特表 2025-500500 ＳＳＴＲ３を発現する腫瘍の治療におけるソマトスタチン作動薬の使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2025-01-09

(54)【発明の名称】ＳＳＴＲ３を発現する腫瘍の治療におけるソマトスタチン作動薬の使用

(51)【国際特許分類】

   A61K 38/12 20060101AFI20241226BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20241226BHJP

   A61K 31/155 20060101ALI20241226BHJP

   A61K 31/407 20060101ALI20241226BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20241226BHJP

   A61P 5/02 20060101ALI20241226BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20241226BHJP

   A61P 5/38 20060101ALI20241226BHJP

   A61P 5/48 20060101ALI20241226BHJP

【ＦＩ】

A61K38/12 ZNA

A61K45/00

A61K31/155

A61K31/407

A61P35/00

A61P5/02

A61P25/00

A61P5/38

A61P5/48

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024538373

(86)(22)【出願日】2022-12-22

(85)【翻訳文提出日】2024-08-26

(86)【国際出願番号】 EP2022087485

(87)【国際公開番号】W WO2023118437

(87)【国際公開日】2023-06-29

(31)【優先権主張番号】102021000032615

(32)【優先日】2021-12-24

(33)【優先権主張国・地域又は機関】IT

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】591279294

【氏名又は名称】イタルファルマコ ソシエタ ペル アチオニ

【氏名又は名称原語表記】ＩＴＡＬＦＡＲＭＡＣＯ ＳＯＣＩＥＴＡ ＰＥＲ ＡＺＩＯＮＩ

(74)【代理人】

【識別番号】110001243

【氏名又は名称】弁理士法人谷・阿部特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】ダニエラ モデーナ

(72)【発明者】

【氏名】ジョバンニ サンドローネ

(72)【発明者】

【氏名】アンドレア スティブナッツィ

(72)【発明者】

【氏名】クリスティアン ステインクーラー

(72)【発明者】

【氏名】ナタリア エス．ペレガタ

(72)【発明者】

【氏名】ステファン シュルツ

【テーマコード（参考）】

4C084

4C086

4C206

【Ｆターム（参考）】

4C084AA01

4C084AA02

4C084AA03

4C084AA19

4C084BA01

4C084BA08

4C084BA17

4C084BA23

4C084CA59

4C084MA02

4C084MA16

4C084MA23

4C084MA35

4C084MA37

4C084MA41

4C084MA43

4C084MA52

4C084MA55

4C084MA57

4C084MA60

4C084MA65

4C084MA66

4C084NA05

4C084NA06

4C084ZA022

4C084ZA152

4C084ZA592

4C084ZA662

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4C084ZC112

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4C086BC07

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4C086MA16

4C086MA23

4C086MA35

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4C086MA41

4C086MA43

4C086MA52

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4C086MA60

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4C086ZA15

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4C086ZC11

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4C206MA85

4C206MA86

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4C206NA06

4C206ZA02

4C206ZA15

4C206ZA59

4C206ZA66

4C206ZB26

4C206ZC11

(57)【要約】

本発明は、非機能性下垂体腺腫（ＮＦＰＡ）、または膵臓腫瘍、褐色細胞腫、傍神経節腫、肺カルチノイドまたは乳癌から選択される他の神経内分泌関連悪性腫瘍から選択される、ＳＳＴＲ３発現腫瘍の治療における、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩および／または溶媒和物の使用に関する。
より具体的には、本発明は、非機能性下垂体腺腫（ＮＦＰＡ）、または膵臓腫瘍、褐色細胞腫、傍神経節腫、肺カルチノイドまたは乳癌から選択される他の神経内分泌関連悪性腫瘍から選択される、ＳＳＴＲ３発現腫瘍に罹患した患者の治療における、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩および／または溶媒和物、ならびに少なくとも１つの生理学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物の使用に供する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ＳＳＴＲ３発現腫瘍の治療に使用するための、式（Ｉ）の化合物：

【化1】

またはその薬学的に許容される塩および／または溶媒和物。

【請求項2】

非機能性下垂体腺腫、ならびに膵腫瘍、褐色細胞腫、傍神経節腫、肺カルチノイドまたは乳癌から選択される神経内分泌関連悪性腫瘍の治療における使用のための、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩および／または溶媒和物。

【請求項3】

患者に毎日投与されることを特徴とする、請求項１または２に記載の使用のための化合物またはその薬学的に許容される塩および／または溶媒和物。

【請求項4】

ヒトに投与されることを特徴とする、請求項１～３のいずれかに記載の使用のための化合物またはその薬学的に許容される塩および／または溶媒和物。

【請求項5】

０．５～５ｍｇ／ｄｉｅ、好ましくは０．２～２．５ｍｇ／ｄｉｅ、より好ましくは０．１～２ｍｇ／ｄｉｅの範囲の量で患者に投与されることを特徴とする、請求項１または２に記載の使用のための化合物またはその薬学的に許容される塩および／または溶媒和物。

【請求項6】

少なくとも１つの生理学的に許容される賦形剤とともに請求項１～５のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩および／または溶媒和物を含有する医薬組成物の形態で患者に投与されることを特徴とする、請求項１～５のいずれかに記載の使用のための化合物またはその薬学的に許容される塩および／または溶媒和物。

【請求項7】

前記医薬組成物が、経口、舌下、直腸、血管内、静脈内、皮下経路、好ましくは静脈内経路により投与されることを特徴とする、請求項１～６のいずれかに記載の使用のための化合物またはその薬学的に許容される塩および／または溶媒和物。

【請求項8】

前記医薬組成物が固体または液体の形態であることを特徴とする、請求項１～７のいずれかに記載の使用のための化合物またはその薬学的に許容される塩および／または溶媒和物。

【請求項9】

前記固体形態が、粉末、錠剤、顆粒剤、凝集剤、圧縮されたピルもしくはコーティングされたピル、硬カプセルもしくはゼラチンカプセルから選択されることを特徴とする、請求項８に記載の使用のための化合物またはその薬学的に許容される塩および／または溶媒和物。

【請求項10】

前記液体形態が懸濁液、シロップまたは注射用液体であることを特徴とする、請求項８に記載の使用のための化合物またはその薬学的に許容される塩および／または溶媒和物。

【請求項11】

少なくとも１つの活性素と組み合わせて患者に投与されることを特徴とする、請求項１～１０のいずれかに記載の使用のための化合物またはその薬学的に許容される塩および／または溶媒和物。

【請求項12】

前記少なくとも１つの活性素が、インスリンの分泌促進薬(a secretagogues of the insulin)、インスリン分泌の促進剤(a promoter of the insulin secretion)、インスリン感作剤、低インスリン用量剤、ドーパミン受容体２作動性を有する薬剤、抗血管新生作用を有する薬剤または化学療法剤から選択されることを特徴とする、請求項１～１１のいずれかに記載の使用のための化合物またはその薬学的に許容される塩および／または溶媒和物。

【請求項13】

前記インスリン感作活性を有する薬剤がメトホルミンであり、前記インスリンの分泌促進剤がスルホニル尿素またはビンダグリプチンおよびナタグリニドから選択されるインクレチンベースの薬剤、インスリン分泌の促進をする薬剤がＧＬＰ－１アゴニストであり、好ましくは前記薬剤はリラグルチドまたはエキセナチドであり、ドーパミン受容体２作動性を有する前記薬剤はカベルゴリンまたはブロモクリプチンであり、前記化学療法剤はテモゾロミドである、請求項１２に記載の使用のための化合物またはその薬学的に許容される塩および／または溶媒和物。

【請求項14】

少なくとも１つの活性素と同時に、別々に、または逐次的に投与されることを特徴とする、請求項１１に記載の使用のための化合物またはその薬学的に許容される塩および／または溶媒和物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ＳＳＴＲ３発現腫瘍の治療における、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩および／または溶媒和物の使用に関する。

【背景技術】

【0002】

非機能性下垂体腺腫（ＮＦＰＡ）は、ホルモン分泌過多の臨床的証拠とは関連しない良性の下垂体前葉腫瘍である。ＮＦＰＡは主に性腺刺激ホルモン分泌細胞性の下垂体腺腫であり、すべての下垂体腫瘍の約３５％（１４～５４％）を占める。有病率は７～４１．３／１００，０００人、標準化された発生率は０．６５～２．３４／１００，０００人である。発生のピークは３０代～７０代である^1、2。

【0003】

ＮＦＰＡは、海綿静脈洞および鞍底に広がる圧迫および病変によって引き起こされる頭痛、視覚障害、および／または脳神経障害などの「腫瘤効果（mass effect）」の徴候や症状の発生時にしばしば診断される³。さらに、いくつかの場合、他の目的で行われた画像検査で偶然診断される。それぞれ正常下垂体前葉の圧迫および下垂体茎偏位による下垂体機能低下症および高プロラクチン血症がみられることもある。

【0004】

現在、ほとんどのＮＦＰＡに対する標準的な第一選択療法は、内視鏡または顕微鏡を用いた経蝶形骨手術および経頭蓋手術であり、第二選択療法は主に鞍上腫瘍に用いられる⁴。

【0005】

外科治療後のＮＦＰＡはしばしば進行し、手術単独で治療したＮＦＰＡ患者の再増殖率は１５～６６％、手術とその後の放射線治療を行った患者の再増殖率は２～２８％である^5、6。さらに、放射線治療の体系的な使用は、その副作用によって制限されている。

【0006】

したがって、補助的なおよび／または代替的な術語療法は関連する医学的ニーズである。しかしながら、その頻度にもかかわらず、ＮＦＰＡまたはＧＰＡ（性腺刺激ホルモン下垂体腺腫）に対して標準的な薬物療法は現在推奨されていない^7、8。

【0007】

ＮＦＰＡの治療について、３つの腫瘍クラスのペプチド、即ちドーパミン受容体２（ＤＲ２）作動薬、ソマトスタチン作動薬（ＳＳＡ）およびゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）類似体が試験されている。さらに、いくつかのセンターでは、進行性の腫瘍に対する治療としてテモゾロミドの使用が導入されている。

【0008】

ＤＲ２作動薬（カベルゴリンおよびブロモクリプチン）の有効性は受容体の発現と相関しており、いくつかの研究では、薬剤を手術直後に投与した場合にのみ有効性が示された。

【0009】

ＧｎＲＨ類似体の有効性の証拠は示されていない。さらに、いくつかのケースでは、性腺刺激ホルモン分泌細胞腺腫を有する患者の転移性前立腺がんに対する治療としてＧｎＲＨ作動薬を使用した場合、ＧｎＲＨ作動薬は、腫瘍の増殖を変化せずに性腺刺激ホルモン分泌を増悪し、または下垂体卒中を誘発した⁹。

