特表 2024-546930 安定化ＩＬ－１８ポリペプチド及びその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-12-26

(54)【発明の名称】安定化ＩＬ－１８ポリペプチド及びその使用

(51)【国際特許分類】

   C07K 14/54 20060101AFI20241219BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20241219BHJP

   C07K 14/765 20060101ALI20241219BHJP

   C07K 16/00 20060101ALI20241219BHJP

   C12N 15/12 20060101ALI20241219BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20241219BHJP

   C12N 15/62 20060101ALI20241219BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20241219BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20241219BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20241219BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20241219BHJP

   C12P 21/02 20060101ALI20241219BHJP

   C07K 1/14 20060101ALI20241219BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20241219BHJP

   C07K 16/24 20060101ALI20241219BHJP

   C12Q 1/02 20060101ALI20241219BHJP

   A61K 38/20 20060101ALI20241219BHJP

   A61K 47/60 20170101ALI20241219BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20241219BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20241219BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20241219BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20241219BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20241219BHJP

   G01N 33/536 20060101ALI20241219BHJP

   G01N 33/53 20060101ALI20241219BHJP

【ＦＩ】

C07K14/54 ZNA

C07K19/00

C07K14/765

C07K16/00

C12N15/12

C12N15/13

C12N15/62 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

C12P21/02 C

C07K1/14

C07K16/28

C07K16/24

C12Q1/02

A61K38/20

A61K47/60

A61K45/00

A61P35/00

A61P43/00 121

A61P35/02

A61K39/395 N

G01N33/536 A

G01N33/53 D

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024535842

(86)(22)【出願日】2022-12-14

(85)【翻訳文提出日】2024-08-02

(86)【国際出願番号】 US2022081529

(87)【国際公開番号】W WO2023114829

(87)【国際公開日】2023-06-22

(31)【優先権主張番号】63/289,948

(32)【優先日】2021-12-15

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】509012625

【氏名又は名称】ジェネンテック， インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】110002077

【氏名又は名称】園田・小林弁理士法人

(72)【発明者】

【氏名】ベインブリッジ， トラヴィス ウィリアム

(72)【発明者】

【氏名】ブルトグル バイカラ， ベイザー

(72)【発明者】

【氏名】ソコロスキー， ジョナサン トーマス

【テーマコード（参考）】

4B063

4B064

4B065

4C076

4C084

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B063QA01

4B063QA19

4B063QA20

4B063QQ03

4B063QQ08

4B063QQ79

4B063QR48

4B063QR72

4B063QR77

4B063QS32

4B063QS40

4B063QX02

4B064AG03

4B064CA02

4B064CA05

4B064CA06

4B064CA08

4B064CA10

4B064CA19

4B064CC24

4B064DA01

4B064DA13

4B065AA01X

4B065AA01Y

4B065AA57X

4B065AA57Y

4B065AA72X

4B065AA72Y

4B065AA90X

4B065AA90Y

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065BD14

4B065CA44

4B065CA46

4C076CC27

4C076CC41

4C076EE59

4C084AA01

4C084AA02

4C084AA19

4C084DA12

4C084NA05

4C084NA14

4C084ZB261

4C084ZB262

4C084ZB271

4C084ZC751

4C085AA14

4C085BB11

4H045AA10

4H045AA30

4H045BA09

4H045CA40

4H045DA02

4H045EA20

4H045EA50

4H045FA74

(57)【要約】

本発明は、安定化ＩＬ－１８ポリペプチド並びにその作製及び使用方法を提供する。
【選択図】図３Ａ

【特許請求の範囲】

【請求項1】

修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドを含むポリペプチドであって、修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、又は少なくとも９７％同一であり、修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドが、ジスルフィド結合を形成し得る少なくとも１対のシステインを含む、ポリペプチド。

【請求項2】

修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドが遊離システインを含まない、請求項１に記載のポリペプチド。

【請求項3】

修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドが、１対又は２対のシステインを含み、各対のシステインがジスルフィド結合を形成する、請求項１又は請求項２に記載のポリペプチド。

【請求項4】

配列番号１のアミノ酸配列中の少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、又は４つすべてのシステインが、別のアミノ酸で置換されている、請求項１から３のいずれか一項に記載のポリペプチド。

【請求項5】

配列番号１のアミノ酸配列中の少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、又は４つすべてのシステインが、セリンで置換されている、請求項４に記載のポリペプチド。

【請求項6】

修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドが、アミノ酸置換Ｃ７４Ｓ、Ｃ１０４Ｓ、Ｃ１１２Ｓ、及び／又はＣ１６３Ｓのうちの１つ、２つ、３つ、又は４つを含み、アミノ酸番号付けが図４Ａに従う、請求項１から５のいずれか一項に記載のポリペプチド。

【請求項7】

修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドが、以下から選択されるアミノ酸置換のセット：
ａ）Ｌ４５Ｃ及びＥ１９２Ｃ；
ｂ）Ｙ３７Ｃ及びＳ９１Ｃ；
ｃ）Ｓ４３Ｃ及びＳ８６Ｃ；
ｄ）Ｓ４６Ｃ及びＶ１８９Ｃ；
ｅ）Ｓ４６Ｃ及びＩ８５Ｃ；
ｆ）Ｖ４７Ｃ及びＱ１９０Ｃ；
ｇ）Ｎ５０Ｃ；
ｈ）Ｎ５０Ｃ及びＬ１７４Ｃ；
ｉ）Ｆ５７Ｃ及びＴ８１Ｃ；
ｊ）Ｄ９０Ｃ及びＡ９７Ｃ；
ｋ）Ｖ９８Ｃ及びＱ１３９Ｃ；
ｌ）Ｔ９９Ｃ及びＰ１２４Ｃ；
ｍ）Ｓ１０１Ｃ及びＴ１０９Ｃ；
ｎ）Ｉ１０７Ｃ及びＮ１２３Ｃ；
ｏ）Ｒ１４０Ｃ及びＱ１５０Ｃ；並びに
ｐ）Ａ１６２Ｃ及びＩ１８５Ｃ；
を含み、
アミノ酸番号付けが図４Ａに従う、
請求項１から６のいずれか一項に記載のポリペプチド。

【請求項8】

修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドを含むポリペプチドであって、修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、又は少なくとも９７％同一であり、修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドが、以下から選択されるアミノ酸置換のセット：
ａ）Ｌ４５Ｃ及びＥ１９２Ｃ；
ｂ）Ｙ３７Ｃ及びＳ９１Ｃ；
ｃ）Ｓ４３Ｃ及びＳ８６Ｃ；
ｄ）Ｓ４６Ｃ及びＶ１８９Ｃ；
ｅ）Ｓ４６Ｃ及びＩ８５Ｃ；
ｆ）Ｖ４７Ｃ及びＱ１９０Ｃ；
ｇ）Ｎ５０Ｃ；
ｈ）Ｎ５０Ｃ及びＬ１７４Ｃ；
ｉ）Ｆ５７Ｃ及びＴ８１Ｃ；
ｊ）Ｄ９０Ｃ及びＡ９７Ｃ；
ｋ）Ｖ９８Ｃ及びＱ１３９Ｃ；
ｌ）Ｔ９９Ｃ及びＰ１２４Ｃ；
ｍ）Ｓ１０１Ｃ及びＴ１０９Ｃ；
ｎ）Ｉ１０７Ｃ及びＮ１２３Ｃ；
ｏ）Ｒ１４０Ｃ及びＱ１５０Ｃ；並びに
ｐ）Ａ１６２Ｃ及びＩ１８５Ｃ；
を含み、
アミノ酸番号付けが図４Ａに従う、
ポリペプチド。

【請求項9】

修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドが、以下から選択されるアミノ酸置換のセット：
ａ）Ｌ４５Ｃ及びＥ１９２Ｃ；
ｂ）Ｙ３７Ｃ及びＳ９１Ｃ；
ｃ）Ｓ４３Ｃ及びＳ８６Ｃ；
ｄ）Ｓ４６Ｃ及びＶ１８９Ｃ；
ｅ）Ｓ４６Ｃ及びＩ８５Ｃ；
ｆ）Ｖ４７Ｃ及びＱ１９０Ｃ；
ｇ）Ｆ５７Ｃ及びＴ８１Ｃ；
ｈ）Ｄ９０Ｃ及びＡ９７Ｃ；
ｉ）Ｖ９８Ｃ及びＱ１３９Ｃ；
ｊ）Ｔ９９Ｃ及びＰ１２４Ｃ；
ｋ）Ｓ１０１Ｃ及びＴ１０９Ｃ；
ｌ）Ｉ１０７Ｃ及びＮ１２３Ｃ；
ｍ）Ｒ１４０Ｃ及びＱ１５０Ｃ；並びに
ｎ）Ａ１６２Ｃ及びＩ１８５Ｃ；
を含み、
アミノ酸置換Ｃ７４Ｓ、Ｃ１０４Ｓ、Ｃ１１２Ｓ、及びＣ１６３Ｓを含み、アミノ酸置換番号付けが図４Ａに従う、
請求項１から６のいずれか一項に記載のポリペプチド。

【請求項10】

修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドが、
ａ）Ｎ５０Ｃ、Ｃ７４Ｓ、Ｃ１０４Ｓ、及びＣ１１２Ｓ；並びに
ｂ）Ｎ５０Ｃ、Ｃ７４Ｓ、Ｃ１０４Ｓ、及びＬ１７４Ｃ；
から選択されるアミノ酸置換のセットを含み、
アミノ酸番号付けが図４Ａに従う、
請求項７又は請求項８に記載のポリペプチド。

【請求項11】

修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号５、６、８、９、１２、１３、１５、１８、１９～２４、及び２７から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一である、請求項１から１０のいずれか一項に記載のポリペプチド。

【請求項12】

修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドが、配列番号５、６、８、９、１２、１３、１５、１８、１９～２４、及び２７から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１から１０のいずれか一項に記載のポリペプチド。

【請求項13】

ポリペプチドがＩＬ－１８Ｒαに結合する、請求項１から１２のいずれか一項に記載のポリペプチド。

【請求項14】

ポリペプチドが、表面プラズモン共鳴によって測定して、１００ｎＭ未満、又は５０ｎＭ未満、又は３０ｎＭ未満、又は２０ｎＭ未満、又は１０ｎＭ未満、０．１ｎＭと１００ｎＭの間、又は１ｎＭと１００ｎＭの間の親和性でＩＬ－１８Ｒαに結合する、請求項１１に記載のポリペプチド。

【請求項15】

ポリペプチドが、野生型ＩＬ－１８と比較してＩＬ－１８Ｒαに対して有意に減少した親和性で結合するか、又はＩＬ－１８Ｒαと検出可能に結合しない、請求項１から１２のいずれか一項に記載のポリペプチド。

【請求項16】

ポリペプチドが、５０ｎＭ超、６０ｎＭ超、７０ｎＭ超、８０ｎＭ超、９０ｎＭ超、１００ｎＭ超、５０ｎＭと１ｍＭの間、６０ｎＭと１ｍＭの間、７０ｎＭと１ｍＭの間、８０ｎＭと１ｍＭの間の親和性でＩＬ－１８Ｒαに結合する、請求項１５に記載のポリペプチド。

【請求項17】

ポリペプチドが、表面プラズモン共鳴によって測定して、８１ｎＭまでＩＬ－１８Ｒαに対する検出可能な結合を示さない、請求項１５に記載のポリペプチド。

【請求項18】

ポリペプチドがＩＬ－１８ＢＰに結合する、請求項１から１７のいずれか一項に記載のポリペプチド。

【請求項19】

ポリペプチドが、表面プラズモン共鳴によって測定して、１ｎＭ未満、１００ｐＭ未満、又は５０ｐＭ未満、又は３０ｐＭ未満、又は２０ｐＭ、１０ｐＭ未満、１ｆＭと１ｎＭの間、１０ｆＭと１ｎＭの間、１ｆＭと１００ｐＭの間、１０ｆＭと１００ｐＭの間、１ｆＭと５０ｐＭの間、１０ｆＭと５０ｐＭの間、１ｆＭと３０ｐＭの間、又は１０ｆＭと３０ｐＭの間の親和性でＩＬ－１８ＢＰに結合する、請求項１８に記載のポリペプチド。

【請求項20】

ポリペプチドが、レポーターアッセイにおいて、１ｎＭ未満、８００ｐＭ未満、７００ｐＭ未満、６００ｐＭ未満、５００ｐＭ未満、４００ｐＭ未満、３００ｐＭ未満、２００ｐＭ未満、１００ｐＭ未満、１ｐＭと１ｎＭの間、１ｐＭと８００ｐＭの間、１ｐＭと５００ｐＭの間、又は１ｐＭと３００ｐＭの間のＥＣ５０でＩＬ－１８受容体を通じたシグナル伝達を誘発する、請求項１から１９のいずれか一項に記載のポリペプチド。

【請求項21】

ポリペプチドが、ｉｎ ｖｉｔｒｏでヒトリンパ球におけるＩＦＮγ発現を誘発する、請求項１から２０のいずれか一項に記載のポリペプチド。

【請求項22】

リンパ球がＴ細胞又はＮＫ細胞である、請求項２１に記載のポリペプチド。

【請求項23】

ポリペプチドが、１ｎＭ未満、８００ｐＭ未満、７００ｐＭ未満、６００ｐＭ未満、５００ｐＭ未満、４００ｐＭ未満、３００ｐＭ未満、２００ｐＭ未満、１００ｐＭ未満、１ｐＭと１ｎＭの間、１ｐＭと８００ｐＭの間、１ｐＭと５００ｐＭの間、又は１ｐＭと３００ｐＭの間のＥＣ５０で、ｉｎ ｖｉｔｒｏでヒトＴ細胞におけるＩＦＮγ発現を誘発する、請求項２１又は２２に記載のポリペプチド。

【請求項24】

ポリペプチドが、野生型ヒトＩＬ－１８よりも大幅に減少した程度で、ｉｎ ｖｉｔｒｏでヒトリンパ球におけるＩＦＮγ発現を誘発する、請求項１から２３のいずれか一項に記載のポリペプチド。

【請求項25】

リンパ球がＴ細胞又はＮＫ細胞である、請求項２４に記載のポリペプチド。

【請求項26】

修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドが、Ｙ３７、Ｌ４１、Ｋ４４、Ｍ８７、Ｋ８９、Ｓ９１、Ｑ９２、Ｐ９３、Ｇ９５、Ｍ９６、Ｅ１１３、Ｑ１３９、Ｓ１４１、Ｄ１４６、Ｎ１４７、Ｍ１４９、Ｖ１８９、及びＮ１９１から選択される位置において、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、又は少なくとも６つの置換をさらに含み、アミノ酸番号付けが図４Ａに従う、請求項１から２５のいずれか一項に記載のポリペプチド。

【請求項27】

修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドが、Ｙ３７Ｈ、Ｙ３７Ｒ、Ｌ４１Ｈ、Ｌ４１Ｉ、Ｌ４１Ｙ、Ｋ４４Ｑ、Ｋ４４Ｒ、Ｍ８７Ｔ、Ｍ８７Ｋ、Ｍ８７Ｄ、Ｍ８７Ｎ、Ｍ８７Ｅ、Ｍ８７Ｒ、Ｋ８９Ｒ、Ｋ８９Ｇ、Ｋ８９Ｓ、Ｋ８９Ｔ、Ｓ９１Ｋ、Ｓ９１Ｒ、Ｑ９２Ｅ、Ｑ９２Ａ、Ｑ９２Ｒ、Ｑ９２Ｖ、Ｑ９２Ｇ、Ｑ９２Ｋ、Ｑ９２Ｌ、Ｐ９３Ｌ、Ｐ９３Ｇ、Ｐ９３Ａ、Ｐ９３Ｋ、Ｇ９５Ｔ、Ｇ９５Ａ、Ｍ９６Ｋ、Ｍ９６Ｑ、Ｍ９６Ｒ、Ｍ９６Ｌ、Ｅ１１３Ｄ、Ｑ１３９Ｅ、Ｑ１３９Ｋ、Ｑ１３９Ｐ、Ｑ１３９Ａ、Ｑ１３９Ｒ、Ｓ１４１Ｒ、Ｓ１４１Ｄ、Ｓ１４１Ｋ、Ｓ１４１Ｎ、Ｓ１４１Ａ、Ｄ１４６Ｈ、Ｄ１４６Ｋ、Ｄ１４６Ｎ、Ｄ１４６Ｑ、Ｄ１４６Ｅ、Ｄ１４６Ｓ、Ｄ１４６Ｇ、Ｎ１４７Ｈ、Ｎ１４７Ｙ、Ｎ１４７Ｄ、Ｎ１４７Ｒ、Ｎ１４７Ｓ、Ｎ１４７Ｇ、Ｍ１４９Ｖ、Ｍ１４９Ｒ、Ｍ１４９Ｔ、Ｍ１４９Ｋ、Ｖ１８９Ｉ、Ｖ１８９Ｔ、Ｖ１８９Ａ、Ｎ１９１Ｋ及びＮ１９１Ｈから選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、又は少なくとも６つの置換をさらに含む、請求項２６に記載のポリペプチド。

【請求項28】

修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドが、位置Ｍ８７、Ｍ９６、Ｓ１４１、Ｄ１４６、及びＮ１４７において；又は位置Ｍ８７、Ｋ８９、Ｑ９２、Ｓ１４１、及びＮ１４７において、置換をさらに含み、アミノ酸番号付けが図４Ａに従う、請求項１から２７のいずれか一項に記載のポリペプチド。

【請求項29】

修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドが、置換（ｉ）Ｍ８７Ｔ若しくはＭ８７Ｋ；（ｉｉ）Ｍ９６Ｋ若しくはＭ９６Ｌ；（ｉｉｉ）Ｓ１４１Ｄ、Ｓ１４１Ｎ、若しくはＳ１４１Ａ；（ｉｖ）Ｄ１４６Ｋ、Ｄ１４６Ｎ、Ｄ１４６Ｓ、若しくはＤ１４６Ｇ；及び（ｖ）Ｎ１４７Ｙ、Ｎ１４７Ｙ、Ｎ１４７Ｒ、若しくはＮ１４７Ｇをさらに含むか；又は置換（ｉ）Ｍ８７Ｋ；（ｉｉ）Ｋ８９Ｇ若しくはＫ８９Ｓ；（ｉｉｉ）Ｑ９２Ｇ、Ｑ９２Ｒ、若しくはＱ９２Ｌ；（ｉｖ）Ｄ１４６Ｎ、Ｄ１４６Ｓ、若しくはＤ１４６Ｇ；及び（ｖ）Ｎ１４７Ｒ若しくはＮ１４７Ｇをさらに含む、請求項２８に記載のポリペプチド。

【請求項30】

修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドが、Ｙ３７、Ｌ４１、Ｄ５３、Ｅ６７、Ｔ７０、Ｄ７１、Ｓ７２、Ｄ７３、Ｄ７６、Ｎ７７、Ｍ８７、Ｑ９１、Ｍ９６、Ｑ１３９、Ｈ１４５、Ｍ１４９、及びＲ１６７から選択される位置において、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、又は少なくとも６つの置換をさらに含み、アミノ酸番号付けが図４Ａに従う、請求項１から２９のいずれか一項に記載のポリペプチド。

【請求項31】

修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドが、Ｙ３７Ｄ、Ｙ３７Ｆ、Ｙ３７Ｈ、Ｙ３７Ｌ、Ｌ４１Ｆ、Ｌ４１Ｈ、Ｄ５３Ａ、Ｄ５３Ｇ、Ｄ５３Ｒ、Ｄ５３Ｈ、Ｅ６７Ａ、Ｅ６７Ｔ、Ｅ６７Ｇ、Ｅ６７Ｋ、Ｅ６７Ｒ、Ｔ７０Ａ、Ｔ７０Ｋ、Ｔ７０Ｅ、Ｄ７１Ｓ、Ｄ７１Ａ、Ｄ７１Ｙ、Ｓ７２Ｎ、Ｓ７２Ｋ、Ｓ７２Ｒ、Ｄ７３Ｐ、Ｄ７３Ａ、Ｄ７３Ｒ、Ｄ７３Ｈ、Ｄ７３Ｌ、Ｄ７３Ｖ、Ｄ７６Ｙ、Ｄ７６Ｓ、Ｄ７６Ａ、Ｎ７７Ｋ、Ｎ７７Ｓ、Ｎ７７Ｒ、Ｍ８７Ｆ、Ｍ８７Ｌ、Ｍ８７Ｉ、Ｑ９１Ｈ、Ｍ９６Ｌ、Ｍ９６Ｆ、Ｍ９６Ｉ、Ｑ１３９Ｌ、Ｑ１３９Ｉ、Ｈ１４５Ａ、Ｈ１４５Ｐ、Ｈ１４５Ｄ、Ｍ１４９Ｌ、Ｍ１４９Ｉ、Ｍ１４９Ｆ及びＲ１６７Ｓから選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、又は少なくとも６つの置換をさらに含む、請求項３０に記載のポリペプチド。

【請求項32】

修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドが、置換Ｄ５３Ｇ、Ｅ６６Ａ、及びＱ１３９Ｌ又はＱ１３９Ｉのいずれかをさらに含む、請求項１から２９、３０、及び３１のいずれか一項に記載のポリペプチド。

【請求項33】

修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドが、置換Ｄ７１Ｓ及びＭ８７Ｆをさらに含む、請求項３２に記載のポリペプチド。

【請求項34】

ポリペプチドが融合パートナーを含む、請求項１から３３のいずれか一項に記載のポリペプチド。

【請求項35】

ポリペプチドが、融合パートナーを含まない修飾ＩＬ－１８ポリペプチドよりも長い半減期を有する、請求項３４に記載のポリペプチド。

【請求項36】

融合パートナーが、Ｆｃドメイン、ヒト血清アルブミン、又は抗原結合ドメインである、請求項３４又は請求項３５に記載のポリペプチド。

【請求項37】

Ｆｃドメインが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ４ Ｆｃドメインである、請求項３６に記載のポリペプチド。

【請求項38】

ポリペプチドが融合パートナーを含まない、請求項１から３７のいずれか一項に記載のポリペプチド。

【請求項39】

請求項１から３８のいずれか一項に記載のポリペプチドと、コンジュゲート部分とを含む、コンジュゲート。

【請求項40】

コンジュゲート部分が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などのポリマーである、請求項３９に記載のコンジュゲート。

【請求項41】

請求項１から３８のいずれか一項に記載のポリペプチドをコードする、単離された核酸。

【請求項42】

請求項４１に記載の核酸を含む、宿主細胞。

【請求項43】

請求項１から４０のいずれか一項に記載のポリペプチドを発現する、宿主細胞。

【請求項44】

修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドを含むポリペプチドを産生する方法であって、ポリペプチドの発現に適した条件下で請求項４２又は請求項４３に記載の宿主細胞を培養することを含む方法。

【請求項45】

宿主細胞からポリペプチドを回収することをさらに含む、請求項４４に記載の方法。

【請求項46】

宿主細胞が真核生物宿主細胞である、請求項４４又は請求項４５に記載の方法。

【請求項47】

宿主細胞が哺乳動物宿主細胞である、請求項４６に記載の方法。

【請求項48】

宿主細胞がＣＨＯ細胞又は２９３細胞である、請求項４７に記載の方法。

【請求項49】

請求項４４から４８のいずれか一項に記載の方法によって産生されるポリペプチド。

【請求項50】

請求項１から３８及び４９のいずれか一項に記載のポリペプチド又は請求項３９若しくは請求項４０に記載のコンジュゲートと、薬学的に許容される担体とを含む、薬学的組成物。

【請求項51】

追加の治療剤をさらに含む、請求項５０に記載の薬学的組成物。

【請求項52】

追加の治療剤が免疫腫瘍学的薬剤である、請求項５１に記載の薬学的組成物。

【請求項53】

免疫腫瘍学的薬剤が、免疫チェックポイント阻害剤又は免疫共刺激分子のアゴニストである、請求項５１又は請求項５２に記載の薬学的組成物。

【請求項54】

追加の治療剤が、腫瘍関連抗原に結合する抗体；ＣＤ２８、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、ＨＶＥＭ、ＮＫＧ２Ｄ、ＭＩＣＡ、２Ｂ４、ＩＬ－２、ＩＬ－１２、ＩＬ－２７、ＩＦＮγ、ＩＦＮα、ＴＮＦα、ＩＬ－１、ＣＤＮ、ＨＭＧＢ１、若しくはＴＬＲアゴニスト；又はＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＴＩＭ－３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＬＡＧ－３、ＣＤ４７、ＳＩＲＰα、Ｂ７Ｈ４、ＣＤ９６、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ２２６、プロスタグランジン、ＶＥＧＦ、エンドセリンＢ、ＩＤＯ、アルギナーゼ、ＭＩＣＡ／ＭＩＣＢ、ＴＩＭ－３、ＩＬ－１０、ＩＬ－４、若しくはＩＬ－１３アンタゴニストである、請求項５１から５３のいずれか一項に記載の薬学的組成物。

【請求項55】

追加の治療剤がＰＤ－１軸結合アンタゴニストである、請求項５１から５４のいずれか一項に記載の薬学的組成物。

【請求項56】

ＰＤ－１軸アンタゴニストが、ＰＤ－１結合アンタゴニスト又はＰＤＬ１結合アンタゴニストである、請求項５５に記載の薬学的組成物。

【請求項57】

追加の治療剤が抗体である、請求項５１から５６のいずれか一項に記載の薬学的組成物。

【請求項58】

追加の治療剤が、イピリムマブ、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、ウトミルマブ、ウレルマブ、ＩＮＢＲＸ－１０５、ＧＳＫ３３５９６０９、ＪＴＸ－２０１１、ＴＲＸ５１８－００１、ＭＫ－４１６６、ＢＭＳ－９８６１５６、ＩＮＣＡＧＮ０１８７６、クサツズマブ、バルリルマブ、ＰＦ－０４５１８６０、ＭＥＤＩ０５６２／６４６９／６３８３、ＧＳＫ３１７４９９８、ＢＭＳ－９８６１７８、ＣＰ８７０８９３、ＡＰＸ００５Ｍ、ＣＡ－１７０、モガムリズマブ、ＭＧＤ００９、８Ｈ９、ＴＳＲ－０２２、ＭＢＧ４５３、Ｓｙｍ０２３、オレクルマブ、レラトリマブ、ＩＭＰ３２１（エフティラギモドアルファ）、ＬＡＧ５２５、リリルマブ、インドキシモド、エパカドスタット、チスレリズマブ、チラゴルマブ、ＢＭＳ－９８６２０７、ＭＴＩＧ７１９２Ａ、ＡＢ１５４、シフォラデナント、Ｍ７８２４、ガルニセルチブ、ＴＴＩ－６２１、エボルパセプト、マグロリマブ、オレクルマブ、ポリ－ＩＣＩＣ、レフィトリモド、ＳＤ－１０１、ＤＳＰ－０５０９、リンタトリモド、ＣＭＰ－００１、ＮＫＴＲ－２１４、ＲＯ６８７４２８１、ＴＨＯＲ－７０７、ＣＢ－１１５８、ＬＴＸ－３１５、又はペギロデカキンから選択される、請求項５１から５６のいずれか一項に記載の薬学的組成物。

【請求項59】

医薬としての使用のための、請求項１から３８及び４９のいずれか一項に記載のポリペプチド、請求項３９若しくは４０に記載のコンジュゲート、又は請求項５０から５８のいずれか一項に記載の薬学的組成物。

【請求項60】

がんの治療における使用のための、請求項１から３８及び４９のいずれか一項に記載のポリペプチド、請求項３９若しくは４０に記載のコンジュゲート、又は請求項５０から５８のいずれか一項に記載の薬学的組成物。

【請求項61】

がんが、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、又は白血病である、請求項６０に記載の使用のためのポリペプチド又は薬学的組成物。

