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2024-546924抗ＰＩＬＲＡ抗体、その使用、ならびに関連する方法及び試薬
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-12-26
(54)【発明の名称】抗ＰＩＬＲＡ抗体、その使用、ならびに関連する方法及び試薬
(51)【国際特許分類】
C07K 16/28 20060101AFI20241219BHJP
C07K 16/46 20060101ALI20241219BHJP
C12N 15/62 20060101ALI20241219BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20241219BHJP
C12N 15/13 20060101ALI20241219BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20241219BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20241219BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20241219BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20241219BHJP
C12P 21/08 20060101ALI20241219BHJP
C12N 5/078 20100101ALI20241219BHJP
【ＦＩ】
C07K16/28 ZNA
C07K16/46
C12N15/62 Z
C12N15/63 Z
C12N15/13
C12N1/15
C12N1/19
C12N1/21
C12N5/10
C12P21/08
C12N5/078
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024535797
(86)(22)【出願日】2022-12-16
(85)【翻訳文提出日】2024-07-23
(86)【国際出願番号】 US2022053245
(87)【国際公開番号】W WO2023114515
(87)【国際公開日】2023-06-22
(31)【優先権主張番号】63/290,930
(32)【優先日】2021-12-17
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】518086619
【氏名又は名称】デナリ セラピューティクス インコーポレイテッド
【氏名又は名称原語表記】Ｄｅｎａｌｉ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｉｎｃ．
(74)【代理人】
【識別番号】100102978
【弁理士】
【氏名又は名称】清水 初志
(74)【代理人】
【識別番号】100205707
【弁理士】
【氏名又は名称】小寺 秀紀
(74)【代理人】
【識別番号】100160923
【弁理士】
【氏名又は名称】山口 裕孝
(74)【代理人】
【識別番号】100119507
【弁理士】
【氏名又は名称】刑部 俊
(74)【代理人】
【識別番号】100142929
【弁理士】
【氏名又は名称】井上 隆一
(74)【代理人】
【識別番号】100148699
【弁理士】
【氏名又は名称】佐藤 利光
(74)【代理人】
【識別番号】100188433
【弁理士】
【氏名又は名称】梅村 幸輔
(74)【代理人】
【識別番号】100128048
【弁理士】
【氏名又は名称】新見 浩一
(74)【代理人】
【識別番号】100129506
【弁理士】
【氏名又は名称】小林 智彦
(74)【代理人】
【識別番号】100114340
【弁理士】
【氏名又は名称】大関 雅人
(74)【代理人】
【識別番号】100214396
【弁理士】
【氏名又は名称】塩田 真紀
(74)【代理人】
【識別番号】100121072
【弁理士】
【氏名又は名称】川本 和弥
(74)【代理人】
【識別番号】100221741
【弁理士】
【氏名又は名称】酒井 直子
(74)【代理人】
【識別番号】100114926
【弁理士】
【氏名又は名称】枝松 義恵
(72)【発明者】
【氏名】ダ ローザ クレール
(72)【発明者】
【氏名】キム ド ジン
(72)【発明者】
【氏名】リサインゴ キャサリン
(72)【発明者】
【氏名】マクドナルド マデリーン
(72)【発明者】
【氏名】モンロー キャサリン エム．
(72)【発明者】
【氏名】パーク ジョシュア アイ．
(72)【発明者】
【氏名】プロプソン ニコラス イー．
(72)【発明者】
【氏名】サベルストロム ハンナ
(72)【発明者】
【氏名】セオリス ジュニア リチャード
(72)【発明者】
【氏名】ウィーラッコディー ターニャ エヌ．
(72)【発明者】
【氏名】ヤン アレクサンダー
【テーマコード（参考）】
4B064
4B065
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B064AG27
4B064CA19
4B064CC24
4B064CE10
4B064DA01
4B065AA01X
4B065AA57X
4B065AA72X
4B065AA87X
4B065AB01
4B065BA02
4B065CA44
4H045AA11
4H045BA10
4H045BA41
4H045DA76
4H045EA21
4H045FA74
(57)【要約】
本明細書において、カニクイザルＰＩＬＲＡタンパク質及びヒトＰＩＬＲＡタンパク質に対して同等の結合性を有するが、ヒトＰＩＬＲＢタンパク質に対してより弱い結合性を有し、加えて、ＰＩＬＲＡ Ｇ７８バリアント及びＲ７８バリアントの両方に対する結合性を有する、非常に望ましい選択性を有する抗ＰＩＬＲＡ抗体が提供される。本明細書に記載される抗体の結合性及び選択性プロファイルは、代用の分子に依存する必要なしにそれらを動物試験（例えば、サル）に使用することを可能にし、また、いずれのＰＩＬＲＡバリアントを有する対象の処置の場合にも使用することを可能にする。更に、ＰＩＬＲＡに関する生物学的発見及び細胞におけるＰＩＬＲＡシグナル伝達を低減させる効果が、本明細書において初めて記載される。
【選択図】なし
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
カニクイザルペア型免疫グロブリン様２型受容体α（ｃｙｎｏＰＩＬＲＡ）に特異的に結合する、単離された抗体またはその抗原結合断片であって、該ｃｙｎｏＰＩＬＲＡに対する結合親和性が、ヒトペア型免疫グロブリン様２型受容体β（ｈＰＩＬＲＢ）に対する結合親和性より少なくとも２倍強い、該単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項2】
前記抗体またはその抗原結合断片が、ヒトペア型免疫グロブリン様２型受容体α（ｈＰＩＬＲＡ）にも結合する、請求項１に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項3】
ヒトペア型免疫グロブリン様２型受容体α（ｈＰＩＬＲＡ）及びカニクイザルＰＩＬＲＡ（ｃｙｎｏＰＩＬＲＡ）に結合する、単離された抗体またはその抗原結合断片であって、該ｃｙｎｏＰＩＬＲＡに対する結合親和性が、該ｈＰＩＬＲＡに対する結合親和性と比較して１００倍以内である、該単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項4】
前記ｈＰＩＬＲＡに対する結合親和性が、前記ｈＰＩＬＲＢに対する結合親和性より少なくとも１０倍強い、請求項２または３に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項5】
前記ｃｙｎｏＰＩＬＲＡに対する結合親和性が、前記ｈＰＩＬＲＢに対する結合親和性より少なくとも１０倍強い、請求項１～４のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項6】
ヒトペア型免疫グロブリン様２型受容体α（ｈＰＩＬＲＡ）に結合する、単離された抗体またはその抗原結合断片であって、該抗体またはその抗原結合断片が、６３位、６４位、７８位、１０６位、１４３位、１１６～１１８位、及び１８２～１８６位の位置のうちの１つ以上における１個以上のアミノ酸に結合し、該位置が配列番号１の配列を参照して決定される、該単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項7】
前記抗体またはその抗原結合断片が、７８位、１０６位、及び１４３位の位置のうちの１つ以上における１個以上のアミノ酸に結合する、請求項６に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項8】
前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号１のＧ７８、Ｋ１０６、及びＥ１４３に結合する、請求項６または７に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項9】
前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号１３６のＲ７８、Ｋ１０６、及びＥ１４３に結合する、請求項６または７に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項10】
前記抗体またはその抗原結合断片が、６３位及び６４位の位置のうちの１つ以上における１個以上のアミノ酸に結合する、請求項６に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項11】
前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号１のＴ６３及びＡ６４に結合する、請求項６または１０に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項12】
前記抗体またはその抗原結合断片が、１０６位、１１６～１１８位、及び１８２～１８６位の位置のうちの１つ以上における１個以上のアミノ酸に結合する、請求項６に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項13】
前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号１のＫ１０６に結合する、請求項６または１２に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項14】
前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号１のＱ１１６、Ｋ１１７、及び／またはＱ１１８に結合する、請求項６または１２に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項15】
前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号１のＱ１８２、Ｇ１８３、Ｋ１８４、Ｒ１８５、及び／またはＲ１８６に結合する、請求項６または１２に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項16】
前記抗体またはその抗原結合断片が、以下：（ａ）配列番号４～１１のいずれか１つのアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号４～１１のいずれか１つのアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲ－Ｈ１）配列、
（ｂ）配列番号１２～１９のいずれか１つのアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性を有するか、または配列番号１２～１９のいずれか１つのアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ２（ＣＤＲ－Ｈ２）配列、
（ｃ）配列番号２０～２９のいずれか１つのアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性を有するか、または配列番号２０～２９のいずれか１つのアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲ－Ｈ３）配列、
（ｄ）配列番号３０～３８のいずれか１つのアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号３０～３８のいずれか１つのアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲ－Ｌ１）配列、
（ｅ）配列番号３９～４６のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性を有するか、または配列番号３９～４６のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ２（ＣＤＲ－Ｌ２）配列、及び
（ｆ）配列番号４７～５３のいずれか１つのアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性を有するか、または配列番号４７～５３のいずれか１つのアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲ－Ｌ３）配列
を含む、請求項１～１５のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項17】
前記アミノ酸置換が保存的置換である、請求項１６に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項18】
前記抗体または抗原結合断片が、以下：（ｉ）配列番号４の配列を含むか、もしくは配列番号４の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１２の配列を含むか、もしくは配列番号１２の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２０の配列を含むか、もしくは配列番号２０の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３０の配列を含むか、もしくは配列番号３０の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３９の配列を含むか、もしくは配列番号３９の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４７の配列を含むか、もしくは配列番号４７の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｉｉ）配列番号５の配列を含むか、もしくは配列番号５の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１３の配列を含むか、もしくは配列番号１３の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２２の配列を含むか、もしくは配列番号２２の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３１の配列を含むか、もしくは配列番号３１の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３９の配列を含むか、もしくは配列番号３９の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４７の配列を含むか、もしくは配列番号４７の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｉｉｉ）配列番号６の配列を含むか、もしくは配列番号６の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１４の配列を含むか、もしくは配列番号１４の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２３の配列を含むか、もしくは配列番号２３の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３２の配列を含むか、もしくは配列番号３２の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４０の配列を含むか、もしくは配列番号４０の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４８の配列を含むか、もしくは配列番号４８の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｌ３、
（ｉｖ）配列番号７の配列を含むか、もしくは配列番号７の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１５の配列を含むか、もしくは配列番号１５の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２４の配列を含むか、もしくは配列番号２４の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３３の配列を含むか、もしくは配列番号３３の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４１の配列を含むか、もしくは配列番号４１の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４９の配列を含むか、もしくは配列番号４９の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｖ）配列番号７の配列を含むか、もしくは配列番号７の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１５の配列を含むか、もしくは配列番号１５の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２５の配列を含むか、もしくは配列番号２５の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３４の配列を含むか、もしくは配列番号３４の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４２の配列を含むか、もしくは配列番号４２の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４９の配列を含むか、もしくは配列番号４９の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｖｉ）配列番号８の配列を含むか、もしくは配列番号８の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１６の配列を含むか、もしくは配列番号１６の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２６の配列を含むか、もしくは配列番号２６の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３５の配列を含むか、もしくは配列番号３５の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４３の配列を含むか、もしくは配列番号４３の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号５０の配列を含むか、もしくは配列番号５０の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｌ３
を含む、請求項１６または１７に記載の単離された抗体または抗原結合断片。
【請求項19】
前記抗体またはその抗原結合断片が、以下：（ａ）ＧＸ１ＴＦＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｈ（配列番号７４）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列であって、Ｘ１がＦまたはＹであり、Ｘ２がＤまたはＩであり、Ｘ３がＤまたはＧであり、Ｘ４がＹまたはＦであり、Ｘ５がＡまたはＹであり、かつＸ６がＭまたはＩである、該ＣＤＲ－Ｈ１配列、
（ｂ）Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５ＳＧＸ６Ｘ７Ｘ８（配列番号７５）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列であって、Ｘ１がＧまたはＷであり、Ｘ２がＦ、Ｍ、またはＩであり、Ｘ３がＳまたはＮであり、Ｘ４がＷまたはＰであり、Ｘ５がＮまたはＥであり、Ｘ６がＳまたはＤであり、Ｘ７がＩまたはＴであり、かつＸ８がＧまたはＴである、該ＣＤＲ－Ｈ２配列、
（ｃ）Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９ＦＤＸ１０（配列番号７６）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列であって、Ｘ１がＤであるか、または存在せず、Ｘ２がＫまたはＧであり、Ｘ３がＳまたはＮであり、Ｘ４がＩまたはＷであり、Ｘ５がＳ、Ｇ、またはＮであり、Ｘ６がＡまたはＦであり、Ｘ７がＡまたはＰであり、Ｘ８がＧまたはＤであり、Ｘ９がＲまたはＴであり、かつＸ１０がＹ、Ｓ、またはＦである、該ＣＤＲ－Ｈ３配列、
（ｄ）Ｘ１Ｘ２ＳＸ３Ｘ４ＩＸ５Ｘ６ＹＬＮ（配列番号７７）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列であって、Ｘ１がＱまたはＲであり、Ｘ２がＡまたはＳであり、Ｘ３がＲまたはＱであり、Ｘ４がＲ、Ｇ、またはＳであり、Ｘ５がＮまたはＳであり、かつＸ６がＮまたはＩである、該ＣＤＲ－Ｌ１配列、
（ｅ）Ｘ１ＡＳＸ２ＬＸ３Ｘ４（配列番号７８）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列であって、Ｘ１がＤまたはＶであり、Ｘ２がＮまたはＳであり、Ｘ３がＥまたはＱであり、かつＸ４がＴまたはＳである、該ＣＤＲ－Ｌ２配列、及び
（ｆ）ＱＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４ＰＸ５Ｔ（配列番号７９）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列であって、Ｘ１がＹまたはＳであり、Ｘ２がＤまたはＹであり、Ｘ３がＮまたはＳであり、Ｘ４がＬまたはＡであり、かつＸ５がＬまたはＦである、該ＣＤＲ－Ｌ３配列
を含む、請求項１～１６のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項20】
前記抗体または抗原結合断片が、以下：（ｉ）配列番号４の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１２の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２０の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３０の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３９の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４７の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｉｉ）配列番号５の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１３の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２２の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３１の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３９の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４７の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｉｉｉ）配列番号６の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１４の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２３の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３２の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４０の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４８の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３
を含む、請求項１９に記載の単離された抗体または抗原結合断片。
【請求項21】
前記抗体またはその抗原結合断片が、以下：（ｉ）配列番号７の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１５の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２４の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３３の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４１の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４９の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｉｉ）配列番号７の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１５の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２５の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３４の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４２の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４９の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｉｉｉ）配列番号８の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１６の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２６の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３５の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４３の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号５０の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３
を含む、請求項１～１６のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項22】
配列番号５４～６３のいずれか１つに対する少なくとも８５％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）配列を含む、請求項１～２１のいずれか１項に記載の単離された抗体または抗原結合断片。
【請求項23】
前記ＶＨ配列が、配列番号５４～６３のいずれか１つの配列を含む、請求項２２に記載の単離された抗体または抗原結合断片。
【請求項24】
配列番号１３７～１４４及び１５８のいずれか１つに対する少なくとも８５％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）配列を含む、請求項１～２１のいずれか１項に記載の単離された抗体または抗原結合断片。
【請求項25】
前記ＶＨ配列が、配列番号１３７～１４４及び１５８のいずれか１つの配列を含む、請求項２４に記載の単離された抗体または抗原結合断片。
【請求項26】
配列番号６４～７３のいずれか１つに対する少なくとも８５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）配列を含む、請求項１～２５のいずれか１項に記載の単離された抗体または抗原結合断片。
【請求項27】
前記ＶＬ配列が、配列番号６４～７３のいずれか１つの配列を含む、請求項２６に記載の単離された抗体または抗原結合断片。
【請求項28】
配列番号１４５～１４９のいずれか１つに対する少なくとも８５％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＬ）配列を含む、請求項１～２５のいずれか１項に記載の単離された抗体または抗原結合断片。
【請求項29】
前記ＶＬ配列が、配列番号１４５～１４９のいずれか１つの配列を含む、請求項２８に記載の単離された抗体または抗原結合断片。
【請求項30】
前記抗体または抗原結合断片が、以下：（ｉ）配列番号５４を含むＶＨ配列及び配列番号６５を含むＶＬ配列、または
（ｉｉ）配列番号５６を含むＶＨ配列及び配列番号６６を含むＶＬ配列、または
（ｉｉｉ）配列番号５７を含むＶＨ配列及び配列番号６７を含むＶＬ配列、または
（ｉｖ）配列番号５８を含むＶＨ配列及び配列番号６８を含むＶＬ配列、または
（ｖ）配列番号５９を含むＶＨ配列及び配列番号６９を含むＶＬ配列、または
（ｖｉ）配列番号６０を含むＶＨ配列及び配列番号７０を含むＶＬ配列
を含む、請求項１～２９のいずれか１項に記載の単離された抗体または抗原結合断片。
【請求項31】
前記抗体または抗原結合断片が、以下：（ｉ）配列番号５４を含むＶＨ配列及び配列番号６５を含むＶＬ配列、または
（ｉｉ）配列番号５６を含むＶＨ配列及び配列番号６６を含むＶＬ配列、または
（ｉｉｉ）配列番号５７を含むＶＨ配列及び配列番号６７を含むＶＬ配列
を含む、請求項１～３０のいずれか１項に記載の単離された抗体または抗原結合断片。
【請求項32】
前記抗体または抗原結合断片が、以下：（ｉ）配列番号１３７を含むＶＨ配列及び配列番号１４５を含むＶＬ配列、または
（ｉｉ）配列番号１４０を含むＶＨ配列及び配列番号１４５を含むＶＬ配列、または
（ｉｉｉ）配列番号１４３を含むＶＨ配列及び配列番号１４６を含むＶＬ配列、または
（ｉｖ）配列番号１４３を含むＶＨ配列及び配列番号１４９を含むＶＬ配列
を含む、請求項１～２９のいずれか１項に記載の単離された抗体または抗原結合断片。
【請求項33】
前記抗体が、Ｆｃドメインを形成している２つのＦｃポリペプチドを含む、請求項１～３２のいずれか１項に記載の単離された抗体または抗原結合断片。
【請求項34】
一方または両方のＦｃポリペプチドが、配列番号９４の配列に対する少なくとも８５％の同一性を有する配列を含む、請求項３３に記載の単離された抗体または抗原結合断片。
【請求項35】
前記抗体がＩｇＧ１である、請求項１～３４のいずれか１項に記載の単離された抗体または抗原結合断片。
【請求項36】
前記抗体が全長抗体である、請求項１～３５のいずれか１項に記載の単離された抗体または抗原結合断片。
【請求項37】
ヒトペア型免疫グロブリン様２型受容体α（ｈＰＩＬＲＡ）に結合する、単離された抗体またはその抗原結合断片であって、該抗体またはその抗原結合断片が、表１の抗体クローン１～３９からなる群から選択される抗体クローンにより認識されるエピトープと同じかまたは実質的に同じであるエピトープを認識する、該単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項38】
前記抗体またはその抗原結合断片が、抗体クローン２、４、及び５からなる群から選択される抗体クローンにより認識されるエピトープと同じかまたは実質的に同じであるエピトープを認識する、請求項３７に記載の単離された抗体または抗原結合断片。
【請求項39】
前記抗体またはその抗原結合断片が、ｈＰＩＬＲＡ活性をアンタゴナイズする、請求項１～３８のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項40】
前記抗体またはその抗原結合断片が、ｈＰＩＬＲＡへのシアリル化タンパク質の結合を遮断する、請求項１～３９のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項41】
前記シアリル化タンパク質が、シアリル化されたＮＰＤＣ１、ＰＡＮＰ、ＨＳＶ－１ ｇＢ、ＣＯＬＥＣ１２、Ｃ４ａ、Ｃ４ｂ、ＤＡＧ１、またはＣｌｅｃ４ｇである、請求項４０に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項42】
前記抗体またはその抗原結合断片が、ＥＧＦＲもしくはＳＴＡＴ３のリン酸化を増強するか、またはＳＴＡＴ１のリン酸化を減少させる、請求項１～４１のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項43】
前記抗体またはその抗原結合断片が、細胞遊走を増強する、請求項１～４２のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項44】
前記抗体またはその抗原結合断片が、ミクログリア遊走を増強する、請求項４３に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項45】
前記抗体またはその抗原結合断片が、抗炎症性遺伝子またはタンパク質の発現を増強する、請求項１～４４のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項46】
前記抗体またはその抗原結合断片が、ＩＬ１ＲＮ遺伝子の発現を増強する、請求項４５に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項47】
前記抗体またはその抗原結合断片が、炎症誘発性サイトカインタンパク質の発現または分泌を低減させる、請求項１～４６のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項48】
前記抗体またはその抗原結合断片が、ＴＮＦ、ＩＬ－６、及び／またはＩＰ－１０の発現を低減させる、請求項４７に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項49】
前記抗体またはその抗原結合断片が、細胞呼吸を増加させる、請求項１～４８のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項50】
前記抗体またはその抗原結合断片が、ミトコンドリア呼吸を増加させる、請求項４９に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項51】
前記抗体またはその抗原結合断片が、ＡＴＰ産生を増加させる、請求項１～５０のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項52】
前記抗体またはその抗原結合断片が、脂肪酸代謝を増加させる、請求項１～５１のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項53】
前記抗体またはその抗原結合断片が、末梢免疫細胞を活性化しない、請求項１～５２のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項54】
前記抗体またはその抗原結合断片が、好中球及び単球を活性化しない、請求項５３に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項55】
前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項１～５４のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項56】
前記抗体がキメラ抗体である、請求項１～５５のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項57】
前記抗体がヒト化抗体である、請求項１～５６のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項58】
前記抗体が完全ヒト抗体である、請求項１～５７のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項59】
前記抗原結合断片が、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、または二価ｓｃＦｖである、請求項１～５８のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項60】
ｈＰＩＬＲＡへの結合について請求項１～５９のいずれか１項に記載の単離された抗体と競合する、抗体またはその抗原結合断片。
【請求項61】
請求項１～５９のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
【請求項62】
請求項１～５９のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片をコードする核酸配列を含む、ポリヌクレオチド。
【請求項63】
請求項６２に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
【請求項64】
請求項６２に記載のポリヌクレオチドを含む、宿主細胞。
【請求項65】
単離された抗体またはその抗原結合断片を産生するための方法であって、請求項６２に記載のポリヌクレオチドによりコードされる単離された抗体またはその抗原結合断片が発現される条件下で宿主細胞を培養する工程を含む、該方法。
【請求項66】
請求項１～５９のいずれか１項に記載の単離された抗体もしくはその抗原結合断片または請求項６１に記載の医薬組成物と、それらの使用説明書と
を含む、キット。
【請求項67】
対象における神経変性疾患を処置する方法であって、請求項１～５９のいずれか１項に記載の単離された抗体もしくはその抗原結合断片または請求項６１に記載の医薬組成物を該対象に投与する工程を含む、該方法。
【請求項68】
前記神経変性疾患が、アルツハイマー病、原発性加齢関連タウオパチー、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、前頭側頭型認知症、１７番染色体に連鎖しパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症、嗜銀顆粒性認知症、筋萎縮性側索硬化症、グアム島の筋萎縮性側索硬化症／パーキンソン認知症複合（ＡＬＳ－ＰＤＣ）、大脳皮質基底核変性症、慢性外傷性脳症、クロイツフェルト・ヤコブ病、ボクサー認知症、石灰沈着を伴うびまん性神経原線維変化病、ダウン症候群、家族性英国型認知症、家族性デンマーク型認知症、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー病、球状グリア性タウオパチー、グアドループにおける認知症を伴うパーキンソニズム（Ｇｕａｄｅｌｏｕｐｅａｎ ｐａｒｋｉｎｓｏｎｉｓｍ ｗｉｔｈ ｄｅｍｅｎｔｉａ）、グアドループにおけるＰＳＰ（Ｇｕａｄｅｌｏｐｅａｎ ＰＳＰ）、ハレルフォルデン・スパッツ病、神経軸索スフェロイド形成を伴う遺伝性びまん性白質脳症（ＨＤＬＳ）、ハンチントン病、封入体筋炎、多系統萎縮症、筋緊張性ジストロフィー、那須ハコラ病、神経原線維変化優位型認知症、ニーマン・ピック病Ｃ型、淡蒼球・橋・黒質変性症、パーキンソン病、ピック病、脳炎後パーキンソニズム、プリオンタンパク質・脳アミロイドアンギオパチー（ｐｒｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｅｒｅｂｒａｌ ａｍｙｌｏｉｄ ａｎｇｉｏｐａｔｈｙ）、進行性皮質下グリオーシス、亜急性硬化性全脳炎、及び神経原線維変化型認知症からなる群から選択される、請求項６７に記載の方法。
【請求項69】
前記神経変性疾患がアルツハイマー病である、請求項６８に記載の方法。
【請求項70】
ある分子がＰＩＬＲＡタンパク質に対する活性を有するかどうかを決定するための方法であって、（ａ）該ＰＩＬＲＡタンパク質を発現する細胞を該分子と接触させる工程と、
（ｂ）より低いＰＩＬＲＡ発現を有する、工程（ａ）と同じ種類の細胞を、工程（ａ）の前、それと同時、またはその後のいずれかにおいて該分子と接触させる工程と、
（ｃ）両方の細胞における、リン酸化ＳＴＡＴ３（ｐＳＴＡＴ３）レベル、リン酸化ＳＴＡＴ１（ｐＳＴＡＴ１）レベル、リン酸化ＥＧＦＲ（ｐＥＧＦＲ）レベル、カドヘリン発現、インテグリン発現、及びミクログリア遊走のうちの１つを測定する工程であって、これらの測定のうちの１つについての細胞間でのレベルの変化が、工程（ａ）の該ＰＩＬＲＡタンパク質に対する活性を該分子が有することを示す、該測定する工程と
を含む、該方法。
【請求項71】
工程（ａ）の前記細胞が、前記ＰＩＬＲＡタンパク質を天然に発現する、請求項７０に記載の方法。
【請求項72】
より低いＰＩＬＲＡ発現を有する前記細胞が、前記ＰＩＬＲＡタンパク質についてノックアウトされている、請求項７０または７１に記載の方法。
【請求項73】
前記細胞がミクログリアである、請求項７２に記載の方法。
【請求項74】
前記細胞がｉＭｉｃｒｏｇｌｉａである、請求項７３に記載の方法。
【請求項75】
前記細胞がＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａである、請求項７４に記載の方法。
【請求項76】
工程（ａ）の前記細胞が、前記ＰＩＬＲＡタンパク質を発現または過剰発現するように操作または改変されている、請求項７０に記載の方法。
【請求項77】
より低いＰＩＬＲＡ発現を有する前記細胞が、前記ＰＩＬＲＡタンパク質を天然に発現する、または前記ＰＩＬＲＡタンパク質の発現のための操作も改変もされていない、請求項７６に記載の方法。
【請求項78】
前記分子が、分子ライブラリー由来のものである、請求項７０～７７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項79】
前記分子が、前記ＰＩＬＲＡタンパク質に結合すると分かっている、請求項７０～７８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項80】
前記ＰＩＬＲＡタンパク質に前記分子が結合するかどうかが分かっていない、請求項７０～７８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項81】
前記分子が、抗体、ペプチド、有機低分子、または核酸である、請求項７０～８０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項82】
ＰＩＬＲＡタンパク質に結合する分子が、ＰＩＬＲＡを発現する細胞におけるシグナル伝達応答または活性を調節するかどうかを決定するための方法であって、（ａ）該細胞を該分子と接触させる工程と、
（ｂ）リン酸化ＳＴＡＴ３（ｐＳＴＡＴ３）レベル、リン酸化ＳＴＡＴ１（ｐＳＴＡＴ１）レベル、リン酸化ＥＧＦＲ（ｐＥＧＦＲ）レベル、カドヘリン発現、インテグリン発現、及びミクログリア遊走のうちの１つを測定する工程であって、該測定のうちの１つについてのレベルの変化が、ＰＩＬＲＡを発現する該細胞における該シグナル伝達応答または活性を該分子が調節することを示す、該測定する工程と
を含む、該方法。
【請求項83】
前記変化が、前記分子なしでの前記細胞におけるレベルと比較した、前記細胞に前記分子が接触した場合の前記測定のうちの１つについてのレベルの増加または減少である、請求項８２に記載の方法。
【請求項84】
前記細胞が、インビトロアッセイにおけるものである、請求項８２または８３に記載の方法。
【請求項85】
前記細胞が、哺乳動物におけるものである、請求項８２または８３に記載の方法。
【請求項86】
工程（ａ）が、前記哺乳動物に前記分子を投与することを含む、請求項８５に記載の方法。
【請求項87】
前記細胞が、ミクログリア、骨髄性細胞、単球、または好中球である、請求項８２～８６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項88】
操作されたヒト人工多能性幹細胞（ＩＰＳＣ）またはＩＰＳＣ細胞株であって、該ＩＰＳＣが、ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアントまたはＧ７８バリアントをコードする遺伝子を２コピー発現するように改変されている、該操作されたヒトＩＰＳＣまたはＩＰＳＣ細胞株。
【請求項89】
前記ＩＰＳＣが、内在性ゲノム遺伝子座で改変されている、請求項８８に記載の操作されたヒトＩＰＳＣまたはＩＰＳＣ細胞株。
【請求項90】
ヒト人工多能性幹細胞（ＩＰＳＣ）に由来する、操作されたミクログリア細胞モデルであって、該ＩＰＳＣが、ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアントまたはＧ７８バリアントをコードする遺伝子を２コピー発現するように改変されている、該操作されたミクログリア細胞モデル。
【請求項91】
前記ＩＰＳＣが、内在性ゲノム遺伝子座で改変されている、請求項９０に記載の操作されたミクログリア細胞モデル。
【請求項92】
マッチする一対の細胞株であって、（ａ）該対のうちの第１の細胞株が、ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性であり、かつ
（ｂ）該対のうちの第２の細胞株が、ＰＩＬＲＡタンパク質のＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性であり、
該対の第１及び第２の細胞株の両方が、同じ親細胞株に由来し、かつ一方または両方の細胞株が、内在性ＰＩＬＲＡ遺伝子において操作されている、
該マッチする一対の細胞株。
【請求項93】
前記親細胞株が、前記ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性である、請求項９２に記載のマッチする一対の細胞株。
【請求項94】
前記親細胞株が、前記ＰＩＬＲＡタンパク質のＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性である、請求項９２に記載のマッチする一対の細胞株。
【請求項95】
前記親細胞株が、前記ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアント及びＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてヘテロ接合性である、請求項９２に記載のマッチする一対の細胞株。
【請求項96】
前記ＰＩＬＲＡタンパク質のＧ７８バリアント及びＲ７８バリアントをコードする遺伝子についてヘテロ接合性である第３の細胞株を更に含む、請求項９２～９５のいずれか１項に記載のマッチする一対の細胞株。
【請求項97】
前記第３の細胞株が、前記ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアントまたはＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性である前記親細胞株に由来する、請求項９６に記載のマッチする一対の細胞株。
【請求項98】
改変されたＰＩＬＲＡ遺伝子を有する骨髄性細胞株または骨髄性細胞株に分化することができる幹細胞株を作製する方法であって、（ａ）既存の骨髄性細胞株または既存の幹細胞株が、ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性であるか、ＰＩＬＲＡタンパク質のＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性であるか、またはＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアント及びＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてヘテロ接合性であるかを決定する工程と、
（ｂ）ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアントまたはＰＩＬＲＡタンパク質のＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性である操作された細胞株を作製するために、ＰＩＬＲＡタンパク質をコードする遺伝子を改変することにより細胞株を操作する工程と
を含み、
該操作された細胞株が、操作される前は、選択されたバリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性ではなかった、
該方法。
【請求項99】
マッチする一対の細胞株を作製する方法であって、（ａ）既存の骨髄性細胞株または骨髄性細胞株に分化することができる既存の幹細胞株が、ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性であるか、ＰＩＬＲＡタンパク質のＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性であるか、またはＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアント及びＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてヘテロ接合性であるかを決定する工程と、
（ｂ）（ｉ）ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性である操作された細胞株を作製するために、ＰＩＬＲＡタンパク質をコードする遺伝子を改変することにより第１の細胞株を操作する、及び／または（ｉｉ）ＰＩＬＲＡタンパク質のＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性である操作された細胞株を作製するために、ＰＩＬＲＡタンパク質をコードする遺伝子を改変することにより第２の細胞株を操作する工程と
を含む、該方法。
【請求項100】
前記操作された細胞株が、操作される前は、選択されたバリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性ではなかった、請求項９９に記載の方法。
【請求項101】
工程（ａ）の前記既存の細胞株が、前記ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアントについてホモ接合性であり、かつ、工程（ｂ）の前記操作が、前記ＰＩＬＲＡタンパク質のＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性である操作された細胞株を作製するために、前記既存の細胞株を改変すること
を含む、請求項９８～１００のいずれか１項に記載の方法。
【請求項102】
工程（ａ）の前記既存の細胞株が、前記ＰＩＬＲＡタンパク質のＧ７８バリアントについてホモ接合性であり、かつ、工程（ｂ）の前記操作が、前記ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性である操作された細胞株を作製するために、前記既存の細胞株を改変すること
を含む、請求項９８～１００のいずれか１項に記載の方法。
【請求項103】
工程（ａ）の前記既存の細胞株が、前記ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアント及びＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてヘテロ接合性であり、かつ、工程（ｂ）の前記操作が、前記ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性である操作された細胞株、及び前記ＰＩＬＲＡタンパク質のＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性である操作された細胞株を作製するために、前記既存の細胞株を改変すること
を含む、請求項９８～１００のいずれか１項に記載の方法。
【請求項104】
前記骨髄性細胞株がＩＰＳＣ株である、請求項９８～１０３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項105】
ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアント及びＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてヘテロ接合性である、既存の骨髄性細胞株または骨髄性細胞株に分化することができる既存の幹細胞株から、マッチする一対の細胞株を作製する方法であって、（ａ）ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性である第１の操作された細胞株を作製するために、該既存の細胞株を操作する工程と、
（ｂ）ＰＩＬＲＡタンパク質のＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性である第２の操作された細胞株を作製するために、工程（ａ）で作製された細胞株または該既存の細胞株のいずれかを操作する工程と
を含む、該方法。
【請求項106】
ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアント及びＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてヘテロ接合性である、既存の骨髄性細胞株または骨髄性細胞株に分化することができる既存の幹細胞株から、マッチする一対の細胞株を作製する方法であって、（ａ）ＰＩＬＲＡタンパク質のＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性である第１の操作された細胞株を作製するために、該既存の細胞株を操作する工程と、
（ｂ）ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性である第２の操作された細胞株を作製するために、工程（ａ）で作製された細胞株または該既存の細胞株のいずれかを操作する工程と
を含む、該方法。
【請求項107】
ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性である、既存の骨髄性細胞株または骨髄性細胞株に分化することができる既存の幹細胞株から、マッチする一対の細胞株を作製する方法であって、ＰＩＬＲＡタンパク質のＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性である操作された細胞株を作製するために、該既存の細胞株を操作する工程を含む、該方法。
【請求項108】
ＰＩＬＲＡタンパク質のＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性である、既存の骨髄性細胞株または骨髄性細胞株に分化することができる既存の幹細胞株から、マッチする一対の細胞株を作製する方法であって、ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性である操作された細胞株を作製するために、該既存の細胞株を操作する工程を含む、該方法。
【請求項109】
前記骨髄性細胞株がＩＰＳＣ株である、請求項１０５～１０８のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年１２月１７日に出願された米国仮特許出願第６３／２９０，９３０号の優先権を主張し、その開示は全ての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０２１年１２月１７日に出願された米国仮特許出願第６３／２９０，９３０号の優先権を主張し、その開示は全ての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【0002】
背景
ペア型免疫グロブリン様２型受容体α（ＰＩＬＲＡ）は、ミクログリアなどの様々な免疫細胞で発現し、抑制性細胞シグナル伝達経路において機能すると考えられている膜貫通受容体である。ＰＩＬＲＡのミスセンスバリアント（Ｇ７８Ｒ）は、アルツハイマー病リスクの減少に関連付けられる。Ｇ７８Ｒバリアントは、シアル酸結合に必須な残基の相互作用を変化させ、幾つかのＰＩＬＲＡリガンドに対する結合性の低減をもたらす。
ペア型免疫グロブリン様２型受容体α（ＰＩＬＲＡ）は、ミクログリアなどの様々な免疫細胞で発現し、抑制性細胞シグナル伝達経路において機能すると考えられている膜貫通受容体である。ＰＩＬＲＡのミスセンスバリアント（Ｇ７８Ｒ）は、アルツハイマー病リスクの減少に関連付けられる。Ｇ７８Ｒバリアントは、シアル酸結合に必須な残基の相互作用を変化させ、幾つかのＰＩＬＲＡリガンドに対する結合性の低減をもたらす。
【0003】
ＰＩＬＲＡ活性を調節する治療薬が依然として必要とされている。
【発明の概要】
【0004】
簡単な概要
本明細書では、カニクイザルＰＩＬＲＡ（ｃｙｎｏＰＩＬＲＡ）及びｈＰＩＬＲＡの両方に選択的に結合するが、ヒトＰＩＬＲＢ（ｈＰＩＬＲＢ）に対する比較的より低い結合性を有し得る抗体が記載される。本発明者らは、望ましい選択性を可能にするエピトープを同定した。この選択性プロファイルは、非常に有利であるが、ｃｙｎｏＰＩＬＲＡとｈＰＩＬＲＢとの間の高い相同性を考慮すると非常に困難でもある。カニクイザルタンパク質とヒトタンパク質との間で同等の結合性を有することは、代用の分子に依存する必要なく、サルでの試験を実施することを可能にする。対照的に、ＰＩＬＲＢへの結合は、ＰＩＬＲＢがＰＩＬＲＡと非常に類似する細胞外ドメインを有するが、異なる細胞内ドメインを有し、これが異なる活性または更には反対の活性を有すると予想されるため、望ましくない。
本明細書では、カニクイザルＰＩＬＲＡ（ｃｙｎｏＰＩＬＲＡ）及びｈＰＩＬＲＡの両方に選択的に結合するが、ヒトＰＩＬＲＢ（ｈＰＩＬＲＢ）に対する比較的より低い結合性を有し得る抗体が記載される。本発明者らは、望ましい選択性を可能にするエピトープを同定した。この選択性プロファイルは、非常に有利であるが、ｃｙｎｏＰＩＬＲＡとｈＰＩＬＲＢとの間の高い相同性を考慮すると非常に困難でもある。カニクイザルタンパク質とヒトタンパク質との間で同等の結合性を有することは、代用の分子に依存する必要なく、サルでの試験を実施することを可能にする。対照的に、ＰＩＬＲＢへの結合は、ＰＩＬＲＢがＰＩＬＲＡと非常に類似する細胞外ドメインを有するが、異なる細胞内ドメインを有し、これが異なる活性または更には反対の活性を有すると予想されるため、望ましくない。
【0005】
更に、本明細書に記載されるこの選択性プロファイルを有するある特定の抗体は、ＰＩＬＲＡの両方のバリアント型（Ｇ７８及びＲ７８）にも結合し、これらに対する活性を有し、従って、このことにより、各バリアントの頻度が世界のそれぞれの地域で大きく異なることを考慮して、それらを種々の集団で使用できるようになる。
【0006】
非常に有用な抗体を開発することに加えて、本発明者らは、ＰＩＬＲＡシグナル伝達の特定の下流エフェクターの発見が含まれる、ＰＩＬＲＡ生物学に関連する重要な発見もし、ミクログリアにおけるＰＩＬＲＡ受容体によるシグナル伝達を減少させる効果を初めて特徴付けた。これらの洞察は、ＰＩＬＲＡリガンドの遮断を細胞における生物学的効果に関連付けることを初めて可能にし、医薬品の発見ならびに既知のＰＩＬＲＡ結合剤の細胞及び動物に対する生物学的影響の測定の両方のための新たな手法を提供する。
【0007】
一態様では、本開示は、カニクイザルペア型免疫グロブリン様２型受容体α（ｃｙｎｏＰＩＬＲＡ）に特異的に結合する、単離された抗体またはその抗原結合断片を特徴とし、ここで、ｃｙｎｏＰＩＬＲＡに対する結合親和性は、ヒトペア型免疫グロブリン様２型受容体β（ｈＰＩＬＲＢ）に対する結合親和性より少なくとも２倍（例えば、少なくとも２倍、５倍、１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、または１００倍）強い。幾つかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ヒトペア型免疫グロブリン様２型受容体α（ｈＰＩＬＲＡ）にも結合する。
【0008】
別の態様では、本開示は、ヒトペア型免疫グロブリン様２型受容体α（ｈＰＩＬＲＡ）及びカニクイザルＰＩＬＲＡ（ｃｙｎｏＰＩＬＲＡ）に結合する、単離された抗体またはその抗原結合断片を特徴とし、ここで、ｃｙｎｏＰＩＬＲＡに対する結合親和性は、ｈＰＩＬＲＡに対する結合親和性と比較して１００倍以内（例えば、９０倍、８０倍、７０倍、６０倍、５０倍、４０倍、３０倍、２０倍、１０倍、５倍、または２倍以内）である。
【0009】
この態様の幾つかの実施形態では、ｃｙｎｏＰＩＬＲＡに対する結合親和性は、ｈＰＩＬＲＡに対する結合親和性と比較して５０倍以内（例えば、４５倍、４０倍、３５倍、３０倍、２５倍、２０倍、１５倍、１０倍、５倍、または２倍以内）である。この態様の幾つかの実施形態では、ｃｙｎｏＰＩＬＲＡに対する結合親和性は、ｈＰＩＬＲＡに対する結合親和性と比較して２５倍以内（例えば、２０倍、１５倍、１０倍、９倍、８倍、７倍、６倍、５倍、４倍、３倍、または２倍以内）である。幾つかの実施形態では、ｃｙｎｏＰＩＬＲＡに対する結合親和性は、ｈＰＩＬＲＡに対する結合親和性と比較して１０倍以内（例えば、９倍、８倍、７倍、６倍、５倍、４倍、３倍、または２倍以内）である。ある特定の実施形態では、ｃｙｎｏＰＩＬＲＡに対する結合親和性は、ｈＰＩＬＲＡに対する結合親和性と比較して５倍以内（例えば、４倍、３倍、または２倍以内）である。特定の実施形態では、ｃｙｎｏＰＩＬＲＡに対する結合親和性は、ｈＰＩＬＲＡに対する結合親和性と比較して２倍以内である。
【0010】
この態様の幾つかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ｈＰＩＬＲＡ及びｃｙｎｏＰＩＬＲＡと比較してより弱い親和性でヒトペア型免疫グロブリン様２型受容体β（ｈＰＩＬＲＢ）に結合する。幾つかの実施形態では、ｈＰＩＬＲＡに対する結合親和性は、ｈＰＩＬＲＢに対する結合親和性より少なくとも１０倍（例えば、少なくとも２０倍、４０倍、６０倍、８０倍、１００倍、１２０倍、１４０倍、１６０倍、１８０倍、２００倍、２２０倍、２４０倍、２６０倍、２８０倍、または３００倍）強い。幾つかの実施形態では、ｈＰＩＬＲＡに対する結合親和性は、ｈＰＩＬＲＢに対する結合親和性より少なくとも２５倍（例えば、少なくとも３０倍、３５倍、４０倍、４５倍、５０倍、５５倍、６０倍、８０倍、１００倍、１２０倍、１４０倍、１６０倍、１８０倍、２００倍、２２０倍、２４０倍、２６０倍、２８０倍、または３００倍）強い。ある特定の実施形態では、ｈＰＩＬＲＡに対する結合親和性は、ｈＰＩＬＲＢに対する結合親和性より少なくとも１００倍（例えば、少なくとも１１０倍、１２０倍、１３０倍、１４０倍、１５０倍、１６０倍、１７０倍、１８０倍、１９０倍、２００倍、２２０倍、２４０倍、２６０倍、２８０倍、または３００倍）強い。
【0011】
本明細書に記載される本開示の態様の幾つかの実施形態では、ｃｙｎｏＰＩＬＲＡに対する結合親和性は、ｈＰＩＬＲＢに対する結合親和性より少なくとも１０倍（例えば、少なくとも２０倍、４０倍、６０倍、８０倍、または１００倍）強い。幾つかの実施形態では、ｃｙｎｏＰＩＬＲＡに対する結合親和性は、ｈＰＩＬＲＢに対する結合親和性より少なくとも２５倍（例えば、少なくとも３０倍、３５倍、４０倍、４５倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、または１００倍）強い。
【0012】
別の態様では、本開示は、ヒトペア型免疫グロブリン様２型受容体α（ｈＰＩＬＲＡ）に結合する、単離された抗体またはその抗原結合断片を特徴とし、ここで、当該抗体またはその抗原結合断片は、６３位、６４位、７８位、１０６位、１４３位、１１６～１１８位、及び１８２～１８６位の位置のうちの１つ以上における１個以上のアミノ酸に結合し、位置は配列番号１の配列を参照して決定される。
【0013】
幾つかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、７８位、１０６位、及び１４３位の位置のうちの１つ以上における１個以上のアミノ酸に結合する。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１のＧ７８、Ｋ１０６、及びＥ１４３に結合する。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１３６のＲ７８、Ｋ１０６、及びＥ１４３に結合する。
【0014】
幾つかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、６３位及び６４位の位置のうちの１つ以上における１個以上のアミノ酸に結合する。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１のＴ６３及びＡ６４に結合する。
【0015】
