２３）を標的とする。言い換えると、いくつかの実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、配列番号２２６の位置４０２８～５１９２内のヒトＧＢＡ遺伝子のプロモーター（配列番号２２３）を標的とする。
【0160】
いくつかの実施形態において、ヒトＧＢＡ遺伝子のプロモーターは配列番号２２３を含む。
【0161】
いくつかの実施形態において、ヒトＧＢＡ遺伝子のプロモーターは配列番号２２３からなる。
【0162】
いくつかの実施形態において、標的配列は配列番号２２３内のヌクレオチドの配列である。
【0163】
配列番号２２３は参照配列として本明細書に提供され、標的核酸は、配列番号２２３の対立遺伝子バリアント、例えばヒトＧＢＡゲノム配列中に１つ又は複数の多型を含む対立遺伝子バリアントであり得ることが理解されよう。
【0164】
いくつかの実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストの連続ヌクレオチド配列は、配列番号２２３のヌクレオチド１３～３３、３４～５４、３８～５８、１２１～１４１、１５９～１７９、１６０～１８０、１７３～１９３、１９９～２１９、２００～２２０、３１３～３３３、３１９～３３９、３３５～３５５、３３６～３５６、３５９～３７９、３９１～４１１、４２２～４４２、４２３～４４３、４５４～４７４、４６９～４８９、５３５～５５５、５４８～５６８、５５１～５７１、５８９～６０９、５９０～６１０、６５４～６７４、６６９～６８９、６７０～６９０、６７６～６９６、６８５～７０５、７４４～７６４、７６１～７８１、７６２～７８２、９１３～９３３及び９２２～９４２からなる群から選択される配列に相補的である。
【0165】
いくつかの実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストの連続ヌクレオチド配列は、配列番号２２３のヌクレオチド１２１～１４１、１６０～１８０、１７３～１９３、１９９～２１９、２００～２２０、３３５～３５５、３３６～３５６、３５９～３７９、３９１～４１１、４２３～４４３、４６９～４８９、５３５～５５５、５４８～５６８、５５１～５７１、５８９～６０９及び６７０～６９０からなる群から選択される配列に相補的である。
【0166】
いくつかの実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストの連続ヌクレオチド配列は、配列番号２２３のヌクレオチド１２１～１４１、１６０～１８０、１９９～２１９、２００～２２０、３３５～３５５、３３６～３５６、３５９～３７９、４２３～４４３、４６９～４８９、５４８～５６８、５５１～５７１及び６７０～６９０からなる群から選択される配列に相補的である。
【0167】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３及び配列番号７４からなる群から選択される配列、又はそれらの断片に相補的である。
【0168】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号４４、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５７、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３及び配列番号６７からなる群から選択される配列、又はそれらの断片に相補的である。
【0169】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号４４、配列番号４６、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５７、配列番号５９、配列番号６１、配列番号６２及び配列番号６７からなる群から選択される配列、又はそれらの断片に相補的である。
【0170】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号４４又はその断片に相補的である。
【0171】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号４６又はその断片に相補的である。
【0172】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号４７又はその断片に相補的である。
【0173】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号４８又はその断片に相補的である。
【0174】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号４９又はその断片に相補的である。
【0175】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号５２又はその断片に相補的である。
【0176】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号５３又はその断片に相補的である。
【0177】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号５４又はその断片に相補的である。
【0178】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号５５又はその断片に相補的である。
【0179】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号５７又はその断片に相補的である。
【0180】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号５９又はその断片に相補的である。
【0181】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号６０又はその断片に相補的である。
【0182】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号６１又はその断片に相補的である。
【0183】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号６２又はその断片に相補的である。
【0184】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号６３又はその断片に相補的である。
【0185】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、配列番号６７又はその断片に相補的である。
【0186】
標的配列の断片は、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０ヌクレオチド長であり得る。
【0187】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、本明細書に列挙される標的配列のいずれかの少なくとも８個の連続ヌクレオチドに相補的である。
【0188】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、本明細書に列挙される標的配列のいずれかの少なくとも１０個の連続ヌクレオチドに相補的である。
【0189】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、本明細書に列挙される標的配列のいずれかの少なくとも１２個の連続ヌクレオチドに相補的である。
【0190】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、本明細書に列挙される標的配列のいずれかの少なくとも１４個の連続ヌクレオチドに相補的である。
【0191】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、本明細書に列挙される標的配列のいずれかの少なくとも１６個の連続ヌクレオチドに相補的である。
【0192】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、本明細書に列挙される標的配列のいずれかの少なくとも１８個の連続ヌクレオチドに相補的である。
【0193】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、本明細書に列挙される標的配列のいずれかの少なくとも１９個の連続ヌクレオチドに相補的である。
【0194】
相補性
「相補性」という用語は、ヌクレオシド／ヌクレオチドのワトソン・クリック塩基対合能力を記述する。ワトソン・クリック塩基対は、グアニン（Ｇ）－シトシン（Ｃ）及びアデニン（Ａ）－チミン（Ｔ）／ウラシル（Ｕ）である。
「相補性」という用語は、ヌクレオシド／ヌクレオチドのワトソン・クリック塩基対合能力を記述する。ワトソン・クリック塩基対は、グアニン（Ｇ）－シトシン（Ｃ）及びアデニン（Ａ）－チミン（Ｔ）／ウラシル（Ｕ）である。
【0195】
オリゴヌクレオチドは修飾核酸塩基を有するヌクレオシドを含んでいてもよく、例えば５－メチルシトシンは、しばしばシトシンの代わりに用いられ、したがって、相補性という用語は、非修飾核酸塩基と修飾核酸塩基との間でのワトソン・クリック塩基対合を包含することが理解されよう（例えば、Ｈｉｒａｏ ｅｔ ａｌ．，２０１２，Ａｃｃｏｕｎｔｓ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，４５，２０５５及びＢｅｒｇｓｔｒｏｍ，２００９，Ｃｕｒｒ．Ｐｒｏｔｏｃ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｃｈｅｍ．，３７，１．４．１を参照されたい）。
【0196】
「％相補的」という用語は、本明細書で使用される場合、連続ヌクレオチド配列にわたって、参照配列（例えば、標的配列又は配列モチーフ）に相補的である、核酸分子（例えば、オリゴヌクレオチド）中の連続ヌクレオチド配列のヌクレオチドの（パーセントでの）割合を指す。したがって、相補性のパーセンテージは、（標的配列５’－３’と３’－５’からのオリゴヌクレオチド配列とを整列させた場合に）２つの配列間で相補的である（ワトソン・クリック塩基対から）整列された核酸塩基の数を数え、その数をオリゴヌクレオチド中のヌクレオチドの総数で割り、１００を掛けることによって計算される。このような比較において、整列（塩基対を形成）しない核酸塩基／ヌクレオチドは、ミスマッチと称される。挿入及び欠失は、連続ヌクレオチド配列の％相補性の計算において許容されない。相補性の決定において、核酸塩基の化学的修飾は、核酸塩基がワトソン・クリック塩基対合を形成する機能的能力を保持する限り、無視されることが理解されるであろう（例えば、５’－メチルシトシンは、％同一性を計算する目的では、シトシンと同一であるとみなされる）。
【0197】
本発明のある実施形態において、オリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、ｓａＲＮＡなどの二本鎖オリゴヌクレオチドである。これらの実施形態において、二本鎖オリゴヌクレオチドは、連続ヌクレオチド配列の３’末端にあり得る２ヌクレオチドオーバーハングなどのヌクレオチドオーバーハングを有し得る。そのような実施形態では、相補性は、オーバーハングのない二本鎖配列に基づいて定義される。例えば、オリゴヌクレオチドが２１ヌクレオチド長であり、２ヌクレオチドオーバーハングを含む場合、相補性は、２ヌクレオチドオーバーハングのない１９ヌクレオチドに基づいて決定される。
【0198】
本発明において、「相補的」という用語は、連続ヌクレオチド配列が、標的配列、すなわち、ヒトＧＢＡ遺伝子の１つ又は複数のプロモーターに対して少なくとも約７５％相補的、又は少なくとも約８０％相補的、又は少なくとも約８５％相補的、又は少なくとも約９０％相補的、又は少なくとも約９５％相補的であることを必要とする。いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、標的配列、すなわち、ヒトＧＢＡ遺伝子の１つ又は複数のプロモーターに対して少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％又は少なくとも約９９％相補的であり得る。言い換えると、いくつかの実施形態においては、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト内の連続ヌクレオチド配列は、１、２、３又はそれよりも多くのミスマッチを含んでもよく、ミスマッチは、その標的と塩基対合しない連続ヌクレオチド配列内のヌクレオチドである。
【0199】
「完全に相補的」という用語は、１００％の相補性を指す。
【0200】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、標的配列に完全に相補的である。
【0201】
同一性