【請求項62】

がんが、腺癌（例えば、結腸直腸腺癌、胃腺癌、又は膵臓腺癌）（転移性腺癌（例えば、転移性結腸直腸腺癌、転移性胃腺癌、又は転移性膵臓腺癌）であってもよい）、食道がん、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃ ｏｒ ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、小腸がん、大腸がん、小細胞肺がん、膠芽腫、神経芽腫、黒色腫、乳癌、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）、結腸直腸がん（ＣＲＣ）、肝細胞癌、乳がん、直腸がん、非小細胞肺がん、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、腎細胞がん、前立腺がん、肝臓がん、膵臓がん、軟部肉腫、カポジ肉腫、カルチノイド癌、頭頸部がん、卵巣がん、中皮腫、多発性骨髄腫、ホジキンリンパ腫を除くが、胚中心Ｂ細胞様（ＧＣＢ）ＤＬＢＣＬ、活性化Ｂ細胞様（ＡＢＣ）ＤＬＢＣＬ、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）、小リンパ球性白血病（ＳＬＬ）、リンパ形質細胞性リンパ腫（ＬＬ）、ワルデンストレームマクログロブリン血症（ＷＭ）、中枢神経系リンパ腫（ＣＮＳＬ）、バーキットリンパ腫（ＢＬ）、Ｂ細胞性前リンパ球性白血病、脾辺縁帯リンパ腫、有毛細胞白血病、脾リンパ腫／白血病、分類不能な脾びまん性赤髄小Ｂ細胞リンパ腫、有毛細胞白血病変異型、ワルデンストレームマクログロブリン血症、重鎖疾患、形質細胞骨髄腫、孤立性骨形質細胞腫、骨外形質細胞腫、粘膜関連リンパ組織の節外辺縁帯リンパ腫（ＭＡＬＴリンパ腫）、結節性辺縁帯リンパ腫、小児結節性辺縁帯リンパ腫、小児濾胞性リンパ腫、原発性皮膚濾胞中心リンパ腫、Ｔ細胞／組織球豊富大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ＣＮＳの原発性ＤＬＢＣＬ、原発性皮膚ＤＬＢＣＬ、下腿型の高齢者のＥＢＶ陽性ＤＬＢＣＬ、慢性炎症に伴うＤＬＢＣＬ、リンパ腫様肉芽腫症、原発性縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ＡＬＫ陽性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、形質芽球性リンパ腫、ＨＨＶ８関連多中心性キャッスルマン病に発生した大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性浸出性リンパ腫を含む成熟Ｂ細胞がん：びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫とバーキットリンパ腫の中間の特徴を有する分類不能のＢ細胞リンパ腫、又はびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫と古典的ホジキンリンパ腫の中間の特徴を有する分類不能のＢ細胞リンパ腫である、請求項６０又は請求項６１に記載の使用のためのポリペプチド又は薬学的組成物。

【請求項63】

がんの治療のための医薬の製造における、請求項１から３８及び４９のいずれか一項に記載のポリペプチド、請求項３９若しくは４０に記載のコンジュゲート、又は請求項５０から５８のいずれか一項に記載の薬学的組成物の使用。

【請求項64】

がんが、癌腫、腺癌、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、又は白血病である、請求項６３に記載の使用。

【請求項65】

がんが、腺癌（例えば、結腸直腸腺癌、胃腺癌、又は膵臓腺癌）（転移性腺癌（例えば、転移性結腸直腸腺癌、転移性胃腺癌、又は転移性膵臓腺癌）であってもよい）、食道がん、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃ ｏｒ ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、小腸がん、大腸がん、小細胞肺がん、膠芽腫、神経芽腫、黒色腫、乳癌、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）、結腸直腸がん（ＣＲＣ）、肝細胞癌、乳がん、直腸がん、非小細胞肺がん、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、腎細胞がん、前立腺がん、肝臓がん、膵臓がん、軟部肉腫、カポジ肉腫、カルチノイド癌、頭頸部がん、卵巣がん、中皮腫、多発性骨髄腫、ホジキンリンパ腫を除くが、胚中心Ｂ細胞様（ＧＣＢ）ＤＬＢＣＬ、活性化Ｂ細胞様（ＡＢＣ）ＤＬＢＣＬ、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）、小リンパ球性白血病（ＳＬＬ）、リンパ形質細胞性リンパ腫（ＬＬ）、ワルデンストレームマクログロブリン血症（ＷＭ）、中枢神経系リンパ腫（ＣＮＳＬ）、バーキットリンパ腫（ＢＬ）、Ｂ細胞性前リンパ球性白血病、脾辺縁帯リンパ腫、有毛細胞白血病、脾リンパ腫／白血病、分類不能な脾びまん性赤髄小Ｂ細胞リンパ腫、有毛細胞白血病変異型、ワルデンストレームマクログロブリン血症、重鎖疾患、形質細胞骨髄腫、孤立性骨形質細胞腫、骨外形質細胞腫、粘膜関連リンパ組織の節外辺縁帯リンパ腫（ＭＡＬＴリンパ腫）、結節性辺縁帯リンパ腫、小児結節性辺縁帯リンパ腫、小児濾胞性リンパ腫、原発性皮膚濾胞中心リンパ腫、Ｔ細胞／組織球豊富大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ＣＮＳの原発性ＤＬＢＣＬ、原発性皮膚ＤＬＢＣＬ、下腿型の高齢者のＥＢＶ陽性ＤＬＢＣＬ、慢性炎症に伴うＤＬＢＣＬ、リンパ腫様肉芽腫症、原発性縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ＡＬＫ陽性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、形質芽球性リンパ腫、ＨＨＶ８関連多中心性キャッスルマン病に発生した大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性浸出性リンパ腫を含む成熟Ｂ細胞がん：びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫とバーキットリンパ腫の中間の特徴を有する分類不能のＢ細胞リンパ腫、又はびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫と古典的ホジキンリンパ腫の中間の特徴を有する分類不能のＢ細胞リンパ腫である、請求項６３又は請求項６４に記載の使用。

【請求項66】

がんを有する対象を治療する方法であって、有効量の、請求項１から３８及び４９のいずれか一項に記載のポリペプチド、請求項３９若しくは４０に記載のコンジュゲート、又は請求項５０に記載の薬学的組成物を対象に投与することを含む方法。

【請求項67】

がんが、癌腫、腺癌、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、又は白血病である、請求項６６に記載の方法。

【請求項68】

がんが、腺癌（例えば、結腸直腸腺癌、胃腺癌、又は膵臓腺癌）（転移性腺癌（例えば、転移性結腸直腸腺癌、転移性胃腺癌、又は転移性膵臓腺癌）であってもよい）、食道がん、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃ ｏｒ ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、小腸がん、大腸がん、小細胞肺がん、膠芽腫、神経芽腫、黒色腫、乳癌、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）、結腸直腸がん（ＣＲＣ）、肝細胞癌、乳がん、直腸がん、非小細胞肺がん、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、腎細胞がん、前立腺がん、肝臓がん、膵臓がん、軟部肉腫、カポジ肉腫、カルチノイド癌、頭頸部がん、卵巣がん、中皮腫、多発性骨髄腫、ホジキンリンパ腫を除くが、胚中心Ｂ細胞様（ＧＣＢ）ＤＬＢＣＬ、活性化Ｂ細胞様（ＡＢＣ）ＤＬＢＣＬ、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）、小リンパ球性白血病（ＳＬＬ）、リンパ形質細胞性リンパ腫（ＬＬ）、ワルデンストレームマクログロブリン血症（ＷＭ）、中枢神経系リンパ腫（ＣＮＳＬ）、バーキットリンパ腫（ＢＬ）、Ｂ細胞性前リンパ球性白血病、脾辺縁帯リンパ腫、有毛細胞白血病、脾リンパ腫／白血病、分類不能な脾びまん性赤髄小Ｂ細胞リンパ腫、有毛細胞白血病変異型、ワルデンストレームマクログロブリン血症、重鎖疾患、形質細胞骨髄腫、孤立性骨形質細胞腫、骨外形質細胞腫、粘膜関連リンパ組織の節外辺縁帯リンパ腫（ＭＡＬＴリンパ腫）、結節性辺縁帯リンパ腫、小児結節性辺縁帯リンパ腫、小児濾胞性リンパ腫、原発性皮膚濾胞中心リンパ腫、Ｔ細胞／組織球豊富大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ＣＮＳの原発性ＤＬＢＣＬ、原発性皮膚ＤＬＢＣＬ、下腿型の高齢者のＥＢＶ陽性ＤＬＢＣＬ、慢性炎症に伴うＤＬＢＣＬ、リンパ腫様肉芽腫症、原発性縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ＡＬＫ陽性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、形質芽球性リンパ腫、ＨＨＶ８関連多中心性キャッスルマン病に発生した大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性浸出性リンパ腫を含む成熟Ｂ細胞がん：びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫とバーキットリンパ腫の中間の特徴を有する分類不能のＢ細胞リンパ腫、又はびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫と古典的ホジキンリンパ腫の中間の特徴を有する分類不能のＢ細胞リンパ腫である、請求項６６又は請求項６７に記載の方法。

【請求項69】

追加の治療剤を対象に投与することを含む、請求項６６から６８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項70】

追加の治療剤が免疫腫瘍学的薬剤又は化学療法剤である、請求項６９に記載の方法。

【請求項71】

免疫腫瘍学的薬剤が、免疫チェックポイント阻害剤又は免疫共刺激分子のアゴニストである、請求項７０に記載の方法。

【請求項72】

追加の治療剤が、腫瘍関連抗原に結合する抗体；ＣＤ２８、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、ＨＶＥＭ、ＮＫＧ２Ｄ、ＭＩＣＡ、２Ｂ４、ＩＬ－２、ＩＬ－１２、ＩＬ－２７、ＩＦＮγ、ＩＦＮα、ＴＮＦα、ＩＬ－１、ＣＤＮ、ＨＭＧＢ１、若しくはＴＬＲアゴニスト；又はＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＴＩＭ－３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＬＡＧ－３、ＣＤ４７、ＳＩＲＰα、Ｂ７Ｈ４、ＣＤ９６、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ２２６、プロスタグランジン、ＶＥＧＦ、エンドセリンＢ、ＩＤＯ、アルギナーゼ、ＭＩＣＡ／ＭＩＣＢ、ＴＩＭ－３、ＩＬ－１０、ＩＬ－４、若しくはＩＬ－１３アンタゴニストである、請求項６９から７１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項73】

追加の治療剤がＰＤ－１軸結合アンタゴニストである、請求項６９から７２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項74】

ＰＤ－１軸アンタゴニストが、ＰＤ－１結合アンタゴニスト又はＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニストである、請求項７３に記載の方法。

【請求項75】

追加の治療剤が抗体である、請求項６９から７４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項76】

追加の治療剤が、イピリムマブ、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、ウトミルマブ、ウレルマブ、ＩＮＢＲＸ－１０５、ＧＳＫ３３５９６０９、ＪＴＸ－２０１１、ＴＲＸ５１８－００１、ＭＫ－４１６６、ＢＭＳ－９８６１５６、ＩＮＣＡＧＮ０１８７６、クサツズマブ、バルリルマブ、ＰＦ－０４５１８６０、ＭＥＤＩ０５６２／６４６９／６３８３、ＧＳＫ３１７４９９８、ＢＭＳ－９８６１７８、ＣＰ８７０８９３、ＡＰＸ００５Ｍ、ＣＡ－１７０、モガムリズマブ、ＭＧＤ００９、８Ｈ９、ＴＳＲ－０２２、ＭＢＧ４５３、Ｓｙｍ０２３、オレクルマブ、レラトリマブ、ＩＭＰ３２１（エフティラギモドアルファ）、ＬＡＧ５２５、リリルマブ、インドキシモド、エパカドスタット、チスレリズマブ、ＢＭＳ－９８６２０７、ＭＴＩＧ７１９２Ａ、ＡＢ１５４、シフォラデナント、Ｍ７８２４、ガルニセルチブ、ＴＴＩ－６２１、エボルパセプト、マグロリマブ、オレクルマブ、ポリ－ＩＣＩＣ、レフィトリモド、ＳＤ－１０１、ＤＳＰ－０５０９、リンタトリモド、ＣＭＰ－００１、ＮＫＴＲ－２１４、ＲＯ６８７４２８１、ＴＨＯＲ－７０７、ＣＢ－１１５８、ＬＴＸ－３１５、ペギロデカキンから選択される、請求項６９から７５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項77】

細胞上のＩＬ－１８受容体を活性化する方法であって、請求項１から３８及び４９のいずれか一項に記載のポリペプチド又は請求項３９若しくは請求項４０に記載のコンジュゲートと細胞を接触させることを含む方法。

【請求項78】

リンパ球におけるＩＦＮγ発現を誘発する方法であって、請求項１から３８及び４９のいずれか一項に記載のポリペプチド又は請求項３９若しくは請求項４０に記載のコンジュゲートとリンパ球を接触させることを含む方法。

【請求項79】

リンパ球を活性化する方法であって、請求項１から３８及び４９のいずれか一項に記載のポリペプチド又は請求項３９若しくは請求項４０に記載のコンジュゲートとリンパ球を接触させることを含む方法。

【請求項80】

リンパ球がＴ細胞又はＮＫ細胞である、請求項７８又は請求項７９に記載の方法。

【請求項81】

細胞又はリンパ球がｉｎ ｖｉｔｒｏである、請求項７７から８０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項82】

細胞又はリンパ球がｉｎ ｖｉｖｏである、請求項７７から８０のいずれ一項に記載の方法。

【請求項83】

ヒトＩＬ－１８アミノ酸配列を含むポリペプチドの安定性を改善する方法であって、ジスルフィド結合を形成する少なくとも１対のシステインをＩＬ－１８アミノ酸配列に導入して、修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドを含むポリペプチドを作製することを含む方法。

【請求項84】

修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドが遊離システインを含まない、請求項８３に記載の方法。

【請求項85】

修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドが、１対又は２対のシステインを含み、各対のシステインがジスルフィド結合を形成する、請求項８３又は請求項８４に記載の方法。

【請求項86】

配列番号１のアミノ酸配列中の少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、又は４つすべてのシステインが、別のアミノ酸で置換されている、請求項８３から８５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項87】

配列番号１のアミノ酸配列中の少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、又は４つすべてのシステインが、セリンで置換されている、請求項８６に記載の方法。

【請求項88】

修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドが、アミノ酸置換Ｃ７４Ｓ、Ｃ１０４Ｓ、Ｃ１１２Ｓ、及び／又はＣ１６３Ｓのうちの１つ、２つ、３つ、又は４つを含み、アミノ酸番号付けが図４Ａに従う、請求項８３から８７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項89】

サンプル中のＩＬ－１８ＢＰを検出する方法であって、請求項１から３８及び４９のいずれか一項に記載のポリペプチドとサンプルを接触させることと、ＩＬ－１８ＢＰへのポリペプチドの結合を検出することとを含む方法。

【請求項90】

サンプル中のＩＬ－１８Ｒαを検出する方法であって、請求項１から３８及び４９のいずれか１つに記載のポリペプチドとサンプルを接触させることと、ＩＬ－１８Ｒαへのポリペプチドの結合を検出することとを含む方法。

【請求項91】

ポリペプチドが検出可能な標識を含む、請求項８９又は請求項９０に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
［０００１］本出願は、２０２１年１２月１５日に出願された米国仮出願第６３／２８９，９４８号の優先権の利益を主張し、その全体があらゆる目的のために参照により本明細書に援用される。

【0002】

技術分野
［０００２］本発明は安定化ＩＬ－１８ポリペプチド並びにその作製及び使用方法に関する。

【背景技術】

【0003】

［０００３］インターロイキン１８（ＩＬ－１８）は、炎症性のＩＬ－１ファミリーサイトカインである。他のＩＬ－１ファミリーメンバーと同様に、ＩＬ－１８はシグナルペプチドを含まないため、多くの可溶性タンパク質に典型的な方法では分泌されず、むしろ非従来型のタンパク質分泌経路を用いる［Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ，２０２０］。シグナルペプチドの代わりに、ＩＬ－１８のアミノ末端には阻害性プロペプチド配列が含まれ、カスパーゼ１によってタンパク質分解されて成熟型になるまで、サイトカインを不活性状態に保つ［Ｔｓｕｔｓｕｍｉ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉ Ｒｅｐ，２０１９］。ＩＬ－１８には、ＩＬ－１８ＲαとＩＬ－１８Ｒβという２つの同種のシグナル伝達共受容体と、ＩＬ－１８ＢＰという可溶性の「おとり」受容体がある。ＩＬ－１８シグナル伝達経路は、まず成熟ＩＬ－１８がＩＬ－１８Ｒαに結合することによって開始され、ＩＬ－１８／ＩＬ－１８Ｒα複合体は次にＩＬ－１８Ｒβを高親和性ヘテロ三量体複合体にリクルートし、受容体の細胞内ｔｏｌｌ／インターロイキン１受容体（ＴＩＲ）ドメインを通してシグナルを伝達する。対照的に、ＩＬ－１８Ｒαと相同性を有するＩＬ－１８ＢＰは、成熟サイトカインに対して非常に強い親和性を有し、ＩＬ－１８Ｒα／ＩＬ－１８Ｒβを通じたＩＬ－１８のシグナル伝達を立体的に遮断することができ、天然のアンタゴニストとして機能する。

【0004】

［０００４］ＩＬ－１８シグナル伝達は、エフェクターＴ細胞の成熟及び機能を促進することができ、ＮＫ細胞を刺激することができる。ＩＬ－１８シグナルは、単剤療法としてもチェックポイント阻害剤との組み合わせでも、抗腫瘍免疫を促進し得ることを示唆する新たな知見が得られている。野生型サイトカインによる臨床効果は限定的である［Ｔａｒｈｉｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ，２００９］が、その理由は、比較的豊富なＩＬ－１８アンタゴニストであるＩＬ－１８ＢＰによって阻害されるためである可能性が高い。しかしながら、最近の研究では、ＩＬ－１８ＢＰに耐性があるように操作されたＩＬ－１８バリアントが、ＷＴサイトカインと比較して、マウスモデルにおいて優れた抗腫瘍反応を提供することが示されている［Ｚｈｏｕ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ，２０２０］。治療薬としては、ＩＬ－１８の半減期の短さ及び不安定さといった、いくつかの特徴が課題となり得る。

【0005】

［０００５］組み換えＩＬ－１８は、プロフォーム［Ｋｉｒｋｐａｔｒｉｃｋ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ＆ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，２００３］又はＳＵＭＯなどの安定化パートナーと遺伝的に融合した状態［Ｋａｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｓｔｒｕｃｔ Ｂｉｏｌ，２００３；Ｋｒｕｍｍ ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，２０１５］のいずれかで、大腸菌で低収量で産生されるのが最も一般的であり、機能活性のためには、精製後にプロテアーゼによるさらなる処理が必要である。ＩＬ－１８での臨床試験は、ＧＳＫ［Ｔａｒｈｉｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ，２００９；Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ，２０１３］及びＳｉｍｃｈａ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（Ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ：ＮＣＴ０４７８７０４２）などでいくつか行われているが、いずれも大腸菌で産生された組み換えサイトカインを用いている。哺乳動物宿主細胞における組み換えタンパク質の産生は、大腸菌に比べて、低レベルのエンドトキシンや、アルブミン又はＩｇＧのＦｃドメインとの融合体のような、ｉｎ ｖｉｖｏ半減期延長を目的としたより複雑なフォーマットを産生する能力など、魅力的な利点を提供し、それらはジスルフィド結合形成及びグリコシル化のための哺乳動物タンパク質折り畳み機構の恩恵を受ける。組み換えＩＬ－１８は、特に哺乳類宿主細胞において、シグナルペプチドを使用しないその型破りな分泌機構と、活性サイトカインを産生するために除去する必要があるＮ末端阻害性プロペプチドの存在もあって、産生が困難な分子である［Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０１３］。さらに、ヒトＩＬ－１８もマウスＩＬ－１８も遊離システインを含むが、いずれも機能的な分子内ジスルフィドを形成しないため、非還元条件下で非天然のジスルフィド結合分子間凝集体の形成に利用可能なままである。システイン残基の酸化による分子の急速な不活性化も示された［Ｃｏｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｃｏｍｍ．，２０１５］。さらに、ＩＬ－１８は、特にプロペプチドを除去した後、比較的低い熱安定性を有することが報告されている［Ｔｓｕｔｓｕｍｉ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉ Ｒｅｐ，２０１９］。このように、ＩＬ－１８固有の分子不安定性は、この分子を研究用試薬として使用する際に大きな障害となり、ＩＬ－１８をベースとした治療薬のＣＭＣに大きな負債をもたらす可能性がある。

【0006】

［０００６］安定化ＩＬ－１８に対する必要性がまだ存在する。本明細書に記載される本発明は、この必要性を満たし、他の利益を提供する。

【発明の概要】

【0007】

［０００７］本発明は、安定化ＩＬ－１８タンパク質並びにその作製及び使用方法を提供する。

【0008】

実施態様１．修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドを含むポリペプチドであって、修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、又は少なくとも９７％同一であり、修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドが、ジスルフィド結合を形成し得る少なくとも１対のシステインを含む、ポリペプチド。

【0009】

実施態様２．修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドが遊離システインを含まない、実施態様１に記載のポリペプチド。

【0010】

実施態様３．修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドが、１対又は２対のシステインを含み、各対のシステインがジスルフィド結合を形成する、実施態様１又は実施態様２に記載のポリペプチド。

【0011】

実施態様４．配列番号１のアミノ酸配列中の少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、又は４つすべてのシステインが、別のアミノ酸で置換されている、実施態様１から３のいずれか１つに記載のポリペプチド。

【0012】

実施態様５．配列番号１のアミノ酸配列中の少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、又は４つすべてのシステインが、セリンで置換されている、実施態様４に記載のポリペプチド。

【0013】

実施態様６．修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドが、アミノ酸置換Ｃ７４Ｓ、Ｃ１０４Ｓ、Ｃ１１２Ｓ、及び／又はＣ１６３Ｓのうちの１つ、２つ、３つ、又は４つを含み、アミノ酸番号付けが図４Ａに従う、実施態様１から５のいずれか１つに記載のポリペプチド。

【0014】

実施態様７．修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドが、以下から選択されるアミノ酸置換のセット：
ａ）Ｌ４５Ｃ及びＥ１９２Ｃ；
ｂ）Ｙ３７Ｃ及びＳ９１Ｃ；
ｃ）Ｓ４３Ｃ及びＳ８６Ｃ；
ｄ）Ｓ４６Ｃ及びＶ１８９Ｃ；
ｅ）Ｓ４６Ｃ及びＩ８５Ｃ；
ｆ）Ｖ４７Ｃ及びＱ１９０Ｃ；
ｇ）Ｎ５０Ｃ；
ｈ）Ｎ５０Ｃ及びＬ１７４Ｃ；
ｉ）Ｆ５７Ｃ及びＴ８１Ｃ；
ｊ）Ｄ９０Ｃ及びＡ９７Ｃ；
ｋ）Ｖ９８Ｃ及びＱ１３９Ｃ；
ｌ）Ｔ９９Ｃ及びＰ１２４Ｃ；
ｍ）Ｓ１０１Ｃ及びＴ１０９Ｃ；
ｎ）Ｉ１０７Ｃ及びＮ１２３Ｃ；
ｏ）Ｒ１４０Ｃ及びＱ１５０Ｃ；並びに
ｐ）Ａ１６２Ｃ及びＩ１８５Ｃ；
を含み、
アミノ酸番号付けが図４Ａに従う、
実施態様１から６のいずれか１つに記載のポリペプチド。

【0015】

実施態様８．修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドを含むポリペプチドであって、修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、又は少なくとも９７％同一であり、修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドが、
ａ）Ｌ４５Ｃ及びＥ１９２Ｃ；
ｂ）Ｙ３７Ｃ及びＳ９１Ｃ；
ｃ）Ｓ４３Ｃ及びＳ８６Ｃ；
ｄ）Ｓ４６Ｃ及びＶ１８９Ｃ；
ｅ）Ｓ４６Ｃ及びＩ８５Ｃ；
ｆ）Ｖ４７Ｃ及びＱ１９０Ｃ；
ｇ）Ｎ５０Ｃ；
ｈ）Ｎ５０Ｃ及びＬ１７４Ｃ；
ｉ）Ｆ５７Ｃ及びＴ８１Ｃ；
ｊ）Ｄ９０Ｃ及びＡ９７Ｃ；
ｋ）Ｖ９８Ｃ及びＱ１３９Ｃ；
ｌ）Ｔ９９Ｃ及びＰ１２４Ｃ；
ｍ）Ｓ１０１Ｃ及びＴ１０９Ｃ；
ｎ）Ｉ１０７Ｃ及びＮ１２３Ｃ；
ｏ）Ｒ１４０Ｃ及びＱ１５０Ｃ；並びに
ｐ）Ａ１６２Ｃ及びＩ１８５Ｃ；
から選択されるアミノ酸置換のセットを含み、
アミノ酸番号付けが図４Ａに従う、
ポリペプチド。

【0016】

実施態様９．修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドが、以下から選択されるアミノ酸置換のセット：
ａ）Ｌ４５Ｃ及びＥ１９２Ｃ；
ｂ）Ｙ３７Ｃ及びＳ９１Ｃ；
ｃ）Ｓ４３Ｃ及びＳ８６Ｃ；
ｄ）Ｓ４６Ｃ及びＶ１８９Ｃ；
ｅ）Ｓ４６Ｃ及びＩ８５Ｃ；
ｆ）Ｖ４７Ｃ及びＱ１９０Ｃ；
ｇ）Ｆ５７Ｃ及びＴ８１Ｃ；
ｈ）Ｄ９０Ｃ及びＡ９７Ｃ；
ｉ）Ｖ９８Ｃ及びＱ１３９Ｃ；
ｊ）Ｔ９９Ｃ及びＰ１２４Ｃ；
ｋ）Ｓ１０１Ｃ及びＴ１０９Ｃ；
ｌ）Ｉ１０７Ｃ及びＮ１２３Ｃ；
ｍ）Ｒ１４０Ｃ及びＱ１５０Ｃ；並びに
ｎ）Ａ１６２Ｃ及びＩ１８５Ｃ；
を含み、
アミノ酸置換Ｃ７４Ｓ、Ｃ１０４Ｓ、Ｃ１１２Ｓ、及びＣ１６３Ｓを含み、アミノ酸置換番号付けが図４Ａに従う、
実施態様１から６のいずれか１つに記載のポリペプチド。

【0017】

実施態様１０．修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドが、
ａ）Ｎ５０Ｃ、Ｃ７４Ｓ、Ｃ１０４Ｓ、及びＣ１１２Ｓ；並びに
ｂ）Ｎ５０Ｃ、Ｃ７４Ｓ、Ｃ１０４Ｓ、及びＬ１７４Ｃ；
から選択されるアミノ酸置換のセットを含み、
アミノ酸番号付けが図４Ａに従う、
実施態様７又は実施態様８に記載のポリペプチド。

【0018】

実施態様１１．修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号５、６、８、９、１２、１３、１５、１８、１９～２４、及び２７から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一である、実施態様１から１０のいずれか１つに記載のポリペプチド。

【0019】

実施態様１２．修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドが、配列番号５、６、８、９、１２、１３、１５、１８、１９～２４、及び２７から選択されるアミノ酸配列を含む、実施態様１から１０のいずれか１つに記載のポリペプチド。

【0020】

実施態様１３．ポリペプチドがＩＬ－１８Ｒαに結合する、実施態様１から１２のいずれか１つに記載のポリペプチド。

【0021】

実施態様１４．ポリペプチドが、表面プラズモン共鳴によって測定して、１００ｎＭ未満、又は５０ｎＭ未満、又は３０ｎＭ未満、又は２０ｎＭ未満、又は１０ｎＭ未満、０．１ｎＭと１００ｎＭの間、又は１ｎＭと１００ｎＭの間の親和性でＩＬ－１８Ｒαに結合する、実施態様１１に記載のポリペプチド。

【0022】

実施態様１５．ポリペプチドが、野生型ＩＬ－１８と比較してＩＬ－１８Ｒαに対して有意に減少した親和性で結合するか、又はＩＬ－１８Ｒαと検出可能に結合しない、実施態様１から１２のいずれか１つに記載のポリペプチド。

【0023】

実施態様１６．ポリペプチドが、５０ｎＭ超、６０ｎＭ超、７０ｎＭ超、８０ｎＭ超、９０ｎＭ超、１００ｎＭ超、５０ｎＭと１ｍＭの間、６０ｎＭと１ｍＭの間、７０ｎＭと１ｍＭの間、８０ｎＭと１ｍＭの間の親和性でＩＬ－１８Ｒαに結合する、実施態様１５に記載のポリペプチド。

