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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-12-26
(54)【発明の名称】ＨＩＶ感染に対する組合せ療法およびその使用
(51)【国際特許分類】
A61K 39/395 20060101AFI20241219BHJP
A61P 31/18 20060101ALI20241219BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20241219BHJP
A61K 31/496 20060101ALI20241219BHJP
C07K 16/10 20060101ALI20241219BHJP
C12N 9/99 20060101ALI20241219BHJP
C07K 16/46 20060101ALI20241219BHJP
C12N 15/13 20060101ALN20241219BHJP
C12N 15/10 20060101ALN20241219BHJP
【ＦＩ】
A61K39/395 S
A61P31/18
A61P43/00 121
A61K31/496
C07K16/10 ZNA
C12N9/99
C07K16/46
C12N15/13
C12N15/10 200Z
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024535995
(86)(22)【出願日】2022-12-16
(85)【翻訳文提出日】2024-08-14
(86)【国際出願番号】 US2022081724
(87)【国際公開番号】W WO2023114951
(87)【国際公開日】2023-06-22
(31)【優先権主張番号】63/290,758
(32)【優先日】2021-12-17
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】521396042
【氏名又は名称】ヴィーブ、ヘルスケア、カンパニー
【氏名又は名称原語表記】ＶＩＩＶ ＨＥＡＬＴＨＣＡＲＥ ＣＯＭＰＡＮＹ
(74)【代理人】
【識別番号】100120031
【弁理士】
【氏名又は名称】宮嶋 学
(74)【代理人】
【識別番号】100120617
【弁理士】
【氏名又は名称】浅野 真理
(74)【代理人】
【識別番号】100172557
【弁理士】
【氏名又は名称】鈴木 啓靖
(72)【発明者】
【氏名】ロバート、フェリス
(72)【発明者】
【氏名】ヘザー、マドセン
(72)【発明者】
【氏名】チー、ハンフェイ
【テーマコード（参考）】
4C085
4C086
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C085AA02
4C085AA14
4C085BA69
4C085CC23
4C085EE01
4C085GG01
4C086AA01
4C086AA02
4C086CB05
4C086DA34
4C086DA38
4C086GA14
4C086MA02
4C086MA04
4C086MA17
4C086MA52
4C086MA55
4C086NA05
4C086NA14
4C086NA15
4C086ZB33
4C086ZC55
4C086ZC75
4H045AA11
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA10
4H045CA40
4H045DA76
4H045EA29
4H045FA74
(57)【要約】
本開示は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染の治療法または治療、クリア、予防もしくは治癒の方法に関する。本開示は、ＨＩＶの治療および／またはＨＩＶ感染細胞のクリアランスに使用するための、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩と、ＣＤ４結合部位（ＣＤ４ｂｓ）結合性タンパク質との組合せを提供する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
それを必要とするヒトにおいてヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染を治療するための方法であって、治療有効量の：
（ａ）ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩を含む第１の薬剤；ならびに、
（ｂ）少なくとも１種の広域中和抗体またはその抗原結合性断片を含む第２の薬剤
を投与することを含む、方法。
【請求項2】
第１の薬剤が、ホステムサビルまたはその薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
第１の薬剤が、テムサビルまたはその薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の方法。
【請求項4】
第２の薬剤が、ＨＩＶ ｇｐ１６０、ＨＩＶ ｇｐ１２０およびＨＩＶ ｇｐ４１からなる群から選択される少なくとも１種のＨＩＶエンベロープ糖タンパク質に結合する、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項5】
第２の薬剤が、ＨＩＶ ｇｐ１２０に結合する、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項6】
第２の薬剤が、２Ｇ１２、２Ｆ５、３ＢＣ１７６、３ＢＮＣ６０、３ＢＮＣ１－１７、４Ｅ１０、８ＡＮＣ１３１、８ＡＮＣ１９５、１０Ｅ８、１０－１０７４、１２Ａ１２、３５０２２、ｂ１２、Ｂ２５３０、ＣＨ０１－０４、ＣＨ１０３、ＣＨ３１、ＨＪ１６、Ｍ６６．６、Ｎ６、Ｎ６ＬＳ、Ｎ６－ＤＥ、Ｎ６－ＬＡＧＡ、ＮＩＨ４５－４６、ＰＧ９、ＰＧ１６、ＰＧＤＭ１４００、ＰＧＴ１２１、ＰＧＴ１２８、ＰＧＴ１３５、ＰＧＴ１４１－ＰＧＴ１４５、ＰＧＴ１５１、ＰＧＶ０４、ＶＲＣ０１、ＶＲＣ０１－ＬＳ、ＶＲＣ０７、ＶＲＣ０７－５２３、ＶＲＣ０７－ＬＳおよびＺ１３からなる群から選択される少なくとも１種の薬剤である、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項7】
第２の薬剤が、配列番号１と少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である配列を含むＣＤＲＨ１のアミノ酸配列と、配列番号２と少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である配列を含むＣＤＲＨ２のアミノ酸配列と、配列番号３と少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である配列を含むＣＤＲＨ３のアミノ酸配列とを有する重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）、および、
配列番号４と少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である配列を含むＣＤＲＬ１のアミノ酸配列と、配列番号５と少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である配列を含むＣＤＲＬ２のアミノ酸配列と、配列番号６と少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である配列を含むＣＤＲＨ３のアミノ酸配列とを有する軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）
を含む、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片である、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項8】
第２の薬剤が、配列番号７と少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片である、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項9】
第２の薬剤が、配列番号８と少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片である、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項10】
単離されたモノクローナル抗体が、Ｍ４２８Ｌ変異およびＮ４３４Ｓ変異を含む組換え定常ドメインをさらに含む、請求項７～９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項11】
単離されたモノクローナル抗体が、Ｓ２３９Ｄ変異およびＩ３３２Ｅ変異を含む組換え定常ドメインをさらに含む、請求項７～１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項12】
単離されたモノクローナル抗体が、Ｌ２３５Ａ変異およびＧ２３７Ａ変異を含む組換え定常ドメインをさらに含む、請求項７～１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項13】
第２の薬剤が、配列番号１のＣＤＲＨ１のアミノ酸配列と、配列番号２のＣＤＲＨ２のアミノ酸配列と、配列番号３のＣＤＲＨ３のアミノ酸配列とを有する重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）、および、
配列番号４のＣＤＲＬ１のアミノ酸配列と、配列番号５のＣＤＲＬ２のアミノ酸配列と、配列番号６のＣＤＲＨ３のアミノ酸配列とを有する軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）
を含む、単離されたモノクローナル抗体（Ｎ６）またはその抗原結合性断片である、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項14】
第２の薬剤が、配列番号１のＣＤＲＨ１のアミノ酸配列と、配列番号２のＣＤＲＨ２のアミノ酸配列と、配列番号３のＣＤＲＨ３のアミノ酸配列とを有する重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）、
配列番号４のＣＤＲＬ１のアミノ酸配列と、配列番号５のＣＤＲＬ２のアミノ酸配列と、配列番号６のＣＤＲＨ３のアミノ酸配列とを有する軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）、ならびに、
Ｍ４２８Ｌ変異およびＮ４３４Ｓ変異を含む組換え定常ドメイン
を含む、単離されたモノクローナル抗体（Ｎ６ＬＳ）またはその抗原結合性断片である、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項15】
第２の薬剤が、配列番号１のＣＤＲＨ１のアミノ酸配列と、配列番号２のＣＤＲＨ２のアミノ酸配列と、配列番号３のＣＤＲＨ３のアミノ酸配列とを有する重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）、
配列番号４のＣＤＲＬ１のアミノ酸配列と、配列番号５のＣＤＲＬ２のアミノ酸配列と、配列番号６のＣＤＲＨ３のアミノ酸配列とを有する軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）、ならびに
Ｓ２３９Ｄ変異およびＩ３３２Ｅ変異を含む組換え定常ドメイン
を含む、単離されたモノクローナル抗体（Ｎ６－ＤＥ）またはその抗原結合性断片である、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項16】
第２の薬剤が、配列番号１のＣＤＲＨ１のアミノ酸配列と、配列番号２のＣＤＲＨ２のアミノ酸配列と、配列番号３のＣＤＲＨ３のアミノ酸配列とを有する重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）、
配列番号４のＣＤＲＬ１のアミノ酸配列と、配列番号５のＣＤＲＬ２のアミノ酸配列と、配列番号６のＣＤＲＨ３のアミノ酸配列とを有する軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）、ならびに、
Ｌ２３５Ａ変異およびＧ２３７Ａ変異を含む組換え定常ドメイン
を含む、単離されたモノクローナル抗体（Ｎ６－ＬＡＧＡ）またはその抗原結合性断片である、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項17】
抗原結合性断片が、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖまたはｓｃＦＶ２断片である、請求項７～１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項18】
少なくとも１種のインテグラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩を含む、治療有効量の第３の薬剤を投与することをさらに含む、請求項１～１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項19】
第３の薬剤が、ラルテグラビル、エルビテグラビル、ドルテグラビル、ビクテグラビルおよびカボテグラビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤を含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項20】
第３の薬剤が、ラルテグラビルまたはカボテグラビルである、請求項１８～１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項21】
第３の薬剤が、カボテグラビルである、請求項１８～２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項22】
第１の薬剤がテムサビルであり、第２の薬剤がＮ６ＬＳであり、かつ、第３の薬剤がカボテグラビルである、請求項１～２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項23】
第１の薬剤がテムサビルであり、第２の薬剤がＮ６－ＤＥであり、かつ、第３の薬剤がカボテグラビルである、請求項１～２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項24】
第１の薬剤、第２の薬剤および第３の薬剤の各々が、医薬組成物の形態である、請求項１～２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項25】
第１の薬剤が、第２の薬剤を投与する前に投与される、請求項１～２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項26】
ヒトに、約１ｍｇ／ｋｇ体重～約１００ｍｇ／ｋｇ体重の第１の薬剤を、１日１回、１日２回または１日３回、経口投与することを含む、請求項１～２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項27】
ヒトに、約１ｍｇ／ｋｇ体重～約１００ｍｇ／ｋｇ体重の第１の薬剤を、１日１回、１日２回または１日３回、非経口投与することを含む、請求項１～２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項28】
ヒトが、ヒト免疫不全ウイルス１（ＨＩＶ－１）感染と診断される、請求項１～２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項29】
ヒトが、以前に１または２以上の異なるＨＩＶ治療モダリティで治療されている、請求項１～２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項30】
ヒトに、請求項１～２３のいずれか一項に記載の第１の薬剤を含む第１の医薬組成物と、請求項１～２３のいずれか一項に記載の第２の薬剤を含む第２の医薬組成物とを投与することを含む、ＨＩＶの治療に使用するための組合せ。
【請求項31】
ヒトに、第１の医薬組成物が、第２の医薬組成物を投与する前に投与される、請求項３０に記載の使用のための組合せ。
【請求項32】
ヒトに、約１ｍｇ／ｋｇ体重～約１００ｍｇ／ｋｇ体重の第１の医薬組成物が、１日１回、１日２回または１日３回、経口投与される、請求項３０～３１のいずれか一項に記載の使用のための組合せ。
【請求項33】
ヒトに、約１ｍｇ／ｋｇ体重～約１００ｍｇ／ｋｇ体重の第１の医薬組成物が、１日１回、１日２回または１日３回、非経口投与される、請求項３０～３１のいずれか一項に記載の使用のための組合せ。
【請求項34】
請求項１８～２３のいずれか一項に記載の第３の薬剤を含む第３の医薬組成物を投与することをさらに含む、請求項３０～３３のいずれか一項に記載の使用のための組合せ。
【請求項35】
請求項３０に記載の第１の医薬組成物と、請求項３０に記載の第２の医薬組成物と、任意選択で、請求項３４に記載の第３の医薬組成物とを含む、キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年１２月１７に提出された米国仮特許出願第６３／２９０，７５８号の利益を主張するものであり、その開示内容は、その全体が本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０２１年１２月１７に提出された米国仮特許出願第６３／２９０，７５８号の利益を主張するものであり、その開示内容は、その全体が本明細書に組み込まれる。
【0002】
配列表
本出願は、配列表を含み、この配列表は、コンピュータ可読形態でＸＭＬファイルフォーマットにて電子的に提出されており、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。２０２２年１２月１５日に作成された上記ＸＭＬファイルは、名前が「７００９０ＷＯ０１＿ＳｅｑＬｉｓｔ＿Ｕｐｄａｔｅｄ＿５Ｄｅｃ２０２２」で、サイズが１５，６０５バイトである。
本出願は、配列表を含み、この配列表は、コンピュータ可読形態でＸＭＬファイルフォーマットにて電子的に提出されており、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。２０２２年１２月１５日に作成された上記ＸＭＬファイルは、名前が「７００９０ＷＯ０１＿ＳｅｑＬｉｓｔ＿Ｕｐｄａｔｅｄ＿５Ｄｅｃ２０２２」で、サイズが１５，６０５バイトである。
【0003】
発明の分野
本発明は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染を治療、予防または治癒する方法に関する。特に、本発明は、薬物の組合せを使用して、ＨＩＶ感染細胞を治療、クリアランス、予防または治癒する方法に関する。いくつかの実施形態において、組合せは、ＨＩＶ感染の治療、クリア、予防および／または治癒のための治療または予防用途において、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩を含む薬剤と、ＣＤ４結合部位結合性タンパク質または広域中和抗体を含む薬剤とを含む。
本発明は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染を治療、予防または治癒する方法に関する。特に、本発明は、薬物の組合せを使用して、ＨＩＶ感染細胞を治療、クリアランス、予防または治癒する方法に関する。いくつかの実施形態において、組合せは、ＨＩＶ感染の治療、クリア、予防および／または治癒のための治療または予防用途において、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩を含む薬剤と、ＣＤ４結合部位結合性タンパク質または広域中和抗体を含む薬剤とを含む。
【背景技術】
【0004】
発明の背景
後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）を引き起こすウイルスであるヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）は、世界で最も深刻な公衆衛生上の課題の１つである。ＨＩＶは、依然として重大な医学上の問題であり、流行が始まって以来、７９３０万人がＨＩＶに感染し、３６３０万人がＨＩＶで死亡している。２０２０年末の時点で、世界全体で、３７７０万人がＨＩＶに罹患していた。世界中で１５～４９歳の成人の推定０．７％がＨＩＶに罹患しているが、しかし、流行による負担が国や地域によって大きく異なる状態が続いている。
後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）を引き起こすウイルスであるヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）は、世界で最も深刻な公衆衛生上の課題の１つである。ＨＩＶは、依然として重大な医学上の問題であり、流行が始まって以来、７９３０万人がＨＩＶに感染し、３６３０万人がＨＩＶで死亡している。２０２０年末の時点で、世界全体で、３７７０万人がＨＩＶに罹患していた。世界中で１５～４９歳の成人の推定０．７％がＨＩＶに罹患しているが、しかし、流行による負担が国や地域によって大きく異なる状態が続いている。
【0005】
レトロウイルスであるＨＩＶは、感染宿主細胞内で新規なウイルス粒子（ビリオン）が集合することにより複製する。これらの新規なビリオンは、感染宿主細胞（現在は産生細胞として知られている）を離れ、他の感受性のある宿主細胞に感染を拡げる。産生細胞内でのビリオンの形態形成は、３つの段階：集合、出芽および成熟に分けることができる。集合段階では、ビリオンは、ｇｐ１６０ウイルスエンベロープ（ＥＮＶ）タンパク質を含む、感染性に必要とされる構成要素の全てをパッケージングする。ＥＮＶは、ビリオンを標的細胞に融合させるための膜内在性タンパク質である。パッケージング過程の一部として、ＥＮＶタンパク質は、感染産生細胞のＥＲ（ｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃ ｒｅｔｉｃｕｌｕｍ）膜に共翻訳的に挿入され、次いで、細胞分泌経路を通って移動し、この経路において、グリコシル化され、３量体複合体へと集合し、膜貫通型（ｇｐ４１）および表面型（ｇｐ１２０）サブユニットへと、細胞プロテアーゼのフューリンによってプロセシングされ、小胞輸送を介して形質膜へと運ばれる（Ｓｕｎｄｑｕｉｓｔ，Ｗ．Ｉ．、＆ Ｋｒａｅｕｓｓｌｉｃｈ，Ｈ．Ｇ．（２０１２）．ＨＩＶ－１ ａｓｓｅｍｂｌｙ，ｂｕｄｄｉｎｇ，ａｎｄ ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ．Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ ｉｎ ｍｅｄｉｃｉｎｅ、２（７）、ａ００６９２４）。このように、集合過程が進んでいくと、感染宿主細胞は、ＨＩＶに特徴的なＥＮＶを細胞表面上に提示する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0006】
感染細胞の表面に提示されたＥＮＶは、抗体媒介性感染細胞死を生じ得る抗体の認識によるクリアランスにおいて魅力的な標的となる可能性がある。しかし、感染細胞の表面上のＥＮＶは、シス発現した宿主ＣＤ４受容体との相互作用によって影響され、複数のコンフォメーションを呈することで、抗体の認識の低下が生じる可能性がある。そのため、感染宿主細胞で発現したＥＮＶに対する抗体の認識を向上する必要がある。
【課題を解決するための手段】
【0007】
発明の概要
一態様では、ヒトＨＩＶを治療または予防する方法であって、以下の群：ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質；ｇｐ１２０結合性タンパク質；広域中和抗体またはその抗原結合性断片；ホステムサビルまたはその薬学的に許容される塩；テムサビルまたはその薬学的に許容される塩；および、インテグラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩から選択される、治療有効量の２種または３種以上の薬剤を投与することを含む、方法が提供される。
一態様では、ヒトＨＩＶを治療または予防する方法であって、以下の群：ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質；ｇｐ１２０結合性タンパク質；広域中和抗体またはその抗原結合性断片；ホステムサビルまたはその薬学的に許容される塩；テムサビルまたはその薬学的に許容される塩；および、インテグラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩から選択される、治療有効量の２種または３種以上の薬剤を投与することを含む、方法が提供される。
【0008】
一態様では、それを必要とするヒトにおいてＨＩＶ感染を治療または予防するための方法であって、治療有効量の：（ａ）ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩を含む第１の薬剤；ならびに（ｂ）少なくとも１種の広域中和抗体またはその抗原結合性断片を含む第２の薬剤を投与することを含む、方法が提供される。
【0009】
一態様では、それを必要とするヒトにおいてＨＩＶ感染を治療または予防するための方法であって、治療有効量の：（ａ）ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩を含む第１の薬剤；（ｂ）少なくとも１種の広域中和抗体またはその抗原結合性断片を含む第２の薬剤；ならびに（ｃ）少なくとも１種のインテグラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩を含む第３の薬剤を投与することを含む、方法が提供される。
【0010】
一態様では、ＨＩＶの治療または予防に使用するための組合せであって、ヒトに、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩を含む第１の薬剤を含む第１の医薬組成物、ならびに、少なくとも１種の広域中和抗体またはその抗原結合性断片を含む第２の薬剤を含む第２の医薬組成物を投与することを含む、組合せが提供される。いくつかの実施形態では、使用のための組合せは、少なくとも１種のインテグラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩を含む第３の薬剤を含む第３の医薬組成物を投与することをさらに含む。
【0011】
一態様では、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩を含む第１の薬剤を含む第１の医薬組成物と、少なくとも１種の広域中和抗体またはその抗原結合性断片を含む第２の薬剤を含む第２の医薬組成物と、任意選択で、少なくとも１種のインテグラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩を含む第３の薬剤を含む第３の医薬組成物とを含む、キットが提供される。
【図面の簡単な説明】
【0012】
【図1】ＨＩＶ感染細胞へのｂｎＡｂ結合の平均蛍光強度（ｍｅａｎ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ：ＭＦＩ）の、テムサビルによる増強を示す図である。
【図2】ｂｎＡｂが結合したＨＩＶ感染細胞のパーセンテージの、テムサビルによる増強を示す図である。
【図3】ＨＩＶ感染初代細胞に対する抗体依存性エフェクター細胞媒介性細胞傷害（ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｅｌｌ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ：ＡＤＣＣ）の、テムサビルによる用量依存的な増強を示す図である。
【図4】テムサビルが、エフェクター細胞の非存在下では、ＨＩＶ感染初代細胞の細胞死を引き起こさないことを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【0013】
定義
他に定義されない限り、本明細書で使用する全ての技術用語および科学用語は、本発明が関係する技術分野の当業者によって一般に理解される意味と同じ意味を有する。本明細書に記載されたものと類似または同等の方法および材料を本発明の実施に使用できるが、適切な方法および材料は、以下に記載されている。