幾つかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、１０６位、１１６～１１８位、及び１８２～１８６位の位置のうちの１つ以上における１個以上のアミノ酸に結合する。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１のＫ１０６に結合する。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１のＱ１１６、Ｋ１１７、及び／またはＱ１１８に結合する。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１のＱ１８２、Ｇ１８３、Ｋ１８４、Ｒ１８５、及び／またはＲ１８６に結合する。
【0016】
本明細書に記載される本開示の態様の幾つかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、以下を含む：
（ａ）配列番号４～１１のいずれか１つのアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号４～１１のいずれか１つのアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲ－Ｈ１）配列；
（ｂ）配列番号１２～１９のいずれか１つのアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号１２～１９のいずれか１つのアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ２（ＣＤＲ－Ｈ２）配列；
（ｃ）配列番号２０～２９のいずれか１つのアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号２０～２９のいずれか１つのアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲ－Ｈ３）配列；
（ｄ）配列番号３０～３８のいずれか１つのアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号３０～３８のいずれか１つのアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲ－Ｌ１）配列；
（ｅ）配列番号３９～４６のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号３９～４６のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ２（ＣＤＲ－Ｌ２）配列；及び
（ｆ）配列番号４７～５３のいずれか１つのアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号４７～５３のいずれか１つのアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲ－Ｌ３）配列。
（ａ）配列番号４～１１のいずれか１つのアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号４～１１のいずれか１つのアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲ－Ｈ１）配列；
（ｂ）配列番号１２～１９のいずれか１つのアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号１２～１９のいずれか１つのアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ２（ＣＤＲ－Ｈ２）配列；
（ｃ）配列番号２０～２９のいずれか１つのアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号２０～２９のいずれか１つのアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲ－Ｈ３）配列；
（ｄ）配列番号３０～３８のいずれか１つのアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号３０～３８のいずれか１つのアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲ－Ｌ１）配列；
（ｅ）配列番号３９～４６のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号３９～４６のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ２（ＣＤＲ－Ｌ２）配列；及び
（ｆ）配列番号４７～５３のいずれか１つのアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号４７～５３のいずれか１つのアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲ－Ｌ３）配列。
【0017】
幾つかの実施形態では、アミノ酸置換は、保存的置換である。
【0018】
幾つかの実施形態では、抗体または抗原結合断片は、以下を含む：
（ｉ）配列番号４の配列を含むか、もしくは配列番号４の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１２の配列を含むか、もしくは配列番号１２の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２０の配列を含むか、もしくは配列番号２０の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３０の配列を含むか、もしくは配列番号３０の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３９の配列を含むか、もしくは配列番号３９の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４７の配列を含むか、もしくは配列番号４７の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｌ３；または
（ｉｉ）配列番号５の配列を含むか、もしくは配列番号５の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１３の配列を含むか、もしくは配列番号１３の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２２の配列を含むか、もしくは配列番号２２の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３１の配列を含むか、もしくは配列番号３１の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３９の配列を含むか、もしくは配列番号３９の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４７の配列を含むか、もしくは配列番号４７の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｌ３；または
（ｉｉｉ）配列番号６の配列を含むか、もしくは配列番号６の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１４の配列を含むか、もしくは配列番号１４の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２３の配列を含むか、もしくは配列番号２３の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３２の配列を含むか、もしくは配列番号３２の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４０の配列を含むか、もしくは配列番号４０の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４８の配列を含むか、もしくは配列番号４８の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｌ３；
（ｉｖ）配列番号７の配列を含むか、もしくは配列番号７の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１５の配列を含むか、もしくは配列番号１５の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２４の配列を含むか、もしくは配列番号２４の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３３の配列を含むか、もしくは配列番号３３の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４１の配列を含むか、もしくは配列番号４１の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４９の配列を含むか、もしくは配列番号４９の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｌ３；または
（ｖ）配列番号７の配列を含むか、もしくは配列番号７の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１５の配列を含むか、もしくは配列番号１５の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２５の配列を含むか、もしくは配列番号２５の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３４の配列を含むか、もしくは配列番号３４の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４２の配列を含むか、もしくは配列番号４２の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４９の配列を含むか、もしくは配列番号４９の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｌ３；または
（ｖｉ）配列番号８の配列を含むか、もしくは配列番号８の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１６の配列を含むか、もしくは配列番号１６の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２６の配列を含むか、もしくは配列番号２６の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３５の配列を含むか、もしくは配列番号３５の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４３の配列を含むか、もしくは配列番号４３の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号５０の配列を含むか、もしくは配列番号５０の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｌ３。
（ｉ）配列番号４の配列を含むか、もしくは配列番号４の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１２の配列を含むか、もしくは配列番号１２の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２０の配列を含むか、もしくは配列番号２０の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３０の配列を含むか、もしくは配列番号３０の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３９の配列を含むか、もしくは配列番号３９の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４７の配列を含むか、もしくは配列番号４７の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｌ３；または
（ｉｉ）配列番号５の配列を含むか、もしくは配列番号５の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１３の配列を含むか、もしくは配列番号１３の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２２の配列を含むか、もしくは配列番号２２の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３１の配列を含むか、もしくは配列番号３１の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３９の配列を含むか、もしくは配列番号３９の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４７の配列を含むか、もしくは配列番号４７の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｌ３；または
（ｉｉｉ）配列番号６の配列を含むか、もしくは配列番号６の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１４の配列を含むか、もしくは配列番号１４の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２３の配列を含むか、もしくは配列番号２３の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３２の配列を含むか、もしくは配列番号３２の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４０の配列を含むか、もしくは配列番号４０の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４８の配列を含むか、もしくは配列番号４８の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｌ３；
（ｉｖ）配列番号７の配列を含むか、もしくは配列番号７の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１５の配列を含むか、もしくは配列番号１５の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２４の配列を含むか、もしくは配列番号２４の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３３の配列を含むか、もしくは配列番号３３の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４１の配列を含むか、もしくは配列番号４１の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４９の配列を含むか、もしくは配列番号４９の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｌ３；または
（ｖ）配列番号７の配列を含むか、もしくは配列番号７の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１５の配列を含むか、もしくは配列番号１５の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２５の配列を含むか、もしくは配列番号２５の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３４の配列を含むか、もしくは配列番号３４の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４２の配列を含むか、もしくは配列番号４２の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４９の配列を含むか、もしくは配列番号４９の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｌ３；または
（ｖｉ）配列番号８の配列を含むか、もしくは配列番号８の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１６の配列を含むか、もしくは配列番号１６の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２６の配列を含むか、もしくは配列番号２６の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３５の配列を含むか、もしくは配列番号３５の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４３の配列を含むか、もしくは配列番号４３の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号５０の配列を含むか、もしくは配列番号５０の配列と比較して１つ以上の保存的置換を含む、ＣＤＲ－Ｌ３。
【0019】
幾つかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、以下を含む：
（ａ）ＧＸ１ＴＦＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｈ（配列番号７４）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列であって、Ｘ１がＦまたはＹであり、Ｘ２がＤまたはＩであり、Ｘ３がＤまたはＧであり、Ｘ４がＹまたはＦであり、Ｘ５がＡまたはＹであり、かつＸ６がＭまたはＩである、当該ＣＤＲ－Ｈ１配列；
（ｂ）Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５ＳＧＸ６Ｘ７Ｘ８（配列番号７５）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列であって、Ｘ１がＧまたはＷであり、Ｘ２がＦ、Ｍ、またはＩであり、Ｘ３がＳまたはＮであり、Ｘ４がＷまたはＰであり、Ｘ５がＮまたはＥであり、Ｘ６がＳまたはＤであり、Ｘ７がＩまたはＴであり、かつＸ８がＧまたはＴである、当該ＣＤＲ－Ｈ２配列；
（ｃ）Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９ＦＤＸ１０（配列番号７６）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列であって、Ｘ１がＤであるか、または存在せず、Ｘ２がＫまたはＧであり、Ｘ３がＳまたはＮであり、Ｘ４がＩまたはＷであり、Ｘ５がＳ、Ｇ、またはＮであり、Ｘ６がＡまたはＦであり、Ｘ７がＡまたはＰであり、Ｘ８がＧまたはＤであり、Ｘ９がＲまたはＴであり、かつＸ１０がＹ、Ｓ、またはＦである、当該ＣＤＲ－Ｈ３配列；
（ｄ）Ｘ１Ｘ２ＳＸ３Ｘ４ＩＸ５Ｘ６ＹＬＮ（配列番号７７）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列であって、Ｘ１がＱまたはＲであり、Ｘ２がＡまたはＳであり、Ｘ３がＲまたはＱであり、Ｘ４がＲ、Ｇ、またはＳであり、Ｘ５がＮまたはＳであり、かつＸ６がＮまたはＩである、当該ＣＤＲ－Ｌ１配列；
（ｅ）Ｘ１ＡＳＸ２ＬＸ３Ｘ４（配列番号７８）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列であって、Ｘ１がＤまたはＶであり、Ｘ２がＮまたはＳであり、Ｘ３がＥまたはＱであり、かつＸ４がＴまたはＳである、当該ＣＤＲ－Ｌ２配列；及び
（ｆ）ＱＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４ＰＸ５Ｔ（配列番号７９）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列であって、Ｘ１がＹまたはＳであり、Ｘ２がＤまたはＹであり、Ｘ３がＮまたはＳであり、Ｘ４がＬまたはＡであり、かつＸ５がＬまたはＦである、当該ＣＤＲ－Ｌ３配列。
（ａ）ＧＸ１ＴＦＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｈ（配列番号７４）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列であって、Ｘ１がＦまたはＹであり、Ｘ２がＤまたはＩであり、Ｘ３がＤまたはＧであり、Ｘ４がＹまたはＦであり、Ｘ５がＡまたはＹであり、かつＸ６がＭまたはＩである、当該ＣＤＲ－Ｈ１配列；
（ｂ）Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５ＳＧＸ６Ｘ７Ｘ８（配列番号７５）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列であって、Ｘ１がＧまたはＷであり、Ｘ２がＦ、Ｍ、またはＩであり、Ｘ３がＳまたはＮであり、Ｘ４がＷまたはＰであり、Ｘ５がＮまたはＥであり、Ｘ６がＳまたはＤであり、Ｘ７がＩまたはＴであり、かつＸ８がＧまたはＴである、当該ＣＤＲ－Ｈ２配列；
（ｃ）Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９ＦＤＸ１０（配列番号７６）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列であって、Ｘ１がＤであるか、または存在せず、Ｘ２がＫまたはＧであり、Ｘ３がＳまたはＮであり、Ｘ４がＩまたはＷであり、Ｘ５がＳ、Ｇ、またはＮであり、Ｘ６がＡまたはＦであり、Ｘ７がＡまたはＰであり、Ｘ８がＧまたはＤであり、Ｘ９がＲまたはＴであり、かつＸ１０がＹ、Ｓ、またはＦである、当該ＣＤＲ－Ｈ３配列；
（ｄ）Ｘ１Ｘ２ＳＸ３Ｘ４ＩＸ５Ｘ６ＹＬＮ（配列番号７７）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列であって、Ｘ１がＱまたはＲであり、Ｘ２がＡまたはＳであり、Ｘ３がＲまたはＱであり、Ｘ４がＲ、Ｇ、またはＳであり、Ｘ５がＮまたはＳであり、かつＸ６がＮまたはＩである、当該ＣＤＲ－Ｌ１配列；
（ｅ）Ｘ１ＡＳＸ２ＬＸ３Ｘ４（配列番号７８）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列であって、Ｘ１がＤまたはＶであり、Ｘ２がＮまたはＳであり、Ｘ３がＥまたはＱであり、かつＸ４がＴまたはＳである、当該ＣＤＲ－Ｌ２配列；及び
（ｆ）ＱＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４ＰＸ５Ｔ（配列番号７９）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列であって、Ｘ１がＹまたはＳであり、Ｘ２がＤまたはＹであり、Ｘ３がＮまたはＳであり、Ｘ４がＬまたはＡであり、かつＸ５がＬまたはＦである、当該ＣＤＲ－Ｌ３配列。
【0020】
幾つかの実施形態では、抗体または抗原結合断片は、以下を含む：
（ｉ）配列番号４の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１２の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２０の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３０の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３９の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４７の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；または
（ｉｉ）配列番号５の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１３の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２２の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３１の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３９の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４７の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；または
（ｉｉｉ）配列番号６の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１４の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２３の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３２の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４０の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４８の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３。
（ｉ）配列番号４の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１２の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２０の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３０の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３９の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４７の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；または
（ｉｉ）配列番号５の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１３の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２２の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３１の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３９の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４７の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；または
（ｉｉｉ）配列番号６の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１４の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２３の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３２の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４０の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４８の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３。
【0021】
幾つかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、以下を含む：
（ｉ）配列番号７の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１５の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２４の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３３の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４１の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４９の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；または
（ｉｉ）配列番号７の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１５の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２５の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３４の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４２の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４９の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；または
（ｉｉｉ）配列番号８の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１６の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２６の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３５の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４３の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号５０の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３。
（ｉ）配列番号７の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１５の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２４の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３３の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４１の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４９の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；または
（ｉｉ）配列番号７の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１５の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２５の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３４の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４２の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４９の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；または
（ｉｉｉ）配列番号８の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１６の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２６の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３５の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４３の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号５０の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３。
【0022】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号７の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１５の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２４の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３３の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４１の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４９の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。
【0023】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号７の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１５の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２５の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３４の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４２の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４９の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。
【0024】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載される単離された抗体または抗原結合断片は、配列番号５４～６３のいずれか１つに対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有する重鎖可変領域（ＶＨ）配列を含む。幾つかの実施形態では、本明細書に記載される単離された抗体または抗原結合断片は、配列番号５４～６３のいずれか１つに対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するＶＨ配列を含む。幾つかの実施形態では、本明細書に記載される単離された抗体または抗原結合断片は、配列番号５４～６３のいずれか１つに対する少なくとも９５％の配列同一性（例えば、少なくとも９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するＶＨ配列を含む。幾つかの実施形態では、本明細書に記載される単離された抗体または抗原結合断片は、配列番号５４～６３のいずれか１つの配列を含むＶＨ配列を含む。
【0025】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載される単離された抗体または抗原結合断片は、配列番号１３７～１４４のいずれか１つに対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有する重鎖可変領域（ＶＨ）配列を含む。幾つかの実施形態では、本明細書に記載される単離された抗体または抗原結合断片は、配列番号１３７～１４４のいずれか１つに対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するＶＨ配列を含む。幾つかの実施形態では、本明細書に記載される単離された抗体または抗原結合断片は、配列番号１３７～１４４のいずれか１つに対する少なくとも９５％の配列同一性（例えば、少なくとも９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するＶＨ配列を含む。幾つかの実施形態では、本明細書に記載される単離された抗体または抗原結合断片は、配列番号１３７～１４４のいずれか１つの配列を含むＶＨ配列を含む。
【0026】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載される単離された抗体または抗原結合断片は、配列番号６４～７３のいずれか１つに対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）配列を含む。幾つかの実施形態では、本明細書に記載される単離された抗体または抗原結合断片は、配列番号６４～７３のいずれか１つに対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するＶＬ配列を含む。幾つかの実施形態では、本明細書に記載される単離された抗体または抗原結合断片は、配列番号６４～７３のいずれか１つに対する少なくとも９５％の配列同一性（例えば、少なくとも９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するＶＬ配列を含む。幾つかの実施形態では、本明細書に記載される単離された抗体または抗原結合断片は、配列番号６４～７３のいずれか１つの配列を含むＶＬ配列を含む。
【0027】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載される単離された抗体または抗原結合断片は、配列番号１４５～１４９のいずれか１つに対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）配列を含む。幾つかの実施形態では、本明細書に記載される単離された抗体または抗原結合断片は、配列番号１４５～１４９のいずれか１つに対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するＶＬ配列を含む。幾つかの実施形態では、本明細書に記載される単離された抗体または抗原結合断片は、配列番号１４５～１４９のいずれか１つに対する少なくとも９５％の配列同一性（例えば、少なくとも９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するＶＬ配列を含む。幾つかの実施形態では、本明細書に記載される単離された抗体または抗原結合断片は、配列番号１４５～１４９のいずれか１つの配列を含むＶＬ配列を含む。
【0028】
幾つかの実施形態では、抗体または抗原結合断片は、以下を含む：
（ｉ）配列番号５４を含むＶＨ配列及び配列番号６５を含むＶＬ配列；または
（ｉｉ）配列番号５６を含むＶＨ配列及び配列番号６６を含むＶＬ配列；または
（ｉｉｉ）配列番号５７を含むＶＨ配列及び配列番号６７を含むＶＬ配列；または
（ｉｖ）配列番号５８を含むＶＨ配列及び配列番号６８を含むＶＬ配列；または
（ｖ）配列番号５９を含むＶＨ配列及び配列番号６９を含むＶＬ配列；または
（ｖｉ）配列番号６０を含むＶＨ配列及び配列番号７０を含むＶＬ配列。
（ｉ）配列番号５４を含むＶＨ配列及び配列番号６５を含むＶＬ配列；または
（ｉｉ）配列番号５６を含むＶＨ配列及び配列番号６６を含むＶＬ配列；または
（ｉｉｉ）配列番号５７を含むＶＨ配列及び配列番号６７を含むＶＬ配列；または
（ｉｖ）配列番号５８を含むＶＨ配列及び配列番号６８を含むＶＬ配列；または
（ｖ）配列番号５９を含むＶＨ配列及び配列番号６９を含むＶＬ配列；または
（ｖｉ）配列番号６０を含むＶＨ配列及び配列番号７０を含むＶＬ配列。
【0029】
幾つかの実施形態では、抗体または抗原結合断片は、以下を含む：
（ｉ）配列番号５４を含むＶＨ配列及び配列番号６５を含むＶＬ配列；または
（ｉｉ）配列番号５６を含むＶＨ配列及び配列番号６６を含むＶＬ配列；または
（ｉｉｉ）配列番号５７を含むＶＨ配列及び配列番号６７を含むＶＬ配列。
（ｉ）配列番号５４を含むＶＨ配列及び配列番号６５を含むＶＬ配列；または
（ｉｉ）配列番号５６を含むＶＨ配列及び配列番号６６を含むＶＬ配列；または
（ｉｉｉ）配列番号５７を含むＶＨ配列及び配列番号６７を含むＶＬ配列。
【0030】
幾つかの実施形態では、抗体または抗原結合断片は、以下を含む：
（ｉ）配列番号１３７を含むＶＨ配列及び配列番号１４５を含むＶＬ配列；または
（ｉｉ）配列番号１４０を含むＶＨ配列及び配列番号１４５を含むＶＬ配列；または
（ｉｉｉ）配列番号１４３を含むＶＨ配列及び配列番号１４６を含むＶＬ配列；または
（ｉｖ）配列番号１４３を含むＶＨ配列及び配列番号１４９を含むＶＬ配列。
（ｉ）配列番号１３７を含むＶＨ配列及び配列番号１４５を含むＶＬ配列；または
（ｉｉ）配列番号１４０を含むＶＨ配列及び配列番号１４５を含むＶＬ配列；または
（ｉｉｉ）配列番号１４３を含むＶＨ配列及び配列番号１４６を含むＶＬ配列；または
（ｉｖ）配列番号１４３を含むＶＨ配列及び配列番号１４９を含むＶＬ配列。
【0031】
幾つかの実施形態では、抗体は、Ｆｃドメインを形成している２つのＦｃポリペプチドを含む。幾つかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドのうちの一方または両方は、配列番号９４の配列に対する少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有する配列を含む。
【0032】
幾つかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１である。
【0033】
幾つかの実施形態では、抗体は、全長抗体である。
【0034】
別の態様では、本開示は、ヒトペア型免疫グロブリン様２型受容体α（ｈＰＩＬＲＡ）に結合する、単離された抗体またはその抗原結合断片を特徴とし、ここで、当該抗体またはその抗原結合断片は、表１の抗体クローン１～３９からなる群から選択される抗体クローンにより認識されるエピトープと同じかまたは実質的に同じであるエピトープを認識する。
【0035】
この態様の幾つかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、抗体クローン２、４、及び５からなる群から選択される抗体クローンにより認識されるエピトープと同じかまたは実質的に同じであるエピトープを認識する。
【0036】
本明細書に記載される単離された抗体またはその抗原結合断片の幾つかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ｈＰＩＬＲＡ活性をアンタゴナイズする。幾つかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ｈＰＩＬＲＡへのシアリル化タンパク質の結合を遮断する。幾つかの実施形態では、シアリル化タンパク質は、シアリル化されたＮＰＤＣ１、ＰＡＮＰ、ＨＳＶ－１ ｇＢ、ＣＯＬＥＣ１２、Ｃ４ａ、Ｃ４ｂ、ＤＡＧ１、またはＣｌｅｃ４ｇである。
【0037】
本明細書に記載される単離された抗体またはその抗原結合断片の幾つかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＥＧＦＲもしくはＳＴＡＴ３のリン酸化を増強するか、もしくは増加させるか、またはＳＴＡＴ１のリン酸化を阻害するか、もしくは減少させる。
【0038】
本明細書に記載される単離された抗体またはその抗原結合断片の幾つかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、細胞遊走（例えば、ミクログリア遊走）を増強する。
【0039】
本明細書に記載される単離された抗体またはその抗原結合断片の幾つかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、抗炎症性遺伝子またはタンパク質の発現を増強する。幾つかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＩＬ１ＲＮ遺伝子の発現を増強する。
【0040】
本明細書に記載される単離された抗体またはその抗原結合断片の幾つかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、炎症誘発性サイトカインタンパク質の発現または分泌を低減させる。幾つかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＴＮＦ、ＩＬ－６、及び／またはＩＰ－１０の発現を低減させる。
【0041】
本明細書に記載される単離された抗体またはその抗原結合断片の幾つかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、細胞呼吸を増進させる。幾つかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ミトコンドリア呼吸を増加させる。幾つかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、非ミトコンドリア呼吸を増加させる。
【0042】
本明細書に記載される単離された抗体またはその抗原結合断片の幾つかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、脂肪酸代謝を増加させる（例えば、脂肪酸酸化を増加させる）。
【0043】
本明細書に記載される単離された抗体またはその抗原結合断片の幾つかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＡＴＰ産生を増加させる。
【0044】
本明細書に記載される単離された抗体またはその抗原結合断片の幾つかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、末梢免疫細胞を活性化しない。幾つかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、好中球及び単球を活性化しない。
【0045】
本明細書に記載される単離された抗体またはその抗原結合断片の幾つかの実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体である。幾つかの実施形態では、抗体は、キメラ抗体である。幾つかの実施形態では、抗体は、ヒト化抗体である。幾つかの実施形態では、抗体は、完全ヒト抗体である。幾つかの実施形態では、抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、または二価ｓｃＦｖである。
【0046】
別の態様では、本開示は、ｈＰＩＬＲＡへの結合について本明細書に記載される単離された抗体またはその抗原結合断片と競合する抗体またはその抗原結合断片を特徴とする。
【0047】
別の態様では、本開示は、本明細書に記載される単離された抗体またはその抗原結合断片と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物を特徴とする。
【0048】
別の態様では、本開示は、本明細書に記載される単離された抗体またはその抗原結合断片をコードする核酸配列を含むポリヌクレオチドを特徴とする。別の態様では、本開示は、本明細書に記載される単離された抗体またはその抗原結合断片をコードする核酸配列を含むポリヌクレオチドを含むベクターを特徴とする。別の態様では、本開示は、本明細書に記載される単離された抗体またはその抗原結合断片をコードする核酸配列を含むポリヌクレオチドを含む宿主細胞を特徴とする。
【0049】
別の態様では、本開示は、単離された抗体またはその抗原結合断片を産生するための方法であって、ポリヌクレオチドによりコードされる当該単離された抗体またはその抗原結合断片が発現される条件下で宿主細胞を培養する工程を含む、当該方法を提供する。
【0050】
別の態様では、本開示は、本明細書に記載される単離された抗体もしくはその抗原結合断片または本明細書に記載される医薬組成物と、それらの使用説明書とを含む、キットを特徴とする。
【0051】
別の態様では、本開示は、対象における神経変性疾患を処置する方法であって、本明細書に記載される単離された抗体もしくはその抗原結合断片または本明細書に記載される医薬組成物を当該対象に投与する工程を含む、当該方法を特徴とする。幾つかの実施形態では、神経変性疾患は、以下からなる群から選択される：アルツハイマー病、原発性加齢関連タウオパチー、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、前頭側頭型認知症、１７番染色体に連鎖しパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症、嗜銀顆粒性認知症、筋萎縮性側索硬化症、グアム島の筋萎縮性側索硬化症／パーキンソン認知症複合（ＡＬＳ－ＰＤＣ）、大脳皮質基底核変性症、慢性外傷性脳症、クロイツフェルト・ヤコブ病、ボクサー認知症、石灰沈着を伴うびまん性神経原線維変化病、ダウン症候群、家族性英国型認知症、家族性デンマーク型認知症、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー病、球状グリア性タウオパチー、グアドループにおける認知症を伴うパーキンソニズム（Ｇｕａｄｅｌｏｕｐｅａｎ ｐａｒｋｉｎｓｏｎｉｓｍ ｗｉｔｈ ｄｅｍｅｎｔｉａ）、グアドループにおけるＰＳＰ（Ｇｕａｄｅｌｏｐｅａｎ ＰＳＰ）、ハレルフォルデン・スパッツ病、神経軸索スフェロイド形成を伴う遺伝性びまん性白質脳症（ＨＤＬＳ）、ハンチントン病、封入体筋炎、多系統萎縮症、筋緊張性ジストロフィー、那須ハコラ病、神経原線維変化優位型認知症、ニーマン・ピック病Ｃ型、淡蒼球・橋・黒質変性症、パーキンソン病、ピック病、脳炎後パーキンソニズム、プリオンタンパク質・脳アミロイドアンギオパチー（ｐｒｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｅｒｅｂｒａｌ ａｍｙｌｏｉｄ ａｎｇｉｏｐａｔｈｙ）、進行性皮質下グリオーシス、亜急性硬化性全脳炎、及び神経原線維変化型認知症。特定の実施形態では、神経変性疾患は、アルツハイマー病である。
【0052】
別の態様では、本開示は、ある分子がＰＩＬＲＡタンパク質に対する活性を有するかどうかを決定するための方法であって、（ａ）当該ＰＩＬＲＡタンパク質を発現する細胞を当該分子と接触させる工程；（ｂ）より低いＰＩＬＲＡ発現を有する、工程（ａ）と同じ種類の細胞を、工程（ａ）の前、それと同時、またはその後のいずれかにおいて当該分子と接触させる工程；ならびに（ｃ）両方の細胞における、リン酸化ＳＴＡＴ３（ｐＳＴＡＴ３）レベル、リン酸化ＳＴＡＴ１（ｐＳＴＡＴ１）レベル、リン酸化ＥＧＦＲ（ｐＥＧＦＲ）レベル、カドヘリン発現、インテグリン発現、及びミクログリア遊走のうちの１つを測定する工程であって、これらの測定のうちの１つについての細胞間でのレベルの変化が、工程（ａ）の当該ＰＩＬＲＡタンパク質に対する活性を当該分子が有することを示す、当該測定する工程を含む、当該方法を提供する。
【0053】
幾つかの実施形態では、工程（ａ）の細胞は、ＰＩＬＲＡタンパク質を天然に発現する。幾つかの実施形態において、より低いＰＩＬＲＡ発現を有する細胞は、ＰＩＬＲＡタンパク質についてノックアウトされている。特定の実施形態では、細胞は、ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａなどのミクログリアである。幾つかの実施形態では、細胞は、ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａである。
【0054】
幾つかの実施形態では、工程（ａ）の細胞は、ＰＩＬＲＡタンパク質を発現または過剰発現するように操作または改変されている。幾つかの実施形態では、より低いＰＩＬＲＡ発現を有する細胞は、ＰＩＬＲＡタンパク質を天然に発現する、またはＰＩＬＲＡタンパク質の発現のための操作も改変もされていない。
【0055】
幾つかの実施形態では、分子は、分子ライブラリー由来のものである。ある特定の実施形態では、分子は、ＰＩＬＲＡタンパク質に結合すると分かっている。他の実施形態では、ＰＩＬＲＡタンパク質に分子が結合するかどうかは、分かっていない。ある特定の実施形態では、分子は、抗体、ペプチド、有機低分子、または核酸である。
【0056】
別の態様では、本開示は、ＰＩＬＲＡタンパク質に結合する分子が、ＰＩＬＲＡを発現する細胞におけるシグナル伝達応答または活性を調節するかどうかを決定するための方法であって、（ａ）当該細胞を当該分子と接触させる工程；及び（ｂ）リン酸化ＳＴＡＴ３（ｐＳＴＡＴ３）レベル、リン酸化ＳＴＡＴ１（ｐＳＴＡＴ１）レベル、リン酸化ＥＧＦＲ（ｐＥＧＦＲ）レベル、カドヘリン発現、インテグリン発現、及びミクログリア遊走のうちの１つを測定する工程であって、測定のうちの１つについてのレベルの変化が、ＰＩＬＲＡを発現する当該細胞における当該シグナル伝達応答または活性を当該分子が調節することを示す、当該測定する工程を含む、当該方法を提供する。
【0057】
幾つかの実施形態では、変化は、分子なしでの細胞におけるレベルと比較した、細胞に分子が接触した場合の測定のうちの１つについてのレベルの増加または減少である。例えば、幾つかの実施形態では、変化は、ｐＳＴＡＴ３レベルの増加、例えば、ｐＳＴＡＴ３ Ｙ７０５レベル及び／またはｐＳＴＡＴ３ Ｓ７２７レベルの増加である。別の例では、変化はｐＥＧＦＲレベルの増加である。別の例では、変化は、運動性タンパク質（例えば、カドヘリン、インテグリン、例えば、本明細書に記載されるもののいずれか）の発現レベル及び／または細胞分泌の増加である。更に別の例では、変化は、例えば、実施例４に記載される細胞遊走アッセイを使用して、測定及び定量化され得る細胞（例えば、ミクログリア）遊走の増加である。
【0058】
幾つかの実施形態では、細胞は、インビトロアッセイにおけるものである。他の実施形態では、細胞は、哺乳動物におけるものである。幾つかの実施形態では、工程（ａ）は、哺乳動物に分子を投与することを含む。
【0059】
幾つかの実施形態では、細胞は、ミクログリア、骨髄性細胞、単球、または好中球である。
【0060】
別の態様では、本開示は、操作されたヒト人工多能性幹細胞（ＩＰＳＣ）または細胞株を提供し、ここで、当該ＩＰＳＣは、ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアントまたはＧ７８バリアントをコードする遺伝子を２コピー発現するように改変されている（すなわち、遺伝子操作されている）。幾つかの実施形態では、ＩＰＳＣは、内在性ゲノム遺伝子座で改変されている。
【0061】
別の態様では、本開示は、ヒト人工多能性幹細胞（ＩＰＳＣ）に由来する操作されたミクログリア細胞モデルを提供し、ここで、当該ＩＰＳＣは、ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアントまたはＧ７８バリアントをコードする遺伝子を２コピー発現するように改変されている（すなわち、遺伝子操作されている）。幾つかの実施形態では、ＩＰＳＣは、内在性ゲノム遺伝子座で改変されている。幾つかの実施形態では、操作されたミクログリア細胞モデルは、分化誘導により得られる。
【0062】
別の態様では、本開示は、マッチする一対の細胞株を提供し、ここで、（ａ）当該対のうちの第１の細胞株は、ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性であり、（ｂ）当該対のうちの第２の細胞株は、ＰＩＬＲＡタンパク質のＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性であり、当該対の第１及び第２の細胞株の両方が、同じ親細胞株に由来し、かつ一方または両方の細胞株が、内在性ＰＩＬＲＡ遺伝子において操作されている。幾つかの実施形態では、親細胞株は、ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性である。他の実施形態では、親細胞株は、ＰＩＬＲＡタンパク質のＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性である。幾つかの実施形態では、親細胞株は、ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアント及びＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてヘテロ接合性である。
【0063】
マッチする一対の細胞株の幾つかの実施形態では、ＰＩＬＲＡタンパク質のＧ７８バリアント及びＲ７８バリアントをコードする遺伝子についてヘテロ接合性である第３の細胞株が含まれる。幾つかの実施形態では、第３の細胞株は、ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアントまたはＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性である親細胞株に由来する。
【0064】
別の態様では、本開示は、改変されたＰＩＬＲＡ遺伝子を有する骨髄性細胞株または骨髄性細胞株に分化することができる幹細胞株（例えば、ＩＰＳＣ株）を作製する方法であって、（ａ）既存の骨髄性細胞株または既存の幹細胞株が、ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性であるか、ＰＩＬＲＡタンパク質のＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性であるか、またはＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアント及びＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてヘテロ接合性であるかを決定する工程；ならびに（ｂ）ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアントまたはＰＩＬＲＡタンパク質のＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性である操作された細胞株を作製するために、ＰＩＬＲＡタンパク質をコードする遺伝子を改変することにより細胞株を操作する工程を含み、当該操作された細胞株は、操作される前は、選択されたバリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性ではなかった、当該方法を提供する。
【0065】
別の態様では、本開示は、マッチする一対の細胞株を作製する方法であって、（ａ）既存の骨髄性細胞株または骨髄性細胞株に分化することができる既存の幹細胞株（例えば、ＩＰＳＣ株）が、ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性であるか、ＰＩＬＲＡタンパク質のＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性であるか、またはＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアント及びＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてヘテロ接合性であるかを決定する工程；ならびに（ｂ）（ｉ）ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性である操作された細胞株を作製するために、ＰＩＬＲＡタンパク質をコードする遺伝子を改変することにより第１の細胞株を操作する、及び／または（ｉｉ）ＰＩＬＲＡタンパク質のＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性である操作された細胞株を作製するために、ＰＩＬＲＡタンパク質をコードする遺伝子を改変することにより第２の細胞株を操作する工程を含む、当該方法を提供する。
【0066】
幾つかの実施形態では、操作された細胞株は、操作される前は、選択されたバリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性ではなかった。
【0067】
ある特定の実施形態では、工程（ａ）の既存の細胞株は、ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアントについてホモ接合性であり、かつ、工程（ｂ）の操作は、ＰＩＬＲＡタンパク質のＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性である操作された細胞株を作製するために既存の細胞株を改変することを含む。
【0068】
他の実施形態では、工程（ａ）の既存の細胞株は、ＰＩＬＲＡタンパク質のＧ７８バリアントについてホモ接合性であり、かつ、工程（ｂ）の操作は、ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性である操作された細胞株を作製するために既存の細胞株を改変することを含む。
【0069】
幾つかの実施形態では、工程（ａ）の既存の細胞株は、ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアント及びＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてヘテロ接合性であり、かつ、工程（ｂ）の操作は、ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性である操作された細胞株、及びＰＩＬＲＡタンパク質のＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性である操作された細胞株を作製するために、既存の細胞株を改変することを含む。
【0070】
別の態様では、本開示は、ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアント及びＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてヘテロ接合性である、既存の骨髄性細胞株または骨髄性細胞株に分化することができる既存の幹細胞株（例えば、ＩＰＳＣ株）から、マッチする一対の細胞株を作製する方法であって、（ａ）ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性である第１の操作された細胞株を作製するために、既存の細胞株を操作する工程；及び（ｂ）ＰＩＬＲＡタンパク質のＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性である第２の操作された細胞株を作製するために、工程（ａ）で作製された細胞株または既存の細胞株のいずれかを操作する工程を含む、当該方法を提供する。
【0071】
別の態様では、本開示は、ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアント及びＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてヘテロ接合性である、既存の骨髄性細胞株または骨髄性細胞株に分化することができる既存の幹細胞株（例えば、ＩＰＳＣ株）から、マッチする一対の細胞株を作製する方法であって、（ａ）ＰＩＬＲＡタンパク質のＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性である第１の操作された細胞株を作製するために、既存の細胞株を操作する工程；及び（ｂ）ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性である第２の操作された細胞株を作製するために、工程（ａ）で作製された細胞株または既存の細胞株のいずれかを操作する工程を含む、当該方法を提供する。
【0072】
別の態様では、本開示は、ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性である、既存の骨髄性細胞株または骨髄性細胞株に分化することができる既存の幹細胞株（例えば、ＩＰＳＣ株）から、マッチする一対の細胞株を作製する方法であって、ＰＩＬＲＡタンパク質のＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性である操作された細胞株を作製するために、既存の細胞株を操作する工程を含む、当該方法を提供する。
【0073】
別の態様では、本開示は、ＰＩＬＲＡタンパク質のＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性である、既存の骨髄性細胞株または骨髄性細胞株に分化することができる既存の幹細胞株（例えば、ＩＰＳＣ株）から、マッチする一対の細胞株を作製する方法であって、ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性である操作された細胞株を作製するために、既存の細胞株を操作する工程を含む、当該方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【0074】
【図1A】抗ＰＩＬＲＡ抗体がＨＥＫ２９３細胞上に発現されたｈＰＩＬＲＡに用量依存的様式で結合したことを示す。
【図1B】抗ＰＩＬＲＡ抗体がＨＥＫ２９３細胞上に発現されたｈＰＩＬＲＡに用量依存的様式で結合したことを示す。
【図1C】抗ＰＩＬＲＡ抗体がＨＥＫ２９３細胞上に発現されたｈＰＩＬＲＡに用量依存的様式で結合したことを示す。
【図1D】抗ＰＩＬＲＡ抗体がＨＥＫ２９３細胞上に発現されたｈＰＩＬＲＡ Ｇ７８に用量依存的様式で結合したことを示す。データをＦＡＣＳアッセイ技術により得られた蛍光強度中央値として表す。
【図1E】抗ＰＩＬＲＡ抗体が親ＨＥＫ２９３細胞には結合しなかったことを示す。データをＦＡＣＳアッセイ技術により得られた蛍光強度中央値として表す。
【図1F】抗ＰＩＬＲＡ抗体がＨＥＫ２９３細胞上に発現されたｈＰＩＬＲＡ Ｒ７８に用量依存的様式で結合したことを示す。データをＦＡＣＳアッセイ技術により得られた蛍光強度中央値として表す。