【0010】

ソマトスタチン受容体ＳＳＴＲ２に結合し、ＳＳＴＲ５およびＳＳＴＲ３にはそれほど結合しないオクトレオチドおよびランレオチドのようなＳＳＡは、分泌型下垂体腺腫の治療に有効である^10~12が、ＮＦＰＡでは効果が乏しい¹³。

【0011】

同様に、ＳＳＴＲ１、２、３、５に結合する汎作動薬（pan-agonist）であるパシレオチドは、最近の第ＩＩ相臨床試験（ＮＣＴ０１２８３５４２－臨床的に非機能性の下垂体腺腫を有する患者の治療におけるパシレオチドＬＡＲ（長時間作用型放出（Long Acting Release））の有効性と安全性を評価する－パッションＩ（NCT01283542 - Evaluate the Efficacy and Safety of Pasireotide LAR (Long Acting Release) on the Treatment of Patients With Clinically Non-Functioning Pituitary Adenoma - Passion I）（非特許文献１））において、わずかな有効性しか示さず、腫瘍サイズが少なくとも２０％縮小した患者はわずかに１６．７％であった^8、14。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0012】

【特許文献1】国際特許出願ＷＯ２００９／０７１４６０Ａ２（ＷＯ２００９／０７１４６０Ａ２）

【非特許文献】

【0013】

【非特許文献1】NCT01283542 - Evaluate the Efficacy and Safety of Pasireotide LAR (Long Acting Release) on the Treatment of Patients With Clinically Non-Functioning Pituitary Adenoma - Passion I

【非特許文献2】Handbook of Pharmaceutical Excipients, sixth edition(2009)

【非特許文献3】Ntali,G.; Wass, J. A. Epidemiology, Clinical Presentation and Diagnosis of Non-Functioning Pituitary Adenomas. Pituitary 2018, 21 (2), 111-118, DOI: 10.1007/s11102-018-0869-3.

【非特許文献4】Drummond, J.; Roncaroli, F.; Grossman, A. B.; Korbonits, M. Clinical and Pathological Aspects of Silent Pituitary Adenomas. J. Clin. Endocrinol. Metab. 2019, 104 (7), 2473-2489, DOI: 10.1210/jc.2018-00688.

【非特許文献5】Lee, M.; Lupp, A.; Mendoza, N.; Martin, N.; Beschorner, R.; Honegger, J.; Schlegel, J.; Shively, T.; Pulz, E.; Schulz, S.; Roncaroli, F.; Pellegata, N. S. SSTR3 Is a Putative Target for the Medical Treatment of Gonadotroph Adenomas of the Pituitary. Endocr. Relat. Cancer 2015, 22 (1), 111-119, DOI: 10.1530/ERC-14-0472.

【非特許文献6】De Divitiis, E.; Laws, E. R.; Giani, U.; Iuliano, S. L.; De Divitiis, O.; Apuzzo, M. L. J. The Current Status of Endoscopy in Transsphenoidal Surgery: An International Survey. World Neurosurg. 2015, 83 (4), 447-454, DOI: 10.1016/j.wneu.2014.12.029.

【非特許文献7】Reddy, R.; Cudlip, S.; Byrne, J. V.; Karavitaki, N.; Wass, J. A. H. Can We Ever Stop Imaging in Surgically Treated and Radiotherapy-Naive Patients with Non-Functioning Pituitary Adenoma? Eur. J. Endocrinol. 2011, 165 (5), 739-744, DOI: 10.1530/EJE-11-0566.

【非特許文献8】Tampourlou, M.; Ntali, G.; Ahmed, S.; Arlt, W.; Ayuk, J.; Byrne, J. V.; Chavda, S.; Cudlip, S.; Gittoes, N.; Grossman, A.; Mitchell, R.; O’Reilly, M. W.; Paluzzi, A.; Toogood, A.; Wass, J. A. H.; Karavitaki, N. Outcome of Nonfunctioning Pituitary Adenomas That Regrow after Primary Treatment: A Study from Two Large UK Centers. J. Clin. Endocrinol. Metab. 2017, 102 (6), 1889-1897, DOI: 10.1210/jc.2016-4061.

【非特許文献9】Vieira Neto, L.; Boguszewski, C. L.; de Araujo, L. A.; Bronstein, M. D.; Miranda, P. A. C.; Musolino, N. R. d. C.; Naves, L. A.; Vilar, L.; Ribeiro-Oliveira Junior, A.; Gadelha, M. R. A Review on the Diagnosis and Treatment of Patients with Clinically Nonfunctioning Pituitary Adenoma by the Neuroendocrinology Department of the Brazilian Society of Endocrinology and Metabolism. Arch. Endocrinol. Metab. 2016, 60 (4), 374-390, DOI: 10.1590/2359-3997000000179.

【非特許文献10】Ilie, M. D.; Raverot, G. Treatment Options for Gonadotroph Tumors: Current State and Perspectives. J. Clin. Endocrinol. Metab. 2020, 105 (10), 3507-3518, DOI: 10.1210/clinem/dgaa497.

【非特許文献11】Keane, F.; Egan, A. M.; Navin, P.; Brett, F.; Dennedy, M. C. Gonadotropin-Releasing Hormone Agonist-Induced Pituitary Apoplexy. Endocrinol. Diabetes Metab. Case Reports 2016, 2016 (June), DOI: 10.1530/edm-16-0021.

【非特許文献12】Theodoropoulou, M.; Stalla, G. K. Somatostatin Receptors: From Signaling to Clinical Practice. Front. Neuroendocrinol. 2013, 34 (3), 228-252, DOI: 10.1016/j.yfrne.2013.07.005.

【非特許文献13】Ben-Shlomo, A.; Melmed, S. Somatostatin Agonists for Treatment of Acromegaly. Mol. Cell. Endocrinol. 2008, 286 (1-2), 192-198, DOI: 10.1016/j.mce.2007.11.024.

【非特許文献14】Grozinsky-Glasberg, S.; Shimon, I.; Korbonits, M.; Grossman, A. B. Somatostatin Analogues in the Control of Neuroendocrine Tumours: Efficacy and Mechanisms. Endocr. Relat. Cancer 2008, 15 (3), 701-720, DOI: 10.1677/ERC-07-0288.

【非特許文献15】Petersenn, S. Medical Therapy of Aggressive Pituitary Tumors. Exp. Clin. Endocrinol. Diabetes 2021, 129 (3), 186-193, DOI: 10.1055/a-1331-6939.

【非特許文献16】Gomes-Porras, M.; Cardenas-Salas, J.; Alvarez-Escola, C. Somatostatin Analogs in Clinical Practice: A Review. Int. J. Mol. Sci. 2020, 21 (5), 1-27, DOI: 10.3390/ijms21051682.

【非特許文献17】Stahl, P. H. Handbook of Pharmaceutical Salts Properties, Selection, and Use; John Wiley & Sons, 2008.

【非特許文献18】Marinoni, I.; Lee, M.; Mountford, S.; Perren, A.; Bravi, I.; Jennen, L.; Feuchtinger, A.; Drouin, J.; Roncaroli, F.; Pellegata, N. S. Characterization of MENX-Associated Pituitary Tumours. Neuropathol. Appl. Neurobiol. 2013, 39 (3), 256-269, DOI: 10.1111/j.1365-2990.2012.01278.x.

【非特許文献19】Lee, M.; Marinoni, I.; Irmler, M.; Psaras, T.; Honegger, J. B.; Beschorner, R.; Anastasov, N.; Beckers, J.; Theodoropoulou, M.; Roncaroli, F.; Pellegata, N. S. Transcriptome Analysis of MENX-Associated Rat Pituitary Adenomas Identifies Novel Molecular Mechanisms Involved in the Pathogenesis of Human Pituitary Gonadotroph Adenomas. Acta Neuropathol. 2013, 126 (1), 137-150, DOI: 10.1007/s00401-013-1132-7.

【非特許文献20】Oystese, K. A.; Casar-Borota, O.; Normann, K. R.; Zucknick, M.; Berg, J. P.; Bollerslev, J. Estrogen Receptor a, a Sex-Dependent Predictor of Aggressiveness in Nonfunctioning Pituitary Adenomas: Sstr and Sex Hormone Receptor Distribution in NFPA. J. Clin. Endocrinol. Metab. 2017, 102 (9), 3581-3590, DOI: 10.1210/jc.2017-00792.

【非特許文献21】Diana Ilie, M.; Vasiljevic, A.; Louvet, C.; Jouanneau, E.; Raverot, G. Gonadotroph Tumors Show Subtype Differences That Might Have Implications for Therapy. Cancers (Basel). 2020, 12 (4), 1-12, DOI: 10.3390/cancers12041012.

【非特許文献22】Shahbaz, M.; Ruliang, F.; Xu, Z.; Benjia, L.; Cong, W.; Zhaobin, H.; Jun, N. MRNA Expression of Somatostatin Receptor Subtypes SSTR-2, SSTR-3, and SSTR-5 and Its Significance in Pancreatic Cancer. World J. Surg. Oncol. 2015, 13 (1), 1-6, DOI: 10.1186/s12957-015-0467-z.

【非特許文献23】Elston, M. S.; Meyer-Rochow, G. Y.; Conaglen, H. M.; Clarkson, A.; Clifton-Bligh, R. J.; Conaglen, J. V.; Gill, A. J. Increased SSTR2A and SSTR3 Expression in Succinate Dehydrogenase-Deficient Pheochromocytomas and Paragangliomas. Hum. Pathol. 2015, 46 (3), 390-396, DOI: 10.1016/j.humpath.2014.11.012.

【非特許文献24】Kanakis, G.; Grimelius, L.; Spathis, A.; Tringidou, R.; Rassidakis, G. Z.;Oberg, K.; Kaltsas, G.; Tsolakis, A. V. Expression of Somatostatin Receptors 1-5 and Dopamine Receptor 2 in Lung Carcinoids: Implications for a Therapeutic Role. Neuroendocrinology 2015, 101 (3), 211-222, DOI: 10.1159/000381061.

【非特許文献25】Frati, A.; Rouzier, R.; Lesieur, B.; Werkoff, G.; Antoine, M.; Rodenas, A.; Darai, E.; Chereau, E. Expression of Somatostatin Type-2 and -4 Receptor and Correlation with Histological Type in Breast Cancer. Anticancer Res. 2014, 34 (8), 3997-4004.

