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特表2025-500229マルトペンタオース／マルトヘキサオースを形成するアルファ－アミラーゼバリアント
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2025-01-09
(54)【発明の名称】マルトペンタオース／マルトヘキサオースを形成するアルファ－アミラーゼバリアント
(51)【国際特許分類】
C12N 9/26 20060101AFI20241226BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20241226BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20241226BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20241226BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20241226BHJP
C12N 15/56 20060101ALI20241226BHJP
C12P 19/14 20060101ALI20241226BHJP
C11D 7/42 20060101ALI20241226BHJP
【ＦＩ】
C12N9/26 A ZNA
C12N1/15
C12N1/19
C12N1/21
C12N5/10
C12N15/56
C12P19/14
C11D7/42
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024535794
(86)(22)【出願日】2022-12-16
(85)【翻訳文提出日】2024-08-13
(86)【国際出願番号】 US2022081780
(87)【国際公開番号】W WO2023114988
(87)【国際公開日】2023-06-22
(31)【優先権主張番号】63/290,085
(32)【優先日】2021-12-16
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】509240479
【氏名又は名称】ダニスコ・ユーエス・インク
(74)【代理人】
【識別番号】110003579
【氏名又は名称】弁理士法人山崎国際特許事務所
(74)【代理人】
【識別番号】100118647
【弁理士】
【氏名又は名称】赤松 利昭
(74)【代理人】
【識別番号】100123892
【弁理士】
【氏名又は名称】内藤 忠雄
(74)【代理人】
【識別番号】100169993
【弁理士】
【氏名又は名称】今井 千裕
(74)【代理人】
【識別番号】100173978
【弁理士】
【氏名又は名称】朴 志恩
(72)【発明者】
【氏名】ラッシラ、ジョナサン
(72)【発明者】
【氏名】ベイト、マナシ
(72)【発明者】
【氏名】チャン、アマンダ
(72)【発明者】
【氏名】チャン、ホン キット
(72)【発明者】
【氏名】リーファン、クリス
(72)【発明者】
【氏名】ラメル、サンドラ ダブリュ
(72)【発明者】
【氏名】トラン、パトリシア
【テーマコード（参考）】
4B064
4B065
4H003
【Ｆターム（参考）】
4B064AF04
4B064CA02
4B064CA05
4B064CA06
4B064CA08
4B064CA10
4B064CA19
4B064CC24
4B064DA19
4B065AA01X
4B065AA01Y
4B065AA57X
4B065AA57Y
4B065AA72X
4B065AA72Y
4B065AA83X
4B065AA83Y
4B065AA90X
4B065AA90Y
4B065AB01
4B065AC14
4B065BA02
4B065CA32
4B065CA57
4H003AC08
4H003BA09
4H003DA19
4H003EA15
4H003EA16
4H003EB04
4H003EB13
4H003EB24
4H003EB28
4H003EC01
4H003EE05
4H003FA43
(57)【要約】
マルトペンタオース／マルトヘキサオースを形成するα－アミラーゼに関連する組成物及び方法が開示される。α－アミラーゼバリアントは、例えば、デンプンの液化及び糖化のために、洗濯、食器洗浄、及び他の用途におけるデンプン質の染みを洗浄するために、布地処理（例えば、糊抜き）のために、動物飼料において消化性を改善するために、並びに製パン及び醸造のために有用である。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
親アルファ－アミラーゼの組換え型の天然に存在しないバリアントであって、配列番号５との８０％同一性を有し、且つ配列番号５を基準として第５１及び１２５位でのアミノ酸置換を有するアルファ－アミラーゼバリアント。
【請求項2】
前記アミノ酸置換が、配列番号５を基準としてＴ５１Ｖ及びＳ１２５Ｒである、請求項１に記載のアルファ－アミラーゼバリアント。
【請求項3】
配列番号５を基準として第１７２、２２７、又は２３１位でのアミノ酸置換をさらに有する、請求項１又は２に記載のアルファ－アミラーゼバリアント。
【請求項4】
配列番号５を基準としてアミノ酸置換Ｎ１７２Ｑ、Ｎ２２７Ｒ、又はＦ２３１Ｌをさらに有する、請求項１又は２に記載のアルファ－アミラーゼバリアント。
【請求項5】
親アルファ－アミラーゼの組換え型の天然に存在しないバリアントであって、配列番号５との８０％同一性を有し、且つ配列番号５を基準としてアミノ酸置換：（ａ）Ｎ２９Ｑ＋Ｔ５１Ｖ＋Ｓ１２５Ｒ＋Ｎ２２７Ｒ＋Ｓ２５３Ｌ＋Ｇ２７２Ｅ＋Ｋ３１９Ｒ＋Ｓ４１８Ａ
（ｂ）Ｔ５１Ｖ＋Ｓ１２５Ｒ＋Ｆ２３１Ｌ；
（ｃ）Ｔ５１Ｖ＋Ｓ１２５Ｒ＋Ｎ１７２Ｑ＋Ｎ２２７Ｒ；
（ｄ）Ｎ０２９Ｑ＋Ｔ０５１Ｖ＋Ｔ２４４Ｉ＋Ｓ２５３Ｌ＋Ｋ２６８Ｒ＋Ｋ３１９Ｒ＋Ｓ４１８Ａ；または
（ｅ）Ｅ４１５Ｇ
を有するアルファ－アミラーゼバリアント。
【請求項6】
請求項１～５のいずれか一項に記載のα－アミラーゼバリアントを含む洗剤組成物。
【請求項7】
アミノ酸置換Ｘ３９Ｅ、Ｘ９９Ｒ、Ｘ１２６Ａ、Ｘ１２７Ｅ、及びＸ１２８Ｇを有する、バチルス・ギブソニー（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｇｉｂｓｏｎｉｉ）由来のサブチリシンプロテアーゼバリアントをさらに含む、請求項６に記載の洗剤組成物。
【請求項8】
デンプンをオリゴ糖に変換するための方法であって、デンプンを、請求項１～５のいずれか一項に記載の有効量のα－アミラーゼバリアントと接触させることを含む方法。
【請求項9】
表面からデンプン質の染み又は汚れを除去するための方法であって、前記表面を請求項１～５のいずれか一項に記載の有効量のα－アミラーゼバリアントと接触させることと、ポリペプチドに、前記デンプン質の染みに存在するデンプン成分を加水分解させて、水性組成物中に溶解する、より小さいデンプン由来の分子を生成し、それにより前記表面から前記デンプン質の染みを除去することとを含む方法。
【請求項10】
請求項１～５のいずれか一項に記載のα－アミラーゼバリアントをコードする核酸。
【請求項11】
請求項１０に記載の核酸を含む宿主細胞。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年１２月１６日に出願された米国特許出願第６３／２９００８５号の利益を主張するものであり、この特許出願は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０２１年１２月１６日に出願された米国特許出願第６３／２９００８５号の利益を主張するものであり、この特許出願は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【0002】
マルトペンタオース／マルトヘキサオースを形成するα－アミラーゼバリアントに関連する組成物及び方法が開示される。α－アミラーゼバリアントは、例えば、デンプン質の染みの洗浄、デンプンの液化及び糖化、布地の糊抜き、製パン及び醸造のために有用である。
【背景技術】
【0003】
デンプンは、アミロース（１５～３０ｗ／ｗ％）とアミロペクチン（７０～８５ｗ／ｗ％）の混合物からなる。アミロースは、約６０，０００～約８００，０００の分子量（ＭＷ）を有するα－１，４－結合グルコース単位の直鎖からなる。アミロペクチンは、各２４～３０グルコース単位毎にα－１，６分岐点を含有する分岐状ポリマーであり、そのＭＷは１億にも達し得る。
【0004】
α－アミラーゼは、デンプン、グリコーゲン、及び関連する多糖を、内部のα－１，４－グルコシド結合をランダムに切断することによって加水分解する。特にバチルス属（Ｂａｃｉｌｌｉ）由来のα－アミラーゼは、デンプンの液化及び糖化、布地の糊抜き、紙パルプ産業におけるデンプン改質、醸造、製パン、食品工業のためのシロップの製造、発酵プロセスのための供給原料の製造、並びに消化性を上昇させるための動物用飼料を含めた、様々な異なる目的のために使用されてきた。これらの酵素はまた、食器洗浄及び洗濯洗浄中にデンプン質の汚れ及び染みを除去するために使用することができる。
【0005】
α－アミラーゼによるデンプンの加水分解によって生成される生成物は、連続するグルコース分子の数から見ると異なる。大抵の市販のα－アミラーゼは、グルコース（Ｇ１）からマルトヘプタオース（Ｇ７）までの範囲の生成物を生成する。理由は完全には明らかでないが、相当量のマルトペンタオース及びマルトヘキサオースを生成するα－アミラーゼは、洗剤洗浄組成物への導入を含めたある種の商業的応用にとって特に有用であるように思われる。多数の刊行物が、マルトペンタオース／マルトヘキサオース生成α－アミラーゼ及びその他のものの変異を記載している。それにもかかわらず、これまで以上に頑強且つより高性能の改変されたα－アミラーゼ分子の必要性が存在し続ける。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0006】
本組成物及び方法は、マルトペンタオース／マルトヘキサオースを形成するアミラーゼポリペプチドバリアント、及びそれらの使用方法に関する。本発明の組成物及び方法の態様及び実施形態を、以下の個別に番号付けした段落で要約する。
１．一態様では、親アルファ－アミラーゼの組換え型の天然に存在しないバリアントが提供され、このアルファ－アミラーゼバリアントは、配列番号５との８０％同一性を有し、且つ配列番号５に関して第５１及び１２５位でのアミノ酸置換を有する。
２．第１項のアルファ－アミラーゼバリアントのいくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、配列番号５に関してＴ５１Ｖ及びＳ１２５Ｒである。
３．いくつかの実施形態では、第１項又は第２項のアルファ－アミラーゼバリアントは、配列番号５に関して第１７２、２２７、又は２３１位でのアミノ酸置換をさらに有する。
４．いくつかの実施形態では、第１項又は第２項のアルファ－アミラーゼバリアントは、配列番号５に関してアミノ酸置換Ｎ１７２Ｑ、Ｎ２２７Ｒ、又はＦ２３１Ｌをさらに有する。
５．他の態様では、親アルファ－アミラーゼの組換え型の天然に存在しないバリアントが提供され、このアルファ－アミラーゼバリアントは、配列番号５との８０％同一性を有し、且つ配列番号５に関してアミノ酸置換：
（ａ）Ｎ２９Ｑ＋Ｔ５１Ｖ＋Ｓ１２５Ｒ＋Ｎ２２７Ｒ＋Ｓ２５３Ｌ＋Ｇ２７２Ｅ＋Ｋ３１９Ｒ＋Ｓ４１８Ａ
（ｂ）Ｔ５１Ｖ＋Ｓ１２５Ｒ＋Ｆ２３１Ｌ；
（ｃ）Ｔ５１Ｖ＋Ｓ１２５Ｒ＋Ｎ１７２Ｑ＋Ｎ２２７Ｒ；
（ｄ）Ｎ０２９Ｑ＋Ｔ０５１Ｖ＋Ｔ２４４Ｉ＋Ｓ２５３Ｌ＋Ｋ２６８Ｒ＋Ｋ３１９Ｒ＋Ｓ４１８Ａ；又は
（ｅ）Ｅ４１５Ｇ
を有する。
６．別の態様では、第１～５項のいずれか１項のα－アミラーゼバリアントを含む洗剤組成物が提供される。
７．第６項の洗剤組成物のいくつかの実施形態では、アミノ酸置換Ｘ３９Ｅ、Ｘ９９Ｒ、Ｘ１２６Ａ、Ｘ１２７Ｅ、及びＸ１２８Ｇを有する、バチルス・ギブソニー（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｇｉｂｓｏｎｉｉ）由来のサブチリシンプロテアーゼバリアントをさらに含む。
８．別の態様では、デンプンをオリゴ糖に変換するための方法であって、デンプンを第１～５項のいずれか１項の有効量のα－アミラーゼバリアントと接触させることを含む方法が提供される。
９．別の態様では、表面からデンプン質の染み又は汚れを除去するための方法であって、その表面を第１～５項のいずれか１項の有効量のα－アミラーゼバリアントと接触させることと、このポリペプチドに、デンプン質の染みに存在するデンプン成分を加水分解させて、水性組成物中に溶解する、より小さいデンプン由来の分子を生成し、それにより表面からデンプン質の染みを除去することとを含む方法が提供される。
１０．別の態様では、第１～５項のいずれか１項のα－アミラーゼバリアントをコードする核酸が提供される。
１１．別の態様では、第１０項の核酸を含む宿主細胞が提供される。
１．一態様では、親アルファ－アミラーゼの組換え型の天然に存在しないバリアントが提供され、このアルファ－アミラーゼバリアントは、配列番号５との８０％同一性を有し、且つ配列番号５に関して第５１及び１２５位でのアミノ酸置換を有する。
２．第１項のアルファ－アミラーゼバリアントのいくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、配列番号５に関してＴ５１Ｖ及びＳ１２５Ｒである。
３．いくつかの実施形態では、第１項又は第２項のアルファ－アミラーゼバリアントは、配列番号５に関して第１７２、２２７、又は２３１位でのアミノ酸置換をさらに有する。
４．いくつかの実施形態では、第１項又は第２項のアルファ－アミラーゼバリアントは、配列番号５に関してアミノ酸置換Ｎ１７２Ｑ、Ｎ２２７Ｒ、又はＦ２３１Ｌをさらに有する。
５．他の態様では、親アルファ－アミラーゼの組換え型の天然に存在しないバリアントが提供され、このアルファ－アミラーゼバリアントは、配列番号５との８０％同一性を有し、且つ配列番号５に関してアミノ酸置換：
（ａ）Ｎ２９Ｑ＋Ｔ５１Ｖ＋Ｓ１２５Ｒ＋Ｎ２２７Ｒ＋Ｓ２５３Ｌ＋Ｇ２７２Ｅ＋Ｋ３１９Ｒ＋Ｓ４１８Ａ
（ｂ）Ｔ５１Ｖ＋Ｓ１２５Ｒ＋Ｆ２３１Ｌ；
（ｃ）Ｔ５１Ｖ＋Ｓ１２５Ｒ＋Ｎ１７２Ｑ＋Ｎ２２７Ｒ；
（ｄ）Ｎ０２９Ｑ＋Ｔ０５１Ｖ＋Ｔ２４４Ｉ＋Ｓ２５３Ｌ＋Ｋ２６８Ｒ＋Ｋ３１９Ｒ＋Ｓ４１８Ａ；又は
（ｅ）Ｅ４１５Ｇ
を有する。
６．別の態様では、第１～５項のいずれか１項のα－アミラーゼバリアントを含む洗剤組成物が提供される。
７．第６項の洗剤組成物のいくつかの実施形態では、アミノ酸置換Ｘ３９Ｅ、Ｘ９９Ｒ、Ｘ１２６Ａ、Ｘ１２７Ｅ、及びＸ１２８Ｇを有する、バチルス・ギブソニー（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｇｉｂｓｏｎｉｉ）由来のサブチリシンプロテアーゼバリアントをさらに含む。
８．別の態様では、デンプンをオリゴ糖に変換するための方法であって、デンプンを第１～５項のいずれか１項の有効量のα－アミラーゼバリアントと接触させることを含む方法が提供される。
９．別の態様では、表面からデンプン質の染み又は汚れを除去するための方法であって、その表面を第１～５項のいずれか１項の有効量のα－アミラーゼバリアントと接触させることと、このポリペプチドに、デンプン質の染みに存在するデンプン成分を加水分解させて、水性組成物中に溶解する、より小さいデンプン由来の分子を生成し、それにより表面からデンプン質の染みを除去することとを含む方法が提供される。
１０．別の態様では、第１～５項のいずれか１項のα－アミラーゼバリアントをコードする核酸が提供される。
１１．別の態様では、第１０項の核酸を含む宿主細胞が提供される。
【0007】
本組成物及び方法のこれら及び他の態様及び実施形態は、以下の説明及び添付の実施例から明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【0008】
【図1】ＡＡ２５６０ α－アミラーゼ（配列番号１）、ＡＡ７０７ α－アミラーゼ（配列番号２）、ＡＡ５６０ α－アミラーゼ（配列番号３）、ＡＡＩ１０ α－アミラーゼ（配列番号４）、及び国際公開第２０２１／０８０９４８号パンフレットに記載されているＡＡ２５６０ α－アミラーゼのバリアント（配列番号５）のアミノ酸配列のＭＵＳＣＬＥアラインメントを示す。
【0009】
【図2】α－アミラーゼ ＡＡ２５６０におけるアミノ酸５１及び１２５の位置を示す。
【発明を実施するための形態】
【0010】
マルトペンタオース／マルトヘキサオースを形成するアミラーゼ酵素のバリアントに関連する組成物及び方法について記載する。このバリアントは、添付の実施例において詳述する通りの種々の実験的手法によって発見された。アミラーゼ酵素のバリアントの代表的な用途は、食器洗浄、洗濯、及び他の用途におけるデンプン質の染みを洗浄するための、デンプンの液化及び糖化のための、布地処理（例えば、糊抜き）のための、動物飼料において消化性を改善するための、並びに製パン及び醸造のためのものである。以下では、本組成物及び方法のこれら及び他の態様について詳細に記載する。
【0011】
本発明の組成物及び方法の様々な態様及び実施形態について説明する前に、以下の定義及び略語について説明する。
【0012】
１．定義及び略語
この詳細な説明においては、以下の略語及び定義が適用される。文脈が明白に他のことを指示していない限り、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」及び「その（ｔｈｅ）」は、複数の対象を含むことに留意されたい。したがって、例えば、「酵素（ａｎ ｅｎｚｙｍｅ）」への言及は、複数のそのような酵素を含み、「用量（ｔｈｅ ｄｏｓａｇｅ）」への言及は、１つ以上の用量及び当業者に公知のその同等物などを含む。
この詳細な説明においては、以下の略語及び定義が適用される。文脈が明白に他のことを指示していない限り、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」及び「その（ｔｈｅ）」は、複数の対象を含むことに留意されたい。したがって、例えば、「酵素（ａｎ ｅｎｚｙｍｅ）」への言及は、複数のそのような酵素を含み、「用量（ｔｈｅ ｄｏｓａｇｅ）」への言及は、１つ以上の用量及び当業者に公知のその同等物などを含む。
【0013】
本明細書は、読み易くするために多くのセクションで編成されている。しかし、読者は、あるセクションでなされた記載を他のセクションに適用できることを理解できるであろう。このように、本開示の異なるセクションで使用された見出しを、限定的であると解釈すべきではない。
【0014】
他に特に定義しない限り、本明細書で使用する全ての技術用語及び科学用語は、当業者によって一般的に理解される意味と同一の意味を有する。明確にするために次の用語が以下に定義される。
【0015】
１．１．略語及び頭字語
下記の略語／頭字語は、別途規定されない限り下記の意味を有する：
℃ 摂氏温度