本明細書で使用される場合、「同一性」という用語は、連続ヌクレオチド配列にわたって参照配列（例えば、配列モチーフ）と同一である、核酸分子（例えば、オリゴヌクレオチド）内の連続ヌクレオチド配列のヌクレオチドの割合（パーセントで表される）を指す。
本明細書で使用される場合、「同一性」という用語は、連続ヌクレオチド配列にわたって参照配列（例えば、配列モチーフ）と同一である、核酸分子（例えば、オリゴヌクレオチド）内の連続ヌクレオチド配列のヌクレオチドの割合（パーセントで表される）を指す。
【0202】
したがって、同一性のパーセンテージは、（本発明の化合物の連続ヌクレオチド配列中の及び参照配列中の）２つの配列の間で同一の（一致する）整列された核酸塩基の数を数え、その数をオリゴヌクレオチド中のヌクレオチドの総数で割り、１００を掛けることにより計算される。したがって、同一性のパーセンテージ＝（一致数×１００）／整列された領域（例えば、連続ヌクレオチド配列）の長さ。挿入及び欠失は、連続ヌクレオチド配列の同一性のパーセンテージの計算において許容されない。同一性の決定において、核酸塩基の化学的修飾は、核酸塩基がワトソン・クリック塩基対合を形成する機能的能力を保持する限り、無視されることが理解されるであろう（例えば、５’－メチルシトシンは、％同一性を計算する目的では、シトシンと同一であるとみなされる）。
【0203】
したがって、標的配列に相補的な本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト内の連続ヌクレオチド配列は、前記相補的配列と同一性のパーセンテージも共有するように、同一性と相補性との間には関係性が存在することを理解されたい。
【0204】
ハイブリダイゼーション
本明細書で用いられる「ハイブリダイズ」又は「ハイブリダイズする」という用語は、２つの核酸鎖（例えば、オリゴヌクレオチド及び標的核酸）が対向する鎖上の塩基対間に水素結合を形成することにより二重鎖を形成することと理解されるべきである。２つの核酸鎖の間の結合の親和性が、ハイブリダイゼーションの強度である。これは、しばしば、オリゴヌクレオチドの半分が標的核酸と二重鎖を形成する温度として定義される、融解温度（Ｔｍ）の観点で記述される。生理学的条件では、Ｔｍは、厳密には親和性に比例しない（Ｍｅｒｇｎｙ ａｎｄ Ｌａｃｒｏｉｘ，２００３，Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ １３：５１５－５３７）。標準状態ギブス自由エネルギーΔＧ°が、結合親和性をより正確に表し、ΔＧ°＝－ＲＴｌｎ（Ｋｄ）によって反応の解離定数（Ｋｄ）に関連付けられ、式中、Ｒは気体定数であり、Ｔは絶対温度である。したがって、オリゴヌクレオチドと標的核酸の間での反応の非常に低いΔＧ°は、オリゴヌクレオチドと標的核酸の間での強いハイブリダイゼーションを反映している。ΔＧ°は、水性濃度が１Ｍ、ｐＨが７、温度が３７℃である反応に伴うエネルギーである。標的核酸へのオリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーションは、自発的反応であり、自発的反応の場合のΔＧ°は、ゼロ未満である。ΔＧ°は、例えば、Ｈａｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９６５，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍ．３６－３８及びＨｏｌｄｇａｔｅ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｔｏｄａｙに記載されているような等温滴定熱量測定（ＩＴＣ）法の使用により、実験的に測定され得る。当業者は、ΔＧ°測定のために市販の装置が入手可能であることを知るであろう。ΔＧ°は、Ｓｕｇｉｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３４：１１２１１－１１２１６及びＭｃＴｉｇｕｅ ｅｔ ａｌ．，２００４，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ４３：５３８８－５４０５によって記載されている適切に得られた熱力学パラメータを使用して、ＳａｎｔａＬｕｃｉａ，１９９８，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．９５：１４６０－１４６５によって記載されている最近傍モデル（ｎｅａｒｅｓｔ ｎｅｉｇｈｂｏｒ ｍｏｄｅｌ）を用いることにより数値的に推定され得る。
本明細書で用いられる「ハイブリダイズ」又は「ハイブリダイズする」という用語は、２つの核酸鎖（例えば、オリゴヌクレオチド及び標的核酸）が対向する鎖上の塩基対間に水素結合を形成することにより二重鎖を形成することと理解されるべきである。２つの核酸鎖の間の結合の親和性が、ハイブリダイゼーションの強度である。これは、しばしば、オリゴヌクレオチドの半分が標的核酸と二重鎖を形成する温度として定義される、融解温度（Ｔｍ）の観点で記述される。生理学的条件では、Ｔｍは、厳密には親和性に比例しない（Ｍｅｒｇｎｙ ａｎｄ Ｌａｃｒｏｉｘ，２００３，Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ １３：５１５－５３７）。標準状態ギブス自由エネルギーΔＧ°が、結合親和性をより正確に表し、ΔＧ°＝－ＲＴｌｎ（Ｋｄ）によって反応の解離定数（Ｋｄ）に関連付けられ、式中、Ｒは気体定数であり、Ｔは絶対温度である。したがって、オリゴヌクレオチドと標的核酸の間での反応の非常に低いΔＧ°は、オリゴヌクレオチドと標的核酸の間での強いハイブリダイゼーションを反映している。ΔＧ°は、水性濃度が１Ｍ、ｐＨが７、温度が３７℃である反応に伴うエネルギーである。標的核酸へのオリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーションは、自発的反応であり、自発的反応の場合のΔＧ°は、ゼロ未満である。ΔＧ°は、例えば、Ｈａｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９６５，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍ．３６－３８及びＨｏｌｄｇａｔｅ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｔｏｄａｙに記載されているような等温滴定熱量測定（ＩＴＣ）法の使用により、実験的に測定され得る。当業者は、ΔＧ°測定のために市販の装置が入手可能であることを知るであろう。ΔＧ°は、Ｓｕｇｉｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３４：１１２１１－１１２１６及びＭｃＴｉｇｕｅ ｅｔ ａｌ．，２００４，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ４３：５３８８－５４０５によって記載されている適切に得られた熱力学パラメータを使用して、ＳａｎｔａＬｕｃｉａ，１９９８，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．９５：１４６０－１４６５によって記載されている最近傍モデル（ｎｅａｒｅｓｔ ｎｅｉｇｈｂｏｒ ｍｏｄｅｌ）を用いることにより数値的に推定され得る。
【0205】
いくつかの実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、１０～３０ヌクレオチド長であるオリゴヌクレオチドについて－１０ｋｃａｌ未満の推定ΔＧ°値で標的核酸にハイブリダイズする。
【0206】
いくつかの実施形態において、ハイブリダイゼーションの程度又は強度は、標準状態でのギブスの自由エネルギーΔＧ°により測定される。オリゴヌクレオチドは、８～３０ヌクレオチド長のオリゴヌクレオチドに対して－１０ｋｃａｌの範囲未満、例えば－１５ｋｃａｌ未満、例えば－２０ｋｃａｌ未満、及び例えば－２５ｋｃａｌ未満の推定ΔＧ°値で標的核酸にハイブリダイズし得る。いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドは、－１０～－６０ｋｃａｌ、例えば－１２～－４０、例えば－１５～－３０ｋｃａｌ、又は－１６～－２７ｋｃａｌ、例えば－１８～－２５ｋｃａｌの推定ΔＧ°値で、標的核酸にハイブリダイズする。
【0207】
二本鎖オリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト
いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、二本鎖オリゴヌクレオチドである。
いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、二本鎖オリゴヌクレオチドである。
【0208】
いくつかの実施形態において、二本鎖オリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、低分子活性化ＲＮＡ（ｓａＲＮＡ）である。
【0209】
本明細書で使用される「低分子活性化ＲＮＡ」（ｓａＲＮＡ）という用語は、典型的には２１ヌクレオチド長であり、任意に３’末端に、２ヌクレオチドオーバーハングを含み得る小さい二本鎖ＲＮＡを指す。ｓａＲＮＡは、ＲＮＡ活性化（ＲＮＡａ）として知られるプロセスによって遺伝子活性化を誘導することができ、遺伝子活性化は、ｓａＲＮＡと標的核酸配列とのハイブリダイゼーションによって誘導される。前記標的核酸配列は、典型的には、遺伝子のプロモーター領域を含む。
【0210】
ｓａＲＮＡによる転写上方制御の既知の機構はＡｇｏ２を含み、標的部位、例えばプロモーターにおけるエピジェネティック修飾に関連する。Ａｇｏ２は、複合体を標的に誘導し、ＲＮＡ誘導性転写活性化（ＲＩＴＡ）複合体の構築を促進するｓａＲＮＡと会合する。ＲＩＴＡ－ＲＮＡポリメラーゼＩＩ相互作用は、転写開始及び生産的伸長、並びにヒストン２Ｂのモノユビキチン化を促進すると考えられている（Ｐｏｒｔｎｏｙ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ．，２０１６，２６（３），３２０－３３５）。
【0211】
いくつかの実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト、例えばｓａＲＮＡは、１９ヌクレオチド長である。
【0212】
いくつかの実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト、例えばｓａＲＮＡは、２０ヌクレオチド長である。
【0213】
いくつかの実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト、例えばｓａＲＮＡは、２１ヌクレオチド長である。
【0214】
いくつかの実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト、例えばｓａＲＮＡは、２２ヌクレオチド長である。
【0215】
二本鎖オリゴヌクレオチドを含む実施形態を議論する場合、長さ測定値は鎖の一方の長さを指すことが理解されよう。２本の鎖が同じ長さでなくてもよい実施形態では、長さは最長鎖の長さとみなされる。
【0216】
いくつかの実施形態において、ｓａＲＮＡなどの本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、ヌクレオチドオーバーハングを有し得る。ヌクレオチドオーバーハングは、２ヌクレオチドオーバーハングであり得る。いくつかの実施形態において、オーバーハングは、連続ヌクレオチド配列の３’末端にあり得る。いくつかの実施形態において、オーバーハングは、２つのチミンヌクレオチド（ＴＴ）を含むか、又は２つのチミンヌクレオチド（ＴＴ）からなり得る。
【0217】
連続ヌクレオチド配列
一実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、ヒトＧＢＡゲノム配列のプロモーター１内の配列を標的とし得る。
一実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、ヒトＧＢＡゲノム配列のプロモーター１内の配列を標的とし得る。
【0218】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のセンス鎖は、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９、配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、配列番号８９、配列番号９０、配列番号９１、配列番号９２、配列番号９３、配列番号９４、配列番号９５、配列番号９６、配列番号９７、配列番号９８、配列番号９９、配列番号１００、配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、配列番号１０６、配列番号１０７、配列番号１０８、配列番号１０９、配列番号１１０、配列番号１１１、配列番号１１２、配列番号１１３及び配列番号１１４からなる群から選択される配列若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0219】