【非特許文献26】Florio, T.; Morini, M.; Villa, V.; Arena, S.; Corsaro, A.; Thellung, S.; Culler, M. D.; Pfeffer, U.; Noonan, D. M.; Schettini, G.; Albini, A. Somatostatin Inhibits Tumor Angiogenesis and Growth via Somatostatin Receptor-3-Mediated Regulation of Endothelial Nitric Oxide Synthase and Mitogen-Activated Protein Kinase Activities. Endocrinology 2003, 144 (4), 1574-1584, DOI: 10.1210/en.2002-220949.

【非特許文献27】Zatelli, M. C.; Piccin, D.; Vignali, C.; Tagliati, F.; Ambrosio, M. R.; Bondanelli, M.; Cimino, V.; Bianchi, A.; Schmid, H. A.; Scanarini, M.; Pontecorvi, A.; De Marinis, L.; Maira, G.; Degli Uberti, E. C. Pasireotide, a Multiple Somatostatin Receptor Subtypes Ligand, Reduces Cell Viability in Non-Functioning Pituitary Adenomas by Inhibiting Vascular Endothelial Growth Factor Secretion. Endocr. Relat. Cancer 2007, 14 (1), 91-102, DOI: 10.1677/ERC-06-0026.

【非特許文献28】unther, T.; Tulipano, G.; Dournaud, P.; Bousquet, C.; Csaba, Z.; Kreienkamp, H. J.; Lupp, A.; Korbonits, M.; Castano, J. P.; Wester, H. J.; Culler, M.; Melmed, S.; Schulz, S. International Union of Basic and Clinical Pharmacology. CV. Somatostatin Receptors: Structure, Function, Ligands, and New Nomenclature. Pharmacol. Rev. 2018, 70 (4), 763-835, DOI: 10.1124/pr.117.015388.

【非特許文献29】Gatto, F.; Feelders, R. A.; Van Der Pas, R.; Kros, J. M.; Waaijers, M.; Sprij-Mooij, D.; Neggers, S. J. C. M. M.; Van Der Lelij, A. J.; Minuto, F.; Lamberts, S. W. J.; De Herder, W. W.; Ferone, D.; Hofland, L. J. Immunoreactivity Score Using an Anti-Sst2A Receptor Monoclonal Antibody Strongly Predicts the Biochemical Response to Adjuvant Treatment with Somatostatin Analogs in Acromegaly. J. Clin. Endocrinol. Metab. 2013, 98 (1), E66-E71, DOI: 10.1210/jc.2012-2609.

【非特許文献30】Kooistra, A. J.; Mordalski, S.; Esguerra, M.; Mamyrbekov, A.; Munk, C.; Keser, M.; Gloriam, D. E. OUP Accepted Manuscript. Nucleic Acids Res. 2020, 49 (December 2020), 335-343, DOI: 10.1093/nar/gkaa1080.

【非特許文献31】A. Stevenazzi, G. Sandrone, M. Pinori, P. M. NMR and Molecular Dynamics Analysis of SOM230: A Pluripotent Somatostatin Analogue 9th INTERNATIONAL SYMPOSIUM ON SOLID PHASE SYNTHESIS, COMPLEMENTARY SOLUTION METHODS & COMBINATORIAL LIBRARIES 2nd INTERNATIONAL SYMPOSIUM ON PROTEOMIC, COMBINATORIAL & OTH; 2007.

【非特許文献32】Lehmann, A.; Kliewer, A.; Gunther, T.; Nagel, F.; Schulz, S. Identification of Phosphorylation Sites Regulating Sst3 Somatostatin Receptor Trafficking. Mol. Endocrinol. 2016, 30 (6), 645-659, DOI: 10.1210/me.2015-1244.

【非特許文献33】Gulde, S.; Wiedemann, T.; Schillmaier, M.; Valenca, I.; Lupp, A.; Steiger, K.; Yen, H. Y.; Bauerle, S.; Notni, J.; Luque, R.; Schmid, H.; Schulz, S.; Ankerst, D. P.; Schilling, F.; Pellegata, N. S. Gender-Specific Efficacy Revealed by Head-to-Head Comparison of Pasireotide and Octreotide in a Representative in Vivo Model of Nonfunctioning Pituitary Tumors. Cancers (Basel). 2021, 13 (12), DOI: 10.3390/cancers13123097.

【非特許文献34】Daniel Benten, Yasmin Behrang, Ludmilla Unrau, Victoria Weissmann, Gerrit Wolters-Eisfeld, Susanne Burdak-Rothkamm, Felix R. Stahl, Martin Anlauf, Patricia Grabowski, Markus Mobs, Jan Dieckhoff, Bence Sipos, Martina Fahl, Corinna Eggers, Daniel Perez, Maximillian Bockhorn, Jakob R. Izbicki, Ansgar W. Lohse, Jorg Schrader. Establishment of the First Well-differentiated Human Pancreatic Neuroendocrine Tumor Model. Mol Cancer Res 16, 496-507, 2018.

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0014】

したがって、ＮＦＰＡまたはその他の神経内分泌関連悪性腫瘍に罹患した患者に、低い副作用で、効果的に使用できる新規で効果的な薬物療法が必要とされている。

【図面の簡単な説明】

【0015】

【図1A】図１はＩＴＦ２９８４、パシレオチド、オクトレオチドの構造を表す。 本研究で評価したソマトスタチン類似体（ＳＳＡ）の構造を示す。（Ａ）ＩＴＦ２９８４、（Ｂ）パシレオチドおよび（Ｃ）オクトレオチド。

【図1B】図１はＩＴＦ２９８４、パシレオチド、オクトレオチドの構造を表す。 本研究で評価したソマトスタチン類似体（ＳＳＡ）の構造を示す。（Ａ）ＩＴＦ２９８４、（Ｂ）パシレオチドおよび（Ｃ）オクトレオチド。

【図1C】図１はＩＴＦ２９８４、パシレオチド、オクトレオチドの構造を表す。 本研究で評価したソマトスタチン類似体（ＳＳＡ）の構造を示す。（Ａ）ＩＴＦ２９８４、（Ｂ）パシレオチドおよび（Ｃ）オクトレオチド。

【図2】図２は、ＳＲＩＦ－１４（青色のチューブ）のベストＺＤＯＣＫスコアポーズおよびＳＳＴＲ３およびＳＳＴＲ２の「活性」コンフォーマーの重ね合わせを示す。ＥＬ４ ５ループはＳＳＴＲ２（赤いリボン）ではチャネルの入り口を減少させるが、ＳＳＴＲ３では干渉しない。上下の写真はそれぞれ正面および上から見たものである。右上図はリガンドＴｒｐ８側鎖ポケット（右上側）、右下図：内部空間のＬｙｓ８：ζ窒素原子はｋ－オピオド作動薬ＭＰ１１０４の３級アミンの近くにある。

【図3】図３はＳＲＩＦ－１４のＰｈｅ－Ｔｒｐ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒモチーフのベストスコアポーズの詳細、およびＩ、Ｉ’、ＩＩ、ＩＩ’βターンの骨格ねじれの参考値をまとめた一般的なスケッチである。Ｔｒｐ－．Ｌｙｓダイアドの測定された二面角Φ、Ψは理想的なβターンＩＩ’型と定性的に一致している。

【図4】図４は、ラット下垂体前葉細胞の初代培養を用いたｉｎ ｖｉｔｒｏでのＧＨＲＨ刺激によるＧＨ放出の阻害を示す。 グラフは、ラット下垂体前葉細胞の初代培養物を用いて、オクトレチド、パシレオチドおよびＩＴＦ２９８４により誘導されたｉｎ ｖｉｔｒｏでのＧＨＲＨ刺激によるＧＨ放出の阻害を示す。結果は３回の実験の平均値±ＳＤで表した。

【図5】図５：ＨＥＫ２９３細胞におけるＩＴＦ２９８４によって誘導されるＳＳＴＲ３の内在化（インターナリジェーション（internalization））（Ａ、Ｂ） 野生型ｈＳＳＴＲ３を安定して発現しているＨＥＫ２９３細胞を、１μＭまたは１０μＭのＳＳＴ１４、オクトレオチド、パシレオチドまたはＩＴＦ２９８４で３０分間処理した。その後、細胞を固定し、抗－ＨＡ抗体で染色し、共焦点顕微鏡で観察した。表示されているのは、少なくとも３つの独立した実験を二重に行ったうちの１つからの代表画像である。

【図6】図６：Ｕ２ＯＳ細胞において、ＳＳＴ２８、パシレオチド、ＩＴＦ２９８４およびオクトレオチドで処理した後のＳＳＴＲ３の内在化 図６は、ＳＳＴ２８、パシレオチド、ＩＴＦ２９８４およびオクトレオチドで処理した後のＳＳＴＲ３の内在化を示す（任意単位（Arbitrary Units）（ＡＵ））での内在化された蛍光の平均値）。

【図7】図７：ＨＥＫ２９３トランスフェクション細胞におけるＩＴＦ２９８４選択的ＳＳＴＲ３リン酸化（ホスホリル化（phosphorylation）） （Ａ）ヒトＳＳＴＲ３受容体の模式図であり、カルボキシル末端テール内のすべての潜在的リン酸受容部位を示す。リン酸化特異的抗体のエピトープを（－Ｐ）でマークした。 （Ｂ、Ｃ）野生型ｈＳＳＴＲ３を安定に発現するＨＥＫ２９３細胞を、３７℃で１０分間、１０μＭのＳＳＴ１４、オクトレオチド、パシレオチドまたはＩＴＦ２９８４に曝露しないか、１０^-12～１０^-5Ｍの範囲の濃度で曝露した（Ｂ）；１０μＭのＳＳＴ１４、オクトレオチド、ＩＴＦ２９８４またはパシレオチドに１０^-12から１０^-5Ｍの範囲の濃度で曝露した（Ｃ）。その後、リン酸化ＳＳＴ３受容体のレベルを、リン酸化部位特異的（phosphosite-specific）抗－ｐＳ３３７／ｐＴ３４１または抗－ｐＴ３４８を用いて測定した。

【図8】図８：ＨＥＫ２９３トランスフェクション細胞における作動薬選択的ＳＳＴＲ２リン酸化 （Ａ）ヒトＳＳＴＲ２受容体の模式図であり、カルボキシル末端テール内のすべての潜在的リン酸受容部位を示す。リン酸化特異的抗体のエピトープを（－Ｐ）でマークした。 （Ｂ、Ｃ）野生型ｈＳＳＴＲ２を安定に発現するＨＥＫ２９３細胞を、ＳＳＴ１４（＝ＳＳ１４）、オクトレオチド、パシレオチド、またはＩＴＦ２９８４に、３７℃で１０分間、１０μＭまたは１μＭの濃度で曝露しないか、または曝露した。その後、リン酸化ＳＳＴＲ２受容体のレベルを、リン酸化部位特異的抗－ｐＳ３４１／ｐＳ３４３、ｐＴ３５３／Ｔ３５４、ｐＴ３５６／Ｔ３５９抗体を用いて測定した。その後、ブロットを取り除き、ＵＭＢ１抗体で再プローブ化し、ゲルのローディングが等しいことを確認した。パシレオチドおよびＩＴＦ２９８４はＳ３４１／Ｓ３４３の選択的リン酸化を誘導する。対照的に、ＳＳＴ１４およびオクトレオチドはＳＳＴＲ２の完全なリン酸化を誘導する。示されたブロットは３つの独立した実験の代表である。分子量マーカーの位置は左側に示した（単位はｋＤａ）。

