特表 2025-500698 中等度から最重度の眉間皺及び外眼角皺の治療

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2025-01-09

(54)【発明の名称】中等度から最重度の眉間皺及び外眼角皺の治療

(51)【国際特許分類】

   A61K 38/16 20060101AFI20241226BHJP

   A61K 47/02 20060101ALI20241226BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20241226BHJP

   A61K 47/18 20170101ALI20241226BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20241226BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20241226BHJP

【ＦＩ】

A61K38/16

A61K47/02

A61K9/08

A61K47/18

A61P17/00

A61P25/00

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024542123

(86)(22)【出願日】2023-01-13

(85)【翻訳文提出日】2024-09-12

(86)【国際出願番号】 GB2023050061

(87)【国際公開番号】W WO2023135428

(87)【国際公開日】2023-07-20

(31)【優先権主張番号】63/299,705

(32)【優先日】2022-01-14

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/399,127

(32)【優先日】2022-08-18

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】517242544

【氏名又は名称】ガルデルマ・ホールディング・エスアー

(71)【出願人】

【識別番号】517340507

【氏名又は名称】イプセン バイオファーム リミテッド

【氏名又は名称原語表記】ＩＰＳＥＮ ＢＩＯＰＨＡＲＭ ＬＩＭＩＴＥＤ

(74)【代理人】

【識別番号】110000914

【氏名又は名称】弁理士法人ＷｉｓｅＰｌｕｓ

(72)【発明者】

【氏名】アクセン， エーファ

(72)【発明者】

【氏名】リン， シャオミン

(72)【発明者】

【氏名】ヴァインベルク， フェリペ

(72)【発明者】

【氏名】マグワイア， コートニー

(72)【発明者】

【氏名】ニルソン， アンナ

【テーマコード（参考）】

4C076

4C084

【Ｆターム（参考）】

4C076AA11

4C076BB15

4C076BB16

4C076BB31

4C076CC01

4C076CC18

4C076DD07

4C076DD23Z

4C076DD26Z

4C076DD51Q

4C076FF16

4C076FF36

4C076FF61

4C076FF67

4C084AA01

4C084AA02

4C084BA01

4C084BA08

4C084BA22

4C084BA26

4C084BA44

4C084CA04

4C084CA53

4C084DA33

4C084MA17

4C084MA63

4C084MA65

4C084MA66

4C084NA05

4C084NA06

4C084NA07

4C084ZA011

4C084ZA891

(57)【要約】

本明細書では、液体ボツリヌス神経毒組成物を用いた眉間皺及び外眼角皺の治療方法を開示する。
【選択図】図５

【特許請求の範囲】

【請求項1】

低い眼瞼下垂リスクでヒト対象において眉間皺（ＧＬ）、外眼角皺（ＬＣＬ）、又はそれらの組み合わせを治療する方法であって、
ボツリヌス神経毒を含む液体組成物を治療有効量で上記対象に投与し、それによってＧＬ、ＬＣＬ、又はそれらの組み合わせの外観を軽減させることを含み、
上記ボツリヌス神経毒は、酵素活性がより低い又は比活性がより低いボツリヌス神経毒製品より眼瞼下垂を発症させる可能性が低い、方法。

【請求項2】

低い眼瞼下垂リスクでヒト対象において眉間皺（ＧＬ）、外眼角皺（ＬＣＬ）、又はそれらの組み合わせを治療する方法に使用するためのボツリヌス神経毒を含む液体組成物であって、
上記方法は、治療有効量の上記液体組成物を上記対象に投与し、それによってＧＬ、ＬＣＬ、又はそれらの組み合わせの外観を軽減させることを含み、
上記ボツリヌス神経毒は、酵素活性がより低い又は比活性がより低いボツリヌス神経毒製品より眼瞼下垂を発症させる可能性が低い、液体組成物。

【請求項3】

上記対象は重篤な有害事象を経験しない、請求項１に記載の方法、又は請求項２に記載の液体組成物。

【請求項4】

上記対象は、ＢＯＴＯＸ ＣＯＳＭＥＴＩＣ（登録商標）、ＸＥＯＭＩＮ（登録商標）、及びＪＥＵＶＥＡＵ（登録商標）より選択されるボツリヌス神経毒製品での治療と比較して眼瞼下垂を経験する可能性が低い、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法又は液体組成物。

【請求項5】

上記酵素活性がより低いボツリヌス神経毒製品は、ＢＯＴＯＸ ＣＯＳＭＥＴＩＣ（登録商標）、ＸＥＯＭＩＮ（登録商標）、及びＪＥＵＶＥＡＵ（登録商標）より選択される、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法又は液体組成物。

【請求項6】

ヒト対象において眉間皺（ＧＬ）、外眼角皺（ＬＣＬ）、又はそれらの組み合わせを治療する方法であって、
ボツリヌス神経毒を含む液体組成物を治療有効量で上記対象に投与し、それによってＧＬ、ＬＣＬ、又はそれらの組み合わせの外観を軽減させることを含み、
（ｉ）上記液体組成物は、少なくとも約９７ＢＵ／ｍｌ以上の活性を有する、方法。

【請求項7】

ヒト対象において眉間皺（ＧＬ）、外眼角皺（ＬＣＬ）、又はそれらの組み合わせを治療する方法に使用するためのボツリヌス神経毒を含む液体組成物であって、
上記方法は、治療有効量の上記液体組成物を上記対象に投与し、それによってＧＬ、ＬＣＬ、又はそれらの組み合わせの外観を軽減させることを含み、
（ｉ）上記液体組成物は、少なくとも約９７ＢＵ／ｍｌ以上の活性を有する、液体組成物。

【請求項8】

該液体製剤は、約２．０×１０^８Ｕ／総タンパク質ｍｇのＢｏＮＴ比活性を有し、上記比活性（Ｕ／ｍｇ）は、μＢＣＡ法で決定されたタンパク質総量（ｍｇ／ｍｌ）で除算したＵ／ｍｌ単位のマウスＬＤ５０効力を使用して任意に測定される、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法又は液体組成物。

【請求項9】

該液体製剤は、少なくとも約１．１０ＢＵ／ＲＢＵ又は少なくとも約０．１７ＢＵ／ｐｇのボツリヌス神経毒濃度で正規化された酵素活性を有し、上記ボツリヌス神経毒の上記酵素活性は、ＢＯＴＥＳＴ^ＴＭを使用して任意に決定される、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法又は液体組成物。

【請求項10】

該液体製剤は、少なくとも約１．３５ＣＢｐＡ単位／ＢｏＮＴのボツリヌス神経毒濃度で正規化された相対的効力を有し、上記ボツリヌス神経毒の該酵素活性は、細胞ベースのアッセイを使用して決定される、請求項１～９のいずれか一項に記載の方法又は液体組成物。

【請求項11】

該液体製剤は、ヒト又は動物由来の賦形剤を含まない、請求項１～１０のいずれか一項に記載の方法又は液体組成物。

【請求項12】

眼瞼下垂の発生は、２％未満、１．９％未満、１．８％未満、１．７％未満、１．５％未満、１．４％未満、１．３％未満、１．２％未満、１．１％未満、１．０％未満、又は０．９％と同等に低い、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法又は液体組成物。

【請求項13】

上記対象は眼瞼下垂を経験しない、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法又は液体組成物。

【請求項14】

上記対象は、ＢＯＴＯＸ ＣＯＳＭＥＴＩＣ（登録商標）、ＸＥＯＭＩＮ（登録商標）、及びＪＥＵＶＥＡＵ（登録商標）より選択されるボツリヌス神経毒製品での治療と比較して眼瞼下垂を経験する可能性が低い、請求項１～１３のいずれか一項に記載の方法又は液体組成物。

【請求項15】

ＧＬ、ＬＣＬ、又はそれらの組み合わせは、中等度から重度である、請求項１～１４のいずれか一項に記載の方法又は液体組成物。

【請求項16】

ＧＬ、ＬＣＬ、又はそれらの組み合わせは、重度又は最重度である、請求項１～１５のいずれか一項に記載の方法又は液体組成物。

【請求項17】

上記ボツリヌス神経毒を含む液体組成物は、動物タンパク質又はコンパニオンタンパク質を含まない、請求項１～１６のいずれか一項に記載の方法又は液体組成物。

【請求項18】

上記対象はＧＬを有する、請求項１～１７のいずれか一項に記載の方法又は液体組成物。

【請求項19】

上記対象はＬＣＬを有する、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法又は液体組成物。

【請求項20】

上記対象は、ＧＬ及びＬＣＬの組み合わせを有する、請求項１～１９のいずれか一項に記載の方法又は液体組成物。

【請求項21】

上記治療は、ＢＯＴＯＸ ＣＯＳＭＥＴＩＣ（登録商標）より高い奏効率を提供する、請求項１～２０のいずれか一項に記載の方法又は液体組成物。

【請求項22】

上記液体組成物は少なくとも４種の緩衝剤を含む、請求項１～２１のいずれか一項に記載の方法又は液体組成物。

【請求項23】

上記液体組成物は、約１００～約３００ｍＭの濃度又は約０．１～１０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する第１の緩衝剤を含む、請求項１～２２のいずれか一項に記載の方法又は液体組成物。

【請求項24】

上記液体組成物は、約１～約２５ｍＭの濃度又は約０．１～１．０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する第２の緩衝剤を含む、請求項２３に記載の方法又は液体組成物。

【請求項25】

上記液体組成物は、約１～約２５ｍＭの濃度又は約０．１～１．０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する第３の緩衝剤を含む、請求項２４に記載の方法又は液体組成物。

【請求項26】

上記液体組成物は、約１～約２５ｍＭの濃度又は約０．１～１．０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する第４の緩衝剤を含む、請求項２５に記載の方法又は液体組成物。

【請求項27】

上記液体組成物は、約１～約２５ｍＭの濃度又は約０．１～１．０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する第５の緩衝剤を含む、請求項２６に記載の方法又は液体組成物。

【請求項28】

上記緩衝剤は、塩化ナトリウム、塩化カリウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、リン酸水素二ナトリウム二水和物、及びリン酸二水素ナトリウム二水和物からなる群より選択される、請求項２２～２７のいずれか一項に記載の方法又は液体組成物。

【請求項29】

上記液体組成物は、アミノ酸であってもよい少なくとも１種の安定剤を含む、請求項１～２８のいずれか一項に記載の方法又は液体組成物。

【請求項30】

上記アミノ酸は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、及びトリプトファンからなる群より選択される、請求項２９に記載の方法又は液体組成物。

【請求項31】

上記アミノ酸は、Ｄアイソフォーム又はＬアイソフォームである、請求項２９又は３０に記載の方法又は液体組成物。

【請求項32】

上記アミノ酸は、約０．１～約３．０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、請求項２９～３１のいずれか一項に記載の方法又は液体組成物。

【請求項33】

上記液体組成物は、非イオン性界面活性剤であってもよい少なくとも１種の界面活性剤を含む、請求項１～３２のいずれか一項に記載の方法又は液体組成物。

【請求項34】

上記非イオン性界面活性剤は、約０．０１％（ｖ／ｖ）～約５．０％（ｖ／ｖ）の濃度又は約０．１～約３．０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、請求項３３に記載の方法又は液体組成物。

【請求項35】

上記ボツリヌス神経毒は、ボツリヌス神経毒Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、Ｅ型、Ｆ型、及びＧ型からなる群より選択される、請求項１～３４のいずれか一項に記載の方法又は液体組成物。

【請求項36】

上記ボツリヌス神経毒はボツリヌス神経毒Ａ型である、請求項３５に記載の方法又は液体組成物。

【請求項37】

上記液体組成物のｐＨは６．６～６．９である、請求項１～３６のいずれか一項に記載の方法又は液体組成物。

【請求項38】

上記ボツリヌス神経毒は、約１５０ｋＤａの分子量を有する、請求項１～３７のいずれか一項に記載の方法又は液体組成物。

【請求項39】

上記液体組成物の浸透圧は２７０ｍｏｓｍ／ｋｇ～３１０ｍｏｓｍ／ｋｇである、請求項１～３８のいずれか一項に記載の方法又は液体組成物。

【請求項40】

１～１００単位のボツリヌス毒素が上記対象に投与される、請求項１～３９のいずれか一項に記載の方法又は液体組成物。

【請求項41】

１０～７５単位のボツリヌス毒素が上記対象に投与される、請求項４０に記載の方法又は液体組成物。

【請求項42】

２５～７５単位のボツリヌス毒素が上記対象に投与される、請求項４０に記載の方法又は液体組成物。

【請求項43】

１０、２５、３０、４５、５０、６０、７５、又は９０単位のボツリヌス毒素が上記対象に投与される、請求項４０に記載の方法又は液体組成物。

【請求項44】

上記液体組成物が注射により投与される、請求項１～４３のいずれか一項に記載の方法又は液体組成物。

【請求項45】

上記注射は、皮下、経皮、皮内、又は筋肉内である、請求項４４に記載の方法又は液体組成物。

【請求項46】

上記対象は、眉間領域に複数回注射される、請求項４４又は４５に記載の方法又は液体組成物。

【請求項47】

隣接する注射箇所が約０．５～約１０ｃｍ離れている、請求項４６に記載の方法又は液体組成物。

【請求項48】

隣接する注射箇所が約１．５～約３ｃｍ離れている、請求項４６に記載の方法又は液体組成物。

【請求項49】

上記注射は、鼻根筋と顔の片側又は両側の皺眉筋とに行われる、請求項４６～４８のいずれか一項に記載の方法又は液体組成物。

【請求項50】

上記注射は、最初に鼻根筋に、続いて顔の片側又は両側の皺眉筋に、正中部から外側に移動して行われる、請求項４９に記載の方法又は液体組成物。

【請求項51】

すべての上記注射が、眼窩上縁の約１ｃｍ上で、瞳孔中心線に対して内側に行われる、請求項４６～５０のいずれか一項に記載の方法又は液体組成物。

【請求項52】

すべての上記注射が、眉毛の中央又は骨の眼窩上隆起の少なくとも１ｃｍ上に行われる、請求項４６～５１のいずれか一項に記載の方法又は液体組成物。

【請求項53】

上記対象は、外眼角の下に、眼輪筋の外側部分に、及び／又は眼窩縁から１～２ｃｍのところに複数回注射される、請求項４４又は４５に記載の方法又は液体組成物。

【請求項54】

上記対象は、外眼角の下に、眼輪筋の外側部分に、及び／又は眼窩縁から１～２ｃｍのところにさらに複数回注射される、請求項４４～５３のいずれか一項に記載の方法又は液体組成物。

【請求項55】

上記方法を約１ヶ月～約６ヶ月の間隔で繰り返して、ＧＬ、ＬＣＬ、又はそれらの組み合わせの再発を抑制する、請求項１～５４のいずれか一項に記載の方法又は液体組成物。

【請求項56】

上記方法を約３ヶ月～約６ヶ月の間隔で繰り返す、請求項５５に記載の方法又は液体組成物。

【請求項57】

上記方法を約４ヶ月の間隔で繰り返す、請求項５６に記載の方法又は液体組成物。

【請求項58】

本明細書に開示されるような対象において眉間皺及び／又は外眼角皺を治療するのに使用するためのボツリヌス神経毒を含む液体組成物。

【請求項59】

本明細書に開示されるような眉間皺及び／又は外眼角皺を治療するためのボツリヌス神経毒を含む液体組成物の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

相互参照ステートメント
本出願は、米国特許法第１１９条（ｅ）の下で、２０２２年１月１４日に出願された米国仮特許出願第６３／２９９，７０５号及び２０２２年８月１８日に出願された米国仮特許出願第６３／３９９，１２７号の優先権を主張する。これらの仮出願の内容全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

技術分野
本明細書では、ボツリヌス神経毒製剤を使用して中等度から重度及び最重度の眉間皺（ＧＬ）及び外眼角皺（ＬＣＬ）を治療するための方法及び組成物が記載されている。また、液体ボツリヌス神経毒製剤及び組成物も提供される。

【背景技術】

【0003】

本技術の背景技術に関する以下の説明は、単に本技術の理解を助けるために提供されるものであり、本技術の先行技術を説明するものや構成するものとは認められない。

【0004】

一般的に免疫学的に異なる７つのボツリヌス神経毒（ボツリヌス神経毒血清型Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、及びＧ）が特徴付けられており、それぞれが型特異的な抗体による中和によって区別されている。一例として、ＢＯＴＯＸ（登録商標）は、Ａｌｌｅｒｇａｎ社（カリフォルニア州アーバイン）から市販されているボツリヌス毒素Ａ型（ＢｏＮＴ－Ａ）精製神経毒複合体の商標である。ＢＯＴＯＸ（登録商標）は、細かい皺の外観を一時的に軽減させる注射による美容トリートメントとして人気がある。

【0005】

現在米国で承認されている４種類のＢｏＮＴ－Ａ製品、すなわちＢＯＴＯＸ ＣＯＳＭＥＴＩＣ（登録商標）、ＤＹＳＰＯＲＴ（登録商標）、ＸＥＯＭＩＮ（登録商標）、及びＪＥＵＶＥＡＵ（登録商標）がある。これらの製品はすべて、安定性の観点から凍結乾燥又はフリーズドライの状態で保存されている。各製品が活性成分としてＢｏＮＴ－Ａを含有するにもかかわらず、各製品の活性、安定性、及び安全性は同じではない。反対に、これらの製品の多くは比較的変わりやすい活性、安定性、及び安全性を有し、それらすべては、前述した製品を投与する前に医師が再調製する必要があることからさらに複雑になっている。

【0006】

眼瞼下垂（ｅｙｅｌｉｄ ｐｔｏｓｉｓ）（「眼瞼下垂（ｂｌｅｐｈａｒｏｐｔｏｓｉｓ）」）は、多くのＢｏＮＴ－Ａ臨床試験での有害事象として記録されており、その発生率は治療群でばらつきがある。重要なことに、眼瞼下垂は、あらゆるプラセボ群では起こらなかったため、ボツリヌス毒素の注射に直接起因し得ることを示している。合計で８０００名を超える患者での試験の検討では、眼瞼下垂率は約２．５％であることが分かった。具体的には、眼瞼下垂の発生率はＢｏｔｏｘ（３％）及びＪｅｕｖｅａｕ（２％）について認められた。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0007】

したがって、現在、眼瞼下垂を発症しない、又は眼瞼下垂を発症させる頻度がより少なく、重度がより低い安全なボツリヌス神経毒製剤であって、好ましくは保存及び治療での使用に適した液体形態のボツリヌス神経毒製剤が必要とされている。

【課題を解決するための手段】

【0008】

本開示は、一般に、外眼角皺（ＬＣＬ）、額皺、及び眉間皺（ＧＬ）等の皺（ｌｉｎｅｓ、ｗｒｉｎｋｌｅｓ）を治療するボツリヌス神経毒の組成物及び方法に関する。

【0009】

一態様では、本開示は、低い眼瞼下垂リスクでヒト対象において顔面上部の皺（例えば、眉間皺（ＧＬ）、外眼角皺（ＬＣＬ）、額皺、又はそれらの組み合わせ）を治療する方法であって、ボツリヌス神経毒を含む液体組成物を治療有効量で対象に投与し、それによってＧＬ、ＬＣＬ、額皺、又はそれらの組み合わせの外観を軽減させることを含み、上記ボツリヌス神経毒は、酵素活性がより低い又は比活性がより低いボツリヌス神経毒製品より眼瞼下垂を発症させる可能性が低い、方法を提供する。言い換えれば、低い眼瞼下垂リスクでヒト対象において顔面上部の皺（例えば、眉間皺（ＧＬ）、外眼角皺（ＬＣＬ）、額皺、又はそれらの組み合わせ）を治療するためにボツリヌス神経毒を含む液体組成物であって、上記治療は、ボツリヌス神経毒を含む液体組成物を治療有効量で対象に投与し、それによって顔面上部の皺（例えば、ＧＬ、ＬＣＬ、額皺、又はそれらの組み合わせ）の外観を軽減させることを含み、上記ボツリヌス神経毒は、酵素活性がより低い又は比活性がより低いボツリヌス神経毒製品より眼瞼下垂を発症させる可能性が低い、液体組成物が提供される。「酵素活性」という用語は、代替的に本明細書で「Ｌ鎖タンパク質分解活性」と呼ばれ得るが、例えば、ボツリヌス神経毒のＬ鎖が、標的（ＳＮＡＲＥ）タンパク質を切断するプロテアーゼドメインを含むことを示す。