二本鎖オリゴヌクレオチドは、センス鎖又はアンチセンス鎖のいずれかを参照することによって定義することができることが当業者には明らかであろう。
【0220】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のセンス鎖は、配列番号７７、配列番号８１、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号９０、配列番号９１、配列番号９３、配列番号９７、配列番号９９、配列番号１０１、配列番号１０４、配列番号１０７及び配列番号１１０からなる群から選択される配列若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0221】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のセンス鎖は、配列番号９７、配列番号９９、配列番号１０１、配列番号１０７及び配列番号１１０からなる群から選択される配列若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0222】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のセンス鎖は、配列番号７７若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0223】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のセンス鎖は、配列番号８１若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0224】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のセンス鎖は、配列番号８３若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0225】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のセンス鎖は、配列番号８４若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0226】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のセンス鎖は、配列番号８５若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0227】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のセンス鎖は、配列番号９０若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0228】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のセンス鎖は、配列番号９１若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0229】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のセンス鎖は、配列番号９３若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0230】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のセンス鎖は、配列番号９７若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0231】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のセンス鎖は、配列番号９９若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0232】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のセンス鎖は、配列番号１０１若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0233】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のセンス鎖は、配列番号１０４若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0234】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のセンス鎖は、配列番号１０７若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0235】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のセンス鎖は、配列番号１１０若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0236】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のアンチセンス鎖は、配列番号１４９、配列番号１５０、配列番号１５１、配列番号１５２、配列番号１５３、配列番号１５４、配列番号１５５、配列番号１５６、配列番号１５７、配列番号１５８、配列番号１５９、配列番号１６０、配列番号１６１、配列番号１６２、配列番号１６３、配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１６６、配列番号１６７、配列番号１６８、配列番号１６９、配列番号１７０、配列番号１７１、配列番号１７２、配列番号１７３、配列番号１７４、配列番号１７５、配列番号１７６、配列番号１７７、配列番号１７８、配列番号１７９、配列番号１８０、配列番号１８１、配列番号１８２、配列番号１８３、配列番号１８４、配列番号１８５、配列番号１８６、配列番号１８７及び配列番号１８８からなる群から選択される配列若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0237】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のアンチセンス鎖は、配列番号１５１、配列番号１５５、配列番号１５７、配列番号１５８、配列番号１５９、配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１６７、配列番号１７１、配列番号１７３、配列番号１７５、配列番号１７８、配列番号１８１及び配列番号１８４からなる群から選択される配列若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0238】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のアンチセンス鎖は、配列番号１７１、配列番号１７３、配列番号１７５、配列番号１８１及び配列番号１８４からなる群から選択される配列若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0239】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のアンチセンス鎖は、配列番号１５１若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0240】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のアンチセンス鎖は、配列番号１５５若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0241】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のアンチセンス鎖は、配列番号１５７若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0242】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のアンチセンス鎖は、配列番号１５８若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0243】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のアンチセンス鎖は、配列番号１５９若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0244】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のアンチセンス鎖は、配列番号１６４若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0245】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のアンチセンス鎖は、配列番号１６５若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0246】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のアンチセンス鎖は、配列番号１６７若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0247】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のアンチセンス鎖は、配列番号１７１若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0248】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のアンチセンス鎖は、配列番号１７３若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0249】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のアンチセンス鎖は、配列番号１７５若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0250】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のアンチセンス鎖は、配列番号１７８若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0251】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のアンチセンス鎖は、配列番号１８１若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0252】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のアンチセンス鎖は、配列番号１８４若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0253】
一実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、ヒトＧＢＡゲノム配列のプロモーター２内の配列を標的とし得る。
