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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-12-26
(54)【発明の名称】電気化学発光検出のための方法
(51)【国際特許分類】
G01N 21/66 20060101AFI20241219BHJP
G01N 33/53 20060101ALI20241219BHJP
G01N 33/543 20060101ALI20241219BHJP
G01N 21/64 20060101ALI20241219BHJP
C12Q 1/6816 20180101ALI20241219BHJP
C12Q 1/6844 20180101ALI20241219BHJP
C12Q 1/34 20060101ALI20241219BHJP
C12Q 1/48 20060101ALI20241219BHJP
【ＦＩ】
G01N21/66
G01N33/53 M
G01N33/543 575
G01N21/64 F
C12Q1/6816 Z ZNA
C12Q1/6844 Z
C12Q1/34
C12Q1/48 Z
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024539798
(86)(22)【出願日】2022-12-22
(85)【翻訳文提出日】2024-08-27
(86)【国際出願番号】 US2022082313
(87)【国際公開番号】W WO2023129884
(87)【国際公開日】2023-07-06
(31)【優先権主張番号】63/295,470
(32)【優先日】2021-12-30
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】518024932
【氏名又は名称】メソ スケール テクノロジーズ，エルエルシー
(74)【代理人】
【識別番号】100078282
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 秀策
(74)【代理人】
【識別番号】100113413
【弁理士】
【氏名又は名称】森下 夏樹
(74)【代理人】
【識別番号】100181674
【弁理士】
【氏名又は名称】飯田 貴敏
(74)【代理人】
【識別番号】100181641
【弁理士】
【氏名又は名称】石川 大輔
(74)【代理人】
【識別番号】230113332
【弁護士】
【氏名又は名称】山本 健策
(72)【発明者】
【氏名】ケンテン， ジョン
(72)【発明者】
【氏名】ペッテルソン， ジョン
(72)【発明者】
【氏名】シーガル， ジョージ
(72)【発明者】
【氏名】タッカー－シュワルツ， アレクサンダー ケー．
【テーマコード（参考）】
2G043
4B063
【Ｆターム（参考）】
2G043AA04
2G043BA16
2G043CA04
2G043DA02
2G043EA06
4B063QA01
4B063QQ42
4B063QR55
4B063QS34
4B063QX02
(57)【要約】
本開示は、電気化学発光（ＥＣＬ）共反応物質を含む新規の組成物に関する。実施形態では、組成物は、イオン成分、界面活性剤、又はそれらの組み合わせを更に含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質は、トリエタノールアミン（ＴＥＡ）、ｔｅｒｔ－ブチルジエタノールアミン（ｔＢＤＥＡ）、メチルジブチルエタノールアミン（ＭＤＥＡ）、３－［ビス－（２－ヒドロキシ－エチル）－アミノ］－プロパン－１－スルホン酸（ＤＥＡ－ＰＳ）、又はそれらの組み合わせである。組成物を使用する方法及び組成物を含むキットも、本明細書において提供され、クエンチ部位を有するＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブを使用する方法を含む。
【選択図】図１４
【選択図】図１４
【特許請求の範囲】
【請求項1】
電気化学発光（ＥＣＬ）検出方法であって、ａ）電極を含む基材であって、前記基材の表面上に固定化された結合試薬を有する、基材を提供することと、
ｂ）前記基材を組成物と接触させることであって、前記組成物が、
ｉ）オリゴヌクレオチドを含む結合パートナー及び／又は結合錯体であって、前記結合試薬が、前記結合パートナー及び／又は結合錯体を結合する、結合パートナー及び／又は結合錯体と、
ｉｉ）前記結合パートナー及び／又は結合錯体の前記オリゴヌクレオチドのオリゴヌクレオチド配列に相補的なオリゴヌクレオチド配列を含む複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブと、
ｉｉｉ）ＴＰＡではないＥＣＬ共反応物質と、を含む、接触させることと、
ｃ）前記複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブの一部分を、前記結合パートナー及び／又は結合錯体の前記オリゴヌクレオチドにハイブリダイズさせることであって、前記結合パートナー及び／又は結合錯体が、前記結合試薬によって結合され、前記複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブの別の一部分は、前記結合試薬によって結合された前記結合パートナー及び／又は結合錯体の前記オリゴヌクレオチドにハイブリダイズされない、ハイブリダイズさせることと、
ｄ）前記結合パートナー及び／又は結合錯体の前記オリゴヌクレオチドにハイブリダイズした前記複数のＥＣＬ標識プローブの前記一部分を選択的に脱クエンチすることと、
ｅ）前記電極に電圧を印加して、ＥＣＬを生成することと、
ｆ）前記ＥＣＬを測定することであって、前記電圧を印加し、前記ＥＣＬを測定する前に、前記結合パートナー及び／又は結合錯体の前記オリゴヌクレオチドにハイブリダイズしていない前記複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブの前記一部分が、前記組成物から除去されない、測定することと、を含む、方法。
【請求項2】
ｂ）前記基材を前記組成物と接触させることが、ｂ’）前記基材を、前記結合パートナー及び／又は結合錯体を含む組成物と接触させることと、
ｂ’’）前記基材を、前記複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブを含む組成物と接触させることと、
ｂ’’’）前記基材を、前記ＥＣＬ共反応物質を含む組成物と接触させることと、を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
工程ｂ’）、ｂ’’）及びｂ’’’）の各々が、順次行われる、請求項２に記載の方法。
【請求項4】
工程ｂ’）、ｂ’’）及びｂ’’’）のうちの少なくとも２つが、同時に行われる、請求項２に記載の方法。
【請求項5】
前記方法が、ｂ’）前記基材を、前記結合パートナー及び／若しくは結合錯体を含む第１の組成物と接触させ、前記結合パートナー及び／若しくは結合錯体を、前記結合試薬に結合させることによって前記表面上に固定化させることと、
ｂ’’）固定化された前記結合パートナー及び／若しくは結合錯体を含む前記基材を、前記複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブ及び前記ＥＣＬ共反応物質を含む第２の組成物と接触させること、
又は
ｂ’）前記基材を、前記結合パートナー及び／若しくは結合錯体並びに前記複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブを含む第１の組成物と接触させることであって、前記複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブの一部分が、前記結合パートナー及び／若しくは結合錯体の前記オリゴヌクレオチドにハイブリダイズされる、接触させることと、前記結合パートナー及び／若しくは結合錯体を、前記結合試薬に結合させることによって前記表面上に固定化させることと、
ｂ’’）固定化された前記結合パートナー及び／若しくは結合錯体を含む前記基材を、前記ＥＣＬ共反応物質を含む第２の組成物と接触させること、
又は
ｂ’）前記基材を、前記結合パートナー及び／若しくは結合錯体を含む第１の組成物と接触させ、前記結合パートナー及び／若しくは結合錯体を、前記結合試薬に結合させることによって、前記表面上に固定化させることと、
ｂ’’）固定化された前記結合パートナー及び／若しくは結合錯体を含む前記基材を、前記複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブを含む第２の組成物と接触させ、前記複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブの一部分を、前記固定化された結合パートナー及び／若しくは結合錯体の前記オリゴヌクレオチドにハイブリダイズさせることと、
ｂ’’’）前記基材を、前記ＥＣＬ共反応物質を含む第３の組成物と接触させることと、を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項6】
前記基材と前記結合パートナー及び／若しくは結合錯体との前記接触の後に前記基材を洗浄して、前記結合試薬によって結合されていない結合パートナー及び／若しくは結合錯体を除去することを更に含み、前記洗浄が、前記基材を、前記複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブを含む前記組成物と接触させる前である、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項7】
電気化学発光（ＥＣＬ）検出方法であって、ａ）電極を含む基材であって、前記基材の表面上に固定化されたオリゴヌクレオチドを含む結合パートナー及び／又は結合錯体を有する、基材を提供することと、
ｂ）前記基材を組成物と接触させることであって、前記組成物が、
ｉ）前記結合パートナー及び／又は結合錯体の前記オリゴヌクレオチドのオリゴヌクレオチド配列に相補的なオリゴヌクレオチド配列を含む複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブと、
ｉｉ）ＴＰＡではないＥＣＬ共反応物質と、を含む、接触させることと、
ｃ）前記複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブの一部分を、固定化された前記結合パートナー及び／又は結合錯体の前記オリゴヌクレオチドにハイブリダイズさせることであって、前記複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブの別の一部分が、前記固定化された結合パートナー及び／又は結合錯体の前記オリゴヌクレオチドにハイブリダイズされない、ハイブリダイズさせることと、
ｄ）前記結合パートナー及び／又は結合錯体の前記オリゴヌクレオチドにハイブリダイズした前記複数のＥＣＬ標識プローブの前記一部分を選択的に脱クエンチすることと、
ｅ）前記電極に電圧を印加して、ＥＣＬを生成することと、
ｆ）前記ＥＣＬを測定することであって、前記電圧を印加し、前記ＥＣＬを測定する前に、前記結合パートナー及び／又は結合錯体の前記オリゴヌクレオチドにハイブリダイズしていない前記複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブの前記一部分が、前記組成物から除去されない、測定することと、を含む、方法。
【請求項8】
ｂ）前記基材を前記組成物と接触させることが、ｂ’）前記基材を、前記複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブを含む組成物と接触させることと、
ｂ’’）前記基材を、前記ＥＣＬ共反応物質を含む組成物と接触させることと、を含む、請求項７に記載の方法。
【請求項9】
工程ｂ’）及びｂ’’）の各々が、順次行われる、請求項８に記載の方法。
【請求項10】
工程ｂ’）及びｂ’’）の各々が、同時に行われ、必要に応じて、前記複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブ及び前記ＥＣＬ共反応物質が、単一の組成物中にある、請求項８に記載の方法。
【請求項11】
前記結合パートナー及び／又は結合錯体が、分析物を含む、請求項１～１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項12】
前記分析物が、ペプチドを含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項13】
前記分析物が、オリゴヌクレオチドを含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項14】
前記分析物が、前記結合パートナー及び／又は結合錯体の前記オリゴヌクレオチドである、請求項１３に記載の方法。
【請求項15】
前記分析物が、前記オリゴヌクレオチドで標識される、請求項１１～１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項16】
前記分析物が、前記分析物を、前記オリゴヌクレオチドを含む検出試薬と結合させることによって前記オリゴヌクレオチドで標識される、請求項１５に記載の方法。
【請求項17】
前記結合パートナー及び／又は結合錯体の前記オリゴヌクレオチドが、前記複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブの前記オリゴヌクレオチド配列に相補的な前記配列の複数のコピーを含む、請求項１～１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項18】
前記基材を前記複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブと接触させる前に、増幅反応を実行して、前記複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブの前記オリゴヌクレオチド配列に相補的な前記配列の前記複数のコピーを生成することを更に含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項19】
前記分析物が、前記分析物を、オリゴヌクレオチドプライマーを含む検出試薬と結合させることによって前記オリゴヌクレオチドで標識され、前記オリゴヌクレオチドプライマーが、ポリメラーゼによって伸長されて、前記ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブの前記オリゴヌクレオチド配列に相補的な前記配列の前記複数のコピーを含む前記オリゴヌクレオチドを生成する、請求項１６に記載の方法。
【請求項20】
前記増幅反応又はプライマー伸長が、ローリングサークル増幅反応である、請求項１８又は１９に記載の方法。
【請求項21】
前記ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブが、ステムループ又はヘアピン構造、ＥＣＬ標識、及びクエンチ部位を含み、前記クエンチ部位は、前記オリゴヌクレオチドプローブがステムループ又はヘアピン構成にあるときには前記ＥＣＬ標識に近接して、前記ＥＣＬ標識をクエンチするが、前記ステムループ又はヘアピン構造が開放構成にあるときには前記ＥＣＬ標識をクエンチせず、前記選択的に脱クエンチすることが、前記複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブの前記一部分を、開放構成の前記結合パートナー及び／又は結合錯体の前記オリゴヌクレオチドにハイブリダイズさせることを含む、請求項１～２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項22】
前記ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブが、ＥＣＬ標識及びクエンチ部位を含み、前記クエンチ部位は、前記オリゴヌクレオチドプローブが線形構成にあるときには前記ＥＣＬ標識に近接して、前記ＥＣＬ標識をクエンチし、前記選択的に脱クエンチすることは、前記クエンチ部位を、前記結合パートナー及び／又は結合錯体の前記オリゴヌクレオチドにハイブリダイズされた前記複数のＥＣＬ標識プローブの前記一部分のみから選択的に切断することを含み、その結果、前記クエンチ部位が溶液中に放出され、前記クエンチ部位の切断後に、前記結合パートナー及び／又は結合錯体の前記オリゴヌクレオチドにハイブリダイズされたままである前記ハイブリダイズされたＥＣＬ標識プローブの前記ＥＣＬ標識に近接しなくなる、請求項１～２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項23】
前記切断が、酵素によって実行される、請求項２２に記載の方法。
【請求項24】
前記酵素が、ニッキング制限エンドヌクレアーゼ、ＲＮａｓｅＨ２、及び５’エキソヌクレアーゼ活性を有するポリメラーゼからなる群から選択される、請求項２３に記載の方法。
【請求項25】
前記酵素が、前記結合パートナー及び／又は結合錯体の前記オリゴヌクレオチドをそのままにして、前記ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブのみを切断する、請求項２３又は２４に記載の方法。
【請求項26】
前記酵素が、前記ハイブリダイズされたＥＣＬ標識プローブ内の配列を認識するニッキング制限エンドヌクレアーゼ、又は前記ハイブリダイズされたＥＣＬ標識プローブ内のＲＮＡ塩基を認識するＲＮａｓｅＨ２である、請求項２５に記載の方法。
【請求項27】
前記酵素が、５’エキソヌクレアーゼ活性を有するポリメラーゼであり、前記方法が、プライマーを、前記ハイブリダイズされたＥＣＬ標識プローブの５’位において前記結合パートナー及び／又は結合錯体の前記オリゴヌクレオチドにハイブリダイズさせることと、
５’エキソヌクレアーゼ活性を有する前記ポリメラーゼに、前記プライマーを前記ハイブリダイズされたＥＣＬ標識プローブまで伸長させることであって、前記５’エキソヌクレアーゼ活性が、前記ハイブリダイズされたＥＣＬ標識プローブの前記クエンチ部位を切断する、伸長させることと、を更に含み、
前記ＥＣＬ標識プローブが、前記５’エキソヌクレアーゼ活性に耐性のある一部分を含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項28】
前記ＥＣＬ共反応物質が、３－（ジ－ｎ－プロピルアミノ）－プロパンスルホン酸、４－（ジ－ｎ－プロピルアミノ）－ブタンスルホン酸、４－［ビス－（２－ヒドロキシエタン）－アミノ］－ブタンスルホン酸、ピペリジン－Ｎ－（３－プロパンスルホン酸）、アゼパン－Ｎ－（３－プロパンスルホン酸）、ピペリジン－Ｎ－（３－プロピオン酸）（ＰＰＡ）、３－モルホリノ－２－ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳＯ）、３－モルホリンプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－Ｎ’－３－プロパンスルホン酸（ＥＰＰＳ）、Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－Ｎ’－３－エタンスルホン酸（ＢＥＳ）、ピペラジン－Ｎ，Ｎ’－ビス（２－エタンスルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）、トリエタノールアミン（ＴＥＡ）、Ｎ－２－ヒドロキシピペラジン－Ｎ－２－エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、ピペラジン－Ｎ，Ｎ’－ビス－４－ブタンスルホン酸、ホモピペリジン－Ｎ－３－プロパンスルホン酸、ピペラジン－Ｎ，Ｎ’－ビス－３－プロパンスルホン酸、ピペリジン－Ｎ－３－プロパンスルホン酸、ピペラジン－Ｎ－２－ヒドロキシエタン－Ｎ’－３－メチルプロパノエート、ピペラジン－Ｎ，Ｎ’－ビス－３－メチルプロパノエート、１，６－ジアミノヘキサン－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸、Ｎ，Ｎ－ビスプロピル－Ｎ－４－アミノブタンスルホン酸、Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－２－アミノエタンスルホン酸（ＴＥＳ）、１，３－ビス［トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミノ］プロパン（ビス－トリスプロパン）、３－ジメチルアミノ－１－プロパノール、３－ジメチルアミノ－２－プロパノール、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラプロピルプロパン－１，３－ジアミン（ＴＰＡ二量体）、ピペラジン－Ｎ，Ｎ’－ビス（２－ヒドロキシプロパン）スルホン酸（ＰＯＰＳＯ）及び２－ヒドロキシ－３－［４－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－１－イル］プロパン－１－スルホン酸（ＨＥＰＰＳＯ）、Ｎ－ブチルジエタノールアミン（ＢＤＥＡ）、２－ジブチルアミノエタノール（ＤＢＡＥ）、ｔｅｒｔ－ブチルジエタノールアミン（ｔＢＤＥＡ）、メチルジエタノールアミン（ＭＤＥＡ）、３－［ビス－（２－ヒドロキシ－エチル）－アミノ］－プロパン－１－スルホン酸（ＤＥＡ－ＰＳ）、並びにそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１～２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項29】
前記ＥＣＬ共反応物質が、ＴＥＡであるか、又はＴＥＡ、ＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１～２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項30】
前記クエンチ部位が、ＡＴＴＯ ５４０Ｑ、ＡＴＴＯ ５７５Ｑ、ＡＴＴＯ ５８０Ｑ、ＡＴＴＯ ６１２Ｑ、Ｉｏｗａ Ｂｌａｃｋ ＦＱ、Ｉｏｗａ Ｂａｃｋ ＲＱ、ＱＳＹ ２１、ＩＲＤｙｅ ＱＣ－１、ＢＨＱ０、ＢＨＱ１、ＢＨＱ－２、ＢＨＱ－３、ダブシル、ＱＳＹ ７、ＱＳＹ ９、ＱＳＹ ２１、ＱＳＹ ３５、ＱＸＬ ４９０、ＱＸＬ ５２０、ＱＸＬ ５７０、ＱＸＬ ６７０、フェロセン、鉄ビピリジン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１～２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項31】
前記ＥＣＬ標識が、ルテニウム、オスミウム、イリジウム、レニウム、及び／又はランタニド金属を含む有機金属錯体である、請求項１～３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項32】
前記ＥＣＬ標識が、トリス（ビピリジン）ルテニウム又は修飾トリス（ビピリジン）ルテニウムを含む、請求項１～３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項33】
前記ＥＣＬ標識が、式ＩＩ：【化7】
【請求項34】
前記共反応物質が、番号付き項目１～６９のうちのいずれか１つの組成物中にある、請求項１～３３のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年１２月３０日に出願された米国仮特許出願第６３／２９５，４７０号の優先権の利益を主張し、これはその全体が参照により明示的に組み込まれる。
本出願は、２０２１年１２月３０日に出願された米国仮特許出願第６３／２９５，４７０号の優先権の利益を主張し、これはその全体が参照により明示的に組み込まれる。
【0002】
配列表、表、又はコンピュータプログラム一覧への参照
本出願は、電子形式の配列表とともに出願されている。配列表は、ＭＳＤ＿００２ＷＯ２＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ．ｘｍｌという名称（最終保存日：２０２２年１２月２２日、サイズ：８．６１ｋｂ）のファイルとして提供される。そこに含まれる情報は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本出願は、電子形式の配列表とともに出願されている。配列表は、ＭＳＤ＿００２ＷＯ２＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ．ｘｍｌという名称（最終保存日：２０２２年１２月２２日、サイズ：８．６１ｋｂ）のファイルとして提供される。そこに含まれる情報は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【0003】
いくつかの市販の機器は、分析測定のために電気化学発光（ＥＣＬ）を使用している。ＥＣＬ標識と相互作用し、ＥＣＬを生成する化合物は、ＥＣＬ共反応物質と称される。一般的に使用される共反応物質としては、Ｒｕ（Ｂｐｙ）３
＋２由来のＥＣＬ用の三級アミン（例えば、ＵＳ５，８４６，４８５を参照されたい）、シュウ酸塩、及び過硫酸塩、並びにルミノール由来のＥＣＬ用の過酸化水素（例えば、ＵＳ５，２４０，８６３を参照されたい）が挙げられる。ＥＣＬ標識によって生成された光は、診断手順においてレポーター信号として使用され得る（例えば、ＵＳ５，２３８，８０８を参照されたい）。例えば、ＥＣＬ標識は、検出試薬に共有結合することができ、結合相互作用における検出試薬の関与は、ＥＣＬ標識から放出されるＥＣＬを測定することによって監視することができる。あるいは、ＥＣＬ活性化合物からのＥＣＬ信号は、化学的環境を示し得る（例えば、ＥＣＬ共反応物質の形成又は破壊を監視するＥＣＬアッセイを記載するＵＳ５，６４１，６２３を参照されたい）。ＥＣＬベースのアッセイは、米国特許第５，０９３，２６８号、同第５，１４７，８０６号、同第５，３２４，４５７号、同第５，５９１，５８１号、同第５，５９７，９１０号、同第５，６４１，６２３号、同第５，６４３，７１３号、同第５，６７９，５１９号、同第５，７０５，４０２号、同第５，８４６，４８５号、同第５，８６６，４３４号、同第５，７８６，１４１号、同第５，７３１，１４７号、同第６，０６６，４４８号、同第６，１３６，２６８号、同第５，７７６，６７２号、同第５，３０８，７５４号、同第５，２４０，８６３号、同第６，２０７，３６９号、同第５，５８９，１３６号、及び同第６，９１９，１７３号、並びに国際公開第９９／６３３４７号、同第００／０３２３３号、同第９９／５８９６２号、同第９９／３２６６２号、同第９９／１４５９９号、同第９８／１２５３９号、同第９７／３６９３１号、及び同第９８／５７１５４号に更に記載されており、これらの各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【0004】
市販されているＥＣＬ機器は、それらの感受性、動的範囲、精度、及びとりわけ複雑な試料マトリックスの許容性のために、広く使用されるようになった。ＥＣＬベースの測定を実行するために、いくつかの種類の商業的計測装置（ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｔｉｏｎ）が利用可能である（例えば、Ｄｅｂａｄ，Ｊ．Ｄ．，ｅｔ ａｌ．，２００４．Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ ＥＣＬ，ｉｎ：Ｅｌｅｃｔｒｏｇｅｎｅｒａｔｅｄ Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ．Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，ｐｐ．４３－７８を参照されたい）。ＥＣＬ機器は、例えば、米国特許第５，９３５，７７９号及び同第５，９９３，７４０号（ビーズベースのＥＣＬアッセイ）、米国特許第６，１４０，０４５号、同第６，０６６，４４８号、同第６，０９０，５４５号、同第６，２０７，３６９号、及び国際公開第９８／１２５３９号（固定化された結合試薬を使用するＥＣＬアッセイ）、米国特許第６，９７７，７２２号及び同第７，８４２，２４６号（ＥＣＬアッセイのための集積電極を有するマルチウェルプレート）、並びに米国公開第２０１２／０１９０５８９号及びＵＳ２０１２／０１７８０９１（カートリッジベースのＥＣＬアッセイ）に更に記載されており、これらの各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【0005】
ＥＣＬ共反応物質トリプロピルアミン（ＴＰＡ）は、典型的には、ＥＣＬベースのアッセイで使用される。
分子ビーコンは、オリゴヌクレオチドである分子プローブであり、ステム及びループ、クエンチ部位、並びに蛍光部位を含み、これらは、標的配列がない場合、クエンチ部位が蛍光部位に近接しているときに蛍光部位からの蛍光信号を低減するように相互作用する。理想的な条件下で、この分子プローブは、ハイブリダイゼーション時に蛍光を２００倍増加させることができる。しかしながら、このタイプの分子ビーコンは、典型的には、所与の時間にアッセイすることができる単一の分析物（又は上記の場合、標的配列）に限定される。更に、蛍光部位を有するそのような分子ビーコンは、容易には制御されず、光退色のために寿命が限られている。加えて、これらのタイプの分子ビーコンは、複数回のインキュベーションと洗浄のサイクルを必要とするため、アッセイの持続時間が長くなり、したがって、効率が低下する可能性がある。ＥＣＬ標識を有する分子ビーコンプローブの例は、Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．２１：２７１０－２７１１（２００３）及びＳｅｎｓｏｒｓ ＆ Ａｃｔｕａｔｏｒｓ：Ｂ．Ｃｈｅｍｉｃａｌ ３３０：１２９２６１（２０２１）に開示されている。
分子ビーコンは、オリゴヌクレオチドである分子プローブであり、ステム及びループ、クエンチ部位、並びに蛍光部位を含み、これらは、標的配列がない場合、クエンチ部位が蛍光部位に近接しているときに蛍光部位からの蛍光信号を低減するように相互作用する。理想的な条件下で、この分子プローブは、ハイブリダイゼーション時に蛍光を２００倍増加させることができる。しかしながら、このタイプの分子ビーコンは、典型的には、所与の時間にアッセイすることができる単一の分析物（又は上記の場合、標的配列）に限定される。更に、蛍光部位を有するそのような分子ビーコンは、容易には制御されず、光退色のために寿命が限られている。加えて、これらのタイプの分子ビーコンは、複数回のインキュベーションと洗浄のサイクルを必要とするため、アッセイの持続時間が長くなり、したがって、効率が低下する可能性がある。ＥＣＬ標識を有する分子ビーコンプローブの例は、Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．２１：２７１０－２７１１（２００３）及びＳｅｎｓｏｒｓ ＆ Ａｃｔｕａｔｏｒｓ：Ｂ．Ｃｈｅｍｉｃａｌ ３３０：１２９２６１（２０２１）に開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0006】
【特許文献1】米国特許第５，８４６，４８５号明細書
【特許文献2】米国特許第５，２４０，８６３号明細書
【特許文献3】米国特許第５，２３８，８０８号明細書
【特許文献4】米国特許第５，６４１，６２３号明細書
【特許文献5】米国特許第５，０９３，２６８号明細書
【特許文献6】米国特許第５，１４７，８０６号明細書
【特許文献7】米国特許第５，３２４，４５７号明細書
【特許文献8】米国特許第５，５９１，５８１号明細書
【特許文献9】米国特許第５，５９７，９１０号明細書
【特許文献10】米国特許第５，６４１，６２３号明細書
【特許文献11】米国特許第５，６４３，７１３号明細書
【特許文献12】米国特許第５，６７９，５１９号明細書
【特許文献13】米国特許第５，７０５，４０２号明細書
【特許文献14】米国特許第５，８４６，４８５号明細書
【特許文献15】米国特許第５，８６６，４３４号明細書
【特許文献16】米国特許第５，７８６，１４１号明細書
【特許文献17】米国特許第５，７３１，１４７号明細書
【特許文献18】米国特許第６，０６６，４４８号明細書
【特許文献19】米国特許第６，１３６，２６８号明細書
【特許文献20】米国特許第５，７７６，６７２号明細書
【特許文献21】米国特許第５，３０８，７５４号明細書
【特許文献22】米国特許第５，２４０，８６３号明細書
【特許文献23】米国特許第６，２０７，３６９号明細書
【特許文献24】米国特許第５，５８９，１３６号明細書
【特許文献25】米国特許第６，９１９，１７３号明細書
【特許文献26】国際公開第１９９９／６３３４７号
【特許文献27】国際公開第２０００／０３２３３号
【特許文献28】国際公開第１９９９／５８９６２号
【特許文献29】国際公開第１９９９／３２６６２号
【特許文献30】国際公開第１９９９／１４５９９号
【特許文献31】国際公開第１９９８／１２５３９号
【特許文献32】国際公開第１９９７／３６９３１号
【特許文献33】国際公開第１９９８／５７１５４号
【特許文献34】米国特許第５，９３５，７７９号明細書
【特許文献35】米国特許第５，９９３，７４０号明細書
【特許文献36】米国特許第６，１４０，０４５号明細書
【特許文献37】米国特許第６，０９０，５４５号明細書
【特許文献38】国際公開第１９９８／１２５３９号
【特許文献39】米国特許第６，９７７，７２２号明細書
【特許文献40】米国特許第７，８４２，２４６号明細書
【特許文献41】米国特許出願公開第２０１２／０１９０５８９号明細書
【特許文献42】米国特許出願公開第２０１２／０１７８０９１号明細書
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0007】
本開示の実施形態は、電気化学発光（ＥＣＬ）検出方法であって、
ａ）電極を含む基材であって、基材の表面上に固定化された結合試薬を有する、基材を提供することと、
ｂ）基材を組成物と接触させることであって、組成物が、
ｉ）オリゴヌクレオチドを含む結合パートナー及び／又は結合錯体であって、結合試薬が、結合パートナー及び／又は結合錯体を結合する、結合パートナー及び／又は結合錯体と、
ｉｉ）結合パートナー及び／又は結合錯体のオリゴヌクレオチドのオリゴヌクレオチド配列に相補的なオリゴヌクレオチド配列を含む複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブと、
ｉｉｉ）ＴＰＡではないＥＣＬ共反応物質と、を含む、接触させることと、
ｃ）複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブの一部分を、結合パートナー及び／又は結合錯体のオリゴヌクレオチドにハイブリダイズさせることであって、結合パートナー及び／又は結合錯体が、結合試薬によって結合され、複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブの別の一部分は、結合試薬によって結合された結合パートナー及び／又は結合錯体のオリゴヌクレオチドにハイブリダイズされない、ハイブリダイズさせることと、
ｄ）結合パートナー及び／又は結合錯体のオリゴヌクレオチドにハイブリダイズした複数のＥＣＬ標識プローブの一部分を選択的に脱クエンチすることと、
ｅ）電極に電圧を印加して、ＥＣＬを生成することと、
ｆ）ＥＣＬを測定することであって、電圧を印加し、ＥＣＬを測定する前に、結合パートナー及び／又は結合錯体のオリゴヌクレオチドにハイブリダイズしていない複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブの一部分が、組成物から除去されない、測定することと、を含む、方法を含む。
実施形態では、ｂ）基材を組成物と接触させることは、
ｂ’）基材を、結合パートナー及び／又は結合錯体を含む組成物と接触させることと、
ｂ’’）基材を、複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブを含む組成物と接触させることと、
ｂ’’’）基材を、ＥＣＬ共反応物質を含む組成物と接触させることと、を含む。
実施形態では、工程ｂ’）、ｂ’’）及びｂ’’’）の各々は、順次行われる。実施形態では、工程ｂ’）、ｂ’’）及びｂ’’’）のうちの少なくとも２つは、同時に行われる。実施形態では、本方法は、
ｂ’）基材を、結合パートナー及び／若しくは結合錯体を含む第１の組成物と接触させ、結合パートナー及び／若しくは結合錯体を、結合試薬に結合することによって表面上に固定化させることと、
ｂ’’）固定化された結合パートナー及び／若しくは結合錯体を含む基材を、複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブ及びＥＣＬ共反応物質を含む第２の組成物と接触させること、又は
ｂ’）基材を、結合パートナー及び／若しくは結合錯体並びに複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブを含む第１の組成物と接触させることであって、複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブの一部分が、結合パートナー及び／若しくは結合錯体のオリゴヌクレオチドにハイブリダイズされる、接触させることと、結合パートナー及び／若しくは結合錯体を、結合試薬に結合することによって表面上に固定化させることと、
ｂ’’）固定化された結合パートナー及び／若しくは結合錯体を含む基材を、ＥＣＬ共反応物質を含む第２の組成物と接触させること、又は
ｂ’）基材を、結合パートナー及び／若しくは結合錯体を含む第１の組成物と接触させ、結合パートナー及び／若しくは結合錯体を、結合試薬に結合することによって、表面上に固定化させることと、
ｂ’’）固定化された結合パートナー及び／若しくは結合錯体を含む基材を、複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブを含む第２の組成物と接触させ、複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブの一部分を、固定化された結合パートナー及び／若しくは結合錯体のオリゴヌクレオチドにハイブリダイズさせることと、
ｂ’’’）基材を、ＥＣＬ共反応物質を含む第３の組成物と接触させることと、を含む。
実施形態では、基材と結合パートナー及び／若しくは結合錯体との接触の後に基材を洗浄して、結合試薬によって結合されていない結合パートナー及び／若しくは結合錯体を除去することを更に含み、洗浄は、基材を、複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブを含む組成物と接触させる前である。
ａ）電極を含む基材であって、基材の表面上に固定化された結合試薬を有する、基材を提供することと、
ｂ）基材を組成物と接触させることであって、組成物が、
ｉ）オリゴヌクレオチドを含む結合パートナー及び／又は結合錯体であって、結合試薬が、結合パートナー及び／又は結合錯体を結合する、結合パートナー及び／又は結合錯体と、
ｉｉ）結合パートナー及び／又は結合錯体のオリゴヌクレオチドのオリゴヌクレオチド配列に相補的なオリゴヌクレオチド配列を含む複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブと、
ｉｉｉ）ＴＰＡではないＥＣＬ共反応物質と、を含む、接触させることと、
ｃ）複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブの一部分を、結合パートナー及び／又は結合錯体のオリゴヌクレオチドにハイブリダイズさせることであって、結合パートナー及び／又は結合錯体が、結合試薬によって結合され、複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブの別の一部分は、結合試薬によって結合された結合パートナー及び／又は結合錯体のオリゴヌクレオチドにハイブリダイズされない、ハイブリダイズさせることと、
ｄ）結合パートナー及び／又は結合錯体のオリゴヌクレオチドにハイブリダイズした複数のＥＣＬ標識プローブの一部分を選択的に脱クエンチすることと、
ｅ）電極に電圧を印加して、ＥＣＬを生成することと、
ｆ）ＥＣＬを測定することであって、電圧を印加し、ＥＣＬを測定する前に、結合パートナー及び／又は結合錯体のオリゴヌクレオチドにハイブリダイズしていない複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブの一部分が、組成物から除去されない、測定することと、を含む、方法を含む。
実施形態では、ｂ）基材を組成物と接触させることは、
ｂ’）基材を、結合パートナー及び／又は結合錯体を含む組成物と接触させることと、
ｂ’’）基材を、複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブを含む組成物と接触させることと、
ｂ’’’）基材を、ＥＣＬ共反応物質を含む組成物と接触させることと、を含む。
実施形態では、工程ｂ’）、ｂ’’）及びｂ’’’）の各々は、順次行われる。実施形態では、工程ｂ’）、ｂ’’）及びｂ’’’）のうちの少なくとも２つは、同時に行われる。実施形態では、本方法は、
ｂ’）基材を、結合パートナー及び／若しくは結合錯体を含む第１の組成物と接触させ、結合パートナー及び／若しくは結合錯体を、結合試薬に結合することによって表面上に固定化させることと、
ｂ’’）固定化された結合パートナー及び／若しくは結合錯体を含む基材を、複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブ及びＥＣＬ共反応物質を含む第２の組成物と接触させること、又は
ｂ’）基材を、結合パートナー及び／若しくは結合錯体並びに複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブを含む第１の組成物と接触させることであって、複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブの一部分が、結合パートナー及び／若しくは結合錯体のオリゴヌクレオチドにハイブリダイズされる、接触させることと、結合パートナー及び／若しくは結合錯体を、結合試薬に結合することによって表面上に固定化させることと、
ｂ’’）固定化された結合パートナー及び／若しくは結合錯体を含む基材を、ＥＣＬ共反応物質を含む第２の組成物と接触させること、又は
ｂ’）基材を、結合パートナー及び／若しくは結合錯体を含む第１の組成物と接触させ、結合パートナー及び／若しくは結合錯体を、結合試薬に結合することによって、表面上に固定化させることと、
ｂ’’）固定化された結合パートナー及び／若しくは結合錯体を含む基材を、複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブを含む第２の組成物と接触させ、複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブの一部分を、固定化された結合パートナー及び／若しくは結合錯体のオリゴヌクレオチドにハイブリダイズさせることと、
ｂ’’’）基材を、ＥＣＬ共反応物質を含む第３の組成物と接触させることと、を含む。
実施形態では、基材と結合パートナー及び／若しくは結合錯体との接触の後に基材を洗浄して、結合試薬によって結合されていない結合パートナー及び／若しくは結合錯体を除去することを更に含み、洗浄は、基材を、複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブを含む組成物と接触させる前である。
【0008】
本開示の実施形態は、電気化学発光（ＥＣＬ）検出方法であって、
ａ）電極を含む基材であって、基材の表面上に固定化されたオリゴヌクレオチドを含む結合パートナー及び／又は結合錯体を有する、基材を提供することと、
ｂ）基材を組成物と接触させることであって、組成物が、
ｉ）結合パートナー及び／又は結合錯体のオリゴヌクレオチドのオリゴヌクレオチド配列に相補的なオリゴヌクレオチド配列を含む複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブと、
ｉｉ）ＴＰＡではないＥＣＬ共反応物質と、を含む、接触させることと、
ｃ）複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブの一部分を、固定化された結合パートナー及び／又は結合錯体のオリゴヌクレオチドにハイブリダイズさせることであって、複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブの別の一部分が、固定化された結合パートナー及び／又は結合錯体のオリゴヌクレオチドにハイブリダイズされない、ハイブリダイズさせることと、
ｄ）結合パートナー及び／又は結合錯体のオリゴヌクレオチドにハイブリダイズした複数のＥＣＬ標識プローブの一部分を選択的に脱クエンチすることと、
ｅ）電極に電圧を印加して、ＥＣＬを生成することと、
ｆ）ＥＣＬを測定することであって、電圧を印加し、ＥＣＬを測定する前に、結合パートナー及び／又は結合錯体のオリゴヌクレオチドにハイブリダイズしていない複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブの一部分が、組成物から除去されない、測定することと、を含む、方法を含む。
実施形態では、ｂ）基材を組成物と接触させることは、
ｂ’）基材を、複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブを含む組成物と接触させることと、
ｂ’’）基材を、ＥＣＬ共反応物質を含む組成物と接触させることと、を含む。
実施形態では、工程ｂ’）及びｂ’’）の各々は、順次行われる。実施形態では、工程ｂ’）及びｂ’’）の各々は、同時に行われ、必要に応じて、複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブ及びＥＣＬ共反応物質は、単一の組成物中にある。
ａ）電極を含む基材であって、基材の表面上に固定化されたオリゴヌクレオチドを含む結合パートナー及び／又は結合錯体を有する、基材を提供することと、
ｂ）基材を組成物と接触させることであって、組成物が、
ｉ）結合パートナー及び／又は結合錯体のオリゴヌクレオチドのオリゴヌクレオチド配列に相補的なオリゴヌクレオチド配列を含む複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブと、
ｉｉ）ＴＰＡではないＥＣＬ共反応物質と、を含む、接触させることと、
ｃ）複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブの一部分を、固定化された結合パートナー及び／又は結合錯体のオリゴヌクレオチドにハイブリダイズさせることであって、複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブの別の一部分が、固定化された結合パートナー及び／又は結合錯体のオリゴヌクレオチドにハイブリダイズされない、ハイブリダイズさせることと、
ｄ）結合パートナー及び／又は結合錯体のオリゴヌクレオチドにハイブリダイズした複数のＥＣＬ標識プローブの一部分を選択的に脱クエンチすることと、
ｅ）電極に電圧を印加して、ＥＣＬを生成することと、
ｆ）ＥＣＬを測定することであって、電圧を印加し、ＥＣＬを測定する前に、結合パートナー及び／又は結合錯体のオリゴヌクレオチドにハイブリダイズしていない複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブの一部分が、組成物から除去されない、測定することと、を含む、方法を含む。
実施形態では、ｂ）基材を組成物と接触させることは、
ｂ’）基材を、複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブを含む組成物と接触させることと、
ｂ’’）基材を、ＥＣＬ共反応物質を含む組成物と接触させることと、を含む。
実施形態では、工程ｂ’）及びｂ’’）の各々は、順次行われる。実施形態では、工程ｂ’）及びｂ’’）の各々は、同時に行われ、必要に応じて、複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブ及びＥＣＬ共反応物質は、単一の組成物中にある。
【0009】
先行する段落のものを含む、本開示の実施形態は、結合パートナー及び／又は結合錯体が、分析物を含む、実施形態を含む。実施形態では、分析物は、ペプチドを含む。実施形態では、分析物は、オリゴヌクレオチドを含む。実施形態では、分析物は、結合パートナー及び／又は結合錯体のオリゴヌクレオチドである。実施形態では、分析物は、オリゴヌクレオチドで標識される。実施形態では、分析物は、分析物を、オリゴヌクレオチドを含む検出試薬と結合することによってオリゴヌクレオチドで標識される。実施形態では、結合パートナー及び／又は結合錯体のオリゴヌクレオチドは、複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブのオリゴヌクレオチド配列に相補的な配列の複数のコピーを含む。実施形態では、基材を複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブと接触させる前に、増幅反応を実行して、複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブのオリゴヌクレオチド配列に相補的な配列の複数のコピーを生成する。実施形態では、分析物は、分析物を、オリゴヌクレオチドプライマーを含む検出試薬と結合することによってオリゴヌクレオチドで標識され、オリゴヌクレオチドプライマーが、ポリメラーゼによって伸長されて、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブのオリゴヌクレオチド配列に相補的な配列の複数のコピーを含むオリゴヌクレオチドを生成する。実施形態では、増幅反応又はプライマー伸長は、ローリングサークル増幅反応である。実施形態では、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブは、ステムループ又はヘアピン構造、ＥＣＬ標識、及びクエンチ部位を含み、クエンチ部位は、オリゴヌクレオチドプローブがステムループ又はヘアピン構成にあるときにはＥＣＬ標識に近接して、ＥＣＬ標識をクエンチするが、ステムループ又はヘアピン構造が開放構成にあるときにはＥＣＬ標識をクエンチせず、選択的脱クエンチは、複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブの部分を、開放構成の結合パートナー及び／又は結合錯体のオリゴヌクレオチドにハイブリダイズさせることを含む。実施形態では、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブは、ＥＣＬ標識及びクエンチ部位を含み、クエンチ部位は、オリゴヌクレオチドプローブが線形構成（linear confirmation）にあるときにはＥＣＬ標識に近接して、ＥＣＬ標識をクエンチし、選択的脱クエンチは、クエンチ部位を、結合パートナー及び／又は結合錯体のオリゴヌクレオチドにハイブリダイズされた複数のＥＣＬ標識プローブの部分のみから選択的に切断することを含み、その結果、クエンチ部位が溶液中に放出され、クエンチ部位の切断後に、結合パートナー及び／又は結合錯体のオリゴヌクレオチドにハイブリダイズされたままであるハイブリダイズされたＥＣＬ標識プローブのＥＣＬ標識に近接しなくなる。実施形態では、切断は、酵素によって実行される。実施形態では、酵素は、ニッキング制限エンドヌクレアーゼ、ＲＮａｓｅＨ２、及び５’エキソヌクレアーゼ活性を有するポリメラーゼからなる群から選択される。実施形態では、酵素は、結合パートナー及び／又は結合錯体のオリゴヌクレオチドをそのままにして、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブのみを切断する。実施形態では、酵素は、ハイブリダイズされたＥＣＬ標識プローブ内の配列を認識するニッキング制限エンドヌクレアーゼ、又はハイブリダイズされたＥＣＬ標識プローブ内のＲＮＡ塩基を認識するＲＮａｓｅＨ２である。実施形態では、酵素は、５’エキソヌクレアーゼ活性を有するポリメラーゼであり、本方法は、プライマーを、ハイブリダイズされたＥＣＬ標識プローブの５’位において結合パートナー及び／又は結合錯体のオリゴヌクレオチドにハイブリダイズさせることと、５’エキソヌクレアーゼ活性を有するポリメラーゼに、プライマーをハイブリダイズされたＥＣＬ標識プローブまで伸長させることであって、５’エキソヌクレアーゼ活性が、ハイブリダイズされたＥＣＬ標識プローブのクエンチ部位を切断する、伸長させることと、を更に含み、ＥＣＬ標識プローブは、５’エキソヌクレアーゼ活性に耐性のある部分を含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質は、３－（ジ－ｎ－プロピルアミノ）－プロパンスルホン酸、４－（ジ－ｎ－プロピルアミノ）－ブタンスルホン酸、４－［ビス－（２－ヒドロキシエタン）－アミノ］－ブタンスルホン酸、ピペリジン－Ｎ－（３－プロパンスルホン酸）、アゼパン－Ｎ－（３－プロパンスルホン酸）、ピペリジン－Ｎ－（３－プロピオン酸）（ＰＰＡ）、３－モルホリノ－２－ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳＯ）、３－モルホリンプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－Ｎ’－３－プロパンスルホン酸（ＥＰＰＳ）、Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－Ｎ’－３－エタンスルホン酸（ＢＥＳ）、ピペラジン－Ｎ，Ｎ’－ビス（２－エタンスルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）、トリエタノールアミン（ＴＥＡ）、Ｎ－２－ヒドロキシピペラジン－Ｎ－２－エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、ピペラジン－Ｎ，Ｎ’－ビス－４－ブタンスルホン酸、ホモピペリジン－Ｎ－３－プロパンスルホン酸、ピペラジン－Ｎ，Ｎ’－ビス－３－プロパンスルホン酸、ピペリジン－Ｎ－３－プロパンスルホン酸、ピペラジン－Ｎ－２－ヒドロキシエタン－Ｎ’－３－メチルプロパノエート、ピペラジン－Ｎ，Ｎ’－ビス－３－メチルプロパノエート、１，６－ジアミノヘキサン－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸、Ｎ，Ｎ－ビスプロピル－Ｎ－４－アミノブタンスルホン酸、Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－２－アミノエタンスルホン酸（ＴＥＳ）、１，３－ビス［トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミノ］プロパン（ビス－トリスプロパン）、３－ジメチルアミノ－１－プロパノール、３－ジメチルアミノ－２－プロパノール、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラプロピルプロパン－１，３－ジアミン（ＴＰＡ二量体）、ピペラジン－Ｎ，Ｎ’－ビス（２－ヒドロキシプロパン）スルホン酸（ＰＯＰＳＯ）及び２－ヒドロキシ－３－［４－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－１－イル］プロパン－１－スルホン酸（ＨＥＰＰＳＯ）、Ｎ－ブチルジエタノールアミン（ＢＤＥＡ）、２－ジブチルアミノエタノール（ＤＢＡＥ）、ｔｅｒｔ－ブチルジエタノールアミン（ｔＢＤＥＡ）、メチルジエタノールアミン（ＭＤＥＡ）、３－［ビス－（２－ヒドロキシ－エチル）－アミノ］－プロパン－１－スルホン酸（ＤＥＡ－ＰＳ）、並びにそれらの組み合わせからなる群から選択される。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質は、ＴＥＡであるか、又はＴＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、及びそれらの組み合わせからなる群、ＴＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、及びそれらの組み合わせからなる群、若しくはＴＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。実施形態では、クエンチ部位は、ＡＴＴＯ ５４０Ｑ、ＡＴＴＯ ５７５Ｑ、ＡＴＴＯ ５８０Ｑ、ＡＴＴＯ ６１２Ｑ、Ｉｏｗａ Ｂｌａｃｋ ＦＱ、Ｉｏｗａ Ｂａｃｋ ＲＱ、ＱＳＹ ２１、ＩＲＤｙｅ ＱＣ－１、ＢＨＱ０、ＢＨＱ１、ＢＨＱ－２、ＢＨＱ－３、ダブシル、ＱＳＹ ７、ＱＳＹ ９、ＱＳＹ ２１、ＱＳＹ ３５、ＱＸＬ ４９０、ＱＸＬ ５２０、ＱＸＬ ５７０、ＱＸＬ ６７０、フェロセン、鉄ビピリジン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。実施形態では、ＥＣＬ標識は、ルテニウム、オスミウム、イリジウム、レニウム、及び／又はランタニド金属を含む有機金属錯体である。ＥＣＬ標識は、トリス（ビピリジン）ルテニウム又は修飾トリス（ビピリジン）ルテニウムを含む。ＥＣＬ標識は、式ＩＩ：
（ＩＩ）に示される化学構造を含む。実施形態では、共反応物質は、上記及び本明細書における実施形態のうちのいずれか１つの組成物中にある。実施形態では、共反応物質は、番号付き項目１～６９のうちのいずれか１つの組成物中にある。実施形態では、共反応物質は、ＴＥＡを含む。
【化1】
【0010】
以下の図面は、本明細書の一部を形成し、本開示の特定の態様の例示的な実施形態を更に示すために含まれる。
【図面の簡単な説明】
【0011】
【図1A】図１Ａ及び図１Ｂは、実施例１に関連し、ＥＣＬベースのアッセイの一実施形態の結果を示す。２つの界面活性剤のうちの１つと組み合わせたＥＣＬ共反応物質のパネルを、固体表面ＥＣＬアッセイにおいて、ＥＣＬ生成について、並びに表面結合（「ＢＴＩ」）ＥＣＬ標識と遊離（溶液中、「ＦＴ」）ＥＣＬ標識とを区別する能力について試験した。図１Ａは、ＥＣＬ読み取りバッファーのみ（標識を含まない）を使用して、ＢＴＩ、ＦＴ、及びバックグラウンド信号（「Ｄ１００」）で測定されたＥＣＬ信号で示す。図１Ｂは、結合標識からのＥＣＬ信号と遊離標識からのＥＣＬ信号との比（「ＢＴＩ／ＦＴ」）、及び信号対バックグラウンド比（「Ｓ／Ｂ」）を示す。
【図1B】同上。
【図2A】図２Ａ～図２Ｃは、実施例２に関連し、ＥＣＬベースのアッセイの一実施形態の結果を示す。図２Ａは、ＴＥＡの濃度が異なる、ＢＴＩ及びＦＴから生成されたＥＣＬ並びにＢＴＩ／ＦＴ比のプロットを示す。図２Ｂは、ＴＥＡの濃度が異なる、ＢＴＩ、ＦＴ及びバックグラウンド（Ｄ１００）からの測定されたＥＣＬ信号を示す。図２Ｃは、ＰＩＰＥＳ ＥＣＬ読み取りバッファーと比較した、ＢＴＩ／ＦＴ比、Ｓ／Ｂ比、及びＥＣＬ生成パーセントを示す。
【図2B】同上。
【図2C】同上。
【図3A】図３Ａ及び図３Ｂは、実施例３に関連し、ＥＣＬベースのアッセイの一実施形態の結果を示す。図３Ａは、ＰＩＰＥＳ濃度の関数としてのＥＣＬ信号の変化を示す。図３Ｂは、ＰＩＰＥＳ又はＴＥＡ濃度の関数としてのＥＣＬ信号の変化を示す。
【図3B】同上。
【図4A】本明細書に記載され、実施例４に更に記載されるＥＣＬベースのアッセイの実施形態を示す。図４Ａは、表面上に固定化された捕捉抗体（「ｃＡｂ」、結合試薬）を分析物（そのうちの１つは捕捉抗体に特異的に結合される）の混合物と接触させ、次いで表面を洗浄すると、結果として、分析物が表面上で捕捉される、「標準的な」２段階洗浄アッセイを示す。次いで、それぞれがＥＣＬ標識を含有し、かつそのうちの１つが分析物に特異的に結合する検出抗体（「ｄＡｂ」、検出試薬）の混合物を表面に添加し、次に表面を洗浄すると、結果として、ｃＡｂと、分析物と、ｄＡｂと、を含む結合錯体が得られる。次に、ＥＣＬ読み取りバッファーを表面に添加し、生成されたＥＣＬを、ＥＣＬ読み取り機器によって読み取る。
【図4B】本明細書に記載され、実施例４に更に記載されるＥＣＬベースのアッセイの実施形態を示す。図４Ｂは、表面上の捕捉抗体を分析物混合物と接触させ、次いで表面を図４Ａのように洗浄する、「１段階」アッセイを示す。次に、検出抗体混合物を添加し、続いて、ＥＣＬ読み取りバッファーを添加するが、検出抗体混合物とＥＣＬ読み取りバッファーとを添加する間に洗浄は行わない。次に、生成されたＥＣＬを、ＥＣＬ読み取り機器によって読み取る。
【図4C】本明細書に記載され、実施例４に更に記載されるＥＣＬベースのアッセイの実施形態を示す。図４Ｃは、表面上の捕捉抗体を、分析物混合物及び検出抗体混合物と接触させ、続いて、ＥＣＬ読み取りバッファーと接触させるが、いずれの工程間でも洗浄は行わない、「１段階の非洗浄」アッセイを示す。次に、生成されたＥＣＬを、ＥＣＬ読み取り機器によって読み取る。
【図4D】本明細書に記載され、実施例４に更に記載されるＥＣＬベースのアッセイの実施形態を示す。図４Ｄは、表面上の捕捉抗体を分析物混合物と接触させ、表面を洗浄し、検出抗体混合物を添加し、表面を必要に応じて再び洗浄すると、結果として、図４Ａのような結合錯体が得られる、「モックＥＣＬ標識」アッセイを示す。次いで、ＥＣＬ標識を含み、かつ表面上の結合錯体のいずれの成分とも結合しない検出抗体とともに、表面にＥＣＬ読み取りバッファーを添加するが、これは、溶液中の「遊離」ＥＣＬ標識のプロキシとして機能する。次に、生成されたＥＣＬを、ＥＣＬ読み取り機器によって読み取る。
【図4E】本明細書に記載され、実施例４に更に記載されるＥＣＬベースのアッセイの実施形態を示す。図４Ｅは、１つ以上の表面が、複数の結合ドメインを含み、各結合ドメインが、分析物混合物中の分析物に結合することができる捕捉抗体を含む、「標準的な」２段階洗浄アッセイの多重化バージョンを示す。結合ドメインを含む表面（複数可）を、分析物混合物を添加した後に洗浄すると、結果として、結合ドメイン上に複数の分析物が捕捉される。次いで、それぞれがＥＣＬ標識を含有し、かつ分析物混合物中の分析物に結合することができる検出抗体の混合物を表面（複数可）に添加し、次いで表面を洗浄すると、結果として複数の結合錯体が得られ、各結合錯体は、ｃＡｂと、分析物と、ｄＡｂと、を含む。次に、ＥＣＬ読み取りバッファーを表面に添加し、生成されたＥＣＬを、ＥＣＬ機器によって読み取る。
【図4F】本明細書に記載され、実施例４に更に記載されるＥＣＬベースのアッセイの実施形態を示す。図４Ｆは、１つ以上の表面が、複数の結合ドメインを含み、各結合ドメインが、分析物混合物中の分析物に結合することができる捕捉抗体を含む、「１段階」アッセイの多重化バージョンを示す。結合ドメインを含む表面（複数可）を、図４Ｅのように分析物混合物を添加した後に洗浄する。検出抗体混合物を添加して複数の結合錯体を形成し、次に、ＥＣＬ読み取りバッファーを添加するが、検出抗体混合物とＥＣＬ読み取りバッファーとを添加する間に洗浄は行わない。次に、生成されたＥＣＬを、ＥＣＬ読み取り機器によって読み取る。
【図4G】本明細書に記載され、実施例４に更に記載されるＥＣＬベースのアッセイの実施形態を示す。図４Ｇは、１つ以上の表面が、複数の結合ドメインを含み、各結合ドメインが、分析物混合物中の分析物に結合することができる捕捉抗体を含む、「１段階の非洗浄」アッセイの多重化バージョンを示す。結合ドメインを含む表面（複数可）を分析物混合物及び検出抗体混合物と接触させて、複数の結合錯体を形成し、次いで、ＥＣＬ読み取りバッファーを添加するが、いずれの工程の間でも洗浄は行わない。次に、生成されたＥＣＬを、ＥＣＬ読み取り機器によって読み取る。
【図4H】本明細書に記載され、実施例４に更に記載されるＥＣＬベースのアッセイの実施形態を示す。図４Ｈは、１つ以上の表面が、複数の結合ドメインを含み、各結合ドメインが、分析物混合物中の分析物に結合することができる捕捉抗体を含む、「モックＥＣＬ標識」アッセイの多重化バージョンを示す。結合試薬を含む表面（複数可）を分析物混合物と接触させ、表面を洗浄し、検出抗体混合物を添加し、表面を必要に応じて再度洗浄すると、結果として、図４Ｅのように複数の結合錯体が得られる。次いで、ＥＣＬ標識を含み、かつ表面上の結合錯体のいずれの成分とも結合しない検出抗体とともに、表面にＥＣＬ読み取りバッファーを添加するが、これは、溶液中の「遊離」ＥＣＬ標識のプロキシとして機能する。次に、生成されたＥＣＬを、ＥＣＬ読み取り機器によって読み取る。
【図5A】実施例５Ａに関連し、ＥＣＬベースのアッセイの一実施形態の結果を示す。図５Ａは、ＢＤＥＡ、ＰＩＰＥＳ、及びＴＥＡ読み取りバッファーを用いた３つの異なる多重化アッセイ形式（図４Ｅ、４Ｆ、及び４Ｈに示される）からの特異的ＥＣＬ信号及び非特異的結合（ＮＳＢ）の結果を示す。
【図5D】実施例５Ａに関連し、ＥＣＬベースのアッセイの一実施形態の結果を示す。図５Ｄは、全てのＥＣＬ読み取りバッファー及びアッセイ形式にわたる信号対バックグラウンド（Ｓ／Ｂ）及び信号対ノイズ（Ｓ／Ｎ）比の比較を示す。
【図6A】実施例５Ｂに関連し、ＥＣＬベースのアッセイの一実施形態の結果を示す。図６Ａは、ＢＤＥＡ、ＰＩＰＥＳ、及びＴＥＡ読み取りバッファーを用いた３つの異なる多重化アッセイ形式（図４Ｅ、４Ｆ、及び４Ｇに示される）からの特異的ＥＣＬ信号及び非特異的結合（ＮＳＢ）の結果を示す。
【図7A】実施例６に関連し、ＥＣＬベースのアッセイの一実施形態の結果を示す。図７Ａは、１段階の非洗浄ＥＣＬアッセイにおいてＴＥＡ読み取りバッファーを用いて試験した試料マトリックスの一覧を示す。図７Ｂは、１段階の非洗浄ＥＣＬアッセイにおいてＴＥＡ読み取りバッファーを用いて試験される、図７Ａの試料マトリックスに添加される干渉物質の一覧を示す。
【図7B】同上。
【図8A】実施例６に関連し、ＥＣＬベースのアッセイの一実施形態の結果を示す。図８Ａは、希釈剤と混合した異なる試料マトリックスを用いて、結合ＥＣＬ標識（「結合」）及び遊離ＥＣＬ標識（「遊離」）を含むＴＥＡ読み取りバッファーから生成されたＥＣＬ信号の結果を示す。「Ｈ２Ｏ」は、ＴＥＡ読み取りバッファーの前に試料マトリックスの代わりに水を使用した対照からの信号を示す。「遊離」を含むカラムヘッダーは、希釈剤中の６ｎＭの遊離ＥＣＬ標識を示す。図８Ｂは、試料マトリックスを添加しなかったアッセイから生成されたＥＣＬ信号に対して正規化された図８Ａの結果を示す。
【図8B】同上。
【図9A】実施例６に関連し、ＥＣＬベースのアッセイの一実施形態の結果を示す。図９Ａは、異なる試料マトリックス中の異なる干渉物質を含む結合ＥＣＬ標識及び遊離ＥＣＬ標識を含むＴＥＡ読み取りバッファーから生成されたＥＣＬ信号の結果を示す。図９Ｂは、試料マトリックス及び干渉物質を添加しなかったアッセイから生成されたＥＣＬ信号に対して正規化された図９Ａの結果を示す。
【図9B】同上。
【図10A】実施例６に関連し、ＥＣＬベースのアッセイの一実施形態の結果を示す。図１０Ａは、異なる試料マトリックス中の遊離ＥＣＬ標識（「Ｄ３＋ＳＴＡＧ」）を含むＴＥＡ読み取りバッファーから生成されたＥＣＬ信号の結果を示す。「遊離」を含むカラムヘッダーは、希釈剤中の２４０ｎＭの遊離ＥＣＬ標識を示す。図１０Ｂは、試料マトリックスを添加しなかったアッセイから生成されたＥＣＬ信号に対して正規化された図１０Ａの結果を示す。
【図10B】同上。
【図11A】実施例６に関連し、ＥＣＬベースのアッセイの一実施形態の結果を示す。図１１Ａは、異なる試料マトリックス中の異なる干渉物質を含む２４０ｎＭの遊離ＥＣＬを含むＴＥＡ読み取りバッファーから生成されたＥＣＬ信号の結果を示す。図１１Ｂは、試料マトリックス及び干渉物質を添加しなかったアッセイから生成されたＥＣＬ信号に対して正規化された図１１Ａの結果を示す。