他に定義されない限り、本明細書で使用する全ての技術用語および科学用語は、本発明が関係する技術分野の当業者によって一般に理解される意味と同じ意味を有する。本明細書に記載されたものと類似または同等の方法および材料を本発明の実施に使用できるが、適切な方法および材料は、以下に記載されている。
【0014】
本明細書で言及される全ての刊行物、特許出願、特許およびその他の参考文献は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【0015】
さらに、材料、方法および実施例は、例示に過ぎず、限定を意図するものではない。本発明の１または２以上の実施形態の詳細は、以下の添付の説明に記述されている。本発明の他の特徴、目的および利点は、本明細書の説明および特許請求の範囲から明らかとなるであろう。
【0016】
ＨＩＶ
ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）は、さらに明記しない限り、ＨＩＶ－１を意味することを意図する。本発明はまた、ＨＩＶ－２に対しても、またはＨＩＶ－１／ＨＩＶ－２二重感染を有する患者に対しても効果的である可能性がある。ヒト免疫不全ウイルスタイプ１（ＨＩＶ－１）感染およびその結果生じる後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）は、抗ＨＩＶ－１治療剤を開発するための多大な努力にもかかわらず、依然として世界規模の公衆衛生上の脅威となっている。エンベロープウイルスＨＩＶ－１は、幅広い防御機構の陰に隠れて液性認識から逃れている。主要なＨＩＶ－１エンベロープタンパク質（ＨＩＶ－１ Ｅｎｖ）は、約１６０ｋＤの糖タンパク質（ｇｐ１６０）である。感染の間、宿主細胞のプロテアーゼは、ｇｐ１６０をｇｐ１２０およびｇｐ４１へと切断する。ｇｐ４１は膜内在性タンパク質であるのに対して、ｇｐ１２０は成熟ウイルスから突出している。ｇｐ１２０は、ＣＤ４結合部位によって宿主細胞受容体ＣＤ４に結合する。ｇｐ１２０およびｇｐ４１は共にＨＩＶ－１エンベロープスパイクを形成し、このスパイクは中和抗体の標的となる。ＨＩＶ－１ Ｅｎｖに結合する広域中和抗体が特定されており、これには、ｇｐ１２０のＣＤ４結合部位に特異的に結合し、ＨＩＶ－１株を高パーセンテージで中和できる、Ｎ６ＬＳ抗体が含まれる。
ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）は、さらに明記しない限り、ＨＩＶ－１を意味することを意図する。本発明はまた、ＨＩＶ－２に対しても、またはＨＩＶ－１／ＨＩＶ－２二重感染を有する患者に対しても効果的である可能性がある。ヒト免疫不全ウイルスタイプ１（ＨＩＶ－１）感染およびその結果生じる後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）は、抗ＨＩＶ－１治療剤を開発するための多大な努力にもかかわらず、依然として世界規模の公衆衛生上の脅威となっている。エンベロープウイルスＨＩＶ－１は、幅広い防御機構の陰に隠れて液性認識から逃れている。主要なＨＩＶ－１エンベロープタンパク質（ＨＩＶ－１ Ｅｎｖ）は、約１６０ｋＤの糖タンパク質（ｇｐ１６０）である。感染の間、宿主細胞のプロテアーゼは、ｇｐ１６０をｇｐ１２０およびｇｐ４１へと切断する。ｇｐ４１は膜内在性タンパク質であるのに対して、ｇｐ１２０は成熟ウイルスから突出している。ｇｐ１２０は、ＣＤ４結合部位によって宿主細胞受容体ＣＤ４に結合する。ｇｐ１２０およびｇｐ４１は共にＨＩＶ－１エンベロープスパイクを形成し、このスパイクは中和抗体の標的となる。ＨＩＶ－１ Ｅｎｖに結合する広域中和抗体が特定されており、これには、ｇｐ１２０のＣＤ４結合部位に特異的に結合し、ＨＩＶ－１株を高パーセンテージで中和できる、Ｎ６ＬＳ抗体が含まれる。
【0017】
結合性タンパク質
用語「ＣＤ４結合部位（ＣＤ４ｂｓ）結合性タンパク質」は、本明細書で使用する場合、ＨＩＶエンベロープ糖タンパク質ｇｐ１２０のＣＤ４結合部位に結合できる、抗体およびその他のタンパク質構築物、例えば、ドメインを指す。用語「ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質」、「ＣＤ４ｂｓ結合ドメイン」および「抗原結合性タンパク質」は、本明細書で互換的に使用される。この用語は、天然の同族リガンドまたは受容体を含まない。いくつかの実施形態では、ｇｐ１２０上のＣＤ４結合部位に結合し、ＨＩＶ－１を中和する、モノクローナル抗体およびその抗原結合性断片が、本明細書で提供される。
用語「ＣＤ４結合部位（ＣＤ４ｂｓ）結合性タンパク質」は、本明細書で使用する場合、ＨＩＶエンベロープ糖タンパク質ｇｐ１２０のＣＤ４結合部位に結合できる、抗体およびその他のタンパク質構築物、例えば、ドメインを指す。用語「ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質」、「ＣＤ４ｂｓ結合ドメイン」および「抗原結合性タンパク質」は、本明細書で互換的に使用される。この用語は、天然の同族リガンドまたは受容体を含まない。いくつかの実施形態では、ｇｐ１２０上のＣＤ４結合部位に結合し、ＨＩＶ－１を中和する、モノクローナル抗体およびその抗原結合性断片が、本明細書で提供される。
【0018】
抗体
本明細書で、用語「抗体」は、免疫グロブリン様ドメインを有する分子（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤまたはＩｇＥ）を指す最も広い意味で使用され、モノクローナル抗体、組換え抗体、ポリクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体を含む多重特異性抗体およびヘテロコンジュゲート抗体；単一可変ドメイン（例えば、ドメイン抗体（ＤＡＢ））、抗原結合抗体断片、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ジスルフィドによって連結したＦｖ、単鎖Ｆｖ、ジスルフィドによって連結したｓｃＦｖ、ダイアボディ、ＴＡＮＤＡＢＳなど、ならびに、前述のいずれかの修飾バージョンを含む（代替的な「抗体」フォーマットの概要に関しては、ＨｏｌｌｉｇｅｒおよびＨｕｄｓｏｎ、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２００５、Ｖｏｌ ２３、Ｎｏ．９、１１２６～１１３６参照）。
本明細書で、用語「抗体」は、免疫グロブリン様ドメインを有する分子（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤまたはＩｇＥ）を指す最も広い意味で使用され、モノクローナル抗体、組換え抗体、ポリクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体を含む多重特異性抗体およびヘテロコンジュゲート抗体；単一可変ドメイン（例えば、ドメイン抗体（ＤＡＢ））、抗原結合抗体断片、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ジスルフィドによって連結したＦｖ、単鎖Ｆｖ、ジスルフィドによって連結したｓｃＦｖ、ダイアボディ、ＴＡＮＤＡＢＳなど、ならびに、前述のいずれかの修飾バージョンを含む（代替的な「抗体」フォーマットの概要に関しては、ＨｏｌｌｉｇｅｒおよびＨｕｄｓｏｎ、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２００５、Ｖｏｌ ２３、Ｎｏ．９、１１２６～１１３６参照）。
【0019】
用語「完全な抗体または免疫グロブリン（ｆｕｌｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｏｒ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ）」、「抗体または免疫グロブリンの全体（ｗｈｏｌｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｏｒ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ）」、あるいは、「無傷の抗体または免疫グロブリン」は、本明細書で互換的に使用され、およそ１５０，０００ダルトンの分子量を有するヘテロ４量体糖タンパク質を指す。無傷の抗体は、ジスルフィド共有結合によって連結された２つの同一な重鎖（ＨＣ）および２つの同一な軽鎖（ＬＣ）から構成されている。このＨ２Ｌ２構造は、折り畳まれて、「Ｆａｂ」断片として知られる２つの抗原結合性断片、および、「Ｆｃ」結晶化可能フラグメント（ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｂｌｅ ｆｒａｇｍｅｎｔ）を含む３つの機能性ドメインを形成する。Ｆａｂ断片は、アミノ末端の可変重鎖（ＶＨ）または可変軽鎖（ＶＬ）の可変ドメイン、ならびに、カルボキシ末端のＣＨ１（重鎖）およびＣＬ（軽鎖）の定常ドメインから構成されている。Ｆｃ断片は、対になったＣＨ２およびＣＨ３領域の２量体形成で形成される２つのドメインから構成されている。Ｆｃは、免疫細胞上の受容体への結合によって、あるいは、古典的補体経路の最初の構成要素であるＣ１ｑへの結合によって、エフェクター機能を誘発し得る。抗体の５つのクラスＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＥおよびＩｇＤは、それぞれμ、α、γ、εおよびδと呼ばれる異なる重鎖のアミノ酸配列によって定義され、各重鎖がΚまたはλ軽鎖のいずれかと対を形成し得る。血清中の抗体の大部分は、ＩｇＧクラスに属し、ヒトＩｇＧには４つのアイソタイプが存在し（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４）、その配列は、主としてそのヒンジ領域で異なっている。
【0020】
完全ヒト抗体は、様々な方法を使用して、例えば、酵母ベースのライブラリーまたはヒト抗体のレパートリーを産生できるトランスジェニック動物（例えば、マウス）を使用して得ることができる。目的の抗原に結合するヒト抗体を表面に提示する酵母は、ＦＡＣＳ（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ－Ａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｃｅｌｌ Ｓｏｒｔｉｎｇ）ベースの方法を使用して、あるいは標識抗原使用ビーズ上への捕捉によって選択できる。ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現するように修飾したトランスジェニック動物を目的の抗原で免疫化して、抗原特異的ヒト抗体を、Ｂ細胞選別手法を使用して単離することができる。次いで、これらの手法を使用して産生したヒト抗体は、望ましい特性、例えば、親和性、開発可能性および選択性に関して特徴付けられ得る。
【0021】
代替的な抗体フォーマットとしては、代替的なスキャフォールドが挙げられ、抗原結合性タンパク質の１または２以上のＣＤＲを、適切な非免疫グロブリンタンパク質スキャフォールドまたは骨組み、例えば、アフィボディ、ＳｐＡスキャフォールド、ＬＤＬ受容体クラスＡドメイン、アビマー（例えば、米国特許出願公開第２００５／００５３９７３号、同上第２００５／００８９９３２号、同上第２００５／０１６４３０１号参照）またはＥＧＦドメインの上に配置できる。
【0022】
用語「広域中和抗体」（ｂｒｏａｄｌｙ ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｙ：ｂｎＡｂ）は、ウイルス付着および細胞への侵入を、ＨＩＶエンベロープ糖タンパク質（Ｅｎｖ）（例えば、ｇｐ１６０、ｇｐ１２０、ｇｐ４１）への結合を介して阻害する抗体と定義され、その阻害は、非限定的な例としては、ＨＩＶ－１エンベロープ偽型ウイルスおよびウイルス分離株の大規模なパネル（１００超）の５０％超、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上、９５％以上、９９％以上において、インビトロでの感染を５０％阻害するものである。例えば、米国公開特許出願第２０１２０１２１５９７号；Ｂｕｒｔｏｎら、Ｂｒｏａｄｌｙ Ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｔｏ ＨＩＶ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｒｏｌｅ ｉｎ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｓｉｇｎ．Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１６年５月２０日；３４：６３５～５９を参照されたい。
【0023】
例えば、広域中和抗体としては、２Ｇ１２、２Ｆ５、３ＢＣ１７６、３ＢＮＣ６０、３ＢＮＣ１１７、４Ｅ１０、８ＡＮＣ１３１、８ＡＮＣ１９５、１０Ｅ８、１０－１０７４、１２Ａ１２、３５０２２、ｂ１２、Ｂ２５３０、ＣＨ０１－０４、ＣＨ１０３、ＣＨ３１、ＨＪ１６、Ｍ６６．６、Ｎ６、Ｎ６ＬＳ、ＮＩＨ４５－４６、ＰＧ９、ＰＧ１６、ＰＧＤＭ１４００、ＰＧＴ１２１、ＰＧＴ１２８、ＰＧＴ１３５、ＰＧＴ１４１－ＰＧＴ１４５、ＰＧＴ１５１、ＰＧＶ０４、ＶＲＣ０１、ＶＲＣ０１－ＬＳ、ＶＲＣ０７、ＶＲＣ０７－５２３、ＶＲＣ０７－ＬＳ、Ｚ１３または本明細書で開示される任意の他の広域中和抗体を挙げることができるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、広域中和抗体は、ＨＩＶエンベロープ糖タンパク質に結合する。いくつかの実施形態では、広域中和抗体は、ｇｐ１６０、ｇｐ１２０およびｇｐ４１からなる群から選択されるＨＩＶエンベロープ糖タンパク質に結合する。一実施形態では、広域中和抗体は、ＨＩＶエンベロープ糖タンパク質ｇｐ４１に結合する。いくつかの実施形態では、広域中和抗体はｇｐ１２０に結合する。いくつかの実施形態では、広域中和抗体は、ｇｐ１２０に結合し、ＨＩＶ－１を中和する。ＶＲＣ０７－５２３の例は、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ、８８（２１）：１２６６９～１２６８２ページ（２０１４年１１月）に記述されている。３ＢＮＣ１ １７の例は、米国公開第２０１４０２１２４５８号に記述されている。ＮＩＨ４５－４６の例は、米国公開第２０１５０２７４８１３号に記述されている。ＰＧＶ０４の例は、米国公開第２０１３０２５１７２６号に記述されている。ｂ１２の例は、米国公開第２０１６０００９７８９号に記述されている。ＣＨ３１の例は、米国公開第２０１３０２５１７２６号に記述されている。ＣＨ１０３の例は、米国公開第２０１４０２１２４５８号に記述されている。別の実施形態では、ＨＩＶエンベロープ糖タンパク質にｇｐ１２０－ｇｐ４１境界面で結合する抗体が提供される。かかる抗体としては、８ＡＮＣ１９５、３５０２２、およびＰＧＴ１５１から選択される抗体が挙げられるが、これらに限定されない。８ＡＮＣ１９５の例は、米国公開第２０１５０３６１１６０号に記述されている。３５０２２の例は、米国公開第２０１６００２２８０３号に記述されている。ＰＧＴ１５１の例は、米国公開第２０１５０１５２１６７号に記述されている。別の実施形態では、これらに限定されないが、４Ｅ１０、１０Ｅ８、２Ｆ５およびＺ１３ｅ１を含む、ｇｐ４１ ＭＰＥＲ（ｍｅｍｂｒａｎｅ－ｐｒｏｘｉｍａｌ ｅｘｔｅｒｎａｌ ｒｅｇｉｏｎ）に結合する抗体が提供される。４Ｅ１０の例は、米国公開第２０１６０００９７８９号に記述されている。１０Ｅ８の例は、ＰＣＴ公開出願第ＷＯ２０１３０７０７７６号に記述されている。２Ｆ５の例は、米国公開第２０１５０１５８９３４号に記述されている。Ｚ１３ｅ１の例は、米国公開第２０１２０２６９８２１号に記述されている。
【0024】
いくつかの実施形態では、広域中和抗体は、ＶＲＣ０１、ＶＲＣ０１－ＬＳ、Ｎ６、Ｎ６ＬＳ、Ｎ６－ＤＥ、Ｎ６－ＬＡＧＡ、ＶＲＣ０７およびＶＲＣ０７－５２３からなる群から選択される。ＶＲＣ０１の開示の例は、米国特許第８，６３７，０３６号に記述されている。ＶＲＣ０１－ＬＳの開示の例は、ＷＯ２０１２／１０６５７８に記述されている。Ｎ６およびＮ６ＬＳの開示の例は、ＷＯ２０１６／１９６９７５に記述されている。ＶＲＣ０７およびＶＲＣ０７－５２３の開示の例は、米国特許第８，６３７，０３６号、米国特許公開第２０１４／０３２２１６３Ａ１号、ＷＯ２０１６／１９６９７５およびＷＯ２０１７／７９４７９に記述されている。
【0025】
抗原結合部位
抗原結合部位は、抗原結合性タンパク質上の抗原に特異的に結合できる部位を指し、単一可変ドメインである場合もあれば、あるいは、標準的な抗体に見出され得る対になったＶＨ／ＶＬドメインである場合もある。また、単鎖Ｆｖ（ＳｃＦｖ）ドメインが抗原結合部位を提供する場合もある。
抗原結合部位は、抗原結合性タンパク質上の抗原に特異的に結合できる部位を指し、単一可変ドメインである場合もあれば、あるいは、標準的な抗体に見出され得る対になったＶＨ／ＶＬドメインである場合もある。また、単鎖Ｆｖ（ＳｃＦｖ）ドメインが抗原結合部位を提供する場合もある。
【0026】
ＣＤＲ
「ＣＤＲ」は、抗原結合性タンパク質の相補性決定領域のアミノ酸配列と定義される。これらは、免疫グロブリンの重鎖および軽鎖の超可変領域である。免疫グロブリンの可変部分には、３つの重鎖のＣＤＲ（またはＣＤＲ領域）および３つの軽鎖のＣＤＲ（またはＣＤＲ領域）が存在する。したがって、「ＣＤＲ」は、本明細書で使用する場合、３つの重鎖のＣＤＲすべて、３つの軽鎖のＣＤＲすべて、重鎖および軽鎖のＣＤＲすべて、または少なくとも２つのＣＤＲを指す。
「ＣＤＲ」は、抗原結合性タンパク質の相補性決定領域のアミノ酸配列と定義される。これらは、免疫グロブリンの重鎖および軽鎖の超可変領域である。免疫グロブリンの可変部分には、３つの重鎖のＣＤＲ（またはＣＤＲ領域）および３つの軽鎖のＣＤＲ（またはＣＤＲ領域）が存在する。したがって、「ＣＤＲ」は、本明細書で使用する場合、３つの重鎖のＣＤＲすべて、３つの軽鎖のＣＤＲすべて、重鎖および軽鎖のＣＤＲすべて、または少なくとも２つのＣＤＲを指す。
【0027】
本明細書を通して、完全長抗原結合配列内、例えば、抗体の重鎖の配列または抗体の軽鎖の配列内の可変ドメイン配列および可変ドメイン領域におけるアミノ酸残基は、Ｋａｂａｔナンバリング規則に従ってナンバリングされる。同様に、実施例で使用される用語「ＣＤＲ」、「ＣＤＲＬ１」、「ＣＤＲＬ２」、「ＣＤＲＬ３」、「ＣＤＲＨ１」、「ＣＤＲＨ２」、「ＣＤＲＨ３」は、Ｋａｂａｔナンバリング規則に従う。さらなる情報に関しては、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第４版、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ（１９８７）を参照されたい。
【0028】
可変ドメイン配列および完全長抗体配列内のアミノ酸残基に対する代替的なナンバリング規則が存在することは当業者には明らかであろう。また、ＣＤＲ配列に対する代替的なナンバリング規則、例えば、Ｃｈｏｔｈｉａら（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７７～８８３に記述されているナンバリング規則も存在する。抗原結合性タンパク質の構造およびタンパク質の折り畳みによっては、他の残基がＣＤＲ配列の一部と見なされることになり得、当業者にそのように理解されるであろう。
【0029】
当業者が利用可能な他のＣＤＲ配列に対するナンバリング規則としては、「ＡｂＭ」（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｂａｔｈ）および「ｃｏｎｔａｃｔ」（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｃｏｌｌｅｇｅ Ｌｏｎｄｏｎ）方法が挙げられる。
【0030】
以下の表１は、各ＣＤＲまたは結合ユニットに対する各ナンバリング規則を使用した一定義を表す。表１において、Ｋａｂａｔナンバリングスキームが、可変ドメインのアミノ酸配列のナンバリングを行うのに使用される。ＣＤＲ定義のいくつかは、使用する個々の刊行物によって異なる場合があることに留意されたい。
【0031】
【表1】
【0032】
ＣＤＲバリアント
ＣＤＲは、１以上のアミノ酸の置換、欠失または付加によって修飾され得、バリアント抗原結合性タンパク質は非修飾タンパク質の生物学的特徴を実質的に保持する。
ＣＤＲは、１以上のアミノ酸の置換、欠失または付加によって修飾され得、バリアント抗原結合性タンパク質は非修飾タンパク質の生物学的特徴を実質的に保持する。
【0033】
ＣＤＲ Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３の各々は、単独で修飾され得るか、あるいは任意の変更または組合せで任意の他のＣＤＲと組み合わせて修飾され得ることが理解されるであろう。一実施形態では、ＣＤＲは、最大３アミノ酸、例えば、１または２アミノ酸、例えば、１アミノ酸の置換、欠失または付加によって修飾される。典型的には、修飾は、置換、特に保存的置換、例えば、以下の表２に示されるようなものである。
【0034】
【表2】
【0035】
例えば、バリアントＣＤＲにおいて、代替的な定義、例えば、ＫａｂａｔまたはＣｈｏｔｈｉａの一部としてＣＤＲを構成する隣接残基は、保存的アミノ酸残基で置換され得る。
【0036】
上記のバリアントＣＤＲを含む、かかる抗原結合性タンパク質は、本明細書では「機能性ＣＤＲバリアント」と呼ばれ得る。
【0037】
エピトープ
用語「エピトープ」は、本明細書で使用する場合、抗原結合性タンパク質の特定の結合ドメイン（パラトープとしても知られている）と接触する抗原の部分を指す。エピトープは直鎖状エピトープであっても、あるいはコンフォメーションエピトープ／不連続エピトープであってもよい。コンフォメーションエピトープまたは不連続エピトープは、抗原の一次配列において他の配列で分離されている（すなわち、連続した配列内にない）ポリペプチド鎖の三次折り畳みで集合するアミノ酸残基を含む。これらの残基は、ポリペプチド鎖の異なる領域からのものである場合があるが、しかし、抗原の三次元構造において近接している。多量体抗原の場合において、コンフォメーションエピトープまたは不連続エピトープは、異なるペプチド鎖からの残基を含み得る。エピトープ内に含まれる特定の残基は、コンピュータモデリングプログラムによって、または当技術分野で知られている方法、例えば、Ｘ線結晶構造解析で得られた三次元構造によって決めることができる。エピトープマッピングは、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ「Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ」、Ｍｉｋｅ ＳｃｈｕｔｋｏｗｓｋｉおよびＵｌｒｉｃｈ Ｒｅｉｎｅｋｅ（５２４巻、２００９）ならびにＪｏｈａｎ ＲｏｃｋｂｅｒｇおよびＪｏｈａｎ Ｎｉｌｖｅｂｒａｎｔ（１７８５巻、２０１８）などの刊行物に記載されているように、当業者に知られている様々な手法を使用して実施できる。例示的な方法は、ペプチドベースアプローチ、例えば、一連の重複ペプチドの結合をＥＬＩＳＡなどの手法を使用してスクリーニングするペプスキャン、あるいは、ファージ上などでペプチドまたはタンパク質の変異体の大規模ライブラリーをインビトロディスプレイする方法を含む。詳細なエピトープ情報は、Ｘ線結晶構造解析、溶液核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法およびｃｒｙｏ－ＥＭ（ｃｒｙｏｇｅｎｉｃ－ｅｌｅｃｔｒｏｎ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ）を含む構造学的手法によって決めることができる。変異誘発、例えば、アラニンスキャニングは、結合消失分析がエピトープマッピングに使用される効果的なアプローチである。別の方法は、水素／重水素交換（ＨＤＸ）を、タンパク質分解およびＬＣ－ＭＳ（ｌｉｑｕｉｄ－ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）分析と組み合わせて不連続エピトープまたはコンフォメーションエピトープを特徴付けるものである。
用語「エピトープ」は、本明細書で使用する場合、抗原結合性タンパク質の特定の結合ドメイン（パラトープとしても知られている）と接触する抗原の部分を指す。エピトープは直鎖状エピトープであっても、あるいはコンフォメーションエピトープ／不連続エピトープであってもよい。コンフォメーションエピトープまたは不連続エピトープは、抗原の一次配列において他の配列で分離されている（すなわち、連続した配列内にない）ポリペプチド鎖の三次折り畳みで集合するアミノ酸残基を含む。これらの残基は、ポリペプチド鎖の異なる領域からのものである場合があるが、しかし、抗原の三次元構造において近接している。多量体抗原の場合において、コンフォメーションエピトープまたは不連続エピトープは、異なるペプチド鎖からの残基を含み得る。エピトープ内に含まれる特定の残基は、コンピュータモデリングプログラムによって、または当技術分野で知られている方法、例えば、Ｘ線結晶構造解析で得られた三次元構造によって決めることができる。エピトープマッピングは、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ「Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ」、Ｍｉｋｅ ＳｃｈｕｔｋｏｗｓｋｉおよびＵｌｒｉｃｈ Ｒｅｉｎｅｋｅ（５２４巻、２００９）ならびにＪｏｈａｎ ＲｏｃｋｂｅｒｇおよびＪｏｈａｎ Ｎｉｌｖｅｂｒａｎｔ（１７８５巻、２０１８）などの刊行物に記載されているように、当業者に知られている様々な手法を使用して実施できる。例示的な方法は、ペプチドベースアプローチ、例えば、一連の重複ペプチドの結合をＥＬＩＳＡなどの手法を使用してスクリーニングするペプスキャン、あるいは、ファージ上などでペプチドまたはタンパク質の変異体の大規模ライブラリーをインビトロディスプレイする方法を含む。詳細なエピトープ情報は、Ｘ線結晶構造解析、溶液核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法およびｃｒｙｏ－ＥＭ（ｃｒｙｏｇｅｎｉｃ－ｅｌｅｃｔｒｏｎ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ）を含む構造学的手法によって決めることができる。変異誘発、例えば、アラニンスキャニングは、結合消失分析がエピトープマッピングに使用される効果的なアプローチである。別の方法は、水素／重水素交換（ＨＤＸ）を、タンパク質分解およびＬＣ－ＭＳ（ｌｉｑｕｉｄ－ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）分析と組み合わせて不連続エピトープまたはコンフォメーションエピトープを特徴付けるものである。
【0038】
同一性パーセント
クエリー核酸配列と、対象核酸配列との間の「同一性パーセント（Ｐｅｒｃｅｎｔ ｉｄｅｎｔｉｔｙ）」または「同一性パーセント（％）（％ ｉｄｅｎｔｉｔｙ）」は、パーセンテージとして表現される「同一性」値であり、これは、ペアワイズグローバル配列アラインメントが適切なアルゴリズム（例えば、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ－ＷｕｎｓｃｈもしくはＧｅｎｅＰＡＳＴ／ＫＥＲＲ）またはソフトウェア（例えば、ＤＮＡＳＴＡＲ ＬａｓｅｒｇｅｎｅもしくはＧｅｎｅＰＡＳＴ／ＫＥＲＲ）を使用して実施された後にクエリー配列の全長にわたって、適切なアルゴリズム（例えば、ＢＬＡＳＴＮ、ＦＡＳＴＡ、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ－Ｗｕｎｓｃｈ、Ｓｍｉｔｈ－Ｗａｔｅｒｍａｎ、ＬＡＬＩＧＮ、もしくはＧｅｎｅＰＡＳＴ／ＫＥＲＲ）またはソフトウェア（例えば、ＤＮＡＳＴＡＲ Ｌａｓｅｒｇｅｎｅ、ＧｅｎｏｍｅＱｕｅｓｔ、ＥＭＢＯＳＳ ｎｅｅｄｌｅもしくはＥＭＢＯＳＳ ｉｎｆｏａｌｉｇｎ）を使用して計算される。重要なことに、クエリー核酸配列は、本明細書、特に１または２以上の請求項で開示される核酸配列によって記載され得る。
