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特表2025-500354神経線維腫症の治療的および診断的ターゲットとしての活性化されたＲａｓおよびその用途｛ＡｃｔｉｖａｔｅｄＲａｓａｓａｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｎｄｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｔａｒｇｅｔｆｏｒｎｅｕｒｏｆｉｂｒｏｍａｔｏｓｉｓａｎｄｉｔｓｕｓｅｓ｝

書誌要約請求の範囲詳細な説明課題実施例実施するための形態図面の説明

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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2025-01-09

(54)【発明の名称】神経線維腫症の治療的および診断的ターゲットとしての活性化されたＲａｓおよびその用途｛ＡｃｔｉｖａｔｅｄＲａｓａｓａｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｎｄｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｔａｒｇｅｔｆｏｒｎｅｕｒｏｆｉｂｒｏｍａｔｏｓｉｓａｎｄｉｔｓｕｓｅｓ｝

(51)【国際特許分類】

C07K 14/47 20060101AFI20241226BHJP

C07K 16/18 20060101ALI20241226BHJP

C07K 16/46 20060101ALI20241226BHJP

C12N 15/115 20100101ALI20241226BHJP

C12N 15/11 20060101ALI20241226BHJP

C12N 15/113 20100101ALI20241226BHJP

C12Q 1/06 20060101ALI20241226BHJP

C12Q 1/6876 20180101ALI20241226BHJP

A61P 25/00 20060101ALI20241226BHJP

A61P 43/00 20060101ALI20241226BHJP

A61K 31/4245 20060101ALI20241226BHJP

G01N 33/50 20060101ALI20241226BHJP

G01N 33/15 20060101ALI20241226BHJP

【ＦＩ】

C07K14/47

C07K16/18

C07K16/46

C12N15/115 Z

C12N15/11 Z

C12N15/113 Z

C12Q1/06

C12Q1/6876 Z

A61P25/00

A61P43/00 105

A61K31/4245

G01N33/50 Z

G01N33/15 Z

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024537415

(86)(22)【出願日】2022-12-20

(85)【翻訳文提出日】2024-08-19

(86)【国際出願番号】 KR2022020770

(87)【国際公開番号】W WO2023121199

(87)【国際公開日】2023-06-29

(31)【優先権主張番号】10-2021-0183885

(32)【優先日】2021-12-21

(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】515267910

【氏名又は名称】ジアサンファウンデーション

(71)【出願人】

【識別番号】517301162

【氏名又は名称】ユニバーシティーオブウルサンファウンデーションフォーインダストリーコーオペレイション

【氏名又は名称原語表記】ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹＯＦＵＬＳＡＮＦＯＵＮＤＡＴＩＯＮＦＯＲＩＮＤＵＳＴＲＹＣＯＯＰＥＲＡＴＩＯＮ

(71)【出願人】

【識別番号】523362386

【氏名又は名称】ヒューマンスケープインコーポレイテッド

【氏名又は名称原語表記】ＨＵＭＡＮＳＣＡＰＥＩＮＣ．

(74)【代理人】

【識別番号】100107766

【弁理士】

【氏名又は名称】伊東忠重

(74)【代理人】

【識別番号】100070150

【弁理士】

【氏名又は名称】伊東忠彦

(72)【発明者】

【氏名】リ，ボムヒ

(72)【発明者】

【氏名】チャン，ミンフ

(72)【発明者】

【氏名】ホ，スンヒ

(72)【発明者】

【氏名】ト，ヒョサン

(72)【発明者】

【氏名】カン，ミンジ

【テーマコード（参考）】

2G045

4B063

4C086

4H045

【Ｆターム（参考）】

2G045AA40

4B063QA01

4B063QA19

4B063QQ02

4B063QQ08

4B063QR48

4B063QR55

4B063QR62

4B063QS32

4B063QS33

4B063QX02

4B063QX10

4C086AA01

4C086AA02

4C086BC71

4C086MA01

4C086MA04

4C086NA14

4C086ZA01

4C086ZB21

4H045AA10

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA10

4H045CA40

4H045DA75

4H045DA76

4H045EA20

4H045EA50

(57)【要約】

Ｒａｓ活性を利用する神経線維腫症治療剤に対する感受性予測用バイオマーカー組成物およびＲａｓ活性抑制剤を含む神経線維腫症予防または治療用医薬組成物に関するものであり、バイオマーカー組成物は個体の生物学的サンプルにおいてＧＴＰが結合して活性化されたＲＡＳ（Ｒａｓ－ＧＴＰ）タンパク質と活性化されたｐ－ＥＲＫタンパク質またはそれをコードする遺伝子の発現レベルを測定する簡単な方法を通じて、神経線維腫症治療剤に対する感受性を正確に診断することができ、医薬組成物はＲａｓタンパク質の活性を抑制するため、Ｒａｓタンパク質の活性度が増加した神経線維腫症の予防または治療用途として有用に使用されるであろう。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

（１）ＧＴＰが結合して活性化されたＲＡＳ（Ｒａｓ－ＧＴＰ）タンパク質および活性化されたｐ－ＥＲＫタンパク質からなる群から選択されるいずれか１つ以上のタンパク質と、
（２）前記タンパク質をコードする遺伝子との発現レベルを測定する製剤を含む、神経線維腫症治療剤に対する感受性予測用バイオマーカー組成物。

【請求項2】

神経線維腫症治療剤は、下記の化学式１で表される化合物、またはその医薬的に許容される塩である、請求項１に記載の神経線維腫症治療剤に対する感受性予測用バイオマーカー組成物。

【化1】

前記式で
Ｚはハロゲン、ヒドロキシル、置換もしくは非置換のアルキル、置換もしくは非置換のアルコキシ、置換もしくは非置換のアリール、置換もしくは非置換のヘテロアリール、置換もしくは非置換のシクロアルキル、置換もしくは非置換のヘテロサイクル、または置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキルであり、
Ｒは水素またはハロゲンである。

【請求項3】

前記の化学式１で表される化合物が３－［５－（２－フルオロ－フェニル）－［１、２、４］オキサジアゾール－３－イル］－安息香酸である、請求項２に記載の神経線維腫症治療剤に対する感受性予測用バイオマーカー組成物。

【請求項4】

前記タンパク質の発現レベルを測定することができる製剤は、前記タンパク質に特異的に結合するモノクローナル（ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ）抗体、ポリクローナル（ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ）抗体、キメリック（ｃｈｉｍｅｒｉｃ）抗体、リガンド（ｌｉｇａｎｄ）、ＰＮＡ（ｐｅｐｔｉｄｅｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄ）、アプタマー（ａｐｔａｍｅｒ）およびナノパーティクル（ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ）からなる群から選択されるものである、請求項１に記載の神経線維腫症治療剤に対する感受性予測用バイオマーカー組成物。

【請求項5】

前記タンパク質をコードする遺伝子の発現レベルを測定することができる製剤は、前記遺伝子に特異的に結合するプライマー（ｐｒｉｍｅｒ）対、プローブ（ｐｒｏｂｅ）及びアンチセンスヌクレオチド（ａｎｔｉｓｅｎｓｅｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）からなる群から選択されるものである、請求項１に記載の神経線維腫症治療剤に対する感受性予測用バイオマーカー組成物。

【請求項6】

前記神経線維腫症は、ＮＦ１遺伝子に終止コドン突然変異を有するものである、請求項１に記載の神経線維腫症治療剤に対する感受性予測用バイオマーカー組成物。

【請求項7】

第１項～第６項のいずれか一項に記載のバイオマーカー組成物を含む、神経線維腫症治療剤に対する感受性予測用キット。

【請求項8】

個体から得られた生物学的サンプルにおいて、
（１）ＧＴＰが結合して活性化されたＲＡＳ（Ｒａｓ－ＧＴＰ）タンパク質および活性化されたｐ－ＥＲＫタンパク質からなる群から選択されるいずれか１つ以上のタンパク質と、
（２）前記タンパク質をコードする遺伝子との発現レベルを測定するステップを含む、神経線維腫症治療剤に対する感受性予測に必要な情報を提供する方法。

