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特表2025-500766ヒトの癌を治療するためのｓｗｉｔｃｈａｂｌｅ ＣＡＲ－Ｔ療法
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2025-01-15
(54)【発明の名称】ヒトの癌を治療するためのｓｗｉｔｃｈａｂｌｅ ＣＡＲ－Ｔ療法
(51)【国際特許分類】
A61K 39/395 20060101AFI20250107BHJP
A61K 47/68 20170101ALI20250107BHJP
A61K 35/17 20250101ALI20250107BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20250107BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20250107BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20250107BHJP
A61K 31/675 20060101ALI20250107BHJP
A61K 31/7076 20060101ALI20250107BHJP
C12N 5/10 20060101ALN20250107BHJP
C12N 15/62 20060101ALN20250107BHJP
C12N 15/12 20060101ALN20250107BHJP
C12N 15/13 20060101ALN20250107BHJP
【ＦＩ】
A61K39/395 D ZNA
A61K39/395 N
A61K47/68
A61K35/17
A61P35/00
A61P35/02
A61P43/00 121
A61K31/675
A61K31/7076
C12N5/10
C12N15/62 Z
C12N15/12
C12N15/13
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024533834
(86)(22)【出願日】2022-12-06
(85)【翻訳文提出日】2024-08-02
(86)【国際出願番号】 US2022081010
(87)【国際公開番号】W WO2023107940
(87)【国際公開日】2023-06-15
(31)【優先権主張番号】63/286,868
(32)【優先日】2021-12-07
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】501244222
【氏名又は名称】ザ スクリプス リサーチ インスティテュート
(74)【代理人】
【識別番号】100114188
【弁理士】
【氏名又は名称】小野 誠
(74)【代理人】
【識別番号】100119253
【弁理士】
【氏名又は名称】金山 賢教
(74)【代理人】
【識別番号】100124855
【弁理士】
【氏名又は名称】坪倉 道明
(74)【代理人】
【識別番号】100129713
【弁理士】
【氏名又は名称】重森 一輝
(74)【代理人】
【識別番号】100137213
【弁理士】
【氏名又は名称】安藤 健司
(74)【代理人】
【識別番号】100183519
【弁理士】
【氏名又は名称】櫻田 芳恵
(74)【代理人】
【識別番号】100196483
【弁理士】
【氏名又は名称】川嵜 洋祐
(74)【代理人】
【識別番号】100160255
【弁理士】
【氏名又は名称】市川 祐輔
(74)【代理人】
【識別番号】100228980
【弁理士】
【氏名又は名称】副島 由加里
(74)【代理人】
【識別番号】100146318
【弁理士】
【氏名又は名称】岩瀬 吉和
(74)【代理人】
【識別番号】100127812
【弁理士】
【氏名又は名称】城山 康文
(72)【発明者】
【氏名】ヤング，トラヴィス
(72)【発明者】
【氏名】ラボルダ，エドゥアルド
【テーマコード（参考）】
4B065
4C076
4C085
4C086
4C087
【Ｆターム（参考）】
4B065AA93X
4B065AB01
4B065BA02
4B065CA25
4B065CA44
4C076CC27
4C076CC41
4C076EE59
4C085AA13
4C085AA14
4C085BB11
4C085EE03
4C086AA01
4C086AA02
4C086DA35
4C086EA18
4C086MA03
4C086MA04
4C086NA05
4C086ZB26
4C086ZB27
4C086ZC75
4C087AA01
4C087AA02
4C087BB65
4C087MA02
4C087NA14
4C087ZB26
4C087ZB27
4C087ZC75
(57)【要約】
本発明では、適切な用量のｓｗｉｔｃｈａｂｌｅ ＣＡＲ－Ｔ細胞及び相補的スイッチ分子を用いてヒト対象のＣＤ－１９陽性悪性腫瘍を治療する方法が提供される。
【選択図】図1
【選択図】図1
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ヒト対象のＣＤ１９陽性悪性腫瘍を治療し、前記腫瘍の増殖を阻止しかつ／又は前記腫瘍の退縮を促進する方法であって、（ａ）配列番号２及び３としてそれぞれ示されている軽鎖可変領域及び重鎖可変領域配列を備える抗ＣＤ１９Ｆａｂ抗体を備えるキメラ抗原受容体Ｔ細胞スイッチ分子（ＣＡＲ－Ｔスイッチ）と、（ｂ）配列番号６に示されているＣＡＲ配列を備える相補的ＣＡＲ－Ｔ細胞とを前記対象に投与し、これにより、前記対象のＢ細胞悪性腫瘍を治療し、前記腫瘍の増殖を阻止しかつ／又は前記腫瘍の退縮を促進するステップを含む方法。
【請求項2】
前記抗ＣＤ１９Ｆａｂ抗体は配列番号１５及び１６としてそれぞれ示されている軽鎖配列及び重鎖配列を備える、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
前記対象には処置の開始時に前記ＣＡＲ－Ｔ細胞の１回分の用量が投与され、前記処置の期間中に前記ＣＡＲ－Ｔスイッチの複数回分の用量が投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項4】
前記対象には前記ＣＡＲ－Ｔ細胞の１回分の用量が注入され、その後、前記ＣＡＲ－Ｔスイッチの１回以上の注入サイクルが行なわれ、各サイクルは約５～約９日間毎日前記ＣＡＲ－Ｔスイッチを注入する「オン」フェーズと、約１４～約２８日間ＣＡＲ－Ｔを投与しない「オフ」フェーズとを備える、請求項３に記載の方法。
【請求項5】
前記対象に投与される前記ＣＡＲ－Ｔ細胞の前記用量は細胞約６０×１０６個、約８０×１０６個、約１００×１０６個、約１２０×１０６個、約１４０×１０６個、約１６０×１０６個、約１８０×１０６個、約２００×１０６個、約３００×１０６個、約４００×１０６個、約５００×１０６個、約６００×１０６個、約７００×１０６個、約８００×１０６個、約９００×１０６個、約１０００×１０６個又はこれらを超える個数分である、請求項３に記載の方法。
【請求項6】
前記対象に投与される前記ＣＡＲ－Ｔ細胞の前記用量は細胞約０．３５×１０８個から約１４×１０８個分である、請求項３に記載の方法。
【請求項7】
前記対象に投与される前記ＣＡＲ－Ｔ細胞の前記用量は細胞約１．４×１０８個から約７×１０８個分である、請求項３に記載の方法。
【請求項8】
前記対象に投与される前記ＣＡＲ－Ｔ細胞の前記用量は細胞約１．４×１０８個分である、請求項３に記載の方法。
【請求項9】
前記対象に投与される前記ＣＡＲ－Ｔスイッチの用量は体重１ｋｇあたり約０．０１ｍｇ～約０．１ｍｇである、請求項３に記載の方法。
【請求項10】
前記対象に投与される前記ＣＡＲ－Ｔスイッチの用量は体重１ｋｇあたり約０．０１ｍｇ、約０．０２５ｍｇ、約０．０３ｍｇ、約０．０４ｍｇ、約０．０４５ｍｇ、約０．０５ｍｇ、約０．０５５ｍｇ、約０．０６ｍｇ、約０．０６５ｍｇ、約０．０７０ｍｇ、約０．０７５ｍｇ、約０．０８５ｍｇ又は０．０９５ｍｇである、請求項９に記載の方法。
【請求項11】
前記対象に投与される前記ＣＡＲ－Ｔスイッチの用量は体重１ｋｇあたり約０．０４５ｍｇ～約０．０７５ｍｇである、請求項９に記載の方法。
【請求項12】
前記対象に投与される前記ＣＡＲ－Ｔスイッチの用量は体重１ｋｇあたり約０．０６ｍｇである、請求項９に記載の方法。
【請求項13】
前記ＣＤ１９陽性悪性腫瘍はＣＤ１９陽性Ｂ細胞癌である、請求項１に記載の方法。
【請求項14】
前記ＣＤ１９陽性悪性腫瘍は再発性／難治性Ｂ細胞悪性腫瘍である、請求項１に記載の方法。
【請求項15】
ヒト対象のＣＤ１９陽性の再発性／難治性Ｂ細胞悪性腫瘍を治療し、前記腫瘍の増殖を阻止しかつ／又は前記腫瘍の退縮を促進する方法であって、（ａ）ＣＡＲ－Ｔ細胞約０．３５×１０８個～約７×１０８個の１回分の用量を前記対象に投与するステップであって、前記ＣＡＲ－Ｔ細胞は配列番号６に示されているＣＡＲ配列を備える、ステップと、（ｂ）各々が（ｉ）約５～約９日間の「オン」フェーズと（ｉｉ）約１４～約２８日間の「オフ」フェーズとを備える１つ以上のサイクル中にＣＡＲ－Ｔスイッチ分子を前記対象に投与するステップであって、前記「オン」フェーズで体重１ｋｇあたり約０．０４５ｍｇ～約０．０７５ｍｇの１日の用量が投与され、前記ＣＡＲ－Ｔスイッチ分子は配列番号１５及び１６としてそれぞれ示されている軽鎖配列及び重鎖配列を備える抗ＣＤ１９ Ｆａｂ抗体を備える、ステップとを含み、これにより、前記対象の前記ＣＤ１９陽性の再発性／難治性Ｂ細胞悪性腫瘍を治療し、前記腫瘍の増殖を阻止しかつ／又は前記腫瘍の退縮を促進する、方法。
【請求項16】
前記ＣＡＲ－Ｔ細胞は前記対象の自家細胞である、請求項１５に記載の方法。
【請求項17】
前記ＣＡＲ－Ｔ細胞の注入用量は細胞約１．４×１０８個分であり、前記「オン」フェーズで注入される前記ＣＡＲ－Ｔスイッチの１日の用量は体重１ｋｇあたり約０．０６ｍｇである、請求項１５に記載の方法。
【請求項18】
前記「オン」フェーズは約７日間であり、前記「オフ」フェーズは約２１日間である、請求項１５に記載の方法。
【請求項19】
ＣＡＲ－Ｔスイッチ注入のサイクルの数は２、３、４、５、６、７又はこれらを超える、請求項１５に記載の方法。
【請求項20】
前記対象は前記ＣＡＲ－Ｔ細胞及び前記スイッチ分子が投与される前にリンパ球枯渇化プレコンディショニングを受ける、請求項１５に記載の方法。
【請求項21】
前記リンパ球枯渇化プレコンディショニングはシクロホスファミド及びフルダラビンを用いる化学療法である、請求項２０に記載の方法。
【請求項22】
前記ＣＤ１９陽性の再発性／難治性Ｂ細胞悪性腫瘍はびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）、有毛細胞白血病（ＨＣＬ）、原発性眼内リンパ腫、バーキットリンパ腫及びワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症からなる群から選択される、請求項１５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連する出願の参照
本特許出願は米国仮特許出願第６３／２８６，８６８号（２０２１年１２月７日に出願され、現在係属中）の優先権を主張するものである。優先権出願の全開示の全体があらゆる目的で参照により本開示に援用される。
本特許出願は米国仮特許出願第６３／２８６，８６８号（２０２１年１２月７日に出願され、現在係属中）の優先権を主張するものである。優先権出願の全開示の全体があらゆる目的で参照により本開示に援用される。
【背景技術】
【0002】
莫大な臨床的利点があるにもかかわらず、ＣＡＲ－Ｔ細胞療法に関連する有害事象が依然として課題となっている。最も頻発する有害事象は患者への投与後に現在のＣＡＲ－Ｔ細胞製品の活性レベルを調整できないことによるサイトカイン放出症候群及び免疫エフェクタ細胞関連神経毒性症候群である。別の課題には、ｏｎ ｔａｒｇｅｔ毒性、ｏｆｆ ｔｕｍｏｒ毒性及び抗原欠損が介在した疾患の再発が含まれる。
【0003】
これらの課題に対処するために、“ｓｗｉｔｃｈａｂｌｅ”ＣＡＲ－Ｔ（ｓＣＡＲ－Ｔ）プラットフォームが開発され、このプラットフォームでは、抗体を用いたスイッチによってｓＣＡＲ－Ｔ細胞の活性が制御される。スイッチは腫瘍抗原を標的とし、ｓＣＡＲはスイッチに埋め込まれた固有のペプチドを認識する。スイッチはｓＣＡＲ－Ｔ細胞と腫瘍細胞との間にブリッジを形成し、ｓＣＡＲ－Ｔ細胞を活性化して腫瘍細胞の殺傷を誘発する。スイッチ細胞とｓＣＡＲ－Ｔ細胞とを組み合せると、異種移植モデルと同種移植モデルとで腫瘍が完全に除去されるが、単独では各々は活性を持たないように設計されている。スイッチの半減期が短いことで、スイッチ投与を通じてｓＣＡＲＴ細胞の活性を素早く調整することができる。さらに、異なるスイッチに交換することで、モジュール方式を用いてｓＣＡＲ－Ｔ細胞を他の腫瘍標的にリダイレクトすることができる。ｓＣＡＲ－Ｔ細胞の周期的なオン／オフ刺激により、ｓＣＡＲ－Ｔ細胞の記憶と持続性が改善されることが示されている。
【0004】
本技術では、ｓＣＡＲ－Ｔプラットフォームをヒト対象の治療に実際に適用することが強く求められている。本発明はこの要求と他の未解決の要求とに対処することを対象とする。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0005】
一態様では、本発明では、ヒト対象のＣＤ１９陽性悪性腫瘍を治療し、腫瘍の増殖を阻止しかつ／又は腫瘍の退縮を促進する方法が提供される。本方法は、（ａ）配列番号２及び３としてそれぞれ示されている軽鎖可変領域及び重鎖可変領域配列を備える抗ＣＤ１９ Ｆａｂ抗体を備えるキメラ抗原受容体Ｔ細胞スイッチ分子（ＣＡＲ－Ｔスイッチ）と、（ｂ）配列番号６に示されているＣＡＲ配列を備える相補的ＣＡＲ－Ｔ細胞とを対象に投与し、これにより、対象のＢ細胞悪性腫瘍を治療し、腫瘍の増殖を阻止しかつ／又は腫瘍の退縮を促進するステップを含む。いくつかの実施形態では、用いられる抗ＣＤ１９Ｆａｂ抗体は配列番号１５及び１６としてそれぞれ示されている軽鎖配列及び重鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、対象には処置の開始時にＣＡＲ－Ｔ細胞の１回分の用量が投与され、処置の期間中にＣＡＲ－Ｔスイッチの複数回分の用量が投与される。これらの実施形態のいくつかでは、対象にはＣＡＲ－Ｔ細胞の１回分の用量が注入され、その後、ＣＡＲ－Ｔスイッチの１回以上の注入サイクルが行なわれる。注入サイクルの各々は約５～約９日間毎日ＣＡＲ－Ｔスイッチを注入する「オン」フェーズと、約１４～約２８日間ＣＡＲ－Ｔを投与しない「オフ」フェーズとを含む。
【0006】
様々な実施形態では、対象に投与されるＣＡＲ－Ｔ細胞の用量は細胞約６０×１０６個、約８０×１０６個、約１００×１０６個、約１２０×１０６個、約１４０×１０６個、約１６０×１０６個、約１８０×１０６個、約２００×１０６個、約３００×１０６個、約４００×１０６個、約５００×１０６個、約６００×１０６個、約７００×１０６個、約８００×１０６個、約９００×１０６個、約１０００×１０６個又はこれらを超える個数分である。いくつかの実施形態では、対象に投与されるＣＡＲ－Ｔ細胞の用量は細胞約０．３５×１０８個から約１４×１０８個分である。これらの実施形態のいくつかでは、対象に投与されるＣＡＲ－Ｔ細胞の用量は細胞約１．４×１０８個から約７×１０８個分である。一実施形態では、対象に投与されるＣＡＲ－Ｔ細胞の用量は細胞約１．４×１０８個分である。
【0007】
本発明のいくつかの方法では、対象に投与されるＣＡＲ－Ｔスイッチの用量は体重１ｋｇあたり約０．０１ｍｇ～約０．１ｍｇである。様々な実施形態では、対象に投与されるＣＡＲ－Ｔスイッチの用量は体重１ｋｇあたり約０．０１ｍｇ、約０．０２５ｍｇ、約０．０３ｍｇ、約０．０４ｍｇ、約０．０４５ｍｇ、約０．０５ｍｇ、約０．０５５ｍｇ、約０．０６ｍｇ、約０．０６５ｍｇ、約０．０７０ｍｇ、約０．０７５ｍｇ、約０．０８５ｍｇ又は０．０９５ｍｇであることが可能である。いくつかの実施形態では、対象に投与されるＣＡＲ－Ｔスイッチの用量は体重１ｋｇあたり約０．０４５ｍｇ～約０．０７５ｍｇである。一実施形態では、対象に投与されるＣＡＲ－Ｔスイッチの用量は体重１ｋｇあたり約０．０６ｍｇである。
【0008】
本発明のいくつかの方法では、治療される対象のＣＤ１９陽性悪性腫瘍はＣＤ１９陽性Ｂ細胞癌である。いくつかの方法では、治療されるＣＤ１９陽性悪性腫瘍は再発性／難治性のＢ細胞悪性腫瘍である。
【0009】
関連する態様では、本発明では、ヒト対象のＣＤ１９陽性の再発性／難治性Ｂ細胞悪性腫瘍を治療し、腫瘍の増殖を阻止しかつ／又は腫瘍の退縮を促進する方法が提供される。本方法は、（ａ）ＣＡＲ－Ｔ細胞約０．３５×１０８個～約７×１０８個の１回分の用量を対象に投与するステップであって、ＣＡＲ－Ｔ細胞は配列番号６に示されているＣＡＲ配列を含む、ステップと、（ｂ）各々が（ｉ）約５～約９日間の「オン」フェーズと（ｉｉ）約１４～約２８日間の「オフ」フェーズとを含む１つ以上の注入サイクル中に、配列番号１５及び１６としてそれぞれ示されている軽鎖配列及び重鎖配列を含む改変抗ＣＤ１９ Ｆａｂ抗体であるＣＡＲ－Ｔスイッチ分子を対象に投与するステップであって、「オン」フェーズで体重１ｋｇあたり約０．０４５ｍｇ～約０．０７５ｍｇの、対象に注入されるＣＡＲ－Ｔの１日の用量が用いられる、ステップとをともなう。好ましくは、投与されるＣＡＲ－Ｔ細胞は対象の自家細胞である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ－Ｔ細胞の注入用量は細胞約１．４×１０８個分であり、「オン」フェーズで注入されるＣＡＲ－Ｔスイッチの１日の用量は体重１ｋｇあたり約０．０６ｍｇである。これらの実施形態のいくつかでは、「オン」フェーズは約７日間であり、「オフ」フェーズは約２１日間である。様々な実施形態では、ＣＡＲ－Ｔスイッチ注入のサイクルの数は２、３、４、５、６、７、８、９、１０又はこれらを超えることが可能である。
【0010】