【図9】図９：ＨＥＫ２９３トランスフェクション細胞における作動薬選択的ＳＳＴＲ５リン酸化 （Ａ）ヒトＳＳＴＲ₅受容体の模式図であり、カルボキシル末端テール内のすべての潜在的リン酸受容部位を示す。リン酸化酵素特異的抗体のエピトープを（－Ｐ）で示した。（Ｂ）野生型ｈＳＳＴＲ５を安定して発現しているＨＥＫ２９３細胞を、３７℃で１０分間、ＳＳ１４、オクトレオチド、パシレオチド、ＩＴＦ２９８４に曝露しなかったか、または曝露した。ＳＳＴＲ５のリン酸化を誘導するＳＳＴ１４、オクトレオチド、パシレオチドおよびＩＴＦ２９８４の能力を、リン酸化部位特異的抗－ｐＴ３３３抗体を用いたウェスタンブロットで試験した。ＩＴＦ２９８４はＳＳＴＲ５の部分的なリン酸化を誘導した。パシレオチドはＩＴＦ２９８４およびオクトレオチドよりも強力であった。（Ｃ）続いて、ブロットを取り除き、抗－ＨＡ抗体で再プローブ化し、ゲルのローディングが等しいことを確認した。示されたブロットは３つの独立した実験の代表である。分子量マーカーの位置は左側に示した（単位はｋＤａ）。

【図10】図１０：ＨＥＫ２９３トランスフェクション細胞における、作動薬を介したＳＳＴＲ３のＧタンパク質シグナル伝達 ＳＳＴＲ３を介してＧＩＲＫ２チャネルを活性化するＳＳＴ１４、オクトレオチド、パシレオチド、ＩＴＦ２９８４の能力を蛍光膜電位アッセイを用いて試験した。使用した濃度を示す。ＩＴＦ２９８４はＳＳＴＲ３において強力なＧタンパク質シグナルを誘導し、オクトレオチドまたはパシレオチドよりも約５倍強力であった。データポイントは平均値±Ｓ．Ｅ．Ｍ．を表す。

【図11】図１１：蛍光ベースの膜電位アッセイを用いたマウスＡｔＴ－２０細胞におけるＧタンパク質シグナル伝達（G protein-signalling）の解析 （Ａ）野生型ＡｔＴ－２０細胞において、内因性に発現されたＳＳＴＲ２およびＳＳＴＲ５受容体（黒）または外因性に発現されたヒトＳＳＴＲ３受容体（灰色）を介して内因性ＧＩＲＫチャネルを活性化するオクトレオチドの能力を試験した。（Ｂ）野生型ＡｔＴ－２０細胞において、内因性に発現されたＳＳＴＲ２およびＳＳＴＲ５受容体（黒）または外因性に発現されたヒトＳＳＴＲ３受容体（灰色）を介して内因性ＧＩＲＫチャネルを活性化するＩＴＦ２９８４の能力を試験した。ＳＳＴＲ３の発現は、用量反応曲線の左方シフトをもたらした。

【図12】図１２：ＩＴＦ２９８４またはプラセボを投与したラットの腫瘍体積の変化 ５．５ヵ月齢のＭＥＮＸ罹患ラットに、ＩＴＦ２９８４を１４日ごとに１回、指定用量（１２．５ｍｇ／ｋｇ体重）で注射した。１４日ごとにＭＲＩを行い、腫瘍体積を０日目の体積に対して正規化した。雄と雌のラットの腫瘍を別々に示した。データは平均値±ＳＥＭである。＃は有意でない；＊はｐ値＜０．０５；＊＊はｐ値＜０．００１。

【図13】図１３：ＩＴＦ２９８４またはプラセボを投与したラットにおけるＮＦＰＡの増殖 （Ａ、Ｂ）ラットの腫瘍における１００．０００μｍ²あたりのＫｉ６７陽性細胞数を２群（ＩＴＦ２９８４投与群、対照群）および雌雄に帰属した。表示は平均値±ＳＥＭである。＊はｐ値＜０．０５；＊＊はｐ値＜０．００１である。

【図14】図１４：ＩＴＦ２９８４またはプラセボで処理したＮＦＰＡを有する雌雄ラットにおけるＳｓｔｒ遺伝子の発現 （Ａ）プラセボ処理された雌雄両方の対照ラットにおけるＳＳＴＲ１，２，３，５遺伝子に対するｍＲＮＡコピー数／細胞の絶対定量。（Ｂ）対照群と比較したＩＴＦ２９８４処理群におけるＳｓｔｒ１，２，３，５遺伝子の相対発現であり、任意に１００％に設定した。平均値±ＳＥＭで示した。＊はｐ値＜０．０５である。

【図15】図１５は、１８日間処理したＮＴ－３細胞株スフェロイドに対するＩＴＦ２９８４の濃度増加（２０～２５６０ｎＭ）の細胞毒性効果である。写真は常に０、４、７、１１、１４、１８日目に同じウェルから取得した。０日目は処理初日に対応する。

【図16】図１６は、１８日間処理したＮＴ－３細胞株スフェロイドに対するオクトレオチドの濃度増加（２０～２５６０ｎＭ）の細胞毒性効果である。写真は常に同じウェルから０、４、７、１１、１４、１８日目に取得した。０日目は処理初日に相当する。

【図17】図１７は、１８日間処理したＮＴ－３細胞株スフェロイドに対するパシレオチドの濃度増加（２０～２５６０ｎＭ）の細胞毒性効果である。写真は常に０、４、７、１１、１４、１８日目に同じウェルから取得した。０日目は処理初日に相当する。

【発明を実施するための形態】

【0016】

定義
別段の定義がない限り、本明細書で使用される全ての術語、表記および他の科学用語は、本開示が関係する当業者によって一般的に理解される意味を有することが意図される。場合によっては、一般的に理解される意味を有する用語は、明確化のため、および／または、すぐに参照できるように、本明細書において定義される。したがって、そのような定義を本明細書に含めることは、当該技術分野において一般的に理解されることを超えて実質的な相違を表すと解釈されるべきではない。

【0017】

本明細書において「生理学的に許容される賦形剤」という用語は、それ自体何らの薬理学的効果を有さず、哺乳動物、好ましくはヒトに投与された場合に有害な反応をもたらさない物質を指す。生理学的に許容される賦形剤は当該技術分野において周知であり、例えば、参照目的で本明細書に組み込まれるＨａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ， ｓｉｘｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ（２００９）（非特許文献２）に記載されている。

【0018】

本明細書において、「塩および／または薬学的に許容される誘導体」という用語は、生物学的有効性および塩化もしくは誘導体化合物の特性を有し、哺乳動物、好ましくはヒトに投与した場合に、有害な反応をもたらさない塩または誘導体を指す。薬学的に許容される塩は、無機塩であっても有機塩であってもよく、薬学的に許容される塩の例としては、炭酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、硫酸水素塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、トリフルオロ酢酸塩、２－ナフタレンスルホン酸塩、パラトルエンスルホン酸塩などが含まれるが、これらに限定されない。薬学的に許容される塩に関するより詳細な情報は、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｓａｌｔｓ¹⁵（非特許文献１７）に見出されうる。薬学的に許容される誘導体には、エステル、エーテルおよびＮ－オキシドが含まれる。

【0019】

本明細書において、「同時使用、分離使用、または逐次使用」という用語は、第１および第２の化合物の同時投与、または２つの化合物が患者の体内で同時に作用するような方法での投与、または治療効果をもたらすように一方の化合物を他方の化合物の後に投与することを指す。いくつかの実施形態では、化合物は食事と一緒に服用される。他の実施形態では、化合物は食後、例えば食後３０分または６０分後に服用される。いくつかの実施形態では、化合物を一定期間患者に投与し、その後、他の化合物を投与する。

【0020】

用語「含む（comprising）」、「有する（having）」、「含む（including）」および「含有する（containing）」は、「オープン（open）」用語（すなわち、「～を含むが、～に限定されない」という意味）として理解されるべきであり、「～から本質的になる（consist essentially of）」、「から本質的になる（consisting essentially of）」、「からなる（consist of）」、または「からなる（consisting of）」などの用語をサポートするものとみなされるべきである。

【0021】

本発明における略号「ＮＦＰＡ」は、「非機能性下垂体腺腫」を意味する。

【0022】

本発明における「ＳＳＡ」という用語は、ソマトスタチン類似体を意味する。

【0023】

本発明における「ＰＡＮ－作動薬」という用語は、ソマトスタチン受容体（ＳＳＴＲ１、２、３および５）の作動薬を意味する。

【0024】

「肺カルチノイド腫瘍」は、神経内分泌細胞からなる癌性腫瘍の一種である。これらの細胞は肺を含む全身に見出される。ホルモンまたはホルモン様物質を産生および分泌することから、これらは内分泌細胞と考えられている。

【0025】

「褐色細胞腫」は、褐色細胞としても知られるクロマフィン細胞で構成される副腎髄質のまれな腫瘍である。褐色細胞腫と同じ細胞から成る腫瘍が副腎の外で発生する場合、それは「傍神経節腫」といわれる。これらの神経内分泌腫瘍は、大量のカテコールアミン、メタネフリン、またはメトキシチラミンを産生および放出する能力を有し、その結果、高血圧（血圧が高い）、頻脈（心拍数が速い）、発汗（汗をかく）などの最も一般的な症状をもたらす。しかしながら、これらの腫瘍のすべてがカテコールアミンを分泌するわけではない。分泌されないものは生化学的にサイレントと呼ばれ、主に頭頸部に位置する。

【0026】

発明の説明
実験セクションで詳細に開示されるように、本発明者らは、ＳＳＴＲ３に対する高い結合親和性および第一世代のＳＳＡに対して改善された特性を有する新規環状ＳＳＡ汎作動薬ヘキサペプチドであるＩＴＦ２９８４が、ヒトの対応物に酷似しているＭＥＮＸ（ホモ接合変異体）ＮＦＰＡラットモデルにおいて、ＮＦＰＡの治療に有効であることを驚くべきことに見出した^16、17。