【図1G】抗ＰＩＬＲＡ抗体がＣＨＯ－Ｋ１細胞上に発現されたｈＰＩＬＲＡに結合し、親ＣＨＯ－Ｋ１細胞には結合しなかったことを示す。
【図1H】抗ＰＩＬＲＡ抗体がｈＰＩＬＲＡ Ｇ７８を発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞に用量依存的様式で結合したことを示す。データをＦＡＣＳアッセイ技術により得られた蛍光強度中央値として表す。
【図1I】抗ＰＩＬＲＡ抗体が親ＣＨＯ－Ｋ１細胞への結合を示さなかったことを示す。データをＦＡＣＳアッセイ技術により得られた蛍光強度中央値として表す。
【図1J】抗ＰＩＬＲＡ抗体がヒトＩＰＳＣ由来のミクログリアに結合したことを示す。
【図1K】抗ＰＩＬＲＡ抗体がＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ヒトＩＰＳＣ由来のミクログリアには結合しなかったことを示す。
【図1L】抗ＰＩＬＲＡ抗体が、ＰＩＬＲＡ Ｇ７８についてホモ接合性であるヒトＩＰＳＣ由来のｉＭｉｃｒｏｇｌｉａに結合したことを示す。
【図1M】抗ＰＩＬＲＡ抗体が、ＰＩＬＲＡ Ｒ７８についてホモ接合性であるヒトＩＰＳＣ由来のｉＭｉｃｒｏｇｌｉａに結合したことを示す。
【図2A】抗ＰＩＬＲＡ抗体がｃｙｎｏＰＩＬＲＡを発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞に結合し、ｈＰＩＬＲＢを発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞または親ＣＨＯ－Ｋ１細胞には結合しなかったことを示す。
【図2B】抗ＰＩＬＲＡ抗体がｃｙｎｏＰＩＬＲＡを発現するＣＨＯ細胞に用量依存的様式で結合したことを示す。
【図2C】抗ＰＩＬＲＡ抗体がｈＰＩＬＲＢを発現するＣＨＯ細胞には結合しなかったことを示す。
【図2D】抗ＰＩＬＲＡ抗体がｈＰＩＬＲＢ－ＤＡＰ１２を過剰発現するＨＥＫ２９３細胞に結合しなかったことを示す。
【図2E】参照抗体がｈＰＩＬＲＡを発現するＣＨＯ細胞に結合したことを示す。
【図2F】参照抗体がｃｙｎｏＰＩＬＲＡまたはｈＰＩＬＲＢを発現するＣＨＯ細胞には結合しなかったことを示す。
【図3A】リガンド結合が許容された場合の代表的なＳＰＲセンサーグラムを示す。
【図3B】リガンド結合が抗体により遮断された場合の代表的なＳＰＲセンサーグラムを示す。
【図3C】ＰＩＬＲＡ Ｇ７８ ＨＥＫ細胞のシアリダーゼ処理が抗ＰＩＬＲＡ抗体の結合を増強したことを示す。
【図3D】ＰＩＬＲＡ Ｇ７８ ＨＥＫ細胞のシアリダーゼ処理が抗ＰＩＬＲＡ抗体の結合を増強したことを示す。
【図3E】ＰＩＬＲＡ Ｇ７８ ＨＥＫ細胞のシアリダーゼ処理が抗ＰＩＬＲＡ抗体の結合を増強したことを示す。
【図3F】ＰＩＬＲＡ Ｇ７８ ＨＥＫ細胞のシアリダーゼ処理が抗ＰＩＬＲＡ抗体の結合を増強したことを示す。
【図3G】ＰＩＬＲＡ Ｒ７８ ＨＥＫ細胞のシアリダーゼ処理が抗ＰＩＬＲＡ抗体の結合にほとんど影響を及ぼさなかったことを示す。
【図3H】ＰＩＬＲＡ Ｒ７８ ＨＥＫ細胞のシアリダーゼ処理が抗ＰＩＬＲＡ抗体の結合にほとんど影響を及ぼさなかったことを示す。
【図3I】ＰＩＬＲＡ Ｒ７８ ＨＥＫ細胞のシアリダーゼ処理が抗ＰＩＬＲＡ抗体の結合にほとんど影響を及ぼさなかったことを示す。
【図3J】ＰＩＬＲＡ Ｒ７８ ＨＥＫ細胞のシアリダーゼ処理が抗ＰＩＬＲＡ抗体の結合にほとんど影響を及ぼさなかったことを示す。
【図4A】無血清培地においてＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａが、野生型ヒトｉＭｉｃｒｏｇｌｉａと比較して、リン酸化されたＥＧＦＲ Ｙ１０８６のレベルを増加させたことを示す。グラフは、バックグラウンドを上回るスポット強度での発現を平均値＋／－ＳＥＭとして示す。Ｎ＝２の技術的反復。Ｐ＞０．０１、２元配置ＡＮＯＶＡ。
【図4B】無血清培地においてＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａが、野生型ヒトｉＭｉｃｒｏｇｌｉａと比較して、リン酸化されたＳＴＡＴ３ Ｙ７０５のレベルを増加させたことを示す。グラフは、バックグラウンドを上回るスポット強度での発現を平均値＋／－ＳＥＭとして示す。Ｎ＝２の技術的反復。Ｐ＞０．０１、２元配置ＡＮＯＶＡ。
【図4C】抗ＰＩＬＲＡ抗体が、ｈＰＩＬＲＡ Ｇ７８を発現するＨＥＫ２９３細胞においてｐＳＴＡＴ３ Ｙ７０５を特異的に誘導したことを示す。親ＨＥＫ２９３細胞またはアイソタイプ対照抗体では誘導されなかった。データをバックグラウンド（ＰＢＳ）に対する倍率平均値またはアイソタイプ対照に対する倍率平均値＋／－ＳＥＭとして示す（ｎ＝４の技術反復試験）。
【図4D】抗ＰＩＬＲＡ抗体が、ｈＰＩＬＲＡ Ｇ７８を発現するＨＥＫ２９３細胞においてｐＳＴＡＴ３ Ｓ７２７を特異的に誘導したことを示す。親ＨＥＫ２９３細胞またはアイソタイプ対照抗体では誘導されなかった。データをバックグラウンド（ＰＢＳ）に対する倍率平均値またはアイソタイプ対照に対する倍率平均値＋／－ＳＥＭとして示す（ｎ＝４の技術反復試験）。
【図4E】抗ＰＩＬＲＡ抗体が、ｈＰＩＬＲＡ Ｇ７８を発現するＨＥＫ２９３細胞においてｐＥＧＦＲ Ｙ１０８６を特異的に誘導したことを示す。親ＨＥＫ２９３細胞またはアイソタイプ対照抗体では誘導されなかった。データをバックグラウンド（ＰＢＳ）に対する倍率平均値またはアイソタイプ対照に対する倍率平均値＋／－ＳＥＭとして示す（ｎ＝４の技術反復試験）。
【図4F】ｈＰＩＬＲＡ Ｇ７８を発現するＨＥＫ２９３細胞におけるｐＳＴＡＴ３ Ｙ７０５の用量依存的な誘導を示す。抗ＰＩＬＲＡ抗体をｈＰＩＬＲＡ Ｇ７８を発現するＨＥＫ２９３細胞に用量漸増して投与し、ｐＳＴＡＴ３ Ｙ７０５の誘導を３０分後に測定した。データを平均値＋／－ＳＥＭでのアイソタイプ対照に対する発現倍率として示す（ｎ＝２の技術的反復）。
【図4G】抗ＰＩＬＲＡ抗体がヒトＰＩＬＲＡ ７８Ｇを発現するＨＥＫ細胞に用量漸増して投与され、３０分後にｐＳＴＡＴ３ Ｙ７０５を誘導したことを示す。
【図4H】抗ＰＩＬＲＡ抗体がヒトＰＩＬＲＡ ７８Ｇを発現するＨＥＫ細胞に用量漸増して投与され、３０分後にｐＳＴＡＴ３ Ｓ７２７を誘導したことを示す。
【図4I】ＰＩＬＲＡ Ｇ７Ｇを発現するＨＥＫ２９３細胞において抗ＰＩＬＲＡ抗体により誘導されるｐＳＴＡＴ３ Ｙ７０５が、ｍＴＯＲＣ１／２阻害剤であるＡＺＤ８０５５（３．１２５～５０ｎＭ）またはｍＴＯＲ阻害剤であるトリン１（３１．２５～５００ｎＭ）との２時間のプレインキュベーションにより部分的に阻害されたことを示す。データを平均値＋／－ＳＥＭでのＨＥＫ２９３対照細胞（ＤＭＳＯビヒクルアイソタイプ対照）に対する発現倍率として示す（ｎ＝１～４の技術的反復）。
【図4J】抗ＰＩＬＲＡ抗体が、ＰＩＬＲＡ Ｒ７８を発現するＨＥＫ２９３細胞においてｐＳＴＡＴ３ Ｙ７０５の誘導を遮断したことを示す。データを平均値＋／－ＳＥＭでのＰＩＬＲＡ Ｇ７８を発現するＨＥＫ２９３細胞に対する発現倍率として示す（ｎ＝２～３の技術的反復）。
【図4K】抗ＰＩＬＲＡ抗体がヒトＰＩＬＲＡ ７８Ｒを発現するＨＥＫ２９３細胞に用量漸増して投与され、３０分後にｐＳＴＡＴ３ Ｙ７０５を誘導したことを示す。
【図4L】抗ＰＩＬＲＡ抗体がヒトＰＩＬＲＡ ７８Ｒを発現するＨＥＫ２９３細胞に用量漸増して投与され、３０分後にｐＳＴＡＴ３ Ｓ７２７を誘導したことを示す。
【図4M】ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａが、無血清培地において野生型ヒトｉＭｉｃｒｏｇｌｉａと比較して、ホスホ－キナーゼプロファイラー及び総ＳＴＡＴ１ ＡｌｐｈａＬｉｓａによるより低いリン酸化ＳＴＡＴ１ Ｙ７０１レベルを示したことを示す。図４Ｍのグラフは、バックグラウンドを上回るスポット強度での発現を平均値＋／－ＳＥＭとして示す。Ｎ＝２の技術的反復。
【図4N】ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａが、無血清培地において野生型ヒトｉＭｉｃｒｏｇｌｉａと比較して、ホスホ－キナーゼプロファイラー及び総ＳＴＡＴ１ ＡｌｐｈａＬｉｓａによるより低い総ＳＴＡＴ１レベルを示したことを示す。図４Ｎのグラフは、野生型に対する発現倍率を平均値＋／－ＳＥＭとして示す。Ｎ＝４の技術的反復。
【図4O】ＰＩＬＲＡ Ｇ７８を発現するＨＥＫ２９３細胞が、親ＨＥＫ２９３細胞と比較してより高いリン酸化ＳＴＡＴ１レベルを示したことを示す。発現を平均値＋／－ＳＥＭとして示す。ｎ＝３～４の技術的反復。
【図4P】１００ｎＭの抗ＰＩＬＲＡ ｍＡｂの投与が野生型ヒトｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおけるリン酸化ＳＴＡＴ１ Ｙ７０１レベルを低減させ、ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａの表現型を模写したことを示す。ＰＢＳに対する発現を平均値＋／－ＳＥＭとして示す。Ｎ＝３の技術的反復。
【図4Q】抗ＰＩＬＲＡ ｍＡｂの投与が、ＰＩＬＲＡ Ｇ７８を発現するＨＥＫ２９３細胞においてリン酸化ＳＴＡＴ１ Ｙ７０１レベルを低減させたことを示す。親ＨＥＫ２９３細胞またはアイソタイプ対照抗体では低減されなかった。グラフはＰＢＳに対する発現倍率を平均値＋／－ＳＥＭとして示す。ｎ＝２～３の技術的反復。
【図4R】抗ＰＩＬＲＡ ｍＡｂの投与が、ＰＩＬＲＡ Ｇ７８を発現するＨＥＫ２９３細胞において総ＳＴＡＴ１レベルを低減させたことを示す。親ＨＥＫ２９３細胞またはアイソタイプ対照抗体では低減されなかった。グラフはＰＢＳに対する発現倍率を平均値＋／－ＳＥＭとして示す。ｎ＝２～３の技術的反復。
【図5A】ＰＩＬＲＡ ＬｏＦが、ストッパー除去の１２０時間後に、無細胞の検出区域へのｉＭｉｃｒｏｇｌｉａの遊走を促進することを示す。ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおけるＰＩＬＲＡの再発現（ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ＋ＯＥ）は、遊走レベルを野生型ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおいて観察されるレベルに戻す。
【図5B】抗ＰＩＬＲＡ抗体が、ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ細胞と同様に、ストッパー除去の１２０時間後に、無細胞の検出区域への野生型ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａの遊走を増強したことを示す。ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ及び野生型ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａの両方は、ビヒクル（ＰＢＳ）のみを投与された。データを平均値＋／－ＳＥＭとして示す（ｎ＝１～６の技術的反復）。
【図5C】抗ＰＩＬＲＡ抗体が、ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ細胞と同様に、ストッパー除去の１２０時間後に、無細胞の検出区域への野生型ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａの遊走を増強したことを示す。ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ及び野生型ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａの両方は、ビヒクル（ＰＢＳ）のみを投与された。データを平均値＋／－ＳＥＭとして示す（ｎ＝１～６の技術的反復）。
【図5D】ＰＩＬＲＡ ＬｏＦが、化学誘引物質である補体５ａ（Ｃ５ａ）へのｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ遊走を増強したことを示す。
【図5E】抗ＰＩＬＲＡ抗体が、ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ細胞と同様に、ｉＭｉｇｒｏｇｌｉａのＣ５ａへの走化性を増強したことを示す。
【図5F】抗ＰＩＬＲＡ抗体が、処理の４日後でのｉＭｉｃｒｏｇｌｉａによる上清へのインテグリンの分泌を増強したことを示す。
【図5G】抗ＰＩＬＲＡ抗体が、処理の４日後でのｉＭｉｃｒｏｇｌｉａによる上清へのカドヘリンの分泌を増強したことを示す。
【図6A】ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおけるＰＩＬＲＡ ＬｏＦが、無血清培地において野生型ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａと比較してＩＬ１ＲＮ遺伝子発現を促進したことを示す。データを平均値＋／－ＳＥＭとして示す（ｎ＝３の技術的反復）。
【図6B】ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおけるＰＩＬＲＡ ＬｏＦが、無血清培地において野生型ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａと比較してＩＬ１ＲＡサイトカイン分泌を刺激したことを示す。データを平均値＋／－ＳＥＭとして示す（ｎ＝３の技術的反復）。
【図6C】抗ＰＩＬＲＡ抗体が無血清培地において野生型ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａのＩＬ１ＲＡサイトカイン分泌を刺激し、ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおいて観察された表現型を模倣したことを示す。データを平均値＋／－ＳＥＭとして示す（ｎ＝３の技術的反復）。
【図6D】ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおけるＰＩＬＲＡ ＬｏＦが、野生型ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａと比較して、ＬＰＳにより誘導されるＴＮＦの遺伝子発現の変化を抑制したことを示す。データを平均値＋／－ＳＥＭとして示す（ｎ＝３の技術的反復）。
【図6E】ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおけるＰＩＬＲＡ ＬｏＦが、野生型ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａと比較して、ＬＰＳにより誘導されるＩＬ－６の遺伝子発現の変化を抑制したことを示す。データを平均値＋／－ＳＥＭとして示す（ｎ＝３の技術的反復）。
【図6F】ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおけるＰＩＬＲＡ ＬｏＦが、野生型ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａと比較して、ＬＰＳにより誘導されるＣＸＣＬ１０の遺伝子発現の変化を抑制したことを示す。データを平均値＋／－ＳＥＭとして示す（ｎ＝３の技術的反復）。
【図6G】ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおけるＰＩＬＲＡ ＬｏＦが、野生型ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａと比較して、ＬＰＳにより誘導されるＴＮＦαサイトカイン発現の変化を抑制したことを示す。データを平均値＋／－ＳＥＭとして示す（ｎ＝３の技術的反復）。
【図6H】ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおけるＰＩＬＲＡ ＬｏＦが、野生型ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａと比較して、ＬＰＳにより誘導されるＩＬ－６サイトカイン発現の変化を抑制したことを示す。データを平均値＋／－ＳＥＭとして示す（ｎ＝３の技術的反復）。
【図6I】ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおけるＰＩＬＲＡ ＬｏＦが、野生型ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａと比較して、ＬＰＳにより誘導されるＩＰ－１０サイトカイン発現の変化を抑制したことを示す。データを平均値＋／－ＳＥＭとして示す（ｎ＝３の技術的反復）。
【図6J】抗ＰＩＬＲＡ抗体が、野生型ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおけるＬＰＳにより誘導されるＩＰ－１０サイトカイン分泌を減弱し、ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおいて観察された表現型を模倣したことを示す。データを平均値＋／－ＳＥＭとして示す（ｎ＝３の技術的反復）。
【図6K】抗ＰＩＬＲＡ抗体が、野生型ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおけるＬＰＳにより誘導されるＴＮＦαサイトカイン分泌を減弱し、ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおいて観察された表現型を模倣したことを示す。データを平均値＋／－ＳＥＭとして示す（ｎ＝３の技術的反復）。
【図6L】抗ＰＩＬＲＡ抗体が、野生型ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおけるＬＰＳにより誘導されるＩＬ－６サイトカイン分泌を減弱し、ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおいて観察された表現型を模倣したことを示す。データを平均値＋／－ＳＥＭとして示す（ｎ＝３の技術的反復）。
【図6M】抗ＰＩＬＲＡ抗体が、野生型ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおけるＬＰＳにより誘導されるＩＰ－１０サイトカイン分泌を減弱し、ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおいて観察された表現型を模倣したことを示す。データを平均値＋／－ＳＥＭとして示す（ｎ＝３の技術的反復）。
【図6N】抗ＰＩＬＲＡ抗体が、野生型ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおけるＬＰＳにより誘導されるＴＮＦαサイトカイン分泌を減弱し、ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおいて観察された表現型を模倣したことを示す。データを平均値＋／－ＳＥＭとして示す（ｎ＝３の技術的反復）。
【図6O】抗ＰＩＬＲＡ抗体が、野生型ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおけるＬＰＳにより誘導されるＩＬ－６サイトカイン分泌を減弱し、ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおいて観察された表現型を模倣したことを示す。データを平均値＋／－ＳＥＭとして示す（ｎ＝３の技術的反復）。
【図6P】抗ＰＩＬＲＡ抗体（１００ｎＭ）が、無血清培地中のホモ接合性Ｇ７８ ＰＩＬＲＡを発現するＩＰＳＣ由来のｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおいて、ＬＰＳにより誘導されるＩＰ－１０サイトカイン分泌を減弱したことを示す。
【図6Q】抗ＰＩＬＲＡ抗体（１００ｎＭ）が、無血清培地中のホモ接合性Ｒ７８ ＰＩＬＲＡを発現するＩＰＳＣ由来のｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおいて、ＬＰＳにより誘導されるＩＰ－１０サイトカイン分泌を減弱したことを示す。
【図7A】ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａが、最大呼吸の増加を示したことを示す。ｈＰＩＬＲＡを発現するＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ（ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ＋ＯＥ）におけるＰＩＬＲＡの再発現は、ミトコンドリア呼吸を野生型レベルに戻した。ｎ＝５の技術的反復。
【図7B】ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａが、ミトコンドリア予備呼吸能の増加を示したことを示す。ｈＰＩＬＲＡを発現するＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ（ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ＋ＯＥ）におけるＰＩＬＲＡの再発現は、ミトコンドリア呼吸を野生型レベルに戻した。ｎ＝５の技術的反復。
【図7C】抗ＰＩＬＲＡ抗体が、野生型ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおける最大呼吸をアイソタイプ対照と比較して増加させたことを示す。抗体のＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａに対する更なる影響はなかった。このことは抗体特異性を示す。ｎ＝６の技術的反復。
【図7D】抗ＰＩＬＲＡ抗体が、野生型ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおけるミトコンドリア予備呼吸能をアイソタイプ対照と比較して増加させたことを示す。抗体のＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａに対する更なる影響はなかった。このことは抗体特異性を示す。ｎ＝６の技術的反復。
【図7E】抗ＰＩＬＲＡ抗体が、野生型ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおける最大呼吸をアイソタイプ対照と比較して増加させたことを示す。抗体のＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａに対する更なる影響はなかった。このことは抗体特異性を示す。ｎ＝６の技術的反復。
【図7F】抗ＰＩＬＲＡ抗体が、野生型ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおけるミトコンドリア予備呼吸能をアイソタイプ対照と比較して増加させたことを示す。抗体のＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａに対する更なる影響はなかった。このことは抗体特異性を示す。ｎ＝６の技術的反復。
【図7G】野生型ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおけるＡβ１－４２フィブリルにより誘導された非ミトコンドリア酸素消費速度の減少（図７Ｇの灰色の棒）が、抗ＰＩＬＲＡ抗体によりレスキューされたことを示す（図７Ｈの縞模様の灰色の棒）。ｎ＝６の技術的反復。
【図7H】野生型ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおけるＡβ１－４２フィブリルにより誘導された非ミトコンドリア酸素消費速度の減少（図７Ｇの灰色の棒）が、抗ＰＩＬＲＡ抗体によりレスキューされたことを示す（図７Ｈの縞模様の灰色の棒）。ｎ＝６の技術的反復。
【図7I】ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａがより高いミトコンドリアＯＸＰＨＯＳ活性と共にＡＴＰ産生の増加を示したことを示す。ｎ＝６の技術的反復。
【図7J】抗ＰＩＬＲＡ抗体が野生型ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおいてＰＩＬＲＡ ＬｏＦを再現し、ＡＴＰ生成速度を増強したことを示す。ｎ＝６の技術的反復。
【図9A】抗ＰＩＬＲＡ抗体のｈＰＩＬＲＡエピトープを示す分子構造である。
【図9B】抗ＰＩＬＲＡ抗体がヒトＰＩＬＲＡに結合するエピトープビンである。
【図10】ｃｙｎｏＰＩＬＲＡ、ｈＰＩＬＲＡ、及びｈＰＩＬＲＢのＥＣＤ及びストーク領域配列のアラインメント（位置は配列番号１の配列を参照して決定される）を示す。
【図11】参照抗体＃１～＃４がｈＰＩＬＲＡ Ｇ７８を発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞に結合し、ｈＰＩＬＲＢまたはｃｙｎｏＰＩＬＲＡ Ｇ７８を発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞には結合しなかったことを示す（位置は配列番号１の配列を参照して決定される）。
【発明を実施するための形態】
【0075】
詳細な説明
Ｉ．導入
ＰＩＬＲＡは、ミクログリア、単球、マクロファージ、樹状細胞、及び好中球などの様々な免疫細胞の細胞表面に発現する抑制性膜貫通受容体である。特定の理論に拘束されるものではないが、ＰＩＬＲＡはリガンド結合時に、細胞質ホスファターゼ、例えば、ＰＴＰＮ６／ＳＨＰ－１及びＰＴＰＮ１１／ＳＨＰ－２を動員し、それらのＳＨ２ドメインがシグナル伝達分子の脱リン酸化によりシグナル伝達を遮断することよって抑制性受容体として作用すると考えられている。ＰＩＬＲＡのミスセンスバリアント（Ｇ７８Ｒ）は、ＰＩＬＲＡのシアル酸結合ポケットを変化させ、これにより、そのリガンドのうちの幾つかへのＰＩＬＲＡの結合の低減をもたらす。そのリガンドの１つは単純ヘルペスウイルス１型のシアリル化された糖タンパク質Ｂ（ＨＳＶ－１ ｇＢ）である。一部のアルツハイマー病患者においてＨＳＶ－１感染が存在することが示唆されている。ＰＩＬＲＡのＧ７８Ｒバリアントは、ＰＩＬＲＡシグナル伝達をアンタゴナイズするか、または低減させ、これにより、ミクログリア応答を修飾することにより個体をアルツハイマー病から防御することが提唱されている。
Ｉ．導入
ＰＩＬＲＡは、ミクログリア、単球、マクロファージ、樹状細胞、及び好中球などの様々な免疫細胞の細胞表面に発現する抑制性膜貫通受容体である。特定の理論に拘束されるものではないが、ＰＩＬＲＡはリガンド結合時に、細胞質ホスファターゼ、例えば、ＰＴＰＮ６／ＳＨＰ－１及びＰＴＰＮ１１／ＳＨＰ－２を動員し、それらのＳＨ２ドメインがシグナル伝達分子の脱リン酸化によりシグナル伝達を遮断することよって抑制性受容体として作用すると考えられている。ＰＩＬＲＡのミスセンスバリアント（Ｇ７８Ｒ）は、ＰＩＬＲＡのシアル酸結合ポケットを変化させ、これにより、そのリガンドのうちの幾つかへのＰＩＬＲＡの結合の低減をもたらす。そのリガンドの１つは単純ヘルペスウイルス１型のシアリル化された糖タンパク質Ｂ（ＨＳＶ－１ ｇＢ）である。一部のアルツハイマー病患者においてＨＳＶ－１感染が存在することが示唆されている。ＰＩＬＲＡのＧ７８Ｒバリアントは、ＰＩＬＲＡシグナル伝達をアンタゴナイズするか、または低減させ、これにより、ミクログリア応答を修飾することにより個体をアルツハイマー病から防御することが提唱されている。
【0076】
以下の実施例セクションで詳述されるように、ヒトＰＩＬＲＡ（ｈＰＩＬＲＡ）に特異的に結合し、ＰＩＬＲＡにより調節される１つ以上のミクログリア機能を調節する抗体が作製された。特に、本発明者らは、非常に望ましい特徴を有する抗体を初めて同定した。これらとしては、カニクイザル（「ｃｙｎｏ」）ＰＩＬＲＡ（ｃｙｎｏＰＩＬＲＡ）及びｈＰＩＬＲＡの両方に選択的に結合するが、ヒトＰＩＬＲＢ（ｈＰＩＬＲＢ）に対する比較的より低い結合性を有し得る抗体が挙げられる。このことは、非常に有利であるが、ｃｙｎｏＰＩＬＲＡとｈＰＩＬＲＢとの間の高い相同性を考慮すると非常に困難でもある。カニクイザルＰＩＬＲＡとヒトＰＩＬＲＡとの間で同等の結合性を有することは、代用の分子を用いる必要なく、サルでの試験を実施することを可能にする。ＰＩＬＲＢへの結合は、それらの各々の細胞内ドメインの差異を考慮すると、ＰＩＬＲＢがＰＩＬＲＡと比較して異なる活性または反対の活性を有すると考えられるため、望ましくない。本明細書に記載される特定の抗体は、ｈＰＩＬＲＡに対する結合親和性と比較して１００倍以内（例えば、９０倍、８０倍、７０倍、６０倍、５０倍、４０倍、３０倍、２０倍、１０倍、５倍、または２倍以内）の結合親和性でｃｙｎｏＰＩＬＲＡに結合することができる。抗体は、ｈＰＩＬＲＢに対する結合親和性と比べて少なくとも１０倍（例えば、少なくとも１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、３５倍、４０倍、４５倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、または１００倍）強いｈＰＩＬＲＡに対する結合親和性も有し得る。ある特定の実施形態では、抗体は、（ｉ）エフェクター機能を低減させるもしくは除去する変異、及び／または（ｉｉ）例えば、新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への抗体のＦｃの結合を増加させることにより、インビボ半減期を増加させる変異を有し得るＦｃポリペプチドを更に含む。
【0077】
本発明者らは、ＰＩＬＲＡ配列のある特定のアミノ酸残基に結合する抗体が望ましい特性を示し得ることも発見した。これらの残基としては、６３、６４、７８、１０６、１４３、１１６～１１８、及び１８２～１８６が挙げられる。特定の例では、本発明者らは、ｈＰＩＬＲＡの（ｉ）Ｇ７８、Ｋ１０６、及びＥ１４３、または（ｉｉ）Ｔ６３及びＡ６４を含むエピトープに結合する抗体が、ｃｙｎｏＰＩＬＲＡにも結合することができるが、ｈＰＩＬＲＢに対する低減された結合性を有することを示す。
【0078】
ＩＩ．定義
本明細書で使用する場合、内容で明確に指示されない限り、単数形の「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、及び「その（ｔｈｅ）」は、複数形の指示物を包含する。従って、例えば、「抗体」への言及は、２つ以上のかかる分子の組み合わせなどを任意に包含する。
本明細書で使用する場合、内容で明確に指示されない限り、単数形の「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、及び「その（ｔｈｅ）」は、複数形の指示物を包含する。従って、例えば、「抗体」への言及は、２つ以上のかかる分子の組み合わせなどを任意に包含する。
【0079】
本明細書で使用する場合、用語「約」及び「およそ」は、数値または範囲で指定される量を修飾するために使用される場合、当該数値及び当業者に知られている当該値からの妥当な偏差、例えば、±２０％、±１０％、または±５％が、記載される値の意図される意味の範囲内であることを示す。
【0080】
本明細書で使用する場合、用語「ＰＩＬＲＡ」は、ＰＩＬＲＡ遺伝子によりコードされるペア型免疫グロブリン様２型受容体αタンパク質を指す。本明細書で使用する場合、「ＰＩＬＲＡ」または「ＰＩＬＲＡタンパク質」は、任意の脊椎動物、例えば、限定されるものではないが、ヒト、非ヒト霊長類（例えば、カニクイザル）、げっ歯類（例えば、マウス、ラット）、及び他の哺乳動物の天然（すなわち、野生型）のＰＩＬＲＡタンパク質を指す。幾つかの実施形態では、ＰＩＬＲＡタンパク質は、以下の配列番号１の配列を有するヒトＰＩＬＲＡ（ｈＰＩＬＲＡ）タンパク質である。
ＭＧＲＰＬＬＬＰＬＬＰＬＬＬＰＰＡＦＬＱＰＳＧＳＴＧＳＧＰＳＹＬＹＧＶＴＱＰＫＨＬＳＡＳＭＧＧＳＶＥＩＰＦＳＦＹＹＰＷＥＬＡＴＡＰＤＶＲＩＳＷＲＲＧＨＦＨＧＱＳＦＹＳＴＲＰＰＳＩＨＫＤＹＶＮＲＬＦＬＮＷＴＥＧＱＫＳＧＦＬＲＩＳＮＬＱＫＱＤＱＳＶＹＦＣＲＶＥＬＤＴＲＳＳＧＲＱＱＷＱＳＩＥＧＴＫＬＳＩＴＱＡＶＴＴＴＴＱＲＰＳＳＭＴＴＴＷＲＬＳＳＴＴＴＴＴＧＬＲＶＴＱＧＫＲＲＳＤＳＷＨＩＳＬＥＴＡＶＧＶＡＶＡＶＴＶＬＧＩＭＩＬＧＬＩＣＬＬＲＷＲＲＲＫＧＱＱＲＴＫＡＴＴＰＡＲＥＰＦＱＮＴＥＥＰＹＥＮＩＲＮＥＧＱＮＴＤＰＫＬＮＰＫＤＤＧＩＶＹＡＳＬＡＬＳＳＳＴＳＰＲＡＰＰＳＨＲＰＬＫＳＰＱＮＥＴＬＹＳＶＬＫＡ
ＭＧＲＰＬＬＬＰＬＬＰＬＬＬＰＰＡＦＬＱＰＳＧＳＴＧＳＧＰＳＹＬＹＧＶＴＱＰＫＨＬＳＡＳＭＧＧＳＶＥＩＰＦＳＦＹＹＰＷＥＬＡＴＡＰＤＶＲＩＳＷＲＲＧＨＦＨＧＱＳＦＹＳＴＲＰＰＳＩＨＫＤＹＶＮＲＬＦＬＮＷＴＥＧＱＫＳＧＦＬＲＩＳＮＬＱＫＱＤＱＳＶＹＦＣＲＶＥＬＤＴＲＳＳＧＲＱＱＷＱＳＩＥＧＴＫＬＳＩＴＱＡＶＴＴＴＴＱＲＰＳＳＭＴＴＴＷＲＬＳＳＴＴＴＴＴＧＬＲＶＴＱＧＫＲＲＳＤＳＷＨＩＳＬＥＴＡＶＧＶＡＶＡＶＴＶＬＧＩＭＩＬＧＬＩＣＬＬＲＷＲＲＲＫＧＱＱＲＴＫＡＴＴＰＡＲＥＰＦＱＮＴＥＥＰＹＥＮＩＲＮＥＧＱＮＴＤＰＫＬＮＰＫＤＤＧＩＶＹＡＳＬＡＬＳＳＳＴＳＰＲＡＰＰＳＨＲＰＬＫＳＰＱＮＥＴＬＹＳＶＬＫＡ
【0081】
幾つかの実施形態では、ＰＩＬＲＡタンパク質は、以下の配列番号２の配列を有するカニクイザルＰＩＬＲＡ（ｃｙｎｏＰＩＬＲＡ）タンパク質である。
ＭＧＲＰＬＬＬＰＬＬＬＰＬＬＰＬＬＬＰＰＡＦＬＱＰＧＧＳＡＧＳＧＰＳＧＰＹＧＶＴＱＲＫＨＬＳＡＰＭＧＧＳＶＥＩＰＦＳＦＹＨＰＷＥＬＡＡＡＰＮＭＫＩＳＷＲＲＧＮＦＨＧＥＦＦＹＲＴＲＰＡＦＩＨＥＤＹＳＮＲＬＬＬＮＷＴＥＧＱＤＲＧＬＬＲＩＷＮＬＲＫＥＤＱＳＶＹＦＣＲＶＥＬＤＴＲＲＳＧＲＱＲＷＱＳＩＥＧＴＫＬＴＩＴＱＡＶＴＴＴＴＱＲＰＳＳＭＴＴＴＲＲＰＳＳＡＴＴＴＡＧＬＲＶＴＱＧＫＲＨＳＤＳＷＨＬＳＬＫＴＡＶＧＶＴＶＡＶＡＶＬＧＩＭＩＬＧＬＩＣＬＬＲＷＲＲＲＫＧＱＱＲＴＫＡＴＴＰＡＫＥＰＦＱＮＴＥＥＰＹＥＮＩＲＮＥＧＱＮＴＤＰＫＰＮＰＫＤＤＧＩＶＹＡＳＬＡＬＳＳＳＴＳＰＲＶＰＰＳＨＨＰＬＫＳＰＱＮＥＴＬＹＳＶＬＫＶ
ＭＧＲＰＬＬＬＰＬＬＬＰＬＬＰＬＬＬＰＰＡＦＬＱＰＧＧＳＡＧＳＧＰＳＧＰＹＧＶＴＱＲＫＨＬＳＡＰＭＧＧＳＶＥＩＰＦＳＦＹＨＰＷＥＬＡＡＡＰＮＭＫＩＳＷＲＲＧＮＦＨＧＥＦＦＹＲＴＲＰＡＦＩＨＥＤＹＳＮＲＬＬＬＮＷＴＥＧＱＤＲＧＬＬＲＩＷＮＬＲＫＥＤＱＳＶＹＦＣＲＶＥＬＤＴＲＲＳＧＲＱＲＷＱＳＩＥＧＴＫＬＴＩＴＱＡＶＴＴＴＴＱＲＰＳＳＭＴＴＴＲＲＰＳＳＡＴＴＴＡＧＬＲＶＴＱＧＫＲＨＳＤＳＷＨＬＳＬＫＴＡＶＧＶＴＶＡＶＡＶＬＧＩＭＩＬＧＬＩＣＬＬＲＷＲＲＲＫＧＱＱＲＴＫＡＴＴＰＡＫＥＰＦＱＮＴＥＥＰＹＥＮＩＲＮＥＧＱＮＴＤＰＫＰＮＰＫＤＤＧＩＶＹＡＳＬＡＬＳＳＳＴＳＰＲＶＰＰＳＨＨＰＬＫＳＰＱＮＥＴＬＹＳＶＬＫＶ
【0082】
本明細書で使用する場合、用語「ＰＩＬＲＢ」は、ＰＩＬＲＢ遺伝子によりコードされるペア型免疫グロブリン様２型受容体βタンパク質を指す。本明細書で使用する場合、「ＰＩＬＲＢ」または「ＰＩＬＲＢタンパク質」は、任意の脊椎動物、例えば、限定されるものではないが、ヒト、非ヒト霊長類（例えば、カニクイザル）、げっ歯類（例えば、マウス、ラット）、及び他の哺乳動物の天然（すなわち、野生型）のＰＩＬＲＢタンパク質を指す。幾つかの実施形態では、ＰＩＬＲＢタンパク質は、以下の配列番号３の配列を有するヒトＰＩＬＲＢ（ｈＰＩＬＲＢ）タンパク質である。
ＭＧＲＰＬＬＬＰＬＬＬＬＬＱＰＰＡＦＬＱＰＧＧＳＴＧＳＧＰＳＹＬＹＧＶＴＱＰＫＨＬＳＡＳＭＧＧＳＶＥＩＰＦＳＦＹＹＰＷＥＬＡＩＶＰＮＶＲＩＳＷＲＲＧＨＦＨＧＱＳＦＹＳＴＲＰＰＳＩＨＫＤＹＶＮＲＬＦＬＮＷＴＥＧＱＥＳＧＦＬＲＩＳＮＬＲＫＥＤＱＳＶＹＦＣＲＶＥＬＤＴＲＲＳＧＲＱＱＬＱＳＩＫＧＴＫＬＴＩＴＱＡＶＴＴＴＴＴＷＲＰＳＳＴＴＴＩＡＧＬＲＶＴＥＳＫＧＨＳＥＳＷＨＬＳＬＤＴＡＩＲＶＡＬＡＶＡＶＬＫＴＶＩＬＧＬＬＣＬＬＬＬＷＷＲＲＲＫＧＳＲＡＰＳＳＤＦ
ＭＧＲＰＬＬＬＰＬＬＬＬＬＱＰＰＡＦＬＱＰＧＧＳＴＧＳＧＰＳＹＬＹＧＶＴＱＰＫＨＬＳＡＳＭＧＧＳＶＥＩＰＦＳＦＹＹＰＷＥＬＡＩＶＰＮＶＲＩＳＷＲＲＧＨＦＨＧＱＳＦＹＳＴＲＰＰＳＩＨＫＤＹＶＮＲＬＦＬＮＷＴＥＧＱＥＳＧＦＬＲＩＳＮＬＲＫＥＤＱＳＶＹＦＣＲＶＥＬＤＴＲＲＳＧＲＱＱＬＱＳＩＫＧＴＫＬＴＩＴＱＡＶＴＴＴＴＴＷＲＰＳＳＴＴＴＩＡＧＬＲＶＴＥＳＫＧＨＳＥＳＷＨＬＳＬＤＴＡＩＲＶＡＬＡＶＡＶＬＫＴＶＩＬＧＬＬＣＬＬＬＬＷＷＲＲＲＫＧＳＲＡＰＳＳＤＦ
【0083】
本明細書で使用する場合、用語「抗ＰＩＬＲＡ抗体」は、ＰＩＬＲＡタンパク質（例えば、ヒトＰＩＬＲＡ）に特異的に結合する抗体を指す。
【0084】
本明細書で使用する場合、用語「抗体」は、その可変領域により抗原に特異的に結合する、免疫グロブリンフォールドを有するタンパク質を指す。この用語は、全長抗体及び一本鎖抗体、二重特異性抗体などの多重特異性抗体、単一特異性抗体、一価抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ならびにヒト抗体が含まれる、インタクトなポリクローナル抗体、インタクトなモノクローナル抗体を包含する。用語「抗体」は、本明細書で使用する場合、限定されるものではないが、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及び二価ｓｃＦｖが含まれる、可変領域により結合特異性を保持している抗体断片も包含し得る。抗体は、κまたはλに分類される軽鎖を有し得る。抗体は、γ、μ、α、δ、またはεに分類される重鎖を有し得、これらの重鎖はまた、それぞれ、免疫グロブリンクラスであるＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥを規定する。
【0085】
本明細書で使用する場合、用語「全長抗体」は、一般に、ジスルフィド結合により相互に連結された２本の重鎖及び２本の軽鎖の４本のポリペプチド鎖を有する免疫グロブリン分子を指す。各重鎖は、Ｎ末端からＣ末端方向の、重鎖可変領域（ＶＨ）、ＣＨ１定常ドメイン、ヒンジ領域、ＣＨ２定常ドメイン、及びＣＨ３定常ドメインから構成される。各軽鎖は、Ｎ末端からＣ末端方向の、軽鎖可変領域（ＶＬ）及びＣＬ定常ドメインから構成される。Ｆａｂドメインまたは断片は、ＶＨ、ＣＨ１、ＶＬ、及びＣＬドメインから形成される。全長抗体は、２つのＦａｂドメイン及びＦｃドメインを有するとも記載され得、ここで、Ｆｃドメインは２つのＦｃポリペプチドを含み、各ＦｃポリペプチドはＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメインを含み得、抗体のヒンジ領域の少なくとも一部を含み得る。
【0086】
本明細書で使用する場合、用語「抗ＰＩＬＲＡ抗原結合部分」は、ＰＩＬＲＡタンパク質（例えば、ｈＰＩＬＲＡ及び／またはｃｙｎｏＰＩＬＲＡ）に特異的に結合する抗原結合セグメントまたは抗原結合物質を指す。用語「抗原結合部分」及び「抗原結合断片」は、本明細書において互換的に使用され、その可変領域により抗原（例えば、ＰＩＬＲＡタンパク質）に特異的に結合する能力を保持している、抗体の１つ以上の断片を指す。抗原結合断片の例としては、限定されるものではないが、Ｆａｂ断片（ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、及びＣＨ１ドメインからなる一価の断片）、Ｆ（ａｂ´）２断片（ヒンジ領域でのジスルフィド架橋により連結された２つのＦａｂ断片を含む二価の断片）、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｄｓＦｖ）、相補性決定領域（ＣＤＲ）、ＶＬ（軽鎖可変領域）、及びＶＨ（重鎖可変領域）が挙げられる。
【0087】
用語「可変領域」または「可変ドメイン」は、生殖細胞系列可変領域（Ｖ）遺伝子、多様性領域（Ｄ）遺伝子、または結合領域（Ｊ）遺伝子に由来し（定常領域（Ｃμ及びＣδ）遺伝子セグメントに由来しない）、抗原への結合の特異性を抗体に付与する、抗体重鎖または軽鎖のドメインを指す。抗体可変領域は、通常、３つの超可変性の「相補性決定領域」が間に置かれた４つの保存された「フレームワーク」領域を含む。
【0088】
用語「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」は、軽鎖及び重鎖の可変領域毎に規定される、各鎖における４つのフレームワーク領域を中断する３つの超可変領域を指す。ＣＤＲは、主に抗原のエピトープへの抗体結合を担う。各鎖のＣＤＲは、通常、Ｎ末端から出発して順番に番号付けてＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と称され、また通常、特定のＣＤＲが存在する鎖毎に識別される。従って、ＶＨ ＣＤＲ３またはＣＤＲ－Ｈ３は、それが見出される抗体重鎖の可変領域に存在し、一方で、ＶＬ ＣＤＲ１またはＣＤＲ－Ｌ１は、それが見出される抗体軽鎖の可変領域のＣＤＲ１である。
【0089】
種々の軽鎖または重鎖の「フレームワーク領域」または「ＦＲ」は、種内で比較的保存されている。構成要素である軽鎖及び重鎖のフレームワーク領域の組み合わせである抗体のフレームワーク領域は、ＣＤＲを３次元空間に配置及び整列させる機能を果たす。フレームワーク配列は、生殖細胞系列抗体遺伝子配列を含む公共ＤＮＡデータベースまたは公開された参考文献から取得され得る。例えば、ヒト重鎖及び軽鎖可変領域遺伝子の生殖細胞系列ＤＮＡ配列は、ヒト及びマウス配列の生殖細胞系列可変領域遺伝子配列データベース「ＶＢＡＳＥ２」に見出され得る。
【0090】
ＣＤＲ及びフレームワーク領域のアミノ酸配列は、当該技術分野において周知の種々の定義、例えば、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、国際ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓデータベース（ＩＭＧＴ）、ＡｂＭ、及び観察された抗原接触（「Ｃｏｎｔａｃｔ」）を使用して決定され得る。幾つかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｏｎｔａｃｔ定義に従って決定される。ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２６２：７３２－７４５（１９９６）を参照のこと。幾つかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、及び／またはＣｏｎｔａｃｔのＣＤＲ定義の組み合わせにより決定される。
【0091】
用語「エピトープ」は、抗体のＣＤＲが特異的に結合する抗原の部分または領域を指し、数個のアミノ酸、または数個のアミノ酸、例えば、５もしくは６個、もしくはそれ以上、例えば、２０個以上のアミノ酸の一部、またはそれらのアミノ酸の一部を含み得る。例えば、標的がタンパク質である場合、エピトープは、連続アミノ酸（例えば、直鎖状エピトープ）、またはタンパク質のフォールディングにより近接しているタンパク質の異なる部分のアミノ酸（例えば、不連続または立体構造エピトープ）から構成され得る。幾つかの実施形態では、エピトープは、１つのアミノ酸（例えば、セリンまたはトレオニン残基）がリン酸化されている。
【0092】
本明細書で使用する場合、語句「エピトープを認識する」は、抗ＰＩＬＲＡ抗体に関して使用する場合、抗体のＣＤＲが、そのエピトープまたはそのエピトープを含有する抗原の一部で、抗原（すなわち、ＰＩＬＲＡタンパク質）と相互作用するか、またはそれに特異的に結合することを意味する。
【0093】
「モノクローナル抗体」は、単一の細胞クローンまたは単一の細胞株によって産生され、その一次アミノ酸配列が同一である抗体分子からなるか、または本質的にそれからなる抗体を指す。
【0094】
「ポリクローナル抗体」は、不均一な抗体集団から得られる抗体を指し、ここで、当該集団における異なる抗体は、ある抗原の異なるエピトープに結合する。
【0095】
「キメラ抗体」は、定常領域もしくはその一部が改変、置換、もしくは交換され、その結果、抗原結合部位（すなわち、可変領域、ＣＤＲ、またはその一部）が、異なるもしくは改変されたクラス、エフェクター機能、及び／または種の定常領域に連結されている抗体分子、または可変領域もしくはその一部が、異なるもしくは改変された抗原特異性を有する可変領域（例えば、異なる種に由来するＣＤＲ及びフレームワーク領域）に改変、置換、もしくは交換されている抗体分子を指す。幾つかの実施形態では、キメラ抗体は、ある供給源または種（例えば、マウス）に由来する可変領域、及び別の供給源または種（例えば、ヒト）に由来する定常領域を含むモノクローナル抗体である。キメラ抗体を作製するための方法は、当該技術分野において説明されている。
【0096】
「ヒト化抗体」は、ＣＤＲの外側に非ヒト免疫グロブリンに由来する最小限の配列を有する、非ヒト供給源（例えば、マウス）に由来するキメラ免疫グロブリンである。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ（例えば、２つ）の抗原結合性可変ドメイン（複数可）を含み、ここで、ＣＤＲ領域は、非ヒト免疫グロブリンのＣＤＲ領域に実質的に相当し、フレームワーク領域は、ヒト免疫グロブリン配列のフレームワーク領域に実質的に相当する。ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、通常はヒト免疫グロブリン配列の免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部も含み得る。抗体ヒト化の方法は、当技術分野において公知である。
【0097】
「ヒト抗体」または「完全ヒト抗体」は、ヒト生殖細胞系列遺伝子に通常由来するヒト重鎖及び軽鎖配列を有する抗体である。幾つかの実施形態では、抗体は、ヒト細胞により、ヒト抗体レパートリーを利用する非ヒト動物（例えば、ヒト抗体配列を発現するように遺伝子操作されているトランスジェニックマウス）により、またはファージディスプレイプラットフォームにより産生される。
【0098】
用語「特異的に結合する」は、分子（例えば、抗体またはその抗原結合部分）が、それが別のエピトープまたは非標的化合物（例えば、構造的に異なる抗原）に結合するよりも、試料においてより強い親和性で、より強い結合活性で、及び／またはより長い持続時間でエピトープまたは標的に結合することを指す。幾つかの実施形態では、エピトープまたは標的に特異的に結合する抗体（またはその抗原結合部分）は、他のエピトープまたは非標的化合物と比べて少なくとも１．５倍強い親和性、例えば、少なくとも１．５倍、２．５倍、５倍、１０倍、１００倍、１，０００倍、１０，０００倍、またはより強い親和性でエピトープまたは標的に結合する抗体（またはその抗原結合部分）である。本明細書で使用する場合、特定のエピトープまたは標的「への特異的結合」、「に特異的に結合する」、または「に特異的である」という用語は、例えば、結合するエピトープまたは標的に対する平衡解離定数ＫＤが、例えば、１０－４Ｍ以下、例えば、１０－５Ｍ、１０－６Ｍ、１０－７Ｍ、１０－８Ｍ、１０－９Ｍ、１０－１０Ｍ、１０－１１Ｍ、または１０－１２Ｍである分子により表され得る。ある種に由来する標的（例えば、ＰＩＬＲＡタンパク質（例えば、ｈＰＩＬＲＡ及び／またはｃｙｎｏＰＩＬＲＡ））に特異的に結合する抗体は、その標的のオーソログにも特異的に結合し得ることが当業者によって理解されるであろう。
【0099】
用語「結合親和性」は、２つの分子間、例えば、抗体（またはその抗原結合部分）と抗原との間の非共有結合性相互作用の強さを指すために本明細書において使用される。従って、例えば、この用語は、特に明記しない限り、または文脈から明らかでない限り、抗体（またはその抗原結合部分）と抗原との間の１：１の相互作用を指し得る。結合親和性は、平衡解離定数（ＫＤ）を測定することにより定量化され得、ＫＤは、会合速度定数（ｋａ、時間－１Ｍ－１）で除算した解離速度定数（ｋｄ、時間－１）を指す。ＫＤは、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）システムなどの表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）法；ＫｉｎＥｘＡ（登録商標）などの結合平衡除外法；及びバイオレイヤー干渉法（例えば、ＦｏｒｔｅＢｉｏ（登録商標）Ｏｃｔｅｔプラットフォームを使用する）を使用して、複合体形成及び解離の動態を測定することにより決定され得る。本明細書で使用する場合、「結合親和性」は、抗体（またはその抗原結合部分）と抗原との間の１：１の相互作用を反映するものなどの形式的な結合親和性だけでなく、見かけの親和性も包含し、そのために強い結合を反映し得るＫＤが算出される。
【0100】
本明細書で使用する場合、用語「交差反応する」は、抗体が惹起された抗原以外の抗原に結合する当該抗体の能力を指す。幾つかの実施形態では、交差反応性は、抗体が惹起された抗原とは別の種に由来する抗原に結合する当該抗体の能力を指す。非限定的な例として、ヒトＰＩＬＲＡペプチドに対して惹起される本明細書に記載される抗ＰＩＬＲＡ抗体は、異なる種（例えば、カニクイザルまたはマウス）に由来するＰＩＬＲＡペプチドまたはタンパク質との交差反応性を示し得る。
【0101】
用語「調節する」は、タンパク質または細胞の１つ以上の特性を変化させるか、または改変することを指す。細胞の特性は、当該細胞のタンパク質（例えば、ＰＩＬＲＡタンパク質）の１つ以上の特性を変化させる結果として、すなわち、当該細胞の当該タンパク質に結合させることにより、変化し得る。調節され得る細胞の特性としては、限定されるものではないが、細胞増殖、遊走、生存、シグナル伝達、貪食、及びバイオマーカー分泌が挙げられる。例えば、細胞のＰＩＬＲＡタンパク質に結合する分子は、ＰＩＬＲＡへの結合の結果として、細胞の１つ以上の下流シグナル伝達応答または活性を引き起こし得、従って、当該分子は、細胞のシグナル伝達応答または活性を調節すると言われる。幾つかの実施形態では、用語「調節する」は、ＰＩＬＲＡへの結合なしでの細胞のシグナル伝達応答または活性と比較した、ＰＩＬＲＡへの結合の結果としての細胞のシグナル伝達応答または活性の増加または減少を指し得る。ＰＩＬＲＡへの結合の結果としての細胞シグナル伝達応答または活性の変化の例としては、限定されるものではないが、リン酸化ＳＴＡＴ３（ｐＳＴＡＴ３）レベル、リン酸化ＳＴＡＴ１（ｐＳＴＡＴ１）レベル、リン酸化ＥＧＦＲ（ｐＥＧＦＲ）レベル、カドヘリン発現、インテグリン発現、及び細胞（例えば、ミクログリア）遊走の変化が挙げられる。
【0102】
本明細書で使用する場合、用語「ＣＨ３ドメイン」及び「ＣＨ２ドメイン」は、免疫グロブリン定常領域ドメインポリペプチドを指す。ＩｇＧ抗体の文脈において、ＣＨ３ドメインポリペプチドは、ＥＵ番号付けスキームに従って番号付けされる場合、３４１位前後から４４７位前後までのアミノ酸セグメントを指し、ＣＨ２ドメインポリペプチドは、ＥＵ番号付けスキームに従って番号付けされる場合、２３１位前後から３４０位前後までのアミノ酸セグメントを指す。ＣＨ２及びＣＨ３ドメインポリペプチドは、ＩＭＧＴ（ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ）番号付けスキームによって番号付けられてもよく、この場合、ＩＭＧＴ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ｃｈａｒｔによる番号付け（ＩＭＧＴのウェブサイト）に従って、ＣＨ２ドメインの番号付けは１～１１０であり、ＣＨ３ドメインの番号付けは１～１０７である。ＣＨ２及びＣＨ３ドメインは、免疫グロブリンのＦｃ領域の一部である。ＩｇＧ抗体の文脈において、Ｆｃ領域は、ＥＵ番号付けスキームに従って番号付けされる場合、２３１位前後～４４７位前後までのアミノ酸セグメントを指す。本明細書で使用する場合、用語「Ｆｃ領域」は、抗体のヒンジ領域の少なくとも一部も含み得る。例示的な部分的ヒンジ領域の配列は、ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号９８）である。
【0103】
用語「～に対応する」、「～を参照して決定される」、または「～を参照して番号付けされる」は、ポリペプチド配列内の所与のアミノ酸残基を同定する文脈で使用される場合、所与のアミノ酸配列が特定の参照配列と最大限にアライメントされ、比較されたときの、当該参照配列の残基の位置を指す。従って、例えば、あるポリペプチドのアミノ酸残基は、配列番号１と最適にアラインメントされたときに、当該残基が配列番号１のアミノ酸と一列に並ぶ場合、配列番号１の当該アミノ酸に「対応する」。参照配列とアラインメントされるポリペプチドは、参照配列と同じ長さである必要はない。
【0104】
本明細書で使用する場合、用語「Ｆｃポリペプチド」は、構造ドメインとしてのＩｇフォールドを特徴とする、天然に存在する免疫グロブリン重鎖ポリペプチドのＣ末端領域を指す。Ｆｃポリペプチドは、ＣＨ２ドメイン及び／またはＣＨ３ドメインを少なくとも含む定常領域配列を含み、ヒンジ領域の少なくとも一部を含み得るが、可変領域を含まない。
【0105】
「改変Ｆｃポリペプチド」とは、野生型の免疫グロブリン重鎖Ｆｃポリペプチド配列と比較して少なくとも１つの変異、例えば、置換、欠失、または挿入を有するが、天然Ｆｃポリペプチドの全体的なＩｇフォールドまたは構造を保持しているＦｃポリペプチドのことを指す。
【0106】
用語「単離された」は、核酸またはタンパク質（例えば、抗体）に関して使用される場合、当該核酸またはタンパク質が、その天然状態で会合している他の細胞成分を本質的に含まないことを表す。純度及び均一性は、通常、電気泳動（例えば、ポリアクリルアミドゲル電気泳動）またはクロマトグラフィー（例えば、高速液体クロマトグラフィー）などの分析化学技術を使用して決定される。幾つかの実施形態では、単離された核酸またはタンパク質（例えば、抗体）は、少なくとも８５％純粋であるか、少なくとも９０％純粋であるか、少なくとも９５％純粋であるか、または少なくとも９９％純粋である。
【0107】
用語「アミノ酸」は、天然に存在するアミノ酸及び合成アミノ酸、ならびに天然に存在するアミノ酸と同様の様式で機能するアミノ酸類似体及びアミノ酸模倣物を指す。天然に存在するアミノ酸は、遺伝暗号によりコードされるアミノ酸、及び後に修飾されたアミノ酸、例えば、ヒドロキシプロリン、γ－カルボキシグルタミン酸及びＯ－ホスホセリンである。天然に存在するαアミノ酸としては、限定されるものではないが、アラニン（Ａｌａ）、システイン（Ｃｙｓ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、グリシン（Ｇｌｙ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、アルギニン（Ａｒｇ）、リジン（Ｌｙｓ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、メチオニン（Ｍｅｔ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、プロリン（Ｐｒｏ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、セリン（Ｓｅｒ）、トレオニン（Ｔｈｒ）、バリン（Ｖａｌ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、チロシン（Ｔｙｒ）、及びそれらの組み合わせが挙げられる。天然に存在するαアミノ酸の立体異性体としては、限定されるものではないが、Ｄ－アラニン（Ｄ－Ａｌａ）、Ｄ－システイン（Ｄ－Ｃｙｓ）、Ｄ－アスパラギン酸（Ｄ－Ａｓｐ）、Ｄ－グルタミン酸（Ｄ－Ｇｌｕ）、Ｄ－フェニルアラニン（Ｄ－Ｐｈｅ）、Ｄ－ヒスチジン（Ｄ－Ｈｉｓ）、Ｄ－イソロイシン（Ｄ－Ｉｌｅ）、Ｄ－アルギニン（Ｄ－Ａｒｇ）、Ｄ－リジン（Ｄ－Ｌｙｓ）、Ｄ－ロイシン（Ｄ－Ｌｅｕ）、Ｄ－メチオニン（Ｄ－Ｍｅｔ）、Ｄ－アスパラギン（Ｄ－Ａｓｎ）、Ｄ－プロリン（Ｄ－Ｐｒｏ）、Ｄ－グルタミン（Ｄ－Ｇｌｎ）、Ｄ－セリン（Ｄ－Ｓｅｒ）、Ｄ－トレオニン（Ｄ－Ｔｈｒ）、Ｄ－バリン（Ｄ－Ｖａｌ）、Ｄ－トリプトファン（Ｄ－Ｔｒｐ）、Ｄ－チロシン（Ｄ－Ｔｙｒ）、及びそれらの組み合わせが挙げられる。アミノ酸類似体は、天然に存在するアミノ酸と同じ基本的な化学構造（すなわち、水素、カルボキシル基、アミノ基、及びＲ基に結合しているα炭素）を有する化合物、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムを指す。かかる類似体は、修飾されたＲ基（例えば、ノルロイシン）または修飾されたペプチド骨格を有するが、天然に存在するアミノ酸と同じ基本的な化学構造を保持する。「アミノ酸模倣物」は、アミノ酸の一般的化学構造と異なる構造を有する化合物を指すが、天然に存在するアミノ酸と同様の様式で機能する。本明細書においてアミノ酸は、ＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎにより推奨される、一般的に公知のアミノ酸の３文字記号または１文字記号により表記され得る。
【0108】
用語「ポリペプチド」及び「ペプチド」は、アミノ酸残基の一本鎖ポリマーを指すために本明細書において互換的に使用される。当該用語は、１つ以上のアミノ酸残基が、対応する天然に存在するアミノ酸の人工の化学的模倣物であるアミノ酸ポリマー、ならびに天然に存在するアミノ酸ポリマー及び非天然アミノ酸ポリマーに適用される。アミノ酸ポリマーは、完全にＬ－アミノ酸のみを含み得るか、完全にＤ－アミノ酸のみを含み得るか、またはＬ及びＤ－アミノ酸の組み合わせを含み得る。
【0109】
本明細書で使用する場合、用語「タンパク質」は、ポリペプチドまたは一本鎖ポリペプチドの二量体（すなわち、２つ）もしくは多量体（すなわち、３つ以上）のいずれかを指す。タンパク質の一本鎖ポリペプチドは、共有結合、例えば、ジスルフィド結合または非共有結合性相互作用により連結されていてもよい。
【0110】
用語「ポリヌクレオチド」及び「核酸」は、任意の長さのヌクレオチド鎖を互換的に指し、ＤＮＡ及びＲＮＡを包含する。ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾ヌクレオチドもしくは塩基、及び／またはそれらの類似体、またはＤＮＡもしくはＲＮＡポリメラーゼによって鎖に組み込まれ得る任意の基質であり得る。ポリヌクレオチドは、修飾ヌクレオチド、例えば、メチル化ヌクレオチド及びそれらの類似体を含み得る。本明細書において企図されるポリヌクレオチドの例としては、一本鎖及び二本鎖のＤＮＡ、一本鎖及び二本鎖のＲＮＡ、ならびに一本鎖及び二本鎖のＤＮＡ及びＲＮＡの組み合わせを有するハイブリッド分子が挙げられる。
【0111】
用語「保存的置換」及び「保存的変異」は、あるアミノ酸の、類似の特徴を有すると分類され得る別のアミノ酸との置換をもたらす変化を指す。このように定義される保存的アミノ酸グループのカテゴリーの例としては、Ｇｌｕ（グルタミン酸またはＥ）、Ａｓｐ（アスパラギン酸またはＤ）、Ａｓｎ（アスパラギンまたはＮ）、Ｇｌｎ（グルタミンまたはＱ）、Ｌｙｓ（リジンまたはＫ）、Ａｒｇ（アルギニンまたはＲ）、及びＨｉｓ（ヒスチジンまたはＨ）が含まれる「荷電／極性グループ」；Ｐｈｅ（フェニルアラニンまたはＦ）、Ｔｙｒ（チロシンまたはＹ）、Ｔｒｐ（トリプトファンまたはＷ）、及び（ヒスチジンまたはＨ）が含まれる「芳香族グループ」；ならびにＧｌｙ（グリシンまたはＧ）、Ａｌａ（アラニンまたはＡ）、Ｖａｌ（バリンまたはＶ）、Ｌｅｕ（ロイシンまたはＬ）、Ｉｌｅ（イソロイシンまたはＩ）、Ｍｅｔ（メチオニンまたはＭ）、Ｓｅｒ（セリンまたはＳ）、Ｔｈｒ（トレオニンまたはＴ）、及びＣｙｓ（システインまたはＣ）が含まれる「脂肪族グループ」が挙げられ得る。各グループ内でサブグループも特定され得る。例えば、荷電または極性アミノ酸のグループは、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、及びＨｉｓを含む「正に荷電したサブグループ」；Ｇｌｕ及びＡｓｐを含む「負に荷電したサブグループ」；ならびにＡｓｎ及びＧｌｎを含む「極性サブグループ」が含まれるサブグループに更に分割され得る。別の例では、芳香族または環状グループは、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、及びＴｒｐを含む「窒素環サブグループ」；ならびにＰｈｅ及びＴｙｒを含む「フェニルサブグループ」が含まれるサブグループに更に分割され得る。更に別の例では、脂肪族グループは、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｇｌｙ、及びＡｌａを含む「脂肪族非極性サブグループ」、ならびにＭｅｔ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、及びＣｙｓを含む「脂肪族弱極性サブグループ」などのサブグループに更に分割され得る。保存的変異のカテゴリーの例としては、上記サブグループ内のアミノ酸のアミノ酸置換、例えば、限定されるものではないが、正電荷が維持され得るようなＬｙｓのＡｒｇへの置換またはその逆；負電荷が維持され得るようなＧｌｕのＡｓｐへの置換またはその逆；遊離－ＯＨが維持され得るようなＳｅｒのＴｈｒへの置換またはその逆；ならびに遊離－ＮＨ２が維持され得るようなＧｌｎのＡｓｎへの置換またはその逆が挙げられる。幾つかの実施形態では、疎水性を維持するために、例えば、活性部位において、疎水性アミノ酸が天然に存在する疎水性アミノ酸と置換される。
【0112】
２つ以上のポリペプチド配列の文脈において、用語「同一」またはパーセント「同一性」は、２つ以上の配列または部分配列が、配列比較アルゴリズムを使用して、または手動のアラインメント及び目視検査により測定される場合に、比較ウィンドウまたは指定された領域にわたって最大の一致となるように比較及びアラインメントされたとき、特定の領域にわたって同じであるか、または一致しているアミノ酸残基の特定の百分率、例えば、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、もしくは少なくとも９５％以上の同一性を有することを指す。
【0113】
ポリペプチドの配列比較では、通常、１つのアミノ酸配列が参照配列としての役割を果たし、候補配列がこれと比較される。最大限のアラインメントを得るために、アラインメントは、当業者が利用可能な種々の方法、例えば、目視によるアラインメントにより、または既知のアルゴリズムを使用した公開されているソフトウェアを使用して実行され得る。かかるプログラムとしては、ＢＬＡＳＴプログラム、ＡＬＩＧＮ、ＡＬＩＧＮ－２（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆ．）、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）が挙げられる。アラインメントに用いられるパラメーターは、最大限のアラインメントが得られるように当業者により決定され得る。本出願におけるポリペプチド配列の配列比較では、２つのタンパク質配列をアラインメントするための標準的なタンパク質ＢＬＡＳＴであるＢＬＡＳＴＰアルゴリズムがデフォルトのパラメーターと共に使用される。
【0114】
本明細書において互換的に使用される用語「対象」、「個体」、及び「患者」は、限定されるものではないが、ヒト、非ヒト霊長類、げっ歯類（例えば、ラット、マウス、及びモルモット）、ウサギ、ウシ、ブタ、ウマ、及び他の哺乳動物種が含まれる、哺乳動物を指す。一実施形態では、対象、個体、または患者は、ヒトである。
【0115】
用語「処置する」、「処置」、及び同様の用語は、所望の薬理学的及び／または生理学的効果を達成することを通常意味するように本明細書において使用される。「処置する」または「処置」は、あらゆる客観的または主観的パラメーターが含まれる、神経変性疾患（例えば、アルツハイマー病または本明細書に記載される別の神経変性疾患）の処置または改善の成功のあらゆる兆候、例えば、寛解、鎮静、患者生存率の改善、生存期間もしくは生存率の増加、症状の減弱、または疾患が患者にとってより許容できるものになること、変性もしくは衰弱の速度の緩徐化、または患者の肉体的もしくは精神的健康の改善を指し得る。症状の処置または改善は、客観的または主観的パラメーターに基づいてもよい。処置の効果は、処置を受けていない個体もしくは個体の集団と比較され得るか、または処置前もしくは処置の間の異なる時点での同じ患者と比較され得る。
【0116】
用語「薬学的に許容される賦形剤」は、ヒトまたは動物における使用に生物学的または薬理学的に適合する非活性医薬成分、例えば、限定されるものではないが、緩衝剤、担体、または防腐剤を指す。
【0117】
本明細書で使用する場合、薬剤（例えば、本明細書に記載される抗体）の「治療量」または「治療上有効量」は、対象における疾患の症状を処置するか、軽減するか、緩和するか、またはその重症度を低減させる薬剤の量である。薬剤（例えば、本明細書に記載される抗体）の「治療量」は、患者の生存率を改善し得るか、生存期間もしくは生存率を増加させ得るか、症状を減弱させ得るか、損傷、疾患、もしくは状態（例えば、神経変性疾患）をより許容できるものにし得るか、変性もしくは衰弱の速度を遅らせ得るか、または患者の肉体的もしくは精神的健康を改善し得る。
【0118】
用語「投与する」は、薬剤、化合物、または組成物を生物学的作用が望まれる部位に送達する方法を指す。これらの方法としては、限定されるものではないが、局所送達、非経口送達、静脈内送達、皮内送達、筋肉内送達、クモ膜下腔内送達、結腸送達、直腸送達、または腹腔内送達が挙げられる。一実施形態では、本明細書に記載される抗体は、静脈内投与される。
【0119】
用語「対照」または「対照値」は、参照値またはベースライン値を指す。適切な対照は、当業者により決定され得る。幾つかの例では、対照値は、同じ対象または実験内のベースラインを基準として決定され得る。他の例では、対照値は、対照対象（例えば、健常対照または疾患対照）または対照対象（例えば、健常対照または疾患対照）の集団（例えば、１０、２０、５０、１００、２００、５００、１０００人、またはそれ以上の対照対象の集団）の平均値を基準として決定され得る。
【0120】
ＩＩＩ．抗ＰＩＬＲＡ抗体
一態様では、ペア型免疫グロブリン様２型受容体α（ＰＩＬＲＡ）タンパク質（例えば、ｈＰＩＬＲＡ及び／またはｃｙｎｏＰＩＬＲＡタンパク質）に特異的に結合する抗体が提供される。幾つかの実施形態では、抗体は、ｈＰＩＬＲＡタンパク質に特異的に結合する。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、他のＰＩＬＲ受容体（例えば、ペア型免疫グロブリン様２型受容体β（ＰＩＬＲＢ））以上にＰＩＬＲＡに対して選択的である。