クエリー核酸配列と、対象核酸配列との間の「同一性パーセント（Ｐｅｒｃｅｎｔ ｉｄｅｎｔｉｔｙ）」または「同一性パーセント（％）（％ ｉｄｅｎｔｉｔｙ）」は、パーセンテージとして表現される「同一性」値であり、これは、ペアワイズグローバル配列アラインメントが適切なアルゴリズム（例えば、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ－ＷｕｎｓｃｈもしくはＧｅｎｅＰＡＳＴ／ＫＥＲＲ）またはソフトウェア（例えば、ＤＮＡＳＴＡＲ ＬａｓｅｒｇｅｎｅもしくはＧｅｎｅＰＡＳＴ／ＫＥＲＲ）を使用して実施された後にクエリー配列の全長にわたって、適切なアルゴリズム（例えば、ＢＬＡＳＴＮ、ＦＡＳＴＡ、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ－Ｗｕｎｓｃｈ、Ｓｍｉｔｈ－Ｗａｔｅｒｍａｎ、ＬＡＬＩＧＮ、もしくはＧｅｎｅＰＡＳＴ／ＫＥＲＲ）またはソフトウェア（例えば、ＤＮＡＳＴＡＲ Ｌａｓｅｒｇｅｎｅ、ＧｅｎｏｍｅＱｕｅｓｔ、ＥＭＢＯＳＳ ｎｅｅｄｌｅもしくはＥＭＢＯＳＳ ｉｎｆｏａｌｉｇｎ）を使用して計算される。重要なことに、クエリー核酸配列は、本明細書、特に１または２以上の請求項で開示される核酸配列によって記載され得る。
【0039】
クエリー配列は、対象配列と１００％同一であってもよく、あるいは対象配列に対してある特定の整数までのアミノ酸またはヌクレオチドの変化を含み、その結果、同一性パーセント（％）が１００％未満となってもよい。例えば、クエリー配列は、対象配列と少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または、少なくとも９９％同一である。核酸配列の場合、かかる変化は、１以上のヌクレオチド残基の欠失、置換または挿入を含み、上記変化は、クエリー配列の５’末端位置または３’末端位置で生じ得るか、あるいは、これらの末端位置の間の任意の位置においてクエリー配列のヌクレオチド残基内にて個別でまたはクエリー配列内の１もしくは２以上の連続した群で散らばって生じ得る。アミノ酸配列の場合、かかる変化は、１以上のアミノ酸残基の欠失、置換（保存的置換および非保存的置換を含む）または挿入を含み、上記変化は、クエリー配列のアミノ末端位置またはカルボキシ末端位置で生じ得るか、あるいは、これらの末端位置の間の任意の位置においてクエリー配列のアミノ酸残基内にて個別でまたはクエリー配列内の１もしくは２以上の連続した群で散らばって生じ得る。
【0040】
抗体配列の場合、同一性パーセント（％）は、ＣＤＲを含むクエリー配列の全長にわたって決めることができる。あるいは、例えば、全てのＣＤＲが対象配列と１００％同一であり、同一性パーセント（％）の変動がクエリー配列の残りの部分、例えば、フレームワーク配列にあるため、ＣＤＲ配列が固定され、無傷である場合、同一性パーセント（％）は、１もしくは２以上または全てのＣＤＲを除外し得る。バリアント配列は、非修飾タンパク質の生物学的特徴を実質的に保持している。
【0041】
配列の変動（Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｖａｒｉａｔｉｏｎ）
ＶＨもしくはＶＬ（またはＨＣもしくはＬＣ）配列は、最大１０アミノ酸の置換、付加または欠失を有するバリアント配列であり得る。例えば、バリアント配列は、最大９、８、７、６、５、４、３、２または１アミノ酸の置換、付加または欠失を有し得る。
ＶＨもしくはＶＬ（またはＨＣもしくはＬＣ）配列は、最大１０アミノ酸の置換、付加または欠失を有するバリアント配列であり得る。例えば、バリアント配列は、最大９、８、７、６、５、４、３、２または１アミノ酸の置換、付加または欠失を有し得る。
【0042】
ＨＣ配列は、最大２０％の配列の変動を有するバリアント配列であり得る。
【0043】
ＬＣ配列は、最大２０％の配列の変動を有するバリアント配列であり得る。
【0044】
配列の変動は、例えば、ＣＤＲがＶＨもしくはＶＬ（またはＨＣもしくはＬＣ）配列で同じであり、変動がＶＨもしくはＶＬ（またはＨＣもしくはＬＣ）配列の残りの部分にあるため、ＣＤＲ配列が固定され、無傷である場合、１もしくは２以上または全てのＣＤＲを除外し得る。
【0045】
典型的には、変動は、置換、特に保存的置換、例えば、表２に示されるようなものである。バリアント配列は、非修飾タンパク質、例えば、Ｎ６の生物学的特徴を実質的に保持している。
【0046】
Ｆｃ修飾
Ｆｃ操作方法が、抗体の機能的特性または薬物動態特性を修飾するのに適用できる。エフェクター機能は、Ｆｃ領域に変異を生じさせて変化させることができ、該変異は、Ｃ１ｑまたはＦｃγ受容体への結合を増加または減少させ、補体依存性細胞傷害（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ：ＣＤＣ）活性を含む抗体媒介性補体活性化、または、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を修飾する。また、抗体のグリコシル化パターンを修飾することで、エフェクター機能を変化させることもできる。抗体のインビボ半減期は、ＦｃのＦｃＲｎ（胎児性Ｆｃ受容体）への結合に影響を及ぼす変異を加えることで変化させることができる。
Ｆｃ操作方法が、抗体の機能的特性または薬物動態特性を修飾するのに適用できる。エフェクター機能は、Ｆｃ領域に変異を生じさせて変化させることができ、該変異は、Ｃ１ｑまたはＦｃγ受容体への結合を増加または減少させ、補体依存性細胞傷害（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ：ＣＤＣ）活性を含む抗体媒介性補体活性化、または、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を修飾する。また、抗体のグリコシル化パターンを修飾することで、エフェクター機能を変化させることもできる。抗体のインビボ半減期は、ＦｃのＦｃＲｎ（胎児性Ｆｃ受容体）への結合に影響を及ぼす変異を加えることで変化させることができる。
【0047】
エフェクター機能
用語「エフェクター機能」は、本明細書で使用する場合、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体媒介性補体活性化、例えば、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、補体依存性細胞媒介性食作用（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｅｌｌ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ：ＣＤＣＰ）、抗体依存性補体媒介性細胞溶解（ａｎｔｉｂｏｄｙ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｃｅｌｌ ｌｙｓｉｓ：ＡＤＣＭＬ）、および、Ｆｃ媒介性食作用（Ｆｅ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ）または抗体依存性細胞性食作用（ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ：ＡＤＣＰ）を含む抗体媒介性効果のうちの１または２以上を指す。
用語「エフェクター機能」は、本明細書で使用する場合、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体媒介性補体活性化、例えば、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、補体依存性細胞媒介性食作用（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｅｌｌ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ：ＣＤＣＰ）、抗体依存性補体媒介性細胞溶解（ａｎｔｉｂｏｄｙ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｃｅｌｌ ｌｙｓｉｓ：ＡＤＣＭＬ）、および、Ｆｃ媒介性食作用（Ｆｅ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ）または抗体依存性細胞性食作用（ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ：ＡＤＣＰ）を含む抗体媒介性効果のうちの１または２以上を指す。
【0048】
抗原結合性タンパク質または抗体のＦｃ領域と、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）、ＦｃＲｎ、Ｃ１ｑ、およびＩＩ型Ｆｃ受容体を含む様々なＦｃ受容体（ＦｃＲ）との間の相互作用は、抗原結合性タンパク質または抗体のエフェクター機能を媒介すると考えられる。重要な生物学的効果は、エフェクター機能の結果であり得る。通常、エフェクター機能を媒介するには、抗原結合性タンパク質または抗体の抗原への結合が必要であり、全ての抗原結合性タンパク質または抗体があらゆるエフェクター機能を媒介するわけではない。
【0049】
エフェクター機能は、例えば、以下を含む多くの手法で評価できる：ＦｃγＲＩＩＩを介してナチュラルキラー（ＮＫ）細胞によって媒介されるか、またはＦｃγＲＩを介して単球／マクロファージによって媒介される、標的細胞を被覆した抗体のＡＤＣＣエフェクター機能の評価、あるいはＣ１ｑを介して補体カスケードによって媒介される、標的細胞を被覆した抗体のＣＤＣエフェクター機能の評価。例えば、本発明の抗原結合性タンパク質のＡＤＣＣエフェクター機能は、ナチュラルキラー細胞アッセイにおいて評価できる。かかるアッセイの例は、Ｓｈｉｅｌｄｓら、２００１、Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２７６巻、６５９１～６６０４ページ；Ｃｈａｐｐｅｌら、１９９３、Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２６８巻、２５１２４～２５１３１ページ；Ｌａｚａｒら、２００６、ＰＮＡＳ、１０３；４００５～４０１０に見出すことができる。
【0050】
ＣＤＣ機能を決めるためのアッセイの例は、Ｊ Ｉｍｍ Ｍｅｔｈ、１９９５、１８４：２９～３８に記載されているものを含む。エフェクター機能（例えば、ＦｃＲｎ結合、ＦｃγＲｓおよびＣ１ｑ結合、ＣＤＣ、ＡＤＣＭＬ、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ）への変異の影響は、例えば、Ｇｒｅｖｙｓら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１５年６月１日；１９４（１１）：５４９７～５５０８、またはＴａｍら、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ２０１７、６（３）；Ｍｏｎｎｅｔら、２０１４ ｍＡｂｓ、６：２、４２２～４３６に記載されているように評価できる。
【0051】
本明細書を通して、Ｆｃ領域、抗体配列または完全長抗原結合性タンパク質配列におけるアミノ酸残基は、ＥＵインデックスナンバリング規則に従ってナンバリングされる。
【0052】
エフェクター機能の増強
特定の変異を含むヒトＩｇＧ１定常領域は、Ｆｃ受容体への結合を増強することが示されている。場合によっては、これらの変異はまた、以下で記載するように、エフェクター機能、例えば、ＡＤＣＣおよびＣＤＣを増強することが示されている。本発明の抗原結合性タンパク質は、以下の変異のいずれかを含み得る。
特定の変異を含むヒトＩｇＧ１定常領域は、Ｆｃ受容体への結合を増強することが示されている。場合によっては、これらの変異はまた、以下で記載するように、エフェクター機能、例えば、ＡＤＣＣおよびＣＤＣを増強することが示されている。本発明の抗原結合性タンパク質は、以下の変異のいずれかを含み得る。
【0053】
ＣＤＣの増強：Ｆｃ操作は、補体ベースのエフェクター機能を増強するのに使用され得る。例えば、（ＩｇＧ１を参照した場合）、Ｋ３２６Ｗ／Ｅ３３３Ｓ；Ｓ２６７Ｅ／Ｈ２６８Ｆ／Ｓ３２４Ｔ；およびＩｇＧ１／ＩｇＧ３クロスサブクラスは、Ｃ１ｑ結合を増加させることができる；Ｅ３４５Ｒ（Ｄｉｅｂｏｌｄｅｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２０１４；３４３：１２６０～１２９３）およびＥ３４５Ｒ／Ｅ４３０Ｇ／Ｓ４４０Ｙは、予め形成されたＩｇＧ６量体（Ｗａｎｇら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｅｌｌ．２０１８年１月；９（１）：６３～７３）をもたらす。
【0054】
ＡＤＣＣの増強：Ｆｃ操作は、ＡＤＣＣを増強するのに使用できる。例えば、（ＩｇＧ１を参照した場合）、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｖ３０５Ｉ／Ｐ３９６Ｌ；Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ；およびＳ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａは、ＦｃγＲＩＩＩａ結合を増加させ；Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ａ３３０Ｌは、ＦｃγＲＩＩＩａ結合を増加させ、ＦｃγＲＩＩｂ結合を減少させ；Ｇ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅは、ＦｃγＲＩＩａへの結合を改善し、ＦｃγＲＩＩａ／ＦｃγＲＩＩｂ結合比（活性化／阻害比）を改善し、マクロファージによる抗体被覆標的細胞の食作用を増強する。非対称で、一方の重鎖にはＬ２３４Ｙ／Ｌ２３５Ｑ／Ｇ２３６Ｗ／Ｓ２３９Ｍ／Ｈ２６８Ｄ／Ｄ２７０Ｅ／Ｓ２９８Ａ変異を含み、反対の重鎖にはＤ２７０Ｅ／Ｋ３２６Ｄ／Ａ３３０Ｍ／Ｋ３３４Ｅを含むＦｃは、ＦｃγＲＩＩＩａ Ｆ１５８（低親和性対立遺伝子）およびＦｃγＲＩＩＩａ Ｖ１５８（高親和性対立遺伝子）に対する親和性を増加させるが、阻害性ＦｃγＲＩＩｂに対する結合親和性を増加させない（Ｍｉｍｏｔｏら、２０１３）。
【0055】
ＡＤＣＰの増強：Ｆｃ操作は、ＡＤＣＰを増強するのに使用できる。例えば、（ＩｇＧ１を参照した場合）、Ｇ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅは、ＦｃγＲＩＩａ結合を増加させ、ＦｃγＲＩＩＩａ結合を増加させる（Ｒｉｃｈａｒｄｓ Ｊら、Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．２００８；７：２５１７～２５２７）。
【0056】
同時結合の増加：Ｆｃ操作は、ＦｃＲとの同時結合を増加させるのに使用できる。例えば、（ＩｇＧ１を参照した場合）、Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆは、ＦｃγＲＩＩｂ結合を増加させ；Ｎ３２５Ｓ／Ｌ３２８Ｆは、ＦｃγＲＩＩａ結合を増加させ、ＦｃγＲＩＩＩａ結合を減少させる（Ｗａｎｇら、２０１８）。
【0057】
エフェクター機能の減少
ヒト定常領域のいくつかのアイソタイプ、特に、ＩｇＧ４およびＩｇＧ２アイソタイプは、本質的に以下の機能を欠いている：ａ）古典的経路による補体の活性化；およびｂ）ＡＤＣＣ。抗原結合性タンパク質の重鎖の定常領域への様々な修飾は、望ましいエフェクター特性に応じてエフェクター機能を変化させるために実施され得る。Ｆｃ受容体への結合を減少させ、エフェクター機能、例えば、ＡＤＣＣおよびＣＤＣを減少させる特定の変異を含むＩｇＧ１定常領域が記載されている（Ｄｕｎｃａｎら、Ｎａｔｕｒｅ １９８８、３３２；５６３～５６４；Ｌｕｎｄら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９１、１４７；２６５７～２６６２；Ｃｈａｐｐｅｌら、ＰＮＡＳ １９９１、８８；９０３６～９０４０；ＢｕｒｔｏｎおよびＷｏｏｆ、Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９２、５１；１～８４；Ｍｏｒｇａｎら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １９９５、８６；３１９～３２４；Ｈｅｚａｒｅｈら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．２００１、７５（２４）；１２１６１～１２１６８）。
ヒト定常領域のいくつかのアイソタイプ、特に、ＩｇＧ４およびＩｇＧ２アイソタイプは、本質的に以下の機能を欠いている：ａ）古典的経路による補体の活性化；およびｂ）ＡＤＣＣ。抗原結合性タンパク質の重鎖の定常領域への様々な修飾は、望ましいエフェクター特性に応じてエフェクター機能を変化させるために実施され得る。Ｆｃ受容体への結合を減少させ、エフェクター機能、例えば、ＡＤＣＣおよびＣＤＣを減少させる特定の変異を含むＩｇＧ１定常領域が記載されている（Ｄｕｎｃａｎら、Ｎａｔｕｒｅ １９８８、３３２；５６３～５６４；Ｌｕｎｄら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９１、１４７；２６５７～２６６２；Ｃｈａｐｐｅｌら、ＰＮＡＳ １９９１、８８；９０３６～９０４０；ＢｕｒｔｏｎおよびＷｏｏｆ、Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９２、５１；１～８４；Ｍｏｒｇａｎら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １９９５、８６；３１９～３２４；Ｈｅｚａｒｅｈら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．２００１、７５（２４）；１２１６１～１２１６８）。
【0058】
本発明の一実施形態では、抗原結合性タンパク質のエフェクター機能、例えば、ＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣが減少するような定常領域を含む抗原結合性タンパク質が提供される。かかる一実施形態では、重鎖の定常領域は、ＩｇＧ２もしくはＩｇＧ４アイソタイプの自然発生的に無効化された定常領域または変異ＩｇＧ１定常領域を含み得る。適切な修飾の例は、ＥＰ０３０７４３４に記載されている。一例は、２３５位および２３７位（ＥＵインデックスナンバリング）でのアラニンとの置換、すなわち、Ｌ２３５ＡおよびＧ２３７Ａ（一般的に「ＬＡＧＡ」変異と呼ばれる）を含む。別の例は、２３４位および２３５位（ＥＵインデックスナンバリング）でのアラニンとの置換、すなわち、Ｌ２３４ＡおよびＬ２３５Ａ（一般的に「ＬＡＬＡ」変異と呼ばれる）を含む。ＥＰ２６９１４１７およびＵＳ８９６９５２６に記載されているさらなる例は、ＩｇＧ１ Ｆｃでは、ＬＡＬＡ変異（ＥＵインデックスナンバリング）と組み合わせたＰ３２９ＧまたはＰ３２９Ｒを含み、ＩｇＧ４ Ｆｃ（ＥＵインデックスナンバリング）では、Ｓ２２８ＰおよびＬ２３５Ｅと組み合わせたＰ３２９ＧまたはＰ３２９Ｒを含む。
【0059】
ＦｃＲｎ結合の追加または増加により半減期を増加させる変異
「半減期」は、抗原結合性タンパク質の血清中濃度が元の値の半分に達するのに必要とされる時間を指す。タンパク質の血清中半減期は、Ｋｉｍら、１９９４、Ｅｕｒ．Ｊ．ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏ．２４：５４２～５４８に記載されている方法に従って薬物動態研究によって測定できる。この方法に従って、放射性標識タンパク質は、マウスに静脈内注射し、例えば、注射後約３分間～約７２時間、時間に対する血漿中濃度を、定期的に測定する。分子の薬物動態分析および半減期の決定のための他の方法は、当業者にはよく知られているであろう。
「半減期」は、抗原結合性タンパク質の血清中濃度が元の値の半分に達するのに必要とされる時間を指す。タンパク質の血清中半減期は、Ｋｉｍら、１９９４、Ｅｕｒ．Ｊ．ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏ．２４：５４２～５４８に記載されている方法に従って薬物動態研究によって測定できる。この方法に従って、放射性標識タンパク質は、マウスに静脈内注射し、例えば、注射後約３分間～約７２時間、時間に対する血漿中濃度を、定期的に測定する。分子の薬物動態分析および半減期の決定のための他の方法は、当業者にはよく知られているであろう。
【0060】
本発明の抗原結合性タンパク質は、定常ドメインまたはその断片のＦｃＲｎに対する親和性が増加するアミノ酸修飾を有し得る。治療および診断用ＩｇＧ抗体および他の生物活性分子の半減期（すなわち、血清中半減期）の増加は、これらの分子の投与量および／または投与頻度の減少を含む多くの利点を有する。一実施形態では、本発明の抗原結合性タンパク質は、以下のアミノ酸修飾の１または２以上を有するＩｇＧ定常ドメインの全てまたは一部（ＦｃＲｎ結合部分）を含む。
【0061】
例えば、ＩｇＧ１を参照した場合、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ（一般的に「ＹＴＥ」変異と呼ばれる）およびＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ（一般的に「ＬＳ」変異と呼ばれる）は、ｐＨ６．０でのＦｃＲｎ結合を増加させる（Ｗａｎｇら、２０１８）。
【0062】
半減期はまた、Ｔ２５０Ｑ／Ｍ４２８Ｌ、Ｖ２５９Ｉ／Ｖ３０８Ｆ／Ｍ４２８Ｌ、Ｎ４３４Ａ、およびＴ３０７Ａ／Ｅ３８０Ａ／Ｎ４３４Ａ変異（ＩｇＧ１およびＫａｂａｔナンバリングに準拠した場合）によっても増強され得る（Ｍｏｎｎｅｔら）。
【0063】
半減期およびＦｃＲｎ結合はまた、Ｈ４３３ＫおよびＮ４３４Ｆ変異（一般的に「ＨＮ」または「ＮＨａｎｃｅ」変異と呼ばれる）の導入によっても延長され得る（ＩｇＧ１を参照した場合）（ＷＯ２００６／１３０８３４）。
【0064】
ＷＯ００／４２０７２には、変化したＦｃＲｎ結合親和性を有するバリアントＦｃ領域を含むポリペプチドであって、そのＦｃ領域のアミノ酸位置２３８、２５２、２５３、２５４、２５５、２５６、２６５、２７２、２８６、２８８、３０３、３０５、３０７、３０９、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８６、３８８、４００、４１３、４１５、４２４、４３３、４３４、４３５、４３６、４３９および４４７（ＥＵインデックスナンバリング）における１または２以上のアミノ酸修飾を含む、ポリペプチドを開示する。
【0065】
ＷＯ０２／０６０９１９は、野生型ＩｇＧ定常ドメインに対して１または２以上のアミノ酸修飾を含むＩｇＧ定常ドメインを含んでなる修飾されたＩｇＧであって、野生型ＩｇＧ定常ドメインを有するＩｇＧの半減期と比較して増加した半減期を有し、１または２以上のアミノ酸修飾が、位置２５１、２５３、２５５、２８５～２９０、３０８～３１４、３８５～３８９および４２８～４３５の１または２以上に存在する、修飾されたＩｇＧを開示する。
【0066】
Ｓｈｉｅｌｄｓら（２００１、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ；２７６：６５９１～６０４）は、ヒトＩｇＧ１抗体のＦｃ領域内の残基を変化させるのにアラニンスキャニング変異誘発を使用し、次いで、ヒトＦｃＲｎへの結合を評価した。アラニンに変えたときにＦｃＲｎへの結合を効果的に抑止した位置は、Ｉ２５３、Ｓ２５４、Ｈ４３５およびＹ４３６を含む。結合の減少がさほど顕著に示されなかった他の位置は以下の通りである：Ｅ２３３～Ｇ２３６、Ｒ２５５、Ｋ２８８、Ｌ３０９、Ｓ４１５およびＨ４３３。いくつかのアミノ酸位置が、アラニンに変えたときにＦｃＲｎ結合の改善を示した；それらの中でも注目すべきは、Ｐ２３８、Ｔ２５６、Ｅ２７２、Ｖ３０５、Ｔ３０７、Ｑ３１１、Ｄ３１２、Ｋ３１７、Ｄ３７６、Ｅ３８０、Ｅ３８２、Ｓ４２４およびＮ４３４である。多くの他のアミノ酸位置は、ＦｃＲｎ結合において、わずかな改善（Ｄ２６５、Ｎ２８６、Ｖ３０３、Ｋ３６０、Ｑ３６２およびＡ３７８）を示したか、あるいは変化を示さなかった（Ｓ２３９、Ｋ２４６、Ｋ２４８、Ｄ２４９、Ｍ２５２、Ｅ２５８、Ｔ２６０、Ｓ２６７、Ｈ２６８、Ｓ２６９、Ｄ２７０、Ｋ２７４、Ｎ２７６、Ｙ２７８、Ｄ２８０、Ｖ２８２、Ｅ２８３、Ｈ２８５、Ｔ２８９、Ｋ２９０、Ｒ２９２、Ｅ２９３、Ｅ２９４、Ｑ２９５、Ｙ２９６、Ｎ２９７、Ｓ２９８、Ｒ３０１、Ｎ３１５、Ｅ３１８、Ｋ３２０、Ｋ３２２、Ｓ３２４、Ｋ３２６、Ａ３２７、Ｐ３２９、Ｐ３３１、Ｅ３３３、Ｋ３３４、Ｔ３３５、Ｓ３３７、Ｋ３３８、Ｋ３４０、Ｑ３４２、Ｒ３４４、Ｅ３４５、Ｑ３４５、Ｑ３４７、Ｒ３５６、Ｍ３５８、Ｔ３５９、Ｋ３６０、Ｎ３６１、Ｙ３７３、Ｓ３７５、Ｓ３８３、Ｎ３８４、Ｑ３８６、Ｅ３８８、Ｎ３８９、Ｎ３９０、Ｋ３９２、Ｌ３９８、Ｓ４００、Ｄ４０１、Ｋ４１４、Ｒ４１６、Ｑ４１８、Ｑ４１９、Ｎ４２１、Ｖ４２２、Ｅ４３０、Ｔ４３７、Ｋ４３９、Ｓ４４０、Ｓ４４２、Ｓ４４４およびＫ４４７）。
【0067】
ＦｃＲｎ結合の改善に関して最も顕著な効果は、組合せバリアントで見出された。ｐＨ６．０では、Ｅ３８０Ａ／Ｎ４３４Ａバリアントは、ネイティブなＩｇＧ１と比較して、ＦｃＲｎへの結合がＥ３８０Ａの場合は２倍であり、Ｎ４３４Ａの場合は３．５倍であるのに対して、８倍超優れていることが示された。このバリアントにＴ３０７Ａを加えると、ネイティブなＩｇＧ１と比較して結合が１２倍改善した。一実施形態では、本発明の抗原結合性タンパク質は、Ｅ３８０Ａ／Ｎ４３４Ａ変異を含み、ＦｃＲｎへの結合が増加している。
【0068】
Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａら（２００２、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．；１６９：５１７１～８０）は、マウスＦｃＲｎに対するヒトＩｇＧ１のヒンジ－Ｆｃ断片ファージディスプレイライブラリーのランダム変異誘発およびスクリーニングを記載している。彼らは、位置２５１、２５２、２５４～２５６、３０８、３０９、３１１、３１２、３１４、３８５～３８７、３８９、４２８、４３３、４３４および４３６のランダム変異誘発を開示していた。ＩｇＧ１－ヒトＦｃＲｎ複合体の安定性は、Ｆｃ－ＦｃＲｎ境界面を横断する帯状の領域に位置している残基（Ｍ２５２、Ｓ２５４、Ｔ２５６、Ｈ４３３、Ｎ４３４およびＹ４３６）を置換した場合に大きく改善し、周辺の残基、例えば、Ｖ３０８、Ｌ３０９、Ｑ３１１、Ｇ３８５、Ｑ３８６、Ｐ３８７およびＮ３８９を置換した場合に、より低い程度であるが改善する。ヒトＦｃＲｎへの親和性が最も高いバリアントは、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ変異（「ＹＴＥ」変異）と、Ｈ４３３Ｋ／Ｎ４３４Ｆ／Ｙ４３６Ｈ変異とを組み合わせることで得られ、野生型ＩｇＧ１と比較して親和性の５７倍の増加を示した。かかる変異ヒトＩｇＧ１のインビボでの挙動は、野生型ＩｇＧ１と比較して、カニクイザルにおいて血清中半減期のほぼ４倍の増加を示した。
【0069】
したがって、本発明は、ＦｃＲｎへの結合が最適化された抗原結合性タンパク質を提供する。好ましい実施形態では、抗原結合性タンパク質は、上記抗原結合性タンパク質のＦｃ領域内に１以上のアミノ酸修飾を含み、上記修飾は、Ｆｃ領域の２２６、２２７、２２８、２３０、２３１、２３３、２３４、２３９、２４１、２４３、２４６、２５０、２５２、２５６、２５９、２６４、２６５、２６７、２６９、２７０、２７６、２８４、２８５、２８８、２８９、２９０、２９１、２９２、２９４、２９７、２９８、２９９、３０１、３０２、３０３、３０５、３０７、３０８、３０９、３１１、３１５、３１７、３２０、３２２、３２５、３２７、３３０、３３２、３３４、３３５、３３８、３４０、３４２、３４３、３４５、３４７、３５０、３５２、３５４、３５５、３５６、３５９、３６０、３６１、３６２、３６９、３７０、３７１、３７５、３７８、３８０、３８２、３８４、３８５、３８６、３８７、３８９、３９０、３９２、３９３、３９４、３９５、３９６、３９７、３９８、３９９、４００、４０１、４０３、４０４、４０８、４１１、４１２、４１４、４１５、４１６、４１８、４１９、４２０、４２１、４２２、４２４、４２６、４２８、４３３、４３４、４３８、４３９、４４０、４４３、４４４、４４５、４４６および４４７からなる群から選択されるアミノ酸位置における修飾である。
【0070】
さらに、様々な刊行物は、ＦｃＲｎ結合ポリペプチドを分子へ導入すること（ＷＯ９７／４３３１６、ＵＳ５８６９０４６、ＵＳ５７４７０３５、ＷＯ９６／３２４７８およびＷＯ９１／１４４３８）によって、あるいは分子をＦｃＲｎ結合親和性が保存されているが他のＦｃ受容体への親和性が大きく減少している抗体と融合すること（ＷＯ９９／４３７１３）または抗体のＦｃＲｎ結合ドメインと融合すること（ＷＯ００／０９５６０、ＵＳ４７０３０３９）によって修飾された半減期を有する生理活性分子を得るための方法を記載している。