【0254】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のセンス鎖は、配列番号１１５、配列番号１１６、配列番号１１７、配列番号１１８、配列番号１１９、配列番号１２０、配列番号１２１、配列番号１２２、配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７、配列番号１２８、配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３、配列番号１３４、配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号１３７、配列番号１３８、配列番号１３９、配列番号１４０、配列番号１４１、配列番号１４２、配列番号１４３、配列番号１４４、配列番号１４５、配列番号１４６、配列番号１４７及び配列番号１４８からなる群から選択される配列若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0255】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のセンス鎖は、配列番号１１８、配列番号１２０、配列番号１２１、配列番号１２２、配列番号１２３、配列番号１２６、配列番号１２７、配列番号１２８、配列番号１２９、配列番号１３１、配列番号１３３、配列番号１３４、配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号１３７及び配列番号１４１からなる群から選択される配列若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0256】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のセンス鎖は、配列番号１１８、配列番号１２０、配列番号１２２、配列番号１２３、配列番号１２６、配列番号１２７、配列番号１２８、配列番号１３１、配列番号１３３、配列番号１３５、配列番号１３６及び配列番号１４１からなる群から選択される配列若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0257】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のセンス鎖は、配列番号１１８若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0258】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のセンス鎖は、配列番号１２０若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0259】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のセンス鎖は、配列番号１２１若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0260】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のセンス鎖は、配列番号１２２若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0261】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のセンス鎖は、配列番号１２３若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0262】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のセンス鎖は、配列番号１２６若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0263】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のセンス鎖は、配列番号１２７若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0264】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のセンス鎖は、配列番号１２８若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0265】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のセンス鎖は、配列番号１２９若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0266】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のセンス鎖は、配列番号１３１若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0267】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のセンス鎖は、配列番号１３３若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0268】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のセンス鎖は、配列番号１３４若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0269】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のセンス鎖は、配列番号１３５若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0270】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のセンス鎖は、配列番号１３６若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0271】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のセンス鎖は、配列番号１３７若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0272】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のセンス鎖は、配列番号１４１若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0273】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のアンチセンス鎖は、配列番号１８９、配列番号１９０、配列番号１９１、配列番号１９２、配列番号１９３、配列番号１９４、配列番号１９５、配列番号１９６、配列番号１９７、配列番号１９８、配列番号１９９、配列番号２００、配列番号２０１、配列番号２０２、配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５、配列番号２０６、配列番号２０７、配列番号２０８、配列番号２０９、配列番号２１０、配列番号２１１、配列番号２１２、配列番号２１３、配列番号２１４、配列番号２１５、配列番号２１６、配列番号２１７、配列番号２１８、配列番号２１９、配列番号２２０、配列番号２２１及び配列番号２２２からなる群から選択される配列若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0274】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のアンチセンス鎖は、配列番号１９２、配列番号１９４、配列番号１９５、配列番号１９６、配列番号１９７、配列番号２００、配列番号２０１、配列番号２０２、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号２０７、配列番号２０８、配列番号２０９、配列番号２１０、配列番号２１１及び配列番号２１５からなる群から選択される配列若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0275】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のアンチセンス鎖は、配列番号１９２、配列番号１９４、配列番号１９６、配列番号１９７、配列番号２００、配列番号２０１、配列番号２０２、配列番号２０５、配列番号２０７、配列番号２０９、配列番号２１０及び配列番号２１５からなる群から選択される配列若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0276】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のアンチセンス鎖は、配列番号１９２若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0277】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のアンチセンス鎖は、配列番号１９４若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0278】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のアンチセンス鎖は、配列番号１９５若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0279】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のアンチセンス鎖は、配列番号１９６若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0280】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のアンチセンス鎖は、配列番号１９７若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0281】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のアンチセンス鎖は、配列番号２００若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0282】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のアンチセンス鎖は、配列番号２０１若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0283】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のアンチセンス鎖は、配列番号２０２若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0284】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のアンチセンス鎖は、配列番号２０３若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0285】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のアンチセンス鎖は、配列番号２０５若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0286】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のアンチセンス鎖は、配列番号２０７若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0287】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のアンチセンス鎖は、配列番号２０８若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0288】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のアンチセンス鎖は、配列番号２０９若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0289】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のアンチセンス鎖は、配列番号２１０若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0290】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のアンチセンス鎖は、配列番号２１１若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0291】
いくつかの実施形態において、連続ヌクレオチド配列のアンチセンス鎖は、配列番号２１５若しくはその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む。
【0292】
オリゴヌクレオチドが二本鎖オリゴヌクレオチドである特定の実施形態において、連続ヌクレオチド配列は、本明細書に列挙される配列のいずれかの１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０ヌクレオチドの断片であり得る。
【0293】
ｓａＲＮＡなどの二本鎖オリゴヌクレオチドは、それぞれが内因性ＲＮＡ又はＤＮＡのオリゴヌクレオチド配列などの相補的オリゴヌクレオチド配列とハイブリダイズし得る２本の相補鎖を含むことが理解されよう。理論に拘束されることを望むものではないが、本発明の二本鎖オリゴヌクレオチドは、標的配列のセンス鎖、アンチセンス鎖又は両方の鎖に結合することによって作用し得ることが理解されよう。
【0294】
オリゴヌクレオチドにおける領域Ｄ’又はＤ’’