一態様では、ペア型免疫グロブリン様２型受容体α（ＰＩＬＲＡ）タンパク質（例えば、ｈＰＩＬＲＡ及び／またはｃｙｎｏＰＩＬＲＡタンパク質）に特異的に結合する抗体が提供される。幾つかの実施形態では、抗体は、ｈＰＩＬＲＡタンパク質に特異的に結合する。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、他のＰＩＬＲ受容体（例えば、ペア型免疫グロブリン様２型受容体β（ＰＩＬＲＢ））以上にＰＩＬＲＡに対して選択的である。
【0121】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、本明細書において開示されるような１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）、重鎖可変領域、及び／または軽鎖可変領域配列を含む抗体である。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、本明細書において開示されるような１つ以上のＣＤＲ、重鎖可変領域、及び／または軽鎖可変領域配列を含み、更に本明細書において開示されるような１つ以上の機能的特性を備える（例えば、ＰＩＬＲＡ活性をアンタゴナイズする抗体（例えば、ｈＰＩＬＲＡへのリガンドの結合を遮断し、下流タンパク質のリン酸化を変化させ（例えば、ＥＧＦＲまたはＳＴＡＴ３のリン酸化を増加させ、ＳＴＡＴ１のリン酸化を減少させる）、細胞呼吸、脂肪酸代謝（例えば、脂肪酸酸化）、及びＡＴＰ産生を増進させ、細胞遊走（例えば、ミクログリア遊走）を増強し、抗炎症性遺伝子もしくはタンパク質の発現を増加させ、及び／またはサイトカインタンパク質の発現を低減させる抗体））。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、本明細書に記載されるような１つ以上の改変を含むＦｃポリペプチドを含む。
【0122】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、完全ヒト抗体である。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、キメラ抗体である。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、ヒト化され、及び／または親和性成熟した抗体である。
【0123】
抗ＰＩＬＲＡ抗体配列
幾つかの実施形態では、重鎖配列もしくはその一部、及び／または軽鎖配列もしくはその一部は、本明細書に記載される抗ＰＩＬＲＡ抗体（例えば、クローン２、クローン４、またはクローン５）に由来する。これらのクローンのＣＤＲ、重鎖可変領域、及び軽鎖可変領域のアミノ酸配列を表１に示す。
幾つかの実施形態では、重鎖配列もしくはその一部、及び／または軽鎖配列もしくはその一部は、本明細書に記載される抗ＰＩＬＲＡ抗体（例えば、クローン２、クローン４、またはクローン５）に由来する。これらのクローンのＣＤＲ、重鎖可変領域、及び軽鎖可変領域のアミノ酸配列を表１に示す。
【0124】
【表1】
【0125】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、以下からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲを含む：
（ａ）配列番号４～１１のいずれか１つのアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号４～１１のいずれか１つのアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲ－Ｈ１）配列；
（ｂ）配列番号１２～１９のいずれか１つのアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号１２～１９のいずれか１つのアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ２（ＣＤＲ－Ｈ２）配列；
（ｃ）配列番号２０～２９のいずれか１つのアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号２０～２９のいずれか１つのアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲ－Ｈ３）配列；
（ｄ）配列番号３０～３８のいずれか１つのアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号３０～３８のいずれか１つのアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲ－Ｌ１）配列；
（ｅ）配列番号３９～４６のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号３９～４６のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ２（ＣＤＲ－Ｌ２）配列；及び
（ｆ）配列番号４７～５３のいずれか１つのアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号４７～５３のいずれか１つのアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲ－Ｌ３）配列。
（ａ）配列番号４～１１のいずれか１つのアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号４～１１のいずれか１つのアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲ－Ｈ１）配列；
（ｂ）配列番号１２～１９のいずれか１つのアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号１２～１９のいずれか１つのアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ２（ＣＤＲ－Ｈ２）配列；
（ｃ）配列番号２０～２９のいずれか１つのアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号２０～２９のいずれか１つのアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲ－Ｈ３）配列；
（ｄ）配列番号３０～３８のいずれか１つのアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号３０～３８のいずれか１つのアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲ－Ｌ１）配列；
（ｅ）配列番号３９～４６のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号３９～４６のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ２（ＣＤＲ－Ｌ２）配列；及び
（ｆ）配列番号４７～５３のいずれか１つのアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号４７～５３のいずれか１つのアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲ－Ｌ３）配列。
【0126】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、以下からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲを含む：
（ａ）配列番号４～１１のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列；
（ｂ）配列番号１２～１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列；
（ｃ）配列番号２０～２９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列；
（ｄ）配列番号３０～３８のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列；
（ｅ）配列番号３９～４６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列；及び
（ｆ）配列番号４７～５３のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列。
（ａ）配列番号４～１１のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列；
（ｂ）配列番号１２～１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列；
（ｃ）配列番号２０～２９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列；
（ｄ）配列番号３０～３８のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列；
（ｅ）配列番号３９～４６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列；及び
（ｆ）配列番号４７～５３のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列。
【0127】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、（ａ）～（ｆ）のうちの２つ、３つ、４つ、５つ、または６つ全てを含む。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、（ａ）のＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）のＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）のＣＤＲ－Ｈ３を含む。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、（ｄ）のＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）のＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）のＣＤＲ－Ｌ３を含む。幾つかの実施形態では、最大２つのアミノ酸置換を有するＣＤＲは、参照配列と比較して１つのアミノ酸置換（例えば、１つの保存的置換）を有する。幾つかの実施形態では、最大２つのアミノ酸置換を有するＣＤＲは、参照配列と比較して２つのアミノ酸置換（例えば、２つの保存的置換）を有する。幾つかの実施形態では、最大２つのアミノ酸置換は、保存的置換である。
【0128】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、以下を含む：
（ａ）配列番号４のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号４のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号１２のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号２０のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号２０のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号３０のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号３０のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号３９のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号３９のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号４７のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号４７のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ３。
（ａ）配列番号４のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号４のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号１２のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号２０のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号２０のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号３０のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号３０のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号３９のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号３９のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号４７のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号４７のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ３。
【0129】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、以下を含む：
（ａ）配列番号５のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号５のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号１３のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号２１のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号２１のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号３１のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号３１のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号３９のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号３９のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号４７のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号４７のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ３。
（ａ）配列番号５のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号５のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号１３のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号２１のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号２１のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号３１のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号３１のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号３９のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号３９のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号４７のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号４７のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ３。
【0130】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、以下を含む：
（ａ）配列番号５のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号５のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号１３のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号２２のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号２２のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号３１のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号３１のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号３９のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号３９のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号４７のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号４７のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ３。
（ａ）配列番号５のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号５のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号１３のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号２２のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号２２のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号３１のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号３１のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号３９のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号３９のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号４７のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号４７のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ３。
【0131】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、以下を含む：
（ａ）配列番号６のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号６のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号１４のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号２３のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号３２のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号３２のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号４０のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号４０のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号４８のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号４８のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ３。
（ａ）配列番号６のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号６のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号１４のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号２３のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号３２のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号３２のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号４０のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号４０のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号４８のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号４８のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ３。
【0132】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、以下を含む：
（ａ）配列番号７のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号７のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号１５のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号１５のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号２４のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号２４のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号３３のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号３３のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号４１のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号４１のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号４９のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号４９のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ３。
（ａ）配列番号７のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号７のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号１５のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号１５のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号２４のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号２４のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号３３のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号３３のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号４１のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号４１のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号４９のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号４９のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ３。
【0133】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、以下を含む：
（ａ）配列番号７のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号７のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号１５のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号１５のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号２５のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号２５のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号３４のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号３４のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号４２のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号４２のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号４９のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号４９のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ３。
（ａ）配列番号７のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号７のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号１５のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号１５のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号２５のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号２５のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号３４のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号３４のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号４２のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号４２のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号４９のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号４９のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ３。
【0134】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、以下を含む：
（ａ）配列番号８のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号８のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号１６のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号２６のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号２６のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号３５のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号３５のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号４３のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号４３のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号５０のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号５０のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ３。
（ａ）配列番号８のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号８のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号１６のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号２６のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号２６のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号３５のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号３５のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号４３のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号４３のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号５０のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号５０のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ３。
【0135】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、以下を含む：
（ａ）配列番号９のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号９のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号１７のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号１７のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号２７のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号２７のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号３６のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号３６のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号４４のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号４４のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号５１のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号５１のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ３。
（ａ）配列番号９のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号９のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号１７のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号１７のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号２７のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号２７のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号３６のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号３６のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号４４のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号４４のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号５１のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号５１のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ３。
【0136】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、以下を含む：
（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号１０のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号１８のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号１８のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号２８のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号２８のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号３７のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号３７のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号４５のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号５２のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号５２のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ３。
（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号１０のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号１８のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号１８のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号２８のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号２８のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号３７のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号３７のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号４５のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号５２のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号５２のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ３。
【0137】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、以下を含む：
（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号１１のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号１９のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号２９のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号２９のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号３８のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号３８のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号４６のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号４６のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号５３のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号５３のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ３。
（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号１１のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号１９のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）配列番号２９のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号２９のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）配列番号３８のアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号３８のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号４６のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号４６のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）配列番号５３のアミノ酸配列に対する少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、または配列番号５３のアミノ酸配列と比較して最大２つのアミノ酸置換（例えば、１つまたは２つの保存的置換）を有する、ＣＤＲ－Ｌ３。
【0138】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、以下を含む：
（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；または
（ｂ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；または
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；または
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；または
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；または
（ｆ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；または
（ｇ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；または
（ｈ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；または
（ｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；または
（ｊ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３。
（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；または
（ｂ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；または
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；または
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；または
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；または
（ｆ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；または
（ｇ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；または
（ｈ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；または
（ｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；または
（ｊ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３。
【0139】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号５４～６３のいずれか１つに対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡは、配列番号５４～６３のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
【0140】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１３７～１４４及び１５８のいずれか１つに対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡは、配列番号１３７～１４４及び１５８のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
【0141】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号６４～７３のいずれか１つに対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号６４～７３のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【0142】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号５４～６３のいずれか１つに対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号６４～７３のいずれか１つに対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡは、配列番号５４～６３のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号６４～７３のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【0143】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１３７～１４４のいずれか１つに対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号１４５～１４９のいずれか１つに対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡは、配列番号１３７～１４４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１４５～１４９のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【0144】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、以下を含む：
（ａ）配列番号５４に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号６４に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＬ配列；または
（ｂ）配列番号５４に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号６５に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＬ配列；または
（ｃ）配列番号５５に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号６６に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＬ配列；または
（ｄ）配列番号５６に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号６６に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＬ配列；または
（ｅ）配列番号５７に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号６７に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＬ配列；または
（ｆ）配列番号５８に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号６８に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＬ配列；または
（ｇ）配列番号５９に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号６９に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＬ配列；または
（ｈ）配列番号６０に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号７０に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＬ配列；または
（ｉ）配列番号６１に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号７１に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＬ配列；または
（ｊ）配列番号６２に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号７２に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＬ配列；または
（ｋ）配列番号６３に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号７３に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＬ配列。
（ａ）配列番号５４に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号６４に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＬ配列；または
（ｂ）配列番号５４に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号６５に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＬ配列；または
（ｃ）配列番号５５に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号６６に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＬ配列；または
（ｄ）配列番号５６に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号６６に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＬ配列；または
（ｅ）配列番号５７に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号６７に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＬ配列；または
（ｆ）配列番号５８に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号６８に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＬ配列；または
（ｇ）配列番号５９に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号６９に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＬ配列；または
（ｈ）配列番号６０に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号７０に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＬ配列；または
（ｉ）配列番号６１に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号７１に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＬ配列；または
（ｊ）配列番号６２に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号７２に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＬ配列；または
（ｋ）配列番号６３に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号７３に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＬ配列。
【0145】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、以下を含む：
（ａ）それぞれ配列番号４、１２、及び２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ならびに配列番号５４に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＨ配列、ならびにそれぞれ配列番号３０、３９、及び４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３、ならびに配列番号６４に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＬ配列；または
（ｂ）それぞれ配列番号４、１２、及び２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ならびに配列番号５４に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＨ配列、ならびにそれぞれ配列番号３０、３９、及び４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３、ならびに配列番号６５に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＬ配列；または
（ｃ）それぞれ配列番号５、１３、及び２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ならびに配列番号５５に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＨ配列、ならびにそれぞれ配列番号３１、３９、及び４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３、ならびに配列番号６６に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＬ配列；または
（ｄ）それぞれ配列番号５、１３、及び２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ならびに配列番号５６に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＨ配列、ならびにそれぞれ配列番号３１、３９、及び４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３、ならびに配列番号６６に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＬ配列；または
（ｅ）それぞれ配列番号６、１４、及び２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ならびに配列番号５７に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＨ配列、ならびにそれぞれ配列番号３２、４０、及び４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３、ならびに配列番号６７に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＬ配列；または
（ｆ）それぞれ配列番号７、１５、及び２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ならびに配列番号５８に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＨ配列、ならびにそれぞれ配列番号３３、４１、及び４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３、ならびに配列番号６８に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＬ配列；または
（ｇ）それぞれ配列番号７、１５、及び２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ならびに配列番号５９に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＨ配列、ならびにそれぞれ配列番号３４、４２、及び４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３、ならびに配列番号６９に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＬ配列；または
（ｈ）それぞれ配列番号８、１６、及び２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ならびに配列番号６０に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＨ配列、ならびにそれぞれ配列番号３５、４３、及び５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３、ならびに配列番号７０に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＬ配列；または
（ｉ）それぞれ配列番号９、１７、及び２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ならびに配列番号６１に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＨ配列、ならびにそれぞれ配列番号３６、４４、及び５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３、ならびに配列番号７１に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＬ配列；または
（ｊ）それぞれ配列番号１０、１８、及び２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ならびに配列番号６２に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＨ配列、ならびにそれぞれ配列番号３７、４５、及び５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３、ならびに配列番号７２に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＬ配列；または
（ｋ）それぞれ配列番号１１、１９、及び２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ならびに配列番号６３に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＨ配列、ならびにそれぞれ配列番号３８、４６、及び５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３、ならびに配列番号７３に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＬ配列。
（ａ）それぞれ配列番号４、１２、及び２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ならびに配列番号５４に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＨ配列、ならびにそれぞれ配列番号３０、３９、及び４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３、ならびに配列番号６４に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＬ配列；または
（ｂ）それぞれ配列番号４、１２、及び２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ならびに配列番号５４に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＨ配列、ならびにそれぞれ配列番号３０、３９、及び４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３、ならびに配列番号６５に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＬ配列；または
（ｃ）それぞれ配列番号５、１３、及び２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ならびに配列番号５５に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＨ配列、ならびにそれぞれ配列番号３１、３９、及び４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３、ならびに配列番号６６に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＬ配列；または
（ｄ）それぞれ配列番号５、１３、及び２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ならびに配列番号５６に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＨ配列、ならびにそれぞれ配列番号３１、３９、及び４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３、ならびに配列番号６６に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＬ配列；または
（ｅ）それぞれ配列番号６、１４、及び２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ならびに配列番号５７に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＨ配列、ならびにそれぞれ配列番号３２、４０、及び４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３、ならびに配列番号６７に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＬ配列；または
（ｆ）それぞれ配列番号７、１５、及び２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ならびに配列番号５８に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＨ配列、ならびにそれぞれ配列番号３３、４１、及び４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３、ならびに配列番号６８に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＬ配列；または
（ｇ）それぞれ配列番号７、１５、及び２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ならびに配列番号５９に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＨ配列、ならびにそれぞれ配列番号３４、４２、及び４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３、ならびに配列番号６９に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＬ配列；または
（ｈ）それぞれ配列番号８、１６、及び２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ならびに配列番号６０に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＨ配列、ならびにそれぞれ配列番号３５、４３、及び５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３、ならびに配列番号７０に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＬ配列；または