【請求項9】

下記の化学式１で表される化合物、またはその医薬的に許容される塩を有効成分として含む、神経線維腫症の予防または治療用医薬組成物。

【化2】

【請求項10】

前記の化学式１で表される化合物が、３－［５－（２－フルオローフェニル）－［１、２、４］オキサジアゾール－３－イル］－安息香酸である、請求項９に記載の神経線維腫症の予防または治療用医薬組成物。

【請求項11】

前記神経線維腫症は、ＮＦ１遺伝子に終止コドン突然変異を有するものである、請求項９に記載の神経線維腫症の予防または治療用医薬組成物。

【請求項12】

前記神経線維腫症は、Ｒａｓタンパク質の活性度が増加したものである、請求項９に記載の神経線維腫症の予防または治療用医薬組成物。

【請求項13】

神経線維腫症治療剤に対する感受性を予測するための、
（１）ＧＴＰが結合して活性化されたＲＡＳ（Ｒａｓ－ＧＴＰ）タンパク質および活性化されたｐ－ＥＲＫタンパク質からなる群から選択されるいずれか１つ以上のタンパク質と、
（２）前記タンパク質をコードする遺伝子との発現レベルを測定することができる製剤を含むバイオマーカーの用途。

【請求項14】

個体から得られた生物学的サンプルにおいて、
（１）ＧＴＰが結合して活性化されたＲＡＳ（Ｒａｓ－ＧＴＰ）タンパク質および活性化されたｐ－ＥＲＫタンパク質からなる群から選択されるいずれか１つ以上のタンパク質と、
（２）前記タンパク質をコードする遺伝子との発現レベルを測定するステップを含む、神経線維腫症患者の神経線維腫症治療剤に対する感受性を予測する方法。

【請求項15】

下記の化学式１で表される化合物、またはその医薬的に許容される塩を有効成分として含む組成物を個体に投与するステップを含む、神経線維腫症を予防または治療する方法。

【化3】

【請求項16】

下記の化学式１で表される化合物、またはその医薬的に許容される塩を有効成分として含む組成物を、神経線維腫症の予防または治療に使用するための治療剤の製造に使用するための用途。

【化4】

【請求項17】

（ａ）ＮＦ１遺伝子突然変異を有する生物学的試料を試験物質と接触させるステップと、
（ｂ）前記接触した生物学的試料において、（１）ＧＴＰが結合して活性化されたＲＡＳ（Ｒａｓ－ＧＴＰ）タンパク質および活性化されたｐ－ＥＲＫタンパク質からなる群から選択されるいずれか１つ以上のタンパク質と、（２）前記タンパク質をコードする遺伝子との発現レベルを測定するステップを含む、神経線維腫症治療剤のスクリーニング方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

神経線維腫症の治療的および診断的ターゲットとしての活性化されたＲａｓおよびその用途に関する。

【背景技術】

【0002】

神経線維腫症１型（ｎｅｕｒｏｆｉｂｒｏｍａｔｏｓｉｓｔｙｐｅ１、ＮＦ１）は、常染色体優性遺伝疾患であり、世界的に３、０００人あたり１人の頻度で比較的高い発症率を持っている遺伝疾患の１つである。ＮＦ１遺伝子突然変異によって発症し、多発性カフェオレ斑と皮膚の神経線維腫が特徴であり、様々なレベルの神経系、骨格系発現と新生物性発現が患者に大きな影響を与えることができる。ＮＦ１患者は中枢および末梢神経系腫瘍が発生するリスクがあり、これは一般人に比べて１、０００倍高い比率である。

【0003】

既存の神経線維腫症１型の治療法としては、化学療法、放射線療法、外科的手術切除などの大衆療法だけが唯一の治療法であるが、多くの器官で多発的に発生する場合は手術が不可能な場合が多い。

【0004】

最近、神経線維腫症１型の患者の非侵襲的治療剤として、ＭＥＫ抑制剤であるセルメチニブ（ｓｅｌｕｍｅｔｉｎｉｂ）がＦＤＡおよび国内の希少医薬品として承認された。他の治療剤としてチロシンキナーゼ抑制剤であるカルボザンチニブ（ｃａｒｂｏｚａｎｔｉｎｉｂ）が臨床実験の結果、安全性および腫瘍抑制効果を示すと報告されたが、様々な腫瘍を縮小させたりまたは完全に除去することはできないという限界点がある。また、神経線維腫症１型を有する患者が上記の治療剤に全て反応するわけではないため、より多くの治療剤が必要な状況である。

【0005】

一方、韓国人神経線維腫症患者の遺伝子突然変異の類型について調査した結果、約３０％の患者が終止コドン突然変異（ｓｔｏｐ－ｃｏｄｏｎｍｕｔａｔｉｏｎ）を有していると報告された。また、近年早期終止コドンをｒｅａｄ－ｔｈｒｏｕｇｈするアタルレン（Ａｔａｌｕｒｅｎ；ＰＴＣＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＳ，ＵＳＡ）が、筋肉疾患治療剤として臨床研究されており、終止コドン突然変異を有する神経線維腫症患者の治療剤として言及されているが、これに対する薬効の研究はない状況である。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0006】

一態様は、Ｒａｓ活性度またはｐ－ＥＲＫの活性度を利用して早期終止コドンをｒｅａｄ－ｔｈｒｏｕｇｈする化合物に対する神経線維腫症患者の感受性を予測することができるバイオマーカー組成物を提供することである。

【0007】

別の態様は、前記組成物を含む前記化合物に対する神経線維腫症患者の感受性予測用キットを提供することである。

【0008】

別の態様は、前記バイオマーカー組成物を利用して、前記化合物に対する神経線維腫症患者の感受性予測に必要な情報を提供する方法を提供することである。

【0009】

別の態様は、Ｒａｓ活性を抑制することができる化合物を含む神経線維腫症の予防または治療用医薬組成物を提供することである。

【0010】

別の態様は、ＮＦ１遺伝子突然変異を有する生物学的試料を試験物質と接触させるステップと、前記接触された生物学的試料で（１）ＧＴＰが結合して活性化されたＲＡＳ（Ｒａｓ－ＧＴＰ）タンパク質および活性化されたｐ－ＥＲＫタンパク質からなる群から選択されるいずれか１つ以上のタンパク質と、（２）前記タンパク質をコードする遺伝子との発現レベルを測定するステップを含む神経線維腫症治療剤のスクリーニング方法を提供することである。

【0011】

別の態様は、神経線維腫症治療剤に対する感受性を予測するための、（１）ＧＴＰが結合して活性化されたＲＡＳ（Ｒａｓ－ＧＴＰ）タンパク質および活性化されたｐ－ＥＲＫタンパク質からなる群から選択されるいずれか１つ以上のタンパク質と、または（２）前記タンパク質をコードする遺伝子との発現レベルを測定することができる製剤を含むバイオマーカーの用途を提供することである。

【0012】

別の態様は、個体から得られた生物学的サンプルにおいて、（１）ＧＴＰが結合して活性化されたＲＡＳ（Ｒａｓ－ＧＴＰ）タンパク質および活性化されたｐ－ＥＲＫタンパク質からなる群から選択されるいずれか１つ以上のタンパク質と、（２）前記タンパク質をコードする遺伝子との発現レベルを測定するステップを含む、神経線維腫症患者の神経線維腫症治療剤に対する感受性を予測する方法を提供することである。

【0013】

別の態様は、前記化合物またはその医薬的に許容される塩を有効成分として含む組成物を個体に投与するステップを含む神経線維腫症を予防または治療する方法を提供することである。

【0014】

別の態様は、前記化合物またはその医薬的に許容される塩を有効成分として含む組成物を、神経線維腫症の予防または治療に使用するための治療剤の製造に使用するための用途を提供することである。

【課題を解決するための手段】

【0015】

前記目的を達成するために、一態様は、（１）ＧＴＰが結合して活性化されたＲＡＳ（Ｒａｓ－ＧＴＰ）タンパク質および活性化されたｐ－ＥＲＫタンパク質からなる群から選択されるいずれか１つ以上のタンパク質と、（２）前記タンパク質をコードする遺伝子との発現レベルを測定する製剤を含む、神経線維腫症治療剤に対する感受性予測用バイオマーカー組成物を提供する。

