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▶ キャノピー イムノ‐セラピューティクス リミテッドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-12-26
(54)【発明の名称】ＩＧ様融合タンパク質およびその使用
(51)【国際特許分類】
C07K 14/705 20060101AFI20241219BHJP
C07K 19/00 20060101ALI20241219BHJP
C07K 16/00 20060101ALI20241219BHJP
C12N 15/12 20060101ALI20241219BHJP
C12N 15/13 20060101ALI20241219BHJP
C12N 15/62 20060101ALI20241219BHJP
C12P 21/02 20060101ALI20241219BHJP
A61K 38/17 20060101ALI20241219BHJP
A61P 21/04 20060101ALI20241219BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20241219BHJP
G01N 33/53 20060101ALI20241219BHJP
【ＦＩ】
C07K14/705 ZNA
C07K19/00
C07K16/00
C12N15/12
C12N15/13
C12N15/62 Z
C12P21/02 C
A61K38/17
A61P21/04
A61K39/395 Y
G01N33/53 N
G01N33/53 D
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024556825
(86)(22)【出願日】2022-12-13
(85)【翻訳文提出日】2024-08-06
(86)【国際出願番号】 IL2022051321
(87)【国際公開番号】W WO2023112028
(87)【国際公開日】2023-06-22
(31)【優先権主張番号】63/288,782
(32)【優先日】2021-12-13
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】524223541
【氏名又は名称】キャノピー イムノ‐セラピューティクス リミテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100114775
【弁理士】
【氏名又は名称】高岡 亮一
(74)【代理人】
【識別番号】100121511
【弁理士】
【氏名又は名称】小田 直
(74)【代理人】
【識別番号】100202751
【弁理士】
【氏名又は名称】岩堀 明代
(74)【代理人】
【識別番号】100208580
【弁理士】
【氏名又は名称】三好 玲奈
(74)【代理人】
【識別番号】100191086
【弁理士】
【氏名又は名称】高橋 香元
(72)【発明者】
【氏名】オヴェド，クフィル
(72)【発明者】
【氏名】デンクバーグ，ガリット
(72)【発明者】
【氏名】リーフ，シャロン
(72)【発明者】
【氏名】ピンズール，エレナ
【テーマコード（参考）】
4B064
4C084
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B064AG20
4B064AG26
4B064CA19
4B064CC24
4B064DA01
4B064DA13
4C084AA02
4C084AA07
4C084BA01
4C084BA41
4C084CA53
4C084DC50
4C084NA14
4C084ZA941
4C084ZA942
4C085AA35
4C085BB42
4C085DD62
4C085EE03
4H045AA10
4H045AA11
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA10
4H045BA41
4H045CA40
4H045DA50
4H045DA75
4H045EA20
4H045EA50
4H045FA74
(57)【要約】
重症筋無力症自己抗体の第１のヒト受容体標的またはその類似体もしくは誘導体の断片と、重症筋無力症自己抗体の第２のヒトタンパク質受容体またはその類似体もしくは誘導体の断片とを含む組成物が提供される。組成物を含む医薬組成物、組成物のポリペプチドをコードする核酸系、ならびに組成物を使用した処置および処置に対する適性を決定する方法；ならびに組成物を製造する方法も提供される。
【選択図】図３Ａ
【選択図】図３Ａ
【特許請求の範囲】
【請求項1】
第１のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の断片と、第２のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の断片とを含む組成物であって、前記第１および第２のサブユニットは異なるサブユニットである、組成物。
【請求項2】
前記断片が、前記アセチルコリン受容体サブユニットの細胞外ドメインの断片である、請求項１に記載の組成物。
【請求項3】
前記第１および第２のアセチルコリン受容体サブユニットが、アセチルコリン受容体サブユニットアルファ（ＡＣＨＲＡ）、アセチルコリン受容体サブユニットベータ（ＡＣＨＲＢ）、アセチルコリン受容体サブユニットガンマ（ＡＣＨＲＧ）、アセチルコリン受容体サブユニットデルタ（ＡＣＨＲＤ）およびアセチルコリン受容体サブユニットイプシロン（ＡＣＨＲＥ）から選択される、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項4】
ａ．前記第１のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の断片と第１の二量体化ドメインとを含む第１のポリペプチド鎖；およびｂ．前記第２のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の断片と第２の二量体化ドメインとを含む第２のポリペプチド鎖
を含むタンパク質複合体を含み、
前記第１および第２の二量体化ドメインは、互いに二量体化するように構成されている、請求項１～３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項5】
前記二量体化が、前記第１の二量体化ドメインと前記第２の二量体化ドメインとの間に共有結合を形成することを含む、請求項４に記載の組成物。
【請求項6】
前記タンパク質複合体が免疫グロブリン足場を含む、請求項４または５に記載の組成物。
【請求項7】
ａ．前記第１の二量体化ドメインが、免疫グロブリンの重鎖の第１のヒンジドメインを含み、前記第２の二量体化ドメインが、重鎖の第２のヒンジドメインを含み、前記第１および前記第２の二量体化ドメインが、ジスルフィド結合によって二量体化する；またはｂ．前記第１および第２の二量体化ドメインが、各々、免疫グロブリンの重鎖のＣＨ１ドメインおよび免疫グロブリンの軽鎖のＣＬドメインから選択されるドメインを含み、ジスルフィド結合によって二量体化し、前記第１および第２の二量体化ドメインは両方とも前記ＣＨ１ドメインまたは前記ＣＬドメインを含まない、
請求項４～６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項8】
前記第１、第２またはその両方のポリペプチド鎖の前記断片および前記二量体化ドメインが、リンカーによって分離されている、請求項４～７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項9】
前記第１のポリペプチド鎖、前記第２のポリペプチド鎖またはその両方が、ヒト抗体重鎖のＦｃ領域をさらに含む、請求項４～８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項10】
前記Ｆｃ領域が、前記タンパク質複合体に結合する細胞に対する細胞傷害性を誘導することができる、請求項９に記載の組成物。
【請求項11】
前記第１のポリペプチド鎖が、免疫グロブリンの重鎖の第１のＣＨ３ドメイン、免疫グロブリンの重鎖の第１のＣＨ２ドメインまたはその両方を含み、前記第２のポリペプチド鎖が、免疫グロブリンの重鎖の第２のＣＨ３ドメイン、免疫グロブリンの重鎖の第２のＣＨ２ドメインまたはその両方を含む、請求項９または１０に記載の組成物。
【請求項12】
前記第１のＣＨ３ドメイン、前記第１のＣＨ２ドメインまたは両方が少なくとも第１の変異を含み、前記第２のＣＨ３ドメイン、前記第２のＣＨ２ドメインまたはその両方が少なくとも第２の変異を含み、前記変異が、前記第１および第２のポリペプチド鎖のヘテロ二量体化を可能にし、前記第１のポリペプチド鎖のホモ二量体化および前記第２のポリペプチド鎖のホモ二量体化を阻害する、請求項１１に記載の組成物。
【請求項13】
前記第１の変異が、表１に提供される変異から選択され、前記第２の変異が、表１に提供され、前記第１の変異に対応する変異である、請求項１２に記載の組成物。
【請求項14】
前記ＦｃがＩｇＧ２もしくはＩｇＧ４に由来するか、またはエフェクター機能を低下させる少なくとも１つの変異を含む、請求項９～１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項15】
前記第１、第２またはその両方のポリペプチド鎖の前記Ｆｃ領域が、リンカーによって前記断片または前記二量体化ドメインから分離されている、請求項９～１４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項16】
前記第１、第２またはその両方のポリペプチド鎖の前記二量体化ドメインが、前記断片のＣ末端または前記断片のＮ末端にある、請求項９～１５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項17】
抗体可変ドメインを欠いている、請求項１～１６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項18】
第３のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の断片と第３の二量体化ドメインとを含む第３のポリペプチドをさらに含み、前記第１のポリペプチドは第４の二量体化ドメインをさらに含み、前記第３および第４の二量体化ドメインは互いに二量体化することができる、請求項４～１７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項19】
ａ．前記第３の二量体化ドメインが、免疫グロブリンの重鎖の第１のヒンジドメインを含み、前記第４の二量体化ドメインが、重鎖の第２のヒンジドメインを含み、前記第１および前記第２の二量体化ドメインが、ジスルフィド結合によって二量体化する；またはｂ．前記第３および第４の二量体化ドメインが、各々、免疫グロブリンの重鎖のＣＨ１ドメインおよび免疫グロブリンの軽鎖のＣＬドメインから選択されるドメインを含み、ジスルフィド結合によって二量体化し、前記第１および第３のポリペプチドは両方とも前記ＣＨ１ドメインまたは前記ＣＬドメインを含まない、
請求項１８に記載の組成物。
【請求項20】
第４のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の断片と第５の二量体化ドメインとを含む第４のポリペプチドをさらに含み、前記第２のポリペプチドは第６の二量体化ドメインをさらに含み、前記第５および６の二量体化ドメインは互いに二量体化することができる、請求項１８または１９に記載の組成物。
【請求項21】
ａ．前記第５の二量体化ドメインが、免疫グロブリンの重鎖の第１のヒンジドメインを含み、前記第６の二量体化ドメインが、重鎖の第２のヒンジドメインを含み、前記第１および前記第２の二量体化ドメインが、ジスルフィド結合によって二量体化する；またはｂ．前記第５および６の二量体化ドメインが、各々、免疫グロブリンの重鎖のＣＨ１ドメインおよび免疫グロブリンの軽鎖のＣＬドメインから選択されるドメインを含み、ジスルフィド結合によって二量体化し、前記第１および第３のポリペプチドは両方とも前記ＣＨ１ドメインまたは前記ＣＬドメインを含まない、
請求項２０に記載の組成物。
【請求項22】
前記第１のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の断片と、前記第２のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の断片とを含む単一のポリペプチド鎖を含む、請求項１～２１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項23】
前記単一のポリペプチド鎖が、第３のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の断片と、任意選択で第４のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の断片とをさらに含む、請求項２２に記載の組成物。
【請求項24】
前記断片がアミノ酸リンカーによって分離されており、任意選択で前記リンカーが可撓性ＧＳリンカーであるか、または前記リンカーが剛性リンカーである、請求項２２または２３に記載の組成物。
【請求項25】
前記ポリペプチド鎖がヒト抗体重鎖のＦｃ領域をさらに含み、第２のポリペプチド鎖が第３のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体とヒト抗体重鎖のＦｃ領域とを含み、任意選択で前記第２のポリペプチド鎖が第４のヒトアセチルコリン受容体サブユニットをさらに含む、請求項２２～２４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項26】
第３のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体を含む第２ポリペプチド鎖をさらに含み、任意選択で前記第２のポリペプチド鎖は第４のヒトアセチルコリン受容体サブユニットをさらに含む、請求項２２～２４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項27】
前記複合体が、配列番号６４～６９から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列またはそれと少なくとも８０％の同一性を含むその誘導体を含む、請求項１～２６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項28】
前記断片の少なくとも１つが、前記断片の安定性または溶解性を増加させる変異を含む、請求項１～２７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項29】
前記変異が、アセチルコリン受容体サブユニット内のｃｙｓループをＣＤＶＳＧＶＤＴＥＳＧＡＴＮＣ（配列番号４４）で置き換えることを含む、請求項２８に記載の組成物。
【請求項30】
前記アセチルコリン受容体サブユニットが、配列番号１３１に提供されるアミノ酸配列を含むアルファサブユニット、配列番号１３２に提供されるアミノ酸配列を含むベータサブユニット、配列番号１３３に提供されるアミノ酸配列を含むガンマサブユニット、配列番号１３４に提供されるアミノ酸配列を含むデルタサブユニット、および配列番号１３５に提供されるアミノ酸配列を含むイプシロンサブユニットから選択される、請求項２８または２９に記載の組成物。
【請求項31】
その類似体もしくは誘導体が、ヒトタンパク質と少なくとも８５％の同一性を含む、請求項１～３０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項32】
前記断片が、タンパク質からの少なくとも２０個の連続アミノ酸を含む、請求項１～３１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項33】
前記断片が、前記自己抗体の少なくとも１つのＢ細胞受容体（ＢＣＲ）特異的エピトープ標的を含む、請求項１～３２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項34】
前記断片が、前記断片の凝集を減少させる少なくとも１つの変異を含む、請求項１～３３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項35】
前記断片が、ａ．ＡＣＨＲＡの断片であって、配列番号１を含む野生型ＡＣｈＲａまたは配列番号１３１を含む溶解度が増加したＡＣｈＲａ内のＮ１４１の欠失、Ｆ１００Ｇ、Ｗ１４９Ｒ、Ｖ１５５Ａ、Ｙ９３Ｆ、Ｙ９３Ｈ、Ｙ９３Ｒおよびそれらの組み合わせから選択される変異を含む断片；
ｂ．ＡＣＨＲＧの断片であって、配列番号６を含む野生型ＡＣｈＲａまたは配列番号１３３を含む溶解度が増加したＡＣｈＲａ内のＭ８４Ｓ、Ｙ１０５Ｅ、Ｙ１１７Ｅ、Ｙ１１７Ｒおよびそれらの組み合わせから選択される変異を含む断片；ならびに
ｃ．ＡＣＨＲＤの断片であって、配列番号８を含む野生型ＡＣｈＲａまたは配列番号１３４を含む溶解度が増加したＡＣｈＲａ内のＣ１０８Ａ、Ｃ１０８Ｉ、Ｙ１１９Ｒ、Ｎ１４１の欠失、Ｌ１５１Ｅおよびそれらの組み合わせから選択される変異を含む断片
から選択される、請求項３４に記載の組成物。
【請求項36】
前記第１のポリペプチド鎖および前記第２のポリペプチド鎖が、配列番号９２および配列番号９３；配列番号９５および配列番号９６；配列番号９７および配列番号９８、配列番号９９および配列番号１００、配列番号９２および配列番号１０２；配列番号１０３および配列番号１００；配列番号１０５および配列番号１３０；配列番号１０５および配列番号１０６；ならびに配列番号１０５および配列番号１０７から選択される、請求項４～３５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項37】
前記単一のポリペプチド鎖が、配列番号９４、配列番号１０４、および配列番号１０８～１２９から選択される、請求項２２～３５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項38】
前記断片の凝集を減少させる少なくとも１つの変異を含む第１のヒトアセチルコリン受容体サブユニットの断片を含むポリペプチドであって、前記断片は、ａ．ＡＣＨＲＡの断片であって、配列番号１を含む野生型ＡＣｈＲａまたは配列番号１３１を含む溶解度が増加したＡＣｈＲａ内のＮ１４１の欠失、Ｆ１００Ｇ、Ｗ１４９Ｒ、Ｖ１５５Ａ、Ｙ９３Ｆ、Ｙ９３Ｈ、Ｙ９３Ｒおよびそれらの組み合わせから選択される変異を含む断片；
ｂ．ＡＣＨＲＧの断片であって、配列番号６を含む野生型ＡＣｈＲａまたは配列番号１３３を含む溶解度が増加したＡＣｈＲａ内のＭ８４Ｓ、Ｙ１０５Ｅ、Ｙ１１７Ｅ、Ｙ１１７Ｒおよびそれらの組み合わせから選択される変異を含む断片；ならびに
ｃ．ＡＣＨＲＤの断片であって、配列番号８を含む野生型ＡＣｈＲａまたは配列番号１３４を含む溶解度が増加したＡＣｈＲａ内のＣ１０８Ａ、Ｃ１０８Ｉ、Ｙ１１９Ｒ、Ｎ１４１の欠失、Ｌ１５１Ｅおよびそれらの組み合わせから選択される変異を含む断片
から選択される、ポリペプチド。
【請求項39】
アセチルコリン受容体サブユニット内のｃｙｓループをＣＤＶＳＧＶＤＴＥＳＧＡＴＮＣ（配列番号４４）で置き換えることをさらに含み、前記サブユニットはＡＣＨＲＡであり、前記ｃｙｓループはＣＥＩＩＶＴＨＦＰＦＤＥＱＮＣ（配列番号３９）からなり、前記サブユニットはＡＣＨＲＧであり、前記ｃｙｓループはＣＳＩＳＶＴＹＦＰＦＤＷＱＮＣ（配列番号４１）からなり、または前記サブユニットはＡＣＨＲＤであり、前記ｃｙｓループはＣＰＩＳＶＴＹＦＰＦＤＷＱＮＣ（配列番号４２）からなる、請求項３８に記載のポリペプチド。
【請求項40】
アミノ酸リンカーによって前記第１の断片に連結された第２のアセチルコリン受容体サブユニットの第２の断片をさらに含み、任意選択で第３、第４、または第５のアセチルコリン受容体サブユニットからの断片をさらに含む、請求項３８または３９に記載のポリペプチド。
【請求項41】
ヒト抗体重鎖のＦｃ領域をさらに含み、任意選択で前記Ｆｃ領域がアミノ酸リンカーによって前記断片から分離されている、請求項３８～４０のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項42】
配列番号７２～９１から選択される配列を含む、請求項３８～４１のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項43】
医薬組成物であって、請求項１～３７のいずれか一項に記載の組成物または請求項３８～４２のいずれか一項に記載のポリペプチドと、薬学的に許容され得る担体、賦形剤またはアジュバントとを含み、任意選択で前記医薬組成物が対象への全身投与用に製剤化されている、医薬組成物。
【請求項44】
重症筋無力症の処置を必要とする対象において重症筋無力症を処置する方法であって、前記方法が、請求項１～３７のいずれか一項に記載の組成物、請求項３８～４２のいずれか一項に記載のポリペプチドまたは請求項４３に記載の医薬組成物を前記対象に投与し、それによって重症筋無力症を処置することを含む、方法。
【請求項45】
前記対象において、少なくとも前記第１のヒトアセチルコリン受容体サブユニットに対する循環抗体のレベルを前記投与前に低下させることをさらに含む、請求項４４に記載の方法。
【請求項46】
前記対象において、前記第１のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたは前記第２のヒトアセチルコリン受容体サブユニットを含むタンパク質複合体内のヒトアセチルコリン受容体サブユニットに対する循環抗体のレベルを低下させることをさらに含む、請求項４４または４５に記載の方法。
【請求項47】
前記処置することが、前記ヒトアセチルコリン受容体サブユニットに対する循環自己抗体の濃度を減少させることを含む、請求項４４～４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項48】
前記処置することが、前記自己抗体を産生するＢ細胞を死滅させることを含む、請求項４４～４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項49】
前記Ｂ細胞が、前記組成物またはポリペプチドの断片に対する自己抗体を産生する自己反応性Ｂ細胞である、請求項４８に記載の方法。
【請求項50】
核酸分子を含む核酸系であって、第１の核酸分子が、請求項４～２３および２８～３７のいずれか一項に記載の組成物の前記第１のポリペプチド鎖をコードし、第２の核酸分子が、請求項４～２１および２６～３７のいずれか一項に記載の組成物の前記第２のポリペプチド鎖をコードし、または前記核酸分子が、請求項２２～３７のいずれか一項に記載の組成物の鎖の単一ポリペプチドまたは請求項３８～４２のいずれか一項に記載のポリペプチドをコードする、核酸系。
【請求項51】
請求項１８～２３および２８～３７のいずれか一項に記載の組成物の前記第３のポリペプチド鎖をコードする第３の核酸分子、請求項２０～２３および２８～３７のいずれか一項に記載の組成物の前記第４のポリペプチド鎖をコードする第４の核酸分子、またはその両方をさらに含む、請求項５０に記載の核酸系。
【請求項52】
請求項１～３７のいずれか一項に記載の組成物または請求項３８～４２のいずれか一項に記載のポリペプチドを生成する方法であって、前記方法は、請求項５０または５１に記載の核酸系を細胞内で発現させるステップであって、前記核酸系が、前記細胞内で前記コードされたポリペプチドを生成するように構成されている、ステップを含み、それによって請求項１～３７のいずれか一項に記載の組成物または請求項３８～４２のいずれか一項に記載のポリペプチドを生成する、方法。
【請求項53】
タンパク質を生成する方法であって、前記方法は、第１のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の細胞外ドメインの第１の断片と、第２のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の細胞外ドメインの第２の断片とを得るステップであって、前記第１および第２のヒトアセチルコリン受容体サブユニットは異なるタンパク質であり、前記第１の断片を前記第２の断片に連結して単一のポリペプチド鎖を生成する、ステップ；または
単一のポリペプチド鎖をコードする核酸配列を含む１つ以上のベクターを含む宿主細胞を培養するステップであって、前記一のポリペプチド鎖は、
ｉ．第１のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の細胞外ドメインの第１の断片と、第２のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の細胞外ドメインの第２の断片とを得るステップであって、前記第１および第２のヒトアセチルコリン受容体サブユニットは異なるタンパク質である、ステップ；
および
ｉｉ．前記第１の断片を前記第２の断片に連結して単一のポリペプチド鎖を生成するステップ
によって生成される、ステップ
を含み、
それによってタンパク質を生成する、方法。
【請求項54】
タンパク質複合体を生成する方法であって、前記方法は、第１のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の細胞外ドメインの第１の断片と、第２のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の細胞外ドメインの第２の断片とを得るステップであって、前記第１および第２のヒトアセチルコリン受容体サブユニットは異なるタンパク質であり、前記第１の断片を第１の二量体化ドメインに連結して第１のポリペプチド鎖を生成し、前記第２の断片を第２の二量体化ドメインに連結して第２のポリペプチド鎖を生成し、前記第１および第２の二量体化ドメインは互いに二量体化することができ、前記二量体化を誘導するのに十分な条件下で前記第１のポリペプチドと前記第２のポリペプチドとを接触させる、ステップ；または
少なくとも２本のポリペプチド鎖をコードする核酸配列を含む１つ以上のベクターを含む宿主細胞を培養するステップであって、該２本のポリペプチド鎖は、
ｉ．第１のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の細胞外ドメインの第１の断片と、第２のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の細胞外ドメインの第２の断片とを得るステップであって、前記第１および第２のヒトアセチルコリン受容体サブユニットは異なるタンパク質である、ステップ；および
ｉｉ．前記第１の断片を第１の二量体化ドメインに連結して第１のポリペプチド鎖を生成し、前記第２の断片を第２の二量体化ドメインに連結して第２のポリペプチド鎖を生成するステップであって、前記第１および第２の二量体化ドメインは互いに二量体化することができる、ステップ
によって生成される、ステップ
を含み、
それによってタンパク質複合体を生成する、方法。
【請求項55】
前記タンパク質が、請求項２２～３７のいずれか一項に記載の組成物の単一のポリペプチド鎖である、請求項５３に記載の方法。
【請求項56】
前記タンパク質複合体が、請求項４～２１および２６～３７のいずれか一項に記載の組成物のタンパク質複合体である、請求項５４に記載の方法。
【請求項57】
ａ．第３の二量体化ドメインを、前記第１のポリペプチド鎖内の前記第１の二量体化ドメインまたは第１の断片に連結するステップ；第３のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の細胞外ドメインの第３の断片を得て、前記第３の断片を第４の二量体化ドメインに連結して第３のポリペプチド鎖を生成するステップであって、前記第３の二量体化ドメインと前記第４の二量体化ドメインとは互いに二量体化することができる、ステップ；および前記第１、第２、および第３のポリペプチドを、前記二量体化を誘導するのに十分な条件下で接触させるステップ；またはｂ．前記宿主細胞において、
ｉ．第３のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の細胞外ドメインの第３の断片を得るステップ；および
ｉｉ．前記第３の断片を第４の二量体化ドメインに連結して第３のポリペプチド鎖を生成するステップ；
によって生成される第３のポリペプチド鎖をコードする核酸配列を発現させるステップであって、
前記第１のポリペプチド鎖が第３の二量体化ドメインをさらに含み、前記第３の二量体化ドメインと前記第４の二量体化ドメインとが互いに二量体化することができる、ステップ
をさらに含む、請求項５４または５６に記載の方法。
【請求項58】
ａ．第６の二量体化ドメインを、前記第２のポリペプチド鎖内の前記第２の二量体化ドメインまたは第２の断片に連結するステップ；第４のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の細胞外ドメインの第４の断片を得て、前記第４の断片を第５の二量体化ドメインに連結して第４のポリペプチド鎖を生成するステップであって、前記第５の二量体化ドメインと前記第６の二量体化ドメインとは互いに二量体化することができる、ステップ；および前記第１、第２、第３および第４のポリペプチドを、前記二量体化を誘導するのに十分な条件下で接触させるステップ；またはｂ．前記宿主細胞において、
ｉ．第４のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の細胞外ドメインの第４の断片を得るステップ；および
ｉｉ．前記第４の断片を第５の二量体化ドメインに連結して第４のポリペプチド鎖を生成するステップ；
によって生成される第４のポリペプチド鎖をコードする核酸配列を発現させるステップであって、
前記第２のポリペプチド鎖が第６の二量体化ドメインをさらに含み、前記第５の二量体化ドメインと前記第６の二量体化ドメインとが互いに二量体化することができる、ステップ
をさらに含む、請求項５７に記載の方法。
【請求項59】
ポリペプチドを生成する方法であって、前記方法は、ａ．第１のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の細胞外ドメインの第１の断片を得るステップ；および
ｂ．変異した第１の断片を生成するために、前記第１の断片の凝集を減少させる少なくとも１つの変異を前記第１の断片において生成するステップ
を含み、
それによってポリペプチドを生成する、方法。
【請求項60】
前記変異した第１の断片の凝集の減少を確認することをさらに含む、請求項５９に記載の方法。
【請求項61】
前記少なくとも１つの変異が、前記第１の断片に対する自己抗体への前記第１の断片の結合を実質的に減少させないことを確認することをさらに含む、請求項５９または６０に記載の方法。
【請求項62】
前記変異した第１の断片を、ヒト抗体重鎖のＦｃ領域に、第２のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の細胞外ドメインの第２の断片に、またはその両方に連結することをさらに含み、任意選択で前記第２の断片は、前記第２の断片の凝集を減少させる少なくとも１つの変異を含む、請求項５９～６１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項63】
その類似体もしくは誘導体が、前記ヒトタンパク質と少なくとも８５％の同一性を含む、請求項５３～６２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項64】
請求項５３～６３のいずれか一項に記載の方法によって生成されるタンパク質複合体またはタンパク質。
【請求項65】
請求項４４～４９のいずれか一項に記載の方法によって処置されることを必要とする対象の適性を決定する方法であって、前記方法は、前記対象から試料を受け取るステップと、前記試料を請求項１～３７のいずれか一項に記載の組成物または請求項３８～４２のいずれか一項に記載のポリペプチドと接触させるステップと、前記試料内のＡＣｈＲに対する自己抗体の前記組成物または前記ポリペプチドへの結合を決定するステップとを含み、ＡＣｈＲに対する自己抗体の前記組成物または前記ポリペプチドへの結合が、前記対象が請求項４４～４９のいずれか一項に記載の方法によって処置されるのに適していることを示し、それによって、処置される対象の適性を決定する、方法。
【請求項66】
前記試料中のＡＣｈＲに対する自己抗体の少なくとも２０％の前記組成物または前記ポリペプチドへの結合が、前記対象が請求項４４～４９のいずれか一項に記載の方法によって処置されるのに適していることを示す、請求項６５に記載の方法。【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年１２月１３日に出願された米国仮特許出願第６３／２８８，７８２号の優先権の利益を主張するものであり、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０２１年１２月１３日に出願された米国仮特許出願第６３／２８８，７８２号の優先権の利益を主張するものであり、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【0002】
電子配列表の参照
電子配列表（ＣＮＰＹ－Ｐ－００２－ＰＣＴ．ｘｍｌ；サイズ：１７０，３７０バイト；および作成日２０２２年１２月１２日）の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
電子配列表（ＣＮＰＹ－Ｐ－００２－ＰＣＴ．ｘｍｌ；サイズ：１７０，３７０バイト；および作成日２０２２年１２月１２日）の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【0003】
本発明は、融合タンパク質生成および重症筋無力症処置の分野におけるものである。
【背景技術】
【0004】
重症筋無力症（ＭＧ）は、最も一般的な神経筋伝達障害である。発症年齢は二峰性であり、第１のピークは２０～３０歳代（女性優勢）であり、第２のピークは６０～８０歳代（男性優勢）である。ＭＧは、神経筋接合機能の破壊による骨格筋の衰弱によって特徴付けられる自己免疫疾患である。ＭＧ患者の約８５％は血清中にアセチルコリン受容体（ＡＣｈＲ）特異的抗体を有し、この抗体がＡＣｈＲアンタゴニストとして作用し、受容体クラスター形成および内在化を引き起こし、補体を動員し、その後組織損傷を引き起こす。個々の患者は、ＡＣｈＲに対する異なる抗体の混合物を有する。ＡＣｈＲ抗体陽性ＭＧの一部の患者はまた、胸腺異常を有し、およそ２／３が過形成を有し、１０％が胸腺腫を有する。ＭＧの主たる臨床的特徴は、変動する骨格筋の衰弱であり、しばしば真の筋疲労を伴う。
【0005】
重症筋無力症には、眼筋型および全身型の２つの臨床形態がある。眼筋無力症では、衰弱は眼瞼および外眼筋に限定される。汎発性疾患では、衰弱は眼筋にも影響を及ぼし得るが、それは、眼球筋、四肢筋、および呼吸筋の様々な組み合わせにも関与する。症候の一時的な悪化は、感染、手術、妊娠、出産、投薬、免疫抑制剤の漸減によって、または疾患の自然な進行の一部として引き起こされ得る。呼吸筋の関与は、重症筋無力症の最も重篤な症候であり、「筋無力症クリーゼ」と呼ばれる呼吸機能不全および差し迫った呼吸不全をもたらし得る。また、フルオロキノロン、アミノグリコシド、硫酸マグネシウム、ヒドロキシクロロキン、ペニシラミン、およびボツリヌス毒素を含むＭＧ患者において回避しなければならない薬物の長いリストもある。β遮断薬、プロカインアミド、キニジン、およびキニーネも、可能であれば避けるべきである。ＭＧの治療法には、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤（ピリドスチグミン）、慢性免疫抑制療法、迅速かつ一過性の免疫調節療法（例えば、血漿交換および免疫グロブリン静注－ＩＶＩＧ）、および胸腺摘出術が含まれる。処置目標は、最小限の薬物関連副作用で患者の最小限の症候を可能にすることである。しかしながら、利用可能な療法はない。ＭＧ患者における初期対症療法は、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤（例えば、ピリドスチグミン）に基づいている。ピリドスチグミンのコリン作動性有害作用は、多くの患者において用量制限的であり得、腹部痙攣および下痢を含み得る。汎発性ＭＧを有するほとんどの患者は、グルココルチコイドおよび／または他の免疫抑制薬による追加の治療を必要とするが、これはセカンドライン治療である。治療的血漿交換（プラズマフェレシス）およびＩＶＩＧは、即効性を有するが、持続時間が短い。ＭＧを処置する新しい方法、特に持続的な効果を有する方法が大いに必要とされている。具体的には、ＭＧを引き起こす自己抗体を標的とする治療法が必要であり、それ以上に、これらの自己抗体の供給源である自己反応性Ｂ細胞／形質細胞を直接標的とし、潜在的に症状を治癒することができる薬物が大いに必要とされている。
【発明の概要】
【0006】
本発明は、第１のヒトアセチルコリン受容体サブユニットの断片および第２のヒトアセチルコリン受容体サブユニットの断片を含む組成物を提供する。
【0007】
第１の態様によれば、第１のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の断片と、第２のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の断片とを含む組成物が提供され、第１および第２のサブユニットは異なるサブユニットである。
【0008】
別の態様によれば、第１のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の断片と、第２のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の断片とを含む組成物が提供され、第１および第２のサブユニットは異なるサブユニットである。
【0009】
別の態様によれば、断片の凝集を減少させる少なくとも１つの変異を含む第１のヒトアセチルコリン受容体サブユニットの断片を含むポリペプチドが提供され、前述の断片は、
ａ．ＡＣＨＲＡの断片であって、配列番号１を含む野生型ＡＣｈＲａまたは配列番号１３１を含む溶解度が増加したＡＣｈＲａ内のＮ１４１の欠失、Ｆ１００Ｇ、Ｗ１４９Ｒ、Ｖ１５５Ａ、Ｙ９３Ｆ、Ｙ９３Ｈ、Ｙ９３Ｒおよびそれらの組み合わせから選択される変異を含む断片；
ｂ．ＡＣＨＲＧの断片であって、配列番号６を含む野生型ＡＣｈＲａまたは配列番号１３３を含む溶解度が増加したＡＣｈＲａ内のＭ８４Ｓ、Ｙ１０５Ｅ、Ｙ１１７Ｅ、Ｙ１１７Ｒおよびそれらの組み合わせから選択される変異を含む断片；ならびに
ｃ．ＡＣＨＲＤの断片であって、配列番号８を含む野生型ＡＣｈＲａまたは配列番号１３４を含む溶解度が増加したＡＣｈＲａ内のＣ１０８Ａ、Ｃ１０８Ｉ、Ｙ１１９Ｒ、Ｎ１４１の欠失、Ｌ１５１Ｅおよびそれらの組み合わせから選択される変異を含む断片
から選択される。
ａ．ＡＣＨＲＡの断片であって、配列番号１を含む野生型ＡＣｈＲａまたは配列番号１３１を含む溶解度が増加したＡＣｈＲａ内のＮ１４１の欠失、Ｆ１００Ｇ、Ｗ１４９Ｒ、Ｖ１５５Ａ、Ｙ９３Ｆ、Ｙ９３Ｈ、Ｙ９３Ｒおよびそれらの組み合わせから選択される変異を含む断片；
ｂ．ＡＣＨＲＧの断片であって、配列番号６を含む野生型ＡＣｈＲａまたは配列番号１３３を含む溶解度が増加したＡＣｈＲａ内のＭ８４Ｓ、Ｙ１０５Ｅ、Ｙ１１７Ｅ、Ｙ１１７Ｒおよびそれらの組み合わせから選択される変異を含む断片；ならびに
ｃ．ＡＣＨＲＤの断片であって、配列番号８を含む野生型ＡＣｈＲａまたは配列番号１３４を含む溶解度が増加したＡＣｈＲａ内のＣ１０８Ａ、Ｃ１０８Ｉ、Ｙ１１９Ｒ、Ｎ１４１の欠失、Ｌ１５１Ｅおよびそれらの組み合わせから選択される変異を含む断片
から選択される。
【0010】
いくつかの実施形態によれば、第１のヒトタンパク質、第２のヒトタンパク質またはその両方は細胞表面受容体であり、断片は受容体の細胞外ドメインの断片である。
【0011】
いくつかの実施形態によれば、断片は、アセチルコリン受容体サブユニットの細胞外ドメインの断片である。
【0012】
いくつかの実施形態によれば、第１および第２のアセチルコリン受容体サブユニットは、アセチルコリン受容体サブユニットアルファ（ＡＣＨＲＡ）、アセチルコリン受容体サブユニットベータ（ＡＣＨＲＢ）、アセチルコリン受容体サブユニットガンマ（ＡＣＨＲＧ）、アセチルコリン受容体サブユニットデルタ（ＡＣＨＲＤ）およびアセチルコリン受容体サブユニットイプシロン（ＡＣＨＲＥ）から選択される。
【0013】
いくつかの実施形態によれば、第１のヒトタンパク質の断片および第２のヒトタンパク質の断片は、異なる配列を含む。
【0014】
いくつかの実施形態によれば、本発明の組成物は、
ａ．第１のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の断片と第１の二量体化ドメインとを含む第１のポリペプチド鎖；および
ｂ．第２のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の断片と第２の二量体化ドメインとを含む第２のポリペプチド鎖
を含むタンパク質複合体を含み、
第１および第２の二量体化ドメインは、互いに二量体化するように構成されている。
ａ．第１のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の断片と第１の二量体化ドメインとを含む第１のポリペプチド鎖；および
ｂ．第２のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の断片と第２の二量体化ドメインとを含む第２のポリペプチド鎖
を含むタンパク質複合体を含み、
第１および第２の二量体化ドメインは、互いに二量体化するように構成されている。
【0015】
いくつかの実施形態によれば、本発明の組成物は、
ａ．第１のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の断片と第１の二量体化ドメインとを含む第１のポリペプチド鎖；および
ｂ．第２のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の断片と第２の二量体化ドメインとを含む第２のポリペプチド鎖
を含むタンパク質複合体を含み、
第１および第２の二量体化ドメインは、互いに二量体化するように構成されている。
ａ．第１のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の断片と第１の二量体化ドメインとを含む第１のポリペプチド鎖；および
ｂ．第２のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の断片と第２の二量体化ドメインとを含む第２のポリペプチド鎖
を含むタンパク質複合体を含み、
第１および第２の二量体化ドメインは、互いに二量体化するように構成されている。
【0016】
いくつかの実施形態によれば、二量体化することは、第１の二量体化ドメインと第２の二量体化ドメインとの間に共有結合を形成することを含む。
【0017】
いくつかの実施形態によれば、タンパク質複合体は免疫グロブリン足場を含む。
【0018】
いくつかの実施形態によれば、
ａ．第１の二量体化ドメインは、免疫グロブリンの重鎖の第１のヒンジドメインを含み、第２の二量体化ドメインは、重鎖の第２のヒンジドメインを含み、第１および第２の二量体化ドメインは、ジスルフィド結合によって二量体化する；または
ｂ．第１および第２の二量体化ドメインは、各々、免疫グロブリンの重鎖のＣＨ１ドメインおよび免疫グロブリンの軽鎖のＣＬドメインから選択されるドメインを含み、ジスルフィド結合によって二量体化し、第１および第２の二量体化ドメインは両方ともＣＨ１ドメインまたはＣＬドメインを含まない。
ａ．第１の二量体化ドメインは、免疫グロブリンの重鎖の第１のヒンジドメインを含み、第２の二量体化ドメインは、重鎖の第２のヒンジドメインを含み、第１および第２の二量体化ドメインは、ジスルフィド結合によって二量体化する；または
ｂ．第１および第２の二量体化ドメインは、各々、免疫グロブリンの重鎖のＣＨ１ドメインおよび免疫グロブリンの軽鎖のＣＬドメインから選択されるドメインを含み、ジスルフィド結合によって二量体化し、第１および第２の二量体化ドメインは両方ともＣＨ１ドメインまたはＣＬドメインを含まない。
【0019】
いくつかの実施形態によれば、第１、第２または両方のポリペプチド鎖の断片および二量体化ドメインは、リンカーによって分離されている。
【0020】
いくつかの実施形態によれば、第１のポリペプチド鎖、第２のポリペプチド鎖またはその両方は、ヒト抗体重鎖のＦｃ領域をさらに含む。
【0021】
いくつかの実施形態によれば、Ｆｃ領域は、タンパク質複合体に結合する細胞に対する細胞傷害性を誘導することができる。
【0022】
いくつかの実施形態によれば、第１のポリペプチド鎖は、免疫グロブリンの重鎖の第１のＣＨ３ドメイン、免疫グロブリンの重鎖の第１のＣＨ２ドメインまたはその両方を含み、第２のポリペプチド鎖は、免疫グロブリンの重鎖の第２のＣＨ３ドメイン、免疫グロブリンの重鎖の第２のＣＨ２ドメインまたはその両方を含む。
【0023】
いくつかの実施形態によれば、第１のＣＨ３ドメインは少なくとも第１の変異を含み、第２のＣＨ３ドメインは少なくとも第２の変異を含み、変異は、第１および第２のポリペプチド鎖のヘテロ二量体化を可能にし、第１のポリペプチド鎖のホモ二量体化および第２のポリペプチド鎖のホモ二量体化を阻害する。
【0024】
いくつかの実施形態によれば、第１のＣＨ２ドメインは少なくとも第１の変異を含み、第２のＣＨ２ドメインは少なくとも第２の変異を含み、変異は、第１および第２のポリペプチド鎖のヘテロ二量体化を可能にし、第１のポリペプチド鎖のホモ二量体化および第２のポリペプチド鎖のホモ二量体化を阻害する。
【0025】
いくつかの実施形態によれば、第１の変異は、表１に提供される変異から選択され、第２の変異は、表１に提供され、第１の変異に対応する変異である。
【0026】
いくつかの実施形態によれば、ＦｃはＩｇＧ２もしくはＩｇＧ４に由来するか、またはエフェクター機能を低下させる少なくとも１つの変異を含む。
【0027】
いくつかの実施形態によれば、第１、第２または両方のポリペプチド鎖のＦｃ領域は、リンカーによって断片または二量体化ドメインから分離されている。
【0028】
いくつかの実施形態によれば、第１、第２または両方のポリペプチド鎖の二量体化ドメインは、断片のＣ末端にあり、Ｆｃ領域のＮ末端にある。いくつかの実施形態によれば、第１、第２または両方のポリペプチド鎖の二量体化ドメインは、断片のＣ末端にある。いくつかの実施形態によれば、第１、第２または両方のポリペプチド鎖の二量体化ドメインは、断片のＮ末端にある。
【0029】
いくつかの実施形態によれば、本発明の組成物は、抗体可変ドメインを欠いている。
【0030】
いくつかの実施形態によれば、本発明の組成物は、第３のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の断片と第３の二量体化ドメインとを含む第３のポリペプチドをさらに含み、第１のポリペプチドは第４の二量体化ドメインをさらに含み、第３および第４の二量体化ドメインは互いに二量体化することができる。
【0031】
いくつかの実施形態によれば、本発明の組成物は、第３のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の断片と第３の二量体化ドメインとを含む第３のポリペプチドをさらに含み、第１のポリペプチドは第４の二量体化ドメインをさらに含み、第３および第４の二量体化ドメインは互いに二量体化することができる。
【0032】
いくつかの実施形態によれば、
ａ．第３の二量体化ドメインは、免疫グロブリンの重鎖の第１のヒンジドメインを含み、第４の二量体化ドメインは、重鎖の第２のヒンジドメインを含み、第１および第２の二量体化ドメインは、ジスルフィド結合によって二量体化する；または