【0071】
抗体の細胞傷害および半減期の両方を改善するためのＦｃＲｎ親和性増強Ｆｃバリアントが、ｐＨ６．０でのスクリーニングにおいて同定された。選択されたＩｇＧバリアントは、低フコシル化分子として産生され得る。得られたバリアントは、ｈＦｃＲｎマウスにおいて、向上した血清中持続性および保存され増強されたＡＤＣＣを示す（Ｍｏｎｎｅｔら）。例示的なバリアントは、以下を含む（ＩｇＧ１およびＫａｂａｔナンバリングに準拠した場合）：
Ｐ２３０Ｔ／Ｖ３０３Ａ／Ｋ３２２Ｒ／Ｎ３８９Ｔ／Ｆ４０４Ｌ／Ｎ４３４Ｓ；Ｐ２２８Ｒ／Ｎ４３４Ｓ；Ｑ３１１Ｒ／Ｋ３３４Ｒ／Ｑ３４２Ｅ／Ｎ４３４Ｙ；Ｃ２２６Ｇ／Ｑ３８６Ｒ／Ｎ４３４Ｙ；Ｔ３０７Ｐ／Ｎ３８９Ｔ／Ｎ４３４Ｙ；Ｐ２３０Ｓ／Ｎ４３４Ｓ；Ｐ２３０Ｔ／Ｖ３０５Ａ／Ｔ３０７Ａ／Ａ３７８Ｖ／Ｌ３９８Ｐ／Ｎ４３４Ｓ；Ｐ２３ＯＴ／Ｐ３８７Ｓ／Ｎ４３４Ｓ；Ｐ２３０Ｑ／Ｅ２６９Ｄ／Ｎ４３４Ｓ；Ｎ２７６Ｓ／Ａ３７８Ｖ／Ｎ４３４Ｓ；Ｔ３０７Ａ／Ｎ３１５Ｄ／Ａ３３０Ｖ／３８２Ｖ／Ｎ３８９Ｔ／Ｎ４３４Ｙ；Ｔ２５６Ｎ／Ａ３７８Ｖ／Ｓ３８３Ｎ／Ｎ４３４Ｙ；Ｎ３１５Ｄ／Ａ３３０Ｖ／Ｎ３６１Ｄ／Ａ３８７Ｖ／Ｎ４３４Ｙ；Ｖ２５９Ｉ／Ｎ３１５Ｄ／Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｙ；Ｐ２３０Ｓ／Ｎ３１５Ｄ／Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｙ；Ｆ２４１Ｌ／Ｖ２６４Ｅ／Ｔ３０７Ｐ／Ａ３７８Ｖ／Ｈ４３３Ｒ；Ｔ２５０Ａ／Ｎ３８９Ｋ／Ｎ４３４Ｙ；Ｖ３０５Ａ／Ｎ３１５Ｄ／Ａ３３０Ｖ／Ｐ３９５Ａ／Ｎ４３４Ｙ；Ｖ２６４Ｅ／Ｑ３８６Ｒ／Ｐ３９６Ｌ／Ｎ４３４Ｓ／Ｋ４３９Ｒ；Ｅ２９４ｄｅｌ／Ｔ３０７Ｐ／Ｎ４３４Ｙ（ここで、「ｄｅｌ」は欠失を示す）。
Ｐ２３０Ｔ／Ｖ３０３Ａ／Ｋ３２２Ｒ／Ｎ３８９Ｔ／Ｆ４０４Ｌ／Ｎ４３４Ｓ；Ｐ２２８Ｒ／Ｎ４３４Ｓ；Ｑ３１１Ｒ／Ｋ３３４Ｒ／Ｑ３４２Ｅ／Ｎ４３４Ｙ；Ｃ２２６Ｇ／Ｑ３８６Ｒ／Ｎ４３４Ｙ；Ｔ３０７Ｐ／Ｎ３８９Ｔ／Ｎ４３４Ｙ；Ｐ２３０Ｓ／Ｎ４３４Ｓ；Ｐ２３０Ｔ／Ｖ３０５Ａ／Ｔ３０７Ａ／Ａ３７８Ｖ／Ｌ３９８Ｐ／Ｎ４３４Ｓ；Ｐ２３ＯＴ／Ｐ３８７Ｓ／Ｎ４３４Ｓ；Ｐ２３０Ｑ／Ｅ２６９Ｄ／Ｎ４３４Ｓ；Ｎ２７６Ｓ／Ａ３７８Ｖ／Ｎ４３４Ｓ；Ｔ３０７Ａ／Ｎ３１５Ｄ／Ａ３３０Ｖ／３８２Ｖ／Ｎ３８９Ｔ／Ｎ４３４Ｙ；Ｔ２５６Ｎ／Ａ３７８Ｖ／Ｓ３８３Ｎ／Ｎ４３４Ｙ；Ｎ３１５Ｄ／Ａ３３０Ｖ／Ｎ３６１Ｄ／Ａ３８７Ｖ／Ｎ４３４Ｙ；Ｖ２５９Ｉ／Ｎ３１５Ｄ／Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｙ；Ｐ２３０Ｓ／Ｎ３１５Ｄ／Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｙ；Ｆ２４１Ｌ／Ｖ２６４Ｅ／Ｔ３０７Ｐ／Ａ３７８Ｖ／Ｈ４３３Ｒ；Ｔ２５０Ａ／Ｎ３８９Ｋ／Ｎ４３４Ｙ；Ｖ３０５Ａ／Ｎ３１５Ｄ／Ａ３３０Ｖ／Ｐ３９５Ａ／Ｎ４３４Ｙ；Ｖ２６４Ｅ／Ｑ３８６Ｒ／Ｐ３９６Ｌ／Ｎ４３４Ｓ／Ｋ４３９Ｒ；Ｅ２９４ｄｅｌ／Ｔ３０７Ｐ／Ｎ４３４Ｙ（ここで、「ｄｅｌ」は欠失を示す）。
【0072】
ドメイン
用語「ドメイン」は、ポリペプチドの残りの部分とは独立して三次構造を保持する折り畳まれたポリペプチド構造を指す。一般的に、ドメインは、ポリペプチドの個別の機能特性を担っており、多くの場合、タンパク質および／またはドメインの残りの部分の機能を損なうことなく、他のポリペプチドに追加、除去または移動され得る。
用語「ドメイン」は、ポリペプチドの残りの部分とは独立して三次構造を保持する折り畳まれたポリペプチド構造を指す。一般的に、ドメインは、ポリペプチドの個別の機能特性を担っており、多くの場合、タンパク質および／またはドメインの残りの部分の機能を損なうことなく、他のポリペプチドに追加、除去または移動され得る。
【0073】
単一可変ドメイン
用語「単一可変ドメイン」は、抗体可変ドメインに特徴的な配列を含む折り畳まれたポリペプチドドメインを指す。したがって、単一可変ドメインは、ＶＨ、ＶＨＨおよびＶＬなどの完全な抗体可変ドメイン、および修飾抗体可変ドメイン、例えば、１もしくは２以上のループが抗体可変ドメインに特徴的ではない配列で置き換えられているもの、あるいは短縮されているかまたはＮ末端もしくはＣ末端の延長を含む抗体可変ドメイン、ならびに、完全長ドメインの結合の活性および特異性を少なくとも保持する可変ドメインの折り畳まれた断片を含む。本明細書に定義される単一可変ドメインは、異なる可変領域またはドメインとは独立して、抗原またはエピトープに結合できる。「ドメイン抗体」または「ＤＡＢ」は、ヒト「単一可変ドメイン」と同じものと考えることができる。単一可変ドメインは、ヒト単一可変ドメインであり得るが、しかし、他の種、例えば、げっ歯類（例えば、ＷＯ００／２９００４で開示されるもの）、テンジクザメおよびラクダ科ＶＨＨ由来の単一可変ドメインも含む。ラクダ科ＶＨＨは、自然発生的に軽鎖を欠いた重鎖のみの抗体を産生する、ラクダ、ラマ、アルパカ、ヒトコブラクダ、およびグアナコを含む種由来の免疫グロブリンの単一可変ドメインポリペプチドである。かかるＶＨＨドメインは、当技術分野で利用可能な標準的な手法に従ってヒト化でき、かかるドメインは、「単一可変ドメイン」であると考えられる。
用語「単一可変ドメイン」は、抗体可変ドメインに特徴的な配列を含む折り畳まれたポリペプチドドメインを指す。したがって、単一可変ドメインは、ＶＨ、ＶＨＨおよびＶＬなどの完全な抗体可変ドメイン、および修飾抗体可変ドメイン、例えば、１もしくは２以上のループが抗体可変ドメインに特徴的ではない配列で置き換えられているもの、あるいは短縮されているかまたはＮ末端もしくはＣ末端の延長を含む抗体可変ドメイン、ならびに、完全長ドメインの結合の活性および特異性を少なくとも保持する可変ドメインの折り畳まれた断片を含む。本明細書に定義される単一可変ドメインは、異なる可変領域またはドメインとは独立して、抗原またはエピトープに結合できる。「ドメイン抗体」または「ＤＡＢ」は、ヒト「単一可変ドメイン」と同じものと考えることができる。単一可変ドメインは、ヒト単一可変ドメインであり得るが、しかし、他の種、例えば、げっ歯類（例えば、ＷＯ００／２９００４で開示されるもの）、テンジクザメおよびラクダ科ＶＨＨ由来の単一可変ドメインも含む。ラクダ科ＶＨＨは、自然発生的に軽鎖を欠いた重鎖のみの抗体を産生する、ラクダ、ラマ、アルパカ、ヒトコブラクダ、およびグアナコを含む種由来の免疫グロブリンの単一可変ドメインポリペプチドである。かかるＶＨＨドメインは、当技術分野で利用可能な標準的な手法に従ってヒト化でき、かかるドメインは、「単一可変ドメイン」であると考えられる。
【0074】
タンパク質スキャフォールド
抗原結合性断片は、１または２以上のＣＤＲを、非抗体タンパク質スキャフォールド上に配置することによって提供され得る。「タンパク質スキャフォールド」としては、本明細書で使用する場合、免疫グロブリン（Ｉｇ）スキャフォールド、例えば、４鎖または２鎖抗体であり得るＩｇＧスキャフォールド、抗体のＦｃ領域のみを含み得るＩｇＧスキャフォールド、抗体の１または２以上の定常領域を含み得るＩｇＧスキャフォールド、定常領域がヒトまたは霊長類由来であり得るＩｇＧスキャフォールド、あるいは、ヒトおよび霊長類の定常領域の人工キメラであり得るＩｇＧスキャフォールドが挙げられるが、これらに限定されない。
抗原結合性断片は、１または２以上のＣＤＲを、非抗体タンパク質スキャフォールド上に配置することによって提供され得る。「タンパク質スキャフォールド」としては、本明細書で使用する場合、免疫グロブリン（Ｉｇ）スキャフォールド、例えば、４鎖または２鎖抗体であり得るＩｇＧスキャフォールド、抗体のＦｃ領域のみを含み得るＩｇＧスキャフォールド、抗体の１または２以上の定常領域を含み得るＩｇＧスキャフォールド、定常領域がヒトまたは霊長類由来であり得るＩｇＧスキャフォールド、あるいは、ヒトおよび霊長類の定常領域の人工キメラであり得るＩｇＧスキャフォールドが挙げられるが、これらに限定されない。
【0075】
タンパク質スキャフォールドは、Ｉｇスキャフォールド、例えば、ＩｇＧ、またはＩｇＡスキャフォールドであり得る。ＩｇＧスキャフォールドは、無傷の抗体のドメイン（すなわち、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ＶＨ、ＶＬ）の一部または全てを含み得る。抗原結合性タンパク質は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４またはＩｇＧ４ＰＥから選択されるＩｇＧスキャフォールドを含み得る。例えば、スキャフォールドはＩｇＧ１であり得る。スキャフォールドは、抗体のＦｃ領域もしくはその一部からなるか、またはこれを含むことができる。
【0076】
タンパク質スキャフォールドは、ＣＴＬＡ－４、リポカリン、プロテインＡ由来分子、例えば、プロテインＡのＺドメイン（アフィボディ、ＳｐＡ）、Ａドメイン（アビマー／マキシボディ）；熱ショックタンパク質、例えば、ＧｒｏＥｌおよびＧｒｏＥＳ；トランスフェリン（ｔｒａｎｓ－ｂｏｄｙ）；アンキリン反復タンパク質（ＤＡＲＰｉｎ）；ペプチドアプタマー；Ｃタイプレクチンドメイン（テトラネクチン）；ヒト□－クリスタリンおよびヒトユビキチン（ａｆｆｉｌｉｎ）；ＰＤＺドメイン；ヒトプロテアーゼインヒビターのサソリ毒クニッツタイプドメイン；ならびにフィブロネクチン／アドネクチンからなる群から選択されるスキャフォールドの誘導体であり得、抗原、例えば、ｇｐ１２０のＣＤ４結合部位への結合を得るためにタンパク質操作に供されている。
【0077】
付着阻害剤（Ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）
本明細書で使用する場合、「付着阻害剤」は、ＨＩＶの外表面上のｇｐ１２０タンパク質に結合して、ＨＩＶがＣＤ４＋ Ｔリンパ球（ＣＤ４細胞）に結合し、これに侵入するのを防ぐ、および／または、ＨＩＶ感染ＣＤ４細胞の外表面上に発現するｇｐ１２０タンパク質に結合する小分子薬のクラスを指す。付着阻害剤の例としては、テムサビルおよびホステムサビルが挙げられる。
本明細書で使用する場合、「付着阻害剤」は、ＨＩＶの外表面上のｇｐ１２０タンパク質に結合して、ＨＩＶがＣＤ４＋ Ｔリンパ球（ＣＤ４細胞）に結合し、これに侵入するのを防ぐ、および／または、ＨＩＶ感染ＣＤ４細胞の外表面上に発現するｇｐ１２０タンパク質に結合する小分子薬のクラスを指す。付着阻害剤の例としては、テムサビルおよびホステムサビルが挙げられる。
【0078】
テムサビル
本明細書で使用する場合、テムサビルは、１－（４－ベンゾイルピペラジン－１－イル）－２－［４－メトキシ－７－（３－メチル－１，２，４－トリアゾール－１－イル）－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｃ］ピリジン－３－イル］エタン－１，２－ジオンまたはＵＳ７，３５４，９２４に開示される化合物（Ｉ）を指す。
本明細書で使用する場合、テムサビルは、１－（４－ベンゾイルピペラジン－１－イル）－２－［４－メトキシ－７－（３－メチル－１，２，４－トリアゾール－１－イル）－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｃ］ピリジン－３－イル］エタン－１，２－ジオンまたはＵＳ７，３５４，９２４に開示される化合物（Ｉ）を指す。
【0079】
【化1】
【0080】
ホステムサビル
本明細書で使用する場合、ホステムサビルは、１－ベンゾイル－４－［２－［４－メトキシ－７－（３－メチル－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－１イル）－１－［（ホスホノオキシ）メチル］－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｃ］ピリジン－３－イル］－１，２－ジオキソエチル］－ピペラジンまたはＵＳ７，７４５，６２５；ＵＳ８，１６８，６１５；およびＵＳ８，４６１，３３３に開示される化合物（ＩＩ）を指す。
本明細書で使用する場合、ホステムサビルは、１－ベンゾイル－４－［２－［４－メトキシ－７－（３－メチル－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－１イル）－１－［（ホスホノオキシ）メチル］－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｃ］ピリジン－３－イル］－１，２－ジオキソエチル］－ピペラジンまたはＵＳ７，７４５，６２５；ＵＳ８，１６８，６１５；およびＵＳ８，４６１，３３３に開示される化合物（ＩＩ）を指す。
【0081】
【化2】
【0082】
ホステムサビルは、テムサビルに代謝されるプロドラッグ（リン酸メチルがＨに置き換えられた）である。非ホスホン化化合物は、１－ベンゾイル－４－［２－［４－メトキシ－７－（３－メチル－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－１イル）－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｃ］ピリジン－３－イル］－１，２－ジオキソエチル］－ピペラジンである。
【0083】
産生細胞
本明細書で使用する場合、「産生細胞」は、ＨＩＶの標的となり感染する細胞群を指す。次いで、この細胞群はＨＩＶの複製を促進する。ＣＤ４＋ Ｔリンパ球およびマクロファージは、この産生細胞のカテゴリーに該当する。
本明細書で使用する場合、「産生細胞」は、ＨＩＶの標的となり感染する細胞群を指す。次いで、この細胞群はＨＩＶの複製を促進する。ＣＤ４＋ Ｔリンパ球およびマクロファージは、この産生細胞のカテゴリーに該当する。
【0084】
プロドラッグ
本明細書で使用する場合、「プロドラッグ」は、薬物分子の生体可逆性の誘導体を指し、該誘導体は、酵素的および／または化学的変換をインビボで受けて、活性薬物を放出し、次いで、この活性薬物が望ましい薬理効果を発揮することができるものである。
本明細書で使用する場合、「プロドラッグ」は、薬物分子の生体可逆性の誘導体を指し、該誘導体は、酵素的および／または化学的変換をインビボで受けて、活性薬物を放出し、次いで、この活性薬物が望ましい薬理効果を発揮することができるものである。
【0085】
医薬組成物
本明細書で使用する場合、用語「医薬組成物」は、医薬用途に適した組成物を意味する。本明細書に記載される抗原結合性タンパク質、抗体、阻害剤およびインテグラーゼ阻害剤は、本明細書に記載されるヒト疾患の治療における使用のための医薬組成物に組み込まれ得る。一実施形態では、医薬組成物は、抗原結合性タンパク質と、１または２以上の薬学的に許容される担体および／または賦形剤とを含む。
本明細書で使用する場合、用語「医薬組成物」は、医薬用途に適した組成物を意味する。本明細書に記載される抗原結合性タンパク質、抗体、阻害剤およびインテグラーゼ阻害剤は、本明細書に記載されるヒト疾患の治療における使用のための医薬組成物に組み込まれ得る。一実施形態では、医薬組成物は、抗原結合性タンパク質と、１または２以上の薬学的に許容される担体および／または賦形剤とを含む。
【0086】
薬学的に許容される塩
本明細書で使用する場合、用語「薬学的に許容される塩」は、対象化合物の望ましい生物活性を保持し、望ましくない毒性効果の発生が最小限である塩を指す。これらの薬学的に許容される塩は、化合物の最終の単離および精製中にその場で調製してもよいし、あるいは、遊離酸または遊離塩基の形態の精製した化合物を適切な塩基または酸それぞれと別々に反応させることによって調製してもよい。
本明細書で使用する場合、用語「薬学的に許容される塩」は、対象化合物の望ましい生物活性を保持し、望ましくない毒性効果の発生が最小限である塩を指す。これらの薬学的に許容される塩は、化合物の最終の単離および精製中にその場で調製してもよいし、あるいは、遊離酸または遊離塩基の形態の精製した化合物を適切な塩基または酸それぞれと別々に反応させることによって調製してもよい。
【0087】
薬学的に許容される塩としては、特に、Ｂｅｒｇｅ，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．、１９７７、６６、１～１９に記載されているもの、または編集者Ｐ Ｈ ＳｔａｈｌおよびＣ Ｇ Ｗｅｒｍｕｔｈ、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ；Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｕｓｅ、第２版Ｓｔａｈｌ／Ｗｅｒｍｕｔｈ：Ｗｉｌｅｙ－ ＶＣＨ／ＶＨＣＡ、２０１１に列挙されているものが挙げられる。
【0088】
適切な薬学的に許容される塩としては、酸または塩基付加塩を挙げることができる。本発明の適切な薬学的に許容される塩としては、塩基付加塩が挙げられる。
【0089】
代表的な薬学的に許容される塩基付加塩としては、アルミニウム、２－アミノ－２－（ヒドロキシメチル）－１，３－プロパンジオール（ＴＲＩＳ、トロメタミン）、アルギニン、ベネタミン（ｂｅｎｅｔｈａｍｉｎｅ）（Ｎ－ベンジルフェネチルアミン）、ベンザチン（Ｎ，Ｎ’－ジベンジルエチレンジアミン）、ビス－（２－ヒドロキシエチル）アミン、ビスマス、カルシウム、クロロプロカイン、コリン、クレミゾール（１－ｐクロロベンジル－２－ピロリルジン（ｐｙｒｒｏｌｉｌｄｉｎｅ）－１’－イルメチルベンズイミダゾール）、シクロヘキシルアミン、ジベンジルエチレンジアミン、ジエチルアミン、ジエチルトリアミン、ジメチルアミン、ジメチルエタノールアミン、ドーパミン、エタノールアミン、エチレンジアミン、Ｌ－ヒスチジン、鉄、イソキノリン、レピジン、リチウム、リジン、マグネシウム、メグルミン（Ｎ－メチルグルカミン）、ピペラジン、ピペリジン、カリウム、プロカイン、キニーネ、キノリン、ナトリウム、ストロンチウム、ｔ－ブチルアミン、および亜鉛が挙げられるが、これらに限定されない。
【0090】
治療有効量
本明細書で使用する場合、用語「治療有効量」または「有効量」は、投与される化合物の量を指し、該量は、病態を予防する、あるいは、治療される障害の症状の１または２以上をある程度緩和するものである。本明細書での使用に適した医薬組成物としては、活性成分が意図した目的を達成するのに十分な量で含まれる組成物が挙げられる。治療有効量を決めることは、特に本明細書に提供される詳細な説明を考慮すれば、十分に当業者の能力の範囲内である。
本明細書で使用する場合、用語「治療有効量」または「有効量」は、投与される化合物の量を指し、該量は、病態を予防する、あるいは、治療される障害の症状の１または２以上をある程度緩和するものである。本明細書での使用に適した医薬組成物としては、活性成分が意図した目的を達成するのに十分な量で含まれる組成物が挙げられる。治療有効量を決めることは、特に本明細書に提供される詳細な説明を考慮すれば、十分に当業者の能力の範囲内である。
【0091】
治療（Ｔｒｅａｔ）
本明細書で使用する場合、治療法の文脈での用語「治療」、「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」または「治療する（ｔｒｅａｔ）」は、特定の病態を軽減すること、病態の症状を排除または軽減すること、病態の進行、浸潤、または拡散を遅延または排除すること、ならびに、以前罹患していたヒトにおける病態の再発を軽減または遅延することを指す。本発明は、いくつかの病態を治療するためのそれを必要とする哺乳類（例えば、ヒト）における医薬の調製のための本発明の化合物または組成物の使用をさらに提供する。
本明細書で使用する場合、治療法の文脈での用語「治療」、「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」または「治療する（ｔｒｅａｔ）」は、特定の病態を軽減すること、病態の症状を排除または軽減すること、病態の進行、浸潤、または拡散を遅延または排除すること、ならびに、以前罹患していたヒトにおける病態の再発を軽減または遅延することを指す。本発明は、いくつかの病態を治療するためのそれを必要とする哺乳類（例えば、ヒト）における医薬の調製のための本発明の化合物または組成物の使用をさらに提供する。
【0092】
予防（Ｐｒｅｖｅｎｔ）
本明細書で使用する場合、治療法の文脈での用語「予防」、「予防する（ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ）」または「予防する（ｐｒｅｖｅｎｔ）」は、特定の病態または病態の症状を防止すること、あるいは、先行する感染の発生において病態の再発を防止することを指す。本発明は、いくつかの病態を予防するためのそれを必要とする哺乳類（例えば、ヒト）における医薬の調製のための本発明の化合物の使用をさらに提供する。
本明細書で使用する場合、治療法の文脈での用語「予防」、「予防する（ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ）」または「予防する（ｐｒｅｖｅｎｔ）」は、特定の病態または病態の症状を防止すること、あるいは、先行する感染の発生において病態の再発を防止することを指す。本発明は、いくつかの病態を予防するためのそれを必要とする哺乳類（例えば、ヒト）における医薬の調製のための本発明の化合物の使用をさらに提供する。
【0093】
中和（Ｎｅｕｔｒａｌｉｚａ）
本明細書で使用する場合、用語「中和する（ｎｅｕｔｒａｌｉｚｅ）」または「中和する（ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ）」は、インビトロまたはインビボで、抗原結合性タンパク質の存在下のＨＩＶ抗原、例えば、ＥＮＶまたはｇｐ１２０の生物活性を、抗原結合性タンパク質の非存在下の抗原の活性と比較して低下させることを指す。ＨＩＶの中和は、ＨＩＶの受容体との相互作用を介してウイルス侵入を防ぐことによるものであり得る。
本明細書で使用する場合、用語「中和する（ｎｅｕｔｒａｌｉｚｅ）」または「中和する（ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ）」は、インビトロまたはインビボで、抗原結合性タンパク質の存在下のＨＩＶ抗原、例えば、ＥＮＶまたはｇｐ１２０の生物活性を、抗原結合性タンパク質の非存在下の抗原の活性と比較して低下させることを指す。ＨＩＶの中和は、ＨＩＶの受容体との相互作用を介してウイルス侵入を防ぐことによるものであり得る。
【0094】
ＨＩＶ抗原認識
本明細書で使用する場合、用語「ＨＩＶ抗原認識」、「抗原認識」、または「ＥＮＶ検出」は、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質による感染細胞の表面上のＥＮＶへの結合を指す。
本明細書で使用する場合、用語「ＨＩＶ抗原認識」、「抗原認識」、または「ＥＮＶ検出」は、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質による感染細胞の表面上のＥＮＶへの結合を指す。
【0095】
クリアランス（Ｃｌｅａｒａｎｃｅ）
本明細書で使用する場合、用語「クリアランス」、「クリアランスする（ｃｌｅａｒ）」または「クリアランスする（ｃｌｅａｒｉｎｇ）」は、ＨＩＶ感染細胞の殺傷を指す。一例として、一実施形態では、「クリアランス」は、単独または１もしくは２以上の他の化合物との組合せでの治療的投与または投与の組合せが、ウイルスを産生できる複製能のあるＨＩＶゲノムを保有する細胞の除去、排除、または殺傷を誘導することを指す。クリアランスは、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）試験で測定されるＨＩＶ ＤＮＡのレベルの減少として反映され得る。クリアランスはまた、治療的介入を中止したときのＨＩＶウイルスの検出の遅延としても反映され得る。
本明細書で使用する場合、用語「クリアランス」、「クリアランスする（ｃｌｅａｒ）」または「クリアランスする（ｃｌｅａｒｉｎｇ）」は、ＨＩＶ感染細胞の殺傷を指す。一例として、一実施形態では、「クリアランス」は、単独または１もしくは２以上の他の化合物との組合せでの治療的投与または投与の組合せが、ウイルスを産生できる複製能のあるＨＩＶゲノムを保有する細胞の除去、排除、または殺傷を誘導することを指す。クリアランスは、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）試験で測定されるＨＩＶ ＤＮＡのレベルの減少として反映され得る。クリアランスはまた、治療的介入を中止したときのＨＩＶウイルスの検出の遅延としても反映され得る。
【0096】
治癒（Ｃｕｒｅ）
本明細書で使用する場合、治療法の文脈での用語「治癒」、「治癒する（ｃｕｒｉｎｇ）」または「ウイルス寛解（ｖｉｒａｌ ｒｅｍｉｓｓｉｏｎ）」は、定められた期間の間、ヒト免疫不全ウイルスもしくは症状、または症状もしくはウイルスの進行を根絶、停止、休止または終結することを指す。一例として、一実施形態では、「治癒」または「治癒を行う（ｃｕｒｉｎｇ）」は、単独または１もしくは２以上の他の化合物との組合せでの治療的投与または投与の組合せが、ヒト免疫不全ウイルスの持続的なウイルス制御（例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）試験、ｂＤＮＡ（ｂｒａｎｃｈｅｄ ｃｈａｉｎ ＤＮＡ）試験または核酸配列ベース増幅（ＮＡＳＢＡ）試験で血漿ウイルス血症が検出されないレベル）を、他の治療的介入なしに誘導し維持する（最低でも２年後に）ことを指す。以上のＰＣＲ、ｂＤＮＡおよびＮＡＳＢＡ試験は、当業者に知られている手法およびよく知られている手法を使用して実施される。一例として、ヒト免疫不全ウイルスもしくは症状、または症状もしくはウイルスの進行の根絶、停止、休止または終結は、最低２年間持続し得る。
本明細書で使用する場合、治療法の文脈での用語「治癒」、「治癒する（ｃｕｒｉｎｇ）」または「ウイルス寛解（ｖｉｒａｌ ｒｅｍｉｓｓｉｏｎ）」は、定められた期間の間、ヒト免疫不全ウイルスもしくは症状、または症状もしくはウイルスの進行を根絶、停止、休止または終結することを指す。一例として、一実施形態では、「治癒」または「治癒を行う（ｃｕｒｉｎｇ）」は、単独または１もしくは２以上の他の化合物との組合せでの治療的投与または投与の組合せが、ヒト免疫不全ウイルスの持続的なウイルス制御（例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）試験、ｂＤＮＡ（ｂｒａｎｃｈｅｄ ｃｈａｉｎ ＤＮＡ）試験または核酸配列ベース増幅（ＮＡＳＢＡ）試験で血漿ウイルス血症が検出されないレベル）を、他の治療的介入なしに誘導し維持する（最低でも２年後に）ことを指す。以上のＰＣＲ、ｂＤＮＡおよびＮＡＳＢＡ試験は、当業者に知られている手法およびよく知られている手法を使用して実施される。一例として、ヒト免疫不全ウイルスもしくは症状、または症状もしくはウイルスの進行の根絶、停止、休止または終結は、最低２年間持続し得る。
【0097】
非経口
本明細書で使用する場合、治療法の文脈での用語「非経口の（ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ）」または「非経口で（ｐａｒｅｎｔｅｒａｌｌｙ）」は、医薬化合物または組成物の経口投与以外の投与経路を指す。本明細書での使用に適した非経口投与経路は、注射、注入、移植、あるいは、消化管以外の他の何らかの経路を含む。非経口注射投与経路は、静脈内、筋肉内および皮下注射投与経路を含む。
本明細書で使用する場合、治療法の文脈での用語「非経口の（ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ）」または「非経口で（ｐａｒｅｎｔｅｒａｌｌｙ）」は、医薬化合物または組成物の経口投与以外の投与経路を指す。本明細書での使用に適した非経口投与経路は、注射、注入、移植、あるいは、消化管以外の他の何らかの経路を含む。非経口注射投与経路は、静脈内、筋肉内および皮下注射投与経路を含む。
【0098】
閉じたコンフォメーション（Ｃｌｏｓｅｄ Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）