【0024】

実施態様１７．ポリペプチドが、表面プラズモン共鳴によって測定して、８１ｎＭまでＩＬ－１８Ｒαに対する検出可能な結合を示さない、実施態様１５に記載のポリペプチド。

【0025】

実施態様１８．ポリペプチドがＩＬ－１８ＢＰに結合する、実施態様１から１７のいずれか１つに記載のポリペプチド。

【0026】

実施態様１９．ポリペプチドが、表面プラズモン共鳴によって測定して、１ｎＭ未満、１００ｐＭ未満、又は５０ｐＭ未満、又は３０ｐＭ未満、又は２０ｐＭ、１０ｐＭ未満、１ｆＭと１ｎＭの間、１０ｆＭと１ｎＭの間、１ｆＭと１００ｐＭの間、１０ｆＭと１００ｐＭの間、１ｆＭと５０ｐＭの間、１０ｆＭと５０ｐＭの間、１ｆＭと３０ｐＭの間、又は１０ｆＭと３０ｐＭの間の親和性でＩＬ－１８ＢＰに結合する、実施態様１８に記載のポリペプチド。

【0027】

実施態様２０．ポリペプチドが、レポーターアッセイにおいて、１ｎＭ未満、８００ｐＭ未満、７００ｐＭ未満、６００ｐＭ未満、５００ｐＭ未満、４００ｐＭ未満、３００ｐＭ未満、２００ｐＭ未満、１００ｐＭ未満、１ｐＭと１ｎＭの間、１ｐＭと８００ｐＭの間、１ｐＭと５００ｐＭの間、又は１ｐＭと３００ｐＭの間のＥＣ５０でＩＬ－１８受容体を通じたシグナル伝達を誘発する、実施態様１から１９のいずれか１つに記載のポリペプチド。

【0028】

実施態様２１．ポリペプチドが、ｉｎ ｖｉｔｒｏでヒトリンパ球におけるＩＦＮγ発現を誘発する、実施態様１から２０のいずれか１つに記載のポリペプチド。

【0029】

実施態様２２．リンパ球がＴ細胞又はＮＫ細胞である、実施態様２１に記載のポリペプチド。

【0030】

実施態様２３．ポリペプチドが、１ｎＭ未満、８００ｐＭ未満、７００ｐＭ未満、６００ｐＭ未満、５００ｐＭ未満、４００ｐＭ未満、３００ｐＭ未満、２００ｐＭ未満、１００ｐＭ未満、１ｐＭと１ｎＭの間、１ｐＭと８００ｐＭの間、１ｐＭと５００ｐＭの間、又は１ｐＭと３００ｐＭの間のＥＣ５０で、ｉｎ ｖｉｔｒｏでヒトＴ細胞におけるＩＦＮγ発現を誘発する、実施態様２１又は２２に記載のポリペプチド。

【0031】

実施態様２４．ポリペプチドが、野生型ヒトＩＬ－１８よりも大幅に減少した程度で、ｉｎ ｖｉｔｒｏでヒトリンパ球におけるＩＦＮγ発現を誘発する、実施態様１から２３のいずれか１つに記載のポリペプチド。

【0032】

実施態様２５．リンパ球がＴ細胞又はＮＫ細胞である、実施態様２４に記載のポリペプチド。

【0033】

実施態様２６．修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドが、Ｙ３７、Ｌ４１、Ｋ４４、Ｍ８７、Ｋ８９、Ｓ９１、Ｑ９２、Ｐ９３、Ｇ９５、Ｍ９６、Ｅ１１３、Ｑ１３９、Ｓ１４１、Ｄ１４６、Ｎ１４７、Ｍ１４９、Ｖ１８９、及びＮ１９１から選択される位置において、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、又は少なくとも６つの置換をさらに含み、アミノ酸番号付けが図４Ａに従う、実施態様１から２５のいずれか１つに記載のポリペプチド。

【0034】

実施態様２７．修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドが、Ｙ３７Ｈ、Ｙ３７Ｒ、Ｌ４１Ｈ、Ｌ４１Ｉ、Ｌ４１Ｙ、Ｋ４４Ｑ、Ｋ４４Ｒ、Ｍ８７Ｔ、Ｍ８７Ｋ、Ｍ８７Ｄ、Ｍ８７Ｎ、Ｍ８７Ｅ、Ｍ８７Ｒ、Ｋ８９Ｒ、Ｋ８９Ｇ、Ｋ８９Ｓ、Ｋ８９Ｔ、Ｓ９１Ｋ、Ｓ９１Ｒ、Ｑ９２Ｅ、Ｑ９２Ａ、Ｑ９２Ｒ、Ｑ９２Ｖ、Ｑ９２Ｇ、Ｑ９２Ｋ、Ｑ９２Ｌ、Ｐ９３Ｌ、Ｐ９３Ｇ、Ｐ９３Ａ、Ｐ９３Ｋ、Ｇ９５Ｔ、Ｇ９５Ａ、Ｍ９６Ｋ、Ｍ９６Ｑ、Ｍ９６Ｒ、Ｍ９６Ｌ、Ｅ１１３Ｄ、Ｑ１３９Ｅ、Ｑ１３９Ｋ、Ｑ１３９Ｐ、Ｑ１３９Ａ、Ｑ１３９Ｒ、Ｓ１４１Ｒ、Ｓ１４１Ｄ、Ｓ１４１Ｋ、Ｓ１４１Ｎ、Ｓ１４１Ａ、Ｄ１４６Ｈ、Ｄ１４６Ｋ、Ｄ１４６Ｎ、Ｄ１４６Ｑ、Ｄ１４６Ｅ、Ｄ１４６Ｓ、Ｄ１４６Ｇ、Ｎ１４７Ｈ、Ｎ１４７Ｙ、Ｎ１４７Ｄ、Ｎ１４７Ｒ、Ｎ１４７Ｓ、Ｎ１４７Ｇ、Ｍ１４９Ｖ、Ｍ１４９Ｒ、Ｍ１４９Ｔ、Ｍ１４９Ｋ、Ｖ１８９Ｉ、Ｖ１８９Ｔ、Ｖ１８９Ａ、Ｎ１９１Ｋ及びＮ１９１Ｈから選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、又は少なくとも６つの置換をさらに含む、実施態様２６に記載のポリペプチド。

【0035】

実施態様２８．修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドが、位置Ｍ８７、Ｍ９６、Ｓ１４１、Ｄ１４６、及びＮ１４７において；又は位置Ｍ８７、Ｋ８９、Ｑ９２、Ｓ１４１、及びＮ１４７において、置換をさらに含み、アミノ酸番号付けが図４Ａに従う、実施態様１から２７のいずれか１つに記載のポリペプチド。

【0036】

実施態様２９．修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドが、置換（ｉ）Ｍ８７Ｔ若しくはＭ８７Ｋ；（ｉｉ）Ｍ９６Ｋ若しくはＭ９６Ｌ；（ｉｉｉ）Ｓ１４１Ｄ、Ｓ１４１Ｎ、若しくはＳ１４１Ａ；（ｉｖ）Ｄ１４６Ｋ、Ｄ１４６Ｎ、Ｄ１４６Ｓ、若しくはＤ１４６Ｇ；及び（ｖ）Ｎ１４７Ｙ、Ｎ１４７Ｙ、Ｎ１４７Ｒ、若しくはＮ１４７Ｇをさらに含むか；又は置換（ｉ）Ｍ８７Ｋ；（ｉｉ）Ｋ８９Ｇ若しくはＫ８９Ｓ；（ｉｉｉ）Ｑ９２Ｇ、Ｑ９２Ｒ、若しくはＱ９２Ｌ；（ｉｖ）Ｄ１４６Ｎ、Ｄ１４６Ｓ、若しくはＤ１４６Ｇ；及び（ｖ）Ｎ１４７Ｒ若しくはＮ１４７Ｇをさらに含む、実施態様２８に記載のポリペプチド。

【0037】

実施態様３０．修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドが、Ｙ３７、Ｌ４１、Ｄ５３、Ｅ６７、Ｔ７０、Ｄ７１、Ｓ７２、Ｄ７３、Ｄ７６、Ｎ７７、Ｍ８７、Ｑ９１、Ｍ９６、Ｑ１３９、Ｈ１４５、Ｍ１４９、及びＲ１６７から選択される位置において、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、又は少なくとも６つの置換をさらに含み、アミノ酸番号付けが図４Ａに従う、実施態様１から２９のいずれか１つに記載のポリペプチド。

【0038】

実施態様３１．修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドが、Ｙ３７Ｄ、Ｙ３７Ｆ、Ｙ３７Ｈ、Ｙ３７Ｌ、Ｌ４１Ｆ、Ｌ４１Ｈ、Ｄ５３Ａ、Ｄ５３Ｇ、Ｄ５３Ｒ、Ｄ５３Ｈ、Ｅ６７Ａ、Ｅ６７Ｔ、Ｅ６７Ｇ、Ｅ６７Ｋ、Ｅ６７Ｒ、Ｔ７０Ａ、Ｔ７０Ｋ、Ｔ７０Ｅ、Ｄ７１Ｓ、Ｄ７１Ａ、Ｄ７１Ｙ、Ｓ７２Ｎ、Ｓ７２Ｋ、Ｓ７２Ｒ、Ｄ７３Ｐ、Ｄ７３Ａ、Ｄ７３Ｒ、Ｄ７３Ｈ、Ｄ７３Ｌ、Ｄ７３Ｖ、Ｄ７６Ｙ、Ｄ７６Ｓ、Ｄ７６Ａ、Ｎ７７Ｋ、Ｎ７７Ｓ、Ｎ７７Ｒ、Ｍ８７Ｆ、Ｍ８７Ｌ、Ｍ８７Ｉ、Ｑ９１Ｈ、Ｍ９６Ｌ、Ｍ９６Ｆ、Ｍ９６Ｉ、Ｑ１３９Ｌ、Ｑ１３９Ｉ、Ｈ１４５Ａ、Ｈ１４５Ｐ、Ｈ１４５Ｄ、Ｍ１４９Ｌ、Ｍ１４９Ｉ、Ｍ１４９Ｆ及びＲ１６７Ｓから選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、又は少なくとも６つの置換をさらに含む、実施態様３０に記載のポリペプチド。

【0039】

実施態様３２．修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドが、置換Ｄ５３Ｇ、Ｅ６６Ａ、及びＱ１３９Ｌ又はＱ１３９Ｉのいずれかをさらに含む、実施態様１から２９、３０、及び３１のいずれか１つに記載のポリペプチド。

【0040】

実施態様３３．修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドが、置換Ｄ７１Ｓ及びＭ８７Ｆをさらに含む、実施態様３２に記載のポリペプチド。

【0041】

実施態様３４．ポリペプチドが融合パートナーを含む、実施態様１から３３のいずれか１つに記載のポリペプチド。

【0042】

実施態様３５．ポリペプチドが、融合パートナーを含まない修飾ＩＬ－１８ポリペプチドよりも長い半減期を有する、実施態様３４に記載のポリペプチド。

【0043】

実施態様３６．融合パートナーが、Ｆｃドメイン、ヒト血清アルブミン、又は抗原結合ドメインである、実施態様３４又は実施態様３５に記載のポリペプチド。

【0044】

実施態様３７．Ｆｃドメインが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ４ Ｆｃドメインである、実施態様３６に記載のポリペプチド。

【0045】

実施態様３８．ポリペプチドが融合パートナーを含まない、実施態様１から３７のいずれか１つに記載のポリペプチド。

【0046】

実施態様３９．実施態様１から３８のいずれか１つに記載のポリペプチドと、コンジュゲート部分とを含む、コンジュゲート。

【0047】

実施態様４０．コンジュゲート部分が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などのポリマーである、実施態様３９に記載のコンジュゲート。

【0048】

実施態様４１．実施態様１から３８のいずれかに記載のポリペプチドをコードする、単離された核酸。

【0049】

実施態様４２．実施態様４１の核酸を含む、宿主細胞。

【0050】

実施態様４３．実施態様１から４０のいずれか１つに記載のポリペプチドを発現する、宿主細胞。

【0051】

実施態様４４．修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドを含むポリペプチドを産生する方法であって、ポリペプチドの発現に適した条件下で実施態様４２又は実施態様４３に記載の宿主細胞を培養することを含む方法。

【0052】

実施態様４５．宿主細胞からポリペプチドを回収することをさらに含む、実施態様４４に記載の方法。

【0053】

実施態様４６．宿主細胞が真核生物宿主細胞である、実施態様４４又は実施態様４５に記載の方法。

【0054】

実施態様４７．宿主細胞が哺乳動物宿主細胞である、実施態様４６に記載の方法。

【0055】

実施態様４８．宿主細胞がＣＨＯ細胞又は２９３細胞である、実施態様４７に記載の方法。

【0056】

実施態様４９．実施態様４４から４８のいずれか１つの方法によって産生されるポリペプチド。

【0057】

実施態様５０．実施態様１から３８及び４９のいずれか１つに記載のポリペプチド又は実施態様３９若しくは実施態様４０に記載のコンジュゲートと、薬学的に許容される担体とを含む、薬学的組成物。

【0058】

実施態様５１．追加の治療剤をさらに含む、実施態様５０に記載の薬学的組成物。

【0059】

実施態様５２．追加の治療剤が免疫腫瘍学的薬剤である、実施態様５１に記載の薬学的組成物。

【0060】

実施態様５３．免疫腫瘍学的薬剤が、免疫チェックポイント阻害剤又は免疫共刺激分子のアゴニストである、実施態様５１又は実施態様５２に記載の薬学的組成物。

【0061】

実施態様５４．追加の治療剤が、腫瘍関連抗原に結合する抗体；ＣＤ２８、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、ＨＶＥＭ、ＮＫＧ２Ｄ、ＭＩＣＡ、２Ｂ４、ＩＬ－２、ＩＬ－１２、ＩＬ－２７、ＩＦＮγ、ＩＦＮα、ＴＮＦα、ＩＬ－１、ＣＤＮ、ＨＭＧＢ１、若しくはＴＬＲアゴニスト；又はＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＴＩＭ－３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＬＡＧ－３、ＣＤ４７、ＳＩＲＰα、Ｂ７Ｈ４、ＣＤ９６、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ２２６、プロスタグランジン、ＶＥＧＦ、エンドセリンＢ、ＩＤＯ、アルギナーゼ、ＭＩＣＡ／ＭＩＣＢ、ＴＩＭ－３、ＩＬ－１０、ＩＬ－４、若しくはＩＬ－１３アンタゴニストである、実施態様５１から５３のいずれか１つに記載の薬学的組成物。

【0062】

実施態様５５．追加の治療剤がＰＤ－１軸結合アンタゴニストである、実施態様５１から５４のいずれか１つに記載の薬学的組成物。

【0063】

実施態様５６．ＰＤ－１軸アンタゴニストが、ＰＤ－１結合アンタゴニスト又はＰＤＬ１結合アンタゴニストである、実施態様５５に記載の薬学的組成物。

【0064】

実施態様５７．追加の治療剤が抗体である、実施態様５１から５６のいずれか１つに記載の薬学的組成物。

【0065】

実施態様５８．追加の治療剤が、イピリムマブ、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、ウトミルマブ、ウレルマブ、ＩＮＢＲＸ－１０５、ＧＳＫ３３５９６０９、ＪＴＸ－２０１１、ＴＲＸ５１８－００１、ＭＫ－４１６６、ＢＭＳ－９８６１５６、ＩＮＣＡＧＮ０１８７６、クサツズマブ、バルリルマブ、ＰＦ－０４５１８６０、ＭＥＤＩ０５６２／６４６９／６３８３、ＧＳＫ３１７４９９８、ＢＭＳ－９８６１７８、ＣＰ８７０８９３、ＡＰＸ００５Ｍ、ＣＡ－１７０、モガムリズマブ、ＭＧＤ００９、８Ｈ９、ＴＳＲ－０２２、ＭＢＧ４５３、Ｓｙｍ０２３、オレクルマブ、レラトリマブ、ＩＭＰ３２１（エフティラギモドアルファ）、ＬＡＧ５２５、リリルマブ、インドキシモド、エパカドスタット、チスレリズマブ、チラゴルマブ、ＢＭＳ－９８６２０７、ＭＴＩＧ７１９２Ａ、ＡＢ１５４、シフォラデナント、Ｍ７８２４、ガルニセルチブ、ＴＴＩ－６２１、エボルパセプト、マグロリマブ、オレクルマブ、ポリ－ＩＣＩＣ、レフィトリモド、ＳＤ－１０１、ＤＳＰ－０５０９、リンタトリモド、ＣＭＰ－００１、ＮＫＴＲ－２１４、ＲＯ６８７４２８１、ＴＨＯＲ－７０７、ＣＢ－１１５８、ＬＴＸ－３１５、又はペギロデカキンから選択される、実施態様５１から５６のいずれか１つに記載の薬学的組成物。

【0066】

実施態様５９．医薬としての使用のための、実施態様１から３８及び４９のいずれか１つに記載のポリペプチド、実施態様３９若しくは４０に記載のコンジュゲート、又は実施態様５０から５８のいずれか１つに記載の薬学的組成物。

【0067】

実施態様６０．がんの治療における使用のための、実施態様１から３８及び４９のいずれか１つに記載のポリペプチド、実施態様３９若しくは４０に記載のコンジュゲート、又は実施態様５０から５８のいずれか１つに記載の薬学的組成物。

【0068】

実施態様６１．がんが、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、又は白血病である、実施態様６０に記載の使用のためのポリペプチド又は薬学的組成物。

【0069】

実施態様６２．がんが、腺癌（例えば、結腸直腸腺癌、胃腺癌、又は膵臓腺癌）（転移性腺癌（例えば、転移性結腸直腸腺癌、転移性胃腺癌、又は転移性膵臓腺癌）であってもよい）、食道がん、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃ ｏｒ ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、小腸がん、大腸がん、小細胞肺がん、膠芽腫、神経芽腫、黒色腫、乳癌、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）、結腸直腸がん（ＣＲＣ）、肝細胞癌、乳がん、直腸がん、非小細胞肺がん、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、腎細胞がん、前立腺がん、肝臓がん、膵臓がん、軟部肉腫、カポジ肉腫、カルチノイド癌、頭頸部がん、卵巣がん、中皮腫、多発性骨髄腫、ホジキンリンパ腫を除くが、胚中心Ｂ細胞様（ＧＣＢ）ＤＬＢＣＬ、活性化Ｂ細胞様（ＡＢＣ）ＤＬＢＣＬ、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）、小リンパ球性白血病（ＳＬＬ）、リンパ形質細胞性リンパ腫（ＬＬ）、ワルデンストレームマクログロブリン血症（ＷＭ）、中枢神経系リンパ腫（ＣＮＳＬ）、バーキットリンパ腫（ＢＬ）、Ｂ細胞性前リンパ球性白血病、脾辺縁帯リンパ腫、有毛細胞白血病、脾リンパ腫／白血病、分類不能な脾びまん性赤髄小Ｂ細胞リンパ腫、有毛細胞白血病変異型、ワルデンストレームマクログロブリン血症、重鎖疾患、形質細胞骨髄腫、孤立性骨形質細胞腫、骨外形質細胞腫、粘膜関連リンパ組織の節外辺縁帯リンパ腫（ＭＡＬＴリンパ腫）、結節性辺縁帯リンパ腫、小児結節性辺縁帯リンパ腫、小児濾胞性リンパ腫、原発性皮膚濾胞中心リンパ腫、Ｔ細胞／組織球豊富大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ＣＮＳの原発性ＤＬＢＣＬ、原発性皮膚ＤＬＢＣＬ、下腿型の高齢者のＥＢＶ陽性ＤＬＢＣＬ、慢性炎症に伴うＤＬＢＣＬ、リンパ腫様肉芽腫症、原発性縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ＡＬＫ陽性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、形質芽球性リンパ腫、ＨＨＶ８関連多中心性キャッスルマン病に発生した大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性浸出性リンパ腫を含む成熟Ｂ細胞がん：びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫とバーキットリンパ腫の中間の特徴を有する分類不能のＢ細胞リンパ腫、又はびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫と古典的ホジキンリンパ腫の中間の特徴を有する分類不能のＢ細胞リンパ腫である、実施態様６０又は実施態様６１に記載の使用のためのポリペプチド又は薬学的組成物。

【0070】

実施態様６３．がんの治療のための医薬の製造における、実施態様１から３８及び４９のいずれか１つに記載のポリペプチド、実施態様３９若しくは４０に記載のコンジュゲート、又は実施態様５０から５８のいずれか１つに記載の薬学的組成物の使用。

【0071】

実施態様６４．がんが、癌腫、腺癌、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、又は白血病である、実施態様６３に記載の使用。

【0072】

実施態様６５．がんが、腺癌（例えば、結腸直腸腺癌、胃腺癌、又は膵臓腺癌）（転移性腺癌（例えば、転移性結腸直腸腺癌、転移性胃腺癌、又は転移性膵臓腺癌）であってもよい）、食道がん、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃ ｏｒ ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、小腸がん、大腸がん、小細胞肺がん、膠芽腫、神経芽腫、黒色腫、乳癌、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）、結腸直腸がん（ＣＲＣ）、肝細胞癌、乳がん、直腸がん、非小細胞肺がん、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、腎細胞がん、前立腺がん、肝臓がん、膵臓がん、軟部肉腫、カポジ肉腫、カルチノイド癌、頭頸部がん、卵巣がん、中皮腫、多発性骨髄腫、ホジキンリンパ腫を除くが、胚中心Ｂ細胞様（ＧＣＢ）ＤＬＢＣＬ、活性化Ｂ細胞様（ＡＢＣ）ＤＬＢＣＬ、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）、小リンパ球性白血病（ＳＬＬ）、リンパ形質細胞性リンパ腫（ＬＬ）、ワルデンストレームマクログロブリン血症（ＷＭ）、中枢神経系リンパ腫（ＣＮＳＬ）、バーキットリンパ腫（ＢＬ）、Ｂ細胞性前リンパ球性白血病、脾辺縁帯リンパ腫、有毛細胞白血病、脾リンパ腫／白血病、分類不能な脾びまん性赤髄小Ｂ細胞リンパ腫、有毛細胞白血病変異型、ワルデンストレームマクログロブリン血症、重鎖疾患、形質細胞骨髄腫、孤立性骨形質細胞腫、骨外形質細胞腫、粘膜関連リンパ組織の節外辺縁帯リンパ腫（ＭＡＬＴリンパ腫）、結節性辺縁帯リンパ腫、小児結節性辺縁帯リンパ腫、小児濾胞性リンパ腫、原発性皮膚濾胞中心リンパ腫、Ｔ細胞／組織球豊富大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ＣＮＳの原発性ＤＬＢＣＬ、原発性皮膚ＤＬＢＣＬ、下腿型の高齢者のＥＢＶ陽性ＤＬＢＣＬ、慢性炎症に伴うＤＬＢＣＬ、リンパ腫様肉芽腫症、原発性縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ＡＬＫ陽性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、形質芽球性リンパ腫、ＨＨＶ８関連多中心性キャッスルマン病に発生した大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性浸出性リンパ腫を含む成熟Ｂ細胞がん：びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫とバーキットリンパ腫の中間の特徴を有する分類不能のＢ細胞リンパ腫、又はびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫と古典的ホジキンリンパ腫の中間の特徴を有する分類不能のＢ細胞リンパ腫である、実施態様６３又は実施態様６４に記載の使用。

【0073】

実施態様６６．がんを有する対象を治療する方法であって、有効量の、実施態様１から３８及び４９のいずれか１つに記載のポリペプチド、実施態様３９若しくは４０に記載のコンジュゲート、又は実施態様５０に記載の薬学的組成物を対象に投与することを含む方法。

【0074】

実施態様６７．がんが、癌腫、腺癌、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、又は白血病である、実施態様６６に記載の方法。

【0075】

実施態様６８．がんが、腺癌（例えば、結腸直腸腺癌、胃腺癌、又は膵臓腺癌）（転移性腺癌（例えば、転移性結腸直腸腺癌、転移性胃腺癌、又は転移性膵臓腺癌）であってもよい）、食道がん、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃ ｏｒ ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、小腸がん、大腸がん、小細胞肺がん、膠芽腫、神経芽腫、黒色腫、乳癌、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）、結腸直腸がん（ＣＲＣ）、肝細胞癌、乳がん、直腸がん、非小細胞肺がん、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、腎細胞がん、前立腺がん、肝臓がん、膵臓がん、軟部肉腫、カポジ肉腫、カルチノイド癌、頭頸部がん、卵巣がん、中皮腫、多発性骨髄腫、ホジキンリンパ腫を除くが、胚中心Ｂ細胞様（ＧＣＢ）ＤＬＢＣＬ、活性化Ｂ細胞様（ＡＢＣ）ＤＬＢＣＬ、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）、小リンパ球性白血病（ＳＬＬ）、リンパ形質細胞性リンパ腫（ＬＬ）、ワルデンストレームマクログロブリン血症（ＷＭ）、中枢神経系リンパ腫（ＣＮＳＬ）、バーキットリンパ腫（ＢＬ）、Ｂ細胞性前リンパ球性白血病、脾辺縁帯リンパ腫、有毛細胞白血病、脾リンパ腫／白血病、分類不能な脾びまん性赤髄小Ｂ細胞リンパ腫、有毛細胞白血病変異型、ワルデンストレームマクログロブリン血症、重鎖疾患、形質細胞骨髄腫、孤立性骨形質細胞腫、骨外形質細胞腫、粘膜関連リンパ組織の節外辺縁帯リンパ腫（ＭＡＬＴリンパ腫）、結節性辺縁帯リンパ腫、小児結節性辺縁帯リンパ腫、小児濾胞性リンパ腫、原発性皮膚濾胞中心リンパ腫、Ｔ細胞／組織球豊富大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ＣＮＳの原発性ＤＬＢＣＬ、原発性皮膚ＤＬＢＣＬ、下腿型の高齢者のＥＢＶ陽性ＤＬＢＣＬ、慢性炎症に伴うＤＬＢＣＬ、リンパ腫様肉芽腫症、原発性縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ＡＬＫ陽性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、形質芽球性リンパ腫、ＨＨＶ８関連多中心性キャッスルマン病に発生した大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性浸出性リンパ腫を含む成熟Ｂ細胞がん：びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫とバーキットリンパ腫の中間の特徴を有する分類不能のＢ細胞リンパ腫、又はびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫と古典的ホジキンリンパ腫の中間の特徴を有する分類不能のＢ細胞リンパ腫である、実施態様６６又は実施態様６７に記載の方法。

【0076】

実施態様６９．追加の治療剤を対象に投与することを含む、実施態様６６から６８のいずれか１つに記載の方法。

【0077】

実施態様７０．追加の治療剤が免疫腫瘍学的薬剤又は化学療法剤である、実施態様６９に記載の方法。

【0078】

実施態様７１．免疫腫瘍学的薬剤が、免疫チェックポイント阻害剤又は免疫共刺激分子のアゴニストである、実施態様７０に記載の方法。

【0079】

実施態様７２．追加の治療剤が、腫瘍関連抗原に結合する抗体；ＣＤ２８、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、ＨＶＥＭ、ＮＫＧ２Ｄ、ＭＩＣＡ、２Ｂ４、ＩＬ－２、ＩＬ－１２、ＩＬ－２７、ＩＦＮγ、ＩＦＮα、ＴＮＦα、ＩＬ－１、ＣＤＮ、ＨＭＧＢ１、若しくはＴＬＲアゴニスト；又はＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＴＩＭ－３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＬＡＧ－３、ＣＤ４７、ＳＩＲＰα、Ｂ７Ｈ４、ＣＤ９６、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ２２６、プロスタグランジン、ＶＥＧＦ、エンドセリンＢ、ＩＤＯ、アルギナーゼ、ＭＩＣＡ／ＭＩＣＢ、ＴＩＭ－３、ＩＬ－１０、ＩＬ－４、若しくはＩＬ－１３アンタゴニストである、実施態様６９から７１のいずれか１つに記載の方法。