ｂ．第３および第４の二量体化ドメインは、各々、免疫グロブリンの重鎖のＣＨ１ドメインおよび免疫グロブリンの軽鎖のＣＬドメインから選択されるドメインを含み、ジスルフィド結合によって二量体化し、第１および第３のポリペプチドは両方ともＣＨ１ドメインまたはＣＬドメインを含まない。
ａ．第３の二量体化ドメインは、免疫グロブリンの重鎖の第１のヒンジドメインを含み、第４の二量体化ドメインは、重鎖の第２のヒンジドメインを含み、第１および第２の二量体化ドメインは、ジスルフィド結合によって二量体化する；または
ｂ．第３および第４の二量体化ドメインは、各々、免疫グロブリンの重鎖のＣＨ１ドメインおよび免疫グロブリンの軽鎖のＣＬドメインから選択されるドメインを含み、ジスルフィド結合によって二量体化し、第１および第３のポリペプチドは両方ともＣＨ１ドメインまたはＣＬドメインを含まない。
【0033】
いくつかの実施形態によれば、本発明の組成物は、第４のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の断片と第５の二量体化ドメインとを含む第４のポリペプチドをさらに含み、第２のポリペプチドは第６の二量体化ドメインをさらに含み、第５および６の二量体化ドメインは互いに二量体化することができる。
【0034】
いくつかの実施形態によれば、本発明の組成物は、第４のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の断片と第５の二量体化ドメインとを含む第４のポリペプチドをさらに含み、第２のポリペプチドは第６の二量体化ドメインをさらに含み、第５および６の二量体化ドメインは互いに二量体化することができる。
【0035】
いくつかの実施形態によれば、
ａ．第５の二量体化ドメインは、免疫グロブリンの重鎖の第１のヒンジドメインを含み、第６の二量体化ドメインは、重鎖の第２のヒンジドメインを含み、第１および第２の二量体化ドメインは、ジスルフィド結合によって二量体化する；または
ｂ．第５および６の二量体化ドメインは、各々、免疫グロブリンの重鎖のＣＨ１ドメインおよび免疫グロブリンの軽鎖のＣＬドメインから選択されるドメインを含み、ジスルフィド結合によって二量体化し、第１および第３のポリペプチドは両方ともＣＨ１ドメインまたはＣＬドメインを含まない。
ａ．第５の二量体化ドメインは、免疫グロブリンの重鎖の第１のヒンジドメインを含み、第６の二量体化ドメインは、重鎖の第２のヒンジドメインを含み、第１および第２の二量体化ドメインは、ジスルフィド結合によって二量体化する；または
ｂ．第５および６の二量体化ドメインは、各々、免疫グロブリンの重鎖のＣＨ１ドメインおよび免疫グロブリンの軽鎖のＣＬドメインから選択されるドメインを含み、ジスルフィド結合によって二量体化し、第１および第３のポリペプチドは両方ともＣＨ１ドメインまたはＣＬドメインを含まない。
【0036】
いくつかの実施形態によれば、第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドは両方ともＣＨ１ドメインを含まないか、または両方ともＣＬドメインを含む。
【0037】
いくつかの実施形態によれば、第３および第４の二量体化ドメインまたは第５および第６の二量体化ドメインは、第３および第４の二量体化ドメインならびに第５および第６の二量体化ドメインの二量体化を可能にし、第３の二量体化ドメインの第５または第６の二量体化ドメインへの二量体化および第６の二量体化ドメインの第３または第４の二量体化ドメインへの二量体化を阻害する変異を含む。
【0038】
いくつかの実施形態によれば、本発明の組成物は、第１のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の断片と、第２のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の断片とを含む単一のポリペプチド鎖を含む。
【0039】
いくつかの実施形態によれば、本発明の組成物は、第１のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の断片と、第２のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の断片とを含む単一のポリペプチド鎖を含む。
【0040】
いくつかの実施形態によれば、単一のポリペプチド鎖は、第３のアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の断片と、任意選択で第４のアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の断片とをさらに含む。
【0041】
いくつかの実施形態によれば、単一のポリペプチド鎖は、第３のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の断片と、任意選択で第４のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の断片とをさらに含む。
【0042】
いくつかの実施形態によれば、断片はアミノ酸リンカーによって分離されている。
【0043】
いくつかの実施形態によれば、リンカーは可撓性ライナーである。いくつかの実施形態によれば、可撓性リンカーはＧＳリンカーである。いくつかの実施形態によれば、リンカーは剛性リンカーである。
【0044】
いくつかの実施形態によれば、ポリペプチド鎖は、ヒト抗体重鎖のＦｃ領域をさらに含む。
【0045】
いくつかの実施形態によれば、第２のポリペプチド鎖は、第３のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体とヒト抗体重鎖のＦｃ領域とを含む。
【0046】
いくつかの実施形態によれば、第２のポリペプチド鎖は、第４のヒトアセチルコリン受容体サブユニットをさらに含む。
【0047】
いくつかの実施形態によれば、本発明の組成物は、第３のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体を含む第２ポリペプチド鎖をさらに含み、任意選択で、前述の第２ポリペプチド鎖は第４ヒトアセチルコリン受容体サブユニットをさらに含む。
【0048】
いくつかの実施形態によれば、自己抗体は、断片の少なくとも２つにまたがるエピトープに対するものである。
【0049】
いくつかの実施形態によれば、第１、第２、ならびに任意選択で第３および第４のヒトタンパク質の断片は、アセチルコリン受容体（ＡＣｈＲ）アルファ、ＡＣｈＲベータ、ＡＣｈＲガンマ、ＡＣｈＲデルタ、およびＡＣｈＲイプシロンからなる群から選択されるヒト受容体の細胞外ドメインの断片から選択される。
【0050】
いくつかの実施形態によれば、複合体は、配列番号６４～６９から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列またはそれと少なくとも８０％の同一性を含むその誘導体を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも８０％は、少なくとも８５％である。
【0051】
いくつかの実施形態によれば、第１、第２、第３および第４のヒトタンパク質の断片は、異なる配列を含む。
【0052】
いくつかの実施形態によれば、第１、第２、ならびに任意選択で第３および第４のタンパク質は、ヒトにおける単一のタンパク質複合体の一部である。
【0053】
いくつかの実施形態によれば、断片の少なくとも１つは、リガンド結合ドメインに変異を含み、変異は、リガンドへの結合を低下させる。
【0054】
いくつかの実施形態によれば、断片の少なくとも１つは、断片の安定性または溶解性を増加させる変異を含む。
【0055】
いくつかの実施形態によれば、変異は、アセチルコリン受容体サブユニット内のｃｙｓループをＣＤＶＳＧＶＤＴＥＳＧＡＴＮＣ（配列番号４４）で置き換えることを含む。
【0056】
いくつかの実施形態によれば、アセチルコリン受容体サブユニットは、配列番号１３１に提供されるアミノ酸配列を含むアルファサブユニット、配列番号１３２に提供されるアミノ酸配列を含むベータサブユニット、配列番号１３３に提供されるアミノ酸配列を含むガンマサブユニット、配列番号１３４に提供されるアミノ酸配列を含むデルタサブユニット、および配列番号１３５に提供されるアミノ酸配列を含むイプシロンサブユニットから選択される。
【0057】
いくつかの実施形態によれば、その類似体または誘導体は、ヒトタンパク質と少なくとも８０％の同一性を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも８０％は、少なくとも８５％である。
【0058】
いくつかの実施形態によれば、断片は、タンパク質からの少なくとも２０個の連続アミノ酸を含む。
【0059】
いくつかの実施形態によれば、断片は、自己抗体の少なくとも１つのＢ細胞受容体（ＢＣＲ）特異的エピトープ標的を含む。
【0060】
いくつかの実施形態によれば、断片は、断片の凝集を減少させる少なくとも１つの変異を含む。
【0061】
いくつかの実施形態によれば、断片は、
ａ．ＡＣＨＲＡの断片であって、配列番号１を含む野生型ＡＣｈＲａまたは配列番号１３１を含む溶解度が増加したＡＣｈＲａ内のＮ１４１の欠失、Ｆ１００Ｇ、Ｗ１４９Ｒ、Ｖ１５５Ａ、Ｙ９３Ｆ、Ｙ９３Ｈ、Ｙ９３Ｒおよびそれらの組み合わせから選択される変異を含む断片；
ｂ．ＡＣＨＲＧの断片であって、配列番号６を含む野生型ＡＣｈＲａまたは配列番号１３３を含む溶解度が増加したＡＣｈＲａ内のＭ８４Ｓ、Ｙ１０５Ｅ、Ｙ１１７Ｅ、Ｙ１１７Ｒおよびそれらの組み合わせから選択される変異を含む断片；ならびに
ｃ．ＡＣＨＲＤの断片であって、配列番号８を含む野生型ＡＣｈＲａまたは配列番号１３４を含む溶解度が増加したＡＣｈＲａ内のＣ１０８Ａ、Ｃ１０８Ｉ、Ｙ１１９Ｒ、Ｎ１４１の欠失、Ｌ１５１Ｅおよびそれらの組み合わせから選択される変異を含む断片
から選択される。
ａ．ＡＣＨＲＡの断片であって、配列番号１を含む野生型ＡＣｈＲａまたは配列番号１３１を含む溶解度が増加したＡＣｈＲａ内のＮ１４１の欠失、Ｆ１００Ｇ、Ｗ１４９Ｒ、Ｖ１５５Ａ、Ｙ９３Ｆ、Ｙ９３Ｈ、Ｙ９３Ｒおよびそれらの組み合わせから選択される変異を含む断片；
ｂ．ＡＣＨＲＧの断片であって、配列番号６を含む野生型ＡＣｈＲａまたは配列番号１３３を含む溶解度が増加したＡＣｈＲａ内のＭ８４Ｓ、Ｙ１０５Ｅ、Ｙ１１７Ｅ、Ｙ１１７Ｒおよびそれらの組み合わせから選択される変異を含む断片；ならびに
ｃ．ＡＣＨＲＤの断片であって、配列番号８を含む野生型ＡＣｈＲａまたは配列番号１３４を含む溶解度が増加したＡＣｈＲａ内のＣ１０８Ａ、Ｃ１０８Ｉ、Ｙ１１９Ｒ、Ｎ１４１の欠失、Ｌ１５１Ｅおよびそれらの組み合わせから選択される変異を含む断片
から選択される。
【0062】
いくつかの実施形態によれば、第１のポリペプチド鎖および第２のポリペプチド鎖は、配列番号９２および配列番号９３；配列番号９５および配列番号９６；配列番号９７および配列番号９８、配列番号９９および配列番号１００、配列番号９２および配列番号１０２；配列番号１０３および配列番号１００；配列番号１０５および配列番号１３０；配列番号１０５および配列番号１０６；ならびに配列番号１０５および配列番号１０７から選択される。
【0063】
いくつかの実施形態によれば、単一のポリペプチド鎖は、配列番号９４、配列番号１０４、および配列番号１０８～１２９から選択される。
【0064】
いくつかの実施形態によれば、ポリペプチドは、アセチルコリン受容体サブユニット内のｃｙｓループをＣＤＶＳＧＶＤＴＥＳＧＡＴＮＣ（配列番号４４）で置き換えることをさらに含み、サブユニットはＡＣＨＲＡであり、ｃｙｓループはＣＥＩＩＶＴＨＦＰＦＤＥＱＮＣ（配列番号３９）からなり、サブユニットはＡＣＨＲＧであり、ｃｙｓループはＣＳＩＳＶＴＹＦＰＦＤＷＱＮＣ（配列番号４１）からなり、またはサブユニットはＡＣＨＲＤであり、ｃｙｓループはＣＰＩＳＶＴＹＦＰＦＤＷＱＮＣ（配列番号４２）からなる。
【0065】
いくつかの実施形態によれば、ポリペプチドは、アミノ酸リンカーによって第１の断片に連結された第２のアセチルコリン受容体サブユニットの第２の断片をさらに含む。いくつかの実施形態によれば、ポリペプチドは、第３、第４または第５のアセチルコリン受容体サブユニットからの断片をさらに含む。
【0066】
いくつかの実施形態によれば、ポリペプチドは、ヒト抗体重鎖のＦｃ領域をさらに含む。いくつかの実施形態によれば、Ｆｃ領域は、アミノ酸リンカーによって前述の断片から分離されている。
【0067】
いくつかの実施形態によれば、ポリペプチドは、配列番号７２～９１から選択される配列を含む。
【0068】
別の態様によれば、本発明の組成物と、薬学的に許容され得る担体、賦形剤またはアジュバントとを含む医薬組成物が提供される。
【0069】
別の態様によれば、本発明のポリペプチドと、薬学的に許容され得る担体、賦形剤またはアジュバントとを含む医薬組成物が提供される。
【0070】
別の態様によれば、重症筋無力症の処置を必要とする対象において重症筋無力症を処置する方法であって、本発明の組成物または本発明の医薬組成物を対象に投与し、それによって重症筋無力症を処置することを含む、方法が提供される。
【0071】
いくつかの実施形態によれば、本発明の方法は、対象において、少なくとも第１のヒトアセチルコリン受容体サブユニットに対する循環抗体のレベルを投与前に低下させることをさらに含む。
【0072】
いくつかの実施形態によれば、本発明の方法は、対象において、第１のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたは第２のヒトアセチルコリン受容体サブユニットを含むタンパク質複合体内のヒトアセチルコリン受容体サブユニットに対する循環抗体のレベルを低下させることをさらに含む。
【0073】
いくつかの実施形態によれば、処置することは、ヒトアセチルコリン受容体サブユニットに対する循環自己抗体の濃度を減少させるステップを含む。
【0074】
いくつかの実施形態によれば、処置することは、自己抗体を産生するＢ細胞を死滅させるステップを含む。
【0075】
いくつかの実施形態によれば、組成物はＦｃ領域を含み、処置することは、自己抗体を産生するＢ細胞を死滅させることを含む。
【0076】
いくつかの実施形態によれば、Ｂ細胞は、組成物またはポリペプチドの断片に対する自己抗体を産生する自己反応性Ｂ細胞である。
【0077】
別の態様によれば、核酸分子を含む核酸系であって、第１の核酸分子が本発明の組成物の第１のポリペプチド鎖をコードし、第２の核酸分子が本発明の組成物の第２のポリペプチド鎖をコードする、核酸系が提供される。
【0078】
別の態様によれば、本発明のポリペプチドをコードする核酸分子を含む核酸系が提供される。
【0079】
いくつかの実施形態によれば、本発明の核酸系は、本発明の組成物の第３のポリペプチド鎖をコードする第３の核酸分子、本発明の組成物の第４のポリペプチド鎖をコードする第４の核酸分子、またはその両方をさらに含む。
【0080】
別の態様によれば、第１のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の断片と、第２のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の断片とを含む本発明の組成物の単一のポリペプチド鎖をコードする核酸分子が提供される。
【0081】
別の態様によれば、本発明の組成物を製造する方法であって、本発明の核酸系または本発明の核酸分子を細胞内で発現させるステップを含み、核酸系は、細胞内でコードされたポリペプチドを生成するように構成されており、それによって本発明の組成物を製造する、方法が提供される。
【0082】
別の態様によれば、本発明のポリペプチドを生成する方法であって、本発明の核酸系を細胞内で発現させるステップを含み、核酸系は、細胞内でコードされたポリペプチドを生成するように構成されており、それによって本発明の組成物を製造する、方法が提供される。
【0083】
別の態様によれば、タンパク質を生成する方法であって、該方法は、
第１のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の細胞外ドメインの第１の断片と、第２のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の細胞外ドメインの第２の断片とを得るステップであって、第１および第２のヒトアセチルコリン受容体サブユニットは異なるタンパク質であり、第１の断片を第２の断片に連結して単一のポリペプチド鎖を生成する、ステップ；または
単一のポリペプチド鎖をコードする核酸配列を含む１つ以上のベクターを含む宿主細胞を培養するステップであって、該単一のポリペプチド鎖は、
ｉ．第１のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の細胞外ドメインの第１の断片と、第２のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の細胞外ドメインの第２の断片とを得るステップであって、第１および第２のヒトアセチルコリン受容体サブユニットは異なるサブユニットである、ステップ；
および
ｉｉ．第１の断片を第２の断片に連結して単一のポリペプチド鎖を生成するステップ
によって生成される、ステップ
を含み、
それによってタンパク質を生成する、方法が提供される。
第１のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の細胞外ドメインの第１の断片と、第２のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の細胞外ドメインの第２の断片とを得るステップであって、第１および第２のヒトアセチルコリン受容体サブユニットは異なるタンパク質であり、第１の断片を第２の断片に連結して単一のポリペプチド鎖を生成する、ステップ；または
単一のポリペプチド鎖をコードする核酸配列を含む１つ以上のベクターを含む宿主細胞を培養するステップであって、該単一のポリペプチド鎖は、
ｉ．第１のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の細胞外ドメインの第１の断片と、第２のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の細胞外ドメインの第２の断片とを得るステップであって、第１および第２のヒトアセチルコリン受容体サブユニットは異なるサブユニットである、ステップ；
および
ｉｉ．第１の断片を第２の断片に連結して単一のポリペプチド鎖を生成するステップ
によって生成される、ステップ
を含み、
それによってタンパク質を生成する、方法が提供される。
【0084】
別の態様によれば、タンパク質複合体を生成する方法であって、該方法は、
第１のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の細胞外ドメインの第１の断片と、第２のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の細胞外ドメインの第２の断片とを得るステップであって、第１および第２のヒトアセチルコリン受容体サブユニットは異なるタンパク質であり、第１の断片を第１の二量体化ドメインに連結して第１のポリペプチド鎖を生成し、第２の断片を第２の二量体化ドメインに連結して第２のポリペプチド鎖を生成し、第１および第２の二量体化ドメインは互いに二量体化することができ、二量体化を誘導するのに十分な条件下で第１のポリペプチドと第２のポリペプチドとを接触させる、ステップ；または
少なくとも２本のポリペプチド鎖をコードする核酸配列を含む１つ以上のベクターを含む宿主細胞を培養するステップであって、該２本のポリペプチド鎖は、
ｉ．第１のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の細胞外ドメインの第１の断片と、第２のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の細胞外ドメインの第２の断片とを得るステップであって、第１および第２のヒトアセチルコリン受容体サブユニットは異なるサブユニットである、ステップ；および
ｉｉ．第１の断片を第１の二量体化ドメインに連結して第１のポリペプチド鎖を生成し、第２の断片を第２の二量体化ドメインに連結して第２のポリペプチド鎖を生成するステップであって、第１および第２の二量体化ドメインは互いに二量体化することができる、ステップ
によって生成される、ステップ
を含み、
それによってタンパク質複合体を生成する、方法が提供される。
第１のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の細胞外ドメインの第１の断片と、第２のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の細胞外ドメインの第２の断片とを得るステップであって、第１および第２のヒトアセチルコリン受容体サブユニットは異なるタンパク質であり、第１の断片を第１の二量体化ドメインに連結して第１のポリペプチド鎖を生成し、第２の断片を第２の二量体化ドメインに連結して第２のポリペプチド鎖を生成し、第１および第２の二量体化ドメインは互いに二量体化することができ、二量体化を誘導するのに十分な条件下で第１のポリペプチドと第２のポリペプチドとを接触させる、ステップ；または
少なくとも２本のポリペプチド鎖をコードする核酸配列を含む１つ以上のベクターを含む宿主細胞を培養するステップであって、該２本のポリペプチド鎖は、
ｉ．第１のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の細胞外ドメインの第１の断片と、第２のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の細胞外ドメインの第２の断片とを得るステップであって、第１および第２のヒトアセチルコリン受容体サブユニットは異なるサブユニットである、ステップ；および
ｉｉ．第１の断片を第１の二量体化ドメインに連結して第１のポリペプチド鎖を生成し、第２の断片を第２の二量体化ドメインに連結して第２のポリペプチド鎖を生成するステップであって、第１および第２の二量体化ドメインは互いに二量体化することができる、ステップ
によって生成される、ステップ
を含み、
それによってタンパク質複合体を生成する、方法が提供される。
【0085】
いくつかの実施形態によれば、タンパク質は、本発明の組成物の単一のポリペプチド鎖である。
【0086】
いくつかの実施形態によれば、タンパク質複合体は、本発明の組成物のタンパク質複合体である。
【0087】
いくつかの実施形態によれば、本方法は、
ａ．第３の二量体化ドメインを、第１のポリペプチド鎖内の第１の二量体化ドメインまたは第１の断片に連結するステップ；第３のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の細胞外ドメインの第３の断片を得て、第３の断片を第４の二量体化ドメインに連結して第３のポリペプチド鎖を生成するステップであって、第３の二量体化ドメインと第４の二量体化ドメインとは互いに二量体化することができる、ステップ；第１、第２、および第３のポリペプチドを、二量体化を誘導するのに十分な条件下で接触させるステップ；または
ｂ．宿主細胞において、
ｉ．第３のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の細胞外ドメインの第３の断片を得るステップ；および
ｉｉ．第３の断片を第４の二量体化ドメインに連結して第３のポリペプチド鎖を生成するステップ；
によって生成される第３のポリペプチド鎖をコードする核酸配列を発現させるステップであって、
第１のポリペプチド鎖が第３の二量体化ドメインをさらに含み、第３の二量体化ドメインと第４の二量体化ドメインとが互いに二量体化することができる、ステップ
をさらに含む。
ａ．第３の二量体化ドメインを、第１のポリペプチド鎖内の第１の二量体化ドメインまたは第１の断片に連結するステップ；第３のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の細胞外ドメインの第３の断片を得て、第３の断片を第４の二量体化ドメインに連結して第３のポリペプチド鎖を生成するステップであって、第３の二量体化ドメインと第４の二量体化ドメインとは互いに二量体化することができる、ステップ；第１、第２、および第３のポリペプチドを、二量体化を誘導するのに十分な条件下で接触させるステップ；または
ｂ．宿主細胞において、
ｉ．第３のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の細胞外ドメインの第３の断片を得るステップ；および
ｉｉ．第３の断片を第４の二量体化ドメインに連結して第３のポリペプチド鎖を生成するステップ；
によって生成される第３のポリペプチド鎖をコードする核酸配列を発現させるステップであって、
第１のポリペプチド鎖が第３の二量体化ドメインをさらに含み、第３の二量体化ドメインと第４の二量体化ドメインとが互いに二量体化することができる、ステップ
をさらに含む。
【0088】
いくつかの実施形態によれば、本方法は、
ａ．第６の二量体化ドメインを、第２のポリペプチド鎖内の第２の二量体化ドメインまたは第２の断片に連結するステップ；第４のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の細胞外ドメインの第４の断片を得て、第４の断片を第５の二量体化ドメインに連結して第４のポリペプチド鎖を生成するステップであって、第５の二量体化ドメインと第６の二量体化ドメインとは互いに二量体化することができる、ステップ；第１、第２、第３および第４のポリペプチドを、二量体化を誘導するのに十分な条件下で接触させるステップ；または
ｂ．宿主細胞において、
ｉ．第４のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の細胞外ドメインの第４の断片を得るステップ；および
ｉｉ．第４の断片を第５の二量体化ドメインに連結して第４のポリペプチド鎖を生成するステップ；
によって生成される第４のポリペプチド鎖をコードする核酸配列を発現させるステップであって、
第２のポリペプチド鎖が第６の二量体化ドメインをさらに含み、第５の二量体化ドメインと第６の二量体化ドメインとが互いに二量体化することができる、ステップ
をさらに含む。
ａ．第６の二量体化ドメインを、第２のポリペプチド鎖内の第２の二量体化ドメインまたは第２の断片に連結するステップ；第４のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の細胞外ドメインの第４の断片を得て、第４の断片を第５の二量体化ドメインに連結して第４のポリペプチド鎖を生成するステップであって、第５の二量体化ドメインと第６の二量体化ドメインとは互いに二量体化することができる、ステップ；第１、第２、第３および第４のポリペプチドを、二量体化を誘導するのに十分な条件下で接触させるステップ；または
ｂ．宿主細胞において、
ｉ．第４のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の細胞外ドメインの第４の断片を得るステップ；および
ｉｉ．第４の断片を第５の二量体化ドメインに連結して第４のポリペプチド鎖を生成するステップ；
によって生成される第４のポリペプチド鎖をコードする核酸配列を発現させるステップであって、
第２のポリペプチド鎖が第６の二量体化ドメインをさらに含み、第５の二量体化ドメインと第６の二量体化ドメインとが互いに二量体化することができる、ステップ
をさらに含む。
【0089】
別の態様によれば、ポリペプチドを生成する方法であって、該方法は、
ａ．第１のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の細胞外ドメインの第１の断片を得るステップ；および
ｂ．変異した第１の断片を生成するために、第１の断片の凝集を減少させる少なくとも１つの変異を第１の断片において生成するステップ
を含み、
それによってポリペプチドを生成する、方法が提供される。
ａ．第１のヒトアセチルコリン受容体サブユニットまたはその類似体もしくは誘導体の細胞外ドメインの第１の断片を得るステップ；および
ｂ．変異した第１の断片を生成するために、第１の断片の凝集を減少させる少なくとも１つの変異を第１の断片において生成するステップ
を含み、
それによってポリペプチドを生成する、方法が提供される。
【0090】
いくつかの実施形態によれば、本方法は、変異した第１の断片の減少した凝集を確認することをさらに含む。
【0091】
いくつかの実施形態によれば、本方法は、少なくとも１つの変異が、第１の断片に対する自己抗体への第１の断片の結合を実質的に減少させないことを確認することをさらに含む。
【0092】
いくつかの実施形態によれば、本方法は、変異した第１の断片をヒト抗体重鎖のＦｃ領域に、第２のヒトアセチルコリン受容体サブユニットもしくはその類似体もしくは誘導体の細胞外ドメインの第２の断片に、またはその両方に連結することをさらに含む。いくつかの実施形態によれば、第２の断片は、第２の断片の凝集を減少させる少なくとも１つの変異を含む。
【0093】
いくつかの実施形態によれば、その類似体または誘導体は、ヒトタンパク質と少なくとも８０％の同一性を含む。
【0094】
別の態様によれば、本発明の方法によって生成されるタンパク質複合体またはタンパク質が提供される。
【0095】
別の態様によれば、本発明の方法によって処置されることを必要とする対象の適性を決定する方法であって、該方法は、対象から試料を受け取るステップと、試料を本発明の組成物と接触させるステップと、試料内のＡＣｈＲに対する自己抗体の組成物への結合を決定するステップとを含み、ＡＣｈＲに対する自己抗体の組成物への結合が、対象が本発明の方法によって処置されるのに適していることを示し、それによって、処置される対象の適性を決定する、方法が提供される。
【0096】
別の態様によれば、本発明の方法によって処置されることを必要とする対象の適性を決定する方法であって、該方法は、対象から試料を受け取るステップと、試料を本発明のポリペプチドと接触させるステップと、試料内のＡＣｈＲに対する自己抗体のポリペプチドへの結合を決定するステップとを含み、ＡＣｈＲに対する自己抗体のポリペプチドへの結合が、対象が本発明の方法によって処置されるのに適していることを示し、それによって、処置される対象の適性を決定する、方法が提供される。
【0097】
いくつかの実施形態によれば、試料中のＡＣｈＲに対する自己抗体の本発明の組成物または本発明のポリペプチドへの少なくとも２０％の結合は、対象が本発明の方法によって処置されるのに適していることを示す。
【0098】
本発明の更なる実施形態および適用可能性の全範囲は、以下に与えられる詳細な説明から明らかになるであろう。しかしながら、詳細な説明および特定の例は、本発明の好ましい実施形態を示しているが、本発明の精神および範囲内の様々な変更および修正がこの詳細な説明から当業者に明らかになるため、単なる例示として与えられていることを理解されたい。
【図面の簡単な説明】
【0099】
【図1A】抗ＡＣｈＲ血清学的ＥＬＩＳＡアッセイで測定された、アルファ１ ＥＣＤによる血清枯渇を伴う場合と伴わない場合の％枯渇の結果の棒グラフである。グラフは、３３５人のランダムに選択されたＭＧ患者の結果を示し、ｙ軸は、％枯渇（［１００％－｛抗ＡＣｈＲ濃度（以前のアルファ－ＥＣＤ枯渇あり）／抗ＡＣｈＲ濃度（未処置）｝］として定義される）を示し、ｘ軸は、異なる患者試料を表す。
【図1B】例示的な高度に枯渇した試料における用量依存的枯渇を示す線グラフである。
【図1C】例示的な中程度に枯渇した試料における用量依存的枯渇を示す線グラフである。
【図1D】例示的な枯渇していない試料における用量依存的枯渇を示す線グラフである。ｙ軸は、試料中の遊離抗ＡＣｈＲ抗体の濃度（ｎＭ）を表し、ｘ軸は、試料を枯渇させるために使用されるアルファ－ＥＣＤの濃度（ｎＭ）を示す。
【図1E】１Ａで使用した血清試料中の総抗体濃度の棒グラフである。灰色の線は、疾患の臨床的カットオフを示す。
【図1F】枯渇アッセイを使用することによって試料中に存在するＡＣｈＲ断片特異的抗体のパーセンテージを決定する方法の図である。
【図1G】％アルファ結合と抗ＡＣｈＲ力価との間の相関を示すドットプロットである。
【図2A】４１人のＭＧ患者の各血清試料について、各ＡＣｈＲサブユニット（ε／δ／γ／β／α）に対して検出された相対的抗ＡＣｈＲ抗体のパーセンテージを示す等高線プロットである。
【図2B】無作為に試験した８０人のＭＧ患者の血清試料中の様々なサブユニットまたはサブユニットの組み合わせについてのブロッキング率の棒グラフである。平均％枯渇に加えて、グラフはまた、各サブユニットまたはそれらの組み合わせにおいて少なくとも５０％または少なくとも７５％の枯渇を有するであろう患者のパーセントを示す。
【図3A】本発明の４本鎖治療剤の可能な実施形態の図であり、ＡＣｈＲ陽性ＭＧを処置するための分子の一般的な実施形態を示す。
【図3B】本発明の４本鎖治療剤の可能な実施形態の図であり、４本の鎖が各々異なるタンパク質断片を含む実施形態を示す。
【図3C】本発明の４本鎖治療剤の可能な実施形態の図であり、４つのタンパク質断片がすべて同じである実施形態を示す。
【図3D】本発明の４本鎖治療剤の可能な実施形態の図であり、２本の重鎖が同一であり、２本の軽鎖が同一である実施形態を示す。
【図3E】本発明の４本鎖治療剤の可能な実施形態の図であり、２本の重鎖が異なり、２本の軽鎖が同一である実施形態を示す。
【図3F】本発明の４本鎖治療剤の可能な実施形態の図であり、２本の重鎖が同じタンパク質断片を含み、２本の軽鎖が異なるタンパク質断片を含む実施形態を示す。
【図3G】抗ＡＣｈＲ抗体を接種し、次いで様々な用量の本発明の分子で処置したラットにおける臨床スコアの折れ線グラフである。
【図3H】抗ＡＣｈＲ抗体を接種し、次いで様々な用量の本発明の分子で処置したラットのカプランマイヤー生存曲線である。
【図3I】抗ＡＣｈＲ抗体を接種し、次いで本発明の分子または２つの非特異的（ＮＳ）Ｆｃで処置したラットにおける臨床スコアの折れ線グラフである。
【図3J】抗ＡＣｈＲ抗体を接種し、次いで本発明の分子またはＮＳ－Ｆｃで処置したラットのカプランマイヤー生存曲線である。
【図4A】本発明の２本鎖治療剤の可能な実施形態の図であり、ＡＣｈＲ陽性ＭＧを処置するための２本の重鎖を有する分子の一般的な実施形態を示す。
【図4B】本発明の２本鎖治療剤の可能な実施形態の図であり、ＣＨ１、ＣＨ２またはＣＨ３ドメインの少なくとも１つが除外されている実施形態を示す。
【図4C】本発明の２本鎖治療剤の可能な実施形態の図であり、２つのタンパク質断片が同じである実施形態を示す。
【図4D】本発明の２本鎖治療剤の可能な実施形態の図であり、２つのタンパク質断片が異なる実施形態を示す。
【図4E】本発明の２本鎖治療剤の可能な実施形態の図であり、２つのタンデム断片が各重鎖に含まれる一般的な実施形態を示す。
【図4F】本発明の２本鎖治療剤の可能な実施形態の図であり、すべてのサブユニットが同じであるタンデム断片構成を示す。
【図4G】本発明の２本鎖治療剤の可能な実施形態の図であり、各重鎖が同じ２つの異なる断片を含むタンデム断片構成を示す。
【図4H】本発明の２本鎖治療剤の可能な実施形態の図であり、２本の鎖が同じではない異なる断片を含むタンデム断片構成を示す。
【図4I】本発明の２本鎖治療剤の可能な実施形態の図であり、一方の重鎖には２つのタンデム断片が含まれ、他方の重鎖には１つの断片のみが含まれる一般的な実施形態を示す。
【図4J】本発明の２本鎖治療剤の可能な実施形態の図であり、一方の重鎖には２つのタンデム断片が含まれ、他方の重鎖には断片を欠いている一般的な実施形態を示す。
【図4K】本発明の２本鎖治療剤の可能な実施形態の図であり、３つのサブユニットが同じであるタンデム構成を示す。
【図4L】本発明の２本鎖治療剤の可能な実施形態の図であり、３つのサブユニットのうちの２つが同じであるタンデム構成を示す。
【図4M】本発明の２本鎖治療剤の可能な実施形態の図であり、３つすべてのサブユニットが異なるタンデム構成を示す。
【図4N】本発明の２本鎖治療剤の可能な実施形態の図であり、各重鎖に３つタンデム断片が含まれる一般的な実施形態を示す。
【図4O】本発明の２本鎖治療剤の可能な実施形態の図であり、６つすべてのサブユニットが同じであるタンデム構成を示す。
【図4P】本発明の２本鎖治療剤の可能な実施形態の図であり、鎖上の３つすべてのサブユニットが異なり、２本の鎖が同じであるタンデム構成を示す。
【図4Q】本発明の２本鎖治療剤の可能な実施形態の図であり、鎖上の３つすべてのサブユニットが異なり、２本の鎖が異なるタンデム構成を示す。
【図4R】本発明の２本鎖治療剤の可能な実施形態の図であり、一方の重鎖に３つのタンデム断片が含まれ、他方の重鎖に２、１または０個の断片が含まれる一般的な実施形態を示す。
【図4S】本発明の２本鎖治療剤の可能な実施形態の図であり、１本の重鎖および１本の軽鎖を有する分子の一般的な実施形態を示す。
【図5A】本発明の３本鎖治療剤の可能な実施形態の図であり、２本の重鎖および１本の軽鎖を有する分子の一般的な実施形態を示す。
【図5B】本発明の３本鎖治療剤の可能な実施形態の図であり、３つのタンパク質断片が同じである実施形態を示す。
【図5C】本発明の３本鎖治療剤の可能な実施形態の図であり、タンパク質断片の各々が異なる実施形態を示す。
【図5D】本発明の３本鎖治療剤の可能な実施形態の図であり、２つのタンパク質断片が同じであり、３つ目が異なる実施形態を示す。
【図6】図３に示すものと同様であるが、４本の鎖が各々、異なるタンパク質断片と、４本鎖分子の形成を促進する異なる免疫グロブリン足場とを含む、本発明のＡＣｈＲ陽性ＭＧを処置するための４本鎖治療剤の実施形態の図である。
【図7A】本発明の４鎖治療剤の一般的な実施形態の図であり、２本の鎖が２つの二量体化ドメインを含み、２本の鎖が単一の二量体化ドメインを含む、４本鎖の一般的な実施形態を示す。
【図7B】本発明の４鎖治療剤の一般的な実施形態の図であり、様々なドメインと断片とを分離する任意選択のリンカーを用いた実施形態を示す。
【図8A】本発明の１本鎖治療剤の図であり、２つの異なるＡＣｈＲサブユニットからの断片を含む１本鎖分子の実施形態を示す。
【図8B】本発明の１本鎖治療剤の図であり、３つの異なるＡＣｈＲサブユニットからの断片を含む１本鎖分子の実施形態を示す。
【図8C】本発明の１本鎖治療剤の図であり、４つの異なるＡＣｈＲサブユニットからの断片を含む１本鎖分子の実施形態を示す。
【図8D】本発明の１本鎖治療剤の図であり、２つの異なるＡＣｈＲサブユニットからの断片と重鎖定常領域とを含む１本鎖分子の実施形態を示す。
【図8E】本発明の１本鎖治療剤の図であり、様々なドメインを分離するアミノ酸（ＡＡ）リンカーを有する８Ａ～Ｄの１本鎖分子を示す。
【図9】本発明の様々な分子と接触させたＭＧ血清からのＡＣｈＲ特異的自己抗体の平均枯渇パーセントの棒グラフである。無関係の細胞外ドメイン構築物（ＣＲＤ－２３９およびＣＲＤ－２４１）を陰性対照として使用した。各分子を少なくとも１７個の異なる患者血清試料と接触させた。
【図10A】分子対：ＣＲＤ－１０１およびＣＲＤ－２６９によって生成された枯渇率を比較するドットプロットである。
【図10B】分子対：ＣＲＤ－１０１およびＣＲＤ－６４２によって生成された枯渇率を比較するドットプロットである。
【図10C】分子対：ＣＲＤ－１０４およびＣＲＤ－３９１によって生成された枯渇率を比較するドットプロットである。
【図10D】分子対：ＣＲＤ－１０３およびＣＲＤ－３８２によって生成された枯渇率を比較するドットプロットである。
【図11】ハイブリドーマ細胞へのＥＣＤテトラマーの結合を示す蛍光増加の棒グラフである。任意のハイブリドーマのＥＣＤテトラマー結合ＭＦＩを陰性対照バックグラウンドＭＦＩで割ることによって、バックグラウンド値からのＭＦＩ倍率変化を計算した。ハイブリドーマ２０４－４を陰性対照として使用し、テトラマーＣＲＤ－２３３およびＣＲＤ－２４２も陰性対照として使用した。
【図12】陰性対照Ｂ細胞ハイブリドーマ株へのＥＣＤテトラマーの結合のヒストグラムである。
【図13A】様々なＢ細胞ハイブリドーマ細胞株へのアルファ－ガンマ組み合わせ分子テトラマーの結合、すなわち、抗アルファハイブリドーマおよび抗ガンマハイブリドーマへのＣＲＤ－５０６の結合の棒グラフである。
【図13B】様々なＢ細胞ハイブリドーマ細胞株へのアルファ－ガンマ組み合わせ分子テトラマーの結合、すなわち、抗アルファハイブリドーマへのＣＲＤ－５０９およびＣＲＤ－６００の結合の棒グラフである。
【図13C】様々なＢ細胞ハイブリドーマ細胞株へのアルファ－ガンマ組み合わせ分子テトラマーの結合、すなわち抗ガンマハイブリドーマおよび陰性対照ハイブリドーマへのＣＲＤ－５０９およびＣＲＤ－６００の結合の棒グラフである。
【図14】様々なアルファサブユニット含有分子の抗アルファハイブリドーマへの結合の棒グラフである。
【図15A】様々なハイブリドーマへのアルファ－ガンマ分子の結合の棒グラフである。
【図15B】様々なハイブリドーマへのガンマ－デルタ分子の結合の棒グラフである。
【図15C】様々なハイブリドーマへのＩｇＧ４ Ｆｃを有するアルファ－ガンマガンマ分子の結合の棒グラフである。
【発明を実施するための形態】
【0100】
本発明は、いくつかの実施形態では、重症筋無力症自己抗体の第１のヒト受容体標的またはその類似体もしくは誘導体の断片と、重症筋無力症自己抗体の第２のヒトタンパク質受容体またはその類似体もしくは誘導体の断片とを含む組成物を提供する。少なくとも２本のポリペプチド鎖を含むタンパク質複合体であって、第１の鎖が、重症筋無力症自己抗体の第１のヒトタンパク質標的またはその類似体もしくは誘導体の断片と、第１の二量体化ドメインとを含み、第２の鎖が、重症筋無力症自己抗体の第２のヒトタンパク質標的またはその類似体もしくは誘導体の断片と、第１の二量体化ドメインと二量体化することができる第２の二量体化ドメインとを含む、タンパク質複合体も提供される。本発明はさらに、組成物および／またはタンパク質複合体を含む医薬組成物、組成物のポリペプチドをコードする核酸および／またはタンパク質複合体、ならびに組成物および／またはタンパク質複合体を使用した処置および処置に対する適性を決定する方法；ならびに組成物および／またはタンパク質複合体を生成する方法に関する。
【0101】
第１の態様により、重症筋無力症自己抗体の第１のタンパク質標的またはその類似体もしくは誘導体を含むタンパク質が提供される。
【0102】
別の態様では、重症筋無力症自己抗体の第１のタンパク質標的またはその類似体もしくは誘導体の断片と、重症筋無力症自己抗体の第２のタンパク質標的またはその類似体もしくは誘導体の断片とを含む組成物が提供される。
【0103】
別の態様では、重症筋無力症自己抗体の第１のタンパク質標的またはその類似体もしくは誘導体の断片と、重症筋無力症自己抗体の第２のタンパク質標的またはその類似体もしくは誘導体の断片とを含むタンパク質が提供される。
【0104】
別の態様では、少なくとも２本のポリペプチド鎖を含むタンパク質複合体であって、第１のポリペプチド鎖が、重症筋無力症自己抗体の第１のタンパク質標的またはその類似体もしくは誘導体の断片と、第１の二量体化ドメインとを含み、第２のポリペプチド鎖が、重症筋無力症自己抗体の第２のタンパク質標的またはその類似体もしくは誘導体の断片と、第２の二量体化ドメインとを含む、タンパク質複合体が提供される。
【0105】
いくつかの実施形態では、タンパク質は、重症筋無力症の処置に使用するためのものである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、重症筋無力症の処置に使用するためのものである。いくつかの実施形態では、ポリペプチド鎖は、重症筋無力症の処置に使用するためのものである。いくつかの実施形態では、タンパク質複合体は、重症筋無力症の処置に使用するためのものである。いくつかの実施形態では、組成物は、重症筋無力症の処置に使用するためのものである。いくつかの実施形態では、タンパク質は治療剤である。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは治療剤である。いくつかの実施形態では、ポリペプチド鎖は治療剤である。いくつかの実施形態では、タンパク質複合体は治療剤である。
【0106】
いくつかの実施形態では、組成物は、少なくとも２本のポリペプチド鎖を含むタンパク質複合体を含み、第１のポリペプチド鎖が、重症筋無力症自己抗体の第１のタンパク質標的またはその類似体もしくは誘導体の断片と、第１の二量体化ドメインとを含み、第２のポリペプチド鎖が、重症筋無力症自己抗体の第２のタンパク質標的またはその類似体もしくは誘導体の断片と、第２の二量体化ドメインとを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、本発明のタンパク質複合体を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、本発明のタンパク質を含む。いくつかの実施形態では、タンパク質は組換えタンパク質である。いくつかの実施形態では、タンパク質は融合タンパク質である。
【0107】
本明細書で使用される場合、「ペプチド」、「ポリペプチド」および「タンパク質」という用語は、アミノ酸残基のポリマーを指すために交換可能に使用される。別の実施形態では、本明細書で使用される「ペプチド」、「ポリペプチド」および「タンパク質」という用語は、天然ペプチド、ペプチド模倣物（典型的には非ペプチド結合または他の合成修飾を含む）ならびにペプチド類似体であるペプトイドおよびセミペプトイドまたはそれらの任意の組み合わせを包含する。別の実施形態では、記載されるペプチド、ポリペプチドおよびタンパク質は、体内にある間にそれらをより安定にするか、または細胞内に浸透することができる修飾を有する。一実施形態では、「ペプチド」、「ポリペプチド」および「タンパク質」という用語は、天然に存在するアミノ酸ポリマーに適用される。別の実施形態では、「ペプチド」、「ポリペプチド」および「タンパク質」という用語は、１つ以上のアミノ酸残基が対応する天然に存在するアミノ酸の人工化学類似体であるアミノ酸ポリマーに適用される。
【0108】
いくつかの実施形態では、タンパク質複合体は免疫グロブリン（Ｉｇ）様複合体である。いくつかの実施形態では、タンパク質複合体はＩｇ様足場を含む。いくつかの実施形態では、タンパク質複合体はＩｇ様骨格を含む。いくつかの実施形態では、タンパク質複合体はＩｇ Ｆｃ融合複合体である。いくつかの実施形態では、組成物は抗体可変ドメインを欠いている。いくつかの実施形態では、タンパク質複合体は抗体可変ドメインを欠いている。いくつかの実施形態では、組成物は可変ドメインを欠いている。いくつかの実施形態では、タンパク質複合体は可変ドメインを欠いている。いくつかの実施形態では、第１の鎖は可変ドメインを欠いている。いくつかの実施形態では、第２の鎖は可変ドメインを欠いている。いくつかの実施形態では、タンパク質複合体は多重鎖複合体である。いくつかの実施形態では、組成物は治療用組成物である。いくつかの実施形態では、タンパク質複合体は治療用複合体である。いくつかの実施形態では、組成物は、治療方法に使用するためのものである。いくつかの実施形態では、タンパク質複合体は、治療方法に使用するためのものである。いくつかの実施形態では、組成物は、医薬品の製造に使用するためのものである。いくつかの実施形態では、タンパク質複合体は、医薬品の製造に使用するためのものである。いくつかの実施形態では、組成物は、重症筋無力症の処置に使用するためのものである。いくつかの実施形態では、タンパク質複合体は、重症筋無力症の処置に使用するためのものである。いくつかの実施形態では、タンパク質複合体は、重症筋無力症の診断に使用するためのものである。いくつかの実施形態では、タンパク質複合体は、重症筋無力症における適切な処置の決定に使用するためのものである。いくつかの実施形態では、タンパク質複合体は、重症筋無力症における血清学的応答の特徴付けに使用するためのものである。いくつかの実施形態では、タンパク質複合体は、重症筋無力症におけるＡＣｈＲ抗体価の決定に使用するためのものである。