【0027】

ＩＴＦ２９８４の分子キャラクタリゼーションの過程で、本発明者らは、パシレオチドおよびオクトレオチドのような他の汎作動薬と構造的に類似している一方で、ＩＴＦ２９８４が既知の分子と比較してＳＳＴＲ３に対してより高い親和性を有することを見出した。分子モデリングにより、ＩＴＦ２９８４におけるより高いβ－ＩＩ’ターンの確率が、より高いＳＳＴＲ３親和性と相関することが明らかになり、このことは、この分子のユニークな選択性パターンに対する構造的根拠を提供する。

【0028】

特に、得られたｉｎ－ｖｉｔｒｏの結果は、驚くべきことに、ＩＴＦ２９８４が２つの異なる細胞株において、パシレオチドまたはオクトレオチドよりも効果的にＳＳＴＲ３の内在化（インターナリジェーション（internalization））およびリン酸化（ホスホリル化（phosphorylation））を誘導し、さらに薬理学的に適切な濃度範囲においてＧＩＲＫの活性化を誘導することを示している。これらのデータから、ＩＴＦ２９８４はＳＳＴＲ３受容体の完全な作動薬であり、受容体の内在化を促進すると考えられる。

【0029】

いくつかの研究によると、ＳＳＴＲ３は性腺刺激ホルモン分泌細胞腺腫で頻繁に強く発現しているが、ＳＳＴＲ２は少数の患者でのみ、ＳＳＴＲ５は例外的にしか発現していない^{3、8、18、19}。

【0030】

さらに、最近の研究では、下垂体腺腫以外にも、膵腫瘍²⁰、褐色細胞腫、傍神経節腫²¹、肺カルチノイド²²および乳癌²³などの神経内分泌に関連した多様な悪性腫瘍におけるＳＳＴＲ３発現の上昇が示唆されている。

【0031】

非機能性下垂体腺腫（ＮＦＰＡ）および膵腫瘍などのその他の神経内分泌関連悪性腫瘍²⁰、褐色細胞腫、傍神経節腫²¹、肺カルチノイド²²および乳癌²³などの神経内分泌関連悪性腫瘍は、ＳＳＴＲ３発現腫瘍とみなされる。

【0032】

ソマトスタチン（ＳＳＴ）およびＳＳＡによるＳＳＴＲ３の活性化は、タンパク質チロシンホスファターゼの活性化と、それに続くＲａｆ１およびＭＡＰＫの不活性化を通じて、分裂促進経路を妨害することにより、細胞静止効果と細胞毒性効果を誘導する。さらに、ＳＳＴＲ３の関与は、ｐ５３とカスパーゼの活性化を通してアポトーシスを誘導することが提唱された。ＳＳＴＲ３のターゲティングはまた、内皮細胞の増殖、その結果の血管新生を阻害する^10、24~26。

【0033】

したがって、ＳＳＴＲ３を認識し活性化する新しいＳＳＡの開発は、以下の事実：
１） ＮＦＰＡは主にＳＳＴＲ３を発現しており、これは放射線治療後も維持されること³、そして、
２） ＳＳＡに対する下垂体腺腫の応答は、ＧＨ分泌腺腫におけるＳＳＴＲ２にみられるように、特定のＳＳＴＲサブタイプの発現に依存すること²⁷、
によって、ＮＦＰＡの治療に対する潜在的に有望な戦略である。

【0034】

これは、ＩＴＦ２９８４がマウスの腫瘍増殖を効果的に抑制し、ＮＦＰＡ細胞の増殖の強力な減少を誘導することを明確に示す、実験のセクションで報告したｉｎ ｖｉｖｏ試験で得られた結果によって確認された。

【0035】

ＩＴＦ２９８４は、見出された受容体親和性プロファイルおよびｉｎ ｖｉｔｒｏで得られたデータと一致して、選択的な抗腫瘍活性を示した。

【0036】

この抗腫瘍活性は、ＩＴＦ２９８４で処理した腫瘍の増殖指数（ＫＩ６７陽性）の低下と合致した。さらに、ＩＴＦ２９８４は雌ラットのＳＳＴＲ３ ｍＲＮＡ発現を選択的に誘導し、代償的なアップレギュレーションを示唆した。

【0037】

従って、得られたデータは、このモデルにおけるＩＴＦ２９８４のｉｎ ｖｉｖｏでのＳＳＴＲ３の関与および主にＳＳＴＲ３駆動性の抗腫瘍活性と一致しており、ＮＦＰＡ、およびＳＳＴＲ３発現腫瘍（すなわち、膵臓腫瘍、褐色細胞腫、傍神経節腫、肺癌および乳癌）および繊毛病などの他のＳＳＴＲ３駆動性疾患におけるＩＴＦ２９８４の臨床使用の構想をｉｎ ｖｉｖｏで証明するものである。

【0038】

最近、ＭＥＮＸモデルにおけるパシレオチドおよびオクトレオチドの活性が報告され²⁸、本発明者らはそれらのデータを本明細書で報告するＩＴＦ２９８４の結果と比較した。発表された報告では、パシレオチドはオクトレオチドよりも高い抗腫瘍活性を有することが示され、それは雌雄両方のラットで明らかであったが、雌の方が高い活性を示す傾向があった。この高い活性はＳＳＴＲ３受容体の関与によるものである。

【0039】

これらのデータは、ＩＴＦ２９８４を用いた本発明者らの観察とは異なっていることに本発明者らは注目した。実際に、ＩＴＦ２９８４は雌ラットにのみ有意な放射線腫瘍応答とＳＳＴＲ３ ｍＲＮＡの代償的なアップレギュレーションを示したが、ＳＳＴＲ３レベルの低い雄ラットでは有意な抗腫瘍効果は観察されなかった。本発明者らは、これらのデータを、試験された実験条件下では、排他的ではないとしても、ＳＳＴＲ３の関与によって主に媒介されるＩＴＦ２９８４のより選択的な活性という観点から解釈している。

【0040】

また、治療動物が治療終了時に不快感の兆候を示さないことも観察されている。ＩＴＦ２９８４の安全性は、前臨床安全性試験、健常人ボランティアを対象とした２つの臨床第Ｉ相試験、および先端巨大症患者を対象とした臨床第ＩＩ相試験でも確認されており、許容容量での有効性が示されている^(39、40)。

【0041】

したがって、本発明の一実施形態は、ＳＳＴＲ３発現腫瘍の治療における、式（Ｉ）の化合物：

【0042】

【化1】

【0043】

またはその薬学的に許容される塩および／または溶媒和物の使用である。

【0044】

好ましい実施形態によれば、前記ＳＳＴＲ３発現腫瘍は、膵腫瘍、褐色細胞腫、傍神経節腫、肺カルチノイドまたは乳癌から選択される、非機能性下垂体腺腫（ＮＦＰＡ）または神経内分泌関連悪性腫瘍である。

【0045】

好ましくは、前記薬学的に許容される塩および／または溶媒和物は、パモエート、ジアセテートまたはトリフルオロアセテートである。

【0046】

式（Ｉ）の化合物のＩＵＰＡＣ名は、（３Ｓ，６Ｒ，９Ｓ，１２Ｓ，１５Ｓ，１９Ｒ，２０ａＳ）－９－（４－アミノブチル）－１５－ベンジル－１２－（４－（ベンジルオキシ）ベンジル）－６－（（３，８－ジメトキシナフタレン－２－イル）メチル）－３－（４－ヒドロキシベンジル）－１，４，７，１０，１３，１６－ヘキサオキソイコサヒドロピロロ［１、２－ａ］［１，４，７，１０，１３，１６］ヘキサアザシクロオクタデシン－１９－イル（２－アミノエチル）カルバメートまたはシクロ［４（Ｒ）－［Ｎ－（２－アミノエチル）カルバモイルオキシ］－Ｌ－プロリル－Ｌ－チロシル－Ｄ－３，８－ジメトキシナフチルアラニル－Ｌ－リシル－（４－Ｏ－ベンジル）－Ｌ－チロシル－Ｌ－フェニルアラニル］である。

【0047】

式（Ｉ）の化合物は、本明細書ではＩＴＦ２９８４とも表記され、国際特許出願ＷＯ２００９／０７１４６０Ａ２（ＷＯ２００９／０７１４６０Ａ２）（特許文献１）にすでに開示されている。

【0048】

本発明の好ましい実施形態によれば、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩および／または溶媒和物を、患者に毎日投与する。

【0049】

好ましくは、患者は人間である。

【0050】

さらに好ましい実施形態によれば、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩および／または溶媒和物は、０．５～５ｍｇ／ｄｉｅ、好ましくは０．２～２．５ｍｇ／ｄｉｅ、より好ましくは０．１～２ｍｇ／ｄｉｅの範囲の量で患者に投与される。

【0051】

好ましくは、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩および／または溶媒和物を、０．１ｍｇを１日２回、好ましくは０．５ｍｇを１日２回、より好ましくは５ｍｇを１日１回の量で、患者に投与する。

【0052】

好ましくは、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩および／または溶媒和物は、経口、舌下、直腸、血管内、静脈内、皮下経路で投与され、好ましくは経口経路で投与される。

【0053】

さらなる好ましい実施形態によれば、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩および／または溶媒和物は、少なくとも１つの生理学的に許容される賦形剤とともにそれを含有する医薬組成物の形態で患者に投与される。

【0054】

好ましくは、前記医薬組成物は、経口、舌下、直腸、血管内、静脈内、皮下経路により投与され、好ましくは静脈内経路により投与される。

【0055】

好ましくは、前記医薬組成物は固体または液体の形態である。

【0056】

より好ましくは、前記固体形態は、粉末、錠剤、顆粒剤、凝集剤、圧縮されたまたはコーティングされたピル、硬カプセル剤またはゼラチンカプセル剤から選択され；前記液体形態は、懸濁液、シロップ剤または注射用液剤である。

【0057】

本発明の好ましい実施形態によれば、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩および／または溶媒和物は、少なくとも１つの活性素（active principle）と組み合わせて患者に投与される。

【0058】

好ましくは、前記少なくとも１つの活性素は、インスリンの分泌促進薬(a secretagogues of the insulin)、インスリン分泌の促進剤(a promoter of the insulin secretion)、インスリン感作剤、低インスリン用量剤、ドーパミン受容体２作動性（アゴニズム（agonism））を有する薬剤、抗血管新生作用を有する薬剤または化学療法剤から選択される。