いくつかの方法では、対象はＣＡＲ－Ｔ細胞及びスイッチ分子が投与される前にリンパ球枯渇化プレコンディショニングを用いて治療される対象である。これらの実施形態のいくつかでは、対象のリンパ球枯渇化プレコンディショニングを、シクロホスファミド及びフルダラビンを用いる化学療法により実現することができる。様々な実施形態では、対象において治療されるＣＤ１９陽性の再発性／難治性Ｂ細胞悪性腫瘍はたとえば、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）、有毛細胞白血病（ＨＣＬ）、原発性眼内リンパ腫、バーキットリンパ腫又はワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症であることが可能である。
【0011】
本発明の性質及び利点のさらなる理解を本明細書及び請求項の残りの部分を参照することによって実現することができる。
【図面の簡単な説明】
【0012】
【図1】ヒト初回（ＦＩＨ）用量を決定するためのＭＡＢＥＬを用いたアプローチによるｉｎ ｖｉｖｏ試験を示す。
【図2】ＣＡＲ－Ｔスイッチ分子ＳＷＩ０１９のヒト等価用量のシミュレーションを示す。
【図3】患者の処置効果を示すＣＴスキャンを示す。
【図4】治療された患者における毒性の解消を示す。
【図5】ｓＣＡＲ－Ｔ療法の用量漸増第Ｉ相試験の概略図である。Ａ．第Ｉ相用量漸増試験の設計。Ｂ．処置スケジュールの概要。
【図6】ｃｌｉｎｉｃａｌ ｕｔｉｌｉｔｙ ｉｎｄｅｘによるＢＡＹＤＥモデルでの用量の推奨を示す。
【発明を実施するための形態】
【0013】
本発明はヒト患者におけるｓｗｉｔｃｈａｂｌｅ ＣＡＲ－Ｔ療法の適切な用量を決定するための、本発明者によってなされた、以下に詳細に説明されている試験に一部基づいている。特に、用量漸増第Ｉ相ヒト臨床試験を通じて、本発明者はいくつかのＣＤ１９陽性悪性腫瘍の処置において、特異性を持つＣＤ１９ターゲティングｓＣＡＲ－Ｔプラットフォームのスイッチ及び対応するＣＡＲ－Ｔ細胞の適切な用量を決定することができた。
【0014】
したがって、本発明では、本開示で説明されているｓＣＡＲ－Ｔプラットフォームを用いて様々な癌、たとえば、ＣＤ１９発現腫瘍に罹患したヒト患者を治療する方法及び投与レジメンが提供される。別段の記載のない限り、本発明は、たとえば、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｕｍｅ ２８９：Ｓｏｌｉｄ－Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊ．Ｎ．Ａｂｅｌｓｏｎ，Ｍ．Ｉ．Ｓｉｍｏｎ，Ｇ．Ｂ．Ｆｉｅｌｄｓ（編集者），Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、１ｓｔ ｅｄｉｔｉｏｎ（１９９７）（ＩＳＢＮ－１３：９７８－０１２１８２１９０６）、米国特許第４，９６５，３４３号及び第５，８４９，９５４号、Ｍａｎｉａｔｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，ＵＳＡ（１９８２）、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（２ｎｄ ｅｄ．），Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，ＵＳＡ（１９８９）、Ｄａｖｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂａｓｉｃ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＵＳＡ（１９８６）、又はＭｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ：Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ Ｖｏｌ．１５２，Ｓ．Ｌ．Ｂｅｒｇｅｒ及びＡ．Ｒ．Ｋｉｍｍｅｒｌ編，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＵＳＡ（１９８７）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ（ＣＰＰＳ）（Ｊｏｈｎ Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ，ｅｔ．ａｌ．，編，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ（ＣＰＣＢ）（Ｊｕａｎ Ｓ．Ｂｏｎｉｆａｃｉｎｏ ｅｔ．ａｌ．編，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．）及びＣｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌｓ：Ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ｂｙ Ｒ．Ｉａｎ Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，出版社：Ｗｉｌｅｙ－Ｌｉｓｓ、５ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ（２００５），Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｍｅｔｈｏｄｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．５７，Ｊｅｎｎｉｅ Ｐ．Ｍａｔｈｅｒ及びＤａｖｉｄ Ｂａｒｎｅｓ編，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１ｓｔ ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９８）に記載されている標準的な手順を用いて実行することができる。
【0015】
以下の記載箇所では、本発明の組成物及び方法を実施するための基本的説明をさらに記載する。
【0016】
Ｉ．定義
別段の定義のない限り、本開示で用いられているすべての技術用語及び科学用語は、本発明が関係する技術の当業者によって一般に理解される意味と同じ意味を持つ。本発明で用いられている多くの用語の一般的な定義については、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｍｏｒｒｉｓ（編集），Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ（１ｓｔ ｅｄ．，１９９２）、Ｏｘｆｏｒｄ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．（編集），Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ（改訂版，２０００）、Ｅｎｃｙｃｌｏｐａｅｄｉｃ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｋｕｍａｒ（編集），Ａｎｍｏｌ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ Ｐｖｔ．Ｌｔｄ．（２００２）、Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ ｅｔ ａｌ．（編集），Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（３ｒｄ ｅｄ．，２００２）、Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｈｕｎｔ（編集），Ｒｏｕｔｌｅｄｇｅ（１ｓｔ ｅｄ．，１９９９）、Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｎａｈｌｅｒ（編集），Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ Ｔｅｌｏｓ（１９９４）、Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｋｕｍａｒ及びＡｎａｎｄａｎｄ（編集），Ａｎｍｏｌ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ Ｐｖｔ．Ｌｔｄ．（２００２）、並びにＡ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｏｘｆｏｒｄ Ｐａｐｅｒｂａｃｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ），Ｍａｒｔｉｎ及びＨｉｎｅ（編集），Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ（４ｔｈ ｅｄ．，２０００）を参照して当業者は理解する。以下、本発明に特に適用される当該用語のいくつかをさらに詳細に説明する。
別段の定義のない限り、本開示で用いられているすべての技術用語及び科学用語は、本発明が関係する技術の当業者によって一般に理解される意味と同じ意味を持つ。本発明で用いられている多くの用語の一般的な定義については、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｍｏｒｒｉｓ（編集），Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ（１ｓｔ ｅｄ．，１９９２）、Ｏｘｆｏｒｄ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．（編集），Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ（改訂版，２０００）、Ｅｎｃｙｃｌｏｐａｅｄｉｃ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｋｕｍａｒ（編集），Ａｎｍｏｌ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ Ｐｖｔ．Ｌｔｄ．（２００２）、Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ ｅｔ ａｌ．（編集），Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（３ｒｄ ｅｄ．，２００２）、Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｈｕｎｔ（編集），Ｒｏｕｔｌｅｄｇｅ（１ｓｔ ｅｄ．，１９９９）、Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｎａｈｌｅｒ（編集），Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ Ｔｅｌｏｓ（１９９４）、Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｋｕｍａｒ及びＡｎａｎｄａｎｄ（編集），Ａｎｍｏｌ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ Ｐｖｔ．Ｌｔｄ．（２００２）、並びにＡ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｏｘｆｏｒｄ Ｐａｐｅｒｂａｃｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ），Ｍａｒｔｉｎ及びＨｉｎｅ（編集），Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ（４ｔｈ ｅｄ．，２０００）を参照して当業者は理解する。以下、本発明に特に適用される当該用語のいくつかをさらに詳細に説明する。
【0017】
本開示及び添付の請求項で用いられている単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は文脈上別段の明示がない限り、複数の指示対象を含むことに留意する。さらに、請求項を、一切の適宜選択可能な要素を除外するように作成することができることにも留意する。したがって、この記載は請求項の要素の記載又は「否定的な」限定の使用に関連して、「唯一」、「のみ」などの排他的な用語を用いるための前提として用いられることを意図している。
【0018】
用語「抗体」は通常、所定の抗原、１つ以上のエピトープに対する強い一価、二価又は多価の結合を示す１つ以上のポリペプチド鎖を指す。別段の断りのない限り、本発明で用いられる抗体又は抗体フラグメントは、特定の抗原結合活性を持たないいくつかの免疫グロブリン分子又はバリアント抗体、たとえば触媒抗体も含む。免疫グロブリンｓは任意の脊椎動物種に由来する配列を持つことができる。これらを任意の適切な技術を用いて生成することができ、たとえば、ハイブリドーマ技術、リボソームディスプレイ、ファージディスプレイ、遺伝子シャッフリングライブラリ、半合成若しくは完全合成ライブラリ又はこれらの組合せを用いて生成することができる。別段の断りのない限り、本発明で用いられている用語「抗体」は、インタクト抗体、抗体フラグメント、及び以下で説明されていたり当該技術で公知であったりする他のデザイナ抗体を含む（たとえば、Ｓｅｒａｆｉｎｉ，Ｊ Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．３４：５３３－６，１９９３を参照）。
【0019】
インタクト「抗体」は通常、ジスルフィド結合によって相互に接続された少なくとも２つの重鎖（Ｈ鎖）（約５０～７０ｋＤ）と２つの軽鎖（Ｌ鎖）（約２５ｋＤ）とを備える。抗体の連鎖をコードする免疫グロブリン遺伝子として認識されているものには、κ、λ、α、γ、δ、ε及びμ定常領域遺伝子と無数の免疫グロブリン可変領域遺伝子とが含まれる。軽鎖はκ又はλのいずれかに分類される。重鎖はγ、μ、α、δ又はεに分類され、これらによって免疫グロブリンのクラスＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ及びＩｇＥがそれぞれ定められる。
【0020】
抗体の各重鎖は重鎖可変領域（ＶＨ）と重鎖定常領域とで構成される。ほとんどのＩｇＧアイソタイプ（サブクラス）の重鎖定常領域はＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３の３つのドメインで構成され、ＩｇＭやＩｇＥのようないくつかのＩｇＧアイソタイプは４番目の定常領域ドメインＣＨ４で構成される。各軽鎖は軽鎖可変領域（ＶＬ）と軽鎖定常領域とで構成される。軽鎖定常領域は１つのドメインＣＬで構成される。重鎖及び軽鎖の可変領域は抗原と相互作用する結合ドメインを含む。抗体の定常領域は免疫系の様々な細胞と、古典的な補体系の第１成分（Ｃｌｑ）とを含む宿主の組織や因子に対する免疫グロブリンの結合を媒介することができる。
【0021】
抗体のＶＨ領域とＶＬ領域とは相補性決定領域（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｒｅｇｉｏｎ：ＣＤＲ）とも呼ばれる超可変領域にさらに細分化され、超可変領域にはより保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）が点在する。各ＶＨ及びＶＬは３つのＣＤＲと４つのＦＲとで構成され、これらはアミノ末端からカルボキシル末端に向かってＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順で配置されている。ＣＤＲ領域及びＦＲ領域の位置及び採番体系はたとえば、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｕ．Ｓ．Ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ Ｐｒｉｎｔｉｎｇ Ｏｆｆｉｃｅ（１９８７年及び１９９１年）によって定められている。
【0022】
本開示で用いられている抗体フラグメント（又は抗体の抗原結合フラグメント）は、他の非免疫グロブリンを考えたときの、少なくとも１つの抗体由来のＶＨ、ＶＬ若しくはＣＨ免疫グロブリンドメイン又は抗体以外を由来とする成分を含む任意のタンパク質又はポリペプチドを指す。このような分子は（ｉ）免疫グロブリンＣＨドメインの全部若しくは一部を持つ受容体若しくは受容体成分を含む結合タンパク質のＦｃ融合タンパク質、（ｉｉ）ＶＨ及び若しくはＶＬドメインが別の分子足場に結合されている結合タンパク質、又は（ｉｉｉ）免疫グロブリンＶＨ及び／若しくはＶＬ及び／若しくはＣＨドメインが、天然に存在する抗体若しくは抗体フラグメントには通常見られない仕方で組み合されかつ／若しくは組み立てられる分子を含むが、これらに限定されない。
【0023】
ヒト以外（たとえばげっ歯類（たとえばマウスやウサギ））の免疫グロブリンの「ヒト化」形態はヒト以外の免疫グロブリンに由来する最小配列を含む免疫グロブリンである。ほとんどの部分について、ヒト化免疫グロブリンは、レシピエントの超可変領域の残基が、所望の特異性、親和性及び能力を持つマウス、ラット、ハムスタ、ウサギ、ニワトリ、ウシやヒト以外の霊長類などのヒト以外の種の超可変領域の残基（ドナー抗体）に置き換えられたヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。場合によっては、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基も、対応するヒト以外の残基に置き換えられる。さらに、ヒト化抗体はレシピエント抗体にもドナー抗体にも見られない残基を備えることができる。これらの変更は抗体の性能をさらに向上させるために行なわれる。一般的に、ヒト化免疫グロブリンは少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインのほぼすべてを備え、超可変ループのすべて又はほぼすべてがヒト以外の免疫グロブリンの超可変ループに対応し、ＦＲ領域のすべて又はほぼすべてがヒト免疫グロブリン配列のＦＲ領域である。ヒト化免疫グロブリンは、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部も備えてもよく、典型的にはヒト免疫グロブリンの少なくとも一部を備えてもよい。さらなる詳細についてはＪｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－５２５、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２９及びＰｒｅｓｔａ（１９９２）Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３－５９６を参照する。