ＡＤＷ 自動食器洗浄
ｄＨ２Ｏ又はＤＩ 脱イオン水
ｄＩＨ２Ｏ 脱イオン水、Ｍｉｌｌｉ－Ｑ濾過
ＤＮＡ デオキシリボ核酸
ＥＣ 酵素番号
ｇ又はｇｍ グラム
ＧＡ グルコアミラーゼ
Ｈ２Ｏ 水
ＨＤＤ 重質粉末洗剤
ＨＤＬ 高密度液体洗剤
ｈｒ（ｓ） 時間
ＨＳＧ 高起泡性粒状洗剤
ｋＤａ キロダルトン
ｋｇ キログラム
Ｍ モル濃度
ｍｇ ミリグラム
ｍｉｎ（ｓ） 分
ｍＬ及びｍｌ ミリリットル
ｍｍ ミリメートル
ｍＭ ミリモル濃度
ＭＷ 分子量
ＭＷＵ 修正ウォルゲムス単位；１．６×１０－５ｍｇ／ＭＷＵ＝活性の単位
性能指数
ｐｐｍ 百万分率、例えば、乾燥固体１グラム当たりのμｇタンパク質
ｓｅｃ 秒
ｓｐ． 種
Ｕ 単位
ｖ／ｖ 体積／体積
ｗ／ｖ 重量／体積
ｗ／ｗ 重量／重量
ｗｔ％ 重量％
μｇ マイクログラム
μＬ及びμｌ マイクロリットル
μｍ マイクロメートル
μＭ マイクロモル濃度
下記の略語／頭字語は、別途規定されない限り下記の意味を有する：
℃ 摂氏温度
ＡＤＷ 自動食器洗浄
ｄＨ２Ｏ又はＤＩ 脱イオン水
ｄＩＨ２Ｏ 脱イオン水、Ｍｉｌｌｉ－Ｑ濾過
ＤＮＡ デオキシリボ核酸
ＥＣ 酵素番号
ｇ又はｇｍ グラム
ＧＡ グルコアミラーゼ
Ｈ２Ｏ 水
ＨＤＤ 重質粉末洗剤
ＨＤＬ 高密度液体洗剤
ｈｒ（ｓ） 時間
ＨＳＧ 高起泡性粒状洗剤
ｋＤａ キロダルトン
ｋｇ キログラム
Ｍ モル濃度
ｍｇ ミリグラム
ｍｉｎ（ｓ） 分
ｍＬ及びｍｌ ミリリットル
ｍｍ ミリメートル
ｍＭ ミリモル濃度
ＭＷ 分子量
ＭＷＵ 修正ウォルゲムス単位；１．６×１０－５ｍｇ／ＭＷＵ＝活性の単位
性能指数
ｐｐｍ 百万分率、例えば、乾燥固体１グラム当たりのμｇタンパク質
ｓｅｃ 秒
ｓｐ． 種
Ｕ 単位
ｖ／ｖ 体積／体積
ｗ／ｖ 重量／体積
ｗ／ｗ 重量／重量
ｗｔ％ 重量％
μｇ マイクログラム
μＬ及びμｌ マイクロリットル
μｍ マイクロメートル
μＭ マイクロモル濃度
【0016】
１．２．定義
用語「α－アミラーゼ」又は「アミロース分解酵素」又は一般にはアミラーゼは、とりわけ、デンプンの分解を触媒することが可能な酵素を指す。α－アミラーゼは、デンプン内のα－Ｄ－（１→４）Ｏ－グリコシド結合を切断する加水分解酵素である。一般に、α－アミラーゼ（ＥＣ３．２．１．１；α－Ｄ－（１→４）－グルカングルカノヒドロラーゼ）は、デンプン分子内のα－Ｄ－（１→４）Ｏ－グリコシド結合をランダムに切断して３つ以上の（１－４）－α－結合型Ｄ－グルコース単位を含有する多糖類を生成する、エンド作用性酵素であると定義されている。一方、β－アミラーゼ（ＥＣ３．２．１．２；α－Ｄ－（１→４）－グルカンマルトヒドロラーゼ）及びいくつかの製品固有α－アミラーゼ様マルトース生成α－アミラーゼ（ＥＣ３．２．１．１３３）などのエキソ作用性アミロース分解酵素は、基質の非還元末端から多糖分子を切断する。β－アミラーゼ、α－グルコシダーゼ（ＥＣ３．２．１．２０；α－Ｄ－グルコシドグルコヒドロラーゼ）、アミラーゼグルコアミラーゼ（ＥＣ３．２．１．３；α－Ｄ－（１→４）－グルカングルコヒドロラーゼ）、並びに製品固有アミラーゼ様マルトテトラオシダーゼ（ＥＣ３．２．１．６０）及びマルトヘキサオシダーゼ（ＥＣ３．２．１．９８）は、特定の長さのマルト－オリゴ糖又は特定のマルトオリゴ糖の強化シロップを生成することができる。いくつかの細菌α－アミラーゼは、主に、デンプン及び関連するα－１，４－グルカンからマルトテトラオース（Ｇ４）、マルトペンタオース（Ｇ５）、又はマルトヘキサオース（Ｇ６）を生成するのに対して、大抵のα－アミラーゼは、これらをさらに、最終産物としてのグルコース及び／又はマルトースに変換する。Ｂａｃｉｌｌｕｓ種ＤＳＭ１２６４９（すなわち、ＳＴＡＩＮＺＹＭＥＴＭの親）に由来するＡＡ５６０アミラーゼ及びＢａｃｉｌｌｕｓ種７０７アミラーゼなどのＧ６アミラーゼ（マルトヘキサオース生成α－アミラーゼ（ＥＣ３．２．１．９８）とも呼ばれる）は、技術的にはエキソ作用性であるが、α－アミラーゼと比較して類似の構造を有し、場合によっては、同じ有益な変異のいくつかに反応するように思われる。
用語「α－アミラーゼ」又は「アミロース分解酵素」又は一般にはアミラーゼは、とりわけ、デンプンの分解を触媒することが可能な酵素を指す。α－アミラーゼは、デンプン内のα－Ｄ－（１→４）Ｏ－グリコシド結合を切断する加水分解酵素である。一般に、α－アミラーゼ（ＥＣ３．２．１．１；α－Ｄ－（１→４）－グルカングルカノヒドロラーゼ）は、デンプン分子内のα－Ｄ－（１→４）Ｏ－グリコシド結合をランダムに切断して３つ以上の（１－４）－α－結合型Ｄ－グルコース単位を含有する多糖類を生成する、エンド作用性酵素であると定義されている。一方、β－アミラーゼ（ＥＣ３．２．１．２；α－Ｄ－（１→４）－グルカンマルトヒドロラーゼ）及びいくつかの製品固有α－アミラーゼ様マルトース生成α－アミラーゼ（ＥＣ３．２．１．１３３）などのエキソ作用性アミロース分解酵素は、基質の非還元末端から多糖分子を切断する。β－アミラーゼ、α－グルコシダーゼ（ＥＣ３．２．１．２０；α－Ｄ－グルコシドグルコヒドロラーゼ）、アミラーゼグルコアミラーゼ（ＥＣ３．２．１．３；α－Ｄ－（１→４）－グルカングルコヒドロラーゼ）、並びに製品固有アミラーゼ様マルトテトラオシダーゼ（ＥＣ３．２．１．６０）及びマルトヘキサオシダーゼ（ＥＣ３．２．１．９８）は、特定の長さのマルト－オリゴ糖又は特定のマルトオリゴ糖の強化シロップを生成することができる。いくつかの細菌α－アミラーゼは、主に、デンプン及び関連するα－１，４－グルカンからマルトテトラオース（Ｇ４）、マルトペンタオース（Ｇ５）、又はマルトヘキサオース（Ｇ６）を生成するのに対して、大抵のα－アミラーゼは、これらをさらに、最終産物としてのグルコース及び／又はマルトースに変換する。Ｂａｃｉｌｌｕｓ種ＤＳＭ１２６４９（すなわち、ＳＴＡＩＮＺＹＭＥＴＭの親）に由来するＡＡ５６０アミラーゼ及びＢａｃｉｌｌｕｓ種７０７アミラーゼなどのＧ６アミラーゼ（マルトヘキサオース生成α－アミラーゼ（ＥＣ３．２．１．９８）とも呼ばれる）は、技術的にはエキソ作用性であるが、α－アミラーゼと比較して類似の構造を有し、場合によっては、同じ有益な変異のいくつかに反応するように思われる。
【0017】
本明細書の「酵素単位」は、アッセイの指定された条件下で１時間あたりに形成される生成物の量を指す。例えば、「グルコアミラーゼ 活性単位」（ＧＡＵ）は、６０℃、ｐＨ４．２で、可溶性のデンプン基質（４％ ＤＳ）から、１時間あたり１ｇのグルコースを生成する酵素の量と定義される。「可溶性のデンプン単位」（ＳＳＵ）は、５０℃、ｐＨ４．５で、可溶性のデンプン基質（４％ ＤＳ）から、１分あたり１ｍｇのグルコースを生成する酵素の量である。ＤＳは、「乾燥固体」を指す。
【0018】
用語「デンプン」は、式（Ｃ６Ｈ１０Ｏ５）ｘ（式中、Ｘは任意の数であり得る）を有するアミロース及びアミロペクチンから構成される、植物の複合多糖炭水化物から構成される、任意の物質を指す。この用語には、植物系物質、例えば穀物、穀草類、草類、塊茎及び根、より具体的には小麦、大麦、トウモロコシ、ライ麦、米、ソルガム、フスマ、キャッサバ、キビ、ミロ、ジャガイモ、サツマイモ及びタピオカから得られる物質が含まれる。用語「デンプン」には、粒状デンプンが含まれる。用語「粒状デンプン」は、生の、すなわち未調理のデンプン、例えば糊化を受けていないデンプンを指す。
【0019】
本明細書で使用する場合、用語「液化」又は「液化する」は、デンプンがより低い粘性及びより短い鎖のデキストリンに変換されるプロセスを意味する。
【0020】
ポリペプチドに関する「野生型」、「親」、又は「参照」という用語は、１つ以上のアミノ酸の位置での人為的な置換、挿入又は欠失を含まない、天然型ポリペプチドを指す。同様に、ポリヌクレオチドに関する「野生型」、「親」、又は「参照」という用語は、人為的なヌクレオシド変化を含まない、天然型ポリヌクレオチドを指す。しかし、野生型、親又は参照ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、天然型ポリヌクレオチドに限定されず、野生型、親、又は参照ポリペプチドをコードするあらゆるポリヌクレオチドを包含することに留意されたい。
【0021】
野生型ポリペプチドへの言及は、成熟形のポリペプチドを含むと理解される。「成熟」ポリペプチド又はそのバリアントは、シグナル配列が存在しない、例えば、そのポリペプチドの発現中又は発現後の未熟型のポリペプチドから切断されたものである。
【0022】
ポリペプチドに関する用語「バリアント」は、アミノ酸の１つ以上の天然型又は人為的な置換、挿入若しくは欠失を含むという点で、特定の野生型、親又は参照ポリペプチドと異なるポリペプチドを指す。同様に、ポリヌクレオチドに関する用語「バリアント」は、ヌクレオチド配列が、特定の野生型、親又は参照ポリヌクレオチドと異なる、ポリヌクレオチドを指す。野生型、親又は参照ポリペプチド又はポリヌクレオチドの同一性は、文脈から明らかになるであろう。
【0023】
本α－アミラーゼの場合、「活性」は、本明細書で記載するように測定できるα－アミラーゼ活性を指す。
【0024】
用語「性能利益」は、分子の望ましい特性の改良を指す。代表的な性能利益には、限定はされないが、デンプン基質の加水分解の増大、穀物の増大、穀草類又は他のデンプン基質の液化性能、洗浄性能の増大、熱安定性の増大、洗剤安定性の増大、貯蔵安定性の増大、溶解性の増大、ｐＨプロファイルの変化、カルシウム依存性の低下、比活性の増大、基質特異性の改変、基質結合の改変、ｐＨ依存性活性の改変、ｐＨ依存性安定性の改変、酸化安定性の増大及び発現増大が含まれる。場合によっては、性能利益は、比較的低い温度で実現される。場合によっては、性能利益は、比較的高い温度で実現される。
【0025】
用語「プロテアーゼ」及び「プロテイナーゼ」は、タンパク質を形成するペプチド又はポリペプチド鎖内でアミノ酸を共に連結するペプチド結合の加水分解を指す「タンパク質分解」又は「タンパク質分解的切断」を実施する能力を有する酵素タンパク質を指す。タンパク質消化酵素としてのプロテアーゼのこの活性は、「タンパク質分解活性」と呼ばれる。
【0026】
用語「セリンプロテアーゼ」は、その酵素中でセリンが酵素活性部位で求核性アミノ酸として機能する、タンパク質中のペプチド結合を切断する酵素を指す。セリンプロテアーゼは、その構造に基づいて、２つの広いカテゴリー：キモトリプシン様（トリプシン様）又はサブチリシン様に分類される。洗濯用洗剤及び食器洗浄用洗剤中で最も一般的に使用されるのは、セリンプロテアーゼ、特にサブチリシン様である。
【0027】
「組み合わせバリアント」は、２つ以上の変異、例えば２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、又はそれを超える置換、欠失及び／又は挿入を含むバリアントである。
【0028】
用語「組換え」は、対象の細胞、核酸、タンパク質又はベクターに関して使用される場合、対象がその天然の状態から改変されていることを示す。したがって、例えば、組換え細胞は、天然（非組換え）型の細胞内には見られない遺伝子を発現するか、又は天然に見られるものとは異なるレベルで若しくは異なる条件下で天然の遺伝子を発現する。組換え核酸は、天然の配列と１つ以上のヌクレオチドが異なる、且つ／又は異種配列、例えば発現ベクター内の異種プロモーターに作動可能に連結されている。組換えタンパク質は、天然配列と１つ以上のアミノ酸が異なる可能性がある、且つ／又は異種配列と融合されている。アミラーゼをコードする核酸を含むベクターは、組換えベクターである。
【0029】
「回収（された）」、「単離（された）」、及び「分離（された）」という用語は、化合物、タンパク質（ポリペプチド）、細胞、核酸、アミノ酸、若しくは他の特定の物質又は構成要素であって、天然に見出されるようにそれが自然に同伴している少なくとも１つの他の物質又は構成要素から除去されるものを指す。それらの「単離された」ポリペプチドには、異種宿主細胞内で発現した分泌ポリペプチドを含有する細胞培養ブロスが含まれるが、それに限定されない。
【0030】
用語「精製された」は、相当に純粋な状態、例えば、少なくとも約９０％純粋、少なくとも約９５％純粋、少なくとも約９８％純粋又は少なくとも約９９％純粋でさえある物質（例えば、単離ポリペプチド又はポリヌクレオチド）を指す。
【0031】
用語「濃縮（された）」は、約５０％純粋、少なくとも約６０％純粋、少なくとも約７０％純粋、又はさらに少なくとも約７０％純粋である物質（例えば、単離ポリペプチド又はポリヌクレオチド）を指す。
【0032】
酵素に関連する用語「熱安定性の」及び「熱安定性」は、高温への曝露後に活性を保持する酵素の能力を指す。酵素、例えばアミラーゼ酵素の熱安定性は、その時間中に規定条件下で酵素活性の半分が失われる、分、時間又は日数で与えられるその半減期（ｔ１／２）によって測定できる。半減期は、高温への曝露（すなわち、高温によるチャレンジ）後の残留α－アミラーゼ活性を測定することによって計算され得る。
【0033】
酵素に関連する「ｐＨ範囲」は、酵素が触媒活性を示すｐＨ値の範囲を指す。
【0034】
酵素に関連する用語「ｐＨ安定性の」及び「ｐＨ安定性」は、所定の時間（例えば、１５分間、３０分間、１時間）にわたって広いｐＨ範囲にわたり活性を保持する酵素の能力に関する。
【0035】
用語「アミノ酸配列」は、用語「ポリペプチド」、「タンパク質」、及び「ペプチド」と同義であり、互換的に使用される。そのようなアミノ酸配列が活性を示す場合、それらは「酵素」と呼ぶことができる。アミノ酸残基に対して従来の１文字コード又は３文字コードが使用され、アミノ酸配列は、標準のアミノからカルボキシ末端方向（すなわち、Ｎ→Ｃ）に表示される。
【0036】
「核酸」という用語は、ポリペプチドをコードできるＤＮＡ、ＲＮＡ、ヘテロ二本鎖及び合成分子を含む。核酸は、一本鎖又は二本鎖であり得、化学修飾を含有することができる。用語「核酸」及び「ポリヌクレオチド」は、互換的に使用される。遺伝コードは縮重しているため、特定のアミノ酸をコードするために２個以上のコドンを使用し得、本発明の組成物及び方法は、特定のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を包含する。他に規定しない限り、核酸配列は、５’－から－３’の方向に表示される。
【0037】
「合成」分子は、生物によってではなく、インビトロの化学合成又は酵素合成によって生成される。
【0038】
細胞内へ核酸配列を挿入する文脈での用語「導入された」は、当該技術分野において公知の通りの「遺伝子導入」、「形質転換」、又は「形質導入」を意味する。
【0039】
「宿主株」又は「宿主細胞」は、その中に当該のポリペプチド（例えば、アミラーゼ）をコードするポリヌクレオチドを含む、発現ベクター、ファージ、ウイルス、又は他のＤＮＡ構築物が導入されている生物である。代表的な宿主株は、当該のポリペプチドを発現する及び／又は糖類を発酵させることが可能な微生物細胞（例えば、細菌、糸状菌、及び酵母）である。用語「宿主細胞」には、細胞から作製されたプロトプラストが含まれる。
【0040】
ポリヌクレオチド又はタンパク質に関連する用語「異種の」は、宿主細胞中で自然には生じないポリヌクレオチド又はタンパク質を指す。
【0041】
ポリヌクレオチド又はタンパク質に関連する用語「内在性の」は、宿主細胞中で自然に生じるポリヌクレオチド又はタンパク質を指す。
【0042】
用語「発現」は、核酸配列に基づいてポリペプチドが生成されるプロセスを指す。このプロセスには、転写と翻訳の両方が含まれる。
【0043】
「シグナル配列」は、細胞外部へのタンパク質の分泌を容易にする、タンパク質のＮ末端部分に結合しているアミノ酸の配列である。成熟形態の細胞外タンパク質は、分泌プロセス中に切断除去されるシグナル配列を欠如している。
【0044】
「生物活性」は、例えば酵素活性などの特定の生物活性を有する配列を指す。
【0045】
用語「比活性」は、特定条件下で単位時間当たりの酵素又は酵素調製物によって生成物に変化され得る基質のモル数を指す。比活性は、一般に単位（Ｕ）／ｍｇ（タンパク質）として表示される。
【0046】
本明細書で使用する場合、「水の硬度」は、水中に存在する無機質（例えば、カルシウム及びマグネシウム）の尺度である。
【0047】
「アミラーゼを含む培養細胞物質」又は類似の言葉は、構成成分としてアミラーゼを含む細胞溶解物又は上清（培地を含む）を指す。細胞物質は、アミラーゼを生成する目的のために培養で増殖された異種宿主由来であり得る。
【0048】
「配列同一性（パーセント）」は、デフォルトのパラメータを用いるＭＵＳＣＬＥアルゴリズムなどのソフトウェアプログラムを使用して整列させた場合に、特定の配列が、指定された参照配列内のアミノ酸残基と同一の少なくともある一定のパーセンテージのアミノ酸残基を有することを意味する。例えば、Ｅｄｇａｒ，Ｒ．Ｃ． （２００４）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３２：１７９２－９７を参照されたい。
【0049】
欠失は、参照配列と比較した場合に非同一である残基として計数される。
【0050】
用語「乾燥固体含量」（ｄｓ）は、乾燥重量パーセントベースでのスラリーの総固体を指す。用語「スラリー」は、不溶性固体を含有する水性混合物を指す。
【0051】
語句「同時糖化発酵（ＳＳＦ）」は、エタノール産生微生物などの微生物有機体と、アミラーゼなどの少なくとも１種の酵素が、同一プロセス工程中に存在する、生化学物質の製造におけるプロセスを指す。ＳＳＦには、同一反応容器内における同時の、グルコースを含めた糖類へのデンプン基質（粒状、液化、又は可溶化されたもの）の加水分解と、アルコール又は他の生化学物質若しくは生体物質への糖類の発酵とが含まれる。
【0052】
「エタノール産生微生物」は、糖又はオリゴ糖をエタノールに変換する能力を備える微生物を指す。
【0053】
用語「発酵飲料」は、微生物発酵、例えば細菌及び／又は真菌発酵などの発酵プロセスを含む方法によって生成されるあらゆる飲料を指す。
【0054】
用語「麦芽」は、あらゆる穀粒麦芽、例えば大麦麦芽又は小麦麦芽を指す。
【0055】
用語「マッシュ」は、後に麦汁と使用済み穀物とに分離されることとなる、水と混和された、任意のデンプン及び／又は糖を含有する植物性物質、例えば、例えば粉砕された大麦麦芽、粉砕された大麦、及び／又は他の添加物又はそれらの組み合わせを含む製粉用穀物の水性スラリーを指す。
【0056】
用語「麦汁」は、マッシュ過程で製粉用穀物を抽出した後に流出する、未発酵の酒を指す。
【0057】
用語「約」は、基準とされる値に対する±１５％を指す。
【0058】
２．マルトペンタオース／マルトヘキサオースを形成するα－アミラーゼバリアント
記載されるのは、自動食器洗浄（ＡＤＷ）用途において高度な性能を示す、マルトペンタオース／マルトヘキサオース形成α－アミラーゼの組み合わせバリアントである。このバリアントは、本明細書ではＡＡ２５６０と称され、以前は国際公開第２０１８／１８４００４号パンフレットにおいてＢｓｐＡｍｙ２４（配列番号１）と認識されていた、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）の種由来のα－アミラーゼと最も密接に関連する。ＡＡ２５６０α－アミラーゼの成熟アミノ酸配列は、配列番号１として、以下に示される：