【図11B】同上。
【図12】実施例７に関連し、ＥＣＬベースのアッセイの一実施形態の結果を示す。実施例１に記載されるＥＣＬ共反応物質の組み合わせを、ＥＣＬベースのアッセイにおいて試験した。図１２のチャートの右上側は、ＢＴＩから生成されたＥＣＬ信号を示し、図１２のチャートの左下側は、混合ＥＣＬ共反応物質のＥＣＬ信号と、個々のＥＣＬ共反応物質によって生成された信号の合計との比を示す。
【図13A】実施例８に関連し、ＥＣＬベースのアッセイの一実施形態の結果を示す。実施例１に記載されるＥＣＬ共反応物質を、ＴＲＩＴＯＮ（登録商標）Ｘ－１００の存在に対する感受性について試験した。図１３Ａは、ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００（ＴＸ１００）及びＰＥＧ（１８）トリデシルエーテル（ＰＥＧ１８ＴＤＥ）中の各ＥＣＬ反応物質のＢＴＩ及びＦＴからのＥＣＬ信号を示す。
【図13B】実施例８に関連し、ＥＣＬベースのアッセイの一実施形態の結果を示す。実施例１に記載されるＥＣＬ共反応物質を、ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００の存在に対する感受性について試験した。図１３Ｂは、ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００対ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテル中で生成されたＥＣＬの比を示す。
【図14】ＥＣＬ標識分子ビーコンオリゴヌクレオチドプローブ及び共反応物質（共反応物質は図示せず）を利用した、標的オリゴヌクレオチド分析物（複数可）を検出するための方法の一実施形態の図である。
【図15】実施例１０～１２に記載されているように、ＥＣＬ標識分子ビーコンオリゴヌクレオチドプローブ及びＴＥＡ共反応物質（共反応物質は図示せず）を利用した、標的オリゴヌクレオチド分析物（複数可）を検出するための方法の一実施形態の図である。
【図16】実施例９で調製され、実施例１０～１２に記載される実験で使用される、ＥＣＬ標識分子ビーコンプローブの実施形態の図である。
【図17A】実施例９のＥＣＬ標識分子ビーコンプローブを使用した、実施例１０に記載の非洗浄実験の一実施形態の結果のグラフ表示である。図１７Ａは、ＴＰＡを含有する読み取りバッファーを使用した、溶液中に遊離している標的オリゴヌクレオチドの濃度が高くなっていく場合のＥＣＬ信号を示す。
【図17B】実施例９のＥＣＬ標識分子ビーコンプローブを使用した、実施例１０に記載の非洗浄実験の一実施形態の結果のグラフ表示である。図１７Ｂは、ＴＰＡを含有する読み取りバッファーを使用した、基材の表面上に固定化された標的オリゴヌクレオチドの濃度が高くなっていく場合のＥＣＬ信号を示す。
【図17C】実施例９のＥＣＬ標識分子ビーコンプローブを使用した、実施例１０に記載の非洗浄実験の一実施形態の結果のグラフ表示である。図１７Ｃは、ＴＥＡを含有する読み取りバッファーを使用した、溶液中に遊離している標的オリゴヌクレオチドの濃度が高くなっていく場合のＥＣＬ信号を示す。
【図17D】実施例９のＥＣＬ標識分子ビーコンプローブを使用した、実施例１０に記載の非洗浄実験の一実施形態の結果のグラフ表示である。図１７Ｄは、ＴＥＡを含有する読み取りバッファーを使用した、基材の表面上に固定化された標的オリゴヌクレオチドの濃度が高くなっていく場合のＥＣＬ信号を示す。
【図18A】実施例９のＥＣＬ標識分子ビーコンプローブを使用した、実施例１１に記載される非洗浄の広濃度範囲実験の結果を報告する。図１８Ａは、ＴＥＡを含有する読み取りバッファーを使用した、基材の表面上に固定化された標的オリゴヌクレオチドの濃度が高くなっていく場合のＥＣＬ信号を示す。
【図18B】実施例９のＥＣＬ標識分子ビーコンプローブを使用した、実施例１１に記載される非洗浄の広濃度範囲実験の結果を報告する。図１８Ｂは、標的オリゴヌクレオチドの濃度が低くなっていく各ＭＢプローブについての、図１８Ａに示されるＥＣＬ信号強度を列挙するチャートである。
【図19A】実施例９のＥＣＬ標識分子ビーコンプローブを使用した、実施例１２に記載の２段階非洗浄実験の一実施形態の結果を報告する。図１９Ａは、ＴＥＡを含有する読み取りバッファーを使用した、基材の表面上に固定化された標的オリゴヌクレオチドの濃度が増加している状態でのＥＣＬ信号を示す。
【図19B】実施例９のＥＣＬ標識分子ビーコンプローブを使用した、実施例１２に記載の２段階非洗浄実験の一実施形態の結果を報告する。図１９Ｂは、標的オリゴヌクレオチドの濃度が減少している各ＭＢプローブについて、図１８Ａに示されるＥＣＬ信号強度を列挙するチャートである。
【図20】オリゴヌクレオチドプライマーで間接的に標識されたペプチド分析物を検出するための方法の一実施形態の図であり、本方法は、プライマーに由来する伸長配列に結合するＥＣＬ標識分子ビーコンオリゴヌクレオチドプローブを利用する。ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブの添加後に洗浄工程は実行されない。この実施形態では、ストレプトアビジンが、結合試薬であり、ビオチン化捕捉抗体、ペプチド分析物、及び伸長オリゴヌクレオチドプライマーを含む第２の抗体が、一緒に結合錯体を形成する。
【図21】ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブを利用して標的オリゴヌクレオチド分析物（複数可）を検出するための方法であって、クエンチ部位が、酵素、例えばニッキングエンドヌクレアーゼによって、ハイブリダイズされたプローブから選択的に切断され、ＥＣＬ標識プローブの残りの部分が標的オリゴヌクレオチドにハイブリダイズされたままでプローブのＥＣＬ標識を脱クエンチする、方法の一実施形態の図である。
【発明を実施するための形態】
【0012】
本開示のＥＣＬ共反応物質は、異なるアッセイ形式にわたって一貫したＥＣＬ生成を提供する。例えば、トリエタノールアミン（ＴＥＡ）を含む本明細書の組成物は、洗浄工程を必要としないＥＣＬベースのアッセイにおいて有用であることが見出された。固体表面上で実施される多くのＥＣＬベースのアッセイは、表面上のＥＣＬ標識を検出する前に、未結合ＥＣＬ標識を除去するための少なくとも１つの洗浄工程を含む（すなわち、「洗浄」アッセイ）。検出方法が、表面に結合したＥＣＬ標識（例えば、検出される結合錯体の一部として）又は溶液中の非結合「遊離」ＥＣＬ標識を効果的に識別できる場合、洗浄工程を排除してもよい。洗浄工程が排除された「非洗浄」アッセイ形式は、多くの状況で洗浄工程を実行するのが困難又は煩雑である可能性があるため、しばしば有利である。しかしながら、非洗浄アッセイ形式は、典型的には、反応混合物中に存在する遊離ＥＣＬ標識と結合ＥＣＬ標識との不完全な識別からの高いバックグラウンドＥＣＬ信号に起因して、開発するのが困難である。
【0013】
固体表面上で実施されるＥＣＬベースのアッセイにおいて、トリエタノールアミン（ＴＥＡ）は、驚くべきことに、溶液中の非結合（「遊離」）ＥＣＬ標識と、表面結合ＥＣＬ標識とを高い程度で区別することが発見された。ＴＥＡを含む本明細書に記載の組成物は、トリプロピルアミン（ＴＰＡ）などの従来の共反応物質を含む従来の組成物と比べて、遊離標識からのＥＣＬ信号に対する結合標識からのＥＣＬ信号の比を増加させる。したがって、本明細書の組成物は、特に低親和性相互作用を測定する場合に、改善されたアッセイ性能を提供し、これは、反応における高濃度のＥＣＬ標識の存在を必要とするが、洗浄工程中の結合錯体の解離に起因する著しい信号損失を受けることも予期される。
【0014】
例えば、ＴＥＡ、ｔｅｒｔ－ブチルジエタノールアミン（ｔＢＤＥＡ）、メチルジエタノールアミン（ＭＤＥＡ）、及び／又は３－［ビス－（２－ヒドロキシ－エチル）－アミノ］－プロパン－１－スルホン酸（ＤＥＡ－ＰＳ）を含む、本明細書の組成物から生成されるＥＣＬ信号は、界面活性剤の有無に基づいて、又は界面活性剤の同一性に基づいて異なる組成物間の性能の一貫性の向上などの更なる利点を提供する。特に、組成物は、界面活性剤を含有しない場合、脂質二重層膜を破壊しない穏やかな界面活性剤（ポリエチレングリコール（１８）トリデシルエーテルなど）を含有する場合、又はより厳格な界面活性剤（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００など）を含有する場合、同様に機能する。したがって、厳格な界面活性剤（例えば、全細胞又は細胞外小胞などの特定の目的分析物の一部である脂質二重層膜を破壊する、ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）は、最適なＥＣＬ生成のためにＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００を通常必要とする典型的なＥＣＬ共反応物質であるトリプロピルアミン（ＴＰＡ）とは対照的な本明細書に記載のＥＣＬ共反応物質を含む組成物には必要ない。したがって、本明細書の組成物は、厳格な界面活性剤に対して感受性のある分析物を検出するためのアッセイにおいて有用である。更に、ＥＣＬ共反応物質ＥＣＬ信号は、異なる界面活性剤の存在によってさほどの影響を受けず、したがって、これらのＥＣＬ共反応物質は、多用途であり、それらのＥＣＬ生成能力を維持しながら、異なる製剤に容易に組み込むことができる。
【0015】
したがって、例えば、ＴＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、及び／又はＤＥＡ－ＰＳを含む本明細書の組成物は、有利に、実行可能なＥＣＬベースのアッセイの種類を拡大する。
【0016】
本明細書における別段の定義がない限り、本開示で使用される科学用語及び技術用語は、当業者によって一般的に理解されている意味を有するものとする。更に、文脈によって別段の必要がない限り、単数形の用語は複数形を含み、複数形の用語は単数形を含むものとする。冠詞「ａ」及び「ａｎ」は、１つ又は２つ以上（すなわち、少なくとも１つ）の、冠詞の文法上の目的語を指すために本明細書で使用される。例として、「要素（ａｎ ｅｌｅｍｅｎｔ）」は、１つの要素又は２つ以上の要素を意味する。
【0017】
特許請求の範囲における「又は（ｏｒ）」という用語の使用は、代替物のみを指すことが明示的に示されない限り、「及び／又は（ａｎｄ／ｏｒ）」を意味するために使用されるか、又は代替物は互いに排他的であるが、本開示は、代替物及び「及び／又は」のみを指す定義を支持する。
【0018】
本明細書で使用される場合、「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」（並びに「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」及び「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」などの、「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」の任意の変形若しくは形態）、「有すること（ｈａｖｉｎｇ）」（並びに「有する（ｈａｖｅ）」及び「有する（ｈａｓ）」などの、「有すること（ｈａｖｉｎｇ）」の任意の変形若しくは形態）、「含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」（並びに「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」及び「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」などの、「含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」の任意の変形若しくは形態）、又は「含有すること（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」（並びに「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｓ）」及び「含有する（ｃｏｎｔａｉｎ）」などの、「含有すること（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」の任意の変形若しくは形態）という用語は、包括的であるか又はオープンエンドであり、追加の記載されていない要素又は方法工程を除外しない。
【0019】
用語「例えば（ｆｏｒ ｅｘａｍｐｌｅ）」及びその対応する略語「ｅ．ｇ．」（イタリック体であるか否かにかかわらず）の使用は、記載される特定の用語が、明示的に別段の定めがない限り、参照又は引用される特定の実施例に限定されることを意図されない本開示の代表的な実施例及び実施形態であることを意味する。
【0020】
本明細書で使用される場合、「間（ｂｅｔｗｅｅｎ）」は、範囲の両端を含む範囲である。例えば、ｘとｙの間の数は、数ｘとｙ、及びｘとｙに含まれる任意の数（分数と整数を含む）を明示的に含む。更に、本明細書における「５～１０」の範囲への言及は、５、６、７、８、９、及び１０の整数、並びに５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９などの分数を含む。任意の数値範囲への言及は、その範囲が包含する各数値（分数及び整数を含む）を明示的に含む。例示すると、「少なくとも５０」又は「少なくとも約５０」の範囲は、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０などの整数、及び５０．１、５０．２、５０．３、５０．４、５０．５、５０．６、５０．７、５０．８、５０．９などの分数を含む。更なる例示では、本明細書における「５０未満」又は「約５０未満」の範囲への言及は、４９、４８、４７、４６、４５、４４、４３、４２、４１、４０などの整数、及び４９．９、４９．８、４９．７、４９．６、４９．５、４９．４、４９．３、４９．２、４９．１、４９．０などの分数を含む。
【0021】
本明細書で使用される場合、「実質的に」又は「実質的な」という用語は、作用、特徴、特性、状態、構造、項目、又は結果が完全に又はほぼ完全に欠如していることを指す否定的な意味で使用される場合に適用可能である。例えば、「実質的に」平坦な表面は、完全に平坦であるか、又は完全に平坦であるのと同じ効果を持つほぼ平坦であるかのいずれかであろう。更なる実施例では、特定の成分を「実質的に含まない」組成物は、その成分をいかなる量でも有しないか、又はその成分が存在しない場合と同じ効果を持つ程低い量でその成分が組成物中に存在する。
【0022】
実施形態では、本開示は、（ａ）トリエタノールアミン（ＴＥＡ）と、（ｂ）イオン成分と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、当該組成物が、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない、組成物を提供する。
【0023】
実施形態では、本開示は、（ａ）トリエタノールアミン（ＴＥＡ）と、（ｂ）イオン成分と、（ｃ）ＥＣＬ標識成分と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、当該組成物が、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない、組成物を提供する。
【0024】
実施形態では、本開示は、（ａ）約１０００ｍＭ～約６５００ｍＭのトリエタノールアミン（ＴＥＡ）と、（ｂ）約５００ｍＭ～約２０００ｍＭのイオン成分と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有する、方法を提供する。
【0025】
実施形態では、本開示は、（ａ）トリエタノールアミン（ＴＥＡ）と、（ｂ）イオン成分と、（ｃ）アルキルエーテルポリエチレングリコール（ＰＥＧ）と、からなる組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有する、組成物を提供する。
【0026】
実施形態では、本開示は、（ａ）ＴＥＡと、（ｂ）イオン成分と、（ｃ）必要に応じて、ＥＣＬ標識成分及び界面活性剤の一方又は両方と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、必要に応じて、当該組成物が、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない、組成物を提供する。
【0027】
実施形態では、本開示は、（ａ）Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチルジエタノールアミン（ｔＢＤＥＡ）、メチルジエタノールアミン（ＭＤＥＡ）、３－［ビス－（２－ヒドロキシ－エチル）－アミノ］－プロパン－１－スルホン酸（ＤＥＡ－ＰＳ）、及びそれらの組み合わせから選択される電気化学発光（ＥＣＬ）共反応物質と、（ｂ）イオン成分と、（ｃ）界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有する、組成物を提供する。
【0028】
実施形態では、本開示は、記載された量の記載された成分からなるか、又は本質的にそれらからなる組成物を提供する。記載された成分から本質的になる組成物において、かかる組成物は、組成物のＥＣＬ生成特性に実質的に（ｍａｔｅｒｉａｌｌｙ）影響を及ぼす構成成分を特に除外する。組成物のＥＣＬ生成特性は、当業者に既知の方法によって決定できる。例えば、組成物を、電極上の既知の量のＥＣＬ標識と接触させることができ、電圧を電極に印加し、それにより、ＥＣＬを生成する。実施形態では、「実質的に（ｍａｔｅｒｉａｌｌｙ）影響を受けない」ＥＣＬ生成特性とは、記載された成分「から本質的になる」組成物が、記載された成分「からなる」組成物として約８０％、約９０％、約９５％、約９８％、約９９％、約１００％、約１０１％、約１０２％、約１０５％、約１１０％、又は約１２０％のＥＣＬを生成することを意味する。実施形態では、記載された成分から本質的になる組成物は、追加のＥＣＬ生成化合物、例えば、追加のＥＣＬ共反応物質を特異的に除外する。
【0029】
実施形態では、本開示は、（ａ）トリエタノールアミン（ＴＥＡ）と、（ｂ）イオン成分と、（ｃ）界面活性剤と、からなる組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、当該組成物が、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、（ａ）トリエタノールアミン（ＴＥＡ）と、（ｂ）イオン成分と、（ｃ）界面活性剤と、からなる組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、当該組成物が、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない、組成物を提供する。
【0030】
実施形態では、本開示は、（ａ）トリエタノールアミン（ＴＥＡ）と、（ｂ）イオン成分と、（ｃ）界面活性剤と、（ｄ）ＥＣＬ標識成分と、から本質的になる組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、当該組成物が、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、（ａ）トリエタノールアミン（ＴＥＡ）と、（ｂ）イオン成分と、（ｃ）界面活性剤と、（ｄ）ＥＣＬ標識成分と、からなる組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有する、組成物を提供する。
【0031】
実施形態では、本開示は、（ａ）約１０００ｍＭ～約６５００ｍＭのトリエタノールアミン（ＴＥＡ）と、（ｂ）約５００ｍＭ～約２０００ｍＭのイオン成分と、（ｃ）界面活性剤と、からなる組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、（ａ）約１０００ｍＭ～約６５００ｍＭのトリエタノールアミン（ＴＥＡ）と、（ｂ）約５００ｍＭ～約２０００ｍＭのイオン成分と、（ｃ）界面活性剤と、からなる組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有する、組成物を提供する。
【0032】
実施形態では、本開示は、（ａ）約１０００ｍＭ～約６５００ｍＭのトリエタノールアミン（ＴＥＡ）と、（ｂ）約５００ｍＭ～約２０００ｍＭのイオン成分と、（ｃ）界面活性剤と、（ｄ）ＥＣＬ標識成分と、からなる組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、（ａ）約１０００ｍＭ～約６５００ｍＭのトリエタノールアミン（ＴＥＡ）と、（ｂ）約５００ｍＭ～約２０００ｍＭのイオン成分と、（ｃ）界面活性剤と、（ｄ）ＥＣＬ標識成分と、からなる組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有する、組成物を提供する。
【0033】
実施形態では、本開示は、（ａ）トリエタノールアミン（ＴＥＡ）と、（ｂ）イオン成分と、（ｃ）アルキルエーテルポリエチレングリコール（ＰＥＧ）と、からなる組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、（ａ）トリエタノールアミン（ＴＥＡ）と、（ｂ）イオン成分と、（ｃ）アルキルエーテルポリエチレングリコール（ＰＥＧ）と、からなる組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有する、組成物を提供する。
【0034】
実施形態では、本開示は、（ａ）トリエタノールアミン（ＴＥＡ）と、（ｂ）イオン成分と、（ｃ）アルキルエーテル－ＰＥＧと、（ｄ）ＥＣＬ標識成分と、からなる組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、（ａ）トリエタノールアミン（ＴＥＡ）と、（ｂ）イオン成分と、（ｃ）アルキルエーテル－ＰＥＧと、（ｄ）ＥＣＬ標識成分と、からなる組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有する、組成物を提供する。
【0035】
実施形態では、本開示は、（ａ）Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチルジエタノールアミン（ｔＢＤＥＡ）、メチルジエタノールアミン（ＭＤＥＡ）、３－［ビス－（２－ヒドロキシ－エチル）－アミノ］－プロパン－１－スルホン酸（ＤＥＡ－ＰＳ）、及びそれらの組み合わせから選択される電気化学発光（ＥＣＬ）共反応物質と、（ｂ）イオン成分と、（ｃ）界面活性剤と、（ｄ）ｐＨ干渉成分と、からなる組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、（ａ）Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチルジエタノールアミン（ｔＢＤＥＡ）、メチルジエタノールアミン（ＭＤＥＡ）、３－［ビス－（２－ヒドロキシ－エチル）－アミノ］－プロパン－１－スルホン酸（ＤＥＡ－ＰＳ）、及びそれらの組み合わせから選択される電気化学発光（ＥＣＬ）共反応物質と、（ｂ）イオン成分と、（ｃ）界面活性剤と、（ｄ）ｐＨ干渉成分と、からなる組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有する、組成物を提供する。
【0036】
実施形態では、本開示は、（ａ）ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、及びそれらの組み合わせから選択されるＥＣＬ共反応物質と、（ｂ）イオン成分と、（ｃ）界面活性剤と、（ｄ）ｐＨ緩衝成分と、（ｅ）ＥＣＬ標識成分と、からなる組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、（ａ）ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、及びそれらの組み合わせから選択されるＥＣＬ共反応物質と、（ｂ）イオン成分と、（ｃ）界面活性剤と、（ｄ）ｐＨ緩衝成分と、（ｅ）ＥＣＬ標識成分と、からなる組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有する、組成物を提供する。
【0037】
本明細書で考察されるように、本明細書におけるＥＣＬ共反応物質は、有利には、異なるアッセイ形式（例えば、洗浄及び非洗浄アッセイ）にわたって、異なるクラスの界面活性剤（例えば、脂質二重層膜を破壊しない穏やかな界面活性剤、並びに脂質二重層膜を破壊し得るより厳格な界面活性剤）と組み合わせて、一貫したＥＣＬ生成を提供する。したがって、本明細書におけるＥＣＬ共反応物質（「ＥＣＬ読み取りバッファー」とも称される）を含む組成物は、広範なＥＣＬベースの結合アッセイにおいて有用である。
【0038】
実施形態では、ＥＣＬ共反応物質は、三級アミンを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質は、三級アルキルアミンを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質は、三級ヒドロキシアルキルアミンを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質は、両性イオン性三級アミンを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質は、二級アミンを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質は、トリブチルアミン（ＴＢＡ）、（ジブチル）アミノエタノール（ＤＢＡＥ）、（ジエチル）アミノエタノール（ＤＥＡＥ）、トリエタノールアミン（ＴＥＡ）、ブチルジエタノールアミン（ＢＤＥＡ）、プロピルジエタノールアミン（ＰＤＥＡ）、エチルジエタノールアミン（ＥＤＥＡ）、メチルジエタノールアミン（ＭＤＥＡ）、ｔｅｒｔ－ブチルジエタノールアミン（ｔＢＤＥＡ）、ジブチルアミン（ＤＢＡ）、ブチルエタノールアミン（ＢＥＡ）、ジエタノールアミン（ＤＥＡ）、ジブチルアミンプロピルスルホン酸塩（ＤＢＡ－ＰＳ）、ジブチルアミンブチルスルホン酸塩（ＤＢＡ－ＢＳ）、ブチルエタノールアミンプロピルスルホン酸塩（ＢＥＡ－ＰＳ）、ブチルエタノールアミンブチルスルホン酸塩（ＢＥＡ－ＢＳ）、ジエタノールアミンプロピルスルホン酸塩（別名３－［ビス－（２－ヒドロキシ－エチル）－アミノ］－プロパン－１－スルホン酸、ＤＥＡ－ＰＳ）、又はジエタノールアミンブチルスルホン酸塩（ＤＥＡ－ＢＳ）である。本明細書に記載される例示的なＥＣＬ共反応物質の構造を以下に示す。
【化2】
【0039】
トリエタノールアミンＥＣＬ共反応物質
本開示は、ＥＣＬ共反応物質を含む組成物を提供する。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質は、トリエタノールアミン（ＴＥＡ）である。本明細書で考察されるように、ＴＥＡは、非洗浄結合アッセイにおいて有利なＥＣＬ生成特性を提供することが見出された。目的の種（例えば、本明細書に記載の分析物又は結合錯体）が固体表面上で捕捉され、検出されるアッセイでは、ＴＥＡは、検出される種の一部ではない「遊離」ＥＣＬ標識（例えば、分析物又は結合錯体）と、表面に結合した種の一部である「結合」ＥＣＬ標識（例えば、分析物又は結合錯体）とを区別することができる。ＴＥＡをＥＣＬ共反応物質として利用する非洗浄結合アッセイは、ＥＣＬ標識からの、検出される種に対して非特異的なＥＣＬを減少させ、それにより、バックグラウンドＥＣＬを減少させ、アッセイの信号対バックグラウンド比を増加させる。実施形態では、ＴＥＡをＥＣＬ共反応物質として使用する非洗浄アッセイは、ＥＣＬ共反応物質としてトリプロピルアミン（ＴＰＡ）又はピペラジン－Ｎ，Ｎ’－ビス（２－エタンスルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）を使用するアッセイと比較して、２倍高い、３倍高い、４倍高い、５倍高い、又は１０倍高い信号対バックグラウンド比を有する。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質としてＴＥＡを使用する非洗浄アッセイは、ＥＣＬ共反応物質としてＴＰＡ又はＰＩＰＥＳを使用するアッセイと比較して、２倍低い、３倍低い、４倍低い、５倍低い、１０倍低い、２０倍低い、又は４０倍低い検出限界を有する。
本開示は、ＥＣＬ共反応物質を含む組成物を提供する。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質は、トリエタノールアミン（ＴＥＡ）である。本明細書で考察されるように、ＴＥＡは、非洗浄結合アッセイにおいて有利なＥＣＬ生成特性を提供することが見出された。目的の種（例えば、本明細書に記載の分析物又は結合錯体）が固体表面上で捕捉され、検出されるアッセイでは、ＴＥＡは、検出される種の一部ではない「遊離」ＥＣＬ標識（例えば、分析物又は結合錯体）と、表面に結合した種の一部である「結合」ＥＣＬ標識（例えば、分析物又は結合錯体）とを区別することができる。ＴＥＡをＥＣＬ共反応物質として利用する非洗浄結合アッセイは、ＥＣＬ標識からの、検出される種に対して非特異的なＥＣＬを減少させ、それにより、バックグラウンドＥＣＬを減少させ、アッセイの信号対バックグラウンド比を増加させる。実施形態では、ＴＥＡをＥＣＬ共反応物質として使用する非洗浄アッセイは、ＥＣＬ共反応物質としてトリプロピルアミン（ＴＰＡ）又はピペラジン－Ｎ，Ｎ’－ビス（２－エタンスルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）を使用するアッセイと比較して、２倍高い、３倍高い、４倍高い、５倍高い、又は１０倍高い信号対バックグラウンド比を有する。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質としてＴＥＡを使用する非洗浄アッセイは、ＥＣＬ共反応物質としてＴＰＡ又はＰＩＰＥＳを使用するアッセイと比較して、２倍低い、３倍低い、４倍低い、５倍低い、１０倍低い、２０倍低い、又は４０倍低い検出限界を有する。
【0040】
ＥＣＬ共反応物質としてのＴＥＡの更なる利点は、ＴＥＡが試料マトリックス及び／又は干渉物質に対して感受性でないことである。これは、反応混合物が、例えば、アセトアミノフェン、イブプロフェン、ナプロキセン、サリチル酸、及び／又はトルブタミンなどの代謝産物及び／若しくは薬物干渉物質も含有する可能性がある、ヒト又は動物源（例えば、タンパク質、細胞成分及びデブリ、培地などを含有する）由来のマトリックスを含有し得る、非洗浄アッセイとの関連において特に有益である。実施形態では、ＴＥＡは、試料マトリックス及び／又は干渉物質を含まない反応混合物と同様に、１つ以上の試料マトリックス及び／又は１つ以上の干渉物質を含む反応混合物中で実質的に同じＥＣＬ信号を生成する。
【0041】
ＴＥＡは、界面活性剤の不在下で使用する場合、又は異なる種類の界面活性剤、例えば、本明細書に記載の厳格な界面活性剤及び穏やかな界面活性剤と組み合わせた場合に、一貫したＥＣＬ信号を生成するという利点を提供することが更に発見された。本明細書で使用される場合、「厳格な」界面活性剤は、脂質二重層膜（例えば、細胞若しくは細胞外小胞（ＥＶ）の膜）を破壊、溶解（ｌｙｓｉｎｇ）及び／又は溶解（ｄｉｓｓｏｌｖｉｎｇ）することができる。対照的に、「穏やかな」界面活性剤は、脂質二重層膜を破壊、溶解（ｌｙｓｅ）又は溶解（ｄｉｓｓｏｌｖｅ）しない。実施形態では、ＴＥＡ及び厳格な界面活性剤を含む組成物は、同じＥＣＬ生成条件（例えば、電圧波形、電極の種類、組成物の量、ＥＣＬ標識の量など）に供されるとき、厳格な界面活性剤の代わりに穏やかな界面活性剤が存在することを除いて、同一の成分を含む組成物として実質的に同様のＥＣＬ信号を生成する。実施形態では、厳格な界面活性剤は、ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００、ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１１４、ＮＰ－４０、ＩＧＥＰＡＬ（登録商標）ＣＡ－６３０、３－［（３－コールアミドプロピル）ジメチルアンモニオ］－１－プロパンスルホン酸塩（ＣＨＡＰＳ）、又はドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）である。実施形態では、穏やかな界面活性剤は、ＢＲＩＪ（登録商標）、ＴＷＥＥＮ（登録商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）、若しくはＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）界面活性剤、又はＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルなどのアルキルエーテル－ＰＥＧ界面活性剤である。
【0042】
ＴＥＡは、約７．７のｐＫａを有し、生物学的アッセイの典型的な所望のｐＨ範囲である約７．０～約８．０の範囲内に組成物のｐＨを維持することが可能である。更に、ｐＨが約７．０～約８．０であるＴＥＡ組成物は、本明細書に記載の非結合ＥＣＬ標識と比較して、電極結合ＥＣＬ標識から優先的に生成されるＥＣＬ信号を有する。したがって、ＴＥＡを含む本明細書の組成物は、生物学的アッセイとのｐＨ適合性という追加の利点を有し、追加のｐＨ緩衝成分を必要とせず、それにより、組成物の産生プロセスを簡素化し、コストを低減する。実施形態では、ＴＥＡを含む組成物は、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない。溶液を特定のｐＨ範囲内に維持するためにｐＨ緩衝成分として作用することができる材料は、当業者に既知である。例えば、約７．０～約８．０のｐＨを維持することができるバッファーとしては、ピペラジンＮ，Ｎ’－ビス（２－エタンスルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）、塩化コラミン、３－（Ｎ－モルホリノ）プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、Ｎ－［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］－２－アミノエタンスルホン酸（ＴＥＳ）、３－（Ｎ，Ｎ－ビス［２－ヒドロキシエチル］アミノ）－２－ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＤＩＰＳＯ）、４－（Ｎ－モルホリノ）ブタンスルホン酸（ＭＯＢＳ）、アセトアミドグリシン、Ｎ－［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］－３－アミノ－２－ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳＯ）、ピペラジン－１，４－ビス（２－ヒドロキシプロパンスルホン酸）二水和物（ＰＯＰＳＯ）、Ｎ－（ヒドロキシエチル）ピペラジン－Ｎ’－２－ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＨＥＰＰＳＯ）、３－［４－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－１－イル］プロパン－１－スルホン酸（ＨＥＰＰＳ）、トリシン、グリシンアミド、Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－Ｎ’－（４－ブタンスルホン酸）（ＨＥＰＢＳ）、及びビシンが挙げられるが、これらに限定されない。ｐＨ緩衝成分の更なる非限定的な例としては、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（「Ｔｒｉｓ」）、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン（「ＧｌｙＧｌｙ」）、ホウ酸塩、酢酸塩、及びクエン酸塩が挙げられる。実施形態では、ＴＥＡを含む組成物は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、及びクエン酸塩のいずれも含まない。実施形態では、ＴＥＡを含む組成物は、約７．０～約８．０のｐＫａを有する追加の成分を実質的に含まない。
【0043】
更に、多くの一般的なｐＨ緩衝成分は、それらの構造に三級アミンを有し、ＥＣＬを生成することができる。ＥＣＬ共反応物質として作用することができる例示的なｐＨ緩衝成分は、ＵＳ６，９１９，１７３に提供され、ＨＥＰＥＳ、ＰＯＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、及びＰＩＰＥＳを含むが、これらに限定されない。実施形態では、ＴＥＡを含む組成物は、追加のＥＣＬ共反応物質を実質的に含まない。実施形態では、ＴＥＡを含む組成物は、ＨＥＰＥＳ、ＰＯＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、及びＰＩＰＥＳのいずれも含まない。実施形態では、ＴＥＡを含む組成物は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、ＰＯＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、及びＰＩＰＥＳのいずれも含まない。
【0044】
実施形態では、組成物中のＴＥＡの濃度は、約５００ｍＭ～約７０００ｍＭ、約８００ｍＭ～約６８００ｍＭ、約１０００ｍＭ～約６５００ｍＭ、約１０００ｍＭ～約６４００ｍＭ、約１０００ｍＭ～約６０００ｍＭ、約１０００ｍＭ～約５５００ｍＭ、約１１００ｍＭ～約５０００ｍＭ、約１１００ｍＭ～約４８００ｍＭ、約１１００ｍＭ～約４０００ｍＭ、約１１００ｍＭ～約３５００ｍＭ、約１１００ｍＭ～約３２００ｍＭ、約１１００ｍＭ～約３０００ｍＭ、約１１００ｍＭ～約２５００ｍＭ、約１２００ｍＭ～約２４００ｍＭ、又は約１２００ｍＭ～約１６００ｍＭである。実施形態では、組成物中のＴＥＡの濃度は、約１０００ｍＭ、約１１００ｍＭ、約１２００ｍＭ、約１３００ｍＭ、約１４００ｍＭ、約１５００ｍＭ、約１６００ｍＭ、約１７００ｍＭ、約１８００ｍＭ、約１９００ｍＭ、約２０００ｍＭ、約２１００ｍＭ、約２２００ｍＭ、約２３００ｍＭ、約２４００ｍＭ、約２５００ｍＭ、約２６００ｍＭ、約２７００ｍＭ、約２８００ｍＭ、約２９００ｍＭ、約３０００ｍＭ、約３１００ｍＭ、約３２００ｍＭ、約３３００ｍＭ、約３４００ｍＭ、約３５００ｍＭ、約３６００ｍＭ、約３７００ｍＭ、約３８００ｍＭ、約３９００ｍＭ、約４０００ｍＭ、約４１００ｍＭ、約４２００ｍＭ、約４３００ｍＭ、約４４００ｍＭ、約４５００ｍＭ、約４６００ｍＭ、約４７００ｍＭ、約４８００ｍＭ、約４９００ｍＭ、約５０００ｍＭ、約５１００ｍＭ、約５２００ｍＭ、約５３００ｍＭ、約５４００ｍＭ、約５５００ｍＭ、約５６００ｍＭ、約５７００ｍＭ、約５８００ｍＭ、約５９００ｍＭ、約６０００ｍＭ、約６１００ｍＭ、約６２００ｍＭ、約６３００ｍＭ、約６４００ｍＭ、約６５００ｍＭ、約６６００ｍＭ、約６７００ｍＭ、約６８００ｍＭ、約６９００ｍＭ、又は約７０００ｍＭである。実施形態では、組成物中のＴＥＡの濃度は、少なくとも約１０００ｍＭ、少なくとも約１２００ｍＭ、少なくとも約１６００ｍＭ、少なくとも約１８００ｍＭ、少なくとも約２０００ｍＭ、少なくとも約２５００ｍＭ、少なくとも約３０００ｍＭ、少なくとも約３５００ｍＭ、少なくとも約４０００ｍＭ、少なくとも約４５００ｍＭ、少なくとも約５０００ｍＭ、少なくとも約５５００ｍＭ、又は少なくとも約６０００ｍＭである。驚くべきことに、組成物中のＴＥＡ濃度は、生成されたＥＣＬ信号の強度と正の相関関係を示し、これは、ＰＩＰＥＳ（ＰＩＰＥＳ及びＴＥＡの両方が、本明細書に記載されるように電極付近でＥＣＬを閉じ込める能力を有するため、ＴＥＡと同様に挙動することが予想された）などの他のＥＣＬ共反応物質が、ＥＣＬ共反応物質濃度の増加に伴ってＥＣＬ生成の減少を示したため、予想外であった（例えば、図３Ａ及び３Ｂを参照されたい）。したがって、本明細書において提供されるＴＥＡ組成物は、本明細書に記載の非結合ＥＣＬ標識に対して、電極結合ＥＣＬ標識から、広い濃度範囲、例えば、約１０００ｍＭ～約６５００ｍＭにわたって、ＥＣＬ信号を優先的かつ一貫して生成することができる。電極結合ＥＣＬ生成の一貫性は、ＥＣＬベースのアッセイにおいて、例えば、洗浄又は非洗浄アッセイ形式において、ＥＣＬ生成における可変性を低下させる。高濃度で使用することができるＥＣＬ共反応物質（例えば、ＴＥＡ）は、試料及び／又はアッセイ混合物の希釈を最小限に抑え、アッセイ成分の結合平衡及び動態の撹乱を回避し、したがってＥＣＬ信号を最大化することによって、非洗浄アッセイにおける利点を提供する。高濃度で使用することができるＥＣＬ共反応物質（例えば、ＴＥＡ）は、より低い親和性結合及び／又は検出試薬を有するアッセイにおいても有用であり、高濃度で使用することができないＥＣＬ共反応物質（例えば、ＰＩＰＥＳ）と比較して、改善された感受性を提供する。
【0045】
アルキルジエタノールアミン／両性イオン性三級アミンＥＣＬ共反応物質
本開示は、アルキルジエタノールアミンＥＣＬ共反応物質及び／又は両性イオン性三級アミンＥＣＬ共反応物質を含む組成物を更に提供する。実施形態では、アルキルジエタノールアミンは、ブチルジエタノールアミン（ＢＤＥＡ）、プロピルジエタノールアミン（ＰＤＥＡ）、エチルジエタノールアミン（ＥＤＥＡ）、メチルジエタノールアミン（ＭＤＥＡ）、又はｔｅｒｔ－ブチルジエタノールアミン（ｔＢＤＥＡ）である。実施形態では、アルキルジエタノールアミンは、Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチルジエタノールアミン（ｔＢＤＥＡ）又はメチルジエタノールアミン（ＭＤＥＡ）である。実施形態では、両性イオン性三級アミンＥＣＬ共反応物質は、ジブチルアミンプロピルスルホン酸塩（ＤＢＡ－ＰＳ）、ジブチルアミンブチルスルホン酸塩（ＤＢＡ－ＢＳ）、ブチルエタノールアミンプロピルスルホン酸塩（ＢＥＡ－ＰＳ）、ブチルエタノールアミンブチルスルホン酸塩（ＢＥＡ－ＢＳ）、ジエタノールアミンプロピルスルホン酸塩（別名３－［ビス－（２－ヒドロキシ－エチル）－アミノ］－プロパン－１－スルホン酸、ＤＥＡ－ＰＳ）、又はジエタノールアミンブチルスルホン酸塩（ＤＥＡ－ＢＳ）である。実施形態では、両性イオン性三級アミンＥＣＬ共反応物質は、ＤＥＡ－ＰＳである。ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、及びＤＥＡ－ＰＳは、界面活性剤の不在下で使用される場合、又は異なる種類の界面活性剤、例えば、本明細書に記載の厳格な界面活性剤及び穏やかな界面活性剤と組み合わせた場合に、一貫したＥＣＬ生成特性を有利に示すことが見出された。実施形態では、ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、及び／又はＤＥＡ－ＰＳ、並びに厳格な界面活性剤を含む組成物は、同じＥＣＬ生成条件（例えば、電圧波形、電極の種類、組成物の量、ＥＣＬ標識の量など）に供されるとき、厳格な界面活性剤の代わりに穏やかな界面活性剤が存在することを除いて、同一の成分を含む組成物として実質的に同様のＥＣＬ信号を生成する。実施形態では、厳格な界面活性剤は、ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００、ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１１４、ＮＰ－４０、ＩＧＥＰＡＬ（登録商標）ＣＡ－６３０、３－［（３－コールアミドプロピル）ジメチルアンモニオ］－１－プロパンスルホン酸塩（ＣＨＡＰＳ）、又はドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）である。実施形態では、穏やかな界面活性剤は、ＢＲＩＪ（登録商標）、ＴＷＥＥＮ（登録商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）、若しくはＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）界面活性剤、又はＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルなどのアルキルエーテル－ＰＥＧ界面活性剤である。
本開示は、アルキルジエタノールアミンＥＣＬ共反応物質及び／又は両性イオン性三級アミンＥＣＬ共反応物質を含む組成物を更に提供する。実施形態では、アルキルジエタノールアミンは、ブチルジエタノールアミン（ＢＤＥＡ）、プロピルジエタノールアミン（ＰＤＥＡ）、エチルジエタノールアミン（ＥＤＥＡ）、メチルジエタノールアミン（ＭＤＥＡ）、又はｔｅｒｔ－ブチルジエタノールアミン（ｔＢＤＥＡ）である。実施形態では、アルキルジエタノールアミンは、Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチルジエタノールアミン（ｔＢＤＥＡ）又はメチルジエタノールアミン（ＭＤＥＡ）である。実施形態では、両性イオン性三級アミンＥＣＬ共反応物質は、ジブチルアミンプロピルスルホン酸塩（ＤＢＡ－ＰＳ）、ジブチルアミンブチルスルホン酸塩（ＤＢＡ－ＢＳ）、ブチルエタノールアミンプロピルスルホン酸塩（ＢＥＡ－ＰＳ）、ブチルエタノールアミンブチルスルホン酸塩（ＢＥＡ－ＢＳ）、ジエタノールアミンプロピルスルホン酸塩（別名３－［ビス－（２－ヒドロキシ－エチル）－アミノ］－プロパン－１－スルホン酸、ＤＥＡ－ＰＳ）、又はジエタノールアミンブチルスルホン酸塩（ＤＥＡ－ＢＳ）である。実施形態では、両性イオン性三級アミンＥＣＬ共反応物質は、ＤＥＡ－ＰＳである。ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、及びＤＥＡ－ＰＳは、界面活性剤の不在下で使用される場合、又は異なる種類の界面活性剤、例えば、本明細書に記載の厳格な界面活性剤及び穏やかな界面活性剤と組み合わせた場合に、一貫したＥＣＬ生成特性を有利に示すことが見出された。実施形態では、ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、及び／又はＤＥＡ－ＰＳ、並びに厳格な界面活性剤を含む組成物は、同じＥＣＬ生成条件（例えば、電圧波形、電極の種類、組成物の量、ＥＣＬ標識の量など）に供されるとき、厳格な界面活性剤の代わりに穏やかな界面活性剤が存在することを除いて、同一の成分を含む組成物として実質的に同様のＥＣＬ信号を生成する。実施形態では、厳格な界面活性剤は、ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００、ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１１４、ＮＰ－４０、ＩＧＥＰＡＬ（登録商標）ＣＡ－６３０、３－［（３－コールアミドプロピル）ジメチルアンモニオ］－１－プロパンスルホン酸塩（ＣＨＡＰＳ）、又はドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）である。実施形態では、穏やかな界面活性剤は、ＢＲＩＪ（登録商標）、ＴＷＥＥＮ（登録商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）、若しくはＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）界面活性剤、又はＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルなどのアルキルエーテル－ＰＥＧ界面活性剤である。
【0046】
実施形態では、組成物中のアルキルジエタノールアミン又は両性イオン性三級アミンの濃度は、約１０ｍＭ～約５００ｍＭ、約２０ｍＭ～約４００ｍＭ、約５０ｍＭ～約２５０ｍＭ、又は約１００ｍＭ～約２００ｍＭである。実施形態では、組成物中のアルキルジエタノールアミン両性イオン性三級アミンの濃度は、約１０ｍＭ、約２０ｍＭ、約３０ｍＭ、約４０ｍＭ、約５０ｍＭ、約６０ｍＭ、約７０ｍＭ、約８０ｍＭ、約９０ｍＭ、約１００ｍＭ、約１１０ｍＭ、約１２０ｍＭ、約１３０ｍＭ、約１４０ｍＭ、約１５０ｍＭ、約１６０ｍＭ、約１７０ｍＭ、約１８０ｍＭ、約１９０ｍＭ、約２００ｍＭ、約２５０ｍＭ、約３００ｍＭ、約３５０ｍＭ、約４００ｍＭ、約４５０ｍＭ、又は約５００ｍＭである。実施形態では、アルキルジエタノールアミンは、ｔＢＤＥＡである。実施形態では、アルキルジエタノールアミンは、ＭＤＥＡである。実施形態では、アルキルジエタノールアミンは、ｔＢＤＥＡとＭＤＥＡの組み合わせである。実施形態では、両性イオン性三級アミンは、ＤＥＡ－ＰＳである。実施形態では、組成物は、ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、及びＤＥＡ－ＰＳのうちの２つ以上の組み合わせを含む。
【0047】
実施形態では、アルキルジエタノールアミン並びに／又は両性イオン性三級アミン（例えば、ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、及び／若しくはＤＥＡ－ＰＳ）を含む組成物は、ｐＨ緩衝成分を更に含む。実施形態では、ｐＨ緩衝成分は、約７．０～約８．０のｐＫａを有する。実施形態では、ｐＨ緩衝成分は、組成物のｐＨを約７．０～約８．５、約７．２～約８．０、又は約７．４～約７．９で維持することができる。実施形態では、ｐＨ緩衝成分は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、ＰＩＰＥＳ、ＭＯＰＳ、ＴＥＳ、ＤＩＰＳＯ、ＭＯＢＳ、ＴＡＰＳＯ、ＰＯＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、ＨＥＰＰＳ、トリシン、グリシンアミド、ＨＥＰＢＳ、ビシン、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ｐＨ緩衝成分は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、又はそれらの組み合わせである。実施形態では、ｐＨ緩衝成分は、Ｔｒｉｓを含む。実施形態では、ｐＨ緩衝成分は、リン酸塩を含む。
【0048】
実施形態では、組成物中のｐＨ緩衝成分の濃度は、約１０ｍＭ～約８００ｍＭ、約２０ｍＭ～約６００ｍＭ、約５０ｍＭ～約４００ｍＭ、約１００ｍＭ～約３００ｍＭ、約１２０ｍＭ～約２８０ｍＭ、又は約１５０ｍＭ～約２５０ｍＭである。実施形態では、組成物中のｐＨ緩衝成分の濃度は、約５０ｍＭ、約１００ｍＭ、約１５０ｍＭ、約２００ｍＭ、約２５０ｍＭ、約３００ｍＭ、約３５０ｍＭ、約４００ｍＭ、約４５０ｍＭ、又は約５００ｍＭである。
【0049】
イオン成分
実施形態では、本明細書の組成物は、イオン成分を含む。塩などのイオン成分は、溶液中でイオンに解離する。高いイオン濃度は、ＥＣＬ共反応物質とのＥＣＬ標識の非特異的結合を有利に低減することができることが見出された。イオン成分の非限定的な例としては、カチオンＬｉ＋、Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｒｂ＋、Ｃｓ＋、Ｍｇ＋２、Ｃａ＋２、及びＮＨ４ ＋を含む塩、並びに／又はアニオンＦ－、Ｃｌ－、Ｂｒ－、Ｉ－、リン酸塩、硫酸塩、及びホウ酸塩を含む塩が挙げられる。実施形態では、イオン成分は、Ｌｉ＋、Ｎａ＋、又はＫ＋を含む。実施形態では、イオン成分は、Ｃｌ－を含む。実施形態では、イオン成分は、塩化リチウム（ＬｉＣｌ）、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、塩化カリウム（ＫＣｌ）、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、イオン成分は、ＮａＣｌを含む。実施形態では、イオン成分は、ＫＣｌを含む。
実施形態では、本明細書の組成物は、イオン成分を含む。塩などのイオン成分は、溶液中でイオンに解離する。高いイオン濃度は、ＥＣＬ共反応物質とのＥＣＬ標識の非特異的結合を有利に低減することができることが見出された。イオン成分の非限定的な例としては、カチオンＬｉ＋、Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｒｂ＋、Ｃｓ＋、Ｍｇ＋２、Ｃａ＋２、及びＮＨ４ ＋を含む塩、並びに／又はアニオンＦ－、Ｃｌ－、Ｂｒ－、Ｉ－、リン酸塩、硫酸塩、及びホウ酸塩を含む塩が挙げられる。実施形態では、イオン成分は、Ｌｉ＋、Ｎａ＋、又はＫ＋を含む。実施形態では、イオン成分は、Ｃｌ－を含む。実施形態では、イオン成分は、塩化リチウム（ＬｉＣｌ）、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、塩化カリウム（ＫＣｌ）、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、イオン成分は、ＮａＣｌを含む。実施形態では、イオン成分は、ＫＣｌを含む。
【0050】
実施形態では、組成物中のイオン成分の濃度は、約１００ｍＭ～約２０００ｍＭ、約２００ｍＭ～約１８００ｍＭ、約３００ｍＭ～約１７００ｍＭ、約４００ｍＭ～約１６００ｍＭ、約５００ｍＭ～約１５００ｍＭ、約６００ｍＭ～約１２００ｍＭ、約７００ｍＭ～約１０００ｍＭ、又は約８００ｍＭ～約９００ｍＭである。実施形態では、組成物中のイオン成分の濃度は、約５００ｍＭ、約５５０ｍＭ、約６００ｍＭ、約６５０ｍＭ、約７００ｍＭ、約７５０ｍＭ、約８００ｍＭ、約８５０ｍＭ、約９００ｍＭ、約９５０ｍＭ、約１０００ｍＭ、約１１００ｍＭ、約１２００ｍＭ、約１３００ｍＭ、約１４００ｍＭ、又は約１５００ｍＭである。
【0051】
実施形態では、組成物は、約１００ｍＭ～約２０００ｍＭ、約２００ｍＭ～約１８００ｍＭ、約３００ｍＭ～約１７００ｍＭ、約４００ｍＭ～約１６００ｍＭ、約５００ｍＭ～約１５００ｍＭ、約６００ｍＭ～約１２００ｍＭ、約７００ｍＭ～約１０００ｍＭ、又は約８００ｍＭ～約９００ｍＭのＮａＣｌを含む。実施形態では、組成物は、約１００ｍＭ～約２０００ｍＭ、約２００ｍＭ～約１８００ｍＭ、約３００ｍＭ～約１７００ｍＭ、約４００ｍＭ～約１６００ｍＭ、約５００ｍＭ～約１５００ｍＭ、約６００ｍＭ～約１２００ｍＭ、約７００ｍＭ～約１０００ｍＭ、又は約８００ｍＭ～約９００ｍＭのＫＣｌを含む。実施形態では、組成物は、約１００ｍＭ～約２０００ｍＭ、約２００ｍＭ～約１８００ｍＭ、約３００ｍＭ～約１７００ｍＭ、約４００ｍＭ～約１６００ｍＭ、約５００ｍＭ～約１５００ｍＭ、約６００ｍＭ～約１２００ｍＭ、約７００ｍＭ～約１０００ｍＭ、又は約８００ｍＭ～約９００ｍＭのＬｉＣｌを含む。
【0052】
実施形態では、組成物は、約０．２Ｍ～約２Ｍ、約０．５Ｍ～約１．５Ｍ、約０．７５Ｍ～約１．２５Ｍ、又は約０．８Ｍ～約１．０Ｍのイオン強度を有する。実施形態では、組成物は、約０．３Ｍ以上、約０．５Ｍ以上、約０．８Ｍ以上、又は約１．０Ｍ以上のイオン強度を有する。実施形態では、組成物は、塩化物イオンを含み、塩化物イオンの濃度は、約０．３Ｍ以上、約０．５Ｍ以上、約０．８Ｍ以上、又は約１．０Ｍ以上である。
【0053】
実施形態では、アッセイ読み出しとしてのＥＣＬを用いたイムノアッセイにおける非特異的結合（ＮＳＢ）は、イオン成分を含有する組成物が、イオン成分を含有しない以外は同一の組成物と比較して低い。
【0054】
界面活性剤
本明細書において提供される、例えば、ＴＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、及び／又はＤＥＡ－ＰＳをＥＣＬ共反応物質として含む組成物を使用する場合、組成物のＥＣＬ生成特性は、組成物中の界面活性剤の存在、濃度、又は構造に実質的に影響を受けないことが予期せずに発見された。対照的に、ＴＰＡベースの組成物は、一般に、最適な信号生成のために界面活性剤の存在を必要とする。特に、ＴＰＡは、ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００中のフェノールエーテル部分などの芳香族部分を含む界面活性剤の存在下で最適なＥＣＬ生成を提供する。
本明細書において提供される、例えば、ＴＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、及び／又はＤＥＡ－ＰＳをＥＣＬ共反応物質として含む組成物を使用する場合、組成物のＥＣＬ生成特性は、組成物中の界面活性剤の存在、濃度、又は構造に実質的に影響を受けないことが予期せずに発見された。対照的に、ＴＰＡベースの組成物は、一般に、最適な信号生成のために界面活性剤の存在を必要とする。特に、ＴＰＡは、ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００中のフェノールエーテル部分などの芳香族部分を含む界面活性剤の存在下で最適なＥＣＬ生成を提供する。
【0055】
実施形態では、本明細書の組成物は、界面活性剤を実質的に含まない。実施形態では、本明細書の組成物は、界面活性剤を含む。実施形態では、本明細書の組成物は、界面活性剤の臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）を下回る濃度で界面活性剤を含む。ＣＭＣは、ミセルが形成される界面活性剤の濃度であり、ＣＭＣを上回る、組成物に添加される任意の追加の量の界面活性剤が、ミセルに組み込まれる。界面活性剤のＣＭＣは、例えば、Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌ Ｃｈｅｍ ９２（６）：４２５９－４２６５（２０２０）に記載される滴定方法を使用して、及び／又は動的接触角測定装置及び／又はテンシオメータなどのデバイスを使用して、当業者によって決定され得る。
【0056】
実施形態では、本明細書の組成物は、非イオン性界面活性剤を含む。実施形態では、本明細書の組成物は、イオン性界面活性剤を含む。非イオン性界面活性剤としては、ＮＯＮＩＤＥＴ（商標）（オクチルフェノキシポリエトキシエタノール）、ＢＲＩＪ（登録商標）（ポリオキシエチレン脂肪酸エーテル）、ＴＲＩＴＯＮ（商標）（２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール）、ＴＷＥＥＮ（登録商標）（ポリソルベート）、ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）（ポリオキシルヒマシ油）、ＴＨＥＳＩＴ（登録商標）（ポリエチレングリコールドデシルエーテル）、ＬＵＢＲＯＬ（登録商標）（ポリオキシエチレンアルキルエーテル）、ＧＥＮＡＰＯＬ（登録商標）（イソトリデシルアルコールポリグリコールエーテル）、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）（ＰＥＯ－ＰＰＯ－ＰＥＯとして配列されたポリ（エチレンオキシド）（ＰＥＯ）とポリ（プロピレンオキシド）（ＰＰＯ）のポロキサマーブロックコポリマー）、ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）（ＰＥＯ－ＰＰＯのポロキサミンブロックコポリマー）、ＳＹＮＰＥＲＯＮＩＣ（登録商標）（ＰＥＧ－ＰＰＧ－ＰＥＧとして配置されたポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）及びポリ（プロピレングリコール）（ＰＰＧ）のブロックコポリマー）、及びＳＰＡＮ（登録商標）（ソルビタン）の商品名で知られている界面活性剤のクラスが挙げられる。非イオン性界面活性剤の具体例としては、例えば、ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７（ＰＥＧ１０１－ＰＰＧ５６－ＰＥＧ１０１、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７としても知られる）、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３（ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８）、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１（ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５）、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１（ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６）、ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１（エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール）、ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４（ポリエチレングリコールドデシルエーテル）、ＢＲＩＪ（登録商標）５８（ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル）、ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０（ポリソルベート２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、並びにＰＥＧ（１０）トリデシルエーテル、ＰＥＧ（１２）トリデシルエーテル、及びＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルなどのアルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などが挙げられる。
【0057】
実施形態では、界面活性剤は、フェノールエーテルを含む。実施形態では、界面活性剤は、２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）である。本明細書に記載される界面活性剤との関連において、ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００は、脂質二重層膜、例えば、細胞若しくは細胞外小胞（ＥＶ）の膜を破壊、溶解、及び／又は溶解することができる「厳格な」界面活性剤である。
【0058】
実施形態では、界面活性剤は、芳香族部分を含まない。実施形態では、界面活性剤は、フェノールエーテルを含まない。実施形態では、界面活性剤は、脂質二重層膜、例えば、細胞若しくは細胞外小胞（ＥＶ）の膜を破壊、溶解（ｌｙｓｅ）又は溶解（ｄｉｓｓｏｌｖｅ）しない。かかる界面活性剤は、「穏やかな」界面活性剤と称され得る。穏やかな界面活性剤の例としては、ＢＲＩＪ（登録商標）、ＴＷＥＥＮ（登録商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）、又はＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）という商品名で知られている界面活性剤のクラスが挙げられる。実施形態では、界面活性剤は、エステル連結を含まない。実施形態では、界面活性剤は、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレート－ブロック－エトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである。実施形態では、界面活性剤は、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である。実施形態では、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）は、ＰＥＧ（１０）トリデシルエーテル、ＰＥＧ（１２）トリデシルエーテル、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテル、又はそれらの組み合わせである。実施形態では、界面活性剤は、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルである。
【0059】
本明細書に記載されるように、本明細書の組成物は、異なる種類の界面活性剤、例えば、本明細書に記載の厳格な界面活性剤及び穏やかな界面活性剤の存在下において、一貫したＥＣＬ信号生成を有利に提供する。実施形態では、ＴＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせ及び厳格な界面活性剤を含む組成物は、同じＥＣＬ生成条件（例えば、電圧波形、電極の種類、組成物の量、ＥＣＬ標識の量など）に供されるとき、厳格な界面活性剤の代わりに穏やかな界面活性剤が存在することを除いて、同一の成分を含む組成物として実質的に同様のＥＣＬ信号を生成する。実施形態では、ＴＥＡ、ＢＤＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせ及び厳格な界面活性剤を含む組成物は、同じＥＣＬ生成条件（例えば、電圧波形、電極の種類、組成物の量、ＥＣＬ標識の量など）に供されるとき、厳格な界面活性剤の代わりに穏やかな界面活性剤が存在することを除いて、同一の成分を含む組成物として実質的に同様のＥＣＬ信号を生成する。実施形態では、厳格な界面活性剤は、ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００である。実施形態では、穏やかな界面活性剤は、ＢＲＩＪ（登録商標）、ＴＷＥＥＮ（登録商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）、若しくはＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）界面活性剤、又はＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルなどのアルキルエーテル－ＰＥＧ界面活性剤である。
【0060】
実施形態では、組成物中の界面活性剤の濃度は、組成物が、約５０ダイン／ｃｍ以下、約４０ダイン／ｃｍ以下、又は約３５ダイン／ｃｍ以下の気液表面張力を有するようなものである。実施形態では、界面活性剤は、組成物中に、そのｃｍｃ、そのｃｍｃの約２倍以上、又はそのｃｍｃの約５倍以上で存在する。
【0061】
実施形態では、界面活性剤は、組成物の約０．１％（ｖ）、約０．５％（ｖ／ｖ）、約１％（ｖ／ｖ）、約２％（ｖ／ｖ）、約５％（ｖ／ｖ）、約７％（ｖ／ｖ）、又は約１０％（ｖ／ｖ）である。実施形態では、組成物中の界面活性剤の濃度は、約０．１ｍＭ～約２０ｍＭ、約０．１ｍＭ～約１０ｍＭ、約０．５ｍＭ～約８ｍＭ、約０．７５ｍＭ～約６ｍＭ、又は約１ｍＭ～約５ｍＭである。実施形態では、組成物中の界面活性剤の濃度は、約０．１ｍＭ、約０．２ｍＭ、約０．３ｍＭ、約０．４ｍＭ、約０．５ｍＭ、約０．６ｍＭ、約０．７ｍＭ、約０．８ｍＭ、約０．９ｍＭ、約１ｍＭ、約２ｍＭ、約３ｍＭ、約４ｍＭ、約５ｍＭ、約６ｍＭ、約７ｍＭ、約８ｍＭ、約９ｍＭ、又は約１０ｍＭである。
【0062】