本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、いくつかの実施形態において、標的核酸に相補的なオリゴヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列、例えばミックスマー又はトータルマー領域、並びにさらに５’及び／又は３’ヌクレオシドを含むか、又はそれからなり得る。さらなる５’及び／又は３’ヌクレオシドは、標的核酸に相補的、例えば完全に相補的であってもよく、又は相補的、例えば完全に相補的でなくてもよい。このようなさらなる５’及び／又は３’ヌクレオシドは、本明細書では領域Ｄ’及びＤ’’と称され得る。
本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、いくつかの実施形態において、標的核酸に相補的なオリゴヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列、例えばミックスマー又はトータルマー領域、並びにさらに５’及び／又は３’ヌクレオシドを含むか、又はそれからなり得る。さらなる５’及び／又は３’ヌクレオシドは、標的核酸に相補的、例えば完全に相補的であってもよく、又は相補的、例えば完全に相補的でなくてもよい。このようなさらなる５’及び／又は３’ヌクレオシドは、本明細書では領域Ｄ’及びＤ’’と称され得る。
【0295】
領域Ｄ’又はＤ’’の付加は、連続ヌクレオチド配列、例えばミックスマー又はトータルマーをコンジュゲート部分又は別の官能基に連結する目的のために使用され得る。連続ヌクレオチド配列をコンジュゲート部分と連結するために使用される場合、領域Ｄ’又はＤ’’の付加は、生体切断可能なリンカーとしての役割を果たすことができる。あるいは、領域Ｄ’又はＤ’’の付加は、エキソヌクレアーゼ（ｅｘｏｎｕｃｌｅｏａｓｅ）保護を提供するために、又は合成若しくは製造を容易にするために使用され得る。
【0296】
領域Ｄ’又はＤ’’は、独立して、１、２、３、４若しくは５個の追加のヌクレオチドを含むか、又は１、２、３、４若しくは５個の追加のヌクレオチドからなり得、１、２、３、４又は５個の追加のヌクレオチドは標的核酸に相補的であってもよく、又は相補的でなくてもよい。Ｆ又はＦ’領域に隣接するヌクレオチドは、ＤＮＡ若しくはＲＮＡ又はこれらの塩基修飾バージョンなどの、糖修飾ヌクレオチドではない。Ｄ’又はＤ’’領域は、ヌクレアーゼ感受性の生体切断可能なリンカーとしての役割を果たし得る（リンカーの定義を参照されたい）。いくつかの実施形態において、追加の５’及び／又は３’末端ヌクレオチドは、ホスホジエステル結合で結合されており、ＤＮＡ又はＲＮＡである。領域Ｄ’又はＤ’’としての使用に適したヌクレオチドベースの生体切断可能なリンカーは、国際公開第２０１４／０７６１９５号に開示されており、これには例としてホスホジエステル結合されたＤＮＡジヌクレオチドが含まれる。ポリオリゴヌクレオチド構築物における生体切断可能なリンカーの使用は国際公開第２０１５／１１３９２２号に開示されており、それらは単一のオリゴヌクレオチド内で複数のアンチセンス構築物を結合するために使用されている。
【0297】
一実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、ミックスマー又はトータルマーを構成する連続ヌクレオチド配列に加えて、領域Ｄ’及び／又はＤ’’を含む。
【0298】
いくつかの実施形態において、領域Ｄ’又はＤ’’とミックスマー又はトータルマー領域との間に位置するヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル結合である。
【0299】
コンジュゲート
本発明は、少なくとも１つのコンジュゲート部分に共有結合したオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストを包含する。いくつかの実施形態において、これは本発明のコンジュゲートと称され得る。
本発明は、少なくとも１つのコンジュゲート部分に共有結合したオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストを包含する。いくつかの実施形態において、これは本発明のコンジュゲートと称され得る。
【0300】
いくつかの実施形態において、本発明は、少なくとも１つのコンジュゲート部分に共有結合したオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストを提供する。
【0301】
本明細書で用いられる「コンジュゲート」という用語は、非ヌクレオチド部分（コンジュゲート部分又は領域Ｃ又は第３の領域）に共有結合したオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストを指す。コンジュゲート部分は、任意に領域Ｄ’又はＤ’’などのリンカー基を介して、オリゴヌクレオチドに共有結合していてもよい。
【0302】
オリゴヌクレオチドコンジュゲート及びそれらの合成は、Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｉｎ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｄｒｕｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ，ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｓ．Ｔ．Ｃｒｏｏｋｅ，ｅｄ．，Ｃｈ．１６，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，２００１及びＭａｎｏｈａｒａｎ，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ａｎｄ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，２００２，１２，１０３による包括的な概説にも報告されている。
【0303】
いくつかの実施形態において、非ヌクレオチド部分（コンジュゲート部分）は、炭水化物（例えば、ＧａｌＮＡｃ）、細胞表面受容体リガンド、原薬、ホルモン、親油性物質、ポリマー、タンパク質、ペプチド、毒素（例えば、細菌毒素）、ビタミン、ウイルスタンパク質（例えば、カプシド）又はこれらの組み合わせからなる群から選択される。
【0304】
リンカー
結合又はリンカーは、１つ又は複数の共有結合を介して関心対象の１つの化学基又はセグメントを関心対象の別の化学基又はセグメントに連結する、２つの原子間の接続である。コンジュゲート部分は、直接又は連結部分（例えば、リンカー又はテザー）を介してオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストに結合させ得る。リンカーは、第３の領域、例えばコンジュゲート部分（領域Ｃ）を、第１の領域、例えば、標的核酸に相補的なオリゴヌクレオチド又は連続ヌクレオチド配列（領域Ａ）に共有結合する役割を果たす。
結合又はリンカーは、１つ又は複数の共有結合を介して関心対象の１つの化学基又はセグメントを関心対象の別の化学基又はセグメントに連結する、２つの原子間の接続である。コンジュゲート部分は、直接又は連結部分（例えば、リンカー又はテザー）を介してオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストに結合させ得る。リンカーは、第３の領域、例えばコンジュゲート部分（領域Ｃ）を、第１の領域、例えば、標的核酸に相補的なオリゴヌクレオチド又は連続ヌクレオチド配列（領域Ａ）に共有結合する役割を果たす。
【0305】
本発明のいくつかの実施形態において、本発明のコンジュゲート又はオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストコンジュゲートは、任意に、標的核酸に相補的なオリゴヌクレオチド又は連続ヌクレオチド配列（領域Ａ又は第１の領域）と、コンジュゲート部分（領域Ｃ又は第３の領域）との間に位置するリンカー領域（第２の領域又は領域Ｂ及び／又は領域Ｙ）を含み得る。
【0306】
領域Ｂは、哺乳動物の体内で通常遭遇する又は遭遇するものに類似した条件下で切断可能である生理学的に不安定な結合を含むか、又はそれからなる生体切断可能なリンカーを指す。生理学的に不安定なリンカーが化学的変換（例えば、切断）を受ける条件には、ｐＨ、温度、酸化条件若しくは還元条件又は酸化剤若しくは還元剤などの化学条件、並びに哺乳動物の細胞で見られる又は遭遇するものに類似した塩濃度が含まれる。哺乳動物の細胞内条件には、タンパク質分解酵素又は加水分解酵素又はヌクレアーゼなどの哺乳動物細胞に通常存在する酵素活性の存在も含まれる。一実施形態において、生体切断可能なリンカーは、Ｓ１ヌクレアーゼ切断の影響を受けやすい。いくつかの実施形態において、ヌクレアーゼ感受性リンカーは、少なくとも２つの連続するホスホジエステル結合を含むＤＮＡヌクレオシドなどの１～５個のヌクレオシドを含む。ホスホジエステルを含有する生体切断可能なリンカーは、国際公開第２０１４／０７６１９５号により詳細に記載されている。
【0307】
領域Ｙは、必ずしも生体切断可能ではないが、主にコンジュゲート部分（領域Ｃ又は第３の領域）をオリゴヌクレオチド（領域Ａ又は第１の領域）に共有結合させる役割を果たすリンカーを指す。領域Ｙリンカーは、エチレングリコール、アミノ酸単位又はアミノアルキル基などの反復単位の鎖構造又はオリゴマーを含み得る。本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストコンジュゲートは、以下の領域要素Ａ－Ｃ、Ａ－Ｂ－Ｃ、Ａ－Ｂ－Ｙ－Ｃ、Ａ－Ｙ－Ｂ－Ｃ又はＡ－Ｙ－Ｃから構築され得る。いくつかの実施形態において、リンカー（領域Ｙ）は、例えばＣ６～Ｃ１２アミノアルキル基を含むＣ２～Ｃ３６アミノアルキル基などのアミノアルキルである。いくつかの実施形態において、リンカー（領域Ｙ）は、Ｃ６アミノアルキル基である。
【0308】
塩
本明細書で使用される「塩」という用語は、その一般的に知られている意味、すなわちアニオン及びカチオンのイオン集合（ｉｏｎｉｃ ａｓｓｅｍｂｌｙ）に合致する。
本明細書で使用される「塩」という用語は、その一般的に知られている意味、すなわちアニオン及びカチオンのイオン集合（ｉｏｎｉｃ ａｓｓｅｍｂｌｙ）に合致する。
【0309】
本発明は、本発明によるオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストの医薬的に許容され得る塩、又は本発明によるコンジュゲートを提供する。
【0310】
本発明は、医薬的に許容され得る塩の形態である、本発明によるオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストを提供する。いくつかの実施形態において、医薬的に許容され得る塩は、ナトリウム塩又はカリウム塩であり得る。
【0311】
本発明は、本発明によるオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト又は本発明によるコンジュゲートの医薬的に許容され得るナトリウム塩を提供する。
【0312】
本発明は、本発明によるオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト又は本発明によるコンジュゲートの医薬的に許容され得るカリウム塩を提供する。
【0313】
オリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストの送達
本発明は、本発明によるオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストであって、前記オリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、脂質ベースの送達ビヒクル中に封入されているか、デンドリマーに共有結合されている若しくはデンドリマー中に封入されているか、又はアプタマーにコンジュゲートされている、本発明によるオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストを提供する。
本発明は、本発明によるオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストであって、前記オリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、脂質ベースの送達ビヒクル中に封入されているか、デンドリマーに共有結合されている若しくはデンドリマー中に封入されているか、又はアプタマーにコンジュゲートされている、本発明によるオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストを提供する。
【0314】