【0109】
本明細書で使用される場合、「ポリペプチド鎖」という用語は、アミノ末端（Ｎ末端）からカルボキシル末端（Ｃ末端）までペプチド結合によって連結されたアミノ酸のポリマーを指す。いくつかの実施形態では、ポリペプチド鎖は組換えポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ポリペプチド鎖は、少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０または５００個のアミノ酸を含む。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。いくつかの実施形態では、ポリペプチド鎖は、多くとも３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、１０００、１２５０、１５００、１７５０、２０００、２２５０、２５００、２７５０、３０００、３２５０、３５００、３７５０、４０００、４２５０、４５００、４７５０、または５０００個のアミノ酸を含む。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。
【0110】
本明細書で使用される場合、「組換えポリペプチド」という用語は、組換えＤＮＡによってコードされ、したがって天然には存在しないタンパク質を指す。いくつかの実施形態では、タンパク質複合体は天然に存在しない。いくつかの実施形態では、ポリペプチド鎖は天然に存在しない。いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは合成ポリペプチドである。「組換えＤＮＡ」という用語は、実験室方法によって形成されたＤＮＡ分子を指す。一般に、この組換えＤＮＡは、細胞内で組換えタンパク質を発現するために使用されるベクター、プラスミドまたはウイルスの形態である。細胞発現による組換えタンパク質の生成は当該技術分野で周知であり、組換えタンパク質発現の任意の方法を使用して本発明のポリペプチドを生成することができる。組換えタンパク質生成のための無細胞発現系も用いられ得る。
【0111】
本明細書で使用される「発現」という用語は、遺伝子産物の生合成を指し、前述の遺伝子産物の転写および／または翻訳が含まれる。したがって、核酸分子の発現は、核酸断片の転写（例えば、ｍＲＮＡまたは他の機能的ＲＮＡをもたらす転写）および／またはＲＮＡの前駆体または成熟タンパク質（ポリペプチド）への翻訳を指し得る。いくつかの実施形態では、本発明の核酸分子を細胞内で発現させて、本発明のポリペプチドを生成する。いくつかの実施形態では、本発明の核酸複合体を細胞内で発現させて、本発明のタンパク質複合体を生成する。いくつかの実施形態では、ＲＮＡはベクターである。
【0112】
細胞内でのＤＮＡ配列またはＲＮＡの発現は、当業者に周知である。それは、多くの方法の中でも、トランスフェクション、ウイルス感染、または細胞のゲノムの直接変化によって行うことができる。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、プラスミドまたはウイルスベクターなどの発現ベクター中にある。いくつかの実施形態では、コザック配列は、転写開始コドンの上流に挿入される。いくつかの実施形態では、コザック配列は、タンパク質発現の量を増強する。
【0113】
いくつかの実施形態では、タンパク質複合体は、少なくとも２本のポリペプチド鎖を含む。いくつかの実施形態では、タンパク質複合体は、少なくとも３本のポリペプチド鎖を含む。いくつかの実施形態では、タンパク質複合体は、少なくとも４本のポリペプチド鎖を含む。いくつかの実施形態では、タンパク質複合体は、２本のポリペプチド鎖を含むか、または２本のポリペプチド鎖からなる。いくつかの実施形態では、タンパク質複合体は、３本のポリペプチド鎖を含むか、または３本のポリペプチド鎖からなる。いくつかの実施形態では、タンパク質複合体は、４本の鎖を含むか、または４本の鎖からなる。いくつかの実施形態では、ポリペプチド鎖は同じである。いくつかの実施形態では、ポリペプチド鎖は異なる。いくつかの実施形態では、ポリペプチド鎖の少なくとも２つは同じである。いくつかの実施形態では、ポリペプチド鎖の少なくとも２つは異なる。
【0114】
様々なサブユニットのＥＣＤが相互作用して完全な受容体を形成し、したがって二量体化ドメインがなくてもタンパク質複合体を形成できることが当業者によって理解されるであろう。いくつかの実施形態では、タンパク質複合体は、少なくとも２つのタンパク質を含む。いくつかの実施形態では、タンパク質複合体は、少なくとも３つのタンパク質を含む。いくつかの実施形態では、タンパク質複合体は、少なくとも４つのタンパク質を含む。
【0115】
タンパク質
いくつかの実施形態では、タンパク質は哺乳動物タンパク質である。いくつかの実施形態では、哺乳動物はヒトである。いくつかの実施形態では、タンパク質は膜貫通タンパク質である。いくつかの実施形態では、タンパク質は細胞表面タンパク質である。いくつかの実施形態では、タンパク質は受容体である。いくつかの実施形態では、タンパク質は受容体内のサブユニットである。いくつかの実施形態では、タンパク質は細胞表面タンパク質である。いくつかの実施形態では、細胞表面タンパク質は内在性膜タンパク質である。いくつかの実施形態では、細胞表面タンパク質は原形質膜包埋タンパク質である。いくつかの実施形態では、細胞表面タンパク質は膜固定タンパク質である。いくつかの実施形態では、タンパク質は重症筋無力症関連タンパク質である。いくつかの実施形態では、タンパク質は合成タンパク質である。いくつかの実施形態では、タンパク質は、天然に存在するタンパク質である。いくつかの実施形態では、タンパク質は、重症筋無力症自己抗体の標的である。いくつかの実施形態では、タンパク質は、ＡＣｈＲａ、ＡＣｈＲｂ、ＡＣｈＲｇ、ＡＣｈＲｄ、およびＡＣｈＲｅから選択される。
いくつかの実施形態では、タンパク質は哺乳動物タンパク質である。いくつかの実施形態では、哺乳動物はヒトである。いくつかの実施形態では、タンパク質は膜貫通タンパク質である。いくつかの実施形態では、タンパク質は細胞表面タンパク質である。いくつかの実施形態では、タンパク質は受容体である。いくつかの実施形態では、タンパク質は受容体内のサブユニットである。いくつかの実施形態では、タンパク質は細胞表面タンパク質である。いくつかの実施形態では、細胞表面タンパク質は内在性膜タンパク質である。いくつかの実施形態では、細胞表面タンパク質は原形質膜包埋タンパク質である。いくつかの実施形態では、細胞表面タンパク質は膜固定タンパク質である。いくつかの実施形態では、タンパク質は重症筋無力症関連タンパク質である。いくつかの実施形態では、タンパク質は合成タンパク質である。いくつかの実施形態では、タンパク質は、天然に存在するタンパク質である。いくつかの実施形態では、タンパク質は、重症筋無力症自己抗体の標的である。いくつかの実施形態では、タンパク質は、ＡＣｈＲａ、ＡＣｈＲｂ、ＡＣｈＲｇ、ＡＣｈＲｄ、およびＡＣｈＲｅから選択される。
【0116】
本明細書で使用される場合、「受容体」という用語は、リガンドに結合することができる細胞の表面に発現されるタンパク質を指す。いくつかの実施形態では、受容体は、細胞の細胞質にシグナルを伝達することができるタンパク質である。いくつかの実施形態では、受容体はリガンド結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、受容体は膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、受容体は細胞内ドメインを含む。
【0117】
いくつかの実施形態では、断片は、タンパク質の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含む。いくつかの実施形態では、断片は、細胞外ドメイン全体またはそのバリアントを含む。いくつかの実施形態では、断片は、細胞外ドメイン全体またはそのバリアントからなる。いくつかの実施形態では、バリアントは変異体である。いくつかの実施形態では、バリアント、細胞外ドメインの一部の置き換えを含む。いくつかの実施形態では、断片は、タンパク質の細胞外ドメインの断片を含む。いくつかの実施形態では、断片は、タンパク質の細胞外ドメインからなる。いくつかの実施形態では、断片は、タンパク質の細胞外ドメインの断片からなる。いくつかの実施形態では、断片は、タンパク質の膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、断片は、タンパク質の膜貫通ドメインを欠いている。いくつかの実施形態では、断片は、タンパク質の細胞内ドメインを欠いている。いくつかの実施形態では、鎖は、膜貫通ドメインを欠いている。いくつかの実施形態では、鎖は、細胞内ドメインを欠いている。いくつかの実施形態では、断片は、相同ヒトタンパク質からの配列を含む。いくつかの実施形態では、断片は、相同非ヒトタンパク質からの配列を含む。いくつかの実施形態では、断片は、ヒトタンパク質における変異を含む。
【0118】
いくつかの実施形態では、断片は、タンパク質の少なくとも５個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、断片は、タンパク質の少なくとも１０個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、断片は、少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５または１００個のアミノ酸を含む。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。いくつかの実施形態では、タンパク質のアミノ酸は、タンパク質の連続アミノ酸である。いくつかの実施形態では、断片は、タンパク質の１００％未満を含む。いくつかの実施形態では、断片は、タンパク質の細胞外ドメインの１００％未満を含む。いくつかの実施形態では、断片は、１００、９９、９７、９５、９０、８５、８０、７５、７０、６５、６０、５５または５０％未満のタンパク質を含む。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。いくつかの実施形態では、断片は、タンパク質の細胞外ドメインの１００、９９、９７、９５、９０、８５、８０、７５、７０、６５、６０、５５または５０％未満を含む。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。いくつかの実施形態では、断片は、５～５００、５～２５０、５～１００、５～５０、１０～５００、１０～２５０、１０～１００、１０～５０、２０～５００、２０～２５０、２０～２００、２０～５０、２５～５００、２５～２５０、２５～１００、２５～５０、５０～５００、５０～２５０、５０～１００、１００～５００、または１００～２５０個のアミノ酸を含む。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。いくつかの実施形態では、断片は、多くとも２０、３０、４０、５０、６０、７０、７５、８０、９０、１００、１１０、１２０、１２５、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１７５、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２２５、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２７５、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３２５、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３７５、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４２５、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４７５、４８０、４９０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０または１０００個のアミノ酸を含む。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。
【0119】
いくつかの実施形態では、バリアントは、少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９２、９５、９７、または９９％の相同性または同一性を含む。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。いくつかの実施形態では、バリアントは、少なくとも８５％の相同性または同一性を含む。いくつかの実施形態では、バリアントは、少なくとも９０％の相同性または同一性を含む。いくつかの実施形態では、バリアントは、少なくとも９２％の相同性または同一性を含む。いくつかの実施形態では、バリアントは、少なくとも９５％の相同性または同一性を含む。いくつかの実施形態では、バリアントは、少なくとも９７％の相同性または同一性を含む。いくつかの実施形態では、バリアントは、少なくとも９９％の相同性または同一性を含む。いくつかの実施形態では、バリアントは変異体である。
【0120】
いくつかの実施形態では、鎖は、少なくとも１つの断片を含む。いくつかの実施形態では、鎖は、少なくとも２つの断片を含む。いくつかの実施形態では、断片は、リンカーによって分離されている。いくつかの実施形態では、リンカーはアミノ酸リンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーは少なくとも１つのアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは可撓性リンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーは、鎖から除外されたタンパク質の領域と比較して増加した溶解度を含む。いくつかの実施形態では、タンパク質の領域は、タンパク質ではないタンパク質の領域によって置き換えられる。いくつかの実施形態では、置き換え領域は、置き換えられたタンパク質の領域と比較して増加した溶解度を含む。いくつかの実施形態では、置き換え領域は、置き換えられたタンパク質の領域と比較して増加したタンパク質安定性を含む。
【0121】
いくつかの実施形態では、タンパク質は、抗体の標的である。本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭのすべてのクラスを含み、それらのすべてのサブクラスも含む。いくつかの実施形態では、抗体は循環抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、天然に存在する抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は自己抗体である。
【0122】
本明細書で使用される場合、「自己抗体」という用語は、対象自身のタンパク質の少なくとも１つに対する対象自身の免疫系によって生成された抗体を指す。いくつかの実施形態では、自己抗体は自己反応性抗体である。いくつかの実施形態では、自己抗体は、自己抗原を標的とする。自己抗原（ｓｅｌｆ－ａｎｔｉｇｅｎ）は、自己抗原（ａｕｔｏａｎｔｉｇｅｎ）としても知られている。いくつかの実施形態では、自己抗体は、重症筋無力症に関連する。いくつかの実施形態では、自己抗体は、重症筋無力症を特徴付ける。いくつかの実施形態では、自己抗体は、重症筋無力症の自己抗体である。いくつかの実施形態では、自己抗体は、自己反応性Ｂ細胞によって生成される。いくつかの実施形態では、タンパク質は、抗体の抗原である。いくつかの実施形態では、断片は、抗体の抗原を含む。いくつかの実施形態では、断片は、抗体の少なくとも１つの抗原を含む。いくつかの実施形態では、断片は、抗体の少なくとも２つの抗原を含む。いくつかの実施形態では、断片は、抗体の少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の抗原を含む。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。いくつかの実施形態では、抗体の抗原は自己抗原である。いくつかの実施形態では、抗原はエピトープである。いくつかの実施形態では、抗原は、少なくとも１つのエピトープを含む。いくつかの実施形態では、エピトープは、少なくとも５個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、エピトープは、５～６個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、エピトープは、５～１０個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、エピトープは単純なエピトープである。いくつかの実施形態では、単純なエピトープは線状エピトープである。いくつかの実施形態では、エピトープは複合エピトープである。いくつかの実施形態では、複合エピトープは３Ｄエピトープである。いくつかの実施形態では、複合エピトープは不連続エピトープである。いくつかの実施形態では、不連続エピトープは、組み合わさってエピトープを形成するアミノ酸の少なくとも２つの不連続部分を含む。いくつかの実施形態では、リンカー配列は、エピトープの２つの部分の間にある。
【0123】
本明細書で使用される場合、「類似体」という用語は、タンパク質の配列と実質的に同一のアミノ酸配列を有するが、１つ以上の残基が機能的に類似の残基で保存的に置換されている任意のペプチドを含む。いくつかの実施形態では、類似体は、元のタンパク質と同様の機能性を示す。保存的置換の例としては、ある非極性（疎水性）残基、例えばイソロイシン、バリン、ロイシンまたはメチオニンの別のものへの置換、ある極性（親水性）残基の別のものへの置換、例えばアルギニンとリジンとの間、グルタミンとアスパラギンとの間、グリシンとセリンとの間、ある塩基性残基、例えばリジン、アルギニンまたはヒスチジンの別のものへの置換、またはある酸性残基、例えばアスパラギン酸またはグルタミン酸の別のものへの置換が挙げられる。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。いくつかの実施形態では、置換は、タンパク質の抗原性領域の外側にある。いくつかの実施形態では、置換は、抗体のエピトープの外側にある。いくつかの実施形態では、類似体は、依然として抗体の標的である。いくつかの実施形態では、類似体は、自己抗体の結合を保持する。類似体は、タンパク質の標準アミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列をもたらす欠失または変異を有し得る。さらに、類似体は、タンパク質の断片に類似していてもよいが、そのような場合、断片は、タンパク質の少なくとも５０個の連続アミノ酸または抗体の少なくとも１つのエピトープを含まなければならない。いくつかの実施形態では、類似体は、タンパク質の標準配列に対する類似体である。
【0124】
いくつかの実施形態では、タンパク質の類似体は、タンパク質の標準アミノ酸配列と少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の相同性を有するアミノ酸配列を含む。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。いくつかの実施形態では、タンパク質の類似体は、タンパク質の標準アミノ酸配列と少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。いくつかの実施形態では、類似体は、少なくとも１つの置換を含む。いくつかの実施形態では、類似体は、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個の置換を含む。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。いくつかの実施形態では、置換は、標準配列の変異である。
【0125】
本明細書で使用される「誘導体」という用語は、タンパク質をベースとし、それでも抗体の結合を保持する任意のポリペプチドを指す。誘導体は、タンパク質の単なる断片ではなく、置き換えられたまたは除去されたアミノ酸（類似体）を有せず、むしろ翻訳後修飾などのタンパク質に加えられた追加の修飾を有し得る。さらに、誘導体は、タンパク質の断片の誘導体であり得るが、そのような場合、断片は、タンパク質の少なくとも５０個の連続アミノ酸または抗体の少なくとも１つのエピトープを含まなければならない。いくつかの実施形態では、誘導体は、タンパク質の標準配列の誘導体である。
【0126】
いくつかの実施形態では、タンパク質の誘導体は、タンパク質の標準アミノ酸配列と少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の相同性を有するアミノ酸配列を含む。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。いくつかの実施形態では、タンパク質の誘導体は、タンパク質の標準アミノ酸配列と少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。
【0127】
既知のタンパク質の標準アミノ酸配列は、当該技術分野で周知である。それらは、ＵｎｉＰｒｏｔ、ＮＣＢＩ、およびＵＣＳＣ Ｇｅｎｏｍｅ Ｂｒｏｗｓｅｒを含む様々なデータベースに見出すことができる。標準配列として受け入れられている任意の配列を用いることができる。非限定的な例として、ヒトアセチルコリン受容体サブユニットアルファはＣＨＲＮＡ１遺伝子によってコードされ、その標準核酸配列はＥｎｔｒｅｚ遺伝子１１３４に見出すことができ、その標準タンパク質コードｍＲＮＡ配列はＮＭ＿００１０３９５２３およびＮＭ＿００００７９に見出すことができ、その標準アミノ酸配列はＮＰ＿００００７０およびＮＰ＿０３１４１５およびＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ０２７０８に見出すことができる。いくつかの実施形態では、標準配列は、集団の少なくとも５０、６０、７０、７５、８０、９０、９５、９７、または９９％に存在する配列と同一の配列である。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。いくつかの実施形態では、標準配列は、集団中に存在する最も一般的な配列と同一の配列である。いくつかの実施形態では、集団は疾患集団である。いくつかの実施形態では、集団は、自己免疫疾患を有する集団である。
【0128】
いくつかの実施形態では、タンパク質はアセチルコリン受容体（ＡＣｈＲ）である。いくつかの実施形態では、タンパク質はアセチルコリン受容体サブユニットである。いくつかの実施形態では、サブユニットはアルファサブユニットである。いくつかの実施形態では、サブユニットはベータサブユニットである。いくつかの実施形態では、サブユニットはガンマサブユニットである。いくつかの実施形態では、サブユニットはデルタサブユニットである。いくつかの実施形態では、サブユニットはイプシロンサブユニットである。いくつかの実施形態では、サブユニットは、アルファ、ベータ、ガンマ、デルタおよびイプシロンのサブユニットから選択される。
【0129】
いくつかの実施形態では、タンパク質はアセチルコリン受容体アルファサブユニット（ＡＣｈＲａ）である。いくつかの実施形態では、ＡＣｈＲａは、遺伝子ＣＨＲＮＡ１によってコードされる。いくつかの実施形態では、ＡＣｈＲａはヒトＡＣｈＲａである。いくつかの実施形態では、ＣＨＲＮＡ１は、Ｅｎｔｒｅｚ遺伝子＃１１３４によって同定される。いくつかの実施形態では、ＡＣｈＲａは、ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ Ｐ０２７０８によって同定される。いくつかの実施形態では、ＡＣｈＲａは、ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ Ｐ０２０７０８．１またはＰ０２０７０８．２によって同定される。いくつかの実施形態では、ＡＣｈＲａは、ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ Ｐ０２０７０８．１によって同定される。いくつかの実施形態では、ＡＣｈＲａは、ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ Ｐ０２０７０８．２によって同定される。いくつかの実施形態では、ＣＨＲＮＡ１は、ＮＭ＿００１０３９５２３またはＮＭ＿００００７９で提供されるヌクレオチド配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＡＣｈＲａは、ＮＰ＿００００７０またはＮＰ＿００１０３４６１２で提供されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＡＣｈＲａの細胞外ドメインの標準アミノ酸配列は、ＳＥＨＥＴＲＬＶＡＫＬＦＫＤＹＳＳＶＶＲＰＶＥＤＨＲＱＶＶＥＶＴＶＧＬＱＬＩＱＬＩＮＶＤＥＶＮＱＩＶＴＴＮＶＲＬＫＱＱＷＶＤＹＮＬＫＷＮＰＤＤＹＧＧＶＫＫＩＨＩＰＳＥＫＩＷＲＰＤＬＶＬＹＮＮＡＤＧＤＦＡＩＶＫＦＴＫＶＬＬＱＹＴＧＨＩＴＷＴＰＰＡＩＦＫＳＹＣＥＩＩＶＴＨＦＰＦＤＥＱＮＣＳＭＫＬＧＴＷＴＹＤＧＳＶＶＡＩＮＰＥＳＤＱＰＤＬＳＮＦＭＥＳＧＥＷＶＩＫＥＳＲＧＷＫＨＳＶＴＹＳＣＣＰＤＴＰＹＬＤＩＴＹＨＦＶＭＱＲＬＰ（配列番号１）を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＡＣｈＲａの細胞外ドメインの標準アミノ酸配列は、ＳＥＨＥＴＲＬＶＡＫＬＦＫＤＹＳＳＶＶＲＰＶＥＤＨＲＱＶＶＥＶＴＶＧＬＱＬＩＱＬＩＮＶＤＥＶＮＱＩＶＴＴＮＶＲＬＫＱＧＤＭＶＤＬＰＲＰＳＣＶＴＬＧＶＰＬＦＳＨＬＱＮＥＱＷＶＤＹＮＬＫＷＮＰＤＤＹＧＧＶＫＫＩＨＩＰＳＥＫＩＷＲＰＤＬＶＬＹＮＮＡＤＧＤＦＡＩＶＫＦＴＫＶＬＬＱＹＴＧＨＩＴＷＴＰＰＡＩＦＫＳＹＣＥＩＩＶＴＨＦＰＦＤＥＱＮＣＳＭＫＬＧＴＷＴＹＤＧＳＶＶＡＩＮＰＥＳＤＱＰＤＬＳＮＦＭＥＳＧＥＷＶＩＫＥＳＲＧＷＫＨＳＶＴＹＳＣＣＰＤＴＰＹＬＤＩＴＹＨＦＶＭＱＲＬＰ（配列番号２）を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインはシグナルペプチドを欠いている。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインはシグナルペプチドをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＡＣｈＲａシグナルペプチドは、ＭＥＰＷＰＬＬＬＬＦＳＬＣＳＡＧＬＶＬＧ（配列番号３）を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＡＣｈＲａシグナルペプチドは、ＭＦＭＣＬＥＧＧＥＫＮＬＴＶＬＶＳＳＡＶＳＡＧＬＶＬＧ（配列番号６１）を含むかまたはそれからなる。
【0130】
いくつかの実施形態では、タンパク質はアセチルコリン受容体ベータサブユニット（ＡＣｈＲｂ）である。いくつかの実施形態では、ＡＣｈＲｂは、遺伝子ＣＨＲＮＢ１によってコードされる。いくつかの実施形態では、ＡＣｈＲｂはヒトＡＣｈＲｂである。いくつかの実施形態では、ＣＨＲＮＢ１は、Ｅｎｔｒｅｚ遺伝子＃１１４０によって同定される。いくつかの実施形態では、ＡＣｈＲｂは、ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ Ｐ１１２３０によって同定される。いくつかの実施形態では、ＣＨＲＮＢ１は、ＮＭ＿０００７４７で提供されるヌクレオチド配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＡＣｈＲｂは、ＮＰ＿０００７３８で提供されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＡＣｈＲｂの細胞外ドメインの標準アミノ酸配列は、ＳＥＡＥＧＲＬＲＥＫＬＦＳＧＹＤＳＳＶＲＰＡＲＥＶＧＤＲＶＲＶＳＶＧＬＩＬＡＱＬＩＳＬＮＥＫＤＥＥＭＳＴＫＶＹＬＤＬＥＷＴＤＹＲＬＳＷＤＰＡＥＨＤＧＩＤＳＬＲＩＴＡＥＳＶＷＬＰＤＶＶＬＬＮＮＮＤＧＮＦＤＶＡＬＤＩＳＶＶＶＳＳＤＧＳＶＲＷＱＰＰＧＩＹＲＳＳＣＳＩＱＶＴＹＦＰＦＤＷＱＮＣＴＭＶＦＳＳＹＳＹＤＳＳＥＶＳＬＱＴＧＬＧＰＤＧＱＧＨＱＥＩＨＩＨＥＧＴＦＩＥＮＧＱＷＥＩＩＨＫＰＳＲＬＩＱＰＰＧＤＰＲＧＧＲＥＧＱＲＱＥＶＩＦＹＬＩＩＲＲＫＰ（配列番号４）を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインはシグナルペプチドを欠いている。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインはシグナルペプチドをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＡＣｈＲｂシグナルペプチドは、ＭＴＰＧＡＬＬＭＬＬＧＡＬＧＡＰＬＡＰＧＶＲＧ（配列番号５）を含むかまたはそれからなる。
【0131】
いくつかの実施形態では、タンパク質はアセチルコリン受容体ガンマサブユニット（ＡＣｈＲｇ）である。いくつかの実施形態では、ＡＣｈＲｇは、遺伝子ＣＨＲＮＧによってコードされる。いくつかの実施形態では、ＡＣｈＲｇはヒトＡＣｈＲｇである。いくつかの実施形態では、ＣＨＲＮＧは、Ｅｎｔｒｅｚ遺伝子＃１１４６によって同定される。いくつかの実施形態では、ＡＣｈＲｇは、ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ Ｐ０７５１０によって同定される。いくつかの実施形態では、ＣＨＲＮＧは、ＮＭ＿００５１９９で提供されるヌクレオチド配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＡＣｈＲｇは、ＮＰ＿００５１９０で提供されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＡＣｈＲｇの細胞外ドメインの標準アミノ酸配列は、ＲＮＱＥＥＲＬＬＡＤＬＭＱＮＹＤＰＮＬＲＰＡＥＲＤＳＤＶＶＮＶＳＬＫＬＴＬＴＮＬＩＳＬＮＥＲＥＥＡＬＴＴＮＶＷＩＥＭＱＷＣＤＹＲＬＲＷＤＰＲＤＹＥＧＬＷＶＬＲＶＰＳＴＭＶＷＲＰＤＩＶＬＥＮＮＶＤＧＶＦＥＶＡＬＹＣＮＶＬＶＳＰＤＧＣＩＹＷＬＰＰＡＩＦＲＳＡＣＳＩＳＶＴＹＦＰＦＤＷＱＮＣＳＬＩＦＱＳＱＴＹＳＴＮＥＩＤＬＱＬＳＱＥＤＧＱＴＩＥＷＩＦＩＤＰＥＡＦＴＥＮＧＥＷＡＩＱＨＲＰＡＫＭＬＬＤＰＡＡＰＡＱＥＡＧＨＱＫＶＶＦＹＬＬＩＱＲＫＰ（配列番号６）を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインはシグナルペプチドを欠いている。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインはシグナルペプチドをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＡＣｈＲｇシグナルペプチドは、ＭＨＧＧＱＧＰＬＬＬＬＬＬＬＡＶＣＬＧＡＱＧ（配列番号７）を含むかまたはそれからなる。
【0132】
いくつかの実施形態では、タンパク質はアセチルコリン受容体デルタサブユニット（ＡＣｈＲｄ）である。いくつかの実施形態では、ＡＣｈＲｄは、遺伝子ＣＨＲＮＤによってコードされる。いくつかの実施形態では、ＡＣｈＲｄはヒトＡＣｈＲｄである。いくつかの実施形態では、ＣＨＲＮＤは、Ｅｎｔｒｅｚ遺伝子＃１１４４によって同定される。いくつかの実施形態では、ＡＣｈＲｄは、ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ Ｑ０７００１によって同定される。いくつかの実施形態では、ＣＨＲＮＤは、ＮＭ＿０００７５１、ＮＭ＿００１２５６６５７、ＮＭ＿００１３１１１９５、またはＮＭ＿００１３１１１９６で提供されるヌクレオチド配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＡＣｈＲｄは、ＮＰ＿０００７４２、ＮＰ＿００１２４３５８６、ＮＰ＿００１２９８１２４またはＮＰ＿００１２９８１２５で提供されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＡＣｈＲｄの細胞外ドメインの標準アミノ酸配列は、ＬＮＥＥＥＲＬＩＲＨＬＦＱＥＫＧＹＮＫＥＬＲＰＶＡＨＫＥＥＳＶＤＶＡＬＡＬＴＬＳＮＬＩＳＬＫＥＶＥＥＴＬＴＴＮＶＷＩＥＨＧＷＴＤＮＲＬＫＷＮＡＥＥＦＧＮＩＳＶＬＲＬＰＰＤＭＶＷＬＰＥＩＶＬＥＮＮＮＤＧＳＦＱＩＳＹＳＣＮＶＬＶＹＨＹＧＦＶＹＷＬＰＰＡＩＦＲＳＳＣＰＩＳＶＴＹＦＰＦＤＷＱＮＣＳＬＫＦＳＳＬＫＹＴＡＫＥＩＴＬＳＬＫＱＤＡＫＥＮＲＴＹＰＶＥＷＩＩＩＤＰＥＧＦＴＥＮＧＥＷＥＩＶＨＲＰＡＲＶＮＶＤＰＲＡＰＬＤＳＰＳＲＱＤＩＴＦＹＬＩＩＲＲＫＰ（配列番号８）を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインはシグナルペプチドを欠いている。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインはシグナルペプチドをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＡＣｈＲｄシグナルペプチドは、ＭＥＧＰＶＬＴＬＧＬＬＡＡＬＡＶＣＧＳＷＧ（配列番号９）を含むかまたはそれからなる。
【0133】
いくつかの実施形態では、タンパク質はアセチルコリン受容体イプシロンサブユニット（ＡＣｈＲｅ）である。いくつかの実施形態では、ＡＣｈＲｅは、遺伝子ＣＨＲＮＥによってコードされる。いくつかの実施形態では、ＡＣｈＲｅはヒトＡＣｈＲｅである。いくつかの実施形態では、ＣＨＲＮＥは、Ｅｎｔｒｅｚ遺伝子＃１１４５によって同定される。いくつかの実施形態では、ＡＣｈＲｅは、ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ Ｑ０４８４４によって同定される。いくつかの実施形態では、ＣＨＲＮＥは、ＮＭ＿００００８０で提供されるヌクレオチド配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＡＣｈＲｅは、ＮＰ＿００００７１で提供されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＡＣｈＲｅの細胞外ドメインの標準アミノ酸配列は、ＫＮＥＥＬＲＬＹＨＨＬＦＮＮＹＤＰＧＳＲＰＶＲＥＰＥＤＴＶＴＩＳＬＫＶＴＬＴＮＬＩＳＬＮＥＫＥＥＴＬＴＴＳＶＷＩＧＩＤＷＱＤＹＲＬＮＹＳＫＤＤＦＧＧＩＥＴＬＲＶＰＳＥＬＶＷＬＰＥＩＶＬＥＮＮＩＤＧＱＦＧＶＡＹＤＡＮＶＬＶＹＥＧＧＳＶＴＷＬＰＰＡＩＹＲＳＶＣＡＶＥＶＴＹＦＰＦＤＷＱＮＣＳＬＩＦＲＳＱＴＹＮＡＥＥＶＥＦＴＦＡＶＤＮＤＧＫＴＩＮＫＩＤＩＤＴＥＡＹＴＥＮＧＥＷＡＩＤＦＣＰＧＶＩＲＲＨＨＧＧＡＴＤＧＰＧＥＴＤＶＩＹＳＬＩＩＲＲＫＰ（配列番号１０）を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインはシグナルペプチドを欠いている。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインはシグナルペプチドをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＡＣｈＲｅシグナルペプチドは、ＭＡＲＡＰＬＧＶＬＬＬＬＧＬＬＧＲＧＶＧ（配列番号１１）を含むかまたはそれからなる。
【0134】
いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、抗体鎖のシグナルペプチドである。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは抗体重鎖のものである。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは抗体軽鎖のものである。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドはカッパ軽鎖のものである。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドはラムダ軽鎖のものである。いくつかの実施形態では、重鎖シグナルペプチドは、ＭＥＷＳＷＶＦＬＦＦＬＳＶＴＴＧＶＨＳ（配列番号７０）を含む。いくつかの実施形態では、重鎖シグナルペプチドは、配列番号７０からなる。いくつかの実施形態では、重鎖シグナルペプチドは、ＭＥＦＧＬＳＷＬＦＬＶＡＩＬＫＧＶＱＣ（配列番号１４）を含む。いくつかの実施形態では、重鎖シグナルペプチドは、配列番号１４からなる。いくつかの実施形態では、軽鎖シグナルペプチドは、ＭＳＶＰＴＱＶＬＧＬＬＬＬＷＬＴＤＡＲＣ（配列番号７１）を含む。いくつかの実施形態では、軽鎖シグナルペプチドは、配列番号７１からなる。いくつかの実施形態では、重鎖シグナルペプチドはマウス重鎖シグナルペプチドであり、ＭＧＷＳＣＩＩＬＦＬＶＡＴＡＴＧＶＨＳ（配列番号１５）を含む。いくつかの実施形態では、重鎖シグナルペプチドは、配列番号１５からなる。
【0135】
いくつかの実施形態では、第１のタンパク質および第２のタンパク質は同じタンパク質である。いくつかの実施形態では、第１および第２のタンパク質は同じタンパク質であり、断片は異なる断片である。いくつかの実施形態では、断片は異なる断片である。いくつかの実施形態では、断片は、異なる配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、第１および第２のタンパク質は異なるタンパク質である。
【0136】
いくつかの実施形態では、タンパク質または断片は、溶解度を増加させる変異を含む。いくつかの実施形態では、タンパク質または断片は、タンパク質または断片の安定性を増加させる変異を含む。いくつかの実施形態では、変異は挿入である。いくつかの実施形態では、タンパク質は表面タンパク質であり、溶解度を増加させる変異を含む。いくつかの実施形態では、断片は表面タンパク質の細胞外ドメインであり、溶解度を増加させる挿入を含む。いくつかの実施形態では、挿入は、タンパク質または断片の領域の代わりに行われる。いくつかの実施形態では、タンパク質のループは、より高い溶解度を有するループで置き換えられる。いくつかの実施形態では、ＡＣｈＲａのループは、ＣＥＩＩＶＴＨＦＰＦＤＥＱＮＣ（配列番号３９）を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＡＣｈＲｂのループは、ＣＳＩＱＶＴＹＦＰＦＤＷＱＮＣ（配列番号４０）を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＡＣｈＲｇのループは、ＣＳＩＳＶＴＹＦＰＦＤＷＱＮＣ（配列番号４１）を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＡＣｈＲｄのループは、ＣＰＩＳＶＴＹＦＰＦＤＷＱＮＣ（配列番号４２）を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＡＣｈＲｅのループは、ＣＡＶＥＶＴＹＦＰＦＤＷＱＮＣ（配列番号４３）を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、より高い溶解度を有するループは、ＣＤＶＳＧＶＤＴＥＳＧＡＴＮＣ（配列番号４４）を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、より高い溶解度のインサートは、配列番号４４を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、より高い溶解度のインサートは、ＤＶＳＧＶＤＴＥＳＧＡＴ（配列番号６３）を含む。いくつかの実施形態では、ＡＣｈＲは、溶解度および安定性を増加させるために変異されている。いくつかの実施形態では、変異は、Ｖ８Ｅ、Ｗ１４９ＲおよびＶ１５５Ａから選択される。いくつかの実施形態では、変異は、Ｖ８Ｅ、Ｗ１４９ＲおよびＶ１５５Ａのうちの少なくとも２つの変異である。いくつかの実施形態では、変異は、Ｖ８Ｅ、Ｗ１４９ＲおよびＶ１５５Ａの３つすべての変異である。いくつかの実施形態では、ＡＣｈＲａは変異を含む。いくつかの実施形態では、非ＡＣｈＲａアセチルコリン受容体サブユニットは並行変異を含む。いくつかの実施形態では、並行変異は、相同性を有するアミノ酸に対する変異である。
【0137】
いくつかの実施形態では、変異が作られるアルファサブユニット細胞外ドメインは、ＳＥＨＥＴＲＬＶＡＫＬＦＫＤＹＳＳＶＶＲＰＶＥＤＨＲＱＶＶＥＶＴＶＧＬＱＬＩＱＬＩＮＶＤＥＶＮＱＩＶＴＴＮＶＲＬＫＱＱＷＶＤＹＮＬＫＷＮＰＤＤＹＧＧＶＫＫＩＨＩＰＳＥＫＩＷＲＰＤＬＶＬＹＮＮＡＤＧＤＦＡＩＶＫＦＴＫＶＬＬＱＹＴＧＨＩＴＷＴＰＰＡＩＦＫＳＹＣＤＶＳＧＶＤＴＥＳＧＡＴＮＣＳＭＫＬＧＴＷＴＹＤＧＳＶＶＡＩＮＰＥＳＤＱＰＤＬＳＮＦＭＥＳＧＥＷＶＩＫＥＳＲＧＷＫＨＳＶＴＹＳＣＣＰＤＴＰＹＬＤＩＴＹＨＦＶＭＱＲＬＰ（配列番号１３１）を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、変異が行われるベータサブユニット細胞外ドメインは、ＳＥＡＥＧＲＬＲＥＫＬＦＳＧＹＤＳＳＶＲＰＡＲＥＶＧＤＲＶＲＶＳＶＧＬＩＬＡＱＬＩＳＬＮＥＫＤＥＥＭＳＴＫＶＹＬＤＬＥＷＴＤＹＲＬＳＷＤＰＡＥＨＤＧＩＤＳＬＲＩＴＡＥＳＶＷＬＰＤＶＶＬＬＮＮＮＤＧＮＦＤＶＡＬＤＩＳＶＶＶＳＳＤＧＳＶＲＷＱＰＰＧＩＹＲＳＳＣＤＶＳＧＶＤＴＥＳＧＡＴＮＣＴＭＶＦＳＳＹＳＹＤＳＳＥＶＳＬＱＴＧＬＧＰＤＧＱＧＨＱＥＩＨＩＨＥＧＴＦＩＥＮＧＱＷＥＩＩＨＫＰＳＲＬＩＱＰＰＧＤＰＲＧＧＲＥＧＱＲＱＥＶＩＦＹＬＩＩＲＲＫＰ（配列番号１３２）を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、変異が行われるガンマサブユニット細胞外ドメインは、ＲＮＱＥＥＲＬＬＡＤＬＭＱＮＹＤＰＮＬＲＰＡＥＲＤＳＤＶＶＮＶＳＬＫＬＴＬＴＮＬＩＳＬＮＥＲＥＥＡＬＴＴＮＶＷＩＥＭＱＷＣＤＹＲＬＲＷＤＰＲＤＹＥＧＬＷＶＬＲＶＰＳＴＭＶＷＲＰＤＩＶＬＥＮＮＶＤＧＶＦＥＶＡＬＹＣＮＶＬＶＳＰＤＧＣＩＹＷＬＰＰＡＩＦＲＳＡＣＤＶＳＧＶＤＴＥＳＧＡＴＮＣＳＬＩＦＱＳＱＴＹＳＴＮＥＩＤＬＱＬＳＱＥＤＧＱＴＩＥＷＩＦＩＤＰＥＡＦＴＥＮＧＥＷＡＩＱＨＲＰＡＫＭＬＬＤＰＡＡＰＡＱＥＡＧＨＱＫＶＶＦＹＬＬＩＱＲＫＰ（配列番号１３３）を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、変異が行われるデルタサブユニット細胞外ドメインは、ＬＮＥＥＥＲＬＩＲＨＬＦＱＥＫＧＹＮＫＥＬＲＰＶＡＨＫＥＥＳＶＤＶＡＬＡＬＴＬＳＮＬＩＳＬＫＥＶＥＥＴＬＴＴＮＶＷＩＥＨＧＷＴＤＮＲＬＫＷＮＡＥＥＦＧＮＩＳＶＬＲＬＰＰＤＭＶＷＬＰＥＩＶＬＥＮＮＮＤＧＳＦＱＩＳＹＳＣＮＶＬＶＹＨＹＧＦＶＹＷＬＰＰＡＩＦＲＳＳＣＤＶＳＧＶＤＴＥＳＧＡＴＮＣＳＬＫＦＳＳＬＫＹＴＡＫＥＩＴＬＳＬＫＱＤＡＫＥＮＲＴＹＰＶＥＷＩＩＩＤＰＥＧＦＴＥＮＧＥＷＥＩＶＨＲＰＡＲＶＮＶＤＰＲＡＰＬＤＳＰＳＲＱＤＩＴＦＹＬＩＩＲＲＫＰ（配列番号１３４）を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、変異が行われるイプシロンサブユニット細胞外ドメインは、ＫＮＥＥＬＲＬＹＨＨＬＦＮＮＹＤＰＧＳＲＰＶＲＥＰＥＤＴＶＴＩＳＬＫＶＴＬＴＮＬＩＳＬＮＥＫＥＥＴＬＴＴＳＶＷＩＧＩＤＷＱＤＹＲＬＮＹＳＫＤＤＦＧＧＩＥＴＬＲＶＰＳＥＬＶＷＬＰＥＩＶＬＥＮＮＩＤＧＱＦＧＶＡＹＤＡＮＶＬＶＹＥＧＧＳＶＴＷＬＰＰＡＩＹＲＳＶＣＤＶＳＧＶＤＴＥＳＧＡＴＮＣＳＬＩＦＲＳＱＴＹＮＡＥＥＶＥＦＴＦＡＶＤＮＤＧＫＴＩＮＫＩＤＩＤＴＥＡＹＴＥＮＧＥＷＡＩＤＦＣＰＧＶＩＲＲＨＨＧＧＡＴＤＧＰＧＥＴＤＶＩＹＳＬＩＩＲＲＫＰ（配列番号１３５）を含むかまたはそれからなる。
【0138】
別の態様では、配列番号１３１～１３５のいずれか１つを含むタンパク質が提供される。
【0139】
いくつかの実施形態では、タンパク質は、配列番号１３１を含む。いくつかの実施形態では、タンパク質は、配列番号１３２を含む。いくつかの実施形態では、タンパク質は、配列番号１３３を含む。いくつかの実施形態では、タンパク質は、配列番号１３４を含む。いくつかの実施形態では、タンパク質は、配列番号１３５を含む。いくつかの実施形態では、タンパク質は、配列番号１３１～１３５から選択される複数の配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明の複合体は、配列番号１３１～１３５から選択される配列を含む第１の鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明の複合体は、配列番号１３１～１３５から選択される配列を含む第２の鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明の複合体は、配列番号１３１～１３５から選択される配列を含む第３の鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明の複合体は、配列番号１３１～１３５から選択される配列を含む第４の鎖を含む。いくつかの実施形態では、細胞外ドメイン断片は、配列番号１３１～１３５から選択される。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインバリアントは、配列番号１３１～１３５から選択される。
【0140】
いくつかの実施形態では、断片は、リガンド結合ドメインを含み、リガンド結合を阻害する変異をさらに含む。いくつかの実施形態では、変異は、リガンド結合ドメインにある。本発明のタンパク質複合体は抗体およびＢ細胞に結合することを意味しているため、対象に存在する内因性リガンドに結合せず、したがって、内因性受容体に結合するために利用可能な正常なリガンドレベルを残すことが有利であることが当業者によって理解されるであろう。いくつかの実施形態では、タンパク質はＡＣｈＲａであり、変異は、フェニルアラニンに対する配列番号１のチロシン１９０または配列番号２のチロシン２１５である。いくつかの実施形態では、タンパク質はＡＣｈＲａであり、変異はフェニルアラニンに対する配列番号１のチロシン１９０である。いくつかの実施形態では、タンパク質はＡＣｈＲａであり、変異はフェニルアラニンに対する配列番号２のチロシン２１５である。
【0141】
別の態様では、凝集を減少させる少なくとも１つの変異を含むアセチルコリン受容体サブユニットの細胞外ドメインを含むタンパク質が提供される。
【0142】
いくつかの実施形態では、断片は、凝集を減少させる変異を含む。いくつかの実施形態では、凝集は自己二量体化を含む。いくつかの実施形態では、凝集は多量体化を含む。いくつかの実施形態では、アセチルコリン受容体サブユニットの細胞外ドメインはタンパク質である。いくつかの実施形態では、変異は、複数の変異である。いくつかの実施形態では、複数は２である。いくつかの実施形態では、複数は３である。
【0143】