【0024】
本開示で用いられている用語「ヒト免疫グロブリン」はヒト生殖細胞免疫グロブリン配列に由来する可変領域及び定常領域を有する免疫グロブリンを含むことを意図している。本発明のヒト免疫グロブリンはたとえばＣＤＲ、特にＣＤＲ３において、ヒト生殖細胞免疫グロブリン配列によってコードされていないアミノ酸残基（たとえば、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのランダム特異的突然変異誘発や部位特異的突然変異誘発によって導入されたりｉｎ ｖｉｖｏでの体細胞突然変異によって導入されたりする突然変異体）を含むことができる。ただし、本開示で用いられている用語「ヒト免疫グロブリン」は、マウスなどの別の哺乳動物種の生殖細胞に由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列に移植されている免疫グロブリンを含むことは意図していない。
【0025】
リンパ球除去（ＬＤ）化学療法又はリンパ球除去プレコンディショニングは、内在性Ｔ細胞（及びＴｒｅｇ）を枯渇させることで、内在性Ｔ細胞が注入されるＣＡＲ－Ｔ細胞と拮抗し／これを抑制し、注入されるＣＡＲ－Ｔ細胞を拡大／増殖させようとしないように、ＣＡＲ－Ｔ細胞注入前に対象に施される治療を指す。ＬＤプレコンディショニングの一例は対象にフルダラビン＋シクロホスファミド（ＦｌｕＣｙ）を投与することである。
【0026】
「特異的結合」又は「特異的に結合する」又は「に特異的」であるという用語は、免疫グロブリンや低分子薬品が標的分子や抗原（たとえば、特定のポリペプチド、ペプチドやその他標的（たとえば、糖タンパク質標的）上のエピトープ）に結合することなど、結合部分が結合標的に結合することを指し、特異的でない相互作用と測定可能な程度の差がある結合を意味する（たとえば、特異的でない相互作用はウシ血清アルブミンやカゼインに対する結合であることが可能である）。特異的結合については、たとえば、結合部分（たとえば低分子薬品）すなわち免疫グロブリンの標的分子に対する結合を、制御分子に対する結合と比較して決定することによって測定することができる。たとえば、標的に類似する制御分子（たとえば、標識のない標的が過剰にある）と競合させることによって特異的結合を決定することができる。この場合、標識のある標的のプローブに対する結合が標識のない過剰な標的によって競合的に阻害される場合、特異的結合が示される。
【0027】
特定の標的分子や、特定の標的分子上のエピトープに対する「特異的結合」又は「特異的に結合する」又は「特異的」であるという用語は、たとえば、標的に対するＫｄが少なくとも約２００ｎＭ又は少なくとも約１５０ｎＭ又は少なくとも約１００ｎＭ又は少なくとも約６０ｎＭ又は少なくとも約５０ｎＭ又は少なくとも約４０ｎＭ又は少なくとも約３０ｎＭ又は少なくとも約２０ｎＭ又は少なくとも約１０ｎＭ又は少なくとも約８ｎＭ又は少なくとも約６ｎＭ又は少なくとも約４ｎＭ又は少なくとも約２ｎＭ又は少なくとも約１ｎＭ又はこれらを超える分子によって示すことができるものである。特定の場合には、用語「特異的結合」は、結合部分が特定の標的分子や、標的分子上のエピトープに結合し、その他一切の分子やエピトープにほぼ結合しない結合を指す。
【0028】
本開示では、用語「融合」は、出所の異なるアミノ酸配列を、これらをコードするヌクレオチド配列をフレーム内で組み合せることによって組み合せて１つのポリペプチド鎖にすることを指すのに用いられる。用語「融合」は、ポリペプチド鎖の末端の１つに対する融合に加えて、内部融合、すなわち、出所の異なる配列をポリペプチド鎖内に挿入することを明示的に含む。本開示では、用語「融合」は出所の異なるアミノ酸配列を組み合せることを指すのに用いられる。
【0029】
用語「エピトープ」は、免疫グロブリンに特異的に結合することができるあらゆる分子決定因子を含む。いくつかの態様では、エピトープ決定因子は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリルやスルホニルなどの分子の化学的に活性な表面群を含み、また、いくつかの態様では、特定の三次元構造特性及び／又は特定の電荷特性を持つことができる。エピトープは免疫グロブリンが結合する抗原の領域である。「結合領域」は結合分子が結合する結合標的上の領域である。
【0030】
用語「標的」又は「結合標的」は最も広い意味で用いられ、特にポリペプチドを含み、また、核酸、炭水化物、脂質、細胞、及び自然界に存在する生物学的機能を持ったり持たなかったりするその他の分子を含むが、これらに限定されない。いくつかの特定の実施形態では、用語「標的」は標的細胞、たとえば腫瘍細胞上の細胞表面の分子を指す。
【0031】
用語「抗原」は、免疫グロブリンに結合したり細胞免疫反応を引き起こしたりすることができる物質又はそのフラグメントを指す。免疫原は、有機体の免疫反応、具体的には動物の免疫反応、より具体的には、ヒトを含む哺乳動物の免疫反応を誘発することができる抗原を指す。用語「抗原」は上記で定義されている抗原決定基すなわちエピトープとして知られている領域を含む。
【0032】
核酸は別の核酸配列と機能的な関係にある場合に「機能的にリンクされている」。たとえば、プレ配列や分泌リーダのＤＮＡがポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現される場合に当該ＤＮＡがポリペプチドのＤＮＡに機能的にリンクされたり、プロモータ又はエンハンサが配列の転写に影響を及ぼす場合に当該プロモータ又はエンハンサがコード配列に機能的にリンクされたり、リボソーム結合部位が翻訳を容易にするように配置される場合に当該リボソーム結合部位がコード配列に機能的にリンクされたりする。一般的に、「機能的にリンクされている」は、リンクされているＤＮＡ配列が連続していることを意味し、分泌リーダの場合、連続しておりかつ読取りフレーム内にあることを意味する。ただし、エンハンサは連続している必要はない。リンクは都合の良い制限部位での連結によって実現される。このような部位が存在しない場合、従来の仕方にしたがって合成オリゴヌクレオチドアダプタ又はリンカが用いられる。
【0033】
ペプチド配列又はポリペプチド配列、すなわち、本開示で特定されているｓｃＦＶ抗体ポリペプチド配列又はＧＣＮ４由来のペプチドに対する「パーセント（％）アミノ酸配列一致率（ｐｅｒｃｅｎｔ（％）ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｉｄｅｎｔｉｔｙ）」は、配列のアライメントを行ない、必要に応じてギャップを導入して最大パーセント配列一致率を実現し、いかなる従来の置換も配列一致率の一部として考慮しなかった後に、特異性を持つペプチド配列又はポリペプチド配列内のアミノ酸残基と同一である配列候補内のアミノ酸残基の割合として定義される。アミノ酸配列一致率のパーセントを決定するためのアライメントを、たとえば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮやＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公用のコンピュータソフトウェアを用いて当該技術の技術範囲内の様々な仕方で実現することができる。比較される配列の全長にわたる最大限のアライメントを実現するのに必要なアルゴリズムを含め、アライメントを測定するための適切なパラメータを当業者は決定することができる。２つの配列は、比較ウィンドウ、すなわち、公知の配列比較アルゴリズムの１つを用いて測定される指定領域にわたって最大の対応関係が構築された状態や、手動のアライメントと目視検査によって最大の対応関係が構築された状態で比較及びアライメントを行なったときに、２つの配列の同じアミノ酸残基又はヌクレオチドの割合が指定された割合である（すなわち、指定された領域（指定のない場合は配列全体）にわたって６０％の一致率である（６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％や９９％の一致率であってもよい））場合、「実質的に同一」である。
【0034】
「治療」又は「処置」は、治療的処置と予防的又は防止的措置との両方を指し、その目的は対象となる病状や障害の進行を止めたり遅らせ（軽減）たりすることである。処置を必要とする対象には、既に障害を抱えている対象だけでなく、障害を抱え易い対象や、障害の進行を止めるべき対象も含まれる。たとえば、対象又は哺乳動物が本発明の処置を受けた後、癌細胞数の減少若しくは癌細胞の消失、腫瘍サイズの減少、癌の軟部組織及び骨への拡散を含む周囲の器官への癌細胞の浸潤の抑制（すなわち、所定程度遅らせること、好ましくは、止めること）、腫瘍転移の抑制（すなわち、所定程度遅らせること、好ましくは、止めること）、腫瘍増殖の所定程度の抑制、並びに／又は特定の癌に関連する１つ以上の症状の所定程度の緩和、罹患率及び／若しくは死亡率の低下及び生活の質の問題の改善の１つ以上について減少を観察及び／又は測定することができたり消失したりすることが対象に見られる場合、対象又は哺乳動物の癌の「治療」が成功する。
【0035】
用語「保存的に改変されたバリアント」はアミノ酸配列と核酸配列との両方に適用される。特定の核酸配列に関して、保存的に改変されたバリアントは、同一又は本質的に同一のアミノ酸配列をコードする核酸を指したり、核酸がアミノ酸配列をコードしていない場合は本質的に同一の配列を指したりする。遺伝コードが縮重しているので、いずれのタンパク質も多数の機能的に同一の核酸によってコードされる。たとえば、コドンＧＣＡ、ＧＣＣ、ＧＣＧ及びＧＣＵはすべてアミノ酸アラニンをコードする。したがって、コドンによってアラニンが指定されているすべての位置で、コードされたポリペプチドを変更することなく、コドンを、記載されている対応するコドンのいずれかに変更することができる。このような核酸多様性は「サイレント多様性」と呼ばれ、保存的に改変された多様性の一種である。ポリペプチドをコードする本開示のすべての核酸配列が核酸のあらゆる可能なサイレント多様性も記述する。核酸内の各コドン（通常メチオニンの唯一のコドンであるＡＵＧと、通常トリプトファンの唯一のコドンであるＴＧＧとを除く）を改変して機能的に同一の分子を生成することができることを当業者であれば理解する。したがって、ポリペプチドをコードする核酸の各サイレント多様性は記述されている各配列に暗黙的に含まれる。
【0036】
ポリペプチド配列の場合、「保存的に改変されたバリアント」は、保存的アミノ酸置換がなされたバリアント、すなわち、アミノ酸残基が同様の電荷を持つ側鎖を有する他のアミノ酸残基に置き換えられたバリアントを指す。当該技術では類似の電荷を持つ側鎖を有するアミノ酸残基のファミリが定められている。これらのファミリは、塩基性側鎖（たとえば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（たとえば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、極性無電荷側鎖（たとえば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（たとえば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β分岐側鎖（たとえば、トレオニン、バリン、イソロイシン）、芳香族側鎖（たとえば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸を含む。
【0037】
用語「接触」はそれについての標準的な意味を持ち、２つ以上の薬品（たとえば、ポリペプチドやファージ）を組み合せること、薬品と細胞とを組み合せること又は異なる細胞の２つの集団を組み合せることを指す。接触はｉｎ ｖｉｔｒｏで生じる場合があり、たとえば、抗体と細胞とを混合したり、試験管や増殖培地内で抗体の集団と細胞の集団とを混合したりする。接触は細胞内すなわちｉｎ ｓｉｔｕでも生じる場合があり、たとえば、２つのポリペプチドをコードする組換えポリヌクレオチドの細胞内での共発現によって２つのポリペプチドを細胞内で接触させたり、細胞溶解物内で２つのポリペプチドを接触させたりする。接触は対象の内部でｉｎ ｖｉｖｏで生じる場合もあり、たとえば、薬品を標的細胞に送達するために対象に薬品を投与することによって生じる場合がある。
【0038】
用語「対象」は多くの場合、ヒトとヒト以外の動物（特にヒト以外の哺乳動物）との両方を指す。別段の断りのない限り、開示されている治療法に関する場合は当該用語はヒト患者を指す方が優先される。
【0039】
人工Ｔ細胞受容体（キメラＴ細胞受容体、キメラ免疫受容体、キメラ抗原受容体（ｃｈｉｍｅｒｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ：ＣＡＲ）やＴ－ｂｏｄｙとしても知られている）は、免疫エフェクタ細胞に任意の特異性を組み込む遺伝子改変受容体（ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）である。通常、当該受容体はモノクローナル抗体の特異性をＴ細胞に組み込むのに用いられ、そのコード配列の移動はレトロウイルス若しくはレンチウイルスベクタ又はトランスポゾンによって促進される。ＣＡＲ遺伝子改変Ｔ細胞（本開示ではＣＡＲ－Ｔ細胞やＣＡＲ＋Ｔ細胞とも略記）は、細胞外認識部位が抗体由来の認識ドメインで構成され、細胞内領域が１つ以上のリンパ球刺激部分に由来するキメラ受容体を備えた遺伝子的に改変されたＴ細胞である。試作段階のＣＡＲの構造はモジュール式の構造であり、様々な機能ドメインに収容することで、Ｔ細胞の特異性の選択と活性化の制御とを可能にするように設計されている。好ましい抗体由来の認識部位は、モノクローナル抗体の重鎖可変領域と軽鎖可変領域との両方の特異性と結合残基とを組み合せる単鎖可変フラグメント（ｓｉｎｇｌｅ ｃｈａｉｎ ｖａｒｉａｂｌｅ ｆｒａｇｍｅｎｔ：ｓｃＦｖ）である。最も一般的なリンパ球活性化部分には、Ｔ細胞誘発部分（たとえばＣＤ３ｚｅｔａ）と直列するＴ細胞共刺激（たとえば、ＣＤ２８及び／又は４－１ＢＢ）ドメインが含まれる。このようなキメラ受容体をエフェクタリンパ球（Ｔ細胞やナチュラルキラー細胞など）に設けることにより、既定の特異性により任意の所望の標的抗原に遺伝子改変細胞がＨＬＡ拘束のない仕方でリダイレクトされる。特定の患者の末梢リンパ球から採取したＴ細胞にＣＡＲコンストラクトがｅｘ ｖｉｖｏでレトロウイルス若しくはレンチウイルスベクタ又はトランスポゾンを用いて導入される。得られたＣＡＲ遺伝子改変Ｔ細胞を患者に注入するのに続いて、当該Ｔ細胞は移動して標的部位に達し、標的細胞や標的組織と相互作用すると、活性化を経て既定のエフェクタ機能を発揮する。ＣＡＲアプローチの治療標的には、癌及びＨＩＶ感染細胞又は自己免疫エフェクタ細胞が含まれる。
【0040】
「ベクタ」はプラスミド、ファージ、コスミドなどのレプリコンであり、これに別のポリヌクレオチドセグメントを取り付けることで、取り付けられたセグメントの複製を引き起こすことができる。１つ以上のポリペプチドを対象としてコードする遺伝子の発現を誘導することができるベクタを「発現ベクタ」と称する。
【0041】
本開示で用いられる場合、ｓＣＡＲ－ＴプラットフォームはＣＡＲ－Ｔスイッチ分子及び相補的ＣＡＲ－Ｔ細胞（本開示で用いられる際、ｓＣＡＲ－Ｔ細胞とも称する）を指す。ＣＡＲ－Ｔスイッチ分子（ＣＡＲ－Ｔスイッチ）は、標的細胞（たとえば腫瘍細胞）の表面上の標的分子に特異的に結合することができるターゲティング部分（たとえば、抗体や、その抗原結合フラグメント）を含む。ＣＡＲ－Ｔスイッチは相補的ＣＡＲ－Ｔ細胞のＣＡＲに結合することもできる。通常、ＣＡＲ－Ｔ細胞のＣＡＲの細胞外ドメインは、ＣＡＲ－ＴスイッチのＣＡＲ－ＩＤドメイン（たとえば、ペプチドや低分子）を特異的に認識する抗体部分（たとえばｓｃＦｖ）を含む。
【0042】
ＩＩ．ヒト患者を治療するためのｓｗｉｔｃｈａｂｌｅ ＣＡＲ－Ｔプラットフォーム
本発明では、様々な癌、腫瘍や悪性腫瘍に罹患したヒト患者を治療するためのｓＣＡＲ－Ｔ療法が提供される。いくつかの実施形態では、本方法は患者のＣＤ－１９陽性悪性腫瘍の症状を治療又は改善することを意図している。関連する実施形態では、本発明の新規の療法は対象の腫瘍の退縮を促進しかつ／又は腫瘍の増殖を阻止することを対象とする。いくつかの実施形態では、本発明の療法で治療される対象にリンパ球除去化学療法（別名はＬＤプレコンディショニング）を用いてプレコンディショニングがなされる。このＬＤプレコンディショニングは、対象にＣＡＲ－Ｔ細胞を実際に注入することが可能である前に必須のステップである。これにより、ｉｎ ｖｉｖｏでのＣＡＲ Ｔ細胞の拡大及び生存に「好ましい（ｆａｖｏｒａｂｌｅ）」環境が生成され、制御性Ｔ細胞を排除することによってこの環境が生成される可能性が高い。ＬＤプレコンディショニングにより、腫瘍の免疫原性を向上させて疾患の制御を改善することができる。野生型Ｔ細胞との競合がなくなるとともに、生存／増殖促進サイトカイン、すなわちインターロイキン（ＩＬ）－７及びＩＬ－１５が増加することにより、養子移入されたＴ細胞の恒常性増殖を促進するようにＬＤプレコンディショニングが働くことが示されている。治療前のリンパ球枯渇化プレコンディショニングを当該技術で周知の方法、たとえば、本開示で例示されているシクロホスファミド及びフルダラビンコンディショニング化学療法によって容易に実行することができる。たとえば、Ｐａｐｌｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｌｅｕｋ Ｒｅｓ Ｒｅｐ．３：２８－３１，２０１４、Ｂｏｔ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １２６：４４２６，２０１５、Ｈｉｒａｙａｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １３３：１８７６－１８８７，２０１９、Ｈａｙ及びＴｕｒｔｌｅ，Ｄｒｕｇｓ ７７：２３７－２４５，２０１７並びにＹａｋｏｕｂ－Ａｇｈａ ｅｔ ａｌ．，Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ．１０５：２９７－３１６，２０２０を参照する。