これは、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストを標的とされる細胞に送達すること、及び／又はオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストの薬物動態を改善することを目的とし得る。
【0315】
脂質ベースの送達ビヒクルの例としては、水中油型エマルジョン、ミセル、リポソーム及び脂質ナノ粒子が挙げられる。
【0316】
医薬組成物
本発明は、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト又は本発明のコンジュゲート若しくは塩と、医薬的に許容され得る希釈剤、溶媒、担体、塩、及び／又はアジュバントとを含む、医薬組成物を提供する。
本発明は、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト又は本発明のコンジュゲート若しくは塩と、医薬的に許容され得る希釈剤、溶媒、担体、塩、及び／又はアジュバントとを含む、医薬組成物を提供する。
【0317】
本発明は、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト又は本発明のコンジュゲートと、医薬的に許容され得る塩とを含む、医薬組成物を提供する。例えば、塩は、ナトリウム塩又はカリウム塩などの金属カチオンを含み得る。
【0318】
本発明は、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト若しくは本発明のコンジュゲート、又は本発明の医薬的に許容され得る塩と、水性希釈剤又は溶媒とを含む、本発明による医薬組成物を提供する。
【0319】
本発明は、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト又は本発明のコンジュゲート、又は本発明の医薬的に許容され得る塩のリン酸緩衝生理食塩水溶液などの溶液を提供する。適切には、本発明のリン酸緩衝生理食塩水溶液などの溶液は無菌溶液である。
【0320】
ＧＢＡ発現を調節するための方法
本発明は、ＧＢＡを発現している細胞などの細胞においてＧＢＡの発現を増強、上方制御、又は回復させるための方法であって、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト又は本発明のコンジュゲート又は本発明の塩又は本発明の医薬組成物を有効量で前記細胞に投与することを含む、方法を提供する。
本発明は、ＧＢＡを発現している細胞などの細胞においてＧＢＡの発現を増強、上方制御、又は回復させるための方法であって、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト又は本発明のコンジュゲート又は本発明の塩又は本発明の医薬組成物を有効量で前記細胞に投与することを含む、方法を提供する。
【0321】
いくつかの実施形態において、方法は、インビトロ法である。
【0322】
いくつかの実施形態において、方法は、インビボ法である。
【0323】
いくつかの実施形態において、細胞はヒト細胞又は哺乳動物細胞のいずれかである。
【0324】
いくつかの実施形態において、細胞は、ＧＢＡの低下した発現に関連する疾患に罹患しているか若しくは罹患しやすい対象の一部であるか、又はＧＢＡの低下した発現に関連する疾患に罹患しているか若しくは罹患しやすい対象に由来する。そのような疾患には、ゴーシェ病、パーキンソン病、認知症、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）及び急速眼球運動（ＲＥＭ）睡眠行動障害が含まれるが、これらに限定されない。
【0325】
処置
本明細書で使用される場合、「処置」という用語は、既存の疾患（例えば、本明細書で言及される疾患又は障害）の処置、又は疾患の予防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）、すなわち予防（ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ）の両方を指す。したがって、本明細書で言及される処置は、いくつかの実施形態において、予防的であり得ることが認識されよう。
本明細書で使用される場合、「処置」という用語は、既存の疾患（例えば、本明細書で言及される疾患又は障害）の処置、又は疾患の予防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）、すなわち予防（ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ）の両方を指す。したがって、本明細書で言及される処置は、いくつかの実施形態において、予防的であり得ることが認識されよう。
【0326】
本発明は、治療有効量又は予防有効量の、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト又は本発明の医薬組成物を、ＧＢＡの低下した発現に関連する疾患に罹患しているか又は罹患しやすい対象に投与することを含む、ＧＢＡの低下した発現に関連する疾患を処置又は予防するための方法を提供する。
【0327】
一実施形態において、疾患は、ゴーシェ病、パーキンソン病、認知症、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）及び急速眼球運動（ＲＥＭ）睡眠行動障害からなる群から選択される。
【0328】
一実施形態において、疾患はパーキンソン病である。
【0329】
一実施形態において、疾患はゴーシェ病である。
【0330】
いくつかの実施形態において、対象は、動物、好ましくはマウス、ラット、ハムスター若しくはサルなどの哺乳動物、又は好ましくはヒトである。
【0331】
本発明は、医薬として使用するための本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストを提供する。
【0332】
本発明は、医薬の調製のための本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストを提供する。
【0333】
本発明は、治療における使用のための本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストを提供する。
【0334】
本発明は、医薬として使用するための本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト又は医薬組成物を提供する。
【0335】
本発明は、医薬の調製のための、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト又は本発明の医薬組成物を提供する。
【0336】
本発明は、治療において使用するための本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト又は本発明による医薬組成物を提供する。
【0337】
本発明は、パーキンソン病の処置において使用するための本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト又は本発明の医薬組成物を提供する。
【0338】
本発明は、ゴーシェ病の処置において使用するための本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト又は本発明の医薬組成物を提供する。
【0339】
本発明は、パーキンソン病の処置又は予防のための医薬の調製のための、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト又は本発明の医薬組成物の使用を提供する。
【0340】
本発明は、ゴーシェ病の処置又は予防のための医薬の調製のための、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト又は本発明の医薬組成物の使用を提供する。
【0341】
投与
本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト又は医薬組成物は、局所的（皮膚、吸入、眼又は耳など）又は経腸的（経口的に又は消化管を通してなど）又は非経口的（静脈内、皮下、筋肉内、脳内、脳室内又は髄腔内など）に投与され得る。
本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト又は医薬組成物は、局所的（皮膚、吸入、眼又は耳など）又は経腸的（経口的に又は消化管を通してなど）又は非経口的（静脈内、皮下、筋肉内、脳内、脳室内又は髄腔内など）に投与され得る。
【0342】
好ましい実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチド又は医薬組成物は、静脈内、動脈内、皮下、腹腔内又は筋肉内注射若しくは注入、髄腔内又は頭蓋内、例えば脳内又は脳室内投与を含む非経口経路によって投与される。一実施形態において、オリゴヌクレオチドは、脳内又は脳室内に投与される。別の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、髄腔内に投与される。
【0343】
本発明はまた、髄腔内投与用の剤形である医薬の製造のための、記載されるような本発明のオリゴヌクレオチドの使用を提供する。
【0344】
本発明はまた、脳内又は室内投与用の剤形である医薬の製造のための、記載されるような本発明のオリゴヌクレオチドの使用を提供する。
【0345】
本発明はまた、脳室内投与用の剤形である医薬の製造のための、記載されるような本発明のオリゴヌクレオチドの使用を提供する。
【0346】
併用療法
いくつかの実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオチドコンジュゲート又は医薬組成物は、別の治療剤との併用処置で使用される。
いくつかの実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオチドコンジュゲート又は医薬組成物は、別の治療剤との併用処置で使用される。
【0347】
ＧＢＡ上方制御
ある実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、ＧＢＡ ｍＲＮＡ、ＧＢＡタンパク質、又はＧＢＡ ｍＲＮＡ及びＧＢＡタンパク質の産生を増強し得る。
ある実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、ＧＢＡ ｍＲＮＡ、ＧＢＡタンパク質、又はＧＢＡ ｍＲＮＡ及びＧＢＡタンパク質の産生を増強し得る。
【0348】
ある実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、ＧＢＡ ｍＲＮＡの産生を少なくとも約１０％増強し得る。他の実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、ＧＢＡ ｍＲＮＡの産生を少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、少なくとも約２００％、少なくとも約３００％、少なくとも約４００％、少なくとも約５００％、又は少なくとも約６００％、又はそれを超えて増強し得る。
【0349】
ある実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、ＧＢＡタンパク質の産生を少なくとも約１０％増強し得る。他の実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、ＧＢＡタンパク質の産生を少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、少なくとも約２００％、少なくとも約３００％、少なくとも約４００％、少なくとも約５００％、又は少なくとも約６００％、又はそれを超えて増強し得る。
【0350】
ある実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、ＧＢＡ ｍＲＮＡ及びＧＢＡタンパク質の産生を少なくとも約１０％増強し得る。他の実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、ＧＢＡ ｍＲＮＡ及びＧＢＡタンパク質の産生を少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、少なくとも約２００％、少なくとも約３００％、少なくとも約４００％、少なくとも約５００％、又は少なくとも約６００％、又はそれを超えて増強し得る。
【0351】
いくつかの実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストは、対照と比較して、ＧＢＡ ｍＲＮＡ、ＧＢＡタンパク質、又はＧＢＡ ｍＲＮＡ及びＧＢＡタンパク質の産生を増強し得る。対照は、オリゴヌクレオチドに曝露されたことがない細胞であり得る。いくつかの実施形態において、対照は、擬似トランスフェクション、例えばＰＢＳでの細胞の処理であり得る。
【表1】
【実施例】
【0352】
実施例１：ＧＢＡ ｍＲＮＡに対するｓａＲＮＡの効果