【0010】

ボツリヌス神経毒を顔面上部の皺（先に記載したもの）を治療するために利用する場合、効力が比較的高い（例えば酵素活性が比較的高い、又は比活性が比較的高い）ボツリヌス神経毒が、効力が比較的低い（例えば酵素活性が比較的低い、又は比活性が比較的低い）ボツリヌス神経毒製品より眼瞼下垂を発症させる可能性が高いと予測され得ることから、この見解は驚くべきものである。ボツリヌス神経毒が意図した標的筋肉から近接する眼瞼の筋肉まで広がり、その弛緩性麻痺（下垂）を発症させる場合に眼瞼下垂が起こる。したがって、効力が比較的高いボツリヌス神経毒は、高い美容効果を達成するためには望ましかもしれないが、このようなアプローチの予想される弱点の１つは、上記ボツリヌス神経毒が眼瞼下垂を発症させる可能性がより高くなり得ることである。

【0011】

別の態様は、低い眼瞼下垂リスクでヒト対象において顔面上部の皺（例えば、眉間皺（ＧＬ）、外眼角皺（ＬＣＬ）、額皺、又はそれらの組み合わせ）を治療する美容方法であって、ボツリヌス神経毒を含む液体組成物を治療有効量で対象に投与し、それによって顔面上部の皺（例えば、ＧＬ、ＬＣＬ、額皺、又はそれらの組み合わせ）の外観を軽減させることを含み、上記ボツリヌス神経毒は、酵素活性がより低い又は比活性がより低いボツリヌス神経毒製品より眼瞼下垂を発症させる可能性が低い、美容方法を提供する。

【0012】

別の態様は、対象の顔面上部の皺（例えば、ＧＬ、ＬＣＬ、額皺、又はそれらの組み合わせ）を治療する方法であって、ボツリヌス神経毒（好ましくはボツリヌス神経毒を含む液体組成物）を治療有効量で対象に投与することを含み、上記顔面の皺の重症度は低減され、上記対象が経験する眼瞼下垂の発生率が低下する、方法を提供する。別の態様は、対象の顔面上部の皺（例えば、ＧＬ、ＬＣＬ、額皺、又はそれらの組み合わせ）を治療する方法であって、ボツリヌス神経毒（好ましくはボツリヌス神経毒を含む液体組成物）を治療有効量で対象に投与することを含み、上記顔面の皺の重症度が低減され、上記対象が経験する眼瞼下垂の発生率は、酵素活性がより低い又は比活性がより低い代替的なボツリヌス神経毒製品で治療した対象における眼瞼下垂の発生率と比較して低下する、方法を提供する。言い換えれば、対象の顔面上部の皺（例えば、ＧＬ、ＬＣＬ、額皺、又はそれらの組み合わせ）を治療するためのボツリヌス神経毒（好ましくはボツリヌス神経毒を含む液体組成物）であって、上記顔面の皺の重症度が低減され、上記対象が経験する眼瞼下垂の発生率が低下する、ボツリヌス神経毒を提供する。別の態様は、対象の顔面上部の皺（例えば、ＧＬ、ＬＣＬ、額皺、又はそれらの組み合わせ）を治療するためのボツリヌス神経毒（好ましくはボツリヌス神経毒を含む液体組成物）であって、上記顔面の皺の重症度が低減され、上記対象が経験する眼瞼下垂の発生率は、酵素活性がより低い又は比活性がより低い代替的なボツリヌス神経毒製品で治療した対象における眼瞼下垂の発生率と比較して低下する、ボツリヌス神経毒を提供する。

【0013】

眉間皺を治療する場合、ボツリヌス神経毒は典型的には、皺眉筋の最大２か所及び鼻根筋の１か所に投与される。

【0014】

額皺を治療する場合、ボツリヌス神経毒は典型的には、前頭筋の最大５か所に投与される。

【0015】

外眼角皺を治療する場合、ボツリヌス神経毒は典型的には、眼輪筋の外側部分の最大３か所に投与される。

【0016】

顔面上部の皺は眉間皺であってもよい。顔面の皺は、中等度～重度の顔面の皺、例えば中等度の顔面の皺又は重度の顔面の皺であってもよい。眼瞼下垂の発生率は、１％未満、好ましくは０．９％以下であってもよい。眉間皺を治療するために投与されるボツリヌス神経毒の総用量（診察／受診／日当たり）は、４０～６０Ｕ（好ましくは５０Ｕ）であってもよく、ここで１単位は、マウスにおいて算出した致死量（ＬＤ５０）の中央値に相当するボツリヌス神経毒の量である。外眼角皺を治療するために投与されるボツリヌス神経毒の総用量（診察／受診／日当たり）は、５０～７０Ｕ（好ましくは６０Ｕ）であってもよく、ここで１単位は、マウスにおいて算出した致死量（ＬＤ５０）の中央値に相当するＢｏＮＴ／Ａの量である。

【0017】

いくつかの実施形態では、対象は重篤な有害事象を経験しない。いくつかの実施形態では、対象は、Ｂｏｔｏｘ Ｃｏｓｍｅｔｉｃ（登録商標）、Ｘｅｏｍｉｎ（登録商標）、及びＪｅｕｖｅａｕ（登録商標）より選択されるボツリヌス神経毒製品での治療と比較して眼瞼下垂を経験する可能性が低い。いくつかの実施形態では、酵素活性がより低いボツリヌス神経毒製品は、Ｂｏｔｏｘ Ｃｏｓｍｅｔｉｃ（登録商標）、Ｘｅｏｍｉｎ（登録商標）、及びＪｅｕｖｅａｕ（登録商標）より選択される。

【0018】

ボツリヌス神経毒は、約１．１６ＢＵ／ＢｏＮＴのボツリヌス神経毒濃度で正規化された酵素活性を有してもよい。さらに又はあるいは、本開示は、必要としているヒト対象において低い眼瞼下垂リスクで眉間皺（ＧＬ）、外眼角皺（ＬＣＬ）、額皺、又はそれらの組み合わせを治療する方法であって、ボツリヌス神経毒を含む液体組成物を治療有効量で対象に投与し、それによってＧＬ、ＬＣＬ、額皺、又はそれらの組み合わせの外観を軽減させることを含み、上記ボツリヌス神経毒は、約１．１６ＢＵ／ＢｏＮＴのボツリヌス神経毒濃度で正規化された酵素活性を有する、方法を提供する。ヒト対象は、ボツリヌス神経毒（例えば、１．１６ＢＵ／ＢｏＮＴ未満のボツリヌス神経毒濃度で正規化された酵素活性、又は約２．０×１０^８Ｕ／ｍｇ未満の比活性を有するボツリヌス神経毒製剤、例えばＢｏｔｏｘ Ｃｏｓｍｅｔｉｃ（登録商標）、Ｘｅｏｍｉｎ（登録商標）、及びＪｅｕｖｅａｕ（登録商標））を投与する際に眼瞼下垂を発症するリスクがあるか、又は発症する可能性が高いと考えられる対象であってもよい。ヒト対象はまた、ボツリヌス神経毒を投与する際に眼瞼下垂に罹患しており、及び／又は眼瞼下垂を発症した病歴を有する対象であってもよい。別の実施形態では、ヒト対象は、任意の用量又は酵素活性のボツリヌス神経毒を投与する際に（ｉ）眼瞼下垂を発症するリスクがなく、（ｉｉ）眼瞼下垂に罹患しておらず、かつ／又は（ｉｉｉ）眼瞼下垂を発症した病歴を有していない対象ではない。

【0019】

液体組成物は、約９７ＢＵ／ｍｌ以上の活性を有し得て、任意で、液体組成物は、約１０のボツリヌス神経毒濃度で正規化された酵素活性を有し得る。別の態様では、本開示は、ヒト対象において眉間皺（ＧＬ）、外眼角皺（ＬＣＬ）、額皺、又はそれらの組み合わせを治療する方法であって、ボツリヌス神経毒を含む液体組成物を治療有効量で対象に投与し、それによってＧＬ、ＬＣＬ、額皺、又はそれらの組み合わせの外観を軽減させることを含み、（ｉ）上記液体組成物は、約９７ＢＵ／ｍｌ以上の活性を有し、任意で、上記液体組成物は、約１０のボツリヌス神経毒濃度で正規化された酵素活性を有する、方法を提供する。

【0020】

前述の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、液体製剤は、約２．０×１０^８Ｕ／総タンパク質ｍｇのＢｏＮＴ比活性を有し、比活性（Ｕ／ｍｇ）は、μＢＣＡ法（ｍｇ／ｍｌ）で決定されたタンパク質総量で除算したＵ／ｍｌ単位のマウスＬＤ５０効力を使用して任意に測定される。

【0021】

前述の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、液体製剤は、約１．１６ＢＵ／ＢｏＮＴのボツリヌス神経毒濃度で正規化された酵素活性を有し、ボツリヌス神経毒の酵素活性は、ＢＯＴＥＳＴ^ＴＭを使用して任意に決定される。

【0022】

前述の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、液体製剤は、約１．２０単位／ＢｏＮＴのボツリヌス神経毒濃度で正規化された相対的効力を有し、ボツリヌス神経毒の酵素活性は、細胞ベースのアッセイを使用して決定される。

【0023】

前述の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、液体製剤は、ヒト又は動物由来の賦形剤を含まない。

【0024】

前述の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、眼瞼下垂の発生は２％未満であり得る。本明細書で言及される眼瞼下垂の百分率は、好ましくは、眼瞼下垂を示すコホート（例えば、少なくとも５０名の患者のコホート）の患者の百分率に相当し、コホートの各患者は、ＢｏＮＴ製剤を投与される。これは、本明細書に記載の液体組成物が対象としたコホートに投与される場合、上記コホートの２％未満が眼瞼下垂を経験することを意味する。前述の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、眼瞼下垂の発生は、２％未満、１．９％未満、１．８％未満、１．７％未満、１．５％未満、１．４％未満、１．３％未満、１．２％未満、１．１％未満、１．０％未満、又は０．９％と同等に低い。例えば、眼瞼下垂の発生は１．０％以下であり得る。好ましくは、眼瞼下垂の発生は０．９％以下であり得る。したがって、代替的なボツリヌス神経毒製品（例えば、酵素活性がより低い又は比活性がより低いボツリヌス神経毒製品）での治療後の眼瞼下垂の発生は２％を超え得る。

【0025】

前述の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、対象は眼瞼下垂を経験しない。

【0026】

前述の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、対象は、Ｂｏｔｏｘ Ｃｏｓｍｅｔｉｃ（登録商標）、Ｘｅｏｍｉｎ（登録商標）、及びＪｅｕｖｅａｕ（登録商標）より選択されるボツリヌス神経毒製品での治療と比較して眼瞼下垂を経験する可能性が低い。前述の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、対象は、乾燥形態（例えば凍結乾燥粉末形態）で保存され、対象に投与するために再調製された代替的なボツリヌス神経毒製品での治療と比較して眼瞼下垂を経験する可能性が低い。

【0027】

前述の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、ＧＬ、ＬＣＬ、又はそれらの組み合わせは中等度から重度である。

【0028】

前述の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、ＧＬ、ＬＣＬ、又はそれらの組み合わせは重度又は最重度である。

【0029】

前述の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、ボツリヌス神経毒を含む液体組成物は、動物タンパク質又はコンパニオンタンパク質（ｃｏｍｐａｎｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ）を含まない。

【0030】

前述の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、対象はＧＬのみが治療される。前述の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、対象はＬＣＬのみが治療される。前述の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、対象はＧＬ及びＬＣＬの組み合わせが治療される。これらの実施形態のいずれでも、ＧＬ及び／又はＬＣＬは、対象の顔の片側又は両側であってもよい。

【0031】

前述の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、治療は、Ｂｏｔｏｘ Ｃｏｓｍｅｔｉｃ（登録商標）より高い奏効率を提供する。前述の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、治療は、乾燥形態（例えば凍結乾燥粉末形態）で保存され、対象に投与するために再調製された代替的なボツリヌス神経毒製品より高い奏効率を提供する。

【0032】

前述の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、液体組成物は約４種の緩衝剤を含む。例えば、液体組成物は、約１００～約３００ｍＭの濃度又は約０．１～１０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する第１の緩衝剤を含んでもよい。液体組成物は、約１～約２５ｍＭの濃度又は約０．１～１．０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する第２の緩衝剤を含んでもよい。液体組成物は、約１～約２５ｍＭの濃度又は約０．１～１．０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する第３の緩衝剤を含んでもよい。液体組成物は、約１～約２５ｍＭの濃度又は約０．１～１．０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、第４の緩衝剤を含んでもよい。液体組成物は、約１～約２５ｍＭの濃度又は約０．１～１．０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する第５の緩衝剤を含んでもよい。いくつかの実施形態では、上記緩衝剤は、塩化ナトリウム、塩化カリウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、リン酸水素二ナトリウム二水和物、及びリン酸二水素ナトリウム二水和物からなる群から選択される。

【0033】

前述の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、液体組成物は、アミノ酸であってもよい約１種の安定剤を含む。例えば、アミノ酸は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、及びトリプトファンからなる群より選択することができる。いくつかの実施形態では、アミノ酸はＤアイソフォーム又はＬアイソフォームである。いくつかの実施形態では、アミノ酸は、約０．１～約３．０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。

【0034】

前述の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、液体組成物は、非イオン性界面活性剤であってもよい約１種の界面活性剤を含む。いくつかの実施形態では、非イオン性界面活性剤は、約０．０１％（ｖ／ｖ）～約５．０％（ｖ／ｖ）の濃度又は約０．１～約３．０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。

【0035】

前述の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、ボツリヌス神経毒は、ボツリヌス神経毒Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、Ｅ型、Ｆ型、及びＧ型からなる群より選択される。特に、ボツリヌス神経毒はボツリヌス神経毒Ａ型であってもよい。

【0036】

前述の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、液体組成物のｐＨは６．６～６．９である。いくつかの実施形態では、ｐＨは６．７５又は約６．７５であってもよい。

【0037】

前述の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、ボツリヌス神経毒は、約１５０ｋＤａの分子量を有する。

【0038】

前述の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、液体組成物の浸透圧は２７０ｍｏｓｍ／ｋｇ～３１０ｍｏｓｍ／ｋｇである。

【0039】

前述の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、１～１００単位のボツリヌス毒素が対象に投与される。いくつかの実施形態では、１０～７５単位のボツリヌス毒素が対象に投与される。いくつかの実施形態では、２５～７５単位のボツリヌス毒素が対象に投与される。いくつかの実施形態では、１０、２５、３０、４５、５０、６０、７５、又は９０単位のボツリヌス毒素が対象に投与される。

【0040】

前述の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、液体組成物は注射により投与される。注射は、例えば、皮下、経皮、皮内、又は筋肉内であってもよい。いくつかの実施形態では、対象は、眉間領域に複数回注射される。いくつかの実施形態では、隣接する注射箇所が約０．５～約１０ｃｍ離れている。いくつかの実施形態では、隣接する注射箇所が約１．５～約３ｃｍ離れている。いくつかの実施形態では、注射は、鼻根筋と顔の片側又は両側の皺眉筋とに行われる。いくつかの実施形態では、注射は、最初に鼻根筋に、続いて顔の片側又は両側の皺眉筋に、正中部から外側に移動して行われる。いくつかの実施形態では、すべての注射は、眼窩上縁の約１ｃｍ上で、瞳孔中心線に対して内側に行われる。いくつかの実施形態では、すべての注射は、眉毛の中央又は骨の眼窩上隆起の約１ｃｍ上に行われる。いくつかの実施形態では、対象は、外眼角の下に、眼輪筋の外側部分に、及び／又は眼窩縁から１～２ｃｍのところに複数回注射される。いくつかの実施形態では、対象は、外眼角の下に、眼輪筋の外側部分に、及び／又は眼窩縁から１～２ｃｍのところにさらに複数回注射される。

【0041】

前述の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、上記方法を約１ヶ月～約６ヶ月の間隔で繰り返して、ＧＬ、ＬＣＬ、又はそれらの組み合わせの再発を抑制する。いくつかの実施形態では、上記再発を抑制するために、上記方法を約３ヶ月～約６ヶ月の間隔で繰り返す。いくつかの実施形態では、上記再発を抑制するために、上記方法を約４ヶ月の間隔で繰り返す。

【0042】

本開示はまた、本明細書に開示されたように対象において眉間皺及び／又は外眼角皺を治療するのに使用するためのボツリヌス神経毒を含む液体組成物を提供する。

【0043】

本開示はまた、本明細書に開示されたように眉間皺及び／又は外眼角皺を治療するためのボツリヌス神経毒を含む液体組成物の使用を提供する。

【0044】

以下の詳細な説明は、例示的かつ説明的であるが、限定することを意図していない。

【図面の簡単な説明】

【0045】

【図1】図１は、ＭＡＳ ＧＬスケール（安静時）及びＭＡＳ ＧＬスケール（動的）を示す。

【0046】

【図2】図２は、眉間皺の重症度スコアリングマトリクスを示す。

【0047】

【図3】図３は、経時的な眉間皺ＱＭ１１１４－ＤＰ試験の対象のＩＬＡ奏効者率の結果を示す。

【0048】

【図4】図４は、経時的な眉間皺ＱＭ１１１４－ＤＰ試験の対象のグローバル美的改善スコア（ＧＡＩＳ）解析を示す。

【0049】

【図5】図５は、眉間皺ＱＭ１１１４－ＤＰ試験の安全性結果（関連有害事象）を示す。

【0050】

【図6】図６は、外眼角皺の重症度スコアリングマトリクスを示す。

【0051】

【図7】図７は、経時的な外眼角皺ＱＭ１１１４－ＤＰ試験の対象のＩＬＡ奏効者率の結果を示す。

【0052】

【図8】図８は、経時的な外眼角皺ＱＭ１１１４－ＤＰ試験の対象のグローバル美的改善スコア（ＧＡＩＳ）解析を示す。

【0053】

【図9】図９は、外眼角皺ＱＭ１１１４－ＤＰ試験の安全性結果（関連有害事象）を示す。

【0054】

【図10】図１０は、経時的な眉間皺のＩＬＡ奏効者率の結果を示す。

【0055】

【図11】図１１は、経時的な外眼角皺のＩＬＡ奏効者率の結果を示す。

【0056】

【図12】図１２は、グローバル美的改善スコア（ＧＡＩＳ）解析を示す。

【0057】

【図13】図１３は、眉間皺の複合２等級改善を示す。

【0058】

【図14】図１４は、眉間皺の治験責任医師スコアを示す。

【0059】

【図15】図１５は、外眼角皺の複合２等級改善を示す。

【0060】

【図16】図１６は、外眼角皺の治験責任医師スコアを示す。

【0061】

【図17】図１７は、ＢｏＴｅｓｔ^ＴＭを使用して測定した酵素活性を示す。

【0062】

【図18】図１８は、ＢｏＮＴ－Ａ特異的ＥＬＩＳＡ（ＢＯＬＩＳＡ^ＴＭ）で正規化されたＢｏＴｅｓｔ^ＴＭを使用して測定された比活性を示す。上段は、ＢｏＴｅｓｔ Ｕ／ＲＢＵである単位での比活性実験の１回の反復からの結果を示す。下段はＵ／ｐｇを示す。

【0063】

【図19】図１９は、ＢｏＮＴ－Ａ濃度で正規化された細胞ベースのアッセイからの相対的効力を示す。

【0064】

【図20】図２０は、ＵＰＬＣ－ＳＥＣの主ピークにおける高レベルの純度（９８％超）の製剤（ＱＭ－１１１４）を示す。

【0065】

【図21】図２１は、検出可能な不純物が観察されないが、ＢｏＮＴ－Ａ１から予想されるバンドのみ観察されたＳＤＳ－ＰＡＧＥ解析からの結果を示す。

【0066】

【図22】図２２は、最大笑顔時のＩＬＡ及びＳＬＡ評価に基づく１ヶ月目のＬＣＬの複合２等級奏効者を示す。ＱＭ－１１１４で治療した２６名の対象及びプラセボで治療した４名の対象に対して１ヶ月目の評価をリモートで行い、この解析には含めなかった。ＣＭＨ、コクランマンテルヘンツェル；ＩＬＡ、治験責任医師ライブ評価；ＬＣＬ、外眼角皺；ＳＬＡ、対象ライブ評価。