【0016】

「ＲＡＳタンパク質」という用語は、低分子ＧＴＰ（Ｇｕａｎｏｓｉｎｅｔｒｉｐｈｏｓｈａｔｅ）結合タンパク質の一種であり、Ｋ－Ｒａｓタンパク質、Ｈ－Ｒａｓタンパク質、Ｎ－Ｒａｓタンパク質などのアイソフォーム（ｉｓｏｆｏｒｍ）が存在するタンパク質を意味することができる。Ｒａｓタンパク質は、様々な細胞外刺激による細胞の増殖、分化、接着などのシグナルを上流のチロシンキナーゼ受容体から下流のエフェクターに仲介する機能を担うことができる。

【0017】

Ｒａｓタンパク質はＧＴＰ（Ｇｕａｎｏｓｉｎｅｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ）と結合した状態（Ｒａｓ－ＧＴＰ）が活性型であり、ＧＤＰ（Ｇｕａｎｏｓｉｎｅｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ）と結合した状態（Ｒａｓ－ＧＤＰ）が非活性型であり、活性型と非活性型の状態変化を通じて細胞増殖などを調節することができる。一方、ヒトのがんではＲａｓタンパク質が高い頻度で変異しており、この変異に起因してＲａｓタンパク質が常に活性型となっていることが知られている。

【0018】

形質転換活性を有する活性型Ｒａｓは、ＧＤＰやＧＴＰのグアニン環やリン酸基との相互作用に重要なアミノ酸変異があり、内在性ＧＴＰ加水分解活性の低下やＧＤＰ解離速度の上昇を示すことができる。その発現によって細胞内でＧＴＰを結合した活性型比率が増加し、細胞増殖制御に異常を起こすことがある。ＧＴＰが結合した活性型Ｒａｓは、Ｒａｆと結合することにより、ＲａｆからＭＡＰリン酸化酵素に至るセリン－スレオニンリン酸化酵素の段階的連鎖を直接制御することができる。

【0019】

前記ＥＲＫは、Ｒａｓタンパク質によって調節されるＳｅｒ／Ｔｈｒｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅのうち１つであり得る。活性化されていないＥＲＫは細胞質（ｃｙｔｏｐｌａｓｍ）にあることができるが、活性化されたＥＲＫは核内に移動することができる。さらに、活性化されたＥＲＫは、ターゲットタンパク質のリン酸化または他のタンパク質リン酸化酵素（ｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅｓ）を活性化させ、シグナル伝達系を調節することができる。

【0020】

「感受性」という用語は、個々の神経線維腫症患者に対して特定の薬物が治療効果を示すかどうかを意味することができる。神経線維腫症の治療に有効であると認められている種類の治療剤であっても、個々の患者によって効果を示す場合と効果を示さない場合があることが知られている。このような個々の患者の神経線維腫症に対して治療剤が効果を示すか否かを治療剤に対する感受性と呼ぶことができる。前記「感受性」は「治療反応性」と互換的に使用することができ、「感受性予測用」は「治療反応性予測用」または「コンパニオン診断用」と互換的に使用することができる。

【0021】

「コンパニオン診断（ＣｏｍｐａｎｉｏｎＤｉａｇｎｏｓｉｓ）」という用語は、患者の治療反応性を予測するための診断技法を意味することができる。

【0022】

前記コンパニオン診断用組成物は、神経線維腫症治療剤の投与の必要性と、神経線維腫症治療剤に対する薬剤耐性の発現の可能性と、神経線維腫症治療剤に対する感受性と、神経線維腫症治療剤による治療の予後予測に関する情報を提供するためのものであり得る。

【0023】

「バイオマーカー」という用語は、コンパニオン診断マーカーとしても使用することができ、生物学的サンプルにおいて患者の特定の薬物治療に対する反応性を予め予測することができる物質を意味することができる。正常個体から得られた生物学的サンプルに比べて、神経線維腫症患者から採取した生物学的サンプルにおいて増加または減少を示すポリペプチドまたは核酸（例えば、ｍＲＮＡなど）、脂質、糖脂質、糖タンパク質、糖（例えば、単糖類、二糖類、オリゴ糖類など）などの有機生体分子などを含むことができる。

【0024】

一具体例において、前記神経線維腫症治療剤に対する感受性予測用バイオマーカーは、ＧＴＰが結合して活性化されたＲＡＳ（Ｒａｓ－ＧＴＰ）タンパク質またはそれをコードする遺伝子であり得る。その発現レベルが高いと神経線維腫症治療剤に対する感受性が高いと判断することができ、逆にその発現レベルが低い場合には神経線維腫症治療剤に対する感受性が低いと判断することができる。

【0025】

一具体例において、前記神経線維腫症治療剤に対する感受性予測用バイオマーカーは、活性化されたｐ－ＥＲＫタンパク質またはそれをコードする遺伝子であり得る。その発現レベルが高いと神経線維腫症治療剤に対する感受性が高いと判断することができ、逆にその発現レベルが低い場合には神経線維腫症治療剤に対する感受性が低いと判断することができる。

【0026】

前記神経線維腫症治療剤は、下記の化学式１で表される化合物、またはその医薬的に許容される塩である、神経線維腫症治療剤に対する感受性予測用バイオマーカー組成物であり得る。

【0027】

【化1】

【0028】

「ハロゲン」という用語は、他に言及しない限り、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩを意味することができる。

【0029】

「ヒドロキシル」という用語は、他に言及がない限り、１個の水素原子と１個の酸素原子からなる一価の原子団であり、化学式－ＯＨを有する基を意味することができる。

【0030】

「アルキル」という用語は、特に明記しない限り、線状または分枝状の飽和した炭化水素残基を意味することができる。例えば、「Ｃ_１～１０アルキル」は、１～１０個の炭素で骨格が形成されたアルキルを意味する。具体的には、Ｃ_１～１０アルキルは、メチル、エチル、ｎ－プロピル、ｉ－プロピル、ｎ－ブチル、ｉ－ブチル、ｔ－ブチル、ｎ－ペンチル、ｉ－ペンチル、ｔ－ペンチル、ｓｅｃ－ペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシルなどを含むことができる。

【0031】

「アルコキシ」という用語は、特に明記しない限り、上記で定義したアルキル基が酸素原子を介して母化合物に付着されている化学式－Ｏ－アルキルを有する基を意味することができる。アルコキシ基のアルキル部分は、１～２０個の炭素原子（すなわち、Ｃ_１～Ｃ_２０アルコキシ）、１～１２個の炭素原子（すなわち、Ｃ_１～Ｃ_１２アルコキシ）、または１～６個の炭素原子（すなわち、Ｃ_１～Ｃ_６アルコキシ）を有することができる。適切なアルコキシ基の例には、メトキシ（－Ｏ－ＣＨ_３または－ＯＭｅ）、エトキシ（－ＯＣＨ_２ＣＨ_３または－ＯＥｔ）、ｔ－ブトキシ（－Ｏ－Ｃ（ＣＨ_３）_３または－Ｏ－ｔＢｕ）などがある。

【0032】

「アリール」という用語は、母芳香族環系の６個の炭素原子から１個の水素原子が除去されて誘導される芳香族炭化水素ラジカルを意味することができる。例えば、アリール基は、６～２０個の炭素原子、６～１４個の炭素原子、または６～１２個の炭素原子を有することができる。

【0033】

「シクロアルキル」という用語は、環中に炭素原子のみを含む飽和モノサイクルまたはポリサイクルを指す。シクロアルキルは、モノサイクルとしては３～７個の炭素原子を、バイシクロアルキルとしては７～１２個の炭素原子を、ポリサイクルとしては最大約２０個の炭素原子を有することができる。

【0034】

「ヘテロサイクル」という用語は、１つ以上のヘテロ原子を有する芳香性または非芳香性の環を意味し、飽和または不飽和であってもよく、単環または多環であってもよい。例えば、「４～１０員のヘテロサイクル」とは、ヘテロ原子および炭素原子を含む合計４～１０個の原子炉骨格からなるヘテロサイクルを意味する。具体的には、４～１０員のヘテロサイクルは、アゼチジン、ジアゼチジン、ピロリジン、ピロール、イミダゾリジン、イミダゾール、ピラゾリジン、ピラゾール、オキサゾリジン、オキサゾール、イソオキサゾリジン、イソオキサゾール、チアゾリジン、チアゾール、イソチアゾリジン、イソチアゾール、ピペリジン、ピリジン、ピペラジン、ジアジン、モポリン、チオモポリン、アゼパン、ジアゼパンなどを含むことができる。