本明細書で使用する場合、用語「閉じたコンフォメーション」、「状態１のコンフォメーション（ｓｔａｔｅ １ ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）」、「融合前コンフォメーション」または「プレトリガー状態（ｐｒｅ－ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ ｓｔａｔｅ）」は、中和抗体の認識からの回避をもたらすＮ－結合型グリカンで多量に覆われた外表面が露出しているＣＤ４受容体結合の前のＨＩＶ ＥＮＶ３量体構築の状態を指す。ＣＤ４受容体との相互作用は、ＥＮＶの構造の再編成と、中間の開いた状態へのコンフォメーション遷移とを引き起こし、ひいては閉じたコンフォメーションでは遮蔽されていた共受容体結合部位およびエピトープの露出が生じることとなる。
本明細書で使用する場合、用語「閉じたコンフォメーション」、「状態１のコンフォメーション（ｓｔａｔｅ １ ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）」、「融合前コンフォメーション」または「プレトリガー状態（ｐｒｅ－ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ ｓｔａｔｅ）」は、中和抗体の認識からの回避をもたらすＮ－結合型グリカンで多量に覆われた外表面が露出しているＣＤ４受容体結合の前のＨＩＶ ＥＮＶ３量体構築の状態を指す。ＣＤ４受容体との相互作用は、ＥＮＶの構造の再編成と、中間の開いた状態へのコンフォメーション遷移とを引き起こし、ひいては閉じたコンフォメーションでは遮蔽されていた共受容体結合部位およびエピトープの露出が生じることとなる。
【0099】
発明の説明
ＨＩＶの治療を行う方法
本発明の方法は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）を治療、クリアランス、中和、予防または治癒するために使用され得る。一態様では、本発明は、ＨＩＶを治療または予防する方法であって、以下の群：ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質；ｇｐ１２０結合性タンパク質；広域中和抗体またはその抗原結合性断片；ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩；ならびに、インテグラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩から選択される、治療有効量の２種または３種以上の薬剤を投与することを含む、方法を提供する。
ＨＩＶの治療を行う方法
本発明の方法は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）を治療、クリアランス、中和、予防または治癒するために使用され得る。一態様では、本発明は、ＨＩＶを治療または予防する方法であって、以下の群：ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質；ｇｐ１２０結合性タンパク質；広域中和抗体またはその抗原結合性断片；ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩；ならびに、インテグラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩から選択される、治療有効量の２種または３種以上の薬剤を投与することを含む、方法を提供する。
【0100】
一態様では、それを必要とするヒトにおいてＨＩＶ感染を治療または予防するための方法であって、治療有効量の：（ａ）ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩を含む第１の薬剤；ならびに、（ｂ）少なくとも１種の広域中和抗体またはその抗原結合性断片を含む第２の薬剤を投与することを含む、方法が提供される。
【0101】
一態様では、それを必要とするヒトにおいてＨＩＶ感染を治療または予防するための方法であって、治療有効量の：（ａ）ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩を含む第１の薬剤；（ｂ）少なくとも１種の広域中和抗体またはその抗原結合性断片を含む第２の薬剤；ならびに、（ｃ）少なくとも１種のインテグラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩を含む第３の薬剤を投与することを含む、方法が提供される。
【0102】
いくつかの実施形態では、それを必要とするヒトにおいてＨＩＶ感染を治療または予防するための方法であって、治療有効量の：（ａ）ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩を含む第１の薬剤；ならびに、（ｂ）少なくとも１種の広域中和抗体またはその抗原結合性断片を含む第２の薬剤を投与することを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、第１の薬剤は、ホステムサビルまたはその薬学的に許容される塩である。いくつかの実施形態では、第１の薬剤は、テムサビルまたはその薬学的に許容される塩である。
【0103】
いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、ＨＩＶ ｇｐ１６０、ＨＩＶ ｇｐ１２０およびＨＩＶ ｇｐ４１からなる群から選択される少なくとも１種のＨＩＶ糖タンパク質に結合する少なくとも１種の広域中和抗体またはその抗原結合性断片である。いくつかの実施形態では、少なくとも１種の広域中和抗体は、ＨＩＶ ｇｐ１６０に結合する。いくつかの実施形態では、少なくとも１種の広域中和抗体は、ＨＩＶ ｇｐ１２０に結合する。いくつかの実施形態では、少なくとも１種の広域中和抗体は、ＨＩＶ ｇｐ４１に結合する。いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、２Ｇ１２、２Ｆ５、３ＢＣ１７６、３ＢＮＣ６０、３ＢＮＣ１－１７、４Ｅ１０、８ＡＮＣ１３１、８ＡＮＣ１９５、１０Ｅ８、１０－１０７４、１２Ａ１２、３５０２２、ｂ１２、Ｂ２５３０、ＣＨ０１－０４、ＣＨ１０３、ＣＨ３１、ＨＪ１６、Ｍ６６．６、Ｎ６、Ｎ６ＬＳ、Ｎ６－ＤＥ、Ｎ６－ＬＡＧＡ、ＮＩＨ４５－４６、ＰＧ９、ＰＧ１６、ＰＧＤＭ１４００、ＰＧＴ１２１、ＰＧＴ１２８、ＰＧＴ１３５、ＰＧＴ１４１－ＰＧＴ１４５、ＰＧＴ１５１、ＰＧＶ０４、ＶＲＣ０１、ＶＲＣ０１－ＬＳ、ＶＲＣ０７、ＶＲＣ０７－５２３、ＶＲＣ０７－ＬＳおよびＺ１３からなる群から選択される少なくとも１種の抗体である。いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、Ｎ６、Ｎ６ＬＳ、Ｎ６－ＤＥ、Ｎ６－ＬＡＧＡ、ＶＲＣ０１、ＶＲＣ０１－ＬＳ、ＶＲＣ０７、ＶＲＣ０７－５２３およびＶＲＣ０７－ＬＳからなる群から選択される少なくとも１種の抗体である。いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、Ｎ６、Ｎ６ＬＳ、Ｎ６－ＤＥ、ＶＲＣ０１、ＶＲＣ０１－ＬＳ、ＶＲＣ０７、ＶＲＣ０７－５２３およびＶＲＣ０７－ＬＳからなる群から選択される少なくとも１種の抗体である。いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、Ｎ６、Ｎ６ＬＳおよび本明細書で開示されるＡＤＣＣ変異のいずれか１つを有するＮ６またはＮ６ＬＳからなる群から選択される、少なくとも１種の抗体である。いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、配列番号１と少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である配列を含むＣＤＲＨ１のアミノ酸配列と、配列番号２と少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である配列を含むＣＤＲＨ２のアミノ酸配列と、配列番号３と少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である配列を含むＣＤＲＨ３のアミノ酸配列とを有する重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）、および、配列番号４と少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である配列を含むＣＤＲＬ１のアミノ酸配列と、配列番号５と少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である配列を含むＣＤＲＬ２のアミノ酸配列と、配列番号６と少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である配列を含むＣＤＲＨ３のアミノ酸配列とを有する軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）を含む、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片である。ある実施形態では、第２の薬剤は、配列番号７と少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片である。いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、配列番号８と少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片である。いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体は、Ｍ４２８Ｌ変異およびＮ４３４Ｓ変異を含む組換え定常ドメインをさらに含む。いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体は、Ｓ２３９Ｄ変異およびＩ３３２Ｅ変異を含む組換え定常ドメインをさらに含む。いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体は、Ｌ２３５Ａ変異およびＧ２３７Ａ変異を含む組換え定常ドメインをさらに含む。
【0104】
いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、配列番号１のＣＤＲＨ１のアミノ酸配列と、配列番号２のＣＤＲＨ２のアミノ酸配列と、配列番号３のＣＤＲＨ３のアミノ酸配列とを有する重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）、および、配列番号４のＣＤＲＬ１のアミノ酸配列と、配列番号５のＣＤＲＬ２のアミノ酸配列と、配列番号６のＣＤＲＨ３のアミノ酸配列とを有する軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）を含む、単離されたＮ６モノクローナル抗体またはその抗原結合性断片である。いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、配列番号１のＣＤＲＨ１のアミノ酸配列と、配列番号２のＣＤＲＨ２のアミノ酸配列と、配列番号３のＣＤＲＨ３のアミノ酸配列とを有する重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）；配列番号４のＣＤＲＬ１のアミノ酸配列と、配列番号５のＣＤＲＬ２のアミノ酸配列と、配列番号６のＣＤＲＨ３のアミノ酸配列とを有する軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）；ならびに、Ｍ４２８Ｌ変異およびＮ４３４Ｓ変異を含む組換え定常ドメインを含む、単離されたＮ６ＬＳモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片である。いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、配列番号１のＣＤＲＨ１のアミノ酸配列と、配列番号２のＣＤＲＨ２のアミノ酸配列と、配列番号３のＣＤＲＨ３のアミノ酸配列とを有する重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）；配列番号４のＣＤＲＬ１のアミノ酸配列と、配列番号５のＣＤＲＬ２のアミノ酸配列と、配列番号６のＣＤＲＨ３のアミノ酸配列とを有する軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）；ならびに、Ｓ２３９Ｄ変異およびＩ３３２Ｅ変異を含む組換え定常ドメインを含む、単離されたＮ６－ＤＥモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片である。いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、配列番号１のＣＤＲＨ１のアミノ酸配列と、配列番号２のＣＤＲＨ２のアミノ酸配列と、配列番号３のＣＤＲＨ３のアミノ酸配列とを有する重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）；配列番号４のＣＤＲＬ１のアミノ酸配列と、配列番号５のＣＤＲＬ２のアミノ酸配列と、配列番号６のＣＤＲＨ３のアミノ酸配列とを有する軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）；ならびに、Ｌ２３５Ａ変異およびＧ２３７Ａ変異を含む組換え定常ドメインを含む、単離されたＮ６－ＬＡＧＡモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片である。いくつかの実施形態では、抗原結合性断片は、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖまたはｓｃＦＶ２断片である。
【0105】
いくつかの実施形態では、本方法は、少なくとも１種のインテグラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩を含む、治療有効量の第３の薬剤を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、第３の薬剤は、ラルテグラビル、エルビテグラビル、ドルテグラビル、ビクテグラビルおよびカボテグラビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤である。いくつかの実施形態では、第３の薬剤は、ラルテグラビルまたはカボテグラビルである。いくつかの実施形態では、第３の薬剤は、カボテグラビルである。いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、本明細書で開示される定常ドメインにおける１以上のＦｃ修飾を有するＮ６である。いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、Ｎ６ＬＳである。いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、Ｎ６－ＤＥである。いくつかの実施形態では、第１の薬剤はテムサビルであり、第２の薬剤はＮ６ＬＳおよびＮ６－ＤＥからなる群から選択され、かつ、第３の薬剤はカボテグラビルである。ある実施形態では、第１の薬剤はテムサビルであり、第２の薬剤はＮ６ＬＳであり、かつ、第３の薬剤はカボテグラビルである。いくつかの実施形態では、第１の薬剤はテムサビルであり、第２の薬剤はＮ６－ＤＥであり、かつ、第３の薬剤はカボテグラビルである。いくつかの実施形態では、第１の薬剤はホステムサビルであり、第２の薬剤はＮ６ＬＳであり、かつ、第３の薬剤はカボテグラビルである。いくつかの実施形態では、第１の薬剤はホステムサビルであり、第２の薬剤はＮ６－ＤＥであり、かつ、第３の薬剤はカボテグラビルである。
【0106】
いくつかの実施形態では、上記の実施形態のいずれか１つに従う方法は、第１の薬剤、第２の薬剤および第３の薬剤の各々が、医薬組成物の形態である。いくつかの実施形態では、第１の薬剤は、第２の薬剤を投与する前に投与される。いくつかの実施形態では、本方法は、ヒトに、約１ｍｇ／ｋｇ体重～約１００ｍｇ／ｋｇ体重の第１の薬剤を、１日１回、１日２回または１日３回、経口投与することを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、ヒトに、約１ｍｇ／ｋｇ体重～約１００ｍｇ／ｋｇ体重の第１の薬剤を、１日１回、１日２回または１日３回、非経口投与することを含む。
【0107】
いくつかの実施形態では、ヒトは、ヒト免疫不全ウイルス１（ＨＩＶ－１）感染と診断される。いくつかの実施形態では、ヒトは、以前に１または２以上の異なるＨＩＶ治療モダリティ（ｍｏｄａｌｉｔｙ）で治療されている。いくつかの実施形態では、ヒトは、高活性抗レトロウイルス療法（ｈｉｇｈｌｙ ａｃｔｉｖｅ ａｎｔｉｒｅｔｒｏｖｉｒａｌ ｔｈｅｒａｐｙ：ＨＡＡＲＴ）と名付けられた抗レトロウイルス薬の組合せの治療レジメンで治療されている。いくつかの実施形態では、ヒトは、最新の抗レトロウイルス療法（ａｎｔｉｒｅｔｒｏｖｉｒａｌ ｔｈｅｒａｐｙ：ＡＲＴ）で治療されている。
【0108】
一態様では、本発明は、それを必要とするヒトにおいてＨＩＶを治療または予防する方法であって、ヒトに、治療有効量の：（ａ）ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩を含む第１の薬剤；ならびに、（ｂ）ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質、ｇｐ１２０結合性タンパク質およびインテグラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩からなる群から選択される第２の薬剤を投与することを含む、方法を提供する。
【0109】
一態様では、本発明は、それを必要とするヒトにおいてＨＩＶを治療または予防する方法であって、ヒトに、治療有効量の：（ａ）ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩を含む第１の薬剤；（ｂ）少なくとも１種のＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質を含む第２の薬剤；ならびに、（ｃ）少なくとも１種のインテグラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩を含む第３の薬剤を投与することを含む、方法を提供する。
【0110】
一態様によれば、本発明は、それを必要とするヒトにおいてＨＩＶ感染を治療する方法であって、ヒトに、治療有効量の、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩を投与すること、ならびに、連続して、治療有効量のＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質を投与することを含み、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質が、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩の後に投与される、方法を提供する。
【0111】
別の態様によれば、本発明は、それを必要とするヒトからＨＩＶ感染細胞をクリアランスする方法であって、治療有効量の、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩、ならびに、治療有効量のＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質を投与することを含む、方法を提供する。ＨＩＶ感染細胞をクリアランスする方法の一実施形態では、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩、ならびに、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質の投与は、同時である。ＨＩＶ感染細胞をクリアランスする方法の一実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩の後に投与される。
【0112】
別の態様によれば、本発明は、それを必要とするヒトにおいてＨＩＶ感染を予防する方法であって、ヒトに、治療有効量の、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩を投与すること、ならびに、連続して、治療有効量のＣＤ４結合部位（ＣＤ４ｂｓ）結合性タンパク質を投与することを含み、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質が、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩の後に投与される、方法を提供する。
【0113】
別の態様によれば、本発明は、それを必要とするヒトにおいてＨＩＶ感染を中和する方法であって、ヒトに、治療有効量の、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩を投与すること、ならびに、連続して、治療有効量のＣＤ４結合部位（ＣＤ４ｂｓ）結合性タンパク質を投与することを含み、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質が、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩の投与の後に投与される、方法を提供する。
【0114】
別の態様によれば、本発明は、それを必要とするヒトにおいてＨＩＶ感染を治癒する方法であって、ヒトに、治療有効量の、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩を投与すること、ならびに、連続して、治療有効量のＣＤ４結合部位（ＣＤ４ｂｓ）結合性タンパク質を投与することを含み、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質が、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩の投与の後に投与される、方法を提供する。
【0115】
いくつかの実施形態では、少なくとも１種の薬剤は、テムサビルまたはホステムサビルである。一実施形態では、少なくとも１種の薬剤は、テムサビルである。いくつかの実施形態では、少なくとも１種の薬剤は、ホステムサビルである。いかなる理論または作用機序にも拘束されるものではないが、テムサビルまたはホステムサビルは、ｇｐ１２０ウイルスの受容体を遮断することで作用し、ウイルスが、宿主ＣＤ４＋細胞へ付着する最初の段階を妨げ、そして、宿主ＣＤ４＋細胞へ侵入するのを防ぐ可能性がある。いくつかの実施形態では、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩の投与は、経口または非経口である。本方法の一実施形態では、テムサビルの投与は、非経口である。いくつかの実施形態では、ホステムサビルの投与は、経口である。いくつかの実施形態では、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩は、１ｍｇ／ｋｇ体重～１００ｍｇ／ｋｇ体重の用量（ｄｏｓｅ）の範囲で投与される。いくつかの実施形態では、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩の用量は、１００ｍｇ～１２００ｍｇである。本方法の一実施形態では、ホステムサビルの用量は、６００ｍｇである。いくつかの実施形態では、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩の投与は、１日１回の用量の投与（ａ ｄａｉｌｙ ｄｏｓｅ）、１日２回の用量の投与（ａ ｔｗｉｃｅ－ｄａｉｌｙ ｄｏｓｅ）、または、１日３回の用量の投与（ａ ｔｈｒｅｅ ｔｉｍｅｓ ｄａｉｌｙ ｄｏｓｅ）である。いくつかの実施形態では、投与は、１日２回の用量の投与である。いくつかの実施形態では、投与は、１日１回の用量の投与である。本方法の一実施形態では、投与は、１日３回の用量の投与である。
【0116】
いくつかの実施形態では、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩は、ｇｐ１２０を宿主細胞膜表面上にロックする。いくつかの実施形態では、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩は、ｇｐ１２０を閉じたコンフォメーションにロックする。いくつかの実施形態では、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩は、細胞膜結合ＣＤ４が、宿主細胞で発現したｇｐ１２０と相互作用するのを妨げる。いくつかの実施形態では、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩は、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質の結合を可能とするか、または促進する。いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質のＨＩＶ感染宿主細胞への結合は、フローサイトメトリーによって平均蛍光強度（ＭＦＩ）を使用して測定される。
【0117】
いくつかの実施形態では、本方法は、ｇｐ１２０結合性タンパク質を含む。ｇｐ１２０結合性タンパク質は、ＨＩＶビリオンまたは感染宿主細胞上に見出されるｇｐ１２０に結合する。いくつかの実施形態では、ｇｐ１２０結合性タンパク質は、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、少なくとも１種のＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質である。いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、抗体またはその結合性断片である。いくつかの実施形態では、抗体は、広域中和抗体またはその結合性断片である。いくつかの実施形態では、広域中和抗体は、Ｎ６、Ｎ６ＬＳ、Ｎ６－ＤＥおよびＮ６－ＬＡＧＡからなる群から選択される。
【0118】
いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、配列番号１と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である配列を含むＣＤＲＨ１のアミノ酸配列と、配列番号２と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である配列を含むＣＤＲＨ２のアミノ酸配列と、配列番号３と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である配列を含むＣＤＲＨ３のアミノ酸配列とを有する重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）；および、配列番号４と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である配列を含むＣＤＲＬ１のアミノ酸配列と、配列番号５と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である配列を含むＣＤＲＬ２のアミノ酸配列と、配列番号６と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である配列を含むＣＤＲＬ３のアミノ酸配列とを有する軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）を含む。
【0119】
いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、配列番号７からなる群から選択される配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、配列番号８からなる群から選択される配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、配列番号９、１１、１３および１４からなる群から選択される配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である配列を含む重鎖（ＨＣ）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、配列番号１０および１２からなる群から選択される配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である配列を含む軽鎖（ＬＣ）のアミノ酸配列を含む。
【0120】
いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質抗体は、完全長免疫グロブリンＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質を含む。本方法の一実施形態では、完全長免疫グロブリンＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、フラグメント結晶化可能領域（ｆｒａｇｍｅｎｔ ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｂｌｅ ｒｅｇｉｏｎ）または「Ｆｃ」領域または「定常領域」を含む。定義された抗体のいずれかのＦｃは、抗体のインビボ半減期を最適化するために、１または２以上のアミノ酸置換を含み得る。ＩｇＧ Ａｂの血清中半減期は、胎児性Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）によって調節される。いくつかの実施形態では、抗体は、ＦｃＲｎへの結合を増加させるアミノ酸置換を含む。いくつかのかかる置換は、当業者に知られており、例えば、ＩｇＧ定常領域のＴ２５０ＱおよびＭ４２８Ｌ（例えば、Ｈｉｎｔｏｎら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ、１７６：３４６～３５６、２００６参照）；Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓ（「ＬＳ」変異、例えば、Ｚａｌｅｖｓｋｙら、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２８：１５７～１５９、２０１０参照）；Ｎ４３４Ａ（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａら、Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、１８：１７５９～１７６９、２００６参照）；Ｔ３０７Ａ、Ｅ３８０ＡおよびＮ４３４Ａ（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａら、Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、１８：１７５９～１７６９、２００６参照）；ならびに、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４ＴおよびＴ２５６Ｅ（例えば、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２８１：２３５１４～２３５２４、２００６参照）における置換などが知られている。開示される抗体および抗原結合性断片は、上記で列挙された置換のいずれかを含むＦｃポリペプチドに連結され得、例えば、ＦｃポリペプチドはＭ４２８Ｌ置換およびＮ４３４Ｓ置換を含み得る。いくつかの実施形態では、抗体は、非修飾定常ドメインと比較して胎児性Ｆｃ受容体への結合を向上させる修飾を含む組換え定常ドメインを含み、該組換えドメインは、Ｍ４２８Ｌ変異およびＮ４３４Ｓ変異を含むＩｇＧ１定常ドメインである。
【0121】
いくつかの実施形態では、定義された抗体のいずれかの定常領域は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を最適化するために、１または２以上のアミノ酸置換を含む。ＡＤＣＣは、主に、一組の密接に関連したＦｃガンマ受容体（ＦｃｙＲ）を介して媒介される。いくつかの実施形態では、抗体は、ＦｃｙＲＩＩＩａへの結合を増加させる１または２以上のアミノ酸置換を含む。いくつかのかかる置換が当業者に知られており、例えば、ＩｇＧ定常領域のＳ２３９ＤおよびＩ３３２Ｅ（例えば、Ｌａｚａｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ，Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．、１０３：４００５～４０１０、２００６参照）；Ｓ２３９Ｄ、Ａ３３０ＬおよびＩ３３２Ｅ（例えば、Ｌａｚａｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ，Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．、１０３：４００５～４０１０、２００６参照）における置換などが知られている。
【0122】
いくつかの実施形態では、上記の置換の組合せもまた含まれ、ＦｃＲｎおよびＦｃｙＲＩＩＩａへの結合が増加したＩｇＧ定常領域を生成する。組合せは、抗体の半減期およびＡＤＣＣを増加させる。例えば、かかる組合せは、Ｆｃ領域内に以下のアミノ酸置換を有する抗体を含む：（１）Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２ＥおよびＴ２５０Ｑ／Ｍ４２８Ｌ；（２）Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２ＥおよびＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ；（３）Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２ＥおよびＮ４３４Ａ；（４）Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２ＥおよびＴ３０７Ａ／Ｅ３８０Ａ／Ｎ４３４Ａ；（５）Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２ＥおよびＭ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ；（６）Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅおよび２５０Ｑ／Ｍ４２８Ｌ；（７）Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２ＥおよびＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ；（８）Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２ＥおよびＮ４３４Ａ；（９）Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２ＥおよびＴ３０７Ａ／Ｅ３８０Ａ／Ｎ４３４Ａ；または（１０）Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２ＥおよびＭ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、感染細胞に対して直接細胞傷害性となるように、あるいは、自然防御、例えば、補体、抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）またはマクロファージによる食作用を利用するように、修飾される。
【0123】
いくつかの実施形態では、抗体は、抗体断片である。いくつかの実施形態では、抗体断片は、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、単鎖Ｆｖタンパク質（「ｓｃＦｖ」）、ジスルフィド安定化Ｆｖタンパク質（「ｄｓＦｖ」）、ダイアボディおよびＴＡＮＤＡＢＳから選択される。本方法の一実施形態では、抗体断片は、ｓｃＦｖである。
【0124】
いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、非修飾定常ドメインと比較して胎児性Ｆｃ受容体への結合を向上させる修飾を含む組換え定常ドメインを含み、該組換えドメインは、Ｍ４２８Ｌ変異およびＮ４３４Ｓ変異（「ＬＳ」変異）を含むＩｇＧ１定常ドメインである。
【0125】
いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、非修飾定常ドメインと比較して抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）に影響を及ぼす修飾を含む組換え定常ドメインを含み、該組換えドメインは、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ変異（「ＤＥ」変異）またはＬ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ変異（「ＬＡＧＡ」変異）を含むＩｇＧ１定常ドメインである。
【0126】
いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、Ｎ６、Ｎ６ＬＳ、Ｎ６－ＬＡＧＡおよびＮ６－ＤＥからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、Ｎ６である。いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、Ｎ６ＬＳである。いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、Ｎ６－ＬＡＧＡである。いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、Ｎ６－ＤＥである。
【0127】
いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩の投与の少なくとも３０分後、少なくとも１時間後、少なくとも２時間後、少なくとも４時間後または少なくとも６時間後の時点で連続して投与される。いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩の投与の少なくとも３０分後の時点で投与される。いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩の投与の少なくとも１時間後の時点で投与される。本方法の一実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩の投与の少なくとも２時間後の時点で投与される。いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩の投与の少なくとも４時間後の時点で投与される。本方法の一実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩の投与の少なくとも６時間後の時点で投与される。いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩の投与の少なくとも２４時間後の時点で投与される。本方法の一実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩の投与の少なくとも４８時間後の時点で投与される。いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩の投与の少なくとも７２時間後の時点で投与される。いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩の投与の少なくとも９６時間後の時点で投与される。理論に束縛されるものではないが、ヒトに、ＣＤ４結合部位（ＣＤ４ｂｓ）結合性タンパク質の投与の前に、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩を投与すると、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質のＨＩＶ ＥＮＶへの結合が増強される。これは、ヒトに、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩を投与すると、ＥＮＶ３量体の細胞内グリコシル化および／またはプロセシングが変化し、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質の結合およびＨＩＶ抗原認識が促進されるためであると考えられる。また、ヒトに、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩を投与すると、ＥＮＶ３量体が宿主細胞の表面膜にロックまたは固定されて、ＥＮＶの排出（ｓｈｅｄｄｉｎｇ）が妨げられ、ｂｎＡｂの結合（ｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ）が促進されると考えられる。
【0128】
いくつかの実施形態では、本方法は、連続して投与した後に、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩、ならびに、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質を同時に投与する第２の投与を少なくともさらに含む。
【0129】
様々な実施形態では、本方法は、少なくとも１種のインテグラーゼ阻害剤を投与することを含む。インテグラーゼ阻害剤、すなわち、ＩＮＳＴＩ（ｉｎｔｅｇｒａｓｅ ｓｔｒａｎｄ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）は、レトロウイルスの組込みを妨げることで機能する活性物質である。例示的な化合物としては、ラルテグラビル、エルビテグラビル、ドルテグラビル、ビクテグラビルおよびカボテグラビルが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、少なくとも１種のインテグラーゼ阻害剤は、カボテグラビルを含む。
【0130】
ＨＩＶの治療に使用するための組合せ
一態様では、本発明は、ＨＩＶの治療に使用するための医薬組成物であって、以下の群：ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質；ｇｐ１２０結合性タンパク質；ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩；ならびに、インテグラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩から選択される、２種または３種以上の薬剤を含む、医薬組成物を提供する。
一態様では、本発明は、ＨＩＶの治療に使用するための医薬組成物であって、以下の群：ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質；ｇｐ１２０結合性タンパク質；ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩；ならびに、インテグラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩から選択される、２種または３種以上の薬剤を含む、医薬組成物を提供する。
【0131】
一態様では、本発明は、ＨＩＶの治療または予防に使用するための組合せであって、ヒトに、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩を含む第１の薬剤を含む第１の医薬組成物、ならびに、少なくとも１種の広域中和抗体またはその抗原結合性断片を含む第２の薬剤を含む第２の医薬組成物を投与することを含む、組合せを提供する。いくつかの実施形態では、ＨＩＶの治療または予防に使用するための組合せは、少なくとも１種のインテグラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩を含む第３の薬剤を含む第３の医薬組成物を投与することをさらに含む。
【0132】
いくつかの実施形態では、第１の薬剤は、テムサビルまたはその薬学的に許容される塩である。さらなる他の実施形態では、第１の薬剤は、ホステムサビルまたはその薬学的に許容される塩である。
【0133】
いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、ＨＩＶエンベロープ糖タンパク質またはＨＩＶ ｇｐ１２０に結合する。いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、２Ｇ１２、２Ｆ５、３ＢＣ１７６、３ＢＮＣ６０、３ＢＮＣ１－１７、４Ｅ１０、８ＡＮＣ１３１、８ＡＮＣ１９５、１０Ｅ８、１０－１０７４、１２Ａ１２、３５０２２、ｂ１２、Ｂ２５３０、ＣＨ０１－０４、ＣＨ１０３、ＣＨ３１、ＨＪ１６、Ｍ６６．６、Ｎ６、Ｎ６ＬＳ、Ｎ６－ＤＥ、Ｎ６－ＬＡＧＡ、ＮＩＨ４５－４６、ＰＧ９、ＰＧ１６、ＰＧＤＭ１４００、ＰＧＴ１２１、ＰＧＴ１２８、ＰＧＴ１３５、ＰＧＴ１４１－ＰＧＴ１４５、ＰＧＴ１５１、ＰＧＶ０４、ＶＲＣ０１、ＶＲＣ０１－ＬＳ、ＶＲＣ０７、ＶＲＣ０７－５２３、ＶＲＣ０７－ＬＳおよびＺ１３からなる群から選択される少なくとも１種の薬剤である。いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、Ｎ６、Ｎ６ＬＳ、Ｎ６－ＤＥ、Ｎ６－ＬＡＧＡ、ＶＲＣ０１、ＶＲＣ０１－ＬＳ、ＶＲＣ０７、ＶＲＣ０７－５２３およびＶＲＣ０７－ＬＳからなる群から選択される少なくとも１種の抗体である。いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、Ｎ６、Ｎ６ＬＳ、Ｎ６－ＤＥ、ＶＲＣ０１、ＶＲＣ０１－ＬＳ、ＶＲＣ０７、ＶＲＣ０７－５２３およびＶＲＣ０７－ＬＳからなる群から選択される少なくとも１種の抗体である。いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、Ｎ６、Ｎ６ＬＳおよび本明細書で開示されるＡＤＣＣ変異のいずれか１つを有するＮ６またはＮ６ＬＳからなる群から選択される、少なくとも１種の抗体である。いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、配列番号１と少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である配列を含むＣＤＲＨ１のアミノ酸配列と、配列番号２と少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である配列を含むＣＤＲＨ２のアミノ酸配列と、配列番号３と少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である配列を含むＣＤＲＨ３のアミノ酸配列とを有する重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）、および、配列番号４と少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である配列を含むＣＤＲＬ１のアミノ酸配列と、配列番号５と少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である配列を含むＣＤＲＬ２のアミノ酸配列と、配列番号６と少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である配列を含むＣＤＲＨ３のアミノ酸配列とを有する軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）を含む、単離されたモノクローナル抗体または抗原結合性断片である。ある実施形態では、第２の薬剤は、配列番号７と少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、単離されたモノクローナル抗体または抗原結合性断片である。いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、配列番号８と少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、単離されたモノクローナル抗体または抗原結合性断片である。いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体は、Ｍ４２８Ｌ変異およびＮ４３４Ｓ変異を含む組換え定常ドメインをさらに含む。いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体は、Ｓ２３９Ｄ変異およびＩ３３２Ｅ変異を含む組換え定常ドメインをさらに含む。いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体は、Ｌ２３５Ａ変異およびＧ２３７Ａ変異を含む組換え定常ドメインをさらに含む。
【0134】
いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、配列番号１のＣＤＲＨ１のアミノ酸配列と、配列番号２のＣＤＲＨ２のアミノ酸配列と、配列番号３のＣＤＲＨ３のアミノ酸配列とを有する重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）、および、配列番号４のＣＤＲＬ１のアミノ酸配列と、配列番号５のＣＤＲＬ２のアミノ酸配列と、配列番号６のＣＤＲＨ３のアミノ酸配列とを有する軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）を含む、単離されたＮ６モノクローナル抗体または抗原結合性断片である。いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、配列番号１のＣＤＲＨ１のアミノ酸配列と、配列番号２のＣＤＲＨ２のアミノ酸配列と、配列番号３のＣＤＲＨ３のアミノ酸配列とを有する重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）；配列番号４のＣＤＲＬ１のアミノ酸配列と、配列番号５のＣＤＲＬ２のアミノ酸配列と、配列番号６のＣＤＲＨ３のアミノ酸配列とを有する軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）；ならびに、Ｍ４２８Ｌ変異およびＮ４３４Ｓ変異を含む組換え定常ドメインを含む、単離されたＮ６ＬＳモノクローナル抗体または抗原結合性断片である。いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、配列番号１のＣＤＲＨ１のアミノ酸配列と、配列番号２のＣＤＲＨ２のアミノ酸配列と、配列番号３のＣＤＲＨ３のアミノ酸配列とを有する重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）；配列番号４のＣＤＲＬ１のアミノ酸配列と、配列番号５のＣＤＲＬ２のアミノ酸配列と、配列番号６のＣＤＲＨ３のアミノ酸配列とを有する軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）；ならびに、Ｓ２３９Ｄ変異およびＩ３３２Ｅ変異を含む組換え定常ドメインを含む、単離されたＮ６－ＤＥモノクローナル抗体または抗原結合性断片である。いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、配列番号１のＣＤＲＨ１のアミノ酸配列と、配列番号２のＣＤＲＨ２のアミノ酸配列と、配列番号３のＣＤＲＨ３のアミノ酸配列とを有する重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）；配列番号４のＣＤＲＬ１のアミノ酸配列と、配列番号５のＣＤＲＬ２のアミノ酸配列と、配列番号６のＣＤＲＨ３のアミノ酸配列とを有する軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）；ならびに、Ｌ２３５Ａ変異およびＧ２３７Ａ変異を含む組換え定常ドメインを含む、単離されたＮ６－ＬＡＧＡモノクローナル抗体または抗原結合性断片である。いくつかの実施形態では、抗原結合性断片は、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖまたはｓｃＦＶ２断片である。
【0135】
いくつかの実施形態では、使用のための組合せは、少なくとも１種のインテグラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩を含む第３の薬剤を含む、治療有効量の第３の医薬組成物を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、第３の薬剤は、ラルテグラビル、エルビテグラビル、ドルテグラビル、ビクテグラビルおよびカボテグラビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤である。いくつかの実施形態では、第３の薬剤は、ラルテグラビルまたはカボテグラビルである。いくつかの実施形態では、第３の薬剤は、カボテグラビルである。いくつかの実施形態では、第１の薬剤はテムサビルであり、第２の薬剤はＮ６ＬＳおよびＮ６－ＤＥからなる群から選択され、かつ、第３の薬剤はカボテグラビルである。いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、本明細書で開示される定常ドメインにおける１以上のＡＤＣＣ変異を有するＮ６である。いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、Ｎ６ＬＳである。いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、Ｎ６－ＤＥである。
【0136】
いくつかの実施形態では、使用のための組合せは、ヒトに、第１の医薬組成物を、第２の医薬組成物を投与する前に投与することを含む。いくつかの実施形態では、ヒトに、約１ｍｇ／ｋｇ体重～約１００ｍｇ／ｋｇ体重の第１の医薬組成物が、１日１回、１日２回または１日３回、経口投与される。いくつかの実施形態では、ヒトに、約１ｍｇ／ｋｇ体重～約１００ｍｇ／ｋｇ体重の第１の医薬組成物が、１日１回、１日２回または１日３回、非経口投与される。
【0137】
一態様では、本発明は、ＨＩＶの治療に使用するための医薬組成物であって、（ａ）ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩を含む第１の薬剤と、（ｂ）ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質、ｇｐ１２０結合性タンパク質およびインテグラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩からなる群から選択される第２の薬剤とを含む、医薬組成物を提供する。
【0138】
一態様では、本発明は、ＨＩＶの治療に使用するための医薬組成物であって、（ａ）ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩を含む第１の薬剤と、（ｂ）少なくとも１種のＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質を含む第２の薬剤と、（ｃ）少なくとも１種のインテグラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩を含む第３の薬剤とを含む、医薬組成物を提供する。
【0139】
別の態様によれば、本発明は、ＨＩＶの治療に使用するための組合せであって、治療有効量の、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩と、治療有効量のＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質とを含む、組合せを提供する。いくつかの実施形態では、ＨＩＶの治療における使用のために、ヒトに、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩が投与され、次いで、連続して、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質が投与される。
【0140】
別の態様によれば、本発明は、ＨＩＶ感染細胞のクリアランスに使用するための組合せであって、治療有効量の、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩と、治療有効量のＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質とを含み、ヒトに、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩と、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質とが投与される、組合せを提供する。ＨＩＶ感染細胞のクリアランスに使用するための組合せの一実施形態では、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩の投与と、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質の投与とは、同時である。ＨＩＶ感染細胞のクリアランスに使用するための組合せの一実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩の投与の後に投与される。