【0067】

【図23】図２３は、治療効果の発現時間を示す。具体的には、対象の日記に基づいたＬＣＬ治療の開始に対する時間。

【0068】

【図24】図２４は、最大笑顔時の治験責任医師評価に基づいた奏効者率を示す。

【0069】

【図25】図２５は、最大笑顔時の治験責任医師報告型奏効者率がＬＣＬ重症度で１等級以上の改善であったことを示す。

【0070】

【図26】図２６は、外眼角皺（ＬＣＬ）が治療後にベースラインスコアまで戻る時間を示す。

【発明を実施するための形態】

【0071】

本開示に従う実施形態は、以下により十分に記載される。しかしながら、本開示の態様は、異なる形態で具体化されてもよく、本明細書に明記された実施形態に限定されるものと解釈されるべきではない。むしろ、これらの実施形態は、本開示が徹底的かつ完全なものとなり、本発明の範囲を当業者に十分に伝えるように提供される。本明細書の記載において使用される用語は、特定の実施形態を記載するためのものに過ぎず、限定することは意図していない。

【0072】

別段文脈が示さない限り、本明細書に記載の方法の様々な特徴が任意の組み合わせで使用され得ることが具体的に意図されている。また、本開示は、いくつかの実施形態では、本明細書に明記された任意の特徴又は特徴の組み合わせが除外又は省略され得ることも企図している。説明すると、本明細書において、方法が工程Ａ、Ｂ、及びＣを含むと述べられている場合、Ａ、Ｂ、若しくはＣのいずれか、又はそれらの組み合わせが、単独又は任意の組み合わせで省略及び放棄されてもよいことが具体的に意図されている。

【0073】

別段明示的に示されない限り、すべての特定の実施形態、特徴、及び用語は、記載された実施形態、特徴、又は用語、及びそれらの生物学的等価物を含むことを意図している。

【0074】

Ｉ．定義
本明細書で使用される場合、単数形「ａ（１つの）」、「ａｎ（１つの）」、及び「ｔｈｅ（その）」は、単数形のみを示すことが明確に述べられない限り、単数形及び複数形の両方を表す。

【0075】

常に明示されないものの、すべての数値的指定には「約」という用語が先行することを理解されたい。「約」という用語は、包含される数が、本明細書に明記された数きっかりに限定されず、本発明の範囲から逸脱することがない限り、記載された数の実質的に付近にある数を指すことを意図していることを意味する。本明細書で使用される場合、「約」は、当業者によって理解され、それが使用される文脈である程度変動する。この用語の使用が、それが使用される文脈を考慮して当業者にとって明確ではない場合、「約」は、特定の用語の最大でプラスマイナス１５％、１０％、５％、１％、又は０．１％までを意味する。

【0076】

また、本明細書で使用される場合、「及び／又は」は、関連する列挙された項目の１つ以上のありとあらゆる可能性のある組み合わせの他、代替案（「又は」）で解釈される場合、組み合わせの欠如も指し、それらを包含する。

【0077】

本明細書で使用される場合、「投与する」、「投与」、又は「投与すること」は、（１）例えば医療従事者又はその者の委任代理人のいずれかによって、あるいはその者の指導によって、提供し、与え、投薬し、かつ／又は処方すること、及び（２）例えば医療従事者又は対象によって、取り入れるか、服用するか、又は消費することを指す。投与は、経口、非経口（例えば、筋肉内、腹腔内、静脈内、ＩＣＶ、大槽内注射若しくは注入、皮下注射、又は移植）、経鼻の吸入噴霧、腟内、直腸内、舌下、尿道（例えば尿道坐剤）、あるいは局所投与経路（例えば、ゲル、軟膏、クリーム、エアロゾル等）による投与を非限定的に含むものとし、各投与経路に適切な従来の無毒性の薬学的に許容される担体、アジュバント、賦形剤、及びビヒクルを含む好適な投薬量単位製剤で単独で又は一緒に製剤化することができる。本発明は、投与経路、処方、又は投薬計画によって限定されない。本明細書で開示される医薬組成物は「局所投与される」（局所投与）、すなわち、治療の結果が望まれる部位又はその近傍に投与される。投与は、所定の患者の必要に応じて、片側又は両側であってもよい。

【0078】

本明細書で使用される場合、「治療する」、「治療すること」、又は「治療」は、眉間皺（ＧＬ）及び／又は外眼角皺（ＬＣＬ）又はそれらの１つ以上の症状の外観を軽減させる又は改善することを含み、ＧＬ又はＬＣＬが「治った」又は「除かれた」と見なされるか否かに関わらず、かつすべての症状が解消されるか否かに関わらない。これらの用語はまた、ＧＬ、ＬＣＬ、及び／又はそれらの１つ以上の症状の進行を抑制又は予防すること、並びに治療的及び／又は予防的利益を達成することも含む。

【0079】

「ボツリヌス毒素」という用語は、純粋な毒素（すなわち、分子量約１５０ｋＤａの神経毒成分）として、又はボツリヌス毒素複合体（分子量約３００～約９００ｋＤａ）としてのボツリヌス神経毒Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、Ｅ型、Ｆ型、又はＧ型を意味し、組換え、キメラ、ハイブリッド、リターゲッティング、及びアミノ酸配列改変ボツリヌス神経毒を含むが、細胞傷害性ボツリヌス毒素Ｃ_２及びＣ_３等の神経毒ではないボツリヌス毒素は含まない。

【0080】

「局所投与」とは、非全身的な経路によって医薬剤を標的組織、筋肉、若しくは皮下、又はその近傍に投与すること（すなわち、皮下（ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ）、筋肉内、皮下（ｓｕｂｄｅｒｍａｌ）、皮内、皮下（ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ）、器官内（例えば、膀胱壁や前立腺体内に注入）、又は経皮経路による投与）を意味する。したがって、局所投与は、静脈内投与や経口投与等の全身的な（すなわち血液循環系への）投与経路を除く。末梢投与とは、内臓又は腸（すなわち内臓への）投与とは対照的に、周辺部（すなわち、患者の顔、四肢、体幹、又は頭部の表面又は内部）への投与を意味する。

【0081】

「医薬組成物」とは、活性成分（活性剤）がボツリヌス神経毒であり得る製剤を意味する。「製剤」とは、活性剤の他に少なくとも１種の追加成分が医薬組成物に存在することを意味する。したがって、医薬組成物は、ヒトの患者等の対象への美容的、診断的、又は治療的な投与（すなわち、皮下又は筋肉内注射）に適した製剤である。

【0082】

「有効量」とは、眉間皺及び／又は外眼角皺を薄くしたり、滑らかにしたり、伸ばしたりする等の有益な又は望ましい結果をもたらすのに十分な量である。本明細書で使用される有効量は、眉間皺又は外眼角皺の形成が悪化することを防止するか、又は既存の眉間皺の形成を逆進させるのに十分な量も含むであろう。したがって、正確な「有効量」を特定することはできない。有効量は、１回以上の投与、塗布、又は投薬で投与することができる。このような送達は、個々の投与量単位が使用される期間、薬剤の投与場所、眉間皺の重症度、投与経路等を含む多くの変数に依存する。しかし、特定の対象に対する本開示の治療剤の特定の用量レベルは、採用された特定の化合物の活性、対象の年齢、体重、全体的な健康状態、性別、及び食事、投与時間、排泄率、薬剤の組み合わせ、及び治療される特定の障害の重症度と投与形態を含む様々な要因に依存することが理解される。治療投与量は一般的に、安全性と有効性を最適化するために調整することができる。投与量は、医師によって決定され、必要に応じて、治療の観察された効果に合わせて調整することができる。好ましくは、有効量は副作用（例えば眼瞼下垂）を発症させない。

【0083】

ＩＩ．ＢｏＮＴの液体組成物
本明細書では、ボツリヌス神経毒（ＢｏＮＴ）及び緩衝剤を含む液体組成物であって、液体として保存するのに適しており、さらに再調製又は混和することなく眉間皺の治療に適している液体組成物が提供される。言い換えれば、開示された液体組成物は、「すぐに使える」ものであり、現在市販されている他のＢｏＮＴ製品とは異なり、あらゆる種類の特殊な調製を必要としない。したがって、本発明の液体組成物は、乾燥形態（例えば凍結乾燥粉末形態）で保存され、対象に投与するために再調製する必要がある代替的なボツリヌス神経毒製品と対照的であり得る。

【0084】

ボツリヌス神経毒（ＢｏＮＴ）は、１００ｋＤａの重鎖と５０ｋＤａの軽鎖とからなる１５０キロダルトン（ｋＤａ）のタンパク質二量体である。この２つの鎖は、２つのシステイン残基のジスルフィド結合で結ばれている。軽鎖は、２５ｋＤａのシナプトソーム関連タンパク質（ＳＮＡＰ－２５）を切断する酵素である。重鎖は、毒素タンパク質の結合と内在化を仲介する。他の市販のＢｏＮＴとは異なり、本液体組成物（その例示的実施形態は本明細書ではＱＭ１１１４と呼ばれる）中のボツリヌス神経毒は、液体形態で安定しており、使用前に再調製又は混和する必要はない。いくつかの実施形態では、液体組成物に処方されるＢｏＮＴはボツリヌス神経毒Ａ型（ＢｏＮＴ－Ａ１）である。実施例に概説されるように、本液体組成物の例示的実施形態はヒト臨床試験で調査されたが、ＱＭ１１１４（又はＱＭ１１１４－ＤＰ）と呼ばれる。したがって、ＱＭ１１１４は、以下にその賦形剤及び特性を参照してより詳細に説明する本発明の液体組成物の代表的な実施形態である。

【0085】

また、本開示のために、液体組成物（例えばＱＭ１１１４）は、いかなるヒト又は動物由来の賦形剤も含まず、このような製剤は、濾過及び／又はクロマトグラフィーを使用して高レベルの純度で全体として動物質を含まないプロセスを用いて製造することができる。プロセスは、沈殿の工程又は凍結乾燥を含まなくてもよい。製剤は、中性又はほぼ中性のｐＨ（例えば、６．５、６．６、６．７、６．７５、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５のｐＨ）を有してもよい。いくつかの実施形態では、ｐＨは約６．７５であってもよい。

【0086】

液体組成物（例えばＱＭ１１１４）の比活性は、競合製品と同じくらい高いか、又はそれよりも高い。比活性は、ある特定の量の毒素がどのくらい活性であるかを指し得るが、活性の測定値（例えば、細胞ベースの効力アッセイ又はＢＯＴＥＳＴ^ＴＭ）を活性の測定中に存在する酵素の量の測定値（例えばＢＯＬＩＳＡ（登録商標））で除算することによって確認することができる。例えば、ＢｏＮＴ比活性は、約１．５×１０^８、約１．６×１０^８、約１．７×１０^８、約１．８×１０^８、約１．９×１０^８、約２．０×１０^８、約２．１×１０^８、約２．２×１０^８、約２．３×１０^８、約２．４×１０^８、又は約２．５×１０^８Ｕ／総タンパク質ｍｇ以上であり得るが、比活性（Ｕ／ｍｇ）は、μＢＣＡ法で決定されたタンパク質総量（ｍｇ／ｍｌ）で除算したＵ／ｍｌ単位のマウスＬＤ５０効力を使用して測定される。いくつかの実施形態では、比活性は約２．０×１０^８Ｕ／総タンパク質ｍｇであり得る。いくつかの実施形態では、開示された液体組成物（例えばＱＭ１１１４）は、Ｂｏｔｏｘ Ｃｏｓｍｅｔｉｃ（登録商標）、Ｘｅｏｍｉｎ（登録商標）、及びＪｅｕｖｅａｕ（登録商標）等の他の臨床ＢｏＮＴ製剤より高い比活性を有する。いくつかの実施形態では、開示された液体組成物（例えばＱＭ１１１４）は、乾燥形態（例えば凍結乾燥粉末形態）で保存され、対象に投与するために再調製する必要がある他の臨床ＢｏＮＴ製剤より高い比活性を有する。

【0087】

液体組成物（例えばＱＭ１１１４）は、ナトリウムイオン、塩化物イオン、及び／又はリン酸イオンを含む緩衝剤を含み得る。このようなイオンの添加は通常、緩衝塩の添加によって行われる。いくつかの実施形態では、製剤は、生理食塩水リン酸緩衝液を含んでもよく、いくつかの実施形態では、ヒト又は動物由来の賦形剤は存在しなくてもよい。

【0088】

例えば、液体組成物（例えばＱＭ１１１４）は、少なくとも１種の塩化物イオン源、例えば塩化ナトリウム、塩化カリウム、又は別の塩化物イオン源を約１００～約３００ｍＭの濃度、例えば、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、若しくは３００ｍＭの濃度で含んでいてもよく、又は約１～約２５ｍＭの濃度、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５ｍＭの濃度で含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、液体組成物（例えばＱＭ１１１４）は、複数の塩化物イオン源を同じ又は異なる濃度で含んでいてもよく、例えば、塩化ナトリウム又は別のナトリウム若しくは塩化物イオン源を約１００～約３００ｍＭの濃度、例えば、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、又は３００ｍＭの濃度で、塩化カリウム又は別の塩化物イオン源を約１～約２５ｍＭの濃度、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５ｍＭの濃度で含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、１種以上のナトリウム／塩化物イオン源は、約０．１～１０ｍｇ／ｍＬの範囲の同じ又は異なる濃度、例えば、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９、若しくは１０ｍｇ／ｍＬ、又はその間の任意の値の濃度で存在していてもよい。

【0089】

さらに又はあるいは、液体組成物（例えばＱＭ１１１４）は、少なくとも１種のリン酸イオン源、例えばリン酸ナトリウム、リン酸カリウム、リン酸水素二ナトリウム二水和物、リン酸二水素ナトリウム二水和物、又は別のリン酸イオン源を約１～約５０ｍＭ又は約５～約１５ｍＭの濃度、例えば、１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、又は５０ｍＭの濃度で含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、液体組成物は、複数のリン酸イオン源を同じ又は異なる濃度で含んでいてもよく、例えば、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、リン酸水素二ナトリウム二水和物、リン酸二水素ナトリウム二水和物、又は別のリン酸イオン源を約１～約５０ｍＭ又は約５～約１５ｍＭの濃度、例えば、１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、又は５０ｍＭの濃度で、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、リン酸水素二ナトリウム二水和物、リン酸二水素ナトリウム二水和物、又は別のリン酸イオン源から選択される異なるリン酸イオン源を約１～約５０ｍＭ又は約５～約１５ｍＭの濃度、例えば、１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、又は５０ｍＭの濃度で含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、１種以上のリン酸イオン源は、約０．１～１．０ｍｇ／ｍＬの範囲の同じ又は異なる濃度、例えば、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、若しくは１．０ｍｇ／ｍＬ、又はその間の任意の値の濃度で存在してもよい。

【0090】

いくつかの実施形態では、液体組成物（例えばＱＭ１１１４）は、１～５種以上の緩衝剤を含んでいてもよい。したがって、液体組成物（例えばＱＭ１１１４）は、塩化ナトリウム、塩化カリウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、リン酸水素二ナトリウム二水和物、又はリン酸二水素ナトリウム二水和物を含むがこれらに限定されない１、２、３、４、又は５種以上の緩衝剤を含んでもよい。１、２、３、４、又は５種以上の緩衝剤は、同じ又は異なる濃度で存在してもよい。例えば、いくつかの実施形態では、第１の緩衝剤（例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、リン酸水素二ナトリウム二水和物、又はリン酸二水素ナトリウム二水和物）は、約１００～約３００ｍＭの濃度、例えば、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、又は３００ｍＭの濃度で存在してもよく、又は約０．１～１０ｍｇ／ｍＬの濃度、例えば、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９、若しくは１０ｍｇ／ｍＬ、又はその間の任意の値の濃度で存在してもよい。いくつかの実施形態では、第２の緩衝剤（例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、リン酸水素二ナトリウム二水和物、又はリン酸二水素ナトリウム二水和物）は、約１～約２５ｍＭの濃度、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５ｍＭの濃度で存在してもよく、又は約０．１～１．０ｍｇ／ｍＬの濃度、例えば、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、若しくは１．０ｍｇ／ｍＬ、又はその間の任意の値の濃度で存在してもよい。いくつかの実施形態では、第３の緩衝剤（例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、リン酸水素二ナトリウム二水和物、又はリン酸二水素ナトリウム二水和物）は、約１～約２５ｍＭの濃度、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５ｍＭの濃度で存在してもよく、又は約０．１～１．０ｍｇ／ｍＬの濃度、例えば、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、若しくは１．０ｍｇ／ｍＬ、又はその間の任意の値の濃度で存在してもよい。いくつかの実施形態では、第４の緩衝剤（例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、リン酸水素二ナトリウム二水和物、又はリン酸二水素ナトリウム二水和物）は、約１～約２５ｍＭの濃度、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５ｍＭの濃度で存在してもよく、又は約０．１～１．０ｍｇ／ｍＬの濃度、例えば、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、若しくは１．０ｍｇ／ｍＬ、又はその間の任意の値の濃度で存在してもよい。いくつかの実施形態では、第５の緩衝剤（例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、リン酸水素二ナトリウム二水和物、又はリン酸二水素ナトリウム二水和物）は、約１～約２５ｍＭの濃度、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５ｍＭの濃度で存在してもよく、又は約０．１～１．０ｍｇ／ｍＬの濃度、例えば、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、若しくは１．０ｍｇ／ｍＬ、又はその間の任意の値の濃度で存在してもよい。

【0091】

組成物の安定性又は他の特性を改善するために、他の成分が液体組成物に含まれてもよい。例えば、適用可能な安定剤としては、アミノ酸（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、セリン、スレオニン、リジンヒスチジン、トリプトファン、アスパラギン酸、又はグルタミン酸）、亜硫酸水素ナトリウム、クエン酸ナトリウム又は他のクエン酸塩等が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、アミノ酸は、疎水性の側鎖を有するアミノ酸（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、及びトリプトファン）であってもよい。いくつかの実施形態では、アミノ酸はＤアイソフォームであってもよく、いくつかの実施形態では、アミノ酸はＬアイソフォームであってもよい。したがって、いくつかの実施形態では、液体組成物は、少なくとも１種のＤ－又はＬ－アミノ酸（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、セリン、スレオニン、リジンヒスチジン、トリプトファン、アスパラギン酸、又はグルタミン酸）を約０．１～約３．０ｍｇ／ｍＬ、約０．５～約２．５ｍｇ／ｍＬ、又は約０．７５～約２．２５ｍｇ／ｍＬの濃度で含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、液体組成物は、少なくとも１種のＤ－又はＬ－アミノ酸（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、セリン、スレオニン、リジンヒスチジン、トリプトファン、アスパラギン酸、又はグルタミン酸）を０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、若しくは３．０ｍｇ／ｍＬ、又はその間の任意の値の濃度で含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、液体組成物は、少なくとも１種のＤ－又はＬ－アミノ酸（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、セリン、スレオニン、リジンヒスチジン、トリプトファン、アスパラギン酸、又はグルタミン酸）を約０．１、約０．２、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、若しくは約３．０ｍｇ／ｍＬ、又はその間の任意の値の濃度で含んでいてもよい。