本発明では、様々な癌、腫瘍や悪性腫瘍に罹患したヒト患者を治療するためのｓＣＡＲ－Ｔ療法が提供される。いくつかの実施形態では、本方法は患者のＣＤ－１９陽性悪性腫瘍の症状を治療又は改善することを意図している。関連する実施形態では、本発明の新規の療法は対象の腫瘍の退縮を促進しかつ／又は腫瘍の増殖を阻止することを対象とする。いくつかの実施形態では、本発明の療法で治療される対象にリンパ球除去化学療法（別名はＬＤプレコンディショニング）を用いてプレコンディショニングがなされる。このＬＤプレコンディショニングは、対象にＣＡＲ－Ｔ細胞を実際に注入することが可能である前に必須のステップである。これにより、ｉｎ ｖｉｖｏでのＣＡＲ Ｔ細胞の拡大及び生存に「好ましい（ｆａｖｏｒａｂｌｅ）」環境が生成され、制御性Ｔ細胞を排除することによってこの環境が生成される可能性が高い。ＬＤプレコンディショニングにより、腫瘍の免疫原性を向上させて疾患の制御を改善することができる。野生型Ｔ細胞との競合がなくなるとともに、生存／増殖促進サイトカイン、すなわちインターロイキン（ＩＬ）－７及びＩＬ－１５が増加することにより、養子移入されたＴ細胞の恒常性増殖を促進するようにＬＤプレコンディショニングが働くことが示されている。治療前のリンパ球枯渇化プレコンディショニングを当該技術で周知の方法、たとえば、本開示で例示されているシクロホスファミド及びフルダラビンコンディショニング化学療法によって容易に実行することができる。たとえば、Ｐａｐｌｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｌｅｕｋ Ｒｅｓ Ｒｅｐ．３：２８－３１，２０１４、Ｂｏｔ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １２６：４４２６，２０１５、Ｈｉｒａｙａｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １３３：１８７６－１８８７，２０１９、Ｈａｙ及びＴｕｒｔｌｅ，Ｄｒｕｇｓ ７７：２３７－２４５，２０１７並びにＹａｋｏｕｂ－Ａｇｈａ ｅｔ ａｌ．，Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ．１０５：２９７－３１６，２０２０を参照する。
【0043】
多くの場合、治療される対象（ＬＤ化学療法を受けた後であってもよい）には、対象が罹患している特定の癌、たとえばＣＤ１９陽性Ｂ細胞悪性腫瘍の処置用に設計されたｓｗｉｔｃｈａｂｌｅ ＣＡＲ－Ｔ細胞プラットフォーム（ｓＣＡＲ－Ｔ）が投与される。ｓｗｉｔｃｈａｂｌｅ ＣＡＲ－Ｔ細胞プラットフォームは（ａ）ＣＡＲ－Ｔ細胞のＣＡＲに結合することができ、腫瘍細胞上の細胞表面分子を特異的に標的とするＣＡＲ－Ｔスイッチ（本開示では、ＣＡＲ－Ｔスイッチ分子（ＣＡＲ－ＴスイッチポリペプチドやＣＡＲ－Ｔスイッチ化合物を含む）とも称する）と、（ｂ）スイッチが結合することができるＣＡＲを含む相補的ＣＡＲ－Ｔ細胞とを含む。ヒト対象を治療する場合、投与されるＣＡＲ－Ｔスイッチ及び相補的ＣＡＲ－Ｔ細胞がヒトのもの又はヒト化したものであることが好ましい。たとえば、ＣＡＲがヒト化ポリペプチドであることが可能であり、ＣＡＲが発現するＴ細胞が、ヒト細胞であることが可能である。これらの実施形態のいくつかでは、ヒト化ＣＡＲを発現させるＴ細胞は治療される特定のヒト対象から単離された自家Ｔ細胞である。多くの場合、投与を免疫療法の標準的なプロトコールや、本開示に記載されているより詳細な基本的説明にしたがって実行することができる。いくつかの好ましい実施形態では、ＣＡＲ－Ｔスイッチ及び相補的ＣＡＲ－Ｔ細胞を注入によって対象に投与する。いくつかの実施形態では、本開示で説明されているｓＣＡＲ－Ｔ処置方法を、癌を治療するのに用いられる他の既知の療法や治療薬、たとえば、化学療法、ホルモン療法、放射線療法や手術と組み合せて用いることができる。
【0044】
いくつかの方法では、相補的ＣＡＲ－Ｔ細胞とともに１つ以上のＣＡＲ－Ｔスイッチを治療される対象に投与することができ、これらは腫瘍細胞上の異なる表面分子を標的とする。いくつかの好ましい実施形態では、異なるＣＡＲ－Ｔスイッチ分子が同じＣＡＲ－ＩＤドメインを含み、これにより、異なるスイッチが同じ相補的ＣＡＲ－Ｔ細胞と相互作用することが可能になる。このような処置は不均一性を持つ腫瘍に特に有用である。たとえば、白血病やリンパ腫に罹患している患者を（ａ）ＣＤ１９ターゲティングＣＡＴＲ－ＴスイッチとＣＤ２０又はＣＤ２２ターゲティングスイッチとの両方と、（ｂ）相補的ＣＡＲ－Ｔ細胞とを含む医薬組成物を用いて治療することができる。これらの実施形態では、ＣＡＲ－Ｔスイッチは逐次的に投与したり同時に投与したりすることができる。第１のスイッチが標的とする標的細胞上の第１の細胞表面分子のダウンレギュレーション後に標的細胞上の第２の細胞表面分子を標的とする第２のスイッチを投与してもよい。
【0045】
関連する態様では、本発明の方法を対象のＣＡＲ－Ｔ細胞の移植や拡大に広く用いることができる。通常、対象はＣＡＲ－Ｔ細胞によって治療することが意図されている疾患や症状（たとえば癌）に罹患している対象である。本方法では、（ａ）（ｉ）キメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ｃｈｉｍｅｒｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ ｄｏｍａｉｎ：ＣＡＲ－ＩＤ）と、（ｉｉ）対象が罹患している疾患や症状を発現させる分子（たとえば、腫瘍細胞表面分子）に特異的なターゲティング部分とを含むＣＡＲ－Ｔスイッチと、（ｂ）単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を有する相補的ＣＡＲ－Ｔ細胞であって、ｓｃＦｖが相補的ＣＡＲ－Ｔ細胞のＣＡＲの細胞外ドメインでＣＡＲ－ＩＤに特異的に結合する、相補的ＣＡＲ－Ｔ細胞とが対象に投与される。
【0046】
通常、本発明の方法で用いられるｓｗｉｔｃｈａｂｌｅ ＣＡＲ－Ｔ細胞プラットフォームは１つ以上のＣＡＲ－Ｔスイッチ分子と１つ以上の相補的ＣＡＲ－Ｔ細胞とを含む。いくつかの実施形態では、投与される１つ以上のスイッチとそのＣＡＲ－Ｔ細胞とは互いに補い合う。通常、対象に投与されるＣＡＲ－Ｔスイッチはキメラ抗原受容体相互作用ドメイン（ＣＡＲ－ＩＤ）とターゲティングドメインすなわちターゲティング部分とを含む。ＣＡＲ－ＩＤは相補的ＣＡＲ－Ｔ細胞上のＣＡＲの細胞外ドメインに特異的に結合する。ＣＡＲ－ＩＤがＣＡＲ－Ｔ細胞のＣＡＲによって結合することができるように、ＣＡＲ－ＴスイッチのＣＡＲ－ＩＤは、本開示で説明されているターゲティング部分（たとえば、抗ＣＤ１９抗体やその抗原結合部分）と融合したり接合したりそれ以外の仕方で取り付けたりすることができる任意の物質である。たとえば、ＣＡＲ－ＩＤはＣＡＲ結合タンパク質、ＣＡＲ結合ペプチド、ＣＡＲ結合低分子であってもよい。いくつかの好ましい実施形態では、ＣＡＲ－ＩＤは酵母転写因子ＧＣＮ４ペプチド又はその誘導体若しくは相同体を含む。たとえば、Ｈｉｎｎｅｂｕｓｃｈ及びＦｉｎｋ，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８０：５３７４－８，１９８３、Ａｒｎｄｔ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８３：８５１６－２０，１９８６、国際公開第２０１５／０５７８３４号並びに国際公開第２０１５／０５７８５２号を参照する。これらの実施形態のいくつかでは、酵母転写因子ＧＣＮ４ペプチドはＢｅｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ．ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ ４５０：１４９－１５３，１９９及びＺａｈｎｄ，Ｃ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９：１８８７０－１８８７７，２００４に記載されているようなＧＣＮ４（７Ｐ１４Ｐ）ペプチド配列又はエピトープを含む。例として、ＣＡＲ－ＩＤ内のＧＣＮ４由来のペプチドは配列ＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＫＬ（配列番号１）又は配列ＲＭＫＱＬＥＰＫＶＥＥＬＬＰＫＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＫＬＶＧＥＲ（配列番号１３）を含むことができる。
【0047】
用いられるＣＡＲ－Ｔスイッチのターゲティング部分は標的腫瘍細胞の表面に存在する任意の標的分子、たとえば、本開示で例示されているＣＤ１９に結合することができる。標的分子は抗原を含むことができることが好ましい。様々な実施形態では、標的分子はタンパク質、脂質部分、糖タンパク質、糖脂質、炭水化物、多糖類、核酸、ＭＨＣ結合ペプチドやこれらの組合せであることが可能である。いくつかの好ましい実施形態では、ターゲティング部分はターゲティング抗体やその抗原結合フラグメントなどのターゲティングポリペプチドである（たとえば、本開示で例示されているＦａｂ）。ターゲティング抗体はヒト抗体、完全ヒト抗体、ヒト化抗体、ヒト遺伝子改変抗体、ヒト以外の抗体及び／又はキメラ抗体であることが可能である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ－Ｔスイッチに用いられるヒト以外の抗体をヒト化して、親のヒト以外の抗体の特異性及び親和性を保持しつつ、ヒトに対する免疫原性を抑えることができる。ヒト患者を治療する場合、ターゲティング抗体はヒト化抗体又はヒト抗体であることが好ましい。様々な実施形態では、ターゲティング抗体は腫瘍細胞上の異なる標的分子、たとえば、ＣＤ１９、Ｈｅｒ２、ＣＬＬ１、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＳ１、ＢＣＭＡ、ＣＥＡやこれらのフラグメントに特異的に結合することができる。
【0048】
いくつかの好ましい実施形態では、ＣＡＲ－Ｔスイッチのターゲティング部分はヒト化重鎖配列及び／又はヒト化軽鎖配列を含む抗体又は抗原結合フラグメントである。本発明の方法に用いるために使用及び／又はヒト化することができる腫瘍ターゲティングＣＡＲ－Ｔスイッチのいくつかの具体的な例がたとえば、ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０５７４６０、ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０６０７１３、ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０６０６８４、ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０２４５２４、ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０２７９９７及びＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０２７９９０に記載されている。
【0049】
いくつかの実施形態では、ＣＡＲ－ＩＤとターゲティング部分とが融合する。これらの実施形態のいくつかでは、ＣＡＲ－ＩＤの構造成分（たとえばペプチド末端）がポリペプチドターゲティング部分（たとえば、ヒト化抗ＣＤ１９抗体やその抗原結合フラグメント）の末端につなげられたりリンクされたりする。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ－ＩＤとターゲティング部分とがリンカを介して融合する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ－ＩＤがターゲティング部分に部位特異的に取り付けられる。部位特異的取付けは、ターゲティング部分上の所定の部位、たとえば、本開示で例示されているスイッチ分子にあるようなターゲティング抗体の軽鎖Ｎ末端にＣＡＲ－ＩＤを取り付けることをともなってもよい。いくつかの実施形態では、部位特異的取付けは、ターゲティング部分の天然以外のアミノ酸にＣＡＲ－ＩＤを取り付けることをともなってもよい。具体的な例として、本発明の方法で用いられるＣＡＲ－ＴスイッチはＣＤ１９ターゲティング分子ＳＷＩ０１９である。これは、ＧＧＧＧＳ（配列番号１４）リンカを介してヒト化抗ＣＤ１９ Ｆａｂ分子の軽鎖のＮ末端と融合するＧＣＮ４由来のペプチドＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＫＬ（配列番号１）を含む改変Ｆａｂ抗体である。Ｆａｂ分子の得られたＧＣＮペプチド融合軽鎖可変領域配列は示されている配列番号２である。この軽鎖配列に加えて、ＳＷＩ０１９スイッチ（改変Ｆａｂ分子）は配列番号３に示されている重鎖可変領域配列も有する。定常領域を含めて、ＳＷＩ０１９の軽鎖配列及び重鎖配列がそれぞれ配列番号１５及び１６に示されている。このＣＡＲ－Ｔスイッチの構造のより詳細な情報はたとえば、米国特許第１１，１７４，３０６号及びＲｏｄｇｅｒｓ ＤＴ，ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ，２０１６；１１３（４）：Ｅ４５９－６８に記載されている。
【0050】
ＣＡＲ－Ｔスイッチとともに、癌の処置のために相補的ＣＡＲ－Ｔ細胞も対象に投与される。通常、ＣＡＲ－Ｔ細胞は、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む。細胞外ドメインは、用いられるＣＡＲ－ＴスイッチのＣＡＲ－ＩＤ（たとえば、ＧＣＮ４、Ｆｌａｇ、Ｋ４やＥ４ペプチドや、ＦＩＴＣなどの低分子）に特異的に結合することができる。いくつかの好ましい実施形態では、ＣＡＲの細胞外ドメインはスイッチのＣＡＲ－ＩＤに結合する抗体又は抗体フラグメント（たとえばｓｃＦｖ）を含む。抗体はヒト抗体、完全ヒト抗体、ヒト化抗体、ヒト遺伝子改変抗体、ヒト以外の抗体及び／又はキメラ抗体であってもよい。ヒト患者を治療するためには、ＣＡＲ－Ｔ細胞のＣＡＲの抗体がヒト抗体又はヒト化抗体であることが好ましい。ＣＡＲ－Ｔ細胞のＣＡＲにいくつかの既知のタンパク質膜貫通ドメインを用いることができる。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインはＣＤ８又はＣＤ２８の膜貫通ドメインであることが可能である。多くの場合、細胞内シグナル伝達ドメインがＣＤ３ζ、ＦｃＲ－γ、Ｓｙｋ－ＰＴなどのシグナル伝達ドメインと、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＣＤ１３４などの共シグナル伝達ドメインとを含むことができる。いくつかの実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは（ａ）ＣＤ３ζドメインに加えて、（ｂ）ＣＤ２８ドメイン、４－１ＢＢドメイン又はＣＤ２８ドメインと４－１ＢＢドメインとの両方を含むことができる。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインと膜貫通ドメインとを接続するヒンジ領域がＣＡＲに存在する。
【0051】
用いられるＣＡＲ－ＴスイッチのＣＡＲ－ＩＤに応じて、様々なＣＡＲ－ＩＤ結合部分が相補的ＣＡＲ－Ｔ細胞の細胞外ドメインに存在することが可能である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲの細胞外ドメインは酵母転写因子ＧＣＮ４又はそのフラグメントを認識する抗体又は抗体フラグメントを含むことができる。たとえば、Ｒｏｄｇｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ１１３：Ｅ４５９－Ｅ４６８，２０１６を参照する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ－Ｔ細胞のＣＡＲの細胞外ドメインは抗フルオレセインイソチオシアネート（ａｎｔｉ－ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ：ＦＩＴＣ）抗体又はそのＦＩＴＣ結合部分を含むことができる。抗ＦＩＴＣ抗体が抗ＦＩＴＣ ｓｃＦｖであることが可能である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ－Ｔ細胞のＣＡＲの細胞外ドメインは合成ペプチド（天然には存在しないペプチド）を認識する抗体又はフラグメントを含むことができる。たとえば、ＣＡＲの抗体はＦＬＡＧ（登録商標）タグ又はそのフラグメントを特異的に認識する抗体であることが可能である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲの細胞外ドメインは抗ＨＴＰ抗体又はそのフラグメントを含むことができる。
【0052】
ヒト対象を治療する場合、投与されるＣＡＲ－Ｔ細胞のＣＡＲはヒトに対する免疫原性を抑えるために当然ヒトのＣＡＲ又はヒト化されているＣＡＲであることが好ましい。いくつかの実施形態では、投与されるＣＡＲ－Ｔ細胞のＣＡＲの細胞外ドメインは同時に投与されるスイッチのＣＡＲ－ＩＤに結合するヒト化ｓｃＦｖを含む。ヒト化ｓｃＦｖはヒト免疫グロブリンフレームワークに組み込まれるヒト以外（たとえばマウス）のＣＤＲを有するヒト化ＶＨ（可変重鎖）配列を備えることができる。いくつかの実施形態では、ＣＡＲの細胞外ドメインはヒト化抗ＧＣＮ４ ｓｃＦｖを含むことができる。このようなｓｃＦｖ分子はＺａｈｎｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９：１８８７０－７７，２００４に記載されている抗ＧＣＮ４ ｓｃＦｖクローン５２ＳＲ４から派生したものであることが可能である。ヒト化抗ＧＣＮ４ ｓｃＦｖ（たとえば、クローン５２ＳＲ４のヒト化形態）はヒト化軽鎖を含んだりヒト化重鎖を含んだりヒト化軽鎖とヒト化重鎖とを含んだりする。ヒト化抗ＧＣＮ４（たとえば、クローン５２ＳＲ４のヒト化形態）はヒト免疫グロブリンフレームワークに組み込まれるヒト以外（たとえばマウス）のＣＤＲを有するヒト化ＶＨ（可変重鎖）配列を含むことができる。本発明のＣＡＲ－Ｔ細胞に用いることができるこのようなヒト化抗ＧＣＮ４ ｓｃＦｖ分子の具体的な例には本開示で例示されているｓＣＡＲ－Ｔ細胞にあるような配列番号７に示されている配列が含まれる。