実施形態では、組成物は、約０．１ｍＭ～約２０ｍＭ、約０．１ｍＭ～約１０ｍＭ、約０．５ｍＭ～約８ｍＭ、約０．７５ｍＭ～約６ｍＭ、又は約１ｍＭ～約５ｍＭの２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）を含む。実施形態では、組成物は、約０．１ｍＭ～約２０ｍＭ、約０．１ｍＭ～約１０ｍＭ、約０．５ｍＭ～約８ｍＭ、約０．７５ｍＭ～約６ｍＭ、又は約１ｍＭ～約５ｍＭのＰｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）を含む。実施形態では、組成物は、約０．１ｍＭ～約２０ｍＭ、約０．１ｍＭ～約１０ｍＭ、約０．５ｍＭ～約８ｍＭ、約０．７５ｍＭ～約６ｍＭ、又は約１ｍＭ～約５ｍＭのＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）を含む。実施形態では、組成物は、約０．１ｍＭ～約２０ｍＭ、約０．１ｍＭ～約１０ｍＭ、約０．５ｍＭ～約８ｍＭ、約０．７５ｍＭ～約６ｍＭ、又は約１ｍＭ～約５ｍＭのＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）を含む。実施形態では、組成物は、約０．１ｍＭ～約２０ｍＭ、約０．１ｍＭ～約１０ｍＭ、約０．５ｍＭ～約８ｍＭ、約０．７５ｍＭ～約６ｍＭ、又は約１ｍＭ～約５ｍＭのＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）を含む。実施形態では、組成物は、約０．１ｍＭ～約２０ｍＭ、約０．１ｍＭ～約１０ｍＭ、約０．５ｍＭ～約８ｍＭ、約０．７５ｍＭ～約６ｍＭ、又は約１ｍＭ～約５ｍＭのエチレンジアミンテトラキス（プロポキシレート－ブロック－エトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）を含む。実施形態では、組成物は、約０．１ｍＭ～約２０ｍＭ、約０．１ｍＭ～約１０ｍＭ、約０．５ｍＭ～約８ｍＭ、約０．７５ｍＭ～約６ｍＭ、又は約１ｍＭ～約５ｍＭのポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）を含む。実施形態では、組成物は、約０．１ｍＭ～約２０ｍＭ、約０．１ｍＭ～約１０ｍＭ、約０．５ｍＭ～約８ｍＭ、約０．７５ｍＭ～約６ｍＭ、又は約１ｍＭ～約５ｍＭのポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）を含む。実施形態では、組成物は、約０．１ｍＭ～約２０ｍＭ、約０．１ｍＭ～約１０ｍＭ、約０．５ｍＭ～約８ｍＭ、約０．７５ｍＭ～約６ｍＭ、又は約１ｍＭ～約５ｍＭのポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）を含む。実施形態では、組成物は、約０．１ｍＭ～約２０ｍＭ、約０．１ｍＭ～約１０ｍＭ、約０．５ｍＭ～約８ｍＭ、約０．７５ｍＭ～約６ｍＭ、又は約１ｍＭ～約５ｍＭの２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレートを含む。実施形態では、組成物は、約０．１ｍＭ～約２０ｍＭ、約０．１ｍＭ～約１０ｍＭ、約０．５ｍＭ～約８ｍＭ、約０．７５ｍＭ～約６ｍＭ、又は約１ｍＭ～約５ｍＭのアルキルエーテル－ＰＥＧを含む。実施形態では、アルキルエーテル－ＰＥＧは、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルである。
【0063】
ｐＨ
実施形態では、本明細書の組成物は、約６．０～約９．０のｐＨ、約７．０～約８．０のｐＨ、約７．２～約７．６のｐＨ、約７．５～約７．８のｐＨ、約７．４～約７．９のｐＨ、約７．０、約７．１、約７．２、約７．３、約７．４、約７．５、約７．６、約７．７、約７．８、約７．９、又は約８．０のｐＨを有する。実施形態では、組成物のｐＨは、約７．５である。実施形態では、組成物のｐＨは、約７．８である。
実施形態では、本明細書の組成物は、約６．０～約９．０のｐＨ、約７．０～約８．０のｐＨ、約７．２～約７．６のｐＨ、約７．５～約７．８のｐＨ、約７．４～約７．９のｐＨ、約７．０、約７．１、約７．２、約７．３、約７．４、約７．５、約７．６、約７．７、約７．８、約７．９、又は約８．０のｐＨを有する。実施形態では、組成物のｐＨは、約７．５である。実施形態では、組成物のｐＨは、約７．８である。
【0064】
実施形態では、ＴＥＡを含む組成物は、約７．０～約８．０、約７．４～約７．９、又は約７．５～約７．８のｐＨを有し、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない。実施形態では、ＴＥＡを含む組成物は、約７．０～約８．０、約７．４～約７．９、又は約７．５～約７．８のｐＨを有し、約７．０～約８．０のｐＫａを有する追加の成分を実質的に含まない。実施形態では、ＴＥＡを含む組成物は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、及びクエン酸塩のいずれも含まない。実施形態では、ＴＥＡを含む組成物は、ＨＥＰＥＳ、ＰＯＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、及びＰＩＰＥＳのいずれも含まない。実施形態では、ＴＥＡを含む組成物は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、ＰＯＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、及びＰＩＰＥＳのいずれも含まない。
【0065】
ＥＣＬ標識成分
実施形態では、本明細書の組成物は、ＥＣＬ標識成分を含む。実施形態では、例えば、ＴＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、及び／又はＤＥＡ－ＰＳ、並びにＥＣＬ標識成分を含む、本明細書において提供されるＥＣＬ共反応物質組成物は、ＥＣＬを生成することができる。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、検出試薬を含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、検出試薬の結合パートナーを含む。
実施形態では、本明細書の組成物は、ＥＣＬ標識成分を含む。実施形態では、例えば、ＴＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、及び／又はＤＥＡ－ＰＳ、並びにＥＣＬ標識成分を含む、本明細書において提供されるＥＣＬ共反応物質組成物は、ＥＣＬを生成することができる。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、検出試薬を含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、検出試薬の結合パートナーを含む。
【0066】
実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。実施形態では、検出試薬は、抗体若しくはその抗原検出断片、抗原、配位子、受容体、オリゴヌクレオチド、ハプテン、エピトープ、ミモトープ、又はアプタマーを含む。実施形態では、検出試薬は、その抗原／エピトープ検出部分、抗体断片若しくは誘導体、抗体類似体、操作抗体、又は抗体と同様の方法で抗原に結合する物質を含む、抗体又はそのバリアントである。実施形態では、検出試薬は、抗体の少なくとも１つの重鎖又は軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。実施形態では、検出試薬は、１つ以上の抗体からのうちの少なくとも２つのＣＤＲを含む。実施形態では、検出試薬は、抗体又はその抗原検出断片である。実施形態では、検出試薬は、共役リンカーを介してＥＣＬ標識に共有連結している。標識、例えば、ＥＣＬ標識を検出試薬にコンジュゲートする方法は、当業者に既知である。
【0067】
実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、検出試薬の結合パートナーである。実施形態では、ＥＣＬ標識成分及び検出試薬は、ＥＣＬによって検出することができる錯体を形成する。実施形態では、ＥＣＬ標識成分及び検出試薬は、受容体－配位子対、抗原－抗体対、ハプテン－抗体対、エピトープ－抗体対、ミモトープ－抗体対、アプタマー－標的分子対、又はインターカレーター－標的分子対を含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分及び検出試薬は、相補的オリゴヌクレオチドを含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分及び検出試薬は、ビオチン－アビジン又はビオチン－ストレプトアビジン対を含む。
【0068】
実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、オリゴヌクレオチドである。実施形態では、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチド及び検出試薬は、相補的オリゴヌクレオチドを含み、他の実施形態では、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドは、検出試薬である。実施形態では、結合試薬は、オリゴヌクレオチドを含み、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドは、そのオリゴヌクレオチドに相補的である。実施形態では、結合パートナーは、オリゴヌクレオチドを含み、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドは、その結合パートナーオリゴヌクレオチドに相補的である。実施形態では、結合パートナーは、分析物オリゴヌクレオチドであり、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドは、分析物オリゴヌクレオチドに相補的である。実施形態では、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドの結合パートナーは、分析物オリゴヌクレオチドであり、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドは、分析物オリゴヌクレオチドの一部分に相補的であり、結合試薬は、分析物オリゴヌクレオチドの異なる部分に相補的である捕捉オリゴヌクレオチドである。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ペプチド又はタンパク質などの標的分析物に結合する検出試薬（例えば、検出抗体）に付着した伸長プライマーに相補的なオリゴヌクレオチドプローブである。実施形態では、結合試薬は、ストレプトアビジンであり、オリゴヌクレオチドを含む結合錯体は、ビオチン化捕捉抗体、ペプチド、及びオリゴヌクレオチドプライマーを含む第２の抗体の錯体である（例えば、限定されないが、図２０を参照されたい）。
【0069】
実施形態では、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドは、プローブである。実施形態では、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドは、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、若しくはそれ以上のヌクレオチド長、又は先行する値のうちのいずれか２つによって画定される範囲であるプローブである。一実施形態では、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブは、ステムループ又はヘアピン構造、ＥＣＬ標識、及びクエンチ部位を含み、当該クエンチ部位は、ＥＣＬ標識に近接しており、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブがステムループ又はヘアピン構成にあるときにはＥＣＬ標識をクエンチするが、ステムループ又はヘアピン構造が開放構成にあるときにはＥＣＬ標識をクエンチしない。実施形態では、ステムループ又はヘアピン構造を有するＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブは、ＥＣＬ標識分子ビーコンプローブである。実施形態では、ＥＣＬ標識ヘアピン又は分子ビーコンオリゴヌクレオチドプローブの結合パートナーは、分析物オリゴヌクレオチドであり、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブは、分析物オリゴヌクレオチドの一部分に相補的であり、結合試薬は、分析物オリゴヌクレオチドの異なる部分に相補的である捕捉オリゴヌクレオチドである（例えば、限定されないが、図１４を参照されたい）。実施形態では、ＥＣＬ標識分子ビーコンプローブは、ペプチド又はタンパク質などの標的分析物に結合する検出試薬（例えば、検出抗体）に付着した伸長プライマーに相補的である（例えば、限定されないが、図２０を参照されたい）。
【0070】
ＥＣＬ標識分子ビーコンプローブは、従来の分子ビーコンプローブについて当該技術分野で知られている従来の方法を使用して作製することができる。実施形態では、プローブは、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０塩基長のプローブ配列、又は先行する値のうちのいずれか２つによって画定される範囲、例えば１０～３０、１０～１５、若しくは１５～３０塩基のプローブ配列と、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３塩基長の５’及び３’ステム補体配列、又は先行する値のうちのいずれか２つによって画定される範囲、例えば５～８塩基の５’及び３’ステム補体配列と、を有することができる。実施形態では、ステムは、５～８塩基対の長さであり、非常に高いＧＣ含有量（７５～１００％）を有する。実施形態では、ＥＣＬ標識分子ビーコンプローブは、５’及び３’末端において、ＥＣＬ標識及びクエンチ部位、例えば、５’ＥＣＬ標識及び３’クエンチ部位で標識されるか、又はその逆である。従来の分子ビーコンプローブの設計ツールは、ｗｗｗ．ｍｏｌｅｃｕｌａｒ－ｂｅａｃｏｎｓ．ｏｒｇ／ＭＢ＿ＳＣ＿ｄｅｓｉｇｎに見出され得る。実施形態では、短いプローブ配列の使用は、ステムループ構造の使用の必要性を低減し、接触によるより効果的な静的クエンチを可能にする。これらの目標を達成するために、ＬＮＡ配列に基づく分子ビーコンは、有用であることが証明されている。例は、Ｅｂｏｉｇｂｏｄｉｎ ＫＥ， ｅｔ ａｌ．Ｒａｐｉｄ ａｎｄ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ａｓｓａｙ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ ｕｓｉｎｇ ＲＴ－ＳＩＢＡ，ＢＭＣ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ．２０１７（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に見出される。そのようなプローブの例は、／５６－ＲＯＸＮ／＋ＣＡ＋Ａ＋ＴＡ＋Ｔ＋Ｔ＋ＧＡ＋ＧＡ＋ＴＡ／３ＩＡＢｋＦＱ／である。実施形態では、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブは、二本鎖安定化技術（Ｍｉｎｏｒ Ｇｒｏｏｖｅ Ｂｉｎｄｅｒ、ＭＧＢ（商標））、ＢＨＱｐｌｕｓ（登録商標）プローブ（Ｂｉｏｓｅａｒｃｈ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を使用して、より短いプローブ設計を可能にするように設計してもよい。Ｍｉｎｏｒ Ｇｒｏｏｖｅ Ｂｉｎｄｅｒは、ホスホラミダイトとして入手可能であり、ＣＰＧは、プローブ合成（ＩＤＴ）中にオリゴヌクレオチド合成プロセスへのそれらの組み込みを可能にする。一実施形態は、ＭＧＢ－ＣＰＧ支持体を使用し、クエンチャー分子を添加し、次いで配列と最後の５’アミノ基を添加して、ＥＣＬ部位で標識することである。あるいは、それらは、オリゴヌクレオチド合成中に導入されたアミノ基のＮＨＳエステルベースの標識を行うことにより、合成後に添加してもよい。Ｍｉｎｏｒ Ｇｒｏｏｖｅ Ｂｉｎｄｅｒとしては、ＵＳ９，３３４，４９５（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されているものが挙げられる。
【0071】
実施形態では、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブは、ＥＣＬ標識及びクエンチャーを含み、ＥＣＬ標識及びクエンチャーは、プローブが線形構成（例えば、ステムループでもヘアピン構成でもない）にあるときにはプローブ上で互いに十分に近く、線形構成では、クエンチ部位は、プローブが（例えば、図２１に示されるように）相補的オリゴヌクレオチドにハイブリダイズされているかどうかにかかわらず、ＥＣＬ信号をクエンチする。そのようなＥＣＬ標識プローブは、当該技術分野で知られている従来の方法、例えば、ＴａｑＭａｎ（登録商標）プローブを設計するために使用される方法を使用して作製することができる。実施形態では、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、若しくはそれ以上のヌクレオチド長、又は先行する値のうちのいずれか２つによって画定される範囲であるＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブ。実施形態では、ＥＣＬ標識プローブは、５’及び３’末端において、ＥＣＬ標識及びクエンチ部位、例えば、５’ＥＣＬ標識及び３’クエンチ部位で標識されるか、又はその逆である。実施形態では、ＥＣＬ標識部位及びクエンチ部位のうちの一方又は両方は、オリゴヌクレオチドの５’末端又は３’末端以外の位置で付着する。実施形態では、クエンチ部位は、オリゴヌクレオチドの５’末端にある。
【0072】
実施形態では、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブは、ＤＮＡ、ＲＮＡ、両方の混合物であり、かつ／又は１つ以上の修飾核酸を含む。実施形態では、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドは、例えば、エキソヌクレアーゼ又はエンドヌクレアーゼによる酵素的切断に耐性のある１つ以上のヌクレオチドを含む。実施形態では、耐性ヌクレオチド（複数可）は、ペプチド核酸、又は当該技術分野で知られている他の耐性核酸模倣物である。実施形態では、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブの一部分のみが耐性であり、クエンチ部位は、耐性ではない部分（例えば、５’部分）上にあり、一方、ＥＣＬ標識は、耐性である部分（例えば、中央部分及び／又は３’部分）上にあるため、酵素（例えば、５’エキソヌクレアーゼ）がＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドを切断すると、クエンチ部位が溶液中に放出され、ＥＣＬ標識を含むＥＣＬ標識プローブの耐性部分は、相補的オリゴヌクレオチド（例えば、結合パートナー及び／又は結合錯体のオリゴヌクレオチド）にハイブリダイズされたままである。実施形態では、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブは、（例えば、図２１に示すように）相補的オリゴヌクレオチド（例えば、結合パートナー及び／又は結合錯体のオリゴヌクレオチド）にハイブリダイズされているときにのみ、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブを切断する酵素によって認識されるヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ）の配列及び／又は種類などであるが、これらに限定されない特徴を含む。実施形態では、酵素は制限エンドヌクレアーゼであり、必要に応じて、ニッキングエンドヌクレアーゼであり、特徴は制限エンドヌクレアーゼによって認識される配列であるか、又は酵素はＲＮａｓＨ２酵素であり、特徴は１つ以上のＲＮＡヌクレオチドである。実施形態では、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブは、クエンチ部位に近い特徴を含むため、酵素がＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブを切断すると、クエンチ部位が溶液中に放出され、ＥＣＬ標識を含むＥＣＬ標識プローブは相補的オリゴヌクレオチド（例えば、結合パートナー及び／又は結合錯体のオリゴヌクレオチド）にハイブリダイズされたままである。
【0073】
実施形態では、複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブを使用することができる。実施形態では、各々が、異なる標的オリゴヌクレオチド（例えば、結合試薬、検出試薬、結合パートナー、及び／又はオリゴヌクレオチド分析物上のオリゴヌクレオチド）の配列に相補的な異なる配列を有し、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブのそれらのそれぞれの標的オリゴヌクレオチドへの特異的ハイブリダイゼーションを可能にする、複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブ。いくつかの実施形態では、標的オリゴヌクレオチドは、既知の位置でのＥＣＬ信号の存在が標的オリゴヌクレオチド（例えば、結合試薬、検出試薬、結合パートナー、及び／又はオリゴヌクレオチド分析物上のオリゴヌクレオチド）の存在と相関し得るように、基材上の既知の位置に局在する。いくつかの実施形態では、複数の異なる標的オリゴヌクレオチドは、培養プレートウェルの底部表面上の複数のスポットに局在し、特定の配列を有する各標的オリゴヌクレオチドは、特定の事前に定義されたスポットに局在する。いくつかの実施形態では、各スポットは、基材表面（例えば、プレートウェル底部）上の他のスポットに固定化された結合試薬とは異なる、特定の固定化された結合試薬（例えば、捕捉オリゴヌクレオチド）を含む。各スポットは、結合試薬が固定されている電極層でコーティングされ得る。このようにして、多重化反応は、複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブを使用して実行することができる。いくつかの実施形態では、多重反応は、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、又はそれ以上の異なるＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブを利用し、各々は、異なる標的オリゴヌクレオチドに相補的な異なるオリゴヌクレオチド配列を有する。実施形態では、ＥＣＬ標識は、本明細書、例えば以下のパラグラフに記載される標識である。実施形態では、クエンチャー部位は、ＡＴＴＯ ５４０Ｑ、ＡＴＴＯ ５７５Ｑ、ＡＴＴＯ ５８０Ｑ、ＡＴＴＯ ６１２Ｑ、Ｉｏｗａ Ｂｌａｃｋ ＦＱ、Ｉｏｗａ Ｂａｃｋ ＲＱ、ＱＳＹ ２１、ＩＲＤｙｅ ＱＣ－１、ＢＨＱ０、ＢＨＱ１、ＢＨＱ－２、ＢＨＱ－３、ダブシル、ＱＳＹ ７、ＱＳＹ ９、ＱＳＹ ２１、ＱＳＹ ３５、ＱＸＬ ４９０、ＱＸＬ ５２０、ＱＸＬ ５７０、及びＱＸＬ ６７０からなる群から選択される。実施形態では、クエンチャー部位は、抗ＥＣＬ標識抗体、又はその結合断片である。実施形態では、クエンチ部位は、フェロセン又は鉄トリス－ビピリジンである。実施形態では、ＥＣＬ標識は、以下の式ＩＩを有する。実施形態では、ＥＣＬ標識は、以下の式ＩＩを有し、クエンチャー部位は、ＢＨＱ２である。実施形態では、ＥＣＬ標識は、以下の式ＩＩを有し、クエンチャー部位は、Ｉｏｗａ Ｂｌａｃｋである。実施形態では、ＥＣＬ標識は、以下の式ＩＩを有し、クエンチャー部位は、ダブシルである。
【0074】
実施形態では、ＥＣＬ標識は、電気化学発光有機金属錯体を含む。実施形態では、電気化学発光有機金属錯体は、ルテニウム、オスミウム、イリジウム、レニウム、及び／又はランタニド金属を含む。実施形態では、ＥＣＬ標識は、ルテニウムを含む。実施形態では、電気化学発光有機金属錯体は、置換若しくは非置換ビピリジン、又は置換若しくは非置換フェナントロリンを含む。実施形態では、ＥＣＬ標識は、置換ビピリジンを含む。実施形態では、ＥＣＬ標識は、ルテニウム（ＩＩ）トリス－ビピリジンを含む。実施形態では、ＥＣＬ標識は、少なくとも１つの置換ビピリジン配位子を含む有機金属錯体を含み、置換ビピリジン配位子は、少なくとも１つのスルホネート基を含む。実施形態では、ＥＣＬ標識は、少なくとも２つの置換ビピリジン配位子を含む有機金属錯体を含み、各置換ビピリジン配位子は、少なくとも１つのスルホネート基を含む。実施形態では、少なくとも１つのスルホネート基を含む置換ビピリジン配位子は、式Ｉ：
（Ｉ）の化合物である。
【化3】
【0075】
実施形態では、ＥＣＬ標識は、３つの配位子を含み、第１の配位子は、式Ｉの化合物であり、第２の配位子は、検出試薬に共有連結している少なくとも１つの置換基を有するビピリジンを含む。実施形態では、ＥＣＬ標識は、３つの配位子を含む有機金属錯体を含み、配位子のうちの２つはそれぞれ式Ｉの化合物であり、第３の配位子は、検出試薬に共有連結している少なくとも１つの置換基を有するビピリジンを含む。
【0076】
実施形態では、第１の検出可能な標識は、式ＩＩ：
（ＩＩ）の化合物である。
【化4】
【0077】
更なる例示的なＥＣＬ標識は、ＵＳ５，７１４，０８９、ＵＳ６，１３６，２６８、ＵＳ６，３１６，６０７、ＵＳ６，４６８，７４１、ＵＳ６，４７９，２３３、ＵＳ６，８０８，９３９、及びＵＳ９，４９９，５７３に見出され得、これらの各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【0078】
ＴＥＡ組成物
実施形態では、本開示は、約１０００ｍＭ～約６５００ｍＭのＴＥＡと、約５００ｍＭ～約１５００ｍＭのイオン成分と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、当該イオン成分が、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、又はＬｉＣｌである、組成物を提供する。実施形態では、組成物は、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、約７．０～約８．０のｐＫａを有する追加の成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、ＰＯＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、及びＰＩＰＥＳのいずれも含まない。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
実施形態では、本開示は、約１０００ｍＭ～約６５００ｍＭのＴＥＡと、約５００ｍＭ～約１５００ｍＭのイオン成分と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、当該イオン成分が、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、又はＬｉＣｌである、組成物を提供する。実施形態では、組成物は、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、約７．０～約８．０のｐＫａを有する追加の成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、ＰＯＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、及びＰＩＰＥＳのいずれも含まない。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0079】
実施形態では、本開示は、約１１００ｍＭ～約３５００ｍＭのＴＥＡと、約６００ｍＭ～約１２００ｍＭのイオン成分と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、当該イオン成分が、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、又はＬｉＣｌである、組成物を提供する。実施形態では、組成物は、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、約７．０～約８．０のｐＫａを有する追加の成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、ＰＯＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、及びＰＩＰＥＳのいずれも含まない。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0080】
実施形態では、本開示は、約１２００ｍＭ～約１６００ｍＭのＴＥＡと、約７００ｍＭ～約９００ｍＭのイオン成分と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、当該イオン成分が、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、又はＬｉＣｌである、組成物を提供する。実施形態では、組成物は、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、約７．０～約８．０のｐＫａを有する追加の成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、ＰＯＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、及びＰＩＰＥＳのいずれも含まない。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。実施形態では、組成物は、約１２００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＮａＣｌと、を含む。実施形態では、組成物は、約１６００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＮａＣｌと、を含む。実施形態では、組成物は、約１２００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＫＣｌと、を含む。実施形態では、組成物は、約１６００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＫＣｌと、を含む。実施形態では、組成物は、約１２００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＬｉＣｌと、を含む。実施形態では、組成物は、約１６００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＬｉＣｌと、を含む。実施形態では、本組成物は、約７．５のｐＨを有する。実施形態では、本組成物は、約７．８のｐＨを有する。
【0081】
実施形態では、本開示は、約１０００ｍＭ～約６５００ｍＭのＴＥＡと、約５００ｍＭ～約１５００ｍＭのイオン成分と、約０．１ｍＭ～約１０ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、当該イオン成分が、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、又はＬｉＣｌであり、当該界面活性剤が、２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、界面活性剤は、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルである。実施形態では、組成物は、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、約７．０～約８．０のｐＫａを有する追加の成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、ＰＯＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、及びＰＩＰＥＳのいずれも含まない。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0082】
実施形態では、本開示は、約１１００ｍＭ～約３５００ｍＭのＴＥＡと、約６００ｍＭ～約１２００ｍＭのイオン成分と、約０．５ｍＭ～約８ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、当該イオン成分が、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、又はＬｉＣｌであり、当該界面活性剤が、２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、界面活性剤は、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルである。実施形態では、組成物は、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、約７．０～約８．０のｐＫａを有する追加の成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、ＰＯＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、及びＰＩＰＥＳのいずれも含まない。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0083】
実施形態では、本開示は、約１２００ｍＭ～約１６００ｍＭのＴＥＡと、約７００ｍＭ～約９００ｍＭのイオン成分と、約１ｍＭ～約５ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．４～約７．９のｐＨを有し、当該イオン成分が、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、又はＬｉＣｌであり、当該界面活性剤が、２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、界面活性剤は、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルである。実施形態では、組成物は、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、約７．０～約８．０のｐＫａを有する追加の成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、ＰＯＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、及びＰＩＰＥＳのいずれも含まない。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0084】
実施形態では、本開示は、約１２００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのイオン成分と、約１ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．４～約７．９のｐＨを有し、当該イオン成分が、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、又はＬｉＣｌであり、当該界面活性剤が、２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、界面活性剤は、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルである。実施形態では、組成物は、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、約７．０～約８．０のｐＫａを有する追加の成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、ＰＯＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、及びＰＩＰＥＳのいずれも含まない。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0085】
実施形態では、本開示は、約１６００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのイオン成分と、約１ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．４～約７．９のｐＨを有し、当該イオン成分が、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、又はＬｉＣｌであり、当該界面活性剤が、２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、界面活性剤は、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルである。実施形態では、組成物は、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、約７．０～約８．０のｐＫａを有する追加の成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、ＰＯＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、及びＰＩＰＥＳのいずれも含まない。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0086】
実施形態では、本開示は、約３２００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのイオン成分と、約１ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．４～約７．９のｐＨを有し、当該イオン成分が、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、又はＬｉＣｌであり、当該界面活性剤が、２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、界面活性剤は、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルである。実施形態では、組成物は、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、約７．０～約８．０のｐＫａを有する追加の成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、ＰＯＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、及びＰＩＰＥＳのいずれも含まない。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0087】
実施形態では、本開示は、約６４００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのイオン成分と、約１ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．４～約７．９のｐＨを有し、当該イオン成分が、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、又はＬｉＣｌであり、当該界面活性剤が、２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、界面活性剤は、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルである。実施形態では、組成物は、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、約７．０～約８．０のｐＫａを有する追加の成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、ＰＯＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、及びＰＩＰＥＳのいずれも含まない。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0088】
実施形態では、本開示は、約１２００ｍＭのＴＥＡと、約７００ｍＭ～約９００ｍＭのイオン成分と、約１ｍＭ～約５ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、当該イオン成分が、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、又はＬｉＣｌであり、当該界面活性剤が、２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ－７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、界面活性剤は、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルである。実施形態では、組成物は、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、約７．０～約８．０のｐＫａを有する追加の成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、ＰＯＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、及びＰＩＰＥＳのいずれも含まない。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0089】
実施形態では、本開示は、約１６００ｍＭのＴＥＡと、約７００ｍＭ～約９００ｍＭのイオン成分と、約１ｍＭ～約５ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、当該イオン成分が、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、又はＬｉＣｌであり、当該界面活性剤が、２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、界面活性剤は、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルである。実施形態では、組成物は、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、約７．０～約８．０のｐＫａを有する追加の成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、ＰＯＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、及びＰＩＰＥＳのいずれも含まない。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0090】
実施形態では、本開示は、約３２００ｍＭのＴＥＡと、約７００ｍＭ～約９００ｍＭのイオン成分と、約１ｍＭ～約５ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、当該イオン成分が、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、又はＬｉＣｌであり、当該界面活性剤が、２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ－７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、界面活性剤は、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルである。実施形態では、組成物は、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、約７．０～約８．０のｐＫａを有する追加の成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、ＰＯＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、及びＰＩＰＥＳのいずれも含まない。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0091】
実施形態では、本開示は、約６４００ｍＭのＴＥＡと、約７００ｍＭ～約９００ｍＭのイオン成分と、約１ｍＭ～約５ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、当該イオン成分が、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、又はＬｉＣｌであり、当該界面活性剤が、２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ－７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、界面活性剤は、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルである。実施形態では、組成物は、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、約７．０～約８．０のｐＫａを有する追加の成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、ＰＯＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、及びＰＩＰＥＳのいずれも含まない。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0092】
実施形態では、本開示は、約１０００ｍＭ～約６５００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＮａＣｌと、約１ｍＭ～約５ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、当該界面活性剤が、２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、界面活性剤は、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルである。実施形態では、組成物は、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、約７．０～約８．０のｐＫａを有する追加の成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、ＰＯＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、及びＰＩＰＥＳのいずれも含まない。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0093】
実施形態では、本開示は、約１０００ｍＭ～約６５００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＫＣｌと、約１ｍＭ～約５ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、当該界面活性剤が、２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、界面活性剤は、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルである。実施形態では、組成物は、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、約７．０～約８．０のｐＫａを有する追加の成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、ＰＯＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、及びＰＩＰＥＳのいずれも含まない。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0094】
実施形態では、本開示は、約１０００ｍＭ～約６５００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＬｉＣｌと、約１ｍＭ～約５ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、当該界面活性剤が、２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、界面活性剤は、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルである。実施形態では、組成物は、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、約７．０～約８．０のｐＫａを有する追加の成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、ＰＯＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、及びＰＩＰＥＳのいずれも含まない。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0095】
実施形態では、本開示は、約１０００ｍＭ～約６５００ｍＭのＴＥＡと、約７００ｍＭ～約９００ｍＭのイオン成分と、約１ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、当該界面活性剤が、２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）である、組成物を提供する。実施形態では、組成物は、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、約７．０～約８．０のｐＫａを有する追加の成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、ＰＯＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、及びＰＩＰＥＳのいずれも含まない。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0096】
実施形態では、本開示は、約１０００ｍＭ～約６５００ｍＭのＴＥＡと、約７００ｍＭ～約９００ｍＭのイオン成分と、約１ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、当該イオン成分が、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、又はＬｉＣｌであり、当該界面活性剤が、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、組成物は、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、約７．０～約８．０のｐＫａを有する追加の成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、ＰＯＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、及びＰＩＰＥＳのいずれも含まない。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0097】
実施形態では、本開示は、約１０００ｍＭ～約６５００ｍＭのＴＥＡと、約７００ｍＭ～約９００ｍＭのイオン成分と、約１ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、当該イオン成分が、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、又はＬｉＣｌであり、当該界面活性剤が、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルである、組成物を提供する。実施形態では、組成物は、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、約７．０～約８．０のｐＫａを有する追加の成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、ＰＯＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、及びＰＩＰＥＳのいずれも含まない。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0098】
実施形態では、本開示は、約１０００ｍＭ～約６５００ｍＭのＴＥＡと、約７００ｍＭ～約９００ｍＭのイオン成分と、約１ｍＭ～約５ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有し、当該イオン成分が、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、又はＬｉＣｌであり、当該界面活性剤が、２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ－７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、界面活性剤は、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルである。実施形態では、組成物は、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、約７．０～約８．０のｐＫａを有する追加の成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、ＰＯＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、及びＰＩＰＥＳのいずれも含まない。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0099】
実施形態では、本開示は、約１０００ｍＭ～約６５００ｍＭのＴＥＡと、約７００ｍＭ～約９００ｍＭのイオン成分と、約１ｍＭ～約５ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有し、当該イオン成分が、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、又はＬｉＣｌであり、当該界面活性剤が、２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ－７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、界面活性剤は、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルである。実施形態では、組成物は、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、約７．０～約８．０のｐＫａを有する追加の成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、ＰＯＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、及びＰＩＰＥＳのいずれも含まない。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0100】
実施形態では、本開示は、約１２００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＮａＣｌと、約１ｍＭの２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１２００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＮａＣｌと、約１ｍＭの２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１６００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＮａＣｌと、約１ｍＭの２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１６００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＮａＣｌと、約１ｍＭの２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約３２００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＮａＣｌと、約１ｍＭの２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約３２００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＮａＣｌと、約１ｍＭの２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約６４００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＮａＣｌと、約１ｍＭの２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約６４００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＮａＣｌと、約１ｍＭの２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、組成物は、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、約７．０～約８．０のｐＫａを有する追加の成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、ＰＯＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、及びＰＩＰＥＳのいずれも含まない。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0101】
実施形態では、本開示は、約１２００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＫＣｌと、約１ｍＭの２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１２００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＫＣｌと、約１ｍＭの２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１６００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＫＣｌと、約１ｍＭの２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１６００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＫＣｌと、約１ｍＭの２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約３２００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＫＣｌと、約１ｍＭの２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約３２００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＫＣｌと、約１ｍＭの２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約６４００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＫＣｌと、約１ｍＭの２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約６４００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＫＣｌと、約１ｍＭの２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、組成物は、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、約７．０～約８．０のｐＫａを有する追加の成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、ＰＯＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、及びＰＩＰＥＳのいずれも含まない。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0102】
実施形態では、本開示は、約１２００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＬｉＣｌと、約１ｍＭの２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１２００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＬｉＣｌと、約１ｍＭの２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１６００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＬｉＣｌと、約１ｍＭの２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１６００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＬｉＣｌと、約１ｍＭの２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約３２００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＬｉＣｌと、約１ｍＭの２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約３２００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＬｉＣｌと、約１ｍＭの２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約６４００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＬｉＣｌと、約１ｍＭの２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約６４００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＬｉＣｌと、約１ｍＭの２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、組成物は、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、約７．０～約８．０のｐＫａを有する追加の成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、ＰＯＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、及びＰＩＰＥＳのいずれも含まない。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0103】
実施形態では、本開示は、約１２００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＮａＣｌと、約１ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有し、当該界面活性剤が、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１２００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＮａＣｌと、約１ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有し、当該界面活性剤が、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、組成物は、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、約７．０～約８．０のｐＫａを有する追加の成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、ＰＯＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、及びＰＩＰＥＳのいずれも含まない。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0104】
実施形態では、本開示は、約１６００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＮａＣｌと、約の界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有し、当該界面活性剤が、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１６００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＮａＣｌと、約１の界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有し、当該界面活性剤が、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、組成物は、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、約７．０～約８．０のｐＫａを有する追加の成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、ＰＯＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、及びＰＩＰＥＳのいずれも含まない。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0105】