いくつかの実施形態では、タンパク質はＡＣｈＲａであり、変異はＮ１４１の欠失である。いくつかの実施形態では、Ｎ１４１は配列番号１内にある。いくつかの実施形態では、Ｎ１４１は配列番号１３１内にある。いくつかの実施形態では、タンパク質はＡＣｈＲａであり、変異はフェニルアラニン１００の変異である。いくつかの実施形態では、フェニルアラニン１００は、グリシン（Ｆ１００Ｇ）に変異している。いくつかの実施形態では、フェニルアラニン１００は、チロシン（Ｆ１００Ｙ）に変異している。いくつかの実施形態では、フェニルアラニン１００は、イソロイシン（Ｆ１００Ｉ）に変異している。いくつかの実施形態では、Ｆ１００は配列番号１内にある。いくつかの実施形態では、Ｆ１００は配列番号１３１内にある。いくつかの実施形態では、タンパク質はＡＣｈＲａであり、変異はトリプトファン１４９の変異である。いくつかの実施形態では、トリプトファン１４９は、荷電アミノ酸に変異している。いくつかの実施形態では、トリプトファン１４９は、負に荷電したアミノ酸に変異している。いくつかの実施形態では、トリプトファン１４９は、グルタミン酸（Ｗ１４９Ｅ）に変異している。いくつかの実施形態では、トリプトファン１４９は、アスパラギン酸（Ｗ１４９Ｄ）に変異している。いくつかの実施形態では、トリプトファン１４９は、正に荷電したアミノ酸に変異している。いくつかの実施形態では、トリプトファン１４９は、リジン（Ｗ１４９Ｋ）に変異している。いくつかの実施形態では、トリプトファン１４９は、アルギニン（Ｗ１４９Ｒ）に変異している。いくつかの実施形態では、トリプトファン１４９は、ヒスチジン（Ｗ１４９Ｈ）に変異している。いくつかの実施形態では、トリプトファン１４９は、グルタミン（Ｗ１４９Ｑ）に変異している。いくつかの実施形態では、Ｗ１４９は配列番号１の範囲内である。いくつかの実施形態では、Ｗ１４９は配列番号１３１の範囲内である。いくつかの実施形態では、タンパク質はＡＣｈＲａであり、変異はバリン１５５の変異である。いくつかの実施形態では、バリン１５５は、アラニン（Ｖ１５５Ａ）に変異している。いくつかの実施形態では、バリン１５５は、イソロイシン（Ｖ１５５Ｉ）に変異している。いくつかの実施形態では、バリン１５５は、ロイシン（Ｖ１５５Ｌ）に変異している。いくつかの実施形態では、Ｖ１５５は配列番号１内にある。いくつかの実施形態では、Ｖ１５５は配列番号１３１内にある。いくつかの実施形態では、タンパク質はＡＣｈＲａであり、変異はチロシン９３の変異である。いくつかの実施形態では、チロシン９３の変異は、アルファ－ガンマ相互作用を減少させる。いくつかの実施形態では、チロシン９３は、アルファ－ガンマ相互作用を減少させる任意のアミノ酸に変異している。いくつかの実施形態では、チロシン９３は、フェニルアラニン（Ｙ９３Ｆ）に変異している。いくつかの実施形態では、チロシン９３は、正に荷電したアミノ酸に変異している。いくつかの実施形態では、チロシン９３は、ヒスチジン（Ｙ９３Ｈ）に変異している。いくつかの実施形態では、チロシン９３は、アルギニン（Ｙ９３Ｒ）に変異している。いくつかの実施形態では、チロシン９３は、リジン（Ｙ９３Ｋ）に変異している。いくつかの実施形態では、Ｙ９３は配列番号１の範囲内である。いくつかの実施形態では、Ｙ９３は配列番号１３１の範囲内である。
【0144】
いくつかの実施形態では、変異は、タンパク質の酸化を低下させる。いくつかの実施形態では、タンパク質はＡＣｈＲｇであり、変異はメチオニン８４の変異である。変異は、少なくとも部分的に、メチオニン酸化を減少させ、貯蔵寿命を増加させるために行われる。任意のアミノ酸への変異がこの結果をもたらすであろう。いくつかの実施形態では、メチオニン８４の変異は、アルファ－ガンマ相互作用を低下させる。いくつかの実施形態では、メチオニン８４は、アルファ－ガンマ相互作用を減少させる任意のアミノ酸に変異している。いくつかの実施形態では、メチオニン８４が欠失されている。いくつかの実施形態では、メチオニン８４は、セリン（Ｍ８４Ｓ）に変異している。いくつかの実施形態では、Ｍ８４は配列番号６内にある。いくつかの実施形態では、Ｍ８４は配列番号１３３内にある。いくつかの実施形態では、タンパク質はＡＣｈＲｇであり、変異はチロシン１０５の変異である。いくつかの実施形態では、チロシン１０５の変異は、アルファ－ガンマ相互作用を低下させる。いくつかの実施形態では、チロシン１０５は、アルファ－ガンマ相互作用を減少させる任意のアミノ酸に変異している。いくつかの実施形態では、チロシン１０５は、荷電アミノ酸に変異している。いくつかの実施形態では、チロシン１０５は、負に荷電したアミノ酸に変異している。いくつかの実施形態では、チロシン１０５は、グルタミン酸（Ｙ１０５Ｅ）に変異している。いくつかの実施形態では、チロシン１０５は、アスパラギン酸（Ｙ１０５Ｄ）に変異している。いくつかの実施形態では、チロシン１０５は、正に荷電したアミノ酸に変異している。いくつかの実施形態では、チロシン１０５は、アルギニン（Ｙ１０５Ｒ）に変異している。いくつかの実施形態では、チロシン１０５は、リジン（Ｙ１０５Ｋ）に変異している。いくつかの実施形態では、チロシン１０５は、ヒスチジン（Ｙ１０５Ｈ）に変異している。いくつかの実施形態では、Ｙ１０５は配列番号６内にある。いくつかの実施形態では、Ｙ１０５は配列番号１３３内にある。いくつかの実施形態では、タンパク質はＡＣｈＲｇであり、変異はチロシン１１７の変異である。いくつかの実施形態では、チロシン１１７の変異は、アルファ－ガンマ相互作用を低下させる。いくつかの実施形態では、チロシン１１７は、アルファ－ガンマ相互作用を減少させる任意のアミノ酸に変異している。いくつかの実施形態では、チロシン１１７は、荷電アミノ酸に変異している。いくつかの実施形態では、チロシン１１７は、負に荷電したアミノ酸に変異している。いくつかの実施形態では、チロシン１１７は、グルタミン酸（Ｙ１１７Ｅ）に変異している。いくつかの実施形態では、チロシン１１７は、アスパラギン酸（Ｙ１１７Ｄ）に変異している。いくつかの実施形態では、チロシン１１７は、正に荷電したアミノ酸に変異している。いくつかの実施形態では、チロシン１１７は、アルギニン（Ｙ１１７Ｒ）に変異している。いくつかの実施形態では、チロシン１１７は、リジン（Ｙ１１７Ｋ）に変異している。いくつかの実施形態では、チロシン１１７は、ヒスチジン（Ｙ１１７Ｈ）に変異している。いくつかの実施形態では、Ｙ１１７は配列番号６内にある。いくつかの実施形態では、Ｙ１１７は配列番号１３３内にある。いくつかの実施形態では、変異は、複数の変異であり、Ｍ８４、Ｙ１０５およびＹ１１７の変異から選択される少なくとも２つの変異を含む。いくつかの実施形態では、変異は複数の変異であり、Ｍ８４Ｓ、Ｙ１０５ＥおよびＹ１１７Ｅから選択される少なくとも２つの変異を含む。いくつかの実施形態では、変異は複数の変異であり、Ｍ８４Ｓ、Ｙ１０５ＥおよびＹ１１７Ｒから選択される少なくとも２つの変異を含む。いくつかの実施形態では、変異は複数の変異であり、Ｍ８４Ｓ、Ｙ１０５ＥおよびＹ１１７Ｅのすべてを含む。いくつかの実施形態では、変異は複数の変異であり、Ｍ８４Ｓ、Ｙ１０５ＥおよびＹ１１７Ｒのすべてを含む。いくつかの実施形態では、変異は２つの変異であり、Ｍ８４ＳおよびＹ１０５Ｅを含む。いくつかの実施形態では、変異は２つの変異であり、Ｙ１１７ＥおよびＹ１０５Ｅを含む。いくつかの実施形態では、変異は２つの変異であり、Ｙ１１７ＲおよびＹ１０５Ｅを含む。
【0145】
いくつかの実施形態では、タンパク質はＡＣｈＲｄであり、変異はシステイン１０８の変異である。いくつかの実施形態では、システイン１０８は、任意の他のアミノ酸に変異している。いくつかの実施形態では、システイン１０８が欠失されている。ジスルフィド結合を形成し得る遊離システインを除去することによって凝集を減少させることが望まれていることが当業者によって理解されるであろう。したがって、任意の変異が可能である。いくつかの実施形態では、システイン１０８は、アラニン（Ｃ１０８Ａ）に変異している。いくつかの実施形態では、システイン１０８は、イソロイシン（Ｃ１０８Ｉ）に変異している。いくつかの実施形態では、Ｃ１０８は配列番号８内にある。いくつかの実施形態では、Ｃ１０８は配列番号１３４内にある。いくつかの実施形態では、タンパク質はＡＣｈＲｄであり、変異はチロシン１１９の変異である。いくつかの実施形態では、チロシン１１９の変異は、デルタ疎水性を低下させる。いくつかの実施形態では、チロシン１１９は、デルタ疎水性を低下させる任意のアミノ酸に変異している。いくつかの実施形態では、チロシン１１９は、正に荷電したアミノ酸に変異している。いくつかの実施形態では、チロシン１１９は、アルギニン（Ｙ１１９Ｒ）に変異している。いくつかの実施形態では、チロシン１１９は、リジン（Ｙ１１９Ｋ）に変異している。いくつかの実施形態では、チロシン１１９は、ヒスチジン（Ｙ１１９Ｈ）に変異している。いくつかの実施形態では、チロシン１１９は、負に荷電したアミノ酸に変異している。いくつかの実施形態では、チロシン１１９は、グルタミン酸（Ｙ１１９Ｅ）に変異している。いくつかの実施形態では、チロシン１１９は、アスパラギン酸（Ｙ１１９Ｄ）に変異している。いくつかの実施形態では、Ｙ１１９は配列番号８内にある。いくつかの実施形態では、Ｙ１１９は配列番号１３４内にある。いくつかの実施形態では、タンパク質はＡＣｈＲａであり、変異はＮ１４１の欠失である。いくつかの実施形態では、Ｎ１４１は配列番号８内にある。いくつかの実施形態では、Ｎ１４１は配列番号１３４内にある。いくつかの実施形態では、タンパク質はＡＣｈＲｄであり、変異はロイシン１５１の変異である。いくつかの実施形態では、ロイシン１５１の変異は、サブユニット相互作用を低下させる。いくつかの実施形態では、ロイシン１５１は、サブユニット相互作用を減少させる任意のアミノ酸に変異している。いくつかの実施形態では、ロイシン１５１が欠失されている。いくつかの実施形態では、ロイシン１５１は、荷電アミノ酸に変異している。いくつかの実施形態では、ロイシン１５１は、正に荷電したアミノ酸に変異している。いくつかの実施形態では、ロイシン１５１は、正に荷電していないアミノ酸に変異している。いくつかの実施形態では、ロイシン１５１は、負に荷電したアミノ酸に変異している。いくつかの実施形態では、ロイシン１５１は、グルタミン酸（Ｌ１５１Ｅ）に変異している。いくつかの実施形態では、ロイシン１５１は、変異アスパラギン酸（Ｌ１５１Ｄ）である。いくつかの実施形態では、Ｌ１５１は配列番号８内にある。いくつかの実施形態では、Ｌ１５１は配列番号１３４内にある。いくつかの実施形態では、変異は、Ｃ１０８、Ｙ１１９、Ｌ１５１の変異およびＮ１４１の欠失から選択される複数の変異である。いくつかの実施形態では、変異は、Ｃ１０８Ａ、Ｙ１１９Ｒ、Ｌ１５１ＥおよびＮ１４１の欠失から選択される複数の変異である。いくつかの実施形態では、変異は２つの変異であり、Ｃ１０８ＡおよびＹ１１９Ｒを含む。いくつかの実施形態では、変異は２つの変異であり、Ｃ１０８ＡおよびＬ１５１Ｅを含む。いくつかの実施形態では、変異は２つの変異であり、Ｃ１０８ＡおよびＮ１４１の欠失を含む。いくつかの実施形態では、変異は３つの変異であり、Ｃ１０８Ａ、Ｙ１１９ＲおよびＬ１５１Ｅを含む。いくつかの実施形態では、変異は３つの変異であり、Ｃ１０８Ａ、Ｙ１１９ＲおよびＮ１４１の欠失を含む。
【0146】
二量体化ドメイン
いくつかの実施形態では、二量体化ドメインは、互いに二量体化することができる。いくつかの実施形態では、第１の二量体化ドメインは、第２の二量体化ドメインと二量体化することができる。いくつかの実施形態では、第１および第２の二量体化ドメインは、互いに二量体化することができる。いくつかの実施形態では、二量化することができるのは、二量化するように構成されている。いくつかの実施形態では、二量体化は、生理学的条件下で行われる。いくつかの実施形態では、二量体化は体液内である。いくつかの実施形態では、体液は血液である。いくつかの実施形態では、体液は血漿である。いくつかの実施形態では、体液は血清である。いくつかの実施形態では、二量体化は対象内である。いくつかの実施形態では、二量体化は、インビボで行われる。いくつかの実施形態では、二量体化は、インビトロで行われる。
いくつかの実施形態では、二量体化ドメインは、互いに二量体化することができる。いくつかの実施形態では、第１の二量体化ドメインは、第２の二量体化ドメインと二量体化することができる。いくつかの実施形態では、第１および第２の二量体化ドメインは、互いに二量体化することができる。いくつかの実施形態では、二量化することができるのは、二量化するように構成されている。いくつかの実施形態では、二量体化は、生理学的条件下で行われる。いくつかの実施形態では、二量体化は体液内である。いくつかの実施形態では、体液は血液である。いくつかの実施形態では、体液は血漿である。いくつかの実施形態では、体液は血清である。いくつかの実施形態では、二量体化は対象内である。いくつかの実施形態では、二量体化は、インビボで行われる。いくつかの実施形態では、二量体化は、インビトロで行われる。
【0147】
本明細書で使用される場合、「二量体化ドメイン」という用語は、別のアミノ酸配列（他の二量体化ドメイン）と接触するとそれに結合して二量体を形成するアミノ酸配列を指す。二量体化ドメインは、多くのタンパク質配列が互いに結合することが知られているため、当該技術分野で周知である。いくつかの実施形態では、二量体化は、二量体化ドメイン間の共有結合の形成を含む。いくつかの実施形態では、二量体化は静電結合を含む。いくつかの実施形態では、二量体化は静電結合を含まない。いくつかの実施形態では、二量体化は可逆的である。いくつかの実施形態では、二量体化は不可逆的である。いくつかの実施形態では、二量体化は、二量体化ドメイン間に形成する結合を含む。いくつかの実施形態では、結合は化学結合である。いくつかの実施形態では、結合はジスルフィド結合である。いくつかの実施形態では、結合はペプチド結合である。二量体化ドメインの例としては、いくつか例を挙げると、抗体重鎖のヒンジドメイン、抗体重／軽鎖のＣＨ１／ＣＬドメイン、およびＴＣＲアルファ／ベータのＥＣＤドメインが挙げられる。さらに、上部ヒンジドメインは、二量体化を防ぐために、セリンへのシステイン置換／変異で操作することができる。いくつかの実施形態では、二量体化ドメインは、ＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ配列（配列番号６３）を含むかまたはそれからなる。
【0148】
いくつかの実施形態では、二量体化ドメインは、免疫グロブリン（Ｉｇ）ヒンジドメインを含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、Ｉｇヒンジドメインは重鎖ヒンジドメインである。いくつかの実施形態では、ＩｇはヒトＩｇである。いくつかの実施形態では、免疫グロブリンは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭから選択される。いくつかの実施形態では、免疫グロブリンはＩｇＧである。いくつかの実施形態では、ＩｇＧはＩｇＧ１である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧはＩｇＧ２である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧはＩｇＧ３である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧは、ＩｇＧ１およびＩｇＧ３から選択される。いくつかの実施形態では、ＩｇＧはＩｇＧ４である。いくつかの実施形態では、第１および第２の二量体化ドメインは両方ともＩｇヒンジドメインである。いくつかの実施形態では、第１および第２の二量体化ドメインは同一である。いくつかの実施形態では、第１および第２の二量体化ドメインは、少なくとも９５％同一である。いくつかの実施形態では、第１および第２の二量体化ドメインは、少なくとも５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、９７、９９または１００％同一である。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。
【0149】
いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、アミノ酸配列ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ（配列番号１６）を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、配列番号１６のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１ヒンジは、配列番号１６を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、アミノ酸配列ＥＰＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＡＡＡ（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、配列番号１７のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ２ヒンジは、配列番号１７を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、アミノ酸配列ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧ（配列番号１８）を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、配列番号１８のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ４ヒンジは、配列番号１８を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、アミノ酸配列ＥＬＫＴＰＬＧＤＴＴＨＴＣＰＲＣＰＥＰＫＳＣＤＴＰＰＰＣＰＲＣＰＥＰＫＳＣＤＴＰＰＰＣＰＲＣＰＥＰＫＳＣＤＴＰＰＰＣＰＲＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰ（配列番号１９）を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、配列番号１９のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ３ヒンジは、配列番号１９を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＣＰＸＣＰ（配列番号２０）モチーフを含む。いくつかの実施形態では、配列番号２０のＸはＰおよびＲから選択される。いくつかの実施形態では、配列番号２０はＣＰＰＣＰ（配列番号２１）である。いくつかの実施形態では、配列番号２０は、ＣＰＲＣＰ（配列番号２２）である。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号３７）を含む。したがって、ヒンジ領域はＣＰＸＣＰモチーフの後に終了すると考えられ得ることが理解されるであろう。
【0150】
いくつかの実施形態では、二量体化ドメインは、Ｉｇ ＣＨ１ドメインを含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、二量体化ドメインは、Ｉｇ重鎖ＣＨ１ドメインを含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、二量体化ドメインは、Ｉｇ軽鎖を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、二量体化ドメインは、軽鎖ＣＬドメインを含むか、または軽鎖ＣＬドメインからなる。いくつかの実施形態では、ＣＬドメインはＣＬカッパドメインである。くつかの実施形態では、ＣＬドメインはＣＬラムダドメインである。Ｉｇ重鎖のＣＨ１ドメインが軽鎖ＣＬドメインと二量体化することは当該技術分野で周知である。いくつかの実施形態では、第１の二量体化ドメインはＣＨ１ドメインを含むかまたはそれからなり、第２の二量体化ドメインはＣＬドメインを含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、第１および第２の二量体化ドメインは両方ともヒンジドメインを含む。いくつかの実施形態では、第１および第２の二量体化ドメインは両方ともＣＨ１ドメインを含まない。いくつかの実施形態では、第１および第２の二量体化ドメインは両方ともＣＬドメインを含まない。いくつかの場合、第１および第２のポリペプチド鎖は両方ともＣＨ１ドメインを含まない。いくつかの場合、第１および第２のポリペプチド鎖は両方ともＣＬドメインを含まない。
【0151】
いくつかの実施形態では、Ｉｇ ＣＨ１ドメインは、アミノ酸配列ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶ（配列番号２３）を含む。いくつかの実施形態では、Ｉｇ ＣＨ１ドメインは、配列番号２３からなる。いくつかの実施形態では、配列番号２３は、ＩｇＧ１ ＣＨ１ドメインである。いくつかの実施形態では、Ｉｇ ＣＨ１ドメインは、アミノ酸配列ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＴＶ（配列番号２４）を含む。いくつかの実施形態では、Ｉｇ ＣＨ１ドメインは、配列番号２４からなる。いくつかの実施形態では、配列番号２４は、ＩｇＧ２ ＣＨ１ドメインである。いくつかの実施形態では、Ｉｇ ＣＨ１ドメインは、アミノ酸配列ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＴＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶ（配列番号２５）を含む。いくつかの実施形態では、Ｉｇ ＣＨ１ドメインは、配列番号２５からなる。いくつかの実施形態では、配列番号２５は、ＩｇＧ３ ＣＨ１ドメインである。いくつかの実施形態では、Ｉｇ ＣＨ１ドメインは、アミノ酸配列ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶ（配列番号２６）を含む。いくつかの実施形態では、Ｉｇ ＣＨ１ドメインは、配列番号２６からなる。いくつかの実施形態では、配列番号２６は、ＩｇＧ４ ＣＨ１ドメインである。
【0152】
いくつかの実施形態では、Ｉｇ ＣＬカッパドメインは、アミノ酸配列ＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号２７）を含む。いくつかの実施形態では、Ｉｇ ＣＬカッパドメインは、配列番号２７からなる。いくつかの実施形態では、Ｉｇ ＣＬラムダドメインは、アミノ酸配列ＧＱＰＫＡＮＰＴＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＧＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＫＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳ（配列番号２８）を含む。いくつかの実施形態では、Ｉｇ ＣＬラムダドメインは、配列番号２８からなる。
【0153】
Ｆｃ領域
いくつかの実施形態では、組成物はＦｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域はＦｃドメインである。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域はＦｃ断片である。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖はＦｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチド鎖はＦｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、第１および第２のポリペプチド鎖の両方がＦｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、抗体重鎖のＦｃ領域である。いくつかの実施形態では、抗体重鎖はヒト抗体重鎖である。いくつかの実施形態では、重鎖はＩｇＧ重鎖である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧはＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４から選択される。いくつかの実施形態では、ＩｇＧは、ＩｇＧ１およびＩｇＧ３から選択される。いくつかの実施形態では、ＩｇＧはＩｇＧ１である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧはＩｇＧ２である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧはＩｇＧ３である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧはＩｇＧ４である。
いくつかの実施形態では、組成物はＦｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域はＦｃドメインである。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域はＦｃ断片である。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖はＦｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチド鎖はＦｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、第１および第２のポリペプチド鎖の両方がＦｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、抗体重鎖のＦｃ領域である。いくつかの実施形態では、抗体重鎖はヒト抗体重鎖である。いくつかの実施形態では、重鎖はＩｇＧ重鎖である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧはＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４から選択される。いくつかの実施形態では、ＩｇＧは、ＩｇＧ１およびＩｇＧ３から選択される。いくつかの実施形態では、ＩｇＧはＩｇＧ１である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧはＩｇＧ２である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧはＩｇＧ３である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧはＩｇＧ４である。
【0154】
いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、細胞傷害効果を誘導することができる。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１２）を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１２からなる。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１のＦｃドメインは、配列番号１２を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１２と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９３、９５、９７、または９９％の相同性を有する配列を含むかまたはそれからなる。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、細胞傷害効果を誘導するように構成されている。いくつかの実施形態では、細胞傷害効果は標的細胞に対するものである。いくつかの実施形態では、細胞傷害効果は結合時である。いくつかの実施形態では、細胞傷害効果は、タンパク質複合体によって結合された細胞に対するものである。いくつかの実施形態では、細胞傷害効果は、タンパク質複合体に結合する細胞に対するものである。いくつかの実施形態では、細胞傷害効果は、Ｆｃ領域への免疫細胞の結合によって媒介される。いくつかの実施形態では、細胞傷害効果は、Ｆｃ領域による免疫細胞活性化によって媒介される。いくつかの実施形態では、細胞傷害効果は、Ｆｃ領域による免疫細胞動員によって媒介される。いくつかの実施形態では、免疫細胞はＴ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫細胞はナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である。いくつかの実施形態では、免疫細胞はマクロファージである。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は細胞傷害性Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞はＣＤ８陽性Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導する。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を誘導する。
【0155】
いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域はＩｇ ＣＨ２ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域はＩｇ重鎖ＣＨ２ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域はＩｇ ＣＨ３ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域はＩｇ重鎖ＣＨ３ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、Ｉｇ ＣＨ２ドメインおよびＩｇ ＣＨ３ドメインの両方を含むかまたはそれらからなる。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、Ｉｇ重鎖ＣＨ２ドメインおよびＩｇ重鎖ＣＨ３ドメインの両方を含むかまたはそれらからなる。いくつかの実施形態では、第１の鎖はＦｃ領域の第１の部分を含み、第２の鎖はＦｃ領域の第２の部分を含む。いくつかの実施形態では、第１の部分は、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメインまたはその両方を含む。いくつかの実施形態では、第２の部分は、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメインまたはその両方を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域の第１の部分とＦｃ領域の第２の部分との界面が機能性Ｆｃ領域を生成する。いくつかの実施形態では、界面は接触を含む。いくつかの実施形態では、界面は、隣接する位置決めを含む。いくつかの実施形態では、界面は、本発明のタンパク質複合体の形成を含む。いくつかの実施形態では、界面は、第１および第２の二量体化ドメインの二量体化を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ２ドメインは、Ｉｇ ＣＨ２ドメインである。いくつかの実施形態では、ＣＨ２ドメインは、重鎖ＣＨ２ドメインである。いくつかの実施形態では、ＣＨ３ドメインは、Ｉｇ ＣＨ３ドメインである。いくつかの実施形態では、ＣＨ３ドメインは、重鎖ＣＨ３ドメインである。
【0156】
いくつかの実施形態では、ＣＨ２ドメインは、アミノ酸配列ＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫ（配列番号２９）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ２ドメインは、アミノ酸配列ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫ（配列番号１３）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ２ドメインは、配列番号２９からなる。いくつかの実施形態では、配列番号２９は、ＩｇＧ１ ＣＨ２ドメインである。いくつかの実施形態では、ＣＨ２ドメインは、アミノ酸配列ＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫ（配列番号３０）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ２ドメインは、配列番号３０からなる。いくつかの実施形態では、配列番号３０は、ＩｇＧ２ ＣＨ２ドメインである。いくつかの実施形態では、ＣＨ２ドメインは、アミノ酸配列ＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫ（配列番号３１）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ２ドメインは、配列番号３１からなる。いくつかの実施形態では、配列番号３１は、ＩｇＧ４ ＣＨ２ドメインである。いくつかの実施形態では、ＣＨ２ドメインは、アミノ酸配列ＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＫＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫ（配列番号３２）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ２ドメインは、配列番号３２からなる。いくつかの実施形態では、配列番号３２は、ＩｇＧ３ ＣＨ２ドメインである。
【0157】
いくつかの実施形態では、ＣＨ３ドメインは、アミノ酸配列ＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号３３）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ３ドメインは、アミノ酸配列ＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号６２）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ３ドメインは、配列番号３３からなる。いくつかの実施形態では、ＣＨ３ドメインは、配列番号６２からなる。いくつかの実施形態では、配列番号３３は、ＩｇＧ１ ＣＨ３ドメインである。いくつかの実施形態では、配列番号６２は、ＩｇＧ１ ＣＨ３ドメインである。いくつかの実施形態では、配列番号３３の配列は、主にヨーロッパ系およびアメリカ系のヒトに多く見出される配列である。いくつかの実施形態では、配列番号６２は、主にアジア系のヒトに見出される配列である。いくつかの実施形態では、ＣＨ３ドメインは、アミノ酸配列ＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＳＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号３４）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ３ドメインは、配列番号３４からなる。いくつかの実施形態では、配列番号３４は、ＩｇＧ２ ＣＨ３ドメインである。いくつかの実施形態では、ＣＨ３ドメインは、アミノ酸配列ＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号３５）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ３ドメインは、配列番号３５からなる。いくつかの実施形態では、配列番号３５は、ＩｇＧ４ ＣＨ３ドメインである。いくつかの実施形態では、ＣＨ３ドメインは、アミノ酸配列ＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＳＧＱＰＥＮＮＹＮＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＩＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＲＦＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号３６）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ３ドメインは、配列番号３６からなる。いくつかの実施形態では、配列番号３６は、ＩｇＧ３ ＣＨ３ドメインである。
【0158】
いくつかの実施形態では、Ｆｃは変異を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ３ドメインは変異を含む。いくつかの実施形態では、第１のＣＨ３ドメインは、第１の変異を含む。いくつかの実施形態では、第２のＣＨ３ドメインは、第２の変異を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ２ドメインは変異を含む。いくつかの実施形態では、第１のＣＨ２ドメインは、第１の変異を含む。いくつかの実施形態では、第２のＣＨ２ドメインは、第２の変異を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインは両方とも変異を含む。いくつかの実施形態では、第１のＣＨ２ドメインおよび第１のＣＨ３ドメインは、各々、第１の変異を含む。いくつかの実施形態では、第２のＣＨ２ドメインおよび第２のＣＨ３ドメインは、各々、第２の変異を含む。いくつかの実施形態では、変異は、第１のポリペプチド鎖のホモ二量体化を阻害する。いくつかの実施形態では、第１の変異は、第１のポリペプチド鎖のホモ二量体化を阻害する。いくつかの実施形態では、変異は、第２のポリペプチド鎖のホモ二量体化を阻害する。いくつかの実施形態では、第２の変異は、第２のポリペプチド鎖のホモ二量体化を阻害する。いくつかの実施形態では、変異は、ヘテロ二量体化を可能にする。いくつかの実施形態では、変異は、第１および第２の鎖のヘテロ二量体化を可能にする。いくつかの実施形態では、許容することは、促進することである。いくつかの実施形態では、許容することは、増強することである。
【0159】
重鎖ヘテロ二量体化を促進するおよび／またはホモ二量体化を阻害する変異は、当該技術分野で周知である。任意のそのような変異または改変を、本発明のポリペプチドを構築するために使用することができる。いくつかの実施形態では、ＩｇＧからの領域が、ＩｇＡからの領域で置き換えられる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲａからの領域が第１のＣＨ３ドメインに挿入され、ＴＣＲｂからの領域が第２のＣＨ３ドメインに挿入される。いくつかの実施形態では、変異は、ＴＣＲからの領域の挿入である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲは、ＴＣＲａおよびＴＣＲｂから選択される。いくつかの実施形態では、変異は、異なるＩｇからの領域の挿入である。これらの変異の例は、表１に見出すことができる。いくつかの実施形態では、変異は、表１の変異から選択される。いくつかの実施形態では、第１の変異は、表１の行および第２列に示される変異の群から選択され、第２の変異は、第３列の表１の同じ行に示される変異の群である。表１の変異は、特に明記しない限り、ＩｇＧ１のＫａｂａｔナンバリングとともに提供される。対応する変異を他のＩＧにおいて、具体的には他のＩｇＧにおいて行うことができる。いくつかの実施形態では、第１の変異はＴ３６６Ｙであり、第２の変異はＹ４０７Ｔである。いくつかの実施形態では、第１の変異は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗであり、第２の変異は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖである。いくつかの実施形態では、第１の変異は、Ｓ３６４ＨおよびＦ４０５Ａであり、第２の変異は、Ｙ３４９ＴおよびＴ３９２Ｆである。いくつかの実施形態では、第１の変異は、Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５Ａ、およびＹ４０７Ｖであり、第２の変異は、Ｔ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２Ｌ、およびＴ３９４Ｗである。いくつかの実施形態では、第１の変異は、Ｋ３９２ＤおよびＫ４０９Ｄであり、第２の変異は、Ｅ３５６Ｋ、およびＤ３９９Ｋである。いくつかの実施形態では、第１の変異は、Ｄ２２１Ｅ、Ｐ２２８Ｅ、およびＬ３６８Ｅであり、第２の変異は、Ｄ２２１Ｒ、Ｐ２２８Ｒ、およびＫ４０９Ｒである。いくつかの実施形態では、第１の変異は、Ｋ３６０ＥおよびＫ４０９Ｗであり、第２の変異は、Ｑ３４７Ｒ、Ｄ３９９Ｖ、およびＦ４０５Ｔである。いくつかの実施形態では、第１の変異は、Ｋ３６０Ｅ、Ｋ４０９Ｗ、およびＹ３４９Ｃであり、第２の変異は、Ｑ３４７Ｒ、Ｄ３９９Ｖ、Ｆ４０５Ｔ、およびＳ３５４Ｃである。いくつかの実施形態では、第１の変異はＦ４０５Ｌであり、第２の変異はＫ４０９Ｒである。いくつかの実施形態では、第１の変異は、Ｋ３６０Ｄ、Ｄ３９９Ｍ、およびＹ４０７Ａであり、第２の変異は、Ｅ３４５Ｒ、Ｑ３４７Ｒ、Ｔ３６６Ｖ、およびＫ４０９Ｖである。いくつかの実施形態では、第１の変異は、Ｙ３４９Ｓ、Ｋ３７０Ｙ、Ｔ３６６Ｍ、およびＫ４０９Ｖであり、第２の変異は、Ｅ３５６Ｇ、Ｅ３５７Ｄ、Ｓ３６４Ｑ、およびＹ４０７Ａである。いくつかの実施形態では、第１の変異はＴ３６６Ｋであり、第２の変異は、Ｃ３５１Ｄ、Ｙ３４９Ｅ、Ｙ３４９Ｄ、Ｌ３６８Ｅ、Ｌ３６８Ｄ、Ｙ３４９ＥおよびＲ３５５Ｅ、Ｙ３４９ＥおよびＲ３５５Ｄ、Ｙ３４９ＤおよびＲ３５５Ｅ、ならびにＹ３４９ＤおよびＲ３５５Ｄから選択される。いくつかの実施形態では、第１の変異は、Ｔ３６６ＫおよびＣ３５１Ｋであり、第２の変異は、Ｃ３５１Ｄ、Ｙ３４９Ｅ、Ｙ３４９Ｄ、Ｌ３６８Ｅ、Ｌ３６８Ｄ、Ｙ３４９ＥおよびＲ３５５Ｅ、Ｙ３４９ＥおよびＲ３５５Ｄ、Ｙ３４９ＤおよびＲ３５５Ｅ、ならびにＹ３４９ＤおよびＲ３５５Ｄから選択される。いくつかの実施形態では、第１の変異は、Ｌ３５１ＤおよびＬ３６８Ｅであり、第２の変異は、Ｌ３５１ＫおよびＴ３６６Ｋである。いくつかの実施形態では、第１の変異は、Ｌ３６８ＤおよびＫ３７０Ｓであり、第２の変異は、Ｅ３５７ＱおよびＳ３６４Ｋである。いくつかの実施形態では、第１の変異はＴ３６６Ｗであり、第２の変異はＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖである。いくつかの実施形態では、ＩｇはＩｇＧ２であり、第１の変異はＣ２２３Ｅ、Ｐ２２８Ｅ、およびＬ３６８Ｅであり、第２の変異はＣ２２３Ｒ、Ｅ２２５Ｒ、Ｐ２２８Ｒ、およびＫ４０９Ｒである。いくつかの実施形態では、第１の変異は、Ｓ３５４ＣまたはＴ３６６Ｗであり、第２の変異は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、またはＹ４０７Ｖである。いくつかの実施形態では、第１の変異は、Ｓ３６４ＨまたはＦ４０５Ａであり、第２の変異は、Ｙ３４９ＴまたはＴ３９２Ｆである。いくつかの実施形態では、第１の変異は、Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５Ａ、またはＹ４０７Ｖであり、第２の変異は、Ｔ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２Ｌ、またはＴ３９４Ｗである。いくつかの実施形態では、第１の変異は、Ｋ３９２Ｄ、またはＫ４０９Ｄであり、第２の変異は、Ｅ３５６Ｋ、またはＤ３９９Ｋである。いくつかの実施形態では、第１の変異は、Ｄ２２１Ｅ、Ｐ２２８Ｅ、またはＬ３６８Ｅであり、第２の変異は、Ｄ２２１Ｒ、Ｐ２２８Ｒ、またはＫ４０９Ｒである。いくつかの実施形態では、第１の変異は、Ｋ３６０Ｅ、またはＫ４０９Ｗであり、第２の変異は、Ｑ３４７Ｒ、Ｄ３９９Ｖ、またはＦ４０５Ｔである。いくつかの実施形態では、第１の変異は、Ｋ３６０Ｅ、Ｋ４０９Ｗ、またはＹ３４９Ｃであり、第２の変異は、Ｑ３４７Ｒ、Ｄ３９９Ｖ、Ｆ４０５Ｔ、またはＳ３５４Ｃである。いくつかの実施形態では、第１の変異は、Ｋ３６０Ｄ、Ｄ３９９Ｍ、またはＹ４０７Ａであり、第２の変異は、Ｅ３４５Ｒ、Ｑ３４７Ｒ、Ｔ３６６Ｖ、またはＫ４０９Ｖである。いくつかの実施形態では、第１の変異は、Ｙ３４９Ｓ、Ｋ３７０Ｙ、Ｔ３６６Ｍ、またはＫ４０９Ｖであり、第２の変異は、Ｅ３５６Ｇ、Ｅ３５７Ｄ、Ｓ３６４Ｑ、またはＹ４０７Ａである。いくつかの実施形態では、第１の変異は、Ｌ３５１ＤまたはＬ３６８Ｅであり、第２の変異は、Ｌ３５１ＫまたはＴ３６６Ｋである。いくつかの実施形態では、第１の変異は、Ｌ３６８ＤまたはＫ３７０Ｓであり、第２の変異は、Ｅ３５７ＱまたはＳ３６４Ｋである。いくつかの実施形態では、第１の変異はＴ３６６Ｗであり、第２の変異はＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡまたはＹ４０７Ｖである。いくつかの実施形態では、ＩｇはＩｇＧ２であり、第１の変異はＣ２２３Ｅ、Ｐ２２８Ｅ、またはＬ３６８Ｅであり、第２の変異はＣ２２３Ｒ、Ｅ２２５Ｒ、Ｐ２２８Ｒ、またはＫ４０９Ｒである。いくつかの実施形態では、ＣＨ３ドメインは、ＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号４６）を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＣＨ３ドメインは、ＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号４７）を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＣＨ３ドメインは、ＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＹＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号４８）を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＣＨ３ドメインは、ＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＴＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号４９）を含むかまたはそれからなる。
【0160】
【表1】
【0161】
いくつかの実施形態では、変異はエフェクター機能を低下させる。いくつかの実施形態では、エフェクター機能は、ＡＤＣＣ、ＣＤＣまたはその両方を含む。いくつかの実施形態では、エフェクター機能の低下は、細胞傷害性の低下を含む。いくつかの実施形態では、低下は消失である。いくつかの実施形態では、ＦｃはＩｇＧ１またはＩｇＧ３に由来し、変異はエフェクター機能を低下させる。いくつかの実施形態では、ＦｃはＩｇＧ１に由来し、エフェクター機能を低下させる少なくとも１つの変異を含む。エフェクター機能を低下させる変異は当該技術分野で周知であり、任意のそのような変異を使用することができる。そのような変異の例は、Ｓａｕｎｄｅｒｓ，２０１９，「Ｃｏｎｃｅｐｔｕａｌ ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ ｔｏ ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｅｆｆｅｃｔｏｒ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ｈａｌｆ－ｌｉｆｅ」Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，Ｊｕｎ ７；１０：１２９６に見出すことができ、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【0162】