（ｉ）それぞれ配列番号９、１７、及び２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ならびに配列番号６１に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＨ配列、ならびにそれぞれ配列番号３６、４４、及び５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３、ならびに配列番号７１に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＬ配列；または
（ｊ）それぞれ配列番号１０、１８、及び２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ならびに配列番号６２に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＨ配列、ならびにそれぞれ配列番号３７、４５、及び５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３、ならびに配列番号７２に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＬ配列；または
（ｋ）それぞれ配列番号１１、１９、及び２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ならびに配列番号６３に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＨ配列、ならびにそれぞれ配列番号３８、４６、及び５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３、ならびに配列番号７３に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するＶＬ配列。
【0146】
クローン２
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、及び配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む。
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、及び配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む。
【0147】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号５４に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
【0148】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号６５に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号６５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【0149】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号５４に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号６５に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号６５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【0150】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、それぞれ配列番号４、１２、及び２０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１～３を含み、配列番号５４に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有する重鎖可変領域、ならびにそれぞれ配列番号３０、３９、及び４７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１～３を含み、配列番号６５に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有する軽鎖可変領域を含む。
【0151】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、各々がそれぞれ配列番号４、１２、及び２０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１～３を含み、配列番号１２２に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有する２本の重鎖、ならびに各々がそれぞれ配列番号３０、３９、及び４７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１～３を含み、配列番号１２３に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有する２本の軽鎖を含む。
【0152】
クローン４
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、及び配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む。
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、及び配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む。
【0153】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号５６に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号５６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
【0154】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号６６に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号６６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【0155】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号５６に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号６６に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号５６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号６６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【0156】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、それぞれ配列番号５、１３、及び２２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１～３を含み、配列番号５６に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有する重鎖可変領域、ならびにそれぞれ配列番号３１、３９、及び４７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１～３を含み、配列番号６６に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有する軽鎖可変領域を含む。
【0157】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、各々がそれぞれ配列番号５、１３、及び２２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１～３を含み、配列番号１２４に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有する２本の重鎖、ならびに各々がそれぞれ配列番号３１、３９、及び４７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１～３を含み、配列番号１２５に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有する２本の軽鎖を含む。
【0158】
クローン５
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、及び配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む。
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、及び配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む。
【0159】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号５７に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号５７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
【0160】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号６７に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号６７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【0161】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号５７に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号６７に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号５７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号６７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【0162】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、それぞれ配列番号６、１４、及び２３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１～３を含み、配列番号５７に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有する重鎖可変領域、ならびにそれぞれ配列番号３２、４０、及び４８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１～３を含み、配列番号６７に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有する軽鎖可変領域を含む。
【0163】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、各々がそれぞれ配列番号６、１４、及び２３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１～３を含み、配列番号１２６に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有する２本の重鎖、ならびに各々がそれぞれ配列番号３２、４０、及び４８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１～３を含み、配列番号１２７に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有する２本の軽鎖を含む。
【0164】
クローン１２
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、及び配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む。
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、及び配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む。
【0165】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１３７に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１３７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
【0166】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１４５に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【0167】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１３７に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１４５に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１３７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号１４５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【0168】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、それぞれ配列番号７、１５、及び２４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１～３を含み、配列番号１３７に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有する重鎖可変領域、ならびにそれぞれ配列番号３３、４１、及び４９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１～３を含み、配列番号１４５に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有する軽鎖可変領域を含む。
【0169】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、各々がそれぞれ配列番号７、１５、及び２４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１～３を含み、配列番号１５０に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有する２本の重鎖、ならびに各々がそれぞれ配列番号３３、４１、及び４９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１～３を含み、配列番号１５１に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有する２本の軽鎖を含む。
【0170】
クローン１５
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、及び配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む。
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、及び配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む。
【0171】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１４０に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
【0172】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１４５に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【0173】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１４０に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１４５に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号１４５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【0174】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、それぞれ配列番号７、１５、及び２４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１～３を含み、配列番号１４０に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有する重鎖可変領域、ならびにそれぞれ配列番号３３、４１、及び４９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１～３を含み、配列番号１４５に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有する軽鎖可変領域を含む。
【0175】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、各々がそれぞれ配列番号７、１５、及び２４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１～３を含み、配列番号１５２に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有する２本の重鎖、ならびに各々がそれぞれ配列番号３３、４１、及び４９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１～３を含み、配列番号１５１に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有する２本の軽鎖を含む。
【0176】
クローン２３
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、及び配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む。
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、及び配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む。
【0177】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１４３に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
【0178】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１４６に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１４６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【0179】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１４３に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１４６に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号１４６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【0180】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、それぞれ配列番号７、１５、及び２５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１～３を含み、配列番号１４３に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有する重鎖可変領域、ならびにそれぞれ配列番号３４、４２、及び４９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１～３を含み、配列番号１４６に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有する軽鎖可変領域を含む。
【0181】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、各々がそれぞれ配列番号７、１５、及び２５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１～３を含み、配列番号１５３に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有する２本の重鎖、ならびに各々がそれぞれ配列番号３４、４２、及び４９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１～３を含み、配列番号１５４に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有する２本の軽鎖を含む。
【0182】
クローン３５
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、及び配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む。
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、及び配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む。
【0183】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１４３に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
【0184】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１４９に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１４９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【0185】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１４３に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１４９に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号１４９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【0186】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、それぞれ配列番号７、１５、及び２５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１～３を含み、配列番号１４３に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有する重鎖可変領域、ならびにそれぞれ配列番号３４、４２、及び４９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１～３を含み、配列番号１４９に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有する軽鎖可変領域を含む。
【0187】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、各々がそれぞれ配列番号７、１５、及び２５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１～３を含み、配列番号１５３に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有する２本の重鎖、ならびに各々がそれぞれ配列番号３４、４２、及び４９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１～３を含み、配列番号１５５に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有する２本の軽鎖を含む。
【0188】
コンセンサス配列
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、本明細書において開示されるコンセンサス配列に包含される１つ以上の配列を含む。非限定的な例として、コンセンサス配列は、同じ（または類似の）生殖細胞系列に由来する抗体の重鎖配列または軽鎖配列（例えば、ＣＤＲ）をアラインメントすることにより同定され得る。幾つかの実施形態では、コンセンサス配列は、同じ（または同程度の）長さの配列を有し、及び／または少なくとも１つの高度に類似するＣＤＲ（例えば、高度に類似するＣＤＲ３）を有する抗体から生成され得る。幾つかの実施形態では、これらの抗体のかかる配列は、保存されたアミノ酸もしくはモチーフ（すなわち、配列における変化がタンパク質機能を変化させ得るアミノ酸またはモチーフ）及び／または配列内の多様性が生じる領域（すなわち、配列の多様性がタンパク質機能に大きな影響を及ぼす可能性が低い領域）を同定するために、アラインメント及び比較され得る。あるいは、コンセンサス配列は、保存されたアミノ酸またはモチーフ（すなわち、配列における変化がタンパク質機能を変化させ得るアミノ酸またはモチーフ）及び配列のアラインメントにおいて多様性が生じる領域（すなわち、配列の多様性がタンパク質機能に大きな影響を及ぼす可能性が低い領域）を決定するために、同じかまたは類似する（例えば、重複する）エピトープに結合する抗体の重鎖配列または軽鎖配列（例えば、ＣＤＲ）をアラインメントすることにより同定され得る。幾つかの実施形態では、１つ以上のコンセンサス配列は、本明細書に開示される抗ＰＩＬＲＡ抗体と同じかまたは類似するエピトープを認識する抗体について同定され得る。コンセンサス配列内の「Ｘ」で示す位置に挿入するアミノ酸を選択する場合、幾つかの実施形態では、当該アミノ酸は、アラインメントされた配列における対応する位置に見出されるアミノ酸から選択されることが理解されよう。
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、本明細書において開示されるコンセンサス配列に包含される１つ以上の配列を含む。非限定的な例として、コンセンサス配列は、同じ（または類似の）生殖細胞系列に由来する抗体の重鎖配列または軽鎖配列（例えば、ＣＤＲ）をアラインメントすることにより同定され得る。幾つかの実施形態では、コンセンサス配列は、同じ（または同程度の）長さの配列を有し、及び／または少なくとも１つの高度に類似するＣＤＲ（例えば、高度に類似するＣＤＲ３）を有する抗体から生成され得る。幾つかの実施形態では、これらの抗体のかかる配列は、保存されたアミノ酸もしくはモチーフ（すなわち、配列における変化がタンパク質機能を変化させ得るアミノ酸またはモチーフ）及び／または配列内の多様性が生じる領域（すなわち、配列の多様性がタンパク質機能に大きな影響を及ぼす可能性が低い領域）を同定するために、アラインメント及び比較され得る。あるいは、コンセンサス配列は、保存されたアミノ酸またはモチーフ（すなわち、配列における変化がタンパク質機能を変化させ得るアミノ酸またはモチーフ）及び配列のアラインメントにおいて多様性が生じる領域（すなわち、配列の多様性がタンパク質機能に大きな影響を及ぼす可能性が低い領域）を決定するために、同じかまたは類似する（例えば、重複する）エピトープに結合する抗体の重鎖配列または軽鎖配列（例えば、ＣＤＲ）をアラインメントすることにより同定され得る。幾つかの実施形態では、１つ以上のコンセンサス配列は、本明細書に開示される抗ＰＩＬＲＡ抗体と同じかまたは類似するエピトープを認識する抗体について同定され得る。コンセンサス配列内の「Ｘ」で示す位置に挿入するアミノ酸を選択する場合、幾つかの実施形態では、当該アミノ酸は、アラインメントされた配列における対応する位置に見出されるアミノ酸から選択されることが理解されよう。
【0189】
クローン２、４、及び５
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、以下を含む：
（ａ）ＧＸ１ＴＦＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｈ（配列番号７４）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列であって、Ｘ１がＦまたはＹであり、Ｘ２がＤまたはＩであり、Ｘ３がＤまたはＧであり、Ｘ４がＹまたはＦであり、Ｘ５がＡまたはＹであり、かつＸ６がＭまたはＩである、当該ＣＤＲ－Ｈ１配列；
（ｂ）Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５ＳＧＸ６Ｘ７Ｘ８（配列番号７５）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列であって、Ｘ１がＧまたはＷであり、Ｘ２がＦ、Ｍ、またはＩであり、Ｘ３がＳまたはＮであり、Ｘ４がＷまたはＰであり、Ｘ５がＮまたはＥであり、Ｘ６がＳまたはＤであり、Ｘ７がＩまたはＴであり、かつＸ８がＧまたはＴである、当該ＣＤＲ－Ｈ２配列；
（ｃ）Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９ＦＤＸ１０（配列番号７６）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列であって、Ｘ１がＤであるか、または存在せず、Ｘ２がＫまたはＧであり、Ｘ３がＳまたはＮであり、Ｘ４がＩまたはＷであり、Ｘ５がＳ、Ｇ、またはＮであり、Ｘ６がＡまたはＦであり、Ｘ７がＡまたはＰであり、Ｘ８がＧまたはＤであり、Ｘ９がＲまたはＴであり、かつＸ１０がＹ、Ｓ、またはＦである、当該ＣＤＲ－Ｈ３配列；
（ｄ）Ｘ１Ｘ２ＳＸ３Ｘ４ＩＸ５Ｘ６ＹＬＮ（配列番号７７）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列であって、Ｘ１がＱまたはＲであり、Ｘ２がＡまたはＳであり、Ｘ３がＲまたはＱであり、Ｘ４がＲ、Ｇ、またはＳであり、Ｘ５がＮまたはＳであり、かつＸ６がＮまたはＩである、当該ＣＤＲ－Ｌ１配列；
（ｅ）Ｘ１ＡＳＸ２ＬＸ３Ｘ４（配列番号７８）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列であって、Ｘ１がＤまたはＶであり、Ｘ２がＮまたはＳであり、Ｘ３がＥまたはＱであり、かつＸ４がＴまたはＳである、当該ＣＤＲ－Ｌ２配列；及び
（ｆ）ＱＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４ＰＸ５Ｔ（配列番号７９）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列であって、Ｘ１がＹまたはＳであり、Ｘ２がＤまたはＹであり、Ｘ３がＮまたはＳであり、Ｘ４がＬまたはＡであり、かつＸ５がＬまたはＦである、当該ＣＤＲ－Ｌ３配列。
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、以下を含む：
（ａ）ＧＸ１ＴＦＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｈ（配列番号７４）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列であって、Ｘ１がＦまたはＹであり、Ｘ２がＤまたはＩであり、Ｘ３がＤまたはＧであり、Ｘ４がＹまたはＦであり、Ｘ５がＡまたはＹであり、かつＸ６がＭまたはＩである、当該ＣＤＲ－Ｈ１配列；
（ｂ）Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５ＳＧＸ６Ｘ７Ｘ８（配列番号７５）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列であって、Ｘ１がＧまたはＷであり、Ｘ２がＦ、Ｍ、またはＩであり、Ｘ３がＳまたはＮであり、Ｘ４がＷまたはＰであり、Ｘ５がＮまたはＥであり、Ｘ６がＳまたはＤであり、Ｘ７がＩまたはＴであり、かつＸ８がＧまたはＴである、当該ＣＤＲ－Ｈ２配列；
（ｃ）Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９ＦＤＸ１０（配列番号７６）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列であって、Ｘ１がＤであるか、または存在せず、Ｘ２がＫまたはＧであり、Ｘ３がＳまたはＮであり、Ｘ４がＩまたはＷであり、Ｘ５がＳ、Ｇ、またはＮであり、Ｘ６がＡまたはＦであり、Ｘ７がＡまたはＰであり、Ｘ８がＧまたはＤであり、Ｘ９がＲまたはＴであり、かつＸ１０がＹ、Ｓ、またはＦである、当該ＣＤＲ－Ｈ３配列；
（ｄ）Ｘ１Ｘ２ＳＸ３Ｘ４ＩＸ５Ｘ６ＹＬＮ（配列番号７７）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列であって、Ｘ１がＱまたはＲであり、Ｘ２がＡまたはＳであり、Ｘ３がＲまたはＱであり、Ｘ４がＲ、Ｇ、またはＳであり、Ｘ５がＮまたはＳであり、かつＸ６がＮまたはＩである、当該ＣＤＲ－Ｌ１配列；
（ｅ）Ｘ１ＡＳＸ２ＬＸ３Ｘ４（配列番号７８）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列であって、Ｘ１がＤまたはＶであり、Ｘ２がＮまたはＳであり、Ｘ３がＥまたはＱであり、かつＸ４がＴまたはＳである、当該ＣＤＲ－Ｌ２配列；及び
（ｆ）ＱＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４ＰＸ５Ｔ（配列番号７９）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列であって、Ｘ１がＹまたはＳであり、Ｘ２がＤまたはＹであり、Ｘ３がＮまたはＳであり、Ｘ４がＬまたはＡであり、かつＸ５がＬまたはＦである、当該ＣＤＲ－Ｌ３配列。
【0190】
特定の実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、以下を含む：
（ａ）ＧＦＴＦＤＤＹＡＸ１Ｈ（配列番号８０）の配列であって、Ｘ１がＭもしくはＩである、当該配列を含むか、またはＧＹＴＦＩＧＦＹＩＨ（配列番号６）の配列を含む、ＣＤＲ－Ｈ１配列；
（ｂ）ＧＸ１ＳＷＮＳＧＳＩＧ（配列番号８１）の配列であって、Ｘ１がＦもしくはＭである、当該配列を含むか、またはＷＩＮＰＥＳＧＤＴＴ（配列番号１４）の配列を含む、ＣＤＲ－Ｈ２配列；
（ｃ）ＤＫＳＩＸ１ＡＡＧＲＦＤＸ２（配列番号８２）の配列であって、Ｘ１がＳもしくはＧであり、かつＸ２がＹもしくはＳである、当該配列を含むか、またはＧＮＷＮＦＰＤＴＦＤＦ（配列番号２３）の配列を含む、ＣＤＲ－Ｈ３配列；
（ｄ）ＱＡＳＸ１Ｘ２ＩＮＮＹＬＮ（配列番号８３）の配列であって、Ｘ１がＲもしくはＱであり、かつＸ２がＲもしくはＧである、当該配列を含むか、またはＲＳＳＱＳＩＳＩＹＬＮ（配列番号３２）の配列を含む、ＣＤＲ－Ｌ１配列；
（ｅ）ＤＡＳＮＬＥＴ（配列番号３９）またはＶＡＳＳＬＱＳ（配列番号４０）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列；及び
（ｆ）ＱＱＹＤＮＬＰＬＴ（配列番号４７）またはＱＱＳＹＳＡＰＦＴ（配列番号４８）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列。
（ａ）ＧＦＴＦＤＤＹＡＸ１Ｈ（配列番号８０）の配列であって、Ｘ１がＭもしくはＩである、当該配列を含むか、またはＧＹＴＦＩＧＦＹＩＨ（配列番号６）の配列を含む、ＣＤＲ－Ｈ１配列；
（ｂ）ＧＸ１ＳＷＮＳＧＳＩＧ（配列番号８１）の配列であって、Ｘ１がＦもしくはＭである、当該配列を含むか、またはＷＩＮＰＥＳＧＤＴＴ（配列番号１４）の配列を含む、ＣＤＲ－Ｈ２配列；
（ｃ）ＤＫＳＩＸ１ＡＡＧＲＦＤＸ２（配列番号８２）の配列であって、Ｘ１がＳもしくはＧであり、かつＸ２がＹもしくはＳである、当該配列を含むか、またはＧＮＷＮＦＰＤＴＦＤＦ（配列番号２３）の配列を含む、ＣＤＲ－Ｈ３配列；
（ｄ）ＱＡＳＸ１Ｘ２ＩＮＮＹＬＮ（配列番号８３）の配列であって、Ｘ１がＲもしくはＱであり、かつＸ２がＲもしくはＧである、当該配列を含むか、またはＲＳＳＱＳＩＳＩＹＬＮ（配列番号３２）の配列を含む、ＣＤＲ－Ｌ１配列；
（ｅ）ＤＡＳＮＬＥＴ（配列番号３９）またはＶＡＳＳＬＱＳ（配列番号４０）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列；及び
（ｆ）ＱＱＹＤＮＬＰＬＴ（配列番号４７）またはＱＱＳＹＳＡＰＦＴ（配列番号４８）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列。
【0191】
特定の実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、以下を含む：
（ａ）ＧＦＴＦＤＤＹＡＸ１Ｈ（配列番号８０）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列であって、Ｘ１がＭまたはＩである、当該ＣＤＲ－Ｈ１配列；
（ｂ）ＧＸ１ＳＷＮＳＧＳＩＧ（配列番号８１）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列であって、Ｘ１がＦまたはＭである、当該ＣＤＲ－Ｈ２配列；
（ｃ）ＤＫＳＩＸ１ＡＡＧＲＦＤＸ２（配列番号８２）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列であって、Ｘ１がＳまたはＧであり、かつＸ２がＹまたはＳである、当該ＣＤＲ－Ｈ３配列；
（ｄ）ＱＡＳＸ１Ｘ２ＩＮＮＹＬＮ（配列番号８３）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列であって、Ｘ１がＲまたはＱであり、かつＸ２がＲまたはＧである、当該ＣＤＲ－Ｌ１配列；
（ｅ）ＤＡＳＮＬＥＴ（配列番号３９）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列；及び
（ｆ）ＱＱＹＤＮＬＰＬＴ（配列番号４７）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列。
（ａ）ＧＦＴＦＤＤＹＡＸ１Ｈ（配列番号８０）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列であって、Ｘ１がＭまたはＩである、当該ＣＤＲ－Ｈ１配列；
（ｂ）ＧＸ１ＳＷＮＳＧＳＩＧ（配列番号８１）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列であって、Ｘ１がＦまたはＭである、当該ＣＤＲ－Ｈ２配列；
（ｃ）ＤＫＳＩＸ１ＡＡＧＲＦＤＸ２（配列番号８２）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列であって、Ｘ１がＳまたはＧであり、かつＸ２がＹまたはＳである、当該ＣＤＲ－Ｈ３配列；
（ｄ）ＱＡＳＸ１Ｘ２ＩＮＮＹＬＮ（配列番号８３）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列であって、Ｘ１がＲまたはＱであり、かつＸ２がＲまたはＧである、当該ＣＤＲ－Ｌ１配列；
（ｅ）ＤＡＳＮＬＥＴ（配列番号３９）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列；及び
（ｆ）ＱＱＹＤＮＬＰＬＴ（配列番号４７）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列。
【0192】
クローン６、７、及び８
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、以下を含む：
（ａ）ＧＹＴＦＴＸ１Ｘ２ＹＭＹ（配列番号８４）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列であって、Ｘ１がＥまたはＧであり、かつＸ２がＹまたはＨである、当該ＣＤＲ－Ｈ１配列；
（ｂ）Ｘ１ＩＸ２ＰＸ３Ｘ４ＧＸ５ＴＤ（配列番号８５）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列であって、Ｘ１がＲまたはＷであり、Ｘ２がＤまたはＮであり、Ｘ３がＥまたはＮであり、Ｘ４がＤまたはＳであり、かつＸ５がＧまたはＤである、当該ＣＤＲ－Ｈ２配列；
（ｃ）ＴＩＲＧＴＶＦＸ１Ｘ２（配列番号８６）の配列であって、Ｘ１がＡもしくはＶであり、かつＸ２がＦもしくはＹである、当該配列を含むか、またはＥＧＬＤＧＤＰＦＤＹ（配列番号２６）の配列を含む、ＣＤＲ－Ｈ３配列；
（ｄ）ＲＸ１ＳＥＤＩＸ２ＮＧＬＡ（配列番号８７）の配列であって、Ｘ１がＡもしくはＰであり、かつＸ２がＦもしくはＹである、当該配列を含むか、またはＲＳＳＱＳＬＶＨＳＤＧＮＴＹＬＳ（配列番号３５）の配列を含む、ＣＤＲ－Ｌ１配列；
（ｅ）ＮＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６（配列番号８８）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列であって、Ｘ１がＡまたはＩであり、Ｘ２がＫ、Ｎ、またはＳであり、Ｘ３がＴ、Ｓ、またはＮであり、Ｘ４がＬまたはＲであり、Ｘ５がＨまたはＦであり、かつＸ６がＴまたはＳである、当該ＣＤＲ－Ｌ２配列；及び
（ｆ）ＱＱＹＹＤＹＰＬＴ（配列番号４９）またはＩＱＴＴＱＦＳＴ（配列番号５０）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列。
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、以下を含む：
（ａ）ＧＹＴＦＴＸ１Ｘ２ＹＭＹ（配列番号８４）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列であって、Ｘ１がＥまたはＧであり、かつＸ２がＹまたはＨである、当該ＣＤＲ－Ｈ１配列；
（ｂ）Ｘ１ＩＸ２ＰＸ３Ｘ４ＧＸ５ＴＤ（配列番号８５）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列であって、Ｘ１がＲまたはＷであり、Ｘ２がＤまたはＮであり、Ｘ３がＥまたはＮであり、Ｘ４がＤまたはＳであり、かつＸ５がＧまたはＤである、当該ＣＤＲ－Ｈ２配列；
（ｃ）ＴＩＲＧＴＶＦＸ１Ｘ２（配列番号８６）の配列であって、Ｘ１がＡもしくはＶであり、かつＸ２がＦもしくはＹである、当該配列を含むか、またはＥＧＬＤＧＤＰＦＤＹ（配列番号２６）の配列を含む、ＣＤＲ－Ｈ３配列；
（ｄ）ＲＸ１ＳＥＤＩＸ２ＮＧＬＡ（配列番号８７）の配列であって、Ｘ１がＡもしくはＰであり、かつＸ２がＦもしくはＹである、当該配列を含むか、またはＲＳＳＱＳＬＶＨＳＤＧＮＴＹＬＳ（配列番号３５）の配列を含む、ＣＤＲ－Ｌ１配列；
（ｅ）ＮＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６（配列番号８８）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列であって、Ｘ１がＡまたはＩであり、Ｘ２がＫ、Ｎ、またはＳであり、Ｘ３がＴ、Ｓ、またはＮであり、Ｘ４がＬまたはＲであり、Ｘ５がＨまたはＦであり、かつＸ６がＴまたはＳである、当該ＣＤＲ－Ｌ２配列；及び
（ｆ）ＱＱＹＹＤＹＰＬＴ（配列番号４９）またはＩＱＴＴＱＦＳＴ（配列番号５０）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列。
【0193】
特定の実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、以下を含む：
（ａ）ＧＹＴＦＴＥＹＹＭＹ（配列番号７）またはＧＹＴＦＴＧＨＹＭＨ（配列番号８）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列；
（ｂ）ＲＩＤＰＥＤＧＧＴＤ（配列番号１５）またはＷＩＮＰＮＳＧＤＴＤ（配列番号１６）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列；
（ｃ）ＴＩＲＧＴＶＦＸ１Ｘ２（配列番号８６）の配列であって、Ｘ１がＡもしくはＶであり、かつＸ２がＦもしくはＹである、当該配列を含むか、またはＥＧＬＤＧＤＰＦＤＹ（配列番号２６）の配列を含む、ＣＤＲ－Ｈ３配列；
（ｄ）ＲＸ１ＳＥＤＩＸ２ＮＧＬＡ（配列番号８７）の配列であって、Ｘ１がＡもしくはＰであり、かつＸ２がＦもしくはＹである、当該配列を含むか、またはＲＳＳＱＳＬＶＨＳＤＧＮＴＹＬＳ（配列番号３５）の配列を含む、ＣＤＲ－Ｌ１配列；
（ｅ）ＮＡＸ１Ｘ２ＬＨＴ（配列番号８９）の配列であって、Ｘ１がＫもしくはＮであり、かつＸ２がＴもしくはＳである、当該配列を含むか、またはＮＩＳＮＲＦＳ（配列番号４３）の配列を含む、ＣＤＲ－Ｌ２配列；及び
（ｆ）ＱＱＹＹＤＹＰＬＴ（配列番号４９）またはＩＱＴＴＱＦＳＴ（配列番号５０）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列。
（ａ）ＧＹＴＦＴＥＹＹＭＹ（配列番号７）またはＧＹＴＦＴＧＨＹＭＨ（配列番号８）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列；
（ｂ）ＲＩＤＰＥＤＧＧＴＤ（配列番号１５）またはＷＩＮＰＮＳＧＤＴＤ（配列番号１６）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列；
（ｃ）ＴＩＲＧＴＶＦＸ１Ｘ２（配列番号８６）の配列であって、Ｘ１がＡもしくはＶであり、かつＸ２がＦもしくはＹである、当該配列を含むか、またはＥＧＬＤＧＤＰＦＤＹ（配列番号２６）の配列を含む、ＣＤＲ－Ｈ３配列；
（ｄ）ＲＸ１ＳＥＤＩＸ２ＮＧＬＡ（配列番号８７）の配列であって、Ｘ１がＡもしくはＰであり、かつＸ２がＦもしくはＹである、当該配列を含むか、またはＲＳＳＱＳＬＶＨＳＤＧＮＴＹＬＳ（配列番号３５）の配列を含む、ＣＤＲ－Ｌ１配列；
（ｅ）ＮＡＸ１Ｘ２ＬＨＴ（配列番号８９）の配列であって、Ｘ１がＫもしくはＮであり、かつＸ２がＴもしくはＳである、当該配列を含むか、またはＮＩＳＮＲＦＳ（配列番号４３）の配列を含む、ＣＤＲ－Ｌ２配列；及び
（ｆ）ＱＱＹＹＤＹＰＬＴ（配列番号４９）またはＩＱＴＴＱＦＳＴ（配列番号５０）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列。
【0194】
特定の実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、以下を含む：
（ａ）ＧＹＴＦＴＥＹＹＭＹ（配列番号７）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列；
（ｂ）ＲＩＤＰＥＤＧＧＴＤ（配列番号１５）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列；
（ｃ）ＴＩＲＧＴＶＦＸ１Ｘ２（配列番号８６）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列であって、Ｘ１がＡまたはＶであり、かつＸ２がＦまたはＹである、当該ＣＤＲ－Ｈ３配列；
（ｄ）ＲＸ１ＳＥＤＩＸ２ＮＧＬＡ（配列番号８７）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列であって、Ｘ１がＡまたはＰであり、かつＸ２がＦまたはＹである、当該ＣＤＲ－Ｌ１配列；
（ｅ）ＮＡＸ１Ｘ２ＬＨＴ（配列番号８９）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列であって、Ｘ１がＫまたはＮであり、かつＸ２がＴまたはＳである、当該ＣＤＲ－Ｌ２配列；及び
（ｆ）ＱＱＹＹＤＹＰＬＴ（配列番号４９）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列。
（ａ）ＧＹＴＦＴＥＹＹＭＹ（配列番号７）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列；
（ｂ）ＲＩＤＰＥＤＧＧＴＤ（配列番号１５）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列；
（ｃ）ＴＩＲＧＴＶＦＸ１Ｘ２（配列番号８６）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列であって、Ｘ１がＡまたはＶであり、かつＸ２がＦまたはＹである、当該ＣＤＲ－Ｈ３配列；
（ｄ）ＲＸ１ＳＥＤＩＸ２ＮＧＬＡ（配列番号８７）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列であって、Ｘ１がＡまたはＰであり、かつＸ２がＦまたはＹである、当該ＣＤＲ－Ｌ１配列；
（ｅ）ＮＡＸ１Ｘ２ＬＨＴ（配列番号８９）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列であって、Ｘ１がＫまたはＮであり、かつＸ２がＴまたはＳである、当該ＣＤＲ－Ｌ２配列；及び
（ｆ）ＱＱＹＹＤＹＰＬＴ（配列番号４９）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列。
【0195】
抗ＰＩＬＲＡ抗体の結合特性
幾つかの実施形態では、ＰＩＬＲＡタンパク質（例えば、ｈＰＩＬＲＡタンパク質）に特異的に結合する本明細書に記載される抗体は、細胞（例えば、ＰＩＬＲＡを内因的に発現する細胞株、例えば、免疫細胞、または例えば、以下の実施例セクションに記載されるような、ＰＩＬＲＡを発現するように操作された細胞株）上に発現されるＰＩＬＲＡに結合する。幾つかの実施形態では、本明細書に記載されるようなＰＩＬＲＡタンパク質に特異的に結合する抗体は、精製もしくは組換えＰＩＬＲＡタンパク質もしくはその一部に結合するか、またはＰＩＬＲＡを含むキメラタンパク質もしくはその一部に結合する。
幾つかの実施形態では、ＰＩＬＲＡタンパク質（例えば、ｈＰＩＬＲＡタンパク質）に特異的に結合する本明細書に記載される抗体は、細胞（例えば、ＰＩＬＲＡを内因的に発現する細胞株、例えば、免疫細胞、または例えば、以下の実施例セクションに記載されるような、ＰＩＬＲＡを発現するように操作された細胞株）上に発現されるＰＩＬＲＡに結合する。幾つかの実施形態では、本明細書に記載されるようなＰＩＬＲＡタンパク質に特異的に結合する抗体は、精製もしくは組換えＰＩＬＲＡタンパク質もしくはその一部に結合するか、またはＰＩＬＲＡを含むキメラタンパク質もしくはその一部に結合する。
【0196】
幾つかの実施形態では、ヒトＰＩＬＲＡタンパク質に特異的に結合する抗体は、別の種の１種以上の他のＰＩＬＲＡタンパク質との交差反応性を示す。幾つかの実施形態では、ヒトＰＩＬＲＡタンパク質に特異的に結合する抗体は、カニクイザル（「ｃｙｎｏ」）ＰＩＬＲＡタンパク質（ｃｙｎｏＰＩＬＲＡ）との交差反応性を示す。
【0197】
結合親和性、結合動態、及び交差反応性を分析するための方法は、当技術分野において公知である。これらの方法としては、限定されるものではないが、固相結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡアッセイ）、免疫沈降、表面プラズモン共鳴（例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ））、結合平衡除外法（例えば、ＫｉｎＥｘＡ（登録商標））、フローサイトメトリー、蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）、バイオレイヤー干渉法（例えば、Ｏｃｔｅｔ（商標）（ＦｏｒｔｅＢｉｏ，Ｉｎｃ．、Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ、ＣＡ））、及びウェスタンブロット分析が挙げられる。幾つかの実施形態では、結合親和性及び／または交差反応性を測定するために、ＥＬＩＳＡが使用される。ＥＬＩＳＡアッセイを実行するための方法は当技術分野において公知であり、以下の実施例セクションにも記載されている。幾つかの実施形態では、結合親和性、結合動態、及び／または交差反応性を測定するために、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）が使用される。幾つかの実施形態では、結合親和性、結合動態、及び／または交差反応性を測定するために、結合平衡除外法が使用される。幾つかの実施形態では、結合親和性、結合動態、及び／または交差反応性を測定するために、バイオレイヤー干渉法アッセイが使用される。
【0198】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載される抗ＰＩＬＲＡ抗体は、カニクイザルペア型免疫グロブリン様２型受容体α（ｃｙｎｏＰＩＬＲＡ）に特異的に結合し、ここで、ｃｙｎｏＰＩＬＲＡに対する結合親和性は、ヒトペア型免疫グロブリン様２型受容体β（ｈＰＩＬＲＢ）に対する結合親和性より少なくとも２倍（例えば、少なくとも２倍、５倍、１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、または１００倍）強い。
【0199】
本明細書に記載されるように、幾つかの実施形態では、本明細書に記載される抗ＰＩＬＲＡ抗体は、ｈＰＩＬＲＡ及びｃｙｎｏＰＩＬＲＡの両方との交差反応性を示す。幾つかの実施形態では、本明細書に記載される抗ＰＩＬＲＡ抗体は、ｈＰＩＬＲＡ及びｃｙｎｏＰＩＬＲＡの両方に結合する。
【0200】
ある特定の実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体のｃｙｎｏＰＩＬＲＡに対する結合親和性は、ｈＰＩＬＲＡに対する結合親和性と比較して１００倍以内（例えば、１００倍、９０倍、８０倍、７０倍、６０倍、５０倍、４０倍、３０倍、２０倍、１０倍、９倍、８倍、７倍、６倍、５倍、４倍、３倍、２倍、または１．５倍以内）である。特定の実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、０．１ｎＭ～５００ｎＭ（例えば、０．１ｎＭ～４００ｎＭ、０．１ｎＭ～３００ｎＭ、０．１ｎＭ～２００ｎＭ、または０．１ｎＭ～１００ｎＭ）の結合親和性でｈＰＩＬＲＡに結合する。特定の実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、０．１ｎＭ～１００ｎＭ（例えば、０．１ｎＭ～９０ｎＭ、０．１ｎＭ～８０ｎＭ、０．１ｎＭ～７０ｎＭ、０．１ｎＭ～６０ｎＭ、０．１ｎＭ～５０ｎＭ、０．１ｎＭ～４０ｎＭ、０．１ｎＭ～３０ｎＭ、０．１ｎＭ～２０ｎＭ、０．１ｎＭ～１０ｎＭ、０．１ｎＭ～５ｎＭ、０．１ｎＭ～１ｎＭ、１ｎＭ～１００ｎＭ、５ｎＭ～１００ｎＭ、１０ｎＭ～１００ｎＭ、２０ｎＭ～１００ｎＭ、３０ｎＭ～１００ｎＭ、４０ｎＭ～１００ｎＭ、５０ｎＭ～１００ｎＭ、６０ｎＭ～１００ｎＭ、７０ｎＭ～１００ｎＭ、８０ｎＭ～１００ｎＭ、または９０ｎＭ～１００ｎＭ）の結合親和性でｈＰＩＬＲＡに結合する。
【0201】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載される抗ＰＩＬＲＡ抗体は、ｈＰＩＬＲＢ以上にｈＰＩＬＲＡ及び／またはｃｙｎｏＰＩＬＲＡに対して選択的に結合する。特定の実施形態では、抗体のｈＰＩＬＲＡに対する結合親和性は、ｈＰＩＬＲＢに対する結合親和性より少なくとも１０倍（例えば、少なくとも１０倍、２０倍、４０倍、６０倍、８０倍、１００倍、１２０倍、１４０倍、１６０倍、１８０倍、２００倍、２２０倍、２４０倍、２６０倍、２８０倍、または３００倍）強い。
【0202】
抗ＰＩＬＲＡ抗体により認識されるエピトープ
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、本明細書に記載される抗体クローンにより認識されるエピトープと同じかまたは実質的に同じであるヒトＰＩＬＲＡのエピトープを認識する。本明細書で使用する場合、用語「実質的に同じ」は、本明細書に記載される抗体クローンにより認識されるエピトープに関して使用される場合、抗ＰＩＬＲＡ抗体が、本明細書に記載される抗体クローンにより認識されるエピトープと同じであるか、その内部に存在するか、もしくはそれとほぼ同じである（例えば、それに対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、またはそれと比較して１つ、２つ、もしくは３つのアミノ酸置換（例えば、保存的置換）を有する）か、またはそれと大きく重複している（例えば、それと少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または９５％重複する）エピトープを認識することを意味する。
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、本明細書に記載される抗体クローンにより認識されるエピトープと同じかまたは実質的に同じであるヒトＰＩＬＲＡのエピトープを認識する。本明細書で使用する場合、用語「実質的に同じ」は、本明細書に記載される抗体クローンにより認識されるエピトープに関して使用される場合、抗ＰＩＬＲＡ抗体が、本明細書に記載される抗体クローンにより認識されるエピトープと同じであるか、その内部に存在するか、もしくはそれとほぼ同じである（例えば、それに対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するか、またはそれと比較して１つ、２つ、もしくは３つのアミノ酸置換（例えば、保存的置換）を有する）か、またはそれと大きく重複している（例えば、それと少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または９５％重複する）エピトープを認識することを意味する。
【0203】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、クローン２及びクローン４～８（例えば、クローン２、４、及び５）ならびにそのバリアントからなる群から選択される抗体クローンにより認識されるエピトープと同じかまたは実質的に同じであるヒトＰＩＬＲＡのエピトープを認識する。
【0204】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、ＰＩＬＲＡの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）、例えば、配列番号１のアミノ酸２０～１４３を含むＥＣＤの範囲内でヒトＰＩＬＲＡのエピトープを認識する。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、ＰＩＬＲＡのストーク領域内のエピトープでヒトＰＩＬＲＡに結合する。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、ＰＩＬＲＡシグナル伝達を阻害するアンタゴニストである。
【0205】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、６３位、６４位、７８位、１０６位、１４３位、１１６～１１８位、及び１８２～１８６位の位置のうちの１つ以上における１個以上のアミノ酸に結合し、ここで、位置は配列番号１を参照して決定される。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１における６３位、６４位、７８位、１０６位、１４３位、１１６～１１８位、及び１８２～１８６位の位置のうちの１つ以上における１個以上のアミノ酸に結合する。図１０は、ｃｙｎｏＰＩＬＲＡ、ｈＰＩＬＲＡ、及びｈＰＩＬＲＢのＥＣＤ及びストーク領域配列のアラインメントを示す。ある特定の実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、ｈＰＩＬＲＡの７８位、１０６位、及び１４３位の位置のうちの１つ以上における１個以上のアミノ酸に結合する。特定の実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１のＧ７８、Ｋ１０６、及び／またはＥ１４３に結合する。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１のＧ７８に結合する。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１３６のＲ７８に結合する。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１のＫ１０６に結合する。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１のＥ１４３に結合する。特定の実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１のＧ７８、Ｋ１０６、及びＥ１４３に結合する。特定の実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１３６のＲ７８、Ｋ１０６、及びＥ１４３に結合する。
【0206】
ある特定の実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、ｈＰＩＬＲＡの６３位及び６４位の位置のうちの１つ以上における１個以上のアミノ酸に結合する。特定の実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１のＴ６３及び／またはＡ６４に結合する。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１のＴ６３に結合する。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１のＡ６４に結合する。特定の実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１のＴ６３及びＡ６４に結合する。
【0207】
ある特定の実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、ｈＰＩＬＲＡの１０６位及び１１６～１１８位の位置のうちの１つ以上における１個以上のアミノ酸に結合する。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１のＱ１１６、Ｋ１１７、及び／またはＱ１１８（例えば、Ｑ１１６、Ｋ１１７、及びＱ１１８）に結合する。
【0208】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、ｈＰＩＬＲＡのストーク２領域内のエピトープ、例えば、配列番号１の１８２～１８６位のＱＧＫＲＲ（配列番号９０）を認識する。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１の残基１８２～１８６の範囲内の１、２、３、または４個のアミノ酸を含むエピトープを認識する。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１の残基１８２～１８６の範囲内の２、３、または４個の連続アミノ酸を含むエピトープを認識する。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１の残基１８２～１８６の範囲内の５個全てのアミノ酸を含むエピトープを認識する。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１のＱ１８２、Ｇ１８３、Ｋ１８４、Ｒ１８５、及び／またはＲ１８６（例えば、Ｑ１８２、Ｇ１８３、Ｋ１８４、Ｒ１８５、及びＲ１８６）に結合する。
【0209】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、ｈＰＩＬＲＡのストーク１領域内のエピトープ、例えば、配列番号１の１５６～１６３位のＴＴＱＲＰＳＳＭ（配列番号９１）を認識する。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１の残基１５６～１６３の範囲内の１、２、３、４、５、６、または７個のアミノ酸を含むエピトープを認識する。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１の残基１５６～１６３の範囲内の２、３、４、５、６、または７個の連続アミノ酸を含むエピトープを認識する。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１の残基１５６～１６３の範囲内の８個全てのアミノ酸を含むエピトープを認識する。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１のＴ１５６、Ｔ１５７、Ｑ１５８、Ｒ１５９、Ｐ１６０、Ｓ１６１、Ｓ１６２、及び／またはＭ１６３（例えば、Ｔ１５６、Ｔ１５７、Ｑ１５８、Ｒ１５９、Ｐ１６０、Ｓ１６１、Ｓ１６２、及びＭ１６３）に結合する。