トランスフェクションの前日に、完全増殖培地（ＤＭＥＭ（Ｓｉｇｍａ：Ｄ６５４６）、１０％ ＦＢＳ、２ｍＭグルタミン、０．１ｍＭ（１×）ＮＥＡＡ、２５μｇ／ｍｌゲンタマイシン）中の９６ウェルプレートに、２５０００／ウェルの密度で、ＳＫ－Ｎ－ＡＳ神経芽細胞腫細胞を播種した。播種の翌日、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎの説明書に従って１０ｎＭの最終濃度でＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎ ＲＮＡｉＭａｘ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して、配列番号１～７４のｓａＲＮＡ（ｎ＝２）若しくはＰＢＳ（疑似）のいずれかで細胞をトランスフェクトした。トランスフェクションの４８時間後、ＲＮｅａｓｙ（登録商標）９６ Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を使用してｍＲＮＡを単離し、２００μＬのＲＮＡｓｅ非含有水で抽出した。表３のプロトコルに従って、４μＬをワンステップＲＴ－ｑＰＣＲ分析のためのインプットとして使用した。ＧＢＡに特異的なカスタム設計されたｑＰＣＲアッセイ及びＴＢＰのための予め設計されたアッセイ（ＨＥＸ、Ｈｓ．ＰＴ．５８ｖ．３９８５８７７４、ＩＤＴ）を使用する（ｑＳｃｒｉｐｔ（商標）ＸＬＴ Ｏｎｅ－Ｓｔｅｐ ＲＴ－ｑＰＣＲ ＴｏｕｇｈＭｉｘ（登録商標）、Ｌｏｗ ＲＯＸ（商標）、Ｑｕａｎｔａ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、＃９５１３４－５００）。Ｒ Ｓｏｆｔｗａｒｅを使用してハウスキーピング遺伝子ＴＢＰと比較して、ＧＢＡ ｍＲＮＡ濃度を定量した。図１を参照されたい。
トランスフェクションの前日に、完全増殖培地（ＤＭＥＭ（Ｓｉｇｍａ：Ｄ６５４６）、１０％ ＦＢＳ、２ｍＭグルタミン、０．１ｍＭ（１×）ＮＥＡＡ、２５μｇ／ｍｌゲンタマイシン）中の９６ウェルプレートに、２５０００／ウェルの密度で、ＳＫ－Ｎ－ＡＳ神経芽細胞腫細胞を播種した。播種の翌日、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎの説明書に従って１０ｎＭの最終濃度でＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎ ＲＮＡｉＭａｘ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して、配列番号１～７４のｓａＲＮＡ（ｎ＝２）若しくはＰＢＳ（疑似）のいずれかで細胞をトランスフェクトした。トランスフェクションの４８時間後、ＲＮｅａｓｙ（登録商標）９６ Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を使用してｍＲＮＡを単離し、２００μＬのＲＮＡｓｅ非含有水で抽出した。表３のプロトコルに従って、４μＬをワンステップＲＴ－ｑＰＣＲ分析のためのインプットとして使用した。ＧＢＡに特異的なカスタム設計されたｑＰＣＲアッセイ及びＴＢＰのための予め設計されたアッセイ（ＨＥＸ、Ｈｓ．ＰＴ．５８ｖ．３９８５８７７４、ＩＤＴ）を使用する（ｑＳｃｒｉｐｔ（商標）ＸＬＴ Ｏｎｅ－Ｓｔｅｐ ＲＴ－ｑＰＣＲ ＴｏｕｇｈＭｉｘ（登録商標）、Ｌｏｗ ＲＯＸ（商標）、Ｑｕａｎｔａ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、＃９５１３４－５００）。Ｒ Ｓｏｆｔｗａｒｅを使用してハウスキーピング遺伝子ＴＢＰと比較して、ＧＢＡ ｍＲＮＡ濃度を定量した。図１を参照されたい。
【表2】
【表3】
【0353】
配列番号１０、配列番号１１、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号３０、配列番号３６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６２、配列番号６７はすべて、ＳＫ－Ｎ－ＡＳ細胞におけるトランスフェクション後４８時間で、疑似トランスフェクションと比較して１５％を超えてＧＢＡ ｍＲＮＡの発現を増加させる（図１）。
【0354】
実施例２：ＧＢＡ ｍＲＮＡに対するｓａＲＮＡの効果
トランスフェクションの前日に、完全増殖培地（ＤＭＥＭ Ｓｉｇｍａ：Ｄ０８１９、１５％ ＦＢＳ、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、２５μｇ／ｍｌゲンタマイシン）中の９６ウェルプレートに、１５０００／ウェルの密度で、Ｈ４神経膠腫細胞を播種した。播種の翌日、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎの説明書に従って１０ｎＭの最終濃度でＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎ ＲＮＡｉＭａｘ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して、配列番号１～７４のｓａＲＮＡ（ｎ＝２）若しくはＰＢＳ（疑似）のいずれかで細胞をトランスフェクトした。トランスフェクションの４８時間後、ＲＮｅａｓｙ（登録商標）９６Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を使用してｍＲＮＡを単離し、２００μＬのＲＮＡｓｅ非含有水で抽出した。表３のプロトコルに従って、４μＬをワンステップＲＴ－ｑＰＣＲ分析のためのインプットとして使用した。ＧＢＡに特異的なカスタム設計されたｑＰＣＲアッセイ及びＴＢＰのための予め設計されたアッセイ（ＨＥＸ、Ｈｓ．ＰＴ．５８ｖ．３９８５８７７４、ＩＤＴ）を使用する（ｑＳｃｒｉｐｔ（商標）ＸＬＴ Ｏｎｅ－Ｓｔｅｐ ＲＴ－ｑＰＣＲ ＴｏｕｇｈＭｉｘ（登録商標）、Ｌｏｗ ＲＯＸ（商標）、Ｑｕａｎｔａ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、＃９５１３４－５００）。ＧＢＡ ｍＲＮＡ濃度は、Ｒ Ｓｏｆｔｗａｒｅを使用してハウスキーピング遺伝子ＨＰＲＴ１と比較して定量した。図２を参照されたい。
トランスフェクションの前日に、完全増殖培地（ＤＭＥＭ Ｓｉｇｍａ：Ｄ０８１９、１５％ ＦＢＳ、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、２５μｇ／ｍｌゲンタマイシン）中の９６ウェルプレートに、１５０００／ウェルの密度で、Ｈ４神経膠腫細胞を播種した。播種の翌日、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎの説明書に従って１０ｎＭの最終濃度でＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎ ＲＮＡｉＭａｘ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して、配列番号１～７４のｓａＲＮＡ（ｎ＝２）若しくはＰＢＳ（疑似）のいずれかで細胞をトランスフェクトした。トランスフェクションの４８時間後、ＲＮｅａｓｙ（登録商標）９６Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を使用してｍＲＮＡを単離し、２００μＬのＲＮＡｓｅ非含有水で抽出した。表３のプロトコルに従って、４μＬをワンステップＲＴ－ｑＰＣＲ分析のためのインプットとして使用した。ＧＢＡに特異的なカスタム設計されたｑＰＣＲアッセイ及びＴＢＰのための予め設計されたアッセイ（ＨＥＸ、Ｈｓ．ＰＴ．５８ｖ．３９８５８７７４、ＩＤＴ）を使用する（ｑＳｃｒｉｐｔ（商標）ＸＬＴ Ｏｎｅ－Ｓｔｅｐ ＲＴ－ｑＰＣＲ ＴｏｕｇｈＭｉｘ（登録商標）、Ｌｏｗ ＲＯＸ（商標）、Ｑｕａｎｔａ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、＃９５１３４－５００）。ＧＢＡ ｍＲＮＡ濃度は、Ｒ Ｓｏｆｔｗａｒｅを使用してハウスキーピング遺伝子ＨＰＲＴ１と比較して定量した。図２を参照されたい。
【0355】
配列番号３、配列番号７、配列番号９、配列番号１６、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号３３、配列番号３６、配列番号４４、配列番号４６、配列番号４９、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５７、配列番号５９、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６７はすべて、Ｈ４細胞におけるトランスフェクション後４８時間で、疑似トランスフェクションと比較して１５％倍を超えてＧＢＡ ｍＲＮＡの発現を増加させる（図２）。
【0356】
実施形態
１．オリゴヌクレオチドグルコセレブロシダーゼ（ＧＢＡ）アゴニストであって、前記オリゴヌクレオチドは８～４０ヌクレオチド長であり、ヒトＧＢＡゲノム配列の１つ又は複数のプロモーターに相補的な８～４０ヌクレオチド長の連続配列を含む、オリゴヌクレオチドグルコセレブロシダーゼ（ＧＢＡ）アゴニスト。
１．オリゴヌクレオチドグルコセレブロシダーゼ（ＧＢＡ）アゴニストであって、前記オリゴヌクレオチドは８～４０ヌクレオチド長であり、ヒトＧＢＡゲノム配列の１つ又は複数のプロモーターに相補的な８～４０ヌクレオチド長の連続配列を含む、オリゴヌクレオチドグルコセレブロシダーゼ（ＧＢＡ）アゴニスト。
【0357】
２．前記連続ヌクレオチド配列が、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９又は４０ヌクレオチド長である、項目１に記載のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト。
【0358】
３．前記連続ヌクレオチド配列が１９ヌクレオチド長である、項目２に記載のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト。
【0359】
４．前記連続ヌクレオチド配列が、前記オリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストと同じ長さである、項目１～３のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト。
【0360】
５．前記連続ヌクレオチド配列が、前記ヒトＧＢＡゲノム配列の１つ又は複数のプロモーターに少なくとも７５％相補的である、項目１～４のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト。
【0361】
６．前記連続ヌクレオチド配列が、前記ヒトＧＢＡゲノム配列の１つ又は複数のプロモーターに少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％又は少なくとも９５％相補的である、項目５に記載のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト。
【0362】
７．前記連続ヌクレオチド配列が、前記ヒトＧＢＡゲノム配列の１つ又は複数のプロモーターに完全に相補的である、項目１～６のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト。
【0363】
８．前記ヒトＧＢＡゲノム配列が配列番号２２６である、項目１～７のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト。
【0364】
９．前記ヒトＧＢＡ遺伝子の前記プロモーターが配列番号２２５を含む、項目１～８のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト。
【0365】
１０．前記ヒトＧＢＡ遺伝子の前記プロモーターが配列番号２２５からなる、項目９に記載のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト。
【0366】
１１．前記プロモーターが前記ヒトＧＢＡ遺伝子のエクソン１のすぐ上流に位置する（Ｐ１）、項目１～１０のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト。
【0367】
１２．前記プロモーターが、前記ヒトＧＢＡ遺伝子のエクソン１中のＡＴＧ開始コドンの１，１３７と１の間のヌクレオチド上流に位置する、項目１１のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト。
【0368】
１３．前記ヒトＧＢＡ遺伝子の前記プロモーターが配列番号２２４を含む、項目１１又は項目１２のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト。
【0369】
１４．前記ヒトＧＢＡ遺伝子の前記プロモーターが配列番号２２４からなる、項目１３に記載のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト。