【0059】

好ましくは、インスリン感作活性を有する前記薬剤は、メトホルミンであり、これは肝臓における糖新生を低下させる。

【0060】

好ましくは、前記インスリンの分泌促進剤は、スルホニル尿素またはビンダグリプチンおよびナタグリニドから選択されるインクレチンベースの薬剤である。

【0061】

好ましくは、前記インスリン分泌の促進剤はＧＬＰ－１作動薬であり、より好ましくは、前記薬剤はリラグルチドまたはエキセナチドである。

【0062】

好ましくは、ドーパミン受容体２作動性を有する前記薬剤は、カベルゴリンおよびブロモクリプチンである。

【0063】

好ましくは、前記化学療法剤はテモゾロミドである。

【0064】

さらなる好ましい実施形態によれば、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩および／または溶媒和物は、少なくとも１つの活性素と同時に、別々に、または逐次的に投与される。

【0065】

本発明は、以下の実験セクションでさらに詳細に説明される。以下の実施例は本発明を限定することを意図するものではない。

【実施例】

【0066】

実験セクション
ＩＴＦ２９８４の構造
新規なＳＳＴ汎作動薬である環状ヘキサペプチドＩＴＦ２９８４（図１のパネルＡで報告されている式）は、第一世代のＳＳＡに対して改善された特性を持つ汎作動薬を同定することを目的とした医薬品化学プログラムで発見された。この化合物は、パシレオチドおよびオクトレオチドなどの他の既知のソマトスタチン類似体に関して、ＳＳＴＲ１、２、３、５について高い結合親和性を示し、すべての受容体に対してナノモル範囲のＩＣ₅₀値を有した。ＩＣ₅₀の値は、１つの代表的な実験から得られたものである。３つの独立した実験からの信頼区間（表１）。

【0067】

オクトレオチドと比較した場合、ＩＴＦ２９８４はＳＳＴＲ１、ＳＳＴＲ３およびＳＳＴＲ５に対して高い親和性を示し、ＳＳＴＲ２に対しては低い親和性を示したが、パシレオチドと比較すると、ヒトＳＳＴＲ１、ＳＳＴＲ２およびＳＳＴＲ３に対して高い親和性を示した（表１）。

【0068】

表１は、パシレオチドおよびオクトレオチドと比較したＩＴＦ２９８４の活性のプロファイルを示している。

【0069】

表１．本研究で出現したＩＴＦ２９８４、第一世代（オクトレオチド）および第二世代（パシレオチド）のＳＳＡのプロファイル。カラーコードによる定性的説明：優秀（非常に薄い灰色）、良好／普通（薄い灰色）、普通（濃い灰色）、無視できる（非常に濃い灰色）、悪い（特に濃い灰色）

【0070】

【表1】

【0071】

特に、ＳＳＴＲ３に対するＩＴＦ２９８４のＩＣ₅₀の値は、オクトレオチドまたはパシレオチドで得られた値よりも約１桁低かった。

【0072】

ＳＳＴＲ３に対するＩＴＦ２９８４の高い親和性の構造的根拠を合理的に解釈するために、分子モデリングアプローチを用いた。この目的のために、Ｇ共役タンパク質受容体の構造に関するオープンアクセスリポジトリであるＧＰＣＲｄｂ²⁸のＳＳＴＲ構造を用いた。受容体ＳＳＴＲ１～４のモデルは、主にκ－オピオイド受容体（またはＫＯＰ、配列類似性６０～６６％、活性および不活性コンフォーマーそれぞれのｐｄｂコード６Ｂ７３および６ＶＩ４）をベースにしている。一方、ＳＳＴＲ５はδ－オピオイド受容体により類似している。このモデリングの実行にオピオイド受容体を用いることの妥当性は、この特定のＧＰＣＲファミリーに対するＩＴＦ２９８４とパシレオチドの単回用量結合アッセイによって実験的に確認され、この場合、両ヘキサペプチドは１０^-5Ｍで作動薬を完全に置換することができる（表２）。

【0073】

表２：１０^-5ＭのＩＴＦ２９８４およびパシレオチドによって誘導されるいくつかのＧタンパク質共役受容体の阻害率（薄い灰色＝阻害率２５～５０％；濃い灰色＝阻害率５０％超）

【0074】

【表2-1】

【0075】

【表2-2】

【0076】

【表2-3】

【0077】

ＳＳＴＲ２およびＳＳＴＲ３におけるＩＴＦ２９８４とパシレオチドの異なる挙動を説明するために、本発明者らはまず、５％Ｄ－マンニトール溶液中のＳＳＴ１４のＮＭＲ研究から得られたＳＳＴ１４コンフォーマーを用いて、ソマトスタチンと受容体の相互作用を探索した（１０個のコンフォーマーのうち最初のコンフォーマー、ＰＤＢコード２ＭＩ１）。ＳＳＴ１４はＳＳＴＲ３によくドッキングし、ＺＤＯＣＫスコアが最も高いポーズは膜貫通ヘリックスＴＭ５、ＴＭ６、ＴＭ７と相互作用し、ＴＭ４とＴＭ５をつなぐ細胞外ループ（ＥＬ４－５）の近くにあるらしいＰｈｅ７と相互作用している。残念ながら、ＳＲＩＦ－１４とＳＳＴＲ２については、ＴＭ４とＴＭ５の間に長い細胞外ループがあるため、同等のドッキング計算を行うことができなかった：このループコンフォメーションは、ＳＳＴＲ２の膜貫通ヘリックスによって区切られた内部空間への入り口を妨害する（図２）。

【0078】

ＳＳＴＲ３モデルにおけるＳＳＴ１４の結合形状には、一連の興味深い特徴がある：
ｉ） Ｌｙｓ９はＡｓｐ１２３に固定され、κ－オピオイドの活性型（ＰＤＢコード６Ｂ７３）をＳＳＴＲ３－ＳＳＴ１４の最適ドッキングポーズ複合体に重ね合わせると、ζ－窒素原子はＫＯＰ作動薬ＭＰ１１０４のＮＨ₄ ⁺基と同じ領域を占める。
ｉｉ） Ｔｒｐ８は、Ｌｅｕ１００、Ｖａｌ２９９、Ｔｙｒ２９５およびＰｈｅ２７３で区切られた疎水性ポケットに適合し、局所的な非共有結合ネットワークに埋もれる。
ｉｉｉ） リガンド残基Ｐｈｅ７－Ｔｒｐ８－Ｌｙｓ９－Ｔｈｒ１０は、歪んだβ－ＩＩ’ターンを生成する。

【0079】

最も可能性の高いＳＲＩＦ－１４結合コンフォーマーに見いだされる歪んだβ－ＩＩ’ターンは、このような二次構造モチーフの高い安定性を示すペプチド作動薬が好ましいことを示唆している。パシレオチドとＬ－３６３、３０１のＮＭＲ研究²⁹により、他の環状ヘキサペプチドに比べてこのコンフォーマーの高い柔軟性が示され、このより大きな自由度がすべての受容体結合部位により良く適合するパシレオチドの能力の理由であると考えられる。

【0080】

ＩＴＦ２９８４の類似の実験（図３）は、パシレオチドに比べてＩＴＦ２９８４のβ－ＩＩ’ターンの確率が高いことを示しており、これは、軌道解析で検出された分子動力学スナップショットの数が多いことによる（１２％ではなく３０％）。化合物ＩＴＦ２８４２のβ－ＩＩ’－ターン確率は、さらに高い（５８％）。３分子すべてについてＳＳＴＲ１～３およびＳＳＴＲ５に対する結合結果を比較すると（表３）、β－ターンの安定性と対ＳＳＴＲ３の効力（および選択性）との間に相関関係があることがわかる。β－ターンの安定性が高いほど、ＳＳＴＲ３に対する選択性が高い。

【0081】

本発明者らは、ＳＳＴＲ３に対するＩＴＦ２９８４の親和性の上昇を説明するもっともらしい構造仮説が存在すると結論づけた。

【0082】

【表3】

【0083】

本発明者らはさらにＩＴＦ２９８４の生物学的活性を特徴付けた：この分子はラット下垂体前葉初代細胞培養からのＧＨ放出を強力に阻害したが、パシレオチドに関しては統計学的な差はなかった（図４）。ＩＴＦ２９８４はさらに、ラットのペントバルビタール誘発ＧＨ放出を阻害し、ラットおよびイヌのＩＧＦ１レベルを低下させた。

【0084】

ＩＴＦ２９８４と他のＳＳＴＲ作動薬との間のメカニズムの違いを明らかにするために、２つの異なる実験モデル：ヒトＳＳＴＲでトランスフェクションされたＨＥＫ２９３細胞、およびヒトＧＦＰタグ付き受容体（ＳＳＴＲ２－ｔＧＦＰ、ＳＳＴＲ３－ｔＧＦＰ、ＳＳＴＲ５－ｔＧＦＰ）でトランスフェクションされたＵ２ＯＳ細胞、を用いてＳＳＴＲの内在化を調べた。ＳＳＴ１４とＳＳＴ２８は、それぞれ１回目と２回目の実験で参照化合物として含まれた。

【0085】

トランスフェクションされたＨＥＫ２９３細胞において、ＩＴＦ２９８４はＳＳＴＲ３の強い内在化を誘導したが、これはＳＳＴ１４によって誘導されたものと同程度であり、オクトレオチまたはパシレオチドによって誘導されたものよりも有意に高かった（図５Ａ、５Ｂ）。対照的に、ＳＳＴＲ２とＳＳＴＲ５の部分的な内在化のみが観察された。

【0086】

Ｕ２ＯＳ細胞では、未処理の対照と比較して、すべての化合物が用量依存的にＳＳＴＲ２－ｔＧＦＰの内在化を増加させ、オクトレオチドが最も強力な内在化誘導剤であり、パシレオチドおよびＩＴＦ２９８４がそれに続いた。ＳＳＴＲ５－ｔＧＦＰをトランスフェクションした細胞では、ＳＳＡによる処理による受容体の内在化の増加は、ＳＳＴの効果は低かった（ＳＳＴ２８の約５０％）が、ＳＳＴの効果と同様であった（表４、図６）。

【0087】

【表4】

【0088】

最後に、ＳＳＴＲ３－ｔＧＦＰを導入した細胞では、ＩＴＦ２９８４は最も強力な受容体内在化誘導剤であり、１μＭでＳＳＴ２８に匹敵する増加を示した。同じ濃度では、オクトレオチドおよびパシレオチドの効果は著しく低かった。