実施形態では、本開示は、約３２００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＮａＣｌと、約１ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有し、当該界面活性剤が、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約３２００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＮａＣｌと、約１ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有し、当該界面活性剤が、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、組成物は、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、約７．０～約８．０のｐＫａを有する追加の成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、ＰＯＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、及びＰＩＰＥＳのいずれも含まない。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0106】
実施形態では、本開示は、約６４００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＮａＣｌと、約の界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有し、当該界面活性剤が、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約６４００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＮａＣｌと、約１の界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有し、当該界面活性剤が、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、組成物は、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、約７．０～約８．０のｐＫａを有する追加の成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、ＰＯＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、及びＰＩＰＥＳのいずれも含まない。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0107】
実施形態では、本開示は、約１２００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＫＣｌと、約１ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有し、当該界面活性剤が、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１２００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＫＣｌと、約１ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有し、当該界面活性剤が、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、組成物は、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、約７．０～約８．０のｐＫａを有する追加の成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、ＰＯＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、及びＰＩＰＥＳのいずれも含まない。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0108】
実施形態では、本開示は、約１６００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＫＣｌと、約の界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有し、当該界面活性剤が、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１６００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＫＣｌと、約１の界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有し、当該界面活性剤が、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、組成物は、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、約７．０～約８．０のｐＫａを有する追加の成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、ＰＯＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、及びＰＩＰＥＳのいずれも含まない。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0109】
実施形態では、本開示は、約３２００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＫＣｌと、約１ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有し、当該界面活性剤が、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約３２００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＫＣｌと、約１ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有し、当該界面活性剤が、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、組成物は、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、約７．０～約８．０のｐＫａを有する追加の成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、ＰＯＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、及びＰＩＰＥＳのいずれも含まない。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0110】
実施形態では、本開示は、約６４００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＫＣｌと、約の界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有し、当該界面活性剤が、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約６４００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＫＣｌと、約１の界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有し、当該界面活性剤が、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、組成物は、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、約７．０～約８．０のｐＫａを有する追加の成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、ＰＯＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、及びＰＩＰＥＳのいずれも含まない。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0111】
実施形態では、本開示は、約１２００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＬｉＣｌと、約１ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有し、当該界面活性剤が、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１２００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＬｉＣｌと、約１ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有し、当該界面活性剤が、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、組成物は、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、約７．０～約８．０のｐＫａを有する追加の成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、ＰＯＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、及びＰＩＰＥＳのいずれも含まない。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0112】
実施形態では、本開示は、約１６００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＬｉＣｌと、約の界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有し、当該界面活性剤が、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１６００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＬｉＣｌと、約１の界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有し、当該界面活性剤が、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、組成物は、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、約７．０～約８．０のｐＫａを有する追加の成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、ＰＯＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、及びＰＩＰＥＳのいずれも含まない。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0113】
実施形態では、本開示は、約３２００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＬｉＣｌと、約１ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有し、当該界面活性剤が、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約３２００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＬｉＣｌと、約１ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有し、当該界面活性剤が、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、組成物は、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、約７．０～約８．０のｐＫａを有する追加の成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、ＰＯＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、及びＰＩＰＥＳのいずれも含まない。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0114】
実施形態では、本開示は、約６４００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＬｉＣｌと、約の界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有し、当該界面活性剤が、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約６４００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＬｉＣｌと、約１の界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有し、当該界面活性剤が、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、組成物は、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、約７．０～約８．０のｐＫａを有する追加の成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、ＰＯＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、及びＰＩＰＥＳのいずれも含まない。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0115】
実施形態では、本開示は、約１２００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＮａＣｌと、約１ｍＭのＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルと、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１２００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＮａＣｌと、約１ｍＭのＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルと、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１６００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＮａＣｌと、約１ｍＭのＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルと、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１６００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＮａＣｌと、約１ｍＭのＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルと、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約３２００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＮａＣｌと、約１ｍＭのＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルと、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約３２００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＮａＣｌと、約１ｍＭのＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルと、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約６４００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＮａＣｌと、約１ｍＭのＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルと、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約６４００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＮａＣｌと、約１ｍＭのＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルと、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、組成物は、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、約７．０～約８．０のｐＫａを有する追加の成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、ＰＯＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、及びＰＩＰＥＳのいずれも含まない。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0116】
実施形態では、本開示は、約１２００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＫＣｌと、約１ｍＭのＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルと、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１２００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＫＣｌと、約１ｍＭのＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルと、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１６００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＫＣｌと、約１ｍＭのＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルと、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１６００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＫＣｌと、約１ｍＭのＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルと、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約３２００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＫＣｌと、約１ｍＭのＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルと、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約３２００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＫＣｌと、約１ｍＭのＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルと、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約６４００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＫＣｌと、約１ｍＭのＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルと、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約６４００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＫＣｌと、約１ｍＭのＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルと、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、組成物は、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、約７．０～約８．０のｐＫａを有する追加の成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、ＰＯＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、及びＰＩＰＥＳのいずれも含まない。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0117】
実施形態では、本開示は、約１２００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＬｉＣｌと、約１ｍＭのＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルと、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１２００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＬｉＣｌと、約１ｍＭのＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルと、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１６００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＬｉＣｌと、約１ｍＭのＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルと、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１６００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＬｉＣｌと、約１ｍＭのＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルと、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約３２００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＬｉＣｌと、約１ｍＭのＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルと、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約３２００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＬｉＣｌと、約１ｍＭのＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルと、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約６４００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＬｉＣｌと、約１ｍＭのＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルと、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約６４００ｍＭのＴＥＡと、約８５０ｍＭのＬｉＣｌと、約１ｍＭのＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルと、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、組成物は、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、約７．０～約８．０のｐＫａを有する追加の成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、ＰＯＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、及びＰＩＰＥＳのいずれも含まない。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0118】
実施形態では、本開示は、ＴＥＡと、イオン成分と、必要に応じて、ＥＣＬ標識成分及び界面活性剤の一方又は両方と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、必要に応じて、当該組成物が、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない、組成物を提供する。実施形態では、組成物は、約１０００ｍＭ～約６５００ｍＭのＴＥＡと、約５００ｍＭ～約２０００ｍＭのイオン成分と、を含む。実施形態では、界面活性剤は、アルキルエーテル－ＰＥＧを含む。実施形態では、組成物は、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、記載された成分から本質的になるか、又はそれらからなる。
【0119】
実施形態では、本開示は、ＴＥＡと、イオン成分と、ＥＣＬ標識成分及び界面活性剤の一方又は両方と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、必要に応じて、当該組成物が、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない、組成物を提供する。実施形態では、組成物は、約１０００ｍＭ～約６５００ｍＭのＴＥＡと、約５００ｍＭ～約２０００ｍＭのイオン成分と、を含む。実施形態では、界面活性剤は、アルキルエーテル－ＰＥＧを含む。実施形態では、組成物は、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、記載された成分から本質的になるか、又はそれらからなる。
【0120】
実施形態では、本開示は、ＴＥＡと、イオン成分と、必要に応じて、ＥＣＬ標識成分及び界面活性剤の一方又は両方と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、当該組成物が、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない、組成物を提供する。実施形態では、組成物は、約１０００ｍＭ～約６５００ｍＭのＴＥＡと、約５００ｍＭ～約２０００ｍＭのイオン成分と、を含む。実施形態では、界面活性剤は、アルキルエーテル－ＰＥＧを含む。実施形態では、組成物は、記載された成分から本質的になるか、又はそれらからなる。
【0121】
実施形態では、本開示は、ＴＥＡと、イオン成分と、界面活性剤と、ＥＣＬ標識成分と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、ＴＥＡと、イオン成分と、界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、ＴＥＡと、イオン成分と、界面活性剤と、ＥＣＬ標識成分と、界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、組成物は、約１０００ｍＭ～約６５００ｍＭのＴＥＡと、約５００ｍＭ～約２０００ｍＭのイオン成分と、を含む。実施形態では、界面活性剤は、アルキルエーテル－ＰＥＧを含む。実施形態では、組成物は、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない。実施形態では、組成物は、記載された成分から本質的になるか、又はそれらからなる。
【0122】
実施形態では、本明細書において提供される組成物は、乾燥形態である。実施形態では、本明細書において提供される組成物は、乾燥粉末の形態である。実施形態では、本明細書で提供される組成物は、凍結乾燥粉末である。本開示を通して、組成物が、その記載された成分の特定の濃度（例えば、約１０００ｍＭ～約６５００ｍＭのＴＥＡ、約５００ｍＭ～約２０００ｍＭのイオン成分、及び／若しくは約０．１ｍＭ～約１０ｍＭの界面活性剤）、並びに／又はその記載された成分の特定のｐＨ（例えば、約７．０～約８．０のｐＨ）を含むとき、組成物の成分の記載された濃度及びｐＨが、液体形態の組成物、例えば、液体希釈剤（例えば、水又は水性アッセイバッファー）で再構成された乾燥組成物に関するものであることが当業者に理解されるであろう。実施形態では、組成物は、乾燥形態であり、液体希釈剤で再構成される場合、記載された濃度で記載された成分を含む。実施形態では、組成物は、乾燥形態であり、液体希釈剤で構成される場合、記載されたｐＨを含む。
【0123】
アルキルジエタノールアミン／両性イオン性三級アミン組成物
実施形態では、本開示は、約５０ｍＭ～約２５０ｍＭのｔＢＤＥＡと、約５００ｍＭ～約１５００ｍＭのイオン成分と、約０．１ｍＭ～約１０ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、当該イオン成分が、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、又はＬｉＣｌであり、当該界面活性剤が、２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、界面活性剤は、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルである。実施形態では、組成物は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのｐＨ緩衝成分を更に含む。実施形態では、ｐＨ緩衝成分は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、又はそれらの組み合わせである。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
実施形態では、本開示は、約５０ｍＭ～約２５０ｍＭのｔＢＤＥＡと、約５００ｍＭ～約１５００ｍＭのイオン成分と、約０．１ｍＭ～約１０ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、当該イオン成分が、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、又はＬｉＣｌであり、当該界面活性剤が、２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、界面活性剤は、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルである。実施形態では、組成物は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのｐＨ緩衝成分を更に含む。実施形態では、ｐＨ緩衝成分は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、又はそれらの組み合わせである。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0124】
実施形態では、本開示は、約５０ｍＭ～約２５０ｍＭのＭＤＥＡと、約５００ｍＭ～約１５００ｍＭのイオン成分と、約０．１ｍＭ～約１０ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、当該イオン成分が、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、又はＬｉＣｌであり、当該界面活性剤が、２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、界面活性剤は、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルである。実施形態では、組成物は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのｐＨ緩衝成分を更に含む。実施形態では、ｐＨ緩衝成分は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、又はそれらの組み合わせである。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0125】
実施形態では、本開示は、約５０ｍＭ～約２５０ｍＭのＤＥＡ－ＰＳと、約５００ｍＭ～約１５００ｍＭのイオン成分と、約０．１ｍＭ～約１０ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、当該イオン成分が、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、又はＬｉＣｌであり、当該界面活性剤が、２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、界面活性剤は、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルである。実施形態では、組成物は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのｐＨ緩衝成分を更に含む。実施形態では、ｐＨ緩衝成分は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、又はそれらの組み合わせである。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0126】
実施形態では、本開示は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのｔＢＤＥＡと、約７００ｍＭ～約９００ｍＭのイオン成分と、約１ｍＭ～約５ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、当該イオン成分が、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、又はＬｉＣｌであり、当該界面活性剤が、２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、界面活性剤は、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルである。実施形態では、組成物は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのｐＨ緩衝成分を更に含む。実施形態では、ｐＨ緩衝成分は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、又はそれらの組み合わせである。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0127】
実施形態では、本開示は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのＭＤＥＡと、約７００ｍＭ～約９００ｍＭのイオン成分と、約１ｍＭ～約５ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、当該イオン成分が、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、又はＬｉＣｌであり、当該界面活性剤が、２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、界面活性剤は、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルである。実施形態では、組成物は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのｐＨ緩衝成分を更に含む。実施形態では、ｐＨ緩衝成分は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、又はそれらの組み合わせである。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0128】
実施形態では、本開示は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのＤＥＡ－ＰＳと、約７００ｍＭ～約９００ｍＭのイオン成分と、約１ｍＭ～約５ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、当該イオン成分が、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、又はＬｉＣｌであり、当該界面活性剤が、２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、界面活性剤は、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルである。実施形態では、組成物は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのｐＨ緩衝成分を更に含む。実施形態では、ｐＨ緩衝成分は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、又はそれらの組み合わせである。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0129】
実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのｔＢＤＥＡと、約８５０ｍＭのイオン成分と、約１ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、当該イオン成分が、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、又はＬｉＣｌであり、当該界面活性剤が、２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、界面活性剤は、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルである。実施形態では、組成物は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのｐＨ緩衝成分を更に含む。実施形態では、ｐＨ緩衝成分は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、又はそれらの組み合わせである。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0130】
実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのＭＤＥＡと、約８５０ｍＭのイオン成分と、約１ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、当該イオン成分が、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、又はＬｉＣｌであり、当該界面活性剤が、２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、界面活性剤は、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルである。実施形態では、組成物は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのｐＨ緩衝成分を更に含む。実施形態では、ｐＨ緩衝成分は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、又はそれらの組み合わせである。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0131】
実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのＤＥＡ－ＰＳと、約８５０ｍＭのイオン成分と、約１ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、当該イオン成分が、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、又はＬｉＣｌであり、当該界面活性剤が、２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、界面活性剤は、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルである。実施形態では、組成物は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのｐＨ緩衝成分を更に含む。実施形態では、ｐＨ緩衝成分は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、又はそれらの組み合わせである。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0132】
実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのｔＢＤＥＡと、約７００ｍＭ～約９００ｍＭのイオン成分と、約１ｍＭ～約５ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、当該イオン成分が、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、又はＬｉＣｌであり、当該界面活性剤が、２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ－７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、界面活性剤は、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルである。実施形態では、組成物は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのｐＨ緩衝成分を更に含む。実施形態では、ｐＨ緩衝成分は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、又はそれらの組み合わせである。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0133】
実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのＭＤＥＡと、約７００ｍＭ～約９００ｍＭのイオン成分と、約１ｍＭ～約５ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、当該イオン成分が、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、又はＬｉＣｌであり、当該界面活性剤が、２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ－７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、界面活性剤は、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルである。実施形態では、組成物は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのｐＨ緩衝成分を更に含む。実施形態では、ｐＨ緩衝成分は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、又はそれらの組み合わせである。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0134】
実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのＤＥＡ－ＰＳと、約７００ｍＭ～約９００ｍＭのイオン成分と、約１ｍＭ～約５ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、当該イオン成分が、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、又はＬｉＣｌであり、当該界面活性剤が、２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ－７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、界面活性剤は、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルである。実施形態では、組成物は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのｐＨ緩衝成分を更に含む。実施形態では、ｐＨ緩衝成分は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、又はそれらの組み合わせである。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0135】
実施形態では、本開示は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのｔＢＤＥＡと、約８５０ｍＭのＮａＣｌと、約１ｍＭ～約５ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、当該界面活性剤が、２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、界面活性剤は、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルである。実施形態では、組成物は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのｐＨ緩衝成分を更に含む。実施形態では、ｐＨ緩衝成分は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、又はそれらの組み合わせである。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0136】
実施形態では、本開示は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのＭＤＥＡと、約８５０ｍＭのＮａＣｌと、約１ｍＭ～約５ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、当該界面活性剤が、２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、界面活性剤は、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルである。実施形態では、組成物は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのｐＨ緩衝成分を更に含む。実施形態では、ｐＨ緩衝成分は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、又はそれらの組み合わせである。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0137】
実施形態では、本開示は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのＤＥＡ－ＰＳと、約８５０ｍＭのＮａＣｌと、約１ｍＭ～約５ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、当該界面活性剤が、２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、界面活性剤は、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルである。実施形態では、組成物は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのｐＨ緩衝成分を更に含む。実施形態では、ｐＨ緩衝成分は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、又はそれらの組み合わせである。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0138】
実施形態では、本開示は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのｔＢＤＥＡと、約８５０ｍＭのＫＣｌと、約１ｍＭ～約５ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、当該界面活性剤が、２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、界面活性剤は、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルである。実施形態では、組成物は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのｐＨ緩衝成分を更に含む。実施形態では、ｐＨ緩衝成分は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、又はそれらの組み合わせである。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0139】
実施形態では、本開示は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのＭＤＥＡと、約８５０ｍＭのＫＣｌと、約１ｍＭ～約５ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、当該界面活性剤が、２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、界面活性剤は、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルである。実施形態では、組成物は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのｐＨ緩衝成分を更に含む。実施形態では、ｐＨ緩衝成分は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、又はそれらの組み合わせである。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0140】
実施形態では、本開示は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのＤＥＡ－ＰＳと、約８５０ｍＭのＫＣｌと、約１ｍＭ～約５ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、当該界面活性剤が、２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、界面活性剤は、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルである。実施形態では、組成物は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのｐＨ緩衝成分を更に含む。実施形態では、ｐＨ緩衝成分は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、又はそれらの組み合わせである。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0141】
実施形態では、本開示は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのｔＢＤＥＡと、約８５０ｍＭのＬｉＣｌと、約１ｍＭ～約５ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、当該界面活性剤が、２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、界面活性剤は、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルである。実施形態では、組成物は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのｐＨ緩衝成分を更に含む。実施形態では、ｐＨ緩衝成分は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、又はそれらの組み合わせである。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0142】
実施形態では、本開示は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのＭＤＥＡと、約８５０ｍＭのＬｉＣｌと、約１ｍＭ～約５ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、当該界面活性剤が、２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、界面活性剤は、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルである。実施形態では、組成物は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのｐＨ緩衝成分を更に含む。実施形態では、ｐＨ緩衝成分は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、又はそれらの組み合わせである。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0143】
実施形態では、本開示は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのＤＥＡ－ＰＳと、約８５０ｍＭのＬｉＣｌと、約１ｍＭ～約５ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、当該界面活性剤が、２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、界面活性剤は、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルである。実施形態では、組成物は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのｐＨ緩衝成分を更に含む。実施形態では、ｐＨ緩衝成分は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、又はそれらの組み合わせである。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0144】
実施形態では、本開示は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのｔＢＤＥＡと、約７００ｍＭ～約９００ｍＭのイオン成分と、約１ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、当該界面活性剤が、２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）である、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのＭＤＥＡと、約７００ｍＭ～約９００ｍＭのイオン成分と、約１ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、当該界面活性剤が、２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）である、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのＤＥＡ－ＰＳと、約７００ｍＭ～約９００ｍＭのイオン成分と、約１ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、当該界面活性剤が、２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）である、組成物を提供する。実施形態では、組成物は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのｐＨ緩衝成分を更に含む。実施形態では、ｐＨ緩衝成分は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、又はそれらの組み合わせである。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0145】
実施形態では、本開示は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのｔＢＤＥＡと、約７００ｍＭ～約９００ｍＭのイオン成分と、約１ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、当該イオン成分が、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、又はＬｉＣｌであり、当該界面活性剤が、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのＭＤＥＡと、約７００ｍＭ～約９００ｍＭのイオン成分と、約１ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、当該イオン成分が、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、又はＬｉＣｌであり、当該界面活性剤が、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのＤＥＡ－ＰＳと、約７００ｍＭ～約９００ｍＭのイオン成分と、約１ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、当該イオン成分が、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、又はＬｉＣｌであり、当該界面活性剤が、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、組成物は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのｐＨ緩衝成分を更に含む。実施形態では、ｐＨ緩衝成分は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、又はそれらの組み合わせである。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0146】
実施形態では、本開示は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのｔＢＤＥＡと、約７００ｍＭ～約９００ｍＭのイオン成分と、約１ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、当該イオン成分が、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、又はＬｉＣｌであり、当該界面活性剤が、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルである、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのＭＤＥＡと、約７００ｍＭ～約９００ｍＭのイオン成分と、約１ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、当該イオン成分が、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、又はＬｉＣｌであり、当該界面活性剤が、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルである、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのＤＥＡ－ＰＳと、約７００ｍＭ～約９００ｍＭのイオン成分と、約１ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、当該イオン成分が、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、又はＬｉＣｌであり、当該界面活性剤が、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルである、組成物を提供する。実施形態では、組成物は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのｐＨ緩衝成分を更に含む。実施形態では、ｐＨ緩衝成分は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、又はそれらの組み合わせである。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0147】
実施形態では、本開示は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのｔＢＤＥＡと、約７００ｍＭ～約９００ｍＭのイオン成分と、約１ｍＭ～約５ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有し、当該イオン成分が、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、又はＬｉＣｌであり、当該界面活性剤が、２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、界面活性剤は、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルである。実施形態では、組成物は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのｐＨ緩衝成分を更に含む。実施形態では、ｐＨ緩衝成分は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、又はそれらの組み合わせである。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0148】
実施形態では、本開示は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのｔＢＤＥＡと、約７００ｍＭ～約９００ｍＭのイオン成分と、約１ｍＭ～約５ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有し、当該イオン成分が、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、又はＬｉＣｌであり、当該界面活性剤が、２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、界面活性剤は、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルである。実施形態では、組成物は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのｐＨ緩衝成分を更に含む。実施形態では、ｐＨ緩衝成分は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、又はそれらの組み合わせである。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0149】
実施形態では、本開示は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのＭＤＥＡと、約７００ｍＭ～約９００ｍＭのイオン成分と、約１ｍＭ～約５ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有し、当該イオン成分が、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、又はＬｉＣｌであり、当該界面活性剤が、２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ－７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、界面活性剤は、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルである。実施形態では、組成物は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのｐＨ緩衝成分を更に含む。実施形態では、ｐＨ緩衝成分は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、又はそれらの組み合わせである。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0150】