【0080】

実施態様７３．追加の治療剤がＰＤ－１軸結合アンタゴニストである、実施態様６９から７２のいずれか１つに記載の方法。

【0081】

実施態様７４．ＰＤ－１軸アンタゴニストが、ＰＤ－１結合アンタゴニスト又はＰＤＬ１結合アンタゴニストである、実施態様７３に記載の方法。

【0082】

実施態様７５．追加の治療剤が抗体である、実施態様６９から７４のいずれか１つに記載の方法。

【0083】

実施態様７６．追加の治療剤が、イピリムマブ、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、ウトミルマブ、ウレルマブ、ＩＮＢＲＸ－１０５、ＧＳＫ３３５９６０９、ＪＴＸ－２０１１、ＴＲＸ５１８－００１、ＭＫ－４１６６、ＢＭＳ－９８６１５６、ＩＮＣＡＧＮ０１８７６、クサツズマブ、バルリルマブ、ＰＦ－０４５１８６０、ＭＥＤＩ０５６２／６４６９／６３８３、ＧＳＫ３１７４９９８、ＢＭＳ－９８６１７８、ＣＰ８７０８９３、ＡＰＸ００５Ｍ、ＣＡ－１７０、モガムリズマブ、ＭＧＤ００９、８Ｈ９、ＴＳＲ－０２２、ＭＢＧ４５３、Ｓｙｍ０２３、オレクルマブ、レラトリマブ、ＩＭＰ３２１（エフティラギモドアルファ）、ＬＡＧ５２５、リリルマブ、インドキシモド、エパカドスタット、チスレリズマブ、ＢＭＳ－９８６２０７、ＭＴＩＧ７１９２Ａ、ＡＢ１５４、シフォラデナント、Ｍ７８２４、ガルニセルチブ、ＴＴＩ－６２１、エボルパセプト、マグロリマブ、オレクルマブ、ポリ－ＩＣＩＣ、レフィトリモド、ＳＤ－１０１、ＤＳＰ－０５０９、リンタトリモド、ＣＭＰ－００１、ＮＫＴＲ－２１４、ＲＯ６８７４２８１、ＴＨＯＲ－７０７、ＣＢ－１１５８、ＬＴＸ－３１５、ペギロデカキンから選択される、実施態様６９から７５のいずれか１つに記載の方法。

【0084】

実施態様７７．細胞上のＩＬ－１８受容体を活性化する方法であって、実施態様１から３８及び４９のいずれか１つに記載のポリペプチド又は実施態様３９若しくは実施態様４０に記載のコンジュゲートと細胞を接触させることを含む方法。

【0085】

実施態様７８．リンパ球におけるＩＦＮγ発現を誘発する方法であって、実施態様１から３８及び４９のいずれか１つに記載のポリペプチド又は実施態様３９若しくは実施態様４０に記載のコンジュゲートとリンパ球を接触させることを含む方法。

【0086】

実施態様７９．リンパ球を活性化する方法であって、実施態様１から３８及び４９のいずれか１つに記載のポリペプチド又は実施態様３９若しくは実施態様４０に記載のコンジュゲートとリンパ球を接触させることを含む方法。

【0087】

実施態様８０．リンパ球がＴ細胞又はＮＫ細胞である、実施態様７８又は実施態様７９に記載の方法。

【0088】

実施態様８１．細胞又はリンパ球がｉｎ ｖｉｔｒｏである、実施態様７７から８０のいずれか１つに記載の方法。

【0089】

実施態様８２．細胞又はリンパ球がｉｎ ｖｉｖｏである、実施態様７７から８０のいずれか１つに記載の方法。

【0090】

実施態様８３．ヒトＩＬ－１８アミノ酸配列を含むポリペプチドの安定性を改善する方法であって、ジスルフィド結合を形成する少なくとも１対のシステインをＩＬ－１８アミノ酸配列に導入して、修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドを含むポリペプチドを作製することを含む方法。

【0091】

実施態様８４．修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドが遊離システインを含まない、実施態様８３に記載の方法。

【0092】

実施態様８５．修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドが、１対又は２対のシステインを含み、各対のシステインがジスルフィド結合を形成する、実施態様８３又は実施態様８４に記載の方法。

【0093】

実施態様８６．配列番号１のアミノ酸配列中の少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、又は４つすべてのシステインが、別のアミノ酸で置換されている、実施態様８３から８５のいずれか１つに記載の方法。

【0094】

実施態様８７．配列番号１のアミノ酸配列中の少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、又は４つすべてのシステインが、セリンで置換されている、実施態様８６に記載の方法。

【0095】

実施態様８８．修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドが、アミノ酸置換Ｃ７４Ｓ、Ｃ１０４Ｓ、Ｃ１１２Ｓ、及び／又はＣ１６３Ｓのうちの１つ、２つ、３つ、又は４つを含み、アミノ酸番号付けが図４Ａに従う、実施態様８３から８７のいずれか１つに記載の方法。

【0096】

実施態様８９．サンプル中のＩＬ－１８ＢＰを検出する方法であって、実施態様１から３８及び４９のいずれか１つに記載のポリペプチドとサンプルを接触させることと、ＩＬ－１８ＢＰへのポリペプチドの結合を検出することとを含む方法。

【0097】

実施態様９０．サンプル中のＩＬ－１８Ｒαを検出する方法であって、実施態様１から３８及び４９のいずれか１つに記載のポリペプチドとサンプルを接触させることと、ＩＬ－１８Ｒαへのポリペプチドの結合を検出することとを含む方法。

【0098】

実施態様９１．ポリペプチドが検出可能な標識を含む、実施態様８９又は実施態様９０に記載の方法。

【図面の簡単な説明】

【0099】

【図1A-1B】［０００８］哺乳動物産生のためのＩＬ－１８コンストラクトを示す。図１Ａは、ヒト及びマウスのＩＬ－１８コンストラクトを示す。ヒトＩＬ－１８コンストラクトは成熟ヒトＩＬ－１８を含み、続いて連続してＴＥＶプロテアーゼ部位、ポリ－ヒスチジンタグ、及びモノマーヒトＦｃを含む。マウスＩＬ－１８コンストラクトも同様のデザインを有するが、Ｆｃの代わりにマウス血清アルブミン（ＭＳＡ）がＣ末端にある。図１Ｂは、大腸菌産生のための野生型の成熟ＩＬ－１８コンストラクトを示す。成熟ヒト又はマウスＩＬ－１８のＮ末端に、ポリ－ヒスチジンタグをつけた小型ユビキチン関連修飾因子（ＳＵＭＯ）が融合した。ＳＵＭＯプロテアーゼによって切断されると、タグのない、クリーンなＮ末端を有する成熟ＩＬ－１８になる。

【図2A-2Z】［０００９］分析的サイズ排除クロマトグラム及びＳＤＳ－ＰＡＧＥによる、ＷＴ ＩＬ－１８に対するＩＬ－１８のいくつかの新規ジスルフィドバリアントの収量の増加及び凝集の減少を示す。ヒトＩＬ－１８バリアントはモノマーヒトＦｃ融合体として発現し、マウスＩＬ－１８バリアントはマウスアルブミン融合体として発現した。

【図3A-3B】［０００１０］一次Ｔ細胞効力アッセイにおけるＩＬ－１８バリアントの用量反応曲線を示す。図３Ａは、一次ヒトＴ細胞効力アッセイにおけるヒトＩＬ－１８バリアントの用量反応曲線を示す。図３Ｂは、一次マウスＴ細胞効力アッセイにおけるマウスＩＬ－１８バリアントの用量反応曲線を示す。

【図4A-4B】［０００１１］成熟ヒトＩＬ－１８（４Ａ；配列番号１）及び成熟マウスＩＬ－１８（４Ｂ；配列番号２）の配列を示し、本明細書で使用されるアミノ酸番号付けを含む。

【図5A-5B】［０００１２］ＭＣ３８結腸がんモデルにおけるマウスＩＬ－１８ Ｔ４４Ｃ／Ｌ１８９Ｃ Ｆｃ（「ｄｓＩＬ－１８Ｆｃ」）の有効性を示す。図５Ａは、０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、及び５ｍｇ／ｋｇを週２回、５回投与したｄｓＩＬ－１８Ｆｃの単独投与（上段：２番目、３番目、及び４番目のグラフ）と、１０ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ－Ｌ１抗体との併用投与（下段：２番目、３番目、及び４番目のグラフ）の有効性を示す。コントロール抗体１０ｍｇ／ｋｇの単独投与（上段：１番目のグラフ）とＰＤ－Ｌ１との併用投与（下段：１番目のグラフ）の有効性も示す。各グラフの太い破線は比較のためのコントロール群（コントロール抗体単独）を示し、各グラフの太い実線は群適合を示す。細い線は、各動物のデータを示す。図５Ｂは、同じモデルにおけるＷＴ ＩＬ－１８の有効性を示す（右のグラフ）。各グラフの太い破線は比較のためのコントロール群（コントロール抗体単独）を示し、各グラフの太い実線は群適合を示す。細い線は、各動物のデータを示す。

【図6A】［０００１３］ヒトＬ４５Ｃ／Ｅ１９２Ｃバリアントの結晶構造からの骨格トレースを示す。各構造の新規ジスルフィドを示し、標識付けた。

【図6B】ヒトＡ１６２Ｃ／Ｉ１８５Ｃバリアントの結晶構造からの骨格トレースを示す。各構造の新規ジスルフィドを示し、標識付けた。

【発明を実施するための形態】

【0100】

［０００１４］ＩＬ－１８は強力な免疫刺激サイトカインであり、臨床試験では抗腫瘍効果が早期には実証されなかったものの、最近の研究では、天然のＩＬ－１８アンタゴニストであるＩＬ－１８ＢＰを回避することで、サイトカインに対する治療反応を大幅に改善できる可能性があることが示唆されている。ＩＬ－１８ＢＰの障害に加え、組み換え成熟ＩＬ－１８はかなり不安定で、研究スケールにおいてさえも生産が困難である。さらに、従来のＩｇＧベースの治療薬と比べて、組み換えＩＬ－１８の半減期は２日未満と非常に短い ［Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，２００６］。ＩＬ－１８をベースとした治療薬の成功は、これらの欠点に対処することで大きく向上する可能性がある。

【0101】

［０００１５］臨床試験で使用されるＩＬ－１８ベースの治療薬は、通常、大腸菌で産生されてきた。哺乳動物を宿主とするタンパク質治療薬を大量に生産する能力は、生産及び精製プロセスを大幅に簡略化する一方で、哺乳動物に特異的な翻訳後修飾及びタンパク質折り畳み機構を必要とする機能を組み込んだ、より複雑なデザインも可能にする。例えば、ＩＬ－１８治療薬をアルブミン又はＩｇＧのＦｃドメインに融合させることで、分子の薬物動態学的及び／又は薬力学的特性を大幅に改善することができる。一般的になりつつあるもう一つのアプローチは、半減期延長モジュールに加えて、Ｆａｂ又はＶＨＨのような標的モジュールを追加することである。これらのアプローチはすべて、哺乳動物宿主の生産から恩恵を受ける。我々はここで、操作されたジスルフィドによるＩＬ－１８の安定化によって、Ｆｃとアルブミンの両方の融合体を含む安定した分子を高収率で実際に生産できることを証明した。加えて、我々が評価した２つのバリアント（Ｎ５０Ｃ及びＮ５０Ｃ／Ｌ１７４Ｃ）は、ＩＬ－１８Ｒαへの結合が非常に弱く、細胞ベースのアッセイでは効力が著しく低下するという予期せぬ特性を実証したが、ＩＬ－１８ＢＰへの強い親和性は維持されていた。この独特な性質を利用して、循環ＩＬ－１８ＢＰアンタゴニストの分子トラップを生成し、それによりＩＬ－１８シグナル伝達を増強することができる。

【0102】

［０００１６］ここで、我々はヒト及びマウスのＩＬ－１８に新規の非天然ジスルフィド結合を操作した。我々のＩＬ－１８ジスルフィド安定化ＩＬ－１８バリアントは、哺乳動物宿主細胞で首尾よく発現し、大腸菌で産生されたＷＴ ＩＬ－１８と比較して、有意に高い収率と低い凝集レベルで分泌された。

【0103】

［０００１７］さらに、いくつかのバリアントは、非還元条件下で、ＷＴと比べて改善された熱安定性を示す。ＩＬ－１８Ｒαに対する２つのバリアントの結合を検出することはできなかったが、ＳＰＲによって決定されたように、ＩＬ－１８バリアントは通常、ＩＬ－１８ＲαとＩＬ－１８ＢＰの両方に対して同様の親和性を有する。最後に、ＳＰＲの結果と同様に、細胞ベースのレポーターアッセイでは、ほとんどのバリアントがＷＴと同様の効力を示した。これらの結果を総合すると、ＩＬ－１８に特定のジスルフィド結合を導入することにより、治療薬としての薬物様特性が改善され、融合タンパク質の産生を含む組み換えサイトカインの産生が容易になることが示唆される。

【0104】

Ｉ．定義
［０００１８］「親和性」は、分子（例えば、たんぱく質）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、受容体）との間の非共有相互作用の総和の強度を指す。別途指示されない限り、本明細書で使用される場合、「結合親和性」は、結合対のメンバー（例えば、タンパク質及び受容体）間の１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子Ｘの、そのパートナーＹに対する親和性は一般に、解離定数（Ｋ_Ｄ）によって表すことができる。親和性は、本明細書中に記載のものも含め、当該技術分野で既知の一般的な方法により測定することができる。結合親和性を測定するための具体的な実例となる例示的な方法を以下に記載する。

【0105】

［０００１９］「がん」という用語は、制御されない細胞増殖によって典型的に特徴付けられる、哺乳動物における生理学的状態を指す。がんの例には、腺癌（例えば、結腸直腸腺癌、胃腺癌（ｇａｓｔｒｉｃ ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ）、又は膵腺癌）（転移性腺癌（例えば、転移性結腸直腸腺癌、転移性胃腺癌、又は転移性膵腺癌）であてもよい）、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、及び白血病又はリンパ系悪性腫瘍が含まれるが、これらに限定されない。このようながんのより具体的な例には、食道がん、小腸がん、大腸がん、扁平上皮がん（例えば、上皮細胞扁平上皮がん）、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、肺の腺癌及び肺の扁平上皮癌を含む肺がん、腹膜がん、肝細胞癌、胃腸がん及び胃腸間質がんを含む胃がん（ｇａｓｔｒｉｃ ｏｒ ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、膵臓がん、膠芽細胞腫、子宮頸がん、卵巣がん、肝臓がん、膀胱がん、尿路がん、肝がん、乳がん、結腸がん、直腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜癌又は子宮癌、唾液腺癌、腎臓がん又は腎がん、前立腺がん、外陰部がん、甲状腺がん、肝臓癌、肛門癌、陰茎癌、黒色腫、表在拡大型黒色腫、悪性黒子型黒色腫、末端性黒子性黒色腫、結節型黒色腫、多発性骨髄腫及びＢ細胞リンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）；小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；中悪性度／濾胞性ＮＨＬ；中悪性度びまん性ＮＨＬ；高悪性度免疫芽細胞性ＮＨＬ；高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ；高悪性度小型非開裂細胞性ＮＨＬ；巨大病変ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；及びワルデンストレームマクログロブリン血症を含む）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）；急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）；有毛細胞白血病；慢性骨髄芽球性白血病；及び移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）、並びに母斑症に関連する異常な血管増殖、浮腫（例えば脳腫瘍に関連するもの）、メーグス症候群、脳がん、並びに頭頚部がん、及び関連転移が含まれるが、これらに限定されない。

【0106】

［０００２０］「化学療法剤」は、がんの治療に有用な化学的化合物を指す。化学療法剤の例としては、チオテパ、シクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標））、テモゾロミド（Ｍｅｔｈａｚｏｌａｓｔｏｎｅ（登録商標）、Ｔｅｍｏｄａｒ（登録商標））、トレオスルタン、ベンダムスチン塩酸塩（Ｔｒｅａｎｄａ（登録商標））などのアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファン、及びピポスルファンなどのスルホン酸アルキル；ベンゾドパ、カルボクオン、メツレドーパ、ウレドーパなどのアジリジン類；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド、及びトリメチロメラミンなどのエチレンイミン類及びメチルアミン類；アセトゲニン（特にブラタシン及びブラタシノン）；デルタ－９－テトラヒドロカンナビノール（ドロナビノール、ＭＡＲＩＮＯＬ（登録商標））；ベータ－ラパコン；ラパコール；コルヒチン；ベツリン酸；カンプトテシン（合成類似体トポテカン（ＨＹＣＡＭＴＩＮ（登録商標））、ＣＰＴ－１１（イリノテカン、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標））、イリノテカンリポソーム注射液（Ｏｎｉｖｙｄｅ（登録商標））、アセチルカンプトテシン、スコポレクチン、及び９－アミノカンプトテシンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ－１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン及びビゼレシン合成類似体を含む）；ポドフィロトキシン；ポドフィリン酸；テニポシド；クリプトフィシン（特にクリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成類似体ＫＷ－２１８９及びＣＢ１－ＴＭ１を含む）；エレウテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチン；スポンジスタチン；クロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベンビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタードなどの窒素マスタード類；カルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、及びラニムヌスティンなどのニトロソウレア類；エネジイン系抗生物質（例えば、カリケアマイシン、特にカリケアマイシンガンマ１Ｉ及びカリケアマイシンオメガＩ１（例えば、Ｎｉｃｏｌａｏｕ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，３３：１８３－１８６ （１９９４）参照）；経口アルファ－４インテグリン阻害剤ＣＤＰ３２３；ダイネミシンＡを含むダイネミシン；エスペラマイシン；並びにネオカルジノスタチン発色団及び関連する色素タンパク質エンジイン抗生物質クロモフォア）、アクラシノミシン、アクチノマイシン、オートラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ドキソルビシン（ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標）、モルホリノ－ドキソルビシン、シアノモルホリノ－ドキソルビシン、２－ピロリノ－ドキソルビシン、ドキソルビシンＨＣｌリポソーム注射液（ＤＯＸＩＬ（登録商標））、リポソームドキソルビシンＴＬＣ Ｄ－９９（ＭＹＯＣＥＴ（登録商標））、ペグ化（ｐｅｇｌｙｌａｔｅｄ）リポソームドキソルビシン（ＣＡＥＬＹＸ（登録商標））、及びデオキシドキソルビシン）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシンＣなどのマイトマイシン類、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポルフィロマイシン、ピューロマイシン、ケラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；メトトレキサート、ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ（登録商標））、テガフール（ＵＦＴＯＲＡＬ（登録商標））、カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ（登録商標））、エポチロン、及び５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）などの代謝拮抗剤；デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサートなどの葉酸類似体；フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン、クラドリビン（Ｌｅｕｓｔａｔ（登録商標））、及びネララビン（Ａｒｒａｎｏｎ（登録商標））などのプリン類似体；アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジンなどのピリミジン類似体；カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンなどのアンドロゲン類；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなどの抗アドレナリン剤（ａｎｔｉ－ａｄｒｅｎａｌ）；フロリン酸などの葉酸補充剤；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキセート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デフォファミン；デメコルシン；ジアジコン；エルフォルニチン；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダイニン；メイタンシン及びアンサミトシンなどのメイタンシノイド類；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール；ニトラエリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；２－エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖複合体（ＪＨＳ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２’－トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン類（特にＴ－２毒素、ベラキュリンＡ、ロリジンＡ及びアングイジン）；ウレタン；ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ（登録商標）、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（登録商標））；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）；チオテパ；タキソイド、例えば、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標））、パクリタキセルのアルブミン操作ナノ粒子製剤（ＡＢＲＡＸＡＮＥＴＭ）、カバジタキセル（Ｊｅｖｔａｎａ（登録商標））、及びドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標））；クロランブシル；６－チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；シスプラチン、オキサリプラチン（例えば、ＥＬＯＸＡＴＩＮ（登録商標））、及びカルボプラチンなどの白金薬剤；ビンブラスチン（ＶＥＬＢＡＮ（登録商標））、ビンクリスチン（ＯＮＣＯＶＩＮ（登録商標））、ビンクリスチン硫酸リポソーム（Ｍａｒｑｉｂｏ（登録商標））、ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ（登録商標）、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（登録商標））、ビンフルニン（Ｊａｖｌｏｒ（登録商標））、及びビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標））を含む、微小管を形成するチューブリン重合を阻害するビンカ類；エトポシド（ＶＰ－１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ロイコボリン；ノバントロン；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；イバンドロネート；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；ベキサロテン（ＴＡＲＧＲＥＴＩＮ（登録商標））を含むレチノイン酸などのレチノイド類；クロドロネート（例えば、ＢＯＮＥＦＯＳ（登録商標）又はＯＳＴＡＣ（登録商標））、エチドロネート（ＤＩＤＲＯＣＡＬ（登録商標））、ＮＥ－５８０９５、ゾレドロン酸／ゾレドロネート（ＺＯＭＥＴＡ（登録商標））、アレンドロネート（ＦＯＳＡＭＡＸ（登録商標））、パミドロネート（ＡＲＥＤＩＡ（登録商標））、チルドロネート（ＳＫＥＬＩＤ（登録商標））、又はリセドロネート（ＡＣＴＯＮＥＬ（登録商標））などのビスホスホネート類；トロキサシタビン（１，３－ジオキソランヌクレオシドシトシン類似体）；アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に異常細胞増殖に関与するシグナル伝達経路の遺伝子の発現を阻害するもの、例えばＰＫＣアルファ、Ｒａｆ、Ｈ－Ｒａｓ、及び上皮成長因子受容体（ＥＧＦ－Ｒ）；ＴＨＥＲＡＴＯＰＥ（登録商標）ワクチン及び遺伝子治療ワクチンなどのワクチン、例えば、ＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、及びＶＡＸＩＤ（登録商標）ワクチン；トポイソメラーゼ１阻害剤（例えば、ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ（登録商標））；ｒｍＲＨ（例えば、ＡＢＡＲＥＬＩＸ（登録商標））、ソラフェニブ（例えば、Ｎｅｘａｖａｒ（登録商標））、ＳＵ－１１２４８（スニチニブ、ＳＵＴＥＮＴ（登録商標）、ファイザー）、ペリホシン、ＣＯＸ－２阻害剤（例えば、セレコキシブ又はエトリコキシブ）、カルフィルゾミブ（Ｋｙｐｒｏｌｉｓ（登録商標））及びやクエン酸イキサゾミブ（Ｎｉｎｌａｒｏ（登録商標））などのプロテオソーム阻害剤（例えば、ＰＳ３４１）；ボルテゾミブ（ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標））；ＣＣＩ－７７９；チピファルニブ（Ｒ１１５７７）；オラフェニブ、ＡＢＴ５１０；オブリメルセンナトリウム（ＧＥＮＡＳＥＮＳＥ（登録商標））及びベネトクラクス（Ｖｅｎｃｌｅｘｔａ（登録商標））などのＢｃｌ－２阻害剤；ピキサントロン；ゲフィチニブ（Ｉｒｅｓｓａ（登録商標））などのＥＧＦＲ阻害剤（以下の定義を参照）；ボスチニブ（Ｂｏｓｕｌｉｆ（登録商標））、カボザンチニブ－ｓ－マレイン酸塩（Ｃａｂｏｍｅｔｙｘ（登録商標）、Ｃｏｍｅｔｒｉｑ（登録商標））、ジマレイン酸アファチニブ（Ｇｉｌｏｔｒｉｆ（登録商標））、メシル酸イマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標））、ポナチニブ塩酸塩（Ｉｃｌｕｓｉｇ（登録商標））などのチロシンキナーゼ阻害剤（以下の定義を参照）；アキシチニブ（Ｉｎｌｙｔａ（登録商標））、イブルチニブ（Ｉｍｂｒｕｖｉｃａ（登録商標））、トシル酸ソラフェニブ（Ｎｅｘａｖａｒ（登録商標））、ダサチニブ（Ｓｐｒｙｃｅｌ（登録商標））、オシメルチニブ（Ｔａｇｒｉｓｓｏ（登録商標））、エルロチニブ塩酸塩（Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標））、ニロチニブ（Ｔａｓｉｇｎａ（登録商標））、ジトシル酸ラパチニブ（Ｔｙｋｅｒｂ（登録商標））、クリゾチニブ（Ｘａｌｋｏｒｉ（登録商標））及びパゾパニブ塩酸塩（Ｖｏｔｒｉｅｎｔ（登録商標））；ラパマイシン（シロリムス、ＲＡＰＡＭＵＮＥ（登録商標））、エベロリムス（Ａｆｉｎｉｔｏｒ（登録商標））、及びテムシロリムス（Ｔｏｒｉｓｅｌ（登録商標））などのセリン－スレオニンキナーゼ阻害剤；ロナファルニブ（ＳＣＨ６６３６、ＳＡＲＡＳＡＲＴＭ）などのファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤；ネツピタント、及びロラピタント塩酸塩（Ｖａｒｕｂｉ（登録商標））などのＮＫ１受容体アンタゴニスト；イミキモド（Ａｌｄａｒａ（登録商標））；アレクチニブ（Ａｌｅｃｅｎｓａ（登録商標））及びセリチニブ（Ｚｙｋａｄｉａ（登録商標））などの未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）阻害剤；ベリノスタット（Ｂｅｌｅｏｄａｑ（登録商標））及びボリノスタット（Ｚｏｌｉｎｚａ（登録商標））などのヒストンデアセチラーゼ阻害剤、クロファラビンなどのプリンヌクレオシド代謝拮抗剤、コビメチニブ（Ｃｏｔｅｌｌｉｃ（登録商標））及びトラメチニブ（Ｍｅｋｉｎｉｓｔ（登録商標））などのマイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＥＫ）阻害剤；デシタビン（Ｄａｃｏｇｅｎ（登録商標））などの核酸合成阻害剤；ビスモデギブ（Ｅｒｉｖｅｄｇｅ（登録商標））及びソニデギブ（Ｏｄｏｍｚｏ（登録商標））などのヘッジホッグシグナル伝達経路阻害剤；パノビノスタット（Ｆａｒｙｄａｋ（登録商標））などのヒストンデアセチラーゼ阻害剤；プララトレキサート（Ｆｏｌｏｔｙｎ（登録商標））、ラルチトレキセド、及びペメトレキセド二ナトリウム（Ａｌｉｍｔａ（登録商標））などの抗葉酸剤；メシル酸エリブリン（Ｈａｌａｖｅｎ（登録商標））などの有糸分裂阻害剤；パルボシクリブ（Ｉｂｒａｎｃｅ（登録商標））などのサイクリン依存性キナーゼの阻害剤；ロミデプ
シン（Ｉｓｔｏｄａｘ（登録商標））などのデプシペプチド；イキサベピロン（Ｉｘｅｍｐｒａ（登録商標））などのエポチロンＢ類似体；リン酸ルキソリチニブ（Ｊａｋａｆｉ（登録商標））などのヤヌスキナーゼ阻害剤；メシル酸レンバチニブ（Ｌｅｎｖｉｍａ（登録商標））、バンデタニブ（Ｃａｐｒｅｌｓａ（登録商標））、レゴラフェニブ（Ｓｔｉｖａｒｇａ（登録商標））、ニンテダニブ（Ｖａｒｇａｔｅｆ（登録商標））などのマルチプルキナーゼ阻害剤；トリフルリジンなどのヌクレオシド類似体；チピラシル塩酸塩などのチミジンホスホリラーゼ阻害剤；オラパリブ（Ｌｙｎｐａｒｚａ（登録商標））などのＰＡＲＰ阻害剤；サリドマイド（Ｓｔｉｖａｒｇａ（登録商標）、Ｔｈａｌｏｍｉｄｅ（登録商標））及びその誘導体であるポマリドマイド（Ｐｏｍａｌｙｓｔ（登録商標））及びレナリドマイド（Ｒｅｖｌｉｍｉｄ（登録商標））など；プレドニゾンなどの合成コルチコステロイド；酢酸ランレオチド（Ｓｏｍａｔｕｌｉｎｅ（登録商標））などのソマトスタチンの類似体；メペコハク酸オマセタキシン（Ｓｙｎｒｉｂｏ（登録商標））などのタンパク質翻訳阻害剤；ダブラフェニブ（Ｔａｎｆｉｎｌａｒ（登録商標））及びベムラフェニブ（Ｚｅｌｂｏｒａｆ（登録商標））などの関連酵素Ｂ－Ｒａｆの阻害剤；三酸化ヒ素（Ｔｒｉｓｅｎｏｘ（登録商標））；三酢酸ウリジン（Ｖｉｓｔｏｇａｒｄ（登録商標））；二塩化ラジウム２２３（Ｘｏｆｉｇｏ（登録商標））；トラベクテジン（Ｙｏｎｄｅｌｉｓ）、イデラリシブ（Ｚｙｄｅｌｉｇ（登録商標））などのホスホイノシチド３キナーゼ阻害剤；ミルファムルチド（Ｍｅｐａｃｔ（登録商標））；並びに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸又は誘導体；並びにシクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン及びプレドニゾロンの併用療法の略称であるＣＨＯＰと；オキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮＴＭ）を５－ＦＵ及びロイコボリンと組み合わせた治療レジメンの略称であるＦＯＬＦＯＸなどの、上記の２つ以上の組み合わせが挙げられる。