【0210】
交差反応性
ある特定の実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、ｈＰＩＬＲＡとｃｙｎｏＰＩＬＲＡとの間で保存されている１つ以上のエピトープを認識する。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、ｈＰＩＬＲＡ及び／またはｃｙｎｏＰＩＬＲＡにおける６４位、７８位、１３９位、１４３位、１５６～１６３位、及び１８２～１８５位の位置のうちの１つ以上における１個以上のアミノ酸に結合し、ここで、位置は配列番号１を参照して決定される。特定の実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、ｈＰＩＬＲＡ及びｃｙｎｏＰＩＬＲＡにおける６４位、７８位、１３９位、１４３位、１５６～１６３位、及び１８２～１８５位の位置のうちの１つ以上における１個以上のアミノ酸に結合し、ここで、位置は配列番号１を参照して決定される。特定の実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１の配列を有するｈＰＩＬＲＡのＡ６４、Ｇ７８、Ｗ１３９、Ｅ１４３、Ｔ１５６、Ｔ１５７、Ｑ１５８、Ｒ１５９、Ｐ１６０、Ｓ１６１、Ｓ１６２、Ｍ１６３、Ｑ１８２、Ｇ１８３、Ｋ１８４、及び／またはＲ１８５、ならびに配列番号２の配列を有するｃｙｎｏＰＩＬＲＡのＡ６８、Ｇ８２、Ｗ１４３、Ｅ１４７、Ｔ１６０、Ｔ１６１、Ｑ１６２、Ｒ１６３、Ｐ１６４、Ｓ１６５、Ｓ１６６、Ｍ１６７、Ｑ１８６、Ｇ１８７、Ｋ１８８、及び／またはＲ１８９に結合する。
ある特定の実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、ｈＰＩＬＲＡとｃｙｎｏＰＩＬＲＡとの間で保存されている１つ以上のエピトープを認識する。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、ｈＰＩＬＲＡ及び／またはｃｙｎｏＰＩＬＲＡにおける６４位、７８位、１３９位、１４３位、１５６～１６３位、及び１８２～１８５位の位置のうちの１つ以上における１個以上のアミノ酸に結合し、ここで、位置は配列番号１を参照して決定される。特定の実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、ｈＰＩＬＲＡ及びｃｙｎｏＰＩＬＲＡにおける６４位、７８位、１３９位、１４３位、１５６～１６３位、及び１８２～１８５位の位置のうちの１つ以上における１個以上のアミノ酸に結合し、ここで、位置は配列番号１を参照して決定される。特定の実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１の配列を有するｈＰＩＬＲＡのＡ６４、Ｇ７８、Ｗ１３９、Ｅ１４３、Ｔ１５６、Ｔ１５７、Ｑ１５８、Ｒ１５９、Ｐ１６０、Ｓ１６１、Ｓ１６２、Ｍ１６３、Ｑ１８２、Ｇ１８３、Ｋ１８４、及び／またはＲ１８５、ならびに配列番号２の配列を有するｃｙｎｏＰＩＬＲＡのＡ６８、Ｇ８２、Ｗ１４３、Ｅ１４７、Ｔ１６０、Ｔ１６１、Ｑ１６２、Ｒ１６３、Ｐ１６４、Ｓ１６５、Ｓ１６６、Ｍ１６７、Ｑ１８６、Ｇ１８７、Ｋ１８８、及び／またはＲ１８９に結合する。
【0211】
特定の実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１の配列を有するｈＰＩＬＲＡのＡ６４及び配列番号２の配列を有するｃｙｎｏＰＩＬＲＡのＡ６８に結合する。特定の実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１の配列を有するｈＰＩＬＲＡのＧ７８及び配列番号２の配列を有するｃｙｎｏＰＩＬＲＡのＧ８２に結合する。特定の実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１３６の配列を有するｈＰＩＬＲＡのＲ７８及び配列番号２の配列を有するｃｙｎｏＰＩＬＲＡのＧ８２に結合する。特定の実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１の配列を有するｈＰＩＬＲＡのＷ１３９及び配列番号２の配列を有するｃｙｎｏＰＩＬＲＡのＷ１４３に結合する。特定の実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１の配列を有するｈＰＩＬＲＡのＥ１４３及び配列番号２の配列を有するｃｙｎｏＰＩＬＲＡのＥ１４７に結合する。特定の実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、ｈＰＩＬＲＡ（例えば、配列番号１の１５６～１６３位）及びｃｙｎｏＰＩＬＲＡ（例えば、配列番号２の１６０～１６７位）の両方におけるＴＴＱＲＰＳＳＭ（配列番号９１）の範囲内の１個以上の同じアミノ酸に結合する。特定の実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、ｈＰＩＬＲＡ（例えば、配列番号１の１８２～１８５位）及びｃｙｎｏＰＩＬＲＡ（例えば、配列番号２の１８６～１８９位）の両方におけるＱＧＫＲ（配列番号９２）の範囲内の１個以上の同じアミノ酸に結合する。
【0212】
特定の実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１の配列を有するｈＰＩＬＲＡのＧ７８、Ｋ１０６、Ｅ１４３、及び配列番号２の配列を有するｃｙｎｏＰＩＬＲＡのＧ８２、Ｄ１１０、Ｅ１４７に結合する。特定の実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１３６の配列を有するｈＰＩＬＲＡのＲ７８、Ｋ１０６、Ｅ１４３、及び配列番号２の配列を有するｃｙｎｏＰＩＬＲＡのＧ８２、Ｄ１１０、Ｅ１４７に結合する。特定の実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、配列番号１の配列を有するｈＰＩＬＲＡのＴ６３及びＡ６４、ならびに配列番号２の配列を有するｃｙｎｏＰＩＬＲＡのＡ６７及びＡ６８に結合する。特定の実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、ｈＰＩＬＲＡのＱＧＫＲＲ（配列番号９０）（例えば、配列番号１の１８２～１８６位）の範囲内の１つ以上の位置、及びｃｙｎｏＰＩＬＲＡのＱＧＫＲＨ（配列番号９３）（例えば、配列番号２の１８６～１９０位）の範囲内の対応する同じ位置に結合する。
【0213】
抗ＰＩＬＲＡ抗体の機能的特性
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体（例えば、開示される１つ以上のＣＤＲ、重鎖可変領域、及び／または軽鎖可変領域配列を有する抗体）は、本明細書に開示される１つ以上の活性に作用する。例えば、幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、ＰＩＬＲＡ活性、すなわち、リガンドにより誘導されるＰＩＬＲＡ活性をアンタゴナイズするか、または低減させる。
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体（例えば、開示される１つ以上のＣＤＲ、重鎖可変領域、及び／または軽鎖可変領域配列を有する抗体）は、本明細書に開示される１つ以上の活性に作用する。例えば、幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、ＰＩＬＲＡ活性、すなわち、リガンドにより誘導されるＰＩＬＲＡ活性をアンタゴナイズするか、または低減させる。
【0214】
ある特定の実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、ｈＰＩＬＲＡへのリガンドの結合を遮断する。特定の実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、シアリル化タンパク質、例えば、以下のタンパク質のいずれかのシアリル化型の、ｈＰＩＬＲＡへの結合を遮断する：神経増殖分化制御タンパク質１（ｎｅｕｒａｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｐｒｏｔｅｉｎ １）（ＮＰＤＣ１）、ＰＩＬＲＡ結合神経タンパク質（ＰＡＮＰ；ＰＩＡＮＰ）、単純ヘルペスウイルス１型糖タンパク質Ｂ（ＨＳＶ－１ ｇＢ）、コレクチン－１２（ＣＯＬＥＣ１２）、補体成分４Ａ（Ｃ４ａ）、補体成分４Ｂ（Ｃ４ｂ）、ジストログリカン１（ジストロフィン結合糖タンパク質１；ＤＡＧ１）、及びＣ型レクチンドメインファミリーメンバーＧ（Ｃｌｅｃ４ｇ）。
【0215】
更に、幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、１種以上の下流タンパク質のリン酸化を変化させ、例えば、ＥＧＦＲもしくはＳＴＡＴ３のリン酸化を増加させるか、またはＳＴＡＴ１のリン酸化を減少させる。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、抗ＰＩＬＲＡ抗体で処理された試料において下流タンパク質リン酸化のレベルが対照値と比較して少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、またはそれ以上増加する場合、１種以上の下流タンパク質（例えば、ＥＧＦＲまたはＳＴＡＴ３）のリン酸化を誘導するか、または増加させる。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、抗ＰＩＬＲＡ抗体で処理された試料において下流タンパク質リン酸化のレベルが対照値と比較して少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、またはそれ以上増加する場合、１種以上の下流タンパク質（例えば、ＥＧＦＲまたはＳＴＡＴ３）のリン酸化を誘導する。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、抗ＰＩＬＲＡ抗体で処理された試料において下流タンパク質リン酸化のレベルが対照値と比較して少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、またはそれ以上減少する場合、１種以上の下流タンパク質（例えば、ＳＴＡＴ１）のリン酸化を減少させる。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、抗ＰＩＬＲＡ抗体で処理された試料において下流タンパク質リン酸化のレベルが対照値と比較して少なくとも２分の１、３分の１、４分の１、５分の１、６分の１、７分の１、８分の１、９分の１、１０分の１、またはそれ以下に減少する場合、１種以上の下流タンパク質（例えば、ＳＴＡＴ１）のリン酸化を減少させる。
【0216】
幾つかの実施形態では、対照値は、未処理の試料（例えば、抗ＰＩＬＲＡ抗体で処理されていないＰＩＬＲＡを発現する細胞を含む試料、または抗ＰＩＬＲＡ抗体で処理されていない対象由来の試料）、またはＰＩＬＲＡリガンドで処理されたが、抗ＰＩＬＲＡ抗体で処理されていない試料、またはＰＩＬＲＡに結合しない適切な抗体で処理された試料における下流タンパク質リン酸化のレベルである。
【0217】
試料におけるリン酸化を検出及び／または定量化するために、幾つかの実施形態では、免疫アッセイが使用される。幾つかの実施形態では、免疫アッセイは、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、酵素多重免疫測定法（ＥＭＩＡ）、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、微粒子酵素免疫測定法（ＭＥＩＡ）、免疫組織化学（ＩＨＣ）、免疫組織染色、キャピラリー電気泳動免疫測定法（ＣＥＩＡ）、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、免疫蛍光法、化学発光免疫測定法（ＣＬ）、または電気化学発光免疫測定法（ＥＣＬ）である。幾つかの実施形態では、リン酸化は、増幅発光近接ホモジニアスアッセイ（ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｉｎｃ．）を利用する免疫アッセイを使用して検出及び／または定量化される。
【0218】
幾つかの実施形態では、リン酸化は、１個以上の細胞、例えば、１個以上のＰＩＬＲＡを発現する細胞（例えば、ヒトＩＰＳＣ由来のミクログリアなどのＰＩＬＲＡを内因的に発現する細胞株、または例えば、以下の実施例セクションに記載されるような、ＰＩＬＲＡを発現するように操作された細胞株）を含む試料を使用して測定される。幾つかの実施形態では、試料は、体液、例えば、血液、血漿、血清、尿、または脳脊髄液を含む。幾つかの実施形態では、試料は、組織（例えば、肺、脳、腎臓、脾臓、神経組織、または骨格筋）またはかかる組織由来の細胞を含む。幾つかの実施形態では、試料は、（例えば、ヒトまたは非ヒト対象由来の）内在性の液体、組織、または細胞を含む。
【0219】
更に、幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、抗炎症性遺伝子またはタンパク質の発現を増加させる。例えば、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、ＩＬ１ＲＮ遺伝子の発現を増強する。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、抗ＰＩＬＲＡ抗体で処理された試料における抗炎症性遺伝子またはタンパク質の発現レベルが対照値と比較して少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、またはそれ以上増加する場合、抗炎症性遺伝子またはタンパク質の発現を増強する。他の実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、炎症誘発性サイトカインタンパク質の発現または分泌を低減させる。例えば、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、ＴＮＦ、ＩＬ－６、及び／またはＩＰ－１０の発現を低減させる。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、抗ＰＩＬＲＡ抗体で処理された試料におけるサイトカインタンパク質の発現レベルが対照値と比較して少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、またはそれ以上低減される場合、サイトカインタンパク質の発現を低減させる。
【0220】
更に、幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、（例えば、ＩＰＳＣ由来のミクログリア及び疾患関連ミクログリアが含まれる、ミクログリアの）細胞遊走及び／または細胞機能を増強する。疾患関連ミクログリア及び疾患関連ミクログリアを検出する方法は、Ｋｅｒｅｎ－Ｓｈａｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ，２０１７，１６９：１２７６－１２９０に記載されている。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、１つ以上の細胞種（例えば、ミクログリア、単球、または好中球）の細胞遊走を増強する。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、１つ以上の細胞種（例えば、ミクログリア、単球、または好中球）の細胞機能（例えば、ＡＴＰ産生、脂肪酸代謝、及び／または細胞呼吸）を増強する。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、ミクログリアの細胞遊走及び／または細胞機能を増強する。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、疾患関連ミクログリアの細胞遊走及び／または細胞機能を増強する。
【0221】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、抗ＰＩＬＲＡ抗体で処理された試料における活性のレベルが対照値と比較して少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、またはそれ以上増加する場合、細胞遊走及び／または細胞機能を増強する。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、抗ＰＩＬＲＡ抗体で処理された試料における活性のレベルが対照値と比較して少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、またはそれ以上増加する場合、細胞遊走及び／または細胞機能を増強する。幾つかの実施形態では、対照値は、未処理の試料（例えば、抗ＰＩＬＲＡ抗体で処理されていない試料）、ＰＩＬＲＡリガンドで処理されたが、抗ＰＩＬＲＡ抗体で処理されていない試料、またはＰＩＬＲＡに結合しない適切な抗体で処理された試料における活性（例えば、遊走または機能）のレベルである。
【0222】
幾つかの実施形態では、細胞遊走は、走化性アッセイを使用して測定される。走化性アッセイが当技術分野において公知である。幾つかの実施形態では、細胞遊走アッセイ（例えば、走化性アッセイ）は、ＰＩＬＲＡを内因的に発現する細胞、例えば、ヒトＩＰＳＣ由来のミクログリアを含む試料に対して実行される。幾つかの実施形態では、細胞遊走アッセイ（例えば、走化性アッセイ）は、ＰＩＬＲＡを発現するように操作された細胞を含む試料に対して実行される。幾つかの実施形態では、細胞遊走アッセイは、ＰＩＬＲＡを欠失しているか、またはＰＩＬＲＡが機能的に不活性化されている細胞を含む試料に対して実行される。幾つかの実施形態では、細胞遊走は、以下の実施例セクションに記載されるような走化性アッセイを使用して測定される。
【0223】
幾つかの実施形態では、細胞機能は、その細胞に適した機能アッセイを使用して測定される。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、脂肪酸代謝（例えば、脂肪酸酸化）を増強する。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、細胞のＡＴＰ産生を増強する。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、細胞呼吸（例えば、ミトコンドリア呼吸または非ミトコンドリア呼吸）を増強する。細胞のＡＴＰ産生及び／または呼吸の変化は、例えば、以下の実施例セクションに記載されるような、１つ以上のアッセイを使用して評価され得る。
【0224】
ＩＶ．Ｆｃポリペプチド及びその改変
幾つかの態様では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、２つのＦｃポリペプチドを含み、それらの一方または両方は、各々が独立して選択される改変（例えば、変異）を含み得るか、または野生型Ｆｃポリペプチド、例えば、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃポリペプチドであり得る。幾つかの実施形態では、本明細書に記載される抗ＰＩＬＲＡ抗体の一方または両方のＦｃポリペプチドは、野生型Ｆｃポリペプチド（例えば、配列番号９４）の配列に対する少なくとも９０％（例えば、９０％、９２％、９４％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み得る。幾つかの実施形態では、本明細書に記載される抗ＰＩＬＲＡ抗体の一方のＦｃポリペプチドは、野生型Ｆｃポリペプチド（例えば、配列番号９４）であり得るが、他方のＦｃポリペプチドは、野生型Ｆｃポリペプチド（例えば、配列番号９４）と比較して少なくとも１つのアミノ酸改変を有し得る。幾つかの実施形態では、本明細書に記載される抗ＰＩＬＲＡ抗体の両方のＦｃポリペプチドが野生型Ｆｃポリペプチド（例えば、配列番号９４）であり得る。幾つかの実施形態では、本明細書に記載される抗ＰＩＬＲＡ抗体の両方のＦｃポリペプチドが、野生型Ｆｃポリペプチド（例えば、配列番号９４）と比較して少なくとも１つのアミノ酸改変を有し得る。一方または両方のＦｃポリペプチドに導入され得る変異の非限定的な例としては、例えば、血清安定性を増加させるため、エフェクター機能を調節するため、グリコシル化に影響を及ぼすため、及び／またはヒトにおける免疫原性を低減させるための変異が挙げられる。
幾つかの態様では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、２つのＦｃポリペプチドを含み、それらの一方または両方は、各々が独立して選択される改変（例えば、変異）を含み得るか、または野生型Ｆｃポリペプチド、例えば、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃポリペプチドであり得る。幾つかの実施形態では、本明細書に記載される抗ＰＩＬＲＡ抗体の一方または両方のＦｃポリペプチドは、野生型Ｆｃポリペプチド（例えば、配列番号９４）の配列に対する少なくとも９０％（例えば、９０％、９２％、９４％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み得る。幾つかの実施形態では、本明細書に記載される抗ＰＩＬＲＡ抗体の一方のＦｃポリペプチドは、野生型Ｆｃポリペプチド（例えば、配列番号９４）であり得るが、他方のＦｃポリペプチドは、野生型Ｆｃポリペプチド（例えば、配列番号９４）と比較して少なくとも１つのアミノ酸改変を有し得る。幾つかの実施形態では、本明細書に記載される抗ＰＩＬＲＡ抗体の両方のＦｃポリペプチドが野生型Ｆｃポリペプチド（例えば、配列番号９４）であり得る。幾つかの実施形態では、本明細書に記載される抗ＰＩＬＲＡ抗体の両方のＦｃポリペプチドが、野生型Ｆｃポリペプチド（例えば、配列番号９４）と比較して少なくとも１つのアミノ酸改変を有し得る。一方または両方のＦｃポリペプチドに導入され得る変異の非限定的な例としては、例えば、血清安定性を増加させるため、エフェクター機能を調節するため、グリコシル化に影響を及ぼすため、及び／またはヒトにおける免疫原性を低減させるための変異が挙げられる。
【0225】
エフェクター機能を調節するためのＦｃポリペプチド改変
幾つかの実施形態では、本明細書に記載される抗体に存在する一方または両方のＦｃポリペプチドは、エフェクター機能を低減させる改変を含み得、すなわち、エフェクター機能を媒介するエフェクター細胞上に発現されたＦｃ受容体への結合時にある特定の生物学的機能を誘導する能力が低減されている。抗体エフェクター機能の例としては、限定されるものではないが、Ｃ１ｑへの結合及び補体依存性細胞障害（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体への結合、抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方調節、及びＢ細胞活性化が挙げられる。エフェクター機能は、抗体クラスによって異なり得る。例えば、天然のヒトＩｇＧ１及びＩｇＧ３抗体は、免疫系細胞に存在する適切なＦｃ受容体への結合時にＡＤＣＣ及びＣＤＣ活性を誘発することができ、天然のヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４は、免疫細胞に存在する適切なＦｃ受容体への結合時にＡＤＣＰ機能を誘発することができる。
幾つかの実施形態では、本明細書に記載される抗体に存在する一方または両方のＦｃポリペプチドは、エフェクター機能を低減させる改変を含み得、すなわち、エフェクター機能を媒介するエフェクター細胞上に発現されたＦｃ受容体への結合時にある特定の生物学的機能を誘導する能力が低減されている。抗体エフェクター機能の例としては、限定されるものではないが、Ｃ１ｑへの結合及び補体依存性細胞障害（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体への結合、抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方調節、及びＢ細胞活性化が挙げられる。エフェクター機能は、抗体クラスによって異なり得る。例えば、天然のヒトＩｇＧ１及びＩｇＧ３抗体は、免疫系細胞に存在する適切なＦｃ受容体への結合時にＡＤＣＣ及びＣＤＣ活性を誘発することができ、天然のヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４は、免疫細胞に存在する適切なＦｃ受容体への結合時にＡＤＣＰ機能を誘発することができる。
【0226】
幾つかの実施形態では、Ｆｃポリペプチド二量体における一方または両方のＦｃポリペプチドは、エフェクター機能を低減させるまたは除去する改変を含み得る。エフェクター機能を低減させる例示的なＦｃポリペプチド変異としては、限定されるものではないが、ＣＨ２ドメインにおける置換、例えば、ＥＵ番号付けスキームに従って２３４位及び２３５位での、及び／または３２９位での置換が挙げられる。例えば、幾つかの実施形態では、一方または両方のＦｃポリペプチドは、２３４位及び２３５位にＡｌａ残基（本明細書において「ＬＡＬＡ」とも称される）を含む。幾つかの実施形態では、一方または両方のＦｃポリペプチドは、３２９位にＧｌｙ残基（本明細書において「Ｐ３２９Ｇ」または「ＰＧ」とも称される）または３２９位にＳｅｒ残基（本明細書において「Ｐ３２９Ｓ」または「ＰＳ」とも称される）を含む。幾つかの実施形態では、一方または両方のＦｃポリペプチドは、２３４位及び２３５位にＡｌａ残基、ならびに３２９位にＧｌｙ残基（本明細書において「ＬＡＬＡ ＰＧ」とも称される）を含む。幾つかの実施形態では、一方または両方のＦｃポリペプチドは、２３４位及び２３５位にＡｌａ残基、ならびに３２９位のＳｅｒ残基（本明細書において「ＬＡＬＡ ＰＳ」とも称される）を含む。
【0227】
エフェクター機能を調節する追加のＦｃポリペプチド変異としては、限定されるものではないが、以下が挙げられる。３２９位は、プロリンがグリシンもしくはアルギニン、またはＦｃのプロリン３２９とＦｃγＲＩＩＩのトリプトファン残基であるＴｒｐ ８７及びＴｒｐ １１０との間で形成されるＦｃ／Ｆｃγ受容体界面を破壊するのに十分大きなアミノ酸残基で置換される変異を有し得る。追加の例示的な置換としては、ＥＵ番号付けスキームに従って、Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３５Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｄ、及びＰ３３１Ｓが挙げられる。複数の置換、例えば、ＥＵ番号付けスキームに従って、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域のＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ；ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域のＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ；ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域のＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｓ；ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域のＳ２２８Ｐ及びＬ２３５Ｅ；ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域のＬ２３４Ａ及びＧ２３７Ａ；ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域のＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＧ２３７Ａ；ヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域のＶ２３４Ａ及びＧ２３７Ａ；ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域のＬ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＥ３１８Ａ；ならびにヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域のＳ２２８Ｐ及びＬ２３６Ｅが存在してもよい。幾つかの実施形態では、一方または両方のＦｃポリペプチドは、ＡＤＣＣを調節する１つ以上のアミノ酸置換、例えば、ＥＵ番号付けスキームに従って２９８位、３３３位、及び／または３３４位での置換を有し得る。
【0228】
血清半減期を延長するためのＦｃポリペプチド改変
幾つかの実施形態では、血清半減期を増大させる改変が本明細書に記載される任意のＦｃポリペプチドに導入され得る。例えば、幾つかの実施形態では、Ｆｃポリペプチド二量体における一方または両方のＦｃポリペプチドは、ＥＵ番号付けスキームに従って番号付けされる、Ｍ４２８Ｌ及びＮ４３４Ｓ置換（ＬＳ置換とも称される）を含み得る。あるいは、Ｆｃポリペプチド二量体における一方または両方のＦｃポリペプチドは、Ｎ４３４ＳまたはＮ４３４Ａ置換を有し得る。あるいは、Ｆｃポリペプチド二量体における一方または両方のＦｃポリペプチドは、Ｍ４２８Ｌ置換を有し得る。他の実施形態では、Ｆｃポリペプチド二量体における一方または両方のＦｃポリペプチドは、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅ置換を含み得る。
幾つかの実施形態では、血清半減期を増大させる改変が本明細書に記載される任意のＦｃポリペプチドに導入され得る。例えば、幾つかの実施形態では、Ｆｃポリペプチド二量体における一方または両方のＦｃポリペプチドは、ＥＵ番号付けスキームに従って番号付けされる、Ｍ４２８Ｌ及びＮ４３４Ｓ置換（ＬＳ置換とも称される）を含み得る。あるいは、Ｆｃポリペプチド二量体における一方または両方のＦｃポリペプチドは、Ｎ４３４ＳまたはＮ４３４Ａ置換を有し得る。あるいは、Ｆｃポリペプチド二量体における一方または両方のＦｃポリペプチドは、Ｍ４２８Ｌ置換を有し得る。他の実施形態では、Ｆｃポリペプチド二量体における一方または両方のＦｃポリペプチドは、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅ置換を含み得る。
【0229】
幾つかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドの一方または両方は、そのＣ末端リジン（例えば、ＥＵ番号付けに従って、Ｆｃポリペプチドの４４７位のＬｙｓ残基）が除去されていてもよい。Ｃ末端リジン残基は、多数の種にわたって免疫グロブリンにおいて高度に保存されており、タンパク質生成の間に細胞機構により完全にまたは部分的に除去され得る。幾つかの実施形態では、ＦｃポリペプチドにおけるＣ末端リジンの除去は、タンパク質の安定性を改善し得る。
【0230】
幾つかの実施形態では、ヒンジ領域（例えば、配列番号９７）またはその一部（例えば、配列番号９８）が本明細書に記載されるＦｃポリペプチドまたは改変されたＦｃポリペプチドに連結され得る。ヒンジ領域は、任意の免疫グロブリンサブクラスまたはアイソタイプに由来し得る。例示的な免疫グロブリンヒンジは、ＩｇＧヒンジ領域、例えば、ＩｇＧ１ヒンジ領域、例えば、ヒトＩｇＧ１ヒンジアミノ酸配列ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号９７）またはその一部（例えば、ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ；配列番号９８）である。幾つかの実施形態では、ヒンジ領域は、ＦｃポリペプチドのＮ末端領域に存在する。
【0231】
Ｖ．細胞株及び操作する方法
本明細書において、ＰＩＬＲＡタンパク質のＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性であるか、ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性であるか、またはＰＩＬＲＡタンパク質のＧ７８バリアント及びＲ７８バリアントをコードする遺伝子についてヘテロ接合性である細胞及び細胞株も提供される。本開示は、ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアントまたはＧ７８バリアントをコードする遺伝子を２コピー発現する（すなわち、当該遺伝子についてホモ接合性となる）ように改変（すなわち、遺伝子操作）された、操作ヒト人工多能性幹細胞（ＩＰＳＣ）または細胞株を提供する。幾つかの実施形態では、ＩＰＳＣは、内在性ゲノム遺伝子座で改変されている。
本明細書において、ＰＩＬＲＡタンパク質のＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性であるか、ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性であるか、またはＰＩＬＲＡタンパク質のＧ７８バリアント及びＲ７８バリアントをコードする遺伝子についてヘテロ接合性である細胞及び細胞株も提供される。本開示は、ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアントまたはＧ７８バリアントをコードする遺伝子を２コピー発現する（すなわち、当該遺伝子についてホモ接合性となる）ように改変（すなわち、遺伝子操作）された、操作ヒト人工多能性幹細胞（ＩＰＳＣ）または細胞株を提供する。幾つかの実施形態では、ＩＰＳＣは、内在性ゲノム遺伝子座で改変されている。
【0232】
本開示は、ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアントまたはＧ７８バリアントをコードする遺伝子を２コピー発現する（すなわち、当該遺伝子についてホモ接合性となる）ように改変（すなわち、遺伝子操作）されたヒト人工多能性幹細胞（ＩＰＳＣ）に由来する操作ミクログリア細胞または細胞株も提供する。操作ミクログリア細胞または細胞株は、ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアントをコードする遺伝子を１コピー、及びＧ７８バリアントをコードする遺伝子を１コピー発現する（すなわち、Ｒ７８バリアント及びＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてヘテロ接合性となる）ように改変（すなわち、遺伝子操作）されたヒト人工多能性幹細胞（ＩＰＳＣ）に由来してもよい。幾つかの実施形態では、ＩＰＳＣは、内在性ゲノム遺伝子座で改変されている。幾つかの実施形態では、操作ミクログリア細胞または細胞株は、分化誘導により得られる。
【0233】
本明細書において、マッチする一対の細胞株として役立つ２つの細胞株（例えば、ＩＰＳＣ株またはそれに由来するミクログリア）であって、一方の細胞株がＰＩＬＲＡタンパク質のＧ７８バリアントを発現し、他方の細胞株がＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアントを発現する、当該細胞株も提供される。本開示は、マッチする一対の細胞株を提供し、ここで、（ａ）当該対のうちの第１の細胞株は、ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性であり、（ｂ）当該対のうちの第２の細胞株は、ＰＩＬＲＡタンパク質のＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性であり、かつ当該対の第１及び第２の細胞株の両方が、同じ親細胞株に由来し、かつ一方または両方の細胞株が、内在性ＰＩＬＲＡ遺伝子において操作されている。マッチする一対の細胞株の特定の実施形態では、マッチする一対の細胞株を作製するために使用される親細胞株は、ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性であり得、このことは、当該一対におけるＰＩＬＲＡタンパク質のＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性である細胞株のみが親細胞株から作製される必要があることを意味する。マッチする一対の細胞株の他の実施形態では、マッチする一対の細胞株を作製するために使用される親細胞株は、ＰＩＬＲＡタンパク質のＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性であり得、このことは、当該一対におけるＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性である細胞株のみが親細胞株から作製される必要があることを意味する。更なる他の実施形態では、親細胞株は、ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアント及びＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてヘテロ接合性である（すなわち、一方のアレルがＧ７８バリアントをコードし、他方のアレルがＲ７８バリアントをコードする）。この場合、マッチする一対における両方の細胞株が親細胞株から作製される必要がある。
【0234】
マッチする一対の細胞株の幾つかの実施形態では、ＰＩＬＲＡタンパク質のＧ７８バリアント及びＲ７８バリアントをコードする遺伝子についてヘテロ接合性である第３の細胞株が含まれる。幾つかの実施形態では、第３の細胞株は、ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアントまたはＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性である親細胞株に由来する。
【0235】
本開示は、改変されたＰＩＬＲＡ遺伝子を有する骨髄性細胞株または骨髄性細胞株に分化することができる幹細胞株（例えば、ＩＰＳＣ株またはそれに由来するミクログリア）を作製する方法であって、（ａ）既存の骨髄性細胞株または既存の幹細胞株が、ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性であるか、ＰＩＬＲＡタンパク質のＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性であるか、またはＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアント及びＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてヘテロ接合性であるかを決定する工程；ならびに（ｂ）ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアントまたはＰＩＬＲＡタンパク質のＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性である操作された細胞株を作製するために、ＰＩＬＲＡタンパク質をコードする遺伝子を改変することにより細胞株を操作する工程を含み、当該操作された細胞株が、操作される前は、選択されたバリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性ではなかった、当該方法も提供する。換言すれば、既存の細胞株に応じて、既存の細胞株は、目的の細胞株で選択したバリアントを生成させるために、改変されることを必要としてもしなくてもよい。
【0236】
本開示は、マッチする一対の細胞株（例えば、ＩＰＳＣ株またはそれに由来するミクログリア）を作製する方法であって、（ａ）既存の骨髄性細胞株または骨髄性細胞株に分化することができる既存の幹細胞株が、ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性であるか、ＰＩＬＲＡタンパク質のＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性であるか、またはＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアント及びＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてヘテロ接合性であるかを決定する工程；ならびに（ｂ）（ｉ）ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性である操作された細胞株を作製するために、ＰＩＬＲＡタンパク質をコードする遺伝子を改変することにより第１の細胞株を操作する、及び／または（ｉｉ）ＰＩＬＲＡタンパク質のＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性である操作された細胞株を作製するために、ＰＩＬＲＡタンパク質をコードする遺伝子を改変することにより第２の細胞株を操作する工程を含む、当該方法も提供する。幾つかの実施形態では、操作された細胞株は、操作される前は、選択されたバリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性ではなかった。
【0237】
特定の実施形態では、工程（ａ）の既存の細胞株は、ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアントについてホモ接合性であり、かつ、工程（ｂ）の操作は、ＰＩＬＲＡタンパク質のＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性である操作された細胞株を作製するために既存の細胞株を改変することを含む。特定の実施形態では、工程（ａ）の既存の細胞株は、ＰＩＬＲＡタンパク質のＧ７８バリアントについてホモ接合性であり、かつ、工程（ｂ）の操作は、ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性である操作された細胞株を作製するために既存の細胞株を改変することを含む。他の実施形態では、工程（ａ）の既存の細胞株は、ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアント及びＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてヘテロ接合性であり、かつ、工程（ｂ）の操作は、ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性である操作された細胞株、及びＰＩＬＲＡタンパク質のＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性である操作された細胞株を作製するために、既存の細胞株を改変することを含む。
【0238】
内在性ゲノム遺伝子座（例えば、ＰＩＬＲＡ遺伝子座）での改変を有する操作された細胞または細胞株は、種々の方法及び技術、例えば、ＣＲＩＰＳＲ／Ｃａｓ９系、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、Ｔａｌｅエフェクタードメインヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、及びトランスポゾンにより媒介される系を使用して作製され得る。これらの方法は、通常、１種以上のヌクレアーゼをコードする１種以上のポリヌクレオチドを細胞に投与することを含み、その結果、ヌクレアーゼは、ＤＮＡを切断し、ＤＮＡ鎖に５’及び３’切断末端を生じさせることにより内在性遺伝子の改変を媒介する。５’末端からの５’に延在する配列及び３’末端からの３’に延在する配列と実質的に相同である左及び右相同性アームに挟まれたドナー配列の存在下で、ドナーは、相同組換え修復（ＨＤＲ）によってヌクレアーゼにより標的とされる内在性遺伝子に組み込まれる。幾つかの実施形態では、内在性ゲノム遺伝子座での改変は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９系を使用して実施される。例えば、所望のバリアントのＰＩＬＲＡをコードする異種遺伝子をコードする核酸配列が、改変される細胞の内在性ＰＩＬＲＡゲノム遺伝子座に導入され、これにより、内在性ＰＩＬＲＡをコードする天然に存在する配列が異種遺伝子と置き換えられる。
【0239】
ＣＲＩＳＰＲ
幾つかの実施形態では、所望のバリアントのＰＩＬＲＡをコードする異種遺伝子の導入またはノックインは、ＣＲＩＰＳＲ／Ｃａｓ９系を使用して実行される。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９系は、Ｃａｓ９タンパク質、及び置き換えられるべき内在性ＰＩＬＲＡ遺伝子の標的モチーフにＣａｓ９タンパク質を誘導し、当該標的モチーフにハイブリダイズすることができる少なくとも１～２種のリボ核酸を含む。これらのリボ核酸は、一般に「シングルガイドＲＮＡ」または「ｓｇＲＮＡ」と称される。次いで、Ｃａｓ９タンパク質は、標的モチーフを切断し、これにより、二本鎖切断または一本鎖切断をもたらす。２つの相同性アームに挟まれた異種ＰＩＬＲＡ遺伝子配列を含むドナーＤＮＡの存在下で、ドナーＤＮＡは標的ＤＮＡに挿入され、内在性遺伝子と置き換わる。
幾つかの実施形態では、所望のバリアントのＰＩＬＲＡをコードする異種遺伝子の導入またはノックインは、ＣＲＩＰＳＲ／Ｃａｓ９系を使用して実行される。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９系は、Ｃａｓ９タンパク質、及び置き換えられるべき内在性ＰＩＬＲＡ遺伝子の標的モチーフにＣａｓ９タンパク質を誘導し、当該標的モチーフにハイブリダイズすることができる少なくとも１～２種のリボ核酸を含む。これらのリボ核酸は、一般に「シングルガイドＲＮＡ」または「ｓｇＲＮＡ」と称される。次いで、Ｃａｓ９タンパク質は、標的モチーフを切断し、これにより、二本鎖切断または一本鎖切断をもたらす。２つの相同性アームに挟まれた異種ＰＩＬＲＡ遺伝子配列を含むドナーＤＮＡの存在下で、ドナーＤＮＡは標的ＤＮＡに挿入され、内在性遺伝子と置き換わる。
【0240】
本開示で使用されるＣａｓ９タンパク質は、天然に存在するＣａｓ９タンパク質またはその機能的誘導体であり得る。天然配列ポリペプチドの「機能的誘導体」は、天然配列ポリペプチドと共通する質的生物学的特徴を有する化合物である。「機能的誘導体」としては、限定されるものではないが、天然配列の断片ならびに天然配列ポリペプチドの誘導体及びその断片が挙げられ、ただし、それらは対応する天然配列ポリペプチドと共通する生物活性を有する。本明細書において意図される生物活性は、ＤＮＡ基質を断片に加水分解するＣａｓ９の機能的誘導体の能力である。Ｃａｓ９ポリペプチドの好適な機能的誘導体またはその断片としては、限定されるものではないが、Ｃａｓ９タンパク質の変異体、融合物、共有結合による修飾形態、またはそれらの断片が挙げられる。
【0241】
幾つかの実施形態では、Ｃａｓ９タンパク質は、ストレプトコッカス・ピオゲネス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）に由来する。Ｃａｓ９は、ｓｇＲＮＡに非相補的な標的ＤＮＡを切断するＲｕｖＣ様ドメイン、及びｓｇＲＮＡに相補的な標的ＤＮＡを切断するＨＮＨヌクレアーゼドメインを含め、２つのエンドヌクレアーゼドメインを含有する。Ｃａｓ９の二本鎖エンドヌクレアーゼ活性は、プロトスペーサー関連モチーフ（ｐｒｏｔｏｓｐａｃｅｒ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｍｏｔｉｆ、ＰＡＭ）として公知の保存された短い配列（２～５ヌクレオチド）が標的配列の標的モチーフの３’の直後に続くことも必要とする。幾つかの実施形態では、ＰＡＭモチーフは、ＮＧＧモチーフである。ドナーＤＮＡが反応に導入される。一つの例では、ドナーＤＮＡは、左相同性アームと右相同性アームとの間に存在する所望のバリアントの異種ＰＩＬＲＡ遺伝子を含む。
【0242】
ｓｇＲＮＡは、用いられる特定のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９系及び標的ポリヌクレオチドの配列に応じて選択され得る。幾つかの実施形態では、１～２種のリボ核酸は、Ｃａｓ９タンパク質により認識されるデオキシリボ核酸モチーフに直接隣接する標的モチーフにハイブリダイズするように設計されている。幾つかの実施形態では、１～２種のリボ核酸の各々は、Ｃａｓ９タンパク質により認識されるデオキシリボ核酸モチーフに直接隣接する標的モチーフにハイブリダイズするように設計されており、ここで、当該標的モチーフは、置き換えられるべきゲノム配列に隣接する。ガイドＲＮＡは、例えば、ｈｔｔｐ：／／ｃｒｉｓｐｒ．ｍｉｔ．ｅｄｕの容易に利用可能なソフトウェアを使用して設計され得る。
【0243】
幾つかの実施形態では、本明細書において開示されるドナーＤＮＡは、ｈＰＩＬＲＡ Ｇ７８バリアントのアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む。幾つかの実施形態では、本明細書において開示されるドナーＤＮＡは、ｈＰＩＬＲＡ Ｒ７８バリアントのアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む。本明細書において開示されるドナーＤＮＡは、当該ヌクレオチド配列に隣接しており、Ｃａｓ９タンパク質による切断部位に対して５’側及び３’側のエキソン配列と重複するように設計されている左相同性アーム及び右相同性アームを更に含む。相同性アームは、５’側及び３’側のエキソン配列を越えて延在し得、相同性アームの各々は、少なくとも２０、３０、４０、５０、１００、または１５０ヌクレオチド長であり得る。当業者は、実験に必要とされる相同性アームの最適な長さを容易に決定することができる。
【0244】
幾つかの実施形態では、ｓｇＲＮＡは、標的ポリヌクレオチド配列以外の核酸配列とのハイブリダイゼーションを最小限にするように選択され得る。幾つかの実施形態では、１～２種のリボ核酸は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９系のオフターゲット効果を最小限にするために、細胞内の他の全てのゲノムヌクレオチド配列と比較した場合に、少なくとも２つのミスマッチを有する標的モチーフにハイブリダイズするように設計される。当業者は、オフターゲット効果を最小限にするための好適な標的モチーフを選択するために、種々の技術が使用され得ることを理解するであろう（例えば、バイオインフォマティクス分析）。
【0245】
ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）
幾つかの実施形態では、所望のバリアントのＰＩＬＲＡをコードする異種遺伝子の導入またはノックインは、ＺＦＮを使用して実行される。ＺＦＮは、ＦｏｋＩエンドヌクレアーゼの非特異的切断ドメイン（Ｎ）及びジンクフィンガータンパク質（ＺＦＰ）を含む融合タンパク質である。一対のＺＮＦが標的遺伝子の特定の位置の認識に関与し、一方が改変されるべき部位の上流の配列を認識し、他方が下流の配列を認識する。ＺＦＮのヌクレアーゼ部分は、特異的な遺伝子座で切断する。次いで、ドナーＤＮＡが特異的な遺伝子座に挿入され得る。ＺＦＮを使用する方法は周知であり、例えば、米国特許第９，０４５，７６３号及び更にＤｕｒａｉ ｅｔ ａｌ．，“Ｚｉｎｃ Ｆｉｎｇｅｒ Ｎｕｃｌｅａｓｅｓ：Ｃｕｓｔｏｍ－Ｄｅｓｉｇｎｅｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｃｉｓｓｏｒｓ ｆｏｒ Ｇｅｎｏｍｅ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｏｆ Ｐｌａｎｔ ａｎｄ Ｍａｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌｌｓ，” Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，３３（１８）：５９７８－５９９０（２００５）に開示されており、それらの開示は参照によりその全体が組み込まれる。
幾つかの実施形態では、所望のバリアントのＰＩＬＲＡをコードする異種遺伝子の導入またはノックインは、ＺＦＮを使用して実行される。ＺＦＮは、ＦｏｋＩエンドヌクレアーゼの非特異的切断ドメイン（Ｎ）及びジンクフィンガータンパク質（ＺＦＰ）を含む融合タンパク質である。一対のＺＮＦが標的遺伝子の特定の位置の認識に関与し、一方が改変されるべき部位の上流の配列を認識し、他方が下流の配列を認識する。ＺＦＮのヌクレアーゼ部分は、特異的な遺伝子座で切断する。次いで、ドナーＤＮＡが特異的な遺伝子座に挿入され得る。ＺＦＮを使用する方法は周知であり、例えば、米国特許第９，０４５，７６３号及び更にＤｕｒａｉ ｅｔ ａｌ．，“Ｚｉｎｃ Ｆｉｎｇｅｒ Ｎｕｃｌｅａｓｅｓ：Ｃｕｓｔｏｍ－Ｄｅｓｉｇｎｅｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｃｉｓｓｏｒｓ ｆｏｒ Ｇｅｎｏｍｅ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｏｆ Ｐｌａｎｔ ａｎｄ Ｍａｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌｌｓ，” Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，３３（１８）：５９７８－５９９０（２００５）に開示されており、それらの開示は参照によりその全体が組み込まれる。
【0246】
転写アクチベーター様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）
幾つかの実施形態では、所望のバリアントのＰＩＬＲＡをコードする異種遺伝子の導入またはノックインは、ＴＡＬＥＮを使用して実行される。ＴＡＬＥＮは、それらが一対としてゲノム部位の周囲に結合し、同じ非特異的ヌクレアーゼであるＦｏｋＩに特定の部位でゲノムを切断するように誘導するという点でＺＦＮと同様であるが、ＤＮＡトリプレットを認識する代わりに、各ドメインが単一ヌクレオチドを認識する。ＺＦＮを使用する方法も周知であり、例えば、米国特許第９，００５，９７３号及び更にＣｈｒｉｓｔｉａｎ ｅｔ ａｌ．，“Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ＤＮＡ Ｄｏｕｂｌｅ－Ｓｔｒａｎｄ Ｂｒｅａｋｓ ｗｉｔｈ ＴＡＬ Ｅｆｆｅｃｔｏｒ Ｎｕｃｌｅａｓｅｓ，” Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１８６（２）：７５７－７６１（２０１０）に開示されており、それらの開示は参照によりその全体が組み込まれる。
幾つかの実施形態では、所望のバリアントのＰＩＬＲＡをコードする異種遺伝子の導入またはノックインは、ＴＡＬＥＮを使用して実行される。ＴＡＬＥＮは、それらが一対としてゲノム部位の周囲に結合し、同じ非特異的ヌクレアーゼであるＦｏｋＩに特定の部位でゲノムを切断するように誘導するという点でＺＦＮと同様であるが、ＤＮＡトリプレットを認識する代わりに、各ドメインが単一ヌクレオチドを認識する。ＺＦＮを使用する方法も周知であり、例えば、米国特許第９，００５，９７３号及び更にＣｈｒｉｓｔｉａｎ ｅｔ ａｌ．，“Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ＤＮＡ Ｄｏｕｂｌｅ－Ｓｔｒａｎｄ Ｂｒｅａｋｓ ｗｉｔｈ ＴＡＬ Ｅｆｆｅｃｔｏｒ Ｎｕｃｌｅａｓｅｓ，” Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１８６（２）：７５７－７６１（２０１０）に開示されており、それらの開示は参照によりその全体が組み込まれる。
【0247】
本開示は、ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアント及びＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてヘテロ接合性である、既存の骨髄性細胞株（例えば、ＩＰＳＣ株またはそれに由来するミクログリア）または骨髄性細胞株に分化することができる既存の幹細胞株から、マッチする一対の細胞株を作製する方法であって、（ａ）ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性である第１の操作された細胞株を作製するために、既存の細胞株を操作する工程；及び（ｂ）ＰＩＬＲＡタンパク質のＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性である第２の操作された細胞株を作製するために、工程（ａ）で作製された細胞株または既存の細胞株のいずれかを操作する工程を含む、当該方法も提供する。本明細書に記載されるように、ｈＰＩＬＲＡ Ｒ７８バリアントまたはＧ７８バリアントのアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含むドナーＤＮＡを使用してマッチする一対の細胞株を作製するために、ＣＲＩＰＳＲ／Ｃａｓ９系が使用され得る。
【0248】
別の態様では、本開示は、ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアント及びＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてヘテロ接合性である、既存の骨髄性細胞株または骨髄性細胞に分化することができる既存の幹細胞株（例えば、ＩＰＳＣ株またはそれに由来するミクログリア）から、マッチする一対の細胞株を作製する方法であって、（ａ）ＰＩＬＲＡタンパク質のＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性である第１の操作された細胞株を作製するために、既存の細胞株を操作する工程；及び（ｂ）ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性である第２の操作された細胞株を作製するために、工程（ａ）で作製された細胞株または既存の細胞株のいずれかを操作する工程を含む、当該方法を提供する。本明細書に記載されるように、ｈＰＩＬＲＡ Ｒ７８バリアントまたはＧ７８バリアントのアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含むドナーＤＮＡを使用してマッチする一対の細胞株を作製するために、ＣＲＩＰＳＲ／Ｃａｓ９系が使用され得る。
【0249】
本開示は、ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性である、既存の骨髄性細胞株または骨髄性細胞株に分化することができる既存の幹細胞株（例えば、ＩＰＳＣ株またはそれに由来するミクログリア）から、マッチする一対の細胞株を作製する方法であって、ＰＩＬＲＡタンパク質のＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性である操作された細胞株を作製するために、既存の細胞株を操作する工程を含む、当該方法も提供する。本明細書に記載されるように、ｈＰＩＬＲＡ Ｇ７８バリアントのアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含むドナーＤＮＡを使用してマッチする一対の細胞株を作製するために、ＣＲＩＰＳＲ／Ｃａｓ９系が使用され得る。
【0250】
本開示は、ＰＩＬＲＡタンパク質のＧ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性である、既存の骨髄性細胞株または骨髄性細胞株に分化することができる既存の幹細胞株（例えば、ＩＰＳＣ株またはそれに由来するミクログリア）から、マッチする一対の細胞株を作製する方法であって、ＰＩＬＲＡタンパク質のＲ７８バリアントをコードする遺伝子についてホモ接合性である操作された細胞株を作製するために、既存の細胞株を操作する工程を含む、当該方法も提供する。本明細書に記載されるように、ｈＰＩＬＲＡ Ｒ７８バリアントのアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含むドナーＤＮＡを使用してマッチする一対の細胞株を作製するために、ＣＲＩＰＳＲ／Ｃａｓ９系が使用され得る。
【0251】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載される操作された細胞、細胞株、または細胞モデルは、分化誘導により得られる。
【0252】
ＶＩ．スクリーニング方法
本開示は、ＰＩＬＲＡタンパク質に結合し、及び／またはその発現もしくは活性を調節する分子、特にＰＩＬＲＡ活性をアンタゴナイズするか、または低減させる分子（すなわち、ｈＰＩＬＲＡへのリガンドの結合を遮断する分子）をスクリーニング及び同定するための方法も提供する。幾つかの実施形態では、ＰＩＬＲＡ結合性分子を同定するために、ＰＩＬＲＡへの結合及び／またはＰＩＬＲＡ活性化に関連する１つ以上の下流シグナル伝達応答が測定され得る。例えば、細胞のＰＩＬＲＡタンパク質に結合する分子は、ＰＩＬＲＡへの結合の結果として、細胞の１つ以上の下流シグナル伝達応答または活性を引き起こし得る。幾つかの実施形態では、ＰＩＬＲＡタンパク質に結合する分子は、ＰＩＬＲＡへの結合なしでの細胞のシグナル伝達応答または活性と比較した、ＰＩＬＲＡへの結合の結果としての細胞のシグナル伝達応答または活性の増加または減少を引き起こし得る。ＰＩＬＲＡへの結合の結果としての細胞シグナル伝達応答または活性の変化の例としては、限定されるものではないが、リン酸化ＳＴＡＴ３（ｐＳＴＡＴ３）レベル、リン酸化ＳＴＡＴ１（ｐＳＴＡＴ１）レベル、リン酸化ＥＧＦＲ（ｐＥＧＦＲ）レベル、カドヘリン発現、インテグリン発現、及び細胞（例えば、ミクログリア）遊走の変化が挙げられる。特定の実施形態では、ＰＩＬＲＡに結合し、ＰＩＬＲＡ活性をアンタゴナイズするか、または低減させる分子は、下流シグナル伝達応答、例えば、ｐＳＴＡＴ３（例えば、ｐＳＴＡＴ３ Ｙ７０５、またはｐＳＴＡＴ３ Ｓ７２７）レベルの増加、ｐＥＧＦＲレベルの増加、タンパク質（例えば、カドヘリン、インテグリン）の発現レベル及び／または細胞分泌の増加、及び／または細胞（例えば、ミクログリア）遊走の増加を引き起こし得る。ＰＩＬＲＡに結合し、ＰＩＬＲＡ活性をアンタゴナイズするか、またはそれを低減させる分子により引き起こされ得る他の下流シグナル伝達応答の例は、例えば、細胞呼吸の増進、脂肪酸代謝（例えば、脂肪酸酸化）の増進、ＡＴＰ産生の増進、抗炎症性遺伝子もしくはタンパク質の発現の増加、及び／またはサイトカインタンパク質発現の低減であり得る。
本開示は、ＰＩＬＲＡタンパク質に結合し、及び／またはその発現もしくは活性を調節する分子、特にＰＩＬＲＡ活性をアンタゴナイズするか、または低減させる分子（すなわち、ｈＰＩＬＲＡへのリガンドの結合を遮断する分子）をスクリーニング及び同定するための方法も提供する。幾つかの実施形態では、ＰＩＬＲＡ結合性分子を同定するために、ＰＩＬＲＡへの結合及び／またはＰＩＬＲＡ活性化に関連する１つ以上の下流シグナル伝達応答が測定され得る。例えば、細胞のＰＩＬＲＡタンパク質に結合する分子は、ＰＩＬＲＡへの結合の結果として、細胞の１つ以上の下流シグナル伝達応答または活性を引き起こし得る。幾つかの実施形態では、ＰＩＬＲＡタンパク質に結合する分子は、ＰＩＬＲＡへの結合なしでの細胞のシグナル伝達応答または活性と比較した、ＰＩＬＲＡへの結合の結果としての細胞のシグナル伝達応答または活性の増加または減少を引き起こし得る。ＰＩＬＲＡへの結合の結果としての細胞シグナル伝達応答または活性の変化の例としては、限定されるものではないが、リン酸化ＳＴＡＴ３（ｐＳＴＡＴ３）レベル、リン酸化ＳＴＡＴ１（ｐＳＴＡＴ１）レベル、リン酸化ＥＧＦＲ（ｐＥＧＦＲ）レベル、カドヘリン発現、インテグリン発現、及び細胞（例えば、ミクログリア）遊走の変化が挙げられる。特定の実施形態では、ＰＩＬＲＡに結合し、ＰＩＬＲＡ活性をアンタゴナイズするか、または低減させる分子は、下流シグナル伝達応答、例えば、ｐＳＴＡＴ３（例えば、ｐＳＴＡＴ３ Ｙ７０５、またはｐＳＴＡＴ３ Ｓ７２７）レベルの増加、ｐＥＧＦＲレベルの増加、タンパク質（例えば、カドヘリン、インテグリン）の発現レベル及び／または細胞分泌の増加、及び／または細胞（例えば、ミクログリア）遊走の増加を引き起こし得る。ＰＩＬＲＡに結合し、ＰＩＬＲＡ活性をアンタゴナイズするか、またはそれを低減させる分子により引き起こされ得る他の下流シグナル伝達応答の例は、例えば、細胞呼吸の増進、脂肪酸代謝（例えば、脂肪酸酸化）の増進、ＡＴＰ産生の増進、抗炎症性遺伝子もしくはタンパク質の発現の増加、及び／またはサイトカインタンパク質発現の低減であり得る。
【0253】
本明細書において、ある分子がＰＩＬＲＡタンパク質に対する活性を有するかどうかを決定するためにスクリーニングする方法であって、（ａ）当該ＰＩＬＲＡタンパク質を発現する細胞を当該分子と接触させる工程；（ｂ）より低いＰＩＬＲＡ発現を有する、工程（ａ）と同じ種類の細胞を、工程（ａ）の前、それと同時、またはその後のいずれかにおいて当該分子と接触させる工程；ならびに（ｃ）両方の細胞における、リン酸化ＳＴＡＴ３（ｐＳＴＡＴ３）レベル、リン酸化ＳＴＡＴ１（ｐＳＴＡＴ１）レベル、リン酸化ＥＧＦＲ（ｐＥＧＦＲ）レベル、カドヘリン発現、インテグリン発現、及びミクログリア遊走のうちの１つを測定する工程を含む、当該方法が提供される。幾つかの実施形態では、これらの測定のうちの１つについての細胞間でのレベルの変化は、工程（ａ）のＰＩＬＲＡタンパク質に対する活性を当該分子が有することを示す。
【0254】