【0035】

「ヘテロアリール」という用語は、環内に少なくとも１つ以上のヘテロ原子を有する芳香族ヘテロシクリルを指す。ヘテロアリールの非限定的な例には、ピリジニル、ピロリル、オキサゾリル、インドリル、イソインドリル、フリニル、フラニル、チエニル、ベンゾフラニル、ベンゾチオフェニル、カルバゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、イソオキサゾリル、ピラゾリル、イソチアゾリル、キノリル、イソキノリル、ピリダジル、ピリミジル、ピラジル（これらは環に１つ以上の置換基を有してもよい）などがある。

【0036】

「ヘテロシクロアルキル」という用語は、環内に１つ以上のヘテロ原子を有する非芳香族ヘテロシクリルを指すことができる。ヘテロシクロアルキルは、二重結合の存在により環が芳香性（Ａｒｏｍａｔｉｃ）を有さない範囲で、環内に１つ以上の炭素－炭素二重結合または炭素－ヘテロ原子二重結合を有することができる。ヘテロシクロアルキルの非限定的な例には、アゼチジニル、アジリジンイル、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジンイル、ホモピペラジンイル、モポリノ、チオモポリノ、テトラヒドロフランイル、テトラヒドロチオフランイル、テトラヒドロピランイル、ピランイル（これらは環に１つ以上の置換基を有してもよい）などがある。

【0037】

「ヘテロ原子」という用語は、炭素（Ｃ）以外の原子を意味し、具体的には窒素（Ｎ）、酸素（Ｏ）または硫黄（Ｓ）原子であり得る。

【0038】

「置換」という用語は、指定された原子上の原子が（Ｖａｌｅｎｃｅ）を超えずにこのような置換から化学的に安定した化合物となるように、分子構造体内の水素原子を置換基で置き換えることを指すことができる。例えば、「グループＡが置換基Ｂに置換」されるというのは、グループＡの骨格を構成する炭素などの原子に結合された水素原子が置換基Ｂに置換され、グループＡと置換基Ｂが共有結合を形成することを意味することができる。

【0039】

前記Ｚは、Ｚがｐ－トリルと（４－クロロメチル－フェニル）、（２－クロロ－ピリジン－３－イル）、（２－フルオロ－フェニル）、（３、４－ジフルオロ－フェニル）、（４－メトキシ－フェニル）、ベンゾ［１、３］ジオキソール－イル、（４－エチル－フェニル）、ｏ－トリル、（２－クロロ－フェニル）、（３－メチル－チオフェン－２－イル）、ベンゾ［ｂ］チオフェン－２－イル、（３－フルオロ－フェニル）、（４－ｔｅｒｔ－ブチル－フェニル）、（２－メトキシ－フェニル）、（２、ジフルオロ－フェニル）、チオフェン－２－イル、（２、４－ジフルオロ－フェニル）、（３－クロロ－フェニル）、ｍ－トリル、（４－トリフルオロメチル－フェニル）、（４－フルオロ－フェニル）、（３－メトキシ－フェニル）、フェニル、（２、６－ジフルオロ－フェニル）、（２、ジメチル－フラン－３－イル）、（４－ピロール－１－イル－フェニル）、（３－ジメチルアミノ－フェニル）、ビフェニル－４－イル、（４－ジメチルアミノ－フェニル）、ベンゾ［１、２、５］オキサジアゾール－イル、ｍ－トリル、（２－トリフルオロメチル－フェニル）、（６－クロロ－ピリジン－３－イル）、（３、ビス－トリフルオロメチル－フェニル）、ラン－２－イル、（４－ニトロ－フェニル）、（３、４－ジメトキシ－フェニル）、（３－トリフルオロメトキシ－フェニル）、ナフタレン－１－イル、シクロヘキシル、ピリジン－３－イル、ピリジン－４－イル、シクロペンチル、シクロプロピル、（４－ペンチルオキシ－フェニル）、（３、４、トリメトキシ－フェニル）、（４－イソブチル－フェニル）、シクロブチル、（１－アセチル－ピペリジン－４－イル）、イソオキサゾール－イル、［２－クロロ－６－フルオロ－フェニル）－メチル－イソオキサゾール－４－イル］または［２－クロロ－フェニル）－メチル－イソオキサゾール－４－イル］であり得る。具体的に、前記Ｚは（２－フルオロ－フェニル）と（３、４－ジフルオロ－フェニル）、（２－クロロ－フェニル）、（３－フルオロ－フェニル）、（２、５－ジフルオロ－フェニル）、（２、４－ジフルオロ－フェニル）、（３－クロロ－フェニル）、（４－フルオロ－フェニル）、または（２、６－ジフルオロ－フェニル）であり得る。

【0040】

前記の化学式１で表される化合物は、早期終止コドン（ｐｒｅｍａｔｕｒｅｓｔｏｐｃｏｄｏｎｓ）をｒｅａｄ－ｔｈｒｏｕｇｈすることができる。

【0041】

前記の化学式１で表される化合物は、３－［５－（２－フルオロ－フェニル）－［１、２、４］オキサジアゾール－３－イル］－安息香酸であり得る。前記化合物は、下記の化学式２で表される。

【0042】

【化2】

前記の化学式２で表される化合物は、アタルレン（Ａｔａｌｕｒｅｎ）、ＰＣＴ１２４、またはトランスラナ（Ｔｒａｎｓｌａｒｎａ）とも呼ばれ、早期終止コドンを（ｐｒｅｍａｔｕｒｅｓｔｏｐｃｏｄｏｎｓ）をｒｅａｄ－ｔｈｒｏｕｇｈすることができる。

【0043】

前記神経線維腫症治療剤は、前記化合物の医薬的に許容される塩を含むことができる。前記医薬的に許容される塩は、ヒトに対する毒性が低くなければならず、母化合物の生物学的活性および物理化学的特性に何らの否定的な影響を及ぼさないものであり得る。

【0044】

例えば、前記医薬的に許容される塩は、アルカリ金属塩（ナトリウム塩など）またはアルカリ土類金属塩（カリウム塩など）であり得る。前記アルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩は、例えば、前記化合物を過剰のアルカリ金属水酸化物またはアルカリ土類金属水酸化物の溶液中に溶解させ、未溶解の化合物の塩を濾過した後、濾液を蒸発および乾燥させることにより得ることができる。

【0045】

さらに、前記化合物は、キラル炭素中心を有してもよく、したがって、ＲまたはＳ異性体、ラセミ化合物、個々の鏡像異性体または混合物、個々のジアステレオマーまたは混合物の形態で存在してもよく、このような全ての立体異性体およびこれらの混合物は本発明の範囲に属することができる。

【0046】

さらに、前記化合物は、前記化合物の水和物および溶媒和物を含むことができる。前記水和物および溶媒和物は、公知の方法を使用して製造することができ、無毒性および水溶性であることが望ましい。特に、望ましくは、前記水和物および溶媒和物は、それぞれ水およびアルコール性溶媒（特にエタノールなど）の１～５個の分子が結合したものであり得る。

【0047】

前記Ｒａｓ－ＧＴＰタンパク質および／または活性化したｐ－ＥＲＫタンパク質の発現レベルの測定は、神経線維腫症治療剤に対する感受性を予測するために、個体の生物学的サンプルにおいて前記タンパク質の存在およびそのタンパク質の発現の程度を確認する過程であり、前記タンパク質に対して特異的に結合する分子を利用してタンパク質の量を確認するものであってもよい。

【0048】

前記タンパク質の発現レベルを測定することができる製剤は、モノクローナル（ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ）抗体、ポリクローナル（ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ）抗体、キメリック（ｃｈｉｍｅｒｉｃ）抗体、リガンド（ｌｉｇａｎｄ）、ＰＮＡ（ｐｅｐｔｉｄｅｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄ）、アプタマー（ａｐｔａｍｅｒ）およびナノパーティクル（ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ）からなる群から選択されるいずれか１つ以上であってもよいが、これらに限定されるものではない。