【0092】

いくつかの実施形態では、液体組成物（例えばＱＭ１１１４）は、１種以上の界面活性剤（例えば、ポリソルベート（例えば、ポリソルベート８０又はポリソルベート２０）又はノノキシノールのような非イオン性界面活性剤；ドキュセートのようなアニオン性界面活性剤；又は第四級アンモニウム塩のようなカチオン性界面活性剤）をさらに含んでもよい。したがって、いくつかの実施形態では、液体組成物は、ポリソルベート（例えば、ポリソルベート８０又はポリソルベート２０）又はノノキシノールを含むがこれらに限定されない非イオン性界面活性剤を含んでもよい。いくつかの実施形態では、液体組成物は、ドキュセートを含むがこれに限定されないアニオン性界面活性剤を含んでもよい。いくつかの実施形態では、液体組成物は、第四級アンモニウム塩を含むがこれに限定されないカチオン性界面活性剤を含んでもよい。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、約０．０１％（ｖ／ｖ）～約５．０％（ｖ／ｖ）、約０．０５％（ｖ／ｖ）～約２．５％（ｖ／ｖ）、又は約０．１％（ｖ／ｖ）～約１．５％（ｖ／ｖ）の濃度で存在してもよい。いくつかの実施形態では、少なくとも１種の界面活性剤は、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、若しくは５．０％（ｖ／ｖ）、又はその間の任意の値の濃度で存在してもよい。いくつかの実施形態では、少なくとも１種の界面活性剤は、約０．０１、約０．０２、約０．０３、約０．０４、約０．０５、約０．０６、約０．０７、約０．０８、約０．０９、約０．１、約０．２、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９、約４．０、約４．１、約４．２、約４．３、約４．４、約４．５、約４．６、約４．７、約４．８、約４．９、若しくは約５．０％（ｖ／ｖ）、又はその間の任意の値の濃度で存在してもよい。いくつかの実施形態では、液体組成物は、少なくとも１種の界面活性剤を０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、若しくは３．０ｍｇ／ｍＬ、又はその間の任意の値の濃度で含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、液体組成物は、少なくとも１種の界面活性剤を約０．１、約０．２、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、若しくは約３．０ｍｇ／ｍＬ、又はその間の任意の値の濃度で含んでいてもよい。

【0093】

いくつかの実施形態では、液体組成物は、１種以上の乳化剤（例えば大豆レシチン）、湿潤剤、賦形剤（ラクトース、マンニトール、グルコース、微結晶セルロース、コロイダルシリカ、及びデンプン等）、結合剤（ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドン、及びメタケイ酸アルミン酸マグネシウム等）、崩壊剤（デンプン、Ｌ－ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース、クロスカルメロースナトリウム、及びセルロースカルシウムグリコレート等）、潤滑剤（ステアリン酸マグネシウム等）、膨潤剤（ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボポール、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルアルコール、キサンタンガム、及びグァーガム等）、膨潤アジュバント（グルコース、フルクトース、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルトース、トレハロース、リン酸塩、クエン酸塩、ケイ酸塩、グリシン、グルタミン酸塩、及びアルギニン等）、及び／又は可溶化剤（ポリエチレングリコール、プロピレングリコール等）をさらに含んでいてもよい。

【0094】

いくつかの実施形態では、液体組成物は、１～５種以上の緩衝剤（例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、リン酸水素二ナトリウム二水和物、又はリン酸二水素ナトリウム二水和物）；１種以上の安定剤（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、セリン、スレオニン、リジンヒスチジン、トリプトファン、アスパラギン酸、又はグルタミン酸）；及び１種以上の界面活性剤（例えば、ポリソルベート（例えば、ポリソルベート８０又はポリソルベート２０）又はノノキシノールのような非イオン性界面活性剤；ドキュセートのようなアニオン性界面活性剤；又は第四級アンモニウム塩のようなカチオン性界面活性剤）を含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、液体組成物は、（ｉ）約１００～約３００ｍＭの濃度又は約０．１～１０ｍｇ／ｍＬの濃度の第１の緩衝剤（例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、リン酸水素二ナトリウム二水和物、又はリン酸二水素ナトリウム二水和物）；（ｉｉ）約１～約２５ｍＭの濃度又は約０．１～１．０ｍｇ／ｍＬの濃度の第２の緩衝剤（例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、リン酸水素二ナトリウム二水和物、又はリン酸二水素ナトリウム二水和物）；（ｉｉｉ）約１～約２５ｍＭの濃度又は約０．１～１．０ｍｇ／ｍＬの濃度の第３の緩衝剤（例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、リン酸水素二ナトリウム二水和物、又はリン酸二水素ナトリウム二水和物）；（ｉｖ）約１～約２５ｍＭの濃度又は約０．１～１．０ｍｇ／ｍＬの濃度の第４の緩衝剤（例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、リン酸水素二ナトリウム二水和物、又はリン酸二水素ナトリウム二水和物）；（ｖ）約０．１～約３．０ｍｇ／ｍＬの濃度の１種以上の安定剤（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、セリン、スレオニン、リジンヒスチジン、トリプトファン、アスパラギン酸、又はグルタミン酸）；及び（ｖｉ）約０．０５％（ｖ／ｖ）～約２．５％（ｖ／ｖ）の濃度又は約０．１～約３．０ｍｇ／ｍＬの濃度の１種以上の界面活性剤（例えば、ポリソルベート（例えば、ポリソルベート８０又はポリソルベート２０）又はノノキシノールのような非イオン性界面活性剤；ドキュセートのようなアニオン性界面活性剤；又は第四級アンモニウム塩のようなカチオン性界面活性剤）を含んでもよい。いくつかの実施形態では、安定剤はアミノ酸であってもよく、いくつかの実施形態では、界面活性剤はポリソルベート等の非イオン性界面活性剤であってもよい。本開示のために、ＱＭ１１１４－医薬品（本明細書で「ＱＭ１１１４－ＤＰ」又は単に「ＱＭ１１１４」とも呼ばれる）が前述の実施形態のいずれか又は以下の実施形態のいずれかを例示し得ることを理解すべきである。

【0095】

液体組成物（例えばＱＭ１１１４）は、５．５～８のｐＨを有してもよい。いくつかの実施形態では、ｐＨは６．０～７．５、例えば、約６．３、６．３５、６．４、６．４５、６．５、６．５５、６．６、６．６５、６．７、６．７５、６．８、６．８５、６．９、６．９５、７．０、７．０５、７．１、７．１５、７．２、７．２５、７．３、７．３５、７．４、７．４５、又は７．５である。いくつかの実施形態では、ｐＨは６．６～６．９である。好ましくは、液体組成物は水性希釈剤、より好ましくは水、例えば滅菌水、注射用水、精製水、及び注射用滅菌水を含む。

【0096】

液体組成物は、保存時に安定なＢｏＮＴの液体製剤を提供するために、（例えばＢｏＮＴに加えて）以下の成分：
ａ．１００～３００ｍＭの濃度のＮａＣＬ、及び１～２５ｍＭの濃度のＫＣｌより選択される塩化物イオン源；
ｂ．１～５０ｍＭの濃度の、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、リン酸水素二ナトリウム二水和物、及びリン酸二水素ナトリウム二水和物より選択される複数のリン酸イオン源；
ｃ．０．０１～５％（ｖ／ｖ）の濃度の非イオン性界面活性剤；並びに
ｄ．０．１～３ｍｇ／ｍｌの濃度の、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、及びトリプトファンより選択されるアミノ酸安定剤
を含んでいてもよい。

【0097】

本発明に係る液体組成物は、トリプトファン及び／又はチロシンであるアミノ酸を含んでもよい。理論に拘束されることを望むわけではないが、トリプトファン及び／又はチロシンが、活性タンパク質を機能しないようにし得る該タンパク質の酸化を防止することができると仮定される。実際、神経毒よりモル過剰で添加したアミノ酸が最初に酸化され、神経毒が保持されると考えられる。トリプトファン又はチロシンが、ポリソルベート等の界面活性剤の反応分解生成物を中和することができるとも仮定される。好ましくは、アミノ酸はトリプトファンである。より好ましくは、アミノ酸はＬ－トリプトファンである。

【0098】

アミノ酸濃度は、約０．１～５ｍｇ／ｍｌ、例えば０．１～５ｍｇ／ｍｌ、０．２５～３ｍｇ／ｍｌ、例えば、約０．２５、０．５、１、１．５、２、又は３ｍｇ／ｍｌであり得る。好ましくは、アミノ酸（例えばトリプトファン及び／又はチロシン）濃度は０．５ｍｇ／ｍｌより大きい。例えば、アミノ酸濃度は、下限が０．５ｍｇ／ｍｌより大きく、上限が１、１．５、２、３、４、５、６、７、又は８ｍｇ／ｍｌであり得る。有利には、５ｍｇ／ｍｌより大きい濃度は僅少濃度のアミノ酸を表し得るが、その濃度にわたって安定化効果が特に優勢になり得る。参照によって本明細書に組み込まれるＷＯ２０１７／２０３０３８Ａ１の実施例を参照のこと。

【0099】

液体組成物は経時的に安定であり得る。例えば、液体組成物は２～８℃で２ヶ月間安定であり得る。一実施形態によると、液体組成物は２～８℃、例えば５℃で３ヶ月間安定である。好ましい実施形態によると、液体組成物は２～８℃、例えば５℃で６ヶ月間安定である。一実施形態によると、液体組成物は２～８℃、例えば５℃で１２ヶ月間安定である。一実施形態によると、液体組成物は２～８℃、例えば５℃で１８ヶ月間安定である。一実施形態によると、液体組成物は２～８℃、例えば５℃で２４ヶ月間安定である。一実施形態によると、液体組成物は２～８℃、例えば５℃で３６ヶ月間安定である。一実施形態によると、液体組成物は室温、例えば２５℃で３ヶ月間安定である。一実施形態によると、液体組成物は室温、例えば２５℃で６ヶ月間安定である。一実施形態によると、３７℃で２ヶ月間安定である。

【0100】

安定性は、経時的にボツリヌス神経毒の活性を比較することによって評価することができる。ボツリヌス神経毒の活性は、ボツリヌス神経毒が細胞上のその標的受容体に結合し、細胞内に軽鎖を移行させ、かつ／又はその標的ＳＮＡＲＥタンパク質を切断する活性の能力を指し得る。ボツリヌス神経毒活性を測定するための方法は当該技術分野で周知である。ボツリヌス神経毒活性は、例えば、上記に記載されたようなマウス致死アッセイ（ＬＤ５０）、マウス横隔神経片側横隔膜アッセイ等の筋肉組織ベースのアッセイ（例えば、Ｂｉｇａｌｋｅ，Ｈ．ａｎｄ Ｒｕｍｍｅｌ Ａ．，Ｔｏｘｉｎｓ ７．１２（２０１Ｓ）：４８９Ｓ－４９０Ｓに記載）、細胞ベースのアッセイ（例えば、ＷＯ２０１３４９５０８若しくはＷＯ２０１２１６６９４３に記載）、又はＢｏＴｅｓｔ（登録商標）（ＢｉｏＳｅｎｔｉｎｅｌ社から入手可能なボツリヌス神経毒検出キット）等の細胞外タンパク質分解活性アッセイを使用することによって評価することができる。

【0101】

好ましくは、本発明に係る組成物は、所定の期間にわたって所定の温度で所定の活性損失率以下である場合に安定であると考えられる。

【0102】

一実施形態によると、本発明に係る組成物は、３、６、１２、１８、２４、又は３６ヶ月間にわたって２～８℃で細胞外タンパク質分解活性の損失が３０％以下、例えば６ヶ月間にわたって５℃で細胞外タンパク質分解活性の損失が３０％以下である場合に安定であると考えられる。好ましくは、本発明に係る組成物は、３ヶ月間にわたって５℃で、より好ましくは６、１２、１８、２４、又は３６ヶ月間にわたって５℃で細胞外タンパク質分解活性の損失が２０％以下である場合に安定であると考えられる。別の実施形態によると、本発明に係る組成物は、３ヶ月間にわたって室温、例えば２５℃で細胞外タンパク質分解活性の損失が４０％以下である場合に安定であると考えられる。好ましくは、本発明に係る組成物は、３ヶ月間にわたって２５℃で、より好ましくは６ヶ月間にわたって２５℃で細胞外タンパク質分解活性の損失が３０％以下である場合に安定であると考えられる。別の実施形態によると、本発明に係る組成物は、２ヶ月間にわたって３７℃で細胞外タンパク質分解活性の損失が５０％以下である場合に安定であると考えられる。細胞外タンパク質分解活性は、ＢｏＴｅｓｔ（登録商標）アッセイで測定することができる。

【0103】

一実施形態によると、本発明に係る組成物は、２、３、６、１２、１８、２４、又は３６ヶ月間にわたって２～８℃でＭＬＤ５０単位の損失が３０％以下、例えば６ヶ月間にわたって５℃でＭＬＤ５０単位の損失が３０％以下である場合に安定であると考えられる。好ましくは、本発明に係る組成物は、２ヶ月間にわたって５℃で、より好ましくは３、６、１２、１８、２４、又は３６ヶ月間にわたって５℃でＭＬＤ５０単位の損失が２０％以下である場合に安定であると考えられる。別の実施形態によると、本発明に係る組成物は、２ヶ月又は３ヶ月間にわたって室温、例えば２５℃でＭＬＤ５０単位の損失が４０％以下である場合に安定であると考えられる。好ましくは、本発明に係る組成物は、３ヶ月間にわたって２５℃で、より好ましくは６ヶ月間にわたって２５℃でＭＬＤ５０単位の損失が３０％以下である場合に安定であると考えられる。別の実施形態によると、本発明に係る組成物は、２ヶ月間にわたって３７℃でＭＬＤ５０単位の損失が５０％以下である場合に安定であると考えられる。ＭＬＤ５０単位は、上記に示したように測定することができる。

【0104】

液体組成物は、患者、特にヒト患者への注射に適したものであり得る。ボツリヌス神経毒の量は一般的に、マウスの腹腔内致死量の中央値として定義されるマウスＬＤ_５０（致死量５０）単位で表される。ボツリヌス毒素のマウスＬＤ_５０（ＭＬＤ_５０）単位は標準化された単位ではない。実際、市販されている毒素のメーカーごとに使用されているアッセイは、特に希釈緩衝液の選択において異なっている。例えば、ＢＯＴＯＸ（登録商標）に使用される試験では、生理食塩水が希釈剤として使用されている。ゼラチン緩衝液は、ＬＤ_５０アッセイで使用される高希釈において毒素を保護すると考えられている。一方、生理食塩水を希釈剤として使用すると、効力が幾分失われると考えられる。

【0105】

いくつかの実施形態では、マウスＬＤ_５０を決定するために使用される希釈緩衝液はゼラチンリン酸緩衝液である。例えば、マウスＬＤ_５０は、Ｈａｍｂｌｅｔｏｎ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｏｘｏｉｄｉｎｇ ｏｆ Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ ｔｙｐｅ Ａ ｔｏｘｉｎ．Ｅｄｓ．Ｇ．Ｅ．Ｊｒ Ｌｅｗｉｓ，ａｎｄ Ｐ．Ｓ．Ａｎｇｅｌ．Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＵＳＡ，１９８１，ｐ．２４８に記載されているように決定することができる。簡単にいうと、ボツリヌス毒素試料を０．２％（ｗ／ｖ）ゼラチン０．０７Ｍ Ｎａ２ＨＰＯ４緩衝液（ｐＨ６．５）に連続的に段階希釈する。体重約２０ｇのマウス群（例えば、１群当たり４～８匹）に、希釈した毒素の試料（例えば、１匹当たり０．５ｍｌ）を腹腔内に注射する。５０％致死量に及ぶように希釈群、例えば５つの希釈群を選択する。マウスを最大７２時間観察し、マウス致死量５０（ＭＬＤ_５０）を推定する。

【0106】

本発明に係る液体組成物は、好ましくは１ｍＬ当たり４～１００００ＬＤ_５０単位のボツリヌス神経毒を含み、より好ましくは１ｍＬ当たり１０～２００ＬＤ_５０単位のボツリヌス神経毒を含み、例えば１ｍＬ当たり１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、２００ＬＤ_５０単位のボツリヌス神経毒を含む。ボツリヌス神経毒の量は、ｎｇで表すこともできる。

【0107】

本発明に係る液体組成物は、２００～４００ｍｏｓｍ／ｋｇ、好ましくは２７０～３１０ｍｏｓｍ／ｋｇ、例えば、２７０、２７５、２８０、２８５、２９０、２９５、３００、３０５、若しくは３１０ｍｏｓｍ／ｋｇ、又はその間の任意の値の浸透圧を有する。