記載されるのは、自動食器洗浄（ＡＤＷ）用途において高度な性能を示す、マルトペンタオース／マルトヘキサオース形成α－アミラーゼの組み合わせバリアントである。このバリアントは、本明細書ではＡＡ２５６０と称され、以前は国際公開第２０１８／１８４００４号パンフレットにおいてＢｓｐＡｍｙ２４（配列番号１）と認識されていた、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）の種由来のα－アミラーゼと最も密接に関連する。ＡＡ２５６０α－アミラーゼの成熟アミノ酸配列は、配列番号１として、以下に示される：
【化1】
【0059】
密接に関連するマルトペンタオース／マルトヘキサオース形成α－アミラーゼは、本明細書で「ＡＡ７０７」と称されるバチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）の種７０７由来である。ＡＡ７０７α－の成熟アミノ酸配列は、配列番号２として、以下に示される：
【化2】
【0060】
別の密接に関連するマルトペンタオース／マルトヘキサオース形成α－アミラーゼは、ＡＡ５６０と称されるバチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）の種由来である。ＡＡ５６０の成熟アミノ酸配列は、配列番号３として、以下に示される：
【化3】
【0061】
アミノ酸配列同一性に基づくと、別の推定されるマルトペンタオース／マルトヘキサオース形成α－アミラーゼは、別のバチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）の種由来であり、本明細書ではＡＡＩ１０と称される。ＡＡＩ１０α－アミラーゼの成熟アミノ酸配列は、配列番号４として、以下に示される：
【化4】
【0062】
これらの４種のα－アミラーゼのＭＵＳＣＬＥアラインメントを、図１に示す。アミノ酸配列同一性を、表１にまとめて示す。ＡＡ７０７、ＡＡ５６０、及びＡＡＩ１０はすべて、ＡＡ２５６０に対する８０％超のアミノ酸同一性を有する。
【表1】
【0063】
優れた洗浄性能を示すことが国際公開第２０２１／０８０９４８号パンフレットに記載されている、ＡＡ２５６０ α－アミラーゼのバリアントを、配列番号５として下に示す：
【化5】
【0064】
このバリアントは、番号付けのために野生型のＡＡ２５６０ α－アミラーゼ（配列番号１）を使用すると、ＡＡ２５６０ α－アミラーゼを基準として変異Ｔ４０Ｎ、Ｓ９１Ｒ、Ｙ１００Ｆ、Ｗ１１６Ｒ、Ｑ１７２Ｎ、ΔＲ１８１、ΔＧ１８２、Ｓ２４４Ｑ、及びＨ２８１Ｓを有する。
【0065】
出発点として前述のＡＡ２５６０ α－アミラーゼバリアントを使用して、さらに改良された洗浄性能を示す、さらなるＡＡ２５６０ α－アミラーゼバリアントを設計した。新規バリアントのほとんどには、２つの変異Ｔ５１Ｖ及びＳ１２５Ｒが含まれる。これらの位置での変異は、分子のデンプン結合溝内のヒドロキシル基の喪失をもたらす。酵素の構造モデルでは、Ｔ５１及びＳ１２５のヒドロキシル基は、溶媒曝露され、デンプン結合溝内の水素結合に利用可能である（図１）。
【0066】
ある理論に制限されないが、本発明者らは、Ｔ５１Ｖ変異とＳ１２５Ｒ変異の組み合わせが、デンプン結合溝における水素結合のための、そうでなければ曝露される可能性があるヒドロキシル基を除去することによって、活性部位における非生産的な結合型のデンプンを減少させるように共に働くことができることを提唱する。これらのヒドロキシル基の喪失は、触媒作用のための求核剤に関する分子及び一般の酸／塩基側鎖の最適な配置と相いれない構造のデンプンの結合を防止することができる。この理論に基づくと、これらの位置のヒドロキシル基を除去する他の置換も、類似の洗浄利益を提供する可能性があり、したがって、置換は、より一般的に、Ｔ５１Ｘ及びＳ１２５Ｘ（ここでは、Ｘは、ＳでもＴでもない）と記述することができる。
【0067】
本発明のバリアントの別の特徴は、引き続き、第９１位の変異及び／又はα－アミラーゼＴＩＭバレル構造の底部（基部）の少なくとも１つの変異である。バレル底部残基は、ゼロよりも大きい溶媒接近可能表面積を有し、且つ活性部位と逆のバレルの側で、及び各ストランドのＮ末端を含有する側で、コアβ－バレル構造内にある又はβ－バレル構造に隣接している。関連する残基は、番号付けについて配列番号１を参照すると、第６、７、４０、９６、９８、１００、２２９、２３０、２３１、２６２、２６３、２８５、２８６、２８７、２８８、３２２、３２３、３２４、３２５、３６２、３６３、及び３６４位である。すべての場合において、これらの残基は、ＴＩＭバレル構造の基部に並び、これは、α－アミラーゼ及び多くの他の酵素の主要な構築的特徴に相当する。残基９１の例示的な変異は、極性残基から、荷電残基、特に正の電荷を持つ残基、例えばアルギニンへの置換（すなわち、Ｘ９１Ｒ）であり、ＡＡ２５６０の場合には、これは、特定の置換Ｓ９１Ｒである。
【0068】
バリアントは、さらに、ループ内（番号付けについて配列番号１を参照すると、表面が曝露される残基１６７、１６９、１７１、１７２、及び１７６が含まれる）の変異を特徴とすることができる。バリアントは、さらに、溶解度に影響を与えると考えられている、第１１６及び２８１位での変異を特徴とすることができる。
【0069】
バリアントは、さらに、番号付けについて配列番号１を参照すると、第１９０及び／又は２４４位での安定化変異を特徴とすることができる。こうした変異は、十分に特徴付けられており、現在の、洗浄、穀物加工、及び繊維処理の両方のために使用される市販品として入手可能なα－アミラーゼに含まれている。これらの残基における例示的変異は、置換Ｘ１９０Ｐ及びＸ２４４Ａ、Ｅ又はＱ、特にＥ１９０Ｐ、Ｓ２４４Ａ、Ｓ２４４Ｅ、及びＳ２４４Ｑである。第１９０位での変異と組み合わせた、第２７５及び２７９位での変異も、興味深いものである。
【0070】
バリアントは、さらに、番号付けについて配列番号１を参照すると、第１、７、１１８、１９５、２０２、２０６、３２１、２４５、及び４５９位での変異を特徴とすることができ、これは、現在の、市販品として入手可能なα－アミラーゼに含まれているか、又はこうした用途について提案されている。
【0071】
バリアントは、番号付けについて配列番号１を使用すると、Ｒ１８１、Ｇ１８２、Ｔ１８３、及びＧ１８４に対応するカルシウム結合ループに隣接するＸ１Ｇ／Ｓ１Ｘ２Ｇ２モチーフ内に１つの欠失をさらに含む。いくつかの実施形態では、バリアントは、Ｒ１８１及びＧ１８２、又はＴ１８３及びＧ１８４に対応するアミノ酸残基の隣接するペアでの欠失を含む。Ｒ１８１及びＧ１８２に対応するアミノ酸残基内の欠失は、「ΔＲＧ」と称することができるのに対して、第１８３位の残基（通常、Ｔ、Ｄ、又はＨ）及びＧ１８４に対応するアミノ酸残基内の欠失は、必要に応じて「ΔＴＧ」、「ΔＤＧ」、「ΔＨＧ」などと称することができる。両方のペアの欠失は、α－アミラーゼにおいて、同じ影響を生じるように思われる。
【0072】
バリアントには、類似の折り畳みを有する、及び／又は（ｉ）例えばＢ．リケニホルミス（Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｍｉｓ）（すなわち、ＢＬＡ及びＬＡＴ）、Ｂ．ステアロサーモフィルス（Ｂ．ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）（すなわち、ＢＳＧ）及びＢ．アミロリケファシエンス（Ｂ．ａｍｙｌｏｌｉｑｕｉｆａｃｉｅｎｓ）（すなわち、Ｐ００６９２、ＢＡＣＡＭ、及びＢＡＡ）由来の、周知のバチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）α－アミラーゼのいずれか、又はそのハイブリッド、（ｉｉ）糖質関連酵素データベース（ＣＡＺｙ）ファミリー１３ α－アミラーゼと分類されるいずれかのα－アミラーゼ、又は（ｉｉｉ）以下では記述用語「Ｔｅｒｍａｍｙｌ様」によって称されているいずれかのアミラーゼ、との６０％以上のアミノ酸配列同一性を有する、他のα－アミラーゼにおける使用について上に記載された変異がさらに含まれ得る。例示的なα－アミラーゼには、限定はされないが、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）の種ＳＧ－１，バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）の種７０７からのもの、及びＡ７－７、ＳＰ７２２、ＤＳＭ９０ １４、及びＫＳＭ ＡＰ１３７８と称されるα－アミラーゼが含まれる。同様に、本明細書に記載された変異の組み合わせのいずれかが、マルトペンタオース／マルトヘキサオース生成α－アミラーゼとして記載されているかどうかにかかわらず、これらのα－アミラーゼにおいて性能利益をもたらすことができる。
【0073】
特に企図される組み合わせバリアントを、配列番号５を基準として、及び番号付けのために配列番号５を使用して、以下に列挙する。配列番号５のバリアントは、既に欠失ΔＲ１８１及びΔＧ１８２を有しており、したがって、配列番号１を基準とすると第１８３位以降の各位の数は２つ減っていることに留意されたい。
Ｔ５１Ｖ＋Ｓ１２５Ｒ＋Ｆ２３１Ｌ
Ｔ５１Ｖ＋Ｓ１２５Ｒ＋Ｎ１７２Ｑ＋Ｎ２２７Ｒ
Ｔ５１Ｖ＋Ｓ１２５Ｒ＋Ｆ２３１Ｌ
Ｔ５１Ｖ＋Ｓ１２５Ｒ＋Ｎ１７２Ｑ＋Ｎ２２７Ｒ
【0074】
関連実施形態において、特に企図される組み合わせバリアントを、配列番号５を基準として、及び番号付けのために配列番号５を使用して、以下に列挙する。
Ｎ２９Ｑ＋Ｔ５１Ｖ＋Ｓ１２５Ｒ＋Ｎ２２７Ｒ＋Ｓ２５３Ｌ＋Ｇ２７２Ｅ＋Ｋ３１９Ｒ＋Ｓ４１８Ａ
Ｎ２９Ｑ＋Ｔ５１Ｖ＋Ｔ２４４Ｉ＋Ｓ２５３Ｌ＋Ｋ２６８Ｒ＋Ｋ３１９Ｒ＋Ｓ４１８Ａ
Ｅ４１５Ｇ
Ｎ２９Ｑ＋Ｔ５１Ｖ＋Ｓ１２５Ｒ＋Ｎ２２７Ｒ＋Ｓ２５３Ｌ＋Ｇ２７２Ｅ＋Ｋ３１９Ｒ＋Ｓ４１８Ａ
Ｎ２９Ｑ＋Ｔ５１Ｖ＋Ｔ２４４Ｉ＋Ｓ２５３Ｌ＋Ｋ２６８Ｒ＋Ｋ３１９Ｒ＋Ｓ４１８Ａ
Ｅ４１５Ｇ
【0075】
α－アミラーゼが、上に列挙した変異を天然に有する場合（すなわち、野生型α－アミラーゼが、変異であると特定された残基を既に含んでいた場合）、その特定の変異は、そのα－アミラーゼには適用されないことが理解されるであろう。しかし、他の記載された変異は、その位置での天然に存在する残基と組み合せて機能することができる。
【0076】
本α－アミラーゼバリアントには、アミノ酸配列内の１個又は数個のアミノ酸の置換、欠失、又は付加、例えば、１０個未満、９個未満、８個未満、７個未満、６個未満、５個未満、４個未満、３個未満、又は更には２個未満の置換、欠失、又は付加も含まれ得る。こうしたバリアントは、それが由来するα－アミラーゼと同様の活性を有することが期待される。本α－アミラーゼバリアントには、そのＮ又はＣ末端での１個又は数個の残基の少しの欠失及び／又は伸長も含まれ得る。こうした少しの変化は、本明細書に記載された発明概念を無効にする可能性は低い。
【0077】
本発明のアミラーゼは、「前駆体」、「未成熟」、若しくは「完全長」（これらの場合にはシグナル配列が含まれる）、又は「成熟」（この場合にはシグナル配列が欠如している）であり得る。成熟形態のポリペプチドが、一般に、最も有用である。他に記載がない限り、本明細書で使用するアミノ酸残基の番号付けは、それぞれの成熟形態のアミラーゼポリペプチドを基準とする。
【0078】
いくつかの実施形態では、α－アミラーゼバリアントは、配列番号１、２、３、４、又は５との、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は更には少なくとも９９％、ただし１００％よりも小さいアミノ酸配列同一性を有する。
【0079】
２．５．アミラーゼポリペプチドバリアントをコードするヌクレオチド
別の態様では、α－アミラーゼポリペプチドバリアントをコードする核酸が提供される。この核酸は、ある特定のアミラーゼポリペプチド、又はその特定のα－アミラーゼとの指定された程度のアミノ酸配列同一性を有するα－アミラーゼをコードすることができる。
別の態様では、α－アミラーゼポリペプチドバリアントをコードする核酸が提供される。この核酸は、ある特定のアミラーゼポリペプチド、又はその特定のα－アミラーゼとの指定された程度のアミノ酸配列同一性を有するα－アミラーゼをコードすることができる。
【0080】
いくつかの実施形態では、核酸は、配列番号１、２、３、４、又は５との、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は更には少なくとも９９％、ただし１００％よりも小さいアミノ酸配列同一性を有するα－アミラーゼをコードする。遺伝子コードの縮重に起因して、複数の核酸が同じポリペプチドをコードし得ることが理解されるであろう。
【0081】
いくつかの実施形態では、核酸は、ストリンジェント又は非常にストリンジェントな条件下で、配列番号１、２、３、４、又は５との、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は更には少なくとも９９％、ただし１００％よりも小さいアミノ酸配列同一性を有するα－アミラーゼをコードする（又はコードする核酸に相補的である）核酸にハイブリダイズする。
【0082】
３．α－アミラーゼバリアントの産生
本発明のα－アミラーゼバリアントは、例えば、当該技術分野で周知の方法を使用して、分泌又は細胞内発現によって、宿主細胞中で生成することができる。発酵、分離、及び濃縮技術は、当該技術分野に周知であり、従来法を使用して、濃縮されたα－アミラーゼポリペプチドバリアント含有溶液を調製することができる。
本発明のα－アミラーゼバリアントは、例えば、当該技術分野で周知の方法を使用して、分泌又は細胞内発現によって、宿主細胞中で生成することができる。発酵、分離、及び濃縮技術は、当該技術分野に周知であり、従来法を使用して、濃縮されたα－アミラーゼポリペプチドバリアント含有溶液を調製することができる。
【0083】
生産規模での回収のために、α－アミラーゼポリペプチドバリアントは、ポリマーを用いた綿状沈殿を介して細胞を除去することによって上に一般に記載した通りに濃縮又は部分的に精製することができる。或いは、酵素は、精密濾過、それに続く利用可能な膜及び装置を使用する限外濾過による濃縮によって、濃縮又は精製することができる。しかし、一部の用途では、酵素は濃縮又は精製する必要がなく、全ブロス培養物を溶解させ、それ以上の処理を行わずに使用することができる。その後、酵素は、例えば顆粒に加工処理することができる。
【0084】
４．α－アミラーゼバリアントを含有する洗浄組成物
本発明の組成物及び方法の一態様は、例えば自動及び手動食器洗浄（ＡＤＷ）、洗濯洗浄、及び他の硬質表面洗浄のための構成成分としてα－アミラーゼバリアントを含む、洗浄組成物を含む。
本発明の組成物及び方法の一態様は、例えば自動及び手動食器洗浄（ＡＤＷ）、洗濯洗浄、及び他の硬質表面洗浄のための構成成分としてα－アミラーゼバリアントを含む、洗浄組成物を含む。
【0085】
４．１．概要
好ましくは、α－アミラーゼバリアントは、公知のα－アミラーゼについて従来使用される濃度で又はそれ未満の濃度で、洗剤配合物に組み込まれる。記載されるα－アミラーゼバリアントは、性能において、以前から入手可能なあらゆるものよりも優れているので、既存のα－アミラーゼと比較して、標準の用量で優れた性能を、また、より低用量で同様の性能を発揮することが期待される。以下では、本発明のα－アミラーゼの包含のための、洗剤組成物の特定の形態及び配合について記載する。
好ましくは、α－アミラーゼバリアントは、公知のα－アミラーゼについて従来使用される濃度で又はそれ未満の濃度で、洗剤配合物に組み込まれる。記載されるα－アミラーゼバリアントは、性能において、以前から入手可能なあらゆるものよりも優れているので、既存のα－アミラーゼと比較して、標準の用量で優れた性能を、また、より低用量で同様の性能を発揮することが期待される。以下では、本発明のα－アミラーゼの包含のための、洗剤組成物の特定の形態及び配合について記載する。
【0086】
４．２．自動食器洗浄（ＡＤＷ）洗剤組成物
代表的なＡＤＷ洗剤組成物には、０～１０重量％の量で存在する、エトキシル化非イオン性界面活性剤、アルコールアルコキシル化界面活性剤、エポキシキャップ化ポリ（オキシアルキル化）アルコール、若しくはアミンオキシド界面活性剤を含めた、非イオン性界面活性剤；リン酸塩ビルダー（例えば、一リン酸塩、二リン酸塩、三ポリリン酸塩、他のオリゴマーポリリン酸塩、トリポリリン酸ナトリウム－ＳＴＰＰ）及びリン酸を含まないビルダー（例えば、０．５重量％～５０重量％の範囲内のメチル－グリシン－二酢酸（ＭＧＤＡ）並びにその塩及び誘導体、グルタミン酸－Ｎ，Ｎ－二酢酸（ＧＬＤＡ）並びにその塩及び誘導体、イミノジコハク酸（ＩＤＳ）並びにその塩及び誘導体、カルボキシメチルイヌリン並びにその塩及び誘導体、ニトリロ三酢酸（ＮＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、β－アラニン二酢酸（β－ＡＤＡ）及びその塩、ポリ－カルボン酸のホモポリマー及びコポリマー並びにそれらの部分的若しくは完全中和塩、モノマーのポリカルボン酸及びヒドロキシカルボン酸並びにその塩を含めた、アミノ酸をベースとする化合物）を含めた、５～６０％の範囲内のビルダー；寸法安定性を提供するための約０．１重量％～約５０重量％の範囲内のスルホン化／カルボキシル化ポリマー；約０．１重量％～約１０重量％の範囲内の乾燥助剤（例えば、任意選択的に３～６官能基－典型的には重縮合を促進する酸、アルコール若しくはエステル官能基を有するさらなるモノマーと一緒の、ポリエステル、特にアニオン性ポリエステル、ポリカーボネート－、ポリウレタン－及び／又はポリ尿素－ポリオルガノシロキサン化合物若しくはその、特に反応性環状炭酸塩及び尿素タイプの前駆体化合物）、約１重量％～約２０重量％の範囲内のケイ酸塩（ケイ酸ナトリウム若しくはケイ酸カリウム、例えば二ケイ酸ナトリウム、メタケイ酸ナトリウム及び結晶性フィロケイ酸塩が含まれる）；無機漂白剤（例えば、過水和物塩、例えば過ホウ酸塩、過炭酸塩、過リン酸塩、過硫酸塩及び過ケイ酸塩）及び有機漂白剤（例えば、ジアシル及びテトラアシルペルオキシドを含めた有機ペルオキシ酸、特にジペルオキシドデカン二酸、ジペルオキシテトラデカン二酸及びジペルオキシヘキサデカン二酸）；漂白活性剤（すなわち、約０．１重量％～約１０重量％の範囲内の有機過酸前駆体）；漂白触媒（例えば、トリアザシクロノナンマンガン及び関連錯体、Ｃｏ、Ｃｕ、Ｍｎ及びＦｅビスピリジルアミン及び関連錯体並びに酢酸ペンタミンコバルト（ＩＩＩ）及び関連錯体）；約０．１重量％～５重量％の範囲内の金属ケア剤（例えば、ベンザトリアゾール、金属塩及び錯体及び／又はケイ酸塩）；自動食器洗浄用洗剤組成物１ｇ当たり約０．０１～５．０ｍｇの活性酵素の範囲内の酵素（例えば、プロテアーゼ、α－アミラーゼ、リパーゼ、セルラーゼ、コリンオキシダーゼ、ペルオキシダーゼ／オキシダーゼ、ペクチン酸リアーゼ、マンナナーゼ、クチナーゼ、ラッカーゼ、ホスホリパーゼ、リソホスホリパーゼ、アシルトランスフェラーゼ、ペルヒドロラーゼ、アリールエステラーゼ及びそれらの混合物）；並びに酵素安定剤成分（例えば、オリゴ糖、多糖及び無機二価金属塩）が含まれる。