【0049】

このための分析方法としては、ウェスタンブロッティング（Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ）、ＥＬＩＳＡ（ｅｎｚｙｍｅｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔａｓｓａｙ）、放射線免疫分析（Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ；ＲＩＡ）、放射線免疫拡散法（ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｄｉｆｆｕｓｉｏｎ）、オウクテロニー（Ｏｕｃｈｔｅｒｌｏｎｙ）免疫拡散法、ロケット（ｒｏｃｋｅｔ）、免疫電気泳動法、免疫沈降分析法（ｉｍｍｕｎｏｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎａｓｓａｙ）、免疫組織化学的分析（ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌａｎａｌｙｓｉｓ）、補体固定分析法（ＣｏｍｐｌｅｍｅｎｔＦｉｘａｔｉｏｎＡｓｓａｙ）、ＦＡＣＳ（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅａｃｔｉｖａｔｅｄｃｅｌｌｓｏｒｔｅｒ）、タンパク質チップ（ｐｒｏｔｅｉｎｃｈｉｐ）、２次元電気泳動分析、タンパク質質量分析、液体クロマトグラフィー質量分析（ＬｉｑｕｉｄＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ－ＭａｓｓＳｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ，ＬＣ－ＭＳ）、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ（ＬｉｑｕｉｄＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ－ＭａｓｓＳｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ／ＭａｓｓＳｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ（ＭａｔｒｉｘＤｅｓｏｒｐｔｉｏｎ／ＩｏｎｉｚａｔｉｏｎＴｉｍｅｏｆＦｌｉｇｈｔＭａｓｓＳｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）分析、ＳＥＬＤＩ－ＴＯＦ（ＳｕｌｆａｃｅＥｎｈａｎｃｅｄＬａｓｅｒＤｅｓｏｒｐｔｉｏｎ／ＩｏｎｉｚａｔｉｏｎＴｉｍｅｏｆＦｌｉｇｈｔＭａｓｓＳｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）分析などがあるが、これに限定されるものではない。

【0050】

一具体例によれば、前記Ｒａｓ－ＧＴＰタンパク質の発現レベルを測定することができる製剤は、Ｒａｓ－ＧＴＰタンパク質に特異的に結合し、Ｒａｓ－ＧＤＰタンパク質には結合しないものであり得る。

【0051】

一具体例によれば、前記活性化されたｐ－ＥＲＫタンパク質の発現レベルを測定することができる製剤は、ｐ－ＥＲＫタンパク質に特異的に結合するものであり得る。

【0052】

前記タンパク質をコードする遺伝子の発現レベルの測定は、神経線維腫症治療剤に対する感受性を予測するために個体の生物学的サンプルにおいて前記タンパク質をコードする遺伝子の存在の有無とその遺伝子の発現の程度を確認する過程であり、前記遺伝子に特異的に結合する分子を利用して遺伝子の量を確認するものであり得る。

【0053】

前記タンパク質をコードする遺伝子の発現レベルを測定することができる製剤は、前記遺伝子に特異的に結合するプライマー（ｐｒｉｍｅｒ）対、プローブ（ｐｒｏｂｅ）およびアンチセンスヌクレオチド（ａｎｔｉｓｅｎｓｅｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）からなる群から選択されるいずれか１つ以上であり得るが、これに限定されるものではない。

【0054】

そのための分析方法としては、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ－ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ；ＲＴ－ＰＣＲ）、リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（ｒｅａｌｔｉｍｅ－ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ）、ＲＮａｓｅ保護分析法（ＲＮａｓｅ保護分析法（ＲＮａｓｅｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎａｓｓａｙ；ＲＰＡ））、ノーザンブロッティング（Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ）およびＤＮＡチップなどがあるが、これらに限定されるものではない。

【0055】

前記神経線維腫症は、ＮＦ１遺伝子に終止コドン突然変異を有するものであり得る。

【0056】

「終止コドン突然変異（ｓｔｏｐｃｏｄｏｎｍｕｔａｔｉｏｎ）」という用語は、突然変異によって塩基配列の一部が終止コドンであるＵＡＧ、ＵＡＡ、ＵＡＧのうち１つになり、ポリペプチドの合成が中断されることを意味することができる。

【0057】

前記終止コドン突然変異は、ＤＮＡ塩基が他の塩基と置換される点、突然変異（ｐｏｉｎｔｍｕｔａｔｉｏｎ）のうち１つであるナンセンス突然変異（ｎｏｎｓｅｎｓｅｍｕｔａｔｉｏｎ）または構造移動突然変異（Ｆｒａｍｅｓｈｉｆｔｍｕｔａｔｉｏｎ）によるものであり得る。

【0058】

「ノンセンス突然変異（ｎｏｎｓｅｎｓｅｍｕｔａｔｉｏｎ）」という用語は、ＤＮＡ塩基配列がタンパク質に転換されるとき、塩基配列の一部が終止コドン（ＵＡＧ、ＵＡＡ、ＵＧＡの１つ）に転換され、これ以上はタンパク質の合成が行われない突然変異を意味する。

【0059】

「構造移動突然変異（Ｆｒａｍｅｓｈｉｆｔｍｕｔａｔｉｏｎ）」という用語は、ＤＮＡ塩基配列に１個または２個または３の倍数ではない数のヌクレオチドの挿入（ｉｎｓｅｒｔ）または欠失（ｄｅｌｅｔｉｏｎ）になる変異によって遺伝子の転写、翻訳過程を経て生成されるタンパク質のアミノ酸配列は大きく異なる突然変異を意味することができる。

【0060】

一具現例において、前記終止コドン突然変異は、ｉ）ＮＦ１遺伝子のＤＮＡ塩基配列において５２４２番目の塩基であるシチジン（Ｃ）がチミン（Ｔ）に置換されてＮＦ１タンパク質を構成する１７４８番目のアミノ酸であるアルギニン（Ａｒｇ、Ｒ）が終止コドンに転換、ｉｉ）ＮＦ１遺伝子のＤＮＡ塩基配列において２５６０番目の塩基であるシチジン（Ｃ）がチミン（Ｔ）に置換されてＮＦ１タンパク質を構成する８５４番目のアミノ酸であるグルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）が終止コドンに転換、ｉｉｉ）ＮＦ１遺伝子のＤＮＡ塩基配列において４５３７番目の塩基であるシチジン（Ｃ）がチミン（Ｔ）に置換されてＮＦ１タンパク質を構成する１５１３番目のアミノ酸であるアルギニン（Ａｒｇ、Ｒ）が終止コドンに転換、ｉｖ）ＮＦ１遺伝子のＤＮＡ塩基配列において２９７８番目の塩基であるチミン（Ｔ）がグアニン（Ｇ）に置換されてＮＦ１タンパク質を構成する９９３番目のアミノ酸であるロイシン（Ｌｅｕ、Ｌ）が終止コドンに転換、ｖ）ＮＦ１遺伝子のＤＮＡ塩基配列において７４８６番目の塩基であるシチジン（Ｃ）がチミン（Ｔ）に置換されてＮＦ１タンパク質を構成する２４９６番目のアミノ酸であるアルギニン（Ａｒｇ、Ｒ）が終止コドンに転換されたものであり得る。

【0061】

他の具現例において、神経線維腫症患者の中でＮＦ１遺伝子に終止コドン突然変異を有する患者を選別し、選別された患者の線維芽細胞でＲａｓ－ＧＴＰ活性度を測定した後、アタルレンを処理した結果、Ｒａｓ－ＧＴＰ発現が健常者と比較して有意に増加した患者群でＲａｓ－ＧＴＰおよびｐ－ＥＲＫタンパク質の発現が有意に減少することを通じて、アタルレンが神経線維腫症の治療効果を有することを確認することができる。したがって、ＮＦ１遺伝子に終止コドン突然変異を有する神経線維腫症患者のうち、活性状態のＲａｓ（Ｒａｓ－ＧＴＰ）および／または活性化されたｐ－ＥＲＫタンパク質の発現の増減の有無によって、アタルレンに対する感受性を予測することができる。

【0062】

別の態様は、前記バイオマーカー組成物を含む神経線維腫症治療剤に対する感受性予測用キットを提供する。

【0063】

前記キットは、個体から単離された生物学的サンプルを利用して前記神経線維腫症治療剤に対する感受性を予測することができる。具体的には、前記キットは個体から採取した線維芽細胞を利用して前記神経線維腫症治療剤に対する感受性を予測することができる。