ＩｇＧ２およびＩｇＧ４は、大幅に低下したエフェクター機能を有し、一般に本質的に細胞傷害性ではないことが当業者には知られている。さらに、ＩｇＧ４中のＳ２２８ＰおよびＬ２３５Ｅなどの変異は、エフェクター機能をさらに低下させることが知られている。さらに、ＩｇＧ１およびＩｇＧ３の細胞傷害性／エフェクター機能を低下させる変異は、当該技術分野で周知である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧは、少なくとも１つの変異を含む。いくつかの実施形態では、変異は、複数の変異である。いくつかの実施形態では、変異は、細胞傷害性を低下させる。いくつかの実施形態では、変異は、安定性を増加させる。いくつかの実施形態では、変異は、凝集を減少させる。いくつかの実施形態では、細胞傷害性を低下させる複数の変異はＬＡＬＡ変異を含む。いくつかの実施形態では、細胞傷害性を低下させる複数の変異はＰＧ－ＬＡＬＡ変異を含む。いくつかの実施形態では、変異は、ＩｇＧ１ヒト重鎖のプロリン３２９のグリシンへの変異（Ｐ３２９Ｇ）である。いくつかの実施形態では、ＰからＧへの変異は、配列番号１２のＰ１０９のＧへの変異である。いくつかの実施形態では、変異は、ＩｇＧ１ヒト重鎖のロイシン２３４のアラニンへの変異（Ｌ２３４Ａ）である。いくつかの実施形態では、ＬからＡへの変異は、配列番号１２のＬ１４のＡへの変異である。いくつかの実施形態では、変異は、ＩｇＧ１ヒト重鎖のロイシン２３５のアラニンへの変異（Ｌ２３５Ａ）である。いくつかの実施形態では、ＬからＡへの変異は、配列番号１２のＬ１５のＡへの変異である。いくつかの実施形態では、複数の変異は、配列番号１２のＰ１０９Ｇ、Ｌ１４ＡおよびＬ１５Ａを含む。いくつかの実施形態では、複数の変異は、配列番号１２のＬ１４ＡおよびＬ１５Ａを含む。いくつかの実施形態では、複数の変異は、ＩｇＧ１ヒト重鎖のＰ３２９Ｇ、Ｌ２３４ＡおよびＬ２３５Ａを含む。いくつかの実施形態では、複数の変異は、ＩｇＧ１ヒト重鎖のＬ２３４ＡおよびＬ２３５Ａを含む。ＩｇＧ３重鎖または非ヒトＩｇＧ１の重鎖においても並行変異を行えることが当業者によって理解されるであろう。いくつかの実施形態では、細胞傷害性を低下させる複数の変異はＹＴＥ変異を含む。いくつかの実施形態では、変異は、ＩｇＧ１ヒト重鎖のメチオニン２５２のチロシンへの変異（Ｍ２５２Ｙ）である。いくつかの実施形態では、ＭからＹへの変異は、配列番号１２のＭ３２のＹへの変異である。いくつかの実施形態では、変異は、ＩｇＧ１ヒト重鎖のセリン２５４のトレオニンへの変異（Ｓ２５４Ｔ）である。いくつかの実施形態では、ＳからＴへの変異は、配列番号１２のＳ３４のＴへの変異である。いくつかの実施形態では、変異は、ＩｇＧ１ヒト重鎖のトレオニン２５６のグルタミン酸への変異（Ｔ２５６Ｅ）である。いくつかの実施形態では、ＴからＥへの変異は、配列番号１２のＴ３６のＥへの変異である。いくつかの実施形態では、複数の変異は、配列番号１２のＭ３２Ｙ、Ｓ３４ＴおよびＴ３６Ｅを含む。いくつかの実施形態では、複数の変異は、ＩｇＧ１ヒト重鎖のＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４ＴおよびＴ２５６Ｅを含む。いくつかの実施形態では、変異は、ＩｇＧ１ヒト重鎖のアスパラギン２９７の変異（Ｎ２９７）である。いくつかの実施形態では、アスパラギンは、アラニン（Ｎ２９７Ａ）に変異している。いくつかの実施形態では、アスパラギンは、グルタミン（Ｎ２９７Ｑ）に変異している。いくつかの実施形態では、アスパラギンは、配列番号１２のＮ７７（Ｎ７７ＡまたはＮ７７Ｑ）である。ＩｇＧ３重鎖または非ヒトＩｇＧ１の重鎖においても並行変異を行えることが当業者によって理解されるであろう。本明細書に示される数は、可変ドメインを含む全長ＩｇＧに関連することが理解されるであろう。数は、ＩｇＧのＦｃ部分のみの中のこれらのアミノ酸の位置に対応するようにシフトされ得る。
【0163】
第３および第４の鎖
いくつかの実施形態では、タンパク質複合体は、第３のポリペプチド鎖をさらに含む。いくつかの実施形態では、第３のポリペプチド鎖は、重症筋無力症自己抗体のタンパク質標的の第３の断片を含む。いくつかの実施形態では、第３の断片は、第１の断片とは異なる。いくつかの実施形態では、第３の断片は、第２の断片とは異なる。いくつかの実施形態では、第３の断片は、第１の断片と同じである。いくつかの実施形態では、第１の断片は、第２の断片と同じである。いくつかの実施形態では、第３の断片は、第１および第２の断片と同じである。いくつかの実施形態では、同じとは、同じ配列である。いくつかの実施形態では、異なるとは、異なる配列である。
いくつかの実施形態では、タンパク質複合体は、第３のポリペプチド鎖をさらに含む。いくつかの実施形態では、第３のポリペプチド鎖は、重症筋無力症自己抗体のタンパク質標的の第３の断片を含む。いくつかの実施形態では、第３の断片は、第１の断片とは異なる。いくつかの実施形態では、第３の断片は、第２の断片とは異なる。いくつかの実施形態では、第３の断片は、第１の断片と同じである。いくつかの実施形態では、第１の断片は、第２の断片と同じである。いくつかの実施形態では、第３の断片は、第１および第２の断片と同じである。いくつかの実施形態では、同じとは、同じ配列である。いくつかの実施形態では、異なるとは、異なる配列である。
【0164】
いくつかの実施形態では、第３のポリペプチドは、第３の二量体化ドメインをさらに含む。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、第４の二量体化ドメインをさらに含む。いくつかの実施形態では、第３および第４の二量体化ドメインは、互いに二量体化することができる。いくつかの実施形態では、第３および第４の二量体化ドメインは、互いに二量体化するように構成されている。いくつかの実施形態では、第３の二量体化ドメインは、第１の二量体化ドメインに二量体化するように構成されていない。いくつかの実施形態では、第３の二量体化ドメインは、第２の二量体化ドメインに二量体化するように構成されていない。いくつかの実施形態では、第４の二量体化ドメインは、第１の二量体化ドメインに二量体化するように構成されていない。いくつかの実施形態では、第４の二量体化ドメインは、第２の二量体化ドメインに二量体化するように構成されていない。いくつかの実施形態では、二量体化するように構成されていると、二量体化することができる。いくつかの実施形態では、第３および第４の二量体化ドメインは、第１および第２の二量体化ドメインとは異なる。いくつかの実施形態では、第１および第２の二量体化ドメインはヒンジドメインであり、第３および第４の二量体化ドメインはＣＨ１／ＣＬドメインである。いくつかの実施形態では、第１および第２の二量体化ドメインはＣＨ１／ＣＬドメインであり、第３および第４の二量体化ドメインはヒンジドメインである。
【0165】
いくつかの実施形態では、タンパク質複合体は、第４のポリペプチド鎖をさらに含む。いくつかの実施形態では、第４のポリペプチド鎖は、重症筋無力症自己抗体のタンパク質標的の第４の断片を含む。いくつかの実施形態では、第４の断片は、第１の断片とは異なる。いくつかの実施形態では、第４の断片は、第２の断片とは異なる。いくつかの実施形態では、第４の断片は、第３の断片とは異なる。いくつかの実施形態では、第４の断片は、第１の断片と同じである。いくつかの実施形態では、第４の断片は、第２の断片と同じである。いくつかの実施形態では、第４の断片は、第３の断片と同じである。いくつかの実施形態では、第４の断片は、第１、第２および第３の断片と同じである。いくつかの実施形態では、第１、第２、および第３の断片はすべて同じである。いくつかの実施形態では、第１、第２、第３および第４の断片はすべて異なる。いくつかの実施形態では、同じとは、同じ配列である。いくつかの実施形態では、異なるとは、異なる配列である。いくつかの実施形態では、異なるとは、異なるタンパク質である。いくつかの実施形態では、異なるとは、同じタンパク質であるが異なる配列を含む。いくつかの実施形態では、異なるとは、同じタンパク質であるがタンパク質の異なる領域である。いくつかの実施形態では、第１、第２、第３および第４のタンパク質の少なくとも２つは、単一のタンパク質複合体の一部である。いくつかの実施形態では、タンパク質複合体は、哺乳動物における複合体である。いくつかの実施形態では、タンパク質複合体は、ヒトにおける複合体である。
【0166】
いくつかの実施形態では、第４のポリペプチドは、第５の二量体化ドメインをさらに含む。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、第６の二量体化ドメインをさらに含む。いくつかの実施形態では、第５および第６の二量体化ドメインは、互いに二量体化することができる。いくつかの実施形態では、第５および第６の二量体化ドメインは、互いに二量体化するように構成されている。いくつかの実施形態では、第５の二量体化ドメインは、第１の二量体化ドメインに二量体化するように構成されていない。いくつかの実施形態では、第５の二量体化ドメインは、第２の二量体化ドメインに二量体化するように構成されていない。いくつかの実施形態では、第５の二量体化ドメインは、第３の二量体化ドメインに二量体化するように構成されていない。いくつかの実施形態では、第５の二量体化ドメインは、第４の二量体化ドメインに二量体化するように構成されていない。いくつかの実施形態では、第６の二量体化ドメインは、第１の二量体化ドメインに二量体化するように構成されていない。いくつかの実施形態では、第６の二量体化ドメインは、第２の二量体化ドメインに二量体化するように構成されていない。いくつかの実施形態では、第６の二量体化ドメインは、第３の二量体化ドメインに二量体化するように構成されていない。いくつかの実施形態では、第６の二量体化ドメインは、第４の二量体化ドメインに二量体化するように構成されていない。いくつかの実施形態では、第５および第６の二量体化ドメインは、第１および第２の二量体化ドメインとは異なる。いくつかの実施形態では、第５および第６の二量体化ドメインは、第３および第４の二量体化ドメインとは異なる。いくつかの実施形態では、第１および第２の二量体化ドメインはヒンジドメインであり、第３および第４の二量体化ドメインはＣＨ１／ＣＬドメインであり、第５および第６の二量体化ドメインはＣＨ１／ＣＬドメインである。いくつかの実施形態では、第１および第２の二量体化ドメインはＣＨ１／ＣＬドメインであり、第３および第４の二量体化ドメインはヒンジドメインであり、第５および第６の二量体化ドメインはヒンジドメインである。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドは両方ともＣＨ１ドメインを含まない。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドは両方ともＣＨ１ドメインを含む。第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドは両方ともＣＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドは両方ともＣＬドメインを含まない。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドはＣＨ１ドメインを含み、第２のポリペプチドはＣＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、第３のポリペプチドはＣＬドメインを含み、第４のポリペプチドはＣＨ１ドメインを含む。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドはＣＬドメインを含み、第２のポリペプチドはＣＨ１ドメインを含む。いくつかの実施形態では、第３のポリペプチドはＣＨ１ドメインを含み、第４のポリペプチドはＣＬドメインを含む。
【0167】
いくつかの実施形態では、第３および第４の二量体化ドメインは、第３および第４の二量体化ドメインの二量体化を可能にし、第３の二量体化ドメインの第５、第６またはその両方の二量体化ドメインへの二量体化を阻害する変異を含む。いくつかの実施形態では、第３および第４の二量体化ドメインは、第３および第４の二量体化ドメインの二量体化を可能にし、第４の二量体化ドメインの第５、第６またはその両方の二量体化ドメインへの二量体化を阻害する変異を含む。いくつかの実施形態では、第５および第６の二量体化ドメインは、第５および第６の二量体化ドメインの二量体化を可能にし、第５の二量体化ドメインの第３、第４またはその両方の二量体化ドメインへの二量体化を阻害する変異を含む。いくつかの実施形態では、第５および第６の二量体化ドメインは、第５および第６の二量体化ドメインの二量体化を可能にし、第６の二量体化ドメインの第３、第６またはその両方の二量体化ドメインへの二量体化を阻害する変異を含む。
【0168】
代替構成
いくつかの実施形態では、組成物は、重症筋無力症自己抗体の第１のタンパク質標的またはその類似体もしくは誘導体の断片と、重症筋無力症自己抗体の第２のタンパク質標的またはその類似体もしくは誘導体の断片とを含むポリペプチド鎖を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチド鎖は単一のポリペプチド鎖である。いくつかの実施形態では、１本鎖は、第１のタンパク質の断片および第２のタンパク質の断片を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチド鎖は、重症筋無力症自己抗体の第３のタンパク質標的またはその類似体もしくは誘導体の断片をさらに含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチド鎖は、重症筋無力症自己抗体の第４のタンパク質標的またはその類似体もしくは誘導体の断片をさらに含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチド鎖はＦｃ領域をさらに含む。
いくつかの実施形態では、組成物は、重症筋無力症自己抗体の第１のタンパク質標的またはその類似体もしくは誘導体の断片と、重症筋無力症自己抗体の第２のタンパク質標的またはその類似体もしくは誘導体の断片とを含むポリペプチド鎖を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチド鎖は単一のポリペプチド鎖である。いくつかの実施形態では、１本鎖は、第１のタンパク質の断片および第２のタンパク質の断片を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチド鎖は、重症筋無力症自己抗体の第３のタンパク質標的またはその類似体もしくは誘導体の断片をさらに含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチド鎖は、重症筋無力症自己抗体の第４のタンパク質標的またはその類似体もしくは誘導体の断片をさらに含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチド鎖はＦｃ領域をさらに含む。
【0169】
いくつかの実施形態では、重症筋無力症自己抗体の第１のタンパク質標的またはその類似体もしくは誘導体の断片は、リンカーによって重症筋無力症自己抗体の第２のタンパク質標的またはその類似体もしくは誘導体の断片から分離されている。いくつかの実施形態では、重症筋無力症自己抗体の第３のタンパク質標的またはその類似体もしくは誘導体の断片は、リンカーによって、重症筋無力症自己抗体の第１のタンパク質標的または第２のタンパク質標的またはその類似体もしくは誘導体の断片から分離されている。いくつかの実施形態では、重症筋無力症自己抗体の第４のタンパク質標的またはその類似体もしくは誘導体の断片は、リンカーによって、重症筋無力症自己抗体の第１のタンパク質標的、第２のタンパク質標的または第３のタンパク質標的またはその類似体もしくは誘導体の断片から分離されている。いくつかの実施形態では、断片は、リンカーによってＦｃ領域から分離されている。
【0170】
いくつかの実施形態では、断片および二量体化ドメインは、リンカーによって分離されている。いくつかの実施形態では、二量体化ドメインおよびＦｃ領域は、リンカーによって分離されている。いくつかの実施形態では、断片およびＦｃ領域は、リンカーによって分離されている。いくつかの実施形態では、リンカーはアミノ酸リンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーは化学的リンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーはペプチドリンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーは結合である。いくつかの実施形態では、結合はペプチド結合である。いくつかの実施形態では、結合はアミノ酸結合である。いくつかの実施形態では、リンカーは可撓性リンカーである。リンカーは当該技術分野で周知であり、任意のリンカーを使用することができる。いくつかの実施形態では、リンカーは化学的リンカーである。
【0171】
いくつかの実施形態では、コンジュゲートとは、連結されている。いくつかの実施形態では、コンジュゲーションは、結合を介する。いくつかの実施形態では、コンジュゲートは、直接コンジュゲートされている。いくつかの実施形態では、コンジュゲートは、リンカーを介してコンジュゲートされている。
【0172】
いくつかの実施形態では、リンカーは、鎖の異なる部分間の立体障害を阻害するのに十分な長さである。いくつかの実施形態では、リンカーは、コンジュゲートの異なる部分間の立体障害を阻害するのに十分な長さである。いくつかの実施形態では、リンカーは、鎖の別の部分からの立体障害なしに抗体の断片への結合を可能にするのに十分な長さである。いくつかの実施形態では、リンカーは、コンジュゲートの別の部分からの立体障害なしに抗体の断片への結合を可能にするのに十分な長さである。いくつかの実施形態では、リンカーは、鎖の別の部分からの立体障害なしに細胞の断片への結合を可能にするのに十分な長さである。いくつかの実施形態では、リンカーは、コンジュゲートの別の部分からの立体障害なしに細胞の断片への結合を可能にするのに十分な長さである。いくつかの実施形態では、リンカーは、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５アミノ酸長である。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。いくつかの実施形態では、リンカーは、少なくとも１アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは少なくとも５アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、少なくとも１０アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、少なくとも１５アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、多くとも１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０または１００アミノ酸長である。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。いくつかの実施形態では、リンカーは、多くとも１０アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、多くとも２０アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、多くとも５０アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、多くとも１００アミノ酸長である。
【0173】
いくつかの実施形態では、リンカーは可撓性リンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーはＧＳリンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーはグリシン－セリン含有リンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーはグリシン残基およびセリン残基からなる。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＧＧＳ（配列番号３８）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＧＧＧＳ（配列番号１３６）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、配列番号３８からなる。いくつかの実施形態では、リンカーは、配列番号１３６からなる。いくつかの実施形態では、リンカーは（ＧＧＧＳ）ｎを含み、ｎは整数であるいくつかの実施形態では、リンカーは（ＧＧＧＧＳ）ｎを含み、ｎは整数であるいくつかの実施形態では、リンカーは（ＧＧＧＳ）ｎからなり、ｎは整数であるいくつかの実施形態では、リンカーは（ＧＧＧＧＳ）ｎからなり、ｎは整数であるいくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＳＡＧＳＡＡＧＳＧＥＦ（配列番号４５）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、（ＧＧＧＳ）ｎＧＳを含むかまたはそれからなり、ｎは整数である。いくつかの実施形態では、ｎは、１、２、３、４、５、または６から選択される。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。いくつかの実施形態では、ｎは６である。いくつかの実施形態では、リンカーは剛性リンカーである。いくつかの実施形態では、剛性リンカーは、ＥＡＡＡＫ（配列番号１３７）を含む。いくつかの実施形態では、剛性リンカーは、配列番号１３７からなる。いくつかの実施形態では、剛性リンカーは（ＥＡＡＡＫ）ｎを含み、ｎは整数である。いくつかの実施形態では、剛性リンカーは（ＥＡＡＡＫ）ｎからなり、ｎは整数である。いくつかの実施形態では、剛性リンカーは（ＥＡＡＡＫ）ｎＧＳを含み、ｎは整数である。いくつかの実施形態では、剛性リンカーは（ＥＡＡＡＫ）ｎＧＳからなり、ｎは整数である。いくつかの実施形態では、剛性リンカーは（ＥＡＡＡＫ）ｎＧＧＳを含み、ｎは整数である。いくつかの実施形態では、剛性リンカーは（ＥＡＡＡＫ）ｎＧＧＳからなり、ｎは整数である。いくつかの実施形態では、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９および１０から選択される。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。いくつかの実施形態では、ｎは２である。いくつかの実施形態では、ｎは３である。いくつかの実施形態では、ｎは４である。いくつかの実施形態では、ｎは５である。
【0174】
いくつかの実施形態では、二量体化ドメインは、断片のＣ末端にある。いくつかの実施形態では、断片は、二量体化ドメインのＣ末端にある。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、断片のＣ末端にある。いくつかの実施形態では、断片は、Ｆｃ領域のＣ末端にある。いくつかの実施形態では、二量体化ドメインは、Ｆｃ領域のＣ末端にある。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、二量体化ドメインのＣ末端にある。いくつかの実施形態では、二量体化ドメインは、断片のＮ末端にある。いくつかの実施形態では、断片は、二量体化ドメインのＮ末端にある。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、断片のＮ末端にある。いくつかの実施形態では、断片は、Ｆｃ領域のＮ末端にある。いくつかの実施形態では、二量体化ドメインは、Ｆｃ領域のＮ末端にある。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、二量体化ドメインのＮ末端にある。
【0175】
いくつかの実施形態では、エピトープは、少なくとも２つの断片にまたがる。いくつかの実施形態では、エピトープは、第１および第２の断片にまたがる。いくつかの実施形態では、エピトープは、第１および第３の断片にまたがる。いくつかの実施形態では、エピトープは、第１および第４の断片にまたがる。いくつかの実施形態では、エピトープは、第２および第３の断片にまたがる。いくつかの実施形態では、エピトープは、第２および第４の断片にまたがる。いくつかの実施形態では、エピトープは、第３および第４の断片にまたがる。いくつかの実施形態では、エピトープは、２つのタンパク質にまたがる。いくつかの実施形態では、エピトープは、タンパク質複合体中の２つのタンパク質にまたがる。いくつかの実施形態では、エピトープは、３つの断片にまたがる。いくつかの実施形態では、エピトープは、３つのタンパク質にまたがる。いくつかの実施形態では、エピトープは、４つの断片にまたがる。いくつかの実施形態では、エピトープは、４つのタンパク質にまたがる。いくつかの実施形態では、エピトープは複合エピトープである。いくつかの実施形態では、エピトープはＢ細胞受容体（ＢＣＲ）特異的エピトープである。
【0176】
いくつかの実施形態では、３つの断片はすべて、ＡＣｈＲａに由来する。いくつかの実施形態では、３つの断片はすべて、ＡＣｈＲｂに由来する。いくつかの実施形態では、３つの断片はすべて、ＡＣｈＲｇに由来する。いくつかの実施形態では、３つの断片はすべて、ＡＣｈＲｄに由来する。いくつかの実施形態では、３つの断片はすべて、ＡＣｈＲｅに由来する。いくつかの実施形態では、３つの断片は、ＡＣｈＲａ、ＡＣｈＲｂ、ＡＣｈＲｇ、ＡＣｈＲｄおよびＡＣｈＲｅから選択される。いくつかの実施形態では、３つの断片は、ＡＣｈＲａ、ＡＣｈＲｂ、ＡＣｈＲｇ、ＡＣｈＲｄおよびＡＣｈＲｅからの２つの異なるタンパク質を含む。いくつかの実施形態では、３つの断片は、ＡＣｈＲａ、ＡＣｈＲｂ、ＡＣｈＲｇ、ＡＣｈＲｄおよびＡＣｈＲｅからの３つの異なるタンパク質を含む。
【0177】
いくつかの実施形態では、４つの断片はすべて、ＡＣｈＲａに由来する。いくつかの実施形態では、４つの断片はすべて、ＡＣｈＲｂに由来する。いくつかの実施形態では、４つの断片はすべて、ＡＣｈＲｇに由来する。いくつかの実施形態では、４つの断片はすべて、ＡＣｈＲｄに由来する。いくつかの実施形態では、４つの断片はすべて、ＡＣｈＲｅに由来する。いくつかの実施形態では、４つの断片は、ＡＣｈＲａ、ＡＣｈＲｂ、ＡＣｈＲｇ、ＡＣｈＲｄおよびＡＣｈＲｅから選択される。いくつかの実施形態では、４つの断片は、ＡＣｈＲａ、ＡＣｈＲｂ、ＡＣｈＲｇ、ＡＣｈＲｄおよびＡＣｈＲｅからの２つの異なるタンパク質を含む。いくつかの実施形態では、４つの断片は、ＡＣｈＲａ、ＡＣｈＲｂ、ＡＣｈＲｇ、ＡＣｈＲｄおよびＡＣｈＲｅからの３つの異なるタンパク質を含む。いくつかの実施形態では、４つの断片は、ＡＣｈＲａ、ＡＣｈＲｂ、ＡＣｈＲｇ、ＡＣｈＲｄおよびＡＣｈＲｅからの４つの異なるタンパク質を含む。
【0178】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号５０）に連結された断片を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号５０に連結された断片を含む。いくつかの実施形態では、第１および第２のポリペプチドは両方とも、配列番号５０に連結された断片を含む。
【0179】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号５１）に連結された断片を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号５１に連結された断片を含む。いくつかの実施形態では、第１および第２のポリペプチドは両方とも、配列番号５１に連結された断片を含む。
【0180】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号５２）に連結された断片を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号５２に連結された断片を含む。いくつかの実施形態では、第１および第２のポリペプチドは両方とも、配列番号５２に連結された断片を含む。
【0181】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＹＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号５３）に連結された断片を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号５３に連結された断片を含む。いくつかの実施形態では、第１および第２のポリペプチドは両方とも、配列番号５３に連結された断片を含む。
【0182】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＴＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号５４）に連結された断片を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号５４に連結された断片を含む。いくつかの実施形態では、第１および第２のポリペプチドは両方とも、配列番号５４に連結された断片を含む。
【0183】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、ＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号５５）に連結された断片を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号５５に連結された断片を含む。いくつかの実施形態では、第１および第２のポリペプチドは両方とも、配列番号５５に連結された断片を含む。
【0184】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、ＧＱＰＫＡＮＰＴＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＧＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＫＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号５６）に連結された断片を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号５６に連結された断片を含む。いくつかの実施形態では、第１および第２のポリペプチドは両方とも、配列番号５６に連結された断片を含む。
【0185】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、ＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号５７）に連結された断片を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号５７に連結された断片を含む。いくつかの実施形態では、第１および第２のポリペプチドは両方とも、配列番号５７に連結された断片を含む。
【0186】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、ＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号５８）に連結された断片を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号５８に連結された断片を含む。いくつかの実施形態では、第１および第２のポリペプチドは両方とも、配列番号５８に連結された断片を含む。
【0187】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、ＧＱＰＫＡＮＰＴＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＧＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＫＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号５９）に連結された断片を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号５９に連結された断片を含む。いくつかの実施形態では、第１および第２のポリペプチドは両方とも、配列番号５９に連結された断片を含む。
【0188】
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、ＧＱＰＫＡＮＰＴＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＧＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＫＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号６０）に連結された断片を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号６０に連結された断片を含む。いくつかの実施形態では、第１および第２のポリペプチドは両方とも、配列番号６０に連結された断片を含む。
【0189】
いくつかの実施形態では、第３のポリペプチドは、配列番号２３に連結された断片を含む。いくつかの実施形態では、第３のポリペプチドは、配列番号２４に連結された断片を含む。いくつかの実施形態では、第３のポリペプチドは、配列番号２５に連結された断片を含む。いくつかの実施形態では、第３のポリペプチドは、配列番号２６に連結された断片を含む。いくつかの実施形態では、第３のポリペプチドは、配列番号２７に連結された断片を含む。いくつかの実施形態では、第３のポリペプチドは、配列番号２８に連結された断片を含む。いくつかの実施形態では、第４のポリペプチドは、配列番号２３に連結された断片を含む。いくつかの実施形態では、第４のポリペプチドは、配列番号２４に連結された断片を含む。いくつかの実施形態では、第４のポリペプチドは、配列番号２５に連結された断片を含む。いくつかの実施形態では、第４のポリペプチドは、配列番号２６に連結された断片を含む。いくつかの実施形態では、第４のポリペプチドは、配列番号２７に連結された断片を含む。いくつかの実施形態では、第４のポリペプチドは、配列番号２８に連結された断片を含む。
【0190】
いくつかの実施形態では、ポリペプチド鎖は、溶解度を増加させる変異を含み、リンカーを介して軽鎖ＣＬカッパドメインに連結されたＡＣｈＲａの断片を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、アミノ酸配列ＳＥＨＥＴＲＬＶＡＫＬＦＫＤＹＳＳＶＶＲＰＶＥＤＨＲＱＶＶＥＶＴＶＧＬＱＬＩＱＬＩＮＶＤＥＶＮＱＩＶＴＴＮＶＲＬＫＱＱＷＶＤＹＮＬＫＷＮＰＤＤＹＧＧＶＫＫＩＨＩＰＳＥＫＩＷＲＰＤＬＶＬＹＮＮＡＤＧＤＦＡＩＶＫＦＴＫＶＬＬＱＹＴＧＨＩＴＷＴＰＰＡＩＦＫＳＹＣＤＶＳＧＶＤＴＥＳＧＡＴＮＣＳＭＫＬＧＴＷＴＹＤＧＳＶＶＡＩＮＰＥＳＤＱＰＤＬＳＮＦＭＥＳＧＥＷＶＩＫＥＳＲＧＷＫＨＳＶＴＹＳＣＣＰＤＴＰＹＬＤＩＴＹＨＦＶＭＱＲＬＰＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号６４）を含むかまたはそれからなる。
【0191】
いくつかの実施形態では、ポリペプチド鎖は、溶解度を増加させる変異を含み、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む重鎖にリンカーを介して連結されたＡＣｈＲａの断片を含み、ＣＨ３ドメインは、ポリペプチド鎖のホモ二量体化を阻害する変異を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号９２のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号９５のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号９７のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号９８のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号９９のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。上記のＣＨ２およびＣＨ３ドメインならびに他のすべてのＣＨ２／ＣＨ３ドメインは、特に明記しない限り、ＩｇＧ１に由来することが理解されるであろう。
【0192】
いくつかの実施形態では、ポリペプチド鎖は、溶解度を増加させる変異を含み、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む重鎖にリンカーを介して連結されたＡＣｈＲｂの断片を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、アミノ酸配列ＳＥＡＥＧＲＬＲＥＫＬＦＳＧＹＤＳＳＶＲＰＡＲＥＶＧＤＲＶＲＶＳＶＧＬＩＬＡＱＬＩＳＬＮＥＫＤＥＥＭＳＴＫＶＹＬＤＬＥＷＴＤＹＲＬＳＷＤＰＡＥＨＤＧＩＤＳＬＲＩＴＡＥＳＶＷＬＰＤＶＶＬＬＮＮＮＤＧＮＦＤＶＡＬＤＩＳＶＶＶＳＳＤＧＳＶＲＷＱＰＰＧＩＹＲＳＳＣＤＶＳＧＶＤＴＥＳＧＡＴＮＣＴＭＶＦＳＳＹＳＹＤＳＳＥＶＳＬＱＴＧＬＧＰＤＧＱＧＨＱＥＩＨＩＨＥＧＴＦＩＥＮＧＱＷＥＩＩＨＫＰＳＲＬＩＱＰＰＧＤＰＲＧＧＲＥＧＱＲＱＥＶＩＦＹＬＩＩＲＲＫＰＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号６５）を含むかまたはそれからなる。
【0193】
いくつかの実施形態では、ポリペプチド鎖は、溶解度を増加させる変異を含み、ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む重鎖にリンカーを介して連結されたＡＣｈＲｂの断片を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号６５のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
【0194】
いくつかの実施形態では、タンパク質複合体は、各々が配列番号６５を含む２つのポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、タンパク質複合体は、各々が配列番号６５からなる２つのポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、タンパク質複合体は、配列番号６５を含むかまたはそれからなる第１のポリペプチド鎖と、配列番号６４を含むかまたはそれからなる第２のポリペプチド鎖とを含む。いくつかの実施形態では、タンパク質複合体は、配列番号６５を含むかまたはそれからなる第３のポリペプチド鎖をさらに含む。いくつかの実施形態では、タンパク質複合体は、配列番号６４からなる第４のポリペプチド鎖をさらに含む。
【0195】
いくつかの実施形態では、ポリペプチド鎖は、溶解度を増加させる変異を含み、ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む重鎖にリンカーを介して連結されたＡＣｈＲｂの断片を含み、ＣＨ３ドメインは、ポリペプチド鎖のホモ二量体化を阻害する変異を含む。いくつかの実施形態では、ホモ二量体化を阻害する変異はＴ３６６Ｗである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、アミノ酸配列ＳＥＡＥＧＲＬＲＥＫＬＦＳＧＹＤＳＳＶＲＰＡＲＥＶＧＤＲＶＲＶＳＶＧＬＩＬＡＱＬＩＳＬＮＥＫＤＥＥＭＳＴＫＶＹＬＤＬＥＷＴＤＹＲＬＳＷＤＰＡＥＨＤＧＩＤＳＬＲＩＴＡＥＳＶＷＬＰＤＶＶＬＬＮＮＮＤＧＮＦＤＶＡＬＤＩＳＶＶＶＳＳＤＧＳＶＲＷＱＰＰＧＩＹＲＳＳＣＤＶＳＧＶＤＴＥＳＧＡＴＮＣＴＭＶＦＳＳＹＳＹＤＳＳＥＶＳＬＱＴＧＬＧＰＤＧＱＧＨＱＥＩＨＩＨＥＧＴＦＩＥＮＧＱＷＥＩＩＨＫＰＳＲＬＩＱＰＰＧＤＰＲＧＧＲＥＧＱＲＱＥＶＩＦＹＬＩＩＲＲＫＰＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号６６）を含むかまたはそれからなる。
【0196】
いくつかの実施形態では、ポリペプチド鎖は、溶解度を増加させる変異を含み、ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む重鎖にリンカーを介して連結されたＡＣｈＲｇの断片を含み、ＣＨ３ドメインは、ポリペプチド鎖のホモ二量体化を阻害する変異を含む。いくつかの実施形態では、ホモ二量体化を阻害する変異は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、アミノ酸配列ＲＮＱＥＥＲＬＬＡＤＬＭＱＮＹＤＰＮＬＲＰＡＥＲＤＳＤＶＶＮＶＳＬＫＬＴＬＴＮＬＩＳＬＮＥＲＥＥＡＬＴＴＮＶＷＩＥＭＱＷＣＤＹＲＬＲＷＤＰＲＤＹＥＧＬＷＶＬＲＶＰＳＴＭＶＷＲＰＤＩＶＬＥＮＮＶＤＧＶＦＥＶＡＬＹＣＮＶＬＶＳＰＤＧＣＩＹＷＬＰＰＡＩＦＲＳＡＣＤＶＳＧＶＤＴＥＳＧＡＴＮＣＳＬＩＦＱＳＱＴＹＳＴＮＥＩＤＬＱＬＳＱＥＤＧＱＴＩＥＷＩＦＩＤＰＥＡＦＴＥＮＧＥＷＡＩＱＨＲＰＡＫＭＬＬＤＰＡＡＰＡＱＥＡＧＨＱＫＶＶＦＹＬＬＩＱＲＫＰＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号６７）を含むかまたはそれからなる。
【0197】
いくつかの実施形態では、ポリペプチド鎖は、溶解度を増加させる変異と凝集を減少させる少なくとも１つの変異とを含み、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む重鎖にリンカーを介して連結されたＡＣｈＲｇの断片を含み、ＣＨ３ドメインは、ポリペプチド鎖のホモ二量体化を阻害する変異を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号９３のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１００のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
【0198】
いくつかの実施形態では、ポリペプチド鎖は、溶解度を増加させる変異と凝集を減少させる少なくとも１つの変異とを含み、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む重鎖にリンカーを介して連結されたＡＣｈＲｄの断片を含み、ＣＨ３ドメインは、ポリペプチド鎖のホモ二量体化を阻害する変異を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号９８のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１０２のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１０３のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１０６のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１０７のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１３０のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、組成物は、配列番号９２を含むかまたはそれからなる第１の鎖と、配列番号９３を含むかまたはそれからなる第２の鎖とを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、配列番号９２を含むかまたはそれからなる第１の鎖と、配列番号１０２を含むかまたはそれからなる第２の鎖とを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、配列番号１０３を含むかまたはそれからなる第１の鎖と、配列番号１０２を含むかまたはそれからなる第２の鎖とを含む。この実施形態では、第１のポリペプチドはＴ３６６Ｗ変異を含み、第２のポリペプチドはＴ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ変異を含むが、変異は反対の鎖に切り替えることができ、分子は依然として動作可能であることが当業者によって理解されるであろう。
【0199】
いくつかの実施形態では、ポリペプチド鎖は、溶解度を増加させる変異と凝集を減少させる少なくとも１つの変異とを含むＡＣｈＲｇにＧＳリンカーを介して連結され、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む重鎖にリンカーを介して連結された、溶解度を増加させる変異を含むＡＣｈＲａの断片を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号９４のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１０４のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
【0200】
いくつかの実施形態では、ポリペプチド鎖は、溶解度を増加させる変異と凝集を減少させる少なくとも１つの変異とを含むＡＣｈＲｇにＧＳリンカーを介して連結され、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む重鎖にリンカーを介して連結された、溶解度を増加させる変異を含むＡＣｈＲａの断片を含み、ＣＨ３ドメインは、ポリペプチド鎖のホモ二量体化を阻害する変異を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号９５のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１０５のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
【0201】
いくつかの実施形態では、ポリペプチド鎖は、溶解度を増加させる変異と凝集を減少させる少なくとも１つの変異とを含むＡＣｈＲｄにＧＳリンカーを介して連結され、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む重鎖にリンカーを介して連結された、溶解度を増加させる変異を含むＡＣｈＲａの断片を含み、ＣＨ３ドメインは、ポリペプチド鎖のホモ二量体化を阻害する変異を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号９６のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、組成物は、配列番号９５を含むかまたはそれからなる第１の鎖と、配列番号９６を含むかまたはそれからなる第２の鎖とを含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１０６のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１０７のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、組成物は、配列番号１０５を含むかまたはそれからなる第１の鎖と、配列番号１０６を含むかまたはそれからなる第２の鎖とを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、配列番号１０５を含むかまたはそれからなる第１の鎖と、配列番号１０７を含むかまたはそれからなる第２の鎖とを含む。この実施形態では、第１のポリペプチドはＴ３６６Ｗ変異を含み、第２のポリペプチドはＴ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ変異を含むが、変異は反対の鎖に切り替えることができ、分子は依然として動作可能であることが当業者によって理解されるであろう。
【0202】