実施形態では、本開示は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのＭＤＥＡと、約７００ｍＭ～約９００ｍＭのイオン成分と、約１ｍＭ～約５ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有し、当該イオン成分が、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、又はＬｉＣｌであり、当該界面活性剤が、２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ－７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、界面活性剤は、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルである。実施形態では、組成物は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのｐＨ緩衝成分を更に含む。実施形態では、ｐＨ緩衝成分は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、又はそれらの組み合わせである。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0151】
実施形態では、本開示は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのＤＥＡ－ＰＳと、約７００ｍＭ～約９００ｍＭのイオン成分と、約１ｍＭ～約５ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有し、当該イオン成分が、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、又はＬｉＣｌであり、当該界面活性剤が、２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ－７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、界面活性剤は、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルである。実施形態では、組成物は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのｐＨ緩衝成分を更に含む。実施形態では、ｐＨ緩衝成分は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、又はそれらの組み合わせである。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0152】
実施形態では、本開示は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのＤＥＡ－ＰＳと、約７００ｍＭ～約９００ｍＭのイオン成分と、約１ｍＭ～約５ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有し、当該イオン成分が、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、又はＬｉＣｌであり、当該界面活性剤が、２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ－７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、界面活性剤は、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルである。実施形態では、組成物は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのｐＨ緩衝成分を更に含む。実施形態では、ｐＨ緩衝成分は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、又はそれらの組み合わせである。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0153】
実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのｔＢＤＥＡと、約８５０ｍＭのＮａＣｌと、約１ｍＭの２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのｔＢＤＥＡと、約８５０ｍＭのＮａＣｌと、約１ｍＭの２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのＭＤＥＡと、約８５０ｍＭのＮａＣｌと、約１ｍＭの２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのＭＤＥＡと、約８５０ｍＭのＮａＣｌと、約１ｍＭの２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのＤＥＡ－ＰＳと、約８５０ｍＭのＮａＣｌと、約１ｍＭの２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのＤＥＡ－ＰＳと、約８５０ｍＭのＮａＣｌと、約１ｍＭの２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、組成物は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのｐＨ緩衝成分を更に含む。実施形態では、ｐＨ緩衝成分は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、又はそれらの組み合わせである。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0154】
実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのｔＢＤＥＡと、約８５０ｍＭのＫＣｌと、約１ｍＭの２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのｔＢＤＥＡと、約８５０ｍＭのＫＣｌと、約１ｍＭの２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのＭＤＥＡと、約８５０ｍＭのＫＣｌと、約１ｍＭの２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのＭＤＥＡと、約８５０ｍＭのＫＣｌと、約１ｍＭの２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのＤＥＡ－ＰＳと、約８５０ｍＭのＫＣｌと、約１ｍＭの２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのＤＥＡ－ＰＳと、約８５０ｍＭのＫＣｌと、約１ｍＭの２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、組成物は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのｐＨ緩衝成分を更に含む。実施形態では、ｐＨ緩衝成分は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、又はそれらの組み合わせである。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0155】
実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのｔＢＤＥＡと、約８５０ｍＭのＬｉＣｌと、約１ｍＭの２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのｔＢＤＥＡと、約８５０ｍＭのＬｉＣｌと、約１ｍＭの２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのＭＤＥＡと、約８５０ｍＭのＬｉＣｌと、約１ｍＭの２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのＭＤＥＡと、約８５０ｍＭのＬｉＣｌと、約１ｍＭの２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのＤＥＡ－ＰＳと、約８５０ｍＭのＬｉＣｌと、約１ｍＭの２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのＤＥＡ－ＰＳと、約８５０ｍＭのＬｉＣｌと、約１ｍＭの２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノール（ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００）と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、組成物は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのｐＨ緩衝成分を更に含む。実施形態では、ｐＨ緩衝成分は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、又はそれらの組み合わせである。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0156】
実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのｔＢＤＥＡと、約８５０ｍＭのＮａＣｌと、約１ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有し、当該界面活性剤が、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのｔＢＤＥＡと、約８５０ｍＭのＮａＣｌと、約１ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有し、当該界面活性剤が、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、組成物は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのｐＨ緩衝成分を更に含む。実施形態では、ｐＨ緩衝成分は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、又はそれらの組み合わせである。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0157】
実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのＭＤＥＡと、約８５０ｍＭのＮａＣｌと、約の界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有し、当該界面活性剤が、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのＭＤＥＡと、約８５０ｍＭのＮａＣｌと、約１の界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有し、当該界面活性剤が、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、組成物は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのｐＨ緩衝成分を更に含む。実施形態では、ｐＨ緩衝成分は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、又はそれらの組み合わせである。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0158】
実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのＤＥＡ－ＰＳと、約８５０ｍＭのＮａＣｌと、約の界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有し、当該界面活性剤が、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのＤＥＡ－ＰＳと、約８５０ｍＭのＮａＣｌと、約１の界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有し、当該界面活性剤が、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、組成物は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのｐＨ緩衝成分を更に含む。実施形態では、ｐＨ緩衝成分は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、又はそれらの組み合わせである。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0159】
実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのｔＢＤＥＡと、約８５０ｍＭのＫＣｌと、約１ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有し、当該界面活性剤が、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのｔＢＤＥＡと、約８５０ｍＭのＫＣｌと、約１ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有し、当該界面活性剤が、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、組成物は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのｐＨ緩衝成分を更に含む。実施形態では、ｐＨ緩衝成分は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、又はそれらの組み合わせである。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0160】
実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのＭＤＥＡと、約８５０ｍＭのＫＣｌと、約の界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有し、当該界面活性剤が、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのＭＤＥＡと、約８５０ｍＭのＫＣｌと、約１の界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有し、当該界面活性剤が、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、組成物は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのｐＨ緩衝成分を更に含む。実施形態では、ｐＨ緩衝成分は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、又はそれらの組み合わせである。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0161】
実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのＤＥＡ－ＰＳと、約８５０ｍＭのＫＣｌと、約の界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有し、当該界面活性剤が、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのＤＥＡ－ＰＳと、約８５０ｍＭのＫＣｌと、約１の界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有し、当該界面活性剤が、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、組成物は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのｐＨ緩衝成分を更に含む。実施形態では、ｐＨ緩衝成分は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、又はそれらの組み合わせである。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0162】
実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのｔＢＤＥＡと、約８５０ｍＭのＬｉＣｌと、約１ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有し、当該界面活性剤が、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのｔＢＤＥＡと、約８５０ｍＭのＬｉＣｌと、約１ｍＭの界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有し、当該界面活性剤が、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、組成物は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのｐＨ緩衝成分を更に含む。実施形態では、ｐＨ緩衝成分は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、又はそれらの組み合わせである。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0163】
実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのＭＤＥＡと、約８５０ｍＭのＬｉＣｌと、約の界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有し、当該界面活性剤が、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのＭＤＥＡと、約８５０ｍＭのＬｉＣｌと、約１の界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有し、当該界面活性剤が、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、組成物は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのｐＨ緩衝成分を更に含む。実施形態では、ｐＨ緩衝成分は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、又はそれらの組み合わせである。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0164】
実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのＤＥＡ－ＰＳと、約８５０ｍＭのＬｉＣｌと、約の界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有し、当該界面活性剤が、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのＤＥＡ－ＰＳと、約８５０ｍＭのＬｉＣｌと、約１の界面活性剤と、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有し、当該界面活性剤が、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、組成物を提供する。実施形態では、組成物は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのｐＨ緩衝成分を更に含む。実施形態では、ｐＨ緩衝成分は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、又はそれらの組み合わせである。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0165】
実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのｔＢＤＥＡと、約８５０ｍＭのＮａＣｌと、約１ｍＭのＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルと、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのｔＢＤＥＡと、約８５０ｍＭのＮａＣｌと、約１ｍＭのＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルと、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのＭＤＥＡと、約８５０ｍＭのＮａＣｌと、約１ｍＭのＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルと、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのＭＤＥＡと、約８５０ｍＭのＮａＣｌと、約１ｍＭのＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルと、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのＤＥＡ－ＰＳと、約８５０ｍＭのＮａＣｌと、約１ｍＭのＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルと、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのＤＥＡ－ＰＳと、約８５０ｍＭのＮａＣｌと、約１ｍＭのＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルと、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、組成物は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのｐＨ緩衝成分を更に含む。実施形態では、ｐＨ緩衝成分は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、又はそれらの組み合わせである。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0166】
実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのｔＢＤＥＡと、約８５０ｍＭのＫＣｌと、約１ｍＭのＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルと、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのｔＢＤＥＡと、約８５０ｍＭのＫＣｌと、約１ｍＭのＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルと、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのＭＤＥＡと、約８５０ｍＭのＫＣｌと、約１ｍＭのＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルと、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのＭＤＥＡと、約８５０ｍＭのＫＣｌと、約１ｍＭのＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルと、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのＤＥＡ－ＰＳと、約８５０ｍＭのＫＣｌと、約１ｍＭのＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルと、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのＤＥＡ－ＰＳと、約８５０ｍＭのＫＣｌと、約１ｍＭのＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルと、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、組成物は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのｐＨ緩衝成分を更に含む。実施形態では、ｐＨ緩衝成分は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、又はそれらの組み合わせである。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0167】
実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのｔＢＤＥＡと、約８５０ｍＭのＬｉＣｌと、約１ｍＭのＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルと、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのｔＢＤＥＡと、約８５０ｍＭのＬｉＣｌと、約１ｍＭのＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルと、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのＭＤＥＡと、約８５０ｍＭのＬｉＣｌと、約１ｍＭのＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルと、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのＭＤＥＡと、約８５０ｍＭのＬｉＣｌと、約１ｍＭのＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルと、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのＤＥＡ－ＰＳと、約８５０ｍＭのＬｉＣｌと、約１ｍＭのＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルと、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．５のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、本開示は、約１５０ｍＭのＤＥＡ－ＰＳと、約８５０ｍＭのＬｉＣｌと、約１ｍＭのＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルと、を含む、組成物であって、当該組成物が、約７．８のｐＨを有する、組成物を提供する。実施形態では、組成物は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのｐＨ緩衝成分を更に含む。実施形態では、ｐＨ緩衝成分は、Ｔｒｉｓ、リン酸塩、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、又はそれらの組み合わせである。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0168】
実施形態では、本開示は、ＥＣＬ共反応物質と、イオン成分と、界面活性剤と、を含む、組成物を提供する。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質は、トリブチルアミン（ＴＢＡ）、（ジブチル）アミノエタノール（ＤＢＡＥ）、（ジエチル）アミノエタノール（ＤＥＡＥ）、トリエタノールアミン（ＴＥＡ）、ブチルジエタノールアミン（ＢＤＥＡ）、プロピルジエタノールアミン（ＰＤＥＡ）、エチルジエタノールアミン（ＥＤＥＡ）、メチルジエタノールアミン（ＭＤＥＡ）、ｔｅｒｔ－ブチルジエタノールアミン（ｔＢＤＥＡ）、ジブチルアミン（ＤＢＡ）、ブチルエタノールアミン（ＢＥＡ）、ジエタノールアミン（ＤＥＡ）、ジブチルアミンプロピルスルホン酸塩（ＤＢＡ－ＰＳ）、ジブチルアミンブチルスルホン酸塩（ＤＢＡ－ＢＳ）、ブチルエタノールアミンプロピルスルホン酸塩（ＢＥＡ－ＰＳ）、ブチルエタノールアミンブチルスルホン酸塩（ＢＥＡ－ＢＳ）、ジエタノールアミンプロピルスルホン酸塩（別名３－［ビス－（２－ヒドロキシ－エチル）－アミノ］－プロパン－１－スルホン酸、ＤＥＡ－ＰＳ）、ジエタノールアミンブチルスルホン酸塩（ＤＥＡ－ＢＳ）、又はそれらの組み合わせである。実施形態では、組成物は、約７．０～約８．０のｐＨを有する。実施形態では、組成物は、ｐＨ緩衝成分を更に含む。好適なイオン成分（例えば、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、及びＬｉＣｌ）、界面活性剤（例えば、本明細書に記載のＴＲＩＴＯＮ Ｘ－１００又は穏やかな界面活性剤）、ｐＨ緩衝成分（例えば、Ｔｒｉｓ又はリン酸塩）、及び組成物中のそれらの濃度が、本明細書で提供される。実施形態では、組成物は、ＥＣＬ標識成分を更に含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。
【0169】
方法
実施形態では、本開示は、電気化学発光（ＥＣＬ）を生成する方法であって、（ａ）電極を、本明細書で提供するＥＣＬ共反応物質組成物と接触させることと、（ｂ）電圧を当該電極に印加することと、（ｃ）ＥＣＬを生成することと、を含む、方法を提供する。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、本開示は、電気化学発光（ＥＣＬ）を生成する方法であって、（ａ）電極を、ＴＥＡ、イオン成分、及び必要に応じて界面活性剤を含むＴＥＡ組成物と接触させることと、（ｂ）当該電極に電圧を印加することと、（ｃ）ＥＣＬを生成することと、を含む、方法を提供する。実施形態では、方法は、生成されたＥＣＬを検出することを更に含む。実施形態では、方法は、生成されたＥＣＬを測定することを更に含む。実施形態では、電極は、表面上に存在する。
実施形態では、本開示は、電気化学発光（ＥＣＬ）を生成する方法であって、（ａ）電極を、本明細書で提供するＥＣＬ共反応物質組成物と接触させることと、（ｂ）電圧を当該電極に印加することと、（ｃ）ＥＣＬを生成することと、を含む、方法を提供する。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、本開示は、電気化学発光（ＥＣＬ）を生成する方法であって、（ａ）電極を、ＴＥＡ、イオン成分、及び必要に応じて界面活性剤を含むＴＥＡ組成物と接触させることと、（ｂ）当該電極に電圧を印加することと、（ｃ）ＥＣＬを生成することと、を含む、方法を提供する。実施形態では、方法は、生成されたＥＣＬを検出することを更に含む。実施形態では、方法は、生成されたＥＣＬを測定することを更に含む。実施形態では、電極は、表面上に存在する。
【0170】
実施形態では、本開示は、電気化学発光（ＥＣＬ）を生成する方法であって、（ａ）電極を、（ｉ）本明細書において提供されるＥＣＬ共反応物質組成物及び（ｉｉ）ＥＣＬ標識と接触させることと、（ｂ）当該電極に電圧を印加することと、（ｃ）ＥＣＬを生成することと、を含む、方法を提供する。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、本開示は、電気化学発光（ＥＣＬ）を生成する方法であって、（ａ）電極を、（ｉ）ＴＥＡと、イオン成分と、必要に応じて界面活性剤と、を含むＴＥＡ組成物、及び（ｉｉ）ＥＣＬ標識と接触させることと、（ｂ）当該電極に電圧を印加することと、（ｃ）ＥＣＬを生成することと、を含む、方法を提供する。実施形態では、方法は、生成されたＥＣＬを検出することを更に含む。実施形態では、方法は、生成されたＥＣＬを測定し、それにより、ＥＣＬ標識の量を定量することを更に含む。実施形態では、電極は、表面上に存在する。
【0171】
実施形態では、本開示は、試料中のＥＣＬ標識の量を定量する方法であって、（ａ）電極を、（ｉ）本明細書において提供されるＥＣＬ共反応物質組成物又は本明細書において提供されるＴＥＡ組成物、及び（ｉｉ）当該ＥＣＬ標識を含む当該試料と接触させることと、（ｂ）当該電極に電圧を印加すること、（ｃ）ＥＣＬを生成することと、（ｄ）当該ＥＣＬを測定することと、（ｅ）測定されたＥＣＬからＥＣＬ標識の量を定量することと、を含む、方法を提供する。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＴＥＡ組成物は、ＴＥＡと、イオン成分と、必要に応じて界面活性剤と、を含む。
【0172】
実施形態では、ＥＣＬは、本明細書の組成物中のＥＣＬ共反応物質（例えば、ＴＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、及び／又はＤＥＡ－ＰＳ）とＥＣＬ標識との間の反応から生成される。実施形態では、ＥＣＬ標識は、ＥＣＬ標識成分上に存在する。実施形態では、ＥＣＬ標識は、試料中に存在する。実施形態では、試料は、ＥＣＬ標識成分を含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、検出試薬を含む。実施形態では、試料は、ＥＣＬ標識成分の結合パートナーを含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、検出試薬の結合パートナーを含む。実施形態では、検出試薬は、検出試薬、分析物、及び捕捉試薬を含む結合錯体の一部であり、捕捉試薬は、表面上に固定化された（ｉｍｍｂｏｌｉｚｅｄ）結合試薬に対する結合パートナーを含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ペプチド又はタンパク質などの標的分析物に結合する検出試薬（例えば、検出抗体）に付着した伸長プライマーに相補的なオリゴヌクレオチドプローブである。検出試薬及びそれらの結合パートナーは、本明細書に更に記載される。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、結合錯体中に存在し、方法は、生成されたＥＣＬを検出することによって結合錯体を検出することを更に含む。実施形態では、方法は、電極を、ＥＣＬ標識成分の結合パートナーを含む試料と接触させることを含み、ＥＣＬ標識成分及び結合パートナーは、結合錯体を形成し、当該方法は、生成されたＥＣＬを検出することによって結合錯体を検出することを更に含む。実施形態では、方法は、生成されたＥＣＬを測定し、それにより、ＥＣＬ標識成分及び／又は結合錯体の量を定量することを含む。
【0173】
実施形態では、試料、本明細書において提供されるＥＣＬ共反応物質組成物又はＴＥＡ組成物、及びＥＣＬ標識成分のそれぞれは、乾燥している。実施形態では、実施形態では、試料、本明細書において提供されるＥＣＬ共反応物質組成物又はＴＥＡ組成物、及びＥＣＬ標識成分のそれぞれは、液体である。実施形態では、試料、本明細書において提供されるＥＣＬ共反応物質組成物又はＴＥＡ組成物、及びＥＣＬ標識成分のうちの１つ以上は、乾燥しており、残りの成分（複数可）は、液体である。例えば、試料は、液体であり、本明細書において提供されるＥＣＬ共反応物質組成物又はＴＥＡ組成物、及びＥＣＬ標識成分の一方又は両方は、乾燥している。液体成分及び乾燥成分を含む実施形態では、液体成分は、乾燥成分を再構成する。実施形態では、方法は、電極を液体希釈剤と接触させ、それにより、乾燥した成分（複数可）を液体中で再構成することを更に含む。実施形態では、乾燥成分（複数可）は、表面上に存在する。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、乾燥しており、表面上に存在する。実施形態では、ＴＥＡ組成物は、乾燥しており、表面上に存在する。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、乾燥しており、表面上に存在する。乾燥形態の組成物が、本明細書に記載されている。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＴＥＡ組成物は、ＴＥＡと、イオン成分と、必要に応じて界面活性剤と、を含む。
【0174】
実施形態では、結合錯体中のＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬の第１のコピーである。実施形態では、結合錯体は、検出試薬の第１のコピーと、表面上に固定化された結合試薬と、を含む。結合試薬は、本明細書に更に記載される。実施形態では、方法は、結合錯体を形成することを更に含む。実施形態では、結合錯体は、当該方法の工程（ａ）の前又は間に形成される。
【0175】
実施形態では、結合錯体は、結合試薬と、検出試薬の第１のコピーと、ＥＣＬ標識を含む検出試薬の第２のコピーと、を含むアッセイ混合物を、結合錯体が表面上に形成され、かつ検出試薬の第２のコピーが溶液中に残る条件下でインキュベートすることによって形成される。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ＢＤＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡを含む。実施形態では、ＴＥＡ組成物は、ＴＥＡと、イオン成分と、必要に応じて界面活性剤と、を含む。
【0176】
実施形態では、結合錯体は、結合試薬と、検出試薬の第１のコピーと、ＥＣＬ標識を含む検出試薬の第２のコピーと、本明細書において提供されるＥＣＬ共反応物質組成物又はＴＥＡ組成物と、を含むアッセイ混合物を、結合錯体が表面上に形成され、かつ検出試薬の第２のコピーが溶液中に残る条件下でインキュベートすることによって形成される。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、組成物は、ＴＥＡを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＴＥＡ組成物は、ＴＥＡと、イオン成分と、必要に応じて界面活性剤と、を含む。
【0177】
実施形態では、結合錯体は、試料を、検出試薬の第１のコピー、ＥＣＬ標識を含む検出試薬の第２のコピー、及び本明細書において提供されるＥＣＬ共反応物質組成物又はＴＥＡ組成物と組み合わせ、それにより、アッセイ混合物を形成することと、結合錯体が表面上に形成され、第２の検出試薬が溶液中に残る条件下で、アッセイ混合物を結合試薬と接触させることと、によって形成される。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ＢＤＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、組成物は、ＴＥＡを含む。実施形態では、ＴＥＡ組成物は、ＴＥＡと、イオン成分と、必要に応じて界面活性剤と、を含む。
【0178】
実施形態では、結合錯体は、分析物を更に含む。分析物は、本明細書に更に記載される。実施形態では、結合試薬及び検出試薬は、それぞれ、分析物に特異的に結合する。実施形態では、方法は、生成されたＥＣＬを検出することによって分析物を検出することを含む。実施形態では、方法は、生成されたＥＣＬを測定し、それにより、分析物の量を定量することを含む。
【0179】
実施形態では、ＥＣＬ標識は、電気化学発光有機金属錯体を含む。実施形態では、電気化学発光有機金属錯体は、ルテニウム、オスミウム、イリジウム、レニウム、及び／又はランタニド金属を含む。実施形態では、ＥＣＬ標識は、ルテニウムを含む。実施形態では、ＥＣＬ標識は、ルテニウム（ＩＩ）トリス－ビピリジンを含む。実施形態では、電気化学発光有機金属錯体は、置換若しくは非置換ビピリジン、又は置換若しくは非置換フェナントロリンを含む。実施形態では、ＥＣＬ標識は、置換ビピリジンを含む。実施形態では、ＥＣＬ標識は、少なくとも１つの置換ビピリジン配位子を含む有機金属錯体を含み、置換ビピリジン配位子は、少なくとも１つのスルホネート基を含む。実施形態では、ＥＣＬ標識は、少なくとも２つの置換ビピリジン配位子を含む有機金属錯体を含み、各置換ビピリジン配位子は、少なくとも１つのスルホネート基を含む。実施形態では、少なくとも１つのスルホネート基を含む置換ビピリジン配位子は、式Ｉの化合物である。実施形態では、ＥＣＬ標識は、式ＩＩの化合物を含む。
【0180】
実施形態では、本明細書の組成物は、例えば、目的の分析物及び／若しくは分析物を含む結合錯体を検出並びに／又は定量するために、ＥＣＬベースの結合アッセイにおいて使用される。実施形態では、結合錯体は、例えば、電極を含む表面上に形成され、結合錯体は、本明細書に記載のＥＣＬ共反応物質と接触したときにＥＣＬを生成することができるＥＣＬ標識を含む。結合アッセイ形式には、以下が含まれるが、これらに限定されない：（１）目的の分析物をＥＣＬ標識で標識し、分析物の結合パートナーである結合試薬を表面に固定化させ、結合試薬と標識された分析物との直接結合によって結合錯体を形成する、直接結合アッセイ；（２）固定化された結合試薬とＥＣＬ標識を含む検出試薬が、両方とも分析物の結合パートナーであり、分析物が、２つの結合パートナーに結合して、結合複合錯体を形成する、サンドイッチ結合アッセイ；（３）固定化された結合試薬が、分析物の結合パートナーであり、標識された検出試薬が、分析物への結合のための固定化された結合試薬と競合する競合体（例えば、分析物又は分析物の構造類似体）であるか、あるいは標識された検出試薬が、分析物の結合パートナーであり、固定化された結合試薬が、分析物への結合のための検出試薬と競合する競合体である、競合的結合アッセイ。競合的結合アッセイでは、固定化された結合試薬と標識された検出試薬との直接結合によって形成された標識結合錯体は、分析物の量が増加するにつれて量が減少する。結合アッセイは、例えば、ＷＯ２０１４／１６５０６１、ＷＯ２０１４／１６０１９２、ＷＯ２０１５／１７５８５６、ＵＳ９，６１８，５１０、ＵＳ１０，１１４，０１５、ＵＳ１０，４０８，８２３、ＵＳ２０１７／０１６８０４７、及びＵＳ２０１９／００１１４４１に更に記載されており、これらの各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【0181】
実施形態では、本開示は、結合錯体を検出するための方法であって、（ａ）液体試料を、本明細書において提供されるＥＣＬ共反応物質若しくはＴＥＡ組成物を含む表面と接触させることであって、当該液体試料が、ＥＣＬ標識成分を含むか、又は当該液体試料が、ＥＣＬ標識成分の結合パートナーを含み、当該方法が、当該表面をＥＣＬ標識成分と接触させ、それにより、ＥＣＬ標識成分を含む結合錯体を当該表面上に形成することを更に含む、接触させることと、（ｂ）当該表面に電圧を印加して、ＥＣＬを生成することと、（ｃ）生成されたＥＣＬを検出し、それにより、結合錯体を検出することと、を含む、方法を提供する。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡを含む。実施形態では、ＴＥＡ組成物は、ＴＥＡと、イオン成分と、必要に応じて界面活性剤と、を含む。実施形態では、表面は、電極を含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬を含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬を含み、結合錯体は、結合試薬及び検出試薬を含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、検出試薬の結合パートナーを含み、結合パートナーは、ＥＣＬ標識を含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、検出試薬の結合パートナーを含み、結合錯体は、結合試薬と、検出試薬と、結合パートナーと、を含む。検出試薬及び結合パートナーは、本明細書に更に記載される。実施形態では、検出試薬及びＥＣＬ標識成分は、相補的オリゴヌクレオチドを含む。実施形態では、結合錯体は、分析物を更に含む。実施形態では、結合試薬及び検出試薬は、それぞれ、分析物に特異的に結合する。
【0182】
実施形態では、本開示は、結合錯体を検出するための方法であって、（ａ）液体試料を表面と接触させることであって、当該表面が、ＥＣＬ標識成分と、本明細書において提供されるＥＣＬ共反応物質組成物若しくはＴＥＡ組成物と、を含み、当該液体試料が、ＥＣＬ標識成分の結合パートナーを含み、それにより、当該ＥＣＬ標識成分を含む結合錯体を当該表面上に形成することと、（ｂ）当該表面に電圧を印加して、ＥＣＬを生成することと、（ｃ）生成されたＥＣＬを検出し、それにより、当該結合錯体を検出することと、を含む、方法を提供する。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡを含む。実施形態では、ＴＥＡ組成物は、ＴＥＡと、イオン成分と、必要に応じて界面活性剤と、を含む。実施形態では、表面は、電極を含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬を含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬を含み、結合錯体は、結合試薬及び検出試薬を含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、検出試薬の結合パートナーを含み、結合パートナーは、ＥＣＬ標識を含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、検出試薬の結合パートナーを含み、結合錯体は、結合試薬と、検出試薬と、結合パートナーと、を含む。検出試薬及び結合パートナーは、本明細書に更に記載される。実施形態では、検出試薬及びＥＣＬ標識成分は、相補的オリゴヌクレオチドを含む。実施形態では、結合錯体は、分析物を更に含む。実施形態では、結合試薬及び検出試薬は、それぞれ、分析物に特異的に結合する。
【0183】
実施形態では、本開示は、結合錯体を検出するための方法であって、（ａ）表面上に結合錯体を形成することであって、当該結合錯体が、ＥＣＬ標識成分を含む、形成することと、（ｂ）当該結合錯体を、本明細書において提供されるＥＣＬ共反応物質組成物又はＴＥＡ組成物と接触させることと、（ｃ）当該表面に電圧を印加して、ＥＣＬを生成することと、（ｄ）生成されたＥＣＬを検出し、それにより、当該結合錯体を検出することと、を含む、方法を提供する。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ＢＤＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡを含む。実施形態では、ＴＥＡ組成物は、ＴＥＡと、イオン成分と、必要に応じて界面活性剤と、を含む。実施形態では、表面は、電極を含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬を含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、ＥＣＬ標識を含む検出試薬を含み、結合錯体は、結合試薬及び検出試薬を含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、検出試薬の結合パートナーを含み、結合パートナーは、ＥＣＬ標識を含む。実施形態では、ＥＣＬ標識成分は、検出試薬の結合パートナーを含み、結合錯体は、結合試薬と、検出試薬と、結合パートナーと、を含む。検出試薬及び結合パートナーは、本明細書に更に記載される。実施形態では、検出試薬及びＥＣＬ標識成分は、相補的オリゴヌクレオチドを含む。実施形態では、結合錯体は、分析物を更に含む。実施形態では、結合試薬及び検出試薬は、それぞれ、分析物に特異的に結合する。
【0184】
実施形態では、本開示は、結合錯体を検出するための方法であって、（ａ）表面上に結合錯体を形成することであって、当該表面が、電極を含み、当該結合錯体が、当該表面上に固定化された結合試薬と、電気化学発光（ＥＣＬ）標識を含む検出試薬と、を含む、形成することと、（ｂ）当該結合錯体を、本明細書において提供されるＥＣＬ共反応物質組成物又はＴＥＡ組成物と接触させることと、（ｃ）当該表面に電圧を印加して、ＥＣＬを生成することと、（ｄ）生成されたＥＣＬを検出し、それにより、当該結合錯体を検出することと、を含む、方法を提供する。実施形態では、結合錯体は、分析物を更に含み、結合試薬及び検出試薬は、それぞれ、分析物に特異的に結合する。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ＢＤＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡを含む。実施形態では、ＴＥＡ組成物は、ＴＥＡと、イオン成分と、必要に応じて界面活性剤と、を含む。実施形態では、結合錯体は、分析物を更に含む。実施形態では、結合試薬及び検出試薬は、それぞれ、分析物に特異的に結合する。
【0185】
実施形態では、本開示は、試料中の目的の分析物を検出するための方法であって、（ａ）試料を、（ｉ）結合試薬を含む表面であって、当該結合試薬が、当該分析物に特異的に結合する、結合試薬、及び（ｉｉ）当該分析物に特異的に結合する検出試薬であって、当該検出試薬が、電気化学発光（ＥＣＬ）標識を含み、それにより、当該結合試薬と、当該分析物と、当該検出試薬と、を含む結合錯体を当該表面上に形成する、接触させることと、（ｂ）当該表面上の当該結合錯体を、本明細書において提供されるＥＣＬ共反応物質組成物又はＴＥＡ組成物と接触させることと、（ｃ）当該表面に電圧を印加して、ＥＣＬを生成することと、（ｄ）生成されたＥＣＬを検出することと、を含む、方法を提供する。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ＢＤＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡを含む。実施形態では、ＴＥＡ組成物は、ＴＥＡと、イオン成分と、必要に応じて界面活性剤と、を含む。実施形態では、表面は、電極を含む。実施形態では、目的の分析物は、オリゴヌクレオチドであり、分析物に特異的に結合する検出試薬は、ＥＣＬ標識と、少なくともＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブが相補的オリゴヌクレオチドにハイブリダイズされていないときに、ＥＣＬ信号をクエンチするクエンチ部位と、を含むオリゴヌクレオチドプローブである。実施形態では、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブは、ステムループ又はヘアピン構造、ＥＣＬ標識、及びクエンチ部位を含み、当該クエンチ部位は、ＥＣＬ標識に近接しており、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブがステムループ又はヘアピン構成にあるときにはＥＣＬ標識をクエンチするが、ステムループ又はヘアピン構造が（例えば、図１４及び２０に示されるような）開放構成にあるときにはＥＣＬ標識をクエンチしない。実施形態では、ステムループ又はヘアピン構造を有するＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブは、ＥＣＬ標識分子ビーコンプローブである。実施形態では、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブは、ＥＣＬ標識及びクエンチャーを含み、ＥＣＬ標識及びクエンチャーは、プローブが線形構成（例えば、ステムループでもヘアピン構成でもない）にあるときにはプローブ上で互いに十分に近く、線形構成では、クエンチ部位は、プローブが（例えば、図２１に示されるように）相補的オリゴヌクレオチドにハイブリダイズされているかどうかにかかわらず、ＥＣＬ信号をクエンチする。
【0186】
実施形態では、本開示は、試料中の目的の分析物を検出するための方法であって、試料を、（ｉ）結合試薬を含む表面であって、当該結合試薬が、当該分析物（例えば、ペプチド）を含む結合錯体に特異的に結合する、表面、（ｉｉ）当該分析物に特異的に結合する捕捉試薬（例えば、抗体）であって、当該捕捉試薬が、当該結合試薬（例えば、ビオチン／ストレプトアビジン）に対する結合パートナーを更に含む、表面、（ｉｉｉ）当該分析物に特異的に結合する検出試薬であって、当該検出試薬が、オリゴヌクレオチドプライマー（例えば、オリゴヌクレオチドラブル抗体）を含む、検出試薬、（ｉｖ）鋳型オリゴヌクレオチド、及び（ｖ）ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブと接触させることを含む、方法を提供する。実施形態では、捕捉試薬及び検出試薬は、分析物に結合し、プライマーは、鋳型オリゴヌクレオチドに結合し、プライマーは、鋳型オリゴヌクレオチドの増幅により伸長され、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブは、（例えば、図２０に示すように）伸長プライマーオリゴヌクレオチドに結合する。実施形態では、結合錯体は、結合パートナーと、分析物と、伸長オリゴヌクレオチドプライマーを含む検出試薬と、を含む。表面を、本明細書において提供されるＥＣＬ共反応物質組成物又はＴＥＡ組成物と接触させ、表面に電圧を印加して、ＥＣＬを生成し、生成されたＥＣＬを検出し、それにより、当該分析物を検出する。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ＢＤＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡを含む。実施形態では、ＴＥＡ組成物は、ＴＥＡと、イオン成分と、必要に応じて界面活性剤と、を含む。実施形態では、表面は、電極を含む。実施形態では、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブは、分子ビーコンプローブである。
【0187】
本明細書で考察されるように、本明細書において提供される組成物は、洗浄工程を必要としないＥＣＬベースのアッセイで使用され得る。表面上で行われるＥＣＬベースのアッセイとの関連で使用される「洗浄工程」は、アッセイ反応混合物から望ましくない成分、例えば、試料の過剰な、非特異的に結合された、若しくは非結合の試薬（例えば、検出試薬及び／若しくはＥＣＬ標識）、並びに／又は試料の非結合の若しくは非特異的に結合された成分を除去するために、洗浄バッファーを表面に添加することを指す。一例では、生体試料は、目的の分析物と、目的のものではなく、結合試薬に特異的に結合しない様々な他の生体材料と、を含有することができ、洗浄工程は、かかる成分を反応混合物から除去することができる。実施形態では、組成物は、ＴＥＡを含む。実施形態では、組成物は、ＴＥＡと、イオン成分と、必要に応じて界面活性剤と、を含む。「洗浄」アッセイにおいて、洗浄工程は、典型的には、表面上のＥＣＬ標識を検出する前に、非結合ＥＣＬ標識を除去するために使用される。検出方法が、表面に結合したＥＣＬ標識（例えば、検出される結合錯体の一部として）又は溶液中の非結合「遊離」ＥＣＬ標識を効果的に識別できる場合、洗浄工程を排除してもよい。洗浄工程が排除された「非洗浄」アッセイ形式は、多くの状況で洗浄工程を実行するのが困難又は煩雑である可能性があるため、しばしば有利である。しかしながら、非洗浄アッセイ形式は、典型的には、反応混合物中に存在する遊離ＥＣＬ標識と結合ＥＣＬ標識との不完全な識別からの高いバックグラウンドＥＣＬ信号に起因して、開発するのが困難である。洗浄工程を使用するアッセイにおいても、質の悪い洗浄に関連する可能性のある低レベルの遊離標識混入に対する許容性を提供することによって、洗浄の非効率性又は洗浄の質の変動に対するより堅牢性を提供するため、結合ＥＣＬ標識と遊離ＥＣＬ標識とを良好に識別することが有利である。
【0188】
本明細書で考察されるように、本明細書の組成物は、固体表面（例えば、固体電極表面）上で行われるＥＣＬベースのアッセイにおいて、驚くべきことに、遊離ＥＣＬ標識と、結合ＥＣＬ標識とを識別した。実施形態では、本明細書における組成物は、結合標識からのＥＣＬ信号と遊離標識からのＥＣＬ信号との比を増加させる。したがって、本明細書の組成物は、特に低親和性相互作用を測定する場合に、改善されたアッセイ性能を提供し、これは、反応における高濃度のＥＣＬ標識の存在を必要とするが、洗浄工程中の結合錯体の解離に起因する著しい信号損失を受けることも予期される。実施形態では、組成物は、ＴＥＡを含む。実施形態では、組成物は、ＴＥＡと、イオン成分と、必要に応じて界面活性剤と、を含む。
【0189】
理論によって拘束されるものではないが、本明細書の組成物及びＥＣＬ共反応物質（例えば、ＴＥＡ）は、ＥＣＬがＥＣＬ標識から生成される固体電極表面からの距離を減少させると考えられる。これにより、遊離標識（電極上の溶液全体に分布する）と比較して、結合標識（電極に近接して保持される）の信号が増加する。結合標識からの信号の増加はまた、「有効励起長」の観点から特徴付けることができ、これは、遊離ＥＣＬ標識が励起されることができる最大距離である。「有効励起長」は、以下の影響を受ける。（１）ＥＣＬの生成に関与する距離の短い中間体（例えばＥＣＬ共反応物質の酸化生成物）は、副反応で枯渇する前に電極から拡散することができる（これらの中間体の寿命及び拡散定数の関数）、並びに（２）遊離標識又は非結合試薬が、これらの反応性中間体との反応に関与するのに十分に電極に近い領域内に拡散する速度（非結合ＥＣＬ標識又は標識試薬の拡散定数の関数）。本明細書の組成物を使用する方法では、有効励起長は、ＴＰＡを含む組成物と比較して、２倍超、３倍超、４倍超、５倍超、９倍超、７倍超、８倍超、９倍超、又は１０倍超減少する。実施形態では、組成物は、ＴＥＡを含む。実施形態では、組成物は、ＴＥＡと、イオン成分と、必要に応じて界面活性剤と、を含む。
【0190】
実施形態では、本明細書の方法は、洗浄工程を含まない。本方法が結合錯体を検出する実施形態では、本方法は、表面上に結合錯体を形成する前、間、又は後の洗浄工程を含まない。本方法が試料中の目的の分析物を検出する実施形態では、本方法は、（ｉ）結合試薬を含む表面であって、結合試薬が分析物に特異的に結合する、表面、及び（ｉｉ）分析物に特異的に結合する検出試薬と試料を接触させる前、間、又は後に洗浄工程を含まない。実施形態では、本方法は、結合錯体を組成物と接触させる前、結合中、又は結合後に洗浄工程を含まない。実施形態では、本方法は、ＥＣＬを生成するための表面への電圧の前、間、又は後に洗浄工程を含まない。実施形態では、本方法は、生成されたＥＣＬを検出する前又は間に洗浄工程を含まない。実施形態では、組成物は、ＴＥＡを含む。実施形態では、組成物は、ＴＥＡと、イオン成分と、必要に応じて界面活性剤と、を含む。
【0191】
実施形態では、本明細書の方法は、洗浄工程を含む。本方法が結合錯体を検出する実施形態では、本方法は、表面上に結合錯体を形成する前、その間、又はその後に洗浄工程を含む。本方法が試料中の目的の分析物を検出する実施形態では、本方法は、（ｉ）結合試薬を含む表面であって、結合試薬が分析物に特異的に結合する、表面、及び（ｉｉ）分析物に特異的に結合する検出試薬と試料を接触させる前、間、又は後に洗浄工程を含む。実施形態では、本方法は、結合錯体を組成物と接触させる前、結合中、又は結合後に洗浄工程を含む。実施形態では、本方法は、ＥＣＬを生成するための表面への電圧の前、間、又は後に洗浄工程を含む。実施形態では、本方法は、生成されたＥＣＬを検出する前又は間に洗浄工程を含む。実施形態では、組成物は、ＴＥＡ、ＢＤＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、組成物は、ＴＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡを含む。
【0192】
実施形態では、本開示は、結合錯体を検出するための方法であって、（ａ）試料を、（ｉ）本明細書において提供されるＥＣＬ共反応物質組成物又はＴＥＡ組成物、及び（ｉｉ）検出試薬の少なくとも２つのコピーを含む検出混合物であって、当該検出試薬の各コピーがＥＣＬ標識を含む、検出混合物と組み合わせることによって、アッセイ混合物を形成することと、（ｂ）当該アッセイ混合物を、必要に応じて電極を含む表面上に固定化された結合試薬と、（Ｉ）結合錯体が当該表面上に形成され、当該結合錯体が当該結合試薬及び当該検出試薬の第１のコピーを含み、かつ（ＩＩ）当該検出試薬の第２のコピーが溶液中に残存する条件下で接触させることと、（ｃ）電圧を表面に印加して、ＥＣＬを生成することと、（ｄ）生成されたＥＣＬを検出し、それにより、当該結合錯体を検出することと、を含む、方法を提供する。実施形態では、表面は、電極を含む。実施形態では、検出試薬の第２のコピーは、工程（ｂ）～（ｄ）のいずれの前にも除去されない。実施形態では、検出試薬の第２のコピーは、工程（ｂ）の前に除去されない。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ＢＤＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＴＥＡ組成物は、ＴＥＡと、イオン成分と、必要に応じて界面活性剤と、を含む。
【0193】
実施形態では、本開示は、結合錯体を検出するための方法であって、（ａ）（ｉ）表面上に固定化された結合試薬であって、当該表面が、必要に応じて電極を含む、結合試薬と、（ｉｉ）検出試薬の少なくとも２つのコピーを含む検出試薬であって、当該検出試薬の各コピーが、電気化学発光（ＥＣＬ）標識を含む、検出混合物と、を含むアッセイ混合物を、（ｉ）結合錯体が当該表面上に形成され、当該結合錯体が、当該結合試薬と、当該検出試薬の第１のコピーと、を含み、かつ（ｉｉ）当該検出試薬の第２のコピーが溶液中に残る条件下で、インキュベートすることと、（ｂ）当該結合錯体を、本明細書において提供されるＥＣＬ共反応物質組成物又はＴＥＡ組成物と接触させることと、（ｃ）電圧を当該表面に印加して、ＥＣＬを生成することと、（ｄ）生成されたＥＣＬを検出し、それにより、当該結合錯体を検出することと、を含む、方法を提供する。実施形態では、表面は、電極を含む。実施形態では、方法は、工程（ｂ）～（ｄ）のいずれかの前に表面を洗浄し、それにより、検出試薬の第２のコピーを除去することを更に含む。実施形態では、検出試薬の第２のコピーは、工程（ｂ）～（ｄ）のいずれの前にも除去されない。実施形態では、検出試薬の第２のコピーは、工程（ｂ）の前に除去されない。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡを含む。実施形態では、ＴＥＡ組成物は、ＴＥＡと、イオン成分と、必要に応じて界面活性剤と、を含む。
【0194】
実施形態では、本開示は、結合錯体を検出するための方法であって、（ａ）（ｉ）表面上に固定化された結合試薬であって、当該表面が、必要に応じて電極を含む、結合試薬と、（ｉｉ）検出試薬の少なくとも２つのコピーを含む検出混合物であって、当該検出試薬の各コピーが、電気化学発光（ＥＣＬ）標識を含む、検出混合物と、（ｉｉｉ）本明細書において提供されるＥＣＬ共反応物質組成物又はＴＥＡ組成物と、を含む、アッセイ混合物を、（ｉ）当該表面上に結合錯体が形成され、当該結合錯体が、当該結合試薬と、当該検出試薬の第１のコピーと、を含み、かつ（ｉｉ）当該検出試薬の第２のコピーが溶液中に残る条件下でインキュベートすることと、（ｂ）当該表面に電圧を印加して、ＥＣＬを生成することと、（ｃ）生成されたＥＣＬを検出し、それにより、当該結合錯体を検出することと、を含む、方法を提供する。実施形態では、表面は、電極を含む。実施形態では、方法は、工程（ｂ）又は（ｃ）のいずれかの前に表面を洗浄し、それにより、検出試薬の第２のコピーを除去することを更に含む。実施形態では、検出試薬の第２のコピーは、工程（ｂ）又は（ｄ）のいずれの前にも除去されない。実施形態では、検出試薬の第２のコピーは、工程（ｂ）の前に除去されない。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡを含む。実施形態では、ＴＥＡ組成物は、ＴＥＡと、イオン成分と、必要に応じて界面活性剤と、を含む。
【0195】
実施形態では、結合錯体は、分析物を更に含み、結合試薬及び検出試薬の第１のコピーは、それぞれ、分析物に特異的に結合する。
【0196】
実施形態では、結合試薬の少なくとも２つのコピーは、表面上に固定化され、結合試薬の第１のコピーは、検出試薬の第１のコピーと錯体を形成し、結合試薬の第２のコピーは、検出試薬の第２のコピーと錯体を形成しないように、競合体に結合する。実施形態では、結合試薬の少なくとも２つのコピーは、表面上に固定化され、結合試薬の第１のコピーは、検出試薬の第１のコピーと錯体を形成し、検出試薬の第２のコピーは、結合試薬の第２のコピーが検出試薬の第２のコピーと錯体を形成しないように、競合体に結合する。競合体及び競合的アッセイ形式は、本明細書に更に記載される。
【0197】
実施形態では、結合試薬は、検出試薬の第１のコピーに結合して、結合錯体を形成する。
【0198】
実施形態では、結合試薬は、抗体若しくはその抗原結合断片、抗原、配位子、受容体、オリゴヌクレオチド、ハプテン、エピトープ、ミモトープ、又はアプタマーを含む。実施形態では、結合試薬は、その抗原／エピトープ結合部分、抗体断片若しくは誘導体、抗体類似体、操作抗体、又は抗体と同様の方法で抗原に結合する物質を含む、抗体又はそのバリアントである。実施形態では、結合試薬は、抗体の少なくとも１つの重鎖又は軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。実施形態では、結合試薬は、１つ以上の抗体からのうちの少なくとも２つのＣＤＲを含む。実施形態では、結合試薬は、抗体又はその抗原結合断片である。実施形態では、結合試薬は、分析物に特異的に結合する。本明細書で使用される場合、「特異的に結合する」は、試薬（例えば、結合試薬）が、ランダムな非関連物質と比較して、その結合パートナー（例えば、分析物のエピトープ）に優先的に結合することを意味する。実施形態では、結合試薬は、分析物のエピトープに特異的に結合する結合ドメインを含む、抗体又はその抗原結合断片である。
【0199】
実施形態では、結合試薬は、表面に固定化される。実施形態では、結合試薬は、表面に直接固定化される。実施形態では、結合試薬は、結合試薬及び表面上の二次結合パートナーを介して表面上に間接的に固定化される。例示的な二次結合パートナーには、相補的オリゴヌクレオチド、受容体－配位子対、抗原－抗体対、ハプテン－抗体対、エピトープ－抗体対、ミモトープ－抗体対、アプタマー－標的分子対、ハイブリダイゼーションパートナー、インターカレーター－標的分子対、相互反応性部分（例えば、チオール及びマレイミド又はヨードアセトアミド、アルデヒド及びヒドラジド、又はアジド及びアルキン又はシクロアルキン）が含まれるが、これらに限定されない。
【0200】
実施形態では、検出試薬は、抗体若しくはその抗原検出断片、抗原、配位子、受容体、オリゴヌクレオチド、ハプテン、エピトープ、ミモトープ、又はアプタマーを含む。実施形態では、検出試薬は、その抗原／エピトープ検出部分、抗体断片若しくは誘導体、抗体類似体、操作抗体、又は抗体と同様の方法で抗原に結合する物質を含む、抗体又はそのバリアントである。実施形態では、検出試薬は、抗体の少なくとも１つの重鎖又は軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。実施形態では、検出試薬は、１つ以上の抗体からのうちの少なくとも２つのＣＤＲを含む。実施形態では、検出試薬は、抗体又はその抗原検出断片である。実施形態では、検出試薬は、分析物に特異的に結合する。実施形態では、検出試薬は、分析物のエピトープに特異的に結合する結合ドメインを含む、抗体又はその抗原結合断片である。実施形態では、検出試薬は、結合試薬とは異なる分析対象のエピトープに結合する。実施形態では、結合試薬及び検出試薬の両方が、抗体又はその抗原結合断片である。