代表的なＡＤＷ洗剤組成物には、０～１０重量％の量で存在する、エトキシル化非イオン性界面活性剤、アルコールアルコキシル化界面活性剤、エポキシキャップ化ポリ（オキシアルキル化）アルコール、若しくはアミンオキシド界面活性剤を含めた、非イオン性界面活性剤；リン酸塩ビルダー（例えば、一リン酸塩、二リン酸塩、三ポリリン酸塩、他のオリゴマーポリリン酸塩、トリポリリン酸ナトリウム－ＳＴＰＰ）及びリン酸を含まないビルダー（例えば、０．５重量％～５０重量％の範囲内のメチル－グリシン－二酢酸（ＭＧＤＡ）並びにその塩及び誘導体、グルタミン酸－Ｎ，Ｎ－二酢酸（ＧＬＤＡ）並びにその塩及び誘導体、イミノジコハク酸（ＩＤＳ）並びにその塩及び誘導体、カルボキシメチルイヌリン並びにその塩及び誘導体、ニトリロ三酢酸（ＮＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、β－アラニン二酢酸（β－ＡＤＡ）及びその塩、ポリ－カルボン酸のホモポリマー及びコポリマー並びにそれらの部分的若しくは完全中和塩、モノマーのポリカルボン酸及びヒドロキシカルボン酸並びにその塩を含めた、アミノ酸をベースとする化合物）を含めた、５～６０％の範囲内のビルダー；寸法安定性を提供するための約０．１重量％～約５０重量％の範囲内のスルホン化／カルボキシル化ポリマー；約０．１重量％～約１０重量％の範囲内の乾燥助剤（例えば、任意選択的に３～６官能基－典型的には重縮合を促進する酸、アルコール若しくはエステル官能基を有するさらなるモノマーと一緒の、ポリエステル、特にアニオン性ポリエステル、ポリカーボネート－、ポリウレタン－及び／又はポリ尿素－ポリオルガノシロキサン化合物若しくはその、特に反応性環状炭酸塩及び尿素タイプの前駆体化合物）、約１重量％～約２０重量％の範囲内のケイ酸塩（ケイ酸ナトリウム若しくはケイ酸カリウム、例えば二ケイ酸ナトリウム、メタケイ酸ナトリウム及び結晶性フィロケイ酸塩が含まれる）；無機漂白剤（例えば、過水和物塩、例えば過ホウ酸塩、過炭酸塩、過リン酸塩、過硫酸塩及び過ケイ酸塩）及び有機漂白剤（例えば、ジアシル及びテトラアシルペルオキシドを含めた有機ペルオキシ酸、特にジペルオキシドデカン二酸、ジペルオキシテトラデカン二酸及びジペルオキシヘキサデカン二酸）；漂白活性剤（すなわち、約０．１重量％～約１０重量％の範囲内の有機過酸前駆体）；漂白触媒（例えば、トリアザシクロノナンマンガン及び関連錯体、Ｃｏ、Ｃｕ、Ｍｎ及びＦｅビスピリジルアミン及び関連錯体並びに酢酸ペンタミンコバルト（ＩＩＩ）及び関連錯体）；約０．１重量％～５重量％の範囲内の金属ケア剤（例えば、ベンザトリアゾール、金属塩及び錯体及び／又はケイ酸塩）；自動食器洗浄用洗剤組成物１ｇ当たり約０．０１～５．０ｍｇの活性酵素の範囲内の酵素（例えば、プロテアーゼ、α－アミラーゼ、リパーゼ、セルラーゼ、コリンオキシダーゼ、ペルオキシダーゼ／オキシダーゼ、ペクチン酸リアーゼ、マンナナーゼ、クチナーゼ、ラッカーゼ、ホスホリパーゼ、リソホスホリパーゼ、アシルトランスフェラーゼ、ペルヒドロラーゼ、アリールエステラーゼ及びそれらの混合物）；並びに酵素安定剤成分（例えば、オリゴ糖、多糖及び無機二価金属塩）が含まれる。
【0087】
ある特定の例示的なＡＤＷ組成物（その中で、本バリアントの少なくともいくつかが試験されている）を、表２に示す。
【表2】
【0088】
４．３．重質液体（ＨＤＬ）洗濯用洗剤組成物
代表的なＨＤＬ洗濯用洗剤組成物は、アニオン性洗浄性界面活性剤（直鎖、分岐鎖若しくはランダム鎖の、置換若しくは非置換アルキル硫酸塩、アルキルスルホン酸塩、アルコキシル化アルキル硫酸塩、アルキルリン酸塩、アルキルホスホン酸塩、アルキルカルボン酸塩及び／又はそれらの混合物の群から選択される）、及び任意選択的に、非イオン性界面活性剤（直鎖、分岐鎖若しくはランダム鎖の、置換若しくは非置換アルコキシル化アルキルアルコール、例えばＣ８～Ｃ１８エトキシル化アルキルアルコール及び／又はＣ６～Ｃ１２アルキルフェノールアルコキシレートの群から選択される）を含めた、洗浄性界面活性剤（１０ｗｔ／ｗｔ％～４０ｗｔ／ｗｔ％）を含み、ここで、アニオン性洗浄性界面活性剤（６～９の親水性指数（ＨＩｃ）を有する）と非イオン性洗浄性界面活性剤との重量比は、１：１より大きい。好適な洗浄性界面活性剤としてはまた、カチオン性洗浄性界面活性剤（アルキルピリジニウム化合物、アルキル第四級アンモニウム化合物、アルキル第四級ホスホニウム化合物、アルキル第三級スルホニウム化合物及び／又はこれらの混合物の群から選択される）；双性イオン性及び／又は両性洗浄性界面活性剤（アルカノールアミンスルホベタインの群から選択される）；両性界面活性剤；半極性非イオン性界面活性剤、並びにこれらの混合物が挙げられる。
代表的なＨＤＬ洗濯用洗剤組成物は、アニオン性洗浄性界面活性剤（直鎖、分岐鎖若しくはランダム鎖の、置換若しくは非置換アルキル硫酸塩、アルキルスルホン酸塩、アルコキシル化アルキル硫酸塩、アルキルリン酸塩、アルキルホスホン酸塩、アルキルカルボン酸塩及び／又はそれらの混合物の群から選択される）、及び任意選択的に、非イオン性界面活性剤（直鎖、分岐鎖若しくはランダム鎖の、置換若しくは非置換アルコキシル化アルキルアルコール、例えばＣ８～Ｃ１８エトキシル化アルキルアルコール及び／又はＣ６～Ｃ１２アルキルフェノールアルコキシレートの群から選択される）を含めた、洗浄性界面活性剤（１０ｗｔ／ｗｔ％～４０ｗｔ／ｗｔ％）を含み、ここで、アニオン性洗浄性界面活性剤（６～９の親水性指数（ＨＩｃ）を有する）と非イオン性洗浄性界面活性剤との重量比は、１：１より大きい。好適な洗浄性界面活性剤としてはまた、カチオン性洗浄性界面活性剤（アルキルピリジニウム化合物、アルキル第四級アンモニウム化合物、アルキル第四級ホスホニウム化合物、アルキル第三級スルホニウム化合物及び／又はこれらの混合物の群から選択される）；双性イオン性及び／又は両性洗浄性界面活性剤（アルカノールアミンスルホベタインの群から選択される）；両性界面活性剤；半極性非イオン性界面活性剤、並びにこれらの混合物が挙げられる。
【0089】
本組成物は、任意選択的に、両親媒性アルコキシル化グリース洗浄ポリマー（分枝状の親水性及び疎水性性質を有するアルコキシル化ポリマー、例えば０．０５ｗｔ％～１０ｗｔ％の範囲のアルコキシル化ポリアルキレンイミンなどの群から選択される）及び／又はランダムグラフトポリマー（典型的には、不飽和Ｃ１～Ｃ６カルボン酸、エーテル、アルコール、アルデヒド、ケトン、エステル、糖単位、アルコキシ単位、無水マレイン酸、グリセロールなどの飽和ポリアルコール及びそれらの混合物からなる群から選択されるモノマーを含む親水性骨格と、Ｃ４～Ｃ２５アルキル基、ポリプロピレン、ポリブチレン、飽和Ｃ１～Ｃ６モノ－カルボン酸のビニルエステル、アクリル酸又はメタクリル酸のＣ１～Ｃ６アルキルエステル及びそれらの混合物からなる群から選択される疎水性側鎖とからなる）からなる界面活性増強性ポリマーを含むことができる。
【0090】
本組成物は、例えば、防汚ポリマー（非イオン性末端キャップ化ポリエステル、例えばＳＲＰ１、ランダム若しくはブロック構造の糖、ジカルボン酸、ポリオール及びそれらの組み合わせから選択される少なくとも１つのモノマー単位を含むポリマー、ランダム又はブロック構造のエチレンテレフタレート系ポリマー及びそれらのコポリマー、例えばＲｅｐｅｌ－ｏ－ｔｅｘ ＳＦ、ＳＦ－２及びＳＲＰ６、Ｔｅｘｃａｒｅ ＳＲＡ１００、ＳＲＡ３００、ＳＲＮ１００、ＳＲＮ１７０、ＳＲＮ２４０、ＳＲＮ３００及びＳＲＮ３２５、Ｍａｒｌｏｑｕｅｓｔ ＳＬが含まれる）、再付着防止ポリマー（０．１ｗｔ％～１０ｗｔ％；５００～１００，０００Ｄａの範囲内の分子量の、カルボン酸ポリマー、例えばアクリル酸、マレイン酸（又はマレイン酸無水物）、フマル酸、イタコン酸、アコニット酸、メサコン酸、シトラコン酸、メチレンマロン酸及びそれらの任意の混合物、ビニルピロリドンホモポリマー及び／又はポリエチレングリコールなどから選択される少なくとも１つのモノマーを含むポリマーなどのカルボン酸ポリマーが含まれる）；セルロースポリマー（アルキルセルロース、アルキルアルコキシアルキルセルロース、カルボキシアルキルセルロース、アルキルカルボキシアルキルセルロース（その例にはカルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、メチルヒドロキシエチルセルロース、メチルカルボキシメチルセルロース及びそれらの混合物が含まれる）から選択されるポリマーが含まれる）、並びにカルボキシレートポリマー（例えば、マレイン酸／アクリル酸ランダムコポリマー又はポリアクリレートホモポリマー）などの追加のポリマーを含むことができる。
【0091】
本組成物は、飽和又は不飽和脂肪酸、好ましくは飽和又は不飽和Ｃ１２～Ｃ２４脂肪酸（０ｗｔ％～１０ｗｔ％）；沈着助剤（その例には、多糖類、好ましくはセルロースポリマー、ポリジアリルジメチルアンモニウムハロゲン化物（ＤＡＤＭＡＣ）、及びランダム又はブロック構造の、ＤＡＤ ＭＡＣとビニルピロリドン、アクリルアミド、イミダゾール、イミダゾリニウムハロゲン化物及びそれらの混合物とのコポリマー、カチオン性グアーガム、カチオン性セルロース、例えばカチオン性ヒドキシエチルセルロース、カチオン性デンプン、カチオン性ポリアクリルアミド及びそれらの混合物が含まれる）をさらに含むことができる。
【0092】
本組成物は、染料移動阻害剤（その例として、マンガンフタロシアニン、ペルオキシダーゼ、ポリビニルピロリドンポリマー、ポリアミンＮ－オキシドポリマー、Ｎ－ビニルピロリドンとＮ－ビニルイミダゾールとのコポリマー、ポリビニルオキサゾリドン及びポリビニルイミダゾール及び／又はそれらの混合物が含まれる）；キレート剤（その例として、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミンペンタメチレンホスホン酸（ＤＴＰＭＰ）、ヒドロキシエタンジホスホン酸（ＨＥＤＰ）、エチレンジアミンＮ，Ｎ’－ジコハク酸（ＥＤＤＳ）、メチルグリシン二酢酸（ＭＧＤＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、プロピレンジアミン四酢酸（ＰＤＴＡ）、２－ヒドロキシピリジン－Ｎ－オキシド（ＨＰＮＯ）、又はメチルグリシン二酢酸（ＭＧＤＡ）、グルタミン酸Ｎ，Ｎ－二酢酸（Ｎ，Ｎ－ジカルボキシメチルグルタミン酸四ナトリウム塩（ＧＬＤＡ））、ニトリロ三酢酸（ＮＴＡ）、４，５－ジヒドロキシ－ｍ－ベンゼンジスルホン酸、クエン酸及びそれらの任意の塩、Ｎ－ヒドロキシエチルエチレンジアミン三酢酸（ＨＥＤＴＡ）、トリエチレンテトラアミン六酢酸（ＴＴＨＡ）、Ｎ－ヒドロキシエチルイミノ二酢酸（ＨＥＩＤＡ）、ジヒドロキシエチルグリシン（ＤＨＥＧ）、エチレンジアミンテトラプロピオン酸（ＥＤＴＰ）並びにそれらの誘導体が含まれる）をさらに含むことができる。
【0093】
本組成物は、好ましくは、プロテアーゼ、α－アミラーゼ、リパーゼ、セルラーゼ、コリンオキシダーゼ、ペルオキシダーゼ／オキシダーゼ、ペクチン酸リアーゼ、マンナナーゼ、クチナーゼ、ラッカーゼ、ホスホリパーゼ、リソホスホリパーゼ、アシルトランスフェラーゼ、ペルヒドロラーゼ、アリールエステラーゼ及びそれらの任意の混合物から選択される酵素（一般に、約０．０１ｗｔ％の活性酵素～０．０３ｗｔ％の活性酵素）を含んでいた。本組成物は、酵素安定剤（その例としては、プロピレングリコール若しくはグリセロールなどのポリオール、糖若しくは糖アルコール、乳酸、可逆性プロテアーゼ阻害剤、ホウ酸若しくはホウ酸誘導体、例えば芳香族ホウ酸エステル又は４－ホルミルフェニルホウ酸などのフェニルホウ酸誘導体が挙げられる）を含むことができる。
【0094】
本組成物は、任意選択的に、シリコーン系又は脂肪酸系起泡抑制剤；色相染料（ｈｕｅｉｎｇ ｄｙｅｓ）、カルシウムカチオン及びマグネシウムカチオン、視覚信号成分、消泡剤（０．００１ｗｔ％～約４．０ｗｔ％）及び／又は構造化剤／増粘剤（０．０１ｗｔ％～約５ｗｔ％；ジグリセリド及びトリグリセリド、エチレングリコールジステアレート、微結晶セルロース、セルロース系材料、マイクロファイバーセルロース、バイオポリマー、キサンタンガム、ジェランガム及びそれらの混合物からなる群から選択される）を含むことができる。
【0095】
本組成物は、任意の液体形態、例えば、液体若しくはゲル形態又はそれらの任意の組み合わせであり得る。本組成物は、任意の単位用量形態、例えばパウチであり得る。
【0096】
４．４．重質乾燥／固体（ＨＤＤ）洗濯用洗剤組成物
典型的なＨＤＤ洗濯用洗剤組成物には、アニオン洗浄性界面活性剤（例えば、直鎖若しくは分岐鎖若しくはランダム鎖の置換若しくは非置換のアルキル硫酸塩、アルキルスルホン酸塩、アルキルアルコキシル化硫酸塩、アルキルリン酸塩、アルキルホスホン酸塩、アルキルカルボン酸塩及び／又はそれらの混合物）、非イオン洗浄性界面活性剤（例えば、直鎖若しくは分岐鎖若しくはランダム鎖の置換若しくは非置換のＣ８～Ｃ１８アルキルエトキシレート及び／又はＣ６～Ｃ１２アルキルフェノールアルコキシレート）、カチオン性洗浄性界面活性剤（例えば、アルキルピリジニウム化合物、アルキル第四級アンモニウム化合物、アルキル第四級ホスホニウム化合物、アルキル第三スルホニウム化合物及びこれらの混合物）、両性イオン性及び／又は両性洗浄性界面活性剤（例えば、アルカノールアミンスルホベタイン）、両性界面活性剤、半極性非イオン性界面活性剤及びそれらの混合物を含む洗浄性界面活性剤；リン酸を含まないビルダー（例えば、その例に、０ｗｔ％～１０ｗｔ％未満の範囲内のゼオライトＡ、ゼオライトＸ、ゼオライトＰ及びゼオライトＭＡＰが含まれる、ゼオライトビルダー）、リン酸塩ビルダー（例えば、０ｗｔ％～１０ｗｔ％未満の範囲内のトリポリリン酸ナトリウム）、クエン酸、クエン酸塩及びニトリロ三酢酸、ケイ酸塩（例えば、０ｗｔ％～１０ｗｔ％未満の範囲内のケイ酸ナトリウム若しくはケイ酸カリウム又はメタケイ酸ナトリウム、又は層状ケイ酸塩（ＳＫＳ－６））を含むビルダー；炭酸塩（例えば、０ｗｔ％～８０ｗｔ％未満の範囲内の炭酸ナトリウム及び／又は重炭酸ナトリウム）；並びに光脱色剤を含めた漂白剤（例えば、スルホン化亜鉛フタロシアニン、スルホン化アルミニウムフタロシアニン、キサンテン染料及びそれらの混合物）、疎水性若しくは親水性漂白活性剤（例えば、ドデカノイルオキシベンゼンスルホン酸塩、デカノイルオキシベンゼンスルホン酸塩、デカノイルオキシ安息香酸若しくはその塩、３，５，５－トリメチヘキサノイルオキシベンゼンスルホン酸塩、テトラアセチルエチレンジアミン－ＴＡＥＤ、ノナノイルオキシベンゼンスルホン酸塩－ＮＯＢＳ、ニトリルクワット及びそれらの混合物）；過酸化水素源（例えば、その例に、過ホウ酸塩、過炭酸塩、過硫酸塩、過リン酸塩若しくは過ケイ酸塩の、ナトリウム塩一水和物若しくは四水和物が含まれる、無機過水和塩）、予備形成された親水性及び／又は疎水性過酸（例えば、過カルボン酸及び塩、過炭酸及び塩、ペリミド酸及び塩、ペルオキシモノ硫酸及び塩及びそれらの混合物）及び／又は漂白触媒（例えば、イミン漂白増強剤（その例には、イミニウムカチオン及びポリイオンが含まれる）、イミニウム両性イオン、変性アミン、変性アミンオキシド、Ｎ－スルホニルイミン、Ｎ－ホスホニルイミン、Ｎ－アシルイミン、チアジアゾール二酸化物、ペルフルオロイミン、環状糖ケトン及びそれらの混合物、並びに金属含有漂白触媒（例えば、亜鉛若しくはアルミニウムなどの補助金属カチオン、並びにエチレンジアミン四酢酸、エチレンジアミンテトラ（メチレンホスホン酸）、及びその水溶性塩などの封鎖剤と共に、銅、鉄、チタン、ルテニウム、タングステン、モリブデン、若しくはマンガンカチオン）を含めた漂白剤が含まれる。
典型的なＨＤＤ洗濯用洗剤組成物には、アニオン洗浄性界面活性剤（例えば、直鎖若しくは分岐鎖若しくはランダム鎖の置換若しくは非置換のアルキル硫酸塩、アルキルスルホン酸塩、アルキルアルコキシル化硫酸塩、アルキルリン酸塩、アルキルホスホン酸塩、アルキルカルボン酸塩及び／又はそれらの混合物）、非イオン洗浄性界面活性剤（例えば、直鎖若しくは分岐鎖若しくはランダム鎖の置換若しくは非置換のＣ８～Ｃ１８アルキルエトキシレート及び／又はＣ６～Ｃ１２アルキルフェノールアルコキシレート）、カチオン性洗浄性界面活性剤（例えば、アルキルピリジニウム化合物、アルキル第四級アンモニウム化合物、アルキル第四級ホスホニウム化合物、アルキル第三スルホニウム化合物及びこれらの混合物）、両性イオン性及び／又は両性洗浄性界面活性剤（例えば、アルカノールアミンスルホベタイン）、両性界面活性剤、半極性非イオン性界面活性剤及びそれらの混合物を含む洗浄性界面活性剤；リン酸を含まないビルダー（例えば、その例に、０ｗｔ％～１０ｗｔ％未満の範囲内のゼオライトＡ、ゼオライトＸ、ゼオライトＰ及びゼオライトＭＡＰが含まれる、ゼオライトビルダー）、リン酸塩ビルダー（例えば、０ｗｔ％～１０ｗｔ％未満の範囲内のトリポリリン酸ナトリウム）、クエン酸、クエン酸塩及びニトリロ三酢酸、ケイ酸塩（例えば、０ｗｔ％～１０ｗｔ％未満の範囲内のケイ酸ナトリウム若しくはケイ酸カリウム又はメタケイ酸ナトリウム、又は層状ケイ酸塩（ＳＫＳ－６））を含むビルダー；炭酸塩（例えば、０ｗｔ％～８０ｗｔ％未満の範囲内の炭酸ナトリウム及び／又は重炭酸ナトリウム）；並びに光脱色剤を含めた漂白剤（例えば、スルホン化亜鉛フタロシアニン、スルホン化アルミニウムフタロシアニン、キサンテン染料及びそれらの混合物）、疎水性若しくは親水性漂白活性剤（例えば、ドデカノイルオキシベンゼンスルホン酸塩、デカノイルオキシベンゼンスルホン酸塩、デカノイルオキシ安息香酸若しくはその塩、３，５，５－トリメチヘキサノイルオキシベンゼンスルホン酸塩、テトラアセチルエチレンジアミン－ＴＡＥＤ、ノナノイルオキシベンゼンスルホン酸塩－ＮＯＢＳ、ニトリルクワット及びそれらの混合物）；過酸化水素源（例えば、その例に、過ホウ酸塩、過炭酸塩、過硫酸塩、過リン酸塩若しくは過ケイ酸塩の、ナトリウム塩一水和物若しくは四水和物が含まれる、無機過水和塩）、予備形成された親水性及び／又は疎水性過酸（例えば、過カルボン酸及び塩、過炭酸及び塩、ペリミド酸及び塩、ペルオキシモノ硫酸及び塩及びそれらの混合物）及び／又は漂白触媒（例えば、イミン漂白増強剤（その例には、イミニウムカチオン及びポリイオンが含まれる）、イミニウム両性イオン、変性アミン、変性アミンオキシド、Ｎ－スルホニルイミン、Ｎ－ホスホニルイミン、Ｎ－アシルイミン、チアジアゾール二酸化物、ペルフルオロイミン、環状糖ケトン及びそれらの混合物、並びに金属含有漂白触媒（例えば、亜鉛若しくはアルミニウムなどの補助金属カチオン、並びにエチレンジアミン四酢酸、エチレンジアミンテトラ（メチレンホスホン酸）、及びその水溶性塩などの封鎖剤と共に、銅、鉄、チタン、ルテニウム、タングステン、モリブデン、若しくはマンガンカチオン）を含めた漂白剤が含まれる。