いくつかの実施形態では、ポリペプチド鎖は、溶解度を増加させる変異と凝集を減少させる少なくとも１つの変異とを含むＡＣｈＲｇにＧＳリンカーを介して連結され、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む重鎖にリンカーを介して連結された、溶解度を増加させる変異と凝集を減少させる変異とを含むＡＣｈＲａの断片を含み、ＣＨ３ドメインは、ポリペプチド鎖のホモ二量体化を阻害する変異を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号９７のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、ポリペプチド鎖は、溶解度を増加させる変異と凝集を減少させる少なくとも１つの変異とを含むＡＣｈＲｇにＧＳリンカーを介して連結され、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む重鎖にリンカーを介して連結された、溶解度を増加させる変異と凝集を減少させる変異とを含むＡＣｈＲａの断片を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１１４のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
【0203】
いくつかの実施形態では、ポリペプチド鎖は、溶解度を増加させる変異と凝集を減少させる少なくとも１つの変異とを含み、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む重鎖にリンカーを介して連結されたＡＣｈＲｄの断片を含み、ＣＨ３ドメインは、ポリペプチド鎖のホモ二量体化を阻害する変異を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号９９のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、組成物は、配列番号９７を含むかまたはそれからなる第１の鎖と、配列番号９８を含むかまたはそれからなる第２の鎖とを含む。この実施形態では、第１のポリペプチドはＴ３６６Ｗ変異を含み、第２のポリペプチドはＴ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ変異を含むが、変異は反対の鎖に切り替えることができ、分子は依然として動作可能であることが当業者によって理解されるであろう。
【0204】
いくつかの実施形態では、ポリペプチド鎖は、溶解度を増加させる変異と凝集を減少させる少なくとも１つの変異とを含むＡＣｈＲｄにＧＳリンカーを介して連結され、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む重鎖にリンカーを介して連結された、溶解度を増加させる変異と凝集を減少させる変異とを含むＡＣｈＲａの断片を含み、ＣＨ３ドメインは、ポリペプチド鎖のホモ二量体化を阻害する変異を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号９９のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１０６のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１０７のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
【0205】
いくつかの実施形態では、ポリペプチド鎖は、溶解度を増加させる変異と凝集を減少させる少なくとも１つの変異とを含み、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む重鎖にリンカーを介して連結されたＡＣｈＲｇの断片を含み、ＣＨ３ドメインは、ポリペプチド鎖のホモ二量体化を阻害する変異を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１００のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、組成物は、配列番号９９を含むかまたはそれからなる第１の鎖と、配列番号１００を含むかまたはそれからなる第２の鎖とを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、配列番号９２を含むかまたはそれからなる第１の鎖と、配列番号１０２を含むかまたはそれからなる第２の鎖とを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、配列番号１０３を含むかまたはそれからなる第１の鎖と、配列番号１００を含むかまたはそれからなる第２の鎖とを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、配列番号１０５を含むかまたはそれからなる第１の鎖と、配列番号１３０を含むかまたはそれからなる第２の鎖とを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、配列番号１０５を含むかまたはそれからなる第１の鎖と、配列番号１０６を含むかまたはそれからなる第２の鎖とを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、配列番号１０５を含むかまたはそれからなる第１の鎖と、配列番号１０７を含むかまたはそれからなる第２の鎖とを含む。この実施形態では、第１のポリペプチドはＴ３６６Ｗ変異を含み、第２のポリペプチドはＴ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ変異を含むが、変異は反対の鎖に切り替えることができ、分子は依然として動作可能であることが当業者によって理解されるであろう。
【0206】
いくつかの実施形態では、ポリペプチド鎖は、溶解度を増加させる変異と凝集を減少させる少なくとも１つの変異とを含むＡＣｈＲｄにＧＳリンカーを介して連結され、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む重鎖にリンカーを介して連結された、溶解度を増加させる変異を含むＡＣｈＲａにＧＳリンカーを介して連結された、溶解度を増加させる変異と凝集を減少させる少なくとも１つの変異とを含むＡＣｈＲｇの断片を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１０８のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、ポリペプチド鎖は、溶解度を増加させる変異と凝集を減少させる少なくとも１つの変異とを含むＡＣｈＲｇにＧＳリンカーを介して連結され、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む重鎖にリンカーを介して連結された、溶解度を増加させる変異を含むＡＣｈＲａにＧＳリンカーを介して連結された、溶解度を増加させる変異と凝集を減少させる少なくとも１つの変異とを含むＡＣｈＲｇの断片を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１０９のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１１６のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
【0207】
いくつかの実施形態では、ポリペプチド鎖は、溶解度を増加させる変異と凝集を減少させる少なくとも１つの変異とを含むＡＣｈＲｇにＧＳリンカーを介して連結され、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む重鎖にリンカーを介して連結された、溶解度を増加させる変異と凝集を減少させる変異とを含むＡＣｈＲａにＧＳリンカーを介して連結された、溶解度を増加させる変異と凝集を減少させる少なくとも１つの変異とを含むＡＣｈＲｇの断片を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１１５のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
【0208】
いくつかの実施形態では、ポリペプチド鎖は、溶解度を増加させる変異と溶解度を減少させる少なくとも１つの変異とを含むＡＣｈＲｇにＧＳリンカーを介して連結され、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む重鎖にリンカーを介して連結された、溶解度を増加させる変異と凝集を減少させる変異とを含むＡＣｈＲａの断片を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１１０のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１１１のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。リンカーによって分離されたタンデムサブユニットの場合、サブユニットの順序は上記のとおりであり得るか、または切り替えられ得ることが当業者によって理解されるであろう。
【0209】
いくつかの実施形態では、ポリペプチド鎖は、溶解度を増加させる変異と凝集を減少させる少なくとも１つの変異とを含むＡＣｈＲｇにＧＳリンカーを介して連結され、ＩｇＧ４からのＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む重鎖にリンカーを介して連結された、溶解度を増加させる変異を含むＡＣｈＲａの断片を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１１２のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、配列番号９２～１１１、１１４～１１６および１２４～１２６のいずれか１つの中で、ＩｇＧ１からのＣＨ２およびＣＨ３ドメインは、ＩｇＧ４からのＣＨ２およびＣＨ３ドメインで置き換えられる。ホモ二量体化を減少させるために存在する変異はいずれも保存され、ＩｇＧ４ ＣＨ３にも存在することが理解されるであろう。
【0210】
いくつかの実施形態では、ポリペプチド鎖は、溶解度を増加させる変異と溶解度を減少させる少なくとも１つの変異とを含むＡＣｈＲｇにＧＳリンカーを介して連結され、エフェクター機能を減少させる変異を含むＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む重鎖にリンカーを介して連結された、溶解度を増加させる変異を含むＡＣｈＲａの断片を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１１３のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、配列番号９２～１１１、１１４～１１６および１２４～１２６のいずれか１つの中で、ＣＨ２およびＣＨ３は、エフェクター機能を低下させる変異を含み得る。
【0211】
特定のリンカーが上記の分子に提供されているが、任意のリンカーを使用できることが理解されるであろう。いくつかの実施形態では、任意の可撓性リンカーを使用することができる。いくつかの実施形態では、リンカーは（ＧＧＧＧＳ）６リンカーである。いくつかの実施形態では、２つのサブユニット間のリンカーは（ＧＧＧＧＳ）６リンカーである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１１７のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、リンカーは（ＧＧＧＧＳ）３リンカーである。いくつかの実施形態では、ＣＨ２ドメインに対するリンカーは（ＧＧＧＧＳ）３リンカーである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１１８のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１２７のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１２８のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１２９のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、リンカーは（ＧＧＧＧＳ）６ＧＳリンカーである。いくつかの実施形態では、２つのサブユニット間のリンカーは（ＧＧＧＧＳ）６ＧＳリンカーである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１１９のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、任意の可撓性リンカーを使用することができる。いくつかの実施形態では、リンカーは（ＧＧＧＧＳ）５リンカーである。いくつかの実施形態では、２つのサブユニット間のリンカーは（ＧＧＧＧＳ）５リンカーである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１２０のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
【0212】
いくつかの実施形態では、リンカーは剛性リンカーである。いくつかの実施形態では、２つのサブユニット間のリンカーは剛性リンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーは（ＥＡＡＡＫ）２ＧＧＳリンカーである。いくつかの実施形態では、２つのサブユニット間のリンカーは（ＥＡＡＡＫ）２ＧＧＳリンカーである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１２１のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１２２のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１２３のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
【0213】
いくつかの実施形態では、ポリペプチド鎖は、溶解度を増加させる変異と凝集を減少させる少なくとも１つの変異とを含むＡＣｈＲｇにＧＳリンカーを介して連結され、溶解度を増加させる変異と凝集を減少させる少なくとも１つの変異とを含むＡＣｈＲａにＧＳリンカーを介して連結されたＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１２４のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、ポリペプチド鎖は、溶解度を増加させる変異と凝集を減少させる少なくとも１つの変異とを含むＡＣｈＲａの断片にＧＳリンカーを介して連結され、溶解度を増加させる変異と凝集を減少させる少なくとも１つの変異とを含むＡＣｈＲｇにＧＳリンカーを介して連結されたＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１２５のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
【0214】
いくつかの実施形態では、タンパク質複合体は、配列番号６６を含むかまたはそれからなる第１のポリペプチドと、配列番号６７を含むかまたはそれからなる第２のポリペプチドとを含む。この実施形態では、ＡＣｈＲｂを含むポリペプチドはＴ３６６Ｗ変異を含有し、ＡＣｈＲｇを含むポリペプチドはＴ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖを含有するが、変異は反対の鎖に切り替えることができ、分子は依然として動作可能であることが当業者によって理解されるであろう（例えば、配列番号６９を参照されたい）。いくつかの実施形態では、タンパク質複合体は、配列番号６６を含むかまたはそれからなる第１のポリペプチド鎖と、配列番号６４を含むかまたはそれからなる第２のポリペプチド鎖とを含む。いくつかの実施形態では、タンパク質複合体は、配列番号６７を含むかまたはそれからなる第１のポリペプチド鎖と、配列番号６４を含むかまたはそれからなる第２のポリペプチド鎖とを含む。いくつかの実施形態では、タンパク質複合体は、配列番号６６を含むかまたはそれからなる第１のポリペプチドと、配列番号６７を含むかまたはそれからなる第２のポリペプチドと、配列番号６４を含むかまたはそれからなる第３のポリペプチド鎖とをさらに含む。いくつかの実施形態では、タンパク質複合体は、配列番号６４からなる第４のポリペプチド鎖をさらに含む。
【0215】
いくつかの実施形態では、ポリペプチド鎖は、溶解度を増加させる変異を含み、ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む重鎖にリンカーを介して連結されたＡＣｈＲｅの断片を含み、ＣＨ３ドメインは、ポリペプチド鎖のホモ二量体化を阻害する変異を含む。いくつかの実施形態では、ホモ二量体化を阻害する変異は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、アミノ酸配列ＫＮＥＥＬＲＬＹＨＨＬＦＮＮＹＤＰＧＳＲＰＶＲＥＰＥＤＴＶＴＩＳＬＫＶＴＬＴＮＬＩＳＬＮＥＫＥＥＴＬＴＴＳＶＷＩＧＩＤＷＱＤＹＲＬＮＹＳＫＤＤＦＧＧＩＥＴＬＲＶＰＳＥＬＶＷＬＰＥＩＶＬＥＮＮＩＤＧＱＦＧＶＡＹＤＡＮＶＬＶＹＥＧＧＳＶＴＷＬＰＰＡＩＹＲＳＶＣＤＶＳＧＶＤＴＥＳＧＡＴＮＣＳＬＩＦＲＳＱＴＹＮＡＥＥＶＥＦＴＦＡＶＤＮＤＧＫＴＩＮＫＩＤＩＤＴＥＡＹＴＥＮＧＥＷＡＩＤＦＣＰＧＶＩＲＲＨＨＧＧＡＴＤＧＰＧＥＴＤＶＩＹＳＬＩＩＲＲＫＰＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号６８）を含むかまたはそれからなる。
【0216】
いくつかの実施形態では、タンパク質複合体は、配列番号６６を含むかまたはそれからなる第１のポリペプチドと、配列番号６８を含むかまたはそれからなる第２のポリペプチドとを含む。この実施形態では、ＡＣｈＲｂを含むポリペプチドはＴ３６６Ｗ変異を含有し、ＡＣｈＲｅを含むポリペプチドはＴ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖを含有するが、変異は反対の鎖に切り替えることができ、分子は依然として動作可能であることが当業者によって理解されるであろう。いくつかの実施形態では、タンパク質複合体は、配列番号６８を含むかまたはそれからなる第１のポリペプチド鎖と、配列番号６４を含むかまたはそれからなる第２のポリペプチド鎖とを含む。いくつかの実施形態では、タンパク質複合体は、配列番号６６を含むかまたはそれからなる第１のポリペプチドと、配列番号６８を含むかまたはそれからなる第２のポリペプチドと、配列番号６４を含むかまたはそれからなる第３のポリペプチド鎖とをさらに含む。いくつかの実施形態では、タンパク質複合体は、配列番号６４からなる第４のポリペプチド鎖をさらに含む。
【0217】
いくつかの実施形態では、ポリペプチド鎖は、溶解度を増加させる変異を含み、ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む重鎖にリンカーを介して連結されたＡＣｈＲｇの断片を含み、ＣＨ３ドメインは、ポリペプチド鎖のホモ二量体化を阻害する変異を含む。いくつかの実施形態では、ホモ二量体化を阻害する変異はＴ３６６Ｗである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、アミノ酸配列ＲＮＱＥＥＲＬＬＡＤＬＭＱＮＹＤＰＮＬＲＰＡＥＲＤＳＤＶＶＮＶＳＬＫＬＴＬＴＮＬＩＳＬＮＥＲＥＥＡＬＴＴＮＶＷＩＥＭＱＷＣＤＹＲＬＲＷＤＰＲＤＹＥＧＬＷＶＬＲＶＰＳＴＭＶＷＲＰＤＩＶＬＥＮＮＶＤＧＶＦＥＶＡＬＹＣＮＶＬＶＳＰＤＧＣＩＹＷＬＰＰＡＩＦＲＳＡＣＤＶＳＧＶＤＴＥＳＧＡＴＮＣＳＬＩＦＱＳＱＴＹＳＴＮＥＩＤＬＱＬＳＱＥＤＧＱＴＩＥＷＩＦＩＤＰＥＡＦＴＥＮＧＥＷＡＩＱＨＲＰＡＫＭＬＬＤＰＡＡＰＡＱＥＡＧＨＱＫＶＶＦＹＬＬＩＱＲＫＰＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号６９）を含むかまたはそれからなる。
【0218】
いくつかの実施形態では、タンパク質複合体は、配列番号６７を含むかまたはそれからなる第１のポリペプチドと、配列番号６９を含むかまたはそれからなる第２のポリペプチドとを含む。そのような分子は、ホモ二量体化を阻害する変異なしにＣＨ３ドメインを使用して作製することもできることが当業者によって理解されるであろう。そのような場合、ホモ二量体化するので、単一のポリペプチド鎖のみが必要であろう。このポリペプチドは、配列番号６５に類似するであろうが、ＡＣｈＲｂ断片の代わりにＡＣｈＲｇ断片を含むであろう。
【0219】
いくつかの実施形態では、タンパク質複合体は、配列番号６９を含むかまたはそれからなる第１のポリペプチドと、配列番号６８を含むかまたはそれからなる第２のポリペプチドとを含む。この実施形態では、ＡＣｈＲｇを含むポリペプチドはＴ３６６Ｗ変異を含有し、ＡＣｈＲｅを含むポリペプチドはＴ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖを含有するが、変異は反対の鎖に切り替えることができ、分子は依然として動作可能であることが当業者によって理解されるであろう。いくつかの実施形態では、タンパク質複合体は、配列番号６９を含むかまたはそれからなる第１のポリペプチド鎖と、配列番号６４を含むかまたはそれからなる第２のポリペプチド鎖とを含む。いくつかの実施形態では、タンパク質複合体は、配列番号６９を含むかまたはそれからなる第１のポリペプチドと、配列番号６８を含むかまたはそれからなる第２のポリペプチドと、配列番号６４を含むかまたはそれからなる第３のポリペプチド鎖とをさらに含む。いくつかの実施形態では、タンパク質複合体は、配列番号６４からなる第４のポリペプチド鎖をさらに含む。
【0220】
いくつかの実施形態では、ポリペプチド鎖は、本明細書に提供される配列と少なくとも７０％の同一性を有する配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、ポリペプチド鎖は、本明細書に提供される配列と少なくとも７５％の同一性を有する配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、ポリペプチド鎖は、本明細書に提供される配列と少なくとも８０％の同一性を有する配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、ポリペプチド鎖は、本明細書に提供される配列と少なくとも８５％の同一性を有する配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、ポリペプチド鎖は、本明細書に提供される配列と少なくとも９０％の同一性を有する配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、ポリペプチド鎖は、本明細書に提供される配列と少なくとも９５％の同一性を有する配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、ポリペプチド鎖は、本明細書に提供される配列と少なくとも９７％の同一性を有する配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、ポリペプチド鎖は、本明細書に提供される配列と少なくとも９９％の同一性を有する配列を含むかまたはそれからなる。
【0221】
いくつかの実施形態では、タンパク質は、配列番号７２～９１のいずれか１つから選択される。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号７２～９１のいずれか１つから選択される。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号９２～１００および１０２～１３０のいずれか１つから選択される。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号７２～１００および１０２～１３０のいずれか１つから選択される。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号９４、１０４および１０８～１２９のいずれか１つから選択される。
【0222】
医薬組成物
別の態様では、本発明のタンパク質を含む医薬組成物が提供される。
別の態様では、本発明のタンパク質を含む医薬組成物が提供される。
【0223】
別の態様では、本発明のポリペプチド鎖を含む医薬組成物が提供される。
【0224】
別の態様では、本発明のタンパク質複合体を含む医薬組成物が提供される。
【0225】
別の態様では、本発明の組成物を含む医薬組成物が提供される。
【0226】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、薬学的に許容され得る担体、賦形剤またはアジュバントを含む。本明細書で使用される場合、「担体」、「アジュバント」または「賦形剤」という用語は、活性薬剤ではない医薬組成物の任意の成分を指す。本明細書で使用される場合、「薬学的に許容され得る担体」という用語は、非毒性の不活性固体、半固体液体充填剤、希釈剤、カプセル化材料、任意の種類の製剤補助剤、または単に滅菌水性媒体、例えば生理食塩水を指す。薬学的に許容され得る担体として機能し得る材料のいくつかの例は、糖類、例えばラクトース、グルコースおよびスクロース、デンプン類、例えばコーンスターチおよびジャガイモデンプン、セルロースおよびその誘導体、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロース；トラガント末；麦芽、ゼラチン、タルク；賦形剤、例えばカカオバターおよび坐剤ワックス；油類、落花生油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油、ダイズ油；グリコール類、例えばプロピレングリコール、ポリオール、例えばグリセリン、ソルビトール、マンニトールおよびポリエチレングリコール；エステル類、オレイン酸エチル、ラウリン酸エチル、寒天；緩衝剤、例えば水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウム；アルギン酸；パイロジェンフリー水；等張食塩水、リンゲル液；エチルアルコールおよびリン酸緩衝液、ならびに医薬製剤に使用される他の非毒性の適合可能な物質である。本明細書において担体として機能し得る物質のいくつかの非限定的な例としては、糖、デンプン、セルロースおよびその誘導体、トラガカント末、麦芽、ゼラチン、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、硫酸カルシウム、植物油、ポリオール、アルギン酸、パイロジェンフリー水、等張食塩水、リン酸緩衝液、ココアバター（坐剤基剤）、乳化剤、ならびに他の医薬製剤に使用される他の非毒性の薬学的に適可能な物質が挙げられる。湿潤剤および潤滑剤、例えばラウリル硫酸ナトリウム、ならびに着色剤、香味剤、賦形剤、安定剤、酸化防止剤、および保存剤も存在し得る。本明細書で企図される組成物を製剤化するために、任意の非毒性、不活性、および有効な担体を使用することができる。これに関して適切な薬学的に許容され得る担体、賦形剤、および希釈剤は、当業者に周知であり、例えば、Ｔｈｅ Ｍｅｒｃｋ Ｉｎｄｅｘ，Ｔｈｉｒｔｅｅｎｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｂｕｄａｖａｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｅｄｓ．，Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ．，Ｉｎｃ．，Ｒａｈｗａｙ，Ｎ．Ｊ．（２００１）；ｔｈｅ ＣＴＦＡ（Ｃｏｓｍｅｔｉｃ，Ｔｏｉｌｅｔｒｙ，ａｎｄ Ｆｒａｇｒａｎｃｅ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｓｍｅｔｉｃ Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ａｎｄ Ｈａｎｄｂｏｏｋ，Ｔｅｎｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（２００４）；およびｔｈｅ 「Ｉｎａｃｔｉｖｅ Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ Ｇｕｉｄｅ，」Ｕ．Ｓ．Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ（ＦＤＡ）Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（ＣＤＥＲ）Ｏｆｆｉｃｅ ｏｆ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔに記載されているものであり、これらのすべての内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。本発明の組成物に有用な薬学的に許容され得る賦形剤、担体および希釈剤の例としては、蒸留水、生理食塩水、リンゲル液、デキストロース溶液、ハンクス溶液、およびＤＭＳＯが挙げられる。これらの追加の不活性成分、ならびに有効な製剤および投与手順は当該技術分野で周知であり、標準的な教科書、例えばＧｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｌｍａｎ’ｓ：Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｅｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，８ｔｈ Ｅｄ．，Ｇｉｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．Ｅｄｓ．Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ（１９９０）；Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ Ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．（１９９０）；およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ Ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，Ｐａ．，（２００５）に記載されており、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。本明細書に記載される組成物はまた、人工的に作製された構造、例えばリポソーム、ＩＳＣＯＭＳ、徐放性粒子、および血清中のペプチドまたはポリペプチドの半減期を増加させる他のビヒクルに含まれていてもよい。リポソームには、エマルジョン、フォーム、ミセル、不溶性単層、液晶、リン脂質分散液、ラメラ層などが含まれる。本明細書に記載されるペプチドとともに使用するためのリポソームは、一般に中性および負に荷電したリン脂質およびステロール、例えばコレステロールを含む標準的な小胞形成脂質から形成される。脂質の選択は、一般に、リポソームサイズおよび血液中の安定性などを考慮して決定される。例えば、Ｃｏｌｉｇａｎ，Ｊ．Ｅ．ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９９，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋに概説されているように、リポソームを調製するための様々な方法が利用可能であり、また、米国特許第４，２３５，８７１号明細書、同第４，５０１，７２８号明細書、同第４，８３７，０２８号明細書、同第５，０１９，３６９号明細書も参照のこと。
【0227】
担体は、合計で約０．１重量％～約９９．９９９９９重量％の本明細書に提示される医薬組成物を含み得る。
【0228】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、重症筋無力症の処置に使用するためのものである。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、治療有効量の本発明のタンパク質複合体を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、治療有効量の本発明のコンジュゲートを含む。「治療有効量」という用語は、哺乳動物の疾患または障害を処置するのに有効な薬物の量を指す。いくつかの実施形態では、治療有効量は、所望の治療的または予防的結果を達成するために、必要な投薬量および期間で有効な量である。正確な剤形およびレジメンは、患者の症状に応じて医師によって決定される。いくつかの実施形態では、有効量は、疾患の少なくとも１つの症候を処置するのに十分な量である。いくつかの実施形態では、疾患は重症筋無力症である。いくつかの実施形態では、重症筋無力症は、タンパク質に対する自己抗体によって特徴付けられる。
【0229】
本明細書で使用される場合、疾患、障害、または症状の「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」または「処置する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」という用語は、その少なくとも１つの症候の緩和、その重症度の低下、またはその進行の阻害を包含する。処置は、疾患、障害、または症状が完全に治癒することを意味する必要はない。有効な処置であるために、本明細書における有用な組成物または方法は、疾患、障害または症状の重症度を低下させるか、それに関連する症候の重症度を低下させるか、または患者もしくは対象の生活の質の改善を提供するだけでよい。重症筋無力症の処置は当該技術分野で周知であり、重症筋無力症症候の改善を評価するための任意の許容され得る尺度を含み得る。これには、筋肉制御の改善、筋肉の下垂、ラップまたは重苦しさの軽減、呼吸の改善、自己抗体価の減少、シナプス機能の改善、または任意の他の改善の尺度が含まれ得る。
【0230】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は全身投与用に製剤化される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、対象への投与のために製剤化される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、ヒトへの投与のために製剤化される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、静脈内投与用に製剤化される。
【0231】
本明細書で使用される場合、「投与する（ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｉｎｇ）」、「投与（ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）」などの用語は、健全な医療行為において、治療効果を提供するような方法で活性薬剤を含有する組成物を対象に送達する任意の方法を指す。本主題の一態様は、治療有効量の本主題の組成物を必要とする患者への治療有効量の本主題の組成物の静脈内投与を提供する。他の適切な投与経路としては、非経口、皮下、経口、筋肉内、または腹腔内を挙げることができる。いくつかの実施形態では、投与することは、静脈内投与である。いくつかの実施形態では、投与は、経口、静脈内、筋肉内、腹腔内、腫瘍間、局所、または皮下投与から選択される。いくつかの実施形態では、投与することは、疾患部位に投与することである。
【0232】
投与される投薬量は、レシピエントの年齢、健康状態および体重、もしあれば併用処置の種類、処置の頻度、ならびに所望の効果の性質によって異なる。
【0233】
処置方法
別の態様では、重症筋無力症の処置を必要とする対象において重症筋無力症を処置する方法であって、該方法は、本発明のタンパク質を対象に投与し、それによって、対象において重症筋無力症を処置することを含む、方法が提供される。
別の態様では、重症筋無力症の処置を必要とする対象において重症筋無力症を処置する方法であって、該方法は、本発明のタンパク質を対象に投与し、それによって、対象において重症筋無力症を処置することを含む、方法が提供される。
【0234】
別の態様では、重症筋無力症の処置を必要とする対象において重症筋無力症を処置する方法であって、該方法は、本発明のポリペプチド鎖を対象に投与し、それによって、対象において重症筋無力症を処置することを含む、方法が提供される。
【0235】
別の態様では、重症筋無力症の処置を必要とする対象において重症筋無力症を処置する方法であって、該方法は、本発明のタンパク質複合体を対象に投与し、それによって、対象において重症筋無力症を処置することを含む、方法が提供される。
【0236】
別の態様では、重症筋無力症の処置を必要とする対象において重症筋無力症を処置する方法であって、該方法は、本発明の組成物を対象に投与し、それによって、対象において重症筋無力症を処置することを含む、方法が提供される。
【0237】
いくつかの実施形態では、投与することは、本発明の医薬組成物を投与することである。いくつかの実施形態では、重症筋無力症は、タンパク質に対する抗体によって特徴付けられる。いくつかの実施形態では、タンパク質は、重症筋無力症抗体の標的である。タンパク質複合体は、対象において重症筋無力症抗体によって標的化されるタンパク質の断片を用いて設計されることが当業者によって理解されるであろう。いくつかの実施形態では、抗体は自己抗体である。
【0238】
いくつかの実施形態では、処置することは、抗体濃度を低下させることを含む。いくつかの実施形態では、処置することは、より低い抗体数を含む。いくつかの実施形態では、抗体濃度は循環抗体濃度である。いくつかの実施形態では、処置することは、抗体を枯渇させることを含む。いくつかの実施形態では、処置することは、抗体を捕捉することを含む。いくつかの実施形態では、本発明の分子への抗体の結合は、抗体の捕捉をもたらす。いくつかの実施形態では、処置することは、Ｂ細胞を死滅させることを含む。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞は自己反応性Ｂ細胞である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞を死滅させることは、特異的Ｂ細胞死滅である。いくつかの実施形態では、処置することは、抗体を産生するＢ細胞を死滅させることを含む。いくつかの実施形態では、処置することは、抗体を産生するＢ細胞を死滅させ、他のＢ細胞を実質的に死滅させないことを含む。いくつかの実施形態では、処置することは、タンパク質複合体に対する抗体を産生するＢ細胞を死滅させることを含む。いくつかの実施形態では、処置することは、断片に対する抗体を産生するＢ細胞を死滅させることを含む。いくつかの実施形態では、処置することは、タンパク質複合体の断片に対する抗体を産生するＢ細胞を死滅させることを含む。
【0239】
いくつかの実施形態では、抗体を低下させることは、抗体を結合することを含む。いくつかの実施形態では、低下することは、抗体の少なくとも１０、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７０、７５、８０、９０、９５、９７、９９または１００％を除去することである。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。いくつかの実施形態では、抗体は自己抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、対象中の抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は循環抗体である。いくつかの実施形態では、自己抗体は、タンパク質または断片に対する自己抗体である。いくつかの実施形態では、自己抗体は細胞傷害性自己抗体である。いくつかの実施形態では、自己抗体はＩｇＧ１自己抗体を含む。いくつかの実施形態では、自己抗体はＩｇＧ３を含む。いくつかの実施形態では、自己抗体は、ＩｇＧ１およびＩｇＧ３自己抗体を含む。いくつかの実施形態では、自己抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２およびＩｇＧ３自己抗体を含む。いくつかの実施形態では、自己抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４自己抗体を含む。いくつかの実施形態では、自己抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４自己抗体を含む。いくつかの実施形態では、低下することは、抗体の少なくとも２５％を除去することである。いくつかの実施形態では、低下することは、抗体の少なくとも５０％を除去することである。いくつかの実施形態では、低下することは、抗体の少なくとも７０％を除去することである。いくつかの実施形態では、低下することは、抗体の少なくとも７５％を除去することである。いくつかの実施形態では、抗体のパーセントは、自己抗体のパーセントである。いくつかの実施形態では、抗体のパーセントは、タンパク質または断片に対する抗体のパーセントである。いくつかの実施形態では、抗体のパーセントは、疾患に関連する抗体のパーセントである。
【0240】
いくつかの実施形態では、本方法は、対象において抗体を減少させることをさらに含む。いくつかの実施形態では、減少させることは投与前である。いくつかの実施形態では、抗体を減少させることは、循環抗体を減少させることである。いくつかの実施形態では、抗体は自己抗体である。いくつかの実施形態では、抗体はタンパク質に対するものである。いくつかの実施形態では、抗体は、断片が由来するタンパク質に対するものである。いくつかの実施形態では、抗体は、断片の少なくとも１つが由来するタンパク質に対するものである。いくつかの実施形態では、減少させることは、断片の少なくとも１つが由来するすべてのタンパク質に対する抗体を減少させることである。いくつかの実施形態では、抗体はタンパク質複合体に対するものである。抗体を減少させる方法は当該技術分野で周知であり、例えば、プラズマフェレシス、静脈内Ｉｇ（ＩＶＩｇ）、抗体フィルタリング、およびＢ細胞標的化療法が含まれ、これらのいずれも使用することができる。いくつかの実施形態では、本方法は、投与前の抗体のプラズマフェレシスを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、本発明の治療薬を投与する前にＢ細胞標的化療法を投与するステップを含む。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞標的化療法は抗Ｂ細胞療法である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞標的化療法はＢ細胞致死療法である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞標的化療法はｐａｎ Ｂ細胞療法である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞標的化療法は標的化療法ではない。本明細書で使用される場合、「標的Ｂ細胞療法」は、特異的抗体を産生する特異的Ｂ細胞クローンのみを標的とする療法である。いくつかの実施形態では、抗Ｂ細胞療法は抗Ｂ細胞抗体である。Ｂ細胞標的化抗体は当該技術分野で公知であり、非限定的な例として抗ＣＤ２０抗体が挙げられる。抗ＣＤ２０治療抗体は当該技術分野で周知であり、リツキシマブ、オクレリズマブ、オビヌツズマブ、オファツムマブ、イブリツモマブ、チウキセタン、トシツモマブ、およびウブリツキシマブが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞標的化療法はリツキシマブである。
【0241】
核酸
別の態様では、本発明のタンパク質をコードする核酸分子が提供される。
別の態様では、本発明のタンパク質をコードする核酸分子が提供される。
【0242】
別の態様では、少なくとも２つの核酸分子を含む核酸系であって、第１の核酸分子が本発明のタンパク質複合体の第１のポリペプチド鎖をコードし、第２の核酸分子が本発明のタンパク質複合体の第２のポリペプチド鎖をコードする、核酸系が提供される。
【0243】
別の態様では、少なくとも２つの核酸分子を含む核酸系であって、第１の核酸分子が、重症筋無力症自己抗体の第１のヒトタンパク質標的またはその類似体もしくは誘導体の断片と第１の二量体化ドメインとを含む第１のポリペプチド鎖をコードし、第２の核酸分子が、重症筋無力症自己抗体の第２のヒトタンパク質標的またはその類似体もしくは誘導体の断片と第２の二量体化ドメインとを含む第２のポリペプチド鎖をコードする、核酸系が提供される。
【0244】
別の態様では、本発明の組成物のポリペプチド鎖をコードする核酸分子が提供される。
【0245】
別の態様では、本発明の組成物をコードする核酸分子が提供される。
【0246】
別の態様では、重症筋無力症自己抗体の第１のタンパク質標的またはその類似体もしくは誘導体の断片および重症筋無力症自己抗体の第２のヒトタンパク質標的またはその類似体もしくは誘導体の断片をコードする核酸分子が提供される。
【0247】
いくつかの実施形態では、核酸分子は、重症筋無力症の処置に使用するためのものである。いくつかの実施形態では、核酸系は、重症筋無力症の処置に使用するためのものである。
【0248】
いくつかの実施形態では、核酸系は、本発明のタンパク質複合体の第３のポリペプチドをコードする第３の核酸分子をさらに含む。いくつかの実施形態では、核酸系は、本発明のタンパク質複合体の第４のポリペプチドをコードする第４の核酸分子をさらに含む。いくつかの実施形態では、第１の核酸分子は、本発明の第１のポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、第２の核酸分子は、本発明の第２のポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、第３の核酸分子は、本発明の第３のポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、第４の核酸分子は、第４のポリペプチドをコードする。
【0249】
いくつかの実施形態では、核酸分子はベクターである。いくつかの実施形態では、ベクターは発現ベクターである。いくつかの実施形態では、核酸分子は、ポリペプチド鎖をコードするオープンリーディングフレームを含む。細胞内でのオープンリーディングフレームの発現は当業者に周知である。それは、多くの方法の中でも、トランスフェクション、ウイルス感染、または細胞のゲノムの直接変化によって行うことができる。発現ベクターは当該技術分野で周知であり、本発明のタンパク質複合体が発現されている標的細胞に適合する任意のベクターを使用することができる。
【0250】
ベクター核酸配列は、一般に、細胞内での増殖のための少なくとも１つの複製起点と、任意選択的で追加のエレメント、例えば異種ポリヌクレオチド配列、発現制御エレメント（例えば、プロモーター、エンハンサー）、選択可能マーカー（例えば、抗生物質耐性）、ポリ－アデニン配列とを含有する。いくつかの実施形態では、ベクターはプロモーターを含む。いくつかの実施形態では、プロモーターは、本発明のタンパク質複合体が発現されている標的細胞での発現のために構成されている。
【0251】