【0201】
実施形態では、検出試薬は、ＥＣＬ標識を含む。実施形態では、ＥＣＬ標識は、電気化学発光有機金属錯体を含む。実施形態では、有機金属錯体は、ルテニウム、オスミウム、イリジウム、レニウム、及び／又はランタニド金属を含む。実施形態では、有機金属錯体は、置換若しくは非置換ビピリジン、又は置換若しくは非置換フェナントロリンを含む。実施形態では、ＥＣＬ標識は、ルテニウムを含む。実施形態では、ＥＣＬ標識は、ルテニウム（ＩＩ）トリス－ビピリジンを含む。実施形態では、ＥＣＬ標識は、置換ビピリジンを含む。実施形態では、ＥＣＬ標識は、少なくとも１つの置換ビピリジン配位子を含む有機金属錯体を含み、置換ビピリジン配位子は、少なくとも１つのスルホネート基を含む。実施形態では、ＥＣＬ標識は、少なくとも２つの置換ビピリジン配位子を含む有機金属錯体を含み、各置換ビピリジン配位子は、少なくとも１つのスルホネート基を含む。実施形態では、少なくとも１つのスルホネート基を含む置換ビピリジン配位子は、式Ｉの化合物である。実施形態では、ＥＣＬ標識は、式ＩＩの化合物を含む。例示的なＥＣＬ標識は、ＵＳ５，７１４，０８９、ＵＳ６，１３６，２６８、ＵＳ６，３１６，６０７、ＵＳ６，４６８，７４１、ＵＳ６，４７９，２３３、ＵＳ６，８０８，９３９、及びＵＳ９，４９９，５７３に提供され、これらの各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【0202】
実施形態では、結合試薬及び／又は検出試薬は、分析物に直接結合する。例えば、結合試薬及び検出試薬は、それぞれ、分析物上のエピトープに特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片である。実施形態では、結合試薬及び／又は検出試薬は、二次相互作用を介して分析物と間接的に結合する。実施形態では、分析物は、結合試薬及び／又は検出試薬の結合パートナーに連結される。例えば、結合試薬及び／又は検出試薬は、ストレプトアビジンを含み、分析物は、ビオチンに連結される。二次相互作用によって認識することができる結合パートナーの更なる例としては、例えば、アビジン－ビオチン、ストレプトアビジン－ビオチン、抗体－ハプテン、抗体－エピトープタグ、核酸－相補的核酸、アプタマー－アプタマー標的、及び受容体－配位子が挙げられる。
【0203】
実施形態では、表面は、マルチウェルプレートを含む。実施形態では、表面は、粒子を含む。実施形態では、表面は、アッセイカートリッジを含む。実施形態では、表面は、スライド、チップ、ウェル、アッセイセル若しくはフローセル、チューブ、チャネル、ビーズ、又は微粒子の表面を含む。実施形態では、表面は、粒子を含み、方法は、粒子を追加の表面上に収集することと、電圧を追加の表面上の粒子に印加することと、を更に含む。実施形態では、粒子は、ビーズ（磁気ビーズなど）であり、方法は、磁化プレート上にビーズ（複数可）を収集することであって、当該プレートが電極を含む、収集することと、プレートに電圧を印加することと、を更に含む。実施形態では、表面及び／又は追加の表面は、電極を含む。実施形態では、電極は、炭素電極、白金電極、金電極、又は銀電極である。実施形態では、電極は、炭素インク電極である。実施形態では、基材表面は、電極を含む。実施形態では、基材は、その上にコーティングされた電極層を含む。
【0204】
実施形態では、方法は、試料中の目的の分析物又は結合錯体の量を測定することを含む。ＥＣＬベースの結合アッセイにおけるＥＣＬ標識（又は分析物若しくは結合錯体）の量及び／又は濃度を決定するためにＥＣＬ信号の測定量を使用するアプローチは、当業者に既知であり、例えば、較正標準及び／又は較正曲線を使用して、ＥＣＬ信号とＥＣＬ標識及び／若しくは分析物の量並びに／又は濃度との関係を確立することを含む。較正は、異なる時間に、例えば、方法の開発中、特定のロットのアッセイ材料の適格性確認（ｑｕａｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ）中、及び／又はアッセイ測定時に、実行され得る。較正はまた、アッセイ成分及び計測装置の既知の物理的及び化学的挙動に基づいた計算を使用して実行してもよい。
【0205】
本明細書の方法を使用して、目的の分析物を含有し得る種々の試料を試験することができる。実施形態では、試料は、生体試料である。実施形態では、試料は、（生若しくは死）細胞、不死化細胞、細胞由来の生成物、細胞断片、細胞画分、（分画若しくは未分画）細胞溶解物、真核細胞、原核細胞、細胞小器官、細胞核及びその画分、細胞膜、ハイブリドーマ、細胞培養上清液（例えば、ハイブリドーマなどの抗体産生生物由来の上清液）、細胞骨格、タンパク質錯体、構造的生物学的成分、靭帯及び腱などの骨格成分、毛髪、毛皮、羽毛、毛髪画分、皮膚、真皮、内皮、哺乳類流体、分泌物、排泄物、全血、血漿、血清、痰、涙液、リンパ液、滑液、胸水、尿、汗、脳脊髄液、腹水、乳汁、糞便、気管支洗浄（ｂｒｏｎｃｈｉａｌ ｌａｖａｇｅ）、唾液、羊水、鼻汁、膣分泌液、擦過生検、精子、精液（ｓｅｍｅｎ）／精液（ｓｅｍｉｎａｌ ｆｌｕｉｄ）、創傷分泌物及び排泄物、粘膜スワブ、組織吸引物、組織ホモジネート、又はそれらからの抽出（ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ）、精製（ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ）、又はそれらの希釈（ｄｉｌｕｔｉｏｎ）に由来する。実施形態では、試料は、植物、植物副産物、土壌、水源、油、汚水、又は環境試料に由来する。実施形態では、試料は、水、有機溶媒（例えば、アセトニトリル、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、ｎ－メチルピロリドン、アルコール、若しくはそれらの組み合わせ）、ＥＤＴＡ、ヘパリン、クエン酸塩、又はそれらの組み合わせを更に含む。試料は、本明細書に記載される単一の供給源から入手し得るか、又は２つ以上の供給源からの混合物を含有し得る。
【0206】
本開示の方法を用いて測定することができる分析物としては、試料中に存在する、全細胞、細胞表面抗原、細胞内粒子（例えば、細胞小器官若しくは膜断片）、エクソソーム、細胞外小胞、リポソーム、膜小胞、ウイルス、プリオン、チリダニ若しくはその断片、ウイロイド、抗体、抗原、ハプテン、脂肪酸、核酸（及び合成類似体）、タンパク質（及び合成類似体）、リポタンパク質、多糖、阻害剤、補因子、ハプテン、細胞受容体、受容体配位子、リポ多糖、糖タンパク質、ペプチド、ポリペプチド、酵素、酵素基質、酵素生成物、第２のメッセンジャー、細胞代謝産物、ホルモン、薬理学的薬剤、合成有機分子、有機金属分子、トランキライザー、バルビタール酸塩、アルカロイド、ステロイド、ビタミン、アミノ酸、糖、レクチン、組換えタンパク質若しくは誘導タンパク質、ビオチン、アビジン、ストレプトアビジン、又は無機分子が挙げられるが、これらに限定されない。測定され得る活性としては、ホスホリラーゼ、ホスファターゼ、エステラーゼ、トランス－グルタミナーゼ、核酸損傷活性、トランスフェラーゼ、オキシダーゼ、レダクターゼ、デヒドロゲナーゼ、グリコシダーゼ、リボソーム、タンパク質処理酵素（例えば、プロテアーゼ、キナーゼ、タンパク質ホスファターゼ、ユビキチン－タンパク質リガーゼなど）、核酸処理酵素（例えば、ポリメラーゼ、ヌクレアーゼ、インテグラーゼ、リガーゼ、ヘリカーゼ、テロメラーゼなど）、細胞受容体活性化、第２のメッセンジャー系活性化などの活性が挙げられるが、これらに限定されない。
【0207】
全細胞は、動物、植物、又は細菌であり得、生細胞であり得るか、又は死細胞であり得る。例としては、真菌及び線虫などの植物病原体が挙げられる。「細胞内粒子」という用語は、本明細書に照らして理解される明白かつ通常の意味を有し、例えば、細胞内小器官、破壊された細胞からの膜粒子、細胞壁の断片、リボソーム、多酵素錯体、及び生体に由来し得る他の粒子を包含する。核酸としては、例えば、染色体ＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、ウイルスＤＮＡ、及び複数の供給源に由来する組換えＤＮＡが挙げられる。核酸としては、ＲＮＡ、例えば、メッセンジャーＲＮＡ、リボソームＲＮＡ、及びトランスファーＲＮＡも挙げられる。ポリペプチドとしては、例えば、酵素、輸送タンパク質、受容体タンパク質、及びウイルスコートタンパク質などの構造タンパク質が挙げられる。実施形態では、ポリペプチドは、酵素又は抗体である。実施形態では、ポリペプチドは、モノクローナル抗体である。ホルモンとしては、例えば、インスリン及びＴ４甲状腺ホルモンが挙げられる。薬理学的薬剤は、例えば、強心配糖体を含む。合成ポリペプチド、合成核酸、並びに合成膜、小胞及びリポソームなどの生物学的材料に化学的に類似する合成物質を含むことは、本開示の範囲内である。上記は、本開示での使用に好適な生物学的物質の包括的な列挙であることを意図するものではなく、本開示の広範な範囲を例示することのみを意図するものである。
【0208】
実施形態では、本明細書における方法は、複数の結合錯体及び／又は分析物を検出することができる多重化方法である。実施形態では、多重化方法は、複数の結合錯体及び／又は分析物を同時に検出する。実施形態では、多重化方法は、複数の結合錯体及び／又は分析物を測定するために１つ以上の方法工程を繰り返すことを含む。実施形態では、方法工程のそれぞれは、各結合錯体及び／又は分析物に対して並行して実行される。本方法が複数の結合錯体を検出する実施形態では、各結合錯体は、異なる結合試薬及び／又は検出試薬を含む。本方法が複数の分析物を検出する実施形態では、各分析物は、異なる結合試薬及び／又は検出試薬に結合する。実施形態では、各分析物の、その対応する結合試薬への結合は、複数の分析物を含む試料と表面（複数可）を接触させることによって、並行して実行される。
【0209】
実施形態では、多重化方法は、洗浄工程を含まない。多重化非洗浄アッセイは、アッセイ混合物中に存在する検出試薬の量が増加し、したがって溶液中のＥＣＬ標識の量が増加し、高いバックグラウンドＥＣＬ信号に寄与するため、特に困難である。本明細書におけるＥＣＬ共反応物質は、多重化非洗浄アッセイを含む多重化アッセイ形式における結合ＥＣＬ標識と遊離ＥＣＬ標識との驚くほど良好な識別を有し、高いＥＣＬ信号及び低いバックグラウンドを提供した。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質は、ＴＥＡである。
【0210】
実施形態では、表面は、複数の結合ドメインを含み、各結合錯体は、異なる結合ドメイン中で形成される。実施形態では、複数の結合ドメインは、単一の表面上にある。実施形態では、表面は、マルチウェルプレートを含み、各結合ドメインは、異なるウェル内にある。実施形態では、表面は、マルチウェルプレートのウェルを含み、各結合ドメインは、ウェルの別個の部分内にある。実施形態では、複数の結合ドメインは、１つ以上の表面上にある。実施形態では、表面は、粒子を含み、各結合ドメインは、異なる粒子上にある。実施形態では、粒子は、粒子アレイ内に配置される。実施形態では、粒子は、特定の粒子の識別を可能にし、各結合ドメインを区別するようにコード化される。
【0211】
実施形態では、各結合ドメインは、標的化剤相補体に結合することができる標的化剤を含み、各結合試薬は、連結剤に結合することができる補助連結剤を含む。実施形態では、（１）補助連結剤を介して、結合試薬を、連結剤に接続された標的化試薬相補体に結合させることと、（２）標的化剤を含む結合ドメインに（１）の生成物を結合させることであって、（ｉ）各結合ドメインが異なる標的化剤を含み、（ｉｉ）各標的化試薬相補体が標的化試薬のうちの１つに選択的に結合する、結合させることと、によって、結合試薬を結合ドメイン内に固定化し、それにより、各結合試薬を、その関連する結合ドメインに固定化する。
【0212】
実施形態では、連結剤及び補助連結剤の両方の結合パートナーである必要に応じて架橋剤は、それぞれの標的化剤相補体にそれぞれが結合した結合試薬が、結合ドメインと接触し、架橋剤、各結合試薬上の標的化剤相補体、及び各結合ドメイン上の標的化剤を介してそれらのそれぞれの標的化剤に結合するように、連結剤及び補助連結剤を架橋する。
【0213】
実施形態では、標的化剤及び標的化剤相補体は、アビジン－ビオチン、ストレプトアビジン－ビオチン、抗体－ハプテン、抗体－抗原、抗体－エピトープタグ、核酸－相補的核酸、アプタマー－アプタマー標的、及び受容体－配位子から選択される結合パートナー対の２つのメンバーである。実施形態では、標的化剤及び標的化剤相補体は、交差反応部分、例えば、チオール及びマレイミド若しくはヨードアセトアミド、アルデヒド及びヒドラジド、又はアジド及びアルキン若しくはシクロアルキンである。実施形態では、標的化剤は、ビオチンであり、標的化剤相補体は、アビジン又はストレプトアビジンである。
【0214】
実施形態では、連結剤及び補助連結剤は、アビジン－ビオチン、ストレプトアビジン－ビオチン、抗体－ハプテン、抗体－抗原、抗体－エピトープタグ、核酸－相補的核酸、アプタマー－アプタマー標的、及び受容体－配位子から選択される結合パートナー対の２つのメンバーである。実施形態では、連結剤及び補助連結剤は、交差反応部分、例えば、チオール及びマレイミド若しくはヨードアセトアミド、アルデヒド及びヒドラジド、又はアジド及びアルキン若しくはシクロアルキンである。実施形態では、連結剤は、アビジン又はストレプトアビジンであり、補助連結剤は、ビオチンである。実施形態では、標的化剤及び標的化剤相補体は、相補的オリゴヌクレオチドである。実施形態では、標的化剤相補体は、ストレプトアビジンであり、標的化剤は、ビオチンであり、連結剤及び補助連結剤は、相補的オリゴヌクレオチドである。
【0215】
架橋剤を含む実施形態では、架橋剤は、ストレプトアビジン又はアビジンであり、連結剤及び補助連結剤は、それぞれビオチンである。
【0216】
実施形態では、本開示は、ＥＣＬ共反応物質、イオン成分、及び界面活性剤を組み合わせることを含む、組成物を産生するための方法を提供する。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質は、トリブチルアミン（ＴＢＡ）、（ジブチル）アミノエタノール（ＤＢＡＥ）、（ジエチル）アミノエタノール（ＤＥＡＥ）、トリエタノールアミン（ＴＥＡ）、ブチルジエタノールアミン（ＢＤＥＡ）、プロピルジエタノールアミン（ＰＤＥＡ）、エチルジエタノールアミン（ＥＤＥＡ）、メチルジエタノールアミン（ＭＤＥＡ）、ｔｅｒｔ－ブチルジエタノールアミン（ｔＢＤＥＡ）、ジブチルアミン（ＤＢＡ）、ブチルエタノールアミン（ＢＥＡ）、ジエタノールアミン（ＤＥＡ）、ジブチルアミンプロピルスルホン酸塩（ＤＢＡ－ＰＳ）、ジブチルアミンブチルスルホン酸塩（ＤＢＡ－ＢＳ）、ブチルエタノールアミンプロピルスルホン酸塩（ＢＥＡ－ＰＳ）、ブチルエタノールアミンブチルスルホン酸塩（ＢＥＡ－ＢＳ）、ジエタノールアミンプロピルスルホン酸塩（ＤＥＡ－ＰＳ）、又はジエタノールアミンブチルスルホン酸（ＤＥＡ－ＢＳ、別名３－［ビス－（２－ヒドロキシ－エチル）－アミノ］－プロパン－１－スルホン酸）である。
【0217】
実施形態では、本開示は、トリエタノールアミン（ＴＥＡ）及びイオン成分を組み合わせることを含む、組成物を産生するための方法を更に提供する。実施形態では、本開示は、トリエタノールアミン（ＴＥＡ）、イオン成分、及び界面活性剤を組み合わせることを含む、組成物を産生するための方法であって、当該方法が、追加のｐＨ緩衝成分を添加することを含まない、方法を更に提供する。実施形態では、成分のうちの１つ以上が、乾燥形態で提供される。組成物に好適なイオン成分及び界面活性剤は、本明細書に提供され、例えば、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、及びＬｉＣｌ（イオン成分の場合）、並びに、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、及びアルキルエーテル－ポリエチレングリコール（例えば、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテル）（界面活性剤の場合）を含む。ＴＥＡ、イオン成分、及び界面活性剤は、本明細書に記載の濃度で含まれ得る。実施形態では、本方法によって産生される組成物は、約１０００ｍＭ～約６５００ｍＭのＴＥＡと、約７００～約１０００ｍＭのイオン成分と、約０．５ｍＭ～約１０ｍＭの界面活性剤と、を含む。実施形態では、本方法によって産生される組成物は、約１２００ｍＭ～約１６００ｍＭのＴＥＡと、約７００～約１０００ｍＭのイオン成分と、約１ｍＭ～約５ｍＭの界面活性剤と、を含む。
【0218】
実施形態では、本開示は、ｔｅｒｔ－ブチルジエタノールアミン（ｔＢＤＥＡ）、メチルジエタノールアミン（ＭＤＥＡ）、３－［ビス－（２－ヒドロキシ－エチル）－アミノ］－プロパン－１－スルホン酸（ＤＥＡ－ＰＳ）、又はそれらの組み合わせ、イオン成分、及び界面活性剤を組み合わせることを含む、組成物を産生するための方法を更に提供する。実施形態では、成分のうちの１つ以上が、乾燥形態で提供される。組成物に好適なイオン成分及び界面活性剤は、本明細書に提供され、例えば、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、及びＬｉＣｌ（イオン成分の場合）、並びに、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７（ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７）、ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３）、ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１）、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ１）、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロックエトキシレート）テトロール（ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４）、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル（ＢＲＩＪ（登録商標）５８）、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、及びアルキルエーテル－ポリエチレングリコール（例えば、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテル）（界面活性剤の場合）を含む。ｔＢＤＥＡ及び／又はＭＤＥＡ、イオン成分、並びに界面活性剤は、本明細書に記載の濃度で含まれ得る。実施形態では、本方法によって産生造される組成物は、約５０ｍＭ～約２５０ｍＭのｔＢＤＥＡ、約５０ｍＭ～約２５０ｍＭのＭＤＥＡ、及び／又は約５０ｍＭ～約２５０ｍＭのＤＥＡ－ＰＳ、約７００～約１０００ｍＭのイオン成分、並びに約０．５ｍＭ～約１０ｍＭの界面活性剤を含む。
【0219】
ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブを利用する方法
上記の方法を含む、本明細書に開示される方法のいくつかの実施形態では、本方法は、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブの使用に基づく、感受性及び特異的検出のための新しいタイプの分子アッセイである。実施形態では、プローブは、少なくともプローブが相補的オリゴヌクレオチドにハイブリダイズしていないときにＥＣＬ信号をクエンチするクエンチ部位を含む。実施形態では、プローブは、分子ビーコン様設計を有する。いかなる理論にも拘束されることなく、ＥＣＬ信号は、電極の表面の近くで最も効率的に生成されると考えられる。実施形態では、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブを電極表面上又はその付近に固定化することは、溶液中のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブの検出と比較して、より高い信号をもたらす。ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブがハイブリダイズする標的オリゴヌクレオチドが表面に固定化されるとき、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブは、最適な励起距離内にある。加えて、プローブがクエンチ部位を含む場合、本方法は、相補的オリゴヌクレオチドにハイブリダイズしたプローブを脱クエンチする一方で、相補的オリゴヌクレオチドにハイブリダイズしていないプローブを脱クエンチしない工程を含み、これは選択的脱クエンチと呼ばれる。固定化及び脱クエンチの両方が、信号の増加をもたらす。実施形態では、選択的脱クエンチは、クエンチ部位がＥＣＬ標識に近接しなくなるように、分子ビーコン様設計を有するＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドを相補的オリゴヌクレオチドにハイブリダイズさせることを含む。実施形態では、選択的脱クエンチは、相補的オリゴヌクレオチドにハイブリダイズされたプローブからのみクエンチ部位を切断し、それによって、クエンチ部位を溶液中に放出し、ＥＣＬ標識プローブを相補的オリゴヌクレオチドにハイブリダイズされたままにすることを含む。
上記の方法を含む、本明細書に開示される方法のいくつかの実施形態では、本方法は、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブの使用に基づく、感受性及び特異的検出のための新しいタイプの分子アッセイである。実施形態では、プローブは、少なくともプローブが相補的オリゴヌクレオチドにハイブリダイズしていないときにＥＣＬ信号をクエンチするクエンチ部位を含む。実施形態では、プローブは、分子ビーコン様設計を有する。いかなる理論にも拘束されることなく、ＥＣＬ信号は、電極の表面の近くで最も効率的に生成されると考えられる。実施形態では、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブを電極表面上又はその付近に固定化することは、溶液中のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブの検出と比較して、より高い信号をもたらす。ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブがハイブリダイズする標的オリゴヌクレオチドが表面に固定化されるとき、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブは、最適な励起距離内にある。加えて、プローブがクエンチ部位を含む場合、本方法は、相補的オリゴヌクレオチドにハイブリダイズしたプローブを脱クエンチする一方で、相補的オリゴヌクレオチドにハイブリダイズしていないプローブを脱クエンチしない工程を含み、これは選択的脱クエンチと呼ばれる。固定化及び脱クエンチの両方が、信号の増加をもたらす。実施形態では、選択的脱クエンチは、クエンチ部位がＥＣＬ標識に近接しなくなるように、分子ビーコン様設計を有するＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドを相補的オリゴヌクレオチドにハイブリダイズさせることを含む。実施形態では、選択的脱クエンチは、相補的オリゴヌクレオチドにハイブリダイズされたプローブからのみクエンチ部位を切断し、それによって、クエンチ部位を溶液中に放出し、ＥＣＬ標識プローブを相補的オリゴヌクレオチドにハイブリダイズされたままにすることを含む。
【0220】
実施形態では、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブアッセイは、電極の表面により近いＥＣＬ標識をより選択的に励起して、特異的結合事象からの信号を更に強化する読み取りバッファーＥＣＬ共反応物質と組み合わせることができる ＴＥＡが、より選択的な共反応物質を例示することができるが、この共反応物質群には、ＭＤＥＡ、ＢＤＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせも含まれる。実施形態では、共反応物質の群には、ＭＤＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせも含まれる いかなる理論にも拘束されることなく、ＴＥＡによって例示される共反応物質のこの群において、ラジカルは、ＴＰＡなどのより長い寿命の種とは対照的に、電極表面に非常に近く、ウェルの溶液中ではないＥＣＬ生成をもたらす短い寿命を有すると考えられている。（例えば、図１４、２０及び２１に示すように）固定化された相補的オリゴヌクレオチドへのハイブリダイゼーションによってＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブを表面に固定化することによって、信号の大部分は、特異的に結合した分子種から生成される。相補的オリゴヌクレオチドにハイブリダイズされていないＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブ上のＥＣＬ標識を活性化するために励起距離内に拡散する共反応分子のごくわずかな部分は、（例えば、分子ビーコン様プローブが（例えば、図１４及び２０に示されるような）その開放形式ではないため、又はクエンチ部位が（例えば、図２１に示されるように）ＥＣＬ標識に近接しているため）、クエンチされたＥＣＬ信号を生成し、したがって、より少ないＥＣＬ信号を生成する。
【0221】
相補的オリゴヌクレオチドにハイブリダイズした場合にのみ選択的に脱クエンチされるクエンチ部位を含むＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブを使用することによって生じる低バックグラウンドは、非洗浄アッセイを可能にし、このアッセイでは、プローブを読み取りバッファーに添加し、プレートが読み取られる前に固定化標的配列に適用することができる。いかなる理論にも拘束されることなく、以下の要因のうちの１つ以上、特に３つの要因全てを有するアッセイは、アッセイ性能の向上に寄与し、ＥＣＬ信号の検出前に標的オリゴヌクレオチドにハイブリダイズしていないＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブを除去する洗浄工程を必要としないアッセイを可能にすると考えられている：
１．電極の表面近くでのＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブの固定化は、より効率的なＥＣＬ信号生成を可能にする；
２．固定化された相補的オリゴヌクレオチドにハイブルダイズされたＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブの選択的脱クエンチは、特異的結合事象に対して生成されるＥＣＬ信号を選択的に増加させる；並びに／又は
３．ＴＥＡベースの読み取りバッファー（又は同様の短いラジカル寿命を有する共反応物質、例えば、ＭＤＥＡ、ＢＤＥＡ、ｔＢＤＥＡ、及びＤＥＡ－ＰＳ）は、固定化された相補的オリゴヌクレオチドにハイブリダイズしたＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブと、溶液中のクエンチされたＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブとの間の信号生成の識別を更に強化する。
１．電極の表面近くでのＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブの固定化は、より効率的なＥＣＬ信号生成を可能にする；
２．固定化された相補的オリゴヌクレオチドにハイブルダイズされたＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブの選択的脱クエンチは、特異的結合事象に対して生成されるＥＣＬ信号を選択的に増加させる；並びに／又は
３．ＴＥＡベースの読み取りバッファー（又は同様の短いラジカル寿命を有する共反応物質、例えば、ＭＤＥＡ、ＢＤＥＡ、ｔＢＤＥＡ、及びＤＥＡ－ＰＳ）は、固定化された相補的オリゴヌクレオチドにハイブリダイズしたＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブと、溶液中のクエンチされたＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブとの間の信号生成の識別を更に強化する。
【0222】
実施形態では、方法は、本明細書に記載のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブを使用して、結合錯体、結合パートナー、及び／又は分析物の存在を検出することを含む。実施形態では、本方法は、本明細書に開示されるような、結合試薬及び／若しくは結合パートナー、並びに／又は結合錯体が固定化された表面を有する基材（例えば、ウェル、マルチウェルプレート、スライドなど）を提供することを含む。実施形態では、基材表面は、電極を含む。実施形態では、基材は、その上にコーティングされた電極層を含む。
【0223】
実施形態では、固定化された結合試薬は、結合試薬に対する結合パートナー及び／又は結合錯体を含有する組成物に曝露される。例えば、結合パートナー及び／又は結合錯体は、目的の分析物であるか、又はそれを含む。結合試薬は、結合パートナー及び／又は結合錯体を結合することが許容される。結合パートナー及び／又は結合錯体の結合後、必要に応じて、洗浄を実行して、未結合の結合パートナー及び／又は結合錯体を洗浄することができる。実施形態では、結合パートナー及び／又は結合錯体は、オリゴヌクレオチドを含む。結合パートナー及び／若しくは結合錯体は、結合試薬に曝露される前のオリゴヌクレオチドを含むことができるか、又はオリゴヌクレオチドは、結合パートナー及び／又は結合錯体が結合試薬によって結合された後に結合パートナー及び／又は結合錯体に添加されることができる。例えば、結合パートナー及び／又は結合錯体は、結合試薬に曝露される前に、又は結合パートナー及び／又は結合錯体が結合試薬に結合された後に、オリゴヌクレオチドで標識され得る。実施形態では、結合パートナーは、目的のオリゴヌクレオチド分析物であり、したがって、結合パートナー及びオリゴヌクレオチドは、全く同一である。実施形態では、結合パートナー及び／又は結合錯体は、オリゴヌクレオチド分析物を含むが、オリゴヌクレオチド分析物に添加されるか、又はオリゴヌクレオチド分析物とハイブリダイズされる追加のオリゴヌクレオチド（例えば、タグ配列）を更に含む。
【0224】
オリゴヌクレオチドを含む結合パートナー及び／又は結合錯体を、本明細書に記載のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブに曝露する。実施形態では、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブは、結合パートナー及び／又は結合錯体オリゴヌクレオチドのオリゴヌクレオチド配列に相補的なオリゴヌクレオチド配列を含む。実施形態では、結合パートナー及び／又は結合錯体は、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブに曝露する前に基材上に固定化され、他の実施形態では、結合パートナー及び／又は結合錯体は、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブに曝露した後に基材上に固定化される。実施形態では、ＥＣＬ標識プローブは、少なくともプローブが相補的オリゴヌクレオチドにハイブリダイズしていない間にＥＣＬ信号をクエンチしたクエンチ部位を含む。実施形態では、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブは、ステムループ又はヘアピン構造、ＥＣＬ標識、及びクエンチ部位を含み、クエンチ部位は、オリゴヌクレオチドプローブがステムループ又はヘアピン構成にあるときにはＥＣＬ標識に近接して、ＥＣＬ標識をクエンチするが、ステムループ又はヘアピン構造が開放構成にあるときにはＥＣＬ標識をクエンチしない。実施形態では、ＥＣＬ標識付きＥＣＬ標識及びクエンチャー、ＥＣＬ標識及びクエンチャーは、プローブが線形構成（例えば、ステムループでもヘアピン構成でもない）にあるときにはプローブ上で互いに十分に近く、線形構成では、クエンチ部位は、プローブが相補的オリゴヌクレオチドにハイブリダイズされているかどうかにかかわらず、ＥＣＬ信号をクエンチする。実施形態では、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブは、基材上に固定化された結合試薬への結合パートナー及び／又は結合錯体の結合と、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブへの結合パートナーの曝露とが同時に起こるような、結合試薬に対する結合パートナー及び／又は結合錯体を含有する組成物中に存在する。実施形態では、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブ及びオリゴヌクレオチドを含む結合パートナー及び／又は結合錯体を、最初に一緒に混合し、次いで、両方を含む組成物を、固定化された結合試薬を含む基材に曝露させる。実施形態では、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブは、結合パートナー及び／又は結合錯体が結合試薬によって基材に結合された後、洗浄が実行される場合には必要に応じて洗浄の後に添加される。
【0225】
ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブを、結合パートナー又は結合錯体の相補的オリゴヌクレオチドにハイブリダイズさせる。ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブが、ＥＣＬ標識及びクエンチ部位を有するステムループ又はヘアピン構造を有する実施形態では、ハイブリダイゼーションは、ステムループ又はヘアピン構造を開放し、クエンチ部位がもはやＥＣＬ標識によって放出されるＥＣＬ信号をクエンチしないように、ＥＣＬ標識をクエンチ部位から分離する。ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブを結合パートナー上の相補的オリゴヌクレオチドにハイブリダイズさせるための条件は、従来のオリゴヌクレオチドプローブ（例えば、分子ビーコンプローブ又は加水分解プローブ（ＴａｑＭａｎ（登録商標）プローブとも呼ばれる））について当技術分野で既知の条件とすることができる。
【0226】
実施形態では、ハイブリダイズされたＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブを、選択的に脱クエンチし、ハイブリダイズされていないプローブをクエンチされたままにする。実施形態では、選択的脱クエンチは、クエンチ部位がＥＣＬ標識に近接しなくなるように、分子ビーコン様設計を有するＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドを相補的オリゴヌクレオチドにハイブリダイズさせることを含む。実施形態では、選択的脱クエンチは、相補的オリゴヌクレオチドにハイブリダイズされたプローブからのみクエンチ部位を切断し、それによって、クエンチ部位を溶液中に放出し、ＥＣＬ標識プローブを相補的オリゴヌクレオチドにハイブリダイズされたままにすることを含む。実施形態では、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブの一部分は、相補的オリゴヌクレオチドにハイブリダイズせず、閉鎖ステムループ又はヘアピン構造に残るか、又は少なくともプローブが相補的オリゴヌクレオチドにハイブリダイズされていない場合に、クエンチ部位がＥＣＬ標識に近接して、標識によって放出されるＥＣＬ信号をクエンチするように構成される。
【0227】
実施形態では、選択的脱クエンチは、クエンチ部位を、結合パートナー及び／又は結合錯体のオリゴヌクレオチドにハイブリダイズされたＥＣＬ標識プローブの部分のみから選択的に切断することを含み、その結果、クエンチ部位が溶液中に放出され、クエンチ部位の切断後に結合パートナー及び／又は結合錯体のオリゴヌクレオチドにハイブリダイズされたままであるハイブリダイズされたＥＣＬ標識プローブのＥＣＬ標識に近接しなくなる。実施形態では、切断は、酵素、例えば、制限エンドヌクレアーゼ、例えば、ニッキングエンドヌクレアーゼ、ＲＮａｓｅＨ２、又は５’エキソヌクレアーゼ活性を有するポリメラーゼによって実行される。実施形態では、酵素は、結合パートナー及び／又は結合錯体のオリゴヌクレオチドをそのままにして、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブのみを切断する。実施形態では、酵素は、ハイブリダイズされたＥＣＬ標識プローブ内の配列を認識するニッキング制限エンドヌクレアーゼ、又はハイブリダイズされたＥＣＬ標識プローブ内のＲＮＡ塩基を認識するＲＮａｓｅＨ２である。実施形態では、酵素は、５’エキソヌクレアーゼ活性を有するポリメラーゼであり、本方法は、プライマーを、ハイブリダイズされたＥＣＬ標識プローブの５’位において結合パートナー及び／又は結合錯体のオリゴヌクレオチドの一部分上の相補的配列にハイブリダイズすることと、５’エキソヌクレアーゼ活性を有するポリメラーゼ（例えば、ＴａｑＭａｎポリメラーゼ）が、ポリメラーゼがハイブリダイズされたＥＣＬ標識プローブに遭遇するまでプライマーを伸長するような伸長反応を実行することであって、この時点で、ポリメラーゼの５’エキソヌクレアーゼ活性が、ハイブリダイズされたＥＣＬ標識プローブのクエンチ部位を切断する、実行することと、を含む。ＥＣＬ標識プローブ全体の消化を防止するために、ＥＣＬ標識プローブは、５’エキソヌクレアーゼ活性に耐性を有する部分を含み、その結果、ＥＣＬ標識を含むＥＣＬ標識プローブの十分な部分がそのまま、結合パートナー及び／又は結合錯体のオリゴヌクレオチドにハイブリダイズされたままである。
【0228】
選択的に脱クエンチされた、ハイブリダイズされたＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブ（並びに溶液中のクエンチされたハイブリダイズされていないプローブ）を含む基材は、本明細書に記載されるＥＣＬ共反応物質に曝露される。ＥＣＬ共反応物質は、ハイブリダイゼーションの前又は後に、組成物に添加することができる。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質は、本明細書で記載される組成物（例えば、読み取りバッファー）中にある。ＥＣＬ共反応物質、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブ、及び結合パートナーは全て、別個の組成物（例えば、溶液）中に存在することができ、その結果、それらは、任意の順序で基材と順次接触することができる（例えば、最初に結合パートナー、次いでＥＣＬ標識オリゴヌクレオチド、次いで最後にＥＣＬ共反応物質；又は最初にＥＣＬ標識オリゴヌクレオチド、次いでＥＣＬ標識オリゴヌクレオチド、次いで最後に結合パートナーなど）か、又はそれらは１つ以上の組成物（例えば、第１の組成物中の結合パートナー、及び第２の溶液中のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブ及びＥＣＬ共反応物質）中で組み合わせることができ、その結果、それらは全て一度に、又は順次に基材と接触することができる。
【0229】
結合試薬、結合パートナー、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブのハイブリダイズされた部分及びハイブリダイズされていない部分、並びにＥＣＬ共反応物質を含む基材及び組成物を、電極に電圧を印加することによってＥＣＬ反応に供し、生成された任意のＥＣＬ信号を測定する。
【0230】
実施形態では、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブが、信号の検出前に基材に接触する組成物に添加された後、基材の洗浄は行われない。この方法は、ＥＣＬ信号の検出前に少なくとも１回の洗浄を排除することによって方法を簡素化するため、有利である。実施形態では、基材が結合パートナーと接触した後、及びＥＣＬ信号の検出の前に、基材の洗浄は行われない。ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブが添加された後、又は基材が結合パートナー及び／又は結合錯体と接触した後のいずれかの、洗浄を伴わない実施形態では、ＥＣＬ共反応物質は、ＴＥＡ、ＢＤＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、及びＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせからなる群から選択される。実施形態では、共反応物質は、ＴＥＡである。ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブが添加された後、又は基材が結合パートナー及び／又は結合錯体と接触した後のいずれかの、洗浄を伴わない実施形態では、ＥＣＬ共反応物質は、ＴＰＡではない。クエンチ部位（例えば、ステムループ又はヘアピン構造を有する（例えば、ＥＣＬ標識分子ビーコンプローブ）、又はクエンチ部位がＥＣＬ標識に近接している他の構造を有する）ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブ、基材上に固定化された結合パートナー及び／又は結合錯体、並びにＴＥＡ、ＢＤＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、及びＤＥＡ－ＰＳ、若しくはそれらの組み合わせ、及びＴＥＡを含むＥＣＬ共反応性組成物の使用の組み合わせは、特に、ハイブリダイズされていないＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブを除去するための洗浄を実行しない場合でも、優れたＥＣＬ信号をもたらす。
【0231】
実施形態では、結合パートナーは、分析物及び／又は結合錯体を含む。実施形態では、分析物はペプチドを含み、かつ／又は分析物はオリゴヌクレオチドを含む。実施形態では、分析物は、結合パートナーのオリゴヌクレオチドである。実施形態では、分析物は、オリゴヌクレオチドで標識される。実施形態では、分析物は、分析物を、オリゴヌクレオチドを含む検出試薬と結合させることによってオリゴヌクレオチドで標識され、必要に応じて結合錯体を形成する。実施形態では、結合パートナー及び／又は結合錯体のオリゴヌクレオチドは、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブのオリゴヌクレオチド配列に相補的な配列の複数のコピーを含む。実施形態では、基材を複数のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブと接触させる前に、増幅反応を実行して、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブのオリゴヌクレオチド配列に相補的な配列の複数のコピーを生成する。実施形態では、増幅反応は、ローリングサークル増幅反応である。実施形態では、結合パートナー及び／又は結合錯体は、ローリングサークル増幅のためのオリゴヌクレオチドプライマーを含む。
【0232】
実施形態では、結合パートナー及び／又は結合錯体は、分析物を含む。実施形態では、分析物はペプチドを含み、かつ／又は分析物はオリゴヌクレオチドを含む。実施形態では、分析物は、結合パートナーのオリゴヌクレオチドである。実施形態では、分析物は、オリゴヌクレオチドプライマー又は伸長オリゴヌクレオチドプライマーで間接的に標識される。実施形態では、分析物はペプチドであり、分析物を、オリゴヌクレオチドプライマーを含む検出試薬（例えば、抗体）と結合させることによってオリゴヌクレオチドプライマーで標識され、必要に応じて結合錯体を形成する。実施形態では、ペプチド分析物を標識するオリゴヌクレオチドプライマーは、分析物を標識した後に伸長される。伸長オリゴヌクレオチドプライマーは、ＥＣＬ標識プローブのオリゴヌクレオチド配列に相補的な配列の複数のコピーを含む。実施形態では、基材を複数のＥＣＬ標識プローブと接触させる前に、増幅反応を実行して、オリゴヌクレオチドプライマーを伸長させ、少なくともＥＣＬ標識プローブのオリゴヌクレオチド配列の一部分に相補的な配列の複数のコピーを生成する。実施形態では、増幅反応は、ローリングサークル増幅反応である。実施形態では、結合錯体は、伸長オリゴヌクレオチドプライマーで標識された分析物を含む。
【0233】
実施形態では、本開示は、試料中の目的の分析物を検出するための方法であって、（ａ）試料を、（ｉ）結合試薬を含む表面であって、当該結合試薬が、当該分析物に特異的に結合する、結合試薬、及び（ｉｉ）当該分析物に特異的に結合する検出試薬であって、当該検出試薬が、電気化学発光（ＥＣＬ）標識を含み、それにより、当該結合試薬と、当該分析物と、当該検出試薬と、を含む結合錯体を当該表面上に形成する、接触させることと、（ｂ）当該表面上の当該結合錯体を、本明細書において提供されるＥＣＬ共反応物質組成物又はＴＥＡ組成物と接触させることと、（ｃ）当該表面に電圧を印加して、ＥＣＬを生成することと、（ｄ）生成されたＥＣＬを検出することと、を含む、方法を提供する。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ＢＤＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡを含む。実施形態では、ＴＥＡ組成物は、ＴＥＡと、イオン成分と、必要に応じて界面活性剤と、を含む。実施形態では、表面は、電極を含む。実施形態では、目的の分析物は、オリゴヌクレオチドであり、分析物に特異的に結合する検出試薬は、ＥＣＬ標識と、少なくともＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブが相補的オリゴヌクレオチドにハイブリダイズされていないときに、ＥＣＬ信号をクエンチするクエンチ部位と、を含むオリゴヌクレオチドプローブである。実施形態では、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブは、ステムループ又はヘアピン構造、ＥＣＬ標識、及びクエンチ部位を含み、当該クエンチ部位は、ＥＣＬ標識に近接しており、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブがステムループ又はヘアピン構成にあるときにはＥＣＬ標識をクエンチするが、ステムループ又はヘアピン構造が開放構成にあるときにはＥＣＬ標識をクエンチしない。実施形態では、ステムループ又はヘアピン構造を有するＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブは、ＥＣＬ標識分子ビーコンプローブである。実施形態では、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブは、ＥＣＬ標識及びクエンチャーを含み、ＥＣＬ標識及びクエンチャーは、プローブが線形構成（例えば、ステムループでもヘアピン構成でもない）にあるときにはプローブ上で互いに十分に近く、線形構成では、クエンチ部位は、プローブが相補的オリゴヌクレオチドにハイブリダイズされているかどうかにかかわらず、ＥＣＬ信号をクエンチする。
【0234】
実施形態では、本開示は、試料中の目的の分析物を検出するための方法であって、試料を、（ｉ）結合試薬を含む表面であって、当該結合試薬が、当該分析物（例えば、ペプチド）を含む結合錯体に特異的に結合する、表面、（ｉｉ）当該分析物に特異的に結合する捕捉試薬（例えば、抗体）であって、当該捕捉試薬が、当該結合試薬（例えば、ビオチン／ストレプトアビジン）に対する結合パートナーを更に含む、表面、（ｉｉｉ）当該分析物に特異的に結合する検出試薬であって、当該検出試薬が、オリゴヌクレオチドプライマー（例えば、オリゴヌクレオチドラブル抗体）を含む、検出試薬、（ｉｖ）鋳型オリゴヌクレオチド、及び（ｖ）ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブと接触させることを含む、方法を提供する。実施形態では、捕捉試薬及び検出試薬は、分析物に結合し、プライマーは、鋳型オリゴヌクレオチドに結合し、プライマーは、鋳型オリゴヌクレオチドの増幅により伸長されて、捕捉試薬、分析物、検出試薬、及び伸長オリゴヌクレオチドプライマーを含む結合錯体を形成する（例えば、図２０に示すように）。実施形態では、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブは、結合錯体の伸長プライマーオリゴヌクレオチドに結合する。表面を、本明細書において提供されるＥＣＬ共反応物質組成物又はＴＥＡ組成物と接触させ、表面に電圧を印加して、ＥＣＬを生成し、生成されたＥＣＬを検出し、それにより、当該分析物を検出する。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ＢＤＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡを含む。実施形態では、ＴＥＡ組成物は、ＴＥＡと、イオン成分と、必要に応じて界面活性剤と、を含む。実施形態では、表面は、電極を含む。実施形態では、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブは、分子ビーコンプローブである。
【0235】
実施形態では、結合試薬は、例えば、捕捉オリゴヌクレオチドであり、結合パートナーは、捕捉オリゴヌクレオチドの配列に相補的である核酸配列、並びにＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブに相補的である配列を含む目的のオリゴヌクレオチド（分析物）である。図１４は、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブが、本明細書に記載のステムループ構造及びクエンチ部位を含む、そのような実施形態の一例を示す。図１４の左側に示すように、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブが標的にハイブリダイズしていない場合、ＥＣＬ標識（★）（例えば、Ｒｕ（ｂｐｙ）３ベースのＳ－ＴＡＧ）は、クエンチ部位（●）（例えば、ＢＨＱ２又はＩｏｗａ Ｂｌａｃｋ）の近くにあり、その結果、ＥＣＬ信号がクエンチされる。図１４の右側に示されるように、結合パートナーは、相補的配列を有する捕捉オリゴヌクレオチド（結合試薬）にハイブリダイズされる標的オリゴヌクレオチド（標的）である。捕捉オリゴヌクレオチド（結合試薬）は、電極基材（灰色の楕円形）の表面上に固定化されている。ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブが、標的オリゴヌクレオチドの相補的オリゴヌクレオチド配列にハイブリダイズすると、ステムループ構造が開き、ＥＣＬ標識（★）をクエンチ部位（●）から分離し、その結果、ＥＣＬ信号を、ＥＣＬ共反応物質（ＴＥＡ、図示せず）の存在下で印加するときに生成することができる。
【0236】
実施形態では、図１４に示される原理は、他の結合パートナー又は結合錯体に適用される。例えば、捕捉オリゴヌクレオチドは、代わりに、ペプチドなどの分析物を結合し、分析物を基材の表面上に固定化する抗体又は他の試薬であり得る。実施形態では、捕捉オリゴヌクレオチドは、代わりに、分析物及び捕捉試薬を含む結合錯体に結合し、それによって基材の表面上に分析物を固定化するストレプトアビジンであってもよい。結合錯体は、ビオチン化捕捉試薬、分析物、及びオリゴヌクレオチドを含む検出試薬を含み得る。結合パートナー及び／又は結合錯体のオリゴヌクレオチドは、分析物を（直接的又は間接的に）標識するオリゴヌクレオチドプライマーに由来する伸長オリゴヌクレオチドであり得る。その伸長プライマーは、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブに相補的な配列の１つ以上のコピーを含み得る。例えば、図２０を参照されたい。図２０では、ペプチド分析物は、ビオチン化捕捉抗体に結合した固定化ストレプトアビジンを介して、基材表面上に固定化される。ペプチド分析物は、オリゴヌクレオチドプライマーで（検出抗体とも呼ばれる第２の抗体への結合により）間接的に標識される。オリゴヌクレオチドプライマーは、鋳型オリゴヌクレオチドに結合し、その後、鋳型オリゴヌクレオチド末端がライゲーションされ、プライマーが伸長され（例えば、ポリメラーゼ酵素で）、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブが伸長プライマーオリゴヌクレオチドに結合する。共反応物質の存在下で電圧を印加され、ＥＣＬ信号を読み取る。同様の実施形態では、鋳型オリゴヌクレオチドは、ライゲーションが必要でないように、環状形態で提供される。実施形態では、洗浄工程は、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドを分析物混合物に添加した後、及びＥＣＬ信号を読み取る前には実行しない。
【0237】
実施形態では、上記のように、ＥＣＬ標識及びクエンチャーを有するＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブであって、ＥＣＬ標識及びクエンチャーが、プローブが線形構成（例えば、ステムループでもヘアピン構成でもない）にあるときにはプローブ上で互いに十分に近く、線形構成では、クエンチ部位は、プローブが相補的オリゴヌクレオチドにハイブリダイズされているかどうかにかかわらず、ＥＣＬ信号をクエンチする、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブを使用することができる。選択的脱クエンチは、相補的オリゴヌクレオチドにハイブリダイズされたプローブからのみクエンチ部位を切断し、それによって、クエンチ部位を溶液中に放出し、ＥＣＬ標識プローブを相補的オリゴヌクレオチドにハイブリダイズされたままにすることを含む。図２１は、そのようなＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブ及び選択的脱クエンチの方法を利用する実施形態を示す。図２１の左側に示すように、ＥＣＬ標識（★）（例えば、Ｒｕ（ｂｐｙ）３ベースのＳ－ＴＡＧ）は、クエンチ部位（●）（例えば、ＢＨＱ２又はＩｏｗａ Ｂｌａｃｋ）の近くにあり、その結果、ＥＣＬ信号がクエンチされる。図２１の中央部分に示されるように、結合パートナーは、相補的配列を有する捕捉オリゴヌクレオチド（結合試薬）にハイブリダイズされる標的オリゴヌクレオチド（標的）である。捕捉オリゴヌクレオチド（結合試薬）は、電極基材（灰色の楕円形）の表面上に固定化されている。ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブが標的オリゴヌクレオチドの相補的オリゴヌクレオチド配列にハイブリダイズするとき、ハイブリダイズされたプローブ及び相補的オリゴヌクレオチドは、切断酵素の認識部位、例えば、ニッキング制限エンドヌクレアーゼによって認識される配列を含む二本鎖オリゴヌクレオチドを形成する。図２１の左側に示されるように、酵素（例えば、ニッキング制限エンドヌクレアーゼ）は、ＥＣＬ標識プローブからクエンチ部位を切断し、それを溶液中に放出し、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブの残りの部分をそのまま、標的とハイブリダイズしたままにする。クエンチ部位の切断は、ＥＣＬ標識（★）をクエンチ部位（●）から分離し、その結果、ＥＣＬ共反応物質（ＴＥＡ、図示せず）の存在下で電圧を印加すると、ＥＣＬ信号を生成することができる。図２１に示されるように、ハイブリダイズされたＥＣＬ標識付きからクエンチ部位を選択的に切断する他の方法が企図され、かつ本明細書に記載されており、これには、ＲＮＡｓｅＨ２酵素及びＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブのＲＮＡ部分を使用すること、並びにエキソヌクレアーゼ耐性部分を含むＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブとともにプライマー及び５’エキソヌクレアーゼ活性を有するポリメラーゼを使用することが含まれる。
【0238】
実施形態では、本明細書に記載の、例えば、図２１に示されるような、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブ及びクエンチ部位の選択的切断を、図２０に示される分子ビーコンプローブの代わりに使用することができる。
【0239】
実施形態では、本明細書に記載のＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブが利用され、ハイブリダイズされていないＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブはＥＣＬ反応の前には除去されず（洗浄なし）、ＥＣＬ共反応物質は、３－（ジ－ｎ－プロピルアミノ）－プロパンスルホン酸、４－（ジ－ｎ－プロピルアミノ）－ブタンスルホン酸、４－［ビス－（２－ヒドロキシエタン）－アミノ］－ブタンスルホン酸、ピペリジン－Ｎ－（３－プロパンスルホン酸）、アゼパン－Ｎ－（３－プロパンスルホン酸）、ピペリジン－Ｎ－（３－プロピオン酸）（ＰＰＡ）、３－モルホリノ－２－ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳＯ）、３－モルホリンプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－Ｎ’－３－プロパンスルホン酸（ＥＰＰＳ）、Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－Ｎ’－３－エタンスルホン酸（ＢＥＳ）、ピペラジン－Ｎ，Ｎ’－ビス（２－エタンスルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）、トリエタノールアミン（ＴＥＡ）、Ｎ－２－ヒドロキシピペラジン－Ｎ－２－エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、ピペラジン－Ｎ，Ｎ’－ビス－４－ブタンスルホン酸、ホモピペリジン－Ｎ－３－プロパンスルホン酸、ピペラジン－Ｎ，Ｎ’－ビス－３－プロパンスルホン酸、ピペリジン－Ｎ－３－プロパンスルホン酸、ピペラジン－Ｎ－２－ヒドロキシエタン－Ｎ’－３－メチルプロパノエート、ピペラジン－Ｎ，Ｎ’－ビス－３－メチルプロパノエート、１，６－ジアミノヘキサン－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸、Ｎ，Ｎ－ビスプロピル－Ｎ－４－アミノブタンスルホン酸、Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－２－アミノエタンスルホン酸（ＴＥＳ）、１，３－ビス［トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミノ］プロパン（ビス－トリスプロパン）、３－ジメチルアミノ－１－プロパノール、３－ジメチルアミノ－２－プロパノール、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラプロピルプロパン－１，３－ジアミン（ＴＰＡ二量体）、ピペラジン－Ｎ，Ｎ’－ビス（２－ヒドロキシプロパン）スルホン酸（ＰＯＰＳＯ）及び２－ヒドロキシ－３－［４－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－１－イル］プロパン－１－スルホン酸（ＨＥＰＰＳＯ）、Ｎ－ブチルジエタノールアミン（ＢＤＥＡ）、２－ジブチルアミノエタノール（ＤＢＡＥ）、ｔｅｒｔ－ブチルジエタノールアミン（ｔＢＤＥＡ）、メチルジエタノールアミン（ＭＤＥＡ）、３－［ビス－（２－ヒドロキシ－エチル）－アミノ］－プロパン－１－スルホン酸（ＤＥＡ－ＰＳ）、並びにそれらの組み合わせからなる群から選択される。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質は、ＴＥＡ、ＢＤＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質は、ＴＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質は、ＴＥＡ、ＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質は、ＴＥＡである。
【0240】
他の実施形態は、本開示、及び当業者の知識を考慮すると、当業者にとって明らかであろう。
【0241】
アッセイモジュール
実施形態では、本開示は、乾燥形態のＴＥＡ組成物を含むアッセイモジュールであって、当該ＴＥＡ組成物が、ＴＥＡと、イオン成分と、必要に応じて界面活性剤と、を含む、アッセイモジュールを提供する。実施形態では、本開示は、乾燥形態で本明細書において提供されるＥＣＬ共反応物質組成物を含むアッセイモジュールを提供する。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ＢＤＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。
実施形態では、本開示は、乾燥形態のＴＥＡ組成物を含むアッセイモジュールであって、当該ＴＥＡ組成物が、ＴＥＡと、イオン成分と、必要に応じて界面活性剤と、を含む、アッセイモジュールを提供する。実施形態では、本開示は、乾燥形態で本明細書において提供されるＥＣＬ共反応物質組成物を含むアッセイモジュールを提供する。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ＢＤＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、ＴＥＡ、ｔＢＤＥＡ、ＭＤＥＡ、ＤＥＡ－ＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む。
【0242】
実施形態では、アッセイモジュールは、マルチウェルプレートを含む。実施形態では、アッセイモジュールは、アッセイカートリッジを含む。実施形態では、アッセイモジュールは、スライド、チップ、ウェル、アッセイセル若しくはフローセル、チューブ、チャネル、ビーズ、又は微粒子を含む。実施形態では、アッセイモジュールは、電極を含む。実施形態では、電極は、炭素電極、白金電極、金電極、又は銀電極である。実施形態では、電極は、炭素インク電極である。
【0243】
実施形態では、アッセイモジュールは、乾燥形態の結合試薬を更に含む。実施形態では、アッセイモジュールは、乾燥形態の検出試薬を更に含む。実施形態では、アッセイモジュールは、乾燥形態の結合試薬及び検出試薬を更に含む。結合試薬及び検出試薬は、本明細書に更に記載される。実施形態では、検出試薬は、ＥＣＬ標識を含む。
【0244】
実施形態では、ＥＣＬ標識は、電気化学発光有機金属錯体を含む。実施形態では、有機金属錯体は、ルテニウム、オスミウム、イリジウム、レニウム、及び／又はランタニド金属を含む。実施形態では、有機金属錯体は、置換若しくは非置換ビピリジン、又は置換若しくは非置換フェナントロリンを含む。実施形態では、ＥＣＬ標識は、ルテニウムを含む。実施形態では、ＥＣＬ標識は、ルテニウム（ＩＩ）トリス－ビピリジンを含む。実施形態では、ＥＣＬ標識は、置換ビピリジンを含む。実施形態では、ＥＣＬ標識は、少なくとも１つの置換ビピリジン配位子を含む有機金属錯体を含み、置換ビピリジン配位子は、少なくとも１つのスルホネート基を含む。実施形態では、ＥＣＬ標識は、少なくとも２つの置換ビピリジン配位子を含む有機金属錯体を含み、各置換ビピリジン配位子は、少なくとも１つのスルホネート基を含む。実施形態では、少なくとも１つのスルホネート基を含む置換ビピリジン配位子は、式Ｉの化合物である。実施形態では、ＥＣＬ標識は、式ＩＩの化合物を含む。
【0245】
キット
実施形態では、本開示は、本明細書に記載されるＥＣＬ共反応物質組成物又はＴＥＡ組成物を含むキットを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、トリブチルアミン（ＴＢＡ）、（ジブチル）アミノエタノール（ＤＢＡＥ）、（ジエチル）アミノエタノール（ＤＥＡＥ）、トリエタノールアミン（ＴＥＡ）、ブチルジエタノールアミン（ＢＤＥＡ）、プロピルジエタノールアミン（ＰＤＥＡ）、エチルジエタノールアミン（ＥＤＥＡ）、メチルジエタノールアミン（ＭＤＥＡ）、ｔｅｒｔ－ブチルジエタノールアミン（ｔＢＤＥＡ）、ジブチルアミン（ＤＢＡ）、ブチルエタノールアミン（ＢＥＡ）、ジエタノールアミン（ＤＥＡ）、ジブチルアミンプロピルスルホン酸塩（ＤＢＡ－ＰＳ）、ジブチルアミンブチルスルホン酸塩（ＤＢＡ－ＢＳ）、ブチルエタノールアミンプロピルスルホン酸塩（ＢＥＡ－ＰＳ）、ブチルエタノールアミンブチルスルホン酸塩（ＢＥＡ－ＢＳ）、ジエタノールアミンプロピルスルホン酸塩（ＤＥＡ－ＰＳ、別名３－［ビス－（２－ヒドロキシ－エチル）－アミノ］－プロパン－１－スルホン酸、）、ジエタノールアミンブチルスルホン酸塩（ＤＥＡ－ＢＳ）、及びそれらの組み合わせから選択されるＥＣＬ共反応物質を含む。実施形態では、組成物は、ＴＥＡを含む。実施形態では、組成物は、ｔＢＤＥＡを含む。実施形態では、組成物は、ＭＤＥＡを含む。実施形態では、組成物は、ＭＤＥＡを含む。実施形態では、組成物は、ＤＥＡ－ＰＳを含む。実施形態では、ＴＥＡ組成物は、ＴＥＡと、イオン成分と、必要に応じて界面活性剤と、を含む。
実施形態では、本開示は、本明細書に記載されるＥＣＬ共反応物質組成物又はＴＥＡ組成物を含むキットを含む。実施形態では、ＥＣＬ共反応物質組成物は、トリブチルアミン（ＴＢＡ）、（ジブチル）アミノエタノール（ＤＢＡＥ）、（ジエチル）アミノエタノール（ＤＥＡＥ）、トリエタノールアミン（ＴＥＡ）、ブチルジエタノールアミン（ＢＤＥＡ）、プロピルジエタノールアミン（ＰＤＥＡ）、エチルジエタノールアミン（ＥＤＥＡ）、メチルジエタノールアミン（ＭＤＥＡ）、ｔｅｒｔ－ブチルジエタノールアミン（ｔＢＤＥＡ）、ジブチルアミン（ＤＢＡ）、ブチルエタノールアミン（ＢＥＡ）、ジエタノールアミン（ＤＥＡ）、ジブチルアミンプロピルスルホン酸塩（ＤＢＡ－ＰＳ）、ジブチルアミンブチルスルホン酸塩（ＤＢＡ－ＢＳ）、ブチルエタノールアミンプロピルスルホン酸塩（ＢＥＡ－ＰＳ）、ブチルエタノールアミンブチルスルホン酸塩（ＢＥＡ－ＢＳ）、ジエタノールアミンプロピルスルホン酸塩（ＤＥＡ－ＰＳ、別名３－［ビス－（２－ヒドロキシ－エチル）－アミノ］－プロパン－１－スルホン酸、）、ジエタノールアミンブチルスルホン酸塩（ＤＥＡ－ＢＳ）、及びそれらの組み合わせから選択されるＥＣＬ共反応物質を含む。実施形態では、組成物は、ＴＥＡを含む。実施形態では、組成物は、ｔＢＤＥＡを含む。実施形態では、組成物は、ＭＤＥＡを含む。実施形態では、組成物は、ＭＤＥＡを含む。実施形態では、組成物は、ＤＥＡ－ＰＳを含む。実施形態では、ＴＥＡ組成物は、ＴＥＡと、イオン成分と、必要に応じて界面活性剤と、を含む。