【0064】

前記キットには、前記タンパク質または遺伝子の発現レベルを測定するための製剤だけでなく、免疫学的分析に一般的に使用されるツール、試薬などが含まれ得る。

【0065】

前記ツールまたは試薬の一例として、適切な担体、検出可能なシグナルを生成することができる標識物質、発色団、溶解剤、洗浄剤、緩衝剤、安定化剤などが含まれ得るが、これらに限定されるものではない。標識物質が酵素である場合には、酵素活性を測定することができる基質および反応停止剤を含むことができる。担体は可溶性担体、不溶性担体があり、可溶性担体の一例として当該技術分野で公知の生理学的に許容される緩衝液、例えばＰＢＳがあり、不溶性担体の一例としてポリスチレン、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリエステル、ポリアクリロニトリル、フッ素樹脂、架橋デキストラン、ポリサッカロイド、ラテックスに金属をメッキした磁性微粒子のような高分子、その他の紙、ガラス、金属、アガロースおよびこれらの組み合わせであり得る。

【0066】

前記バイオマーカー組成物については、前記で説明した通りである。

【0067】

別の態様は、個体から得られた生物学的サンプルにおいて、（１）ＧＴＰが結合して活性化されたＲＡＳ（Ｒａｓ－ＧＴＰ）タンパク質および活性化されたｐ－ＥＲＫタンパク質からなる群から選択されるいずれか１つ以上のタンパク質と、（２）前記タンパク質をコードする遺伝子の発現レベルを測定することを含む、神経線維腫症治療剤に対する感受性予測に必要な情報を提供する方法を提供する。

【0068】

前記方法は、活性化されたＲａｓ－ＧＴＰタンパク質またはそれをコードする遺伝子の発現レベルが、正常個体から得られた生物学的サンプルで測定された発現レベルより増加した場合、神経線維腫症治療剤に対する感受性が高いと判断し、逆にその発現レベルが低い場合は神経線維腫症治療剤に対する感受性が低いと判断するステップをさらに含むことができる。

【0069】

前記方法は、活性化されたｐ－ＥＲＫタンパク質またはそれをコードする遺伝子の発現レベルが、正常個体から得られた生物学的サンプルで測定された発現レベルより増加した場合、神経線維腫症治療剤に対する感受性が高いと判断し、逆にその発現レベルが低い場合は神経線維腫症治療剤に対する感受性が低いと判断するステップをさらに含むことができる。

【0070】

「生物学的サンプル」という用語は、一態様によるＲａｓ－ＧＴＰタンパク質またはそれをコードする遺伝子の発現レベルおよび／またはｐ－ＥＲＫタンパク質またはそれをコードする遺伝子の発現レベルを測定することができる個体から得られたすべてのサンプルを意味することができる。

【0071】

前記生物学的サンプルは、血液、血漿、血清、尿、唾液、喀痰、脳脊髄液、細胞、細胞培養液、組織抽出物または腫瘍組織であり得るが、これらに限定されるものではない。具体的には、前記生物学的サンプルは、個体から採取した線維芽細胞であり得る。前記生物学的サンプルは、当技術分野で通常使用されている方法で処理して準備することができる。

【0072】

別の態様は、下記の化学式１で表される化合物、またはその医薬的に許容される塩を有効成分として含む神経線維腫症の予防または治療用医薬組成物を提供する。

【0073】

【化3】

【0074】

前記の化学式１で表される化合物およびその医薬的に許容される塩は、前記で説明した通りである。

【0075】

前記の化学式１で表される化合物は、３－［５－（２－フルオロ－フェニル）－［１、２、４］オキサジアゾール－３－イル］－安息香酸であり得る。

【0076】

前記神経線維腫症は、ＮＦ１遺伝子に終止コドン突然変異を有するものであり得る。

【0077】

前記神経線維腫症は、Ｒａｓタンパク質の活性度が増加したものであり得る。

【0078】

前記神経線維腫症については、前記で説明した通りである。

【0079】

一具現例において、神経線維腫症患者の中でＮＦ１遺伝子に終止コドン突然変異を有する患者を選別し、選別された患者の線維芽細胞でＲａｓ－ＧＴＰ活性度を測定した後、アタルレンを処理した結果、Ｒａｓ－ＧＴＰ活性度が健常者と比較して有意に増加した患者群でＲａｓ－ＧＴＰおよびｐ－ＥＲＫタンパク質の発現が有意に減少することを通じて、アタルレンが神経線維腫症の治療効果を有することを確認することができる。したがって、アタルレンは、活性状態のＲａｓ（Ｒａｓ－ＧＴＰ）の発現が増加したＮＦ１遺伝子に終止コドン突然変異を有する神経線維腫症患者の治療用途に使用することができる。

【0080】

前記医薬組成物は、有効成分として前記化合物を組成物の総重量を基準に約０．１重量％～約９０重量％、具体的には約０．５重量％～約７５重量％、より具体的には約１重量％～約５０重量％で含有することができる。

【0081】

前記医薬組成物は、通常の方法に従って製剤に配合される一般的で無毒性の医薬的に許容される添加剤を含むことができる。例えば、前記医薬組成物は、医薬的に許容される担体、希釈剤または賦形剤をさらに含むことができる。

【0082】

前記医薬組成物に使用される添加剤の例には、甘味剤、結合剤、溶媒、溶解補助剤、湿潤剤、乳化剤、等張化剤、吸収剤、崩壊剤、酸化防止剤、保存剤、潤滑剤、滑沢剤、充填剤、香味剤などを含むことができる。例えば、前記添加剤は、ラクトース、デキストロース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、セルロース、グリシン、シリカ、タルク、ステアリン酸、ステアリン、ステアリン酸マグネシウム、アルミノケイ酸マグネシウム、デンプン、ゼラチン、トラガカントアルギン酸、ナトリウムアルギネート、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、寒天、水、エタノール、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、塩化ナトリウム、塩化カルシウム、オレンジエッセンス、イチゴエッセンス、バニラ香などを含むことができる。

【0083】

前記医薬組成物は、経口投与（例えば、錠剤、丸剤、散剤、カプセル剤、シロップまたはエマルジョン）または非経口投与（例えば、筋肉内、静脈内または皮下注射）のための様々な製剤形態で配合されることができる。

【0084】

具体的には、前記医薬組成物は経口投与用製剤として配合することができ、このとき使用される添加剤には、セルロース、カルシウムシリケート、トウモロコシデンプン、ラクトース、スクロース、デキストロース、リン酸カルシウム、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ゼラチン、タルク、界面活性剤、懸濁剤、乳化剤、希釈剤などが含まれ得る。また、滑沢剤（Ｇｌｉｄａｎｔ）の例には、コロイド状二酸化ケイ素（ＣｏｌｌｏｉｄａｌＳｉｌｉｃｏｎＤｉｏｘｉｄｅ）、マグネシウムシリケート（ＭａｇｎｅｓｕｉｍＳｉｌｌｉｃａｔｅ）などがあり、希釈剤（Ｄｉｌｕｅｎｔ）の例には、微結晶セルロース（ＭｉｃｒｏｃｒｙｓｔａｌｌｉｎｅＣｅｌｌｕｌｏｓｅ）、ラクトース無水物（ＬａｃｔｏｓｅＡｎｈｙｄｒｏｕｓ）、ラクトース一水和物（ＬａｃｔｏｓｅＭｏｎｏｈｙｄｒａｔｅ）、ケイ化（ｓｉｌｉｃｉｆｉｅｄ）ＭＣＣＨＤ９０などがあり、崩壊剤（Ｄｉｓｉｎｔｅｇｒａｎｔ）の例には、クロスカルメロースナトリウム（ＣｒｏｓｃａｒｍｅｌｌｏｓｅＳｏｄｉｕｍ）、クロスポビドン（Ｃｒｏｓｐｏｖｉｄｏｎｅ）などがあり、潤滑剤（Ｌｕｂｒｉｃａｎｔ）の例には、マグネシウムステアレート（ＭａｇｎｅｓｉｕｍＳｔｅａｒａｔｅ）、ラウリル硫酸ナトリウム（ＳｏｄｉｕｍＬａｕｒｙｌＳｕｌｆａｔｅ）、ステアリン酸（ＳｔｅａｒｉｃＡｃｉｄ）などがある。

【0085】

また、経口投与のための液状製剤には、懸濁剤、乳剤、シロップ剤などが例示されることができ、一般的に使用される単純希釈剤である水、液体パラフィン以外の様々な賦形剤、例えば湿潤剤、甘味剤、芳香剤、保存剤などが含まれ得る。