【0107】

［０００２１］本明細書で定義される化学療法剤は、がんの成長を促進し得るホルモンの効果を調節、低減、遮断、又は阻害するように作用する「抗ホルモン剤」又は「内分泌治療薬」を含む。それらは、それら自体がホルモンであってもよく、タモキシフェン（ＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標））、４－ヒドロキシタモキシフェン、トレミフェン（ＦＡＲＥＳＴＯＮ（登録商標））、イドキシフェン、ドロロキシフェン、ラロキシフェン（ＥＶＩＳＴＡ（登録商標））、トリオキシフェン、ケオキシフェン、及びＳＥＲＭ３などの選択的エストロゲン受容体調節剤（ＳＥＲＭ）を含む、混合アゴニスト／アンタゴニストプロファイルを有する抗エストロゲン；デガレリクス、リュープロプレリン、及びトリプトレリンなどのゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）アンタゴニスト；フルベストラント（ＦＡＳＬＯＤＥＸ（登録商標））、及びＥＭ８００（そのような薬剤は、エストロゲン受容体（ＥＲ）二量体化をブロックする、ＤＮＡ結合を阻害する、ＥＲターンオーバーを増加させる、及び／又はＥＲレベルを抑制する場合がある）などのアゴニスト特性を有しない純粋な抗エストロゲン；ホルメスタン及びエキセメスタン（ＡＲＯＭＡＳＩＮ（登録商標））などのステロイド性アロマターゼ阻害剤、並びにアナストロゾール（ＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標））、レトロゾール（ＦＥＭＡＲＡ（登録商標））、及びアミノグルテチミドなどの非ステロイド性アロマターゼ阻害剤を含むアロマターゼ阻害剤、並びにボロゾール（ＲＩＶＩＳＯＲ（登録商標））、メゲストロールアセテート（ＭＥＧＡＳＥ（登録商標））、ファドロゾール、及び４（５）－イミダゾールを含む、他のアロマターゼ阻害剤；リュープロリド（ＬＵＰＲＯＮ（登録商標）及びＥＬＩＧＡＲＤ（登録商標））、ゴセレリン、ブセレリン、ヒストレリン、及びトリプテレリン（ｔｒｉｐｔｅｒｅｌｉｎ）を含む、黄体形成ホルモン放出ホルモンアゴニスト；メゲストロールアセテート及びメドロキシプロゲステロンアセテートなどのプロゲスチン、ジエチルスチルベストロール及びプレマリンなどのエストロゲン、並びにフルオキシメステロン、全てのトランスレチオン酸（ｔｒａｎｓｒｅｔｉｏｎｉｃ ａｃｉｄ）、及びフェンレチニドなどのアンドロゲン／レチノイドを含む、性ステロイド；デキサメタゾン；オナプリストン；抗プロゲステロン；エストロゲン受容体下方調節剤（ＥＲＤ）；フルタミド、ニルタミド（例えば、Ｎｉｌａｎｄｒｏｎ（登録商標））、酢酸アビラテロン（Ｚｙｔｉｇａ（登録商標））、酢酸シプロテロン（Ｃｙｐｒｏｓｔａｔ（登録商標））、エンザルタミド（Ｘｔａｎｄｉ（登録商標））及びビカルタミドなどの抗アンドロゲン；並びに上記のうちのいずれかの薬学的に許容される塩、酸、又は誘導体；並びに上記のうちの２つ以上の組み合わせを含むが、これらに限定されない。

【0108】

［０００２２］薬剤、例えば、薬学的組成物の、「有効量」は、所望の治療結果又は予防的結果を達成するために必要な投与量及び期間での有効な量を指す。

【0109】

［０００２３］「宿主細胞」、「宿主細胞株」、及び「宿主細胞培養物」という用語は、互換可能に使用され、外因性核酸が導入された細胞を指し、そのような細胞の子孫も含まれる。宿主細胞には、「形質転換体」及び「形質転換細胞」が含まれ、これらには、初代形質転換細胞と、継代の数に関係なく、それに由来する子孫とが含まれる。子孫は、核酸の含有量が親細胞と完全に同一でなくてもよく、変異を含んでいてもよい。元の形質転換細胞においてスクリーニング又は選択されたのと同じ機能又は生物学的活性を有する変異子孫が本明細書に含まれる。

【0110】

［０００２４］本明細書で使用される「ＩＬ－１８」という用語は、別途指示されない限り、霊長類（例えばヒト）及び齧歯類（例えばマウス及びラット）などの哺乳動物を含む、任意の脊椎動物源の任意の天然ＩＬ－１８を指す。この用語は、「完全長」の未処理ＩＬ－１８、及び細胞内でのプロセシングから生じる任意の形態のＩＬ－１８を包含する。この用語はまた、ＩＬ－１８の天然に存在するバリアント、例えば、スプライスバリアント又は対立遺伝子バリアントも包含する。例示的な成熟ヒトＩＬ－１８のアミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ：Ｑ１４１１６のアミノ酸３７～１９３として、及び本明細書中の配列番号１に示される。例示的な成熟マウスＩＬ－１８のアミノ酸は、ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ７０３８０のアミノ酸３６～１９２として、及び本明細書中の配列番号２に示される。

【0111】

［０００２５］「安定化ＩＬ－１８ポリペプチド」という用語は、ジスルフィド結合を形成することができる少なくとも１対のシステインを含むように修飾された、修飾ＩＬ－１８ポリペプチドを含むポリペプチドを指す。安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、修飾ＩＬ－１８ポリペプチドに加えて、例えば融合パートナーのような追加のアミノ酸配列を含んでいてもよい。

【0112】

［０００２６］「個体」又は「対象」は、哺乳動物である。哺乳動物には、家畜動物（例えばウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、及びウマ）、霊長類（例えばヒト、及びサルなどの非ヒト霊長類）、ウサギ、及び齧歯類（例えばマウス及びラット）が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の態様では、個体又は対象はヒトである。

【0113】

［０００２７］「単離された」ポリペプチドは、その天然環境の成分から分離されたポリペプチドである。いくつかの態様では、ポリペプチドは、例えば、電気泳動（例えば、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、等電点電気泳動法（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）又はクロマトグラフィー（例えば、イオン交換又は逆相ＨＰＬＣ）法によって決定された場合、９５％又は９９％よりも高い純度まで精製される。

【0114】

［０００２８］「核酸分子」又は「ポリヌクレオチド」という用語は、ヌクレオチドのポリマーを含む任意の化合物及び／又は物質を含む。各ヌクレオチドは、塩基、具体的には、プリン塩基又はピリミジン塩基（すなわち、シトシン（Ｃ）、グアニン（Ｇ）、アデニン（Ａ）、チミン（Ｔ）又はウラシル（Ｕ））、糖（すなわち、デオキシリボース又はリボース）、及びリン酸基で構成される。多くの場合、核酸分子は塩基配列によって記載され、それにより、塩基は、核酸分子の一次構造（線状構造）を表す。塩基の配列は、典型的には、５’から３’に向かって表される。本明細書では、核酸分子という用語は、例えば、相補ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）及びゲノムＤＮＡを含むデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、リボ核酸（ＲＮＡ）、特にメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、ＤＮＡ又はＲＮＡの合成型、並びにこれらの分子のうちの２つ以上を含む混合ポリマーを包含する。核酸分子は、線状でも環状でもよい。さらに、核酸分子という用語には、センス鎖及びアンチセンス鎖の両方、並びに一本鎖形態及び二本鎖形態が含まれる。さらに、本明細書に記載される核酸分子は、天然に存在するヌクレオチド又は天然には存在しないヌクレオチドを含有し得る。天然には存在しないヌクレオチドの例としては、誘導体化された糖若しくはリン酸骨格結合又は化学的に修飾された残基を有する修飾ヌクレオチド塩基が挙げられる。核酸分子は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、及び／又は例えば宿主若しくは患者におけるｉｎ ｖｉｖｏで、本発明のポリペプチドの直接的な発現のためのベクターとして適したＤＮＡ分子及びＲＮＡ分子も包含する。そのようなＤＮＡ（例えば、ｃＤＮＡ）ベクター又はＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ベクターは、修飾されていなくてもよく、又は修飾されていてもよい。例えば、ｍＲＮＡは、ｉｎ ｖｉｖｏでポリペプチドを生成するために対象にｍＲＮＡを注入することができるように、ＲＮＡベクターの安定性及び／又はコードされた分子の発現を高めるように化学修飾されてもよい（例えば、Ｓｔａｄｌｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２０１７、オンラインでは２０１７年６月１２日に公開、ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｍ．４３５６又はＥＰ２１０１８２３ Ｂ１を参照）。

【0115】

［０００２９］「単離された」核酸は、その天然環境の成分から分離された核酸分子である。単離された核酸には、通常は核酸分子を含む細胞に含まれる核酸分子が含まれるが、核酸分子は染色体外に、又は天然の染色体位置とは異なる染色体位置に存在する。

【0116】

［０００３０］「添付文書」という用語は、治療製品の商品包装に通例含まれる指示書を指すのに用いられ、そのような治療製品の適応症、用法、用量、投与、併用療法、使用に関する禁忌及び／又は注意事項についての情報を含む。

【0117】

［０００３１］参照ポリペプチド配列に対する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、配列をアラインメントして、最大の配列同一性パーセントを達成するために必要であればギャップを導入した後の、アラインメントのためにいかなる保存的置換も配列同一性の一部として考慮しない場合の、参照ポリペプチド配列内のアミノ酸残基と同一である候補配列内のアミノ酸残基の割合として定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定するためのアラインメントは、当該技術分野の範囲内にある様々な方法、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、Ｃｌｕｓｔａｌ Ｗ、Ｍｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェア又はＦＡＳＴＡプログラムパッケージのような公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して達成され得る。当業者であれば、比較する配列の全長にわたって最大のアラインメントを達成するのに必要な任意のアルゴリズムを含めた、配列を整列させるための適切なパラメータを決定することができる。あるいは、同一性パーセントの値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ－２を使用して生成され得る。ＡＬＩＧＮ－２配列比較コンピュータプログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．によって作成されており、ソースコードは、米国著作権局（Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．，２０５５９）のユーザドキュメンテーションにファイルされており、米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７の下に登録されており、国際公開第２００１／００７６１１号に記載されている。

【0118】

［０００３２］別途指示がない限り、本明細書における目的のために、アミノ酸配列同一性パーセントの値は、ＦＡＳＴＡパッケージバージョン３６．３．８ｃのｇｇｓｅａｒｃｈプログラムを使用して、又はその後ＢＬＯＳＵＭ５０比較マトリックスを用いて生成される。ＦＡＳＴＡプログラムパッケージは、Ｗ．Ｒ．Ｐｅａｒｓｏｎ及びＤ．Ｊ．Ｌｉｐｍａｎ（１９８８），「Ｉｍｐｒｏｖｅｄ Ｔｏｏｌｓ ｆｏｒ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ」，ＰＮＡＳ ８５：２４４４－２４４８；Ｗ．Ｒ．Ｐｅａｒｓｏｎ （１９９６）「Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ」Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２６６：２２７－２５８；並びにＰｅａｒｓｏｎら（１９９７）Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ４６：２４－３６によって作成され、ｗｗｗ．ｆａｓｔａ．ｂｉｏｃｈ．ｖｉｒｇｉｎｉａ．ｅｄｕ／ｆａｓｔａ＿ｗｗｗ２／ｆａｓｔａ＿ｄｏｗｎ．ｓｈｔｍｌ又はｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｓｓｓ／ｆａｓｔａから公的に入手可能である。あるいは、ｆａｓｔａ．ｂｉｏｃｈ．ｖｉｒｇｉｎｉａ．ｅｄｕ／ｆａｓｔａ＿ｗｗｗ２／ｉｎｄｅｘ．ｃｇｉでアクセス可能な公的なサーバーを使用して、ｇｇｓｅａｒｃｈ（ｇｌｏｂａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ：ｐｒｏｔｅｉｎ）プログラム及びデフォルトオプション（ＢＬＯＳＵＭ５０；ｏｐｅｎ：－１０；ｅｘｔ：－２；Ｋｔｕｐ＝２）を用い、ローカルではなくグローバルのアラインメントを確実に行い、配列を比較することができる。アミノ酸同一性パーセントは、出力アラインメントヘッダ中に与えられる。

【0119】

［０００３３］「薬学的組成物」又は「薬学的製剤」という用語は、それに含有される有効成分の生物活性が有効になるような形態であるとともに、薬学的組成物を投与され得る対象に対して許容できないほど毒性である追加の成分を含有しない、調製物を指す。

【0120】

［０００３４］「薬学的に許容される担体」は、対象にとって非毒性である、薬学的組成物又は製剤中の有効成分以外の成分を指す。薬学的に許容される担体には、バッファー、添加物、安定剤、又は防腐剤が含まれるが、これらに限定されない。

【0121】

［０００３５］本明細書で使用される場合、「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」（及び「治療する（ｔｒｅａｔ）」又は「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」などのその文法的変化形）は、治療される個体の疾患の自然な経過を変化させる試みにおける臨床的介入を指し、予防のために又は臨床病理学の過程で行われ得る。治療の望ましい効果には、疾患の発症又は再発を予防すること、症状の緩和、疾患の直接的又は間接的な病理学的帰結の縮小、転移の予防、疾患進行の速度を遅らせること、疾患状態の改善又は緩和、及び寛解又は予後の改善が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの態様では、本発明のポリペプチドは、疾患の発症を遅延させるために、又は疾患の進行を遅らせるために使用される。

【0122】

［０００３６］「ベクター」という用語は、本明細書で使用される場合、連結している別の核酸を増殖させることができる核酸分子を指す。この用語は、自己複製核酸構造としてのベクターと、導入された宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターとを含む。ある種のベクターは、作用可能に連結された核酸の発現を指示することができる。そのようなベクターは、本明細書では「発現ベクター」と呼ばれる。

【0123】

ＩＩ．組成物及び方法
［０００３７］いくつかの態様では、本発明は、部分的に安定化ＩＬ－１８ポリペプチドに基づく。いくつかの実施態様では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、少なくとも１つのジスルフィド結合を含む。安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、例えば、がん、感染性疾患、及び炎症の治療に有用である。

【0124】

Ａ．例示的な安定化ＩＬ－１８ポリペプチド
［０００３８］いくつかの態様では、本発明は安定化ＩＬ－１８ポリペプチドを提供する。いくつかの実施態様では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドはＩＬ－１８Ｒαに結合する。いくつかの実施態様では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、１００ｎＭ未満、又は５０ｎＭ未満、又は３０ｎＭ未満、又は２０ｎＭ未満、又は１０ｎＭ未満、又は０．１ｎＭと１００ｎＭの間、又は１ｎＭと１００ｎＭの間の親和性でＩＬ－１８Ｒαに結合する。いくつかの実施態様では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、野生型ＩＬ－１８と比較してＩＬ－１８Ｒαに対して有意に減少した親和性でＩＬ－１８Ｒαに結合するか、又はＩＬ－１８Ｒαと検出可能に結合しない。いくつかの実施態様では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、５０ｎＭ超、６０ｎＭ超、７０ｎＭ超、８０ｎＭ超、９０ｎＭ超、１００ｎＭ超、５０ｎＭと１ｍＭの間、６０ｎＭと１ｍＭの間、７０ｎＭと１ｍＭの間、８０ｎＭと１ｍＭの間の親和性でＩＬ－１８Ｒαに結合する。いくつかの実施態様では、親和性は、表面プラズモン共鳴によって測定される。いくつかの実施態様では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、ＩＬ－１８Ｒαに対する検出可能な結合を示さない、例えば、表面プラズモン共鳴によって測定して、８１ｎＭまで検出可能な結合を示さない。

【0125】

［０００３９］いくつかの実施態様では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、ＩＬ－１８ＢＰに結合する。いくつかの実施態様では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、１ｎＭ未満、１００ｐＭ未満、又は５０ｐＭ未満、又は３０ｐＭ未満、又は２０ｐＭ、１０ｐＭ未満、１ｆＭと１ｎＭの間、１０ｆＭと１ｎＭの間、１ｆＭと１００ｐＭの間、１０ｆＭと１００ｐＭの間、１ｆＭと５０ｐＭの間、１０ｆＭと５０ｐＭの間、１ｆＭと３０ｐＭの間、又は１０ｆＭと３０ｐＭの間の親和性でＩＬ－１８ＢＰに結合する。いくつかの実施態様では、親和性は、表面プラズモン共鳴によって測定される。

【0126】

［０００４０］いくつかの実施態様では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、ＩＬ－１８受容体を通じたシグナル伝達を誘発する。いくつかの実施態様では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、例えばｉｎ ｖｉｖｏでのレポーターアッセイにおいて、１ｎＭ未満、８００ｐＭ未満、７００ｐＭ未満、６００ｐＭ未満、５００ｐＭ未満、４００ｐＭ未満、３００ｐＭ未満、２００ｐＭ未満、１００ｐＭ未満、１ｐＭと１ｎＭの間、１ｐＭと８００ｐＭの間、１ｐＭと５００ｐＭの間、又は１ｐＭと３００ｐＭの間のＥＣ５０でＩＬ－１８受容体を通じたシグナル伝達を誘発する。いくつかの実施態様では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、Ｔ細胞又はＮＫ細胞などのヒトリンパ球においてＩＦＮγ発現を誘発する。いくつかの実施態様では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、１ｎＭ未満、８００ｐＭ未満、７００ｐＭ未満、６００ｐＭ未満、５００ｐＭ未満、４００ｐＭ未満、３００ｐＭ未満、２００ｐＭ未満、１００ｐＭ未満、１ｐＭと１ｎＭの間、１ｐＭと８００ｐＭの間、１ｐＭと５００ｐＭの間、又は１ｐＭと３００ｐＭの間のＥＣ５０で、ｉｎ ｖｉｔｒｏでヒトＴ細胞におけるＩＦＮγ発現を誘発する。いくつかの実施態様では、本明細書で提供される安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、野生型ヒトＩＬ－１８よりも大幅に減少した程度で、ｉｎ ｖｉｔｒｏで、Ｔ細胞又はＮＫ細胞などのヒトリンパ球におけるＩＦＮγ発現を誘発する。

【0127】

［０００４１］様々な実施態様において、本明細書で提供される安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、ジスルフィド結合を形成することができる少なくとも１対のシステインを含むように修飾された、修飾ＩＬ－１８ポリペプチドを含む。いくつかの実施態様では、修飾ＩＬ－１８ポリペプチドは、１対又は２対のシステインを有する。いくつかの実施態様では、各対のシステインは、ジスルフィド結合を形成することができる。「ジスルフィド結合を形成できる」とは、生理学的条件などの適切な条件下で、システインがジスルフィド結合を形成及び／又は維持するのに十分な近接性及び配向性を有することを意味する。いくつかの実施態様では、修飾ＩＬ－１８ポリペプチドは、遊離システインを含まない。様々な実施態様において、修飾ＩＬ－１８ポリペプチドは、野生型成熟ＩＬ－１８（配列番号１）のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、又は少なくとも９７％同一である。いくつかの実施態様では、野生型成熟ＩＬ－１８アミノ酸配列中の、ジスルフィド結合を形成することができるシステイン対の一部ではない任意のシステインは、セリンで置換される。したがって、いくつかの実施態様では、修飾ＩＬ－１８ポリペプチドは、アミノ酸置換Ｃ７４Ｓ、Ｃ１０４Ｓ、Ｃ１１２Ｓ、及びＣ１６３Ｓのうちの１つ、２つ、３つ、又は４つを含み、アミノ酸番号付けは図４Ａに従う。

【0128】

［０００４２］いくつかの実施態様では、修飾ＩＬ－１８ポリペプチドは、以下から選択されるアミノ酸置換のセット：
ａ）Ｌ４５Ｃ及びＥ１９２Ｃ；
ｂ）Ｙ３７Ｃ及びＳ９１Ｃ；
ｃ）Ｓ４３Ｃ及びＳ８６Ｃ；
ｄ）Ｓ４６Ｃ及びＶ１８９Ｃ；
ｅ）Ｓ４６Ｃ及びＩ８５Ｃ；
ｆ）Ｖ４７Ｃ及びＱ１９０Ｃ；
ｇ）Ｎ５０Ｃ；
ｈ）Ｎ５０Ｃ及びＬ１７４Ｃ；
ｉ）Ｆ５７Ｃ及びＴ８１Ｃ；
ｊ）Ｄ９０Ｃ及びＡ９７Ｃ；
ｋ）Ｖ９８Ｃ及びＱ１３９Ｃ；
ｌ）Ｔ９９Ｃ及びＰ１２４Ｃ；
ｍ）Ｓ１０１Ｃ及びＴ１０９Ｃ；
ｎ）Ｉ１０７Ｃ及びＮ１２３Ｃ；
ｏ）Ｒ１４０Ｃ及びＱ１５０Ｃ；並びに
ｐ）Ａ１６２Ｃ及びＩ１８５Ｃ；
を含み、アミノ酸番号付けは図４Ａに従う。いくつかのこのような実施態様では、修飾ＩＬ－１８ポリペプチドは、アミノ酸置換Ｃ７４Ｓ、Ｃ１０４Ｓ、Ｃ１１２Ｓ、及びＣ１６３Ｓのうちの１つ、２つ、３つ、又は４つを含み、アミノ酸番号付けは図４Ａに従う。

【0129】

［０００４３］いくつかの実施態様では、修飾ＩＬ－１８ポリペプチドは、以下から選択されるアミノ酸置換のセット：
ａ）Ｌ４５Ｃ及びＥ１９２Ｃ；
ｂ）Ｙ３７Ｃ及びＳ９１Ｃ；
ｃ）Ｓ４３Ｃ及びＳ８６Ｃ；
ｄ）Ｓ４６Ｃ及びＶ１８９Ｃ；
ｅ）Ｓ４６Ｃ及びＩ８５Ｃ；
ｆ）Ｖ４７Ｃ及びＱ１９０Ｃ；
ｇ）Ｆ５７Ｃ及びＴ８１Ｃ；
ｈ）Ｄ９０Ｃ及びＡ９７Ｃ；
ｉ）Ｖ９８Ｃ及びＱ１３９Ｃ；
ｊ）Ｔ９９Ｃ及びＰ１２４Ｃ；
ｋ）Ｓ１０１Ｃ及びＴ１０９Ｃ；
ｌ）Ｉ１０７Ｃ及びＮ１２３Ｃ；
ｍ）Ｒ１４０Ｃ及びＱ１５０Ｃ；並びに
ｎ）Ａ１６２Ｃ及びＩ１８５Ｃ；
を含み、アミノ酸置換番号付けは図４Ａに従う。いくつかのこのような実施態様では、修飾ＩＬ－１８ポリペプチドは、アミノ酸置換Ｃ７４Ｓ、Ｃ１０４Ｓ、Ｃ１１２Ｓ、及びＣ１６３Ｓを含み、アミノ酸番号付けは図４Ａに従う。

【0130】

［０００４４］いくつかの実施態様では、修飾ＩＬ－１８ポリペプチドは、配列番号５、９、１２、１３、１５、１８、１９～２４、及び２７から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様では、修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドは、配列番号５、９、１２、１３、１５、１８、１９～２４、及び２７から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0131】

［０００４５］いくつかの実施態様では、修飾ＩＬ－１８ポリペプチドは、アミノ酸置換Ｎ５０Ｃを含み、アミノ酸番号付けは図４Ａに従う。いくつかの実施態様では、修飾ＩＬ－１８ポリペプチドは、アミノ酸置換Ｌ１７４Ｃを含み、アミノ酸番号付けは図４Ａに従う。いくつかの実施態様では、修飾ＩＬ－１８ポリペプチドは、置換Ｎ５０Ｃ、Ｃ７４Ｓ、Ｃ１０４Ｓ、及びＣ１１２Ｓを含むか、又は置換Ｎ５０Ｃ、Ｃ７４Ｓ、Ｃ１０４Ｓ、及びＬ１７４Ｃを含み、アミノ酸番号付けは図４Ａに従う。いくつかの実施態様では、Ｎ５０Ｃは、天然システインＣ１６３とジスルフィド結合を形成することができる。いくつかの実施態様では、Ｌ１７４Ｃは、天然システインＣ１１２とジスルフィド結合を形成することができる。

【0132】

［０００４６］いくつかの実施態様では、修飾ＩＬ－１８ポリペプチドは、配列番号６及び８から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様では、修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドは、配列番号６及び８から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0133】

［０００４７］本明細書で提供される修飾ＩＬ－１８ポリペプチドは、１つ又は複数の追加の置換を含んでいてもよい。修飾ＩＬ－１８ポリペプチドに含まれ得る非限定的な例示的な追加の置換には、米国特許出願公開第２０１９／００７０２６２号に記載されているものが含まれる。いくつかの実施態様では、修飾ＩＬ－１８ポリペプチドは、Ｙ３７、Ｌ４１、Ｋ４４、Ｍ８７、Ｋ８９、Ｓ９１、Ｑ９２、Ｐ９３、Ｇ９５、Ｍ９６、Ｅ１１３、Ｑ１３９、Ｓ１４１、Ｄ１４６、Ｎ１４７、Ｍ１４９、Ｖ１８９、及びＮ１９１から選択される位置において、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、又は少なくとも６つの置換をさらに含み、アミノ酸番号付けは図４Ａに従う。いくつかの実施態様では、修飾ＩＬ－１８ポリペプチドは、Ｙ３７Ｈ、Ｙ３７Ｒ、Ｌ４１Ｈ、Ｌ４１Ｉ、Ｌ４１Ｙ、Ｋ４４Ｑ、Ｋ４４Ｒ、Ｍ８７Ｔ、Ｍ８７Ｋ、Ｍ８７Ｄ、Ｍ８７Ｎ、Ｍ８７Ｅ、Ｍ８７Ｒ、Ｋ８９Ｒ、Ｋ８９Ｇ、Ｋ８９Ｓ、Ｋ８９Ｔ、Ｓ９１Ｋ、Ｓ９１Ｒ、Ｑ９２Ｅ、Ｑ９２Ａ、Ｑ９２Ｒ、Ｑ９２Ｖ、Ｑ９２Ｇ、Ｑ９２Ｋ、Ｑ９２Ｌ、Ｐ９３Ｌ、Ｐ９３Ｇ、Ｐ９３Ａ、Ｐ９３Ｋ、Ｇ９５Ｔ、Ｇ９５Ａ、Ｍ９６Ｋ、Ｍ９６Ｑ、Ｍ９６Ｒ、Ｍ９６Ｌ、Ｅ１１３Ｄ、Ｑ１３９Ｅ、Ｑ１３９Ｋ、Ｑ１３９Ｐ、Ｑ１３９Ａ、Ｑ１３９Ｒ、Ｓ１４１Ｒ、Ｓ１４１Ｄ、Ｓ１４１Ｋ、Ｓ１４１Ｎ、Ｓ１４１Ａ、Ｄ１４６Ｈ、Ｄ１４６Ｋ、Ｄ１４６Ｎ、Ｄ１４６Ｑ、Ｄ１４６Ｅ、Ｄ１４６Ｓ、Ｄ１４６Ｇ、Ｎ１４７Ｈ、Ｎ１４７Ｙ、Ｎ１４７Ｄ、Ｎ１４７Ｒ、Ｎ１４７Ｓ、Ｎ１４７Ｇ、Ｍ１４９Ｖ、Ｍ１４９Ｒ、Ｍ１４９Ｔ、Ｍ１４９Ｋ、Ｖ１８９Ｉ、Ｖ１８９Ｔ、Ｖ１８９Ａ、Ｎ１９１Ｋ及びＮ１９１Ｈから選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、又は少なくとも６つの置換をさらに含む。