ベクターは、非ウイルス法またはウイルス法を介して送達されるＤＮＡプラスミドであり得る。ウイルスベクターは、レトロウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクターまたはポックスウイルスベクターであり得る。プロモーターは、哺乳動物細胞において活性であり得る。プロモーターは、ウイルスプロモーターであり得る。プロモーターは、細菌細胞において活性であり得る。プロモーターは、ヒト細胞において活性であり得る。プロモーターは、線維芽細胞において活性であり得る。本明細書で使用される「プロモーター」という用語は、ＲＮＡポリメラーゼ、すなわちＲＮＡポリメラーゼＩＩの開始部位の周りに集まっている転写制御モジュールの群を指す。プロモーターは、各々がおよそ７～２０ｂｐのＤＮＡからなり、転写活性化因子またはリプレッサータンパク質のための１つ以上の認識部位を含む、個別の機能モジュールから構成されている。
【0252】
いくつかの実施形態では、オープンリーディングフレームはプロモーターに動作可能に連結されている。「動作可能に連結される」という用語は、目的のヌクレオチド配列が、ヌクレオチド配列（例えば、ベクターが宿主細胞に導入される場合、インビトロ転写／翻訳系において、または宿主細胞において）の発現を可能にする様式で１つ以上の調節エレメントもしくは複数のエレメントに連結されていることを意味することを意図している。
【0253】
いくつかの実施形態では、ベクターは、エレクトロポレーション（例えば、Ｆｒｏｍ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２，５８２４（１９８５）に記載されるように）、熱ショック、ウイルスベクターによる感染、小さなビーズもしくは粒子のマトリックス内、または表面（Ｋｌｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３２７．７０－７３（１９８７））上のいずれかでの核酸による小さな粒子による高速弾道貫入などを含む標準的な方法によって細胞に導入される。
【0254】
いくつかの実施形態では、核酸配列は、ＲＮＡポリメラーゼＩＩ（ＲＮＡＰ ＩＩおよびＰｏｌ ＩＩ）によって転写される。ＲＮＡＰ ＩＩは、真核細胞に見出される酵素である。これは、ＤＮＡの転写を触媒して、ｍＲＮＡならびにほとんどのｓｎＲＮＡおよびマイクロＲＮＡの前駆体を合成する。
【0255】
いくつかの実施形態では、哺乳動物発現ベクターには、限定されないが、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社から入手可能なｐｃＤＮＡ３、ｐｃＤＮＡ３．１（±）、ｐＧＬ３、ｐＺｅｏＳＶ２（±）、ｐＳｅｃＴａｇ２、ｐＤｉｓｐｌａｙ、ｐＥＦ／ｍｙｃ／ｃｙｔｏ、ｐＣＭＶ／ｍｙｃ／ｃｙｔｏ、ｐＣＲ３．１、ｐＳｉｎＲｅｐ５、ＤＨ２６Ｓ、ＤＨＢＢ、ｐＮＭＴ１、ｐＮＭＴ４１、ｐＮＭＴ８１、Ｐｒｏｍｅｇａ社から入手可能なｐＣＩ、Ｓｔｒａｔｅｇｅｎｅ社から入手可能なｐＭｂａｃ、ｐＰｂａｃ、ｐＢＫ－ＲＳＶおよびｐＢＫ－ＣＭＶ、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ社から入手可能なｐＴＲＥＳ、およびそれらの誘導体が含まれる。
【0256】
いくつかの実施形態では、レトロウイルスなどの真核生物ウイルスからの調節エレメントを含有する発現ベクターが本発明によって使用される。ＳＶ４０ベクターには、ｐＳＶＴ７およびｐＭＴ２が含まれる。いくつかの実施形態では、ウシパピローマウイルスに由来するベクターには、ｐＢＶ－１ＭＴＨＡが含まれ、エプスタインバーウイルスに由来するベクターには、ｐＨＥＢＯ、およびｐ２Ｏ５が含まれる。他の例示的なベクターには、ｐＭＳＧ、ｐＡＶ００９／Ａ＋、ｐＭＴＯ１０／Ａ＋、ｐＭＡＭｎｅｏ－５、バキュロウイルスｐＤＳＶＥ、およびＳＶ－４０初期プロモーター、ＳＶ－４０後期プロモーター、メタロチオネインプロモーター、マウス乳腺腫瘍ウイルスプロモーター、ラウス肉腫ウイルスプロモーター、ポリヘドリンプロモーター、または真核細胞での発現に有効であることが示されている他のプロモーターの指示下でタンパク質の発現を可能にする任意の他のベクターが含まれる。
【0257】
いくつかの実施形態では、外側感染（ｌａｔｅｒａｌ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）および標的特異性などの利点を提供する組換えウイルスベクターがインビボ発現に使用される。一実施形態では、外側感染は、例えばレトロウイルスのライフサイクルに固有のものであり、単一の感染細胞が多くの子孫ビリオンを産生し、それが発芽して隣接する細胞に感染するプロセスである。一実施形態では、その結果、広い領域が急速に感染し、その大部分は最初は元のウイルス粒子に感染しなかった。一実施形態では、外側に広がることができないウイルスベクターが産生される。一実施形態では、この特徴は、所望の目的が、特定の遺伝子を局所的な数の標的細胞にのみ導入することである場合に有用であり得る。
【0258】
本発明の発現ベクターを細胞に導入するために、種々の方法を用いることができる。そのような方法は、一般に、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇｓ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８９，１９９２）、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍｄ．（１９８９）、Ｃｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｓｏｍａｔｉｃ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ａｎｎ Ａｒｂｏｒ，Ｍｉｃｈ．（１９９５）、Ｖｅｇａ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ａｎｎ Ａｒｂｏｒ Ｍｉｃｈ．（１９９５）、Ｖｅｃｔｏｒｓ：Ａ Ｓｕｒｖｅｙ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｖｅｃｔｏｒｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｕｓｅｓ，Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈｓ，Ｂｏｓｔｏｎ Ｍａｓｓ．（１９８８）およびＧｉｌｂｏａ ｅｔ ａｔ．［Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４（６）：５０４－５１２，１９８６］に記載されており、例えば、安定なまたは一過性のトランスフェクション、リポフェクション、エレクトロポレーションおよび組換えウイルスベクターによる感染が含まれる。さらに、ポジティブ－ネガティブセレクション法については、米国特許第５，４６４，７６４号明細書および同第５，４８７，９９２号明細書を参照されたい。
【0259】
一実施形態では、植物発現ベクターが使用される。一実施形態では、ポリペプチドコード配列の発現は、いくつかのプロモーターによって駆動される。いくつかの実施形態では、ウイルスプロモーター、例えばＣａＭＶの３５Ｓ ＲＮＡおよび１９Ｓ ＲＮＡプロモーター［Ｂｒｉｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３１０：５１１－５１４（１９８４）］、またはＴＭＶに対するコートタンパク質プロモーター［Ｔａｋａｍａｔｓｕ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．６：３０７－３１１（１９８７）］が使用される。別の実施形態では、植物プロモーター、例えば、ＲＵＢＩＳＣＯの小サブユニット［Ｃｏｒｕｚｚｉ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．３：１６７１－１６８０（１９８４）；およびＢｒｏｇｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２４：８３８－８４３（１９８４）］または熱ショックプロモーター、例えばダイズｈｓｐ１７．５－Ｅもしくはｈｓｐ１７．３－Ｂ［Ｇｕｒｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．６：５５９－５６５（１９８６）］が使用される。一実施形態では、Ｔｉプラスミド、Ｒｉプラスミド、植物ウイルスベクター、直接ＤＮＡ形質転換、マイクロインジェクション、エレクトロポレーションおよび当業者に周知の他の技術を使用して、コンストラクトが植物細胞に導入される。例えば、Ｗｅｉｓｓｂａｃｈ＆Ｗｅｉｓｓｂａｃｈ［Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ，Ｓｅｃｔｉｏｎ ＶＩＩＩ，ｐｐ ４２１－４６３（１９８８）］を参照されたい。当該技術分野で周知の昆虫および哺乳動物宿主細胞系などの他の発現系も本発明によって使用することができる。
【0260】
挿入されたコード配列（ポリペプチドをコードする）の転写および翻訳に必要なエレメントを含むこと以外に、本発明の発現コンストラクトは、発現されたポリペプチドの安定性、産生、精製、収率、または活性を最適化するように操作された配列も含み得ることが理解されるであろう。
【0261】
いくつかの実施形態では、核酸分子は単一の核酸分子である。いくつかの実施形態では、第１および第２の核酸分子は異なる分子である。いくつかの実施形態では、第１および第２の核酸分子は同じ分子である。いくつかの実施形態では、第１、第２、第３および第４の核酸分子のいずれか２つは異なる分子である。いくつかの実施形態では、第１、第２、第３および第４の核酸分子のいずれか２つは同じ分子である。いくつかの実施形態では、第１、第２、第３および第４の核酸分子のいずれか３つは異なる分子である。いくつかの実施形態では、第１、第２および第３の核酸分子は異なる分子である。いくつかの実施形態では、第１、第２、第３および第４の核酸分子のいずれか３つは同じ分子である。いくつかの実施形態では、第１、第２、第３および第４の核酸分子のすべては異なる分子である。いくつかの実施形態では、第１、第２、第３および第４の核酸分子のすべては同じ分子である。
【0262】
製造方法
別の態様では、タンパク質を生成する方法であって、該方法は、
第１のヒト受容体またはその類似体もしくは誘導体の細胞外ドメインの第１の断片と、第２のヒト受容体またはその類似体もしくは誘導体の細胞外ドメインの第２の断片とを得るステップであって、第１および第２のヒト受容体は、重症筋無力症自己抗体および異なるタンパク質の標的であり、第１の断片を第２の断片に連結して単一のポリペプチド鎖を生成する、ステップを含み、
それによってタンパク質を生成する、方法が提供される。
別の態様では、タンパク質を生成する方法であって、該方法は、
第１のヒト受容体またはその類似体もしくは誘導体の細胞外ドメインの第１の断片と、第２のヒト受容体またはその類似体もしくは誘導体の細胞外ドメインの第２の断片とを得るステップであって、第１および第２のヒト受容体は、重症筋無力症自己抗体および異なるタンパク質の標的であり、第１の断片を第２の断片に連結して単一のポリペプチド鎖を生成する、ステップを含み、
それによってタンパク質を生成する、方法が提供される。
【0263】
別の態様では、タンパク質を生成する方法であって、該方法は、
重症筋無力症自己抗体のヒト受容体標的の第１の断片を得るステップと、第１の断片の凝集を減少させる少なくとも１つの変異を第１の断片において生成するステップとを含み、
それによってタンパク質を生成する、方法が提供される。
重症筋無力症自己抗体のヒト受容体標的の第１の断片を得るステップと、第１の断片の凝集を減少させる少なくとも１つの変異を第１の断片において生成するステップとを含み、
それによってタンパク質を生成する、方法が提供される。
【0264】
別の態様では、タンパク質複合体を生成する方法であって、該方法は、
重症筋無力症自己抗体の第１のタンパク質標的またはその類似体もしくは誘導体の第１の断片と、重症筋無力症自己抗体の第２のタンパク質標的またはその類似体もしくは誘導体の第２の断片とを得るステップと、第１の断片を第１の二量体化ドメインに連結して第１のポリペプチドを生成し、第２の断片を第２の二量体化ドメインに連結して第２のポリペプチド鎖を生成するステップとを含み、
それによってタンパク質複合体を生成する、方法が提供される。
重症筋無力症自己抗体の第１のタンパク質標的またはその類似体もしくは誘導体の第１の断片と、重症筋無力症自己抗体の第２のタンパク質標的またはその類似体もしくは誘導体の第２の断片とを得るステップと、第１の断片を第１の二量体化ドメインに連結して第１のポリペプチドを生成し、第２の断片を第２の二量体化ドメインに連結して第２のポリペプチド鎖を生成するステップとを含み、
それによってタンパク質複合体を生成する、方法が提供される。
【0265】
別の態様では、タンパク質を生成する方法であって、該方法は、
単一のポリペプチド鎖をコードする核酸配列を含む１つ以上のベクターを含む宿主細胞を培養するステップであって、該単一のポリペプチド鎖は、
ｉ．重症筋無力症自己抗体のヒト受容体標的の第１の断片を得るステップと、
ｉｉ．第１の断片の凝集を減少させる少なくとも１つの変異を第１の断片において生成するステップとを含み、
それによってタンパク質を生成する、方法が提供される。
単一のポリペプチド鎖をコードする核酸配列を含む１つ以上のベクターを含む宿主細胞を培養するステップであって、該単一のポリペプチド鎖は、
ｉ．重症筋無力症自己抗体のヒト受容体標的の第１の断片を得るステップと、
ｉｉ．第１の断片の凝集を減少させる少なくとも１つの変異を第１の断片において生成するステップとを含み、
それによってタンパク質を生成する、方法が提供される。
【0266】
別の態様では、タンパク質を生成する方法であって、該方法は、
単一のポリペプチド鎖をコードする核酸配列を含む１つ以上のベクターを含む宿主細胞を培養するステップであって、該単一のポリペプチド鎖は、
ｉ．第１のヒト受容体またはその類似体もしくは誘導体の細胞外ドメインの第１の断片と、第２のヒト受容体またはその類似体もしくは誘導体の細胞外ドメインの第２の断片とを得るステップであって、第１および第２のヒト受容体は、重症筋無力症自己抗体および異なるタンパク質の標的である、ステップと、
第１の断片を第２の断片に連結して単一のポリペプチド鎖を生成するステップと
によって生成される、ステップ
を含み、
それによってタンパク質を生成する、方法が提供される。
単一のポリペプチド鎖をコードする核酸配列を含む１つ以上のベクターを含む宿主細胞を培養するステップであって、該単一のポリペプチド鎖は、
ｉ．第１のヒト受容体またはその類似体もしくは誘導体の細胞外ドメインの第１の断片と、第２のヒト受容体またはその類似体もしくは誘導体の細胞外ドメインの第２の断片とを得るステップであって、第１および第２のヒト受容体は、重症筋無力症自己抗体および異なるタンパク質の標的である、ステップと、
第１の断片を第２の断片に連結して単一のポリペプチド鎖を生成するステップと
によって生成される、ステップ
を含み、
それによってタンパク質を生成する、方法が提供される。
【0267】
別の態様では、タンパク質複合体を生成する方法であって、該方法は、
少なくとも２本のポリペプチド鎖をコードする核酸配列を含む１つ以上のベクターを含む宿主細胞を培養するステップであって、該２本のポリペプチド鎖は、
ｉ．重症筋無力症自己抗体の第１のタンパク質標的またはその類似体もしくは誘導体の第１の断片と、重症筋無力症自己抗体の第２のタンパク質標的またはその類似体もしくは誘導体の第２の断片とを得るステップと、
ｉｉ．第１の断片を第１の二量体化ドメインに連結して第１のポリペプチドを生成し、第２の断片を第２の二量体化ドメインに連結して第２のポリペプチド鎖を生成するステップと
によって生成される、ステップ
を含み、
それによってタンパク質複合体を生成する、方法が提供される。
少なくとも２本のポリペプチド鎖をコードする核酸配列を含む１つ以上のベクターを含む宿主細胞を培養するステップであって、該２本のポリペプチド鎖は、
ｉ．重症筋無力症自己抗体の第１のタンパク質標的またはその類似体もしくは誘導体の第１の断片と、重症筋無力症自己抗体の第２のタンパク質標的またはその類似体もしくは誘導体の第２の断片とを得るステップと、
ｉｉ．第１の断片を第１の二量体化ドメインに連結して第１のポリペプチドを生成し、第２の断片を第２の二量体化ドメインに連結して第２のポリペプチド鎖を生成するステップと
によって生成される、ステップ
を含み、
それによってタンパク質複合体を生成する、方法が提供される。
【0268】
いくつかの実施形態では、タンパク質はポリペプチドである。いくつかの実施形態では、タンパク質複合体は、本発明のタンパク質複合体である。いくつかの実施形態では、タンパク質組成物は、本発明の組成物である。いくつかの実施形態では、タンパク質は、本発明のタンパク質である。いくつかの実施形態では、タンパク質は、本発明のポリペプチド鎖である。いくつかの実施形態では、断片は、本発明の断片である。いくつかの実施形態では、誘導体は、本発明の誘導体である。いくつかの実施形態では、類似体は、本発明の類似体である。いくつかの実施形態では、二量体化ドメインは、本発明の二量体化ドメインである。いくつかの実施形態では、組成物、タンパク質複合体、タンパク質、断片、類似体、誘導体または二量体化ドメインは、上記のようなものである。
【0269】
いくつかの実施形態では、タンパク質はヒトタンパク質である。いくつかの実施形態では、タンパク質は細胞表面タンパク質である。いくつかの実施形態では、第１および第２のタンパク質は同じタンパク質である。いくつかの実施形態では、第１および第２のタンパク質は異なるタンパク質である。いくつかの実施形態では、第１および第２のタンパク質は、重症筋無力症自己抗体の標的である。いくつかの実施形態では、第１および第２のタンパク質は、重症筋無力症に関連する自己抗体の標的である。いくつかの実施形態では、重症筋無力症は、第１および第２のタンパク質に対する自己抗体によって特徴付けられる。いくつかの実施形態では、タンパク質は受容体であり、断片は細胞外ドメインの断片である。いくつかの実施形態では、断片は、細胞外ドメインの断片を含む。いくつかの実施形態では、断片は細胞外ドメインからなる。
【0270】
いくつかの実施形態では、第１および第２の二量体化ドメインは、互いに二量体化することができる。いくつかの実施形態では、第１および第２の二量体化ドメインは、互いに二量体化するように構成されている。いくつかの実施形態では、本方法は、第１および第２のポリペプチドを接触させることをさらに含む。いくつかの実施形態では、接触させるステップは、ポリペプチドを一緒にインキュベートすることを含む。いくつかの実施形態では、接触させるステップは、細胞内で行われる。いくつかの実施形態では、接触させるステップは、インビトロで行われる。いくつかの実施形態では、接触させるステップは、二量体化を可能にするのに十分な条件下で行われる。いくつかの実施形態では、許容することは、誘導することである。いくつかの実施形態では、条件は、ポリペプチドの二量体化を可能にするのに十分である。いくつかの実施形態では、条件は生理学的条件である。
【0271】
いくつかの実施形態では、本方法は、第３の二量体化ドメインを第１のポリペプチドに挿入することをさらに含む。いくつかの実施形態では、挿入することは、連結することである。いくつかの実施形態では、挿入することは、第３の二量体化ドメインをコードする核酸配列を、第１のポリペプチドをコードする核酸分子またはベクターに挿入することである。いくつかの実施形態では、連結することは、第３の二量体化ドメインを第１の二量体化ドメインに連結することである。いくつかの実施形態では、連結することは、第３の二量体化ドメインを第１の断片に連結することである。
【0272】
いくつかの実施形態では、本方法は、重症筋無力症自己抗体の第３のタンパク質標的またはその類似体もしくは誘導体の第３の断片を得ることと、それを第４の二量体化ドメインに連結して第３のポリペプチド鎖を生成することとをさらに含む。いくつかの実施形態では、第３および第４の二量体化ドメインは、互いに二量体化することができる。いくつかの実施形態では、第３および第４の二量体化ドメインは、互いに二量体化するように構成されている。いくつかの実施形態では、本方法は、第１、第２および第３のポリペプチド鎖を接触させることをさらに含む。いくつかの実施形態では、本方法は、第３のポリペプチド鎖をコードする核酸配列を宿主細胞内で発現させることをさらに含む。いくつかの実施形態では、第３のポリペプチド鎖は、第３のタンパク質の第３の断片を得ることと、それを第４の二量体化ドメインに連結して第３のポリペプチド鎖を生成することとによって生成される。いくつかの実施形態では、本方法は、第１、第２および第３のポリペプチド鎖を細胞内で発現させることを含む。
【0273】
いくつかの実施形態では、本方法は、第５の二量体化ドメインを第２のポリペプチドに挿入することをさらに含む。いくつかの実施形態では、挿入することは、連結することである。いくつかの実施形態では、挿入することは、第５の二量体化ドメインをコードする核酸配列を、第２のポリペプチドをコードする核酸分子またはベクターに挿入することである。いくつかの実施形態では、連結することは、第５の二量体化ドメインを第２の二量体化ドメインに連結することである。いくつかの実施形態では、連結することは、第５の二量体化ドメインを第２の断片に連結することである。
【0274】
いくつかの実施形態では、本方法は、重症筋無力症自己抗体の第４のタンパク質標的またはその類似体もしくは誘導体の第４の断片を得ることと、それを第６の二量体化ドメインに連結して第４のポリペプチド鎖を生成することとをさらに含む。いくつかの実施形態では、第５および第６の二量体化ドメインは、互いに二量体化することができる。いくつかの実施形態では、第５および第６の二量体化ドメインは、互いに二量体化するように構成されている。いくつかの実施形態では、本方法は、第１、第２、第３および第４のポリペプチド鎖を接触させることをさらに含む。いくつかの実施形態では、本方法は、第４のポリペプチド鎖をコードする核酸配列を宿主細胞内で発現させることをさらに含む。いくつかの実施形態では、第４のポリペプチド鎖は、第４のタンパク質の第４の断片を得ることと、それを第６の二量体化ドメインに連結して第４のポリペプチド鎖を生成することとによって生成される。いくつかの実施形態では、本方法は、第１、第２、第３および第４のポリペプチド鎖を細胞内で発現させることを含む。
【0275】
いくつかの実施形態では、本方法は、Ｆｃ領域を第１の鎖に挿入することをさらに含む。いくつかの実施形態では、本方法は、Ｆｃ領域を第２の鎖に挿入することをさらに含む。いくつかの実施形態では、本方法は、Ｆｃ領域を第３の鎖に挿入することをさらに含む。いくつかの実施形態では、本方法は、Ｆｃ領域を第４の鎖に挿入することをさらに含む。いくつかの実施形態では、本方法は、Ｆｃ領域の一部を第１の鎖に挿入し、Ｆｃ領域の一部を第２の鎖に挿入することをさらに含み、２つの部分の界面が完全なＦｃ領域を作り出す。
【0276】
いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、二量体化ドメインのＣ末端に挿入される。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、断片のＣ末端に挿入される。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、二量体化ドメインのＮ末端に挿入される。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、断片のＮ末端に挿入される。いくつかの実施形態では、断片は、二量体化ドメインのＣ末端に挿入または連結される。いくつかの実施形態では、断片は、二量体化ドメインのＮ末端に挿入または連結される。
【0277】
いくつかの実施形態では、本方法は、ポリペプチド鎖の少なくとも２つの部分の間にリンカーを挿入することをさらに含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、断片と二量体化ドメインとの間に挿入される。いくつかの実施形態では、リンカーは、断片とＦｃ領域との間に挿入される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｆｃ領域と二量体化ドメインとの間に挿入される。いくつかの実施形態では、リンカーは、二量体化ドメインと別の二量体化ドメインとの間に挿入される。いくつかの実施形態では、リンカーは、断片と別の断片との間に挿入される。いくつかの実施形態では、リンカーは、第１のタンパク質の断片と第２のタンパク質の断片との間に挿入される。
【0278】
いくつかの実施形態では、本方法は、断片の溶解度を増加させる少なくとも１つの変異を断片に生成することをさらに含む。いくつかの実施形態では、本方法は、変異断片の溶解度を測定することをさらに含む。いくつかの実施形態では、本方法は、溶解度が増加した変異断片を選択することをさらに含む。いくつかの実施形態では、増加とは、少なくとも所定の閾値だけ増加することである。いくつかの実施形態では、増加とは、有意に増加することである。いくつかの実施形態では、増加とは、少なくとも１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０または５００％増加することである。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。いくつかの実施形態では、増加とは、少なくとも２５％増加することである。いくつかの実施形態では、増加とは、少なくとも５０％増加することである。
【0279】
いくつかの実施形態では、本方法は、断片の凝集を減少させる少なくとも１つの変異を断片に生成することをさらに含む。いくつかの実施形態では、本方法は、変異断片の凝集を測定することをさらに含む。いくつかの実施形態では、本方法は、溶解度が減少した変異断片を選択することをさらに含む。いくつかの実施形態では、減少とは、少なくとも所定の閾値だけ減少することである。いくつかの実施形態では、減少とは、有意に減少することである。いくつかの実施形態では、減少とは、少なくとも１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０または５００％減少することである。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。いくつかの実施形態では、減少とは、少なくとも２５％減少することである。いくつかの実施形態では、減少とは、少なくとも５０％減少することである。
【0280】
いくつかの実施形態では、本方法は、少なくとも１つの変異が、第１の断片に対する自己抗体への第１の断片の結合を実質的に減少させないことを確認することをさらに含む。いくつかの実施形態では、本方法は、変異した第１の断片への自己抗体の結合をさらに測定する。いくつかの実施形態では、本方法は、実質的に同じまたはより多くの自己抗体結合を含む変異断片を選択することを含む。いくつかの実施形態では、自己抗体および重症筋無力症自己抗体。いくつかの実施形態では、自己抗体は、重症筋無力症対象に見出される自己抗体である。いくつかの実施形態では、確認することまたは測定することは、変異断片を、重症筋無力症に罹患している対象からの試料と接触させることと、試料中の自己抗体の変異断片への結合を測定することとを含む。いくつかの実施形態では、試料は血液である。いくつかの実施形態では、試料は血清である。いくつかの実施形態では、試料は、単離された自己抗体を含む。いくつかの実施形態では、確認することまたは測定することは、非変異断片を、重症筋無力症を罹患している対象からの試料と接触させることと、試料中の自己抗体の変異断片への結合を測定することとを含む。いくつかの実施形態では、確認することまたは測定することは、非変異断片と変異断片との結合を比較することと、実質的により少ない自己抗体結合を有しない変異断片を選択することとを含む。いくつかの実施形態では、実質的により少ないとは、有意に少ないことである。いくつかの実施形態では、実質的により少ないとは、少ないことである。いくつかの実施形態では、実質的により少ないとは、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５または５０％より少ない結合のことである。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。いくつかの実施形態では、実質的により少ないとは、１０％より少ない結合のことである。
【0281】
別の態様では、本発明の方法によって生成されるタンパク質複合体が提供される。
【0282】
別の態様では、本発明の方法によって生成されるタンパク質が提供される。
【0283】
別の態様では、本発明の方法によって生成された組成物が提供される。
【0284】
患者選択
別の態様では、本発明の方法によって処置される対象の適性を決定する方法であって、対象から試料を受け取るステップと、試料を本発明の組成物と接触させるステップと、試料内の抗体の組成物への結合を決定するステップとを含み、抗体の組成物への結合が、対象が本発明の方法によって処置されるのに適していることを示し、それによって処置される対象の適性を決定する、方法が提供される。
別の態様では、本発明の方法によって処置される対象の適性を決定する方法であって、対象から試料を受け取るステップと、試料を本発明の組成物と接触させるステップと、試料内の抗体の組成物への結合を決定するステップとを含み、抗体の組成物への結合が、対象が本発明の方法によって処置されるのに適していることを示し、それによって処置される対象の適性を決定する、方法が提供される。
【0285】
別の態様では、本発明の方法によって処置される対象の適性を決定する方法であって、対象から試料を受け取るステップと、試料を本発明のタンパク質複合体と接触させるステップと、試料内の抗体のタンパク質複合体への結合を決定するステップとを含み、タンパク質複合体への抗体の結合が、対象が本発明の方法によって処置されるのに適していることを示し、それによって処置される対象の適性を決定する、方法が提供される。
【0286】
別の態様では、本発明の方法によって処置される対象の適性を決定する方法であって、対象から試料を受け取るステップと、試料を本発明のタンパク質と接触させるステップと、試料内の抗体のタンパク質への結合を決定するステップとを含み、タンパク質への抗体の結合が、対象が本発明の方法によって処置されるのに適していることを示し、それによって処置される対象の適性を決定する、方法が提供される。
【0287】
いくつかの実施形態では、対象は、処置を必要とする対象である。いくつかの実施形態では、対象は、上記のような対象である。いくつかの実施形態では、対象は、重症筋無力症を罹患している。いくつかの実施形態では、対象は、重症筋無力症に関連する自己抗体が陽性であることが知られている。いくつかの実施形態では、対象は血清反応陽性である。いくつかの実施形態では、対象は血清反応陰性である。いくつかの実施形態では、対象は処置に対してナイーブである。いくつかの実施形態では、処置は、重症筋無力症の処置である。いくつかの実施形態では、対象は処置を受けており、再発している。
【0288】
いくつかの実施形態では、本方法は、対象から試料を得ることを含む。いくつかの実施形態では、試料は組織を含む。いくつかの実施形態では、試料は生検材料である。いくつかの実施形態では、試料は体液である。いくつかの実施形態では、体液は血液である。いくつかの実施形態では、体液は血清である。いくつかの実施形態では、体液は血漿である。いくつかの実施形態では、体液は、抗体を含む流体である。いくつかの実施形態では、体液は、血液、血清、血漿、腸液、唾液、腫瘍液、尿、間質液、脳脊髄液および便のうちの少なくとも１つから選択される。
【0289】
いくつかの実施形態では、自己抗体は重症筋無力症自己抗体である。いくつかの実施形態では、自己抗体はＡＣｈＲに対するものである。いくつかの実施形態では、自己抗体は、ＡＣｈＲに対する抗体である。いくつかの実施形態では、自己抗体は、ＡＣｈＲサブユニットに対する抗体である。いくつかの実施形態では、自己抗体はＡＣｈＲサブユニットに対するものである。いくつかの実施形態では、自己抗体は病理学的自己抗体である。いくつかの実施形態では、自己抗体は、疾患を引き起こす自己抗体である。
【0290】
いくつかの実施形態では、接触させることは、インキュベートすることである。いくつかの実施形態では、接触させることは、タンパク質複合体への抗体の結合に十分な条件下で行われる。いくつかの実施形態では、条件は、抗体がタンパク質複合体に結合するのに十分な時間を含む。いくつかの実施形態では、条件は生理学的条件を含む。いくつかの実施形態では、タンパク質複合体は試料に添加される。いくつかの実施形態では、タンパク質複合体は体液に溶解される。いくつかの実施形態では、抗体は自己抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、タンパク質に対する抗体である。
【0291】
いくつかの実施形態では、タンパク質またはタンパク質複合体への少なくとも閾値量の抗体の結合は、対象が処置に適していることを示す。いくつかの実施形態では、タンパク質またはタンパク質複合体への閾値量を超える抗体の結合は、対象が処置に適していることを示す。いくつかの実施形態では、抗体の量は抗体の数である。いくつかの実施形態では、抗体の量は、抗体のパーセンテージである。いくつかの実施形態では、パーセンテージは、試料中の抗体のパーセンテージである。いくつかの実施形態では、閾値は、試料中の抗体の１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０または７５％である。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。いくつかの実施形態では、閾値は２０％である。いくつかの実施形態では、閾値は２５％である。いくつかの実施形態では、閾値は５０％である。いくつかの実施形態では、閾値は７０％である。いくつかの実施形態では、閾値は７５％である。
【0292】
いくつかの実施形態では、組成物は、検出可能な部分をさらに含む。いくつかの実施形態では、タンパク質複合体は、検出可能な部分をさらに含む。いくつかの実施形態では、タンパク質は、検出可能な部分をさらに含む。いくつかの実施形態では、本方法は、組成物、複合体および／またはタンパク質を、検出可能な部分を含むペプチドと接触させることをさらに含む。いくつかの実施形態では、ペプチドは、組成物、タンパク質および／または複合体に結合するように構成されている。いくつかの実施形態では、ペプチドは、組成物、タンパク質および／または複合体に特異的である。本明細書で使用される場合、「特異的結合」という用語は、他の分子を排除して特異的分子に結合することを指す。いくつかの実施形態では、ペプチドは、組成物、タンパク質および／または複合体に特異的であり、試料中の他のタンパク質を排除する。いくつかの実施形態では、ペプチドは、試料中の天然に存在する抗体を排除するための組成物、タンパク質および／または複合体に特異的である。いくつかの実施形態では、ペプチドは、試料中の抗体を排除するための組成物、タンパク質および／または複合体に特異的である。いくつかの実施形態では、結合を決定するステップは、その部分を検出するステップを含む。いくつかの実施形態では、決定することは、タンパク質複合体を単離することを含む。いくつかの実施形態では、決定することは、複合体から抗体を溶出させることを含む。タンパク質同定の方法は当該技術分野で周知であり、任意のそのような方法を使用することができる。そのような方法の例としては、ウェスタンブロッティング、ＥＬＩＳＡ、ＦＡＣＳ分析および質量分析などによるタンパク質配列決定が挙げられる。いくつかの実施形態では、決定することはＥＬＩＳＡを含む。いくつかの実施形態では、ＥＬＩＳＡは競合ＥＬＩＳＡである。いくつかの実施形態では、競合ＥＬＩＳＡは抗体との競合を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、疾患に関連する抗体である。
【0293】
いくつかの実施形態では、結合は、正の結合である。いくつかの実施形態では、結合は、所定の閾値を超える結合である。いくつかの実施形態では、結合は、特異的結合である。いくつかの実施形態では、結合は、タンパク質複合体の断片の少なくとも１つに結合することである。いくつかの実施形態では、結合は、タンパク質複合体の断片の少なくとも２つに結合することである。いくつかの実施形態では、結合は、タンパク質複合体の断片の少なくとも３つに結合することである。いくつかの実施形態では、結合は、タンパク質複合体の断片の少なくとも４つに結合することである。いくつかの実施形態では、試料中の抗体の少なくとも１０、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７０、７５、８０、９０、９５、９７、９９または１００％の結合。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。いくつかの実施形態では、試料中の抗体の少なくとも５０％の結合。いくつかの実施形態では、試料中の抗体の少なくとも７０％の結合。いくつかの実施形態では、試料中の抗体の少なくとも７５％の結合。いくつかの実施形態では、抗体のパーセントは、自己抗体のパーセントである。いくつかの実施形態では、抗体のパーセントは、タンパク質に対する抗体のパーセントである。いくつかの実施形態では、抗体のパーセントは、疾患に関連する抗体のパーセントである。
【0294】
本明細書で使用される場合、「約」という用語は、値と組み合わせた場合、基準値の±１０％を指す。例えば、約１０００ナノメートル（ｎｍ）の長さは、１０００ｎｍ±１００ｎｍの長さを指す。
【0295】
本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈上他に明確に指示されない限り、複数の指示対象を含むことに留意されたい。したがって、例えば、「ポリヌクレオチド」への言及は、複数のそのようなポリヌクレオチドを含み、「ポリペプチド」への言及は、当業者に公知の１つ以上のポリペプチドおよびその等価物への言及などを含む。特許請求の範囲は、任意の要素を除外するように作成され得ることにさらに留意されたい。したがって、この記述は、特許請求の範囲の要素の列挙または「否定的」限定の使用に関連して、「単独で」、「のみ」などのような排他的な用語を使用するための先行詞としての役割を果たすことを意図している。
【0296】
「Ａ、Ｂ、およびＣなどのうちの少なくとも１つ」に類似した慣用句が使用される場合、一般に、そのような構成は、当業者が慣用句を理解するであろうという意味で意図される（例えば、「Ａ、Ｂ、およびＣのうちの少なくとも１つを有するシステム」は、Ａのみ、Ｂのみ、Ｃのみ、ＡとＢとを一緒に、ＡとＣとを一緒に、ＢとＣとを一緒に、および／またはＡとＢとＣとを一緒に有するシステムなどを含むが、これらに限定されない）。２つ以上の代替的な用語を提示する実質的に任意の選言的な単語および／または句は、明細書、特許請求の範囲、または図面のいずれかにかかわらず、用語の１つ、用語のいずれか、または両方の用語を含む可能性を企図すると理解されるべきであることが当業者によってさらに理解されるであろう。例えば、「ＡまたはＢ」という語句は、「Ａ」または「Ｂ」または「ＡおよびＢ」の可能性を含むと理解される。
【0297】
明確にするために別個の実施形態の文脈で説明されている本発明の特定の特徴は、単一の実施形態では組み合わせて提供されてもよいことが理解される。逆に、簡潔にするために単一の実施形態の文脈で説明されている本発明の様々な特徴は、別個にまたは任意の適切な部分的組み合わせで提供されてもよい。本発明に関連する実施形態のすべての組み合わせは、本発明によって具体的に包含され、あたかも各々およびすべての組み合わせが個別に明示的に開示されているかのように本明細書に開示される。さらに、様々な実施形態およびその要素のすべての部分的組み合わせもまた、本発明によって具体的に包含され、あたかもそのような部分的組み合わせの各々およびすべてが個別に明示的に本明細書に開示されているかのように本明細書に開示される。
【0298】
本発明の更なる目的、利点、および新規な特徴は、限定することを意図するものではない以下の実施例を検討することによって当業者に明らかになるであろう。上記で明確にされ、以下の特許請求の範囲のセクションで特許請求される本発明の様々な実施形態および実施形態は、以下の実施例において実験的裏付けが見出される。
【0299】
上記で明確にされ、以下の特許請求の範囲のセクションで特許請求される本発明の様々な実施形態および実施形態は、以下の実施例において実験的裏付けを見出す。
【実施例】
【0300】
一般に、本明細書で使用される命名法および本発明で利用される実験手順には、分子的、生化学的、免疫学的、微生物学的および組換えＤＮＡ技術が含まれる。そのような技術は文献で十分に説明されている。例えば、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」 Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，（１９８９）；「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」 Ｖｏｌｕｍｅｓ Ｉ－ＩＩＩ Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｒ．Ｍ．，ｅｄ．（１９９４）；Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ（１９８９）；Ｐｅｒｂａｌ，「Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ」，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８８）；Ｗａｔｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，「Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＤＮＡ」，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｂｏｏｋｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｂｉｒｒｅｎ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ）「Ｇｅｎｏｍｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ Ｓｅｒｉｅｓ」，Ｖｏｌｓ．１－４，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９８）；ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｉｅｓ ａｓ ｓｅｔ ｆｏｒｔｈ米国特許第４，６６６，８２８号明細書；同第４，６８３，２０２号明細書；同第４，８０１，５３１号明細書；同第５，１９２，６５９号明細書および同第５，２７２，０５７号明細書に記載されている方法；「Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ」，Ｖｏｌｕｍｅｓ Ｉ－ＩＩＩ Ｃｅｌｌｉｓ，Ｊ．Ｅ．，ｅｄ．（１９９４）；「Ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌｓ－Ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ」 ｂｙ Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，Ｗｉｌｅｙ－Ｌｉｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９９４），Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ；「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」 Ｖｏｌｕｍｅｓ Ｉ－ＩＩＩ Ｃｏｌｉｇａｎ Ｊ．Ｅ．，ｅｄ．（１９９４）；Ｓｔｉｔｅｓ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ），「Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」（８ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ），Ａｐｐｌｅｔｏｎ＆Ｌａｎｇｅ，Ｎｏｒｗａｌｋ，ＣＴ（１９９４）；Ｍｉｓｈｅｌｌ ａｎｄ Ｓｈｉｉｇｉ（ｅｄｓ），「Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ－Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｃｏｕｒｓｅ Ｍａｎｕａｌ」 ＣＳＨＬ Ｐｒｅｓｓ（１９９６）；を参照されたい（これらのすべては参照により組み込まれる）。他の一般的な参考文献がこの文書全体にわたって提供される。
【0301】
実施例１：
全重症筋無力症（ＭＧ）患者の８０～９０％がアセチルコリン受容体（ＡＣｈＲ）に対する自己抗体を有することが見出されている。しかしながら、アセチルコリン受容体複合体は５つのサブユニット（アルファ１、ベータ１、ガンマ、デルタおよびイプシロン）で構成されている。ＭＧ患者の診断評価は、一般に、一方のサブユニットに対する抗体と他方のサブユニットに対する抗体とを区別しない。それにもかかわらず、ＭＧ治療薬を生成する際のほとんどの抗原特異的試みは、ＡＣｈＲのアルファサブユニット（ＡＣｈＲａ）と、この分子に対する自己抗体を標的とする治療薬とに焦点を当ててきた。
全重症筋無力症（ＭＧ）患者の８０～９０％がアセチルコリン受容体（ＡＣｈＲ）に対する自己抗体を有することが見出されている。しかしながら、アセチルコリン受容体複合体は５つのサブユニット（アルファ１、ベータ１、ガンマ、デルタおよびイプシロン）で構成されている。ＭＧ患者の診断評価は、一般に、一方のサブユニットに対する抗体と他方のサブユニットに対する抗体とを区別しない。それにもかかわらず、ＭＧ治療薬を生成する際のほとんどの抗原特異的試みは、ＡＣｈＲのアルファサブユニット（ＡＣｈＲａ）と、この分子に対する自己抗体を標的とする治療薬とに焦点を当ててきた。
【0302】
実際に抗ＡＣｈＲα１を有する重症筋無力症集団のパーセンテージを決定するために、３３５人のＡＣｈＲ血清反応陽性ＭＧ患者から血清試料を採取した。シスループ修飾ＡＣｈＲα１細胞外ドメイン（ＥＣＤ、配列番号１３１）をデコイ枯渇分子として使用して、試料を直接ＥＬＩＳＡアッセイで試験した（プロセスの例は図１Ｆに記載している）。このアッセイのために、そのすべてのサブユニットを有する完全なＡＣｈＲ複合体を血清中の自己抗体に結合するためのベイトとして使用した。この結合アッセイを、漸増濃度の固相結合ＡＣｈＲα１の存在下または非存在下で実施し、結合の減少パーセントを各試料について測定した（図１Ａ）。ＡＣｈＲ受容体結合の減少は、ＡＣｈＲα１に対して存在する自己抗体の濃度に比例する。驚くべきことに、一部の対象は非常に高いレベルの阻害を有し、主にＡＣｈＲα１に対する自己抗体の存在を示したが（図１Ａ、左端の試料；および図１Ｂ）、他の対象は中程度のレベルの阻害しか示さず、自己抗体の大部分がアルファサブユニットに対してではなかったことを示し（図１Ｃ）、さらに他の対象は実質的な阻害を有さず、ＡＣｈＲに対する自己抗体が陽性であったにもかかわらず、それらの自己抗体の１０％以下がＡＣｈＲα１に対してであったことを示した（図１Ｄ）。重要なことに、全ＡＣｈＲ結合を測定したとき（図１Ｅ）、全抗体濃度と抗ＡＣｈＲα１である抗体のパーセントとの間に相関がなく（図１Ｇ）、最も高い全抗体価を有する試料のいくつかは、抗ＡＣｈＲａ１自己抗体が低いかまたは存在しなかった。
【0303】
実施例２：