【0086】

さらに、非経口投与用のための製剤には、滅菌水溶液剤、非水性溶剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥製剤および坐剤が含まれる。非水性溶剤、懸濁剤には、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブオイルのような植物油、エチルオレートのような注射可能なエステルなどが使用されてもよい。座制の基剤には、ウィテプソル、マクロゴール、ツイン６１、カカオジ、ラウリンジ、グリセロゼラチンなどが使用されてもよい。一方、注射剤には、溶解剤、等張化剤、懸濁化剤、乳化剤、安定化剤、防腐剤などの従来の添加剤が含まれてもよい。

【0087】

前記医薬組成物は、治療学的に有効な量または医薬的に有効な量で患者に投与されてもよい。

【0088】

「治療学的に有効な量」または「医薬的に有効な量」という用語は、対象疾患を予防または治療するのに有効な化合物または組成物の量であり、医学的治療に適用可能な合理的な利益／リスク比率で疾患を治療するのに十分であり、副作用を引き起こさない程度の量を意味する。前記有効量のレベルは、患者の健康状態、疾患の種類、重症度、薬物の活性、薬物に対する感受性、投与方法、投与時間、投与経路および排出比率、治療期間、配合または同時使用される薬物を含む要素および他の医学分野においてよく知られている要因によって決定され得る。

【0089】

前記医薬組成物は、個々の治療剤として投与するか、他の治療剤と組み合わせて投与することができ、従来の治療剤と順次または同時に投与することができ、単一または複数投与することができる。前記の要素のすべてを考慮して、副作用なしに最小限の量で最大の効果を得ることができる量を投与することが重要であり、これは当業者によって容易に決定され得る。

【0090】

具体的には、前記医薬組成物において前記化合物の有効量は、患者の年齢、性別、体重に応じて変わることができ、一般的には、体重１ｋｇ当たり約０．１ｍｇ～約１，０００ｍｇ、または約５ｍｇ～約２００ｍｇを毎日あるいは、１日１回～３回に分けて投与することができる。しかしながら、投与経路、疾病の重症度、性別、体重、年齢などによって増減することができるので、範囲はこれに限定されない。

【0091】

さらに、前記医薬組成物は、化学療法、放射線療法、免疫療法、ホルモン治療、骨髄移植、幹細胞代替治療、他の生物学的治療、外科的介入、またはそれらの組み合わせと併用して腫瘍療法のために投与されてもよい。例えば、長期的に進行される他の治療戦略と共に補助療法として使用されるか、または重症患者における腫瘍退縮または化学予防療法後の患者の状態を維持するために使用されてもよい。

【0092】

別の態様は、（ａ）ＮＦ１遺伝子突然変異を有する生物学的試料を試験物質と接触させるステップと、（ｂ）前記接触した生物学的試料において、（１）ＧＴＰが結合して活性化されたＲＡＳ（Ｒａｓ－ＧＴＰ）タンパク質および活性化されたｐ－ＥＲＫタンパク質からなる群から選択されるいずれか１つ以上のタンパク質と、（２）前記タンパク質をコードする遺伝子の発現レベルを測定するステップを含む、神経線維腫症治療剤のスクリーニング方法を提供する。

【0093】

前記生物学的試料は、細胞または動物モデルであり得る。前記試料は、神経線維腫症患者から単離された試料であり得る。

【0094】

一具体例によれば、前記スクリーニング方法は、前記試験物質と接触させた後の生物学的試料のＲａｓ－ＧＴＰタンパク質またはそれをコードする遺伝子の発現レベルが、試験物質と接触させる前と比較して減少した場合、前記試験物質を神経線維腫症治療剤と判断するステップを含むことができる。

【0095】

一具体例によれば、前記スクリーニング方法は、前記試験物質と接触させた後の生物学的試料の活性化されたｐ－ＥＲＫタンパク質またはそれをコードする遺伝子の発現レベルが、試験物質と接触させる前と比較して減少した場合、前記試験物質を神経線維腫症治療剤と判断するステップを含むことができる。

【0096】

前記スクリーニング方法は、前記試験物質と接触した生物学的試料のＲａｓ－ＧＴＰタンパク質またはそれをコードする遺伝子の発現レベルを測定した結果と、試験物質と接触していない生物学的試料から測定された結果とを比較するステップを含むことができる。

【0097】

前記スクリーニング方法は、前記試験物質と接触した生物学的試料の活性化されたｐ－ＥＲＫタンパク質またはそれをコードする遺伝子の発現レベルを測定した結果と、試験物質と接触していない生物学的試料から測定された結果とを比較するステップを含むことができる。

【0098】

別の態様は、神経線維腫症治療剤に対する感受性を予測するための、（１）ＧＴＰが結合して活性化されたＲＡＳ（Ｒａｓ－ＧＴＰ）タンパク質および活性化されたｐ－ＥＲＫタンパク質からなる群から選択されるいずれか１つ以上のタンパク質と、（２）前記タンパク質をコードする遺伝子の発現レベルを測定することができる製剤を含むバイオマーカーの用途を提供する。

【0099】

別の態様は、個体から得られた生物学的サンプルにおいて、（１）ＧＴＰが結合して活性化されたＲＡＳ（Ｒａｓ－ＧＴＰ）タンパク質および活性化されたｐ－ＥＲＫタンパク質からなる群から選択されいずれか１つ以上のタンパク質と、（２）前記タンパク質をコードする遺伝子の発現レベルを測定するステップを含む、神経線維腫症患者の神経線維腫症治療剤に対する感受性を予測する方法を提供する。

【0100】

別の態様は、下記の化学式１で表される化合物、またはその医薬的に許容される塩を有効成分として含む組成物を個体に投与するステップを含む、神経線維腫症を予防または治療する方法を提供する。

【0101】

【化4】

【0102】

別の態様は、下記の化学式１で表される化合物、またはその医薬的に許容される塩を有効成分として含む組成物を神経線維腫症の予防または治療に使用するための治療剤の製造に使用するための用途を提供する。

【0103】

【化5】

【0104】

重複する内容は、本明細書の複雑性を考慮して省略し、本明細書で他に定義されていない用語は、本発明が属する技術分野において一般的に使用される意味を有するものである。

【発明の効果】

【0105】

一態様による神経線維腫症治療剤に対する感受性予測用バイオマーカー組成物を利用すると、個体の生物学的サンプルにおいてＧＴＰが結合して活性化されたＲＡＳ（Ｒａｓ－ＧＴＰ）タンパク質またはそれをコードする遺伝子および／または活性化されたｐ－ＥＲＫタンパク質またはそれをコードする遺伝子の発現レベルを測定する簡単な方法を通じて、神経線維腫症治療剤に対する感受性を正確に診断することができる。

【0106】

一態様による神経線維腫症の予防または治療用医薬組成物を利用すると、Ｒａｓタンパク質の活性を抑制するため、Ｒａｓタンパク質の活性度が増加した神経線維腫症の予防または治療用途として有用に使用することができる。

【図面の簡単な説明】

【0107】

【図1】図１は、一態様によりＮＦ１遺伝子に終止コドン突然変異が存在すると選別された神経線維腫症患者の終止コドン突然変異情報を示す図である。

【図2】図２は、一態様によりＮＦ１遺伝子に終止コドン突然変異が存在すると選別された神経線維腫症患者のＧＴＰが結合して活性化されたＲＡＳ（Ｒａｓ－ＧＴＰ）タンパク質の発現量を測定した結果である。

【図3】図３は、一態様によりＮＦ１遺伝子に終止コドン突然変異が存在すると選別された神経線維腫症患者のうち、Ｒａｓ－ＧＴＰの発現量が高い患者の線維芽細胞にアタルレン（ＰＴＣ）３０μｇ／ｍｌを投与する前と後のＲａｓ－ＧＴＰの発現量の変化を測定した結果である。

【図4】図４は、一態様によりＮＦ１遺伝子に終止コドン突然変異が存在すると選別された神経線維腫症患者のうち、Ｒａｓ－ＧＴＰの発現量が高い患者の線維芽細胞にアタルレン（ＰＴＣ－１２４）２０μｇ／ｍｌまたは３０μｇ／ｍｌを投与する前と後のｐ－ＥＲＫの発現量を比較するために電気泳動した結果である。