【0089】

本発明者らは、２つの異なる細胞株において、ＩＴＦ２９８４がパシレオチドまたはオクトレオチドよりも効果的にＳＳＴＲ３の内在化を誘導すると結論づけた。

【0090】

リン酸化部位特異的抗体を用いたヒトＳＳＴＲ２、ＳＳＴＲ３およびＳＳＴＲ５受容体のＳＳＡで誘導される活性化の評価
次に、ＳＳＡによって誘導されるヒトＳＳＴＲの活性化を、以下の残基に対するリン酸化部位特異的（phosphosite-specific）抗体を用いたウェスタンブロットによって試験した：ＳＳＴＲ２について：Ｓ３４１／ｐＳ３４３、Ｔ３５３／Ｔ３５４、Ｔ３５６／Ｔ３５９；ＳＳＴＲ３について：Ｓ３３７／Ｔ３４１、Ｔ３５８；ＳＳＴＲ５について：Ｔ３３３³⁰。ＳＳＴＲ３は、用量依存的様式および薬理学的に適切なナノモルの用量範囲で完全なリン酸化を誘導した（図７Ｂ、Ｃ）が、パシレオチドは、薬理学的に適切なマイクロモルの用量範囲で弱い効果しか誘導しなかった。ＳＳＴＲ２では、両方のシクロヘキサペプチドがＳ３４１／Ｓ３４３の選択的リン酸化を誘導したが、ＳＳＴ１４およびオクトレオチドは、調査したすべての部位でＳＳＴＲ２の完全なリン酸化をもたらした（図８Ｂ、Ｃ）。最後に、ＳＳＴＲ５のｐＴ３３３リン酸化部位は、すべての試験化合物によって部分的にしか影響を受けず、パシレオチドが最も顕著な効果を示した（図９Ｂ、Ｃ）。

【0091】

ＨＥＫ２９３細胞およびＡｔＴ２０ ＳＳＴＲ３トランスフェクション細胞においてＳＳＴＲ３の作動薬で媒介されるＧタンパク質シグナル伝達。

【0092】

ソマトスタチン受容体のシグナル伝達（シグナリング（signaling））は、Ｇタンパク質共役型内向き整流カリウム（ＧＩＲＫ）チャネルを活性化することが知られている³⁰。

【0093】

そこで、ｈＳＳＴＲ３をトランスフェクションしたＨＥＫ２９３細胞およびＡｔＴ２０野生型の両方、ならびにｈＳＳＴＲ３をトランスフェクションした細胞で、ＧＩＲＫベースの蛍光膜電位アッセイを用いて、ＳＳＴＲ作動薬によって媒介されるＧタンパク質シグナル伝達を研究した。

【0094】

ヒトＳＳＴＲ３受容体を安定に発現しているＨＥＫ２９３細胞をＳＳＴ１４、オクトレオチド、パシレオチドおよびＩＴＦ２９８４で刺激すると、ＦＭＰ染料の蛍光シグナルは用量依存的に減少し、ＩＴＦ２９８４はオクトレオチドまたはパシレオチドよりも強力であった（図１０）。ＩＴＦ２９８４をよりよく特徴化するために、ＧＩＲＫチャネルの活性化をＳＳＴＲ２およびＳＳＴＲ５にも適用した。ＨＥＫ２９３－ＧＩＲＫ２－ＧＦＰ－ＨＡ－ｈＳＳＴ２では、最も強力な作動薬はオクトレオチドであり、次いでパシレオチドおよびＩＴＦ２９８４であったが、ＨＥＫ２９３－ＧＩＲＫ２－ＧＦＰ－ＨＡ－ｈＳＳＴ５では、パシレオチドによって最も高い活性化が誘導された。ＨＥＫ２９３細胞におけるＳＳＴＲ２、ＳＳＴＲ３、ＳＳＴＲ５の作動薬媒介性Ｇタンパク質シグナル伝達の結果を表５にまとめた。

【0095】

結果は、３回の独立した実験による二重測定から算出した平均値±ＳＥＭで表した。

【0096】

【表5】

【0097】

さらに、オクトレオチドとＩＴＦ２９８４によって媒介されるＧタンパク質シグナル伝達を、ＧＩＲＫ１／２チャネルならびにＳＳＴＲ２およびＳＳＴＲ５受容体を内因性に発現するマウス大脳皮質腫瘍ＡｔＴ－２０細胞で解析した。ＳＳＴＲ３受容体の外因性発現は、ＩＴＦ２９８４で媒介される用量反応曲線の左方シフトをもたらしたが、これらの条件下のオクトレオチドではシフトしなかった。これらのデータは、ｈＳＳＴＲ３をトランスフェクションしたＨＥＫ２９３細胞株で得られたデータと一致している。

【0098】

ｉｎ ｖｉｖｏでの内因性ＮＦＰＡに対するＩＴＦ２９８４の有効性
試験管内研究の結果に勇気づけられ、本発明者らは、ヒトのＮＦＰＡに非常によく似たＮＦＰＡが完全な浸透性で発達する唯一の自発的内因性モデルであるＭＥＮＸ（ホモ接合変異体）ラットモデルでＩＴＦ２９８４のｉｎ ｖｉｔｒｏでの抗腫瘍活性を研究することにした^16、17。このモデルで発達するＮＦＰＡは、これらのヒト対応体のＳＳＴＲ発現パターンも再現し、高いＳＳＴＲ３発現を示した。興味深いことに、ＭＥＸラット下垂体腫瘍におけるＳＳＴＲ３レベルは性別に特異的であり、雌で高い発現が観察された。このパターンはヒトＮＦＰＡにも及ぶ可能性がある。男女両方のラットをＩＴＦ２９８４またはプラセボで５６日間処理し、腫瘍の成長を高解像度ＭＲＩを用いて縦断的にモニターした。

【0099】

ＩＴＦ２９８４を投与した雄ラットおよび対照群のメンバーでは、相対的な腫瘍体積の急激な増加が認められ（図１２）、二次的な時間効果を持つ線形混合効果モデル（ＬＭＥ）に最もよく適合した対数的な値を示した。対照的に、ＩＴＦ２９８４を投与した雌ラットは、処理中の腫瘍体積のわずかな増加のみを示し、代わりに直線的な成長を示した。ＩＴＦ２９８４で処理されたラットの雌雄間の時間勾配の差は有意であった（ｐ値＝０．０２５１）。このことは、雌の突然変異ラットは雄と比較してＩＴＦ２９８４に有意によく応答したことを示している。意外なことに、２匹の雌ラットは試験開始時にすでに比較的大きな腫瘍を有していたが、ＩＴＦ２９８４は腫瘍の成長を抑制し続け、これら２匹は処理終了時に不快の徴候を示さなかった。雌雄の両方を組み合わせた場合、ＩＴＦ２９８４を処理したラットにおける腫瘍増殖の全体的な減少（薬物反応の代用として使用）は、最も良く適合したＬＭＥによって評価されたように、対照ラットにおける腫瘍増殖の減少に対して控えめであった。しかし、雌雄を別々に分析すると、薬剤で処理した雌ラットはプラセボで処理した雌ラットと比較して腫瘍増殖の抑制を示し、前者のグループがＩＴＦ２９８４に応答したことを示している。

【0100】

ＮＦＰＡの増殖率に対するＩＴＦ２９８４の効果
処理終了時に、生体外（ex vivo）分析用に下垂体組織を採取した。Ｋｉ６７の染色をプラセボまたはＩＴＦ２９８４で処理したラットのすべての腫瘍に対して行い、１００．０００μｍ²あたりのＫｉ６７陽性細胞の数を数えた。プラセボ投与（対照）ＮＦＰＡは、報告されたように、平均して、面積当たり３７５個（雄）および３１２個（雌）のＫｉ６７陽性細胞を示した（図１３）。驚くべきことではないが、対照群では、雄および雌において、Ｋｉ６７陽性細胞数と絶対腫瘍容積との間に正の傾向があった。ＩＴＦ２９８４で処理したラットの腫瘍では、Ｋｉ－６７陽性細胞数は、平均して、雄ラットで２５０個（－３３．５％）、雌ラットで１３４個（－５７％）に減少した（図１３）。プラセボとＩＴＦ２９８４で処理した雌ラットの間のＫｉ６７陽性細胞数の差は有意であった（ｐ＝０．０３１）。腫瘍細胞増殖の変化は、ＭＲＩによって決定された腫瘍体積の変化と相関している：ＩＴＦ２９８４は雄よりも雌でより効果的に腫瘍増殖を抑制し、これは前者におけるＮＦＰＡ細胞増殖のより強力な減少と一緒であった。

【0101】

ラットＮＦＰＡにおけるＳＳＴＲの発現
様々なＳｓｔｒ遺伝子の発現レベルは、定量的ＲＴ－ＰＣＲにより各転写物のコピー数（絶対定量）を測定することで、処理終了時のラット腫瘍で評価された。また、２動物群からの腫瘍を免疫組織化学（ＩＨＣ）を用いてＳＳＴＲ１、２、３および５に対する抗体で染色し、その結果を、雌ラットにおけるＳＳＴＲ３の高発現で確認した³¹。ＩＴＦ２９８４を投与すると、雌雄ともにＳＳＴＲ５の発現がダウンレギュレーションされ、ＳＳＴＲ３のｍＲＮＡが増加した（図１４）。この雌性ラットにおけるＳＳＴＲ３の高発現は、雌性におけるＩＴＦ２９８４の効果が大きいことを説明する。

【0102】

ヒトの女性においても、ＳＳＴＲ３の発現が統計学的に有意に高いことは示されていない。

【0103】

Ｔ－３細胞株スフェロイドに対するＩＴＦ２９８４の活性と、オクトレオチドおよびパシレオチドとの比較
方法 － ＮＴ－３細胞株スフェロイドの作製と処理
ＮＴ－３高分化膵神経内分泌（ＰａｎＮＥＴ）細胞株⁽³²⁾は、膵腫瘍のｉｎ ｖｉｔｒｏモデルである。

【0104】

前記細胞は、１０％ＦＢＳ、１％ペニシリン／ストレプトマイシン、２０ｎｇ／ｍｌのＥＧＦ（ＡＦ－１００－１５、ペプロテック社製）、１０ｎｇ／ｍｌのＦＧＦ（１００－１８Ｂ、ペプロテック社製）を含むＲＰＭＩ１６４０培地ＧｌｕｔａＭＡＸ（商標）で培養された。

【0105】

３Ｄスフェロイドは、９６ウェルＵＬＡプレート（コーニング（Ｃｏｒｎｉｎｇ））に２０００細胞／ウェルを播種して作製した。各条件について４つの複製を播種した。

【0106】

スフェロイド形成には処理開始前の４日を要した。

【0107】

ＩＴＦ２９８４、パシレオチド、オクトレオチドのストック溶液は１００％ＤＭＳＯ中で調製され、０．５％ＤＭＳＯを含有する完全増殖培地で２５６０、１２８０、６４０、３２０、１６０、８０、４０、２０ｎＭの作業溶液が調製された。