ほとんどのＭＧ患者の自己抗体レパートリーをよりよく理解するために、Ｚｉｓｉｍｏｐｏｕｌｏｕ ｅｔ ａｌ．，２００８，「Ａｎｔｉｇｅｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｐｈｅｒｅｓｉｓ ｏｆ ｈｕｍａｎ ａｎｔｉ－ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｕｔｏａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｒｏｍ ｍｙａｓｔｈｅｎｉａ ｇｒａｖｉｓ ｐａｔｉｅｎｔｓ’ ｓｅｒａ ｕｓｉｎｇ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ－ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｄｏｍａｉｎｓ」で提供されたデータを分析した。試験した４１人の患者試料を、全抗ＡＣｈＲ自己抗体プールに対する各ＡＣｈＲサブユニットに対する自己抗体の寄与に基づいてマッピングした（図２Ａ）。見て分かるように、アルファサブユニットに対する自己抗体は多くの対象に寄与するが、他の多くは主に他のサブユニットに対する自己抗体を有し、実際に大部分は異なるサブユニットを標的とする自己抗体の組み合わせを有する。したがって、単一のＡＣｈＲサブユニットまたはサブユニットの組み合わせのいずれかと接触させることによって少なくとも５０％または７５％の阻害を有するであろう対象の割合を示すプロットを作成した（図２Ｂ）。驚くべきことに、アルファサブユニット単独、実際にはサブユニットのいずれか単独は、試験した患者のいずれにおいても７５％のブロッキングをほとんど生じない。実際、アルファサブユニット単独では、患者の約２０％において５０％を超える阻害しかもたらさないであろう。
ほとんどのＭＧ患者の自己抗体レパートリーをよりよく理解するために、Ｚｉｓｉｍｏｐｏｕｌｏｕ ｅｔ ａｌ．，２００８，「Ａｎｔｉｇｅｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｐｈｅｒｅｓｉｓ ｏｆ ｈｕｍａｎ ａｎｔｉ－ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｕｔｏａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｒｏｍ ｍｙａｓｔｈｅｎｉａ ｇｒａｖｉｓ ｐａｔｉｅｎｔｓ’ ｓｅｒａ ｕｓｉｎｇ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ－ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｄｏｍａｉｎｓ」で提供されたデータを分析した。試験した４１人の患者試料を、全抗ＡＣｈＲ自己抗体プールに対する各ＡＣｈＲサブユニットに対する自己抗体の寄与に基づいてマッピングした（図２Ａ）。見て分かるように、アルファサブユニットに対する自己抗体は多くの対象に寄与するが、他の多くは主に他のサブユニットに対する自己抗体を有し、実際に大部分は異なるサブユニットを標的とする自己抗体の組み合わせを有する。したがって、単一のＡＣｈＲサブユニットまたはサブユニットの組み合わせのいずれかと接触させることによって少なくとも５０％または７５％の阻害を有するであろう対象の割合を示すプロットを作成した（図２Ｂ）。驚くべきことに、アルファサブユニット単独、実際にはサブユニットのいずれか単独は、試験した患者のいずれにおいても７５％のブロッキングをほとんど生じない。実際、アルファサブユニット単独では、患者の約２０％において５０％を超える阻害しかもたらさないであろう。
【0304】
ＭＧ治療薬が標的集団の少なくとも５０％を処置し、自己抗体の５０％超、理想的には７５％超を中和することができるためには、アルファ／ベータ／ガンマ／デルタ／イプシロンの組み合わせが必要であろう（図２Ｂ）。潜在的には自己抗体のレベルの任意の低下が有益であり得るが、実質的な低下をもたらし得、ＭＧ集団の大部分に対して有効であり得る処置をもたらすためには、複数のＡＣｈＲサブユニットを標的とする必要がある。これは、これらのサブユニットの二重および三重の組み合わせでも達成することができる。
【0305】
実施例３：
ＭＧ患者の長期寛解は、自己抗体プールを産生する自己反応性Ｂ細胞の大部分を除去する必要がある。ＭＧの症候の処置に潜在的に効果的であるが、自己抗体を単に循環から除去するだけでは、長寿命のＢ細胞が新しい自己抗体を作り続けるため、対象の残りの寿命の間、反復処置が必要になる。重要なことに、自己抗体を産生したＢ細胞は、自己抗体と同一の表面にＢ細胞受容体（ＢＣＲ）を発現する。これにより、Ｂ細胞自体が、ＢＣＲ－（および自己抗体）特異的エピトープを含有する治療薬によって標的化されることが可能になる。標的エピトープを抗体重鎖のＦｃ領域に連結することにより、治療薬は、自己抗体産生Ｂ細胞の特異的死滅を指示することができる。このアプローチはまた、自己反応性ＢＣＲを保有するすべての細胞がその分化状態にかかわらず標的化されるので、細胞表面上の特異的分化マーカー（例えば、ＣＤ１９、ＣＤ３８、ＢＣＭＡ）を標的化する薬剤を使用した場合に生じる、特異的亜集団の潜在的回避にも堅牢である。このアプローチはまた、自己反応性ＢＣＲを保有しているか否かにかかわらず、非特異的分化マーカー（例えば、ＣＤ１９、ＣＤ３８、ＢＣＭＡ）を標的とする処置によって損傷を受ける非自己反応性亜集団を保護および保存するのに有益である。
ＭＧ患者の長期寛解は、自己抗体プールを産生する自己反応性Ｂ細胞の大部分を除去する必要がある。ＭＧの症候の処置に潜在的に効果的であるが、自己抗体を単に循環から除去するだけでは、長寿命のＢ細胞が新しい自己抗体を作り続けるため、対象の残りの寿命の間、反復処置が必要になる。重要なことに、自己抗体を産生したＢ細胞は、自己抗体と同一の表面にＢ細胞受容体（ＢＣＲ）を発現する。これにより、Ｂ細胞自体が、ＢＣＲ－（および自己抗体）特異的エピトープを含有する治療薬によって標的化されることが可能になる。標的エピトープを抗体重鎖のＦｃ領域に連結することにより、治療薬は、自己抗体産生Ｂ細胞の特異的死滅を指示することができる。このアプローチはまた、自己反応性ＢＣＲを保有するすべての細胞がその分化状態にかかわらず標的化されるので、細胞表面上の特異的分化マーカー（例えば、ＣＤ１９、ＣＤ３８、ＢＣＭＡ）を標的化する薬剤を使用した場合に生じる、特異的亜集団の潜在的回避にも堅牢である。このアプローチはまた、自己反応性ＢＣＲを保有しているか否かにかかわらず、非特異的分化マーカー（例えば、ＣＤ１９、ＣＤ３８、ＢＣＭＡ）を標的とする処置によって損傷を受ける非自己反応性亜集団を保護および保存するのに有益である。
【0306】
図３Ａは、本発明の治療剤の一実施形態を示す。免疫グロブリン（Ｉｇ）様タンパク質複合体１０１は、４本のポリペプチド鎖：２本の重鎖様ポリペプチド１１０および２本の軽鎖様ポリペプチド１２０を含む。鎖１１０は、それらの間のジスルフィド結合を介して二量体化することができる。さらに、鎖１１０は、ＣＨ３ドメイン１１１、ＣＨ２ドメイン１１２、ヒンジ領域１１３およびＣＨ１ドメイン１１４のいずれかまたはすべてを含み得る。この実施形態では、ヒンジ領域１１３はジスルフィド結合を含み、二量体化ドメインとして作用するが、他の二量体化ドメインの使用も可能である。これらのドメインは当該技術分野で周知であり、例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、およびＩｇＤドメインのいずれかから選択することができる。当業者は、鎖１１０に組み込まれたＩｇＧ１およびＩｇＧ３のＦｃ部分が、分子が抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を誘導することを可能にすることを理解するであろう。鎖１２０は、ＣＨ１ドメイン１１４およびＣＬドメイン１２４に見出されるジスルフィド結合を介して鎖１１０と二量体化することができる。
【0307】
鎖１１０および１２０は、天然に存在する抗体または人工の抗体とは異なり、可変領域を欠いている。各鎖は、可変領域の代わりに、ヒトアセチルコリン受容体の細胞外部分からの断片１３０を有する。各鎖は、同じＡＣｈＲサブユニットまたは異なるサブユニットを有するように生成することができる。実際、図３Ｂに示すように、２つの重鎖１１５および１１６は、鎖１１５が例えばベータサブユニット１３１を含み、鎖１１６がガンマサブユニット１３２を含むように別々に操作することができる。同じことが軽鎖１２５および１２６にも当てはまり、これらは、例えば、アルファ１３３およびイプシロン１３４サブユニットを含むことができる。したがって、治療用分子は、単一サブユニットの４つのコピー（図３Ｃ）、２つの異なるサブユニットの各々２つのコピー（図３Ｄ）、または４つの異なるサブユニットの各々１つのコピー（図３Ｂ）またはそれらの任意の他の組み合わせで設計することができる。実際、分子は、１つのサブユニットの３つのコピーと別のサブユニットの１つのコピーとで、または１つのサブユニットの２つのコピーと２つの他のサブユニットの１つのコピーとで操作できるほど十分にモジュール化されている。図３Ｅは、２つの軽鎖が同一であるが、２つの重鎖が異なる実施形態を示す。また、図３Ｆは、２つの重鎖が同一であり、２つの軽鎖が異なる実施形態を示す。重要なことに、治療用分子は、５つの異なるＡＣｈＲサブユニットのうちの４つを含むように操作することができ、これは上記で説明したように、ＡＣｈＲ陽性患者の少なくとも５０％において５０％を超える阻害を誘導することができ、試験したすべての患者において少なくとも４０％の阻害を誘導することができる。任意の鎖が任意のサブユニットを含むことができ、図３Ａ～図３Ｆに示されている鎖とサブユニットとの組み合わせは例示的なものにすぎず、限定的なものではないことが当業者によって理解されるであろう。
【0308】
図４Ａ～図４Ｆは、２本の鎖のみが組み合わされた本発明のいくつかの実施形態を示す。図４Ａ～Ｅでは、タンパク質複合体２０１は、具体的には２つの重鎖である２本のポリペプチド鎖を含む。重鎖２１５および２１６は、任意選択で、ＣＨ２ ２１２、ＣＨ３ ２１１および／またはＣＨ１ ２１４ドメインを含むことができる。この実施形態では、二量体化ドメインは、ジスルフィド結合を介して二量体化する重鎖ヒンジ２１３であるが、他の二量体化ドメインも想定される。図４Ｂは、ＣＨ２ドメイン２１２またはＣＨ３ドメイン２１１またはＣＨ１ドメイン２１４を含まない分子を示す。これらのドメインのうちの２つを欠く組み合わせも想定される（図４Ｂ）。各鎖は、可変領域の代わりに、ヒトアセチルコリン受容体の細胞外部分からの断片２３０を有する。各鎖は、同じＡＣｈＲサブユニット（図４Ｃ）または異なるサブユニット（図４Ｄ）を有するように生成することができる。２つの異なるサブユニットが用いられる場合、２１５および２１６の主にヘテロ二量体が形成され、ホモ二量体ではないように分子を設計することが有利である。同じことが、図３における鎖１１５および鎖１１６のヘテロ二量体の形成にも当てはまる。ホモ二量体化を阻害し、ヘテロ二量体化を促進する、Ｋｎｏｂｓ－ｉｎ－Ｈｏｌｅｓ、ＤｕｏＢｏｄｉｅｓなどのＣＨ３／ＣＨ２ドメインにおける変異を設計するための当該分野で公知の技術が多数存在する。任意のそのような技術を用いることができる。
【0309】
図４Ｅには、２つの重鎖を含む代替構成が示されている。可変領域の代わりに単一の断片２３０を含む代わりに、２つのタンデム断片２３０が使用される。これらの断片は、任意選択のリンカー２９０によって分離されていてもよい。この構成は、重鎖可変部および軽鎖可変部が単一のペプチド上にある１本鎖抗体と構造が類似しており、図３Ｄに示される分子と本質的に等価である。重鎖２１５および２１６は、任意選択で、ＣＨ２ ２１２、ＣＨ３ ２１１および／またはＣＨ１ ２１４ドメインを含むことができる。この実施形態では、二量体化ドメインは、ジスルフィド結合を介して二量体化する重鎖ヒンジ２１３であるが、他の二量体化ドメインも想定される。簡単にするために、３つすべてのＣＨドメインを含む例を、ＣＨ１ドメインを欠く例として示す。ＣＨ２またはＣＨ３ドメインを欠くか、またはこれらのドメインのいずれか２つを欠く分子も想定される。断片２３０は、任意のＡＣｈＲサブユニットに由来し得ることが理解されるであろう。したがって、２つの同じサブユニットのリピートを１本鎖上に挿入することができ（図４Ｆ、２つのＡＣｈＲｇサブユニット２３２）、または２つの異なるサブユニットを１本鎖上で組み合わせることができる（図４Ｇ、ＡＣｈＲｇサブユニット２３２およびＡＣｈＲａサブユニット２３３）。当然のことながら、ホモ二量体化よりもヘテロ二量体化を促進するために様々な技術が使用され得るので、重鎖は同一である必要はない（図４Ｈ、一方の鎖上のＡＣｈＲｇサブユニット２３２およびＡＣｈＲａサブユニット２３３ならびに他方の鎖上のＡＣｈＲｄサブユニット２３４およびＡＣｈＲｂサブユニット２３１）。
【0310】
当然のことながら、２つの重鎖が同一でない場合、分子は、２つのタンデム断片２３０を含有する重鎖の一方のみを有し、単一断片２３０を含有する他方の重鎖を有するか（図４Ｉ）、または断片を含有しない（図４Ｊ）ように設計することができる。同じ断片が、すべての位置の両方の鎖に含まれ得る（図４Ｋ、一方の鎖上の２つのＡＣｈＲｇサブユニット２３２および他方の鎖上の単一のＡＣｈＲｇサブユニット２３２）、両方の鎖に含まれるが、タンデム位置に異なるサブユニットを有する（図４Ｌ、一方の鎖上のＡＣｈＲｇサブユニット２３２およびＡＣｈＲａサブユニット２３３ならびに他方の鎖上の単一のＡＣｈＲｇサブユニット２３２）、または３つすべての断片が異なり得る（図４Ｍ、一方の鎖上のＡＣｈＲｇサブユニット２３２およびＡＣｈＲａサブユニット２３３ならびに他方の鎖上の単一のＡＣｈＲｂサブユニット２３１）。
【0311】
図４Ｎでは、２つの重鎖を含む代替的な構成が示されており、３つのタンデム断片２３０が両方の鎖に使用されている。これらの断片は、任意選択のリンカー２９０によって分離されていてもよい。２つのタンデム断片と同様に、断片が同じ（図４Ｏ）、または異なる（図４Ｐ）構成が可能である。さらに、２本の鎖は、同じ断片（図４Ｑ）または同じ数の断片（図４Ｒ）を含む必要はない。図４Ｆ～図４ＲはＣＨ２ ２１２およびＣＨ３ ２１３ドメインのみを有する分子を示しているが、それらはＣＨ１ドメイン２１４またはさらにはドメインの１つのみ（ＣＨ１、ＣＨ２またはＣＨ３）を含むように構築することもできることが理解されるであろう。
【0312】
図４Ｓでは、タンパク質複合体２０１は、具体的には重鎖２１５および軽鎖２２０である２本のポリペプチド鎖を含む。そのような実施形態では、二量体化ドメインは、ＣＨ１ドメイン２１４およびＣＬドメイン２２４である。重鎖２１５は、任意選択で、ＣＨ３ドメイン２１１、ＣＨ２ドメイン２１２および／またはヒンジ領域２１３を含み得る。ヒンジドメインが存在しないことは、２本の重鎖２１５のホモ二量体化を排除するための一つの選択肢である。代替的に、（例えば、セリンまたはグルタミンへの）システイン置換／変異をヒンジに導入してもよく、またはヘテロ二量体化を促進し、ホモ二量体化を阻害するＣＨ２／ＣＨ３領域の変異の１つを用いてもよい。可変領域の代わりに、各鎖は、任意のヒトアセチルコリン受容体サブユニットの細胞外部分からの断片２３０を有する。
【0313】
重鎖３１５、重鎖３１６および軽鎖３２０の３本の鎖を有するタンパク質複合体３０１の作製も想定される（図５Ａ～図５Ｄ）。図５Ａは、重鎖３１６がＣＨ１ドメインの代わりにＣＬドメイン３６４を含む１つの可能な実施形態を示す。３１５／３１６ヘテロ二量体を確保する上記の方法を用いることができる。重鎖３１５および３１６は、任意選択でＣＨ３ドメイン３１１、ＣＨ２ドメイン３１２および／またはヒンジ領域３１３を含んでもよく、または異なる二量体化ドメインを用いてもよい。軽鎖３２０内のＣＬドメイン３２４は、重鎖３１５内のＣＨ１ドメイン３１４としか二量体化することができない。可変領域の代わりに、各鎖は、任意のヒトアセチルコリン受容体サブユニットの細胞外部分からの断片３３０を有する。３本の鎖はすべて同じ断片（例えば、ＡＣｈＲｇ断片３３２、図５Ｂ）を含むことができ、３本の鎖はすべて異なる断片（例えば、ＡＣｈＲｂ断片３３１、ＡＣｈＲｇ断片３３２およびＡＣｈＲａ断片３３３、図５Ｃ）を含むことができ、または３本の鎖は１つが繰り返される２つの異なる断片（例えば、ＡＣｈＲｇ断片３３２およびＡＣｈＲａ断片３３３、図５Ｄ）を含むことができる。図５Ｄは、軽鎖および重鎖のいずれかとして２つの同一の断片を有することもでき、したがって、この実施形態には３つの異なる構成があることが当業者には理解されるであろう。
【0314】
ＣＨ１ドメインの代わりにＣＬドメインを含む重鎖の１つを用いたこの構成はまた、４つの異なる断片とのタンパク質複合体の形成を可能にすることができる。図３Ｂのタンパク質複合体と同様に、図６に示すタンパク質複合体４０１は、各鎖上に４つの異なる断片を有する。この実施形態では、断片ＡＣｈＲａ ４３３、ＡＣｈＲｂ ４３１、ＡＣｈＲｇ ４３２およびＡＣｈＲｅ ４３４が用いられるが、当業者であれば、任意の４つの断片を使用できることを理解するであろう。ＭＧの処置のために、具体的には、ＡＣｈＲａ、ＡＣｈＲｂ、ＡＣｈＲｇ、ＡＣｈＲｄ、およびＡＣｈＲｅのいずれか４つを使用することができる。同じタンパク質からの異なる断片が異なる鎖上にあり得る実施形態も想定される。この実施形態では、第２の軽鎖４２６は、重鎖４１６のＣＬドメイン４６４と二量体化することができるようにＣＨ１ドメイン４７４を含む。重鎖４１５はＣＨ１ドメイン４１４を含み、軽鎖４２５はＣＬドメイン４２４を含む。これにより、鎖４２５は鎖４１５のみと二量体化することができ、鎖４２６は鎖４１６のみと二量体化することができる。本明細書の上記で記載されるように、任意選択のＣＨ２ドメイン４１２およびＣＨ３ドメイン４１３における変異を用いて、鎖４１５および４１６のヘテロ二量体化を促進することができる。ヒンジ領域４１３は、ここでは２つの重鎖間の二量体化ドメインとして使用されるが、任意の二量体化ドメイン（ＣＨ１／ＣＬ以外）を用いることができる。
【0315】
上記の実施形態では、免疫グロブリン骨格が示され、記載されているが、他の二量体化ドメインを選択することによって同様の分子が得られることが当業者によって理解されるであろう。図７Ａ～図７Ｄは、一般的なタンパク質複合体５０１を示す。図７Ａでは、第１の鎖５１５は、第２の鎖５１６の第２の二量体化ドメイン（ＤＤ２）５７３と特異的に二量体化することができる第１の二量体化ドメイン（ＤＤ１）５６３を含む。鎖５１５は、第３の鎖５２５の第４の二量体化ドメイン（ＤＤ４）５２４と特異的に二量体化することができる第３の二量体化ドメイン（ＤＤ３）５１４をさらに含む。鎖５１６は、第４の鎖５２６の第６の二量体化ドメイン（ＤＤ６）５７４と特異的に二量体化することができる第５の二量体化ドメイン（ＤＤ５）５６４をさらに含む。４本の鎖の各々はまた、重症筋無力症自己抗体のヒトタンパク質標的の断片５３０を含む。上述のように、これらの標的には、ＡＣｈＲａ、ＡＣｈＲｂ、ＡＣｈＲｇ、ＡＣｈＲｄ、およびＡＣｈＲｅが含まれる。これらはすべて同じアミノ酸配列を有する同じ断片であり得るか、または異なる配列（同じタンパク質または異なるタンパク質のいずれかからのもの）であり得る。
【0316】
図７Ｂは、各別個のドメインがリンカーによって分離されている、図７Ａの代替実施形態を示す。これらのリンカーはすべて任意選択であり、リンカーの組み合わせが想定されることが当業者によって理解されるであろう。図７Ｂの構成は、様々なドメイン／断片のいずれかまたはすべての間にリンカー用いることもできることがさらに理解されるであろう。
【0317】
図８Ａ～図８Ｅには、本発明の１本鎖実施形態が示されている。図８Ａは、第１のアセチルコリン受容体サブユニット（ＡＣｈＲａ、６３３）の断片および第２アセチルコリン受容体サブユニット（ＡＣｈＲｇ、６３２）の断片を含有する１本鎖融合タンパク質６０１を示す。当然のことながら、２つの異なる断片の任意の置換を使用できることが理解されるであろう。具体的には、２つの異なるタンパク質からの断片を使用することができる。図８Ｂおよび図８Ｃは、同様の実施形態を示すが、異なるタンパク質からの３つおよび４つの断片をそれぞれ含む。図８Ｄに示されるように、１本鎖はまた、少なくともＣＨ３ドメイン６１１と、任意選択でＣＨ１ドメイン６１４、ヒンジ領域６１３および／またはＣＨ２ドメイン６１２とを有する重鎖定常領域を含み得る。最後に、アミノ酸リンカーを使用して、１本鎖のドメインのいずれかを分離することができる。図８Ｅは、２つ、３つ、または４つの断片がすべてリンカー６９０によって分離されている実施形態、ならびに断片６３３および６３２がリンカー６９０によって分離されており、リンカー６９０がＣ末端断片６３２もＣＨ１ドメイン６１４から分離している実施形態を示す。ＣＨ１ドメイン６１４、ヒンジ領域６１３、ＣＨ２ドメイン６１２およびＣＨ３ドメイン６１１を分離するリンカーは示されていないが、これらのドメインのいずれかまたはすべてがリンカーによって分離され得ることは当業者には理解されるであろう。さらに、これらの様々なリンカーはすべて同じ配列を含むことができ、または異なるアミノ酸配列から作製できることが理解されるであろう。また、１つのみまたは５つすべての断片を有する順列が想定されることが理解されるであろう。
【0318】
図４～図８には示されていないが、アセチルコリン受容体サブユニットは変異を含有し得る。そのような変異は、本明細書の上記で記載されるように、溶解度を増加させ得る。そのような変異は、本明細書の上記で記載されるように、リガンド結合を阻害し得る。そのような変異は、凝集を減少させ得る（例えば、本明細書の上記で記載される）。上記および図４～図８に示される構築物のいずれも、断片の１つまたは多くにそのような変異を含み得る。
【0319】
上記の各種分子は、様々な形態で生成された。溶解度が増加した（Ｌａｚａｒｉｄｉｓ ｅｔ ａｌ．，２０１４，「Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ＡＣｈＲ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｄｏｍａｉｎ ｍｕｔａｎｔｓ ｗｉｔｈ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ」，Ｉｎｔ Ｊ Ｂｉｏｌ Ｍａｃｒｏｍｏｌ．２０１４ Ｆｅｂ；６３：２１０－７（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に開示される）ループ置換サブユニットＥＣＤ（配列番号１３１～１３５）を使用して、溶解度の増加に起因してはるかに高いタンパク質収率を生成することができるため、これらの分子を生成した。
【0320】
実施例４：
大部分のＭＧ集団を処置する能力をさらに試験するために、本明細書の上記のインビトロ枯渇アッセイをより大きなコホートにおいて繰り返す。５つのＥＣＤ－ループ置換サブユニット：アルファ－１、ベータ－１、ガンマ、デルタおよびイプシロンからのＡＣｈＲサブユニットの最適な組み合わせは、集団の少なくとも５０％において抗ＡＣｈＲ抗体を中和する能力に基づいて決定される。本発明の以下の分子（タンパク質複合体）：１）α１－ＣＬ／β１－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３（図３Ｄ）；２）α１－ＣＬ／β１－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３／γ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３（図３Ｅ）または３）α１－ＣＬ／β１－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３／ε－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３（図３Ｅ）をアッセイに用いると、この上昇したレベルのブロッキングが生じることが示される。
大部分のＭＧ集団を処置する能力をさらに試験するために、本明細書の上記のインビトロ枯渇アッセイをより大きなコホートにおいて繰り返す。５つのＥＣＤ－ループ置換サブユニット：アルファ－１、ベータ－１、ガンマ、デルタおよびイプシロンからのＡＣｈＲサブユニットの最適な組み合わせは、集団の少なくとも５０％において抗ＡＣｈＲ抗体を中和する能力に基づいて決定される。本発明の以下の分子（タンパク質複合体）：１）α１－ＣＬ／β１－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３（図３Ｄ）；２）α１－ＣＬ／β１－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３／γ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３（図３Ｅ）または３）α１－ＣＬ／β１－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３／ε－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３（図３Ｅ）をアッセイに用いると、この上昇したレベルのブロッキングが生じることが示される。
【0321】
ラットにおけるＭＧモデルの誘導および臨床評価
受動的移行ＭＧモデル：雌Ｌｅｗｉｓラットに、ＭＧを誘発するためにＡＣｈＲサブユニットに対する抗体を腹腔内または皮下注射し、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＬｏｓｅｎ ｅｔ ａｌ．Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ２７０，２０１５の方法に従ってＥＡＭＧ臨床スコアの変化について評価した。本発明の分子を、抗ＡＣｈＲサブユニット抗体投与後の異なる用量および異なる時点で静脈内または皮下投与し、対照と比較して、自己反応性抗体の力価を低下させ、ＭＧ臨床スコアを低下させ、処置群の全生存率を増加させる本発明の分子の能力を決定する。アルファ１ ＡＣｈＲサブユニットを調べるために、本発明の分子α１－ＣＬ／β１－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３（図３Ｄ）を、ｍＡｂ３５抗アルファ－１モノクローナル抗体投与後の異なる用量および異なる時点で静脈内投与した。群＃１（ｎ＝１２）のラットには、陰性対照としてＰＢＳを投与した。群＃２（ｎ－１０）のラットには、１０ｍｇ／ｋｇの本発明の分子の４つの用量を投与した。抗体投与の４、１２、２４および３２時間後に用量を投与した。群＃３のラット（ｎ＝６）には、抗体投与の７時間後に４０ｍｇ／ｋｇの用量を１回投与した。群＃４のラット（ｎ＝６）には、抗体投与の７時間後に２０ｍｇ／ｋｇの用量を１回投与した。群＃６のラット（ｎ＝６）には、抗体投与の７時間後に６ｍｇ／ｋｇの用量を１回投与した。群＃５（ｎ＝６）のラットにも、抗体投与の７時間後に２０ｍｇ／ｋｇの用量を１回投与したが、この投与は皮下投与であった。用量または投与経路にかかわらず、本発明の分子は、抗体処置ラットのＭＧ臨床スコアを一貫して低下させた（図３Ｇ）。さらに、２０または４０ｍｇ／ｋｇの１回用量が６ｍｇ／ｋｇの単回用量よりもわずかに優れているため、用量依存性が観察された。興味深いことに、１０ｍｇ／ｋｇの４つの用量が最良の臨床効果を示した。皮下投与は、ＰＢＳ対照よりも改善を示すことを示し、Ｉ．Ｖ．投与よりも有意に劣っている。ラットの全生存率も測定した（図３Ｈ）。生存の場合、すべてのＩ．Ｖ．注射が５日超後に１００％の生存をもたらしたので、処置間のわずかな差は観察できなかった。ここでも皮下投与は効果が低下した。
受動的移行ＭＧモデル：雌Ｌｅｗｉｓラットに、ＭＧを誘発するためにＡＣｈＲサブユニットに対する抗体を腹腔内または皮下注射し、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＬｏｓｅｎ ｅｔ ａｌ．Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ２７０，２０１５の方法に従ってＥＡＭＧ臨床スコアの変化について評価した。本発明の分子を、抗ＡＣｈＲサブユニット抗体投与後の異なる用量および異なる時点で静脈内または皮下投与し、対照と比較して、自己反応性抗体の力価を低下させ、ＭＧ臨床スコアを低下させ、処置群の全生存率を増加させる本発明の分子の能力を決定する。アルファ１ ＡＣｈＲサブユニットを調べるために、本発明の分子α１－ＣＬ／β１－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３（図３Ｄ）を、ｍＡｂ３５抗アルファ－１モノクローナル抗体投与後の異なる用量および異なる時点で静脈内投与した。群＃１（ｎ＝１２）のラットには、陰性対照としてＰＢＳを投与した。群＃２（ｎ－１０）のラットには、１０ｍｇ／ｋｇの本発明の分子の４つの用量を投与した。抗体投与の４、１２、２４および３２時間後に用量を投与した。群＃３のラット（ｎ＝６）には、抗体投与の７時間後に４０ｍｇ／ｋｇの用量を１回投与した。群＃４のラット（ｎ＝６）には、抗体投与の７時間後に２０ｍｇ／ｋｇの用量を１回投与した。群＃６のラット（ｎ＝６）には、抗体投与の７時間後に６ｍｇ／ｋｇの用量を１回投与した。群＃５（ｎ＝６）のラットにも、抗体投与の７時間後に２０ｍｇ／ｋｇの用量を１回投与したが、この投与は皮下投与であった。用量または投与経路にかかわらず、本発明の分子は、抗体処置ラットのＭＧ臨床スコアを一貫して低下させた（図３Ｇ）。さらに、２０または４０ｍｇ／ｋｇの１回用量が６ｍｇ／ｋｇの単回用量よりもわずかに優れているため、用量依存性が観察された。興味深いことに、１０ｍｇ／ｋｇの４つの用量が最良の臨床効果を示した。皮下投与は、ＰＢＳ対照よりも改善を示すことを示し、Ｉ．Ｖ．投与よりも有意に劣っている。ラットの全生存率も測定した（図３Ｈ）。生存の場合、すべてのＩ．Ｖ．注射が５日超後に１００％の生存をもたらしたので、処置間のわずかな差は観察できなかった。ここでも皮下投与は効果が低下した。
【0322】
次に、本発明の分子（α１－ＣＬ／β１－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３）とＩＶＩＧの等価物との比較を試験した。ＩＶＩＧがＭＧを処置する可能性が高い機構は、身体を非特異的抗体で飽和させることによる全体的な抗体産生の減少によるものである。さらに、飽和レベルのＦｃの存在は、全身のＦｃ受容体と競合する。これを模倣するために、受動的ＭＧラットを、静脈内投与による１用量の２０ｍｇ／ｋｇの分子、または各々がＦｃに連結された２つの異なる無関係なタンパク質の同じ用量で処置した。これらの非特異的Ｆｃは、本質的にＩＶＩＧと等価である。図３Ｉに見出されるように、予想どおり、本発明の分子は臨床スコアに対して顕著な効果を有した（図３Ｇも参照されたい）。非特異的Ｆｃは非常に穏やかな陽性効果を有したが、特異的分子よりも有意に悪化していた。マウスの生存が観察された場合、同様の結果が観察され（図３Ｊ）、本発明の分子は１００％の生存をもたらしたが、非特異的分子は中程度の改善しかもたらさなかった。
【0323】
表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用した親和性の分析：ｍＡｂ３５抗体に対するα１－ＥＣＤモノマーおよびα１－ＣＬ／α１－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３（図３Ｃ）テトラマーまたはα１－ＣＨ２－ＣＨ３（図４Ｂ）ダイマーの親和性対結合活性をＳＰＲデバイスを使用して測定する。ｍＡｂ３５抗体をリガンドとしてセンサーチップ上に固定する。異なる濃度のα１－モノマー、α１－ＣＬ／α１－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３テトラマー（図３Ｃ）およびα１－ＣＨ２－ＣＨ３ダイマー（図４Ｂ）を分析物として反応させる。代替的に、α１－モノマー、α１－ＣＬ／α１－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３テトラマー（図３Ｃ）および／またはα１－ＣＨ２－ＣＨ３ダイマー（図４Ｂ）をセンサーチップ上にリガンドとして固定する。異なる濃度のｍＡｂ３５抗体を分析物として反応させる。得られたセンサグラムを、ＳＰＲ評価ソフトウェアを使用したグローバルフィッティング法により解析する。上記のα１－ＥＣＤダイマーおよびテトラマー分子が、α１－モノマー（親和性）と比較してｍＡｂ３５抗体への結合強度（結合活性）を増加させる能力を決定する。
【0324】
実施例５：サブユニット凝集を減少させる変異
ＡＣＨＲサブユニットは、一緒に複合体化して活性受容体を形成することを意味する。しかしながら、サブユニットを各々個別に発現させた場合、自己相互作用が非常に大きくなり、高レベルの凝集をもたらすことが観察された。したがって、凝集に関与すると仮定された様々なサブユニットの領域に変異が生じた。特に、ジスルフィド結合を引き起こし得る遊離シトシンが消失した。サブユニット上のＢｉ相互作用表面を破壊し、疎水性表面をより親水性にした。変異体は、自己抗体エピトープおよび抗体結合を大きく破壊せずに凝集を減少させるように設計された。ループ置換サブユニットを変異の基礎として使用した。
ＡＣＨＲサブユニットは、一緒に複合体化して活性受容体を形成することを意味する。しかしながら、サブユニットを各々個別に発現させた場合、自己相互作用が非常に大きくなり、高レベルの凝集をもたらすことが観察された。したがって、凝集に関与すると仮定された様々なサブユニットの領域に変異が生じた。特に、ジスルフィド結合を引き起こし得る遊離シトシンが消失した。サブユニット上のＢｉ相互作用表面を破壊し、疎水性表面をより親水性にした。変異体は、自己抗体エピトープおよび抗体結合を大きく破壊せずに凝集を減少させるように設計された。ループ置換サブユニットを変異の基礎として使用した。
【0325】
表２～４は、アルファ、ガンマおよびデルタサブユニットにおいて作製された変異を提供する。ベータサブユニットは実質的な凝集を示さなかったので、変異体はそのために設計されなかった。分子をＣＨＯ細胞における一過性発現によって発現させ、タンパク質をニッケルカラムでのアフィニティークロマトグラフィーによって精製した。精製目的のために、各サブユニットのＣ末端に剛性リンカーを付加し、続いてＨｉｓ－Ａｖｉタグ（ＨＨＨＨＨＨＨＨＰＧＳＧＬＮＤＩＦＥＡＱＫＩＥＷＨＥ、配列番号１３８）を付加した。タンパク質を還元ＳＤＳページおよび非還元ＳＤＳページの両方で可視化して凝集を可視化し、ウエスタンブロットを使用してバンドが実際に発現サブユニットの凝集体であることを確認した。最後に、生成したタンパク質をＳＥＣ－ＨＰＬＣで調べた。すべてのサブユニット（ＷＴおよび変異体）が同じサイズであったので、それらは同じ時点で溶出するはずである。サブユニットのモノマーは最後に溶出すると予想される。最後のピークの下の面積は、モノマーサブユニットを表すと考えられ、それから、モノマー形態で見出される分子のパーセンテージを計算し、表に提供する。
【0326】
【表2】
【0327】
【表3】
【0328】
【表4】
【0329】
ガンマサブユニットにおけるＭ８４Ｓ変異以外のすべての生成された変異体は、実際に凝集を減少させ、生成されたモノマーの量を増加させた。多くの場合、生成されたタンパク質の総収量も大幅に増加した。Ｍ８４Ｓ変異は凝集を減少させなかったが、凝集を実質的に増加させなかったか、または収率に影響せず、この変異は、分子の貯蔵寿命の間に曝露されたメチオニンの酸化を防止するという追加の利点を有する。デルタ変異のいくつかは、モノマーのわずかな増加しかもたらさなかったが、ダイマーもはるかに高い分子量の凝集体にわたって増加したことが認められた。これも有益な結果であり、ダイマーは、モノマーほど望ましくないが、大きな凝集体よりも優れている。
【0330】
次に、ヒトＭＧ血清からサブユニット特異的抗ＡＣｈＲ ＩｇＧ抗体を枯渇させる様々な分子の能力（力価＞０．５ｎＭ）を試験した。この目的のために、アビジン被覆セファロースビーズを、本発明のｃ末端ビオチン化ＥＣＤ含有分子で装飾した。次いで、ＭＧ血清試料を、分子被覆ビーズ（０．５７ｕＭ）の有無にかかわらず、振盪下（４００ＲＰＭ、オービタル）室温で１時間インキュベートした。遠心分離（３，２００×ｇで５分間）後、上清を回収し、Ｅｕｒｏｉｍｍｕｎ ＥＬＩＳＡを使用して抗ＡＣｈＲ ＩｇＧ濃度について試験した。このようにして枯渇率を算出した。変異されたＥＣＤによる枯渇をＷＴ対応物による枯渇と比較した。
【0331】
図９は、多くの血清試料にわたる平均枯渇を示すことによって枯渇研究の結果を要約している。溶解度を増加させるためにアルファサブユニットのｃｙｓループの置き換えを含むＣＲＤ－１０１は、Ｆｃ断片に融合した野生型アルファサブユニットと同程度に有効であった（ＣＲＤ－２６９、配列番号１０１）。ＣＲＤ－６４２は、Ｗ１４９Ｒ変異（および以下の分子のすべてに含まれるループ置換）を有するアルファサブユニットを含み、ＣＲＤ－１０１と同程度に有効であった。ガンマサブユニットに三重変異Ｍ８４Ｓ／Ｙ１０５Ｅ／Ｙ１１７Ｒを含むＣＲＤ－３８２は、野生型ガンマサブユニット（ＣＲＤ１０３）と同程度に有効であった。同様に、Ｃ１０８Ａ変異を有するデルタサブユニットを含むＣＲＤ－３９１は、野生型デルタ（ＣＲＤ－１０４）と同程度に有効であった。
【0332】
個々の血清試料を調べたとき、変異体ＥＣＤの多くが実際にはそれらの非変異対応物よりも優れていることが見出された。ＣＲＤ－１０１（Ｃｙｓループ置換アルファサブユニット）を、ＣＲＤ－２６９（Ｆｃに融合したＷＴアルファ）と直接比較したところ、統計学的に有意である約１７％多い枯渇をもたらすことが見出された（ｐ＜０．０００１）（図１０Ａ）。Ｗ１４９Ｒ変異の追加は、ｃｙｓループの置換によってもたらされる増加に加えて、枯渇を約１３％（ｐ＜０．０００１）増加させることが見出された（図１０Ｂ）。デルタサブユニットにＣ１０８Ａ変異を追加すると、枯渇が約１５％（ｐ＜０．０００１）増加した（図１０Ｃ）。しかしながら、ガンマサブユニットの三重変異は枯渇の増加を引き起こさなかったが、枯渇も減少させなかった（図１０Ｄ）。
【0333】
実施例６：ＥＣＤがＢ細胞に結合する能力
次に、ＭＧ自己抗体を発現するＢ細胞ハイブリドーマに結合する本発明の分子の能力を試験した。蛍光標識ストレプトアビジン分子を、ビオチンでＣ末端タグ付けされた様々な変異ＥＣＤ分子とインキュベートした。各ストレプトアビジン分子は４つのビオチン分子に結合するため、得られた分子は実際にはＥＣＤテトラマーであった。異なるＡＣｈＲサブユニットに対してＢＣＲを発現する様々なハイブリドーマを培養した。ハイブリドーマのうち４つは抗アルファサブユニット抗体を発現し（Ｍａｂ３５、ａ－１９２、ａ－１９５およびａ－１９８）、１つは抗β抗体を発現し（ｂ－７３）、２つは抗ガンマ抗体を発現し（ｇ－６６およびｇ－６７）、３つは抗デルタ抗体を発現した（４３－Ｅ４－Ｂ４、６９－Ｇ１１－Ｄ５－Ｆ７および２３－Ｆ３－Ｈ１）。無関係な標的に対する抗体を産生する様々なハイブリドーマを陰性対照として使用した。ハイブリドーマ細胞をＥＣＤテトラマーとインキュベートした後、細胞を２回洗浄し（ＤＰＢＳ＋１％ ＦＢＳ）、細胞表面の蛍光をフローサイトメトリーによって分析した（ＣｙｔｏＦｌｅｘ、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ社）。図１１に見出されるように、各サブユニットテトラマーは、そのテトラマーに対する抗体を発現するハイブリドーマ細胞に特異的に結合した。他のハイブリドーマへの非特異的結合は、陰性対照への結合と同様であった。これは、本発明の分子が血清中のＭＧ自己抗体に結合することができるだけでなく、他のＢ細胞を害することなく自己抗体が由来するＢ細胞に結合する（および死滅させる）ことができることを示している。
次に、ＭＧ自己抗体を発現するＢ細胞ハイブリドーマに結合する本発明の分子の能力を試験した。蛍光標識ストレプトアビジン分子を、ビオチンでＣ末端タグ付けされた様々な変異ＥＣＤ分子とインキュベートした。各ストレプトアビジン分子は４つのビオチン分子に結合するため、得られた分子は実際にはＥＣＤテトラマーであった。異なるＡＣｈＲサブユニットに対してＢＣＲを発現する様々なハイブリドーマを培養した。ハイブリドーマのうち４つは抗アルファサブユニット抗体を発現し（Ｍａｂ３５、ａ－１９２、ａ－１９５およびａ－１９８）、１つは抗β抗体を発現し（ｂ－７３）、２つは抗ガンマ抗体を発現し（ｇ－６６およびｇ－６７）、３つは抗デルタ抗体を発現した（４３－Ｅ４－Ｂ４、６９－Ｇ１１－Ｄ５－Ｆ７および２３－Ｆ３－Ｈ１）。無関係な標的に対する抗体を産生する様々なハイブリドーマを陰性対照として使用した。ハイブリドーマ細胞をＥＣＤテトラマーとインキュベートした後、細胞を２回洗浄し（ＤＰＢＳ＋１％ ＦＢＳ）、細胞表面の蛍光をフローサイトメトリーによって分析した（ＣｙｔｏＦｌｅｘ、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ社）。図１１に見出されるように、各サブユニットテトラマーは、そのテトラマーに対する抗体を発現するハイブリドーマ細胞に特異的に結合した。他のハイブリドーマへの非特異的結合は、陰性対照への結合と同様であった。これは、本発明の分子が血清中のＭＧ自己抗体に結合することができるだけでなく、他のＢ細胞を害することなく自己抗体が由来するＢ細胞に結合する（および死滅させる）ことができることを示している。
【0334】
無関係な標的に対する抗体を産生した１７の異なるハイブリドーマ株を試験して、非特異的／バックグラウンド結合を決定した。これらの標的には、他の自己免疫疾患のタンパク質標的（３つのハイブリドーマ）、インテグリンベータ３（２つのハイブリドーマ）、病原因子（ウイルスおよび細菌を含む９つのハイブリドーマ）および３つのヒト表面タンパク質（３つのハイブリドーマ）が含まれた。驚くべきことに、非変異アルファサブユニット（しかしながら、ｃｙｓループ置換を含むＣＲＤ－１０１）を含むテトラマーは、少なくとも１つの陰性対照ハイブリドーマ（ＡＰ－３、インテグリンベータ３に対する抗体、図１２）に非特異的に結合することが見出された。しかしながら、ＣＲＤ－６４２はこの非特異的結合を示さず、したがって予想外に改善された特異性を示す。
実施例７：ＥＣＤの組み合わせを含む分子
実施例７：ＥＣＤの組み合わせを含む分子
【0335】
次に、変異細胞外ドメインの様々な組み合わせを生成した。ＩｇＧ ＦｃのＣＨ２およびＣＨ３ドメインを使用して、３つの異なる組み合わせ分子のセットを生成した（特に明記しない限り、ＷＴ ＩｇＧ１を使用した）。第１のバッチ（表５）では、一方が野生型アルファサブユニットを有し、他方が変異ガンマを有する重鎖の組み合わせは、驚くほど高い収率をもたらした。アルファサブユニットおよび変異ガンマを同じ鎖上に配置するが、ＧＳフレキシブルによって分離すると、良好なタンパク質収率も得られた。一方の鎖上の野生型アルファと別の鎖上の変異体デルタとの組み合わせ、および変異体デルタを有する鎖と変異体ガンマを有する第２の鎖との組み合わせは、両方とも驚くほど高い収率をもたらした。変異体アルファ、変異体ガンマおよび変異体デルタを用いて三重の組み合わせも生成した。これらの分子の両方（デルタをそれ自体の重鎖に有するものおよびガンマをそれ自体の重鎖に有するもの）は、どちらも収率が悪いということはなかった。いくつかの鎖のＣ末端にｓｏｒｔａｓｅタグ（ＬＰＥＴＧ、配列番号１３９）を付加した。
【0336】
【表5】
【0337】
第２のバッチ（表６）では、更なる組み合わせを試験した。２つの異なる重鎖の組み合わせ（ｋｎｏｂ－ｉｎ－ｈｏｌｅｓ修飾による）およびリンカーを介した１本鎖上の組み合わせはすべて十分な収率をもたらした。試験した分子の最終バッチ（表７）は、様々な他のリンカー（より長い可撓性リンカーおよび剛性リンカー）ならびに細胞傷害性を減少させるようなＦｃ領域の変化を試験した。この場合も十分な収率が得られた。したがって、生成されたすべての分子は、治療剤として利用可能である。
【0338】
【表6】
【0339】
【表7】
【0340】
産生された分子を、ＥＣＤのみで実施したのと同じアッセイでそれらの枯渇能力について試験した。二重および三重サブユニット分子は、相加効果に近い効果をもたらすようであり、存在するすべてのサブユニットが、分子に含まれる場合、依然としてそれらの標的自己抗体に結合していることを示している（図９）。
【0341】
組み合わせ分子を使用してハイブリドーマ結合アッセイも行った。このアッセイでは、ハイブリドーマ上の分子結合を、ＰＥ標識抗ヒトＦＣポリクローナル抗体を使用してＦＡＣＳによって検出した。１コピーのｃｙｓループ置換アルファサブユニットおよび１コピーの変異ガンマサブユニット（ループ置換もされている）を含むＣＲＤ－５０６を、３つの抗アルファハイブリドーマ株、１つの抗ベータ株、１つの抗ガンマ株および３つの陰性対照株とインキュベートし、無関係なタンパク質に対する抗体を産生した。図１３Ａに見出されるように、組み合わせ分子は、すべてのアルファハイブリドーマおよびガンマハイブリドーマに強く結合したが、ベータハイブリドーマまたは陰性対照ハイブリドーマには結合しなかった。これは、組み合わせ分子の特異性および機能性を実証する。
【0342】
２つの他のアルファ－ガンマ分子も試験した。ＣＲＤ－５０９は、リンカーによって分離されたタンデムアルファおよびガンマサブユニットを各々有する２つの重鎖を含む。ガンマサブユニットは二重変異している。ＣＲＤ－６００は、類似の分子であるが、三重変異を有する。両方の分子は、抗アルファハイブリドーマ細胞のみに結合し、陰性対照ハイブリドーマには結合しなかった（図１３Ｂ）。同様に、両方の分子が抗ガンマハイブリドーマに結合した（図１３Ｃ）。興味深いことに、５つの異なる陰性対照ハイブリドーマ株を試験し、両方の分子は非特異的結合をほとんど示さなかったが、三重変異体は二重変異体よりも少ない値を示し、予想外の優位性を示した。これらの結果は、異なるＥＣＤが同じ鎖上にある場合であっても、ＥＣＤの組み合わせがそれらの結合能力を無効にしないことを補強する。
【0343】
いくつかの組み合わせた分子を、野生型アルファサブユニットのみを含有する重鎖ホモ二量体（ＣＲＤ－２６９）に対して試験した。予想外にも、これらの分子は、１コピーのみのアルファサブユニットを有するにもかかわらず、実際には抗アルファハイブリドーマよりも優れたバインダーであった（図１４）。これは、アルファサブユニット内のｃｙｓループの置換に起因し得る。
【0344】
アルファ－デルタ二重分子（ＣＲＤ－５８５）の試験は、抗アルファおよび抗デルタハイブリドーマに対してのみ特異的結合を示した（図１５Ａ）。同様に、ガンマ－デルタ二重分子（ＣＲＤ－５８６）は、抗ガンマおよび抗デルタハイブリドーマに対してのみ特異的結合を示した（図１５Ｂ）。ＩｇＧ１の代わりにＩｇＧ４ Ｆｃを含めることは、結合に悪影響を及ぼさなかった（図１５Ｃ）。同様に、エフェクター機能を低下させたＩｇＧ１ Ｆｃにおける変異は、結合に悪影響を及ぼさない。
【0345】
本発明をその特定の実施形態と併せて説明してきたが、多くの代替形態、修正形態および変形形態が当業者には明らかであることは自明である。したがって、添付の特許請求の範囲の精神および広い範囲に含まれるすべてのそのような代替形態、修正形態および変形形態を包含することが意図されている。
【図1A】
【図1B】
【図1C】
【図1D】
【図1E】
【図1F】
【図1G】
【図2A】
【図2B】
【図3A】
【図3B】
【図3C】
【図3D】
【図3E-1】
【図3E-2】
【図3F】
【図3G】
【図3H】
【図3I】
【図3J】
【図4A】
【図4B-1】
【図4B-2】
【図4C】
【図4D】
【図4E】
【図4F】
【図4G】
【図4H】
【図4I】
【図4J】
【図4K】
【図4L】
【図4M】
【図4N】
【図4O】
【図4P】
【図4Q】
【図4R-1】
【図4R-2】
【図4S-1】
【図4S-2】
【図5A】
【図5B】
【図5C】
【図5D】
【図6】
【図7A】
【図7B】
【図8A】
【図8B】
【図8C】
【図8D】
【図8E】
【図9】
【図10A】
【図10B】
【図10C】
【図10D】
【図11】
【図12】
【図13A】
【図13B】
【図13C】
【図14】
【図15A】
【図15B】
【図15C】
【配列表】
【国際調査報告】