【0370】
１５．前記連続ヌクレオチド配列が、配列番号２２４のヌクレオチド３９～５９、１４８～１６８、１５３～１７３、３０２～３２２、３１３～３３３、５１７～５３７、５３２～５５２、６５６～６７６、７４８～７６８、７５０～７７０、８１５～８３５、８４０～８６０、９０４～９２４及び９９６～１０１６からなる群から選択される配列又はその断片に相補的である、項目１１～１４のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト。
【0371】
１６．前記連続ヌクレオチド配列が、配列番号３、配列番号７、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号３０、配列番号３３及び配列番号３６からなる群から選択される配列又はその断片に相補的である、項目１１～１４のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト。
【0372】
１７．前記オリゴヌクレオチドが二本鎖オリゴヌクレオチドである、項目１～１６のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト。
【0373】
１８．前記オリゴヌクレオチドがｓａＲＮＡである、項目１７のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト。
【0374】
１９．前記連続ヌクレオチド配列のセンス鎖が、配列番号７７、配列番号８１、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号９０、配列番号９１、配列番号９３、配列番号９７、配列番号９９、配列番号１０１、配列番号１０４、配列番号１０７及び配列番号１１０からなる群から選択される配列又はその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む、項目１７又は項目１８のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト。
【0375】
２０．前記連続ヌクレオチド配列のアンチセンス鎖が、配列番号１５１、配列番号１５５、配列番号１５７、配列番号１５８、配列番号１５９、配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１６７、配列番号１７１、配列番号１７３、配列番号１７５、配列番号１７８、配列番号１８１及び配列番号１８４からなる群から選択される配列又はその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む、項目１７～１９のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト。
【0376】
２１．前記プロモーターが前記ヒトＧＢＡ遺伝子のエクソン－２のすぐ上流に位置する（Ｐ２）、項目１～１０のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト。
【0377】
２２．前記プロモーターが、前記ヒトＧＢＡ遺伝子のエクソン１中のＡＴＧ開始コドンの４，５５８と３，３９４の間のヌクレオチド上流に位置する、項目２１のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト。
【0378】
２３．前記ヒトＧＢＡ遺伝子の前記プロモーターが配列番号２２３を含む、項目２１又は項目２２のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト。
【0379】
２４．前記ヒトＧＢＡ遺伝子の前記プロモーターが配列番号２２３からなる、項目２３に記載のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト。
【0380】
２５．前記連続ヌクレオチド配列が、配列番号２２３のヌクレオチド１２１～１４１、１６０～１８０、１７３～１９３、１９９～２１９、２００～２２０、３３５～３５５、３３６～３５６、３５９～３７９、３９１～４１１、４２３～４４３、４６９～４８９、５３５～５５５、５４８～５６８、５５１～５７１、５８９～６０９及び６７０～６９０からなる群から選択される配列又はその断片に相補的である、項目２１～２４のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト。
【0381】
２６．前記連続ヌクレオチド配列が、配列番号４４、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５７、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３及び配列番号６７からなる群から選択される配列又はその断片に相補的である、項目２１～２４のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト。
【0382】
２７．前記オリゴヌクレオチドが二本鎖オリゴヌクレオチドである、項目２１～２７のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト。
【0383】
２８．前記オリゴヌクレオチドがｓａＲＮＡである、項目２７のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト。
【0384】
２９．前記連続ヌクレオチド配列のセンス鎖が、配列番号１１８、配列番号１２０、配列番号１２１、配列番号１２２、配列番号１２３、配列番号１２６、配列番号１２７、配列番号１２８、配列番号１２９、配列番号１３１、配列番号１３３、配列番号１３４、配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号１３７及び配列番号１４１からなる群から選択される配列又はその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む、項目２７又は項目２８に記載のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト。
【0385】
３０．前記連続ヌクレオチド配列のアンチセンス鎖が、配列番号１９２、配列番号１９４、配列番号１９５、配列番号１９６、配列番号１９７、配列番号２００、配列番号２０１、配列番号２０２、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号２０７、配列番号２０８、配列番号２０９、配列番号２１０、配列番号２１１及び配列番号２１５からなる群から選択される配列又はその少なくとも１０個の連続ヌクレオチドであるか、又はそれを含む、項目２７～２９のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト。
【0386】
３１．前記オリゴヌクレオチドが、オリゴヌクレオチドミックスマー若しくはトータルマーであるか、又はオリゴヌクレオチドミックスマー若しくはトータルマーを含む、項目１～３０のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト。
【0387】
３２．前記オリゴヌクレオチドが、対照と比較して、ＧＢＡの発現を少なくとも１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％又は５０％を超えて増加させることができる、項目１～３１のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト。
【0388】
３３．前記対照が、前記オリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストに曝露されていない細胞である、項目３２に記載のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト。
【0389】
３４．前記オリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストが、少なくとも１つのコンジュゲート部分に共有結合している、項目１～３３のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト。
【0390】
３５．前記オリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストが、医薬的に許容され得る塩の形態である、項目１～３４のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト。
【0391】
３６．前記塩がナトリウム塩又はカリウム塩である、項目３５に記載のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト。
【0392】
３７．前記オリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストが、脂質ベースの送達ビヒクル中に封入されているか、デンドリマーに共有結合されている若しくはデンドリマー中に封入されているか、又はアプタマーにコンジュゲートされている、項目１～３６のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト。
【0393】
３８．項目１～３７のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストと、医薬的に許容され得る希釈剤、溶媒、担体、塩及び／又はアジュバントとを含む医薬組成物。
【0394】
３９．前記医薬組成物が、リン酸緩衝生理食塩水などの、水性希釈剤又は溶媒を含む、項目３８に記載の医薬組成物。
【0395】
４０．標的細胞におけるＧＢＡ発現を上方制御するか、又は回復させるためのインビボ又はインビトロ方法であって、有効量の項目１～３７のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト又は項目３８若しくは項目３９に記載の医薬組成物を前記細胞に投与する工程を含む、方法。
【0396】
４１．前記細胞がヒト細胞又は哺乳動物細胞のいずれかである、項目４０に記載の方法。
【0397】
４２．ＧＢＡ ｍＲＮＡの発現が、対照と比較して、少なくとも１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％又は５０％を超えて増加する、項目４０又は項目４１に記載の方法。
【0398】
４３．ＧＢＡタンパク質の発現が、対照と比較して、少なくとも１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％又は５０％を超えて増加する、項目４０～４２のいずれか１つに記載の方法。
【0399】
４４．前記対照が、前記オリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニストに曝露されたことがない細胞である、項目４２又は項目４３に記載の方法。
【0400】
４５．疾患に罹患しているか又は罹患しやすい対象に、治療有効量又は予防有効量の項目１～３７のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチドＧＢＡアゴニスト、又は項目３８若しくは項目３９の医薬組成物を投与する工程を含む、疾患を処置又は予防するための方法。
【0401】
４６．対象における疾患の処置又は予防のための医薬として使用するための、項目１～３７のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド又は項目３８若しくは項目３９に記載の医薬組成物。
【0402】
４７．対象における疾患の処置又は予防のための医薬の調製のための、項目１～３７のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド又は項目３８若しくは項目３９に記載の医薬組成物の使用。
【0403】
４８．前記疾患がＧＢＡの低下した発現と関連する、項目４５に記載の方法、項目４６に記載の使用のためのオリゴヌクレオチド若しくは医薬組成物又は項目４７に記載の使用。
【0404】
４９．前記疾患が、ゴーシェ病、パーキンソン病、認知症、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）及び急速眼球運動（ＲＥＭ）睡眠行動障害からなる群から選択される、項目４５に記載の方法、項目４６に記載の使用のためのオリゴヌクレオチド若しくは医薬組成物、又は項目４７に記載の使用。
【0405】
５０．前記疾患がパーキンソン病である、項目４５に記載の方法、項目４６に記載の使用のためのオリゴヌクレオチド若しくは医薬組成物、又は項目４７に記載の使用。
【0406】
５１．前記疾患がゴーシェ病である、項目４５に記載の方法、項目４６に記載の使用のためのオリゴヌクレオチド若しくは医薬組成物、又は項目４７に記載の使用。
【図1】
【図2】
【配列表】
【国際調査報告】