【0134】

［０００４８］いくつかの実施態様では、修飾ＩＬ－１８ポリペプチドは、Ｍ８７位、Ｍ９６位、Ｓ１４１位、Ｄ１４６位、及びＮ１４７位；又はＭ８７位、Ｋ８９位、Ｑ９２位、Ｓ１４１位、及びＮ１４７位における置換をさらに含む。いくつかのこのような実施態様では、修飾ＩＬ－１８ポリペプチドは、置換（ｉ）Ｍ８７Ｔ若しくはＭ８７Ｋ；（ｉｉ）Ｍ９６Ｋ若しくはＭ９６Ｌ；（ｉｉｉ）Ｓ１４１Ｄ、Ｓ１４１Ｎ、若しくはＳ１４１Ａ；（ｉｖ）Ｄ１４６Ｋ、Ｄ１４６Ｎ、Ｄ１４６Ｓ、若しくはＤ１４６Ｇ；及び（ｖ）Ｎ１４７Ｙ、Ｎ１４７Ｙ、Ｎ１４７Ｒ、若しくはＮ１４７Ｇをさらに含むか；又は置換（ｉ）Ｍ８７Ｋ；（ｉｉ）Ｋ８９Ｇ若しくはＫ８９Ｓ；（ｉｉｉ）Ｑ９２Ｇ、Ｑ９２Ｒ、若しくはＱ９２Ｌ；（ｉｖ）Ｄ１４６Ｎ、Ｄ１４６Ｓ、若しくはＤ１４６Ｇ；及び（ｖ）Ｎ１４７Ｒ若しくはＮ１４７Ｇをさらに含む。

【0135】

［０００４９］いくつかの実施態様では、修飾ＩＬ－１８ポリペプチドは、Ｙ３７、Ｌ４１、Ｄ５３、Ｅ６７、Ｔ７０、Ｄ７１、Ｓ７２、Ｄ７３、Ｄ７６、Ｎ７７、Ｍ８７、Ｑ９１、Ｍ９６、Ｑ１３９、Ｈ１４５、Ｍ１４９、及びＲ１６７から選択される位置において、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、又は少なくとも６つの置換をさらに含み、アミノ酸番号付けは図４Ａに従う。いくつかの実施態様では、修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドは、Ｙ３７Ｄ、Ｙ３７Ｆ、Ｙ３７Ｈ、Ｙ３７Ｌ、Ｌ４１Ｆ、Ｌ４１Ｈ、Ｄ５３Ａ、Ｄ５３Ｇ、Ｄ５３Ｒ、Ｄ５３Ｈ、Ｅ６７Ａ、Ｅ６７Ｔ、Ｅ６７Ｇ、Ｅ６７Ｋ、Ｅ６７Ｒ、Ｔ７０Ａ、Ｔ７０Ｋ、Ｔ７０Ｅ、Ｄ７１Ｓ、Ｄ７１Ａ、Ｄ７１Ｙ、Ｓ７２Ｎ、Ｓ７２Ｋ、Ｓ７２Ｒ、Ｄ７３Ｐ、Ｄ７３Ａ、Ｄ７３Ｒ、Ｄ７３Ｈ、Ｄ７３Ｌ、Ｄ７３Ｖ、Ｄ７６Ｙ、Ｄ７６Ｓ、Ｄ７６Ａ、Ｎ７７Ｋ、Ｎ７７Ｓ、Ｎ７７Ｒ、Ｍ８７Ｆ、Ｍ８７Ｌ、Ｍ８７Ｉ、Ｑ９１Ｈ、Ｍ９６Ｌ、Ｍ９６Ｆ、Ｍ９６Ｉ、Ｑ１３９Ｌ、Ｑ１３９Ｉ、Ｈ１４５Ａ、Ｈ１４５Ｐ、Ｈ１４５Ｄ、Ｍ１４９Ｌ、Ｍ１４９Ｉ、Ｍ１４９Ｆ及びＲ１６７Ｓから選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、又は少なくとも６つの置換をさらに含む。いくつかの実施態様では、修飾ヒトＩＬ－１８ポリペプチドは、置換Ｄ５３Ｇ、Ｅ６６Ａ、及びＱ１３９Ｌ又はＱ１３９Ｉのいずれか、並びに任意選択的に置換Ｄ７１Ｓ及びＭ８７Ｆをさらに含む。

【0136】

［０００５０］本明細書に記載される実施態様のいずれかでは、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、修飾ＩＬ－１８ポリペプチド及び融合パートナーを含み得る。いくつかの実施態様では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、修飾ＩＬ－１８ポリペプチドを含み、融合パートナーを含まない。

【0137】

［０００５１］本明細書に記載される実施態様のいずれかでは、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）のようなポリマーにコンジュゲートされ得る。したがって、いくつかの実施態様では、ＰＥＧなどのポリマーにコンジュゲートされた本明細書で提供される安定化ＩＬ－１８ポリペプチドを含むコンジュゲートが提供される。

【0138】

タンパク質バリアント
［０００５２］ある特定の態様では、本明細書で提供されるポリペプチドのアミノ酸配列バリアントが企図される。例えば、ポリペプチドの結合親和性及び／又は他の生物学的特性を変化させることが望ましい場合がある。ポリペプチドのアミノ酸配列バリアントは、ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列に適切な修飾を導入することによって、又はペプチド合成によって、調製され得る。このような修飾には、例えば、ポリペプチドのアミノ酸配列内の残基からの欠失、及び／又はそれへの挿入、及び／又はその置換が含まれる。欠失、挿入及び置換の任意の組み合わせは、最終コンストラクトが、所望の特徴（例えば、結合）を有する限り、最終コンストラクトに到達するように行うことができる。

【0139】

ａ）置換、挿入、及び欠失バリアント
［０００５３］ある特定の態様では、１つ又は複数のアミノ酸置換を有するポリペプチドバリアントが提供される。保存的置換は、「好ましい置換」の見出しの下に表１に示されている。さらに実質的な変化は、「例示的な置換」という見出しの下に表１に提供され、アミノ酸側鎖クラスを参照して以下にさらに記載される通りである。アミノ酸置換を目的のポリペプチドに導入し、その生成物を所望の活性、例えば、受容体結合の増加若しくは減少、効力の増加若しくは減少、免疫原性の減少、生産収率の改善、及び／又は半減期の改善についてスクリーニングすることができる。

【0140】

［０００５４］アミノ酸は、共通の側鎖特性に従ってグループ分けされ得る：
（１）疎水性：ノルロイシン，Ｍｅｔ，Ａｌａ，Ｖａｌ，Ｌｅｕ，Ｉｌｅ；
（２）中性の親水性：Ｃｙｓ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，Ａｓｎ，Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ，Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ，Ｌｙｓ，Ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ，Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ，Ｔｙｒ，Ｐｈｅ。

【0141】

［０００５５］非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのあるメンバーを別のクラスのあるメンバーと交換することを伴う。

【0142】

［０００５６］突然変異誘発のために標的とすることができるポリペプチドの残基又は領域を同定するための有用な方法は、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ａｎｄ Ｗｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１－１０８５により記載されているように、「アラニンスキャニング突然変異誘発」と呼ばれる。この方法では、残基又は標的残基のグループ（例えばａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ及びｇｌｕ等の荷電残基）が同定され、ポリペプチドの、例えばその受容体との相互作用が影響を受けるかどうかを判定するために、中性又は負荷電アミノ酸（例えばアラニン又はポリアラニン）により置き換えられる。最初の置換に対する機能的感受性を示すアミノ酸位置にさらなる置換を導入することもできる。あるいは、又は加えて、ポリペプチド－受容体複合体の結晶構造を使用して、ポリペプチドとその受容体との間の接触点を同定してもよい。このような接触残基及び隣接残基は、置換の候補として標的にしても排除してもよい。バリアントは、所望の特性を有するか否かを決定するためにスクリーニングされてもよい。

【0143】

［０００５７］アミノ酸配列の挿入には、長さが残基１個から１００個又はそれ以上の残基を含有するポリペプチドまで及ぶアミノ末端融合及び／又はカルボキシ末端融合、並びに単一又は複数のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。末端挿入の例には、Ｎ末端メチオニル残基を有するポリペプチドが含まれる。ポリペプチドの他の挿入バリアントには、例えばポリペプチドの血清半減期を増加させるための、Ｎ末端又はＣ末端への融合が含まれる。

【0144】

例示的な融合パートナー
［０００５８］いくつかの実施態様では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、融合パートナーを含む。いくつかの実施態様では、融合パートナーは、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドの半減期を延長し、且つ／又はポリペプチドの精製を助けることができる。いくつかの実施態様では、融合パートナーは抗原結合ドメインである。様々な融合パートナーが当該技術分野で知られており、Ｆｃ領域、アルブミン、抗体、Ｆａｂｓ、ｓｃＦｖ、及びＶＨＨドメインなどが挙げられるが、これらに限定されない。ある実施態様では、融合パートナーはヒトタンパク質由来である。いくつかの実施態様では、融合パートナーは、例えば、望ましい特性を付与するために、それが由来するヒトタンパク質と比較して置換を含む。

【0145】

Ｆｃ領域
［０００５９］いくつかの実施態様では、本明細書で提供される安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、Ｆｃ領域を含む。様々な実施態様では、Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３又はＩｇＧ_４ Ｆｃ領域である。

【0146】

［０００６０］ある特定の態様では、１つ又は複数のアミノ酸修飾は、本明細書で提供される安定化ＩＬ－１８ポリペプチドの融合パートナーに導入されて、それによりポリペプチドが生成され得る。ポリペプチドは、例えば、１つ又は複数のアミノ酸位置にアミノ酸修飾（例えば、置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ_１Ｆｃ領域、ヒトＩｇＧ_２ Ｆｃ領域、ヒトＩｇＧ_３ Ｆｃ領域、又はヒトＩｇＧ_４ Ｆｃ領域）を含み得る。

【0147】

［０００６１］ある特定の態様では、本発明は、全てではないがいくつかのエフェクター機能を有することで、Ｆｃ領域を含むポリペプチドのｉｎ ｖｉｖｏ半減期が重要でありながら、ある特定のエフェクター機能（例えば補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）及び抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ））が不必要又は有害である用途に対して望ましい候補となる、Ｆｃ領域を企図する。ＣＤＣ及び／又はＡＤＣＣ活性の低下／枯渇を確認するために、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏの細胞傷害性アッセイを実行することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイは、Ｆｃ領域を含むポリペプチドがＦｃγＲ結合を欠いている（したがって、ＡＤＣＣ活性を欠いている可能性が高い）が、ＦｃＲｎ結合能力を保持していることを確実にするために行うことができる。ＡＤＣＣを媒介するための主な細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するのに対して、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞でのＦｃＲの発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７－４９２ （１９９１）の４６４頁の表３に要約されている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイの非限定的な例は、米国特許第５５００３６２号 （例えばＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８３：７０５９－７０６３ （１９８６）を参照）及びＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：１４９９－１５０２ （１９８５）；５，８２１，３３７ （Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：１３５１－１３６１ （１９８７）を参照）に記載されている。あるいは、非放射性アッセイ法を用いてもよい（例えばフローサイトメトリー用のＡＣＴＩ^ＴＭ非放射性細胞傷害性アッセイ （ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ）；及びＣｙｔｏＴｏｘ ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を参照）。このようなアッセイに有用なエフェクター細胞には、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。あるいは、又は加えて、目的のＡＤＣＣ活性は、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９５：６５２－６５６（１９９８）に開示されるような動物モデルにおいて、ｉｎ ｖｉｖｏで評価され得る。また、Ｃ１ｑ結合アッセイを実施して、Ｆｃ領域を含むポリペプチドはＣ１ｑに結合することができないためにＣＤＣ活性を欠くことを確認することができる。例えば、国際公開第２００６／０２９８７９号及び同第２００５／１００４０２号のＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照のこと。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを行うことができる（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ－Ｓａｎｔｏｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２：１６３（１９９６）；Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０１：１０４５－１０５２（２００３）；及びＣｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ａｎｄ Ｍ．Ｊ．Ｇｌｅｎｎｉｅ，Ｂｌｏｏｄ １０３：２７３８－２７４３（２００４）を参照）。ＦｃＲｎ結合及びｉｎ ｖｉｖｏクリアランス／半減期の決定も、当該技術分野で既知の方法を用いて実施することができる（Ｐｅｔｋｏｖａ，Ｓ．Ｂ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ’ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（１２）：１７５９－１７６９（２００６）；国際公開第２０１３／１２０９２９号を参照）。

【0148】

［０００６２］エフェクター機能が低下したＦｃ領域を含むポリペプチドしては、Ｆｃ領域の残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７及び３２９のうちの１つ又は複数の置換を有するものが挙げられる（米国特許第６，７３７，０５６号）。このようなＦｃ変異体には、アラニンへの残基２６５及び２９７の置換を有する、いわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ変異体を含め、アミノ酸位置２６５、２６９、２７０、２９７及び３２７のうちの２つ以上において置換を有するＦｃ変異体が含まれる（米国特許第７３３２５８１号）。

【0149】

［０００６３］ＦｃＲへの結合が改善又は減少したある特定のＦｃ領域が記載されている。（例えば、米国特許第６７３７０５６号；国際公開第２００４／０５６３１２号、及びＳｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１－６６０４ （２００１）を参照）。

【0150】

［０００６４］ある特定の態様では、ポリペプチドは、ＡＤＣＣを改善する１つ又は複数のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の２９８位、３３３位、及び／又は３３４位（残基のＥＵ番号付け）における置換を有するＦｃ領域を含む。

【0151】

［０００６５］ある特定の態様では、ポリペプチドは、ＦｃγＲ結合を減少させる１つ又は複数のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の２３４位及び２３５位（残基のＥＵ番号付け）における置換を有するＦｃ領域を含む。いくつかの態様では、置換はＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ（ＬＡＬＡ）である。ある特定の態様では、Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ_１ Ｆｃ領域に由来するＦｃ領域に、Ｄ２６５Ａ及び／又はＰ３２９Ｇをさらに含む。いくつかの態様では、置換は、ヒトＩｇＧ_１Ｆｃ領域に由来するＦｃ領域における、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ（ＬＡＬＡ－ＰＧ）である。（例えば、国際公開第２０１２／１３０８３１号を参照）。いくつかの態様において、置換は、ヒトＩｇＧ_１Ｆｃ領域に由来するＦｃ領域における、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＤ２６５Ａ（ＬＡＬＡ－ＤＡ）である。

【0152】

［０００６６］いくつかの態様では、例えば、米国特許第６１９４５５１号、国際公開第９９／５１６４２号、及びＩｄｕｓｏｇｉｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８－４１８４ （２０００）に記載されているように、Ｃ１ｑ結合及び／又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）の変化（すなわち、改善又は減少のいずれか）をもたらす改変が、Ｆｃ領域内において行われる。

【0153】

［０００６７］半減期が延長され、胎児への母性ＩｇＧの移動を担う（Ｇｕｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７ （１９７６）及びＫｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９ （１９９４））新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合が改善されたポリペプチドが、米国特許出願公開第２００５／００１４９３４号（Ｈｉｎｔｏｎら）に記載されている。それらのポリペプチドは、ＦｃＲｎへのＦｃ領域の結合を改善する１つ又は複数の置換を中に有する融合パートナーＦｃ領域を含む。このようなＦｃバリアントには、Ｆｃ領域残基：２３８、２５２、２５４、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４、又は４３４のうちの１つ又は複数において置換、例えば、Ｆｃ領域残基４３４の置換を有するものが含まれる（例えば、米国特許第７３７１８２６号；Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ，Ｗ．Ｆ．，ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８１（２００６）２３５１４－２３５２４を参照）。

【0154】

［０００６８］マウスＦｃ－マウスＦｃＲｎ相互作用に重要なＦｃ領域残基は、部位特異的突然変異誘発によって同定されている（例えばＤａｌｌ’Ａｃｑｕａ，Ｗ．Ｆ．，ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ １６９ （２００２）５１７１－５１８０を参照）。残基Ｉ２５３、Ｈ３１０、Ｈ４３３、Ｎ４３４、及びＨ４３５（ＥＵインデックス番号付け）が、相互作用に関与する（Ｍｅｄｅｓａｎ，Ｃ．，ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２６ （１９９６）２５３３；Ｆｉｒａｎ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３ （２００１）９９３；Ｋｉｍ，Ｊ．Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４ （１９９４）５４２）。残基Ｉ２５３、Ｈ３１０及びＨ４３５は、ヒトＦｃとマウスＦｃＲｎとの相互作用にとって重要であることが見出された（Ｋｉｍ，Ｊ．Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９ （１９９９）２８１９）。ヒトＦｃ－ヒトＦｃＲｎ複合体の研究により、この相互作用には残基Ｉ２５３、Ｓ２５４、Ｈ４３５及びＹ４３６が重要であることが示されている（Ｆｉｒａｎ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３ （２００１）９９３；Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６ （２００１）６５９１－６６０４）。Ｙｅｕｎｇ，Ｙ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８２ （２００９）７６６７－７６７１）では、残基２４８～２５９及び３０１～３１７及び３７６～３８２及び４２４～４３７の様々な変異体が報告され、調査されている。

【0155】

［０００６９］ある特定の態様では、ポリペプチドは、ＦｃＲｎ結合を低下させる１つ又は複数のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の２５３位、及び／又は３１０位、及び／又は４３５位（残基のＥＵ番号付け）における置換を有するＦｃ領域を含む。ある特定の態様では、ポリペプチドは、２５３位、３１０位及び４３５位にアミノ酸置換を有するＦｃ領域を含む。いくつかの態様では、置換は、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域に由来するＦｃ領域における、Ｉ２５３Ａ、Ｈ３１０Ａ、及びＨ４３５Ａである。例えば、Ｇｒｅｖｙｓ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９４（２０１５）５４９７－５５０８を参照のこと。

【0156】

［０００７０］ある特定の態様では、ポリペプチドは、ＦｃＲｎ結合を低下させる１つ又は複数のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の３１０位、及び／又は４３３位、及び／又は４３６位（残基のＥＵ番号付け）における置換を有するＦｃ領域を含む。ある特定の態様では、ポリペプチドは、３１０位、４３３位及び４３６位にアミノ酸置換を有するＦｃ領域を含む。いくつかの態様では、置換は、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域に由来するＦｃ領域における、Ｈ３１０Ａ、Ｈ４３３Ａ、及びＹ４３６Ａである。（例えば、国際公開第２０１４／１７７４６０号を参照）。

【0157】

［０００７１］ある特定の態様では、ポリペプチドは、ＦｃＲｎ結合を増加させる１つ又は複数のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の２５２位、及び／又は２５４位、及び／又は２５６位（残基のＥＵ番号付け）における置換を有するＦｃ領域を含む。ある特定の態様では、ポリペプチドは、２５２位、２５４位及び２５６位にアミノ酸置換を有するＦｃ領域を含む。いくつかの態様では、置換は、ヒトＩｇＧ_１ Ｆｃ領域に由来するＦｃ領域におけるＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅである。Ｆｃ領域バリアントの他の例に関しては、Ｄｕｎｃａｎ＆Ｗｉｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ ３２２：７３８－４０（１９８８）、米国特許第５６４８２６０号、米国特許第５６２４８２１号、及び国際公開第９４／２９３５１号も参照されたい。

【0158】

Ｂ．組み換え方法及び組成物
［０００７２］いくつかの実施態様では、本明細書で報告される方法で使用される安定化ＩＬ－１８ポリペプチドをコードする単離された核酸が提供される。

【0159】

［０００７３］いくつかの態様では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドを作製する方法であって、上で提供されたように、ポリペプチドをコードする核酸を含む宿主細胞を、ポリペプチドの発現に好適な条件下で培養することと、任意に、ポリペプチドを宿主細胞（又は宿主細胞培養物）から回収することとを含む、方法が提供される。

【0160】

［０００７４］ＩＬ－１８ポリペプチドの組み換え産生に関しては、例えば上述の、ポリペプチドをコードする核酸が単離され、宿主細胞内でのさらなるクローニング及び／又は発現のために、１つ又は複数のベクターに挿入される。そのような核酸は、容易に、従来の手順を使用して単離及び配列決定すること、又は組み換え方法により産生すること、又は化学合成によって得ることができる。

【0161】

［０００７５］ポリペプチドをコードするベクターのクローニング又は発現に適した宿主細胞は、本明細書に記載の原核生物細胞又は真核細胞を含む。

【0162】

［０００７６］いくつかの実施態様では、脊椎動物細胞を宿主として使用することもできる。例えば、懸濁液中で増殖するように適合されている哺乳動物細胞株は有用であり得る。有用な哺乳動物宿主細胞株の例は、ＳＶ４０（ＣＯＳ－７）によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株、ヒト胎児腎臓株（例えば、Ｇｒａｈａｍ，Ｆ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６（１９７７）５９－７４に記載されるような２９３細胞又は２９３Ｔ細胞、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）、マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｊ．Ｐ．，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３（１９８０）２４３－２５２に記載されるようなＴＭ４細胞）、サル腎臓細胞（ＣＶ１）、アフリカミドリサル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６）、ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ）、イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ）、バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ ３Ａ）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８）、ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）、マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２）、ＴＲＩ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｊ．Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３（１９８２）４４－６８に記載）、ＭＲＣ５細胞及びＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳動物宿主細胞株としては、ＤＨＦＲ－ＣＨＯ細胞（Ｕｒｌａｕｂ，Ｇ．ｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ７７（１９８０）４２１６－４２２０）を含む、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞；並びに骨髄腫細胞株、例えば、Ｙ０、ＮＳ０及びＳｐ２／０が挙げられる。

【0163】

［０００７７］いくつかの態様では、宿主細胞は、真核生物、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞又はリンパ球細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。

【0164】

Ｃ．アッセイ
［０００７８］本明細書で提供される安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、それらの物理的／化学的特性及び／又は生物活性について、当該技術分野で既知の様々なアッセイによって、同定され得るか、スクリーニングされ得るか、又は特徴付けられ得る。

【0165】

１．結合アッセイ及びその他のアッセイ
［０００７９］いくつかの態様では、本発明の安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、例えばＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロット等の既知の方法によって、その結合活性について試験される。

【0166】

［０００８０］いくつかの態様では、本発明の安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、ＩＬ－１８Ｒα又はＩＬ－１８ＢＰに対するその結合親和性、すなわちＫ_Ｄについて試験される_。いくつかの態様では、Ｋ_Ｄは、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）表面プラズモン共鳴アッセイを使用して測定される。例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）－２０００、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）－３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）又はＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）８Ｋを使用するアッセイは、≦５０反応単位（ＲＵ）で、例えばストレプトアビジンチップ上の、固定化した標的（ビオチン化ＩＬ－１８Ｒα又はＩＬ－１８ＢＰなど）を用いて２５℃又は３７℃で実施される。別の態様では、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップ（ＣＭ５、ＢＩＡＣＯＲＥ，Ｉｎｃ．）を、Ｎ－エチル－Ｎ’－（３－ジメチルアミノプロピル）－カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及びＮ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）を用いて供給業者の指示に従って活性化する。標的を、１０ｍＭの酢酸ナトリウム（ｐＨ４．８）で５μｇ／ｍｌ（約０．２μＭ）に希釈した後、≦５０反応単位（ＲＵ）の結合タンパク質を得るように、５μｌ／分の流量で注入する。標的の注入後、未反応群を遮断するために、１Ｍのエタノールアミンを注入する。動態測定のために、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドの２倍又は３倍連続希釈液を、ＨＢＳ－Ｐ＋バッファー（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．４、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、０．００５％ 界面活性剤Ｐ２０）に注入する。会合速度（ｋ_ｏｎ）及び解離速度（ｋ_ｏｆｆ）を、会合センサグラム及び解離センサグラムを同時に適合することによって、単純１対１（１：１）ラングミュア結合モデル（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅ バージョン３．２又はＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）８Ｋ）を使用して計算する。平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）は、ｋ_ｏｆｆ／ｋ_ｏｎ比として計算される。例えば、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５－８８１（１９９９）を参照。

【0167】

［０００８１］ＢＩＡｃｏｒｅ^ＴＭＴ２００機器を使用する別の例示的なアッセイでは、例えば、ヒトＩｇＧ１定常領域を含む安定化ＩＬ－１８ポリペプチドをプロテインＡチップ上に捕捉して、およそ３００ＲＵを達成する。いくつかのこのような実施態様では、精製された標的の連続希釈液を、追加の３ｍＭ ＣａＣｌ_２を含むＨＢＳ－Ｐバッファー中に３７℃で１００μＬ／分の流量で注入する。結合率（ｋａ）及び解離率（ｋｄ）は、１：１ラングミュア結合モデル（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ^ＴＭＴ２００ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅ バージョン２．０）を用いて計算する。平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）は、比率ｋｄ／ｋａとして計算され得る。

【0168】

［０００８２］オン速度が上記の表面プラズモン共鳴アッセイによって１０^６Ｍ^－１ ｓ^－１を超える場合、このオン速度は、撹拌されたキュベットを備えるストップフローを装備した分光光度計（Ａｖｉｖ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）又は８０００シリーズＳＬＭ－ＡＭＩＮＣＯ^ＴＭ分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）等の分光計において測定される、漸増濃度の標的の存在下で、２５℃でのＰＢＳ（ｐＨ７．２）中の２０ｎＭ安定化ＩＬ－１８ポリペプチドの蛍光発光強度（励起＝２９５ｎｍ、発光＝３４０ｎｍ、１６ｎｍ帯域通過）の増加又は減少を測定する、蛍光クエンチ技法を使用することによって、決定され得る。

【0169】

［０００８３］いくつかの実施態様では、レポーターアッセイは、例えば本明細書に記載されるように、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドの効力を決定するために使用される。例示的なアッセイは以下の通りである。ＨＥＫ２９３細胞は、ＩＬ－１８受容体を発現するように安定的にトランスフェクトされている。ＩＬ－１８受容体シグナル伝達は、分泌型アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）の発現を促進し、ＳＥＡＰは比色試薬を用いて測定される。

【0170】

［０００８４］さらなる例示的なアッセイにおいて、ＩＬ－１８ポリペプチドは、例えば、本明細書に記載されるように、ＩＦＮγ産生を測定することによって天然Ｔ細胞アッセイを使用して効力について試験され得る。例示的なアッセイは以下の通りである。末梢血単核細胞は、例えばＳｅｐＭａｔｅ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｔｕｂｅｓ（ＳＴＥＭＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，１５４６０）を用いて、全血から単離される。ヒトＴ細胞は、例えば免疫磁気陰性選択キット（ＳＴＥＭＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，１７９５１）を用いて、ＰＢＭＣから単離される。ＣＤ３及びＣＤ２８でプレコートした３８４ウェルプレート上に、細胞を１×１０^４細胞／ウェルで播種する。安定化ＩＬ－１８ポリペプチドの濃度範囲、例えば０．５から１０，０００ｐＭ、又は５から１００，０００ｐＭで細胞を刺激する。細胞は、ＮＥＡＡ、ピルビン酸ナトリウム、β－メルカプトエタノール、及びヒトＩＬ－１２を補充した１０％ＦＢＳ ＲＰＭＩ培地中、３７℃、５％ＣＯ２で培養される。２４時間後、上清中のＩＦＮ－γ産生を、例えばヒトＩＦＮ－γ ＨＴＲＦキット（Ｃｉｓｂｉｏ、６２ＨＩＦＮＧＰＥＧ）を用いて測定する。

【0171】

［０００８５］ある特定の実施態様では、安定化ＩＬ－１８タンパク質は、ＳｅｐＭａｔｅ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｔｕｂｅｓ（ＳＴＥＭＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、１５４６０）を介して全血から単離された末梢血単核細胞の刺激について試験される。ヒトＴ細胞は、免疫磁気陰性選択キット（ＳＴＥＭＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，１７９５１）によって、ＰＢＭＣから単離される。ＣＤ３（５ｕｇ／ｍＬ、Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ、１６－００３７－８５）及びＣＤ２８（５ｕｇ／ｍＬ、Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ５５５７２５）でプレコートした３８４ウェルプレート上に、細胞を１×１０４細胞／ウェルで播種する。ヒトＩＬ－１８刺激アッセイでは、細胞の濃度は０．５から１０，０００ｐＭの範囲である。より減弱したＩＬ－１８分子については、濃度を５から１００，０００ｐＭの範囲に増加させる。すべての処理は、ＮＥＡＡ（希釈１：１００、Ｇｉｂｃｏ １１１４０－０５０）、ピルビン酸ナトリウム（希釈１：１００、Ｇｉｂｃｏ １１３６０－０７０）、ｂ－メルカプトエタノール（希釈１：１０００、Ｇｉｂｃｏ ２１９８５－０２３）及びヒトＩＬ－１２（１０ｎｇ／ｍＬ、Ｒ＆Ｄ、２１９－ＩＬ－０２５／ＣＦ）を補充した１０％ ＦＢＳ ＲＰＭＩ培地中、３７℃、５％ ＣＯ２でインキュベートされる。２４時間後、上清中のＩＦＮ－γ産生をヒトＩＦＮ－γ ＨＴＲＦキット（Ｃｉｓｂｉｏ、６２ＨＩＦＮＧＰＥＧ）を用いて測定する。