【0108】

一実施形態によると、本発明に係る液体組成物は、
－ １ｍｌ当たり４～１００００ＬＤ５０単位のボツリヌス神経毒、
－ ０．００１～１５％ｖ／ｖのポリソルベート、
－ ０．１～５ｍｇ／ｍｌのトリプトファン、
－ １０～５００ｍＭのＮａＣｌ、
－ １～５０ｍＭのＫＣｌ、
－ １～１００ｍＭのリン酸ナトリウム
を含むか、又はそれらから本質的になっていてもよく、
５．５～８のｐＨを有し、５℃で２ヶ月間（例えば６ヶ月間）安定である。
一実施形態によると、本発明に係る液体組成物は、
－ １ｍｌ当たり４～１００００ＬＤ５０単位のボツリヌス神経毒、
－ ０．００１～１５％ｖ／ｖのポリソルベート、
－ ０．１～５ｍｇ／ｍｌのトリプトファン、
－ １０～５００ｍＭのＮａＣｌ、
－ １～５０ｍＭのＫＣｌ、
－ １～１００ｍＭのリン酸水素二ナトリウム二水和物及びリン酸二水素ナトリウム二水和物
を含むか、又はそれらから本質的になっていてもよく、
５．５～８のｐＨを有し、５℃で２ヶ月間（例えば６ヶ月間）安定である。
一実施形態によると、本発明に係る液体組成物は、
－ １ｍｌ当たり１０～２０００ＬＤ５０単位のボツリヌス神経毒、
－ ０．００５～２％ｖ／ｖのポリソルベート、
－ ０．１～５ｍｇ／ｍｌのトリプトファン、
－ ２５～３００ｍＭのＮａＣｌ、
－ １～１０ｍＭのＫＣｌ、
－ ２～５０ｍＭのリン酸ナトリウム
を含むか、又はそれらから本質的になっていてもよく、
６．０～７．５のｐＨを有し、５℃で１２ヶ月間安定である。
一実施形態によると、本発明に係る液体組成物は、
－ １ｍｌ当たり１０～２０００ＬＤ５０単位のボツリヌス神経毒、
－ ０．００５～２％ｖ／ｖのポリソルベート、
－ ０．１～５ｍｇ／ｍｌのトリプトファン、
－ ２５～３００ｍＭのＮａＣｌ、
－ １～１０ｍＭのＫＣｌ、
－ ２～５０ｍＭのリン酸水素二ナトリウム二水和物及びリン酸二水素ナトリウム二水和物
を含むか、又はそれらから本質的になっていてもよく、
６．０～７．５のｐＨを有し、５℃で１２ヶ月間安定である。
一実施形態によると、本発明に係る液体組成物は、
－ １ｍｌ当たり１０～２０００ＬＤ５０単位のボツリヌス神経毒、
－ ０．０５～０．２％ｖ／ｖのポリソルベート８０、
－ ０．１～５ｍｇ／ｍｌのトリプトファン、
－ ２５～３００ｍＭのＮａＣｌ、
－ １～１０ｍＭのＫＣｌ、
－ ２～５０ｍＭのリン酸ナトリウム
を含むか、又はそれらから本質的になっていてもよく、
６．０～７．５のｐＨを有し、５℃で１２ヶ月間安定である。
一実施形態によると、本発明に係る液体組成物は、
－ １ｍｌ当たり１０～２０００ＬＤ５０単位のボツリヌス神経毒、
－ ０．０５～０．２％ｖ／ｖのポリソルベート８０、
－ ０．１～５ｍｇ／ｍｌのトリプトファン、
－ ２５～３００ｍＭのＮａＣｌ、
－ １～１０ｍＭのＫＣｌ、
－ ２～５０ｍＭのリン酸水素二ナトリウム二水和物及びリン酸二水素ナトリウム二水和物
を含むか、又はそれらから本質的になっていてもよく、
６．０～７．５のｐＨを有し、５℃で１２ヶ月間安定である。
一実施形態によると、本発明に係る液体組成物は、
－ ボツリヌス神経毒Ａ、
－ ０．２％ｖ／ｖのポリソルベート８０、
－ １ｍｇ／ｍｌのトリプトファン、
－ １４０ｍＭのＮａＣｌ、
－ ３ｍＭのＫＣｌ、
－ １０ｍＭのリン酸ナトリウム
を含むか、又はそれらから本質的になっていてもよく、
上記組成物のｐＨは約６．６である。
一実施形態によると、本発明に係る液体組成物は、
－ ボツリヌス神経毒Ａ、
－ ０．２％ｖ／ｖのポリソルベート８０、
－ １ｍｇ／ｍｌのトリプトファン、
－ １４０ｍＭのＮａＣｌ、
－ ３ｍＭのＫＣｌ、
－ １０ｍＭのリン酸水素二ナトリウム二水和物及びリン酸二水素ナトリウム二水和物
を含むか、又はそれらから本質的になっていてもよく、
上記組成物のｐＨは約６．６である。
一実施形態によると、本発明に係る液体組成物は、
－ ボツリヌス神経毒Ａ、
－ ０．０４％ｖ／ｖのポリソルベート８０、
－ １ｍｇ／ｍｌのトリプトファン、
－ １４０ｍＭのＮａＣｌ、
－ ３ｍＭのＫＣｌ、
－ １０ｍＭのリン酸ナトリウム
を含むか、又はそれらから本質的になっていてもよく、
上記組成物のｐＨは約６．９である。
一実施形態によると、本発明に係る液体組成物は、
－ ボツリヌス神経毒Ａ、
－ ０．０４％ｖ／ｖのポリソルベート８０、
－ １ｍｇ／ｍｌのトリプトファン、
－ １４０ｍＭのＮａＣｌ、
－ ３ｍＭのＫＣｌ、
－ １０ｍＭのリン酸水素二ナトリウム二水和物及びリン酸二水素ナトリウム二水和物
を含むか、又はそれらから本質的になっていてもよく、
上記組成物のｐＨは約６．９である。
一実施形態によると、本発明に係る液体組成物は、
－ ボツリヌス神経毒Ｂ、
－ ０．２５％ｖ／ｖのポリソルベート２０、
－ ４ｍｇ／ｍｌのトリプトファン、
－ １４０ｍＭのＮａＣｌ、
－ ３ｍＭのＫＣｌ、
－ １０ｍＭのリン酸ナトリウム
を含むか、又はそれらから本質的になっていてもよく、
上記組成物のｐＨは約７．４である。
一実施形態によると、本発明に係る液体組成物は、
－ ボツリヌス神経毒Ｂ、
－ ０．２５％ｖ／ｖのポリソルベート２０、
－ ４ｍｇ／ｍｌのトリプトファン、
－ １４０ｍＭのＮａＣｌ、
－ ３ｍＭのＫＣｌ、
－ １０ｍＭのリン酸水素二ナトリウム二水和物及びリン酸二水素ナトリウム二水和物
を含むか、又はそれらから本質的になっていてもよく、
上記組成物のｐＨは約７．４である。
一実施形態によると、本発明に係る液体組成物は、
－ ボツリヌス神経毒Ａ、
－ ０．０１％ｖ／ｖのポリソルベート８０、
－ ０．２５ｍｇ／ｍｌのトリプトファン、
－ ２５５ｍＭのＮａＣｌ、
－ ２ｍＭのリン酸ナトリウム
を含むか、又はそれらから本質的になっていてもよく、
上記組成物のｐＨは約７．２である。
一実施形態によると、本発明に係る液体組成物は、
－ ボツリヌス神経毒Ａ、
－ ０．０１％ｖ／ｖのポリソルベート８０、
－ ０．２５ｍｇ／ｍｌのトリプトファン、
－ ２５５ｍＭのＮａＣｌ、
－ １０ｍＭのＫＣｌ、
－ ５０ｍＭのリン酸ナトリウム
を含むか、又はそれらから本質的になっていてもよく、
上記組成物のｐＨは約６．３である。
一実施形態によると、本発明に係る液体組成物は、
－ ボツリヌス神経毒Ａ、
－ １％ｖ／ｖのポリソルベート８０、
－ ０．２５ｍｇ／ｍｌのトリプトファン、
－ ２５５ｍＭのＮａＣｌ、
－ ５０ｍＭのリン酸ナトリウム
を含むか、又はそれらから本質的になっていてもよく、
上記組成物のｐＨは約６．３である。
一実施形態によると、本発明に係る液体組成物は、
－ ボツリヌス神経毒Ａ、
－ １％ｖ／ｖのポリソルベート８０、
－ ３ｍｇ／ｍｌのトリプトファン、
－ ２５５ｍＭのＮａＣｌ、
－ １０ｍＭのＫＣｌ、
－ ５０ｍＭのリン酸ナトリウム
を含むか、又はそれらから本質的になっていてもよく、
上記組成物のｐＨは約７．２である。
一実施形態によると、本発明に係る液体組成物は、
－ ボツリヌス神経毒Ａ、
－ １％ｖ／ｖのポリソルベート８０、
－ ３ｍｇ／ｍｌのトリプトファン、
－ ２５５ｍＭのＮａＣｌ、
－ １０ｍＭのＫＣｌ、
－ ５０ｍＭのリン酸水素二ナトリウム二水和物及びリン酸二水素ナトリウム二水和物
を含むか、又はそれらから本質的になっていてもよく、
上記組成物のｐＨは約７．２である。
一実施形態によると、本発明に係る液体組成物は、
－ ボツリヌス神経毒Ａ、
－ ０．１％ｖ／ｖのポリソルベート８０、
－ １．６２５ｍｇ／ｍｌのトリプトファン、
－ １４０ｍＭのＮａＣｌ、
－ ３ｍＭのＫＣｌ、
－ １０ｍＭのリン酸ナトリウム
を含むか、又はそれらから本質的になっていてもよく、
上記組成物のｐＨは約６．７５である。
一実施形態によると、本発明に係る液体組成物は、
－ ボツリヌス神経毒Ａ、
－ ０．１％ｖ／ｖのポリソルベート８０、
－ １．６２５ｍｇ／ｍｌのトリプトファン、
－ １４０ｍＭのＮａＣｌ、
－ ３ｍＭのＫＣｌ、
－ １０ｍＭのリン酸水素二ナトリウム二水和物及びリン酸二水素ナトリウム二水和物
を含むか、又はそれらから本質的になっていてもよく、
上記組成物のｐＨは約６．７５である。
一実施形態によると、本発明に係る液体組成物は、
－ ボツリヌス神経毒Ａ、
－ ０．０１％ｖ／ｖのポリソルベート８０、
－ １ｍｇ／ｍｌのトリプトファン、
－ １４０ｍＭのＮａＣｌ、
－ ３ｍＭのＫＣｌ、
－ １０ｍＭのリン酸ナトリウム
を含むか、又はそれらから本質的になっていてもよく、
上記組成物のｐＨは約６．７５である。
一実施形態によると、本発明に係る液体組成物は、
－ ボツリヌス神経毒Ａ、
－ ０．０１％ｖ／ｖのポリソルベート８０、
－ １ｍｇ／ｍｌのトリプトファン、
－ １４０ｍＭのＮａＣｌ、
－ ３ｍＭのＫＣｌ、
－ １０ｍＭのリン酸水素二ナトリウム二水和物及びリン酸二水素ナトリウム二水和物
を含むか、又はそれらから本質的になっていてもよく、
上記組成物のｐＨは約６．７５である。
一実施形態によると、本発明に係る液体組成物は、
－ ボツリヌス神経毒Ａ、
－ ０．１％ｖ／ｖのポリソルベート８０、
－ １ｍｇ／ｍｌのトリプトファン、
－ １４０ｍＭのＮａＣｌ、
－ ３ｍＭのＫＣｌ、
－ １０ｍＭのリン酸ナトリウム
を含むか、又はそれらから本質的になっていてもよく、
上記組成物のｐＨは約６．７５である。
一実施形態によると、本発明に係る液体組成物は、
－ ボツリヌス神経毒Ａ、
－ ０．１％ｖ／ｖのポリソルベート８０、
－ １ｍｇ／ｍｌのトリプトファン、
－ １４０ｍＭのＮａＣｌ、
－ ３ｍＭのＫＣｌ、
－ １０ｍＭのリン酸水素二ナトリウム二水和物及びリン酸二水素ナトリウム二水和物
を含むか、又はそれらから本質的になっていてもよく、
上記組成物のｐＨは約６．７５である。
一実施形態によると、本発明に係る液体組成物は、
－ ボツリヌス神経毒Ａ、
－ １％ｖ／ｖのポリソルベート８０、
－ １ｍｇ／ｍｌのトリプトファン、
－ １４０ｍＭのＮａＣｌ、
－ ３ｍＭのＫＣｌ、
－ １０ｍＭのリン酸ナトリウム
を含むか、又はそれらから本質的になっていてもよく、
上記組成物のｐＨは約６．７５である。
一実施形態によると、本発明に係る液体組成物は、
－ ボツリヌス神経毒Ａ、
－ １％ｖ／ｖのポリソルベート８０、
－ １ｍｇ／ｍｌのトリプトファン、
－ １４０ｍＭのＮａＣｌ、
－ ３ｍＭのＫＣｌ、
－ １０ｍＭのリン酸水素二ナトリウム二水和物及びリン酸二水素ナトリウム二水和物
を含むか、又はそれらから本質的になっていてもよく、
上記組成物のｐＨは約６．７５である。
一実施形態によると、本発明に係る液体組成物は、
－ ボツリヌス神経毒Ｂ、
－ １５％ｖ／ｖのポリソルベート２０、
－ １ｍｇ／ｍｌのトリプトファン、
－ １４０ｍＭのＮａＣｌ、
－ ３ｍＭのＫＣｌ、
－ １０ｍＭのリン酸ナトリウム
を含むか、又はそれらから本質的になっていてもよく、
上記組成物のｐＨは約７．４である。
一実施形態によると、本発明に係る液体組成物は、
－ ボツリヌス神経毒Ｂ、
－ １５％ｖ／ｖのポリソルベート２０、
－ １ｍｇ／ｍｌのトリプトファン、
－ １４０ｍＭのＮａＣｌ、
－ ３ｍＭのＫＣｌ、
－ １０ｍＭのリン酸水素二ナトリウム二水和物及びリン酸二水素ナトリウム二水和物
を含むか、又はそれらから本質的になっていてもよく、
上記組成物のｐＨは約７．４である。
一実施形態によると、本発明に係る液体組成物は、
－ ボツリヌス神経毒Ｂ、
－ １５％ｖ／ｖのポリソルベート２０、
－ ４ｍｇ／ｍｌのトリプトファン、
－ １４０ｍＭのＮａＣｌ、
－ ３ｍＭのＫＣｌ、
－ １０ｍＭのリン酸ナトリウム
を含むか、又はそれらから本質的になっていてもよく、
上記組成物のｐＨは約７．４である。
一実施形態によると、本発明に係る液体組成物は、
－ ボツリヌス神経毒Ｂ、
－ １５％ｖ／ｖのポリソルベート２０、
－ ４ｍｇ／ｍｌのトリプトファン、
－ １４０ｍＭのＮａＣｌ、
－ ３ｍＭのＫＣｌ、
－ １０ｍＭのリン酸水素二ナトリウム二水和物及びリン酸二水素ナトリウム二水和物
を含むか、又はそれらから本質的になっていてもよく、
上記組成物のｐＨは約７．４である。
一実施形態によると、本発明に係る液体組成物は、
－ ボツリヌス神経毒Ｂ、
－ ０．２５％ｖ／ｖのポリソルベート２０、
－ ４ｍｇ／ｍｌのトリプトファン、
－ １４０ｍＭのＮａＣｌ、
－ ３ｍＭのＫＣｌ、
－ １０ｍＭのリン酸ナトリウム
を含むか、又はそれらから本質的になっていてもよく、
上記組成物のｐＨは約７．４である。
一実施形態によると、本発明に係る液体組成物は、
－ ボツリヌス神経毒Ｂ、
－ ０．２５％ｖ／ｖのポリソルベート２０、
－ ４ｍｇ／ｍｌのトリプトファン、
－ １４０ｍＭのＮａＣｌ、
－ ３ｍＭのＫＣｌ、
－ １０ｍＭのリン酸水素二ナトリウム二水和物及びリン酸二水素ナトリウム二水和物
を含むか、又はそれらから本質的になっていてもよく、
上記組成物のｐＨは約７．４である。

【0109】

ＢｏＮＴの酵素活性はまた、最適化した反応緩衝液中のＢｏＮＴタンパク質分解活性の検出を提供するアッセイであるＢＯＴＥＳＴ^ＴＭ（例えば、ＢＯＴＥＳＴ^ＴＭマトリクスＡボツリヌス神経毒検出キット；ＢｉｏＳｅｎｔｉｎｅｌ製のカタログ番号Ａ１０１５）によって決定することができる。ＢＯＴＥＳＴ^ＴＭの意図した用途としては、ＢｏＮＴ医薬製剤の定量化及び特性評価、創薬、ハイスループットスクリーニング用途、及び検出用途が挙げられる。ＢＯＴＥＳＴ^ＴＭは、ＢｏＮＴ／Ａ及びＥの天然に存在する基質であるＳＮＡＰ－２５の残基１４１～２０６からなるレポーターを含む。基質は、２種の蛍光タンパク質であるシアン蛍光タンパク質（ＣＦＰ）誘導体及び黄色蛍光タンパク質（ＹＦＰ）誘導体の間に挟まれる。ＣＦＰ及びＹＦＰ部分はドナー／アクセプターフェルスター共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）対を形成する。ＢｏＮＴのための基質によって分離されたＦＲＥＴドナー／アクセプター対の使用により、ＢｏＮＴタンパク質分解活性の検出が可能になる。ＢｏＮＴの不在下では、レポーターは無傷であり、ＣＦＰ及びＹＦＰ部分は近接している。ＣＦＰが励起されると、ＦＲＥＴによってＹＦＰにエネルギー移動が起こる。結果として、ＣＦＰ発光は消光し、ＹＦＰはＦＲＥＴによって蛍光を発する。ＢｏＮＴの存在下では、レポーターがＢｏＮＴのタンパク質分解活性によって切断される。ＣＦＰ及びＹＦＰ部分は物理的に分離され、ＦＲＥＴはもはや生じることはない。ＣＦＰ発光は回復し、ＹＦＰ発光は減少する。このように、ＢＯＴＥＳＴ^ＴＭは、ＢｏＮＴによって特異的に切断された場合にレシオメトリック応答をもたらす蛍光レポーターを利用しており、これにより、相対蛍光単位（ＲＦＵ）又は発光比としてのアウトプットが提供される。これらのアウトプットを使用して、ボツリヌス単位（「ＢＵ」、酵素単位「Ｕ」若しくは国際単位「ＩＵ」と同義であり得る）／ｍｌ又はＢＵ／ＢｏＮＴ濃度（例えばｍｇ）を算出することができる。言い換えれば、ＢｏＮＴの酵素活性は、最適化した反応緩衝液中のＢｏＮＴタンパク質分解活性の検出を提供するものなど、第１の細胞ベースのアッセイによって決定することもできる。このような第１の細胞ベースのアッセイは、ＢｏＮＴ／Ａ及びＥの天然に存在する基質であるＳＮＡＰ－２５の残基１４１～２０６からなるレポーターを含む。基質は、２種の蛍光タンパク質であるシアン蛍光タンパク質（ＣＦＰ）誘導体及び黄色蛍光タンパク質（ＹＦＰ）誘導体の間に挟まれる。ＣＦＰ及びＹＦＰ部分は、ドナー／アクセプターフェルスター共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）対を形成する。ＢｏＮＴのための基質によって分離されたＦＲＥＴドナー／アクセプター対の使用により、ＢｏＮＴタンパク質分解活性の検出が可能になる。ＢｏＮＴの不在下では、レポーターは無傷であり、ＣＦＰ及びＹＦＰ部分は近接している。ＣＦＰが励起されると、ＦＲＥＴによってＹＦＰにエネルギー移動が起こる。結果として、ＣＦＰ発光は消光し、ＹＦＰはＦＲＥＴによって蛍光を発する。ＢｏＮＴの存在下では、レポーターはＢｏＮＴのタンパク質分解活性によって切断される。ＣＦＰ及びＹＦＰ部分は物理的に分離され、ＦＲＥＴはもはや生じることはない。ＣＦＰ発光は回復し、ＹＦＰ発光は減少する。このように、第１の細胞ベースのアッセイは、ＢｏＮＴによって特異的に切断された場合にレシオメトリック応答をもたらす蛍光レポーターを利用しており、これにより、相対蛍光単位（ＲＦＵ）又は発光比としてのアウトプットが提供される。これらのアウトプットを使用して、ボツリヌス単位（「ＢＵ」、酵素単位「Ｕ」若しくは国際単位「ＩＵ」と同義であり得る）／ｍｌ又はＢＵ／ＢｏＮＴ濃度（例えばｍｇ）を算出することができる。

【0110】

いくつかの実施形態では、製剤の活性又は比活性は、ＢＯＴＥＳＴ^ＴＭマトリクスＡボツリヌス神経毒検出キット（ＢｉｏＳｅｎｔｉｎｅｌ製のカタログ番号Ａ１０１５）を使用して確認することができる。ＢＯＴＥＳＴ^ＴＭマトリクスＡボツリヌス神経毒（ＢｏＮＴ）検出キットは、血清、血液、食物、水、細菌上清、及び医薬試料等の複合的マトリクス中のＢｏＮＴ血清型Ａ（ＢｏＮＴ／Ａ）の検出及び定量化のためのｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイである。ＢＯＴＥＳＴ^ＴＭマトリクスＡキットは、２種の一次試薬であるマトリクスＡビーズ及びＢＯＴＥＳＴ^ＴＭＡ／Ｅレポーターからなる。マトリクスＡビーズは、１００μｌ～５０ｍｌのサイズ範囲である試料から複合的マトリクス中のＢｏＮＴ／Ａ複合体又はホロトキシンを捕捉、濃縮、及び単離する。そして、ＢＯＴＥＳＴ^ＴＭＡ／Ｅレポーターは捕捉したＢｏＮＴ／Ａの量を検出し、ＢｏＮＴ／Ａの活性及び量の評価を提供する。マトリクス組成物及び試料サイズに応じて、ピコモル感度は３時間未満で達成でき、フェムトモル感度は２４時間で達成できる。マトリクスＡビーズは、商標や特許で保護された磁気ビーズに共有結合した抗ＢｏＮＴ／Ａ抗体からなる。これらのビーズをＢｏＮＴ／Ａを含む試料に添加し、インキュベートすることで、ＢｏＮＴ／Ａ結合が生じる。ＢｏＮＴ／Ａ活性の決定を妨げかねない干渉化合物は、マトリクスＡビーズを洗浄することによって除去される。ＢＯＴＥＳＴ^ＴＭＡ／Ｅレポーターは、タンパク質分解ＢｏＮＴの天然に存在する基質をモデルとしており、ＢｏＮＴ／Ａのエンドペプチダーゼ活性を検出する。ＢＯＴＥＳＴ^ＴＭＡ／Ｅレポーターは、ＳＮＡＰ－２５のアミノ酸１４１～２０６を含み、ＢｏＮＴ／Ａの非活性結合部位と切断部位の両方を包含する。レポーターは、ＢｏＮＴ／Ａに対して親和性が高く、マトリクスＡビーズに結合したＢｏＮＴ／Ａと共にインキュベートすると、迅速かつ高感度にＢｏＮＴ／Ａタンパク質分解活性を検出する。このキットに好適な１つのプロトコルを以下の実施例で説明する。言い換えれば、製剤の活性又は比活性は、血清、血液、食物、水、細菌上清、及び医薬試料等の複合的マトリクス中のＢｏＮＴ血清型Ａ（ＢｏＮＴ／Ａ）の検出及び定量化のためのものなど、第２の細胞ベースのアッセイを使用して確認することができる。第２の細胞ベースのアッセイは、２種の一次試薬であるビーズ（磁気ビーズに共有結合した抗ＢｏＮＴ／Ａ抗体からなる）、及びタンパク質分解ＢｏＮＴの天然に存在する基質をモデルとしたポリペプチドであり、ＢｏＮＴ／Ａのエンドペプチダーゼ活性を検出するレポーターからなる。ビーズは、１００μｌ～５０ｍｌのサイズ範囲である試料から複合的マトリクス中のＢｏＮＴ／Ａ複合体又はホロトキシンを捕捉、濃縮、及び単離する。そして、レポーターは捕捉したＢｏＮＴ／Ａの量を検出し、ＢｏＮＴ／Ａの活性及び量の評価を提供する。マトリクス組成物及び試料サイズに応じて、ピコモル感度は３時間未満で達成でき、フェムトモル感度は２４時間で達成できる。上記で言及したように、ビーズは、磁気ビーズに共有結合した抗ＢｏＮＴ／Ａ抗体からなる。これらのビーズを、ＢｏＮＴ／Ａを含む試料に添加し、インキュベートすることで、ＢｏＮＴ／Ａ結合が生じる。ＢｏＮＴ／Ａ活性の決定を妨げかねない干渉化合物は、ビーズを洗浄することによって除去される。レポーターは、タンパク質分解ＢｏＮＴの天然に存在する基質をモデルとしており、ＢｏＮＴ／Ａのエンドペプチダーゼ活性を検出する。レポーターは、ＳＮＡＰ－２５のアミノ酸１４１～２０６を含み、ＢｏＮＴ／Ａの非活性結合部位と切断部位の両方を包含する。レポーターは、ＢｏＮＴ／Ａに対して親和性が高く、ビーズに結合したＢｏＮＴ／Ａと共にインキュベートすると、迅速かつ高感度にＢｏＮＴ／Ａタンパク質分解活性を検出する。このキットに好適な１つのプロトコルを以下の実施例で説明する。