スクリーニングのための方法のある特定の実施形態では、工程（ａ）の細胞は、ＰＩＬＲＡタンパク質を天然に発現する。幾つかの実施形態では、より低いＰＩＬＲＡ発現を有する細胞は、ＰＩＬＲＡタンパク質についてノックアウトまたはサイレンシングされている。特定の実施形態では、細胞は、ミクログリアであり得る。ある特定の実施形態では、細胞は、ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ（例えば、ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ）である。
【0255】
スクリーニングのための方法のある特定の実施形態では、工程（ａ）の細胞は、ＰＩＬＲＡタンパク質を発現または過剰発現するように操作または改変されている。幾つかの実施形態では、より低いＰＩＬＲＡ発現を有する細胞は、ＰＩＬＲＡタンパク質を天然に発現する、またはＰＩＬＲＡタンパク質の発現のための操作も改変もされていない。
【0256】
幾つかの実施形態では、分子のライブラリーが本明細書に記載される方法を使用してスクリーニングされ得る。ある特定の例では、分子は、ＰＩＬＲＡタンパク質に結合すると分かっている。他の場合には、ＰＩＬＲＡタンパク質に分子が結合するかどうかは、分かっていない。ＰＩＬＲＡタンパク質に対する何らかの活性を分子が有するかどうか決定するためにスクリーニングされ得る分子の例としては、限定されるものではないが、抗体、ペプチド、有機低分子、または核酸が挙げられる。
【0257】
本明細書において、ＰＩＬＲＡタンパク質に結合する分子が、ＰＩＬＲＡを発現する細胞におけるシグナル伝達応答または活性を調節するかどうかを決定するための方法であって、（ａ）当該細胞を当該分子と接触させる工程；ならびに（ｂ）リン酸化ＳＴＡＴ３（ｐＳＴＡＴ３）レベル、リン酸化ＳＴＡＴ１（ｐＳＴＡＴ１）レベル、リン酸化ＥＧＦＲ（ｐＥＧＦＲ）レベル、カドヘリン発現、インテグリン発現、及び細胞（例えば、ミクログリア）遊走のうちの１つを測定する工程を含む、当該方法も提供される。幾つかの実施形態では、測定のうちの１つについてのレベルの変化は、ＰＩＬＲＡを発現する細胞におけるシグナル伝達応答または活性を当該分子が調節することを示す。ある特定の実施形態では、変化は、分子なしでの細胞におけるレベルと比較した、細胞に分子が接触した場合の測定のうちの１つについてのレベルの増加または減少、特に本明細書の他箇所に記載される変化である。これらの方法の特定の実施形態では、細胞は、インビトロアッセイにおけるものである。他の実施形態では、細胞は、哺乳動物におけるものである（すなわち、インビボでの方法）。
【0258】
幾つかの実施形態では、本方法がインビボで使用される場合、工程（ａ）は、哺乳動物に分子を投与することを含む。
【0259】
幾つかの実施形態では、ＰＩＬＲＡを発現する細胞は、ミクログリア、骨髄性細胞、単球、または好中球であり得る。
【0260】
スクリーニングアッセイ
ＰＩＬＲＡタンパク質に結合し、及び／またはその発現もしくは活性を調節する分子を同定するためのスクリーニングアッセイは、標準的方法により実行され得る。スクリーニング方法は、ハイスループットな技術を必要とし得る。加えて、これらのスクリーニング技術は、培養細胞または生物、例えば、マウス、蠕虫、ハエ、もしくは酵母で実行され得る。
ＰＩＬＲＡタンパク質に結合し、及び／またはその発現もしくは活性を調節する分子を同定するためのスクリーニングアッセイは、標準的方法により実行され得る。スクリーニング方法は、ハイスループットな技術を必要とし得る。加えて、これらのスクリーニング技術は、培養細胞または生物、例えば、マウス、蠕虫、ハエ、もしくは酵母で実行され得る。
【0261】
多数の方法が、かかるスクリーニングアッセイを実行するのに利用可能である。１つの手法によれば、候補分子は、ＰＩＬＲＡを発現する細胞の培養培地に異なる濃度で添加される。分子がＰＩＬＲＡタンパク質に結合し、及び／またはその発現もしくは活性を調節するかどうかの測定として、ホスホ－ＳＴＡＴ３（ｐＳＴＡＴ３）誘導などの下流シグナル伝達が使用される場合、ｐＳＴＡＴ３レベルは、ＰＩＬＲＡタンパク質を発現する細胞で測定され得、より低レベルのＰＩＬＲＡを発現する対応する細胞（例えば、ＰＩＬＲＡノックアウト）でのｐＳＴＡＴ３レベルと比較され得る。他の場合では、ｐＳＴＡＴ３レベルは、細胞に分子を添加する前後で測定され得る。ｐＳＴＡＴ３のこれらのレベルは、比較され得る。
【0262】
別の手法では、抗ＰＩＬＲＡ抗体がインテグリン及びカドヘリンなどのタンパク質のｉＭｉｃｒｏｇｌｉａによる分泌を増強したことが実施例において実証されるように、これらのタンパク質の細胞分泌が、分子がＰＩＬＲＡタンパク質に結合し、及び／またはその発現もしくは活性を調節するかどうか決定するために測定され得る。標準的な実験技術がこれらのタンパク質を細胞から単離するために使用され得、これらのタンパク質の検出は、例えば、質量分析、ウェスタンブロット、及びプロテオームプロファイラーキット（Ｈｕｍａｎ Ｓｏｌｕｂｌｅ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ａｒｒａｙ Ｋｉｔ － Ｎｏｎ－Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｐａｎｅｌ（Ｒ＆Ｄ ＡＲＹ０１２））を使用して実行され得る。
【0263】
他の実施形態では、ＰＩＬＲＡタンパク質に結合する候補分子は、クロマトグラフィーベースの技術を使用して同定され得る。例えば、組換えＰＩＬＲＡがＰＩＬＲＡを発現するように操作された細胞から標準的な技術により精製され得、カラムに固定化され得る。次いで、候補分子の溶液がカラムに通され、ＰＩＬＲＡに特異的な分子が、カラムに固定化されたポリペプチドに結合する能力に基づいて同定される。分子を単離するために、非特異的に結合した分子を除去するためにカラムが洗浄され、次いで、関心対象の分子がカラムから遊離され、回収される。この方法（または任意の他の適切な方法）により単離された分子は、必要に応じて、（例えば、高速液体クロマトグラフィーにより）更に精製され得る。
【0264】
試験分子
通常、候補分子は、当該技術分野において公知の方法により天然産物もしくは合成（または半合成）抽出物の両方の大きなライブラリーまたは化学ライブラリーから同定され得る。例えば、医薬品の発見及び開発の分野の当業者は、試験抽出物または化合物の正確な供給源が本開示のスクリーニング法（複数可）に重要でないことを理解するであろう。従って、本明細書に記載される方法を使用して実質的に任意の数の化学抽出物または分子がスクリーニングされ得る。かかる抽出物または分子の例としては、限定されるものではないが、植物、真菌、原核生物、または動物ベースの抽出物、発酵ブロス、及び合成化合物、ならびに既存の化合物の修飾物が挙げられる。限定されるものではないが、糖、脂質、ペプチド、及びポリヌクレオチドベースの化合物が含まれる、任意の数の化合物のランダム合成または指向性合成（例えば、半合成または全合成）を生じさせるための多数の方法も利用可能である。合成化合物ライブラリーは市販されている。あるいは、細菌、真菌、植物、及び動物抽出物の形態での天然化合物のライブラリーが市販されている。加えて、天然のライブラリー及び人工的に作製されたライブラリーが、必要に応じて、当該技術分野において公知の方法により、例えば、標準的な抽出法及び分画法により作製される。更に、必要に応じて、任意のライブラリーまたは化合物は、標準的な化学的、物理的、または生化学的方法を使用して容易に修飾される。
通常、候補分子は、当該技術分野において公知の方法により天然産物もしくは合成（または半合成）抽出物の両方の大きなライブラリーまたは化学ライブラリーから同定され得る。例えば、医薬品の発見及び開発の分野の当業者は、試験抽出物または化合物の正確な供給源が本開示のスクリーニング法（複数可）に重要でないことを理解するであろう。従って、本明細書に記載される方法を使用して実質的に任意の数の化学抽出物または分子がスクリーニングされ得る。かかる抽出物または分子の例としては、限定されるものではないが、植物、真菌、原核生物、または動物ベースの抽出物、発酵ブロス、及び合成化合物、ならびに既存の化合物の修飾物が挙げられる。限定されるものではないが、糖、脂質、ペプチド、及びポリヌクレオチドベースの化合物が含まれる、任意の数の化合物のランダム合成または指向性合成（例えば、半合成または全合成）を生じさせるための多数の方法も利用可能である。合成化合物ライブラリーは市販されている。あるいは、細菌、真菌、植物、及び動物抽出物の形態での天然化合物のライブラリーが市販されている。加えて、天然のライブラリー及び人工的に作製されたライブラリーが、必要に応じて、当該技術分野において公知の方法により、例えば、標準的な抽出法及び分画法により作製される。更に、必要に応じて、任意のライブラリーまたは化合物は、標準的な化学的、物理的、または生化学的方法を使用して容易に修飾される。
【0265】
粗製抽出物が活性を有することが発見される場合、観察された効果の原因となる化学成分を単離するために、有望なリード抽出物の更なる分画が必要とされる。従って、抽出、分画、及び精製プロセスの目標は、所望の活性を有する粗製抽出物中の化学成分の特徴付け及び同定である。かかる多様な抽出物の分画及び精製の方法は、当該技術分野において公知である。必要に応じて、有用であると示された分子は、当該技術分野において公知の方法により化学修飾され得る。
【0266】
ＶＩＩ．細胞または動物におけるＰＩＬＲＡ結合性分子の活性の測定
本明細書において、ＰＩＬＲＡタンパク質（例えば、ｈＰＩＬＲＡ Ｇ７８またはＲ７８）に結合する分子の結合及び／または活性を測定するための方法も提供される。幾つかの実施形態では、分子は、ＰＩＬＲＡ活性をアンタゴナイズするか、または低減させる（すなわち、ｈＰＩＬＲＡへのリガンドの結合を遮断する分子）。ＰＩＬＲＡ結合性分子の結合及び／または活性、ならびに細胞または動物に対するその効果を決定するために、様々な測定がなされ得る。例えば、本明細書において本発明者らは、リン酸化ＳＴＡＴ３の誘導が、ＰＩＬＲＡに依存する細胞の下流シグナル伝達応答であり、ＰＩＬＲＡがアンタゴナイズされる場合に起こることを実証した。
本明細書において、ＰＩＬＲＡタンパク質（例えば、ｈＰＩＬＲＡ Ｇ７８またはＲ７８）に結合する分子の結合及び／または活性を測定するための方法も提供される。幾つかの実施形態では、分子は、ＰＩＬＲＡ活性をアンタゴナイズするか、または低減させる（すなわち、ｈＰＩＬＲＡへのリガンドの結合を遮断する分子）。ＰＩＬＲＡ結合性分子の結合及び／または活性、ならびに細胞または動物に対するその効果を決定するために、様々な測定がなされ得る。例えば、本明細書において本発明者らは、リン酸化ＳＴＡＴ３の誘導が、ＰＩＬＲＡに依存する細胞の下流シグナル伝達応答であり、ＰＩＬＲＡがアンタゴナイズされる場合に起こることを実証した。
【0267】
幾つかの実施形態では、ＰＩＬＲＡ結合性分子の結合及び／または活性を測定するために、細胞がＰＩＬＲＡ結合性分子と共にインキュベートされた後に、リン酸化ＳＴＡＴ３（例えば、ｐＳＴＡＴ３ Ｙ７０５及び／またはｐＳＴＡＴ３ Ｓ７２７）レベルが、例えば、Ｐｒｏｔｅｏｍｅ Ｐｒｏｆｉｌｅｒ Ｈｕｍａｎ Ｐｈｏｓｐｈｏ－Ｋｉｎａｓｅ Ａｒｒａｙ Ｋｉｔ（例えば、ＡＲＹ００３Ｃ、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して、測定され得る。他の実施形態では、リン酸化タンパク質レベルを測定するために、細胞がＰＩＬＲＡ結合性分子と共にインキュベートされた後、細胞が固定され得、標準的な免疫組織染色プロトコールを使用してリン酸化タンパク質が検出され得る。次いで、細胞が共焦点顕微鏡で撮像され得、細胞毎の平均蛍光スポット面積及び強度を算出して、リン酸化タンパク質レベルを決定するためにソフトウェアを使用して画像が解析され得る。
【0268】
ＰＩＬＲＡへの結合（すなわち、ＰＩＬＲＡのアンタゴナイズ）に依存する他の細胞応答としては、例えば、リン酸化ＥＧＦＲ（例えば、ｐＥＧＦＲ Ｙ１０８６）レベルの増加が挙げられ、これも上記のようにホスホ－キナーゼ（ｐｈｏｓｐｈｏｒ－ｋｉｎａｓｅ）アレイキットまたは免疫組織染色を使用して測定され得る。
【0269】
幾つかの実施形態では、分子毎のＰＩＬＲＡ結合時のＳＴＡＴ３及び／またはＥＧＦＲリン酸化レベルの測定は、分子のアンタゴニスト作用を順位付けるために使用され得る。例えば、結合が最も高いレベルのｐＳＴＡＴ３をもたらしたＰＩＬＲＡ結合性分子は、ＰＩＬＲＡタンパク質に対して最も強いアンタゴニスト活性を有すると決定され得る。
【0270】
ＰＩＬＲＡ結合性分子の結合及び／または活性ならびに細胞または動物に対するその効果を決定するために行われ得る他の測定としては、例えば、細胞遊走の測定が挙げられ、これは、ＰＩＬＲＡに依存し、ＰＩＬＲＡがアンタゴナイズされる場合に起こる細胞の別の下流シグナル伝達応答である。例えば、実施例４に記載されるように、細胞遊走の測定及び定量化は、無細胞の検出区域を作るためにゴムストッパーが使用され得る細胞遊走アッセイを使用して実行され得る。次いで、ＰＩＬＲＡ結合性分子が添加されると、ゴムストッパーが取り除かれ、ＮｕｃＢｌｕｅまたはＤＡＰＩなどの細胞染色剤が添加され得る。細胞が顕微鏡を使用して撮像され得、検出区域に遊走した細胞の核標識を定量化するためにソフトウェアを使用して画像が解析され得る。更に、ＰＩＬＲＡをアンタゴナイズするＰＩＬＲＡ結合性分子は、運動性タンパク質の細胞分泌も増強するため、細胞へのＰＩＬＲＡ結合性分子の添加後の細胞上清中のかかる運動性タンパク質の定量化も実行され得る。例えば、上清中の可溶性分析物は、プロテオームプロファイラーキット、例えば、Ｈｕｍａｎ Ｓｏｌｕｂｌｅ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ａｒｒａｙ Ｋｉｔ － Ｎｏｎ－Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｐａｎｅｌ（例えば、Ｒ＆Ｄ ＡＲＹ０１２）で分析され得る。このようにして定量化され得る運動性タンパク質の例としては、限定されるものではないが、カドヘリン及びインテグリンが挙げられる。
【0271】
ＰＩＬＲＡ結合性分子の結合及び／または活性の測定は、細胞または動物（例えば、マウス、サル）で実行され得る。インビボでの研究では、動物、例えば、ＰＩＬＲＡタンパク質（例えば、ＰＩＬＲＡ Ｇ７８またはＲ７８）を発現する動物は、利用可能な任意の投与様式（例えば、ＩＶ、ＩＰ、経口、経鼻、または経皮投与）によりＰＩＬＲＡ結合性分子を投与され得る。適切な細胞、組織、及び／または液体試料が、本明細書に記載されるＰＩＬＲＡ依存的な下流シグナル伝達応答のうちの１つ以上、例えば、ｐＳＴＡＴ３レベル、ｐＥＧＦＲレベル、運動性タンパク質（例えば、カドヘリン、インテグリン）の量を測定及び定量化するために、動物から単離され得る。幾つかの実施形態では、細胞または動物は、ＰＩＬＲＡ Ｇ７８をコードする遺伝子についてホモ接合性である。幾つかの実施形態では、細胞または動物は、ＰＩＬＲＡ Ｒ７８をコードする遺伝子についてホモ接合性である。幾つかの実施形態では、細胞または動物は、ＰＩＬＲＡ Ｇ７８及びＲ７８バリアントをコードする遺伝子についてヘテロ接合性である。
【0272】
ＶＩＩＩ．抗体の調製
幾つかの実施形態では、抗体は、抗体応答の誘導のために動物または複数の動物（例えば、マウス、ウサギまたはラット）を抗原または抗原の混合物で免疫することにより調製される。幾つかの実施形態では、抗原または抗原の混合物は、アジュバント（例えば、フロイントアジュバント）と共に投与される。最初の免疫化後、その後の１回以上の抗原または複数の抗原のブースター注射が、抗体産生を改善するために行われ得る。免疫化後、抗原特異的Ｂ細胞が、例えば、脾臓及び／またはリンパ系組織から採取される。モノクローナル抗体を作製するために、Ｂ細胞は骨髄腫細胞と融合され、その後に抗原特異性についてスクリーニングされる。抗体を調製する方法は、以下の実施例セクションにも記載される。
幾つかの実施形態では、抗体は、抗体応答の誘導のために動物または複数の動物（例えば、マウス、ウサギまたはラット）を抗原または抗原の混合物で免疫することにより調製される。幾つかの実施形態では、抗原または抗原の混合物は、アジュバント（例えば、フロイントアジュバント）と共に投与される。最初の免疫化後、その後の１回以上の抗原または複数の抗原のブースター注射が、抗体産生を改善するために行われ得る。免疫化後、抗原特異的Ｂ細胞が、例えば、脾臓及び／またはリンパ系組織から採取される。モノクローナル抗体を作製するために、Ｂ細胞は骨髄腫細胞と融合され、その後に抗原特異性についてスクリーニングされる。抗体を調製する方法は、以下の実施例セクションにも記載される。
【0273】
関心対象の抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子は、細胞からクローニングされ得、例えば、モノクローナル抗体をコードする遺伝子がハイブリドーマからクローニングされ得、組換えモノクローナル抗体を産生するために使用され得る。モノクローナル抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子ライブラリーがハイブリドーマまたは形質細胞から作製されてもよい。あるいは、ファージまたは酵母ディスプレイ技術が、選択された抗原に特異的に結合する抗体及びＦａｂ断片を同定するために使用され得る。抗体は二重特異性にされてもよく、すなわち、２つの異なる抗原を認識することができる。抗体は、ヘテロコンジュゲート、例えば、２つの共有結合により連結された抗体、または免疫毒素であってもよい。
【0274】
抗体は、原核生物及び真核生物の発現系が含まれる、任意の数の発現系を使用して産生され得る。幾つかの実施形態では、発現系は、哺乳動物細胞発現系、例えば、ハイブリドーマまたはＣＨＯ細胞発現系である。多数のかかる系は、商業的供給者から広く入手可能である。抗体がＶＨ及びＶＬ領域の両方を含む実施形態では、ＶＨ及びＶＬ領域は、単一のベクターを使用して、例えば、ジシストロン発現ユニットで、または異なるプロモーターの制御下で発現され得る。他の実施形態では、ＶＨ及びＶＬ領域は、別個のベクターを使用して発現され得る。本明細書に記載されるようなＶＨまたはＶＬ領域は、任意にＮ末端のメチオニンを含み得る。
【0275】
幾つかの実施形態では、抗体は、キメラ抗体である。キメラ抗体を作製するための方法は、当該技術分野で公知である。例えば、マウスなどの１つの種由来の抗原結合領域（重鎖可変領域及び軽鎖可変領域）がヒトなどの別の種のエフェクター領域（定常ドメイン）に融合されているキメラ抗体が作製され得る。別の例として、抗体のエフェクター領域が異なる免疫グロブリンクラスまたはサブクラスのエフェクター領域で置換されている「クラススイッチした」キメラ抗体が作製され得る。
【0276】
幾つかの実施形態では、抗体は、ヒト化抗体である。一般に、非ヒト抗体は、その免疫原性を低減させるためにヒト化される。ヒト化抗体は、通常、非ヒトである（例えば、マウス可変領域配列に由来する）１つ以上の可変領域（例えば、ＣＤＲ）またはその一部、及びおそらく、非ヒトである幾つかのフレームワーク領域またはその一部を含み、ヒト抗体配列に由来する１つ以上の定常領域を更に含む。非ヒト抗体をヒト化するための方法は、当技術分野において公知である。トランスジェニックマウスまたは他の哺乳動物などの他の生物がヒト化抗体またはヒト抗体を発現させるために使用され得る。抗体をヒト化する他の方法としては、例えば、可変ドメインリサーフェシング、ＣＤＲ移植、特異性決定残基（ＳＤＲ）移植、誘導型選択（ｇｕｉｄｅｄ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ）、及びフレームワークシャフリングが挙げられる。
【0277】
ヒト化に代わる手段として、完全ヒト抗体が作製され得る。非限定的な例として、内因性免疫グロブリン産生がない状態で全レパートリーのヒト抗体を免疫化時に産生することができるトランスジェニック動物（例えば、マウス）が作製され得る。例えば、キメラマウス及び生殖系列変異体マウスにおける抗体重鎖連結領域（ＪＨ）遺伝子のホモ接合性欠失は、内因性抗体産生の完全な阻害をもたらすことが説明されている。かかる生殖系列変異体マウスにおけるヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子配列の導入は、抗原曝露時にヒト抗体の産生をもたらす。別の例として、ヒト抗体は、ハイブリドーマベースの方法により、例えば、ヒトモノクローナル抗体を産生する細胞株を作製するために一次ヒトＢ細胞を使用することにより産生され得る。
【0278】
ヒト抗体は、ファージディスプレイまたは酵母ディスプレイ技術を使用して産生されてもよい。ファージディスプレイでは、可変重鎖及び可変軽鎖遺伝子のレパートリーが増幅され、ファージディスプレイベクターで発現される。幾つかの実施形態では、抗体ライブラリーは、ヒト供給源から増幅される天然のレパートリーである。幾つかの実施形態では、抗体ライブラリーは、重鎖及び軽鎖配列をクローニングし、組換えて、異なる抗原特異性を有する抗体の大きなプールを作製することにより作製される合成ライブラリーである。ファージは、通常、抗体断片（例えば、Ｆａｂ断片またはｓｃＦｖ断片）を提示し、次いで、関心対象の抗原への結合についてスクリーニングされる。
【0279】
幾つかの実施形態では、抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、ＶＨ、またはＶＨＨ）が生成される。抗体断片の生成のための様々な技術が開発されている。元来、これらの断片は、インタクトな抗体のタンパク質消化により得られた。しかしながら、これらの断片は現在、組換え宿主細胞を使用して直接生成され得る。例えば、抗体断片は、抗体ファージライブラリーから単離され得る。あるいは、Ｆａｂ’－ＳＨ断片は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞から直接回収され得、Ｆ（ａｂ’）２断片を形成させるために化学的に連結され得る。Ｆ（ａｂ’）２断片は、別の手法により組換え宿主細胞培養物から直接単離されてもよい。抗体断片の生成のための他の技術は、当業者に明らかとなる。
【0280】
幾つかの実施形態では、抗体または抗体断片は、インビボでの半減期の延長をもたらすために、別の分子、例えば、ポリエチレングリコール（ペグ化）または血清アルブミンにコンジュゲートされる。
【0281】
ＩＸ．核酸、ベクター、及び宿主細胞
幾つかの実施形態では、本明細書において開示される抗ＰＩＬＲＡ抗体は、組換え方法を使用して調製される。従って、幾つかの態様では、本開示は、本明細書に記載されるような抗ＰＩＬＲＡ抗体（例えば、本明細書に記載されるＣＤＲ、重鎖可変領域、及び軽鎖可変領域のうちの任意の１つ以上）のいずれかをコードする核酸配列を含む単離された核酸；かかる核酸を含むベクター；ならびに抗体をコードする核酸を複製するため、及び／または抗体を発現させるために使用される、核酸が導入される宿主細胞を提供する。
幾つかの実施形態では、本明細書において開示される抗ＰＩＬＲＡ抗体は、組換え方法を使用して調製される。従って、幾つかの態様では、本開示は、本明細書に記載されるような抗ＰＩＬＲＡ抗体（例えば、本明細書に記載されるＣＤＲ、重鎖可変領域、及び軽鎖可変領域のうちの任意の１つ以上）のいずれかをコードする核酸配列を含む単離された核酸；かかる核酸を含むベクター；ならびに抗体をコードする核酸を複製するため、及び／または抗体を発現させるために使用される、核酸が導入される宿主細胞を提供する。
【0282】
幾つかの実施形態では、ポリヌクレオチド（例えば、単離されたポリヌクレオチド）は、本明細書に記載されるような抗体をコードするヌクレオチド配列を含む。幾つかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、表１に開示される１つ以上のアミノ酸配列（例えば、ＣＤＲ、重鎖、または軽鎖配列）をコードするヌクレオチド配列を含む。幾つかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、表１に開示される配列（例えば、ＣＤＲ、重鎖、または軽鎖配列）に対する少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む。幾つかの実施形態では、本明細書に記載されるポリヌクレオチドは、異種核酸（例えば、異種プロモーター）に作動可能に連結される。
【0283】
本開示の抗体またはその断片をコードするポリヌクレオチドを含有する好適なベクターとしては、クローニングベクター及び発現ベクターが挙げられる。選択されるクローニングベクターは、使用されることが意図される宿主細胞に応じて異なり得るが、有用なクローニングベクターは通常、自己複製する能力を有し、特定の制限エンドヌクレアーゼのための単一の標的を有し得、及び／またはベクターを含有するクローンを選択するのに使用され得るマーカー遺伝子を保有し得る。例としては、プラスミド及び細菌ウイルス、例えば、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（例えば、ｐＢＳ ＳＫ＋）及びその派生物、ｍｐｌ８、ｍｐｌ９、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９、ＣｏｌＥ１、ｐＣＲ１、ＲＰ４、ファージＤＮＡ、ならびにｐＳＡ３及びｐＡＴ２８などのシャトルベクターが挙げられる。これら及び多数の他のクローニングベクターが、ＢｉｏＲａｄ、Ｓｔｒａｔｅｇｅｎｅ、及びＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎなどの商業的販売業者から入手可能である。
【0284】
発現ベクターは通常、本開示の核酸を含有する複製可能なポリヌクレオチド構築物である。発現ベクターは、エピソームまたは染色体ＤＮＡの不可欠な部分のいずれかとして、宿主細胞内で複製し得る。好適な発現ベクターとしては、限定されるものではないが、プラスミド、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルスが含まれるウイルスベクター、及び任意の他のベクターが挙げられる。
【0285】
本明細書に記載されるようなポリヌクレオチドまたはベクターをクローニングするか、または発現させるための好適な宿主細胞としては、原核生物または真核生物の細胞が挙げられる。幾つかの実施形態では、宿主細胞は、原核生物である。幾つかの実施形態では、宿主細胞は、真核生物、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはリンパ系細胞である。幾つかの実施形態では、宿主細胞は、ヒト細胞、例えば、ヒト胎児腎臓（ＨＥＫ）細胞である。
【0286】
別の態様では、本明細書に記載されるような抗ＰＩＬＲＡ抗体を作製する方法が提供される。幾つかの実施形態では、本方法は、本明細書に記載されるような宿主細胞（例えば、本明細書に記載されるようなポリヌクレオチドまたはベクターを発現する宿主細胞）を抗体発現に適した条件下で培養することを含む。幾つかの実施形態では、抗体は、その後に宿主細胞（または宿主細胞培養培地）から回収される。
【0287】
Ｘ．抗ＰＩＬＲＡ抗体を使用する治療方法
別の態様では、本明細書において開示される抗ＰＩＬＲＡ抗体（例えば、上記のセクションＩＩＩに記載された抗ＰＩＬＲＡ抗体）を使用した治療法が提供される。幾つかの実施形態では、神経変性疾患を処置する方法が提供される。幾つかの実施形態では、（例えば、神経変性疾患を有する対象における）１つ以上のＰＩＬＲＡ活性を調節する方法が提供される。
別の態様では、本明細書において開示される抗ＰＩＬＲＡ抗体（例えば、上記のセクションＩＩＩに記載された抗ＰＩＬＲＡ抗体）を使用した治療法が提供される。幾つかの実施形態では、神経変性疾患を処置する方法が提供される。幾つかの実施形態では、（例えば、神経変性疾患を有する対象における）１つ以上のＰＩＬＲＡ活性を調節する方法が提供される。
【0288】
幾つかの実施形態では、神経変性疾患を処置する方法が提供される。幾つかの実施形態では、神経変性疾患は、以下からなる群から選択される：アルツハイマー病、原発性加齢関連タウオパチー、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、前頭側頭型認知症、１７番染色体に連鎖しパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症、嗜銀顆粒性認知症、筋萎縮性側索硬化症、グアム島の筋萎縮性側索硬化症／パーキンソン認知症複合（ＡＬＳ－ＰＤＣ）、大脳皮質基底核変性症、慢性外傷性脳症、クロイツフェルト・ヤコブ病、ボクサー認知症、石灰沈着を伴うびまん性神経原線維変化病、ダウン症候群、家族性英国型認知症、家族性デンマーク型認知症、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー病、球状グリア性タウオパチー、グアドループにおける認知症を伴うパーキンソニズム（Ｇｕａｄｅｌｏｕｐｅａｎ ｐａｒｋｉｎｓｏｎｉｓｍ ｗｉｔｈ ｄｅｍｅｎｔｉａ）、グアドループにおけるＰＳＰ（Ｇｕａｄｅｌｏｐｅａｎ ＰＳＰ）、ハレルフォルデン・スパッツ病、神経軸索スフェロイド形成を伴う遺伝性びまん性白質脳症（ＨＤＬＳ）、ハンチントン病、封入体筋炎、多系統萎縮症、筋緊張性ジストロフィー、那須ハコラ病、神経原線維変化優位型認知症、ニーマン・ピック病Ｃ型、淡蒼球・橋・黒質変性症、パーキンソン病、ピック病、脳炎後パーキンソニズム、プリオンタンパク質・脳アミロイドアンギオパチー（ｐｒｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｅｒｅｂｒａｌ ａｍｙｌｏｉｄ ａｎｇｉｏｐａｔｈｙ）、進行性皮質下グリオーシス、亜急性硬化性全脳炎、及び神経原線維変化型認知症。幾つかの実施形態では、神経変性疾患は、アルツハイマー病である。幾つかの実施形態では、神経変性疾患は、那須ハコラ病である。幾つかの実施形態では、神経変性疾患は、前頭側頭型認知症である。幾つかの実施形態では、神経変性疾患は、パーキンソン病である。幾つかの実施形態では、本方法は、ｈＰＩＬＲＡタンパク質に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片、例えば、本明細書に記載されるような抗ＰＩＬＲＡ抗体、または本明細書に記載されるような抗ＰＩＬＲＡ抗体を含む医薬組成物を対象に投与することを含む。
【0289】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載されるような抗ＰＩＬＲＡ抗体（またはその抗原結合部分もしくは医薬組成物）は、ＰＩＬＲＡ活性を特徴とする神経変性疾患を処置するのに使用される。幾つかの実施形態では、ＰＩＬＲＡ活性を特徴とする神経変性疾患は、アルツハイマー病である。
【0290】
幾つかの実施形態では、対象（例えば、神経変性疾患を有する対象）における１つ以上のＰＩＬＲＡ活性を調節する方法が提供される。幾つかの実施形態では、本方法は、ＰＩＬＲＡ活性をアンタゴナイズするか、もしくは低減させること、例えば、ｈＰＩＬＲＡへのリガンドの結合を遮断すること、１種以上の下流タンパク質のリン酸化を変化させること（例えば、ＥＧＦＲまたはＳＴＡＴ３のリン酸化の増加；ＳＴＡＴ１のリン酸化の減少）、細胞呼吸、脂肪酸代謝（例えば、脂肪酸酸化）、及びＡＴＰ産生を増進させること、細胞遊走を増強すること、抗炎症性遺伝子もしくはタンパク質の発現を増加させること、及び／またはサイトカインタンパク質発現を低減させることを含む。従って、別の態様では、例えば、神経変性疾患を有する対象における、ＰＩＬＲＡ活性をアンタゴナイズする方法が提供される。幾つかの実施形態では、対象における１つ以上のＰＩＬＲＡ活性を調節する方法は、ｈＰＩＬＲＡタンパク質に特異的に結合する、単離された抗体もしくはその抗原結合部分、例えば、本明細書に記載されるような抗ＰＩＬＲＡ抗体、または本明細書に記載されるような抗ＰＩＬＲＡ抗体を含む医薬組成物を当該対象に投与することを含む。
【0291】
幾つかの実施形態では、処置される対象は、ヒト、例えば、成人または小児である。
【0292】
幾つかの実施形態では、神経変性疾患を有する対象におけるプラーク蓄積を低減させる方法が提供される。幾つかの実施形態では、本方法は、本明細書に記載されるような抗体または医薬組成物を対象に投与することを含む。幾つかの実施形態では、対象は、アルツハイマー病を有する。幾つかの実施形態では、対象は、神経変性疾患の動物モデル（例えば、５ＸＦＡＤまたはＡＰＰ／ＰＳ１マウスモデル）である。幾つかの実施形態では、プラーク蓄積は、例えば、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）スキャンを使用した、アミロイドプラークイメージング及び／またはタウイメージングにより測定される。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体の投与は、プラーク蓄積をベースライン値（例えば、抗ＰＩＬＲＡ抗体投与前の対象におけるプラーク蓄積レベル）と比較して少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％低減させる。
【0293】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、治療上有効量または治療上有効用量で対象に投与される。しかしながら、投与量は、選択される投与経路、組成物の製剤、患者の反応、状態の重症度、対象の体重、及び処方する医師の判断が含まれる、幾つかの因子に応じて異なり得る。投与量は、個々の患者毎に必要に応じて経時的に増加または減少され得る。ある特定の例では、患者は、最初に低用量を投与され、次いで、患者にとって許容可能な有効な投与量に増加される。有効量の決定は、十分に当業者の能力の範囲内である。
【0294】
本明細書に記載される抗ＰＩＬＲＡ抗体の投与経路は、経口送達、腹腔内送達、経皮送達、皮下送達、静脈内送達、筋肉内送達、クモ膜下腔内送達、吸入送達、局所送達、病巣内送達、直腸送達、気管支内送達、経鼻送達、経粘膜送達、腸内送達、点眼送達、もしくは点耳送達、または当該技術分野において公知の任意の他の方法であり得る。幾つかの実施形態では、抗体は、経口、静脈内、または腹腔内投与される。
【0295】
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体（及び任意に別の治療薬）は、長期間、例えば、少なくとも３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０日間、またはより長期間にわたって対象に投与される。
【0296】
ＸＩ．医薬組成物及びキット
別の態様では、ｈＰＩＬＲＡタンパク質に特異的に結合する抗体を含む医薬組成物及びキットが提供される。幾つかの実施形態では、医薬組成物及びキットは、神経変性疾患を処置するのに使用される。幾つかの実施形態では、医薬組成物及びキットは、１つ以上のＰＩＬＲＡ活性、例えば、ＥＧＦＲ、ＳＴＡＴ３、及び／またはＳＴＡＴ１のリン酸化を調節（例えば、増強または阻害）するのに使用される。
別の態様では、ｈＰＩＬＲＡタンパク質に特異的に結合する抗体を含む医薬組成物及びキットが提供される。幾つかの実施形態では、医薬組成物及びキットは、神経変性疾患を処置するのに使用される。幾つかの実施形態では、医薬組成物及びキットは、１つ以上のＰＩＬＲＡ活性、例えば、ＥＧＦＲ、ＳＴＡＴ３、及び／またはＳＴＡＴ１のリン酸化を調節（例えば、増強または阻害）するのに使用される。
【0297】
医薬組成物
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物が提供される。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、上記のセクションＩＩＩに記載されたような抗体またはその抗原結合断片である。
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物が提供される。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、上記のセクションＩＩＩに記載されたような抗体またはその抗原結合断片である。
【0298】
幾つかの実施形態では、医薬組成物は、本明細書に記載される抗ＰＩＬＲＡ抗体を含み、１種以上の薬学的に許容される担体及び／または賦形剤を更に含む。薬学的に許容される担体としては、生理的適合性があり、活性薬剤の活性に干渉しないか、または別様にそれを阻害しない任意の溶媒、分散媒、またはコーティングが挙げられる。薬学的に許容される様々な賦形剤が当該技術分野において周知である。
【0299】
幾つかの実施形態では、担体は、静脈内、筋肉内、経口、腹腔内、クモ膜下腔内、経皮、局所、または皮下投与に適したものである。薬学的に許容される担体は、例えば、組成物を安定化するように、または活性薬剤（複数可）の吸収を増加もしくは減少させるように作用する１種以上の生理学的に許容される化合物（複数可）を含有し得る。生理学的に許容される化合物としては、例えば、グルコース、スクロース、もしくはデキストランなどの炭水化物、アスコルビン酸もしくはグルタチオンなどの抗酸化剤、キレート剤、低分子量タンパク質、活性薬剤のクリアランスもしくは加水分解を低減させる組成物、または賦形剤もしくは他の安定剤、及び／または緩衝剤が挙げられ得る。他の薬学的に許容される担体及びその配合物は、当該技術分野において周知である。
【0300】
本明細書に記載される医薬組成物は、当業者に公知の方法で、例えば、従来の混合プロセス、溶解プロセス、造粒プロセス、糖衣錠製造プロセス、乳化プロセス、カプセル化プロセス、封入プロセス、または凍結乾燥プロセスにより製造され得る。以下の方法及び賦形剤は、単なる例示にすぎず、決して本発明を限定するものではない。
【0301】
経口投与の場合、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、当該技術分野において周知の薬学的に許容される担体と組み合わせることにより製剤化され得る。かかる担体は、処置される患者による経口摂取のための錠剤、丸剤、糖衣錠、カプセル、エマルション、親油性及び親水性懸濁液、液体、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液などとして化合物が製剤化されることを可能にする。経口使用のための医薬製剤は、化合物を固形賦形剤と共に混合し、所望により、得られた混合物を粉砕し、必要に応じて、錠剤または糖衣錠コアを得るために、好適な助剤を添加した後に顆粒の混合物を処理することにより得られ得る。好適な賦形剤としては、例えば、充填剤、例えば、ラクトース、スクロース、マンニトール、またはソルビトールが含まれる糖；セルロース調製物、例えば、トウモロコシ澱粉、小麦デンプン、米デンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、及び／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）が挙げられる。必要に応じて、崩壊剤、例えば、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸もしくはその塩、例えば、アルギン酸ナトリウムが添加され得る。
【0302】
抗ＰＩＬＲＡ抗体は、注射、例えば、ボーラス注射または持続注入による非経口投与用に製剤化され得る。注射の場合、化合物または複数の化合物は、それらを水性溶媒または非水性溶媒、例えば、植物油もしくは他の同様の油、合成脂肪酸グリセリド、高級脂肪酸エステル、またはプロピレングリコール中に、かつ必要に応じて、可溶化剤、等張剤、懸濁化剤、乳化剤、安定剤、及び防腐剤などの従来の添加剤と共に、溶解、懸濁、または乳化させることにより、調製物に製剤化され得る。幾つかの実施形態では、化合物は、水性溶液、例えば、ハンクス液、リンガー液、または生理食塩緩衝液などの生理的適合性の緩衝液中に製剤化され得る。注射用の製剤は、単位剤形で、例えば、防腐剤が添加されたアンプルまたは複数回投与用容器で提供され得る。組成物は油性または水性ビヒクル中の懸濁液、溶液、またはエマルジョンなどの形態を取り得、懸濁剤、安定化剤、及び／または分散剤などの製剤用薬剤（ｆｏｒｍｕｌａｔｏｒｙ ａｇｅｎｔ）を含有し得る。
【0303】
通常、インビボでの投与に使用するための医薬組成物は無菌である。滅菌は、当該技術分野において公知の方法、例えば、加熱滅菌、蒸気滅菌、濾過滅菌、または放射線照射により達成され得る。
【0304】
本開示の医薬組成物の投与量及び所望の薬物濃度は、想定される具体的な用途に応じて異なり得る。適切な投与量または投与経路の決定は、十分に当業者の技術の範囲内である。好適な投与量は上記にも記載されている。
【0305】
キット
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体を含むキットが提供される。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、上記のセクションＩＩＩに記載されたような抗体またはその抗原結合断片である。
幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体を含むキットが提供される。幾つかの実施形態では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、上記のセクションＩＩＩに記載されたような抗体またはその抗原結合断片である。
【0306】
幾つかの実施形態では、キットは、１種以上の追加の治療薬を更に含む。例えば、幾つかの実施形態では、キットは、本明細書に記載されるような抗ＰＩＬＲＡ抗体を含み、神経変性疾患、例えば、アルツハイマー病の処置に使用するための１種以上の追加の治療薬を更に含む。幾つかの実施形態では、治療薬は、神経変性疾患の認知症状または行動症状の処置に使用するための薬剤（例えば、抗うつ薬、ドーパミンアゴニスト、または抗精神病薬）である。幾つかの実施形態では、治療薬は、神経保護薬（例えば、カルビドパ／レボドパ、抗コリン作動薬、ドーパミン作動薬、モノアミンオキシダーゼＢ（ＭＡＯ－Ｂ）阻害剤、カテコール－Ｏ－メチルトランスフェラーゼ（ＣＯＭＴ）阻害剤、グルタミン酸作動薬、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤、カンナビノイド、カスパーゼ阻害剤、メラトニン、抗炎症剤、ホルモン（例えば、エストロゲンまたはプロゲステロン）、またはビタミン）である。
【0307】
幾つかの実施形態では、キットは、本明細書に記載されるような抗ＰＩＬＲＡ抗体を含み、抗ＰＩＬＲＡ抗体により誘導される活性を測定するための（例えば、ＥＧＦＲ、ＳＴＡＴ３、及び／またはＳＴＡＴ１リン酸化を測定するための）１種以上の試薬を更に含む。
【0308】
幾つかの実施形態では、キットは、本明細書に記載される方法を実施するための指示（すなわち、プロトコール）を含む説明資料（例えば、上記のような治療法のためのキットの使用説明書）を更に含む。説明資料は、通常、手書きの資料または印刷された資料を含むが、それらに限定されない。かかる使用説明書を記憶し、それをエンドユーザーに伝達することができる任意の媒体が本開示により企図される。かかる媒体としては、限定されるものではないが、電子記憶媒体（例えば、磁気ディスク、テープ、カートリッジ、チップ）、光学媒体（例えば、ＣＤ－ＲＯＭ）などが挙げられる。かかる媒体は、かかる説明資料を提供するインターネットサイトのアドレスを含み得る。
【実施例】
【0309】
本開示を具体例により詳細に説明する。以下の実施例は、単に例示目的で提供されるものであり、如何様にも本開示を限定することを意図しない。
【0310】
実施例１．ＩＰＳＣ由来のミクログリア、ＨＥＫ２９３、及びＣＨＯ－Ｋ１細胞におけるＰＩＬＲＡ及びＰＩＬＲＢへの結合の評価
ＨＥＫ２９３、ＣＨＯ－Ｋ１、及びヒトＩＰＳＣ－由来のミクログリアへのＰＩＬＲＡ ｍＡｂの結合
親ＨＥＫ２９３細胞をＮｕｃＢｌｕｅ Ｌｉｖｅ ＲｅａｄｙＰｒｏｂｅｓ Ｒｅａｇｅｎｔで３０分間標識した。親ＨＥＫ２９３細胞及びｈＰＩＬＲＡを発現するＨＥＫ２９３細胞を混合し、洗浄し、ＦＡＣＳ希釈液（ＰＢＳ、０．２％のＢＳＡ、及び１ｎＭのＥＤＴＡ）中で様々な濃度の抗ＰＩＬＲＡ抗体またはアイソタイプ対照抗体と共に氷上で３０分間インキュベートした。細胞をＦＡＣＳ希釈液で２回洗浄し、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７コンジュゲート抗ヒトＩｇＧと共に氷上で３０分間インキュベートし、１回洗浄した。細胞への抗体の結合をＦＡＣＳにより検出し、ＦＬＯＪＯソフトウェアで実行したデータ解析により蛍光強度中央値（ＭＦＩ）を導き出した（図１Ａ～１Ｃ）。
ＨＥＫ２９３、ＣＨＯ－Ｋ１、及びヒトＩＰＳＣ－由来のミクログリアへのＰＩＬＲＡ ｍＡｂの結合
親ＨＥＫ２９３細胞をＮｕｃＢｌｕｅ Ｌｉｖｅ ＲｅａｄｙＰｒｏｂｅｓ Ｒｅａｇｅｎｔで３０分間標識した。親ＨＥＫ２９３細胞及びｈＰＩＬＲＡを発現するＨＥＫ２９３細胞を混合し、洗浄し、ＦＡＣＳ希釈液（ＰＢＳ、０．２％のＢＳＡ、及び１ｎＭのＥＤＴＡ）中で様々な濃度の抗ＰＩＬＲＡ抗体またはアイソタイプ対照抗体と共に氷上で３０分間インキュベートした。細胞をＦＡＣＳ希釈液で２回洗浄し、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７コンジュゲート抗ヒトＩｇＧと共に氷上で３０分間インキュベートし、１回洗浄した。細胞への抗体の結合をＦＡＣＳにより検出し、ＦＬＯＪＯソフトウェアで実行したデータ解析により蛍光強度中央値（ＭＦＩ）を導き出した（図１Ａ～１Ｃ）。
【0311】
ＣＨＯ－Ｋ１細胞及びｈＰＩＬＲＡを発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞を、１００ｎＭの単一濃度の抗ＰＩＬＲＡまたはアイソタイプ対照抗体と共に氷上で３０分間インキュベートした。細胞をＦＡＣＳ希釈液で２回洗浄し、次いで、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７コンジュゲート抗ヒトＩｇＧと共に氷上で３０分間インキュベートし、ＦＡＣＳ希釈液で１回洗浄した。細胞への抗体の結合をＦＡＣＳにより検出し、ＦＬＯＪＯソフトウェアで実行したデータ解析によりＭＦＩを導き出した（図１Ｇ）。図１Ａ～１Ｃ及び１Ｇは共に、ＨＥＫ２９３及びＣＨＯ－Ｋ１細胞上に発現されたｈＰＩＬＲＡへの抗ＰＩＬＲＡ抗体の結合を実証する。親ＨＥＫ２９３細胞及びＣＨＯ－Ｋ１細胞への抗ＰＩＬＲＡ抗体の結合の欠如も結合の特異性を実証する。
【0312】
野生型ＩＰＳＣに由来するヒトミクログリア（ヒトｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ；ＰＩＬＲＡ Ｒ７８／Ｇ７８ヘテロ接合性）またはＰＩＬＲＡ機能欠損（ＬｏＦ）ＩＰＳＣ（ヒトＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ）に１００ｎＭのビオチン化した抗ＰＩＬＲＡまたはアイソタイプ対照抗体を氷上で４５分間投与した。細胞をＰＢＳで洗浄し、続いて、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８コンジュゲートストレプトアビジンと共に氷上で３０分間インキュベートした。細胞をＰＢＳで数回洗浄後、共焦点顕微鏡を使用して撮像した。Ｈａｒｍｏｎｙ Ｓｏｆｔｗａｒｅを使用して、細胞毎の平均蛍光スポット面積を算出した。データをＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８コンジュゲートストレプトアビジンのみで処理された対照ウェルにおけるバックグラウンドシグナルに対する倍率表示として示す（図１Ｊ及び１Ｋ）。図１Ｊ及び１Ｋは共に、内因性細胞表面レベルのｈＰＩＬＲＡを有するＣＮＳ関連細胞種であるヒトｉＭｉｃｒｏｇｌｉａへの抗ＰＩＬＲＡ抗体の結合を実証する。更に、ヒトＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａへの抗ＰＩＬＲＡ抗体結合の欠如は、ｈＰＩＬＲＡへの結合の特異性を実証した。更に、ヒトｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ及びＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａの両方へのアイソタイプ対照抗体結合の欠如は、ＣＮＳ関連細胞種への非特異的抗体の結合の欠如を実証した。
【0313】
ｃｙｎｏＰＩＬＲＡまたはｈＰＩＬＲＢを発現するＣＨＯ細胞へのＰＩＬＲＡ ｍＡｂの結合
ＣＨＯ－Ｋ１細胞、ｃｙｎｏＰＩＬＲＡを発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞、及びｈＰＩＬＲＢを発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞を、１００ｎＭの単一濃度の抗ＰＩＬＲＡまたはアイソタイプ対照抗体と共に氷上で３０分間インキュベートした。細胞をＦＡＣＳ希釈液で２回洗浄し、次いで、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７コンジュゲート抗ヒトＩｇＧと共に氷上で３０分間インキュベートし、ＦＡＣＳ希釈液で１回洗浄した。細胞への抗体の結合をＦＡＣＳにより検出し、ＦＬＯＪＯソフトウェアで実行したデータ解析によりＭＦＩを導き出した。図２Ａに示すように、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、ｃｙｎｏＰＩＬＲＡを発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞に結合したが、ｈＰＩＬＲＢを発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞または親ＣＨＯ－Ｋ１細胞には結合しなかった。ＣＨＯ－Ｋ１細胞上に発現されたｃｙｎｏＰＩＬＲＡへの抗ＰＩＬＲＡ抗体の結合は、抗体による細胞表面標的への結合及びカニクイザル交差反応性を実証した。これらは、カニクイザルでの抗体安全性評価及びＴＥ／ＰＫ／ＰＤ試験を可能にする固有の結合特性である。
ＣＨＯ－Ｋ１細胞、ｃｙｎｏＰＩＬＲＡを発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞、及びｈＰＩＬＲＢを発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞を、１００ｎＭの単一濃度の抗ＰＩＬＲＡまたはアイソタイプ対照抗体と共に氷上で３０分間インキュベートした。細胞をＦＡＣＳ希釈液で２回洗浄し、次いで、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７コンジュゲート抗ヒトＩｇＧと共に氷上で３０分間インキュベートし、ＦＡＣＳ希釈液で１回洗浄した。細胞への抗体の結合をＦＡＣＳにより検出し、ＦＬＯＪＯソフトウェアで実行したデータ解析によりＭＦＩを導き出した。図２Ａに示すように、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、ｃｙｎｏＰＩＬＲＡを発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞に結合したが、ｈＰＩＬＲＢを発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞または親ＣＨＯ－Ｋ１細胞には結合しなかった。ＣＨＯ－Ｋ１細胞上に発現されたｃｙｎｏＰＩＬＲＡへの抗ＰＩＬＲＡ抗体の結合は、抗体による細胞表面標的への結合及びカニクイザル交差反応性を実証した。これらは、カニクイザルでの抗体安全性評価及びＴＥ／ＰＫ／ＰＤ試験を可能にする固有の結合特性である。
【0314】
全体として、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、ｈＰＩＬＲＡを発現するＨＥＫ２９３及びＣＨＯ－Ｋ１細胞、ならびにｃｙｎｏＰＩＬＲＡを発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞に結合した。このことは、結合特異性及びカニクイザル交差反応性を実証する。この抗体は、内因性細胞表面レベルでｈＰＩＬＲＡを発現するヒトｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにも結合し、ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａには結合しなかった。
【0315】
実施例２．抗ＰＩＬＲＡ抗体の特徴付け
結合特性
ｈＰＩＬＲＡ、ｈＰＩＬＲＢ、及びｃｙｎｏＰＩＬＲＡの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）に対する抗ＰＩＬＲＡ抗体の結合親和性を、Ｂｉａｃｏｒｅ ８Ｋ機器を使用したＳＰＲにより測定した（表２）。マウス抗ヒトＦａｂ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅのｈｕｍａｎ Ｆａｂ ｃａｐｔｕｒｅ ｋｉｔ）を固定化したＢｉａｃｏｒｅ（商標）Ｓｅｒｉｅｓ Ｓ ＣＭ５センサーチップ上に抗体を捕捉し、続いて、組換えＥＣＤ試薬の３倍系列希釈物を３０μＬ／分の流速で注入した。３分間の会合に続く１０分間の解離を使用して各試料を分析した。各注入後、５０ｍＭのグリシン（ｐＨ２．０）の再生緩衝液を使用してセンサーチップを再生させた。ｋｏｎ及びｋｏｆｆの同時フィッティングの１：１ラングミュアモデルを動態解析に使用した。
結合特性
ｈＰＩＬＲＡ、ｈＰＩＬＲＢ、及びｃｙｎｏＰＩＬＲＡの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）に対する抗ＰＩＬＲＡ抗体の結合親和性を、Ｂｉａｃｏｒｅ ８Ｋ機器を使用したＳＰＲにより測定した（表２）。マウス抗ヒトＦａｂ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅのｈｕｍａｎ Ｆａｂ ｃａｐｔｕｒｅ ｋｉｔ）を固定化したＢｉａｃｏｒｅ（商標）Ｓｅｒｉｅｓ Ｓ ＣＭ５センサーチップ上に抗体を捕捉し、続いて、組換えＥＣＤ試薬の３倍系列希釈物を３０μＬ／分の流速で注入した。３分間の会合に続く１０分間の解離を使用して各試料を分析した。各注入後、５０ｍＭのグリシン（ｐＨ２．０）の再生緩衝液を使用してセンサーチップを再生させた。ｋｏｎ及びｋｏｆｆの同時フィッティングの１：１ラングミュアモデルを動態解析に使用した。
【0316】
エピトープマッピング
抗ＰＩＬＲＡ抗体のＰＩＬＲＡ結合エピトープを、Ｂｉａｃｏｒｅ ８Ｋ機器を使用したＳＰＲにより同定した。マウス抗ヒトＦａｂ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅのｈｕｍａｎ Ｆａｂ ｃａｐｔｕｒｅ ｋｉｔ）を固定化したＢｉａｃｏｒｅ（商標）Ｓｅｒｉｅｓ Ｓ ＣＭ５センサーチップ上に抗ＰＩＬＲＡ抗体を捕捉し、続いて、ＰＩＬＲＡからＰＩＬＲＢへの単一点変異体バリアントを１μＭの濃度で注入した。エピトープビニングのために、抗ＰＩＬＲＡ抗体を固定化したＢｉａｃｏｒｅ（商標）Ｓｅｒｉｅｓ Ｓ ＣＭ５センサーチップの各チャネルに１μＭの組換えヒトＰＩＬＲＡを３００秒間注入した。その後、各サイクル毎に単一の抗ＰＩＬＲＡ抗体の注入により、二次抗ＰＩＬＲＡ抗体の結合をモニタリングした。
抗ＰＩＬＲＡ抗体のＰＩＬＲＡ結合エピトープを、Ｂｉａｃｏｒｅ ８Ｋ機器を使用したＳＰＲにより同定した。マウス抗ヒトＦａｂ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅのｈｕｍａｎ Ｆａｂ ｃａｐｔｕｒｅ ｋｉｔ）を固定化したＢｉａｃｏｒｅ（商標）Ｓｅｒｉｅｓ Ｓ ＣＭ５センサーチップ上に抗ＰＩＬＲＡ抗体を捕捉し、続いて、ＰＩＬＲＡからＰＩＬＲＢへの単一点変異体バリアントを１μＭの濃度で注入した。エピトープビニングのために、抗ＰＩＬＲＡ抗体を固定化したＢｉａｃｏｒｅ（商標）Ｓｅｒｉｅｓ Ｓ ＣＭ５センサーチップの各チャネルに１μＭの組換えヒトＰＩＬＲＡを３００秒間注入した。その後、各サイクル毎に単一の抗ＰＩＬＲＡ抗体の注入により、二次抗ＰＩＬＲＡ抗体の結合をモニタリングした。
【0317】
ヒトＰＩＬＲＡに対するリガンド遮断
抗ＰＩＬＲＡ抗体のリガンド遮断特徴を、Ｂｉａｃｏｒｅ ８Ｋ機器を使用したＳＰＲにより評価した（図３Ａ及び３Ｂ）。マウス抗ヒトＦａｂ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅのｈｕｍａｎ Ｆａｂ ｃａｐｔｕｒｅ ｋｉｔ）を固定化したＢｉａｃｏｒｅ（商標）Ｓｅｒｉｅｓ Ｓ ＣＭ５センサーチップ上に抗ＰＩＬＲＡ抗体を捕捉し、続いて、３００ｎＭの組換えｈＰＩＬＲＡ ＥＣＤを注入した。その後、以下の組換えＰＩＬＲＡリガンドの注入によりｈＰＩＬＲＡ－リガンド相互作用をモニタリングした：ｈＮＰＤＣ１（３５～１８１）、ｈＰＡＮＰ（７６～１７８）、及びＨＳＶ ｇＢ（２３～２７９）。これらはＰＩＬＲＡの既知のシアリル化リガンドである。ｈＰＩＬＲＡへのリガンドの結合の遮断は、抗体がｈＰＩＬＲＡをアンタゴナイズすることができたことを実証した。
抗ＰＩＬＲＡ抗体のリガンド遮断特徴を、Ｂｉａｃｏｒｅ ８Ｋ機器を使用したＳＰＲにより評価した（図３Ａ及び３Ｂ）。マウス抗ヒトＦａｂ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅのｈｕｍａｎ Ｆａｂ ｃａｐｔｕｒｅ ｋｉｔ）を固定化したＢｉａｃｏｒｅ（商標）Ｓｅｒｉｅｓ Ｓ ＣＭ５センサーチップ上に抗ＰＩＬＲＡ抗体を捕捉し、続いて、３００ｎＭの組換えｈＰＩＬＲＡ ＥＣＤを注入した。その後、以下の組換えＰＩＬＲＡリガンドの注入によりｈＰＩＬＲＡ－リガンド相互作用をモニタリングした：ｈＮＰＤＣ１（３５～１８１）、ｈＰＡＮＰ（７６～１７８）、及びＨＳＶ ｇＢ（２３～２７９）。これらはＰＩＬＲＡの既知のシアリル化リガンドである。ｈＰＩＬＲＡへのリガンドの結合の遮断は、抗体がｈＰＩＬＲＡをアンタゴナイズすることができたことを実証した。
【0318】
以下の表２は、ｈＰＩＬＲＡ Ｇ７８、ｈＰＩＬＲＡ Ｒ７８、ｈＰＩＬＲＢ、及びｃｙｎｏＰＩＬＲＡに対する抗ＰＩＬＲＡ抗体の結合親和性、ｈＰＩＬＲＡ Ｇ７８を発現するＨＥＫ２９３細胞において測定された結合のＥＣ５０値、抗体のｈＰＩＬＲＡ結合エピトープ、ならびに、様々な試験されたリガンドを抗体が遮断したかどうかを示す。
【0319】
【表2】
【0320】
上記のように、本発明者らの全ての抗ＰＩＬＲＡ抗体は、ｈＰＩＬＲＡ（Ｇ７８バリアント及びＲ７８バリアントの両方）及びｃｙｎｏＰＩＬＲＡに対する強い結合を示した一方で、ｈＰＩＬＲＢに対する結合を示さなかったか、または非常に弱い結合を示した。更に、１１種の抗体のうちの８種が、試験した全てのリガンドを遮断した一方で、クローン９及びクローン１０は、ＨＳＶ ｇＢ（２３～２７９）を遮断した。しかしながら、４つ全ての参照抗体は、ｃｙｎｏＰＩＬＲＡへの結合を示さず、ＨＳＶ ｇＢ（２３～２７９）のみを遮断した。
【0321】
実施例３．抗ＰＩＬＲＡ抗体により誘導されるシグナル伝達経路
ヒトｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ及びＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおけるホスホキナーゼタンパク質活性の評価（ＥＧＦＲ及びＳＴＡＴ３ Ｙ７０５）
ＰＩＬＲＡ下流シグナル伝達の理解は、アンタゴニスト抗体を同定するのに重要である。ＤＩＶ７２の野生型ヒトｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ及びＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａを血清添加培地にプレーティングした。２４時間後に培地を交換して、血清を除去し、細胞を７２時間後に溶解させた。ｐＥＧＦＲ Ｙ１０８６（図４Ａ）及びｐＳＴＡＴ３ Ｙ７０５（図４Ｂ）のホスホキナーゼレベルを、Ｐｒｏｔｅｏｍｅ Ｐｒｏｆｉｌｅｒ Ｈｕｍａｎ Ｐｈｏｓｐｈｏ－Ｋｉｎａｓｅ Ａｒｒａｙ Ｋｉｔ（ＡＲＹ００３Ｃ、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を取扱説明書に従って使用して測定した。
ヒトｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ及びＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおけるホスホキナーゼタンパク質活性の評価（ＥＧＦＲ及びＳＴＡＴ３ Ｙ７０５）
ＰＩＬＲＡ下流シグナル伝達の理解は、アンタゴニスト抗体を同定するのに重要である。ＤＩＶ７２の野生型ヒトｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ及びＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａを血清添加培地にプレーティングした。２４時間後に培地を交換して、血清を除去し、細胞を７２時間後に溶解させた。ｐＥＧＦＲ Ｙ１０８６（図４Ａ）及びｐＳＴＡＴ３ Ｙ７０５（図４Ｂ）のホスホキナーゼレベルを、Ｐｒｏｔｅｏｍｅ Ｐｒｏｆｉｌｅｒ Ｈｕｍａｎ Ｐｈｏｓｐｈｏ－Ｋｉｎａｓｅ Ａｒｒａｙ Ｋｉｔ（ＡＲＹ００３Ｃ、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を取扱説明書に従って使用して測定した。
【0322】
ｈＰＩＬＲＡ Ｇ７８またはｈＰＩＬＲＡ Ｒ７８を発現するＨＥＫ２９３細胞における抗ＰＩＬＲＡ抗体による下流シグナル伝達の評価（ＳＴＡＴ３ Ｙ７０５、ＳＴＡＴ３ Ｓ７２７、及びＥＧＦＲ）
親ＨＥＫ２９３細胞またはｈＰＩＬＲＡ Ｇ７８（７８位にＧｌｙを有するＰＩＬＲＡ）もしくはｈＰＩＬＲＡ Ｒ７８（７８位にＡｒｇを有するＰＩＬＲＡ）を発現するＨＥＫ２９３細胞に、１００ｎＭの抗ＰＩＬＲＡ ｍＡｂまたはアイソタイプ対照を低血清条件（１％のウシ胎児血清）で３０～６０分間投与した。細胞を４％の氷冷したパラホルムアルデヒドで固定し、標準的な免疫組織染色プロトコールを使用してｐＳＴＡＴ３ Ｙ７０５（３０分間投与した；図４Ｃ）、ｐＳＴＡＴ３ Ｓ７２７（６０分間投与した；図４Ｄ）、及びｐＥＧＦＲ Ｙ１０８６（６０分間投与した；図４Ｅ）について染色した。細胞を共焦点顕微鏡で撮像し、Ｈａｒｍｏｎｙ Ｓｏｆｔｗａｒｅで画像を解析して、平均蛍光スポット面積及び強度を細胞毎に算出した。
親ＨＥＫ２９３細胞またはｈＰＩＬＲＡ Ｇ７８（７８位にＧｌｙを有するＰＩＬＲＡ）もしくはｈＰＩＬＲＡ Ｒ７８（７８位にＡｒｇを有するＰＩＬＲＡ）を発現するＨＥＫ２９３細胞に、１００ｎＭの抗ＰＩＬＲＡ ｍＡｂまたはアイソタイプ対照を低血清条件（１％のウシ胎児血清）で３０～６０分間投与した。細胞を４％の氷冷したパラホルムアルデヒドで固定し、標準的な免疫組織染色プロトコールを使用してｐＳＴＡＴ３ Ｙ７０５（３０分間投与した；図４Ｃ）、ｐＳＴＡＴ３ Ｓ７２７（６０分間投与した；図４Ｄ）、及びｐＥＧＦＲ Ｙ１０８６（６０分間投与した；図４Ｅ）について染色した。細胞を共焦点顕微鏡で撮像し、Ｈａｒｍｏｎｙ Ｓｏｆｔｗａｒｅで画像を解析して、平均蛍光スポット面積及び強度を細胞毎に算出した。
【0323】
抗ＰＩＬＲＡ ｍＡｂ用量反応性を評価するために、ｈＰＩＬＲＡ Ｇ７８を発現するＨＥＫ２９３細胞に、低血清条件で抗ＰＩＬＲＡ抗体（２００ｎＭ未満）を用量漸増して３０分間投与した（図４Ｆ）。表３は、各抗体についてバックグラウンドに対する倍率（アイソタイプ対照抗体と比較した各抗体でのｐＳＴＡＴ３ Ｙ７０５の誘導倍率）及びｐＳＴＡＴ３ Ｙ７０５誘導のｎＭでの効力を示すＥＣ５０値の一覧を示す。ｈＰＩＬＲＡ Ｇ７８を発現するＨＥＫ２９３細胞におけるｐＳＴＡＴ３ Ｙ７０５の用量反応性の誘導は、効力及び最大の効果に基づいてアンタゴニスト抗体を順位付けるために利用することができる。ｈＰＩＬＲＡ Ｇ７８を発現するＨＥＫ２９３細胞においてＳＴＡＴ３ Ｙ７０５、ＳＴＡＴ３ Ｓ７２７、及びＥＧＦＲ Ｙ１０８６のリン酸化が誘導されたが、親ＨＥＫ２９３細胞では誘導されなかったことは、特異的なＰＩＬＲＡ依存的下流シグナル伝達を実証した。更に、アイソタイプ対照抗体でシグナル伝達が誘導されなかったことは、ＰＩＬＲＡ選択性及び特異性を実証した。
【0324】
【表3】
【0325】
ヒト化抗ＰＩＬＲＡ抗体をホスホ－ＳＴＡＴシグナル伝達の誘導についても試験した。図４Ｇ及び４Ｈに示すように、抗ＰＩＬＲＡ抗体がヒトＰＩＬＲＡ ７８Ｇを発現するＨＥＫ細胞に用量漸増して投与され、３０分後にｐＳＴＡＴ３ Ｙ７０５（図４Ｇ）またはｐＳＴＡＴ３ Ｓ７２７（図４Ｈ）を誘導した。ＥＣ５０値（表４）は、ｐＳＴＡＴ３ Ｙ７０５またはｐＳＴＡＴ３ Ｓ７２７誘導のｎＭでの効力を各抗体について示す。データを平均値＋／－ＳＥＭでのアイソタイプ対照に対する発現倍率として示す（ｎ＝２の生物学的反復（図４Ｇ）、ｎ＝２の技術的反復（図４Ｈ））。
【0326】
【表4】
【0327】
更に、図４Ｋ及び４Ｌに示すように、抗ＰＩＬＲＡ抗体がヒトＰＩＬＲＡ ７８Ｒを発現するＨＥＫ２９３細胞に用量漸増して投与され、３０分後にｐＳＴＡＴ３ Ｙ７０５（図４Ｋ）またはｐＳＴＡＴ３ Ｓ７２７（図４Ｌ）を誘導した。ＥＣ５０値（表５）は、ｐＳＴＡＴ３ Ｙ７０５誘導のｎＭでの効力を各抗体について示す。データを平均値＋／－ＳＥＭでのアイソタイプ対照に対する発現倍率として示す（ｎ＝３の生物学的反復（図４Ｋ）、ｎ＝２の技術的反復（図４Ｌ））。
【0328】
【表5】
【0329】
ｈＰＩＬＲＡ ７８Ｒまたは７８Ｇを発現するＨＥＫ２９３細胞におけるｐＳＴＡＴ３（Ｙ７０５）及び／またはｐＳＴＡＴ３（Ｓ７２７）の用量反応性の誘導は、効力及び最大の効果に基づいてアンタゴニスト抗体を順位付けるために利用することができる。
【0330】
ｐＳＴＡＴ３ Ｙ７０５誘導がｍＴＯＲ依存的であるかどうか評価するために、細胞にｍＴＯＲ阻害剤であるトリン１（３１．２５～５００ｎＭ）またはＡＺＤ８０５５（３．１２５～５０ｎＭ）を２時間投与し、その後、１００ｎＭの抗ＰＩＬＲＡ ｍＡｂまたはアイソタイプ対照を３０分間加えた。図４Ｉは、抗ＰＩＬＲＡ抗体により誘導されるｐＳＴＡＴ３ Ｙ７０５がｍＴＯＲ阻害剤により部分的に阻害されたことを示す。