【0246】
実施形態では、本開示は、混合時に本明細書に記載の組成物を形成する２つ以上の成分を含むキットを提供する。実施形態では、本開示は、１つ以上の容器、バイアル、又は区画内に、（ａ）トリエタノールアミン（ＴＥＡ）と、（ｂ）イオン成分と、を含む、キットであって、当該キットが、追加のｐＨ緩衝成分を含まない、キットを提供する。実施形態では、本開示は、１つ以上の容器、バイアル、又は区画内に、（ａ）トリエタノールアミン（ＴＥＡ）と、（ｂ）イオン成分と、（ｃ）界面活性剤と、を含む、キットであって、当該キットが、追加のｐＨ緩衝成分を含まない、キットを提供する。イオン成分（例えば、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、及び／若しくはＬｉＣｌ）、界面活性剤（例えば、ＴＲＩＴＯＮ Ｘ－１００、ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）Ｐ－４０７、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ－１２３、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ－１２１、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）３１Ｒ）、ＴＥＴＲＯＮＩＣ（登録商標）７０１、ＢＲＩＪ（登録商標）Ｌ４、ＢＲＩＪ（登録商標）５８、ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、及び／若しくはアルキルエーテル－ポリエチレングリコール（例えば、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテル））、並びに／又はそれらの濃度が本明細書に記載される。
【0247】
実施形態では、キットは、アッセイ試薬、較正試薬、表面、ＥＣＬ標識、又はそれらの組み合わせを更に含む。実施形態では、キットは、アッセイ試薬を含む。実施形態では、アッセイ試薬は、結合試薬、検出試薬、又はそれらの両方を含む。結合試薬及び検出試薬は、本明細書に更に記載され、例えば、抗体若しくはその抗原結合断片、抗原、配位子、受容体、オリゴヌクレオチド、ハプテン、エピトープ、ミモトープ、又はアプタマーを含む。実施形態では、結合試薬は、抗体又はその抗原結合断片である。実施形態では、検出試薬は、抗体又はその抗原結合断片である。実施形態では、結合試薬及び検出試薬の両方が、抗体又はその抗原結合断片である。
【0248】
実施形態では、キットは、本明細書に記載されるアッセイモジュールを含む。実施形態では、アッセイモジュールは、本明細書に記載のＥＣＬ共反応物質組成物又はＴＥＡ組成物を乾燥形態で含む。実施形態では、キットは、表面を含む。ＥＣＬベースの結合アッセイを実行するのに好適な表面が、本明細書に記載されている。実施形態では、表面は、マルチウェルプレートを含む。実施形態では、表面は、アッセイカートリッジを含む。実施形態では、表面は、粒子を含む。実施形態では、表面は、スライド、チップ、ウェル、アッセイセル若しくはフローセル、チューブ、ビーズ、又は微粒子の表面を含む。表面が粒子、ビーズ、又は微粒子を含む実施形態では、キットは、粒子、ビーズ、又は微粒子を収集するための追加の表面、例えばプレートを更に含む。実施形態では、追加の表面は、磁気的に収集可能な粒子、ビーズ、又は微粒子を含む。実施形態では、追加の表面は、磁気プレートを更に含む。実施形態では、表面及び／又は追加の表面は、電極を含む。実施形態では、電極は、炭素電極、白金電極、金電極、又は銀電極である。実施形態では、電極は、炭素インク電極である。
【0249】
実施形態では、結合試薬は、表面上に固定化される。実施形態では、結合試薬及び表面は、キット内で別々に提供され、キットは、結合試薬を表面に固定化するための試薬を更に含む。結合試薬を表面に固定化する方法が、本明細書に提供され、例えば、結合試薬及び表面上の二次結合パートナーを介した直接固定化又は間接固定化を含む。
【0250】
実施形態では、キットは、ＥＣＬ標識を含む。ＥＣＬ標識が、本明細書に更に記載されており、例えば、ルテニウム含有化合物を含む。実施形態では、ＥＣＬ標識は、電気化学発光有機金属錯体を含む。実施形態では、有機金属錯体は、ルテニウム、オスミウム、イリジウム、レニウム、及び／又はランタニド金属を含む。実施形態では、有機金属錯体は、置換若しくは非置換ビピリジン、又は置換若しくは非置換フェナントロリンを含む。実施形態では、ＥＣＬ標識は、ルテニウムを含む。実施形態では、ＥＣＬ標識は、ルテニウム（ＩＩ）トリス－ビピリジンを含む。実施形態では、ＥＣＬ標識は、置換ビピリジンを含む。実施形態では、ＥＣＬ標識は、少なくとも１つの置換ビピリジン配位子を含む有機金属錯体を含み、置換ビピリジン配位子は、少なくとも１つのスルホネート基を含む。実施形態では、ＥＣＬ標識は、少なくとも２つの置換ビピリジン配位子を含む有機金属錯体を含み、各置換ビピリジン配位子は、少なくとも１つのスルホネート基を含む。実施形態では、少なくとも１つのスルホネート基を含む置換ビピリジン配位子は、式Ｉの化合物である。実施形態では、ＥＣＬ標識は、式ＩＩの化合物を含む。実施形態では、検出試薬は、ＥＣＬ標識を含む。実施形態では、検出試薬及びＥＣＬ標識は、キット内に別々に提供され、キットは、検出試薬をＥＣＬ標識にコンジュゲートするための試薬を更に含む。コンジュゲーション方法は、当業者に既知である。
【0251】
実施形態では、キットは、較正試薬を含む。実施形態では、較正試薬は、既知の量の目的の分析物を含む。実施形態では、較正試薬は、既知の量のＥＣＬ標識を含む。実施形態では、キットは、ある範囲の濃度の分析物又はＥＣＬ標識を含む複数の較正試薬を含む。実施形態では、複数の較正試薬は、本明細書に記載のＥＣＬベースの結合アッセイの定量上限及び下限に近い濃度の分析物又はＥＣＬ標識を含む。実施形態では、複数の較正試薬は、結合アッセイのダイナミックレンジ全体に及ぶ。実施形態では、較正試薬は、陽性対照試薬である。実施形態では、較正試薬は、陰性対照試薬である。実施形態では、陽性又は陰性対照試薬は、本開示の方法と試験される試料の比較の基礎を提供するために使用される。
【0252】
実施形態では、キットの１つ以上の成分は、例えば、凍結乾燥試薬として、乾燥形態で提供される。実施形態では、キットの１つ以上の成分が、溶液中で提供される。実施形態では、結合試薬は、凍結乾燥される。実施形態では、結合試薬は、溶液で提供される。実施形態では、検出試薬は、凍結乾燥される。実施形態では、検出試薬は、溶液で提供される。実施形態では、較正試薬は、凍結乾燥される。実施形態では、較正試薬は、溶液で提供される。実施形態では、キットは、液体希釈剤を更に含む。実施形態では、液体希釈剤は、乾燥試薬を再構成する。実施形態では、液体希釈剤は、水である。実施形態では、キットの１つ以上の成分は、例えば、試薬の作動濃度の２倍、４倍、５倍、１０倍、又は２０倍の濃縮原液として提供される。
【0253】
実施形態では、キットは、例えば、本明細書に記載の組成物及び方法から生成されるＥＣＬを検出するためのアッセイ機器を含む。実施形態では、キットは、アッセイ消耗品、例えば、本明細書に記載の方法の１つ以上の工程中に試料及び／若しくは試薬を含有するように構成されたアッセイモジュール、液体試料及び試薬を移送するためのピペットチップ及び他の消耗品、アッセイモジュール及びアッセイで使用される他の消耗品（例えば、チューブ、キュベット、ウェル、マルチウェルプレート、カートリッジ、側方流動デバイス、フローセル）のためのカバー及びシール、他のアッセイ消耗品を保持するためのラック、試料を識別するための標識（バーコード、ＲＦＩＤなどのヒト可読若しくは機械可読形式を含む）、又は方法に関する情報及び／若しくは方法を実行するための指示を提供するための他のアッセイ消耗品及び媒体（紙及び電子媒体を含む）を更に含む。
【0254】
特許、特許出願、論文、教科書などを含む、本明細書で引用される全ての参考文献、並びにそれらにおいて引用される参考文献は、それらが既に引用されていない程度まで、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【0255】
番号付き項目
本開示の実施形態は、以下の番号付き項目を含む。
１．組成物であって、
（ａ）トリエタノールアミン（ＴＥＡ）、
（ｂ）イオン成分と、
（ｃ）電気化学発光（ＥＣＬ）標識成分と、を含む、組成物であって、
組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、組成物が、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない、組成物。
２．組成物であって、本質的に、
（ａ）トリエタノールアミン（ＴＥＡ）、（ｂ）イオン成分、及び（ｃ）界面活性剤、又は
（ａ）トリエタノールアミン（ＴＥＡ）、（ｂ）イオン成分、（ｃ）界面活性剤、及び（ｄ）ＥＣＬ標識成分からなる、組成物であって、
組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、組成物が、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない、組成物。
３．組成物であって、
（ａ）トリエタノールアミン（ＴＥＡ）、（ｂ）イオン成分、及び（ｃ）界面活性剤、又は
（ａ）トリエタノールアミン（ＴＥＡ）、（ｂ）イオン成分、（ｃ）界面活性剤、及び（ｄ）ＥＣＬ標識成分からなる、組成物であって、
組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有する、組成物。
４．組成物であって、
（ａ）約１０００ｍＭ～約６５００ｍＭのトリエタノールアミン（ＴＥＡ）と、
（ｂ）約５００ｍＭ～約２０００ｍＭのイオン成分と、を含む、組成物であって、
組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有する、組成物。
５．組成物であって、本質的に、
（ａ）約１０００ｍＭ～約６５００ｍＭのトリエタノールアミン（ＴＥＡ）、（ｂ）約５００ｍＭ～約２０００ｍＭのイオン成分、及び（ｃ）界面活性剤、又は
（ａ）約１０００ｍＭ～約６５００ｍＭのトリエタノールアミン（ＴＥＡ）、（ｂ）約５００ｍＭ～約２０００ｍＭのイオン成分、（ｃ）界面活性剤、及び（ｄ）ＥＣＬ標識成分からなる、組成物であって、
組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有する、組成物。
６．組成物であって、
（ａ）約１０００ｍＭ～約６５００ｍＭのトリエタノールアミン（ＴＥＡ）、（ｂ）約５００ｍＭ～約２０００ｍＭのイオン成分、及び（ｃ）界面活性剤、又は
（ａ）約１０００ｍＭ～約６５００ｍＭのトリエタノールアミン（ＴＥＡ）、（ｂ）約５００ｍＭ～約２０００ｍＭのイオン成分、（ｃ）界面活性剤、及び（ｄ）ＥＣＬ標識成分からなる、組成物であって、
組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有する、組成物。
７．組成物であって、
（ａ）トリエタノールアミン（ＴＥＡ）、
（ｂ）イオン成分と、
（ｃ）アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）と、を含む、組成物であって、
組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有する、組成物。
８．組成物であって、本質的に、
（ａ）トリエタノールアミン（ＴＥＡ）、（ｂ）イオン成分、及び（ｃ）アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又は
（ａ）トリエタノールアミン（ＴＥＡ）、（ｂ）イオン成分、（ｃ）アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、及び（ｄ）ＥＣＬ標識成分からなる、組成物であって、
組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有する、組成物。
９．組成物であって、
（ａ）トリエタノールアミン（ＴＥＡ）、（ｂ）イオン成分、及び（ｃ）アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又は
（ａ）トリエタノールアミン（ＴＥＡ）、（ｂ）イオン成分、（ｃ）アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、及び（ｄ）ＥＣＬ標識成分からなる、組成物であって、
組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有する、組成物。
１０．組成物であって、
（ａ）トリエタノールアミン（ＴＥＡ）、
（ｂ）イオン成分と、
（ｃ）必要に応じて、ＥＣＬ標識成分及び界面活性剤の一方又は両方と、を含む、組成物であって、
組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、
必要に応じて、組成物が、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない、組成物。
１１．組成物が、ＥＣＬ標識成分、界面活性剤、又はそれらの両方を含む、項目１０の組成物。
１２．組成物が、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない、項目１０の組成物。
１３．組成物が、
（ａ）約１０００ｍＭ～約６５００ｍＭのＴＥＡと、
（ｂ）約５００ｍＭ～約２０００ｍＭのイオン成分と、を含む、項目１０～１２のいずれかの組成物。
１４．組成物が、ＥＣＬ標識成分を含む、項目１０～１３のうちのいずれかの組成物。
１５．組成物が、界面活性剤を含む、項目１０～１３のうちのいずれかの組成物。
１６．組成物が、ＥＣＬ標識成分と、界面活性剤と、を含む、項目１０～１５のうちのいずれか１つの組成物。
１７．界面活性剤が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む、項目１０～１６のうちのいずれかの組成物。
１８．界面活性剤が、アルキルエーテル－ＰＥＧを含む、項目１０～１７のうちのいずれかの組成物。
１９．組成物が、当該成分から本質的になる、項目１２～１８のうちのいずれかの組成物。
２０．組成物が、当該成分からなる、項目１９の組成物。
２１．組成物であって、
（ａ）Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチルジエタノールアミン（ｔＢＤＥＡ）、メチルジエタノールアミン（ＭＤＥＡ）、３－［ビス－（２－ヒドロキシ－エチル）－アミノ］－プロパン－１－スルホン酸（ＤＥＡ－ＰＳ）、及びそれらの組み合わせから選択される電気化学発光（ＥＣＬ）共反応物質と、
（ｂ）イオン成分と、
（ｃ）界面活性剤と、を含む、組成物であって、
組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有する、組成物。
２２．組成物であって、本質的に、
（ａ）Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチルジエタノールアミン（ｔＢＤＥＡ）、メチルジエタノールアミン（ＭＤＥＡ）、３－［ビス－（２－ヒドロキシ－エチル）－アミノ］－プロパン－１－スルホン酸（ＤＥＡ－ＰＳ）、及びそれらの組み合わせから選択される電気化学発光（ＥＣＬ）共反応物質、（ｂ）イオン成分、並びに（ｃ）界面活性剤、又は
（ａ）Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチルジエタノールアミン（ｔＢＤＥＡ）、メチルジエタノールアミン（ＭＤＥＡ）、３－［ビス－（２－ヒドロキシ－エチル）－アミノ］－プロパン－１－スルホン酸（ＤＥＡ－ＰＳ）、及びそれらの組み合わせから選択される電気化学発光（ＥＣＬ）共反応物質、（ｂ）イオン成分、（ｃ）界面活性剤、並びに（ｄ）ＥＣＬ標識成分から本質的になる、組成物であって、
組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有する、組成物。
２３．組成物であって、
（ａ）Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチルジエタノールアミン（ｔＢＤＥＡ）、メチルジエタノールアミン（ＭＤＥＡ）、３－［ビス－（２－ヒドロキシ－エチル）－アミノ］－プロパン－１－スルホン酸（ＤＥＡ－ＰＳ）、及びそれらの組み合わせから選択される電気化学発光（ＥＣＬ）共反応物質、（ｂ）イオン成分、（ｃ）界面活性剤、並びに（ｄ）ｐＨ緩衝成分、又は
（ａ）Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチルジエタノールアミン（ｔＢＤＥＡ）、メチルジエタノールアミン（ＭＤＥＡ）、３－［ビス－（２－ヒドロキシ－エチル）－アミノ］－プロパン－１－スルホン酸（ＤＥＡ－ＰＳ）、及びそれらの組み合わせから選択される電気化学発光（ＥＣＬ）共反応物質、（ｂ）イオン成分、（ｃ）界面活性剤、（ｄ）ｐＨ緩衝成分、並びに（ｅ）ＥＣＬ標識成分からなる、組成物であって、
組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有する、組成物。
２４．ＥＣＬ標識成分を更に含む、項目４、７、又は２１の組成物。
２５．組成物が、成分（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）から本質的になる、項目５、８、又は２２の組成物。
２６．組成物が、成分（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、及び（ｄ）から本質的になる、項目５、８、又は２２の組成物。
２７．組成物が、成分（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）からなる、項目６又は９の組成物。
２８．組成物が、成分（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、及び（ｄ）からなる、項目６又は９の組成物。
２９．組成物が、成分（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、及び（ｄ）からなる、項目２３の組成物。
３０．組成物が、成分（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、及び（ｅ）からなる、項目２３の組成物。
３１．ＴＥＡの濃度が、約１０００ｍＭ～約６５００ｍＭである、項目１～３、７～９、１０～１２、又は２４～２８のうちのいずれかの組成物。
３２．ＴＥＡの濃度が、約１１００ｍＭ～約３５００ｍＭである、項目１～２０、２４～２８、又は３１のうちのいずれかの組成物。
３３．ＴＥＡの濃度が、約１２００ｍＭ～約１６００ｍＭである、項目３２の組成物。
３４．ＥＣＬ共反応物質の濃度が、約５０ｍＭ～約２５０ｍＭである、項目２１～２６、２９、又は３０のうちのいずれかの組成物。
３５．ＥＣＬ共反応物質の濃度が、約１００ｍＭ～約２００ｍＭである、項目３４の組成物。
３６．イオン成分が、塩化物イオンを含む、項目１～３５のうちのいずれかの組成物。
３７．イオン成分が、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、ＬｉＣｌ、又はそれらの組み合わせを含む、項目３６の組成物。
３８．イオン成分が、ＮａＣｌを含む、項目３７の組成物。
３９．イオン成分が、ＫＣｌを含む、項目３７の組成物。
４０．イオン成分の濃度が、約５００ｍＭ～約１５００ｍＭである、項目１～３９のうちのいずれかの組成物。
４１．イオン成分の濃度が、約６００ｍＭ～約１２００ｍＭである、項目４０の組成物。
４２．イオン成分の濃度が、約７００ｍＭ～約１０００ｍＭである、項目４１の組成物。
４３．イオン成分の濃度が、約８００ｍＭ～約９００ｍＭである、項目４２の組成物。
４４．界面活性剤を更に含む、項目１又は４の組成物。
４５．界面活性剤が、非イオン性界面活性剤である、項目２、３、５、６、又は１０～４３のうちのいずれかの組成物。
４６．界面活性剤が、フェノールエーテルを含む、項目４５の組成物。
４７．界面活性剤が、２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノールである、項目４５の組成物。
４８．界面活性剤が、フェノールエーテルを含まない、項目４５の組成物。
４９．界面活性剤が、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７、ポリ（エチレンオキシド）（ＰＥＯ）とポリ（プロピレンオキシド）（ＰＰＯ）ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８とのブロックコポリマー、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）とポリ（プロピレングリコール）（ＰＰＧ）ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５とのブロックコポリマー、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロック－エトキシレート）テトロール、ポリエチレングリコールドデシルエーテル、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル、ポリソルベート２０、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、項目４８の組成物。
５０．界面活性剤が、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である、項目４９の組成物。
５１．アルキルエーテル－ＰＥＧが、ＰＥＧ（１０）トリデシルエーテル、ＰＥＧ（１２）トリデシルエーテル、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテル、又はそれらの組み合わせである、項目７～９又は５０のうちのいずれかの組成物。
５２．アルキルエーテルＰＥＧが、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルである、項目５１の組成物。
５３．界面活性剤の濃度が、約０．１ｍＭ～約１０ｍＭである、項目２、３、５、６、又は１０～５２のうちのいずれかの組成物。
５４．界面活性剤の濃度が、約０．５ｍＭ～約８ｍＭである、項目５３の組成物。
５５．界面活性剤の濃度が、約１ｍＭ～約５ｍＭである、項目５４の組成物。
５６．アルキルエーテル－ＰＥＧの濃度が、約０．１ｍＭ～約１０ｍＭである、項目７～９又は５０～５２のうちのいずれかの組成物。
５７．アルキルエーテル－ＰＥＧの濃度が、約０．５ｍＭ～約８ｍＭである、項目５６の組成物。
５８．アルキルエーテル－ＰＥＧの濃度が、約１ｍＭ～約５ｍＭである、項目５７の組成物。
５９．ｐＨが、約７．４～約７．９である、項目１～５８のうちのいずれかの組成物。
６０．ｐＨが、約７．５～約７．８である、項目５９の組成物。
６１．組成物が、リン酸塩、Ｔｒｉｓ、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、及びクエン酸塩のいずれも含まない、項目１、２、４、５、７、８、１０～１９、２４～２６、又は３１～６０のうちのいずれかの組成物。
６２．組成物が、約７．０～約８．０のｐＫａを有する追加の成分を含まない、項目１、２、４、５、７、８、１０～１９、２４～２６、又は３１～６０のうちのいずれかの組成物。
６３．組成物が、ｐＨ緩衝成分を更に含む、項目２１の組成物。
６４．組成物が、更に、ｐＨ緩衝成分から本質的になる、項目２２の組成物。
６５．ｐＨ緩衝成分が、リン酸塩、Ｔｒｉｓ、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、又はそれらの組み合わせである、項目６３又は６４の組成物。
６６．ｐＨ緩衝成分が、リン酸塩である、項目６５の組成物。
６７．ｐＨ緩衝成分が、Ｔｒｉｓである、項目６５の組成物。
６８．ｐＨ緩衝成分の濃度が、約１００ｍＭ～約３００ｍＭである、項目６３～６７のうちのいずれかの組成物。
６９．ｐＨ緩衝成分の濃度が、約１５０ｍＭ～約２５０ｍＭである、項目６８の組成物。
７０．ＥＣＬ標識成分が、ＥＣＬ標識を含む検出試薬を含むか、又はＥＣＬ標識成分が、検出試薬の結合パートナーを含み、結合パートナーが、ＥＣＬ標識を含む、項目１～３、５、６、８～２０、２２、２４、２６、２８、３０、又は３１～６９のうちのいずれか１つの組成物。
７１．ＥＣＬ標識成分が、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である、項目７０の組成物。
７２．ＥＣＬ標識成分及び検出試薬が、相補的オリゴヌクレオチドを含む、項目７０の組成物。
７３．ＥＣＬ標識が、電気化学発光有機金属錯体を含む、項目７０～７２のうちのいずれか１つの組成物。
７４．電気化学発光有機金属錯体が、ルテニウム、オスミウム、イリジウム、又はレニウムを含む、項目７３の組成物。
７５．電気化学発光有機金属錯体が、ルテニウムを含む、項目７４の組成物。
７６．電気化学発光有機金属錯体が、置換若しくは非置換ビピリジン、又は置換若しくは非置換フェナントロリンを含む、項目７５の組成物。
７７．電気化学発光有機金属錯体が、少なくとも１つの置換ビピリジン配位子を含み、置換ビピリジン配位子が、少なくとも１つのスルホネート基を含む、項目７６の組成物。
７８．電気化学発光有機金属錯体が、少なくとも２つの置換ビピリジン配位子を含み、各置換ビピリジン配位子が、少なくとも１つのスルホネート基を含む、項目７７の組成物。
７９．置換ビピリジン配位子が、式Ｉ：
（Ｉ）の化合物である、項目７７又は７８の組成物。
８０．ＥＣＬ標識が、式ＩＩ：
（ＩＩ）の化合物である、項目７０～７９のうちのいずれか１つの組成物。
８１．組成物が、乾燥形態である、項目１～８０のうちのいずれか１つの組成物。
８２．電気化学発光（ＥＣＬ）を生成するための方法であって、
（ａ）電極を、
（ｉ）ＴＥＡと、イオン成分と、必要に応じて界面活性剤と、を含むＴＥＡ組成物、又は
項目１～８１のうちのいずれかの組成物と、
（ｉｉ）ＥＣＬ標識と接触させることと、
（ｂ）電圧を電極に印加し、それにより、ＥＣＬを生成することと、を含む、方法。
８３．生成されたＥＣＬを検出することを更に含む、項目８２の方法。
８４．電極が、表面上に存在する、項目８２又は８３の方法。
８５．ＥＣＬ標識が、ＥＣＬ標識成分上に存在する、項目８２～８４のうちのいずれかの方法。
８６．ＥＣＬ標識が、試料中に存在する、項目８２～８４のうちのいずれかの方法。
８７．工程（ａ）が、ＥＣＬ標識成分の結合パートナーを含む試料と電極を接触させることを更に含み、ＥＣＬ標識成分及び結合パートナーが、結合錯体を形成し、方法が、生成されたＥＣＬを検出することによって結合錯体を検出することを含む、項目８５の方法。
８８．ＥＣＬ標識成分が、結合錯体中に存在し、方法が、生成されたＥＣＬを検出することによって、結合錯体を検出することを含む、項目８５の方法。
８９．結合錯体中のＥＣＬ標識成分が、ＥＣＬ標識を含む検出試薬の第１のコピーであり、結合錯体が、表面上に固定化された結合試薬と、検出試薬の第１のコピーと、を含む、項目８８の方法。
９０．結合錯体を形成することを更に含む、項目８８又は８９の方法。
９１．結合錯体が、方法の工程（ａ）の前又は間に形成される、項目９０の方法。
９２．結合錯体が、
結合試薬と、検出試薬の第１のコピーと、ＥＣＬ標識を含む検出試薬の第２のコピーと、を含むアッセイ混合物を、
結合錯体が表面上に形成され、かつ検出試薬の第２のコピーが溶液中に残る条件下でインキュベートすることによって形成される、項目８９～９１のいずれかの方法。
９３．結合錯体が、
結合試薬と、検出試薬の第１のコピーと、ＥＣＬ標識を含む検出試薬の第２のコピーと、ＴＥＡ組成物又は項目１～８１のうちのいずれかの組成物と、を含むアッセイ混合物を、
結合錯体が表面上に形成され、かつ検出試薬の第２のコピーが溶液中に残る条件下でインキュベートすることによって形成される、項目８９～９１のいずれかの方法。
９４．結合錯体が、
試料を、検出試薬の第１のコピー、ＥＣＬ標識を含む検出試薬の第２のコピー、及びＴＥＡ組成物又は項目１～８１のうちのいずれかの組成物と組み合わせ、それにより、アッセイ混合物を形成することと、
結合錯体が表面上に形成され、かつ第２の検出試薬が溶液中に残る条件下で、アッセイ混合物を結合試薬と接触させることと、によって形成される、項目８９～９１のいずれかの方法。
９５．試料、ＴＥＡ組成物又は項目１～８１のうちのいずれかの組成物、及びＥＣＬ標識成分のそれぞれが、乾燥しているか、
試料、ＴＥＡ組成物又は項目１～８１のうちのいずれかの組成物、及びＥＣＬ標識成分のそれぞれが、液体であるか、又は
試料、ＴＥＡ組成物又は項目１～８１のうちのいずれかの組成物、及びＥＣＬ標識成分のうちの１つ以上が、乾燥しており、残りの成分（複数可）が、液体である、項目８５～９４の方法。
９６．ＴＥＡ組成物又は項目１～８１のうちのいずれかの組成物が、乾燥しており、表面上に存在する、項目９５の方法。
９７．結合錯体が、分析物を更に含み、方法が、分析物を検出することを含む、項目８８～９６のうちのいずれかの方法。
９８．生成されたＥＣＬを測定し、それにより、ＥＣＬ標識、ＥＣＬ標識成分、結合錯体、又は分析物の量を定量することを更に含む、項目８２～９７のうちのいずれかの方法。
９９．結合錯体を検出する方法であって、
（ａ）液体試料を表面と接触させることであって、表面が、
ＴＥＡ、イオン成分、及び必要に応じて界面活性剤を含むＴＥＡ組成物、又は
項目１～８１のうちのいずれか１つの組成物と、を含み、
液体試料が、ＥＣＬ標識成分を含むか、又は液体試料が、ＥＣＬ標識成分の結合パートナーを含み、方法が、表面をＥＣＬ標識成分と接触させ、
それにより、ＥＣＬ標識成分を含む結合錯体を表面上に形成する、接触させることと、
（ｂ）表面に電圧を印加して、ＥＣＬを生成することと、
（ｃ）生成されたＥＣＬを検出し、それにより、結合錯体を検出することと、を含む、方法。
１００．結合錯体を検出する方法であって、
（ａ）液体試料を表面と接触させることであって、表面が、ＥＣＬ標識成分と、
ＴＥＡ、イオン成分、及び必要に応じて界面活性剤を含むＴＥＡ組成物、又は
項目１～８１のうちのいずれか１つの組成物と、を含み、
液体試料が、ＥＣＬ標識成分の結合パートナーを含み、
それにより、ＥＣＬ標識成分を含む結合錯体を表面上に形成する、接触させることと、
（ｂ）表面に電圧を印加して、ＥＣＬを生成することと、
（ｃ）生成されたＥＣＬを検出し、それにより、結合錯体を検出することと、を含む、方法。
１０１．結合錯体を検出するための方法であって、
（ａ）結合錯体を表面上に形成することであって、表面が、必要に応じて電極を含み、結合錯体が、ＥＣＬ標識成分を含む、形成することと、
（ｂ）結合錯体を、
ＴＥＡ、イオン成分、及び必要に応じて界面活性剤を含むＴＥＡ組成物、又は
項目１～８１のうちのいずれか１つの組成物と接触させることと、
（ｃ）表面に電圧を印加して、ＥＣＬを生成することと、
（ｄ）生成されたＥＣＬを検出し、それにより結合錯体を検出することと、を含む、方法。
１０２．試料中の目的の分析物を検出するための方法であって、
（ａ）試料を、（ｉ）結合試薬を含む表面であって、結合試薬が、分析物に特異的に結合する、表面、及び（ｉｉ）分析物に特異的に結合する検出試薬であって、検出試薬が、ＥＣＬ標識を含む、検出試薬と接触させ、それにより、結合試薬と、分析物と、検出試薬と、を含む結合錯体を表面上に形成する、接触させることと、
（ｂ）表面上の結合錯体を、
ＴＥＡ、イオン成分、及び必要に応じて界面活性剤を含むＴＥＡ組成物、又は
項目１～８１のうちのいずれかの組成物と接触させることと、
（ｃ）表面に電圧を印加して、ＥＣＬを生成することと、
（ｄ）生成されたＥＣＬを検出し、それにより、分析物を検出することと、を含む、方法。
１０３．方法が、洗浄工程を含まない、項目９９～１０２のうちのいずれか１つの方法。
１０４．工程（ａ）が、洗浄工程を含まない、項目９９～１０２のうちのいずれか１つの方法。
１０５．ＥＣＬ標識成分が、ＥＣＬ標識を含む検出試薬を含むか、又はＥＣＬ標識成分が、検出試薬の結合パートナーを含み、結合パートナーが、ＥＣＬ標識を含む、項目９９～１０１のうちのいずれか１つの方法。
１０６．ＥＣＬ標識成分が、検出試薬を含み、結合錯体が、結合試薬と、検出試薬と、を含む、項目１０５の方法。
１０７．ＥＣＬ標識成分が、検出試薬の結合パートナーを含み、結合錯体が、結合試薬と、検出試薬と、結合パートナーと、を含む、項目１０５の方法。
１０８．検出試薬及びＥＣＬ標識成分が、相補的オリゴヌクレオチドを含む、項目１０７の方法。
１０９．結合錯体を検出するための方法であって、
（ａ）試料を、
ｉ．ＴＥＡ、イオン成分、及び必要に応じて界面活性剤を含むＴＥＡ組成物、又は
項目１～８１のうちのいずれかの組成物と、
ｉｉ．検出試薬の少なくとも２つのコピーを含む検出混合物であって、検出試薬の各コピーが、ＥＣＬ標識を含む、検出混合物と、を含む、アッセイ混合物を、
（ｂ）アッセイ混合物を、必要に応じて電極を含む表面上に固定化された結合試薬と、
ｉ．結合錯体が表面上に形成され、結合錯体が、結合試薬と、検出試薬の第１のコピーと、を含み、かつ
ｉｉ．検出試薬の第２のコピーが溶液中に残る条件下で、インキュベートすることと、
（ｃ）表面に電圧を印加して、ＥＣＬを生成することと、
（ｄ）生成されたＥＣＬを検出し、それにより結合錯体を検出することと、を含む、方法。
１１０．結合錯体を検出するための方法であって、
（ａ）アッセイ混合物であって、
ｉ．表面上に固定化された結合試薬であって、表面が、必要に応じて電極を含む、結合試薬と、
ｉｉ．検出試薬の少なくとも２つのコピーを含む検出混合物であって、検出試薬の各コピーが、ＥＣＬ標識を含む、検出混合物と、を含む、アッセイ混合物を、
ｉ．結合錯体が表面上に形成され、結合錯体が、結合試薬と、検出試薬の第１のコピーと、を含み、かつ
ｉｉ．検出試薬の第２のコピーが溶液中に残る条件下で、インキュベートすることと、
（ｂ）結合錯体を、
ＴＥＡ、イオン成分、及び必要に応じて界面活性剤を含むＴＥＡ組成物、又は
項目１～８１のうちのいずれかの組成物と接触させることと、
（ｃ）表面に電圧を印加して、ＥＣＬを生成することと、
（ｄ）生成されたＥＣＬを検出し、それにより結合錯体を検出することと、を含む、方法。
１１１．検出試薬の第２のコピーが、工程（ｂ）～（ｄ）のいずれかの前に除去されない、項目１０９又は１１０の方法。
１１２．検出試薬の第２のコピーが、工程（ｄ）の前に除去されない、項目１０９又は１１０の方法。
１１３．結合錯体を検出するための方法であって、
（ａ）アッセイ混合物であって、
ｉ．表面上に固定化された結合試薬であって、表面が、必要に応じて電極を含む、結合試薬と、
ｉｉ．検出試薬の少なくとも２つのコピーを含む検出混合物であって、検出試薬の各コピーが、ＥＣＬ標識を含む、検出混合物と、
ｉｉｉ．ＴＥＡ、イオン成分、及び必要に応じて界面活性剤を含むＴＥＡ組成物、又は
項目１～８１のうちのいずれかの組成物と、を含むアッセイ混合物を、
ｉ．結合錯体が表面上に形成され、結合錯体が、結合試薬と、検出試薬の第１のコピーと、を含み、かつ
ｉｉ．検出試薬の第２のコピーが溶液中に残る条件下で、インキュベートすることと、
（ｂ）表面に電圧を印加して、ＥＣＬを生成することと、
（ｃ）生成されたＥＣＬを検出し、それにより、結合錯体を検出することと、を含む、方法。
１１４．検出試薬の第２のコピーが、工程（ｂ）又は（ｃ）のいずれかの前に除去されない、項目１１３の方法。
１１５．検出試薬の第２のコピーが、工程（ｃ）の前に除去されない、項目１１３の方法。
１１６．結合錯体が、分析物を更に含み、結合試薬及び検出試薬の第１のコピーが、それぞれ、分析物に特異的に結合する、項目１０６～１１５のうちのいずれかの方法。
１１７．結合試薬の少なくとも２つのコピーが、表面上に固定化され、結合試薬の第１のコピーが、検出試薬の第１のコピーと錯体を形成し、結合試薬の第２のコピーが、検出試薬の第２のコピーと錯体を形成しないように、競合体に結合する、項目１０９～１１６のうちのいずれかの方法。
１１８．結合試薬の少なくとも２つのコピーが、表面上に固定化され、結合試薬の第１のコピーが、検出試薬の第１のコピーと錯体を形成し、検出試薬の第２のコピーが、結合試薬の第２のコピーが検出試薬の第２のコピーと錯体を形成しないように、競合体に結合する、項目１０９～１１６のうちのいずれかの方法。
１１９．結合試薬が、検出試薬の第１のコピーに結合して、結合錯体を形成する、項目１０９～１１５のうちのいずれかの方法。
１２０．方法が、１つ以上の結合錯体を同時に検出することができる多重化方法である、項目９９～１１９のうちのいずれかの方法。
１２１．方法が、１つ以上の分析物を同時に検出することができる多重化方法である、項目９９～１１９のうちのいずれかの方法。
１２２．ＴＥＡ組成物又は項目１～８１のうちのいずれか１つの組成物が、乾燥形態である、項目９９～１２１のうちのいずれか１つの方法。
１２３．検出混合物が、乾燥形態である、項目１０９～１２２のうちのいずれか１つの方法。
１２４．ＴＥＡ組成物又は項目１～８１のうちのいずれかの組成物及び検出混合物が、乾燥形態である、項目１０９～１２３のうちのいずれか１つの方法。
１２５．結合試薬及び検出試薬が、それぞれ、抗体若しくはその抗原結合断片、抗原、配位子、受容体、オリゴヌクレオチド、ハプテン、エピトープ、ミモトープ、又はアプタマーを含む、項目１０２～１２４のうちのいずれかの方法。
１２６．試料中のＥＣＬ標識の量を定量するための方法であって、
（ａ）電極を、
（ｉ）ＴＥＡ、イオン成分、及び必要に応じて界面活性剤を含むＴＥＡ組成物、又は
項目１～８１のうちのいずれかの組成物と接触させることと、
（ｉｉ）ＥＣＬ標識を含む試料と接触させることと、
（ｂ）電極に電圧を印加することと、
（ｃ）ＥＣＬを生成することと、
（ｄ）ＥＣＬを測定することと、
（ｅ）測定されたＥＣＬからＥＣＬ標識の量を定量することと、を含む、方法。
１２７．組成物を生成するための方法であって、
（ａ）トリエタノールアミン（ＴＥＡ）、
（ｂ）イオン成分、
（ｃ）界面活性剤、及び
（ｄ）ＥＣＬ標識成分を組み合わせることを含む、組成物を産生するための方法であって、
方法が、追加のｐＨ緩衝成分を添加することを含まない、方法。
１２８．ＥＣＬ標識が、ＥＣＬ活性有機金属錯体を含む、項目８２～１２７のうちのいずれかの方法。
１２９．ＥＣＬ活性有機金属錯体が、ルテニウムを含む、項目１２８の方法。
１３０．ＥＣＬ活性有機金属錯体が、少なくとも１つの置換ビピリジン配位子を含み、置換ビピリジン配位子が、少なくとも１つのスルホネート基を含む、項目１２８又は１２９の方法。
１３１．ＥＣＬ標識が、式ＩＩの化合物である、項目１３０の方法。
１３２．表面が、マルチウェルプレートのウェルを含む、項目８４～１３１のうちのいずれかの方法。
１３３．表面が、アッセイカートリッジを含む、項目８４～１３１のうちのいずれかの方法。
１３４．表面が、粒子を含む、項目８４～１３１のうちのいずれかの方法。
１３５．表面が、電極を含む、項目８４～１３４のうちのいずれかの方法。
１３６．粒子を電極上に収集することと、電極上の粒子に電圧を印加することと、を更に含む、項目１３４の方法。
１３７．電極が、炭素電極、白金電極、金電極、又は銀電極を含む、項目８２～９８、１３５又は１３６のうちのいずれかの方法。
１３８．電極が、炭素インク電極である、項目１３７の方法。
１３９．乾燥形態のＴＥＡ組成物を含むアッセイモジュールであって、ＴＥＡ組成物が、ＴＥＡと、イオン成分と、必要に応じて界面活性剤と、を含む、アッセイモジュール。
１４０．アッセイモジュールが、マルチウェルプレート又はアッセイカートリッジである、項目１３９のアッセイモジュール。
１４１．アッセイモジュールが、乾燥形態の結合試薬及び／又は検出試薬を更に含む、項目１３９又は１４０のアッセイモジュール。
１４２．アッセイモジュールが、検出試薬を更に含む、項目１４１のアッセイモジュール。
１４３．検出試薬が、ＥＣＬ標識を含む、項目１４１又は１４２のアッセイモジュール。
１４４．ＥＣＬ標識が、ＥＣＬ活性有機金属錯体を含む、項目１４３のアッセイモジュール。
１４５．ＥＣＬ活性有機金属錯体が、ルテニウムを含む、項目１４４のアッセイモジュール。
１４６．ＥＣＬ活性有機金属錯体が、少なくとも１つの置換ビピリジン配位子を含み、置換ビピリジン配位子が、少なくとも１つのスルホネート基を含む、項目１４４又は１４５のアッセイモジュール。
１４７．ＥＣＬ標識が、式ＩＩの化合物である、項目１４６のアッセイモジュール。
１４８．キットであって、１つ以上の容器、バイアル、又は区画内に、
（ａ）ＴＥＡ、イオン成分、及び必要に応じて界面活性剤を含むＴＥＡ組成物、又は
項目１～８１のうちのいずれかの組成物と、
（ｂ）必要に応じて、電極を含む表面と、を含み、
ＴＥＡ組成物が、追加のｐＨ緩衝成分を含まない、キット。
１４９．アッセイ機器、アッセイ試薬、較正試薬、ＥＣＬ標識、又はそれらの組み合わせを更に含む、項目１４８のキット。
１５０．項目１～８１のうちのいずれかの組成物と、
アッセイ機器、アッセイ試薬、較正試薬、表面、ＥＣＬ標識、又はそれらの組み合わせと、を含む、キット。
１５１．キットの１つ以上の成分が、乾燥形態で提供される、項目１４８～１５０のうちのいずれかのキット。
１５２．キットが、表面を含み、ＴＥＡ組成物が、乾燥形態で提供される、項目１４８のキット。
１５３．キットが、表面を含み、ＴＥＡ組成物が、表面上に提供される、項目１４８のキット。
１５４．アッセイ試薬が、結合試薬、検出試薬、又はそれらの両方を含む、項目１４９～１５３のうちのいずれかのキット。
１５５．結合試薬及び検出試薬が、それぞれ、抗体若しくはその抗原結合断片、抗原、配位子、受容体、オリゴヌクレオチド、ハプテン、エピトープ、ミモトープ、又はアプタマーを含む、項目１５４のキット。
１５６．キットが、表面を含み、結合試薬及び／又は検出試薬が、表面上に提供される、項目１５４又は１５５のキット。
１５７．キットが、表面と、結合試薬を表面に固定化するための試薬と、を含む、項目１５４又は１５５のキット。
１５８．キットが、ＥＣＬ標識を含む検出試薬を含む、項目１５４～１５７のうちのいずれかのキット。
１５９．キットが、検出試薬と、検出試薬をＥＣＬ標識にコンジュゲートするための試薬と、を含む、項目１５４～１５７のうちのいずれかのキット。
１６０．ＥＣＬ標識が、ＥＣＬ活性有機金属錯体を含む、項目１５０～１５９のうちのいずれかのキット。
１６１．ＥＣＬ活性有機金属錯体が、ルテニウムを含む、項目１６０のキット。
１６２．ＥＣＬ活性有機金属錯体が、少なくとも１つの置換ビピリジン配位子を含み、置換ビピリジン配位子が、少なくとも１つのスルホネート基を含む、項目１６０又は１６１のキット。
１６３．ＥＣＬ標識が、式ＩＩの化合物である、項目１６２のアッセイモジュール。
１６４．キットが、表面を含み、表面が、マルチウェルプレートのウェルを含む、項目１４８～１６３のうちのいずれかのキット。
１６５．キットが、表面を含み、表面が、アッセイカートリッジを含む、項目１４８～１６３のうちのいずれかのキット。
１６６．キットが、表面を含み、表面が、粒子を含む、項目１４８～１６５のうちのいずれかのキット。
１６７．結合錯体の存在が、ＥＣＬ標識及びクエンチ部位を含むＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブを使用して検出され、当該クエンチ部位が、少なくともＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブが相補的オリゴヌクレオチドにハイブリダイズされていない場合に、当該ＥＣＬ標識に近接して、当該ＥＣＬ標識をクエンチし、例えば、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブがステムループ又はヘアピン構造を含み、当該クエンチ部位は、オリゴヌクレオチドプローブがステムループ又はヘアピン構成にあるときには当該ＥＣＬ標識に近接して、当該ＥＣＬ標識をクエンチするが、ステムループ又はヘアピン構造が開放構成にあるときにはＥＣＬ標識をクエンチしない、先行する項目のうちのいずれかの組成物、方法、又はキット。
１６８．ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブが、結合パートナー及び／又は結合錯体のオリゴヌクレオチド配列に相補的なオリゴヌクレオチド配列を含む、項目１６７の組成物、方法、又はキット。
１６９．結合パートナー及び／又は結合錯体が、分析物を含む、項目１６７の組成物、方法、又はキット。
１７０．分析物が、ペプチドを含む、項目１６９の組成物、方法、又はキット。
１７１．分析物が、オリゴヌクレオチドを含む、項目１６９の組成物、方法、又はキット。
１７２．分析物が、結合パートナーのオリゴヌクレオチドである、項目１７１の組成物、方法、又はキット。
１７３．分析物が、オリゴヌクレオチドで標識される、項目１６９～１７１のうちのいずれか１つの組成物、方法、又はキット。
１７４．分析物が、分析物を、オリゴヌクレオチドを含む検出試薬と結合させることによってオリゴヌクレオチドで標識される、項目１７３の組成物、方法、又はキット。
１７５．結合パートナー及び／又は結合錯体のオリゴヌクレオチドが、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブのオリゴヌクレオチド配列に相補的な配列の複数のコピーを含む、項目１６８～１７４のいずれか１つの組成物、方法、又はキット。
１７６．ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブのオリゴヌクレオチド配列に相補的な配列の複数のコピーが、増幅反応の生成物である、項目１７５の組成物、方法、又はキット。
１７７．分析物が、分析物を、オリゴヌクレオチドプライマーを含む検出試薬と結合させることによってオリゴヌクレオチドで標識され、オリゴヌクレオチドプライマーが、ポリメラーゼによって伸長されて、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブのオリゴヌクレオチド配列に相補的な配列の複数のコピーを含むオリゴヌクレオチドを生成する、項目１７３の組成物、方法、又はキット。
１７８．増幅反応が、ローリングサークル増幅反応である、項目１７６又は１７７の組成物、方法、又はキット。
１７９．ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブが、ＥＣＬ標識成分、結合試薬、及び／又は検出試薬である、項目１６７～１７８のうちのいずれか１つの組成物、方法、又はキット。
１８０．ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブが、相補的オリゴヌクレオチドにハイブリダイズしたときに、選択的に脱クエンチされる、項目１６７～１７９のうちのいずれか１つの組成物、方法、又はキット。
１８１．選択的脱クエンチが、分子ビーコン様設計を有するＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドを相補的オリゴヌクレオチドにハイブリダイズし、クエンチ部位がＥＣＬ標識に近接しなくなるようにすること、又はクエンチ部位を相補的オリゴヌクレオチドにハイブリダイズされたプローブからのみ切断し、それによってクエンチ部位を溶液中に放出し、ＥＣＬ標識プローブを相補的オリゴヌクレオチドにハイブリダイズしたままにすることを含む、項目１８０の組成物、方法、又はキット。
１８２．クエンチ部位を切断することが、酵素、例えば、制限エンドヌクレアーゼ、例えば、ニッキングエンドヌクレアーゼ、ＲＮａｓｅＨ２、又は５’エキソヌクレアーゼ活性を有するポリメラーゼによって実行される、項目１８１の組成物、方法、又はキット。
本開示の実施形態は、以下の番号付き項目を含む。
１．組成物であって、
（ａ）トリエタノールアミン（ＴＥＡ）、
（ｂ）イオン成分と、
（ｃ）電気化学発光（ＥＣＬ）標識成分と、を含む、組成物であって、
組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、組成物が、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない、組成物。
２．組成物であって、本質的に、
（ａ）トリエタノールアミン（ＴＥＡ）、（ｂ）イオン成分、及び（ｃ）界面活性剤、又は
（ａ）トリエタノールアミン（ＴＥＡ）、（ｂ）イオン成分、（ｃ）界面活性剤、及び（ｄ）ＥＣＬ標識成分からなる、組成物であって、
組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、組成物が、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない、組成物。
３．組成物であって、
（ａ）トリエタノールアミン（ＴＥＡ）、（ｂ）イオン成分、及び（ｃ）界面活性剤、又は
（ａ）トリエタノールアミン（ＴＥＡ）、（ｂ）イオン成分、（ｃ）界面活性剤、及び（ｄ）ＥＣＬ標識成分からなる、組成物であって、
組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有する、組成物。
４．組成物であって、
（ａ）約１０００ｍＭ～約６５００ｍＭのトリエタノールアミン（ＴＥＡ）と、
（ｂ）約５００ｍＭ～約２０００ｍＭのイオン成分と、を含む、組成物であって、
組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有する、組成物。
５．組成物であって、本質的に、
（ａ）約１０００ｍＭ～約６５００ｍＭのトリエタノールアミン（ＴＥＡ）、（ｂ）約５００ｍＭ～約２０００ｍＭのイオン成分、及び（ｃ）界面活性剤、又は
（ａ）約１０００ｍＭ～約６５００ｍＭのトリエタノールアミン（ＴＥＡ）、（ｂ）約５００ｍＭ～約２０００ｍＭのイオン成分、（ｃ）界面活性剤、及び（ｄ）ＥＣＬ標識成分からなる、組成物であって、
組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有する、組成物。
６．組成物であって、
（ａ）約１０００ｍＭ～約６５００ｍＭのトリエタノールアミン（ＴＥＡ）、（ｂ）約５００ｍＭ～約２０００ｍＭのイオン成分、及び（ｃ）界面活性剤、又は
（ａ）約１０００ｍＭ～約６５００ｍＭのトリエタノールアミン（ＴＥＡ）、（ｂ）約５００ｍＭ～約２０００ｍＭのイオン成分、（ｃ）界面活性剤、及び（ｄ）ＥＣＬ標識成分からなる、組成物であって、
組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有する、組成物。
７．組成物であって、
（ａ）トリエタノールアミン（ＴＥＡ）、
（ｂ）イオン成分と、
（ｃ）アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）と、を含む、組成物であって、
組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有する、組成物。
８．組成物であって、本質的に、
（ａ）トリエタノールアミン（ＴＥＡ）、（ｂ）イオン成分、及び（ｃ）アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又は
（ａ）トリエタノールアミン（ＴＥＡ）、（ｂ）イオン成分、（ｃ）アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、及び（ｄ）ＥＣＬ標識成分からなる、組成物であって、
組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有する、組成物。
９．組成物であって、
（ａ）トリエタノールアミン（ＴＥＡ）、（ｂ）イオン成分、及び（ｃ）アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又は
（ａ）トリエタノールアミン（ＴＥＡ）、（ｂ）イオン成分、（ｃ）アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、及び（ｄ）ＥＣＬ標識成分からなる、組成物であって、
組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有する、組成物。
１０．組成物であって、
（ａ）トリエタノールアミン（ＴＥＡ）、
（ｂ）イオン成分と、
（ｃ）必要に応じて、ＥＣＬ標識成分及び界面活性剤の一方又は両方と、を含む、組成物であって、
組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有し、
必要に応じて、組成物が、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない、組成物。
１１．組成物が、ＥＣＬ標識成分、界面活性剤、又はそれらの両方を含む、項目１０の組成物。
１２．組成物が、追加のｐＨ緩衝成分を実質的に含まない、項目１０の組成物。
１３．組成物が、
（ａ）約１０００ｍＭ～約６５００ｍＭのＴＥＡと、
（ｂ）約５００ｍＭ～約２０００ｍＭのイオン成分と、を含む、項目１０～１２のいずれかの組成物。
１４．組成物が、ＥＣＬ標識成分を含む、項目１０～１３のうちのいずれかの組成物。
１５．組成物が、界面活性剤を含む、項目１０～１３のうちのいずれかの組成物。
１６．組成物が、ＥＣＬ標識成分と、界面活性剤と、を含む、項目１０～１５のうちのいずれか１つの組成物。
１７．界面活性剤が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む、項目１０～１６のうちのいずれかの組成物。
１８．界面活性剤が、アルキルエーテル－ＰＥＧを含む、項目１０～１７のうちのいずれかの組成物。
１９．組成物が、当該成分から本質的になる、項目１２～１８のうちのいずれかの組成物。
２０．組成物が、当該成分からなる、項目１９の組成物。
２１．組成物であって、
（ａ）Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチルジエタノールアミン（ｔＢＤＥＡ）、メチルジエタノールアミン（ＭＤＥＡ）、３－［ビス－（２－ヒドロキシ－エチル）－アミノ］－プロパン－１－スルホン酸（ＤＥＡ－ＰＳ）、及びそれらの組み合わせから選択される電気化学発光（ＥＣＬ）共反応物質と、
（ｂ）イオン成分と、
（ｃ）界面活性剤と、を含む、組成物であって、
組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有する、組成物。
２２．組成物であって、本質的に、
（ａ）Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチルジエタノールアミン（ｔＢＤＥＡ）、メチルジエタノールアミン（ＭＤＥＡ）、３－［ビス－（２－ヒドロキシ－エチル）－アミノ］－プロパン－１－スルホン酸（ＤＥＡ－ＰＳ）、及びそれらの組み合わせから選択される電気化学発光（ＥＣＬ）共反応物質、（ｂ）イオン成分、並びに（ｃ）界面活性剤、又は
（ａ）Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチルジエタノールアミン（ｔＢＤＥＡ）、メチルジエタノールアミン（ＭＤＥＡ）、３－［ビス－（２－ヒドロキシ－エチル）－アミノ］－プロパン－１－スルホン酸（ＤＥＡ－ＰＳ）、及びそれらの組み合わせから選択される電気化学発光（ＥＣＬ）共反応物質、（ｂ）イオン成分、（ｃ）界面活性剤、並びに（ｄ）ＥＣＬ標識成分から本質的になる、組成物であって、
組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有する、組成物。
２３．組成物であって、
（ａ）Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチルジエタノールアミン（ｔＢＤＥＡ）、メチルジエタノールアミン（ＭＤＥＡ）、３－［ビス－（２－ヒドロキシ－エチル）－アミノ］－プロパン－１－スルホン酸（ＤＥＡ－ＰＳ）、及びそれらの組み合わせから選択される電気化学発光（ＥＣＬ）共反応物質、（ｂ）イオン成分、（ｃ）界面活性剤、並びに（ｄ）ｐＨ緩衝成分、又は
（ａ）Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチルジエタノールアミン（ｔＢＤＥＡ）、メチルジエタノールアミン（ＭＤＥＡ）、３－［ビス－（２－ヒドロキシ－エチル）－アミノ］－プロパン－１－スルホン酸（ＤＥＡ－ＰＳ）、及びそれらの組み合わせから選択される電気化学発光（ＥＣＬ）共反応物質、（ｂ）イオン成分、（ｃ）界面活性剤、（ｄ）ｐＨ緩衝成分、並びに（ｅ）ＥＣＬ標識成分からなる、組成物であって、
組成物が、約７．０～約８．０のｐＨを有する、組成物。
２４．ＥＣＬ標識成分を更に含む、項目４、７、又は２１の組成物。
２５．組成物が、成分（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）から本質的になる、項目５、８、又は２２の組成物。
２６．組成物が、成分（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、及び（ｄ）から本質的になる、項目５、８、又は２２の組成物。
２７．組成物が、成分（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）からなる、項目６又は９の組成物。
２８．組成物が、成分（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、及び（ｄ）からなる、項目６又は９の組成物。
２９．組成物が、成分（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、及び（ｄ）からなる、項目２３の組成物。
３０．組成物が、成分（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、及び（ｅ）からなる、項目２３の組成物。
３１．ＴＥＡの濃度が、約１０００ｍＭ～約６５００ｍＭである、項目１～３、７～９、１０～１２、又は２４～２８のうちのいずれかの組成物。
３２．ＴＥＡの濃度が、約１１００ｍＭ～約３５００ｍＭである、項目１～２０、２４～２８、又は３１のうちのいずれかの組成物。
３３．ＴＥＡの濃度が、約１２００ｍＭ～約１６００ｍＭである、項目３２の組成物。
３４．ＥＣＬ共反応物質の濃度が、約５０ｍＭ～約２５０ｍＭである、項目２１～２６、２９、又は３０のうちのいずれかの組成物。
３５．ＥＣＬ共反応物質の濃度が、約１００ｍＭ～約２００ｍＭである、項目３４の組成物。
３６．イオン成分が、塩化物イオンを含む、項目１～３５のうちのいずれかの組成物。
３７．イオン成分が、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、ＬｉＣｌ、又はそれらの組み合わせを含む、項目３６の組成物。
３８．イオン成分が、ＮａＣｌを含む、項目３７の組成物。
３９．イオン成分が、ＫＣｌを含む、項目３７の組成物。
４０．イオン成分の濃度が、約５００ｍＭ～約１５００ｍＭである、項目１～３９のうちのいずれかの組成物。
４１．イオン成分の濃度が、約６００ｍＭ～約１２００ｍＭである、項目４０の組成物。
４２．イオン成分の濃度が、約７００ｍＭ～約１０００ｍＭである、項目４１の組成物。
４３．イオン成分の濃度が、約８００ｍＭ～約９００ｍＭである、項目４２の組成物。
４４．界面活性剤を更に含む、項目１又は４の組成物。
４５．界面活性剤が、非イオン性界面活性剤である、項目２、３、５、６、又は１０～４３のうちのいずれかの組成物。
４６．界面活性剤が、フェノールエーテルを含む、項目４５の組成物。
４７．界面活性剤が、２－［４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）フェノキシ］エタノールである、項目４５の組成物。
４８．界面活性剤が、フェノールエーテルを含まない、項目４５の組成物。
４９．界面活性剤が、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ ４０７、ポリ（エチレンオキシド）（ＰＥＯ）とポリ（プロピレンオキシド）（ＰＰＯ）ＰＥＯ１８－ＰＰＯ７２－ＰＥＯ１８とのブロックコポリマー、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）とポリ（プロピレングリコール）（ＰＰＧ）ＰＥＧ５－ＰＰＧ６８－ＰＥＧ５とのブロックコポリマー、ＰＰＯ２６－ＰＥＯ５－ＰＰＯ２６、エチレンジアミンテトラキス（プロポキシレートブロック－エトキシレート）テトロール、ポリエチレングリコールドデシルエーテル、ポリエチレングリコールヘキサデシルエーテル、ポリソルベート２０、２，４，７，９－テトラメチル－ｄ－デシン－４，７－ジオールエトキシレート、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、又はそれらの組み合わせである、項目４８の組成物。
５０．界面活性剤が、アルキルエーテル－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である、項目４９の組成物。
５１．アルキルエーテル－ＰＥＧが、ＰＥＧ（１０）トリデシルエーテル、ＰＥＧ（１２）トリデシルエーテル、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテル、又はそれらの組み合わせである、項目７～９又は５０のうちのいずれかの組成物。
５２．アルキルエーテルＰＥＧが、ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテルである、項目５１の組成物。
５３．界面活性剤の濃度が、約０．１ｍＭ～約１０ｍＭである、項目２、３、５、６、又は１０～５２のうちのいずれかの組成物。
５４．界面活性剤の濃度が、約０．５ｍＭ～約８ｍＭである、項目５３の組成物。
５５．界面活性剤の濃度が、約１ｍＭ～約５ｍＭである、項目５４の組成物。
５６．アルキルエーテル－ＰＥＧの濃度が、約０．１ｍＭ～約１０ｍＭである、項目７～９又は５０～５２のうちのいずれかの組成物。
５７．アルキルエーテル－ＰＥＧの濃度が、約０．５ｍＭ～約８ｍＭである、項目５６の組成物。
５８．アルキルエーテル－ＰＥＧの濃度が、約１ｍＭ～約５ｍＭである、項目５７の組成物。
５９．ｐＨが、約７．４～約７．９である、項目１～５８のうちのいずれかの組成物。
６０．ｐＨが、約７．５～約７．８である、項目５９の組成物。
６１．組成物が、リン酸塩、Ｔｒｉｓ、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、及びクエン酸塩のいずれも含まない、項目１、２、４、５、７、８、１０～１９、２４～２６、又は３１～６０のうちのいずれかの組成物。
６２．組成物が、約７．０～約８．０のｐＫａを有する追加の成分を含まない、項目１、２、４、５、７、８、１０～１９、２４～２６、又は３１～６０のうちのいずれかの組成物。
６３．組成物が、ｐＨ緩衝成分を更に含む、項目２１の組成物。
６４．組成物が、更に、ｐＨ緩衝成分から本質的になる、項目２２の組成物。
６５．ｐＨ緩衝成分が、リン酸塩、Ｔｒｉｓ、ＨＥＰＥＳ、グリシルグリシン、ホウ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、又はそれらの組み合わせである、項目６３又は６４の組成物。
６６．ｐＨ緩衝成分が、リン酸塩である、項目６５の組成物。
６７．ｐＨ緩衝成分が、Ｔｒｉｓである、項目６５の組成物。
６８．ｐＨ緩衝成分の濃度が、約１００ｍＭ～約３００ｍＭである、項目６３～６７のうちのいずれかの組成物。
６９．ｐＨ緩衝成分の濃度が、約１５０ｍＭ～約２５０ｍＭである、項目６８の組成物。
７０．ＥＣＬ標識成分が、ＥＣＬ標識を含む検出試薬を含むか、又はＥＣＬ標識成分が、検出試薬の結合パートナーを含み、結合パートナーが、ＥＣＬ標識を含む、項目１～３、５、６、８～２０、２２、２４、２６、２８、３０、又は３１～６９のうちのいずれか１つの組成物。
７１．ＥＣＬ標識成分が、ＥＣＬ標識を含む検出試薬である、項目７０の組成物。
７２．ＥＣＬ標識成分及び検出試薬が、相補的オリゴヌクレオチドを含む、項目７０の組成物。
７３．ＥＣＬ標識が、電気化学発光有機金属錯体を含む、項目７０～７２のうちのいずれか１つの組成物。
７４．電気化学発光有機金属錯体が、ルテニウム、オスミウム、イリジウム、又はレニウムを含む、項目７３の組成物。
７５．電気化学発光有機金属錯体が、ルテニウムを含む、項目７４の組成物。
７６．電気化学発光有機金属錯体が、置換若しくは非置換ビピリジン、又は置換若しくは非置換フェナントロリンを含む、項目７５の組成物。
７７．電気化学発光有機金属錯体が、少なくとも１つの置換ビピリジン配位子を含み、置換ビピリジン配位子が、少なくとも１つのスルホネート基を含む、項目７６の組成物。
７８．電気化学発光有機金属錯体が、少なくとも２つの置換ビピリジン配位子を含み、各置換ビピリジン配位子が、少なくとも１つのスルホネート基を含む、項目７７の組成物。
７９．置換ビピリジン配位子が、式Ｉ：
【化5】
８０．ＥＣＬ標識が、式ＩＩ：
【化6】
８１．組成物が、乾燥形態である、項目１～８０のうちのいずれか１つの組成物。
８２．電気化学発光（ＥＣＬ）を生成するための方法であって、
（ａ）電極を、
（ｉ）ＴＥＡと、イオン成分と、必要に応じて界面活性剤と、を含むＴＥＡ組成物、又は
項目１～８１のうちのいずれかの組成物と、
（ｉｉ）ＥＣＬ標識と接触させることと、
（ｂ）電圧を電極に印加し、それにより、ＥＣＬを生成することと、を含む、方法。
８３．生成されたＥＣＬを検出することを更に含む、項目８２の方法。
８４．電極が、表面上に存在する、項目８２又は８３の方法。
８５．ＥＣＬ標識が、ＥＣＬ標識成分上に存在する、項目８２～８４のうちのいずれかの方法。
８６．ＥＣＬ標識が、試料中に存在する、項目８２～８４のうちのいずれかの方法。
８７．工程（ａ）が、ＥＣＬ標識成分の結合パートナーを含む試料と電極を接触させることを更に含み、ＥＣＬ標識成分及び結合パートナーが、結合錯体を形成し、方法が、生成されたＥＣＬを検出することによって結合錯体を検出することを含む、項目８５の方法。
８８．ＥＣＬ標識成分が、結合錯体中に存在し、方法が、生成されたＥＣＬを検出することによって、結合錯体を検出することを含む、項目８５の方法。
８９．結合錯体中のＥＣＬ標識成分が、ＥＣＬ標識を含む検出試薬の第１のコピーであり、結合錯体が、表面上に固定化された結合試薬と、検出試薬の第１のコピーと、を含む、項目８８の方法。
９０．結合錯体を形成することを更に含む、項目８８又は８９の方法。
９１．結合錯体が、方法の工程（ａ）の前又は間に形成される、項目９０の方法。
９２．結合錯体が、
結合試薬と、検出試薬の第１のコピーと、ＥＣＬ標識を含む検出試薬の第２のコピーと、を含むアッセイ混合物を、
結合錯体が表面上に形成され、かつ検出試薬の第２のコピーが溶液中に残る条件下でインキュベートすることによって形成される、項目８９～９１のいずれかの方法。
９３．結合錯体が、
結合試薬と、検出試薬の第１のコピーと、ＥＣＬ標識を含む検出試薬の第２のコピーと、ＴＥＡ組成物又は項目１～８１のうちのいずれかの組成物と、を含むアッセイ混合物を、
結合錯体が表面上に形成され、かつ検出試薬の第２のコピーが溶液中に残る条件下でインキュベートすることによって形成される、項目８９～９１のいずれかの方法。
９４．結合錯体が、