【0141】
別の態様によれば、本発明は、ＨＩＶの予防に使用するための組合せであって、治療有効量の、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩と、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質とを含み、ヒトに、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩が投与され、次いで、連続して、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質が投与される、組合せを提供する。
【0142】
別の態様によれば、本発明は、ＨＩＶの中和に使用するための組合せであって、治療有効量の、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩と、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質とを含み、ヒトに、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩が投与され、次いで、連続して、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質が投与される、組合せを提供する。
【0143】
別の態様によれば、本発明は、ＨＩＶの治癒に使用するための組合せであって、治療有効量の、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩と、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質とを含み、ヒトに、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩が投与され、次いで、連続して、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質が投与される、組合せを提供する。
【0144】
いくつかの実施形態では、少なくとも１種の薬剤は、テムサビルまたはその薬学的に許容される塩である。使用のための組合せの一実施形態では、少なくとも１種の薬剤は、ホステムサビルまたはその薬学的に許容される塩である。
【0145】
いくつかの実施形態では、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩の投与は、経口または非経口である。いくつかの実施形態では、テムサビルの投与は、非経口である。いくつかの実施形態では、ホステムサビルの投与は、経口である。
【0146】
いくつかの実施形態では、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩は、１ｍｇ／ｋｇ体重～１００ｍｇ／ｋｇ体重の用量（ｄｏｓｅ）の範囲で投与される。いくつかの実施形態では、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩の用量は、１００ｍｇ～１０００ｍｇである。いくつかの実施形態では、ホステムサビルの用量は、６００ｍｇである。
【0147】
いくつかの実施形態では、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩の投与は、１日１回の用量の投与（ａ ｄａｉｌｙ ｄｏｓｅ）、１日２回の用量の投与（ａ ｔｗｉｃｅ－ｄａｉｌｙ ｄｏｓｅ）、または、１日３回の用量の投与（ａ ｔｈｒｅｅ ｔｉｍｅｓ ｄａｉｌｙ ｄｏｓｅ）である。いくつかの実施形態では、投与は、１日２回の用量の投与である。いくつかの実施形態では、投与は、１日１回の用量の投与である。いくつかの実施形態では、投与は、１日３回の用量の投与である。
【0148】
いくつかの実施形態では、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩は、ｇｐ１２０を宿主細胞膜表面上にロックする。いくつかの実施形態では、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩は、ｇｐ１２０を閉じたコンフォメーションにロックする。使用のための組合せの一実施形態では、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩は、細胞膜結合ＣＤ４が、宿主細胞で発現したｇｐ１２０と相互作用するのを妨げる。いくつかの実施形態では、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩は、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質の結合を可能とするか、または促進する。いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質のＨＩＶ感染宿主細胞への結合は、フローサイトメトリーによって平均蛍光強度（ＭＦＩ）を使用して測定される。
【0149】
いくつかの実施形態では、使用のための組合せは、ｇｐ１２０結合性タンパク質を含む。ｇｐ１２０結合性タンパク質は、ＨＩＶビリオンまたは感染宿主細胞上に見出されるｇｐ１２０に結合する。いくつかの実施形態では、ｇｐ１２０結合性タンパク質は、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、少なくとも１種のＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質である。いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、抗体またはその結合性断片である。いくつかの実施形態では、抗体は、広域中和抗体またはその結合性断片である。いくつかの実施形態では、広域中和抗体は、Ｎ６、Ｎ６ＬＳ、Ｎ６－ＤＥおよびＮ６－ＬＡＧＡからなる群から選択される。
【0150】
いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、配列番号１と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である配列を含むＣＤＲＨ１のアミノ酸配列と、配列番号２と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である配列を含むＣＤＲＨ２のアミノ酸配列と、配列番号３と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である配列を含むＣＤＲＨ３のアミノ酸配列とを有する重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）、および、配列番号４と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である配列を含むＣＤＲＬ１のアミノ酸配列と、配列番号５と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である配列を含むＣＤＲＬ２のアミノ酸配列と、配列番号６と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である配列を含むＣＤＲＬ３のアミノ酸配列とを有する軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）を含む。
【0151】
いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、配列番号７からなる群から選択される配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列を含む。
【0152】
いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、配列番号８からなる群から選択される配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）のアミノ酸配列を含む。
【0153】
いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、配列番号９、１１、１３および１４からなる群から選択される配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である配列を含む重鎖（ＨＣ）のアミノ酸配列を含む。
【0154】
いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、配列番号１０および１２からなる群から選択される配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である配列を含む軽鎖（ＬＣ）のアミノ酸配列を含む。
【0155】
いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質抗体は、完全長免疫グロブリンＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、完全長免疫グロブリンＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、フラグメント結晶化可能領域または「Ｆｃ」領域または「定常領域」を含む。定義された抗体のいずれかのＦｃは、抗体のインビボ半減期を最適化するために、１または２以上のアミノ酸置換を含み得る。ＩｇＧ Ａｂの血清中半減期は、胎児性Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）によって調節される。使用のための組合せの一実施形態では、抗体は、ＦｃＲｎへの結合を増加させるアミノ酸置換を含む。いくつかのかかる置換は、当業者に知られており、例えば、ＩｇＧ定常領域のＴ２５０ＱおよびＭ４２８Ｌ（例えば、Ｈｉｎｔｏｎら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ、１７６：３４６～３５６、２００６参照）；Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓ（「ＬＳ」変異、例えば、Ｚａｌｅｖｓｋｙら、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２８：１５７～１５９、２０１０参照）；Ｎ４３４Ａ（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａら、Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、１８：１７５９～１７６９、２００６参照）；Ｔ３０７Ａ、Ｅ３８０ＡおよびＮ４３４Ａ（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａら、Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、１８：１７５９～１７６９、２００６参照）；ならびにＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４ＴおよびＴ２５６Ｅ（例えば、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２８１：２３５１４～２３５２４、２００６参照）における置換などが知られている。開示される抗体および抗原結合性断片は、上記で列挙された置換のいずれかを含むＦｃポリペプチドに連結され得、例えば、ＦｃポリペプチドがＭ４２８Ｌ置換およびＮ４３４Ｓ置換を含み得る。使用のための組合せの一実施形態では、抗体は、非修飾定常ドメインと比較して胎児性Ｆｃ受容体への結合を向上させる修飾を含む組換え定常ドメインを含み、該組換えドメインは、Ｍ４２８Ｌ変異およびＮ４３４Ｓ変異を含むＩｇＧ１定常ドメインである。
【0156】
いくつかの実施形態では、定義された抗体のいずれかの定常領域は、ＡＤＣＣを最適化するために、１または２以上のアミノ酸置換を含む。ＡＤＣＣは、主に、一組の密接に関連したＦｃｙ受容体を介して媒介される。使用のための組合せの一実施形態では、抗体は、ＦｃｙＲＩＩＩａへの結合を増加させる１または２以上のアミノ酸置換を含む。いくつかのかかる置換が当業者に知られており、例えば、ＩｇＧ定常領域のＳ２３９ＤおよびＩ３３２Ｅ（例えば、Ｌａｚａｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ，Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．、１０３：４００５～４０１０、２００６参照）；Ｓ２３９Ｄ、Ａ３３０ＬおよびＩ３３２Ｅ（例えば、Ｌａｚａｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ，Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．、１０３：４００５～４０１０、２００６参照）における置換などが知られている。
【0157】
いくつかの実施形態では、上記の置換の組合せもまた含まれ、ＦｃＲｎおよびＦｃｙＲＩＩＩａへの結合が増加したＩｇＧ定常領域を生成する。組合せは、抗体の半減期およびＡＤＣＣを増加させる。例えば、かかる組合せは、Ｆｃ領域内に以下のアミノ酸置換を有する抗体を含む：（１）Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２ＥおよびＴ２５０Ｑ／Ｍ４２８Ｌ；（２）Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２ＥおよびＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ；（３）Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２ＥおよびＮ４３４Ａ；（４）Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２ＥおよびＴ３０７Ａ／Ｅ３８０Ａ／Ｎ４３４Ａ；（５）Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２ＥおよびＭ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ；（６）Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅおよび２５０Ｑ／Ｍ４２８Ｌ；（７）Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２ＥおよびＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ；（８）Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２ＥおよびＮ４３４Ａ；（９）Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２ＥおよびＴ３０７Ａ／Ｅ３８０Ａ／Ｎ４３４Ａ；または（１０）Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２ＥおよびＭ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ。いくつかの例では、抗体またはその抗原結合性断片は、感染細胞に対して直接細胞傷害性となるように、あるいは、自然防御、例えば、補体、ＡＤＣＣまたはマクロファージによる食作用を利用するように、修飾される。
【0158】
いくつかの実施形態では、抗体は、抗体断片である。使用のための組合せの一実施形態では、抗体断片は、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、単鎖Ｆｖタンパク質（「ｓｃＦｖ」）、ジスルフィド安定化Ｆｖタンパク質（「ｄｓＦｖ」）、ダイアボディおよびＴＡＮＤＡＢＳから選択される。使用のための組合せの一実施形態では、抗体断片は、ｓｃＦｖである。
【0159】
いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、非修飾定常ドメインと比較して胎児性Ｆｃ受容体への結合を向上させる修飾を含む組換え定常ドメインを含み、該組換えドメインは、Ｍ４２８Ｌ変異およびＮ４３４Ｓ変異（「ＬＳ」変異）を含むＩｇＧ１定常ドメインである。
【0160】
いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、非修飾定常ドメインと比較してＡＤＣＣに影響を及ぼす修飾を含む組換え定常ドメインを含み、該組換えドメインは、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ変異（「ＤＥ」変異）を含むＩｇＧ１定常ドメインである。
【0161】
いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、Ｎ６、Ｎ６ＬＳ、Ｎ６－ＬＡＧＡおよびＮ６－ＤＥからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、Ｎ６である。いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、Ｎ６ＬＳである。いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、Ｎ６－ＬＡＧＡである。いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、Ｎ６－ＤＥである。
【0162】
いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩の投与の少なくとも３０分後、少なくとも１時間後、少なくとも２時間後、少なくとも４時間後および少なくとも６時間後からなる群から選択される時点で連続して投与される。いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩の投与の少なくとも３０分後の時点で投与される。使用のための組合せの一実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩の投与の少なくとも１時間後の時点で投与される。いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩の投与の少なくとも２時間後の時点で投与される。使用のための組合せの一実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩の投与の少なくとも４時間後の時点で投与される。いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩の投与の少なくとも６時間後の時点で投与される。いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩の投与の少なくとも２４時間後の時点で投与される。いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩の投与の少なくとも４８時間後の時点で投与される。使用のための組合せの一実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩の投与の少なくとも７２時間後の時点で投与される。いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩の投与の少なくとも９６時間後の時点で投与される。
【0163】
いくつかの実施形態では、使用のための組合せは、連続して投与した後に、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩、ならびに、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質を同時に投与する第２の投与を少なくともさらに含む。
【0164】
様々な実施形態では、本発明の組合せはまた、インテグラーゼ阻害剤をも包含し得る。インテグラーゼ阻害剤、すなわち、ＩＮＳＴＩ（ｉｎｔｅｇｒａｓｅ ｓｔｒａｎｄ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）は、レトロウイルスの組込みを妨げることで機能する活性物質である。例示的な化合物としては、ラルテグラビル、エルビテグラビル、ドルテグラビル、ビクテグラビルおよびカボテグラビルが挙げられるが、これらに限定されない。
【0165】
他の態様
別の態様によれば、本発明は、上記に定義される、治療有効量の、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩、ならびに、治療有効量のＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質の、ＨＩＶの治療に使用するための医薬の製造における使用であって、ＨＩＶの治療に使用するために、ヒトに、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩が投与され、次いで、連続して、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質が投与される、使用を提供する。
別の態様によれば、本発明は、上記に定義される、治療有効量の、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩、ならびに、治療有効量のＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質の、ＨＩＶの治療に使用するための医薬の製造における使用であって、ＨＩＶの治療に使用するために、ヒトに、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩が投与され、次いで、連続して、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質が投与される、使用を提供する。
【0166】
別の態様によれば、本発明は、上記に定義される、治療有効量の、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩、ならびに、治療有効量のＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質の、ＨＩＶの治療に使用するための医薬の製造における使用であって、ＨＩＶの予防に使用するために、ヒトに、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩が投与され、次いで、連続して、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質が投与される、使用を提供する。
【0167】
別の態様によれば、本発明は、上記に定義される、治療有効量の、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩、ならびに、治療有効量のＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質の、ＨＩＶの治療に使用するための医薬の製造における使用であって、ＨＩＶの中和に使用するために、ヒトに、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩が投与され、次いで、連続して、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質が投与される、使用を提供する。
【0168】
別の態様によれば、本発明は、上記に定義される、治療有効量の、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩、ならびに、治療有効量のＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質の、ＨＩＶの治療に使用するための医薬の製造における使用であって、ＨＩＶの治癒に使用するために、ヒトに、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩が投与され、次いで、連続して、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質が投与される、使用を提供する。
【0169】
別の態様によれば、本発明は、上記に定義される、治療有効量の、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩、ならびに、治療有効量のＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質の、ＨＩＶ感染細胞のクリアランスに使用するための医薬の製造における使用を提供する。
【0170】
別の態様によれば、本発明は、治療有効量の、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩と、治療有効量のＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質とを含む、キットを提供する。
【0171】
いくつかの実施形態では、本発明は、それを必要とするヒトにおいてＨＩＶ感染を治療する方法であって、ヒトに、治療有効量の、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩、ならびに、治療有効量のＣＤ４結合部位（ＣＤ４ｂｓ）結合性タンパク質を投与することを含み、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質が、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩の投与の後に投与される、方法を提供する。
【0172】
いくつかの実施形態では、本発明は、それを必要とするヒトからＨＩＶ感染細胞をクリアランスする方法であって、治療有効量の、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩、ならびに、治療有効量のＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質を投与することを含む、方法を提供する。
【0173】
いくつかの実施形態では、本発明は、ＨＩＶの治療に使用するための組合せであって、治療有効量の、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩、ならびに、治療有効量のＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質を含み、ヒトに、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩が投与され、次いで、連続して、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質が投与される、組合せを提供する。ある実施形態では、ＨＩＶ感染細胞のクリアランスに使用するための組合せは、治療有効量の、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩、ならびに、治療有効量のＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質を含み、ヒトに、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩、ならびに、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質が投与される。
【0174】