【0097】
本組成物は、好ましくは、酵素、例えば、プロテアーゼ、α－アミラーゼ、リパーゼ、セルラーゼ、コリンオキシダーゼ、ペルオキシダーゼ／オキシダーゼ、ペクチン酸リアーゼ、マンナナーゼ、クチナーゼ、ラッカーゼ、ホスホリパーゼ、リソホスホリパーゼ、アシルトランスフェラーゼ、ペルヒドロラーゼ、アリールエステラーゼ及びそれらの混合物を含む。
【0098】
本組成物は、任意選択的に、香料マイクロカプセル、デンプン封入香料アコード、色相剤、布地完全性及びカチオンポリマーを含めた追加のポリマー、ダイロック成分、布地柔軟剤、増白剤（例えば、Ｃ．Ｉ．蛍光増白剤）、凝集剤、キレート剤、アルコキシル化ポリアミン、布用沈殿助剤、及び／又はシクロデキストリンを含めた、追加の洗剤成分を含むことができる。
【0099】
４．５．追加の酵素
本明細書に記載した洗浄組成物はいずれも、任意の数の追加の酵素を含むことができる。一般に、酵素は、選択された洗剤と（例えば、他の酵素成分及び非酵素成分などとのｐＨ最適性、適合性に関して）適合するべきであり、且つ、酵素は、有効量で存在するべきである。例として、下記の酵素を挙げる。
本明細書に記載した洗浄組成物はいずれも、任意の数の追加の酵素を含むことができる。一般に、酵素は、選択された洗剤と（例えば、他の酵素成分及び非酵素成分などとのｐＨ最適性、適合性に関して）適合するべきであり、且つ、酵素は、有効量で存在するべきである。例として、下記の酵素を挙げる。
【0100】
プロテアーゼ：
好適なプロテアーゼには、動物、野菜、又は微生物起源のプロテアーゼが含まれる。天然に処理されたタンパク質だけでなく、化学的に修飾された又はタンパク質改変された変異体が含まれる。プロテアーゼは、セリンプロテアーゼ又は金属プロテアーゼ、アルカリ性微生物プロテアーゼ、トリプシン様プロテアーゼ、又はキモトリプシン様プロテアーゼであり得る。アルカリ性プロテアーゼの例は、サブチリシン、特にバチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）由来のプロテアーゼ（例えば、サブチリシンＮｏｖｏ、サブチリシンＣａｒｌｓｂｅｒｇ、サブチリシン３０９、サブチリシン１４７、バチルス・ギブソニー（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｇｉｂｓｏｎｉｉ）、及びサブチリシン１６８である（例えば、国際公開第１９８９／０６２７９号パンフレット、国際公開第２０２００２４２８５８号パンフレットを参照されたい）。例示的なプロテアーゼには、限定はされないが、国際公開第１９９５／２３２２１号パンフレット、国際公開第１９９２／２１７６０号パンフレット、国際公開第２００８／０１０９２５号パンフレット、国際公開第２０１０／０５６６３５６号パンフレット、国際公開第２０１１／０７２０９９号パンフレット、国際公開第２０１１／１３０２２号パンフレット、国際公開第２０１１／１４０３６４号パンフレット、国際公開第２０１２／１５１５３４号パンフレット、国際公開第２０１５／０３８７９２号パンフレット、国際公開第２０１５／０８９４４１号パンフレット、国際公開第２０１５／０８９４４７号パンフレット、国際公開第２０１５／１４３３６０号パンフレット、国際公開第２０１６／００１４４９号パンフレット、国際公開第２０１６／００１４５０号パンフレット、国際公開第２０１６／０６１４３８号パンフレット、国際公開第２０１６／０６９５４４号パンフレット、国際公開第２０１６／０６９５４８号パンフレット、国際公開第２０１６／０６９５５２号パンフレット、国際公開第２０１６／０６９５５７号パンフレット、国際公開第２０１６／０６９５６３号パンフレット、国際公開第２０１６／０６９５６９号パンフレット、国際公開第２０１６／０８７６１７号パンフレット、国際公開第２０１６／０８７６１９号パンフレット、国際公開第２０１６／１４５４２８号パンフレット、国際公開第２０１６／１７４２３４号パンフレット、国際公開第２０１６／１８３５０９号パンフレット、国際公開第２０１６／２０２８３５、国際公開第２０１６／２０５７５５、国際公開第２００８／００９０７４７号パンフレット、国際公開第２０１８／１１８９５０号パンフレット、国際公開第２０１８／１６９７５０号パンフレット、国際公開第２０１８／１１８９１７号パンフレット、米国特許第５，８０１，０３９号明細書、米国特許第５，３４０，７３５号明細書、米国特許第５，５００，３６４号明細書、米国特許第５，８５５，６２５号明細書、ＲＥ第３４６０６号明細書、米国特許第５，９５５，３４０号明細書、米国特許第５，７００，６７６号明細書、米国特許第６，３１２，９３６号明細書、米国特許第６，４８２，６２８号明細書、米国特許第８，５３０，２１９号明細書に記載されているプロテアーゼ、並びに、国際公開第２００７／０４４９９３号パンフレット、国際公開第２００９／０５８３０３号パンフレット、国際公開第２００９／０５８６６１号パンフレット、国際公開第２０１４／０７１４１０号パンフレット、国際公開第２０１４／１９４０３２号パンフレット、国際公開第２０１４／１９４０３４号パンフレット、国際公開第２０１４／１９４０５４号パンフレット、及び国際公開第２０１４／１９４１１７号パンフレットに記載されているメタロプロテアーゼが含まれる。
好適なプロテアーゼには、動物、野菜、又は微生物起源のプロテアーゼが含まれる。天然に処理されたタンパク質だけでなく、化学的に修飾された又はタンパク質改変された変異体が含まれる。プロテアーゼは、セリンプロテアーゼ又は金属プロテアーゼ、アルカリ性微生物プロテアーゼ、トリプシン様プロテアーゼ、又はキモトリプシン様プロテアーゼであり得る。アルカリ性プロテアーゼの例は、サブチリシン、特にバチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）由来のプロテアーゼ（例えば、サブチリシンＮｏｖｏ、サブチリシンＣａｒｌｓｂｅｒｇ、サブチリシン３０９、サブチリシン１４７、バチルス・ギブソニー（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｇｉｂｓｏｎｉｉ）、及びサブチリシン１６８である（例えば、国際公開第１９８９／０６２７９号パンフレット、国際公開第２０２００２４２８５８号パンフレットを参照されたい）。例示的なプロテアーゼには、限定はされないが、国際公開第１９９５／２３２２１号パンフレット、国際公開第１９９２／２１７６０号パンフレット、国際公開第２００８／０１０９２５号パンフレット、国際公開第２０１０／０５６６３５６号パンフレット、国際公開第２０１１／０７２０９９号パンフレット、国際公開第２０１１／１３０２２号パンフレット、国際公開第２０１１／１４０３６４号パンフレット、国際公開第２０１２／１５１５３４号パンフレット、国際公開第２０１５／０３８７９２号パンフレット、国際公開第２０１５／０８９４４１号パンフレット、国際公開第２０１５／０８９４４７号パンフレット、国際公開第２０１５／１４３３６０号パンフレット、国際公開第２０１６／００１４４９号パンフレット、国際公開第２０１６／００１４５０号パンフレット、国際公開第２０１６／０６１４３８号パンフレット、国際公開第２０１６／０６９５４４号パンフレット、国際公開第２０１６／０６９５４８号パンフレット、国際公開第２０１６／０６９５５２号パンフレット、国際公開第２０１６／０６９５５７号パンフレット、国際公開第２０１６／０６９５６３号パンフレット、国際公開第２０１６／０６９５６９号パンフレット、国際公開第２０１６／０８７６１７号パンフレット、国際公開第２０１６／０８７６１９号パンフレット、国際公開第２０１６／１４５４２８号パンフレット、国際公開第２０１６／１７４２３４号パンフレット、国際公開第２０１６／１８３５０９号パンフレット、国際公開第２０１６／２０２８３５、国際公開第２０１６／２０５７５５、国際公開第２００８／００９０７４７号パンフレット、国際公開第２０１８／１１８９５０号パンフレット、国際公開第２０１８／１６９７５０号パンフレット、国際公開第２０１８／１１８９１７号パンフレット、米国特許第５，８０１，０３９号明細書、米国特許第５，３４０，７３５号明細書、米国特許第５，５００，３６４号明細書、米国特許第５，８５５，６２５号明細書、ＲＥ第３４６０６号明細書、米国特許第５，９５５，３４０号明細書、米国特許第５，７００，６７６号明細書、米国特許第６，３１２，９３６号明細書、米国特許第６，４８２，６２８号明細書、米国特許第８，５３０，２１９号明細書に記載されているプロテアーゼ、並びに、国際公開第２００７／０４４９９３号パンフレット、国際公開第２００９／０５８３０３号パンフレット、国際公開第２００９／０５８６６１号パンフレット、国際公開第２０１４／０７１４１０号パンフレット、国際公開第２０１４／１９４０３２号パンフレット、国際公開第２０１４／１９４０３４号パンフレット、国際公開第２０１４／１９４０５４号パンフレット、及び国際公開第２０１４／１９４１１７号パンフレットに記載されているメタロプロテアーゼが含まれる。
【0101】
典型的な市販のプロテアーゼには、限定はされないが、ＭＡＸＡＴＡＳＥ、ＭＡＸＡＣＡＬ、ＭＡＸＡＰＥＭ、ＯＰＴＩＣＬＥＡＮ（登録商標）、ＯＰＴＩＭＡＳＥ（登録商標）、ＰＲＯＰＥＲＡＳＥ（登録商標）、ＰＵＲＡＦＥＣＴ（登録商標）、ＰＵＲＡＦＥＣＴ（登録商標）ＯＸＰ、ＰＵＲＡＭＡＸ（登録商標）、ＥＸＣＥＬＬＡＳＥ（登録商標）、ＰＲＥＦＥＲＥＮＺ（商標）プロテアーゼ（例えば、Ｐ１００、Ｐ１１０、Ｐ２８０、Ｐ３００）、ＥＦＦＥＣＴＥＮＺ（商標）プロテアーゼ（例えば、Ｐ１０００、Ｐ１０５０、Ｐ２０００）、ＥＸＣＥＬＥＮＺ（商標）プロテアーゼ（例えば、Ｐ１０００）、ＵＬＴＩＭＡＳＥ（登録商標）、及びＰＵＲＡＦＡＳＴ（Ｄａｎｉｓｃｏ ＵＳ）；ＡＬＣＡＬＡＳＥ（登録商標）、ＡＬＣＡＬＡＳＥ（登録商標）ＵＬＴＲＡ、ＢＬＡＺＥ（登録商標）、ＢＬＡＺＥ（登録商標）ＥＶＩＴＹ（登録商標）、ＢＬＡＺＥ（登録商標）ＥＶＩＴＹ（登録商標）１６Ｌ、ＣＯＲＯＮＡＳＥ（登録商標）、ＳＡＶＩＮＡＳＥ（登録商標）、ＳＡＶＩＮＡＳＥ（登録商標）ＵＬＴＲＡ、ＳＡＶＩＮＡＳＥ（登録商標）ＥＶＩＴＹ（登録商標）、ＳＡＶＩＮＡＳＥ（登録商標）ＥＶＥＲＩＳ（登録商標）、ＰＲＩＭＡＳＥ、ＤＵＲＡＺＹＭ、ＰＯＬＡＲＺＹＭＥ（登録商標）、ＯＶＯＺＹＭＥ（登録商標）、ＫＡＮＮＡＳＥ（登録商標）、ＬＩＱＵＡＮＡＳＥ（登録商標）、ＥＶＥＲＩＳ（登録商標）、ＮＥＵＴＲＡＳＥ（登録商標）、ＰＲＯＧＲＥＳＳ ＵＮＯ（登録商標）、ＲＥＬＡＳＥ（登録商標）、及びＥＳＰＥＲＡＳＥ（登録商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ）；ＢＬＡＰ（商標）及びＢＬＡＰ（商標）バリアント（Ｈｅｎｋｅｌ）；ＬＡＶＥＲＧＹ（商標）ＰＲＯ １０４Ｌ（ＢＡＳＦ）、及びＫＡＰ（登録商標）（Ｂ．アルカロフィルス（Ｂ．ａｌｋａｌｏｐｈｉｌｕｓ）サブチシリン）（Ｋａｏ）が含まれる。好適なプロテアーゼには、天然に存在するプロテアーゼ、又は相当に低い温度で機能するように特異的に選択又は遺伝子改変された操作されたバリアントが含まれる。
【0102】
本発明の組成物及び方法の特定の実施形態では、記載されるα－アミラーゼバリアントは、アミノ酸置換Ｘ３９Ｅ、Ｘ９９Ｒ、Ｘ１２６Ａ、Ｘ１２７Ｅ、及びＸ１２８Ｇを有し、且つ、Ｎ７４Ｄ－Ｍ２１１Ｌ－Ｎ２５３Ｐ、Ｒ１７９Ｑ－Ｍ２１１Ｌ－Ｎ２５３Ｐ、Ｎ７４Ｄ－Ｎ２５３Ｐ、Ｎ８５Ｒ－Ｇ１６０Ｑ－Ｒ１７９Ｑ－Ｍ２１１Ｌ－Ｎ２１２Ｓ－Ｎ２５３Ｐ、Ｒ１７９Ｑ－Ｎ２５３Ｐ、Ｇ１６０Ｑ－Ｒ１７９Ｑ－Ｍ２１１Ｌ－Ｎ２１２Ｓ－Ｎ２５３Ｐ、Ｒ１７９Ｑ－Ｍ２１１Ｌ、Ｇ１６０Ｑ－Ｒ１７９Ｑ－Ｍ２１１Ｌ－Ｎ２５３Ｐ、Ｇ１６０Ｑ－Ｒ１７９Ｑ－Ｎ２１２Ｓ－Ｎ２５３Ｐ、Ｎ７４Ｄ－Ｍ２１１Ｌ、Ｍ２１１Ｌ－Ｎ２４２Ｄ、Ｇ１６０Ｑ－Ｒ１７９Ｑ－Ｍ２１１Ｌ－Ｎ２１２Ｓ、Ｎ７４Ｄ－Ｒ１７９Ｑ－Ｍ２１１Ｌ－Ｎ２５３Ｐ、Ｇ１６０Ｑ－Ｒ１７９Ｑ－Ｍ２１１Ｌ、Ｇ１６０Ｑ－Ｒ１７９Ｑ－Ｎ２５３Ｐ、Ｎ７４Ｄ－Ｑ２００Ｌ－Ｍ２１１Ｌ、Ｎ７４Ｄ－Ｇ１６０Ｑ－Ｎ２１２Ｓ－Ｎ２５３Ｐ、Ｎ７４Ｄ－Ｇ１６０Ｑ－Ｍ２１１Ｌ－Ｎ２５３Ｐ、Ｇ１６０Ｑ－Ｒ１７９Ｑ、Ｇ１６０Ｑ－Ｒ１７９Ｑ－Ｎ２１２Ｓ、Ｎ７４Ｄ－Ｇ１６０Ｑ－Ｎ２５３Ｐ、Ｎ７４Ｄ－Ｇ１６０Ｑ－Ｒ１７９Ｑ－Ｍ２１１Ｌ－Ｎ２１２Ｓ－Ｎ２５３Ｐ、Ｎ７４Ｄ－Ｎ０８５Ｒ－Ｇ１６０Ｑ－Ｒ１７９Ｑ－Ｍ２１１Ｌ、Ｎ７４Ｄ－Ｇ１６０Ｑ－Ｍ２１１Ｌ－Ｎ２１２Ｓ－Ｎ２５３Ｐ、Ｎ７４Ｄ－Ｎ０８５Ｒ－Ｎ１１６Ｒ－Ｑ２００Ｌ－Ｑ２５６Ｅ、Ｎ７４Ｄ－Ｇ１６０Ｑ－Ｒ１７９Ｑ－Ｎ２１２Ｓ－Ｎ２５３Ｐ、Ｎ７４Ｄ－Ｇ１６０Ｑ－Ｍ２１１Ｌ－Ｎ２１２Ｓ、Ｎ７４Ｄ－Ｇ１６０Ｑ、Ｎ７４Ｄ－Ｇ１６０Ｑ－Ｒ１７９Ｑ－Ｍ２１１Ｌ－Ｎ２５３Ｐ、Ｎ７４Ｄ－Ｒ１７９Ｑ－Ｍ２１１Ｌ、Ｎ７４Ｄ－Ｇ１６０Ｑ－Ｎ２１２Ｓ、Ｎ７４Ｄ－Ｇ１６０Ｑ－Ｍ２１１Ｌ、Ｎ７４Ｄ－Ｇ１６０Ｑ－Ｒ１７９Ｑ－Ｎ２５３Ｐ、Ｎ７４Ｄ、Ｎ７４Ｄ－Ｇ１６０Ｑ－Ｒ１７９Ｑ－Ｍ２１１Ｌ－Ｎ２１２Ｓ、Ｎ７４Ｄ－Ｎ０８５Ｒ－Ｍ２１１Ｌ－Ｎ２１２Ｓ、Ｎ７４Ｄ－Ｇ１６０Ｑ－Ｒ１７９Ｑ－Ｎ２１２Ｓ、Ｎ７４Ｄ－Ｇ１６０Ｑ－Ｒ１７９Ｑ－Ｍ２１１Ｌ、Ｎ７４Ｄ－Ｍ２１１Ｌ－Ｑ２５６Ｅ、Ｎ７４Ｄ－Ｇ１６０Ｑ－Ｒ１７９Ｑ、Ｒ１７９Ｑ－Ｍ２１１Ｌ－Ｎ２１２Ｓ－Ｎ２５３Ｐ、Ｒ１７９Ｑ－Ｍ２１１Ｌ－Ｎ２１２Ｓ、Ｎ７４Ｄ－Ｎ０８５Ｒ－Ｒ１７９Ｑ－Ｍ２１１Ｌ－Ｎ２１２Ｓ、Ｎ７４Ｄ－Ｍ２１１Ｌ－Ｎ２１２Ｓ、Ｎ７４Ｄ－Ｒ１７９Ｑ－Ｍ２１１Ｌ－Ｎ２１２Ｓ、Ｎ７４Ｄ－Ｍ２１１Ｌ－Ｎ２４２Ｄ、Ｎ７４Ｄ－Ｑ２００Ｌ－Ｍ２１１Ｌ－Ｑ２５６Ｅ、Ｎ７４Ｄ－Ｑ２００Ｌ－Ｍ２１１Ｌ－Ｎ２４２Ｄ－Ｑ２５６Ｅ、Ｎ７４Ｄ－Ｑ２００Ｌ、Ｎ７４Ｄ－Ｍ２１１Ｎ－Ｎ２１２Ｑ、Ｎ７４Ｄ－Ｍ２１１Ｎ－Ｎ２１２Ｑ－Ｑ２５６Ｅ、Ｎ７４Ｄ－Ｍ２１１Ｎ－Ｑ２５６Ｅ、Ｎ７４Ｄ－Ｍ２１１Ｑ、Ｎ７４Ｄ－Ｍ２１１Ｑ－Ｎ２１２Ｑ、Ｎ７４Ｄ－Ｍ２１１Ｑ－Ｎ２１２Ｑ－Ｑ２５６Ｅ、Ｎ７４Ｄ－Ｍ２１１Ｑ－Ｑ２５６Ｅ、Ｎ７４Ｄ－Ｎ１９８Ａ－Ｍ２１１Ｑ、Ｎ７４Ｄ－Ｎ１９８Ａ－Ｍ２１１Ｑ－Ｎ２１２Ｑ、Ｎ７４Ｄ－Ｎ１９８Ａ－Ｍ２１１Ｑ－Ｑ２５６Ｅ、Ｎ７４Ｄ－Ｎ１９８Ｇ－Ｍ２１１Ｑ、Ｎ７４Ｄ－Ｎ１９８Ｇ－Ｍ２１１Ｑ－Ｎ２１２Ｑ、Ｎ７４Ｄ－Ｎ１９８Ｇ－Ｍ２１１Ｑ－Ｑ２５６Ｅ、Ｎ７４Ｄ－Ｎ１９８Ｋ－Ｍ２１１Ｑ－Ｎ２１２Ｑ、Ｎ７４Ｄ－Ｎ１９８Ｌ－Ｍ２１１Ｑ－Ｎ２１２Ｑ、Ｎ７４Ｄ－Ｎ１９８Ｑ－Ｍ２１１Ｑ－Ｎ２１２Ｑ、Ｎ７４Ｄ－Ｎ１９８Ｒ－Ｍ２１１Ｑ－Ｎ２１２Ｑ、Ｎ７４Ｄ－Ｎ１９８Ｔ－Ｍ２１１Ｑ－Ｎ２１２Ｑ、Ｎ７４Ｄ－Ｎ１９８Ｖ－Ｍ２１１Ｑ－Ｎ２１２Ｑ、Ｎ７４Ｄ－Ｎ２１２Ｑ－Ｑ２５６Ｅ、Ｎ７４Ｄ－Ｑ２５６Ｅ、Ｎ７４Ｄ－Ｒ２０７Ｑ、Ｎ７４Ｄ－Ｒ２０７Ｑ－Ｍ２１１Ｎ、Ｎ７４Ｄ－Ｒ２０７Ｑ－Ｍ２１１Ｎ－Ｎ２１２Ｑ、Ｎ７４Ｄ－Ｒ２０７Ｑ－Ｍ２１１Ｎ－Ｎ２１２Ｑ－Ｑ２５６Ｅ、Ｎ７４Ｄ－Ｒ２０７Ｑ－Ｍ２１１Ｎ－Ｑ２５６Ｅ、Ｎ７４Ｄ－Ｒ２０７Ｑ－Ｍ２１１Ｑ、Ｎ７４Ｄ－Ｒ２０７Ｑ－Ｍ２１１Ｑ－Ｎ２１２Ｑ、Ｎ７４Ｄ－Ｒ２０７Ｑ－Ｍ２１１Ｑ－Ｎ２１２Ｑ－Ｑ２５６Ｅ、Ｎ７４Ｄ－Ｒ２０７Ｑ－Ｎ２１２Ｑ、Ｎ７４Ｄ－Ｒ２０７Ｑ－Ｎ２１２Ｑ－Ｑ２５６Ｅ、Ｎ７４Ｄ－Ｒ２０７Ｑ－Ｑ２５６Ｅ、Ｎ７４Ｄ－Ｎ１９８Ｓ－Ｍ２１１Ｑ、及びＮ７４Ｄ－Ｎ１９８Ｌ－Ｍ２１１Ｑからなる群から選択される１つ以上の追加の置換をさらに有する、バチルス・ギブソニー（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｇｉｂｓｏｎｉｉ）由来のサブチリシンプロテアーゼバリアント（ＢＧ４６と称される）と組み合わせて使用される。ここで、アミノ酸位置は、配列番号５のアミノ酸配列との対応によって番号付けされ、ここで、このバリアントは、配列番号６のアミノ酸配列との少なくとも９０％の同一性を有する。これらのアミノ酸配列を、以下に示す。
【0103】
ＢＧ４６プロテアーゼのアミノ酸配列（配列番号６）：
【化6】
【0104】
置換Ｓ３９Ｅ、Ｓ９９Ｒ、Ｓ１２６Ａ、Ｄ１２７Ｅ、及びＦ１２８Ｇを有するＢＧ４６のアミノ酸配列（配列番号７）：
【化7】
【0105】
リパーゼ：
好適なリパーゼには、細菌又は真菌起源のリパーゼが含まれる。化学修飾された、タンパク質分解的に修飾された、又はタンパク質改変された変異体が含まれる。有用なリパーゼの例としては、限定はされないが、フミコラ属（Ｈｕｍｉｃｏｌａ）（異名：サーモマイセス属（Ｔｈｅｒｍｏｍｙｃｅｓ））由来の、例えば、Ｈ．ラヌギノサ（Ｈ．ｌａｎｕｇｉｎｏｓａ）（Ｔ．ラヌギノーサス（Ｔ．ｌａｎｕｇｉｎｏｓｕｓ））（例えば、欧州特許第２５８０６８号明細書及び欧州特許第３０５２１６号明細書を参照されたい）由来の、Ｈ．インソレンス（Ｈ．ｉｎｓｏｌｅｎｓ）（例えば、国際公開第９６／１３５８０号パンフレットを参照されたい）由来のリパーゼ；シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）リパーゼ（例えば、Ｐ．アルカリゲネス（Ｐ．ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）又はＰ．シュードアルカリゲネス（Ｐ．ｐｓｅｕｄｏａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）（例えば、欧州特許第２１８２７２号明細書を参照されたい）、Ｐ．セパシア（Ｐ．ｃｅｐａｃｉａ）（例えば、欧州特許第３３１３７６号明細書を参照されたい）、Ｐ．スタッツェリ（Ｐ．ｓｔｕｔｚｅｒｉ）（例えば、英国特許第１，３７２，０３４号明細書を参照されたい）、Ｐ．フルオレセンス（Ｐ．ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）の種、ＳＤ７０５株（例えば、国際公開第９５／０６７２０号パンフレット及び国際公開第９６／２７００２号パンフレットを参照されたい）、Ｐ．ウィスコンシネンシス（Ｐ．ｗｉｓｃｏｎｓｉｎｅｎｓｉｓ）（例えば、国際公開第９６／１２０１２号パンフレットを参照されたい）由来）；バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）リパーゼ（例えば、Ｂ．スブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）（例えば、Ｄａｒｔｏｉｓ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ １１３１：２５３－３６０を参照されたい）、Ｂ．ステアロサーモフィルス（Ｂ．ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）（例えば、ＪＰ６４／７４４９９２号公報）又はＢ．プミルス（Ｂ．ｐｕｍｉｌｕｓ）（例えば、国際公開第９１／１６４２２号パンフレットを参照されたい）由来）が挙げられる。この配合物中での使用が企図される追加のリパーゼバリアントには、例えば：国際公開第９２／０５２４９号パンフレット、国際公開第９４／０１５４１号パンフレット、国際公開第９５／３５３８１号パンフレット、国際公開第９６／００２９２号パンフレット、国際公開第９５／３０７４４号パンフレット、国際公開第９４／２５５７８号パンフレット、国際公開第９５／１４７８３号パンフレット、国際公開第９５／２２６１５号パンフレット、国際公開第９７／０４０７９号パンフレット、国際公開第９７／０７２０２号パンフレット、欧州特許第４０７２２５号明細書、及び欧州特許第２６０１０５号明細書に記載されているものが含まれる。