【0053】
本発明で用いられる補完的かつ不活性なＣＡＲ－Ｔ細胞を当該技術で周知の方法や、たとえば、国際公開第２０１８／０７５８０７号、国際公開第２０１５／０５７８３４号、国際公開第２０１５／０５７８５２号やＭａｒｃｕ－Ｍａｌｉｎａ ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｏｎ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｖｏｌ．９，Ｎｏ．５に例示されている特定のプロトコールにしたがって調製することができる。一般的には、ＣＡＲをコードする遺伝物質を任意の適切なＴ細胞、たとえば、セントラルメモリＴ細胞などのヒトＴ細胞に導入するのに組換え技術を用いることができる。例として、遺伝子改変ＣＡＲ（たとえばヒト化ＣＡＲ）を発現させるレンチウイルスベクタを用いたヒトＴ細胞の形質導入によって本発明の方法で用いられるＣＡＲ－Ｔ細胞を生成することができる。いくつかのヒト化ＣＡＲ配列及び当該ヒト化ＣＡＲ配列を内在するＣＡＲ－Ｔ細胞が当該技術で知られている。これらのすべてを、本発明の方法に用いる場合に容易に使用しかつ／又は適応させることができる。たとえば、国際公開第２０１８／０７５８０７号、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｍａｒｋｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ８：３６，２０２０及びＭａｕｄｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １２８：２１７，２０１６を参照する。
【0054】
具体的な例として、本発明の方法で用いられるＣＡＲ－ＴスイッチはＧＣＮ４ペプチドと融合するヒト化抗ＣＤ１９抗体又はその抗原結合フラグメント（たとえばＦａｂ）を含むことができる。ヒト化抗ＣＤ１９抗体は配列番号２及び３とそれぞれ同一又は実質的に同一（たとえば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％）の軽鎖可変領域配列及び重鎖可変領域配列を含むことができる。ＧＣＮ４ペプチドＣＡＲ－ＩＤは配列番号１と同一又は実質的に同一（たとえば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％）のアミノ酸配列を含むことができ、軽鎖のＮ末端にある抗ＣＤ１９抗体と融合する。当該ＣＡＲ－Ｔスイッチとともに用いられる相補的ＣＡＲ－Ｔ細胞はその細胞外ドメインにヒト化抗ＧＣＮ４抗体又はその抗原結合フラグメント（たとえばｓｃＦｖ）を含む。抗ＧＣＮ４抗体の軽鎖可変領域配列及び重鎖可変領域配列が配列番号４及び５にそれぞれ示されている。ＧＳリンカによって接続されるこれらの２つの可変領域配列を有する、特異性を持つ抗ＧＣＮ４ ｓｃＦｖ分子が配列番号７に示されている。当該ＣＡＲには、ｓｃＦｖのＣ末端を膜貫通ドメインのＮ末端（配列番号９）に接続するヒンジ領域（配列番号８）が存在する。ＣＡＲの細胞内ドメインがＮ末端からＣ末端に向かってＣＤ２８ドメイン（配列番号１０）、４－１ＢＢドメイン（配列番号１１）及びＣＤ３ζドメイン（配列番号１２）を含む。ＣＡＲ分子全体のアミノ酸配列が配列番号６に示されている。当該ＣＤ－１９ターゲティングヒト化ＣＡＲ－Ｔスイッチ及び相補的ＣＡＲ－Ｔ細胞の合成及び製造については当該技術で説明されている。たとえば、国際公開第２０１８／０７５８０７号を参照する。本発明の方法に用いるのに適する他の多くのヒト化ＣＡＲ－Ｔスイッチ及び相補的ＣＡＲ－Ｔ細胞も知られている。たとえば、国際公開第２０１８／０７５８０７号及びＶｉａｕｄ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ Ｓｃｉ．ＵＳＡ １１５：Ｅ１０８９８－Ｅ１０９０６，２０１８を参照する。
【0055】
配列番号２（Ｎ末端融合ＧＣＮ４ペプチドを有するヒト化抗ＣＤ１９軽鎖可変領域）
ＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＫＬＧＧＧＧＳＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＫＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＶＫＬＬＩＹＨＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＦＣＱＱＧＡＴＬＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号３（ヒト化抗ＣＤ１９重鎖可変領域）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＶＴＣＴＶＳＧＶＳＬＰＤＹＧＶＳＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＧＳＥＴＴＹＹＮＳＡＬＫＳＲＬＴＩＳＫＤＮＳＫＮＱＶＳＬＫＭＳＳＬＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＫＨＹＹＹＧＧＳＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号４（ヒト化抗ＧＣＮ４軽鎖可変領域）
ＱＡＶＶＴＱＥＰＳＬＴＶＳＰＧＧＴＶＴＬＴＣＧＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＳＷＶＱＥＫＰＤＨＬＦＲＧＬＩＧＧＴＮＮＲＡＰＧＶＰＡＲＦＳＧＳＬＬＧＧＫＡＡＬＴＩＳＧＡＱＰＥＤＥＡＩＹＦＣＶＬＷＹＳＤＨＷＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＤＧ
配列番号５（ヒト化抗ＧＣＮ４重鎖可変領域）
ＱＶＱＬＱＱＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＩＴＣＴＶＳＧＦＬＬＴＤＹＧＶＮＷＶＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＧＤＧＩＴＤＹＮＰＳＬＫＳＲＬＴＶＳＫＤＴＳＫＮＱＶＳＬＫＭＳＳＬＴＤＡＤＴＡＲＹＹＣＶＴＧＬＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ
配列番号６（ヒト化ＣＡＲの全配列）
ＱＡＶＶＴＱＥＰＳＬＴＶＳＰＧＧＴＶＴＬＴＣＧＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＳＷＶＱＥＫＰＤＨＬＦＲＧＬＩＧＧＴＮＮＲＡＰＧＶＰＡＲＦＳＧＳＬＬＧＧＫＡＡＬＴＩＳＧＡＱＰＥＤＥＡＩＹＦＣＶＬＷＹＳＤＨＷＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＤＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＱＱＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＩＴＣＴＶＳＧＦＬＬＴＤＹＧＶＮＷＶＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＧＤＧＩＴＤＹＮＰＳＬＫＳＲＬＴＶＳＫＤＴＳＫＮＱＶＳＬＫＭＳＳＬＴＤＡＤＴＡＲＹＹＣＶＴＧＬＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＤＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＫＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ
配列番号７（ヒト化抗ＧＣＮ４ ｓｃＦｖ）
ＱＡＶＶＴＱＥＰＳＬＴＶＳＰＧＧＴＶＴＬＴＣＧＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＳＷＶＱＥＫＰＤＨＬＦＲＧＬＩＧＧＴＮＮＲＡＰＧＶＰＡＲＦＳＧＳＬＬＧＧＫＡＡＬＴＩＳＧＡＱＰＥＤＥＡＩＹＦＣＶＬＷＹＳＤＨＷＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＤＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＱＱＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＩＴＣＴＶＳＧＦＬＬＴＤＹＧＶＮＷＶＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＧＤＧＩＴＤＹＮＰＳＬＫＳＲＬＴＶＳＫＤＴＳＫＮＱＶＳＬＫＭＳＳＬＴＤＡＤＴＡＲＹＹＣＶＴＧＬＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ
配列番号８（ヒト化ＣＡＲのヒンジ）
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＤ
配列番号９（ヒト化ＣＡＲの膜貫通ドメイン）
ＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶ
配列番号１０（ヒト化ＣＡＲの細胞内ドメインのＣＤ２８ドメイン）
ＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳ
配列番号１１（ヒト化ＣＡＲの細胞内ドメインの４－１ ＢＢドメイン）
ＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬ
配列番号１２（ヒト化ＣＡＲの細胞内ドメインのＣＤ３ζドメイン）
ＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＫＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ
配列番号１５（ＣＡＲ－ＴスイッチＦａｂ ＳＷＩ０１９の全軽鎖配列）
ＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＫＬＧＧＧＧＳＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＫＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＶＫＬＬＩＹＨＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＦＣＱＱＧＡＴＬＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号１６（ＣＡＲ－ＴスイッチＦａｂ ＳＷＩ０１９の全重鎖配列）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＶＴＣＴＶＳＧＶＳＬＰＤＹＧＶＳＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＧＳＥＴＴＹＹＮＳＡＬＫＳＲＬＴＩＳＫＤＮＳＫＮＱＶＳＬＫＭＳＳＬＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＫＨＹＹＹＧＧＳＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣ
ＩＩＩ．治療対象となるヒトの癌
本発明の方法は同時に投与されるＣＡＲ－Ｔスイッチによって認識される１つ以上の特定の標的分子（たとえばＣＤ１９）を担持するヒト対象の腫瘍細胞にｓＣＡＲ－Ｔ細胞を誘導することによってヒトの癌を治療することを対象とする。スイッチは同じ標的分子（たとえばＣＤ１９）を発現する複数の標的細胞と相互作用してもよし、異なる標的分子（たとえば、ＣＤ１９及びＣＤ２０）を発現する複数の標的細胞と相互作用してもよい。いくつかの方法では、本発明のｓＣＡＲ－Ｔプラットフォームによって標的とされる癌細胞表面分子が受容体である。受容体は細胞外受容体であってもよい。受容体は細胞表面受容体であってもよい。限定を課さない例として、受容体はホルモン、神経伝達物質、サイトカイン、増殖因子や細胞認識分子に結合してもよい。受容体は膜貫通受容体であってもよい。受容体は酵素結合受容体であってもよい。受容体はＧタンパク質共役受容体（Ｇ－ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｕｐｌｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ：ＧＰＣＲ）であってもよい。受容体は増殖因子受容体であってもよい。細胞表面分子が受容体以外の細胞表面タンパク質であってもよい。標的分子は分化タンパク質群であってもよい。限定を課さない例として、細胞表面分子をＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３４、ＣＤ３１、ＣＤ１１７、ＣＤ４５、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１５、ＣＤ２４、ＣＤ１１４、ＣＤ１８２、ＣＤ１４、ＣＤ１１ａ、ＣＤ９１、ＣＤ１６、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ２５、ＣＤ８、ＣＤ３８、ＣＤ２２、ＣＤ６１、ＣＤ５６、ＣＤ３０、ＣＤ１３、ＣＬＬ１、ＣＤ３３、ＣＤ１２３又はこれらのフラグメント若しくは相同体から選択してもよい。いくつかの好ましい実施形態では、標的分子は本開示で例示されているＣＤ１９である。
ＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＫＬＧＧＧＧＳＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＫＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＶＫＬＬＩＹＨＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＦＣＱＱＧＡＴＬＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号３（ヒト化抗ＣＤ１９重鎖可変領域）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＶＴＣＴＶＳＧＶＳＬＰＤＹＧＶＳＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＧＳＥＴＴＹＹＮＳＡＬＫＳＲＬＴＩＳＫＤＮＳＫＮＱＶＳＬＫＭＳＳＬＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＫＨＹＹＹＧＧＳＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号４（ヒト化抗ＧＣＮ４軽鎖可変領域）
ＱＡＶＶＴＱＥＰＳＬＴＶＳＰＧＧＴＶＴＬＴＣＧＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＳＷＶＱＥＫＰＤＨＬＦＲＧＬＩＧＧＴＮＮＲＡＰＧＶＰＡＲＦＳＧＳＬＬＧＧＫＡＡＬＴＩＳＧＡＱＰＥＤＥＡＩＹＦＣＶＬＷＹＳＤＨＷＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＤＧ
配列番号５（ヒト化抗ＧＣＮ４重鎖可変領域）
ＱＶＱＬＱＱＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＩＴＣＴＶＳＧＦＬＬＴＤＹＧＶＮＷＶＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＧＤＧＩＴＤＹＮＰＳＬＫＳＲＬＴＶＳＫＤＴＳＫＮＱＶＳＬＫＭＳＳＬＴＤＡＤＴＡＲＹＹＣＶＴＧＬＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ
配列番号６（ヒト化ＣＡＲの全配列）
ＱＡＶＶＴＱＥＰＳＬＴＶＳＰＧＧＴＶＴＬＴＣＧＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＳＷＶＱＥＫＰＤＨＬＦＲＧＬＩＧＧＴＮＮＲＡＰＧＶＰＡＲＦＳＧＳＬＬＧＧＫＡＡＬＴＩＳＧＡＱＰＥＤＥＡＩＹＦＣＶＬＷＹＳＤＨＷＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＤＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＱＱＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＩＴＣＴＶＳＧＦＬＬＴＤＹＧＶＮＷＶＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＧＤＧＩＴＤＹＮＰＳＬＫＳＲＬＴＶＳＫＤＴＳＫＮＱＶＳＬＫＭＳＳＬＴＤＡＤＴＡＲＹＹＣＶＴＧＬＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＤＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＫＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ
配列番号７（ヒト化抗ＧＣＮ４ ｓｃＦｖ）
ＱＡＶＶＴＱＥＰＳＬＴＶＳＰＧＧＴＶＴＬＴＣＧＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＳＷＶＱＥＫＰＤＨＬＦＲＧＬＩＧＧＴＮＮＲＡＰＧＶＰＡＲＦＳＧＳＬＬＧＧＫＡＡＬＴＩＳＧＡＱＰＥＤＥＡＩＹＦＣＶＬＷＹＳＤＨＷＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＤＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＱＱＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＩＴＣＴＶＳＧＦＬＬＴＤＹＧＶＮＷＶＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＧＤＧＩＴＤＹＮＰＳＬＫＳＲＬＴＶＳＫＤＴＳＫＮＱＶＳＬＫＭＳＳＬＴＤＡＤＴＡＲＹＹＣＶＴＧＬＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ
配列番号８（ヒト化ＣＡＲのヒンジ）
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＤ
配列番号９（ヒト化ＣＡＲの膜貫通ドメイン）
ＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶ
配列番号１０（ヒト化ＣＡＲの細胞内ドメインのＣＤ２８ドメイン）
ＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳ
配列番号１１（ヒト化ＣＡＲの細胞内ドメインの４－１ ＢＢドメイン）
ＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬ
配列番号１２（ヒト化ＣＡＲの細胞内ドメインのＣＤ３ζドメイン）
ＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＫＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ
配列番号１５（ＣＡＲ－ＴスイッチＦａｂ ＳＷＩ０１９の全軽鎖配列）
ＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＫＬＧＧＧＧＳＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＫＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＶＫＬＬＩＹＨＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＦＣＱＱＧＡＴＬＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号１６（ＣＡＲ－ＴスイッチＦａｂ ＳＷＩ０１９の全重鎖配列）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＶＴＣＴＶＳＧＶＳＬＰＤＹＧＶＳＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＧＳＥＴＴＹＹＮＳＡＬＫＳＲＬＴＩＳＫＤＮＳＫＮＱＶＳＬＫＭＳＳＬＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＫＨＹＹＹＧＧＳＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣ
ＩＩＩ．治療対象となるヒトの癌
本発明の方法は同時に投与されるＣＡＲ－Ｔスイッチによって認識される１つ以上の特定の標的分子（たとえばＣＤ１９）を担持するヒト対象の腫瘍細胞にｓＣＡＲ－Ｔ細胞を誘導することによってヒトの癌を治療することを対象とする。スイッチは同じ標的分子（たとえばＣＤ１９）を発現する複数の標的細胞と相互作用してもよし、異なる標的分子（たとえば、ＣＤ１９及びＣＤ２０）を発現する複数の標的細胞と相互作用してもよい。いくつかの方法では、本発明のｓＣＡＲ－Ｔプラットフォームによって標的とされる癌細胞表面分子が受容体である。受容体は細胞外受容体であってもよい。受容体は細胞表面受容体であってもよい。限定を課さない例として、受容体はホルモン、神経伝達物質、サイトカイン、増殖因子や細胞認識分子に結合してもよい。受容体は膜貫通受容体であってもよい。受容体は酵素結合受容体であってもよい。受容体はＧタンパク質共役受容体（Ｇ－ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｕｐｌｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ：ＧＰＣＲ）であってもよい。受容体は増殖因子受容体であってもよい。細胞表面分子が受容体以外の細胞表面タンパク質であってもよい。標的分子は分化タンパク質群であってもよい。限定を課さない例として、細胞表面分子をＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３４、ＣＤ３１、ＣＤ１１７、ＣＤ４５、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１５、ＣＤ２４、ＣＤ１１４、ＣＤ１８２、ＣＤ１４、ＣＤ１１ａ、ＣＤ９１、ＣＤ１６、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ２５、ＣＤ８、ＣＤ３８、ＣＤ２２、ＣＤ６１、ＣＤ５６、ＣＤ３０、ＣＤ１３、ＣＬＬ１、ＣＤ３３、ＣＤ１２３又はこれらのフラグメント若しくは相同体から選択してもよい。いくつかの好ましい実施形態では、標的分子は本開示で例示されているＣＤ１９である。
【0056】
本発明の方法により様々なヒトの癌を治療することができる。いくつかの実施形態では、治療される癌は不均一性を持つ。いくつかの実施形態では、治療される癌は血液細胞の悪性腫瘍である。たとえば、治療される癌は骨髄細胞やその他の血液細胞に由来することが可能である。これらの実施形態では、癌はＢ細胞、Ｔ細胞、単球、血小板、白血球、好中球、好酸球、好塩基球、リンパ球、造血幹細胞や血管内皮細胞前駆体に由来することが可能である。いくつかの実施形態では、治療される癌は再発性の難治性Ｂ細胞悪性腫瘍である。いくつかの好ましい実施形態では、治療される癌はＣＤ１９陽性Ｂリンパ球に由来する。いくつかの実施形態では、癌は幹細胞に由来してもよい。たとえば、ターゲティング癌細胞が多能性細胞に由来してもよい。いくつかの実施形態では、標的とされる癌細胞は１つ以上の内分泌腺に由来することが可能である。内分泌腺はリンパ腺、下垂体、甲状腺、副甲状腺、膵臓、生殖腺や松果腺であってもよい。
【0057】
いくつかの好ましい実施形態では、本発明の方法は再発性／難治性Ｂ細胞悪性腫瘍に罹患しており、以前に処置を受けた対象を治療することを対象とする。このような疾患及び症状は当該技術で周知である。たとえば、Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｕｍｏｕｒｓ，Ｌｙｏｎ，Ｆｒａｎｃｅ：ＩＡＲＣ，Ｒｅｖｉｓｅｄ ４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（２０１７）のＳｗｅｒｄｌｏｗ ｅｔ ａｌ．，ＷＨＯ ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｕｍｏｕｒｓ ｏｆ ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ａｎｄ ｌｙｍｐｈｏｉｄ ｔｉｓｓｕｅｓ及びＳｗｅｒｄｌｏｗ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ ２０１６，１２７（２０）：２３７５－９０を参照する。様々な実施形態では、当該対象はびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ｄｉｆｆｕｓｅ ｌａｒｇｅ Ｂ ｃｅｌｌ ｌｙｍｐｈｏｍａ：ＤＬＢＣＬ）と古典的ホジキンリンパ腫との中間の特徴を持ち、分類不能なものを含む様々な形態のＢ細胞リンパ腫に罹患している対象であることが可能である。これらは、たとえば、ＤＬＢＣＬ（ＮＯＳ）、慢性炎症に関連するＤＬＢＣＬ、胚中心Ｂ細胞型、活性化Ｂ細胞型、慢性リンパ性白血病（ｃｈｒｏｎｉｃ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ ｌｅｕｋｅｍｉａ：ＣＬＬ）／小リンパ球性リンパ腫（ｓｍａｌｌ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ ｌｙｍｐｈｏｍａ：ＳＬＬ）、濾胞性リンパ腫（ｆｏｌｌｉｃｕｌａｒ ｌｙｍｐｈｏｍａ：ＦＬ）やその他低悪性度に分類される組織（ｉｎｄｏｌｅｎｔ ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ）からＤＬＢＣＬへの形質転換、リヒタ形質転換をともなうＣＬＬ、脾臓辺縁帯リンパ腫、脾臓Ｂ細胞リンパ腫／白血病、分類不能（脾臓びまん性赤脾髄小型Ｂ細胞リンパ腫及び有毛細胞白血病バリアント）、粘膜関連リンパ組織型節外性辺縁帯リンパ腫（ＭＡＬＴリンパ腫）、節性辺縁帯リンパ腫、マントル帯限局型マントル細胞腫瘍症（ｉｎ ｓｉｔｕ ｍａｎｔｌｅ ｃｅｌｌ ｎｅｏｐｌａｓｉａ）を含むマントル細胞リンパ腫（ｍａｎｔｌｅ ｃｅｌｌ ｌｙｍｐｈｏｍａ：ＭＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）（胚中心限局型濾胞性腫瘍症と十二指腸型濾胞性リンパ腫とを含む）、ＩＲＦ４再構成をともなう大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性皮膚濾胞中心リンパ腫、並びにエプスタインバーウイルス（ｅｐｓｔｅｉｎ ｂａｒ ｖｉｒｕｓ：ＥＢＶ）＋ＤＬＢＣＬ（ＮＯＳ）（ＥＢＶ＋ＤＬＢＣＬを含む）を含む。本発明の方法により治療するのに適した腫瘍は様々な原発性縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫も含む。これらは、たとえば、ＡＬＫ＋大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ＨＨＶ８＋ＤＬＢＣＬ（ＮＯＳ）、ＭＹＣ並びにＢＣＬ２及び／又はＢＣＬ６再構成をともなう高悪性度Ｂ細胞リンパ腫、高悪性度Ｂ細胞リンパ腫（ＮＯＳ）、並びにバーキットリンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫（ｌｙｍｐｈｏｐｌａｓｍａｃｙｔｉｃ ｌｙｍｐｈｏｍａ：ＬＰＬ）（ワルデンシュトレームマクログロブリン血症（Ｗａｌｄｅｎｓｔｒｏｍ ｍａｃｒｏｇｌｏｂｕｌｉｎｅｍｉａ：ＷＭ）を含む）を含む。
【0058】
本発明のいくつかの方法は白血病、たとえばＣＤ－１９陽性白血病の治療を対象とする。白血病の具体的な例には骨髄性白血病、リンパ芽球性白血病、骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、骨髄単球性白血病、好中球性白血病、骨髄異形成症候群、Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、大細胞リンパ腫、混合細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、再発性小リンパ球性リンパ腫、有毛細胞白血病、多発性骨髄腫、好塩基球性白血病、好酸球性白血病、巨核芽球性白血病、単芽球性白血病、単球性白血病、赤白血病、赤芽球性白血病及び肝細胞癌が含まれる。いくつかの実施形態では、治療される障害は血液悪性腫瘍である。いくつかの実施形態では、治療される障害はＢ細胞悪性腫瘍である。いくつかの実施形態では、治療される障害は慢性リンパ性白血病である。いくつかの実施形態では、治療される障害は急性リンパ性白血病である。いくつかの実施形態では、治療される障害はＣＤ１９陽性バーキットリンパ腫である。
【0059】
いくつかの好ましい実施形態では、治療される癌はＣＤ１９陽性腫瘍や悪性腫瘍である。これらの実施形態のいくつかでは、治療される癌はＢ細胞癌又はＢ細胞悪性腫瘍である。Ｂ細胞癌又はＢ細胞悪性腫瘍は非ホジキンリンパ腫（ｎｏｎ－Ｈｏｄｇｋｉｎ ｌｙｍｐｈｏｍａｓ：ＮＨＬ）の大部分を占めるＢ細胞リンパ腫を含む。これらのＢ細胞癌の例には、たとえば、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯リンパ腫、バーキットリンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫（ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症）、有毛細胞白血病（ｈａｉｒｙ ｃｅｌｌ ｌｅｕｋｅｍｉａ：ＨＣＬ）、原発性中枢神経系（ｃｅｎｔｒａｌ ｎｅｒｖｏｕｓ ｓｙｓｔｅｍ：ＣＮＳ）リンパ腫及び原発性眼内リンパ腫が含まれる。
【0060】
ＩＶ．投与及び用量
本開示で説明されているヒトの癌の治療を実施する際、処置を必要とする対象に、本開示で説明されているｓＣＡＲ－Ｔプラットフォームの治療有効量を含む医薬組成物が投与される。本開示で説明されているように、治療有効量は、投与レジメンが適用される対象で許容不能な毒性が現れることがないように当然最適な量でもある。ｓＣＡＲ－Ｔプラットフォームに加えて、組成物は、１つ以上の薬学的に許容可能な担体や薬品、たとえば、塩類、賦形剤又は溶媒剤を含むことができる。薬学的に許容可能な担体はあらゆる適切な薬学的に許容可能な担体であることが可能である。これは、ヒト患者や患畜に対する投与に適する１つ以上の適合性のある固体又は液体の充填剤、希釈剤、別の賦形剤やカプセル化物質である（たとえば、生理学的に許容可能な担体や薬理学的に許容可能な担体）。ｓＣＡＲ－Ｔプラットフォームの投与はあらゆる順序で行なうことができる。たとえば、いくつかの実施形態では、ＣＡＲ－Ｔスイッチの投与と同時にｓＣＡＲ－Ｔ細胞を投与してもよい。他のいくつかの方法では、ｓＣＡＲ－Ｔ細胞の投与前にＣＡＲ－Ｔスイッチを投与してもよい。いくつかの好ましい実施形態では、本開示で例示されているように、ＣＡＲ－Ｔスイッチ投与前にｓＣＡＲ－Ｔ細胞を投与する。
本開示で説明されているヒトの癌の治療を実施する際、処置を必要とする対象に、本開示で説明されているｓＣＡＲ－Ｔプラットフォームの治療有効量を含む医薬組成物が投与される。本開示で説明されているように、治療有効量は、投与レジメンが適用される対象で許容不能な毒性が現れることがないように当然最適な量でもある。ｓＣＡＲ－Ｔプラットフォームに加えて、組成物は、１つ以上の薬学的に許容可能な担体や薬品、たとえば、塩類、賦形剤又は溶媒剤を含むことができる。薬学的に許容可能な担体はあらゆる適切な薬学的に許容可能な担体であることが可能である。これは、ヒト患者や患畜に対する投与に適する１つ以上の適合性のある固体又は液体の充填剤、希釈剤、別の賦形剤やカプセル化物質である（たとえば、生理学的に許容可能な担体や薬理学的に許容可能な担体）。ｓＣＡＲ－Ｔプラットフォームの投与はあらゆる順序で行なうことができる。たとえば、いくつかの実施形態では、ＣＡＲ－Ｔスイッチの投与と同時にｓＣＡＲ－Ｔ細胞を投与してもよい。他のいくつかの方法では、ｓＣＡＲ－Ｔ細胞の投与前にＣＡＲ－Ｔスイッチを投与してもよい。いくつかの好ましい実施形態では、本開示で例示されているように、ＣＡＲ－Ｔスイッチ投与前にｓＣＡＲ－Ｔ細胞を投与する。
【0061】
本発明の治療組成物の調製及び投与に関する概略的な基本的説明が当該技術で説明されている。たとえば、Ｇｏｏｄｍａｎ＆Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｅｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｈａｒｄｍａｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ（１０ＰｔｈＰ ｅｄ．，２００１）、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｇｅｎｎａｒｏ，ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ（２０ＰｔｈＰ ｅｄ．，２００３）及びＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ａｎｓｅｌ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ（７ＰｔｈＰ ｅｄ．，１９９９）を参照する。治療組成物を対象に投与する方法を当該技術で日常的に実施されている手順に基づいて実現することができる。たとえば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，２０ｔｈ ｅｄ．，２０００、Ｉｗａｓａｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊｐｎ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．８８：８６１－６，１９９７、Ｊｅｓｐｅｒｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｈｅａｒｔ Ｊ．１１：２６９－７４，１９９０及びＭａｒｔｅｎｓ，Ｒｅｓｕｓｃｉｔａｔｉｏｎ ２７：１７７，１９９４を参照する。通常、ｓＣＡＲ－Ｔプラットフォームを含む組成物はリン酸緩衝生理食塩水（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ：ＰＢＳ）などの生理学的に忍容可能な媒体で投与される（たとえば、注入により投与される）。処置を必要とする対象に治療組成物をあらゆる適切な経路で投与することができる。いくつかの好ましい実施形態では、組成物は非経口投与によって対象に投与される。これらの実施形態では、投与される組成物は当然無菌水性製剤を含み、無菌水性製剤が投与を受ける対象の血液と等張であることが好ましい。
【0062】