【0172】

Ｄ．診断及び検出のための方法及び組成物
［０００８６］ある特定の態様では、本明細書で提供される安定化ＩＬ－１８ポリペプチドのいずれも、生物学的サンプル中のＩＬ－１８ＢＰ又はＩＬ－１８Ｒαの存在を検出する野に有用である。本明細書で使用される場合、「検出する」という用語は、定量的又は定性的な検出を包含する。ある特定の態様では、生物学的試料は、痰、分泌細胞、気道上皮細胞、免疫細胞、肺細胞若しくは組織、又は気管支細胞若しくは組織などの生物学的流体、細胞、又は組織を含む。

【0173】

［０００８７］いくつかの態様では、診断又は検出の方法に使用するための安定化ＩＬ－１８ポリペプチドが提供される。さらなる態様では、生物学的サンプル中のＩＬ－１８ＢＰ又はＩＬ－１８Ｒαの存在を検出する方法が提供される。ある特定の態様では、本方法は、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドのＩＬ－１８ＢＰ又はＩＬ－１８Ｒαに対する結合を許容する条件下で、生物学的サンプルを本明細書に記載の安定化ＩＬ－１８ポリペプチドと接触させることと、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドとＩＬ－１８ＢＰ又はＩＬ－１８Ｒαとの間に複合体が形成されているかどうかを検出することとを含む。そのような方法は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｉｎ ｖｉｖｏの方法であり得る。いくつかの態様では、例えば、ＩＬ－１８ＢＰ又はＩＬ－１８Ｒαが患者の選択のためのバイオマーカーである場合、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドを使用して、ＩＬ－１８ＢＰ又はＩＬ－１８Ｒαを用いた療法に適格な対象を選択する。

【0174】

［０００８８］ある特定の態様では、標識された安定化ＩＬ－１８ポリペプチドが提供される。標識には、直接検出される標識又は部分（蛍光、発色団、高電子密度、化学発光、及び放射性標識など）、並びに間接的に検出される、例えば、酵素反応又は分子相互作用による酵素又はリガンドなどの部分が含まれるが、これらに限定されない。例示的な標識には、放射性同位元素^３２Ｐ、^１４Ｃ、^１２５Ｉ、^３Ｈ、及び^１３１Ｉ、希土類キレート又はフルオレセイン及びその誘導体などのフルオロフォア、ローダミン及びその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロン、ルセリフェラーゼ、例えば、ホタルルシフェラーゼ及び細菌ルシフェラーゼ（米国特許第４，７３７，４５６号）、ルシフェリン、２，３－ジヒドロフタラジンジオン、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、糖オキシダーゼ、例えばグルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、グルコース－６－リン酸デヒドロゲナーゼ、ウリカーゼやキサンチンオキシダーゼなどの複素環式オキシダーゼを、ＨＲＰ、ラクトペルオキシダーゼ、又はミクロペルオキシダーゼ、ビオチン／アビジン、スピン標識、バクテリオファージ標識、安定したフリーラジカルなどの色素前駆体を酸化するために過酸化水素を使用する酵素と結合したものなどが含まれるが、これらに限定されない。

【0175】

Ｅ．薬学的組成物
［０００８９］さらなる態様では、例えば、以下の治療方法のいずれかにおける使用のための、本明細書で提供されるポリペプチドのいずれかを含む、薬学的組成物が提供される。いくつかの態様では、薬学的組成物は、本明細書で提供されるポリペプチドのいずれかと、薬学的に許容される担体とを含む。いくつかの態様では、薬学的組成物は、本明細書で提供されるポリペプチドのいずれかと、少なくとも１つの追加の治療剤、例えば、以下に記載するものとを含む。

【0176】

［０００９０］本明細書中に記載されるような安定化ＩＬ－１８タンパク質の薬学的組成物は、凍結乾燥された組成物又は水溶液の形態で、所望の純度を有するそのようなポリペプチドを１つ又は複数の任意選択的な薬学的に許容される担体（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０））と混合することによって調製される。薬学的に許容される担体は、一般に、用いられる投与量及び濃度においてレシピエントに対して無毒性であり、それらとしては、緩衝剤、例えば、ヒスチジン、リン酸、クエン酸、酢酸及び他の有機酸；アスコルビン酸及びメチオニンを含む酸化防止剤；保存剤（例えば、塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル若しくはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えば、メチルパラベン若しくはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；及びｍ－クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン若しくは免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン若しくはリジン；単糖類、二糖類、及びグルコース、マンノース若しくはデキストリンを含む他の炭水化物；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖類、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロース若しくはソルビトール；塩形成対イオン、例えば、ナトリウム；金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質複合体）；並びに／又は非イオン性界面活性物質、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書における例示的な薬学的に許容される担体には、可溶性中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）どの間質性薬物分散剤、例えば、ｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｈａｌｏｚｙｍｅ，Ｉｎｃ．）などのヒト可溶性ＰＨ－２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質がさらに含まれる。ある特定の例示的なｓＨＡＳＥＧＰ及び使用方法は、ｒＨｕＰＨ２０を含め、米国特許出願公開第２００５／０２６０１８６号及び第２００６／０１０４９６８号に記載されている。いくつかの態様では、ｓＨＡＳＥＧＰは、１つ又は複数の追加のグリコサミノグリカナーゼ（例えば、コンドロイチナーゼ）と組み合わされる。

【0177】

［０００９１］本明細書の薬学的組成物はまた、治療されている特定の適応症に必要とされる複数の有効成分、好ましくは互いに悪影響を及ぼさない補完的な活性を有するものを含み得る。例えば、化学療法剤及び／又は免疫腫瘍学的薬剤をさらに提供することが望ましい場合がある。いくつかの実施態様では、追加の治療剤は、免疫腫瘍学的薬剤である。このような有効成分は、意図される目的に有効な量で組み合わせて好適に存在する。

【0178】

［０００９２］有効成分は、例えばコアセルベーション技術によって又は界面重合によって調製されたマイクロカプセル、例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロース若しくはゼラチンマイクロカプセル及びポリ－（メチルメタクリレート）マイクロカプセル中に、コロイド薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子、及びナノカプセル）中に、あるいはマクロエマルション中に封入され得る。そのような技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．，（１９８０）に開示されている。

【0179】

［０００９３］徐放性用の薬学的組成物が調製され得る。徐放性調製物の適切な例には、ポリペプチドを含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリクスが含まれ、そのマトリックスは、成形品、例えば、フィルム、又はマイクロカプセルの形態である。

【0180】

［０００９４］ｉｎ ｖｉｖｏでの投与に用いられる薬学的組成物は、一般に滅菌されている。滅菌は、例えば滅菌濾過膜による濾過によって容易に達成され得る。

【0181】

Ｆ．治療方法及び投与経路
［０００９５］本明細書で提供される安定化ＩＬ－１８ポリペプチドのいずれも、治療方法に使用され得る。

【0182】

［０００９６］一態様では、医薬としての使用のための安定化ＩＬ－１８ポリペプチドが提供される。さらなる態様では、がんの治療における使用のための安定化ＩＬ－１８ポリペプチドが提供される。がんの例としては、癌腫、腺癌、リンパ腫（例えば、ホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫）、芽細胞腫、肉腫及び白血病が挙げられるが、これらに限定されない。ある特定の実施態様では、本発明のポリペプチドを用いる治療に適しているがんには、腺癌（例えば、結腸直腸腺癌、胃腺癌、又は膵臓腺癌）（転移性腺癌（例えば、転移性結腸直腸腺癌、転移性胃腺癌、又は転移性膵臓腺癌）であってもよい）、食道がん、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃ ｏｒ ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、小腸がん、大腸がん、小細胞肺がん、神経膠芽腫、神経芽細胞腫、黒色腫、乳癌、胃がん、結腸直腸がん（ＣＲＣ）、肝細胞癌、乳がん、直腸がん、非小細胞肺がん、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、腎細胞がん、前立腺がん、肝臓がん、膵臓がん、軟部組織肉腫、カポジ肉腫、カルチノイド癌、頭頸部がん、卵巣がん、中皮腫、及び多発性骨髄腫が含まれる。他の実施態様では、がんは、ホジキンリンパ腫を除くが、胚中心Ｂ細胞様（ＧＣＢ）ＤＬＢＣＬ、活性化Ｂ細胞様（ＡＢＣ）ＤＬＢＣＬ、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）、小リンパ球性白血病（ＳＬＬ）、リンパ形質細胞性リンパ腫（ＬＬ）、ワルデンストレームマクログロブリン血症（ＷＭ）、中枢神経系リンパ腫（ＣＮＳＬ）、バーキットリンパ腫（ＢＬ）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、脾臓辺縁帯リンパ腫、有毛細胞白血病、脾臓リンパ腫／白血病、分類不能な脾臓びまん性赤髄小Ｂ細胞リンパ腫、有毛細胞白血病変異型、ワルデンストレームマクログロブリン血症、重鎖病、形質細胞骨髄腫、骨の孤立性形質細胞腫、骨外性形質細胞腫、粘膜関連リンパ組織の節外性辺縁帯リンパ腫（ＭＡＬＴリンパ腫）、結節性辺縁帯リンパ腫、小児結節性辺縁帯リンパ腫、小児濾胞性リンパ腫、原発性皮膚濾胞中心リンパ腫、Ｔ細胞／組織球に富む大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ＣＮＳの原発性ＤＬＢＣＬ、原発性皮膚ＤＬＢＣＬ、下肢型、高齢者のＥＢＶ陽性ＤＬＢＣＬ、慢性炎症関連ＤＬＢＣＬ、リンパ腫様肉芽腫症、原発性縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ＡＬＫ陽性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、形質芽球性リンパ腫、ＨＨＶ８関連多中心性キャッスルマン病に発生した大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫を含む成熟Ｂ細胞がん：びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫とバーキットリンパ腫の中間の特徴を有する分類不能のＢ細胞リンパ腫、及びびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫と古典的ホジキンリンパ腫の中間の特徴を有する分類不能のＢ細胞リンパ腫のクラスから選択される。さらなる実施態様では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、感染症疾患の治療における使用のためのものである。

【0183】

［０００９７］ある特定の態様では、治療方法に使用するための安定化ＩＬ－１８ポリペプチドが提供される。ある特定の態様では、本発明は、がんを有する個体に有効量の安定化ＩＬ－１８ポリペプチドを投与することを含む、該個体を治療する方法における使用のための安定化ＩＬ－１８ポリペプチドを提供する。そのような一態様では、方法は、例えば、以下に記載されるように、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又は６つの追加の治療剤）を個体に投与することをさらに含む。さらなる態様では、本発明は、細胞上のＩＬ－１８受容体を活性化するのに使用するための安定化ＩＬ－１８ポリペプチドを提供する。ある特定の態様では、本発明は、個体に有効量の安定化ＩＬ－１８ポリペプチドを投与して細胞上のＩＬ－１８受容体を活性化することを含む、個体における細胞上のＩＬ－１８を活性化する方法における使用のための安定化ＩＬ－１８ポリペプチドを提供する。

【0184】

［０００９８］さらなる態様では、本発明は、リンパ球上のＩＦＮγ発現を誘発するのに使用するための安定化ＩＬ－１８ポリペプチドを提供する。ある特定の態様では、本発明は、個体に有効量の安定化ＩＬ－１８ポリペプチドを投与してリンパ球におけるＩＦＮγ発現を誘発することを含む、個体のリンパ球におけるＩＦＮγ発現を誘発する方法における使用のための安定化ＩＬ－１８ポリペプチドを提供する。

【0185】

［０００９９］さらなる態様では、本発明は、リンパ球を活性化するのに使用するための安定化ＩＬ－１８ポリペプチドを提供する。ある特定の態様では、本発明は、個体に有効量の安定化ＩＬ－１８ポリペプチドを投与してリンパ球を活性化することを含む、個体のリンパ球を活性化する方法における使用のための安定化ＩＬ－１８ポリペプチドを提供する。

【0186】

［０００１００］さらなる実施態様では、本発明は、医薬の製造又は調製における安定化ＩＬ－１８ポリペプチドの使用を提供する。一態様では、医薬は、がんの治療のためのものである。がんの例としては、癌腫、リンパ腫（例えば、ホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫）、芽細胞腫、肉腫、及び白血病が挙げられるが、これらに限定されない。そのようながんのより特定の例としては、扁平上皮細胞がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、肺腺癌腫、肺扁平上皮癌腫、腹膜のがん、肝細胞癌、消化器がん、膵がん、神経膠腫、子宮頸がん、卵巣がん、肝臓がん、膀胱がん、肝がん、乳がん、結腸がん、直腸結腸がん、子宮内膜又は子宮の癌、唾液腺癌、腎臓がん、肝臓がん、前立腺がん、外陰がん、甲状腺がん、肝癌、白血病及び他のリンパ増殖性障害並びに様々なタイプの頭頸部がんが挙げられる。さらなる実施態様では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、感染症疾患の治療における使用のためのものである。さらなる態様では、医薬は、がんを有する個体に有効量の医薬を投与することを含む、がんを治療する方法に使用するためのものである。そのような一態様では、方法は、例えば、以下に記載されるように、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を個体に投与することをさらに含む。

【0187】

［０００１０１］さらなる態様では、本発明は、がんを治療するための方法を提供する。一態様では、本方法は、そのようながんを有する個体に有効量の安定化ＩＬ－１８ポリペプチドを投与することを含む。そのような一態様では、方法は、以下に記載されるように、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を個体に投与することをさらに含む。

【0188】

［０００１０２］本明細書で提供される態様のいずれかによる「個体」は、好ましくはヒトである。

【0189】

［０００１０３］さらなる態様では、本発明は、例えば上記の治療方法のいずれかにおいて使用するための、本明細書で提供される安定化ＩＬ－１８ポリペプチドのいずれかを含む薬学的組成物を提供する。一態様では、薬学的組成物は、本明細書で提供される安定化ＩＬ－１８ポリペプチドのいずれかと、薬学的に許容される担体とを含む。別の態様では、薬学的組成物は、本明細書で提供される安定化ＩＬ－１８ポリペプチドのいずれかと、少なくとも１つの追加の治療剤、例えば、以下に記載するものとを含む。

【0190】

［０００１０４］本発明の安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、単独で投与することも、併用療法で使用することもできる。例えば、併用療法は、本発明の安定化ＩＬ－１８ポリペプチドを投与することと、少なくとも１つの追加の治療剤（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又は６つの追加の治療剤）を投与することとを含む。いくつかの実施態様では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、免疫腫瘍学的薬剤及び／又は化学療法剤と組み合わせて投与される。

【0191】

［０００１０５］ある特定の態様では、併用療法は、本発明の安定化ＩＬ－１８ポリペプチドを投与することと、少なくとも１つの追加の治療剤、例えば、腫瘍関連抗原に結合する抗体；ＣＤ２８、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、ＨＶＥＭ、ＮＫＧ２Ｄ、ＭＩＣＡ、２Ｂ４、ＩＬ－２、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２７、ＩＦＮγ、ＩＦＮα、ＴＮＦα、ＩＬ－１、ＣＤＮ、ＨＭＧＢ１、若しくはＴＬＲアゴニスト；又はＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＴＩＭ－３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＬＡＧ－３、ＣＤ４７、ＳＩＲＰα、Ｂ７Ｈ４、ＣＤ９６、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ２２６、プロスタグランジン、ＶＥＧＦ、エンドセリンＢ、ＩＤＯ、アルギナーゼ、ＭＩＣＡ／ＭＩＣＢ、ＴＩＭ－３、ＩＬ－１０、ＩＬ－４、若しくはＩＬ－１３アンタゴニストである抗体と、を投与することとを含む。

【0192】

［０００１０６］いくつかの実施態様では、本明細書で提供される安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、少なくとも１つの免疫腫瘍学的薬剤と共に投与される。いくつかの実施態様では、免疫腫瘍学的薬剤は、活性化共刺激分子に対するアゴニストである。いくつかの実施態様では、免疫腫瘍学的薬剤は、免疫チェックポイント阻害剤である。様々な実施態様では、免疫腫瘍学的薬剤は抗体である。

【0193】

［０００１０７］理論に拘束されることを望むものではないが、活性化共刺激分子を促進することによる又は陰性共刺激分子を阻害することによるＴ細胞刺激の増強が、腫瘍細胞死を促し、それによってがんを治療又はがんの進行を遅延し得ると考えられる。したがって、いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、活性化共刺激分子に対するアゴニストと共に投与され得る。いくつかの例では、活性化共刺激性分子には、ＣＤ２８、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、ＨＶＥＭ、ＮＫＧ２Ｄ、ＭＩＣＡ、２Ｂ４、ＩＬ－２、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２７、ＩＦＮγ、ＩＦＮα、ＴＮＦα、ＩＬ－１、ＣＤＮ、ＨＭＧＢ１、又はＴＬＲが含まれ得る。いくつかの例では、活性化共刺激分子に対するアゴニストは、ＣＤ２８、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、ＨＶＥＭ、ＮＫＧ２Ｄ、ＭＩＣＡ、２Ｂ４、ＩＬ－２、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２７、ＩＦＮγ、ＩＦＮα、ＴＮＦα、ＩＬ－１、ＣＤＮ、ＨＭＧＢ１、又はＴＬＲに結合するアゴニスト抗体である。いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、抑制性共刺激分子に対するアンタゴニストとの組み合わせで投与され得る。いくつかの例では、抑制性共刺激分子には、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＴＩＭ－３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＬＡＧ－３、ＣＤ４７、ＳＩＲＰα、Ｂ７Ｈ４、ＣＤ９６、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ２２６、プロスタグランジン、ＶＥＧＦ、エンドセリンＢ、ＩＤＯ、アルギナーゼ、ＭＩＣＡ／ＭＩＣＢ、ＴＩＭ－３、ＩＬ－１０、ＩＬ－４、又はＩＬ－１３が含まれ得る。いくつかの例では、抑制性共刺激分子に対するアンタゴニストは、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＴＩＭ－３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＬＡＧ－３、ＣＤ４７、ＳＩＲＰα、Ｂ７Ｈ４、ＣＤ９６、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ２２６、プロスタグランジン、ＶＥＧＦ、エンドセリンＢ、ＩＤＯ、アルギナーゼ、ＭＩＣＡ／ＭＩＣＢ、ＴＩＭ－３、ＩＬ－１０、ＩＬ－４、又はＩＬ－１３に結合するアンタゴニスト抗体である。

【0194】

［０００１０８］いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、ＣＴＬＡ－４（ＣＤ１５２としても知られている）に対するアンタゴニスト、例えば、遮断抗体と組み合わせて投与され得る。いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、イピリムマブと組み合わせて投与され得る。いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、トレメリムマブ（チシリムマブとしても知られている）と組み合わせて投与され得る。

【0195】

［０００１０９］いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６としても知られている）に対するアンタゴニスト、例えば、遮断抗体と組み合わせて投与され得る。いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、ＭＧＡ２７１と組み合わせて投与され得る。

【0196】

［０００１１０］いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、ＴＧＦベータに対するアンタゴニスト、例えば、メテリムマブ、フレソリムマブ、又はＬＹ２１５７２９９と組み合わせて投与され得る。

【0197】

［０００１１１］いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するＴ細胞（例えば、細胞毒性Ｔ細胞又は細胞毒性リンパ球（ＣＴＬ））の養子移入を含む処置と組み合わせて投与され得る。いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、優性陰性ＴＧＦベータ受容体、例えば、優性陰性ＴＧＦベータＩＩ型受容体を含むＴ細胞の養子移入を含む処置と組み合わせて投与され得る。

【0198】

［０００１１２］いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、ＣＤ１３７（ＴＮＦＲＳＦ９、４－１ＢＢ、又はＩＬＡとしても知られている）に対するアゴニスト、例えば、活性化抗体と組み合わせて投与され得る。いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、ウレルマブと組み合わせて投与され得る。いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、ウトミルマブと組み合わせて投与され得る。いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、ＩＮＢＲＸ－１０５と組み合わせて投与され得る。

【0199】

［０００１１３］いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、ＣＤ４０に対するアゴニスト、例えば、活性化抗体と組み合わせて投与され得る。いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、ＣＰ－８７０８９３と組み合わせて投与され得る。いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、ＡＰＸ００５Ｍと組み合わせて投与され得る。いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、ＯＸ４０（ＣＤ１３４としても知られている）に対するアゴニスト、例えば、活性化抗体と組み合わせて投与され得る。いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、抗ＯＸ４０抗体（例えば、ＡｇｏｎＯＸ）と組み合わせて投与され得る。いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、ＰＦ－０４５１８６００（ＰＦ－８６００）と組み合わせて投与され得る。いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、ＭＥＤＩ０５６２、ＭＥＤＩ６４６９、及び／又はＭＥＤＩ６３８３と組み合わせて投与され得る。いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、ＧＳＫ３１７４９９８と組み合わせて投与され得る。いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、ＢＭＳ９８６１７８と組み合わせて投与され得る。

【0200】

［０００１１４］いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、ＣＤ２７に対するアゴニスト、例えば、活性化抗体と組み合わせて投与され得る。いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、バルリルマブと組み合わせて投与され得る。

【0201】

［０００１１５］いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドはＩＣＯＳに対するアゴニストと組み合わせて投与され得る。いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、ボプラテリマブと組み合わせて投与され得る。いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、ＧＳＫ３３５９６０９と組み合わせて投与され得る。

【0202】

［０００１１６］いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、ＩＬ－１５アゴニストと組み合わせて投与され得る。

【0203】

［０００１１７］いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、ＩＬ－２７アゴニストと組み合わせて投与され得る。

【0204】

［０００１１８］いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、ＧＩＴＲに対するアゴニストと組み合わせて投与され得る。いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、ＴＲＸ ５１８－００１と組み合わせて投与され得る。いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、ＭＫ－４１６６と組み合わせて投与され得る。いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、ＢＭＳ－９８６１５６と組み合わせて投与され得る。いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、ＩＮＣＡＧＮ０１８７６と組み合わせて投与され得る。

【0205】

［０００１１９］いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、ＣＤ７０に対するアゴニストと組み合わせて投与され得る。いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、クサツズマブと組み合わせて投与され得る。

【0206】

［０００１２０］いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、ＶＩＳＴＡに対するアンタゴニストと組み合わせて投与され得る。いくつかの例では、ＶＩＳＴＡアンタゴニストはＣＡ－１７０である。

【0207】

［０００１２１］いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、ＣＣＲ４に対するアンタゴニストと組み合わせて投与され得る。いくつかの例では、ＣＣＲ４アンタゴニストはモガムリズマブである。

【0208】

［０００１２２］いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、Ｂ７－Ｈ３に対するアンタゴニストと組み合わせて投与され得る。いくつかの例では、Ｂ７－Ｈ３アンタゴニストはＭＧＤ００９である。いくつかの例では、Ｂ７－Ｈ３アンタゴニストは８Ｈ９である。

【0209】

［０００１２３］いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、ＴＩＭ－３に対するアンタゴニストと組み合わせて投与され得る。いくつかの例では、ＴＩＭ－３アンタゴニストはＴＳＲ－０２２である。いくつかの例では、ＴＩＭ－３アンタゴニストはＭＢＧ４５３である。いくつかの例では、ＴＩＭ－３アンタゴニストはＳｙｍ０２３である。いくつかの例では、ＴＩＭ－３アンタゴニストはオレクルマブである。

【0210】

［０００１２４］いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、ＬＡＧ－３に対するアンタゴニストと組み合わせて投与され得る。いくつかの例では、ＬＡＧ－３アンタゴニストはレラトリマブである。いくつかの例では、ＬＡＧ－３アンタゴニストはＩＭＰ３２１（エフチラギモド アルファ）である。いくつかの例では、ＬＡＧ－３アンタゴニストはＬＡＧ５２５である。

【0211】

［０００１２５］いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、ＫＩＲ（２ＤＬ１－３）に対するアンタゴニストと組み合わせて投与され得る。いくつかの例では、ＫＩＲアンタゴニストはリリルマブである。

【0212】

［０００１２６］いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、ＩＤＯ－１，２に対するアンタゴニストと組み合わせて投与され得る。いくつかの例では、ＩＤＯ－１，２アンタゴニストはインドキシモドである。いくつかの例では、ＩＤＯ－１，２アンタゴニストはエパカドスタットである。いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、インドールアミン－２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）に対するアンタゴニストと組み合わせて投与され得る。いくつかの例では、ＩＤＯアンタゴニストは、１－メチル－Ｄ－トリプトファン（１－Ｄ－ＭＴとしても知られる）である。

【0213】

［０００１２７］いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、ＴＩＧＩＴに対するアンタゴニストと組み合わせて投与され得る。いくつかの例では、ＴＩＧＩＴアンタゴニストはチスレリズマブである。いくつかの例では、ＴＩＧＩＴアンタゴニストはチラゴルマブである。いくつかの例では、ＴＩＧＩＴアンタゴニストはＢＭＳ－９８６２０７である。いくつかの例では、ＴＩＧＩＴアンタゴニストはＭＴＩＧ７１９２Ａである。いくつかの例では、ＴＩＧＩＴアンタゴニストはＡＢ１５４である。

【0214】

［０００１２８］いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、Ａ２ａＲに対するアンタゴニストと組み合わせて投与され得る。いくつかの例では、Ａ２ａＲアンタゴニストはシフォラデナントである。

【0215】

［０００１２９］いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、形質転換増殖因子βに対するアンタゴニストと組み合わせて投与され得る。いくつかの例では、形質転換増殖因子βアンタゴニストはＭ７８２４である。いくつかの例では、形質転換増殖因子βアンタゴニストはカルニセルチブ（ｃａｌｕｎｉｓｅｒｔｉｂ）である。

【0216】

［０００１３０］いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、ＣＤ４７に対するアンタゴニストと組み合わせて投与され得る。いくつかの例では、ＣＤ４７アンタゴニストはＴＴＩ－６２１である。いくつかの例では、ＣＤ４７アンタゴニストはＡＬＸ１４８（エボルパセプト）である。いくつかの例では、ＣＤ４７アンタゴニストはマグロリマブである。

【0217】

［０００１３１］いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、ＣＤ７３に対するアンタゴニストと組み合わせて投与され得る。いくつかの例では、ＣＤ７３はオレクルマブである。

【0218】

［０００１３２］いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、ｔｏｌｌ様受容体に対する薬剤と組み合わせて投与され得る。いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、ＰｏｌｙＩＣＩＣと組み合わせて投与され得る。いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、レフチトリモド（ｌｅｆｔｉｔｏｌｉｍｏｄ）と組み合わせて投与され得る。いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、ＳＤ１０１と組み合わせて投与され得る。いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、ＤＳＰ－０５０９と組み合わせて投与され得る。いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、リンタトリモドと組み合わせて投与され得る。いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、ＣＭＰ－００１と組み合わせて投与され得る。

【0219】

［０００１３３］いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、インターロイキン２受容体に対する薬剤と組み合わせて投与され得る。いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、ＮＫＴＲ－２１４と組み合わせて投与され得る。いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、ＲＯ６８７４２８１と組み合わせて投与され得る。いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、ＴＨＯＲ－７０７と組み合わせて投与され得る。

【0220】

［０００１３４］いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、アルギナーゼ阻害剤と組み合わせて投与され得る。いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、ＣＢ－１１５８と組み合わせて投与され得る。

【0221】

［０００１３５］いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、腫瘍溶解性ペプチドと組み合わせて投与され得る。いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、ＬＴＸ－３１５と組み合わせて投与され得る。

【0222】

［０００１３６］いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、インターロイキン１０と組み合わせて投与され得る。いくつかの例では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、ペギロデカキンと組み合わせて投与され得る。