【0111】

本開示のために、開示された治療に適した液体組成物（例えばＱＭ１１１４）は、上記及び実施例に記載されるようにＢＯＴＥＳＴ^ＴＭで決定した場合（言い換えれば、第１の細胞ベースのアッセイで決定した場合）、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、少なくとも９９、少なくとも１００、少なくとも１０１、少なくとも１０２、少なくとも１０３、少なくとも１０４、少なくとも１０５、少なくとも１０６、少なくとも１０７、少なくとも１０８、少なくとも１０９、少なくとも１１０、少なくとも１１１、少なくとも１１２、少なくとも１１３、少なくとも１１４、又は少なくとも１１５ＢＵ／ｍｌの酵素活性を有し得る。いくつかの実施形態では、開示された治療に適した液体組成物（例えばＱＭ１１１４）は、ＢＯＴＥＳＴ^ＴＭで決定した場合（言い換えれば、第１の細胞ベースのアッセイで決定した場合）、約９５、約９６、約９７、約９８、約９９、約１００、約１０１、約１０２、約１０３、約１０４、約１０５、約１０６、約１０７、約１０８、約１０９、約１１０、約１１１、約１１２、約１１３、約１１４、又は約１１５ＢＵ／ｍｌの酵素活性を有し得る。いくつかの実施形態では、開示された治療に適した液体組成物（例えばＱＭ１１１４）は、ＢＯＴＥＳＴ^ＴＭで決定した場合（言い換えれば、第１の細胞ベースのアッセイで決定した場合）、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、又は１１５ＢＵ／ｍｌの酵素活性を有し得る。いくつかの実施形態では、開示された治療に適した液体組成物（例えばＱＭ１１１４）は、ＢＯＴＥＳＴ^ＴＭで決定した場合（言い換えれば、第１の細胞ベースのアッセイで決定した場合）、約９５、約９６、約９７、約９８、約９９、約１００、約１０１、約１０２、約１０３、約１０４、約１０５、約１０６、約１０７、約１０８、約１０９、約１１０、約１１１、約１１２、約１１３、約１１４、又は約１１５ＢＵ／ｍｌの酵素活性を有し得る。いくつかの実施形態では、開示された治療に適した液体組成物（例えばＱＭ１１１４）は、ＢＯＴＥＳＴ^ＴＭで決定した場合（言い換えれば、第１の細胞ベースのアッセイで決定した場合）、９５～１００、９６～１００、９７～１００、９８～１００、９９～１００、９６～９９、９７～９９、９８～９９、又は９７～９８ＢＵ／ｍｌの酵素活性を有し得る。

【0112】

いくつかの態様では、酵素活性は、異なるＢｏＮＴ酵素の相対的活性レベル（すなわち、比活性の算出）を考慮に入れるために所定の製剤中のＢｏＮＴ濃度で正規化されてもよい。例えば、比活性又は正規化された活性は、ＢＯＴＥＳＴ^ＴＭ（例えば、ＢＯＴＥＳＴ^ＴＭマトリクスＡボツリヌス神経毒検出キット；ＢｉｏＳｅｎｔｉｎｅｌ製のカタログ番号Ａ１０１５）の結果を試験する製剤中のＢｏＮＴの濃度又は量で除算することによって算出してもよい。例えば、比活性又は正規化された活性は、第１の細胞ベースのアッセイ又は第２の細胞ベースのアッセイの結果を試験する製剤中のＢｏＮＴの濃度又は量で除算することによって算出してもよい。いくつかの実施形態では、開示された治療に適した液体組成物（例えばＱＭ１１１４）は、少なくとも０．９８、少なくとも０．９９、少なくとも１．００、少なくとも１．０１、少なくとも１．０２、少なくとも１．０３、少なくとも１．０４、少なくとも１．０５、少なくとも１．０６、少なくとも１．０７、少なくとも１．０８、少なくとも１．０９、少なくとも１．１０、少なくとも１．１１、少なくとも１．１２、少なくとも１．１３、少なくとも１．１４、少なくとも１．１５、少なくとも１．１６、少なくとも１．１７、少なくとも１．１８、少なくとも１．１９、又は少なくとも１．２０ＢＵ／ＢｏＮＴのＲＢＵのＢｏＮＴ濃度（すなわち比活性）で正規化された酵素活性を有し得る。いくつかの実施形態では、開示された治療に適した液体組成物（例えばＱＭ１１１４）は、約０．９８、約０．９９、約１．００、約１．０１、約１．０２、約１．０３、約１．０４、約１．０５、約１．０６、約１．０７、約１．０８、約１．０９、約１．１０、約１．１１、約１．１２、約１．１３、約１．１４、約１．１５、約１．１６、約１．１７、約１．１８、約１．１９、又は約１．２０ＢＵ／ＢｏＮＴのＲＢＵのＢｏＮＴ濃度で正規化された酵素活性を有し得る。いくつかの実施形態では、開示された治療に適した液体組成物（例えばＱＭ１１１４）は、０．９８、０．９９、１．００、１．０１、１．０２、１．０３、１．０４、１．０５、１．０６、１．０７、１．０８、１．０９、１．１０、１．１１、１．１２、１．１３、１．１４、１．１５、１．１６、１．１７、１．１８、１．１９、又は１．２０ＢＵ／ＢｏＮＴのＲＢＵのＢｏＮＴ濃度で正規化された酵素活性を有し得る。さらに又はあるいは、いくつかの実施形態では、開示された治療に適した液体組成物（例えばＱＭ１１１４）は、少なくとも０．１２、少なくとも０．１３、少なくとも０．１４、少なくとも０．１５、少なくとも０．１６、少なくとも０．１７、少なくとも０．１８、少なくとも０．１９、少なくとも０．２０、少なくとも０．２１、少なくとも０．２２、少なくとも０．２３、少なくとも０．２４、又は少なくとも０．２５ＢＵ／ＢｏＮＴのｐｇのＢｏＮＴ濃度（すなわち比活性）で正規化された酵素活性を有し得る。いくつかの実施形態では、開示された治療に適した液体組成物（例えばＱＭ１１１４）は、約０．１２、約０．１３、約０．１４、約０．１５、約０．１６、約０．１７、約０．１８、約０．１９、約０．２０、約０．２１、約０．２２、約０．２３、約０．２４、又は約０．２５ＢＵ／ＢｏＮＴのｐｇのＢｏＮＴ濃度で正規化された酵素活性を有し得る。いくつかの実施形態では、開示された治療に適した液体組成物（例えばＱＭ１１１４）は、０．１２、０．１３、０．１４、０．１５、０．１６、０．１７、０．１８、０．１９、０．２０、０．２１、０．２２、０．２３、０．２４、又は０．２５ＢＵ／ＢｏＮＴのｐｇのＢｏＮＴ濃度で正規化された酵素活性を有し得る。濃度で正規化された活性のために、活性は、ＢＯＴＥＳＴ^ＴＭによって決定し、ＢｏＮＴ濃度で除算することができ、ＢｏＮＴ濃度は、ＢｏＮＴ特異的ＥＬＩＳＡ（例えばＢＯＬＩＳＡ（登録商標））等を使用して決定することができる。

【0113】

ＢＯＬＩＳＡ（登録商標）又はボツリヌス神経毒サンドイッチＥＬＩＳＡを用いて、伝統的なサンドイッチＥＬＩＳＡアプローチを使用して液体マトリクスからＢｏＮＴの総質量を検出し、定量化することができる。いくつかの異なるＢＯＬＩＳＡ（登録商標）キットが、ＢｉｏＳｅｎｔｉｎｅｌ社から様々な血清型（例えば、ＢｏＮＴ／Ａカタログ番号Ａ１０２９；ＢｏＮＴ／Ｂカタログ番号Ａ１０４５；ＢｏＮＴ／Ｂ４カタログ番号Ａ１０４８；ＢｏＮＴ／Ｃカタログ番号Ａ１０４２；ＢｏＮＴ／Ｅカタログ番号Ａ１０３４）について利用可能である。ＢＯＬＩＳＡ（登録商標）キット（言い換えれば、ＢｏＮＴ特異的ＥＬＩＳＡ）では、抗ＢｏＮＴ抗体を固体支持体に結合させ、ＢｏＮＴを含む試料を支持体と接触させる。試料中に存在するＢｏＮＴを抗体に結合させ、すべての他の材料を除去するか、又は洗い流す。ＢｏＮＴの同じ血清型に結合する第２の検出可能に標識された抗体を添加し、試料中のＢｏＮＴ量を、検出可能な標識（例えば、蛍光、酵素活性、比色変化等）のアウトプットを検出又は定量化することによって決定することができる。比活性（すなわち、製剤中のＢｏＮＴ濃度で除算した製剤中の活性レベル）を算出するために、ＢＯＬＩＳＡ（登録商標）アッセイ（言い換えれば、ＢｏＮＴ特異的ＥＬＩＳＡ）は特に有用である。ＢＯＬＩＳＡ（登録商標）アッセイ（言い換えれば、ＢｏＮＴ特異的ＥＬＩＳＡ）のアウトプットは、重量／ｍｌ（例えば、ｍｇ、μｇ、若しくはｐｇ／ｍｌ）又は相対的ＢＯＬＩＳＡ（登録商標）単位（ＲＢＵ）／ｍｌであり得る。

【0114】

相対的効力又は酵素活性は、細胞ベースの効力アッセイ（ＣＢＰＡ）を使用して決定することもできる。ＣＢＰＡは、ＢｏＮＴ作用の重要な工程：受容体結合、内在化－移行、及び触媒活性を評価することができ、したがって、上記に記載した標準的なマウスバイオアッセイの代わりに使用することができる。例えば、特に有用な１つのＣＢＰＡは、ＰＣＴ／ＩＢ２０２１／０５６２１０（ＷＯ２０２２／００９１８２）に記載されており、（ａ）およそ２つの異なるＢｏＮＴ試料を、ＳＮＡＰ２５タンパク質を発現する細胞を含むおよそ２つの容器に分配することであって、第１のＢｏＮＴ試料が既知の効力の参照試料であり、第２のＢｏＮＴ試料が未知の効力の試験試料である、ことと、（ｂ）ある期間、細胞をＢｏＮＴと共にインキュベートすることと、（ｃ）参照試料及び試験試料に相当する切断したＳＮＡＰ２５タンパク質と未切断のＳＮＡＰ２５タンパク質との比を決定することと、（ｄ）参照試料と比べた試験試料の効力を特定することとを含む。任意で、既知の効力の品質管理試料である第３のＢｏＮＴ試料を第３の容器に分配し、陽性対照として利用することができる。いくつかの実施形態では、（ｃ）は、切断したＳＮＡＰ２５タンパク質及び未切断のＳＮＡＰ２５タンパク質をウエスタンブロット及びデンシトメトリーによる定量化に供することを含んでもよい。いくつかの実施形態では、ある期間は、約６、１２、１６、２０、２４、３２、４０、４８、又は５６時間である。いくつかの実施形態では、およそ２つの容器はそれぞれ複数のウェルを含む。いくつかの実施形態では、およそ２つの異なるＢｏＮＴ試料は、複数のウェルに段階希釈される。いくつかの態様では、およそ２つの容器は組織培養プレートである。いくつかの実施形態では、およそ２つの容器は４８ウェルプレート、９６ウェルプレート、３８４ウェルプレート、又は１５３６ウェルプレートである。いくつかの実施形態では、細胞はおよそ２つの容器に接着又は付着される。いくつかの実施形態では、細胞は天然にＳＮＡＰ２５を発現する。いくつかの実施形態では、細胞は異種ＳＮＡＰ２５を発現する。いくつかの実施形態では、細胞は非神経細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は遺伝子操作される。いくつかの実施形態では、細胞は神経細胞である。いくつかの実施形態では、神経細胞は運動ニューロンである。いくつかの実施形態では、細胞は非増殖剤で処理される。いくつかの実施形態では、非増殖剤はγ－セクレターゼを阻害する。いくつかの態様では、非増殖剤はＤＡＰＴである。いくつかの実施形態では、（ｂ）の終了時、プロテアーゼ阻害剤をおよそ２つの容器に添加する。いくつかの実施形態では、細胞をＢｏＮＴと共にインキュベートした後、細胞を溶解する。いくつかの実施形態では、細胞を音波処理によって溶解する。いくつかの実施形態では、溶解剤を添加することによって細胞を溶解する。いくつかの実施形態では、溶解剤は洗剤を含む。このアッセイにより、マウスでのＬＤ_５０実験に依存する必要なく、現在の動物ベースの効力アッセイと同じ効力データが提供される。

【0115】

別の可能なＣＢＰＡは、運動ニューロン由来のヒト人工多能性幹細胞（ｈｉＰＳＣ）、及びウエスタンブロットによって検出されるＳＮＡＰ２５切断を利用することができる。別の例は、分化したヒト神経芽腫ＳｉＭａ細胞を利用するＣＢＰＡであり、切断したＳＮＡＰ２５のＢｏＮＴ／Ａ依存性細胞内増加を測定するサンドイッチＥＬＩＳＡを使用して効力を決定できる。Ｓａｌａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ ｓｅｒｏｔｙｐｅ Ａ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｃｅｌｌ－ｂａｓｅｄ ｐｏｔｅｎｃｙ ａｓｓａｙ ｔｏ ｒｅｐｌａｃｅ ｔｈｅ ｍｏｕｓｅ ｂｉｏａｓｓａｙ，ＰＬＯＳ ＯＮＥ，２０１２，７（１１）：ｅ４９５１６等において、このような例示的なアッセイが開示されている。

【0116】

いくつかの実施形態では、開示された治療に適した液体組成物（例えばＱＭ１１１４）の相対的効力は、細胞ベースのアッセイ（例えば、上記で述べたようなｈｉＰＳＣベースのアッセイ又はＳｉＭａ細胞ベースのアッセイ）で決定した場合、約１１５、約１１６、約１１７、約１１８、約１１９、約１２０、約１２１、約１２２、約１２３、約１２４、約１２５、約１２６、約１２７、約１２８、約１２９、約１３０、約１３１、約１３２、約１３３、約１３４、約１３５、約１３６、約１３７、約１３８、約１３９、又は約１４０ＣＢｐＡ単位であり得る。いくつかの実施形態では、開示された治療に適した液体組成物（例えばＱＭ１１１４）の相対的効力は、細胞ベースのＥＬＩＳＡで決定した場合、少なくとも１１５、少なくとも１１６、少なくとも１１７、少なくとも１１８、少なくとも１１９、少なくとも１２０、少なくとも１２１、少なくとも１２２、少なくとも１２３、少なくとも１２４、少なくとも１２５、少なくとも１２６、少なくとも１２７、少なくとも１２８、少なくとも１２９、少なくとも１３０、少なくとも１３１、少なくとも１３２、少なくとも１３３、少なくとも１３４、少なくとも１３５、少なくとも１３６、少なくとも１３７、少なくとも１３８、少なくとも１３９、又は少なくとも１４０ＣＢｐＡ単位であり得る。いくつかの実施形態では、開示された治療に適した液体組成物（例えばＱＭ１１１４）の相対的効力は、細胞ベースのアッセイ（例えば、上記で述べたようなｈｉＰＳＣベースのアッセイ又はＳｉＭａ細胞ベースのアッセイ）で決定した場合、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、又は１４０単位であり得る。

【0117】

いくつかの態様では、効力又は活性は、異なるＢｏＮＴ酵素の相対的活性レベル（すなわち、比活性の算出）を考慮に入れるために所定の製剤中のＢｏＮＴ濃度で正規化され得る。例えば、いくつかの実施形態では、開示された治療に適した液体組成物（例えばＱＭ１１１４）は、少なくとも１．２０、少なくとも１．２１、少なくとも１．２２、少なくとも１．２３、少なくとも１．２４、少なくとも１．２５、少なくとも１．２６、少なくとも１．２７、少なくとも１．２８、少なくとも１．２９、少なくとも１．３０、少なくとも１．３１、少なくとも１．３２、少なくとも１．３３、少なくとも１．３４、少なくとも１．３５、少なくとも１．３６、少なくとも１．３７、少なくとも１．３８、少なくとも１．３９、又は少なくとも１．４０ＣＢｐＡ単位／ＢｏＮＴ濃度（例えばｍｇ）のＢｏＮＴ濃度で正規化された効力を有し得る。いくつかの実施形態では、開示された治療に適した液体組成物（例えばＱＭ１１１４）は、約１．２０、約１．２１、約１．２２、約１．２３、約１．２４、約１．２５、約１．２６、約１．２７、約１．２８、約１．２９、約１．３０、約１．３１、約１．３２、約１．３３、約１．３４、約１．３５、約１．３６、約１．３７、約１．３８、約１．３９、又は約１．４０ＣＢｐＡ単位／ＢｏＮＴ濃度（例えばｍｇ）のＢｏＮＴ濃度で正規化された効力を有し得る。いくつかの実施形態では、開示された治療に適した液体組成物（例えばＱＭ１１１４）は、１．２０、１．２１、１．２２、１．２３、１．２４、１．２５、１．２６、１．２７、１．２８、１．２９、１．３０、１．３１、１．３２、１．３３、１．３４、１．３５、１．３６、１．３７、１．３８、１．３９、又は１．４０ＣＢｐＡ単位／ＢｏＮＴ濃度（例えばｍｇ）のＢｏＮＴ濃度で正規化された効力を有し得る。濃度で正規化された効力／活性のために、効力又は活性は、細胞ベースのアッセイ（例えば、上記に述べたようにＰＣＴ／ＩＢ２０２１／０５６２１０に開示される細胞ベースのアッセイ）によって決定することができ、製剤の濃度は、ＥＬＩＳＡアッセイ（例えばＢＯＬＩＳＡ（登録商標））等によって決定することができる。

【0118】

ＩＩＩ．治療
本明細書では、ヒト対象において中等度から重度の眉間皺及び／又は外眼角皺を治療する方法であって、ボツリヌス神経毒を含む液体組成物（例えば、ＱＭ１１１４又は「すぐに使える」液体組成物）を治療有効量で対象に投与し、それによって中等度から重度の眉間皺の外観を軽減させることを含む方法が提供される。液体組成物は、上記のＩＩ．に開示された前述の実施形態のいずれかに相当し得る。