【0108】

培地の５０％を（スフェロイドの除去を避けるため）、所望の薬剤濃度の２倍を含有する新しい培地に交換し、処理を３日ごとに繰り返した。

【0109】

スフェロイドの形態は処理中毎日モニターし、０、４、７、１１、１４、１８日目に写真を撮った。０日目は処理初日に相当する。写真は各時点で同じウェルから撮影した。

【0110】

結果 － ＮＴ－３スフェロイドに関するＩＴＦ２９８４の細胞毒性活性
最近開発されたＮＴ－３細胞株は、高レベルのＳＳＴＲ、特にＳＳＴＲ３を発現する、よく分化したＰａｎＮＥＴである⁽³²⁾。

【0111】

ＩＴＦ２９８４は、オクトレオチドおよびパシレオチドと並行して、ＮＴ－３スフェロイドに関する細胞毒性活性について用量応答で試験した。スフェロイドの成長／生存を１８日間追跡した。

【0112】

図１５に示すように、ＩＴＦ２９８４は、スフェロイドの体積を減少させ、これは濃度≧６４０ｎＭで７日目から始まった。２．５６μＭでスフェロイドは完全に破壊された。同じ現象はオクトレオチドとパシレオチドで処理したスフェロイドではあまり明確ではなく、最高濃度でもその形態を依然として維持している（図１６と１７）。

【0113】

従って、ＮＴ－３スフェロイドで観察された細胞毒性活性が抗腫瘍活性に対応することを考慮すると、前記結果は、ＩＴＦ２９８４が膵臓癌の治療により効果的な薬剤として使用できることを示しうる。

【0114】

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（特許文献１８）(16) Marinoni, I.; Lee, M.; Mountford, S.; Perren, A.; Bravi, I.; Jennen, L.; Feuchtinger, A.; Drouin, J.; Roncaroli, F.; Pellegata, N. S. Characterization of MENX-Associated Pituitary Tumours. Neuropathol. Appl. Neurobiol. 2013, 39 (3), 256-269, DOI: 10.1111/j.1365-2990.2012.01278.x.

【0131】

（特許文献１９）(17) Lee, M.; Marinoni, I.; Irmler, M.; Psaras, T.; Honegger, J. B.; Beschorner, R.; Anastasov, N.; Beckers, J.; Theodoropoulou, M.; Roncaroli, F.; Pellegata, N. S. Transcriptome Analysis of MENX-Associated Rat Pituitary Adenomas Identifies Novel Molecular Mechanisms Involved in the Pathogenesis of Human Pituitary Gonadotroph Adenomas. Acta Neuropathol. 2013, 126 (1), 137-150, DOI: 10.1007/s00401-013-1132-7.

【0132】

（特許文献２０）(18) Oystese, K. A.; Casar-Borota, O.; Normann, K. R.; Zucknick, M.; Berg, J. P.; Bollerslev, J. Estrogen Receptor a, a Sex-Dependent Predictor of Aggressiveness in Nonfunctioning Pituitary Adenomas: Sstr and Sex Hormone Receptor Distribution in NFPA. J. Clin. Endocrinol. Metab. 2017, 102 (9), 3581-3590, DOI: 10.1210/jc.2017-00792.

【0133】

（特許文献２１）(19) Diana Ilie, M.; Vasiljevic, A.; Louvet, C.; Jouanneau, E.; Raverot, G. Gonadotroph Tumors Show Subtype Differences That Might Have Implications for Therapy. Cancers (Basel). 2020, 12 (4), 1-12, DOI: 10.3390/cancers12041012.

【0134】

（特許文献２２）(20) Shahbaz, M.; Ruliang, F.; Xu, Z.; Benjia, L.; Cong, W.; Zhaobin, H.; Jun, N. MRNA Expression of Somatostatin Receptor Subtypes SSTR-2, SSTR-3, and SSTR-5 and Its Significance in Pancreatic Cancer. World J. Surg. Oncol. 2015, 13 (1), 1-6, DOI: 10.1186/s12957-015-0467-z.

【0135】

（特許文献２３）(21) Elston, M. S.; Meyer-Rochow, G. Y.; Conaglen, H. M.; Clarkson, A.; Clifton-Bligh, R. J.; Conaglen, J. V.; Gill, A. J. Increased SSTR2A and SSTR3 Expression in Succinate Dehydrogenase-Deficient Pheochromocytomas and Paragangliomas. Hum. Pathol. 2015, 46 (3), 390-396, DOI: 10.1016/j.humpath.2014.11.012.

【0136】

（特許文献２４）(22) Kanakis, G.; Grimelius, L.; Spathis, A.; Tringidou, R.; Rassidakis, G. Z.;Oberg, K.; Kaltsas, G.; Tsolakis, A. V. Expression of Somatostatin Receptors 1-5 and Dopamine Receptor 2 in Lung Carcinoids: Implications for a Therapeutic Role. Neuroendocrinology 2015, 101 (3), 211-222, DOI: 10.1159/000381061.

【0137】

（特許文献２５）(23) Frati, A.; Rouzier, R.; Lesieur, B.; Werkoff, G.; Antoine, M.; Rodenas, A.; Darai, E.; Chereau, E. Expression of Somatostatin Type-2 and -4 Receptor and Correlation with Histological Type in Breast Cancer. Anticancer Res. 2014, 34 (8), 3997-4004.

【0138】

（特許文献２６）(24) Florio, T.; Morini, M.; Villa, V.; Arena, S.; Corsaro, A.; Thellung, S.; Culler, M. D.; Pfeffer, U.; Noonan, D. M.; Schettini, G.; Albini, A. Somatostatin Inhibits Tumor Angiogenesis and Growth via Somatostatin Receptor-3-Mediated Regulation of Endothelial Nitric Oxide Synthase and Mitogen-Activated Protein Kinase Activities. Endocrinology 2003, 144 (4), 1574-1584, DOI: 10.1210/en.2002-220949.

【0139】

（特許文献２７）(25) Zatelli, M. C.; Piccin, D.; Vignali, C.; Tagliati, F.; Ambrosio, M. R.; Bondanelli, M.; Cimino, V.; Bianchi, A.; Schmid, H. A.; Scanarini, M.; Pontecorvi, A.; De Marinis, L.; Maira, G.; Degli Uberti, E. C. Pasireotide, a Multiple Somatostatin Receptor Subtypes Ligand, Reduces Cell Viability in Non-Functioning Pituitary Adenomas by Inhibiting Vascular Endothelial Growth Factor Secretion. Endocr. Relat. Cancer 2007, 14 (1), 91-102, DOI: 10.1677/ERC-06-0026.

【0140】

（特許文献２８）(26) Gunther, T.; Tulipano, G.; Dournaud, P.; Bousquet, C.; Csaba, Z.; Kreienkamp, H. J.; Lupp, A.; Korbonits, M.; Castano, J. P.; Wester, H. J.; Culler, M.; Melmed, S.; Schulz, S. International Union of Basic and Clinical Pharmacology. CV. Somatostatin Receptors: Structure, Function, Ligands, and New Nomenclature. Pharmacol. Rev. 2018, 70 (4), 763-835, DOI: 10.1124/pr.117.015388.

【0141】

（特許文献２９）(27) Gatto, F.; Feelders, R. A.; Van Der Pas, R.; Kros, J. M.; Waaijers, M.; Sprij-Mooij, D.; Neggers, S. J. C. M. M.; Van Der Lelij, A. J.; Minuto, F.; Lamberts, S. W. J.; De Herder, W. W.; Ferone, D.; Hofland, L. J. Immunoreactivity Score Using an Anti-Sst2A Receptor Monoclonal Antibody Strongly Predicts the Biochemical Response to Adjuvant Treatment with Somatostatin Analogs in Acromegaly. J. Clin. Endocrinol. Metab. 2013, 98 (1), E66-E71, DOI: 10.1210/jc.2012-2609.

【0142】

（特許文献３０）(28) Kooistra, A. J.; Mordalski, S.; Esguerra, M.; Mamyrbekov, A.; Munk, C.; Keser, M.; Gloriam, D. E. OUP Accepted Manuscript. Nucleic Acids Res. 2020, 49 (December 2020), 335-343, DOI: 10.1093/nar/gkaa1080.

【0143】

（特許文献３１）(29) A. Stevenazzi, G. Sandrone, M. Pinori, P. M. NMR and Molecular Dynamics Analysis of SOM230: A Pluripotent Somatostatin Analogue 9th INTERNATIONAL SYMPOSIUM ON SOLID PHASE SYNTHESIS, COMPLEMENTARY SOLUTION METHODS & COMBINATORIAL LIBRARIES 2nd INTERNATIONAL SYMPOSIUM ON PROTEOMIC, COMBINATORIAL & OTH; 2007.

【0144】

（特許文献３２）(30) Lehmann, A.; Kliewer, A.; Gunther, T.; Nagel, F.; Schulz, S. Identification of Phosphorylation Sites Regulating Sst3 Somatostatin Receptor Trafficking. Mol. Endocrinol. 2016, 30 (6), 645-659, DOI: 10.1210/me.2015-1244.

【0145】

（特許文献３３）(31) Gulde, S.; Wiedemann, T.; Schillmaier, M.; Valenca, I.; Lupp, A.; Steiger, K.; Yen, H. Y.; Bauerle, S.; Notni, J.; Luque, R.; Schmid, H.; Schulz, S.; Ankerst, D. P.; Schilling, F.; Pellegata, N. S. Gender-Specific Efficacy Revealed by Head-to-Head Comparison of Pasireotide and Octreotide in a Representative in Vivo Model of Nonfunctioning Pituitary Tumors. Cancers (Basel). 2021, 13 (12), DOI: 10.3390/cancers13123097.

【0146】

（特許文献３４）(32) Daniel Benten, Yasmin Behrang, Ludmilla Unrau, Victoria Weissmann, Gerrit Wolters-Eisfeld, Susanne Burdak-Rothkamm, Felix R. Stahl, Martin Anlauf, Patricia Grabowski, Markus Mobs, Jan Dieckhoff, Bence Sipos, Martina Fahl, Corinna Eggers, Daniel Perez, Maximillian Bockhorn, Jakob R. Izbicki, Ansgar W. Lohse, Jorg Schrader. Establishment of the First Well-differentiated Human Pancreatic Neuroendocrine Tumor Model. Mol Cancer Res 16, 496-507, 2018.

【図1A】

【図1B】

【図1C】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【配列表】

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【国際調査報告】