好適なリパーゼには、細菌又は真菌起源のリパーゼが含まれる。化学修飾された、タンパク質分解的に修飾された、又はタンパク質改変された変異体が含まれる。有用なリパーゼの例としては、限定はされないが、フミコラ属（Ｈｕｍｉｃｏｌａ）（異名：サーモマイセス属（Ｔｈｅｒｍｏｍｙｃｅｓ））由来の、例えば、Ｈ．ラヌギノサ（Ｈ．ｌａｎｕｇｉｎｏｓａ）（Ｔ．ラヌギノーサス（Ｔ．ｌａｎｕｇｉｎｏｓｕｓ））（例えば、欧州特許第２５８０６８号明細書及び欧州特許第３０５２１６号明細書を参照されたい）由来の、Ｈ．インソレンス（Ｈ．ｉｎｓｏｌｅｎｓ）（例えば、国際公開第９６／１３５８０号パンフレットを参照されたい）由来のリパーゼ；シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）リパーゼ（例えば、Ｐ．アルカリゲネス（Ｐ．ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）又はＰ．シュードアルカリゲネス（Ｐ．ｐｓｅｕｄｏａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）（例えば、欧州特許第２１８２７２号明細書を参照されたい）、Ｐ．セパシア（Ｐ．ｃｅｐａｃｉａ）（例えば、欧州特許第３３１３７６号明細書を参照されたい）、Ｐ．スタッツェリ（Ｐ．ｓｔｕｔｚｅｒｉ）（例えば、英国特許第１，３７２，０３４号明細書を参照されたい）、Ｐ．フルオレセンス（Ｐ．ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）の種、ＳＤ７０５株（例えば、国際公開第９５／０６７２０号パンフレット及び国際公開第９６／２７００２号パンフレットを参照されたい）、Ｐ．ウィスコンシネンシス（Ｐ．ｗｉｓｃｏｎｓｉｎｅｎｓｉｓ）（例えば、国際公開第９６／１２０１２号パンフレットを参照されたい）由来）；バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）リパーゼ（例えば、Ｂ．スブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）（例えば、Ｄａｒｔｏｉｓ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ １１３１：２５３－３６０を参照されたい）、Ｂ．ステアロサーモフィルス（Ｂ．ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）（例えば、ＪＰ６４／７４４９９２号公報）又はＢ．プミルス（Ｂ．ｐｕｍｉｌｕｓ）（例えば、国際公開第９１／１６４２２号パンフレットを参照されたい）由来）が挙げられる。この配合物中での使用が企図される追加のリパーゼバリアントには、例えば：国際公開第９２／０５２４９号パンフレット、国際公開第９４／０１５４１号パンフレット、国際公開第９５／３５３８１号パンフレット、国際公開第９６／００２９２号パンフレット、国際公開第９５／３０７４４号パンフレット、国際公開第９４／２５５７８号パンフレット、国際公開第９５／１４７８３号パンフレット、国際公開第９５／２２６１５号パンフレット、国際公開第９７／０４０７９号パンフレット、国際公開第９７／０７２０２号パンフレット、欧州特許第４０７２２５号明細書、及び欧州特許第２６０１０５号明細書に記載されているものが含まれる。
【0106】
代表的な市販のリパーゼとしては、限定はされないが、Ｍ１リパーゼ、ＬＵＭＡ ＦＡＳＴ及びＬＩＰＯＭＡＸ（Ｇｅｎｅｎｃｏｒ）；ＬＩＰＥＸ（登録商標）、ＬＩＰＯＣＬＥＡＮ（登録商標）、ＬＩＰＯＬＡＳＥ（登録商標）及びＬＩＰＯＬＡＳＥ（登録商標）ＵＬＴＲＡ（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ）；並びにリパーゼＰ（Ａｍａｎｏ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏ．Ｌｔｄ）が挙げられる。
【0107】
ポリエステラーゼ：
本組成物に、例えば国際公開第０１／３４８９９号パンフレット、同第０１／１４６２９号パンフレット、及び米国特許第６，９３３，１４０号明細書に記載されているものなどの、好適なポリエステラーゼを含めることができる。
本組成物に、例えば国際公開第０１／３４８９９号パンフレット、同第０１／１４６２９号パンフレット、及び米国特許第６，９３３，１４０号明細書に記載されているものなどの、好適なポリエステラーゼを含めることができる。
【0108】
アミラーゼ：
本組成物は、他のα－アミラーゼを含めた、他のアミラーゼと組み合わせることができる。こうした組み合わせは、異なるα－アミラーゼが、異なる性能特性を示し、異なる複数のα－アミラーゼの組み合わせが、異なるα－アミラーゼの利点を提供する組成物をもたらす場合に、特に望ましい。他のα－アミラーゼとしては、市販品として入手できるα－アミラーゼ、例えば、ＳＴＡＩＮＺＹＭＥ（登録商標）、ＮＡＴＡＬＡＳＥ（登録商標）、ＤＵＲＡＭＹＬ（登録商標）、ＴＥＲＭＡＭＹＬ（登録商標）、ＦＵＮＧＡＭＹＬ（登録商標）、及びＢＡＮ（商標）（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ Ａ／Ｓ及びＮｏｖｏｚｙｍｅｓ Ａ／Ｓ）；ＲＡＰＩＤＡＳＥ（登録商標）、ＰＯＷＥＲＡＳＥ（登録商標）、ＰＵＲＡＳＴＡＲ（登録商標）、及びＰＲＥＦＥＲＥＮＺ（商標）（ＤｕＰｏｎｔ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ．）などが挙げられる。例示的なα－アミラーゼは、国際公開第９４／１８３１４Ａ１号パンフレット、国際公開第２００８／０２９３６０７号パンフレット、国際公開第２０１３／０６３４６０号パンフレット、国際公開第１０／１１５０２８号パンフレット、国際公開第２００９／０６１３８０Ａ２号パンフレット、国際公開第２０１４／０９９５２３号パンフレット、国際公開第２０１５／０７７１２６Ａ１号パンフレット、国際公開第２０１３／１８４５７７号パンフレット、国際公開第２０１４／１６４７７７号パンフレット、国際公開第９５／１０６０３号パンフレット、国際公開第９５／２６３９７号パンフレット、国際公開第９６／２３８７４号パンフレット、国際公開第９６／２３８７３号パンフレット、国際公開第９７／４１２１３号パンフレット、国際公開第９９／１９４６７号パンフレット、国際公開第００／６００６０号パンフレット、国際公開第００／２９５６０号パンフレット、国際公開第９９／２３２１１号パンフレット、国際公開第９９／４６３９９号パンフレット、国際公開第００／６００５８号パンフレット、国際公開第００／６００５９号パンフレット、国際公開第９９／４２５６７号パンフレット、国際公開第０１／１４５３２号パンフレット、国際公開第０２／０９２７９７号パンフレット、国際公開第０１／６６７１２号パンフレット、国際公開第０１／８８１０７号パンフレット、国際公開第０１／９６５３７号パンフレット、国際公開第０２／１０３５５号パンフレット、国際公開第２００６／００２６４３号パンフレット、国際公開第２００４／０５５１７８号パンフレット、及び国際公開第９８／１３４８１号パンフレットに記載されている。
本組成物は、他のα－アミラーゼを含めた、他のアミラーゼと組み合わせることができる。こうした組み合わせは、異なるα－アミラーゼが、異なる性能特性を示し、異なる複数のα－アミラーゼの組み合わせが、異なるα－アミラーゼの利点を提供する組成物をもたらす場合に、特に望ましい。他のα－アミラーゼとしては、市販品として入手できるα－アミラーゼ、例えば、ＳＴＡＩＮＺＹＭＥ（登録商標）、ＮＡＴＡＬＡＳＥ（登録商標）、ＤＵＲＡＭＹＬ（登録商標）、ＴＥＲＭＡＭＹＬ（登録商標）、ＦＵＮＧＡＭＹＬ（登録商標）、及びＢＡＮ（商標）（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ Ａ／Ｓ及びＮｏｖｏｚｙｍｅｓ Ａ／Ｓ）；ＲＡＰＩＤＡＳＥ（登録商標）、ＰＯＷＥＲＡＳＥ（登録商標）、ＰＵＲＡＳＴＡＲ（登録商標）、及びＰＲＥＦＥＲＥＮＺ（商標）（ＤｕＰｏｎｔ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ．）などが挙げられる。例示的なα－アミラーゼは、国際公開第９４／１８３１４Ａ１号パンフレット、国際公開第２００８／０２９３６０７号パンフレット、国際公開第２０１３／０６３４６０号パンフレット、国際公開第１０／１１５０２８号パンフレット、国際公開第２００９／０６１３８０Ａ２号パンフレット、国際公開第２０１４／０９９５２３号パンフレット、国際公開第２０１５／０７７１２６Ａ１号パンフレット、国際公開第２０１３／１８４５７７号パンフレット、国際公開第２０１４／１６４７７７号パンフレット、国際公開第９５／１０６０３号パンフレット、国際公開第９５／２６３９７号パンフレット、国際公開第９６／２３８７４号パンフレット、国際公開第９６／２３８７３号パンフレット、国際公開第９７／４１２１３号パンフレット、国際公開第９９／１９４６７号パンフレット、国際公開第００／６００６０号パンフレット、国際公開第００／２９５６０号パンフレット、国際公開第９９／２３２１１号パンフレット、国際公開第９９／４６３９９号パンフレット、国際公開第００／６００５８号パンフレット、国際公開第００／６００５９号パンフレット、国際公開第９９／４２５６７号パンフレット、国際公開第０１／１４５３２号パンフレット、国際公開第０２／０９２７９７号パンフレット、国際公開第０１／６６７１２号パンフレット、国際公開第０１／８８１０７号パンフレット、国際公開第０１／９６５３７号パンフレット、国際公開第０２／１０３５５号パンフレット、国際公開第２００６／００２６４３号パンフレット、国際公開第２００４／０５５１７８号パンフレット、及び国際公開第９８／１３４８１号パンフレットに記載されている。
【0109】
セルラーゼ：
セルラーゼを、本組成物に添加することができる。好適なセルラーゼには、細菌又は真菌起源のセルラーゼが含まれる。化学修飾された又はタンパク質改変された変異体が含まれる。好適なセルラーゼとしては、例えば、米国特許第４，４３５，３０７号；第５，６４８，２６３号；第５，６９１，１７８号；第５，７７６，７５７号明細書；及び国際公開第８９／０９２５９号パンフレットに開示されている、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、フミコラ属（Ｈｕｍｉｃｏｌａ）、フザリウム属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）、チエラビア属（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ）、アクレモニウム属（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ）由来のセルラーゼ、例えば、フミコラ・インソレンス（Ｈｕｍｉｃｏｌａ ｉｎｓｏｌｅｎｓ）、ミセリオフトラ・サーモフィラ（Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌａ）、及びフザリウム・オキシスポラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）由来の真菌セルラーゼが挙げられる。使用が企図される代表的なセルラーゼは、布地にとっての色保護利益を有するセルラーゼである。こうしたセルラーゼの例は、例えば、欧州特許第０４９５２５７号明細書、欧州特許第０５３１３７２号明細書、国際公開第９６／１１２６２号パンフレット、国際公開第９６／２９３９７号パンフレット、及び国際公開第９８／０８９４０号パンフレットに記載されているセルラーゼである。他の例は、例えば国際公開第９４／０７９９８号パンフレット；国際公開第９８／１２３０７号パンフレット；国際公開第９５／２４４７１号パンフレット；ＰＣＴ／ＤＫ９８／００２９９号明細書；欧州特許第５３１３１５号明細書；米国特許第５，４５７，０４６号；第５，６８６，５９３号；及び第５，７６３，２５４号明細書に記載されたものなどの、セルラーゼバリアントである。代表的なセルラーゼとしては、国際公開第２００５０５４４７５号パンフレット、国際公開第２００５０５６７８７号パンフレット、米国特許第７，４４９，３１８号明細書、米国特許第７，８３３，７７３号明細書、米国特許第４，４３５，３０７号明細書；欧州特許第０４９５２５７号明細書；及び米国仮特許出願第６２／２９６，６７８号及び第６２／４３５３４０号明細書に記載されたセルラーゼが挙げられる。代表的な市販のセルラーゼとしては、限定はされないが、ＣＥＬＬＵＣＬＥＡＮ（登録商標）、ＣＥＬＬＵＺＹＭＥ（登録商標）、ＣＡＲＥＺＹＭＥ（登録商標）、ＣＡＲＥＺＹＭＥ（登録商標）ＰＲＥＭＩＵＭ、ＥＮＤＯＬＡＳＥ（登録商標）、及びＲＥＮＯＺＹＭＥ（登録商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ）、ＲＥＶＩＴＡＬＥＮＺ（登録商標）１００、ＲＥＶＩＴＡＬＥＮＺ（登録商標）２００／２２０、及びＲＥＶＩＴＡＬＥＮＺ（登録商標）２０００（Ｄａｎｉｓｃｏ ＵＳ）；並びにＫＡＣ－５００（Ｂ）（Ｋａｏ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）が挙げられる。
セルラーゼを、本組成物に添加することができる。好適なセルラーゼには、細菌又は真菌起源のセルラーゼが含まれる。化学修飾された又はタンパク質改変された変異体が含まれる。好適なセルラーゼとしては、例えば、米国特許第４，４３５，３０７号；第５，６４８，２６３号；第５，６９１，１７８号；第５，７７６，７５７号明細書；及び国際公開第８９／０９２５９号パンフレットに開示されている、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、フミコラ属（Ｈｕｍｉｃｏｌａ）、フザリウム属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）、チエラビア属（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ）、アクレモニウム属（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ）由来のセルラーゼ、例えば、フミコラ・インソレンス（Ｈｕｍｉｃｏｌａ ｉｎｓｏｌｅｎｓ）、ミセリオフトラ・サーモフィラ（Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌａ）、及びフザリウム・オキシスポラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）由来の真菌セルラーゼが挙げられる。使用が企図される代表的なセルラーゼは、布地にとっての色保護利益を有するセルラーゼである。こうしたセルラーゼの例は、例えば、欧州特許第０４９５２５７号明細書、欧州特許第０５３１３７２号明細書、国際公開第９６／１１２６２号パンフレット、国際公開第９６／２９３９７号パンフレット、及び国際公開第９８／０８９４０号パンフレットに記載されているセルラーゼである。他の例は、例えば国際公開第９４／０７９９８号パンフレット；国際公開第９８／１２３０７号パンフレット；国際公開第９５／２４４７１号パンフレット；ＰＣＴ／ＤＫ９８／００２９９号明細書；欧州特許第５３１３１５号明細書；米国特許第５，４５７，０４６号；第５，６８６，５９３号；及び第５，７６３，２５４号明細書に記載されたものなどの、セルラーゼバリアントである。代表的なセルラーゼとしては、国際公開第２００５０５４４７５号パンフレット、国際公開第２００５０５６７８７号パンフレット、米国特許第７，４４９，３１８号明細書、米国特許第７，８３３，７７３号明細書、米国特許第４，４３５，３０７号明細書；欧州特許第０４９５２５７号明細書；及び米国仮特許出願第６２／２９６，６７８号及び第６２／４３５３４０号明細書に記載されたセルラーゼが挙げられる。代表的な市販のセルラーゼとしては、限定はされないが、ＣＥＬＬＵＣＬＥＡＮ（登録商標）、ＣＥＬＬＵＺＹＭＥ（登録商標）、ＣＡＲＥＺＹＭＥ（登録商標）、ＣＡＲＥＺＹＭＥ（登録商標）ＰＲＥＭＩＵＭ、ＥＮＤＯＬＡＳＥ（登録商標）、及びＲＥＮＯＺＹＭＥ（登録商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ）、ＲＥＶＩＴＡＬＥＮＺ（登録商標）１００、ＲＥＶＩＴＡＬＥＮＺ（登録商標）２００／２２０、及びＲＥＶＩＴＡＬＥＮＺ（登録商標）２０００（Ｄａｎｉｓｃｏ ＵＳ）；並びにＫＡＣ－５００（Ｂ）（Ｋａｏ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）が挙げられる。
【0110】
マンナナーゼ：
典型的なマンナナーゼとしては、限定はされないが、例えば、国際公開第２０１６００７９２９号パンフレット；米国特許第６５６６１１４号、第６６０２８４２号、及び第６４４０９９１号明細書；並びに国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０６０８５０号明細書及び国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０６０８４４号明細書に記載されているようなものなどの、細菌又は真菌起源のものが挙げられる。典型的なマンナナーゼとしては、限定はされないが、例えば、国際公開第２０１６００７９２９号パンフレット；米国特許第６５６６１１４号、第６６０２８４２号、及び第６４４０９９１号明細書；並びに国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０６０８５０号明細書及び国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０６０８４４号明細書に記載されているようなものなどの、細菌又は真菌起源のものが挙げられる。
典型的なマンナナーゼとしては、限定はされないが、例えば、国際公開第２０１６００７９２９号パンフレット；米国特許第６５６６１１４号、第６６０２８４２号、及び第６４４０９９１号明細書；並びに国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０６０８５０号明細書及び国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０６０８４４号明細書に記載されているようなものなどの、細菌又は真菌起源のものが挙げられる。典型的なマンナナーゼとしては、限定はされないが、例えば、国際公開第２０１６００７９２９号パンフレット；米国特許第６５６６１１４号、第６６０２８４２号、及び第６４４０９９１号明細書；並びに国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０６０８５０号明細書及び国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０６０８４４号明細書に記載されているようなものなどの、細菌又は真菌起源のものが挙げられる。