【図5】図５は、一態様によりＮＦ１遺伝子に終止コドン突然変異が存在すると選別された神経線維腫症患者のうち、Ｒａｓ－ＧＴＰの発現量が高い患者の線維芽細胞にアタルレン（ＰＴＣ－１２４）２０μｇ／ｍｌまたは３０μｇ／ｍｌを投与する前と後のＥＲＫとｐ－ＥＲＫの発現比率を測定した結果である。

【発明を実施するための形態】

【0108】

以下、本発明を実施形態によりさらに詳細に説明する。しかしながら、これらの実施形態は、本発明を例示的に説明するためのものであり、本発明の範囲がこれらの実施形態に限定されるものではない。

【0109】

実施形態１神経線維腫症患者のうち、ＮＦ１遺伝子に終止コドン変異が存在する患者の選別
神経線維腫症患者から抽出したＤＮＡを対象に神経線維腫症の原因遺伝子であるＮＦ１遺伝子をポリメラーゼ連鎖反応（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ、ＰＣＲ）を利用して増幅した後、サンガーシーケンシング（ｓａｎｇｅｒｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ）を行った。分析結果に基づいて、ＮＦ１遺伝子に終止コドン変異が存在する２２人の患者を選別した。選別された患者のＮＦ１遺伝子に存在する終止コドン変異情報は、以下の表１に記載される通りである（図１）。

【0110】

【表1】

実施形態２選別された神経線維腫症患者のＲＡＳタンパク質の活性度の測定
健常者と実施形態１で選別された神経線維腫症患者の皮膚線維芽細胞において、以下のような方法でＲＡＳタンパク質の活性度を比較した。

【0111】

供与された健常者および神経線維腫症患者のそれぞれの皮膚線維芽細胞をＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ＋１％Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ－Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎの培地で培養した。細胞密度が容器の７０～８０％になるように培養した後、ＦＢＳを除いた培地に交換した後、細胞を培養して２４時間のｓｔａｒｖａｔｉｏｎ過程を経た。次に、細胞をＦＢＳが含まれた培地に移動させた後、Ｒａｓ活性剤（ａｃｔｉｖａｔｏｒ）であるＥＧＦ（ｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ）を１００ｎｇ／ｍｌ濃度に希釈して処理し、５分間３７℃で反応させて各サンプルを準備した。ＲＡＳタンパク質の活性度分析は、従来の測定方式であるＰｕｌｌ－ｄｏｗｎａｓｓａｙの欠点を補完して少量の細胞と同時に多くのサンプルが測定可能なＣｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ社のＧ－ＬＩＳＡＲａｓａｃｔｉｖａｔｉｏｎＡｓｓａｙＢｉｏｃｈｅｍＫｉｔ（ＡｂｓｏｒｂａｎｃｅＢａｓｅｄ）（Ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ，ＣａｔＮｏ．ＢＫ１３１）を使用した。

【0112】

ＲＡＳタンパク質の活性度分析方法を簡単に説明すると、ＥＧＦ処理後にキットに含まれた細胞溶解（ｃｅｌｌｌｙｓｉｓ）溶液を利用して細胞を溶解させ、上清液のみ取得した後、上清液に含まれているタンパク質を定量化した。全てのサンプルの同様のタンパク質量を、Ｒａｓ－ＧＴＰ結合タンパク質（Ｒａｓ－ＧＴＰｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ）が結合したプレートのウェルに入れ、撹拌機で３００ｒｐｍの速度で撹拌しながら４℃で３０分間反応させた。その後、洗浄液で３回洗浄した後、結合されていないタンパク質を除去してからａｎｔｉ－Ｒａｓ抗体を入れて常温で４５分間３００ｒｐｍの速度で撹拌機で反応させた後、３回の洗浄過程を経た。洗浄液を完全に除去してから２次抗体を入れた後、１次抗体反応過程と同様に常温で４５分間４００ｒｐｍ速度で攪拌機で反応させた後、３回の洗浄過程を経た。これらの過程を通じて活性状態（ａｃｔｉｖｅｓｔａｔｅ）であるＧＴＰに結合したＲａｓ（ＧＤＰ－ｂｏｕｎｄＲａｓ）タンパク質は残り、非活性状態（ｉｎａｃｔｉｖｅｓｔａｔｅ）であるＧＤＰに結合したＲａｓ（ＧＤＰ－ｂｏｕｎｄＲａｓ）タンパク質は洗浄過程で除去される。次に、ＨＲＰｄｅｔｅｃｔｉｏｎｒｅａｇｅｎｔを入れて１５分間常温で反応させた後、４９０ｎｍで吸光度を測定することにより、Ｒａｓ－ＧＴＰの存在量を通じてＲａｓタンパク質の活性度を測定する方式である。

【0113】

その結果、健常者と比較して、ほとんどの神経線維腫症患者由来の線維芽細胞でＲａｓ－ＧＴＰのシグナルが高く測定されることを通じて、Ｒａｓタンパク質の活性度が増加していることを確認した（図２）。

【0114】

実施形態３アタルレン（Ａｔａｌｕｒｅｎ）処理によるＲＡＳタンパク質活性度の変化の測定
供与された健常者および神経線維腫症患者の皮膚線維芽細胞をＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ＋１％Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ－Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎの培地でアタルレンを２０μｇ／ｍｌおよび３０μｇ／ｍｌの濃度でそれぞれ処理した後、３日間培養した。細胞密度が容器の７０～８０％になるように培養した後、ＦＢＳを除いた培地に交換した後、細胞を培養して２４時間のｓｔａｒｖａｔｉｏｎ過程を経た。次に、細胞をＦＢＳが含まれた培地に移動させた後、Ｒａｓ活性剤であるＥＧＦ（ｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ）を１００ｎｇ／ｍｌ濃度に希釈して処理し、５分間３７℃で反応させて各サンプルを準備した。各サンプルにおけるＲａｓタンパク質の活性度の測定は、実施形態２に記載した方法と同様に行った。

【0115】

その結果、健常者と比較してＲａｓタンパク質の活性度が増加している神経線維腫症患者の皮膚線維芽細胞にアタルレンを処理した場合に、Ｒａｓ－ＧＴＰのシグナルが有意に減少することを確認した（図３）。これを通じて、アタルレンはＲａｓタンパク質の活性度を低下させることにより神経線維腫症治療効果があることが分かった。

【0116】

実施形態４アタルレン処理によるｐ－ＥＲＫ／ＥＲＫタンパク質発現量の変化の測定
ＮｕＰＡＧＥＴＭ４～１２％Ｂｒｉｓ－ＴｒｉｓＧｅｌ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を利用して実施形態３でＲａｓ活性度を測定した同様のタンパク質を電気泳動した。

【0117】

その結果、健常者の線維芽細胞では、アタルレン処理による活性状態のリン酸化されたＥＲＫ（ｐ－ＥＲＫ）発現の変化はなかったが、アタルレン処理によるＲａｓタンパク質の活性度が減少した神経線維腫症患者の繊維芽細胞ではｐ－ＥＲＫ発現が減少することを確認した（図４）。

【0118】

ＥＲＫ活性度をより正確に比較するために、前記で電気泳動したタンパク質をｈｙｂｏｎｄ－ＥＣＬｍｅｍｂｒａｎｅに移動（ｔｒａｎｓｆｅｒ）させた後、３％ｓｋｉｍｍｉｌｋを利用してｍｅｍｂｒａｎｅをブロッキング（ｂｌｏｃｋｉｎｇ）した。次に、ｍｅｍｂｒａｎｅにＥＲＫとｐ－ＥＲＫ抗体を４℃で２４時間反応させた後、ＴＢＳＴで３回洗浄した。２次抗体を常温で１時間反応させた後、ＴＢＳＴで３回洗浄した。洗浄が終わったｍｅｍｂｒａｎｅでＥＲＫとｐ－ＥＲＫの発現比率を測定した。

【0119】

その結果、健常者の線維芽細胞ではアタルレン処理によるｐ－ＥＲＫタンパク質の発現程度が多少増加したが、アタルレン処理によるＲａｓタンパク質の活性度が減少した神経線維腫症患者の線維芽細胞ではｐ－ＥＲＫ発現が減少することを確認した（図５）。

【図1】