【0119】

再調製又は混和する必要がない「すぐに使える」液体組成物（例えばＱＭ１１１４）を利用することに加えて、開示された治療は、液体組成物が、製剤中のＢｏＮＴ濃度で正規化された場合、競合製品（例えば、ＸＥＯＭＩＮ（登録商標）、ＢＯＴＯＸ（登録商標））より酵素的に活性であるＢｏＮＴ（例えばＢｏＮＴ／Ａ）を含むという点で、従来のＢｏＮＴベースの治療に対してさらに区別できる。本明細書に記載の「競合製品」は、乾燥形態（例えば凍結乾燥粉末形態）で保存され、対象に投与するために再調製する必要があるＢｏＮＴ製剤と呼ぶこともできる。結果として、液体組成物（例えばＱＭ１１１４）は、競合製品より少なくＢｏＮＴを含むことができ、そのため、一般により安全となり、眼瞼下垂等の有害事象又は副作用を生じさせる可能性が低くなる。したがって、本明細書に開示の方法及び使用は、眼瞼下垂を発症するリスクがある対象、以前に眼瞼下垂に罹患した対象、又は以前にＢｏＮＴ製剤で（例えば、ＧＬ、ＬＣＬ、若しくはそれらの組み合わせが）治療され、眼瞼下垂を経験した対象を選択する工程を含み得る。いくつかの実施形態では、本明細書に開示の方法及び使用は、以前にＢｏＮＴ製剤で（例えば、ＧＬ、ＬＣＬ、若しくはそれらの組み合わせが）治療されていない対象を選択する工程を含み得る。

【0120】

液体組成物（例えばＱＭ１１１４）における酵素活性レベルが高いほど、競合製品（例えば、ＸＥＯＭＩＮ（登録商標）、ＢＯＴＯＸ（登録商標））と比較して（ＢｏＮＴ濃度で正規化された場合）相対的効力も高くなる。より高い活性及びより高い効力により、開示された方法は、競合製品（例えば、ＸＥＯＭＩＮ（登録商標）、ＢＯＴＯＸ（登録商標））と比較して、ＧＬ及びＬＣＬの減少という点で結果がより迅速に発現し、結果がより長く持続し、副作用（例えば下垂）の発生が少なくなる。

【0121】

したがって、本開示は、ＱＭ１１１４等のＢｏＮＴでＧＬ及びＬＣＬを治療する方法であって、競合製品（例えば、ＢＯＴＯＸ ＣＯＳＭＥＴＩＣ（登録商標）、ＸＥＯＭＩＮ（登録商標）、及びＪＥＵＶＥＡＵ（登録商標））と比べてより安全であり、かつ／又は副作用がより少ないか、若しくはより重症ではない方法を提供する。本開示はまた、ＱＭ１１１４等のＢｏＮＴでＧＬ及びＬＣＬを治療する方法であって、競合製品（例えば、ＢＯＴＯＸ ＣＯＳＭＥＴＩＣ（登録商標）、ＸＥＯＭＩＮ（登録商標）、及びＪＥＵＶＥＡＵ（登録商標））より眼瞼下垂を発症させる可能性が低い方法を提供する。本開示はまた、ＱＭ１１１４等のＢｏＮＴでＧＬ及びＬＣＬを治療する方法であって、競合製品（例えば、ＢＯＴＯＸ ＣＯＳＭＥＴＩＣ（登録商標）、ＸＥＯＭＩＮ（登録商標）、及びＪＥＵＶＥＡＵ（登録商標））より治療効果を迅速に発現させる方法を提供する。本開示はまた、ＱＭ１１１４等のＢｏＮＴでＧＬ及びＬＣＬを治療する方法であって、競合製品（例えば、ＢＯＴＯＸ ＣＯＳＭＥＴＩＣ（登録商標）、ＸＥＯＭＩＮ（登録商標）、及びＪＥＵＶＥＡＵ（登録商標））より長い期間、治療効果を提供する方法を提供する。

【0122】

さらに又はあるいは、本開示は、必要としているヒト対象において低い眼瞼下垂リスクで眉間皺（ＧＬ）、外眼角皺（ＬＣＬ）、又はそれらの組み合わせを治療する方法であって、ボツリヌス神経毒を含む液体組成物を治療有効量で対象に投与し、それによってＧＬ、ＬＣＬ、又はそれらの組み合わせの外観を軽減させることを含み、上記ボツリヌス神経毒は、少なくとも１．１６ＢＵ／ＢｏＮＴのボツリヌス神経毒濃度で正規化された酵素活性を有する、方法を提供する。ヒト対象は、ボツリヌス神経毒（例えば、１．１６ＢＵ／ＢｏＮＴ未満のボツリヌス神経毒濃度で正規化された酵素活性、又は約２．０×１０^８Ｕ／ｍｇ未満の比活性を有するボツリヌス神経毒製剤、例えば、Ｂｏｔｏｘ Ｃｏｓｍｅｔｉｃ（登録商標）、Ｘｅｏｍｉｎ（登録商標）、及びＪｅｕｖｅａｕ（登録商標））を投与する際に眼瞼下垂を発症するリスクがあるか、又は発症する可能性が高いと考えられる対象であってもよい。ヒト対象はまた、ボツリヌス神経毒を投与する際に眼瞼下垂に罹患しており、及び／又は眼瞼下垂を発症した病歴を有する対象であってもよい。別の実施形態では、ヒト対象は、任意の用量又は酵素活性のボツリヌス神経毒を投与する際に（ｉ）眼瞼下垂を発症するリスクがなく、（ｉｉ）眼瞼下垂に罹患しておらず、かつ／又は（ｉｉｉ）眼瞼下垂を発症した病歴を有していない対象ではない。

【0123】

具体的に眼瞼下垂に関して、本開示は、他の競合製品で観察されるものより著しく低いＱＭ１１１４による眼瞼下垂率の証拠を提供する。例えば、合計で８０００名を超える患者での試験の検討では、眼瞼下垂率は約２．５％であることが分かった。具体的には、眼瞼下垂の発生率はＢｏｔｏｘ（３％）及びＪｅｕｖｅａｕ（２％）について確認された。実施例１に示すように、ＱＭ１１１４でＬＣＬ／ＧＬを治療する場合に確認された眼瞼下垂率は、一部の試験において０．９％と同等に低かった。したがって、開示された治療（ＬＣＬ、ＧＬ、又はそれらの組み合わせのための治療）のいくつかの実施形態では、眼瞼下垂率は、２％未満、１．９％未満、１．８％未満、１．７％未満、１．５％未満、１．４％未満、１．３％未満、１．２％未満、１．１％未満、１．０％未満、又は０．９％と同等に低くてもよい。開示された治療（ＬＣＬ、ＧＬ、又はそれらの組み合わせのための治療）のいくつかの実施形態では、眼瞼下垂率は、約２％、約１．９％、約１．８％、約１．７％、約１．５％、約１．４％、約１．３％、約１．２％、約１．１％、約１．０％、又は約０．９％であってもよい。開示された治療（ＬＣＬ、ＧＬ、又はそれらの組み合わせのための治療）のいくつかの実施形態では、眼瞼下垂率は、１．９％、１．８％、１．７％、１．５％、１．４％、１．３％、１．２％、１．１％、１．０％、又は０．９％以下であってもよい。

【0124】

さらに、いくつかの実施形態では、本開示は、対象において外眼角皺（ＬＣＬ）を治療する方法であって、ＢｏＮＴの液体組成物（例えばＱＭ１１１４）を投与することを含み、該治療は、ＢＯＴＯＸ ＣＯＳＭＥＴＩＣ（登録商標）（言い換えれば、乾燥形態（例えば凍結乾燥粉末形態）で保存され、対象に投与するために再調製する必要があるＢｏＮＴ製剤）でＬＣＬを治療する奏効率より高い、方法を提供する。

【0125】

いくつかの実施形態では、１～１００単位のボツリヌス毒素が対象に投与される。いくつかの実施形態では、１０～７５単位のボツリヌス毒素が対象に投与される。いくつかの実施形態では、２５～７５単位のボツリヌス毒素が対象に投与される。いくつかの実施形態では、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、又は１００単位のボツリヌス毒素が対象に投与される。いくつかの実施形態では、５０～２５０単位のボツリヌス毒素が対象に投与される。いくつかの実施形態では、７５～２００単位のボツリヌス毒素が対象に投与される。いくつかの実施形態では、対象に投与される液体組成物の濃度は、ボツリヌス毒素１～３００単位／ｍＬ、例えば、１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、２００、２１０、２１５、２２０、２２５、２３０、２３５、２４０、２４５、２５０、２５５、２６０、２６５、２７０、２７５、２８０、２８５、２９０、２９５、又は３００単位／ｍＬである。

【0126】

いくつかの実施形態では、組成物は注射により投与される。いくつかの実施形態では、注射は、皮下、経皮、皮内、又は筋肉内である。いくつかの実施形態では、方法は、眉間領域に複数の注射を行うことを含む。いくつかの実施形態では、隣接する注射の部位は約０．５～１０ｃｍ離れている。いくつかの実施形態では、隣接する注射の部位は約１．５～３ｃｍ離れている。いくつかの実施形態では、注射は片側であってもよい。いくつかの実施形態では、注射は両側であってもよい。

【0127】

いくつかの実施形態では、注射は、鼻根筋と顔の各側の皺眉筋とに行われ、いくつかの実施形態では、注射は、特定の順序で行われ、例えば、最初に鼻根筋に、続いて顔の各側の皺眉筋に、正中部から外側に移動して行われる。いくつかの実施形態では、すべての注射は、眼窩上縁の約１ｃｍ上で、瞳孔中心線に対して内側に行われる。

【0128】

いくつかの実施形態では、すべての注射は、眉毛の中央又は骨の眼窩上隆起の少なくとも１ｃｍ上に行われる。

【0129】

いくつかの実施形態では、組成物は、外眼角皺（ＬＣＬ）を治療、予防、又は改善するために投与されてもよい。いくつかの実施形態では、治療は約３回の注射（注射部位ごとに１回の注射）を含んでもよい。例えば、治療は、１、２、３、４、又は５回の注射を含んでいてもよい。注射の位置は、個々の対象のＬＣＬ皺パターンに応じて調整されてもよい。個々の対象の皺パターンに応じて、ＬＣＬ領域の皺が外眼角の上下にある場合、例えば図１２Ａに記載されるように注射を行った。あるいは、個々の対象のＬＣＬの皺が主に外眼角の下にある場合、例えば図１２Ｂに記載されるように注射を行った。いくつかの実施形態では、注射点は、眼輪筋の外側部分であってもよく、該当する場合には、眼窩縁から約１～２ｃｍのところであってもよい。いくつかの実施形態は、顔の各側に投与される等量（１００μｌ）の３回の注射（すなわち、合計６回の注射）を含んでもよい。

【0130】

いくつかの実施形態では、組成物は、ＧＬ及びＬＣＬを共に（すなわち同時に）治療、予防、又は改善するために投与されてもよい。いくつかの実施形態では、治療は、例えば、ＧＬ領域（５回の注射）及びＬＣＬ領域（顔の各側に３回の注射）に投与される等量（１００μｌ）の１１回の注射（注射部位ごとに１回の注射）を含んでもよい。いくつかの実施形態では、ＧＬ及びＬＣＬの同時治療は、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、又は１４回以上の注射を含んでいてもよい。例えば、ＧＬについては、５つの注射部位が、各皺眉筋に２回の注射、鼻根筋に１回の注射を含んでもよく、ＬＣＬについては、注射の位置は、個々の対象のＬＣＬ皺パターンに応じて調整されてもよい。個々の対象の皺パターンに応じて、ＬＣＬ領域の皺が外眼角の上下にあった場合、図１２Ａに記載されるように注射を行ってもよい。あるいは、個々の対象のＬＣＬの皺が主に外眼角の下にあった場合、図１２Ｂに記載されるように注射を行ってもよい。いくつかの実施形態では、ＬＣＬを治療するための注射点は、眼輪筋の外側部分であってもよく、該当する場合には、眼窩縁から約１～２ｃｍのところであってもよい。

【0131】

いくつかの実施形態では、上記再発を抑制するために、方法を約３ヶ月～約６ヶ月の間隔で繰り返す。いくつかの実施形態では、上記再発を抑制するために、方法を約４ヶ月の間隔で繰り返す。

【0132】

本明細書で提供される方法は、対象における眉間皺及び／又は外眼角皺の外観の一時的な軽減をもたらす。治療の有効性は、当業者に公知の方法で評価することができる。例示的な評価方法は、以下及び実施例で示される。

【0133】

ａ．眉間皺の重症度の４点写真スケール：治験責任医師ライブ評価（ＧＬ－ＩＬＡ）
有効な眉間皺重症度の４点写真スケールには２つの等級付けシステム：最大しかめ面時の治験責任医師ライブ評価のためのもの及び安静時の治験責任医師ライブ評価のためのものが含まれる。このスケールは眉間皺の重症度をなし（等級０）から、軽度（等級１）、中等度（等級２）、重度の眉間皺（等級３）まで表す。また、それぞれの等級は個別の写真と説明文で示される。治験責任医師は、４点写真スケールの使用についてトレーニングを受ける。治験責任医師は、スクリーニング時、ベースライン時（治療前）、及び治療後のすべての診察時に対象の顔と直接、実物で比較するために４点写真スケールを使用する。対象は、治験責任医師の評価とは独立して、自身の眉間皺の重症度の評価を行う。対象は、静的４点カテゴリースケールを用いてスクリーニング時、ベースライン時（治療前）、及び治療後のすべての診察時に自身の最大しかめ面時の眉間皺を評価するよう求められる。

【表1】

【0134】

ｂ．グローバル美的改善スケール（ＧＡＩＳ）
対象は、治療後のすべての診察時に以下のカテゴリースケールを用いて、自身の治療前の外観と比較して自身の最大しかめ面時の眉間皺のグローバル美的改善を評価する。

【表2】

【0135】

対象は、「注射の直前と比較してあなたの最大しかめ面時の眉間皺（眉毛間の皺）の外観の変化をどのように評価しますか？」と尋ねられる。

【0136】

対象は、ベースラインと比較して自身の最大しかめ面時の眉間皺の外観が変化した度合いを最もよく表す評価を１つ選択するように指示される。対象は、評価しやすくなるようにベースラインの写真を見直すことができる。

【0137】

ｃ．日記カード
対象は、治療の翌日（１日目）から７日目（試験診察３回目）まで自身の試験治療反応の評価を日記カードに記録するよう求められる。対象は、以下の質問に「はい」又は「いいえ」で回答するよう求められる：「注射を受けてから、あなたの眉間皺（眉毛間の皺）の外観が改善したことに気付きましたか？」。対象は、毎日日記カードに記入し、７日目の診察時に日記を試験センターに返却する。

【0138】

ｄ．ＦＡＣＥ－Ｑ
ＦＡＣＥ－Ｑは、美容的顔面処置の経験と成果を対象の視点から評価するための患者報告型アウトカムツールである。ＦＡＣＥ－Ｑは、４０以上のスケールで構成されており、４つの領域（顔の外観の満足度、健康関連の生活の質、副作用、及びケアプロセス）をカバーしている。各領域には、独立して機能するスケールが１つ以上ある。本試験ために、かつ治療される状態を考慮して、評価スケジュールに記載された時点で対象が記入するように心理的機能スケールを選択した。

【0139】

ｅ．顔の皺治療満足度質問票
これらの質問は、対象に、直近の処置で治療された顔の領域について考えてもらうものである。対象は、与えられた文にどの程度同意するかについて最も一致する回答を選択する。例示的な質問表を以下に示す。各質問に対する回答は１つだけである。

【表3】

【0140】

ｆ．皺の満足度（ＳＷＬ）質問票
ベースライン時（治療前）及び治療後のすべての診察時に、対象は、Ｇａｌｄｅｒｍａ社によって開発された有効なＳＷＬ質問票を記入するように求められる。

【0141】

ｇ．独立写真審査員（ＩＰＲ）
対象の無作為化治療について盲検化された３名のＩＰＲが、有効な眉間皺重症度の４点写真スケールを用いて各対象の最大しかめ面時のＧＬの写真評価を行う。ＩＰＲによる評価は、試験終了時に全対象に対して行われる。ＩＰＲは、ベースライン時及び治療後の各診察時に各対象の最大しかめ面時のＧＬの写真と比較するためにスケールを使用する。ＩＰＲスコアは、３名の審査員のスコアの中央値として決定される。ＩＰＲは、試験の他のいかなる側面にも関与しない。

【実施例】

【0142】

実施例１ 中等度から重度の眉間皺の治療に対するＱＭ１１１４－ＤＰの有効性及び安全性（試験４３ＱＭ１６０２）
多施設。中等度から重度の眉間皺の治療に対するＱＭ１１１４医薬品（ＤＰ）の有効性及び安全性を評価する無作為化二重盲検プラセボ対照試験を、米国及びカナダの１０か所で３００名の対象に実施した。ＱＭ１１１４－ＤＰは、上記の説明に概説した少なくとも４種の緩衝剤を含む本発明のボツリヌス神経毒（例えばＢｏＮＴ／Ａ）の液体組成物の例である。したがって、これらの例全体でＱＭ１１１４－ＤＰに言及する場合、本発明の例示的な「ボツリヌス神経毒を含む液体組成物」を指す。群１（治療群）は、ベースライン時にＱＭ１１１４－ＤＰ（５単位）の単一治療を受けた２２５名の対象からなっていた。群２（プラセボ群）は、ベースライン時に単一プラセボ治療を受けた７５名の対象からなっていた。治療の有効性及び安全性は、投与後の７日目、１４日目、並びに１ヶ月目、２ヶ月目、３ヶ月目、４ヶ月目、５ヶ月目、及び６ヶ月目にフォローアップ診察で測定した。

【0143】

一次的有効性評価項目は、眉間皺についての「複合奏効者率」を使用して測定した。眉間皺の複合奏効者率は、１ヶ月目の最大しかめ面時に２種の評価スケール：治験責任医師ライブ評価（ＩＬＡ）４点写真スケール及び対象自己評価（ＳＳＡ）静的４点カテゴリースケールを使用して評価する。「複合奏効者」とは、眉間皺の重症度で０又は１のスコアと、同時にＵＬＡスケール及びＳＳＡスケールの両方でベースラインから少なくとも２等級の改善とを達成する対象を指す。図２は、眉間皺の重症度スコアリングマトリクスを示す。

【0144】

本試験の一次的有効性評価項目は、治療群の８２．９％の対象（１６５／１９９）が複合奏効者であったのに対して、プラセボ群の対象は誰も（０％：０／６７）複合奏効者ではなかったことを示した。１ヶ月目に測定した一次的有効性評価項目（複合率）は、プラセボと比較して高く、統計的に有意な結果（ｐ＜０．００１）を示した。

【0145】

二次的有効性を解析するために、経時的なＩＬＡ奏効者率を測定した。図３は、経時的なＩＬＡ奏効者率の結果を示す。あらゆる時点で、治療群は、プラセボ群と比較して著しく高いＩＬＡ奏効率（ｐ＜０．００１）を示した。図３を参照のこと。

【0146】

次に、探索的な有効性の解析を、対象にグローバル美的改善スコア（ＧＡＩＳ）解析を使用して実施した。この解析では、奏効者は、対象ＧＡＩＳについて「改善した」、「かなり改善した」、又は「非常に改善した」と反応する対象である。この例では、ＧＡＩＳについての対象奏効率は高かった（大部分は、６ヶ月を通して改善した又は良好になったと評価した）。図４を参照のこと。治療群の対象は、早くも０日目で効果発現を報告した。治療群の反応発現の中央値は２日であった。

【0147】

安全性：有害事象（ＡＥ）の全体的発生率はプラセボと同等であった。すべての重篤な有害事象（ＳＡＥ）は、試験薬又は注射処置と無関係に評価した。すべての治療下で発現した有害事象（ＴＥＡＥ－「関連有害事象」ともいう）は強度が軽度又は中程度であり、頻度が最も高いＴＥＡＥは、頭痛、眼瞼下垂、及びあざであった。図５を参照のこと。死亡した対象、又は早期の試験中止に至るＴＥＡＥを経験した対象はいなかった。