対象の腫瘍の増殖を抑制し、腫瘍の退縮を促進するのに十分な量のＣＡＲ－Ｔスイッチ及び相補的ｓＣＡＲ－Ｔ細胞を対象に投与するべきである。腫瘍の種類、腫瘍の大きさ及び発達段階、投与の経路、治療される特定の対象の年齢並びに腫瘍の治療分野の当業者に容易に明確となるその他の要因に基づいて十分な細胞数を決定することができる。注入又は移植による投与についての概略的な基本的説明として、体重１ｋｇあたり約１×１０５～約１×１０８個のＣＡＲ＋細胞を含むｓＣＡＲ－Ｔ細胞用量１回分が治療される対象に投与される。ｓＣＡＲ－Ｔ細胞の１回分の用量が単回投与で対象に投与されることが好ましいが、本発明の実施の際に１回分の用量を複数回（たとえば、２回、３回や４回）の投与に分割することも妥当である。いくつかの実施形態では、用量は体重１ｋｇあたり約５×１０６～約２×１０７個の細胞を含むことができる。様々な実施形態では、ｓＣＡＲ－Ｔ細胞用量は体重１ｋｇあたり細胞約２．５×１０５個、約５×１０５個、約７．５×１０５個、約１×１０６個、約２．５×１０６個、約５×１０６個、約７．５×１０６個、約１×１０７個、約２．５×１０７個、約５×１０７個、約７．５×１０７個又はこれらを超える個数分を含むことができる。これの代わりに、正常体重（たとえば、７０ｋｇ前後すなわち約５０ｋｇから約９０ｋｇ）の対象にｓＣＡＲ－Ｔ細胞の固定用量を投与することができる。様々な実施形態では、固定ＣＡＲ＋Ｔ細胞用量は細胞約２０×１０６個、約４０×１０６個、約６０×１０６個、約８０×１０６個、約１００×１０６個、約１２０×１０６個、約１４０×１０６個、約１６０×１０６個、約１８０×１０６個、約２００×１０６個、約３００×１０６個、約４００×１０６個、約５００×１０６個、約６００×１０６個、約７００×１０６個、約８００×１０６個、約９００×１０６個、約１０００×１０６個又はこれらを超える個数分であることが可能である。
【0063】
いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋Ｔ細胞約３５×１０６～約７００×１０６個（又は約１４００×１０６個）分の固定用量を対象に投与することができる。体重７０ｋｇの患者の場合、このＣＡＲ＋Ｔ細胞用量は体重１ｋｇあたり細胞約０．０５×１０７～約１×１０７個（又は２×１０７個）分に相当する。これらの実施形態のいくつかでは、本開示で例示されているように、細胞約１４０×１０６個分から細胞約７００×１０６個分の固定用量が対象に投与される。体重７０ｋｇの患者の場合、このＣＡＲ－Ｔ細胞用量は体重１ｋｇあたり細胞約０．２×１０７～１×１０７個分に相当する。体重が大幅に異なる対象を治療する場合、これに応じて、体重１ｋｇあたりを基準にしたＣＡＲ－Ｔ細胞用量を調節することができる。いくつかの好ましい実施形態では、細胞約１４０×１０６個分の固定用量が対象に投与され、これは、体重約７０ｋｇの対象の場合、体重１ｋｇあたり細胞０．２×１０７個分に相当する。
【0064】
ＣＡＲ－Ｔスイッチ分子の場合、１日の用量は体重１ｋｇあたり約０．０００１ｍｇ～約１０ｍｇの範囲であることが可能である。いくつかの実施形態では、投与されるスイッチの１日の用量は体重１ｋｇあたり約０．０００２５ｍｇ～約２．５ｍｇである。いくつかの実施形態では、投与されるスイッチの１日の用量は体重１ｋｇあたり約０．０００５ｍｇ（すなわち、０．０００７５ｍｇや０．００１ｍｇ）から約０．５ｍｇ（すなわち、１ｍｇ、１．５ｍｇや２ｍｇ）の任意の量である。いくつかの実施形態では、投与されるスイッチの１日の用量は体重１ｋｇあたり約０．０１ｍｇ（又は０．００５ｍｇ）から約０．１ｍｇ又は約１ｍｇの任意の量である。いくつかの実施形態では、投与されるスイッチの１日の用量は体重１ｋｇあたり約０．０４５ｍｇ～約０．０７５ｍｇの任意の量である。様々な実施形態では、投与されるＣＡＲ－Ｔスイッチ分子の１日の用量は体重１ｋｇあたり約０．０００１ｍｇ、約０．０００２５ｍｇ、約０．０００５ｍｇ、約０．０００７５ｍｇ、約０．００１ｍｇ、約０．００２５ｍｇ、約０．００５ｍｇ、約０．００７５ｍｇ、約０．０１ｍｇ、約０．０２５ｍｇ、約０．０５ｍｇ、約０．０６ｍｇ、約０．０７５ｍｇ、約０．１ｍｇ、約０．２５ｍｇ、約０．５ｍｇ、約０．７５ｍｇ、約１ｍｇ、約１．５ｍｇ、約２ｍｇ、約２．５ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ又はこれらを超えることが可能である。いくつかの実施形態では、投与されるＣＡＲ－Ｔスイッチ分子の１日の用量は約０．０１ｍｇ、約０．０２５ｍｇ、約０．０３ｍｇ、約０．０４ｍｇ、約０．０４５ｍｇ、約０．０５ｍｇ、約０．０５５ｍｇ、約０．０６ｍｇ、約０．０６５ｍｇ、約０．０７０ｍｇ、約０．０７５ｍｇ、約０．０８５ｍｇ又は０．０９５ｍｇであることが可能である。いくつかの好ましい実施形態では、投与されるＣＡＲ－Ｔスイッチ分子の１日の用量は約０．０６ｍｇである。ＣＡＲ－Ｔ細胞の投与と同様に、示されている用量（ＣＡＲ－Ｔスイッチ分子）も単回投与で投与したり複数回投与で投与したりすることができる。
【0065】
いくつかの実施形態では、治療される対象にＣＡＲ－Ｔ細胞が処置の開始時にのみ投与される（たとえば、１回又は２回の投与）一方で、その後、ＣＡＲ－Ｔスイッチ分子が処置の期間中、たとえば、最初の数週間や数ヶ月間にわたって「オン／オフスケジュール」に基づいて複数回投与される。本開示で例示されているように、オン／オフスケジュールは複数のサイクルを備え、各サイクルは「オン」フェーズと「オフ」フェーズとを含む。「オン」フェーズではＣＡＲ－Ｔスイッチが対象に投与される一方で、「オフ」フェーズではＣＡＲ－Ｔスイッチが投与されない。様々な実施形態では、特定の期間（たとえば、約１日から数週間の任意の長さ）続く「オン」フェーズ中に、１日２回、毎日、１日毎、３日毎又はこれらよりも長い頻度でスイッチ分子を対象に投与することができる。サイクルの「オフ」フェーズは「オン」フェーズの投与間隔よりも長い任意の期間であることが可能である。したがって、たとえば、「オン」フェーズで投与が毎日又は１日毎に行なわれる場合、「オフ」フェーズは約数日から約数年の任意の長さの期間続くことが可能である。様々な実施形態では、「オン」フェーズがたとえば、１日、２日、３日、４日、５日、６日、１週間、２週間、３週間又はこれらを超え、投与が毎日、２日毎、３日毎又はこれらよりも長い頻度で行なわれることが可能である。これらの「オン」フェーズの各々に対して、「オフ」フェーズがたとえば、４日間、５日間、６日間、１週間、２週間、３週間、４週間、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、１年又はこれらよりも長いことが可能である。「オン」フェーズ及び「オフ」フェーズの期間の長さが複数のサイクルでそれぞれ同じであることが可能である。これの代わりに、「オン」フェーズ及び／又は「オフ」フェーズの継続期間が異なるサイクル間で異なることが可能である。以下で詳細に説明されている具体的な例として、処置が少なくとも約６サイクルを含むことができる。各サイクルは２８日間続き、本開示で例示されているように、オンフェーズ及びオフフェーズがそれぞれ７日間及び２１日間である。
【0066】
細胞数及び投与頻度は処置が予防目的か治療目的かによっても異なる。予防用途では、比較的少数の細胞を長期間にわたって比較的低頻度の間隔で投与することができる。対象によっては生涯にわたって処置を受け続ける場合がある。治療用途では、腫瘍の増悪が軽減するかなくなるまで、好ましくは、対象の腫瘍が部分的又は完全に退縮することが見られるまで、比較的短い間隔で比較的多数の細胞が必要になる場合がある。その後、対象に予防レジメンを施すことができる。
【0067】
いくつかの実施形態では、本開示で開示されているｓＣＡＲ－Ｔプラットフォームを吸収又は封入させた膜、スポンジやその他適切な材料を患部に埋め込むことによって本開示で説明されている治療組成物を局所的に投与することができる。埋め込みデバイスを用いる場合、デバイスをあらゆる適切な組織や器官に埋め込んでもよく、本開示に開示されているＣＡＲ－Ｔプラットフォームの送達を、デバイスを通じてボーラスにより直接行なったり、連続投与により直接行なったり、連続注入を用いるカテーテルを介して直接行なったりすることができる。
【0068】
具体的な例として、本発明のいくつかの治療法は、まず、ＣＤ１９陽性の再発性／難治性Ｂ細胞悪性腫瘍が存在する対象に、配列番号６に示されているＣＡＲ配列を含むＣＡＲ－Ｔ細胞約０．３５×１０８～約７×１０８個分の用量１回分を投与し（たとえば、注入により投与）、その後、配列番号２及び３にそれぞれ示されている軽鎖可変領域配列及び重鎖可変領域配列を含む抗ＣＤ１９ Ｆａｂ抗体であるＣＡＲ－Ｔスイッチ分子を１つ以上の注入サイクルで対象に投与するステップをともなう。各注入サイクルは（ｉ）約５～約９日間の「オン」フェーズと、（ｉｉ）約１４～約２８日間の「オフ」フェーズとを含む。オンフェーズでは、体重１ｋｇあたり約０．０４５ｍｇ～約０．０７５ｍｇのスイッチの用量が毎日投与される。これらの実施形態のいくつかでは、用いられるＣＡＲ－Ｔ細胞は対象の自家細胞である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ－Ｔ細胞の注入用量は細胞約１．４×１０８個分であり、「オン」フェーズで注入されるＣＡＲ－Ｔスイッチの１日の用量は体重１ｋｇあたり約０．０６ｍｇである。いくつかの実施形態では、「オン」フェーズは約７日間であり、「オフ」フェーズは約２１日間である。様々な実施形態では、ＣＡＲ－Ｔスイッチの投与の注入サイクルの数は２、３、４、５、６又はこれらを超えることが可能である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ－Ｔ細胞及びスイッチ分子の注入前に、リンパ球枯渇化プレコンディショニングが対象に施される。これらの実施形態のいくつかでは、リンパ球枯渇化プレコンディショニングはシクロホスファミド及びフルダラビンを用いる化学療法により行なわれる。
【0069】
本開示で説明されているｓＣＡＲ－Ｔプラットフォームを癌治療に用いられる他の既知のレジメンと組み合せて用いることができる。別の治療薬品と同時に投与する方法が当該技術で周知である。たとえば、Ｈａｒｄｍａｎ，ｅｔ ａｌ．（編集）（２００１）Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，１０ｔｈ ｅｄ．，ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．、Ｐｏｏｌｅ及びＰｅｔｅｒｓｏｎ（編集）（２００１）Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ｆｏｒ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａ．，Ｐａ．並びにＣｈａｂｎｅｒ及びＬｏｎｇｏ（編集）（２００１）Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａ．，Ｐａを参照する。
【0070】
例
以下の例は本発明をさらに説明するために提供されており、本発明の範囲を限定するために提供されてはいない。本発明の他の変形例が当業者には容易に明確となり、添付の請求項に含まれる。
以下の例は本発明をさらに説明するために提供されており、本発明の範囲を限定するために提供されてはいない。本発明の他の変形例が当業者には容易に明確となり、添付の請求項に含まれる。
【0071】
例１．ヒト癌患者に対するｓＣＡＲ－Ｔ療法のＩＮＤ－ｅｎａｂｌｉｎｇ ｓｔｕｄｉｅｓ
“ｓｗｉｔｃｈａｂｌｅ”ＣＡＲ－Ｔ（ｓＣＡＲ－Ｔ）療法は、ｓＣＡＲ－Ｔ細胞の活性が抗体を用いたスイッチによって制御されることを含む。スイッチは腫瘍抗原を標的とし、ｓＣＡＲはスイッチに埋め込まれた固有のペプチドを認識する。スイッチはｓＣＡＲ－Ｔ細胞と腫瘍細胞との間にブリッジを形成し、ｓＣＡＲ－Ｔ細胞を活性化して腫瘍細胞の殺傷を誘発する。発明者が用いたｓＣＡＲ－Ｔ処置プラットフォームはヒト化不活性ＣＡＲ－Ｔ細胞（本開示ではＣＬＢＲ００１とも称する）と、対応するスイッチ分子（本開示ではＳＷＩ０１９とも称する）とを含む。ＣＡＲ－Ｔ細胞のＣＡＲの細胞外ドメイン（配列番号６）が、スイッチ分子のＧＣＮ４誘導体ペプチド（配列番号１）に特異的に結合するヒト化ｓｃＦｖ抗体フラグメント（配列番号７）を含む。スイッチ分子はＣＤ１９ターゲティングＦａｂ抗体（配列番号３及び２にそれぞれ示されている重鎖可変領域配列及び軽鎖可変領域配列を有する）をさらに含み、当該抗体の軽鎖Ｎ末端がＧＣＮ４ペプチドと融合する。このｓＣＡＲ－Ｔプラットフォームに関するより詳細な情報がたとえば国際公開第２０１８／０７５８０７号で報告されている。スイッチ分子とｓＣＡＲ－Ｔ細胞との各々は単独では活性を持たないように設計されているが、これらを組み合せると、異種移植モデルと同種移植モデルとで腫瘍が完全に除去されたことが実証されている。スイッチの半減期が短いことで、スイッチ投与を通じてｓＣＡＲＴ細胞の活性を素早く調整することができる。さらに、異なるスイッチに交換することで、モジュール方式を用いてｓＣＡＲ－Ｔ細胞を他の腫瘍標的にリダイレクトすることができる。さらに、ｓＣＡＲ－Ｔ細胞の周期的なオン／オフ刺激により、ｓＣＡＲ－Ｔ細胞の記憶と持続性とが改善されることが示されている。
“ｓｗｉｔｃｈａｂｌｅ”ＣＡＲ－Ｔ（ｓＣＡＲ－Ｔ）療法は、ｓＣＡＲ－Ｔ細胞の活性が抗体を用いたスイッチによって制御されることを含む。スイッチは腫瘍抗原を標的とし、ｓＣＡＲはスイッチに埋め込まれた固有のペプチドを認識する。スイッチはｓＣＡＲ－Ｔ細胞と腫瘍細胞との間にブリッジを形成し、ｓＣＡＲ－Ｔ細胞を活性化して腫瘍細胞の殺傷を誘発する。発明者が用いたｓＣＡＲ－Ｔ処置プラットフォームはヒト化不活性ＣＡＲ－Ｔ細胞（本開示ではＣＬＢＲ００１とも称する）と、対応するスイッチ分子（本開示ではＳＷＩ０１９とも称する）とを含む。ＣＡＲ－Ｔ細胞のＣＡＲの細胞外ドメイン（配列番号６）が、スイッチ分子のＧＣＮ４誘導体ペプチド（配列番号１）に特異的に結合するヒト化ｓｃＦｖ抗体フラグメント（配列番号７）を含む。スイッチ分子はＣＤ１９ターゲティングＦａｂ抗体（配列番号３及び２にそれぞれ示されている重鎖可変領域配列及び軽鎖可変領域配列を有する）をさらに含み、当該抗体の軽鎖Ｎ末端がＧＣＮ４ペプチドと融合する。このｓＣＡＲ－Ｔプラットフォームに関するより詳細な情報がたとえば国際公開第２０１８／０７５８０７号で報告されている。スイッチ分子とｓＣＡＲ－Ｔ細胞との各々は単独では活性を持たないように設計されているが、これらを組み合せると、異種移植モデルと同種移植モデルとで腫瘍が完全に除去されたことが実証されている。スイッチの半減期が短いことで、スイッチ投与を通じてｓＣＡＲＴ細胞の活性を素早く調整することができる。さらに、異なるスイッチに交換することで、モジュール方式を用いてｓＣＡＲ－Ｔ細胞を他の腫瘍標的にリダイレクトすることができる。さらに、ｓＣＡＲ－Ｔ細胞の周期的なオン／オフ刺激により、ｓＣＡＲ－Ｔ細胞の記憶と持続性とが改善されることが示されている。
【0072】
この例示されているｓＣＡＲ－Ｔプラットフォームを用いて、発明者はｓＣＡＲ－Ｔ療法のヒト初回（ＦＩＨ）臨床試験を用意し、裏付けるのに際してＩＮＤ－ｅｎａｂｌｉｎｇ ｓｔｕｄｉｅｓを行なった。ｓＣＡＲ－Ｔ細胞が存在しない場合に固有活性を欠く抗体を用いたスイッチ分子と組み合され、内在性抗原標的を欠くｓＣＡＲ－Ｔ細胞を含むプラットフォームの前臨床開発には新規のアプローチの開発が必要であった。このようなシステムの正確性（ｆｉｄｅｌｉｔｙ）は制御に不可欠であるので、ＣＬＢＲ００１細胞が正常組織の存在下では活性化しないことを確認するために、ＳＷＩ０１９の存在下又は非存在下のＣＬＢＲ００１細胞と、１４個の初代細胞のパネルとを共培養することによってｉｎ ｖｉｔｒｏでの活性試験を行なった。このパネルは身体全体の主要組織の概観を表わしている。結果から、ＣＬＢＲ００１が試験された１４種類の細胞タイプのいずれにおいても活性を示さなかったことが示され、ＳＷＩ０１９に対するＣＬＢＲ００１の認識の正確性が高いことが裏付けられている。
【0073】
ＣＬＢＲ００１細胞が存在しない場合にＳＷＩ０１９に活性がないので、ヒト初回開始用量（ｆｉｒｓｔ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｓｔａｒｔｉｎｇ ｄｏｓｅ）を裏付ける「無副作用量」（ｎｏ ａｄｖｅｒｓｅ ｅｆｆｅｃｔ ｌｅｖｅｌ：ＮＯＡＥＬ）を特定するための従来の毒性学的試験の適用対象とはならなかった。このような場合、予測されるＣｍａｘに基づいて開始ヒト用量（ｓｔａｒｔｉｎｇ ｈｕｍａｎ ｄｏｓｅ）を裏付けるのに推定最小薬理作用量（ｍｉｎｉｍａｌ ａｎｔｉｃｉｐａｔｅｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｅｆｆｅｃｔ ｌｅｖｅｌ：ＭＡＢＥＬ）が一般的に用いられる。しかし、ＣＬＢＲ００１と組み合されたＳＷＩ０１９のフェムトモルレベルのｉｎ ｖｉｔｒｏでの活性の結果、開始用量は可能な臨床活性の範囲をはるかに超えるようにモデル化されたものとなった。このため、ＭＡＢＥＬを決定するｉｎ ｖｉｖｏを用いたアプローチが開発された。この試験では、ＣＤ１９＋Ｎａｌｍ－６細胞腫瘍が存在するＮＳＧマウスにＣＬＢＲ００１細胞を投与し、ＳＷＩ０１９の単回用量漸増を行なった。抗腫瘍活性、末梢サイトカイン、及び末梢血中のＣＬＢＲ００１細胞に対するＳＷＩ０１９有効用量（ＥＤ５０）値の比較により、Ｎａｌｍ－６腫瘍負荷の減少が、最も感度の高い活性マーカであったことが示された。末梢血からのＣＬＢＲ００１細胞の血管外漏出及び３つすべてのサイトカイン（ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２及びＴＮＦ－α）が弱いＥＤ５０値を示した。したがって、抗腫瘍活性（Ｎａｌｍ－６腫瘍負荷の減少）を、ｉｎ ｖｉｖｏ ＭＡＢＥＬを決定するのに用いられるパラメータとして選択した。マウスとＮＨＰ ＳＷＩ０１９ ＰＫデータとを用いた相対成長スケーリングを用いることで、ｉｎ ｖｉｖｏ ＭＡＢＥＬ試験のＥＤ２０に対応するヒトにおけるＳＷＩ０１９推奨用量をモデル化した。ｉｎ ｖｉｔｒｏ ＭＡＢＥＬアプローチを用いてモデル化された用量と比較して、ｉｎ ｖｉｖｏ ＭＡＢＥＬアプローチではヒト初回開始点が約１３，０００倍高いことが分かった。この試験の結果から、安全性と患者のベネフィットの可能性とのバランスを取るヒト初回試験の優れた開始点が得られる。
【0074】
【0075】
図１はＦＩＨ用量を評価するためのｉｎ ｖｉｖｏ ＭＡＢＥＬを用いたアプローチに関する。ｉｎ ｖｉｔｒｏ ＭＡＢＥＬシミュレーションからこのような少量の送達についての問題が提示され、治療用量に達するまでに患者の多数の投与コホートを要する可能性があった。このため、Ｎａｌｍ－６異種移植を用いてｉｎ ｖｉｖｏ ＭＡＢＥＬアプローチが開発された。当該試験では、腫瘍負荷の減少、サイトカイン、及び末梢血中のｓＣＡＲ－Ｔが検査された。
【0076】