いくつかの実施形態では、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩、ならびに、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、同時に（ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔｌｙ）、同時に（ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙ）、別々に、または連続して投与される。ある実施形態では、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩、ならびに、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、連続して投与され、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質が、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩の投与の後に投与される。いくつかの実施形態では、少なくとも１種の薬剤は、テムサビルまたはその薬学的に許容される塩である。他の実施形態では、少なくとも１種の薬剤は、ホステムサビルまたはその薬学的に許容される塩である。
【0175】
いくつかの実施形態では、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩は、経口または非経口で投与される。いくつかの実施形態では、テムサビルの投与は、非経口である。他の実施形態では、ホステムサビルの投与は、経口である。
【0176】
いくつかの実施形態では、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩は、１ｍｇ／ｋｇ体重～１００ｍｇ／ｋｇ体重の用量（ｄｏｓｅ）の範囲で投与される。いくつかの実施形態では、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩の用量は、１００ｍｇ～１２００ｍｇである。いくつかの実施形態では、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩は、１日１回、１日２回または１日３回、投与される。一実施形態では、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩は、１日２回、投与される。
【0177】
いくつかの実施形態では、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩は、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質の結合を促進する。いくつかの実施形態では、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩は、ｇｐ１２０エンベロープ糖タンパク質（ｇｐ１２０ ＥＮＶ）を閉じたコンフォメーションにロックする。
【0178】
いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、ＣＤ４ｂｓに結合する抗体またはその結合性断片を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、広域中和抗体またはその結合性断片である。いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、配列番号１と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である配列を含むＣＤＲＨ１のアミノ酸配列と、配列番号２と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である配列を含むＣＤＲＨ２のアミノ酸配列と、配列番号３と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である配列を含むＣＤＲＨ３のアミノ酸配列とを有する重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）、および、配列番号４と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である配列を含むＣＤＲＬ１のアミノ酸配列と、配列番号５と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である配列を含むＣＤＲＬ２のアミノ酸配列と、配列番号６と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である配列を含むＣＤＲＬ３のアミノ酸配列とを有する軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）を含む。
【0179】
いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、配列番号７と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、配列番号８と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）のアミノ酸配列を含む。
【0180】
いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、配列番号９、１１、１３および１４からなる群から選択される配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である配列を含む重鎖（ＨＣ）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、配列番号１０および１２からなる群から選択される配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である配列を含む軽鎖（ＬＣ）のアミノ酸配列を含む。
【0181】
ある実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、完全長免疫グロブリンＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質抗体断片である。いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質抗体断片は、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、単鎖Ｆｖタンパク質（「ｓｃＦｖ」）、ジスルフィド安定化Ｆｖタンパク質（「ｄｓＦｖ」）、ダイアボディまたはＴＡＮＤＡＢＳである。いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質抗体断片は、ｓｃＦｖである。
【0182】
いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、非修飾定常ドメインと比較して胎児性Ｆｃ受容体への結合を向上させる修飾を含む組換え定常ドメインを含み、該組換えドメインは、Ｍ４２８Ｌ変異およびＮ４３４Ｓ変異を含むＩｇＧ１定常ドメインである。いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、非修飾定常ドメインと比較して抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）に影響を及ぼす修飾を含む組換え定常ドメインを含み、該組換えドメインが、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ変異またはＬ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ変異を含むＩｇＧ１定常ドメインである。いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、Ｎ６、Ｎ６ＬＳ、Ｎ６－ＤＥおよびＮ６－ＬＡＧＡからなる群から選択されるモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、Ｎ６である。いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、Ｎ６ＬＳである。
【0183】
いくつかの実施形態では、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩の投与の少なくとも３０分後、少なくとも１時間後、少なくとも２時間後、少なくとも４時間後および少なくとも６時間後の時点で投与される。いくつかの実施形態では、本方法は、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の追加の薬剤またはその薬学的に許容される塩を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、本方法または組合せは、少なくとも１種のインテグラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩を含む第３の薬剤をさらに含む。
【0184】
いくつかの実施形態では、治療有効量の、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩、ならびに、治療有効量のＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質の、ＨＩＶの治療に使用するための医薬の製造における使用が提供される。いくつかの実施形態では、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩、ならびに、ＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質は、ヒトに、同時に（ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔｌｙ）、同時に（ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙ）、別々に、または連続して投与される。いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるいずれかの実施形態に従う、治療有効量の、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩、ならびに、治療有効量のＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質の、ＨＩＶ感染細胞のクリアランスに使用するための医薬の製造における使用が提供される。
【0185】
一態様では、本発明は、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩を含む第１の薬剤を含む第１の医薬組成物と、少なくとも１種の広域中和抗体またはその抗原結合性断片を含む第２の薬剤を含む第２の医薬組成物と、任意選択で、少なくとも１種のインテグラーゼ阻害剤またはその薬学的に許容される塩を含む第３の薬剤を含む第３の医薬組成物とを含む、キットを提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、治療有効量の、ホステムサビルおよびテムサビルからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤またはその薬学的に許容される塩と、治療有効量のＣＤ４ｂｓ結合性タンパク質とを含む、キットを提供する。
【実施例】
【0186】
実施例１：抗ウイルス活性
概要
ＨＩＶ－１実験室株ＨｘＢ２を使用したヒトＣＤ４＋ Ｔ細胞の産生性感染によって細胞表面に発現したＨＩＶ－１エンベロープに対するｂｎＡｂ Ｎ６、Ｎ６－ＤＥおよびＮ６－ＬＡＧＡの結合に関するテムサビルの効果を、フローサイトメトリーによって評価した。
概要
ＨＩＶ－１実験室株ＨｘＢ２を使用したヒトＣＤ４＋ Ｔ細胞の産生性感染によって細胞表面に発現したＨＩＶ－１エンベロープに対するｂｎＡｂ Ｎ６、Ｎ６－ＤＥおよびＮ６－ＬＡＧＡの結合に関するテムサビルの効果を、フローサイトメトリーによって評価した。
【0187】
手順
標的細胞の調製およびＨＩＶ－１感染：末梢血単核球（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ ｃｅｌｌｓ：ＰＢＭＣｓ）を、健康なドナーから連続流白血球アフェレーシス（ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ－ｆｌｏｗ ｌｅｕｋａｐｈｅｒｅｓｉｓ）によって取得し、ｆｉｃｏｌｌ－ｈｙｐａｑｕｅ密度勾配遠心分離によって単離し、液体窒素の気相中で凍結保存した。ＰＢＭＣｓは、３７℃水浴中で室温まで急速解凍し、２μｇ／ｍＬのフィトヘマグルチニン－Ｐ（Ｓｉｇｍａ）を含むアッセイ培地（１０％ウシ胎仔血清＋３０Ｕ／ｍＬ組換えＩＬ－２を添加したＲＰＭＩ １６４０培地）において、３７℃、５％ＣＯ２の加湿インキュベーター中で３日間培養した。ＣＤ４＋ Ｔ細胞は、陰性選択によって単離し（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、２回洗浄し、アッセイ培地を使用して最終密度１～２×１０６細胞／ｍＬに再懸濁し、３７℃、５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。細胞を、５００×ｇで１０分間遠心分離し、アッセイ培地で５×１０６細胞／ｍＬに再懸濁し、２００μＬ（合計１×１０６細胞）を２４ウェル組織培養処理プレートに分配した。ヒトＰＢＭＣ細胞で以前増殖させたＨＩＶ－１実験室株ＨｘＢ２ウイルスを、５０μｇ／ｍＬのＤＥＡＥ－デキストランを含むアッセイ培地で希釈し、２００μＬを２４ウェルプレート中の細胞に添加した。プレートを、１，２００×ｇで１．５時間遠心分離し、感染細胞を回収し、５０ｍＬコニカルチューブにプールした。感染細胞を、２回洗浄し、最終密度１～２×１０６細胞／ｍＬへとアッセイ培地に再懸濁し、３７℃、５％ＣＯ２で３日間インキュベートした。
標的細胞の調製およびＨＩＶ－１感染：末梢血単核球（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ ｃｅｌｌｓ：ＰＢＭＣｓ）を、健康なドナーから連続流白血球アフェレーシス（ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ－ｆｌｏｗ ｌｅｕｋａｐｈｅｒｅｓｉｓ）によって取得し、ｆｉｃｏｌｌ－ｈｙｐａｑｕｅ密度勾配遠心分離によって単離し、液体窒素の気相中で凍結保存した。ＰＢＭＣｓは、３７℃水浴中で室温まで急速解凍し、２μｇ／ｍＬのフィトヘマグルチニン－Ｐ（Ｓｉｇｍａ）を含むアッセイ培地（１０％ウシ胎仔血清＋３０Ｕ／ｍＬ組換えＩＬ－２を添加したＲＰＭＩ １６４０培地）において、３７℃、５％ＣＯ２の加湿インキュベーター中で３日間培養した。ＣＤ４＋ Ｔ細胞は、陰性選択によって単離し（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、２回洗浄し、アッセイ培地を使用して最終密度１～２×１０６細胞／ｍＬに再懸濁し、３７℃、５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。細胞を、５００×ｇで１０分間遠心分離し、アッセイ培地で５×１０６細胞／ｍＬに再懸濁し、２００μＬ（合計１×１０６細胞）を２４ウェル組織培養処理プレートに分配した。ヒトＰＢＭＣ細胞で以前増殖させたＨＩＶ－１実験室株ＨｘＢ２ウイルスを、５０μｇ／ｍＬのＤＥＡＥ－デキストランを含むアッセイ培地で希釈し、２００μＬを２４ウェルプレート中の細胞に添加した。プレートを、１，２００×ｇで１．５時間遠心分離し、感染細胞を回収し、５０ｍＬコニカルチューブにプールした。感染細胞を、２回洗浄し、最終密度１～２×１０６細胞／ｍＬへとアッセイ培地に再懸濁し、３７℃、５％ＣＯ２で３日間インキュベートした。
【0188】
ＨＩＶ感染標的細胞のテムサビルおよびＮ６ ｂｎＡｂでの処理：ＨＩＶ感染細胞を、５００×ｇで１０分間遠心分離し、アッセイ培地で３×１０６細胞／ｍＬに再懸濁し、５０μＬ（合計１５０，０００細胞）を９６ウェルＵ底組織培養処理プレートに分配した。次いで、感染細胞培養物を、ＤＭＳＯに０．５μＭの最終濃度で溶解したテムサビルを使用して、または、ビヒクル対照としてＤＭＳＯのみを使用して処理し、アッセイプレートを３７℃、５％ＣＯ２で１６～２４時間インキュベートした。Ｎ６ ｂｎＡｂ（Ｎ６、Ｎ６－ＤＥおよびＮ６－ＬＡＧＡ）を、記載された配列に従ってＣｈｅｍＰａｒｔｎｅｒによってＨＥＫ２９３細胞から産生した。抗体を、１５０ｍＭアルギニン、５０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ５．５、１５０ｍＭ ＮａＣｌ）からなるバッファーで溶出および希釈し、アッセイ培地で段階的に用量設定し、テムサビル処理細胞に５０μｇ／ｍＬ～０．０１μｇ／ｍＬの最終濃度範囲で添加した。プレートを、３７℃、５％ＣＯ２で３０分間インキュベートした。
【0189】
フローサイトメトリー：アッセイプレートをインキュベーターから取り出し、細胞を、２５℃にて５００×ｇで２分間遠心分離することによってペレット化した。細胞を、２回洗浄し、各洗浄サイクルでは、２００μＬの氷冷洗浄バッファー（２％ウシ胎仔血清を含むリン酸緩衝生理食塩水）と混合し、２５℃にて５００×ｇで２分間遠心分離した。細胞を、１：２，０００のＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ（商標）ｆｉｘａｂｌｅ ａｑｕａ ｄｅａｄ ｃｅｌｌ ｓｔａｉｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、１：４００のＢＶ７８６マウス抗ヒトＣＤ４ ｍＡｂ（クローンＯＫＴ４、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）および１：２００のＲ－フィコエリトリンＦ（ａｂ’）２断片ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）を含む１００μＬ氷冷洗浄バッファーで再懸濁し、４℃にて暗所で３０分間インキュベートした。染色細胞を、上記したように洗浄バッファーで２回洗浄し、ＢＤ ｃｙｔｏｆｉｘ／ｃｙｔｏＰｅｒｍ（商標）で固定し透過処理した後、ＢＤ Ｐｅｒｍ／Ｗａｓｈ（商標）バッファーで１：２００に調製した５０μＬのＦＩＴＣ－抗ＨＩＶ－１コア抗原（ＫＣ５７、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）を使用して４℃にて３０分間細胞内染色した。染色細胞を、上記したように洗浄バッファーで２回洗浄し、Ｆｏｒｔｅｓｓａサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）上でデータ取得を行い、データをＦｌｏｗＪｏ ｖ１０．８ソフトウェア（Ｔｒｅｅ Ｓｔａｒ）を使用して、平均蛍光強度（ＭＦＩ）により分析した。
【0190】
結果
０．５μＭテムサビルでＨＩＶ感染細胞を２４時間処理すると、ＤＭＳＯのみで処理した細胞と比較して、ＣＤ４＋／ｐ２４＋細胞の細胞表面へのｂｎＡｂ Ｎ６、Ｎ６－ＤＥおよびＮ６－ＬＡＧＡの結合が大幅に増加した（図１）。また、０．５μＭテムサビルで処理すると、ＤＭＳＯのみで処理した細胞と比較して、結合したｂｎＡｂを含む細胞の総パーセンテージが顕著に増加した（図２）。
０．５μＭテムサビルでＨＩＶ感染細胞を２４時間処理すると、ＤＭＳＯのみで処理した細胞と比較して、ＣＤ４＋／ｐ２４＋細胞の細胞表面へのｂｎＡｂ Ｎ６、Ｎ６－ＤＥおよびＮ６－ＬＡＧＡの結合が大幅に増加した（図１）。また、０．５μＭテムサビルで処理すると、ＤＭＳＯのみで処理した細胞と比較して、結合したｂｎＡｂを含む細胞の総パーセンテージが顕著に増加した（図２）。
【0191】
実施例２：抗体依存性細胞性細胞傷害
概要
３つのＣＤ４結合部位ｂｎＡｂ、Ｎ６、Ｎ６－ＤＥおよびＮ６－ＬＡＧＡによって媒介されるＨＩＶ感染細胞の殺傷の、テムサビルによる増強を、ＡＤＣＣアッセイで評価した。
概要
３つのＣＤ４結合部位ｂｎＡｂ、Ｎ６、Ｎ６－ＤＥおよびＮ６－ＬＡＧＡによって媒介されるＨＩＶ感染細胞の殺傷の、テムサビルによる増強を、ＡＤＣＣアッセイで評価した。
【0192】
手順
標的およびエフェクター細胞の単離および調製：末梢血単核球（ＰＢＭＣｓ）を、健康なドナーから連続流白血球アフェレーシスによって取得し、ｆｉｃｏｌｌ－ｈｙｐａｑｕｅ密度勾配遠心分離によって単離し、液体窒素の気相中で凍結保存した。ＰＢＭＣｓを、３７℃水浴中で室温まで急速解凍し、１０％ウシ胎仔血清を添加したＲＰＭＩ １６４０培地に再懸濁した。標的細胞として、ＣＤ４＋ Ｔリンパ球を、製造元の説明（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に従って免疫磁性陰性選択ビーズ（ｉｍｍｕｎｏｍａｇｎｅｔｉｃ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｂｅａｄｓ）を使用して精製した。細胞を、フィトヘマグルチニン－Ｐ（Ｓｉｇｍａ；ＰＨＡ－Ｐ；５μｇ／ｍＬ）を使用して３７℃、５％ＣＯ２で７２時間活性化し、次いで、１０％ウシ胎仔血清＋５０Ｕ／ｍＬ組換えＩＬ－２を添加したＲＰＭＩ １６４０培地で同じインキュベーション条件下で維持した。ナチュラルキラー（ＮＫ）エフェクター細胞を、製造元の説明（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に従って免疫磁性陰性選択ビーズを使用して自己ＰＢＭＣから精製した。細胞を、１０％ウシ胎仔血清を添加したＲＰＭＩ １６４０培地で維持し、ＡＤＣＣアッセイの前に３７℃、５％ＣＯ２にて２４時間インキュベートした。
標的およびエフェクター細胞の単離および調製：末梢血単核球（ＰＢＭＣｓ）を、健康なドナーから連続流白血球アフェレーシスによって取得し、ｆｉｃｏｌｌ－ｈｙｐａｑｕｅ密度勾配遠心分離によって単離し、液体窒素の気相中で凍結保存した。ＰＢＭＣｓを、３７℃水浴中で室温まで急速解凍し、１０％ウシ胎仔血清を添加したＲＰＭＩ １６４０培地に再懸濁した。標的細胞として、ＣＤ４＋ Ｔリンパ球を、製造元の説明（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に従って免疫磁性陰性選択ビーズ（ｉｍｍｕｎｏｍａｇｎｅｔｉｃ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｂｅａｄｓ）を使用して精製した。細胞を、フィトヘマグルチニン－Ｐ（Ｓｉｇｍａ；ＰＨＡ－Ｐ；５μｇ／ｍＬ）を使用して３７℃、５％ＣＯ２で７２時間活性化し、次いで、１０％ウシ胎仔血清＋５０Ｕ／ｍＬ組換えＩＬ－２を添加したＲＰＭＩ １６４０培地で同じインキュベーション条件下で維持した。ナチュラルキラー（ＮＫ）エフェクター細胞を、製造元の説明（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に従って免疫磁性陰性選択ビーズを使用して自己ＰＢＭＣから精製した。細胞を、１０％ウシ胎仔血清を添加したＲＰＭＩ １６４０培地で維持し、ＡＤＣＣアッセイの前に３７℃、５％ＣＯ２にて２４時間インキュベートした。
【0193】
標的細胞の感染：ＨＩＶ－１実験室株ＩＩＩＢを使用して、２５μｇ／ｍＬのＤＥＡＥ－デキストランの存在下、２５℃の２４ウェルプレート中、１．５時間の１２００×ｇスピン感染を行うことより、活性化ＣＤ４＋ Ｔリンパ球を感染させた。感染細胞を、回収し、洗浄し、１０％ウシ胎仔血清＋５０Ｕ／ｍＬ組換えＩＬ－２を添加したＲＰＭＩ １６４０培地に再懸濁し、感染率が２０％を超えるまで３７℃、５％ＣＯ２で３日間インキュベートした。
【0194】
ＡＤＣＣアッセイ：ＨＩＶ感染ＣＤ４＋ Ｔ細胞（標的）を、製造元の説明に従って細胞増殖色素とインキュベートし（ｅＦｌｕｏｒ６７０；ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、９６ウェルＵ底プレートにプレーティングした。テムサビルを、ＤＭＳＯに溶解し、１０％ウシ胎仔血清を添加したＲＰＭＩ １６４０培地で希釈し、同じ培地で５倍ずつ段階的に用量設定し、５０ｎＭ～０．０８ｎＭの用量範囲とした。感染細胞のパーセントの減少がＮ６およびテムサビルの抗ウイルス効果の結果である可能性を除外するために、ラルテグラビルを培養培地に添加してウイルスの拡散を防ぎ、これにより、感染細胞の排除の分析を、テムサビルおよびＮ６のウイルス感染の遮断効果と独立して行うことが可能となった。テムサビルを用量設定したものを、色素負荷標的細胞に添加し、アッセイプレートを、３７℃、５％ＣＯ２で１６～２４時間インキュベートした。抗体を、アッセイプレートの適切なウェルに５μｇ／ｍＬの最終濃度で添加し、室温で１５分間インキュベートした。上記した標的およびエフェクター細胞の単離および調製に従って精製したＮＫエフェクター細胞を、３：１のエフェクター細胞対標的細胞の比で添加し、アッセイプレートを３７℃、５％ＣＯ２で２４時間インキュベートした。
【0195】
フローサイトメトリー：アッセイのＡＤＣＣパートに続いて、細胞を、生存率色素（ＬｉｖｅＤｅａｄＡｑｕａ；ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）、抗ＣＤ３－ＢＶ４２１（クローンＳＰ３４－２；ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、１：２００最終濃度）および抗ＣＤ４－ＢＶ７８６（クローンＯＫＴ４；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、１：４００最終濃度）と共に、室温で２０～３０分間インキュベートした。次いで、細胞に対するＨＩＶ－１ ｐ２４の細胞内染色を、Ｃｙｔｏｆｉｘ／Ｃｙｔｏｐｅｒｍ Ｆｉｘａｔｉｏｎ／Ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）の使用、続いて、抗ｐ２４ ｍＡｂ（ＦＩＴＣ抗ｐ２４、クローンＫＣ５７；Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ／Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ；１：２００最終濃度）の添加により、室温で２０～３０分間行った。細胞を、５×１０４フローサイトメトリー粒子／ｍＬ（ＡｃｃｕＣｏｕｎｔブランク粒子；５．３μｍ；Ｓｐｈｅｒｏｔｅｃｈ）を含むＰｈａｒｍｉｎｇｅｎ Ｓｔａｉｎ Ｂｕｆｆｅｒ（ＢＳＡ）（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に再懸濁した。サンプルを、Ｆｏｒｔｅｓｓａサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）上でデータ取得を行い、データをＦｌｏｗＪｏ ｖ１０．８ソフトウェア（Ｔｒｅｅ Ｓｔａｒ）を使用して分析した。特異的殺傷パーセンテージは、生きた標的細胞をゲーティングして以下の式で計算した：（標的細胞＋エフェクター細胞の場合におけるｐ２４＋細胞のパーセンテージ（％））－（標的細胞＋エフェクター細胞＋Ａｂの場合におけるｐ２４＋細胞のパーセンテージ（％））／（標的細胞のみで抗体もテムサビルも含まない場合におけるｐ２４＋細胞のパーセンテージ（％））。
【0196】
結果
テムサビルは、ＣＤ４結合部位ｂｎＡｂによって媒介されるＨＩＶ感染細胞のＮＫによる殺傷を増強する（図３）。Ｆｃ結合増強バージョンであるＮ６－ＤＥは、最も大きい殺傷率を促進したが（最大７５％）、一方、Ｆｃ結合減少バージョンであるＮ６－ＬＡＧＡは、最も小さい殺傷量を示し（最大２５％）、これにより、標的細胞のＮＫ媒介性殺傷には、ＦｃγＲＩＩＩＢ受容体の機能が直接関与していることが示された。エフェクター細胞をアッセイから排除した場合、殺傷の証拠は存在しなかった（図４）。
テムサビルは、ＣＤ４結合部位ｂｎＡｂによって媒介されるＨＩＶ感染細胞のＮＫによる殺傷を増強する（図３）。Ｆｃ結合増強バージョンであるＮ６－ＤＥは、最も大きい殺傷率を促進したが（最大７５％）、一方、Ｆｃ結合減少バージョンであるＮ６－ＬＡＧＡは、最も小さい殺傷量を示し（最大２５％）、これにより、標的細胞のＮＫ媒介性殺傷には、ＦｃγＲＩＩＩＢ受容体の機能が直接関与していることが示された。エフェクター細胞をアッセイから排除した場合、殺傷の証拠は存在しなかった（図４）。
【0197】
配列表
【0198】
【表3-1】
【0199】
【表3-2】
【0200】
【表3-3】
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【配列表】
【国際調査報告】