【0148】

結論
有効性：ＱＭ－１１１４－ＤＰは、対象の眉間皺の減少において一次的評価項目及び二次的評価項目でプラセボに対する統計的に有意な差を示した。

【0149】

発現：治療群の対象は、早くも０日目で有益な効果に気付いたと報告し、発現の中央値は２日であった。

【0150】

安全性：ＱＭ－１１１４－ＤＰの全体的安全性は、好ましいリスク／ベネフィットプロファイルで許容できる。治療群は非常に低い眼瞼下垂率（０．９％）を示した。

【0151】

実施例２ 中等度から重度の外眼角皺の治療に対するＱＭ１１１４－ＤＰの有効性及び安全性（試験４３ＱＭ１９０１）
多施設。中等度から重度の外眼角皺の治療に対するＱＭ１１１４－ＤＰの有効性及び安全性を評価する無作為化二重盲検プラセボ対照試験を、米国及びカナダの１０か所で３００名の対象に実施した。群１（治療群）は、ベースライン時にＱＭ１１１４－ＤＰ（５単位）の単一治療を受けた２２５名の対象からなっていた。群２（プラセボ群）は、ベースライン時に単一プラセボ治療を受けた７５名の対象からなっていた。治療の有効性及び安全性は、投与後の７日目、１４日目、並びに１ヶ月目、２ヶ月目、３ヶ月目、４ヶ月目、５ヶ月目、及び６ヶ月目にフォローアップ診察で測定した。

【0152】

一次的有効性評価項目は、外眼角皺についての「複合奏効者率」を使用して測定した。外眼角皺の複合奏効者率は、１ヶ月目の最大笑顔時に２種の評価スケール：治験責任医師ライブ評価（ＩＬＡ）４点写真スケール及び対象ライブ評価（ＳＬＡ）静的４点カテゴリースケールを使用して評価する。「複合奏効者」は、外眼角皺の重症度で０又は１のスコアと、同時にＵＬＡスケール及びＳＳＡスケールの両方でベースラインから少なくとも２等級の改善とを達成する対象を指す。図６は、外眼角皺の重症度スコアリングマトリクスを示す。

【0153】

本試験の一次的有効性評価項目は、治療群の５１．８％の対象（１０６／２０４）が複合奏効者であったのに対して、プラセボ群の１．４％の対象（１／６９）だけが複合奏効者であったことを示した。１ヶ月目に測定した一次的有効性評価項目（複合率）は、プラセボと比較して高く、統計的に有意な結果（ｐ＜０．００１）を示した。

【0154】

二次的な有効性を解析するために、経時的なＩＬＡ奏効者率を測定した。図７は、経時的なＩＬＡ奏効者率の結果を示す。あらゆる時点で、治療群は、プラセボ群と比較して有意に高いＩＬＡ奏効率（ｐ＜０．００１）を示した。図７を参照のこと。

【0155】

次に、探索的な有効性の解析を、対象にグローバル美的改善スコア（ＧＡＩＳ）解析を使用して実施した。この解析では、奏効者は、対象ＧＡＩＳについて「改善した」、「かなり改善した」、又は「非常に改善した」と反応する対象である。この例では、ＧＡＩＳについての対象奏効者率は高かった（大部分は、６ヶ月を通して改善した又は良好になったと評価した）。図８を参照のこと。治療群の対象は、早くも０日目で効果発現を報告した。治療群の反応発現の中央値は２日であった。

【0156】

安全性：有害事象（ＡＥ）の全体的発生率はプラセボと同等であった。すべての重篤な有害事象（ＳＡＥ）は、試験薬又は注射処置と無関係に評価した。すべての治療下で発現した有害事象（ＴＥＡＥ－「関連有害事象」ともいう）は強度が軽度又は中程度であり、頻度が最も高いＴＥＡＥは注射部位のあざであった。図９を参照のこと。死亡した対象、又は早期の試験中止に至るＴＥＡＥを経験した対象はいなかった。

【0157】

結論
有効性：ＱＭ－１１１４－ＤＰは、対象の外眼角皺の減少において一次的評価項目及び二次的評価項目でプラセボに対する統計的に有意な差を示した。

【0158】

発現：治療群の対象は、早くも０日目で有益な効果に気付いたと報告し、発現の中央値は２日であった。

【0159】

安全性：ＱＭ－１１１４－ＤＰの全体的安全性は、好ましいリスク／ベネフィットプロファイルで許容できる。最も一般的な関連ＡＥは注射部位のあざであった（治療群での４．８％に対してプラセボ群では４．１％）。

【0160】

実施例３ 中等度から重度の外眼角皺及び眉間皺（単独又は組み合わせ）の治療に対するＱＭ１１１４－ＤＰの有効性及び安全性（試験４３ＱＭ１９０２）
多施設。中等度から重度の外眼角皺（ＬＣＬ）及び眉間皺（ＧＬ）（単独又は組み合わせ）の治療に対するＱＭ１１１４－ＤＰの有効性及び安全性を評価する無作為化二重盲検プラセボ対照試験を、米国及びカナダの１２か所で４１３名の対象に実施した。群Ａ（ＬＣＬ単独治療群）は、ベースライン時にＬＣＬへのＱＭ１１１４－ＤＰ（５単位）の単一治療、及びＧＬへの単一プラセボ治療を受けた１１８名の対象からなっていた。群Ｂ（ＧＬ単独治療群）は、ベースライン時にＧＬへのＱＭ１１１４－ＤＰ（５単位）の単一治療、ＬＣＬへの単一プラセボ治療を受けた１１８名の対象からなっていた。群Ｃ（ＬＣＬ／ＧＬ組み合わせ治療群）は、ベースライン時にＬＣＬへのＱＭ１１１４－ＤＰ（５単位）の単一治療、及びＧＬへのＱＭ１１１４－ＤＰ（５単位）の単一治療を受けた１１８名の対象からなっていた。最後に、群Ｄ（プラセボ群）は、ベースライン時にＬＣＬへのプラセボの単一治療、及びＧＬへのプラセボの単一治療を受けた５９名の対象からなっていた。治療の有効性及び安全性は、投与後の７日目、１４日目、並びに１ヶ月目、２ヶ月目、３ヶ月目、４ヶ月目、５ヶ月目、及び６ヶ月目にフォローアップ診察で測定した。

【0161】

眉間皺の一次的有効性評価項目は、眉間皺についての「複合奏効者率」を使用して測定した。眉間皺の複合奏効者率は、１ヶ月目の最大しかめ面時に２種の評価スケール：治験責任医師ライブ評価（ＩＬＡ）４点写真スケール及び対象自己評価（ＳＳＡ）静的４点カテゴリースケールを使用して評価する。「複合奏効者」は、眉間皺の重症度で０又は１のスコアと、同時にＵＬＡスケール及びＳＳＡスケールの両方でベースラインから少なくとも２等級の改善とを達成する対象を指す。図２は、眉間皺の重症度スコアリングマトリクスを示す。

【0162】

眉間皺の一次的有効性評価項目は、ＧＬ単独治療群の７１．１％の対象（７５／１０６）が複合奏効者であり、ＬＣＬ／ＧＬ組み合わせ治療群の７２％の対象（７８／１０８）が複合奏効者であったのに対して、プラセボ群の対象は誰も（０％：０／５５）複合奏効者ではなかったことを示した。１ヶ月目に測定した一次的有効性評価項目（複合率）は、プラセボと比較して高く、統計的に有意な結果（ｐ＜０．００１）を示した。

【0163】

外眼角皺の一次的有効性評価項目は、外眼角皺についての「複合奏効者率」を使用して測定した。外眼角皺の複合奏効者率は、１ヶ月目の最大笑顔時に２種の評価スケール：治験責任医師ライブ評価（ＩＬＡ）４点写真スケール及び対象ライブ評価（ＳＬＡ）静的４点カテゴリースケールを使用して評価する。「複合奏効者」は、外眼角皺の重症度で０又は１のスコアと、同時にＵＬＡスケール及びＳＳＡスケールの両方でベースラインから少なくとも２等級の改善とを達成する対象を指す。図６は、外眼角皺の重症度スコアリングマトリクスを示す。

【0164】

外眼角皺の一次的有効性評価項目は、ＬＣＬ単独治療群の４５．１％の対象（５３／１１７）が複合奏効者であり、ＬＣＬ／ＧＬ組み合わせ治療群の５５％の対象（５９／１０８）が複合奏効者であったのに対して、プラセボ群の対象は誰も（０％：０／５５）複合奏効者ではなかったことを示した。１ヶ月目に測定した一次的有効性評価項目（複合率）は、プラセボと比較して高く、統計的に有意な結果（ｐ＜０．００１）を示した。

【0165】

眉間皺の二次的有効性を解析するために、経時的なＩＬＡ奏効者率を測定した。図１０は、経時的な眉間皺のＩＬＡ奏効者率の結果を示す。あらゆる時点で、治療群（ＧＬ単独治療群及びＧＬ／ＬＣＬ組み合わせ治療群の両方）は、プラセボ群と比較して著しく高いＩＬＡ奏効率（ｐ＜０．００１）を示した。図１０を参照のこと。

【0166】

外眼角皺の二次的有効性を解析するために、経時的なＩＬＡ奏効者率を測定した。図１１は、経時的な外眼角皺のＩＬＡ奏効者率の結果を示す。あらゆる時点で、治療群（ＬＣＬ単独治療群及びＧＬ／ＬＣＬ組み合わせ治療群の両方）は、プラセボ群と比較して著しく高いＩＬＡ奏効率（ｐ＜０．００１）を示した。図１１を参照のこと。

【0167】

次に、探索的な有効性の解析を、対象にグローバル美的改善スコア（ＧＡＩＳ）解析を使用して実施した。この解析では、奏効者は、対象ＧＡＩＳについて「改善した」、「かなり改善した」、又は「非常に改善した」と反応する対象である。この例では、ＧＡＩＳでのＧＬ及びＬＣＬの両方の対象奏効者率は、プラセボ対照と比較して高かった（大部分は、５ヶ月を通して改善した又は良好になったと評価した）。図１２を参照のこと。治療群の対象は、早くも０日目で効果発現を報告した。治療群の反応発現の中央値は２～４日であった。

【0168】

安全性：有害事象（ＡＥ）の全体的発生率はプラセボと同等であった。すべての重篤な有害事象（ＳＡＥ）は、試験薬又は注射処置と無関係に評価した。すべての治療下で発現した有害事象（ＴＥＡＥ－「関連有害事象」ともいう）は強度が軽度又は中程度であり、頻度が最も高いＴＥＡＥは、頭痛（４．３％）、注射部位のあざ（２．６％）、及び眼瞼下垂（１．７％、ＧＬ単独治療群でのみ確認）であった。死亡した対象、又は早期の試験中止に至るＴＥＡＥを経験した対象はいなかった。

【0169】

実施例４ 眉間皺へのＱＭ－１１４－ＤＰ及び他のボツリヌス毒素の効果の比較
比較試験では、ＱＭ－１１１４－ＤＰを他の利用可能なボツリヌス毒素製品と比較した。

【0170】

眉間皺の複合２等級改善：ＱＭ－１１１４－ＤＰは、Ｄａｘｉ４０Ｕ（ダキシボツリヌムトキシンＡ）及びＪｅｕｖｅａｕ ＥＶ－００２（プラボツリナムトキシンＡ）と比較して４週目（３０日目）に眉間皺の優れた複合２等級改善を示した。簡単にいうと、ＱＭ－１１１４－ＤＰは、眉間皺の複合２等級改善が約８２．９％であったのに対して、Ｄａｘｉ４０Ｕは７３．８％、Ｊｅｕｖｅａｕ ＥＶ－００２は７０．４％であった。図１３を参照のこと。

【0171】

眉間皺の治験責任医師スコア：ＱＭ－１１１４－ＤＰは、Ｄａｘｉ４０Ｕ及びＢｏｔｏｘと比較した場合、最大で２４週間（１５０日間）、眉間皺についてなしから軽度という持続する同等の治験責任医師スコアを示した。図１４を参照のこと。

【0172】

外眼角皺の複合２等級改善：ＱＭ－１１１４－ＤＰは、Ｂｏｔｏｘと比較して４週目（３０日目）に外眼角皺の優れた複合２等級改善を示した。図１５を参照のこと。

【0173】

眉間皺の治験責任医師スコア：ＱＭ－１１１４－ＤＰは、Ｄａｘｉ４０Ｕ及びＢｏｔｏｘ（オナボツリヌムトキシンＡ）と比較した場合、最大で２４週間（１５０日間）、眉間皺についてなしから軽度という持続する同等の治験責任医師スコアを示した。興味深いことに、Ｄａｘｉ４０Ｕ及びＢｏｔｏｘでは４週間後になし又は軽度の治験責任医師スコアを有する対象はいなかったことが確認された。図１６を参照のこと。

【0174】

酵素活性の比較：酵素活性は、ＢｏＴｅｓｔ^ＴＭを使用して測定した（図１７及び図１８を参照のこと）。ＢｏＴｅｓｔ^ＴＭアッセイ（ＢＯＴＥＳＴ^ＴＭマトリクスＡボツリヌス神経毒検出キット；ＢｉｏＳｅｎｔｉｎｅｌ製のカタログ番号Ａ１０１５）では、一般的な緩衝液をすべての毒素に使用して、賦形剤由来のすべての効果を排除し、毒素だけを見た。簡単にいうと、試料をマイクロタイターウェルに分注し、マトリクス結合緩衝液を各試料に添加した。再懸濁したマトリクスＡビーズを、試料を含む各ウェルに分注し、プレートをインキュベートした。マトリクスビーズをマトリクス洗浄緩衝液で洗浄した。洗浄緩衝液を除去し、ＤＴＴを含有するＢｏＴｅｓｔ^ＴＭ反応緩衝液と置き換えた。ＢｏＴｅｓｔ^ＴＭマスターストックを添加してから、プレートを覆ってインキュベートし、続いて蛍光読取りを行った。観察した酵素活性パターンは、両方のアッセイで非常に類似して見えた。

【0175】

図１８では、各製品の正規化された値（すなわち比活性）を、ＢｏＮＴ－Ａ特異的ＥＬＩＳＡ（ＢＯＬＩＳＡ（登録商標））を使用して決定される製剤中のＢｏＮＴ量で活性（Ｕ／ｍｌ）を除算することによって算出した。

【0176】

酵素活性の実験を２回繰り返した結果を下記の表に示す。

【表4】

【表5】

【0177】

相対的効力の比較：本発明者らはまた、ウエスタンブロットを介して検出される切断したＳＮＡＰ２５のＢｏＮＴ／Ａ依存性の細胞内増加についてｈｉＰＳＣが評価される細胞ベースのアッセイを使用して、ＱＭ１１１４－ＤＰ及び競合品にどの程度の毒素タンパク質が存在するかを解析した。一般的な緩衝液をＣＢＡ試験で使用した。ボツリヌス神経毒Ａ型の量は、ＢｏＮＴ－Ａ特異的ＥＬＩＳＡを使用して決定した（一般的な緩衝液も使用）。（活性及び効力を毒素量で除算することによって）活性及び効力を正規化した場合、ＱＭ１１１４－ＤＰが毒素分子当たり最良の効力を有することが分かる。したがって、ＱＭ１１１４－ＤＰは、他の毒素よりさらに効力が高い毒素である（例えば、Ｂｏｔｏｘより９０％良好）。図１９を参照のこと。

【0178】

図１９では、相対的効力は、一般的な緩衝剤で実施した細胞ベースのアッセイを使用して決定し、各製品のタンパク質量について正規化した。Ｕ／ｐｇは、ＢｏＮＴ－Ａ特異的ＥＬＩＳＡ（ＢＯＬＩＳＡ（登録商標））を使用して決定される製剤中のＢｏＮＴ量で相対的効力を除算することによって算出した。

【0179】

結論
ＱＭ１１１４－ＤＰは、他のボツリヌス毒素（例えば、Ｄａｘｉ４０Ｕ、Ｊｅｕｖｅａｕ ＥＶ－００２、及びＢｏｔｏｘ）より優れている。特に、ＱＭ１１１４－ＤＰは、効力及び活性の観点からＸｅｏｍｉｎ及びＢｏｔｏｘの両方より性能が優れていた。例えば、ＱＭ１１１４－ＤＰは、他のボツリヌス毒素よりも、ＬＣＬ及びＧＬを治療するための奏効者率が良好である。ＱＭ１１１４－ＤＰはまた、眼瞼下垂等の有害な副作用を生じさせる可能性が低いか、又は他のボツリヌス毒素より低い重度の眼瞼下垂しか発症させない。単位（ＩＵ）当たりの毒素活性は、ＱＭ１１１４－ＤＰの方が高いので、より少ないＱＭ１１１４－ＤＰを使用して同程度の治療が得られるので、あらゆる潜在的な有害事象の確率又は重症度が最小化され得る。最終的に、ＱＭ１１１４－ＤＰは、他の試験した毒素よりも効果発現が速く、効果期間が長い。

【0180】

実施例５ ＱＭ１１１４－ＤＰは純度が高く、複合体を含まない
ＱＭ－１１１４－ＤＰは、超高速液体クロマトグラフィーサイズ排除クロマトグラフィー（ＵＰＬＣ－ＳＥＣ）及びＳＤＳ－ＰＡＧＥを使用してタンパク質純度について分析した。ＵＰＬＣ－ＳＥＣ分析では、ＱＭ－１１１４－ＤＰがＷａｔｅｒ ＢＥＨ^ＴＭＳＥＣカラムで分離され、吸光度（Ａ２８０）を使用して解析されたことが示された。ＳＤＳ－ＰＡＧＥは、還元材料及び非還元材料の両方で行い、不純物の定量化を可能にするコロイドクーマシーで染色した。

【0181】

図２０及び図２１に示すように、ＱＭ－１１１４－ＤＰの製剤は、純度が高く、複合体を含まず、ＢｏＮＴ－Ａは、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析で観察される予想されたバンドのみを表す。

【0182】

実施例６ 外眼角皺（ＬＣＬ）の治療
ＱＭ－１１１４－ＤＰは、１ヶ月目で眉間皺の治療に対して高い複合２等級以上奏効者率（８３％）を有し、最大で６ヶ月間の効果期間及び１日目で１／３を超える対象の発現を有することが示された。そのため、中等度から重度のＬＣＬの治療についてプラセボと比較して６０ＵのＱＭ－１１１４－ＤＰの単回投与を評価するためにさらなる試験を行った。

【0183】

中等度～重度のＬＣＬを有する対象（Ｎ＝３０３）を、ＱＭ－１１１４－ＤＰ６０Ｕ又はプラセボに３：１で無作為化した。ＬＣＬ重症度は、ＬＣＬ治験責任医師ライブ評価（ＬＣＬ－ＩＬＡ）４点写真スケール、ＬＣＬ対象ライブ評価（ＬＣＬ－ＳＬＡ）４点写真スケール、及び対象報告型の効果発現、対象の満足度によって評価した。有害事象もまた追跡した。試験の一次的評価項目は、１ヶ月目の最大笑顔時にＬＣＬ－ＩＬＡ及びＬＣＬ－ＳＬＡを使用して評価した複合２等級奏効者率であった。ＬＣＬ重症度でなし（０）又は軽度（１）のスコアを達成し、かつ最大笑顔時のＬＣＬ－ＩＬＡスケール及びＬＣＬ－ＳＬＡスケールの両方でベースラインから少なくとも２等級改善を有した対象を複合２等級奏効者と定義した。

【0184】

ＬＣＬ複合２等級奏効者率は、プラセボに対してｒｅｌａＢｏＮＴ－Ａでより高かった（５１．８％対１．４％、Ｐ＜０．００１）（図２２）。効果発現の時間の中央値は２日であり、３４％の対象は１日目に発現を報告した（図２３）。治験責任医師は、１ヶ月目に８８％の対象においてなし又は軽度の重症度を報告し、効果は、６ヶ月目に２３％で維持された（図２４）。治験責任医師は、１ヶ月目に９３％の対象において１等級以上の改善を報告し、効果は、６ヶ月目に３６％で維持された（図２５）。

【0185】

さらに、１つの探索的評価項目は、ベースラインに戻る時間であった。この評価項目は、最大笑顔時にＬＣＬ－ＩＬＡ４点写真スケール及びＬＣＬ－ＳＬＡ４点写真スケールの両方で０又は１のスコアを達成した対象で評価した。図２６に示すように、ＩＬＡ及びＳＬＡで同時にベースラインに戻る時間の中央値は１７３日（２４．７週間）であった。このように、ＱＭ－１１１４－ＤＰは長続きするＬＣＬの治療を提供する。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23】

【図24】

【図25】

【図26】

【国際調査報告】