【0331】
更に図４Ｊは、抗ＰＩＬＲＡ抗体が、ＡＤ防御的なＰＩＬＲＡ Ｒ７８を発現するＨＥＫ２９３細胞においてｐＳＴＡＴ３ Ｙ７０５を誘導したことを示す。ＰＩＬＲＡ Ｇ７８に結合する抗ＰＩＬＲＡ抗体（抗体クローン２）は、ＡＤ防御的なＰＩＬＲＡ Ｒ７８を発現するＨＥＫ２９３細胞においてｐＳＴＡＴ３ Ｙ７０５の誘導を部分的に遮断した。Ｇ７８エピトープに結合しない抗ＰＩＬＲＡ抗体（抗体クローン９、１０、及び５）は、ＰＩＬＲＡ Ｇ７８及びＰＩＬＲＡ Ｒ７８における同程度のｐＳＴＡＴ３ Ｙ７０５誘導を示した。親ＨＥＫ２９３細胞ではｐＳＴＡＴ３は誘導されなかった。ＡＤ防御的なＰＩＬＲＡバリアントＲ７８は、低減されたリガンド結合能力を有し、おそらくＧ７８に結合する抗体（例えば、抗体クローン２及び４）に対してもより低い親和性を有する。このＡＤ防御的なＰＩＬＲＡバリアントＲ７８の頻度は世界中で異なる。このバリアントは、アフリカ人集団（１０％）及びヨーロッパ人集団（３８％）ではマイナーアレルであるが、東アジア人集団（６５％）ではメジャーアレルである。ＰＩＬＲＡ Ｒ７８に結合する抗ＰＩＬＲＡ抗体は、大部分の人において親和性の消失に関連し得る。しかしながら、異なるエピトープに結合する抗体クローン５は、ＰＩＬＲＡのＲ７８バリアントを発現する細胞において強い下流シグナル伝達（ｐＳＴＡＴ３ Ｙ７０５）を誘導した。かかる抗ＰＩＬＲＡ抗体は、Ｇ７８に結合する抗体、例えば、抗体クローン２で観察されたＰＩＬＲＡ Ｒ７８を発現する細胞に対する効力の喪失のリスクを取り除くのに役立ち得る。
【0332】
ヒトｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ、ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ、及びＨＥＫ２９３細胞におけるＳＴＡＴ１の評価
ＤＩＶ４５の野生型ヒトｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ及びＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａを血清添加培地にプレーティングした。２４時間後に培地を交換して、血清を除去した。プレーティングの４日後に細胞に１００ｎＭの抗ＰＩＬＲＡ抗体を投与し、３０分後に溶解させた。リン酸化ＳＴＡＴ１ Ｙ７０１レベル（図４Ｍ）を、ＡｌｐｈａＬｉｓａアッセイを取扱説明書に従って使用して測定した。
ＤＩＶ４５の野生型ヒトｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ及びＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａを血清添加培地にプレーティングした。２４時間後に培地を交換して、血清を除去した。プレーティングの４日後に細胞に１００ｎＭの抗ＰＩＬＲＡ抗体を投与し、３０分後に溶解させた。リン酸化ＳＴＡＴ１ Ｙ７０１レベル（図４Ｍ）を、ＡｌｐｈａＬｉｓａアッセイを取扱説明書に従って使用して測定した。
【0333】
ＤＩＶ５８の野生型ヒトｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ及びＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａを血清添加培地にプレーティングした。２４時間後に培地を交換して、血清を除去し、細胞を７２時間後に溶解させた。総ＳＴＡＴ１レベル（図４Ｎ）を、ＡｌｐｈａＬｉｓａアッセイを取扱説明書に従って使用して測定した。溶解された親ＨＥＫ２９３細胞またはｈＰＩＬＲＡ Ｇ７８を発現するＨＥＫ２９３細胞におけるホスホ－ＳＴＡＴ１ Ｙ７０１レベル（図４Ｏ）もＡｌｐｈａＬｉｓａアッセイを取扱説明書に従って使用して測定した。
【0334】
抗ＰＩＬＲＡ抗体を使用して、野生型ヒトｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ及びＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａに投与した。図４Ｐに示すように、抗ＰＩＬＲＡ抗体の１００ｎＭでの３０分の投与のみがリン酸化ＳＴＡＴ１ Ｙ７０１レベルを低減させ、ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａの表現型を模倣した。抗ＰＩＬＲＡ抗体を使用して、親ＨＥＫ２９３細胞及びＰＩＬＲＡ Ｇ７８を発現するＨＥＫ２９３細胞にも投与した。図４Ｑ及び４Ｒに示すように、抗ＰＩＬＲＡ ｍＡｂは、ＰＩＬＲＡ Ｇ７８を発現するＨＥＫ２９３細胞においてリン酸化ＳＴＡＴ１ Ｙ７０１レベル及び総ＳＴＡＴ１レベルを低減させた。親ＨＥＫ２９３細胞またはアイソタイプ対照抗体では低減されなかった。
【0335】
全体として、結果が示したように、抗ＰＩＬＲＡ抗体が投与された野生型及びＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおけるＥＧＦＲ、ＳＴＡＴ３、及びＳＴＡＴ１のリン酸化状態の基礎的変化は、これらの経路がＰＩＬＲＡの下流であることを示唆した。このことは、これまで知られていなかったＰＩＬＲＡ生物学に関連する重要な発見である。
【0336】
実施例４．ＰＩＬＲＡ依存的なｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ遊走の評価
ヒトＩＰＳＣ由来のミクログリアにおけるインビトロでのＰＩＬＲＡ依存的な機能の理解は、インビボでの機能を予測するのに役立ち得る。ミクログリア運動性の増強は、神経変性疾患において有益であり得る。
ヒトＩＰＳＣ由来のミクログリアにおけるインビトロでのＰＩＬＲＡ依存的な機能の理解は、インビボでの機能を予測するのに役立ち得る。ミクログリア運動性の増強は、神経変性疾患において有益であり得る。
【0337】
ＤＩＶ５３の野生型ヒトｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ、ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ、及びｈＰＩＬＲＡを発現するＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ（ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ＯＥ）をウェル当たり２０，０００個の細胞で９６ウェルプレートにプレーティングし、ゴムストッパーで中心に無細胞の検出区域を作った。２日目に新鮮な培地中の抗ＰＩＬＲＡ抗体（１００ｎＭ）、アイソタイプ対照（１００ｎＭ）、またはＰＢＳ（野生型ヒトｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ及びＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ試料）を添加し、ゴムストッパーを取り除いた。６日目にＮｕｃＢｌｕｅを添加し、共焦点顕微鏡を使用して細胞を撮像した。画像をＨａｒｍｏｎｙ Ｓｏｆｔｗａｒｅで解析して、検出区域内の核標識の平均面積を算出した。
【0338】
ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおけるｈＰＩＬＲＡの再発現は、遊走表現型を逆転させて野生型レベルに戻した。このことは、遊走がＰＩＬＲＡ依存的であり、特異的なエンドポイントであることを実証する（図５Ａ）。ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ機能の表現型を模写する抗ＰＩＬＲＡ抗体は、機能的アンタゴニストと分類される。図５Ｂ及び図５Ｃに示すように、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ細胞と同様に、ストッパー除去の１２０時間後に、無細胞の検出区域への野生型ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａの遊走を増強した。アイソタイプ対照抗体での遊走表現型の欠如は、特異性を実証した。ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ及び野生型ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａの両方は、ビヒクル（ＰＢＳ）のみを投与された。
【0339】
更に、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、化学誘引物質である補体５ａ（Ｃ５ａ）への細胞遊走を増強することが示された。野生型ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ細胞及びＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ細胞をＤＩＶ６２（図５Ｄ）またはＤＩＶ１１０（図５Ｅ）で採取し、その後、トランスウェルアッセイのためにカルセインＡＭ色素で標識した。図５Ｅの細胞は、採取前に抗ＰＩＬＲＡ抗体またはアイソタイプ対照（１００ｎＭ）で４日間前処理した。ヒト補体５ａ（１０ｎｇ／ｍｌ）は、化学誘引物質として下部チャンバーに０時点で添加した。データを平均値＋／－ＳＥＭとして示す（ｎ＝３の技術的反復）。図５Ｄ及び５Ｅは、ＰＩＬＲＡ ＬｏＦが、化学誘引物質である補体５ａ（Ｃ５ａ）へのｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ遊走を増強し（図５Ｄ）、抗ＰＩＬＲＡ抗体が、ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ細胞と同様に、ｉＭｉｇｒｏｇｌｉａのＣ５ａへの走化性を増強した（図５Ｅ）ことを示す。
【0340】
抗ＰＩＬＲＡ抗体は、ミクログリアによる運動性タンパク質の分泌も増強した。野生型（ＰＩＬＲＡ Ｒ７８／Ｇ７８ヘテロ接合体）ＩＰＳＣに由来するヒトｉＭｉｃｒｏｇｌｉａを、ＤＩＶ４２で血清添加培地にプレーティングした。２４時間後に培地を交換して、血清を除去し、細胞に抗ＰＩＬＲＡ抗体クローン５（１００ｎＭ）またはアイソタイプ対照を４日間投与した。抗ＰＩＬＲＡ抗体クローン５またはアイソタイプ対照を投与した上清中の可溶性分析物をプロテオームプロファイラーキットであるＨｕｍａｎ Ｓｏｌｕｂｌｅ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ａｒｒａｙ Ｋｉｔ － Ｎｏｎ－Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｐａｎｅｌ（Ｒ＆Ｄ ＡＲＹ０１２）で分析した。データをアイソタイプに対する発現の平均値＋／－ＳＤとして示す（ｎ＝２の技術的反復）。図５Ｆ及び５Ｇは、抗ＰＩＬＲＡ抗体が、処理の４日後でのｉＭｉｃｒｏｇｌｉａによる上清へのインテグリン（図５Ｆ）及びカドヘリン（図５Ｇ）の分泌を増強したことを示す。
【0341】
この実施例は、抗ＰＩＬＲＡ抗体が、ＰＩＬＲＡに対する機能的アンタゴニストとして作用し、細胞遊走を増強することによりＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ機能の表現型を模写したことを実証する。この抗体は、細胞遊走の増強に関連する運動性タンパク質であるカドヘリン及びインテグリンの細胞分泌も増加させた。
【0342】
実施例５．ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおける抗炎症性表現型に対するＰＩＬＲＡの効果
ヒトｉＭｉｃｒｏｇｌｉａインビトロにおけるＰＩＬＲＡ依存的な機能の理解は、インビボでの機能を予測するのに役立ち得る。炎症状態の調節は、神経変性疾患において有益であり得る。ＰＩＬＲＡ依存的な転写変化を評価するために、野生型ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ及びＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａを血清添加培地にプレーティングした。２４時間後に培地を交換して、血清を除去した。７２時間後にＬＰＳ（１０ｎｇ／ｍｌ）またはビヒクルを添加して、サイトカイン反応を刺激した。ＬＰＳ処理の２４時間後に細胞を採取し、野生型ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａまたはＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａの同じ分化バッチから得られた５つの独立した採取物（ＤＩＶ５９、ＤＩＶ６３、ＤＩＶ７０、ＤＩＶ７３、ＤＩＶ７７）からＲＮＡを単離した。各条件について採取物毎に２回の技術的反復をプールした。
ヒトｉＭｉｃｒｏｇｌｉａインビトロにおけるＰＩＬＲＡ依存的な機能の理解は、インビボでの機能を予測するのに役立ち得る。炎症状態の調節は、神経変性疾患において有益であり得る。ＰＩＬＲＡ依存的な転写変化を評価するために、野生型ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ及びＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａを血清添加培地にプレーティングした。２４時間後に培地を交換して、血清を除去した。７２時間後にＬＰＳ（１０ｎｇ／ｍｌ）またはビヒクルを添加して、サイトカイン反応を刺激した。ＬＰＳ処理の２４時間後に細胞を採取し、野生型ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａまたはＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａの同じ分化バッチから得られた５つの独立した採取物（ＤＩＶ５９、ＤＩＶ６３、ＤＩＶ７０、ＤＩＶ７３、ＤＩＶ７７）からＲＮＡを単離した。各条件について採取物毎に２回の技術的反復をプールした。
【0343】
ＰＩＬＲＡ依存的なＩＬ１ＲＡサイトカイン分泌を評価するために、野生型ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ及びＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａをＤＩＶ７０で血清添加培地にプレーティングした。２４時間後に培地を交換して、血清を除去し、細胞に抗体（１００ｎＭ）を投与した。培地交換の７２時間後に上清を採取し、ｈｕｍａｎ ＩＬ１ＲＡ ＭＳＤで分析した。
【0344】
無血清培地におけるＩＬ１ＲＮの転写変化及びＩＬ１ＲＡサイトカイン分泌について、ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおけるＰＩＬＲＡ ＬｏＦは、野生型ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａと比較してＩＬ１ＲＮ遺伝子発現（図６Ａ）及びＩＬ１ＲＡサイトカイン分泌（図６Ｂ）を促進した。更に、抗ＰＩＬＲＡ抗体（１００ｎＭ、７２時間）は、無血清培地中の野生型ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおいてＩＬ１ＲＡサイトカイン分泌を刺激し、ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおいて観察された表現型を模倣した（図６Ｃ）。抗ＰＩＬＲＡ抗体は、ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおけるＩＬ１ＲＡ分泌を増加させなかった。
【0345】
ＬＰＳにより誘導されるＰＩＬＲＡ依存的な炎症誘発性サイトカイン分泌を評価するために、野生型ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ及びＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａをＤＩＶ５３で血清添加培地にプレーティングした。２４時間後に培地を交換して、血清を除去し、野生型細胞に抗体（１００ｎＭ）を投与した。７２時間後にＬＰＳ（１０ｎｇ／ｍｌ）を添加して、サイトカイン反応を刺激した。ＬＰＳ処理の２４時間後に上清を採取し、ｈｕｍａｎ ｐｒｏ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ（４－ｐｌｅｘ） ＭＳＤ及びｈｕｍａｎ ＩＰ－１０ ＭＳＤで分析した。
【0346】
ＬＰＳにより誘導される転写変化について、ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおけるＰＩＬＲＡ ＬｏＦは、野生型ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａと比較してＬＰＳにより誘導されるＴＮＦ、ＩＬ－６、及びＣＸＣＬ１０遺伝子発現を抑制した（図６Ｄ～６Ｆ）。ＬＰＳによって誘導されるサイトカイン分泌の変化について、ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおけるＰＩＬＲＡ ＬｏＦは、野生型ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａと比較してＬＰＳにより誘導されるＴＮＦα、ＩＬ－６、及びＩＰ－１０の分泌を抑制した（図６Ｇ～６Ｉ）。
【0347】
更に、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、野生型ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおけるＬＰＳにより誘導されるＩＰ－１０、ＴＮＦα、及びＩＬ－６サイトカイン分泌を減弱し、ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおいて観察された表現型を模倣することができた（図６Ｊ～６Ｏ）。
【0348】
更に、ホモ接合性Ｇ７８またはＲ７８ ＰＩＬＲＡを発現するｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ細胞も使用して、抗体の抗炎症効果を試験した。ＣＲＩＳＰＲによるＫＩ系統を作製して、ホモ接合性Ｇ７８Ｒ ＰＩＬＲＡ（ＡＤ防御的；Ｒ７８）及びＲ７８Ｇ ＰＩＬＲＡ（標準的ＡＤリスク；Ｇ７８）遺伝子バリアントに対する抗体の影響を決定した。ミクログリアをＤＩＶ５４で血清添加培地にプレーティングした。２４時間後に培地を交換して、血清を除去し、ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ細胞に抗体（１００ｎＭ）を投与した。７２時間後にＬＰＳ（１０ｎｇ／ｍｌ）を添加して、サイトカイン反応を刺激した。ＬＰＳ処理の２４時間後に上清を採取し、ｈｕｍａｎ ＩＰ－１０ ＭＳＤで分析した。データを平均値＋／－ＳＥＭとして示す。図６Ｐ及び６Ｑは、抗ＰＩＬＲＡ抗体（１００ｎＭ）が、無血清培地中のホモ接合性Ｇ７８（図６Ｐ）及びＲ７８（図６Ｑ）ＰＩＬＲＡを発現するＩＰＳＣ由来のｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおいて、ＬＰＳにより誘導されるＩＰ－１０サイトカイン分泌を減弱したことを示す。抗ＰＩＬＲＡ抗体は、いずれのＰＩＬＲＡアレル組み合わせ（Ｒ７８／Ｒ７８、Ｒ７８／Ｇ７８、またはＧ７８／Ｇ７８）を有するＩＰＳＣ由来のミクログリアでも抗炎症性表現型を促進した。このことは、内因性細胞表面レベルのｈＰＩＬＲＡ受容体を有するＣＮＳ関連細胞種におけるアンタゴニスト機能を実証した。
【0349】
この実施例は、抗ＰＩＬＲＡ抗体が野生型ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおいてＩＬ１ＲＡサイトカイン分泌を刺激し、ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおいて観察された表現型を模倣したことを実証する。更に、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、野生型ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ及び内在性ｈＰＩＬＲＡレベルを有するＩＰＳＣ由来のｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおけるＬＰＳにより誘導されるサイトカイン分泌を減弱した。全体として、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、抗炎症性表現型を促進した。
【0350】
実施例６．ミトコンドリア呼吸に対するＰＩＬＲＡの効果
ミクログリアにおける代謝機能障害は、神経変性疾患の病理学的特徴である。基礎的条件でのミトコンドリア呼吸に対するＰＩＬＲＡ依存的な効果を評価するために、野生型ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ、ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ、及びｈＰＩＬＲＡを発現するＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ（ＤＩＶ５１）を、Ｓｅａｈｏｒｓｅ ＸＦアッセイに適したコーティング済みの９６ウェルプレートに２０ｋ個／ウェルの密度でプレーティングした。プレーティングの７２時間後に血清添加培地（Ｃ＋＋＋）を基質制限培地（ＳＬＭ）と交換して、一晩の間、細胞の脂質代謝を刺激した。アッセイ当日、ミトコンドリア適応性及び能力の測定のために、Ｓｅａｈｏｒｓｅ長鎖脂肪酸酸化キットを製造者の使用説明書に従って実行し、オリゴマイシン（１．５μＭ）、ＦＣＣＰ（２μＭ）、及びロテノン／アンチマイシン（０．５μＭ）を逐次的に注入した。図７Ａ及び７Ｂに示すように、ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａは、最大呼吸及びミトコンドリア予備呼吸能の増加を示した。ｈＰＩＬＲＡを発現するＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ（ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ＋ＯＥ）におけるＰＩＬＲＡの再発現は、ミトコンドリア呼吸を野生型レベルに戻した。
ミクログリアにおける代謝機能障害は、神経変性疾患の病理学的特徴である。基礎的条件でのミトコンドリア呼吸に対するＰＩＬＲＡ依存的な効果を評価するために、野生型ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ、ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ、及びｈＰＩＬＲＡを発現するＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ（ＤＩＶ５１）を、Ｓｅａｈｏｒｓｅ ＸＦアッセイに適したコーティング済みの９６ウェルプレートに２０ｋ個／ウェルの密度でプレーティングした。プレーティングの７２時間後に血清添加培地（Ｃ＋＋＋）を基質制限培地（ＳＬＭ）と交換して、一晩の間、細胞の脂質代謝を刺激した。アッセイ当日、ミトコンドリア適応性及び能力の測定のために、Ｓｅａｈｏｒｓｅ長鎖脂肪酸酸化キットを製造者の使用説明書に従って実行し、オリゴマイシン（１．５μＭ）、ＦＣＣＰ（２μＭ）、及びロテノン／アンチマイシン（０．５μＭ）を逐次的に注入した。図７Ａ及び７Ｂに示すように、ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａは、最大呼吸及びミトコンドリア予備呼吸能の増加を示した。ｈＰＩＬＲＡを発現するＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ（ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ＋ＯＥ）におけるＰＩＬＲＡの再発現は、ミトコンドリア呼吸を野生型レベルに戻した。
【0351】
ミトコンドリア呼吸に対する抗ＰＩＬＲＡ ｍＡｂ依存的な効果を評価するために、野生型及びＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ細胞（ＤＩＶ６７）を、Ｓｅａｈｏｒｓｅ ＸＦアッセイに適したコーティング済みの９６ウェルプレートに２０ｋ個／ウェルの密度でプレーティングした。プレーティングの２４時間後に血清添加培地（Ｃ＋＋＋）を基質制限培地（ＳＬＭ）と交換して、細胞の脂質代謝を刺激した。基質制限の間、７２時間の処理期間で１００ｎＭの抗ＰＩＬＲＡ抗体を投与した。アッセイ当日、ミトコンドリア適応性及び能力の測定のために、Ｓｅａｈｏｒｓｅ長鎖脂肪酸酸化キットを製造者の使用説明書に従って実行し、エトモキシル（４μＭ）、オリゴマイシン（１．５μＭ）、ＦＣＣＰ（２μＭ）、及びロテノン／アンチマイシン（０．５μＭ）を逐次的に注入した。抗ＰＩＬＲＡ抗体（１００ｎＭ）は、野生型ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおける最大呼吸（図７Ｃ及び図７Ｅ）及びミトコンドリア予備呼吸能（図７Ｄ及び図７Ｆ）をアイソタイプ対照と比較して増加させた。抗体のＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａに対する更なる影響はなかった。このことは抗体特異性を示す。抗体処理及び遺伝子型の効果は、カルニチンパルミトイルトランスフェラーゼ１（ＣＰＴ１）の阻害により軽減された。このことは、脂肪酸酸化がミトコンドリア機能改善の大きな促進要因であることを示唆する。
【0352】
Ａβ１－４２フィブリルにより誘導される非ミトコンドリア酸素消費速度の減少に対するＰＩＬＲＡ ＬｏＦの効果を評価するために、野生型ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ及びＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ（ＤＩＶ６７）を、Ｓｅａｈｏｒｓｅ ＸＦアッセイに適したコーティング済みの９６ウェルプレートに２０ｋ個／ウェルの密度でプレーティングした。血清添加培地（Ｃ＋＋＋）を、Ａβ１－４２フィブリル（１００ｎＭ）を含有するグルタミン非含有ＤＭＥＭ ＸＦアッセイ培地と交換した。一晩の細胞処理前に、フィブリルの音波処理を１０分間実行した。アッセイ当日、ミトコンドリア適応性及び能力の測定のために、Ｓｅａｈｏｒｓｅミトストレスキットを製造者の使用説明書に従って実行し、オリゴマイシン（１．５μＭ）、ＦＣＣＰ（１μＭ）、及びロテノン／アンチマイシン（０．５μＭ）を逐次的に注入した。抗ＰＩＬＲＡ ｍＡｂの効果を評価するために、野生型ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ及びＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ（ＤＩＶ８０）を２０ｋ個／ウェルの密度でプレーティングした。抗ＰＩＬＲＡ抗体をプレーティングの２４時間後に１００ｎＭで投与し、グルタミン非含有ＤＭＥＭ ＸＦ培地への交換時に補充した。図７Ｇ及び７Ｈに示すように、野生型ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおけるＡβ１－４２フィブリルにより誘導される非ミトコンドリア酸素消費速度の減少（図７Ｇの灰色の棒）は、抗ＰＩＬＲＡ抗体によりレスキューすることができる（図７Ｈの縞模様の灰色の棒）。
【0353】
ミトコンドリアのＡＴＰ産生速度に対するＰＩＬＲＡ依存的な効果を評価するために、野生型ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ、ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ、及びｈＰＩＬＲＡを発現するＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ（ＤＩＶ６１）を、Ｓｅａｈｏｒｓｅ ＸＦアッセイに適したコーティング済みの９６ウェルプレートに２０ｋ個／ウェルの密度でプレーティングした。細胞を血清添加培地で７２時間インキュベートし、その後、Ｓｅａｈｏｒｓｅ ＡＴＰ産生速度キットを製造者の使用説明書に従ってＤＭＥＭ ＸＦアッセイ培地で実行した。ＡＴＰ産生速度の測定のために、オリゴマイシン（１．５μＭ）及びロテノン／アンチマイシン（０．５μＭ）の逐次的注入を適用した（図７Ｉ）。抗ＰＩＬＲＡ ｍＡｂの効果を評価するために、野生型ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ（ＤＩＶ４０）を２０ｋ個／ウェルの密度でプレーティングした。抗ＰＩＬＲＡ抗体をプレーティングの２４時間後に１００ｎＭで投与し、ＤＭＥＭ ＸＦ培地への交換時に補充した。ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａは、より高いミトコンドリアＯＸＰＨＯＳ活性と共にＡＴＰ産生の増加を示した（図７Ｉ）。抗ＰＩＬＲＡ抗体は、野生型ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおいてＰＩＬＲＡ ＬｏＦを再現し、ＡＴＰ生成速度を増加させた（図７Ｊ）。
【0354】
全体として、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、最大呼吸能、予備の蓄え、及びＡＴＰ産生速度が含まれる、野生型ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおけるミトコンドリア活性を増強した。抗ＰＩＬＲＡ抗体は、野生型ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおける脂肪酸酸化も増強し、ＰＩＬＲＡ ＬｏＦ ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａにおいて観察された表現型を模倣した。このことは、疾患において蓄積する脂質基質を代謝させる潜在的により高い能力を示唆する。更に、非ミトコンドリア呼吸もＰＩＬＲＡ ＬｏＦ及び抗ＰＩＬＲＡ抗体により増強された。非ミトコンドリア呼吸は、主にＮＯＸ２によるスーパーオキシド産生によるものであり、制御されないままだと、脂質及びタンパク質酸化などの有害な影響を及ぼし得る。
【0355】
実施例７．末梢免疫細胞に対するＰＩＬＲＡの効果
ヒトＰＩＬＲＡは、好中球及び単球で発現する。これらの末梢免疫細胞への抗ＰＩＬＲＡ抗体の結合は、治療学的同等性の末梢評価を可能にする。抗ＰＩＬＲＡ ｍＡｂの結合を評価するために、ヒト白血球を赤血球の低張圧による溶解によりヘパリン化全血から濃縮し、０．５％のＢＳＡ及び２ｍＭのＥＤＴＡを含有する冷ＰＢＳ中に再懸濁した。Ｆｃ受容体をＨｕｍａｎ ＴｒｕＳｔａｉｎ ＦｃＸで遮断した。次いで、細胞をＣＤ３、ＣＤ１４、ＣＤ１９、ＣＤ４５、ＣＤ６６ｂ、及びＰＩＬＲＡに対する蛍光抗体で標識した。蛍光強度をフローサイトメトリーにより定量化した。抗ＰＩＬＲＡ抗体は、エクスビボで単球（図８Ａ）及び好中球（図８Ｂ）に結合することができた。Ｂ細胞及びＴ細胞（図８Ｃ及び８Ｄ）には結合しなかった。
ヒトＰＩＬＲＡは、好中球及び単球で発現する。これらの末梢免疫細胞への抗ＰＩＬＲＡ抗体の結合は、治療学的同等性の末梢評価を可能にする。抗ＰＩＬＲＡ ｍＡｂの結合を評価するために、ヒト白血球を赤血球の低張圧による溶解によりヘパリン化全血から濃縮し、０．５％のＢＳＡ及び２ｍＭのＥＤＴＡを含有する冷ＰＢＳ中に再懸濁した。Ｆｃ受容体をＨｕｍａｎ ＴｒｕＳｔａｉｎ ＦｃＸで遮断した。次いで、細胞をＣＤ３、ＣＤ１４、ＣＤ１９、ＣＤ４５、ＣＤ６６ｂ、及びＰＩＬＲＡに対する蛍光抗体で標識した。蛍光強度をフローサイトメトリーにより定量化した。抗ＰＩＬＲＡ抗体は、エクスビボで単球（図８Ａ）及び好中球（図８Ｂ）に結合することができた。Ｂ細胞及びＴ細胞（図８Ｃ及び８Ｄ）には結合しなかった。
【0356】
抗ＰＩＬＲＡ ｍＡｂが好中球及び単球を活性化するかどうかを評価するために、ヒト白血球を赤血球の低張圧による溶解によりヘパリン化全血から濃縮し、ＲＰＭＩ１６４０細胞培養完全培地中に再懸濁した。細胞を水相及び固相の両方の１００ｎＭの抗体または１０ｎｇ／ｍＬのＬＰＳで２４時間処理した。次いで、それらを洗浄し、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１４、ＣＤ２５、ＣＤ６６ｂ、及びＨＬＡ－ＤＲに対する蛍光抗体で標識した。蛍光強度をフローサイトメトリーにより定量化した。抗ＰＩＬＲＡ抗体は、エクスビボでヒト好中球及び単球を活性化しなかった。抗ＰＩＬＲＡ抗体で処理された細胞は、ＣＤ２５（図８Ｅ）またはＨＬＡ－ＤＲ（図８Ｆ及び８Ｇ）の上昇を示さなかった。ＣＤ２５及びＨＬＡ－ＤＲの発現は、陽性対照（すなわち、ＬＰＳ処理及び抗ＣＤ３抗体処理）及び陰性対照（すなわち、アイソタイプ対照処理及びＰＢＳ処理）と比較した。
【0357】
抗ＰＩＬＲＡ ｍＡｂがエクスビボでヒト白血球を活性化するかどうかを評価するために、ヒト白血球を赤血球の低張圧による溶解によりヘパリン化全血から濃縮し、ＲＰＭＩ１６４０細胞培養完全培地中に再懸濁した。細胞を水相及び固相の両方の１００ｎＭの抗体または１０ｎｇ／ｍＬのＬＰＳで２４時間処理した。１０００ｇで２０分間遠心分離した後に上清を回収し、８０℃で保存した。可溶タンパク質をＭＳＤ Ｈｕｍａｎ Ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｐａｎｅｌ Ｉ ｋｉｔを使用して定量化した。図８Ｈ及び８Ｉに示すように、エクスビボでヒト白血球は、水相（図８Ｈ）または固相（図８Ｉ）の１００ｎＭの抗ＰＩＬＲＡ抗体による２４時間の処理後に炎症性サイトカイン産生を増加させなかった。
【0358】
全体として、重要な細胞表面マーカー及び炎症誘発性サイトカイン分泌の欠如に基づいて、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、エクスビボで骨髄性細胞活性化に対するなんらの大きな影響も及ぼさなかった。
【0359】
実施例８．抗ＰＩＬＲＡ抗体のエピトープビン
本明細書に記載される抗ＰＩＬＲＡ抗体及び４つの抗ＰＩＬＲＡ参照抗体のＰＩＬＲＡ結合エピトープを、Ｂｉａｃｏｒｅ ８Ｋ機器を使用したＳＰＲにより同定した。マウス抗ヒトＦａｂ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅのｈｕｍａｎ Ｆａｂ ｃａｐｔｕｒｅ ｋｉｔ）を固定化したＢｉａｃｏｒｅ（商標）Ｓｅｒｉｅｓ Ｓ ＣＭ５センサーチップ上に抗ＰＩＬＲＡ抗体を捕捉し、続いて、ＰＩＬＲＡからＰＩＬＲＢへの様々な変異体バリアント（ｈＰＩＬＲＡ Ｍ１～ｈＰＩＬＲＡ Ｍ１１（配列番号１０９～１１９））を１μＭの濃度で注入した。図９Ａは、抗ＰＩＬＲＡ抗体のｈＰＩＬＲＡエピトープを示す分子構造である。ＰＩＬＲＡ結合エピトープは、ＰＩＬＲＡからＰＩＬＲＢへの特定の変異に対する抗体結合の欠如により同定した（図９Ｂ）。図９Ｂに示すように、参照抗体＃１～＃４は、エピトープビン＃３（ｈＰＩＬＲＡのアミノ酸１１６～１１８）に結合することが確認された。参照抗体＃１～＃４の各々の重鎖及び軽鎖配列を配列番号１２８～１３５に示す。各軽鎖及び重鎖配列において、ＣＤＲ１～３の配列は太字であり、ＶＬ及びＶＨの配列は下線が引かれている。本明細書に記載される抗ＰＩＬＲＡ抗体のうち、クローン１０のみがエピトープビン＃３に結合する一方で、残りの抗体は全て参照抗体＃１～＃４と異なるエピトープに結合する。
本明細書に記載される抗ＰＩＬＲＡ抗体及び４つの抗ＰＩＬＲＡ参照抗体のＰＩＬＲＡ結合エピトープを、Ｂｉａｃｏｒｅ ８Ｋ機器を使用したＳＰＲにより同定した。マウス抗ヒトＦａｂ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅのｈｕｍａｎ Ｆａｂ ｃａｐｔｕｒｅ ｋｉｔ）を固定化したＢｉａｃｏｒｅ（商標）Ｓｅｒｉｅｓ Ｓ ＣＭ５センサーチップ上に抗ＰＩＬＲＡ抗体を捕捉し、続いて、ＰＩＬＲＡからＰＩＬＲＢへの様々な変異体バリアント（ｈＰＩＬＲＡ Ｍ１～ｈＰＩＬＲＡ Ｍ１１（配列番号１０９～１１９））を１μＭの濃度で注入した。図９Ａは、抗ＰＩＬＲＡ抗体のｈＰＩＬＲＡエピトープを示す分子構造である。ＰＩＬＲＡ結合エピトープは、ＰＩＬＲＡからＰＩＬＲＢへの特定の変異に対する抗体結合の欠如により同定した（図９Ｂ）。図９Ｂに示すように、参照抗体＃１～＃４は、エピトープビン＃３（ｈＰＩＬＲＡのアミノ酸１１６～１１８）に結合することが確認された。参照抗体＃１～＃４の各々の重鎖及び軽鎖配列を配列番号１２８～１３５に示す。各軽鎖及び重鎖配列において、ＣＤＲ１～３の配列は太字であり、ＶＬ及びＶＨの配列は下線が引かれている。本明細書に記載される抗ＰＩＬＲＡ抗体のうち、クローン１０のみがエピトープビン＃３に結合する一方で、残りの抗体は全て参照抗体＃１～＃４と異なるエピトープに結合する。
【0360】
本発明者らは、抗ＰＩＬＲＡ抗体の異なる結合エピトープを同定することができた。この結果は、本発明者らの抗体により包含されるエピトープの多様性も実証した。
【0361】
実施例９．参照抗ＰＩＬＲＡ抗体の評価
４つの抗ＰＩＬＲＡ参照抗体のｈＰＩＬＲＡ、ｈＰＩＬＲＢ、及びｃｙｎｏＰＩＬＲＡに対する結合親和性を、Ｂｉａｃｏｒｅ ８Ｋの機器を使用したＳＰＲにより測定した（実施例２に記載されている）。４つの参照抗体の結合のＥＣ５０値もｈＰＩＬＲＡ Ｇ７８を発現するＨＥＫ２９３細胞で測定した。
４つの抗ＰＩＬＲＡ参照抗体のｈＰＩＬＲＡ、ｈＰＩＬＲＢ、及びｃｙｎｏＰＩＬＲＡに対する結合親和性を、Ｂｉａｃｏｒｅ ８Ｋの機器を使用したＳＰＲにより測定した（実施例２に記載されている）。４つの参照抗体の結合のＥＣ５０値もｈＰＩＬＲＡ Ｇ７８を発現するＨＥＫ２９３細胞で測定した。
【0362】
【表6】
【0363】
下記の表６及び図１１の両方により示されるように、参照抗体＃１～＃４はｃｙｎｏＰＩＬＲＡに結合せず、従って、ｈＰＩＬＲＡとｃｙｎｏＰＩＬＲＡとの間の交差反応性を欠いていた。
【0364】
実施例１０．ヒト化抗ＰＩＬＲＡ抗体及びその特徴付け
例示的な抗ＰＩＬＲＡ抗体をヒト化した。ヒト化抗体のｈＰＩＬＲＡ ＥＣＤに対する結合親和性の特徴を、Ｂｉａｃｏｒｅ ８Ｋ機器を使用したＳＰＲにより評価した（表７）。表７に列挙する抗体の各々は、抗体のＦｃドメインを形成する２つの野生型Ｆｃポリペプチド（例えば、配列番号９４）を含む。
例示的な抗ＰＩＬＲＡ抗体をヒト化した。ヒト化抗体のｈＰＩＬＲＡ ＥＣＤに対する結合親和性の特徴を、Ｂｉａｃｏｒｅ ８Ｋ機器を使用したＳＰＲにより評価した（表７）。表７に列挙する抗体の各々は、抗体のＦｃドメインを形成する２つの野生型Ｆｃポリペプチド（例えば、配列番号９４）を含む。
【0365】
【表7】
【0366】
更に、ヒト化抗体クローン３６～３９を作製した。これらのクローンのｈＰＩＬＲＡ Ｇ７８、ｈＰＩＬＲＡ Ｒ７８、ｈＰＩＬＲＢ、及びｃｙｎｏＰＩＬＲＡに対する結合親和性をＳＰＲにより測定した（表８）。
【0367】
【表8】
【0368】
更に、改変されたＦｃポリペプチドを有するヒト化抗体の結合のＥＣ５０値を、ｈＰＩＬＲＡ Ｇ７８またはｈＰＩＬＲＡ Ｒ７８を発現するＨＥＫ２９３細胞で測定した（表９）。加えて、ホスホ－ｐＳＴＡＴ３ Ｙ７０５を誘導するＥＣ５０値も測定した。
【0369】
【表9】
【0370】
以下の表１０は、選択されたヒト化抗ＰＩＬＲＡ抗体のｈＰＩＬＲＡ Ｇ７８、ｈＰＩＬＲＡ Ｒ７８、ｈＰＩＬＲＢ、及びｃｙｎｏＰＩＬＲＡに対する結合親和性、ｈＰＩＬＲＡ Ｇ７８を発現するＨＥＫ２９３細胞で測定された結合のＥＣ５０値、ならびにｈＰＩＬＲＡの抗体結合エピトープを更に示す。
【0371】
【表10】
【0372】
本発明者らは、ｈＰＩＬＲＡ（Ｇ７８バリアント及びＲ７８バリアントの両方）及びｃｙｎｏＰＩＬＲＡに対する強い結合親和性、ならびにｈＰＩＬＲＢに対する非常により弱い結合性を保持するヒト化抗ＰＩＬＲＡ抗体の作製に成功した。
【0373】
実施例１１．細胞へのヒト化抗ＰＩＬＲＡ抗体の結合
ＰＩＬＲＡ Ｇ７８またはＲ７８を過剰発現するＨＥＫ２９３細胞を、ＮｕｃＢｌｕｅ Ｌｉｖｅ細胞染色剤を用いて室温で３０分間染色した。親ＨＥＫ２９３細胞及びＨＥＫ ｈＰＩＬＲＡ Ｇ７８細胞を混合し、洗浄し、ＦＡＣＳ希釈液（ＰＢＳ、２％のＦＢＳ、１ｍＭのＥＤＴＡ）を使用して様々な濃度の抗ＰＩＬＲＡ抗体またはアイソタイプ対照抗体と共に２９０ｒｐｍで４℃にて３０分間インキュベートした。細胞をＦＡＣＳ希釈液で２回洗浄し、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７コンジュゲート抗ヒトＩｇＧと共に２９０ｒｐｍで４℃にて３０分間インキュベートした。細胞への抗体結合をＢＤ ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ ＩＩにより検出し、ＦＬＯＪＯ及びＰＲＩＳＭソフトウェアにより結果を解析した後に蛍光強度中央値（ＭＦＩ）を導き出した。内部変動性を考慮して、合計Ｎ＝３の細胞株を二重反復で分析した。ｈＰＩＬＲＡ Ｇ７８を発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞に対して同じプロトコールを使用した。図１Ｄ及び１Ｅは、抗ＰＩＬＲＡ抗体がＨＥＫ２９３細胞を発現するＰＩＬＲＡ Ｇ７８に結合したが、親細胞には結合しなかったことを示す。抗体は、ＰＩＬＲＡ Ｇ７８を発現するＨＥＫ２９３細胞に対する以下のＥＣ５０値を有する：クローン６：９．３ｎＭ；クローン７：１２．９５ｎＭ；クローン１２：１２．０４ｎＭ；クローン１５：１１．２ｎＭ；クローン２３：２１．４ｎＭ；及びクローン３５：１２．８ｎＭ。更に図１Ｆは、ヒト化抗体がＰＩＬＲＡ Ｒ７８を発現するＨＥＫ２９３細胞にも結合したことを示す。抗体は、ＰＩＬＲＡ Ｒ７８を発現するＨＥＫ２９３細胞に対する以下のＥＣ５０値を有する：クローン２：５．１ｎＭ；クローン６：２ｎＭ；クローン７：２．５ｎＭ；クローン１２：２．７ｎＭ；クローン１５：２．７ｎＭ；クローン２３：３．７ｎＭ；及びクローン３５：３．１ｎＭ。更に図１Ｈ及び１Ｉは、抗ＰＩＬＲＡ抗体がＰＩＬＲＡ Ｇ７８を発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞に結合したが、親細胞には結合しなかったことを示す。抗体は、ＰＩＬＲＡ Ｇ７８を発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞に対する以下のＥＣ５０値を有する：クローン６：７．６ｎＭ；クローン７：１０ｎＭ；クローン１２：１０．８ｎＭ；クローン１５：９ｎＭ；クローン２３：１８．２ｎＭ；及びクローン３５。
ＰＩＬＲＡ Ｇ７８またはＲ７８を過剰発現するＨＥＫ２９３細胞を、ＮｕｃＢｌｕｅ Ｌｉｖｅ細胞染色剤を用いて室温で３０分間染色した。親ＨＥＫ２９３細胞及びＨＥＫ ｈＰＩＬＲＡ Ｇ７８細胞を混合し、洗浄し、ＦＡＣＳ希釈液（ＰＢＳ、２％のＦＢＳ、１ｍＭのＥＤＴＡ）を使用して様々な濃度の抗ＰＩＬＲＡ抗体またはアイソタイプ対照抗体と共に２９０ｒｐｍで４℃にて３０分間インキュベートした。細胞をＦＡＣＳ希釈液で２回洗浄し、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７コンジュゲート抗ヒトＩｇＧと共に２９０ｒｐｍで４℃にて３０分間インキュベートした。細胞への抗体結合をＢＤ ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ ＩＩにより検出し、ＦＬＯＪＯ及びＰＲＩＳＭソフトウェアにより結果を解析した後に蛍光強度中央値（ＭＦＩ）を導き出した。内部変動性を考慮して、合計Ｎ＝３の細胞株を二重反復で分析した。ｈＰＩＬＲＡ Ｇ７８を発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞に対して同じプロトコールを使用した。図１Ｄ及び１Ｅは、抗ＰＩＬＲＡ抗体がＨＥＫ２９３細胞を発現するＰＩＬＲＡ Ｇ７８に結合したが、親細胞には結合しなかったことを示す。抗体は、ＰＩＬＲＡ Ｇ７８を発現するＨＥＫ２９３細胞に対する以下のＥＣ５０値を有する：クローン６：９．３ｎＭ；クローン７：１２．９５ｎＭ；クローン１２：１２．０４ｎＭ；クローン１５：１１．２ｎＭ；クローン２３：２１．４ｎＭ；及びクローン３５：１２．８ｎＭ。更に図１Ｆは、ヒト化抗体がＰＩＬＲＡ Ｒ７８を発現するＨＥＫ２９３細胞にも結合したことを示す。抗体は、ＰＩＬＲＡ Ｒ７８を発現するＨＥＫ２９３細胞に対する以下のＥＣ５０値を有する：クローン２：５．１ｎＭ；クローン６：２ｎＭ；クローン７：２．５ｎＭ；クローン１２：２．７ｎＭ；クローン１５：２．７ｎＭ；クローン２３：３．７ｎＭ；及びクローン３５：３．１ｎＭ。更に図１Ｈ及び１Ｉは、抗ＰＩＬＲＡ抗体がＰＩＬＲＡ Ｇ７８を発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞に結合したが、親細胞には結合しなかったことを示す。抗体は、ＰＩＬＲＡ Ｇ７８を発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞に対する以下のＥＣ５０値を有する：クローン６：７．６ｎＭ；クローン７：１０ｎＭ；クローン１２：１０．８ｎＭ；クローン１５：９ｎＭ；クローン２３：１８．２ｎＭ；及びクローン３５。
【0374】
ｉＭｉｃｒｏｇｌｉａへの結合についても抗体を試験した。ＣＲＩＳＰＲによるノックイン系統を作製して、ホモ接合性Ｇ７８Ｒ ＰＩＬＲＡ（ＡＤ防御的；Ｒ７８）またはＲ７８Ｇ ＰＩＬＲＡ（標準的ＡＤリスク；Ｇ７８）遺伝子バリアントを有する細胞への抗体結合を測定した。ＰＩＬＲＡ Ｇ７８またはＰＩＬＲＡ Ｒ７８についてヘテロ接合性であるヒトｉＭｉｃｒｏｇｌｉａに１００ｎＭのビオチン化したＰＩＬＲＡ抗体またはアイソタイプ対照抗体を氷上で４５分間投与した。細胞をＰＢＳで洗浄し、続いて、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８コンジュゲートストレプトアビジンと共に氷上で３０分間インキュベートした。細胞をＰＢＳで数回洗浄後、共焦点顕微鏡を使用して撮像した。Ｈａｒｍｏｎｙ Ｓｏｆｔｗａｒｅを使用して、細胞毎の平均蛍光スポット面積を算出した。データをＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８コンジュゲートストレプトアビジンのみで処理された対照ウェルにおけるバックグラウンドシグナルに対する倍率表示（平均値＋／－ＳＤ）として示す。図１Ｌ及び１Ｍに示すように、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、ＰＩＬＲＡ Ｇ７８（図１Ｌ）またはＰＩＬＲＡ Ｒ７８（図１Ｍ）についてホモ接合性であるヒトＩＰＳＣ由来のｉＭｉｃｒｏｇｌｉａに結合した。Ｇ７８エピトープに結合するクローン２は、ＰＩＬＲＡ Ｒ７８を発現するｉＭｉｃｒｏｇｌｉａへの特異的結合を示さなかった。ＡＤ防御的なＰＩＬＲＡ Ｒ７８バリアントは、低減されたリガンド結合能力を有し、クローン２に対してより低い親和性を有する。このＡＤ防御的なバリアントの頻度は世界中で異なる。このバリアントは、アフリカ人集団（１０％）及びヨーロッパ人集団（３８％）ではマイナーアレルであるが、東アジア人集団（６５％）ではメジャーアレルである。このエピトープに結合する抗ＰＩＬＲＡ抗体は、大部分の人において親和性の消失に関連し得る。従って、本発明者らは、両方のバリアントに結合する抗体の開発を試みた。
【0375】
防御的なＰＩＬＲＡ Ｒ７８についてホモ接合性のｉＭｉｃｒｏｇｌｉａへの、またはＨＥＫ２９３上に発現されたヒトＰＩＬＲＡ Ｒ７８への抗ＰＩＬＲＡ抗体の結合は、細胞表面標的への結合を実証した。抗ＰＩＬＲＡ抗体がいずれのＰＩＬＲＡアレル組み合わせ（Ｒ７８／Ｒ７８、Ｒ７８／Ｇ７８、またはＧ７８／Ｇ７８）を有するヒトＩＰＳＣ由来のＭｉｃｒｏｇｌｉａにも結合することは、内在性細胞表面レベルのｈＰＩＬＲＡ受容体を有するＣＮＳ関連細胞種に結合することを実証した。この結果により、抗体がヒトにおいてアレルに関係なくＰＩＬＲＡに高親和性結合することが予測される。
【0376】
抗体は、ｃｙｎｏＰＩＬＲＡへの結合も示したが、ｈＰＩＬＲＢへの結合は示さなかった。これは望ましいことである。ＣＨＯ－Ｋ１細胞及びｃｙｎｏＰＩＬＲＡを発現するＣＨＯ細胞を、ＮｕｃＢｌｕｅ Ｌｉｖｅ細胞染色剤を用いて室温で３０分間染色した。細胞を混合し、洗浄し、ＦＡＣＳ希釈液（ＰＢＳ、２％のＦＢＳ、１ｍＭのＥＤＴＡ）を使用して様々な濃度のＰＩＬＲＡ抗体またはアイソタイプ対照抗体と共に２９０ｒｐｍで４℃にて３０分間インキュベートした。細胞をＦＡＣＳ希釈液で２回洗浄し、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７コンジュゲート抗ヒトＩｇＧと共に２９０ｒｐｍで４℃にて３０分間インキュベートした。細胞への抗体結合をＢＤ ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ ＩＩにより検出し、ＦＬＯＪＯ及びＰＲＩＳＭソフトウェアにより結果を解析した後に蛍光強度中央値（ＭＦＩ）を導き出した。内部変動性を考慮して、合計Ｎ＝３（Ｂ）またはＮ＝１（Ｃ）の細胞株を二重反復で分析した。図２Ｂ及び２Ｃは、抗ＰＩＬＲＡ抗体がｃｙｎｏＰＩＬＲＡを発現するＣＨＯ細胞に結合し（図２Ｂ）、ｈＰＩＬＲＢを発現するＣＨＯ細胞には結合しなかった（図２Ｃ）ことを示す。
【0377】
更に、この抗体はｈＰＩＬＲＢに結合しないことが示された。ヒトＰＩＬＲＢ－ＤＡＰ１２ ＯＥ ＨＥＫ２９３細胞を、ＮｕｃＢｌｕｅ Ｌｉｖｅ細胞染色剤を用いて室温で３０分間染色した。細胞を混合し、洗浄し、ＦＡＣＳ希釈液（ＰＢＳ、２％のＦＢＳ、１ｍＭのＥＤＴＡ）を使用して様々な濃度のＰＩＬＲＡ抗体、アイソタイプ対照抗体、またはＰＩＬＲＢ結合性陽性対照抗体（ＨＣ：配列番号１５６；及びＬＣ：配列番号１５７；ｈＰＩＬＲＢ－ＤＡＰ１２ ＯＥ ＨＥＫ２９３細胞でのＥＣ５０は１．２ｎＭである）と共に２９０ｒｐｍで４℃にて３０分間インキュベートした。細胞をＦＡＣＳ希釈液で２回洗浄し、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７コンジュゲート抗ヒトＩｇＧと共に２９０ｒｐｍで４℃にて３０分間インキュベートした。細胞への抗体結合をＢＤ ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ ＩＩにより検出し、ＦＬＯＪＯ及びＰＲＩＳＭソフトウェアにより結果を解析した後に蛍光強度中央値（ＭＦＩ）を導き出した。内部変動性を考慮して、合計Ｎ＝３の細胞株を二重反復で分析した。図２Ｄは、抗ＰＩＬＲＡ抗体がｈＰＩＬＲＢ－ＤＡＰ１２を発現するＨＥＫ２９３細胞に結合しなかったことを示す。
【0378】
この実施例は、ヒト化抗ＰＩＬＲＡ抗体が、望ましい選択的な結合プロファイルを維持しており、様々な細胞種、例えば、ＰＩＬＲＡ Ｇ７８またはＲ７８を発現するＨＥＫ２９３細胞、ｈＰＩＬＲＡ Ｇ７８またはｃｙｎｏＰＩＬＲＡを発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞、及びＰＩＬＲＡ Ｇ７８またはＲ７８を発現するヒトＩＰＳＣ由来のｉＭｉｃｒｏｇｌｉａ上のｈＰＩＬＲＡ及びｃｙｎｏＰＩＬＲＡに対して強く結合し、ｈＰＩＬＲＢに対して非常に弱く結合したことを更に実証した。
【0379】
実施例１２．参照抗体との比較
本発明者らは、抗体をＰＩＬＲＡ参照抗体と比較して、ｈＰＩＬＲＡ、ｈＰＩＬＲＢ、及びｃｙｎｏＰＩＬＲＡに対する結合プロファイルを決定することを試みた。このために、ＣＨＯ－Ｋ１、ＣＨＯ－ｈＰＩＬＲＡ、ＣＨＯ－ｈＰＩＬＲＢ、またはＣＨＯ－ｃｙＰＩＬＲＡ細胞を１００ｎＭの単一濃度の抗ＰＩＬＲＡ抗体またはアイソタイプ対照抗体と共に氷上で３０分間インキュベートした。細胞をＦＡＣＳ希釈液で２回洗浄し、次いで、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７コンジュゲート抗ヒトＩｇＧと共に氷上で３０分間インキュベートし、ＦＡＣＳ希釈液で１回洗浄した。細胞への抗体の結合をＦＡＣＳにより検出し、ＦＬＯＪＯソフトウェアで実行したデータ解析により蛍光強度（ＭＦＩ）中央値を導き出した。データをバックグラウンド（アイソタイプ対照）に対するシグナル倍率として示す。平均値＋／－ＳＤ（ｎ＝２の技術的反復）。
本発明者らは、抗体をＰＩＬＲＡ参照抗体と比較して、ｈＰＩＬＲＡ、ｈＰＩＬＲＢ、及びｃｙｎｏＰＩＬＲＡに対する結合プロファイルを決定することを試みた。このために、ＣＨＯ－Ｋ１、ＣＨＯ－ｈＰＩＬＲＡ、ＣＨＯ－ｈＰＩＬＲＢ、またはＣＨＯ－ｃｙＰＩＬＲＡ細胞を１００ｎＭの単一濃度の抗ＰＩＬＲＡ抗体またはアイソタイプ対照抗体と共に氷上で３０分間インキュベートした。細胞をＦＡＣＳ希釈液で２回洗浄し、次いで、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７コンジュゲート抗ヒトＩｇＧと共に氷上で３０分間インキュベートし、ＦＡＣＳ希釈液で１回洗浄した。細胞への抗体の結合をＦＡＣＳにより検出し、ＦＬＯＪＯソフトウェアで実行したデータ解析により蛍光強度（ＭＦＩ）中央値を導き出した。データをバックグラウンド（アイソタイプ対照）に対するシグナル倍率として示す。平均値＋／－ＳＤ（ｎ＝２の技術的反復）。
【0380】
図２Ｅ及び２Ｆは、参照抗体がｈＰＩＬＲＡを発現するＣＨＯ細胞に結合したが、決定的に、ｃｙｎｏＰＩＬＲＡを発現するＣＨＯ細胞には結合しなかったことを示す。対照的に本発明者らの抗体は、ｈＰＩＬＲＡ及びｃｙｎｏＰＩＬＲＡの両方に結合し、ｈＰＩＬＲＢには結合しなかった。
【0381】
実施例１３．ＰＩＬＲＡ Ｇ７８またはＲ７８ ＨＥＫ細胞のシアリダーゼ処理
ＰＩＬＲＡ ７８ＧまたはＰＩＬＲＡ ７８Ｒを発現するＨＥＫ２９３細胞をＳｉａｌＥＸＯ（Ｇｅｎｏｖｉｓ）で処理した。ＳｉａｌＥＸＯは、天然糖タンパク質上のシアル酸の除去に使用され、Ｏ結合型及びＮ結合型グリカンに作用する。これは、α２－３、α２－６、及びα２－８結合に作用する２種のシアリダーゼの組み合わせである。細胞を４００ｎＭのシアリダーゼと共に無血清ＤＭＥＭ中で３７℃にて１時間インキュベートして、天然糖タンパク質（すなわち、ＰＩＬＲＡリガンド）上のシアル酸を除去した。次いで、細胞を２回洗浄し、ＮｕｃＢｌｕｅ Ｌｉｖｅ染色剤と共に室温で３０分間インキュベートし、染色した。親ＨＥＫ２９３細胞及びＨＥＫヒトＰＩＬＲＡ ７８Ｇ（または７８Ｒ）細胞を混合し、洗浄し、様々な濃度の抗ＰＩＬＲＡ抗体またはアイソタイプ対照抗体と共に３０分間インキュベートした。細胞をＦＡＣＳ希釈液（２％のＦＢＳ及び１ｍＭのＥＤＴＡを含有するＰＢＳ）で２回洗浄し、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７コンジュゲート抗ヒトＩｇＧと共に２９０ｒｐｍで４℃にて３０分間インキュベートした。細胞への抗体結合をＢＤ ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ ＩＩにより検出し、ＦＬＯＪＯ及びＰＲＩＳＭソフトウェアにより結果を解析した後に蛍光強度中央値（ＭＦＩ）を導き出した。抗体は、シアリダーゼ処理なしではＨＥＫ２９３ ＰＩＬＲＡ Ｇ７８細胞に対する以下のＥＣ５０値を有する：クローン５：１７ｎＭ；クローン６：１３ｎＭ；クローン７；９．５ｎＭ；及びクローン１：６．８ｎＭ。抗体は、シアリダーゼ処理ありではＨＥＫ２９３ ＰＩＬＲＡ Ｇ７８細胞に対する以下のＥＣ５０値を有する：クローン５：９．８ｎＭ；クローン６：４．８ｎＭ；クローン７：３．２ｎＭ；及びクローン１：１．８ｎＭ。図３Ｃ～３Ｆは、ＰＩＬＲＡ Ｇ７８ ＨＥＫ細胞のシアリダーゼ処理が抗ＰＩＬＲＡ抗体の結合を増強したことを示す。
ＰＩＬＲＡ ７８ＧまたはＰＩＬＲＡ ７８Ｒを発現するＨＥＫ２９３細胞をＳｉａｌＥＸＯ（Ｇｅｎｏｖｉｓ）で処理した。ＳｉａｌＥＸＯは、天然糖タンパク質上のシアル酸の除去に使用され、Ｏ結合型及びＮ結合型グリカンに作用する。これは、α２－３、α２－６、及びα２－８結合に作用する２種のシアリダーゼの組み合わせである。細胞を４００ｎＭのシアリダーゼと共に無血清ＤＭＥＭ中で３７℃にて１時間インキュベートして、天然糖タンパク質（すなわち、ＰＩＬＲＡリガンド）上のシアル酸を除去した。次いで、細胞を２回洗浄し、ＮｕｃＢｌｕｅ Ｌｉｖｅ染色剤と共に室温で３０分間インキュベートし、染色した。親ＨＥＫ２９３細胞及びＨＥＫヒトＰＩＬＲＡ ７８Ｇ（または７８Ｒ）細胞を混合し、洗浄し、様々な濃度の抗ＰＩＬＲＡ抗体またはアイソタイプ対照抗体と共に３０分間インキュベートした。細胞をＦＡＣＳ希釈液（２％のＦＢＳ及び１ｍＭのＥＤＴＡを含有するＰＢＳ）で２回洗浄し、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７コンジュゲート抗ヒトＩｇＧと共に２９０ｒｐｍで４℃にて３０分間インキュベートした。細胞への抗体結合をＢＤ ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ ＩＩにより検出し、ＦＬＯＪＯ及びＰＲＩＳＭソフトウェアにより結果を解析した後に蛍光強度中央値（ＭＦＩ）を導き出した。抗体は、シアリダーゼ処理なしではＨＥＫ２９３ ＰＩＬＲＡ Ｇ７８細胞に対する以下のＥＣ５０値を有する：クローン５：１７ｎＭ；クローン６：１３ｎＭ；クローン７；９．５ｎＭ；及びクローン１：６．８ｎＭ。抗体は、シアリダーゼ処理ありではＨＥＫ２９３ ＰＩＬＲＡ Ｇ７８細胞に対する以下のＥＣ５０値を有する：クローン５：９．８ｎＭ；クローン６：４．８ｎＭ；クローン７：３．２ｎＭ；及びクローン１：１．８ｎＭ。図３Ｃ～３Ｆは、ＰＩＬＲＡ Ｇ７８ ＨＥＫ細胞のシアリダーゼ処理が抗ＰＩＬＲＡ抗体の結合を増強したことを示す。
【0382】
同じプロトコールに従って、ＰＩＬＲＡ Ｒ７８を発現するＨＥＫ細胞に対してもシアリダーゼ処理を実行した。抗体は、シアリダーゼ処理なしではＨＥＫ２９３ ＰＩＬＲＡ Ｒ７８細胞に対する以下のＥＣ５０値を有する：クローン５：１．３Ｍ；クローン６：０．７ｎＭ；クローン７：０．７ｎＭ；及びクローン１：１４ｎＭ。抗体は、シアリダーゼ処理ありではＨＥＫ２９３ ＰＩＬＲＡ Ｒ７８細胞に対する以下のＥＣ５０値を有する：クローン５：０．９ｎＭ；クローン６：０．３ｎＭ；クローン７：０．３ｎＭ；及びクローン１：５．６ｎＭ。図３Ｇ～３Ｊは、ＰＩＬＲＡ Ｒ７８ ＨＥＫ細胞のシアリダーゼ処理が抗ＰＩＬＲＡ抗体の結合にほとんど影響を及ぼさなかったことを示す。
【0383】
細胞表面シアリル化リガンドの除去は、ＰＩＬＲＡ Ｇ７８を過剰発現する細胞への抗ＰＩＬＲＡ抗体の結合を増加させた。このことは、本発明者らの抗体がＰＩＬＲＡへの結合について内在性シスリガンドと競合することを示す。このことは、シアリダーゼ処理が、低減されたリガンド結合を示すＰＩＬＲＡ Ｒ７８細胞への抗ＰＩＬＲＡ抗体の結合に対してほとんど影響を及ぼさなかったことにより更に支持される。
【0384】
実施例１４．抗ＰＩＬＲＡ抗体はインビボで標的結合を示した
抗ＰＩＬＲＡ抗体をインビボで試験するために、本発明者らは、ＰＩＬＲＡ遺伝子を含むヒトゲノム配列を有するＢＡＣトランスジェニック（ＢＡＣｔｇ）マウスを作製した。これらのマウスは、ＢＡＣクローンＣＴＤ－２１１０Ｂ７を胚に微量注入することによりＣ５７ＢＬ／６Ｊ（ＪＡＸストック番号：０００６６４）系統から作製した。このＢＡＣクローンは、ヒトＰＩＬＲＡ（Ｒ７８バージョン）及びＰＩＬＲＢの全長コード領域ならびにその調節エレメントを含む。本発明者らは、このモデルにおけるヒトＰＩＬＲＡの発現を確認した。これらのマウスに５０ｍｇ／ｋｇのクローン６を屠殺の１日前及び４日前に投与した。その後、マウスにアベルチンで麻酔をかけ、ＰＢＳで潅流し、脳を摘出し、ドライアイスで凍結させた。脳組織をホモジナイズして、脳可溶化液を作成し、総タンパク質濃度をＢＣＡにより決定した。Ｍｅｓｏｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙストレプトアビジンコーティングプレートに更にビオチン化ＰＩＬＲＡ捕捉抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＡＦ６４８４）を８００ｒｐｍで室温にて１時間コーティングし、次いで、ＴＢＳＴで３回洗浄した。脳可溶化物の試料を各５０μｌの２つのアリコートに分割した。第１のアリコートには、存在する全てのＰＩＬＲＡを飽和させるために、クローン６（１０μｇ／ｍｌ最終濃度）をスパイク・インし、一方で第２のアリコートには、インビボでの投与により結合されたＰＩＬＲＡの量を定量化するために、アッセイ緩衝液のみを与えた。次いで、これらのアリコートをプレートにアプライし、８００ｒｐｍにて室温で１時間インキュベートし、続いて、ＴＢＳＴで３回洗浄した。最後に、抗ヒトｓｕｆｌｏｔａｇ抗体を検出抗体として０．２５μｇ／ｍｌで添加し、８００ｒｐｍにて室温で１時間インキュベートし、続いて、ＴＢＳＴで３回洗浄した。Ｍｅｓｏ ＳＥＣＴＯＲ Ｓプレートリーダーを使用して蛍光を測定し、ＰＩＬＲＡ濃度を総タンパク質レベルに対して正規化した。
抗ＰＩＬＲＡ抗体をインビボで試験するために、本発明者らは、ＰＩＬＲＡ遺伝子を含むヒトゲノム配列を有するＢＡＣトランスジェニック（ＢＡＣｔｇ）マウスを作製した。これらのマウスは、ＢＡＣクローンＣＴＤ－２１１０Ｂ７を胚に微量注入することによりＣ５７ＢＬ／６Ｊ（ＪＡＸストック番号：０００６６４）系統から作製した。このＢＡＣクローンは、ヒトＰＩＬＲＡ（Ｒ７８バージョン）及びＰＩＬＲＢの全長コード領域ならびにその調節エレメントを含む。本発明者らは、このモデルにおけるヒトＰＩＬＲＡの発現を確認した。これらのマウスに５０ｍｇ／ｋｇのクローン６を屠殺の１日前及び４日前に投与した。その後、マウスにアベルチンで麻酔をかけ、ＰＢＳで潅流し、脳を摘出し、ドライアイスで凍結させた。脳組織をホモジナイズして、脳可溶化液を作成し、総タンパク質濃度をＢＣＡにより決定した。Ｍｅｓｏｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙストレプトアビジンコーティングプレートに更にビオチン化ＰＩＬＲＡ捕捉抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＡＦ６４８４）を８００ｒｐｍで室温にて１時間コーティングし、次いで、ＴＢＳＴで３回洗浄した。脳可溶化物の試料を各５０μｌの２つのアリコートに分割した。第１のアリコートには、存在する全てのＰＩＬＲＡを飽和させるために、クローン６（１０μｇ／ｍｌ最終濃度）をスパイク・インし、一方で第２のアリコートには、インビボでの投与により結合されたＰＩＬＲＡの量を定量化するために、アッセイ緩衝液のみを与えた。次いで、これらのアリコートをプレートにアプライし、８００ｒｐｍにて室温で１時間インキュベートし、続いて、ＴＢＳＴで３回洗浄した。最後に、抗ヒトｓｕｆｌｏｔａｇ抗体を検出抗体として０．２５μｇ／ｍｌで添加し、８００ｒｐｍにて室温で１時間インキュベートし、続いて、ＴＢＳＴで３回洗浄した。Ｍｅｓｏ ＳＥＣＴＯＲ Ｓプレートリーダーを使用して蛍光を測定し、ＰＩＬＲＡ濃度を総タンパク質レベルに対して正規化した。
【0385】
図１２Ａ及び１２Ｂは、抗ＰＩＬＲＡ抗体が、ヒトＰＩＬＲＡを発現するＢＡＣｔｇマウスにおいて５０ｍｇ／ｋｇの投与の１日及び４日後に脳内及び血漿中での標的結合を示したことを示す。抗ＰＩＬＲＡ抗体は、アイソタイプ抗体が投与された動物と比較して、全長（脳）及び可溶性（血漿）ヒトＰＩＬＲＡ受容体の総受容体レベルを増加させた。
【0386】
抗ヒトＩｇＧ ＥＬＩＳＡ（捕捉抗体：ロバ抗ｈｕ ＩｇＧ（Ｆａｂ’）２（最小限の交差反応性、ＪＩＲ ＃７０９－００６－０９８）；検出抗体：ヤギ抗ｈｕＩｇＧ（Ｆａｂ’）２（最小限の交差反応性、ＪＩＲ ＃１０９－０３６－０９８））を使用して様々な器官における抗体の濃度も調査した。図１２Ｃ～１２Ｈは、抗ＰＩＬＲＡ抗体が、ヒトＰＩＬＲＡを発現するＢＡＣｔｇマウスにおいて５０ｍｇ／ｋｇのＩＶ投与の１日及び４日後に脳、血漿、肝臓、肺、脾臓、及び骨髄においてＩｇＧ様の薬物動態を示したことを示す。
【0387】
ＰＩＬＲＡ／ＰＩＬＲＢ ＢＡＣｔｇマウスモデルにおける抗ＰＩＬＲＡ抗体または対照（非標的化）抗体の薬物動態プロファイルは、血漿及び試験された他の組織における薬物曝露プロファイルが同等であるという結果になった。これらのデータは、抗ＰＩＬＲＡ ｍＡｂが、この動物モデルにおいて標的に結合することなく定型抗体として作用したことを示す。
【0388】
追加の配列
【図1A】
【図1B】
【図1C】
【図1D】
【図1E】
【図1F】
【図1G】
【図1H】
【図1I】
【図1J】
【図1K】
【図1L】
【図1M】
【図2A】
【図2B】
【図2C】
【図2D】
【図2E】
【図2F】
【図3A】
【図3B】
【図3C】
【図3D】
【図3E】
【図3F】
【図3G】
【図3H】
【図3I】
【図3J】
【図4A】
【図4B】
【図4C】
【図4D】
【図4E】
【図4F】
【図4G】
【図4H】
【図4I】
【図4J】
【図4K】
【図4L】
【図4M】
【図4N】
【図4O】
【図4P】
【図4Q】
【図4R】
【図5A】
【図5B】
【図5C】
【図5D】
【図5E】
【図5F】
【図5G】
【図6A】
【図6B】
【図6C】
【図6D】
【図6E】
【図6F】
【図6G】
【図6H】
【図6I】
【図6J】
【図6K】
【図6L】
【図6M】
【図6N】
【図6O】
【図6P】
【図6Q】
【図7A】
【図7B】
【図7C】
【図7D】
【図7E】
【図7F】
【図7G】
【図7H】
【図7I】
【図7J】
【図8-1】
【図8-2】
【図8-3】
【図8-4】
【図8-5】
【図8-6】
【図8-7】
【図9A】
【図9B】
【図10】
【図11】
【図12-1】
【図12-2】
【図12-3】
【手続補正書】
【提出日】2024-11-08
【手続補正1】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
【国際調査報告】