図２はＳＷＩ０１９スイッチのヒト等価用量のシミュレーションをまとめたものである。これらはＣＬＢＲ００１ ＣＡＲ－Ｔ細胞とＳＷＩ０１９スイッチとを組み合せた処置におけるｉｎ ｖｉｔｒｏ薬理学的分析及びｉｎ ｖｉｖｏ薬理学的分析で監視される最も感度の高いマーカに基づいている。
【0077】
結論として、ｉｎ ｖｉｖｏ ＭＡＢＥＬアプローチにより、ｉｎ ｖｉｔｒｏ ＭＡＢＥＬシミュレーションと比較して約１３，０００倍高い、ヒト初回（ＦＩＨ）開始スイッチ用量（９．７μｇ／ｋｇ）を決定することができた。このアプローチにより、安全性と患者のベネフィットの可能性とのバランスを取るヒト初回試験の優れた開始点が得られる。
【0078】
例２．腫瘍の治療に用いられるｓｗｉｔｃｈａｂｌｅ ＣＡＲ－Ｔ細胞プラットフォームのヒト試験
上記のＩＮＤ－ｅｎａｂｌｉｎｇ ａｎｉｍａｌ ｓｔｕｄｉｅｓの結果に基づいて、再発性／難治性Ｂ細胞悪性腫瘍の治療に用いられるオン／オフｓＣＡＲ－Ｔ療法（ＣＬＢＲ００１＋ＳＷＩ０１９）のヒト臨床試験（ＮＣＴ０４４５００６９）を開始した。ＣＤ１９ターゲティングキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞は再発性の難治性Ｂ細胞悪性腫瘍の患者に対するトランスフォーマティブな処置選択肢である。重治療歴を持つ患者では顕著な反応が見られるものの、腫瘍抗原欠損に関連する再発とともに、サイトカイン放出症候群（ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｒｅｌｅａｓｅ ｓｙｎｄｒｏｍｅ：ＣＲＳ）や免疫エフェクタ細胞関連神経毒性症候群（ＩＣＡＮＳ）を含む毒性に関する課題が残っている。本開示で説明されているｓＣＡＲ－Ｔ処置はこのような課題に対処することを意図している。
上記のＩＮＤ－ｅｎａｂｌｉｎｇ ａｎｉｍａｌ ｓｔｕｄｉｅｓの結果に基づいて、再発性／難治性Ｂ細胞悪性腫瘍の治療に用いられるオン／オフｓＣＡＲ－Ｔ療法（ＣＬＢＲ００１＋ＳＷＩ０１９）のヒト臨床試験（ＮＣＴ０４４５００６９）を開始した。ＣＤ１９ターゲティングキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞は再発性の難治性Ｂ細胞悪性腫瘍の患者に対するトランスフォーマティブな処置選択肢である。重治療歴を持つ患者では顕著な反応が見られるものの、腫瘍抗原欠損に関連する再発とともに、サイトカイン放出症候群（ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｒｅｌｅａｓｅ ｓｙｎｄｒｏｍｅ：ＣＲＳ）や免疫エフェクタ細胞関連神経毒性症候群（ＩＣＡＮＳ）を含む毒性に関する課題が残っている。本開示で説明されているｓＣＡＲ－Ｔ処置はこのような課題に対処することを意図している。
【0079】
第１相の非盲検の用量漸増試験は再発性／難治性Ｂ細胞悪性腫瘍が存在する患者におけるＣＬＢＲ００１とＳＷＩ０１９との組合せの安全性、忍容性、薬物動態、薬物動態及び臨床活性を評価することを意図した。集中製造施設で患者由来のアフェレシス材料から自家ＣＬＢＲ００１ ｓＣＡＲ－Ｔ細胞を製造した。シクロホスファミド及びフルダラビンによるリンパ球枯渇化後、患者にＣＬＢＲ００１細胞の１回分の用量を投与し、その後、７日間毎日ＳＷＩ０１９を注入した。ＣＡＲ－Ｔ細胞の用量は細胞約１４０×１０６から約７００×１０６個分である。体重７０ｋｇの患者の場合、このＣＡＲ－Ｔ細胞の１回分の用量は体重１ｋｇあたり細胞約０．２×１０７～１×１０７個分に相当する。ＳＷＩ０１９スイッチ分子を２８日間のサイクルで最大６サイクル分投与した。各サイクルは７日間毎日ＩＶ静脈注射により投与することと、その後２１日間投与しないことからなる。ＣＬＢＲ００１及びＳＷＩ０１９の用量漸増を初期コホートで［３＋３］設計よって決定し、その後、ベイジアン・アダプティブ・デザイン（ＢＡＹＤＥ）決定規則の実施によって決定した。
【0080】
コホート１（ＣＡＲ－Ｔ細胞１４０×１０６個＋ＳＷＩ０１９スイッチ１０μｇ／ｋｇ）の３人の患者（濾胞性リンパ腫２人及びマントル細胞リンパ腫１人）にデータカットオフ時点で評価可能な安全性及び反応データが見られる。ＣＬＢＲ００１＋ＳＷＩ０１９の忍容性は高く、コホート１ではＤＬＴが観察されなかった。ＣＬＢＲ００１細胞注入の忍容性は高く、ＳＷＩ０１９投与前の観察期間中にいずれの患者にも細胞製品に起因する有害事象が生じず、このことから、ＳＷＩ０１９が存在しない場合にＣＬＢＲ００１細胞が活性を持たないことが示された。ＳＷＩ０１９の投与後にのみ、血清サイトカイン濃度の上昇と末梢血中のＣＬＢＲ００１の増殖とが観察された。ＳＷＩ０１９のの投与の忍容性は高く、サイクル２でグレード１のＣＲＳとグレード２のＩＣＡＮＳとが同時に発生した症例が１件あった。この事象はデキサメタゾンの投与後２４時間以内に沈静化し、ＳＷＩ０１９の用量を減量（５０％）して投与することを継続するとＣＲＳの再発は観察されず、これにより、プラットフォームが調整可能であることが裏付けられた。第１のコホートでは、３人の患者のうち２人がＬｕｇａｎｏ基準による完全奏効を経験した。
【0081】
これはＢ細胞悪性腫瘍が存在する患者中のｓｗｉｔｃｈａｂｌｅ ＣＡＲ－Ｔ細胞プラットフォームの最初の報告である。Ｂ細胞悪性腫瘍が存在する患者でＣＬＢＲ００１＋ＳＷＩ０１９の組合せの安全性及び忍容性は高く、ＣＬＢＲ００１とＳＷＩ０１９との両方の最低用量を用いたコホート１で有望な臨床活性ががあることが分かった。
【0082】
【0083】
図３は処置前、処置後のサイクル３、処置後のサイクル６のＣＴスキャンによって示されている１人の患者の処置の効果を示している。患者デモグラフィック、病歴、処置反応が上部にまとめられている。下部の３つのＣＴスキャン画像は３つの時点での腸間膜リンパ節の標的病変をそれぞれ示している。結果から、ベースライン（処置前）に腸間膜リンパ節、鼠径部リンパ節、腸骨リンパ節、大動脈周囲リンパ節の５つの標的病変があったことが示されている。腸間膜リンパ節腫瘤の大きさは１４．１ｃｍであった。ＰＥＴによる全体Ｄｅａｕｖｉｌｌｅ ５ＰＳスコア（ｏｖｅｒａｌｌ Ｄｅａｕｖｉｌｌｅ ５ＰＳ ｓｃｏｒｅ）は４であった。処置後、５つのＦＤＧ－ａｖｉｄな標的病変のすべてが減少した。新たな標的腫瘤は観察されず、ＩＨＣによる骨髄中のリンパ腫のエビデンスはない。処置開始から１１ヶ月後にＬｕｇａｎｏ及びＲＥＣＩＬによる患者の完全奏効（ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ：ＣＲ）が継続した。
【0084】
図４は治療された別の患者における毒性の急速な解消を示している。パネルＡには患者デモグラフィック、病歴、処置反応がまとめられている。パネルＢは、サイクル１の７日目（Ｃ１Ｄ７）にスイッチの投与を中止すると、ＣＡＲ－Ｔが継続的に増殖するのにもかかわらず発熱が急速に解消され、機能的な「オフ」スイッチ能力が実証されたことを示している。パネルＣは、ＳＷＩ０１９のサイクル２の１日目の投与でグレード１のサイトカイン放出症候群（Ｇｒ１ ＣＲＳ）／グレード１の免疫エフェクタ細胞関連神経毒性（Ｇｒ１ ＩＣＡＮ）がデキサメタゾンで急速に解消され、５０％の用量（５μｇ／ｋｇ）で継続的に投与すると、さらなる毒性が誘発されなかったことを示している。
【0085】
ヒト臨床試験の結果から、ＣＬＢＲ００１ ｓＣＡＲ－Ｔ細胞＋ＳＷＩ０１９スイッチ分子の組合せの安全性及び忍容性が高いことが示されている。この組合せはＢ細胞悪性腫瘍が存在する患者における臨床的活性の有望な兆候を示している。まとめると、ＳＷＩ０１９投与前にはＣＬＢＲ００１に関連する有害事象は存在せず、ＣＬＢＲ００１細胞単独の安全性と、ＣＢＬＲ００１＋ＳＷＩ０１９の相互作用の正確性（すなわち、ＣＬＢＲ００１が内在性のヒト標的と作用しない）とが示された。最大グレードのＣＲＳ／ＩＣＡＮＳ＝１の場合にＣＬＢＲ００１及びＳＷＩ０１９の最低用量（コホート１：ＣＡＲ－Ｔ細胞１４０×１０６個、ＳＷＩ０１９ １０μｇ／ｋｇ）でＣＲが２件実現された。サイクル２以降でのＳＷＩ０１９によるＣＬＢＲ００１の再活性化によりプラットフォームの機能的可逆性が示されている。ＳＷＩ０１９の用量レベルを維持又は減少させることによって毒性が急速に解消され、ＣＬＢＲ００１＋ＳＷＩ０１９プラットフォームを用いて高い安全性が得られる可能性が示された。
【0086】
例３．第ＩＩ相の推奨用量（ＲＰ２Ｄ）を特定するための臨床試験
図５に示されているように、Ｂ細胞悪性腫瘍が存在する対象に対するＣＬＢＲ００１＋ＳＷＩ０１９ ｓｗｉｔｃｈａｂｌｅ ＣＡＲ－Ｔ処置の最適な投与レジメンを調べるために用量漸増第Ｉ相ヒト臨床試験を行なった（ＣＢＲ－ｓＣＡＲ１９－３００１、ＮＣＴ０４４５００６９）。図５Ａは第Ｉ相ヒト試験の設計の概要を示している。対象適格事項には、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯リンパ腫（ｍａｒｇｉｎａｌ ｚｏｎｅ ｌｙｍｐｈｏｍａ：ＭＺＬ）及びその他の組織学的所見を含む再発性／難治性Ｂ細胞悪性腫瘍が含まれる。急性リンパ性白血病（ａｃｕｔｅ ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ ｌｅｕｋｅｍｉａ：ＡＬＬ）の患者、以前にＣＡＲ－Ｔ細胞療法を受けた患者、以前に同種幹細胞移植を受けた患者を除外した。試験の最初の２つのコホートでは、３＋３用量漸増設計で１０μｇ／ｋｇから開始し、３０μｇ／ｋｇまで進行するスイッチ（ＳＷＩ０１９）の用量漸増を試験した。最初の２つのコホートの対象にはＳＷＩ０１９を投与する前にＣＡＲ＋細胞１４０ｅ６個を投与した。次のコホートでベイジアンアダプティブ用量漸増（Ｂａｙｅｓｉａｎ ａｄａｐｔｉｖｅ ｄｏｓｅ ｅｓｃａｌａｔｉｏｎ：ＢＡＹＤＥ）設計を用いて最適な用量を決定した。コホート４ではＣＡＲ＋細胞１４０ｅ６個を用いて６０μｇ／ｋｇのＳＷＩ０１９を評価し、コホート５ではＣＡＲ＋細胞４２０ｅ６個を用いて３０μｇ／ｋｇのＳＷＩ０１９を評価した。コホート５で、ＢＡＹＤＥモデルによって決定された用量をテストすることが可能であってもよい。設計の目標を、将来の試験で用いられる推奨される第ＩＩ相のＣＡＲ＋細胞とＳＷＩ０１９との用量を立証することとした。立証したＣＬＢＲ００１細胞用量を将来の試験でＳＷＩ０１９とともに用いたり他のスイッチと組み合せて用いたりすることができる。
図５に示されているように、Ｂ細胞悪性腫瘍が存在する対象に対するＣＬＢＲ００１＋ＳＷＩ０１９ ｓｗｉｔｃｈａｂｌｅ ＣＡＲ－Ｔ処置の最適な投与レジメンを調べるために用量漸増第Ｉ相ヒト臨床試験を行なった（ＣＢＲ－ｓＣＡＲ１９－３００１、ＮＣＴ０４４５００６９）。図５Ａは第Ｉ相ヒト試験の設計の概要を示している。対象適格事項には、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯リンパ腫（ｍａｒｇｉｎａｌ ｚｏｎｅ ｌｙｍｐｈｏｍａ：ＭＺＬ）及びその他の組織学的所見を含む再発性／難治性Ｂ細胞悪性腫瘍が含まれる。急性リンパ性白血病（ａｃｕｔｅ ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ ｌｅｕｋｅｍｉａ：ＡＬＬ）の患者、以前にＣＡＲ－Ｔ細胞療法を受けた患者、以前に同種幹細胞移植を受けた患者を除外した。試験の最初の２つのコホートでは、３＋３用量漸増設計で１０μｇ／ｋｇから開始し、３０μｇ／ｋｇまで進行するスイッチ（ＳＷＩ０１９）の用量漸増を試験した。最初の２つのコホートの対象にはＳＷＩ０１９を投与する前にＣＡＲ＋細胞１４０ｅ６個を投与した。次のコホートでベイジアンアダプティブ用量漸増（Ｂａｙｅｓｉａｎ ａｄａｐｔｉｖｅ ｄｏｓｅ ｅｓｃａｌａｔｉｏｎ：ＢＡＹＤＥ）設計を用いて最適な用量を決定した。コホート４ではＣＡＲ＋細胞１４０ｅ６個を用いて６０μｇ／ｋｇのＳＷＩ０１９を評価し、コホート５ではＣＡＲ＋細胞４２０ｅ６個を用いて３０μｇ／ｋｇのＳＷＩ０１９を評価した。コホート５で、ＢＡＹＤＥモデルによって決定された用量をテストすることが可能であってもよい。設計の目標を、将来の試験で用いられる推奨される第ＩＩ相のＣＡＲ＋細胞とＳＷＩ０１９との用量を立証することとした。立証したＣＬＢＲ００１細胞用量を将来の試験でＳＷＩ０１９とともに用いたり他のスイッチと組み合せて用いたりすることができる。
【0087】
図５Ｂに示されている処置スケジュールの概要に示されているように、ＣＢＲ－ｓＣＡＲ１９－３００１試験で登録された対象を以下のように治療した。まず対象に同意することを求め、その後、対象の適格性を審査した。既定の採用基準及び除外基準を満たすと判断された対象については、白血球除去製品を集中製造施設に発送することがなされ、当該施設でＴ細胞を単離し、ｓＣＡＲベクタを用いて形質導入を行なった。細胞製品を製造して出荷した後、対象を処置する場所に返送した。対象がリンパ球除去化学療法（通常、シクロホスファミド及びフルダラビン）を受けた後、ＣＬＢＲ００１細胞を注入した。その後、２８日のサイクルで、ＳＷＩ０１９を７日間毎日投与し、その後、２１日間投与しないというＳＷＩ０１９のサイクルで対象を治療した。対象を特に、用量規定毒性、反応（必要に応じて２８日毎にＰＥＴ／ＣＴを用いた）、薬力学バイオマーカ（末梢血中のサイトカイン）について評価した。
データカットオフ時点で利用可能なデータが存在する最初の９人の対象のうち、７人が部分奏効（ＰＲ）又は完全奏効（ＣＲ）（７８％）を示し、６人がＣＲ（６７％）を示した。対象９人のうち２人にグレード３以上のサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）が見られた、対象のいずれにもグレード３以上の免疫エフェクタ細胞関連神経毒性（ＩＣＡＮＳ）が見られなかった。最初の９人の対象のうち、いずれのグレードのＣＲＳの解消までの時間の中央値も１日であり、いずれのグレードのＩＣＡＮＳの解消までの時間の中央値も３日であった。これは、ＦＤＡが承認した３つのＣＡＲ－Ｔ細胞製品のＣＲＳ又はＩＣＡＮＳの解消までの時間の中央値と比較して、良好である。ＣＲＳの継続期間の短縮は従来のＣＡＲ－Ｔ細胞製品では不可能であったＳＷＩ０１９の投与を控えたり減らしたりすることができる能力に起因すると予想される。
【表1】
【0088】
ＣＢＲ－ｓＣＡＲ１９－３００１試験で治療された最初の４つのコホートの最初の１４人の対象の結果が表２に示されている。最初の３つのコホートでは用量規定毒性（ｄｏｓｅ ｌｉｍｉｔｉｎｇ ｔｏｘｉｃｉｔｙ：ＤＬＴ）が生じず、コホート４では２件のＤＬＴが生じた。ＤＬＴを、コホート１及び２でＳＷＩ０１９の初回投与後３５日目に生じ、コホート３及び４でＳＷＩ０１９の初回投与後２８日目に生じた、ＤＬＴ期間中に生じた処置関連有害事象として定めた。遅発性ＤＬＴ反応を、ＤＬＴウィンドウ後に発生した、ＤＬＴ基準を満たす処置関連有害事象として定めた。有効性反応を、ＰＲ又はＣＲを経験した対象として定めた。データカットオフ時点で、２件の対象で保留であり、１件の対象で不明であった。薬力学的反応（Ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃ ｒｅｓｐｏｎｓｅ：ＰＤ）を、ＳＷＩ０１９投与後に末梢血サイトカイン濃度がベースラインの３倍に増加した対象として定めた。
最適なスイッチ及びＣＬＢＲ００１の用量（ＯＳＤ）を決定するために、上記の表のデータを用いたＢＡＹＤＥモデルを採用した（図６）。ＢＡＹＤＥは、ベイジアンアダプティブモデリングとベイジアンロジスティック回帰モデル（ｂａｙｅｓｉａｎ ｌｏｇｉｓｔｉｃ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｍｏｄｅｌ：ＢＲＬＭ）とにより、安全かつ有効かつ効果的な投与レジメンを推奨するために、過去の試験データと累積試験データとに基づく用量と毒性／反応との関係曲線を用いる用量探索設計である。推奨用量は用量範囲にわたって最適に選択される。ＢＡＹＤＥアプローチにより、過去の安全性データ、毒性データ、ＰＤデータ及び有効性データに基づく初期用量関係、より適切に構築されたベイズモデリングアプローチ並びに試験中に更新された用量関係を用いてより適切な意思決定がサポートされる。用量選択の目標を（ａ）利用可能なデータを用いて最適な用量の推奨を提供すること、（ｂ）最大耐量（ｍａｘｉｍｕｍ ｔｏｌｅｒａｔｅｄ ｄｏｓｅ：ＭＴＤ）を特定すること又は（ｃ）ＭＴＤよりも低く、許容可能なＰＤ反応及び／若しくは有効性反応を示すＯＳＤレベルを特定することとする。用量レベルは（ａ）ＤＬＴ率が３３％を超えるリスクが２５％未満（安全性許容閾値）である場合に安全であり、（ｂ）推定反応率が少なくとも５０％である場合に許容可能なＰＤ反応及び／又は有効性反応を示す。この試験のＢＡＹＤＥモデルでは、用量選択に１：標準ＤＬＴのバイナリ変数、２：遅発性ＤＬＴのバイナリ変数、３：有効性反応のバイナリ変数、４：ＰＤ反応のバイナリ変数という４つのエンドポイントを用いた。許容用量範囲はＳＷＩ０１９で１０～１０００μｇ／ｋｇであり、ＣＬＢＲ００１でＣＡＲ＋細胞１４０～７００ｅ６個であった。
【表2】
【0089】
ＣＬＢＲ００１投与とＳＷＩ０１９投与との組合せをランク付けするためのｃｌｉｎｉｃａｌ ｕｔｉｌｉｔｙ ｉｎｄｅｘを計算するために、モデルに累積的対象データを入力し、反応モデルを更新し、ベイズ法とシミュレーションとを用いて事後確率を推定した。図６に示されているｃｌｉｎｉｃａｌ ｕｔｉｌｉｔｙ ｉｎｄｅｘは、有効性と毒性の可能性との適切なバランスを示す１００で最適である。上記のｃｌｉｎｉｃａｌ ｕｔｉｌｉｔｙ ｉｎｄｅｘでは、保留とした対象の有効性が「ｙｅｓ」であり、不明とした対象の有効性が「ｎｏ」であると仮定した。このようにして、増殖するように選択された最適なスイッチ及びＣＬＢＲ００１の用量はＳＷＩ０１９ ６０μｇ／ｋｇかつＣＡＲ＋細胞１４０ｅ６個であった。
【0090】
前述の発明は理解を容易にするために図示及び例によってある程度詳細に説明されているが、本発明の教示に照らして、添付の請求項の精神又は範囲から逸脱しない限りにおいて教示に特定の変更及び修正を加えることができることは当業者には容易に明確になる。
【0091】
本明細書で引用されているすべての刊行物、データベース、ＧｅｎＢａｎｋ配列、特許及び特許出願は、各々が参照により援用されることが具体的かつ個別に示されているかのように、参照により本開示に援用される。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【配列表】
【国際調査報告】