【0111】
ペルオキシダーゼ／オキシダーゼ：
本組成物中での使用が企図される好適なペルオキシダーゼ／オキシダーゼには、植物、細菌、又は真菌起源のものが含まれる。化学修飾された又はタンパク質改変された変異体が含まれる。有用なペルオキシダーゼの例としては、国際公開第９３／２４６１８号パンフレット、国際公開第９５／１０６０２号パンフレット、及び国際公開第９８／１５２５７号パンフレットに記載されたもののような、コプリヌス属（Ｃｏｐｒｉｎｕｓ）由来、例えばＣ．シネレウス（Ｃ．ｃｉｎｅｒｅｕｓ）由来のペルオキシダーゼ、及びそのバリアントが挙げられる。商業的に入手できるペルオキシダーゼには、例えば、ＧＵＡＲＤＺＹＭＥ（商標）（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ Ａ／Ｓ及びＮｏｖｏｚｙｍｅｓ Ａ／Ｓ）が含まれる。
本組成物中での使用が企図される好適なペルオキシダーゼ／オキシダーゼには、植物、細菌、又は真菌起源のものが含まれる。化学修飾された又はタンパク質改変された変異体が含まれる。有用なペルオキシダーゼの例としては、国際公開第９３／２４６１８号パンフレット、国際公開第９５／１０６０２号パンフレット、及び国際公開第９８／１５２５７号パンフレットに記載されたもののような、コプリヌス属（Ｃｏｐｒｉｎｕｓ）由来、例えばＣ．シネレウス（Ｃ．ｃｉｎｅｒｅｕｓ）由来のペルオキシダーゼ、及びそのバリアントが挙げられる。商業的に入手できるペルオキシダーゼには、例えば、ＧＵＡＲＤＺＹＭＥ（商標）（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ Ａ／Ｓ及びＮｏｖｏｚｙｍｅｓ Ａ／Ｓ）が含まれる。
【0112】
洗剤組成物はまた、家庭用及び／又は工業用布地／洗濯物上に存在するバイオフィルムを除去／洗浄するために有効である、２，６－β－Ｄ－フルクタンヒドロラーゼも含むことができる。
【0113】
洗剤用酵素は、１種以上の酵素を含有する別々の添加物を添加することによって、又はこれらの酵素のすべてを含む組み合わせられた添加物を添加することによって、洗剤組成物中に含めることができる。洗剤添加物、すなわち別々の添加物又は組み合わせられた添加物は、例えば、顆粒、液体、スラリーなどとして調製することができる。代表的な洗剤添加物調製物としては、限定はされないが、顆粒、特に非発塵性の顆粒、液体、特に安定化された液体又はスラリーが挙げられる。
【0114】
ペルヒドロラーゼ：
ペルヒドロラーゼとしては、例えば、国際公開第２００５／０５６７８２号パンフレット、国際公開第２００７／１０６２９３号パンフレット、国際公開第２００８／０６３４００号パンフレット、国際公開第２００８／１０６２１４号パンフレット、及び国際公開第２００８／１０６２１５号パンフレットに記載されているものが挙げられる。
ペルヒドロラーゼとしては、例えば、国際公開第２００５／０５６７８２号パンフレット、国際公開第２００７／１０６２９３号パンフレット、国際公開第２００８／０６３４００号パンフレット、国際公開第２００８／１０６２１４号パンフレット、及び国際公開第２００８／１０６２１５号パンフレットに記載されているものが挙げられる。
【0115】
ヌクレアーゼ：
好適なヌクレアーゼとしては、限定はされないが、国際公開第２０１５／１８１２８７号パンフレット、国際公開第２０１５／１５５３５０号パンフレット、国際公開第２０１６／１６２５５６号パンフレット、国際公開第２０１７／１６２８３６号パンフレット、国際公開第２０１７／０６０４７５号パンフレット（例えば配列番号２１）、国際公開第２０１８／１８４８１６号パンフレット、国際公開第２０１８／１７７９３６号パンフレット、国際公開第２０１８／１７７９３８号パンフレット、国際公開第２０１８／１８５２６９号パンフレット、国際公開第２０１８／１８５２８５号パンフレット、国際公開第２０１８／１７７２０３号パンフレット、国際公開第２０１８／１８４８１７号パンフレット、国際公開第２０１９／０８４３４９号パンフレット、国際公開第２０１９／０８４３５０号パンフレット、国際公開第２０１９／０８１７２１号パンフレット、国際公開第２０１８／０７６８００号パンフレット、国際公開第２０１８／１８５２６７号パンフレット、国際公開第２０１８／１８５２８０号パンフレット、及び国際公開第２０１８／２０６５５３号パンフレットに記載されているものが挙げられる。
好適なヌクレアーゼとしては、限定はされないが、国際公開第２０１５／１８１２８７号パンフレット、国際公開第２０１５／１５５３５０号パンフレット、国際公開第２０１６／１６２５５６号パンフレット、国際公開第２０１７／１６２８３６号パンフレット、国際公開第２０１７／０６０４７５号パンフレット（例えば配列番号２１）、国際公開第２０１８／１８４８１６号パンフレット、国際公開第２０１８／１７７９３６号パンフレット、国際公開第２０１８／１７７９３８号パンフレット、国際公開第２０１８／１８５２６９号パンフレット、国際公開第２０１８／１８５２８５号パンフレット、国際公開第２０１８／１７７２０３号パンフレット、国際公開第２０１８／１８４８１７号パンフレット、国際公開第２０１９／０８４３４９号パンフレット、国際公開第２０１９／０８４３５０号パンフレット、国際公開第２０１９／０８１７２１号パンフレット、国際公開第２０１８／０７６８００号パンフレット、国際公開第２０１８／１８５２６７号パンフレット、国際公開第２０１８／１８５２８０号パンフレット、及び国際公開第２０１８／２０６５５３号パンフレットに記載されているものが挙げられる。
【0116】
本発明のα－アミラーゼバリアントと組み合わせて使用することができる他のヌクレアーゼとしては、Ｎｉｊｌａｎｄ，Ｒ．ｅｔ ａｌ．（２０１０）ＰＬｏＳ ＯＮＥ ５－ｅ１５６６８及びＷｈｉｔｃｈｕｒｃｈ、Ｃ．Ｂ． ｅｔａｌ．（２００２）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２９５：１４８７に記載されたものが挙げられる。
【0117】
４．６．洗浄組成物の形態
本洗剤組成物は、あらゆる好都合な形態、例えば、バー、錠剤、粉末、顆粒、ペースト、又は液体であり得る。液体洗剤は、典型的には約７０％までの水と０％～約３０％の有機溶媒を含有する、水性のものであり得る。約３０％以下の水を含有するコンパクトな洗剤ジェルも企図される。本発明のα－アミラーゼバリアントは、公知の形態及び配合の洗剤組成物と適合性があり、特定の形態及び配合は、本明細書に記載されている。
本洗剤組成物は、あらゆる好都合な形態、例えば、バー、錠剤、粉末、顆粒、ペースト、又は液体であり得る。液体洗剤は、典型的には約７０％までの水と０％～約３０％の有機溶媒を含有する、水性のものであり得る。約３０％以下の水を含有するコンパクトな洗剤ジェルも企図される。本発明のα－アミラーゼバリアントは、公知の形態及び配合の洗剤組成物と適合性があり、特定の形態及び配合は、本明細書に記載されている。
【0118】
本明細書のα－アミラーゼを添加することができる（又は一部の場合にはその構成成分であると特定される）多くの例示的な洗剤配合物は、国際公開第２０１３０６３４６０号パンフレットに記載されている。これらには、ＰＵＲＥＸ（登録商標）ＵｌｔｒａＰａｃｋｓ（Ｈｅｎｋｅｌ）、ＦＩＮＩＳＨ（登録商標）Ｑｕａｎｔｕｍ（Ｒｅｃｋｉｔｔ Ｂｅｎｃｋｉｓｅｒ）、ＣＬＯＲＯＸ（商標）２ Ｐａｃｋｓ（Ｃｌｏｒｏｘ）、ＯｘｉＣｌｅａｎ Ｍａｘ Ｆｏｒｃｅ Ｐｏｗｅｒ Ｐａｋｓ（Ｃｈｕｒｃｈ＆Ｄｗｉｇｈｔ）、ＴＩＤＥ（登録商標）Ｓｔａｉｎ Ｒｅｌｅａｓｅ、ＴＩＤＥ（登録商標）Ｐｏｄｓ、ＣＡＳＣＡＤＥ（登録商標）Ａｃｔｉｏｎ Ｐａｃｓ、ＣＡＳＣＡＤＥ（登録商標）Ｐｌａｔｉｍｕｎ、及びＣＡＳＣＡＤＥ（登録商標）及びＰｕｒｅ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ（Ｐｒｏｃｔｅｒ ＆ Ｇａｍｂｌｅ）などの、市販品として入手できる単位用量洗剤配合物／包装が含まれる。単位用量配合物及び包装は、例えば、米国特許出願公開２００９０２０９４４５Ａ１号明細書、米国特許出願公開２０１０００８１５９８Ａ１号明細書、米国特許第７００１８７８Ｂ２号明細書、欧州特許第１５０４９９４Ｂ１号明細書、国際公開第２００１０８５８８８Ａ２号パンフレット、国際公開第２００３０８９５６２Ａ１号パンフレット、国際公開第２００９０９８６５９Ａ１号パンフレット、国際公開第２００９０９８６６０Ａ１号パンフレット、国際公開第２００９１１２９９２Ａ１号パンフレット、国際公開第２００９１２４１６０Ａ１号パンフレット、国際公開第２００９１５２０３１Ａ１号パンフレット、国際公開第２０１００５９４８３Ａ１号パンフレット、国際公開第２０１００８８１１２Ａ１号パンフレット、国際公開第２０１００９０９１５Ａ１号パンフレット、国際公開第２０１０１３５２３８Ａ１号パンフレット、国際公開第２０１１０９４６８７Ａ１号パンフレット、国際公開第２０１１０９４６９０Ａ１号パンフレット、国際公開第２０１１１２７１０２Ａ１号パンフレット、国際公開第２０１１１６３４２８Ａ１号パンフレット、国際公開第２００８０００５６７Ａ１号パンフレット、国際公開第２００６０４５３９１Ａ１号パンフレット、国際公開第２００６００７９１１Ａ１号パンフレット、国際公開第２０１２０２７４０４Ａ１号パンフレット、ＥＰ１７４０６９０Ｂ１号パンフレット、国際公開第２０１２０５９３３６Ａ１号パンフレット、ＵＳ６７３０６４６Ｂ１号パンフレット、国際公開第２００８０８７４２６Ａ１号パンフレット、国際公開第２０１０１１６１３９Ａ１号パンフレット、及び国際公開第２０１２１０４６１３Ａ１号パンフレットに記載されている。
【0119】
５．α－アミラーゼバリアントを使用する炭水化物プロセシング
本α－アミラーゼバリアントは、様々な産業用炭水化物プロセシング用途に有用であり得る。例えば、α－アミラーゼバリアントは、デンプン変換プロセスにおいて、特に液化を受けているデンプンの糖化プロセスにおいて有用であり得る。所望の最終生成物は、デンプン基質の酵素的変換によって生成することができるあらゆる製品であり得る。例えば、所望の生成物は、他のプロセス、例えばＨＦＣＳの調製などにおいて使用できる、又はたくさんの有用な製品、例えばアスコルビン酸中間物（例えば、グルコン酸塩；２－ケト－Ｌ－グロン酸；５－ケト－グルコン酸；及び２，５－ジケトグルコン酸塩）；１，３－プロパンジオール；芳香族アミノ酸（例えば、チロシン、フェニルアラニン、及びトリプトファン）；有機酸（例えば、乳酸塩、ピルビン酸塩、コハク酸塩、イソクエン酸塩、及びオキサロ酢酸塩）；アミノ酸（例えば、セリン及びグリシン）；抗生物質；抗菌剤；酵素；ビタミン剤；及びホルモン剤などに変換させることができる、グルコース及びマルトースが豊富なシロップであり得る。
本α－アミラーゼバリアントは、様々な産業用炭水化物プロセシング用途に有用であり得る。例えば、α－アミラーゼバリアントは、デンプン変換プロセスにおいて、特に液化を受けているデンプンの糖化プロセスにおいて有用であり得る。所望の最終生成物は、デンプン基質の酵素的変換によって生成することができるあらゆる製品であり得る。例えば、所望の生成物は、他のプロセス、例えばＨＦＣＳの調製などにおいて使用できる、又はたくさんの有用な製品、例えばアスコルビン酸中間物（例えば、グルコン酸塩；２－ケト－Ｌ－グロン酸；５－ケト－グルコン酸；及び２，５－ジケトグルコン酸塩）；１，３－プロパンジオール；芳香族アミノ酸（例えば、チロシン、フェニルアラニン、及びトリプトファン）；有機酸（例えば、乳酸塩、ピルビン酸塩、コハク酸塩、イソクエン酸塩、及びオキサロ酢酸塩）；アミノ酸（例えば、セリン及びグリシン）；抗生物質；抗菌剤；酵素；ビタミン剤；及びホルモン剤などに変換させることができる、グルコース及びマルトースが豊富なシロップであり得る。
【0120】
デンプン変換プロセスは、燃料用アルコール又は飲料用アルコール（すなわち飲用アルコール）を製造するために設計された発酵プロセスの前に又はそれと同時に行うことができる。当業者であれば、これらの最終生成物の製造において使用することができる様々な発酵条件を認識している。α－アミラーゼバリアントは、食品調製物の組成物及び方法においても有用である。α－アミラーゼバリアントのこれらの様々な使用を、以下で、より詳細に説明する。
【0121】
５．１．デンプン基質の調製
本明細書に開示されるプロセスで使用するためのデンプン基質を調製するための方法は、周知である。有用なデンプン基質は、塊茎、根、茎、マメ科植物、穀類、又は全粒から得ることができる。より具体的には、粒状デンプンは、トウモロコシ、トウモロコシ穂軸、コムギ、オオムギ、ライムギ、ライコムギ、ミロ、サゴ、キビ、キャッサバ、タピオカ、ソルガム、コメ、エンドウマメ、マメ、バナナ、又はジャガイモから得ることができる。特に企図されるデンプン基質は、コーンスターチ及びコムギデンプンである。穀物からのデンプンは、粉砕されているか又は全粒であり得、核種、フスマ、及び／又は穂軸などのトウモロコシ固体が含まれる。デンプンはまた、高度に精製された生デンプン又はデンプン精製プロセスからの供給原料であり得る。
本明細書に開示されるプロセスで使用するためのデンプン基質を調製するための方法は、周知である。有用なデンプン基質は、塊茎、根、茎、マメ科植物、穀類、又は全粒から得ることができる。より具体的には、粒状デンプンは、トウモロコシ、トウモロコシ穂軸、コムギ、オオムギ、ライムギ、ライコムギ、ミロ、サゴ、キビ、キャッサバ、タピオカ、ソルガム、コメ、エンドウマメ、マメ、バナナ、又はジャガイモから得ることができる。特に企図されるデンプン基質は、コーンスターチ及びコムギデンプンである。穀物からのデンプンは、粉砕されているか又は全粒であり得、核種、フスマ、及び／又は穂軸などのトウモロコシ固体が含まれる。デンプンはまた、高度に精製された生デンプン又はデンプン精製プロセスからの供給原料であり得る。
【0122】
５．２．デンプンのゼラチン化及び液化
ゼラチン化は一般に、デンプン基質をα－アミラーゼと接触させるのと同時に又はその前に実施されるが、追加の液化誘導酵素を任意選択的に加えてもよい。いくつかの実施形態では、上に記載した通りに調製したデンプン基質は、水を用いてスラリー化される。α－アミラーゼの安定性及び活性を最適化するために、典型的にはスラリーのｐＨはｐＨ約４．５～６．５に調整され、使用されるα－アミラーゼバリアントの特性に応じて、約１ｍＭのカルシウム（約４０ｐｐｍの遊離のカルシウムイオン）を添加することもできる。液化後にスラリー中に残存するα－アミラーゼは、それに続く反応ステップにおいてｐＨを下げることを含めたいくつかの方法を介して、又は酵素がカルシウム依存性である場合にはスラリーからカルシウムを除去することによって、失活させることができる。デンプン＋α－アミラーゼのスラリーは、１０５℃に蒸気加熱されるジェットクッカーを通して、継続的にポンプ輸送することができる。次いで、このスラリーは、室温に冷却される。
ゼラチン化は一般に、デンプン基質をα－アミラーゼと接触させるのと同時に又はその前に実施されるが、追加の液化誘導酵素を任意選択的に加えてもよい。いくつかの実施形態では、上に記載した通りに調製したデンプン基質は、水を用いてスラリー化される。α－アミラーゼの安定性及び活性を最適化するために、典型的にはスラリーのｐＨはｐＨ約４．５～６．５に調整され、使用されるα－アミラーゼバリアントの特性に応じて、約１ｍＭのカルシウム（約４０ｐｐｍの遊離のカルシウムイオン）を添加することもできる。液化後にスラリー中に残存するα－アミラーゼは、それに続く反応ステップにおいてｐＨを下げることを含めたいくつかの方法を介して、又は酵素がカルシウム依存性である場合にはスラリーからカルシウムを除去することによって、失活させることができる。デンプン＋α－アミラーゼのスラリーは、１０５℃に蒸気加熱されるジェットクッカーを通して、継続的にポンプ輸送することができる。次いで、このスラリーは、室温に冷却される。
【0123】
５．３．糖化
液化デンプンは、任意選択的に別の酵素の存在下で、α－アミラーゼバリアントを使用して糖化して、より低いＤＰの（例えば、ＤＰ１＋ＤＰ２）糖が豊富なシロップにすることができる。糖化の生成物の正確な組成は、使用する酵素の組み合わせ及び加工処理される粒状デンプンのタイプに依存する。
液化デンプンは、任意選択的に別の酵素の存在下で、α－アミラーゼバリアントを使用して糖化して、より低いＤＰの（例えば、ＤＰ１＋ＤＰ２）糖が豊富なシロップにすることができる。糖化の生成物の正確な組成は、使用する酵素の組み合わせ及び加工処理される粒状デンプンのタイプに依存する。
【0124】
液化が、一般に連続プロセスとして実行されるのに対して、糖化は、バッチプロセスとして行なわれることが多い。糖化は、典型的には約６０～６５℃の温度且つ約４．０～４．５のｐＨ、例えばｐＨ４．３で最も効果的であり、液化デンプンを冷却すること及びｐＨ調整することが必要になる。糖化は、通常、撹拌槽（これは、充填又は空にするのに数時間を要する可能性がある）中で行う。酵素は、典型的には、タンクを充填しながら乾燥固体に対する固定された比率で添加されるか、又は充填段階の開始時に単一量として添加される。シロップを製造するための糖化反応は、典型的には、約２４～７２時間、例えば２４～４８時間かけて実行される。最大の又は所望されるＤＥに到達したら、反応を、例えば５分間８５℃に加熱することによって停止させる。さらなるインキュベーションは、酵素的解重合反応を介して及び／又は熱力学的平衡のアプローチにより、蓄積されたグルコースがイソマルトース及び／又は他の解重合生成物に再重合するので、より低いＤＥ（最終的には約９０ＤＥまで）をもたらすこととなる。
【0125】
５．４．異性化
α－アミラーゼでの処理によって生成される可溶性デンプン加水分解物は、高フルクトースデンプン系シロップ（ＨＦＳＳ）、例えば高フルクトースコーンシロップ（ＨＦＣＳ）に変換することができる。この変換は、グルコースイソメラーゼ、特に固体担体上に固定されたグルコースイソメラーゼを使用して達成することができる。ｐＨを、（イソメラーゼに応じて）約６．０～約８．０、例えばｐＨ７．５に上昇させ、Ｃａ２＋を、イオン交換によって除去する。好適なイソメラーゼには、ＳＷＥＥＴＺＹＭＥ（登録商標）、ＩＴ（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ Ａ／Ｓ）；Ｇ－ＺＹＭＥ（登録商標）ＩＭＧＩ、並びにＧ－ＺＹＭＥ（登録商標）Ｇ９９３、ＫＥＴＯＭＡＸ（登録商標）、Ｇ－ＺＹＭＥ（登録商標）Ｇ９９３、Ｇ－ＺＹＭＥ（登録商標）Ｇ９９３液体、及びＧＥＮＳＷＥＥＴ（登録商標）ＩＧＩが含まれる。異性化後、混合物は、典型的には約４０～４５％のフルクトース、例えば４２％のフルクトースを含有する。