【0223】

［０００１３７］別の実施態様では、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストと組み合わせて、がんを治療する及び／又はがんの進行を遅延させるために安定化ＩＬ－１８ポリペプチドを使用する方法が提供される。がんを有する個体に有効量の安定化ＩＬ－１８ポリペプチド及び有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストを投与することを含む、該個体における免疫機能を増強する方法が、本明細書でさらに提供される。ＰＤ－１軸結合アンタゴニストは、ＰＤ－１結合アンタゴニスト、ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニスト、及びＰＤ－Ｌ２結合アンタゴニストを含む。

【0224】

［０００１３８］「ＰＤ－１軸結合アンタゴニスト」という用語は、ＰＤ－１シグナル伝達軸でのシグナル伝達から生じるＴ細胞機能障害を除去し、結果としてＴ細胞機能（例えば、増殖、サイトカイン産生、標的細胞殺滅）が修復又は増強されるように、ＰＤ－１軸結合パートナーの、その結合パートナーのうちの１つ又は複数のいずれかとの相互作用を阻害する分子である。本明細書で使用される場合、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストは、ＰＤ－１結合アンタゴニスト、ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニスト、及びＰＤ－Ｌ２結合アンタゴニストを含む。

【0225】

［０００１３９］「ＰＤ－１結合アンタゴニスト」という用語は、ＰＤ－１の、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２等のその結合パートナーのうちの１つ又は複数との相互作用から生じるシグナル伝達を減少させるか、遮断するか、阻害するか、無効化するか、又はそれに干渉する分子である。いくつかの実施態様では、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、ＰＤ－１のその結合パートナーへの結合を阻害する分子である。具体的な態様では、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、ＰＤ－１のＰＤＬ１及び／又はＰＤＬ２への結合を阻害する。例えば、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ－１抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチド、並びにＰＤ－１とＰＤＬ１及び／又はＰＤＬ２との相互作用から生じるシグナル伝達を減少させるか、遮断するか、阻害するか、無効化するか、又はそれに干渉する他の分子を含む。一実施態様では、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、ＰＤ－１を介したＴリンパ球に媒介されるシグナル伝達に応じて発現した細胞表面タンパク質によって、又は同タンパク質を介して媒介される負の共刺激シグナルを低減し、機能不全Ｔ細胞の機能不全を軽減する（例えば、抗原認識に対するエフェクター応答を増強する）。いくつかの実施態様では、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ－１抗体である。具体的な態様では、ＰＤ－１結合アンタゴニストはニボルマブである。別の具体的な態様では、ＰＤ－１結合アンタゴニストはペンブロリズマブである。別の具体的な態様では、ＰＤ－１結合アンタゴニストはＣＴ－０１１（ｈＢＡＴ又はｈＢＡＴ－１としても知られる）である。さらに別の具体的な態様では、ＰＤ－１結合アンタゴニストはＡＭＰ－２２４（Ｂ７－ＤＣＩｇとしても知られる）である。

【0226】

［０００１４０］「ＰＤＬ１結合アンタゴニスト」という用語は、ＰＤＬ１の、ＰＤ－１、Ｂ７－１等のその結合パートナーのうちの１つ又は複数のいずれかとの相互作用から生じるシグナル伝達を減少させるか、遮断するか、阻害するか、無効化するか、又はそれに干渉する分子である。いくつかの実施態様では、ＰＤＬ１結合アンタゴニストは、ＰＤＬ１のその結合パートナーへの結合を阻害する分子である。具体的な態様では、ＰＤＬ１結合アンタゴニストは、ＰＤＬ１のＰＤ－１及び／又はＢ７－１への結合を阻害する。いくつかの実施態様では、ＰＤＬ１結合アンタゴニストは、抗ＰＤＬ１抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチド、及び、ＰＤＬ１の、ＰＤ－１、Ｂ７－１等のその結合パートナーのうちの１つ又は複数との相互作用から生じるシグナル伝達を減少させるか、遮断するか、阻害するか、無効化するか、又はそれに干渉する他の分子を含む。一実施態様では、ＰＤＬ１結合アンタゴニストは、ＰＤＬ１を介したＴリンパ球に媒介されるシグナル伝達に応じて発現した細胞表面タンパク質によって、又は同タンパク質を介して媒介される負の共刺激シグナルを低減し、機能不全Ｔ細胞の機能不全を軽減する （例えば、抗原認識に対するエフェクター応答を増強する）。いくつかの実施態様では、ＰＤＬ１結合アンタゴニストは、抗ＰＤＬ１抗体である。具体的な態様では、抗ＰＤＬ１抗体はアテゾリズマブである。いくつかの実施態様では、抗ＰＤＬ１抗体はアベルマブである。いくつかの実施態様では、抗ＰＤＬ１抗体はデュルバルマブである。

【0227】

［０００１４１］いくつかの態様では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、がんの治療のための併用療法において使用するためのものである。一実施態様では、併用療法は、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドを投与することと、ペンブロリズマブ及びニボルマブを含む抗ＰＤ－１抗体、又はイピリムマブを含む抗ＣＴＬＡ－４抗体などの少なくとも１つのチェックポイント阻害剤を投与することとを含む。一実施態様では、併用療法は、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドを投与することと、抗ＣＴＬＡ－４抗体及び抗ＰＤ－１抗体を投与することとを含む。一実施態様では、併用療法は、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドを投与することと、イピリムマブ及びニボルマブを投与することとを含む。

【0228】

［０００１４２］いくつかの態様では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、ＢＲＡＦ Ｖ６００変異を有する黒色腫の治療のための併用療法において使用するためのものである。一実施態様では、併用療法は、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドを投与することと、ムラフェニブ、コビメチニブ；ダブラフェニブ、又はトラメチニブなどの少なくとも１つのＭＡＰＫ経路阻害剤を投与することとを含む。一実施態様では、併用療法は、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドを投与することと、ベムラフェニブ、コビメチニブ、又はダブラフェニブなどの少なくとも１つのＢＲＡＦ阻害剤、及びトラメチニブなどの少なくとも１つのＭＥＫ阻害剤を投与することとを含む。いくつかの実施態様では、併用療法は、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドと、ベムラフェニブ＋コビメチニブ；又はダブラフェニブ＋トラメチニブとを投与することを含む。いくつかの実施態様では、併用療法は、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドと、ペンブロリズマブ又はニボルマブと、ベムラフェニブ、コビメチニブ、若しくはダブラフェニブなどのＢＲＡＦ阻害剤とを投与することを含む。

【0229】

［０００１４３］このような上記の併用療法は、併用投与（２つ以上の治療剤が同じ又は別個の薬学的組成物に含まれる場合）、及び別個の投与を包含しており、この場合、本発明の安定化ＩＬ－１８ポリペプチドの投与は、１つ又は複数の追加の治療剤の投与前、投与と同時、及び／又は投与後に行うことができる。一態様では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドの投与及び追加の治療剤の投与は、互いの約１ヵ月以内、又は約１、２、若しくは３週間以内、又は約１、２、３、４、５、若しくは６日以内に行われる。一態様では、安定化ＩＬ－１８ポリペプチド及び追加の治療剤は、治療の１日目に患者に投与される。本発明の安定化ＩＬ－１８ポリペプチドはまた、手術、化学療法（すなわち、化学療法剤と組み合わせて）、及び／又は放射線療法と組み合わせて使用することができる。

【0230】

［０００１４４］本発明の安定化ＩＬ－１８ポリペプチド（及び任意の追加の治療剤）は、非経口、肺内及び鼻腔内を含む任意の好適な手段によって投与され得、局所治療が望まれる場合、病巣内投与によって投与され得る。非経口注入には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、又は皮下投与が含まれる。投薬は、その投与が短期か又は長期かに部分的に依存して、任意の適切な経路、例えば、静脈内又は皮下注射などの注射により行うことができる。本明細書では、単回投与又は様々な時点にわたる複数回投与、ボーラス投与、パルス注入を含むがこれらに限定されない様々な投薬スケジュールが企図される。

【0231】

［０００１４５］本発明の安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、良好な医療行為と一致して、製剤化され、投薬され、且つ投与されるだろう。これに関連して考慮すべき要因としては、治療される特定の障害、治療される特定の哺乳動物、個々の患者の臨床状態、障害の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与スケジュール、及び医療施術者に既知である他の要因が挙げられる。安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、必然的にではなく任意選択的に、問題の障害を予防又は治療するために現在使用される１つ又は複数の薬剤と共に製剤化される。このような他の薬剤の有効量は、薬学的組成物中に存在する安定化ＩＬ－１８ポリペプチドの量、障害又は治療の種類、及び上述の他の要因に依存する。これらは、一般に、ここに記載されている投与量と同じ投与量で、又はここに記載されている投与量の約１～９９％、又は経験的／臨床的に適切であると判断される任意の投与量で、及び任意の投与経路で使用される。

【0232】

［０００１４６］疾患の予防又は治療について、本発明の安定化ＩＬ－１８ポリペプチドの適切な投与量は（単独で、又は１つ又は複数の他の追加の治療剤と組み合わせて使用される場合）、治療される疾患の種類、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドの種類、疾患の重症度及び経過、安定化ＩＬ－１８ポリペプチドが予防目的又は治療目的で投与されるかどうか、以前の療法、患者の病歴及び安定化ＩＬ－１８ポリペプチドへの応答、並びに主治医の裁量に依存するであろう。安定化ＩＬ－１８ポリペプチドは、患者に、１回で、又は一連の治療にわたって、好適に投与される。数日以上にわたる反復投与に関しては、状態に応じて、治療は、概して、疾患症状の所望の抑制が起こるまで継続されるものとする。このような用量は、断続的に、例えば、毎週又は３週間毎（例えば、患者が約２～約２０回、又は例えば約６回用量の安定化ＩＬ－１８ポリペプチドを投与されるように）に投与され得る。最初により高い負荷用量、続いて１回又は複数のより低い用量が投与され得る。この治療の進行は、従来の技術及びアッセイによってモニタリングされ得る。

【0233】

Ｇ．製造品
［０００１４７］本発明のいくつかの態様では、上述した障害の治療、予防及び／又は診断に有用な物質を含有する製造品が提供される。製造品は、容器と、容器に貼られているか又は付随しているラベル又は添付文書とを含む。好適な容器は、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、ＩＶ輸液バッグ等を含む。容器は、ガラス又はプラスチックなどの様々な材料から形成され得る。容器は、状態の治療、予防、及び／又は診断に効果的な、単独の又はその他の組成物と組み合わされる化合物を収容し、滅菌されたアクセスポートを有し得る（例えば、容器は、皮下注射針により穿孔可能なストッパーを有する静脈内溶液のバッグ又はバイアルであり得る）。組成物中の少なくとも１つの活性剤は、本発明のポリペプチドである。ラベル又は添付文書は、組成物が、選択される症状を治療するために使用されることを示す。さらに、製造品は、（ａ）本発明のポリペプチドを含む組成物を中に含む第１の容器と、（ｂ）さらなる細胞障害性又は他の治療剤を含む組成物を中に含む第２の容器とを含み得る。本発明のこの態様における製造品は、組成物が特定の状態を治療するために使用され得ることを示す添付文書をさらに含み得る。あるいは、又は加えて、製造品は、薬学的に許容されるバッファー、例えば、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝化生理食塩水、リンゲル溶液及びデキストロース溶液を含む第２の（又は第３の）容器をさらに含み得る。製造品には、他のバッファー、希釈剤、フィルタ、針、及びシリンジを含む、商業的に及びユーザーの立場から望ましい他の材料がさらに含められ得る。

【実施例】

【0234】

ＩＩＩ．実施例
［０００１４８］以下は、本発明の方法及び組成物の実施例である。上に提供された一般的な説明を前提として、他の様々な実施態様が実施され得ることが理解される。

【0235】

実施例１：材料及び方法
組み換えタンパク質
［０００１４９］成熟ヒトＩＬ－１８バリアントは、哺乳動物細胞（ＨＥＫ２９３又はＣＨＯ）において、分泌のためにＮ末端に異所性シグナルペプチドを有する組み換え融合体として産生され、続いて成熟ＩＬ１８（Ｙ３７－Ｄ１９３）、ＴＥＶプロテアーゼ切断配列、Ｈｉｓタグ及び単量体ヒトＦｃが産生された（図１Ａ）。成熟マウスＩＬ－１８バリアントは、哺乳動物細胞（ＨＥＫ２９３又はＣＨＯ）において、分泌のためにＮ末端に異所性シグナルペプチドを有する組み換え融合体として発現し、続いて成熟ＩＬ１８（Ｎ３６－Ｓ１９２）、ＴＥＶプロテアーゼ切断配列、Ｈｉｓタグ及びマウス血清アルブミン（ＭＳＡ）が発現した（図１Ａ）。タンパク質は、アフィニティークロマトグラフィー、続いてサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を介して、馴化培地から精製された。Ｃ末端タグはＴＥＶプロテアーゼ消化によって除去され、プロテアーゼと消化されたＣ末端タグは減算アフィニティークロマトグラフィーによってＩＬ－１８から分離された。

【0236】

［０００１５０］成熟ヒト及びマウス野生型ＩＬ－１８を、Ｎ末端Ｈｉｓ／ＳＵＭＯタグを有する組み換え融合体として大腸菌内で産生した。細胞溶解及び清澄化の後、アフィニティークロマトグラフィー、続いてＳＥＣによって、タンパク質を精製した。Ｎ末端Ｈｉｓ／ＳＵＭＯタグは、ＳＵＭＯプロテアーゼＵＬＰ１による切断によって除去され、消化産物は減算アフィニティークロマトグラフィーによってＩＬ－１８から分離された。

【0237】

［０００１５１］結合速度定数を決定するために、組み換えヒト及びマウスＩＬ－１８Ｒα、ヒトＩＬ－１８ＢＰ（アイソフォームＡ）、及びマウスＩＬ－１８ＢＰ（アイソフォームＤ）細胞外ドメインを哺乳動物細胞で産生し、ビオチン化し、アフィニティークロマトグラフィー、続いてＳＥＣによって精製した。

【0238】

ＩＬ－１８の熱安定性
［０００１５２］ＷＴ ＩＬ－１８及びＩＬ－１８バリアントの熱安定性測定のために、タンパク質を、２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．２、１５０ｍＭ ＮａＣｌ（非還元）又は２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．２、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭ ＴＣＥＰ（還元）中０．５ｍｇ／ｍｌで製剤化した。示差走査蛍光分析（ＤＳＦ）は、ＷＴに対するタンパク質の熱安定性に対するアミノ酸変化の影響を理解するために実施された。ＤＳＦは、蛍光色素の存在下でタンパク質の熱アンフォールディングをモニタリングし、典型的にはリアルタイムＰＣＲ装置を使用して行われる。ＳＹＰＲＯオレンジ色素（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号Ｓ６６５０）を２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．２、１５０ｍＭ ＮａＣｌ中で１：２０に希釈する。ウェル内の２４μｌのＩＬ－１８プロテインに、１μｌの希釈した色素を添加する。リアルタイムＰＣＲ装置（Ｂｉｏ－Ｒａｄ ＣＦＸ ９６ＲＴ）において、２０℃から１００℃まで温度が上昇するにつれて、蛍光強度をプロットし、例えばボルツマンの式を用いて、遷移曲線の変曲点（Ｔｍ）を算出する。Ｎａｔｕｒｅ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，２００７，２：２２１２－２２２１を参照のこと。

【0239】

表面プラズモン共鳴
［０００１５３］Ｂｉａｃｏｒｅ ８Ｋ（Ｃｙｔｉｖａ）を用いて３７℃の温度でＳＰＲ実験を行った。ビオチン化ヒト又はマウスＩＬ－１８Ｒα及びＩＬ－１８ＢＰをＢｉａｃｏｒｅストレプトアビジンセンサーチップ（Ｓｅｒｉｅｓ Ｓ Ｓｅｎｓｏｒ Ｃｈｉｐ ＳＡ、Ｃｙｔｉｖａ）に固定化し、Ｒｍａｘ≦５０ＲＵを得た。ＨＢＳ－Ｐ＋バッファー（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．４、１５０ ｍＭ ＮａＣｌ、０．００５％ 界面活性剤Ｐ２０）に、５回、３倍希釈して測定を行った。相互作用はシングルサイクルキネティクス法で評価し、Ｂｉａｃｏｒｅ ８Ｋ評価ソフトウェアで解析し、１：１結合モデルに適合した。

【0240】

効力アッセイ（Ｔ細胞アッセイ）
［０００１５４］末梢血単核細胞を、ＳｅｐＭａｔｅ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｔｕｂｅｓ（ＳＴＥＭＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，１５４６０）を介して、全血から単離した。ヒトＴ細胞を、免疫磁気陰性選択キット（ＳＴＥＭＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，１７９５１）によって、ＰＢＭＣから単離した。ＣＤ３（５ｕｇ／ｍＬ、Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ、１６－００３７－８５）及びＣＤ２８（５ｕｇ／ｍＬ、Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ５５５７２５）でプレコートした３８４ウェルプレート上に、細胞を１ｘ１０^４細胞／ウェルで播種した。ヒトＩＬ－１８刺激アッセイでは、０．５から１０，０００ｐＭの範囲の濃度で細胞を刺激した。より減弱したＩＬ－１８分子については、濃度を５から１００，０００ｐＭの範囲に増加させた。すべての処理は、ＮＥＡＡ（希釈１：１００、Ｇｉｂｃｏ １１１４０－０５０）、ピルビン酸ナトリウム（希釈１：１００、Ｇｉｂｃｏ １１３６０－０７０）、β－メルカプトエタノール（希釈１：１０００、Ｇｉｂｃｏ ２１９８５－０２３）及びヒトＩＬ－１２（１０ｎｇ／ｍＬ、Ｒ＆Ｄ、２１９－ＩＬ－０２５／ＣＦ）を補充した１０％ ＦＢＳ ＲＰＭＩ培地中、３７℃、５％ ＣＯ２でインキュベートした。２４時間後、上清中のＩＦＮ－γ産生をヒトＩＦＮ－γ ＨＴＲＦキット（Ｃｉｓｂｉｏ、６２ＨＩＦＮＧＰＥＧ）を用いて測定した。

【0241】

実施例２：野生型ＩＬ－１８は不安定であり、哺乳動物細胞で組み換え産生するのは困難である
［０００１５５］哺乳動物宿主細胞においてＩＬ－１８を産生するために、異所性シグナルペプチドをＩＬ－１８の成熟型に組み換え的に融合させ、安定な融合パートナーをＣ末端に融合させた（ヒトＩＬ－１８については単量体Ｆｃ［Ｙｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，ｍＡｂｓ，２０１４］又はマウスオルソログについてはアルブミンのいずれか（図１））。アフィニティー精製後、野生型ヒトＩＬ－１８は高度の凝集とＦｃタグのおおよその質量に相当するより低分子量の分解産物を有し（図２Ａ）、機能的ＩＬ－１８融合タンパク質は検出されなかった。高反応性の遊離天然システインの潜在的な不安定さを減少させるために、これらのシステインがセリン（「ｈＣＳ」及び「ｍＣＳ」）と置き換えられたコンストラクトを生成した。これによって凝集はなくなったものの、生産収率は低く、分子の熱安定性は低かった（図２Ｃ）。

【0242】

実施例３：ジスルフィド－安定化ＩＬ－１８バリアントの操作
［０００１５６］生産収率及び熱安定性は、タンパク質治療剤にとって重要な品質特性である。ＩＬ－１８の安定性を向上させるために、置換及びジスルフィド結合の形成の可能性を考慮して、互いから５Å以内のβ炭素距離を有する残基対をＩＬ－１８の結晶構造に基づいて同定した。天然システインは、意図したジスルフィド結合に関与しない場合、セリンで置換された。ＷＴヒトＩＬ－１８に対するバリアント名とそれぞれの置換を含む、ヒトＩＬ－１８バリアントの残基置換を表２に示す。ＷＴマウスＩＬ－１８に対するバリアントとそれぞれの置換を含む、マウスＩＬ－１８バリアントの残基置換を表３に示す。

＊ 「ＤＲ」は「デコイ耐性」を指し、ＩＬ－１８ＢＰ結合を有意に減少させる変異が含まれていることを示す。

【0243】

実施例４：ジスルフィド－安定化ＩＬ－１８バリアントの特性評価
［０００１５７］ＣＨＯ又はＨＥＫ２９３哺乳動物宿主細胞のいずれかで産生されたＩＬ－１８バリアントを、発現収量及び凝集レベルについて評価した。ヒトＩＬ－１８の結果を図２及び表４に示す。マウスＩＬ－１８の結果を図２及び表５に示す。

【0244】

［０００１５８］ジスルフィド－安定化ヒト及びマウスＩＬ－１８バリアントは、収量が有意に増加したことを実証し、ジスルフィド－安定化ヒトＩＬ－１８バリアントは、ＷＴ ＩＬ－１８に対して凝集体レベルが減少したことを実証した。特に、Ｌ４５Ｃ／Ｅ１９２Ｃは、一段階精製後、検出可能な凝集はなく、ヒト野生型ＩＬ－１８又はｈＣＳ ＩＬ－１８（天然システインはセリンと置き換えられている）のいずれかよりも一桁超高い収量を示した。同等のマウスバリアントＴ４４Ｃ／Ｌ１８９とｍＣＳを比較したときにも、収量の増加が観察された。

【0245】

［０００１５９］さらに、示差走査蛍光測定（ＤＳＦ）による熱安定性評価のために選択されたジスルフィド－安定化ＩＬ－１８バリアントはすべて、それぞれのＷＴ ＩＬ－１８に対して、非還元条件下で、見かけの融解温度は上昇し、Ｌ４５Ｃ／Ｅ１９２Ｃは、ヒト野生型ＩＬ－１８に対して、１５℃を超える融解温度の上昇を示した（表６）。

【0246】

［０００１６０］さらに、ジスルフィド－安定化ＩＬ－１８バリアントには、遊離チオールは存在しない。３０ｍＭメタンチオスルホン酸メチル（ＭＭＴＳ）添加後のＬＣ／ＭＳで測定したＩＬ－１８バリアントの実験質量をダルトン（Ｄａ）で以下の表７に示す。ＭＭＴＳのコンジュゲーションにより、遊離チオール１個あたり４５．９９Ｄａの質量付加増分が生じる。理論質量には、安定化バリアントについては、遊離システインチオールは存在しないという仮定が含まれているが、ヒトＷＴについては含まれていない。

【0247】

［０００１６１］ヒトＬ４５Ｃ／Ｅ１９２Ｃ及びＡ１６２Ｃ／Ｉ１８５Ｃバリアントの結晶構造が解明され、以前に報告されたＷＴ ＩＬ－１８の構造と類似していることがわかった。両構造とも、期待される新規ジスルフィド形成を確認し、表７の質量分析データと一致した。図６Ａ－６Ｂを参照のこと。

【0248】

実施例５：ジスルフィド安定化ＩＬ－１８バリアントの結合動態
［０００１６２］表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によるＩＬ－１８受容体、ＩＬ－１８Ｒα、及びデコイ受容体、ＩＬ－１８ＢＰへの結合動態の分析のために、バリアントのサブセットを選択した（表８）。二つの例外を除いて、すべての速度定数は野生型ＩＬ－１８の一桁以内であった。驚くべきことに、Ｎ５０Ｃ及びＮ５０Ｃ／Ｌ１７４Ｃバリアントは、８１ｎＭまではＩＬ－１８Ｒαとの検出可能な結合がないが、ＩＬ－１８ＢＰとの強い結合を保持する。

【0249】

実施例６：ジスルフィド安定化ＩＬ－１８バリアントの効力
［０００１６３］バリアントがＷＴに対して何らかの効力差を有するか否かを決定するために、それらのＥＣ５０を、ＩＦＮγ産生を測定した天然Ｔ細胞アッセイにおいて評価した。ＩＬ－１８バリアントによる治療に応じたＩＦＮγの産生を測定する。

【0250】

［０００１６４］アッセイの結果を図３Ａ－３Ｂ及び表９に示す。ＳＰＲによる観察と同様に、ほとんどのバリアントは、Ｎ５０Ｃ及びＮ５０Ｃ／Ｌ１７４Ｃを除いて、天然Ｔ細胞アッセイにおいてヒト野生型ＩＬ－１８と同等のＥＣ５０を示した。Ｙ３７Ｃ／Ｓ９１Ｃもヒト野生型ＩＬ－１８と比較してその効力は有意に低下し、Ｓ４６Ｃ／Ｉ８５Ｃ及びＦ５７Ｃ／Ｔ８１Ｃの効力はやや低下した（図３Ａ）。Ｎ５０Ｃを含むバリアントは、効力が一桁超低下した（表９）。ＩＬ－１８バリアントについて、ＩＦＮγ発現誘導の最大値であるＥ_ｍａｘも決定された。図３Ａ及び表９に示すように、Ｓ１０１Ｃ／Ｔ１０９Ｃバリアントはヒト野生型ＩＬ－１８と同様のＥＣ５０を示したが、Ｅｍａｘはおよそ３０％低かった。残りのバリアントのＥｍａｘ値は、ヒト野生型ＩＬ－１８の２０％以内であった。マウスバリアントＴ４４Ｃ／Ｌ１８９Ｃ、Ｔ４４Ｃ／Ｌ１８９Ｃ ＭＳＡ、及びＴ４４Ｃ／Ｌ１８９Ｃ Ｆｃはすべて、マウス野生型ＩＬ－１８と同等のＥＣ５０及びＥｍａｘを示した（表９及び図３Ｂ）。

【0251】

実施例７：ＭＣ３８結腸がんモデルにおけるマウスＩＬ－１８ Ｔ４４Ｃ／Ｌ１８９Ｃ Ｆｃ の有効性
［０００１６５］第１の実験では、Ｃ５７ＢＬ－６マウスに１００万個のＭＣ３８細胞を皮下接種した。治療は、平均腫瘍体積がおよそ１３０～２３０ｍｍ^３に達した時点で開始され、それは接種からおよそ７～９日後であった。全群に週２回、計５回投与した。マウスＩＬ－１８ Ｔ４４Ｃ／Ｌ１８９Ｃ Ｆｃ（「ｄｓＩＬ－１８Ｆｃ」）群には、０．１、１、又は５ｍｇ／ｋｇを腹腔内（ＩＰ）投与した。抗ＰＤ－Ｌ１抗体及びコントロール抗体はそれぞれ、初回投与は１０ｍｇ／ｋｇを静脈内投与し、その後の投与はＩＰ投与とした。

【0252】

［０００１６６］第２の実験では、Ｃ５７ＢＬ－６マウスに１０万個のＭＣ３８細胞を皮下接種した。治療は、平均腫瘍体積がおよそ１３０～２３０ｍｍ^３に達した時点、接種からおよそ１４～１８日後に開始された。ＩＬ－１８ ＷＴ及びＰＢＳコントロール群の両方に、週２回、計５回投与した。ＩＬ－１８ ＷＴ群には、ｄｓＩＬ－１８Ｆｃの７．４ｍｇ／ｋｇのモル当量である３ｍｇ／ｋｇをＩＰ投与した。

【0253】

［０００１６７］結果を図５Ａ及び５Ｂに示す。驚くべきことに、３ｍｇ／ｋｇのＷＴ ＩＬ－１８での処理は、単剤としては意味のある腫瘍増殖阻害を示さなかったが（図５Ａ）、ＷＴ ＩＬ－１８と同様の効力及びＩＬ－１８ＢＰに対する親和性を有するマウスＩＬ－１８ Ｔ４４Ｃ／Ｌ１８９Ｃ Ｆｃ（「ｄｓＩＬ－１８Ｆｃ」）（例えば、表８を参照）の１ｍｇ／ｋｇ及び５ｍｇ／ｋｇでの処理は、中程度から強度の単剤腫瘍増殖阻害が得られ、これは抗ＰＤ－Ｌ１抗体での処理と組み合わせるとさらに増強された（図５Ｂ）。これらの結果は、ＩＬ－１８ＢＰの結合を無効化することがＩＬ－１８バリアントの有効性には必要ないことを示唆している。

【0254】

ＩＶ．特定の配列の表

【図1A-1B】

【図2A-2B】

【図2C-2D】

【図2E-2F】

【図2G-2H】

【図2I-2J】

【図2K-2L】

【図2M-2N】

【図2O-2P】

【図2Q-2R】

【図2S-2T】

【図2U-2V】

【図2W-2X】

【図2Y-2Z】

【図3A-3B】

【図4A-4B】

【図5A】

【図5B】

【図6A】

【図6B】

【配列表】

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【国際調査報告】