試料を、検出試薬の第１のコピー、ＥＣＬ標識を含む検出試薬の第２のコピー、及びＴＥＡ組成物又は項目１～８１のうちのいずれかの組成物と組み合わせ、それにより、アッセイ混合物を形成することと、
結合錯体が表面上に形成され、かつ第２の検出試薬が溶液中に残る条件下で、アッセイ混合物を結合試薬と接触させることと、によって形成される、項目８９～９１のいずれかの方法。
９５．試料、ＴＥＡ組成物又は項目１～８１のうちのいずれかの組成物、及びＥＣＬ標識成分のそれぞれが、乾燥しているか、
試料、ＴＥＡ組成物又は項目１～８１のうちのいずれかの組成物、及びＥＣＬ標識成分のそれぞれが、液体であるか、又は
試料、ＴＥＡ組成物又は項目１～８１のうちのいずれかの組成物、及びＥＣＬ標識成分のうちの１つ以上が、乾燥しており、残りの成分（複数可）が、液体である、項目８５～９４の方法。
９６．ＴＥＡ組成物又は項目１～８１のうちのいずれかの組成物が、乾燥しており、表面上に存在する、項目９５の方法。
９７．結合錯体が、分析物を更に含み、方法が、分析物を検出することを含む、項目８８～９６のうちのいずれかの方法。
９８．生成されたＥＣＬを測定し、それにより、ＥＣＬ標識、ＥＣＬ標識成分、結合錯体、又は分析物の量を定量することを更に含む、項目８２～９７のうちのいずれかの方法。
９９．結合錯体を検出する方法であって、
（ａ）液体試料を表面と接触させることであって、表面が、
ＴＥＡ、イオン成分、及び必要に応じて界面活性剤を含むＴＥＡ組成物、又は
項目１～８１のうちのいずれか１つの組成物と、を含み、
液体試料が、ＥＣＬ標識成分を含むか、又は液体試料が、ＥＣＬ標識成分の結合パートナーを含み、方法が、表面をＥＣＬ標識成分と接触させ、
それにより、ＥＣＬ標識成分を含む結合錯体を表面上に形成する、接触させることと、
（ｂ）表面に電圧を印加して、ＥＣＬを生成することと、
（ｃ）生成されたＥＣＬを検出し、それにより、結合錯体を検出することと、を含む、方法。
１００．結合錯体を検出する方法であって、
（ａ）液体試料を表面と接触させることであって、表面が、ＥＣＬ標識成分と、
ＴＥＡ、イオン成分、及び必要に応じて界面活性剤を含むＴＥＡ組成物、又は
項目１～８１のうちのいずれか１つの組成物と、を含み、
液体試料が、ＥＣＬ標識成分の結合パートナーを含み、
それにより、ＥＣＬ標識成分を含む結合錯体を表面上に形成する、接触させることと、
（ｂ）表面に電圧を印加して、ＥＣＬを生成することと、
（ｃ）生成されたＥＣＬを検出し、それにより、結合錯体を検出することと、を含む、方法。
１０１．結合錯体を検出するための方法であって、
（ａ）結合錯体を表面上に形成することであって、表面が、必要に応じて電極を含み、結合錯体が、ＥＣＬ標識成分を含む、形成することと、
（ｂ）結合錯体を、
ＴＥＡ、イオン成分、及び必要に応じて界面活性剤を含むＴＥＡ組成物、又は
項目１～８１のうちのいずれか１つの組成物と接触させることと、
（ｃ）表面に電圧を印加して、ＥＣＬを生成することと、
（ｄ）生成されたＥＣＬを検出し、それにより結合錯体を検出することと、を含む、方法。
１０２．試料中の目的の分析物を検出するための方法であって、
（ａ）試料を、（ｉ）結合試薬を含む表面であって、結合試薬が、分析物に特異的に結合する、表面、及び（ｉｉ）分析物に特異的に結合する検出試薬であって、検出試薬が、ＥＣＬ標識を含む、検出試薬と接触させ、それにより、結合試薬と、分析物と、検出試薬と、を含む結合錯体を表面上に形成する、接触させることと、
（ｂ）表面上の結合錯体を、
ＴＥＡ、イオン成分、及び必要に応じて界面活性剤を含むＴＥＡ組成物、又は
項目１～８１のうちのいずれかの組成物と接触させることと、
（ｃ）表面に電圧を印加して、ＥＣＬを生成することと、
（ｄ）生成されたＥＣＬを検出し、それにより、分析物を検出することと、を含む、方法。
１０３．方法が、洗浄工程を含まない、項目９９～１０２のうちのいずれか１つの方法。
１０４．工程（ａ）が、洗浄工程を含まない、項目９９～１０２のうちのいずれか１つの方法。
１０５．ＥＣＬ標識成分が、ＥＣＬ標識を含む検出試薬を含むか、又はＥＣＬ標識成分が、検出試薬の結合パートナーを含み、結合パートナーが、ＥＣＬ標識を含む、項目９９～１０１のうちのいずれか１つの方法。
１０６．ＥＣＬ標識成分が、検出試薬を含み、結合錯体が、結合試薬と、検出試薬と、を含む、項目１０５の方法。
１０７．ＥＣＬ標識成分が、検出試薬の結合パートナーを含み、結合錯体が、結合試薬と、検出試薬と、結合パートナーと、を含む、項目１０５の方法。
１０８．検出試薬及びＥＣＬ標識成分が、相補的オリゴヌクレオチドを含む、項目１０７の方法。
１０９．結合錯体を検出するための方法であって、
（ａ）試料を、
ｉ．ＴＥＡ、イオン成分、及び必要に応じて界面活性剤を含むＴＥＡ組成物、又は
項目１～８１のうちのいずれかの組成物と、
ｉｉ．検出試薬の少なくとも２つのコピーを含む検出混合物であって、検出試薬の各コピーが、ＥＣＬ標識を含む、検出混合物と、を含む、アッセイ混合物を、
（ｂ）アッセイ混合物を、必要に応じて電極を含む表面上に固定化された結合試薬と、
ｉ．結合錯体が表面上に形成され、結合錯体が、結合試薬と、検出試薬の第１のコピーと、を含み、かつ
ｉｉ．検出試薬の第２のコピーが溶液中に残る条件下で、インキュベートすることと、
（ｃ）表面に電圧を印加して、ＥＣＬを生成することと、
（ｄ）生成されたＥＣＬを検出し、それにより結合錯体を検出することと、を含む、方法。
１１０．結合錯体を検出するための方法であって、
（ａ）アッセイ混合物であって、
ｉ．表面上に固定化された結合試薬であって、表面が、必要に応じて電極を含む、結合試薬と、
ｉｉ．検出試薬の少なくとも２つのコピーを含む検出混合物であって、検出試薬の各コピーが、ＥＣＬ標識を含む、検出混合物と、を含む、アッセイ混合物を、
ｉ．結合錯体が表面上に形成され、結合錯体が、結合試薬と、検出試薬の第１のコピーと、を含み、かつ
ｉｉ．検出試薬の第２のコピーが溶液中に残る条件下で、インキュベートすることと、
（ｂ）結合錯体を、
ＴＥＡ、イオン成分、及び必要に応じて界面活性剤を含むＴＥＡ組成物、又は
項目１～８１のうちのいずれかの組成物と接触させることと、
（ｃ）表面に電圧を印加して、ＥＣＬを生成することと、
（ｄ）生成されたＥＣＬを検出し、それにより結合錯体を検出することと、を含む、方法。
１１１．検出試薬の第２のコピーが、工程（ｂ）～（ｄ）のいずれかの前に除去されない、項目１０９又は１１０の方法。
１１２．検出試薬の第２のコピーが、工程（ｄ）の前に除去されない、項目１０９又は１１０の方法。
１１３．結合錯体を検出するための方法であって、
（ａ）アッセイ混合物であって、
ｉ．表面上に固定化された結合試薬であって、表面が、必要に応じて電極を含む、結合試薬と、
ｉｉ．検出試薬の少なくとも２つのコピーを含む検出混合物であって、検出試薬の各コピーが、ＥＣＬ標識を含む、検出混合物と、
ｉｉｉ．ＴＥＡ、イオン成分、及び必要に応じて界面活性剤を含むＴＥＡ組成物、又は
項目１～８１のうちのいずれかの組成物と、を含むアッセイ混合物を、
ｉ．結合錯体が表面上に形成され、結合錯体が、結合試薬と、検出試薬の第１のコピーと、を含み、かつ
ｉｉ．検出試薬の第２のコピーが溶液中に残る条件下で、インキュベートすることと、
（ｂ）表面に電圧を印加して、ＥＣＬを生成することと、
（ｃ）生成されたＥＣＬを検出し、それにより、結合錯体を検出することと、を含む、方法。
１１４．検出試薬の第２のコピーが、工程（ｂ）又は（ｃ）のいずれかの前に除去されない、項目１１３の方法。
１１５．検出試薬の第２のコピーが、工程（ｃ）の前に除去されない、項目１１３の方法。
１１６．結合錯体が、分析物を更に含み、結合試薬及び検出試薬の第１のコピーが、それぞれ、分析物に特異的に結合する、項目１０６～１１５のうちのいずれかの方法。
１１７．結合試薬の少なくとも２つのコピーが、表面上に固定化され、結合試薬の第１のコピーが、検出試薬の第１のコピーと錯体を形成し、結合試薬の第２のコピーが、検出試薬の第２のコピーと錯体を形成しないように、競合体に結合する、項目１０９～１１６のうちのいずれかの方法。
１１８．結合試薬の少なくとも２つのコピーが、表面上に固定化され、結合試薬の第１のコピーが、検出試薬の第１のコピーと錯体を形成し、検出試薬の第２のコピーが、結合試薬の第２のコピーが検出試薬の第２のコピーと錯体を形成しないように、競合体に結合する、項目１０９～１１６のうちのいずれかの方法。
１１９．結合試薬が、検出試薬の第１のコピーに結合して、結合錯体を形成する、項目１０９～１１５のうちのいずれかの方法。
１２０．方法が、１つ以上の結合錯体を同時に検出することができる多重化方法である、項目９９～１１９のうちのいずれかの方法。
１２１．方法が、１つ以上の分析物を同時に検出することができる多重化方法である、項目９９～１１９のうちのいずれかの方法。
１２２．ＴＥＡ組成物又は項目１～８１のうちのいずれか１つの組成物が、乾燥形態である、項目９９～１２１のうちのいずれか１つの方法。
１２３．検出混合物が、乾燥形態である、項目１０９～１２２のうちのいずれか１つの方法。
１２４．ＴＥＡ組成物又は項目１～８１のうちのいずれかの組成物及び検出混合物が、乾燥形態である、項目１０９～１２３のうちのいずれか１つの方法。
１２５．結合試薬及び検出試薬が、それぞれ、抗体若しくはその抗原結合断片、抗原、配位子、受容体、オリゴヌクレオチド、ハプテン、エピトープ、ミモトープ、又はアプタマーを含む、項目１０２～１２４のうちのいずれかの方法。
１２６．試料中のＥＣＬ標識の量を定量するための方法であって、
（ａ）電極を、
（ｉ）ＴＥＡ、イオン成分、及び必要に応じて界面活性剤を含むＴＥＡ組成物、又は
項目１～８１のうちのいずれかの組成物と接触させることと、
（ｉｉ）ＥＣＬ標識を含む試料と接触させることと、
（ｂ）電極に電圧を印加することと、
（ｃ）ＥＣＬを生成することと、
（ｄ）ＥＣＬを測定することと、
（ｅ）測定されたＥＣＬからＥＣＬ標識の量を定量することと、を含む、方法。
１２７．組成物を生成するための方法であって、
（ａ）トリエタノールアミン（ＴＥＡ）、
（ｂ）イオン成分、
（ｃ）界面活性剤、及び
（ｄ）ＥＣＬ標識成分を組み合わせることを含む、組成物を産生するための方法であって、
方法が、追加のｐＨ緩衝成分を添加することを含まない、方法。
１２８．ＥＣＬ標識が、ＥＣＬ活性有機金属錯体を含む、項目８２～１２７のうちのいずれかの方法。
１２９．ＥＣＬ活性有機金属錯体が、ルテニウムを含む、項目１２８の方法。
１３０．ＥＣＬ活性有機金属錯体が、少なくとも１つの置換ビピリジン配位子を含み、置換ビピリジン配位子が、少なくとも１つのスルホネート基を含む、項目１２８又は１２９の方法。
１３１．ＥＣＬ標識が、式ＩＩの化合物である、項目１３０の方法。
１３２．表面が、マルチウェルプレートのウェルを含む、項目８４～１３１のうちのいずれかの方法。
１３３．表面が、アッセイカートリッジを含む、項目８４～１３１のうちのいずれかの方法。
１３４．表面が、粒子を含む、項目８４～１３１のうちのいずれかの方法。
１３５．表面が、電極を含む、項目８４～１３４のうちのいずれかの方法。
１３６．粒子を電極上に収集することと、電極上の粒子に電圧を印加することと、を更に含む、項目１３４の方法。
１３７．電極が、炭素電極、白金電極、金電極、又は銀電極を含む、項目８２～９８、１３５又は１３６のうちのいずれかの方法。
１３８．電極が、炭素インク電極である、項目１３７の方法。
１３９．乾燥形態のＴＥＡ組成物を含むアッセイモジュールであって、ＴＥＡ組成物が、ＴＥＡと、イオン成分と、必要に応じて界面活性剤と、を含む、アッセイモジュール。
１４０．アッセイモジュールが、マルチウェルプレート又はアッセイカートリッジである、項目１３９のアッセイモジュール。
１４１．アッセイモジュールが、乾燥形態の結合試薬及び／又は検出試薬を更に含む、項目１３９又は１４０のアッセイモジュール。
１４２．アッセイモジュールが、検出試薬を更に含む、項目１４１のアッセイモジュール。
１４３．検出試薬が、ＥＣＬ標識を含む、項目１４１又は１４２のアッセイモジュール。
１４４．ＥＣＬ標識が、ＥＣＬ活性有機金属錯体を含む、項目１４３のアッセイモジュール。
１４５．ＥＣＬ活性有機金属錯体が、ルテニウムを含む、項目１４４のアッセイモジュール。
１４６．ＥＣＬ活性有機金属錯体が、少なくとも１つの置換ビピリジン配位子を含み、置換ビピリジン配位子が、少なくとも１つのスルホネート基を含む、項目１４４又は１４５のアッセイモジュール。
１４７．ＥＣＬ標識が、式ＩＩの化合物である、項目１４６のアッセイモジュール。
１４８．キットであって、１つ以上の容器、バイアル、又は区画内に、
（ａ）ＴＥＡ、イオン成分、及び必要に応じて界面活性剤を含むＴＥＡ組成物、又は
項目１～８１のうちのいずれかの組成物と、
（ｂ）必要に応じて、電極を含む表面と、を含み、
ＴＥＡ組成物が、追加のｐＨ緩衝成分を含まない、キット。
１４９．アッセイ機器、アッセイ試薬、較正試薬、ＥＣＬ標識、又はそれらの組み合わせを更に含む、項目１４８のキット。
１５０．項目１～８１のうちのいずれかの組成物と、
アッセイ機器、アッセイ試薬、較正試薬、表面、ＥＣＬ標識、又はそれらの組み合わせと、を含む、キット。
１５１．キットの１つ以上の成分が、乾燥形態で提供される、項目１４８～１５０のうちのいずれかのキット。
１５２．キットが、表面を含み、ＴＥＡ組成物が、乾燥形態で提供される、項目１４８のキット。
１５３．キットが、表面を含み、ＴＥＡ組成物が、表面上に提供される、項目１４８のキット。
１５４．アッセイ試薬が、結合試薬、検出試薬、又はそれらの両方を含む、項目１４９～１５３のうちのいずれかのキット。
１５５．結合試薬及び検出試薬が、それぞれ、抗体若しくはその抗原結合断片、抗原、配位子、受容体、オリゴヌクレオチド、ハプテン、エピトープ、ミモトープ、又はアプタマーを含む、項目１５４のキット。
１５６．キットが、表面を含み、結合試薬及び／又は検出試薬が、表面上に提供される、項目１５４又は１５５のキット。
１５７．キットが、表面と、結合試薬を表面に固定化するための試薬と、を含む、項目１５４又は１５５のキット。
１５８．キットが、ＥＣＬ標識を含む検出試薬を含む、項目１５４～１５７のうちのいずれかのキット。
１５９．キットが、検出試薬と、検出試薬をＥＣＬ標識にコンジュゲートするための試薬と、を含む、項目１５４～１５７のうちのいずれかのキット。
１６０．ＥＣＬ標識が、ＥＣＬ活性有機金属錯体を含む、項目１５０～１５９のうちのいずれかのキット。
１６１．ＥＣＬ活性有機金属錯体が、ルテニウムを含む、項目１６０のキット。
１６２．ＥＣＬ活性有機金属錯体が、少なくとも１つの置換ビピリジン配位子を含み、置換ビピリジン配位子が、少なくとも１つのスルホネート基を含む、項目１６０又は１６１のキット。
１６３．ＥＣＬ標識が、式ＩＩの化合物である、項目１６２のアッセイモジュール。
１６４．キットが、表面を含み、表面が、マルチウェルプレートのウェルを含む、項目１４８～１６３のうちのいずれかのキット。
１６５．キットが、表面を含み、表面が、アッセイカートリッジを含む、項目１４８～１６３のうちのいずれかのキット。
１６６．キットが、表面を含み、表面が、粒子を含む、項目１４８～１６５のうちのいずれかのキット。
１６７．結合錯体の存在が、ＥＣＬ標識及びクエンチ部位を含むＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブを使用して検出され、当該クエンチ部位が、少なくともＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブが相補的オリゴヌクレオチドにハイブリダイズされていない場合に、当該ＥＣＬ標識に近接して、当該ＥＣＬ標識をクエンチし、例えば、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブがステムループ又はヘアピン構造を含み、当該クエンチ部位は、オリゴヌクレオチドプローブがステムループ又はヘアピン構成にあるときには当該ＥＣＬ標識に近接して、当該ＥＣＬ標識をクエンチするが、ステムループ又はヘアピン構造が開放構成にあるときにはＥＣＬ標識をクエンチしない、先行する項目のうちのいずれかの組成物、方法、又はキット。
１６８．ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブが、結合パートナー及び／又は結合錯体のオリゴヌクレオチド配列に相補的なオリゴヌクレオチド配列を含む、項目１６７の組成物、方法、又はキット。
１６９．結合パートナー及び／又は結合錯体が、分析物を含む、項目１６７の組成物、方法、又はキット。
１７０．分析物が、ペプチドを含む、項目１６９の組成物、方法、又はキット。
１７１．分析物が、オリゴヌクレオチドを含む、項目１６９の組成物、方法、又はキット。
１７２．分析物が、結合パートナーのオリゴヌクレオチドである、項目１７１の組成物、方法、又はキット。
１７３．分析物が、オリゴヌクレオチドで標識される、項目１６９～１７１のうちのいずれか１つの組成物、方法、又はキット。
１７４．分析物が、分析物を、オリゴヌクレオチドを含む検出試薬と結合させることによってオリゴヌクレオチドで標識される、項目１７３の組成物、方法、又はキット。
１７５．結合パートナー及び／又は結合錯体のオリゴヌクレオチドが、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブのオリゴヌクレオチド配列に相補的な配列の複数のコピーを含む、項目１６８～１７４のいずれか１つの組成物、方法、又はキット。
１７６．ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブのオリゴヌクレオチド配列に相補的な配列の複数のコピーが、増幅反応の生成物である、項目１７５の組成物、方法、又はキット。
１７７．分析物が、分析物を、オリゴヌクレオチドプライマーを含む検出試薬と結合させることによってオリゴヌクレオチドで標識され、オリゴヌクレオチドプライマーが、ポリメラーゼによって伸長されて、ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブのオリゴヌクレオチド配列に相補的な配列の複数のコピーを含むオリゴヌクレオチドを生成する、項目１７３の組成物、方法、又はキット。
１７８．増幅反応が、ローリングサークル増幅反応である、項目１７６又は１７７の組成物、方法、又はキット。
１７９．ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブが、ＥＣＬ標識成分、結合試薬、及び／又は検出試薬である、項目１６７～１７８のうちのいずれか１つの組成物、方法、又はキット。
１８０．ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドプローブが、相補的オリゴヌクレオチドにハイブリダイズしたときに、選択的に脱クエンチされる、項目１６７～１７９のうちのいずれか１つの組成物、方法、又はキット。
１８１．選択的脱クエンチが、分子ビーコン様設計を有するＥＣＬ標識オリゴヌクレオチドを相補的オリゴヌクレオチドにハイブリダイズし、クエンチ部位がＥＣＬ標識に近接しなくなるようにすること、又はクエンチ部位を相補的オリゴヌクレオチドにハイブリダイズされたプローブからのみ切断し、それによってクエンチ部位を溶液中に放出し、ＥＣＬ標識プローブを相補的オリゴヌクレオチドにハイブリダイズしたままにすることを含む、項目１８０の組成物、方法、又はキット。
１８２．クエンチ部位を切断することが、酵素、例えば、制限エンドヌクレアーゼ、例えば、ニッキングエンドヌクレアーゼ、ＲＮａｓｅＨ２、又は５’エキソヌクレアーゼ活性を有するポリメラーゼによって実行される、項目１８１の組成物、方法、又はキット。
【実施例】
【0256】
実施例１．両性イオン及びヒドロキシエチルアミンＥＣＬ共反応物質の評価
以下に列挙したＥＣＬ共反応物質を、ＥＣＬ生成及び固体表面ＥＣＬアッセイにおける表面結合及び遊離（溶液中）ＥＣＬ標識の識別能力について試験した：トリブチルアミン（ＴＢＡ）、（ジブチル）アミノエタノール（ＤＢＡＥ）、（ジエチル）アミノエタノール（ＤＥＡＥ）、トリエタノールアミン（ＴＥＡ）、ブチルジエタノールアミン（ＢＤＥＡ）、プロピルジエタノールアミン（ＰＤＥＡ）、エチルジエタノールアミン（ＥＤＥＡ）、メチルジエタノールアミン（ＭＤＥＡ）、ｔｅｒｔ－ブチルジエタノールアミン（ｔＢＤＥＡ）、ジブチルアミン（ＤＢＡ）、ブチルエタノールアミン（ＢＥＡ）、ジエタノールアミン（ＤＥＡ）、ジブチルアミンプロピルスルホン酸塩（ＤＢＡ－ＰＳ）、ジブチルアミンブチルスルホン酸塩（ＤＢＡ－ＢＳ）、ブチルエタノールアミンプロピルスルホン酸塩（ＢＥＡ－ＰＳ）、ブチルエタノールアミンブチルスルホン酸塩（ＢＥＡ－ＢＳ）、ジエタノールアミンプロピルスルホン酸塩（ＤＥＡ－ＰＳ）、及びジエタノールアノールアミンブチルスルホン酸塩（ＤＥＡ－ＢＳ）。各ＥＣＬ読み取りバッファー組成物を、１５０ｍＭの指定されたＥＣＬ共反応物質、２００ｍＭのリン酸塩、８５０ｍＭのＮａＣｌ、及びＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００（「ＴＸ１００」）又はＰＥＧ（１８）トリデシルエーテル（「ＰＥＧ１８ ＴＤＥ」）のいずれかで調製し、ｐＨ７．５に調整した。
以下に列挙したＥＣＬ共反応物質を、ＥＣＬ生成及び固体表面ＥＣＬアッセイにおける表面結合及び遊離（溶液中）ＥＣＬ標識の識別能力について試験した：トリブチルアミン（ＴＢＡ）、（ジブチル）アミノエタノール（ＤＢＡＥ）、（ジエチル）アミノエタノール（ＤＥＡＥ）、トリエタノールアミン（ＴＥＡ）、ブチルジエタノールアミン（ＢＤＥＡ）、プロピルジエタノールアミン（ＰＤＥＡ）、エチルジエタノールアミン（ＥＤＥＡ）、メチルジエタノールアミン（ＭＤＥＡ）、ｔｅｒｔ－ブチルジエタノールアミン（ｔＢＤＥＡ）、ジブチルアミン（ＤＢＡ）、ブチルエタノールアミン（ＢＥＡ）、ジエタノールアミン（ＤＥＡ）、ジブチルアミンプロピルスルホン酸塩（ＤＢＡ－ＰＳ）、ジブチルアミンブチルスルホン酸塩（ＤＢＡ－ＢＳ）、ブチルエタノールアミンプロピルスルホン酸塩（ＢＥＡ－ＰＳ）、ブチルエタノールアミンブチルスルホン酸塩（ＢＥＡ－ＢＳ）、ジエタノールアミンプロピルスルホン酸塩（ＤＥＡ－ＰＳ）、及びジエタノールアノールアミンブチルスルホン酸塩（ＤＥＡ－ＢＳ）。各ＥＣＬ読み取りバッファー組成物を、１５０ｍＭの指定されたＥＣＬ共反応物質、２００ｍＭのリン酸塩、８５０ｍＭのＮａＣｌ、及びＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００（「ＴＸ１００」）又はＰＥＧ（１８）トリデシルエーテル（「ＰＥＧ１８ ＴＤＥ」）のいずれかで調製し、ｐＨ７．５に調整した。
【0257】
ビオチン及びＥＣＬ標識（「ＢＴＩ」）とコンジュゲートした２ｎＭのＩｇＧを、結合標識の対照として使用し、ストレプトアビジンでコーティングされた電極表面と接触させた。５００ｍＭの遊離ＥＣＬ標識（「ＦＴ」）を遊離標識の対照として使用した。結果を図１Ａ及び１Ｂに示す。図１Ａは、ＥＣＬ読み取りバッファーのみ（標識を含まない）を使用して、ＢＴＩ、ＦＴ、及びバックグラウンド信号（「Ｄ１００」）で測定されたＥＣＬ信号で示す。図１Ｂは、結合標識からのＥＣＬ信号と遊離標識からのＥＣＬ信号との比（「ＢＴＩ／ＦＴ」）、及び信号対バックグラウンド比（「Ｓ／Ｂ」）を示す。
【0258】
図１Ａ及び図１Ｂの生値及び比は、ラジカル寿命、酸化及び還元経路の両方の励起状態形成効率、並びにＥＣＬ標識励起状態の還元／酸化クエンチ効率に関する情報を示す。ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００におけるＥＣＬ信号感度は、短寿命のアミンラジカルカチオン又は－１酸化状態（標識－１）のＥＣＬ標識への低い電子伝達効率をサポートする。
【0259】
結果から、ＤＢＡ－ＢＳがＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００に対して感受性であり、結合された標識よりも遊離標識から有意に多くの信号を産生すると結論付けることができ、これは長寿命の還元ラジカルが産生され、遊離ＥＣＬ標識の効率的な還元につながっていたことを示唆する。更に、ＭＤＥＡのＢＴＩ／ＦＴ信号比は、ラジカルカチオン寿命が短いことが知られているＥＣＬ共反応物質であるＰＩＰＥＳよりも高く、ＭＤＥＡは妥当な信号対バックグラウンド比を有するが、ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００の存在下でのみであり、これはＭＤＥＡもまたラジカルカチオン寿命が短いことを示唆する。ＢＤＥＡは、ＢＴＩからの強い信号及びＦＴからの中間量の信号を示し、これは、ラジカルカチオンを示唆し、ＴＢＡ及びＴＥＡのものの間のラジカル寿命を短縮する。注目すべきことに、ＴＥＡは、非常に低いＦＴ信号及び相当高いＢＴＩ信号を示し、ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００の存在又は不在に対して感受性がなく、試験した全てのＥＣＬ共反応物質の中で最も高いＢＴＩ／ＦＴ比を有した。
【0260】
実施例２．結合／遊離標識信号比対ＴＥＡ濃度
ＴＥＡは、そのｐＫａが７．７であるため、ｐＨバッファー及びＥＣＬ共反応物質の両方として機能する能力を有する。５０ｍＭ～１６００ｍＭの様々なＴＥＡ濃度を、それらのＥＣＬ生成特性について試験した。試験した各ＥＣＬ読み取りバッファー組成物は、特定の濃度のＴＥＡ及び８５０ｍＭのＮａＣｌ（ｐＨ７．８）を含有した。組成物を、実施例１と同様にして、ＢＴＩ及びＦＴ標識を用いて試験した。
ＴＥＡは、そのｐＫａが７．７であるため、ｐＨバッファー及びＥＣＬ共反応物質の両方として機能する能力を有する。５０ｍＭ～１６００ｍＭの様々なＴＥＡ濃度を、それらのＥＣＬ生成特性について試験した。試験した各ＥＣＬ読み取りバッファー組成物は、特定の濃度のＴＥＡ及び８５０ｍＭのＮａＣｌ（ｐＨ７．８）を含有した。組成物を、実施例１と同様にして、ＢＴＩ及びＦＴ標識を用いて試験した。
【0261】
その結果を図２Ａ～２Ｃに示す。図２Ａは、ＴＥＡの濃度が異なる、ＢＴＩ及びＦＴから生成されたＥＣＬ並びにＢＴＩ／ＦＴ比のプロットを示す。プロットの上部及び下部の破線は、それぞれ、ＰＩＰＥＳ ＥＣＬ読み取りバッファーを用いて生成したＢＴＩ信号及びＢＴＩ／ＦＴ比を示す。したがって、ＴＥＡは、約１２００ｍＭ濃度でピークＢＴＩ／ＦＴ比を示し、１２００ｍＭを超えるＴＥＡ濃度では、ＢＴＩ信号は、ＰＩＰＥＳ ＥＣＬ読み取りバッファーの１０～２５％以内であった。ＴＥＡラジカルカチオン及びラジカル寿命の低下、並びにバッファー粘度の変化は、１６００ｍＭのＴＥＡにおける一般的なＢＴＩ／ＦＴの挙動及び明らかな減少に寄与した可能性がある。図２Ｂは、ＴＥＡの濃度が異なる、ＢＴＩ、ＦＴ、及びバックグラウンド（Ｄ１００）からの測定されたＥＣＬ信号を示し、図２Ｃは、ＰＩＰＥＳ ＥＣＬ読み取りバッファーと比較したＢＴＩ／ＦＴ比、Ｓ／Ｂ比、及びＥＣＬ生成パーセントを示す。
【0262】
実施例３．ＥＣＬ信号対共反応物質濃度
実施例２の結果は、ＴＥＡの濃度が増加すると、より高いＥＣＬ信号が生成されることを示唆したが、これは、ＰＩＰＥＳなどの他のＥＣＬ共反応物質の既知の挙動に基づく予測に反するものであった。ＰＩＰＥＳ ＥＣＬ読み取りバッファー及びＴＥＡ ＥＣＬ読み取りバッファーを用いて生成されたＥＣＬ信号を、様々な濃度の共反応物質で測定した。ＰＩＰＥＳ組成物は、２０ｍＭ、４０ｍＭ、又は８０ｍＭのＰＩＰＥＳ、＞０．１％のＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００、及び８０～３２０ｍＭのリン酸カリウムバッファー（ｐＨ７．５）を含有した。ＴＥＡ組成物は、５０ｍＭ、１００ｍＭ、又は２００ｍＭのＴＥＡ、８５０ｍＭのＮａＣｌ、及び１ｍＭのＰＥＧ１８ ＴＤＥを含有した。組成物を、前の実施例について説明したようにＢＴＩで試験した。
実施例２の結果は、ＴＥＡの濃度が増加すると、より高いＥＣＬ信号が生成されることを示唆したが、これは、ＰＩＰＥＳなどの他のＥＣＬ共反応物質の既知の挙動に基づく予測に反するものであった。ＰＩＰＥＳ ＥＣＬ読み取りバッファー及びＴＥＡ ＥＣＬ読み取りバッファーを用いて生成されたＥＣＬ信号を、様々な濃度の共反応物質で測定した。ＰＩＰＥＳ組成物は、２０ｍＭ、４０ｍＭ、又は８０ｍＭのＰＩＰＥＳ、＞０．１％のＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００、及び８０～３２０ｍＭのリン酸カリウムバッファー（ｐＨ７．５）を含有した。ＴＥＡ組成物は、５０ｍＭ、１００ｍＭ、又は２００ｍＭのＴＥＡ、８５０ｍＭのＮａＣｌ、及び１ｍＭのＰＥＧ１８ ＴＤＥを含有した。組成物を、前の実施例について説明したようにＢＴＩで試験した。
【0263】
その結果を図３Ａ（ＥＣＬ信号対ＰＩＰＥＳ濃度）及び図３Ｂ（相対ＥＣＬ信号対ＰＩＰＥＳ濃度及びＴＥＡ濃度を一緒にプロット）に示す。図３Ａは、ＰＩＰＥＳ ＥＣＬ読み取りバッファーについて、ＰＩＰＥＳ濃度が増加すると、ＥＣＬ信号が減少することを確認している。図３Ｂは、ラジカル寿命が短いにもかかわらず、ＴＥＡ濃度の増加に伴ってＥＣＬ信号の強力な増加を示した、ＴＥＡの予期しない対照的な挙動を示す。
【0264】
実施例４．異なるアッセイ形式
図４Ａ～４Ｄは、異なるＥＣＬ共反応物質を含有するＥＣＬ読み取りバッファーを用いて試験した４つの異なるアッセイ形式を示す：ＴＰＡ、ＢＤＥＡ、ＰＩＰＥＳ、及び１．２Ｍ ＴＥＡ。アッセイを分析物のパネルで評価した。図４Ｅ～４Ｈは、図４Ａ～４Ｄにおけるアッセイの多重化バージョンを図示する。
図４Ａ～４Ｄは、異なるＥＣＬ共反応物質を含有するＥＣＬ読み取りバッファーを用いて試験した４つの異なるアッセイ形式を示す：ＴＰＡ、ＢＤＥＡ、ＰＩＰＥＳ、及び１．２Ｍ ＴＥＡ。アッセイを分析物のパネルで評価した。図４Ｅ～４Ｈは、図４Ａ～４Ｄにおけるアッセイの多重化バージョンを図示する。
【0265】
図４Ａは、表面上の結合ドメイン（「ＢＤ」）上に固定化された捕捉抗体（「ｃＡｂ」、結合試薬）を分析物（そのうちの１つは捕捉抗体に特異的に結合される）の混合物と接触させ、次いで表面を洗浄すると、結果として、分析物が表面上で捕捉される、「標準的な」２段階洗浄アッセイを示す。次いで、それぞれがＥＣＬ標識を含有し、かつそのうちの１つが分析物に特異的に結合する検出抗体（「ｄＡｂ」、検出試薬）の混合物を表面に添加し、次に表面を洗浄すると、結果として、ｃＡｂと、分析物と、ｄＡｂと、を含む結合錯体が得られる。次に、ＥＣＬ読み取りバッファーを表面に添加し、生成されたＥＣＬを、ＥＣＬ読み取り機器によって読み取る。図４Ｅは、１つ以上の表面が、複数の結合ドメインを含み、各結合ドメインが、分析物混合物中の分析物に結合することができる捕捉抗体を含む、「標準的な」２段階洗浄アッセイの多重化バージョンを示す。結合ドメインを含む表面（複数可）を、分析物混合物を添加した後に洗浄すると、結果として、結合ドメイン上に複数の分析物が捕捉される。次いで、それぞれがＥＣＬ標識を含有し、かつ分析物混合物中の分析物に結合することができる検出抗体の混合物を表面（複数可）に添加し、次いで表面を洗浄すると、結果として複数の結合錯体が得られ、各結合錯体は、ｃＡｂと、分析物と、ｄＡｂと、を含む。次に、ＥＣＬ読み取りバッファーを表面に添加し、生成されたＥＣＬを、ＥＣＬ機器によって読み取る。
【0266】
標準的な２段階アッセイ形式を使用した本明細書の実施例では、５０μＬの分析物混合物をプレートに添加し、７０５ｒｐｍ及び室温で２時間振盪した。プレートを、洗浄バッファーで１回洗浄し、検出抗体混合物２５μＬをプレートに添加し、７０５ｒｐｍ及び室温で１．５時間振盪した。プレートを、洗浄バッファーで１回洗浄し、プレートに１５０μＬのＥＣＬ読み取りバッファーを添加した。次に、プレートをＥＣＬ読み取り機器で読み取った。
【0267】
図４Ｂは、表面上の結合ドメイン上の捕捉抗体を分析物混合物と接触させ、次いで表面を図４Ａのように洗浄する、「１段階」アッセイを示す。次に、検出抗体混合物を添加し、続いて、ＥＣＬ読み取りバッファーを添加するが、検出抗体混合物とＥＣＬ読み取りバッファーとを添加する間に洗浄は行わない。次に、生成されたＥＣＬを、ＥＣＬ読み取り機器によって読み取る。図４Ｆは、１つ以上の表面が、複数の結合ドメインを含み、各結合ドメインが、分析物混合物中の分析物に結合することができる捕捉抗体を含む、「１段階」アッセイの多重化バージョンを示す。結合ドメインを含む表面（複数可）を、図４Ｅのように分析物混合物を添加した後に洗浄する。検出抗体混合物を添加して複数の結合錯体を形成し、次に、ＥＣＬ読み取りバッファーを添加するが、検出抗体混合物とＥＣＬ読み取りバッファーとを添加する間に洗浄は行わない。次に、生成されたＥＣＬを、ＥＣＬ読み取り機器によって読み取る。
【0268】
１段階アッセイ形式を使用した本明細書の実施例では、５０μＬの分析物混合物をプレートに添加し、７０５ｒｐｍ及び室温で２時間振盪した。プレートを、洗浄バッファーで１回洗浄し、検出抗体混合物２５μＬをプレートに添加し、７０５ｒｐｍ及び室温で１．５時間振盪した。１２５μＬのＥＣＬ読み取りバッファーをプレートに添加した。次に、プレートをＥＣＬ読み取り機器で読み取った。
【0269】
図４Ｃは、表面上の結合ドメイン上の捕捉抗体を、分析物混合物及び検出抗体混合物と接触させ、続いて、ＥＣＬ読み取りバッファーと接触させるが、いずれの工程間でも洗浄は行わない、「１段階の非洗浄」アッセイを示す。次に、生成されたＥＣＬを、ＥＣＬ読み取り機器によって読み取る。図４Ｇは、１つ以上の表面が、複数の結合ドメインを含み、各結合ドメインが、分析物混合物中の分析物に結合することができる捕捉抗体を含む、「１段階の非洗浄」アッセイの多重化バージョンを示す。結合ドメインを含む表面（複数可）を分析物混合物及び検出抗体混合物と接触させて、複数の結合錯体を形成し、次いで、ＥＣＬ読み取りバッファーを添加するが、いずれの工程の間でも洗浄は行わない。次に、生成されたＥＣＬを、ＥＣＬ読み取り機器によって読み取る。
【0270】
１段階の非洗浄アッセイ形式を使用する本明細書の実施例では、２５μＬの分析物混合物をプレートに添加し、続いて２５μＬの検出抗体混合物を添加し、次いで７０５ｒｐｍ及び室温で２時間振盪した。１００μＬのＥＣＬ読み取りバッファーをプレートに添加した。次に、プレートをＥＣＬ読み取り機器で読み取った。
【0271】
図４Ｄは、表面上の捕捉抗体を分析物混合物と接触させ、表面を洗浄し、検出抗体混合物を添加し、表面を必要に応じて再び洗浄すると、結果として、図４Ａのような結合錯体が得られる、「モックＥＣＬ標識」アッセイを示す。次いで、ＥＣＬ標識を含み、かつ表面上の結合錯体のいずれの成分とも結合しない検出抗体とともに、表面にＥＣＬ読み取りバッファーを添加するが、これは、溶液中の「遊離」ＥＣＬ標識のプロキシとして機能する。次に、生成されたＥＣＬを、ＥＣＬ読み取り機器によって読み取る。図４Ｈは、１つ以上の表面が、複数の結合ドメインを含み、各結合ドメインが、分析物混合物中の分析物に結合することができる捕捉抗体を含む、「モックＥＣＬ標識」アッセイの多重化バージョンを示す。結合試薬を含む表面（複数可）を分析物混合物と接触させ、表面を洗浄し、検出抗体混合物を添加し、表面を必要に応じて再度洗浄すると、結果として、図４Ｅのように複数の結合錯体が得られる。次いで、ＥＣＬ標識を含み、かつ表面上の結合錯体のいずれの成分とも結合しない検出抗体とともに、表面にＥＣＬ読み取りバッファーを添加するが、これは、溶液中の「遊離」ＥＣＬ標識のプロキシとして機能する。次に、生成されたＥＣＬを、ＥＣＬ読み取り機器によって読み取る。
【0272】
モックＥＣＬ標識アッセイ形式を使用した本明細書の実施例では、５０μＬの分析物混合物をプレートに添加し、７０５ｒｐｍ及び室温で２時間振盪した。プレートを、洗浄バッファーで１回洗浄し、検出抗体混合物２５μＬをプレートに添加し、７０５ｒｐｍ及び室温で１．５時間振盪した。プレートを、洗浄バッファーで１回洗浄し、過剰な検出試薬を含有するＥＣＬ読み取りバッファー１５０μＬをプレートに添加した。次に、プレートをＥＣＬ読み取り機器で読み取った。
【0273】
実施例５Ａ．異なるアッセイ形式でのＥＣＬ読み取りバッファーの評価
実施例５Ａでは、標準的な２段階、１段階、及びモックＥＣＬ標識多重化アッセイ形式（図４Ｅ、４Ｆ、及び４Ｈに示される）を試験した。読み取りバッファーを、１段階アッセイの５／６に希釈した。これらのアッセイに関する特異的ＥＣＬ信号及び非特異的結合（ＮＳＢ）の結果を図５Ａに示し、検出の最低限度（ＬＬＯＤ）を図５Ｂに示す。ＴＥＡ読み取りバッファーからの特異的ＥＣＬ信号は、標準的な２段階アッセイと比較して、１段階アッセイにおいて有意に変化しなかった。ＴＥＡは、特異的信号の増加及びＮＳＢの減少に起因して、１段階アッセイにおけるＰＩＰＥＳの読み取りバッファーよりも有意に改善された性能を有した。溶液中の遊離検出抗体－ＥＣＬ標識が高濃度であることに起因して、「モックＥＣＬ標識」アッセイでは、全てのＥＣＬ読み取りバッファーにわたってバックグラウンドのいくらかの上昇が観察された。ＴＥＡ読み取りバッファーは、結合標識と遊離標識とを良好に識別するために、このアッセイ形式のバッファーの中で最高の性能を示した。ＴＥＡ読み取りバッファーからの結合標識の特異的ＥＣＬ信号は、通常、ＢＤＥＡ読み取りバッファー製剤の２倍以内であり、したがって、表面選択性の改善が、信号生成全体のコストを最小限に抑えて実現された。
実施例５Ａでは、標準的な２段階、１段階、及びモックＥＣＬ標識多重化アッセイ形式（図４Ｅ、４Ｆ、及び４Ｈに示される）を試験した。読み取りバッファーを、１段階アッセイの５／６に希釈した。これらのアッセイに関する特異的ＥＣＬ信号及び非特異的結合（ＮＳＢ）の結果を図５Ａに示し、検出の最低限度（ＬＬＯＤ）を図５Ｂに示す。ＴＥＡ読み取りバッファーからの特異的ＥＣＬ信号は、標準的な２段階アッセイと比較して、１段階アッセイにおいて有意に変化しなかった。ＴＥＡは、特異的信号の増加及びＮＳＢの減少に起因して、１段階アッセイにおけるＰＩＰＥＳの読み取りバッファーよりも有意に改善された性能を有した。溶液中の遊離検出抗体－ＥＣＬ標識が高濃度であることに起因して、「モックＥＣＬ標識」アッセイでは、全てのＥＣＬ読み取りバッファーにわたってバックグラウンドのいくらかの上昇が観察された。ＴＥＡ読み取りバッファーは、結合標識と遊離標識とを良好に識別するために、このアッセイ形式のバッファーの中で最高の性能を示した。ＴＥＡ読み取りバッファーからの結合標識の特異的ＥＣＬ信号は、通常、ＢＤＥＡ読み取りバッファー製剤の２倍以内であり、したがって、表面選択性の改善が、信号生成全体のコストを最小限に抑えて実現された。
【0274】
標準的な２段階アッセイにおいて、ＴＥＡ読み取りバッファーのＬＬＯＤは、市販のトリプロピルアミン（ＴＰＡ）読み取りバッファーのＬＬＯＤの２～３倍以内であった。異なる読み取りバッファーにわたる１段階アッセイの平均ＬＬＯＤの順序は、以下の通りであった：ＴＰＡ＞ＢＤＥＡ＞ＰＩＰＥＳ＞ＴＥＡ、ＴＥＡが最良（最低）のＬＬＯＤを提供する。
【0275】
図５Ｃは、分析対象物（ＥＣＬ）の存在下及び図５Ａに提示される分析対象物（ＮＳＢ）の不在下における信号の相対比較を示し、全てのＥＣＬ読み取りバッファー及びアッセイ形式は、標準的な２段階アッセイ形式の市販のＴＰＡ製剤で得られた結果に対して正規化されている。一般に、ＰＩＰＥＳ読み取りバッファーは、全てのアッセイ形式にわたってＴＥＡ読み取りバッファーよりも低いＥＣＬ信号を示し、これはＥＣＬ生成効率データの逆であり、ＰＩＰＥＳ性能が、電極表面上の抗体の固定化によって、又はアッセイ中に使用される試料マトリックス又は希釈剤への電極の曝露によって悪影響を受ける可能性があることを示唆している。ＴＥＡ及びＰＩＰＥＳは、標準的な２段階及び１段階アッセイ形式間のＮＳＢ信号における相対的変化が最小であることを示した。
【0276】
図５Ｄは、全てのＥＣＬ読み取りバッファー及びアッセイ形式にわたる信号対バックグラウンド（Ｓ／Ｂ）及び信号対ノイズ（Ｓ／Ｎ）比の比較を示す。平均して、ＴＥＡは、標準的な２段階及び１段階アッセイ形式間のＳ／Ｂの変化が最小であることを示した。平均Ｓ／Ｎ比は、３つ全てのアッセイ形式間のＴＥＡ読み取りバッファーの最小値を変化させた。したがって、ＴＥＡ読み取りバッファーは、非洗浄アッセイ形式での使用に大きな可能性を示した。
【0277】
実施例５Ｂ．異なるアッセイ形式でのＥＣＬ読み取りバッファーの評価
実施例５Ｂでは、標準的な２段階、１段階、及び１段階の非洗浄多重化アッセイ形式（図４Ｅ、４Ｆ、及び４Ｇに示す）を試験した。読み取りバッファーを、１段階アッセイで５／６に、１段階非洗浄アッセイで２／３に希釈した。これらのアッセイの特定のＥＣＬ及びＮＳＢの結果を図６Ａに示し、ＬＬＯＤを図６Ｂに示す。ＴＥＡ読み取りバッファーからの特異的ＥＣＬ信号は、１段階の非洗浄アッセイでバッファーを２／３に希釈したにもかかわらず、ほとんどの分析物にわたって、１段階の非洗浄アッセイでは有意に変化しなかった。１段階非洗浄アッセイ対１段階アッセイでは、ＴＥＡ読み取りバッファーを２／３に希釈したことに起因して、ＥＣＬ生成効率が約３０％低下する可能性があるため、ＴＥＡ読み取りバッファーのＮＳＢもほとんど又は全く変化しなかった。ＰＩＰＥＳ読み取りバッファーは、特異的ＥＣＬ信号の減少及びＮＳＢ信号の増加により、（実施例４Ａでも観察されるように）１段階アッセイにおけるＴＥＡ読み取りバッファーよりも著しく悪化した。一般に、ＴＥＡ読み取りバッファーＬＬＯＤは、標準的な２段階アッセイ形式で、ＴＰＡ読み取りバッファー及びＢＤＥＡ読み取りバッファーの５倍以内であった。
実施例５Ｂでは、標準的な２段階、１段階、及び１段階の非洗浄多重化アッセイ形式（図４Ｅ、４Ｆ、及び４Ｇに示す）を試験した。読み取りバッファーを、１段階アッセイで５／６に、１段階非洗浄アッセイで２／３に希釈した。これらのアッセイの特定のＥＣＬ及びＮＳＢの結果を図６Ａに示し、ＬＬＯＤを図６Ｂに示す。ＴＥＡ読み取りバッファーからの特異的ＥＣＬ信号は、１段階の非洗浄アッセイでバッファーを２／３に希釈したにもかかわらず、ほとんどの分析物にわたって、１段階の非洗浄アッセイでは有意に変化しなかった。１段階非洗浄アッセイ対１段階アッセイでは、ＴＥＡ読み取りバッファーを２／３に希釈したことに起因して、ＥＣＬ生成効率が約３０％低下する可能性があるため、ＴＥＡ読み取りバッファーのＮＳＢもほとんど又は全く変化しなかった。ＰＩＰＥＳ読み取りバッファーは、特異的ＥＣＬ信号の減少及びＮＳＢ信号の増加により、（実施例４Ａでも観察されるように）１段階アッセイにおけるＴＥＡ読み取りバッファーよりも著しく悪化した。一般に、ＴＥＡ読み取りバッファーＬＬＯＤは、標準的な２段階アッセイ形式で、ＴＰＡ読み取りバッファー及びＢＤＥＡ読み取りバッファーの５倍以内であった。
【0278】
図６Ｃは、図６ＡからのＥＣＬ及びＮＳＢの結果の相対的な比較を示し、全てのＥＣＬ読み取りバッファー及びアッセイ形式は、標準的な２段階アッセイ形式におけるＴＰＡ製剤で得られた結果に対して正規化される。平均して、ＴＥＡ読み取りバッファーは、１段階アッセイと１段階の非洗浄アッセイとの間で、特異的ＥＣＬ及びＮＳＢにほとんど変化を示さなかった（分析物ＩＬ－１β、ＩＬ－８、及びＴＮＦ－αは例外であり、これらは他のＥＣＬ読み取りバッファーと同様の信号損失を示した。これは、当該問題がＥＣＬ共反応物質に関連しているのではなく、おそらく、１段階の分析物捕捉及び／又は結合錯体形成工程に関連していることを示唆している）。１段階及び１段階の非洗浄アッセイ形式でのＰＩＰＥＳ読み取りバッファーの性能が悪いのは、ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００の希釈と、おそらく、アッセイ条件及び電極表面の状態の影響に対するＰＩＰＥＳの存在下でのＥＣＬ生成の感受性に起因する可能性が高い。
【0279】
実施例６．共通試料及び希釈マトリックスを用いたＴＥＡ読み取りバッファーの評価
ＴＥＡ読み取りバッファーＥＣＬの生成及びバックグラウンドを、異なる試料マトリックス及び代謝産物及び／又は薬物干渉物質で試験した。ＴＥＡ読み取りバッファー組成物は、１．２ＭのＴＥＡ及び８５０ｍＭのＮａＣｌ（ｐＨ７．８）を含んだ。表面を２ｎＭのＢＴＩと接触させた。アッセイは、ＥＣＬ読み取りバッファーを添加する直前に試料マトリックス（干渉物質の有無にかかわらず）を添加して、図４Ｃに示すように実施した（１段階非洗浄アッセイ）。図７Ａは、試料マトリックスを示し、図７Ｂは、試験した干渉物質を示す。
ＴＥＡ読み取りバッファーＥＣＬの生成及びバックグラウンドを、異なる試料マトリックス及び代謝産物及び／又は薬物干渉物質で試験した。ＴＥＡ読み取りバッファー組成物は、１．２ＭのＴＥＡ及び８５０ｍＭのＮａＣｌ（ｐＨ７．８）を含んだ。表面を２ｎＭのＢＴＩと接触させた。アッセイは、ＥＣＬ読み取りバッファーを添加する直前に試料マトリックス（干渉物質の有無にかかわらず）を添加して、図４Ｃに示すように実施した（１段階非洗浄アッセイ）。図７Ａは、試料マトリックスを示し、図７Ｂは、試験した干渉物質を示す。
【0280】
図８Ａは、異なる試料マトリックスを用いて、結合（「結合」）及び遊離ＥＣＬ標識（「遊離」）を含むＴＥＡ読み取りバッファーから生成されたＥＣＬ信号の結果を示す。「Ｈ２Ｏ」は、ＴＥＡ読み取りバッファーの前にウェルに試料マトリックスの代わりに水を添加した対照からの信号を示す。「遊離」を含むカラムヘッダーは、モック希釈剤中の６ｎＭの遊離ＥＣＬ標識を示す。図８Ｂは、試料マトリックスを添加しなかったアッセイから生成されたＥＣＬ信号に対して正規化された図８Ａの結果を示す。これらの結果は、平均信号変化が５％未満で、１段階非洗浄アッセイで実行したときに、全ての試験された試料マトリックス（例えば、ヒト、動物、及びタンパク質性）が、結合ＥＣＬ標識からのＴＥＡ読み取りバッファーのＥＣＬ生成効率に及ぼす影響は最小限であったことを示す。希釈剤中の６ｎＭの遊離ＥＣＬ標識は、ＴＥＡ読み取りバッファーでは検出不可能であり、わずかなバックグラウンド信号の増加は、マトリックスに依存するように見えた。
【0281】
次いで、試料マトリックスを、ヒト血液試料において一般的に報告されているものを超えるレベルの干渉物質（図７Ｂに示す）でスパイクし（Ｌｏｒｅｎｚ ｅｔ ａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ＆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ２０（５）：３４４－３５２（２０１８））、上記と同じ方法で試験された。図９Ａは、異なる試料マトリックス中の異なる干渉物質を含む結合ＥＣＬ標識及び遊離ＥＣＬ標識を含むＴＥＡ読み取りバッファーから生成されたＥＣＬ信号の結果を示す。図９Ｂは、試料マトリックス及び干渉物質を添加しなかったアッセイから生成されたＥＣＬ信号に対して正規化された図９Ａの結果を示す。これらの結果は、１段階の非洗浄アッセイで実行したときに、スパイクされたＦＢＳ又はＢＳ中の干渉物質が、結合又は遊離ＥＣＬ標識からのＴＥＡ読み取りバッファーのＥＣＬ生成効率に及ぼす影響は最小限であったことを示す。６ｎＭの遊離ＥＣＬ標識は、全てのアッセイにわたってほとんど検出できなかった。
【0282】
遊離ＥＣＬ標識からのＥＣＬ生成に対して、より高い濃度である２４０ｎＭで、試料マトリックスの影響を試験した。図１０Ａは、異なる試料マトリックス中の遊離ＥＣＬ標識（「Ｄ３＋ＳＴＡＧ」）を含むＴＥＡ読み取りバッファーから生成されたＥＣＬ信号の結果を示す。図１０Ｂは、試料マトリックスを添加しなかったアッセイから生成されたＥＣＬ信号に対して正規化された図１０Ａの結果を示す。試料マトリックスは、１段階の非洗浄アッセイで実行した場合、遊離ＥＣＬ標識からのＴＥＡ読み取りバッファーのＥＣＬ生成効率への影響が低く、平均変化は３５％未満であった。ＤＭＥＭ培養培地及び対照遊離ＥＣＬ標識からのＥＣＬ信号は、約１５の余分なバックグラウンドカウントを生成するヒト／動物血清又は血漿よりも低かった。対照信号と比較して、タンパク質性ヒト／動物血清又は血漿の信号が高いのは、電極吸着タンパク質に対するＥＣＬ標識の静電吸引に起因している可能性がある。ＤＭＥＭからのより低いＥＣＬ信号は、フェノール赤色染料の干渉による可能性がある。これらの結果により、１段階の非洗浄アッセイにおいて、ヒト、動物、希釈剤、及び培養マトリックスが、ＴＥＡ読み取りバッファーＥＣＬ生成効率に及ぼす影響が最小限であることが更に確認される。
【0283】
より高い濃度の遊離ＥＣＬ標識（２４０ｎＭ）を、干渉物質によりスパイクした試料マトリックスで試験した。図１１Ａは、異なる試料マトリックス中の異なる干渉物質を含む遊離ＥＣＬ標識を含むＴＥＡ読み取りバッファーから生成されたＥＣＬ信号の結果を示す。図１１Ｂは、試料マトリックス及び干渉物質を添加しなかったアッセイから生成されたＥＣＬ信号に対して正規化された図１１Ａの結果を示す。１段階の非洗浄アッセイで実行した場合、ＴＥＡ読み取りバッファーを使用した遊離標識からの信号生成は、低く、異なる干渉物質の存在下で一貫したままであった。対照条件と比較した干渉物質条件（マトリックスを用いず、干渉物質によるスパイクを行わない「Ｈ２Ｏ」条件）において、信号のわずかな上昇が観察された。これは、干渉物質用の溶剤としてマトリックスに添加されたエタノールの効果であり、干渉物質自体に起因するものではなかった。
【0284】
実施例７．組み合わせＥＣＬ共反応物質測定
実施例１に記載されるＥＣＬ共反応物質の組み合わせを、２００ｍＭのＴｒｉｓ、５０ｍＭのＫＣｌ、８５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１％のＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００（ｐＨ７．８）中の総共反応物質濃度１５０ｍＭで試験した。アッセイを、実施例１に記載されるように、結合ＥＣＬ標識（ＢＴＩ）を用いて実行した。その結果を図１２に示す。図１２のチャートの右上側は、ＢＴＩから生成されたＥＣＬ信号を示し、図１２のチャートの左下側は、混合ＥＣＬ共反応物質のＥＣＬ信号と、個々のＥＣＬ共反応物質によって生成された信号の合計との比を示す。図１２に示すように、ＴＰＡと他のＥＣＬ共反応物質との組み合わせは、考えられる非線形効果を示した。
実施例１に記載されるＥＣＬ共反応物質の組み合わせを、２００ｍＭのＴｒｉｓ、５０ｍＭのＫＣｌ、８５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１％のＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００（ｐＨ７．８）中の総共反応物質濃度１５０ｍＭで試験した。アッセイを、実施例１に記載されるように、結合ＥＣＬ標識（ＢＴＩ）を用いて実行した。その結果を図１２に示す。図１２のチャートの右上側は、ＢＴＩから生成されたＥＣＬ信号を示し、図１２のチャートの左下側は、混合ＥＣＬ共反応物質のＥＣＬ信号と、個々のＥＣＬ共反応物質によって生成された信号の合計との比を示す。図１２に示すように、ＴＰＡと他のＥＣＬ共反応物質との組み合わせは、考えられる非線形効果を示した。
【0285】
実施例８．ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００の存在に対するＥＣＬ共反応物質の感受性
実施例１に記載されるＥＣＬ共反応物質を、一般的に使用されるＥＣＬ共反応物質トリプロピルアミン（ＴＰＡ）によって必要とされるＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００の存在に対する感受性について試験した。実施例１に記載のように、結合（ＢＴＩ）及び遊離（ＦＴ）ＥＣＬ標識を用いてアッセイを実行した。結果を図１３Ａ及び１３Ｂに示す。図１３Ａは、非電気活性界面活性剤であるＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００（ＴＸ１００）及びＰＥＧ（１８）トリデシルエーテル（ＰＥＧ１８ＴＤＥ）中の各ＥＣＬ反応物質についてのＢＴＩ及びＦＴからのＥＣＬ信号を示す。図１３Ｂは、ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００対ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテル中で生成されたＥＣＬの比を示す。
実施例１に記載されるＥＣＬ共反応物質を、一般的に使用されるＥＣＬ共反応物質トリプロピルアミン（ＴＰＡ）によって必要とされるＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００の存在に対する感受性について試験した。実施例１に記載のように、結合（ＢＴＩ）及び遊離（ＦＴ）ＥＣＬ標識を用いてアッセイを実行した。結果を図１３Ａ及び１３Ｂに示す。図１３Ａは、非電気活性界面活性剤であるＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００（ＴＸ１００）及びＰＥＧ（１８）トリデシルエーテル（ＰＥＧ１８ＴＤＥ）中の各ＥＣＬ反応物質についてのＢＴＩ及びＦＴからのＥＣＬ信号を示す。図１３Ｂは、ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００対ＰＥＧ（１８）トリデシルエーテル中で生成されたＥＣＬの比を示す。
【0286】
ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００に対して非常に感受性が高かった化合物は、ラジカルカチオンの寿命が短く、ＥＣＬ信号がより低かったのは、ＥＣＬ標識と共反応物質との間の電子伝達が悪かったこと、及び／又はＥＣＬ標識／共反応物質中間体の急速な副作用に起因する可能性があると考えられた。図１３Ａ及び１３Ｂの結果に基づいて、ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００に対して最も感受性の高いＥＣＬ共反応物質は、ＰＩＰＥＳ＞＞ＤＥＡＥ～＝ＤＢＡ－ＢＳ～＝ＢＥＡ－ＢＳであった。
【0287】
実施例９．ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチド分子ビーコン様プローブの調製
例示的なＥＣＬ標識オリゴヌクレオチド分子ビーコン様プローブ（ＭＢ）を以下のように調製した。一般的なＭＢは、文献（Ｍｈｌａｎｇａ ＆ Ｍａｌｍｂｅｒｇ，Ｍｅｔｈｏｄｓ，２５（４）：４６３－７１２００１）からの例に基づいて設計した。ＭＢのループに相補的な標的配列を設計し、ランダムに生成されたオリゴに挿入して６０－ｍｅｒを形成した。ランダム６０－ｍｅｒは、自己相補性が最も低く、したがって、ＭＢの結合を妨げる可能性がある二次構造を形成する可能性が最も低いものとして、ランダムに生成された配列のプールから選択した。ＭＢに相補的な配列よりも長い標的配列を使用した。これは、目的の配列が、ＭＢがハイブリダイズするより大きなオリゴの領域である可能性が高い、実際の生物学的アッセイのより良い表現であろうからである。
例示的なＥＣＬ標識オリゴヌクレオチド分子ビーコン様プローブ（ＭＢ）を以下のように調製した。一般的なＭＢは、文献（Ｍｈｌａｎｇａ ＆ Ｍａｌｍｂｅｒｇ，Ｍｅｔｈｏｄｓ，２５（４）：４６３－７１２００１）からの例に基づいて設計した。ＭＢのループに相補的な標的配列を設計し、ランダムに生成されたオリゴに挿入して６０－ｍｅｒを形成した。ランダム６０－ｍｅｒは、自己相補性が最も低く、したがって、ＭＢの結合を妨げる可能性がある二次構造を形成する可能性が最も低いものとして、ランダムに生成された配列のプールから選択した。ＭＢに相補的な配列よりも長い標的配列を使用した。これは、目的の配列が、ＭＢがハイブリダイズするより大きなオリゴの領域である可能性が高い、実際の生物学的アッセイのより良い表現であろうからである。
【0288】
２つの異なる標的配列を設計し、１つの６０－ｍｅｒは、分子ビーコンのループ（Ｔ４．１）に相補的な配列を含有し、１つの６０－ｍｅｒは、ループ及びステムの上部ヌクレオチド（Ｔ４．２；図１５）に相補的な配列を含有した。Ｔ４．２配列は、ＭＢをより強く結合し、ステムを不安定化すると予想された。標的オリゴヌクレオチドをビオチン標識して、ストレプトアビジンでコーティングされたプレート上に固定化させた。
【0289】
Ｓ－ＴＡＧ ＥＣＬ信号に対する３つの異なるクエンチャーのクエンチ効率を評価した。３’クエンチャー及び５’アミンを有する４つの分子ビーコンをＩＤＴから注文し、Ｓ－ＴＡＧ－ＮＨＳで標識した（表１、図１６）。３’末端を、以下のクエンチャーで標識した：Ｂｌａｃｋ Ｈｏｌｅ Ｑｕｅｎｃｈｅｒ ２（ＭＢ４－１）、Ｉｏｗａ Ｂｌａｃｋ（ＭＢ４－２）、ダブシル（ＭＢ４－３）。対照として、ＭＢ４－Ｃはクエンチャーで標識しなかった。Ｓ－ＴＡＧ標識ビーコンを、陰イオン交換クロマトグラフィーを使用して、オリゴ産生不純物、加水分解Ｓ－ＴＡＧ－ＮＨＳ、及び追加のＳ－ＴＡＧ種から正常に精製した。
【表1】
【0290】
図１５は、実施例１０～１２で実施した実験の図である。標的オリゴヌクレオチド（標的４．２）は、ビオチン－ストレプタビン相互作用によって電極（灰色の楕円形）の表面に固定化される。いくつかの実験では、電極の表面はコーティングされておらず、標的オリゴヌクレオチドは溶液中に残る。ＥＣＬ標識分子ビーコンプローブを、標的にハイブリダイズさせ、クエンチャー（存在する場合）をＥＣＬ標識から分離し、ＥＣＬ標識をクエンチし、ＥＣＬ共反応物質（図示せず）の存在下での電圧の印加時にＥＣＬ信号の検出を可能にする。
【0291】
実施例１０．ＥＣＬ標識オリゴヌクレオチド分子ビーコン様プローブの性能
初期の実験は、実施例９のＭＢは予想よりも安定しており、より高いＴｍを有し、ステムをわずかに不安定化するように設計されたＴ４．２標的配列について最高の性能が観察されたことを示唆した。ＭＢの固定化中の温度上昇はまた、ＭＢを固定化された標的配列にハイブリダイズさせる前に、ＭＢを溶かすことによってアッセイ信号を増加させた（データは示されていない）。
初期の実験は、実施例９のＭＢは予想よりも安定しており、より高いＴｍを有し、ステムをわずかに不安定化するように設計されたＴ４．２標的配列について最高の性能が観察されたことを示唆した。ＭＢの固定化中の温度上昇はまた、ＭＢを固定化された標的配列にハイブリダイズさせる前に、ＭＢを溶かすことによってアッセイ信号を増加させた（データは示されていない）。
【0292】
ＭＢの性能を、コーティングされていない小スポットプレート上の溶液中の標的オリゴヌクレオチドの存在下、及び小スポットストレプトアビジンプレート上に固定された標的オリゴヌクレオチドの存在下で試験した（図１７Ａ～Ｄ）。加えて、２つの異なるＥＣＬ共反応物質を試験した。最初の５０ｕＬの０～３０００ｎＭ Ｔ４．２ビオチン化標的オリゴヌクレオチドをプレート（コーティングされていないか、又はストレプトアビジンでコーティングされているかのいずれか）中で室温で６０分間、７０５ＲＰＭでインキュベートして、標的オリゴヌクレオチドをストレプトアビジンでコーティングされたプレート上に固定化した。第２の２５ｕＬの３００ｎＭ ＭＢをプレートに添加し、７０５ＲＰＭで５５℃で３０分間インキュベートし、続いて室温で３０分間インキュベートした。最後に、ＥＣＬ共反応物質ＴＰＡを含有する７５ｕＬの２倍読み取りバッファー（ＴＰＡ読み取りバッファー）又は８５０ｍＭのＮａＣＬを含む７５ｕＬの１．２Ｍ ＴＥＡ（ＴＥＡ読み取りバッファー）をウェルに添加し、プレートを読み取った。Ｔ４．２の最終濃度は、０～１０００ｎＭであり、ＭＢの最終濃度は、５０ｎＭであり、ＴＥＡの最終濃度は、６００ｍＭであった。
【0293】
クエンチされたＭＢからのＥＣＬ信号は、対照（ＭＢ４－Ｃ）のＥＣＬ信号よりも低く、効率的なクエンチングを示唆している（図１７Ａ、１７Ｂ、１７Ｃ、及び１７Ｄにおいて、ＭＢ４－Ｃは、標的オリゴヌクレオチドの最低濃度における最上線である）。ＢＨＱ２及びＩｏｗａ Ｂｌａｃｋは、試験したＳ－ＴＡＧ ＥＣＬ標識の最も効率的なクエンチャーであるようである。ＥＣＬ信号が、標的オリゴヌクレオチドの最高濃度で対照と同じレベルまで回復するにつれて、溶液中又は固定化されたときのＭＢの脱クエンチが観察され得る（図１７Ａ～Ｄ）。
【0294】
固定化された標的オリゴヌクレオチドへのハイブリダイゼーションによってＭＢが表面に固定化されると、アッセイ性能及びダイナミックレンジが劇的に増加する（図１７Ｂ及び１７Ｄ）。ダイナミックレンジは、ＴＰＡを含有する読み取りバッファー（図１７Ｂ）と比較して、ＴＥＡを含有する読み取りバッファー（図１７Ｄ）で１桁増大させることができる。いかなる理論にも拘束されるものではないが、これは、放射寿命が減少した読み取りバッファーを使用するときに溶液中のバックグラウンド形態種が減少した結果であると考えられている。
【0295】
実施例１１．非洗浄アッセイにおけるＴＥＡ共反応物質を用いたＥＣＬ標識オリゴヌクレオチド分子ビーコン様プローブの性能
実施例９（図１８Ａ～Ｂ）に記載のＭＢプローブを使用して、広い濃度範囲の標的オリゴヌクレオチドにわたる非洗浄アッセイの感度を、小点ストレプトアビジンプレート上で試験した。より正確な測定のために、試料を１８倍の非特異的結合信号（ＮＳＢ）で３回実行した。まず、４０ｕＬの０～３００ｎＭ Ｔ４．２ビオチン化標的オリゴヌクレオチドを、７０５ＲＰＭで６０分間、室温でストレプトアビジンコーティングプレート中でインキュベートして、標的オリゴヌクレオチドを固定化した。次に、１０ｕＬの７５０ｎＭ ＭＢをプレートに添加し、７０５ＲＰＭで５５℃で３０分間インキュベートし、続いて室温で３０分間インキュベートした。最後に、８５０ｍＭのＮａＣＬを含む１００ｕＬの１．２Ｍ ＴＥＡをウェルに添加し、プレートを読み取った。Ｔ４．２の最終濃度は、０～１００ｎＭであり、ＭＢの最終濃度は、５０ｎＭであり、ＴＥＡの最終濃度は、８００ｍＭであった。ＭＢ４－２についての検出下限（ＬＬＯＤ）は、ＣＶが低いために計算されなかった。増幅を伴わないアッセイの感度は、約１ｐＭである。ＭＢのクエンチング、及びバックグラウンドＥＣＬ信号の減少は、対照ＭＢと比較して観察することができる（ＭＢ４－Ｃ、図１８Ａの標的オリゴヌクレオチドの最低濃度での最上線）。
実施例９（図１８Ａ～Ｂ）に記載のＭＢプローブを使用して、広い濃度範囲の標的オリゴヌクレオチドにわたる非洗浄アッセイの感度を、小点ストレプトアビジンプレート上で試験した。より正確な測定のために、試料を１８倍の非特異的結合信号（ＮＳＢ）で３回実行した。まず、４０ｕＬの０～３００ｎＭ Ｔ４．２ビオチン化標的オリゴヌクレオチドを、７０５ＲＰＭで６０分間、室温でストレプトアビジンコーティングプレート中でインキュベートして、標的オリゴヌクレオチドを固定化した。次に、１０ｕＬの７５０ｎＭ ＭＢをプレートに添加し、７０５ＲＰＭで５５℃で３０分間インキュベートし、続いて室温で３０分間インキュベートした。最後に、８５０ｍＭのＮａＣＬを含む１００ｕＬの１．２Ｍ ＴＥＡをウェルに添加し、プレートを読み取った。Ｔ４．２の最終濃度は、０～１００ｎＭであり、ＭＢの最終濃度は、５０ｎＭであり、ＴＥＡの最終濃度は、８００ｍＭであった。ＭＢ４－２についての検出下限（ＬＬＯＤ）は、ＣＶが低いために計算されなかった。増幅を伴わないアッセイの感度は、約１ｐＭである。ＭＢのクエンチング、及びバックグラウンドＥＣＬ信号の減少は、対照ＭＢと比較して観察することができる（ＭＢ４－Ｃ、図１８Ａの標的オリゴヌクレオチドの最低濃度での最上線）。
【0296】
実施例１２．２段階の洗浄アッセイにおけるＴＥＡ共反応物質を用いたＥＣＬ標識オリゴヌクレオチド分子ビーコン様プローブの性能
２段階非洗浄ＭＢアッセイの性能を、スモールスポットのストレプトアビジンプレートで試験した。まず、４０ｕＬの０～３００ｎＭ Ｔ４．２ビオチン化標的オリゴヌクレオチドを、７０５ＲＰＭで６０分間、室温でストレプトアビジンコーティングプレート中でインキュベートして、標的オリゴヌクレオチドを固定化した。次に、１０ｕＬの７５０ｎＭ ＭＢ及び１００ｕＬの１．２Ｍ ＴＥＡと８５０ｍＭ ＮａＣＬとの混合物をウェルに添加し、５５℃、７０５ＲＰＭで１５分間インキュベートし、続いて室温で１５分間インキュベートしてから、プレートを読み取った。Ｔ４．２標的オリゴヌクレオチドの最終濃度は、０～１００ｎＭであり、ＭＢの最終濃度は、５０ｎＭであり、ＴＥＡの最終濃度は、８００ｍＭであった。結果を図１９Ａ～Ｂに示す。バックグラウンド信号は、ＭＢを添加し、ＴＥＡ読み取りバッファーを添加する前にインキュベートしたアッセイと比較して、２段階アッセイではわずかに増加した（実施例１１）。これは、ＴＥＡ読み取りバッファー中のＭＢの長期インキュベーションの結果であり得る。このアッセイでは、ＭＢ４－３のＬＬＯＤは、ＣＶが低いために計算されなかった。
２段階非洗浄ＭＢアッセイの性能を、スモールスポットのストレプトアビジンプレートで試験した。まず、４０ｕＬの０～３００ｎＭ Ｔ４．２ビオチン化標的オリゴヌクレオチドを、７０５ＲＰＭで６０分間、室温でストレプトアビジンコーティングプレート中でインキュベートして、標的オリゴヌクレオチドを固定化した。次に、１０ｕＬの７５０ｎＭ ＭＢ及び１００ｕＬの１．２Ｍ ＴＥＡと８５０ｍＭ ＮａＣＬとの混合物をウェルに添加し、５５℃、７０５ＲＰＭで１５分間インキュベートし、続いて室温で１５分間インキュベートしてから、プレートを読み取った。Ｔ４．２標的オリゴヌクレオチドの最終濃度は、０～１００ｎＭであり、ＭＢの最終濃度は、５０ｎＭであり、ＴＥＡの最終濃度は、８００ｍＭであった。結果を図１９Ａ～Ｂに示す。バックグラウンド信号は、ＭＢを添加し、ＴＥＡ読み取りバッファーを添加する前にインキュベートしたアッセイと比較して、２段階アッセイではわずかに増加した（実施例１１）。これは、ＴＥＡ読み取りバッファー中のＭＢの長期インキュベーションの結果であり得る。このアッセイでは、ＭＢ４－３のＬＬＯＤは、ＣＶが低いために計算されなかった。
【0297】
本開示は、本明細書に記載される具体的な実施形態によって範囲が限定されるものではない。本明細書に記載されたものに加えて本開示の様々な修正は、前述の記載及び添付の図から当業者には明らかとなるであろう。そのような修正は、特許請求の範囲内に含まれることが意図される。種々の刊行物が本明細書に引用され、それらの開示は参照によりその全体が組み込まれる。
【0298】
本開示の説明される実施形態及び実施例は、限定的ではなく例示的であることを意図し、本開示の全ての実施形態又は実施例を表すものではない。様々な特定の実施形態に適用される本開示の基本的な新規の特徴が示され、説明され、指摘されてきたが、例示されるデバイスの形態及び詳細における並びにそれらの動作における様々な省略、置換及び変更が、本開示の趣旨から逸脱することなく、当業者によって行われ得ることも理解されたい。例えば、同じ結果を達成するために実質的に同じ方法で実質的に同じ機能を実行するそれらの要素及び／又は方法工程の全ての組み合わせが、本開示の範囲内にあることが明示的に意図される。更に、本開示の任意の開示された形態若しくは実施形態に関連して示され、かつ／あるいは説明される構造及び／又は要素及び／又は方法工程が、設計の一般的な選択事項として、任意の他の開示された若しくは提案された形態又は実施形態に組み込まれ得ることを認識されるべきである。更に、以下の特許請求の範囲に記載される本開示の趣旨又は範囲から逸脱することなく、文字通り及び法律で認識される同等物の両方において、様々な修正及び変更を行うことができる。
【図1A】
【図1B】
【図2A】
【図2B】
【図2C】
【図3A】
【図3B】
【図4A】
【図4B】
【図4C】
【図4D】
【図4E】
【図4F】
【図4G】
【図4H】
【図5A】
【図5B】
【図5C】
【図5D】
【図6A】
【図6B】
【図6C】
【図7A】
【図7B】
【図8A】
【図8B】
【図9A】
【図9B】
【図10A】
【図10B】
【図11A】
【図11B】
【図12】
【図13A】
【図13B】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17A】
【図17B】
【図17C】
【図17D】
【図18A】
【図18B】
【図19A】
【図19B】
【図20】
【図21】
【配列表】
【国際調査報告】