α－アミラーゼでの処理によって生成される可溶性デンプン加水分解物は、高フルクトースデンプン系シロップ（ＨＦＳＳ）、例えば高フルクトースコーンシロップ（ＨＦＣＳ）に変換することができる。この変換は、グルコースイソメラーゼ、特に固体担体上に固定されたグルコースイソメラーゼを使用して達成することができる。ｐＨを、（イソメラーゼに応じて）約６．０～約８．０、例えばｐＨ７．５に上昇させ、Ｃａ２＋を、イオン交換によって除去する。好適なイソメラーゼには、ＳＷＥＥＴＺＹＭＥ（登録商標）、ＩＴ（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ Ａ／Ｓ）；Ｇ－ＺＹＭＥ（登録商標）ＩＭＧＩ、並びにＧ－ＺＹＭＥ（登録商標）Ｇ９９３、ＫＥＴＯＭＡＸ（登録商標）、Ｇ－ＺＹＭＥ（登録商標）Ｇ９９３、Ｇ－ＺＹＭＥ（登録商標）Ｇ９９３液体、及びＧＥＮＳＷＥＥＴ（登録商標）ＩＧＩが含まれる。異性化後、混合物は、典型的には約４０～４５％のフルクトース、例えば４２％のフルクトースを含有する。
【0126】
５．５．発酵
可溶性デンプン加水分解物、特に高グルコースシロップは、デンプン加水分解物を、発酵を行う生物と、典型的にはおよそ３２℃、例えばアルコール産生酵母については３０℃～３５℃の温度で接触させることによって発酵させることができる。発酵の温度及びｐＨは、発酵を行う生物に依存することとなる。ＥＯＦ生成物には、代謝産物、例えばクエン酸、乳酸、コハク酸、グルタミン酸一ナトリウム、グルコン酸、グルコン酸ナトリウム、グルコン酸カルシウム、グルコン酸カリウム、イタコン酸及び他のカルボン酸、グルコノΔ－ラクトン、エリソルビン酸ナトリウム、リシン及び他のアミノ酸、Ω３脂肪酸、ブタノール、イソプレン、１，３－プロパンジオール並びに他の生体材料が含まれる。
可溶性デンプン加水分解物、特に高グルコースシロップは、デンプン加水分解物を、発酵を行う生物と、典型的にはおよそ３２℃、例えばアルコール産生酵母については３０℃～３５℃の温度で接触させることによって発酵させることができる。発酵の温度及びｐＨは、発酵を行う生物に依存することとなる。ＥＯＦ生成物には、代謝産物、例えばクエン酸、乳酸、コハク酸、グルタミン酸一ナトリウム、グルコン酸、グルコン酸ナトリウム、グルコン酸カルシウム、グルコン酸カリウム、イタコン酸及び他のカルボン酸、グルコノΔ－ラクトン、エリソルビン酸ナトリウム、リシン及び他のアミノ酸、Ω３脂肪酸、ブタノール、イソプレン、１，３－プロパンジオール並びに他の生体材料が含まれる。
【0127】
５．６．α－アミラーゼバリアントと他の酵素との組み合わせ
α－アミラーゼバリアントを、グルコアミラーゼ（ＥＣ ３．２．１．３）と組み合わせることができる。例示的なグルコアミラーゼは、トリコデルマ属（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）、タラロマイセス属（Ｔａｌａｒｏｍｙｃｅｓ）、クロストリジウム属（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、フザリウム属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）、チエラビア属（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ）、サーモマイセス属（Ｔｈｅｒｍｏｍｙｃｅｓ）、アテリア属（Ａｔｈｅｌｉａ）、フミコラ属（Ｈｕｍｉｃｏｌａ）、ペニシリウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）、アルトマイセス属（Ａｒｔｏｍｙｃｅｓ）、グロエオフィルム属（Ｇｌｏｅｏｐｈｙｌｌｕｍ）、ピクノポルス属（Ｐｙｃｎｏｐｏｒｕｓ）、ステッケリヌム属（Ｓｔｅｃｃｈｅｒｉｎｕｍ）、トラメテス属（Ｔｒａｍｅｔｅｓ）などから得られる。好適な市販のグルコアミラーゼには、ＡＭＧ ２００Ｌ；ＡＭＧ ３００ Ｌ；ＳＡＮ（商標）ＳＵＰＥＲ、及びＡＭＧ（商標）Ｅ（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ）；ＯＰＴＩＤＥＸ（登録商標）３００及びＯＰＴＩＤＥＸ Ｌ－４００（Ｄａｎｉｓｃｏ ＵＳ Ｉｎｃ．）；ＡＭＩＧＡＳＥ（商標）及びＡＭＩＧＡＳＥ（商標）ＰＬＵＳ（ＤＳＭ）；Ｇ－ＺＹＭＥ（登録商標）Ｇ９００（Ｅｎｚｙｍｅ Ｂｉｏ－Ｓｙｓｔｅｍｓ）；並びにＧ－ＺＹＭＥ（登録商標）Ｇ９９０ ＺＲが含まれる。
α－アミラーゼバリアントを、グルコアミラーゼ（ＥＣ ３．２．１．３）と組み合わせることができる。例示的なグルコアミラーゼは、トリコデルマ属（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）、タラロマイセス属（Ｔａｌａｒｏｍｙｃｅｓ）、クロストリジウム属（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、フザリウム属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）、チエラビア属（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ）、サーモマイセス属（Ｔｈｅｒｍｏｍｙｃｅｓ）、アテリア属（Ａｔｈｅｌｉａ）、フミコラ属（Ｈｕｍｉｃｏｌａ）、ペニシリウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）、アルトマイセス属（Ａｒｔｏｍｙｃｅｓ）、グロエオフィルム属（Ｇｌｏｅｏｐｈｙｌｌｕｍ）、ピクノポルス属（Ｐｙｃｎｏｐｏｒｕｓ）、ステッケリヌム属（Ｓｔｅｃｃｈｅｒｉｎｕｍ）、トラメテス属（Ｔｒａｍｅｔｅｓ）などから得られる。好適な市販のグルコアミラーゼには、ＡＭＧ ２００Ｌ；ＡＭＧ ３００ Ｌ；ＳＡＮ（商標）ＳＵＰＥＲ、及びＡＭＧ（商標）Ｅ（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ）；ＯＰＴＩＤＥＸ（登録商標）３００及びＯＰＴＩＤＥＸ Ｌ－４００（Ｄａｎｉｓｃｏ ＵＳ Ｉｎｃ．）；ＡＭＩＧＡＳＥ（商標）及びＡＭＩＧＡＳＥ（商標）ＰＬＵＳ（ＤＳＭ）；Ｇ－ＺＹＭＥ（登録商標）Ｇ９００（Ｅｎｚｙｍｅ Ｂｉｏ－Ｓｙｓｔｅｍｓ）；並びにＧ－ＺＹＭＥ（登録商標）Ｇ９９０ ＺＲが含まれる。
【0128】
α－アミラーゼバリアントと共に使用することができる他の好適な酵素には、フィターゼ、プロテアーゼ、プルラナーゼ、β－アミラーゼ、イソアミラーゼ、α－グルコシダーゼ、セルラーゼ、キシラナーゼ、他のヘミセルラーゼ、β－グルコシダーゼ、トランスフェラーゼ、ペクチナーゼ、リパーゼ、クチナーゼ、エステラーゼ、酸化還元酵素、別のα－アミラーゼ、又はこれらの組み合わせが含まれる。
【0129】
本発明のα－アミラーゼを含む組成物は、バッファー、塩、保存料、水、共溶媒、界面活性剤などと一緒に、本明細書に列挙した追加の酵素のいずれか１つ以上をさらに含むことができる、水性又は非水性の配合物、顆粒、粉末、ゲル、スラリー、ペーストなどであり得る。
【0130】
６．布地を糊抜きする組成物及び使用
さらに企図されているのは、アミラーゼを使用して織物を処理する（例えば、布地を糊抜きする）組成物及び方法である。織物を処理する方法は、当該技術分野において周知である（例えば、米国特許第６，０７７，３１６号明細書を参照されたい）。例えば、織物の感触及び外観は、布地を溶液中のα－アミラーゼと接触させることを含む方法によって改良することができる。織物は、この溶液で加圧下で処理することができる。
さらに企図されているのは、アミラーゼを使用して織物を処理する（例えば、布地を糊抜きする）組成物及び方法である。織物を処理する方法は、当該技術分野において周知である（例えば、米国特許第６，０７７，３１６号明細書を参照されたい）。例えば、織物の感触及び外観は、布地を溶液中のα－アミラーゼと接触させることを含む方法によって改良することができる。織物は、この溶液で加圧下で処理することができる。
【0131】
α－アミラーゼは、織物の機織り中若しくは機織り後に、又は糊抜き段階中に、又は１つ以上の追加の織物加工処理工程中に適用することができる。布地の機織り中、糸は、かなりの力学的ひずみに曝される。織機で織る前に、縦糸は、その引張強度を増大させるために、及び破壊を防止するために、糊付けデンプン又はデンプン誘導体でコーティングされることが多い。α－アミラーゼは、これらの糊付けデンプン又はデンプン誘導体を除去するために、機織り中又は機織り後に適用することができる。製織後、均質な及び抗洗浄性の結果を確実にするために、織物のさらなる加工処理前に、糊付けコーティングを除去するためにアミラーゼを使用することができる。
【0132】
α－アミラーゼを、単独で、又は他の糊抜き化学試薬及び／又は糊抜き酵素と共に使用して、洗剤添加物として、綿を含有する織物を含めた織物を、例えば水性組成物中で糊抜きすることができる。α－アミラーゼを、インジゴ染色デニム織物及び衣服上にストーンウォッシュ加工された外観を作り出すための組成物及び方法において使用することもできる。衣類を製造するために、織物を、裁断して衣類又は衣服に縫製することができ、その後、これを仕上げ処理する。特に、デニムジーンズを製造するために、様々な酵素による仕上げ方法が開発されている。デニム衣類の仕上げは、通常、酵素による糊抜き工程で開始され、その間に、衣服は、アミロース分解酵素の作用を受けて、織物に柔らかさがもたらされ、また、綿は、その後の酵素による仕上げ工程を受け易くなる。α－アミラーゼは、デニムの衣服を仕上げる（例えば、「バイオストーン加工」）、酵素による糊抜きを行う、及び織物への柔らかさを与える、及び／又は工程を仕上げる方法において使用することができる。
【0133】
７．製パン及び食品調製のための組成物及び方法
本発明の組成物及び方法はまた、食品組成物（限定はされないが、α－アミラーゼバリアントを含む、食料製品、動物飼料、及び／又は食品／飼料添加物が含まれる）、並びにα－アミラーゼバリアントと１つ以上の食品成分とを混合することを含む、こうした食品組成物を調製するための方法、又はそれらの使用に関する。さらに、本発明の組成物及び方法は、限定はされないが、パン製造用小麦粉、パン生地、製パン添加物、及び／又は焼成パン製品を含めた、製パン組成物に関する。
本発明の組成物及び方法はまた、食品組成物（限定はされないが、α－アミラーゼバリアントを含む、食料製品、動物飼料、及び／又は食品／飼料添加物が含まれる）、並びにα－アミラーゼバリアントと１つ以上の食品成分とを混合することを含む、こうした食品組成物を調製するための方法、又はそれらの使用に関する。さらに、本発明の組成物及び方法は、限定はされないが、パン製造用小麦粉、パン生地、製パン添加物、及び／又は焼成パン製品を含めた、製パン組成物に関する。
【0134】
９．醸造組成物
本発明のα－アミラーゼバリアントは、醸造のプロセスにおいて、すなわち発酵麦芽飲料を製造する際に使用される、醸造組成物の構成成分であり得る。非発酵性炭水化物は、最終のビール中の溶存固形分の大半を形成する。この残渣は、麦芽アミラーゼがデンプンのα－１，６－結合を加水分解することができないために残留する。α－アミラーゼは、グルコアミラーゼ、並びに任意選択的にプルラナーゼ及び／又はイソアミラーゼと任意選択的に組み合わせて、デンプンをデキストリン及び発酵性糖に変換させ、最終ビール中の残留非発酵性炭水化物を減少させることを助ける。
本発明のα－アミラーゼバリアントは、醸造のプロセスにおいて、すなわち発酵麦芽飲料を製造する際に使用される、醸造組成物の構成成分であり得る。非発酵性炭水化物は、最終のビール中の溶存固形分の大半を形成する。この残渣は、麦芽アミラーゼがデンプンのα－１，６－結合を加水分解することができないために残留する。α－アミラーゼは、グルコアミラーゼ、並びに任意選択的にプルラナーゼ及び／又はイソアミラーゼと任意選択的に組み合わせて、デンプンをデキストリン及び発酵性糖に変換させ、最終ビール中の残留非発酵性炭水化物を減少させることを助ける。
【0135】
本明細書で引用した全ての参考文献は、あらゆる目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。本組成物及び方法、並びにその利点についてさらに説明するために、下記の特定の実施例は、これらが限定的ではなく例示的であるとの理解の下で提供される。
【実施例】
【0136】
実施例１．ＡＡ２５６０ α－アミラーゼバリアント
タンパク質の発現、精製、及び定量化：
国際公開第２０２１／０８０９４８号パンフレットに記載されているＡＡ２５６０ α－アミラーゼのバリアント（本明細書では配列番号５）をベースにするＡＡ２５６０ α－アミラーゼコンビナトリアルバリアントを、合成遺伝子として作製し、標準の手順を使用して好適なバチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）細胞に導入した。すべての変異を、ＤＮＡシークエンシングによって確認した。細胞を、Ｂ．リケニフォルミス（Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）宿主におけるタンパク質発現及び分泌に適した培地中で、７２時間増殖させた。分泌されたタンパク質を、遠心分離によって回収した。精製は、Ｐｈｅｎｙｌ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ６ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ樹脂（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いる疎水性相互作用クロマトグラフィーを通して達成した。精製されたタンパク質を、ｐＨ８の、緩衝剤としてのＨＥＰＥＳ、塩化カルシウム、及びプロピルプロピレングリコールを含有する標準の調製用緩衝液中で安定化させた。タンパク質濃度は、アミノ酸分析と、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）と、２８０ｎｍでの吸光度との混合によって決定した。
タンパク質の発現、精製、及び定量化：
国際公開第２０２１／０８０９４８号パンフレットに記載されているＡＡ２５６０ α－アミラーゼのバリアント（本明細書では配列番号５）をベースにするＡＡ２５６０ α－アミラーゼコンビナトリアルバリアントを、合成遺伝子として作製し、標準の手順を使用して好適なバチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）細胞に導入した。すべての変異を、ＤＮＡシークエンシングによって確認した。細胞を、Ｂ．リケニフォルミス（Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）宿主におけるタンパク質発現及び分泌に適した培地中で、７２時間増殖させた。分泌されたタンパク質を、遠心分離によって回収した。精製は、Ｐｈｅｎｙｌ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ６ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ樹脂（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いる疎水性相互作用クロマトグラフィーを通して達成した。精製されたタンパク質を、ｐＨ８の、緩衝剤としてのＨＥＰＥＳ、塩化カルシウム、及びプロピルプロピレングリコールを含有する標準の調製用緩衝液中で安定化させた。タンパク質濃度は、アミノ酸分析と、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）と、２８０ｎｍでの吸光度との混合によって決定した。
【0137】
酵素性能分析：
α－アミラーゼの活性を、洗剤バックグラウンド中の白色のメラミンタイルからの染色されたデンプンの染みの除去によって決定した。Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｔｅｓｔｍａｔｅｒｉａｌｓから購入した食品着色料（カタログ番号ＤＭ２７７）を用いる、トウモロコシ／コメ混合物着色デンプン（ｍｉｘｅｄ ｃｏｒｎ／ｒｉｃｅ ｃｏｌｏｒｅｄ ｓｔａｒｃｈ）タイル及びトウモロコシ／コメ混合物デンプン（ｍｉｘｅｄ ｃｏｒｎ／ｒｉｃｅ ｓｔａｒｃｈ）タイルを使用して、α－アミラーゼの洗浄活性を決定した。水性緩衝液で作用範囲に希釈し且つＷＦＫＢ洗剤（ＷＦＫ Ｔｅｓｔｇｅｗｅｂｅ ＧｍｂＨ，Ｂｒｕｅｇｇｅｎ，Ｄｅｕｔｓｃｈｌａｎｄ）のあらかじめ作製された洗剤溶液に添加したアミラーゼ溶液を含有する（総体積は３００μＬとなった）、９６ウェルプレートに、これらのタイルを貼り付けた。次いで、着色されたデンプンの染みを有するあらかじめ画像化されたメラミンタイルを、この集合体の撹拌が、デンプン染色された表面上での酵素含有洗剤のはねかかり（ｓｐｌａｓｈｉｎｇ）をもたらすように、９６ウェルプレートの最上部に貼り付けた。洗浄反応は、２５０ｒｐｍで振盪しながら５０ｏＣで１５時間行った。洗浄反応の後、次いで、メラミンタイルを、水中で簡単にすすぎ、乾燥させ、再び画像化した。α－アミラーゼの活性は、洗浄前と洗浄後の画像のＲＧＢ（色）値の差として算出する。洗浄後の画像が白いほど、酵素活性が高い。性能指数（ＰＩ）は、以下の通りに算出する：
ΔＲＧバリアントに対するコンビナトリアルバリアントの性能指数：
配列番号５のバリアントに対する、性能指数に関するバリアントの洗浄性能を、表３に列挙する。
α－アミラーゼの活性を、洗剤バックグラウンド中の白色のメラミンタイルからの染色されたデンプンの染みの除去によって決定した。Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｔｅｓｔｍａｔｅｒｉａｌｓから購入した食品着色料（カタログ番号ＤＭ２７７）を用いる、トウモロコシ／コメ混合物着色デンプン（ｍｉｘｅｄ ｃｏｒｎ／ｒｉｃｅ ｃｏｌｏｒｅｄ ｓｔａｒｃｈ）タイル及びトウモロコシ／コメ混合物デンプン（ｍｉｘｅｄ ｃｏｒｎ／ｒｉｃｅ ｓｔａｒｃｈ）タイルを使用して、α－アミラーゼの洗浄活性を決定した。水性緩衝液で作用範囲に希釈し且つＷＦＫＢ洗剤（ＷＦＫ Ｔｅｓｔｇｅｗｅｂｅ ＧｍｂＨ，Ｂｒｕｅｇｇｅｎ，Ｄｅｕｔｓｃｈｌａｎｄ）のあらかじめ作製された洗剤溶液に添加したアミラーゼ溶液を含有する（総体積は３００μＬとなった）、９６ウェルプレートに、これらのタイルを貼り付けた。次いで、着色されたデンプンの染みを有するあらかじめ画像化されたメラミンタイルを、この集合体の撹拌が、デンプン染色された表面上での酵素含有洗剤のはねかかり（ｓｐｌａｓｈｉｎｇ）をもたらすように、９６ウェルプレートの最上部に貼り付けた。洗浄反応は、２５０ｒｐｍで振盪しながら５０ｏＣで１５時間行った。洗浄反応の後、次いで、メラミンタイルを、水中で簡単にすすぎ、乾燥させ、再び画像化した。α－アミラーゼの活性は、洗浄前と洗浄後の画像のＲＧＢ（色）値の差として算出する。洗浄後の画像が白いほど、酵素活性が高い。性能指数（ＰＩ）は、以下の通りに算出する：
【数1】
配列番号５のバリアントに対する、性能指数に関するバリアントの洗浄性能を、表３に列挙する。
【表3】
【0138】
表３中のすべてのバリアントは、配列番号５のバリアントよりも性能が高い。
【図1】
【図1-2】
【図2】